UJI SITOTOKSIK EKSTRAK ETANOL BUAH KETUMBAR (Coriandrum sativum Linn) TERHADAP Artemia salina Leach DENGAN METODE BRINE
SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
(Cytotoxic test of ethanol extract of coriandrum sativum linn on artemia salina leachwith Brine Shrimp Method Lethality Test)
Febri Tianandari 1 * , Rasidah 2
1 Program Studi D-III Farmasi, Jurusan Farmasi Banda Aceh, Kota Banda Aceh E-mail: febritianandari22@gmail.com
2 Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh, Banda Aceh. E-mail: rara.rsdh@gmail.com
Received: 20/6/2017                       Accepted: 11/7/2017                       Published online: 3/11/2017

## ABSTRAK
Ketumbar  (Coriandrum  sativum  L.)  adalah  salah  satu jenis  tanaman  rempah-rempah  yang  sudah  sangat dikenal di masyarakat. Skrining fitokimia pendahuluan serbuk  ketumbar  mengungkapkan  adanya  kandungan protein, karbohidrat, senyawa fenolik, tanin, flavonoid. Senyawa sitotoksik adalah suatu senyawa atau zat yang dapat  merusak  sel  normal  dan  sel  kanker  dan  juga dapat  digunakan  untuk  menghambat  pertumbuhan  sel tumor.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  efek sitotoksik  ketumbar  terhadap  Arthemia  salina  Leach, dengan  metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT). Hasil penelitian ini diketahui bahwa ekstrak etanol 70% buah  ketumbar  (Coriandrum  sativum  Linn)  memiliki efek  sitotoksik  terhadap  larva  Arthemia  salina  Leach. Nilai  LC 50 dari  ekstrak  etanol  buah  ketumbar (Coriandrum  sativum  Linn)    terhadap  larva  Arthemia salina Leach yaitu 40,548 ppm.
Kata  kunci:  Sitotoksik,  ketumbar  (Coriandrum  sativum Linn), BSLT

## ABSTRACT
Coriander (Coriandrum sativum L.) is one of the most popular  types  of  spice  plants  in  the  community. Precochemical  preliminary  phytochemical  screening reveals  the  presence  of  proteins,  carbohydrates, phenolic  compounds,  tannins,  flavonoids.  Cytotoxic compounds  are  a  compound  or  substance  that  can damage normal cells and cancer cells and can also be used  to  inhibit  tumor  cell  growth.  This  research  was conducted to know the cytotoxic effect of coriander on Arthemia salina Leach, by Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)  method.  This  study  proves  that  70%  ethanol extract  of  Coriandrum  sativum  Linn  fructus  has  a cytotoxic  effect  on  the  larvae  of  Arthemia  salina Leach.  The  LC50  value  of  the  ethanol  extract  of Coriandrum sativum Linn against the Leach Arthemia salina larvae is 40,548 ppm.
* Penulis untuk korespondensi: febritianandari22@gmail.com
Keywords: Cytotoxicity, Coriander (Coriandrum sativum Linn), BSLT

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  penyakit  yang  tidak diketahui  penyebabnya  secara  pasti,  tetapi dipengaruhi oleh banyak faktor seperti merokok atau terkena paparan asap rokok, mengkonsumsi alkohol, sinar ultraviolet pada kulit, obesitas, diet tidak  sehat,  kurang  aktifitas  fisik  dan  infeksi. 1 Pengobatan kanker dilakukan dengan empat cara utama  yaitu  melalui  pembedahan,  radiasi, kemoterapi dan terapi biologi. 2
Obat  herbal  dan  berbagai  tanaman memiliki peran penting dalam bidang kesehatan bahkan  bisa  menjadi  produk  andalan  pada pengobatan penyakit degeneratif. Apresiasi dari masyarakat  terhadap  bahan  alami  semakin meningkat  seiring  dengan  munculnya  berbagai fakta  bahwa  obat  konvensional  memiliki  efek samping yang cukup besar. 3
Beberapa tanaman penghasil agen antikanker  yang  telah  diteliti  diantaranya merupakan famili apiaceae salah satunya adalah ketumbar  ( Coriandrum  sativum L.).  Ekstrak ketumbar  secara  tradisional  telah  digunakan sebagai  stimulan,  karminatif,  antispasmodik, diuretik  dan  anti-rematik.  Buah  ketumbar  juga dilaporkan  berpotensi  sebagai  antioksidan. Selain itu secara invitro bersifat antibakteri dan antijamur. 4 Skrining  fitokimia  pendahuluan serbuk ketumbar diketahui mengandung karbohidrat, protein, senyawa fenolik, tanin, dan flavonoid.
Senyawa sitotoksik adalah suatu senyawa atau zat yang dapat merusak sel normal dan sel kanker  dan  juga  dapat  digunakan  untuk menghambat  pertumbuhan  sel  tumor  malignan. Untuk  mengetahui  suatu  senyawa  memiliki potensi sebagai anti tumor dan antikanker maka perlu  dilakukan  penelitian  awal,  salah  satunya melalui  uji  sitotoksik  menggunakan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (  BSLT).  Metode BSLT  merupakan  salah  satu  metode  yang banyak  digunakan  untuk  pencarian  senyawa antikanker  baru  yang  berasal  dari  tanaman. Metode  ini  memiliki  keuntungan  diantaranya waktu  pelaksanaan  yang  cepat,  biaya  lebih murah,  praktis,  tidak  memerlukan  teknis  yang aseptis,  sampel  yang  relatif  sedikit  dan  hasil ujinya berkorelasi baik dengan beberapa metode uji sitotoksik. 1
Berdasarkan uraian diatas, peneliti tertarik untuk  meneliti  “Uji  Sitotoksik  Ekstrak  Etanol Buah  Ketumbar  ( Coriandrum sativum Linn) terhadap Artemia  salina Leach  dengan  Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)”

