http://jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindo/index

## Aktivitas Iron Chelator Ekstrak Etanol Dan Fraksi Daun Putri Malu (Mimosa pudica L) Terhadap Pasien Thalasemia Menggunakan Metode Fic (Ferrous Ion Chelating)
M Wahyu Ariawan 1* , Ana Indrayati 2 , Supriyadi 2 1 Program Studi Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Adila, Bandar Lampung, Indonesia
2 Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi, Surakarta, Indonesia
Article info Abstract History
Submission : 15-04-2022
Review : 02-06-2022 Accepted : 22-07-2022
* Email: mwahyua31@gmail.com
DOI: 10.33096/jffi.v9i2.838
Keywords: Mimosa pudica L ; mimosine; ferrous ion chelating assay; blood serum; HPLC
Thalassemia is a genetic disease caused by a deficiency of the and  globin chains that make up hemoglobin. This study aims to determine the content of  mimosine  compounds  and  the  optimum  concentration  of  mimosine  in Mimosa pudica L as an iron chelating agent in thalassemia patients in vitro. The  research  was  initiated  by  extracting  and  fractionating  the  leaves  of Putri malu. then tested ferritin levels using the Ferrous Ion Chelating (FIC) test. The test was carried out three times. Furthermore, the ferritin content was  calculated  using  an  ELISA  reader.  The  final  step  is  to  measure mimosine  levels.  Mimosine  with  a  concentration  of  500  ppm  has  iron chelating activity with a percentage decrease in ferritin levels of 84.48%. The n-hexane fraction with a concentration of 500 ppm had iron chelating activity with a decrease in ferritin activity of 81.27%.

## I. Pendahuluan
Tranfusi  darah  pada  penderita  thalasemia merupakan  pengobatan  yang  utama.  Tranfusi  darah diberikan seumur hidup dalam rentang waktu 2-3 bulan. Penatalaksanaan  tranfusi  darah  secara  terus-menerus menyebabkan tingginya kadar besi di dalam organ tubuh pasien. Penimbunan besi dalam tubuh ini dikenal dengan istilah iron  overload (IO). Iron  overload (IO)  dapat menyebabkan  pemberian  tranfusi  darah  berulang  dan terjadinya  peningkatan  absorbsi  besi  di  usus  akibat eritropoesis yang tidak efektif. (Geneva, 2002). Pengkhelatan  adalah  proses  beberapa  zat kimia  yang  memiliki  kemampuan  untuk  mengikat logam  seperti  logam  fe,  tembaga,  dan  logam  transisi lainnya  berperan  dalam  reaksi  fenton  yang menghasilkan radikal bebas yang sangat reaktif (Valko et al. , 2007). Hal ini juga bisa menyebakan terjadinya Reactive  Oxigen  Species (ROS)  atau  yang  disebut radikal  hidroksil  dan  radikal  superoksida  yang  dapat menginisiasi proses peroksidasi lipid yang menyebabkan  berbagai  penyakit  degeneratif  bahkan dapat menyebabkan kanker (Suryohudoyo, 1993).
Agen  kelator  yang  sering  digunakan  adalah deferoxamine .  Akan  tetapi,  penggunaan deferoxamine menyebabkan  efek  samping  seperti  gangguan penglihatan, pendengaran, kardiovaskular, pencernaan, hematologi, hati, saraf dan muskuloskeletal  (Herdata,  2008).  Selain  itu, deferoxamin  memiliki  harga  yang  mahal  (Djajiman, 2007).
Tumbuhan  putri  malu  merupakan  tanaman perdu yang sering dijumpai dan tumbuh liar. Penelitian sebelumnya  menyebutkan  Daun  tanaman  putri  malu
digunakan  sebagai  antihiperglikemia,  antiulser, antidiare, antikonfulsan, sitotoksik, dan hepatoprotektor. Akar  tanaman  berfungsi  untuk  mengobati  demam, penyakit  kuning,  lepra,  disentri,  gangguan  vagina  dan uterin,  radang,  sensasi  terbakar,  kelelahan,  asma,  dan penyakit darah (Suhendra, 2009).
Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Azmi  pada tahun 2011 dan Felisa  pada tahun 2015 menyebutkan bahwa  daun  putri  malu  mengandung  senyawa  kimia mimosin  yang,  memiliki  efek  kelasi  terhadap  besi. Mimosin  memiliki  beberapa  efek  farmakologi  yaitu antidiabetes,  antihepatotoxin,  antioksidan,  antiepilepsi, antitumor (Azmi, Singh and Akhtar, 2011) (Felisa et al. , 2015).
