## AQUASAINS (Jurnal Ilmu Perikanan dan Sumberdaya Perairan)

## PENGARUH PERTUMBUHAN, LEMAK DAN PROFIL ASAM
AMINO ESSENSIAL Skeletonema costatum DALAM KULTUR MASSAL

## MENGGUNAKAN MEDIA KULTUR TEKNIS YANG BERBEDA
Vivi Endar Herawati 1 · Johannes Hutabarat 1
Ringkasan Skeletonema costatum adalah pakan alami yang banyak digunakan khusu- nya dalam budidaya udang, kandungan gi- zi yang tinggi, ukuran yang sesuai dengan bukaan mulut larva merupakan keunggulan dari Skeletonema costatum. Tujuan pene- litian ini adalah untuk menemukan perbe- daan media kultur teknis (Walne dan Gui- llard) secara massal pada Skeletonema cos- tatum terhadap pertumbuhan, lemak dan profil asam amino essensial. Metoda kultur yang digunakan adalah secara massal de- ngan dua media kultur teknis yang berbeda (Double Walne dan Guillard teknis), anali- sis lemak dilakukan dengan analisa proksi- mat dan profil asam amino essensial meng- gunakan HPLC Eurospher 100-5 C18, 250 x 4,6mm. Hasil penelitian menunjukkan bah- wa media kultur yang terbaik adalah Gui- llard teknis dimana pertumbuhan pada Ske- letonema costatum yaitu 86,75 x 104sel/ml dengan lama fase stasioner 52 jam, lemak 7,74%, profil asam amino essensial terting- gi pada Skeletonema costatum, yaitu asam amino Threonin yaitu 2359,05 ppm.
Keywords Skeletonema costatum, Media kultur teknis Guillard dan Double Walne, Pertumbuhan, lemak dan asam amino essensial, Kultur massal
1 )Program Studi Budidaya Perairan, Jurusan Per- ikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl Prof Soedharto, Sema- rang 50275 E-mail: anshinvie@yahoo.com

## Received: 25 Juni 2014
Accepted: 12 Juli 2014

## PENDAHULUAN
Pakan alami sebagai penunjang budidaya ikan dan sekaligus sebagai faktor pendu- kung keberhasilan budidaya semakin giat dibudidayakan [1]. Pakan alami sendiri me- rupakan pakan hidup yang berasal dari alam.
Skeletonema costatum adalah diatom yang merupakan sumber pakan alami bagi la- rva ikan dan sangat baik untuk udang [2]. Hal ini karena kandungan nutrisi dan ukur- an dari S. costatum sangat sesuai dengan bukaan mulut terutama larva udang sta- dia naupli sampai dengan mysis. S. costa- tum adalah diatom berbentuk rantai de- ngan ukuran sel berkisar antara 4-15 µm [2]. Kelebihan dari ditom memiliki nilai nu- trisi yang tinggi dengan kandungann prote- in berkisar antara berkisar 21,63 - 32,05% [3] dan [4]. Kebutuhan larva khususnya udang akan S. costatum sebagai sumber pakan ala- mi dalam jumlah yang banyak, oleh kare- na itu untuk memenuhi kebutuhan pakan alami tersebut kultur dalam skala massal S. costatum sangatlah mutlak untuk me- nunjang suatu usaha perbenihan khusus- nya udang.
Kebutuhan S. costatum sebagai pakan ala- mi dalam kegiatan pembenihan dibutuhk-
222 Vivi Endar Herawati 1 , Johannes Hutabarat 1
an dalam jumlah yang besar, maka diper- lukan suatu kultur masal dengan kepadat- an yang tinggi dalam waktu yang lebih pen- dek. Selain untuk mendapatkan kelimpah- an sel yang tinggi, maka dalam kultur ma- sal diharapkan pula memperoleh kandung- an nutrisi maksimal melalui lemak dan pro- fil asam amino essensial.
