## Pengaruh Pemberian Folat Dosis Bertingkat terhadap Tingkat Kerusakan Retina
Mencit yang Diberi Metanol 50% Peroral
The Effect Of Folic On Different Dosage Level Against Retina Destruction Level Of Mice With Peroral Methanol 50%
I Gusti Ngurah Agung Darma Putra 1 , Al Munawir 2 ,  Sugiyanta 3
1 Mahasiswa Fakultas Kedokteran Universitas Jember
2 Laboratorium Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran Universitas Jember
3 Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Jember Jalan Kalimantan No. 37 Kampus Tegalboto, Jember 68121 e-mail korespondensi: diahtamankampus@yahoo.com

## Abstrak
Terjadi  berbagai  kasus  keracunan  metanol  beberapa  tahun  terakhir.  Keracunan  metanol menyebabkan  kebutaan,  gangguan  CNS,  dan  asidosis  metabolik.  Salah  satu  pengobatan  pada keracunan  metanol  adalah  menggunakan  asam  folat.  Asam  folat  memiliki  peran  penting  pada metabolisme  metanol  dalam  tubuh.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh pemberian  folat  terhadap  tingkat  kerusakan  retina  pada  keracunan  metanol.  Metode  yang digunakan  eksperimental  laboratoris  ( True  Experimental  Design )  dengan post  test  only  control group  design .  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  lima  kali  pengulangan  pada  setiap  perlakuan. Sampel yang digunakan adalah mencit dengan umur 2-3 bulan dan berat 25-30 gram. Perlakuan pada penelitian ini dibedakan menjadi 5 kelompok yaitu kelompok kontrol hanya diberi pelet dan aquades, kelompok kontrol negatif diberikan metanol 7 g/kgBB, kelompok perlakuan 1, 2, dan 3 diberikan  metanol  7  g/kgBB  serta  folat  dengan  dosis  1  mg/kgBB,  3  mg/kgBB  dan  5  mg/kgBB secara  berurutan.  Lama  perlakuan  dilakukan  selama  24  jam,  kemudian  dilakuan  pengambilan organ mata dan dilakukan pembuatan preparat. Kerusakan retina dinilai dengan skor yang telah ada pada setiap penilaiannya. Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa pemberian asam folat dapat menurunkan tingkat kerusakan retina pada keracunan metanol.
Kata Kunci: Asam folat, metanol, mencit, dan retina.

## Abstract
In recent years, there are many methanol poisoned cases. Methanol poisoned cause of blindness, CNS  problem,  and  metabolic  acidosis.  Folic  acid  is  the  one  of  many  medicinal  treatment  for methanol poisoned. Folic acid has important role on methanol metabolism in our body. The aim of the  study  was  to  known  the  effect  of  addition  folic  acid  on  retina  damage  level  of  methanol poisoned.  The  method  is  experimental  laboratories  (true  experiment  design)  with  post  test  only control  group  design.  The  study  included  5  separate  test.  The  subject  were  mice  which  in  2  -  3 months  age  and  had  weight  about  25  -  35  gr.  There  were  5  groups  subject  in  the  study.  There were control group which given usual meals for mice and aquadest, negative control group which given methanol 7gr/ kgBW, treatment group 1,2, and 3 were given methanol 7gr/kgBW and folic acid 1 mg/kg BW, 3mg/kgBW, and 5 mg/kgBW. The treatment  was given about  24 hours, then the  eyes  of  the  mice  were  taken  to  made  blood  smear.  Damage  of  eyes  were  evaluated  based score determined before. It can be concluded that addition folic acid  can reduce retina damage level of metanol poisoned.
Keywords: Folic acid, methanol, mice, and retina
Pendahuluan Kasus keracunan metanol semakin meningkat  seiring  dengan  ditetapkannya Peraturan  Menteri  Keuangan  mengenai pajak  untuk  minuman  yang  mengandung alkohol (Mulyani, 2010). Ketidakseimbangan harga dan daya beli konsumen
mengakibatkan  produsen  membuat  alkohol dengan  mencampurkan  beberapa  bahan. Metanol  merupakan  salah  satu  bahan campuran yang digunakan.
