## UJI EFEKTIFITAS SALEP EKSTRAK ETANOL DAUN BAKAU
HITAM (Rhizophora mucronata Lamk ) DAN PENGUJIAN TERHADAP PROSES PENYEMBUHAN LUKA PUNGGUNG KELINCI YANG DIINFEKSI BAKTERI Staphylococcus aureus
Fachrial Paputungan 1 , Paulina V. Y. Yamlean 1 dan Gayatri Citraningtyas 1
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
The objectives of this research are to find out the quality of 4%, 6%, 8%, and 10% ointments from  black mangrove  extract,  and the healing effect  of infected wound on  rabbit back skin. Extraction  of  black  mangrove  was  done  by  maceration.  Ointments  were  tested  by organoleptics, homogeneityt and pH. Test of healing effectivity was done using 5 categories, that is chloramphenicol ointments (positive control), basic ointments (negative control), black mangrove ethanol ointments extract 4%, black mangrove ethanol ointments extract 6%, black mangrove  ethanol  ointments  extract  8%,  black  mangrove  ethanol  ointments  extract  10% against infected wound of experiment rabbits, which done in 7 days. Data was analyzed using One  Way  ANOVA  ( Analysis  Of  Variance )  and  continued  with  LSD  ( Least  Significant Different ).  The  result  shows  that  the  basic  ointments  and  the  black  mangrove  ethanol ointments  extract  4%,  6%,  8%,  10%  meet  the  quality  standard  by  homogeneity  test, organoleptic  test,  pH  test,  but  did  not  meet  saturate  requirements  of  dispersive  power  test. Black  mangrove  ethanol  extract  ointments  10%  possess  high  activity  of  wound  healing, followed with 8%, 6%, and 4% black mangrove ethanol ointments extract.
Key words : Rhizophora mucranata Lamk, ointments, infected wound, rabbit

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kualitas  sediaan  salep  ekstrak  daun  Bakau  hitam 4%,  6%,  8%  dan  10%  serta  efek  penyembuhan  terhadap  luka  terinfeksi  pada  punggung kelinci . Proses penyarian ekstrak daun Bakau hitam menggunakan metode ekstraksi maserasi. Pada  pengujian  sediaan  salep  dilakukan  uji  organoleptik,  uji  homogenitas  dan  uji  pH. Pengujian  efektivitas  penyembuhan  luka  terinfeksi  menggunakan  5  kelompok,  yaitu Kloramfenikol salep (kontrol positif), dasar salep (kontrol negatif), salep ekstrak etanol daun Bakau hitam 4%, salep ekstrak etanol daun Bakau hitam 6%, salep ekstrak daun Bakau hitam 8% dan salep ekstrak daun Bakau hitam 10% terhadap 6 ekor kelinci dengan panjang luka 1 cm, dilakukan sampai hari ke-7. Data diolah secara statistic menggunakan One Way ANOVA ( Analysis  Of  Variant )  dan  dilanjutkan  dengan  uji  LSD  ( Least  Significant  Different ).  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  basis  salep  dan  salep  ekstrak  etanol  daun  Bakau  hitam  4%, 6%,  8%,  10%  menghasilkan  sediaan  yang  memenuhi  syarat  dari  uji  homogenitas,  uji organoleptik,  uji  pH  akan  tetapi  tidak  memenuhi  syarat  pada  uji  daya  sebar.  Berdasarkan hasil yang didapat salep ekstrak etanol daun Bakau hitam dengan konsentrasi 10% memiliki daya penyembuhan yang baik diikuti dengan salep ekstrak etanol daun Bakau hitam dengan konsentrasi 8%, 6% dan 4%.
Kata kunci : Rhizophora mucronata Lamk, Salep, Luka terinfeksi, Kelinci

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  yang sangat  kaya  akan  sumber  daya  alam.  Baik yang  berasal  dari  nabati  maupun  hewani. Sumber  daya  alam  hayati  yang  melimpah tersebar  luas  dari  berbagai  pulau,  mulai dari  pulau  Sumatera  hingga  pulau  Irian jaya.  Salah satu  sumber  daya  alam hayati yang  melimpah  adalah  hutan  Mangrove. Hutan  mangrove  merupakan  tipe  hutan yang  tumbuh  di  bagian  garis  pantai, terutama  di  atas  rawa–rawa  yang  berair payau,  pantai  yang  terlindung,  dimana keberadaannya  tergenang  ketika  air  laut pasang dan bebas dari genangan ketika air laut surut.
Rhizophora  mucronata merupakan salah satu tumbuhan yang sangat bermanfaat  baik  bagi  komunitas  hutan mangrove  maupun  bagi  mahkluk  hidup lain.    Kulit  batang Rhizophora  mucronata banyak  digunakan  untuk  obat  tradisional sebagai  obat  anti  diare,  obat  pelangsing dan  muntah  (Departemen  Kehutanan, 1997).
Hasil  uji  secara  kualitatif  fitokimia Rhizophora  mucronata telah  dilakukan terhadap  golongan  senyawa  alkaloid, saponin,  flavonoid,  triterpenoid,  steroid, tanin dan fenol. Hasil analisis menunjukkan bahwa seluruh bagian tanaman yang diambil mengandung kelompok senyawa alkaloid, saponin, tanin dan  flavonoid  (Sutiman  Dkk,  2010). Flavonoid  berfungsi  sebagai  antibakteri, antioksidan  dan  jika  diberikan  pada  kulit dapat  menghambat  pendarahan  (Anief, 1997).    Menurut    penelitian  Yasmon (2000),  bagian  tanaman  dari  bakau  hitam yang  lebih  efektif  digunakan  sebagai ekstrak ialah bagian daun.
Staphylococcus  aureus merupakan bakteri  gram  positif.    Peranan  dari  bakteri ini pada umumnya menyebabkan kerugian pada  manusia  diantaranya  sebagai  bakteri penyebab  infeksi.    Beberapa  infeksi  yang disebabkan  bakteri  ini  berupa  bisul, jerawat, impetigo dan infeksi luka.  Infeksi S.  aureus pada  luka  ditandai  dengan
kerusakan  jaringan  yang  disertai  abses bernanah (Ryan dkk , 1994) (Warsa, 1994). Berdasarkan peninjauan dari penelitian  terhadap  khasiat  dari  tumbuhan
Rhizophora  mucronata ,  ekstrak  daun bakau hitam berpotensi untuk dimanfaatkan dalam bidang farmasi. Penyebaran tumbuhan ini yang sangat luas di  Indonesia  merupakan  peluang  besar untuk  mengembangkan  produk  tertentu yang  berbahan  dasar  tumbuhan  bakau hitam  dalam  industri  kefarmasian.    Oleh karena  itu,  dalam  penelitian  ini  akan dikembangkan  lebih  lanjut  mengenai potensi  ekstrak  etanol  daun  bakau  hitam yang  dibuat  dalam  bentuk  sediaan  salep untuk digunakan pada proses penyembuhan  luka  yang  terinfeksi  oleh bakteri.    Besarnya  kontaminasi  bakteri terhadap  luka  pada  umumnya  manusia  di Indonesia merupakan alasan kenapa begitu pentingnya  sediaan  salep  yang  dibuat dengan  memanfaatkan  senyawa  aktif  dari daun bakau hitam sebagai salep untuk luka infeksi.

