## Original Article

## Optimasi  Fosfatidilkolin  dan  Span  80  sebagai  Penyusun Vesikel  Transfersom  Natrium  Diklofenak  menggunakan Design-Expert
Wa Ode Sitti Zubaydah *) , Suryani, dan Nur Janna Kurniawati
Fakultas  Farmasi,  Universitas  Halu  Oleo,  Kampus  Hijau  Bumi  Tridharma,  Anduonohu,  Kec.  Kambu,  Kota Kendari, Sulawesi Tenggara 93232, Indonesia
*Corresponding author: Wa Ode Sitti Zubaydah |Email: woszubaydah@uho.ac.id
Received: 10 September 2022; Revised: 9 November 2022; Accepted: 2 December 2022; Published: 31 December 2022
Abstrak: Natrium diklofenak merupakan golongan NSAID (Non Steroid Anti-Inflammatory Drugs) yang banyak diresepkan  untuk  inflamasi  dan  nyeri.  Namun  dalam  penggunaannya  secara  oral,  natrium  diklofenak mengalami  first  pass  metabolism  di  hati  sehingga  hanya  sekitar  50%  saja  obat  yang  sampai  pada  sirkulasi sistemik  dan  jika  seringkali  diberikan  dengan  dosis  yang  lebih  tinggi  dapat  memperparah  efek  samping  di saluran  pencernaan.  Karena  beberapa  kerugian  diklofenak  pada  penggunaan  oral,  maka  diklofenak dikembangkan ke sistem penghantaran transdermal dalam hal ini nanovesikel transfersom yang  dipilih sebagai alternatif  untuk  mengatasi  permasalahan  tersebut.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memformulasi  vesikel transfersom  natrium  diklofenak  dengan  perbandingan  (4,5%:0,5%),  (4,5%:1%),  (4%:0,5%)  dan  (4%:1%)  agar diperoleh perbandingan formula optimum vesikel transfersom natrium diklofenak dengan basis fosfatidilkolin kedelai  dan  span  80  menggunakan  Design  Expert  dan  untuk  mengetahui  karakteristik  transfersom  natrium diklofenak  berupa  efisiensi  penjerapan,  distribusi  ukuran  partikel  dan  zeta  potensial.  Optimasi  formula transfersom  menggunakan  metode  desain  faktorial  2 2 dengan  faktor  fosfatidilkolin  kedelai  dan  span  80 menggunakan respon efisiensi penjerapan dan ukuran vesikel. Hasil dari penelitian ini yaitu formula optimum dengan  konsentrasi  fosfatidilkolin  kedelai  4,5%  dan  span  80  0,5%  serta  pengujian  karakteristik  vesikel transfersom Natrium diklofenak dengan efisiensi penjerapan 99,56%, distribusi ukuran partikel 160,1 nm dan zeta potensial -57,1 mV.
Keywords: Natrium diklofenak, vesikel transfersom, fosfatidilkolin, span 80, Design Expert

## 1. PENDAHULUAN
Natrium diklofenak  merupakan  golongan NSAID (Non Steroid Anti-Inflammatory Drugs) derivat  sederhana  asam  fenil  asetat.  Sebagai  salah  satu  jenis  obat  NSAID  natrium  diklofenak memiliki efek analgesik, antirematik, antipiretik, dan antiinflamasi [1]. Faktanya, natrium diklofenak rute oral melewati metabolisme lintas pertama di hati  sehingga hanya  sekitar  50%  obat  mencapai sirkulasi sistemik. Metabolisme ekstensif ini adalah alasan mengapa  natrium  diklofenak  memiliki bioavailabilitas  oral  yang  buruk  [2].
Natrium diklofenak untuk pemberian per oral seringkali diberikan dengan dosis yang lebih tinggi sehingga dapat memperparah efek samping di saluran pencernaan. Karena beberapa kerugian
diklofenak pada penggunaan per oral, maka diklofenak dikembangkan ke arah penggunaan topikal sebagai  salah  satu  solusi  alternatif.  Sistem  penghantaran  topikal  ini,  bahan  aktif  tidak  hanya dihantarkan  secaras  transdermal  dengan  nyaman  tetapi  juga  kadar  obat  dalam  aliran  darah dipertahankan  konstan  dalam  waktu  yang  lama,  bioavailabilitas  meningkat,  dan  bila  ada permasalahan,  penghentian  obat  lebih  mudah  dilakukan  dibandingkan  dengan  pemberian  obat melalui rute yang lain [3].
