## ARTIKEL PENELITIAN

## PENGARUH JENIS MEDIA DENGAN HORMON TUMBUH NAA-BAP TERHADAP
PERTUMBUHAN DAN KANDUNGAN FLAVONOID KALUS DAUN Echinaceae purpurea (L.)Moench
Guntur Satrio Pratomo
1 Dosen Pengajar Program Studi D-III Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Palangkaraya
e-mail : guntursatriopratomo@yahoo.com

## ABSTRAK
Echinaceae purpurea (L.) Moench merupakan tanaman obat yang mempunyai   khasiat salah  satunya  imunomodulator  dan  imunostimulan.  Tanaman  ini  mengandung  metabolit sekunder salah satunya yaitu falvonoid.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan media dalam menginduksi kalus dan mempengaruhi kandungan flavonoid dalam kalus daun E.purpurea (L.) Moench.
Eksplan  adalah  daun  E.purpurea  (L.)  Moench  yang  segar,  sehat,  dan  tidak  terlalu  tua. Sterilisasi  eksplan  dilakukan  dengan  Dithane  M-45  2  %,  dengan  penambahan  Tween  80, Agrept  20/WP    2  %  dengan  penambahan  Tween  80,  alkohol  70  %,  dan  Bayclin ® 10  %. Penanaman eksplan dilakukan dengan menggunakan media MS, ½ MS, dan Gamborg dengan penambahan kombinasi zat pengatur tumbuh NAA dan BAP masing-masing konsentrasi 1 ppm. Evaluasi  kalus  dilakukan  terhadap  prosentase  keberhasilan  pembentukan,  waktu  induksi,  dan rata-rata  berat  kalus.  Analisa  flavonoid  dalam  kalus  dilakukan  secara  kualitatif  dengan  reaksi warna,  tes  Wilstater  Cyanidin,  Kromatografi  kertas  ,  dan  Kromatografi  Lapis  Tipis,  serta semikuantitatif dengan KLT-Densitometri
Hasil  penelitian  menujnukkan  bahwa  jenis  media  mempengaruhi  keberhasilan pertumbuhan  kalus  dan  kandungan  flavonoid  kalus  daun  E.purpurea  (L.)  Moench.  Media Gamborg  berpengaruh  paling  baik  dalam  menginduksi  kalus  sedangkan  media  ½  MS berpengaruh paling baik terhadap kandungan flavonoid di banding jenis media lain.
Kata  Kunci :  Flavonoid, E.purpurea  (L.)  Moench ,  Media  MS,  Media  ½  MS,  Media  Gamborg, Hormon NAA dan BAP

