p-ISSN : 2442-6032 e-ISSN :  2598-9979
DOI : 10.35311/jmpi.v9i2.381
Efek Ekstrak Daun Sawo Manila ( Manilkara zapota (L.) Van Royen) Sebagai Adjuvant Antibiotika Amoxicillin Terhadap Resistensi Escherichia coli Dan Staphylococcus aureus
Muhammad Taufiq Duppa 1 , Firmansyah 2 *, Syachriyani Syachrir 2 , Anshari Masri 1
1 Program Studi Farmasi, Universitas Muhammadiyah Makassar
2 Program Studi Farmasi, Universitas Pancasakti Makassar

## ABSTRAK
Resistensi  terhadap  antibiotik  yang  tersedia  pada  bakteri  patogen  menjadi  tantangan global karena jumlah strain resisten terhadap berbagai jenis antibiotik terus meningkat. Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengetahui  efek  ekstrak  daun  Sawo  Manila  sebagai adjuvant  antibiotika  Amoksisilin  terhadap  resistensi  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus .  Ekstrak  daun  Sawo  Manila  diperoleh  dengan  cara  Maserasi menggunakan  pelarut  Etanol  96  %.  Penetuan  daya  hambat  dengan  metode  difusi cakram diinkubasi 1 x 24 jam. Penentuan uji interaksi Amoksilin adjuvant ekstrak daun Sawo Manila berdasarkan ZOI dengan metode AZDAST. Hasil penelitian menunjukkan daya  hambat  rata-rata  Amoksisilin  Adjuvant  ekstrak  daun  Sawo  Manila  terhadap Escherichia coli 1 x 24 jam adalah 14,6 mm, daya hambat Amoksisilin adjuvant ekstrak daun Sawo Manila 10 % b/v terhadap Staphylococcus aureus 1 x 24 jam adalah 15,60 mm. Kesimpulan  penelitian  ini  adalah  Ekstrak  daun  Sawo  10%  b/v  Manila  memiliki  efek daya hambat terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus dan penentuan interaksi Amoksisilin adjuvant daun Sawo Manila 10% b/v memiliki aktivitas antibakteri sinergis terhadap Eschericihia coli dan Staphylococcus aureus .
Kata Kunci : Daun  Sawo  Manila,  Adjuvant  Antibiotika,  Resistensi, Escherichia  coli , Staphylococcus aureus

## ABSTRACT
Resistance to available antibiotics in pathogenic bacteria is a global challenge because the number of strains resistant to various types of antibiotics continues to increase. The aim  of  this  research  is  to  determine  the  effect  of Manilkara  zapota leaf  extract  as  an adjuvant  for  the  antibiotic  Amoxicillin  against  the  resistance  of Escherichia  coli and Staphylococcus aureus bacteria. Manilkara zapota leaf extract was obtained by maceration using  96%  Ethanol  as  a  solvent.  Determination  of  inhibitory  power  using  the  disk diffusion method was incubated 1 x 24 hours. Determination of the interaction test for the Amoxicillin adjuvant extract of Manilkara zapota leaves based on ZOI using AZDAST method. The results of the study showed that the average inhibitory power of Adjuvant Amoxicillin, Manilkara zapota leaf extract against Escherichia coli 1 x 24 hours was 14.6 mm,  the  inhibitory  power  of  Adjuvant  Amoxicillin, Manilkara  zapota leaf  extract  10% w/v against Staphylococcus aureus 1 x 24 hours was 15. 60 mm. The conclusion of this research  is  that Manilkara  zapota leaf  extract  10%  w/v  has  an  inhibitory  effect  on Escherichia coli and Staphylococcus aureus and determining the interaction of the adjuvant Amoxicillin, Manilkara zapota leaf 10% w/v has synergistic antibacterial activity against Eschericihia coli and Staphylococcus aureus.
Keywords : Manilkara  zapota Leaf,  Antibiotic  Adjuvants,  Resistance, Escherichia  coli ,
Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Resistensi antibiotik merupakan
permasalahan global yang harus
dikendalikan  karena  dapat  menurunkan
efektivitas  pengobatan  penyakit  infeksi, meningkatkan  resiko  penularan  penyakit infeksi  dan  meningkatkan  biaya  kesehatan (Hestiyani, 2021). Menurut WHO 2014,
antibiotik  menjadi  tidak  efektif  untuk mengobati penyakit infeksi karena munculnya strain bakteri yang resisten seperti Multidrug-resistant organisms ( MDRO’s).
Sitasi: Duppa, M. T., Firmansyah, Syachrir, S., & Masri, A. (2023). Efek Ekstrak Daun Sawo Manila ( Manilkara zapota (L.) Van Royen) Sebagai Adjuvant Antibiotika Amoxicillin Terhadap Resistensi Escherichia coli Dan Staphylococcus aureus . Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, 9(2), 302-312. https://doi.org/10.35311/jmpi. v9i2.381
Submitted: 09 September 2023 Accepted: 15 Desember 2023 Published: 23 Desember 2023
*Penulis Korespondensi: Firmansyah Email: firmansyah17mb@gmail.com
Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License
MDRO’s yang berkembang karena penggunaan antibiotik tidak terkendali antara lain  Methicilin  resistant Staphylococcus  aureus (MRSA), Vancomycin resistant Staphylococcus aureus ( VRSA), Extended spectrum betalactamase (ESBL), dan lain-lain (Blondeau and Blondeau, 2021).
