## APLIKASI MADU SEBAGAI BAHAN HALAL PENGGANTI PENGAWET BERFORMALIN PRODUK FILLET IKAN PADA MASA TRANSPORTASI

## HONEY APPLICATION AS A HALAL REPLACEMENT MATERIAL FOR FILLET FISH PRODUCT IN TRANSPORTATION
Muhammad Athoillah Sholahuddin*
Departemen Kelautan, Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Airlangga
Kampus C UNAIR Mulyorejo,Surabaya, 60115, Indonesia * Email: athoillahjr278@gmail.com

## ABSTRAK
Ikan  merupakan  makanan  yang  banyak  dikonsumsi  oleh  masyarakat  dikarenakan mengandung  nutrisi  yang  cukup  tinggi.  Produk fillet merupakan  salah  satu diversifikasi produk perikanan  yang  cukup  banyak  digemari  oleh  masyarakat.  Hal  tersebut  dikarenakan  produk fillet mudah  dikonsumsi  dan  memiliki  kandungan  nutrisi  yang  cukup  baik.  Akan  tetapi  produk fillet ikan mudah sekali mengalami penurunan mutu pada saat transportasi. Sehingga memicu pedagang untuk menggunakan  bahan  berbahaya  berupa  formalin  untuk  meningkatkan  masa  simpan  pada  produk fillet. Masa  simpan  produk fillet ikan  perlu  ditingkatkan  supaya  memperoleh  kualitas  yang  baik  dan tidak  mudah  mengalami  kerusakan yakni  dengan  menyimpan fillet pada  suhu  rendah  dan penambahan  bahan  aktif  berupa  madu.  Madu  juga  mempunyai  sifat  antimikroba  sehingga  dapat digunakan  sebagai  pengawet  makanan.  Madu  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  penyebab pembusukan.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  penambahan madu  dengan  konsentrasi  yang  berbeda  terhadap  masa  simpan fillet ikan pada  suhu  dingin. Penelitian ini bersifat eksperimental dengan melakukan pembuatan larutan madu dengan konsentrasi yang  berbeda  (0%:10%;  11%).  Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Uji masa simpan dilakukan dengan menghitung nilai TPC, Protein, pH, Tvbn, dan organoleptik. Hasil uji TPC,  Protein,  pH,  TVBN,  dan  organoleptik  diperoleh  data  bahwa  penambahan  madu  dengan konsentrasi  yang  berbeda  memberikan  pengaruh  nyata  terhadap  masa  simpan fillet ikan. Konsentrasi  terbaik  penambahan  madu  terdapat  pada  konsentrasi  5%.  Sedangkan  masa  simpan yang dapat diterima konsumen dapat mencapai 6 hari masa simpan. Hasil penelitian  menunjukkan bahwa  madu  dapat  dijadikan  sebagai  alternatif  bahan  pengawet  pada  daging fillet ikan  yang berfungsi sebagai antimikroba dan pencegah oksidasi lemak.
Kata kunci: madu, fillet, ikan, masa simpan

## ABSTRACT
Fish is a food that is consumed by many people because fish contain high nutrition. Fillet products are diversification  of  fishery  products  that  are  quite  popular  with  the  community.  That  is  because  fillet products  are  easy  to  consume  and  have  good  nutritional  content.  However,  fish  fillet  products  are easily degraded during transportation. So that triggers traders to use hazardous materials in the form of formalin to increase the shelf life of fillet products. The shelf life of fish fillet products needs to be improved  in  order  to  obtain  good  quality  and  not  be  easily  damaged  by  storing  fillets  at  low temperatures and the addition of active ingredients in the form of honey. Honey also has antimicrobial properties so that it can be used as a food preservative. Honey can inhibit the growth of bacteria that cause  decay.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  effect  of  adding  honey  with  different concentrations on the shelf life of white pomfret (Pampus argenteus) fillets at cold temperatures. This research was experimental by making honey solutions with different concentrations (0%: 10%; 11%). This research uses a completely randomized design (CRD). The shelf life test is done by calculating the value of TPC, Protein, pH, Tvbn, and organoleptic. TPC, Protein, pH, TVBN, and organoleptic test results showed that the addition of honey with different concentrations had a significant effect on the shelf life of white pomfret fish fillets. The best concentration of adding honey is at a concentration of 5%. While the shelf life that can be accepted by consumers can reach 6 days shelf life. The results
showed that honey can be used as an alternative preservative in fish fillet meat that functions as an antimicrobial and fat oxidation prevention.
Keywords: honey, fillets, fish, preserves

