Uji Aplikasi Lactobacillus lactis sebagai Paraprobiotik pada Budidaya Udang Vanamei ( Litopenaeus vannamei ) : Aspek Pertumbuhan Dan Imunitas
Subagiyo 1 *, Sebastian Margino 2 , Triyanto 3 , Sugeng Widada 4
1 Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Jacub Rais, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia
2 Departemen Mikrobiologi Pertanian, Fakultas Pertanian Universitas Gadjah Mada Jl. Flora Bulaksumur, Karang Malang, Caturtunggal, Depok, Sleman, Yogyakarta 55281 Indonesia 3 Jurusan Perikanan, Fakultas Pertanian Universitas Gadjah Mada Jl. Flora Bulaksumur, Karang Malang, Caturtunggal, Depok, Sleman, Yogyakarta 55281 Indonesia 4 Departemen Oseanografi, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Jacub Rais, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia
Email: subagiyo@lecturer.undip.ac.id

## Abstract

## Application of Lactobacillus lactis as Paraprobiotic on Vanamei Shrimp (Litopenaeus vannamei) Culture : the Growth and Immunity Aspects
Growth is one of the targets of shrimp cultivation. One factor that influences this growth is the level of  immunity.  Paraprobiotics  are  probiotics  that  have  been  inactivated,  making  it  easier  for production, storage and application. In this research, a test was carried out on the application of inactive Lactobacilus lactis to vanamei shrimp via pelleted feed (ad libitum). The experiment was carried out on a laboratory scale. There were 4 treatments, namely a single application of one of the 3 L. lactis isolates (isolate U.181, P.32 dan W-331)and a mixed of 3 L. lactis isolates. The application dose was 10 8 cells/gram of feed. The experiment was carried out for 35 days. Parameters observed included  weight  gain  and  cellular  immune  system  (total  number  of  hemocytes  and  hemocyte activity).The results of this study indicate that the application of the paraprobiotic L. lactis either alone or  in  the  form  of  a  mixture  of  the  three  can  improve  the  growth  performance  and  immunity  of vanamei shrimp, namely being able to increase growth between 32-38% higher than the control, as well  as  increasing  the  total  number  of  hemocytes  and  phagocytic  activity  respectively  between 27.4-35.6 % and 29.1-45.9 % higher than the control.
Keywords: paraprobiotic, Lactobacillus lactis, growth, immunity, shrimp

## Abstrak
Pertumbuhan merupakan salah satu target budidaya udang. Salah satu factor yang mempengaruhi pertumbuhan  adalah  tingkat  imunitas.  Paraprobiotik  adalak  probiotik  yang  telah diinaktifkan/dimatikan, sehingga memudahkan untuk produksi, penyimpanan hingga aplikasi. Pada penelitian ini telah dilakukan uji aplikasi Lactobacilus lactis inaktif sebagai paraprobiotik ke udang vanamei  melalui  pakan  pellet  ( ad  libitum ).  Percobaa  dilakukan  pada  skala  laboratorium  Ada  4 perlakuan, yaitu aplikasi tunggal salah satu dari 3 isolat L. lactis (isola t U.181, P.32 dan W-331) dan aplikasi campuran 3 isolat L. lactis . Dosis aplikasi yang dipilih adalah 10 8 sel/gram pakan. Percobaan dilakukan  selama  35  hari.  Parameter  yang  diamati  meliputi  pertambahan  berat  dan  sistem  imun seluler (total jumlah hemosit dan aktivitas hemosit). Hasil penelitian aplikasi paraprobiotik L. lactis baik secara  tunggal  atau  dalam  bentuk  campuran  ketiganya  dapat  meningkatkan  performa pertumbuhan  dan  imunitas  udang  vanamei.  Pada  kondisi  penelitian  ini,  apiikasi  paraprobiotik mampu  meningkatkan  pertumbuhan  antara  32-38  %  lebih  tinggi  daripada  kontrol,  serta
meningkatkan jumlah total hemosit dan aktivitas fagositosis berturut-turut sebesar antara 27,4-35,6 % dan 29,1-45,9 % lebih tinggi daripada kontrol.
