## Livestock and Animal Research
Accredited by Directorate General of Strengthening for Research and Development No. 10/E/KPT/2019
Open Access Livest. Anim. Res. , November 2021, 19(3): 291-300 p-ISSN 2721-5326 e-ISSN 2721-7086 https://doi.org/10.20961/lar.v19i3.51263

## Original Article

## Kecernaan, fermentabilitas dan produksi protein ruminal pelepah sawit yang difermentasi dengan isolat mikrobia rumen kerbau secara in vitro
Limbang Kustiawan Nuswanatara *, Eko Pangestu, Sunarso Sunarso, Marry Christiyanto
Program Studi Peternakan, Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro, Semarang, 50275 * Correspondence: limbang.kn@gmail.com
Received: May 17 th , 2021; Accepted: October 12 th , 2021; Published online: November 17 th , 2021

## Abstrak
Tujuan: Penelitian  bertujuan  untuk  mengkaji  pengaruh  level  isolat  mikrobia  dan  lama  fermentasi terhadap  fermentabilitas  berupa  produksi  NH 3 ,  volatile  fatty  acids  (VFA)  dan  produksi  protein mikrobia, kecernaan bahan kering (KcBK) dan kecernaan bahan organik (KcBO) secara in vitro . Metode: Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Ilmu Nutrisi dan Pakan, Fakultas Peternakan dan Pertanian,  Universitas  Diponegoro,  Semarang.  Penelitian  dilakukan  secara in  vitro, menggunakan rancangan  acak  lengkap  pola  faktorial  dengan  2  faktor  perlakuan  dan  4  ulangan.  Perlakuan  yang digunakan  adalah  level  isolat  mikrobia  (1  dan  3%)  dan  level  lama  fermentasi  (14  dan  28  hari). Variabel  yang  diamati  meliputi  produksi  NH 3 ,  VFA,  protein  mikrobia  dan  protein  total  serta kecernaan  nutrien  yang  meliputi  KcBK  dan  KcBO.  Data  hasil  penelitian  dianalisis  ragam  dan  jika terdapat pengaruh nyata perlakuan dilanjutkan Duncan’s Multiple Range Test . Hasil: Hasil penelitian menunjukan bahwa terdapat interaksi antara faktor level isolat mikrobia dan lama fermentasi terhadap produksi amonia rumen. Namun demikian tidak ada pengaruh interaksi antara faktor level isolate dan lama fermentasi pada produksi volatile fatty acids, produksi protein mikrobia, produksi protein total, kecernaan bahan kering dan kecernaan bahan organik. Perlakuan level  isolat  mikrobia  dan  lama  fermentasi  secara  terpisah  berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap produksi  protein  mikrobia  rumen.  Produksi  VFA  dan  kecernaan  bahan  kering  nyata  (P<0,05) dipengaruhi  oleh  lama  fermentasi,  sedangkan  perlakuan  level  isolat  dan  lama  fermentasi  tidak memberikan pengaruh nyata terhadap produksi protein total dan kecernaan bahan organik.
Kesimpulan: Pengolahan  pelepah  sawit  melalui  proses  fermentasi  dengan  menggunakan  isolat mikrobia selulolitik rumen kerbau mampu meningkatkan nilai nutrien pelepah sawit.
Kata Kunci: in vitro ; fermentasi; kecernaan; pelepah sawit; volatil fatty acids

## Abstract
Objective: The study aimed investigated effect of microbial isolate levels and fermentation time on fermentability regarding ammonia (NH 3 ) production, volatile fatty acids (VFA) and microbial protein production, dry matter digestibility and organic matter digestibility in vitro . Methods: The experiment was conducted at the Laboratory of Nutrition and Feed Science, Faculty of  Animal  and  Agricultural  Sciences,  Universitas  Diponegoro. In  vitro experiment  was  performed using  a  completely  randomized  design  with  a  factorial  pattern  with  2  factors  and  4  replications. The  treatments  were  microbial  isolate  levels  (1  and  3%)  and  fermentation  time  (14  and  28  days).
The parameters observed included production of NH 3 , VFA, microbial protein and total protein as well as the digestibility of dry matter and organic matter. The data were analyzed based on analysis of variance and if there was a significant effect the data were further analyze d with Duncan’s Multiple Range Test.
Results: The  amount  of  microbial  isolate  and  fermentation  time  affected  rumen  ammonia production. On rumen microbial protein content, the amounts of microbial isolate and fermentation time  had  substantial  impact  (P<0.05).  The  isolate  level  and  fermentation  time,  however,  had  no interaction  effect  on  VFA  production,  dry  matter  digestibility,  or  organic  matter  digestibility. The fermentation time influenced (P<0.05) the production of VFA and the digestibility of dry matter, but  the  isolate  level  and  fermentation  time  had  no  effect  on  total  protein  production  or  organic matter digestibility.
Conclusions: Processing  of  palm  fronds  through  fermentation  using  buffalo  rumen  cellulolytic microbial isolates increased nutrient values of palm fronds.
Keywords: digestibility; in vitro ; fermentation; palm fronds; volatil fatty acids

## PENDAHULUAN
Pakan merupakan faktor penentu keberhasilan  suatu  usaha  peternakan,  oleh sebab itu penyediaan pakan yang berkualitas dan kontinyu sepanjang tahun harus dilakukan untuk meningkatkan produktivitas ternak.  Oleh  karena  itu,  perlu  dicari  sumber bahan  pakan  alternatif  yang  potensial untuk  dimanfaatkan  sebagai  pakan  ternak. Pelepah  sawit  merupakan  salah  satu  hasil samping  perkebunan  kelapa  sawit  yang potensial  digunakan  sebagai  pakan  ternak dan  belum  dimanfaatkan  secara  optimal. Jumlah  yang  melimpah  dengan  kandungan nutrien yang ada dalam pelepah sawit, dapat dijadikan  sebagai  bahan  pakan  berserat  bagi ruminansia.
