Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 17 - 22 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048 DOI: http://dx.doi.org/10.20473/bikfar.v7i1.29060
This is an open access article under the CC BY-SA license  ( http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ )
Optimasi Produksi Fibrinolitik oleh Bacillus megaterium BM 9.1 menggunakan media Limbah Pertanian sebagai sumber karbon
Kiki Lestari. 1 , Achmad Toto Poernomo*  Prawita A 1
1 Departemen Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Airlangga, Kampus C Mulyorejo.
* Email : achmad-t-p@ff.unair.ac.id.
Article History Received: 11 March 2020; Received in Revision: 30 March 2020; Accepted: 5 April 2020

## ABSTRAK
Kajian  pengaruh  sumber  karbon  limbah  pertanian  terhadap  produksi  enzim  fibrinolitik  oleh Bacillus  megaterium  BM  9.1  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  plat  fibrin.  Bacillus megaterium  BM  9.1  ditumbuhkan  pada  media  residu  agro  dengan  fermentasi  solid  state. Aktivitas  enzim  fibrinolitik  dinyatakan  dengan  indeks  fibrinolitik.  Indeks  Fibrinolitik  adalah perbandingan  antara  zona  bening  dan  diameter  dinding.  Dari  berbagai  sumber  karbon  yang diuji,  Bacillus  megaterium  BM  9.1  yang  ditanam  pada  kulit  pisang,  kulit  nanas,  kulit  jagung, dedak  padi  dan  tongkol  jagung  dapat  menghasilkan  enzim  fibrinolitik.  Aktivitas  fibrinolitik yang optimal terdapat pada a. Perbandingan indeks fibrinolitik antara Bacillus megaterium BM 9.1 yang ditumbuhkan pada media kombinasi nutrien agar, kulit pisang dan nutrien agar adalah 117,%. Optimasi konsentrasi kulit pisang dilakukan pada konsentrasi 0,5 %, 1 %, 2% dan 4% dan  didapatkan  indeks  fibrinolitik  masing-masing  sebesar  4,26  ±  0,11;  4,32  ±  0,03  ;  4,61  ± 0,03;  dan  4,35  ±  0,05.  Aktivitas  fibrinolitik  optimum  terdapat  pada  kulit  pisang  pada konsentrasi 2%.
Kata kunci : medium, residu agro, enzim fibrinolitik, Bacillus megaterium BM

## ABSTRACT
The study of effect agro recidues carbon sources on fibrinolytic enzyme production by Bacillus megaterium  BM  9.1  was  done  by  using  fibrin  plate  method.  Bacillus  megaterium  BM  9.1 grown  on  agro  residues  medium  with  solid  state  fermentation.  The  fibrinolytic  enzymes activity is declared by fibrinolytic index. Fibrinolytics index is the comparisson between clear zones  and  wall  diameters.  From  various  carbon  sources  tested,  Bacillus  megaterium  BM  9.1 which is grown in banana peel, pineaple skin, corn husk, rice bran and corn cob could produce fibrinolytic enzymes. Optimum fibrinolytic activities found in a nutrient agar  and banana peel medium  at  fibrinolytic  index  4,95  ±  0,08  (p<0,05).  The  comparisson  fibrinolytic  index between Bacillus megaterium BM 9.1 which grown in combination nutrient agar, banana peel and  nutrien  agar  standart  is  117,%.  Banana  peel  concentration  optimation  was  done  at concentration  of  0,5  %,  1 %,  2  %  and  4  %  and  the  fibrinolytic  index  was  found  respectively according to 4,26 ± 0,11 ; 4,32 ± 0,03 ; 4,61 ± 0,03; and 4,35 ± 0,05. The optimum fibrinolytic activity was found in banana peel on consentration 2 %.
Keyword : medium, agro residues, fibrinolytic enzymes, Bacillus megaterium BM 9.1
Pendahuluan Trombosis adalah salah satu penyakit kardiovaskular yang banyak terjadi dalam kehidupan modern saat ini. Penyakit kardiovaskular  seperti  infark  miokard,  penyakit
jantung  iskemik  dan  tekanan  darah  tinggi  adalah penyebab  kematian  utama  di  dunia.  Penyakit trombosis  dapat  disebabkan  oleh  akumulasi  fibrin pada  pembuluh  darah.  Berbagai  enzim  fibrinolitik seperti tissue  plasminogen  activator (t-PA),

## Research Article
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 17 - 22 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Urokinase dan Streptokinase telah banyak digunakan  sebagai  agen  trombolitik  untuk  melisis trombus. Namun agen tersebut dapat menyebabkan pendarahan  dan  kekambuhan  pada  tempat  yang masih  meninggalkan  trombus.  Selain  itu,  agen tersebut  memiliki  waktu  paruh  pendek  dan  harga relatif mahal (Kotb, 2015).
