## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK TERIPANG
Holothuria edulis YANG DIPEROLEH DARI TELUK MANADO
Edyson S. Manoppo 1) , defny S. Wewengkang 1) , Novel Kojong 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Indonesia’s marine waters have a very high diversity of marine biota which can be utilized to support  human  life.  Sea  cucumber  is  one  of  the  many  organisms  which  can  be  used  as  a  source  of marine  bioactive  compounds.  This  study  aims  to  determine  the  antibacterial  activity  of  the  extracts and the fractions of sea cucumber Holothuria edulis from manado bay from bacteria Staphylococcus aureus and Escherichia coli. Samples were extracted by maceration using ethanol and Fractionation using  methanol,  n-hexane,  and  chloroform,  respectively.  Antibacterial  activity  was  performed  using agar  diffusion  method  (disk  diffusion  kirby  and  Bauer).  The  results  showed  that  sea  cucumber Holothuria  edulis  obtained  from  bay  manado  has  activity  of  inhibition  zone  against  bacteria Staphylococcus aureus and Escherichia coli.
Keywords  : activity  of  inhibition  zone,  Sea  cucumber,  Holothuria  edulis,  Staphylococcus  aureus, Escherichia coli

## ABSTRAK
Perairan  laut  Indonesia  memiliki  keanekaragaman  biota  laut  sangat  tinggi  yang  dapat dimanfaatkan  untuk  kehidupan.  Teripang  merupakan  salah  satu  biota  yang  dapat  dijadikan  sebagai sumber  senyawa  bioaktif  dari  laut.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  adanya  aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  dan  fraksi  teripang Holothuria  edulis yang  diperoleh  dari  teluk  Manado terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Sampel diekstraksi secara maserasi dan fraksinasi  menggunakan  pelarut  etanol,  metanol,  n-heksan,  dan  kloroform.  Aktivitas  antibakteri dilakukan  menggunakan  metode  difusi  agar  ( disc  diffusion  Kirby  and  Bauer) .  Hasil  penelitian menunjukan  teripang Holothuria  edulis yang  diperoleh  dari  Teluk  Manado,  memiliki  aktivitas  zona hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan bakteri Escherichia coli.
Kata  kunci :  Aktivitas  Zona  Hambat,  Teripang  Holothuria  edulis,  Staphylococcus  aureus, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Indonesia
merupakan negara kepulauan  dengan  dua  pertiga  wilayahnya adalah  lautan.  Selain  diberikan  gelar sebagai  negara  bahari,  posisinya  yang strategis  yaitu  wilayah  tropis  menjadikan Indonesia  juga  dikenal  sebagai  negara yang  kaya  akan  keragaman  hayati. Hamparan laut yang sangat luas merupakan  potensi  sekaligus  tantangan bagi  bangsa  Indonesia  untuk  dapat mengembangkan sumber daya perairannya (Arini, 2013).
Perairan  laut  Indonesia  memiliki keanekaragaman  biota  laut  sangat  tinggi yang dapat dimanfaatkan untuk kehidupan. Pemanfaatan  biota  laut  saat  ini,  bukan hanya sekadar untuk konsumtif saja, tetapi mengarah  kepada  penelitian  yang  lebih maju, seperti penemuan obat-obatan berbahan  dasar  biota  laut  (Rasyid,  2008). Salah  satu  biota  laut  yang  berpotensi menghasilkan senyawa bioaktif yang dapat digunakan sebagai bahan baku obat-obatan adalah teripang (Albuntana dkk., 2011).
Teripang
merupakan hewan invertebrata  yang  memiliki  tubuh  yang lunak,  berdaging  dan  berbentuk  silindris memanjang seperti ketimun. Bentuk tersebut  menyerupai  mentimun  sehingga teripang  dikenal  dengan  nama  mentimun laut  ( sea  cucumber ).  Teripang  memiliki potensi  ekonomi  yang  cukup  tinggi sebagai bahan makanan dengan kandungan gizi  dan  protein  yang  juga  cukup  tinggi. Teripang dapat ditemukan hampir diseluruh  perairan  pantai,  mulai  dari daerah  pasang  surut  yang  dangkal  sampai perairan yang dalam (Martoyo dkk., 2006).
Bermula dengan pengetahuan masyarakat  nelayan  bahwa  teripang  laut dapat  mempercepat  penyembuhan  luka akibat  terkena  kail,  penelitian  mengenai
khasiat  teripang  laut  semakin  banyak dilakukan dan semakin berkembang (Farouk  dkk.  2007).  Menurut  Matranga (2005)  teripang  sudah  ratusan  tahun digunakan  sebagai  obat-obatan  di  Cina yang  diyakini  mampu  menyembuhkan berbagai jenis penyakit.
Efek penyembuhan
tersebut mungkin disebabkan senyawa bioaktif yang terdapat pada tubuh teripang seperti saponin (Dyck dkk.,  2010).  Senyawa  saponin  yang terkandung dalam teripang dapat berpotensi  sebagai  antibakteri  (Bordbar dkk., 2011).