Metanol  pada  dasarnya  tidak  berbahaya bagi  tubuh,  namun  hasil  metabolisme metanol  dalam  tubuh  berupa  asam  format dapat  mengakibatkan  keracunan  metanol (Pritchard,  2007).  Asam  format  yang terakumulasi  lama  dalam  tubuh  dapat mengakibatkan  rabun,  kebutaan,  gangguan CNS  dan  asidosis  metabolik  (Seme  et  al,
1999). Penanganan pada keracunan metanol masih bersifat supportif (Acute Exposure Guidelines Levels, 2005). Hemodialisis dapat dilakukan  untuk  mengurangi  kadar  asam format  dalam  darah.  Pemberian  antidotum seperti  etanol  dan  fomepizole  dapat diberikan  untuk  mengurangi  akumulasi asam format dalam darah. Asam folat dapat diberikan untuk mempercepat metabolisme metanol.  Pemberian  terapi  tambahan  juga dapat  diberikan  seperti  sodium  bikarbonat untuk  asidosis  metabolik  dan  diazepam untuk  mengurangi  kejang  (Seme  et  al, 1999).
Asam folat dapat mempercepat metabolisme asam format menjadi
karbondioksida  dan air, sehingga akumulasi asam  format  dalam  tubuh  semakin berkurang.  Semakin  cepat  pengeluaran asam  format  maka  efek  kerusakan  dalam tubuh  semakin  berkurang  (Seme  et  al, 1999).

## Metode Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode penelitian  eksperimental  laboratoris  ( True Experimental  Design )  dengan post  test  only control  group  design .  Desain  penelitian  ini dipilih  karena  tidak  dilakukan  pretest terhadap  sampel  sebelum  perlakuan.  Pada penelitain  ini  dilakukan  randomisasi  baik
pada  kelompok  kontrol  maupun  kelompok eksperimen.  Kelompok-kelompok  tersebut dianggap sama sebelum dilakukan perlakuan. Selanjutnya dilakukan pengukuran pengaruh perlakuan (intervensi)  pada  kelompok  eksperimen dengan  cara  membandingkan  dengan kelompok kontrol.
Penelitian  ini  mengambil  2  tempat  sebagai lokasi  pelaksanaan,  yaitu  :  Laboratorium Faal  Fakultas  Kedokteran  Gigi  Universitas Jember  sebagai  tempat  perlakuan  pada masing-masing kelompok dan Laboratorium Histo-Patologi Anatomi Fakultas Kedokteran
Universitas Jember sebagai tempat pemeriksaan  preparat  mata.  Populasi penelitian    ini  adalah  mencit  dengan  umur 2-3 bulan dan berat 25-30 gram.
Alat-alat  yang  diperlukan  diantaranya adalah kandang hewan coba berukuran 40 x 30  x  20  cm,  botol  minum  hewan  coba, wadah  makanan,  kawat  kasas  penutup, sekam, sonde lambung, papan fiksasi, jarum pentul,  pinset,  scapel,  gelas  ukur  dan timbangan  analitik.  Bahan-bahan  yang dipersiapkan  adalah  metanol  100%,  asam folat, CMC Na, aquades dan formalin.
Pembuatan  larutan  metanol  50%  dilakukan dengan cara mencampurkan  metanol 100% dan  aquades  dengan  perbandingan  1:1. Untuk  mempermudah  pemberian  asam folat  dilakukan  suspensi  asam  folat  dari bentuk  tablet  ke  dalam  bentuk  cair. Sebanyak  20  mg  asam  folat  tablet  digerus hingga  membentuk  serbuk.  Karena  serbuk asam  folat  tidak  larut  dalam  air  maka suspensi  dilakukan  dengan  menggunakan CMC  Na  1%.  Sebanyak  0,4  gram  CMC  Na dilarutkan dalam 40 ml air  hangat sehingga membentuk  larutan  CMC  Na  1%.  20  mg serbuk  asam  folat  kemudian  di  campur dengan 40 ml larutan CMC Na  1% sehingga terbentuk  suspensi  asam  folat  dengan perbandingan  1  mg  asam  folat  dalam  2  ml CMC Na 1%.
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  lima  kali pengulangan  pada  setiap  perlakuannya. Kelompok  perlakuan  dalam  penelitian  ini dibagi  menjadi  5  yaitu  kelompok  kontrol yang  hanya  diberi  pelet  dan  aquades, kelompok  kontrol  negatif  yang  diberi metanol  7  g/kgBB,  kelompok  perlakuan  I diberi  metanol  7  g/kgBB  dan  asam  folat  1
mg/kgBB,  kelompok  perlakuan  II  diberi metanol  7  g/kgBB  dan  asam  folat  3 mg/kgBB,  serta  kelompok  perlakuan  III diberi  metanol  7  g/kgBB  dan  asam  folat  5 mg/kgBB.  Pemberian  asam  folat  pada kelompok perlakuan I, II dan III dilakukan 1- 2  jam  sebelum  pemberian  menanol. Pemberian  jeda  waktu  dilakukan  untuk mengurangi  terjadinya  kesalahan  pada penyerapan  asam  asam  folat.  Pada penelitan  sebelumnya  didapatkan  bahwa pemberian  metanol  50%  peroral  dapat mengakibatkan  terjadinya  kerusakan  pada sel gaster (Fadillal, 2010).
