ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 17 (1) (2014) : 23 – 26
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Identifikasi Senyawa Sitotoksik dalam Ekstrak Kloroform Daun Tempuyung ( Sonchus arvensis L. ) Menggunakan GC-MS
Ayu Ni’mah Azifa a , Dewi Kusrini a* , Enny Fachriyah a
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: dewi.kusrini@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o A b s t r a c t
Keywords: Chloroform extract, Tempuyung Leaf ( Sonchus arvensis L. ), cytotoxic, BSLT, GC-MS
Identification  of  cytotoxic  compounds  from  chloroform  extract  of  tempuyung  leaf (Sonchus arvensis L.) using GC-MS has been done. This identification was done using GC- MS method and activity test using BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) method. From the activity test, it was found that the fraction of B result of chloroform extract column is very cytotoxic fraction with LC 50 = 7,862 ppm. In the identification of B fraction, 29 compounds were obtained and 5 compounds were identified with the highest abundance of dibutyl phthalate with retention time of 22.265 minutes and the area of 7.71%, palmitic acid with retention time of 22.626 minutes and the area of 8.49%, 8, 11.14-eicosatrieonic acid with a retention time of 24.4 minutes and an area of 6.95, a dioctyl adipate with retention time of  26.517  minutes  and  an  area  of  7.90%,  and  dioctyl  phthalate  with  retention  time  of 28.983 minutes and an area of 10.61%.

## A b s t r a k
Kata Kunci: Ekstrak kloroform, Daun Tempuyung ( Sonchus arvensis L. ),
sitotoksik, BSLT,
GC-MS
Identifikasi  senyawa  sitotoksik  dari  ekstrak  kloroform  daun  tempuyung  (Sonchus arvensis  L.)  menggunakan  GC-MS  telah  dilakukan.  Identifikasi  ini  dilakukan menggunakan metode GC-MS dan uji aktivitas menggunakan metode BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test ). Dari uji aktivitas, diperoleh bahwa fraksi B hasil kolom ekstrak kloroform merupakan  fraksi  yang  sangat  sitotoksik  dengan  harga  LC 50 =  7,862  ppm.  Pada identifikasi fraksi B, diperoleh 29 senyawa dan ada 5 senyawa yang teridentifikasi dengan kelimpahan tertinggi yaitu dibutil ftalat dengan waktu retensi 22,265 menit dan luas area 7,71%, asam palmitat dengan waktu retensi 22,626 menit dan luas area 8,49%, 8,11,14- asam eikosatrieonat dengan waktu retensi 24,4 menit dan luas area 6,95, dioktil adipat dengan waktu retensi 26,517 menit dan luas area 7,90%, serta dioktil ftalat dengan waktu retensi 28,983 menit dan luas area 10,61%.

## 1. Pendahuluan
Indonesia  kaya  dengan  tanaman  obat  yang  perlu dilindungi dan dimanfaatkan, seperti halnya masyarakat di  Jawa  Tengah  khususnya  yang  memanfaatkan bermacam-macam  tumbuhan  sebagai  ramuan  obat tradisional  untuk  penyembuhan  beberapa  penyakit tertentu.  Salah  satu  tumbuhan  yang  digunakan  secara tradisional  sebagai  obat  atau  ramuan  obat  adalah tumbuhan tempuyung ( Sonchus arvensis L. )
Tanaman  tempuyung  termasuk  dalam  suku Asteraceae,  marga  Sonchus,  dan  jenis  arvensis.  Banyak pengalaman yang menunjukan bahwa daun tempuyung ini dapat berpotensi sebagai obat, seperti asam urat dan diuretik  [1].  Menurut  Xu dkk. [2]  tanaman  ini  dapat digunakan  untuk  pengobatan  asma,  batuk,  dan  dapat menenangkan  saraf.  Selain  itu,  tempuyung  juga  bisa digunakan  untuk  mengobati  demam,  peradangan, penghancur  batu  ginjal,  sirkulasi  darah  dan  sebagai aktivitas anti bakteri [3].
Kandungan  senyawa  pada  daun  tempuyung diantaranya flavonoid (kaemferol, luteolin-7-glukosida dan  apigenin-7-O-glukosida),  saponin,  kumarin (skopoletin),  polifenol, α -laktuserol, β -laktuserol, manitol, inositol, taraksasterol, serta asam-asam fenolat (sinamat,  kumarat,  dan  vanilat)  [4],  7,4-dihidroksi flavon  [5],  sesquiterpen  dari  golongan  terpenoid  [3], turunan asam kuinat yaitu 1,3,4,5-tetra-(p- hidroksifenilasetil)  dan  sesquiterpen  [2],  minyak  atsiri [6].
Identifikasi  senyawa-senyawa  aktif  dalam  ekstrak pelarut  polar daun  tempuyung  sudah banyak dilakukan pada  penelitian  sebelumnya,  tetapi  untuk  identifikasi senyawa-senyawa yang bersifat sitotoksik dalam ekstrak pelarut  semi  polar  pada  daun  tempuyung  belum ditemukan.  Oleh  karena  itu  pada  penelitian  ini  akan dilakukan  identifikasi  senyawa-senyawa  sitotoksik terhadap larva udang Artemia salina Leach dari ekstrak kloroform daun tempuyung ( Sonchus arvensis L. ) dengan menggunakan metode GC-MS.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk memperoleh ekstrak kloroform daun tempuyung ( Sonchus arvensis L. ) yang bersifat sitotoksik terhadap larva Artemia salina L dan  mengidentifikasi  kandungan  senyawa  dalam  fraksi teraktif ekstrak kloroform dengan menggunakan GC-MS.

