## POTENSI NANOKOLAGEN LIMBAH SISIK IKAN SEBAGAI COSMECEUTICAL
Hanny Setyowati 1*) , Wahyuning Setyani 2
1 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi “YAYASAN PHARMASI”, Semarang
2 Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta
Abstract: Collagen is the most abundant protein of white connective tissue, comprising approximately 30% of total animal protein. This is a fibrous protein which give strength and flexibility in the tissue and bone, also  playing  an  important  role  for  skin  and  tendon.  The  utilization  of  collagen  from  fish  scales  waste become  an  alternative  for  medication  (pharmaceutical),  and  daily  care  as  cosmetic,  which  known  by cosmeceutical. Nanotechnology application can be completing of cosmeceutical, not only for cure, but also for daily treatment using an wasted materials changed into beneficial product to be developed.
Keywords : collagen, fish scales waste, cosmeceutical

## 1. Pendahuluan
Kolagen  berasal  dari  bahasa  Yunani  yakni “ cola ”  yang  berarti  lem  ( glue )  dan  “ genno ”  yang berarti  kelahiran  ( birth ).  Hal  ini  disebabkan karakteristik  kolagen  yang  melekatkan  sel  untuk membentuk  kerangka  jaringan  dan  organ  tubuh. Molekul  kolagen  berdiameter  1,5  nm  dengan panjang  280  nm  dan  berat  molekulnya  290.000 Dalton.  Kandungan  kolagen  berupa  tiga  rantai polipeptida  dengan  lebih  dari  1000  asam  amino dimasing-masing rantainya (Asyiraf, 2011).
Senyawa  ini  merupakan  komponen  struktural utama  jaringan  ikat  putih  ( white  connective  tissue ) yang meliputi hampir 30% total protein pada tubuh. Terdapat 19 jenis kolagen, yaitu tipe I sampai XIX. Tipe  I,  II,  III,  dan  V  adalah  kolagen fibrous . Kolagen  tipe  I  ditemukan  di  semua  jaringan  ikat, termasuk  kulit  dan  tulang.  Strukturnya  terdiri  atas heteropolimer (rantai alfa-1 dan alfa-2) dan glycine (tanpa tryptophan dan cysteine )  (Jongjareonrak et al ., 2005). Peran kolagen tipe I yakni sebagai matrik protein ekstraselular dengan karakteristik peningkatan proliferasi sel sehingga secara langsung  mempengaruhi  fisiologis  dan  morfologi sel  (Cardoso et  al .,  2014).  Tipe  I  ini  banyak ditemukan  pada  kulit,  tulang,  dan  sisik  ikan, sementara  kolagen  tipe  V  terdapat  pada  jaringan
ikat  dalam  kulit,  tendon,  dan  otot  ikan  yang  juga mengandung kolagen tipe I (Nagai et al ., 2004).
Kolagen  komersial  biasanya  diperoleh  dari kulit  sapi,  kulit  babi,  atau  kulit  ayam,  tetapi penggunaannya kurang tepat mengingat pertimbangan  agama  dan  kontaminasi  biologis seperti BSE ( Mad Cow Disease ), TSE ( Transmissible Spongiform Encephalophaty ), FMD  ( Foot  and  Mouth  Disease )  dan  sebagainya. Kandungan  asam  amino  yang  tinggi  pada  hewan yang  hidup  darat  juga  menyebabkan  proses denaturasi lebih cepat sehingga kualitas kolagennya  juga  rendah  (Aberoumand,  2012).  Di sisi lain, pendayagunaan kolagen yang berasal dari hewan  yang  hidup  di  air,  seperti  ikan  dapat menjadi  alternatif  yang  menjanjikan.  Ekstrak kolagen dapat berperan sebagai kosmetik dan obat, serta  residunya  ( hydrolysate )  dapat  dimanfaatkan dalam industri makanan sebagai pelembut makanan  (Arvanitoyannis  dan  Kassaveti,  2008). Kolagen  yang  berasal  dari  sisik  ikan  dapat digunakan  untuk  menyembuhkan  luka  bakar  dan perbaikan jaringan (Gelse et al ., 2003).
Cosmeceutical merupakan  gabungan  dari cosmetic dan  obat  ( pharmaceutical ). Cosmetic (FDA) didefinisikan sebagai sediaan yang diaplikasikan pada tubuh manusia untuk
SETYOWATI, SETYANI
membersihkan,  mempercantik,  meningkatkan  daya tarik atau penampilan seseorang. Istilah cosmeceutical ini mencakup pada penggunaan yang lebih  luas,  yakni  bermanfaat  untuk  pengobatan, sekaligus  berperan  pada  perawatan  sehari-hari sebagai kosmetik (Lohani et al ., 2014). Berdasarkan kajian  diatas,  kolagen  dapat  berperan  sebagai cosmeceutical .  Pada  bidang  pengobatan,  kolagen digunakan  sebagai  s ponges untuk  luka  bakar, benang  bedah,  agen  hemostatik,  penggantian  atau substitusi  pada  pembuluh  darah  dan  katup  jantung tiruan.  Pada  bidang  kosmetik,  kolagen  digunakan untuk  mengurangi  keriput  pada  wajah  atau  dapat disuntikkan  ke  dalam  kulit  untuk  menggantikan jaringan  kulit  yang  telah  rusak  (Guillen et  al ., 2011).  Oleh  karenanya,  pemanfaatan  kolagen  yang berasal  dari  limbah  sisik  ikan  sangat  potensial digunakan sebagai cosmeceutical .

## 2. Tinjauan Pustaka
2.1 Limbah Sisik Ikan
Sisik  merupakan  lapisan  terluar  dari  kulit yang  berfungsi  sebagai barrier yang  mencegah masuknya  senyawa  asing  ke  dalam  tubuh  ikan. Variasi  sisik  ikan  ini  sangat  luas,  dapat  dibedakan atas  bentuk,  ukuran,  dan  susunannya.  Klasifikasi umum  terdiri  atas cosmoid , ganoid , placoid ,  dan elasmoid ( cycloid dan ctenoid )  yang  sering ditemukan pada kelas teleost (Zhu et al ., 2011).
Lapisan  kolagen  pada  sisik  ikan  tersusun kaku  akibat  mineralisasi,  konsisten  dengan  sifat fleksibilitas  yang  rendah.  Fase  mineral  terdiri  dari calcium  hydroxyapatite ,  dengan  sejumlah  kecil  ion natrium, magnesium, karbonat, dan fosfat. Demineraliasi  sisik  ikan  telah  dilakukan  dengan merendam  sisik  ikan  ke  dalam  0,5  M  EDTA  (1:25 dari  rasio  berat  sisik)  selama  2  hari  setelah sebelumnya  dihilangkan  sisa  protein  menggunakan larutan  NaCl  10%  selama  1  hari.  Seluruh  prosedur dilakukan  pada  suhu  277  K  untuk  menghambat fragmentasi  kolagen.  Hasil  perendaman  dicuci dengan  air  suling  sebanyak  tiga  kali.  Berakhirnya proses  demineralisasi  ditegaskan  dengan  hilangnya 100%  dari  berat  awal  menggunakan  analisis Thermogravimetri  (TG)  pada  suhu  1437  K. Prosedur  ini  telah  diterapkan  pada  spesies Pagrus major oleh Ikoma 1 et al . (2003).
