## Uji Toksisitas Daun Kelor ( Moringa oleifera) Terhadap

## Sel Fibroblas Gingiva Menggunakan Uji MTT assay
( TOXICITY OF KELOR LEAVES ( Moringa oleifera) AGAINST GINGIVAL FIBROBLAST  USING MTT ASSAY)
Sheila Ayu Nararya 1 , Edhi Jularso 2 , Theresia Indah Budhy 2
1 Mahasiswa Pendidikan Dokter Gigi
2 Staf  Pengajar Departemen Patologi Mulut & Maksilofasial Fakultas Kedokteran Gigi  Universitas Airlangga
Surabaya – Indonesia e-mail : sheila.nararya@ymail.com

## ABSTRACT
Background: The oral cavity’s health is one of the most important  factors in  determining the quality of human life.  Oral  cancer  is  a  type  of   disease  that  can  fataly  change  the  quality  of human  life  if  not  properly  handle. Among  all  the  cancer  treatment,  chemotherapy  is  oftenly  done.  However,  chemotherapy has  some  side  effects that  can  exacerbate  the  patient’s  state.  Alternative  care  has  become  another  promising  option  besides chemotherapy. One of them is Moringa oleifera or as known as kelor leaves. The active compound content of Moringa oleifera extract especially isothiocianate has good potential in cancer therapy. But, any materials used in  human  care  must  passed  the  toxicity  test. Purpose : This  research  was  conducted  to find  out  the  toxicity  of Moringa  oleifera  extract  with  isothiocianate  to  primary  cell  gingival  fibroblast. Method: Experimental laboratory  study  with  the  post  test  only  group  control  design.  There  are  4  types  of  concentration  group  from kelor leaves extract which is 3,125%, 1,625%, 0,812%, and 0,406% and there are also the media control and cell  control.  Each  sample  were  put  in  96  well  that  already  contain  fibroblast  cell  culture  with  6  times replication  for  each  group.  And  then,  it  was  tested  with  MTT  assay. Results: The  concentration  group  from 3,125% until 0,406% has the percentage of living cells above 100%. Conclusion: The results of this research is that  the  kelor  leaves  (Moringa  oleifera)  extract  with  isothiocyanate  is  not  toxic  against  primary  cell  culture fibroblast.
Keywords: Moringa oleifera extract, isothiocyanate , toxicity.
Latar  Belakang: Kesehatan  rongga  mulut  merupakan  salah  satu  faktor  penting  yang  berperan  dalam menentukan kualitas hidup manusia. Kanker rongga mulut merupakan salah satu penyakit yang dapat mengubah kualitas hidup manusia dan berkaibat fatal apabila tidak ditangani dengan tepat. Salah  satu pengobatan kanker yang  sering  dilakukan  adalah  kemoterapi.  Meskipun  demikian,  kemoterapi  memiliki  beberapa  efek  samping yang  dapat  berakibat  buruk  kepada  pasien  kanker.  Perawatan  alternatif  pun    menjadi  pilihan  lain  selain kemoterapi.  Salah  satunya  adalah  dengan  daun  kelor  ( Moringa  oleifera) .  Kandungan  aktif    dari  daun  kelor memiliki  manfaat  yang  baik  sebagai  terapi  kanker.  Namun,  semua  bahan  yang  akan  digunakan  pada  manusia harus  melawati  uji toksisitas. Tujuan: Tujuan dilakukan penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui  hasil toksisitas ekstrak  daun  kelor  ( Moringa  oleifera) dengan  kandungan  isotiosianat  terhadap  cell  line  fibroblas. Metode: Penelitian  eksperimental    laboratoris  dengan  post  test  only  group  design.  Terdapat  4  macam  kelompok konsentrasi dari ekstrak daun kelor yaitu 3,125%, 1,625%, 0,812%, dan 0,406%  disertai dengan kontrol media dan kontrol sel. Setiap perlakuan diletakkan pada plate 96 well  yang telah berisi  kultur  sel fibroblas dengan 6 kali replika untuk setiap kelompok. Kemudian dilakukan uji MTT assay. Hasil: Kelompok konsentrasi 3,125% hingga  0,812%  memiliki  jumlah  persentase  sel  hidup  diatas  100%. Kesimpulan: Hasil  penelitian  ini
menunjukkan bahwa ekstrak daun kelor ( Moringa oleifera) dengan kandungan isotiosianat tidak bersifat toksik terhadap kultur sel primer fibroblas.
Kata Kunci : Ekstrak daun kelor ( Moringa oleifera), isotiosianat, uji toksisitas.

## PENDAHULUAN
Pada  era  yang  telahg  maju  kini  kesehatan merupakan salah satu faktor penting yang berperan dalam  kehidupan  manusia.  Hal  ini  menyebabkan manusia  terfokus  pada  kesehatan  tubuhnya, kesehatan  rongga  mulut  mereka  sering  kali diabaikan. Kesehatan rongga mulut juga merupakan salah satu faktor penting yang berperan dalam  menentukan  kualitas  hidup  menusia.  Salah satu penyakit yang dapat berakibat fatal dikarenakan  tidak  menjaga  kesehatan  dari  tubuh kita termasuk rongga mulut adalah kanker. Prevalensi  penyakit  kanker  pada  tahun  2012 tercatat 369,200 kasus. Dengan rata – rata insidensi tertinggi terdapat di Asia Tenggara 9 .
