## ANALISIS SENYAWA BIOAKTIF EKSTRAK MIKROALGA LAUT Tetraselmis chuii SEBAGAI SUMBER ANTIOKSIDAN ALAMI
(Analysis of Marine Microalgae Tetraselmis chuii Extract Bioactive Compounds as a Natural Antioxidants Source)
Jaya Mahar Maligan 1* , Ayuningtyas Putri Marditia 1 , Widya Dwi Rukmi Putri
Jurusan Teknologi Hasil Pertanian, FTP Universitas Brawijaya, Malang Jl. Veteran, Malang 65145 *Email: maharajay@gmail.com

## ABSTRACT
Microalgae has many benefits such as food, medicine, a mixture of fertilizer and fuel sources. Tetraselmis  chuii  has  chlorophyll  and  phytochemical  compounds  such  as  flavonoids as  a  natural source of antioxidants. This research was performed using a Randomized Block Design (RAK) with two factors, ratio of distilled water : ethanol (2:8, 3:7, and 4:6), and ratio of materials : solvent (1:3. 1:6, and 1:9) with three time replicated. The best treatment was obtained from the combination of ratio of distilled water : ethanol (2:8) and ratio of materials : solvent (1:6) with the value of yield 19,33%; water content 23,35%; total flavonoids 1996,13 mg QE/kg extract; total phenol 578,93 mg GAE/kg extract; total chlotophyll 21,73 mg/g; antioxidant activity 21,04%.
Keywords : antioxidant, MAE, microalgae, Tetraselmis chuii

## ABSTRAK
Mikroalga   memiliki   banyak   manfaat   antara   lain   sebagai   bahan   makanan,   obat-obatan, campuran pupuk, dan sumber bahan bakar.Mikroalga spesies Tetraselmis chuii memiliki klorofil dan beberapa senyawa fitokimia seperti golongan flavonoid sebagai sumber antioksidan alami. Penelitian ini   dilakukan   dengan   menggunakan   metode   RAK   (Rancangan  Acak   Kelompok)   dengan   2   faktor, yaitu : rasio pelarut aquades : etanol (2:8, 3:7, dan 4:6) dan rasio bahan : pelarut (1:3, 1:6, dan 1:9) dengan tiga kali ulangan. Perlakuan terbaik diperoleh dari kombinasi rasio aquades : etanol (2:8) dengan rasio bahan : pelarut (1:6) dengan nilai rendemen 19,33%; kadar air 23,35%; total flavonoid 1996,13  mg  QE/kg  ekstrak;   total  fenol  578,93  mg  GAE/kg   ekstrak;  total  klorofil 21,73   mg/g;  dan aktivitas antioksidan 21,04%.
Kata kunci : antioksidan, MAE, mikroalga, Tetraselmis chuii

## PENDAHULUAN
Mikroalga   merupakan   organisme   yang paling   efisien   dalam   menangkap   dan memanfaatkan energi matahari dan CO 2 untuk keperluan   fotosintesis.Mikroalga   memiliki banyak   manfaat   antara   lain   sebagai   bahan makanan, obat-obatan, campuran pupuk, dan sumber   bahan   bakar  (Chisti,   2007). Dari beberapa   spesies   mikroalga   yang   ada, mikroalga  laut  spesies Tetraselmis   chuii mempunyai   prospek   cerah   di   masa mendatang  sebagai   sumber   pangan   baru karena   mengandung   nilai   gizi   yang   tinggi. Penelitian   yang   telah   dilakukan   terhadap Tetraselmis   chuii menunjukkan   bahwa Tetraselmis chuii mengandung protein sebesar 48,42%, karbohidrat 12,10%, dan lemak 9,7% (Brown et   al., 1997). Selama   ini   mikroalga
tersebut   hanya   sebagai   pakan   ikan   dan crustacea .
Pada   penelitian   sebelumnya   dilakukan skrining fitokimia secara kualitatif berdasarkan pada sifat kelarutan senyawa.Hasil analisis senyawa   fitokimia   diperoleh   tiga   senyawa yang   terkandung   pada   ekstrak   mikroalga Tetraselmis   chuii yaitu   senyawa   golongan alkaloid,   flavonoid,   dan   glokosida   flavonoid (Sani, 2014).
Antioksidan   merupakan   senyawa penangkap radikal bebas yang berfungsi untuk memperlambat   terjadinya   proses   oksidasi pada   bahan   pangan.   Antioksidan   termasuk salah satu jenis bahan tambahan pangan yang dapat digunakan untuk melindungi komponen makanan   yang   bersifat   tidak   jenuh (mempunyai   ikatan   rangkap),   seperti   lemak dan   minyak.Tubuh   manusia   juga menghasilkan
senyawa antioksidan,
contohnya
superoksida dismutase (SOD).Jumlah   senyawa   antioksidan   yang dihasilkan   dari   tubuh   manusia   tidak   cukup untuk   menangkap   radikal   bebas   di   dalam tubuh. Salah satu cara mengatasi kekurangan tersebut adalah mengkonsumsi makanan yang mengandung   senyawa   antioksidan,   seperti vitamin dan mineral (Hermani, 2004).
Pada   penelitian   ini   dilakukan   ekstraksi antioksidan   alami   dari   mikroalga Tetraselmis chuii dengan   menggunakan   gelombang mikro. Microwave Assisted Extraction merupakan   salah   satu   metode   yang dikembangkan untuk proses ekstraksi. Metode ini   memiliki   keunggulan   diantaranya   jumlah pelarut   yang   digunakan   tidak   banyak,   waktu yang   diperlukan   untuk   proses   ini   juga   relatif singkat jika dibandingkan dengan metode lain. Pada   penelitian   Metode   ekstraksi   ini   dapat menghasilkan   rendemen   ekstrak   yang   lebih tinggi   bila   dibandingkan   dengan   metode kovensional (Kusuma, 2012). Salah satu faktor yang   mempengaruhi   hasil   ekstraksi   adalah perbandingan   antara   bahan   terhadap   pelarut yang   digunakan.Maka   perlu   dilakukan   kajian terhadap   faktor   tersebut.   Kajian   yang   akan dilakukan   adalah   rasio   pelarut   aquades dengan   etanol   yaitu   2:8,   3:7,   dan   4:6   (Rivai dkk.,   2008) dan   rasio   bahan   dengan   pelarut yaitu 1:3, 1:6, dan 1:9. Rasio pelarut tersebut dipilih   karena   rasio   alga   terhadap   pelarut optimum pada rasio 1:2-1:10 g/ml pada pelarut heksana dan metanol (Wati dkk., 2011).

