Available online at http://ejurnal.setiabudi.ac.id/ojs/index.php/biomedika P-ISSN : 1979 - 035X & E-ISSN : 2302 - 1306
Perbedaan Derajat Aglutinasi Uji Golongan Darah Berdasarkan Teknik Penanganan Sampel dalam Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah
Difference of Aglutination Degrees in Blood Grouping Test Based on Sample Handling Techniques in Making Red Blood Suspension
Lucia Sincu Gunawan* & Rumeyda Chitra Puspita Program Studi D4 Analis Kesehatan Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Setia Budi Surakarta, Jl. Let. Jend. Sutoyo, Mojosongo, Surakarta, 57127, Jawa Tengah, Indonesia
*Corresponding Author: sincugunawan@gmail.com
Received: July 4, 2019; Revise: December 5, 2019;  Accepted:December 23, 2019 DOI : https://doi.org/10.31001/biomedika.v12i2.546

## ABSTRAK
Pemeriksaan  laboratorium  sebelum  pemberian  transfusi  darah  ( pretransfusion  testing ) merupakan  bagian  yang  sangat  vital  dalam  kegiatan  transfusi.  Pada  beberapa  jenis  uji  pra  transfusi membutuhkan suspensi sel darah merah. Pembuatan suspensi sel bertujuan untuk mengoptimalkan reaksi antigen-antibodi  sehingga  reaksi  yang  muncul  dapat  diamati  dengan  jelas.  Praktek  kerja  penentuan golongan  darah  menggunakan  suspensi  sel  darah  merah,  di  mana  dalam  penyediaannya  menggunakan fase  pencucian  yang  memakan  waktu.  Jenis  sampel  yang  digunakan  dapat  berupa whole  blood dengan antikoagulan  ataupun  sampel  darah  beku.  Karena  keterbatasan  waktu,  maka  modifikasi  dilakukan  pada prosedur baku. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perbedaan derajat aglutinasi uji golongan darah berdasarkan teknik penanganan sampel dalam pembuatan suspensi sel darah merah.  Uji golongan darah Cell Grouping metode tabung dilakukan pada sampel darah vena dengan teknik penanganan sampel yang berbeda  yaitu,  sampel  darah beku  tanpa  antikoagulan  dengan  penyimpanan,  sampel  darah  segar  dengan langsung  penambahan  NaCl  0,9%,  dan  sampel  darah    antikoagulan  EDTA  dengan  penyimpanan  dalam refrigerator 8 – 24 jam dengan suhu 4 0 C. Jumlah sampel untuk tiap jenis penanganan ada 30 sampel, dan dilakukan  penilaian  derajat  aglutinasi  pada  uji  golongan  darah,  dilakukan  oleh  2  analis.  Hasil  mean derajat agutinasi dibedakan antara 3 teknik pembuatan suspensi dengan sampel NaCl (Mean= 3.88; SD= 0.32),  sampel  beku  (Mean=  3.93;  SD=  0.25),  dan  sampel  EDTA  (Mean=  3.98;  SD=  0.13),  namun perbedaan  mean  tersebut  secara  statistik  tidak  signifikan  (p>0.05),  sehingga  dapat  disimpulkan  ketiga jenis  sampel  bisa  digunakan  untuk  menggantikan  satu  dengan  lainnya  sebagai  alternatif  sampel  yang sebanding dalam pembuatan suspensi sel darah merah untuk menentukan  golongan darah ABO metode cell grouping .