## DESAIN PENELITIAN
Penelitian  ini  bersifat true  experiment control  group  design ,  yang  dilakukan  dengan pendekatan observasional. Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Fitokimia Jurusan Farmasi Poltekkes Kemenkes Aceh untuk proses maserasi sampai proses  pengeringan ekstrak.
Bahan  yang  digunakan  yaitu  buah ketumbar  ( Coriandrum  sativum Linn),  etanol 70%,  akuadest,  air  laut,  telur  udang Artemia salina Leach, dimetilsulfoksida 2%  (DMSO 2%).
Alat-alat  yang  akan  digunakan  pada penelitian ini yaitu : wadah maserasi, pengaduk kayu, Vacum Rotary  Evaporator, cawan  petri, corong, Beaker glass ,  lup,  mikropipet,  neraca analitik,  pipet  tetes,  sendok  plastik,  tabung reaksi, Erlenmeyer ,  aluminium  foil,  lakban hitam, seperangkat wadah penetasan udang.

## Pembuatan ekstrak buah ketumbar
Pembuatan ekstrak buah ketumbar dilakukan  dengan  menimbang  serbuk  buah ketumbar sebanyak 100 gram lalu masukkan ke dalam maserator , selanjutnya dituangi 0,5 Liter
etanol 70%. Ditutup dan direndam selama 6 jam pertama  terlindungi  dari  cahaya  sambil  diaduk sesekali.  Kemudian  didiamkan  selama  18  jam. Dipisahkan maserat dengan cara filtrasi ( maserat 1 ).  Diulangi  proses  tersebut  sebanyak  dua  kali dengan  pelarut  yang  sama  dan  volume  pelarut setengah dari volume pelarut penyarian pertama ( maserat  2,  maserat  3 ).  Dikumpulkan  semua maserat, lalu diuapkan dengan vacuum rotatory evaporator. 5

## Penetasan Larva Artemia salina Leach
Penetasan  larva Artemia  salina Leach dilakukan  dengan    menyiapkan    bejana  untuk penetasan telur udang lalu,  di satu ruang dalam bejana tersebut diletakkan  lampu untuk menghangatkan suhu dalam penetasan, sedangkan  di  ruang  sebelahnya  diberi  air  laut. Kedalam  air  laut  dimasukkan  50-100  mg  telur udang  untuk  ditetaskan.  Pada  bagian  telur ditutup  dengan  aluminium  foil,  dan  lampu dinyalakan  selama  48  jam  untuk  menetaskan telur.  Diambil  larva  udang  yang  akan  diuji dengan pipet. 6

## Pembuatan konsentrasi larutan uji
Buat  larutan  induk  dari  200  mg  ekstrak kental  lalu  dilarutkan  dengan  DMSO  2  ml  dan ditambah  aquades  hingga  volumenya  mencapai 100  ml,  sehingga  diperoleh  konsentrasi  larutan induk  2000  ppm.  Kemudian  dibuat  larutan  uji dengan  konsentrasi  1000  ppm,  500  ppm,  250 ppm, 50 ppm dan 25 ppm dalam 10 ml larutan. Dipipet  sebanyak  1  ml  dimasukkan  kedalam masing-masing  tabung  reaksi  yang  telah  berisi Artemia salina Leach 10 ekor dan larutan uji 1 ml.  Konsentrasi  akan  berubah  menjadi  ½  dari konsentrasi  awal,  karena  dalam  tiap  tabung terdapat 2 ml larutan yaitu 1 ml air laut dan 1 ml larutan uji konsentrasi awal. Sehingga diperoleh larutan  uji  konsentrasi  akhir  masing-masing sebesar  500  ppm,  250  ppm,  125  ppm,  25  ppm dan 12,5 ppm. 7