Mimosin memiliki berbagai aktivitas farmakologi seperti antibakteri, antiinflamsi, antidepresi, antipiretik,  antiulser,  antimalaria,  antispasmodik, analgesic, antimalaria, wound healing activity (George J, 2016).  penelitian  lain  menyebutkan  Mimosin  mampu menghambat  metabolisme  folat,  DNA,  proliferasi  sel kultur,  dan  pertumbuhan  sel  tumor  in  vivo,  induksi (Chang et al. , 2000) (George J, 2016).
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas iron  chelator ekstrak  etanol  dan  fraksi-fraksi daun  putri  malu (Mimosa  pudica L ) dengan  metode Ferrous Ion Chelating (FIC) untuk melihat potensinya dalam  mengkelat  logam,  terutama  logam  yang bervalensi 2.
II. Metode Penelitian II.1 Bahan
Bahan kimia yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  etanol  96%,  pelarut n- heksan,  pelarut  etil asetat,  air,  NaCl  0,9%,  ferritin  kit  merk  calbiotekh, standart  feritin,  reagen  biotin,  reagen feritin  Enzyme , substrat  TMB  ( Tetramethylbenzidine ) ,  larutan pencuci,  ferro  sulfat,  standard  mimosin  (Sigma- Aldrich).
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah daun putri malu secara acak, tidak terlalu tua dan tidak  terlalu  muda  dan  tidak  rusak.  Bahan  yang digunakan  adalah  daun  putri  malu  yang  diambil  dari tanaman putri malu.

## II.2 Ekstraksi
Ekstraksi daun putri menggunakan metode maserasi dengan cara perendaman serbuk daun putri malu  menggunakan  pelarut  etanol  96%.    serbuk daun  putri  malu  ditimbang  1  kg  selanjutnya dilakukan  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol 96% sebanyak 10 L perbandingan (1:10), direndam selama  6 jam pertama  sesekali digojok. Kemudian didiamkan  selama  18  jam.  Maserat  dipisahkan dengan cara filtrasi. Dilakukan pengulangan proses penyarian  sekurang-kurangnya  satu  kali  dengan jenis pelarut yang sama dan jumlah volume pelarut sebanyak setengah kali jumlah volume pelarut pada penyarian  pertama.  Maserat  yang  terkumpul, kemudian  diuapkan  dengan  penguap  vakum  atau penguap  tekanan  rendah  hingga  diperoleh  ekstrak kental.

## II.3 Fraksinansi
Fraksinasi dilakukan dengan cara menimbang  ekstrak  etanol  sebanyak  20  gr. Disuspensikan dalam akuadest 100 ml. ditambahkan n- heksan 100 ml. Campuran ekstrak dikocok selama 5  menit,  hingga  terbentuk  dua  lapisan  selanjutnya dipisahkan  lapisan  yang  terbentuk.  Proses  diulang hingga  fraksi n- heksan  menjadi  jernih  atau  warna terlihat konstan. Residu fraksi n- heksan ditambahkan  dengan  100  ml  etil  asetat,  dikocok selama  5  menit,  diamkan  hingga  terbentuk  dua lapisan.  Kemudian  dipisahkan,  Fraksi  dipekatkan dengan  rotary  evaporator  pada  suhu  40  ±  2°C kecepatan  70  rpm  hingga  pelarut  menguap, dilanjutkan  pengeringan  menggunakan  oven  pada suhu 40 ± 2°C.

## II.4 Persiapan Serum Darah II.4.1 Pengambilan Sampel Darah
Sampel  darah  sebanyak  6  ml  disimpan dalam  tabung  yang  bersih.  Darah  yang  digunakan adalah darah pasca transfusi karena pada saat setelah transfusi  maka  kadar  feritin  didalam  tubuh  akan meningkat  selanjutnya  akan  dipisahkan  menjadi serum darah.

