POTENSI GEL HANDSANITIZER EKSTRAK DAUN KITOLOD (Isotoma longiflora L.) SEBAGAI ANTIBAKTERI TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus
Potency of Gel Handsanitizer Kitolod (Isotoma longiflora L.) Leaves Extract As Antibacterial Against Staphylococcus aureus
Heny Setiyowati 1) , Septiana Laksmi Ramayani 2*)
1) Politeknik Katolik Mangunwijaya, Jl. Gajahmada No 91, Semarang, Jawa Tengah Indonesia
2) Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Surakarta, Jl. Ksatrian No 2 Danguran, Klaten, Jawa Tengah Indonesia
* e-mail: septianaLR@gmail.com

## ABSTRAK
Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri  Gram  positif  dan  bakteri  komenseal  yang mengkolonisasi 30% individu sehat di berbagai bagian tubuh. Ekstrak daun kitolod ( Isotoma longiflora L.)  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan berpotensi  untuk  dikembangkan  menjadi  sediaan  gel  handsanitizer.  Tujuan  penelitian  ini adalah  untuk  mengetahui  potensi  gel  handsanitizer  ekstrak  daun  kitolod  sebagai  antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus . Ekstrak daun kitolod dimaserasi dengan etanol 96% dan  kemudian  diformulasi  menjadi  sediaan  gel  handsanitizer.  Pengujian  antibakteri  dengan metode  Kirby  Bauer  dengan  menggunakan  kontrol  negatif  DMSO  10%  dan  basis  gel sedangkan  kontrol  positifnya  sediaan  gel  handsanitizer  di  pasaran.  Hasil  penelitian menunjukkan  kontrol  negatif  tidak  menunjukkan  aktivitas  antibakteri,  sedangkan  kontrol positif, ekstrak daun kitolod dan sediaan gel handsanitizer ekstrak daun kitolod memberikan zona  bening  yang  menandakan  adanya  aktivitas  antibakteri  terhdap  bakteri Staphylococcus aureus. Aktivitas antibakteri  sediaan gel  handsanitizer ekstrak daun kitolod  tergolong  dalam kategori kuat.
Kata kunci: Staphylococcus aureus, gel handsanitizer, Isotoma longiflora L., daun

## ABSTRACT
Staphylococcus  aureus  is  a  Gram  positive  and  commensal  bacteria  that  colonizes  30%  of healthy individuals in various parts of the body. Kitolod ( Isotoma longiflora L .) leaf extract has antibacterial activity against Staphylococcus aureus bacteria and may be developed into hand sanitizer gel preparations. The purpose of this study was to determine the antibacterial activity of the hand sanitizer gel preparation of kitolod leaf extract. Kitolod leaf extract  was macerated  with  96%  ethanol  and  then  formulated  into  a  hand  sanitizer  gel  preparation. Antibacterial activity was carried out using the Kirby Bauer method using a negative control of  10%  DMSO  and  a  gel  base,  while  the  positive  control  was  a  gel  hand  sanitizer  on  the market. The results showed that the negative control did not show antibacterial activity, while the  positive  control,  kitolod  leaf  extract  and  hand  sanitizer  gel  preparations  of  kitolod  leaf extract  gave  a  clear  zone  indicating  the  presence  of  antibacterial  activity  against Staphylococcus  aureus  bacteria.  The  antibacterial  activity  of  the  kitolod  leaf  extract  hand sanitizer gel was classified in the strong category.
Keywords: Staphylococcus aureus, gel handsanitizer, Isotoma longiflora L , leaves