Rute  transdermal  merupakan  penghantaran  obat  melalui  kulit  ke  sistemik  yang  dapat menghindari first pass metabolism, pelepasan obat yang terkontrol, mengurangi efek samping obat, meningkatkan  efek  farmakologi,  menghindari  fluktuasi  kadar  obat,  dan  nyaman  digunakan sehingga dapat meningkatkan kepatuhan pasien [2]. Hambatan terbesar dalam penghantaran rute transdermal  adalah  adanya  lapisan  stratum  korneum  pada  bagian  kulit  terluar.  Lapisan  stratum korneum tersusun secara rapat sehingga sulit ditembus oleh molekul- molekul dari luar. Berbagai pendekatan  dilakukan  untuk  meningkatkan  penetrasi  melewati  stratum korneum  diantaranya dengan  menggunakan  sistem  pembawa  nanovesikel.  Nanovesikel  merupakan  salah  satu  sistem penghantaran  sediaan  transdermal  yang  berbentuk  kantung  dengan  ukuran  nanometer. Nanovesikel terdiri dari liposom, niosom, dan tranfersom [4].
Transfersom adalah suatu vesikel lipid yang memiliki deformabilitas paling baik di antara nanovesikel  lainnya.  Umumnya  transfersom  digunakan  secara  topikal.  Vesikel  ini  terdiri  dari fosfolipid dan edge activator (EA) yang merupakan surfaktan rantai  tunggal. EA adalah bahan yang berperan  dalam  meningkatkan  fleksibilitas  dan  deformabilitas  dari  transfersom  sehingga  dapat dengan mudah melewati stratum korneum [5].
Pada proses formulasi sediaan perlu dilakukan optimasi untuk menentukan formula terbaik dengan  menggunakan  data  hasil  evaluasi  dari  sediaan  yang  dibuat.  Optimasi  dapat  diartikan sebagai  pendekatan  untuk  mendapatkan  kombinasi  terbaik  dari  suatu  produk  atau  karakteristik proses  dibawah  kondisi  tertentu  [6].  Data  parameter-parameter  evaluasi  yang  telah  ditentukan diolah  menggunakan  berbagai  macam  metode.  Pengolahan  data  dapat  dilakukan  lebih  mudah menggunakan software. Salah satu software yang banyak digunakan adalah  Design Expert. Design Expert  menyediakan  beberapa  pilihan  desain  dengan  fungsinya  masing-masing,  salah  satunya adalah  desain  faktorial  untuk  melihat  efek  dan  interaksi  dari  beberapa  faktor  dalam  sebuah penelitian yang berfungsi untuk menemukan formulasi optimal [7].
Dalam  penelitian  ini  akan  dilakukan  formulasi  transfersom  natrium  diklofenak  dalam fosfatidilkolin  sebagai  pembentuk  utama  vesikel  serta  span  80  sebagai  surfaktan  untuk meningkatkan  elastisitas  vesikel  dan  melakukan  uji  karakteristiknya  yang  meliputi  efisiensi penjerapan, ukuran vesikel, distribusi ukuran partikel dan zeta potensial.

## 2. MATERIAL DAN METODE

## 2.1. Bahan
Natrium  Diklofenak  (Fagron  Hellas,  Yunani),  etanol  96%  pro  Analisis  (Merck,  Jerman), fosfatidilkolin  kedelai  (Archer  Daniels  Midland  Company,  USA),  span  80  (Bratachem,  Jakarta), Phosphate  Buffer  Saline  (PBS)  pH  7,4  (Oxoid,  Inggris).  downloaded  from  the  PubChem  database (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov). The 3D structure of all ligands was saved in PDB format.

## 2.1.1. Pembuatan Transfersom
Pembuatan  vesikel  transfersom  dilakukan  dengan  cara  yang  pertama  ditimbang  masing- masing  fosfatidilkolin,  span  80  dan  zat  aktif  natrium  diklofenak,  dengan  perbandingan  masing- masing bahan 4.5:1, 4,5:0.5, 4:1 dan 4:0,5. Kemudian dimasukkan kedalam labu alas bulat yang telah didispersikan dalam etanol. Setelah itu larutan etanol diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu 40°C dan diatur kecepatan putaran bekisar 60-130 rpm hingga terbentuk lapis tipis di dinding labu alas  bulat yang ditandai dengan tidak adanya  aliran  dalam labu.  film  yang  terbentuk dihidrasi dengan larutan dapar fosfat pH 7,4 dan dirotasi dengan  menggunakan shaker  pada kecepatan 60 rpm  selama  1  jam  hingga  vesikel  mengembang.  Vesikel  yang  terbentuk  disonikasi  dengan  bath sonicator pada suhu ruang selama 30 menit dan disaring menggunakan kertas saring membran filter 0,22 mikron. Transfersom yang telah diperoleh disimpan dan dikarakterisasi. Tujuan sonikasi adalah untuk memperoleh ukuran partikel yang lebih kecil dan homogen. Transfersom yang telah diperoleh kemudian diamati stabilitas fisik secara visual.
