J. Kartika Kimia , November 2023, 6, (2), 145-155 Journal homepage : http://jkk.unjani.ac.id/index.php/jkk P-ISSN: 2655-1322     E-ISSN: 2655-0938

## Standardisasi  Ekstrak Buah Ceremai (Phyllanthus Acidus L. Skeels) dan Aktivitas Inhibisi Enzim Elastase
Standardization of Ceremai Fruit Extract (Phyllanthus acidus L. Skeels) and Elastase Enzyme Inhibition Activity
Eneng Elda Ernawati 1* , Nani Suryani 2 , Sifa Nuramalia 1 , Anisah 1 , Rd. Widya Yustika 1 1 Program Studi Farmasi, Fakultas Sains, Farmasi dan Kesehatan, Universitas Mathla’ul Anwar Banten, Indonesia
2 Program Studi Kimia, Fakultas Sains, Farmasi dan Kesehatan, Universitas Mathla’ul Anwar Banten, Indonesia *E-mail: eldaernawati090291@gmail.com
DOI: https://doi.org/10.26874/jkk.v6i2.225
Received : 29 Oct 2023, Revised : 20 Jan 2024, Accepted : 20 Jan 2024, O nline : 28 Jan 2024

## Abstrak
Salah  satu  cara  agar  khasiat  dan  kualitas terjamin,  maka  perlu  dipenuhi  suatu  standar  mutu  produk/bahan obat  dengan  melakukan  standardisasi  ekstrak.  Ekstrak    distandardisasi    dengan    dua    parameter    yaitu parameter  spesifik  dan  non spesifik.  Buah ceremai ( Phyllanthus acidus ) diperkirakan mempunyai aktivitas inhibitor  enzim  elastase  karena  mengandung  vitamin  C  dan  flavonoid.  Enzim  elastase  berfungsi  dalam elastisitas kulit. Penelitian ini bertujuan untuk menetapkan standardisasi ekstrak buah ceremai ( P. acidus ) dan aktivitas inhibisi enzim elastase. Sampel diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut 70%. Parameter  dalam  penentuan  standardisasi  ekstrak  adalah  parameter  spesifik  dan  non  spesifik.  Aktivitas inhibisi  enzim  elastase  dianalisis  dengan  metode  ELISA  menggunakan  kontrol  positif  retinol.  Hasil penentuan standardisasi ekstrak parameter spesifik kadar sari larut air 65,57%, kadar sari larut etanol 27,875. Parameter non spesifik penetapan kadar air 9,17%, penetapan kadar abu total 5,68%, penetapan kadar abu yang tidak larut asam 1,5%, penetapan sisa pelarut 0,01%, penetapan cemaran mikroba ALT dan AKK 10 -1 , pemeriksaan logam berat dengan hasil tidak terdeteksi. Hasil skrining fitokimia ekstrak buah ceremai (EBC) positif mengandung senyawa flavonoid, tanin, saponin, alkaloid, steroid dan fenolik.  Aktivitas inhibisi enzim elastase ekstrak buah ceremai (EBC) menghasilkan rataan nilai IC 50 sebesar 281,09 ± 11,3 µg/mL dan retinol sebagai kontrol positif dengan rataan nilai IC 50 23,81 ± 0,4 µg/mL. Simpulan penelitian ini ialah berdasarkan pengujian standardisasi parameter spesifik dan non-spesifik, ekstrak buah ceremai (EBC) memenuhi standar kualitas  bahan  baku  dan  ekstrak  buah  ceremai  (EBC)  memiliki  aktivitas  inhibisi  enzim  elastase  kategori lemah.
Kata kunci: elastase , Phyllantus acidus, standardisasi ekstrak

## Abstract
One way to ensure that efficacy and quality are guaranteed is that a  product/medicinal ingredient quality standard needs to be met by standardizing the extract. Ceremai fruit (Phyllantus acidus) is thought to have elastase  enzyme  inhibitor  activity  because  it  contains  vitamin  C  and  flavonoids.  The  elastase  enzyme functions in skin elasticity. This research aims to determine the standardization of ceremai fruit extract (P. acidus) and the inhibitory activity of the elastase enzyme. The sample was extracted using the maceration method using 70% solvent. Parameters in determining extract standardization are specific and non-specific. The  inhibitory  activity  of  the  elastase  enzyme  was  analyzed  using  the  ELISA  method.  The  results  of determining  the  standardization  of  extract-specific  parameters,  the  water-soluble  essence  content  was 65.57%, and the ethanol-soluble essence content was 27.875. Non-specific parameters for determining water content  9.17%,  determining  total  ash  content  5.68%,  determining  acid  insoluble  ash  content  1.5%, determining residual solvent 0.01%, determining microbial contamination ALT and AKK 10-1, heavy metal examination  with  undetectable  results.  Ceremai  fruit  extract  (EBC)  is  positive  for  containing  flavonoids, tannins, saponins, alkaloids, steroids, and phenolic compounds. The elastase enzyme inhibitory activity of
ceremai fruit extract (EBC) resulted in an average IC50 value of 281.09 ± 11,3µg/mL and retinol with an average IC50 value of 23.81 ± 0,4 µg/mL. This research concludes that based on standardization testing of specific and non-specific parameters, ceremai fruit extract meets raw material quality standards and ceremai fruit extract (EBC) has weak category elastase enzyme inhibitory activity.

