Synthesis of 3-(4-Hydroxy-3-Metoxyphenyil)-1-Phenyl-2-Propen-1-On and its Antioxidant Activity Assay using DPPH
Yuzkiya Azizah, Ahmad Hanapi, Tri Kustono Adi
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang
Email: ayuzkya@gmail.com

## ABSTRACT
3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1-phenylprop-2-en-1-one  has  been  synthezed  using  aldol condensation  reaction  from  vanillin.  The  research  aims  to  incrase  the  potency  of  vanillin  as antioxidant. The synthesis was carried out using reflux method at 70 °C for 1,5 hours at various moles between vanillin and acetophenone i.e. 1:1; 1:1,5; and 1,5:1. The products were characterized by TLC, FTIR,  GC-MS  and  evaluated  for  their  antioxidant  potential  using  DPPH  (2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl)  assay.  The  best  product  was  obtained  by  various  moles  between  vanillin  and acetophenone at 1:1,5 as a bright yellow solid with a melting point at 65 °C; 76.56 % yield; and 87.02 % purities, with IC 50 of the product is 0.179 mM.
Keywords: aldol condensation, antioxidant, vanillin

## ABSTRAK
3-(4-hidroksi-3-metoksifenil)-1-fenil-2-propen-1-on dapat disintesis melalui reaksi kondensasi aldol dari vanilin.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  meningkatkan  aktivitas  antioksidan  dari  senyawa  vanilin.  Reaksi kondensasi  aldol  antara  vanilin  dengan  asetofenon  dilakukan  menggunakan  metode  refluks  pada  suhu  70  °C selama 1,5 jam dengan variasi mol antara vanilin dan asetofenon sebesar 1:1; 1:1,5; dan 1,5:1. Senyawa produk yang terbentuk diidentifikasi menggunakan KLT dan dikarakterisasi menggunakan FTIR dan KG-SM. Senyawa produk  selanjutnya  diuji  aktivitas  antioksidannya  dengan metode  DPPH.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa masing-masing  produk  hasil  sintesis  mengandung  senyawa  target  3-(4-hidroksi-3-metoksifenil)-1-fenil-2- propen-1-on. Variasi terbaik didapatkan dari reaksi melalui perbandingan mol (vanilin:asetofenon) 1:1,5 dengan produk  berbentuk  padatan  berwarna  kuning,  memiliki  kemurnian  sebesar  87,02  %,  persen  hasil  76,56  %,  dan nilai IC 50 sebesar 0,179 mM.
Kata Kunci : antioksidan, kondensasi aldol, vanilin

## I. PENDAHULUAN
Vanilin merupakan senyawa fenol turunan  benzena  yang  memiliki  rumus  molekul C 8 H 8 O 3 dengan  gugus  fungsi  metoksi  (-OCH 3 ) pada  posisi  orto  dan  gugus  aldehida  (-COH) pada  posisi  para.  Sarifudin  (2002)  dalam Budimarwanti  (2009)  memaparkan  bahwa gugus fenol yang terdapat pada senyawa vanilin menjadikan  vanilin  aktif  sebagai  senyawa antioksidan  dan  berpotensi  untuk  meredam senyawa radikal bebas.
Shyamala  dkk.,  (2007) menyatakan bahwa  aktivitas  antioksidan  senyawa  vanilin masih cukup rendah sehingga untuk menetralkan  radikal  bebas  dibutuhkan  vanilin dengan  konsentrasi  yang  tinggi.  Berdasarkan penelitian  tersebut,  maka  sekiranya  perlu dilakukan  penelitian  untuk  menaikkan  aktivitas antioksidan dari vanilin.
Salah  satu  cara  yang  dapat  dilakukan adalah  memperpanjang  sistem  konjugasi  dari vanilin. Penelitian Naik et al . (2013) menyatakan  bahwa  semakin  panjang  sistem

