Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Etanol, Fraksi Etanol, Etil-Asetat, dan Heksana Kulit Jeruk Purut ( Citrus hystrix DC.) terhadap Sel Kanker Payudara T47D
Cytotoxic Activity of Ethanolic Extract, Ethanolic, Acetic Acid and Hexane Fraction of Kaffir lime peels ( Citrus hystric DC.) against Breast Cancer Cells T47D
Isya Isma Nabilla, Peni Indrayudha*
Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Jl. A. Yani Tromol Pos 1 Pabelan, Kartasura, Sukoharjo, 57162, Indonesia *E-mail: peni.indrayudha@ums.ac.id

## Abstrak
Kulit jeruk purut (Citrus hystrix DC.) telah terbukti aktif terhadap sel HeLa. Penelitian ini bertujuan untuk menentukan aktivitas sitotoksik ekstrak etanol, fraksi etanol, etil asetat, dan heksana kulit jeruk purut (Citus hystrix DC.) pada sel kanker payudara T47D dan untuk mengidentifikasi kandungan senyawa yang terdapat dalam kulit jeruk purut (Citus hystrix DC.). Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi menggunakan etanol 96%. Hasil ekstrak kentalnya difraksinasi dengan metode partisi menggunakan pelarut heksana, etil asetat, dan etanol. Uji aktivitas sitotoksik dilakukan dengan metode MTT. Identifikasi senyawa dilakukan dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan fase diam silika GF 254. Fase gerak yang digunakan adalah heksana:etilasetat (6:4) untuk ekstrak etanol, fraksi etil asetat, dan heksana, serta heksana:etilasetat (4:6) untuk fraksi etanol. Hasil IC50 ekstrak etanol, fraksi etil asetat, dan heksana yang diperoleh berturut-turut sebesar 268,49,  286,82,  dan  136,27 g/mL.  Ekstrak  etanol,  fraksi  etil  asetat,  dan  heksana  mengandung  senyawa golongan alkaloid, flavonoid, terpenoid, dan fenolik, sedangkan fraksi etanol hanya mengandung senyawa golongan flavonoid. Hasil uji sitotoksik menunjukkan ekstrak etanol, fraksi etanol, etil asetat, dan n-heksana kulit jeruk purut tidak aktif terhadap sel kanker payudara T47D.
Kata Kunci : Citrus hystrix DC., fraksinasi, T47D, IC 50

## Abstract
Kaffir lime peels (Citrus hystric DC.) have been reported that it has activity on HeLa cell. The purpose of this study was to determine the cytotoxic activity of ethanol extract, ethanolic, ethyl acetate, and hexane fraction of kaffir lime peels to T47D breast cancer cells and to identify the compounds of kaffir lime peels (Citus hystrix DC.). Extraction was done by maceration using 96% ethanol. The results of thick extracts were fractionated by the liquid-liquid partition method using solvent with different polarity, namely hexane, ethyl acetate, and ethanol.  Cytotoxic  activity  tests  were  carried  out  using  the  MTT  assay.  Identification  of  compounds  were carried out by Thin Layer Chromatography (TLC) method with silica gel GF 254 as a stationary phase. The mobile phase used was hexane:ethylacetate (6:4) for ethanol extract, ethyl acetate and hexane fractions, and hexane:ethylacetate  (4:6)  for  ethanol  fractions.  IC 50 ethanol  extract,  ethyl  acetate  and  hexane  fractions obtained  were 268.49, 286.82, and 136.27  g/mL  respectively.  Ethanol extract,  ethyl acetate,  and hexane fractions contain alkaloid, flavonoid, terpenoid and phenolic compounds, while the ethanol fraction contains only flavonoid compound. Cytotoxic results of ethanol extract, ethanol, ethyl acetate, and hexane fraction of kaffir lime peels did not active against T47D breast cancer cells.
Keywords : Citrus hystrix DC.,  fractination, T47D, IC 50

## PENDAHULUAN
Kanker  adalah  suatu  penyakit  yang disebabkan oleh pertumbuhan dan proliferasi sel  yang  tidak  terkontrol.  Salah  satu  jenis kanker  adalah  kanker  payudara.  Kanker
payudara merupakan kanker yang terjadi pada lapisan sel duktus atau lobulus yang berfungsi untuk  mengalirkan  cairan  susu  (Kabel  dan Baali,  2015).  Di  Indonesia,  kanker  payudara merupakan kanker yang paling banyak terjadi
(KPKN, 2016). Prevalensi kanker payudara di Indonesia  sebesar  0,5%  atau  sekitar  61.682 orang (Kemenkes RI, 2016).