## PENDAHULUAN
Staphylococcus  aureus adalah  bakteri  gram  positif  dan  bakteri  komenseal  yang mengkolonisasi  30%  individu  sehat  di  berbagai  bagian  tubuh  (Rasheed  &  Hussein,  2021). Stphylococcus aureus merupakan penyebab utama gangguan kulit, jaringan lunak, pernafasan, tulang, sendi  dan  endovascular (Gupta et  al ., 2020). Penularan Staphylococcus aureus dapat terjadi  melalui  kontak  dekat  atau  langsung  dari  satu  orang  ke  orang  lain,  berbagi  barang pribadi,  kontaminasi  makanan  dan  kontaminasi  fomite  seperti  ganggang  pintu  (Rasheed  & Hussein,  2021).  Oleh  karena  itu,  berbagai  tindakan  perlu  dilakukan  untuk  mengelola  dan mengurangi  kolonisasi  dan  menghilangkan  infeksi,  contohnya  dengan  menggunakan desinfektan seperti handsanitizer.
Handsanitizer  merupakan  pembersih  tangan  yang  dioleskan  ke  tangan  dengan  tujuan menghilangkan  pathogen  umum  (organisme  penyebab  penyakit).  Pembersih  tangan  dapat berupa gel dan rekomendasi penggunaannya adalah ketika sabun dan air tidak tersedia untuk mencuci  tangan  atau  ketika  mencici  tangan  berulang  kali  merusak  penghalang  alami  kulit. (Fathoni et  al. ,  2019).  Dalam  sediaan  dipasaran,  gel  handsanitizer  mengandung  senyawa alkohol  dengan  konsentrasi  60-80%.  Penggunaan  alkohol  secara  terus  menerus  dapat menyebabkan efek iritasi pada kulit sehingga dapat digunakan senyawa lain dari bahan alam yang  memiliki  aktivitas  antibakteri  untuk  mengurangi  penggunaan  alkohol  (Holifah et  al ., 2020).
Ekstrak daun kitolod diketahui memiliki daya hambat terhadap bakteri Staphylococcus aureus . Daya hambat daun kitolod karena  mengandung senyawa metabolit sekunder alkaloid, flavonoids,  saponin,  tannin,  triterpenoid/steroid  (Gupta et  al .,  2020).  Ekstrak  daun  kitolod pada konsentrasi 300 mg/mL dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus sebesar 14,3  mm.  Aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  daun  kitolod  tergolong  kuat  sehingga  berpotensi untuk dikembangkan menjadi sediaan gel handsanitizer (Oktaviani, 2019). Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi gel handsanitizer ekstrak daun kitolod sebagai antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus.

## METODE Peralatan
Seperangkat  alat  ekstraksi  maserasi,  timbangan  analitik  (Ohaus), moisture  analyzer (Ohaus), inkubator (Memmert), oven (Memmert), jangka sorong.

## Bahan
Daun kitolod, etanol 96%, aquadest steril, DMSO 10%, kertas cakram, HPMC K100M, propilen  glikol,  nutrient  agar,  biakan Staphylococcus  aureus, sediaan  pasaran  gel handsanitizer,  NaCl  0,9%,  serbuk  Mg,  HCL  2N,  HCl  pekat,  pereaksi  Dragendorf,  pereaksi Mayer

## Ekstraksi Daun Kitolod
Daun  kitolod  yang  berwarna  hijau  tua  dan  diperoleh  dari  Kecamatan  Pabelan, Kabupaten  Semarang,  Jawa  Tengah.  Daun  kitolod  selanjutnya  dibuat  menjadi  simplisia dengan  pengeringan  menggunakan  oven  40-50°C  dan  selanjutnya  diserbukkan  hingga menjadi  serbuk  simplisia.  Sebanyak  4,5  kg  serbuk  simplisia  dimaserasi  menggunakan  45  L etanol  96%.  Filtrat  yang  dihasilkan  selanjutnya  diuapkan  hingga  didapatkan  ekstrak  kental. Ekstrak  kental  yang  dihasilkan  dilakukan  uji  organoleptis,  perhitungan  rendemen  dan  susut pengeringan.