Ekstraksi  atau  pemurnian  kolagen  setelah demineralisasi  dapat  menggunakan  tiga  metode utama,  yakni  menghasilkan  kolagen  larut  garam netral,  kolagen  larut  asam,  dan  kolagen  larut pepsin  (Aberoumand,  2010).  Prosedur  ekstraksi kolagen  tersebut  telah  berhasil  dilakukan  pada beberapa spesies, seperti Lates niloticus (Muyonga et  al .,  2004), Sardinops  melanostictus,  Pagrus major, Lateolabrax japonicus (Nagai et al ., 2004),
Lutjanus argentimaculatus, Lutjanus johnii (Rosmilah et al., 2005), Lutjanus vitta , Priacanthus  macracanthus (Jongjareonrak et  al ., 2006), Pangasianodon  hypophthalmus (Singh 2 et al .,  2011),  dan Oreochromis  niloticus (Nurhayati et al ., 2013).
Proses  ekstraksi  menentukan  karakteristik fisik  kolagen  yang  didapatkan,  contohnya  pada penelitian Nurhayati et al . (2013) didapatkan hasil bahwa ekstraksi dengan asam asetat pada suhu 4 0 C dengan  konsentrasi  0,5  M  dan  1,5  M  memiliki perbedaan kadar asam amino, suhu denaturasi, dan kemampuan  mengembang.  Pada  perlakuan  asam asetat  0,5  M,  kolagen  memiliki  proporsi  asam amino  dan  suhu  denaturasi  yang  lebih  tinggi dibandingkan  perlakuan  asam  asetat  1,5  M, meskipun kemampuan mengembangnya membutuhkan  waktu  yang  lebih  lama.  Ekstraksi dengan  asam  asetat  juga  dilakukan  oleh  Dincer et al . (2015) pada spesies Dicentrarchus labrax . Pada penelitian  ini  dilakukan  perbandingan  ekstraksi menggunakan  asam  asetat  0,5  M  dan  campuran pepsin  1%  selama  48  jam.  ASC  ( Acid  Soluble Collagen ) memiliki  rendemen lebih tinggi dibandingkan  PSC  ( Pepsin  Soluble  Collagen ). ASC  diklasifikasikan  dalam  kolagen  tipe  I  yang juga terdapat pada spesies Theragra chalcogramma berdasarkan  penelitian  Yan et  al . (2008)  dan  spesies Pseudosciaena  crocea oleh Wang et al . (2013). Hal yang berbeda ditunjukkan oleh  Muralidharan et  al .  (2013)  karena  rendemen PSC  lebih  besar  dibandingkan  ASC  dari  spesies Odonus  niger . Liofiliasi  sering  dilakukan  untuk mendapatkan  kolagen  murni  setelah  proses ekstraksi  dengan  asam  (Sadowska et  al .,  2003). Baik  ASC  maupun  PSC  memiliki  karakteristik protein  fibrin  (protein  berbentuk  serabut)  yang berguna  dalam  bidang  farmasi,  biomedis,  dan kosmetik (Guillen et al ., 2011).

## Jurnal Farmasi Sains dan Komunitas
Yunoki et  al .  (2003)  menyatakan  bahwa kolagen  yang  berasal  dari  ikan  salmon  memiliki denaturasi  yang  lebih  kecil  dibandingkan  kolagen yang  berasal  dari  mamalia.  Stabilitas  terhadap irradiasi  UV  dan dehydrothermal juga  telah dipastikan  dengan  pengujian  infra  merah  ( Fourier Transform-Infrared  Spectroscopy )  dan  thermal menggunakan
DSC ( Differential Scanning
Calorimetry ). Penelitian serupa juga dilakukan oleh Sankar et al . (2007) dengan menggunakan sisik ikan Lates  calcarifer yang  telah  dievaluasi  dengan  IR ( Infrared Spectroscopy ), TGA ( Thermo-
Gravimetric  Analysis ),  dan  SEM ( Scanning Electron  Microscopy ).  Kekuatan  ( tensile  strength ) yang  baik  dapat  berpotensi  sebagai  bahan penyembuh  luka.  Pengujian  secara  biologis  baik secara in  vivo dan in  vitro dilakukan menggunakan kolagen  dari  ikan  Tilapia.  Ekstrak  kolagen  yang diperoleh  telah  lulus  uji  sterilitas  terhadap  bakteri dan  virus  (termasuk  endotoksin),  serta  toksisitas terhadap  sel,  sensistivitas,  kelainan  kromosom, reaksi  intrakutan,  toksisitas  akut  sistemis,  reaksi pirogen,  dan  hemolisis  juga  menunjukkan  hasil negatif  sesuai  kriteria  ISO  dan Ministry  of  Health, Labour  and  Welfare  of  Japan .  Kolagen  tersebut berpotensi  sebagai  biomaterial  untuk  proses regeneratif  jaringan  pada  penyembuhan  luka (Yamamoto et al ., 2014).
.

## 2.2  Kolagen
Kolagen  adalah  protein  serabut  yang memberikan  kekuatan  dan  fleksibilitas  pada jaringan  dan  tulang  serta  memegang  peranan penting  bagi  jaringan  lainnya,  termasuk  kulit  dan tendon. Senyawa ini merupakan protein utama yang menyusun komponen matrik  ekstraseluler.  Kolagen tersusun  atas triple  helix dari  tiga  rantai  α polipeptida,  mengandung  dua  jenis  turunan  asam amino  yang  tidak  langsung  dimasukkan  selama proses  translasi  (Fratzl,  2008;  Muyonga et  al ., 2004). Struktur triple helix kolagen berasal dari tiga asam  amino  utama,  yakni glycine,  proline ,  dan hydroxyproline (Lodish et  al., 2000) , dapat  diamati pada Gambar 1.
Seluruh  tipe  kolagen  dapat  diekstraksi dengan  cara  fermentasi  diikuti  proses  pemisahan berdasarkan  kelarutannya  pada  ion  dan  pH  yang berbeda. Pemisahan kolagen tipe  I,  II, dan  III telah
dilakukan  dengan  mengkondisikan  larutan  pada pH yang berbeda, salah satunya dengan elektroforesis.  Kolagen  tipe  I  banyak  ditemukan pada  lapisan  dermis  dan  tendon,  kolagen  tipe  II dominan  pada  kartilago,  sedangkan  kolagen  tipe III  juga  ditemukan  pada  dermis  ketika  usia  muda dan  menurun  konsentrasinya  seiring  dengan bertambahnya usia (Hsiao et  al ., 2004). Bae et  al. (2008) yang meneliti kolagen pada spesies Siganus fuscescens , Kyphosus  bigibbus , Myliobatis  tobijei , Dasyatis akajei , Dasyatis laevigata , dan Shahiri et al . (2012) yang menggunakan spesies Onchorhynchus  mykiss menyimpulkan  bahwa kelarutan kolagen pada kisaran pH 1-4 lebih tinggi akibat  gaya  tolak  menolak  antar  molekul, sedangkan  pada  pH  7  dan  9,  justru  terjadi penurunan  kelarutan.  Fenomena  ini  ditandai dengan  terbentuknya  presipitat  dan  agregasi  yang disebabkan oleh interaksi hidrofobik antar molekul kolagen sehingga terjadilah koagulasi.
