## Angka Kebuntingan Sapi Bali yang Diinseminasi Menggunakan Semen Beku Plus Sari Kopi
Pregnancy Rate for Bali Cattle Inseminated Using Frozen Semen Plus Coffee Extract
Sri Firmiaty 1* , Muhammad Basri 2 , Muhammad Idrus 1
* Email: firmy_ch@yahoo.com
1 Program Studi Peternakan Fakultas Pertanian Universitas Bosowa
2 Dinas Peternakan Kabupaten Bulukumba Sulawesi Selatan Diterima: 12 September 2022 / Disetujui: 30 Desember 2022

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui fertilitas semen beku sapi Bali yang diberi sari kopi dalam pengencer dengan melakukan inseminasi buatan pada sejumlah akseptor betina, dilihat dari nilai Non Retur  Rate,  Service  per  Conceprtion,  dan  Angka  kebuntingan.  Materi  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah 40 ekor induk sapi yang sudah pernah beranak, kondisi fisiolgy normal, dibagi dalam  2  kelompok  yaitu  Kelompok  I:  diinseminasi  menggunakan  semen  beku  tanpa  sari  kopi  (20 ekor)  dan  Kelompok  II:  diinseminasi  menggunakan  semen  beku  tanpa  sari  kopi  (20  ekor).  Hasil inseminasi  buatan  (IB)  dianalisis  pada  60  hari  pasca  IB  menunjukkan Service  per  Conception berbeda  nyata  antara  semen  tanpa  sari  kopi  vs  semen  plus  sari  kopi  yaitu  1,53  vs  1.3  (P<.05), sedangkan Angka Kebuntingan pada IB pertama tidak menunjukkan perbedaan yaitu 11 ekor (55%) vs 14 ekor (70%). Dapat disimpulkan bahwa kafein dapat digunakan untuk meningkatkan  motilitas spermatozoa  semen  afkir  sapi  Bali  dengan  fertiltas  baik.  Disarankan  semen  pejantan  unggul  yang mempunyai motilitas di bawah 70 persen atau minimal 60%, dapat dipertimbangkan untuk diproses menjadi semen beku dengan penambahan sari kopi.
Kata Kunci: Angka Kebuntingan, Inseminasi Buatan, Sapi Bali, Sari Kopi, Service per Conception

## ABSTRACT
This study aims to determine the fertility of frozen semen of Bali cattle given coffee extract in diluent by performing artificial insemination on a number of female acceptors, seen from the values of Non- Return Rate, Service per Conception, and Pregnancy Rate. The material used in this study were 40 cows that had given birth, normal physiological conditions, divided into 2 groups, namely Group I: inseminated  using  frozen  semen  without  coffee  extract  (20  cows)  and  Group  II:  inseminated  using frozen semen without coffee extract (20 heads). The results of artificial insemination (IB) analyzed 60 days after IB showed a significantly different Service per Conception between semen without coffee extract vs semen plus coffee extract, namely 1.53 vs 1.3 (P <.05), while the Pregnancy Rate at the first  IB  showed  no  difference  that  is  11  heads  (55%)  vs  14  heads  (70%).  It  can  be  concluded  that caffeine  can  be  used  to  increase  spermatozoa  motility  of  culled  semen  of  Bali  cattle  with  good fertility. It is recommended that superior male semen that has motility below 70 percent or at least 60%, can be considered for processing into frozen semen with the addition of coffee extract.
Keywords :  Pregnancy  Rate,  Artificial  Insemination,  Bali  Cattle,  Coffee  Essence,  Service  per Conception
This work is licensed under Creative Commons Attribution License 4.0 CC-BY International license

## A. PENDAHULUAN
Inseminasi  Buatan  (IB)  merupakan salah  satu  bioteknologi  dalam  bidang
reproduksi  yang  memungkinkan  seekor pejantan  unggul  menyebarkan  genetik unggul  dengan  melakukan  kawin  terhadap
sejumlah  betina  di  berbagai  tempat. Pelaksanaan IB saat ini banyak menggunakan  semen  beku,  yang  berasal dari  ejakulat  pejantan  unggul,  selanjutnya mengalami beberapa proses sampai pembekuan.  Beberapa  kelebihan  semen beku  yaitu  semen  pejantan  unggul  dapat disimpan  dalam  container  berisi  N2  cair selama  10  tahun  (Hafez,  2000).  Dengan demikian  walaupun  ternak  jantan  unggul sudah  mati,  namun  genetic  unggul  masih dapat  dikawinkan  dengan  betina  produktif sehingga melahirkan ternak unggul.