Meningkatnya  penggunaan  antibiotik dalam  mengatasi  berbagai  penyakit  yang disebabkan oleh bakteri mulai menimbulkan  masalah  baru,  terutama karena  sebagian  besar  bahan  antibakteri yang  digunakan  merupakan  zat  kimia berbahaya  dan  sifatnya  tidak  aman  bagi kesehatan  (Nimah  dkk.,  2012).  Sampai saat  ini  penanggulangan  penyakit  yang disebabkan oleh bakteri masih mengandalkan  antibiotik  sintetik.  Hal  ini menimbulkan  kekuatiran  akan  munculnya strain  bakteri  baru  yang  resisten  terhadap antibiotik (Tirtodiharjo, 2011).

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  November  2016  sampai  dengan Maret
2017 di Laboratorium Farmakognosi  dan  Fitokimia  Program Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam Ratulangi, dan Laboratorium Mikrobiologi
Program Studi Farmasi Fakultas
Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam
Universitas Sam Ratulangi.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu masker, sarung tangan, gunting,  snorkel,  fins,  kantong  plastik,
kamera,  wadah  kaca,  pisau,  Erlenmeyer, corong,  rotary  evaporator,  timbangan analitik,  corong  pisah,  gelas  ukur,  gelas kimia,  cawan  petri,  autoklaf,  pinset, pembakar  spritus,  magnetic  stirrer,  pipet tetes,  mikro  tub,  batang  pengaduk, Laminar  air  flow,  rak  tabung  reaksi, tabung reaksi, lemari pendingin, inkubator, cakram (paper disc), eksikator, mikropipet, jangka sorong, vial, pot salep.
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu teripang Holothuria  edulis .  bakteri  uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli ,  etanol,  akuades,  metanol,  n-heksan, kloroform,  nutrient  broth,  nutrien  agar, siprofloksasin  paper  disc,  label,  spidol permanen,  tissue,  aluminium  foil,  kertas saring, kapas, kertas pH.

## Pengambilan Sampel
Sampel  teripang  diambil dari perairan  pantai  malalayang  menggunakan alat  bantu  (masker,  snorkel  dan  fins). Sampel  difoto  dan  di  ambil,  lalu dimasukkan  ke  dalam  kantong  plastik, kemudian langsung dibawa ke Laboratorium Fitokimia dan Farmakognosi Program  Studi  Farmasi  Universitas  Sam Ratulangi.  Kemudian  sampel  rajang  atau dipotong  kecil-kecil,  dimasukan  dalam botol  lalu  langsung  diekstraksi  dengan metode  maserasi  dengan  etanol  96%. Sebagian dari sampel disimpan dalam vial untuk  diawetkan  sebagai voucher dan diberi  label  serta  nomor  sampel,  untuk selanjutnya dideterminasi.

## Pembuatan Ekstrak
Ekstrak  teripang Holothuria  edulis sebanyak  182,7  g  dibuat  dengan  cara maserasi.  Sampel  dipotong  kecil-kecil dimasukkan  ke  dalam  botol,  kemudian direndam  dengan  pelarut  etanol  96% sampai sampel terendam semuanya, dan di biarkan  selama  24  jam.  Sampel  yang
direndam  disaring  menggunakan  kertas saring menghasilkan filtrat 1 dan debris 1. Debris  1  kemudian  direndam  dengan pelarut etanol 96%  sampai  sampel terendam  semuanya  dan  dibiarkan  selama 24 jam, sampel tersebut disaring menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2  kemudian direndam  dengan  pelarut  etanol  96% sampai  sampel  terendam  semuanya  dan dibiarkan  selama  24  jam,  sampel  tersebut disaring menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 3 dan debris 3. Filtrat 1,  2,  dan  3  dicampur  menjadi  satu kemudian disaring, lalu dievaporasi menggunakan  rotary  evaporator  hingga kering dan selanjutnya ditimbang menggunakan timbangan analitik, diperoleh  ekstrak  etanol  sampel  sebanyak 4,7484  g.  Selanjutnya  ekstrak  kasar teripang  digunakan  dalam  fraksinasi  dan pengujian antibakteri.

## Pembuatan Fraksinasi
Sebanyak  3,00  g  dimasukkan kedalam  erlenmeyer,  kemudian  dilarutkan dengan  metanol  80%  sebanyak  100  ml. Setelah  larut,  dimasukan  kedalam  corong pisah  dan  ditambahkan  pelarut  n-heksan sebanyak 100 ml setelah itu dikocok dalam corong  pisah  sampai  homogen.  Dibiarkan hingga  terbentuk  lapisan  metanol  dan lapisan  n-heksan.  Masing-masing  lapisan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda.
Lapisan  n-heksan  selanjutnya  dievaporasi menggunakan  rotary  evaporator  hingga kering, lalu ditimbang. Selanjutnya lapisan metanol  ditambahkan  akuades  100  mL kemudian dipartisi dengan pelarut kloroform  dengan  perbandingan  1:1  v/v setelah  itu  dikocok  dalam  corong  pisah sampai homogen. Dibiarkan hingga terbentuk  dua  lapisan  yaitu  lapisan metanol  dan  lapisan  kloroform.  Masing-
masing  lapisan  ditampung  dalam  wadah yang berbeda.
