1

## SCREENING OF PHYTOCHEMICALS AND BIOACTIVITY TEST OF THE
LEAVES BREADFRUIT ( Artocarpus altilis )
Skrining Fitokimia dan Uji Bioaktivitas Daun Sukun ( Artocarpus altilis )
Rosmawaty 1 , Hellna Tehubijuluw 2
1,2 Chemistry Department, Faculty of Mathematics and Natural Sciences Pattimura University, Kampus Poka, Jl. Ir. M. Putuhena, Ambon 97134
Corresponding author e-mail:rose@fmipa.unpati.ac.id
Received:  Juni 2013 Published: July 2013

## ABSTRACT
Screening  phytochemical  and  bioactivity  test  of  breadfruit  leaves  ( Arthocarpus  altilis )  have  been  done.  The samples were used in the study extracted by maceration method with some solvent polarity enhanced, there are: n-hexane, chloroform, ethyl  acetate, and  methanol. The  bioactivity test use BST (Brine Shrimp  Lethality test). The activity assay use brine shrimp A. salina Leach. Content of the secondary metabolites in four crude extract of  leaves  of  breadfruit  ( A.  altilis )  are  alkaloids,  steroids,  terpenoids,  and  flavonoids.  Whereas  only  phenolic compounds contained in the crude extract of chloroform and methanol. The saponins content only  in the crude extract methanol. The  fourth test of bioactivity of the crude extract of  leaves of  breadfruit there are:  n-hexane, chloroform, ethyl acetate, and methanol had LC 50 : > 1000 mg /  mL; 387.436 mg /  mL; 415.623 mg /  mL; and 392.826 mg / mL respectively. The crude extract of chloroform, ethyl acetate, and methanol classified active in the  BST  test to  brine  shrimp A.  salina ,  while  the  crude  extract  n-hexane  classified  as  inactive.  The  Leaves  of breadfruit ( A. altilis ) has potential to be used as medicine.
Keywords : BST, screening, phytochemical, breadfruit leaves (Arthocarpus altilis), bioactivity.

