ISSN 2354-6565
PENENTUAN KADAR FLAVONOID TOTAL EKSTRAK ETANOLIK DAUN KEPEL ( Stelechocarpus burahol (Bl.) Hook f. & Th.) DENGAN METODE

## SPEKTROFOTOMETRI
Diniatik Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada

## ABSTRAK
Daun  Kepel    telah  dimanfaatkan  untuk  mengatasi  asam  urat,  dan  mampu  menurunkan  kadar kolesterol,  buahnya sehingga berkhasiat sebagai antioksidan  dan  daunnya  sekarang  dipercaya untuk  mengatasi  penyakit  diabetes.  Laporan  penelitian  mengindikasikan  bahwa  senyawa  yang berperan pada aktivitas ini adalah golongan senyawa flavonoid. Penelitian ini bertujuan   untuk mendapatkan data kadar flavonoid dalam daun kepel. berdasarkan kadar rutin sebagai standard. Daun  Kepel  diperoleh  dari  Propinsi  Yogyakarta.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  menggunakan metode  maserasi,  sebagai  penyari  adalah  etanol  70%.  Penetapan  kadar  flavonoid  total menggunakan metode spektrofotometri dengan larutan pembanding rutin, pereaksi geser AlCl 3 . Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  kadar  flavonoid  total  dengan  metode  spektrofotometri dalam daun kepel adalah 9,3 %(b/b), 9,9%(b/b) dan 10,1 %(b/b).
Kata kunci : Stelechocarpus  burahol (Bl.)  Hook  f.  &  Th.,  flavonoid  total,  rutin, spektrofotometri.

## PENDAHULUAN
Daun  kepel  dimanfaatkan  secara  empiris dimanfaatkan  untuk  mengatasi  asam  urat, dan  menurunkan  kadar  kolesterol.    buahnya juga  mempunyai  vitamin  C  yang  tinggi sehingga  berkhasiat  sebagai  antioksidan  dan daunnya sekarang dipercaya untuk mengatasi penyakit  diabet  (Anonim,  2013;  Sunarni, 2007).  Aktivitas  sebagai  antioksidan  dengan menggunakan  DPPH  dari  ekstrak  n  butanol dan etil asetat bunga, ekstrak etil asetat buah yang lebih tinggi dibanding isolat dari fraksi aktif  ekstrak  n  butanol  bunga  (Tisnadjaja dkk, 2006), secara in vivo dilaporkan adanya aktivitas antihiperurisemia ekstrak etanol dan ekstrak  heksan  dari  daun  kepel  yang potensinya setara dengan alopurinol  pada uji penghambatan  xantin  oksidase  dengan menggunakan  tikus  (Purwantiningsih  dkk, 2010).  Penggunaan  empiris  di  masyarakat dan  hasil  penelitian  yang  diuraikan  diatas sangat berkaitan dengan kandungan senyawa dalam tanaman ini. Hasil analisis  mutu daun kepel  yang   diambil  dari  beberapa  daerah, mengandung  saponin,  alkaloid,  tanin, fenolik,  flavonoid,  triterpenoid,  steroid,dan glikosida. Analisa daun  kepel  yang umurnya lebih  dari  100  tahun  terdapat  di  Purworejo, dihasilkan  kandungan  fitokimia  yag  lebih
lengkap  dibandingkan  dengan  tanaman  yang lebih  muda.  Daun  kepel  yang  berasal  dari daerah  Jawa  Barat  (Bogor  dan  Gunung Nagara,  Garut),  kandungan  taninnya  tidak terdeteksi, sedangkan daun yang berasal dari Jawa  Tengah  semua  mengandung  tannin (Anonim, 2013).
Pada  penelitan  ini  diharapkan  dapat diketahui  kadar  flavonoid  total  dari  ekstrak etanol daun kepel.

## METODE PENELITIAN
Determinasi  tumbuhan. Tanaman kepel  yang  digunakan  dalam  penelitian dideterminasi  di  Laboratorium  Biologi Farmasi  Fakultas  Farmasi,  Universitas
Muhammadiyah Purwokerto. Hasil
determinasi  menyatakan  bahwa  spesimen tumbuhan  tersebut  adalah  benar  –  benar tanaman Stelecocharpus burahol, (Bl.) Hook f.  &  Th.  dari  famili  Annonaceae.  Hasil determinasi  tersebut  berdasarkan  buku  Flora of  Java  Vol  II  (Backer  &  Van  Den  Brink, 1965).