Tabel I. Variasi Komposisi Transfersom Natrium Diklofenak
Bahan Konsentrasi Fungsi Natrium Diklofenak (mg) 50 Zat aktif Fosfatidilkolin (%) 4-4,5 Pembentuk vesikel Span 80 (%) 0,5-1 Surfaktan Etanol (%) 10 Pelarut Buffer Fosfat PH 7,4 (%) Ad 100 Medium penghidrasi

## 2.2. Karakterisasi Vesikel Transfersom
2.2.1. Efisiensi Penjerapan (%EE)
Jumlah  obat  yang  terjerap  dan  yang  tidak  terjerap  diukur  dengan  menghitung  efisiensi penjerapan. Langkah awal dilakukan proses sentrifugasi selama 50 menit  dengan kecepatan 2000 rpm terhadap masing-masing koloid tranfersome natrium diklofenak. Supernatan yang berwarna jernih  hasil sentrifugasi  dihitung  kadar  obatnya  menggunakan  spektrofotometer  UV-VIS  yang sudah dilakukan validasi (R2 = 0,99; presisi nilai RSD 0,85%, akurasi 99,90%, LOD dan LOQ masing- masing  1,48  dan  4,50  µg/mL).  Efisiensi  penjerapan  (EP)  dinyatakan  dengan  persentase  selisih jumlah  obat  yang  dimasukkan  dalam  sistem  transfersom  dengan  jumlah  obat  bebas  dalam supernatan (Persamaan 1)
%EP = (TD-FD)/TD x 100%
Persamaan 1. EP = Efisiensi Penjerapan; TD = Total senyawa yang terdapat dalam formula; FD = Jumlah senyawa yang terdapat dalam supernatan (tidak terjerap)
2.2.2. Pemeriksaan Bentuk dan Ukuran Vesikel
Pemeriksaan  bentuk  vesikel  transfersom  natrium  diklofenak  dilakukan  dengan  tujuan untuk mengetahui vesikel yang terbentuk. Pemeriksaan bentuk vesikel dilakukan menggunakan alat mikroskop  optik.  Suspensi  transfersom  yang  dihasilkan  diteteskan  pada  kaca  objek  kemudian disebar secara merata agar tidak terjadi penumpukan sampel sehingga memungkinkan pengamatan vesikel  terlihat  jelas.  Pengamatan  dilakukan  dengan  perbesaran  100x  karena  vesikel  transfersom dapat  teramati  secara  jelas  pada  perbesaran  tersebut.  Setelah  itu,  gambar  yang  diperoleh  dari
mikroskop diolah pada software ImageJ dan Microsoft Excel sehingga diperoleh diameter rata-rata ukuran vesikel transfersom   natrium diklofenak.

## 2.2.3. Uji Distribusi Ukuran Partikel
Analisis ini menggunakan PSA (Particle Size Analyzer) dengan type dynamic light scattering. Prinsip  dasar  alat  ini  adalah  sampel  akan  ditembak  dengan  sinar  laser  dan  akan  terjadi penghamburan cahaya. Penghamburan cahaya tersebut akan dideteksi pada sudut tertentu. Larutan aquades digunakan sebagai baseline, kemudian sebanyak 10 mL sampel dimasukkan ke dalam kuvet. Setelah itu, akan terukur partikel globul-globul transfersom dan indeks polidispersitas. Transfersom dengan ukuran <400 nm akan lebih mudah berpenetrasi melewati lapisan kulit.

## 2.2.4. Zeta Potensial
Besarnya  potensial  zeta  suatu  partikel  dapat  digunakan  untuk  prediksi  kestabilan transfersom. Potensial zeta diukur menggunakan  alat  Zeta  Sizer. Suspensi transfersom diencerkan menggunakan  air  denim.  Sebanyak  10  mL  sampel  yang  telah  diencerkan  dimasukkan  secara perlahan-lahan  ke  dalam  kuvet  khusus.  Sampel  dalam  kuvet  harus  dipastikan  bahwa  tidak  ada gelembung. Kuvet dimasukkan ke dalam alat dan diukur zeta potensial. Potensial zeta ditentukan berdasarkan  pergerakan  elektroforesis  yaitu  pergerakan  relatif  partikel  yang  disebabkan  adanya muatan  elektrik.  Potensial  zeta  merupakan  teknik  untuk  menentukan  muatan  permukaan  pada koloid nanovesikel. Nilai potensial zeta suatu nanovesikel yang lebih besar dari +30 mV atau lebih kecil dari -30 mV menunjukan derajat kestabilan yang tinggi.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Transfersom  natrium  diklofenak  dibuat  dengan  menggunakan  metode  hidrasi  lapis  tipis sehingga menghasilkan transfersom yang homogen dan memiliki ukuran partikel yang kecil. Metode ini banyak digunakan dalam pembuatan transfersom karena prosesnya mudah dilakukan dan tidak memakan  waktu  lama.  Transfersom  dibuat  menggunakan  kombinasi  fosfolipid  dengan  surfaktan dalam 4 perbandingan konsentrasi yang berbeda, dengan rasio perbandingan fosfatidilkolin:span 80 untuk F1, F2, F3 dan F4 berturut turut adalah 4.5:1, 4.5:0.5, 4:1 dan 4:0.5. Visual transfersom natrium diklofenak dalam beberapa perbandingan komposisi fosfatidilkolin dan span 80 dapat dilihat pada gambar 1 berikut.