## Keywords: elastase, Phyllanthus acidus, standardization of extracts

## 1 Pendahuluan
Indonesia  merupakan  negara    kaya  akan sumber  daya  hayati  yang  beraneka  ragam  dan bermanfaat. Sumber  kekayaan  alam  di  antaranya berasal dari tumbuh-tumbuhan yang bisa dimanfaatkan untuk kesehatan dan juga kecantikan [1]. Penggunaan produk herbal berupa obat, suplemen maupun kosmetika telah meningkat  baik  di  negara  berkembang  maupun negara  maju,  sehingga  potensi  dan  peluang penggunaan produk herbal masih sangat luas [2]. Salah satu cara agar khasiat dan kualitas terjamin, maka  perlu  dipenuhi  suatu  standar  mutu produk/bahan obat dengan melakukan standardisasi ekstrak [3]. Ekstrak  distandardisasi dengan  dua  parameter  yaitu  parameter  spesifik dan  non spesifik [4]. Agar  khasiat  dan  kualitas ekstrak  buah  ceremai  ( Phyllantus  acidus )  ini dapat    terjamin,    maka    perlu    dipenuhi    suatu standar    mutu    produk/bahan  ekstrak  dengan melakukan standardisasi ekstrak.
Ceremai  adalah  tumbuhan  termasuk  genus Phyllanthus yang  merupakan  genus terbesar  dari Phyllanthaceae,  dengan  1270  spesies  [5].  Secara farmakologis P.  acidus digunakan  sebagai antimikroba  [6],  antibakteri  [7],  antiinflamasi, antikanker  [8],  antidiabetes  [9],  dan  antioksidan [10–12]. Ekstrak etanol buah P.acidus ditemukan kandungan total fenolik dan total flavonoid  setara dengan  3,19  mg gallic  acid  equivalent (GAE/g) dan  2,58  mg  setara  dengan quercetin  equivalent (QE/g)  dan  kandungan  vitamin  C  102,58  µg AAE/g  [13].  Nilai  IC 50 berdasarkan  pada penghambatan  DPPH  yaitu  IC 50 28,26  ±  0,39 µg/mL  [9].  Ekstrak  metanol  buah P.  acidus mempunyai  aktivitas  antioksidan  yang  kuat dengan  nilai  IC 50 5,96  µg/mL  [14].  Hasil penelitian sebelumnya menunjukkan ekstrak buah ceremai  memiliki  aktivitas  antioksidan  dengan nilai  IC 50 sebesar  76,75  µg/mL  (kategori  kuat) [15]. Radiasi  UV  dapat  menyebabkan  kerusakan DNA dan menginduksi stres oksidatif. Faktor ini meningkatkan sintesis dan aktivitas protease yang menurunkan Extra Celluler Matrix (ECM),  yang terdiri dari kolagen  dan  serat  elastin  [16].  Faktor Reactive Oxygen  Species  (ROS) ataupun  paparan sinar  UV  yang  berlebihan  akan mempercepat proses  aktivasi  enzim  elastase  yang merupakan
satu-satunya  enzim  yang  mampu mendegradasi elastin.  ROS  mampu  menyebabkan  penuaan  dini dengan  cara  menghilangkan  elastisitas  kulit sehingga  kulit  menjadi  keriput,  kendur,  dan mengalami  pigmentasi.  Enzim  elastase  berfungsi dalam  elastisitas  kulit.  Selama  proses aging , elastisitas  kulit  berkurang  oleh  enzim  elastase yang  menyebabkan  kulit  kendur  [17].  Buah P. acidus diperkirakan mempunyai aktivitas inhibitor enzim elastase karena mengandung vitamin C dan flavonoid  seperti  dihidrokuersetin,  kuersetin  dan mirisetin  [18].  Vitamin  C  banyak  dilaporkan sebagai antioksidan dan agen pencerah. Senyawa fenolik  dan  flavonoid  adalah  golongan  metabolit sekunder  yang  populer  digunakan  sebagai antioksidan  [19],  di  mana  antioksidan  ini  dapat mengurangi  atau  memperlambat  proses aging . Sumber  antioksidan  yang  terdapat  di  alam  di antaranya terdapat pada buah ceremai ( P. acidus ). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menetapkan standardisasi ekstrak buah ceremai ( P. acidus ) dan aktivitas inhibisi enzim elastase dengan menggunakan ELISA.

## 2 Metode Penelitian

## 2.1 Alat
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  alat  gelas laboratorium,  neraca  analitik, rotary  evaporator (IKA  RV  10,  Germany),  dehidrator  (Kriss), multiwell plate reader (ELISA) (Bio-Rad).

## 2.2 Bahan
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  buah  ceremai  ( P.  acidus ) berdasarkan  hasil  determinasi  dengan  Nomor  B- 1194/IPH.3./KS/X/2020,  akuades,  etanol  70%, DMSO,  buffer  HEPES,  NaCl,  Tween,  Enzim Neutrophil  elastase,  substrat  (MeOSuc-Ala-Ala- Pro-Val- pNA, 100 μM).

## 2.3 Prosedur Kerja

## 2.3.1 Ekstraksi
Sejumlah 1000 g serbuk simpilisa diekstraksi secara  maserasi  dengan  pelarut  etanol  70% sebanyak  1000  mL  selama  3  x  24  jam.  Maserat yang  terkumpul  dipekatkan  dengan rotary evaporator pada suhu 40 o C .
2.3.1 Pemeriksaan parameter mutu ekstrak [1] a. Parameter Spesifik
1) Organoleptik Pemeriksaan  organoleptik  terhadap  ekstrak dilakukan menggunakan panca indera dengan mengamati bentuk, konsistensi, bau, rasa dan warna dari ekstrak.
2) Penetapan  kadar  senyawa  terlarut  dalam etanol
Sebanyak  5  g  ekstrak  dimaserasi  selama  24 jam  dengan  100  mL  etanol  96%,  kocok selama 6 jam pertama dan didiamkan 18 jam berikutnya.  Saring  secara  cepat,  untuk menghindari  penguapan  etanol,  kemudian uapkan  20  mL  filtrat  hingga  kering  dalam cawan  dangkal.  Panaskan  residu  pada  suhu 105ºC  hingga  bobot  tetap.  Hitung  kadar dalam persen.
3) Penetapan kadar senyawa terlarut dalam air Sebanyak  5  g  ekstrak  dimaserasi  selama  24 jam dengan 100 mL air - kloroform, dikocok selama 6 jam pertama dan didiamkan 18 jam berikutnya. Kemudian  estrak disaring, uapkan  20  mL  filtrat  hingga  kering  dalam cawan,  panaskan  residu  pada  suhu  105ºC hingga  bobot  tetap.  Hitung  kadar  dalam persen.
b. Parameter non spesifik
1) Penetapan kadar air Sebanyak  50  mg  ekstrak  ditetapkan  kadar airnya dengan menggunakan metode titrimeter Karl Fischer. Prinsip penetapannya yaitu  sampel  dititrasi  dengan  larutan  iodin dalam metanol. Konsentrasi air dalam contoh dapat ditetapkan secara elektrometrik.
2) Penetapan kadar abu total Abu  didihkan  dengan  25  mL  asam  sulfat encer  selama  5  menit,  kumpulkan  bagian yang  tidak  larut  dalam  asam,  saring menggunakan  kertas  saring  bebas  abu,  cuci dengan  air  panas,  pijarkan  hingga  bobot tetap, kemudian timbang dan hitung.
3) Penetapan sisa pelarut Percobaan  ini  ditetapkan  menggunakan metode kromatografi Gas-Cair. Alat dilengkapi dengan detektor ionisasi nyala dan kolom  kaca  1,8  m  x  4  mm  berisi  fase  diam dengan ukuran partikel 100 mesh hingga 120 mesh yang dialirkan TR-wax.
4) Penetapan kadar abu yang tidak larut asam Abu  yang  sebelumnya  diperoleh  pada penetapan  kadar  abu  total,  didihkan  dengan 25  mL  asam  sulfat  encer  selama  5  menit, kumpulkan  bagian  yang  tidak  larut  dalam asam, saring menggunakan krus kertas saring bebas  abu,  cuci  dengan  air  panas,  pijarkan hingga bobot tetap, kemudian timbang.
5) Penetapan cemaran mikroba Percobaan  dilakukan  dengan  metode  media agar padat (Angka Lempeng Total dan Angka Kapang Khamir).
6) Uji logam berat Sebanyak 0,5 g ekstrak dimasukkan ke dalam labu Erlemmeyer, lalu ditambahkan HNO 3 P dan  H 2 O 2 30  %.  Kemudian  destruksi  dan diamkan  pada  suhu  kamar,  pindahkan  ke dalam  labu  ukur  50  mL  dan  tambahkan akuades  sampai  tanda  batas.  Standar  jika larutan  keruh,  kemudian  masukan  ke  dalam tabung  reaksi.  Lakukan  pengukuran  larutan uji  menggunakan  ICP-OES  hitung  kadar Pb,Cd dan Hg.
2.3.2 Skrining Fitokimia [2]
1) Uji senyawa Flavonoid
Sebanyak  0,1  gram  ekstrak  ditambahkan  10 ml air panas kemudian disaring. Sebanyak 10
ml filtrat ditambahkan 0,5 g serbuk Mg, 1 ml HCl pekat, dan 1 ml amil alkohol. Uji positif terhadap flavonoid ditandai dengan munculnya warna merah, kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol.
2) Senyawa saponin Sebanyak 0,5 g ekstrak dimasukkan ke dalam tabung  reaksi  kemudian  ditambahkan  1  mL aquadest  hangat  kemudian  digojog  kuat selama  ±  1  menit.  Terdapatnya  saponin ditandai  dengan  terbentuknya  buih  yang mantap  setinggi  1  hingga  10  cm.  Pada penambahan  1  tetes  asam  klorida  2  N  buih tidak hilang.
3) Uji senyawa tanin Sebanyak  0,5  g  ekstrak  ditimbang  dan dimasukkan  ke  dalam  gelas  kimia,  lalu ditambahkan 50 mL air panas kemudian aduk dan  saring.  Filtrat  dibagi  ke  dalam  3  tabung reaksi  dan  masing-masing  ditambahkan  10 tetes FeCl3 1%. Apabila terbentuk warna biru tua  atau  hitam  kehijauan  menunjukkan adanya tanin .
4) Uji steroid dan terpenoid
Sampel disari dengan eter, kemudian sari eter diuapkan hingga kering. Pada residu ditetesi larutan pereaksi Lieberman-Burchard.
Terbentuknya  warna  ungu  menunjukkan senyawa kelompok triterpenoid, bila terbentuk  warna  hijau-biru  menunjukkan adanya senyawa kelompok steroid.
5) Uji senyawa fenolik Sebanyak 1 gram sampel diekstrak dengan 20
mL  etanol  70%.  Ekstrak  sebanyak  1  mL kemudian ditambahkan 2 tetes larutan FeCl 3 5%. Pembentukan warna hijau atau hijau biru menunjukkan senyawa fenol dalam bahan.
6) Uji senyawa alkaloid Sebanyak  0,5  g  ekstrak,  ditambahkan  2  mL
HCl 2N dan 18 mL akuades, panaskan selama 2  menit,  dinginkan,  lalu  saring.  Kemudian filtratnya  dibagi  ke  dalam  6  tabung  reaksi, tiga  tabung  tambahkan  pereaksi  Mayer    20 tetes  dan  tiga  tabung  lainnya  ditambahkan pereaksi Wagner sebanyak 10 tetes. Apabila terbentuk  endapan  maka  sampel  tersebut mengandung  alkaloid,  dengan  pereaksi Mayer  terbentuk  endapan  putih  atau  kuning dan  dengan  pereaksi  Wagner  terbentuk endapan warna coklat