Kata kunci : golongan darah; suspensi sel darah merah; aglutinasi

## ABSTRACT
Pre transfusion testing is  a very essential part of blood transfusion procedure.  In some types of pretransfusion test, suspension of red blood cells is required. This cell suspension is made to optimize the antigen-antibody  reaction  so  that  the  on  going  reaction  can  be  clearly  observed.    The  practice  of determining  blood  type  needs  a  suspension  of  red  blood  cells,  which  its  washing  phase  is  a  time- consuming.  The  type  of  sample  used  can  be  whole  blood  with  anticoagulants  or  frozen  blood  samples. Due  to  time  constraints,  the  standard  procedures  were  modified.  This  study  aimed  to  determine  the differences in the degree of agglutination of blood type testing based on the handling samples’ techniques in  the  manufacture of  red blood  cell  suspensions.  Blood  group  testing  was  done  by  the  tube  method  on
venous  blood  samples  with  different  sample  handling  techniques:  frozen  blood  samples  without anticoagulants  with  storage,  fresh  blood  samples  with  direct  addition  of  0.9%  NaCl,  and  EDTA anticoagulant  blood  samples  with  refrigerator  storage  8  -  24  hours  at  4 0 C.  The  number  of  samples  for each type of treatment is 30 samples, and an assessment of the degree of agglutination in the blood group test is carried out by 2 analysts. There were differences in the mean degree of aglutination between the 3 suspensi-making techniques with NaCl samples (Mean = 3.88; SD = 0.32), frozen samples (Mean = 3.93; SD = 0.25), and EDTA samples (Mean = 3.98; SD = 0.13), but the mean differences was not statistically significant (p> 0.05), so it can be concluded that the three types of samples could be used to replace one another  as  a  comparable  sample  alternative  in  making  red  blood  cell  suspension  to  measure  ABO  cell grouping method.
Keywords: blood type; red blood cell suspension; agglutination

## PENDAHULUAN
Transfusi darah merupakan salah satu komponen terapi yang sangat penting  dalam  penatalaksanaan  pasien. Pemberian transfusi darah harus berpegang  pada prinsip bahwa manfaat yang  akan  diterima  oleh  pasien  jauh lebih  besar  dibandingkan  risiko  yang akan  ditanggung,  sehigga  semboyan “ Getting  the  right  blood  the  right patient  at  the  right  time  and  right place ”  harus  benar-benar  dilaksanakan (Mulyantari, 2017).
Pemeriksaan
laboratorium sebelum  pemberian  transfusi  darah
( pretransfusion testing ) merupakan bagian yang sangat vital dalam kegiatan transfusi.  Uji  pratransfusi  inilah  yang menentukan  apakah  produk  darah  yang akan  ditransfusikan  dapat  memberikan manfaat yang optimal atau tidak kepada pasien.  Selain  itu,  uji  pratransfusi  juga dapat  memprediksi  apakah  transfusi akan  memberikan  efek  samping  yang fatal  atau  tidak  sehingga  pencegahan terjadinya  efek  samping  pemberian transfusi  dapat  lebih  awal  dilakukan. (Mulyantari, 2017)
Pada beberapa jenis uji
pratransfusi  membutuhkan  suspensi  sel darah  merah.  Pemuatan  suspensi  sel
bertujuan  untuk  mengoptimalkan  reaksi antigen-antibodi  sehingga  reaksi  yang muncul  dapat  diamati  dengan  jelas. Beberapa  kepustakaan  menyebutkan bahwa  suspensi  sel  3%  banyak  dipakai untuk  pemeriksaan  serologi.  Namun, berdasarkan Word Health Organization , suspensi  sel  5%  umum  dipakai  untuk prosedur serologi (WHO, 2013).
Pemeriksaan  golongan  darah adalah  suatu  prosedur  laboratorium yang dilakukan untuk menentukan jenis golongan  darah.  Pada  uji  pratransfusi, pemeriksaan  golongan  darah  minimal yang  harus  dikerjakan  adalah  golongan darah  sistem  ABO  dan  Rhesus  (D typing).  Pemeriksaan  golongan  darah dilakukan  baik  pada  donor  maupun pada pasien (WHO, 2002).
Aglutinasi  sel  darah  merah dalam  pemeriksaan  golongan  darah dapat  berlangsung  melalui  dua  tahapan. Tahap pertama antibodi berikatan dengan  permukaan  sel  darah  merah, tahap kedua antibodi berinteraksi dengan sel darah merah sehingga sel-sel saling berdekatan dan terjadilah aglutinasi.  Tahap  pertama  aglutinasi dipengaruhi  oleh  suhu,  pH  medium, konstanta  afinitas  antibodi,  waktu  atau lama  inkubasi,  kekuatan  ion  pada
medium,  dan  rasio  antigen  antibodi. Tahap  kedua  aglutinasi  dipengaruhi oleh  jarak  antar  sel,  muatan  molekul dalam  suspensi,  deformitas  membran, molekul  permukaan  membran  dan struktur molekul (Mulyantari, 2017).