Terapi kanker payudara diberikan kepada pasien berdasarkan pada stadium kanker yang dideritanya.  Pilihan  terapi  yang  dapat digunakan  untuk  pasien  kanker  payudara antara lain kemoterapi, terapi target atau terapi biologi, radioterapi, dan pembedahan (KPKN, 2016). Akan  tetapi, kebanyakan obat antikanker bersifat tidak selektif dan memiliki efek  yang  tidak  diinginkan.  Efek  yang  tidak diinginkan  yang  sering  timbul  antara  lain mual, muntah, rambut rontok, dan sakit kepala (Aslam et al.. , 2014). Agen kemoterapi kanker seperti  doksorubisin  memiliki  efek  samping yang berupa kardiotoksisitas (Carvalho et al.., 2009). Selain itu, adanya resistensi sel kanker terhadap agen kemoterapi kanker mendorong pengembangan  terapi  obat  kanker  yang berasal dari bahan alam yaitu kulit jeruk purut ( Citrus hystrix DC.).
Kulit  jeruk  purut  ( Citrus  hystrix DC.) mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid, terpenoid,  dan  saponin  (Nathanael et  al.., 2015).  Flavonoid  memiliki  aktivitas  sebagai antioksidan dan antikanker (Devy, dkk. 2010 dan Tripoli et al.., 2006). Kandungan minyak atsiri  dalam  daun  jeruk  purut  memiliki aktivitas  antibakteri  (Yuliani, et  al. ,  2011). Ekstrak  etanol  kulit  jeruk  purut  telah  diteliti terhadap sel HeLa yang merupakan sel kanker leher rahim dengan nilai IC 50 sebesar 873,277  g/mL  (Nathanael et  al.., 2015).  Fraksi  etil asetat  daunnya  memiliki  aktivitas  sitotoksik terhadap sel leukimia HL60 dengan nilai IC 50 sebesar  19  g/mL  (Chueahongthong et  al.. , 2011). Pada penelitian ini dilakukan pengujian terhadap sel T47D yang merupakan sel kanker payudara  mengingat  tingginya  prevalensi kanker payudara dan belum adanya penelitian mengenai  potensi  kulit  jeruk  purut  terhadap sel  kanker  payudara  T47D.  Selain  itu,  pada penelitian ini juga dilakukan fraksinasi untuk lebih  mengidentifikasi  kandungan  kimia  dan aktivitas sitotoksik kulit jeruk purut.

## METODE PENELITIAN Ekstraksi
Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode maserasi. Kulit jeruk purut yang telah kering dan halus sebanyak 180 g dimaserasi dengan menggunakan  600  mL  etanol  96%  selama empat  hari.  Filtrat  hasil  maserasi  disaring dengan  vakum  Buchner  dan  diuapkan pelarutnya dengan rotary evaporator . Ekstrak cair  kulit  jeruk  purut  dipekatkan  dengan waterbath hingga  didapat  ekstrak  kental. Remaserasi  dilakukan  sebanyak  dua  kali. Rendemen yang diperoleh kemudian dihitung.

## Fraksinasi
Fraksinasi  dilakukan  dengan  metode partisi  menggunakan  tiga  pelarut  yang berbeda kepolarannya. Pelarut yang digunakan  yaitu  heksana,  etil  asetat,  dan etanol. Fraksinasi diawali dengan melarutkan ekstrak  kental  sebanyak  5,02  g  dengan akuades  dan  etanol  perbandingan  (1:1) sebanyak  50  mL.  Setelah  itu,  ekstrak difraksinasi dengan heksana sampai terbentuk dua  lapisan  yang  terpisah  menggunakan corong  pisah.  Lapisan  atas  sebagai  fraksi heksan  dan  lapisan  bawah  difraksinasi kembali  dengan  menggunakan  etil  asetat. Fraksinasi  dengan  etil  asetat  juga  akan membentuk  dua  lapisan  yang  terpisah. Lapisan  atas  sebagai  fraksi  etil  asetat  dan lapisan bawah sebagai fraksi etanol. Fraksinasi  dilakukan  dengan  memasukkan volume  heksana dan etil asetat setiap 50 mL sampai  fraksi  berwarna  bening.  Setelah diperoleh fraksi heksana, etil asetat, dan etanol diuapkan  pelarutnya  dengan  menggunakan rotary  evaporator dan  dipekatkan  dengan waterbath hingga  diperoleh  fraksi  kental. Kemudian  dihitung  rendemen  dari  masing- masing fraksi.