## 2. Metode Penelitian

## Alat & Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  daun tempuyung, akuades, n-heksana, etanol 96%, kloroform, larva udang, garam krosok, Tween 20, silika gel  60,  dan  pelarut  organik  lain.  Alat-alat  yang digunakan adalah gelas beaker, erlenmeyer, gelas ukur, pipet tetes, plat KLT, chamber KLT, kromatografi kolom, akuarium,  lampu  UV,  rotaryvaporator,  botol  vial,  serta seperangkat alat analisis GC-MS.

## Pembuatan Serbuk Tempuyung
Daun tempuyung ( Sonchus Arvensis L ) diperoleh dari kawasan Tawangmangu, Solo, Jawa Tengah dicuci bersih dipotong kecil-kecil kemudian dikeringkan dengan cara diangin-anginkan  dan  kemudian  dibuat  serbuk  dengan cara diblender.

## Penapisan Fitokimia
Uji  penapisan  fitokimia  serbuk  daun  tempuyung dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan  golongan senyawa  kimianya.  Uji  fitokimia  ini  meliputi  uji flavonoid, uji alkaloid, uji saponin, uji tannin, uji kuinon, uji triterpenoid dan steroid.

## Pembuatan Ekstrak Kloroform Daun Tempuyung
Serbuk  tempuyung  sebanyak  680  gram  dimaserasi menggunakan pelarut n-heksana sampai larutan jernih kemudian  ampas  dikeringkan.  Selanjutnya  ampas dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  96%  hingga  pelarut menjadi  jernih.  Filtrat  dari  hasil  maserasi  diuapkan dengan  rotaryvaporator  sampai  kental,  kemudian dilakukan penghilangan klorofil dengan cara penambahan  aquades  1:1  lalu  disaring  sehingga
didapatkan fraksi etanol+air. Fraksi etanol+air  dipartisi dengan  kloroform.  Selanjutnya  lapisan  atas  yang merupakan  fraksi  kloroform  diuapkan  menggunakan rotaryvaporator sampai diperoleh ekstrak padat dan diuji sitotoksiknya.

## Pemisahan senyawa-senyawa dalam ekstrak kloroform
Ekstrak  kloroform  dianalisis  dengan  metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan fasa diam silika gel 60GF 254 . Fasa gerak yang digunakan berupa campuran pelarut  organik  dengan  perbandingan  tertentu  untuk menentukan  eluen  terbaik  dan  mengetahui  banyaknya komponen dalam ekstrak kloroform.
Senyawa-senyawa dalam ekstrak kloroform dipisahkan dengan metode kromatografi kolom dengan eluen  terbaik  hasil  KLT.  Eluat  dengan  pola  noda  yang sama  disatukan  menjadi  fraksi  besar  (A,B,C,D,E) kemudian diuji sitotoksiknya dengan metode BSLT.

