## PENAMBAHAN INTERLEUKIN-6 PADA MEDIA KULTUR MENINGKATKAN KONSENTRASI PROTEIN PADA MEDIA TERKONDISI SEL PUNCA MESENKIMAL

## ADDITION OF INTERLEUKIN-6 TO CULTURE MEDIUM IMPROVES PROTEIN CONCENTRATION IN CONDITIONED MEDIUM MESENCHYMAL STEM CELLS
Marsudi Siburian 1 , Nor Sri Inayati 2
1 Program Studi Teknik Biomedis, Institut Teknologi Sumatera
2 Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Jenderal Soedirman Korespondensi: author 1. Alamat email: marsudi.siburian@bm.itera.ac.id

## ABSTRAK
Pengobatan regeneratif menggunakan Media Terkondisi Sel Punca Mesenkimal (MTSPM) merupakan salah  satu  metode  yang  dikembangkan  untuk  pengobatan  Diabetes  Melitus  (DM).  Pengembangan  metode produksi MTSPM perlu  dilakukan untuk meningkatkan efikasi, salah satunya dengan menginduksi sekresi dari sel  punca  mesenkimal  (SPM)  menggunakan  senyawa  penanda  dari  penyakit  DM  yaitu  Interleukin-6  (IL-6). Penelitian ini bertujuan untuk menguji efek dari penambahan IL-6 pada media kultur terhadap kultur SPM dan konsentrasi protein pada MTSPM yang dihasilkan. Kultur SPM dilakukan pada temperatur 37˚C dan 5% CO 2 . Kultur SPM dibagi menjadi tiga kelompok yang diberi media tumbuh berbeda, kelompok I dikultur pada media basal, kelompok II dengan media basal + 1pg/mL IL-6, dan kelompok III dengan media basal +10pg/mL IL-6. Pengujian efek IL-6 dilakukan dengan melakukan penghitungan jumlah SPM pada kultur dan pengukuran total protein  pada  MTSPM  menggunakan  metode  Qubit  Fluorometer.  Hasil  pengukuran  dianalisa  secara  statistik dengan uji One Way Anova, Kruskall Wallis dan Mann Whitney. Hasil pengujian menunjukkan pemberian IL-6 mampu meningkatkan jumlah sel pada kultur SPM. Total protein pada MTSPM mengalami peningkatan hingga 65% dan 262% untuk 24 jam pertama dan kedua ketika diberi penambahan IL-6 dengan konsentrasi 10pg/mL. Hal ini menunjukkan terdapat lebih banyak senyawa sitokin dan faktor tumbuh dalam MTSPM yang dihasilkan sehingga terdapat kemungkinan terjadinya peningkatan efikasi dari MTSPM tersebut saat dipergunakan dalam terapi DM. Tetapi hal tersebut perlu diteliti lebih lanjut dengan melihat profil sitokin dan faktor tumbuh dalam MTSPM dan juga dilanjutkan dengan uji in vivo pada hewan model DM.
Kata Kunci: Sel Punca Mesenkimal, Interleukin-6, Media Terkondisi.

## ABSTRACT
Regenerative  medicine  using  Conditioned  Medium-Mesenchymal  Stem  Cell  (CMMSCs)  is  one  of  the developed methods for the treatment of Diabetes Mellitus (DM). However, the method to produce CMMSCs still needs  to  be  developed  to  increase  its  efficacy,  one  of  which  is  by  inducing  secretion  from  mesenchymal  stem cells (MSCs) using marker compounds in DM, such as Interleukin-6 (IL-6). This study aims to examine the effect of  Interleukin-6  (IL-6)  in  the  growth  medium  on  the  culture  of  MSCs  and  the  concentration  of  protein  on CMMSCs. The MSCs were cultured at 37 o C and 5% CO 2 . Culture of MSCs grouped into three which were given different growth mediums, group I cultured in basal medium, group II cultured in basal medium + 1pg/mL IL-6, and  group  III  cultured  in  basal  medium  +10pg/mL  IL-6. Tests  were  carried  out  by  calculating  the  amount  of MSCs  in  culture  and  measuring  the  total  protein  on  CMMSCs  using  the  Qubit  Fluorometer  method. Results were analyzed statistically using the One Way Anova test, Kruskall Wallis, and Mann Whitney test. The results showed that the addition of IL-6 was able to increase the number of cells in the MSCs culture. Total protein in CMMSCs increased up to 65% and 262% for the first and second 24 hours when given the addition of IL-6 at a concentration  of  10pg/mL.  This  shows  that  there  are  more  cytokine  compounds  and  growth  factors  in  the resulting CMMSC, therefore there is a possibility of an increase in efficacy from the CMMSC when used to treat DM. However, it needs further research to evaluate the cytokine and growth factor profile of the CMMSC and followed up with an in vivo trial using the DM animal model.
