## AKTIVITAS IMUNOMODULATOR EKSTRAK ETANOL SPONS
Callyspongia sp. TERHADAP FAGOSITOSIS MAKROFAG PADA
MENCIT JANTAN BALB/C.
Muhammad Ilyas Y. 1,2 , Asriullah Jabbar 1 , Mentarri Bafadal 1 , Muhammad Hajrul Malaka 1 , Firdayanti 2 , I. Sahidin 1*
1 Jurusan Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kendari 2 Politeknik Bina Husada Kendari
1 Email: ilyasyusufmuhammad.apt@gmail.com * Email: sahidin02@UHO.ac.id
Artikel diterima: 5 September 2019; Disetujui: 28 Februari 2020 DOI: https://doi.org/10.36387/jiis.v5i1.377

## ABSTRAK
Spons Callyspongia sp.  mengandung  senyawa  yang  berperan  sebagai  agen imunomodulator,  salah  satunya  flavonoid.  Flavonoid  berpotensi  sebagai imunostimulan  dengan  meningkatan  aktivitas  fagositosis  makrofag.  Penelitian bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  imunomodulator  ekstrak  etanol  spons Callyspongia sp. terhadap fagositosis makrofag pada mencit jantan galur Balb/C . Hewan  uji  mencit  dibagi  ke  dalam  6  kelompok.  Kelompok  pertama  diberikan ekstrak spons Callyspongia sp . 100 mg/kgBB, kelompok kedua diberikan ekstrak spons Callyspongia sp.  200  mg/kgBB,  kelompok  ketiga  diberikan  ekstrak  etanol spons Callyspongia sp . 300 mg/kgBB, kelompok keempat diberikan ekstrak spons Callyspongia sp . 400  mg/kgBB,  kelompok  kontrol  positif  diberikan  Stimuno ® 0,13  mg/gBB  dan  kelompok  kontrol  negatif  diberikan  Na-CMC  0,5%.  Sediaan diberikan  secara  peroral  pada  hari  pertama  sampai  ketujuh.  Pada  hari  kedelapan masing-masing  mencit  diinjeksikan  bakteri Staphylococcus  aureus (SA)  secara intraperitoneal.  Aktivitas  sel  makrofag  dihitung  dari  apusan  cairan  peritoneum mencit dengan menghitung persentase makrofag yang melakukan fagositosis dari 100 sel yang diamati. Data yang diperoleh selanjutnya dianalisis statistik one way Anova dan uji post hoc Tukey . Hasil penelitian menunjukan bahwa ekstrak etanol spons Callyspongia sp . pada  dosis  300  mg/kgBB  dan  400  mg/kgBB  memiliki aktivitas  sebagai  imunoamodulator  berdasarkan  hasil uji statistik post hoc Tukey (P    0,05)  yang  menunjukan  tidak  ada  perbedaan  bermakna  terhadap  kontrol positif (Stimuno ® ) dalam meningkatkan aktivitas fagositosis sel makrofag.
Kata kunci : Spons Callyspongia sp., Makrofag, Fagositosis, Imunomodulator

## ABSTRACT
Sponge  Callyspongia  sp.  has  compounds  that  act  as  immunomodulatory agents,  one  of  which  is  flavonoids.Flavonoids  have  the  potential  to  be immunostimulants  by  increasing  the  phagocytic  activity  of  macrophages.  This study  was  experimental  with  a  post  test  only  control  group  design  method.  This study used 24 micemalestrain Balb /c with a body weight of 20-30 grams divided
into  6  groups.  The  first  group  get  extracts  of  sponge  Callyspongia  sp.  100 mg/kgBW, second group get the extract of sponge Callyspongia sp. 200 mg/kgBW, third  group  get  extracts  of  sponge Callyspongia  sp. 300 mg/kgBW, fourth group get  the extract  of  sponge Callyspongia sp. 400 mg/kgBW, positive control group was given Stimuno ® 0,13 mg/kgBW and the negative control group get  Na-CMC 0.5%. A test given in orally preparations on the first day until the seven day. On the  eighth  day  of  each  of  the  mice  are  injected  bacteria  Staphylococcus  aureus (SA) by intraperitoneal. The activity of macrophage cells from murine peritoneal fluids sweep by calculating the percentage of macrophages that does phagocytosis of  100  cells  are  observed.  The  data  obtained  were  then  analyzed  by  one  way Anova statistics and test post hoc Tukey's. As result, the are that ethanol extracts of  sponge  Callyspongia  sp.  at  doses  of  300  mg/kgBW  and  400  mg/kgBW  have potential  as  immunomodulator  with  based  on  results  of  statistical  tests  post  hoc Tukey  (P    0.05)  showed  no  meaningful  difference  against  the  positive  control (Stimuno  ®)  wich  improving  the  activity  of  the  cells  of  the  macrophage phagocytosis.
