## PENENTUAN KANDUNGAN ANTIOKSIDAN DALAM RIMPANG KENCUR (Kaempferia galanga L.) YANG DIEKSTRAKSI DENGAN BANTUAN GELOMBANG ULTRASONIK
Indrawati 1 , Fitria Suci Ariva 1 , Refilda *2
1 Laboratorium Kimia Analisis Lingkungan, Jurusan Kimia FMIPA, Universitas Andalas 2 Laboratorium Kimia Analitik Terapan, Jurusan Kimia FMIPA, Universitas Andalas e-mail: refilda_59@yahoo.com; refilda@sci.unand.ac.id
Diterima: 09 Oktober 2018 / Disetujui: 29 November 2018 / Dipublikasi online: 15 Desember 2018 DOI: 10.22437/chp.v3i2.5769

## ABSTRACT
Kaempferia galanga L. rhizome is used a traditional medicine and as seasoning. Kaempferia galanga  L.  rhizome  has  many  bioactivies  beneficial  to  antioxidant.  Extraction  of  antioxidant by maceration method takes a long time and the extraction process is not perfect so ultrasonic assisted  extraction  (UAE)  are  used  to  accelerate  the  extraction  process.  The  propose  of  the research  is  to  extract  antioxidant  from  Kaempferia  galanga  L.  rhizome  by  UAE  and  to determinate  the  antioxidant  content  by  1,1-diphenyl-2-picrilhydrazyl  (DPPH)  method.  The optimum conditions for extraction were 20  mL  methanol as the solvent, the weight of  sample 1.5 g, and extraction time 60 minutes. The total antioxidant content from Kaempferia  galanga L.  rhizome  extraction  by  maceration  and  UAE  were  0.6688  ±  0.02  and  0.8126  ±  0.02  mg/g DW.  This  study  also  validated  the  method  of  determining  the  total  antioxidant  content extracted with ultrasonic. The results of the method validation obtained linearity (r) = -0.9984, LoD value = 0.0283 mg/L, LoQ value = 0.0947 mg/L, precision (SDR = 1.97% and HORRAT = 0.96)  and  percent  recovery  103.21%.  Based  on  the  method  validation  value,  it  can  be  said that  the determination of the total  antioxidant content in  the Kaempferia galanga  L. rhizome extracted with the help of UAE can be applied.

## Keywords: Kaempferia galanga L. rhizome, antioxidant, ultrasonic, method validation

## ABSTRAK
Rimpang  kencur  banyak  digunakan  sebagai  ramuan  obat  tradisonal  dan  bumbu  dalam masakan. Rimpang kencur mengandung senyawa bioaktif yang dapat dimanfaatkan sebagai antioksidan. Ekstraksi antioksidan dengan  metode  maserasi  memerlukan waktu yang lama dan  proses  pengekstraksian  kurang  sempurna  sehingga  digunakan  bantuan  gelombang ultrasonik  untuk  mempercepat  proses  ekstraksi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui kondisi  optimum  pengekstraksian  antioksidan  dalam  rimpang  menggunakan  bantuan gelombang  ultrasonik  dan  menentukan  kandungan  antioksidan  total  menggunakan  metode DPPH. Kondisi optimum pengekstraksian adalah menggunakan 20 mL pelarut metanol, berat sampel 1,5 gram, dan waktu pengekstraksian 60 menit. Kandungan antioksidan total dalam rimpang  kencur  yang  diekstraksi  dengan  maserasi  dan  bantuan  gelombang  ultrasonik adalah  0,6688  ±  0,02  dan  0,8126  ±  0,02  mg/g  DW.  Penelitian  ini  juga  dilakukan  validasi metode  penentuan  kandungan  antioksidan  total  yang  diekstraksi  dengan  bantuan gelombang  ultrasonik.  Hasil  validasi  metode  yang  didapatkan  linearitas  (r)  =  -0,9984,  nilai LoD = 0,0283 mg/L, nilai LoQ = 0,0942 mg/L, presisi (SDR = 1,97% dan HORRAT = 0,96) dan perolehan  kembali  yang  didapatkan  103,21%.  Berdasarkan  nilai  validasi  metode  dapat dikatakan  bahwa  penentuan  kandungan  antioksidan  total  dalam  rimpang  kencur  yang diekstraksi dengan bantuan gelombang ultrasonik dapat diterapkan.

