## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI MINYAK ATSIRI DAUN SIRIH HIJAU (Piper betle L.) TERHADAP BAKTERI Streptococcus pyogenes dan
Staphylococcus aureus

## Antibacterial Activity of the Essential Oil from Betel leaf (Piper betle L.) against Streptococcus pyogenes and Staphylococcus aureus
Hernandi Sujono, Samsu Rizal, Sari Purbaya, dan Jasmansyah* Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Informatika, Universitas Jenderal Achmad Yani, Jl. Terusan Jenderal Sudirman PO BOX 148, Cimahi *E-mail: jasmansyah@unjani.ac.id
DOI: https://doi.org/10.26874/jkk.v2i1.27
Received : 13 May 2019, Revised : 31 May 2019, Accepted : 31 May 2019, O nline : 31 May 2019

## Abstrak
Daun sirih hijau ( Piper betle L) merupakan suatu tanaman obat. Minyak atsiri daun sirih hijau memiliki aktivitas antibakteri dari senyawa fenolik dan turunannya. Streptococcus pyogenes dan Staphylococcus aureus merupakan  bakteri  yang  dapat  menyebabkan  radang  tenggorokan  (faringitis).  Penelitian  ini dilakukan  untuk  mengetahui  cara  memperoleh  minyak  atsiri  dari  daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L.) menggunakan  metoda  destilasi  uap-air  dan  mengetahui  aktivitas  antibakterinya  terhadap  bakteri Streptococcus pyogenes dan Staphylococcus aureus menggunakan metode sumuran. Daun sirih hijau sebanyak  5  kg  diisolasi  menggunakan  destilasi  uap-air  menghasilkan  minyak  atsiri  sebanyak  9  mL, dengan rendemen 0,135 %, bobot jenis 0,750 g/mL, dan indeks bias 1,337. Adapun hasil analisis GC- MS  minyak  atsiri  daun  sirih  hijau  diperoleh  10  senyawa  dominan  yaitu  senyawa  kavikol,  eugenol, germacren D, karyofilen, eugenol asetat, 2-alifenol, β-chamigren, α-kadinen, terpineol, dan α-humulen. Hasil uji aktivitas antibakteri dari minyak atsiri daun sirih hijau pada kosentrasi 10%, 20%, 30%, dan 40% dapat menghambat bakteri Streptococcus pyogenes dan Staphylococcus aureus dengan kategori hambatan  lemah  sampai  sedang  untuk  bakteri Streptococcus  pyogenes dan  kategori  hambatan  lemah sampai kuat untuk bakteri Staphylococcus aureus .
Kata Kunci: Antibakteri, daun sirih hijau, metode sumuran, Streptocoocus pyogenes , Staphylococcus aureus

## Abstract
Betel  leaf  (Piper  betle  L)  is  a  medicinal  plant. Its  essential  oil  has  antibacterial  activity  of  phenolic compounds and theirs derivatives that can inhibit a wide range of bacteria. Streptococcus pyogenes and Staphylococcus aureus is a bacteria that can cause strep throat (pharyngitis). This study was conducted to  determine  how  to  obtain  the  essential  oil  of  Betel  leaf  green  (Piper  betle  L.)  using  steam-water distillation method and determine the antibacterial activity of essential oils of betel leaf (Piper betle L.) against the bacteria Streptococcus pyogenes and Staphylococcus aureus using wells method. Betel leaf 5 kg isolated using steam-water distillation of essential oils produces as much as 9 mL,  yield of 0.135%, a specific gravity of 0.750 g / mL, and the refractive index of 1.337. The results of GC-MS analysis of betel  leaf  green  essential  oil  obtained  10  Most  compounds  are  compounds  chavicol,  eugenol, germacrene D, caryophyllen, eugenol acetate, 2-allyphenol, β-chamigrene, α-cadinene, terpineol, and α-humulene. Based on the test results of the antibacterial activity of betel leaf that the essential oil of betel leaf green (Piper betle L) at the concentration of 10%, 20%, 30%, and 40% can inhibit the bacteria Streptococcus  pyogenes  and  Staphylococcus  aureus,  the  category  of  barriers  weak  to  moderate  for
bacteria Streptococcus pyogenes and weak to strong resistance categories for Staphylococcus aureus bacteria.
Keywords: Antibacterial, Piper betle L, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, wells method