Perkebunan  kelapa  sawit  di  Indonesia seluas  12,76  juta  ha  pada  tahun  2018  dengan produksi  bahan  kering  mencapai  36.594.813 ton/tahun.  Jumlah  pelepah  sawit  yang dihasilkan cukup banyak dan sangat potensial digunakan  sebagai  sumber  serat  atau pengganti  pakan  hijauan.  Komposisi  nutrien pelepah  sawit  adalah  26,07%  bahan  kering, 3,07% protein kasar, 50,94% serat kasar, 1,07% lemak  kasar,  39,82%  bahan  ekstrak  tanpa nitrogen,  5,10%  abu,  0,96%  Ca,  0,08%  P  dan energi bruto 4,841 kkal/kg [1].
Pelepah  sawit  tidak  dapat  diberikan sebagai  pakan  ternak  secara  tunggal,  karena terdapat  beberapa  kelemahan  diantaranya adalah  kandungan  serat  yang  tinggi  dan berikatan  dengan  lignin  serta  kadar  protein kasar yang rendah. Kadar lignin pada pelepah
sawit  dilaporkan  sebesar  25,35%  [2].  Kadar lignin  pelepah  sawit  yang  tinggi  mencapai lebih  dari  20%  dari  biomassa  kering, menyebabkan  rendahnya  kecernaan  pelepah sawit dan menjadi faktor pembatas pemanfaatan pelepah sawit sebagai pakan [2].
Peningkatan  nilai  cerna  dari  komponen serat  dapat  dilakukan  melalui  fermentasi dengan memanfaatkan kerja bakteri lignoselulolitik  dari  rumen  kerbau.  Hal  ini didasarkan  bahwa  karakteristik  bakteri pencerna  serat  dari  rumen  kerbau  yang lebih  efisien  dalam  melakukan  degradasi komponen  serat,  sehingga  kecernaan  pakan pada  kerbau  lebih  baik  dibandingkan  pada sapi. Hal ini di duga karena populasi mikroba selulolitik  pada  rumen  kerbau  lebih  tinggi [3].  Isolasi  bakteri  lignoselulolitik  dari  cairan rumen  kerbau  perlu  dilakukan  untuk memperoleh isolate tersebut [4].
Evaluasi  secara  biologis  suatu  bahan pakan  pada  ruminansia  dapat  dilakukan dengan  pengukuran  fermentabilitas  dan kecernaannya  dalam  rumen  secara in  vitro merupakan  salah  satu  indikator  utama penentu  kualitas  suatu  ransum.  Tingkat fermentabilitas  bahan  pakan  dalam  rumen oleh mikrobia rumen dapat diketahui melalui produksi  amonia  (NH 3 ),  VFA,  protein mikrobia  dan  protein  total  secara in  vitro . Amonia adalah hasil dari degradasi protein  dalam  rumen  yang  mencerminkan aktivitas  dan  populasi  mikrobia  rumen [5]. VFA merupakan hasil degradasi karbohidrat  didalam  rumen  oleh  mikroba yang selanjutnya merupakan indikator
Nuswanatara et al. (2021) Livest. Anim. Res. 19(3): 291-300
ketersediaan  energi  untuk  sintesis  protein mikrobia.  Pamungkas et  al .  [6]  menyatakan bahwa sumber protein yang dapat dimanfaatkan oleh ternak berasal dari protein mikroba  dengan  protein  pakan  yang  lolos degradasi  dalam  rumen.  Protein  pakan  yang lolos  dari  degradasi  mikroba  rumen  yang tercampur  dengan  protein  mikroba  disebut juga  dengan  protein  total.  Sintesis  protein mikroba  membutuhkan  NH 3 sebagai  sumber N dan asam ɑ -keto sebagai kerangka karbon. Peningkatan  protein  total  dapat  terjadi  jika protein  hasil  fermentasi  mudah  didegradasi oleh mikrobia rumen untuk disintesis menjadi protein  mikrobia,  hal  ini  harus  didukung dengan  ketersediaan  VFA,  dan  nutrien lainnya  yang  optimal  dalam  rumen  [7]. Berdasarkan  hal  tersebut  diduga  kombinasi perlakuan  level  isolat  mikrobia  dari  cairan rumen  kerbau  dan  lama  pemeraman  dapat meningkatkan  fermentabilitas  dalam  rumen serta  akan  meningkatkan  nilai  kecernaan nutrien bahan pakan.

## MATERI DAN METODE

## Waktu dan lokasi penelitian
Penelitian dilakukan pada bulan Maret – September 2019, di Laboratorium Ilmu Nutrisi dan Pakan, Fakultas Peternakan dan Pertanian Universitas Diponegoro Semarang. Penelitian dilaksanakan melalui 3 tahap. Tahap Pertama , pembuatan  inokulum  isolat  mikrobia  dari cairan  rumen  kerbau.  Cairan  rumen  kerbau yang baru diambil dari RPH diinkubasi pada
suhu 39 ℃ selama 16 jam dengan menambahkan  1%  avicel  dan  2%  glukosa. Isolasi dilakukan dengan menggunakan 50 ml medium  selektif  cair  dimasukkan  ke  dalam tabung erlenmeyer yang telah berisi substrat, kemudian  menambahkan  2%  cairan  rumen kerbau  yang  telah  diinkubasi  dengan dialiri  gas  CO 2 .  Tabung  erlenmeyer  ditutup rapat  dan  diinkubasi  pada  suhu  39 ℃ selama 6 hari [8]. Kultur hasil biakan disimpan di  lemari  pendingin  selama  dua  minggu, kemudian  direinokulasi  pada  medium  cair selama  16  jam  untuk  digunakan  sebagai inokulum  pada  proses  fermentasi.  Proses fermentasi  pelepah  sawit  dilakukan  dengan menambahkan  0,5%  urea  sebagai  sumber N dan menggunakan berbagai level mikrobia cairan  rumen  kerbau  per  berat  kering pelepah sawit. Level mikrobia yang digunakan  adalah  1%  (P1)  dan  3%  (P2) pada  kadar  air  70%  dan  lama  pemeraman 14  hari  (H1)  dan  28  hari  (H2).  Kandungan nutrien  pelepah  sawit  fermentasi  diukur komponen  proksimat  dan  serat  (NDF  dan ADF)  berdasarkan  metode Association  of Official  Analytical  Chemist (AOAC)  [9]. Kandungan nutrien pelepah sawit fermentasi selengkapnya disajikan pada Tabel 1.