Keywords: Mesenchymal Stem Cells, Interleukin-6, Conditioned Medium.
How  To  Cite :  Siburian,  M.,  &  Inayati,  N.  (2021).  PENAMBAHAN  INTERLEUKIN-6  PADA  MEDIA KULTUR  MENINGKATKAN  KONSENTRASI  PROTEIN  PADA  MEDIA  TERKONDISI  SEL  PUNCA MESENKIMAL. Biomedika, 13(2), 144-152. doi:https://doi.org/10.23917/biomedika.v13i2.12881
DOI : https://doi.org/10.23917/ biomedika.v13i2.12881

## PENDAHULUAN
Diabetes melitus (DM) merupakan kelompok  penyakit  metabolisme  yang  ditandai dengan  hiperglikemia  yang  disebabkan  oleh gangguan  metabolisme  karbohidrat,  lemak,  dan protein.  Jumlah  penderita  DM  di  Indonesia diperkirakan  mencapai  21,3  juta  pada  tahun 2030  (Khairani,  Kurniasih  dan  Maula,  2019). Salah  satu  metode  yang  dikembangkan  untuk pengobatan  DM  adalah  pengobatan  regeneratif dengan memanfaatkan sel punca (Tiwari, 2015). Jenis  sel  punca  yang  banyak  dikembangkan untuk  pengobatan  adalah  sel  punca  mesenkimal (SPM),  yang  secara  etika  lebih  dapat  diterima dibandingkan  dengan  sel  punca  embrionik (Rickard, 2002).
Pemanfaatan  SPM  dalam  pengobatan dapat  dilakukan  dengan  menggunakan  SPM secara  langsung  ataupun  dengan  menggunakan senyawa sitokin hasil sekresi SPM yang disebut dengan Media Terkondisi Sel Punca
Mesenkimal  (MTSPM).  Penggunaan  MTSPM dilaporkan dapat menyebabkan perbaikan jaringan  pada  berbagai  kondisi  kerusakan jaringan/organ  (da  Silva  Meirelles et  al. ,  2009;
Madrigal,  Rao  dan  Riordan,  2014).  Beberapa kelebihan  penggunaan  MTSPM  dibandingkan dengan  penggunaan  sel  punca  secara  langsung
antara  lain:  pertimbangan  keamanan  dan  etik yang  lebih  longgar  karena  tidak  melibatkan transplantasi sel hidup; MTSPM dapat dievaluasi  keamanan,  dosis,  dan  potensinya seperti  agen  farmasi  konvensional;  tidak memerlukan cryopreservative (yang  berpotensi toksik  untuk  jangka  waktu  yang  lama)  tanpa mengurangi potensi produk; lebih ekonomis dan praktis  untuk  aplikasi  klinik;  dapat  diproduksi secara  massal;  dan  dapat  dimodifikasi  sesuai efek  spesifik  yang  diinginkan  (Vizoso  et  al., 2017).
Penelitian  terkait  pembuatan  MTSPM telah  dilakukan  dengan  berbagai  variasi  dan modifikasi. Variasi dan modifikasi menyebabkan  perbedaan  media  terkondisi  yang dihasilkan, baik secara jumlah maupun komposisinya.  Salah  satu  variasi  metode pembuatan MTSPM adalah dengan penambahan senyawa  penanda  penyakit  dalam  media  kultur SPM.  Hal  ini  dapat  terjadi  karena  sekresi  dari suatu sel, termasuk SPM, akan dipengaruhi oleh sinyal  yang  terdapat  pada  lingkungan  hidup  sel tersebut (Vizoso et al., 2017).