## METODOLOGI PENELITIAN
Bahan yang digunakan daun bakau hitam,  etanol  95  %,  vaselin  album,  adeps lanae,  kloramfenikol  salep,  alkohol  70%, aquades,  kelinci  6  ekor,  makanan  kelinci dan  bakteri Staphylococcus  aureus . Alat- alat  yang  digunakan  adalah  Alat  gelas, batang  pengaduk,  blender,  pipet  tetes, erlenmayer,  kapas,  kandang,  pencukur bulu,  timbangan  analitik,  evaporator, lumpang  dan  alu,  waterbath,  cawan porselen, pot salep, ayakan 65 mesh, jarum ose,  aluminium  foil,  oven,  blender,  pisau bedah, pisau biasa, gunting, Kertas saring,
Jarum suntik 1 ml dan kamera .

## Identifikasi Sampel Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Sampel daun bakau hitam diambil di daerah  pesisir  pantai  Tasik  ria.    Sampel yang  diambil  yaitu  bagian  daun  dewasa dengan  karakteristik  warna  hijau  tua. Sampel  yang  akan  dibuat  ekstrak  dicuci dengan  air  mengalir.    Daun  bakau  hitam
yang  sudah  dicuci  dengan  bersih  disortasi dengan  cara  mengamati  bentuk  dan  warna sampel  untuk  memastikan  sampel  yang diambil dalam kondisi utuh.  Sampel daun yang sudah disortasi dipotong-potong kecil menggunakan  pisau  potong.    Pengeringan awal  sampel  dilakukan  selama  1-2  hari dengan cara diangin-anginkan diatas media berupa  kertas.    Sampel  yang  sudah diangin-anginkan ditimbang.  Sampel yang sudah  ditimbang  dimasukkan  kedalam oven  pada  suhu  50 o C  selama  4  hari. Sampel  yang  sudah  kering  kemudian ditimbang kembali dan diblender.

## Ekstraksi Daun Bakau Hitam
Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan cara  maserasi.    Dengan  menggunakan pelarut  etanol  95%,  serbuk  simplisia sebanyak  250  gram  direndam  dengan menggunakan  pelarut  etanol  sebanyak 1875 ml.  Dilanjutkan dengan perendaman yang  dilakukan  selama  5  hari  di  dalam wadah  maserasi  dengan  sesekali  diaduk. Debris  dan  filtrat  dipisahkan  dengan menggunakan  kertas  saring.  Dilakukan remaserasi  dengan  menambahkan  625  ml pelarut  etanol  pada  debris  selama  2  hari dengan  sesekali  diaduk.  Setelah  itu,  filtrat hasil  remaserasi  ditambahkan  dengan filtrat  pada  proses  maserasi  sehingga didapat  filtrat  total.    Filtrat  yang  didapat kemudian dievaporasi dengan menggunakan evaporator hingga diperoleh ekstrak  cair.    Ekstrak  cair  dimasukkan  ke dalam  cawan  porselin  untuk  selanjutnya diuapkan  dengan  menggunakan waterbath pada  suhu  60°C  hingga  diperoleh  ekstrak kental.   Dihitung rendemennya.
Pembuatan Salep Ekstrak Bakau Hitam
Pembuatan Basis Salep Dasar salep yang digunakan merupakan  basis  salep  berlemak  yaitu adeps lanae dan vaselin album. Formula standar dasar salep menurt Agoes (2008) ialah : R/ Adeps lanae 15 g Vaselin album 85 g m.f Ungt 100 g Pembuatan  basis  salep  ekstrak  daun bakau  hitam  dilakukan  dengan  cara sebanyak  15  gram  adeps  lanae  dan  85 gram vaselin album.  Dimasukkan kedalam lumpang  bahan-bahan  tersebut.    Bahan- bahan  tersebut  dilebur  di  atas Hotplate – sedang  berlangsung,  dihentikan  pada  saat bahan-bahan  tersebut  melebur  sempurna sambil  diaduk  secara  konstan  hingga terbentuk basis.