Enzim  fibrinolitik  dapat  diperoleh  dari  hewan (Lumbrokinase dan Fibrolase), tumbuhan (Bromelain  dan  Papain)  dan  mikroorganisme (Nattokinnase).  Tumbuhan  dan  hewan  memiliki beberapa  kelemahan  untuk  digunakan  sebagai sumber  enzim  fibrinolitik,  sebab  dibutuhkan perawatan  intensif  dan  waktu  yang  relatif  lama untuk  memperoleh  enzim  fibrinolitik.  Penggunaan mikroorganisme sebagai  sumber enzim fibrinolitik mempunyai  beberapa  keunggulan  dibandingkan tanaman  maupun  hewan,  diantaranya  adalah kemudahan  sel  mikroba  untuk  ditumbuhkan, kecepatan  pertumbuhan  dan  skala  produksi  sel lebih  mudah  ditingkatkan  dengan  pengaturan kondisi  dan  rekayasa  genetika,  kondisi  produksi tidak  tergantung  musim  serta  waktu  yang diperlukan  relatif  tidak  lama  (Glaser  &  Nikaido, 2007)
Penelitian  tentang  enzim  fibrinolitik  berasal  dari mikroorganisme  telah  banyak  dilakukan. Bacillus merupakan  salah  satu  mikroorganisme  penghasil enzim  fibrinolitik.  Penelitian  tentang  enzim fibrinolitik  yang  telah  dilakukan  sebelumnya adalah  Nattokinase  dari Bacillus  natto ,  subtilisin DJ-4 dan CK dari Bacillus sp , subtilisin DFE dari Bacillus  amyloliquefaciens (Peng et  al. ,  2003), Bacillus  megaterium KSK-07  (Kotb,  2015), Bacillus  megaterium BM  9.1  isolasi  dari  tanah hutan Mangrove Surabaya  (Fakhri, 2015) dan lain sebagainya.
Untuk  dapat  menghasilkan  enzim  fibrinolitik, mikroorganisme  memerlukan  media  dan  kondisi pertumbuhan tertentu. Media pertumbuhan umumnya mengandung substansi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan mikroorganisme berupa sumber  karbon,  nitrogen,  sulfur,  besi,  fosfat, magnesium  dan  faktor-faktor  pertumbuhan  lain (Atlas,  2010).  Khususnya  pada  bakteri,  48  % komponen tubuhnya tersususn atas karbon dan .. % nitrogen.  Sumber  karbon  diperlukan  untuk produksi  energi,  pembentukan  biomassa  dan produksi  metabolit.  Sumber  karbon  dapat  berasal dari  karbondioksida  dalam  bentuk  bikarbonat, karbohidrat  seperti  glukosa,  komponen  anorganik seperti  asetat,  lemak,  protein,  hidrokarbon  dan komponen  organik  lainnya  (Atlas,  2010.).  Selain itu,  sumber  karbon  juga  dapat  ditemukan  pada berbagai agro  residues seperti  tongkol  jagung (Singh  Nee  Nigam  &  Pandey,  2009),  kelobot jagung (Singh Nee Nigam & Pandey, 2009), dedak padi  (Bhargav et  al., 2008:  Vijayaraghavan et  al. , 2016;  Vijayaraghavan  &  Prakash  Vincent,  2015),
kulit  pisang  (Vijayaraghavan et  al., 2016; Vijayaraghavan  &  Prakash  Vincent,  2015)  dan kulit  nanas  (Singh  Nee  Nigam  &  Pandey,  2009). Selama ini bahan-bahan tersebut  dianggap sebagai agro  residues dan  hanya  digunakan  sebagai makanan ternak. Agro residue kurang dimanfaatkan sehingga dapat mencemari lingkungan.  Padahal agro  residues tersebut mengandung nutrient-nutrien seperti hemiselulose, pektin,  protein,  serat  sehingga  memiliki  prospek untuk  digunakan  sebagai  sumber  karbon  pada media pertumbuhan bakteri.