## 1 Pendahuluan
Tumbuhan  merupakan  sumber  yang  sangat penting bagi manusia dalam menjalani kehidupan [1]. Piper betle L merupakan suatu tanaman obat yang  memiliki  manfaat,  baik  untuk  kesehatan, pencegahan  dan  pengobatan  berbagai  penyakit. Daun  sirih  hijau  mengandung  berbagai  macam senyawa  fenolik  dan  turunannya  serta  dapat berguna dalam menyembuhkan radang tenggorokan (faringitis) [2].
Bakteri  yang  terdapat  di  tenggorokan  dan menyebabkan faringitis diantaranya adalah Staphylococcus aureus [2]. Selain Staphylococcus aureus ,  faringitis  disebabkan  juga  oleh  bakteri Streptococcus  pyogenes [3].  Kedua  bakteri  ini merupakan bakteri Gram positif yang merupakan bakteri patogen bagi manusia [4].
Khasiat  antibakteri  daun  sirih  hijau  telah dilaporkan  [5],  mengenai  aktivitas  antibakteri ekstrak sirih hijau ( Piper betle L.) terhadap bakteri patogen pangan [6], pengujian aktivitas antibakteri  dari  minyak  atsiri  yang  berasal  dari daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L.)  terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan bakteri gram positif E.coli menggunakan metode paper  disc  method  dan  TSA  sebagai  media  dan menentukan  kandungan  komponen  penyusun minyak atsiri dari daun sirih hijau ( Piper betle L.). menggunakan  analisis Gas  Chromatography- Mass Spectrometry (GC-MS).
Penelitian  tentang  bakteri Streptococcus pyogenes pernah  dilakukan  [7],  dengan  judul penelitian  Uji  efek  antibakteri  ekstrak  kulit  kayu manis ( Cinnamomum burmannii) terhadap Escherichia  coli dan Streptococcus  pyogenes , bahwa  kayu  manis  ( Cinnamomum  burmannii ) memiliki  efek  antibakteri  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Streptococcus pyogenes . Penelitian  menggunakan  metode  sumuran pernah dilakukan oleh [8], dengan judul penelitian yaitu, daya hambat ekstrak daun sirih merah ( piper crocatum ) terhadap Streptococcus mutans . Daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L.)  saat  ini banyak  dimanfaatkan  untuk  pengobatan  alami, salah  satunya  mengobati  radang  tenggorokan (faringitis). Kebanyakan dalam kehidupan sehari- hari, pengobatan faringitis sering kali menggunakan obat antiobiotik seperti amoxicillin, siprofloksasin.  Namun  penggunaan  antiobiotik sendiri  memiliki  efek  samping  karena  dosisnya
yang  cukup  tinggi.  Maka  dari  itu,  berdasarkan latar  belakang  di  atas  perlu  dilakukan  penelitian lebih  lanjut  tentang  uji  aktivitas  antibakteri minyak  atsiri  daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L) terhadap  bakteri Streptococcus  pyogenes dan Staphylococcus aureus .

## 2 Metode Penelitian

## 2.1 Pengambilan minyak atsiri daun sirih hijau
Cuci  daun  sirih  hijau  dengan  air  sampai bersih.  kemudian  setelah  dicuci,  masukan  daun sirih  hijau  ke  dalam  stainlees  steel  pada  alat destilasi uap air. Tambahkan aquades secukupnya.Alirkan uap air pada tumpukan daun sirih  hijau  sampai  didapatkan  minyak  atsiri secara  maksimal.  Minyak  atsiri  yang  telah didapatkan kemudian tambahkan dengan Na 2 SO 4 anhidrat.  Selanjutnya  lakukan  dekantasi  agar didapatkan minyak atsiri murni tanpa kandungan air.
Minyak  atsiri  yang  telah  murni  tanpa kandungan  air  kemudian  dibagi  menjadi  dua bagian. Lakukan uji GC-MS untuk sebagian dari minyak  atsiri  untuk  mengetahui  kandungan minyak atsiri daun sirih hijau dan untuk menguji aktivitas antibakteri minyak atsiri daun sirih hijau terhadap  bakteri Streptococcus  pyogenes dan Staphylococcus aureus .