## Pembuatan  Salep  Ekstrak  Daun  Bakau Hitam
Sediaan  salep  yang  akan  digunakan pada penelitian ini masing-masing memiliki  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun bakau hitam yang berbeda-beda yakni 4%, 6%,  8%  dan  10%.    Salep  ekstrak  daun bakau  hitam  tersebut  dibuat  masing- masing  sebanyak  25  g.    Basis  salep  yang telah  dibuat,  ditambahkan  dengan  ekstrak etanol  daun  bakau  hitam  dan  diaduk hingga  homogen  dengan  menggunakan lumpang  dan  alu  yang  panas  yang disesuaikan dengan masing-masing konsentrasi (Andjani, 2003).
Tabel  1.  Perbandingan  jumlah  basis  salep  dan  ekstrak  daun  bakau  hitam  dari  masing-masing konsentrasi.
Formula Salep KONSENTRASI 4% 6% 8% 10% Ekstrak Etanol Daun Bakau Hitam 1 g 1,5 g 2 g 2,5 g Dasar Salep 24 g 23,5 g 23 g 22,5 g m.f salep 25 g 25 g 25 g 25 g

## Pengujian Sediaan Salep
Pengujian sediaan salep pada ekstrak daun  bakau  hitam  dan  dasar  salep
menggunakan tes organoleptik, tes homogenitas, tes pH dan uji daya sebar. Uji Organoleptik
Diamati  bentuk,  warna  dan  bau sediaan  salep  ekstrak  daun  bakau hitam.    Pengujian  ini  dilakukan untuk melihat secara visual penampilan  fisik  dari  sediaan  salep yang dibuat.  Pengujian organoleptik dilakukan dengan
mengamati sediaan  salep  dari  bentuk,  bau  dan warna sediaan (Anief, 1997).
a. Uji Homogenitas Salep dari masing-masing konsentrasi  diamati  dengan  cara dioleskan pada sekeping kaca
transparan.  Diambli  sediaan    pada bagian  atas,  tengah  dan  bawah. Pengujian ini dilakukan untuk melihat secara fisik mengenai keseragaman  bentuk  salep.    Sediaan salep  dikatakan  homogen  apabila tidak terdapat gumpalan atau butiran kasar pada tiap tiap bagian.  Susunan partikel-partikel  tidak  ada  yang menggumpal  atau  tidak  tercampur (Anonim, 1979).
b. Uji pH
Digunakan  pH-meter  yang  bagian sensornya  dikenakan  pada  sediaan salep dari masing-masing
konsentrasi  dengan  perlakuan  yang sama  kemudian  dibaca  angka  yang terlihat  pada  monitor  pH  meter  dari masing-masing  pengujian  tersebut.
Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui  keasam-basaan  suatu sediaan.    Nilai  pH  yang  ideal  bagi kulit  adalah  4,5  –  6,5  (Anonim, 1979) (Budiman, 2008).
d.     Uji Daya Sebar Sebanyak  0,5  gr  salep  diletakkan diatas  kaca  bulat  yang  berdiameter 15  cm,  kaca  lainnya  diletakkan diatasnya  dan  dibiarkan  selama  1 menit.   Diameter sebar salep diukur. Setelahnya,  ditambahkan  100  gr beban tambahan lalu diukur diameter yang konstan.  Menurut Rajalakshmi (2009),  daya  sebar  yang  baik  5,6  – 6,4 cm.

## Penyiapan Hewan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah kelinci  sebanyak  6  ekor  dengan  umur  6-9 bulan  dengan  berat  ±1,5-2  kg.    Sebelum diperlakukan, kelinci diaklimatisasi dengan  lingkungan  tempat  penelitian selama  5  (lima)  hari  dengan  maksud  agar hewan  uji  tersebut  terbiasa  dengan lingkungan  dan  perlakuan  yang  baru. Hewan  uji  di  tempatkan  dalam  kandang dan diberi makan yang cukup untuk setiap harinya.

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Bakter S.aureus dari  biakan  media Nutrient  agar  yang  berumur  24  jam dimasukkan  ke  dalam  tabung  media  yang berisi NaCl 0,9 % menggunakan jarum ose secara  aseptis,  dikocok  hingga  homogen kemudian disetarakan kekeruhannya dengan  larutan  Mc.  Farland  yang  setara dengan  758  juta  bakteri Staphylococcus aureus. Diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam.
Pembuatan Luka Terinfeksi Pada Punggung Kelinci
Hewan  uji  kelinci  yang  sudah diaklimatisasi dicukur bulu didaerah punggung  sebelah  kanan,  sebelah  kiri  dan pada  bagian  punggung  belakang  sampai licin.    Pada  saat  dibuat  luka,  terlebih dahulu  daerah  punggung  dan  sekitarnya dibersihkan dengan alkohol 70%. Selanjutnya  dibuat  luka  sayatan  dengan ukuran  panjang  1  cm  pada  bagian punggung  dengan  cara  mengangkat  kulit kelinci  dengan  pinset,  kemudian  dibuat luka  dengan  pisau  yang  sudah  disterilkan terlebih dahulu, dibuat luka sampai bagian subkutan.  Luka kelinci yang sudah dibuat luka,  disuntikkan  bakteri Staphylococcus aureus sebanyak  0,1  ml  pada  masing- masing  bagian  yang  dibuat  luka . Diamati selama 24 jam luka tersebut untuk melihat terbentuknya  luka  yang  terinfeksi  atau tidak.    Terbentuknya  luka  yang  terinfeksi bakteri  ditandai  dengan  adanya  edema pada  bagian  sekitar  luka  dan  timbulnya abses bernanah.
Pengamatan dan Perlakuan Luka