Kata kunci : paraprobiotik, Lactobacillus lactis, pertumbuhan, Imunitas, Udang

## PENDAHULUAN
Budidaya udang vaname di Indonesia saat ini merupakan andalan sektor perikanan budidaya dan menjadi prioritas pengembangan akuakultur di Indonesia untuk meningkatkan perekonomian nasional. Potensi yang besar sumberdaya akuakultur Indonesia ditunjukkan oleh luas lahan indikatif mencapai 17,2 juta hektar dengan prakiraan nilai ekonomi sebesar USD 250 milyar per tahun (Putra, 2022).  Sebagai  komoditas  ekspor,  udang  menjadi  komoditas  perikanan  utama  ekspor  Indonesia dengan  nilai  USD1.997,49  juta  (https://kkp.go.id/djpdspkp/artikel/47840-ekspor-perikanan-tumbuh- 10-66-di-2022).  Sasaran  ekspor  udang  Indonesia  meliputi  Amerika,  Jepang,  Tiongkok,  Asean  dan Eropa (https://www.antaranews.com/berita/3254149/kkp-nilai-ekspor-udang-indonesia-ke-amerika- 1106-miliar-dolar).
Pada budidaya udang, aplikasi probiotik telah umum diterapkan sebagai strategi penyehatan udang  (El-Saadony, et  al, 2022).  Probiotik  dikenal  sebagai  mikrobia  hidup  yang  dalam  jumlah tertentu memberikan efek bermanfaat bagi inang, dalam ini ikan dan udang. Akan tetapi aplikasi probiotik dipengaruhi oleh vitalitas, dosis, dan durasi pemberian probiotik (de Almada et al., 2016). Oleh karena itu diusulkan aplikasi probiotik dalam bentuk inaktif yang selanjutnya dikenal sebagai paraprobiotik. Paraprobiotik didefinisikan sebagai sel mikroba yang tidak aktif (tidak dapat hidup) yang  memberikan  manfaat  kesehatan  bagi  konsumen  (Siciliano et  al .,  2021;  Mehta et  al., 2023). Paraprobiotik  bekerja  sebagai  imunostimulator,  antiinflamasi,  antioksidan,  dan  antimikroba,  serta pemacu pertumbuhan (El-Ghany, 2020; Luo et al., 2021). Beberapa pengujian aplikasi paraprobiotik juga telah dilakukan terhadap biota air. Hasil pengujian menunjukkan bahwa aplikasi paraprobiotik dapat meningkatkan pertumbuhan dan imunitas udang (Dash et al., 2015, Zheng et al., 2017; Luo et al., 2021)  dan  ikan  (Yassine et  al., 2021).  Apilkasi  paraprobiotik  di  bidang  peternakan  juga memberikan efek yang menguntungkan, seperti penambahan paraprobiotik ke dalam pakan ayam pedaging  dengan  takaran  0,6%  (b/v)  dapat  meningkatkan  performa  pertumbuhan  seperti Body weight gain (BWG) dan meningkatkan feed conversion ratio (FCR) serta kekebalan (Tukaram et al., 2022). Oleh karena itu, peneltian ini bertujuan untuk mendapatkan justifikasi efektivitas aplikasi L lactis sebagai  paraprobiotik  pada  budidaya  udang  vanamei  skala  laboratorium  pada  aspek pertumbuhan dan imunitas

## MATERI DAN METODE
Materi yang digunakan dalam penelitian meliputi 3 Isolat bakteri L. lactis yaitu isolat U-181, P- 32  dan  W-33.  Isolat-isolat  ini  diperoleh  dari  udang  liar  dan  telah  diseleksi  berdasarkan  karakter probiotik.  Masing-masing  isolate  selanjutkan  dikultur  dalam  media  de  Man  Rogosa  Sharpe  (MRS) broth pada skala Erlenmeyer selama 24 jam (Dehlink et al., 2007). Selanjutnya dilakukan pemanenen massa sel dengan cara sentrifugasi. Massa sel yang diperoleh kemudian dicuci dengan buffer fosfat saline untuk menghilangkan sisa-sisa medium, kemudian dihitung kepadatan selnya menggunakan teknik pengenceran-taburan. Massa sel dimatikan dengan teknik pemanasan di dalam water batch pada suhu 85 o C, selama 10 menit.
