## Optimasi Proses Deasetilasi Kitin menjadi Kitosan dari Selongsong Maggot menggunakan RSM
Rendy Ardianto dan Rizka Amalia*
Jurusan Teknologi Rekayasa Kimia Industri, Sekolah Vokasi, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto Tembalang, Semarang, 50275, Indonesia
Email: amaliarizka@live.undip.ac.id

## Abstrak
Maggot ( Hermetia illucens ) adalah organisme yang berasal dari telur Black Soldier Fly (BSF) dan salah satu organisme  pembusuk  karena  mengonsumsi  bahan-bahan  organik  untuk  bertahan  hidup.  Di  Indonesia budidaya  Black  Soldier  Fly  (BSF)  semakin  diminati  belakangan  ini.  Dalam  budidaya  Black  Soldier  Fly  selalu menghasilkan limbah berupa selongsong Black Soldier Fly yang masih belum banyak digunakan yaitu sekitar 2/5 dari total produksi. Saat ini selongsong maggot belum banyak dimanfaatkan. Padahal, selongsong maggot berpotensi menjadi bahan baku alternatif dalam produksi kitosan.. Dengan demikian, Black Soldier Fly (BSF) ini merupakan sumber baru biopolimer kitin yang menarik untuk diteliti dan digunakan dalam berbagai aplikasi. Untuk produksi kitin sendiri ada 3 tahap yaitu meliputi proses demineralisasi, deproteinasi, dan depigmentasi. Untuk  mengubah  kitin  menjadi  kitosan  dilakukan  proses  deasetilasi.  Nilai  derajat  deasetilasi  sangat mempengaruhi kualitas kitosan yang dihasilkan.  Faktor-faktor utama yang menentukan keberhasilan proses deasetilasi  adalah  suhu  dan  waktu  ekstraksi.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui optimasi  produksi  kitosan  berbasis  selongsong  maggot  dengan  variasi  waktu  dan  suhu.  Optimasi  suhu dilakukan pada variasi suhu deasetilasi 60 o C, 70 o C, 80 o C dan variasi waktu 8, 10, dan 12 jam dengan metode Response Surface Metodhology (RSM). Derajat deasetilasi tertinggi diperoleh saat suhu 84,14214°C dengan waktu 10 jam menghasilkan 93,03823%
Kata kunci : maggot, selongsong, kitosan, deasetilasi, RSM.

## Abstract

## Optimization of the Chitin Deacetylation Process to Chitosan from Maggot Sleeves using RSM
Maggot (Hermetia illucens) is an organism that comes from Black Soldier Fly (BSF) eggs and is one of the decaying organisms because it consumes organic materials to survive. In Indonesia, the cultivation of the Black Soldier Fly has been increasingly in demand lately. In Black Soldier Fly cultivation, it always produces waste in the form of Black Soldier Fly casings which are still not widely used, which is around 2/5 of the total production. Currently maggot casings have not been used much. In fact, maggot sleeves have the potential to become alternative raw materials in chitosan production. Therefore, the Black Soldier Fly (BSF) is an interesting new source of biopolymer chitin for research and use in various applications. For the production of chitin itself there are 3 stages which include the process of demineralization, deproteination, and depigmentation. To convert chitin into chitosan, a deacetylation  process  is  carried  out.  The  degree  of  deacetylation  greatly  affects  the  quality  of  the  chitosan produced.  The  main  factors  that  determine  the  success  of  the  deacetylation  process  are  temperature  and extraction time. Therefore, this research was conducted to determine the  optimization of chitosan production based on maggot sleeves with variations in time and temperature. Temperature optimization was carried out at various deacetylation temperatures of 60oC, 70oC, 80oC and time variations of 8, 10 and 12 hours using the Response Surface Methodology (RSM) method. The highest degree of deacetylation was obtained at 84.14214°C for 10 hours to produce 93.03823%
Keywords : maggot, sleeve,chitosan, deacetylation, RSM.

## PENDAHULUAN
Maggot ( Hermetia illucens ) merupakan salah satu organisme pembusuk yang berasal dari telur Black  Soldier  Fly (BSF) (Silmina et  al. ,  2011).  Di Indonesia budidaya Black Soldier Fly (BSF) semakin diminati belakangan ini. Hal ini disebabkan karena fase belatung dari BSF memiliki kadar protein yang tinggi  (mencapai  40%)  sehingga  banyak dibudidayakan  sebagai  bahan  baku  protein alternatif.  Dalam  budidaya Black  Soldier  Fly (BSF) selalu  menghasilkan  limbah  berupa  selongsong Black  Soldier  Fly (BSF) yang  masih  belum  banyak digunakan  yaitu  sekitar  40%  dari  total  produks (Wahyuni et  al. ,  2020).  Selongsong  maggot dihasilkan pada saat pupa berganti kulit ke tahap instar  berikutnya.  Kandungan  dari  selongsong maggot  meliputi  protein  44,5%,  lemak  7,7%,  abu 9,9%, dan 23% kitin (Liu et al ., 2017) (Soetemans et al .,  2020).  Saat  ini  selongsong  maggot  belum banyak  dimanfaatkan.  Padahal,  selongsong maggot berpotensi menjadi bahan baku alternatif dalam produksi kitosan.. Penelitian Selvina (2021) melaporkan  bahwa  selongsong  maggot  dapat diaplikasikan  menjadi edible  coating yang  dapat mengawetkan buah anggur selama 7 hari. Dengan demikian, Black  Soldier  Fly (BSF) ini  merupakan sumber baru biopolimer kitin yang menarik untuk diteliti dan digunakan dalam berbagai aplikasi.
Kitin  merupakan  biopolimer  alami  yang paling  melimpah  kedua  setelah  selulosa.  Kitin bersumber  tidak  hanya  dari  selongsong  maggot saja  melainkan  berasal  dari  krustasea  dan  jamur ( Dompeipen ,  2017).  Penelitian  oleh  (Arif et  al ., 2013)    melaporkan  kandungan  kitin  pada  kulit udang putih sebesar 19,38%, kandungan kitin pada cangkang kepiting laut sebesar 55,56% (Murniati & Mudasir,  2013),  dan  pada  cangkang  kerang  hijau sebesar  43,86%  (Sikana et  al .,  2016).  Namun, produksi  kitin  dari  selongsong  maggot  belum banyak  diteliti.  Pada  salah  satu  penelitian  oleh Wahyuni et al. (2020) melaporkan kandungan kitin pada  selongsong  maggot  sebesar  5,78%.  Untuk produksi  kitin  sendiri  ada  3  tahap  yaitu  meliputi proses demineralisasi, deproteinasi, dan depigmentasi.  Untuk  mengubah  kitin  menjadi kitosan dilakukan proses deasetilasi.