Keywords : Spons Callyspongia sp., Makrofag, Phagocytosis , Imunomodulator

## PENDAHULUAN
Angka kejadian penyakit infeksi
mengalami peningkatan dalam beberapa tahun terakhir, dan merupakan salah satu penyebab tingginya  angka  kematian  dibeberapa negara berkembang termasuk
diIndonesia (Heria dkk., 2017; Zumrotul, 2013). Infeksi yang disebabkan oleh virus, bakteri, protozoa,  cacing,  dan  jamur  parasitik yang  masuk  ke  dalam  tubuh  atau permukaan  tubuh  merupakan  alasan keberadaan  sistem  imun,  sehingga setiap mekanisme yang dapat mengurangi  infeksi  tersebut  sangat berharga dalam mempertahankan
hidup  melalui  imunitas  (Sukmayadi dkk., 2014).
Sistem  imun  mengacu  pada kemampuan  tubuh  menahan  atau mengeliminasi  benda  asing  atau  sel abnormal  yang  berpotensi  berbahaya (Agustina,  2015).  Sistem  imun  dapat dibagi  menjadi  sistem  imun  non spesifik  dan  spesifik  (Izzati  dkk., 2014). Salah satu upaya yang dilakukan  sistem  imun  nonspesifik dalam  mempertahankan  diri  terhadap masuknya  antigen  yaitu  dengan  cara menghancurkan antigen melalui proses fagositosis (Marusin dan Chairul, 2012).
Salah  satu  sel  imunitas  yang berperan dalam melakukan
prosesfagositosis  adalah  makrofag (Kusmardi, 2007). Makrofag
merupakan efektor utama pada respon imun  seluler.  Sebagai  agen  fagosit, makrofag  bertanggung  jawab  dalam memusnahkan  sel  yang  terinfeksi patogen  intraseluler  dimana  aktivitas fagositosis makrofag dapat
ditingkatkan  dengan  zat-zat  yang bersifat imunomodulator (Akrom, 2015; Nugroho, 2012). Obat sintesis yang biasa digunakan  di  dalam  mengembalikan ketidak  seimbangan  sistem  imun seperti  obat  golongan  antiinflamasi nonsteroid,  obat-obat  imunosupresan, obat-obatan  untuk  imunostimulan. Obat-obat sintesis ini banyak mengakibatkan efek yang tidak diinginkan. Oleh karena itu diperlukan penelitian lebih lanjut untuk membuktikan
aktivitas imunomodulator  dari  ekstrak  maupun hasil isolasi tanaman yang diharapkan memiliki  efek  samping  yang  lebih kecil (Sukmayadi dkk., 2014).
Spons  adalah  salah  satu  sumber daya  alam  hayati  laut  yang  sampai saat ini masih belum banyak diketahui dan  dimanfaatkan  secara  optimal (Krisyuninda, 2012). Salah satu famili
spons  yang memiliki senyawa dengan bioaktivitas    tinggi  berasal  dari  famili Callyspongiidae dengan aktivitas bioaktif yang tinggi jika dibandingkan dengan  biota  laut    lainnya  (Sari  dkk., 2014).  Hasil  penelitian  sebelumnya yang telah dilakukan oleh Krisyuninda (2012)  melakukan  isolasi  senyawa bioaktif spons Callyspongia sp. dengan  metode  kromatografi  lapis tipis  (KLT)  menemukan  kandungan senyawa  steroid,  alkaloid,  flavonoid dan  terpenoid  (Warbung  dkk.,  2013). Hasil pengujian secara in vivo maupun in  vitro dari  metabolit  sekunder  dari bahan alam seperti flavonoid menunjukkan  adanya  respon  imun atau  bersifat  imunomodulator  (Ilyas, 2019;  Wahyuni  dkk.,    2017  ;  Heria dkk., 2017).