## PENDAHULUAN
Ikan merupakan makanan  yang  banyak  dikonsumsi  oleh  masyarakat.  Jumlah  konsumsi  ikan pada  tahun  2017  adalah  47.34  kg/kapita/tahun  dan  meningkat  pada  tahun  2018,  yakni  50.69 kg/kapita/tahun. Hal tersebut menunjukkan bahwa konsumsi ikan semakin meningkat tiap tahunnya. Ikan mengandung nutrisi yang cukup tinggi, yakni terdapat protein, lemak, vitamin, dan mineral yang cuk up untuk memenuhi kebutuhan gizi dalam tubuh. Protein pada daging ikan terdapat lebih kurang 2/3  dari  kebutuhan  protein  hewani  yang  diperlukan  manusia.  Kandungan  protein  ikan  cukup  tinggi yaitu  antara  15-25%  tiap  100  gr  daging  ikan.  Selain  itu  protein  ikan  terdiri  dari  asam-asam  amino yang hampir semuanya diperlukan oleh manusia (Samsundari 2007).
Ikan  diekspor  ke  luar  negeri  salah  satunya  dalam  bentuk fillet, yakni suatu  bagian  daging berasal  dari  ikan  yang  diperoleh  dengan  penyayatan  ikan  secara  utuh  dari  sepanjang  tulang belakang dimulai dari belakang kepala hingga mendekati bagian ekor. Produk fillet merupakan salah satu diversifikasi produk perikanan yang cukup banyak digemari oleh masyarakat. Tahun 2012 total nilai ekspor fillet ikan sejumlah 23 juta kg (BPS 2012) Fillet ikan merupakan salah satu produk hasil perikanan  yang mudah mengalami kerusakan atau high  perishable sehingga  perlu  adanya  penanganan  yang  lebih  (Erlangga  2009).  Ciri-ciri fillet ikan  yang  berkualitas  baik  adalah fillet yang  mempunyai  daging  berwarna  putih,  cemerlang  dan bersih, bau sangat segar dan tekstur yang padat, kompak dan elastis (BSN 2006).
Formalin memiliki kandungan berbahaya bagi tubuh ketika dikonsumsi. Penggunaan formalin sebagai  pengawet  makanan  dilarang  di  Indonesia,  hal  ini  dinyatakan  pada  Peraturan  Menteri Kesehatan  Republik  Indonesia  No.1168/Menkes/Per/X/1999  yang  diperbaharui  dari  Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia No.722/Menkes/Per/IX/1988, Peraturan Menteri Perindustrian Nomor: 24/MInd/Per/5/2006, dan Peraturan Pemerintah Republik Indonesia Nomor 28 Tahun 2004. Formalin memiliki dampak buruk bagi kesehatan manusia. Jika tertelan formalin dapat menyebabkan iritasi  dan  rasa  terbakar  pada  mulut  dan  esofagus,  nyeri  dada  atau  perut,  nausea,  vomitus,  diare, ulkus pada gastrointestinal, perdarahan gastrointestinal dan gagal ginjal. Oleh sebab itu fatwa Majelis Ulama Indonesia Nomor: 43 Tahun 2012 menyatakan bahwa  bahan berformalin sebagai pengawet pada  produk  perikanan  hukumnya  haram karena  dapat  membahayakan  tubuh  yang  mengonsumsi. Maka  dari  itu  perlu  adanya  bahan  pengganti  untuk mengawetkan  produk  perikanan  sehingga  tidak berbahaya bagi tubuh.
Salah  satu  bahan  yang  dapat  dijadikan  pengawet  alami  tersebut  adalah  madu.  Madu merupakan  salah  satu  diantara  jenis  obat-obatan  tradisional  cukup  tua  yang  berkhasiat  sebagai suplemen yang dapat digunakan untuk menambah stamina, pemanis, dan memiliki banyak kegunaan lain.  Madu  menurut  USDA  (2019)  mengandung  38%  fruktosa,  7.2%  maltose,  31%  glukosa,  17.1% air,  4.2%  trisakarida  dan  beberapa  polisakarida,  1.5%  sukrosa,  0.5%  mineral,  vitamin  dan  enzim. Madu bersifat antimikroba karena tersusun atas beberapa molekul gula seperti glukosa dan fruktosa serta  sejumlah  mineral  dan  vitamin.  Kandungan  glukosa  dan  fruktosa  madu  yang  sangat  tinggi dengan  demikian  menyebabkan  larutan  sangat  hipertonis  bila  dibandingkan  dengan  lingkungan  di dalam tubuh bakteri , sifat ini akan menyebabkan lisisnya bakteri akibat dehidrasi yang berat karena efek osmosis (Yuliati 2017).
Selain  sebagai  obat,  madu  juga  mempunyai  sifat  antimikroba  sehingga  dapat  digunakan sebagai pengawet makanan. Madu dapat menghambat pertumbuhan bakteri penyebab pembusukan seperti Pseudomonas  fluorescens,  Alcaligenes  faecalis,  Aspergillus  niger dan Bacillus stearothermophilus (Mundo et  al .  2004).  Hal  tersebut  dapat  terlihat  dari  zona  penghambatan  yang dihasilkan oleh madu yang diberikan pada media yang telah dikultur bakteri-bakteri. Rahardjo (2010) mengatakan,  madu  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  pada  daging  giling  sapi  segar. Penambahan madu dengan konsentrasi tertentu daging giling sapi memiliki umur simpan yang lebih lama  daripada  daging  giling  sapi  tanpa  penambahan  madu  ( control ).  Pada  sisi  lain,  madu  diyakini oleh seorang muslim sebagai makanan sekaligus obat yang halal dan thayyib (baik dan bergizi). Hal ini  sebagaimana  hadits  "Madu adalah  penyembuh  bagi  segala  penyakit  dan  Al-Qur'an  adalah penyembuh terhadap apa yang ada di dalam dada. Maka bagi kalian terdapat dua penyembuhan; Al- Qur'an dan madu." (HR. Ibnu Majah, 3452 dari hadist Ibnu Mas'ud)

## METODE PENELITIAN

## Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian  dilakukan di  Kota Surabaya, dari  bulan  Mei hingga Juli 2019. Hasil  yang  diperoleh diharapkan  dapat  memberikan  informasi  data  paling  baru  ( update )  dari  penelitian-penelitian  serupa sebelumnya.  Penelitian  ini  merupakan  eksperimen  baru  yang  serupa  dengan  penelitian  Rahardjo (2010) yang meneliti tentang madu dapat menghambat pertumbuhan bakteri pada daging giling sapi segar.  Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Uji  masa  simpan  dilakukan dengan menghitung nilai TPC, Protein, pH, Tvbn, dan organoleptik. Hasil uji TPC, Protein, pH, TVBN, dan  organoleptik  diperoleh  data  bahwa  penambahan  madu  dengan  konsentrasi  yang  berbeda memberikan pengaruh nyata terhadap masa simpan fillet ikan.

## Alat dan Bahan Penelitian
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  autoklaf  (Yamato  SM52  Autoclave, Japan), refrigerator (Toshiba GR-M245H Glacio XD7, Japan), pH meter (Eutech pH 700), inkubator (Thermolyne type 42000 Incubator, USA), centrifuge (EBA 20, Germany) , thermostat water bath (HH- 6) , timbangan  analitik  (Ohauss  Pioneer  0-2100  G,  USA),  oven. Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  ikan  bawal  putih,  madu  murni,  asam  asetat,  asam  peroksida  (H 2 O 2 ),  Etanol (C 2 H 5 OH), Plate  Count  Agar (PCA),  akuades,  alkohol  70%,  kapas  pembalut,  spiritus,  natrium hidroksida (NaOH), asam hidroklorat (HCl), maltodekstrin.