Secara  garis  besar,  penyebab ketidaksesuaian  golongan  darah terbagi menjadi  dua  yaitu  kesalahan  teknis  dan permasalahan  pada  sampel  baik  sampel eritrosit  maupun  serum  atau  plasma. Sumber discrepancy dari  kesalahan teknis  antara  lain  kesalahan  identifikasi dan dokumentasi, kesalahan pada reagen  dan  peralatan,  seperti quality
control reagen  tidak  dilakukan  dengan baik, reagen terkontaminasi dan hemolisis, waktu sentrifugasi tidak tepat atau  peralatan  tidak  dikalibrasi  dengan teratur  dan  kesalahan  pada Standard Operating  Procedure (SOP),  seperti prosedur  tidak  sesuai  dengan  instruksi dari  pabrik  reagen,  penambahan  reagen atau sampel yang tidak tepat, konsentrasi  suspensi  sel  darah  merah tidak  tepat,  endapan  sel  pada  bagian bawah tersuspensi secara komplit sebelum  derajat  aglutinasi  ditentukan (Blaney and Howard, 2013).
Pada  praktek  kerja  pendidikan analis  kesehatan  salah  satu  kompetensi yang  harus  dimiliki  adalah  penentuan golongan darah. Dalam pelaksanaannya, maka ketersediaan
alat, bahan, kecukupan waktu dan jumlah mahasiswa dalam setiap kegiatan praktek di laboratorium akan menentukan berhasil terlaksananya prosedur  kerja  yang  telah  ditetapkan dan pada akhirnya berpengaruh terhadap validitas pemeriksaaan. Praktek kerja penentuan golongan darah
menggunakan suspensi sel darah merah, dimana dalam penyediaannya
menggunakan  fase  pencucian  yang memakan  waktu.  Jenis  sampel  yang digunakan  dapat  berupa whole  blood dengan  antikoagulan  ataupun  sampel darah beku. Karena keterbatasan waktu, maka beberapa prosedur baku dilakukan modifikasi. Modifikasi ini menimbulkan pertanyaan  apakah  akan  berpengaruh terhadap validitas pemeriksaaan golongan darah, sekaligus harus dipertimbangkan pembiasaan kerja praktek  yang  benar  akan  menimbulkan memori  yang  mendalam  bagi  calon tenaga  analis  kesehatan,  sehingga  di kemudian  hari  dapat  merupakan  acuan kerja di dunia kerja yang sesungguhnya. Tujuan  Penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui perbedaan derajat aglutinasi uji  golongan  darah  berdasarkan  teknik penanganan  sampel  dalam  pembuatan suspensi  sel  darah  merah.  Penelitian yang  sejenis  ini  hanya  menggunakan perbedaan  sel  darah  yang  dicuci  dan tidak  ataupun  menggunakan  beberapa jenis  suspense  dengan  konsentrasi  yang berbeda, yang menekankan pada penanganan  sampel,  sedangkan  pada penelitian  ini  diteliti  selain  aspek penanganan  sampel  juga  penyimpanan sampel.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  sebagai berikut; tabung reaksi, centrifuge , spuit , mikropipet , refrigerator ,  kapas,  plester, tip ,  termometer  dan tourniquet .  Bahan yang digunakan sebagai berikut;
suspensi  sel  darah  merah  5%,  antisera A, antisera B, NaCl 0,9%

## Obyek  Penelitian
Obyek    dalam  penelitian  ini adalah  darah vena yang diambil dengan spuit pada  vena  di  fossa cubiti.  Sampel  pada  penelitian ini  sejumlah  30  sampel  darah vena  yang  diambil  2  kali  pada hari 1 dan hari 2 pada probandus yang sama. Teknik pengambilan sampel  dengan  metode quota sampling. Dikelompokkan dalam tiga kelompok yaitu: a. Sampel darah beku dengan penundaan waktu (A)  adalah  sampel  darah vena yang tidak menggunakan antikoagulan, disimpan dalam refrigerator dengan  suhu  4 o C  selama
8 – 24 jam.
