## PENGARUH KONSENTRASI DAN LAMA INKUBASI TERHADAP AKTIVITASENZIM SELULASE DARIKAPANG
Aspergillusniger 1) 2) 3) Pujiati , R. Bekti Kiswardianta , Wiwin Solikati 1FPMIPA IKIP PGRI MADIUN email: poesky86@gmail.com 2FPMIPA IKIP PGRI MADIUN
email: kiswardianta.biomipa@gmail.com 2FPMIPA IKIP PGRI MADIUN email: wsolikati@yahoo.com

## Abstract
Aspergillusniger is one type of mold that has a high ability to produce cellulases. Cellulases in the manufacturing process required the right conditions in order to obtain optimum quality and quantity. This study aims to determine the effect of different concentrations of inoculum and  incubation  time  on  cellulases  activity  of  Aspergillusniger.The  method  used  was  a quantitative  experiment  with  pattern  completely  randomized  design(CRD)  two  factorial. Treatment research includes different of inoculum (K) which are 10%(K1), 15% (K2), 20% (K3) and incubation times (T) are 5 days (T1), 7 days (T2), 9days (T3). The datawere taken from the treatment is glucose levels of cellulases activity using theNelson Somogyi method. Analysis data using ANOVA two lanes with 5% of a significance level and continued to test Honestly Significant Difference (HSD). The results showed that: Fhit>Ftabso that there are significant differences in inoculum concentrations and incubation time of cellulolytic activity from  Aspergillusniger.The  highest  glucose  levels  obtained  in  K3T1  treatment  (20%  of concentration and 5days of incubation time) with 0.072%.