## PENDAHULUAN
Keanekaragaman  tumbuhan  yang  ada  di Indonesia  dapat  dimanfaatkan  dalam  semua aspek  kehidupan  manusia,  diantaranya  sebagai senyawa  obat,  pewarna,  pestisida,  pewangi,  dan bahan  kosmetik. Serangkaian  penelitian dilakukan  dengan  dasar  pertimbangan  bahwa tumbuhan  merupakan  tempat  terjadinya  sintesis senyawa  organik  yang  kompleks  menghasilkan sederet  golongan  senyawa  dengan  berbagai macam struktur.
Moraceae terdiri atas  tiga genus utama  yaitu Ficus , Morus ,  dan Artocarpus. Genus Artocarpus dikenal  sebagai  tumbuhan  nangka- nangkaan  yang  terdiri  dari  60  spesies  yang tersebar  di  Asia  Tenggara  dan  Asia  Selatan, sekitar  80%  dari  jumlah  tersebut  terdapat  di Indonesia  (Jarret,  1960  dalam  Ersam,  2001). Beberapa  spesies  dari  genus Artocarpus yang sangat  populer  dan  sering  dimanfaatkan  oleh masyarakat  Indonesia  antara  lain Artocarpus
heterophyllus (nangka), Artocarpus  champeden (cempedak), dan Artocarpus altilis (sukun). Artocarpus  altilis tergolong  tanaman  tropik sejati, tumbuh paling baik di dataran rendah yang panas.    Tanaman  ini  tumbuh  baik  di  daerah basah,  tetapi  juga  dapat  tumbuh  di  daerah  yang sangat  kering  asalkan  ada  air  tanah  dan  aerasi tanah yang cukup. A. altilis bahkan dapat tumbuh baik  di  pulau  karang  dan  di  pantai.  Di  musim kering,  disaat  tanaman  lain  tidak  dapat  atau menurun  produksinya,  justru A.  altilis dapat tumbuh  dan  berbuah  dengan  lebat.  Tidak  heran, jika A.  altilis dijadikan  sebagai  salah  satu cadangan  pangan  nasional  (Koswara,  2006). Selain  itu  tumbuhan  ini  digunakan  antara  lain sebagai bahan bangunan dan bahan  ramuan obat tradisional  untuk  pengobatan  malaria,  disentri, dan  penyakit  kulit.  Daun  sukun  efektif mengobati  penyakit  seperti  liver,  hepatitis,  sakit gigi, gatal-gatal, pembesaran limpa, jantung, dan ginjal (Heyne, 1987). Kemampuan daun A.altilis dalam  menyembuhkan  penyakit  tidak  lepas  dari
1
adanya  senyawa-senyawa  kimia  yang  terdapat pada daun tersebut.
Lima senyawa geranil dihidrocalkon yaitu 1- (2,4-dihidroksifenil)-3-{4 hidroksi-6,6,9-trimetil- 6a,7,8,10a-tetrahidro-6H-dibenzo[ b , d ]piran-5- il}-1-propanon; 1-(2,4-dihidroksifenil)-3- [3,4dihidro-3,8-dihidroksi-2-metil-2-(4-metil-3- pentenil)-2H-1  benzopiran-5-il]-1-propanon;  1- (2,4dihidroksifenil)-3-[8-hidroksi-2-metill-2- (3,4-epoksi-4-metill-1-pentenil)-2H-1- benzopiran-5-il]-1-propanon;1 (2,4dihidroksifenil)-3-[8-hidroksi-2-metil-2-(4- hidroksi-4-metill-2-pentenil)-2H-1-benzopiran- 5-il]-1-propanon, dan 2-[6-hidroksi-3,7- dimetilokta-2( E ),7-dienil]-2′,3,4,4′- tetrahidroksidihidrocalkon,  serta  empat  senyawa geranil  flavonoids  telah  diisolasi  dari  daun A. altilis .    Tiga  di  antara  lima  senyawa  geranil dihidrocalkon tersebut bersifat sitotoksik terhadap  SPC-A-1,  SW-480,  dan  sel  kanker SMMC-7721 (Yu dkk., 2007).
Penelitian  mengenai A.  altilis di  Indonesia telah  dilaporkan  sebelumnya.  Hasil  penelitian tersebut menunjukkan berbagai senyawa turunan flavonoid  telah  diisolasi  dari  hampir  seluruh bagian  tanaman  tersebut.  Pada  ekstrak  benzen kulit  akar  diperoleh  sikloartobilosanton  (1)  dan artonol  B  (2);  pada  bagian  kayu  akar  terdapat sikloartokarpin  (3)  dan  artoindonesianin  F  (4). Pada  bagian  kulit  batang A.  altilis diisolasi senyawa  morusin  (5) dan  artonin  E  (6)  dari ekstrak etilasetat; dari ekstrak kayu batang fraksi n-heksan  diperoleh  artokarpin  (7),  caplasin  (8) dan  artoindonesianin  B  (9).  Dari  ekstrak etilasetat daun telah diidentifikasi suatu dihidrocalkon yaitu 2-geranil-2’,4’,3,4-
tetrahidroksi  dihidrocalkon  (10),  serta  dua turunan  fenolik  yang  belum  teridentifikasi (Ersam  dkk.,  1999;  Ersam  dkk.,  2000;  Erwin dkk., 2001; Bachtiar, 2004).
Sejumlah  senyawa  tersebut  memperlihatkan aktivitas  yang  menarik  seperti  antiinflamasi, sitotoksik,  dan  inhibitor  enzim.    Banyak  metode yang  dapat  digunakan  untuk  menentukan aktivitas  suatu  senyawa.  Salah  satunya  adalah metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BST) dengan  menggunakan  benur  udang Artemia salina untuk  menentukan  toksisitas  suatu senyawa.  Metode BST merupakan metode yang
sederhana dan memiliki korelasi positif terhadap aktivitas antikanker (Mayer dkk., 1982).
Penelitian  mengenai A.  altilis yang  telah dilaporkan  sebelumnya  namun  terkonsentrasi pada  kawasan  barat  Indonesia,  karena  semua sampel  yang  diteliti  berasal  dari  Sumatera  Barat dan  Jawa  Barat.    Adapun  isolasi  senyawa  dari daun A.  altilis yang  berasal  dari  wilayah  timur Indonesia  khususnya  Maluku  belum  pernah dilaporkan.

