## PENGARUH PELUKAAN BUAH JERUK NIPIS (Citrus aurantifolia S.) TERHADAP KANDUNGAN KLOROFIL DAN AKTIVITAS ENZIM DEHIDROGENASE SELAMA PEMATANGAN
EFFECTS OF PHYSICAL WOUNDING OF LIME FRUITS (Citrus aurantifolia. S) ON THE CHLOROPHYLL CONTENT AND  DEHYDROGENASE

## ACTIVITY DURING RIPENING
Putra Adinata 1 , Zulkifli 1 , Ellyzarti 1
1 Jurusan Biologi, Fakultas MIPA,Universitas Lampung, e-mail: nata.adi89@yahoo.co.id
Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung Jl. Prof.Dr. Soemantri Brojonegoro No. 1, Bandar Lampung, Lampung, Indonesia, 35145

## Abstrak
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  April  2012  untuk  menentukan  apakah  pelukaan  fisik  mempengaruhi degradasi  klorofil  dan  aktivitas  enzim  dehidrogenase  selama  proses  pematangan  buah  eruk  nipis. Penelitian dilakukan dalam percobaan faktorial 2x2 denga faktor A 2 taraf waktu pengukuran: 4 hari dan 8 hari setelah pelukaan. Faktor B adalah 2 perlakuan: tidak dilukai dan dilukai. ANOVA dilakukan pada taraf nyata  5%.  Hubungan  antara  dehidrogenase  dan  klorofil  ditentukan  dengan  regresi.  Hasil  menunjukkan bahwa pelukaan secara nyata mempengaruhi klorofila, b, total. Klorofil a, b dan total pada perlakuan lebih rendah  dari  kontrol. Waktu  pengukuran  secara  nyata  hanya  mempengaruhi  a  dan  b,  tetapi  tidak  klorofil total. Klorofil a, b pada kontrol 8 hari setelah pelukaan lebih rendah dari 4 hari, tetapi klorofil b lebih tinggi. Hasil juga menunjukkan bahwa waktu pengukuran secara nyata mempengaruhi aktivitas dehidrogenase. Dehidrogenase 8 hari setelah pelukaan lebih rendah dari 4 hari. Pengaruh pelukaan terhadap hubungan antara  aktivitas  dehidrogenase  dan  kandungan  klorofil  terlihat  8  hari  setelah  pelukaan.  Pelukaan mengubah hubungan dari negative menjadi positif dan pelukaan mempengaruhi degradasi klorofil, tetapi tidak berpengaruh terhadap aktivitas dehidrogenase.
Kata kunci : Pelukaan, Klorofil, Dehidrogenase, Jeruk nipis.

## Abstract
There have been studied effects of  wounding on chlorophyll content and dehydrogenase activity in slime fruits during April 2012. The objective of the study was to determine whether physical wounding influence chlorophyll  degradation  and  dehydrogenase  activity  during  ripening  process.  The  study  was  arranged  in factorial 2x2 with factor A are 2 levels time of measurement, 4 and 8 days after wounding. Factor B are 2 treatment:  unwounded  and  wounded.  ANOVA  was  conducted  at  5%  significant  level.  The  relationship between  dehydrogenase  and  chlorophyll  was  determined  by  regression.  Results  show  that  wounding significantly influence chlorophyll a, b, and total content. Chlorophyll a, b, and total in treatment are lower than  in  control.  Time  of  measurement  significantly  influence  only  the  chlorophyll  a  and  b,  but  not chlorophyll total. Chlorophyll a, b in control 8 days after wounding were lower than 4 days, but chlorophyll b  is  higher.  The  result  also  shows  that  wounding  and  time  of  measurement  were  significantly  influence dehydrogenase  activity.  Dehydrogenase  8  days  after  wounding  is  lower  than  4  days.  The  effects  of wounding on the relationship between dehidrogenase activity and chlorophyll content appears 8 days after wounding. We concluded that wounding influence chlorophyll degradation, but not dehydrogenase activity.