## ALCHEMY , Vol. 4 No. 1 Maret 2015, hal 67-72
konjugasi,  maka  semakin  kecil  nilai  IC 50 suatu senyawa,  dengan  kata  lain  semakin  besar aktivitas antioksidannya.
Gugus fungsi yang paling mudah bereaksi  pada  senyawa  vanilin  adalah  gugus aldehida  (Kumar et  al .,  2013).  Hal  ini  dapat dimanfaatkan  untuk  membentuk  senyawa  baru melalui reaksi kondensasi aldol.
Vanilin merupakan senyawa fenol dengan  gugus  aldehid  tanpa  memiliki  atom  Hα, sehingga  untuk  membentuk  senyawa  baru melalui
mekanisme
kondensasi aldol
diperlukan  senyawa  keton  atau  aldehida  lain yang memiliki atom Hα. Sintesis  senyawa  organik  melalui  reaksi kondensasi aldol silang lebih efektif
menggunakan katalis basa dibandingkan dengan  katalis  asam  (Budimarwanti  dan Handayani,  2010).  Keberadaan  NaOH  sebagai katalis  dalam  reaksi  kondensasi  aldol  juga memegang  peranan  penting.  Konsentrasi  NaOH yang  tepat  akan  membantu  reaksi  kondensasi aldol  sehingga  reaksi  dapat  berjalan  dengan baik  dan  produk  yang  dihasilkan  pun  akan semakin banyak (Pranowo dkk., 2010).
Madiyono  (2002)  telah  mereaksikan vanilin  dan  asetofenon  menggunakan  katalis basa  NaOH  60  %  selama  1,5  jam  dengan variasi  suhu.  Hasil  yang  diperoleh  menyatakan bahwa hasil  terbaik  reaksi  dilakukan  pada  suhu 70  °C.  Gambar  1  menunjukkan  reaksi  yang terjadi  antara  vanilin  dan  asetofenon  dengan bantuan katalis basa.
Mengacu  pada  penelitian  Madiyono (2002),  maka  pada  penelitian  ini  dilakukan sintesis  ulang  menggunakan  variasi  mol  antara vanilin  dan  asetofenon  sebesar  1:1;  1:1,5;  dan 1,5:1.  Produk  hasil  sintesis  yang  diperoleh diidentifikasi menggunakan Kromatografi Lapis  Tipis  (KLT)  dan  dianalisis  menggunakan Spektrofotometer  FTIR  ( Fourier  Transform Infrared  Spectrofotometer )  dan  Kromatografi Gas–Spektrofotometer  Massa  (KG-SM)  untuk mengetahui struktur senyawanya.
Berdasarkan strukturnya, senyawa produk  hasil  sintesis  memiliki  gugus  –OH fenolat  dan  sistem  terkonjugasi  yang  panjang sehingga  dimungkinkan memiliki aktivitas antioksidan. Aktivitas antioksidan pada
penelitian  ini  ditentukan  dengan  menggunakan metode  DPPH  ( 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl ). Metode  DPPH  dipilih  karena  metode  ini merupakan  metode  yang  sangat  sederhana, mudah  dan  cepat  dilakukan,  serta  hanya memerlukan  sedikit  sampel  (Purwaningsih, 2012).
OCH 3 OH O H asetofenon + OH vanilin OCH 3 OH CH 3 O O 3-(4-hidroksi-3-metoksifenil) -1-fenil-2-propen-1-on
Gambar 1 Reaksi antara vanilin dan asetofenon II. METODE PENELITIAN 1. Sintesis Senyawa 3-(4-hidroksi-3- metoksifenil)-1-fenil-2-propen-1-on
(Madiyono, 2002)
Sebanyak  2,5  g  vanilin  (0,0164  mol) dilarutkan  dalam  15  mL  etanol  96  %. Dimasukkan  larutan  ke  dalam  labu  leher  tiga yang  dilengkapi  dengan  pendingin,  pengaduk magnet, termometer, dan penangas air. Ditambah  1,91  mL  (0,0164  mol)  asetofenon dan  10  mL  NaOH  60  %.  Campuran  direfluks pada  suhu  70  °C  selama  1,5  jam,  kemudian didinginkan  pada  suhu  kamar.  Campuran kemudian diencerkan dengan akuades secukupnya  dan  diasamkan  dengan  HCl  10  % hingga  pH  =  1.  Padatan  yang  terbentuk dipisahkan  dengan  cara  dekantasi,  kemudian dikeringkan  dalam  desikator.  Setelah  kering,
padatan  ditimbang,  ditentukan  titik  lelehnya dengan alat penentu titik leleh dan diidentifikasi  senyawa  target  hasil  sintesis menggunakan  KLT,  kemudian  dikarakterisasi menggunakan  FTIR dan KG-SM.
Variasi  mol  vanilin:asetofenon  yang digunakan tertera pada Tabel 1.
Tabel 1 Variasi mol vanilin:asetofenon Variasi mol vanilin:asetofenon Vanilin (g) Asetofenon (mL) 1,0  :   1,0 2,5 1,91 1,0  :   1,5 2,5 2,87 1,5  :   1,0 3,74 1,91
2.  Penentuan  Aktivitas  Antioksidan  Senyawa Metode DPPH (Naik et al. , 2013)
Produk  sintesis  dilarutkan  dalam  pelarut etanol  dengan  konsentrasi  0,25;  0,05;  0,1;  0,2; dan  0,5  mM.  Disiapkan  lima  tabung  reaksi untuk  masing-masing  konsentrasi.  Tiap  tabung reaksi  diisi  dengan  1  mL  larutan  sampel  dan ditambahkan  4  mL  larutan  DPPH  0,1  mM. Setelah  itu  larutan  ditutup  dengan alumunium foil dan  diinkubasi  suhu  37°C  selama  150-190 menit. Kemudian diukur absorbansinya menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada 516  nm.  Data  absorbansi  yang  diperoleh  dari tiap  konsentrasi  dihitung  nilai  persen  (%) aktivitas antioksidannya. Nilai tersebut diperoleh dengan persamaan:
𝑎𝑛𝑡𝑖𝑜𝑘𝑠𝑖𝑑𝑎𝑛 % 𝐴�𝑖�𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 = A 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − A 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 A 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 × 100%
Kontrol  yang  digunakan  adalah  1  mL  etanol dalam  4  mL  larutan  DPPH  0,1  mM.  Setelah
didapatkan persen aktivitas antioksidan, selanjutnya  dihitung  nilai  IC 50 menggunakan persamaan regresi.
Senyawa  pembanding  berupa  vanilin, vitamin  C,  dan  BHT  diperlakukan  sama  seperti sampel  akan  tetapi  larutan  sampel  yang digunakan  diganti  dengan  larutan  vanilin, vitamin  C,  dan  BHT  secara  bergantian  dengan masing-masing  konsentrasi  seperti  tertera  pada Tabel 2.