## Keywords: Aspergillusniger, glucose, cellulases activity

## 1. PENDAHULUAN
K a p a n g A s p e rg i l l u s n i g e r a d a l a h mikroorganisme  yang  dapat  menghasilkan enzim selulase. Menurut Yuniarti (2004: 35-36) Aspergillus  niger telah  dikenal  sebagai  salah s a t u   m i k r o o rg a n i s m e   y a n g   m e m i l i k i kemampuan  yang  tinggi  untuk  menghasilkan berbagai  enzim  yang  penting  penerapannya dalam  industri  pangan  seperti  enzim  selulase, a m i l a s e ,   a m i l o g l u k o s i d a s e .   M e n u r u t Hieronymus  (2010:  4)  menyatakan  bahwa kehidupan  mikroskopik  dalam  tanah  meliputi yeast, fungi, alga, diatom, dan protozoa. Jamur yang  mendiami  tanah  terutama  jamur  tingkat rendah yaitu kapang.
Aspergillus  niger merupakan  fungi  dari ascomycota yang berfilamen, mempunyai hifa, bercabang-cabang dan bersekat, dan ditemukan melimpah  di  alam.  Fungi  diisolasi  dari  tanah, sisa  tumbuhan,  dan  udara  di  dalam  ruangan. Aspergillus  niger tumbuh  optimum  pada  suhu o o 35-37 C, dengan suhu minimum 6-8 C dan suhu o maksimum 45-47 C. Proses pertumbuhan fungi
ini  adalah  aerobik. Aspergillus  niger memiliki warna  dasar  putih  atau  kuning  dengan  lapisan konidiospora yang tebal, berwarna coklat gelap (Maria & Suharto, 2012: 10).
Berikut  ini  adalah  klasifikasi  ilmiah Aspergillus niger.
Tanah hutan yang dipenuhi guguran daun dan  ranting-ranting  membuat  tanahnya  subur. Tanah  yang  subur  akibat  dekomposisi  dan penguraian  daun  beserta  ranting-ranting  oleh mikroorganisme  menjadi  unsur  hara  yang diperlukan  oleh  tumbuhan.  Tanah  yang  subur diindikasikan  populasi  mikroorganisme
Domain : Eukaryota Kingdom : Fungi Phylum : Ascomycota Kelas : Eurotiomycetes Ordo : Eurotiales Family : Trichocomaceae Genus : Aspergillus Spesies : Aspergillus niger
(Maria & Suharto, 2012: 11)
melimpah karena banyaknya sumber energi dari reduksi  senyawa-senyawa  organik  yang dibutuhkan oleh mikroorganisme tersebut.
Produksi  enzim  selulase  dalam  skala industri  membutuhkan  biaya  produksi  tinggi sehingga  enzim  yang  dihasilkan  mahal,  untuk mengatasi  masalah  dalam  produksi  enzim digunakan  substrat  dari  limbah  pertanian. Menurut  Puspita,  Bambang,  Wahyunanato (2013:  22)  menyatakan  produksi  enzim memerlukan substrat yang biasanya berasal dari bahan  berpati  maupun  berselulosa.  Jerami merupakan  limbah  pertanian  yang  sangat melimpah  di  Indonesia.  Jerami  hanya dimanfaatkan  sebagai  pakan  ternak,  sisanya yang  tidak  dimanfaatkan  dibakar  begitu  saja sehingga  dapat  menimbulkan  polusi  udara. Jerami  belum  dimanfaatkan  secara  optimal. Limbah  pertanian  tersebut  dapat  dijadikan substrat dalam pembuatan enzim selulase karena mengandung selulosa.
Menurut  Nadiem,  Arief,  Sugeng  (2010: 131)  menyatakan  Indonesia  menghasilkan  180 juta ton jerami padi tiap tahun yang terdiri dari 38% selulosa, 24% hemiselulosa, dan 8% lignin.
1) Selulosa
Selulosa  merupakan  senyawa  organik yang  paling  banyak  di  alam,  karena  struktur bahan seluruh tumbuhan sebagian besar terdiri atas  selulosa.  Suatu  jaringan  yang  terdiri  atas beberapa  lapis  serat  selulosa  adalah  unsur penguat utama dinding sel tumbuhan. Selulosa merupakan  senyawa  polisakarida  yang mempunyai  rumus  (C6H10O5)n  dimana  n berkisar  dari  2000  sampai  3000,    selulosa terdapat  dalam  tanaman  sebagai  komponen penyususn dinding sel (Harunsyah dan Ridwan, 2012: 49).
2) Hemiselulosa Hemiselulosa termasuk polisakarida yang terdapat bersama-sama dengan selulosa, bila di hidrolisa  menghasilkan  bermacam-macam sakarida  seperti  hektosa  dan  pentosa  (Pandey, dalam Harunsyah & Ridwan, 2012: 49).
3) Lignin
Lignin  adalah  penyusun  jaringan tumbuhan  selain  selulosa  dan  hemiselulosa. Fungsi dari lignin untuk memberi kekakuan pada jaringan pengangkut tumbuhan dan melindungi struktur  yang  tersusun  dari  polisakarida (selulosa  dan  hemiselulosa)  dari  serangan organisme  lain  sehingga  lignin  bersifat rekalsitran (Hammel dalam Subowo, 2010: 1).
Menurut  Judoamidjojo , dkk.  (dalam Gunam,  Buda,  Yoga,  2010:  56)  menyatakan hambatan proses hidrolisis selulosa baik secara
asam maupun enzimatis adalah adanya struktur kristalin  dan  lignin  yang  berfungsi  sebagai pelindung  selulosa.  Menurut  Gunam,  Redi, Bagus  (2011:  30)  menyatakan  untuk  memecah pelindung  lignin  perlu  dilakukan  perlakuan terlebih  dahulu  terhadap  bahan  baku  yaitu dengan  proses  delignifikasi.  Delignifikasi merupakan suatu proses pembebasan lignin dari suatu  senyawa  kompleks.  Dengan  pemberian perlakuan  delignifikasi  pada  substrat  maka selulosa  alami  diharapkan  menjadi  mudah dihidrolisis oleh enzim selulolitik.
Enzim  selulase  merupakan  enzim    yang digunakan  untuk  menghidrolisis  selulosa  yang banyak dimanfaatkan dalam berbagai   industri. Sinatari,  Aminin,  Sarjono  (2013:  131) mengemukakan  enzim  selulase  umumnya digunakan  dalam  berbagai  industri  seperti bioteknologi  makanan,  tekstil,  pakan  ternak, kertas,  dan  pertanian.  Banyaknya  kebutuhan akan  enzim  selulase  diperlukan  jumlah inokulum  dan  waktu  inkubasi  (fermentasi) dalam  jumlah  yang  sesuai  agar  mendapatkan enzim selulase yang optimal, sehingga aktivitas enzim selulase maksimal. Konsentrasi inokulum a d a l a h   j u m l a h   m i k r o o rg a n i s m e   y a n g ditambahkan  dalam  substrat  dan  nutrisi  untuk proses  pembuatan  enzim  selulase.  Jumlah mikroorganisme  sangat  berpengaruh  dalam proses  fermentasi.  Proses  fermentasi  dapat optimal dengan menambahkan jumlah inokulum dengan  konsentrasi  yang  tepat,  sehingga didapatkan  enzim  selulase  dengan  aktivitas enzim yang maksimal. Menurut Widya, Anthoni, Yetria (2013: 36-37) menyatakan besar kecilnya jumlah  inokulum  mempengaruhi  aktivitas enzim.
Menurut  Abdul  Aziz  (dalam  Zulfatus, dkk., 2008: 13) Pada awal fermentasi aktivitas enzim  masih  sangat  rendah.  Aktivitas  enzim akan  meningkat  sejalan  dengan  bertambahnya waktu fermentasi dan menurun pada hari ke-10. Hal  ini  mengikuti  pola  pertumbuhan mikroorganisme yang mengalami beberapa fase pertumbuhan  yaitu  fase  adaptasi,  fase eksponensial, fase stasioner, dan fase kematian. Organisme  pembentuk  spora  biasanya memproduksi  enzim  pada  fase  pasca eksponensial. Jadi dapat diduga bahwa pada saat aktivitas  enzim  yang  dihasilkan  tinggi,  maka kapang  telah  berada  pada  fase  tersebut.  Pada
o temperatur  31 C  aktivitas  tertinggi  diperoleh setelah  hari  ke-4  fermentasi,  akan  tetapi  pada hari ke-6 mengalami penurunan aktivitas enzim dan  pada  hari  ke-8  mengalami  kenaikan kembali.
Produksi  enzim  selulase  diperlukan
Pengaruh Konsentrasi dan Lama Inkubasi Terhadap Aktivitas Enzim Selulase ....
proses dan lama fermentasi untuk menghasilkan enzim selulase dengan optimal. Enzim selulase yang didapat sebelum digunakan diuji aktivitas enzimnya terlebih dahulu. Aktivitas enzim yang telah diketahui kemampuannya dapat langsung diaplikasikan sehingga mendapatkan hasil yang maksimal.