Kitosan merupakan senyawa yang dihasilkan dari kitin dan mempunyai struktur kimia yang sama dengan  kitin.  Kitosan  dibentuk  dari  kitin  yang
dilanjutkan  ke  proses  deasetilasi  yaitu  dengan mereaksikan  alkali  dengan  konsentrasi  tinggi dengan  waktu  yang  relatif  lama  dan  suhu  tinggi. Perbedaan  kitin  dan  kitosan  adalah  pada  setiap cincin  molekul  kitin  terdapat  gugus  asetil  (-CH 3 - CO)  pada  atom  karbon  kedua,  sedangkan  pada kitosan terdapat gugus amina (-NH).
Penelitian oleh Ifa (2018) melaporkan bahwa sisik  ikan  kakap  merah  menghasilkan  kitosan dengan derajat deasetilasi sebesar 73,40%. Sartika et al ., (2016) meneliti proses deasetilasi cangkang rajungan dan mendapatkan hasil derajat deasetilasi sebesar 70,73%, kitosan pada tulang dalam cumi- cumi  menghasilkan  kitosan  dengan  derajat deasetilasi 73% (Yulianis et al ., 2020), dan cangkang kerang darah menghasilkan kitosan dengan derajat deasetilasi  sebesar    89,95%  (Bahri et  al .,  2015). Sementara  kandungan  pada  selongsong  maggot sendiri  pada  penelitian  Wahyuni et  al. (2020) menghasilkan  derajat  deasetilasi  71,12%.  Derajat deasetilasi sangat mempengaruhi  kualitas kitosan yang  dihasilkan.  Derajat  deasetilasi  kitin  yang sesuai SNI 7949:2013 yaitu minimal 75%. Faktor-faktor  utama  yang  menentukan keberhasilan  proses  deasetilasi  adalah  suhu  dan waktu.  Semakin  meningkat  suhu  maka  semakin banyak  gugus  asetil  yang  terlepas  dari  kitin sehingga meningkatkan derajat deasetilasi kitosan yang  dihasilkan.  Namun  jika  suhu  terlalu  tinggi dapat  merusak  struktur  kitin  (Siregar,  2016). Sedangkan semakin tinggi derajat deasetilasi akan semakin baik kitosan yang diperoleh (Setha et al ., 2019).  Pada  penelitian  ini  akan  dilakukan  untuk optimasi  produksi  kitin  dan  kitosan  berbasis selongsong maggot dengan variasi waktu dan suhu proses  deasetilasi.  Optimasi  suhu  dilakukan  pada variasi suhu deasetilasi 60 o C, 70 o C, 80 o C dan variasi waktu 8, 10, dan 12 jam dengan metode Response Surface Metodhology (RSM).

## METODOLOGI
Alat yang digunakan yaitu gelas beaker, labu takar,  gelas  ukur,  pipet  tetes,  neraca  analitik, timbangan,  stopwatch,  kertas  saring,  gelas  arloji, cawan  petri,  kaca  pengaduk, magnetic  stirrer , termometer,  klem  dan  statif,  saringan,  blender, pisau,  dan  corong  kaca.  Bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  selongsong  maggot 500 gram, HCl 3 M, NaOH 2 M, KMnO 4 1%, Asam Oksalat 1%, dan Aquadest.
Rancangan  percobaan  pada  penelitian  ini dengan  metode Respons  Surface  Methodology (RSM) dengan variabel tetap konsentrasi HCl 3 M, NaOH  2  M,  KMnO 4 1%,  Asam  Oksalat  1%,  dan
NaOH pada deasetilasi i 50%. Sedangkan variabel bebas meliputi suhu ekstraksi 60 o C, 70 o C, 80 o C dan waktu ekstraksi 8 jam, 10 jam, 12 jam.
Proses  ekstraksi  dilakukan  4  tahap  yaitu demineralisasi,  deproteinasi,  depigmentasi,  dan deasetilasi.  Proses  demineralisasi  dilakukan perendaman  menggunakan  larutan  HCl  3  M dengan perbandingan 1:10 selama 36 jam. Sampel disaring dengan saringan 500 mesh dan residunya dicuci  sampai  netral  pH-nya  dengan  aquadest (Wang et al ., 2020). Proses deproteinasi dilakukan perendaman  menggunakan  NaOH  2  M  dengan perbandingan  1:10  selama  36  jam.  Sampel  yang sudah direndam, disaring dan dicuci sampai netral dengan  metode  yang  sama.  Proses  depigmentasi atau  penghilangan  pigmen  dilakukan  melalui perendaman  dan  pengadukan  dengan  kecepatan 150  rpm.  Selongsong  maggot  direndam  dengan pelarut  100  mL  KMnO 4 1%  kemudian  dilanjutkan dengan  perendaman  100  ml    Asam  oksalat  1% masing-masing  selama  2  jam.  Setelah  dilakukan ekstraksi  kitin,  kemudian  kitin  yang  didapatkan dicuci sampai netral dan dikeringkan. Timbang kitin untuk  mengetahui  rendemen  dari  hasil  ekstraksi kitin.  Proses  deasetilasi  dilakukan  dengan perendaman  larutan  NaOH  50%  dengan perbandingan massa kitin dan pelarut 1:30 (g/ml). Kemudian  pengadukan  dilanjutkan  dengan menggunakan magnetic stirrer yang diaduk di atas hot plate menggunakan suhu dan waktu tertentu. Optimasi  suhu  dilakukan  pada  variasi  suhu deasetilasi 60 o C, 70 o C, 80 o C dengan variasi waktu 8, 10, dan 12 jam.