## Metode Pengumpulan Data
Data yang digunakan dalam penelitian ini adalah data primer dan sekunder.  Uji masa simpan dilakukan dengan menghitung nilai TPC, Protein, pH, Tvbn, dan organoleptik. Hasil uji TPC, Protein, pH,  TVBN,  dan  organoleptik  diperoleh  data  bahwa  penambahan  madu  dengan  konsentrasi  yang berbeda memberikan pengaruh nyata terhadap masa simpan fillet ikan.
1.  Perhitungan  Jumlah  Baktpenilyida  eri.  Pengujian  mikrobia  dapat  dilakukan  dengan  penentuan Total  Plate  Count (TPC)  (Nugraheni  2013).  Penentuan  TPC  dilakukan  dengan  menghitung jumlah  total  sel  bakteri  pada  cawan  Petri  kemudian  membandingkan  dengan  standar  mutu (Adawyah 2011). BSN (2006) menyatakan bahwa batas maksimum cemaran mikroba dalam fillet ikan kakap adalah 5x10 -5 koloni/g. Metode Total Plate Count (TPC) dilakukan dengan membuat pengenceran bertingkat. Pengenceran bertingkat dilakukan dengan cara menggerus daging fillet ikan sebanyak satu gram dalam sembilan ml larutan NaCl fisiologis steril dengan perbandingan 1:9  sampai  homogen  sehingga  diperoleh  larutan  dengan  pengenceran10 -1 .  Sebanyak  satu  ml suspensi  pengenceran  10 -1 diambil  dengan  menggunakan  pipet  volume  sepuluh  ml  steril kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang  berisi  sembilan  ml  larutan  NaCl  fisiologis steril  dan  dihomogenkan  untuk  mendapatkan  pengenceran  10 -2 ,  dilanjutkan  dengan pengenceran  yang  lebih  tinggi.  Jumlah  pengenceran  disesuaikan  dengan  keperluan  penelitian, penelitian ini menggunakan lima kali pengenceran (10 -1 , 10 -2 , 10 -3 , 10 -4 dan 10 -5 ) (Florensia et al 2012).
Kegiatan penghitungan TPC atau pemupukan dilakukan dengan metode tuang ( pour plate ). Metode  tuang  dilakukan  dengan  cara  mengambil  1  ml  sampel  hasil  pengenceran  dengan menggunakan  pipet  volume  10  ml  steril  dari  tabung  pengenceran  dan  dipindahkan ke  dalam  2 cawan  petri  steril  secara  duplo.  Waktu  yang  baik  selama  pengenceran  dimulai  sampai penuangan ke dalam cawan petri adalah tidak lebih dari 30 menit (Fardiaz 1993).
Media PCA ( Plate Count Agar ) steril yang telah didinginkan sampai suhu 50 o C dimasukkan ke dalam petridish sebanyak 15 ml. Petridish yang telah dituang media PCA digerakkan di atas meja  dengan  gerakan  melingkar  atau  gerakan  seperti  angka  delapan,  kemudian  didiamkan hingga media agar yang terdapat dalam petridish memadat (Fardiaz 1993). Petridish diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 o C selama 24 jam dengan posisi petridish dibalik (Florensia et al . 2012).
2.  Uji Kuantitatif Protein. Metode Kjeldahl dilakukan untuk menganalisis kadar protein  kasar dalam bahan  makanan  secara  tidak  langsung,  yakni  melalui  kadar  nitrogen.  Prinsip  analisis  Kjeldahl adalah  sebagai  berikut:  bahan  organik  di  didihkan  dengan  asam  sulfat  pekat  sehingga  unsur- unsur  dapat  terurai.  Atom  karbon  menjadi  CO2  dan  nitrogen  menjadi  amonium  sulfat.  Larutan tersebut  kemudian  dibuat  alkalis  dengan  menambahkan  NaOH  berlebihan  sehingga  ion amonium bebas menjadi amonia bebas. Amonia yang dipisahkan dengan cara distilasi kemudian dijerat dengan larutan  asam borat. Garam borat  yang terbentuk dititrasi dengan HCl. Dari hasil titrasi  dapat  dihitung  %  N.  Hasil  %  N  tersebut  dapat  digunakan  untuk  memperkirakan  kadar
protein kasarnya. Umumnya campuran protein murni terdiri dari 16% nitrogen. Apabila jumlah N dalam bahan telah diketahui, maka jumlah protein dihitung dengan mengalikan jumlah N dengan faktor  konversi  6.25  (100/16).  Besarnya  faktor  konversi  tergantung  pada  persentase  nitrogen yang menyusun protein dalam bahan pangan.
3.  Uji Organoleptik. Pengujian ini digunakan sebagai pendeteksian awal dalam menilai mutu untuk mengetahui  penyimpangan  dan  perubahan  dalam  produk  (BSN  2006).  Uji  organoleptik  yang akan diamati meliputi kenampakan, bau, daging dan tekstur. Lembar penilaian  yang digunakan untuk  penilaian  uji  organoleptik  berdasarkan  SNI  01-2696.1-2006.  Jumlah  panelis  yang diikutsertakan  pada  penelitian  adalah  30  mahasiswa  Fakultas  Perikanan  dan  Kelautan Universitas  Airlangga  yang  tidak  terlatih.  Sifat  pengujian  organoleptik  subjektif  karena  hanya mengandalkan indera dan kepekaan panelis (Adawyah 2011).
4.  Uji  pH.  Pengujian  dilakukan  menggunakan  pH  meter  (Eutech  pH  700).  Pengukuran  pH  daging fillet ikan  dengan  cara  menimbang  sampel  sebanyak  tiga  gram  kemudian  dilarutkan  dengan menggunakan  akuades  steril  sebanyak  50  mL.  Larutan  sampel  kemudian  diuji  dengan mencelupkan  elektroda  pH  meter.  Pengukuran  dilakukan  sebanyak  tiga  kali  untuk  mendapat hasil  pH  yang  akurat.  Daging  ikan  yang  sudah  busuk  memiliki  nilai  pH  yang  tinggi  disebabkan karena  adanya  senyawa  amoniak,  trimetilamin  dan  senyawa  volatile  lainnya  (Adawyah  2011; Febriana 2017).
5.  Uji Total Volatile Base Nitrogen (TVB-N). Sampel bahan baku berupa daging ikan seberat 2 gram dihomogenkan  dan  direndam  menggunakan  akuades  sebanyak  100  ml  selama  30  menit  lalu disaring.  Sampel  yang  sudah  dihomogenkan  ditambah  TCA  4%  dihomogenkan  menggunakan Vortex.  Asam  borat  sebanyak  1ml  dicampur  dengan  1  tetes methylred dan  1  tetes methylene blue pada  tengan  cawan Conway, kemudian  1  ml  filtrate  dan  1  ml  larutan  potasium  karbonat dimasukkan  pada  bagian  pinggir  cawan Conway lalu  dicampur.  Cawan Conway ditutup  lalu diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 2 jam. Larutan yang telah diinkubasi dititrasi dengan HCl 0,01 mol/liter.