Dalam rangka memperoleh pertumbuhan dan nutrisi yang baik, diperlukan media yang sesuai. Media kultur yang sering di- gunakan untuk mengkultur diatom adalah Guillard [5]; [6]; [7] dan double Walne [8]; [9]; [3]. Modifikasi media Walne (double Wal- ne dan penambahan silikat) mampu me- ningkatkan pertumbuhan jumlah sel S. cos- tatum 3-4 kali lipat [8] dan memacu per- tumbuhan 4-5 kali lipat [3]. Pada peneli- tian ini dikaji secara lebih mendalam ten- tang penggunaan perbedaan media kultur teknis (Walne yang dimodifikasi dan Gu- illard) terhadap pertumbuhan, lemak dan profil asam amino essensial Skeletonema cos- tatum yang dikultur secara massal.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk me- nemukan perbedaan media kultur teknis double Walne dan Guillard dalam kultur massal terhadap pertumbuhan, lemak dan profil asam amino essensial Skeletonema cos- tatum dalam dua media kultur teknis yang berbeda.

## MATERI DAN METODE
Bahan – bahan yang digunakan dalam pe- nelitian ini adalah bibit Skeletonema cos- tatum Media Kultur uji yang digunakan adalah pupuk Walne [6] dengan menggu- nakan komposisi double Walne dengan pe- nambahan silikat [7] dan Guillard teknis [6]. Alat- alat yang digunakan dalam pene- litian ini antara lain adalah autoklaf, hae- mocytometer, bak fiber volume 2 ton, lux meter, water quality checker, mikroskop, planktonet, batu dan selang aerasi, eleme- yer, HPLC Eurospher 100-5 C18, 250x4,6mm untuk analisa asam amino essensial.
Bibit Diatom diperoleh dari biakan murni Laboratorium Pakan Alami BBPBAP Je- para. Sebelum ditanam bibit S. costatum
Tabel 1 Media kultur teknis double Walne dan Guillard yang digunakan untuk mengkultur S. cos- tatum
Komposisi Walne (gram) Guillard (gram) Larutan nutrien: NaH 2 PO 4 .2H 2 O 20 10 NaNO 3 100 84,2 Na 2 EDTA 5 10 Na 2 SiO 3 40 50 MnCl 2 .H 2 O 0,36 0,36 FeCl 3 1,3 2,9 H 3 BO 3 10 - Akuades 1000 ml 1000 ml Larutan Trace metal: ZnCl 2 21 - CoCl 2 .6H 2 O 2 2 (NH 4 ) 8 .Mo 8 O 24 .4H 2 O 0,9 1,26 CuSO 4 .7H 2 O 20 1,96 FeCl 3 .6H 2 O 3,15 3,15 Akuades 100 ml Vitamin: Vitamin B12 0,1 0,01 Thiamin 20 0,2 Biotin 0,1 0,01
Tabel 2 Kualitas air media kultur penelitian Parameter Guillard Walne Pustaka pH 8,31 8,17 7,2-8,5 ∗ DO 2,96 2,96 2,00 – 4,00 ∗∗ Suhu 30,20 30,53 25-31 ∗∗∗ Salinitas 25-28 25-28 17-30 ∗∗∗∗ Ket. : ∗ [5] ; [7] ∗∗ [5] ∗∗∗ [11]; [7] ∗∗∗∗ [11]; [12]
di aerasi selama 15 menit agar tidak meng- endap. Bibit S. costatum kemudian dita- nam dengan kepadatan awal 50.000 sel/mL.
Media kultur yang digunakan dalam pene- litian ini adalah media kultur double Wal- ne dan Guillard teknis untuk mengkultur secara massal Chaetoceros calcitrans dan S. costatum tersaji dalam tabel 1. Air me- dia yang digunakan kultur dipersiapkan pa- da salinitas 28 ppt [9]. Kondisi lingkungan kultur tersaji dalam tabel 2.
Adapun tahap pelaksanaan penelitian yai- tu membuat media dengan cara mencam- pur semua bahan kecuali vitamin, kemu- dian distirer hingga homogen. Setelah itu media di autoclave selama 2 jam. Meng- hitung volume media uji perlakuan, yai-
tu masing-masing 1500L untuk setiap per- lakuan yang terdiri dari campuran pupuk dan air laut steril. Jumlah bibit yang di- inginkan untuk penebaran awal dihitung dengan menggunakan rumus pengenceran bibit sebagai berikut [2] :
V 1 x N 1 = V 2 x N 2 (1)
dimana:
V 1 : Volume bibit yang diperlukan untuk penebaran awal
V 2 : Volume air media yang akan ditebari bibit
N 1 : Jumlah stock S. costatum
N 2 : Jumlah S. costatum yang diingiinkan.
