PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF ETHANOL EXTRACT OF LEMON PEEL (Citrus lemon L. ) BY DPPH METHOD (1.1-Diphenil-2-Picrylhdarzyl)
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DARI EKSTRAK ETANOL KULIT BUAH LEMON SUANGGI ( Citrus lemon L. ) DENGAN METODE DPPH ( 1,1-Diphenil-2-Picrylhydarzyl )
Stevana F.A Paat 1)* , Fatimawali 1) , Irma Antasionasti 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *paatstevana@gmail.com

## ABSTRACT
Lemon  Suanggi  (Citrus  lemon)  contains  flavonoid  compounds  so  that  it  can  act  as  antioxidants  that  can ward off free radicals. The purpose of this study was to find out the antioxidant activity of the ethanol extract of suanggi lemon peel in vitro using the DPPH method (1.1-diphenil-2-picrylhdarzyl) based on that value. Suanggi  Lemon  peel  was  extracted  by  maceration  method  with  95%  ethanol  as  solvent.  The  antioxidant activity  test  used  the  DPPH  method  (1.1-diphenil-2-picrylhdarzyl)  and  vitamin  C  as  a  comparison,  the absorption was measured by UV-Vis spectrophotometer at a wavelength of 517 nm. The antioxidant activity were analyzed by used the equation of the regression line y = 2,0741x + 20,099, obtained 𝐼𝐶 50 14,41 µg/mL and a compration of vitamin C obtained 𝐼𝐶 50 8,0 µg/mL. The results of this study can be concluded that the ethanol extract of suanggi lemon peel has a very strong antioxidant content.
Keywords : Suanggi Lemon Peel, Maceration, Antiokxidant, DPPH

## ABSTRAK
Buah  Lemon  Suanggi  ( Citrus  lemon )  mengandung  senyawa  flavonoid  sehingga  dapat  bersifat  antioksidan yang dapat menangkal radikal bebas. Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol kulit buah Lemon Suanggi secara invitro dengan menggunakan metode DPPH ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil) berdasarkan nilai IC 50 . Kulit buah Lemon Suanggi diekstrasi menggunakan metode maserasi dengan  etanol  95%  sebagai  pelarut.  Uji  aktivitas  antioksidan  menggunakan  metode  DPPH  ( 1,1-diphenil-2- picrylhydarzyl) dan vitamin C sebagai pembanding. Serapan diukur menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm. Aktivitas antioksidan dianalisis menggunakan persamaan garis regresi y = 2,0742x + 20,099, diperoleh IC 50 14,41 µg/mL dan pembanding vitamin C diperoleh IC 50 8,0 µg/mL. Hasil penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  kulit  buah  Lemon  Suanggi  memiliki  aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
Kata kunci : Kulit Buah Lemon Suanggi, Maserasi, Antioksidan, DPPH
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Tubuh  manusia  membutuhkan  substansi yang penting yaitu antioksidan dalam jumlah yang cukup  agar  dapat  meredam  dampak  negatif  dari radikal bebas. Antioksidan alami di hasilkan oleh tubuh manusia, baik berupa enzim-enzim antioksidan  maupun  senyawa-senyawa  yang  juga bersifat antioksidan (Muchtadi, 2013).
Keseimbangan  oksidan  dan  antioksidan  sangat penting  karna  berkaitan  dengan  fungsinya  yaitu sistem  imunitas  tubuh.  Dalam  pengertian  kimia, senyawa  antioksidan  adalah  senyawa  pemberi elektron  (elektron  donor)  (Hernani  dan  Mono, 2006).  Radikal  bebas  adalah  suatu  atom  atau molekul yang sangat reaktif dengan elektron yang tidak  memiliki  pasangan.  Radikal  bebas  mencari reaksi-reaksi  agar  dapat  memperoleh  kembali pasangannya (Corwin, 2009).
Buah Lemon Suanggi merupakan tanaman yang memiliki manfaat sebagai antioksidan  alami  karna  memiliki  kandungan vitamin C, Asam sitrat, minyak atsiri, bioflavonoid,  polifenol,  kumarin,  flavonoid,  dan minyak  minyak  volatil  pada  kulitnya  seperti limonen  (±70%),  α-terpinen,  α-pinen,  β-pinen, serta kumarin, dan polifenol (Nizhar, 2012). Serta air perasan jeruk lemon juga mengandung banyak senyawa bioaktif antara lain flavonoid, tanin, dan asam  sitrat.  Senyawa  bioaktif  yang  terkandung dalam  Lemon  Suanggi  masing-masing  memiliki sifat antibakteri, anti jamur, antidiabetes, antikanker,  dan  aktivitas  antivirus.  (Russo et  al. , 2014).
Citrus lemon L yang dikenal dengan jeruk lemon  termasuk family Rutaceae  umumnya dibudidayakan  di  negara-negara  Asia  Selatan, karena  Lemon  Suanggi  ( Citrus  lemon L.) mempunyai  aktivitas  yang  luas  termasuk  sebagai antibakteri,  anti  jamur,  antidiabetes,  antikanker, dan  aktivitas antivirus.  Flavonoid dapat berfungsi sebagai  antioksidan  langsung  dan  menangkap radikal  bebas,  serta  memiliki  kapasitas  dalam memodulasi  aktivitas  enzim  dan  menghambat poliferasi sel (Batubara, 2017).
Penelitian  ini  dilakukan  uji  aktivitas antioksidan  dari  ekstrak  etanol  kulit  buah  Lemon Suanggi  secara invitro dengan  metode  uji antioksidan  yang  digunakan  adalah  metode peredaman  radikal  bebas  DPPH (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil) berdasarkan  nilai  IC 50 .  Metode  ini memerlukan  sedikit  sampel  sederhana,  mudah, cepat,  dan  peka  untuk  mengevaluasi  aktivitas antioksidan  dari  senyawa  bahan  alam  (Hanani et al. , 2005).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Peneliatian
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  Juni 2021  sampai  September  2021  di  Laboratorium Farmasi  Lanjut  Program  Studi  Farmasi,  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam, Universitas Sam Ratulangi Manado.