## Uji Sitotoksik
Uji sitotoksik diawali dengan mengkultur sel  pada  media  kultur  RPMI  ( Rosewell  Park Memorial  Institute )  yang  mengandung  FBS 10%  v/v (Fetal  Bovine  Serum) ,  penisilin- streptomisin 1% v/v, dan fungizon 0,05% v/v kemudian diinkubasi pada inkubator CO 2 5% suhu 37 o C. Setelah itu, dilakukan pemanenan
sel.  Sel  yang  dipanen  harus  sudah  80% konfluen.  Panen  sel  dilakukan  dengan membuang  media  dan  mencuci  sel  dengan PBS  sebanyak  5  mL.  Pada  sel  ditambahkan tripsin-EDTA  (tripsin  0,25%)  sebanyak  450  L dan diinkubasi selama 5 menit. Kemudian, ditambahkan  media  RPMI  sebanyak  5  mL untuk menginaktifkan tripsin. Sel diresuspensi agar  tidak  menggerombol  dan  diamati keadaannya  dengan  mikroskop.  Setelah  itu, dilakukan  perhitungan  sel  dengan  cara memasukkan 10  L sel ke dalam hemacytometer yang terdiri atas empat kamar hitung. Hemacytometer diletakkan  di  bawah mikroskop  dan  kemudian  dihitung  selnya dengan  menggunakan counter. Berikut  ini cara untuk menghitung jumlah sel:
Jumlah sel terhitung/mL = (  𝑠𝑒𝑙 𝑘𝑎𝑚𝑎𝑟 𝐴−𝐷)
4 x 10 4 (1)
Jumlah panen sel yang ditransfer =
Jumlah total sel yang dibutuhkan Jumlah sel terhitung/mL (2)
Selanjutnya, sel T47D dengan kepadatan 10 4 ditransfer sebanyak 100  L ke dalam plate 96 well kecuali pada kontrol media kemudian diinkubasi pada inkubator CO 2 5% selama 24 jam. Setelah itu, ekstrak etanol, fraksi etanol, etil  asetat,  dan  heksana  dengan  seri konsentrasi  500  g/mL,  250  g/mL,  125  g/mL,  62,5  g/mL,  dan  31,25  g/mL dimasukkan ke dalam sumuran dan diinkubasi pada  inkubator  CO 2 5%  selama  24  jam. Setelah  24  jam,  media  dibuang  dan ditambahkan reagen MTT sebanyak 100  L di setiap sumuran lalu diinkubasi pada inkubator CO 2 5% selama 4 jam. Setelah itu, pada tiap sumuran ditambahkan SDS 10% dalam 0,1 N HCl  sebanyak  100  L  dan  diinkubasi  pada inkubator  CO 2 5%  selama  semalam.  Setelah semalam,  dilakukan  pembacaan  absorbansi dengan  ELISA reader  550  nm.  Hasil absorbansi  digunakan  untuk  menghitung persentase sel hidup.
𝑃𝑒𝑟𝑠𝑒𝑛𝑡𝑎𝑠𝑒 𝑆𝑒𝑙 𝐻𝑖𝑑𝑢𝑝 = Abs.perlakuan−Abs.kontrol media Abs.kontrol sel−Abs.kontrol media x 100%  (3)
Setelah  itu  dihitung  regresi  linier  antara log  konsentrasi  vs  presentase  sel  hidup. Setelah  didapatkan  persamaan  regresi  linier (y=Bx+A),  dihitung  IC 50 dengan  cara memasukkan  nilai  50%  pada  y  kemudian dicari  antilog  dari  nilai  x  pada  persamaan regresi linier tersebut.