Bahan  setengah  jadi  berupa  kitin  dianalisis kandungannya  dengan  FTIR.  Kitosan  yang dihasilkan  dianalisa  kadar  air,  kadar  abu,  kadar nitrogen, FTIR, dan derajat deasetilasi dengan cara titrasi.  Derajat  deasetilasi  dapat  dihitung  dengan rumus :
% DD = C1V1 − C2V2
M × 0,0994 × 0,016 × 100%
Keterangan : C1 = Konsentrasi larutan HCl; V1 = Volume larutan standar HCl; C2 = Konsentrasi larutan standar NaOH; V2 = Volume larutan
standar NaOH; M = Berat konstan kitosan; 0,016 = Berat molekul NH 2 dalam 1 cm 3 0,1 mol.dm -3 HCl dalam gram; 0,0994 = Nilai NH 2 teoritis

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Kitin dari Selongsong Maggot Pada  penelitian  ini,  proses  ekstraksi  kitin dilakukan  dengan  3  tahapan  yaitu  demineralisasi, deproteinasi,
dan
depigmentasi. Proses demineralisasi  merupakan  proses  penghilangan mineral  yang  terdapat  di  dalam  selongsong maggot,  mineral  yang  terkandung  di  dalamnya dalam  bentuk  kalsium  karbonat  (CaCO 3 )  dan kalsium  fosfat  (Ca 3 (PO 4 ) 2 (Mursida et  al .,  2018). Pada  saat  porses  demineralisasi  ditandai  dengan adanya  gas  CO 2 yang  berupa  gelembung  udara pada  saat  selongsong  maggot  dimasukkan  ke dalam larutan HCL 3 M (Mursida et al ., 2018).  Hasil dari  proses  demineralisasi  yang  telah  dicuci menjadi  lebih  lunak  karena  telah  kehilangan kandungan  mineral  dan  protein  sehingga menghasilkan  padatan  serbuk  berwarna  hitam (Younes  & Rinaudo ,  2015).  Dilanjutkan  dengan proses  deproteinasi  yaitu  ion  Na + akan  mengikat ujung  rantai  protein  yang  bermuatan  negatif sehingga  akan  larut  dengan  pelarut  NaOH (Rohima, 2014). Dilakukan pencucian sampel pada setiap  proses  sampai  netral  bertujuan  agar  tidak terjadi  perubahan  pH  yang  ekstrim  ketika perpindahan  dari  larutan  yang  sangat  asam  ke larutan  yang  akan  sangat  basa  yang  dapat menyebabkan  kerusajan  pada  sampel  (Sugita  & Wukirsari,  2019).  Proses  selanjutnya  yaitu depigmentasi, menurut Budiyono (2016) proses ini merupakan proses yang menentukan keberhasilan proses  dari  deproteinasi  karena  mempengaruhi warna  kitosan  yang  dihasilkan.  Proses  ini menggunakan larutan KMnO 4 untuk
menghilangkan pigmen yang masih terikat dengan kitin.  Hasil  depigmentasi  menunjukan  perubahan warna  kitin  menjadi  putih  kekuningan.  Setelah dilakukan 3 tahapan ekstraksi tesebut didapatkan rendemen sebesar 93%.

## Karakterisasi Fisik dan Kimia Kitosan
Kitin  yang  sudah  terbentuk  akan  diubah menjadi kitosan dengan proses deasetilasi. Proses deasetilasi  dilakukan  dengan  pengadukan  dan perendaman  NaOH  50%  yang  ditujukan  untuk
memutus  ikatan  antara  karbon  pada  gugus  asetil dengan  atom  nitrogen  pada  kitin  sehingga berubah
menjadi gugus amina (NH 2 ). Menggunakan  konsentrasi  NaOH  50%  karena dianggap  lebih  ekonomis  dan  ramah  lingkungan dibanding  dengan  konsentrasi  yang  lebih  tinggi. Selain  itu,  penggunaan  konsentrasi  yang  lebih tinggi  sangat  dihindari  karena  semakin  besar konsentrasi basa yang digunakan untuk deasetilasi akan  meningkatkan  kemungkinan  terjadinya tumbukan  dalam  reaksi  deasetilasi  (Azhar et  al ., 2010).  Kitin  tahan  terhadap  basa  karena  memiliki unit  yang  berstruktur  kristalin  dan  adanya  ikatan hidrogen  yang  meluas  antar  atom  nitrogen  dan gugus  hidroksil  (Savitri et  al .,  2010).  Hasil  kitosan dapat dilihat pada Gambar 1.
Kitosan  yang  didapat  dari  kitin  melalui proses deasetilasi dengan  variasi suhu dan waktu ekstraksi  menghasilkan  karakterisasi  warna  yang berbeda  dari  warna  coklat  hingga  putih kekuningan.  Menurut  Melati  (2014),  suhu berpengaruh  pada  warna  dan  penampilan  fisik kitosan dimana ekstraksi kitosan dengan suhu yang tinggi akan cenderung lebih putih kekuningan dan penampilan  fisiknya  akan  semakin  mendekati serbuk  jika  dibandingkan  dengan  ekstraksi  pada suhu rendah. Karakterisasi penampilan fisik kitosan yang dihasilkan pada proses deastilasi pada  suhu 80 o C dan waktu 8 jam memiliki warna putih
kekuningan dan memiliki bentuk kepingan serbuk serta  tekstur  yang  halus  seperti  pada  Gambar  1. Hasil percobaan ini sudah menghasilkan warna dan tekstur kitosan yang baik dan sudah memenuhi SNI 7949:2013 dimana kitosan yang baik harus memilki warna  putih  yang  cenderung  kekuningan  dengan tekstur berupa serbuk yang halus.
Kitosan  dengan  kadar  air  dan  kadar  abu terendah didapatkan pada suhu ekstraksi 84,14214 o C selama 10 jam sebesar 7,65% dan 4,82%. Kitosan dengan kadar air dan kadar abu tertinggi sebesar 42,37%  dan  20,01%  didapatkan  pada  ekstraksi suhu  55,85786 o C  selama  10  jam.  Menurut SNI7949:2013,  kitosan  yang  baik  harus  memilki kadar air maksimal 12% dan kadar abu maksimal 5%.