## 2.3.4 Uji Inhibisi Enzim Elastase
Pengujian  elastase  mengikuti  metode Desmiaty dkk [20] dan Nur dkk [21] dengan modifikasi. Untuk pengujian inhibisi elastase,  sampel  ditimbang  sebanyak  1  g dilarutkan  dalam  DMSO  100  mL,  larutan stok  ekstrak  10.000  ppm,  kemudian  20  µL larutan  sampel  diencerkan  dengan  65  µL larutan buffer (10 mM HEPES, 50 mM NaCl dan 0,05 % Tween 20 dalam DMSO) dalam mikroplate  96  well.  Sampel  diuji  dari konsenterasi 31,25-2000 ppm. 85 μL larutan buffer  sebagai  blanko  (kontrol  negatif). Enzim  Neutrophil  elastase  (2,2  μU/μL) ditambahkan  ke  dalam  larutan  sampel, larutan  kontrol  negatif  dan  inhibitor  kontrol sebanyak 10 μL. Diinkubasi selama 10 menit pada suhu 25 o C dan selanjutnya ditambahkan 5  μL  substrat  (MeOSuc-Ala-Ala-Pro-Val- pNA,  100  μM)  pada  setiap well kemudian diinkubasi  kembali  pada  suhu  25 o C  selama
20  menit.    Densitas  optikal  lubang  96- well
micro plate diukur pada panjang gelombang 401  nm  dengan  menggunakan multi-well plate reader (ELISA).  Persentase  aktivitas penghambatan elastase (A) dari setiap sampel dihitung  dari  selisih  nilai optical  density (OD)  ekstrak  dan  blanko  menggunakan persamaan 1.
𝐴 (%) = 𝑂𝐷 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 −𝑂𝐷 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘
𝑂𝐷 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 × 100% 3 Hasil dan Diskusi 3.1 Hasil ekstraksi buah ceremai Tabel 1. Hasil Ekstraksi Buah Ceremai Berat sampel (g) Pelarut (%) Bobot Ekstrak kental (g) Rendemen (%) 17,600 Etanol 70 % 299,9 29,99
Ekstraksi buah cermai menggunakan metode maserasi  dengan  pelarut  etanol  70%  sebanyak 1000 mL dan simplisia 1000 g. Metode maserasi dipilih  karena  digunakan  untuk  mengekstrak sampel yang relatif tidak tahan panas, menggunakan  etanol  70%  karena  sifatnya  lebih polar  sehingga  diharapkan  dapat  menarik  semua senyawa  yang  bersifat  polar  [22].  Pemekatan dilakukan  dengan  menggunakan vacuum  rotary evaporator pada  suhu  40 o C  dengan  putaran  60 rpm,  tujuannya  adalah  agar  golongan  senyawa yang  ada  pada  sampel  tidak  mudah  rusak  [23]. Hasil dari pembuatan ekstrak kental dapat dilihat pada (Tabel 1). Persen rendemen yang didapatkan EBC  sebesar  29,99  %.  Senyawa  metabolit sekunder  yang  terdapat  pada  EBC  lebih  banyak tersari  dalam  pelarut.  Berdasarkan  penelitian, ekstrak  etanol  96%  buah  ceremai  menghasilkan persen rendemen sebesar 7,717% [24].