Berdasarkan  uraian  di  atas, dimana  data  ilmiah  tentang  aktivitas imunomodulator dari spons Callyspongia sp. masih sangat terbatas, sehingga pentingnya melakukan penelitian ini untuk mengetahui  aktivitas  imunomodulator ekstrak  etanol  spons Callyspongia sp. terhadap    fagositosis  makrofag  pada mencit jantan galur Balb/c .

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  ini  merupakan
penelitian Experimental dengan rancangan The  Randomized  Posttest Only Control Group Design .
Penelitian ini dilaksanakan di
Laboratorium Penelitian Fakultas
Farmasi Universitas Halu Oleo. Pelaksanaan penelitian ini telah mendapatkan  persetujuan  dari  Komisi Etik  Penelitian  Kesehatan  LPPM Universitas Halu Oleo melalui
terbitnya  Ethical  Clearance  (EC) Nomor : 1363/UN29.20/PPM/2018.

## Pengambilan dan Preparasi Sampel
Sampel spons Callyspongia sp . sebanyak  2,8  kg  diperoleh  dari
perairan Kecamatan Soropia, Kabupaten Konawe, Provinsi Sulawesi Tenggara. Pengambilan sampel dilakukan dengan menggunakan pisau dan cutter dengan peralatan selam SCUBA ( Self Contained Underwater Breathing Apparatus ). Sampel spons
dikumpulkan  di  dalam box  ice ,  lalu dilakukan  sortasi  basah,  dibersihkan dari  hewan  laut  yang  hidup  di  dalam spons  dengan  cara  dicuci  dengan  air mengalir, kemudian dipotong menjadi ukuran  yang  lebih  kecil,  kemudian
dilanjutkan  dengan  melakukan  proses ekstraksi.
Skrining Kandungan Senyawa

## Kimia
Komponen  yang  terdapat  dalam spons Callyspongia sp.  dianalisis golongan  senyawa  dengan  reaksi warna  menggunakan  pereaksi  warna terhadap  golongan  senyawa  alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, dan terpenoid.  Skrining  fitokimia  pada penelitian ini dilakukan untuk mengetahui  senyawa  kimia  yang terdapat di dalam ekstrak etanol spons Callyspongia sp.
Uji Aktivitas Imunomodulator dengan Fagositosis Makrofag
Perlakuan  hewan  uji  dilakukan setiap  1  hari  sekali  selama  7  hari secara  peroral  sesuai  dengan  volume pemberian. Kelompok I, mencit diberikan ekstrak dosis 100 mg/kgBB. Kelompok II, mencit diberikan ekstrak dosis 200 mg/kgBB. Kelompok III, mencit diberikan ekstrak dosis 300 mg/kgBB.
Kelompok IV, mencit diberikan ekstrak dosis 400 mg/kgBB, kelompok  V  sebagai  kontrol  positif diberikan stimuno ® yang mengandung ekstrak  meniran  komersial  dosis  0,13
mg/kgBB  dan  kelompok  VI  sebagai kontrol  negatif  yang  diberikan  Na- CMC  0,5%.  Pada  hari  ke  delapan setiap mencit diinfeksi dengan 0,5 mL
suspensi bakteri
SA secara
intraperitoneal,  dibiarkan  selama  satu
jam.  Mencit  dianastesi    dengan  eter lalu dibedah perutnya dengan menggunakan  gunting  bedah  dan pinset  steril.  Jika  ditemukan  cairan peritoneum dalam jumlah sedikit pada perut,  maka  ditambahkan  larutan Phosphat  buffered  saline (PBS)  pH 7,8 steril sebanyak 1-2 mL, digoyang- goyangkan  secara  perlahan  kemudian diambil  cairan  peritoneum  dengan spoit  1  cc.    Cairan  peritoneal  dipulas pada gelas obyek dan difiksasi dengan metanol  selama  5  menit,  kemudian diwarnai  dengan  pewarnaan  Giemsa 10%,  didiamkan  20  menit,  dibilas dengan  air  mengalir.  Setelah  sediaan kering,  dilihat  di  bawah  mikroskop menggunakan  minyak  emersi  dengan perbesaran  (10x–1000x)  (Nugroho, 2012).