Berdasarkan hasil percobaan dengan Tabel 1 didapatkan bahwa nilai rendemen terbesar 93,947 %  dengan  suhu  70°C  dan  waktu  7,17  jam sedangkan  rendemen  terkecil  pada  suhu  80 o C dengan  waktu  12  jam  menghasilkan  rendemen 80,435%. Pada Tabel 1 ini juga menjelaskan bahwa semakin  tinggi  suhu  dan  semakin  lama  waktu reaksi  maka  semakin  kecil  hasil  rendemen  yang diperoleh. Hal ini terjadi karena proses deasetilasi yang menyebabkan banyak gugus asetil pada kitin yang  tereduksi  dan  berubah  menjadi  kitosan sehingga rendemen semakin turun (Wahyuni et al .,
2016). Hal tersebut juga sesuai dengan pernyataan
Wiyarsi & Priyambodo (2009) dimana kitosan yang
(a)                    (b)                    (c)                    (d)                    (e)
(f)                    (g)                     (h)                   (i)                     (j)
Gambar 1. (a) Suhu 60 o C 8 Jam (b) Suhu 60 o C 12 Jam (c) Suhu 80 o C 8 Jam (d) Suhu 80 o C  12 Jam (e) Suhu 55,86 o C 10 Jam (f) Suhu 84,14 o C 10 Jam (g) Suhu 70 o C 7,17 Jam (h) Suhu 70 o C 12,83 Jam (i) Suhu 70 o C 10 Jam (j) Suhu 70 o C 10 Jam

## Tabel 1. Karakterisasi Fisik dan Kimia Kitosan
Run Suhu ( o C) Waktu (Jam) Kadar Air (%) Kadar Abu (%) Warna 1 60 8 42,68 19,36 Coklat 2 60 12 41,75 19,02 Coklat 3 80 8 10,92 8,74 Putih kekuningan 4 80 12 9,58 5,88 Putih kekuningan 5 55,85786 10 42,37 20,01 Coklat 6 84,14214 10 7,65 4,82 Putih kekuningan 7 70 7,17157 37,95 18,97 Kuning kecoklatan 8 70 12,82843 27,39 14,45 Kuning kecoklatan 9 70 10 31,23 18,69 Kuning kecoklatan 10 70 10 31,97 17,47 Kuning kecoklatan telah mengalami proses demineralisasi,
deproteinasi,  depigmentasi,  dan  deasetilasi  akan mengakibatkan  bobot  kitosan  menurun  yang disebabkan  komponen  mineral  dan  protein  akan larut dalam larutan HCl dan NaOH.
Derajat  deasetilasi  merupakan  parameter keberhasilan  proses  deasetilasi.  Menurut  Siregar (2016)  suhu  dan  waktu  berpengaruh  terhadap derajat deastilasi dimana semakin tinggi suhu maka semakin  banyak  gugus  asetil  yang  terlepas  dari kitin  sehingga  derajat  deastilasi  semakin meningkat.  Sedangkan  pada  suhu  rendah  reaksi berjalan  dengan  lambat  sehingga  deastilasi  tidak sempurna.  Namun  jika  suhu  terlalu  tinggi  dapat merusak struktur dari kitosan sendiri. Penelitian ini didapatkan derajat deasetilasi tertinggi pada suhu ekstraksi  84,14214°C  dengan  waktu  10  jam menghasilkan  93,03823%  dan  derajat  deasetilasi terendah  pada  suhu  60°C  dengan  waktu  12  jam menghasilkan  88,53119%.  Hasil  tersebut  lebih besar dari penelitian yang dilakukan oleh Wahyuni et al . (2020) dimana pada suhu 80 o C menghasilkan derajat  deasetilasi  sebesar  75,98%.  Dalam penelitian  ini,  derajat  deasetilasi  dapat  dikatakan sudah  memunuhi  SNI  7949:2013  dimana  derajat deasetilasi  kitosan  minimal  75%.  Namun,  kadar nitrogen  yang    didapatkan  pada  ektraksi  kitosan dengan suhu 84,14 o C selama 10 jam sebesar 41%. Kitosan  dengan  kadar  nitrogen  41%  belum memnuhi  SNI  kitosan  karena  kadar  nitrogen kitosan  menurut SNI 7949:2013 maksimal 5%. Hal tersebut  disebabkan  kurang  optimalnya  proses deproteinasi  menyebabkan  kandungan  protein kitosan  besar.  Proses  deproteinasi  sangat menentukan seberapa banyak protein yang hilang dari kitosan.

## Rendemen Kitosan
Berdasarkan  Tabel  1,  rendemen  yang didapat  akan  dianalisa  dengan  metode  RSM ( Response  Surface  Methodology ) dimana  metode tersebut  sebuah  teknik  statistika  empiris  yang digunakan  untuk  analisis  regresi.  Teknik  statistika empiris  ini  digunakan  untuk  menyelesaikan persamaan  multivariable  secara  simultan  yang menggunakan  data  multivariabel-  kuantitatif (Yulianto et al ., 2018). Telah banyak jenis penelitian yang  telah  menggunakan Response  Surface Methodolgy (RSM)  dalam  berbagai  optimasi. Optimasi  ekstraksi  kitin  dari  pupa  selongsong maggot  dilakukan  melalui  10  percobaan menggunakan variabel suhu dan waktu. Nilai test (t)  menunjukkan  nilai  lebih  besar  dari  nilai percobaan  (p).  Keakuratan  model  ini  dapat diketahui  dari  harga  koefisien  determinasi  (R 2 ). Nilai  R 2 memberikan  ukuran  seberapa  banyak variabilitas  dalam  nilai-nilai  respon  yang  diamati dapat  dijelaskan  oleh  variabel  percobaan  dan interaksi mereka. Harga R 2 ini dapat menyimpulkan bahwa  nilai  yang  diperkirakan  dengan  model mendekati  nilai  yang  diperoleh  dari  hasil percobaan. Nilai R 2 selalu berada di antara 0 dan 1. Semakin  dekat  nilai  R 2 terhadap  1,  menunjukkan bahwa  model  tersebut  baik  dalam  memprediksi respon (Yulianto et al ., 2018). Dalam percobaan ini, nilai  koefisien  determinasi  (R 2 =  0,98968).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  98,968%  menunjukkan variabilitas  dalam  respon  dapat  dijelaskan  oleh model pada Tabel 2.
Pada  Gambar  2  menunjukkan  hubungan antara  suhu  dan  waktu  ekstraksi  selongsong maggot  terhadap  rendemen  kitosan  dimana semakin  lama  waktu  dan  semakin  besar  suhu
ekatraksi maka rendemen akan semakin menurun.
Pada  plot Response  Surface mengindikasikan kondisi operasi optimum pada suhu 71 o C dengan waktu  7,1  jam    menghasilkan  rendemen  >96%.