Penelitian  tahap  ketiga yaitu  analisis fermentabilitas  yang  meliputi  produksi  NH 3 , VFA , protein  mikrobia  dan  produksi  protein total  dan  analisis  kecernaan  nutrien  yang meliputi  KcBK  dan  KcBO  secara in  vitro menggunakan  metode  [10].  Pengukuran produksi VFA dan NH 3 menggunakan sampel
Tabel 1. Kandungan Nutrien Pelepah Sawit Fermentasi dengan Level Isolat dan Lama Peram yang Tabel 1. Berbeda Parameter Kombinasi Perlakuan P1H1 (%) P2H1 (%) P1H2 (%) P2H2 (%) Air 25,01 24,72 24,82 24,91 Abu 0 3,76 0 3,49 0 3,78 0 3,80 Protein Kasar 0 1,86 0 2,07 0 2,34 0 2,61 Lemak Kasar 0 3,98 0 4,61 0 4,47 0 4,85 Serat Kasar 43,32 44,16 44,87 44,89 BETN 47,45 45,72 44,85 43,88 NDF 88,12 87,82 86,61 86,78 ADF 72,85 70,10 73,27 72,28 Lignin 42,09 34,90 42,41 46,17 Selulosa 31,10 39,50 26,56 34,77 Hemiselulosa 14,10 15,00 13,73 14,23 BETN = Bahan Ekstrak Tanpa Nitrogen; NDF = neutral detergent fiber ; ADF = acid detergent fiber
pada  inkubasi  selama  3  jam.  Produksi  VFA diukur  dengan  metode  destilasi  uap  dan NH 3 diukur  dengan  metode  mikro  difusi
Conway [11]. Analisis produksi protein total menggunakan  metode Kjehdal [9],  digunakan endapan yang didapat dari suspensi pelepah  sawit  fermentasi  yang  diinkubasi dalam  cairan  rumen  domba.  Suspensi diendapkan  dengan  menggunakan  larutan campuran Trichloroacetic  acid (TCA)  20%  dan sulfosalicylic  acid (SSA)  2%  melalui  proses sentrifuge  dengan  kecepatan  12.000  rpm selama 20 menit.
Pengukuran  produksi  protein  mikrobia rumen in vitro menggunakan sampel dengan  lama  inkubasi  48  jam,  yang disentrifuge  dengan  kecepatan  3000  rpm selama 20 menit untuk memisahkan antara  supernatan  dan  endapannya,  dengan asumsi  bahwa  mikrobia  belum  sempurna mengendap dengan pelepah sawit fermentasi. Supernatan hasil sentrifuge digunakan untuk  mengukur  produksi  protein  mikrobia rumen  dengan  metode Lowry ,  dan  diukur absorbansinya pada spektrofotometer dengan standar Bovine serum albumin (BSA).
Penentuan nilai kecernaan bahan kering dan kecernaan bahan organic menggunakan  metode  [8],  menggunakan sampel  pelepah  sawit  sebanyak  0,55 – 0,56 gram  yang  dimasukkan  dalam  tabung
fermentor,  kemudian  ditambah  dengan larutan  saliva  buatan  (larutan  McDougall) sebanyak  40  ml  dan  cairan  rumen  domba 10  ml.  Kemudian  diinkubasi  kedalam waterbath bersuhu  39 ℃ dengan  durasi  48 jam.  Pengojokan  selama  6  jam  sekali  untuk meningkatkan kontak enzim dan substratnya. Setelah 48 jam diangkat kemudian didinginkan.  Untuk  memisahkan  supernatan dan  endapan  tabung  disentrifuse  dengan kecepatan  3000  rpm  selama  10  menit. Pencernaan  secara  enzimatis  dilakukan dengan  cara  menambahkan  endapan  dengan larutan  pepsin  HCl  sebanyak  50  ml. Kemudian diinkubasi dalam suasana anaerob selama 48 jam, selama inkubasi juga dilakukan penggojokan  selama  6  jam  sekali.  Residu diambil  dengan  menyaring  melalui  kertas saring  Whatman  no  41.  Sebagai  kontrol digunakan  cairan  rumen  tanpa  pelepah sawit  perlakuan.  Residu  dioven  pada  suhu 105 ℃ selama  12  jam,  kemudian  residu dimasukkan dalam eksikator selama 15 menit dan  dilakukan  penimbangan,  kecernaan bahan  kering  dapat  diketahui  dengan  rumus Equation 1.
Penentuan  KcBO  dilakukan  dengan memasukkan  residu  kedalam  tanur  pada suhu 600 ℃ selama 6 jam, kemudian dihitung bobot  bahan  organiknya.  Kecernaan  bahan organik  dihitung  dengan  rumus  sebagai berikut Equation 2.
KcBK (%) = BK awal − (BK residu − BK blanko)
BK awal x 100                       (1) Keterangan: BK = Bahan Kering, KcBK = Kecernaan Bahan Kering KcBO (%) = BO awal − (BO residu − BO blanko) BO awal x 100                       (2)
Keterangan: BO = Bahan Organik, KcBO = Kecernaan Bahan Organik

## Analisis data
Data  Fermentabilitas  dan  kecernaan nutrien  dianalisis  menggunakan  analisis ragam, jika hasil analisis ragam
menunjukkan pengaruh nyata (p<0,05)
antar  perlakuan,  maka  untuk  mengetahui perbedaan  antar  perlakuan  dilanjutkan dengan Uji jarak berganda Duncan.
Analisis  data  menggunakan  program  SPSS Versi 24.
HASIL
Pengaruh  perlakuan  level  isolat  dan  lama fermentasi  terhadap  produksi  NH 3 ,  VFA, protein mikrobia rumen dan protein total Terdapat  pengaruh  interaksi  (P<0,05) antara  perlakuan  penambahan  level  isolat mikrobia  selulolitik  rumen  kerbau  dan  lama fermentasi  yang  berbeda  pada  pelepah  sawit terhadap  produksi  amonia  (NH 3 )  rumen.