## Bentuk Penelitian
Bentuk dari penelitian ini adalah eksperimental  laboratorium  yang  akan  menguji aktivitas antioksidan ekstrak etanol dari kulit buah Lemon Suanggi (Citrus lemon L .) dengan metode DPPH (1,1  difenil-2-pikrilhidrazil ).  Ekstrasi  kulit buah  Lemon  Suanggi  dilakukan  dengan  cara maserasi. Untuk uji aktivitas antioksidan dilakukan  menggunakan  variasi  konsentrasi  5 µg/mL,  10  µg/mL,  15µg/mL,  20  µg/mL,  25 µg/mL.

## Alat dan Bahan Alat
Timbangan analitik, oven, blender, aluminium  foil ,  toples,  corong,  ayakan,  kertas saring,  beaker  gelas,  labu  takar (pyrex) ,  pipet tetes, mikropipet, tabung reaksi, rak tabung, gelas ukur,  batang  pengaduk,  spatula,  spektrofotometer UV-Vis.

## Bahan
Kulit terluar buah Lemon Suanggi ( Citrus lemon L . ),  Etanol  95%  ( OneMed )  dan  serbuk vitamin C p.a ( Merck) .

## Prosedur Penelitian Pengambilan dan Preparasi Sampel
Buah  lemon  suanggi  yang  di  ambil  dari desa  Minanga  kabupaten  Minahasa  Tenggara, Sulawesi  Utara.  buah  lemon  suanggi  di  cuci bersih dengan air bersih yang mengalir, kemudian kulit  buah  Lemon  Suanggi  dipisahkan  dari buahnya.  Kulit  buah  Lemon  Suanggi  diangin- anginkan lalu di keringkan dalam oven pada suhu 40°C.  Kulit  buah  Lemon  Suanggi  yang  benar- benar  kering  ditimbang  dan  dihaluskan  dengan blender  hingga  menjadi  serbuk,  kemudian  diayak menggunakan ayakan.

## Ekstrasi Metode Maserasi
Sampel  kulit  buah  Lemon  Suanggi diekstrasi  menggunakan  pelarut  etanol  95%. sebanyak  300  g  serbuk  simplisia  dimasukan  ke dalam  toples  kemudian  ditambahkan  pelarut etanol  95%  sebanyak  1500  mL.  Toples  ditutup
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
rapat  dan  dibiarkan  selama  3  hari  terlindung  dari cahaya  ekstrak,  kemudian  disaring  menggunakan kertas  saring  sehingga  didapat  maserat  (Filtrat  I) dan residunya dimaserasi dengan etanol. Prosedur yang  sama,  maserasi  dilakukan  selama  2  hari. Maserat etanol digabungkan (Filtrat I + Filtrat II) dan  dipekatkan  menggunakan  oven  pada  suhu 40°C sehingga diperoleh ektrak kental.