Dengan
menerapkan
persamaan
regresi polinominal orde dua, pada response fitted surface variabel suhu dan waktu didapatkan persamaan :
Z = -15,814555406214 + 1,7729313132926X - 0, 0079481250000012X 2 - 14,542173847575Y - 0,
56732812500003Y 2 + 0,090612500000005XY Keterangan:  Z  = response (rendemen);  X  =  suhu ( o C); Y = waktu (jam).
Kedekatan  nilai  yang  diperkirakan  dengan  model mendekati  nilai  yang  diperoleh  dari  hasil
percobaan  disajikan  pada  Gambar  4.  Nilai  plot didalam  grafik  menunjukkan  korelasi  yang  cukup memuaskan  antara  nilai-nilai  percobaan  dan perkiraan,  karena  penyimpangan  antara  nilai tersebut  mendekati  garis  yang  linear.  Koefiesien regresi  dapat  diperjelas  dengan  diagram  pareto (Gambar 3) untuk setiap variabel. Dari blok diagram pareto,  tampak  variabel  yang  paling  mempengaruhi adalah  waktu  dan  diikuti  oleh  suhu.  Hal  tersebut sesuai  dengan  pernyataan  Wahyuni et  al .  (2016) yang menjelaskan bahwa semakin tinggi suhu dan semakin lama waktu reaksi maka semakin kecil hasil rendemen yang diperoleh yang dikarenakan proses deasetilasi sehingga banyak gugus asetil pada kitin yang tereduksi dan berubah menjadi kitosan yang menyebabkan rendemen semakin turun.
Gambar 2. Response Fitted Surface Variabel Suhu dan Waktu terhadap (%) Rendemen Kitosan
Gambar 3. Diagram Pareto terhadap (%) Rendemen Kitosan
Gambar 4. Perbandingan Data Percobaan dan Perkiraan (%) Rendemen Kitosan

## Tabel 2. Data Estimasi Efek
Faktor Efek Standard Error (1) Suhu (°C) (L) -4,9186 0,724063 Suhu (°C) (Q) -1,5896 0,957846 (2) Waktu (Jam) (L) -12,5891 0,724063 Waktu (Jam) (Q) -4,5386 0,957846 1L by 2L -3,6245 1,023980 Rata – rata 94,6050 0,724063 R 2 0,98968
Hasil dari respon permukaan tingkat kedua yang sesuai dalam bentuk ANOVA yang ada pada Tabel 3. Hal ini diperlukan untuk menguji signifikasi dan  kecukupan  model.  Nilai  P  yang  didapatkan pada penelitian ini sebagian besar kurang dari 0,01 sehingga  dapat  menunjukan  bahwa  model tersebut  cukup  untuk  memprediksi  rendemen dalam rentang variabel yang diteliti. Pada Tabel 3, suhu  (L),  waktu  (L),  waktu  (Q),  dan  1L  by  2L menunjukan  signifikan  dalam  mempengaruhi rendemen  pada  ekstraksi  selongsong  maggot dikarenakan  nilai  p  kurang  dari  0,05. Fisher  rasio varians ,  nilai  F  (=S 2 r/S 2 e)  merupakan  ukuran statistik  yang  valid  dari  seberapa  baik  faktor menjelaskan  variasi  dalam  data  tentang mean . Semakin besar nilai F, maka semakin menunjukkan keseragaman  (Yulianto et  al .,  2018).  Dari  Tabel  3 didapat nilai F hitung sebesar 386,1776 sedangkan dari  F  tabel  dengan  α  =  0,05  didapatkan  hasil 0,192598.  Jadi,  nilai  F  hitung  >  F  tabel  maka dikatakan  H 0 ditolak,  atau  ada  perbedaan  sangat
nyata  pada  setiap  variabel.  Sehingga  dapat dikatakan  bahwa  ANOVA  dari  model  regresi menunjukkan korelasi signifikan.
Parameter optimasi untuk esktraksi kitin dari pupa  selongsong  maggot  terhadap  suhu  dan waktu ditentukan dengan critical value (nilai kritis). Sehingga,  nilai  kritis  untuk  optimasi  %  rendemen kitosan  dicapai  saat  suhu  70,62426°C,  waktu 7,17639 jam, dan % rendemen kitosan 98,97156%.

## Derajat Deasetilasi
Berdasarkan  data  Tabel  1  hasil  derajat deasetikasi  dianalisa  dengan  metode response surface  methology .  Pada  Gambar  5  menunjukan hubungan  antara  suhu  dan  waktu  ekstraksi selongsong  maggot  terhadap  derajat  deasetilasi kitosan.  Berdasarkan  plot Response  Surface mengindikasikan  kondisi  operasi  optimum  pada suhu  84 o C  dengan  waktu  9,6  jam  menghasilkan rendemen  >93%.  Dengan  menerapkan  analisis regresi berganda pada data percobaan, diperoleh
persamaan polinominal tingkat dua untuk mewakili perolehan derajat deasilitasi sebagai berikut :
Z = 101,27835010269 - 0,076617339186873X - 0,00081705625000002X 2 - 1,6290132609613Y - 0,04080140625Y 2 + 0,028183875XY
Keterangan: Z = response (derajat deasetilasi); X = suhu ( o C); Y = waktu (jam).
Optimasi  proses  esktraksi  kitosan  dengan menggunakan  selongsong  maggot  dilakukan melalui  10  kali  percobaan  menggunakan  variabel suhu dan waktu. Keakuratan jenis model ini dapat diketahui  dari  harga  koefisien  determinasi  (R 2 ). Dimana  didapatkan  nilai  R 2 sebesar  0,89584  yang
menunjukkan  bahwa  89,584%  dari  variabilitas dalam respon dapat dijelaskan oleh model Tabel 5.