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini   adalah   bubukmikroalga Tetraselmis   chuii yang diperoleh dari Balai Budidaya Air Payau (BBAP) Situbondo.
Bahan   yang   digunakan   untuk   ekstraksi antioksidan   adalah   aquades  dan   etanol  96% yang   diperoleh   dari   Krida   Tama   Persada. Bahan   yang   digunakan   untuk   analisis   kimia pada   penelitian   ini   adalah reagen Folin- Ciocalteau, natrium karbonat (Na 2 CO 3 ), AlCl 3 , NaNO 2 ,   NaOH   1   M,   kuersetin,   asam   galat, aseton teknis, etanol PA, DPPH 0,2 mM.

## Alat
Alat   yang   digunakan   dalam   ekstraksi pada   penelitian   ini   adalah microwave (Samsung), rotary   vacuum   evaporator (IKA), sentrifuse   (C   3-select),   timbangan   analitik (Ohaus),   toples,   jar   kaca,   botol   kaca   gelap, valkon, dan spatula besi.
Alat yang digunakan untuk analisis pada penelitian   ini   adalah   spektrofotometer   (Unico UV-2100), oven listrik (Memmert U.30), vortex
(LW Scientific),   desikator, beaker glass , bola hisap, corong kaca, tabung reaksi, rak tabung reaksi,   kertas   saring   halus,   alumunium   foil, cawan alumunium, plastik, labu ukur, piet ukur, dan pipet tetes.

## Desain Penelitian
Penelitian   disusun   menggunakan metode   Rancangan   Acak   Kelompok   (RAK) dengan   2   faktor   yaitu   rasio   aquades:etanol (2:8,   3:7,   4:6)   dan   rasio   bahan:pelarut   (1:3, 1:6,   1:9).   Masing-masing   perlakuan   diulang sebanyak 3 kali sehingga diperoleh 27 satuan percobaan.Data dianalisis dengan menggunakan   metode   analisis   ragam ( Analysis   of   Variant atau   ANOVA)   yang dilajutkan   dengan   uji  lanjut   BNT  atau   DMRT dengan selang kepercayaan 5%.

## Tahapan Penelitian
Tahap penelitian dilakukan dengan satu tahapan yaitu pembuatan ekstrak dari mikroalga laut Tetraselmis chuii menggunakan metode Microwave Assisted Extraction.

## Metode
Analisis ekstrak mikroalga Tetraselmis chuii meliputi rendemen (Yuwono dan Susanto, 1998), analisis kadar air (Sudarmadji dkk, 1997), total flavonoid (Atanassova et al., 2011), total fenol (George et al., 2005), total klorofil (AOAC, 1980), dan aktivitas antioksidan (Sharma and Bhat, 2009).
Prosedur Analisis 1. Analisis Rendemen
- Hasil ekstrak ditimbang dalam wadah yang sudah diketahui beratnya
- Rendemen dihitung berdasarkan berat kering bahan
-
Rendemen ( )= beratekstrakkasar beratba h an X 100 - 2. Analisis Kadar Air
- Cawan petri dimasukkan ke dalam oven pada suhu 105 °C selama 24 jam, kemudian dimasukkan ke dalam desikator selama 30 menit, setelah itu ditimbang dengan menggunakan timbangan analitik (x gram)
- Sampel yang sudah dihaluskan ditimbang (y gram), kemudian dimasukkan ke dalam cawan petri yang sudah diketahui beratnya
- Sampel dalam cawan petri dimasukkan ke dalam oven pada suhu 105 °C selama 5 jam, kemudian didinginkan dalam desikator selama
30 menit, sampel yang sudah dingin ditimbang. Perlakuan ini diulang-ulang sampai tercapai berat konstan (z gram), yaitu selisih penimbangan berat sampel berturut-turut kurang dari
0,2 gram
- Kadar air dihitung dengan rumus :
Kadar Air = ( x + y ) − z y X 100 3. Analisis Total Flavonoid
- 1 ml ekstrak ditambah 4 ml aquades dan 0,3 ml NaNO 2 5%
- Larutan diinkubasi delama 5 menit
- Ditambahkan   0,3   ml   AlCl 3 10%   dan diinkubasi 6 menit
- Larutan ditambah dengan 2 ml NaOH 1   M  dan   2,4   ml   aquades.   Kemudian divortex
- Absorbansi   larutan   diukur   dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang   510   nm.   Pengukuran absorbansi dilakukan 3 kali ulangan
- Kuersetin   digunakan   sebagai   standar dengan  seri konsentrasi 0, 200, 400, 600,   800,   dan   1000   mg/kg.   Kurva kalibrasi   kuersetin   digunakan   untuk menentukan   kadar   senyawa   total flavonoid   yang   terkandung   dalam sampel   melalui   persamaan   regrese dan   dinyatakan   dalam   satuan   mg ekuivalen   kuersetin/kg   ekstrak   (mg QE/kg ekstrak)
-