Perhitungan Aktivitas Fagositosis
Aktivitas imunomodulator
ditentukan dengan menghitung  persen
aktivitas  fagositosis  sel  makrofag peritonium mencit. Nilai persen
aktivitas  fagositosis  adalah  persentase sel  makrofag  yang  aktif  melakukan proses  fagositosis  di  antara  100  sel makrofag  (Marusin  dan  Chairul, 2012).

## Analisis Data
Metode analisis data yang digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu metode Analysis of Variance (ANOVA) one-way dengan  syarat terdistribusi normal, taraf kepercayaan 95%  dan  tingkat  signifikansi  (tingkat kesalahan 5% (α = 0,05). Analisis data dilanjutkan  dengan  analisis post  hoc Tukey menggunakan aplikasi
statistical product and service solution (SPSS) versi 22.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi spons Callyspongia sp . dilakukan  dengan  tujuan  untuk menghindari  kemungkinan  terjadinya kesalahan  dalam  pengambilan  sampel yang  akan  digunakan  pada  uji aktivitas imunomodulator. Hasil
determinasi di Laboratorium
Perikanan  menunjukkan  bahwa  spons yang  diteliti  adalah  spons  jenis Callyspongia sp .
Skrining Kandungan Senyawa Kimia
Komponen  yang  terdapat  dalam spons Callyspongia sp . dianalisis golongan  senyawa  dengan  uji  tabung
menggunakan beberapa pereaksi untuk  golongan  senyawa  alkaloid, flavonoid, saponin, tanin, dan terpenoid.  Hasil  skrining  fitokimia disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Spons Callyspongia sp.

## Aktivitas Imunomodulator
Pengujian aktivitas
imunomodulator  pada  penelitian  ini dilakukan  untuk  mengetahui  aktivitas imunomodulator  ekstrak  etanol  spons Callyspongia sp.terhadap peningkatan aktivitas  fagositosis  makrofag  pada mencit  jantan  yang  diinfeksisikan dengan bakteri S. aureus.
Ekstrak etanol
spons Callyspongia sp.  diujikan  dengan variasi dosis 100 mg/kgBB, dosis 200 mg/kgBB,  dosis  300  mg/kgBB,  dan dosis 400 mg/kgBB. Pemilihan variasi  dosis  ini  didasarkan  pada  uji pendahuluan  yang  telah  dilakukan dengan  dosis  50  mg/kgBB,  100 mg/kgBB dan 200 mg/kgBB.
Berdasarkan uji pendahuluan tersebut
dosis  200  mg/kgBB  menunjukan adanya peningkatan aktivitas fagositosis  makrofag  pada  mencit jantan  galur Balb/C yang  diinduksi dengan  bakteri S.  aureus namun masih  berbeda  jauh  dengan  kontrol positif  yang  digunakan.  Sehingga variasi  dosis  yang  digunakan  pada penelitian  ini  dimulai  dari  dosis  100 mg/kgBB, 200 mg/kgBB, 300 mg/kgBB,  dan  400  mg/kgBB  untuk mengetahui  dosis  efektif  dari  ekstrak etanol spons Callyspongia sp. sebagai imunomodulator. Sebagai kontrol positif  digunakan  stimuno ® yang mengandung ekstrak meniran
( Phyllantus niruri L.). Meniran adalah  tanaman  yang  mempunyai aktivitas imunomodulator, yang
No Pengujian Hasil Keterangan Pustaka 1 Alkaloid + Terbentuk endapan jingga Depkes RI, 2000 2 Flavonoid + Terjadi perubahan warna menjadi merah 3 Saponin - Tidak terbentuk busa yang stabil. 4 Tanin + Terbentuk warna hijau kehitaman 5 Terpenoid + Perubahan warna menjadi violet
membantu
tubuh untuk
mengoptimalkan  sistem  imun  yang berperan  dalam  pertahanan  tubuh (Intan dkk., 2016).