Proses pembuatan MTSPM yang dipergunakan dalam terapi DM dapat dimodifikasi  dengan  melakukan  penambahan senyawa penanda DM pada media tumbuh SPM.
Penanda  perkembangan  penyakit  DM  adalah meningkatnya  kadar  glukosa  dan  terjadinya inflamasi  pada  pankreas  yang  ditandai  senyawa pro-inflamasi,  seperti  senyawa Tumor  Necrosis Factor alpha (TNF-α), Interferon gamma (IFN- γ),    Interleukin  (IL)  -  1β,  IL-6  (Nunemaker, 2016;  Shin  et  al.,  2015;  Tsalamandris  et  al., 2019). Beberapa penelitian menunjukkan bahwa pemberian  senyawa  berupa  faktor  inflamasi seperti  TNF-α,  IFN-γ,  dan  IL-1β  dapat meningkatkan potensi regeneratif dan memperbaiki  respon  antiinflamatori  dari  SPM melalui  perubahan  atau  peningkatan  sekresi sitokin atau faktor tumbuh tertentu (Ryan et al. , 2007;  Kwon et  al. ,  2013;  Noone et  al. ,  2013;
Luo  dan  Zheng,  2016;  Redondo-Castro et  al. , 2017;  Rodriguez et  al. ,  2019).  Namun  belum didapati  laporan  penelitian  terkait  penggunaan IL-6  sebagai  senyawa  stimulan  SPM  dalam produksi  MTSPM.  Oleh  karena  itu,  pada penelitian  ini  akan  dilihat  pengaruh  dari penambahan  senyawa  IL-6  dalam  media  kultur terhadap jumlah sel yang dihasilkan dan jumlah protein total dalam MTSPM.

## METODE
Persiapan dan Perbanyakan Sel (Sun et al.,  2017) . Sel  Punca  Mesenkimal  yang
dipergunakan berasal dari jaringan tali pusat dan merupakan  koleksi  Stem  Cell  And  Cancer Institute,  Kalbe  Farma  Tbk..  SPM  yang  berasal dari jaringan tali pusat dikultur pada media basal α-MEM  yang  diberi  penambahan  10% Fetal Bovine Serum (FBS), 1% Penisilin/Streptomisin (P/S)  pada  37˚C,  5%  CO 2 .  Setiap  3  hari  sekali dilakukan  penggantian  media  kultur.  Subkultur SPM  dilakukan  saat  SPM  sudah  konfluen  ± 80%.
Perlakuan  Sel  dan  Produksi  MTSPM (Li et  al. ,  2017  dengan  modifikasi) . SPM disubkultur  dan  dibagi  menjadi  3  kelompok. Setelah  konfluen  (80%),  SPM  diberi  perlakuan seperti  terlihat  pada  tabel  1.  Setiap  24  jam, media terkondisi sel punca mesenkimal dikumpulkan  dalam  tabung  steril,  kemudian disaring dan disimpan pada temperatur -80˚C.
Kelom- pok Jumlah Sampel (cawan) Perlakuan
I II
2
2
Media digantikan dengan media  basal  α-MEM  tanpa serum.  Pengumpulan  media dilakukan  setiap  24  jam  lalu diberi penambahan media baru sesuai kelompok perlakuan hingga 2 x 24 jam.
Media digantikan dengan media  basal  α-MEM  tanpa serum  +  1  pmol/L  IL-6, Pengumpulan media dilakukan  setiap  24  jam  lalu diberi penambahan media baru sesuai kelompok perlakuan hingga 2 x 24 jam.
III 2 Media digantikan dengan media  basal  α-MEM  tanpa serum  +  10  pmol/L  IL-6. Pengumpulan media dilakukan  setiap  24  jam  lalu diberi penambahan media baru sesuai kelompok perlakuan hingga 2 x 24 jam.