## 3.2 Hasil standardisasi ekstrak buah ceremai
(EBC)
a. Parameter spesifik
Pemeriksaan organoleptik merupakan identifikasi  awal  dari  parameter  spesifik  dengan menggunakan  panca  indera  untuk  menentukan bau,  rasa,  warna  dan  bentuk  dari  ekstrak  buah cermai.  Hasil  pemeriksaan  ekstrak  secara organoleptis  ditunjukkan  pada  Tabel  2  Hasil pemeriksaan  menunjukkan  ekstrak  buah  ceremai memiliki  bentuk  yang  kental,  aroma  khas  asam ceremai, berwarna coklat.
Tabel 2. Hasil Uji Parameter Spesifik No Parameter uji Hasil 1 Organoleptis Bentuk Kental Warna Coklat Bau Khas asam Rasa Asam 2 Kadar sari larut air 65,57% 3 Kadar sari larut etanol 27,87%
b. Parameter non spesifik Penetapan kadar sari larut dalam air bertujuan untuk  memberikan  gambaran  awal  jumlah kandungan  senyawa  kimia  bersifat  polar  yang dapat diekstraksi. Prinsip kerja pada penetapan ini adalah  melarutkan  ekstrak  dengan  pelarut  air untuk  ditentukan  jumlah  senyawa  kandungan dengan  metode  gravimetri  yang  didasarkan  pada pengukuran  berat  pada  endapan  ekstrak  yang dihasilkan.  Hasil  rata-rata  yang  diperoleh  dalam
ekstrak  buah  cermai  sebesar  65,57%.  Penetapan kadar sari larut etanol bertujuan untuk mengetahui kadar  senyawa  yang  larut  dalam  etanol. Banyaknya senyawa aktif pada ekstrak yang larut dalam  etanol  disebabkan  sifat  dari  ikatan  pada etanol  yang  dapat  menyari  senyawa aktif  dengan berbagai  perbedaan  kepolaran.  Hasil  rata-rata yang  diperoleh  dari  ekstrak  buah  ceremai  adalah 27,87%.
Pengujian  kadar  air  digunakan  untuk mengukur  kandungan  air  yang  berada  di  dalam ekstrak  dengan  tujuan  memberikan  batasan minimal  atau  rentang  besarnya  kandungan  air dalam  suatu  ekstrak  [25]. Berdasarkan  hasil pengujian kadar air yang diperoleh EBC sebesar 9,17% dimana syarat mutu dari kadar air ini yaitu ≤10%.  Dari  hasil  pengujian  kadar  air  telah memenuhi persyaratan. Jika kandungan air tinggi akan  menyebabkan  pertumbuhan  kapang  dan jamur pada ekstrak.
Tabel 3. Hasil Uji Parameter Non Spesifik No Parameter uji Hasil Persyaratan 1 Penetapan kadar air 9,17% (≤ 10%) [26] 2 Penetapan kadar abu total 4,68% (≤ 10%) [27] 3 Penetapan kadar abu yang tidak larut asam 1,5% (≤ 10%) [27] 4 Penetapan sisa pelarut 0,01% (≤ 1%) [28] 5 Penetapan cemaran mikroba ALT 10 - 1 ≤ 106cfu/g [26] AKK 10 - 1 ≤ 104cfu/g [26] 6 Pemeriksaan logam berat Arsen (As) TD ≤ 5 mg/kg [26] Timbal (Pb) TD ≤ 10 mg/kg [26] Kadnium (Cd) TD ≤ 0,3 mg/kg [26]
Keterangan : TD : Tidak terdeteksi
Pengukuran  kadar  abu  total  dimaksudkan untuk mengukur semua abu yang terbentuk setelah proses perabuan.  Abu  yang  terbentuk  terdiri  dari abu  fisiologi  yang  merupakan  abu  yang  berasal dari  jaringan  tanaman  yang  dianalisis  dan  abu nonfisiologi  yang  berasal  dari  residu  eksternal, misalnya  pasir,  tanah,  atau  debu  yang  melekat pada  permukaan  tanaman  [29].  Penetapan  kadar abu total dilakukan untuk menentukan persentase kandungan  mineral  internal  dan  eksternal  yang berasal dari proses pembentukan simplisia sampai terbentuknya ekstrak kental. Semakin tinggi kadar abu  total  maka  kandungan  mineral  di  dalam ekstrak  semakin  banyak.  Kandungan  mineral dalam  suatu  bahan  dapat  berupa  garam-garam organik dari asetat, oksalat, pektat, asam malat dan garam-garam anorganik dari logam alkali, klorida,
karbonat,  fosfat  dan  sulfat  nitrat.  Mineral  juga dapat  berasal  dari  garam  kompleks yang  bersifat organis [30].
Hasil yang diperoleh dari uji kadar abu yaitu EBC  sebesar  4,86%    Dari  hasil  menunjukkan bahwa  EBC  telah  memenuhi  persyaratan  dari standar  kadar  abu  total.  Abu  tidak  larut  asam merupakan residu abu yang diperoleh setelah total abu  didihkan  dengan  asam  klorida,  sehingga menghasilkan bagian yang tidak larut [29]. Kadar abu  tidak  larut  asam  dapat  mengevaluasi  ekstrak terhadap  kontaminasi  mineral  eksternal  yang berasal dari luar seperti tanah dan pasir. Kadar abu dari  suatu  bahan  menunjukkan  kadar  mineral, kemurnian  serta  tingkat  kebersihan  dalam  proses pengolahan  suatu  produk  [31].  Semakin  tinggi kadar  abu  tidak  larut  asam  menunjukkan  adanya
kandungan mineral  baik  organik/anorganik,  serta kandungan  silikat  yang  berasal  dari  tanah  atau pasir, bahkan unsur logam perak, timbal maupun merkuri  akibat  kontaminan  lingkungan  sekitar yang diperlukan uji lebih lanjut untuk mengetahuinya [32].
Hasil  data  pengujian  kadar  abu  yang  tidak larut asam pada EBC diperoleh 1,59%. Pengujian sisa pelarut bertujuan untuk memberikan jaminan bahwa  selama  proses  tidak  meninggalkan  sisa pelarut  yang  seharusnya  tidak    boleh  ada  atau menunjukkan jumlah pelarut etanol sesuai dengan persyaratan, dan nilai yang dihasilkan menunjukkan  tingkat  kemurnian  suatu  sampel [33].  Dari  hasil  penetapan  kadar  etanol  dalam ekstrak  diperoleh  kadar  etanol  0,01%  pada  EBC hasil pemeriksaan tersebut memenuhi persyaratan batas maksimum sisa pelarut dalam etanol, yaitu ≤ 1%.    Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  yang diperoleh  dapat  digunakan  sebagai  bahan  baku sediaan  karena  mengandung  kadar  etanol  yang rendah [34].
Pengujian  cemaran  mikroba  termasuk  salah satu  uji  untuk  syarat  kemurnian  ekstrak.  Uji  ini mencakup  penentuan  jumlah  mikroorganisme yang diperbolehkan dan untuk menunjukkan tidak adanya  bakteri  tertentu  dalam  ekstrak  [35]. Uji angka lempeng total merupakan metode kuantitatif   yang   digunakan   untuk mengetahui jumlah   mikroba   pada   suatu sampel [36] . Data hasil pengamatan uji ALT dan AKK dapat dilihat pada (Tabel 3)  EBC menunjukkan tidak terdapat koloni  pada  cawan  pengenceran  terendah  yaitu 10 -1 cfu/g.  Hasil  tersebut  memenuhi  persyaratan untuk cemaran mikroba angka lempeng total <10 6 cfu/g, dan angka kapang khamir <10 4 cfu/g.
Logam  berat  adalah  logam-logam  yang memiliki  densitas  spesifik  lebih  dari  5  g/cm 3 . Cemaran  logam  berat  seperti  timbal,  arsen,  dan merkuri  pada  bahan  baku  ekstrak  sangat berbahaya karena  dapat  menyebabkan  keracunan di  dalam  tubuh  bila  melebihi  batas  yang ditentukan.  Hasil  pemeriksaan  cemaran  logam berat  ditunjukkan  pada  Tabel  3.  Hasil  data cemaran logam pada EBC tidak terdeteksi artinya memenuhi persyaratan kadar logam berat. Hal ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  aman  digunakan sebagai  bahan  baku  [31] . Penentuan  kandungan logam timbal (Pb) dan kadmium (Cd) pada ekstrak berguna  untuk  dapat  menjamin  bahwa  ekstrak tidak mengandung Pb dan Cd melebihi batas yang ditetapkan  karena  dapat  bersifat  toksik  terhadap tubuh.