Hewan  uji  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  mencit jantan galur Balb/C sebanyak 24 ekor dibagi  menjadi  6  kelompok.  Dengan pertimbangan  fisiologis  yang  mirip dengan manusia,
mudah diperlakukan,  sistem  imun  mencit jantan tidak dipengaruhi oleh hormon esterogen  seperti  halnya  pada  mencit betina (Rahman, 2016) diduga
estrogen mempengaruhi fungsi enzim-enzim yang berfungsi membantu  terbentuknya  bahan-bahan yang  bersifat  oksidatif  kuat  yang membantu proses fagositosis di dalam makrofag,
sehingga dapat menurunkan  aktivitas  fagositosisnya (Rasyid, 2008).
Ekstrak diberikan selama 7 hari berturut-turut secara per oral sebanyak  satu  kali  sehari  dengan tujuan  untuk  menstimulasi  sistem imun  dari  hewan  uji.  Pada  hari kedelapan  setiap  mencit  diinfeksi dengan  0,5  mL  suspensi  bakteri S. aureus secara intraperitoneal
sebelum dilakukan pembedahan (Adriani dan Lasti, 2014).
Respon imun akan terjadi sebagai  akibat  adanya  invasi  dari bakteri  yaitu S.  aureus sebagai antigen ketika masuk ke dalam tubuh. Respons  imun  yang  timbul  diawali oleh meningkatnya sel fagosit ke arah sumber  infeksi.  Sel  fagosit  seperti makrofag  maupun  neutrofil  akan bergerak  ke  arah  sumber  rangsangan, selanjutnya  memfagosit  sel  yang dianggap asing tersebut. Proses fagositosis di dalam makrofag dilakukan  oleh  berbagai  enzim  dan yang  paling  dominan  adalah  lisosim. Hasil  fagositosis  sel  asing  tersebut akan  berupa  fragmen  protein  yang selanjutnya  disajikan  ke  sel  T  untuk proses pembentukan antibodi (Besung dkk, 2016).
Pengamatan  terhadap  aktivitas fagositosis  makrofag  mencit  diamati melalui  pengamatan  pada  preparat apus  tipis  cairan  peritonium  mencit yang  telah  diwarnai  dengan  pewarna Giemsa. Hasil dari pewarnaan Giemsa menunjukkan adanya pewarnaan  pada  inti  sel  makrofag yang  ditandai  dengan  perubahan warna menjadi ungu kebiruan.
Pengamatan  dilakukan  terhadap  sel makrofag  yang  aktif  melakukan proses  fagositosis  dari  100  sel makrofag  yang  diamati  (Marusin  dan Chairul,  2012;  Wahyuni  dkk.,  2017). Perbedaan  antara  makrofag  aktif  dan tidak aktif dapat dilihat pada  Gambar 1 merupakan hasil apusan tipis cairan peritonium  mencit  yang  diamati  di bawah  mikroskop  cahaya  dengan perbesaran 1000x.
Gambar 1. Apusan tipis cairan peritonium di bawah mikroskop perbesaran 1000x ( A ) Makrofag aktif, ( B )Makrofag tidak aktif, ( C ) Bentuk inti sel makrofag
Berdasarkan  hasil  pengamatan preparat  apus  yang  dilakukan  di bawah  mikroskop,  memperlihatkan sel makrofag aktif berbentuk amoeboid (tidak beraturan) dan
ukuran inti relatif lebih
besarsedangkan  sel  yang  tidak  aktif
tampak  bulat  dengan  ukuran  inti  sel lebih  kecil  (Gambar  1).  Hasil  ini sesuai dengan pernyataan yang dikemukakan  oleh  Efendi  (2003) bahwa  makrofag  berbentuk  tidak beraturan, inti lonjong atau berbentuk seperti  ginjal,  mengandung  granula azurofilik  dan  terletak  eksentris. Peningkatan aktivitas makrofag ditandai  dengan  bentuk  dan  ukuran makrofag  yang  bertambah  besar dengan  penjuluran  pseudopodi  yang sangat bervariasi. Fagosomnya muncul  membran  yang  menjadi  lebih berliku-liku,  lisosom  menjadi  lebih banyak,  aparat  golgi  membesar  dan retikulum endoplasma kasar
berkembang (Bratawidjaja, 2014).
Hasil  penghitungan  aktivitas fagositosis  sel  makrofag  peritoneum mencit  dapat  dilihat  pada  grafik Gambar 2.