Key words : Wounding, chlorophyll, dehydrogenase, lime fruit.

## PENDAHULUAN
Tanaman  jeruk  nipis  merupakan  tanaman  buah tahunan  yang  berasal  dari  Asia,  dan  sejak ratusan tahun yang lalu jeruk nipis sudah tumbuh di Indonesia baik secara alami maupun budidaya,
dan  buahnya  selalu  tersedia  sepanjang  tahun. Buah  jeruk  nipis  yang  sudah  tua  rasanya  asam. Tanaman jeruk nipis umumnya menyukai tempat- tempat  yang  mendapat  sinar  matahari  langsung. (Anonim, 2008a ; Tjitrosoepomo, 1985).

## Jurnal Ilmiah : Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati
Buah jeruk nipis mengandung  senyawa-senyawa kimia  yang  bermanfaat,  misalnya  asam  sitrat, asam  amino,  triptofan,  lisin,minyak  atsiri,  vitamin B 1 dan C. Jeruk nipis juga mengandung 70% mi- nyak  essential  yaitu  citral,  limonen,  fenchon,  ter- pineol,  bisabolene,  dan  terpenoid  lainnya  (Ano- nim, 2012; Chang, 2001; Guo et.al , 2006).
Buah  jeruk  nipis  merupakan  buah  nonklimakterik yaitu buah yang proses pematangannya tidak di- ikuti dengan peningkatan laju respirasi yang ting- gi.  Peningkatan  laju  respirasi  yang  tinggi  pada buah  klimakterik  selama  pematangan  bertujuan untuk  mensuplai  kebutuhan  ATP  dan  NADH untuk  biosintesis  etilen  serta  sintesis  protein  dan enzim yang baru (Taiz and Zeiger, 1991; Leopold et.al, 1975).
Salah satu proses fisiologi yang menonjol selama proses  pematangan  buah  adalah  degradasi  klo- rofil. Buah jeruk nipis yang berwarna hijau karena mengandung  klorofil  berubah  menjadi  kuning ( chlorophyll  loss ).  Hilangnya  klorofil  dari  buah bisa bersamaan dengan puncak pematangan bu- ah (Spurr and Haris, 1970).
Salah  satu  faktor  eksternal  yang  mempercepat pematangan  buah  adalah  luka  fisik  ( physical wounding ) pada kulit buah. Luka pada buah dike- tahui meningkatkan etilen sehingga mempercepat proses  pematangan  buah.  IAA  merupakan  salah satu  hormon  tumbuhan  yang  mempengaruhi produksi  etilen.  Proses  pematangan  buah dikendalikan  oleh  keseimbangan  IAA  dan  etilen. (Spurr  and  Haris,  1970  ;  Taiz  and  Zeiger,  1991). Precursor  dalam  lintasan  biosintesis  IAA  adalah triptophan  dan  enzim  kunci  dalam  lintasan  ini sebagian  besar  adalah  dihidrogenase  yang  juga merupakan enzim utama dalam siklus Krebs.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memahami  peru- bahan  proses  fisiologis  buah  jeruk  nipis  setelah diberi  perlakuan  luka.  Perubahan  yang  diamati adalah  kandungan  klorofil  a,  b  dan  total,  serta aktivitas enzim dehidrogenase. Pengamatan dila- kukan 4 hari dan 8 hari setelah pelukaan.

## BAHAN dan METODE
Penelitian  ini  telah  dilakukan  selama  bulan  April 2012  di  Laboratorium Fisiologi  dan  Laboratorium Biomolekuler FMIPA Universitas Lampung. Pene- litian dilaksanakan dalam percobaan faktorial 2x2 dengan  faktor  A  adalah  waktu  pengukuran  de- ngan  2  taraf  yaitu  4  dan  8  hari  setelah  pelukaan fisik.  Faktor  B  adalah  perlakuan  dengan  2  taraf yaitu  tidak  dilukai  (kontrol)  dan  dilukai.  Setiap kombinasi  perlakuan  diulang  8  kali.  Perlakuan
yang diberikan adalah penorehan luka sepanjang 3 cm secara longitudinal pada kulit buah. Masing- masing buah diberi 4 torehan.