Lapisan kloroform selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary  evaporator  hingga  kering  lalu ditimbang dan hasil inilah yang dinamakan fraksi  kloroform.  Ketiga  fraksi  yang diperoleh akan digunakan dalam pengujian antibakteri.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian aktivitas antibakteri ini distrerilkan terlebih dahulu. Alat-alat gelas disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit, pinset dibakar dengan pembakaran diatas api langsung dan media disterilkan  diautoklaf  pada  suhu  121  ºC selama 15 menit.

## Pembuatan Media Cair B1
Nutrient broth  0,26 g dan aquadest sebanyak  20  mL  diaduk  sampai  rata kemudian  dibuat  homogen  menggunakan magnetic  stirrer  lalu  diautoklaf  pada  suhu 121˚C  selama  15  menit,  ukur  pH  dengan menggunakan  kertas  pH.  Dipipet  1  mL media cair B1, kemudian masukkan dalam tabung reaksi dan tutup dengan aluminium foil. Media cair B1 siap digunakan sebagai media kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Uji B1
Nutrien  agar  2,8  g  dan  akuades sebanyak  100  mL  diaduk  sampai  rata kemudian disterilkan diautoklaf pada suhu 121˚C  selama  15  menit,  kemudian didinginkan  sampai  suhu  40˚C.  setelah dingin  dipindahkan  pada  cawan  petri (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Negatif
Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  menggunakan metanol,  dengan  cara  membuat  larutan stok metanol dengan mengambil sebanyak 200 μL metanol kemudian di totolkan pada
paper  disc .  Kontrol  negatif  digunakan
sebagai  pembanding  dan  pelarut  untuk pembuatan  larutan  kontrol  positif  dan pembuatan larutan uji.

## Pembuatan Larutan uji
Dibuat  larutan  uji  dengan  cara ditimbang  ekstrak  kasar  karang  lunak sebanyak  1  mg,  kemudian  dilarutkan dalam  200  μL  sehingga  menghasilkan konsentrasi  larutan  uji  sebesar  250  μg/50 μL.  Perlakuan  yang  sama  dilakukan  pada fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  dan fraksi metanol (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri
Bakteri  yang  akan  digunakan  yaitu Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli. Media  cair  B1  yang  sudah  disiapkan sebelumnya, ditambahkan dengan masing- masing  bakteri  yang  sudah  dikultur  ( S. aureus dan E.  coli )  sebanyak  100  µL  ke dalam  tabung  reaksi  yang  berbeda.  Tutup dengan  aluminium  foil  tiap  tabung  reaksi dan dimasukkan kedalam inkubator selama 1x24 jam pada suhu 37 ºC (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar ( disc  diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Pada pengujian  aktivitas  antibakteri  ini,  cakram ( paper  disc) yang  digunakan  berukuran  6 mm dengan daya serap 50 μL tiap cakram.
Sampel yang telah ditentukan konsentrasinya  (250  μg/50  μL)  ditotolkan pada masing-masing cakram dengan menggunakan  mikropipet.  Untuk  media agar  yang sudah diautoklaf pada suhu 121 ˚C  selama  15  menit,  kemudian  dinginkan sampai  suhu  40  ˚C.  Ambil  sebanyak  100 μL  bakteri  yang  telah  di  kultur  dalam tabung reaksi, dipipet dan diinokulasi pada media agar lalu tuangkan media agar yang telah  diinokulasi  bakteri  ke  cawan  petri, dan  tunggu  sampai  media  agar  mengeras. Masing-masing  cawan  petri  diberi  label
dan  nomor  sampel  yang  sesuai.  Letakkan kertas  cakram  yang  telah  ditotolkan sampel  uji  Teripang Holothuria  edulis dengan  pinset  kedalam  cawan  petri  lalu diinkubasi selama 24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran
Pengamatan  dilakukan  setelah  24 jam  masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran cakram  menunjukkan  kepekaan  bakteri terhadap  antibiotik  atau  bahan  antibakteri yang  digunakan  sebagai  bahan  uji  yang dinyatakan  dengan  diameter  zona  hambat. Diameter  zona  hambat  diukur  dalam satuan  millimeter  (mm)  menggunakan mistar  berskala  dengan  cara  diukur diameter  total  zona  hambat  cakram. Kemudian  diameter  zona  hambat  tersebut dikategorikan kekuatan daya antibakterinya  berdasarkan  penggolongan Davis dan Stoud (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan Fraksinasi
Teripang Holothuria  edulis yang telah  diambil  dari  pantai  malalayang  di potong kecil-kecil. Hal ini bertujuan untuk memperluas permukaan yang akan berinteraksi dengan pelarut, sehingga akan lebih  banyak  senyawa  yang  dapat  ditarik oleh  pelarut.  Setelah  itu  lakukan  proses ekstraksi yang bertujuan untuk memisahkan  atau  menyari  senyawa  aktif yang  ada  di  dalam  sampel,  sehingga adanya  suatu  proses  pemisahan  dua  atau lebih  komponen  yang  terkandung  dalam sampel,  oleh  suatu  pelarut  (Suryanto,
2012).  Sampel  di  ekstraksi  dengan menggunakan  metode  maserasi.  Tujuan pemilihan  metode  maserasi  karena  cara pengerjaan  dan  peralatan  yang  digunakan sederhana serta mudah dilakukan.