## 3.3 Hasil Uji Skrining Fitokimia
Tabel 4. Data Hasil Uji Skrining Fitokimia Pengujian Pereaksi Pengamatan Hasil Flavonoid Lempeng Mg+HCl+ Amil alkohol Lapisan warna jingga pada amil alkohol ++ Tanin FeCl 3 Hitam kehijauan ++ Saponin H 2 O + HCl Timbul buih + Alkaloid Mayer Endapan putih + Wagner Endapan merah + Steroid Asetat anhidrat+ H 2 SO 4 Larutan berwarna hijau pekat ++ Fenolik FeCl 3 Hijau biru ++
Keterangan : + Hasil menunjukkan positif ++ Hasil menunjukkan positif sangat kuat
Berdasarkan  hasil  pengamatan  bahwa  EBC mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  yaitu flavonoid,  tanin,  saponin,  alkaloid,  steroid  dan fenolik.  Hasil  uji  flavonoid  menunjukkan  positif karena pengujian warna jingga pada lapisan amil alkohol.  Penambahan  Mg  dan  HCl  pekat  dalam metode  identifikasi  flavonoid  berfungsi  untuk mereduksi  inti  benzopiron  yang  terdapat  pada struktur  flavonoid  sehingga  terjadi  pembentukan garam  flavilium  [37].  EBC  menunjukkan  hasil positif  tanin  karena  menghasilkan  warna  hijau kehitaman.  Terbentuknya  warna  hijau  kehitaman pada sampel setelah dilakukan penambahan FeCl 3 kemungkinan  senyawa  tanin  akan  membentuk kompleks ion Fe 3+ [38]. Kandungan saponin pada EBC  menunjukkan  hasil  positif  ditandai  dengan terbentuknya  buih  yang  stabil.  Timbulnya  busa pada  uji  saponin  menunjukkan  adanya  glikosida yang  mempunyai  kemampuan  membentuk  buih dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lainnya  Penambahan HCl 2 N bertujuan untuk  menambah  kepolaran  sehingga  gugus hidrofil akan berikatan lebih stabil dan buih yang terbentuk menjadi stabil [39]. ekstrak menggunakan  HCl  pekat  dan  potongan  pita magnesium  menghasilkan  warna  jingga  pada lapisan  amil  alkohol.  Penambahan  Mg  dan  HCl pekat  dalam  metode  identifikasi  flavonoid berfungsi  untuk  mereduksi  inti  benzopiron  yang terdapat  pada  struktur  flavonoid  sehingga  terjadi pembentukan  garam  flavilium  35  [35].  EBC menunjukkan hasil positif tanin karena menghasilkan warna hijau kehitaman. Terbentuknya warna hijau kehitaman pada sampel setelah dilakukan penambahan FeCl 3 kemungkinan  senyawa  tanin  akan  membentuk kompleks ion Fe 3+ [38]. Kandungan saponin pada
EBC  menunjukkan  hasil  positif  ditandai  dengan terbentuknya  buih  yang  stabil.  Timbulnya  busa pada  uji  saponin  menunjukkan  adanya  glikosida yang  mempunyai  kemampuan  membentuk  buih dalam air yang terhidrolisis menjadi glukosa dan senyawa lainnya  Penambahan HCl 2 N bertujuan untuk  menambah  kepolaran  sehingga  gugus hidrofil akan berikatan lebih stabil dan buih yang terbentuk menjadi stabil [39].
Pada  uji  alkaloid  EBC  menggunakan  dua jenis pereaksi yaitu pereaksi Mayer dan Wagner. Alkaloid  merupakan  senyawa  yang  mengandung satu atau lebih atom nitrogen yang biasanya dalam bentuk  gabungan,  sebagian  adalah  bagian  dari sistem siklik. Hasil pengujian EBC menunjukkan positif alkaloid, ada endapan yang terbentuk pada pereaksi  Mayer  merupakan  kalium-alkaloid, karena  senyawa  alkaloid  mengandung  atom nitrogen  yang  mempunyai  pasangan  elektron bebas sehingga dapat digunakan untuk membentuk ikatan kovalen koordinat dengan ion logam.  Nitrogen  pada  alkaloid  akan  bereaksi dengan ion logam K + dari kalium tetraiodomerkurat  (II)  membentuk  kompleks kalium-alkaloid  yang  mengendap  [40].  Hasil positif alkaloid pada uji Wagner ditandai dengan terbentuknya endapan coklat. Diperkirakan endapan  tersebut  adalah  kalium  alkaloid.  Pada pembuatan  pereaksi  Wagner,  iodin  bereaksi dengan ion I - dari kalium iodida menghasilkan ion I 3 - yang  berwarna  coklat.  Pada  uji  Wagner,  ion logam  K + membentuk  ikatan  kovalen  koordinat dengan  nitrogen  pada  alkaloid  membentuk kompleks  kalium  alkaloid  yang  mengendap  [41] Identifikasi  senyawa triterpenoid dan steroid pada EBC  didasarkan  pada  kemampuan  senyawa triterpenoid membentuk warna oleh H 2 SO 4 dalam pelarut asam asetat anhidrid. Pada uji steroid/triterpenoid  diperoleh  hasil  yang  positif steroid  pada  EBC,  dengan  terbentuknya  larutan yang berwarna hijau pekat. Warna yang terbentuk disebabkan  gugus  OH  pada  steroid  bereaksi dengan  pereaksi  Liebermann-Burchard  dan meningkatkan ketidakjenuhan dalam batas penyatuan  cincin  [41].  Identifikasi  senyawa fenolik  dilakukan  dengan  mereaksikan  EBC dengan FeCl 3 sehingga menimbulkan warna hijau kehitaman  yang  merupakan  senyawa  kompleks polifenol dengan atom pusatnya yaitu Fe.