## Tabel 2 Konsentrasi senyawa pembanding
Senyawa Konsentrasi K 1 K 2 K 3 K 4 K 5 Vanilin 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 Vitamin C 0,025  0,05 0,1 0,2 0,5 BHT 0,025  0,05 0,1 0,2 0,5

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Senyawa 3-(4-hidroksi-3-metoksifenil)- 1-fenil-2-propen-1-on  disintesis  dengan  cara mereaksikan  senyawa  vanilin  dan  asetofenon melalui  reaksi  kondensasi  aldol  menggunakan tiga  variasi  perbandingan  mol  antara  senyawa vanilin dan asetofenon yaitu sebesar (vanilin:asetofenon)  1:1;  1:1,5;  dan  1,5:1. Larutan  basa  NaOH  60  %  digunakan  untuk mempercepat  laju  reaksi  kondensasi  aldol  yang terjadi.  Pada  penelitian  ini,  metode  refluks digunakan untuk memaksimalkan proses sintesis,  yaitu  dengan  menggunakan  suhu pemanasan  70  °C  selama  1,5  jam.  Hasil  dari masing-masing  sintesis  senyawa  tertera  pada Tabel 3. Tabel 3 Hasil sintesis senyawa 3-(4-hidroksi-3-metoksifenil)-1-fenil-2-propen-1-on Sifat Produk hasil sintesis I (vanilin:asetofenon 1:1) Produk hasil sintesis II (vanilin:asetofenon 1:1,5) Produk hasil sintesis III (vanilin:asetofenon 1,5:1) Bentuk Padatan Padatan Padatan Warna Kuning Kuning terang Kuning kecoklatan Titik leleh 76 °C 65 °C 72 °C Berat 2,2284 g 3,6689 g 2,1812 g Kemurnian 84,91 % 87,02 % 68,05 % Persen hasil 45,37 % 76,56 % 35,59 %