b. Sampel  darah  lengkap
segar  (B)  adalah  sampel darah vena tanpa menggunakan antikoagulan, dan langsung dicampur dengan  NaCl  yang  telah disiapkan sebelumnya, berumur  kurang  dari  6 jam.
c. Sampel  darah  lengkap dengan penundaan waktu
(C)  adalah  sampel  darah vena dengan antikoagulan EDTA, disimpan dalam refrigerator dengan suhu 4 o C selama 8 – 24 jam.

## Prosedur Penelitian
Pengambilan darah vena 1. Menyiapkan alat-alat yang diperlukan : Spuit , kapas alkohol 70%, tali pembendung ( torniquete ), plester, tabung
reaksi
2. Memasang  jarum  pada holder , dipastikan terpasang erat.
3. Melakukan  pendekatan  pasien dengan tenang dan ramah;
diusahakan  pasien  senyaman mungkin. 4. Mengidentifikasi pasien dengan benar sesuai dengan data dilembar permintaan.
5. Memverifikasi  keadaan  pasien, misalnya  puasa  atau  konsumsi obat.  dicatat  bila  pasien  minum obat tertentu, tidak puasa dsb.
6. Meminta pasien untuk meluruskan  lengannya,  dipilih lengan  yang  banyak  melakukan aktivitas.
7. Meminta  pasien  mengepalkan tangan.
8. Memasang turniquete kira-kira 10 cm di atas lipat siku.
9. Memilih  bagian  vena mediana
cubital atau cephalic . melakukan perabaan (palpasi) untuk memastikan  posisi  vena;  vena teraba  seperti  sebuah  pipa  kecil, elastis  dan  memiliki  dinding tebal.
10. Membersihkan kulit pada bagian yang akan diambil dengan kapas alkohol  70%  dan  dibiarkan kering. Kulit yang sudah dibersihkan  jangan  dipegang lagi.
11. Menusuk  bagian  vena  dengan posisi  lubang  jarum  menghadap ke atas.
12. Menghisap  darah  secara  pelan- pelan dan sampai dicapai volume yang diperlukan 13. Melepas tourniquet dan meminta pasien membuka kepalan tangannya. Jangan menarik jarum sebelum tourniquet dibuka.
14. Meletakkan kapas ditempat suntikan lalu segera melepaskan/menarik jarum. Menekan  kapas  beberapa  saat lalu diplester selama kira-kira 15 menit.

## Penanganan sampel
1. Sampel  darah  beku  dengan penundaan  waktu  (A).  Sampel darah vena yang didapat, dimasukkan  ke  dalam  tabung melalui  dinding  tabung  dimana pada  tabung  tidak  ditambahkan antikoagulan, kemudian disimpan dalam refrigerator dengan  suhu  4 o C  selama  8  –  24 jam.  Pisahkan  serum,  sebelum pencucian sel.
2. Sampel darah lengkap segar (B). Sampel darah vena yang didapat dan  berumur  kurang  dari  6  jam,
sebanyak 0,5 mL dimasukkan ke dalam tabung  berisi NaCl 0,9% yang telah disiapkan sebelumnya, kurang lebih
mengisi  tigaperempat  tabung (bagian dari tahap pencucian sel darah merah).
3. Sampel  darah  lengkap  dengan penundaan  waktu  (C).  Sampel darah  vena  ditambahkan  dengan
antikoagulan  EDTA  sebanyak  1 mg/  1  mL  darah,  dihomogenkan dengan baik dan disimpan dalam refrigerator dengan  suhu  4 o C selama 8 – 24 jam.

## Pencucian sel
Pencucian  sel  darah  merah bertujuan  untuk  mendapatkan  sel  darah merah yang bebas dari protein/ globulin yang  dapat  mengganggu  pemeriksaan serologi. Prosedur pencucian sel sebagai berikut:
1. Setengah  mili  liter  darah  pekat dimasukkan  ke  dalam  tabung kemudian  tambahkan  larutan salin/  Natrium  Clorida  0,9% sampai mengisi ¾ bagian tabung.