## PENDAHULUAN
Indonesia  kaya  akan  obat  yang berasaldari  tanaman  obat.  Penggunaaan Tanaman  obat  cenderung  meningkat  seiring berkembangnya industri jamu, farmasi, kosmetik,  dan  makanan.  Tanaman  obat dalam  pembudidayaannya  ada  beberapa tahap  yang  harus  dilakukan.  Setiap  tahap memiliki ciri dan perhatian khusus diantaranya  lingkungan  tumbuh  merupakan faktor yang cukup penting karena
berhubungan dengan produksi produksi tanaman dan sifat genetiknya.
Metode  Kultur  Jaringan  Tanaman adalah  suatu  metode  yang  banyak  dipakai untuk  memproduksi  tanaman  dan  atau metabolit  sekunder  tanaman  dengan  waktu relatif  singkat  dan  mudah  yang  memiliki  sifat fisiologi  dan  morfologi  yang  sama  persis dengan  tanaman  induknya  dengan  cara meletakkan  suatu  sel  atau  jaringan  tanaman yang  disebut  eksplan  secara  aseptik  dan
dipelihara  dalam  suatu  media  baik  media padat  maupun  cair  yang  cocok  dalam keadaan  steril.  (  Hendaryono  &  Wijayani 1994)
Keberhasilan dalam budidaya tanaman  secara  kultur  jaringan  berkaitan dengan  media  tempat  tumbuh  tanaman tersebut,  maka  dari  itu  media  memegang peranan  penting  dalam  proses  pertumbuhan tanaman,  karena  media  merupakan  tempat bagi  jaringan  untuk  tumbuh  dan  mengambil nutrisi  untuk  keberlangsungan  kehidupan jaringan. Media menyediakan berbagai bahan yang  di  perlukan  jaringan  untuk  hidup,  tidak hanya  unsur  hara,  makro  dan  mikro,  tetapi juga karbohidrat yang pada umumnya berupa gula  untuk  menggantikan  carbon  yang biasanya  di  peroleh  dari  proses  fotosintetsis. Beberapa  media  yang  banyak  di  gunakan antara  lain  media  Murashige  Skoog  (MS), media  Gamborg,  media  White,    dan  media N6.  Selain  itu  media  juga  harus  di  lengkapi dengan  hormon  tumbuh  karena  media  tanpa hormon  tumbuh  menyebabkan  pertumbuhan eksplan menjadi terhambat atau bahkan tidak tumbuh  sama  sekali.  Hormon  tumbuh  yang efektif pada kultur jaringan untuk pertumbuhan  kalus  yakni  kombinasi  antara auksin  dan  sitokinin  karena  hormon  auksin berguna  untuk  meransang  perpanjangan  sel dan  pembentukan  kalus  sedangkan  sitokinin berguna  untuk  meransang  pembelahan  sel., hormon auksin yang sering di gunkan adalah
Napthalene  Acetic  Acid  (  NAA)  dan  hormon sitokinin yang sring digunakan adalah  Benzyl Amino  Purin  (  BAP  ).  Penelitian  terhadap komposisi  hormon  tumbuh  kombinasi  auksin sitokinin  terhadap  pertumbuhan  kalus  sudah pernah  di  lakukan  dan  memberikan  hasil kombinasi  terbaik  terhadap  pembentukan kalus sebesar 1 mg/ L.. (Candra 2005)
Tanaman  E.purpurea  (L.)  Moench merupakan  tanaman  yang  paling  banyak dikembangkan  karena  terkenal  berfungsi pada  sistem  kekebalan  tubuh  (Hobbs  1994). Tanaman  E.purpurea  (L.)  Moench  mulai diteliti  di  Indonesia    pada  tahun  1998. Tanaman  E.purpurea  (L.)  Moench  memiliki kandungan kimia seperti polisakrida, flavonoid,  turunan  caffeic  acid,  serta  minyak essensial. Tanaman ini dapat mengobati luka akibat  gigitan  ular,  flu,  sakit  gigi,  nyeri, herpes,  dan  dipakai  dalam  pengobatan kanker.
Penelitian  ini  bertujuan  mengetahui pengaruh  penggunaan  media  yaitu  media Murashige  Skoog  (MS),  ½  MS,  Gamborg, dengan  penambahan  hormon  tumbuh  NAA- BAP  dengan  konsentrasi  1ppm,  terhadap keberhasilan  pembentukan  kalus,  waktu induksi kalus, berat kalus, dan mengidentifikasi  kandungan  flavonoid  pada kalus eksplan daun E.purpurea (L.) Moench.