Kolagen yang paling banyak dikenal adalah kolagen  tipe  I  yang  terdiri  dari  tiga  rantai  α polipeptida. Kolagen tipe I paling banyak terdapat pada  bagian  tubuh  yang  lunak  seperti  kulit  dan tendon  maupun  bagian  tubuh  yang  keras  seperti tulang  dan  gigi  serta  jaringan  penghubung (Cardoso et  al .,  2014).  Senyawa  ini  dapat diperoleh  dari  kulit  hewan  laut  seperti  ubur-ubur, bintang  laut,  gurita, paper  nautilus , cuttlefish purple ,  dan sea  urchin .  Ekstraksi  kolagen  tipe  I dari  sisik  ikan  mengandung  kolagen  fiber  tipe  I dan calcium hydroxyapatite (Ca 5 (PO 4 )3OH) (Ikoma 2 et al ., 2003, Pang et al ., 2013).
Glycine ditemukan  sebagai  asam  amino utama  bersama  dengan alanine,  proline, dan hydroxyproline pada  sisik  ikan  spesies Thunnus alalunga, Scoliodon sorrakowah, dan Labeo rohita (Hema et  al., 2013).  Pada  spesies Catla catla dan Cirrhinus
mrigala , ditemukan kandungan glycine dan alanine bersama  dengan grup imin ( proline, hydroxyproline ) yang berlimpah  (Mahboob,  2015). Glycine dan proline juga  menjadi  asam  amino  dengan  konsentrasi terbesar  yang  ditemukan  pada  spesies Liza melinoptera , Liza macrolepis , Valamugil speigleri , dan Mugil  cephalus berdasarkan  penelitian Massod et al . (2015). Hasil ini menegaskan adanya kandungan  kolagen,  sebab glycine dan proline
SETYOWATI, SETYANI
merupakan  komponen  esensial  sebagai  penyusun kolagen.  Evaluasi  dengan  SDS-PAGE  ( Sodium Dodecyl
Sulfate-Polyacrylamide
Gel
Electrophoresis ) menghasilkan data bahwa kolagen yang didapatkan adalah kolagen tipe  I, dengan satu sampai tiga glycine , dan sejumlah kecil tyrosine dan histidine ,  sedangkan tryptophan dan cysteine tidak terlihat.  Selain glycine dan proline , lysine merupakan  komponen  esensial  lainnya  untuk
pembentukkan  kolagen  karena  terlibat  dalam ikatan cross-linking telopeptide kolagen. Kandungan lysine relatif tinggi pada L. melinoptera , M.  cephalus tetapi  rendah  pada L. macrolepis dan V.  Speigleri .  Hal  serupa  juga ditemukan  pada  spesies Priacanthus  tayenus (Kittiphattanabawon et  al .,  2005)  dan Tachysurus maculatus (Bama et  al .,  2010)  yang  sisiknya mengandung kolagen tipe I.
Gambar  1. Struktur  kolagen  triple  helix:  (a)  struktur  kristal  resolusi  tinggi  pertama  kolagen,  tersusun  dari  ( ProHypGly) 4 – (ProHypAla)–(ProHypGly) 5 ; (b) Tampilan melintang dari satu ( ProProGly) 10 triple helix dengan tiga helaian pada ruang kosong yang digambarkan sebagai bola, tongkat, dan pita; (c) gambar bola dan tongkat dari segmen kolagen triple helix ; (d) ikatan tiga helai pada segmen panel c (Shoulders dan Raines, 2009).
Gambar 2. Mekanisme agen cosmeceutical . AHA: Alpha-hydroxyacid ; PIH: Post- inflammatory hyperpigmentation ; UV: ultraviolet light (Tsai dan Hantash, 2008)

## 2.3  Cosmeceutical
Cosmeceutical mulai  tumbuh  dengan  pesat pada  industri  perawatan  personal.  Formulasi cosmeceutical telah menyebar dari ujung rambut sampai  ujung  kaki  dan  telah  digunakan  untuk mengobati hiperpigmentasi, kerutan, dan kerusakan  rambut  (Walters  dan  Roberts,  2008) dengan  berbagai  bentuk  sediaan,  seperti  krim, lotio,  dan  salep  (Kim et  al .,  2008).  Terobosan terbaru  seperti  nanoteknologi  ditujukan  untuk meningkatkan  efektivitas  sediaan cosmeceutical sekaligus membuatnya tampak elegan (Lohani et al .,  2014).  Beberapa  bahan  yang  dapat digunakan  sebagai cosmeceutical diantaranya asam  salisilat,  asam  glikolat  (AHA),  arbutin, ceramide,  vitamin  C,  vitamin  E,  vitamin  A,  dan fenol  tumbuhan  yang  berperan  sebagai  anti inflamasi,  agen depigmenting, mempercepat pertumbuhan  kulit,  pelembab,  dan  tabir  surya, seperti ditunjukkan pada Gambar 2.
Cosmeceutical dapat berupa active cosmetics , nutricosmetics,
performance cosmetics , functional
cosmetics , dan dermaceuticals. Perbedaan cosmetics dan cosmeceutical seperti ditunjukkan pada Tabel 1.

## 2.4  Nanoteknologi
Penggabungan nanoteknologi dalam cosmeceutical bertujuan  untuk  memperbaiki aktivitas  sediaan  kosmetik  tersebut,  diantaranya produk  parfum  memiliki  bau  harum  yang bertahan  lama,  tabir  surya  yang  mampu melindungi  hingga  24  jam,  krim  anti  penuaan dengan  efek  kulit  muda  dan  bercahaya,  serta pelembab  yang  menjaga  agar  kulit  tidak  kering dan  sehat  (Tsai  dan  Hantash,  2008).  Beberapa inovasi dalam nanoteknologi diantaranya pembuatan  nanoemulsi  (karakteristik  transparan dan  tekstur  yang  lembut),  nanokapsul  (pada produk  perawatan  kesehatan),  nanopigmen (aktivitas  perlindungan  sinar  ultraviolet  yang lebih kuat), formulasi liposom (kandungan bahan obat dalam vesikel yang untuk melindungi bahan dari  oksigen  atau  cahaya),  niosom,  nanopartikel lipid padat, dendrimer (Kaur dan Agrawal, 2007) serta  sistem  nanopartikulat  dengan nanotubes , nanocrystal , fullerenes, nanotopes , dan nanospheres (Sharma dan Sharma, 2012). Skema
pembuatan  nanokolagen  (Gambar  3)  telah dilakukan oleh Papi et al . (2011) yang ditujukan untuk meningkatkan stabilitas sediaan cosmeceutical sehingga  menghasilkan  efek maksimal.