Empat  perlakuan  paraprobiotik  yang  diuji  dalam  penelitian  ini  yaitu  perlakuan  satu  jenis paraprobiotik (perlakuan Tunggal) dan perlakuan campuran dari 3 isolat paraprobiotik. Perlakuan Tunggal  meliputi  3  perlakuan  yaitu  paraprobiotik L.  lactis U-181,  P-32  dan  W-33.  Kontrol  untuk perlakuan paraprobiotik adalah pakan komersial yang tidak ditambah dengan paraprobiotik.
Suspensi  Paraprobiotik  dalam  larutan  NaCl  (0,9  %)  ditambahkan  ke  dalam  pakan  udang komersial  dengan  cara  disemprotkan  menggunakan  sprayer  secara  merata.  Kepadatan
paraprobiotik  dalam  pakan  ditetapkan  10 8 sel.g -1 pakan.  Selanjutnya  didiamkan  beberapa  saat agar suspensi bakteri meresap ke dalam pakan.  Penambahan paraprobiotik ke pakan dilakukan hanya pada saat akan digunakan.
Udang  vanname  yang  telah  diaklimatisasi  (Castex et  al., 2008)  dimasukkan  ke  dalam  bak pemeliharaan udang yang terbuat dari bahan polyethylene yang telah disterilkan menggunakan larutan hipoklorit (30%).  Air laut yang digunakan untuk  media pemeliharaan adalah air laut yang telah difilter. Aerasi dilakukan melalui 1 buah batu aerasi setiap bak. Aerasi dilakukan selama 24 jam. Permukaan  bak  ditutup  dengan  jaring  untuk  mencegah  agar  udang  tidak  meloncat  keluar. Pemberian pakan udang dilakukan sebanyak 3 % berat badan dalam 3 kali pemberian per hari.
Selama  penelitian  dilakukan  pengamatan  terhadap  jumlah  udang  uji  yang  mati.  Hasil pengamatan  ini  digunakan  untuk  menghitung  sintasan  (kelulushidupan)  udang.  Nilai  sintasan dihitung  sebagai  prosentase  jumlah  individu  udang  yang  bertahan  hidup  selama  waktu pemeliharaan. Berat udang diukur setiap 7 hari sekali selama 35 hari. Pada setiap bak dilakukan pengukuran  terhadap  5  ekor  udang.  Pertambahan  berat  merupakan  persentase  pertambahan berat udang dari awal penelitian sampai akhir pemeliharaan. Pertambahan berat dihitung dengan rumus menurut Far et al., (2009) sebagai selisih antara berat akhir dengan berat awal.
Performa sistem imun udang yang dianalisis dalam penelitian ini meliputi sistem imun seluler, yaitu jumlah total hemosit (THC) dan aktivitas fagositosis (AF). Analisis hematosit dilakukan dengan mengambil sampel hemolimfe udang, pengambilan hemolimfe dilakukan dari ventral sinus udang dengan prosedur menurut Partida-Arangure et al. (2013). Hemolimfe diambil menggunakan syringe steril  yang  telah  dibasahi  dengan  larutan  antikoagulan  (10%  sodium  sitrat).  Hemolimfe  kemudian ditempatkan pada beberapa tabung mikrotube untuk digunakan dalam penghitungan jumlah total hemosit dan aktivitas fagositosis. Jumlah total hemosit (THC) dihitung menggunakan hemositometer (Chotikachinda et  al., 2008).  Pengamatan  dan  penghitungan  THC  dilakukan  dengan  mikroskop cahaya.
Aktivitas Fagositosis ditentukan dengan metode menurut Sritunyalucksana et al . (2005) yang dimodifikasi. Hemolimfe sebanyak 20 µl ditambahan ke dalam 20 µl PBS yang ada di micro-well plate , kemudian ditambahkan 20 µl 10 8 sel ml -1 Bacillus subtilis (yang telah diinaktifkan dengan formalin 2%). Diambil 7 µl dan dibuat preparat apus pada object glass , difiksasi dengan 95% ethanol, kemudian dilakukan pengecatan dengan 10% Giemsa selama 20 menit. Preparat kemudian dicuci dengan air mengalir  dan  dikeringkan.  Aktivitas  fagositosisi  diamati  dibawah  mikroskop  cahaya.  Perhitungan persentase  aktivitas  fagositosis  (AF),  dihitung  sebagai  perbandingan  antara  jumlah  sel  yang  aktif dengan  jumlah  sel  yang  diamati.  Sedang  respon  perlakuan  dihitung  sebagai  persentase perbandingan perubahan nilai parameter yang diamati dengan nilai kontrol.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  nilai  kelulushidupan  (sintasan)  udang tertinggi terjadi pada perlakuan L. lactis U,181 dan mix U-P-W yaitu 90 %. Sedangkan untuk perlakuan L. lactis P-32 , L. lactis W-331 dan control masing-masing rata-rata sebesar 86,7 %. Hasil pengamatan visual terhadap morfologi udang yang mati tidak menunjukkan gejala terserang penyakit.