## METODE PENELITIAN

## A. Pengumpulan bahan tumbuhan
Daun  sukun  ( Artocarpus  altilis ) diperoleh dari  Desa  Tengah-Tengah  Kecamatan  Salahutu Kabupaten Maluku Tengah, Maluku.

## B. Ekstraksi
Pada penelitian ini daun sukun dalam bentuk serbuk  sebanyak  50  g    diekstrak  dengan menggunakan  pelarut  n-heksan  dengan  cara maserasi  selama      24  jam,  kemudian  residu  dari hasil maserasi dengan pelarut n-heksan dimaserasi  lagi  menggunakan  pelarut  kloroform selama  24  jam.  Selanjutnya  dimaserasi  kembali residu  dari  hasil  maserasi  pelarut  kloroform dengan  menggunakan  pelarut  etil  asetat  selama 24  jam.  Langkah  terakhir  yaitu  maserasi  residu etil  asetat  selama      24  jam  dengan  pelarut metanol.  Selanjutnya  maserat  atau  ekstrak  dari ke  empat  pelarut  tersebut  dipekatkan  hingga diperoleh  ekstrak  kasar.  Kemudian  terhadap keempat  ekstrak  tersebut  dilakukan  uji  fitokimia dan  uji  bioaktivitas  dengan  menggunakan  udang Artemia salina ( Brine Shrimp Lethality Test ).

## C. Uji fitokimia

## 1. Senyawa alkaloid
Uji senyawa alkaloid menggunakan pereaksi
Mayer. Pereaksi Mayer dibuat dengan melarutkan  0,2  gram  HgCl 2 dengan  6  mL akuades  dan  sebanyak  0,5  gram  KI  dilarutkan dalam  1  mL  akuades.  Kedua  larutan  tersebut dicampur. Cara kerja uji alkaloid, yaitu:  sampel dilarutkan dengan asam klorida 0,1 N kemudian dimaserasi  selama  2  jam.  Hasil  maserasi tersebut  ditambahkan  2-3  tetes  pereaksi  Mayer. Adanya  warna  kuning  menandakan  positif alkaloid.
1
2.  Senyawa  terpenoid,  steroid,  fenolik  dan flavonoid
Sampel dikocok kuat dengan kloroform lalu ditambahkan  akuades,  biarkan  sampai  terbentuk dua lapisan.
a. Lapisan kloroform Diteteskan  pada  plat  tetes  dan  biarkan kering,  tambahkan  beberapa  tetes  asam  asetat anhidrat  dan  asam  sulfat  pekat  (pereaksi Liebermann  Burchard).  Terbentuknya  warna merah  atau  jingga  menandakan  positif  untuk senyawa terpenoid dan terbentuknya warna biru atau hijau positif untuk steroid.
b. Lapisan air 1. Beberapa tetes ditempatkan dalam tabung  reaksi  ditambahkan  besi  (III)
klorida,  jika  timbul  warna  hijau  sampai ungu menandakan positif fenolik.
2. Beberapa tetes ditempatkan dalam tabung reaksi, ditambahkan asam klorida pekat dan serbuk magnesium, jika timbul warna  merah  menunjukkan  adanya flavonoid.

