Yasmine et al. : Isolasi Bakteriofag Xanthomonas oryzae dari Lahan Sawah 401
Jurnal Agrotek  Tropika, Agustus  2023,  Vol  11,  No.  3,  pp.  401  -  408 DOI  :  http://dx.doi.org/10.23960/jat.v11i3.6031 ISSN:  2337-4993  (Print),  2620-3138  (Online)

## ISOLASI BAKTERIOFAG Xanthomonas oryzae DARI LAHAN SAWAH DI KELURAHAN KECANDRAN, KECAMATAN SIDOMUKTI, SALATIGA DAN STABILITASNYA TERHADAP BERBAGAI pH

## ISOLATION Xanthomonas oryzae bacteriophages FROM PADDY FIELDS AT KECANDRAN VILLAGE,  SIDOMUKTI SUBDISTRICT,  SALATIGA AND  ITS  STABILITY  TOWARD  VARIOUS  pH
Christiani Yasmine, Andree Wijaya Setiawan, dan Yoga Aji Handoko *
Fakultas Pertanian dan Bisnis, Universitas Kristen Satya Wacana, Kota Salatiga, Indonesia *Email: yoga.handoko@uksw.edu
* Corresponding Author, Diterima: 21 Mei 2022, Direvisi: 14 Mar. 2023, Disetujui: 1 Mei 2023

## ABSTRACT
Bacterial leaf blight (BLB) is a disease that attacks rice plants and is caused by the bacterium Xanthomonas oryzae. So far, farmers have been preventing this BLB disease by spraying bactericides, rotating pathogenic host-plant and planting disease-resistant varieties. However, this control has not given maximum results, due to the diversity of Xanthomonas oryzae strains. Giving the bactericides is still not able to suppress the growth of bacteria completely. Instead, it can only slow down the growth rate of Xanthomonas oryzae and may pose a risk of killing beneficial bacteria. Therefore, it is necessary to make efforts to control Xanthomonas oryzae by considering bacteriophages as biocontrol agents to infect Xanthomonas oryzae. The method to obtain  Xanthomonas  oryzae  bacteriophages  begins  with  taking  soil  samples  in  the  rice  field  by  transect sampling method,  isolation, purification,  and  propagation  of bacteriophages.  The stability  test serves  to determine  how  the  bacteriophage  particles  can  withstand  acidic  and  alkaline  pH.  The  research  result showed there are three samples of bacteriophages that were successfully isolated, named K1 (Kecandran 1),  K2  (Kecandran  2),    and  K3  (Kecandran  3).  The  stability  test  on  pH  in  3  samples  showed  that  the bacteriophage’s titer was stable at pH 7 and pH 9, while at pH 2 and pH 5 the titer decreased. This indicated that the bacteriophages were unable to survive under acidic conditions. The three samples at pH 12 showed a titer decrease which resulted that the bacteriophages were not resistant to base conditions.
Keywords : Bacterial leaf blight, bacteriophage, pH stability, Xanthomonas oryzae