Antibiotika  memiliki  peranan  yang sangat penting dalam mengurangi meningkatnya  kasus  penyakit  infeksi  bakteri dan  angka  kematian.  Tingginya  angka  kasus infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri  seperti mikobakterium, stafilokokus, streftokokus, enterokokus dan  sebagainya  dapat  diobati dengan penggunaan antibiotika. Kemampuan antibiotika untuk mengatasi bahkan
mencegah
kasus penyakit infeksi
menyebabkan meningkatkan tingginya penggunaan agen antibiotika secara signifikan. Kemudian penggunaan antibiotika yang tidak sesuai dan tidak rasional terhadap tujuan  terapi  antibiotika  pada  kasus  infeksi bakteri kecenderungannya antibiotika digunakan  secara  bebas  dan  tanpa  resep dokter.  Sehingga  mengakibatkan  terjadinya perkembangan  bakteri  yang  resisten  pada antibiotika (Sufi, 2015).
Menurut  WHO  2017,  resistensi  pada antibiotika  yang  tersedia  pada  bakteri patogen  saat  ini  menjadi  tantangan  global karena  jumlah  strain  yang  resisten  terhadap berbagai  jenis  antibiotik  meningkat  secara dramatis setiap tahun dan telah menyebar ke seluruh  dunia  (Tacconelli  et  al.  2018).  Untuk mengatasi masalah ini, penggunaan 'adjuvant antibiotik' dalam kombinasi dengan antibiotik sekarang sedang dieksploitasi. Pendekatan ini memungkinkan untuk meningkatkan kemampuan obat dalam pengobatan (González-Bello, 2017).
Amoksisilin  merupakan  antibiotik golongan  penisilin  dengan  kerja  spectrum luas  dan  mudah  diabsorbsi  di  saluran  cerna namun  mudah  terdegradasi  oleh  enzym betalaktamase  yang  diproduksi  bakteri sehingga menyebabkan resistensi.
Amoksisilin  paling  sering  digunakan  dalam pengobatan infeksi dan termasuk dalam Drug Utilition 90 % dengan persentase penggunaan
89,21% (Sitepu, Cahyono, and Monica, 2020). Bakteri Staphylococcus  aureus telah  resisten terhadap amoksisilin dan kombinasi amoksisilin-asam klavunalat (Valzon, Siagian, and Agusmai 2021). Demikian pula Escherichia coli telah  resisten  terhadap  amoksisilin. Beberapa  penelitian  melaporkan  terkait  obat amoxicillin  yang  telah  kebal  terhadap beberapa  bakteri  patogen  seperti  bakteri Escherichia  coli,  Pseudomonas  sp,  Klebsiella  sp, Staphylococcus  epidermidis ,  dan Staphyloccocus aureus memiliki  resistensi  tinggi  terhadap amoxicilin (Sitorus and Si, 2018).
Adjuvant Antibiotik, senyawa ini juga dinamai resistance  breakers atau  antibiotik potentiator dan mereka memiliki sedikit atau tidak ada aktivitas antibiotik tetapi diberikan bersama  dengan  antibiotik  memiliki  efek menghambat  mekanisme  resistensi  bakteri utama  atau  meningkatkan  aktifitas  obat antimikroba.  Terapi  obat  gabungan  ini memiliki  keuntungan  bahwa  tidak  perlu melakukan  upaya  dalam  identifikasi  dan biaya  mahal  terhadap  target  baru  yang penting  untuk  kelangsungan  hidup  bakteri (González-Bello, 2017).
Upaya yang dilakukan dalam
memerangi  tingginya  resistensi  bakteri terhadap Amoxicillin yaitu dengan mengembangkan  agen  antibakteri  baru  yang berasal dari bahan alam. Salah satu tanaman alternatif  pengobatan  yang  memiliki  efek antibakteri  adalah  tanaman  Sawo  Manila ( Manilkara zapota (L.) Van Royen) merupakan family sapotaceae yang  dibudidayakan  dan memiliki buah yang lezat. Bagian pohon yang berbeda  telah  digunakan  untuk  berbagai penyakit dalam praktek pengobatan tradisional.  Berbagai  komponen  fitokimia. Tanaman  Sawo  Manila  adalah  flavonoid, senyawa  fenolik,  alkaloid,  steroid,  asam amino,  protein,  glikosida  antrakuinon,  gula deoksi dan terpenoid (isoprenoid), Selain itu, memiliki  bioaktivitas  seperti  antioksidan, antimikroba, antidiabetik, hipokolesterolemia,
antinosiseptif,
antiinflamasi,
antidiare, antelmintik,
antitumor,
antiarthritis, aktivitas
penghambatan  xantin  oksidase  (Yee  and
Shukkoor,  2019).  Penelitian  ini  dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui efek ekstrak daun Sawo Manila sebagai adjuvant antibiotika  Amoxicillin  terhadap  resistensi bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus .

## METODE PENELITIAN Alat
Seperangkat alat Maserasi, Rotavapor (Buchi®),  Cawan  petri,  Tabung  reaksi (Iwaki®), Rak tabung reaksi, penjepit tabung reaksi,  Erlenmeyer  (Pyrex®),  Gelas  ukur (Iwaki®),  Gelas  beker  (Iwaki®),  Batang pengaduk,  Mistar  jangka  sorong  (taffware SH20),  Bunzen,  Pinset,  Termometer,  gelas benda, Timbangan analitik (Shimadzu
ATX224),  Hot  plate  stirrer,  Autoklaf  (All-
American), Oven sterilisasi (Binder), Inkubator  (Memmert®), Laminar  Air  Flow (LAF), Sarung tangan karet dan Masker.