## Kata Kunci: Kencur, antioksidan, gelobang ultrasonik, validasi metode

## PENDAHULUAN
Kencur (Kaempferia galanga L.) merupakan tanaman yang banyak dibudidayakan di Indonesia,  India,  Malaysia  dan  Cina.  Di  Indonesia  tanaman  ini  banyak  terdapat  didaerah Jawa Tengah, Jawa Tengah, Kalimantan Selatan, Jawa Timur, Jawa Barat, Yogyakarta dan
Sumatera  Barat.  Bagian  dari  tenaman  kencur  yang  banyak  digunakan  adalah  akar  yang terdapat  didalam  tanah  yang  disebut  dengan  rimpang  kencur  atau  rizoma.  Rimpang kencur digunakan sebagai ramuan obat tradisional dan bumbu dalam masakan (Salim dan Muradi, 2012) Penelitian yang pernah dilakukan oleh Hayati, et al 2015 diperoleh informasi kencur mengadung senyawa flavonoid, polifenol, alkaloid dan tanin. Dimana flavonoid dan polifenol  merupakan  kelompok  senyawa  metabolit  sekunder  yang  berperan  sebagai antioksidan.
Antioksidan adalah senyawa yang mampu mengahambat terjadinya reaksi oksidasi. Reaksi  oksidasi  terbentuk  karena  banyak  radikal  bebas  dalam  tubuh.  Serangan  dari radikal  bebas  dapat  menyebabkan  terjadi  kerusakan  sel  atau  jaringan,  berbagai  penyakit hingga  (Wallinger,  2015).  Tubuh  manusia  memproduksi  antioksidan  tetapi  jumlahnya sering  tidak  cukup  untuk  menetralkan  radikal  bebas  yang  masuk  kedalam  tubuh.  Oleh sebab  itu  dibutuhkan  tambahan  antioksidan  untuk  mencegah  terjadinya  pembentukan radikal bebas dalam tubuh. Antioksidan berdasarkan sumbernya terbagi menjadi dua yaitu antioksidan sintetik dan antioksidan alami. Antioksidan sintetik berasal dari hasil sintentis senyawa  kimia  sedangkan  antioksidan  alami  berasal  dari  hasil  ekstraksi  bahan  alam tumbuhan (Bundit, 2016) seperti rimpang kencur yang digunakan pada penelitian ini.
Ekstraksi  antioksidan  umumnya  menggunakan  metode  maserasi,  dimana  sampel direndam  dengan  pelarut  dalam  waktu  tertentu.  Pengekstraksi  dengan  metode  maserasi memiliki  kekurangan  diantaranya  waktu  pengerjaan  yang  lama  dan  proses pengekstraksian  yang  kurang  sempurna  (Xu,  et  al,  2015).  Sehingga  pada  penelitian  ini dilakukan  proses  ekstraksi  menggunakan  bantuan  gelombang  ultrasonik.  Dimana ekstraksi  dengan  bantuan  gelombang  ultrasonik  pengerjaannya  hampir  sama  dengan maserasi,  perbedaanya  adalah  ultrasonik  memanfaatkan  gelombang  ultrasonik  untuk mempercepat  proses  ekstraksi.  Gelombang  ultrasonik  memiliki  frekuensi  diatas  20  kHz (Mathialagan, 2017).
Kondisi  optimum  ekstraksi  antioksidan  rimpang  kencur  menggunakan  bantuan gelombang  ultrasonik  berdasarkan  pengaruh  jenis  pelarut,  berat  sampel  dalam  volume pelarut  yang  sama  dan  waktu  pengekstraksian  dipelajari,  hasilnya  dibandingkan  dengan metode  maserasi.  Kandungan  antioksida  total  yang  dihitung  sebagai  asam  askorbat ditentukan dengan metode 1,1 difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH). Metode DPPH adalah metode yang  didasarkan  pada  kemampuan  antioksidan  untuk  mengikat  radikal  DPPH.  DPPH memberikan serapan maksimum pada panjang gelombang 517 nm dengan warna larutan ungu.  Semakin  banyak  antioksidan  dalam  sampel  maka  warna  larutan  DPPH  akan memudar  sampai  berwarna  kuning.  Metode  DPPH  dipilih  karena  hasil  pengamatanya mudah  diamati,  waktu  analisisnya  cepat,  dan  hasil  yang  didapat  akurat  (Dragovic,  et  al 2010).
Validasi metode penentuan kandungan antioksidan yang diekstraksi dengan menggunkan bantuan gelombang ultrasonik juga dilakukan. Validasi metode dilakukan
untuk memastikan bahwa metode yang  digunkan mempu menghasilkan data yang valid. Validasi metode dilakukan dengan beberapa uji parameter statistik seperti linearitas, LoD dan LoQ, presisi, dan akurasi.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah neraca analitik Kern ABJ, kaca arloji, botol  kaca  gelap,  ultrasonik  RK-510  (frekuensi  35  kHz),  oven,  desikator,  spetrofotometer UV-Vis (PD 303S Spectrophotometer) dan peralatan gelas.

