Fish Scientiae, Volume 1 No. 2, Desember 2011,

## PENGGUNAAN EKSTRAK DAUN SIRIH (Piper betle Linn)
UNTUK MENGHAMBAT BAKTERI Aeromonas hydrophila DAN TOKSISITASNYA PADA IKAN PATIN (Pangasius hypophthalmus)
THE USE OF PIPER BETLE LINN EXTRACT

## ON AEROMONAS HYDROPHILA TO OBSTRUCT AND THE TOKSISITY TO PANGASIUS HYPOPHTHALMUS
Siti Aisiah 1) , Muhammad 1) , Anita 1)
1) Jurusan Budidaya Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Lambung Mangkurat Banjarbaru
E-Mail : siahbams@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Tujuan penelitian ini untuk mengetahui   daya  hambat  daun  sirih   yang  paling besar    terhadap    bakteri Aeromonas  Hydrophila, mengetahui  konsentrasi  minimal ekstrak  daun  sirih  yang  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri A.  hydrophila dan  mengetahui toksisitas  konsentrasi efektif dari    ekstrak  daun  sirih terhadap  ikan patin. Rancangan percobaan yang digunakan untuk  uji toksisitas  adalah rancangan acak  lengkap,  terdiri  dari  4  perlakuan  yaitu  A    =  Ikan  disuntik  dengan  ekstrak daun sirih konsentrasi 75%, B  = Ikan disuntik dengan ekstrak daun sirih konsentrasi 25%, C    =  Kontrol  positif  (ikan  disuntik  dengan  akuades  steril)  dan  D    =  Kontrol  negatif (ikan  tidak  disuntik),  diulang  3  kali.  Hasil  uji  sensitivitas  antibakteri  daun  sirih  yang mempunyai  daya  hambat  dan  daya  bunuh  paling  besar  terhadap  bakteri A. hydrophila adalah  ekstrak  daun  sirih-metanol.  Pengujian  MIC  menunjukkan  bahwa ekstrak  daun  sirih-metanol  memiliki  daya  hambat  minimal  25  %  terhadap  aktivitas bakteri A. hydrophila . Hasil uji toksisitas yang dilakukan terhadap ikan patin dengan konsentrasi  75%  dan  25%  menunjukkan  bahwa  mortalitas  yang  terjadi  tidak mencapai  50%.  Pengamatan  hematologis  pada  masing-masing  perlakuan menunjukkan  hasil  yang  berpengaruh  tidak  nyata  terhadap  kesehatan  ikan  patin. Parameter  kualitas  air  pada  penelitian  ini  yaitu,  ,  kadar  oksigen  terlarut,    pH, amoniak, CO 2 dan suhu masih dapat mendukung kehidupan ikan patin.
Kata Kunci : Daun sirih, Aeromonas hydrophila , ikan patin

## ABSTRACT
This research was aimed a finding the part of Piper betle Linn  which had the biggest  resistance  to  Aeromonas  hydrophila  bacteria  and  to  know  the  minimal concentrate which could obstruct the growth of A.  hydrophila  bacteria  and to know
effective  concentrate  toxicity  of  P.  betle  Linn    to  Pangasius  hypophthalmus.    The random  sampling  used  proportionate  stratified  random  sampling.  In  toxicity  test,  it had be done 4 treatment, which was given to fish, those were : A = fish was injected with 25 % concentrate of extract  P. betle Linn  leaves, B = fish was injected with 75 % concentrate of extract  P. betle Linn  leaves, C =  positive control (fish was injected with  sterile  aquadest),  and  D  =  negative  control  (fish  wasn’t  injected)  and  3  trial. Sensivity result of A. hydrophila bacteria to P. betle Linn  showed that the axtract of Piper betle Linn  leaves-methanol had bigger activity than others.  Depended on MIC test  of  the  leaves P.  betle  Linn-methanol  extract showed  result  that  the  extract  had 25% minimal bloked concentrate to A. hydrophila  bacteria. The result of toxicity test of  P. betle Linn  75%  and 25%  leaves was no mortality 50% of P. hypophthalmus. Water  quality  parameter  during  experiment  like  dissolving  oxygen,  pH,  ammonia, CO 2, and temperature were still in reasonable range for Pangasius hypophthalmus.