Setelah kepadatan awal diketahui, menghi- tung volume larutan stok kultur yang ha- rus dimasukkan ke dalam media 1 L agar didapat kepadatan sel awal 50.000 sel/mL. Menghitung jumlah kepadatan dengan Ha- emocytometer dan pengamatan dilakukan setiap 4 jam untuk S. costatum.
Pemanenan S. costatum dilakukan dengan cara mengangkat aerasi kemudian disaring menggunakan planktonet, sehingga menda- patkan hasil panen S. costatum dikeringk- an sehingga berbentuk serbuk.
Lemak dianalisis proksimat dengan meng- gunakan metode AOAC (1990) [4]. Analisis asam amino essensial dengan menggunak- an HPLC dilakukan di Laboratorium Pe- ngembangan dan Penelitian dan Pengujian Terpadu GajahMada, Yogyakarta, mengi- kuti prosedur LPPT Yogyakarta. Sampel ditimbang sampel ± 2,5 gram; dimasukkan dalam tabung reaksi kaca tertutup kemu- dian ditambahkan 15 ml HCl 6N, divortek hingga homogeny selanjutnya dihidrolisis menggunakan autoklaf pada suhu 110ºC selama 12 jam kemudian didinginkan pada suhu ruang, lalu dinetralkan dengan NaOH 6N. Tambahkan 2,5 ml Pb Acetat 40 % dan 1 ml asam oksalat 15 %, Ditepatkan 50,0 mL menggunakan aquabidest. Selanjutnya diambil ± 3 ml saring millex 0,45. Untuk injeksi ke HPLC diambil larutan yang telah dimillex sebanyak 25 µl + 475µL lar.OPAA,
Gambar 1 Pertumbuhan S. costatum dalam me- dia kultur double Walne dan Guillard. [2]
vortek. Direaksikan selama 3 menit. Kemu- dian diinjeksikan 30 µL ke HPLC.
Analisa data dilakukan dengan menggunak- an uji T, hal ini bertujuan untuk meng- etahui perbedaan antar perlakuan kultur dengan menggunakan media kultur teknis double Walne dan Guillard teknis terhadap pertumbuhan S. costatum.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Pertumbuhan
Salah satu tujuan kultur algae adalah un- tuk mendapatkan kelimpahan sel yang ter- tinggi dengan kandungan nutrisi optimal [13], hal ini dikarenakan pakan alami me- rupakan pakan mutlak yang diberikan pa- da larva ikan dan udang karena kandungan nutrisi yang terdapat dalam pakan alami tidak dapat digantikan oleh pakan buat- an apapun. pertumbuhan S. costatum hasil penelitian disajikan pada Gambar 1. Ada- pun fase pertumbuhan S. costatum dalam media kultur teknis yang berbeda untuk ti- ap fase tersaji pada tabel 3.
Pertumbuhan S. costatum dalam media kul- tur double Walne lebih cepat dibandingkan dalam media kultur teknis Guillard, hal ini dikarenakan kepekatan media kultur dou- ble Walne lebih pekat dibandingkan dengan media kultur Guillard. Penelitian [13], me- nyatakan bahwa kepekatan media kultur berpengaruh terhadap cepat atau lambat- nya masa pertumbuhan mikroalga apabi- la tidak ada perbedaan media kultur maka pertumbuhan microalgae akan berjalan de- ngan cepat sebaliknya apabila ada perbe-
224 Vivi Endar Herawati 1 , Johannes Hutabarat 1
Tabel 3 . Fase pertumbuhan S. costatum dalam media kultur teknis Walne dan Guillard
Perlakuan Fase Lag (Sel/ml) ± sd Fase Eksponensial (Sel/ml) ± sd Fase Stasioner(Sel/ml) ± sd Fase Kematian (Sel/ml) ± sd Media Guillard 48,00 x 104±0,018 b 70,25 x 104 ±0,020 b 86,75 x 104±0,022 b 6,70 x 104±0,028 b Media Walne 117,17 x 104±0,032 b 160,83 x 104±0,040 b 160,83 x 104±0,040 b 122,25 x 104±0,022 b
keterangan : b = berbeda nyata
daan maka microalgae akan membutuhkan waktu yang lama untuk pertumbuhannya.