## Terinfeksi Pada Kelinci
Dilakukan  pengamatan  panjang  luka perlakuan  berbeda  pada  masing-masing  6 kelinci :
Perlakuan A : dioleskan salep ekstrak daun bakau hitam 4 %, 3 x sehari Perlakuan B : dioleskan salep ekstrak daun bakau hitam 6 %, 3 x sehari Perlakuan C : dioleskan salep ekstrak daun bakau hitam 8 %, 3 x sehari Perlakuan D : dioleskan salep ekstrak daun bakau hitam 10 %, 3 x sehari Perlakuan  E  :  dioleskan  salep  kalmicetine (kontrol positif), 3 x sehari Perlakuan  F  :  dioleskan  dasar  salep (kontrol negatif), 3 x sehari
Sediaan  salep  ini  diberikan  dengan cara  dioleskan  pada  bagian  punggung kelinci  yang  dibuat  luka  terinfeksi  secara merata  dengan  pengolesan  tiga  kali  sehari ± 0,25 g dan diukur panjang luka terinfeksi pada  tiap  bagian  luka  dari  masing-masing hewan  uji.    Pengukuran  dilakukan  1  kali sehari  selama  7  hari  untuk  mengamati efektifitas masing-masing kelompok perlakuan.
Variabel Analisis Data Penelitian Pengukuran Rata-rata Panjang Luka
Pengukuran  rata-rata  panjang  luka dilakukan dengan : l 1, :  rata-rata  panjang  luka  setiap  kali pengulangan perlakuan lx: banyaknya perlakuan Dihitung dengan menggunakan
rumus  lx  = untuk  hasil  pengukuran rata-rata panjang luka (cm) dari tiap hewan uji.    Pengukuran  rata-rata  panjang  luka dilakukan  untuk  melihat  perlakuan  mana yang memberikan efek penyembuhan luka paling cepat.
Analisis Data
Untuk melihat data spesifik mengenai proses penyembuhan luka punggung  kelinci  yang  diinfeksi  bakteri Staphylococcus  aureus dilakukan  uji statistic one  way  anova dengan  taraf kepercayaan  95%,  α  =   , 5          k program aplikasi Statistical Product Services  Solution (SPSS)    terhadap  proses penyembuhan    luka  terinfeksi  pada punggung  kelinci  yang  diamati  dalam perubahan  panjang  luka  selama  7  hari. Pengujian  Anova  digunakan  sebagai  dasar pengambilan keputusan dari suatu hipotesis.    Jika  ada  perbedaan  yang signifikan  maka  dilanjutkan  dengan  uji LSD (Lest  Significant  Different) untuk melihat perlakuan mana yang member efek berbeda.
Hipotesis  yang  diambil  untuk pengujian dengan One Way ANOVA ialah : H 0 =  Salep  ekstrak  etanol  daun  bakau hitam  4%,  6%,  8%  dan  10%  tidak mempunyai efek terhadap penyembuhan  luka  terinfeksi  pada kelinci.
H 1 =  Salep  ekstrak  etanol  daun  bakau hitam  4%,  6%,  8%  dan  10%  mempunyai efek penyembuhan terhadap luka terinfeksi pada kelinci.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Uji Homogenitas
Salep  ekstrak  daun  bakau  hitam diambil  secukupnya  pada  bagian  atas, tengah  dan  bawah  kemudian  dioleskan pada gelas objek atau kepingan kaca untuk diuji  homogenitas  sediaan  salep.    Sediaan salep  yang  tidak  homogen  akan  diketahui dengan  melihat  terbentuknya  gumpalan pada  sediaan.    Sediaan  salep  yang homogen ialah sediaan salep dimana dasar salep,  bahan  aktif  dan  bahan  tambahan lainnya  tercampur  merata  dengan  baik. Hasil  pengamatan  dapa  dilihat  pada  table berikut ini :
Tabel 3 . Hasil uji homogenitas salep ekstrak daun bakau hitam Jenis Salep Homogenitas Basis Salep Tidak menggumpal, Homogen Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 4% Tidak Menggumpal, Homogen Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 6% Tidak Menggumpal, Homogen Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 8% Tidak Menggumpal, Homogen Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 10% Tidak Menggumpal, Homogen
Dari hasil uji homogenitas dilakukan untuk  melihat  bahan-bahan  dari  sediaan salep  tercampur  dan  tersebar  menjadi homogen.    pada  basis  krim,  salep  ekstrak daun bakau hitam dengan variasi konsentrasi  4%,  6%,  8%  dan  10%  secara visual  tidak  menunjukan  terbentuknya butiran kasar atau gumpalan.  Pada bagian atas,  tengah,  dan  bawah  sediaan  juga memiliki sifat fisik dan tekstur yang sama. Hasil uji homogenitas yang dilakukan pada setiap  salep  terbukti  homogen  apabila
tidak terdapat partikel-partikel yang menggumpal  serta  memiliki  warna  yang merata pada seluruh bagian salep (Lachman, 2008).