Keywords : Piper betle Linn, A. hydrophila, P. hypophthalmus.

## PENDAHULUAN
Salah  satu  bakteri  penyebab penyakit ikan  adalah Aeromonas hydrophila .  Bakteri  ini  hidup  di  air tawar, terutama perairan yang
mengandung  bahan  organik  yang tinggi  (Afrianto  dan  Liviawaty,  1992).
Aeromonas hydrophila merupakan bakteri patogen oportunuistik penyebab penyakit MAS ( Motile
Aeromonas Septicemia ).
MAS    merupakan    penyakit bakterial    terpenting    pada    budidaya ikan air tawar di Indonesia. Penanggulangan    penyakit        ini dengan      menggunakan    obat-obatan dan  antibiotik  telah  banyak    diteliti seperti    oxytetracyclin,  erythromycin, dan  kanamycin,  tetapi  hasilnya  masih kurang memuaskan. Selain itu,
menurut  Wu dkk (1981) di  dalam Nitimulyo  (1996),  penggunaan  obat untuk  mengontrol  penyakit  bakteri dapat  menimbulkan  masalah,  yaitu dapat mempengaruhi maupun membunuh organisme bukan sasaran,
timbulnya patogen yang resisten terhadap  obat-obatan  dan  antibiotik, menimbulkan residu pada daging ikan, mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangbiakan serta menimbulkan pencemaran lingkungan. Langkah yang tepat dalam menangani masalah penyakit  adalah  melalui  pencegahan dan pengobatan dengan
memperhatikan keamanan secara biologis,  oleh  karena  itu  perlu  dicari obat-obatan alami yang ramah lingkungan.
Siti Aisiah, dkk.:  Penggunaan Ekstrak Daun Sirih  ......
Salah  satu  cara  yang  aman digunakan adalah dengan memanfaatkan  tanaman  obat-obatan alami  yang  ramah  lingkungan,  hal  ini terbukti sangat efektif dalam penyembuhan penyakit. Jenis tanaman  obat  yang  banyak  dipakai dalam usaha kesehatan salah satunya adalah    daun  sirih  ( Piper  betle Linn) yang  banyak  tumbuh  di  Kalimantan Selatan  dan  sangat  mudah  untuk dibudidayakan
Tujuan  penelitian  ini  untuk mengetahui      daya    hambat    daun sirih      yang    paling    besar    terhadap bakteri A.  Hydrophila, mengetahui
konsentrasi  minimal ekstrak daun  sirih yang mampu menghambat pertumbuhan  bakteri A.  hydrophila
terhadap  ikan  patin  dan  mengetahui toksisitas konsentrasi efektif  dari ekstrak daun sirih terhadap ikan patin.

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Hewan  uji  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  benih  ikan patin  dengan  ukuran 10  – 13  cm/ekor yang  dipelihara  dalam  hapa  di  kolam dengan  kapasitas  1x1x1  m  dengan kepadatan  10  ekor/hapa.    Tanaman sirih  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  diperoleh  di    Banjarbaru.  Isolat bakteri A.  hydrophila (strain  AP-02)
berasal  dari  koleksi  Laboratorium Hama  dan  Penyakit  Ikan  Fakultas
Perikanan Universitas Lambung Mangkurat. Media kultur yang digunakan adalah media selektif Aeromonas-Pseudomonas (GSP Agar),  medium stock  culture dan  uji sensitivitas A.  hydrophila yaitu  TSA ( Tryptone  Soya  Agar ),    medium  untuk kultur  cair  bakteri A.  hydrophila yaitu TSB  ( Tryptone  Soya  Broth ),  medium agar  murni    ( Bacto    Agar )  dan aquades.  Sebelum  percobaan  dimulai dilaksanakan persiapan alat dan bahan.  Hapa  yang  digunakan  dicuci hingga bersih dan  dijemur.   Kemudian dilakukan  sterilisasi  terhadap  alat  dan media  kultur  bakteri  yang  digunakan, ekstraksi    tanaman  sirih,  kultur  isolat bakteri dan aklimatisasi ikan.