## 4. Analisis Total Fenol
- 0,2   ml   sampel   diambil   dan dimasukkan ke dalam tabung reaksi
- 1 ml reagen Folin Ciocalteau 10% dan 0,8   ml   Na 2 CO 3 7,5%   dimasukkan   ke dalam   tabung   reaksi   kemudian divortex agar homogen
- Campuran diinkubasi selama 30 menit
- Absorbansi   larutan   diukur   pada panjang   gelombang   750   nm. Pengukuran   absorbansi   dilakukan   3 kali ulangan.
- Asam   galat   digunakan   sebagai standar dengan seri konsentrasi 0, 25, 50,   75,   100,   dan   125   mg/kg.   Kurva kalibrasi asam galat digunakan untuk menentukan   kadar   senyawa   fenolat yang   terkandung   dalam   sampel melalui   persamaan   regresi   dan dinyatakan   dalam   satuan   mg ekuivalen   asam   galat/kg   ekstrak   (mg GAE/kg ekstrak)

## 5. Analisis Total Klorofil
- Timbang   sampel   ekstrak  sebanyak  2 gram,   kemudian   ditambahkan   50   ml aseton
- Kemudian   campuran   sampel   dan aseton divortex
- Larutan   tersebut   disaring   dengan kertas saring
- Diamati   absorbansi   cahaya   dari larutan   yang   tersedia   dengan spektrofotometer   pada   panjang gelombang 663 nm dan 645 nm
- Total   klorofil   dihitung   dengan persamaan berikut :
Total klorofil (mg/g) = 20,2 A 663 nm + 8,02 A 645 nm
6. Analisis Aktivitas Antioksidan
- 0,8 gram ekstrak ditambahkan etanol sampai 10 ml
- Ekstrak divortex untuk melarutkan dan menghomogenkan sampel
- Selanjutnya disaring untuk memisahkan   ekstrak   antioksidan dengan endapan
- 2   ml   ekstrak   dimasukkan   dalam tabung  reaksi  dan  diberi  1  ml  DPPH 0,2 mM dalam etanol
- Kemudian divortex hingga homogen
- Didiamkan   selama   30   menit   pada suhu ruang
- Ukur   absorbansi   pada   panjang gelombang 517 nm
- Aktivitas scavenger radikal   bebas dihitung   sebeagai   presentase berkurangnya   warna   DPPH   dengan menggunakan persamaan :
Aktivitas penangkapan radikal bebas ()= Absorbansi kontrol − Absorbansi sampel Absornasi kontrol X 100 - Blanko dibuat dengan cara yang sama tetapi tidak menggunakan ekstrak.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Rendemen
Rerata   rendemen   ekstrak   kasar mikroalga Tetraselmis chuii dengan kombinasi rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut berkisar   antara   19,3   –   27,6%.   Grafik   rerata rendemen ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii dapat dilihat pada Gambar 4.1.
Gambar 4.1 Grafik pengaruh perlakuan rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut terhadap rendemen ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii
Hasil   analisis   ragam   menunjukkan bahwa   rasio   aquades:etanol   memberikan pengaruh nyata (α = 0,05) terhadap rendemen ekstrak   kasar   mikroalga Tetraselmis   chuii , sedangkan   rasio   bahan:pelarut   dan   interaksi keduanya tidak memberikan pengaruh nyata. Rerata   rendemen   ekstrak   kasar   mikroalga Tetraselmis   chuii akibat   perlakuan   rasio aquades:etanol dapat dilihat pada Tabel 4.1
Tabel 4.1 Pengaruh rasio aquades:etanol terhadap rerata   rendemen   ekstrak   kasar   mikroalga Tetraselmis chuii
Rasio Aquades:Etanol RerataRendemen (%) BNT (α = 0,05) 2:8 20,00±0,64 a 2,53 3:7 23,63±2,29 b 4:6 26,01±1,57 b
*Keterangan: angka yang didampingi huruf yang berbeda berarti berbeda nyata pada uj BNT 5%
Dari   Tabel   4.1   dapat   ditunjukkan bahwa   adanya   pengaruh   nyata   antara   rasio aquades:etanol   terhadap   rendemen   ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii . Data pada Tabel   4.1   menunjukkan   bahwa   rasio aquades:etanol   (4:6)   memiliki   persentase rendemen   ekstrak   yang   paling   tinggi   yaitu 26,01%.
Pada   metode   MAE   beberapa   faktor yang   mempengaruhi   hasil   rendemen   adalah pemilihan   jenis   pelarut,   rasio   pelarut, konstanta   dielektrikum,   jenis   sampel,   suhu, serta   pemakaian   energi.Terutama   nilai konstanta dielektrikum, karena semakin tinggi
nilai   konstanta   dielektrikum   maka   semakin besar pula derajat ekstraksi microwave. Hal ini dikarenakan   untuk   mendapatkan   transfer panas yang optimum ke dalam matriks, maka digunakan   pelarut   yang   memiliki   konstanta dielektrikum   yang   tinggi   dan   memiliki   faktor energi   yang   tinggi   pula.   Diketahui   nilai konstanta dielektrikum dari aquades adalah 80 F/m   dan   etanol   sebesar   7   F/m   (Armstrong, 1999). Untuk   jenis   sampel,   suhu,   serta pemakaian   energi   relatif   sama,   karena diekstrak pada kondisi yang sama.
Jika dilihat dari sifat kepolaran pelarut
dan   dihubungkan   dengan   komponen   kimia yang   ada   pada   mikroalga   menurut   dalam biomassa   mikroalga   mengandung   komposisi kimia   yaitu   protein,   karbohidrat,   pigmen (klorofil   dan   karotenoid),   asam   amino,   lipid, dan   hidrokarbon.   Sehingga   senyawa   yang bersifat polar akan terlarut pada aquades dan senyawa yang kurang polar akan terlarut pada
etanol (Sanchez et al ., 2007).

