Pengaruh Pemberian Heparin pada Level yang Berbeda pada Semen Beku Sapi Limousin Hasil Sexing dengan Menggunakan Albumen Telur Ayam
Andi Hamdana 1) , Herry Sonjaya 2) dan Abd. Latief Toleng 2)
1) Prodi Peternakan, Fakultas Pertanian, Peternakan dan Kehutanan, Universitas Muslim Maros
2) Program Studi Pruduksi Ternak, Fakultas Peternakan, Universitas Hasanuddin. e-mail: andihamdana1982@gmail.com

## ABSTRAK
Teknologi  inseminasi  Buatan  merupakan  salah  satu  cara  meningkatkan  daya  produksi ternak melalui perbaikan mutu genetik yaitu dengan inseminasi Buatan. Keberhasilan IB sangat tergantung pada kualitas semen yang digunakan. Untuk mendapatkan ternak sapi dengan jenis kelamin yang di inginkan adalah dengan pemisahan spermatozoa X dan Y,. Pemisahan sperma dapat dilakukan berdasarkan pertimbangan adanya perbedaan sperma pembawa  kromozom  X  dan  Y  berdasarkan  kualitas  dan  kuantitas  DNA  yang  terdapat dalam  kromozom  seks.    Dengan  penambahan  Heparin  pada  media  pemisah  dapat merangsang motilitas dan pergerakan dari spermatozoa sapi setelah pemisahan kromozom X dan Y, dimana Heparin dapat bekerja secara sinergis mempercepat kapasitasi dan reaksi akrozom.  Tujuan  dari  Penelitian  ini  adalah  unuk  mengetahui  tingkat  motilitas Spermatozoa pada semen beku yang media pengencernya ditambahkan heparin dengan level yang berbeda. Kegunaannya adalah untuk memberikan informasi mengenai fungsi dari  heparin  dalam bahan  pengencer  semen beku  terhadap  motilitas    spermatozoa  sapi Limousin.

## Kata kunci: IB, kromozom seks, sapi

## PENDAHULUAN
Teknologi Inseminasi Buatan merupakan salah satu cara meningkatkan daya  produksi  ternak  melalui  perbaikan mutu  genetik.  Kebersihan  IB  sangat tergantung  pada  kualitas  semen  yang digunakan.  Semen  yang  berkualitas diperoleh  dari  pejantan  unggul  yang sehat,  tumbuh  dan  berkembang  secara optimal.
Usaha  yang  dapat  dilakukan untuk  mendapatkan  jumlah  ternak  sapi dengan  jenis  kelamin  yang  diinginkan adalah dengan pemisahan spermatozoa X dan Y, dimana proses pemisahan ini akan memudahkan kita dalam pemilihan jenis kelamin  yang  diinginkan  sehingga efisiensi usaha peternakan dapat meningkat. Pemisahan sperma dapat dilakukan  berdasarkan  pertimbangan
adanya  perbedaan  sperma  pembawa kromozom  X  dan  Y  berdasarkan pertimbangan adanya perbedaan sperma pembawa kromozom X dan Y berdasarkan kualitas dan kuantitas DNA yang  terdapat  dalam  kromozom  seks, perbedaan kuantitas DNA antara sperma pembawa kromozom X dan Y berdasarkan  persentase  DNA,  dimana hewan  mamalia  berkisar  antara  2,5% sampai  4,5%.  Nukleus  pada  sperma mengandung protein yang beratnya sama dengan  berat  DNA  dalam  bentuk protamine yang mempengaruhi
perbedaan  kuantitas  antara  sperma pembawa  kromozom  X dan  Y, sehingga berat kering sperma pembawa kromozom  X  dan  Y  berbeda  nyata  25% (Meistrich,  1982),  dengan  menggunakan albumen  telur  ayam  pemisahan  antara sperma  X dan Y dapat dilakukan.