Maka  pada  penelitian  ini  akan  dilakukan  kajian pengaruh  media  dengan  sumber  karbon agro residues terhadap  aktivitas  enzim  fibrinolitik Bacillus  megaterium BM  9.1.  Pemilihan agro residue didasarkan  atas  kemudahan  didapatkan, harga  yang  relatif  murah,  kandungan  polisakarida dan  serat  yang  dapat  digunakan  sebagai  nutrisi dalam  pertumbuhan  dan  pembentukan  metabolit suatu mikroorganisme.
The LAB strains are potentially promising because they  generate  bactericidal  bioactive  peptides (bacteriocins) and enzymes that are able to control biofilm formation and the growth of the pathogens. The  bacteriocins  are  also  present  in  species  of genus  Lactobacillus.  The  L.acidophilus  produce lactacin  B  or  F,  whereas  L.  casei  B80  produce casein 80. Certain LAB strains have been reported to  be  highly  antagonistic  to  biofilm-forming  S. aureus (Wysocki, 2010).
The  Lactobacillus  able  to  inhibit  various  types  of bacteria  pathogens  like  Salmonella,  Vibrio, Listeria,  Shigella  and  Staphylococcus.  The  LAB can  produce  antimicrobial  component  called bacteriocin,  for  example,  acidolin,  acidophilic  nor is lactosidine thought to have broad-spectrum good against  Gram  positive  or  negative  bacteria (Ahmed,  2010).  This  study  aims  to  evaluate  the inhibitory  activity  of  probiotic  L.  acidophilus  and L.  casei  fermented  milk  against  S.  aureus  ATCC 8739 and E. coli ATCC 6538.

## Bahan Dan Metode Penelitian
Alat :  peralatan  gelas, autoclave  electric HL-340
Series Vertical Type Steam
Sterilizer , incubatorMemmert , timbangan Sartorius Type BP 221S, Laminar  Air  Flow  Cabinet ,  lemari pendingin, vortex Thermolyne  Maxi  Mix,  pH meter Fisher Versamix , mikropipet, jangka sorong ketelitian 0,05 mm, sengkelit (Öse).
Bahan : Bacillus  megaterium BM  9.1  koleksi Laboratorium  Mikrobiologi  Departemen  Kimia Farmasi  Fakultas  Farmasi  Universitas  Airlangga hasil  isolasi  tanah  hutan  Mangrove  Wonorejo (Fakhri,  2015), agro  residues tongkol  jagung manis  ( Zea  mays  saccharata L)  ±  jagung  umur  3 bulan, kulit jagung manis ( Zea mays saccharata L)
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 17 - 22 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
±  jagung  umur  3  bulan  ,  dedak  padi  IR54  ( Oryza sativa L  var.  IR54)  ±  padi  umur  3  bulan,  kulit nanas  madu (Ananas  comosus L.  Merr)  5  hari menguning  dan  kulit  pisang  kepok  kuning  ( Musa paradisiaca L.)  5  hari  menguning  diambil  dari petani  Magetan,  nutrien  agar  (Oxoid),  agar,  dapar natrium  fosfat  (Sigma), metylene  blue ,  NaCl, NaOH, Fibrin Bovine Blood Simagchem. Preparasi sampel Agro residues tongkol jagung, kulit  jagung, dedak padi,  kulit  pisang  dan  kulit  nanas  dipotong  secara manual  dengan  ketebalan  ±  3  mm  kemudian dikeringkan  dalam  suhu  ruang  selama  3  hari kemudian  dioven  pada  suhu  45 o C  selama  24  jam. Sampel yang telah kering diserbuk dengan blender dan  diayak  dengan  ayakan  mesh  500.  Serbuk disimpan  dalam  wadah  bersih  tertutup  rapat  (P Vijayaraghavan & Vincent, 2015) .