Adapun  standart  SNI  syarat  pembuatan semen  beku  adalah  semen  ternak  jantan harus  memiliki  motilitas  spermatozoa  ≥ 70%  (Susilawati,  2013).  Namun,  tidak semua pejantan bergenetik unggul memiliki semen dengan motilitas permatozoa ≥ 70%, sehingga  semennya  tidak  dapat  diproses menjadi  semen  beku.  Akibatnya  semen tersebut dibuang percuma. Oleh karena itu, dirasa  perlu  dicari  suatu  alternatif  guna meningkatkan  kualitas  semen  yaitu  kafein. Dikemukakan  oleh  Dorland  (1996)  bahwa kafein  dapat  mempengaruhi  sistem  saraf pusat terutama otak. Selain itu, kafein juga digunakan  untuk  merangsang  sperma  dan sistem  kardiovaskular.  Hasil  El  Gaafary  et al.  (1990)  menunjukkan  bahwa  kafein dapat  menambah  laju  motilitas  sperma yang  tidak  ditemukan  di  testis  dengan
menghambat siklus nukleotida fosfodiesterase  dan  mempengaruhi  tingkat intraseluler  dari  sistem  AMP.  Pada  sperma kelinci  yang  ditambahan  kafein  dan diinkubasi  dalam  kurun  waktu  96  jam dengan kadar 0,2 mM/L mampu meningkatkan  jumlah  sperma  yang  motil (Lopez dan Alvarino, 2000). Selain itu, sari kopi  yang  ditambahkan  dalam  pengencer sperma sebelum proses sexing spermatozoa kromosom  X  dan  Y  dapat  menurunkan kecepatan  penurunan  motilitas  sperma selama disimpan (Hasbi et al. 2011).
Larutan pengencer yang
ditambahkan ke ejakulasi hewan, mengandung nutrisi untuk sperma, menjaga pH,  menyediakan  lingkungan  isotonik,  dan melindungi  sperma  dari  sengatan  dingin. Tujuan pengenceran adalah untuk menambah volume semen, sehingga dengan  sekali  ejakulasi  pejantan,  ratusan betina  dapat  menghasilkan  semen,  semen dapat  disimpan  dalam  waktu  yang  lama, mengurangi  kesuburannya,  memungkinkan produksi  semen  yang  tidak  terbatas, terutama  dalam  keadaan  beku.  air  dan memfasilitasi  distribusi  obat-obatan  untuk reproduksi  dibantu  (Hardijanto  et  al., 2008).    Beberapa  bahan  pengencer  yang dikenal saat ini yaitu pengencer skim milk, pengencer  tris  aminomethan  kuning  telur pengencer  ECP,  dan  pengencer  andromed.
Hasil penelitian More (2015) menunjukkan bahwa  motilitas  sperma  pada  semen  afkir dapat ditingkatkan dengan cara penambahan  sari  kopi  dalam  pengencer andromed,  sehingga  dapat  memenuhi standart SNI pembuatan semen beku.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  fertilitas  semen  beku  sapi  Bali yang  diberi  sari  kopi  dalam  pengencer dengan  melakukan  inseminasi  buatan  pada sejumlah  akseptor  betina,  dilihat  dari  nilai Non  Retur  Rate,  Service  per  Conceprtion, dan Angka kebuntingan.

## B. METODE PENELITIAN
1. Metode Penelitian
Metoda yang digunakan dalam penelitian ini adalah metoda eksperimental, dengan  melakukan  inseminasi  buatan menggunakan  semen  beku  yang  berasal dari  semen  afkir  yang  disuplementasi  sari kopi. Alat  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah Insemination  Gun (Gun  IB), termos  nitrogen  cair,  semen  beku  yang telah  diberi  sari  kopi  dan  tanpa  sari  kopi, gunting straw ,  plastik glove ,  plastik shee t dan tissue , sabun, ember air untuk thawing , tali  dan  kandang  jepit  dan  alat  tulis. Sedangkan  bahan  yang  digunakan  semen segar dengan motilitas 60-<70%, pengencer andromed , eosin  negrosin ,  dan  sari  kopi,
Adapun  materi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  40  ekor  induk  sapi
yang sudah pernah beranak 1 sampai 3 kali dalam keadaan estrus .