## Uji Sensitivitas Aeromonas hydro-
phila terhadap Tumbuhan Sirih
Suspensi  bakteri A.  hydrophila dengan  kepadatan 10 9 cfu dari medium  TSB    dikultur  ke  dalam medium  TSA  semi  solid  (0,7%)  pada suhu  ±  40 o C  lalu  divortek.  Medium yang  mengandung  suspensi  bakteri ini dituangkan ke dalam medium Bacto Agar,  sehingga  terdapat  dua  lapisan pada cawan petri dan medium dibiarkan hingga membeku.
Kertas  cakram    ditetesi  20  µl supernatan,  hasil    dari  ekstraksi  daun
dan batang sirih dengan menggunakan pelarut aquades maupun  methanol.  Selain  itu,  kontrol terdiri dari kontrol positif (oxytetracyclin) ditempelkan pada medium  dan  diinkubasi  pada  suhu
kamar  selama  18-24  jam.  Zona
penghambat bakteri (bakteristatik) yang  berwarna  keruh  dan  zona pembunuh (bakterisidal) yang
berwarna  bening    diukur  diameternya.
Selanjutnya,  bagian    tumbuhan  sirih yang  memiliki  zona  penghambat  dan zona pembunuh paling besar digunakan dalam penelitian utama. Uji  Minimal Inhibitor Concentration (MIC) Uji MIC dilakukan untuk mengetahui  konsentrasi  minimal  dari
ekstrak  daun  sirih-methanol  yang dapat  menghambat  atau  membunuh bakteri  sebanyak-banyaknya.    Uji  MIC dilakukan dengan metode difusi cakram,  kertas  cakram  ditetesi  20  µl ekstrak  daun  sirih dengan  konsentrasi
5, 10, 15, 20, 25, 50, 75%. Sedangkan
untuk  kontrol  positif  ditetesi  20  µl oxytetracyclin dan methanol.
Selanjutnya, kertas cakram yang telah
ditetesi  dikering  anginkan.  Kertas
cakram perlakuan tersebut selanjutnya ditempelkan  pada  medium  TSA  semi solid  (0,7  %)  yang  telah  diinokulasi
bakteri  sebanyak  10 9 cfu.  Kemudian diinkubasi  selama  18-24  jam.  Setelah itu,    zona  hambat  yang  ditimbulkan oleh  pengaruh  dari  ekstrak  daun  sirih di amati dan diukur setiap 3 jam.