## Identifikasi Senyawa
Identifikasi  senyawa  dilakukan  untuk mengetahui  senyawa  golongan  tertentu  yang terdapat  dalam  ekstrak  etanol,  fraksi  etanol, etil asetat,  dan  heksana  kulit  jeruk. Penggolongan  senyawa  dilakukan  dengan menggunakan metode kromatografi lapis tipis (KLT). Sampel yang berupa ekstrak dan fraksi dilarutkan  terlebih  dahulu  menggunakan pelarutnya  dan  ditotolkan  ke  fase  diam  dan kemudian dielusikan dengan fase gerak. Fase diam  yang  digunakan  adalah  silika  gel  GF 254,  dan  fase  gerak  yang  digunakan  yaitu heksana:etil  asetat  (6:4)  dalam  10  mL  untuk ekstrak etanol, fraksi etil asetat, dan heksana, serta    heksana:etil  asetat  (4:6)  dalam  10  mL untuk  fraksi  etanol.  Setelah  terelusi,  sampel disemprot  dengan  reagen  semprot  seperti Dragendorf,  FeCl 3 ,  anisaldehid-H 2 SO 4 ,  dan sitroborat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Maserasi  merupakan  metode  ekstraksi yang  dilakukan  dengan  cara  merendam sampel dalam pelarut (Saifudin, 2014). Pelarut yang  digunakan  untuk  memaserasi  sampel yaitu  etanol  96%.  Etanol  96%  dipilih  karena mempunyai  daya  ekstraksi  yang  luas  yaitu mampu  menyari  berbagai  senyawa  yang  ada dalam saampel (Saifudin, 2014). Ekstrak cair kemudian diuapkan pelarutnya dengan rotary evaporator dan dipekatkan dengan waterbath. Remaserasi  dilakukan  sebanyak  dua  kali. Ekstrak kental yang diperoleh sebanyak 23,60 g dengan rendemennya sebesar 13,10%.
Fraksinasi ekstrak etanol kulit jeruk purut dilakukan  dengan  metode  partisi.  Fraksinasi
dilakukan menggunakan pelarut heksana, etil asetat, dan  etanol. Rendemen  yang  diperoleh untuk  fraksi  heksana  sebesar  21,51%,  fraksi etil  asetat  sebesar  24,50%, dan fraksi  etanol sebesar  11,75%.  Diketahui  bahwa  rendemen fraksi  terbesar  yang  diperoleh  adalah  fraksi etil  asetat  dan  yang  terendah  adalah  fraksi etanol.
Uji sitotoksik ektrak etanol, fraksi etanol, etil  asetat,  dan  heksana  kulit  jeruk  purut terhadap sel kanker payudara T47D dilakukan dengan  metode  MTT  assay.  Prinsip  metode MTT assay adalah mereduksi garam tetrazolium  MTT  ((3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)- 2,5-difeniltetrazolium  bromid)  oleh  enzim suksinat  reduktase  dalam  mitokondria  sel
hidup yang akan membentuk kristal formazan berwarna ungu. Penambahan SDS dalam HCl akan  melarutkan  kristal  formazan  yang berwarna  ungu  sehingga  dapat  dibaca absobansinya  dengan  ELISA  reader  (CCRC, 2009).
Adapun  morfologi  sel  T47D  yang  telah diberikan  perlakuan  ekstrak  mengalami kematian berbentuk bulatan kecil (Gambar 1).
Hasil  uji  sitotoksik  diperoleh  dari pembacaan  absorbansi  pada  ELISA  reader (Gambar 2). Sel yang hidup akan mempunyai absorbansi  yang  tinggi  karena  adanya pembentukan kristal formazan yang berwarna ungu  (CCRC,  2009)  sehingga  %  sel  hidup akan  tinggi.  Hasil  uji  sitotoksik  dari  ekstrak
Gambar 1. Morfologi sel T47D pada kontrol sel (A) dan sel yang mengalami kematian karena adanya perlakuan fraksi jeruk purut (B)
Gambar 2. Pengaruh pemberian ekstrak etanol, fraksi etil asetat, dan heksana kulit jeruk purut terhadap rata-rata persentase sel hidup T47D
etanol,  fraksi  etil  asetat,  dan  heksana  kulit jeruk  purut  menunjukkan  bahwa  konsentrasi berbanding  terbalik  dengan  persentase  sel hidup.  Semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak etanol,  fraksi  etil  asetat,  dan  heksana  kulit jeruk  purut  maka  akan  semakin  kecil  %  sel hidupnya.