Kanker  sampai  saat  ini  merupakan  penyakit yang pengobatannya masih belum tuntas. Pengobatan  untuk  kanker  yang  sering  dilakukan salah  satunya  adalah  kemoterapi.  Kemoterapi sendiri  memiliki  beberapa  kelemahan  selain  biaya yang  cukup  mahal  dan  berbagai  macam  efek samping seperti pusing, mual, kelelahan, mucosistis, kerusakan pada saraf, neutropenia, serta infeksi  dapat  terjadi  pada  pasien  setelah  menjalani kemoterapi 18 .
Pengobatan  berbahan  baku  herbal  pun  menjadi pilihan  masyrakat  dalam  upaya  mengobati  kanker dikarenakan  biaya  yang  cukup  murah,  mudah mendapatkan  dan  efek  samping  yang  diakibatkan sedikit.  Salah  satu  produk  pengobatan  herbal adalah Biocurkem. Biocurkem mengandung ekstrak  alami  curcuma  longa  (kunyit)  yang terstandarisasi  dan  telah  dipatenkan.  Biocurkem juga  mengandung  curcuminoid  dan  minyak  atsiri sesquiterpene.  Biocurkem  memiliki  mekanisme kerja  yaitu  menghambat  transformasi,  proliferasi, dan invasi sel kanker. Sebagai terapi untuk kanker, Biocurkem  relatif  aman.  Namun,  Biocurkem memiiliki  bioavailabilitas  yang  rendah.  Lebih  dari 75%  curcuma  diekskresikan  melalui  feses  dan sebagian  kecil  urin,  sehingga  jumlah  yang diabsorpsi  sangat  rendah.  Akibatnya  efek  terapi yang  diharapkan  tidak  tercapai  dan  membutuhkan waktu yang lama 29 .
Inovasi  lain  terhadap  pengobatan  alternatif  pun dikembangkan.  Salah  satunya  adalah Moringa oleifera atau  yang  lebih  dikenal  dengan  sebutan tanaman  kelor.  Tanaman  kelor  merupakan  salah satu  tanaman  dari  spesies Moringaceae yang pendistribusiannya  telah  dikenal  di  seluruh  dunia.
Di  Indonesia,  tanaman  kelor  telah  banyak dibiakkan dan mudah didapat 20 . Tanaman  kelor  ( Moringa  oleifera )  merupakan tanaman yang kaya akan nutrisi. Kandungan nutrisi tersebut  tersebar  pada  seluruh  bagian  tanaman kelor, mulai dari daun, kulitm  batang, bunga, buah (polong),  sampai  akarnya.  Tanaman  kelor  ini mengandung  lebih  banyak  vitamin,  mineral, antioksidan, asam amino esensial, dan senyawa lain yang bermanfaat 14 .
Pada  bagian  daunnya  memiliki  kandungan senyawa  glukosinolat  dan  isotiosianat  yang diketahui sebagai hipotensif, anti kanker,
penghambat aktivitas bakteri, dan jamur 4.
Isotiosianat  sebagai  anti  kanker  memiliki mekanisme  yaitu  mampu  menginduksi  apoptosis dan  menginhibisi  pertumbuhan  sel  kanker  melalui fase G2/M cell cycle arrest 28 . Apoptosis merupakan proses  kematian  sel  yang  memiliki  tujuan  untuk membunuh  sel  yang  berbahaya  dan  menjadi ancaman  bagi  sel  tubuh  lainnya 3 .  Fase  G2/M cell cylce  arrest merupakan  fase  dimana  DNA  yang mengalamu  kerusakan  ditangkap  agar  tidak  terjadi pembelahan  yang  dapat  merusak  sel  tubuh 16 .
Sedangkan  untuk  kandungan  seperti  flavonoid, asam  askorbat,  dan  karetenoid  memiliki  manfaat sebagai antioksidan 14 .
Kandungan  –  kandungan  tersebut  memang memiliki potensi yang baik akan tetapi setiap bahan yang  digunakan  pada  manusia  haruslah  tidak merugikan  atau  tidak  memiliki  efek  toksik. Terlebih  lagi  apabila  bahan  tersebut  memiliki tujuan  untuk  dijadikan  pengobatan  alternatif  yang bersifat  kuratif  dan  preventif.  Diperlukan  adanya suatu  uji  untuk  mengukur  sifat  toksik  dari  bahan tersebut.  Untuk  mengukur  sifat  toksik  suatu  bahan terhadap sel dapat dilakukan melalui uji toksisitas 7 . Telah  dilakukan  penelitian  sebelumnya  dengan konsentrasi  ekstrak  50%,  25%,  12,5%,  dan  6,25% yang  menunjukkan  hasil  penelitian  bersifat  toksik. Maka dari itu, konsentrasi ekstrak 3,125%, 1,625%, 0,812%, dan 0,406% dikarenakan range konsentrasi tersebut  merupakan  range  konsentrasi  yang  cukup rendah  untuk  digunakan  dalam  uji  toksisitas terhadap fibroblast gingiva manusia.