Penghitungan  Jumlah  Sel. Perhitungan sel  dilakuksan  sesuai  metode  dari  Abcam. Suspensi  sel  sebanyak  20  µL  dicampurkan dengan 20 µL trypan blue. Lalu pipetkan 20 µL campuran  ke  ruang  hitung  hemositometer. Hitung  sel  di  bawah  mikroskop  pada 4  kamar hitung,  yang  masing-masing  terdiri  dari  16 kotak. Jumlah sel dihitung dengan menggunakan rumus:
Pengukuran  Protein  Total. Sampel
MTSPM  diukur  kadar  protein  totalnya  dengan menggunakan metode Qubit Fluorometer.
Analisis  Data (Dahlan,  2018) . Analisis data  dilakukan  dengan  menggunakan  software IBM  SPSS  Statistics  23  Distribusi  data  diuji dengan  uji  Shapiro-wilk.  Data  normal  diuji dengan One Way Anova, sedangkan  data yang tidak  terdistribusi  normal  diuji  dengan  Kruskall Wallis dan Mann Whitney.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kultur  dan  Jumlah  SPM. Kultur  Sel Punca  Mesenkimal  (SPM)  yang  berasal  dari jaringan  tali  pusat  atau  yang  lebih  dikenal dengan Umbilical  Cord-Mesenchymal  Stem Cells ,  berhasil  dikultur  dengan  menggunakan media  komplit  yang  terdiri  dari  MEM-α,  FBS 10%, dan P/S 1%. Kultur yang diamati memiliki karakteristik  sesuai  dengan  karakteristik  kultur SPM  yaitu  melekat  pada  tempat  tumbuhnya, berbentuk  spindel,  dan  memanjang  (Ryu  et  al., 2013) (Gambar 1).
Gambar  1. Kultur  sel  punca  mesenkimal  yang diamati dengan perbesaran 100x.
Pengumpulan  MTSPM  dilakukan  dengan mengkultur SPM pada media basal tanpa serum. Selain itu, dilakukan juga penambahan senyawa IL-6 pada media kultur untuk melihat pengaruh senyawa  IL-6,  yang  merupakan  salah  satu senyawa inflamasi penanda perkembangan DM. Penambahan  dilakukan  dalam  dua  konsentrasi, yaitu  1pg/mL  dan  10pg/mL.  Konsentrasi 1pg/mL  merupakan  konsentrasi  senyawa  IL-6
pada  jaringan  normal,  sedangkan  konsentrasi 10pg/mL merupakan konsentrasi yang dibutuhkan  untuk  menyebabkan  disfungsi  islet pada DM Tipe 2 (Nunemaker, 2016).
Di  akhir  masa  perlakuan  dilakukan penghitungan  jumlah  sel  untuk  melihat  apakah penambahan  IL-6  mempengaruhi  proliferasi SPM.  Hasil  menunjukkan  bahwa  SPM  yang diberi  IL-6  memiliki  jumlah  sel  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  SPM  yang  dikultur  pada media  tanpa  serum  (Gambar  2).  Interleukin-6 diduga  berperan  dalam  regulasi  proliferasi  dari sel punca.
Gambar  2 .  Pemberian  IL-6  meningkatkan  jumlah sel, memicu proliferasi.
Penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa  penambahan  IL-6,  dengan  konsentrasi 10ng/mL, pada kultur SPM dari jaringan adiposa dapat  meningkatkan  proliferasi  melalui  aktivasi jalur Ras-dependent extracellular signal- regulated  kinase (ERK)  1/2  (Pricola  et  al.,
2009).  Selain  itu  defisiensi  dari  IL-6  diketahui menyebabkan  gangguan  pada  kemampuan
proliferasi sel punca (Pricola et al., 2009; Tie et al.,  2019).  Perbedaan  jumlah    sel    tentu      saja akan      berdampak      pada  konsentrasi  senyawa sitokin  dan  faktor  tumbuh  yang  disekresikan oleh SPM kedalam media kultur.