## Kadar Air
Rerata   kadar   air   ekstrak   kasar mikroalga Tetraselmis chuii dengan kombinasi rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut berkisar antara 21,47 – 28,48%. Grafik rerata kadar air ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii dapat dilihat pada Gambar 4.2.
Gambar 4.2 Grafik pengaruh perlakuan rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut terhadap kadar air ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii
Hasil   penelitian   ekstraksi   mikroalga laut Tetraselmis chuii dengan dua faktor yaitu rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut didapatkan   hasil   analisis   sidik   ragam memberikan   pengaruh   yang   berbeda   nyata terhadap   kadar   air   ekstrak   kasar   mikroalga Tetraselmis   chuii yang   dihasilkan   pada   taraf kepercayaan   95%.   Dari   hasil   tersebut digunakan   metode Duncan’s   Multiple   Range Test (DMRT) untuk melihat perbedaan dalam ujian lanjutan. Hasil uji lanjut terhadap faktor rasio aquades:etanol dan bahan:pelarut dapat dilihat pada  Tabel 4.2.
Tabel 4.2 Pengaruh rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut   terhadap   rerata   kadar   air   ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii Rasio Aquades : Etanol Rasio Bahan : Pelarut Rerata Kadar Air (%) Notasi 2 : 8 1 : 3 28,06 e 1 : 6 23,35 b 1 : 9 28,48 e 3 : 7 1 : 3 24,48 bc 1 : 6 21,47 a 1 : 9 26,85 d 4 : 6 1 : 3 25,07 c 1 : 6 22,02 a 1 : 9 26,41 d
*Keterangan: angka yang didampingi huruf yang berbeda berarti berbeda nyata pada uji DMRT 5%
Dari   tabel   4.2   dapat   ditunjukkan bahwa   adanya   pengaruh   nyata   antara   rasio aquades:etanol   dan   rasio   bahan:pelarut terhadap   jumlah   kadar   air   ekstrak   kasar mikroalga Tetraselmis   chuii .   Semakin   tinggi rasio aquades:etanol dan bahan:pelarut, kadar air   cenderung   semakin   meningkat.   Hal   ini disebabkan oleh adanya perbedaan titik didih antara dua pelarut. Titik didih etanol sebesar 78,3   °C   (Chang   dan   Raymond,   2003), sedangkan   titik   didih   aquades   atau   air   yaitu 100   °C   (Andarwulan   dkk,   2011).   Sehingga aquades   tidak   dapat   teruapkan   sempurna
pada proses pemisahan pelarut menggunakan rotary   evaporator .   Oleh   karena   itu,   aquades yang  tertinggal  pada  ekstrak  terukur sebagai kadar air ekstrak mikroalga Tetraselmis chuii .

## Total Flavonoid
Rerata   total   flavonoid   ekstrak   kasar mikroalga Tetraselmis chuii dengan kombinasi rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut berkisar  antara   880,47   –  2929,33   mg   QE/kg ekstrak.   Grafik   rerata   total   flavonoid   ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii dapat dilihat pada Gambar 4.3.
Gambar 4.3 Grafik pengaruh perlakuan rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut terhadap total flavonoid ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii
Hasil   analisis   ragam   menunjukkan bahwa   rasio   aquades:etanol   memberikan pengaruh   nyata   (α   =   0,05)   terhadap   total flavonoid ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii ,   sedangkan   rasio   bahan:pelarut   dan interaksi   keduanya   tidak   memberikan pengaruh   nyata.   Rerata   rendemen   ekstrak kasar   mikroalga Tetraselmis   chuii akibat perlakuan   rasio   aquades:etanol   dapat   dilihat pada Tabel 4.3
Tabel 4.3 Pengaruh rasio aquades:etanol terhadap rerata    total   flavonoid   ekstrak   kasar   mikroalga Tetraselmis chuii
Rasio Aquades:Etanol Rerata Total Flavonoid (mg QE/kg ekstrak) BNT (α = 0,05) 2:8 2316,26±531,11 a 518,98 3:7 1096,60±190,03 b 4:6 909,36±30,86     b
*Keterangan: angka yang didampingi huruf yang berbeda berarti berbeda nyata pada uj BNT 5%
Proses ekstraksi mikroalga Tetraselmis chuii menggunakan   variasi   rasio   aquades dengan   etanol.   Aquades   memiliki   konstanta dielektrikum   sebesar   80   F/m,   sedangkan etanol memiliki konstanta dielektrikum sebesar 7   F/m   (Armstrong,   1999).   Dimana   derajat kepolaran   bergantung   pada   konstanta dielektrikum.   Makin   besar   konstanta dielektrikum   makan   akan   semakin   polar pelarut tersebut. Sebaliknya, semakin rendah konstanta   dielektrikum  maka   pelarut   tersebut kepolarannyaakan turun (Saputra dkk., 2013).
Senyawa   golongan   flavonoid   terdapat pada hampir seluruh tanaman hijau. Mikroalga
Tetraselmis   chuii merupakan   jenis   tanaman hijau   karena   ia   memiliki   pigmen   klorofil   dan termasuk   dalam   alga   hijau   ( chlorophyceae ). Flavonoid merupakan golongan fitokimia yang bersifat polar karena memiliki gugus hidroksil (gula) sehingga flavonoid merupakan senyawa yang bersifat polar dan larut pada pelarut polar seperti etanol, metanol, aseton, air, dan lain- lain (Melodita, 2011).
Flavonoid   merupakan   senyawa   polar karena memiliki sejumlah gugus hidroksil yang tidak tersubstitusi.Pelarut polar seperti etanol, metanol,   etil   asetat,   atau   campuran   dari pelarut   tersebut   dapat   digunakan   untuk mengekstrak flavonoid dari jaringan tumbuhan (Rijke, 2005). Total flavonoid yang diekstrak dengan rasio aquades lebih besar memiliki kadar yang lebih   rendah.   Diduga   dengan   pelarut   yang memliki   rasio   aquades   lebih   besar   dapat membuat   pelarut   tersebut   semakin polar.Dengan   adanya   penambahan   aquades lebih banyak, maka campuran pelarut tersebut sekamin   polar.Sehingga   komponen   lainnya yang   bersifat   polar   juga   ikut   terekstrak   dan menyebabkan total flavonoid per berat sampel menjadi rendah (Septiana dan Ari, 2012).
.