Dengan  penambahan  heparin pada  media  pemisah  dapat  merangsang motilitas dan pergerakan dari spermatozoa  sapi  setelah  pemisahan kromosom  X  dan  Y,  dimana  heparin dapat bekerja secara sinergis
mempercepat  kapasitas  dan  reaksi akrosom  (Park,  ohgoda,  Niwa,  1989). Hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan pada semen kambing yang ditambahkan heparin didapatkan, bahwa penambahan heparin  mengurangi  laju  motilitas spermatozoa  dan  persentasi  hidup spermatozoa  kambing  boer  hasil  sexing selama penyimpanan (Nuranti, 2005). Dari  uraian  diatas  maka  kami mencoba  untuk  meneliti  kemungkinan dengan  penambahan  level  heparin  ke dalam media pengencer pada semen beku dapat  mengurangi  laju  penurunan motilitas  hasil  pemisahan  kromozom  X dan Y pada semen sapi Limousin dengan menggunakan  level  heparin  yang berbeda.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk  mengetahui  tingkat  motilitas spermatozoa  pada  semen  beku  yang media pengencernya ditambahkan heparin dengan level yang berbeda. Kegunaannya adalah untuk memberikan  informasi  mengenai  fungsi dari  heparin  dalam  bahan  pengencer semen beku terhadap motilitas spermatozoa sapi Limousin.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  mengenai  pengaruh pemberian  heparin  pada  level  yang berbeda pada semen beku sapi limousin hasil sexing yang menggunakan albumen telur  ayam,  dilaksanakan  pada  bulan April  sampai  Mei,  bertempat  di  Unit Pengembangan Ternak Daerah – Inseminiasi Buatan (UOTD – IB) Jongaya Makassar  dan  di  Laboratorium  Fisiologi
Ternak  Fakultas  Peternakan  Universitas Hasanuddin, Makassar
.

## Materi Penilitian
Peralatan  yang  digunakan  pada pelaksanaan  penelitian  ini  adalah seperangkat  alat  vagina  buatan,  tabung reaksi,  gelas  ukur,  pipet  volume, centrifuge, termometer, lensa mikrometer,  bunsene,  labu  erlenmeyer, spoit, saringan, kapas, kertas label, objek glass dan deck glass.
Bahan  yang  digunakan  pada pelaksanaan penelitian ini adalah semen sapi  Limousin  yang  ditampung  dengan menggunakan  metode  vagina  buatan (VB),  albumen  telur  ayam  ras  sebagai media pemisah,alkohol, eosin, NaCl 0,9%, larutan pengencer andromed (aquabides, fruktosa,  gliserol,  adicum  citricum, buffer,  posfolipid,  spektimocint  30  mg, Lincomisin 15 mg dan gentamican 25 mg) dan  heparin  dengan  volume  0,2  dan  4 lu/ml.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  secara eksperimental  dengan  menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  pola faktorial (2 x 3 x 6 ) untuk motilitas dan pola faktoril ( 2 x 3 x 6 ) persentase hidup dengan  4  kali  ulangan  dimana  1  faktor pengukuran berulang dimana
Faktor A adalah medium pemisah (A1 : 10 %  dan  A2  :  30%),  Faktor  B  adalah  level Heparin (B1 : 0 IU/ml dan 4 IU/ml) serta Faktor  C  adalah  (  pengamatan  semen segar, setelah sexing,
setelah penambahan  heparin,  serta  setelah  PTM
0jam, 3 jam dan 6 jam)
Pelaksanaan  penelitian  terdiri  dari beberapa tahapan sebagai berikut :
a. Pembuatan Media Pemisah
Untuk  media  pemisah  dengan konsentrasi  30%,  albumen  telur sebanyak 30 ml dimasukkan kedalam 70  ml  NaCl  0,9  dan  media  pemisah dengan konsentrasi 10% sebanyak 10 ml dimasukkan kedalam 90 ml NaCl 0,9%  kemudian  dihomogengkan selama  20  menit.  Setelah  media pemisah tersedia kemudian disimpan pada temperatur 5 0 C.
b. Penampung Semen Tahap ini diawali dengan penampungan semen dengan menggunakan vagina buatan. Setelah semen tertampung, segera dilakukan penilaian  secara  makropis  (Warna, PH,  volume  dan  Kosistensi)  dan mikroskopis (gerakan massa, gerakan individu,  persentase  motilitas  dan konsentrasi sperma)
c. Pengeceran Semen Semen  sapi  Limousin  yang  telah dievaluasi  kemudian  diencerkan dengan pengencer dengan perbandingan  1  cc  semen  :  1 pengencer.
d. Pemisahan  Spermatozoa  pembawa
kromozom X dan Y Berdasarkan  media  pemisah  setiap fraksi semen disedot dengan menggunakan  pipet  dan  ditampung dalam  tabung  reaksi  masing-masing 1ml dan dibiarkan selama ± 30 menit.
