## Pewarnaan Preparat Apus Tipis Malaria
( Plasmodium vivax Dan Plasmodium falcifarum ) Menggunakan Ekstrak Murbei Sebagai Pengganti Eosin Pada Komposisi Giemsa
Sandra Amalia Riyadi* 1 , Fathlia Sinta Azhara 2 , Ronald Yeyasa Koromath 3 , Fitri Fadhilah 4 *1,2,3 Program Studi Analis Kesehatan, Sekolah Tinggi Analis Bakti Asih Bandung; Jalan Padasuka Atas No. 233 Bandung 40192 Indonesia,telp (022) 7203733
e-mail: *1 s.amaliariyadi89@gmail.com

## ABSTRACT
Malaria  is  caused  by  the  plasmodium  parasite  and  still  a  threat  to  Indonesia.  The  main examination is staining of thick and thin smear preparations using Giemsa. Because Giemsa is expensive, its waste is difficult to decompose, toxic and rare. Therefore,  there  is  a  need  for  new  inventions  to  utilize  the  potential  of  natural  com ponents  like  mulberry  fruit,  which  contains  anthocyanins  for  coloring  agents,  to  less en  the  impact  and  risk  of  Giemsa . The purpose of this study was to determine the effect of macerated ethanol extract of mulberry with a ratio of 1:3 (w/v) as an alternative to eosin in  Giemsa  on  staining  of  thin  blood  smears  of  malaria,  as  well  as  knowing  the  best concentration  in  staining.  This  type  of  experimental  research  by  observing  the  clarity  of shape,  color  of  parasites  P.vivax,  P.falcifarum,  erythrocyte  cells  also  compared  with  3% Giemsa  as  a  control.  This  study  consisted  of  32  samples,  8  repetitions  and  4  treatments namely P1 (3% Giemsa control), Giemsa modified mulberry eosin P2 (20%), P3 (30%), P4 (40%). The quality of the preparations was assessed based on the clarity and contrast of the colors. Kruskal-Wallis and Mann-Whitney data analysis techniques were used. The results showed that  mulberry  extract  could  be  an  alternative  dye  to  replace  eosin  in  the  composition  of Giemsa on malaria thin smear preparations. The most effective concentration was 30% which could give the Plasmodium nuclei the same quality of staining as the control, while for the erythrocytes the staining quality was not the same as the control.
Keywords: mulberry ethanol extract, thin smear preparation, Giemsa alternative dye

## ABSTRAK
Malaria  disebabkan  oleh  parasit  plasmodium  dan  masih  menjadi  ancaman  di  Indonesia. Pemeriksaan  utamanya  menggunakan  pewarnaan  preparat  apus  tebal  dan  tipis  dengan pewarna  Giemsa.  Karena  Giemsa  harganya  mahal,  limbahnya  sulit  terurai,  beracun  dan langka. Maka perlu adanya pengembangan baru untuk mengurangi resiko Giemsa, dengan memanfaatkan  potensi  bahan  alam  seperti  buah  murbei  yang  mengandung  antosianin sebagai  bahan  pewarnaan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh pemberian ekstrak etanol murbei hasil maserasi rasio 1:3 (b/v) sebagai alternatif pengganti eosin  pada  Giemsa  terhadap  pewarnaan  apus  darah  tipis  malaria,  juga  mengetahui konsentrasi  terbaik  dalam  pewarnaan.  Jenis  penelitian  eksperimental  dengan  cara mengamati  kejelasan  bentuk,  warna  parasit  P.vivax,  P.falcifarum,  sel  eritrosit  juga membandingkannya  dengan  Giemsa  3%  sebagai  kontrol.  Penelitian  ini  terdiri  dari  32 sampel, 8 pengulangan dan 4 perlakuan yaitu P1 (kontrol Giemsa 3%), Giemsa modifikasi eosin murbei P2 (20%), P3 (30%), P4 (40%). Kualitas preparat dinilai berdasarkan kejelasan dan kekontrasan warna. Digunakan teknik analisis data Kruskal-Wallis dan Mann-Whitney. Hasil  menunjukkan  ekstrak  murbei  dapat  menjadi  pewarna  alternatif  pengganti  eosin dalam komposisi Giemsa pada sediaan apus tipis malaria. Konsentrasi paling efektif adalah 30% yang dapat memberi kualitas pewarnaan pada inti Plasmodium yang sama baiknya dengan  kontrol,  sedangkan  untuk  bagian  eritrosit  kualitas  pewarnaannya  belum  sama dengan kontrol.
Kata kunci: Ekstrak etanol murbei, Preparat apus tipis, Pewarna alternatif Giemsa

## PENDAHULUAN
Malaria  merupakan  penyakit  yang  masih  banyak  dijumpai  di  berbagai  provinsi Indonesia  terutama  wilayah  timur  seperti  daerah  Papua.  Adapun  malaria  merupakan penyakit yang disebabkan oleh parasit genus Plasmodium , salah-satu jenis spesies yang banyak di Indonesia adalah Plasmodium falcifarum , dan Plasmodium vivax , penyakit ini ditularkan  melalui  nyamuk  anopeles  betina  yang  berperan  sebagai  vektor  (Sitohang, 2016).  Bervariasinya  manifestasi  gejala  klinis  yang  ditandai  gejala  awal  demam  tinggi, hemoglobin dan trombosit rendah, yang sering di sangka bukan malaria, menyebabkan tingginya  tingkat  kesakitan  dan  kematian  sehingga  melonjaknya  permintaan pemeriksaan (Arsin, 2012).