## Pembuatan dan Pengujian Larutan DPPH
Sebanyak  4  mg  serbuk  DPPH  ditimbang dan  dilarutkan  dalam  etanol  95%  sebanyak  100 mL  dalam  labu  ukur,  larutan  dijaga  pada  suhu kamar,  terlindung  dari  cahaya  untuk  segera digunakan. Pengujian dilakukan dengan menggunaksn  spektrofotometer  UV-Vis  diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang  517  nm, dilakukan sebanyak 3 replikasi.

## Pengujian Aktivitas Antioksidan Ekstrak dengan Metode DPPH
Sebanyak  10  mg  ekstrak  kulit  buah Lemon  Suanggi  dilarutkan  dengan  etanol  95% dalam  labu  takar  10  mL  sampai  tanda  batas. Masing-masing  dibuat  konsentrasi  5  µg/mL,  10 µg/mL,  15  µg/mL,  20  µg/mL,  25  µg/mL. sebanyak  5  mL,  dihitung  dengan  menggunakan rumus pengenceran, yaitu:
Masing-masing konsentrasi dipipet sebanyak  1  mL  dan  dimasukan  ke  dalam  tabung reaksi  dan  ditambahkan  2  mL  larutan  DPPH kemudian di vortex selama 5 detik dan diinkubasi selama  30  menit  pada  suhu  37°C.  Serapannya diukur  pada  panjang  gelombang  517  nm, dilakukan sebanyak 3 replikasi.

## Pembuatan dan Pengujian Larutan Pembanding Vitamin C (p.a)
Vitamin C p.a sebanyak 10 mg ditimbang. Kemudian dilarutkan dalam etanol 95% sebanyak 10 mL. Masing-masing larutan stok dipipet 25 µL, 50µL,  75µL,  100µL,  125µL.  Masing-masing konsetrasi  tersebut  ditambahkan  dengan  etanol 95% sampai tanda batas 5 mL sehingga diperoleh masing-masing  konsentrasi  5  µg/mL,  10  µg/mL, 15  µg/mL,  20  µg/mL,  25  µg/mL.  Konsentrasi- konsentrasi tersebut dipipet 1 Ml, lalu dimasukan kedalam tabung reaksi dan ditambahkan sebanyak 2  mL  larutan  DPPH.  Vortex  selama  5  detik  dan dibiarkan  30  menit  pada  suhu  kamar.  Masing- masing  larutan  diukur  serapannya  pada  panjang gelombang  517  nm,  dilakukan  sebanyak  3 replikasi.
Penentuan Nilai Inhibitory Concentration IC 50 Perhitung  nilai  IC 50 diperlukan  data persen  inhibisi  dari  pengujian  yang  dilakukan. Persen inhibisi dapat dihitung dengan menggunakan rumus sebagai berikut:
Persamaan  tersebut  digunakan  untuk menentukan  IC 50 dari  masing-masing  sampel dinyatakan  dengan  nilai  y  sebesar  50  dan  nilai  x yang  akan  diperoleh  sebagai  IC 50 (Molyneux, 2004).  Suatu  senyawa  memiliki  antioksidan  yang sangat  kuat  bila  nilai  IC 50 <  50  µg/mL,  kuat  bila nilai  IC 50 bernilai  50-100  µg/mL,  sedangkan sedang apabila nilai IC 50 bernilai 100-150 µg/mL, dan lemah bila nilai IC 50 bernilai 151 - 200 µg/mL (Blois, 2005).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas  dari  penangkal  radikal  bebas,  diuji  pada spektrofotometer.  Hasil  pengujian  disajikan  pada tabel dibawah ini:
𝑴 𝟏 × 𝑽 𝟏 =   𝑴 𝟐 𝑽 𝟐 % 𝒊𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒔𝒊  = 𝒂𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒔𝒊 𝒃𝒍𝒂𝒏𝒌𝒐 − 𝒂𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒔𝒊 𝒔𝒂𝒎𝒑𝒆𝒍 𝒂𝒃𝒔𝒐𝒓𝒃𝒂𝒏𝒔𝒊 𝒃𝒍𝒂𝒏𝒌𝒐 × 𝟏𝟎𝟎%
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## Tabel 1. Perbandingan Aktivitas Antioksidan
Sampel Konsentrasi (µg/mL) Absorbansi Rata- Rata Inhibisi (%) 𝑰𝑪 𝟓𝟎 (µg/mL) I II III Ekstrak Etanol 5 0,602 0,600 0,562 0,588 31,70 14,41 µg/mL 10 0,522 0,518 0,468 0,502 41,69 15 0,460 0,441 0,405 0,435 49,47 20 0,395 0,340 0,361 0,365 57,60 25 0,271 0,210 0,153 0,210 75,60 Vitamin C 5 0,503 0,504 0,498 0,498 42,16 8,0 µg/mL 10 0,407 0,422 0,418 0,418 51,45 15 0,217 0,235 0,242 0,231 73,17 20 0,170 0,186 0,190 0,182 78,86 25 0,120 0,085 0,085 0,096 88,85
Gambar 2 . Grafik Aktivitas Antioksidan Ekstrak