Pengumpulan alat dan bahan. Simplisia daun S. burahol diambil kabupaten Banyumas,  Jawa  Tengah.  Pengeringan
dilakukan  dengan  meletakkan  bahan  yang telah  dicuci  bersih  pada  tampah,  kemudian ditutupi  dengan  kain  hitam  supaya  tidak terkena  sinar  matahari  langsung.  Setelah  itu dijemur  dibawah  sinar  matahari  sampai kering.  Simplisia  yang  telah  kering  (dengan memperhatikan  persyaratan  kandungan  air maksimal  dalam  simplisia)  diserbuk  dan ditempatkan dalam botol coklat yang kering. Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini etanol,  etil  asetat,  aquades,  aseton,  methanol pa.,  pembanding  rutin.  Alat  yang  digunakan dalam penelitian ini: alat maserasi, alat gelas, rotary  evaporator ,  kompor  listrik,  corong pisah,  spektrofotometer  UV,  mikropipet, kertas saring,.
Pembuatan  ekstrak  ekstrak  etanol daun S.  burahol . Simplisia  daun  ditimbang +3  kg  dibuat  serbuk  melalui  proses penggilingan dan pengayakan. Serbuk kering ditimbang  +500  gram  kemudian  dimaserasi. Maserasi  dilakukan  dengan  cara  merendam serbuk  simplisia  dalam  cairan  penyari.  Pada penelitian ini untuk  meningkatkan  efektifitas ekstraksi dilakukan pengadukan dan remaserasi,  dimaserasi  selama  2  x  24  jam dengan perbandingan antara simplisia dengan etanol  50%  adalah  1:5  untuk  hari  pertama, dan  1:4  untuk  hari  kedua.  Caranya  yaitu serbuk  simplisia  sebanyak  500  gram dimaserasi  dengan  etanol  70%  sebanyak 5  Liter,  kemudian  dienap-tuangkan  dan diperas.  Ampas  yang  diperoleh  dimaserasi lagi dengan etanol sebanyak 2 Liter. Disaring dengan  kain  flanel.  Ekstrak  cair  etanol diuapkan sampai diperoleh konsistensi kental yang masih  bisa  dituang kemudian ditimbang. Pembuatan ekstrak etanol daun S. burahol  dilakukan  di  Laboratorium  Biologi Farmasi Universitas
Muhammadiyah Purwokerto.
Penentuan  kadar  flavonoid  total. Prinsip  metode  ini  adalah  bahwa  flavonoid ditetapkan  kadarnya  sebagai  aglikon  dengan cara  hidrolisis,  dilakukan  pengukuran spektrofotometri  pada  panjang  gelombang maksimum, setelah direaksikan dengan AlCl 3 untuk  meningkatkan  selektifitasnya  dan ditambah heksanametilentetramin.
Larutan  uji  untuk  ekstrak ,  ditimbang dengan saksama lebih kurang 0,1-1 g ekstrak,
dilarutkan  dalam  10  ml  etanol  80%, disentrifus 1000 x gravitasi selama 10 menit. Bagian supernatan (beningan) dimasukkan ke dalam labu ukur 25 ml, residu diekstraksi dua kali,  tiap  kali  dengan  5  ml  etanol  80%. Supernatan  (beningan)  dikumpulkan  ke dalam  labu  ukur  yang  sama,  ditambahkan etanol 80% sampai tanda.
Larutan  uji  untuk  ekstrak  cair ,  diukur seksama  sejumlah  volume  ekstrak  cair, diencerkan  dengan etanol 80% sampai kadar yang sesuai untuk kolorimetri.
Larutan pembanding , ditimbang
saksama  pembandinglebih  kurang  10  mg pembanding,  dilarutkan  dalam  etanol  80%, diencerkan  secara  kuantitatif  dan  jika  perlu bertahap  dengan  etanol  80%  hingga  kadar 25, 50 dan 100 µg/ml.