Salah-satu  pemeriksaan  laboratorium  yang  dijadikan gold  standart dan  sering digunakan adalah pemeriksaan apus darah tipis dan tebal. Adapun kedua pemeriksaan ini  sangat  penting,  terutama  apus  tipis  untuk  mengindentifikasi  dan  mengkonfirmasi pemeriksaan  pada  apus  tebal  dalam  mendiagnosis  penyakit  malaria,  utamanya  untuk mengindentifikasi  morfologi  sel  darah,  sel  parasit  dan  fase  pertumbuhan  jenis Plasmodium (Arsin,  2012).  Kedua  metode  pemeriksaan  ini  menggunakan  pewarnaan Giemsa.  Oleh  karenanya  Giemsa  menjadi  bahan  penting  dalam  pemeriksaan  malaria. Namun  permasalahannya  kebutuhan  Giemsa  semakin  meningkat  untuk  pemeriksaan, pembelajaran  dan  riset  penelitian  sehingga  harga  Giemsa  relatif  menjadi  mahal  dan menyebabkan  Giemsa  sulit  ditemukan,  terkhusus  di  daerah-daerah  seperti  provinsi papua. Selain itu , Giemsa termasuk salah satu pewarna sintetik yang terdiri dari eosin dan  metilen  biru  yang  limbahnya  sulit  terurai  juga  membahayakan  kesehatan  (Noor, 2020).
Dalam upaya meminimalkan resiko dan memudahkan ketersediaan reagen Giemsa, peneliti tertarik untuk melakukan pemanfaatan bahan alam yang mengandung pewarna alami berasal dari tumbuhan (Antosianin), untuk dijadikan alternatif pengganti pewarna dalam  komposisi  pewarna  Giemsa  yaitu  eosin  dan  di  aplikasikan  sebagai  pewarnaan malaria,  tepatnya  pada  sel-sel  yang  bersifat  basa  yaitu  kromatin  inti P.falcifarum dan P.vivax .  Pada  penelitian  oleh  Subakir  dan  Dzikra  tahun  2020,  dilakukan  penelitian menggunakan ekstrak antosianin dari ubi ungu sebagi pengganti pewarna Giemsa dan didapakan  hasil eritrosit  yang  memiliki  kualitas  pewarnaan  cukup  baik  sedangkan kualitas pewarnaan trombosit dan leukosit kurang baik , penelitian oleh Isnawati, et al tahun 2021 juga meneliti ekstrak betasianin dari umbi bit sebagai pewarna alami dengan hasil  penelitian  ekstrak  betasianin  menunjukkan  bahwa  kualitas  pewarnaan  pada leukosit  dan  trombosit  kurang  baik  dan  eritrosit  memiliki  kualitas  pewarnaan  yang cukup  baik  dengan  memperlihatkan  warna  oranye  yang  cukup  jelas.  Penelitian  oleh Ardila  et.al  pada  2021  juga  mencari  pewarna  alami  pengganti  Giemsa  yaitu  dengan ekstrak  kulit  buah  jamblang,  dengan  hasil  yang  tidak  berbeda  dengan  penelitian- penelitian sebelumnya.
Zat warna antosianin merupakan senyawa turunan flavonoid yang bersifat amfoter dan stabil pada pH asam menghasilkan warna bervariasi mulai dari merah, hijau, ungu biru sampai hitam yang sering di temukan dalam tumbuhan seperti bunga, buah, biji bijian, dan umbi-umbian (Azmi, 2015; Priska,2018).
Dalam penelitian ini tumbuhan yang digunakan zat warna antosianinnya adalah murbei  yang  mana  memiliki  antosianin  cukup  tinggi  dan  baik  untuk  penggunaan  zat warna  (Hasanah,2019).  Selain  itu  buah  murbei  memiliki  ragam  manfaat  yang  belum diketahui banyak orang (Azmi,2015).
Sehingga  berdasarkan  uraian  tersebut,  pada  penelitian  ini  dikembangkan pengaplikasian  zat  warna  antosianin  pada  murbei  untuk  dijadikan  pengganti  pewarna eosin dalam Giemsa sebagai zat warna apus tipis malaria. Pengembangan ini diharapkan mampu mewarnai inti parasit pada preparat, sehingga membantu memperjelas diagnosis, terutama  pada  penentuan  jenis Plasmodium .  Oleh  karenanya  peneliti  melakukan penelitian dengan judul “Pewarnaan Preparat Apus Tipis Malaria ( Plasmodium vivax dan Plasmodium  falcifarum )  Menggunakan  Ekstrak  Murbei  Sebagai  Pengganti  Eosin  Pada Komposisi Giemsa ”.

## METODOLOGI PENELITIAN
Jenis  penelitian  ini  adalah  eksperimental,  yang  dilakukan  dengan  mengetahui pengaruh  pemberian  hasil  ekstraksi  antosianin  dari  buah  murbei  sebagai  zat  warna pengganti eosin dalam komposisi Giemsa pada pewarnaan preparat apus tipis malaria, dengan cara mengamati kejelasan bentuk, warna parasit P.vivax, P.falcifarum , sel eritrosit juga membandingkannya dengan Giemsa 3% sebagai kontrol. Penelitian ini terdiri dari 32 sampel dengan 8 pengulangan dan 4 perlakuan yaitu P1 (kontrol Giemsa 3%), Giemsa modifikasi eosin murbei P2 (20%), P3 (30%), P4 (40%).
Bahan  penelitian  yang  digunakan  antara  lain  buah  murbei  segar  dari  petani Lembang  Bandung,  etanol,  akuades,  HCl,  NaOH,  eosin  2%,  plat  KLT,  buffer  pH  3, metanol, etil asetat, n-butanol, asam asetat glasial, kertas saring (Whatman), kain kassa, aluminium foil, NH 3 , FeCl 3 , reagen mayer, H 2 SO 4 p , asam asetat anhidrat, larutan Giemsa, gliserin,  azur  II  methylene  blue,  gliserin,  dan  sampel  darah  positif  malaria  yang  di dapatkan dari RSUD Mimika Papua.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  diantaranya  Spektrofotometer  Uv-Vis (Shimadzu), seperangkat alat destilasi, freeze dry , mikroskop binokuler, objek glass, cover glass, pH meter, dan rak pewarnaan.