Bahan
Daun  Sawo  Manila,  biakan  murni Staphylococcus aureus , Escherichia coli , Nutrient Agar (NA), Na.CMC, Aquades  steril, Aquades, Paper  disc  blank , Paper  disc , Amoksisilin 25 ppm, Etanol 96%, Alkohol 70 %, Kertas pH, Spritus, Tissu.

## Pengolahan sampel
Pertama-tama  daun  Sawo  Manila dibersihkan  dari  kotoran  yang  ada  sampel, dicuci  dengan  air  yang  mengalir  sampai bersih. kemudian dipotong kecil-kecil. Selanjutnya dikeringkan dengan cara dijemur terlindung  dari  sinar  matahari  langsung  lalu diserbukkan. Simplisia yang didapat kemudian  ditimbang  untuk  proses  ekstraksi selanjutnya.  Karakterisasi  simplisia  daun Sawo  Manila  dilakukan  terhadap  kadar  air (tidak lebih  dari  9,2%),  dan kadar  abu  (tidak lebih  dari  7,2%).  Serbuk  simplisia  yang didapat selanjutnya diekstraksi menggunakan metode Maserasi.

## Pembuatan ekstrak daun Sawo Manila
Serbuk  simplisia  daun  Sawo  Manila sebanyak  500  gram  dimasukkan  kedalam
bejana  Maserasi,  ditambahkan  etanol  96  %, perbandingan 1 : 2 (jumlah serbuk simplisia : jumlah pelarut). Kemudian direndam selama 3  x  24  jam,  sambil  sesekali  dilakukan pengadukan  dan  terlindung  dari  cahaya matahari.  Ekstrak  cair  yang  telah  diperoleh disaring  menggunakan  corong,  kemudian dipekatkan  menggunakan  Rotary  vacuum evaporator  hingga  diperoleh  ekstrak  kental. Setelah  itu  ditimbang  untuk  mengetahui bobotnya (Firmansyah and Duppa, 2022).

## Uji  skrining  senyawa  fitokimia  daun  Sawo Manila
Uji  Alkaloid  menggunakan  1  ml ekstrak + CHCl 3 + NH 3 dan 3 tetes H 2 SO4 2 N, selanjutnya ditambahkan pereaksi Dragendorf  kemudian  diamati  hasil  ujinya. Uji senyawa flavonoid dilakukan dengan 1 ml ekstrak daun Sawo Manila ditambahkan 3 ml Ethanol 70%, ditambahkan 0,1 g Mg dan juga 2  tetes  HCl  pekat  kemudian  diamati  hasil ujinya.  Uji  Saponin  diukur    1  ml  ekstrak ditambahkan  10  ml  air,  lalu  dikocok, didiamkan  15  menit  samapai  busa  yang terbentuk stabil. Uji Steroid yaitu 1 ml ekstrak daun Sawo Manila ditambahkna 3 ml ethanol 70%  +  2  ml  H 2 SO 4 pekat  +  (CH 3 CO) 2 O kemudian  diamati  hasil  uji  terjadi.  Uji  Tanin dilakukan  dengan  melarutkan  1  ml  ekstrak ditambahkan 20 ml air + 2-3 tetes FeCl 3 1% dan diamati  hasil  identifikasi.  Uji  Fenolik menggunakan  1  ml  ekstrak  ditambahkan NaCl  1%  +  larutan  gelatin  10%  kemudian diamati hasil ujinya (Nufus, Qomariyah, and Purnama, 2021).

## Sterilisasi alat
Alat  -  alat  yang  digunakan  dalam penelitian  yang  melalui  tahap  sterilisasi dengan  tujuan  untuk  menghilangkan  atau mematikan mikroorganisme pada alat tersebut.  Alat-alat  gelas  disterilkan  dalam oven  dengan  suhu  160˚C  selama  2  jam sedangkan alat  gelas  yang  mempunyai  skala disterilkan  dalam  autoklaf  pada  suhu 121˚C selama  15  menit.  Alat  berupa  ose  dan  pinset disterilkan  dengan  cara  pemijaran  langsung pada api Bunsen.

## Peremajaan dan pembuatan suspensi bakteri
uji Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus
Maing-masing koloni bakteri
Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli diambil dari stok kultur bakteri dengan jarum ose yang steril dan disuspensikan kedalam 10 ml  media Nutrient  broth steril,  setelah  itu diinkubasi  pada  suhu  35±20 o C  sampai diperoleh  kekeruhan  dengan  transmitan  25 yang  menggunakan  alat Spektrofotometer  UV panjang  gelombang  580  nm  (Sitorus  and  Si, 2018).