## Bahan
Bahan–bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  rimpang  kencur (Kaempferia  galanga  L.),  methanol  96%  teknis,  air  destilasi  yang  dibuat  di  laboratorium Jurusan  Kimia  FMIPA  Unand,  etil  asetat  96%  (teknis),  n-heksana  96%  (teknis),  asam askorbat  p.a  (Merck),  1,1-difenil-2-pikrihidrazil  (DPPH)  p.a.(Sigma  Aldrich),  kertas  saring, aluminium foil.

## Prosedur Penelitian

## Persiapan Sampel
Rimpang  kencur  (Kaempferia  galanga  L.)  diambil  di  daerah  Lubuk  Basung, Kabupaten  Agam.  Rimpang  kencur  segar  ditimbang  ±2  kg  dibersihkan  dengan  air  untuk menghilangkan tanah yang menempel, lalu dipotong kecil-kecil, dikering anginkan, setelah itu dihaluskan. Sampel ini digunakan untuk semua perlakuan.

## Penentuan Kadar Air
Kadar  air  ditentukan  dengan  metode  gravimetri,  dimana  cawan  porselen  dioven selama ±1 jam pada suhu 105 o C, kemudian diletakkan dalam desikator selama ±30 menit dan  ditimbang.  Sampel  (±2,0  g)  dimasukkan  ke  dalam  cawan  tersebut,  kemudian  dioven selama ±3 jam pada suhu 105 o C, setelah itu dimasukkan kedalam desikator selama ±30 menit, kemudian dioven dan didesikator lagi sampai didapatkan berat konstan.  Dihitung persentase kadar airnya (Standar AOAC, 2012).

## Pembuatan Kurva Kalibrasi Larutan Standar Asam Askorbat
Dibuat  variasi  konsentrasi  larutan  standar  asam  askorbat  0,  2,  4,  6,  8,  10  dan  12 mg/L  dari  larutan  induk  100  mg/L.  Dipipet  masing-masing  2  mL  larutan  standar  asam askorbat,  dimasukkan  ke  dalam  botol  vial.  Ditambahkan  3  mL  larutan  DPPH  0,1  mM, kemudian  didiamkan  selama  30  menit.  Absorban  diukur  pada  panjang  gelombang  517 nm.  Hasil  pengukuran  dibuat  kurva  kalibrasi  yang  menunjukkan  hubungan  antara konsentrasi dan absorban.

## Penentuan Kondisi Optimum Pengekstrasian Antioksidan Dengan Menggunakan
Bantuan Gelombang Ultrasonik

## Pengaruh Jenis Pelarut
Sampel  kering  angin  sebanyak  2,0  g  ditambahkan  dengan  20  mL  akuades  dan dilakukan ultrasonik selama 15 menit. Ekstrak yang dihasilkan diencerkan 10 kali,
kemudian  dipipet  2  mL  dan  ditambahkan  3  mL  DPPH  0,1  mM,  setelah  itu  didiamkan selama 30 menit. Absorban diukur pada panjang gelombang 517 nm. Dihitung kandungan antioksidan  menggunakan  persamaan  regresi  dari  kurva  kalibrasi  larutan  standar  asam askorbat.  Percobaan  dilakukan  sebanyak  3  kali  pengulangan.  Hal  yang  sama  dilakukan untuk pelarut etanol, etil asetat, dan n-heksana.