## II.4.2 Pemisahan Serum Darah dan Pengukuran Kadar Feritin
Sampel  darah  sebanyak  6  ml  dimasukkan ke dalam tabung yang bersih, dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit hingga terbentuk  dua  lapisan.  Lapisan  jernih  berwarna kuning  dibagian  atas  adalah  serum.  Bagian  yang diambil  yaitu  serum  karena  serum  dalam  darah mengandung  protein, feritin  antibody .  Serum diambil menggunakan pipet kemudian dipindahkan ke dalam tabung lain yang bersih dan kering. Serum akan diukur kadar feritinnya dengan metode ELISA ( Enzyme Linked Immunosorbent Assay ).

## III. Hasil dan Pembahasan
Tanaman daun putri malu Mimosa pudica L yang digunakan sebagai bahan penelitian dideterminasi terlebih  dahulu.  Tanaman  daun  putri  malu Mimosa pudica L yang  digunakan  sebagai  bahan  penelitian dideterminasi  terlebih  dahulu.  Daun  putri  malu  yang diambil  untuk  penelitian  ini  adalah  daun  yang  masih segar, berwarna hijau tidak terlalu muda, tidak terlalu tua dan  tidak  rusak.  Daun  putri  malu  yang  digunakan sebanyak  15  kg.  Daun  putri  malu  kemudian  diolah melalui  proses  pencucian,  sortasi  basah,  pengeringan, sortasi  kering,  dan  penyerbukan  serta  pengayakan serbuk  daun  putri  malu  sebanyak  1,2  kg,  sehingga diperoleh persentase berat kering terhadap berat basah adalah  20,83%.  Daun putri malu selanjutnya diserbuk untuk  memperkecil  ukuran  partikel  sehingga memperluas  permukaan  partikel  akibatnya  proses ekstraksi dapat berlangsung efektif. Pada perbandingan berat  serbuk  terhadap  berat  daun  kering  didapatkan rendemen sebesar 52%. Semakin tinggi nilai rendemen maka hasilnya akan semakin lebih bagus. Serbuk daun putri malu sebanyak 20 g, diukur kadar airnya dengan alat Sterling Bidwell menggunakan pelarut toluene. Persyaratan  kadar  air  serbuk  simplisia  yaitu kurang dari 10%. Penetapan kadar air serbuk daun putri malu dimaksudkan agar kualitas dan khasiat daun dapat terjaga,  persyaratan  kadar  air  suatu  serbuk  daun  putri malu  adalah  tidak  boleh  lebih  dari  10%  (Depkes  RI, 2013). Hasil penetapan kadar air serbuk daun putri malu dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Penetapan Kadar Air Serbuk Daun Putri Malu
No  Bobot serbuk (gram) Volume terukur (mL) Kadar air (%) 1 20 1,20 6,0 2 20 1,50 7,50 3 20 1,30 6,50 Rata-rata 6,67
Hasil perhitungan penetapan kadar air serbuk daun  putri  malu  rata-rata  sebesar  6,67%.  Hal  ini menunjukkan bahwa serbuk daun putri malu memenuhi persyaratan kadar air karena kurang dari 10%. Kadar air serbuk  daun  putri  malu  tidak  lebih  dari  10%  artinya kadar  air  yang  diperbolehkan  dalam  simplisia  untuk
menghambat  pertumbuhan  jamur  dan  ativitas  enzim adalah kurang dari 10%.
Penelitian  ini menggunakan daun putri malu yang  diekstraksi  dengan  cara  maserasi  dingin menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Ekstrak  yang diperoleh dipekatkan dan dihitung rendemenya, hal ini untuk  mengetahui  besarnya  ekstrak  kental  yang diperoleh  dan  untuk  memperkirakan  jumlah  ekstrak yang  akan  digunakan  dalam  uji  selanjutnya.  Bobot ekstrak kental sebesar 69,98 g, sehingga hasil rendemen yang  diperoleh  13,99%.  Rendemen  yang  diperoleh 13,99%  artinya  perbandingan  jumlah  ekstrak  yang dihasilkan dari  ekstraksi tanaman,  semakin besar nilai rendemen yang dihasilkan nilai ekstrak yang dihasilkan semakin banyak. Metode maserasi merupakan salah satu teknik  penyaringan  yang  dilakukan  dengan  cara merendam  serbuk  simplisia  di  dalam  cairan  penyari. Cairan penyari akan menembus dinding sel dan masuk ke  dalam  rongga  sel  yang  mengandung  zat  aktif.  Zat aktif akan melarut karena adanya perbedaan konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dan di luar sel, maka larutan yang paling pekat akan terdesak keluar. Pelarut yang  digunakan  yaitu  pelarut  etanol  96%.  Etanol digunakan  karena  termasuk  pelarut  universal  yang
mampu  menarik  sebagian  besar  senyawa  dalam simplisia, bersifat tidak toksik bila dibandingkan dengan metanol sehingga dapat digunakan baik untuk uji in vitro maupun in vivo. Penggunaan etanol 96% sering dapat menghasilkan suatu bahan aktif yang optimal, dimana bahan  pengotor  hanya  dalam  skala  kecil  turut  dalam penyarian (Voight, 1995).