Menentukan  zona  hambat  tunggal  dan kombinasi  terhadap Escherichia  coli dan

## Staphylococcus aureus
Penentuan  zona  hambat  dengan menggunakan  metode  difusi  cakram  atau metode Kirby  Baure .  Medium Nutrient  Agar dituang  secara  aseptik  kedalam  cawan  petri steril  sebanyak  20  ml  didiamkan  hingga memadat. Setelah  itu paper  disc Amoksisilin 25 ppm ditetesi 20 μl ekstrak daun Sawo 10 % b/v dan kontrol negatif Na.CMC 0,5 % b/v lalu ditiriskan  paper  disk.  Diinokulasi Escherichia coli kepermukaan  medium  yang  telah memadat,  lalu  diletakkan  paper  disc  ekstrak daun  Sawo  10  %  b/v  (A);  paper  disc Amoksisilin  25  ppm  (B);  paper  disc  ganda ekstrak daun Sawo 10 % b/v (AA); paper disc ganda  Amoksisilin  25  ppm  (BB);  paper  disc Amoksisilin 25 ppm adjuvant daun Sawo 10 % b/v (AB), dan kontrol negatif Na. CMC 0,5 % b/v (C) secara stril yang menggunakan pinset yang  telah  disterilkan  pada  permukaan mediumnya  dengan  jarak paper  disc satu dengan  yang  lainnya  2-3  cm  dari  pinggir cawan  petri  .  Kemudian  diinkubasi  dalam inkubator Memmert® pada suhu 37 o C selama 1  x  24  jam  dan  dilanjutkan  inkubasi  kembali 1x24  jam.  Perlakuan  yang  sama  dilakukan terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus .  Zona hambat  yang  terbentuk  dari  tumbuhnya bakteri  dalam  media  ditandai  dengan terdapatnya area bening ( clear zone ) pada area paper disk . Diameter hambatan diukur dengan jangka  sorong  (Ziaei-Darounkalaei  et  al., 2016).

## Metode penentuan interaksi
Penentuan  uji  interaksi  berdasarkan ZOI  dengan  metode Ameri-Ziaei  Double Antibiotic  Synergism  Test (AZDAST)  (Ziaei- Darounkalaei  et  al.,  2016).  Jika  A  adalah ekstrak  daun  Sawo  Manila  dan  B  adalah Antibiotik, maka dikatakan:
1. Sinergistik  =  jika  luas  zona  hambat  AB  > zona hambat A & B atau AA dan atau BB
2. Potensiasi  = jika Zona hambat A atau B = 0 dan Zona hambat AB > zona hambat A & B atau AA dan atau BB
3. Antagonistik = jika zona hambat AB < zona hambat A & B atau AA dan atau BB
4. Aditif    =  jika  zona  hambat  AB  =  zona hambat AA dan atau BB atau A & B
5. Tidak dapat dibedakan = jika zona hambat AB = zona hambat A atau B

## Analisis data
Data  hasil    penelitian  yang  diperoleh dianalisis  dengan Analysis  of  Variance (ANOVA) one-way atau uji ANOVA satu arah dimana  data  berdistribusi  normal  dan homogen, tingkat kepercayaan 95% dan nilai signifikansi  α  =  0,05.  Metode one  way  Anova , digunakan  untuk  mengetahui  ada  tidaknya pengaruh Amoxicillin adjuvant ekstrak daun Sawo Manila terhadap daya hambat terhadap bakteri  uji.  Interpretasi  data  ANOVA  yang diamati  yaitu  nilai  signifikansi  dari  masing- masing kelompok perlakuan .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui  efek  mengetahui  ekstrak  daun Sawo  Manila  sebagai  adjuvant  antibiotika Amoxicillin terhadap resistensi bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus , dengan  pengujian  daya  hambat  terhadap bakteri uji kemudian ditentukan interaksinya untuk  efek  adjuvant.  Terlebih  dahulu dilakukan  skrining  fitokimia  ekstrak  daun Sawo  Manila  yaitu  identifikasi  alkaloid, flavonoid,  saponin,  steroid,  tannin  dan senyawa fenolik.
Ekstrak    daun    Sawo    Manila diidentifikasi    melalui    tes    warna    dengan berbagai pereaksi sebagaimana terdapat pada
Tabel 1. Pada analisis alkaloid menggunakan pereaksi Dragendorff ditandai dengan endapan    putih.  Endapan    tersebut    sebagai hasil  ikatan  kovalen koordinat  ion  logam  K + dengan    pasangan    elektron    bebas    atom nitrogen    senyawa    alkaloid  (Nugrahani, Andayani,  and  Hakim,  2016).  Uji  flavonoid dengan  penambahan    Mg    dan    HCl    pekat. HCl    pekat    berfungsi    menghidrolisis    O - glikosil    digantikan    dengan  H + dari  asam. Reduksi  inti  benzopiron  flavonoid  oleh  Mg dan  HCl  pekat  menghasilkan  warna  merah pada  senyawa.  Hasil  positif  saponin  pada ekstrak    daun    sawo    manila  dengan  adanya buih.  Gugus  polar  glikosida  yang  bersifat hidrofil  akan  menghadap  keluar  sedangkan
gugus    nonpolar    terpenoid    yang    bersifat hidrofob  akan    menghadap    ke    dalam sehingga  ketika  dikocok  dengan  air  akan terbentuk  buih  (Susanto,  Hardani,  and Rahmawati  2019).  Uji  steroid  menggunakan pereaksi  Liebermann-Burchard      terjadi perubahan   warna   menjadi hijau   kebiruan akibat   reaksi oksidasi  steroid  melalui  ikatan rangkap terkonjugasi. Uji fenolik menunjukkan   hasil   positif   karena   senyawa fenolik   bereaksi   dengan   gelatin   dan   NaCl membentuk   garam.  Kemudian tanin   juga menunjukkan      hasil      positif      warna  coklat kehijauan  akibat  tanin  membentuk  senyawa kompleks dengan pereaksi FeCl 3 1 % (Nufus, Qomariyah, and Purnama, 2021).