## Penambahan IL-6 dan Sekresi Protein.
Total  protein  tersekresikan  pada  media  yang diberi  penambahan  IL-6  10pg/mL,  yang merupakan konsentrasi pada keadaan DM, lebih tinggi  dibanding  perlakuan  lain  ( p value =0.00) (Gambar 3).
Gambar  3 .  Total  Protein  MTSPM:  Total  protein yang diberi penambahan IL-6 lebih tinggi dibandingkan basal.
Sedangkan  pada  kelompok  II  dengan penambahan  IL-6  pada  konsentrasi  normal (1pg/mL) menghasilkan total protein yang tidak berbeda signifikan dengan kultur SPM di media basal  pada  24  jam  pertama  ( p value =0.41)  dan berbeda  signifikan  pada  24  jam  kedua ( p value =0.00). Untuk melihat apakah penambahan IL-6  memberikan  efek  pada  jumlah  protein tersekresikan  maka  dilakukan  penghitungan
jumlah  protein  tersekresikan  per  sel  pada  tiap perlakuan.
Hasil  perbandingan  total  protein  dan jumlah sel menunjukkan bahwa penambahan IL- 6  ke  dalam  media  kultur  SPM  berpengaruh terhadap sekresi protein dari sel (Gambar 4).
Gambar 4 . Total protein tersekresikan per sel. Rata- rata  tiap  sel  pada  kultur  dengan  penambahan  IL-6 10pg/mL  mensekresikan  protein  lebih  banyak dibanding  sel  pada  kelompok  lainnya. p value =0.00;
Berbeda signifikan jika p value <0.05.
Penambahan  IL-6  sebanyak  1pg/mL  ke dalam media kultur menurunkan sekresi protein, dengan  rata-rata  protein  yang  disekresikan  tiap SPM  adalah  0,37pg  untuk  24  jam  pertama  dan 0,36pg untuk 24 jam kedua. Nilai tersebut lebih rendah  dan  berbeda  signifikan  dengan  rata-rata protein tersekresikan pada kelompok basal, yaitu 0,98pg  dan  0,6pg,  ( p value =0.00).  Hal  berbeda ditunjukkan  pada  kelompok  penambahan  IL-6 10pg/mL,  total  protein  yang  disekresikan  SPM pada  media  tumbuhnya  lebih  tinggi  dibanding dua  perlakuan  lainnya.  Rata-rata  protein  yang disekresikan oleh tiap sel untuk kelompok
perlakuan  IL-6  10pg/mL  adalah  yaitu 1,61pg/sel  dan  2,18pg/sel.  Jika  dibandingkan dengan  kelompok  I,  maka  konsentrasi  protein pada  kelompok  III  meningkat  sebanyak  65% pada  24  jam  pertama  dan  242%  pada  24  jam kedua.
Selain  itu,  hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  total  protein  tersekresikan  pada  24  jam pertama  dan  24  jam  kedua  berbeda  nyata  pada kelompok I dan III ( p value =0.00), sedangkan pada kelompok  II  total  protein  tersekresikan  tidak berbeda nyata ( p value =0.63). Hasil ini menunjukkan  terjadinya  perubahan  pola  sekresi protein  pada  SPM  setelah  24  jam  pertama pengumpulan MTSPM. Hal ini dapat disebabkan  oleh  perubahan  metabolisme  sel akibat  berkurangnya  sumber  protein  yang  dapat dipergunakan oleh sel untuk proses metabolismenya karena dalam proses pengumpulan MTSPM tidak dilakukan penambahan  fbs  ke  dalam  media  kultur.  Hasil berbeda dari kelompok II dapat disebabkan oleh rendahnya  sekresi  protein  sehingga  di  24  jam kedua  masih  dapat  mensekresikan  protein dengan  jumlah  yang  sama  dengan  24  jam pertama.