Pertumbuhan  pada  hakekatnya  adalah  pertambahan  berat  persatuan  waktu.  Pada penelitian  aplikasi  paraprobiotik  secara  tunggal  maupun  campuran  mampu  meningkatkan pertambahan  berat  udang  vannamei.  Berdasarkan  hasil  penelitian  terjadi  peningkatan pertambahan  berat  antara  133  %  -138  %,  sedangkan  pada  kontrol  menghasilkan  pertambahan berat  rata-rata  sebesar  100,7  %.  Sehingga  perlakuan  aplikasi  paraprobiotik  menghasilkan  respon peningkatan pertumbuhan antara 32 % - 37 %. Pertambahan berat tertinggi terjadi pada aplikasi paraprobiotik L.  lactis U-181.  Respon  peningkatan  pertumbuhan  oleh  aplikasi  paraprobiotik  juga ditunjukkan  oleh  beberapa  peneliti  seperti  aplikasi  heat  killed L.  plantarum (LP20)  meningkatkan
pertumbuhan dan feed efficiency ratio red sea bream ( Pagrus major ) (Dawood et al., 2015), aplikasi sel  mati Clostridium  butyricum CBG01  mampu  meningkatkan  kinerja  pertumbuhan  dan  tingkat kelangsungan  hidup P.  vannamei (Luo, et  al, 2021),  aplikasi  paraprobiotik Bacillus sp.  NP5 menunjukkan meningkatkan rata-rata bobot akhir, laju pertumbuhan spesifik (LPS) dan rasio konversi pakan (RKP) (Widanarni et al., 2022), aplikasi heat-inactivated Bacillus subtilis mampu meningkatkan performa  pertumbuhan  (berat  akhir,  pertambahan  berat  badan,  dan  laju  pertumbuhan  spesifik) striped catfish ( Pangasianodon hypophthalmus ) (Shawky et al., 2023). Meskipun demikian ada juga penelitian yang memberikan hasil yang berbeda yaitu aplikasi heat- inactivated L. plantarum pada konsentrasi pakan 10 8 cfu.g −1 tidak efektif meningkatkan parameter pertumbuhan Macrobrachium rosenbergii (Dash et al., 2015).
Hemosit  memainkan  peran  penting  pada  sistem  pertahanan  tubuh  krustacea  terutama pada  sistem  pertahanan  seluler  (Lin,  2010).  Hasil  penelitian  menunjukkan  perlakuan  pemberian paraprobiotik L. lactis memberikan respon peningkatan jumlah total hemosit, Jumlah total hemosit pada udang dengan perlakuan bervariasi antara 16,4.10 6 -7,5.10 6 sel.mL -1 , sedangkan pada kontrol sebesar 12,90 10 6 sel.mL -1 , atau perlakuan menghasilkan respon peningkatan jumlah total hemosit antara 27,4-35,6 %. Peningkatan tertinggi terjadi pada perlakuan L. lactis P-32. Peningkatan jumlah total hemosit oleh aplikasi paraprobiotik juga dilaporkan oleh Tung et al. (2009, 2010), Dash et al. (2015), dan Duc et al. (2016), dan komponen seluler dilaporkan oleh Maftuch et al. (2013).