2. Lakukan  sentrifugasi  dengan kecepatan  3000  rpm  selama  1 menit dan buang seluruh supernatant.
3. Lakukan  pencucian  sebanyak  3 kali dan buang seluruh supernatan pada akhir pencucian, sehingga hasil akhirnya adalah sel  darah merah yang  sudah  dicuci  (Mulyantari,
2017).

## Pembuatan suspensi darah merah
1. Pembuatan suspensi sel bertujuan untuk mengoptimalkan reaksi  antigen-antibodi  sehingga reaksi yang muncul dapat diamati dengan jelas. Berdasarkan  WHO,  suspensi  sel 5% umum dipakai untuk prosedur serologi (WHO, 2013).
2. Berikan label pada tabung
sampel, teteskan 1 tetes sel darah merah yang sudah dicuci
tambahkan  19  tetes  NaCl  0,9% dan homogenkan.
Pemeriksaan golongan darah cell grouping dengan metode tube
1. Teteskan  1  tetes  anti-A  pada tabung  yang  bersih  dan  kering, berikan label pada tabung.
2. Teteskan  1  tetes  anti-B  pada tabung  yang  bersih  dan  kering, terpisah  dari  tabung  pertama kemudian  berikan  label  pada tabung.
3. Teteskan  1  tetes  anti-AB  pada tabung ketiga (tergantung rekomendasi reagen yang digunakan) 4. Tambahkan pada masing- masing  tabung  1  tetes  suspensi sel darah merah 5%
5. Campur  dengan  baik  kemudian lakukan sentrifugasi dengan
kecepatan  1000  rpm  selama  1 menit
6. Resuspensi dengan baik sel yang mengendap  pada  dasar  tabung, lihat ada tidaknya aglutinasi
7. Baca  dan  interpretasi  hasil  serta lakukan  pencatatan  hasil  reaksi pada semua tabung.

## Interpretasi hasil
Interpretasi    hasil  uji  golongan darah  yaitu  derajat  kekuatan  aglutinasi sel  darah  merah,  yang  menandakan terjadinya  reaksi  antigen  dan  antibodi yang dapat diamati baik secara makroskopik maupun mikroskopik.
• 4+   :  terdapat  satu  gumpalan besar
• 3+   : terdapat 2 atau 3 gumpalan
• 2+   :  sejumlah  gumpalan  kecil dengan  supernatan  yang jernih
• 1+  :  sejumlah  gumpalan  kecil dengan  supernatan  yang keruh
• Negatif : suspensi sel halus
• Hemolisis: hemolisis  parsial atau  komplit,  menunjukkan
reaksi positif, dianggap sama dengan 4+
Pembacaan  hasil  dilakukan  oleh  dua analis  kesehatan,  dimana  pembacaan dilakukan  secara  mandiri  dan  dicatat pada  lembar  yang  berbeda,  pada  waktu yang sama.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel  darah  yang  berasal  dari mahasiswa  sejumlah  30  sampel  yang memenuhi  kriteria  penelitian  yaitu sampel  mencukupi  dari  volume,  tidak lisis dan memenuhi standar penanganan dan  penyimpanan  sampel.  Pada  proses pengambilan  sampel  terdapat  beberapa kendala dalam penelitian ini, yaitu vena yang  sulit  diakses  dan  jumlah  volume darah yang tidak sesuai, sedangkan pada penanganan  dan  penyimpanan  sampel didapatkan penyulit yaitu adanya sampel  yang  beku  dan  lisis,  sehingga tidak  memenuhi  syarat  sampel.  Tidak semua mahasiswa mengetahui golongan darahnya,  dan  penelitian  ini  juga  dapat memberikan  informasi  golongan  darah mahasiswa yang menjadi subyek penelitian, meski demikian pada metode cell grouping penentuan golongan darah ABO,  maka  golongan  darah  O  tidak akan menghasilkan aglutinasi baik pada antisera  A  dan  antisera  B,  sehingga sampel darah dengan golongan darah O tidak  dapat  digunakan  dalam  penelitian ini.