Interleukin-6 diketahui dapat mempengaruhi  ekspresi  gen  melalui  beberapa
jalur  persinyalan,  diantaranya  melalui  jalur Janus  Kinase/Signal  Transducer  and  Activator of  Transcription (JAK/STAT)  melalui  aktivasi glikoprotein  130  (gp130)  yang  kemudian mengaktivasi Signal  Transducer  And  Activator Of  Transcription  3 (STAT3),  melalui  jalur
Ras/Mitogen Activated Protein
Kinase
(Ras/MAPK)  melalui  aktivasi  protein growth factor  receptor-binding (Grb2)  dan  shc  yang akan  meningkatkan  aktivitas  fosforilasi  dari protein  serin/treonin  kinase,  dan  melalui  jalur Phosphatidylinositol-3-Kinase/Protein  Kinase  B
(PI3K/Akt)  melalui  perantara  protein  gp130 yang  kemudian  memfosforilasi  berbagai  target yang meregulasi diferensiasi sel dan kemampuan  bertahan  hidup  dari  sel  (Luo  dan Zheng,  2016).  Penelitian  lainnya  melaporkan bahwa  terdapat  807  ekspresi  gen  yang dipengaruhi  oleh  konsentrasi  IL-6  pada  tubuh manusia  (Lin  et  al.,  2014).  Penelitian  lain menggunakan kultur sel endotelial menunjukkan bahwa  peredaman  ekspresi  IL-6  mempengaruhi 42  ekspresi  gen,  diantaranya  terdapat  8  gen penyandi  sitokin  yaitu  FGF2,  HGF,  CXCL2, TGFB1,  GAS6,  IL1A,  CXCL11,  TNFSF4 (Ljungberg et al., 2020).
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  dan literatur penelitian terkait peranan IL-6 pada sel,
dapat diartikan bahwa perbedaan konsentrasi IL- 6  dapat  menyebabkan  perubahan  kemampuan proliferasi  SPM  dan  juga  kemampuan  dalam sekresi sel. Penambahan IL-6 dengan
konsentrasi 1pmol/mL menyebabkan
peningkatan kemampuan proliferasi tetapi menyebabkan  ekspresi  protein  yang  dapat disekresikan berkurang. Sedangkan penambahan IL-6 dengan konsentrasi 10pmol/mL menyebabkan peningkatan proliferasi dan peningkatan sekresi protein dari SPM.

## SIMPULAN DAN SARAN
Kultur  sel  punca  mesenkimal  dengan penambahan IL-6 10pg/ml menghasilkan peningkatan  jumlah  sel  pada  kultur  dan  total protein  yang  lebih  tinggi  pada  MTSPM dibandingkan  dengan  kultur  menggunakan media basal dan IL-6 1pg/ml. Total protein yang dihasilkan  lebih  tinggi  65%  dan  262%  pada MTSPM 24 jam pertama dan kedua dibandingkan  dengan  kultur  yang  hanya  diberi media basal. Hal ini menunjukkan terdapat lebih banyak  senyawa  sitokin  dan  faktor  tumbuh dalam  MTSPM  yang  dihasilkan  sehingga terdapat  kemungkinan  terjadinya  peningkatan efikasi dari MTSPM  tersebut saat dipergunakan dalam  terapi.  Tetapi  hal  tersebut  perlu  diteliti lebih  lanjut  dengan  melihat  profil  sitokin  dan
faktor  tumbuh  dalam  MTSPM  dan  juga dilanjutkan  dengan  uji in  vivo pada  hewan model DM.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis menyampaikan terimakasih kepada  Direktorat  Riset  dan  Pengabdian Masyarakat, Direktorat Jenderal Penguatan Riset dan  Pengembangan  Kemenristek/BRIN  yang telah  membiayai  penuh  penelitian  ini,  sesuai dengan
kontrak penelitian
No.
009/SP2H/LT/DRPM/2020. Penulis juga mengucapkan  terimakasih  kepada  Stem  Cell And  Cancer  Institute,  Kalbe  Farma  Tbk.  yang sudah  bersedia  memberikan  sampel  sel  punca mesenkimal.

## DAFTAR PUSTAKA
da  Silva  Meirelles,  L.,  Fontes,  A.M.,  Covas,
D.T.,  Caplan,  A.I.,  2009.  Mechanisms involved  in  the  therapeutic  properties  of mesenchymal stem cells. Cytokine Growth  Factor  Rev.  20,  419–427. https://doi.org/10.1016/j.cytogfr.2009.10.