Peremajaan Bakteri Media  yang  digunakan  untuk  peremajaan Bacillus megaterium BM  9.1  adalah Nutrient agar.  Media Nutrient agar  dibuat  dengan  melarutkan  1,8  % agar dan  1,3  % Nutrient  Broth lalu  ditambahkan aquades  100  ml  dan  dipanaskan.  Memasukkan  ke tabung  reaksi  masing-masing  sebanyak  10  ml, ujungnya  ditutup  dengan  kapas  berlemak  dan disterilisasi dengan autoklaf suhu 121 o C selama 15 menit, kemudian dimiringkan dan dibiarkan hingga memadat.  Mengambil  bakteri  dari  tabung  reaksi induk sebanyak 1 goresan ose. Gesekkan ose yang berisi biakan bakteri murni secara aseptis ke dalam media Nutrient  Agar miring  dan  dilakukan  dalam Laminar  Air  Flow  Cabinet .  Panaskan  ujung  ose kembali.  Diinkubasi  pada  suhu  kamar  37±1°C selama 24 jam
Skrining  Media  yang  Optimal  Untuk  Produksi Enzim Fibrinolitik
Media produksi enzim menggunakan 3 media yaitu media  Nutrien  agar, Nutrien  Agar +  sumber karbon agro  residue ,  dan  agar  +  sumber  karbon agro  residue .  Media Nutrient  Agar digunakan sebagai  standar,  dibuat  dengan  melarutkan  2  % nutrien  agar  dalam  100  mL  aquadest,  media kombinasi Nutrien  Agar dan  sumber  karbon agro residue dibuat dengan melarutkan 2 % nutrien agar dan  1  %  b/v  sumber  karbon agro  residue dalam 100  mL  aquadest,  media  kombinasi  agar  dan sumber  karbon agro  residue dibuat  dengan melarutkan  2  %  agar  dan  1  %  b/v  sumber  karbon agro  residue dalam  100  mL  aquadest.  Masing- masing diatur pada pH 7±0,5. dan dibagi menjadi 8 mL untuk base layer dan 12 mL untuk seed layer dan semua media disterilisasi dengan autoklaf pada suhu  121 o C  selama  15  menit  (modifikasi  metode Arulanatham et al. , 2012). Masing-masing media base layer 8 mL dituang ke dalam  cawan  petri  steril.  Diratakan  dan  ditunggu hingga  padat.  Sebanyak  10  µL  kultur  suspensi
Bacillus  megaterium BM  9.1  dalam  10  mL  NaCl 0,9  %  transmitan  25  %    pada  panjang  gelombang 580 nm diinokulasikan pada masing-masing media seed  layer steril  12  mL  secara  aseptis.  Kemudian dicampur  dengan  vortex  selama  5  menit  untuk menghomogenkan  lalu  dituang  di  atas base  layer. Kemudian  media  diinkubasi  pada  suhu  37 o C selama 24 jam (modifikasi metode Vijayaraghavan et al. , 2016) . Uji Aktivitas Enzim Fibrinolitik
Pembuatan media fibrin plate dengan mencampurkan  2  %  b/v  fibrin Simagchem  Bovine Serum dalam  100  mL  dapar  fosfat  0,1  M  pH  7,4 dan  agar  sebanyak  2  %  b/v.  Kemudian ditambahkan metilen  blue sebanyak  400  µL dengan  tujuan  agar  zona jernih  fibrinolitik  terlihat dengan  jelas  kemudian  dipanaskan.  Sebanyak  20 mL  media  fibrin  dituang  ke  dalam  cawan  petri steril.  Plate  diamkan  selama  30  menit  pada  suhu ruang  (30±2 o C)  hingga  memadat  (modifikasi metode Vijayaraghavan et al ., 2016).
Setelah  media fibrin  plate memadat,  dibuat  empat sumur  dengan  logam  pelubang  steril  diameter  4 mm  pada  masing-masing fibrin  plate .  Masing- masing  media  pertumbuhan  dilubangi  dengan logam pelubang steril diameter 4 nm namun pellet hasil  lubangan  dipindahkan  pada  lubang fibrin plate secara aseptis dan bentuk dipertahankan bulat . Dilakukan replikasi sebanyak tiga kali. Kemudian diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  24  jam.  Jika bakteri  menghasilkan  enzim  fibrinolitik  akan terbentuk  zona  jernih  disekitar  sumur.  Kemudian diukur diaameter zona jernih disekitar sumur. Zona jernih  diindikasikan  sebagai  hasil  degradasi  fibrin dan  diameternya  sebanding  dengan  potensi aktivitas fibrinolitik (modifikasi metode Vijayaraghavan et al,. 2016)
Aktivitas  enzim  dinyatakan  sebagai  Indeks fibrinolitik (IR) = R / r
R : diameter zona jernih (mm) r
: diameter koloni bakteri (mm)
Optimasi  Konsentrasi  Kadar  Sumber  Karbon
Agro residue
Setelah dilakukan uji aktivitas fibrinolitik, ditentukan jenis sumber karbon agro residue yang menghasilkan enzim fibrinolitik paling maksimum, ditandai dengan diameter zona jernih paling besar. Kemudian  dilakukan  optimasi  konsentrasi  sumber karbon agro  residue yang  memberikan  aktivitas fibrinolitik  paling  optimum.  Media  dibuat  pada berbagai  konsentrasi agro  residue yaitu  0,5  %,  1 %,  2  %,  4  %  b/v.  Uji  aktivitas  enzim  fibrinolitik dilakukan seperti langkah di atas.