Tabel 1. Hasil Analisis Fitokimia Ekstrak Daun Sawo Manila
No. Uji skrining senyawa fitokimia Pereaksi Hasil identifikasi kesimpulan (+)/(-) 1 Fenolik FeCl 3 Hitam kuat sampai pekat +++ 2 Flavonoid Mg+HCl pekat + Etanol Merah +++ 3 Steroid Liebermann-Bouchardat Hijau kebiruan +++ 4 Alkaloid Dragendorff Endapan putih ++ 5 Tanin FeCl 3 1% Coklat +++ 6 Saponin - Buih +++
Keterangan : ++ (kuat), +++ (Sangat kuat) (Nufus, Qomariyah, and Purnama, 2021), (Ikalinus, Widyastuti, and Eka Setiasih,
2015).
Penelitian    ini    dilakukan  dengan menggunakan  metode    Difusi    Agar    ( Kirby Bauer ).  Prinsip  kerja  metode  ini  yaitu  Cara Kirby-Bauer adalah suatu metode uji sensitivitas  bakteri  yang  dilakukan  dengan pembuatan suspensi bakteri pada media Brain Heart  Infusion (BHI)  cair  dari  koloni pertumbuhan  kuman  24  jam,  selanjutnya disuspensikan  dalam  0,5  mL  BHI  cair (diinkubasi  4-8  jam  pada  suhu  37 o C).  Hasil inkubasi bakteri diencerkan sampai mencapai standar  konsentrasi  kuman  108  CFU/mL. Suspensi  bakteri  diuji  sensitivitas  dengan meratakan  suspensi  bakteri  tersebut  pada permukaan media agar. Paper disk antibiotika ditempatkan pada permukaan media tersebut dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 19-24
jam.  Hasilnya  dibaca  dan  dilihat  terdapat zona  radikal  atau  iradikal  (Sari  and Febriawan, 2021).
Hasil  rata-rata  diameter  zona  hambat terhadap Escherichia coli pada pengamatan 1 x 24  jam  (Tabel  2,  Gambar  1,  dan  2)  diperoleh ekstrak   daun Sawo Manila 10% b/v (A) 10,85 mm, Amoksisilin (B) 11,04 mm,  ekstrak daun Sawo Manila 10% b/v ganda (AA) 12,17 mm, Amoksisilin  25  ppm  adjuvant  ekstrak  daun Sawo  Manila  10%  b/v  (AB)  14,6  mm  dan Amoksisilin  25  ppm  ganda    (BB)  14,13  mm. Hasil  rata-rata  diameter  daya  hambat terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus pada pengamatan  1  x  24  jam  (Tabel  3,  Gambar  3, dan 4) adalah ekstrak daun Sawo Manila 10% b/v (A) 11,17 mm, Amoksisilin (B) 11,66 mm,
ekstrak  daun  Sawo  Manila  10%  b/v  ganda (AA) 12,23 mm, Amoksisilin 25 ppm adjuvant ekstrak daun Sawo Manila 10 % b/v (AB) 15,60 mm,  Amoksisilin  25  ppm  ganda      (BB)  15,16 mm.  Kontrol  negatif  (-)  menggunakan suspensi  Na.  CMC  0,5%  b/v  dalam  aquadest memperlihatkan tidak adanya zona hambat di sekitar kertas cakram yang ditumbuhi bakteri, menandakan  bahwa  tidak  adanya  aktifitas antibakteri terhadap pertumbuhan Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus .  Hal  ini menunjukkan  Na.  CMC  tidak  memiliki
aktifitas antibakteri. Hasil penelitian menunjukkan  daya  hambat  ekstrak  daun Sawo  Manila    10%  b/v  lebih  besar  terhadap Staphylococcus aureus dengan rata-rata diameter  zona  hambatnya  (11,71  mm) dibanding  terhadap Escherichia  coli (10,85 mm).  Demikian      pula  pada  daya  hambat Amoksisilin  25  ppm  adjuvant  ekstrak  daun Sawo  Manila  10%  b/v    (AB)  lebih  besar terhadap Staphylococcus aureus dengan rata-rata diameter  zona  hambatnya  (15,60  mm) dibanding terhadap Escherichia coli (14,6 mm).