Teknologi  nano  menghasilkan  nanopartikel dengan  dua  karakter  yakni  (1)  nanopartikel soluble dan  atau biodegradable (seperti  liposom dan  nanoemulsi)  dan  (2)  nanopartikel insoluble dan  atau nonbiodegradable (seperti  TiO 2 , fullerenes ,  and quantum  dots ).  Nanopartikel kolagen  yang selanjutnya disingkat  nanokolagen dapat  berpenetrasi  melalui  folikel  rambut  dan pori-pori kulit. Semakin kecil ukuran partikelnya akan semakin mudah menembus lapisan epidermis  kulit  secara  transfolikuler  (Lohani et al ., 2014).
Ukuran nano ini dapat berperan sebagai tabir surya  dengan  karakteristik UV-reflecting dan UV-absorbing . Peredaman sinar UV adalah total penjumlahan  dari  penghamburan  dan  absorpsi serta  tergantung  pada  beberapa  faktor,  yakni  (1) dispersi  partikel  inorganik,  (2)  ukuran  partikel, dan  (3)  indek  refraktif.  Semakin  kecil  ukuran partikel,  perlindungannya  menuju  ke  arah  sinar UV dengan panjang gelombang rendah. Berdasarkan  uji  TEM  ( Transmission  Electron Microscopy ),  nanopartikel  dapat  merefleksikan dan  mengabsorbsi  sinar  UV  lebih  efisien  pada bentuk agregat yang berukuran 100 nm (Gambar 4).  Dengan  demikian,  absorpsi  perkutan  dapat tercapai sehingga dapat berperan sebagai barrier yang  mencegah  kerusakan  kulit  akibat  sinar  UV (Chen et al ., 2013).

## 2.5  Aplikasi cosmeceutical 2.5.1  Skin aging (penuaan dini)
Keriput atau kerutan merupakan manifestasi klinis  dari  ‘ cutaneous  aging ’  dan  tanda terjadinya  penuaan  dini  ( skin  aging ).  Faktor intrinsik  (genetik,  metabolisme  selular,  dan hormon)  dan  faktor  ekstrinsik  (paparan  sinar matahari,  polusi,  radiasi  radikal  bebas/  ion, bahan  kimia,  dan  toksin)  merupakan  kombinasi faktor  yang  menyebabkan  akumulasi  perubahan struktur  dan  fungsi  kulit  (Ganceviciene et  al ., 2012).
SETYOWATI, SETYANI
Tabel 1. Cosmetic versus cosmeceutical (Wanjari dan Waghmare, 2015) Cosmetics Cosmeceuticals
 FD&  C  ACT  ( Federal  Food,  Drug  and  Cosmetics Act )  mendefinisikan  produk cosmetic sesuai  dengan tujuan  penggunaannya  untuk  membersihkan  dan mempercantik kulit.
 Produk cosmeceutical memiliki  manfaat  farmakologi pada kulit.
 Produk cosmetic hanya  menghantarkan  senyawa aktifnya pada lapisan kulit yang paling atas.
 Produk cosmeceutical mengandung  senyawa  aktif yang  beraksi  pada  struktur  sel  kulit  bagian  dalam melalui pemberian secara topikal untuk tujuan terapi,
melawan penyakit, dan penyembuhan atau regenerasi kulit.
 Cosmetic tidak  menghambat  proses  penuaan  dini ( skin  aging )  karena  hanya  bekerja  pada  lapisan  atas epidermis.
 Cosmeceutical lebih terkonsentrasi, alami, dan efektif dalam terapi sekaligus dapat mencegah penuaan dini.
Gambar 3. Skema pembuatan nanopartikel  kolagen (Papi et al ., 2011). Keterangan: 1)  Disolusi lipid dalam  kloroform; 2) Pembentukan  multilayer;  3)  Proses  hidrasi  multilayer;  4)  Pembentukan  vesikel  multilayer;  5)  Pembentukan  inti  kolagen dengan suhu 37 ○ C; 6) Nanopartikel kolagen terdapat pada larutan
Gambar 4. Formasi agregat dan aglomerasi dari nanopartikel (Chen et al ., 2013)
Photoageing adalah super posisi chronicultraviolet (UV) yang menginduksi perubahan  struktur  kulit.  Manifestasi photoaging berupa  kerutan  pada  lapisan  atas  dan  bawah epidermis kulit, perkembangan tekstur kasar, atropi, dan dyspigmentation .  Jumlah  kerusakan  kulit  yang disebabkan  sinar  matahari  ditentukan  dari  jumlah paparan  radiasi  dan  proteksi  pigmen  seseorang. Perubahan epidermis akibat sinar matahari termasuk
dalam  penipisan  epidermis  dan  ekspresi  lesi  yang memicu  aktivasi  keratosis,  karsinoma  sel  basal, dan  karsinoma  sel squamous (Arsiwala et  al ., 2013).
Radiasi sinar UV mempengaruhi modifikasi post -translasi  dari  matrik  protein  kulit (melalui  ROS/ Reactive  Oxygen  Species )  dan menurunkan regulasi transkripsi protein yang sama (melalui  jalur  TGF  -  β  / Smad  signaling ).  Sinar
UVA  dan  UVB  menginduksi  varietas matrix metalloproteinases (MMPs) yang luas. Senyawa ini mendegradasi  matrik  protein  kulit,  spesifiknya yakni  kolagen  melalui  aktivitas  enzimatik.  UV menginduksi MMP-1 dengan menginisiasi cleavage tipe I dan III kolagen kulit, diikuti dengan degradasi MMP-3  dan  MMP-9.  Kolagen  tipe  I  distabilkan oleh  ikatan  silang  dengan  matrik  protein  kulit sehingga  dengan  adanya  degradasi  oleh  MMPs, akan mengganggu intergritas  dermis  yang berujung pada  kerusakan  kulit,  seperti  ditunjukkan  pada Gambar 5 (Alam dan Havey, 2010).
Photoprotection merupakan mekanisme pertahanan  alami  yang  dikembangkan  untuk meminimalkan  kerusakan  kulit  ketika  terpapar radiasi  UV.  Perlindungan  ini  dapat  diperoleh  dari komponen organik atau inorganik yang berasal dari hewan  darat  maupun  laut.  Beberapa  senyawa protektif  tersebut  diantaranya scytonemins (ekslusif dalam cyanobacteria ), mycosporines (pada  jamur),
mycosporine-like  amino  acids (MAAs,  pada cyanobacteria , ganggang, dan hewan laut), phenyl propanoids dan  flavonoid  (tumbuhan  tingkat tinggi),  melanin  (manusia,  hewan  darat  lainnya, atau beberapa bakteri), dan bahan-bahan lain yang mampu mengabsorbsi UV (Pallela et al ., 2010). Berdasarkan pengamatan histopatologi menurut Saghari dan Baumann (2009), sel keriput disebabkan  oleh  penipisan  lapisan  epidermis, perbesaran  (atopi)  jaringan  adiposa  subkutan hipodermis  yang  setara  dengan  kekurangan kolagen,  glikosaminoglikan,  dan  jaringan  elastin. Kekurangan  kolagen  merupakan  temuan  utama yang  menyebabkan  keriput,  baik  pada  kulit  yang terpapar  maupun  tidak  terpapar  sinar  matahari. Biosintesis kolagen mulai menurun seiring dengan bertambahnya usia dan adanya peningkatan matrix metalloproteinases (MMPs) menyebabkan degradasi kolagen semakin besar.