## 3.4 Hasil uji enzim elastase
Pada  pengujian  inhibisi  enzim  elastase metode yang digunakan adalah dengan mengamati reaksi  yang  terjadi  antara  enzim  elastase  dan substrat (MeOSuc-AAPV-pNA). Terjadinya
perubahan  warna  kuning  merupakan  indikator terjadinya  reaksi  inhibisi  enzim  elastase  [30]. Semakin  tinggi  kemampuan    sampel    untuk menghambat  aktivitas    elastase  maka    MeOSuc- AAPV-pNA  yang  terbentuk    akan    semakin rendah  terlihat  pada  warna  yang  dihasilkan  yaitu warna yang agak kuning / bening [42]. Mekanisme penghambatan enzim elastase oleh sampel diamati dengan mengukur serapan pada panjang gelombang  401  nm  menggunakan  ELISA ( Enzyme Linked Immunosorbent Assay ) [20].
Tabel 5. Data Hasil Inhibisi Enzim Elastase
Sampel Pengujian Nilai IC 50 Rataan Nilai IC 50 (µg/mL) Retinol 1 23,68 23,81 ± 0,4 2 23,27 3 24,50 EBC 1 269,68 281,09 ± 11,3 2 281,23 3 292,38
Retinol  digunakan  sebagai  kontrol  positif karena  memiliki  efek  antioksidan  dan  digunakan sebagai  senyawa anti  aging [43].  Retinol merangsang aktivitas fibroblas untuk mensintesis serat  kolagen,  memperbaiki  elastisitas  kulit dengan  menghilangkan  serat  elastin  yang terdegenerasi.  Retinol  dikenal  sebagai  molekul yang  memperbaiki  tekstur  kulit,  dispigmentasi, kekeringan,  dan  garis-garis  halus.  Konsentrasi retinol  dalam  produk  kosmetik  adalah  antara 0,0015%  dan  0,3%.  Efek  iritasi  retinol  dan ketidakstabilannya adalah faktor pembatas penggunaannya  dalam  produk  kosmetik    [44]. Pada  Tabel  4  EBC  menunjukkan    penghambatan elastase  yang  menghasilkan  nilai  IC 50 sebesar 281,09  µg/mL  .  Hal  ini  diduga  karena  di  dalam EBC  memiliki  senyawa  seperti    fenolik,  vitamin C,  alkaloid,    tanin,  seskuiterpen  dan  flavonoid yang dapat bekerja sinergis menghambat aktivitas enzim  elastase  [13] . Buah P.  acidus juga dilaporkan  mengandung  senyawa  asam  glikolat dan asam sitrat yang termasuk ke dalam golongan senyawa AHA ( Alpha Hydroxy Acid ) [45]. AHA dapat  mengurangi  proses  penuaan  dengan  cara meningkatkan  sintesis  glikosaminoglikan  dan sebagai exfoliator yang berfungsi untuk mengangkat  tumpukkan  sel  kulit  mati  pada permukaan kulit. Dengan demikian jika dibandingkan  dengan  kontrol  positif  (retinol) dengan  nilai  IC 50 yang  dihasilkan  sebesar  23,81 µg/mL  dapat  disimpulkan  bahwa  EBC  memiliki
aktivitas penghambatan elastase yang lebih rendah dibandingkan dengan kontrol positif.

## 4 Kesimpulan
Penentuan  standardisasi  ekstrak  parameter spesifik  kadar  sari  larut  air  65,57%,  kadar  sari larut  etanol  27,875.  Parameter  non  spesifik penetapan kadar  air  9,17%,  penetapan  kadar  abu total 5,68%, penetapan kadar abu yang tidak larut asam  1,5%,  penetapan  sisa  pelarut  0,01%, penetapan cemaran mikroba ALT dan AKK 10-1 pemeriksaan  logam  berat  dengan  hasil  tidak terdeteksi.  Hasil  skrining  fitokimia  ekstrak  buah ceremai  (EBC)  positif  mengandung  senyawa flavonoid,  tanin,  saponin,  alkaloid,  steroid  dan fenolik.  Aktivitas  inhibisi  enzim  elastase  ekstrak buah  ceremai  (EBC)  menghasilkan  rataan  nilai IC 50 sebesar  281,09  ±  11,3  µg/mL  dan  retinol sebagai  kontrol  positif  dengan  rataan  nilai  IC 50 23,81 ± 0,4 µg/mL. Simpulan penelitian ini ialah berdasarkan  pengujian  standardisasi  parameter spesifik  dan  non-spesifik,  ekstrak  buah  ceremai (EBC) memenuhi standar kualitas bahan baku dan ekstrak  buah  ceremai  (EBC)  memiliki  aktivitas inhibisi enzim elastase kategori lemah.

## Ucapan Terima Kasih
Terimakasih kepada
Kementerian,
Pendidikan,  Kebudayaan,  Riset  dan  Teknologi (KEMENDIKBUDRISTEK)  atas  bantuan  dana penelitian dengan Nomor 015/SP2H/PPM/ B2/LL4/2023  sehingga  penelitian  ini  bisa terlaksana.