Lama  perlakuan  dilakukan  selama  24  jam. Setelah 24 jam, dilakukan pengambila organ mata  dan  dilakukan  fiksasi  dalam  formalin 10%  minimal  24    jam.  Pembuatan  preparat dilakukan  dengan  pengecatan  hematoksilin eosin  (HE).  Penilaian  kerusakan  retina diambil  dari  penilaian  histopatologi  yang dirumuskan  oleh  El-Bakary et  al (El  Bakary et  al,  2006).  Analisis  data  dilakukan menggunakan  uji  o ne  way Anova  yang sebelumnya  telah  dilakukan  uji  normalitas dengan Kolmogorov-Smirnov dan uji normalitas  menggunakan  uji Levene. Untuk mengetahui  perbedaan  bermakna  pada setiap  kelompok  dilakukan  uji Post  Hoc sebagai uji lanjutan.

## Hasil Penelitian
Rata-rata  hasil  yang  diperoleh  pada  setiap kelompok  perlakuan  menunjuk  hasil  yang signifikan  terhadap  tingkat  kerusakan retina. Pada  perlakuan I dengan pemberian asam  folat  dosis  1  mg/kgBB  menunjukkan rata-rata  nilai  histopatologi  kerusakan retina sebesar 11,2 dalam 5 kali
pengulangan.,  dengan  standar  deviasi sebesar  1,09.  Pada  perlakuan  II  dengan pemberian  asam  folat  dosis  3  mg/kgBB menunjukkan  rata-rata  nilai  histopatologi kerusakan  retina  sebesar  14  dalam  5  kali pengulangan.,  dengan  standar  deviasi  0,7. Pada  perlakuan  III  dengan  pemberian  asam folat  dosis  5  mg/kgBB  menunjukkan  rata- rata  nilai  histopatologi  kerusakan  retina sebesar  15.8  dalam  5  kali  pengulangan., dengan standar deviasi 2,05.
Untuk  kelompok  kontrol  tanpa  pemberian metanol  dan  asam  folat  didapatkan  nilai
rata-rata  sebesar  20  dalam  5  kali pengulangan,  dengan  standar  deviasi  0. Pada  kontrol  negatif  yang  hanya  diberi metanol 7 g/kgBB didapatkan rata-rata nilai histopatologi  kerusakan  retina  sebesar  5.4 dalam  5  kali  pengulangan,  dengan  standar deviasi 1,67.
Tabel 1. Nilai histopatologi kerusakan retina
Kelompok  Kerusakan  retina  (Rerata±
Std. Deviasi) K- 5,4±1,67 K+ 20±0,00 P1 11,2±1,09 P2 14±0,7 P3 15,8±2,05
Data  tabel  1  diatas  memperlihatkan kenaikan  nilai  histopatologi  kerusakan retina.  Hal  ini  berarti  peningkatan  dosis folat  yang  diberikan  menurunkan  tingkat kerusakan retina.

## Pembahasan
Berdasarkan  hasil  penelitian  diatas  dapat diketahui  bahwa  pemberian  asam  folat mengurangi  tingkat  kerusakan  retina  pada keracunan  metanol.  Hal  tersebut  dilihat pada uji one way Anova  yang menunjukkan nilai  signifikansi  0,00  ( sig .  <  0,05)  yang berarti
terdapat perbedaan nilai
histopatologi kerusakan retina.