Aktivitas  fagositosis  hemosit  udang  pada  perlakuan  paraprobiotik  selama  35  hari  aplikasi bervariasi  antara  39,3-44,45  %,  sedangkan  pada  kontrol  sebesar  30,45  %.  Berdasarkan  nilai  ini menunjukkan  perlakuan  paraprobiotik  mampu  menghasilkan  respon  peningkatan  aktivitas fagositosis sebesar 29,1-45,9 %. Respon tertinggi terjadi pada perlakuan L. lactis P.32
Berdasarkan hasil penelitian ini menunjukkan ke 3 paraprobiotik L. lactis yang berbeda yaitu U- 181, P.32 dan W-331 memberikan variasi respon pertumbuhan dan imunitas yang berbeda. Variasi respon  oleh  ini  dimungkinkan  karena  mekanisme  kerja  paraprobiotik  terjadi  melalui  mekanisme interaksi  antara  komponen  sel  terutama  dinding  sel  dan  struktur  tambahan  yang  ada  di  sisi  luar dinding sel dengan sel intestinum. Maka jika ada variasi struktur dinding sel akan memberikan efek yang berbeda. Menurut Sengupta et al., (2013) terdapat spesifisitas strain pada faktor permukaan sel.  Pada  permukaan  sel  bakteri  terdapat  karakteristik  struktur  yang  dikenal  sebagai microbe- associated molecular patterns (MAMP), yang biasanya adalah komponen dinding sel seperti LPS, PG, LTA serta WTA dan juga lipid, lipoprotein, protein dan asam nukleat. Menurut Chapot-Charter
a b
Gambar 1. Pertambahan  berat  dan  sintasan  (kelulusahidupan)  udang  vanamei  pada  aplikasi paraprobiotik L lactis selama 35 hari kultur.
Gambar 2. Jumlah  total  hemosit  (THC)  dan  aktivitas  fagositosis  hemsosit  udang  vanamei  pada aplikasi paraprobiotik L lactis selama 35 hari kultur.
dan Kulakauskas (2014) bakteria dicirikan oleh adanya variasi intraspesies yang ekstensif. Dinding sel BAL merupakan bakteri gram positif memiliki susunan makromolekul yang kompleks. Dinding sel ini terdiri  dari  peptidoglikan  dan  struktur  aksesorisnya  berupa  glikopolimer  seperti  asan  teikoat, polisakarida dan protein. Lapisan peptidoglikan bersifat dinamis selama pertumbuhan sel. Struktur PG merupakan  hasil  dari  proses  biosintesis  yang  kompleks,  reaksi  maturasi  dan  degradasi.  Schar- Zammaretti dan Ubbink (2003) melaporkan dalam penelitiannya bahwa L. johnsonii DSM20533 pada permukaan luar didominasi oleh komponen polisakarida netral, tetapi pada L. johnsonii ATCC332 didominasi  oleh  asam  (Lipo)  teikoat,  sedangkan  pada  L.  johnsonii  ATCC33200  didominasi  oleh poliskarida anionik. Perbedaan pada tingkat strain juga ditunjukkan pada L. helveticus ATCC12046 dan L.  helveticus  ATCC15009 ,  pada  ke  2  strain  ini  permukaan  luar  didominasi  oleh  polisakarida anionik  tetapi  memiliki  karakter  polimer  yang  berbeda  yaitu  yang  pertama  bersifat  heterogen, panjang dan yang ke dua memiliki konformasi padat. Berdasarkan penjelasan tersebut diatas maka dimungkinkan terjadi variasi respon pertumbuhan dan imunitas pada perlakuan paraprobiotik yang berasal dari 3 isolat L. lactis yang digunakan dalam penelitian ini.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa aplikasi paraprobiotik L. lactis pada konsentrasi  10 8 cfu.gram -1 pakan,  baik  secara  tunggal  atau  dalam  bentuk  campuran  ketiganya, dapat meningkatkan pertumbuhan dan imunitas udang Vanamei. Pada kondisi penelitian ini terjadi peningkatan  pertumbuhan  antara  32  %  -  38  %  lebih  tinggi  daripada kontrol,  serta  meningkatkan jumlah total hemosit dan aktivitas fagositosis berturut-turut antara 27,4-35,6 % dan 29,1-45,9 % lebih tinggi daripada kontrol.