Berdasarkan  hal  tersebut,  penulis  ingin  meneliti lebih  dalam  tentang  efek  toksisitas  daun  kelor ( Moringa oleifera).

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  telah  mendapat  persetujuan  kelaikan etik  oleh  HRECC  FODM  UNAIR  dengan  nomor sertifikat 196/HRECC,FODM/IX/2017. Jenis penelitian  yang  digunakan  adalah  eksperimental laboratoris dengan pendekatan randomized post test only  control  group  design dengan  besar  replikasi sebanyak  6  kali  dengan  konsentrasi  ekstrak  daun kelor  yaitu  3,125%,  1,625%,  0,812%,  dan  0,406% disertai  dengan  kontrol  media  dan  kontrol  sel. Setiap  kelompok  perlakuan  diletakkan  pada  plate 96 well. Setiap kelompok konsentrasi ekstrak daun kelor diberi perlakuan dengan  media dan  sel. Pada kontrol media, hanya mengandung media saja yaitu medium  alpha  mem  dan  pada  kontrol  sel  hanya mengandung  sel  fibroblas  saja  sebagai  kontrol negatif.

## Pembuatan Ekstrak Daun Kelor
Sebanyak 500 gram daun kelor segar dikeringkan dan  dilembutkan  dengan  menggunakan  blender, lalu  dilakukan  maserasi  dengan  ditambahkan pelarut  etanol  96%  dimasukkan  ke  dalam  wadah, ditutup dan dibiarkan selama 2 hari dan terlindungi dari  sinar  matahari.  Setelah  itu,  campuran  tersebut disaring sehingga didapat maserat. Ampas dimaserasi  dengan  etanol  96%  menggunakan prosedur  yang  sama.  Maserasi  dilakukan  sampai didapat  maserat  yang  jernih.  Maserat  diuapkan dengan  menggunakan  alat  penguap  vakum  putar pada  suhu  40 0 C.  Ekstrak  daun  kelor  selanjutnya dilakukan  skrining  fitokimia  untuk  mendeteksi senyawa aktif tumbuhan tersebut.

## Tahap Skrining Fitokimia Uji Glikosida
Larutan Percobaan Sari  filtrat  3  kali,  tiap  kali  dengan  20  mL campuran 3 bagian volume kloroform P dan 2 bagian volume isopropanolol P. Pada kumpulan sari tambahkan natrium
sulfatanhidrat P, saring dan uapkan pada suhu tidak lebih dari 50’. Larutan sisa dengan 2 mL metanol P.
Tahap Percobaan
- Uapkan  0,1  mL  larutan  percobaan  di  atas tangas air, larutkan sisa dalam 5 mL asam asetat  anhidrat  P.  Tambahkan  10  tetes asam sulfat P, terjadi warna biru atau hijau menunjukkan  adanya  glikosida  (  reaksi Liebermann Burchard )
- Masukkan  0,1  mL  larutan  percobaan dalam  tabung  reaksi,  uapkan  di  atasa tangas  air.  Pada  sisa  tambahkan  2  mL  air dan  2  tetes  Molish  LP.  Tambahkan  2  mL asam  sulfat  P,  terbentuk  cincin  berwarna ungu  pada  batas  cairan,  menunjukkan adanya ikatan gula ( reaksi Molish )

## Tahap Isolasi Sel Fibroblas
Sampel  gingiva  yang  telah  diambil  segera dicuci dengan menggunakan NaCl/ Aquadest , kemudian dilakukan pencucian kembali menggunakan  media  yang  juga  terdapat  antibiotik. Pencucian dilakukan selama 5 menit. Sampel diiris dan  dihaluskan  menggunakan  gunting  bedah sebelum  diberi  enzim  tripsin.  Sampel  dimasukkan ke dalam tabung erlenmeyer yang didalamnya telah terdapat magnetic  bar dan  diberikan  enzim  tripsin sebanyak  5  ml  menggunakan  pipet filler .  Tabung diletakkan  pada magnetic  stirer  with  heater 37 derajat  celcius  selama  45  menit.  Setelah  45  menit, dilakukan pemberian stopper 5 ml (dengan perbandingan  stopper  :  enzim  tripsin  1:1  )  untuk menghentikan  kerja  enzim  tripsin.  Kemudian, tabung  diletakkan  kembali  pada magnetic  stirer with  heater selama  15  menit.  Supernatan  yang terdapat  di  dalam  tabung  erlenmeyer  dituang  ke dalam conical  tube pertama,  kemudian  endapan yang berisi banyak jaringan dituang ke dalam conical  tube kedua.  Kedua  conical  tube dimasukkan  ke  alat  sentrifugasi  selama  5-6  menit dengan kecepatan 1800 rpm hingga sel mengendap. Kemudian media dibuang dan diambil endapannya. Pada  setiap conical  tube diberi  media  sebanyak  5 ml  bertujuan  mencuci  sisa  enzim  agar  hilang  dan dilakukan  sentrifugasi  selama  5-6  menit  dengan kecepatan 1800 rpm. Kemudian media dibuang dan diambil endapannya saja. Kedua conical tube diberi media  sebanyak  5  ml,  kemudian  campuran  media dan sel di dalam conical tube diambil menggunakan  pipet filler dan  ditaruh  dalam plate.