Proses  pembuatan  fraksi  terlebih  dahulu dilakukan dengan cara menimbang ekstrak etanol daun putri malu sebanyak 20 gram. Pelarut yang digunakan yaitu  pada  proses  fraksinasi  ini  adalah n- heksan,  etil asetat, dan air. Pelarut air digunakan karena air memiliki sifat  polar  dimana  air  dapat  melarutkan  senyawa- senyawa yang bersifat polar pada ekstrak  etanol daun putri  malu  ini.  Pada  hasil  rendemen  yang  didapatkan (Tabel  2)  berat  fraksi n- heksan  adalah  sebanyak  15% b/b.  Rendemen  fraksi  etil  asetat  didapatkan  sebanyak 10%  b/b.  Untuk  hasil  rendemen  fraksi  air  didapatkan hasil  rendemen  sebesar  5%  b/b.  Semakin  besar persentase berat rendemen maka semakin baik hasilnya.
Tabel 2. Persentase rendemen Fraksi
Fraksi Berat fraksi (g) Berat ekstrak (g) Rendemen (%) Fraksi n- Heksan 3 20 15,3% Fraksi Etil Asetat 3 20 10,2% Fraksi Air 1 20 5,4%
Penentuan kadar senyawa terlarut dalam pelarut air dan  etanol.  Hasil  penelitian  menunjukkan  kadar senyawa yang terlarut air rata-rata sebesar 69,471% dan kadar senyawa terlarut dalam etanol sebesar 73,740%. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  senyawa  yang  terlarut dalam  pelarut  etanol  tidak  hanya  senyawa  polar  saja beberapa senyawa bersifat semipolar. susut pengeringan ekstrak  daun  putri  malu  adalah  7,17  %.  Menurut (Depkes RI, 1979) proses reaksi enzimatis di dalam sel ini  terjadi  pada  tumbuhan  dengan  susut  pengeringan lebih dari 10% sehingga dapat dikatakan ekstrak daun putri malu memenuhi persyaratan susut pengeringan.
Hasil  identifikasi  senyawa  kimia  menunjukkan bahwa  serbuk  dan  ekstrak  etanol  daun  putri  malu mengandung  saponin,  tanin  flavonoid  dan  alkaloid. Hasil uji fitokimia ekstrak dan fraksi-fraksi daun putri malu  ( Mimosa  pudica L)  menggunakan  reagen  dapat diketahui  bahwa  ekstrak  tanaman  putri  malu  positif mengandung  senyawa  flavonoid,  alkaloid,  terpenoid, saponin dan tanin.
Analisa profil KLT menunjukkan fraksi etil asetat diduga  mengandung  alkaloid  mimosin  karena menunjukkan warna noda yang sama dan mempunyai nilai Rf sama (hamper sama) dengan standar mimosin. Plat  KLT  terlihat  kurang  jelas  dibawah  sinar  tampak sedangkan dibawah UV dengan panjang gelombang 254 nm dan 366 nm terlihat jelas setelah disemprot pereaksi Dragendorff. Pada fraksi air tidak menunjukkan adanya noda  yang  sama  dengan  standar  mimosin  jika  dilihat
pada sinar UV dengan panjang gelombang 254 nm dan 366nm.  Hal  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  fraksi  etil asetat  dan  fraksi n- heksan  dicurigai  mengandung mimosin  karena  memiliki  nilai  Rf  mendekati  Rf senyawa murninya yaitu mimosin.