## Pembuatan Sediaan Gel Handsanitizer
Gel  handsanitizer  dibuat  berdasarkan  modifikasi  dari  formula  Pontoan et  al (2016) dengan memodifikasi pada zat aktif dan bahan pengawet yang digunakan. Konsentrasi ekstrak daun  kitolod  yang  digunakan  adalah  30%.  Sediaan  handsanitizer  yang  dibuat  sebanyak  50 gram.
Tabel 1. Formula Sediaan Gel Handsanitizer Ekstrak Daun Kitolod (Isotoma longiflora) Nama bahan Fungsi Konsentrasi Ekstrak daun kitolod Zat aktif 30 HPMC K100M Gelling agent 2 Propilen glikol humektan 10 Natrium benzoate Pengawet 0,1 Aquadest ad pelarut 100
Pembuatan sediaan dilakukan dengan cara basis HPMC K100M dikembangkan kedalam 50 mL aquades  dengan  suhu  80º  C  sambil  diaduk.  Larutkan  natrium  benzoat  dengan  aquadest  aduk  hingga larut  lalu  tambahkan  propilen  glikol  aduk  homogen.  Ekstrak  kental  daun  kitolod  dimasukkan  dalam campuran,  selanjutnya  dihomogenkan  dalam  basis  HPMC  K100M  dan  dicukupkan  dengan  aquadest ad 50 g. gel handsanitizer esktrak daun kitolod masukkan kedalam wadah dan disimpan.

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  potensi  gel  handsanitizer  ekstrak  etanolik  daun  kitolod  dilakukan  metode  Kirby  Bauer dengan  mengukur  zona  hambat  yang  terbentuk.  Sebanyak  1  mL  suspensi  bakteri  dimasukan  dalam cawan petri selanjutnya dituangkan media Nutrient Agar, lalu homogenkan. Media didiamkan selama 15  menit  hingga  mengeras.  Kertas  cakram  steril  dicelupkan  dalam  masingmasing  sampel.  Gel hand sanitizer yang ada dipasaran digunakan sebagai kontrol positif dan larutan DMSO 10% dan babis gel sebagai  kontrol  negatif.  Pengamatan  dilakukan  setelah  inkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37˚C. Diameter zona hambat diukur menggunakan milimeter blok.
Gambar 1. Desain uji aktivitas antibakteri pada cawan petri
(a) Ekstrak daun kitolod (b) gel handsanitizer ekstrak daun kitolod (c) DMSO 10% (d) basis gel handsanitizer (e) sediaan pasaran gel handsanitizer