Gambar 5. Sinar UV berinteraksi dengan sel kulit yang berbeda. Lebih spesifik, energi dari sinar UVB diabsorbsi oleh  epidermis  dan  mempengaruhi  sel  epidermis  seperti  keratinosit.  Energi  dari  sinar  UVA  mempengaruhi epidermis,  keratinosit,  dan  fibroblas.  Keterangan:  AP  -1: activator  protein -  1;  NF  -  κ  B: nuclear  factor κ  B; MMP: matrix metalloproteinase ; mtDNA : mitochondrial DNA; ROS: Reactive Oxygen Species
(a) (b)
Gambar 6. (a) Sebelum pemberian, (b) Setelah 25 hari pemberian UV-B UV-A Epidermis AP-1 NF - κB Dermis MMP and mtDNA ROS Keratinocytes Fibroblasts
Sediaan  topikal  yang  mengandung  senyawa retinoid  dapat  digunakan  untuk  mencegah  dan mengobati  penuaan  dini  ( skin aging )  melalui peningkatan sintesis kolagen dan penurunan MMPs. Senyawa  antioksidan  seperti  vitamin  C  (asam askorbat) juga berperan dalam jalur sintesis kolagen melalui  enzim prolyl  hydroxylase .  Penelitian menunjukkan  bahwa  terjadi  penurunan  sel  keriput dengan  pemberian  asam  askorbat  yang  berkorelasi dengan  peningkatan  kolagen  pada  lokasi  yang diobati. Selain vitamin C, coenzyme Q10 (ubiquinone), green  tea ,  dan  vitamin  E  dipercaya dapat  mencegah  dan  mengobati  penuaan  dini  (Lee et al ., 2015). Sejalan dengan bahan sintetik, marine kolagen  juga  dapat  menurunkan  MMPs  dengan meningkatkan aktivitas inhibitor jaringan metalloproteinases . Kolagen juga mendorong biosintesis kolagen melalui peningkatan prokolagen tipe I dan III mRNA (Farris, 2010)
Hasil  penelitian  Chai et  al .  (2010)  yang mengekstraksi  kolagen  dari  sisik  ikan  Tilapia ( Oreochromis  sp )  menunjukkan  bahwa  kolagen memiliki  aktivitas  penetrasi  ke  dalam  stratum korneum  epidermis  berdasarkan  pengujian Franz- type  diffusion  cell .  Ekstrak  kolagen  mengaktifkan jaringan  fibroblas  dan  menginisiasi  biosintesis kolagen dari dalam sehingga meningkatkan elastisitas  dan  kelembaban  kulit.  Pengujian  secara in  vivo telah  dilakukan  oleh  Kumar et  al .  (2011) yang menunjukkan bahwa kolagen yang diekstraksi dari  sisik  ikan  Tilapia  ( Oreochromis  niloticus ) mampu  mengurangi  kerutan  dibagian  dahi  setelah 25  hari  pemakaian  (Gambar  6).  Hal  ini  disebabkan ukuran  molekul  yang  kecil  sehingga  mudah menembus  jaringan  epidermis  dan  dermis  sehingga mampu memperbaiki sel kulit yang rusak.

## 2.5.2  Wound  healing  activity  (penyembuhan  luka bakar)
Kolagen  merupakan  komponen  kunci  pada proses  penyembuhan  luka.  Pada  luka  bakar  terjadi peningkatan  jumlah matrix  metalloproteinases (MMPs)  yang  menyebabkan  degradasi  kolagen
sebagai  penyusun  epidermis  kulit.  Pembentukkan kolagen  ini  dapat  dibuat  dengan  menggunakan pembawa atau kombinasi agen gel, pasta, polimer, oxidized  regenerated  cellulose (ORC),  dan ethylene  diamine  tetraacetic  acid (EDTA)  (Brett, 2008).  Senyawa  ini  merupakan  biomaterial  yang menstimulasi  penyusunan  serat  baru  dan  jaringan di tempat luka serta menciptakan lingkungan yang baik  untuk  proses  penyembuhan  luka.  Serabut kolagen  ketika  diaplikasikan  pada  luka,  tidak hanya  menginisiasi  angiogenesis,  tetapi  juga merangsang  mekanisme  perbaikan  alami  tubuh. Peran ini dapat mengurangi udema dan cairan pada luka,  memfasilitasi  migrasi  fibroblas  ke  tempat luka  sehingga  mampu  menghentikan  pendarahan. Sterilitas  juga  terjamin  pada  pemberian  kolagen yang dibuktikan dengan tidak terdapat infeksi lain disekitar lokasi luka (Singh 1 et al ., 2011).
Fase  regeneratif  pada  penyembuhan  luka memerlukan  tiga  komponen  utama,  yakni  sel, nutrisi,  dan scaffold .  Kolagen  dapat  berperan sebagai  ideal scaffold yang  mendukung  berbagai jaringan  ikat  yang  terdapat  pada  kulit,  tendon, tulang,  kartilago,  pembuluh  darah,  dan  ligamen (Hayashi et  al .,  2012).  Dengan  demikian,  fungsi kolagen  diantaranya  hemostasis,  interaksi  dengan trombosit, interaksi dengan fibronektin, meningkatkan  eksudasi  cairan,  meningkatkan komponen seluler, meningkatkan faktor pertumbuhan  dan  mendorong  proses  fibroplasia dan proliferasi pada epidermis. Tabel 2 menunjukkan  peranan  kolagen  dalam  proses penyembuhan luka menurut Triyono (2005).
Kolagen  dari  luar  berperan  dalam  fase maturasi  dengan  membantu  kolagen  alami  yang dari  dalam  tubuh  untuk  memberi  kekuatan  pada jaringan  baru  serta  meningkatkan  organisasi serabut-serabut  kolagen  pada  waktu  remodeling penyembuhan luka. Kolagen yang ditimbun dalam luka  diubah,  membuat  penyembuhan  lebih  kuat dan  lebih  mirip  jaringan.  Kolagen  baru  menyatu, menekan  pembuluh  darah  dalam  penyembuhan luka,  sehingga  bekas  luka,  menjadi  rata  dan  tipis.