## ABSTRAK
Hawar daun bakteri (HDB) merupakan penyakit yang menyerang tanaman padi dan disebabkan oleh bakteri Xanthomonas  oryzae .  Selama  ini  petani  menanggulangi  penyakit  HDB  ini  dengan  cara    menyemprotkan bakterisida,    pergiliran  tanaman  yang  bukan  inang  patogen,  dan  menanam  varietas  tahan  penyakit. Akan tetapi,  pengendalian  tersebut  belum  memberikan  hasil  yang  maksimal,  karena  keragaman  strain  bakteri Xanthomonas oryzae . Pemberian bakterisida ini masih belum bisa menekan pertumbuhan bakteri sepenuhnya melainkan, hanya bisa memperlambat laju pertumbuhan bakteri Xanthomonas oryzae dan kemungkinan beresiko membunuh bakteri yang menguntungkan. Oleh karena itu, perlu dilakukan upaya untuk mengendalikan bakteri Xanthomonas  oryzae dengan  mempertimbangkan  bakteriofag  sebagai  agen  biokontrol  untuk  menginfeksi bakteri Xanthomonas oryzae . Metode untuk mengisolasi bakteriofag Xanthomonas oryzae diawali dengan pengambilan sampel tanah di lahan sawah dengan cara transek sampling, isolasi, purifikasi, dan propagasi bakteriofag. Pengujian stabilitas bakteriofag berfungsi untuk mengetahui kekuatan partikel bakteriofag dapat bertahan terhadap pH asam dan basa. Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat 3 sampel bakteriofag yang berhasil diisolasi yaitu K1 (Kecandran 1), K2 (Kecandran 2), dan K3  (Kecandran 3). Hasil uji stabilitas bakteriofag terhadap pH menunjukan ketiga sampel diperoleh titer bakteriofag stabil pada pH 7 dan pH 9, sedangkan pada pH 2 dan pH 5 bakteriofag cenderung mengalami penurunan titer dan menunjukkan tidak mampu bertahan pada kondisi asam. Dari ketiga sampel tersebut, pada pH 12 menunjukkan adanya penurunan titer yang mengakibatkan sebagian besar partikel bakteriofag tidak tahan terhadap kondisi basa.
Kata Kunci: Bakteriofag, hawar daun bakteri, stabilitas pH, Xanthomonas oryzae

## 1.  PENDAHULUAN
Indonesia  terdapat  beberapa  penyakit  pada tanaman padi antara lain penyakit hawar pelepah daun, penyakit kerdil hampa, penyakit bercak daun, penyakit hawar daun bakteri (HDB), dan penyakit kerdil rumput (Semangun, 2008). Diantara sekian banyak  penyakit  yang  menyerang  tanaman  padi, penyakit HDB merupakan salah satu masalah serius dalam penurunan produktivitas padi di Indonesia. Penyakit  HDB  disebabkan  oleh  bakteri Xantho- monas  oryzae yang  menyerang  tanaman  padi. Indikasi  yang  terjadi  pada  tanaman  padi  yang terserang bakteri ini dapat dilihat pada daun padi, yakni daun padi menjadi berwarna pucat, layu, dan lama kelamaan akan mati (Wahyudi et al., 2011). Ada  beberapa  cara  mengendalikan  penyakit yang disebabkan oleh bakteri X. oryzae diantaranya dengan  menyemprotkan  bakterisida,  menanam varietas tahan penyakit, pergiliran tanaman yang bukan inang patogen, dan sanitasi lahan (Yanti et al., 2018). Akan tetapi, pengendalian tersebut belum memberikan  hasil  yang  maksimal,  dikarenakan keragaman strain bakteri X.  oryzae .  Keragaman strain bakteri ini disebabkan oleh beberapa faktor diantaranya lingkungan, mutasi gen, dan varietas yang  digunakan.  Lee et  al., (2007)  melaporkan bahwa  penggunaan  bakteriofag  dapat dipertimbangkan sebagai biokontrol (pengendali hayati) untuk menginfeksi X. oryzae yakni, dengan tipe inang X. oryzae pv. oryzae .
Lang et al., (2010) juga menyatakan bahwa bakteriofag  memiliki  peran  khusus  dalam mengendalikan laju pertumbuhan bakteri, salah satu contohnya adalah bakteriofag X. oryzae yang mampu menginfeksi laju bakteri X. oryzae pada tanaman padi. Ranjani et al., (2018) menemukan bahwa bahwa bakteriofag merupakan virus yang menginfeksi bakteri serta memiliki sifat spesifisitas dan  propagasi  eksponensial  yang  menjadikan bakteriofag  menjadi  biokontrol  yang  baik. Bakteriofag sebagai agen kontrol biologis terhadap X.  oryzae dalam  perkembangannya  dapat diaplikasikan sebagai “biopestisida atau predator” yang efektif untuk mengendalikan penyakit HDB. Berdasarkan  uraian  diatas,  perlu  dilakukan penelitian untuk mengisolasi dan menguji stabilitas bakteriofag X. oryza e dari lahan persawahan di Kelurahan  Kecandran,  Kecamatan  Sidomukti, Kota  Salatiga  sebagai  tahapan  awal  dalam menghasilkan agen biokontrol HDB.