## Pengaruh Berat Sampel dengan Volume Pelarut yang Sama
Sampel seberat 1,0; 1,5; 2,5; dan 3,5 g masing-masing ditambahkan dengan 20 mL metanol dan dilakukan ultrasonik selama 15 menit. Ekstrak yang dihasilkan diencerkan 10  kali  kemudian  dipipet  2  mL  dan  ditambahkan  3  mL  DPPH  0,1  mM,  setelah  itu didiamkan selama 30 menit. Absorban diukur pada panjang gelombang 517 nm. Dihitung kandungan  antioksidan  menggunakan  persamaan  regresi  dari  kurva  kalibrasi  larutan standar asam askorbat. Percobaan dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan.

## Pengaruh Waktu Pengekstraksian
Sampel  kering  angin  ditimbang  1,5  g,  ditambahkan  20  mL  metanol  dan  dilakukan ultrasonik selama 15, 30, 45, 60, 75, dan 90 menit. Ekstrak yang dihasilkan diencerkan 10 kali kemudian dipipet 2 mL dan ditambahkan 3 mL DPPH 0,1, setelah itu didiamkan selama 30 menit. Absorban diukur pada panjang gelombang 517 nm. Dihitung kandungan antioksidan  menggunakan  persamaan  regresi  dari  kurva  kalibrasi  larutan  standar  asam askorbat. Percobaan dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan.

## Pengaruh Metode Pengekstraksian
Sampel kering angin 1,5 g dimasukkan kedalam 2 buah botol vial 100 mL. Botol vial pertama  ditmbahkan  20  mL  metanol  dan  direndam  selama  60  menit.  Botol  vial  kedua ditambahkan  20  mL  metanol  dan  diultrasonik  selama  60  menit.  Masing-masing  ekstrak yang  diperoleh  diencerkan  10  kali  kemudian  dipipet  2  mL  dan  ditambahkan  3 mL  DPPH 0,1  mM,  setelah  itu  didiamkan  selama  30  menit.  Absorban  diukur  pada  panjang gelombang  517  nm.  Dihitung  kandungan  antioksidan  menggunakan  persamaan  regresi dari kurva kalibrasi larutan standar asam askorbat. Percobaan dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan. Hal yang sama juga dilakukan untuk rimpang kencur segar.

## Validasi Metode

## Linearitas
Linearitas  diperoleh  dari  kurva  kalibrasi  larutan  standar  asam  askorbat  dengan memplotkan  konsentrasi  dengan  absorban.  Sebagai  parameter  hubungan  linear digunakan koefisien korelasi pada analisis regresi linear y = ax + b.

## LoD dan LoQ
LoD  dihitung  dari  3  kali  simpangan  baku  kurva  kalibrasi  larutan  standar  asam askorbat dibagi slope persamaan garis linear
LoD  3 S B (1)
LoQ dihitung dari 10 kali simpangan baku kurva kalibrasi larutan standar asam askorbat dibagi slope persamaan garis linear.
Presisi
LoD  10 S B (2)
Presisi  suatu  metode  ditentukan  dengan  melihat  standar  deviasi  relatif.  Data  yang didapat  dilakukan  uji  data  terpencil  (outlier)  terlebih  dahulu.  Nilai  SDR  dihitung  dengan membagi nilai standar deviasi yang diperoleh dengan nilai rata-rata.
(3)
̅
Dari  nilai  SDR  yang  diperoleh  dibandingkan  dengan  nilai  Horwitz.  Dimana  nilai Horwitz  merupakan  SDR  yang  diperkirakan  melalui  persamaan  rumus  (H  =  2 1-0,5logC ).
Kriteria presisi suatu metode ditetapkan berdasarkan nilai rasio Horwitz (HORRAT).
(4)

## Akurasi
Parameter dari penentuan akurasi yaitu berdasarkan persen perolehan kembali (recovery). Persen perolehan kembali metode analisa dinyatakan dalam rumus:
[ ] - (5)
Dimana: [sampel + standar] = ekstrak sampel yang sudah diencerkan 10 kali dipipet 2 mL kedalam  botol  vial  gelap,  ditambahkan  2  mL  larutan  asam  askorbat  4  mg/L  dan  3  mL larutan  DPPH  0,1  mM  kemudian  didiamkan  selama  30  menit.  Diukur  absorban  pada panjang  gelombang  517  nm.  [sampel]  =  ekstrak  sampel  yang  sudah  diencerkan  10  kali dipipet 2 mL kedalam botol vial gelap, ditambahkan 3 mL larutan DPPH 0,1 mM kemudian didiamkan selama 30 menit. Diukur absorban pada panjang gelombang 517 nm.