Kedekatan nilai yang diperkirakan dengan model  mendekati  nilai  yang  diperoleh  dari  hasil percobaan  disajikan  pada  Gambar  7.  Nilai  plot didalam  grafik  menunjukkan  korelasi  yang  cukup memuaskan  antara  nilai-nilai  percobaan  dan perkiraan,  karena  penyimpangan  antara  nilai tersebut mendekati garis yang linear. Koefiesien regresi  dapat  diperjelas  dengan  diagram  pareto (Gambar 6) untuk setiap variabel. Dari blok diagram pareto, tampak variabel yang paling mempengaruhi  adalah  waktu  yang  kemudian diikuti  oleh  suhu.  Menurut  Siregar  (2016) menyatakan bahwa semakin lama waktu deasetilasi maka  semakin  besar  derajat  deasetilasi  yang
Tabel 3. Analisa Varian Model Persamaan Polinominal Ekstraksi Kitosan dari Selongsong Maggot
Faktor SS dF MS F p (1)Suhu (°C)(L) 48,3857 1 48,3857 46,1460 0,002452 Suhu (°C)(Q) 2,8879 1 2,8879 2,7542 0,172336 (2)Waktu (Jam)(L) 316,9686 1 316,9686 302,2966 0,000064 Waktu (Q) 23,5418 1 23,5418 22,4521 0,009048 1L by 2L 13,1370 1 13,1370 12,5289 0,024022 Error 4,1941 4 1,0485 Total SS 406,4042 9 386,1776 Tabel 4. Nilai  Prediksi  (%)  Rendemen  Kitosan  pada  Nilai  Kritis  dari  Suhu  dan  Waktu  Ekstraksi  Selongsong Maggot
Faktor Nilai Minimum Perlakuan Nilai Kritis Nilai Maksimum Perlakuan Suhu (°C) 55,85786 70,62426 84,14214 Waktu (Jam) 7,17157 7,17639 12,82843 Perkiraan % Rendemen 98,97156
Gambar 5. Response Fitted Surface Variabel Suhu dan Waktu terhadap (%) Derajat Deasetilisasi
Metana: Media Komunikasi Rekayasa Proses dan Teknologi Tepat Guna
Tabel 5. Data Estimasi Efek Faktor Efek Standard Error (1) Suhu (°C) (L) 1,81667 0,468911 Suhu (°C) (Q) -0,16341 0,620311 (2) Waktu (Jam) (L) -0,32641 0,468911 Waktu (Jam) (Q) 1,12735 0,620311 1L by 2L 1,12735 0,663140 Rata – rata 91,27 0,468911 R 2 0,89584
Gambar 6. Diagram Pareto Pengaruh Terhadap (%) Derajat Deasetilasi
Gambar 7. Perbandingan Data Percobaan dan Perkiraan (%) Derajat Deasetilasi
dihasilkan.  Jika  suhu  semakin  meningkat  maka semakin  banyak  gugus  asetil  yang  terlepas  dari kitin  sehingga  meningkatkan  derajat  deasetilasi kitosan  yang  dihasilkan.  Sedangkan  pada  suhu yang  rendah  reaksi  akan  berjalan  dengan  lebih lambat.
Hasil dari respon permukaan tingkat kedua yang sesuai dalam bentuk ANOVA yang ada pada Tabel 6. Hal ini diperlukan untuk menguji signifikasi
dan kecukupan model. Pada Tabel 6, Nilai p pada suhu  (L)  dan  waktu  (L)  menunjukan  signifikan dalam  mempengaruhi  derajat  deasetilasi  pada ekstraksi  selongsong  maggot  dikarenakan  nilai  p kurang  dari  0,05. Fisher  rasio  varians ,  nilai  F  (= S 2 r/S 2 e) merupakan ukuran statistik yang valid dari seberapa  baik  faktor  menjelaskan  variasi  dalam data  tentang mean .    Semakin  besar  nilai  F,  maka semakin  menunjukkan  keseragaman  (Yulianto et
al ., 2018). Dari tabel ANOVA didapat nilai F hitung sebesar 34,46928 sedangkan d ari F tabel dengan α =  0,05  didapatkan  hasil  0,192598.  Jadi,  nilai  F hitung  >  F  tabel  maka  dikatakan  H 0 ditolak,  atau ada perbedaan sangat nyata pada setiap variabel. Sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  ANOVA  dari model regresi menunjukkan korelasi signifikan.
Parameter  optimasi  untuk  esktraksi  kitosan dari selongsong maggot terhadap suhu dan waktu ditentukan  dengan critical  value (nilai  kritis). Sehingga,  nilai  kritis  untuk  optimasi  %  derajat deasetilasi  kitosan  dicapai  saat  suhu  78,91901°C, waktu  7,29424  jam,  dan  %  derajat  deasetilasi kitosan 92,31386%.

## Analisa FTIR
Kitin dan kitosan dikarakterisasi dengan FTIR untuk menganalisis dan mengetahui gugus fungsi kitin dan kitosan yang didapat. Prinsip analisis FTIR yaitu  mereaksian radiasi elektromagnetik dengan sampel yang memiliki momen dipol permanen dan menentukan  fraksi  yang  ada  dalam  sampel berdasarkan  radiasi  penyerapan  energi  dengan panjang gelombang tertentu (Armelia, 2020). Hasil FTIR dapat dilihat pada Gambar 8.