Walaupun  kekurangan  dari  metode  ini adalah pengerjaannya lama dan
penyariannya  kurang  sempurna  (DepKes RI,  2000).  Untuk  mendapatkan  penyarian yang  maksimal,  agar  senyawa  kimia  di dalam  sampel  dapat  terekstrak  secara menyeluruh  maka  di  lakukan  remaserasi atau  pengulangan  dengan  penggantian pelarut sebanyak tiga kali.
Untuk menentukan komponen senyawa  aktif  yang  ingin  disari  dari sampel,  maka  menurut  Maulinda  (2010), pelarut  atau  solven  yang  adalah  tenaga pemisah  harus  dipilih  sedemikian  hingga kelarutannya terhadap salah satu komponen  murninya  adalah  terbatas  atau sama  sekali  tidak  saling  melarutkan. Ekstraksi sampel ini menggunakan pelarut etanol  96%  karena  pelarut  etanol  menyari hampir  keseluruhan  kandungan  simplisia baik  non  polar,  semi  polar  maupun  polar (Iswanti,  2009).  Setelah  mendapatkan ekstrak, tahap selanjutnya dilakukan fraksinasi.  Fraksinasi  bertujuan  untuk memisahkan  dan  memurnikan  kandungan tertentu  yang  terdapat  dalam  sampel (DepKes RI, 2000) berdasarkan perbedaan kepolaran.  Pada  penelitian  ini  fraksinasi dilakukan dengan metode FCC (Fraksinasi Cair-Cair) yaitu metode pemisahan dengan menggunakan  dua  cairan  pelarut  yang tidak  saling  bercampur,  sehingga  senyawa tertentu  terpisahkan  menurut  kesesuaian sifat  dengan  cairan  pelarut  (Prinsip solve dissolve  like )  (Kantor,  2015).  Jumlah senyawa  yang  dapat  dipisahkan  menjadi fraksi berbeda-beda tergantung pada kandungan  senyawa  di  tiap  jenis  sampel. Pelarut  yang  digunakan  untuk  fraksinasi dapat  disesuaikan  dengan  kandungan senyawa yang diinginkan (Fardhani, 2014).
Pelarut yang digunakan untuk proses fraksinasi  yaitu  n-heksan,  kloroform,  dan metanol  secara  berkesinambungan  dengan
sifat  kepolarannya  yang  berbeda-beda. Karena  masing-masing  pelarut  tersebut dapat secara selektif memisahkan
kelompok kandungan kimia yang terkandung dalam sampel, sehingga didapatkan fraksi yang berbeda-beda.
Tabel 1. Rendemen ekstrak dan fraksi teripang Holothuria edulis . No. Sampel Rendemen (%) Warna sampel 1. EE 2,59 Orange 2. FH 7,13 Putih Susu 3. FK 4,81 Kuning Keruh 4. FM 10,31 Putih Keruh Keterangan :
EE : Ekstrak Etanol       FK: Fraksi Kloroform FH : Fraksi Heksan       FM: Fraksi Metanol
Tabel  I  menunjukkan  rendemen  dari masing-masing  ekstrak.  Untuk  ekstrak etanol,  didapatkan  massa  dari  ekstrak sejumlah 4,7484 g dari massa sampel yang di  maserasi  sebanyak  182,7  g,  sehingga didapatkan  rendemen  2,59  %  dengan warna  filtrat  berupa  Orange.  Selanjutnya ekstrak  etanol  di  fraksinasi  menggunakan pelarut   n-heksan, kloroform  dan metanol. Tahap  awal  fraksinasi  dilakukan  dengan melarutkan  3,00  g  ekstrak  etanol  hasil maserasi  dengan  menggunakan  pelarut metanol,  lalu  dipartisi  pertama  kali menggunakan pelarut n-heksan, didapatkan filtrat n-heksan berwarna putih susu  dengan massa hasil ekstrak sebanyak 0,2139  g,  sehingga  didapatkan  rendemen
7,13  %.  Metanol  kemudian  dipartisi kembali dengan pelarut kloroform, didapatkan  filtrat  kloroform  berwarna kuning  keruh  dengan  massa  hasil  ekstrak sebanyak  0,1445  g,  sehingga  didapatkan rendemen  4,81  %  dan  didapatkan  filtrat metanol  berwarna  putih  keruh  dengan massa  hasil  ekstrak  sebanyak  0,3093  g, sehingga  didapatkan  rendemen  10,31  %.