## Total Fenol
Rerata   total   fenol   ekstrak   kasar mikroalga Tetraselmis chuii dengan kombinasi rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut berkisar antara 266,20 –  636,07  mg  GAE/kg ekstrak. Grafik rerata total fenol ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii dapat dilihat pada Gambar 4.4
.
Gambar 4.4 Grafik pengaruh perlakuan rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut terhadap total fenol ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii
Hasil   analisis   ragam   menunjukkan bahwa   rasio   aquades:etanol   dan   rasio bahan:pelarut memberikan pengaruh nyata (α =   0,05)   terhadap   total   fenol   ekstrak   kasar mikroalga Tetraselmis   chuii tetapi   interaksi keduanya   tidak   berpengaruh   nyata.   Rerata total fenol ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii akibat   perlakuan   rasio   aquades:etanol dapat   dilihat   pada   Tabel   4.4   dan   akibat perlakuan   rasio   bahan:pelarut   dapat   dilihat pada Tabel 4.5.
Tabel 4.4 Pengaruh rasio aquades:etanol terhadap rerata total fenol ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii Rasio Aquades:Etanol Rerata Total Fenol (mg GAE/kg ekstrak) BNT (α = 0,05) 2:8 562,78±82,56   a 82,61 3:7 364,78±119,95 b 4:6 303,63±32,50   b
*Keterangan: angka yang didampingi huruf yang berbeda berarti berbeda nyata pada uj BNT 5%
Pemilihan   pelarut   pada   proses ekstraksi   didasarkan   pada   senyawa   target yang   diinginkan.   Pelarut   yang   bersifat   polar akan   melarutkan   komponen   yang   bersifat polar,   sementara   pelarut   non   polar   akan melarutkan   komponen   senyawa   yang   berifat non   polar.   Hal   ini   sesuai   dengan   prinsip pelarutan   suatu   zat   “ like   dissolve like ”.Kepolaran   suatu   pelarutdapat   ditentukan berdasarkan   sifat   kimia   yakni   tetapan dielektrikum.Tetapan   dielektrik   merupakan ukuran kepolaran suatu pelarut. Pelarut yang mempunyai konstanta dielektrikum yang besar akan   lebih   melarutkan   senyawa   polar, sebaliknya   pelarut   dengan   konstanta dielektrikum   yang   kecil   akan   melarutkan senyawa yang non polar (Cotton et al., 2006). Total fenol yang diekstrak dengan rasio etanol   lebih   besar  memiliki   kadar   yang   lebih tinggi.   Hal   ini   diduga   karena   senyawa   fenol pada mikroalga laut Tetraselmis chuii bersifat semipolar   sehingga   lebih   mudah   terekstrak dengan   menggunakan   pelarut   etanol   yang bersifat semipolar.Pada penelitian sebelumnya, pada umumnya senyawa fenolik lebih   mudah   diekstrak   oleh   pelarut   organik
yang bersifat semipolar, salah satunya adalah etanol (Septiana dkk, 2002).
Dengan   ditambahkan   aquades   lebih banyak,   maka   tingkat   kepolaran   pelarut tersebut meningkat.Sehingga komponen yang bersifat   polar   seperti   karbohidrat   ikut terekstrak   dan   menyebabkan   total   fenol   per berat   sampel   menjadi   rendah ( Septiana   dan Ari, 2012).
Tabel   4.5 Pengaruh   rasio   bahan:pelarut terhadap   rerata   total   fenol   ekstrak   kasar mikroalga Tetraselmis chuii Rasio Bahan:Pelarut Rerata Total Fenol (mg GAE/kg ekstrak) BNT (α = 0,05) 1:3 488,00±156, 26 a 82,61 1:6 397,61±157, 57 b 1:9 345,58±111,7 2 b
*Keterangan: angka yang didampingi huruf yang berbeda berarti berbeda nyata pada uj BNT 5%
Pada pelarut dengan kombinasi antara etanol   dan   aquades   yang   masing-masing memiliki titik didih yang berbeda. Dimana titik didih   etanol   sebesar   78,3   °C   (Chan   dan Raymond,   2003)   lebih   rendah   daripada   titik didih aquades yaitu 100 °C (Andarwulan dkk., 2011).   Rasio   pelarut   yang   lebih   kecil dimungkinkan   dapat   teruapkan   sempurna pada   saat   proses   pemisahan   pelarut.   Tetapi tidak   terjadi   pada   rasio   pelarut   yang   lebih besar.Dimungkinkan   masih   terdapat   aquades atau   air   di   dalam   hasil   ekstrak   mikroalga tersebut yang dapat mengakibatkan terjadinya hidrolisis   senyawa   fenol.Sehingga   tidak teranalisis   sebagai   senyawa   fenol.Maka   dari itu,   semakin   tinggi   rasio   pelarut,   semakin rendah total fenol.