## 2.2 Pembuatan variasi konsentrasi minyak atsiri daun sirih hijau
Minyak daun sirih hijau yang diperoleh dari hasil  proses  destilasi  uap-air,  diencerkan menggunakan DMSO (dimetil sulfoksida) dengan  4  variasi  konsentrasi  (10%,  20%,  30%, 40%).

## 2.3 Kultur  bakteri  Streptococcus  pyogenes  dan Staphylococcus aureus
Pembuatan stok bakteri ini dilakukan untuk memperbanyak dan meremajakan bakteri, dengan  cara  menginokulasikan  1  ose  biakan murni bakteri Streptococcus  pyogenes ke  dalam cawan  petri  yang  berisi  Mueller-Hinton  Agar Darah. Sedangkan untuk bakteri Staphylococcus aureus , menginokulasikan 1 ose biakan murni ke dalam tabung reaksi yang berisi Mueller-Hinton Agar. kemudian masing-masing diinbukasi pada suhu 37˚C selama 24 jam di dalam inkubator.
2.4 Uji  aktivitas  antibakteri  minyak  daun  sirih hijau terhadap bakteri Streptococcus
pyogenes
Bakteri diencerkan dengan mencampurkan 1 ose  suspensi  bakteri Streptococcus  pyogenes ke dalam  tabung  reaksi  yang  telah  berisi  larutan NaCl.  Homogenkan  dengan  cara  di  goyang  dan kekeruhannya  distandarisasi  dengan  konsentrasi Mc  Farland  0,5  sehingga  jumlah  bakteri memenuhi standarisasi untuk uji kepekaan yaitu : 105 – 108 / ml. Kemudian larutan bakteri yang telah  distandarisasi  tadi,  dioleskan  pada  media pertumbuhan  MHA  Darah  menggunakan  swab kapas  steril.  Pada  media  MHA  Darah  dibuat lubang sumuran sebanyak 6 lubang untuk diberi perlakuan  hasil  pengenceran  minyak  daun  sirih hijau  menggunakan  DMSO  (dimetil  sulfoksida) dengan  konsentrasi  10%,    20%,  30%,  dan  40% serta  aquadest  sebagai  kontrol  negatif  dan siprofloksasin  0,2  %  sebagai  kontrol  positif. Inkubasi  ke  dalam  inkubator  dengan suhu 37˚C selama 24 jam.
Amati  dan  ukur  daerah  zona  hambatnya yang  terbentuk  disekitar  lubang  menggunakan jangka sorong. Perlakuan dilakukan secara duplo.

## 2.5 Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Daun Sirih
Hijau  Terhadap  Bakteri  Staphylococcus aureus
Bakteri diencerkan dengan mencampurkan 1 ose  suspensi  bakteri Staphylococcus  aureus ke dalam  tabung  reaksi  yang  telah  berisi  larutan NaCl.  Homogenkan  dengan  cara  di  goyang  dan kekeruhannya  distandarisasi  dengan  konsentrasi 0,5  Mc  Farland  sehingga  jumlah  bakteri memenuhi standarisasi untuk uji kepekaan yaitu :  105-108/ml.  Kemudian  larutan  bakteri  yang telah  distandarisasi  tadi,  dioleskan  pada  media pertumbuhan  MHA  menggunakan  swab  kapas steril. Pada media MHA dibuat lubang sumuran sebanyak  6  lubang  untuk  diberi  perlakuan  hasil pengenceran minyak daun sirih hijau menggunakan DMSO (dimetil sulfoksida) dengan  konsentrasi  10%,  20%,  30%,  dan  40% serta  aquadest  sebagai  kontrol  negatif  dan siprofloksasin  0,2  %  sebagai  kontrol  positif. Inkubasi  ke  dalam  inkubator  dengan suhu 37˚C selama  24  jam.  Amati  dan  ukur  daerah  zona hambatnya  yang  terbentuk  disekitar  lubang menggunakan jangka sorong. Perlakuan dilakukan secara duplo.
2.6 Uji Penegasan Bakteri Streptococcus pyogenes
Siapkan  media  MHA  Darah.  Bakteri  yang sudah distandarisasi, oleskan menggunakan swab kapas steril pada media MHA Darah.Inkubasi ke dalam  inkubator  dengan  suhu  37˚C  selama  24 jam dan amati. Apabila darah pada media MHA Darah terhemolisis, maka bakteri tersebut positif Streptococcus pyogenes .