Data aktivitas fagositosis makrofag  terlebih  dahulu  dilakukan pengujian normalitas dan uji homogenitas, didapatkan nilai signifikansi  (p    0,05)  yang  berarti bahwa  himpunan  data  yang  dimiliki memiliki  karakteristik  yang  sama (homogen)  dan  terdistribusi  normal, sehingga  dapat  dilanjutkan  pengujian
A C B
ANOVA satu arah. Berdasarkan hasil uji  ANOVA  diperoleh  nilai  p    0,05 yakni  p  0,000  yang  berarti  bahwa terdapat  perbedaan  yang  signifikan
dari  aktivitas  fagositosis  makrofag yang  dihasilkan  pada  keseluruhan kelompok  uji,  dilanjutkan  dengan  uji post  hoc dengan  metode  Tukey .
Gambar 2. Grafik peningkatan aktivitas fagositosis sel makrofag
Hasil  uji  lanjut  (Uji  Tukey HSD)  menunjukkan  bahwa  aktivitas fagositosis  makrofag  pada  semua kelompok dosis  adalah berbeda nyata (p  0,05) terhadap kelompok kontrol negatif  Na.  CMC.  Sehingga  dapat diketahui  bahwa  pamberian  ekstrak etanol spons Callyspongia sp.
meningkatkan aktivitas fagositosis sel makrofag  pada  mencit  jantan  yang diinduksi  bakteri S.  aureus ,  dimana pada  dosis  300  mg/kgBB  dan  400 mg/kgBB memiliki persentase
aktivitas  fagositosis  makrofag  yang lebih tinggi.
Peningkatan
aktivitas fagositosis  makrofag  pada  pemberian ekstrak etanol spons Callyspongia sp. diduga  akibat  kandungan  senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung di dalamnya yaitu flavonoid. Hasil ini didukung oleh penelitian yang dilakukan  Wahyuni  dkk.,  (2019) melaporkan bahwa diduga kandungan senyawa  flavonoid  dalam  ekstrak spons Melophus  sarosinorum dapat meningkatkan  aktivitas  fagositosis makrofag sel makrofag mencit
Balb/C .  Penelitian  yang  dilakukan oleh  Ilyas  (2019)  juga  melaporkan bahwa  diduga  kandungan  senyawa
0 20 40 60 80 Kontrol Negatif Kontrol
Positif Dosis 100 mg/kgBB Dosis 200 mg/kgBB Dosis 300 mg/kgBB Dosis 400 mg/kgBB 44,25% 73,5%
53,5% 61,75% 73% 71,25% Kontrol Negatif Kontrol Positif Dosis 100 mg/kgBB Dosis 200 mg/kgBB Dosis 300 mg/kgBB Dosis 400 mg/kgBB
flavonoid  dalam  ekstrak  etanol  daun galing  dapat  meningkatkan  imunitas non  spesifik  melalui  peningkatan aktivitas  fagositosis  pada  mencit Babl/C .  Menurut  Makiyah  (2016)
senyawa  flavonoid  dapat  direspon dengan  baik  oleh  sistem  imun  tubuh, sehingga memacu peningkatan sekresi  sitokin  yang  dihasilkan  oleh sel-sel  imunokompeten,  antara  lain interleukin-1  dan  interleukin-6  yang membantu  meningkatkan  aktivitas
fagositosis makrofag. Senyawa flavanoid  dapat  bekerja  terhadap limfokin (Interferon γ) yang
dihasilkan  oleh  sel  T  sehingga  akan merangsang sel-sel fagosit melakukan respon fagositosis serta dapat memacu proliferasi limfosit, meningkatkan  jumlah  sel  T,  dan meningkatkan sekresi terhadap Interleukin-2,  IL-1,  IL-12,  IL-6,    dan TNF-α meningkatkan  fagositosis antigen  oleh  makrofag  (Asep,  dkk., 2014; Abbas dkk., 2007).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian dapat  kesimpulan  bahwa  ekstrak etanol spons Callyspongia sp. memiliki  aktivitas  imunomodulator
dengan  meningkatkan  fagositosis  sel makrofag mencit jantan, dengan dosis yang  efektif    300  mg/kgBB  dan  400 mg/kgBB sebagai imunomodulator.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  semua pihak yang telah membantu penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas  A.K.  Andrew  H.  Lichman. Shiv  Pillai,  2007, Cellular  and molecular  immunology/Abul  — 7th ed .