## METODE PENELITIAN
Bahan  yang  di  gunakan  adalah  daun E.purpurea  (L.)  Moenchyang  bersal  dari BP2TO-OT  Tawangmangu  Jawa  Tengah, Media yang di gunakan yaitu media Murashige Skoog (MS),  media ½ MS, media Gamborg dengan penambahan hormon tumbuh NAA-BAP dengan konsentrasi 1 ppm, NaClO,  Agrept,  Dithane  M-45,  alkohol  70  %, Tween  80,  aquadest  steril,  detergent.Bahan kimia  untuk  analisis  falvonoid  secara  KLT yaitu asam asetat 15 % sebagaoi fase gerak, fase  diamnya  selulosa, kertas   Whatman  No. 1,  bahan  kimia  untuk  analisa  kualitatif  yakmi HCL  pekat,  serbuk  Mg, heksan,  amil  alkohol, alkohol, FeCl 3 , AlCl 3 , Amonia, Sitroborat Alat  yang  di  gunakan  antara  lain autoklaf, gelas ukur, erlenmeyer, botol kulitur, cawan  petri,  alluminium  foil,  scalpel,  pH  stik, lampu  UV  366  nm,  pipa  kapiler,  oven, waterbath, bejana elusi, dan densitometer. Pembuatan media
Bahan –bahan yang  di perlukan untuk membuat  media    MS,  ½  MS,  Gamborg, adalah  dalam  bentuk  larutan  stok  (makro, mikro dan vitamin)  kecuali agar-agar. Proses pembuatannya  di  mulai  dari  pemipetan larutan stok makro, mikro, vitamin, mioinositol, kemudian di tambahkan aquadest, lalu di tambahkan sukrosa 30 gram untuk media MS. 15 gram untuk media ½ MS, 20  gram  untuk  media  Gamborg,  kemudian
tambahkan hormon tumbuh NAA-BAP dengan  konsentrasi  1ppm,  kemudian  di  ukur pHnya    5,0 –  6,0  ,  kemudian  ditambahkan agar-agar kemudian diaduk dan dipnaskan di hot plate magnetik sterear, setelah tercampurkan homogen, kemudian di masukan  ke  dlam  botol-botol  kultur  yang kemudian  di  tutup  menggunakan  alluminium foil kemudian dilanjutkan pada proses sterilisasi  menggunakan  autoklaf  pada  suhu 121 C tekanan 1 atm selama 15 menit.

## Sterilisasi
Sterilisasi alat dilakukan menggunakan  autoklaf  dengan  suhu  121  C, tekanan 1 atm, selama 30 menit, tahapannya adalah semua alat yang akan di pakai, seperti pinset,  scalpel,  cawan  petri,  di  bungkus dengan  kertas  lalu  di  masukkan  ke  dalam autoklaf untuk selanutnya di sterilkan.

## Sterilisasi eksplan dan penanaman
Daun  E.purpurea  (L.)  Moench  diambil dalam  keadaan  segar  kemudian  di  potong bagian pinggirnya sehingga berbentuk persegi,  kemudian  di  cuci  mengunakan aquadest,  kemudian  direndam  menggunakan larutan Dithane M-45 2% dengan penambahan  4  tetes  tween  80  selama  10-15 menit, kemudian bilas menggunakan aquadest  steril  kemudia  kembali  direndam menggunakan Agrept 2% dengan menggunakan penamabhan 4 tetes Tween 80 selama  10-15  menit,  bilas  mengunakan aquadest steril, masukkan kembali ke dalrutan alkohol 70 % selama 0,5 menit lalu di
bia  menggunakan  aquadest  steril,  kemudian eksplan  di  bawa  kedalam  entkas  atau  ruang penanaman,  didalam  ruang  penanaman ekplan  kembali  di  rendam  dengan  larutan NaClO 10 % selama 10-15 menit kemudian di bilas  menngunakan  aquadest  steril,  barulah sampel  siap  untuk  di  lakukan  penanaman pada botol kultur denan cara daun E.purpurea (L.) Moench tersebut diletakan di cawan petri secara  aseptik  lalu  di  potong  menggunakan scalpel  menjadi  ukuran  1  cm  x  1  cm  dengan bantuan pinset steril ekplan tersebut dimasukkan  kedalam  botol  media  kultur secara  aseptik,  pastikan  sebagian  besar bagian  eksplan  mengenai  media  lalu    botol kultur tersebut di tutup menggunakan alluminium  foil,  semua  alat  yang  di  gunakan pada proses penamanan di ruang kultul harus selalu  di  fiksasi  agara  prosesnya  aseptik, setelah  penanaman  selesai  botol  kultur  di pelihara dalam ruang inkubasi denga penerangan  lampu  TL  berjarak  40-60  cm diatas  permukaan  botol  dan  suhunya  di  jaga berkisar antara 25-28 C.