Ekstrak etanol kulit jeruk purut memiliki nilai  IC 50 sebesar  268,49  g/mL.  Fraksi  etil asetat kulit jeruk purut mempunyai nilai IC 50 sebesar  286,82  g/mL.  Fraksi  heksana  kulit jeruk  purut  mempunyai  nilai  IC 50 sebesar 136,27  g/mL  (Gambar  3).  Hasil  IC 50 fraksi
Gambar 3. Hasil IC50 ekstrak etanol, fraksi etil asetat, dan heksan kulit jeruk purut
Gambar 4.  Hasil KLT ekstrak etanol, fraksi heksana, etil asetat, dan etanol kulit jeruk purut yang telah disemprot Sitroborat pada UV 366 nm (A); Anisaldehid-H2SO4 pada UV 366 nm (B);
Dragendorf pada sinar tampak (C); FeCl3 pada sinar tampak (D).
1 (ekstrak etanol kulit jeruk purut); 2 (fraksi heksana kulit jeruk purut); 3 (fraksi etil asetat kulit jeruk purut); 4 (fraksi etanol kulit jeruk purut)
heksana kulit jeruk purut dua kali lebih kecil daripada  ekstrak  etanol  dan  fraksi  etil  asetat. Potensi  antikanker  berdasarkan  National Cancer  Institute  (NCI)  Amerika  yaitu  aktif apabila  nilai  IC 50 <30  g/mL,  moderat  aktif apabila  nilai  IC 50 30-100  g/mL,  dan  tidak aktif apabila nilai IC 50 >100  g/mL (Abubakar, 2016). Pada penelitian ini, ekstrak etanol,  fraksi  etil  asetat,  dan  heksana  kulit jeruk  tidak  memiliki  aktivitas  sitotoksik karena nilai IC 50 >100  g/mL.
Hasil  uji  sitotoksik  fraksi  etanol  kulit jeruk  purut  pada  konsentrasi  500  g/mL menunjukkan persentase sel hidup yang tinggi yaitu  115,98%.  Konsentrasi  250  g/mL,  125  g/mL, 62,5  g/mL, 31,25  g/mL menunjukkan  persentase  sel  hidup  yang hampir  sama.  Berdasarkan  data  ini,  dapat dikatakan bahwa fraksi etanol kulit jeruk purut tidak  dapat  membunuh  sel  kanker  payudara T47D  sehingga  fraksi  etanol  tidak  memiliki aktivitas  sitotoksik.  Hal  ini  diduga  karena tidak adanya senyawa aktif yang tersari pada fraksi etanol kulit jeruk purut.
Identifikasi  senyawa  dilakukan  dengan metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) yang
kemudian  disemprot  dengan  berbagai  reagen semprot  untuk membantu memvisualisasikan bercak  pada  sinar  tampak  dan  UV  366  nm (Gambar 4). Hasil deteksi golongan senyawa yang  terdapat  pada  ekstrak  etanol,  fraksi etanol,  etil  asetat,  dan  heksana  kulit  jeruk purut dapat dilihat pada Tabel 1 dan Gambar 5.  Hasil  yang  didapatkan  dari  penggolongan senyawa yaitu ekstrak etanol kulit jeruk purut mengandung  senyawa  golongan  flavonoid, terpenoid, alkaloid, dan fenolik sama dengan hasil penelitian Nathanael, et al. (2015). Fraksi etil  asetat  dan  heksana  juga  mengandung senyawa  golongan  flavonoid,  terpenoid, alkaloid, dan fenolik, sedangkan fraksi etanol hanya mengandung senyawa golongan flavonoid. Hasil identifikasi golongan senyawa  yang  terkandung  dalam  kulit  jeruk purut  ini  berkolerasi  dengan  aktivitas sitotoksiknya.  Ekstrak  dan  fraksi  kulit  jeruk purut  yang  memiliki  kandungan  senyawa flavonoid,  terpenoid,  alkaloid,  dan  fenolik memiliki  IC 50 tertentu  meskipun  tidak  aktif, sedangkan fraksi etanol yang hanya mengandung flavonoid tidak mampu menghambat pertumbuhan sel T47D.