## Uji Sitotoksik
Uji sitotoksik dilakukan untuk menentukan aktivitas ekstrak  kloroform  dan  fraksi  A,B,C,D,E  dengan menggunakan metode BSLT.
Pembuatan  larutan  media  dilakukan  dengan  cara melarutkan 38 gram garam krosok ke dalam 1 L akuades. Larutan  media  ditempatkan  dalam  akuarium  yang terbagi  dalam  bagian  gelap  dan  terang.  Telur  udang diletakkan  dalam  bagian  gelap  akuarium.  Larva  akan menetas  di  bagian  gelap  dan  kemudian  berenang  ke bagian  terang.  Larva  siap  dipakai  untuk  uji  sitotoksik setelah  berumur  dua  hari.  Uji  sitotoksik  dilakukan dengan  membuat  larutan  ekstrak  dengan  konsentrasi 1000 ppm, 100 ppm dan 10 ppm. Ekstrak kloroform tidak larut  pada  air  garam,  sehingga  ditambahkan  tween  20 sebanyak 5µL. Larutan air garam, 10 larva Artemia salina L .,  ekstrak  dengan  variasi  konsentrasi  dan  tween  20 dimasukkan ke dalam botol vial 10 mL. Larutan kontrol dibuat  dengan  cara  yang  sama,  akan  tetapi  tidak ditambahkan sampel pada larutan. Botol vial dijaga agar tetap  mendapat  penerangan.  Pengamatan  dilakukan setelah  24  jam  dan  dihitung  jumlah  larva  yang  masih hidup kemudian ditentukan prosentase kematiannya [7]. Uji  sitotoksik  dilakukan  3  kali  percobaan  untuk  setiap konsentrasi  dan  masing-masing  menggunakan  larutan kontrol.  Selanjutnya  dianalisis  dengan  metode  Probit melalui  hubungan  konsentrasi  dengan  prosentase kematian sehingga diperoleh harga LC 50.

## Analisis Isolat
Fraksi yang mepuyai LC 50 terkecil dianalisis dengan GC-MS  untuk  mengetahui  senyawa metabolit  sekunder yang terkandung dalam fraksi paling aktif tersebut.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Pembuatan  ekstrak  kloroform  dilakukan  dengan menggunakan  metode  maserasi  dan  partisi.  Maserasi menggunakan  n-heksana  bertujuan  untuk  mengikat senyawa-senyawa  aktif  daun  tempuyung  yang  bersifat non  polar  serta  menghilangkan  lemak,  kemudian dilanjutkan  maserasi  menggunakan  etanol  96%  untuk mengikat  semua  senyawa  metabolit  sekunder  daun
tempuyung baik yang bersifat polar maupun non polar. Ekstrak kental etanol ini sangat pekat dan berwarna hijau kehitaman.  Penghilangan  klorofil  pada  ekstrak  kental etanol diakukan dengan menambahkan akuades dengan perbandingan 1:1. Selanjutnya fraksi etanol+air dipartisi dengan  kloroform  hingga  mendapatkan  ekstrak  kental kloroform sebanyak 3,05 gram.
Ekstrak  kental  kloroform  dianalisis  menggunakan KLT  untuk  mengetahui  eluen  yang  tepat  sebagai  fase gerak dalam kromatografi kolom. Fase diam berupa silika gel  60GF 254 dan  fase  gerak  berupa  campuran  eluen  n- heksana  p.a  :  kloroform  p.a  :  etil  asetat  p.a  dengan perbandingan  3:8:2.  Kemudian  sebanyak  2,5  gram ekstrak kloroform di kromatografi kolom dengan eluen n-heksana:kloroform:  etil  asetat  dengan  perbandingan 3:8:2.  Eluat  hasil  kolom  ditampung  dalam  218  vial berwarna  hijau  hingga  kuning  kecoklatan.  Fraksi  hasil kolom di  KLT  untuk  menentukan  pola noda  yang  sama sehingga diperoleh 5 fraksi besar yaitu fraksi A, fraksi B, fraksi C, fraksi D dan fraksi E.
Selanjutnya untuk mengetahui aktivitas pada fraksi A,B,C,D  dan  E  dilakukan  uji  sitotoksik  menggunakan metode  BSLT.  Pada  pengujian  ini  dilakukan  dengan variasi  konsentrasi  yang  bertujuan  untuk  melihat pengaruh konsentrasi dari ekstrak terhadap aktivitasnya. Senyawa aktif akan menghasilkan jumlah kematian larva Artemia  salina L.  yang  tinggi.  Data  nilai  kematian  larva selanjutnya diolah untuk memperoleh nilai LC 50 dengan tingkat kepercayaan 95% menggunakan metode analisis probit.
Tabel 1: Harga LC 50 pada ekstrak kloroform, fraksi A, B,
C, D dan E
Sampel Harga LC 50 Keterangan Ekstrak kloroform 33,73 ppm Sitotoksik sedang Fraksi A 12,337ppm Sangat Sitotoksik Fraksi B 7,862 ppm Sangat Sitotoksik Fraksi C 94,98 ppm Sitotoksik Sedang Fraksi D 136,548 ppm Sitotoksik Fraksi E 75,568 ppm Sitotoksik Sedang
Fraksi teraktif dengan harga LC 50 terkecil yaitu fraksi B 7,862 ppm. Selanjutnya fraksi B dianalisis dengan GC- MS untuk mengetahui jumlah senyawa yang terkandung dalam  ekstrak  dan  memperkirakan  struktur  senyawa tersebut. Kromatogram fraksi B ekstrak kloroform daun tempuyung sebagai berikut :
Berdasarkan hasil kromatogram di atas menunjukkan  adanya  29  senyawa.  Pada  kromatogram terlihat  adanya  5  senyawa  dengan  puncak  tinggi  yang memiliki  indeks  kemiripan  dan  kelimpahan  yang  besar yaitu  puncak  18  (dibutil  ftalat)  dengan  area  7,71%, puncak 19 (asam palmitat) dengan area 8,49%, puncak 21 (8,11,14 asam eikosatrienoat) dengan area 6,95, puncak 27  (dioktil  adipat)  dengan  area  7,90%  dan  puncak  29 (dioktil ftalat) dengan area 10,61%.