## 2. Prosedur Penelitian
Semen segar dievaluasi secara makroskopik dan mikroskopik.
Pengamatan  makroskopis  yaitu  volume (ml),  kekentalan  /konsistensi,  warna,  dan pH.  Pengamatan  secara  mikroskopis  yaitu: motilitas  massa  dan  motilitas  individu. Indikator  hidup  dan  mati spermatozoa dievaluasi  dengan  cara  pewarnaan eosin negrosin .  Jika  sperma  terwarnai  maka sperma  itu  dikategorikan  mati  dan  apabila sperma  terlihat  bening  maka  sperma  itu dikategorikan  hidup.  Bubuk  kopi  Robusta sebanyak  20  gr  dilarutkan  ke  dalam  air yang  bersuhu  60 0 C,  kemudian  disaring sebanyak  2  kali  menggunakan  kertas saring.  Sari  kopi  ini  yang  kemudian digunakan dalam perlakuan II (penambahan  Sari  Kopi). Perlakuan  l: semen  setelah  dimasukkan  ke  dalam pengencer andromed (tanpa  sari  kopi sebagai  kontrol).  Perlakuan  ll:  semen setelah  dimasukkan  ke  dalam  pengencer andromed diberi sari kopi. Perlakuan I dan II, selanjutnya disimpan ke dalam refrigenerator dengan suhu 4-5 0 C selama 1 jam untuk equilibrasi dan dibekukan dalam kontainer berisi N 2 cair.
Induk sapi yang telah
memperlihatkan tanda-tanda berahi lengkap
yaitu vulva kemerahan  dan oedema ,  keluar mucus yang  transparan,  dan  diam  ketika dinaiki,  maka  akan  dilakukan  inseminasi. Sebanyak 20 ekor diinseminasi semen beku tanpa  sari  kopi  dan  20  ekor  diinseminasi menggunakan semen beku plus sari kopi.
Deposisi  semen  disemprotkan  di posisi 4. Hasil inseminasi diamati pada hari ke  30  dan  60  setelah  pelaksanaan  IB. Ternak  yang  tidak  menunjukkan  gejala berahi  dikategorikan  bunting,  sedangkan ternak  berahi  kembali  akan  dilakukan inseminasi  ulang,  inseminasi  dilakukan sampai  3  kali. Palpasi  rectal dilakukan setelah 42 hari guna pemeriksaan kebuntingan terhadap induk sapi yang telah diinseminasi.

## 3. Variabel  Penelitian  dan  Analisis Data
Paremeter  penelitian  adalah  S/C, NRR dan Angka Kebuntingan. Non Raturn Rate adalah  jumlah  sapi  betina  akseptor betina  yang  tidak  berahi  kembali  berahi setelah diinseminasi.
Rumus Service per Conception : ∑ ∑
Rumus Angka ss Kebuntingan ss (AK): ∑ ∑
Hasil  pelaksanaan  IB  ini  dianalisis dengan  menggunakan  Uji  t-Student  untuk
S/C dan Chi square untuk AK menggunakan program SPSS.

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN
Teknologi reproduksi Inseminasi Buatan  (IB)  telah  lama  diterapkan  di seluruh wilayah Indonesia termasuk Provinsi  Sulawesi  Selatan  dengan  tujuan untuk  meningkatkan  produktivitas  ternak yang  dikembangakan  untuk  menciptakan ternak  unggulan  pada  masa  mendatang. Pelaksanaan  IB  ini  dengan  memasukkan semen beku yang di- thawing menggunakan insemination  gun ke  dalam  serviks.  Bahan baku  pembuatan  semen  beku  ini  adalah semen  segar  dari  ejakulat  sapi  jantan  yang memenuhi  standar  pengolahan  antara  lain motilitilas  massa  2+  dan  motilitas  individu ≥  70%  (Susilawati  (2013).  Namun terkadang  ejakulat  dari  pejantan  unggul setelah dianalisis semennya tidak memenuhi  standart minimal  SNI, termasuk pejantan  unggul  di  Balai  IB,  terkadang motilitasnya  <70%,  sehingga  tidak  dapat diproses lebih lanjut. Oleh karena itu, perlu dicari  solusi  agar  motilitas  spermatozoa meningkat,  yaitu  diberi  tambahan  bahan kafein  ke  dalam  pengencer  semen.  Zat kafein  banyak  terdapat  dalam  buah  kopi. Dilaporkan  oleh    El-Gaafari  et  al,  (1990) bahwa motilitas spermatozoa dapat ditingkatkan  dengan  penambahan  kafein. Zat tersebut mampu mempengaruhi
motilitas  spermatozoa  yang  tidak  motil, karena kafein berfungsi sebagai
penghambat siklus nukleutida
phopodiestrase. Buah kopi banyak mengandung kafein. Seiring hasil penelitian  Habakase  (2015)  semen  beku hasil sexing  sperma menggunakan  semen afkir  yang  disuplementasi  sari  kopi menunjukkan  bahwa  nilai Post  Thawing Motility (PTM)  sperma  berkromosom  X sebesar  26,40  %  dan  kromosom  Y  sebesar 33  %,  sedangkan  sperma  tanpa  perlakuan sexing,  nilai  PTM  sebesar  30  %  (More, 2015).