## 2.  BAHAN  DAN  METODE

## 2.1 Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada lahan sawah di Kelurahan Kecandran, Kecamatan Sidomukti, Kota  Salatiga  dan  Laboratorium  Mikrobiologi Pertanian,  Fakultas  Pertanian  dan  Bisnis, Universitas  Kristen  Satya  Wacana,  Salatiga. Pelaksanaan penelitian dimulai pada bulan Agustus 2020 sampai dengan Desember 2021.

## 2.2  Prosedur  Penelitian  dan  Parameter Pengamatan
Prosedur penelitian ini menggunakan metode eksploratif  deskriptif,  karena  tidak  adanya struktur tertentu untuk mendapatkan bakteriofag hingga diprediksi terdapat bakteriofag di sekitar tanaman padi.

## 2.3    Isolat Xanthomonas  oryzae
Isolat  bakteri X.  oryzae diperoleh  dari Indonesian Culture Collection (InaCC, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia) dengan kode isolat InaCC  B16.  Untuk  keperluan  penyimpanan, X. oryzae dikulturkan  pada  medium  NA  ( Nutrient Agar )  miring,  sedangkan  untuk  kebutuhan penelitian, X. oryzae dikulturkan pada medium NB ( Nutrient  Broth ) selama  semalam.

## 2.4 Pengambilan Sampel
Sampel tanah diambil dari sekitar perakaran ( rhizosfer ) tanaman padi di Kelurahan Kecandran, Kecamatan  Sidomukti,  Kota  Salatiga  yang dilakukan pada pagi hari pukul 05.30-06.30. Sampel tanah diambil dengan metode transek yaitu diambil 5 titik berjarak dan menarik garis lurus satu petak sawah  (Hidayat,  2017).  Sampel  kemudian dimasukkan dalam  plastik hitam dan  dibawa ke laboratorium. Sampel kemudian diambil sebanyak 25  g  serta  dilarutkan  dalam  larutan SM  buffer sebanyak  50  mL  dan  ditambahkan  5  mL  kultur semalam X.  oryzae .  Sampel  selanjutnya  ditutup plastik hitam dan dihomogenkan dengan shaker pada  kecepatan  200  rpm  selama  3  jam.  Setelah dihomogenkan, sampel diambil disentrifuse pada kecepatan 6.000 rpm selama 20 menit dan diulang sebanyak 3 kali hingga diperoleh supernatan yang
jernih.  Supernatan  selanjutnya  disaring menggunakan  membran  filter  0,22  µm  dan supernatan sebagai lysate ditampung pada tabung falcon serta disimpan pada refrigerator.

## 2.5 Isolasi bakteriofag (adaptasi Ranjani, 2018)
Isolasi  bakteriofag  ini  menggunakan  metode spot test . Prosedurnya ialah menyiapkan lysate dari sampel, kultur semalam X. oryzae dalam medium NB ( Nutrient Broth ), medium NA ( Nutrient Agar ), NA soft agar 5,5% , microtube , bluetip , yellowtip , micropipet 100  µL  dan  1000  µL,  tabung  reaksi, kertas label, bunsen, dan alkohol. Setelah alat dan bahan telah disteril, medium NA ( Nutrient Agar ) dituang dalam cawan petri hingga memadat. Proses selanjutnya  kultur X.  oryzae semalam  sebanyak 100µL  dan  5000  µL NA softagar dicampur  dan dituang  pada  cawan  petri yang  sudah berisi  NA ( Nutrient  Agar )  yang  memadat  (metode double layer agar ). Selanjutnya, lysate diteteskan sebanyak 100 µL dan diinkubasi dalam inkubator selama 24 jam  pada  suhu  30 o C.  Sampel kemudian  diamati terbentuknya plaque (zona  bening/  zona  lisis) sebagai indikator berhasilnya isolasi bakteriofag.