Plate diletakkan  dalam  inkubator  dengan  suhu  37 derajat  celcius  hingga  sel  tumbuh.  Dilakukan pencucian setiap 3-4 hari dan ditanam kembali agar sel mendapat nutrisi yang cukup.
Tahap Splitting / Pasase Sel Media  (5mm)  harus  dibuang  terlebih  dahulu. Kemudian plate dicuci menggunakan Phosphate Buffer Saline (PBS) untuk mencuci sisa media yang masih  menempel  pada plate. Apabila  media  masih tersisa akan  mempersulit terlepasnya sel dari dasar plate. Karena media mengandung serum yang dapat mempengaruhi  kerja  enzim  tripsin.  Kemudian,  sel dicuci menggunakan enzim tripsin untuk melepaskan  sel  yang  menempel  di  dasar plate. Sel yang  telah  diberi  enzim  tripsin  dan  di  inkubasi selama  3-5  menit.  Setelah  5  menit,  diberi  tripsin lagi untuk sel yang masih belum terlepas. Sel yang sudah  terlepas  diberikan  medium alpha MEM  dan dijadikan single  cell. Serum  atau  media  berfungsi
untuk  menghentikan  kerja  tripsin  agar  tidak berlebihan. Kemudian dilakukan inkubasi selama 5 menit.  Proses  pelepasan  sel  dilakukan  2-3  kali karena  sel  masih  sangat  baru.    Proses spliting sel dilakukan hingga mendapatkan sel fibroblast murni dengan  melakukan  proses  peremajaan  sel.  Apabila tidak dilakukan proses spliting sel, pertumbuhan sel tidak  sesuai  dan  berdempetan  sehingga  sel  cepat tua dan mudah mati. PBS dimasukkan sebanyak 2,5 mL  untuk  memisahkan  atau  membuang  media dalam  kultur,  kemudian  diberi  enzim  tripsin sebanyak 2 mL untuk melepaskan sel dalam media dan  diinkubasi  pada  suhu  37  derajat  celcius,  kadar CO 2 5%  selama  5  menit.  Dilakukan  pengamatan untuk  memastikan  semua  sel  sudah  terlepas  dan diambil menggunakan pipet serta diinkubasi selama 5  menit.  Sel  yang  telah  terlepas  diberi  medium alpha MEM  dan  tripsin  dengan  perbandingan  1:1 (masing-masing 2 mL). Kemudian, cairan dimasukkan  ke  dalam conical  tube sehingga  sel akan  menempel  di  dinding tube .  Dilakukan beberapa  kali  pencucian  dengan  menggunakan tripsin  dan alpha MEM  sehingga  sel monolayer menjadi single cell dalam conical tube . Kemudian, dilakukan  sentrifugasi  1800  rpm  selama  5  -  6 menit.  Media  dan  enzim  dibuang  menggunakan pipet, kemudian diberi alpha MEM kembali hingga 50  mL.  Dilakukan  proses vibrating menggunakan tube mixer dan sel dibagi dalam microplate 96 well sebanyak  100  ldengan  kepadatan  3-5x10 3 dan diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37°.

## Tahap Pelakuan pada Kultur Sel Fibroblas
Mengamati microplate yang  berisi  sel  fibroblast yang  telah  diinkubasi  dibawah  mikroskop  cahaya untuk  memastikan  sel  fibroblast  yang  ditanam dalam  setiap  well  atau  sumuran  cukup  banyak untuk  penelitian.  Sel  fibroblast  yang  sudah didistribusikan  dalam  sumuran  dibagi  dalam  6 kelompok  perlakuan,  yaitu  kelompok  1  sebagai kontrol  negatif  (kontrol  sel  ),  kelompok  2  sebagai kontrol  media,  kelompok  3  dengan  perlakuan dengan  paparan  ekstrak  daun  kelor  ( Moringa oleifera) konsentrasi  3,125%,  kelompok  4  dengan perlakuan  dengan  paparan  ekstrak  daun  kelor ( Moringa  oleifera) konsentrasi  1,625%,  kelompok 5  dengan  perlakuan  dengan  paparan  ekstrak  daun kelor  ( Moringa  oelifera) konsentrasi  0,812%, kelompok  6  dengan  perlakuan  dengan  paparan ekstrak  daun  kelor (Moringa  oleifera) konsentrasi 0,406%.  Setiap  perlakuan  mempunyai  replika  6 well  atau  sumuran.  Setelah  itu,  memberikan perlakuan setiap 6 replika/ sumuran pada kelompok 3  dengan  perlakuan  dengan  paparan  ekstrak  daun kelor  ( Moringa  oleifera) konsentrasi  3,125%, kelompok  4  dengan  perlakuan  dengan  paparan
isotiosianat  konsentrasi  1,625%,  kelompok  5 dengan  perlakuan  dengan  paparan  isotiosianat konsentrasi 0,812%, kelompok 6 dengan perlakuan dengan paparan isotiosianat konsentrasi 0,406%.