Variabel    dalam  penelitian  ini adalah  kandungan klorofil  a,  b  dan  total,  serta  aktivitas  enzim  dehi- drogenase. Parameter dalam penelitian ini adalah nilai tengah kandungan klorofil a, b dan total serta aktivitas enzim dehidrogenase dari setiap kombinasi perlakuan.
Absorbansi Klorofil diukur dengan spektrofotome- ter, dan kandungan klorofil a, b dan total ditentu- kan berdasarkan rumus Witham at.al . (1986). Ak- tivitas enzim dehidrogenase ditentukan berdasar- kan transmisi larutan metilen blue yang telah diin- kubasi dengan 2 gram potongan buah jeruk nipis selama  24  jam.  Transmisi  diukur  dengan  spek- trofotometer  pada  panjang  gelombang  600  nm. Semakin  tinggi  transmisi  semakin  tinggi  aktivitas enzim dehidrogenase (Witham at. al, 1986).

## HASIL dan PEMBAHASAN
Analisis ragam dan uji F menunjukkan bahwa pe- lukaan  fisik  dan  waktu  pengukuran  berpengaruh nyata  terhadap  kandungan  klorofil  a.  Ada  inte- raksi  yang  nyata  antara  waktu  pengukuran  de- ngan  pelukaan  terhadap  kandungan  klorofil  a. Dari  grafik terlihat  bahwa  degradasi  klorofil  a,  di- mana  pada  kontrol  terjadi  setelah  8  hari  inisiasi pematangan  buah  dengan  pelukaan  fisik.  Pelu- kaan fisik mempercepat degradasi klorofil a yaitu 4  hari  setelah  inisiasi  pematangan  dengan  pelu- kaan fisik (Tabel 1 dan Gambar 1).
Tabel  1.  Kandungan  klorofil  a  buah  jeruk  nipis
(mg/g jaringan) 4HSP 8HSP Kontrol 0,187±0,007 ab 0,144±0,008 a Perlakuan 0,122±0,007 b 0,124±0,007 b
Keterangan : Angka yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada uji F taraf 5%.
Gambar 1. Perubahan kandungan klorofil a.
0,00 0,02 0,04 0,06 0,08 0,10 0,12 0,14 0,16 0,18 0,20 4HSP 8HSP K a n d u n g a n K lo ro fi l a ( m g /g j a ri n g a n ) Kontrol Perlakuan
Analisis ragam dan uji F menunjukkan bahwa pe- lukaan  fisik  dan  waktu  pengukuran  berpengaruh nyata  terhadap  kandungan  klorofil  b.  Tidak  ada interaksi  yang  nyata  antara  waktu  pengukuran dengan  pelukaan  terhadap  kandungan  klorofil  b. Dari  grafik  terlihat  bahwa  tidak  terjadi  degradasi klorofil  b  pada  kontrol  maupun  perlakuan.  Na- mun,  kandungan  klorofil  b  perlakuan  yang  lebih rendah  dari  kontrol  menunjukkan  bahwa  pelu- kaan mendorong degradasi klorofil b (Tabel 2 dan Gambar 2).
Tabel  2.  Kandungan  klorofil  b  buah  jeruk  nipis  (mg/g  jari- ngan)
4HSP 8HSP Kontrol 0,166±0,009 ab 0,201±0,013 a Perlakuan 0,127±0,008 b 0,161±0,013
Keterangan : Angka yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada uji F taraf 5%.