## Uji  Toksisitas
Uji  toksisitas  dilakukan  untuk mengetahui  dampak    keracunan  yang tidak  disengaja  dari    sirih    pada  ikan. Ikan  patin  yang  telah  diaklimatisasi disuntik dengan dosis sebanyak 0,1 ml supernatan    sirih  dari  hasil  uji  MIC. Sedangkan  untuk  kontrol  negatif  ikan patin  tidak  disuntik.  Kemudian  ikan patin  tersebut  dipelihara  dalam  hapa (Lu,  1995).  Pengaruh  penyuntikan diamati  pada  ikan  patin.  Apabila  ada ikan  yang  terluka  dan  mati,  maka dilakukan pengamatan gejala eksternal  yang  ditimbulkannya  dan jumlah  ikan  yang  mati.  Uji  toksisitas terdiri  dari  4  perlakuan  3  ulangan, yaitu:
A  = Ikan disuntik dengan ekstrak daun sirih dosis 25 %
B  = Ikan disuntik dengan ekstrak daun sirih dosis 75%
C  =  Kontrol  positif  (ikan  disuntik dengan aquades steril)
D = Kontrol negatif (ikan tidak disuntik)
Fish Scientiae, Volume 1 No. 2, Desember 2011,
Pengukuran  Hematokrit,  Leukokrit, Plasma Darah, Eritrosit, dan Leukosit Pengukuran  hematokrit  dan leukokrit  dilakukan setelah  ikan diberi ekstrak  daun    sirih.  Pengambilan darah dengan menggunakan disposable syringe 1 ml yang dibasahi dengan  anti-koagulan  (EDTA)  pada ikan  yang  telah  dibius  dengan  minyak cengkeh. Selanjutnya, darah ditampung  dalam  tabung.  Kemudian
darah dimasukkan dalam kapiler hematokrit  sampai  batas  volume  dan ditutup dengan  lilin.  Setelah  itu hematokrit disentrifuge pada 1000 rpm selama  3  menit.  Selanjutnya,  panjang eritrosit,  leukosit  dan  plasma  darah diukur  dengan  penggaris  dan  dihitung persentase  volumenya  (Isnansetyo, A., 2006).

## Pengamatan
Pengamatan dilakukan terhadap  zona  penghambat  dan  zona pembunuh dalam uji sensitivitas bakteri Aeromonas hydrophila terhadap bagian tumbuhan  sirih  (daun dan  batang)  yang  diamati  dengan metode deskriptif (Nazir,1985). Konsentrasi  ekstrak  yang  mampu menghambat pertumbuhan bakteri
dalam uji MIC diamati dengan metode deskriptif. Uji toksisitas dengan melakukan pengamatan terhadap
jumlah  ikan  yang  mati  melebihi  50% (Lu,  1995).    Gejala  yang  ditimbulkan ikan  patin  akibat  uji  toksisitas  ekstrak daun  sirih  diamati  dengan  metode deskriptif (Nazir,1985).
Mortalitas atau presentase jumlah  ikan  yang  mati  selama  uji toksisitas diperhitungkan berdasarkan Effendi (1992), yaitu : Nt M = x 100 % No
Keterangan :
M   = Mortalitas
No   = Jumlah  ikan  yang  hidup pada awal penelitian (ekor) Nt      =  Jumlah  Ikan  yang  hidup  pada akhir penelitian (ekor) Leukokrit adalah persen volume leukosit  dalam darah ikan dan hematokrit  adalah  persen  volume eritrosit  dalam  darah  ikan    keduanya memberikan petunjuk tentang kesehatan ikan dan membantu menentukan  timbulnya  abnormalitas akibat penggunaan imunostimulan dan obat yang diperhitungkan berdasarkan Anderson dan Siwicki (1994), leukokrit yaitu :
Leukosit Leukokrit =                   x 100 %
Total darah
Eritrosit Hematokrit =                   x 100 %
Total darah Kualitas air  yang diamati pada uji toksisitas  ekstrak daun   sirih  ( Piper betle Linn ) pada ikan patin ( Oreochromis niloticus ) adalah
oksigen  terlarut  (DO),  karbondioksida (CO 2 ), pH, amoniak (NH 3 ), dan suhu.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Sensitivitas Aeromonas hydrophila terhadap Tumbuhan Sirih
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri ekstrak  daun  sirih  yang  dilarutkan dengan  menggunakan  aquades  dan methanol terhadap bakteri A.
hydrophila dapat  dilihat  pada  Tabel  1.
Kertas  cakram  yang  telah  dibasahi ekstrak daun sirih-metanol mempunyai daya  hambat  dan  bunuh  lebih  besar terhadap  pertumbuhan  bakteri  setelah 24  jam  pengamatan  yaitu  bakterisidal
2  mm  dan  bakteristatik  6  mm, sedangkan daun sirih-aquades (bakterisidal  0  dan  bakteristatik  4,5 mm).