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan  analisis  ragam  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) berdasarkan (Gaspersz 1994). Data TPC, kadar protein dan pH yang didapat diuji normalitas terlebih dahulu.  Data  dianalisis  secara  statistik  dengan  analisis  ragam (ANOVA)  apabila  data  telah  normal. Analisis  dilanjutkan  dengan  uji  lanjut Duncan apabila  hasil  ANOVA  berbeda  nyata.  Uji  Duncan bertujuan  untuk  membandingkan  perlakuan  mana  yang  menghasilkan  hasil  terbaik  (Kusriningrum 2012;  Adisty  2017).  Analisa  non  parametrik  yang  dilakukan  dalam  pengujian  organoleptik  adalah metode uji Kruskall Wallis (Mattjik dan Sumertajaya 2002).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Jumlah Total Bakteri
Total  Plate  Count merupakan  indikator  yang  paling  sering  digunakan  untuk  mengetahui populasi bakteri yang terdapat pada makanan. Metode ini tidak membedakan jenis dari bakteri, hanya digunakan  untuk  mendapatkan  informasi  umum  dari  kualitas  sanitasi  dari  produk,  bahan  baku, kondisi pengolahan dan masa simpan. Hasil penghitungan jumlah total bakteri fillet ikan bawal putih dengan menggunakan metode Angka Lempeng Total (ALT) ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1 Hasil rata-rata jumlah total bakteri (CFU/gram) fillet ikan bawal putih
Keterangan: SD = Standar Deviasi Notasi  yang  ditunjukkan  pada superscript yang  berbeda  pada  baris  yang  sama menunjukkan  terdapat  perbedaan  (p<0,05)  sedangkan superscript yang  sama  pada baris yang sama menunjukkan tidak terdapat perbedaan (p>0,05)
Penghitungan  jumlah  total  bakteri  merupakan  salah  satu  parameter  yang  penting  dalam
Waktu Pengamatan Perlakuan ± SD P0 (0%) P1 (5%) P2 (10%) P3 (15%) Hari ke-0 6.22x10 4 a ±0.07  6.22x10 4 a ±0.06 6.22x10 4 a ±0.12 6.22x10 4 a ±0.04 Hari ke-3 7.29x10 4 a ±0.008  6.82x10 4 b ±0.007  6.57x10 4 c ±0.006 6.45x10 4 c ±0.007 Hari ke-6 9.46x10 5 a ±0.11  8.99x10 4 b ±0.02 8.82x10 4 b ±0.02 8.36x10 4 b ±0.02 Hari ke-9 1.11x10 6 a ±0.02  1.06x10 6 a ±0.01 1.04x10 6 a ±0.08 9.93x10 6 a ±0.01
proses  penyimpanan  karena  berpengaruhi  terhadap  jumlah  bakteri  pada  produk fillet .  Data  pada Tabel 1 menunjukkan bahwa selama proses penyimpanan pada suhu dingin, nilai rata-rata pengujian jumlah total bakteri fillet ikan bawal putih setiap perlakuan mengalami peningkatan pada tiap hari dan mencapai  jumlah  tertinggi  pada  saat  penyimpanan  hari  terakhir.  Nilai  rata-rata  jumlah  total  bakteri tertinggi pada hari ke 0 (awal) hingga pada hari ke 9 (akhir) dihasilkan oleh perlakuan 0 (kontrol) yaitu 6.22x10 4 hingga  1.11x10 6 .  Sedangkan  nilai  rata-rata  jumlah  total  bakteri  terendah  pada  hari  ke  0 (awal)  hingga  hari  ke  9  (akhir)  dihasilkan  oleh  perlakuan  ke-3  (penambahan  madu  15%)  yaitu 6.22x10 4 hingga 9.93x10 5 . Hasil analisis sidik ragam menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang nyata  (P<0,05)  terhadap  jumlah  total  bakteri fillet ikan  bawal  putih  dengan  penambahan  madu  dan tanpa penambahan madu.
Berdasarkan  hasil  Uji  Jarak  Berganda  Duncan  ( Duncan’s  Multiple  Range  Test )  maka diketahui  bahwa  jumlah  bakteri  pada  hari  ke  0  seluruh  perlakuan  (0%,  5%,10%  dan  15%)  tidak terdapat  perbedaan  yang  nyata  (p>0.05).  Sementara  pada  perlakuan  hari  ke  3  dan  6  terdapat perbedaan (p<0.05). Pada Hari ke 3 pada perlakuan penambahan madu 0% (P0), 5% (P1) dan 10% (P2) terdapat perbedaan  yang nyata, sementara pada perlakuan penambahan  madu 10% (P2) dan 15%(P3)  tidak  terdapat  perbedaan.  Pada  hari  ke  6  terdapat  perbedaan  hanya  pada  perlakuan  0% (P0)  dan    perlakuan  penambahan  madu  5%  (P1),  sementara  pada  konsentrasi  5%  (P1),  10%  (P2) dan 15% (P3) tidak terdapat perbedaan yang nyata (p>0,05).  Sama halnya dengan hari ke 0, hari ke 9 seluruh perlakuan (0%, 5%,10% dan 15%) tidak terdapat perbedaan yang nyata (p>0,05).

## Uji Protein
Analisis  protein  umumnya  bertujuan  untuk  mengukur  kadar  protein  dalam  bahan  makanan menggunakan metode Kjeldahl.
Tabel 2 Kadar Protein Fillet Ikan Bawal Putih
Keterangan: SD = Standar Deviasi Notasi  yang  ditunjukkan  pada superscript yang  berbeda  pada  baris  yang  sama menunjukkan  terdapat  perbedaan  (p<0,05)  sedangkan superscript yang  sama  pada baris yang sama menunjukkan tidak terdapat perbedaan (p>0,05)
Uji protein merupakan salah satu parameter yang cukup penting dalam karena berpengaruhi terhadap  kualitas  pada  produk fillet .  Data  pada  Tabel  2  menunjukkan  bahwa  selama  proses penyimpanan  pada  suhu  dingin,  nilai  rata-rata  uji  protein fillet ikan  bawal  putih  setiap  perlakuan mengalami  penurunan  pada  tiap  hari  dan  mencapai  jumlah  terendah  pada  saat  penyimpanan  hari terakhir.  Nilai  rata-rata  kadar  protein  terendah  pada  hari  ke  0  (awal)  hingga  pada  hari  ke  9  (akhir) dihasilkan  oleh  perlakuan  0  (kontrol)  yaitu  19.1140%  hingga  11.6001%.  Sedangkan  nilai  rata-rata kadar protein tertinggi pada hari ke 0 (awal) hingga hari ke 9 (akhir) dihasilkan oleh perlakuan ke-3 (penambahan madu 15%) yaitu 19.5482% hingga 11.7087%.
Hasil analisis sidik ragam menunjukkan bahwa terdapat perbedaan yang nyata (P<0,05) hari ke 0 pada semua perlakuan dan tidak memberi pengaruh yang nyata (p>0,05) hari ke 3, 6 dan 9 pada semua perlakuan terhadap kadar protein fillet ikan bawal putih dengan penambahan madu dan tanpa penambahan madu.
Berdasarkan  hasil  Uji  Jarak  Berganda  Duncan  ( Duncan’s  Multiple  Range  Tes t)  maka diketahui bahwa kadar protein pada hari ke 0 pada perlakuan penambahan madu 0% (P0), 5% (P1) dan  10%  (P2)  terdapat  perbedaan  yang  nyata(p<0.05),  sementara  pada  perlakuan  penambahan madu 10% (P2) dan 15% (P3) tidak terdapat perbedaan yang nyata (p>0.05). Sementara pada hari ke  3,  6  dan  9  seluruh  perlakuan  (0%,  5%,10%  dan  15%)  tidak  terdapat  perbedaan  yang  nyata (p>0.05).