Tabel 2. Peranan Kolagen Dalam Proses Penyembuhan Luka (Triyono, 2005)
Fase penyembuhan luka Peranan kolagen
•  Fase inflamasi
a.   Hemostasis  dengan  menghentikan  perdarahan  yang berlebihan.
b.   Vasodilatasi terjadi migrasi netrofil untuk melawan infeksi.
c.   Netrofil  menarik  makrofag  membantu  mengeluarkan debris.
d.   Makrofag  menarik  fibroblas  ke  daerah  luka  untuk  mulai sintesa kolagen.
a.   Membantu proses hemostasis. b.   Menarik makrofag dengan kemampuannya kemotaksis. c.   Menyebabkan  antibakteri  secara  alami  infiltrat inflamasi.
•  Fase proliferasi
a.   Fibroblas terlihat  di  daerah  luka  dan  memulai  sintesis kolagen.
b.   Pembentukan  jaringan  granulasi  terdiri  dari  lengkung- lengkung  kapiler  yang  membentuk  lipatan-lipatan  serabut kolagen.
a.   Aksinya  sebagai  lipatan-lipatan  untuk  penggabungan fibroblas.
b.   Menarik fibroblas ke daerah luka.
c.   Di  dalam  struktur  matrik,  menjadi  model  untuk pertumbuhan jaringan baru.
•   Fase maturasi
a.   Reorganisasi matrik jaringan konektif .
b.   Fibril-fibril  kolagen  konsolidasi  menjadi  lebih  tebal  dan serabut yang lebih padat.
a.   Memberi kekuatan pada jaringan baru.
b.   Meningkatkan  organisasi  serabut-serabut  kolagen yang kas pada fase  remodeling penyembuhan luka.
Manfaat  ini  dapat  meningkatkan  estetika  kulit  dan berperan sebagai kosmetik alami untuk kulit (Brett, 2008).

## 3. Kesimpulan
Nanokolagen sebagai cosmeceutical memiliki  kualitas  dan  aktivitas  yang  sama  dengan bahan  sintetik  lainnya.  Hal  ini  dapat  mendorong pemanfaatan  bahan  alam,  khususnya  limbah  sisik ikan  sehingga  dapat  menerapkan  efektivitas  bahan, mengurangi pencemaran lingkungan, dan meningkatkan  nilai  jual  sisik  ikan  dari  sekedar limbah menjadi bahan yang potensial.

## Daftar Pustaka
Aberoumand,  A.,  2010,  Isolation  and  Characteristics  of Collagen from Fish Waste Material, World Journal of Fish and Marine Sciences , 2 (5): 471-474.
Aberoumand, A., 2012, Comparative Study Between Different Methods  of  Collagen  Extraction  from  Fish  and  its Properties, World  Applied  Sciences  Journal , 16 (3): 316-319.
Alam, M., dan Havey, J., 2010, Chapter 2: Photoaging dalam Draelos , Z.D., Cosmetic  Dermatology:  Products  and Procedures . New York: Blackwell Publishing.
Arsiwala, S., Tahiliani, S., Jerajani, H., Chandrashekhar, B.S.,
Aurangabadkar,  S.,  Kohli,  M.,  Savardekar,  P., Sarangi  K.,  Kharkar,  R.D.,  dan  Shah,  F.,  2013, Evaluation  of  Topikal  Anti-Wrinkle  and  Firming (AWF)  for  Women,  Anti-Wrinkle  and  Firming (AFM)  for  Men  and  Deep  Wrinkles  for  Wrinkles  on Face and Neck, Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research , 6 (3): 86-89.
Arvanitoyannis,  I.S.,  dan  Kassaveti,  A.,  2008,  Fish  Industry Waste:  Treatments,  Environmental  Impacts,  Current
and  Potential  Uses, International  Journal  of  Food Science and Technology , 43 : 726-745.
Asyiraf,  N.,  2011,  Extraction  of  Collagen  From  Fish  Waste and Determination of Its Physico-chemical Characteristic, Final Project , Degree of Bachelor of Science  (Hons.)  Food  Science  and  Technology, Faculty  of  Applied  Sciences,  Selangor:  Universiti Teknologi MARA.
Bae, I.,  Osatomi, K.,  Yoshida, A.,  Osako, K., Yamaguchi, A.,    dan  Hara,  K.,  2008,  Biochemical  Properties  of Acid-Soluble  Collagens  Extracted  from  The  Skins of  Underutilised  Fishes, Food  Chemistry , 108 :  49– 54.
Bama, P., Vijayalakshimi, M., Jayasimman, R., Kalaichelvan, P.T., Deccaraman, M., dan Sankaranarayanan, S., 2010, Extraction of Collagen from  Cat  Fish  ( Tachysurus  maculatus )  by  Pepsin Digestion  and  Preparation  and  Characterization  of Collagen  Chitosan  Sheet, International  Journal  of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 2 (4): 133- 137.
Brett,  D.,  2008,  A  Review  of  Collagen  and  Collagen-based
Wound Dressings, Wounds, 20 (12).
www.medscape.com.
Cardoso,  V.S.,  Quelemes,  P.V.,  Amorin,  A.,  Primo,  F.L., Gobo,  G.G.,  Tedesco,  A.C.,  Mafud,  A.C., Mascarenhas, Y.P., Corrêa, J.R., Kuckelhaus, S.A et al .,  2014,  Collagen  Based  Silver  Nanoparticles  for Biological Applications:
Synthesis and Characterization, Journal of Nanobiotechnology , 12 (36): 1-9.
Chai, H. Y., Li, J. H., Huang, H. N., Li, T. L., Chan, Y. L., Shiau,  C.  Y.,  dan  Wu,  C.  J., 2010,  Effects  of  Sizes and Conformations of Fish-Scale Collagen Peptides on  Facial  Skin  Qualities  and  Transdermal Penetration Efficiency, Hindawi Publishing Corporation, Journal of Biomedicine and
Biotechnology ,  Article  ID  757301,  9  pages, doi:10.1155/2010/757301.
Chen,  L.L.,  Tooley,  I.,  dan  Wang,  S.Q.,  2013,  Chapter  11:
Nanotechnology  in  Photoprotection  dalam  Nasir et al ., Nanotechnology  in  Dermatology ,  New  York:
Springer.
Dincer,  M.  T.,  Agcay,  O.  Y.,  Sargin,  H.,  dan  Baryam,  H., 2015,  Functional  Properties  of  Gelatin  Recovered From  Scales  of  Farmed  Sea  Bass  ( Dicentrarchus labrax ), Turkish  Journal  of  Veterinary  and  Animal Sciences, 39 : 102-109.
Farris,  P.K.,  2010,  Chapter  9:  Marine  Cosmeceuticals  dalam Draelos,  Z.D., Cosmeceuticals:  Procedures  in Cosmetic Dermatology Series , 3 rd Edition Elsevier. Fratzl,  P.,  2008, Collagen:  Structure  and  Mechanics ,  New York: Springer.
Ganceviciene, R., Liakou, A.I., Theodoridis, A.,
Makrantonaki,  E.,  dan  Zouboulis,  C.C.,  2012,  Skin Anti-aging Strategies, Dermato-Endocrinology , 4 (3):
308–319.
Gelse,  K.,  Poschl,  E.,  dan  Aigner,  T.,  2003,  Collagens
Structure,  Function,  and  Biosynthesis, Advanced Drug Delivery , 55 : 1531-1546.