## 2.7 Uji  Penegasan  Bakteri  Staphylococcus aureus
Siapkan  media  MSA.  Bakteri  yang  sudah distandarisasi, oleskan menggunakan swab kapas steril  pada  media  MSA.  Inkubasi  ke  dalam inkubator dengan suhu 37˚C selama 24 jam dan amati.  Apabila  warna  merah  muda  pada  media MSA  berubah  menjadi  warna  kuning,  maka bakteri tersebut positif Staphylococcus aureus.

## 3 Hasil dan Diskusi
Daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L.)    pada penelitian  ini  di  peroleh  dari  daerah  Sindang Kerta Kec. Cimanggu Kabupaten Bandung Barat. Sindang kerta berada di daerah penggunungan/dataran  tinggi.  Sampel  yang digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu  sebanyak  5 kg.  Kemudian 5 kg daun sirih hijau tersebut di destilasi  menggunakan  teknik  destilasi  uap-air. Dimana  dari  5  kg  daun  sirih  hijau  tersebut menghasilkan  minyak  atsiri  sebanyak  9  mL, persen  rendemen  sebesar  0,135  %,  bobot  jenis sebesar  0,750  g/mL,  dan  indeks  bias  sebesar 1,337.
Berdasarkan  literatur  %  rendemen  minyak daun  sirih  hijau  yaitu  sebesar  0,53  %  [9],  % Rendemen yang diperoleh tidak sesuai yang ada pada  literatur.  Hal  disebabkan  oleh  beberapa faktor diantaranya, iklim, kesuburan tanah, umur tanaman, dan cara penyulingan [10].
Bobot jenis standar minyak atsiri daun sirih hijau  antara  lain  berkisar  antara  0,958-1,057 g/mL  [11].  Dari  Bobot  jenis  yang  peroleh  tidak masuk  ke  dalam  rentang  nilai  standar.  Hal  ini disebabkan  oleh  beberapa  faktor  diantaranya adalah  temperatur,  massa  minyak,  volume minyak, dan kekentalan.
Indeks bias standar tanaman famili Piperaceae yaitu  1,496-1,529  [12].  Indeks  bias yang  diperoleh  tidak  masuk  ke  dalam  rentang nilai  standar.  Hal ini  dikarenakan,  minyak  yang diperoleh  diperkirakan  masih  mengandung  air dan dipengaruhi oleh suhu. Sehingga nilai indeks bias yang diperoleh kecil.
3.1 Hasil  Uji  GC-MS  Minyak  atsiri  daun  sirih hijau
Dari  hasil  analisis  GC-MS  minyak  atsiri daun  sirih  hijau  (Piper  betle  L)    dihasilkan  10 senyawa  terbanyak  dari  38  senyawa  yaitu diantaranya  5  senyawa  turunan  fenol  (senyawa kavikol  (21,27  %),  eugenol  (13,30  %),  eugenol asetat (8,34 %), 2-alifenol (7,01 %), dan terpineol (2,87  %)  )  dan  5  senyawa  seskuiterpen (germacren  D  (9,08  %),  karyofilen  (8,37  %), beta-chamigren (4,62 %), alfa-kadinen (3,88 %), dan alfa-humulen (2,42 %). Hasil analisis GC- MS  minyak  atsiri  daun  sirih  hijau  tersebut sesuai dengan literatur.
3.2 Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  minyak  atsiri daun sirih hijau terhadap bakteri Streptococcus pyogenes
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  minyak  atsiri daun  sirih  hijau  dibandingkan  dengan  kontrol positif dan negatifnya terhadap bakteri Streptococcus pyogenes diperlihatkan pada Tabel 1  dan  Gambar  1.    Berdasarkan  hasil  tersebut, masing-masing variasi konsentrasi minyak atsiri daun sirih hijau dapat menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes dan hambatanya dikategorikan ke dalam hambatan lemah sampai sedang (Tabel 3).