## Gambar 2. Perubahan kandungan klorofil b.
Analisis ragam dan uji F menunjukkan bahwa pe- lukaan fisik    berpengaruh  nyata  terhadap  kandu- ngan klorofil total namun, waktu pengukuran tidak berpengaruh  nyata  terhadap  kandungan  klorofil total. Tidak ada interaksi yang nyata antara waktu pengukuran  dan perlakuan   terhadap kandungan klorofil total (Tabel 3 dan Gambar 3).
Tabel  3.  Kandungan  klorofil  total  buah  jeruk  nipis  (mg/g jaringan) 4HSP 8HSP Kontrol 0,353±0,010 ab 0,345±0,024 ab Perlakuan 0,249±0,016 b 0,285±0,016 b Keterangan : Angka yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada uji F taraf 5%.
Gambar  3.  Perubahan  kandungan  klorofil  total  buah  jeruk nipis.
Analisis ragam dan uji F menunjukkan bahwa pe- lukaan fisik tidak berpengaruh nyata terhadap ak- tivitas  enzim  dehidrogenase,  namun  waktu  pe- ngukuran berpengaruh nyata terhadap enzim de- hidrogenase.  Tidak  ada  interaksi  yang  nyata  an- tara  waktu  pengukuran  dengan  perlakuan  terha- dap  aktivitas  enzim  dehidrogenase.  Dari  grafik terlihat  bahwa  terjadi  penurunan  aktivitas  enzim dehidrogenase  baik  pada  kontrol  maupun  perla- kuan.  Aktivitas  enzim  dehidrogenase  yang  relatif sama  antara  kontrol  dan  perlakuan  baik  4  mau- pun  8  hari  setelah  inisiasi  pematangan  dengan pelukaan  menunjukkan  bahwa  pelukaan  fisik tidak  berpengaruh  terhadap  aktivitas  enzim  dehi- drogenase (Tabel 4 dan Gambar 4).
Tabel  4.  Aktifitas  Enzim  Dehidrogenase  buah  jeruk  nipis (transmisi)
4HSP 8HSP Kontrol 0,581±0,047 ab 0,285±0,016 a Perlakuan 0,658±0,121 ab 0,236±0,022 a
Keterangan : Angka yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada uji F taraf 5%.
Gambar  4.  Perubahan  aktivitas  enzim  dehidrogenase  buah jeruk nipis.
0 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 4HSP 8HSP P e ru b a h a n K a n d u n g a n K lo ro fil b (m g /g ja ri n g a n ) Kontrol Perlakuan 0,00 0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30 0,35 0,40 4HSP 8HSP K a n d u n g a n K lo ro fi l T o ta l (m g /g j a ri n g a n ) Kontrol Perlakuan 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 4HSP 8HSP A k ti v it a s E n z im D e h id ro g e n a s e (m g /g j a rin g a n ) Kontrol Perlakuan
Gambar  5.  Korelasi  antara  aktivitas  enzim  dehidrogenase    dan kandungan klorofil a 4 hari setelah pe-lukaan.
Dari Gambar 5 terlihat  tidak ada hubungan yang kuat  antara  aktivitas  enzim  dehidrogenase  de- ngan klorofil a (R 2 =0,002). Pelukaan fisik menye- babkan  aktivitas  enzim  dehidrogenase  berkore- lasi  negatif  dengan  kandungan  klorofil  a.  Kandu- ngan  klorofil  a  yang  rendah  berasosiasi  dengan aktivitas enzim dehidrogenase yang tinggi.
Gambar  6.  Korelasi  antara  aktivitas  enzim  dehidrogenase  dan kandungan klorofil a 8 hari setelah pelukaan fisik.
Dari  Gambar  6  terlihat  aktivitas  enzim  dehidro- genase  berkorelasi  negatif  dengan  kandungan klorofil  a  (R 2 =0,256).  Kandungan  klorofil  a  yang rendah  berasosiasi  dengan  aktivitas  enzim  dehi- drogenase  yang  tinggi.    Pelukaan  fisik  menye- babkan  korelasi  yang  lemah  antara  aktivitas  en- zim  dehidrogenase  dengan  kandungan  klorofil  a (R 2 =0,036).