## 2.6 Purifikasi Bakteriofag (adaptasi Ranjani,
2018)
Pemurnian  bakteriofag X.  oryzae dilakukan dengan cara mengambil plaque tunggal yang tampak dipermukaan medium NA ( Nutrient Agar ). Plaque diambil menggunakan micropipet sebanyak 2 kali dan dimasukkan pada larutan SM buffer 200 µL dalam microtube steril. Plaque yang sudah diambil kemudian ditambahkan  suspensi  bakteri X.  oryzae umur semalam sebanyak 100 µL dan didiamkan selama 45 menit. Selanjutnya plaque diuji menggunakan metode plaque assay dengan cara menuangkan medium NA ( Nutrient Agar ) 5 mL pada cawan petri steril hingga memadat. Suspensi X. oryzae dan plaque tersebut kemudian  ditambahkan  medium  NA softagar sebanyak 5 mL dan dituangkan pada cawan petri yang berisi  medium  NA  ( Nutrient  Agar ).  Sampel selanjutnya diinkubasi pada suhu 30 0 C selama 24 jam. Hasil purifikasi diamati dengan terbentuknya plaque yang ukurannya sama.

## 2.7  Propagasi Bakteriofag (adaptasi Ranjani,
2018)
Untuk proses propagasi bakteriofag X. oryzae dimulai dengan pengambilan plaque hasil purifikasi
dengan ukuran yang sama menggunakan blue tip yang sudah dipotong pada bagian ujungnya, Plaque kemudian  diambil  akan  dicampurkan  ke  dalam medium NB ( Nutrient Broth ) cair sebanyak 25 ml serta  ditambahkan  kultur  bakteri X.  oryzae sebanyak  2  mL  dan  ditutup  dengan  kapas  dan dilapisi  aluminium  foil.  Sampel  selanjutnya dihomogenkan  menggunakan shaker pada kecepatan 100 rpm selama 48 jam. Setelah 48 jam, sampel  disentrifuse  pada  kecepatan  6.000  rpm selama 20 menit hingga memperoleh supernatan yang  jernih  sebagai stock lysate hasil  propagasi dan  disimpan  pada tabung falcon steril. Lysate tersebut  kemudian  dilakukan  pengujian plaque assay melalui seri pengenceran 10 -1 s.d. 10 -10 dalam menggunakan medium NB ( Nutrient Broth ) cair. Lysate dalam  setiap  seri  pengenceran  diambil sebanyak 50 µL dan dimasukkan dalam tabung yang berlabel 10 -1 dan dilakukan pengulangan hingga seri pengenceran 10 -10 . Selanjutnya kultur bakteri Xo (OD 600nm = 0,30)  sebanyak 500 µL dimasukkan ke dalam  tabung  reaksi  steril  dan  yang  telah ditambahkan sebanyak 50 µL lysate pada setiap seri pengenceran. Setiap sampel kemudian ditambahkan medium NA soft agar sebanyak 5 mL dan dituang dalam petridish yang berisi medium NA ( Nutrient Agar )  yang memadat.  Setiap  sampel  selanjutnya diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  30 o C. Terbentuknya plaque dari  seri  pengenceran dihitung  untuk  memperoleh  titer  bakteriofag. Rumus perhitungan titer bakteriofag ditentukan dengan rumus (Hatfull, 2020 ):
bakteriofag  titer = jumlah plaque x 1000µL x faktor pengenceran 50µL               1mL
2.8    Uji  Stabilitas  Bakteriofag  terhadap  pH (adaptasi  Czajkowski,  2014)
Pengaruh  pH  terhadap  stabilitas  partikel bakteriofag diuji dengan mengambil 250 µL lysate bakteriofag X.  oryzae hasil  propagasi  dan dimasukkan pada microtube . Selanjutnya, sebanyak 3 sampel lysate bakteriofag X. oryzae dilakukan pengecekan  pH  menggunakan  pH strip . Penambahan larutan HCl 0,1 M diteteskan pada sampel hingga mencapai pH 2 dan 5 untuk menguji bakteriofag  terhadap  kondisi  asam,  sedangkan penambahan larutan NaOH 0,1 M diteteskan pada sampel hingga mencapai pH 9 dan 12 untuk menguji ketahanan bakteriofag pada kondisi basa. Sampel kemudian diinkubasi selama 60 menit. Selanjutnya
stabilitas bakteriofag terhadap pH diamati respon pembentukan plaque dengan  menggunakan metode double layer agar . Pengujian ini diulang sebanyak 3 kali. Berikut alur penelitian isolasi dan uji  stabilitas  bakteriofag Xanthomonas  oryzae terhadap pH (Gambar 1.).