Proses  pembuatan  zat  warna  modifikasi  Giemsa  untuk  menggantikan  eosin  ini, perlu  beberapa  tahap  yang  dilakukan,  mulai  dari  proses  ekstraksi  murbei  dengan maserasi  oleh  metanol  selama  3  x  24  jam  kemudian  maserat  dipisahkan  fase  airnya dengan  destilasi  dan freeze  dry kemudian  sampel  ekstrak  dapat  digunakan.    Dalam
penelitian  ini  dilakukan  maserasi  menggunakan  etanol,  dengan  perbandingan  sampel dan pelarut yaitu 1:3 b/v, murbei yang di gunakan sebanyak 250 gram dan etanol 750 ml, dilakukan selama 3 x 24 jam dalam botol coklat, di tempat tertutup dan gelap. Setelah didapatkan ekstrak etanol murbei yang pekat dari hasil ekstraksi, selanjutnya dilakukan pembuatan  modifikasi  pewarna,  berdasarkan  pembuatan  stok  Giemsa  100%  secara manual (Ronald,2021). Kemudian dilakukan pengenceran dari stock 100%  menjadi 20%, 30%  dari  40%.  Selanjutnya  preparat  malaria  dikondisikan  kering  dan  telah  difiksasi, kemudian dilakukan pewarnaan dengan Giemsa termodifikasi ekstrak buah murbei 20%, 30%,  40%  selama  45  menit  diamati  dibawah  mikroskop  dengan  pembesaran  lensa objektif 100x dan lensa okuler 10x.
Pada penelitian ini indentifikasi antosianin dilakukan dengan spektrofotometer Uv- Vis,  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dan  Uji  fitokimia.  Pada  uji  spektrofotometer  dibuat kontrol Eosin 1% sebanyak 10 ml, dan sampel ekstrak yang di larutkan akuades 10 ml, lalu dimasukan pada alat dengan panjang gelombang maksimum 510-700 nm. Pada uji kromatografi lapis tipis, eluen yang digunakan adalah butanol : asam asetat : air (4:1:2) v/v, lalu hasil noda diindentifikasi secara visual dengan penyemprotan NH 3 , dan FeCl 3 2% (Wirasuta dkk, 2015), hasil penyemprotan NH 3 yang menandakan terdapat antosianin noda jingga hingga lembayung berubah menjadi biru, dan hasil penyemprotan FeCl 3 2% noda  menjadi  warna  ungu  menandakan  adanya  senyawa  fenol.  Sedangkan  untuk  uji Fitokimia  dilakukan  berbagai  uji  seperti  antosianin,  flavonoid,  alkaloid,  polifenol, terpenoid,  steroid,  tanin  dan  saponin.  Untuk  uji  antosianin  hasil  ekstrak    dicampur dengan HCl 2 M dan dipanaskan selama 5 menit pada 100 o C, hasil positif jika sampel berwarna merah. Analis dilakukan juga menggunakan NaOH 2 M yang dicampur ekstrak, jika positif warna merah berubah menjadi hijau biru dan memudar. Untuk uji flavonoid hasil  ekstraksi  dimasukan  ke  dalam  2  tabung,  tabung  satu  ditambahkan  NaOH  10%, tabung dua ditambahkan H 2 SO 4 . Hasil dinyatakan positif apabila tabung satu berubah mejadi  hijau  kekuningan  sampai  hijau  kuning  kecoklatan,  sedangkan  tabung  dua berubah menjadi merah kekuningan sampai merah kehitaman. Untuk uji alkaloid hasil ekstraksi ditambahkan reagen Mayer dan Dragendorf. Hasil positif ditunjukkan dengan terbentuknya  endapan  putih  pada  reagen  Mayer  dan  endapan  jingga  pada  reagen Dragendorff. Untuk uji polifenol hasil ekstrak ditambahkan larutan FeCl 3 1%. Hasil positif terdapat endapan warna hijau, merah, ungu, biru tua, biru, biru kehitaman, atau hijau kehitaman.  Untuk  uji  terpenoid  dan  steroid  dilakukan  dengan  pengujian  Liebermann- Burchard. Hasil ekstrak ditambahkan 5 tetes H 2 SO 4 p dan 3 tetes asam asetat anhidrat. Positif  triterpenoid  jika  terbentuk  warna  merah  atau  ungu  dan  positif  steroid  jika terbentuk warna hijau. Untuk Uji tanin hasil ekstrak diencerkan aquades dan ditambah besi (III) klorida. Hasil positif jika sampel berubah menjadi biru atau hijau kehitaman. Untuk  uji  saponin  hasil  ekstrak  di  campur  air  panas,  dinginkan  lalu  dikocok  sampai
muncul buih dan ditambahkan 1 tetes HCl 2 N, hasil positif sampel terdapat buih yang banyak dan tahan lama.

## PEMBAHASAN
Berdasarkan  prinsip  pewarnaan,  dilakukan  proses  penambahan  pewarna berfungsi untuk membantu dalam mempertajam suatu elemen sehingga unsur jaringan menjadi  kontras  dan  nampak  lebih  jelas  (Hasanah,2019).  Dari  hal  tersebut  dapat diketahui  bahwa  penggunaan  pewarna  Giemsa  dalam  penelitian  ini  merupakan  faktor yang sangat penting, terutama untuk indentifikasi morfologi sel parasit maupun sel darah yang menentukan keaadaan pasien sebagai tindakan penanganan dan pengobatan.