Tabel   1. Hasil Uji Sensitivitas pada Ekstrak Daun Sirih dalam Aquades dan Metanol terhadap Pertumbuhan Bakteri A. hydrophila . Zona Hambat (mm) No Sampel Waktu Bakterisidal Bakteristatik 1. Daun Sirih-Aquades 3 jam 6 jam 9 jam 12 jam 15 jam 18 jam 21 jam 24 jam - - - - - - - -
- - - 2 2,5 3 4 4,5
2. Daun Sirih-Metanol 3 jam 6 jam 9 jam 12 jam 15 jam 18 jam 21 jam 24 jam - - - - 0,5 1 2 2 - - 2 2,5 4 5 6 6
Keterangan : (-) tidak ada pertumbuhan
Berdasarkan  dari  hasil uji sensitivitas di  atas didapat bahwa dari uji  aktivitas  antibakteri  antara  ekstrak daun  sirih  yang  dilarutkan  dengan menggunakan  aquades  dan  methanol yang  mempunyai  daya  hambat  dan daya  bunuh  paling  besar  terhadap bakteri A.  hydrophila yaitu  terdapat pada  ekstrak  daun  sirih-metanol.  Hal ini  diduga  daun  sirih  mengandung bahan aktif yang mampu menghambat pertumbuhan  bakteri A.  Hydrophila dan  metanol  dapat  melarutkan  bahan aktif  yang  terkandung  di  dalam  daun sirih  tersebut.  Oleh  karena  itu,  dalam penelitian  utama  digunakan  ekstrak daun sirih-metanol.

## Minimal Inhibitor Concentration
(MIC) Pengujian MIC ( Minimal Inhibitor Concentration ) antibakteri
dengan metode difusi cakram menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun sirih-metanol  memiliki  daya  hambat terhadap  bakteri A.  hydrophila .  Hal  ini menunjukkan bahwa konsentrasi ekstrak  daun  sirih-metanol  minimal yang  mampu  menghambat  aktivitas bakteri adalah 25 %. Konsentrasi 50%, 75% dan kontrol positif (oxytetracyclin)
diketahui juga mempunyai kemampuan sebagai bakterisidal terhadap  bakteri A.  hydrophila yang lebih  besar  dibandingkan    konsentrasi 25 %.
Ekstrak  daun  sirih  mempunyai kemampuan  sebagai  bakteristatik  dan bakterisidal. Semakin
tinggi konsentrasi  ekstrak  semakin  sedikit jumlah  bakteri  yang  mampu  bertahan hidup. Ini menunjukkan bahwa dengan meningkatnya  konsentrasi  semakin
hal.190-201
besar kadar bahan aktif yang berfungsi sebagai antibakteri, sehingga kemampuannya dalam menghambat pertumbuhan bakteri juga  semakin  besar.  Kemampuan suatu bahan antimikroba dalam meniadakan kemampuan hidup mikroorganisme tergantung pada konsentrasi  bahan  antimikroba  itu (Schlegel,  1994  di  dalam  Ajizah, 1998). Artinya jumlah bahan antimikroba  dalam  suatu  lingkungan
mikroorganisme  sangat    menentukan kehidupannya.