Andriani  dan  Lasti,  M.Y.,  2014, Identifikasi Keberadaan Staphylococcus sp. Pada
Santan  Kelapa  Kemasan  yang
Beredar  di  Kota  Makassar, 2 (1).
Agustina,  W,  2015,Respon  Imun Pada  Penderita  Asma  Selama
Kehamilan, Jurnal Ilmu Kesehatan , 4 (1): 58-66.
Akrom, Widjaya, A., dan Armansyah, T.,  2015,  Ekstrak  Etanol  Biji Jintan  Hitam  ( Nigella  sativa ) Meningkatkan Aktivitas Fagositosis  Makrofag  Mencit Swiss  Yang  Diinfeksi Lysteria monocytogenes , Jurnal Kedokteran  Hewan , 9(2): 94- 100.
Asep, E., Sukmayadi,  Sri A. Sumiwi,
Melisa  I.  Barliana,  Anisa  D. Aryanti, 2014, Aktivitas Imunomodulator Ekstrak Etanol
Daun Tempuyung ( Sonchus Arvensis Linn).  IJPST, 1 (2).
Besung, I.N.K., Astawa, N.M., Suata, K.,  dan  Suwiti,  N.K.,  2016, Hubungan Antara Aktivasi Makrofag Dengan Kadar Interleukin-6 Dan Antibodi
Terhadap Salmonella typhi Pada Mencit, Jurnal Kedokteran Hewan , 10 (1).
Bratawidjaja,  K.G.,  dan  Rengganis,
Iris,  2014, Imunologi  Dasar , Badan  Penerbit  Fakultas  Ilmu
Kedokteran Universitas Indonesia:Jakarta. Departemen  Kesehatan  RI.  2000. Parameter Standar Umum Ekstrak  Tumbuhan  Obat .  Jilid
VI.  Jakarta:  Direkterot  Jendral POM-Depkes RI. Efendi,  Z.  2003. Daya  Fagositosis Makrofag pada Jaringan Longgar Tubuh. Fakultas Kedokteran Universitas  Sumatera  Utara, Sumatera Utara. Haeria. , Dhuha,  N.S.,  Muhammad Ikram  Hasbi,  M.I.,  2017,  Uji Efek  Imunomodulator  Ekstrak Daun Kemangi ( Ocimum basilicum . L) Dengan Parameter Aktivitas Dan Kapasitas Fagositosis Sel Makrofag  Pada  Mencit  ( Mus Musculus ) Jantan, Jurnal
Farmasi Galenika, 4 (1): 1-7.
Ilyas,  Y.,  Muhammad,  Firdayanti, Wahyuni,  2019.  Peningkatan
Imunitas  Non  Spesifik  ( Innate Immunity )  Mencit  Balb/C  yang Diberi  Ekstrak  Etanol  Daun Tumbuhan  Galing  ( Cayratia trifolia L.Domin.), Medical
Sains;3(2): 83-92. Intan,  P.R.,  Winarno,  M.W.,  Nita Prihartini, N. , 2016, Efek
Ekstrak Campuran Kulit Batang Pulai ( Alstonia scholaris ) danMeniran ( Phyllanthus niruri )  pada  Mencit Swiss Webster yang Diinfeksi Plasmodium  berghei,
Jurnal  Kefarmasian  Indonesia,
6 (2) :79-88 .
Izzati,  S,  A.,  Sumarno.,  Winarsih,  S, 2014, Peran Komplemen, Fagosit (Leukosit) dan Antibodi dalam Menurunkan Jumlah Mycobacterium tuberculosis,
Majalah  Kesehatan  FKUB,  1
(2): 74-80.
Krisyuninda,  M.  P,  Uji  Toksisitas Fraksi  Spons Callyspongia sp. dengan Metode  Brine  Shrimp Test (BST)  dari  Perairan  Pasir
Putih Situbondo. Surabaya: Institut Teknologi Sepuluh
Nopember; 2012. Kusmardi.,  Kumala,  S.,  Triana,  E,  E, 2007,  Efek  Imunomodulator Ekstrak  Daun  Ketepeng  Cina ( Cassia  alata L.)  Terhadap Aktivitas Dan Kapasitas Fagositosis  Makrofag, AKARA, KESEHATAN, 11 (2) : 50-55.