## Hasil Dan Pembahasan
Pertumbuhan Bacillus  megaterium BM  9.1  pada berbagai  media  nutrien  agar,  kombinasi  nutrien agar  dan  sumber  karbon  agro  residues  serta
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 17 - 22 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
kombinasi  agar  dan  sumber  karbon  agro  residues diamati  secara  visual.  Diketahui  bahwa Bacillus megaterium BM 9.1 mampu tumbuh pada berbagai media agar dan nutrien agar yang ditambah sumber karbon agro  residues. Pertumbuhan koloni Bacillus  megaterium BM  9.1  dalam  berbagai media  nampak  terlihat  berwarna  putih,  tersebar merata  pada  permukaan, base  maupun  seed  layer . Pertumbuhan  pada  media  Nutrien  agar  2  %  dan kombinasi nutrien agar 2 % + sumber karbon agro residue 1  %  nampak  lebih  jelas  secara  visual dibandingkan  pada  media  agar  2  %  +  sumber karbon agro  residue 1  %.  Hal  ini  disebabkan media  nutrien  agar  mengandung  ekstrak  daging, ekstrak  yeast  yang  merupakan  diperlukan  untuk pertumbuhan bakteri dan merupakan media standar untuk  pertumbuhan  bakteri.  Contoh  pertumbuhan Bacillus  megaterium BM  9.1  pada  media  Nutrien agar  2  %  +  Kulit  pisang  1  %  dapat  dilihat  pada gambar 3.2.
Hasil  Uji  Fibrinolitik  Bacillus  megaterium  BM
9.1 dari berbagai media
Metode  yang  digunakan  untuk  mengetahui aktivitas enzim fibrinolitik pada Bacillus
megaterium BM 9.1 adalah dengan uji fibrin plate .
Hal  ini  dikarenakan  enzim  fibrinolitik  memecah substrat  spesifik  yaitu  fibrin.  Aktivitas  enzim fibrinolitik  ditentukan  dari  kecepatan  enzim memecah protein fibrin menjadi  peptida dan asam amino.  Pemecahan  protein  fibrin  oleh  enzim fibrinolitik  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  zona jernih  disekitar  sumur.  Aktivitas  fibrinolitik dinyatakan dalam indeks fibrinolitik yaitu perbandingan  antara  diameter  zona  jernih  hasil degradasi fibrin dengan diameter sumur dan diplot kan  dalam  diagram  batang.  Media  fibrin  dibuat dengan  melarutkan  fibrin  2  %,  agar  2  %, metilen blue 400  µL  dalam  100  mL  dapar  fosfat  0,1  M. Penambahan metilen blue bertujuan untuk memperjelas zona jernih yang terbentuk. Diameter zona  diukur  dengan  jangka  sorong  dengan ketelitian  0,05  mm.  Contoh  hasil  uji  aktivitas enzim  fibrinolitik Bacillus  megaterium BM  9.1 yang ditumbuhkan pada media nutrien agar 2 % + kulit  pisang  1  %  dapat  dilihat  pada  gambar  1  dan tabel III.1.
Tabel  I  Hasil  Uji  Aktivitas  Fibrinolitik Bacillus  megaterium BM  9.1  yang  ditumbuhkan  pada  berbagai media
Media pertumbuhan Rerata indeks fibrinolitik ± SD Perbandingan dengan media NA (%) NA kontrol 4,21 ± 0,02 100 Agar 2 % + kulit jagung 1 % 4,07± 0,15 95,49 Agar 2 % + kulit pisang 1 % 4,42 ± 0,08 104,99 Agar 2 % + kulit nanas 1 % 4,42 ± 0,07 104,99 Agar 2 % + tongkol jagung 1 % 3,53 ± 0,05 83,84 Agar 2 % + dedak padi 1 % 4,11 ± 0,04 97,62 NA 2 % + kulit jagung 1 % 4,41 ± 0,05 104,48 NA 2 % + kulit pisang 1 % 4,95 ± 0,08 117,58 NA 2 % + kulit nanas 1 % 4,72 ± 0,15 112,11 NA 2 % + tongkol jagung 1 % 3,98 ± 0,03 94,54 NA 2 % + dedak padi1 % 4,11 ± 0,04 97,62 Kontrol negatif -
Keterangan : NA: nutrien agar (-) tidak menghasilkan enzim fibrinolitik
Dari  hasil  uji  aktivitas  fibrinolitik  Tabel III.1 diketahui bahwa Bacillus megaterium BM 9.1 yang  ditumbuhkan  pada  berbagai  media agro residues meliputi  kulit  pisang,  kulit  nanas,  kulit jagung,  dedak  padi  dan  tongkol  jagung  mampu menghasilkan enzim fibrinolitik. Hal ini
ditunjukkan dengan terbentuknya zona jernih hasil degradasi fibrin oleh enzim fibrinolitik disekitar sumuran.  Kontrol  negatif  yang  digunakan  ialah dapar fosfat 0,1 M pH 7,4 dan tidak menghasilkan zona jernih disekitar lubang.