## Daftar Pustaka
[1] Setyani, I.K., Wahyono, W. and Sulaiman,
T.N.S.  2021.  Standardisasi  Simplisia  dan Ekstrak Buah Kemukus (Piper cubeba Lf.) Sebagai Bahan Baku Sediaan Kapsul Jamu
Sesak Nafas. JPSCR: Journal of Pharmaceutical  Science  and  Clinical Research , Universitas Sebelas Maret. 6 (3)
238. 10.20961/jpscr.v6i3.50372
[2] Djoko,  W.,  Taurhesia,  S.,  Djamil,  R.  and Simanjuntak,  P.  dkk.  2020.  Standardisasi Ekstrak  Etanol  Herba  Pegagan  (Centella asiatica). Sainstech Farma , 13 (2) 118–23.
[3] Ulfah, M., Salsabilla, D. and Sukawati, E. 2019.  STANDARISASI  NON  SPESIFIK EKSTRAK  ETANOL  DAUN  KECAPI
(Sandoricum koetjape Merr.) DAN EKSTRAK ETANOL DAUN KELUWIH
(Artocarpus  communis). JIFFK :  Jurnal
Ilmu  Farmasi  Dan  Farmasi  Klinik ,
Universitas  Wahid  Hasyim  Semerang.  16
(02) 20. 10.31942/jiffk.v16i02.3123
[4] Yuliana, C., Ceriana, R. and Shafriyani, R. 2022.  Standarisasi  Mutu  Ekstrak  Etanol Bunga Soka (Ixora coccinea L.). Journal of Pharmaceutical  and  Health  Research ,
Forum  Kerjasama  Pendidikan  Tinggi (FKPT). 3 (1) 1–5. 10.47065/jharma.v3i1.1322 [5] Tan,  S.-P.,  Tan,  E.N.-Y.,  Lim,  Q.-Y.  and Nafiah,  M.A.  2020.  Phyllanthus  acidus (L.) Skeels: A review of its traditional uses, phytochemistry, and pharmacological properties. Journal of Ethnopharmacology ,  Elsevier  BV.  253 112610. 10.1016/j.jep.2020.112610
[6] Angamuthu,  J.,  Ganapathy,  M.  and Evanjelene,  V.K.  2016.  Evaluation  of
Antioxidant Activity of Phyllanthus Acidus. WwwWjppsCom ,  5  (10)  1011. 10.20959/wjpps201610-7838
[7] Habib,  Md.R.,  Rahman,  M.,  Mannan,  A., Md.  Zulfiker,  A.H.,  Uddin,  M.E.  and
Sayeed,  M.A.  2011.  Evaluation  of antioxidant, cytotoxic, antibacterial potential  and  phytochemical  screening  of chloroform  extract  of  Phyllanthus  acidus. International  Journal  of  Applied  Biology and Pharmaceutical Technology , 2 420–7.
[8] Priya,  N.P.  and  Poonguzhali,  T.  V.  2014. Invitro  anti  inflammatory  and  anticancer potential  from  the  acetone  extract  of fruit of Phyllanthus acidus.L. World Journal of Pharmaceutical Research , 3 (9) 1313–36.
[9] Chigurupati,  S.  2020.  Antioxidant  and antidiabetic  properties  of  Phyllanthus acidus  (L.)  Skeels  ethanolic  seed  extract. International  Food  Research  Journal ,  27 (4) 775–82.
[10] Andrianto,  D.,  Widianti,  W.  and  Bintang, M.  2017.  Antioxidant  and  Cytotoxic Activity  of Phyllanthus  acidus Fruit Extracts. IOP  Conference  Series:  Earth and Environmental Science , IOP
Publishing.  58  12022.  10.1088/1755- 1315/58/1/012022
[11] K,  P.C.,  Channarayapatna-Ramesh,  S., Kujur,  S.,  L,  B.G.,  C,  M.M.  and Udayashankar, A.C. 2018. Evaluation of in Vitro Antioxidant Potential of Phyllanthus
Acidus Fruit. 4 (30) 30–41. 10.26479/2018.0406.03
[12] Rahman,  M.,  Habib,  Md.R.,  Hasan,  R., Sayeed,  M.A.  and  Rana,  M.  2011. Antibacterial,  cytotoxic  and  antioxidant potential of methanolic extract of phyllanthus acidus L. International Journal  of  Drug  Development  and Research , 3 154–61.
[13] Sulaiman,  S.F.  and  Ooi,  K.L.  2014. Antioxidant  and  α-Glucosidase  Inhibitory Activities  of  40  Tropical  Juices  from Malaysia  and  Identification  of  Phenolics from  the  Bioactive  Fruit  Juices  of
Barringtonia  racemosa and Phyllanthus acidus . Journal  of  Agricultural  and  Food Chemistry ,  American  Chemical  Society (ACS). 62 (39) 9576–85. 10.1021/jf502912t
[14] Foyzun,  T.,  Aktar,  K.  and  Ashraf  Uddin, M.  2016.  Evaluation  of  Antioxidant, Cytotoxic  and  Antimicrobial  Activity  of Phyllanthus  acidus. International  Journal of  Pharmacognosy  and  Phytochemical Research , 8 1751–8.
[15] Ernawati,  E.E.,  Farida,  Y.  and  Taurhesia, S.  2021.  Formulasi  Serum  Antioksidan
Kombinasi  Ekstrak  Buah  Ceremai  dan Kulit Buah Semangka. Majalah Farmasetika ,  Universitas  Padjadjaran.  6 (5) 398.
10.24198/mfarmasetika.v6i5.36080
[16] Rinnerthaler,  M.,  Bischof,  J.,  Streubel, M.K.,  Trost,  A.  and  Richter,  K.  2015. Oxidative  stress  in  aging  human  skin. Biomolecules ,  Switzerland.  5  (2)  545–89. 10.3390/biom5020545
[17] Azmi,  N.,  Hashim,  P.,  Hashim,  D.M., Halimoon,  N.  and  Majid,  N.M.N.  2014. Anti-elastase,  anti-tyrosinase  and  matrix metalloproteinase-1  inhibitory  activity  of earthworm  extracts as  potential  new  anti- aging  agent. Asian  Pacific  Journal  of Tropical  Biomedicine ,  China.  4  (Suppl  1) S348–52. 10.12980/APJTB.4.2014C1166
[18] Abd Ghafar, S.Z., Mediani, A., Maulidiani, Ramli, N.S. and Abas, F. 2018. Antioxidant,  α-glucosidase,  and  nitric oxide  inhibitory  activities  of  Phyllanthus acidus  and  LC–MS/MS  profile  of  the active  extract. Food  Bioscience ,  Elsevier
BV. 25 134–40. 10.1016/j.fbio.2018.08.009
[19] Dixit,  D.  and  Reddy,  C.R.K.  2017.  Non- Targeted  Secondary  Metabolite  Profile Study  for  Deciphering  the  Cosmeceutical Potential of Red Marine Macro Alga Jania rubens—An LCMS-Based Approach. Cosmetics ,  MDPI  AG.  4  (4)  45.
10.3390/cosmetics4040045
[20] Desmiaty,  Y.,  Saputri,  F.C.,  Hanafi,  M., Prastiwi,  R.  and  Elya,  B.  2020.  Anti- Elastase, Anti-Tyrosinase and  Anti- Oxidant  of  Rubus  Fraxinifolius  Stem
Methanolic Extract. Pharmacognosy Journal ,  EManuscript  Technologies.  12 (2) 271–5. 10.5530/pj.2020.12.42
[21] Nur, S., Rumiyati, R. and Lukitaningsih, E. 2017. SCREENING OF ANTIOXIDANTS,  ANTI-AGING  AND TYROSINASE INHIBITORY
ACTIVITIES  OF  ETHANOLIC  AND ETHYL  ACETATE  EXTRACTS  OF FRUIT  FLESH  AND  FRUIT  PEEL LANGSAT  (Lansium  domesticum  Corr) IN  VITRO. Majalah  Obat  Tradisional , Universitas  Gadjah  Mada.  22  (1)  63. 10.22146/tradmedj.24342