## Gambar  1.  Transfersom  Natrium  Diklofenak  dengan  Variasi  Perbandingan  Konsentrasi
Fosfatidilkolin dan Span 80 : F1 (4,5:0,5); F2 (4,5:1); F3 (4,5:0,5); F4 (4,5:1)
Persentase  efisiensi  penjerapan  menyatakan  banyaknya  jumlah  zat  aktif  yang dienkapsulasi dalam sistem transfersom. Adapun nilai efisiensi penjerapan yang baik  berkisar 80- 100% [8]. Pada penelitian ini suspensi transfersom yang telah disentrifugasi mengalami pemisahan antara komponen sedimen vesikel yang menjerap zat aktif natrium diklofenak dengan supernatan
F1 F2 F3 F4
yang  mengandung  zat  aktif  yang  tidak  terjerap.  Dalam  perhitungan  penentuan  %EE  digunakan kadar  zat  aktif  natrium  diklofenak  dalam  supenatan  sehingga  dapat  diketahui jumlah obat yang terjerap. Hasil uji efisiensi penjerapan dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2.    Persen Efisiensi Penjerapan
Formula  Fosfatidilkolin:Span 80  Efisiensi Penjerapan (%) 1 4,5:1 99,46 ± 0,01 2 4,5:0,5 99,52 ± 0,02 3 4:1 99,13 ± 0,10 4 4:0,5 99,32 ± 0,03
Hasil  pengukuran  efisiensi  penjerapan  transfersom  natrium  diklofenak  dalam penelitian  ini  hampir  mendekati  100%  yang  berada  pada  rentang  99,13- 99,52%.  Formula  yang mendapatkan  efisiensi  paling  tinggi  didapatkan  pada formula  2,  sedangkan  yang  paling  rendah didapatkan  pada  formula  3.  Efisiensi penjerapan  yang tinggi ini  dipengaruhi oleh  perbandingan konsentrasi  yang  tepat dari  fosfatidilkolin  dan  span  80.  Peningkatan  konsentrasi  fosfatidilkolin memungkinkan  meningkatkan  jumlah  vesikel  yang  terbentuk  sehingga  kapasitas obat  yang dapat  terjerap  menjadi  lebih  besar.  serta  dengan  banyaknya  jumlah konsentrasi  span  80 memungkinkan  meningkatkan  efisiensi  penjerapan  dan peningkatan  kelarutan  obat  yang  ada dalam transfersom [2].   Rasio penggunaan  fosfolipid  dan  span  80  sangat  mempengaruhi  efisiensi penjerapan transfersom  yang  dihasilkan.  Efisiensi  penjerapan  dapat  menurun  seiring  dengan penambahan jumlah konsentrasi surfaktan yang melebihi batas [9]. Secara umum, telah   dilaporkan bahwa  efisiensi  penjerapan  dapat  menurun  karena  adanya  konsentrasi             surfaktan  yang  lebih tinggi.  Hal  ini  terjadi  karena  hasil  dari  peningkatan permeabilitas  membran  vesikel  karena susunan  molekul  surfaktan  dalam  struktur bilayer  lipid  vesikular,  yang  dapat  menghasilkan pori-pori  di  dalam  membran vesikular dan menyebabkan peningkatan fluiditas dan mendorong kebocoran  obat  yang  terperangkap  [10].  Selain  itu,  berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Rachim  dkk  (2012)  yang  telah  berhasil  memformulasikan  transfersom  menyatakan  bahwa transfersom  dengan  surfaktan  span  80  yang  memiliki  nilai  HLB  rendah  dapat  mempengaruhi efisiensi penjerapan. Semakin rendah nilai HLB dari surfaktan maka semakin tinggi pula lipofilisitas dari surfaktan span 80 yang akan memfasilitasi interaksinya dengan lipid bilayer yang mengarah pada peningkatan efisiensi penjerapan obat. Pada proses formulasi perlu dilakukan optimasi untuk menentukan formula terbaik dengan menggunakan data hasil evaluasi dari sediaan yang dibuat.
Pengujian  ukuran  vesikel  transfersom  natrium  diklofenak  dilakukan  dengan menggunakan  mikroskop  cahaya  dengan  perbesaran  100  kali.  Hasil  dari  mikroskop kemudian diolah di software Image-J versi 2022. Image-J adalah software pengolahan gambar digital berbasis Java yang  dibuat  oleh  Wayne  Rasband  dari  Research  Services  Branch,  National  Institute  of  Mental Health,  Bethesda,  Maryland,  USA.  Penggunaan  ImageJ  dalam  analisis  gambar  digital  telah digunakan secara luas dalam bidang kesehatan dan biologi. Hasil pengukuran ukuran vesikel dapat dilihat pada Gambar 2 dan Tabel 3.
