## EFEKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN SALAM
( Syzygium polyanthum (Wight) Walp . ) SEBAGAI PENGAWET

## ALAMI ANTIMIKROBA
Husnul Warnida, Yullia Sukawaty
Akademi Farmasi Samarinda Email : hwarnida@gmail.com

## ABSTRAK
Pengawet adalah zat yang ditambahkan untuk melindungi produk kosmetik dari  kontaminasi  mikroba.  Meningkatnya  permintaan  konsumen  akan  produk preservative-free mendorong pengembangan produk kosmetik yang menggunakan pengawet dari bahan. Salah satu tanaman yang memiliki potensi sebagai pengawet alami  adalah  daun  salam  ( Syzygium  polyanthum (Wight)  Walp).  Penelitian  ini bertujuan  untuk  menguji  efektivitas  ekstrak  etanol  daun  salam  sebagai  pengawet antimikroba dalam sediaan krim sesuai prosedur pengujian pengawet antimikroba menurut Farmakope Indonesia Edisi IV.
Daun  salam  diekstraksi  menggunakan  pelarut  etanol  95%.  Ekstrak  daun salam  diformulasikan  dalam  sediaan  krim  dengan  konsentrasi  5%  dan  10%. Pengujian  dilakukan  terhadap  efektivitas  pengawet  antibakteri  dengan  metode cawan tuang dan perhitungan jumlah bakteri dengan metode lempeng.
Persen  kematian  setelah  14  hari  pengamatan  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus berturut-turut pada formula A sebesar 94,00% dan 84,5%,  sedangkan  formula  B  sebesar  97,28%  dan  92,76%.  Dari  hasil  penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun salam konsentrasi 5% dan 10% belum efektif sebagai pengawet dalam sediaan krim menurut Farmakope Indonesia Edisi IV.
Kata kunci : ekstrak daun salam, pengawet alami, pengawet antimikroba.

## ABSTRACT
Preservative  is  an  additive  substance  to  protect  products  from  microbial contamination. Consumer demand for preservative-free products has encouraged the  development  of  cosmetic  products  with  natural  preservative.  Bay  leaves (Syzygium  polyanthum  (Wight)  Walp.))  have  potential  as  a  natural  preservative. This study aimed to test the effectiveness of the Bay leaves  ethanol extract as an antimicrobial  preservative  in  cream  using  antimicrobial  preservatives  testing procedures according to the Indonesian Pharmacopoeia Edition IV.
Bay  leaves  are  extracted  using  ethanol  95%.  Bay  leaf  extract  formulated into cream with concentration of 5% and 10%. Pour plate method and calculation of  the number of  bacteria by plate  method  has  conducted on the effectiveness  of antibacterial preservative.
Percent  mortality  after  14  days  observation  of  the  Escherichia  coli  and Staphylococcus aureus respectively on formula A are 94.00% and 84.55%, while formula  B  are  97.28%,  and  92.76%.  It  can  be  concluded  that  the  bay  leaves
ethanol extract concentrations of 5% and 10% was ineffective as an antimicrobial preservative according to the Indonesian Pharmacopoeia Edition IV.
Keywords : antimicrobial preservative, bay leaf extract, natural preservative