## 3.  HASIL  DAN  PEMBAHASAN
3.1  Isolasi  Bakteriofag Xanthomonas  oryzae
Isolasi bakteriofag merupakan tahap pertama dalam  mendapatkan  bakteriofag Xanthomonas oryzae ,  dengan  ditunjukkan  adanya  zona transparan ( plaque ) dalam lingkaran yang berlatar belakang warna hitam. Zona transparan ( plaque ) yang  terbentuk  memperlihatkan  bakteri Xanthomonas oryzae diinfeksi oleh bakteriofag. Bitton  (2002)  menyatakan  bahwa  terbentuknya plaque dengan ukuran dan morfologi yang beragam pada jenis bakteriofag diakibatkan infeksi oleh fag pada bakteri sebagai host. Pada Gambar 2, hasil isolasi  bakteriofag  dari  sampel  tanah  sawah  di
Kelurahan Kecandran memiliki potensi cukup besar dengan dihasilkan 3 sampel, yaitu: K1(Kecandran 1), K2 (Kecandran 2), dan K3 (Kecandran 3) yang positif  adanya  bakteriofag Xanthomonas  oryzae dengan  ukuran  beragam.  Jumlah plaque yang terbentuk sangat banyak, karena pada saat proses pengambilan sampel kondisi tanah memiliki tekstur padat dan tidak banyak mengandung air. Selain itu, sampel diambil pada pagi hari yang tidak terkena matahari  secara  langsung.  Sampel  ditemukan bakteriofag yang beragam karena diambil pada saat musim  penghujan.  Shende et  al., (2017) menyatakan  bahwa  keberadaan  bakteriofag  di alam  sangat  tersebar  luas.  Lingkungan  yang ditinggali  oleh  bakteri  inang  adalah  sumber keberadaan berbagai jenis bakteriofag yang bisa diisolasi untuk berbagai tujuan.
3.2 Purifikasi Bakteriofag Xanthomonas oryzae
Purifikasi  merupakan  proses  untuk memisahkan  bakteriofag Xanthomonas  oryzae yang  beragam  hingga  memperoleh  partikel
Gambar 1. Prosedur Isolasi dan Uji Stabilitas Bakteriofag terhadap pH
Gambar 2. Hasil Isolasi Bakteriofag Xanthomonas oryzae K1, K2, K3. Tanda panah mereprentasikan zona pertumbuhan bakteri Xo dan tanda dalam lingkaran dengan latar belakang warna hitam merepresentasikan plaque.
bakteriofag tunggal. Hasil purifikasi ditandai dengan munculnya plaque-plaque dengan  ukuran  yang sama  (Dabrowska et  al., 2005).  Ul  Haq et  al., (2012)  menyatakan  bahwa  tujuan  dilakukan purifikasi  ialah  untuk  menghindari  terjadinya kontaminasi serta memastikan bahwa bakteriofag X. oryzae yang dihasilkan murni. Pada Gambar 3 menunjukkan bahwa hasil  purifikasi  sampel  K1 (Kecandran  1)  dan  K3  (Kecandran  3)  memiliki ukuran plaque yang cenderung sama, sedangkan pada sampel K2 (Kecandran 2) memiliki ukuran plaque yang  lebih  besar.  Perbedaan  ini  karena kemungkinan  ukuran plaque yang  berbeda diakibatkan oleh waktu lisis serta morfologi virion
bakteriofag (Hardanti et al. , 2018). Nindita (2013) menyatakan  bahwa  purifikasi  atau  pemurnian bakteriofag tunggal merupakan proses penting yang dilakukan sebelum perbanyakan partikel bakteriofag.