Gambar 2. Hasil Pengamatan Vesikel Transfersom Natrium Diklofenak Menggunakan Mikroskop
Tabel 3. Hasil Pengukuran Vesikel Transferosom Natrium Diklofenak
Formula Fosfatidilkolin:Span 80 Ukuran Vesikel Transfersom (nm) 1 4,5:1 350,71 ± 14,06 2 4,5:0,5 137,21 ± 13,02 3 4:1 243,16 ± 10,49 4 4:0,5 289,44 ± 15,14
Pada Tabel 3 menunjukkan bahwa perbandingan jumlah penggunaan    fosfatidilkolin : span 80 memiliki pengaruh terhadap ukuran partikel yang dihasilkan. Hasil rata-rata ukuran vesikel yang paling kecil didapatkan pada formula 2 dan rata- rata  ukuran  vesikel  yang  paling  besar  diperoleh pada formula 4. Hasil ini menunjukan bahwa semakin tinggi konsentrasi fosfatidilkolin dan span 80 akan  menghasilkan  ukuran  vesikel  yang  besar.  Peningkatan  jumlah  surfaktan  dapat  membentuk dispersi  transfersom  dengan  ukuran  partikel  yang  lebih  besar.  Ketika  konsentrasi  surfaktan ditingkatkan,  ukuran  vesikel  meningkat  secara  substansial.  Hal  ini  disebabkan  pembentukan struktur  misel  bukan  vesikel.  Konsentrasi  yang  terlalu  tinggi  dapat  menyebabkan  transfersom kehilangan struktur vesikelnya karena pembentukan misel yang berlebihan [9].
Konsentrasi surfaktan yang lebih tinggi akan meningkatkan pembentukan jumlah  vesikel [10].  Peningkatan  konsentrasi  fosfatidilkolin  dilaporkan  dapat  menurunkan  ukuran  vesikel. Kemampuan surfaktan dalam memperkecil ukuran partikel ini meningkatkan proses perpindahan surfaktan dari lingkungan yang lipofil ke lingkungan air sehingga terbentuk sistem nanoemulsi [11]. Pada  peningkatan  konsentrasi  fosfatidilkolin  menghasilkan  enkapsulasi  obat  yang  tinggi  dan ukuran vesikel yang lebih kecil dibandingkan dengan konsentrasi rendah, hal ini dipengaruhi oleh span  80  yang  memiliki  sisi  aktif  pada  permukaannya  dan  bergabung  secara  tegak  lurus  ke permukaan  membran  lipid  bilayer  yang  akan  mengganggu  rantai  asil  dari  matriks  lipid  pada fosfatidilkolin  dan  menghasilkan  peningkatan kelarutan obat serta merenggangnya ukuran vesikel menjadi lebih kecil yang berguna memfasilitasi penetrasi ke dalam lapisan ganda lipid [12].
Optimasi formula dilakukan dengan menggunakan perangkat lunak Design-Expert. Metode optimasi yang dipilih adalah desain faktorial 2 2 (2 faktor yaitu fosfatidilkolin dan span 80) serta 2 respon yaitu efisiensi penjerapan dan ukuran vesikel yang memungkinkan untuk menentukan suatu formula  optimum  dari  vesikel  transfersom  dan  digunakan  untuk  mengetahui  area  optimum  dari
F1 F2
F3
F4
komposisi kombinasi basis transfersom yaitu fosfatidilkolin dan span 80. Variabel bebas dimasukkan beserta batas atas dan bawah dari masing-masing variabel, yaitu fosfatidilkolin (4-4,5%) dan span 80 (0,5-1%). Selain itu dimasukkan respon  yang  diinginkan,  yaitu  efisiensi  penjerapan  dan  ukuran partikel.   Nilai  persentase  batas  atas  dan  batas  bawah  dimasukan  ke  dalam  software  dan  akan mengeluarkan 12 run formula. Selanjutnya akan dibuat sediaan sebanyak 12 formula dari hasil run formula  yang  selanjutnya  akan  dievaluasi  respon  yang  meliputi  efisiensi  penjerapan  dan  ukuran partikel. Tujuan digunakan 2 respon terhadap 12 run formula berdasarkan Design Expert yaitu karena efisiensi  penjerapan  dan  ukuran  partikel  dapat  berpengaruh  terhadap  karakteristik  transfersom yang baik. Hasil run 12 formula yang telah dilakukan evaluasi respon akan di optimasi  lagi dengan memasukkan data respon kemudian dilakukan analisis sehingga Design Expert akan mengeluarkan 1 formula optimal. Hasil respon yang diperoleh untuk menentukan daerah optimum dengan metode desain faktorial dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel  4.  Hasil  Pengukuran  Respon  Efisiensi  Penjerapan  dan  Ukuran  Vesikel  Sebagai  Penentu  Formula Optimum
Run Faktor Respon A:Fosfatidilkolin (%) B: Span 80 (%) Efisiensi Penjerapan (%) Ukuran Vesikel (nm) 1 4 1 99,2356 337,592 2 4,5 1 99,4732 246,545 3 4,5 1 99,4321 224,505 4 4,5 0,5 99,5227 134,196 5 4,5 1 99,4561 258,455 6 4 1 99,0065 371,931 7 4 0,5 99,3227 276,864 8 4,5 0,5 99,4937 123,013 9 4,5 0,5 99,5552 154,460 10 4 1 99,0338 342,621 11 4 0,5 99,3535 302,545 12 4 0,5 99,2629 288,925
Formula yang paling optimum dapat ditentukan dengan nilai desirability maksimum. Nilai desirability  merupakan  nilai  fungsi  untuk  tujuan  optimasi  yang  menunjukkan  kemampuan program  untuk  memenuhi  keinginan  berdasarkan  kriteria  yang  ditetapkan  pada  produk  akhir. Nilai  desirability  yang  semakin  mendekati  nilai  1,0  menunjukkan  kemampuan  program  untuk menghasilkan  produk  yang  dikehendaki  semakin  sempurna  [7].  Pada  hasil  pengaplikasiannya Design  Expert  mengeluarkan  5  formula  dimana  dari  5  formula  tersebut  yang menjadi  formula terpilih yang mendekati nilai 1,0 yaitu formula pertama dengan nilai desirabilitynya 0.876 dapat dilihat Tabel 5.