## 2. METODE PENELITIAN Alat dan bahan
Alumunium  foil , wrapping  plastic ;  autoklaf; ayakan;  sentrifugasi;    timbangan  listrik;  oven; gelas  beaker;  pipet  ukur;  rak  tabung  reaksi; spatula;  spektrofotometer;  tabung  reaksi;  ose; kompor listrik; bunsen; erlenmeyer; gelas ukur; tip; mikropipet; cawan petri; gelas ukur; shaker , korek api, botol spray. PDA (Potato Dextrose Agar); akuades; alkohol 70%; NaOH 6%; amonium sulfat ((NH ) SO ) 10 4 2 4 g/L;  urea (CO(NH ) ) 3 g/L; kalium dihidrogen 2 2
fosfat  (KH PO )  3  g/L;  magnesium  sulfat 2 4
heptahidrat  (MgSO .7H O)  0,5  g/L;  kalsium
4 2
klorida monohidrat (CaCl.H O) 0,5 g/L; substrat 2 j e r a m i ;   r e a g e n s i a   N e l s o n ;   r e a g e n Arsenomolibdat;  glukosa  standar;  KOH  2  M, Aspergilus niger.

## Cara Kerja
Ambil sampel tanah sebanyak 1g dimasukkan ke -1 dalam  tabung  pengenceran  10 selanjutkan -9 dilakukan pengenceran bertingkat 10 . Siapkan PDA (Potato Dextrose Agar)   1,75g dilarutkan dengan  aquades  dalam  erlenmeyer  dan dipanaskan di atas kompor listrik sampai larutan homogen. Sumbat mulut erlenmeyer yang sudah terdapat  media  PDA  dengan  kapas  kasa  100% dan dilapisi dengan alumunium foil. Siapkan 3 pasang cawan petri yang yang dibungkus kertas koran.  sterilkan  erlenmeyer  dan  cawan  petri o dimasukkan dalam autoklaf dengan suhu 121  C selama 20menit. Ambil 1mL dari 3 pengenceran terakhir untuk ditanam secara spread plate pada medium PDA yang telah dituang dalam cawan petri  ±15mL,  kemudian  digoyang  membentuk angka 8 sampai mengeras. Bungkus cawan petri dengan  wrapping  plastic  kemudian  diinkubasi selama 7 hari.