Pengambilan  sampel  darah  berupa  serum  darah pasien  thalasemia  β  mayor  diambil  dari  seorang penderita  thalasemia.  Hasil  pemeriksaan  feritin  serum darah pasien thalasemia  β  mayor adalah sebesar 2031 ng/ml nilai tersebut melebihi nilai normal feritin untuk perempuan  dewasa.  Rentang  kadar  feritin  untuk  anak usia 6 bulan sampai 15 tahun adalah 14 - 124 ng/ml, laki- laki  umur  20–60  tahun  adalah  30–400  ng/ml,  wanita umur  17–60  tahun  adalah  15‐150  ng/ml  dan  laki-laki atau perempuan umur 60–90 tahun adalah 15–650 ng/ml (Ashley, 2012). Feritin menggambarkan cadangan besi di dalam tubuh yang disimpan didalam limpa, hati dan sumsum  tulang  (Andrews,  2004).  Kadar  feritin  yang tinggi disebut juga iron overload pada pasien thalasemia β  mayor  disebabkan  karena  tranfusi  darah  rutin  yang menyebabkan  akumulasi  besi  di  dalam  jaringan  dan organ. Penimbunan besi yang berlebih di dalam organ dapat  menyebabkan  kerusakan  jaringan  dan  disfungsi organ (Priyatiningsih, 2010).
Aktivitas ekstrak etanol dan fraksi-fraksi daun putri malu kelompok uji terhadap penurunan feritin akan dibandingkan dengan kontrol negatif yaitu serum darah tanpa penambahan fraksi atau ekstrak etanol dan kontrol positif  yaitu  serum  darah  ditambah  larutan  standar
mimosin  pada  beberapa  seri  konsentrasi.  Pemilihan konsentrasi kelompok uji berdasarkan penelitian Andreu et  al (2020)  pada  konsentrasi  0,5  mg/ml  (500  ppm) mimosin  dapat  mengikat  kadar  besi  serta  mengurangi kadar besi di dalam darah secara in vitro dan tidak lebih dari  5  mg/ml  (5000  ppm)  standar  mimosin  dapat
melindungi kerusakan DNA karena pengikatan oleh 10 μM  besi  secara  in  vitro.  Menurut  (Jaya,  2010) melaporkan  konsentrasi  ekstrak  air  500  ppm  mimosin dapat  menurunan  kadar  feritin  serum  darah  pasien thalasemia  yang  diukur  menggunakan  metode spektrofotometri UV Vis.
Gambar 1. Kadar Feritin Dalam Serum Darah Keterangan: K (+) kontrol positif standar mimosin, (EE) ekstrak etanol daun putri malu, (FEA) fraksi etil asetat, (FNH) fraksi n- heksan, (FA) fraksi air
Berdasarkan  hasil  pengukuran  kadar  feritin pada kelompok uji pada Gambar 1 menunjukkan bahwa kelompok  uji n- heksan  dengan  konsentrasi  500  ppm dengan  hasil  setelah  perlakuan  sebesar  48,51  ng/ml menunjukkan adanya penurunan kadar feritin tertinggi dibandingkan  dengan  konsentrasi  1500  ppm  setelah perlakuan  sebesar  224,03  ng/ml/.  Semakin  tinggi konsentrasi maka kemampuan aktivitas pengkhelat besi semakin  rendah.  Semakin  tinggi  konsentrasi menyebabkan  semakin  rendahnya  aktivitas  karena kandungan  mimosin  dalam  sample  semakin  sedikit. Mimosin sendiri merupakan suatu analog tirosin yang mengandung  domain  pengikat  logam,  sehingga mimosin mampu mengkelat logam transisi seperti Fe 3+. Mekanisme Iron overload berdasarkan pada tingginya kadar feritin dalam darah karena Fe 3+ berlebih di dalam tubuh mengikat porfirin menjadi protein feritin sebagai cadangan besi dalam tubuh. Kondisi ini adalah kondisi dimana kadar feritin di dalam darah di atas 1000 ng/ml (Fajri, 2018). Besarnya aktivitas kelompok uji terhadap penurunan  kadar  feritin  dinyatakan  dengan  persentase penurunan  feritin  yang  menggambarkan  besarnya persentase kelompok uji yang dapat menurunkan kadar feritin  dalam  serum  darah  pasien  thalasemia  β  mayor (Bulan,  2012).  Besarnya  nilai  penurunan  feritin diketahui bahwa dari ke 5 kelompok uji tersebut, fraksi n- heksan  dan  kontrol  positif  yaitu  mimosin  memiliki
nilai  persentase  penurunan  feritin  tertinggi  terhadap penurunan  kadar  feritin  pada  semua  seri  konsentrasi dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol  dan  fraksi  etil asetat,  dan  fraksin  air.  Fraksi n- heksan  dengan konsentrasi 500 ppm memiliki aktivitas tertinggi yang hampir  sama  dengan  kontrol  positif,  akan  tetapi memiliki nilai persentase penurunan kadar feritin yang lebih  rendah  dibandingkan  dengan  standar  mimosin sebagai  kontrol  positif  pada  semua  seri  konsentrasi. Kandungan  mimosin  yang  dimiliki  paling  banyak karena  berdasarkan  polaritas  pelarutnya  yaitu  alkaloid mimosin  larut  dalam  senyawa  nonpolar  dibandingkan senyawa polar seperti ekstrak etanol, fraksi etil asetat, dan fraksi air.