## Tahap  Pengamatan  dan  Pembacaan  Hasil Penelitian
Garam  MTT  dilarutkan  dalam  PBS ( Phospate  Buffer  Saline) 5  mg/ml. Media sel  dibuang, kemudian dicuci  dengan PBS dan  MTT  ditambahkan  secara  langsung pada  palte  yang  berisi  medium  kultur sebanyak  10 . Inkubasi  kembali  selama
±  4  jam  pada  suhu  37 0 C. Seluruh  media dalam  well  atau  sumuran  dan  bahan  uji diambil  dan  setiap  well  atau  sumuran ditambahkan DMSO sebanyak 50 . Plate diaduk secara mekanis menggunakan plate shaker sampai  Kristal  formazon  terlarut selama  5  menit.  Sel  fibroblast  yang  hidup terwarnai  dengan  formazon  menjadi  biru, sedangkan  yang  mati  tidak  terbentuk warna biru.
Formazon
dibaca absorbansinya secara spektrofotometri menggunakan  ELISA reader dengan panjang  gelombang  620  nm.  Semakin pekat warnanya, maka semakin tinggi nilai absorbansinya dan semakin banyak jumlah sel hidup.

## Hasil
Berdasarkan  hasil  pengamatan  dan  pembacaan nilai  absorbansi  atau optical  density uji  toksisitas ekstrak  daun  kelor  dengan  konsentrasi  3,125%, 1,625%,  0,812%,  dan  0,406%  terhadap  sel fibroblas gingiva didapatkan hasil sebagai berikut
Konsentrasi  Rerata Absorbansi %  Sel Hidup Standar Deviasi 3,125% 0,680 103,8%  1,05028787 1,625% 0,674 103% 2,75286 0,812% 0,662 101% 1,36571825 0,406% 0,654 100% 0,48733774
Tabel  1. Rerata  absorbansi  dan  standar  deviasi proliferasi sel fibroblas setelah perlakuan
Dari  data  hasil  penelitian  yang  didapatkan kemudian dilakukan perhitungan statistik. Sebelum
dilakukan  uji  dan  analisis  antar  kelompok  terlebih dahulu  dilakukan  uji  normalitas  menggunakan  uji Shapiro-Wilk. Pada penelitian ini seluruh kelompok konsentrasi  menunjukkan  distribusi  data  yang normal kecuali pada konsentrasi 1,625%. Dikarenakan  P=0,009  (P<0,05)  .  Kemudian dilakukan uji homogenitas varian data menggunakan Levenne-Test dengan  hasil  P=0,129 (P>0,05) yang menunjukkan data tersebut homogen.  Dilanjutkan  dengan  uji Kruskall-Wallis Test untuk melihat perbedaan signifikansi keseluruhan  dari  kelompok  perlakuan.  Dari  hasil uji Kruskall-Wallis  Test dihasilkan  P=0,011 (P<0,05)  yang  menunjukkan  bahwa  adanya perbedaan  afektivitas yang signifikan  antar kelompok  perlakuan.  Kemudian  dilakukan  uji Mann-Whitney  Test untuk  menentukan  konsentrasi optimum dair ekstrak daun kelor
K.Sel & Konsentrasi 3,125% K.Sel & Konsentrasi 1,625% K.Sel & Konsentrasi 0,812% K.Sel & Konsentrasi 0,406% 0,025 0,200 0,261 0,574
Tabel  2. Hasil  Uji  Signifkansi  dengan Mann- Whitney Test
Dari  hasil  Tabel  2  menunjukkan  bahwa  pada konsentrasi  3,125%  menghasilkan  P=  0,025 (P<0,05)  yang  berarti  konsentrasi  3,125%  dapat dijadikan  konsetrasi  optimum  pada  ekstrak  daun kelor.
Hasil penelitian pada konsentrasi 3,125% menunjukkan gambaran sel fibroblas yang semakin banyak setelah dilakukan uji MTT assay.
Gambar  1. Lapang  pandang  konsentrasi  3,125% sebelum  uji  MTT  assay(a)  dan  sesudah  uji  MTT assay (b)

## PEMBAHASAN
Daun kelor ( Moringa oleifera) merupakan daun yang  memiliki  kandungan  kimia  seperti  polifenol, flavonoid, asam askorbat, dan isotiosianat. Kandungan  kimia  tersebut  memiliki  berbagai manfaat  antara  lain  adalah  sebagai  antioksidan dalam  tubuh,  dapat  menyebabkan  kematian  sel kanker  (apoptosis),  meningkatkan  respon  imun
tubuh  (kekebalan  tubuh),  perbaikan  kerusakan DNA,  dan menginhibisi  aktivasi  karsinogenesis. Terlepas  dari  manfaat  tersebut,  setiap  bahan  atau material  dalam  kedokteran  gigi  yang  akan digunakan sebagai suatu perawatan atau pengobatan harus memenuhi syarat biokompatibel. Suatu  bahan  atau  material  dapat  dikatakan bersifat biokompatibel adalahapabila bahan tersebut  tidak  menyebabkan  iritasi  pada  jaringan hidup, tidak menyebabkan respon toksik, bebas dari bahan  yang  dapat  memicu  reaksi  alergi,  dan  tidak memiliki potensi  karsinogenik. Dalam  menentukan biokompatibel  suatu  bahan  atau  material  dapat dilakukan  melalui  uji  biokompatibilitas  atau  uji toksisitas. Pada tingkat pertama uji biokompatibiltas  suatu  bahan  dapat  dilakukan secara in vitro yaitu bahan material yang akan diuji dikontakkan  diluar  tubuh  mikroorganisme  seperti kultur sel 2 .