Pada  uji Post  hoc menunjukkan  perbedaan nilai  kerusakan  setiap  kelompok.  Pada kelompok  kontrol  yang  diberi  pelet  dan aquades didapatkan rata-rata nilai histopatologi  kerusakan  retina  yang  lebih tinggi  dibandingkan  kelompok  kontrol negatif  yang  diberi  metanol  50%  dengan dosis  7  g/kgBB,  dan  hasil  ini  bermakna secara statistik ( sig. = 0,000). Hasil tersebut sesuai karena pada konsumsi metanol dapat mengakibatkan  kebutaan  dan  toksisitas pada  organ  visual  terutama  kerusakan retina  akibat akumulasi asam format dalam darah [3, 9, 12]. Pada gambaran histpatologi retina  yang  mengalami  kerusakan  akan
tampak  pembengkakan  fotoreseptor  dan terjadi  vakuolisasi  sel  retina  (Shasriari  dan Hosseini, 2000). Metanol yang diabsorpsi ke dalam  tubuh  akan  dimetabolisme  di  hati oleh  beberapa  enzim.  Enzim  alkohol dehidrogenase mengoksidasi metanol menjadi formaldehyde dengan waktu paruh 1-2 menit dan enzim aldehide dehidrogenase  mengoksidasi  formaldehyde menjadi  asam  format  (Seme  et  al,  1999). Akumulasi  asam  format  dalam  tubuh mengakibatkan gangguan fungsi mitokondria di saraf optik, yang
menyebabkan  hiperemi,  edema  dan  atrofi saraf  optik.  Demielinisasi  saraf  optik  terjadi akibat  dari  perusakan  mielin  oleh  asam format.  Kerusakan  yang  lebih  besar  terjadi pada  saraf  optik  bagian  retrolaminar, dengan  pembengkakan  intra-akson  dan kerusakan organ dan kerusakan pada retina (Casarett et al, 1996).
Perbandingan  kelompok  kontrol  negatif dengan  kelompok  perlakuan I,  perlakuan  II, dan perlakuan III terdapat peningkatan nilai histopatologi kerusakan retina yang
bermakna  secara  statistik  ( sig. =  0,000). Hasil  tersebut  sesuai  dengan  penelitian sebelumnya  dimana  pemberian  asam  folat dapat  menurunkan  kerusakan  retina  (Seme et  al,  2001).  Hal  ini  karena  asam  format yang terakumulasi dalam darah di
metabolisme  oleh  asam  folat  menjadi karbondioksida  dan  air.  Metabolisme  oleh asam  folat  mengakibatkan  ekskresi  asam folat  lebih  cepat  dan  akumulasi  di  dalam tubuh  tidak  lama  sehingga  efek  terhadap kerusakan  retina  semakin  berkurang  (Seme et al, 1999).
Perbandingan kelompok perlakuan I dengan kelompok  perlakuan  II  terdapat  perbedaan yang  bermakna  dengan  nilai significancy 0,003. Hal ini karena perbedaan dosis asam folat  yang  bermakna  yaitu  perlakuan  I  1 mg/kgBB dan perlakuan II 3 mg/kgBB.
Perbandingan kelompok perlakuan I dengan kelompok  perlakuan III terdapat perbedaan yang  bermakna  dengan  nilai significancy 0,000. Hal ini karena perbedaan dosis asam folat  yang  bermakna  yaitu  perlakuan  I  1 mg/kgBB dan perlakuan III 5 mg/kgBB.
Perbandingan kelompok perlakuan II dengan  kelompok  perlakuan  III  terdapat perbedaan  yang  bermakna  dengan  nilai
significancy 0,043. Hal ini karena perbedaan dosis  asam  folat  yang  bermakna  yaitu perlakuan  II  3  mg/kgBB  dan  perlakuan  III  5 mg/kgBB.
Asam  folat  diberikan  untuk  mengurangi terjadinya  kerusakan  akibat  metabolisme metanol  dalam  tubuh.  Asam  folat  bekerja dengan mempercepat oksidasi asam format menjadi karbondioksida dan air (Seme et al, 1999).  Asam  format  merupakan  hasil metabolisme metanol di hati yang mengakibatkan  berbagai  kerusakan  sel  dan dapat  mengakibatkan  kematian.  Sesitivitas suatu  spesies  terhadap  asam  formik tergantung  dari  tingkat  tetrahydrofolate dan  10-formylotetrahydrofolate  dalam  hati yang  berperan  pada  metabolisme  asam formik tersebut. Pada spesies dengan kadar folat  tinggi  tidak  terlalu  menunjukan sindrom  keracunan  metanol  seperti  pada spesies  yang  memiliki  kadar  folat  dalam tubuh lebih rendah (El Bakary et al, 2006).
Terakumulasinya  asam  formik  dalam  darah dapat  mengakibatkan  asidosis  metabolik yang berakibat fatal. Akumulasi asam formik dalam  darah  dapat  dikurangi  dengan pemberian  asam  folat  secara  intravena. Penurunan  tersebut  terjadi  karena  folat meningkatkan  metabolisme  asam  formik menjadi karbondioksida dan air (Seme et al, 1999).  Pemberian  asam  folat  dapat memperbaiki  pH  darah  akibat  asidosis karena  metanol,  namun  pada  beberapa keadaan  tidak  terjadi  perbaikan  pada kerusakan mata (Moghadami dan Masoumpoor, 2002).