Gambar  7.  Korelasi  antara  aktivitas  enzim  dehidrogenase  dan kandungan klorofil b 4 hari setelah pelukaan .
Dari  Ganbar  7.  terlihat  bahwa  tidak  ada  korelasi yang  kuat  antara  aktivitas  enzim  dehidrogenase dengan  kandungan  klorofil  b  pada  kontrol (R 2 =0,0163).  Pelukaan  fisik  menyebabkan  kore- lasi  negatif  antara  aktivitas  enzim  dehidrogenase dengan  kandungan  klorofil  b  (R 2 =0,289).  Kan- dungan  klorofil  b  yang  rendah  berasosiasi  de- ngan aktivitas enzim dehidrogenase yang tinggi.
Gambar 8. Korelasi antara aktivitas enzim dehidrogenase dan kan- dungan klorofil a 8 hari setelah pelukaan.
Dari  Gambar  8.  di  atas  terlihat  aktivitas  enzim dehi-drogenase berkorelasi negatif dengan kandungan  klorofil  a  (R 2 =0,518).  Kandungan klorofil  a  yang  rendah  berasosiasi  dengan  aktivi- tas  enzim  dehidrogenase  yang  tinggi.  Pelukaan fisik menyebabkan korelasi positif antara aktivitas enzim de-hidrogenase dengan kandungan klorofil a (R 2 =0,770).
Dari  Gambar  9.  terlihat  tidak  ada  korelasi  yang kuat  antara  aktivitas  enzim  dehidrogenase  de- ngan  kandungan  klorofil  total  baik  pada  kontrol (R 2 =0,011) maupun pada perlakuan (R 2 =0,018).
y = -0.007x + 0.191 R² = 0.002 0.14 0.16 0.18 0.2 0.22 0 0.5 1 K an du ng an K lo ro fil a (m g/ g ja rin ga n) Aktivitas enzim dehidrogenase y = -0.029x + 0.140 R² = 0.247 0.10 0.11 0.12 0.13 0.14 0.15 0 0.5 1 1.5 K A nd un ga n K lo ro fil a (m g/ g ja rin ga n) Aktivitas Enzim Dehidrogenase y = -0.393x + 0.256 R² = 0.256 0 0.2 0.4 0 0.5 K lo ro fil a(m g/ g ja rin ga n) Aktivitas enzim … Kontrol 8HSP y = 0.091x + 0.102 R² = 0.036 0 0.1 0.2 0 0.2 0.4 K llo ro fil a(m g/ g ja rin ga n) Aktivitas enzim … Perlakuan 8HSP y = -… 0 0.1 0.2 0 1 K lo ro fil b (m g/ g ja rin ga n) Aktivitas enzim dehidrogenase (transmisi) Kontrol 4HSP y = -… 0 0.2 0.4 0 1 K lo ro fil b (m g/ g ja rin ga n) Aktivitas enzim dehidrogenase (transmisi) Perlakuan 4HSP y = -0.579x + 0.365 R² = 0.518 0 0.2 0.4 0 0.5 K lo ro fil b (m g/ g ja rin ga n) Aktivitas enzim dehidrogenase Kontrol 8HSP y = 0.526x + 0.037 R² = 0.770 0 0.2 0.4 0 0.5 K lo ro fil b (m g/ g ja rin ga n) Aktivitas enzim dehidrogenase (transmisi) Perlakuan 8HSP b.Perlakuan 4HSP a. kontrol 4HSP
17  /  Biologi Eksperimen dan Keanekaragaman Hayati                                                                                          Putra Adinata
Gambar  9.  Korelasi  antara  aktivitas  enzim  dehidrogenase  dan kandungan klorofil a 4 hari setelah pelukaan.
Gambar 10. Korelasi antara aktivitas enzim dehidrogenase dan kandungan klorofil a 8 hari setelah pelukaan.