## PEMBAHASAN

## Analisa Kadar Air
Kadar air dari rimpang kencur ditentukan untuk mengetahui berat kering btul kring dari rimpang kencur. Kadar air pada sampel ditentukan dengan metode gravimetri, dimana sampel dipanaskan pada suhu 105 ° C untuk menguapkan molekul air yang terdapat pada sampel. Kadar air dari rimpang kencur segar didapatkan adalah 81,49%. Setelah rimpang kencur  dikering  anginkan  selama  14  hari  kadar  air  dalam  sampel  menjadi  20,52%. Rimpang  kencur  dikering  anginkan  pada  suhu  ruang  berfungsi  untuk  mengurangi  kadar air  dan  menghindari  rusaknya  senyawa  aktif  yang  terdapat  dalam  sampel  (Suryani,  et.al 2015).  Selain  itu  agar  antioksidan  yang  didapatkan  lebih  maksimal  karena  sampel  yang digunakan jumlahnya lebih banyak dibandingkan dengan rimpang kencur segar.
Penentuan Kondisi Optimum Pengekstrasian Antioksidan Dengan Menggunakan Bantuan Gelombang Ultrasonik

## Pengaruh Jenis Pelarut
Sampel  rimpang  kencur  diekstrak  dengan  menggunakan  empat  pelarut  (akuades, metanol, etil asetat, dan n-heksana) yang berbeda tingkat kepolarannya. Pengaruh pelarut yang  digunakan  terhadap  kandungan  antioksidan  dalam  rimpang  kencur  dapat  dilihat pada  Gambar  1.  Kandungan  antioksidan  tertinggi  dalam  rimpang  kencur  didapatkan dengan menggunakan pelarut metanol adalah 0,4387 ± 0,02 mg/g DW. Hal ini disebabkan karena kencur memili kandungan senyawa flavonoid dan fenolik yang larut dalam pelarut polar. Diman senyawa fenolik dan flavonoid berperan sebagai antioksidan.
Akuades  memiliki  kepolaran  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  metanol,  namun kandungan  antioksidan  tertinggi  didapatkan  pada  pelarut  metanol.  Hal  ini  disebabkan senyawa bioaktif yang terdapat dalam rimpang kenciur larut baiik dalam metanol. Selain itu  pelarut  metanol  merupakan  pelarut  universal  yang  dapat  melarutkan  senyawa  polar dan semi polar. Penelitian yang dilakukan oleh Elfalleh, et al (2012) mengenai kandungan fenolik  total  dan  aktivitas  antioksidan  dari  kulit,  biji,  daun,  dan  bunga  delima  yang diekstrak  dengan  pelarut  akuades  dan  metanol  didaptkan  hasil  aktivitas  antioksidan tertinggi pada pelarut metanol.

## Gambar 1. Pengaruh jenis pelarut terhadap kandungan antioksidan ekstrak kencur.

## Pengaruh Berat Sampel dengan Volume Pelarut yang Sama
Dari  empat  variasi  berat  sampel  (1;  1,5;  2,5;  dan  3)g  yang  diekstrak  dalam  20  mL pelarut  metanol,  didapatkan  kandungan  antioksidan  tertinggi  pada  berat  sampel  1,5  g adalah  0,5997  ±  0,03  mg/g  DW.  Pengaruh  variasi  berat  sampel  dengan  20  mL  pelarut metanol dapat dilihat pada Gambar 2.
Dari  Gambar  2  dapat  diamati  berat  sampel  mempengaruh  kandungan  antioksidan yang  dihasilkan,  dimana  kandungan  antioksidan  maksimal  didapat  pada  berat  1,5  g dengan voleme pelarut 20 mL. Hal ini dikarenakan perbandingan jumlah sampel rimpang kencur  dengan  jumlah  pelarut  yang  digunakan  sudah  cukup  untuk  mendapatkan kandungan  antioksidan  yang  maksimum,  sehingga  pada  penambahan  berat  yang  lebih besar  dengan  jumlah  pelarut  yang  sama  tidak  dapat  mengekstrak  antioksidan  dengan maksimal. Penelitian yang dilakukan oleh Petigny, (2013) mengenai ekstraksi daun boldo menggunakan ultrasonik dengan variasi berat sampel/pelarut (1%, 4%, 6%, 10% dan
20%)  didapatkan  ekstrak  tertinggi  pada  berat  sampel/pelarut  6%.  Hal  ini  disebabkan perbandingan  berat  sampel  dengan  pelarut  yang  digunakan  sudah  cukup  untuk menghasilkan kandungan antioksidan yang maksimal.
Gambar 2. Pengaruh berat sampel yang diekstrak dengan 20 mL metanol selama 15 menit terhadap kandungan antioksidan dalam rimpang kencur.