Tabel 5. Solusi Formula 1-12 Berdasarkan Nilai Desirability
Fosfatidilkolin Span 80 Efisiensi Penjerapan Ukuran Vesikel Desirability 4,500 0,500 99,524 137,219 0,876 Selected 4,498 0,500 99,523 137,837 0,874 4,500 0,509 99,523 139,090 0,870 4,500 0,513 99,522 139,971 0,867 4,500 0,515 99,522 140,369 0,865
Formula  optimal  juga  dapat  dilihat  dari  hasil  Contour  plot    yang  dihasilkan  oleh  Design Expert yang dapat dilihat pada gambar 3 dan gambar 4 ntuk melihat apakah ada interaksi yang terjadi  perlu  dilakukan  analisis  terhadap  Contour  plot  .  Contour  plot    akan  menunjukan  suatu respon yang akan berubah tergantung pada level dari faktor yang ditetapkan.

## Gambar 3.    Grafik Contour Plot Efisiensi Penjerapan Vesikel Transferosom Natrium Diklofenak
Contour plot    pada Gambar 3. terdapat warna hijau hingga jingga pada faktor fosfatidilkolin yang berarti bahwa semakin tinggi konsentrasi fosfatidilkolin maka akan meningkatkan efisiensi penjerapan obat dari transfersom dan pada faktor span 80 ditunjukkan dengan gambar berwarna hijau  hingga  biru  yang  berarti  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  span  80  akan  menurunkan efisiensi  penjerapan  obat  dari  transfersom.  Interaksi  ini  memang  diharapkan  terjadi  untuk mendapatkan sifat fisik optimum yang dikehendaki. Pada diagram Contour plot    di atas terlihat bahwa formula yang terpilih sebagai formula optimum menurut software adalah formula yang memiliki  gradasi  warna  merah  dan  hijau  yaitu  fosfatidilkolin  4,5%  dan  span  80  0,5%,  dengan efisiensi penjerapan obat yang diinginkan yang paling besar.
Efisiensi  penjerapan  dalam  transfersom  tergantung  pada  konsentrasi  surfaktan  dalam
bilayer.  Awalnya,  dengan  meningkatkan  konsentrasi  surfaktan,  ada  peningkatan  efisiensi penjerapan. Namun, setelah tingkat ambang batas konsentrasi surfaktan, peningkatan surfaktan lebih  lanjut  menyebabkan  penurunan  efisiensi  jebakan.  Hal  ini  mungkin  disebabkan  oleh  fakta bahwa pada konsentrasi tertentu, molekul surfaktan berasosiasi dengan lapisan ganda fosfolipid, menghasilkan partisi obat yang lebih baik. Jadi di atas konsentrasi 0,5% dari surfaktan, molekul dapat  mulai  membentuk  misel  dalam  bilayer  yang  mengakibatkan  pembentukan  pori  pada membran  vesikel  dan  konversi  lengkap  membran  vesikel  menjadi  misel  campuran.  Misel campuran ini dilaporkan memiliki daya dukung obat yang lebih rendah dan permeasi kulit yang buruk [13].

## Gambar 4. Grafik Contour Plot Ukuran Vesikel Transferosom Natrium Diklofenak
Grafik  Contour  plot  pada  Gambar  4  mendeskripsikan  adanya  interaksi  antara  dua  faktor terhadap besarnya ukuran partikel, hal ini ditandai dengan gambar berwarna hijau hingga  biru yang  berarti  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  fosfatidilkolin  maka  akan  akan  menurunkan ukuran vesikel transfersom dan span 80 ditandai dengan gambar warna hijau hingga jingga yang berarti bahwa semakin tinggi konsentrasi span 80 akan meningkatkan ukuran partikel        transfersom natrium  diklofenak.  Interaksi  ini  memang  diharapkan  terjadi  untuk  mendapatkan  sifat  fisik optimum yang dikehendaki. Pada diagram Contour plot di atas terlihat bahwa formula yang terpilih sebagai formula optimum menurut software adalah formula yang memiliki gradasi warna biru dan hijau yaitu fosfatidilkolin 4,5% dan span 80 0,5% dengan ukuran partikel yang diinginkan yaitu yang paling kecil.