## Nilai pH
Nilai  pH  pada  produk  hasil  perikanan  merupakan  salah  satu  indikator  mutu  yang  cukup penting  (Febriana  2017).  Uji  pH  bertujuan  untuk  mengetahui  tingkat  kesegaran  ikan  pada  saat
Waktu Pengamatan Perlakuan ± SD P0 (0%) P1 (5%) P2 (10%) P3 (15%) Hari ke-0 19.0606 a ±0.31 19.2193 ab ±0.17 19.4467 b ±0.18 19.5018 b ±0.26 Hari ke-3 17.5792 a ±0.79 17.7429 a ±1.07 17.7605 a ±1.30 17.9223 a ±1.05 Hari ke-6 14.2309 a ±1.67 14.2547 a ±1.26 14.2677 a ±1.71 14.2845 a ±1.32 Hari ke-9 11.3887 a ±0.61 11.4890 a ±0.96 11.5616 a ±0.91 11.5642 a ±0.91
penyimpanan suhu dingin. Nilai pH fillet ikan bawal putih ditunjukkan pada Tabel 3. Nilai pH masing- masing  perlakuan  terus  mengalami  penurunan  dari  awal  penyimpanan  hingga  akhir  penyimpanan. Pada  uji  Anova  nilai  pH  pada  perlakuan  penambahan  madu  memberikan  pengaruh  yang  nyata (p<0.05) hari ke 3, 6 dan 9 pada semua perlakuan dan tidak memberi pengaruh yang nyata (p>0.05) hari ke 0 pada semua perlakuan.
Berdasarkan  hasil  Uji  Jarak  Berganda  Duncan  ( Duncan’s  Multiple  Range  Test )  maka diketahui  bahwa  pH  pada  hari  ke  0  seluruh  perlakuan  (0%,  5%,10%  dan  15%)  tidak  terdapat perbedaan  yang nyata (p>0.05). Sementara pada perlakuan hari ke 3 ,6 dan 9 terdapat perbedaan (p<0.05).  Pada  Hari  ke  3  pada  perlakuan  penambahan  madu  0%  (P0)  dan  5%  (P1)  dan  10%  (P2) tidak  terdapat  perbedaan  yang  nyata  (p>0.05)  dan  terdapat  perbedaan  nyata  (p<0,05).    dengan perlakuan  penambahan  madu  dengan  konsentrasi  15%  (P3).  Pada  hari  ke  6  terdapat  perbedaan hanya  pada perlakuan 5% (P0), 10% (P1) dan 15%  (P3) dan tidak terdapat perbedaan  yang nyata pada perlakuan control (P0) dan penambahan madu 5% (P1). Pada hari ke 9 pada perlakuan (0%, 5%,10%)  tidak  terdapat  perbedaan  yang  nyata  (p>0,05)  dan  terdapat  perbedaan  pada  konsentrasi 15%.
Tabel 3 Hasil Rata-rata Perhitungan pH (%) fillet ikan bawal putih Waktu Pengamatan Perlakuan ± SD P0 (0%) P1 (5%) P2 (10%) P3 (15%) Hari Ke 0 7.20 a ±0.07 7.15 a ±0.04 7.02 a ±0.26 7.17 a ±0.15 Hari ke 3 6.93 a ±0.13 6.97 a ±0.11 7.07 a ±0.09 7.23 b ±0.04 Hari ke 6 6.90 a ±0.11 6.94 a ±0.11 6.99 ab ±0.18 7.14 b ±0.08 Hari ke 9 6.76 a ±0.11 6.734 a ±0.14 6.674 a ±0.28 6.19 b ±0.11
Keterangan: SD = Standar Deviasi Notasi  yang  ditunjukkan  pada superscript yang  berbeda  pada  baris  yang  sama menunjukkan  terdapat  perbedaan  (p<0.05)  sedangkan superscript yang  sama  pada baris yang sama menunjukkan tidak terdapat perbedaan (p>0,05)

## Nilai Organoleptik
Pengujian organoleptik pada fillet ikan bawal putih meliputi tiga parameter yaitu kenampakan, bau dan tekstur. Parameter kenampakan terdiri dari nilai 9 (warna spesifik jenis, cemerlang), nilai 7 (warna spesifik jenis, kurang cemerlang), nilai 5 (mulai berubah warna, kusam), nilai 3 (bagian pinggir agak kehijauan, kusam), dan nilai 1 (warna kehijauan merata).
Parameter  bau  terdiri  dari  nilai  9  (segar,  spesifik  jenis),  nilai  7  (netral),  nilai  5  (apek  sedikit tengik),  nilai  3  (asam,  sedikit  bau  amoniak,  tengik),  dan  nilai  1  (amoniak  dan  busuk  jelas  sekali). Parameter  tesktur  terdiri  dari  nilai  9  (padat,  kompak  dan  elastis),  nilai  7  (padat,  kurang  kompak, kurang  elastis),  nilai  5  (agak  lembek,  kurang  elastis,  sedikit  berair),  nilai  3  (lembek,  tidak  elastis, berair) dan nilai 1 (Sangat lembek, berair).
Pada  uji  organoleptik  jumlah  panelis  yang  digunakan  yakni  berjumlah  tiga  puluh  orang.  Nilai rata-rata  organoleptik  udang  tertera  pada  Tabel  4.  Hasil  uji  Kruskal-Wallis  menunjukan  pada parameter  kenampakan,  bau  dan  tekstur  memiliki  nilai  0.000.  Semua  parameter  memiliki  nilai (P<0.05). Hasil akhir dari uji Kruskall Wallis adalah nilai P value, yaitu apabila nilainya < batas kristis (0,05) maka dapat ditarik kesimpulan statistik yaitu P0, P1, P2 dan P3 memberikan pengaruh nyata pada parameter organoleptik (kenampakan, bau dan tekstur).
Tabel 4 Nilai rata-rata organoleptik Organoleptik ± SD Parameter Perlakuan P0 P1 P2 P3 Jam ke 0 10 0 10 0 10 0 10 Kruskal- wallis Kenampakan  8,7±1,01  3±0,58  7,9±1,00  3,8±0,61  8,6±1,00  4,2±0,67  8,4±1,00  4,3±0,66 0.000 Bau 8,7±0,43  2,9±0,95  8,4±0,49  3,4±0,95  8,7±3,44  5,6±0,95  7,8±0,66 4±0,95 0.000 Tekstur 8,9±0,3  3±0,58 9±0,34  3,6±0,56  8±0,69  3,4±0,57  7,8±0,66  3,5±0,57 0.000

## UJI TVB-N
Uji Total  Volatile  Base  Nitrogen (TVB-N)  adalah  salah  satu  metode  pengukuran  untuk menentukan  kesegaran  ikan  yang  didasarkan  pada  akumulasi  senyawa-senyawa  basa  seperti amoniak,  trimetialamin,  dan  senyawa  volatile  lainnya  yang  menguap.  Berbagai  macam  senyawa tersebut akan terakumulasi pada daging sesaat setelah ikan mati. Akumulasi ini terjadi akibat reaksi biokimia post  mortem dan  aktivitas  mikroba  pada  daging.  Berbagai  macam  senyawa  yang terakumulasi tersebut dapat digunakan untuk mengukur tingkat kesegaran ikan Semakin tinggi nilai TVBN menunjukkan mutu daging yang semakin menurun. TVBN adalah sebuah uji untuk mengetahui tingkat kebusukan (Etienne 2005).
Tabel 5 Rata-rata nilai uji Total Volatle Base Nitrogen TVBN P0 ± SD P1 ± SD P2 ± SD P3 ± SD Hari-0 1.42 a ±0.148 1.03 b ±0.068 0.91 b ±0.075 0.90 b ± 0.159
Keterangan: SD = Standar Deviasi Notasi  yang  ditunjukkan  pada superscript yang  berbeda  pada  baris  yang  sama menunjukkan  terdapat  perbedaan  (p<0,05)  sedangkan superscript yang  sama  pada baris yang sama menunjukkan tidak terdapat perbedaan (p>0,05)
Berdasarkan  hasil  uji  anova,  pada  hari  ke-0  terdapat  perbedaan  kadar  nitrogen  dari  setiap perlakuan  karena  nilai  signifikansi  <0.05.  Sedangkan  pada  uji  lanjut  Duncan  TVBN  terdapat perbedaan  nyata  pada  perlakuan  kontrol  (P0)  dan  perlakuan  penambahan  madu  dengan konsentrasi 5% (P1) dan tidak terdapat perbedaan nyata pada perlakuan P1, P2, dan P3.