Pada  penelitian  ini  uji  toksisitas  in  vitro dilakukan dengan metode uji enzimatik (kolorimetri)  yang  menggunakan  pereaksi  MTT (Methyl  Tiazolydiphenyl  Tetrabromide)  assay .  Uji ini  digunakan  untuk  mengukur  kemampuan  sel hidup berdasarkan aktivitas mitokondria sel 8 .
Sel  fibroblas  gingiva  ini  berasal  dari  gingiva manusia.  Kultur  sel  dapat  berupa  kultur  sel  primer maupun cell  line .  Kultur  sel  primer  merupakan kultur  yang  dimulai  dari  sel,jaringan,  organ  yang diperoleh  langsung  dari  organisme  asalnya.  Kultur sel  primer  ini  hanya  dapat  dipertahankan  dalam periode  waktu  tertentu 19 .  Kultur  sel  primer memiliki  sifat  yang  lebih  sensitif  dibandingkan dengan cell  lines .  Pada  uji  in  vitro  lebih  ideal menggunakan kultur sel primer.
Pengamatan  uji  toksisitas  merupakan  indikator untuk  mengetahui  pengaruh  konsentrasi  terhadap suatu substansi. Hasil penelitian menunjukkan pada konsentrasi  ekstrak  daun  kelor  ( Moringa  oleifera) sebesar  3,125%    memiliki  persentase  sel  hidup 103,8%,  pada  konsentrasi  1,625%  memiliki persentase  sel  hidup  103%,    pada  konsentrasi 0,812%    memiliki  persentase  sel  hidup  101%  dan pada  konsentrasi  0,406%  memiliki  persentase  sel hidup 100%.  Dari data tersebut dapat ditunjukkan bahwa ekstrak daun kelor memiliki sifat biokompatibel.  Karena,  persentase  sel  hidup mencapai  diatas lethal  concentration yaitu  50%. Lethal concentration 50% (LC50)merupakan konsentrasi perkiraan, dalam lingkungan percobaan yang  terpapar  yang  akan  membunuh  50%  dari populasi  dibawah  kondisi  yang  ditentukan  dari tes 24 .
Data hasil penelitian ini diuji kenormalitasannya dengan  menggunakan  uji Shapiro  Wilk. Dapat diketahui  bahwa  hasil  distribusi  data  dari
konsentrasi 3,125%, 0,812%, dan 0,406% memiliki p>0,05  sehingga  menunjukkan  bahwa  distribusi data  tersebut  normal.  Hanya  pada  konsentrasi 1,625%  yang  memiliki  p<0,05  yang  menunjukkan bahwa  distribusi  data  pada  konsentrasi  tersebut tidak  normal.  Hal  ini  dapat  terjadi  dikarenakan adanya  angka  yang  menyimpang  pada  kelompok konsentrasi 1,625% pada replika ke-3. Homogenitas  varian  data  dari  penelitian  ini  diuji menggunakan Levenne Test. Dari uji terebutmenunjukkan hasil yang homogen yaitu p = 0,129  (p>0,05).  Uji  perbedaan  signifkansi  dari semua  kelompok  perlakuan  secara  keseluruhan diuji  menggunakan Kruskall-Wallis  Test. Hasil  uji Kruskall-Wallis  Test menunjukkan  hasil  yang signifikan dengan p = 0,011 (p <0,05) yang artinya menunjukkan  bahwa  ada  perbedaan  efektivitas yang  signifikan  antar  kelompok  konsentrasi. Berikutnya data diuji menggunakan Mann-Whitney Test untuk  menentukan  konsentrasi  optimum  pada ekstrak  daun  kelor  ( Moringa  oleifera). Hasil  uji menunjukkan  bahwa  konsentrasi  3,125%  memiliki data  yang  signifikan  yaitu  p  =  0,025  (p  <  0,05). Sehingga,  data  tersebut  dapat  dijadikan  pedoman konsentrasi  optimum  pada  ekstrak  daun  kelor ( Moringa oleifera).