Tabel 2. Hasil Pengujian Daya Hambat Terhadap Escherichia coli Pengamatan 1 x 24 Jam No. Perlakuan Diameter zona hambat (mm) 1 2 3 Rata-rata ±   SD 1 Ekstrak daun Sawo Manila 10 % b/v 11,57 10,35 10,63 10,85 ± 0,63 2 Amoksisilin 25 ppm 11,70 10,64 10,80 11,04 ± 0,57 3 Ekstrak daun Sawo Manila 10% b/v ganda 12,43 11,97 12,11 12,17 ± 0,23 4 Amoksisilin adjuvant ekstrak daun Sawo Manila 10 % b/v 14,86 14,38 14,56 14,6   ± 0,24 5 Amoksisilin 25 ppm ganda 13,93 14,21 14,25 14,13 ± 0,17 6 Kontrol Na.CMC 0,5 % b/v 0,00 0,00 0,00 0,00  ± 0,00
Gambar 1. Grafik Hasil Uji Daya Hambat Escherichia coli
Replikasi 1                             Replikasi 2                          Replikasi 3
Gambar 2. Hasil Uji Daya Hambat Escherichia coli 1 x 24 Jam
Tabel 3. Hasil Pengujian Daya Hambat Terhadap Staphylococcus aureus Pengamatan 1 x 24 Jam
No. Perlakuan Diameter zona hambat (mm) 1 2 3 Rata-rata ± SD 1 Ekstrak daun Sawo Manila 10 % b/v 11,41 11,37 10,75 11,17 ± 0,37 2 Amoksisilin 25 ppm 11,84 11,74 11,41 11,66 ± 0,22 3 Ekstrak daun Sawo Manila 10% b/v ganda 12,26 12,28 12,16 12,23 ± 0,06 4 Amoksisilin adjuvant ekstrak daun Sawo Manila 10 % b/v 16,48 16,10 14,23 15,60 ± 1,20 5 Amoksisilin 25 ppm ganda 15,27 15,28 14,94 15,16 ± 0,19 6 Kontrol Na.CMC 0,5 % b/v 0,00 0,00 0,00 0,00 ± 0,00
Gambar 3. Grafik Hasil Uji Daya Hambat Staphylococcus aureus 1 x 24 Jam
Replikasi 1 Replikasi 2                                    Replikasi 3
Gambar 4. Hasil Uji Daya Hambat Terhadap Staphylococcus aureus 1x24 Jam
Tabel 4. Interpretasi Interaksi Amoksisilin dan Ekstrak Daun Sawo Manila Metode AZDAST
No. Bakteri uji Sampel Daya hambat rata- rata (mm) Interaksi  daya hambat Amoksisilin adjuvant ekstrak daun Sawo Manila Interpretasi AZDAST 1 Escherichia coli (1x24 jam) Ekstrak daun Sawo Manila10 % b/v (A) 10,85 AB (14,6 mm) > A (10,85 mm) dan AB (14,6 mm) > B
(11,04 mm) ;
AB (14,6 mm) > AA (12,17 mm) dan AB (14,6 mm)  > BB (14,13) Sinergis Amoksisilin 25 ppm (B) 11,04 Ekstrak daun Sawo Manila 10%  ganda(AA) 12,17 Amoksisilin adjuvant daun Sawo Manila 10 % b/v (AB) 14,6 Amoksisilin 25 ppm ganda (BB) 14,13 Na.CMC 0,5 % (C) 0,00 2 Staphylococcus aureus (1x24 jam) Ekstrak daun Sawo Manila 10 % b/v (A)
11,17
Sinergis Amoksisilin 25 ppm (B) 11,66 AB (15,60 mm) > A (11,71 mm) dan AB (15,60 mm) > B (11,66 mm); AB
(15,60 mm) > AA
(12,23) dan AB
(15,60 mm) > BB (15,16 mm) Ekstrak daun Sawo Manila 10%  ganda(AA) 12,23 Amoksisilin adjuvant daun Sawo Manila 10 % b/v (AB) 15,60 Amoksisilin 25 ppm ganda (BB) 15,16 Na.CMC 0,5 % (C) 0,00
Berdasarkan  hasil  analisis  statistik dengan  uji One  Way  Anova menunjukkan bahwa  data  memenuhi  syarat  uji  Anova karena sig. < 0,005 sehingga dilanjutkan pada uji lanjutan Post Hoc Tes Multiple Comparisons Games  Howell yaitu  untuk  mengetahui perbedaan  rata-rata  zona  hambat  terhadap bakteri Escherichia coli dan bakteri
Staphylococcus  aureus .  Hasil  yang  diperoleh adalah  terdapat  perbedaan  daya  hambat signifikan  terhadap  bakteri Escherichia  coli ekstrak  daun  Sawo  Manila  10%  b/v  (A) dengan  Amoksisilin  25  ppm  ganda  (BB) dengan sig. 0,029 < 0,005, ekstrak daun Sawo Manila  10%  b/v  ganda  (AA)  dengan Amoksisilin  25  ppm  ganda  (BB)  sig.0,002  <
0,005,  Amoksisilin  25  ppm  (B)  dengan Amoksisilin  25  ppm  ganda  (BB)  sig.  0,024  < 0,005.  Kemudian  pada Staphylococcus  aureus diperoleh hasil daya hambat yang siginifikan yaitu ekstrak daun Sawo Manila 10% b/v (A) dengan Amoksisilin 25 ppm ganda (BB) 0,002 <  0,05,  ekstrak  daun  Sawo  Manila  10%  b/v ganda  (AA)  dengan  Amoksisilin  25  ppm ganda (BB) sig. 0,002 < 0,05 dan Amoksisilin 25 ppm  (B)  dengan  Amoksisilin  25  ppm  ganda (BB) sig. 0,000 < 0,005.
Daya  hambat  rata-rata  ekstrak  daun Sawo Manila 10 % b/v terhadap Escherichia.coli pada  pengamatan  masa  inkubasi  1  x  24  jam adalah 10,85 mm. Daya hambat ekstrak daun Sawo Manila 10% b/v terhadap Staphylococcus aureus pada pengamatan masa inkubasi 1 x 24 jam  adalah  11,17  mm.  Daya  hambat Amoksisilin  Adjuvant  ekstrak  daun  Sawo Manila terhadap Escherichia coli pada 1 x 24 jam  adalah  14,6  mm.  Daya  hambat Amoksisilin  adjuvant  ekstrak  daun  Sawo Manila  10  %  b/v  terhadap Staphylococcus aureus pada 1 x 24 jam adalah 15,60 mm.