## 3. Senyawa saponin/ uji Froth
Sedikit ekstrak kasar diekstrasi dengan dietil eter  tiga  kali  dan  fraksi  yang  larut  dalam  dietil eter  dipisahkan.  Sisa  residu  yang  tidak  larut dalam  dietil  eter  ditambahkan  5  ml  air  lalu dikocok, Uji positif ditunjukkan dengan terbentuknya buih  yang  stabil  kira-kira 15 menit (Simes dkk., 1959 dalam Sutisna, 2000).
4. Uji  bioaktivitas  terhadap  benur  udang Artemia salina Leach
Uji bioaktivitas yang digunakan  adalah BST yang  dilakukan  terhadap  benur  udang A.  salina . Uji ini mempunyai korelasi positif dengan uji-uji sekunder yang lain, seperti sebagai anti-tumor sel murni  leukemia    P-388  maupun  anti-kanker (Mayer  dkk.,  1982).    Prosedur  uji  aktivitas sebagai  berikut:  1  mg  sampel  dalam  tabung ependorf  dilarutkan  dengan  DMSO  sebanyak 100  L  kemudian  diencerkan  dengan  150  L akuabides.    Dari  pengenceran  tersebut  diambil 200  L  diencerkan  kembali  dengan  600  L akuabides.    Selanjutnya  pengenceran  dilakukan dalam  mikroplate  dengan  variasi  konsentrasi 500; 250; 125; 62,5; 31,2; 15,6; dan 7,8  g/mL
untuk tiap lubang pada mikroplate dan dilakukan secara  triplo.    Benur  udang A.  salina yang berumur  48  jam  dipipet  sebanyak  100  L dengan jumlah benur 7-15 ekor lalu dimasukkan pada  tiap  lubang  pada  mikroplate  yang  berisi sampel,  kemudian  diinkubasi  selama  24  jam. Perlakuan  ini  juga  dilakukan  pada  kontrol sebagai  kontrol  negatif.    Setelah  24  jam  jumlah benur udang yang mati dan yang hidup pada tiap lubang  dihitung.    Data  jumlah  rata-rata  udang yang  mati  dan  jumlah  total  udang  pada  tiap variasi konsentrasi sampel kemudian dimasukkan  dalam  program  komputer  “Bliss method”  untuk  menentukan  nilai  LC 50 , pengeceran tambahan mungkin diperlukan untuk zat yang sangat aktif (Mayer dkk., 1982).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Uji Fitokimia
Pada  penelitian  ini  sampel  daun  sukun  yang telah  dihaluskan,  diekstraksi  dengan  metode maserasi  menggunakan  pelarut  n-heksan  selama 24  jam.  Kemudian  residu  dari  hasil  maserasi dengan pelarut n-heksan dimaserasi lagi menggunakan  pelarut  kloroform  selama  24  jam. Selanjutnya  dimaserasi  kembali  residu  dari  hasil maserasi pelarut kloroform dengan menggunakan  pelarut  etil  asetat  selama  24  jam. Langkah terakhir yaitu maserasi residu etil asetat selama      24  jam  dengan  pelarut  metanol. Selanjutnya  maserat  atau  ekstrak  dari  ke  empat pelarut  tersebut  dipekatkan  hingga  diperoleh ekstrak  kasar.  Ekstrak  kasar  yang  diperoleh  dari keempat  pelarut  tersebut  yaitu:  n-heksan  2,10  g; koroform 0,54  g;  etil  asetat  1,17  g;  dan  metanol 1,72 g.
Hasil  uji  fitokimia  daun  sukun  dari  keempat ekstrak  kasarnya  yaitu:      n-heksan,  kloroform, etil asetat, dan metanol, dapat dilihat pada Tabel 3.  Tabel 3 menunjukkan bahwa keempat ekstrak kasar  daun  sukun  mangandung  sebagian  besar golongan  senyawa  berdasarkan  uji  fitokimia yaitu  alkaloid,  terpenoid,  steroid,  fenolik, flavonoid,  dan  saponin.  Steroid  menurut  Simes dkk.  (1959)  dalam  Sutisna  (2000)  memberikan hasil  yang  positif  apabila  ekstrak  kasar  sampel ditambah pereaksi Libermann-Burchard memberikan  warna  biru  atau  hijau.  Sedangkan terbentuknya warna merah hingga jingga dengan
1