## PENDAHULUAN
Krim adalah sediaan setengah
padat berupa emulsi mengandung air tidak kurang dari 60% dan
dimaksudkan  untuk  pemakaian  luar (Depkes  RI,  1979).  Kosmetik  yang mengandung  air  dalam  jumlah  besar
rentan terkontaminasi oleh mikroorganisme  yang dapat  merusak komposisi produk atau membahayakan keselamatan penggunanya. Mikroorganisme patogen seperti Staphylococcus
aureus dan Pseudomonas aeruginosa
sering  ditemukan  dalam  produk kosmetik  yang  rusak  (Lundov et  al ,
2009). Pengawet adalah bahan kimia antimikroba  yang  ditambahkan  ke dalam  kosmetik  untuk  mencegah
kontaminasi mikroba yang bersumber  dari  bahan  baku,  proses pembuatan, dan cara pemakaian oleh konsumen. Selain mencegah kontaminasi  dan  memperpanjang umur produk, pengawet juga
ditambahkan untuk melindungi
konsumen  dari  bakteri  pathogen (Varvaresou et al , 2009).
Paraben adalah golongan
pengawet yang paling umum digunakan. Penelitian yang dilakukan terhadap 215 produk kosmetik untuk mengetahui kesesuaian kadar pengawet dengan regulasi di
Denmark  dan  EEC  menyatakan bahwa  77%  produk  yang  diteliti mengandung  0,01%–0,87%  paraben (Rastogi et  al ,  1995).  Efek  samping utama  paraben  adalah  reaksi  alergi. Selain  itu,  paraben  memiliki  sifat mirip estrogen. Pada Desember 2005 Cosmetic
Ingredient Review
meninjau kembali keamanan paraben karena  ada  kemungkinan  hubungan antara  kanker  payudara  dengan konsentrasi    paraben  di  jaringan payudara  (Legendre et  al 2007,
Pugazhendhi et al 2005, Darbre et al
2004,  Byford et  al 2002).  Meskipun
European  Scientific  Committee telah
menyatakan keamanan paraben, sebagian konsumen masih mengkhawatirkan keamanan paraben (Varvaresou et  al ,  2009).  Penelitian
menunjukkan bahwa paraben
dieksresi  melalui  urine,  menyatakan adanya  paparan  paraben  secara  terus
menerus dalam jumlah kecil (Meeker
et al 2011, Calafat et al 2010).
Meningkatnya permintaan konsumen terhadap produk preservative-free cosmetic mendorong industri kosmetik
mengembangkan produk dengan bahan  alam  dari  tumbuh-tumbuhan
sebagai pengawet pengganti. Minyak
atsiri  dan  ekstrak  tumbuh-tumbuhan umumnya memiliki daya antimikroba  (Papageorgiou et  al ,
2010).
Salah  satu  tanaman  yang memiliki  daya  antimikroba  adalah daun  salam  ( Syzygium  polyanthum
(Wight)  Walp.).  Kandungan  kimia daun  salam  adalah  tanin,  flavonoid, dan  minyak  atsiri.  Penelitian  Sari (2012)  menyatakan  bahwa  ekstrak daun  salam  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli dengan
konsentrasi  5%.  Meskipun  daya antimikroba  ekstrak  etanol  daun salam sudah banyak diteliti, tidak ada penelitian tentang kegunaannya sebagai  pengawet  dalam  formula kosmetik.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  menguji  efektivitas  ekstrak etanol  daun  salam  sebagai  pengawet antimikroba  dalam  sediaan  krim
sesuai  prosedur  pengujian  pengawet antimikroba menurut Farmakope
Indonesia Edisi IV.