Pengukuran:  dipipet  secara  terpisah 0,5  ml  larutan  uji  dan  larutan  pembanding, ditambahakan  pada  masing-masing  1,5  ml etanol  P,  0,1  ml  aluminium  klorida  P  10%, 0,1 ml natrium asetat 1M dan 2,8 air suling. Dikocok dan diiamkan selama 30 menit pada suhu  ruang.  Diukur  serapan  pada  panjang gelombang  serapan  maksimum.  Dilakukan pengukuran blangko dengan cara yang sama, tanpa  penambahan  aluminium  klorida,  dibut koreksi seperlunya. masukkan ke dalam labu alas bulat. (Anonim, 2009)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi  Tanaman. Tanaman  kepel ( S.  burahol )  yang  digunakan  dalam penelitian  dideterminasi  di  laboratorium Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada. Tujuan determinasi  untuk  mendapatkan  kebenaran identitas  dengan  jelas  dari  tanaman  yang diteliti  dan  menghindari  kesalahan  dalam pengumpulan  bahan  utama  penelitian.  Hasil determinasi  menyatakan  bahwa  spesimen tumbuhan  tersebut  adalah  benar  –  benar tanaman Stelecocharpus burahol, (Bl.) Hook f.  &  Th.  dari  famili  Annonaceae.  Hasil determinasi tersebut berdasarkan buku Flora of  Java  Vol  II (Backer  and  Van  Den  Brink, 1965).
Pengumpulan  Bahan  dan  Pembuatan Simplisia  Daun  Kepel  ( S.  burahol ). Pada penelitian  ini  menggunakan  tanaman  kepel (Gambar  1)  yang  diambil  di  Kecamatan Mlati,  Kabupaten  Sleman  Yogyakarta.  Daun segar tanaman kepel diambil pada bulan Mei pada  pagi  hari.  Daun  yang  dipetik  adalah daun  kepel  segar  berumur  sedang  di  ambil dari  pohonnya  yang  berumur  30  tahun  sejak penanaman,  daun  di  ambil  setelah  pasca panen  buah.  Daun  yang  diambil  ialah  yang sudah  tua,  karena  diharapkan  diperoleh kandungan  kimia  yang  sudah  optimal (Anonim,  1985).  Pengambilan  dilakukan pada  tempat  dan  waktu  tertentu  untuk menghindari bermacam – macam kandungan kimia dikarenakan  perbedaan  kondisi lingkungan, keadan tanah, dan iklim.
Gambar 1. Tanaman kepel (S. burahol)
19
Daun kepel segar yang didapatkan, dicuci dengan air yang mengalir untuk membersihkan kotoran atau kontaminan yang berupa  tanah,  atau  materi  lain  pada  daun tersebut.  Dipilih  daun  (15  kg)  yang  bagus untuk selanjutnya dianginanginkan. Sebagian daun  kepel  dikeringkan  di  bawah  sinar matahari  yang  ditutupi  kain  hitam,  untuk keperluan  ekstraksi  dengan  etanol.  Selama pemanasan,  bahan  ditata  tidak  bertumpuk dan  dibolak  –  balik  agar  pemanasan  merata serta  proses  pengeringan  berlangsung  cepat. Daun  kepel  sudah  kering  di  hari  ketujuh. Daun  kepel  sisanya  dibuat  dalam  bentuk perasan(Anonim, 1985).
Pengeringan  dilakukan  hingga  kadar  air kurang  dari  10%  atau  sampai  daun  mudah untuk  dihancurkan  ketika  diremas.  Tujuan dari pengeringan adalah mencegah pertumbuhan jamur atau mikroorganisme dan
penguraian  senyawa  aktif  oleh  reaksi enzimatik  dan  proses  hidrolisis  karena kandungan  air  yang  tinggi,  agar  simplisia yang dihasilkan tidak  mudah rusak sehingga dapat  disimpan  dalam  waktu  yang  relatif lama.  Simplisia  kering  yang  diperoleh selanjutnya  diserbuk  dengan  menggunakan blender  untuk  memperkecil  luas  permukaan sehingga kontak permukaan partikel simplisia  dengan  penyari  semakin  besar  dan penyarian lebih optimal.