## Hasil Uji Organoleptik
Pengujian  organoleptik  dilakukan dengan cara melakukan pengamatan terhadap  bentuk,  warna  dan  bau  salep tersebut.  Hasil pengamatan terhadap salep ekstrak  daun  bakau  hitam  dapat  dilihat pada table berikut :
Tabel 4. Hasil uji organoleptik salep ekstrak daun bakau hitam
Jenis Salep Bentuk Warna Bau Basis Salep Setengah Padat  Putih kekuningan Bau Khas Salep Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 4% Setengah Padat  Coklat Bau Khas Ekstrak Daun Bakau Hitam Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 6% Setengah Padat  Coklat Kehijauan Bau Khas Ekstrak Daun Bakau Hitam Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 8% Setengah Padat  Hijau Bau Khas Ekstrak Daun Bakau Hitam Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 10% Setengah Padat  Hijau Kehitaman Bau Khas Ekstrak Daun Bakau Hitam
Pada pengujian organoleptik, diamati bentuk,  warna,  bau  dari  basis  salep  dan salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  yang dibuat dengan variasi konsentrasi 4%, 6%, 8%  dan  10%.    Hasil  pengamatan menunjukkan,  bentuk  dari  basis  salep  dan salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  dengan konsentrasi  4%,  6%,  8%  dan  10% memiliki  bentuk  fisik  yang  sama  yakni setengah  padat.    Bentuk  setengah  padat merupakan  ciri  khas  dari  salep.    Menurut Anonim  (1995)  Salep  ialah  sediaan setengah  padat  yang  ditujukan  untuk pemakaian  topical  pada  kulit  atau  selaput lender.
Pengamatan terhadap basis salep dan sediaan salep dari segi warna menunjukkan perbedaan warna dari masing-masing  variasi  konsentrasi.    Pada pengamatan  terhadap  basis  salep,  warna yang terbentuk yaitu warna putih kekuningan. Hal ini dikarenakan, pencampuran  antara  vaselin  album  yang berwarna  putih  dan    adeps  lanae  yang berwarna  kuning,  merupakan  warna  khas dari  campuran  kedua  basis  salep  tersebut. Pada  pengamatan  terhadap  salep  ekstrak daun bakau hitam dengan variasi konsentrasi    4%,  6%,  8%,  10%  terlihat warna  sediaan  salep  yang  berbeda-beda.
Salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  4% berwarna coklat, salep ekstrak daun bakau hitam 6% berwarna coklat kehijauan, salep ekstrak  daun  bakau  hitam  8%  berwarna hijau  dan  salep  ekstrak  daun  bakau  hitam 10% berwarna coklat kehitaman. Perbedaan  warna  pada  salep  tersebut dikarenakan perbedaan konsentrasi ekstrak daun bakau hitam yang berbeda-beda pada masing-masing  salep  tersebut.    Semakin banyak  kandungan  ekstrak  dalam  sediaan salep,  maka  warna  sediaan  salep  akan semakin mirip dengan karakteristik  warna dari ekstrak yang digunakan.
Pengamatan  terhadap  sediaan  salep dari  segi  bau  menunjukkan  basis  salep memiliki bau khas lemak dominan. Hal ini dikarenakan bahan yang digunakan merupakan bahan salep hasil dari pemurnian  minyak  bumi  dan  bulu  domba. Sedangkan  pengamatan  terhadap  bau  dari
salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  dengan variasi  konsentrasi  4%,  6%,  8%  dan  10% memiliki  bau  khas  yang  sama  yakni  bau khas  dari  ekstrak  daun  bakau  hitam.    Hal ini  dikarenakan  ekstrak  yang  terkandung didalam  masing-masing  salep  menutupi bau  dari  basis  salep  tersebut.    Semakin tinggi  ekstrak  yang  digunakan  dalam sediaan salep, semakin mudah mengetahui bau  khas  ekstrak  yang  digunakan  pada salep tersebut.

## Hasil Uji pH
Pada pengujian pH basis salep, salep ekstrak daun bakau hitam 4%, 6%, 8% dan 10%  digunakan  kertas  indikator  universal. Uji  pH  pada  salep  dilakukan  untuk mengetahui tingkat keasam-basaan sediaan salep.    Hasil  pengujian  pH  sediaan  dapat dilihat pada table berikut
Tabel 5. Hasil Uji pH Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam Jenis Salep Ph Basis Salep 5,5 Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 4% 6 Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 6% 6 Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 8% 5,5 Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 10% 5,5
Pada  pengujian  pH,  digunakan  kertas indikator  universal  untuk  melihat  pH  dari sediaan.    Pada  basis  salep,  salep  ekstrak daun  bakau  hitam  8%  dan  10%  memiliki pH  yang  sama  yakni  5,5.    Sedangkan pengujian  pH  pada  salep  ekstrak  daun bakau hitam 4% dan 6% memiliki pH yang sama  yakni  6.    Dari  hasil  pengujian  pH tersebut, basis salep dan salep ekstrak daun bakau  hitam  4%,  6%,  8%  dan  10%  dapat
digunakan  pada  kulit.    Nilai  pH  sediaan yang  ideal  bagi  kulit  ialah  4,5–6,5 (Trianggono dan Latifa, 2007).

## Hasil Uji Daya Sebar
Pada  pengujian  daya  sebar  dilakukan untuk  mengetahui  daya  sebar  basis  salep, salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  4%,  6%, 8% dan 10%.   Hasil pengujian daya sebar dapat dilihat pada table berikut :
Tabel 6. Hasil Pengujian Daya Sebar Jenis Salep Daya Sebar (cm) Basis Salep 3 cm Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 4% 3,8 cm Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 6% 3,8 cm Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 8% 3,6 cm Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam 10% 4,2 cm
Pada  pengujian  daya  sebar  basis  salep, salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  4%,  6%, 8%  dan  10%  tersebar  secara  merata  pada permukaan  kaca  yang  ditambahkan  beban 100  gram.    Daya  sebar  yang  baik membentuk  lingkaran  dan  tersebar  secara merata  akan  menjamin  pengelepasan  obat yang  merata  pada  bagian  kulit  yang  akan dioleskan  sediaan  salep.    Dari  hasil pengukuran diameter basis salep mempunyai daya sebar 3 cm, salep ekstrak daun  bakau  hitam  4%  mempunyai  daya sebar  3,8  cm,  salep  ekstrak  daun  bakau hitam  6%  mempunyai  daya  sebar  3,8  cm, salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  8% mempunyai  daya  sebar  3,6  cm,  salep ekstrak daun bakau hitam 10% mempunyai daya  sebar  4,2  %.    Salep  ekstrak  daun bakau  hitam  10%    mempunyai  daya  sebar paling  tinggi  yaitu  4,2  %  sehingga kemungkinan  ketika  dioleskan  pada  kulit akan  menjamin  penglepasan  obat  yang merata.    Pada  hasil  uji  daya  sebar  salep ekstrak daun bakau hitam 4%, 6% dan 8% memiliki  daya  sebar  yang  lebih  baik  jika
dibandingkan  dengan  basis  salep  yang hanya  3%  sehingga  kemungkinan  ketika diaplikasikan pada kulit proses penglepasan  obat  yang  merata  tidak  akan jauh  berbeda  dengan  salep  ekstrak  daun bakau hitam 10%.