## Analisis Data
Analisis data secara statistika menggunakan Kruskal Wallis dan Mann-Whitney dengan taraf kepercayaan 95%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil ekstrak daun kitolod diperoleh organoleptis  ekstrak kental, bau khas kitolod dan warna  hijau  kehitaman.  Ekstrak  terbentuk  sebagai  akibat  proses  penguapan  filtrat.  Warna ekstrak  hijau  kehitaman  karena  adanya  senyawa  klorofil  pada  daun  dan  pemanasan  yang mengakibatkan  teroksidasinya  ekstrak  (Ramayani,  Nugraheni, et  al .,  2021).  Rendemen ekstrak yang diperoleh adalah 10,57 % dengan susut pengeringan 5,00%.
Ekstrak  selanjutnya  dibuat  menjadi  sediaan  gel  handsanitizer.  HPMC  K100M digunakan sebagai gelling agent . HPMC dapat membentuk massa gel yang jernih, netral dan viskositas  yang  stabil.  Propilen  glikol  sebagai  humektan  dapat  mengurangi  penguapan  air pada sediaan (Rahmawati et al., 2017). Natrium benzoate digunakan sebagai pengawet karena memiliki sifat larut dalam air yang aman digunakan dalam sediaan farmasi maupun kosmetika .  Sediaan  gel  handsanitizer  ekstrak  daun  kitolod  memiliki  organolpetis  berwarna  hijau kehitaman yang sesuai dengan warna ekstrak daun kitolod.
Skrining  fitokimia  ekstrak  dan  sediaan  gel  handsanitizer  dilakukan  untuk  mengetahui kandungan  senyawa  dalam  ekstrak  dan  sediaan  gel  handsanitizer.  Hasil  skrining  fitokimia sesuai  dengan  penelitian  Mareintika,  (2021),  yaitu  mengandung  alkaloid,  flavonoid  dan
saponin, yang diduga berkhasiat sebagai antibakteri. Pada Tabel 2 dapat dilihat hasil skrining fitokimia.
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak dan Sediaan Gel Handsanitizer Ekstrak Daun Kitolod
Larutan uji Senyawa  yang didentifikasi Warna sebelum direaksikan Pereaksi Warna setelah direaksikan Hasil menurut pustaka Keterangan Ekstrak daun kitolod alkaloid Hijau kehitaman Reagen Mayer Endapan putih Endapan putih 1 + Hijau kehitaman Reagen Dragendorf Endapan jingga Endapan jingga 1 + Flavonoid Hijau kehitaman Serbuk  Mg  – HCl pekat Merah lembayung Merah lembayung 2 + Saponin Hijau kehitaman Aquadest – HCL Buih Buih 2 + Sediaan gel handsanitizer ekstrak daun kitolod alkaloid Hijau kehitaman Reagen Mayer Endapan putih Endapan putih 1 + Hijau kehitaman Reagen Dragendorf Endapan jingga Endapan jingga 1 + Flavonoid Hijau kehitaman Serbuk  Mg  – HCl pekat Merah lembayung Merah lembayung 2 + Saponin Hijau kehitaman Aquadest – HCL Buih Buih 2 +
1 Ergina dkk, 2014
2 Marliana dkk, 2005
Metode difusi kertas cakram ( Kirby-Bauer ) merupakan metode yang cepat, mudah dan murah  untuk  melakukan  uji  aktivitas  antibakteri.  Zona  hambat  disekitar  cakram  yang  diberi larutan uji menunjukkan adanya aktivitas antibakteri. Nutrient Agar digunakan sebagai media karena merupakan media yang baik untuk pertumbuhan beberapa gram positif maupun negatif (Nurhamidin et al ., 2021).
DMSO  10%  merupakan  pelarut  organik  yang  tidak  memiliki  aktivitas  antibakteri, sehingga  aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  kitolod  maupun  sediaan  gel  handsanitizer  tidak dipengaruhi oleh DMSO 10% sebagai pelarut. Selain itu, DMSO 10% juga dapat melarutkan berbagai  senyawa  polar  maupun  non  polar.  Basis  gel  merupakan  sediaan  yang  tidak mengandung  senyawa  aktif,  dan  digunakan  untuk  memastikan  bahwa  komponen  dalam formula  tidak  berpengaruh  terhadap  aktivitas  antibakteri  yang  dihasilkan  oleh  sediaan  gel handsanitizer (Ramayani, Hastuti, et al., 2021).  Sedangkan sebagai kontrol positif digunakan sediaan  pasaran  yang  berfungsi  sebagai  gel  handsanitizer.    Hasil  uji  aktivitas  antibakteri sediaan gel handsanitizer ekstrak daun kitolod dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3.  Hasil  uji  potensi  sediaan  gel  handsanitizer  ekstrak  daun  kitolod  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri
