ISOLASI DAN IDENTIFIKASI ANANIKSANTON DARI EKSTRAK ETIL ASETAT KULIT AKAR SLATRI ( Calophyllum soulattri ) (CLUSIACEAE)
(ISOLATION AND IDENTIFICATION OF ANANIXANTHONE FROM ETHYL ACETATE EXTRACT OF ROOT BARK OF SLATRI ( Calophyllum soulattri ) (CLUSIACEAE))
Dindha Ramah Mulia 1 , Nestri Handayani 2 dan M. Widyo Wartono 1 *
1 Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Sebelas Maret,Jalan Ir. Sutami No. 36 A Kentingan, Surakarta, Jawa Tengah, Indonesia.
2 Jurusan Farmasi, FMIPA, Universitas Sebelas MaretJalan Ir. Sutami No. 36 A Kentingan, Surakarta, Jawa Tengah, Indonesia.
*email: m.widyo.wartono@gmail.com
Received 14 October 2013¸ Accepted 10 March 2014, Published 01 September 2014

## ABSTRAK
Satu senyawa  xanton  yaitu ananiksanton ( 1 ), telah diisolasi untuk pertama kalinya dari ekstrak etil asetat kulit akar Calophyllum soulattri . Struktur molekul senyawa tersebut ditentukan berdasarkan data spektroskopi  meliputi UV, IR, NMR 1D, dan NMR 2D serta membandingkannya dengan data referensi yang telah dilaporkan.
Kata kunci : ananiksanton, Calophyllum soulattri , Clusiaceae, kulit akar

## ABSTRACT
A  xanthone,  named  ananixanthone  ( 1 )  has  been  isolated  and  identified  from  the ethyl acetate extract of the root barks of Calophyllum soulattri . Structure of the compound was determined based on spectroscopic data, including UV, IR, NMR 1D, NMR 2D and by comparison with references.
Keywords : ananixanthone, Calophyllum soulattri , Clusiaceae, root barks

## PENDAHULUAN
Calophyllum merupakan salah satu genus dari famili Clusiaceae, terdiri dari sekitar 180-200  spesies  (Stevens et  al .,  1980).  Tumbuhan  ini  banyak  tumbuh  di  dataran  rendah dekat pantai dan memiliki sebaran cukup luas di kawasan tropis, salah satunya di Indonesia dengan keragaman spesies terbanyak di Kalimantan bagian utara dan Papua (Sevents et al ., 1980).  Bagian  tumbuhan Calophyllum seperti  daun,  kulit  batang  dan  getahnya  telah dimanfaatkan  oleh  masyarakat  secara  tradisional  untuk  mengobati  berbagai  penyakit (Heyne,  1987).  Kajian  fitokimia  dari  genus Calophyllum menunjukkan  bahwa  genus  ini kaya  dengan  senyawa  golongan  xanton,  kumarin,  benzodipiron,  kromanon,  biflavonoid, triterpenoid  dan  steroid  (Noldin et  al .,  2006;  Su et  al .,  2008).  Karakteristik  dan  keunikan
senyawa  yang  terkandung  dalam  tumbuhan Calophyllum memperlihatkan  berbagai bioaktivitas  seperti  anti  HIV  (Laure et  al .,  2008),  anti  malaria  (Hay et  al .,  2004),  anti kanker  (Mah et  al .,  2012),  sebagai  insektisida  (Syahputra et  al .,  2007)  dan  antibakteri (Khan et al., 2002).
Salah  satu  spesies  dari  genus Calophyllum adalah Calophyllum  soulattri .  Di Indonesia tumbuhan C. soulattri juga digunakan sebagai obat tradisional, baik bagian daun, kulit, batang, biji, maupun bunga. Seduhan daunnya dapat digunakan untuk mencuci mata yang  meradang, rebusan kulit batang digunakan untuk  mengobati penyakit keputihan dan rematik,  biji  digunakan  untuk  mengobati  kudis,  borok,  dan  penumbuh  rambut,  seduhan kayu sebagai campuran untuk jamu penguat badan, sementara gelam kayunya sebagai jamu untuk kuda (Heyne, 1987). Beberapa senyawa telah diisolasi dari tumbuhan ini antara lain turunan terpenoid yaitu soulattron A (Nigam et al ., 1988) dan friedelin (Mah et al ., 2011), Turunan  xanton  antara  lain  soulattrin,  kaloksanton  B,  kaloksanton  C,  makluraksanton, filattrin,  brasiksanton  dan  trapezifoliksanton  (Mah et  al., 2011;  2012),  turunan  kumarin yaitu soulamarin (Ee et al., 2011) Sedangkan dari golongan steroid telah berhasil diisolasi senyawa stigmasterol dan β-sitosterol (Mah et al., 2011; 2012).
Kami melaporkan pada tulisan ini isolasi dan identifikasi senyawa ananiksanton ( 1 ) dari ekstrak Etil asetat kulit akar tumbuhan slatri ( C. soulattri ). Struktur molekul senyawa tersebut  ditetapkan  berdasarkan  analisis  spektrum  UV,  IR, 1 H  NMR, 13 C  NMR,  HSQC, HMBC  dan 1 H- 1 H  COSY,  serta  didukung  oleh  data  referensi  yang  telah  dilaporkan sebelumnya (Bayma et al., 1998; Ee et al., 2005).