## DAFTAR PUSTAKA
Castex, M., Chim, L., Pham, D., Lemaire, P., Wabete, N., Nicolas, J., Schmidely, P., & Mariojouls, C. (2008).  Probiotic P.  acidilactici application  in  shrimp Litopenaeus  stylirostris culture  subject  to vibriosis in New Caledonia, Aquaculture, 275, 182–193
Chotikachinda, R., Lapjatupon,  W., Chaisilapasung, S., Sangsue, D. & Tantikitti, C. (2008). Effect of inactive yeast cell wall on growth performance, survival rate and immune parameters in Pacific White Shrimp ( Litopenaeus vannamei). Songklanakarin Journal of Science & Technology, 30 (6), 687-692.
Dash,  G.,  Raman,  R.  P.,  Prasad,  K.  P.,  Makesh,  M.,  Pradeep,  M.A.,  &  Sen,  S.  (2015).  Evaluation  of paraprobiotic applicability of Lactobacillus plantarum in improving the immune response and disease protection in giant freshwater prawn, Macrobrachium rosenbergii (de Man, 1879). Fish & Shellfish Immunology, 43(1), 167-174, doi: 10.1016/j.fsi.2014.12.007.
Dawood, M A.O., Koshio, S., Ishikawa, M., & Yokoyama, S. (2015). Effects of heat killed Lactobacillus plantarum (LP20)  supplemental  diets  on  growth  performance,  stress  resistance  and  immune response  of  red  sea  bream, Pagrus  major. Aquaculture, 442,  29-36,  doi: 10.1016/j.aquaculture.2015.02.005
de Almada, C. N., Almada, C. N., Martinez, R. C. R., Sant'Ana, A. S. (2016). Paraprobiotics: Evidences on their ability to modify biological responses, inactivation methods and perspectives on their application in foods. Trends in food science & technology , 58, 96-114
Dehlink, E., Domig, K. J., Loibichler, C., Kampl, E., Eiwegger, T., Georgopoulos, A., Kneifel, W., Urbanek, R., & Pfalusi, Z. S. (2007). Heat- and Formalin-Inactivated Probiotic Bacteria InduceMComparable Cytokine Patterns in Intestinal Epithelial Cell–Leucocyte Cocultures. Journal of Food Protection , 70(10), 2417–2421.
Duc, P. M., Nhan, H. T., Hoa, T. T. T., Huyen, H. M., Tao, C. T., An, C. M., Thy, D. T. M., Hai1, T. N., Yoshitaka, H.  &  Satoru,  O.  (2016).  Effects  of  heat-killed Lactobacillus  plantarumstrain L-137on  growth performance and immune responses  of white leg shrimp ( Litopenaeus vannamei ) via dietary administration. International Journal of Scientific and Research Publications , 6(3), 270-280.
El-Ghany,  W.A.  (2020).  Paraprobiotics  and  postbiotics:  Contemporary  and  promising  natural antibiotics alternatives and their applications in the poultry field. Open Veterinary Journal, 10(3), 323-330. doi: 10.4314/ovj.v10i3.11.
Far, H.Z., Saad, C.R.B., Daud, H.M., Harmin, S.A. & Shakibazadeh, S. (2009). Effect of Bacillus subtilis on the  growth  and  survival  rate  of  shrimp  ( Litopenaeus  vannamei ), African  Journal  of Biotechnology , 8(14), 3369-3376
Humas  Ditjen  PDSPKP  (2022).  Ekspor  Perikanan  Tumbuh  10,66%  di  2022.    Diakses  Agustus  2023. https://kkp.go.id/djpdspkp/artikel/47840-ekspor-perikanan-tumbuh-10-66-di-2022 Ridwan, M & Situmorang, B. 2022. KKP: Nilai ekspor udang Indonesia ke Amerika 1,106 miliar dolar
KKP: Nilai ekspor udang Indonesia ke Amerika 1,106 miliar dolar https://www.antaranews.com/berita/3254149/kkp-nilai-ekspor-udang-indonesia-ke-amerika- 1106-miliar-dolar.
K. Luo, K., Tian, X., Wang, B., Wei, C., Wang, L., Zhang, S., Liu, Y., Li, T., & Dong, S. (2021). Evaluation of paraprobiotic  applicability  of Clostridium  butyricum CBG01  in  improving  the  growth performance,  immune  responses  and  disease  resistance  in  Pacific  white  shrimp, Penaeus vannamei. Aquaculture , 544, p.737041, doi: 10.1016/j.aquaculture.2021.737041
Maftuch,  Prasetio,  E.,  Sudianto,  A.,  Rozik,  M.,  Nurdiyani,  R.,  Sanusi,  E.,  Murachman,  (2013).