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kedua  faktor perlakuan  pada  proses  fermentasi  pelepah sawit  saling  mempengaruhi  dalam  produksi amonia  (NH 3 )  rumen.  Kombinasi  perlakuan penambahan  level  isolat  mikrobia  3%  dan lama fermentasi 28 hari (P2H2), menghasilkan produksi  NH 3 rumen  terbesar  (P<0,05)  yaitu 8,34  mM,  dibandingkan  dengan  ketiga kombinasi  perlakuan  fermentasi  lainnya. Perlakuan  fermentasi  dengan  menggunakan level  isolat  mikrobia  sebesar  1%  (P1) menunjukkan  tidak  adanya  peningkatan produksi  NH 3 rumen  secara in  vitro, seiring lamanya  proses  fermentasi  yaitu  dari  14  hari (H1)  menjadi  28  hari  (H2),  masing-masing sebesar 6,48 mM dan 6,31 mM. Selengkapnya rerata  hasil  penelitian  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Hasil  penelitian  menunjukkan  tidak terdapat pengaruh interaksi antara perlakuan level  isolat  dan  lama  fermentasi  terhadap produksi  VFA  pelepah  sawit  fermentasi. Hal ini menunjukkan bahwa proses fermentasi  oleh  bakteri  selulolitik  baik pada  perlakuan  level  isolat  1%  (P1)  dan 3%  (P2)  dengan  lama  fermentasi  14  hari (H1)  dan  28  hari  (H2)  belum  mampu  saling mempengaruhi produksi VFA.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa, kombinasi perlakuan penambahan level isolat mikrobia  selulolitik  rumen  kerbau  hingga 3%  dan  lama  fermentasi  hingga  28  hari tidak menunjukkan adanya pengaruh interaksi,  namun  faktor  penambahan  level
isolat mikrobia dan lama fermentasi berpengaruh nyata (p<0,05) terhadap produksi protein mikrobia rumen.
Tidak  ada  pengaruh  interaksi  antara perlakuan  penambahan  level  isolat  mikrobia selulolitik rumen kerbau dan lama fermentasi pada  pelepah  sawit  terhadap  peningkatan produksi protein total. Penambahan berbagai level  isolat  mikrobia  selulolitik  rumen kerbau  dan  perbedaan  lama  fermentasi  tidak memberikan  pengaruh  terhadap  produksi protein total.

## Pengaruh  perlakuan  level  isolat  dan  lama fermentasi terhadap kecernaan bahan kering pelepah sawit
Tidak terdapat pengaruh interaksi antara perlakuan  level  isolat  dan  perbedaan  lama fermentasi  terhadap  KcBK  pelepah  sawit fermentasi.  Level  isolat  hingga  3%  dan  lama fermentasi  hingga  28  hari  belum  saling memberikan dampak pada KcBK. Data KcBK dan KcBO Pelepah sawit fermentasi disajikan pada Tabel 3.
Berdasar  Tabel  3.  menunjukkan  bahwa tidak  terdapat  pengaruh  interaksi  antara perlakuan  level  isolat  dan  lama  fermentasi. Peningkatan  pemberian  level  isolat  mikrobia sampai  3%  dengan  lama  fermentasi  28 hari  menunjukkan  mikrobia  belum  mampu mendegradasi  bahan-bahan  organik  secara sinergis, terutama selulosa dan  hemiselulosa, sehingga kadar bahan organik yang dihasilkan belum optimal meskipun durasi Tabel  2. Pengaruh  perlakuan  Level  Isolat  dan  lama  Fermentasi  terhadap  Produksi  NH 3 ,  VFA, Tabel 2 . Protein Mikrobia Rumen dan Protein Total
Perlakuan Parameter NH 3 (mM) VFA (mM) Protein Mikroba (mg/ml)  Protein Total (mg/ml) Level Isolat x Lama Fermentasi P1H1 6,48+0,11 b 114,25+11,17 ns 35,83+1,96 ns 35,83+1,96 ns P1H2 6,31+0,25 b 0 94,75+12,07 ns 32,55+5,79 ns 32,55+5,79 ns P2H1 6,51+0,25 b 126,50+15,83 ns 23,02+0,56 ns 39,60+8,86 ns P2H2 8,34+0,48 a 126,00+17,43 ns 0 7,66+0,56 ns 39,96+3,85 ns Level Isolat P1 6,40+0,19 b 104,50+14,98 b 16,96+0,19 a 34,19+4,37 ns P2 7,42+1,05 a 126,25+15,22 a 15,34+1,05 b 39,78+6,32 ns Lama Fermentasi H1 6,50+0,19 b 24,28 a +0,18 24,28+0,18 a 37,72+6,27 ns H2 7,32+1,05 a 0 8,02 b +1,14 0 8,02+1,14 b 36,26+6,03 ns
a,b superskrip yang berbeda pada kolom dan baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05). ns (non  signifikan)  =  menunjukkan  tidak  berbeda  nyata(P>0,05).  P1  =  Level  Isolat  1%;  P 2 =  Level  Isolat  3%; H 1 = Lama Fermentasi 14 hari; H 2 = Lama Fermentasi 28 hari
fermentasi  semakin  lama.  Demikian  pula perlakuan  level  isolat  dan  lama  fermentasi secara terpisah masing-masing tidak terdapat pengaruh  nyata  terhadap  kecernaan  bahan organik.

## PEMBAHASAN
Rerata  produksi  NH 3 rumen  berkisar 6,31 mM – 8,34 mM, sejalan yang  dilaporkan [12]  produksi  NH3  pelapah  sawit  yang difermentasi  menggunakan aspergillus  niger berkisar  5,79-6,33  mM  dan  Mardalena et  al. [13],  melaporkan  konsentrasi  NH 3 sebesar 7,10-7,11  mM.  pada  pelepah  sawit  yang difermentasi dengan prolinas. Yuan et al. [14] menyatakan  untuk  pertumbuhan  mikrobia rumen  yang  optimal  dibutuhkan  kosentrasi NH 3 sebesar 4-21 mM.
Perlakuan fermentasi dengan level isolat mikrobia  3%  (P2)  menunjukkan  peningkatan (P<0,05)  produksi  NH 3 rumen,  dengan semakin  lama  proses  fermentasi  yang dilakukan  dari  14  hari  (H1)  menjadi  28  hari (H2).  Hal  ini  dapat  dilihat  dari  terjadinya peningkatan  produksi  NH 3 rumen  menjadi 6,51  mM  dan  8,34  mM.  Produksi  NH 3 yang meningkat  dipengaruhi  kandungan  PK  pada Tabel  1.  Kandungan  PK  yang  tinggi  dengan tingkat  degradasi  yang  tinggi  menyebabkan makin  banyak  protein  yang  terdegradasi, sehingga  konsentrasi  NH 3 di  dalam  rumen menjadi tinggi [15].