penambahan pereaksi Libermann-Burchard manandakan  positif  adanya  terpenoid.  Warna biru  kehijau-hijauan  dan  merah  hingga  jingga yang  ditimbulkan  pada  penambahan  pereaksi Libermann-Burchard pada keempat ekstrak kasar daun  sukun  dimungkinkan  adanya  steroid  dan terpenoid. Menurut Chozin (1996) dalam Sutisna (2000), flavonoid memberikan  hasil  yang positif apabila  ekstrak  kasar  sampel  ditambah  serbuk Mg  dan  HCl  pekat  memberikan  warna  merah, sedangkan  positif  fenolik  apabila  ekstrak  kasar sampel berwarna hijau setelah ditambahkan  pereaksi  FeCl 3 .  Warna  merah  yang
ditimbulkan  pada  penambahan  serbuk  Mg  dan HCl  pekat  pada  keempat  ekstrak  kasar  daun sukun dimungkinkan adanya flavonoid.
Warna  hijau  pada  ekstrak  kasar  etil  asetat dan metanol yang ditimbulkan pada penambahan pereaksi  FeCl 3 dimungkinkan  adanya  fenolik, sedangkan  pada  ekstrak  kasar  n-heksan  dan kloroform  tidak  terbentuk  warna  hijau.  Saponin menurut Simes dkk. (1959) dalam Sutisna (2000) memberikan  hasil  yang  positif  apabila  ekstrak kasar  sampel  ditambah  air  lalu  dikocok menimbulkan  busa  yang  stabil  kira-kira  15 menit.  Busa  yang  stabil  kira-kira  15  menit  yang ditimbulkan  pada  ekstrak  kasar  metanol  daun sukun dimungkinkan adanya saponin, sedangkan ketiga  ekstrak  kasar  lainnya  dari  daun  sukun larut  sempurna  dalam  pelarut  dietil  eter. Terbentuknya warna kuning dengan penambahan pereaksi  Mayer  menandakan  positif  adanya alkaloid.  Warna  kuning  yang  terbentuk  dengan penambahan  pereaksi  Mayer  pada  keempat ekstrak kasar daun sukun tersebut, dimungkinkan adanya alkaloid.
4.2  Uji  Bioaktivitas  terhadap  benur  udang
Artemia salina Leach
Senyawa  bioaktif  hampir  selalu  toksik  pada dosis tinggi. Oleh  karena itu daya bunuh in vivo
dari  senyawa  terhadap  organisme  hewan  dapat digunakan  untuk  mengetahui  ekstrak  tumbuhan yang  mempunyai  bioaktivitas.  Uji  bioaktivitas primer yang  lazim  dilakukan  pada  ekstrak maupun  senyawa-senyawa  bahan  alam  adalah Brine  Shrimp  Lethality Test .  Uji  bioaktivitas  ini dilakukan  terhadap  benur  udang Artemia  salina Leach (Mayer, dkk., 1982).
Uji  bioaktivitas  dari  keempat  ekstrak  kasar daun  sukun  yaitu:  n-heksan,  kloroform,  etil asetat,  dan  metanol  terhadap A.  salina dapat dilihat pada Tabel 4. Keempat ekstrak kasar dari daun  sukun  ( A.  altilis )  yaitu:  n-heksan,
kloroform,  etil  asetat,  dan  metanol,  diuji bioaktivitasnya  dengan  menggunakan  metode BST ( Brine Shrimp Lethality Test ) sesuai dengan cara yang diuraikan oleh Mayer. Menurut Mayer dkk.  (1982),  suatu  ekstrak  dikatakan  berpotensi untuk  dikembangkan  sebagai  bahan  antikanker apabila  ekstrak  tersebut  mampu  menyebabkan kematian  50%  larva  udang A.  salina pada  kadar lebih kecil atau sama dengan 1000 µ g/mL.
Tabel 4 .Nilai LC 50 dari uji bioaktivitas keempat ekstrak kasar daun sukun  ( A. altilis ) No. Ekstrak Kasar
LC 50 ( µ g/mL)
1. n-heksan >1000 2. Kloroform 387,436 3. Etil asetat 415,623 4. Metanol 392,826
Hasil  uji    menunjukkan  adanya  bioaktivitas yang cukup tinggi pada ekstrak kasar kloroform, etil  asetat,  dan  metanol.  Nilai  LC 50 dari  ketiga ekstrak  kasar  tersebut  di  bawah  1000 µ g/mL. Dimana  eksrak  kasar  kloroform  merupakan ekstrak  daun  sukun  yang  paling  aktif,  kemudian diikuti  dengan  ekstrak  kasar  metanol  dan  etil asetat.  Sedangkan  ekstrak  kasar  n-heksan tergolong  tidak  aktif  karena  memiliki  nilai  LC 50 di atas 1000 µ g/mL. Hal ini menunjukkan bahwa
No. Ekstrak kasar Golongan senyawa Alkaloid Terpen Steroid Fenolik Flavonoid Saponin 1. n-heksan + + + - + - 2. Kloroform + + + - + - 3. Etil asetat + + + + + - 4. Metanol + + + + + +
Tabel 3 .  Hasil uji fitokimia ekstrak kasar daun sukun dari pelarut n-heksan, kloroform, etil asetat, dan metanol
1
daun  sukun  ( A.  altilis )  memiliki  potensi  untuk dijadikan obat.