## Pengkulturan murni dengan agar miring
Siapkan  PDA  1,95g  dilarutkan  dengan  50mL aquades  dan  dipanaskan  di  atas  kompor  listrik sampai homogen. Masukkan ±5mL media PDA dalam  tabung  reaksi  kemudian  ditutup  dengan kapas  dan  dilapisi  alumunium  foil.  Sterilkan media PDA dalam tabung reaksi dengan autoklaf
o dengan suhu 121 C selama 20 menit. Media agar dimiringkan sampai mengeras supaya terbentuk agar  miring.  Ambil  spora  Aspergillus  niger dengan  ose  dari  isolasi  mikroba  dan  di tumbuhkan di media agar miring dengan metode zig-zag.

## Penyiapan substrat
Siapkan  jerami  padi  yang  telah  di  keringkan selama  4hari  di  bawah  matahari.  Hancurkan jerami  padi  kemudian  diayak.  Melakukan delignifikasi  dengan  perbandingan  1:15  antara serbuk  jerami  dan  NaOH  selama  12  jam, kemudian  dicuci  sampai  netral  setelah  itu dilakukan pengeringan.

## Pembuatan larutan nutrisi
Melarutkan  urea  (3g/L),  (NH ) SO   (10g/L),
4 2 4 KH PO   (3g/L),  MgSO .7H O  (0,5g/L),
2 4 4 2
CaCl.H O  (0,5g/L)  dengan  akuades  dalam 2 erlenmeyer.

## Pembuatan enzim selulase
Sebanyak  5g  serbuk  jerami  dimasukkan  ke dalam erlenmeyer 250 mL dan ditambahkan 50 mL larutan nutrisi kemudian ditutup. Campuran (media)  tersebut  disterilkan  pada  temperatur o 121 C selama 20 menit kemudian didinginkan. Menginokulasi  bibit Aspergilus  niger sesuai dengan  variabel  yang  telah  ditentukan  pada media  dan  dinkubasi  sesuai  dengan  variabel yang  telah  ditentukan.  Media  yang  telah dinokulasi sesuai variabel yang telah ditentukan dipanen  pada  lama  inkubasi  5,7,  dan  9  hari. Menshaker media enzim selulase selama 2 jam. Memanen  enzim  dengan  disentrifugasi  pada 3000  rpm  selama  10  menit.  Kemudian  didapat supernatan  ( crude  enzim selulase).  Mengukur enzimselulase  5ml  dan  dicampur  dengan substrat  jerami  1%  dari  banyak  larutan  enzim diamkan  selama  30  menitenzim  siap  diuji dengan menggunakan metode Nelson Somogyi.
Uji  aktivitas  enzim  dengan  analisa  glukosa menggunakan metode Nelson Somogyi (Dyah, 2012: 40).

## Preparasi  sampel  dan  pembuatan  kurva standar
Menyediakan  larutan  sampel  sebanyak  0,5ml. Siapkan  6  tabung  reaksi  masing-masing  diisi dengan  0;  0,2;  0,4;  0,6;  0,8;  dan  1  ml  larutan glukosa standar. Tambahkan akuades dalam tiap tabung tersebut sehingga volume untuk tiap-tiap tabung mencapai 1ml. Tambahkan 1ml reagensia Nelson  pada  tiap-tiap  tabung  dan  panaskan
dalam air mendidih selama 20 menit. Dinginkan semua tabung dengan cara direndam dalam air
o dingin hingga suhu mencapai 25 C. Tambahkan 1  ml  reagen  Arsenomolibdat  pada  tiap-tiap tabung, kocok homogen sampai semua endapan Cuprooksida  larut  semua.  Tera  absorbansinya pada ë  540nm  dengan  spektrofotometer.  Buat kurva  standar  hubungan  antara  absorbansi dengan konsentrasi. Tentukan persamaan kurva standarnya.