Hasil  bilangan  spektrum  kitin  dapat  dilihat pada  Gambar  8.  Berdasarkan  hasil  analisis  FTIR pada  kitin  terdapat  beberapa  gugus  fungsi didalamnya yaitu gugus NH, CH, C=O, C-O-C, dan gugus lainnya. Senyawa kitin mengandung gugus NH  yang  merupakan  termasuk  gugus  senyawa Amida dimana gugus tersebut dapat diserap pada bilangan
gelombang
3140-3320 cm -1
(Kristianingrum,  2016).  Dengan  FTIR,  gugus  NH pada  sampel  kitin  didapatkan  pada  bilangan gelombang  3265,14  cm -1 .  Senyawa  kitin mengandung gugus CH khususnya senyawa Alkana dimana  senyawa  tersebut  dapat  diserap  dengan bilangan gelombang 2852-2926 cm -1 . Pada sampel kitin  yang  dianalisa,  gugus  CH  diserap  tepatnya pada bilangan gelombang 2921,96 cm -1 . Senyawa kitin juga mengandung gugus C=O yaitu Karbonil dimana  gugus  tersebut  dapat  diserap  dengan kisaran  bilangan  gelombang  1650  cm -1 .  Gugus C=O pada sampel kitin ditemukan pada bilangan gelombang  1626,06  cm -1 .  Gugus  C-O-C  atau senyawa  Eter  juga  terkandung  dalam  kitin  yang mana  gugus  tersebut  dapat  diserap  dengan bilangan gelombang 1230-1270 cm -1 . Sampel kitin terindikasi  gugus  C-O-C  tepatnya  pada  bilangan gelombang 1238,97 cm -1 . Karakteristik kitosan memiliki ciri khas pada gugus amida dan gugus hidroksil (Armelia, 2020). Hasil bilangan spektrum kitosan dapat dilihat pada Gambar 8.  Kitosan mengandung beberapa gugus fungsi  diantaranya  gugus  OH,  C=O,  dan  gugus lainnya.  Gugus  OH  merupakan  gugus  senyawa Alkohol yang terdapat pada kitosan dimana gugus tersebut  dapat  diserap  dengan  bilangan gelombang 3333-3704 cm -1 (Kristianingrum, 2016). Sedangkan pada sampel kitosan ditemukan gugus OH  pada  bilangan  gelombang  3340,19  cm -1 . Senyawa  kitosan  juga  mengandung  gugus  C=O yaitu  senyawa  karbonil  yang  dapat  diserap  di kisaran  gelombang  1650  cm -1 .  Sampel  senyawa kitosan terindikasi gugus C=O pada bilangan
Tabel 6. Analisa Varian Model Persamaan Polinominal Ekstraksi Kitosan dari Selongsong Maggot
Faktor SS dF MS F p (1)Suhu (°C)(L) 6,60058 1 6,600585 15,00970 0,017929 Suhu (°C)(Q) 0,03052 1 0,030518 0,06940 0,805230 (2)Waktu (Jam)(L) 7,13423 1 7,134228 16,22320 0,015762 Waktu (Q) 0,12176 1 0,121765 0,27689 0,626571 1L by 2L 1,27093 1 1,270929 2,89009 0,164350 Error 1,75902 4 0,439755 Total SS 16,88730 9 34,46928 Tabel 7. Nilai Prediksi (%) Derajat Deasetilisasi pada Nilai Kritis dari Suhu Dan Waktu Esktraksi Selongsong Maggot
Faktor Nilai Minimum Perlakuan Nilai Kritis Nilai Maksimum Perlakuan Suhu (°C) 55,85786 78,91901 84,14214 Waktu (Jam) 7,17157 7,29424 12,82843 Perkiraan (%) Derajat Deasetilasi 92,31386
Gambar 8. Hasil Spektrum Kitin dan Kitosan gelombang  1639,93  cm -1 .  Pada  analisa  FTIR  ini tidak  ditemukan  gugus  amida  (NH 2 )  dikarenakan gugus  tersebut  merupakan  senyawa  volatil  yang mudah menguap pada suhu kamar.
Perbandingan karakterisasi struktur senyawa kitin  dan  kitosan  dapat  dilihat  ada  Gambar  8. Perbedaan  yang  signifikan  dapat  dilihat  pada bilangan  gelombang  3400  cm -1 dan  1650  cm -1 . Pada  bilangan  gelombang  3400  cm -1 ,  kitosan memiliki  gugus  OH  lebih  banyak  daripada  kitin dikarenakan  kitosan  sudah  mengalami  proses deasetilasi dengan larutan NaOH yang menyebabkan  gugus  OH  pada  kitosan  akan semakin bertambah. Gugus OH pada NaOH akan berikatan  dengan  kitin  sehingga  membentuk kitosan.  Sedangkan  pada  bilangan  gelombang 1650 cm -1 , kitosan memiliki kandungan gugus C=O lebih  besar  dari  kitin  yang  disebabkan  proses desetilasi  menghasilkan  produk  samping  berupa Sodium  Asetat  yang  dapat  dilihat  dari  serapan gugus C=O semakin besar.

## KESIMPULAN
Proses ekstraksi kitosan dengan bahan baku selongsong  maggot  telah  dilakukan  dalam penelitian ini. Variabel bebas yang digunakan yaitu suhu  dan  waktu.  Rendemen  kitosan  tertinggi diperoleh pada suhu 70°C dengan waktu 7,17157 jam  diperoleh  rendemen  sebesar  98,981%.  Dan kandungan  kitosan  terendah  diperoleh  saat  suhu 80°C  dengan  waktu  12  jam  memperoleh presentase rendemen 80,435%. Derajat deasetilasi tertinggi  diperoleh  saat  suhu  84,14214°C  dengan waktu 10 jam menghasilkan 93,03823% dan derajat deasetilasi  terendah  dengan  suhu  60°C  dengan waktu  12  jam  menghasilkan  88,53119%.  Hal  ini menandakan  bahwa  suhu  dan  waktu  ekstraksi
sangat  berpengaruh  untuk  pembentukan  kitosan. Pada  proses  deproteinasi  menghasilkan  kitosan yang  masih  banyak  mengandung  protein.  Pada penelitian  selanjutnya  disarankan  untuk  mengkaji pengoptimalan  pada  proses  deproteinasi  untuk menghasilkan kitosan yang memiliki kadar protein kitosan yang sesuai dengan SNI 7949:2013.

## DAFTAR PUSTAKA
Arif, A.R., Ischaidar, N.H. & Dali, S. 2013. Isolasi kitin dari limbah udang putih ( Penaeus merguiensis )  secara  enzimatis. Seminar Nasional Kimia 2013 , p.10-16. Armelia,  N.  2020.  Uji  Perbandingan  Metode Penentuan  Derajat  Deasetilasi  Kitosan Menggunakan Spektroskopi Infra Merah Dan Metode Volumetri. Repository UII.
Azhar,  M.,  Efendi,  J.,  Sofyeni,  E.,  Lesi,  R.F.  &
Novalina, S. 2010. Pengaruh Konsentrasi Naoh Dan  Koh  Terhadap  Derajat  Deasetilasi  Kitin Dari Kulit Udang. Eksakta, 1(11): 1-8. Badan Standarisasi Nasional. 2013. Kitosan - Syarat Mutu Dan Pengolahan. SNI 7949:2013 Bahri, S., Rahim, E.A. & Syarifuddin, S. 2015. Derajat deasetilasi  kitosan  dari  cangkang  kerang darah  dengan  penambahan  naoh  secara bertahap. Kovalen: Jurnal Riset Kimia , 1(1):36-42 Budiyono. 2016. Karakterisasi Kitin Dan Kitosan Asal Kulit  Pupa  Ulat  Sutera  Liar  ( Attacus  atlas L.) Dari  Perkebunan  Teh  Walini  Purwakarta. [Skripsi]. Bogor (Id): Institut Pertanian Bogor. Dompeipen, E.J., 2017. Isolasi dan identifikasi kitin dan kitosan dari kulit udang Windu ( Penaeus monodon )  dengan  spektroskopi  inframerah.
Majalah Biam , 13 (1):31-41.
Ifa, L. 2018. Pembuatan kitosan dari sisik ikan kakap merah. Journal of Chemical Process Engineering ,
3(1):47-50.