Deformabilitas  transfersom  tergantung  pada  komposisi  edge  activator  yang  digunakan. Aktivator tepi adalah komponen pelembut bilayer, seperti surfaktan biokompatibel yang berfungsi meningkatkan fleksibilitas dan permeabilitas bilayer lipid. Konsentrasi span 80 yang terlalu tinggi dapat menyebabkan transfersom kehilangan struktur vesikelnya karena pembentukan misel yang
berlebihan  [14].  Peningkatan  jumlah  surfaktan  dapat  membentuk  dispersi  transfersom  dengan ukuran  partikel  yang  lebih  besar.  Ketika  konsentrasi  surfaktan  ditingkatkan,  ukuran  vesikel meningkat  secara  substansial.  Hal  ini  disebabkan  pembentukan  struktur  misel  bukan  vesikel. Konsentrasi yang terlalu tinggi dapat menyebabkan transfersom kehilangan struktur vesikelnya karena pembentukan misel yang berlebihan [13].
Hasil karakterisasi morfologi vesikel dan persen efisiensi penjerapan menunjukkan bahwa F2 dengan perbandingan 4,5:0,5 merupakan formula optimum pada formulasi transfersom natrium diklofenak,  sehingga  F2  dapat  dilanjutkan  pada  karakterisasi  ukuran  distribusi  partikel  serta indeks polidispersitas  menggunakan  instrumen  Particle  Size  Analyzer  dan  Zeta  Sizer.  Data  yang didapatkan untuk ukuran distribusi partikel yaitu 160,7 nm dengan nilai polidispersitas 0,253 dan nilai zeta potensialnya yaitu -57,1 mV.
Hasil  pengukuran  yang  dilakukan  menunjukan  bahwa  vesikel  transfersom  natrium diklofenak telah memenuhi syarat bentuk dan ukuran transfersom yaitu termasuk dalam kategori vesikel besar lapis tunggal atau Large Unillameral Vesicle (LUV) dengan rentang ukuran vesikel 100- 400  nm.  Transfersome  dengan  ukuran  lebih  kecil  dari  400  nm  akan  lebih  mudah  berpenetrasi melewati  lapisan  kulit  [15].  Indeks  polidispersitas  berfungsi  untuk menentukan kestabilan fisik suatu sistem dispersi. Nilai polidispersitas <0,5 memiliki rentang distribusi dan ukuran yang homogen  yang  menunjukan  vesikel  yang  homogen  dengan  stabilitas  fisik  yang  tinggi.  Semakin dekat  nilai  indeks  polidispersitas  dengan  0,  maka  semakin  homogen  ukuran  vesikel  [2].  Zeta potensial  adalah  perbedaan  potensial  antara  lapisan  permukaan  partikel.  Pada  permukaan partikel,  muatan  listrik  yang  tinggi  akan  mencegah  terjadinya  agregasi  dari  nanopartikel dikarenakan gaya tolak antar partikel yang kuat dapat mencegah adanya agregasi antar partikel [16].  Nilai  potensial  zeta  suspensi  transfersom  yang  dikatakan  stabil  adalah  nilai  potensial  zeta yang menjauhi titik isoelektrik yaitu 0 dan berada lebih besar dari +30 mV atau lebih kecil dari -30 mV [15]. Nilai potensial zeta yang negatif dikarenakan komponen fosfatidilkolin yang digunakan fosfatidilkolin  kedelai  merupakan  komponen  zwitterionic  dengan  titik  isoelektrik  diantara  6-7, sedangkan media hidrasi yang yang digunakan adalah pH 7,4. Pada kondisi pH lebih tinggi dari titik isoelektrik, fosfatidilkolin kedelai memiliki muatan negatif [2].

## 4. KESIMPULAN
Formulasi optimum transfersom dengan perbandingan fosfatidilkolin dan span 80 sebesar 4,5:0,5 menghasilkan transfersom dengan karakter vesikel optimum yakni ukuran partikel  160,7 nm, zeta potensial -57,1 mV dan zeta potensial -57,1 mV.

## References
1. Pradita,  T.  I.  dan  Rejeki,  S.  Uji  Daya  Antiinflamasi  Ekstrak  Etanol  Daun  Mangkokan (Nothopanax Scutellarium Merr.) pada Mencit  Yang Diinduksi  Karagenin.  Indonesian  Journal  on Medical Science, Vol. 9(1), 27-32, 2022.