## Pembahasan
Pengukuran  tingkat  kesegaran  ikan  dapat  dilihat  dari  banyaknya  bakteri  yang  berkembang pada  ikan  dengan  cara  menghitung  jumlah  bakteri  yang  ditumbuhkan  pada  suatu  media  agar  dan diinkubasi selama 9 hari pada suhu dingin. Hasil perhitungan total bakteri fillet ikan bawal putih pada semua perlakuan (P0, P1, P2, dan P3) mengalami peningkatan mulai dari hari ke-0 hingga hari ke-9. Semakin tinggi konsentrasi madu maka nilai bakteri akan semakin menurun. Menurut Raharjo (2010) semakin tinggi konsentrasi madu maka semakin rendah tingkat kenaikan jumlah total mikroba. Madu juga berperan sebagai antibakteri yang cukup baik.  Madu bersifat antimikroba karena tersusun atas beberapa molekul gula seperti glukosa dan fruktosa serta sejumlah mineral dan vitamin. Kandungan glukosa  dan  fruktosa  madu  yang  sangat  tinggi  dengan  demikian  menyebabkan  larutan  sangat hipertonis bila dibandingkan dengan lingkungan di dalam tubuh bakteri , sifat ini akan menyebabkan lisisnya bakteri akibat dehidrasi yang berat karena efek osmosis (Yuliati 2017).
Aktivitas  antibakteri  yang  dimiliki  madu  disebabkan  karena  beberapa  hal.  Menurut  Molan (1992) dalam Suhaedi (2015) diantaranya adalah  efek osmotik, keasaman, hidrogen  peroksida dan faktor  fitokimia.  Nilai  aktivitas  air  madu  adalah  sekitar  0.56-0.62.  Aktivitas  air  madu  terlalu  rendah untuk mendukung pertumbuhan banyak spesies. Sehingga apabila dijadikan sebagai pengawet pada daging,  maka  mikroba  akan  kesulitan  untuk  tumbuh.  Selain  itu  madu  juga  memiliki  karakter  yang cukup asam (pH 3.2-4.5), yang mana ini cukup rendah untuk menjadi penghambat bakteri.
Hasil  perhitungan Total  Plate  Count (TPC)  selama  sembilan  hari  penyimpanan  dalam  suhu dingin  dapat  dilihat  pada  Tabel  5.  Dari  hasil  tersebut  pada  hari  ke-3  diperoleh  hasil  terbaik  pada sampel berturut-turut P2 dan P3 konsentrasi madu 10% dan 15% dengan jumlah rata-rata 6.57x10 4 dan 6.45x10 4 . Hal tersebut dikarenakan semakin tinggi konsentrasi madu maka jumlah bakteri akan semakin sedikit. Hal tersebut sesuai dengan Raharjo (2010) yang menyatakan bahwa semakin tinggi konsentrasi madu maka semakin rendah tingkat kenaikan jumlah total mikroba.
Pada hari ke-6 nilai TPC  pada  perlakuan kontrol  9.46x10 5 CFU/gram, melebihi syarat  yang dapat diterima konsumen yaitu maksimal 5.0x10 5 CFU/gram (BSN 2014). Sedangkan nilai TPC pada perlakuan 5%, 10% dan 15% pada hari ke-6 adalah 8.99 x 10 4 CFU/gram, 8.82 x 10 4 CFU/gram dan 8.36 x 10 4 CFU/gram masih memenuhi syarat kelayakan konsumen. Pada hari ke-9 nilai TPC pada setiap  perlakuan  sudah  melebihi  jumlah  nilai  TPC  yang  dapat  diterima  oleh  konsumen.  Terdapat peningkatan  yang  signifikan  pada  hari  terakhir.  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan  Hosseini et  al . (2016) dalam Febriana (2017) bahwa semakin lama masa simpan, maka pertumbuhan bakteri akan semakin meningkat. Menurut Nafisyah (2010) dalam Adisty (2017)  bakteri pembusuk dapat tumbuh disebabkan  karena  dipengaruhi  oleh  suhu  penyimpanan  ikan.  Pada  suhu  37°C  beberapa  bakteri dapat  memperbanyak  diri  mulai  1,000  hingga  10,000,000  individu  dalam  tujuh  jam.  Dengan menggunakan  perlakuan  menggunakan  suhu  dingin,  yakni  pada  suhu  4-7ºC  maka  pertumbuhan bakteri akan terhambat.
Penambahan  madu  memberikan  hasil  yang  lebih  baik  dibandingkan  perlakuan  tanpa  madu (kontrol).  Molan  (1992)  dalam Astrini et  al. (2014)  menjelasakan  bahwa  yang  berperan  dalam aktivitas  antibakteri  pada  madu  adalah  tekanan  osmotik,  keasaman,  hidrogen  peroksida  dan  faktor fitokimia. Keempat faktor tersebut baik bekerja sendiri-sendiri atau bersama-sama akan menghambat atau  mengurangi  pertumbuhan  sebagian  besar  mikroorganisme.  Menurut  Suhaedi  (2015)  hal  ini disebabkan  madu  memiliki  beberapa  senyawa  fitokimia  diduga  juga  berperan  pada  aktivitas antimikroba madu.
Efek antibakteri diduga disebabkan oleh beberapa faktor antibakteri yang terdapat di dalamnya. Kandungan glukosa dan fruktosa dalam madu sangat tinggi dengan demikian menyebabkan larutan sangat  hipertonis  bila  dibandingkan  dengan  lingkungan  di  dalam  tubuh  bakteri sifat  ini  akan menyebabkan lisisnya bakteri akibat dehidrasi yang berat karena efek osmosis (Yuliati 2017).
Pada  sampel fillet bawal  putih  diperoleh  jumlah  kadar  protein  awal  yakni  pada  hari  ke  0 didapatkan hasil rata-rata 19.30%  yang sesuai dengan standar mutu yang telah ditetapkan SNI 01- 2973-2009  yaitu  minimal  9%.  Pengujian  kadar  protein  pada  hari  ke  3,  6  dan  9  dengan  perlakuan kontrol dan penambahan konsentrasi madu 5%, 10% dan 15% mengandung rata-rata 17.5%, 14.2%, dan 11.5% kadar protein  yang terdapat didalamnya  yang artinya sesuai dengan standar baku  yang telah ditetapkan oleh SNI 01-2973- 2009 yaitu minimal 9%. Hasil pengujian protein yang didapatkan telah memenuhi kadar protein yang baik sesuai dengan standar baku yang telah ditetapkan oleh SNI 01-2973-2009.  Protein  pada fillet ikan  bawal  putih  hari  ke  0  sampai  hari  ke  9  dengan  perlakuan kontrol dan penambahan madu 5%, 10%, dan 15% menunjukkan terdapat peningkatan setiap harinya meskipun  tidak  terlalu  seignifikan.  Hal  tersebut  tidak  sesuai  dengan  hasil  penelitian  Antony et.  al. (2006)  yang  menyatakan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  madu  maka  semakin  rendah  kadar protein  pada  daging  kalkun  kemas.  Hal  tersebut  dikarenakan madu  tidak mengandung  bahan  yang mengandung protein.