## Etanol

## Pembahasan
Pengujian  aktivitas  antioksidan  pada sampel  dilakukan  dengan  metode  DPPH.  Prinsip dari  metode  ini  adalah  mengukur  aktivitas antioksidan  secara  kuantitatif  yaitu  dengan pengukuran  aktivitas  perendaman  radikal  DPPH oleh  ekstrak  etanol  kulit  buah  Lemon  Suanggi ( Citrus lemon L.) menggunakan sperktofotometer UV-Vis  dengan  panjang  gelombang  517  nm sehingga akan diketahui nilai aktivitas perendaman  radikal  bebas,  yang  dinyatakan dengan  nilai IC 50 ( Inhibitory  concentration ) .
Proses  ekstraksi  simplisia  kulit  buah  Lemon Suanggi dilakukan dengan metode maserasi.
Metode ini dipilih karena cara pengerjaan yang  sederhana,  cepat  menarik  senyawa  kimia yang  terdapat  dalam  sampel. Peralatan  yang digunakan  mudah  didapat  dan  tidak  memerlukan peralatan  khusus  (Sa`adah et  al., 2015).  Proses ekstraksi dilakukan menggunakan pelarut etanol
Gambar 3 . Grafik Aktivitas Antioksidan Vitamin C
95%  karena  lebih  selektif.  Etanol  juga  memiliki sifat  toksisitas  rendah  sehingga  tidak  merusak sampel, absorbansinya baik dan dapat mencegahpertumbuhan bakteri dan jamur (Saifudin et al. , 2011).
Pengujian  aktivitas  antioksidan  pada sampel  menggunakan  lima  konsentrasi  yaitu  5 µg/mL,  10  µg/mL,  15  µg/mL,  20  µg/mL,  25 µg/mL,  dimana  pada  masing-masing  konsentrasi dilakukan  tiga  kali  pengujian.  Sampel  yang  diuji aktivitas  antioksidannya  adalah  ekstrak  etanol kulit  buah  Lemon  Suanggi  ( Citrus  lemon )  dan vitamin C sebagai pembanding.
Berdasarkan  Tabel  1,  diketahui  bahwa bertambahnya  konsentrasi  sampel  menyebabkan absorbansi  sampel  semakin  menurun  dan  persen inhibisi meningkat. Menurut  Hanani dan Sekarini (2005), menyatakan bahwa presentase penghambatan (persen inhibisi) terhadap aktivitas radikal bebas akan ikut meningkat seiring dengan
y = 2.0742x + 20.099 R² = 0.969 0 20 40 60 80 0 10 20 30 Ekstrak Etanol %inhibisi Konsentrasi % inhibisi y = 2,4158x + 30,661 R² = 0,9631 0 20 40 60 80 100 0 10 20 30 Vitamin  C % inhibisi Konsentrasi %inhibisi
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
meningkatnya  konsentrasi.  Berdasarkan  hasil pengujian  DPPH,  persen  inhibisi  pada  ekstrak etanol  kulit  buah  Lemon  Suanggi  mengalami peningkatan  pada  konsentrasi  tertinggi  yaitu 25µg/ml yakni 75,60%.
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan  ekstrak  kulit  buah  Lemon  Suanggi memiliki  aktivitas  antioksidan.  Hasil  pengujian aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  kulit  buah Lemon  Suanggi  diperoleh  nilai IC 50 sebesar 14,41  µg/mL  dan  aktivitas  antioksidan  vitamin  C memiliki  nilai IC 50 sebesar  8,0  µg/mL.  Menurut Molyneux  (2004),  dapat  diketahui  bahwa  kulit buah Lemon Suanggi memiliki aktivitas antioksidan yang sangat kuat serta vitamin C yang digunakan sebagai pembanding termasuk antioksidan  yang  sangat  kuat.  Ekstral  etanol  kulit Lemon  Suanggi  mengandung  senyawa  metabolit sekunder flavonoid,  glikosida,  tannin,  steroid  dan triterpenoid.  Kandungan  flavonoid  pada  sitrus memiliki  aktivitas  biologis  yang  luas  termasuk sebagai antibakteri, antijamur, antidiabetes, antikanker dan aktivitas antivirus.
Flavonoid dapat berfungsi sebagai antioksidan  langsung  dan  menangkap  radikal bebas, serta memiliki kapasitas dalam memodulasi.  Senyawa  triterpenoid  pada  ekstrak kulit  buah  Lemon  Suanggi  berpotensi  sebagai antioksidan. Triterpenoid bertindak sebagai antioksidan karena memiliki rantai ikatan rangkap terkonjugasi sehingga elektronnya dapat disambungkan untuk menstabilkan muatan molekul reaktif (Capelli dan Cisewsky, 2007).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  secara in  vitro dengan  menggunakan metode  DPPH  ( 1,1-diphenil-2-picrylhydarzyl ) ekstrak  kulit  buah  Lemon  Suanggi  ( Citrus  lemon L.)  memiliki  aktivitas  antioksidan.  Nilai  yang diperoleh  berada  pada  rentang  <50  µg/mL  yaitu sebesar 14,41 µg/mL dengan aktivitas antioksidan dapat dikatakan sangat kuat.