2. Nurmahliati,  H.;  Widodo,  F.,  dan  Puspita,  O.E.  Effect  of  Soy  Lecithin  and  Sodium  Cholate Concentration  on  Characterization  Pterostilbene  Transfersomes.  Pharmaceutical  Journal  of Indonesia, Vol. 005(02), 109–115, 2020.
3. Purwanti,  T.;  Erawati,  T.,  Rosita,  N.,  Suyuti,  A.,  dan  Chilmi,  U.  Pelepasan  Dan  Penetrasi Natrium Diklofenak Sistem Niosom Span 60 Dalam Basis Gel HPMC 4000. PharmaScientia, Vol. 2(1), 1–12, 2013.
4. Walve  J.R.;  Bakliwal  S.R.,  Rane  B.R.,  Pawar  S.P.  Transfersomes:  A  Surrogated  Carrier  for Transdermal Drug Delivery System," Int J Appl Bio Pharm Technol, Vol. 2, 201-14, 2011.
5. Ramadon, D. dan Mun’im, A. Pemanfaatan Nanoteknologi dalam Sistem Penghantaran Obat Baru untuk Produk Bahan Alam (Utilization of Nanotechnology in Drug Delivery System for Natural Products). Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia , Vol. 14(2), 118–127, 2017.
6. Singh B. S.; Kapil R, Ahuja N. Systematic Optimisation of Drug Delivery Systems: An Insight. The Pharma Review, Vol. 7, 146–186, 2009.
7. Ramadon  D.;  Goldie  A.W.,  dan  Effionora  A.  Novel  Transdermal  Ethosomal  Gel  Containing Green Tea (Camellia sinensis L. Kuntze) Leaves Extract: Formulation and In vitro  Penetration Study. Journal Young Pharm, Vol.9(3), 24-27, 2017.
8. Indalifiany,  A.;  Malaka,  M.  .,  Sahidin,  Fristiohady,  A.,  dan  Andriani,  R.  Formulasi  dan  Uji Stabilitas Fisik Nanoemulgel Esktrak Etanol Spons Petrosia Sp. Jurnal Farmasi Sains dan Praktis, Vol.7(3), 321–331, 2021.
9. Patel, R.; Singh, S. K., Singh, S., Sheth, N. R., dan Gendle, R. Development and Characterization of Curcumin Loaded Transfersome for Transdermal Delivery. Journal of pharmaceutical sciences and research, Vol. 1(4), 71-80, 2009.
10. Opatha,  S.  A.  T.;  Titapiwatanakun,  V.,  dan  Chutoprapat,  R.  Transfersomes:  A  Promising Nanoencapsulation Technique  for Transdermal Drug Delivery. Pharmaceutics, Vol.  12(9), 855, 2020.
11. Kuncahyo I.; Juniar KR dan M. Muchalal. Pengaruh Perbandingan Tween 80   dan Fosfatidilkolin Pada  Formulasi  Transfersom  Naringenin  dan  Kajian  Permeasi  Berbasis  Hidrogel.  Journal  of Pharmaceutical Science and Clinical Research, Vol. 3 (1), 327-338, 2021.
12. Sun J.; Deng Y., Wang S., Cao J dan Gak J. Liposomes Incorporating Sodium        Deoxycholate  for Hexamethylmelamine  (HMM)  Oral  Delivery:  Development,  Characterization,  And  In  Vivo Evaluation. Journal Drug Delivery, Vol. 17(3), 164-170, 2010.
13. Gupta, A.; Aggarwal, G., Singla, S., dan Arora, R. Transfersomes: A Novel Vesicular Carrier for Enhanced  Transdermal  Delivery  of  Sertraline:  Development,  Characterization,  And Performance Evaluation. Scientia Pharmaceutica, Vol. 80(4), 1061-1080, 2012.
14. Dalimunthe,  I.  G.,  dan  Syahputra,  R.  Edge  Activator:  Effect  of  Concentration  Variation  of Tween  80  on  Characteristics  and  Rate  of  Difusion  Transfersome  Sodium  Diclofenac.  Journal Syifa Sciences and Clinical Research, Vol. 3(2), 78–86, 2021.
15. Ratnasari,  D.,  dan  Anwar,  E.  Karakterisasi  Nanovesikel  Transfersom  Sebagai  Pembawa “Rutin”  Dalam  Pengembangan  Sediaan  Transdermal.  Jurnal  Farmamedika  (Pharmamedica Journal), Vol. 1(1), 12–18, 2016.
16. Rachim, P. F.; Mirta, E. L., dan Thoha, M. Y. Pembuatan Surfaktan Natrium Lignosulfonat Dari Tandan Kosong Kelapa Sawit Dengan Sulfonasi Langsung. Jurnal Teknik Kimia, Vol. 18(1), 41– 46, 2012.
© 2022 by the authors. Submitted for possible open access publication under the terms and  conditions  of  the  Creative  Commons  Attribution  (CC  BY)  license (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).