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 17 - 22 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Dari  grafik  di  atas,  terlihat  bahwa  rerata  indeks fibrinolitik tertinggi terdapat pada enzim fibrinolitik Bacillus  megaterium BM  9.1  yang ditumbuhkan pada media kombinasi nutrien agar 2 % dan kulit pisang 1 % yaitu sebesar 4,95 ± 0,08. Dan  menurut  uji  statistik  ANOVA  satu  arah, terdapat  perbedaan  secara  bermakna  rerata  indeks fibrinolitik Bacillus  megaterium BM  9.1  yang ditumbuhkan pada kombinasi nutrien agar 2 % dan kulit  pisang  1  %  (p<0,05).  Jika  dibandingkan dengan  media  standar  nutrien  agar  yaitu  sebesar 117,58  %.  Perbedaan  aktivitas  enzim  fibrinolitik Bacillus  megaterium BM  9.1  dari  berbagai  media agro  residues  kemungkinan  disebabkan  karena komponen  utama  dinding  sel  adalah  selulose  dan pektin dan merupakan penentu struktur dinding sel (Al-Abdalall  &  Al-Khaldi,  2016).  Kandungan karbohidrat 59,0 %, lemak 1,7 % dan serat 31,7 % pada kulit  pisang dapat  digunakan sebagai  sumber selulosa  dan  pektin  untuk  pembuatan  dinding  sel, pertumbuhan, sumber energi dan produksi metabolit  yaitu  salah  satunya  enzim  fibrinolitik dengan  aktivitas  yang  lebih  tinggi  pada Bacillus megaterium BM  9.1.  Pada  media  pertumbuhan yang  berasal  dari  bahan  alam  dapat  terjadi  variasi komponen  penyusun  dan  impurities  sehingga pembentukan biomassa dan metabolit dari mikroorganisme  dalam  media  yang  berasal  dari alam tidak dapat diprediksi (Stanbury, Whitaker, & Hall,  2013).  Hal  ini  terjadi  dalam  penelitian  ini, pada  media  kulit  nanas,  kulit  jagung,  tongkol jagung  dan  dedak  padi  mengandung  komponen yang  dapat  menunjang  pembentukan  enzim fibrinolitik  namun  dengan  kadar  yan  lebih  rendah dibandingkan  kulit  pisang.  Sehingga  dapat disimpulkan bahwa media kulit  pisang yang dapat menghasilkan  aktivitas  enzim  fibrinolitik  paling maksimum.
Hasil  uji  fibrinolitik  Bacillus  megaterium  BM 9.1  yang  ditumbuhkan  pada  kulit  pisang berbagai konsentrasi Oleh  karena  setiap  mikroorganisme  memiliki karakteristik  yang  beragam  dan  kebutuhan  nutrisi yang  berbeda  maka  perlu  dilakukan  optimasi kebutuhan  nutrisi  dalam  media  pertumbuhan  yang merupakan salah satu parameter yang mempengaruhi  pertumbuhan  mikroorganisme  dan metabolit akhir yang dihasilkan. Dari hasil analisis statistik,  jenis  media  pertumbuhan  yang  diketahui memberikan aktivitas fibrinolitik Bacillus megaterium BM  9.1  maksimum  adalah  kombinasi nutrien agar dan kulit pisang. Kemudian dilakukan optimasi konsentrasi kulit pisang untuk mengetahui konsentrasi kulit pisang yang memberikan  aktivitas  fibrinolitik  paling  optimum. Optimasi  konsentrasi  kulit  pisang  dilakukan  pada konsentrasi  0,5  %;  1  %;  2  %  dan  4  %.  Aktivitas fibrinolitik  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  zona
jernih  disekitar  sumur  yang  diinokulasikan  media yang  mengandung  enzim  fibrinolitik Bacillus megaterium BM  9.1  dan  dinyatakan  dalam  indeks fibrinolitik  yaitu  perbandingan  zona  jernih  hasil degradasi  fibrin  disekitar  sumur  dengan  diameter sumur. Diameter zona jernih diukur dengan jangka sorong  ketelitian  0,05  mm.  Hasil  rerata  indeks fibrinolitik  enzim fibrinolitik Bacillus  megaterium BM  9.1  yang  ditumbuhkan  pada  berbagai konsentrasi  kulit  pisang  diplotkan  dalam  diagram batang dengan sumbu X konsentrasi dan sumbu Y rerata indeks fibrinolitik. Contoh hasil uji aktivitas fibrinolitik Bacillus  megaterium BM  9.1  yang ditumbuhkan  pada  kulit  pisang  konsentrasi konsentrasi 2 % tersaji dalam gambar 3.5.