## Total Klorofil
Rerata   total   klorofil   ekstrak   kasar mikroalga Tetraselmis chuii dengan kombinasi rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut berkisar   antara   4,71   –   21,73   mg/g.   Grafik rerata   total   klorofil   ekstrak   kasar   mikroalga Tetraselmis   chuii dapat   dilihat   pada   Gambar 4.6.
Gambar 4.6 Grafik pengaruh perlakuan rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut terhadap total klorofil ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii
Hasil   analisis   ragam   menunjukkan bahwa   rasio   aquades:etanol   memberikan pengaruh   nyata   (α   =   0,05)   terhadap   total klorofil   ekstrak   kasar   mikroalga Tetraselmis chuii ,   sedangkan   rasio   bahan:pelarut   dan interaksi   keduanya   tidak   memberikan pengaruh   nyata.   Rerata   total   klorofil   ekstrak kasar   mikroalga Tetraselmis   chuii akibat perlakuan   rasio   aquades:etanol   dapat   dilihat pada Tabel 4.6.
Tabel   4.6   Pengaruh   rasio   aquades:etanol terhadap   rerata   total   klorofil   ekstrak   kasar mikroalga Tetraselmis chuii
Rasio Aquades:Etanol Rerata Total Klorofil (mg/g) BNT (α = 0,05) 2:8 20,30±1,84 a 4,75 3:7 10,89±3,23 b 4:6 6,38±1,81  b *Keterangan: angka yang didampingi huruf yang berbeda berarti berbeda nyata pada uj BNT 5%
Dari   Tabel   4.6   dapat   ditunjukkan bahwa   adanya   pengaruh   nyata   antara   rasio
aquades:etanol  terhadap   total  klorofil  ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii . Total klorofil paling   tinggi   didapatkan   dengan   diekstrak menggunakan konsentrasi pelarut yang paling tinggi pula.Karena senyawa klorofil (zat warna hijau)   cenderung   bersifat   non   polar.Hal   ini sesuai dengan penelitian  sebelumnya  bahwa ekstraksi   pigmen   non   polar   menghasilkan ekstrak berwarna hijau terang (Septiana dkk., 2002). Semakin tinggi konsentrasi etanol maka semakin rendah tingkat kepolaran pelarut yang digunakan   (Sedjati,   2012)   .Sehingga   pada akhirnya   dapat   meningkatkan   kemampuan pelarut dalam mengekstrak klorofil yang juga bersifat kurang polar.