Berdasarkan  media  pemisah  setipa fraksi semen disedot dengan menggunakan  pipet  dan  ditampung dalam tabung reaksi kemudian semen disentrifuge selama 20 menit dengan kecepatan  2500  rpm.  Kemudian sampel ditambahkan larutan pengencer  masing-masing  untuk mendapatkan  endapan  spermatozoa yang  bersih  dari  medium  pemisah. Setelah  itu  sampel  disimpan  dalam lemari  pendingin  selama  20  menit, kemudian ditambahkan level heparin (0,2 dan 4 IU/ml).
e. Pengemasan Semen dan Ekuilibrasi Pengemasan  kedalam  mini  straw, dilakukan  di  dalam  ruangan  dingin setelah itu dilakukan equilibrasi yaitu proses  penyesuaian  spermatozoa terhadap  glycerol  agar  sewaktu pembekuan  kematian  sperma  yang berlebihan dapat dicegah. Kemudian dimasukkan  kedalam  uap  N2  cair selama 2 menit.
f. Thawing  dan  Pemeriksaan  kualitas semen beku
Semen  yang  telah  dibekukan  selama dua  hari  kemudian  di  angkat  dari nitrogen  cair  dan  dimasukkan  ke dalam air hangat (30 0 C) selama 15- 30 detik.  Straw  digunakan  pada  bagian tengah  untuk  mengeluarkan  semen kemudian  dilakukan  pemeriksaan mikroskopis.
Parameter yang diukur setelah perlakuan
1. Persentase    motilitas  yaitu  semen segar,  setelah  sexing,  penambahan heparin serta setelah 0,3 dan 6 jam
2. Persentasi hidup setelah 0,3 jam dan 6 jam

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  ini  akan dianalisa  berdasarkan  analisis  ragam, dengan paket SPSS  10,0 For Windows Model  matematika  rancangan percobaan yang digunakan adalah :
Y ijk = µ + Ai + Bj + (AB)ij + Ƞ ijl + Ck + (AC)ik + (BC)jk + (ABC)ijk + Ɛ ijkl
I  =  1,2 (Medium pemisah)
J  =  1,  2,  3,  (  Level  heparin  dengan perlakuan  kontrol,  2  IU/Ml,  4 IU/ml
k    = 1, 2, 3, 4, 5, 6,( pengamatan semen segar, medium pemisah, penambahan heparin,       setelah PTM 0 jam, 3 jam dan 6 jam ) untuk motilitas  dan  1,  2,  3  (setelah  PTM 0jam,  3  jam  dan  6  jam)  untuk persentasi Hidup l      =  1, 2, 3, 4 (Ulangan).
Keterangan :
Yijkl= Kualitas
Spermatozoa hasil pemisahan  pada  petak  percobaan ke  -  I  yang  diperoleh  kombinasi perlakuan ijk (taraf ke i dari faktor perlakuan  konsentrasi  medium pemisah 10% dan 30% dan taraf ke- i  dari  faktor  tingkat  penambahan heparin.