Staphylococcus aureus Perlakuan Zona hambat (mm) Ekstrak daun kitolod 16 a Sediaan gel handsanitizer ekstrak daun kitolod 12,8 b DMSO 10% 0 c Basis gel 0 c Sediaan gel handsanitizer di pasaran 21.6 d
Perbedaan huruf menunjukkan p<0.05
Tabel  3  menunjukkan  bahwa  DMSO  10%,  dan  basis  gel  tidak  menunjukkan  zona hambar,  hal  ini  menegaskan  bahwa  pelarut  dan  basis  yang  diguanakan  dalam  penelitian  ini tidak memiliki aktivitas antibakteri dan tidak berpengaruh terhadap aktivitas antibakteri yang disebabkan  oleh  ekstrak  dan  sediaan  gel  handsanitizer  ekstrak  daun  kitolod.  Ekstrak  dan
sediaan  gel  handsanitizer  ekstrak  daun  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus .  Aktivitas  antibakteri  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  zona  hambat berupa  daerah  bening  disekitar  kertas  cakram.  Namun  aktivitas  antibakteri  yang  dihasilkan sediaan gel handsanitizer ekstrak daun kitolod masih lebih kecil dibandingkan dengan sediaan gel  handsanitizer  di  pasaran.  Sediaan  gel  handsanitizer  di  pasaran  diketahui  mengandung senyawa  alkohol  dengan  konsentrasi  70-95%.  Senyawa  alkohol  dapa  berfungsi  sebagai antibakteri dengan mekanisme koagulasi/denaturasi protein dan lipid. Aktivitas ini bergantung pada  ketersediaan  air  karena  kebutuhan  air  untuk  mecapai  permeabilitas  membrane  sel. Setelah konsentrasi intraseluler, komponen sitoplasma menggumpal dan gangguan membrane sel yang diikuti oleh lisis sel (Skelley, 2016).
Sediaan  gel  handsanitizer  diketahui  memiliki  zona  hambat  yang  berbeda  signifikan lebih  rendah  dibandingkan  ekstrak  daun  kitolod.  Formulasi  menyebabkan  adanya  proses pelepasan  zat  aktif  dari  basis  sehingga  berpengaruh  pada  aktivitas  yang  dihasilkan.  Sediaan gel  handsanitizer  ekstrak  daun  kitolod  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  tergolong  dalam kategori  kuat.  Berdasarkan  hasil  skrining  fitokimia  ekstrak  dan  sediaan  gel  handsanitizer ekstrak  daun  kitolod,  senyawa  yang  bertanggung  jawab  pada  aktivitas  antibakteri  adalah senyawa  alkaloid,  flavonoid  dan  saponin.  Komponen  peptidoglikan  pada  sel  bakteri  dapat diganggu oleh senyawa alkaloid sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan  terjadinya  kematian  sel  Protein  ekstraseluler  bakteri  membentuk  senyawa kompleks dengan flavonoid dan terlarut  sehingga dapat  merusak  membrane  sel  bakteri  yang diikuti  dengan  keluarnya  senyawa  intraseluler  (Shamsudin et  al .,  2022).  Saponin  dapat mendenaturasi  protein  karena  permukaan  saponin  yang  serupa  dengan  deterjen  sehingga tegangan permukaan dinding sel bakteri akan diturunkan dan permeabilitas membrane bakteri dirusak  sehingga  kelangsungan  hidup  bakteri  terganggu.  Hal  ini  menyebabkan  sitoplasma mengalami kebocoran dan keluar dari sel yang mengakibatkan kematian sel (Maatalah et al ., 2012).