Penurunan aktivitas kadar feritin fraksi-fraksi menggambarkan bahwa pada konsentrasi kelompok uji terkecil mampu dalam menurunkan kadar feritin secara signifikan  tetapi  semakin  tinggi  konsentrasi  aktivitas penurunan  kadar  feritin  semakin  berkurang.  Semakin tinggi  konsentrasi  pada  alkaloid  mimosin  menjadi semakin  toksik  sehingga  semakin  tinggi  konsentrasi maka aktivitas penurunan kadar feritin akan berkurang (Kyriakou, et al 2020). Pemberian agen pengkhelat besi ( iron chelator ) efektif dalam menurunkan kadar feritin jika diberikan dalam kondisi kelebihan besi berlebih di dalam tubuh. Kelebihan besi dalam tubuh terjadi ketika kadar feritin tinggi di atas 1000 ng/ml. (Petrina, 2011).
0 50 100 150 200 250 500 ppm 750 ppm 1000 ppm 1250 ppm 1500 ppm K a da r fer it in Konsentrasi Penurunan Kadar Feritin Setelah Penambahan Sampel K (+) EE FNH
FEA FA
Pada metode ELISA ini diduga kelebihan Fe 3+ karena  kelebihan  kadar  besi  akan  membentuk  ikatan kompleks dengan mimosin. Sampel ekstrak etanol dan fraksi-fraksi dari daun Mimosa pudica L setelah proses inkubasi kemudian ikatan kompleks ini akan terbuang bersama  dengan  enzim  maupun  protein  yang  tidak spesifik  pada  ELISA  feritin.  Sedangkan  feritin  yang jenuh  dengan  ikatan  antara  Fe 3+ dan  protein  porfirin menyebabkan  tingginya  kadar  feritin  yang  disebut sebagai  kondisi iron  overload .  (Thummajitsakul  and Silprasit, 2017). Mimosin menghambat replikasi DNA yang  akan  mempengaruhi  siklus  sel  dan  akhirnya mengarahkan  pada  pembelahan  sel.  Mimosin merupakan  suatu  agen  pengkhelat  besi  dimana  ketika suatu  sel  kehabisan  ion  besi  maka  akan  memicu putusnya  ikatan  DNA double  helix pada  target  yang mengakibatkan fosforilasi pada protein histon. Hal  ini mengakibatkan  terjadinya  penghambatan  replikasi DNA pada saat elongasi (Wishart, 2012).
Berdasarkan hasil uji statistik aktivitas ekstrak etanol  dan  fraksi-fraksi  menggunakan  uji  normalitas kolmogorov-smirnov  pada  kelima  kelompok  uji terhadap  kadar  feritin  tiap  konsentrasi  memiliki  nilai yaitu sig yaitu lebih besar dari > 0,05 dimana memiliki makna  bahwa  nilai  kadar  feritin  semua  kelompok  uji terdistribusi normal, sedangkan secara deskriptif dapat disimpulkan  bahwa  kelompok  uji  fraksi n- heksan memiliki  nilai  kadar  feritin  paling  rendah  yaitu  pada konsentrasi  500  ppm  dengan  kadar  feritin  rata-rata sebesar  48,51  ng/ml  ±  0,46.  Berdasarkan  test homogenity of variance diperoleh nilai signifikansi (Sig) > 0,05 memiliki makna yaitu varian kelima kelompok uji  adalah  sama  atau  homogen.  Pada  uji  annova diperoleh nilai signifikansi < 0,05 yang memiliki makna bahwa rata-rata nilai kadar feritin kelompok uji kontrol (+), ekstrak etanol, fraksi n- heksan, fraksi etil asetat dan fraksi  air  adalah  berbeda  signifikan.  Hal  ini  memiliki makna bahwa kelima kelompok uji memiliki aktivitas terhadap  penurunan  kadar  feritin  yang  berbeda  secara signifikan.