Tabel 1. Hasil deteksi golongan senyawa yang terdapat pada ekstrak etanol, fraksi etanol, etil asetat,
dan heksana kulit jeruk purut Reagen Senyawa (Hasil deteksi) Ekstrak etanol Fraksi Heksana Fraksi Etil Asetat Fraksi Etanol Sitroborat Flavonoid (Kuning- kehijauan) + + + +
Anisaldehid-
H 2 SO 4 Terpenoid (Kuning-merah tua) + + + - Dragendorf Alkaloid (Kuning- kecoklatan) + + + - FeCl 3 Fenolik (Hitam) + + + -

## KESIMPULAN
Pada  penelitian  ini,  dapat  ditarik kesimpulan  bahwa  ekstrak  etanol,  fraksi  etil asetat,  heksana,  dan  etanol  kulit  jeruk  purut tidak  aktif  terhadap  sel  kanker  payudara
T47D.  Ekstrak  etanol,  fraksi  etil  asetat,  dan heksana kulit jeruk purut memiliki kandungan senyawa  flavonoid,  terpenoid,  alkaloid,  dan fenolik,  sedangkan  fraksi  etanol  jeruk  purut hanya mengandung senyawa flavonoid.

## Daftar Pustaka
Abubakar  A.N.F.,  2016,  Triterpenoid  Biji  Alpukat  ( Persea  americana )  Dan  Aktivitas Sitotoksiknya  Terhadap  Sel  Kanker  Payudara  MCF-7  Dan  Hati  HepG2 ,  Tesis, Institut Pertanian Bogor.
Aslam M.S., Naveed S., Ahmed A., Abbas Z., Gull I., and Athar M.A., 2014, Side Effects of Chemotherapy in Cancer Patients and Evaluation of Patients Opinion  about  Starvation Based  Differenial  Chemotherapy, Journal  of Cancer Therapy , 5, 817-822.
Carvalho  C.,  Renato  X.S.,  Susana  C.,  Sonia  C.,  Paulo  J.O.,  Maria  S.,  Paula  I.M.,  2009, Doxorubicin: The Good, The Bad, and The Ugly Effect, Current Medicinal Chemistry, 16 (25).
CCRC,  2009,  Prosedur  Tetap  Uji  Sitotoksik  Metode  MTT, Cancer  Chemoprevention Resesarch Center Farmasi UGM Yogyakarta, 6-9.
Chueahongthong    F.,    Ampasavate  C.,    Okonogi    S.,    Tima    S.,    Anuchapreeda    S.,  2011, Cytotoxic  effects  of  crude  kaffir  lime  ( Citrus  hystrix ,  DC.)  leaf fractional  extracts on  leukemic  cell  lines, Journal  of  Medicinal  Plants Research , 5(14), 3097-3105.
Devy  N.F.,  Yulianti    F.,  dan  Andrini.,  2010,    Kandungan  Flavonoid  dan  Limonoid  pada Berbagai  Fase  Pertumbuhan  Tanaman  Jeruk  Kalamondin  ( Citrus mitis Blanco)  dan Purut    ( Citrus    hystrix DC.), Jurnal    Balai    Penelitian  Tanaman  Jeruk  dan  Buah Subtropika , 20 (1), 360-367.
Kabel  A.M.,  Baali  F.H.,  2015,  Breast  Cancer:  Insights  into  Risk  Factors,  Pathogenesis, Diagnosis, and Management, Journal of Cancer Research and Treatment, 3 (2), 28-33 .
Kemenkes RI, 2016, Info Datin Pusat Data dan Informasi Kementrian Kesehatan RI .
Komite Penanggulangan Kanker Nasional (KPKN), 2016, Panduan Penatalaksanaan Kanker Payudara , Kemenkes RI, Jakarta.
Nathanael  J., Wijayanti  N., dan  Atmodjo P.K., 2015, Uji  Aktivitas Sitotoksik  Ekstrak Kulit Jeruk Purut ( Citrus hystrix ) pada Sel HeLa Cervical Cancer Line , Jurnal Teknobiologi .
Saifudin A, 2014, Senyawa Alam Metabolit Sekunder Teori,Konsep, dan Teknik Pemurnian, Penerbit Deepublish, Yogyakarta.
Tripoli  E.,  Guardia,  M.L.,  Giammanco  S.,  Majo  D.D.,  and  Giamanco  M.,  2007,  Citrus Flavonoids:  Molecular  Structure,  Biological  Activity  and  Nutritional  Properties:  A Review, Food Chem , 104, 466-479.
Yuliani R., Indrayudha P., dan Sriandita S., 2011, Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Daun Jeruk  Purut  ( Citrus  hystrix )  Terhadap Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli , Pharmacon , 12 (2).