## Prosedur uji sitotoksik dengan metode BSLT
Prosedur  Uji  sitotoksik  dengan  metode BSLT: 8 Dibuat  pengenceran  larutan  uji konsentrasi  awal  1000  ppm,  500  ppm,  250 ppm,  50  ppm,  25  ppm,  dan  kontrol  (0  ppm) dari larutan induk 2000 ppm. Pada konsentrasi
1000 ppm dimasukkan 5 ml air laut dan 5 ml larutan  uji  ke  dalam  tabung  reaksi.  Pada konsentrasi  500  ppm  dimasukkan  7,5  ml  air laut  dan  2,5  ml  larutan  uji  ke  dalam  tabung reaksi. Pada konsentrasi 250 ppm dimasukkan 8,75  ml  air  laut  dan  1,25  ml  larutan  uji  ke dalam tabung reaksi. Pada konsentrasi 50 ppm dimasukkan  9,75  ml  air  laut  dan  0,25  ml larutan  uji  ke  dalam  tabung  reaksi.  Pada konsentrasi 25 ppm dimasukkan 9,875 ml air laut dan 0,125 ml larutan uji ke dalam tabung reaksi
Pada  konsentrasi  0  ppm  air  laut  tanpa larutan  uji  (sebagai  kontrol).  Tabung  reaksi dibagi  6  kelompok  percobaan,  dengan konsentrasi  akhir  500  ppm,  250  ppm,  125 ppm,  25  ppm,  12,5  ppm  dan  0  ppm. Dimasukkan larva Artemia salina Leach yang berumur  48  jam  kedalam  masing-masing tabung.  Ditambahkan  1  ml  air  laut  dan  1  ml larutan  uji.  Dilakukan  tiga  kali  pengulangan (Triplo).  Tabung  reaksi  dibiarkan  di  tempat terbuka  selama  24  jam.  Dihitung  larva  yang masih  hidup  pada  masing-masing  tabung reaksi.  Kriteria  standar  mengukur  kematian larva adalah apabila larva tidak menunjukkan pergerakan  selama  pengamatan.  Dihitung persentase kematian dan dianalisa menggunakan probit.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah  larva udang Arthemia  salina Leach.  Sebanyak  100 mg Arthemia  salina Leach  ditetaskan  dalam bejana yang berisi air laut sebanyak 1 liter dan dibiarkan  dalam  ruang  yang  diberi  lampu selama 48 jam. Hewan uji ini harus berusia 48 jam dan aktif bergerak karena pada fase larva atau  nauplia  ini  terjadi  fase  paling  aktif membelah  secara  mitosis  sehingga  identik dengan  sel  kanker. 7 Kemudian  disiapkan  18 tabung  reaksi  sebagai  wadah  uji  BSLT, masing-masing konsentrasi larutan uji dilakukan secara triplo untuk memperoleh data yang  lebih  akurat.  Setiap  tabung  uji  dipipet sebanyak 1 ml larutan uji dan 1 ml air laut lalu dipipet  sebanyak  10  ekor Arthemia  salina Leach. Untuk uji kontrol dipipet 1 ml air laut dan  10  ekor Arthemia  salina Leach.  Evaluasi
kematian Arthemia  salina Leach  dilakukan setelah 24 jam perlakuan dan dihitung jumlah hewan  coba  yang  mati  untuk  dihitung  nilai LC 50.
Berikut  adalah  hasil  penelitian  dari berbagai konsentrasi ekstrak etanol 70% buah ketumbar  ( Coriandrum  sativum L)  terhadap larva Arthemia salina Leach.
Tabel 1. Pengaruh konsentrasi ekstrak etanol buah ketumbar terhadap Arthemia
salina Leach Konsentrasi (ppm) Perlakuan* Total Kematian Rerata Kematian Persen Kematian T1 T2 T 3 0 0 0 0 0 0 0 12,5 2 3 3 8 2,67 26,6 25 3 4 5 12 4 40,0 125 8 7 5 20 6, 67 66,7 250 8 10 8 26 8,67 86,7 500 9 9 10 28 9,33 93,4
* dalam Tabung (T)
Gambar 1. Pengaruh konsentrasi ekstrak etanol buah ketumbar terhadap Arthemia