Pada komposisi Giemsa terdapat dua zat warna utama yaitu Eosin Y yang bersifat asam  dan  Azur  metilen  biru  bersifat  basa  (Salnus  dkk,2020).  Pada  murbei  terdapat  zat warna alami yaitu antosianin yang bersifat amfoter. Pada penelitian ini bermaksud untuk menggantikan  Eosin  Y  pada  Giemsa  yang  bersifat  asam,  sehingga  antosianin  diekstrak dalam  keadaan  pH  asam  yang  selanjutnya  diaplikasikan  terhadap  preparat  apus  darah tipis  malaria.  Pada  proses  ekstraksi  antosianin  dilakukan  dengan  cara  maserasi  dalam botol  coklat  dan  gelap  hal  ini  berkaitan  dengan  sifat  senyawa  antosianin  yang  ingin  di dapatkan dari proses maserasi ini, memiliki sifat mudah di pengaruhi pH, oksigen, cahaya, yang  mana  jika  sampel  terpengaruh  oleh  hal  tersebut  akan  menyebabkan  zat  warna menjadi tidak stabil, bahkan menyebabkan rusaknya antosianin (Priska,2018). Maserasi merupakan salah-satu proses ektraksi yang sangat tepat untuk senyawa-senyawa bahan alam, karena selain mudah dan terjangkau, maserasi dapat menghindari pengaruh suhu, terutama  suhu  tinggi  yang  memungkinkan  menyebabkan  terdegradasinya  senyawa- senyawa metabolit sekunder, juga akan lebih mengefektifkan senyawa larut dengan baik karena memiliki kontak waktu yang cukup lama dengan sampel (Hidayah,2013). Proses selanjutnya  adalah  destilasi  hal  ini  bertujuan  untuk  memisahkan  pelarut  dari  sampel berdasarkan perbedaan titik didihnya kemudian proses pengeringan dengan cara freeze drying  karena  memiliki  keunggulan  terutama  dalam  mempertahankan  mutu  hasil pengeringan, mempertahankan stabilitas stuktur bahan, menghambat aktifitas mikroba dan  terutama  mengurangi  pengaruh  suhu  yang  tinggi  (Huda,2019) . Adapun  pada penelitian ini sampel didapatkan, dalam bentuk semi solid, salah satu alasannya adalah murbei memiliki kandungan gula dan air yang cukup tinggi sehingga akan perlu waktu cukup lama untuk mendapatkan hasil yang serbuk. Setelah proses freeze drying, di dapat ekstrak etanol murbei yang siap digunakan sebagai bahan pewarna pengganti eosin dalam pembuatan pewarna modifikasi Giemsa. Selain untuk pewarnaan, ekstrak etanol murbei dalam  penelitian  ini  juga  sebelumnya  di  lakukan  indentifikasi  antosianin  dan  senyawa kimia lainnya dengan cara analisis fitokimia, kromatografi lapis tipis dan spektrofotometri UV-Vis.
Rendemen hasil ekstraksi didapatkan sebesar 2% dengan berat sampel hasil freeze dry sebanyak 5 gram, dari berat awal buah murbei 250 gram dan hasil destilasi sebanyak
1 liter. Dari hasil pengamatan uji fitokimia didapatkan ekstrak etanol ini dapat melarutkan senyawa-senyawa kimia dalam murbei seperti flavonoid, alkaloid, saponin, polifenol dan terpenoid, dapat dilihat dalam Tabel 1.

## Tabel 1. Hasil uji fitokimia buah murbei
Uji Reagen Hasil Uji
Keterangan
Antosianin HCl 2M Positif (+) Tidak pudarnya warna merah NaOH 2 M warna hijau biru yang memudar perlahan Flavonoid NaOH 10%, Positif (+) Merah menjadi hijau kuning kecoklatan. Alkaloid Reagen mayer Positif (+) Terbentuknya endapan putih Tanin FeCl3 Negatif (-) Tetap bewarna merah, Tidak berubahnya warna menjadi biru atau hijau kehitaman Saponin Akuades + 1 tetes HCl 2 N Positif (+) Adanya buih yang stabil Polifenol FeCl3 1% Positif (+) Warna semakin merah, (merah kehitaman) Steroid Liebermann- Burchard (5 tetes H2SO4 (P) dan 3 tetes asam asetat anhidrat) Negatif (-) Tidak terbentuk warna hijau, melainkan tetap merah Terpenoid Positif (+) Terbentuk warna merah atau ungu
Pada uji fitokimia hasil positif adanya antosianin dari buah murbei pada penelitian ini sesuai dengan yang telah di dapatkan pada penelitian sebelumnya oleh Handaratri dan yuniati  (2019).  Pada  kromatografi  lapis  tipis  dilakukan  indentifikasi  melalui  pemisahan noda  warna,  dengan  melakukan  elusi  menggunakan  fase  diam  dan  fase  gerak,  yang selanjutnya di lakukan pengukuran nilai Rf ( retardation factor ) dan dibandingkan dengan Rf standar, juga di lakukan indentifikasi warna dengan suatu pereaksi. Fase diam yang di gunakan adalah silika gel yang bersifat polar dan fase geraknya n- Butanol : asam asetat glasial : akuades (4:1:2). Fase gerak tersebut dipilih karena berkaitan dengan kepolaran sampel yang digunakan itu relatif polar, sehingga kesamaan sifat antara fase gerak dan
sampel dapat memberikan pemisahan yang baik. Selain itu dipilihnya fase gerak ini karena merupakan  fase  tebaik  dan  optimal  untuk  memisahkan  senyawa  antosianin (Wirasuta,2015). Fase gerak ini merupakan fase optimal yang mampu mengindentifikasi senyawa antosianin pada ubi jalar. Fase gerak berfungsi sebagai eluen dalam proses elusi, adapun  pada  proses  elusi  terjadinya  pemisahan,  yang  didasarkan  perbedaan  distribusi antara dua fase yaitu fase gerak dan fase diam, yang di dasarkan hukum like dissolve like yaitu  senyawa  polar  akan  cenderung  berinteraksi  dengan  pelarut  polar  dan  sebaliknya senyawa  nonpolar  akan  cenderung  berinteraksi  dengan  pelarut  nonpolar,  juga berdasarkan  proses  migrasi  differensial  komponen-komponen  yang  dipisahkan  melalui kromatografi.