Berdasarkan hasil uji statistik pada fase lag menunjukkan bahwa dengan media kul- tur teknis Walne dan Guillard berpenga- ruh nyata (P<0,05) terhadap pertumbuh- an S. costatum hal ini diduga karena ke- pekatan media kultur teknis Walne ham- pir sama dengan cairan sel tubuh S. cos- tatum sehingga pertumbuhan S. costatum dalam media kultur Walne lebih cepat di- bandingkan S. costatum dalam media kul- tur teknis Guillard dan fase lag terjadi pa- da pengamatan ke 6 (setelah 24 jam pe- nanaman S. costatum dalam media kul- tur). Selanjutnya hasil uji statistik pada fase eksponensial menunjukkan bahwa de- ngan media kultur teknis Walne dan Gu- illard berpengaruh nyata (P<0,05) terha- dap pertumbuhan S. costatum hal ini di- duga cairan tubuh sel S. costatum hampir sama sehingga S. costatum dalam media kultur teknis Walne lebih cepat mengala- mi pembelahan sel hal ini mengakibatkan pertambahan sel persatuan waktu lebih be- sar daripada pertambahan waktu itu sendi- ri dan fase eksponensial terjadi pada jam ke 28 (pengamatan 7). Berdasarkan hasil uji statistik pada fase stasioner menunjukkan bahwa dengan media kultur teknis Walne dan Guillard berpengaruh nyata (P>0,05) terhadap pertumbuhan S. costatum , Per- tumbuhan S. costatum , kepadatan terting- gi terjadi pada S. costatum dalam media kultur teknis Walne, akan tetapi lama fase stasioner berlangsung bersamaan dengan fase eksponensial sehingga lama fase sta- sionernya tidak ada. Hal ini berbeda pa- da S. costatum dalam media kultur teknis Guillard yang mempunyai fase stasioner 4 jam lebih lama. Sehingga pada media kul- tur Guillard teknis lebih menguntungkan dalam budidaya pakan alami selain itu la- manya fase stasioner berkaitan erat dengan
penyerapan nutrient dalam media kultur oleh S. costatum Sehingga media kultur Guillard teknis adalah media kultur terba- ik untuk S. costatum .
Adanya perbedaan kepekatan media kultur dengan cairan sel dalam microalgae akan berpengaruh terhadap pemulihan enzym dan konsentrasi substrat ke tingkat selanjutnya untuk pertumbuhan serta masuknya unsur hara dalam sel melalui proses difusi sebagai akibat perbedaan konsentrasi antar media kultur dengan cairan tubuh.

## Lemak
Pada tabel 4 tersaji lemak S. costatum da- lam media kultur Walne dan Guillard tek- nis. Analisis lemak tertinggi pada fase eks- ponensial yaitu 7,74% dalam media kul- tur teknis guillard, dan pada fase stasio- ner akhir 3,37%. Lemak merupakan fak- tor yang penting dalam pertumbuhan [2]. Perbedaan kandungan nutrisi Skeletonema costatum diakibatkan karena perbedaan kom- posisi nutrien dalam media kultur teknis Walne dan Guillard.
Nutrient yang berpengaruh terhadap per- bedaan kandungan nutrisi Skeletonema cos- tatum pada protein (asam amino) dan le- mak (asam lemak) dalam media kultur tek- nis Walne dan Guillard adalah nitrogen dan Fe. Nitrat sebagai sumber nitrogen dalam media kultur di transport secara langsung ke dalam sel dengan adanya rangasang ATPa- se dari Cl, sebelum mengalami proses diasi- milasi membentuk asam amino bergabung menjadi makromolekul atau protein inilah yang akan menghidrolisis lemak menjadi asam lemak dengan reaksi enzym lipase. Pernyataan ini sejalan dengan [14], bah- wa nitrogen merupkan makronutrient yang dapat mempengaruhi pertumbuhan mela- lui kegiatan metabolisme khususnya bio- sintesis protein, sehingga terjadi reaksi enzyma
Tabel 4 Lemak S. costatum dalam media kultur Walne dan Guillard teknis
Parameter Media Guillard (%) Fase Stasioner Media Walne (%) Fase Stasioner Eksponensial (± sd) Akhir (± sd) Eksponensial (± sd) Akhir (± sd) Lemak 7,74±0,040 3,37±0,034 7,14±0,035 4,45±0,043
lipase yang dihasilkan protein yang kemu- dian dihidrolisis lemak menjadi asam le- mak.