## 3.3 Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Daun Sirih Hijau Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  minyak  atsiri daun  sirih  hijau  dibandingkan  dengan  kontrol positif  dan  negatifnya  terhadap  bakteri  Bakteri Staphylococcus aureus diperlihatkan pada Tabel 2  dan  Gambar  2.    Berdasarkan  hasil  tersebut, masing-masing variasi konsentrasi minyak atsiri daun sirih hijau dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus dan  hambatanya dikategorikan ke dalam hambatan lemah sampai kuat (Tabel 3).
3.4 Hubungan  konsentrasi  dan  kandungan minyak atsiri terhadap aktivitas antibakteri Untuk hasil uji aktivitas antibakteri minyak atsiri  daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L)  dengan variasi  konsentrasi  minyak  sebesar  10%,  20%, 30%,  dan  40%  terbukti  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri Streptococcus  pyogenes dan Staphylococcus  aureus .  Semakin  besar konsentrasi maka akan semakin besar pula daya hambat terhadap bakteri Streptococcus pyogenes dan Staphylococcus  aureus .Yang  menjadikan
perbedaan hasil uji aktivitas antibakteri terhadap bakteri Streptococcus pyogenes maupun Staphylococcus  aureus yaitu  resistensi  dari bakterinya  itu  sendiri  terhadap  suatu  antibiotik atau antibakteri [6].
Adapun klasifikasi respon hambatan pertumbuhan bakteri menurut Greenwood dalam jurnal [13], tentang Pengaruh Pemberian Ekstrak Daun Sirih ( Piper betle L.) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus Isolat Dari Penderita Faringitis ditunjukkan dalam Tabel 3.
Selain  hambatan  dari  minyak  atsiri  daun sirih  hijau,  dilakukan  pula  penghambatan menggunakan  antibiotik  siprofloksasin  0,2  % sebagai kontrol +. Dari hasil hambatan tersebut, menunjukan  hambatan  yang  kuat,  lebih  dari  20 mm,  baik  terhadap  bakteri Streptococcus pyogenes maupun bakteri Staphylococcus aureus . Hambatan minyak atsiri daun sirih hijau mulai efektif menghambat bakteri Streptococcus pyogenes maupun Staphylococcus  aureu s,  yaitu berada pada konsentrasi minyak atsiri daun sirih hijau sebesar 20 % atau > 20 % . Hal ini karena dengan penggunaan konsentrasi mulai dari 20 % atau  >  20  %  bisa  menghasilkan  hambatan kategori sedang sampai kuat.
Daya  antibakteri  minyak  atsiri  daun  sirih hijau disebabkan oleh adanya senyawa fenol dan turunannya yang dapat mendenaturasi protein sel bakteri[9]. Selain merusak dinding sel, senyawa fenol  dan  turunannya  dapat  mendenaturasi protein sel dan merusak membran sel [14]. Pada konsentrasi tinggi fenol dapat merusak membran sitoplasma  secara  total  [15].  Selain  fenol, beberapa  hasil  penelitian  lain  menunjukkan bahwa senyawa terpenoid juga dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  yaitu  dengan mengganggu proses terbentuknya membran atau dinding  sel,  membran  atau  dinding  sel  tidak terbentuk atau terbentuk tidak sempurna [16].