Hal  tersebut  juga  dapat  terlihat  dari  hasil persentase  sel  hidup  dari  semua  kelompok kosentrasi.  Pada  konsentrasi  3,125%    memiliki persentase  sel  hidup  yang  paling  tinggi  yaitu 103,8%.  Persentase  proliferasi  sel  hidup  pada  tiap tingkat  pengeceran  memang  tidak  jauh  berbeda. Namun,  ada  kecenderungan  pada  konsentrasi ekstrak  awal  memiliki  hasil  proliferasi  sel  lebih besar  daripada  hasil  proliferasi  sel  pada  tingkat pengeceran selanjutnya. Hal tersebut dapat disebabkan  karena  semakin  sering  dilakukan pengenceran  pada  suatu  ekstrak  maka  akan mengurangi  kandungan  kimia  dalam  ekstrak tersebut  dan  menyebabkan  jumlah  perbandingan kandungan  kimia  pada  ekstrak  tersebut  lebih  kecil daripada kandungan dari media pada well. Kandungan  aktif  dari  daun  kelor  terutama isotiosianat  memiliki  sifat  dapat    merangsang enzim detoksifikasi seperti glutathione S- transferase yang berfungsi mengkonjugasi zat – zat xenobiotik  menjadi  GSH  (Gluthatione)  dan akhirnya  mendetoksifikasi  lingkungan  seluler(Veal et  al,2002).  Dari  detoksifikasi  lingkungan  seluler atau  melalui  aktivitas  antioksidan  yang  mampu memblokir inisiasi dari susunan radikal bebas dapat mengakibatkan  terbentuknya transforming  growth factor  β sehingga menstimulasi proliferasi fibroblas 13 .
Antioksidan  merupakan  suatu  senyawa  yang dapat  menangkal  dampak  negatif  oksidan  dengan
cara  mendonorkan  satu  elektronnya  kepada senyawa  yang  bersifat  oksidan  tersebut  sehingga aktivitas senyawa oksidan dapat dihambat. Antioksidan  juga  dapat  menghambat  reaksi oksidasi  dengan  cara  mengikat  radikal  bebas  dan molekul  reaktif  sehingga  kerusakan  sel  dapat dicegah.  Kerusakan  sel  akibat  reaktivitas  radikal bebas  merupakan  salah  satu  pemicu  kanker.  Hal tersebut  terjadi  karena  interaksi  senyawa  oksigen reaktif (ROS) dengan DNA mengawali terbentuknya  DNA  adducts  (ikatan  DNA  dengan karsinogen) selama proses perbaikan atau replikasi, yang berakibat terjadinya mutasi DNA. Penumpukan  DNA  termutasi  dapat  menyebabkan terjadinya perkembangan sel neoplastis 25 .
Dari  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak daun kelor ( Moringa oleifera) menunjukkan  sifat  biokompatibel  pada  konsentrasi mulai dari 3,125% hingga 0,406%. Data konsentrasi  efektif  yang  telah  diuji  tersebut  dapat memberikan  informasi  bahwa  konsentrasi  ekstrak daun kelor bersifat non toksik dan aman digunakan sebagai pengobatan herbal.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Aminah,  S,  Ramdhan,  T,  &  Yanis,  M, 2015,  Kandungan  Nutrisi  dan  Sifat Fungsional  Tanaman  Kelor  ( Moringa oleifera), Buletin Pertanian Perkotaan Vol 5, pp.37-39
2. Anusavice,  KJ,  2013 ,  Phillips’  Science  of Dental  Materials ,  12th  ed,  Elsevier Saunders, Missouri, pp. 150
3. Andrianus,  Edmondo,  2014, Potensi Ekstrak  Daun  Rumput  Mutiara  (Hedyotis corymbosa  (L)  Lamk)  terhadap  Apoptosis Sel  Kanker  Rongga  Mulut  pada  Tikus
Wistar Jantan
yang diinduksi
Benzo(A)pirene, Skripsi,Fakultas
Kedokteran  Gigi  Universitas  Airlangga, pp.10-11
4. Anwar,  F,  Latif,  S,  &  Ashraf,  M,  2007, Moringa  oleifera  :  A  Food  Plant  with
Multiple Medicinal Uses, Wiley
Interscience, pp.20-21.
5. Bose, CK, 2007, Possible role of Moringa Oleifera  L. root  in  epithelial  ovarian cancer, MedGenMed, pp.4-5
6. Barrientos,  S,  Stojadinovic,  O,  Golinko, MS,  et  al,  2008, Growth  factor  and Cytokines in wound healing, wound reapir and  regeneration, Wound  Repair  Reagen , Vol. 16(5), pp. 585-601
7. Budhy,  TI,  Wulandari,  Erawati,  & Mooduto,  Latief,  2007,  Uji  Sitotoksisitas
Ekstrak Air Asam Jawa 5% Terhadap Cell Line BHK  21, Indonesian  Journal  of Dentistry, p p.19
8. Freshney, R, 2011, Animal cell Culture , A practical approach , 6th edition, IRI, Press
: Washington DC, pp.113-114
9. Ghantous,  Y,  2017,  Global  Incidence  and Risk  Factors  Of  Oral  Cancer, National Institutes of Health, pp . 1 10. Gibco, 2015, Cell Culture Basic Handbook , Thermo Fisher Scientific, pp.2. 11. Guha,  N,  Boffeta,  P,    Shangina,  ,et  al, 2007,  Oral  Health  and  Risk  of  Squamous Cell Carcinoma of the Head and Neck and Esophagus:  Results  of  Two  Multicentic Case-  Control  Studies, American  Journal of Epidemiology, pp.1159-1160.
12. Harborne,  JB,  1987,  Metode  Fitokimia, Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan,  Penerjemah:  Kosasih  P., Iwang  S.Terbitn  kedua,  Bandung:Penerbit ITB, pp.152-153.