Tidak  terdapat  pengaruh  interaksi  pada rerata  produksi  VFA  diduga,  karena  kadar serat  kasar  baik  pada  pemberian  level  isolat mikrobia  dengan  lama  fermentasi  juga  tidak terjadi perbedaan secara nyata (Tabel 2). Laju pertumbuhan  mikrobia  tergantung  pada ketersediaan  nutrisi  yaitu  kerangka  karbon dan  NH 3 .  Diduga  dalam  penelitian  ini mikrobia  rumen  dalam  memfermentasikan substrat  kekurangan  nutrien,  atau  tidak tersedia  secara  bersamaan  antara  kerangka karbon  dan  NH 3 ,  sehingga  produksi  VFA tidak  terjadi  perbedaan.  Serat  kasar  yang tinggi menghambat mikrobia dalam mendegradasi  kandungan  karbohidrat  dari pelepah  sawit  fermentasi  tersebut.  Pelepah sawit merupakan sumber pakan berserat yang sebagian  besar  terdiri  dari  karbohidrat. Karbohidrat  pakan  di  dalam  rumen  akan didegradasi mejadi glukosa [16,17,18],
selanjutnya  menghasilkan  VFA  dengan volume yang cukup tinggi.
Penelitian
menunjukkan bahwa konsentrasi  VFA  pada  perlakuan  lama fermentasi  28  hari  (H2)  berbeda  nyata (p<0,05)  dengan  perlakuan  lama  fermentasi 14  hari  (H1).  Hal  ini  disebabkan  semakin lama  fermentasi  memberikan  waktu  bagi substrat untuk berinteraksi lebih lama dengan enzim  mikrobia  sehingga  meningkatkan produksi VFA. Lamanya substrat berinteraksi dengan  mikrobia  menunjukkan  peningkatan aktivitas  isolat  mikrobia  untuk  melakukan
Tabel  3. Pengaruh  perlakuan  Level  Isolat  dan  lama  Fermentasi  terhadap  Produksi  NH 3 ,  VFA, Tabel 3 . Protein Mikrobia Rumen dan Protein Total Perlakuan Parameter KcBK (%) KcBO (%) Level Isolat x Lama Fermentasi P1H1 40,13+1,26 41,76+0,11 ns P1H2 41,58+2,48 41,76+1,19 ns P2H1 37,68+0,78 41,27+0,17 ns P2H2 41,22+1,34 41,02+1,19 ns Level Isolat P1 40,86+1,97 ns 41,76+0,78 ns P2 39,45+2,14 ns 41,15+0,79 ns Lama Fermentasi H1 38,91+1,63 b 41,52+0,29 ns H2 41,40+1,85 a 41,33+1,15 ns
a,b superskrip  yang  berbeda  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  (P<0,05). ns (non signifikan) = menunjukkan tidak berbeda nyata(P>0,05). P1 = Level Isolat 1%; P 2 = Level Isolat 3%; H 1 = Lama Fermentasi 14 hari; H 2 = Lama Fermentasi 28 hari
pertumbuhan dan fermentasi, yang mengakibatkan  meningkatnya  konsentrasi VFA [5].
Rata-rata  produksi  VFA  pada  penelitian ini  sebesar  94,75  mM – 126,5  mM,  masih pada  kisaran  normal  untuk  sintesis  protein mikrobia  yang  optimal.  Wajizah et  al. [12] melaporkan  konsentrasi  VFA  pelepah  kelapa sawit yang difermentasi menggunakan aspergillus niger berkisar antara 75,25 sampai  dengan  96,58  mM.  Harahap et  al. [19],  melaporkan  konsentrasi  VFA  pelepah sawit  yang  diamoniasi  dan  fermentasi menghasilkan  VFA  sebesar  95,07-131,35  mM. Wajizah et  al. [12],  melaporkan  konsentrasi VFA  pelepah  sawit  fermentasi  dengan prolinas berkisar yakni 67,97-90,70 mM.
Pelepah  sawit  yang  difermentasi  selama 28  hari  (H2)  terjadi  penurunan  produksi protein  mikrobia  rumen.  Semakin  banyak level mikrobia rumen kerbau yang ditambahkan, meningkatkan populasi mikrobia  dalam  substrat.  Semakin  lama fermentasi, menyebabkan berkurangnya pasokan  nutrien  dalam  substrat  yang dapat  dimanfaatkan  oleh  mikrobia.  Keadaan yang  demikian  mengakibatkan  terjadinya persaingan antar mikrobia dalam memperebutkan  nutrien  dalam  substrat yang  ketersediaannya  terbatas,  hal  ini mengakibatkan  jumlah  mikrobia  yang  mati meningkat.
Penurunan  populasi  mikrobia  hidup yang  melekat  pada  pelepah  sawit  akibat hal  di  atas,  menyebabkan  tidak  optimalnya mikrobia tersebut dalam membantu mikrobia rumen untuk memanfaatkan nutrien prekusor sintesis  protein  mikrobia  di  dalam  rumen, seperti N, sulfur, asam lemak rantai panjang, Zn,  dan  energi.  Laju  pertumbuhan  mikrobia maksimal  dicapai  jika  konsentrasi  semua nutrien tersedia secara optimum dalam rumen [21].  Kurang  termanfaatkannya  nutrien prekusor  sintesis  protein  mikrobia  di  dalam rumen, mengakibatkan menurunnya aktivitas mikrobia  rumen  dalam  proses  tersebut. Hal  ini  tercermin  pada  produksi  NH 3 dan VFA  yang  tidak  bersamaan. Volatile  fatty acids (VFA)  lebih  lambat  diproduksi  dari pada  NH 3 ,  karena  kandungan  karbohidrat struktural  pada  pelepah  sawit  fermentasi yang  masih  tinggi,  akibat  belum  optimalnya
perombakan  ikatan  kompleks  (lignoselulosa dan lignohemiselulosa) pelepah sawit menjadi ikatan yang lebih sederhana pada saat proses fermentasi  pelepah  sawit,  sehingga  mikrobia rumen  membutuhkan  waktu  yang  lebih lama  untuk  memfermentasikannya  menjadi VFA, dan tidak dapat mengimbangi kecepatan  produksi  NH 3 [22].  Peningkatan kualitas  pelepah  sawit  terhadap  kecernaan nutrien dan produk fermentasi rumen kerbau, sintesis  protein  mikroba  ini  disebabkan tersedianya  nutrien  yang  cukup  seperti  NH 3 dan  karbohidrat  yang  mudah  terfermentasi ( fermentable ) .