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui fertilitas semen beku sapi Bali, hasil  proses  pembekuan  semen  afkir  yang diberi  sari  kopi,  dengan  melakukan inseminasi  pada  sapi  Bali  betina  yang menunjukkan gejala-gejala berahi.
Keberhasilan  pelaksaan  IB  dapat  dilihat dari Non  Return  Rate (NRR), Service  per Conception (S/C), dan Angka Kebuntingan (AK).
Non  Return  Rate (NRR)  adalah persentase ternak yang tidak berahi kembali setelah  IB  pertama  atau  ternak  yang  tidak minta  kawin  setelah  diinseminasi,  apabila tidak ada tanda-tanda berahi kembali dalam waktu  8-35  hari  atau  60-90  hari  (Feradis, 2010).  Pada  penelitian  ini  sapi-sapi akseptor setelah diinseminasi pada IB ke 1,
pengamatan  pada  hari  ke  30  menunjukkan pada  IB  pertama  yang  tidak  menunjukkan berahi  kembali  (Non  Return)  sebesar  14 ekor  (70%)  dan  11  ekor  (55%)  masing- masing  untuk  plus  sari  kopi  dan  tanpa  sari kopi (Tabel 1.).  Angka NR dengan asumsi bahwa  ternak  yang  tidak  menunjukkan berahi  lagi  adalah  dikategorikan  bunting, sedangkan  ternak  yang  menampakkan gejala berahi akan dilakukan inseminasi.
Tabel 1. Pengamatan Non Return Rate (NRR)
No. Perlakuan NRR Jumlah 0-30 (days) 31-60 (days) 1. Semen  tanpa sari kopi 11 20 20 2. Semen plus sari kopi 14 20 20 Angka kebuntingan atau NR dianggap baik apabila mencapai 60% untuk IB pertama (Partodihardjo, 1992). Berdasarkan analisis terhadap NRR menunjukkan  bahwa  kedua  perlakuan  IB menggunakan  semen  beku  dengan  tanpa sari kopi adalah baik  ( > 60 %).
Service per Conception adalah berapa kali  inseminasi  dilakukan  sampai  terjadi kebuntingan  pada  ternak  (Hafez,  2000). Hasil  IB  menggunakan  sapi  Bali  sesuai perlakuan dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Analisis S/C hasil IB
Semen beku IB ke 1 (kali) IB ke 1 - 3 (kali) Jumlah ternak Plus sari kopi 1,43 1,3 a 20 ekor Tanpa sari kopi 1,8 1,53 b 20 ekor Keterangan: Huruf berbeda pada kolom yang sama menunjukkan terdapat perbedaan nyata (*) (P<.05)
Hasil  ini  menunjukkan  bahwa semen  beku  menggunakan  sari  kopi menunjukkan  nilai  S/C  yang  lebih  rendah dibanding dengan tanpa sari kopi. Hasil IB pertama  menggunakan  semen  beku  plus sari  kopi  membutuhkan  sekitar  1,43  kali inseminasi  untuk  menghasilkan  suatu kebuntingan, sedangkan tanpa sari kopi 1,8 kali.    Secara  keseluruhan  hasil  IB  ke  1–3, menunjukkan  bahwa  menggunakan  semen beku  yang  diberi  sari  kopi  membutuhkan sekitar 1,3 kali inseminasi untuk menghasilkan kebuntingan, sedangkan tanpa  sari  kopi  1,53.  Sesuai  pendapat  El Gaafary  et  al.  (1990);  Lopez  dan  Alvarino (2000) bahwa spermatosoa yang tidak motil dapat  ditingkatkan  motilitasnya  dengan penambahan  kafein,  sedangkan  kafein  ini banyak terdapat dalam sari kopi.