## 3.3 Propagasi Bakteriofag Xanthomonas oryzae
Perbanyakan  atau  propagasi  bakteriofag bertujuan  untuk  meningkatkan  titer  bakteriofag Xanthomonas  oryzae .  Metode  yang  digunakan dalam proses propagasi ini menggunakan plaque assay . Hasil penelitian menunjukkan bahwa sampel K1, K2, dan K3 dapat dipropagasi yang ditampilkan melalui Tabel 1.
Gambar 3. Hasil Purifikasi Bakteriofag Xanthomonas oryzae K1, K2, K3
Tabel 1. Propagasi Bakteriofag Xanthomonas oryzae K1, K2, K3
Sampel Hasil plating Jumlah plaque Titer bakteriofag (PFU/mL) K1(Kecandran 1) 15 3,0.10 10 K2 (Kecandran 2) 25 5,0.10 10 K3 (Kecandran 3) 8 1,6.10 10
Pada Tabel 1, sampel K1 diketahui jumlah titer plaque yaitu 3x10 10 PFU/mL, K2 jumlah titer fag yaitu 5x10 10 PFU/mL, sedangkan pada sampel K3 dengan jumlah titer plaque 1,6x10 10 PFU/mL. Zona transparan ( plaque ) dengan latar belakang warna hitam yang terbentuk dapat dihitung dengan satuan Plaque  Form  Units (PFU/mL)  (Hayati et  al. , 2016).  Data  tersebut  menunjukkan  bahwa bakteriofag X. oryzae dapat dipropagasi dan titer bakteriofag tertinggi terlihat pada sampel K2 dan titer  bakteriofag  terendah  pada  sampel  K3. Madigan (2012) menyatakan bahwa variasi dari titer bakteriofag disebabkan oleh sistem pertahanan bakteri yang diinfeksi oleh bakteriofag. Lisis dari inang bakteri merupakan proses terakhir didalam infeksi siklus bakteriofag litik (Taj et al., 2014). Hasil  propagasi dapat digunakan dalam karakterisasi morfologi, molekuler, dan fungsional bakteriofag sebelum diaplikasikan sebagai  biokontrol  bakteri Xanthomonas oryzae di  lapangan.

## 3.4 Uji Stabilitas
Pengujian stabilitas bertujuan untuk mengetahui karakterisasi fungsional bakteriofag. Sampel dari
K1, K2 dan K3 telah diuji ketahanannya terhadap pH asam, netral, maupun basa. Hasilnya ditampilkan pada Gambar 4.
Gambar 4 menunjukkan bakteriofag K1, K2, K3  stabil  pada  pH  7.  Hasil  penelitian  ini  sama dengan  penelitian  Jurczak-Kurek et  al., (2016) yang dilaporkan bahwa bakteriofag relatif stabil pada  rentan  pH  7-10.  Pengaruh  pH  2  dan  5 terhadap  sampel  K1,  K2,  dan  K3  menunjukkan penurunan  titer  bakteriofag.  Penurunan  partikel bakteriofag tertinggi pada pH 2 menunjukkan bahwa bakteriofag  tidak mampu  bertahan pada  kondisi asam, karena kemungkinan partikelnya mengalami denaturansi protein (Thung et al., 2017). Sampel K1 dan K3 mengalami penurunan titer pada pH 12.  Hal  ini  dikarenakan  kemungkinan  disosiasi protein kapsid, yang disebabkan oleh konsentrasi ion hidrogen dan hidroksil (Litt et al., 2017). Sampel K2 menunjukkan adanya kestabilan titernya pada pH 9 dan pH 12. Penurunan titer  tertinggi pada sampel  K1  menunjukkan  bahwa  K1  merupakan partikel bakteriofag yang tidak stabil pada kondisi asam  maupun  kondisi  basa.  Karakteristik bakteriofag stabilitas pH serta temperatur panas merupakan  sifat  penting  yang  dapat  menjadi
Gambar 4. Hasil Uji Stabilitas Bakteriofag Xanthomonas oryzae K1, K2, K3 terhadap pH
signifikan  di  dalam  berbagai  aspek  pada  terapi bakteriofag (Jamal et al., 2015).