## Analisa Flavonoid
Kalus  esplan  daun E.purpurea  (L.)
Moench yang  sudah  dipanen  kemudian  di maserasi  menggunakan  pelarut  metanol  :  air 9:1`  selama  3  hari  kemudian  di  pekatkan dengan  cara  diuapkan,    kemudian  di tamabahkan  pelarutnya  5  ml  kemudian  di maukkan  kedalam  labu  takar.  Ekstraksi  juga
dilakukan terhadap tanaman asalnya sebagai pembanding.
Analisa  kualitataifnya  meliputi  reaksi warna dengan FeCl 3 yang akan mengahsilkan warna  yang  bila  ditambahkan  dengan  AlCL 3 , akan  menimbulkan  warna  kuning,    uji penegasan  dengan  tes  Wilstater  Cyanidin yang akan memberikan warna merah crimson dan  megenta  kadang-kadang  hijau  atau  biru. Kromotografi  kertas  menggunakan  kertas whatman  No.  01,    dengan  fase  gerak  asam asetat  15  %    yang  kemudian  dideteksi dengan  sinar  UV  366  nm  yang  kemudian  di uapi  dengan  amonia  lalu  amati  perubahan warna  yang  terjadi  sebelum  diuapi  dan setelah diuapi kemudian dilakukan penghitungan nilai Rf. Pada KLT menggunakan  fase  diam  sellosa  dan  fase gerak  asam  asetat  15  %  kemudian  di  lihat pada  UV  366  nm  dan  di  hitung  hRfnya, secara semi kunatitatif menggunakan densitometrer  untuk  membandingkan  luas area  bercak  yang  di  peroleh  oleh  kalus  dan tanaman asal.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Prosentasi Keberhasilan Pembentukan Kalus
Media  memang  memegang  peranan penting dalam proses terbentuknya kalus, hal terliaht  pada  tabel  1  terlihat  bahwa  3  jenis media  yang  digunakan  yaitu  media  MS,  ½ MS,  dan  media  Gamborg  menghasilkan
presentasi  yang  berbeda.  Pada  penelitian  ini prosentase pembentukan kalus daun E.purpurea  (L.)  Moench  terbaik  terjadi  pada hormon ½ MS.

## Waktu induksi kalus
Gejala pertumbuhan kalus terlihat dari mulai  timbulnya  tonjolan-tonjolan  putih  yang tidak teratur pada bekas irisan daun. Pengaru jenis media dapat di lihat pada tabel 2.
Pada  tabel  tersebut  terlihat  jelas bahwa  media  Gamborg  memberikan  hasil waktu induksi kalus terbaik

## Hasil Rata-rata bobot kalus
Rerata  berat  kalus  diperoleh  dari menimbang  berat  basah  kalus  di  bagi  berat kalus kering  dibagi jumlah botol. Berat basah kalus  lebih  besar  dari  pada  kalus  kering karena  terjadi  penguapan  air    pada  kalus kering.  Rerata  bobot  kalus  tiap  media  dapat dilihat pada tabel 3.
Dari  hasil  evaluasi  kalus  baik  pada prosentase perbentukkan kalus, waktu induksi  kalus,  dan  rerata  berat  kalus,
memperlihatkan  bahwa  penanaman  eksplan daun  E.purpurea  (L.)  Moench  pada  jenis media  yang  berbeda-beda  menghasilkan pertumbuhan  yang  tidak  sama.  Hal  ini dikarenakan  kandungan  unsur  hara  dari masing-masing  media  berbeda.  Berdasarkan hasil  evaluasi  kalus  maka  media  Gamborg merupakan  media  yang  paling  bagus  untuk menumbuhkan  eksplan  daun  E.purpurea  (L.) Moench