µ  =  Nilai  rata-rata  umum  kualitas spermatozoa Ai  =  Pengaruh konsentrasi media pemisah 10% dan 30% ke-i Bj  =  Pengaruh  perlakuan  penambahan heparin pada konsentrasi ke-j
(AB)i  =  Pengaruh  interaksi  taraf  ke-i faktor A dan taraf ke-j faktor B
Ƞ ijl   =  Pengaruh galat percobaan pada kelompok ke -I yang memperoleh   taraf   ke- i faktor A, taraf ke – j faktor B Ck   = Pengaruh  aditif dari taraf ke- k faktor C
(AC)ik=  Pengaruh  interaksi  taraf  ke-i faktor A dan taraf ke- k faktor C (BC)jk =  Pengaruh  interaksi  taraf  ke-j faktor B dan taraf ke-k faktor C
( ABC)ijk  =  Pengaruh interaksi taraf ke-i faktor  A,  taraf  ke-j  faktor  B dan taraf ke-k  faktor C
Ɛ ijkl       =  Pengaruh  galat  percobaan pada  kelompok  ke-  I  yang memperoleh  taraf  ke-  i  faktor A, taraf ke-j faktor B dan taraf ke-k faktor C.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik Semen Beku Sapi Limousin. Karakteristik semen sapi Limousin yang digunakan pada penelitian tertera pada Tabel 1.
Tabel 1. Karakteristik Semen Sapi Limousin yang digunakan pada penelitian
Parameter Nilai A. Makroskopis Warna Kosistensi PH Volume Putih susu Sedang 5,7 4,375 B. Mikroskopis Gerakan Massa Motilitas Individu Konsentrasi(Juta/ml) (++) sampai (+++) 70% 758,25
Pada  penelitian  yang  telah dilakukan, semen segar sebelum diproses sesuai dengan perlakuan terlebih dahulu dilakukan pemeriksaan secara makroskopis dan mikroskopis. Penilaian secara makroskopis meliputi pemeriksaan  warna,  kosistensi,  pH,  dan volume,  sedangkan  pemeriksaan  secara mikroskopis meliputi
pemeriksaan gerakan  massa,  dan  konsentrasi.  Hal  ini sesuai dengan pendapat Toelihere (1993) bahwa penilaian semen dilakukan setelah penampungan,  baik  secara  makroskopis maupun mikroskopis
Semen segar sapi Limousin pada penelitian yang telah dilakukan berwarna putih  susu,  hal  ini  sesuai  dengan pendapat  Parodihardjo  (1992)  bahwa warna  semen  segar  yang  baik  adalah
warna  krem  atau  warna  putih  susu, sedangkan  bila  semen  segar  berwarna hijau  kekuning-kuningan  artinya  semen mengandung kuman Pseudomonas auriginosa ,  semen  yang  berwarna  merah berarti  mengandung  darah  dan  bila berwarna  coklat  berarti  semen  tersebut mengandung  nanah,  serta  apabila  di dalam penampungan vagina buatan yang digunakan  kurang  bagus  sehingga vaselin  serta  air  hangat  yang  ada  di vagina  buatan  masuk  ke  dalam  semen segar. Sehingga apabila terjadi hal seperti ini  maka  akan  mengurangi  kualitas  dari semen  yang  akan  dibekukan  dan persentasi motilitas akan berkurang.
Kosistensi  semen  segar  sapi Limousin  yang  digunakan  disini  adalah kosistensinya sedang, hal ini
menunjukkan  semen  yang  digunakan masih  tergolong  bagus  karena  memiliki kosistensi 500 – 600 juta per ml. Menurut pendapat Toilihere (1993) kosistensi atau derajat  kekentalan  pada  sapi  kental berwarna krem, dengan kosentrasi 300 – 2500 juta per ml. Suatu kosistensi seperti susu encer memiliki kosentrasi 500 – 600 juta  per  ml.  Semen  cair  yang  berawan atau hanya sedikit kekeruhan kosentrasi sekitar 100 juta sel per ml dan yang jernih seperti air kurang dari 50 juta per ml. pH sapi limousin yang digunakan adalah  didapatkan  rataan  5,7  dari  hasil yang  didapatkan  ini  membuktikan bahwa pH condong ke arah basa, hal ini mungkin  disebabkan  semen  yang digunakan  banyak  mengandung  cairan yang  banyak  berasal  dari  urethralis  dan kelenjar pelengkap hal ini sesuai dengan pendapat  Salisbury  dan  Vandenmark, (1985)  bahwa  kebanyakan  air  mani normal  yang  dikumpulkan,  condong  ke arah asam dari pH yang normal dengan variasi sekitar 6,5 – 6,9.