## METODE PENELITIAN
Fasa  diam  untuk  kromatografi  vakum  cair  (KVC)  menggunakan  silika  gel  Merck Si-gel 60 G. Kromatografi flash menggunakan silika gel Kieselgel 60 G (0,04-0,063 mm) 230-400 mesh ASTM (Merck), kromatografi kolom menggunakan sephadex LH-20 0,025- 0,1  mm.  Analisa  KLT  menggunakan  plat  KLT  Kieselgel  F 254 0,25  mm  (Merck).  Pelarut yang  digunakan  yaitu n- heksana,  etil  asetat,  dan  metanol  berkualitas  teknis  yang diredestilasi.  Sedangkan,  pelarut  kloroform  dan  aseton  yang  digunakan  adalah  grade  pro analisis.  Spektrum  UV  diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis  Shimadzu  1240  dan  IR diukur masing dengan FTIR Shimadzu Prestige-21. Spektrum 1 H dan 13 C NMR, ditentukan dengan spektrofotometer Agilent VNMR 500 yang beroperasi pada 500 MHz ( 1 H) dan 125 MHz ( 13 C) menggunakan standar residu pelarut (CDCl 3 ).
Bahan tumbuhan berupa kulit akar C. soulattri diperoleh dari daerah Magelang dan telah diidentifikasi di Laboratorium Bagian Biologi, Fakultas Farmasi UGM Yogyakarta.

## Isolasi
Serbuk kering kulit akar C. soulattri sebanyak 1,2 kg direndam selama 3 x 24 jam dengan  6  L  Etil  asetat.  Filtrat  yang  diperoleh  kemudian  dievaporasi  hingga  diperoleh ekstrak  kasar  sekitar  50  g.  Ektrak  Etil  asetat  kemudian  difraksinasi  menggunakan  KVC sebanyak dua kali proses menggunakan sistem eluen n -heksana : Etil asetat dengan sistem gradien. Hasilnya setelah digabung diperoleh 9 fraksi (A-I). Fraksi E kemudian dilakukan pemisahan  dengan  kromatografi  kolom  tekan . Sebanyak  1,02  gram  fraksi  E  dipisahkan dengan  eluen n -heksana  :  kloroform  :  aseton  dengan  sitem  gradien  dalam  silika  gel  dan diperoleh  8  fraksi  (E 1 -E 8 ).  Fraksi  E 4 (115  mg)  dipisahkan  kembali  dengan  kromatografi kolom  tekan(d=1  cm)  menggunakan  eluen n -heksana  :  kloroform  :  aseton  (8:1:1)  dan (7,5:1:1,5)  dan  diperoleh  9  fraksi  E 4a -  E 4i .  Pada tahap  akhir  fraksi  E 4e (71  mg)  dilakukan kromatografi  kolom  sephadex  dengan  menggunakan  pelarut  metanol  dan  dihasilkan  9 fraksi  (E 4e1 -E 4e9 ).  Dari  fraksi  E 4e9 diperoleh  senyawa  berupa  padatan  kuning  yang diidentifikasi  sebagai  senyawa  ananiksanton  ( 1 )  sebanyak  13  mg.  Senyawa 1. diperoleh berupa padatan  berwarna kuning. Spektrum UV (MeOH) λ maks 252,  272  dan  328  nm,  IR (KBr) υ maks 3451, 3443, dan 1634 cm -1 . 1 H dan 13 C NMR lihat Tabel 1 .