Ketersediaan  NH 3 harus  diikuti  oleh produksi  VFA  total  secara  bersamaan  agar mikrobia rumen dapat memanfaatkan kedua  prekusor  tersebut  secara  efisien untuk berlangsungnya proses sintesis protein  mikrobia.  Amonia  (NH 3 )  berperan dalam  penyediaan  sumber  N  sedangkan VFA  berperan  sebagai  kerangka  karbon (VFA  rantai  cabang)  dan  penyedia  sumber energi  bagi  mikrobia  rumen  pada  proses tersebut,  yaitu adenosin  trifosfat (ATP)  yang dihasilkan melalui proses pemecahan glukosa menjadi  asam  piruvat  (glikolisis).  Penurunan produksi  protein  mikrobia  rumen  pada penelitian  ini,  terutama  pada  pelepah  sawit yang mendapat perlakuan fermentasi P2 (3% level  isolat  mikrobia)  dan  H2  (28  hari fermentasi)  secara  terpisah,  masing-masing 15,34 dan 8,02 mg/ml. Sintesis protein mikroba (SPM) ransum yang mengandung serat sawit amoniasi  pada  berbagai  taraf  konsentrasi daun  ubi  kayu  0,  5,  10,  15,  dan  20% mengasilkan protein mikroba masing-masing yakni  16,08,  18,50,  23,56,  30,64  dan  29,81 mg/ml  [19].  Perlakuan  fermentasi  dengan menambahkan  level  isolat  mikrobia  rumen kerbau  hingga  3%  dan  difermentasi  hingga 28  hari,  diduga  mengandung  sedikit  asam amino  rantai  cabang  akibat  penurunan populasi  mikrobia  hidup  yang  melekat  pada pelepah  sawit.  Kondisi  yang  ideal  untuk proses  sintesis  protein  mikrobia  adalah konsentrasi VFA yang diproduksi sama cepat dengan  produksi  NH 3, sehingga  pada  saat NH 3 terbentuk  diikuti  dengan  ketersediaan produk  fermentasi  asal  karbohidrat  yang digunakan  sebagai  sumber  energi  dan kerangka  karbon.  Nitrogen  yang  dibutuhkan
untuk  sintesis  mikroba  rumen  adalah  dalam bentuk NH3, asam amino dan peptida. Energi untuk  sintesis  mikroba  rumen  adalah  dalam bentuk adenosine  triphosphate (ATP).  Energi dalam  bentuk  asam  lemak  terbang  ( volatile fatty  acids /VFA)  merupakan  sumber  energi bagi ruminansia. Hanya VFA berantai cabang yang  menyediakan  kerangka  karbon  bagi sintesis protein mikroba rumen [22].
Produksi  protein  total  pada  penelitian ini  berkisar  antara  32,55-39,96  mg/g  dengan kadar  protein  kasar  1,86-2,61%,  Wajizah et  al. [12]  melaporkan  kadar  protein  kasar pelepah  sawit  yang  difermentasi  dengan Aspergilus niger dengan penambahan sumber karbohidrat  berbeda  sebesar  11,16  sampai 13,25%,  dengan  rata-rata  penngkatan  protein kasar  sebesar  2,08%.  Produksi  protein  total yang  tinggi  pada  penelitian  ini,  diduga disebabkan  oleh  tingginya  fermentabilitas pelepah  sawit  di  dalam  rumen  menjadi amonia.  Amonia  yang  dihasilkan,  secara efisien  digunakan  sebagai  sumber  N  untuk sintesis  protein  tubuh  mikrobia,  hal  ini terutama  terlihat  pada  kombinasi  perlakuan fermentasi  P1H1  dan  P2H2.  Konsentrasi amonia rumen yang rendah, diduga digunakan  untuk  proses  perkembangbiakan mikrobia  rumen  sehingga  proses  fermentasi berjalan baik, atau adanya penurunan asupan N dan turunnya degradasi protein [23].
Kecernaan bahan kering pada penelitian ini  yakni  berkisar  37,68%-41,58%.  Rerata KcBK sejalan dengan hasil kajian [24], sebesar 30,99-46,39%  pada  pelepah  sawit  yang difermentasi dengan berbagai sumber mikroba.  Lebih  tinggi  dari  yang  dilaporkan [12]  pada  pelepah  kelapa  sawit  yang difermentasi  menggunakan Aspergillus  niger yang menghasilkan  KcBK  sebesar  20,95- 25,23%.  Harahap et  al. [25]  melaporkan bahwa pelepah kelapa sawit yang difermentasi menggunakan Trichoderma viride dan Aspergillus  niger, masing-masing menghasilkan  KcBK  25,71%,  dan  13,31  %. Hal  ini  diduga  karena  hasil  NDF  (Tabel  1) yang  juga  tidak  terjadi  interaksi  antara perlakuan level isolat dan lama fermentasi.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa rerata  KcBK  pada  lama  fermentasi  28  hari (H2) lebih tinggi daripada perlakuan lama
fermentasi 14 hari (H1). Tingginya kecernaan bahan  kering  pada  lama  fermentasi  28  hari (H2)  diduga  terjadi  perenganggan  ikatan lignoselulosa  yang  lebih  mudah  didegradasi oleh mikrobia rumen. Lama waktu fermentasi memberikan  kesempatan  pada  mikrobia rumen  untuk  mendegradasi  pelepah  sawit semakin  tinggi  sehingga  KcBK  meningkat. Lama waktu fermentasi memberikan kesempatan isolat mikrobia dalam melonggarkan  ikatan  lignoselulosa  dan lignohemiselulosa,  sehingga  KcBK  menjadi meningkat.  Rendahnya  kandungan  serat kasar, selulosa dan hemiselulosa memudahkan  bakteri  untuk  melakukan penetrasi  ke  dalam  material  pakan  untuk proses  pencernaan.  Perubahan  struktur serat  mengakibatkan  penetrasi  enzim  yang dihasilkan  mikrobia  rumen  menjadi  lebih mudah,  sehingga  akan  meningkatkan  KcBK. Proses  degradasi  melibatkan  3  jenis  enzim yang bekerja secara sinergis, yaitu endo-1,4- β - glucanase  dan  ekso-1,4- β -glu canase  serta  β - glucosidase. Enzim-enzim tersebut membantu dalam  mendegradasi  komponen  serat,  sesuai giliran  dari  bagian  amorf  berganti  dengan daerah  kristalin  [26].  Penggunaan  jamur dan  enzim  yang  memiliki  kemampuan memetabolisme lignoselulosa berpotensi meningkatkan  nilai  gizi  melalui  mekanisme delignifikasi yang selektif [27].