Dari  perbandingan  persen  rendemen  dari ketiga  fraksi,  di  dapatkan  bahwa  senyawa dari  teripang Holothuria  edulis paling banyak  ditarik  oleh  pelarut  yang  bersifat polar. Perbedaan rendemen tiap ekstrak/fraksi  ini  disebabkan  oleh  adanya perbedaan kelarutan senyawa yang diekstrak pada tiap pelarut yang digunakan,  sehingga  turut  mempengaruhi
hasil dan karakteristik senyawa kimia yang terekstrak (Harborne, 2006).
Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri dari  ekstrak  etanol,  fraksi  metanol,  fraksi n-heksan,  dan  fraksi  kloroform  pada bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus menggunakan metode  difusi  agar.    Metode  difusi  ini dilakukan dengan cara kertas cakram yang berisi  senyawa  antibakteri,  kemudian diletakkan  pada  media  padat  yang  telah diinokulasi  bakteri.  Senyawa  antibakteri akan berdifusi ke dalam media padat  yang diinokulasi bakteri dan menghambat pertumbuhan bakteri yang ditandai dengan terbentuknya  daerah  jernih  di  sekeliling kertas cakram (Brooks dkk., 2004).
Metode  ini  menjadi  metode  yang dipilih dalam uji aktivitas karena memiliki keuntungan yaitu prosedurnya yang sederhana  (mudah  dan  praktis)  untuk dilakukan  dan  dapat  digunakan  untuk melihat sensitivitas berbagai jenis mikroba terhadap  antimikroba  pada  konsentrasi tertentu  dan  sering  digunakan  dalam  uji kepekaan antibiotik dalam program pengendalian  mutu  (Mawaddah,  2008; Akhyar, 2010; Mpila, 2012).
Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah Staphylococcus  aureus untuk  mewakili bakteri  gram  positif  dan Echerichia  coli untuk  mewakili  bakteri  gram  negatif. Penggunaan  bakteri  ini  bertujuan  untuk mengetahui  bahwa  apakah  ekstrak/fraksi dari Holothuria  edulis memiliki  aktivitas
antibakteri serta untuk mengetahui spektrum dari aktivitas antibakteri Holothuria edulis , apakah memiliki spektrum  luas,  yaitu  dapat  membunuh banyak  jenis  mikroba  yaitu  bakteri  gram positif  dan  gram  negatif,  atau  spektrum sempit  yaitu  hanya  membunuh  salah  satu dari gram positif atau negatif.
Dalam  pengujian  ini,  hasil  yang  di dapatkan  yaitu  adanya  zona  hambat disekeliling cakram yang berkururan 6 mm
(paper  disc)  yang  ditandai  dengan  area bening,  hal  ini  menunjukan  adanya kepekaan  bakteri  terhadap  ekstrak  atau fraksi dari Holothuria edulis dan antibiotik yang  digunakan  sebagai  kontrol  positif. Pengamatan  dilakukan  setelah  inkubasi pada  suhu  37˚C  selama  1x24  jam  dengan pengulangan sebanyak 2 kali pada masing- masing  bakteri,  pengulangan  dilakukan untuk  lebih  mengakuratkan  hasil  yang  di akan diperoleh.

## Gambar A                                           Gambar B
Gambar 1. Hasil uji aktivitas zona daya hambat dari ekstrak etanol, fraksi n-heksan, fraksi metanol, dan fraksi kloroform Teripang Holothuria edulis terhadap bakteri  (a). Staphylococcus aureus dan (b). Escherichia coli
Keterangan :
1. Fraksi Kloroform 4. Fraksi Metanol
2. Fraksi n-heksan            5. Kontrol Positif
3. Ekstrak Etanol              6. Kontrol Negatif
Pengukuran diameter zona daya hambat  dari ekstrak etanol, fraksi metanol, fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  dengan konsentrasi 250 μg dalam setiap paper disc yang  memiliki  daya  serap  50  μL  dari
sampel Holothuria  edulis terhadap  bakteri uji Staphylococcus  aureus dan Eschericia coli ditunjukan pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil rata-rata pengujian ekstrak etanol dan fraksi teripang Holothuria edulis terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli.
Sampel
Diameter (mm) Zona Hambat terhadap bakteri uji Escherichia coli Staphylococcus aureus Ekstrak 2,25 3,17 Fraksi Kloroform 2,65 2,10 Fraksi n-heksan 2,75 3,77 Fraksi Metanol 2,57 3,60 Kontrol Positif 18,00 18,00 4
2 1 4 5 6 2 1 3 3 5 6
Dalam  pengujian  ini  digunakan kontrol  positif  dan  negatif.  Kontrol  positif yang digunakan yaitu antibiotik siprofloksasin. Pemilihan antibiotik siprofloksasin karena antibiotik ini memiliki  spektrum  luas,  yang  biasa digunakan  dalam  terapi  infeksi  yang disebabkan  oleh  bakteri  gram-positif maupun  negatif,  diantaranya Escherichia coli, dan Staphylococcus  aureus, bersifat membunuh  bakteri  (bakterisid)  (Sarro, 2001). Penggunaan kontrol positif berfungsi  sebagai  kontrol  dari  zat  uji, dengan  membandingkan  diameter  daerah hambat yang terbentuk (Dwijendra, 2014). Kontrol negatif digunakan untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh pelarut terhadap pertumbuhan bakteri uji, sehingga  dapat  diketahui  bahwa  aktivitas yang  ditunjukan  oleh  ekstrak/fraksi  ialah zat  yang  terkandung  dalam  sampel  bukan berasal  dari  pelarut  yang  digunakan. Kontrol  negatif  yang  digunakan  yaitu metanol.  Menurut  penelitian  sebelumnya oleh  Kantor  (2015)  bahwa  metanol  pada uji  antibakteri  tidak  menunjukan  adanya aktivitas  sehingga  dapat  dipastikan  bahwa metanol tidak berpengaruh terhadap aktivitas antibakteri yang terbentuk.