## IV. Kesimpulan
Hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa kandungan mimosin daun putri malu pada konsentrasi 500 ppm mempunyai aktivitas sebagai agen pengkhelat besi  pada  serum  darah  pasien  thalasemia  β  mayor dengan cara menurunkan kadar feritin secara in vitro.

## Daftar Pustaka
Andrews,  N.  (2004) Iron  deFICiency  and  related disorder .  11th  ed, Wintrobe’sClinical Hematology . 11th ed. Philadelphia: Lea & Febiger.
Ashley,  E.  (2012)  ‘Feritin  (serum,  plasma). Association for Clinical Biochemistry’. Azmi, L., Singh, M. K. and Akhtar, A. K. (2011) ‘). Pharmacological  and  biological  overview on  Mimosa  pudica  Linn’, International Journal  of  Pharmacy  &  Life  Sciences , 2(11), pp. 1226–1234.
Bulan,  S.  (2012) Faktor-faktor  yang  berhubungan
dengan  kualitas  hidup  anak  thalassemia beta  mayor .  Universitas  Diponegoro, Semarang. Chang,  H. et  al. (2000)  ‘Modulation  of  cell  cycle regulatory protein expression and suppression of tumor growth by mimosine in  nude  mice’, Int  J  Oncol  2000 ,  17,  pp.
659–65.
Depkes  RI  (1979) Cara  Pembuatan  Simplisia . Jakarta:  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia.
Depkes  RI  (2013) Sediaan  Galenik .  Jakarta:
Departemen Kesehatan RI. Djajiman,  G.  (2007) Pendekatan  Mutakhir  Kelasi Besi  pada  Thalassemia .  Jakarta:  Sari Pediatri.
Fajri, P. (2018) The preventive effect of Mangifera foetida  L.  leaf  extract  administered simultaneously to excess iron on markers of iron  overload  in  Spraque-Dawley  rats , Medical Journal of Indonesia . Felisa,  P. et  al. (2015)  ‘In  vitro  antioxidant  and anticancer activity of Mimosa pudica Linn extract  and  L-mimosine  on  lymphoma Daudi cells’, Int J Pharm Pharm Sci , 7(12), pp. 100–104.
Herdata, N. H. (2008) ‘Thalasemia Mayor.Welcome &  joining  pediatric  hematology  oncology in Indonesia’.
Jaya, A. (2010) Isolasi dan uji efektivitas antibakteri senyawa  saponin  dari  akar  putri  malu (Mimossa  pudica) .  Universitas  Islam Negeri (UIN) Malang.
Petrina, V. (2011) Hubungan Antara Kadar Feritin Serum  Dengan  Kadar  Hepsidin  Pada
Carrier Talasemia β . Universitas
Diponegoro. Semarang.
Priyatiningsih,  D.  (2010) Pengaruh  Deferasirox terhadap Kadar T4 dan TSH pada Pasien β-Thalasemia Mayor dengan Ferritin yang Tinggi . Universitas Diponegoro. Semarang.
Suhendra,  G.  (2009) Efek  Hepatoprotektif  Ekstrak Etanol  Herba  Putri  Malu  (Mimosa pudica,L.)  pada  Tikus  yang  Diinduksi Parasetamol dengan Melihat Kadar SGPT serum . Univ. Ahmad Dahlan. Suryohudoyo, P. (1993) ‘Oksidan, Antioksidan, dan Radikal Bebas’.
Thummajitsakul,  S.  and  Silprasit,  K.  (2017) ‘Genetic  differentiation  and  antioxidant activities of Bouea macrophylla Griffith in Nakhon  Nayo  province’, J.  Appl  Biol Chem , 60(1), pp. 41–47. Valko,  M. et  al. (2007)  ‘Review:  Free  .adicah  dd antioxidants  in  nomal  physiological nmctions  and  human  disease’, lnter  I Biochem Cell Biol , 39, pp. 44–84. Voight,  R.  (1995) Buku  Pelajaran  Teknologi Farmasi edisi 5 . Yogyakarta: Gadjah Mada
University Press. Wishart, D. (2012) Mimosine .