## Uji Toksisitas
Uji  toksisitas  daun  sirih  pada ikan  nila  dapat  diketahui  berdasarkan jumlah  ikan  yang  mati  melebihi  50% dalam uji kesehatan ikan. Berdasarkan hasil  uji  toksisitas  yang  dilakukan terhadap ikan patin dengan menggunakan ekstrak daun sirih dengan  konsentrasi  25%  dan50% menunjukkan  mortalitas  mulai  terjadi pada hari keempat setelah dilakukannya penyuntikan sampai pada hari kesepuluh dengan
perlakuan  konsentrasi  75%  dengan tingkat mortalitas yang tertinggi yaitu A (0,6  %),  kemudian  diikuti  perlakuan  B (konsentrasi  25%)  dan  kontrol  positif (disuntik dengan aquades steril)
sebesar  0,3  %  dan  yang  terendah terjadi  pada  perlakuan  D  (kontrol negatif)    dengan  tingkat  mortalitasnya sebesar 0%. Ketiga perlakuan mengalami kematian diduga pengaruh dari  perlakuan  konsentrasi  ekstrak daun sirih yang diberikan pada ikan uji dan  akibat  luka  yang  ditimbulkan  dari bekas penyuntikan. Berarti kandungan bahan  alami  pada  daun  sirih  tidak toksik  terhadap  ikan  nila.  Menurut Soemirat,  2003  Toksisitas  terhadap organisme  tertentu  dinyatakan  dalam nilai Lethal Dose (LD 50 ), yaitu
menunjukkan  dosis  racun  yang  dapat mematikan  50%  dari  populasi  hewan percobaan.
Gejala  klinis  yang  ditimbulkan akibat  penyuntikkan  ekstrak  daun sirih-metanol  dapat  mempengaruhi kesehatan  ikan,  yakni  ikan  berenang lemah,  dan  ada  bekas  suntikan berwarna hitam pada bagian intramuskular.  Lebih  lanjut,  gejala eksternal  yang  dapat  dilihat  pada penyuntikkan dengan konsentrasi ekstrak  daun  sirih-metanol  sebanyak 75%  dapat  menyebabkan  luka  dan sedikit  agak  menggembung  pada bagian bekas suntikan, karena pengaruh  ekstrak  daun  sirih-metanol yang  terlalu  tinggi  dengan  dosis  75% tersebut,  sedangkan pada  konsentrasi
25% tidak menunjukkan gejala eksternal yang berarti pada ikan uji. Pengukuran Leukosit, Plasma Darah,  Eritrosit,  Hematokrit  dan Leukokrit Pengamatan hematologis dilakukan  berdasarkan  modifikasi  dari metoda  Klontz  (1994).    Peubah  yang diamati adalah pola gambaran hematologis yang meliputi, hematokrit, leukokrit,  eritrosit, plasma darah, leukosit, dan  total  darah.  Pengamatan hematologis  ikan  dilakukan  dengan pengambilan darah ikan uji.
Hasil  pengamatan  terhadap jumlah leukosit, eritrosit, plasma
darah,  hematokrit  dan  leukokrit  pada ikan  patin  dapat  dilihat  pada  Tabel  2. Sebelum  diberi  4  perlakuan  yaitu
disuntik  dengan  ekstrak  daun  sirih- metanol konsentrasi 25%, 75%, aquades  steril  (kontrol  positif)  dan tanpa  disuntik  (kontrol  negatif)  ikan tersebut  diambil  darahnya  terlebih dahulu. Hasil pengamatan hematologis ikan patin tersebut adalah leukosit  1  mm 3 ,  eritrosit  22  mm 3 , plasma  darah  42  mm 3 ,  hematokrit 33,84 % dan leukokrit 1,53 %.
Tabel 2. Jumlah Leukosit, Eritrosit, Plasma Darah, Hematokrit dan Leukokrit Setelah Diberi Perlakuan
Perlakuan  Ulangan Jumlah Leukosit (mm 3 ) Jumlah Eritrosit (mm 3 ) Jumlah Plasma Darah (mm 3 ) Total Darah (mm 3 ) Jumlah Hematokrit (%) Jumlah Leukokrit (%) A 1 2 26 41 69 37,68 2,89 2 1 20 45 66 35,03 1,51 3 1 24 43 68 32,30 1,47 Rerata 1,33 23,33 43 67,66 34,42 1,95 B 1 1 20 35 63 31,74 1,58 2 1,5 30 40 71,5 41,95 2,09 3 1,5 23 43 67,5 34,07 2,22