## PEMBAHASAN
Senyawa 1 diperoleh berupa padatan berwarna kuning. Spektrum UV menunjukkan serapan maksimum pada λ maks 252, 272 dan 328  nm  yang  memperlihatkan ciri khas pada senyawa golongan xanton. Sementara spektrum IR menunjukkan bahwa ada 2 pita serapan utama  yaitu,  pada  bilangan  gelombang  3453  dan  3443  cm -1 (OH)  dan  1650  cm -1 (C=O).
Spektrum  1H  NMR  menunjukkan  10  sinyal  proton,  enam  sinyal  menunjukkan  proton aromatik/alkena sedangkan sisanya merupakan proton alkana. Proton aromatik ditunjukkan oleh δH 7,78 ( dd, J = 8,0 dan 1,5 Hz), 7,31 ( dd, J = 8,0 dan1,5 Hz) dan 7,25 ppm ( t, J = 8,0 Hz). Proton alkena ditunjukkan oleh puncak pada δ H 6,80 ( d, J = 9,95 Hz ) ; 5,64 ppm ( d,  J  = 9,95  Hz)  dan  δ H 5,26  ppm  ( t ).  Sedangkan  empat  gugus  metil  ditunjukkan  oleh puncak pada δ H 1,83  ( s ,  3H),  1,7  ( s ,  3H)  dan  1,5  ( s ,  6H).  Satu  puncak  pada  3,37 (d,  2H) merupakan alkana pada gugus isoprenil bebas.
Spektrum 13 C  NMR  menunjukkan  22  puncak  yang  merepresentasikan  adanya  23 atom  karbon  pada  senyawa 1 .  Spektrum  ini  merupakan  ciri  khas  senyawa  xanton  yang
tersubstitusi  oleh  dua  gugus  isoprenil.  Gugus  karbonil  ditunjukkan  oleh  δ C 180,8  ppm sedangkan  lima  karbon  oksiaril  ditunjukkan  oleh  puncak-puncak  pada  δ C 160,5;  158,6; 149,2; 144,3 dan 144,1 ppm. Lima karbon aromatik/alkena kuartener ditunjukkan oleh δ C 131,7;  120,1;  112,2;  103,2  dan  100,6.  Enam  karbon  metin  ditunjukan  spektrum  pada    δ C 127,4; 123,9; 121,9; 120,1; 116,9 dan 115 ppm. Karbon kuartener teroksigenasi ditunjukan oleh δ C 78,1 ppm. Empat gugus metil ditunjukkan oleh puncak pada δ C 28,2 (2C); 25,8 dan 17,9  ppm.  satu  karbon  metilen  yaitu  pada  δ C 21,2  ppm.  Korelasi  HSQC  ditunjukan  pada Tabel 1.
Tabel 1 . 1 H dan 13 C NMR senyawa ananiksanton ( 1 ).
No. C δ C (ppm) δ H (ppm,  ∑H m , j )(korelasi  H- C dengan HSQC) 1 160,5 2 112,2 3 158,6 4 100,6 4a 149,2 5 144,3 6 120,1 7,31 (1H, dd , J = 8 & 1,5 Hz) 7 123,9 7,25 (1H, t, J = 8 Hz)) 8 116,9 7,78 (1H, dd , J = 8 & 1,5 Hz) 8a 120,1 9 180,8 9a 103,2 10a 144,1 11 115 6,80 (1H, d , J = 10 Hz) 12 127,4 5,64 (1H, d , J = 10 Hz) 13 78,1 14/15 28,2 1,50 (6H, s ) 16 21,2 3,37 (2H, d ) 17 121,9 5,26 (1H, t ) 18 131,7 19 25,8 1,83 (3H, s ) 20 17,9 1,70 (3H, s )
Data  HMBC  menunjukkan  bahwa  gugus  metil  pada  δ H 1,83  dan  1,7  ppm  saling berkorelasi, proton pada metil  ini  juga  berkorelasi karbon pada δ C 131,7  dan  121,9  ppm. Sementara itu proton triplet pada δ H 5,26 ppm  berkorelasi dengan kedua  metil sedangkan proton  metilen  pada  δ H 3,37  ppm  berkorelasi  dengan  kedua  karbon  alkena  dan  dengan δ C 112,2  ppm.  Hal  ini  menunjukkan  adanya  gugus  isoprenil  bebas  yang  terikat  pada  C2.
Proton  metilen pada δ H 3,37  ppm  juga  berkorelasi  dengan  karbon-karbon  pada  posisi  C1 (δ C 160,5 ppm) dan C3 (158,6 ppm). Gugus piran ditunjukkan oleh spektrum proton metil pada δ H 1,5 ppm yang berkorelasi dengan karbon pada δ C 78,1; 127,4 dan 115 ppm. Pada spektrum  ini  juga terlihat dua sinyal proton  metin alkena pada δ H 6,80  ppm  ( d,  J  = 9,95 Hz ) ; 5,64 ppm ( d, J = 9,95 Hz) tetapan kopling ini menunjukkan adanya sistem cis vinilik. sedangkan  adanya  korelasi  proton  alkena  yang  pada  cincin  piran  δ H 6,80  ppm  dengan karbon  pada  δ C 158,6  ppm  dan    proton  pada  δ H 5,64  ppm  berkorelasi  dengan  karbon kuartener δ C 100,6 ppm menunjukkan bahwa cincin piran tersubstitusi pada posisi C-3 (δ C 158,6 ppm) dan C-4 (δ C 100,6 ppm), Seperti ditunjukkan dalam Gambar 1.
O O OH CH 3 CH 3 O CH 3 CH 3 OH 1 2 4 5 6 7 8 9 10a 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 4a 8a 9a 3 1