Dari  Gambar  10  terlihat  bahwa  aktivitas  enzim dehidrogenase berkorelasi negatif dengan kandu- ngan  klorofil  total  (R 2 =0,440).  Kandungan  klorofil total  yang  rendah  berasosiasi  dengan  aktivitas enzim  dehidrogenase  yang  tinggi.  Pelukaan  fisik menyebabkan  korelasi  positif  antara  aktivitas  en- zim  dehidrogenase  dengan  kandungan  klorofil total  (R 2 =0,703).  Kandungan  klorofil  total  yang rendah  berasosiasi  dengan  aktivitas  enzim dehidrogenase yang rendah.

## KESIMPULAN
Pelukaan  fisik  mempengaruhi  laju  degradasi klorofil  buah  jeruk  nipis,  namun  tidak  mempe- ngaruhi  aktivitas  enzim  dehidrogenase.  Perlu  di- lakukan  penelitian  lanjutan  untuk  mempengaruhi pelukaan fisik terhadap level hormon IAA dan ak- tivitas enzim IAA oksidase pada buah jeruk nipis.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  2008. Jeruknipis. http://www.ccrc.farma- si.ugm.ac.id.  Diakses  pada  tanggal  8  No- vember 2008. Pukul: 14.45 WIB.
Anonim. 2012 kandungan dan khasiat jeruk nipis. http://www.nabit-ist.com/kandungan-dan - khasiat-jeruk-nipis.html. Diakses pada tanggal 1 Januari 2012 pukul: 16.15 WIB. Chang,  L.C.  and  Kinghorn,  A.D.2001. Flavonoid as  Cancer  Chemopreventive  Agents.  In Trigal,  C,  Bioactive,  Coumpounds  from Natural  Sources,  Isolation,  Characterisation and  Biological  Properties .  Taylor  and Francis, New York.
Guo,  X.M.,  Lu  Q.,Liu,  Z.J., Wang,  L.F.,  Feng,  B. A.2006. Effects  of  D-Limonene  on  Leukimia Cells HL-60 and K562 in vitro , Zhongguo Shi Yan Xue Ye Xue Za Zhi. 14(4): 692-5.
Leopold, A. C., and P. E. Kriedemann. 1975. Fruit
Ripening. In : Plant Growth and Develloment ., pp 328-324 Mc Graw Hill Book Company, New York.
Spurr,  A.  R  and  Haris.  1970. Morphological changes in repening fruit . Hortscience 5: 33- 35
Taiz  and  Zeiger.  1991.  Plant  Phisiology.  The Benjamin/Cummings.  Publishing  Company, Inc. Hal, 67-69.
Tjitrosoepomo, Gembong. 1985. Morfologi Tumbuhan .  Gajah  Mada  University  Press, Yogyakarta.
Witham,  H.,  Francis.,  D.F.  Blaydes  and  R.M. Delvin.  1986. Exercise  in  Plant  Phisiology . Psw Publisher.
y = -0.022x + 0.366 R² = 0.011 0 0.5 0 1 K lo ro fil to ta l (m g/ g ja rin ga n) Aktivitas enzim dehidrogenase (transmisi) kontrol 4HSP y = 0.018x + 0.237 R² = 0.018 0 0.2 0.4 0 1 2 K lo ro fil to ta l (m g/ g ja rin ga n) Aktivitas enzim dehidrogenase (transmisi) perlakuan 4HSP y = -0.973x + 0.622 R² = 0.440 0 0.2 0.4 0.6 0 0.2 0.4 K lo ro fil to ta l (m g/ g ja rin ga n) Aktivitas enzim dehidrogenase (transmisi) Kontrol 8HSP y = 0.617x + 0.139 R² = 0.703 0 0.2 0.4 0 0.2 0.4 K lo ro fil to ta l (m g/ g ja rin ga n) Aktivitas enzim dehidrogenase (transmisi) Perlakuan 8HSP