002
Dahlan,  S.M.,  2018.  Statistik  untuk  kedokteran dan  kesehatan,  5th  ed.  Salemba  Medica,
Jakarta.
Khairani,  Kurniasih,  N.,  Maula,  R.,  2019. InfoDATIN  2018.  Pus.  Data  dan  Inf. Kementeri. Kesehat. RI 1–10.
Kwon,  Y.W.,  Heo,  S.C.,  Jeong,  G.O.,  Yoon,
J.W.,  Mo,  W.M.,  Lee,  M.J.,  Jang,  I.H., Kwon,  S.M.,  Lee,  J.S.,  Kim,  J.H.,  2013. Tumor necrosis factor-α-activated
mesenchymal stem cells promote endothelial  progenitor  cell  homing  and
angiogenesis.  Biochim.  Biophys.  Acta  - Mol.  Basis  Dis.  1832,  2136–2144.
https://doi.org/10.1016/j.bbadis.2013.08.0 02 Li, P., Zhou, H., Di, G., Liu, J., Liu, Y., Wang,
Z.,  Sun,  Y.,  Duan,  H.,  Sun,  J.,  2017.
Mesenchymal stem cell-conditioned medium  promotes  MDA-MB-231  cell migration and inhibits A549 cell migration  by  regulating  insulin  receptor and  human  epidermal  growth  factor receptor  3  phosphorylation.  Oncol.  Lett.
13, 1581–1586. https://doi.org/10.3892/ol.2017.5641
Lin,  H.,  Joehanes,  R.,  Pilling,  L.C.,  Dupuis,  J.,
Lunetta,  K.L.,  Ying,  S.-X.,  Benjamin,
E.J.,  Hernandez,  D.,  Singleton,  A.,
Melzer,  D.,  Munson,  P.J.,  Levy,  D., Ferrucci, L., Murabito, J.M., 2014. Whole Blood Gene Expression and Interleukin-6 Levels. Genomics 104, 490–495. https://doi.org/10.1016/j.ygeno.2014.10.0 03. Ljungberg,  L.U.,  Zegeye,  M.M.,  Kardeby,  C.,
Fälker, K., Repsilber, D., Sirsjö, A., 2020.
Global  Transcriptional  Profiling  Reveals Novel  Autocrine  Functions  of  Interleukin 6  in  Human  Vascular  Endothelial  Cells. Mediators Inflamm. 2020, 1–12. https://doi.org/10.1155/2020/4623107
Luo, Y., Zheng, S.G., 2016. Hall of fame among pro-inflammatory cytokines: Interleukin-6
gene  and  its  transcriptional  regulation mechanisms.  Front.  Immunol.  7,  1–7. https://doi.org/10.3389/fimmu.2016.0060 4
Madrigal, M., Rao, K.S., Riordan, N.H., 2014. A review of therapeutic effects of mesenchymal  stem  cell  secretions  and induction  of  secretory  modification  by different culture methods. J. Transl. Med. 12,  1–14.  https://doi.org/10.1186/s12967- 014-0260-8
Noone,  C.,  Kihm,  A.,  English,  K.,  O’Dea,  S., Mahon,  B.P.,  2013.  IFN-γ  stimulated human umbilical-tissue-derived cells potently suppress NK activation and resist
NK-mediated  cytotoxicity  in  vitro.  Stem Cells Dev. 22, 3003–3014. https://doi.org/10.1089/scd.2013.0028
Nunemaker,  C.S.,  2016.  Considerations  for Defining  Cytokine  Dose,  Duration,  and
Milieu That Are Appropriate for Modeling Chronic Low-Grade Inflammation  in  Type  2  Diabetes.  J. Diabetes Res. 2016, 1–9. https://doi.org/10.1155/2016/2846570 Pricola,  K.L.,  Kuhn,  N.Z.,  Haleem-Smith,  H., Song,  Y.,  Tuan,  R.S.,  2009.  Interleukin-6 maintains bone marrow-derived mesenchymal  stem  cell  stemness  by  an ERK1/2-dependent  mechanism.  J.  Cell. Biochem. 108, 577–588. https://doi.org/10.1002/jcb.22289 Redondo-Castro, E., Cunningham, C., Miller, J.,