Kecernaan bahan organik pada penelitian  ini  berkisar  41,02%-41,76%,  lebih tinggi  dari  kajian  [12]  KcBO  pada  pelepah kelapa sawit yang difermentasi menggunakan Aspergillus niger menghasilkan berkisar antara 17,21-21,88%  dan  kajian  [25]  pada  pelepah kelapa sawit yang difermentasi menggunakan Trichoderma  viride dan Aspergillus  niger, masing-masing  menghasilkan  KcBO  25,11%, dan  13,74  %.  Wajizah et  al. [12],  melaporkan KcBK  dan  KcBO  pelepah  sawit  yang difermentasi  dengan  prolinas  berkisar  28,11- 34,04%  dan  28,63-31,64%.  [28]  menyatakan bahan  pakan  yang  baik  memiliki  nilai lebih  dari  60%.  Kecernaan  bahan  organik akan  tinggi  jika  kadar  protein  kasar bahan  pakan  tinggi  dan  akan  rendah jika  kandungan  serat,  baik  NDF,  ADF maupun  hemiselulosa  dalam  bahan  pakan tinggi [29].

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil
penelitian disimpulkan  bahwa,  pengolahan  pelepah sawit  melalui  proses  fermentasi  dengan menggunakan  isolat  mikrobia  selulolitik rumen  kerbau  mampu  meningkatkan  nilai nutrien  pelepah  sawit,  fermentabilitas  baik produksi NH 3 , VFA maupun produksi protein mikroba serta meningkatkan kecernaan bahan bahan kering.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Kami menyatakan bahwa dalam penulisan  artikel  ini  tidak  terdapat  konflik kepentingan  yang  berhubungan  dengan keuangan, pribadi, atau lainnya dengan orang atau  organisasi  lain  yang  terkait  dengan materi yang dibahas dalam naskah.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Mathius,  W.  I.  2008.  Pengembangan  sapi potong  berbasis  industri  kelapa  sawit. Pusat  Penelitian  dan  Pengembangan Peternakan Bogor. Pengembangan Inovasi Pertanian. I(2):206-224.
2. Rahman,  M.  M.,  M.  Lourenco,  H.A. Hassim,  J.J.P.  Boars,  A.S.M.  Sonnenberg, J.W. Cone J.W, J. De Boever, and V. Fievez. 2011.  Improving  ruminal  degradability  of oil  palm  fronds  using  white  rot  fungi.  J.
Anim. Feed. Sci. and Tech. 169(4):157-166. Doi: 10.1016/j.anifeedsci.2011.06.014
3. Wanapat, M., R. Pilajun and P. Kongmun. 2009. Ruminal ecology of swamp buffalo as influenced  by  dietary  sources.  J.  Anim. Feed  Sci.  and  Techn.  151:205-214.  Doi: 10.1016/j.anifeedsci.2009.01.017
4. Hanafi  N.D.,  M.  Tafsin,  dan  D.R.  Purba. 2018.  Isolasi  dan  karakteristik  bakteri lignoselulolitik  rumen  kerbau  sebagai pendegradasi komponen serat. TALENTA Conference  Series:  Science  &  Technology (ST). 1(2):101-108. Doi: 10.32734/st.v1i2.287
5. Muhtarudin  dan  Liman.  2006.  Penentuan tingkat penggunaan mineral organic untuk memperbaiki  bioproses  rumen  pada kambing secara in vitro. Jurusan Produksi Ternak,  Fakultas  Pertanian  Universitas Lampung.  Jurnal  Ilmu-ilmu  Pertanian
Indonesia.  8(2):132-140.  Doi:  10.31186/jipi. 8.2.132-140
6. Pamungkas, D., R. Utomo, N. Ngadiyono, dan  M.  Winugroho.  2010.  Supplementing energy and protein source at different rate of  degradability  to  mixture  of  corn  waste and  coffee  pod  as  basal  diet  on  rumen fermentation kinetic of beef cattle. J. Anim. and  Vet.  Sci.  15(1):22-30.  Doi:  10.14334/ jitv.v15i1.674
7. Ani, A.S., R. I. Pujaningsih, dan Widiyanto. 2015. Perlindungan protein menggunakan tannin  dan  saponin  terhadap  daya fermentasi  rumen  dan  sintesis  protein mikroba. J. Veteriner. 16(3):439-447.
8. Bachrudin,  Z.,  A.S.M.  Sofro  and  B.I.M. Tampoebolon.  1998.  The  characterization of  cellulase  produced  by  buffalo  rumen microbe:  determination  of  michaleis constantas  (Km  and  maximum  velocity (Vm)). Indonesian Journal of Biotechnology. 6:185-188. 9. AOAC.  2016.  Official  methods  of  analysis of  the  association  of  analytical  chemist. 20th  Ed.  Assoc  of  Offi.  Anal.  Chem. MARYLAND USA.
10. Tilley, J.M.A. dan R.A. Terry. 1963. A two stage technique for the in vitro digestion of forage  crops.  J.  Br.  Grsld.  Soc.  18:104-111. Doi: 10.1111/j.1365-2494.1963.tb00335.x
11. Departement  of  Dairy  Science.  1996. General Laboratory Procedures. University of Winconsin, Madison.
12. Wajizah,  S.,  Samadi,  Y.  Usman,  dan  E. Mariana.  2015.  Evaluasi  nilai  nutrisi dan  kecernaan  in  vitropelepah  kelapa sawit  (oil  palm  fronds)  yang  difermentasi menggunakan aspergillus  niger dengan penambahan  sumber  karbohidrat  yang berbeda. J. Agripet. 15(1):13-19.