## Lanjutan Tabel 2.
Rerata 1,33 24,33 41,66 67,33 35,92 1,96 C 1 0,5 22 46 68,5 32,11 0,72 2 1 32 37 70 45,71 1,42 3 1,5 32 36 69,5 46,04 2,15 Rerata 1 28,66 39,66 69,33 41,28 1,43 D 1 1 23 44 68 33,82 1,47 2 0,5 22 45 67,5 32,59 0,74 3 1 30 38 69 43,47 1,44 Rerata 0,83 25 42,5 68,16 36,62 1,21 Hematokrit juga disebut sebagai Packed  Cell  Volume (PCV).
Nilai    PCV  adalah  volume  yang  diisi oleh  eritrosit,  dinyatakan  sebagai persen  terhadap  volume  total  darah. Nilai  hematokrit adalah  volume sel-sel darah yang didapat setelah sentrifugasi dan
dikeluarkannya plasma  darah.  Parameter  hematokrit berpengaruh  terhadap  pengukuran eritrosit  dan  merupakan  perbandingan dengan  volume  eritrosit.  Persentase hematokrit  dalam  darah  ikan  dapat digunakan untuk
mengetahui
kesehatan  ikan.  Hematokrit  pada sejumlah ikan teleostei berkisar antara 20 – 40%. Rerata jumlah hematokrit tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  C
(41,28),  di  ikuti    perlakuan  D  (36,62),
kemudian B (35,92) dan yang
terendah  pada  perlakuan  A  (34,42).
Persentase  darah  merah  (hematokrit) dalam darah ikan dapat menggambarkan  kesehatan  ikan  yang mengalami anemia
mempunyai presentase  serendah-rendahnya  10%. Rendahnya  hematokrit  juga  dapat menunjukkan    terjadinya  kontaminasi, ikan  kekurangan  makan,  kandungan protein pakan yang
rendah,
kekurangan vitamin atau terjadi infeksi.  Hematokrit  yang  tinggi  juga dapat menunjukkan adanya kontaminan, adanya masalah osmolaritas  dan  stres  (Anderson  dan Siwicki, 1994). Nilai leukokrit
dapat menunjukkan  status  kesehatan  ikan (Anderson  dan  Siwicki,  1994).  Rerata jumlah  leukokrit  pada  ikan  uji  yang tertinggi  terdapat  pada  perlakuan  B
(1,96),  diikuti  perlakuan  A  (1,95), kemudian  C  (1,43) dan  yang  terendah pada  perlakuan  D  (1,21).  Menurut
Anderson dan Siwicki (1994),
persentase  darah  putih  (leukokrit) dapat  menunjukkan  status  kesehatan ikan.  Berdasarkan  hasil  penelitian bahwa  pada  perlakuan  B  =  1,96 (konsentrasi  25%)  leukokritnya  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  perlakuan lainnya. Menurut Anderson dan Siwicki (1994)  leukokrit  yang  rendah  dapat disebabkan oleh infeksi kronis, kualitas nutrisi yang rendah, kekurangan vitamin dan adanya kontaminan. Rendahnya leukokrit dapat  disebabkan  oleh  infeksi  awal dan stres.
Parameter  kualitas  air  pada penelitian  ini  yaitu,  suhu  29,5-30  C, kadar  oksigen  terlarut    5,8-7,2  mg/L, derajat  keasaman  (pH)  6,68-7,65, amoniak  (NH3)  0,05-0,2  mg/L  dan karbondioksida  bebas  0,6-2,75  mg/L, masih  dapat  mendukung  kehidupan ikan patin ( Pangasius hypophthalmus).