Dari  tabel  4.1  dapat  dilihat,    30
sampel  yang  memenuhi  syarat,  yang sudah  disiapkan  dalam    90  tabung sesuai dengan perlakuan dalam pembuatan  suspensi  sel  darah  merah, yaitu  tabung  A1  untuk  sampel  subyek nomer 1 dimana sampel darah beku dan disimpan  dalam  refrigerator,  B1  untuk sampel  subyek  nomer  1  dimana  sampel
darah  segar  yang  langsung  dimasukkan dalam tabung berisi  NaCl  0,9%, tabung
C1  untuk  sampel  subyek  nomer  1 dimana sampel darah dengan antikoagulan  EDTA  disimpan  dalam refrigerator,  dan  seterusnya  dilakukan pembuatan suspensi darah dan pemeriksaan golongan darah. Tabel 4.1 Hasil Uji Golongan  Mahasiswa
No. Golongan Darah Sampel beku Sampel segar + NaCl Sampel EDTA 1 2 1 2 1 2 1 A 4 4 4 4 4 4 2 B 4 4 4 4 4 4 3 B 4 4 4 4 4 4 4 B 3 3 4 4 4 4 5 A 4 4 4 4 4 4 6 A 4 4 4 4 4 4 7 B 4 4 4 4 4 4 8 B 4 4 4 4 4 4 9 B 4 4 4 4 4 4 10 B 4 4 4 4 4 4 11 B 4 4 4 4 4 4 12 B 4 4 4 4 4 4 13 B 4 4 4 4 4 4 14 B 4 4 4 4 4 4 15 AB 4 4 4 4 4 4 16 B 4 4 4 3 4 4 17 A 4 4 4 4 4 4 18 A 4 4 4 4 4 4 19 B 4 4 4 4 4 4 20 AB 4 4 4 4 4 4 21 A 4 4 4 4 4 4 22 B 4 3 4 3 4 3 23 B 4 4 4 4 4 4
24 B 4 4 3 3 4 4 25 B 4 4 3 3 4 4 26 B 4 3 4 3 4 4 27 A 4 4 4 4 4 4 28 B 4 4 4 4 4 4 29 AB 4 4 4 4 4 4 30 A 4 4 4 4 4 4
Hasil  intepretasi  uji  golongan darah  dilakukan  oleh  2  analis.  Uji korelasi  antara  dua  analis  untuk mengetahui  korelasi  hasil  pengamatan derajat  aglutinasi golongan  darah, diharapkan  korelasi  yang  baik  antara  2 analis dalam mengamati derajat aglutinasi  dapat  dilihat  pada  tabel  4.2.
Interpretasi  hasil  dari  tabel  4.2  yaitu
terdapat korelasi yang cukup kuat dalam pengamatan  derajat  aglutinasi  antara analis  1  dan  analis  2,  dan  korelasi tersebut  secara  statistik  signfikan  (r= 0.56;  p  <0.001).  Dapat  disimpulkan terdapat  kesepakatan  yang  cukup  baik antara kedua pengamatan tersebut.
Tabel  4.2 Korelasi Antara Hasil Pengamatan Derajat Aglutinasi Antara Analis 1 Dan Analis 2 Analis n Koefisien Korelasi (r) p Analis 1 90 0.56 <0.001

## Analis 2
Tabel 4.3  menunjukkan terdapat perbedaan Mean derajat agutinasi antara 3  teknik  pembuatan  suspensi  dengan sampel  NaCl  (Mean=  3.88;  SD=  0.32), sampel  beku  (Mean=  3.93;  SD=  0.25), dan  sampel  EDTA  (Mean=  3.98;  SD= 0.13),  namun  perbedaan  mean  tersebut secara statistik tidak signifikan (p>0.05).  Dapat  disimpulkan  ketiga sampel bisa digunakan untuk menggantikan  satu  dengan  lainnya sebagai alternatif sampel yang sebanding  untuk  mengukur  derajat aglutinasi golongan darah ABO metode cell grouping .