Pada  penelitian  ini  ekstrak  etanol, fraksi  n-heksan,  dan  fraksi  metanol merupakan  ekstrak/fraksi  yang  efektif untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri S.aureus (gram  positif)  dibandingkan bakteri E.coli (gram  negatif).  Pada umumnya  kelompok  bakteri  gram  positif lebih  peka  terhadap  senyawa yang memiliki aktivitas antimikrobia dibandingkan  dengan  kelompok  bakteri gram negatif. Perbedaan sensitifitas bakteri gram positif dan bakteri gram negatif dapat disebabkan oleh perbedaan struktur dinding  sel  yang  dimiliki  oleh  masing- masing  bakteri  (Lathifah,  2008)  yang mengakibatkan perbedaan penetrasi ekstrak/fraksi uji ke dalam bakteri tersebut.
Dinding  sel  bakteri S.  aureus (gram positif)  memiliki  struktur  dinding  sel dengan  banyak  lapisan  peptidoglikan  dan relatif  sedikit  lipid  sedangkan  bakteri E.
coli (gram  negatif)  mempunyai  struktur lebih  kompleks,  yakni  terdapat  membran luar yang melindungi peptidoglikan, fosfolipid
(lapisan dalam) dan
lipopolisakarida  (lapisan  luar)  (Pratiwi, 2008).
Diameter zona hambat yang ditunjukkan  pada  fraksi  metanol  lebih kecil  bila  dibandingkan  dengan  fraksi  n- heksan. Walaupun pada fraksi metanol jika dilihat dari perbandingan persen rendemen mengandung  senyawa  metabolit  sekunder yang  lebih  banyak  daripada  fraksi  n- heksan. Menurut Dwijendra (2014) Hal ini mungkin  disebabkan  karena  adanya  kerja yang  tidak  sinergis  antara  senyawa metabolit  sekunder  dalam  peranannya sebagai antibakteri.
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh fraksi  n-heksan  yang  merupakan  pelarut non  polar  memiliki  diameter  zona  daya hambat  terbesar  dibandingkan  ekstrak  dan fraksi lainnya dalam menghambat pertumbuhan pada masing-masing bakteri. Menurut  Roihanah,  dkk  (2012)  pelarut  n- heksan  adalah  pelarut  yang  paling  efektif dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri, hal ini disebabkan karena senyawa bioaktif yang  terkandung  pada  teripang  mudah larut  dalam  pelarut  non  polar  yang  dapat berfungsi sebagai bahan antibakteri.
Ekstrak kasar etanol, fraksi kloroform,  fraksi  metanol  dan  fraksi  n- heksan  dari  teripang Holothuria  edulis berdasarkan  kriteria  Davis  dan  Stout (1971) menunjukan senyawa yang terkandung  didalamnya  memiliki  aktivitas antibakteri  yang  kurang  efektif  atau berdaya hambat lemah, namun ekstrak dan fraksi-fraksi  ini  bersifat  spektrum  luas, artinya kandungan senyawa tersebut memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri gram postitif dan gram negatif.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak  kasar,  fraksi  metanol,  fraksi kloroform  dan  fraksi  n-heksan  dari
Teripang Holothuria  edulis memiliki aktivitas  antibakteri  yang  lemah  terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli .
SARAN 1. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut untuk mengetahui kandungan senyawa yang terkandung dalam teripang Holothuria  edulis dan  Pengujian aktivitas antimikroba
dari
mikroba lain yang bersifat patogen.
2. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  tentang  uji  khasiat  biologis dari  teripang Holothuria  edulis untuk  mengetahui  manfaat  secara ilmiah yang lebih luas.

## DAFTAR PUSTAKA
Akhyar.  2010.  Uji  Daya  Hambat  dan
Analisis KLT Bioautografi Ekstrak  Akar  dan  Buah  Bakau (Rhizophora stylosa Griff.)Terhadap  Vibrio  harveyi [skripsi]. Fakultas Farmasi Universitas  Hasanuddin  Makasar, Makasar. Albuntana,  A,.  Yasman  dan  Wisnu,  W. (2011).  Uji  Toksisitas  Ekstrak Empat Jenis Teripang Suku Holothuriidea dari Pulau Penjaliran Timur, Kepulauan Seribu, Jakarta Menggunakan Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Jurnal Ilmu dan Teknologi  Kelautan  Tropis .  3(1):
65-66.