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Hasil  dari  uji  MIC,  menunjukkan bahwa  dengan  dosis  25%  sudah
mampu menghambat bakteri A.hydrophila .  Hasil  uji  toksisitas  yang dilakukan  terhadap  ikan  patin  dengan konsentrasi 75% dan 25% menunjukkan  bahwa  tingkat  kematian (mortalitas) yang terjadi tidak mencapai 50%. Pengamatan hematologis pada masing-masing
perlakuan  menunjukkan  hasil  yang berpengaruh  tidak  nyata  terhadap kesehatan ikan patin. Parameter kualitas  air  pada  penelitian  ini  yaitu, suhu 29,5-30 C, kadar oksigen terlarut 5,8-7,2  mg/L,  derajat  keasaman  (pH) 6,68-7,65,  amoniak  (NH3)  0,05-0,2 mg/L  dan  karbondioksida  bebas  0,6- 2,75  mg/L.  Nilai  kualitas  air  masih dapat  mendukung  kehidupan  ikan patin ( Pangasius hypophthalmus)

## Saran
Ekstrak  daun  sirih  dengan pelarut  methanol  dapat  dipergunakan untuk pengobatan pada budi daya ikan patin  yang  terserang A.hydrophila karena  ektrak  daun  sirih-methanol mempunyai  daya  pembunuh  terhadap A.hydrophila. Tingkat  kematian  tidak mencapai  50%.,  membuktikan  bahwa ekstrak  daun  sirih  methanol  yang disuntikkan  pada  ikan  patin  tidak bersifat toksik.

## DAFTAR PUSTAKA
Afrianto,  E.    dan    Evi  L.,  1992.  Pengendalian  Hama  dan  Penyakit  Ikan.  Kanisius. Yogyakarta. 89 Halaman.
Ajizah, A., 1998.   Sensitivitas    Enteropathogenic Escherichia  coli terhadap Daun
Psidium  guajava L. Secara  in  vitro. FKIP  Unlam  Banjarmasin. (http://bioscientiae.tripod.com/v1n1/v1_n1_ajizah)      ( Diakses    tanggal      16 November 2006 ).
Anderson, D. P.  dan A. K. Siwicki, 1994. Simplited Assay For Measuring Nonspecific Depense Mechanism In Fish. Rough Draft For Presentation at the Fish Health Section/American Fisheries Society Meetings, Seatle Woshington. 239 pp.
Effendie,  M.I.,  1992.  Metodologi  Biologi  Perikanan.  Fakultas  Perikanan  IPB.  Bogor. 75 halaman.
Isnansetyo,  A.,  2006.  Petunjuk  Praktikum  Pelatihan  Evaluasi  Pertahanan  Non spesifik  Ikan.  Laboratorium  Hama  dan  Penyakit  Ikan.  Jurusan  Perikanan, Fakultas Pertanian UGM. Yogyakarta. 181 halaman.
Klontz,  G. W.,  1994.      Fish Hematology.    Stolen et al . (Eds.). Techniques in Fish Immunology-3.   Sos   Publications,    Fair Haven,    NJ 07704-3303. In USA.
p.121-131
Lu, F. C., 1995. Toksikologi Dasar. Asas, Organ Sasaran dan Pepatinian
Nazir, M., 1985. Metode Penelitian. Ghalia Indonesia. Jakarta. 597 halaman.
Nitimulyo,  K.H.,  Triyanto,  dan  Sri  Hartati,  1996.  Uji  Konsentrasi  Penghambatan Minimal,  Resistensi  Dan  Penggunaan  Antibiotik  Untuk  Menang-gulangi Penyakit  Motil  Aeromonas  septisemia  (MAS)  Pada  Lele  Dumbo  ( Clarias gariepinus ). Jurnal Perikanan Universitas Gadjah Mada.  UGM. Yogyakarta.
Soemirat,  Juli.  2003.  Toksikologi  Lingkungan.  Gadjah  Mada  University  Press. Yogyakarta. 220 halaman.
Siti Aisiah, dkk.:  Penggunaan Ekstrak Daun Sirih  ......