## Aktivitas Antioksidan
Rerata   aktivitas   antioksidan   ekstrak kasar   mikroalga Tetraselmis   chuii dengan kombinasi   rasio   aquades:etanol   dan   rasio bahan:pelarut   berkisar   antara   16,04   –   28,45 %.  Grafik  rerata   aktivitas  antioksidan  ekstrak mikroalga Tetraselmis chuii dapat dilihat pada Gambar 4.7.
Gambar 4.7 Grafik pengaruh perlakuan rasio aquades:etanol dan rasio bahan:pelarut terhadap aktivitas antioksidan ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii
Hasil   analisis   ragam   menunjukkan bahwa   rasio   aquades:etanol   dan   rasio bahan:pelarut   tidak   memberikan   pengaruh nyata (α = 0,05) terhadap aktivitas antioksidan ekstrak kasar mikroalga Tetraselmis chuii . Pada   penelitian   ini,   perlakuan   yang diberikan   menunjukkan   adanya   beda   nyata terhadap   senyawa   bioaktif   berupa   total flavonoid,   fenol,   dan   klorofil.   Tetapi   tidak berpengaruh   nyata   terhadap   parameter aktivitas   antioksidan.Hal   ini   kemungkinan senyawa bioaktif yang terekstrak mengandung campuran  senyawa kompleks  yang  polaritas, sifat   antioksidan,   dan   prooksidannya berbeda.Sehingga   menyebabkan   adanya perubahan   aktivitas   oleh   sinergis   dan antagonis   antara   senyawa-senyawa   yang terkandung   di   dalam   ekstrak   mikroalga Tetraselmis   chui .Dimungkinkan   pula   adanya senyawa bioaktif lainnya yang tidak teranalisis tapi
berperan juga sebagai
antioksidan.Mikroalga Tetraselmis   chuii ini juga   mengandung   senyawa   alkaloid   (Sani, 2014).
Alkaloid   adalah   suatu   golongan senyawa organik yang terbanyak ditemukan di alam.Hampir seluruh senyawa alkaloid berasal dari   tumbuh-tumbuhan   dan   tersebar   luas dalam berbagai jenis tumbuhan.Hampir semua alkaloid   yang   ditemukan   di  alam  mempunyai keaktifan   biologis   tertentu,   ada   yang   sangat beracun tetapi ada pula yang sangat berguna dalam   pengobatan.   Misalnya   kuinin,   morfin, fan stiknin adalah alkaloid yang terkenal dan mempunyai   efek   fisiologis   dan   psikologis. Pada   umumnya   alkaloid   hanya   larut   dalam pelarut organik meskipun beberapa ada yang larut   dalam   air.Kebebasan   alkaloid menyebabkan   senyawa   tersebut   sangat mudah mengalami dekomposisi terutama oleh panas   dan   sinar   dengan   adanya   oksigen (Shadmani et al., 2012).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil
penelitian menunjukkan   bahwa   faktor   rasio   aquades dengan   etanol   terhadap   ekstraksi   mikroalga Tetraselmis chuii berpengaruh nyata terhadap
rendemen, total flavonoid, total fenol, dan total klorofil.Sedangkan faktor rasio bahan dengan pelarut   terhadap   ekstraksi   mikroalga Tetraselmis chuii berpengaruh nyata terhadap total   fenol.   Interaksi   antara   faktor   rasio aquades:etanol   dan   rasio   bahan:pelarut memberikan   pengaruh   nyata   terhadap   kadar air. Faktor rasio aquades dengan  etanol dan rasio bahan dengan pelarut tidak memberikan pengaruh nyata terhadap aktivitas antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Andarwulan,   N.,Kusnandar, F. dan Herawati, D. 2011. Analisis Pangan. Dian Rakyat. Jakarta
AOAC. 1980. Official Methods of Analysis. Washington DC. USA
Armstrong,   S.   D.   1999.   Microwave- Assisted Extraction for the Isolation of  Trace   Systemic   Fungicides   from Woody   Plant   Material.   Doctor   of Philosophy   In   Chemistry   Virginia Polytechnic   Institute   and   State University. Virginia Atanassova   M.,   Georgieva   S.,   dan Ivancheva   K.   2011.   Total   Phenolic and   Total   Flavonoid   Contents, Antioxidant   Capacity   and   Biological Contaminants in Medical Herbs. Journal   of   the   University   of Chemical Technology and Metallurgy, 46 (1) : 81-88
Brown, M.R., Jeffrey, S.W., Volkman, J.K., and Dunstan, G.A. 1997. Nutritional Properties of Microalgae of Marinculture. Aquaculture , 151, hal
315-331
Chang,   Raymond.   2003.   Kimia   Dasar   : Konsep-Konsep   Inti.   Erlangga.
Jakarta
Chisti, Y. 2007. Biodiesel from microalgae. Biotechnology Advances , Vol. 25, hal. 294-306 Cotton, F. Albert dan Geoffrey Wilkinson. 2006.   Kimia   Anorganik   Dasar.   UI Pres. Universitas Indonesia
George C., Brat P., Alter P., dan Amiot MJ. 2005.   Rapid   Determination   of Plyphenol   and   Vitamin   C   in   Plant Derived   Product. Journal   of Agriculture, Food and Chemistry. 53 : 1370-1373
Hermani, MR. 2004. Tanaman Berkhasiat Antioksidan. Penebar Swadaya. Bogor
Kusuma,   D.A.   2012.   Ekstraksi   dan Identifikasi   Senyawa   Antimikroba pada   Mikroalga Tetraselmis   chuii Menggunakan   Metode Microwave Assisted   Extraction (MAE),   Kajian Jenis   Pelarut   dan   Lama
Ekstraksi.Skripsi.
Universitas
Brawijaya. Malang
Lenny,   S.   2006.   SenyawaFlavonoida, Fenil   Propanoida,   dan   Alkaloida. FMIPA Universitas Sumatera Utara. Medan Melodita,   R.   2011.   Identifikasi Pendahuluan   Senyawa   Fitokimia dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun   Cincau   Hitam   dengan Perlakuan   Jenis   Pelarut.Skripsi. Fakultas   Teknologi   Pertanian. Universitas Brawijaya. Malang Rijke, E. 2005.Trace-level Dtermination of Flavonoids   and   Their   Conjugates Application   in   Plants   of   The Leguminosae Family.Disertasi. Universitas Amsterdam. Amsterdam
Rivai, H., Nurdin, H., Suryani, H dan Bakhtiar, A. 2008. Pengaruh Perbandingan Etanol-Air Sebagai Pelarut Ekstraksi Terhadap Perolehan Ekstraktif Kadar Senyawa Fenolat dan Aktivitas Antioksidan Dari Daun Jambu Biji ( Psidium Guajava Linn). Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi, Vol. 13, No. 2, 2008, halaman 78-85 Sanchez,   S.,   Gassan   H.,   Martinez,   E. 2007.Use   of   Industrial   Wastewater from Olive-Oil Extraction for biomass Production   of Seenedesmus obliquss . Bioresource Technology 99 (1111-1117)
Sani R.N., 2014. Analisis Rendemen dan Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Mikroalga Laut Tetraselmis chuii . Jurnal Pangan dan Agroindustri , Vol. 2 No. 2 p. 121-126 Saputra,   I.,   Prihandini,  G.,  Zullaikah,  S.
dan Rachimoellah, M.
2013.Ekstraksi   Senyawa   Bioaktif dari Daun Moringa oleifera . JURNAL TEKNIK   POMITS   Vol .   2,   No.   1 (2013)   ISSN-2337-3539(2301-9271 Print)
Sedjati, S. 2012. Profil Pigmen Polar dan Non Polar Mikroalga Laut Spirulina sp.   Dan   Potensinya   sebagai
Pewarna   Alami. Ilmu   Kelautan
September   2012.   Vol.   17   (3):176- 181 Septiana,  A.   T,   D.   Muchtadi,   dan   F.   R. Zakaria.2002.   Aktivitas   Antioksidan Ekstrak   Dikhlorometana   dan   Air Jahe   pada   Asam   Linoleat. Jurnal Teknologi   dan   Industri   Pangan XIII (2) : 105-110
Septiana,   A.   T.   dan  Asnani,   A.   2012. Kajian   Sifat   Fitokimia   Ekstrak Rumput   Laut   Coklat Sargassum duplicatum Menggunakan   Berbagai Pelarut   dan   Metode   Ekstraksi. AGROINTEK Volume 6, No. 1 Maret 2012
Shadmani,   A.,   Azhar,   I.,   Mazhar,   F., Hassan,   M.   M.,   Ahmed,   S.   W., Ahmad,   I.,   Usmanghani,   K.,   and Shamin, S. 2004. Kinetic Studies On
Zingiber Officinale. Pakistan Hournal
of Pharmaceutical Sciences, Vol. 17, hal 47-54 Sharma, O. P. and Bhat T. J. 2009. DPPH Antioxidant   Assay   Revisited. Food Chemistry, 113 : 1202-1205 Sudarmadji,   S.,   B.   Haryono   dan Suhardi.1997.   Prosedur   Analisa Untuk   Bahan   Makanan   dan Pertanian.Yogyakarta : Lyberty Wati,   Adhik   dan   Sylvia   Anggraeni Motto.2011.   Ektraksi   Minyak   dari Mikroalga   Jenis Chlorella   sp
Berbantukan   Ultrasonik.   Jurusan Teknik   Kimia.   Fakultas   Teknik. Universitas Diponegoro. Semarang. Yuwono,   S.   S.   dan   Susanto.   1998. Pengujian   Fisik   Pangan.   Fakultas Teknologi   Pertanian.   Universitas Brawijaya. Malang