[22] Mutmainnah,  N.,  Chadijah,  S.  and Qaddafi,  M.  2018.  PENENTUAN  SUHU DAN WAKTU OPTIMUM PENYEDUHAN  BATANG  TEH  HIJAU (Camelia Sinensis L.) TERHADAP KANDUNGAN ANTIOKSIDAN KAFEIN,  TANIN  DAN  KATEKIN. Lantanida  Journal ,  Universitas  Islam Negeri Ar-Raniry. 6 (1) 1. 10.22373/lj.v6i1.1984 [23] Sari, A.K. and Ayati, R. 2018. PENENTUAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN  EKSTRAK  ETANOL
DAUN  JERUK  PURUT  (Citrus  hystrix D.C)  DENGAN  METODE  DPPH  (1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl). JCPS
(Journal  of  Current  Pharmaceutical Sciences);  Vol  1  No  2  (2018):  March 2018 ,.
[24] Junita,  M.,  Purwanti,  L.  and  Syafnir,  L. 2019.  Uji  Aktivitas  Tabir  Surya  Ekstrak Etanol dan Fraksi Buah Cereme
(Phyllanthus  acidus  (L.)  Skeels)  dengan
Metode Spektrofotometri UV-Sinar Tampak. Prosiding Farmasi , 5 (2).
[25] Purwoko, M.L.Y., Syamsudin and Simanjutak, P. 2020. Standardisasi
Parameter  Spesifik dan Nonspesifik
Ekstrak  Etanol  Daun  Kelor  (  Moringa oleifera ) Asal Kabupaten Blora. Sainstech
Farma Jurnal Ilmu Kefarmasian , 13 (2) 1– 15.
[26] Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan. 2014.  Peraturan  Kepala  Badan  Pengawas
Obat  dan  Makanan  Republik  Indonesia Nomor 12 Tahun 2014 Tentang Persyaratan Mutu Obat Tradisional. Jakarta. [27] Departemen Kesehatan RI. 2017. Farmakope Herbal Indonesia. Depaetemen
Kesehatan RI, Jakarta.
[28] Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan. 2019. Peraturan Badan Pengawas Obat dan Makanan  Nomor  32  Tahun  2019  tentang Persyaratan  Keamanan  dan  Mutu  Obat Tradisional. Jakarta.
[29] Purwantini,  SI.  2021.  Standarisasi  Obat Herbal.  Gadjah  Mada  University  Press, Yogyakarta.
[30] Marpaung,  M.P.  and  Septiyani,  A.  2020.
Penentuan Parameter Spesifik dan NonSpesifik Ekstrak Kental Etanol Batang
Akar  Kuning  (Fibraurea  chloroleuca Miers). Penentuan  Parameter  …  Journal of Pharmacopolium , 3 (2) 58–67.
[31] Ulfah, M., Kurniawan, R.C. and Erny, M. 2021.  STANDARDISASI  PARAMETER NON SPESIFIK DAN SPESIFIK EKSTRAK ETANOL DAUN JAMBLANG  (Syzygium  cumini  (L.) Skeels). Jurnal  Ilmu  Farmasi  Dan Farmasi Klinik , Universitas Wahid Hasyim Semerang. 17 (2) 35.
10.31942/jiffk.v17i2.4066
[32] Evifania,  R.D.,  Apridamayanti,  P.  and Sari,  R.  2020.  Uji  parameter  spesifik  dan nonspesifik  simplisia  daun  senggani (Melastoma  malabathricum  L.). Jurnal Cerebellum ,  Tanjungpura  University.  5 (4A) 17. 10.26418/jc.v6i1.43348
[33] Natanael, G. ias, Simorangkir, G.F., Purba, N.P., br. Tambunan, M.P., Nasution, A.N. and Amansyah, A. 2021. Potensi
Antioksidan  dan  Anti-elastase  Ekstrak
Daun  Kelor  (Moringa  Oleifera)  terhadap Antiaging. Jurnal Keperawatan Priority , 4
(1) 69–76. 10.34012/jukep.v4i1.1432
[34] Gangga,  E.,  Purwati,  R.,  Farida,  Y.  and Kartiningsih,  K.  2017.  Determination  of
Quality  Parameters  and  Antioxidant
Activity  of  Cincau  Hijau  Leaves  (Cyclea barbata
L.Miers.). Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia , Universitas Pancasila. 15 (2) 236. 10.35814/jifi.v15i2.525 [35] Pine,  T.A.D.,  Alam,  G.  and  Attamimi,  F. 2015.  Standardisasi  Mutu  Ekstrak  Daun Gedi  (Abelmoschus  manihot  (L.)  Medik) dan Uji Efek Antioksidan dengan Metode DPPH. JK FIK Uinam , 3 (3).
[36] Yuliastuti,  F.,  Lutfiyati,  H.,  Dianita,  P.S., Hapsari,  W.S.  and  Putri,  M.  2017. Identifikasi  Kandungan  Fitokimia  dan Angka  Lempeng  Total  (ALT)  Ekstrak Daun  Landep  (Barleria  prioritis  L.). University Research Colloquium , 389–96.
[37] Tandi, J., Melinda, B., Purwantari, A. and Widodo,  A.  2020.  Analisis  Kualitatif  dan Kuantitatif  Metabolit  Sekunder  Ekstrak
Etanol Buah Okra (Abelmoschus
esculentus  L.  Moench)  dengan  Metode Spektrofotometri  UV-Vis. KOVALEN:
Jurnal  Riset  Kimia ,  Fakultas  MIPA Universitas  Tadulako  Palu.  6  (1)  74–80. 10.22487/kovalen.2020.v6.i1.15044
[38] Nuraeni,  Y.  and  Darwiati,  W.  2021. Utilization of plant secondary metabolites as botanical pesticides in forest plant pests. Jurnal  Galam ,  Research,  Development and  Innovation  Agency,  Ministry  of Environment  and  Forestry.  2  (1)  1–15. 10.20886/glm.2021.2.1.1-15
[39] Simaremare, E.S. and Souisa, W.V. 2021. Uji  Aktivitas  Antihiperurisemia  Ekstrak
Daun  Gatal  (Laportea  decumana  (Roxb.) Wedd)  Asal  Papua. Pharmauho:  Jurnal Farmasi, Sains, Dan Kesehatan , Universitas  Halu  Oleo.  7  (1)  21. 10.33772/pharmauho.v7i1.14966
[40] Nugrahani,  R.,  Andayani,  Y.  and  Hakim, A.  2016.  SKRINING  FITOKIMIA  DARI EKSTRAK  BUAH  BUNCIS  (Phaseolus vulgaris L) DALAM SEDIAAN
SERBUK. Jurnal  Penelitian  Pendidikan
IPA , Universitas Mataram. 2 (1). 10.29303/jppipa.v2i1.38 [41] Adhariani, M., Maslahat, M. and Sutamihardja, R.T.M. 2018. KANDUNGAN FITOKIMIA DAN SENYAWA  KATINON  PADA  DAUN
KHAT  MERAH  (Catha  edulis). Jurnal Sains Natural , Universitas Nusa Bangsa. 8 (1) 35. 10.31938/jsn.v8i1.113
[42] Juliana,  C.,  Lister,  I.N.E.,  Girsang,  E., Nasution,  A.N.  and  Widowati,  W.  2020.
Antioxidant  and  Elastase  Inhibitor  from Black  Soybean  (Glycine  max  L.)  and  Its Compound (Daidzein). Journal of
Biomedicine  and  Translational  Research , Institute  of  Research  and  Community Services  Diponegoro  University  (LPPM UNDIP). 6 (1) 11–4. 10.14710/jbtr.v6i1.5540 [43] Puspita  Sari,  W.,  Nisa  Berawi,  K.  and Karima,  N.  2019.  Managemen  Topikal
Anti-Aging pada Kulit. Medula , 9 (1) 237– 43.
[44] Zasada,  M.  and  Budzisz,  E.  2019. Retinoids:  active  molecules  influencing skin  structure  formation  in  cosmetic  and dermatological treatments. Postepy Dermatologii  i  Alergologii ,  2019/08/30. Poland. 36 (4) 392–7. 10.5114/ada.2019.87443
[45] Indriatmoko, D., Suryani, N., Rudiana, T. and  Kurniah,  M.  2021.  Formulation  and physical  evaluation  of  facial  cream preparations  from  Ceremai  fruit  juice (Phyllanthus acidus (l.) Skeels). Pharmacy Education ,  International  Pharmaceutical Federation (FIP). 21 (2) 87–92. 10.46542/pe.2021.212.8792