## Pengaruh Waktu Pengekstraksian
Pengaruh waktu pengekstraksian terhadap kandungan antioksidan yang didapatkan dalam  sampel  rimpang  kencur  dapat  dilihat  pada  Gambar  3.  Semakin  lama  watu  yang digunakan maka kandungan antioksidan yang didapatkan akan semakin banyak. Hal ini disebabkan  karena  interaksi  antara  sampel  dengan  pelarut  semakin  besar  sehingga hasilnya  akan  bertambah  sampai  titik  jenuh  larutan  (Muhammad,  2017).  Kandungan antioksidan tertinggi didapatkan pada menit ke-90 sebesar 0,7289 ± 0,02 mg/g DW.

## Gambar 3. Pengaruh waktu ekstraksi terhadap kandungan antioksidan dalam rimpang
kencur.
Pada  menit  ke-60  kandungan  antioksidan  yang  didapatkan  mengalami  kenaikan yang  tidak  signifikan,  hal  ini  dikarenakan  pada  menit  ke-60  pelarut  yang  digunakan untuk  ekstraksi  sudah  mulai  jenuh,  sehingga  pada  menit  ke-75  dan  90  kandungan antioksidan yang didapatkan hampir sama. Kandungan antioksidan yang didapatkan
pada  menit  ke-60  adalah  0,7240  ±  0,03  mg/g  DW.  Penelitian  yang  dilakukan  oleh Hadiyanto  et.  al  (2014)  tentang  ekstraksi  antioksidan  dari  kulit  kentang  menggunakan ultrasonik  dengan  variasi  waktu  ekstraksi  yang  digunakan  30,  45,  dan  60  menit, didapatkan hasil ekstraksi tertinggi pada menit ke 60 sebesar 72,83 ± 0,65 mg/g.

## Pengaruh Metode Ekstraksi
Pada penelitian ini dilakukan perbandingan ekstraksi dengan maserasi dan bantuan gelombang  ultrasonik,  dimana  sampel  yang  digunakan  adalah  sampel  segar  dan  kering. Hasil  kandungan  antioksidan  yang  didapat  dari  kedua  metode  yang  digunakan  dapat dilihat pada Gambar 4.

## Gambar 4. Pengaruh metode ekstraksi menggunakan maserasi dan bantuan gelombang
ultrasonik terhadap sampel segar dan kering angin dari rimpang kencur.
Berdasarkan Gambar 4 dapat diamati kandungan antioksidan tertinggi diperoleh dari metode  ekstraksi  menggunakan  bantuan  gelombang  ultrasonik.  Hal  ini  disebabkan gelombang  ultrasonik  akan  menghasilkan  gelembung  kavitasi  dalam  larutan.  Gelembung kavitasi  akan  terbentuk  pada  dinding  sel  sampel,  sehingga  menyebabkan  terpecahnya dinding  sel  sampel  dan  proses  ekstraksi  menjadi  lebih  cepat.  Penelitian  yang  dilakukan oleh  Albayrak,  et.al.  (2017)  mengenai  penentuan  kadungan  fenolik  dan  aktivitas  biologis dari  Centaurea  sp.  menggunakan  tiga  metode  ekstraksi  (maserasi,  sokletasi,  dan ultrasonic) didapatkan hasil aktivitas antioksidan tertinggi pada metode ultrasonik.
Sampel  rimpang  kencur  kering  angin  mngahasilkan  kandungan  antioksidan tertinggi  dari  kedua  metode.  Hal  ini  disebabkan  karena  rimpang  kencur  kering  angin memiliki  kadar  air  yang  lebih  rendah  dibandingkan  rimpang  kencur  segar  (Tamam,  B. 2011).  Kandungan  antioksidan  yang  dihasilkan  dari  rimpang  kencur  kering  angin  yang diekstraksi dengan maserasi dan bantuan gelombang ultrasonik adalah 0,6688 ± 0,02 dan 0,8126 ± 0,02 mg/g DW.