Hasil  IB  ditinjau  dari  S/C  pada  kedua perlakuan  ini  menunjukkan  semen  tersebut mempunyai  fertilitas  yang  baik.  Hal  ini sesuai  Susilawati  (2013)  dan  Astuti  (2004) yang  menyatakan  bahwa  semakin  rendah nilai  S/C  maka  semakin  tinggi  tingkat fertilitas seekor ternak, sebaliknya semakin tinggi  nilai  S/C  akan  semakin  rendah tingkat  fertilitasnya.  Ditambahkan  oleh Janudeen  and  Hafez  (2001)  bahwa  S/C normal  adalah  1,6  -  2,1  dan  nilai  standart SNI adalah 1-2 (Susilawati & Yekti, 2018). Hasil  S/C  yang  rendah  ini  kemungkinan
juga disebabkan karena sapi Bali mempunyai  fertilitas  yang  tinggi  dengan S/C  sebesar  1,2  sehingga  sapi  Bali  sering dikawinkan dengan jenis lain sebagai upaya perbaikan mutu genetika (Bandini, 2004).
Hasil inseminasi dengan menghitung  persentase  sapi  bunting  pada inseminasi  pertama  disebut Conception Rate (CR)  atau  tingkat  kebuntingan  atau angka kebuntingan. Angka konsepsi ditentukan  berdasarkan  hasil  diagnosa  per rectal  dalam  waktu  45-60  hari  sesudah inseminasi  (Partodihardjo,  1987).  Tidak ada perbedaan nilai AK antara sapi yang di IB  menggunakan  semen  beku  yang  diberi sari kopi dan tanpa sari kopi (P>.05) (Tabel 3.)
Tabel 3. Angka Kebuntingan hasil Inseminasi Buatan Perlakuan Semen Beku AK pada IB Pertama Total Bunting Tidak Bunting Plus Sari Kopi  14 ekor (70%)  6 ekor (30%)  20 ekor Tanpa Sari Kopi 11 ekor (55%) 9 ekor (45%)  20 ekor
Nilai  AK  hasil  IB  menggunakan semen  beku  yang  diberi  sari  kopi  dan semen  beku  tanpa  sari  kopi  sebesar  antara 55%-70% ini menunjukkan ternak akseptor mempunyai  fertilitas  tergolong  baik  untuk ukuran  di  Indonesia.  Sesuai  pendapat Toelihere  (1993)  bahwa  AK    di    negara maju    dapat    berkisar    antara    60%-70%, sedangkan di Indonesia  nilai  AK  sebesar 50%    sudah    termasuk    normal,    dan    jika
<50% berarti menunjukkan wilayah tersebut  memiliki  ternak  yang  kurang subur.
Selain  itu  AK  dipengaruhi  oleh kualitas  maupun  fertilitas  semen  beku, keterampilan inseminator dan kemungkinan adanya  gangguan  reproduksi  pada  sapi betina  (Sholeh,  2000)  dan  deposisi  semen (Susilawati,  2013).  Pelaksanaan  IB  pada penelitian  ini  mendeposisikan  semen  di posisi  4,  sehingga  diperoleh  AK  yang bagus  (normal).  Hal  ini  sejalan  dengan hasil penelitian Amiluddin (2016)
menunjukkan  nilai  AK  sapi  Bali  yang diinseminasi  dengan  deposisi  semen  di posisi 4 sebesar 90%. Sependapat
Susilawati (2011) bahwa sperma sebaiknya diletakkan pada corpus uterus atau pangkal cornua  uteri ,  agar  dapat  sampai  di  tempat pembuahan  dalam  waktu  yang  tepat  dan tidak banyak energy yang keluar.
Semen  yang  disemprotkan  ke  dalam pangkat uterus melewati serviks, mempunyai  nilai  kebuntingan  yang  lebih tinggi,  dibanding  di  posisi  3,  karena  telah melewati  serviks  yang  merupakan  seleksi spermatozoa (Partodiharjo, 1987).