Guillen,  M.C.G.,  Gimenez,  B.,  Caballero,  M.E.L.,  dan Montero,  M.P.,  2011,  Functional  and  Bioactive Properties  of  Collagen  and  Gelatin  from  Alternative Source:  A  Review, Food  Hydrocolloids , 25 (8): 1813-1827.
Hayashi,  Y.,  Ikeda,  T.,  Yamada,  S.,  dan  Yanagiguchi,  K., 2012,  Chapter  11:  Fish  Collagen  and  Tissue  Repair dalam  Kim,  S.K., Marine  Cosmeceuticals:  Trends and  Prospects ,  New  York:  CRC  Press  Taylor  and Francis Group.
Hayashi,  Y.,  Ikeda,  T.,  Yamada,  S.,  Koyama,  Z.,  dan Yanagiguchi,  K.,  2014,  Chapter  22:  The  Application of  Fish  Collagen  to  Dental  and  Hard  Tissue Regenerative  Medicine  dalam  Kim,  S.K., Seafood Processing  By-Products:  Trends  and  Application ,
New York: Springer.
Hema,  G.S.,  Shyni,  K.,  Mathew,  S.,  Anandan,  R.,  Ninan,  G., dan  Lakshmanan,  P.T.,  2013,  A  Simple  Method  for Isolation  of  Fish  Skin  Collagen-  Biochemical Characterization  of  Skin  Collagen  Extracted  from Albacore  Tuna  ( Thunnus  alalunga ),  Dog  Shark ( Scoliodon sorrakowah ),  and  Rohu  ( Labeo  rohita), Annals of Biological Research, 4 (1):271-278. Hsiao,  C.Y.,  Chou,  C.H.,  Sun,  H.W.,  dan  Seah,  J.N.,  2004, Novel  Collagen  Production  Method, United  States Patent  Application  Publication ,  Patent  Number 0253678 A1.
Huang,  C.Y.,  Wu,  C.H.,    Yang,  J.I.,  Li,  Y.H.,  dan  Kuo,  J.M.
2013,  Evaluation  of  Iron-binding  Activity  of Collagen Peptides Prepared from The Scales of Four Cultivated  fishes  in  Taiwan, Journal  of  Food  and Drug Analysis , XXX : 1-8.
Ikoma 1 , T., Kobayashi, H., Tanaka, J., Walsh, D., dan Mannb,
S., 2003, Microstructure, Mechanical, and Biomimetic  Properties  of  Fish  Scales  from Pagrus major, Journal of Structural Biology, 142 : 327–333 .
Ikoma 2 ,  T.,  Kobayashi,  H.,  Tanaka,  J.,  Walsh,  D.,  dan Mannb,  S.  2003.  Physical  properties  of  type  I collagen extracted from fish scales of Pagrus major and Oreochromis niloticas, International Journal of Biological Macromolecules, 32: 199-204.
Jongjareonrak,  A.,  Benjakula,  S.,  Visessanguanb,  W., Prodpranc, T., dan Tanakad, M., 2005, Isolation and Characterisation  of  Acid  and  Pepsin-Solubilised Collagens  from  The  Skin  of  Brownstripe  Red Snapper ( Lutjanus vitta ), Food Chemistry , 93 : 475– 484.
Jongjareonrak,  A.,  Benjakula,  S.,  Visessanguanb,  W.,
Prodpranc, T., dan Tanakad, M., 2006,
Characterization of Edible Films  from  Skin Gelatin of  Brownstripe  Red  Snapper  and  Bigeye  Snapper. Food Hydrocolloids , 20 : 492–501.
Kaur, I.P., dan Agrawal, R., 2007, Nanotechnology: A New Paradigm  in  Cosmeceuticals, Recent  Patents  on Drug Delivery and Formulation , 1 : 171-182.
Kim, S.K., Ravichandran, Y.D.,  Khan, S.B.,  dan Kim, Y.D., 2008,  Prospective  of  the  Cosmeceuticals  Derived from  Marine  Organisms, Biotechnology  and Bioprocess Engineering , 13 : 511-523.
Kittiphattanabawon,  P.,  Benjakul,  S.,    Visessanguan,  W., Nagai,  T.,    dan  Tanaka,  M.,  2005,  Characterisation of  Acid-Soluble  Collagen  From  Skin  and  Bone  of Bigeye  Snapper  ( Priacanthus  tayenus ), Food Chemistry , 89 : 363-372.
Kumar,  M.  H.,  Spandana,  V.,  dan  Poonam,  T.,  2011, Extraction  dan  Determination  of  Collagen  Peptide and  Its  Clinical  Importance  From  Tilapia  Fish Scales ( Oreochromis niloticus ), International Research Journal of Pharmacy , 2 (10): 97-99.
Lee,  H.  Y.,  Ghimeray,  A.K.,  Yim,  J.H.,  dan  Chang,  M.S., 2015,  Antioxidant,  Collagen  Synthesis  Activity in Vitro and Clinical Test on Anti-Wrinkle Activity of Formulated  Cream  Containing Veronica  officinalis Extract,  Journal  of  Cosmetics, Dermatological Sciences and Applications , 5 : 45-51.
Lodish, H., Berk, A., Zipursky, S.L., Matsudaira, P., Baltimore, D., dan Darnell J., 2000, Molecular Cell Biology , 4 th Edition. New York: W. H. Freeman. Lohani, A., Verma, A., Joshi, H., Yadav, N., dan Karki, N.,
2014, Nanotechnology-Based Cosmeceuticals, Hindawi Publishing Corporation ISRN Dermatology , Article ID 843687.
Mahboob,  S.,  2015,  Isolation  and  Characterization  of Collagen  From  Fish  Waste  Material-  Skin,  Scales and  Fins  of Catla  catla and Cirrhinus  mrigala , Journal  of  Food  Science  and  Technology , 52 (7): 4296-4305.
Massod, Z., Yasmeen, R., Haider, M.S., Tarar, O. M., Zehra, L.,  dan  Hossain,  M.  Y.,  2015,  Evaluation  of  Crude Portein and Amino Acid Contents From The Scales of Four Mullet Species  (Mugilidae) Collected From Karachi  Fish  Harbour,  Pakistan, Indian  Journal  of Geo-Marine Science , 44 (5): 1-9.
Muralidharan,  N.,  Shakila,  R.J.,  Sukumar,  D.,  dan Jeyasekaram,  G.,  2013,  Skin,  Bone  and  Muscle Collagen  Extraction  From  The  Trash  Fish,  Leather
Jacket  ( Odonus  niger )  and  Their  Characterization, Journal  of  Food  Sciences  and  Technology , 50 (6):
1106-1113.
Muyonga,  J.H.,  Cole,  C.G.B.,  dan  Duodu,  K.G.,  2004, Characterization  of  Acid  Soluble  Collagen  from Skins  of  Young  and  Adult  Nile  Perch  ( Lates niloticus ), Food Chemistry , 85 : 81-89.