Simplisia selanjutnya  diayak  menggunakan  ayakan mesh  20/40  yang  berarti  sebanyak  100% simplisia kering lolos pada ayakan  mesh 20, kemudian sebanyak 40% dari 100% simplisia kering  lolos  ayakan  mesh  40,  sehingga  dari 500  gram  simplisia  kering  daun  dan  kulit batang  kepel  sebanyak  300  gram  lolos ayakan mesh 20 dan sebanyak 40 gram lolos ayakan  200.  Pada  umumnya  proses penyaringan  ini  penting  dalam  proses ekstraksi,  karena  dengan  adanya  pengecilan ukuran partikel akan memperluas permukaan kontak  serbuk  dengan  penyari  sehingga ekstraksi  menjadi  lebih  maksimal  dan kandungan  zat  aktif  dapat  tersari  secara optimal.
Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kepel . Metode  penyarian  yang  digunakan  adalah maserasi.  Metode  ini  merupakan  metode yang  paling  sederhana  karena  mudah dilakukan, murah, tidak memerlukan peralatan  yang  canggih.  Maserasi  dilakukan dengan  cara  merendam  serbuk  simplisia dalam  cairan  penyari.  Pada  penelitian  ini untuk  meningkatkan  efektifitas  ekstraksi dilakukan  pengadukan  dan  remaserasi, dimaserasi  selama  2  x  24  jam  dengan perbandingan  antara  simplisia  dengan  etanol 50%  adalah  1:5  untuk  hari  pertama,  dan  1:4 untuk  hari  kedua.  Caranya  yaitu  serbuk simplisia  sebanyak  750  gram  dimaserasi dengan  etanol  70%  sebanyak  3,75  Liter, kemudian  dienaptuangkan  dan  diperas. Ampas  yang  diperoleh  dimaserasi  lagi dengan  etanol  70%  sebanyak  3  Liter.  Pada penelitian  ini  penyari  yang  digunakan  yaitu etanol  70%.  Penyari  etanol  70%  dapat menarik  senyawa–senyawa  relatif  polar seperti  senyawa  fenol,  flavonoid,  saponin, dan  senyawa  polar  lain  yang  terkandung dalam  daun  kepel,  sedangkan  etanol  yang
digunakan merupakan etanol teknis yang ada dipasaran  yang  memungkikan  diperoleh kembali  saat  diuapkan  dengan  rotary evaporator . Dipilih  etanol  karena  lebih selektif,  tidak  beracun,  netral,  absorbsi  baik, dapat  mencegah  pertumbuhan  kapang  dan kuman,  panas  yang  diperlukan  untuk pemekatan  lebih sedikit. Sari yang diperoleh diuapkan  di  atas  penangas  air  hingga konsistensi  kental.  Penguapan  dilakukan untuk  menghilangkan  larutan  penyari  agar tidak  mempengaruhi  uji  selanjutnya  seperti yang tertera pada Tabel 1.
Tabel 1 . Rendemen Ekstrak Etanol Jenis Bobot simplisia basah (kg) Bobot simplisia kering (g) Berat ekstrak (g) Rendemen (%) Ekstrak etanol 70% 3 750 150,23 20,03
Pembuatan  kurva  baku  rutin. Dibuat kurva  baku  dengan  menimbang  10,0  mg standar  rutin  yang  dilarutkan  dalam  5  ml etanol  80%.  Panjang  gelombang  maksimal yang diperoleh adalah 415,5 nm. Data kurva baku bisa dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2 . Gambar regresi liner kurva baku rutin
Tabel 2. Data Kurva Baku Rutin Konsentrasi (mg/ml)  Absorbansi 0,050 0,205 0,075 0,279 0,100 0,326 0,125 0,412 0,150 0,489 0,175 0,540 0,200 0,629 0,225 0,690 0,250 0,770
Penetapan  kadar  flavonoid  total  pada ektrak  etanol  daun  kepel. Sebelum ditentukan  kadar  flavonoidnya  dilakukan dulu  uji  kualitatif  adanya  flavonoid,  dengan menggunakan pengamatan dibawah sinar UV 366.  Pada  gambar  3  dibawah  terdapat  pada ekstrak  etanol fluoresensi biru (rf 0,4), hijau kekuningan  (rf  0,55),  kuning  (rf  0,6), lembayung  (rf  0,65),  kuning  (rf  0,7), lembayung  (rf  0,75),  biru  (rf  0,8),  biru  (rf 0,85)  dan  coklat  paling  ujung  (rf  0,9). Dugaan  flavonoid  ada  pada  bercak  no  1 sampai 8, yang paling ujung berwarna coklat bukanlah flavonoid.