Penentuan  uji  interaksi  Amoksilin adjuvan ekstrak daun Sawo Manila berdasarkan  ZOI  dengan  metode  AZDAST (Tabel  4),  hasil  uji  terhadap Escherichia  coli pengamatan  1  x  24  jam  daya  hambat Amoksisilin  25  ppm  adjuvant  ekstrak  daun Sawo  Manila  10%  b/v  (AB)  =  14,6    mm memiliki  daya  hambat  lebih    besar    dari ekstrak  daun Sawo Manila  10% b/v  (A) 10,85 mm dan Amoksisilin 25 ppm  (B)  11,04 mm (AB>A  dan  B);  lebih  besar  dari  ekstrak  daun Sawo Manila 10 % b/v ganda (AA=12,17 mm) dan  Amoksisilin  25    ppm  ganda  (BB  =  14,13 mm) menunjukkan bahwa ekstrak daun Sawo Manila  memiliki  aktifitas  antibakteri  yang sinergis dengan Amoksisilin terhadap Escherichia  coli .  Pada  penentuan  uji  terhadap Staphylococcus
aureus , daya hambat Amoksisilin  25  ppm  adjuvant  ekstrak  daun Sawo Manila 10% b/v (AB = 15,60 mm) lebih besar dari ekstrak daun Sawo Manila 10 % b/v (A = 11,71 mm) dan Amoksisilin 25 ppm (B) = 11,66 mm; lebih besar dari ekstrak daun Sawo Manila 10 % b/v ganda (AA = 12,23 mm) dan Amoksisilin  ganda  25  ppm  (BB  =15,16  mm)
menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  Sawo Manila  memiliki  aktifitas  antibakteri  yang sinergis dengan Amoksisilin terhadap Staphylococcus  aureus (Ziaei-Darounkalaei  et al., 2016).
Berdasarkan hasil uji skrining fitokmia menunjukkan  bahwa  daun  Sawo  Manila memiliki  kandungan  metabolit  sekunder alkaloid,  flavonoid,  saponin,  steroid,  tannin dan  senyawa  fenolik.  Flavonoid  berperan aktif  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri  yaitu  dengan  membentuk  senyawa yang kompleks pada protein ekstraseluler dan terlarut  sehingga  dapat  mengganggu  dan merusak  membran  sel  bakteri  yang  diikuti dengan  keluarnya  senyawa  intraseluler (Nugraha,  Prasetya,  and  Mursiti  2017). Senyawa flavonoid juga mampu mendenaturasikan  protein  dan  merusak membrane sel pada struktur dinding sel dan sitoplasma bakteri yang mengandung protein dan  lemak  (Salim,  Sumardianto,  and  Amalia 2018),  (Oikeh,  Oviasogie,  and  Omoregie, 2020).  Alkaloid  bersifat  sebagai  antibakteri yaitu    dengan    cara  menghambat  komponen penyusun    peptidoglikan    pada    sel    bakteri, sehingga  dinding  sel  tidak  terbentuk  utuh menyebabkan  kematian  sel.  Selain  itu  tannin juga  sebagai  antibakteri  bekerja  dengan mengganggu sintesa peptidoglikan  sehingga pembentukan  dinding  sel  menjadi  kurang sempurna  yang  menyebabkan  keadaan  sel menjadi lisis karena tekanan osmotik maupun fisik  sehingga  sel  bakteri  menjadi  mati (Pertiwi,  Rezaldi,  and  Puspitasari,  2022). Dengan demikian ekstrak daun Sawo Manila memiliki  efek  sebagai  adjuvant  antibiotika Amoxicillin karena memiliki aktivitas antibakteri yang sinergis terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus .

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  Sawo  Manila  10%  b/v memiliki  efek  daya  hambat  terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus dan penentuan  interaksi  Amoxicillin  adjuvant daun Sawo Manila 10% b/v memiliki aktivitas antibakteri  yang  sinergis  terhadap  bakteri
Eschericihia  coli dan  bakteri Staphylococcus aureus .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih kepada Kemenristekdikti atas bantuan pembiayaan  penelitian  melalui  program Hibah Penelitian Dosen Pemula (PDP) tahun 2023. Ucapan terima kasih kepada pimpinan, staf  dan  dosen  Prodi  Farmasi  FKIK Universitas  Muhammadiyah  Makassar  serta ucapan  terimakasih  juga  penulis  sampaikan kepada  Laboratorium  Mikrobiologi  Farmasi Universitas Pancasakti Makassar atas dukungan  kerjasamanya  sehingga  penelitian ini dapat terselesaikan dengan baik dan tepat waktu.

## DAFTAR PUSTAKA
Blondeau, Leah D., and Joseph M. Blondeau. 2021. “Antimicrobial Resistance.”
Diagnostics  and  Therapy  in  Veterinary Dermatology : 163–74.
Firmansyah, Firmansyah, and Muhahammad Taufiq  Duppa.  2022.  “Potensi  Ekstrak Kulit  Buah  Terong  Belanda  (Solanum Betaceum  Cav.)  Dalam  Sediaan  Sirup Sebagai  Imunomodulator  Pencegah Covid-19.” Jurnal  Mandala  Pharmacon Indonesia 8(2): 217–30.
González-Bello, Concepción. 2017. “Antibiotic Adjuvants  –  A  Strategy  to  Unlock
Bacterial  Resistance  to  Antibiotics.” Bioorganic  and  Medicinal  Chemistry Letters 27(18): 4221–28. http://dx.doi.org/10.1016/j.bmcl.2017.08 .027. Hestiyani, Rani Afifah Nur. 2021. “Dekolonisasi Multidrug-Resistant
Organisms  (Mdro’s)  Dengan  Cuci Tangan  Sebagai  Upaya  Pengendalian Resistensi  Antibiotik  Pada  Kelompok Masyarakat Di Kabupaten Banyumas.” Jurnal  ABDI:  Media  Pengabdian  Kepada Masyarakat 6(2): 94.