## 4.  KESIMPULAN
Hasil penelitian disimpulkan bahwa ditemukan 3 partikel bakteriofag, yakni: K1 (Kecandran 1), K2 (Kecandran 2), dan  K3 (Kecandran 3) yang diisolasi  dari  lahan  persawahan  di  Kelurahan Kecandran, Kecamatan Sidomukti, Kota Salatiga. Hasil karakterisasi fungsional melalui uji stabilitas pH  dari  ketiga bakteriofag  menunjukkan  bahwa ketiga  bakteriofag  stabil  pada  pH  7  dan  pH  9. Sedangkan pada kondisi lingkungan asam sampel bakteriofag  tidak  stabil,  sehingga  mengalami penurunan  titer  secara  signifikan.  Pada  pH  12, ketiga  sampel  mengalami  penurunan  titer  dan penurunan tertinggi terdapat pada sampel K1 yang mengindikasikan  ketidaktahanan  partikelnya terhadap kondisi basa.

## 5.  UCAPAN TERIMA  KASIH
Ucapan terima kasih disampaikan kepada Universitas  Kristen  Satya  Wacana  yang mendukung penelitian ini melalui hibah dana penelitian internal.

## 6.  DAFTAR  PUSTAKA
Bitton, G. 2002. Encyclopedia  of  environmental microbiology . https://www.worldcat.org/ title/encyclopedia-of-environmental- microbiology/oclc/47136460. Diakses pada Desember 2021.
Dabrowska, K., K. Switała-Jelen, A. Opolski, B.
Weber-Dabrowska,  & A.  Gorski.  2005. A review:  Bacteriophage  penetration  in vertebrates. Journal  of  Applied Microbiology . 98 (1): 7–13.
Hardanti, S., K. W. Agustin, & D. R. P. Widya. 2018.
Isolasi dan Karakterisasi Bakteriofag Spesifik Salmonella typhi dari  Kulit Ayam. Jurnal Teknologi Pertanian. 19 (2): 107-116.
Hatfull, G. 2020. Prosedure for The Isolation and Purification  of A  Phage.  Phagehunting program. University of Pittsburgh. Pittsburgh.
Hayati,  Z.,  N.  J.  Siti,  &  S. Agung. 2016.  Isolasi Bakteriofag Spesifik Pseudomonas sp. DA1 Dari Biofilm pada Sistem Pengisian Air Minum Isi Ulang. Jurnal Biologi. 5 (3): 29–35.
Hidayat,  M.  2017. Pengolahan  Sampah  di Lamteuba .  85–91.
Jamal, M., H. Tahir, R. D. Chyntanya, & A. Saadia. 2015.  Isolation  and  Characterization of  a Myoviridae  MJ1  Bacteriophage Against Multi-Drug Resistant Escherichia coli 3. J Microbiol. 8 (11): e325917
Jurczak-Kurek,  A.,  T.  Gasior,  B.  Nejman- Faleńczyk, S. Bloch, A. Dydecka, G. Topka, A.  Necel,  M.  Jakubowska-Deredas,  M. Narajczyk, M. Richert, A. Mieszkowska, B. Wróbel, G. W. Grzyn, & A. W. Grzyn. 2016. Biodiversity of Bacteriophages: Morphologi- cal  and  Biological  Properties  of A  Large Group  of  Phages  Isolated  from  Urban Sewage. Scientific Reports . 6: 1–17. Lang, J. M., J. P. Hamilton, M. G. Q. Diaz, M. A.