Dengan keberadaan senyawa turunan fenolik  dan  senyawa  terpenoid  (seskuiterpen) dari minyak atsiri daun sirih hijau, hal ini dapat merusak  dinding  sel,  mendenaturasi  protein  sel dan merusak membran sel bakteri Streptococcus pyogenes dan Staphylococcus aureus . Selain itu juga  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri yaitu  dengan  mengganggu  proses  terbentuknya membran atau dinding sel, membran atau dinding sel  tidak  terbentuk  atau  terbentuk  tidak sempurna.  Sehingga  hal  ini,  dari  10  senyawa terbesar  hasil  GC-MS  minyak  atisiri  daun  sirih hijau,  terbukti  kuat  dapat  menghambat  bakteri Streptococcus  pyogenes dan Staphylococcus
aureus . Adapun 10 senyawa tersebut antara lain, 5 senyawa turunan fenol (senyawa kavikol (21,27 %), eugenol (13,30 %), eugenol asetat (8,34 %), 2-alifenol (7,01 %), dan terpineol (2,87 %) ) dan 5 senyawa seskuiterpen ( (germacren D (9,08 %), karyofilen  (8,37  %),  beta-chamigren  (4,62  %), alfa-kadinen  (3,88  %),  dan  alfa-humulen  (2,42 %) ).
Tabel  1.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  minyak atsiri daun sirih hijau terhadap bakteri Streptococcus pyogenes Konsentrasi Minyak Atsiri Diameter Zona Hambat (mm) I II Rata- Rata 10% 13,3  14,3 13,8 20% 15,4  16,4 15,9 30% 17,4  17,4 17,4 40% 18,4  19,3 18,85 Kontrol (+) Siprofloksasin 0,2%   34,3  34,6 34,45 (-) Aquadest 0 0 0
Gambar  1.  Zona  hambat  hasil  uji  aktivitas antibakteri terhadap bakteri Streptococcus pyogenes  menggunakan:  a)  minyak  atsiri  daun sirih  hijau  10%,  20%,  30%,  40%  dan  b) Siprofloksasin  0,2%  sebagai  kontrol  positif  dan aquadest sebagai kontrol negatif
Tabel  2.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  minyak atsiri daun sirih hijau terhadap bakteri
Staphylococcus aureus Konsentrasi Minyak Atsiri Diameter Zona Hambat (mm) I II Rata- Rata 10% 13,4  14,3 13,85 20% 17,3  17,9 17,6 30% 20,3  21,4 20,85 40% 23,4  24,4 23,9 Kontrol (+) Siprofloksasin 0,2%   43,3  43,6 43,45 (-) Aquadest 0 0 0
Gambar  2.  Zona  hambat  hasil  uji  aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus menggunakan: a) minyak atsiri daun sirih hijau 10%, 20%, 30%, 40% dan b) Siprofloksasin 0,2% sebagai kontrol positif dan aquadest sebagai kontrol negatif
Tabel 3. Kategori respon hambatan pertumbuhan bakteri
Diameter Zona Hambat (mm) Respon Hambatan Pertumbuhan > 20 Kuat 16 – 20 Sedang 1 – 15 Lemah 0 Tidak Ada
3.5 Hasil  Uji  Penegasan  Bakteri  Streptococcus pyogenes dan Staphylococcus aureus
Pada  uji  penegesan  bakteri  ini,  bertujuan untuk  membuktikan  bahwa  bakteri  yang digunakan adalah betul-betul bakteri Streptococcus  pyogenes dan Staphylococcus aureus .  Di  mana  untuk  membuktikan  bakteri Streptococcus  pyogenes ,  Uji  positif  bakteri Streptococcus pyogenes yaitu warna merah darah pada  media  MHA  Darah  akan  terhemolisis seperti Gambar 3 Sedangkan untuk membuktikan bakteri Staphylococcus aureus , Uji positif bakteri Staphylococcus aureus yaitu warna merah muda pada media MSA berubah warna menjadi warna kuning seperti Gambar 4.
Gambar 3. Hasil uji penegasan bakteri
Streptococcus pyogenes
Gambar 4. Hasil uji penegasan bakteri Staphylococcus aureus