Fillet yang sudah tidak segar memiliki pH tinggi (basa) dibandingkan fillet yang masih segar. Hal tersebut  disebabkan  karena  timbulnya  senyawa  yang  bersifat  basa,  seperti  amoniak,  trimetilamin, dan  senyawa  volatil  lainnya.  Nilai  pH  merupakan  indikator  yang  dapat  dipercaya  untuk mengetahui tingkat  kesegaran  produk  pangan.  Nilai  pH  pada fillet ikan  bawal  putih  dengan  penambahan  madu mengalami  penurunan.  Menurut  Stein  (2005)  dalam Febriana  (2017)  menurunnya  nilai  pH disebabkan  oleh  banyaknya  asam  laktat  yang  terakumulasi.  Penumpukan  asam  laktat  ini  terjadi karena adanya proses penguraian glikogen pada daging ikan yaitu perubahan glikogen menjadi asam laktat  pada  proses  glikolisis.  Hal  tersebut  sesuai  dengan  pernyataan  Erlangga  (2009)  pada kemunduran  mutu fillet ikan  lele  dumbo  pada  penyimpanan  suhu chilling dengan  perlakuan  cara kematian bahwa setelah ikan mati akan terjadi perubahan biokimia pada jaringan tubuhnya, ditandai dengan menurunnya pH akibat dari penumpukan asam laktat. Produk perikanan dapat diterima oleh konsumen dengan nilai pH sampai 6.8, akan tetapi dapat dikategorikan busuk apabila nilai pH diatas 7. Batas pH penerimaan konsumen pada umumnya memiliki rentan 6.8-7.0 (Erkan et. al. 2011). Hasil  uji  organoleptik  pada fillet ikan  bawal  putih  tanpa  penambahan  madu  dan  dengan penambahan  madu  yang  meliputi  semua  aspek  menunjukkan  bahwa  pada  hari  ke  0  masih  dapat diterima  oleh  panelis  yang  sesuai  dengan  SNI  nilai  organoleptik  minimal  7.  Kenampakan fillet ikan bawal  putih  pada  hari  ke-0  warna  spesifik  jenis,  cemerlang,  bau  segar  dan  spesifik  jenis  ikan sedangkan tekstur sangat padat dan kompak. Tekstur padat dan kompak dikarenakan penambahan madu  pada fillet bawal  putih.    Hal  tersebut  dikarenakan  penambahan  madu  dapat  mengurangi aktifitas  bakteri  yang  akan  mengurangi  kekompakan  pada fillet ikan  bawal  putih  pada  saat  proses penyimpanan  suhu  dingin.  Menurut  Suhaedi  (2015)  di  dalam madu  terdapat  senyawa  fitokimia  dan hidrgen  peroksida  yang  dapat  dapat  mencegah  dan  mengontrol  pertumbuhan  mikroba,  sehingga akan  menurunkan  komponen  basa  nitrogen  dalam  daging  dan  basa-basa  nitrogen  lain  yang merupakan  hasil  kerja  bakteri  dan  enzim  autolitik  selama  proses  pembusukan.  Kedua  Senyawa tersebut yang dapat memempertahankan kualitas daging yang diawetkan menggunakan madu.
Hasil  uji  organoleptik  selama  penyimpanan  10  hari  semua  parameter  masih  dapat  diterima, namun telah pada batas minimum nilai SNI 2717.1:2009 yaitu 7. Kenampakan pada hari ke 10 utuh, rapih,  warna  sedikit  kusam.  Menurut  Gustini et  al. (2014)  perubahan  warna  pada  daging  ikan disebabkan  pigmen  karotenoid  yang  mengalami  oksidasi  menjadi  pudar  atau  kusam.  Pemudaran warna  disebabkan  oleh  autooksidasi  ikatan  ganda  yaitu  oksidasi  myoglobin  yang  berwarna  merah terang  menjadi  metymyoglobin  yang  berwarna  coklat  menyebabkan  ikan  tampak  lebih  kusam (SIMPATIK DKP 2008).
Bau fillet ikan bawal putih pada hari ke 10 berbau sedikit asam dan bau amoniak. Hal tersebut dikarenakan  perombakan  protein  menjadi  senyawa-  senyawa  volatil  bebas  oleh mikroba  pembusuk (Herliany et  al ,  2013).  Bau  tersebut  berhubungan  dengan  hadirnya  beberapa  senyawa  volatil  yang
diproduksi oleh bakteri pembusuk termasuk TMA, sulfida, alkohol, keton, aldehid dan asam organik yang diketahui bertanggung jawab terhadap timbulnya bau amis dan amoniak (Gram et al. 2002). Total  Volatile  Base  Nitrogen (TVBN)  merupakan  sebuah  pengujian  untuk  menentukan  tingkat kesegaran pada  ikan (Huss  1988). Basa  nitrogen  yang bersifat volatil meningkat jumlahnya selama proses pembusukan ikan (Vyenke et al. 1963). TVBN adalah komponen penting yang menyediakan perhitungan laju kebusukan. Tingkat TVBN pada ikan maupun produk perikanan digunakan sebagai indikator kebusukan melalui aktivitas bakteri (Gram et al. 2002). Jumlah rata-rata awal TVBN kontrol adalah sebesar 1.42 mgN/100 gram, pada konsentrasi 5 % 1,03 mgN/100 gram, 10% 0,91 mgN/100 gram,  dan  15%  dengan  jumlah  0,90  mgN/100  gram.  Semua  mengalami  penurunan  jumlah  TVBN setiap  perlakuan  penambahan  konsentrasi  madu.  Peningkatan  jumlah  TVBN  berbanding  lurus dengan penambahan jumlah bakteri. Semakin tinggi nilai TVBN maka semakin  tinggi pula nilai total bakteri  pada fillet. Hal  tersebut  dikarenakan  aktivitas  bakteri  dapat  menguraikan  senyawa makromolekul  menjadi  senyawa  yang  lebih  sederhana.  Konsentrasi  TVBN  meningkat  disebabkan adanya  proses  degradasi  protein  seperti  amoniak,  histamin,  dan  Trimetilamin  (Susanti  dan Christianto 2016).  Berdasarkan  standar  penerimaan  konsumen,  semua  perlakuan  masih  dalam rentang yang dapat diterima konsumen. Jumlah TVBN yang masih diterima oleh konsumen adalah 20 mgN/100 mg.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  analisis  pada  penelitian  ini,  dapat  disimpulkan  bahwa  penambahan  madu dengan konsentrasi yang berbeda berpengaruh terhadap masa simpan fillet ikan dengan konsentrasi 5% mampu menghambat pertumbuhan bakteri selama masa transportasi. Perlu dilakukan penelitian lanjutan  mengenai  aplikasi  madu  dengan  konsentrasi  berbeda  pada  masa  transportasi  pada penyimpanan 6 hari.