## KESIMPULAN
Sediaan  gel  handsanitizer  ekstrak  daun  kitolod  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dan  tergolong  kuat . Perlu  dilakukan  uji  karakteristik  dan stabilitas sediaan gel handsanitizer.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Politeknik  Katolik  Mangunwijaya  yang  telah  mengijinkan melakukan penelitian di laboratorium yang dimiliki.

## DAFTAR PUSTAKA
Fathoni, D. S., Fadhillah, I., & Kaavessina, M. (2019). Efektivitas Ekstrak Daun Sirih Sebagai Bahan  Aktif  Antibakteri  Dalam  Gel  Hand  Sanitizer  Non-Alkohol. Equilibrium  Journal of Chemical Engineering , 3 (1), 9. https://doi.org/10.20961/equilibrium.v3i1.43215 Gupta,  N.,  Jain,  V.,  Joseph,  M.  R.,  &  Devi,  S.  (2020).  Asian  Journal  of  Pharmaceutical Research  and  Development. Asian  Journal  of  Pharmaceutical  Research  and Development , 8 (1), 86–93. http://dx.doi.org/10.22270/ajprd.v8i1.653%0Ahttp://ajprd.com
Holifah, Ambari, Y., Ningsih, A. W., Sinaga, B., & Nurrosyidah, I. H. (2020). EFEKTIFITAS ANTISEPTIK  GEL  HAND  SANITIZER  EKTRAK  ETANOL  PELEPAH  PISANG KEPOK  (Musa  paradisiaca  L.)  TERHADAP  BAKTERI  Staphylococcus  aureus  DAN Escherihia coli. Jurnal Ilmiah
Medicamento , 6 (2), 123–132. https://doi.org/10.36733/medicamento.v6i2.1107
Maatalah, M. B., Bouzidi, N. K., Bellahouel, S., Merah, B., Fortas, Z., Soulimani, R., Saidi,
S., & Derdour, A. (2012). Antimicrobial activity of the alkaloids and saponin extracts of Anabasis  articulata. Journal  of  Biotechnology  and  Pharmaceutical  Research , 3 (3),  54– 57. http://www.e3journals.org/JBPR
Mareintika,  R.  (2021).  Uji  Efek  Pemberian  Antibakteri  ekstrak  Daun  Kitolod  (  Isotoma Longiflora  (L)  Presl.  )  terhadap  Staphylococcus  Aureus. Jurnal  Mediuka  Hutama , 02 (04), 1084–1088.
Nurhamidin,  A.  P.  R.,  Fatimawali,  F.,  &  Antasionasti,  I.  (2021).  UJI  AKTIVITAS ANTIBAKTERI  EKSTRAK  N-HEKSAN  BIJI  BUAH  LANGSAT  (Lansium domesticum  Corr)  TERHADAP  BAKTERI  Staphylococus  Aureus  DAN  Klebsiella Pneumoniae.
PHARMACON ,
10 (1), 748–755.
https://doi.org/10.35799/PHA.10.2021.32772
Oktaviani,  J.  (2019).  UJI  AKTIVIMetode  yang  digunakan  adalah  metode  sumuran  Metode yang  digunakan  adalah  metode  sumuran  TAS  ANTIBAKTERI  EKSTRAK  ETANOL DAUN  KITOLOD  (Isotoma  longiflora  L.)  C,  PREST  TERHADAP  BAKTERI Staphylococcus aureus DENGAN KONTROL ANTIBIOTIK OFLOXACIN. Farmasindo , 3 (1), 51.
Rahmawati, I. P., Fitriani, V. Y., Mita, N., & Ramadhan, A. M. (2017). Pegaruh Konsentrasi HPMC  (Hidroxy  Propyl  Methyl  Cellulose)  Sebagai  Gelling  Agent  dengan  Kombinasi Humektan  Terhadap  Karakteristik  Fisik  Basis  Gel. Proceeding  of  Mulawarman Pharmaceuticals Conferences , 5 , 139–148. https://doi.org/10.25026/MPC.V5I1.230 Ramayani, S. L., Hastuti, R. S., Hapsari, G. V., Prabandaru, B. T., & Widiyarini, D. (2021). The  Solvent  Effect  of  Hand  sanitizer  Formulation  from  Pecut  Kuda  (Stachytarpheta jamaicensis  [L]  Vahl)  extract. Journal  of  Physics:  Conference  Series , 1764 (1). https://doi.org/10.1088/1742-6596/1764/1/012020
Ramayani, S. L., Nugraheni, D. H., Robertin, A., & Wicaksono, E. (2021). Pengaruh Metode Ekstraksi  Terhadap  Kadar  Total  Fenolik  dan  Kadar  Total  Flavonoid  Daun  Talas (Colocasia esculenta L.) The influence of a method of the extraction of against the level of the total content of phenolic and total flavonoid leaves taro (Colocasia esculenta L.). Journal of Pharmacy , 10 (1), 11–16.
Rasheed, N. A., & Hussein, N. R. (2021). Staphylococcus aureus: An Overview of Discovery, Characteristics,  Epidemiology,  Virulence  Factors  and  Antimicrobial  Sensitivity  Short Title:  Methicillin  Resistant  Staphylococcus  aureus:  An  overview. European  Journal  of Molecular & Clinical Medicine , 08 (03), 2021.
Shamsudin,  N.  F.,  Ahmed,  Q.  U.,  Mahmood,  S.,  Shah,  S.  A.  A.,  Khatib,  A.,  Mukhtar,  S., Alsharif,  M.  A.,  Parveen,  H.,  &  Zakaria,  Z.  A.  (2022).  Antibacterial  Effects  of Flavonoids  and  Their  Structure-Activity  Relationship  Study:  A  Comparative Interpretation. Molecules , 27 (4). https://doi.org/10.3390/molecules27041149 Skelley, J. (2016). Open source tactics:  Bargaining Power for strategic litigation. Journal of Intellectual Property , 16 (1), 1–35.