## Penentuan kadar gula reduksi sampel
Penentuan  kadar  gula  reduksi  sampel  dengan menggunakan  persamaan  kurva  standar.  Kadar gula reduksi (Sudarmadji, 1997):
konsentrasi 20% lama inkubasi 7 hari (K3T2).
Perbedaan konsentrasi inokulum dan lama inkubasi  berpengaruh  pada  aktivitas enzim selulase  dari  kapang Aspergillus  niger dengan substrat jerami dari masing-masingperlakuan.
Berdasarkan  tabel  1  dibuat  histogram seperti pada gambar 1
Gambar 1. Rata-rata kadar glukosa enzimselulase dari kapang Aspergillus niger
Berdasarkan  gambar  4.1  menunjukkan bahwa kadar glukosa paling tinggi terdapat pada perlakuan  konsentrasi  20%  dengan  lama inkubasi  5  hari  (K3T1)  sebesar  0,072% sedangkan  kadar  terendah  pada  perlakuan dengan konsentrasi 20% dengan lama inkubasi 7 hari  (K3T2)  sebesar  0,016%.  Konsentrasi inokulum  dan  lama  inkubasi  mempengaruhi kadar  glukosa  enzim  selulase.  Bila  dikaitkan dengan tabel sidik ragam konsentrasi inokulum mempengaruhi  kadar  glukosa,  hal  ini dikarenakan dalam proses fermentasi inokulum yang  lebih  kecil  dari  15%  tidak  sesuai  untuk produksi enzim selulase karena inokulum yang digunakan jumlahnya tidak optimum (Fransiska, dkk.,  2011:  5-6),  sehingga  konsentrasi  20% c u k u p   o p t i m u m   u n t u k   m e n g h a s i l k a n enzimselulase  dengan  aktivitas  tertinggi  yaitu 0,072%.
Bila  dikaitkan  dengan  tabel  sidik  ragam lama  inkubasi  mempengaruhi  kadar  glukosa enzimselulase  bahwa  lama  inkubasi  5  hari memperoleh  kadar  glukosa  tertinggi  yaitu 0,072%, hal ini sesuai dengan pernyataan Abdul Aziz  dalam  Zulfatus,  dkk.  (2008:  13)  aktivitas enzim  diperoleh  pada  saat  pasca  eksponensial (stasioner)  yaitu  setelah  hari  ke  4  fermentasi. Pada  lama  inkubasi  tersebut  menunjukkan bahwa  enzim  selulase  bekerja  secara  optimal dalam menghidrolisis subtratnya yaitu selulosa yang terdapat pada jerami menjadi glukosa.
Perlakuan Kadar Glukosa Rata-rata Ulangan 1 Ulangan 2 K1T1 0,053 0,057 0,055 K1T2 0.019 0,015 0,017 K1T3 0,029 0,027 0,029 K2T1 0,053 0,055 0,054 K2T2 0,017 0,018 0,018 K2T3 0,027 0,027 0,027 K3T1 0,075 0,069 0,072 K3T2 0,016 0,016 0,016 K3T3 0,025 0,027 0,026

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Data hasil uji kadar glukosa dari aktivitas enzim selulase kapang Aspergillus niger dengan substrat jerami dengan metode Nelson Somogyi dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1.
Penghitungan kadar glukosa dari aktivitas enzim selulase
x.fp b. sampel (mg) . 100 0,055 0,017 0,029 0,054 0,018 0,027 0,072 0,016 0,026 0 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 07 08 0,09 1 5  hari 7 hari 9 hari Lama Inkubasi Histogram Kadar Glukosa Crude Enzim Selulase Dari Kapang Aspergillus Niger Dengan Substrat Jerami 10% 15% 20% Kadar Glukosa Crude Enzim Selulase (%)
Tabel  1.  menunjukkan  bahwa  rata-rata kadar  glukosa  tertinggi  adalah  0,072  pada perlakuan  konsentrasi  inokulum  20%    lama inkubasi 5 hari (K3T1), sedangkan rerata kadar glukosa  terendah  adalah  0,016  pada  perlakuan
Pengaruh Konsentrasi dan Lama Inkubasi Terhadap Aktivitas Enzim Selulase ....
Bila  dikaitkan  dengan  tabel  sidik  ragam konsentrasi  inokulum  dan  lama  inkubasi
( ,  Diunduh
12 Maret 2014). Nadiem  Anwar  danArief  Widjaja.  2010. Peningkatan  Unjuk  Kerja  Hidrolisis Enzimatik  Jerami  Padi  Menggunakan Campuran  Selulase  Kasar  Dari Trichoderma  Reesei  Dan  Aspergillus niger.  Makara  Sains  (Online),  Vol.  14 No. 2, (http://journal.Ui.ac.id, Diunduh 6 Maret 2014). Nana  Sudjana.  2011. Penilaian  Hasil  Proses Belajar  Mengaja. Bandung:  PT