Gambar  3. Analisis  kualitatif  adanya  flavonoid dari ekstrak etanol, hasil hidrolisis eter dan air sisa dengan fase gerak BAW (n butanol: asam asetat:air=4:1:5)  fase  atas  dilihat  di  sinar  UV 366
Dengan  demikian  dilanjutkan  penetapan kadar dengan menggunakan kurva baku yang sudah  dibuat  diatas,  yaitu  y=2,818x+0,059, dapat  ditentukan  kadar  flavonoid  total  dari ekstrak  etanol  daun  kepel.  Pada  table  2 dibawah  diperoleh  kadar  flavonoid  total ekstrak  etanol  daun  kepel  relative  terhadap rutin  yaitu  rata-rata  9,8%  b/b.  Metode penetapan  kadar  ini  mengacu  suplemen farmakope  herbal  (Anonim,  2009),  tidak seperti  yang  diacu  penelitian-penelitian sebelumnya  yang  mengacu  buku  parameter standar  ekstrak  yang  menggunakan  metode hidrolisis  yang  difraksinasi,  sehingga  proses kerjanya  jauh  lebih  singkat  dan  mudah (Diniatik  dkk,  2013).  Kadar  flavonoid  total yang  cukup  besar  (9,8  %  b/b)sangat  bisa diakitkan dengan beberapa uji aktivitas untuk melengkapi  penelitian  terkait  daun  kepel. Beberapa penelitian seperti uji pelarutan batu
y = 2,818x + 0,0595
R² = 0,998
Kurva baku
kalsium dari fraksi air dan fraksi etanol daun kepel sudah dilakukan dan berkorelasi positif dengan  kadar  flavonoid  yang  cukup signifikan  pada  penelitian  ini  (Hidayati, 2004).
Tabel  2. Kadar  Flavonoid  Total  Ekstrak  Etanol Daun  Kepel  Relative  Terhadap  Pembanding Rutin Bobot ekstrak (mg) Absorbansi Kadar mg/ml Kadar flavonoid total % (b/b) 100,1 0,640 0,204 10,2 % 100,2 0,621 0,198 9,9% 100,3 0,581 0,186 9,3%

## KESIMPULAN
1. Rendemen  ekstrak  etanol  daun  kepel sebesar 20,03%
2. Kadar  flavonoid  total  dalam  ekstrak etanol  daun  kepel  adalah  9,3  %(b/b), 9,9%(b/b) dan 10,1 %(b/b)

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2013, Kepel, Balittro Bogor,
Diniatik,  Hapsari,  I., Tiara,  M.,  Meidyawati, A.,  Nurhidayat,  S.,  2013,  Determination and  Validation  Method  of  Total Flavonoid  Content  and    Total  Phenolic Content  of  Ethanolic  Extract  of Mangosteen  ( Garcinia  mangostana L.) Leaves as Natural Preservatives
Candidate  by  using  Spectrophotometric Method, Prosiding  International Seminar NETS, Universitas  Muhammadiyah
Purwokerto
Hidayati,  2004,  Uji  Daya  Melarutkan  Fraksi Air dan Fraksi Etanol Infusa Daun Kepel ( Stelecocharpus burahol , Hook) Terhadap Batu Ginjal Kalsium
Purwantiningsih, Hakim,  A.R., Purwatini, I., 2010, Activity Of The Kepel Stelechocarpus burahol  (Bl.)  Hook.F.  & Th.]  Leaves  Extract  And  Xantine Oksidase  Inhibitory  Study, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences ,Vol. 2, Issue. 2,hal 122-127
Sunarni,  2007,  Flavonoid  antioksidan penangkap  radikal  dari  daun  kepel (Stelechocarpus burahol  (Bl.) Hook f. & Th.), Majalah  Farmasi  Indonesia ,  18(3), 111 – 116
Syukri,  M.,  2007,  Asam  Urat  dan
Hiperuresemia, Majalah Kedokteran Nusantara , Volume 40 No. 1.
Tisnadjaja,  D.,  Saliman,  E.,  Silvia,
Simanjuntak,  P.,  2006,  Pengkajian Burahol ( Stelechocarpus burahol (Blume) Hook  &  Thomson)  sebagai  Buah  yang Memiliki Kandungan Senyawa Antioksidan, Biodiversitas ,  ,  Volume  7,
Nomor 2, Halaman: 199-202