## ALCHEMY , Vol. 4 No. 1 Maret 2015, hal 67-72
3. Identifikasi Senyawa Produk Hasil Sintesis Metode KLT Produk  hasil  sintesis  yang  didapatkan diidentifikasi dengan metode KLT
menggunakan  kloroform  sebagai  eluen.  Ketiga produk  hasil  sintesis  yang  didapatkan  dielusi pada  satu  plat  silika  GF 254 10x5  cm menggunakan  vanilin  sebagai  pembanding. Hasil  identifikasi  menunjukkan  bahwa  masing- masing totolan memiliki spot dengan warna  dan jarak  elusi  yang  berbeda  dengan  vanilin,  baik ketika di bawah cahaya ruang maupun di bawah sinar  UV.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  reaksi telah  terjadi  dan  senyawa  baru  telah  terbentuk. Warna  dan  Rf  dari  masing-masing  spot  tertera pada Tabel 4.
Tabel 4 Hasil analisis menggunakan KLT Spot Warna Rf Cahaya ruang Sinar UV Vanilin (a 1 ) - Gelap 0,4375 Produk I (b 1 ) Kuning Hijau 0,5625 Produk II (b 2 ) Kuning Hijau 0,5375 Produk III (b 3 ) Kuning Hijau 0,5625 Tabel 5 Hasil analisis spektra FTIR Gugus fungsi Bilangan gelombang (cm -1 ) Senyawa vanilin Produk hasil sintesis -OH alkohol 3180 3420 -C-O alkohol 1200 1212 -C-O eter 1266 1273 -Csp 3 -H 2946 2936 -Csp 2 -H 3025 3066 -C=C- aromatik 1588;1465 1584;1421 -C=O keton - 1654 -C=O aldehida 1665 - -C-H aldehida 2744 - Karakterisasi dengan Menggunakan Spektrofotometer  FTIR Karakterisasi senyawa menggunakan FTIR  dilakukan  untuk  mengetahui  adanya beberapa  gugus  fungsi  dari  senyawa  target.
Serapan  yang  diharapkan  muncul  pada  produk hasil  sintesis  adalah  keton  (-C=O);  metoksi  (- O-CH 3 ); dan alkohol  (-OH).
Hasil analisis menunjukkan bahwa perbedaan  spektra  terletak  pada  adanya  gugus aldehida  yang  terlihat  pada  spektra  vanilin  dan gugus  keton  terlihat  pada  spektra  produk  hasil sintesis.  Tabel  4.3  merupakan  tabel  hasil analisis  spektra  FTIR  senyawa  vanilin  dan produk hasil sintesis.

## Karakterisasi  Menggunakan  KG-SM
Karakterisasi  senyawa  produk  hasil sintesis  menggunakan  KG-SM  dilakukan  untuk memastikan  adanya  senyawa  target  pada produk  hasil  sintesis.  Banyaknya  puncak  yang muncul pada kromatogram menunjukkan jumlah  senyawa  yang  terkandung  pada  produk hasil  sintesis.  Puncak  kromatogram  yang didapatkan  disertai  dengan  persen  areanya dalam  satuan  persen  (%)  dan  perkiraan senyawanya berdasarkan nilai m/z.
Hasil analisis ketiga kromatogram menyatakan  bahwa  masing-masing  produk hasil  sintesis  mengandung  senyawa  target  3-(4- hidroksi-3-metoksifenil)-1-fenil-2-propen-1-on. Data  kemurnian  serta  persen  hasil  senyawa target pada masing-masing kromatogram tertera pada Tabel 6.

## Tabel 6 Hasil analisis KG-SM
Kromatogram  Kemurnian Persen hasil Pertama 84,91 % 45,37 % Kedua 87,02 % 76,56 % Ketiga 68,05 % 35,59 % Berdasarkan  Tabel  6  diketahui  bahwa hasil reaksi terbaik didapatkan melalui
perbandingan mol vanilin:asetofenon  1:1,5. Penentuan  Aktivitas  Antioksidan  Produk Hasil Sintesis Penentuan aktivitas antioksidan dilakukan  melalui  pembacaan  absorbansi  dari spektrofotometer UV-Vis pada panjang
gelombang  516  nm.  Absorbansi  yang  terbaca merupakan  nilai  absorbansi  DPPH  sisa  yang tidak  mampu  dinetralkan  menjadi  DPPH-H. Semakin  kecil  DPPH  yang  tersisa,  maka semakin  tinggi  aktivitas  antioksidan  dari senyawa.  Tabel  7  menunjukkan  nilai  aktivitas antioksidan produk hasil sintesis dan pembanding dalam satuan persen (%).
Tabel  7  menunjukkan  bahwa  persentase aktivitas  antioksidan  senyawa  produk  memiliki nilai  yang  lebih  rendah  dibandingkan  dengan vitamin  C  dan  BHT.  Meski  demikian,  aktivitas antioksidan  senyawa  produk  hasil  sintesis memiliki nilai lebih tinggi dibandingkan dengan senyawa vanilin. Tabel 7 Nilai Aktivitas antioksidan produk hasil sintesis dan pembanding Konsentrasi (mM) % Aktivitas Konsentrasi (mM) % Aktivitas Produk Vitamin C BHT Vanilin 0,025 4,02 18,91 10,15 0,2 0,80 0,05 10,16 34,86 22.71 0,4 2,67 0,1 32,35 68,53 41,24 0,6 2,69 0,2 53,90 92,53 67,38 0,8 3,52 0,5 81,31 97,47 81,35 1 3,89
Data pada Tabel 7 selanjutnya digunakan untuk  menentukan  nilai  IC 50 masing-masing senyawa  menggunakan  persamaan  regresi  yang menyatakan  hubungan  antara  log  konsentrasi sampel (x) dengan persentase aktivitas antioksidan senyawa (y).
Nilai IC 50 merupakan nilai yang menyatakan besar konsentrasi senyawa antioksidan  untuk  meredam  50  %  senyawa radikal  bebas.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 suatu senyawa, maka semakin tinggi aktivitas antioksidannya. Tabel 8  menunjukkan nilai  IC 50 senyawa  produk  dan  pembanding  dalam  satuan mM.
Tabel  8  Nilai  IC 50 produk  hasil  sintesis  dan pembanding No. Senyawa Nilai IC 50 (mM) 1. Produk 0,179 2. Vanilin 14,053 3. Vitamin C 0,065 4. BHT 0,128
Berdasarkan  Tabel  7  dan  Tabel  8  maka dapat  dinyatakan  bahwa  kekuatan  antioksidan senyawa secara berturut-turut adalah vitamin C, BHT, produk hasil sintesis, dan vanilin.