Gambar 3 uji fibrinolitik Bacillus megaterium BM 9.1  yang  ditumbuhkan  pada  nutrien  agar  2  %  dan kulit  pisang  2  %  dan  kontrol  negatif  dapar  fosfat pH  7,4.  Masing-masing  media  dilakukan  3  kali replikasi
Tabel  2.  Uji  Aktivitas  Fibrinolitik Bacillus Megaterium BM  9.1  yang  ditumbuhkan  pada media dengan berbagai konsentrasi Kulit Pisang
Konsentrasi kulit pisang (%) Indeks fibrinolitik Rerata Indeks fibrinolitik ± SD 0,5 4,14 4,26 ± 0,11 4,28 4,35 1 4,30 4,32 ± 0,03 4,30 4,35 2 %
4,64
4,61 ± 0,03 4,59 4,60 4 4,39 4,35 ± 0,05 4,30 4,36 Kontrol negatif - -
Dari  hasil  uji  aktivitas  fibrinolitik  Tabel  2  dan gambar  3  diketahui  bahwa Bacillus  megaterium BM  9.1  yang  ditumbuhkan  pada  media  nutrien agar  2%  dan  kulit  pisang  dalam  berbagai

## Zona jernih
Berkala Ilmiah Kimia Farmasi, Vol.7 No.1 Juni 2020 Hal 17 - 22 P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
konsentrasi meliputi 0,5 %; 1 %; 2 %; 4 % mampu menghasilkan enzim fibrinolitik. Hal ini ditunjukkan dengan terbentuknya zona jernih hasil degradasi  fibrin  oleh  enzim  fibrinolitik  disekitar sumur.  Dari  tabel  III.2  menunjukkan  bahwa aktivitas  fibrinolitik  meningkat  secara  progresif pada  konsentrasi  kulit  pisang  0,5  %  sampai  2  %. Namun, peningkatan konsentrasi kulit pisang lebih lanjut 4 %, menurunkan aktivitas enzim fibrinolitik.  Menurut  Nelson  and  Cox,  2008, aktivitas enzim akan meningkat  sebanding  dengan peningkatan konsentrasi substrat. Namun peningkatan  substrat  pada  titik  tertentu  tidak menyebabkan  peningkatan  aktivitas  enzim  bahkan sampai  menyebabkan  penurunan  aktivitas  enzim. Hal  ini  disebut  fenomena feedback  inhibition dan hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  ini.  Pada konsentrasi  kulit  pisang  0,5  %;  1  %  dan  2  % aktivitas  enzim  fibrinolitik  meningkat  seiring dengan  peningkatan  konsentrasi  substrat  namun pada  konsentrasi  4  %  aktivitas  enzim  menurun berbanding terbalik dengan peningkatan konsentrasi  substrat.  Penurunan  aktivitas  enzim yang  berbanding  terbalik  dengan  peningkatan konsentrasi  ini  kemungkinan  disebabkan  oleh  sisi aktif  enzim  ditempati  oleh  substrat  yang  terlalu banyak  sehingga  enzim  jenuh  terhadap  substrat dan nutrisi dalam substrat hanya digunakan bakteri untuk  pertumbuhanun  dan  tidak  menghasilkan metabolit enzim fibrinolitik (Nelson & Cox, 2008) Sehingga  dapat  diketahui  bahwa  aktivitas  enzim fibrinolitik  optimum  terdapat  pada  media  kulit pisang 2 %.