Arini,  D.  2013.  Potensi  Terumbu  Karang Indonesia;  Tantangan  dan  Upaya Konservasinya. Info BPK Manado
3: 147-173.
Bordbar, S. (2011). High-Value Componentsand  Bioactives  from
Sea  Cucumber  for  Functional Foods-A  Review .  Marine  Drugs Journal. 9(1):1772.
Brooks G.F, J.S. Butel., S.A Morse. 2004. Jawetz,  Melnick,  &  Adelberg’s
Medical  Microbiology.  23rd  ed page.  15-31,  184-186.  Lange Medical Books, New York. Brooks G.F., K.C.Carroll, J.S. Butel., S.A.
Morse.  2007. Jawetz,  Melnick, Adelberg’s Medical Microbiology . McGraw-Hill Medical , London. Cherbonnier, G. (1979). Holothuries nouvelles  ou  peu  connues  de  mer Rouge (Echinodermes). Bull.
Mus.  Natn.  Hist.  Nat.,  Paris,
4ieme  serie,  1,  Section  A,  no  4: 861-870.
Darwis, D. 2000. Teknik Dasar Laboratorium  dalam  Penelitian Senyawa  Bahan  Alam  Hayati. Workshop Pengembangan Sumber  Daya  Manusia  dalam Bidang  Kimia  Organik  Bahan Alam  Hayati .  Fakultas  MIPA. Universitas Andalas, Padang. Davis, W. W., and T. R. Stoud. 1971. Disc plate  method  of  microbiological assay .  Journal  of  microbiology
22 : 659-665.
Dewi,  E.,  Nita,  N.,  dan  Analekta,  T.P. 2012.  Identifikasi  jenis  teripang genus  holothuria  asal  perairan sekitar kepulauan seribu berdasarkan perbedaan morfologi. Jurnal  Al-azhar  Indonesia  seri sains dan teknologi . Vol. 1. No. 3 :  144.Direktur  Jendral  POM. 2000. Parameter  Standar  Umum Ekstrak
Tumbuhan
Obat . Direktorat  Jendral  Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta.
Dwijendra, I. M. 2014. Aktivitas Antibakteri dan Karakterisasi Senyawa Fraksi Spons Lamellodysidea  herbacea  yang Diperoleh  dari  Teluk  Manado [skripsi].  Program  Studi  Farmasi FMIPA Universitas
Sam Ratulangi, Manado.
Dyck,  S.,Van,  P.  Gerbaux,  and  P. Flammang.  2010.  Qualitative  and quantitative  saponin  contents  in five  sea  cucumbers  from  the
Indian  ocean.  Mar.Drugs,  8:173- 189.
Endang,  H.  2014.  Analisis  Fitokimia. Buku Kedokteran EGC : Jakarta. Fardhani,  H.  L.  2014.  Pengaruh  Metode Ekstraksi  Secara  Infundasi  dan
Maserasi Daun Asam Jawa (Tamarindus  indica  L.)  Terhadap Kadar  Flavonoid  Total  [skripsi]. Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Harborne,  J.  B.  2006.  Metode  Fitokimia. Terjemahan: Kosasih Patmawinata dan
Iwang  Soediro.  Edisi  kedua. Bandung: Penerbit ITB.
Iswanti,
D.A. 2009. Uji Aktivitas
Antibakteri Fraksi N-Heksan, Fraksi  Etil  Asetat,  Dan  Fraksi Etanol  96%  Daun  Ekor  Kucing
(Acalypha  Hispida  Burm.  F) Terhadap  Bakteri  Staphylococcus aureus  ATCC  25923  Secara Dilusi [skripsi].  Fakultas  Farmasi Universitas Setia Budi, Surakata. Jawetz,  E.,  Melnick  GE.,  dan  Adelberg CA. 2001. Mikrobiologi
Kedokteran.  Edisi  I.  Penerjemah:
Bagian  Mikrobiologi  Kedokteran Universitas  Airlangga.  Penerbit Salemba Medika, Surabaya.
Jawetz,  Melnick,  dan  Adelberg’  s.  2004.
Mikrobiologi  Kedokteran,  Ed  23 , Penerbit  Buku  Kedokteran  EGC, Jakarta.
Jawetz, E., G.E Melnick., C. A. Adelberg.
2005.  Mikrobiologi  Kedokteran Edisi 12. Diterjemahkan oleh dr. Nani Widorini. Penerbit Salemba Medika, Jakarta. Kantor,  M.  N.  N.  2015. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Karang Lunak  Xenia  sp.  yang  Diperoleh dari Teluk Manado [skripsi].Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Manado. Lathifah,  Q.  2008.  Uji  Efektivitas  Ekstrak Kasar  Senyawa  Antibakteri  pada
Buah Belimbing Wuluh
(Averrhoa  bilimbi  L.)  dengan
Variasi Pelarut. [Skripsi] Fakultas
Sains  dan  Teknologi  Universitas Islam Negeri Malang.