Dari  hasil  proses  pemisahan  yang  diamati  dengan  reagen  penampak  warna didapatkan dua pola noda, dengan Rf 0,36 pada noda N, dan 0,18 pada noda X. Adapun Rf pada noda N diduga sebagai senyawa antosianin, karena didasarkan pada standar Rf 0,3 itu merupakan senyawa antosianin (Wirasuta dkk; Laksmiani, 2015) dipastikan juga berdasarkan  hasil  indentifikasi  pengamatan  noda  warna  pada  penguapan  dengan ammonia  dan  penambahan  FeCl 3 2%  sebagai  reagen  penampak  noda,  noda  berubah sesuai karakteristik senyawa antosianin. Pada Gambar 1 hasil visualisasi dengan reagen penampak  noda,  dari  mulanya  hasil  elusi  berwarna  merah  lembayung,  didapat  hasil berubah  menjadi  biru  setelah  di  semprot  dengan  NH 3 ,  yang  menandakan  adanya antosianin dan berwarna ungu setelah di semprot dengan FeCl 3 2%, yang menandakan adanya  gugus  fenolik  pada  noda  tersebut.  Reaksi  perubahan  warna  sampel  dari lembayung menjadi biru setelah diuapkan amoniak terjadi menunjukan positif antosianin yang  termasuk  golongan  flavonoid.  Perubahan  warna  ini  karena  adanya  interaksi  uap amoniak dengan gugus hidroksil pada flavonoid. Adapun dengan penguapan amonia, akan deprotonisasi H, akibatnya ausokrom pada 3 pasang elektron bebas yang menghasilkan warna.  Sama  halnya  dengan  penambahan  reagen  penampak  noda  yang  khas  untuk kerangka flavonoid yaitu FeCl 3 , yang kemudian diamati adanya perubahan menjadi warna ungu, hal ini karena polifenol dapat melepaskan ion H + dan membentuk ion fenoksi yang akan bereaksi dengan FeCl 3 membentuk senyawa kompleks besi (III) heksafenolat.
NH 3 FeCl 3
X N
Pemastian  adanya  antosianin  dilanjutkan  pada  analisis  spektrofotometri  yang bermaksud  untuk  mengetahui  panjang  gelombang  maksimum  zat  warna  pada  ekstrak etanol buah murbei yang kemudian dibandingkan dengan penyerapan panjang gelombang eosin,  pada  penelitian  ini  didapatkan  perbandingan  panjang  gelombang  yang  tidak signifikan,  dimana  eosin  didapatkan  panjang  gelombang  sebesar  569  nm,  sedangkan murbei  567  nm.  Pada  Gambar  2  dapat  dilihat,  panjang  gelombang  buah  murbei  dalam penelitian  ini  yaitu  567  nm.  Diketahui  bahwa  dalam  murbei  diduga  mengandung antosianin,  karena  menurut  Harbone  (1987)  senyawa  antosianin  turunan  flavonoid mempunyai serapan khas pada panjang gelombang antara 475-650 nm, sehingga Panjang gelombang ekstrak etanol murbei ini masih dalam rentang antosianin senyawa turunan flavonoid.

## Gambar 2. Panjang gelombang ekstrak etanol murbei
Antosianin secara spesifik dapat menyerap cahaya pada daerah serapan ultraviolet (UV)  sampai  violet,  tetapi  lebih  kuat  pada  daerah  tampak  dari  spektrum  antosianin terserap  pada  panjang  gelombang  250 – 700  nm,  dengan  2  puncak  sebagai  gugus  gula (glikon)  di  panjang  gelombang  sekitar  278  nm,  dan  puncak  utama  sebagai  antosianin (aglikon)  di  sekitar  panjang  gelombang  465-560  nm.  Gugus  gula  ini  merupakan  gugus aromatik  yang  biasa  muncul  di  270-300  nm,  sedangkan  pada  puncak  utama  aglikon menunjukan  berasal  dari  gugus  karbonil  terkonjugasi  C=C  (Wahyuningsih,2017).  Pada penelitian ini didapatkan panjang gelombang yang di dapat lebih besar dari yang diperoleh pada wahyuningsih, (2017)  yaitu 526 nm, dan dari target puncak utama antosianin yaitu 465-560 nm, namun pada penelitian ini di dapat 567 nm. Sehingga panjang gelombang yang  didapat  lebih  besar,  penggeseran  panjang  gelombang  menjadi  lebih  besar  disebut dengan penggeseran merah (Batokromik). Hal ini terjadi karena adanya subtituen tertentu pada  kromofor,  salahsatunya  terjadi  ketika  ada  perubahan  pelarut  saat  bertambah banyaknya cincin benzen yang terpadu dalam 1 molekul akibat adanya antosianin atau senyawa organik lainnya seperti, protein, tannin, flavonoid dan polisakarida. Hal ini akan meningkatkan penyerapan warna pada panjang gelombang maksimum sehingga menjadi semakin  besar  karena  konjugasi  bertambah  dan  stabilitas  resonasi  membesar.  Pada penelitian  ini,  diduga  yang  menjadi  penyebab  terjadinya  pergeseran  panjang  gelombang menjadi  besar,  salahsatunya  adalah  adanya  perubahan  larutan  pada  sampel.  Adapun
sampel  murbei  ini  awalnya  diekstraksi  dengan  etanol,  namun  saat  pengukuran ditambahkan  pH  3  yang  berisikan  Aquades,  KH 2 PO4,  NH 4 Cl  dan  HCl,  hal  ini  yang memungkinkan  terjadinya  pergeseran  ke  arah  panjang  gelombang  yang  semakin  tinggi karena  penyerapan  warna  semakin  banyak,  warna  merah  semakin  pekat.  Berdasarkan penelitian CN Sutanto, (2012) diketahui  bahwa yang membuat penggeseran batokromik adalah  salah  satunya  yang  cenderung  menstabilkan  antosianin.Selain  itu  penyebab pergeseran  panjang  gelombang  adalah  ekstrak  etanol  murbei  berasal  dari  tumbuhan murbei  yang  mengandung  banyak  gula,  sehingga  akibat  gula  inilah  salah-satunya menyebabkan kelarutan dan stabilitasnya meningkat sehingga panjang gelombang akan bergeser ke yang lebih tinggi (Lestario dkk, 2011).