## KESIMPULAN
Adapun  kesimpulan  dalam  penelitian  ini adalah sebagai berikut:
1. Senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam  keempat  ekstrak  kasar  daun  sukun ( A. altilis )  adalah alkaloid, steroid, terpenoid, dan  flavonoid.    Sedangkan  senyawa  fenolik hanya  terkandung  dalam  ekstrak  kasar kloroform  dan  metanol.    Saponin  hanya terkandung dalam ekstrak kasar metanol.
2. Uji  bioaktivitas  keempat  ekstrak  kasar  daun sukun  yaitu:  n-heksan,  kloroform,  etil  asetat, dan  metanol  memiliki  nilai  LC 50 berturut- turut:  >  1000 µ g/mL;    387,436 µ g/mL; 415,623 µ g/mL; dan 392,826 µ g/mL. Ekstrak kasar  kloroform,  etil  asetat,  dan  metanol tergolong aktif dalam uji BST terhadap benur udang A.  salina ,  sedangkan  ekstrak  kasar  n- heksan tergolong tidak aktif.

## DAFTAR PUSTAKA
Bachtiar,  E.,  2004, Flavonoid  dari  Daun Artocarpus altilis, Tesis, Jurusan Kimia ITB, Bandung.
Ersam,  T.,  Achmad,  S.    A.,    Ghisalberti,  E.    L.,
Hakim,  E.    H.,  Tamin,  R.,  1999,    Dua Senyawa  Isoprenilflavon  dari  Kulit  Akar Artocarpus  altilis (Parkinson)  Fosberg,
Seminar  Nasional  Kimia  Bahan  Alam  ‘99,
Universitas Indonesia, Depok. Ersam,  T.,  Achmad,  S.  A.,    Ghisalberti,  E.    L.,
Hakim,  E.    H.,  Tamin,  R.,  2000,  Isolasi Senyawa Metabolit Sekunder dar Artocarpus altilis , Seminar  Kimia  Bersama  ITB-UKM
IV, 259-266.
Erwin,  Hakim  E.H.,  Achmad  S.A.,  Syah,  Y.M.,
Aimi  N.,  Kitajima  M.,  Makmur  L., Mujahidin D., Takayama H., 2001,
Artoindosianin-B  Suatu  Senyawa  yang Bersifat  Sitotoksik  terhadap  Sel  Tumor  P- 338  dari  Tumbuhan Artocarpus  altilis,  Bull. Soc. Nat. Prod. Chem., 1, 20-23. Ersam,  T.,  2001, Senyawa  Kimia  Makromolekul Beberapa  Tumbuhan  Artocarpus  Hutan Tropika  Sumatera  Barat, Disertasi,  Jurusan Kimia ITB, Bandung.
Koswara,  S.,  2006, Sukun  Sebagai  Cadangan Pangan Alternatif, online,
ebookpangan.com,  diakses  tanggal  08  Juli 2011.
Mayer,  N.,  Ferriginii,  N.  R.,  Putnam,  J.  E.,
Jacobsen, D. E., Nichols, D.,E., McLaughin, J.  L.,  1982,  Brine  Shrimp:  A  Convinient General Bioassay for Active Plant
Constituens, Planta Med ., 45 . 31. Sutisna,  I.,  2000 ,  Isolasi  dan  Karakterisasi Senyawa  Triterpenoid  Lanostana  dari  Kulit Kayu  Danglo ( Macarango  javanica Muell Arg), Skripsi Jurusan Kimia FMIPA, Institut Pertanian Bogor.
Yu,  W.,  Kedi,  X.,  Lin,  L.,  Yuanjiang,  P.,  dan Xiaoxiang,  Z.,  2007,  Geranyl  Flavonoids from  The  Leaves  of Artocarpus  altilis ,
Reasearch Article .