Ditambahkan  oleh  Hafez  (2000)  bahwa hanya  dibutuhkan  satu  spermatozoa  saja dalam  membuahi ovum sehingga  terjadi kebuntingan. Konsentrasi spermatozoa dalam  semen  beku  yang  digunakan
penelittian ini adalah sebesar 25 juta/straw. full latent variable model.

## D. KESIMPULAN DAN SARAN
Hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa  Sari  Kopi  dapat  digunakan  untuk meningkatkan  kualitas  semen  beku  ke dalam  pengencer  semen  afkir,  terlihat  dari hasil  inseminasi  buatan  menunjukkan  nilai S/C sebesar 1,43 dan AK sebesar 70% dari 20 ekor sapi Bali betina yang diinseminasi. Disarankan  semen  pejantan  unggul  yang mempunyai  motilitas  di  bawah  70  persen sebaiknya  diproses  menjadi  semen  beku dengan penambahan Sari Kopi.

## DAFTAR PUSTAKA
Amiluddin.  2016.  Pengaruh  Deposisi  Semen Terhadap Tingkat Kebuntingan Sapi Bali di  Kabupaten  Bulukumba,  Sulawesi Selatan.  Seminar.  Fakultas  Pertanian. Universitas Bosowa. Makassar. Bandini, 2004. Sapi Bali.  Swadaya, Jakarta.
El-Gaafary,  M.  N.,  A.D.  Daader,  and  A.
Ziedan.  1990.  Effects  of  caffein  on  bull semen quality and sperm penetration into cervical  mucus     Anim.Reprod.  Sci.,  23: 13-90.
Feradis. 2010. Bioteknologi   Reproduksi   pada Ternak. Penerbit Alfabeta Bandung.
Habakase,  W.  2015.  Kaji  Banding  Motilitas Spermatozoa  Pembawa  Kromozom  X dan Y dalam Pengencer yang Diberi Sari Kopi. Skripsi. Fakultas Pertanian. Universitas 45. Makassar.
Hafez,  E.S.E.  .2000.  Reproduction  in  Farm Animal. 7th. Lea and Febiger.
Philadelphia. USA.pp. 41-46.
Hasbi.,  H.  Sonjaya,  dan  S.  Gustina.  2011. Pengaruh Medium Pemisah Penambahan
Ekstrak Kopi Sebelum Proses
Pemisahan    Spermatozoa    Pembawass Kromosom  X    dan    Y  dan  Lama Penyimpanan Terhadap  Kualitas Semen
Cair  Kambing  Peranakan  Ettawasss. JITP.  Vol  1.  Fakultas  Peternakan,
Universitas Hasanuddin.
Hudiyanti,T.  2005.  Pengaruh  Penambahan
Ekstrak  Kopi  Terhadap  Peningkatan Kualitas  Semen  Cair  Kambing  Boer
Hasil  Sexing  Spermatozoa    X  dan  Y.
Skripsi. Fakultas Peternakan. Universitas  Hasanuddin. Makassar. Lopez F. J. and J.M.R. Alvriano. 2000.  Effects of  added  caffeine  on  results  following artificial  insemination  with  fresh  and refrigerated  rabbit  semen.  Animalss Science.  58: 147-154.
More,  Y.  2015.  Pengaruh  Penambahan  Sari. Kopi  dalam  Meningkatkan  Motilitas Semen Afkir Sapi Bali. Skripsi.
Universitas 45. Makassar.
Partodihardjo,  S.  1987.  Ilmu  Reproduksi Hewan. Mutiara, Jakarta.
Sholeh,  C.  2000.  Laporan Koasisten  Daerah  di Koperasi  Peternakan  Bandung  Selatan (KPBS) Pengalengan, FKH IPB, Bogor. Susilawati,  T.  2011.  Tingkat  Keberhasilan Insiminasi  Buatan  dengan  Kualitas  dan Deposisi Semen yang Berbeda Pada Sapi Peranakan  Ongole J.Ternak  Tropika Vol 12 15-24 2011.
Susilawati,  T.  2013.  Pedoman  Inseminasi Buatan pada Ternak. UB Press. Brawijaya University Susilawati,  T.  dan  Yekti,  A.P.  A.  2018. Teknologi Inseminasi Buatan
menggunakan semen cair (Liquid Semen).  UB Press.  Malang.