## SARAN
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan,  perlu  penelitian  lebih  lanjut  terhadap pengujian  beberapa  aktivitas  senyawa  pada  buah Lemon Suanggi ( Citrus Lemon L.)

## DAFTAR PUSTAKA
Batubara,  N.  A.  2017.  Efek  Air  Perasan  Buah Jeruk Lemon ( Citrus limon ) terhadap Laju Aliran,  Nilai  pH  Saliva  dan  Jumlah
Koloni Staphylococcus  aureus ( In  Vivo ). [Skripsi].  Universitas  Sumatera  Utara, Medan.
Blois,  M.S.  2005.  Antioxidant  Determination  by The  Use  of  Stable  Free  Radical. Journal Nature . 181 : 1191–1200.
Capelli,  B.,  &  G.  Cisewsky.  2007. Natural Antaxhantin:  King  of  the  Carotenoids . Hawai: Cyanotech Corporation.
Corwin,  E.J.  2009. Buku  Saku  Patofiologi  Edisi Ketiga . Jakarta: EGC.
Hanani,  E.,  A.  Mun’inm,  R.  Sekarini,  &  S. Wiryowidagdo. 2006. Uji Aktivitas Antioksidan  Beberapa  Spons  Laut  Dari Kepulauan  Seribu. Jurnal  Bahan  Alam Indonesia . 5 ( 1 ): 1-4.
Hanani,  E.,  &  R.  Sekarini.  2005.  Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam Spons Callispongia sp.  dari  Kepulauan  Seribu. Jurnal  Ilmu  Kefarmasian . 2 ( 3 ):  127- 133.
Hernani,  &  R.  Mono.  2006. Tanaman  Berkhasiat Antioksidan . Jakarta: Penebar Swadaya.
Molyneux,  P.  2004.  The  use  of  the  stable  free radical  diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH) for estimating   antioxidant activity.
Journal  Science  Technology . 26 ( 2 ):  211- 219.
Muchtadi,  Deddy.  2013. Antioksidan  dan  Kiat Sehat  di  Usia  Produktif .  Bandung:
Alfabeta.
Nizhar,  U.  M.  2012.  Level  Optimum  Sari  Buah Lemon  (Citrus  limon)  sebagai  Bahan Penggumpal  pada  Pembentukan  Curd Keju  Cottage.  [Skripsi] . Univesritas Hasanuddin, Makassar.
Russo,  M.,  I.  Bonaccorsi,  G.  Torre,  M.  Saro,  P.
Dugo, & L. Modello. 2014. Undererestimated  Sources  of  Flavonoid, Limonoids, and Dietary Fibre:
Availability  Lemon’s  by-Products. Jo Funct Foods . ( 9 ): 18-26.
PHARMACON – PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Sa’adah,  H.,  &  H.  Nurhasnawati.  2015.
Perbandingan Pelarut Etanol dan Air Pada Pembuatan  Ekstrak  Umbi  Bawang  Tiwai ( Eleutherine Americana Merr) Menggunakan  Metode  Maserasi. Jurnal
Ilmiah Manuntung . 1 ( 2 ): 149-153.
Saifuddin, A., V. Rahayu, & H. Y. Teruna. 2010.
Standarisasi Bahan Obat Alam.
Jogjakarta: Graha Ilmu.