## IV. KESIMPULAN
1. Produk  hasil  reaksi  kondensasi  aldol  antara vanilin dan  asetofenon adalah  senyawa  3-(4- hidroksi-3-metoksifenil)-1-fenil-2-propen-1- on  dalam  bentuk  padatan.  Warna  dari produk  hasil  sintesis  ketiga  variasi  mol antara  vanilin  dan  asetofenon  1:1;  1,5:1; 1:1,5  secara  berurutan  adalah  kuning; kuning  terang;  dan  kuning  kecoklatan dengan titik  leleh sebesar  76  °C; 65  °C;  dan 72  °C,  serta  persen  hasil  sebesar  45,37  %; 76,56 %; dan 35,59 %.
2. Produk  hasil  sintesis  memiliki  aktivitas antioksidan  dengan  nilai  IC 50 sebesar  0,179
mM melalui  metode DPPH.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Budimarwanti,  C.  2009. Sintesis  Senyawa  4- Hidroksi
-5-Dimetilaminometil-3-
Metoksibenzil  Alkohol  dengan  Bahan Dasar  Vanilin  Melalui  Reaksi  Mannich. UNY, Yogyakarta.
Budimarwanti,  C  dan  Handayani,  S.  2010. Efektivitas  Katalis  Asam  Basa  pada Sintesis  2-hidroksikalkon,  Senyawa  yang Berpotensi sebagai Zat Warna. Prosiding seminar  nasional  Kimia  dan  Pendidikan Kimia 2010 . ISBN: 978-979-98117-7-6.

## ALCHEMY , Vol. 4 No. 1 Maret 2015, hal 67-72
Handayani,  S.,  Arianingrum,  R.,  dan  Haryadi, W. 2011. Vanillin Structure Modification of Isolated Vanilla Fruit (Vanilla planifolia Andrews) to form Vanillinacetone. Proceedings  at  14 th
Chemical Congress 2011 . Page 252-257. Madiyono,  M.  2002. Sintesis  Senyawa  3- Metoksi-4-Hidroksikalkon  dari  Vanilin dan Asetofenon . FMIPA UNDIP, Semarang. Naik,  N.,  Kumar,  V.  H.,  Dias,  S.  M.,  and
Swami,  R.  J.  2013.  Novel  4-Methoxy-2- Acetyl  Benzofuran  Based  Chalcones:  A New  Perceptivity  Into  Their  Antioxidant
Potentials. International  Journal  of Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences. Vol 5, Issue 1, page 242 – 247. Pranowo,  D.,  Affandi,  M.  Y.,  Candraningrum, W., dan Muchalal, M. 2010. Mempelajari  Sintesis  4-(hidroksifenil)-3- buten-2-on .  Jurusan  Kimia  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Purwaningsih,  S.  2012. ILMU  KELAUTAN. Aktivitas  Antioksidan  dan  Komposisi Kimia  Keong  Matah  Merah  ( Cerithidea obtusa ).  ISSN  0853-7291.  Vol.  17  (1) 39-48. Institut Pertanian Bogor, Bogor. Shyamala,  B.  N.,  Naidu,  M.,  Sulochanamma, G.  S.,  dan  Srivinas,  P.  2007.  Studies  on the  antioxidant  activities  of  natural vanilla extract and its constituent compounds  through  in  vitro  models. Journal  of  Agricultural  and  Food Chemistry (55) 7738-7743.