## salina Leach
Berdasarkan Tabel 1 dan Gambar 1 dapat dilihat  persentase  kematian  larva Arthemia salina Leach tertinggi pada konsentrasi 500 ppm dan  terendah  pada  konsentrasi  12,5  ppm. Persentase kematian semakin meningkat dengan peningkatan  konsentrasi  larutan  uji,  untuk kelompok kontrol tidak terdapat larva Arthemia salina Leach  yang  mati  sehingga  dapat disimpulkan  bahwa  kematian  pada  larva Arthemia  salina Leach  murni  disebabkan  oleh ekstrak  etanol  buah  ketumbar  ( Coriandrum sativum L).
Dari  Tabel  2  diperoleh  data  untuk perhitungan persamaan regresi linier hubungan antara Y (nilai probit dari persentase kematian) dan  X  (log  konsentrasi).  Persamaan  regresi linier dapat dilihat pada Gambar 2.
Tabel 2. Pehitungan nilai LC 50 dengan metode probit
Gambar 2. Persamaan regresi linier ekstrak etanol buah ketumbar (Coriandrum sativum L) terhadap nilai probit
Dari Gambar 2 diperoleh nilai Y=1,3119x + 2,8905 sehingga diperoleh nilai LC 50 yaitu  40,548  ppm.  Nilai  LC 50 yang diperoleh menunjukkan bahwa ekstrak etanol buah  ketumbar  ( Coriandrum sativum L) bersifat  toksik  dan  berpotensi  sebagai antikanker karena LC 50 yang diperoleh kurang dari 1000 ppm. 6 Hasil penelitian Zakiah, dkk 9 memperkuat  temuan  tersebut,  bahwa  ekstrak etanol bersifat herbal yaitu daun sirsak ( Annona muricata L.)  memiliki  aktifitas hepatoprotektif terhadap  gambaran  histologi  pada  hati  yang terpapar parasetamol dosis tinggi.

## KESIMPULAN
Penelitian  ini  membuktikan  bahwa ekstrak etanol 70% buah ketumbar ( Coriandrum  sativum Linn)  memiliki  efek sitotoksik  terhadap  larva Arthemia salina Leach.  Nilai  LC 50 dari  ekstrak  etanol  buah ketumbar ( Coriandrum sativum Linn) terhadap  larva Arthemia salina Leach  yaitu 40,548 ppm.
Saran,  karena  serbuk  ketumbar  diketahui mengandung  karbohidrat,  protein,  senyawa fenolik,  tanin,  dan  flavonoid  serta  efek  sistolik maka  sangat  baik  sebagai  herbal  terhadap  anti kanker.

## KEPUSTAKAAN
1.  Purwanto N. Uji Sitotoksik Ekstrak Biji Salak (Salacca  Zalacca  (Gaert)  Voss)  Dengan Menggunakan Mwtode Brine Shrimp Leathality  Test  (BSLT).  In:  Bandung: Fakultas MIPA Universitas Islam; 2015:616- 622. 2.  Wahyuni  FS,  Sutma  S,  Aldi  Y.  Uji  Efek
Sitotoksik  Ekstrak  Etanol  Kulit  Buah  Asam Kandis (Garcinia cowa Roxb.) Terhadap Sel Kanker Payudara t47d dengan Metoda MTT
(Microtetrazolium) Assay. J Sains dan Teknol Farm . 2011;16(2):209-215. 3.  Purwanto  B. Herbal  Dan  Keperawatan Komplementer .  Yogyakarta:  Nuha  Medika; 2013.
4.  Shalini  P,  Mohanty  S.  Screening  of antioxidant  activity  of  Coriandrum  sativum. Indian J Res . 2013;3(4):284-285.
5.  Depkes  RI.  Farmakope  Herbal  Indonesia Edisi 1. 2008:174-175.
6.  Juniarti,  Osmeli  D,  Yuhernita.  Kandungan Senyawa Kimia, Uji Toksisitas (Brine Shrimp Lethality  Test)  dan  Antioksidan  (1,  1- diphenyl-2-pikrilhydrazyl) Dari Ekstrak Daun Saga (Abrus precatorius L.). Makara J Sci . 2010;13(1):50-54.
7.  Subekti  NK.  Uji  toksisitas  akut  ekstrak metanol  daun  laban  abang  terhadap  larva udang  dengan  metode  brine  shrimp  lethality test (BSLT). Jakarta: Skripsi, UIN Hidayatullah; 2014.
8.  Hanifah  NZ.  Uji  Toksisitas  Akut  ekstrak Metanol  daun  sirsak  Annona  muricata  L dengan  metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).  Jakarta:  Skripsi,  UIN  Hidayatullah 2015.
9.  Zakiah N, Yanuarman Y, Frengki F, Munazar M.  Aktifitas  Hepatoprotektif  Ekstrak  Etanol Daun Sirsak (Annona Muricata L.) Terhadap
Kerusakan Hati Tikus yang Diinduksi dengan Parasetamol. AcTion Aceh Nutr J .
2017;2(1):25-31.