Setelah  memastikan  senyawa-senyawa  kimia  yang  terdapat  pada  ekstrak  etanol murbei, selanjutnya pada modifikasi giemsa dengan menganti eosin menggunakan ekstrak etanol murbei kemudian dilakukan pewarnaan pada preparat malaria yang telah kering dan difiksasi. Proses fiksasi ini bertujuan untuk lebih merekatkannya pewarna terhadap sel  darah,  mencegah  lisisnya  sel  darah,  dan  menghentikan  segala  metabolisme  tanpa merubah stuktur dan sifat sel (Dian, 2016). Pada apus darah tipis fiksasi dilakukan untuk mencegah  lisisnya  sel  darah,  dengan  tujuan  utama  adalah  mengkonfirmasi  hasil indentifikasi dari pengamatan dalam apus tebal mengenai fase dan jenis parasit malaria.
Pewarnaan  dilakukan  selama  45  menit  seperti  halnya  pewarnaan  pada  kontrol Giemsa  3%,  dimana  zat  warna  dapat  menyerap  dengan  baik  (Puasa,  2018).  Pada pewarnaan modifikasi, sampel mengandung antosianin yang bersifat amfoter atau mampu bersifat asam dan basa. Antosianin dapat berubah warna seiring dengan perubahan nilai pH.  Pada  pH  tinggi  antosianin  cenderung  berwarna  biru,  sedangkan  pada  pH  rendah cenderung  berwarna  merah  (Putri,  2019).  Setelah  proses  pewarnaan  selesai  dilakukan kemudian diamati pada mikroskop pembesaran 100X lensa objektif dan 10X lensa okuler.
Pada  Gambar  3  terdapat  hasil  pengamatan  preparat.  Pada  penelitian  ini  dengan konsentrasi pewarna modifikasi ekstrak murbei 20%, 30% dan 40% dapat mewarnai sel, namun  warna  yang  di  hasilkan  di  preparat  tidak  lebih  baik  dari  warna  kontrol  Giemsa dimana  sel-sel  parasit  dapat  terwarnai  dengan  jelas  begitupan  sel  darah.Pada  sampel preparate  sel  darah  merah  teramati  berwarna  hijau  sedangkan  inti  dan  sitoplasma parasitnya teramati berwarna hijau kebiruan. Hal ini terjadi kemungkinan akibat adanya pengaruh dari pH terhadap antosianin.
Pada hasil pengamatan didapatkan jenis parasit plasmodium spesies P.falcifarum dan P.vivax , dengan stadiumnya yaitu skizon, tropozoid juga terdapat gamet yang tidak utuh,  sehingga  dapat  dinyatakan  siklus  parasit  sudah  berputar  lebih  dari  tiga  kali  di dalam fase eritrositer. Telah diketahui,  bahwa fase stadium parasit terbagi atas 3 yaitu Tropozoid, Skizon dan Gametosit, adapun dari ketiga jenis stadium tersebut, yang paling banyak dijumpai pada pengamatan preparat penelitian ini adalah fase tropozoid. Tropozoid
memiliki berbagai bentuk diantaranya adalah bentuk cincin, huruf I, burung dan amoboid. Pada penelitian ini didapatkan hasil tropozoid dengan bentuk bentuk cincin, penggunaan bentuk  cincin  bertujuan  untuk  lebih  memudahkan  dalam  memastikan  pengamatan terhadap indikasi adanya malaria, karena malaria memiliki bentuk yang khas terutama untuk P.falcifarum dan P.vivax ,  yang  memiliki  tropozoid  berbeda.  Hal  ini  dapat  diamati dengan adanya perbedaan bentuk stuktur eritrosit dan sitoplasma yang terinfeksi, P.vivax memiliki sitoplasma lebih tebal dan eritrosit yang terinfeksinya membesar sedangkan pada P.  falciparum tidak  terjadi  perbesaran  eritrosit  serta  sitoplasma  yang  lebih  tipis.  Pada pengamatan 30% teramati bentuk skizon dengan ciri-ciri ditemukannya titik-titik kasar berwarna  merah  pada  sitoplasma  (titik  maurer),  serta  terdapat  pigmen  gelap  yang menggumpal atau menyebar yang menandakan skizon P.falciparum .