Toilihere  (1993)  mengemukakan bahwa volume semen yang
diejakulasikan  oleh  pejantan  dapat berbeda-beda  menurut  umur  pejantan, rasa, besar dan beratnya hewan, frekuensi penampungan  serta  beberapa  faktor lainnya.  Pada  penelitian  ini  rata-rata volume ejakulat didapatkan adalah 4,375 cc hal  ini  sesuai  dengan Toilihere (1993) bahwa  volume  semen  sapi  bervariasi antara 1,0 sampai 15,0 ml. Volume rendah tidak  meragukan,  tetapi  bila  disertai dengan  konsentrasi  yang  sperma  yang rendah akan membatasi jumlah spermatozoa yang tersedia.
Gerakan  massa  semen  yang didapatkan  rata-rata  yang  didapatkan adalah (++) dinyatakan baik hal ini sesuai dengan  pendapat  Partodihardjo  (1992) bahwa nilai (++) dinyatakan baik karena terlihat gelombananya cukup aktif dalam pengamatan mikroskopis.
Persentasi  hidup  semen  segar penelitian  pada  tiga  kali  penampungan yang  diperoleh  adalah  70%.  Hasil  ini tergolong  cukup  baik  karena  menurut
Hafez  (1993)  bahwa  persentasi  hidup spermatozoa harus lebih dari 50%.
Kosentasi  semen  sapi  Limousin yang  didapatkan  selama  penampungan adalah 857,25, hasil ini cukup normal, hal ini sesuai dengan Toelihere (1993) bahwa kosistensi  atau  derajat  kekentalan  pada sapi  kental  berwarna  krem,  dengan kosentrasi 300 – 2500 juta per ml.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Heparin  dapat  mengurangi  laju penurunan  pada  persentase  hidup spermatozoa  sapi  Limousin  setelah thawing

## Saran
Untuk  meningkatkan  produksi dan produktivitas ternak dapat dilakukan teknologi IB dengan menggunakan spermatozoa hasing sexing  yang  di  tambahkan  dengan heparin yang dapat merangsang motilitas yang tinggi.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  (1998).  Prosedur  dan  Tatacara Kerja  dan Distribusi Semen Beku. Direktorat  Jenderal  Peternakan
Departemen Pertanian. BIB Lembang. Bandung. ---.  (2002).  Buku  Panduan  Sexing Spermatozoa. Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya, Malang. ---.  (2006).  Vashes  du  Monde.  La Limousin.  http//www.lavache com/
vamonde/france/limousin.htm. 2-13-2006.
Cormier,  N.,  Balley,  J.L.  (2003).  A
Differential Mechanism is Involved  During  Haperin  and Cryopservatio- Induced Capacitation of Bovine Spermatozoa. Departement Sciensces  Animales  Universite Laval, Canada.
Dorland.  (1996).  Kamus  Kedokteran. Penerbit  Buku  Kedokteran  EGC, Jakarta. Evans,  G.,  and  Maxwell,  WMC.  (1990). Salamon Artifical Insemination of Sheep and Goat. Butterworths Psy Limited, Australia.
Gasperz,  V.  (1991).  Metode  Rancangan Percobaan. Armico, Bandung Hafez,  E.S.E.  (1993).  Reproduction  in Farm  Animals.  7 th Edition.    Lea Febiger. Philadelpia : 440- 443.. Hastuti. (2005). Kualitas Semen Kambing
Boer Hasil Sexing Spermatozoa X dan  Y  dengan  Penambahan Calcium  Ionophore  Pada  Level yang Berbeda. Fakultas Peternakan Universitas Hasanuddin, Makassar. Hunter,  R.H.F.  (1995).  Fisiologi  dan Teknologi  Reproduksi  Hewan Betina Domestik. ITB, Bandung. Isnani, N. (1994). Pemisahan Spermatozoa  X  dan  Y  pada  sepi Fries  Holland  dengan  Centrifuge Gradien Densitas Percoll. Fakultas Peternakan Universitas Brawijaya.  Malang,  Akses  04 Desember  2004.  Hhtp://digilib. Brawijaya.ac.id
Johnson,  L.A.  (2000).  Sexing  Mammalia Sperm for Production of off spring
:  the  State  of-the-art,  Anim. Reprod.Sc. 60-61 : 93- 107. Max  well,  W.M.C.  and  Watson.  (1996). Recent Progress in the preservation  of  ram  semen. Animal  Reproduction  Research and  Practice  13 th International Kongress on Animal Reproduction.  Stone  and  Evan (editor), Elservier. Sidney, Australia. Mahaputra, L. Wurlina, T.D. Sulistyati, S. Mulyati. (1998). Pemisahan Spermatozoa  Domba  dengan Sephadex  Collum  G-200.  Media Kedokteran  Hewan.  Fakultas Kedokteran  Hewan  Universitas Airlangga, Surabaya. Mc. Williams. (1997). Foods Experimental Perpestives Third Edition. Prentive Hall. Inc, New Jersey.