Tabel 4.3 Perbedaan Mean Derajat Aglutinasi Antara 3 Teknik: NaCl, Beku, Dan EDTA (Diuji Dengan Oneway Anova )
Metode n Mean SD p NaCl 60 3.88 0.32 0.090 Beku 60 3.93 0.25 EDTA 60 3.98 0.13
Tabel  4.4    menunjukkan  terdapat perbedaan  mean  derajat  agutinasi  yang sangat  kecil  antara  pasangan-pasangan sampel  NaCl, sampel beku, dan sampel EDTA,  dan  perbedaan  mean  tersebut
secara statistik tidak signifikan (p>0.05).  Dapat  disimpulkan  ketiga sampel  bisa  menggantikan  satu  dengan lainnya sebagai alternatif yang sebanding  untuk  mengukur  derajat aglutinasi.
Tabel  4.4 Perbedaan  Mean  Derajat  Aglutinasi  Pasangan  Sampel,  Antara  Tiga  Sampel:  NaCl, Beku, Dan EDTA (Diuji Post-Hoc Test Bonferoni)
Sampel 1 Sampel 2 Beda Mean p NaCl Beku 0.05 0.545 NaCl EDTA 0.10 0.090 Beku EDTA 0.05 0.545 Tabel 4.3  perbedaan  mean derajat aglutinasi ketiga teknik
penanganan  dan  penyimpanan  sampel, dapat  menjawab  pertanyaan  perbedaan derajat  aglutinasi  dalam  penentuan golongan  darah  dengan  jenis    sampel yang berbeda. Meskipun adanya penyulit  pada  penelitian  di  awal,  hal tersebut  dapat  menjadikan  masukan dalam  praktek  kerja  sehari-hari  di laboratorium hematologi bahwa
penyimpanan  sampel  di  refrigerator, harus betul memperhatikan suhu,
sehingga tidak merusakkan sampel yang disimpan  di  dalamnya.  Pengukuran suhu  yang  menggunakan  termometer sederhana yang diletakkan dalam refrigerator,  hanya  sebagai  alat  ukur yang  dapat  membantu  dalam  proses monitoring,  tetapi  tanpa  adanya  alarm yang  memberikan  informasi  adanya ketidaksesuaian  suhu  yang  diinginkan, termometer  tak  lagi  dapat  membantu dalam  usaha  pencegahan  kerusakan bahan  pemeriksaan.  Suhu  refrigerator dipengaruhi  dari  pengaturan  suhu, jumlah  barang  yang  disimpan,  luas regrigerator, suhu ruangan dan
frekuensi  buka  tutup  pintu  refrigerator.
Proses penyimpanan
sampel, merupakan  salah  satu  faktor  praanalitik yang  harus  diperhatikan  analis  dalam usaha  menjamin  validitas  pemeriksaan. Perbedaaan  sampel  dalam  pembuatan suspensi  sel  darah  merah  dalam penelitian  ini  tidak  mempengaruhi derajat  aglutinasi  uji  golongan  darah ABO,  sehingga  ketiga  sampel  ini  dapat dipergunakan dalam pembuatan suspensi darah.
Pemilihan  sampel  ini  dapat merujuk  kebutuhan  tiap  laboratorium yang  menyelenggarakan  pemeriksaan, dimana  sesuai  standar  operasional  yang ditetapkan sebelumnya penggunaan darah  segar  langsung  dicampurkan dengan NaCl 0,9% yang telah dipersiapkan  sebelumnya,  masih  sangat memungkinkan dikerjakan pada
laboratorium  dan  mengandalkan  tenaga analis  yang  terampil  dalam  praktek kerja.  Pada  laboratorium  pendidikan, dimana mahasiswa membutuhkan waktu  lebih  lama  dalam  pengambilan sampel,  maka  alternatif  penggantian
jenis sampel dalam pembuatan suspensi sel  darah  merah  merupakan  salah  satu solusi yang memungkinkan.