Van  Sluys,  M.  R.  G.  Burgos,  C.  M.  Vera Cruz, C. R. Buell, N. A. Tisserat, & J. E. Leach.  2010.  Genomics-based  Diagnostic Marker  Development  for Xanthomonas oryzae pv.  oryzae  and  X.  oryzae  pv. oryzicola. Plant Disease . 94 (3): 311–319. Lee, C. N., R. M. Hu, T. Y. Chow, J. W. Lin, H. Y. Chen, Y.  H. Tseng  &  S.  F.  Weng.  2007. Comparison  of  Genomes  of  Three Xanthomonas  oryzae Bacteriophages. BMC Genomics . 8: 1–11.
Nindita, L.O., & A. K.Wardani. 2013. Purifikasi Phage Cocktail serta Spektrum Penghambatannya terhadap  Bakteri  Penyebab Foodborne Disease . 14 (1): 47–56.
Litt,  P.K.,  &  J.  Divya.  2017.  Isolation  and Physiomorphological  Characterization  of Escheria  coli O157:  H7-  Infecting Bacteriophages Recovered from Beef Cattle Operations. International  of  Journam Microbiology . 2017: 3-11. Madigan,  M.  T.  2012. Brock  Biology  of Microorganisms (13th ed.). https://www.amazon.com/ Brock-Biology-Microorganisms-Michael-Madigan- d p - 0 3 2 1 6 4 9 6 3 X / d p / 0 3 2 1 6 4 9 6 3 X / ref=mt_other?_encoding=UTF8&me=&qid=. Diakses pada Desember 2021.
Ranjani, P., Y. Gowthami, S. Gnanamanickam, &
P.  Palani.  2018. Bacteriophages:  A  New Weapon  for  the  Control  of  Bacterial Blight  Disease  in  Rice  Caused  by Xanthomonas  oryzae . Microbiology  and Biotechnology Letters. 46 (4): 346-359. Semangun, H. 2008. Penyakit-Penyakit Tanaman Pangan  di  Indonesia . https://ugmpress.
ugm.ac.id/id/product/pertanian/penyakit- penyakit-tanaman-pangan-di-indonesia. Diakses pada Desember 2021.
Shende,  R.  K.,  S.  D.  Hirpurkar,  C.  Sannat,  N. Rawat, & V. Pandey. 2017. Isolation and Characterization  of  Bacteriophages  With Lytic Activity Against Common Bacterial Pathogens. Veterinary  World. 10  (8):
973-978.
Taj, M. K., J. X. Ling, L. L. Bing, Z. Qi, I. Taj, T. M. Hassani, Z. Samreen, & W. Yunlin. 2014. Effect of Dilution, Temperature and pH on The Lysis Activity of T4 Phage Against E. coli BL21. Journal  of  Animal  and  Plant Sciences . 24 (4): 1252–1255.
Thung, T. Y., K. J. K. Premarathne, W. S. Chang, Y. Y. Loo, Y. Z. Chin, C. H. Kuan, C. W. Tan, D. F. Basri, J. W. M. Radzi, & S. Radu.
2017.  Use  of A  Lytic  Bacteriophage  to Control Salmonella  enteritidis in  Retail Food. LWT  -  Food  Science  and Technology . 78: 222–225.
Ul Haq, I., W. N. Chaudhry, M. N. Akhtar, S. Andleeb,
& I.  Qadri. 2012.  Bacteriophages and  their Implications  on  Future  Biotechnology:   A review. Virology Journal . 9: 1–8.
Wahyudi, A. T., S. Meliah, & A. Nawangsih. 2011. Xanthomonas  oryzae pv. oryzae Bakteri Penyebab Hawar Daun pada Padi: Isolasi, Karakterisasi,  dan  Telaah  Mutagenesis dengan  Transposon. Makara,  Sains .  15 (1): 89–96.
Yanti, S., Marlina, & Fikrinda. 2018. Pengendalian Penyakit  Hawar  Daun  Bakteri  pada  Padi Sawah  Menggunakan  Fungi  Mikoriza.
Jurnal Agroecotania .  1  (2):  14–21.