## METODE PENELITIAN

## A. Alat dan Bahan
Alat:  alat  gelas  (Pyrex), blender  (philips),  jangka  sorong
(Krisbow),  Inkubator  (Jouan  tipe  IG
150),  magnetic  stirer,  pH  meter, neraca  analitik  (Ohaus),  Otoklaf
( Speedy  Autoclave tipe  Vertical
model  HL-340),  rotary  evaporator
(IKA).
Bahan: air suling, daun
salam,  etanol  70%,  etanol  95%,
emulsifier Luxe® (kualitas farmasetis), gliserin (kualitas
farmasetis),  metil  paraben  (kualitas farmasetis),  propil  paraben  (kualitas farmasetis), sunflower  oil (kualitas farmasetis),  media Nutrient  Agar (NA),
Bakteri  uji: Staphylococcus aureus , dan Escherichia coli .
B. Pembuatan Krim
1. Pengolahan Sampel
Daun salam dibersihkan, dirajang,  dan  dikeringkan  selama  1
minggu. Selanjutnya dihaluskan menjadi  serbuk  dan  diayak  dengan pengayak nomor 40.
2. Ekstraksi Sampel
Sebanyak  200  gram  serbuk
kering daun salam dimaserasi dengan
pelarut  etanol  95% sampai  seluruh serbuk terendam, ditutup dan
disimpan  pada  suhu  kamar  selama  5 hari  terlindung  dari  cahaya,  sambil sering  diaduk.  Simplisia disaring sehingga  didapat  maserat.  Ampas dimaserasi  kembali  dengan etanol
95%  menggunakan  prosedur  yang sama, maserasi dilakukan sebanyak 3 kali.  Seluruh  maserat  digabung  dan
dipekatkan  dengan bantuan  alat
rotary  evaporator pada  temperatur tidak lebih dari 50ºC sampai
diperoleh ekstrak kental yang diuapkan  hingga  kental.  Selanjutnya disimpan dalam desikator.
3. Formulasi Ekstrak Daun Salam
Fomula  krim  ekstrak  daun salam  disajikan  di  tabel  I.  Ekstrak didispersikan dalam gliserin. Fase air (air  dan  metil  paraben)  dipanaskan pada  suhu  75 o C.  Fase  minyak ( sunflower  oil , emulsifier  Luxe ®,
propil  paraben)  dipanaskan  pada suhu 70 o C. Fase air dan fase minyak
diaduk sampai homogen. Ditambahkan  dispersi  ekstrak  daun salam dan gliserin. Tabel I . Formula Krim Nama Bahan Fungsi Formula (%) Basis A B Ekstrak daun salam pengawet - 5 10 Metil paraben pengawet 0,18 - - Propil paraben pengawet 0,02 - - Sunflower oil emollien 15 15 15 Emulsifier Luxe® emulgator 5 5 5 Gliserin humektan 20 20 20 Air suling ad pelarut 100 100 100 C. Uji Efektivitas Pengawet Antibakteri  Ekstrak  Bawang Tiwai
Alat  dan  bahan  disterilisasi dalam  autoklaf  pada  suhu  121 0 C selama  15  menit.  Mikroba  uji  yang telah  diremajakan  disuspensikan  ke dalam  larutan  NaCl  0,9%.  Sediaan krim  sebanyak  1  g  diencerkan
dengan  9  ml    NaCl  0,9%  dan dihomogenkan.  Selanjutnya  dituang ke  dalam  cawan  petri  berisi  media dan  0,05  ml  suspensi  bakteri. Diinkubasi selama 24 jam.
Dilakukan perhitungan jumlah
mikroba selama 14 hari  (Depkes RI, 1995).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada pengujian efektivitas
antimikroba ini, digunakan 4 formula yaitu  kontrol  negatif  (basis  krim tanpa  pengawet),  Kontrol  positif (basis  krim  dengan  pengawet),  dan sampel  (formula  A  dan  formula  B).
Sebagai mikroba uji dipilih Staphylococcus aureus dan
Escherichia coli .
Pengujian  efektivitas  pengawet antibakteri dilakukan selama 14 hari, pengamatan  dilakukan  pada  hari  ke- 1,  hari  ke-7  dan  hari  ke-14.  Hasil
pengujian efektivitas pengawet adalah sebagai berikut: Tabel II. Jumlah Bakteri Hidup dalam Krim Hari Pengamatan Bakteri Uji Jumlah Bakteri Hidup (rata-rata) Kontrol negatif Kontrol positif Formula A Formula B 0 E. coli 2159,0 2159,0 2159,0 2159,0 1 1998,0 0 380,5 261,0 7 1885,5 0 242,5 140,5 14 1800,0 0 150,5 82,5 0 S. aureus 2489,0 2489,0 2489,0 2489,0 1 2229,0 0 547,0 270,0 7 2215,0 0 475,0 238,0 14 2107,5 0 325,0 184,0 Keterangan: Kontrol negatif : Formula krim tanpa ekstrak daun salam Kontrol positif : Formula krim tanpa ekstrak daun salam FA : Formula krim mengandung 5% ekstrak daun salam FB : Formula krim mengandung 10% ekstrak daun salam Dari pengamatan yang dilakukan selama 14 hari, didapatkan hasil  bahwa  jumlah  bakteri  yang masih  hidup  mengalami  penurunan selama waktu
pengamatan.
Penurunan  jumlah  bakteri  hidup formula  B  lebih  besar  daripada formula  A  karena  jumlah  ekstrak daun  salam  dalam  formula  C  lebih besar.  Ekstrak  daun  salam  mampu menghambat pertumbuhan bakteri uji karena  mengandung  senyawa  yang
bersifat  antibakteri  di  antaranya flavonoid,  tanin,    dan  minyak  atsiri (Sari,  2012).  Sedangkan  kontrol positif  yaitu  krim  dengan  pengawet paraben mampu menghambat pertumbuhan  bakteri Escherichia
coli dan Staphylococcus  aureus .  Hal ini  menunjukkan  bahwa  pengawet dalam  kontrol  positif  efektif  sebagai pengawet antibakteri menurut
Farmakope Indonesia Edisi IV.
Berdasarkan hasil analisis statistik efektivitas pengawet antibakteri Escherichia coli menggunakan  metode One  Way
Anova dilanjutkan  dengan  uji  LSD,
terdapat  perbedaan  signifikan  antara basis  krim  dengan  formula  A, formula B dan kontrol positif. Begitu pula  hasil  uji  efektivitas  pengawet
terhadap bakteri Staphylococcus
aureus , terdapat perbedaan signifikan antara basis krim dengan formula  A, formula  B  dan  kontrol  positif,  baik pada  hari  ke  1,  ke  7  maupun  ke  14. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  basis krim, formula A dan formula B tidak memiliki  efektivitas  yang  sama seperti kontrol positif untuk menghambat  pertumbuhan  bakteri uji. Tabel III. Persen Kematian Bakteri Uji Hari Pengamatan Bakteri Uji Jumlah Bakteri Mati (%) Basis Kontrol + Formula B Formula C 1 E. coli 7,24 100,00 85,39 93,12 7 12,66 100,00 91,13 94,69 14 16,62 100,00 94,00 97,28 1 S. aureus 10,44 100,00 81,83 90,43 7 11,00 100,00 82,20 91,62 14 15,32 100,00 84,55 92,76 Keterangan: Kontrol negatif : Formula krim tanpa ekstrak daun salam Kontrol positif : Formula krim tanpa ekstrak daun salam FA : Formula krim mengandung 5% ekstrak daun salam FB : Formula krim mengandung 10% ekstrak daun salam Dari hasil perhitungan jumlah
persentase  kematian  bakteri  dapat dilihat  bahwa  semua  formula  krim dapat membunuh bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus .
Kontrol  positif  yang  mengandung pengawet  turunan  paraben  memiliki daya membunuh bakteri paling tinggi dibandingkan  dengan  formula  A  dan B, yaitu dapat membunuh 100%.
Menurut  Farmakope  Indonesia edisi  IV  suatu  pengawet  dikatakan berdaya  guna  bila  daya  hidup
mikroba  setelah  hari  ke  14  tidak lebih  dari  0,1%  dari  jumlah  mikroba
awal suspensi atau jumlah
kematiannya  99,9%.  Berdasarkan syarat daya guna pengawet antimikroba  Farmakope  IV,  kontrol positif  memenuhi  syarat  pengawet antimikroba,  sedangkan  formula  A dan  formula  B  tidak  memenuhi persyaratan.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  uji  efektivitas pengawet  antibakteri,  ekstrak  daun salam konsentrasi 5% dan 10% tidak efektif  sebagai  pengawet  menurut persyaratan Farmakope Indonesia IV.