## REMAJA ROSDAKARYA
Nasrul  Rofiah  Hidayati.  2010. Buku  Petunjuk
Kimia  Dasar  I .  Madiun:  IKIP  PGRI MADIUN Nova  Aulia  Rohana,  dkk.2013. Produksi Selulase  Dari  Aspergillus  niger  Dan Kemampuannya Menghidrolisis Ampas Tebu . Jurnal Kimia Unand (Online), Vol. 2   N o .   2 ,   ( h t t p : / / J u r n a l s a i n - unand.com , Diunduh 29 Januari 2014). Nuryani.  2005. Strategi  Belajar  Mengajar Biologi .  Malang:  Universitas  Negeri Malang. Poltekkes Surakarta. 2012. Praktikum dan PKL .
(Online),  ( , Diunduh 17 Maret 2014). Puspita  Wahyuningtyas,  dkk.  2013. Studi Pembuatan  Enzim  Selulase  Dari Mikrofungi Trichoderma reesei Dengan Substrat  Jerami  Padi  Sebagai  Katalis Hidrolisis  Enzimatik  Pada  Produksi B i o e t a n o l .   J u r n a l   B i o p r o s e s KomoditasTropis (Online), Vol. 1 No. 1, ( , Diunduh 24 Januari 2014). Rizka  Anindyah  Novitasari.  2013. Identifikasi Keanekaragaman  Zooplankton  Di Waduk Bening Saradan Sebagai Bahan Penyusun  Panduan  Praktikum  Materi Klasifikasi  Makhluk  Hidup  Di  SMA . Skripsi  tidak  diterbitkan.  Madiun: Program Studi Pendidikan Biologi IKIP PGRI Madiun. Selviza  Safaria,  dkk.  2013. Efektivitas Campuran  Enzim  Selulase  Dari
Aspergillus  niger  Dan  Trichoderma
http://repository.unhas.ac.id
http://www.poltekkes- solo.ac.id http://jbkt.ub.ac.id
reesei  Dalam  Menghidrolisis  Substrat S a b u t   K e l a p a .   J u r n a l   K i m i a Khatulistiwa  (Online),  Vol.  2  No.  1, ( http://jurnal.untan.ac.ad ,  Diunduh tanggal 29 Januari 2014).
Sinantari, dkk. 2013. Pemurnian Selulase Dari Isolat  Kb  Kompos  Termofilik  Desa
Bayat Klaten Menggunakan Fraksinasi
Amonium  Sulfat .  Chem  Info  (Online), Vol.  1  No.1,  ( , Diunduhtanggal 29 Januari 2014).
Subowo. 2010. Uji Aktivitas Enzim Selulase Dan Ligninase  Dari  Beberapa  Jamur  Dan Potensinya  Sebagai  Pendukung P e r t u m b u h a n   Ta n a m a n   Te ro n g (Solanum  melongena).  Berita  Biologi, 10(1): 1.
Sugiyono. 2012. Metode Penelitian Pendekatan Kuantitatif, Kualitatif, R & D . Bandung: Alfabeta.
Widya  Lestari,  dkk.  2013. Pengaruh Konsentrasi  Inokulum  Dan  Induser Terhadap  Produksi  Protease  Alkali Bacillus  Sp.  Isolat  Mi.2.3  Termofilik . Jurnal Biologika (Online), Vol. 2 No. 1, ( , Diunduh 10 Maret 2014).
WildanYatim.  2003. Biologi  Modern  Biologi Sel . Bandung: Tarsito.
Yuniarti  Yusak.2004.Pengaruh  Suhu  Dan  Ph Bufer  Asetat  Terhadap  Hidrolisa  Cmc Oleh  Enzim  Selulase  Dari  Ekstrak Aspergillus  Niger  Dalam  Media Campuran  Onggok  Dan  Dedak .  Jurnal Sains  Kimia  (Online),  Vol.8  no.2, ( http://repository.Usu.ac.id ,  Diunduh 24 Januari 2014).
Zulfatus  Sa'adah,  dkk.  2008. Produksi  Enzim Selulase  oleh  Aspergillus  niger Menggunakan  Substrat  Jerami  dengan Sistem  Fermentasi  Padat .  (Online),
( http://eprints.undip.ac.id ,  Diunduh
12 Maret 2014).
http://portalgaruda.org
http://jurnalbiologika.files.wordpress. com