## 4 Kesimpulan
Pengambilan  Minyak  atsiri  dari  daun  sirih hijau  ( Piper  betle L.)  dapat  diperoleh  dengan metode  destilasi  uap-air  dan  diperoleh  juga persen  rendemen  sebesar  0,135  %,  bobot  jenis 0,750 g/mL, dan indeks bias 1,337. Berdasarkan hasil GC-MS, 10 senyawa terbanyak terdiri dari 5  senyawa  turunan  fenol  dan  5  senyawa seskuiterpen.  Minyak  atsiri  daun  sirih  hijau ( Piper  betle L)  dapat  menghambat  bakteri Streptococcus  pyogenes dan Staphylococcus aureus .

## Daftar Pustaka
[1] Sudewo, B. 2004. Tanaman Obat Populer Penggempur  Aneka  Penyakit .  Agromedia
Pustaka. Jakarta.
[2] Gupte,  S.1990. Mikrobiologi  Dasar  Edisi Ketiga.  Terjemahan  dari The Textbook  of Medical Microbiology, oleh J. E. Suryawidjaja. Binarupa Aksara. Jakarta.
[3] Dorland, W.A.N. 2010. Kamus kedokteran dorland . Edisi 31. EGC. Hal. 1238-1239.
[4] Hermawan,A.,  Hana,  W.  dan  Wiwiek,  T. 2007. Pengaruh Ekstrak Daun Sirih (Piper betle L.) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia Coli dengan Metode  Diffusi  Disk . UNAIR. Surabaya. [5] Suliantri, B.S.L.Jenie, M.T Suhartono, dan A.  Apriyantono. Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak  Sirih  Hijau  (Piper  Betle L) Terhadap Bakteri Patogen Pangan . Jurnal
Teknol  dan  Industri  Pangan,  Vol.  XIX No.1 Th.2008.
[6] Rachmat,  Masykur,  Mae  Sri  Hartini  W, dan Subagus Wahyuono. Aktivitas
Antibakteri  sediaan  obat  kumur  berisi minyak atsiri daun sirih (Piper Betle Linn) dan Analisis Komposisi Minyak Atsirinya . 2000.  Majalah  Farmasi  Indonesia,  Vol. 11(4), Hal. 235-240.
[7] Repi,  Christi  Mambo,  dan  Jane  Wuisan. Uji  efek  antibakteri  ekstrak  kulit  kayu manis Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus Isolat dari Penderita  Faringitis . Loka  Penelitian dan Pengembangan Biomedis Aceh, SEL Vol.
2 No. 2 November 2015: 57-65.
[8] Wahyu,  N  Qolifah  Indah,  Pujiana  Endah Lestari , dan Erna sulistyani. Daya Hambat
Ekstrak Daun Sirih Merah (Piper crocatum) terhadap Streptococcus mutans . Jurnal Hasil Penelitian Mahasiswa, 2013.
[9] Harapini, M., Agusta, A., dan Rahayu, R. D.  1996. Analisis  Komponen  Kimia Minyak  Atsiri  dari  Dua  Macam  Sirih (Daun Sirih Kuning dan Hijau ), Prosiding Simposium  Nasional  I  Tumbuhan  Obat dan Aromatika. Hal. 58-64.
[10] Ketaren,  S.  1985.  Pengantar  Teknologi Minyak Atsiri. Jakarta. Balai Pustaka.
[11] Guenther,  E.  1952. The  Essential  Oils. Volume  Two,  Fourth  Printing,  Van
Nostrand  Reinhold  Company .  New  York.
Hal. 504-515.
[12] Gunther,  E.,  1987.  Minyak  Atsiri.  Jilid  I. Penerbit Universitas Indonesia. Jakarta.
[13] Effa dan Nona Rahmaida Puetri. Pengaruh
Pemberian  Ekstrak  Daun  Sirih  (Piper betle L.) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus Isolat dari Penderita  Faringitis . Loka  Penelitian dan Pengembangan Biomedis Aceh, SEL Vol.
2 No. 2 November 2015: 57-65.
[14] Pelczar. M. J., dan Chan, E. S. 1986. Dasar – Dasar Mikrobiologi . UI Press. Jakarta.
[15] Volk  dan  Wheeler.  1988. Mikrobiologi Dasar.  Edisi  Kelima.  Jilid  I. Penerbit Erlangga. Jakarta. [16] Markham, KR. 2012. Cara mengidentifikasi flavanoid. Indonesia Medicus  Veterinus ,  Vol.  1.  No.  3.    Hal. 337-51.