Meustrich.  M.L.  (1982).  Potential  and Limitation of Phisical Method for Sparating  of  Sperm.  Baring  an  X OR Y Cromosome. In Pospect  for Sexing Mammalia Sperm. Edition. Rp Amman and G.E, Seidel., 143- 168.
Nuranthy. (2005). Pengaruh Penambahan Heparin pada level yang Berbeda Terhadap  Kualitas  Semen  Cair Kambing  Boer  Hasil  Pemisahan Spermatozoa  X  dan  Y,  Fakultas
Peternakan Universitas Hasanuddin, Nur. K,S. (2006). Peternak Sapi di Ngalik, Sleman. Yogyakarta. http://www.Pikiran Rakyat Com Partodiharjo, S. (1992). Ilmu Reproduction  Hewan.  Mutiara, Jakarta. Pancahastana, H. (1999). Upaya merubah sex  rasio  spermatozoa  dengan melakukan pemisahan spermatozoa X dan Y menggunakan  putih  telur  pada sapi  Bali.  Fakultas  Peternakan, Universitas Brawijaya, Malang. Pereire, R.J.T.A., R.k. Uli., S.
Walledshortand W. Holtz. (2000). The  Effect  of  Heparin,  Cafferin, and  Calsium  IonphorebA  23187 an  in  vutro  induction  of  the acrosome  reaction  in  frozen- thawed  bovine  and  caprine Spermatozoa.  J.  Theriogonology. 54 : 185-192.
Saili,  T.  (1999).  Efektivitas  Penggunaan
Albumen sebagai Medium Separasi dalam Upaya Mengubah Rasio Alamiah Spermatozoa Pembawa  Kromosom  X  dan  Y pada  Sapi.  Tesis  Pasca  Sarjana IPB,Bogor.
Salisbury, G.W. and N.L Vand Denmark. (1985). Fisiologi Reproduction dan Insemination  Buatan  pada  Sapi. Gadjah  Mada  University  Press,
Yogyakarta.
Susilawati,  T.  (2003).  Penentuan  dan Pengaturan Jenis Kelamin. Fakultas  Peternakan  Universitas Brawijaya, Malang. -------------. Sumitro,S.B. Soehartojo,
Mantra,  Y  dan  Nuryadi.  (2002).
Pola  Kapasitasi  Spermatozoa  X dan  Y  sapi  Hasil  Pemisahan dengan  Menggunakan  Filtrasi Sephadex, dan Sentrifuge Gradien Densites Percoll. Fakultas Peternakan  Unibaw,  Fakultas Peternakan  Unibraw,  Fakultas MIPA unibraw, Fakultas Kedokteran Hewan Unair. Dispet NTT.  Akses  06  Desember  2005, http//diglib brawijaya.ac.id Toelihere, M.R. (1993). Inseminasi Buatan pada Ternak. Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor. Angsa, Bandung. ----------------.  Dan  T.L.  Yusuf.1985. Pengantar  Praktikum  Inseminasi Buatan Edisi 4. Fakultas Kedokteran Hewan, IPB. Bandung.
Vishwanath,  R.  And  Shannon.  2000. Storage of Bovine Semen in Liquid and  Frozen  State.  Anim.  Reprod.
Sci 62 : 23-53 Watson,  P.F.  2000.  The  Causess  of Reduced Fertility with Cryopserved Semen. Anim. Reprod. Sci. 60-61 : 481 – 492