Nagai, T., Izumi, M., dan Ishii, M., 2004, Fish Scale Collagen:
Preparation and Partial Charaterization, International Journal  of  Food  Science  and  Technology, 39 (3): 239-244.
Nurhayati,  Tazwir,  dan  Murniyati,  2013,  Ekstraksi  dan Karakterisasi  Kolagen  Larut  Asam  dari  Kulit  Ikan Nila  ( Oreochromis  niloticus ), JPB  Kelautan  dan Perikanan , 8 (1): 85-92.
Pallela,  R.,  Young,  Y.  N.,  dan  Kim,  S.  K.,  2010,  Anti- photoaging and Photoprotective Compounds Derived from  Marine  Organisms, Marine  Drugs, 8 :  1189- 1202.
Pallela, R., Janapala, V.R., Shim, Y. B., dan Kim, S. K., 2015,
Biomedical  Implication  of  Type  I  Collagen:  A Marine Perspective, Research Gate , http://www.researchgate.net/publication/236131239,
1-12.
Pang, S., Chang,  Y.P., dan Woo, K.K., 2013, The Evaluation of  the  Suitability  of  Fish  Wastes  as  a  Source  of Collagen, 2nd  International Conference  on  Nutrition and Food Sciences , 53 : 77-81.
Papi,  M.,    Palmieri,  V.,    Maulucci,  G.,  Arcovito,  G.,    Greco, E.,    Quintiliani,  G., et  al .,  2011,    Controlled  Self Assembly  of  Collagen  Nanoparticle, Journal  of Nanoparticle Research , Springer, 1-7.
Rosmilah,  M.,  Shahnaz,  M.,  Masita,  A.,  Noormalin,  A.,  dan Jamaludin,  M.,  2005,  Identification  of  Major Allergens  of  Two  Species  of  Local  Snappers: Lutjanus argentimaculatus (Merah/ Red Snapper) and Lutjanus  johnii (Jenahak/  Golden  Snapper), Tropical Biomedicine, 22 (2): 171–177.
Sadowska,  M.,  Kolodziejska,  I.,  dan  Niecikowska,  C.,  2003,
Isolation  of  Collagen  From  The  Skins  of  Baltic  cod ( Gadus morhua ), Food Chemistry , 81 : 257-262. Saghari,  S.  dan  Baumann,  L.,  2009,  Chapter  19:  Wrinkled Skin  dalam  Baumann,  L. Cosmetic  Dermatology Principle  and  Practice ,  2 nd Edition,  New  York:  Mc Graw Hill.
Sankar,  S.,  Sekar,  S.,  Mohan,  R.,  Rani,  S.,  Sundaraseelan,  J., dan  Sastry,  T.P.,  2007,  Preparation  and  Partial Characterization  of  Collagen  Sheet  from  Fish  ( Lates calcarifer ) Scales, International Journal of
Biological Macromolecules , 42 : 6-9.
Shahiri,  H.T.,  Maghsoudlou,  Y.,  Motamedzadegan,  A., Sadeghi,  A.  R.  M.,  dan  Rostamzad,  H.,  2012,  Study on  Some  Properties  of  Acid-Soluble  Collagens Isolated from Fish Skin and Bones of Rainbow Trout ( Onchorhynchus mykiss ), International Food Research Journal, 19 (1): 251-257.
Sharma,  B.  dan  Sharma,  A.,  2012,  Future  Prospect  of Nanotechnology  in  Development  of  Anti-Ageing
Formulations, International  Journal  of  Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 4 (3): 57-66.
Shoulders, M.D. dan Raines, R.T., 2009, Collagen Structure and  Stability, Annual  Review  of  Biochemistry, 78 : 929-958.
Singh 1 , O., Gupta, S.S., Soni, M., Moses, S., Shukla, S., dan Mathur,  R.K.,  2011,  Collagen  Dressing  Versus Conventional  Dressings  in  Burn  and  Chronic Wounds:  A  Retrospective  Study, Journal  of Cutaneous and Aesthetic Surgery , 4 (1): 12–16. Singh 2 ,  P.,  Benjakul,  S.,  Maqsood,  S.,  dan  Kishimura,  H., 2011,  Isolation  and  Characterization  of  Collagen Extracted  from  The  Skin  of  Striped  Catfish ( Pangasianodon  hypophtalmus ), Food  Chemistry , 124 (1): 97-105.
Triyono,  B.,  2005,  Perbedaan  Tampilan  Kolagen  di  Sekitar Luka Insisi pada Tikus Wistar yang Diberi Infiltrasi Penghilang  Nyeri  Levobupikain  dan  yang  Tidak Diberi Levobupikain, Thesis , Semarang: Universitas Diponegoro.
Tsai, T.C., dan Hantash, B.M., 2008, Cosmeceutical Agents:
A Comprehensive Review of the Literature, Clinical Medicine: Dermatology , 1 : 1-20.
Walters,  H.A.  dan  Roberts,  M.S.,  2008, Dermatologic, Cosmeceutic, and Cosmetic Development: Therapeutic  and  Novel  Approaches ,  New  York: Informa Healthcare USA, Inc.
Wang, B., Wang, Y. M., Chi, C.F., Luo, H. Y., Deng, S.G., dan  Ma,  J.Y.,  2013,  Isolation  and  Characterization of  Collagen  and  Antioxidant  Collagen  Peptides from  Scales  of  Croceine  Croaker  ( Pseudosciaena crocea ), Marine Drugs, 11 : 4641-4661.
Wanjari,  N.  dan  Waghmare,  J.,  2015,  A  Review  on  Latest Trend  of  Cosmetics-Cosmeceuticals, International Journal  of  Pharma  Research  &  Review , 4 (5):  45- 51.
Yamamoto,  K.,  Igawa,  K.,  Sugimoto,  K.,  Yoshizawa,  Y., Yanagiguchi,  K.,  Ikeda,  T.,  Yamada,  S.,  dan Hayashi,  Y.,  2014,  Biological  Safety  of  Fish (Tilapia) Collagen, Hindawi Publishing Corporation,  BioMed  Research  International , Article ID 630757, 9 pages, http://dx.doi.org/10.1155/2014/630757.
Yan,  M.  Y.,  Li,  B.F.,  Zhao,  X.,  Ren,  G.Y.,  Zhuang,  Y.L.,
Hou, H., Zhang, X.K., Chen, L., dan Fan. Y., 2008, Characterization  of  Acid-Soluble  Collagen  From The Skin of Walleye pollock ( Theragra chalcogramma ), Food Chemistry , 107 : 1581-1586. Yunoki, S., Suzuki, T., dan Takai, M., 2003, Stabilization of Low Denaturation Temperature Collagen From Fish by  Physical  Cross-Linking  Methods, Journal  of Bioscience and Bioengineering , 96 (6): 575-577.
Zhu, D., Ortega, C.F., Motamedi, R., Szewciw, L., Vernerey, F.,  dan  Barthelat,  F.,  2011,  Structure  and  Mechanical Performance  of  a  ‘‘Modern’’  Fish  Scale, Advanced Engineering Materials , 13 (XX): B1-B10