Martuscelli, L., Aoulad-Ali, S., Rothwell, N.J., Kielty, C.M., Allan, S.M., Pinteaux, E.,  2017.  Interleukin-1  primes  human mesenchymal  stem  cells  towards  an  anti- inflammatory  and  pro-trophic  phenotype in  vitro.  Stem  Cell  Res.  Ther.  8,  1–11. https://doi.org/10.1186/s13287-017-0531- 4
Rickard,  M.,  2002.  Key  Ethical  Issues  in
Embryonic  Stem  Cell  Research.  Inf.  Res. Serv. 1–15. Rodriguez, L.A., Mohammadipoor, A., Alvarado,  L.,  Kamucheka,  R.M.,  Asher,
A.M.,  Cancio,  L.C.,  Antebi,  B.,  2019. Preconditioning  in  an  Inflammatory Milieu  Augments  the  Immunotherapeutic Function  of  Mesenchymal  Stromal  Cells. Cells 8, 1–31. https://doi.org/10.3390/cells8050462 Ryan,  J.M.,  Barry,  F.,  Murphy,  J.M.,  Mahon, B.P.,  2007.  Interferon-γ  does  not  break,
but  promotes  the  immunosuppressive capacity  of  adult  human  mesenchymal stem cells. Clin. Exp. Immunol. 149, 353–
363. https://doi.org/10.1111/j.1365-
2249.2007.03422.x
Ryu, Y.J., Cho, T.J., Lee, D.S., Choi, J.Y., Cho,
J.,  2013.  Phenotypic  characterization  and in  vivo  localization  of  human  adipose- derived  mesenchymal  stem  cells.  Mol.
Cells 35, 557–564. https://doi.org/10.1007/s10059-013-0112- z Shin, J.J., Lee, E.K., Park, T.J., Kim, W., 2015. Damage-associated  molecular  patterns and  their  pathological  relevance  in diabetes mellitus, Ageing Research Reviews. Elsevier B.V. https://doi.org/10.1016/j.arr.2015.06.004 Sun, L., Li, D., Song, K., Wei, J., Yao, S., Li, Z., Su, X., Ju, X., Chao, L., Deng, X., Kong,
B.,  Li,  L.,  2017.  Exosomes  derived  from human umbilical cord mesenchymal stem cells  protect  against  cisplatin-induced ovarian granulosa cell stress and apoptosis  in  vitro.  Sci.  Rep.  7,  1–13. https://doi.org/10.1038/s41598-017-
02786-x
Tie,  R.,  Li,  H.,  Cai,  S.,  Liang,  Z.,  Shan,  W.,
Wang, B., Tan, Y., Zheng, W., Huang, H., 2019.  Interleukin-6  signaling  regulates hematopoietic  stem  cell  emergence.  Exp. Mol. Med. 51, 1–12. https://doi.org/10.1038/s12276-019-0320- 5 Tiwari,  P.,  2015.  Recent  trends  in  therapeutic approaches  for  diabetes  management:  A comprehensive  update.  J.  Diabetes  Res. 2015, 1–12. https://doi.org/10.1155/2015/340838 Tsalamandris, S., Antonopoulos, A.S., Oikonomou,  E.,  Papamikroulis,  G.A.,
Vogiatzi,  G.,  Papaioannou,  S.,  Deftereos,
S.,  Tousoulis,  D.,  2019.  The  role  of inflammation in diabetes: Current concepts  and  future  perspectives.  Eur. Cardiol. Rev. 14, 50–59. https://doi.org/10.15420/ecr.2018.33.1
Vizoso,  F.J.,  Eiro,  N.,  Cid,  S.,  Schneider,  J., Perez-Fernandez, R., 2017. Mesenchymal stem  cell  secretome:  Toward  cell-free therapeutic  strategies  in  regenerative medicine. Int. J. Mol. Sci. 18.