## DAFTAR PUSTAKA
Byford,  J,R,.  Shaw,  L,E,.  Drew, M,G,B,.  Pope,  G,S,.  Sauer, M,J,. Darbre, P,D,. Oestrogenic activity of parabens  in  MCF7  human breast  cancer  cells. The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology .  Volume  80  Issue 1:49-60 (2002) Calafat,  A,M,.  Ye,  X,.  Wong,  L,. Bishop, A,M,. and Needham, L,L,. Urinary Concentrations of Four Parabens in the U.S. Population. Environmental Health Perspectives. Volume 118 number 5. May 2010 Darbre,  P,D,.  Aljarrah,  A,.  Miller, W,R,. Coldham, N,G,. Sauer,  M,J,.  And  Pope,
G,S,. Concentrations of parabens  in  human  breast tumours. Journal of Applied Toxicology . Volume 24 Issue 1: 5-13 (2004) Ditjen  POM.  1979. Farmakope Indonesia. Edisi III . Departemen  Kesehatan  RI. Jakarta Ditjen  POM.  1995. Farmakope Indonesia. Edisi IV . Departemen  Kesehatan  RI. Jakarta
Legendre,  J,Y,.    Schnitzler,  I.  Li, Q,Y,.  Hausen,  C,.  Huart,
M,.  Luengo,  G,S,.  Abella, M,L,.  and  Roreger  M,. Formulation, characterization, and efficacy  of  an  adenosine- containing  dissolvable  film for  a  localized  anti-wrinkle effect, J.  Cosmet.  Sci.( 58) 147–155 (2007). Lundov, M,D,. Moesby, L,. Zachariae, C,. dan Johansen, J,D,.  Contamination  versus preservation  of  cosmetics:  a review on legislation, usage, infections, and contact allergy. Contact  Dermatitis (60): 70–78 (2009)
Meeker,  J,D,. Yang,  T.  Ye,  X. Calafat,  A,M,.  and  Hauser,
R. Urinary  Concentrations of  Parabens  and  Serum Hormone  Levels,  Semen Quality Parameters, and Sperm DNA Damage. Environmental Health Perspectives .  Volume  119 number 2. February 2011 Pugazhendhi,  D.  Pope,  G.S,.  and Darbre,  P,D,.  Oestrogenic activity of p - hydroxybenzoic acid (common metabolite of paraben esters) and methylparaben  in  human breast  cancer  cell  lines. Journal of Applied Toxicology. Volume 25 Issue 4:301-309 (2005) Papageorgiou,  S.  Varvaresou,  A. Tsirivas.  New  Alternatives to  Cosmetics  Preservation, Int. J. Cosmet. Sci.,
( 61): 107–123 (2010).
Rastogi, ,SC,. Schouten, A. Kruijf, N de. Weijland, J,W,. Contents of  methyl-,  ethyl-,  propyl-,
butyl-  and  benzylparaben  in cosmetic  products. Contact Dermatitis (32), issue 1: 28– 30 (1995)
Sari,  C.  2012.  Uji  daya  antibakteri
ekstrak  etanol  daun  Salam ( Syzygyum polyanthum ) terhadap bakteri Staphylococcus aureus ATCC 6538 dan Escherichia coli ATCC 11229 secara in vitro. Skripsi . Surakarta: Universitas  Muhammadiyah Surakarta. Varvaresou,  A.  Papageorgiou,  S.
Tsirivas,  E.  Protopapa,  E.
Kintziou,  H.  Kefala,  V.  and
Dementzos,C. Self- preserving  cosmetics, Int.  J.
Cosmet.  Sci.,  ( 31): 163–175
(2009)