Tabel 4.3  menunjukkan terdapat perbedaan mean derajat agutinasi antara 3  teknik  pembuatan  suspensi  dengan sampel  NaCl  (Mean=  3.88;  SD=  0.32), sampel  beku  (Mean=  3.93;  SD=  0.25), dan  sampel  EDTA  (Mean=  3.98;  SD= 0.13),  namun  perbedaan  mean  tersebut secara statistik tidak signifikan (p>0.05) sehingga  dapat  disimpulkan  ketiga sampel bisa digunakan untuk menggantikan  satu  dengan  lainnya sebagai alternatif sampel yang sebanding  untuk  mengukur  derajat aglutinasi  golongan darah ABO metode cell grouping . Sebuah
metode pemeriksaan akan lebih menguntungkan jika  lebih  sederhana,  tidak  memakan waktu,  bisa  lebih  fleksibel  dalam pengaturan  waktu,  dan  tidak  memakan biaya  yang  besar  dengan  penggunaan bahan-bahan  seperti  antikoagulan  dan sebagainya.  Meski  demikian  pemilihan sampel  juga  dapat  terkait  dengan rangkaian  pemeriksaan  yang  harus dilakukan  oleh  pasien,  semisal  pasien membutuhkan  pemeriksaan  darah  rutin dan  juga  uji  golongan  darah,  maka sediaan  darah  dengan  antikoagulan EDTA menjadi sebuah pilihan, sedangkan jika permintaan uji golongan darah ini dilakukan dimana sampel yang tersedia  sampel  darah  beku  dengan penyimpanan 24 jam tetap masih  dapat digunakan,  tanpa  khawatir  bahwa  hasil pemeriksaan akan terpengaruh.

## KESIMPULAN
Mean  derajat  aglutinasi  antara  3 teknik  pembuatan  suspensi  dengan sampel  NaCl  (Mean=  3.88;  SD=  0.32), sampel  beku  (Mean=  3.93;  SD=  0.25), dan  sampel  EDTA  (Mean=  3.98;  SD= 0.13),  namun  perbedaan  mean  tersebut secara statistik tidak signifikan (p>0.05),  sehingga  dapat  disimpulkan ketiga  jenis  sampel  bisa  digunakan untuk menggantikan satu dengan lainnya  sebagai  alternatif  sampel  yang sebanding  dalam  pembuatan  suspensi sel darah merah untuk mengukur derajat aglutinasi golongan darah ABO metode cell grouping .

## DAFTAR PUSTAKA
Blaney,  K.  and  Howard,  P.  2013. Basic  & Applied  Concepts  of  Blood  Banking and Transfusion Practices 3rd Edition . Tissue  Typing  Laboratory,  Florida Hospital;  OneBlood,  Inc.,  Orlando, Florida.
Handono,  J.,  Wijaya,  S.K.,  Ibrahim,  A.S.  2017. Deteksi  Aglutinasi  Secara  Otomatis Untuk  Uji  Golongan  Darah  Tipe  ABO Berbasis  Kertas. Jurnal  Sains  dan Teknologi. 1(1):15-25. Kiswari,  R.  2014. Hematologi  dan  Transfusi . Jakarta: PT. Gelora Aksara Pratama Mulyantari, N.K., Yasa W.P.S. 2017. Laboratorium  Pra  Transfusi  Up  Date . Bali: Udayana University Press. Mutiawati,  V.K.,  2013.  Perbedaan  Derajat Aglutinasi Pemeriksaan Golongan Darah Antara Eritrosit Tanpa Pencucian  dengan  Pencucian  pada Penderita Talasemia. Jurnal Kedokteran Syiah Kuala . (2): 65-70. NIB.  2013. Guidance  Manual  on  ABO  and  Rh Blood  Grouping .  India:  Ministry  Of Health and Family Welfare. Riyanto A. 2011. Aplikasi Metodologi Penelitian  Kesehatan .  Bantul:  Nuha Medika.
Riswanto.  2013. Pemeriksaan  Laboratorium
Hematologi .  Yogyakarta:  Alfa  Media & Kana Medika. Sukorini,  U.,  Nugroho,  D.K.,  Rizki,  M..  2010. Pemantapan Mutu Internal Laboratorium Klinik . Yogyakarta: Alfa Media & Kana Medika. WHO.  2002. Detection  and  Identification  of Antibodies .  Safe  Blood  and  Blood Product. Genewa : WHO.