## Hasil  Uji  Efektivitas  Salep  Ekstrak Daun Bakau Hitam
Pengamatan terhadap uji efektivitas salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  dilakukan dengan  melihat  perubahan  panjang  luka terinfeksi  selama  7  hari.    Pengamatan panjang  luka  terinfeksi  dilakukan  untuk melihat  kelompok  perlakuan  mana  yang memberikan efek pada luka terinfeksi pada punggung  kelinci.    Pengamatan  dimulai pada saat terjadinya eritema (kemerahan) ± 24 jam setelah penyuntikan bakteri sebagai tanda  terjadi  infeksi  pada  luka  kelinci. Selanjutnya  dilihat  dari  berkurangnya panjang  luka  terinfeksi  selama  7  hari. Hasil  pengamatan  dapat  dilihat  pada  table berikut :
Gambar 4 . Grafik rata-rata penyembuhan luka terinfeksi pada punggung kelinci dari hari hari ke-0 sampai hari ke-7.
Keterangan : KAL    = Kloramfenikol Salep (kontrol positif) DS = Dasar Salep (kontrol negative) SEDBH = Salep Ekstrak Daun Bakau Hitam
Hasil  pengamatan  anatomi  pada proses  penyembuhan  luka  terinfeksi  pada kelinci  dapat  dilihat  pada  lampiran  17.
Proses  penyembuhan  didasarkan  pada terbentuknya  keropeng (scrub) ,  hilangnya nanah,  adanya  pembekuan  darah  dan
berkurangnya  ukuran  luka  untuk  masing- masing kelompok perlakuan.
Pada  pembuatan  luka  infeksi  pada kelinci,  jika  dilihat  dari  mekanisme terjadinya luka maka termasuk dalam luka insisi,  ini  dikarenakan  luka  yang  dibuat pada  kelinci  diakibatan  irisan  dari  benda yang  tajam  seperti  pisau.    Menurut  luas dan kedalaman luka  yang dibuat  termasuk dalam  jenis  luka  stadium  III,hal  ini ditandai  dengan  hilangnya  kulit  secara keseluruhan  pada  bagian  luka  dan  diikuti dengan  kerusakan  jaringan  subkutan  yang dapat  meluas  sampai  bawah  tetapi  tidak melewati  jaringan  mendasar.    Jika  dilihat dari tingkat  kontaminasi, luka  yang dibuat termasuk jenis luka kotor atau luka infeksi karena pada bagian luka terdapat mikroorganisme.    Sedangkan  jika  ditinjau dari  waktu  dan  penyembuhan  luka  maka termasuk  dalam  jenis  luka  akut  (Taylor dkk, 1997).
Berdasarkan grafik dan hasil perhitungan  rata-rata  panjang  luka  dari masing-masing kelompok perlakuan, kelompok  perlakuan  yang  memberikan efek  dengan  berkurangnya  panjang  luka paling  cepat  adalah  kelompok  perlakuan salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  10  %, diikuti  dengan  kelompok  perlakuan  salep ekstrak  daun  bakau  hitam  8%,  kontrol positif, salep ekstrak daun bakau hitam 6% dan  4%  sedangkan  kelompok  perlakuan yang memberikan efek dengan berkurangnya  panjang  luka  paling  lama adalah  pada  kelompok  perlakuan  dasar salep (kontrol negatif). Hal ini dikarenakan pada masing-masing kelompok  perlakuan  salep  ekstrak  daun bakau  hitam  4,  6,  8,  10  %  memiliki kandungan  senyawa  flavonoid  berupa Dihidroflavonol,  Asam  fenolat,  Asam propanoat, Hydroquinone dan Asam miristat  yang  diduga  dapat  membantu menekan proses penyembuhan luka terinfeksi  pada  kelinci  dimana  senyawa aktif  pada    masing-masing  perlakuan  4%, 6%,  8%  dan  10%  mempunyai  kadar  yang berbeda-beda Sehingga
proses penyembuhan pada masing-masing
perlakuan  juga  menghasilkan  variasi penyembuhan luka terinfeksi yang berbeda-beda.    Pada  kelompok  perlakuan yang  menggunakan  merk  dagang  salep kloramfenikol  (kontrol  positif)  memiliki daya  penyembuhan  yang  hampir  selaras dengan  salep  ekstrak  daun  bakau  hitam dengan  konsentrasi  8  %  dan  10  % dikarenakan  kandungan  yang  terdapat dalam setiap salep kalmicetine mengandung 20 mg kloramfenikol dimana mekanisme  kerjanya  yakni  menghambat infeksi  kuman  yang  disebabkan  oleh bakteri (Setiabudy, dkk, 2007). Sedangkan pada kelompok perlakuan dasar salep  (kontrol  negatif)  memberikan  efek penyembuhan  paling  lama.    Hal  ini dikarenakan  tidak  adanya  kandungan senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam sediaan  tersebut  yang  bisa  membantu proses  penyembuhan  luka  terinfeksi    pada punggung kelinci.
Untuk  melihat  hasil  uji One  Way ANOVA, terlebih dahulu dilakukan pengujian  terhadap  homogenitas  varians data  terhadap  rata-rata  panjang  luka terinfeksi  pada  punggung  kelinci  agar selanjutnya  didapat  data  yang  valid.    Dari hasil  pengujian  varians  data  didapat homogen  signifikan  <  0,05,  dimana diperoleh  nilai  signifikan  =  0,01.  Data yang  didapat  kemudian  dilanjutkan  ke  uji One Way ANOVA.
Pada  hasil  pengujian One  Way ANOVA, data  yang diperoleh mempunyai nilai  signifikan  =  0,018  (sig  <0,05) sehingga  dapat  dikatakan  antara  kelima kelompok terdapat perbedaan yang bermakna.    Dari  hasil  uji One  Way ANOVA    pada  rata-rata  panjang  luka terinfeksi pada punggung kelinci diperoleh nilah  F  hitung  sebesar  2,844.    Sedangkan pada  nilai  F  tabel  diperoleh  2,29.    Hasil perhitungan pada F tabel diperoleh dengan cara  perhitungan,  nilai  V 1 diperoleh dengan menggunakan jumlah varian (perlakuan)  dikurangkan  1  (6-1  =  5) sehingga  nilai  V 1 =  5  dan  nilai  V 2 diperoleh  dengan  melihat  banyaknya sampel  (144)  dikurangkan  dengan  jumlah
varian  (6),  sehingga  diperoleh  nilai  138. Sehingga  jika  dilihat  pada  F  table diperoleh  nilai  2,29.    Jika  dibandingkan antara  nilai  F  hitung  sebesar  2,844  dan  F tabel sebesar 2,29 maka dapat dikatakan F hitung lebih besar dari pada F tabel (2,844 >  2,29)  sehingga  hipotesis  yang  diterima ialah  H 1 yaitu  salep  ekstrak  daun  bakau hitam  4%, 6%, 8%, 10% mempunyai  efek terhadap  penyembuhan  luka  terinfeksi pada punggung kelinci.
Hasil pengujian LSD (Least significant  different) digunakan  untuk melihat  apakah  setiap  perlakuan  memiliki perbedaan  yang  bermakna  atau  tidak. Apabila  nilai  signifikan  perlakuan  yang satu  terhadap  perlakuan  yang  lain  >  0,05 maka  tidak  terdapat  perbedaan  yang bermakna antara perlakuan tersebut dengan  yang  lain  sedangkan  apabila  nilai sinifikan  <  0,05  maka  terdapat  perbedaan bermakna  perlakuan  tersebut  dengan perlakuan  yang  lain.    Pada  hasil  uji  LSD terlihat  antara  perlakuan  kontrol  positif, salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  4%,  6%,
8%,  10%  tidak  memiliki  perbedaan  yang bermakna  dimana  nilai  yang  diperoleh antara  perlakuan  tersebut  memiliki  nilai signifikan > 0,05. Hal ini mengindikasikan pada  perlakuan  salep  ekstrak  daun  bakau hitam  4%,  6%,  8%  dan  10%  mempunyai efek penyembuhan terhadap luka terinfeksi punggung  kelinci.    Sedangkan  pada perlakuan kontrol negatif terhadap perlakuan  kontrol  positif  dan  perlakuan salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  4%,  6%, 8%,  10%  memiliki  perbedaan  yang bermakna  karena  nilai  signifikan  yang diperoleh adalah <0,05. Hal ini mengindikasikan  pada  perlakuan  kontrol negatif tidak mempunyai
efek penyembuhan luka terinfeksi pada punggung kelinci.