Makiyah, A., Husin, U.A., Sadeli, R.,
2016. Efek Imunostimulasi Ekstrak  Etanol  Umbi  Iles-iles Terhadap  AktivitasFagositosis
Sel  Makrofag  pada  Tikus  Putih Strain Wistar  yang  Diinokulasi Staphylococcus  aureus . MKB, 48 (2).
Marusin,  S.,  Chairul,  2012,  Efek Ekstrak   Air Dan  Alkohol Pada Siwak  ( Salvadora  persica L.) Terhadap Peningkatan Aktivitas Dan  Kapasitas  Fagositosis  Sel
Makrofag, Media Litbang Kesehatan , 22(1): 38-44. Nugroho, Y.A., 2012, Efek Pemberian  Kombinasi  Buah Sirih  ( Piper  betle L)  Fruit,
Daun Miyana ( Plectranthus scutellarioides (L.)  R.  BR.) Leaf,  Madu  Dan  Kuning  Telur Terhadap Peningkatan Aktivitas Dan  Kapasitas  Fagositosis  Sel Makrofag, Media Litbang
Kesehatan , 22(1): 1-5.
Rahman,  H.,  Aldi,  Y.,  Mayanti,  E.,
2016, Aktifitas Imunomodulator Dan  Jumlah  Sel  Leukosit  Dari
EkstrakKulit  Buah  Naga  Merah ( Hylocereus  lemairei (Hook.)
Britton    Rose)  PadaMencit Putih  Jantan, Jurnal  Farmasi Higea , 8 (1).
Rasyid, R., Yanwirasti, Ellyza Nasrul, E.,  2008.  Pengaruh  Estrogen Terhadap Aktifitas Sel Makrofag  Dalam  Menfagosit Candida  albicans Secara In
Vitro, Majalah Kedokteran Andalas , 1 (32).
Salim,  M.,  Sulistyaningrum,  N., Isnawati, A., Sitorus, H.,Yahya, Ni’mah, T., 2016, Karakterisasi
Simplisia  dan  Ekstrak  Kulit Buah Duku (Lansiumdomesticum Corr) dari Provinsi  Sumatera  Selatan  dan Jambi, Jurnal Kefarmasian Indonesia , 6 (2): 117-128.
Sari,  N.I.,  Ahmad,  A.,  dan  Dali,  S, Isolasi  dan  karakterisasi  protein bioaktif dari Spons Callyspongia sp . sebagai  zat antioksidan. Makassar: Program Sarjana  Universitas  Haanuddin; 2014. Available from:
URI:http://repository.unhas.ac.i
d/handle/123 456789/8695. Sukmayadi,  A,  E.,  Sumiwi,  A,  S., Barliana,  M,  I.,  Aryanti,  A,  D, 2014, Aktivitas Imunomodulator Ekstrak Etanol Daun Tempuyung ( Sonchus arvensis Linn . ). Jurnal IJPST, 1 (1): 65-72.
Wahyuni, Malaka, Hajrul, M., Fristiohady  A.,  Yusuf  I.M., Sahidin, 2017. Potensi Imunomodulator Ekstrak Etanol Buah  Kecombrang  ( Etlingera elatior (Jack) R.M.Smith) Terhadap  Aktivitas  Fagositosis Makrofag  Mencit  Jantan  Galur Balb/C. PHARMACON; 6(3):350-355. Wahyuni, Yusuf I.M., Fristiohady A., Malik,  F.,  Indalifiany,  A., Sahidin, 2019. Efek Imunomodulator Ekstrak Etanol Spons Melophus  sarasinorum Terhadap  Aktivitas  Fagositosis Sel  Makrofag  Pada  Mencit Jantan  Balb/C  Jurnal  Farmasi Galenika; 5(2):147-157.
Warbung,  Y.Y.,  Wowor,  V.N.S., Posangi, J., 2013, Daya Hambat Ekstrak Spons Laut Callyspongia Sp Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus  aureus , Jurnal E-GIGI , 1 (2): 1-12.
Zumrotul Mufidah, 2013, Buah Mengkudu  ( Morinda  citrifolia ) Meningkatkan  Respon  Imun Mencit ( Mus musculus ) Terhadap Infeksi Bakteri Staphylococcus aureus,  Journal of  Health Sciences,  6  (2): 27-3.