Ikalinus,  Robertino,  Sri  Widyastuti,  and  Ni Eka Setiasih. 2015. “Skrining Fitokimia
Ekstrak  Etanol  Kulit  Batang  Kelor (Moringa  Oleifera).” Indonesia  Medicus Veterinus 4(1): 77.
Nufus,  Inarotun,  Nur  Qomariyah,  and  Erlix Rakhmad  Purnama.  2021.  “Aktivitas Antidiabetik  Ekstrak  Daun  Sawo Manila  (Manilkara  Zapota)  Terhadap Kadar  Gula  Darah  Dan  Penyembuhan
Ulkus Diabetikum Pada Mencit Diabetes.” LenteraBio :  Berkala  Ilmiah
Biologi 10(3): 319–28.
Nugraha, Aditya Cahya, Agung Tri Prasetya, and Sri Mursiti. 2017. “Isolasi,
Identifikasi,  Uji  Aktivitas  Senyawa
Flavonoid  Sebagai  Antibakteri  Dari Daun  Mangga.” Indonesian  Journal  of Chemical Science 6(2): 91–96.
Nugrahani,  Rizki,  Yayuk  Andayani,  and Aliefman  Hakim.  2016.  “Skrining Fitokimia  Dari  Ekstrak  Buah  Buncis (Phaseolus  Vulgaris  L)  Dalam  Sediaan Serbuk.” Jurnal  Penelitian  Pendidikan IPA 2(1).
Oikeh,  Ehigbai  I.,  Faith  E.  Oviasogie,  and
Ehimwenma S. Omoregie. 2020.
“Quantitative  Phytochemical  Analysis and  Antimicrobial  Activities  of  Fresh and  Dry  Ethanol  Extracts  of  Citrus Sinensis  (L.)  Osbeck  (Sweet  Orange) Peels.” Clinical Phytoscience 6(1).
Pertiwi,  Fernanda  Desmak,  Firman  Rezaldi, and  Ranny  Puspitasari.  2022.  “Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol
Bunga  Telang  (Clitoria  Ternatea  L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus Epidermidis.” Biosaintropis  (Bioscience- Tropic) 7(2): 57–68. Salim, Ahmad Niam, Sumardianto
Sumardianto,  and  Ulfah  Amalia.  2018. “Efektivitas  Serbuk  Simplisia  Biji Pepaya  Sebagai  Antibakteri  Pada Udang  Putih  (Penaeus  Merguensis) Selama  Penyimpanan  Dingin.” Jurnal Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia 21(2): 188.
Sari,  Zada  Amalia  Agatha,  and  Rahmat Febriawan.  2021.  “Perbedaan Hasil Uji Aktivitas  Antibakteri  Metode Well Diffusion Dan Kirby  Bauer Terhadap Pertumbuhan  Bakteri.” Jurnal  Medika
Hutama 2(4): 1156–62. Sitepu,  Rehmadanta,  Toni  Tri  Cahyono,  and Eva Monica. 2020. “Evaluasi Penggunaan Antibiotik Dengan Metode Atc/Ddd  Dan  Pdd Dengan Du 90% Pada Penderita Ispa Non
Pneumonia  Di  Puskesmas  Kabupaten Sampang.” Jurnal  JKFT 5(1):  16–22.
http://jurnal.umt.ac.id/index.php/jkft/a rticle/view/2664.
Sitorus,  Panal,  and  M  Si.  2018.  “Uji  Efek Kombinasi Amoksisilin Dengan Ekstrak Etanol Daun Sirih ( Piper Betle L  )  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  Coli  Dan  Staphylococcus Aureus  TALENTA  Conference  Series
Uji Efek Kombinasi Amoksisilin
Dengan  Ekstrak  Etanol  Daun  Sirih  ( Piper Bet.” 1(1): 313–19.
Sufi,  Desrini.  2015.  “Resistensi  Antibiotik, Akankah Dapat Dikendalikan ?” Jurnal Kedokteran  dan  Kesehatan  Indonesia 6(4):
5–7.
http://www.who.int/tb/publications/20 11/factsheet_tb_2011.pdf.
Susanto, Agus, Hardani, and Sri Rahmawati.
2019.  “Uji  Skrining  Fitokimia  Ekstrak Etanol  Daun  Ubi  Jalar  Ungu  (Ipomoea Batatas  L).” ARTERI :  Jurnal  Ilmu
Kesehatan 1(1): 1–7.
Tacconelli,  Evelina  et  al.  2018.  “Discovery, Research,  and  Development  of  New Antibiotics:  The  WHO  Priority  List  of Antibiotic-Resistant Bacteria and Tuberculosis.” The  Lancet  Infectious
Diseases 18(3): 318–27.
Valzon, May, Dewi Sartika Siagian, and Riski
Agusmai. 2021. “Amoxicylin- Klavulanate and Cefadroxyl Resistance
Toward Staphylococcus Aureus Isolate from  Children’s  Nose  Mucosa.” Jurnal Aisyah : Jurnal Ilmu Kesehatan 6(1): 137– 42.
Yee,  Yong  Ka,  and  Mohamed  Saleem  Abdul Shukkoor.  2019.  “Manilkara  Zapota:  A Phytochemical  and  Pharmacological Review.” Materials  Today:  Proceedings 29(November 2018): 30–33. https://doi.org/10.1016/j.matpr.2020.05. 688.
Ziaei-Darounkalaei,  Navid  et  al.  2016.
“AZDAST  the  New  Horizon  in Antimicrobial  Synergism  Detection.” MethodsX 3(232): 43–52. http://dx.doi.org/10.1016/j.mex.2016.01. 002.