## PENUTUP
Kesimpulan Berdasarkan penelitian ini dapat disimpulkan  bahwa  formulasi  basis  salep dan  salep  ekstrak  daun  bakau  hitam  yang dibuat dengan variasi konsentrasi 4%, 6%,
8%  dan  10%  memenuhi  parameter  uji homogenitas,  uji  organoleptis  dan  uji  pH tetapi  tidak  memenuhi  parameter  kualitas daya  sebar.  Salep  ekstrak  daun  Bakau hitam yang dibuat dengan variasi konsentrasi  4%,  6%,  8%  dan  10% mempunyai  efek  penyembuhan  terhadap luka terinfeksi pada punggung kelinci.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdul  Halim  Alfarobi,  2010, Aktivitas Bioaktif  Pada  Ekstrak  Daun  Bakau Rhizophora  mucronata  Terhadap Penghambatan  Bakteri  Escherichia coli. Skripsi. Teknologi Hasil
Perikanan. Universitas  Brawijaya.
Malang. Agoes,  Goeswin.  2008. Pengembangan Sediaan Farmasi . ITB-Press,
Bandung.
Andjani,  T.W  dan  Maharddika,  D.  2003 Perbandingan  Efek  Aplikasi  Adas Manis  Segar  Tumbuk  Dan  Adas Manis  Segar  Destilasi  pada  Mukosa Mulut  Tikus  Wistar  Strain  LMR Yang Mengalami
Peradangan
(Penelitian  Labolatorik).  Universitas Indonesia : Jakarta.
Anief, Moh. 1997. Formulasi Obat Topika
Dengan Dasar Penyakit Kulit. Cetakan Pertama.Yogyakarta: Penerbit  Gadjah  Mada  University
Press. Hal. 1-15.
Anonim,  1995. Farmakope  Indonesia. Edisi IV. Departemen Kesehatan RI : Jakarta.
Anonim,  1979 .  Farmakope  Indonesia Edisi  III .  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Anonim, 2009. Luka dan Cedera . http://id.wikipedia.org/wiki/Luka.
November 15th 2009. Anonim,  2000. Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Departemen Kesehatan RI : Jakarta. Ansel,  H.  C.  1989. Pengantar  Bentuk Sediaan Farmasi, diterjemahkan oleh Farida Ibrahim.
Ansel,  H.  C.  2005. Pengantar  Bentuk Sediaan Farmasi.
Universitas
Indonesia Press : Jakarta.
Budiman, M. H. 2008. Uji Stabilitas Fisik Krim  Antioksidan  Ekstrak  Serbuk Tomat. skripsi. FMIPA UI, Jakarta.
Brooks  G.  F,  Butel  S.  J,  Morse  A.  S.
(2001) Medical
Microbiology . International Edition. 22 nd ed.
McGraw-Hill. New York.
Cappucino,  J.  G  and  N.  Sherman.  2001.
Microbiology. S Chand Cb Ltd , New Delhi.
Departemen  Kehutanan.  1997. Strategi
Nasional  Pengelolaan  Mangrove  di Indonesia.  Jilid  2:  Strategi  dan Rancang Tindak . Departemen Kehutanan RI, Jakarta.
Dian  Riana  Ningsih,  Warsinah,  dan
Suwandri,  2006, Fraksinasi  Ekstrak Metanol  Kulit  Batang  Rhizophora mucronata dan Uji Daya Hambatnya Terhadap  Bakteri    Escherichia  coli. Program  Sarjana  MIPA  Unsoed Purwokerto.
Howard C Ansel, 2008. Pengantar Bentuk Sediaan  Farmasi  ed  4 .  Jakarta.  UI- Press.
Hustamin, Rudy. 2006. Panduan Memelihara  Kelinci  Hias.  Jakarta : Agro Media Pustaka.
Junqueira  L.  C.  Carneiro  J.  Kelley  R.O. 1997. Histologi  Dasar .  Jakarta: EGC. H.336-344
Katzung,  B.  G.  1998. Basic  and  Clinical Pharmacology. 7th ed. USA: Prentice  Hall  Inc,  Appleton  & Lange. p.743-745.
Lachman, Leon . 2008. Teori dan Praktek Farmasi Industri. Jakarta :UI-Press Madigan  M;  Martinko  J  (editors).  2005. Brock  Biology  of  Microorganisms , 11th ed., Prentice Hall.
Mycek,  M.  J.,  R.  A.  Harvey,  and  P.C. Champe,  1997. Inhibitor  of  Cell Wall  Synthesis  In:  Pharmacology. 2nd  ed.  Philadelphia:  Lippincott Williams & Wikins. p.297-310.