Levinson  W.  2008. Review  of  Medical Microbiology .  The  McGraw-Hill Companies, Amerika. Loing,  Q.  N.  H.,  D.S.  Wewengkang.,  J. Abidjulu. 2016. AKtivitas Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi Karang  Lunak  Lobophytum  sp. Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.
Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi-UNSRAT.  5(1):  115- 124.
Manawan,  F.  2014. Aktifitas  Antibakteri dan Karakterisasi Senyawa Spons Haliclona Sp, yang diperoleh dari Teluk  Manado. [ Skripsi ].  FMIPA
Universitas Sam Ratulangi,
Manado.
Martoyo,  J.,  Nugroho,  A.,  dan  Tjahjo,  W.
(2006). Budi  Daya  Teripang. Edisi  Revisi.  Jakarta:  Penebar Swadaya. Hal. 14.
Martinko,  J.M.,  M.  T.  Madigan.,  P.  V.
Dunlap.,  D.P  Clark.  2009.  Brock Biology of Microorganisms Twelfth Edition. Pearson Benjammin Cummings, New Jersey. Maulinda,  D.  2010. Ekstraksi  Antioksidan (Likopen) dari Buah Tomat
Dengan  Menggunakan  Solven Campuran,  n-Heksana,  Aseton, dan  Etanol [skripsi].  Fakultas Teknik, Semarang. Matranga, V. 2005. Echinodermata; Progress in molecular and subcellular biology. Springer , Jerman: xxiii+263 hlm. Mawaddah,  R.  2008. Kajian  Hasil  Riset Potensi  Antimikroba  Alami  dan Aplikasinya dalam Bahan Pangan di  Pusat  Informasi  Teknologi Pertanian  Fateta  IPB [skripsi]. Fakultas Teknologi Pertanian ITB, Bogor.
Moat, A.  G., Foster, J. W., Spector, M. P. 2002.  Microbiol  Physiology.  Ed
4.  New  York  :  John  Wiley  and Sons.
Mpila,  D.  A.  2012.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Mayana  (Coleus  atropurpureus benth)  Terhadap  Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli  dan Pseudomas  aeruginosa  Secara Invitro  [skripsi].  Program  Studi Farmasi  FMIPA  Universitas  Sam Ratulangi, Manado. Neal,  M.  J.  2006. Farmakologi  Medis , diterjemahkan  oleh  Surapsari,  J., 81. Penerbit Erlangga,Jakarta.
Nielsen,  S.  S.  2003.  Food  Analysis  3rd
edition. Kluwer Academic/Plenum. Publisher New York, USA. Nimah,  S.  Widodo  F,  dan  Agus  T.  2012. Uji  Bioaktivitas Ekstrak Teripang Pasir ( Holothuria scabra) terhadap  Bakteri Pseudomonas aeruginosa dan Bacillus  cereus.
Jurnal Perikanan no 1. Vol.2
Ortez,  J.H.  2005.Disk  Diffusion  testing  in
manual of
antimicrobial susceptibility  testing.  Marie  B.
Coyle  (Coord.  Ed).  American society for Microbiology.
Pratiwi,  S.T.  2008.  Mikrobiologi  Farmasi. Erlangga  :  Jakarta,  pp.  136-147, 176. Radji,  M.  2011, Buku  Ajar  Mikrobiologi: Panduan  Mahasiswa  Farmasi  & Kedokteran , EGC, Jakarta. Rasyid, A. 2008. Biota laut sebagai sumber obat-obatan. Oseana, 33(1):11-18. Roihana S, Sukoso, Andayani S. Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Teripang
( Holoturia  Sp )  Terhadap  Bakteri
Vibrio  Harveyi  Secara  In-Vitro.
Fakultas  Perikanan  Dan  Ilmu Kelautan.  Universitas  Brawijaya. Malang. 2012. Sarker, D.,Satyajit., Latif, Z., & Gray, I.A., 2005, Natural Products Isolation,
2 nd Ed,  283-285,  New  Jersey,
Humana Press.
Sarro,  A.D.,  G.D.  Sarro.  2001.  Adverse Reactions  to  Fluoroquinolones.
An  Overview  on  Mechanism Aspect. Current Medicinal Chemistry. 8 :371-384. Setiabudy, R. 2007. Pengantar
Antimikroba.  Dalam  :  Gunawan, S.G.,  Setiabudy,  R.,  Nefrialdi, Elysabeth  (Editor).  Farmakologi dan  Terapi  Edisi  Ke-5.  Jakarta  : Balai  Penerbit  FKUI.  Hlm.  585– 598.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan . Putra Media Nusantara, Surabaya.
Sutedjo.  2008.  Mengenal  Obat- obatan secara Mudah & Aplikasinya  dalam  Perawatan. Amara Books : Yogyakarta. Tirtodiharjo, M.K. 2011. Strategi mengatasi  bacteria  yang  resisten terhadap antibiotika. Pidato Pengukuhan  Jabatan  Guru  Besar Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada tanggal 22 Desember 2011. Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. 21hlm.