Adapun  dalam  pengamatan  preparat  parasit  malaria  ini,  hal  yang  lebih  mudah untuk diamati adalah dengan mendapatkan bentuk tropozoid dari malaria, ciri khas dari malaria itu memiliki inti dan sitoplasma. Inti parasit, mampu di warnai oleh pewarna yang bersifat  asam  sedangkan  sitoplasma  terwarnai  oleh  zat  warna  yang  bersifat  basa (Anggryani,2019).  Sehingga  dalam  penelitian  ini  pewarna  eosin  dalam  Giemsa  yang bersifat  asam  mewarnai  inti  yang  bersifat  basa,  dan  metilen  biru  mewarnai  sitoplasma yang bersifat asam. Sama halnya yang terjadi dengan eosin, zat warna alami (antosianin) dalam ekstrak etanol murbei yang dibuat untuk mengganti eosin, memiliki pH asam yang dapat mewarnai dinding sel berselulosa yang memiliki pH basa. Ion negatif pada zat warna (H+)  akan  terlepas  dan  berikatan  kovalen  dengan  ion  positif  yang  ada  pada  dinding  sel jaringan sehingga ekstrak dari buah murbei dapat mewarnai sel inti parasit yang bersifat basa (Hasanah,2019). Selain karena adanya reaksi ikatan elektrostatik antara muatan ion, sebagaimana reaksi yang terjadi antara sel darah dengan pewarma sintetik, reaksi dengan pewarna  alami  pun  sama,  dimana  terbentuknya  warna  dihubungkan  dengan  adanya ikatan oksigen sebagaimana Fe (besi) pada heme sel darah merah akan mengikat 4 unsur oksigen untuk dapat membuat sel darah tersebut terwarnai (Ronald,2021). Sebagaimana tujuan dalam penelitian ini yaitu mengobservasi konsentrasi ekstrak buah murbei untuk dijadikan pewarna alternatif pengganti eosin dalam komposisi Giemsa, pada pemeriksaan malaria metode sediaan apus tipis. Hasil pengamatan dengan variasi konsentrasi ekstrak murbei 20%, 30%, 40% dan Giemsa 3% sebagai kontrolnya, kemudian dinilai oleh peneliti dan  satu  orang  verifikator  yang  ahli  dibidangnya.  Adapun  penilaian  pengamatan  hasil pewarnaan  dengan  ekstrak  murbei  dan  Giemsa  menggunakan  teknik  likert  scale,  non parameterik dengan output data ordinal. Untuk hasil pengamatan terdapat dalam gambar 3.
(Ekstrak murbei 20%) Tropozoid Plasmodium Falciparum
(Ekstrak murbei 30%)
Tropozoid Plasmodium vivax (Ekstrak murbei 30% ) Skizon Plasmodium Falciparum
(Ekstrak murbei 40%)
Tropozoid Plasmodium Falciparum
(Giemsa 3% ) Tropozoid Plasmodium vivax
(Giemsa 3%)
Tropozoid Plasmodium Falciparum
Gambar 3. Hasil pewarnaan ekstrak murbei 20%, 30%, 40% sebagai pengganti eosin pada Giemsa serta perbandingannya pada kontrol (Giemsa 3%) untuk pemeriksaan malaria metode sediaan apus tipis.
Berdasarkan  hasil  penilaian  diketahui  bahwa  Giemsa  3%  memberikan  kualitas warna yang baik. Namun untuk menguji perbedaan kualitas perwarnaan yang ada berbeda signifikan atau tidak dengan metode alternatif, maka dilakukan uji beda signifikan Kruskal Wallis,  karena  sifat  data  pada  penelitian  ini  adalah  data  non  parametrik  dan  variasi perlakuan lebih dari dua perlakuan. Perbandingan yang dilakukan adalah perbandingan kualitas pewarnaan dari setiap perlakuan eksperimen dan preparat kontrol Giemsa 3%.
Hipotesis uji Kruskal wallis pada penelitian ini adalah jika nilai Asymp.sig > 0,05 maka  variasi  konsentrasi  ekstrak  murbei  memberikan  kualitas  pewarnaan  yang  tidak berbeda  signifikan.  Jika  Asymp.Sig  <  0,05  maka  variasi  konsentrasi  ekstrak  murbei memberikan  perbedaan  kualitas  pewarnaan  yang  signifikan.  Hasil  uji  Kruskal  wallis berdasarkan perhitungan SPSS IBM versi 25 memberikan nilai Asymp.Sig 0,000 < 0,05
baik pada bagian Inti (I), Sitoplasma (S) dan Eritrosit (E). Tabel uji Kruskal Wallis tersedia pada Tabel 2
Dikarenakan hasil uji Kruskal Wallis memberikan perbedaan yang signifikan maka analisis data dilanjutkan dengan uji Mann Whitney. Berdasarkan hasil uji Mann Whitney U pada Tabel 3 maka diketahui bahwa pada modifikasi Giemsa ekstrak murbei 20% dan 30% diketahui pada bagian inti dan sitoplasma parasit memberikan kualitas yang tidak berbeda signifikan dengan Asymp.sig > 0,05. Namun jika dianalisis nilai Asymp. Sig pada ekstrak  murbei  30%  memberikan  nilai  Asymp.sig  1,000  lebih  besar  dibandingkan Asymp.Sig  pada  ekstrak  murbei  20%.  Sedangkan  pada  ekstrak  murbei  40%,  diketahui baik  bagian  inti,  sitoplasma  parasit  dan  eritrosit  kualitas  pewarnaan  yang  diberikan kurang kualitasnya secara signifikan dibandingkan dengan Giemsa 3%.