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  asam folat  dapat  menurunkan  tingkat  kerusakan retina.  Pada  pemberian  asam  folat  dengan dosis  1  mg/kgBB,  3  mg/kgBB,  dan  5 mg/kgBB secara signifikan dapat menurunkan tingkat kerusakan retina dilihat dari gambaran histopatologinya.
Namun,  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  dengan  jumlah  sampel  yang  lebih besar,  waktu  penelitian  yang  lebih  lama, serta  dengan  dosis  asam  folat  yang  lebih luas.  Penelitian  lebih  lanjut  mengenai  uji dosis  efektif  dan  uji  toksisitas  pemberian
asam  folat  pada  penangakan  keracunan metanol juga perlu dilakukan.

## Ucapan Terima Kasih
Ngurah  Agung  mengucapkan  kepada  dr. Enny Suswati, M. Kes, selaku Dekan Fakultas Kedokteran  Universitas  Jember  atas  segala fasilitas  dan  kesempatan  yang  diberikan selama  menempuh  pendidikan  di  Fakultas Kedokteran  Universitas  Jember;  dr.  Al Munawir,  M.  Kes,  Ph.D,  selaku  Dosen pembimbing  utama  dan  dr.  Sugiyanta,  M. Ked,  selaku  Dosen  Pembimbing  Anggota yang  telah  meluangkan  waktu,  pikiran, tenaga  dan  perhatiannya  dalam  penulisan tugas akhir; dr. Muhammad Ihwan Narwanto,  M.  Sc,  dan  dr.  Ali  Santosa sebagai  dosen  penguji  yang  telah  banyak memberikan kritik dan saran yang membangun  dalam  penulisan  tugas  akhir; semua  pihak  yang  telah  membantu terselesaikannya tugas akhir ini.

## Daftar Pustaka
Acute  Exposure  Guidelines  Levels  (AEGLs) Interim 2. 2005. Methanol . CAS Reg No : 67-56-1.
Casarett,  L.  J.,  Doull,  J.,  and  Klaassen,  C.  D. 1996. Casarett  and  Doull's  Toxicology: The  Basic  Science  of  Poisons.  5th  ed . New York : McGraw-Hill ; 604-5, 756-7.
El-Bakary,  A.  A.,  El-Dakrory,  S.  A.,  Sohayla, M.  A.,  Hasanein,  N.  A.,  and  Malek,  H. A. 2006. Retinaranitidine as an alcohol dehydrogenase  inhibitor  in  acute methanol  toxicity  in  rats .  Journal  of
Toxicology  and  Environmental  Health
Sciences.  ISSN  9820.  Vol.  3  (6):  145- 154.
Fadilla,  P.  P.  2010.
Pengaruh  Lama
Pemberian  Metanol  50%  Peroral Terhadap Tingkat Kerusakan Sel Gaster Tikus  Wistar .  Fakultas  Kedokteran Universitas Diponogoro.
Moghadami,  M.,  and  Masoumpoor,  M. 2002. Therapeutic  response  to  fonilic acid in methanol poisoning epidemic in shiraz . Iran J Med Sci ; 33 (1) : 22-26.
Mulyani, S. I. 2010. “ Tarif Cukai Etil Alkohol. Minuman  yang  Mengandung  Etil Alkohol, dan Konsentrat yang Mengandung  Etil  Alkohol ”.  Peraturan Menteri Keuangan Nomor 62/PMK.011/2010.  Menteri  Keuangan Republik Indonesia.
Pritchard, J. D. 2007. Methanol Toxicological Overview . CHAPD : HPA.
Seme,  MT.,  Summerfelt,  P.,  Henry,  MM., Neitz,  J.,  &  Eells,  JT.  1999.  Formate- induced  inhibition  of  photoreceptor function  in  methanol  intoxication. Pharmacol., 289(1): 361-370.
Seme,  MT.,  Summerfelt,  P.,  Neitz,  J.,  Eells, JT.,  &  Henry,  MM.    2001.  Differential recovery  of  retinal  function  after mitochondrial  inhibition  by  methanol intoxication. Investig. Ophthalmol. Vis. Sci., 42: 834-841.
Shasriari,  H.  A.,  dan  Hosseini,  R.  A.  2000. Preventive  Effects  of  Vitamin  B12  and
Folic Acid in Metanol-Induced
Retinopathy  in  an  Animal  Model. Medical  Journal  of  The  Islamic Republic Of Iran. May ; 14(1) : 83-86.