## Kesimpulan
Media  dengan  sumber  karbon agro  residues mampu  menumbuhkan  dan  menghasilkan  enzim fibrinolitik oleh Bacillus megaterium BM 9.1.
Terdapat  perbedaan  aktivitas  enzim  fibrinolitik Bacillus  megaterium BM  9.1  yang  ditumbuhkan pada  media  dengan  berbagai  sumber  karbon agro residues dibandingkan  dengan  media  nutrien  agar standar . Aktivitas  enzim  fibrinolitik  maksimum dibandingkan  dengan  media  standar  nutrien  agar terdapat  pada Bacillus  megaterium BM  9.1 yang ditumbuhkan  pada  media  nutrien  agar  dan  kulit pisang yaitu sebesar 117,58 %.
Konsentrasi kulit pisang optimum untuk menghasilkan  enzim  fibrinolitik  dengan  aktivitas maksimum  adalah  sebesar  2  %  dengan  indeks fibrinolitik sebesar 4,61 ±  0,03.

## Daftar pustaka
Al-Abdalall,  A.  H.,  &  Al-Khaldi,  E.  M.  (2016). Production  of  alkaline  proteases  by  alkalophilic Bacillus subtilis during recycling animal and plant wastes. African Journal of Biotechnology , 15 (47),
2698–2702. Atlas, R. M. (n.d.). Handbook of MICROBIOLOGICAL MEDIA Fourth Edition .
Bhargav,  S.;  Panda,  B.  P.;  Ali,.  M.;  Javed,  S.  (2008).
Solid-state  fermentation  systems-an  overview. Critical reviews in biotechnology , 25 (1–2), 1–30. Fakhri,  C.  H.  (2015). Skrining  bakteri  penghasil  enzim fibrinolitik  asal  perairan  pantai  ekowisata mangrove  wonorejo  kota  surabaya .  universitas airlangga.
Glaser,  A.  N.,  &  Nikaido,  H.  (2007). Microbial biotechnology. Fundamentals of Applied
Microbiology,  Second  Edition .  (S.  Edition, Ed.) Journal  Of  Bacteriology (Second.).  New York:  Published in the United  States  of America by Cambridge University Press, New York.
Kotb, E. (2015). Purification and Partial Characterization  of  Serine  Fibrinolytic  Enzyme from Bacillus megaterium KSK 07 Isolated from Kishk , a Traditional Egyptian Fermented Food 1, 51 (1), 34–43. elson,  D.  L.,  &  Cox,  M.  M.  (2008). Lehninger PRINCIPLE OF BIOCHEMISTRY (5th editio.). Peng,  Y.,  Huang,  Q.,  Zhang,  R.  H.,  &  Zhang,  Y.  Z. (2003).  Purification  and  characterization  of  a fibrinolytic  enzyme  produced  by  Bacillus amyloliquefaciens DC-4 screened  from  douchi,  a traditional  Chinese  soybean  food. Comparative biochemistry and physiology. Part B, Biochemistry  &  molecular  biology , 134 (1),  45– 52.
Prod, J. N., Resour, P., Arulanantham, R., Pathmanathan,  S.,  &  Ravimannan,  N.  (2012). Alternative  culture  media  for  bacterial  growth using  different  formulation  of  protein  sources,
2 (6), 697–700.
Singh  Nee  Nigam,  P.,  &  Pandey,  A.  (2009).
Biotechnology for agro-industrial residues utilisation: Utilisation of agro-residues .
Biotechnology  for  Agro-Industrial  Residues Utilisation: Utilisation of Agro-Residues .
Stanbury,  P.  F.,  Whitaker,  A.,  &  Hall,  S.  J.  (2013).
Principles  of  fermentation  technology (Second Ed., Vol. 53). Butterworth-Heinemann An imprint of  Elsevier  Science  200  Wheeler  Road, Burlington MA 01803.
Vijayaraghavan,  P,  &  Vincent,  S.  G.  P.  (2015).  A  low cost  fermentation  medium  for  potential  fi brinolytic enzyme production by a newly isolated marine bacterium , Shewanella sp . Biotechnology Reports , 7 , 135–142. Elsevier B.V.
Vijayaraghavan, Ponnuswamy, Vincent, S. G. P., Arasu, M. V., & Al-Dhabi, N. A. (2016). Bioconversion of  agro-industrial  wastes  for  the  production  of fibrinolytic  enzyme  from  Bacillus  Halodurans IND18: Purification and biochemical characterization. Electronic Journal of
Biotechnology , 20 , 1–8. Elsevier B.V.