Selain nitrogen perbedaan komposisi Fe di- mana pada media Guillard teknis lebih ba- nyak dibandingkan media Walne teknis ber- pengaruh terhadap kandungan protein dan lemak Chaetoceros sp. dan Skeletonema sp . [7], menyatakan bahwa FeCl 3 (besi) me- miliki kemampuan untuk mereduksi nitrat menjadi nitrit kemudian mereduksi nitrit menjadi amonium. Amonium merupakan sumber nitrogen. Nitrogen merupakan nu- trien yang dibutuhkan paling banyak un- tuk pertumbuhan mikroalgae.

## Profil Asam Amino Essensial
Pada Tabel 5 tersaji profil asam amino es- sensial dimana konsentrasi total asam ami- no essensial S. costatum . Hasil analisis kan- dungan asam amino essensial pada S. cos- tatum dilihat pada tertinggi dalam media kultur Guillard. Berdasarkan kromatogram tertinggi, yaitu Threonin S. costatum 2359,05 ppm dalam media kultur Guillard teknis dan 2070,73 ppm pada media kultur tek- nis Walne. asam amino essensial pada S. costatum dilihat pada kromatogram tere- dah yaitu Isoleucyne, yaitu 84,89 ppm da- lam media kultur Guillard teknis dan 61,47 ppm pada media kultur teknis Walne.
Komposisi asam amino dari protein diatom sangat mirip antar spesies [15] dan relatif tidak terpengaruh oleh fase pertumbuhan serta kondisi cahaya. Berdasarkan hasil pe- nelitian asam amino tertinggi S. costatum terdapat pada media kultur Guillard tek- nis. Dalam penelitiannya [15], mendapatk- an hasil untuk diatom berkisar 1,83 ppm - 2,21 ppm, berdasarkan penelitian yang di- lakukan mendapatkan hasil 2,05 ppm un- tuk S. costatum.
Tabel 5 Profil asam amino essensial S. costatum dalam media kultur teknis double Walne dan Gu- illard
P arameter uji Skeletonema
sp. Guillard (ppm) (± sd) Skeletonema sp. W alne (ppm) (± sd) Selisih Nilai (ppm)
L-Histidine 173,72 ± 0,012
113,33 ± 0,015
60,39 (G)
L-Threonine
2359,05 ± 0,018
2070,73 ± 0,019 288,3 (G)
L-Arginine
339,55 ± 0,011
267 ± 0,019 72,55 (G)
L-Methionine
71,07 ± 0,037
51,86 ± 0,031 19,21 (G)
L-V aline+L-Thryptophan 124,37 ± 0,022
88,36 ± 0,016 36,01(G)
L-Phen ylalanine 187,54 ± 0,019 145,99 ± 0,044 41,5 (G)
L-Isoleucine
84,89 ± 0,013
61,47 ± 0,017 23,42 (G)
L-Leucine
298,09 ± 0,037
220,9 ± 0,026 77,19 (G)
L-Lycine
331,65 ± 0,019
226,67 ± 0,011
104,98 (G)
Dari hasil kromatogram terdapat asam ami- no threonin yang tertinggi, adapun fungsi dari asam amino threonin sebagai kerangka dasar senyawa vitamin karena asam nukle- at yang berfungsi sebagai pengikat ion lo- gam yang diperlukan dalam reaksi enzyma- tis selain itu threonin juga berfungsi mem- bantu pencegahan penumpukan lemak [4].
226 Vivi Endar Herawati 1 , Johannes Hutabarat 1
Selanjutnya dari hasil kromatogram terda- pat asam amino valin dan triptofan beri- katan hal ini dikarenakan triptofan meru- pakan asam amino essensial yang mempu- nyai rantai cabang aromatik dan valin me- rupakan asam amino essensial yang mem- punyai rantai cabang alifatis. Dua asam amino yang berikatan melalui satu ikatan peptida dengan cara melepas molekul air ini sering disebut reaksi keseimbangan le- bih ke arah hidrolisis dengan tidak memer- lukan energi.
Asam – asam amino digabungkan oleh sua- tu ikatan peptida (-CONH-) dimana gugus karboksil suatu asam amino berkaitan de- ngan gugus amino dari molekul asam ami- no lain menghasilkan suatu dipeptida de- ngan melepaskan molekul air [16]. Dipepti- da ini masih mempunyai gugus asam amino dan karboksil bebas sehingga dapat bere- aksi dengan dipeptida dipeptida lain dan akhirnya memebentuk suatu molekul pro- tein.

## SIMPULAN
Media kultur terbaik adalah Guillard tek- nis hal ini berdasarkan pada pertumbuhan, lemak da profil asam amio essensial.