13. Istindiah,  HN  &  Auerkari,  EL,  2001, Mekanisme  Kontrol  Siklus  Sel  (Suatu Tinjauan  Khusus  Peran  Protein  Regulator Pada  Jalur  Retinoblastoma  (Rb)  ), Jurnal Kedokteran  Gigi  Universitas  Indonesia vol 8(1) pp.40
14. Kayanoki,  Y,  Fujii,  J,  Suzuki,  K,et  al, 1994, Suppression of Antioxidatve Enzym Expression  by  Transforming  Growth Factor-β1 in Rat Hepatocytes, The Journal of Biological Chemistry, pp.15488
15. Krisnadi,  Dudi,  2015,  Kelor  Super
Nutrisi .Pusat Informasi dan Pengembangan Tanaman Kelor Indonesia Lembaga  Swadaya  Masyarakat  –  Media
Peduli  Lingkungan(LSM-Mepeling), pp.8- 12, 36-37,63-64.
16. Kumar  S  &  Pandey  AK, Chemistry  and Biological  Activities  of  Flavonoids:  An Overview,  Review  Article , The  Scientific World  Journal ,  Vol  2013,  Article  ID 162750, pp 1-16.
17. Kousholt,  A,  Menzel,  T,  &  Sorensen,  C, 2012,  Pathways  for  Genome  Integrity  in G2 Phase of the Cell Cycle, Biomolecules, pp. 2.
18. Laborde,  E,  2010,  Glutathine  Transferase as  mediators  of  Signalling  Pathway Involved  in  Cell  Proliferation  and  Cell Death, pp.3-4.
19. Loprinzi, C, Bensinger, W, & Peterson, D, 2014, Understanding and Managing Chemotherapy Side Effects, Cancer Care, pp.4-7.
20. Ma’at,  Suprapto,  2011, Teknik  Dasar Kultur Sel , Surabaya: Airlangga University, pp.9-10
21. Marthur,  B,  2005,  Moringa  oleifera, Treesforlife, pp.11
22. Provost, J, 1998, MTT Proliferatoin Assay Protocol.Investigating the Biochemistry & Cellular  Physiology  of  NHE1, Provost  & Wallert Research pp.15-16.
23. Putra,  Wayan  DP,  Dharmayudha,  Anak AGO, & Sudimartini, LM, 2016,
Identifikasi Senyawa Kimia Ekstrak Etanol Daun Kelor ( Moringa oleifera L) di Bali, Indonesia Medicus Veterinus, pp.466-467.
24. Redha,  Abdhi,  2010,  Flavonoid:Struktur, Sifat  Antioksidatif  dan  Peranannya  dalam sistem  biologis, Jurnal  Belian  vol  9, pp.197-199.
25. Ricci,  P,  2008, Environmental  and  Health
Risk Assessment and Management: Principles and Practices, Netherlands:Springer, pp.213. 26. Sayuti,  Kesuma  &  Yenrina,  Rina,  2015, Antioksidan, alami dan sintetik , Padang:AU Press, pp.10-17
27. Saxena,  M,  Nema,  R,  &  Gupta,  A,  2013, Phytochemistry  of  Medicinal  Plants, Joural of Pharmacognosy and
Phytochemistry, pp.168.
28. Shentilreja,  P  &  Kathiresan,  K,  2015,  In Vitro  Cytotoxicity  MTT  Assay  in  Vero, HepG2  and  MCF-7  Cell  study  of  Marine Yeast, Journal  of  Applied  Phamaceutical Science Vol.5, pp.081-082.
29. Srivastava,  S& Singh, S, 2004, Cell cycle arrest,apoptosis induction and inhibition of nuclear  factor  kappa  B  activation  in  anti- proliferatic activity of benzyl isothiocyanate  against  human  pancreatic cancer  cells, Carcinogenesis:Departement of  Pharmacology  and  University  of Pittsburg Cancer Institute, pp.1701-1704 30. Tiara,  2010,  Curcumin  sebagai  Terapi Pendamping  untuk  Kanker. Jurnal  Medika Kedokteran  Indonesia vol XXXV, pp.1-2.
31. Toma, A& Deno, S, 2014, Phytochemistry and Pharmacological Activities of Moriga oleifera, Internatioinal Journal of Biological Chemistry, pp.223-227.
32. Veal, E, Toone, M,  Jones, N, Morgan, B, 2002,  Distinct  Roles  for  Gluthatione  S- Transferase  in  the  Oxidative  Stress Response in Schizosaccharomyces pombe, Journal of Biological Chemistry, pp.1.
33. Warnakulasuriya, S, 2008,
Global Epidemiology of Oral and
Ooropharyngeal  Cancer, Department  of Oral  Medicine  and  Experimental  Oral Pathology, London:Elsevier, pp.309
34. Walton,  R&  Toerbinejed,  2008, Prinsip dan  Praktik  Ilmu  Endodonsia  3th  ed,
Jakarta:EGC, pp.15.
35. Yousef, A, 2011, Isothiocyanate
Glycoside, Phytotherapy, pp. 1.
36. Yulianti,  T,  2009,  Biofumigan  Untuk
Pengendalian Patogen Tular Tanah
Penyebab Penyakit Tanaman Yang Ramah