## Gambar 1. Struktur ananiksanton
Spektrum 1 H NMR juga menunjukkan sinyal proton-proton aromatik yaitu pada δ H 7,78 ppm (H-8); 7,31 ppm (H-6) [ dd, J = 8,0 dan1,5 Hz] dan 7,25 ppm (H-7) [ t, J = 8,0 Hz]  yang  sesuai  untuk  struktur  benzena  tersubstitusi  1,2  dan  3.  Spektrum  COSY  juga menunjukkan  bahwa  H-7  berkorelasi  dengan  H-6  dan  H-8,  sementara  H-8  hanya berkorelasi dengan H-7, sementara H-6 hanya berkorelasi dengan H7 saja.  Pada spektrum HMBC  proton  aromatik  pada  δ H 7,78  ppm  menunjukkan  korelasi  dengan  sinyal  karbon dari karbonil (δ C 180,8 ppm), satu buah karbon kuartener aromatik (δ C 120,1 ppm) dan satu buah karbon oksiaril (δ C 144,1  ppm).  Dari  data  ini  menunjukkan  bahwa  proton  aromatik pada  δ H 7,78  ppm  terletak  pada  C-8.  Sinyal  proton  pada  δ H 7,25  ppm  juga  memiliki korelasi  dengan  karbon  oksiaril  (δ C 144,27  ppm),  yang  diindikasikan  merupakan  karbon yang  tersubstitusi  oleh  gugus  OH  pada  posisi  C-5.  Berdasarkan  hasil  analisis  data  yang telah  dijabarkan  di  atas,  maka  struktur  senyawa  yang  disarankan  adalah  ananiksanton  ( 1 ) dengan  rumus  molekul  C 23 H 22 O 5 (BM  =  378).  Berdasarkan  literatur,  senyawa  ini  pernah diisolasi  dari  ekstrak  Etil  asetat  kulit  batang Symphonia  globulifera yang  diperoleh  dari Brazil (Bayma et al., 1998) dan dari ekstrak n -heksan kulit batang Mesua daphnifolia yang diperoleh dari Malaysia ( Ee et al., 2005).

## KESIMPULAN
Isolasi  senyawa  bahan  alam  dari  ekstrak  kulit  akar  slatri  ( Calophyllum  soulatrtri ) diperoleh  senyawa  ananiksanton,  senyawa  ini  diperoleh  untuk  pertamakalinya  dari tumbuhan slatri.