## DAFTAR PUSTAKA
Andarwulan,   N.,Kusnandar,
F. dan Herawati, D. 2011. Analisis Pangan. Dian Rakyat. Jakarta
AOAC. 1980. Official Methods of Analysis. Washington DC. USA Armstrong,   S.   D.   1999.   Microwave- Assisted Extraction for the Isolation of  Trace   Systemic   Fungicides   from Woody   Plant   Material.   Doctor   of Philosophy   In   Chemistry   Virginia Polytechnic   Institute   and   State University. Virginia
Atanassova   M.,   Georgieva   S.,   dan Ivancheva   K.   2011.   Total   Phenolic and   Total   Flavonoid   Contents, Antioxidant   Capacity   and   Biological
Contaminants in Medical Herbs. Journal   of   the   University   of Chemical Technology and Metallurgy, 46 (1) : 81-88
Brown, M.R., Jeffrey, S.W., Volkman, J.K., and Dunstan, G.A. 1997. Nutritional Properties of Microalgae of Marinculture. Aquaculture , 151, hal 315-331
Chang,   Raymond.   2003.   Kimia   Dasar   : Konsep-Konsep   Inti.   Erlangga. Jakarta
Chisti, Y. 2007. Biodiesel from microalgae. Biotechnology Advances , Vol. 25, hal. 294-306
Cotton, F. Albert dan Geoffrey Wilkinson. 2006.   Kimia   Anorganik   Dasar.   UI Pres. Universitas Indonesia George C., Brat P., Alter P., dan Amiot MJ. 2005.   Rapid   Determination   of Plyphenol   and   Vitamin   C   in   Plant Derived   Product. Journal   of Agriculture, Food and Chemistry. 53 :
1370-1373
Hermani, MR. 2004. Tanaman Berkhasiat Antioksidan. Penebar Swadaya. Bogor Kusuma,   D.A.   2012.   Ekstraksi   dan Identifikasi   Senyawa   Antimikroba pada   Mikroalga Tetraselmis   chuii Menggunakan   Metode Microwave Assisted   Extraction (MAE),   Kajian Jenis   Pelarut   dan   Lama Ekstraksi.Skripsi. Universitas Brawijaya. Malang Lenny,   S.   2006.   SenyawaFlavonoida, Fenil   Propanoida,   dan   Alkaloida. FMIPA Universitas Sumatera Utara. Medan Melodita,   R.   2011.   Identifikasi Pendahuluan   Senyawa   Fitokimia dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun   Cincau   Hitam   dengan Perlakuan   Jenis   Pelarut.Skripsi. Fakultas   Teknologi   Pertanian. Universitas Brawijaya. Malang Rijke, E. 2005.Trace-level Dtermination of Flavonoids   and   Their   Conjugates
Application   in   Plants   of   The Leguminosae Family.Disertasi. Universitas Amsterdam. Amsterdam
Rivai, H., Nurdin, H., Suryani, H dan Bakhtiar, A. 2008. Pengaruh Perbandingan Etanol-Air Sebagai Pelarut Ekstraksi Terhadap Perolehan Ekstraktif Kadar Senyawa Fenolat dan Aktivitas Antioksidan Dari Daun Jambu Biji ( Psidium Guajava Linn). Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi, Vol. 13, No. 2, 2008, halaman 78-85
Sanchez,   S.,   Gassan   H.,   Martinez,   E.
2007.Use   of   Industrial   Wastewater from Olive-Oil Extraction for biomass Production   of
Seenedesmus obliquss . Bioresource Technology 99 (1111-1117)
Sani R.N., 2014. Analisis Rendemen dan Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Mikroalga Laut Tetraselmis chuii . Jurnal Pangan dan Agroindustri , Vol. 2 No. 2 p. 121-126
Saputra,   I.,   Prihandini,  G.,  Zullaikah,  S.
dan Rachimoellah, M.
2013.Ekstraksi   Senyawa   Bioaktif dari Daun Moringa oleifera . JURNAL TEKNIK   POMITS   Vol .   2,   No.   1
(2013)   ISSN-2337-3539(2301-9271 Print)
Sedjati, S. 2012. Profil Pigmen Polar dan Non Polar Mikroalga Laut Spirulina sp.   Dan   Potensinya   sebagai Pewarna   Alami. Ilmu   Kelautan September   2012.   Vol.   17   (3):176- 181
Septiana,   A.   T,   D.   Muchtadi,   dan   F.   R. Zakaria.2002.   Aktivitas   Antioksidan Ekstrak   Dikhlorometana   dan   Air Jahe   pada   Asam   Linoleat. Jurnal Teknologi   dan   Industri   Pangan XIII (2) : 105-110
Septiana,   A.   T.   dan  Asnani,   A.   2012. Kajian   Sifat   Fitokimia   Ekstrak Rumput   Laut   Coklat Sargassum duplicatum Menggunakan   Berbagai Pelarut   dan   Metode   Ekstraksi. AGROINTEK Volume 6, No. 1 Maret 2012
Shadmani,   A.,   Azhar,   I.,   Mazhar,   F., Hassan,   M.   M.,   Ahmed,   S.   W., Ahmad,   I.,   Usmanghani,   K.,   and Shamin, S. 2004. Kinetic Studies On Zingiber Officinale. Pakistan Hournal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 17, hal 47-54 Sharma, O. P. and Bhat T. J. 2009. DPPH Antioxidant   Assay   Revisited. Food Chemistry, 113 : 1202-1205 Sudarmadji,   S.,   B.   Haryono   dan Suhardi.1997.   Prosedur   Analisa Untuk   Bahan   Makanan   dan Pertanian.Yogyakarta : Lyberty Wati,   Adhik   dan   Sylvia   Anggraeni Motto.2011.   Ektraksi   Minyak   dari Mikroalga   Jenis Chlorella   sp Berbantukan   Ultrasonik.   Jurusan Teknik   Kimia.   Fakultas   Teknik. Universitas Diponegoro. Semarang. Yuwono,   S.   S.   dan   Susanto.   1998.
Pengujian   Fisik   Pangan.   Fakultas Teknologi   Pertanian.   Universitas Brawijaya. Malang