## DAFTAR PUSTAKA
Adawyah R. 2011. Pengolahan dan Pengawetan Ikan. Jakarta (ID): Bumi Aksara. Adisty O. 2017 Pengaruh edible coating gelatin dengan minyak atsiri daun sirih ( piper botle ) terhadap mutu  sensoris  dan  masa  simpan fillet ikan  gurami  ( osphronemus  gouramy ).  Skripsi.  Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga
Antony S, Rieck JR, Acton JC, Han IY, Halpin EL, Dawson PL. 2006. Effect of dry honey on the self life of packaged turkey slice. Poultry Science 85: 1811-1820
Astrini  D,  Wibowo  MS,  Nugrahani  I.  2014.  Aktivitas  antibakteri  madu  pahit  terhadap  bakteri  gram negatif  dan  gram  positif  serta  potensinya  dibandingkan  terhadap  antibiotik  Kloramfenikol, Oksitetrasiklin dan Gentamisin. Acta Pharmaceutica Indonesia , (39) 3 & 4: 75
[BSN] Badan Standardisasi Nasional. 2006. Fillet Kakap Beku. Standar Nasional Indonesia No. SNI 01-2696.1-2006 hal. 2.
[BSN] Badan Standarisasi Nasional. 2014. Udang Kupas Mentah Beku (SNI 3457: 2014). Hal 12 l Erkan  N,  Tosun  SY,  Ulusoy  S,  Uretener  SG.  2011.  The  use  of  thyme  and  laurel  essential  oil treatments  to  extend  the  shelf  life  of  bluefish  ( Pomatomus  saltatrix )  during  storage  in  ice. Journal für Verbraucherschutz und Lebensmittelsicherheit . 6(1): 39-48.
Erlangga.  2009.  Kemunduran  Mutu  Fillet  Ikan  Lele  Dumbo  ( Clarias  gariepinus )  Pada  Penyimpanan Suhu Chilling Dengan  Perlakuan  Cara  Kematian.  Skripsi.  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu Kelautan. Institut Pertanian Bogor
Fardiaz S. 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan. Jakarta (ID): Raja Grafindo Persada Jakarta, 35-41. Febriana I. 2017. Pengaruh Konsentrasi Minyak Atsiri Daun Jeruk Purut ( Citrus hystrix ) pada Coating Gelatin  terhadap  Masa  Simpan Fillet Ikan  Kakap  Merah  ( Lutjanus Sp.).  Skripsi.  Fakultas Perikanan dan Kelautan. Universitas Airlangga.
Florensia S, Dewi P, Utami NR. 2012. Pengaruh Ekstrak Lengkuas pada Perendaman Ikan Bandeng terhadap Jumlah Bakteri. Life Science , 1 (2). Gasperz V. 1994. Metode Perancangan Percobaan Untuk Ilmu-ilmu Pertanian, Ilmu-ilmu Teknik, dan Biologi. Bandung (ID): CV. Armico.
Gram L, Ravn L, Rasch M, Bruhn JB, Christensen AB, Givskov M. 2002. Food spoilage—interactions between food spoilage bacteria. International journal of food microbiology , 78 (1-2): 79-97. Huss  HH.  1988.  Fresh  fish  quality  and  quality  changes:  a  training  manual  prepared  for  the FAO/DANIDA  Training  Programme  on  Fish  Technology  and  Quality  Control  (No.  29).  Food  & Agriculture Org.
Kusriningrum RS. 2012. Perancangan Percobaan Cetakan Ketiga. Pusat Penerbitan dan Percetakan Unair. Hal , 99 . Mattjik AA, Sumertajaya IM. 2002. Perancangan Percobaan dengan Aplikasi SAS dan Minitab . Bogor: IPB Press
Mundo  MA,  Olga  I.  Padilla-Zakour,  Worobo  RB.  2004.  Growth  inhibition  of  food  pathogens  and  food spoilage organisms by selected raw honeys. International Journal of Microbiology 97: 1-8
Nugraheni M.  2013. Pengetahuan Bahan Pangan Hewan.Yogyakarta (ID): Penerbit Graha Ilmu.
Raharjo  S.  2010.  Aplikasi  Madu  sebagai  Pengawet  Daging  Sapi  Giling  Segar  Selama  Proses Penyimpanan. Skripsi. Fakultas Pertanian. Universitas Sebelas Maret.
Samsundari S. 2007. Identifikasi ikan segar yang dipilih konsumen beserta kandungan gizinya pada beberapa pasar tradisional di Kota Malang. Jurnal Protein . 14: 41-49
[SIMPATIK  DKP]  Sistem  Informasi  Perhitungan  Statistik  Kelautan  dan  Perikanan  Departemen Kelautan  dan  Perikanan.  2008.  Data  produksi  perikanan  Indonesia  tahun  2004-2006. www.statistik.dkp.go.id. [14 Mei 2019]
Suhaedi.  2015.  Pengaruh  Aplikasi Madu Terhadap  Nilai  TBA  dan  TPC  Dangke  yang  Disimpan pada Suhu Dingin. Universitas Hasanuddin Makasar. Makasar.
Susanti RF, Christianto G. 2016. The Effect of filler addition and oven temperature to the antioxidant quality  in  the  drying  of Physalis  angulata fruit  extract  obtained  by  subcritical  water  extraction. IOP Conference Series: Materials Science and Engineering, 105 (1): 1-10.
Stein  T.2005.  Bacillus  subtilis  antibiotics:  structures,  syntheses  and  specific  functions. Molecular microbiology , 56 (4), 845-857.
[USDA] United States Departement of Agriculture. 2019. Central Search Results: Honey. diakses pada 14 Mei 2019. [internet]. Tersedia pada https://fdc.nal.usda.gov/fdc- app.html#/?query=ndbNumber:19296
Yuliati Y.2017. Literasi sains dalam pembelajaran IPA. Jurnal Cakrawala Pendas , 3 (2).
.