Noor,  Y.  R.,  M.  Khazali,  dan  I.  N.  N. Suryadiputra. 1999.
Panduan
Pengenalan  Mangrove  di  Indonesia . PKA/WI-IP. Bogor. Rachmawati,  S.  2008, Study  Makroskopi,
Mikroskopi  dan  Skrining  Fitokimia Daun  Anredera  cordifolia  (Ten.) Steenis, Thesis, Airlangga University, Surabaya.
Rajalakshmi, G. N. et al. 2009.
Formulation  and  Evaluation  of Clotrimazole and Ichtammol Ointment .  International  Journal  of Pharma and Bioscience 4 : 10-12.
Ryan, K. J., J. J. Champoux, S. Falkow, J. J.  Plonde,  W.  L.  Drew,  F.  C.
Neidhardt,  and  C.  G.  Roy.  1994. Medical Microbiology An Introduction  to  Infectious Diseases. 3rd ed. Connecticut: Appleton&Lange. p.254. Saptiani, Ani, 2011, Uji Aktivitas Antibakteri  Staphylococcus  aureus dan  Escherichia  coli  Ekstrak  Dari Daun Mangrove Rhizophora
mucronata . Universitas Brawijaya. Schunack, W., Mayer, K., dan Haake, M.. 1990. Senyawa  Obat .  Edisi  kedua. Penerjemah:  Joke  Wattimena  dan Sriewoelan  Soebito.  Yogyakarta. Penerbit  Universitas  Gadjah  Mada.
Hal 768. Setiabudy, Rianto,
dkk. 2007.
Farmakologi  dan  Terapi. Edisi  5. Jakarta  :  Departemen  Farmakologi dan Terapeutik, FKUI.
Sjamsuhidayat.  1997. Buku  Ajar  Ilmu Bedah. Buku  Kedokteran  EGC  :
Jakarta.
Sutiman dan Eli  Rohaeti. 2010. Teknologi Pembelajaran .  Yogyakarta:  FMIPA
UNY.
Sudjadi, 1985. Penuntun Struktur Senyawa Organik ; Fakultas Farmasi UGM. Sutjihati,  R.,  Soediro  Soetarno.,  Siti Kusmadiyani.,  1995.  Pemeriksaan Senyawa  Fenolik  Daun Rhizophora mucronata Lamk.  (Rhizoporaceae), Suatu  Tumbuhan  Mangrove.  Skripsi Sekolah Farmasi ITB. Bandung.
Setiabudy,
R. 1995. Pengantar Antimikroba. dalam: S.G.
Ganiswarna,  R.  Setiabudy,  F.D. Suyatna,  dkk. Farmakologi  dan Terapi .  Edisi  IV.  jakarta:Gaya  Baru. hal. 571-576.
Syah  C.  2011. Pertumbuhan  tanaman bakau (Rhizophora Mucronata) pada  lahan  restorasi  mangrove    di Hutan Lindung Angke Kapuk Provinsi Dki  Jakarta. [ Tesis ] . Bogor :  Program  Pascasarjana,  Institut Pertanian Bogor.
Smith  JBBV  dan  Soesanto  M.  1988. Pemeliharaan, Pembiakan dan Penggunaan  Hewan  Percobaan  di Daerah Tropis. UI Press : Jakarta. Trianggono,  R.  I.  Latifah,  F.  2007. Buku Pegangan Ilmu Pengetahuan
Kosmetik . PT. Gramedia : Jakarta. Taylor  C,  Lilis  C,  LeMone.  P.  1997. Fundamental  of  Nursing  :  The  Art and  Science  of  Nursing  Care. Lippinott-Raven Publisher
: Philadelphia.
Warsinah,  S.  N.  Nurhandayani,  S.  S. Susilowati,  2002, Penjaringan  dan
Isolasi  Alkaloid  pada  Tumbuhan Bakau  R.  mucronata  sebagai  Obat Anti  Inflamasi  dan  anti  Demam, Laporan  Proyek  Due  Batch  II UNSOED, Purwokerto.
Wibisono,  A.  H.  2008. Efek  Penggunaan Ekstrak  Kunyit  (Curcuma  Longa) terhadap  Lama  Periode  Inflamasi pada  Marmut  (Cavia  Porcellus) dengan Luka Bakar Derajat 2 . Tugas Akhir.  Tidak  diterbitkan,  Fakultas Kedokteran  Universitas  Brawijaya,
Malang.
Warsa, U. C. 1994. Staphylococcus dalam

## Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran.
Edisi  Revisi.  Jakarta  :  Penerbit Binarupa Aksara. hal. 103-110.
Yasmon,  A.  2000.  Sensitifitas Vibrio Parahaemolyticus terhadap  Ekstrak Mangrove Rhizopora  Apiculata di Dalam Lumpur dan Air Laut. Skripsi Sarjana  Fakultas  Perikanan  dan IlmuKelautan Universitas Riau. 37p.