13. Mardalena,  S.  Syarif  dan  Akmal.  2016. Efek  pemberian  pelepah  sawit  yang difermentasi  dengan  prolinas  terhadap karakteristik  rumen  sapi  perah  PFH.  J. Ilmiah  Ilmu-Ilmu  Peternakan.  19(2):55-62. Doi: 10.22437/jiiip.v19i2.3846
14. Yuan, Z. Q., S. X. Tang, B. Zeng, M. Wang, Z. L. Tan, Z. H. Sun, C. S. Zhou, X F Han, and M. A. Bamikole. 2010. Effects of dietary supplementation with alkyl polyglycoside, a nonionic surfactant, on nutrient digestion and  ruminal  fermentation  in  goats.  J.
Anim.  Sci.  88:  3984-3991.  doi:  10.2527/jas. 2009-2397
15. Marhaeniyanto,  E.  dan  S.  Susanti.  2018. Fermentabilitas  ruminal  secara  in  vitro suplementasi  tepung  daun  gamal,  kelor, randu dan sengon dalam konsentrat hijau.
Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan  28  (3):213- 223. Doi: 10.21776/ub.jiip.2018.028.03.04 16. Adriani  dan  Mushawir.  2009.  Kadar glukosa darah, laktosa dan produksi susu sapi perah pada berbagai tingkat suplementasi  mineral  makro.  J.  Ind.  Trop. Animal Agri. 34(2):88-96.
17. Hindratiningrum,  N.,  M.  Bata  dan  S.  A. Santosa.  2011.  Produk  fermentasi  rumen dan  produksi  protein  mikroba  sapi lokal  yang  diberi  pakan  jerami  amoniasi dan beberapa bahan pakan sumber energi. J.  Agripet,  11(2):29-34.  Doi:  10.17969/ agripet.v11i2.371
18. Araujo,  A.P.C.,  B.C.  Venturelli,  M.C.B. Santos,  R.  Gardinal,  N.R.B.  Consolo,  G.D. Calomeni,  J.E.  Freitas,  R.V.  Barletta,  J.R.
Gandra, P.G. Paiva, and F.P. Renno,. 2015. Chitosan  affects  total  nutrient  digestion and ruminal fermentation in Nellore steers. Anim.  Feed.  Sci.  and  Tech.  206:114-118. Doi: 10.1016/j.anifeedsci.2015.05.016
19. Harahap N. , E. Mirwandhono, dan N. D. Hanafi. 2017. Uji Kecernaan Bahan Kering, Bahan Organik, Kadar Nh3 Dan Vfa Pada Pelepah  Daun  Sawit  Terolah  Pada  Sapi Secara In Vitro. Jurnal Peternakan. 1(1):13- 21.
20. Rodríguez  R.,  A.  Sosa  and  Y.  Rodríguez. 2007. Microbial protein synthesis in rumen and  its  importance  to  ruminants.  Cuban Journal  of  Agricultural  Science.  41(4):287- 294.
21. Syapura, M. Bata dan W. S. Pratama. 2013. Peningkatan  kualitas  jerami  padi  dan pengaruhnya  terhadap  kecernaan  nutrien dan  produk  fermentasi  rumen  kerbau dengan  feces  sebagai  sumber  inoculum.  J.
Agripet. 13(2):59-67. Doi: 10.17969/agripet. v13i2.822
22. Anggraeny, Y. N., H. Soetanto, Kusmartono dan Hartutik. 2015.
Sinkronisasi  suplai  protein  dan  energi dalam rumen untuk meningkatkan
efisiensi pakan berkualitas rendah. Wartazoa.  25(3):107-116.  Doi:  10.14334/ wartazoa.v25i3.1155 23. Ramos,  S.,  M.  L.  Tejido,  M.E  M.  J.  Ranill and  M.  D.  Carro.  2009.  Microbial  protein synthesis,  ruminal  digestion,  microbial populations, and nitrogen balance in sheep fed  diets  varying  in  forage-to-concentrate ratio  and  type  of  forage.  J.  Anim.  Sci. 87:2924-2934. Doi: 10.2527/jas.2009-1938 24. Astuti,  T.  dan  G.  Yelni.  2015.  Evaluasi kecernaan  nutrient  pelepah  sawit  yang difermentasi  dengan  berbagai  sumber mikroorganisme  sebagai  bahan  pakan ternak  ruminansia.  J.  Sain  Peternakan Indonesia.  10(2):101-106.  Doi:  10.31186/ jspi.id.10.2.101-106 25. Harahap,  N.,  E.  Mirwandhono  dan  N.  D.
Hanafi.  2017. Uji  kecernaan  bahan  kering, bahan organik, kadar NH3 dan VFA pada pelepah  daun  sawit  terolah  pada  sapi secara  in  vitro.  Jurnal  Peternakan.  1(1):13- 21. Doi: 10.31604/jac.v1i1.209
26. Aminah  S,  L.  K.  Nuswantara,  B.  I.  M.
Tampoebolon, dan Sunarso. 2020. Peningkatan Kualitas Sabut Kelapa Melalui Teknologi Fermentasi Menggunakan  Mikroba  Pencerna  Serat Terseleksi  dari  Cairan  Rumen  Kerbau. Sains Peternakan. 18(1):44-52. Doi: 10.20961/sainspet.v%vi%i.35976.
27. Yanuartono, H. Purnamaningsih, S.
Indarjulianto  dan  A.  Nururroz.  2017. Potensi  jerami  sebagai  pakan  ternak ruminansia.  Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan.
27(1):40-62.  Doi:  10.21776/ub.jiip.2017.027.
01.05
28. Fathul, F. dan S. Wajizah. 2010.
Penambahan  mikromineral  Mn  dan  Cu dalam ransum terhadap aktivitas biofermentasi  rumen  domba  secara  in vitro.  Jurnal  Ilmu  Ternak  dan  Veteriner. 15(1):9-15.
29. Jayanegara,  A.,  A.  Sofyan,  H.P.S.  Makkar dan K. Becker. 2009. Kinetika produksi gas,
kecernaan  bahan  organik  dan  produksi gas  metana  in  vitro  pada  hay  jerami yang disuplementasi hijauan mengandung tanin. Media Peternakan. 32(2):120-129.