## Analisis Flavonoid
Analisa  senyawa  flavonoid  dalam tanaman asal dan kalus daun E.purpurea (L.) Moench  dilakukan  secara  kualitatif  yang meliputi  uji  reaksi  warna,  uji  dengan  tes Wilstater Cyanidine, Kromatografi kertas, dan Kromatografi Lapis Tipis
Dari  hasil  uji  reaksi  warna  dan  tes Wilstater  Cyanidine  pada kalus  eksplan  daun dan  tanaman  asal    E.purpurea  (L.)  Moench memberikan  interpretasi    bahwa  keduanya mengandung  flavonoid,  hasil  terlihat  pada tabel 4
Pada  pengujian  Kromatografi  kertas yang menngubnakan kertas Whatman No. 01 sebagai  fase  diam  dan  menggunakan  fase gerak  asam  asetat  15  %  menghasilkan wartna  kuning  lemah  pad  UV  366  nm  yang jika  di  uapi  dengan  amonia  akan  menjadi kuning  dan  kuning  intensif  bila  di  semprot
dengan sitroborat hal ini menunjukkan bahwa antara  tanaman  asli  dan  kalus  eksplan  daun
E.purpurea (L.) Moench menghasilkan metabolit sekunder yang sama dan Kromatografi  Lapis  Tipis    pada  pengujian  ini juga  memberikan  hasil  noda  bercak  yang sama  hal  ini  berarti  antara  teknik  kultur jaringan  akan  menghasilkan  metabolit  yang sama dengan  tanaman asalnya. Hasil pengujian  Kromatografi  kertas  (tabel  5)  dan Klromatografi  Lapis  Tipis  (tabel  6)  dapat dilihat pada tabel dibawah ini
Hasil pengujian KLT Densitometri  pada kalus eksplan  daun  E.purpurea  (L.)  Moench  di setiap  jenis  media  menunjukkan  luas  area yang  berbeda-beda,  hal  in  berarti  besarnya kandungan  flavonoid  pada  masing-masing media  berbeda  semakin  luas  areanya  maka, semakin  besar  kadar  flavonoidnya,  hasil  luas area  terbesar  di  tunjukkan  oleh  media  ½  MS berarti  kalus  yang  di  hasilkan  pada  eksplan dengan  media  ½  MS  memiliki  kandungan flavonoid  yang  lebih  besar  dibanding  media yang lain.
Hasil  Pengukuran  luas  area  menggunakan Densitometri  dapat  dilihat  pada  tabel  7  di bawah ini
.

## KESIMPULAN
Dari hasilpenelitian yang telahdilakukandapatdisimpulkan a.  Pemakaian  media  Murashige  Skoog,  ½
Murashige Skoog, dan Gamborg dengan  penambahan  hormon  tumbuh NAA-BAP  dengan  konsentrasi  masing- masing  1  ppm  dapat  mempengaruhi keberhasilan  pembentukkan  kalus  dari eksplan  daun  tanaman  E.purpurea  (L.) Moench,  waktu  induksi  kalus,  dan  rata- rata  berat  kalus  daun  E.purpurea  (L.) Moench.  Media  yang  paling  baik  dalam menginduksi kalus adalah media Gamborg  dengan  waktu  induksi  10.24 hari.
b.  Pemakaian  media  Murashige  Skoog,  ½
Murashige Skoog, dan Gamborg
dengan  penambahan  hormon  tumbuh NAA-BAP  dengan  konsentrasi  masing- masing  1  ppm  dapat  mempengaruhi kandungan  flavonoid  pada  kalus  daun tanaman E.purpurea (L.) Moench.
Dengan  kandungan  flavonoid  tertinggi
ada pada media ½ MS

## DAFTAR PUSTAKA
1.  Candra RA. 2005. Pengaruh Penambahan  Hormon  NAA  dan  BAP dalam  Media  MS  terhadap  Kandungan Senyawa  Flavonoid  dalam  Daun E. purpurea (L.) Moench [Skripsi]. Surakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi. hlm 45-49 2.  Harbone,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia , diterjemahkan  oleh  Padmawinata,  K., Soediro,  I,  Penerbit  ITB,  Bandung,13, 71-74.
3.  Hendaryono, D.P.S., Wijayani, A. 1994.
Teknik Kultur Jaringan, Kanisius, Yogyakarta. hlm 28-29, 59-62, 89 4.  Hobbs,  C.,  1994. Echinacea  the Immune Herbs , Botanica Press,Capitola, CA, 39. 5. Markham, K. 1988. Cara Mengidentifikasi Flavonoid ,
diterjemahkan  Kosasih  Padmawinata, Penerbit ITB, Bandung, 1, 10, 15, 32 .