## TERIMA KASIH
Terima  kasih  kami  sampaikan  pada  Prof.  Dr.  Yana  Maolana  Syah,  yang  telah membantu dalam pengukuran spektrum NMR di ITB Bandung.

## DAFTAR PUSTAKA
Bayma, J.C., Aruda, M.S.P., and Neto. M.S., 1998, A Prenylated Xanthone from The Bark of Symphonia globulifera, Phytochemistry , vol. 49, no. 4, pp. 1159-1160.
Ee,  G.C.L.,  Lim,  C.K.,  and  Rahmat,  A.,  2005,  Structure-Activity  Relationship  of Xanthones  from Mesua  daphnifolia and Gracinia  nitida towards  Human  Estrogen Receptor  Negative  Breast  Cancer  Cell  Line, Natural  Product  Sciences, vol.  11, no. 4, pp. 220-224.
Ee,  G.C.L.,  Mah,  S.H.,  Teh,  SS.,  Rahmani,  M.,  Go  R.,  and  Taufiq-Yap,  Y.H., 2011,Soulamarin,  a  New  Coumarin  from  Stem  Bark  of Calophyllum soulattri , Molecules , vol. 16, pp. 9721-9727.
Hay,  A.E.,  He´lesbeux,  J.J.,  Duval,  O.,  Laba,  M.,  Grellier,  P.,  and  Richomme,  P., 2004,Antimalarial  Xanthones  from Calophyllum  caledonicum and Garcinia vieillardii , Life Sciences, vol 75, pp. 3077–3085.
Heyne,  K.,  1987, Tumbuhan  Berguna  Indonesia  (Terjemahan) ,  Jilid  3,  Badan  Litbang Kehutanan, Jakarta.
Khan, M.R., Kihara, M., and Omoloso , A.D., 2002, Antimicrobial Activity of Calophyllum soulattri , Fitoterapia, vol. 73, pp. 741-743.
Laure, F., Raharivelomanana, P., Franc¸ J., Butaud, O., Bianchini, J.P.,  and Gaydou, E.M., 2008,  Screening  of  Anti-HIV-1  Inophyllums  by  HPLC–DAD  of Calophyllum inophyllum Leaf Extracts  from  French Polynesia  Islands, Analytica  Chimica  Acta , vol. 624, pp. 147–153.
Mah, S.H., Ee, G.C.L., Rahmani, M., Yun, H.T, Sukari, M.A., and Teh, S.S, 2011, A New Pyranoxanthone from Calophyllum soulattri , Molecules, vol. 16, pp. 3999-4004.
Mah, S.H., Ee, G.C.L., Teh, S.S., Rahmani, M, Lim, Y.M.,  and Go, R., 2012, Phylatrin, A New  Cytotoxic  Xanthone  from Calophyllum  soulattri , Molecules, vol.  17,  pp. 8303-8311.
Nigam,  S.K.,  Banerji,  R.,  Rebuffat,  S.,  Cesario,  M.,  Pawards,  C.,  and  Bodo,  B.,  1988, Soulattrone  A,  A  C 24 Terpenoid  from CalophyllumSoulattri,  Phytochemistry, vol. 27, no. 2, pp. 527-530.
Noldin,  V.F.,  Isaias  D.B,  and  Filho,  V.C.,  2006, Calophyllum Genus:  Chemical  and Pharmacological Importance , Química Nova, vol. 29, pp. 549-554.
Stevens,  P.F.,  1980,  A  Revision  of  The  Old  World  Species  of Calophyllum  (Guttiferae), Journal of The Arnold Arboretum, vol. 61, pp. 117-699.
Su,  X.H.,  Zhang,  M.L.,  Li,  L.G.,  Huo,  C.H.,  Gu,  Y.C., and  Shi,  Q.W., 2008,  Chemical Constituents of The Plants of The Genus Calophyllum , Chemistry and Biodiversity, vol. 5, pp. 2579-2608.
Syahputra, E., Prijono, D., and Dono. D., 2007, Sediaan Insektisida Calophyllum soulattri ; Aktivitas  Insektisida  dan  Residu  terhadap  Larva Crocidolomia  pavonana dan Keamanan pada Tanaman, J.H.P.T Tropika, vol. 7, no.1, pp. 21-29.