Improvement  of  innate  immune  responses  and  defense  activity  in  tiger  shrimp  ( Penaeus monodon Fab.)  by  intramuscular  administration  of  the  outer  membrane  protein Vibrio alginolyticus . SpringerPlus, 2, p.432. doi: 10.1186/2193-1801-2-432S Mehta,  P.,  Ayakar,  S.,  &  Singhal,  R.S.  (2023),  The  potential  of  paraprobiotics  and  postbiotics  to modulate  the  immune  system:  A  Review. Microbiological  Research 275,  p.127449,  doi: 10.1016/j.aquaculture.2023.739751
Putra A. (2022). Peluang besar Indonesia jadi pemain utama udang dunia. TROBOS Aqua , 119(10), 66-67.
Sengupta, R., Altermann, E., Anderson, R.C., McNabb, W.C., Moughanand, P.J., & Roy, N.C. (2013). The  Role  of  Cell  Surface  Architecture  of  Lactobacilli  in  Host-Microbe  Interactions  in  the Gastrointestinal  Tract, Mediators  of  inflammation ,  Article  ID  237921,  16pages  doi: 10.1155/2013/237921
Shawky, A., Abd El-Razek, I.M., El-Halawany, R.S., Zaineldin, A.I., Amer, A.A., Gewaily, M.S., Dawood, M. A.O. (2023). Dietary effect of heat-inactivated Bacillus subtilis on the growth performance, blood  biochemistry,  immunity,  and  antioxidative  response  of  striped  catfish  ( Pangasianodon hypophthalmus ), Aquaculture , 575, p.739751,
Siciliano, R.A., Reale, A., Mazzeo, M. F., Morandi, S., Silvetti, T. & Brasca, M. (2021). Paraprobiotics: A New  Perspective  for  Functional  Foods  and  Nutraceuticals, Nutrients ,13(4),  p.1225;  doi: 10.3390/nu13041225
Sritunyalucksana, K., Lee, S.Y., & Söderhäll, K. (2002). A beta-1,3-glucan binding protein from the black tiger shrimp, Penaeus monodon . Developmental and Comparative Immunology, 26(3), 237-45.
Tukaram,  N.M.,  Biswas,  A.,  Deo,  C.,  Laxman,  A.J.,  Monika.  M.,  &  Tiwari,  A.K.  (2022).  Effects  of paraprobiotic as replacements for antibiotic on performance, immunity, gut health and carcass characteristics in broiler chickens. Scientific Reports, 12, p.22619. doi: 10.1038/s41598-022-27181-z Tung, H. T, Koshio, S., Traifalgar, R. F., Ishikawa, M., Yokoyama, S. (2010). Effects of dietary Heat-killed Lactobacillus plantarum on larval and post larval kuruma shrimp Marsupenaeus japonicas bate.
Journal of the World Aquaculture Society, 41(1), 16–27. doi: 10.1111/j.1749-7345.2009.00329.x Tung, H.T., Koshio, S., Teshima, S.I., Ishitaka, M., Yokoyama, S., Ren, T., Hirose, Y., Phuong, N.D.T. (2009). Effects  of  heat-skilled Lactobacillus  plantarum supplementatal  diets  on  growth  performance, stress resistance and immune response of juvenile Kuruma shrimp Marsupenaeus japonicas Bate. Aquaculture Science, 57(2), 175-184.
Widanarni, Sukenda, Anggraeni, A. A., Maharani, Rr B. A., Mulyadin, A., & Yuhana, M. (2022). Efek aplikasi dosis paraprobiotik Bacillus sp. NP5 yang berbeda terhadap kinerja pertumbuhan dan resistansi ikan nila terhadap infeksi Streptococcus agalactiae. Jurnal Akuakultur Indonesia, 21(2), 186 – 197. Zheng, X., Duan, Y., Dong, H., & Zhang, J. (2017). Effects of dietary Lactobacillus plantarum in different treatments on growth performance and immune gene expression of white shrimp Litopenaeus vannamei under normal condition and stress of acute low salinity. Fish & Shellfish Immunology 62,
(195-201) doi: 10.1016/j.fsi.2017.01.015