## Validasi Metode

## Linearitas
Uji  linearitas  digunakan  untuk  melihat  kemampuan  metode  memberikan  yang sesuai  terhadap  konsentrasi  analit  dalam  sampel.  Linearitas  dihitung  berdasarkan persamaan regresi yang diperoleh dari kurva kalibrasi larutan standar yang didapatkan.
Parameter  yang  digunakan  untuk  menentukan  linearitas  adalah  koefisien  korelasi  dan koefisien  determinasi.  Linearitas  dari  penentuan  kandungan  antioksidan  dalam  rimpang kencur  yang  diekstraksi  dengan  bantuan  gelombang  ultrasonik  dapat  dilihat  pada Gambar  5.  Dimana  nilai  koefisien  korelasi  dan  koefisien  determinasi  yang  didapatkan adalah  -0,9984  dan  0,9969.  Nilai  koefisien  korelasi  dan  koefisien  determinasi  yang didapatkan  mendekati  -1  dan  -1,  hal  ini  menandakan  metode  memiliki  hubungan linearitas yang baik.

## Gambar 5. Kurva Kalibarsi Larutan Standar Asam Askorbat

## LoD dan LoQ
LoD merupakan jumlah terkecil analit dalam sampel yang masih dapat dideteksi oleh alat.  Sedangankan  LoQ  adalah  jumlah  terkecil  analit  dalam  sampel  yang  masih  dapat dideteksi oleh alat secara kuantitatif. Semakin kecil nilai LoD dan LoQ dari suatu metode maka ketelitian dari metode tersebut semakin bagus. Nilai LoD dan LoQ yang didapat dari penentuan  kandungan  antioksidan  dalam  rimpang  kencur  yang  diekstraski  dengan bantuan gelombang ultrasonik adalah 0,0283 dan 0,0942 mg/L.

## Presisi
Presisi  merupakan  suatu  uji  untuk  melihat  ketelitian  dari  suatu  metode.  Presisi suatu  metode  dilihat  berdasarkan  nilai  SDR  dan  HORRAT.  Menurut  Association  of Analytical  Chemistry  (AOAC)  presisi  suatu  metode  dikatakan  teliti  apabila  memiliki  nilai ≤  8                        ,3  –  1,3.  Presisi  metode  penentuan  kandungan  antioksidan  yang diekstraksi dengan bantuan gelombang ultrasonik adalah SDR = 1,97 dan HORRAT = 0,96. Berdasarkan  nilai  SDR  dan  HORRAT  tersebut  dapat  dikatakan  metode  penentuan kandungan  antioksidan  yang  diekstraksi  dengan  bantuan  gelombang  ultrasonik  adalah metode yang teliti.

## Akurasi
Akurasi  adalah  suatu  uji  untuk  menentukan  keakuratan  dari  suatu  metode  yang digunakan.  Keakuratan  adalah  kedekatan  hasil  analisis  dengan  konsentrasi  analit sebenarnya.  Parameter  dari  penentuan  akurasi  adalah  persen  perolehan  kembali. Menurut  AOAC  metode  dapat  dikatakan  akurat  apabila  memiliki  persen  perolehan kembali  98–108  %.  Persen  perolehan  kembali  dari  metode  penentuan  kandungan antioksidan yang diekstraksi dengan bantuan gelombang ultrasonik adalah 103,21%.
Berdasarkan nilai persen perolehan kembali tersebut dapat dikatakan metode penentuan kandungan  antioksidan  yang  diekstraksi  dengan  bantuan  gelombang  ultrasonik  adalah metode yang teliti.

## KESIMPULAN
Kondisi optimum yang diperoleh pada pengekstrasian antioksidan dalam rimpang kencur (Kaempferia galanga L.) dengan bantuan gelombang ultrasonik yaitu menggunakan 20  mL  pelarut  metanol,  berat  sampel  1,5  g,  dan  waktu  pengekstrasian  60  menit. Kandungan  antioksidan  yang  ekstraksi  dengan  maserasi  dan  bantuan  gelombang ultrasonik  adalah  0,6688  ±  0,02  mg/g  DW  dan  0,8126  ±  0,02  mg/g  DW.  Berdasarkan parameter uji statistik untuk validasi metode dapat disimpulkan bahwa metode penentuan kandungan  antioksdan  yang  diekstraksi  dengan  bantuan  gelombang  unltrasonik  adalah metode yang valid untuk diterapkan.