## 4. Kesimpulan
Fraksi  B  berupa  gel  berwarna  coklat  kehitaman merupakan  fraksi  yang  paling  sitotoksik  dengan  nilai LC 50 terkecil  (7,862  ppm).  Analisis  menggunakan kromatografi gas-spektrometer massa (GC-MS) menunjukkan  bahwa  fraksi  B  terdapat  29  senyawa. Senyawa – senyawa  sitotoksik  ekstrak  daun  tempuyung yang  memiliki  indeks  kemiripan  dan  kelimpahan  besar yaitu dibutil ftalat, asam palmitat, 8,11,14 asam eikosa- trienoat, dioktil adipat dan dioktil ftalat.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  LO  Brandsæter,  M  Goul  Thomsen,  K  Wærnhus,  H Fykse,  Effects  of  repeated  clover  undersowing  in spring cereals and stubble treatments in autumn on Elymus  repens,  Sonchus  arvensis  and  Cirsium arvense, Crop  Protection ,  32,  (2012)  104-110 http://dx.doi.org/10.1016/j.cropro.2011.09.022
[2]  Yang-Jun Xu, Shao-Bo Sun, Li-Mei Sun, Dong-Feng Qiu,  Xiu-Jin  Liu,  Zhi-Bo  Jiang,  Cheng-Shan  Yuan, Quinic acid esters and sesquiterpenes from Sonchus arvensis, Food  chemistry ,  111,  1,  (2008)  92-97 http://dx.doi.org/10.1016/j.foodchem.2008.03.028
[3]  Xia ZhengXiang, Liang JingYu, Steroids and phenols from  Sonchus  arvensis, Chinese  Journal  of  Natural
Medicines , 8, 4, (2010) 267-269 http://dx.doi.org/10.3724/SP.J.1009.2010.00267
[4]  Jaka Sulaksana, B Santoso, DI Jayusman, Tempuyung Budi  Daya  Dan  Pemanfaatan  Untuk  Obat, Cetakan pertama. Jakarta: Penebar Swadaya. Hal , 5, (2004) 10- 11
[5]  Adjib Sriningsih, H.W., Sumaryonoa, W., Wibowoa, A. E.,  Caidira,  Firdayania,  Kusumaningruma,  S., Kartakusuma  P.,  Analisis  Senyawa  Golongan Flavonoid Herba Tempuyung (Sonchus arvensis L.), in, Fakultas Farmasi Universitas Pancasila, Pusat P2 Teknologi  Farmasi  dan  Medika  Deputi  Bidang  TAB BPPT, 2010.
[6] N Radulović, P Blagojević, R Palić, Fatty acid derived compounds--the  dominant  volatile  class  of  the
essential oil poor Sonchus arvensis subsp. uliginosus (Bieb.) Nyman, Natural product communications , 4, 3,
(2009) 405-410
[7]  BN Meyer, NR Ferrigni, JE Putnam, LB Jacobsen, DE j Nichols,  Jerry  L  McLaughlin,  Brine  shrimp:  a convenient  general  bioassay  for  active  plant constituents, Planta  medica ,  45,  05,  (1982)  31-34 http://dx.doi.org/10.1055/s-2007-971236