Acknowledgements Terima kasih disampaikan kepada Dinas Perikanan dan Kelautan Maribaya Tegal dan Pemerintah Provinsi Jawa Tengah atas semua fasilitas yang telah diberikan pada saat pe- nelitian. Seluruh staf Satker PPIP Sluke Rembang yang telah banyak membantu. Ucapan terimakasih penulis ucapkan pada ibu Antik Erlina, M.Si; Sis- ka Apriliyanti., S.Pi dan semua staf Laboratorium Pakan Alami BBPBAP Jepara.

## Pustaka
1. Herawati Endar, Johannes Hutabarat, S. Budi Prayitno, Ocky Karna Radjasa, YS. Darman- to. 2013. The Profile Essential Amino Acid, Fatty Acid and The Growth of Chaetoceros gracilis Using Technical Media Culture Gui- llard and Double Walne. FFTC-NTOU Joint International Seminar on Integrating of Pro- missing Technologyfor Aquaculture and Fishe- ries.
2. Herawati V.E., Johannes Hutabarat, S.Budi Prayitno. 2012. The Effect of Essential Amino Acid Profile, Fatty Acid Profile and To Grow- th of Skeletonema costatum using Technical Media Culture Guillard and Double Walne. J. Coast Dev. Vol 16 (1): 48-54. 3. BBPBAP, 2010. “ Pattern of Growth, Protein Content and Production Biomass Skeletone- ma sp At Various Levels of Gram” . Litkayasa report. BBPBAP
4. Herawati, V.E. 2013. “ Analysis of Techni- cal Culture Media Chaetoceros calcitrans and Skeletonema costatum To Improving Quality of Local Artemia salina as a Source of Natu- ral Feeding Larvae of Shrimp Vanname (Lito- pennaeus vannamei).” [Disertation]. Doctoral Program. Universitas Diponegoro. Semarang. 5. Anderson R. 2005. Algal Culturing Tehniques. J. Aquat. Int. 15(4). 239-269.
6. BBPBAP. 2007. “ Application Medium ’Wal- ne’ 2 Dosage and Preparation Techniques Me- dia On Culture Chaetoceros sp Laboratoti- um Scale and Semi Bulk”. Litkayasa Report.
BBPBAP 7. Amsler. D. 2008. Alga Chemical Technology
Department of Biology University of Alabama at Birmingham. Aquaculture 18(5): 105-116.
8. Susanto, A., E. Sutanti dan A. Basyar, 2007. Provision of plankton biomass for shrimp ha- tcheries and aquaculture. Reports test resul- ts. Center for Development of Brackish Water
Aquaculture, Jepara 9. Rousch JM.Scott SE, Sommerfeld MR. 2008.Changes in Fatty Acids Profile of Into- lerant Thermo and Tolerant Marine Diatoms During Temperature Stress.Journal Exp. Ma- rine Biol. 39(5): 145-156 pp. 10. Abdul gani, N., Zuhdi, A. and Sukresi. 2008 Potential Skeletonema costatum and Spiruli- na Microalgae as biodiesel feedstock. Journal Oceatek 5. 15-21 11. Cahyaningsih, S., 2006. “Natural Forage Pro- duction Technical Instructions”. Department of Marine and Fisheries
12. Koniyo, Yuniarti. 2010. “ Biology and Culture Method of Plankton For Natural Feeding Ani- mals Water Larva” . Faculty of Sciences. UNG.
3 (2): 1-6.
13. Fogg, G.E. 1965. Algae Culture and Pyto- plankton Ecology.The University of Wincon- sin Press. Madisson Milk. Wauhe 14. Agustini, N.W.S and Kabinawa, I. N. K. 2011. The Influence of Nitrate Concentration as a Nitrogen Resources and Culture Media Towa- rds The Forming. Biotechnology and Research Center LIPI. Bogor 15. Brown, M.R. 2002. ” Nutritional Value and Use of Microalgae in Aquaculture.” Simposium In- ternasional de Nutrition Acuicola. Mexico.
16. Araujo,S and V. Garcia. 2010. “ Growth and Biochemical Composition of the Diatom Cha- etoceros cf. wighamii brightwell Under Diffe- rent Temperature, Salinityand Carbon Dioxi- de Levels. 1. Protein, Carbohydrates and Li- pids. J.Aquaculture. 24(6):40-48.