## DAFTAR PUSTAKA
Albayrak,  S.  Atasagun,  B.  Aksoy,  A.:  Comparison  of  phenolic  components  and  biological activities of two Centaurea sp. obtained by three extraction techniques. Asian Pacific Journal of Tropical Medicine., 10(6), 599-606.
AOAC  Guidelinnes  for  Single  Laboratory  Validation  of  Chemical  Methods.  2012.  USA. Bundit, T. Anothai, T. Pattaramart, P. Roongpet T and Chuleeporn, S. 2016. Comparison of Antioxidant Contents of Thai Honeys to Manuka Honey. Mal. J Nutr. 22 (3): 413-420.
Dragovic-Uzelac, V. Savic, Z, Brala, A. Levaj, B. Bursac, D. Kovacevic and Bisko, A. 2010. Evaluation of Phenolic Content and Antioxidant Capacity of Blueberry  Cultivars (Vaccinium corymbosum L.) Grown in Norwthwest Croatia. Food Technology and
Biotechnology., 48(2),214-221.
Elfalleh,  W.  Hannachi,  H.  Tlili,  N.  Yahia,  Y.  Nasri,  N.  Frechichi,  A.  2012.  Total  phenolic contents  and  antioxidant  activities  of  pomegranate  peel,  seed,  leaf,  and  flower. Journal of Medicinal Plants., 6, 4724-4730.
Hadiyanto, H. Sutanto, A.A, Suharto, Y. 2014. Ultrasound assisted extraction of antioxidant from  Coleus  tuberosus  peels.  Carpathian  Journal  of  Food  Science  and  Technology. 6(1), 58-65.
Hayati, E.K. Ningsih, R, dan Latifah. 2015. Antioxidant activity of flavonoid frome rhizome Kaempferia galanga L. Extract. Journal of Chemistry. 4(2), 127-137.
Mathialagan,  R.  Mansor,  N.  Samsuddin,  M.R,  Uemura,  Y  and  Majeed,  Z.  2017. Optimisation  of  Ultrasonic  Assisted  Extraction  (UAE)  of  Alicin  from  Garlic  (Allium sativum L.). Chemical Engineering Transactions, 56, 1747-1752.
Muhammad, N.S. Kausar,  T. Jabbar, S.  Mumtaz, A. Ahad, K. Saddozai, A. Extraction and Quatification of polyphenols from kinnow (Citrus reticulate L.) peel using ultrasound and maceration techniques. Journal Food and Drug Analysis. 25, 488-500.
Petigny,  L.  Perino-Issatier,  S.  Wajsman,  J  and  Chemat,  F.  2013.  Batch  and  Continous Ultrasound  Assisted  Extraction  of  Boldo  Leaves  (Peumus  boldus  Mol.).  Molecular Sciences. 14, 5740-5764.
Salim,  Z.  Munadi,  E.  2012.  Info  Komoditi  Tanaman  Obat.  Balai  Pengkajian  Pengembangan

## Perdagangan Republik Indonesia. Jakarta.
Tamam,  B.  Suratiah,  Dewi.  N.A.  2011.  Potensi  ekstrak  kunyit  dan  kencur  sebagai antimikroba dan antioksidan. Jurnal Skala Husada. 8(2), 138-142.
Suyani,  N.C.  Permana,  D.G.M.,  Jambe,  AA.GN.A.  2015.  Pengaruh  jenis  pelarut  terhadap kandungan  antioksidanekstrak  daun  matoa  (Pometia  pinnata),  Jurnal  Ilmu  dan Teknologi Pangan, 5(1), 1-10
Wollinger,  A.,  Perrin,  É.,  Chahboun,  J.,  Jeannot,  V.,  Touraud,  D.,  &  Kunz,  W.  2016. Antioxidant activity of hydro distillation water residues from Rosmarinus officinalis L. leaves determined by DPPH assays. Comptes Rendus Chimie, 19(6), 754-765.
Xu, D. P., Zhou, Y., Zheng, J., Li, S., Li, A. N., & Li, H. B. 2016. Optimization of ultrasound- assisted  extraction  of  natural  antioxidants  from  the  flower  of  Jatropha  integerrima by response surface methodology. Molecules, 21(1), 18.