Kristianingrum,  S.  2016.  Handout  Spektroskopi Infra  Merah  (Infrared  Spectroscopy,  IR). Yogyakarta: Universitas Negeri Yogyakarta
Liu, X., Chen, X., Wang, H., Yang, Q., ur Rehman, K.,
Li, W., Cai, M., Li, Q., Mazza, L., Zhang, J. & Yu, Z. 2017.  Dynamic  changes  of  nutrient composition throughout the entire life cycle of black soldier fly. PLoS One , 12(8):p.e0182601. Melati, E. 2014. Pembuatan glukosamin hidroklorida (GlcN  HCl)  dari  kitin  karapas  udang  dengan metode autoklaf. [Skripsi]. Bogor (Id): Institut Pertanian Bogor.
Murniati, D. & Mudasir, M. 2013. Isolasi Kitin dari Cangkang  Kepiting  Laut  ( Portunus  pelagicus Linn. )  serta  Pemanfaatannya  untuk  Adsorpsi Fe  dengan  Pengompleks  1,  10-fenantrolin. None , 3:p.108292.
Mursida,  M.,  Tasir,  T.  &  Sahriawati,  S.  2018.
Efektifitas  Larutan  Alkali  pada  Proses Deasetilasi dari Berbagai Bahan Baku Kitosan. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia ,
21(2):356-366. DOI: 10.17844/Jphpi.V21i2.23091. Rochima,  E.,  2014.  Kajian  pemanfaatan  limbah rajungan  dan  aplikasinya  untuk  bahan minuman  kesehatan  berbasis  kitosan. Jurnal Akuatika. 5(1): 71-82.
Sartika,  I.D.,  Alamsjah,  M.A.,  &  Sugijanto,  N.E.N. 2016.  Isolasi  dan  karakterisasi  kitosan  dari cangkang  rajungan  ( Portunus  pelagicus ).
Jurnal  Biosains  Pascasarjana ,  18(2):98-111. DOI: 10.20473/jbp.v18i2.2016.98-111
Savitri, E., Soeseno, N. and Adiarto, T., 2010. Sintesis kitosan,  poli  (2-amino-2-deoksi-D-Glukosa), skala  pilot  project  dari  limbah  kulit  udang sebagai  bahan  baku  alternatif  pembuatan biopolimer.  Repository.  UPN  "Veteran" Yogyakarta Selvina,  R.,  Karakterisasi  dan  Aplikasi  Kitosan Selongsong  Pupa  Black  Soldier  Fly  sebagai Edible  Coating  pada  Anggur  Merah  (Vitis vinifera). Repository IPB University Setha,  B.,  Rumata,  F.,  &  Silabab,  B.  2019. Characteristics  of  Chitosan  from  White  Leg Shrimp  Shells  Extracted  Using  Different Temperature  and  Time  of  the  Deasetilation Process. Jurnal  Pengolahan  Hasil  Perikanan Indonesia , 22(3):498-507.
Sikana, A.M., Ningsih, N.F., Saputri, M.R., Wandani, S.A.  and  Ambarwati,  R.,  2016.  Pemanfaatan Limbah  Cangkang  Kupang  Sebagai  Sumber Kitin  dan  Kitosan. Sains  dan  Matematika ,
4(2):50-54 Silmina, D., Edriani, G. & Putri, M. 2011. Efektifitas berbagai media budidaya terhadap pertumbuhan  maggot Hermetia  illucens .  IPB Bogor.
Siregar, E.C., Suryati, S. & Hakim, L. 2017. Pengaruh suhu  dan  waktu  reaksi  pada  pembuatan kitosan  dari  tulang  sotong  (Sepia  officinalis). Jurnal Teknologi Kimia Unimal , 5(2):37-44. Soetemans, L., Uyttebroek, M. & Bastiaens, L., 2020.
Characteristics  of  chitin  extracted  from  black soldier fly in different life stages. International Journal of Biological Macromolecules , 165:3206-3214.
Sugita,  P.  &  Wukirsari,  T.  2019. Kitosan:  sumber biomaterial masa depan . PT Penerbit IPB Press. Wahyuni, S., Selvina, R., Fauziyah, R., Prakoso, H.T., Priyono, P. & Siswanto, S. 2020. Optimasi Suhu dan  Waktu  Deasetilasi  Kitin  Berbasis Selongsong  Maggot  ( Hermetia  ilucens ) menjadi  Kitosan. Jurnal  Ilmu  Pertanian Indonesia , 25(3):373-381.
Wahyuni, W., Ridhay, A. & Nurakhirawati, N. 2016. Pengaruh Waktu Proses Deasetilasi Kitin Dari Cangkang Bekicot (Achatina Fulica) Terhadap Derajat Deasetilasi. Kovalen: Jurnal Riset Kimia , 2(1): 1-7. DOI: 10.22487/J24775398.2016.V2.I1. 6039. Wang,  H.,  ur  Rehman,  K.,  Feng,  W.,  Yang,  D.,  ur Rehman,  R.,  Cai,  M.,  Zhang,  J.,  Yu,  Z.  and Zheng, L., 2020. Physicochemical structure of chitin in the developing stages of black soldier fly. International  Journal  of  Biological Macromolecules , 149:901-907. Wiyarsi,  A.  &  Priyambodo,  E.  2009.  Pengaruh konsentrasi  kitosan  dari  cangkang  udang terhadap  efisiensi  penjerapan  logam  berat. Laporan Penelitian. Jurusan Pendidikan Kimia FMIPA.  Yogyakarta:  Universitas  Negeri Yogyakarta .
Younes, I. & Rinaudo, M., 2015. Chitin and chitosan preparation  from  marine  sources.  Structure, properties  and  applications. Marine  drugs , 13(3):1133-1174. DOI: 10.3390/ Md13031133 .. Yulianis,  Y.,  Sanuddin,  M.  &  Annisaq,  N.,  2020. Pembuatan  Kitosan  Dari  Kitin  Dari  Limbah Tulang  Dalam  Cumi-Cumi. Journal  of Healthcare Technology and Medicine , 6(1):62-69. Yulianto,  M.,  Paramita,  V.,  Hartati,  I.  &  Amalia,  R. 2018.  Response  surface  methodology  of pressurized  liquid  water  extraction  of curcumin  from  curcuma  domestica  val. Rasayan Journal of Chemistry , 11:1564-1571.