Tabel 2 . Hasil Uji Kruskal Wallis I S E Kruskal Wallis 54,478 58,269 63,000 Asymp. Sig. 0,000 < 0,05 0,000 < 0,05 0,000 < 0,05 Tabel 3 . Hasil uji lanjut Mann Whitney U Kelompok Perlakuan ekstrak murbei Uji Asymp. Sig Keterangan 20% terhadap Giemsa 3% Inti sel (I) 0,151 > 0,05 Tidak berbeda signifikan Sitoplasma (S) 0,317 > 0,05 Tidak berbeda signifikan Eritrosit (E) 0,000 < 0,05 Berbeda signfikan 30% terhadap Giemsa 3% Inti sel (I) 1,000 > 0,05 Tidak berbeda signifikan Sitoplasma (S) 1,000 > 0,05 Tidak berbeda signifikan Eritrosit (E) 0,000 < 0,05 Berbeda signfikan 40% terhadap Giemsa 3% Inti sel (I) 0,000 < 0,05 Berbeda signfikan Sitoplasma (S) 0,000 < 0,05 Berbeda signfikan Eritrosit (E) 0,000 < 0,05 Berbeda signfikan
Dari  hasil  uji  olah  data  di  atas  didapatkan  bahwa  kondisi  konsentrasi  terbaik berada  pada  konsentrasi  modifikasi  Giemsa  murbei  30%  sebagai  pengganti  eosin  pada Giemsa.  Ekstrak  murbei  mampu  memberikan  kualitas  pewarnaan  yang  sama  baiknya dengan kontrol, penyerapan dan kontras zat warna dapat terlihat lebih baik di banding kedua  konsentrasi  lainnya.  Hal  ini  juga  berpengaruh  terhadap  penyerapan  pada sitoplasma dan inti parasit yang cukup terlihat jelas. Dari penelitian ini juga dapat diamati bahwa  pengenceran  yang  terlalu  tinggi  dan  konsentrasi  yang  terlalu  pekat  tidak  baik untuk  pewarnaan  preparat  malaria,  pewarna  dalam  konsentrasi  yang  pekat  dan  terlalu encer  dapat  menyebabkan  zat  warna  sulit  untuk  diserap  sehingga  proses  pengamatan menjadi kurang jelas.
Dari  hasil  penelitian  yang  telah  disebutkan  ekstrak  buah  murbei  mampu menggantikan eosin sebagai zat warna pada pewarna Giemsa.  Inti sel parasit malaria P.
vivax,  P.  falcifarum dan  eritrosit  dapat  terwarnai  dengan  baik.  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian sebelumnya bahwa ekstrak murbei mampu dengan baik mewarnai sel-sel dan jaringan,  pada  preparat  jaringan  tumbuhan  akar  bawang  merah  (Noor  dkk,  2020),  dan pewarna preparat gosok tulang femur kelinci (Hasanah,2019).

## KESIMPULAN
Ekstrak Murbei mampu dijadikan sebagai alternatif pengganti pewarna eosin pada Giemsa terhadap pewarnaan inti parasit P.vivax dan P.falcifarum dalam pembuatan apus darah tipis malaria yang kualitas pewarnaannya tidak berbeda signifikan dengan kontrol Giemsa. Konsentrasi optimum dari ekstrak etanol murbei untuk mewarnai inti P.vivax dan P.falcifarum pada  sediaan  apus  darah  tipis  malaria  adalah  sebesar  30%  yang  mampu memberikan  kualitas  pewarnaan  sama  baiknya  dengan  kontrol,  namun  hanya  pada bagian inti dan sitoplasma sel, sedangkan tidak untuk bagian eritrosit.

## DAFTAR PUSTAKA
Adhinata, Faisal Dharma, Esti Suryani, And Paramasari Dirgahayu. 2016. “Identification Of Parasite Pasmodium Sp . On Thin Blood Smears With Rule- Based Method.” Journal Itsmart 5(1): 16 – 24.
Andi  Arsunan  Arsin.  2012.  Masagena  Press Malaria  Di  Indonesia  Tinjauan  Aspek Epidemiologi . Anggryani,  Chintya.  2019. Pengaruh  Perbedaan  Pengenceran  Giemsa  Terhadap  Sediaan Darah Tipis Pada Penyakit Malaria Di Rsud M. Zein Painan . Azmi, Aliefa Nur, And Yunianta. 2015. “Extraction Of Anthocyanin Mulberry ( Morus Alba L .) With Ultrasonic Bath ( Study Of Extraction Time And Solid : Liquid Ratio ).” Jurnal Pangan Dan Agroindustri 3(2): 773 – 83.
Dais  Iswanto,  Purwanto,  Nuraliah  Rusman.  2020.  “Penggunaan  Ekstrak  Buah  Merah (Pandanus  Conoedius,Sp.Lam)  Asal  Papua  Sebagai  Pewarna  Morfologi  Eritrosit Dengan Metode Sediaan Apusan Darah Tepi (Sadt.” 1.
Dewi, Aprilia Larasati (2018). "Pengaruh Waktu Terhadap Kadar Fenol Dan Tanin Ekstrak Daun Pandan".Universitas Diponegoro
Dian, Rachmawati. 2016. “Pengaruh Lama Penguapan Larutan Fiksasi Terhadap Hasil Makroskopis Dan Mikroskopis Sediaan Apus Darah Tepi.” Endarini.
2016. Farmakognisi-Dan-Fitokimia- . Jakarta Selatan.
Gafur,  Maryati  Abd,  Ishak  Isa,  Nurhayati  Bialangi,  And  Jurusan  Kimia  Fakultas.  2013.
Isolasi Dan Identifikasi Senyawa Flavonoid Dari Daun Jamblang (Syzygium Cumini) . Hada,Didimus  Daton,2018."Perbandingan  Pengenceran  Larutan  Giemsa  3%  Dan  5% Terhadap  Pemeriksaan  Morfologi  Falciparum".  Universitas  Muhammadiyah Semarang.
Handaratri,  Anitarakhmi,  And  Yuyun  Yuniati.  2019.  “Kajian  Ekstraksi  Antosianin  Dari Buah Murbei Dengan Metode Sonikasi Dan Microwave.” Reka Buana : Jurnal Ilmiah Teknik Sipil Dan Teknik Kimia 4(1): 63.
Hasanah, Lia Rohmatul. 2019. “Pengaruh Pemberian Filtrat Buah Murbei (Morus Alba L)
Sebagai Pewarna Alternatif Terhadap Kualitas Preparat Gosok Tulang Femur Kelinci (Oryctolagalus Cuniculus L).” Skripsi 8(5): 55.
Hidayah,  Tri.  2013.  “Uji  Stabilitas  Pigmen  Dan  Antioksidan  Hasil  Ekstraksi  Zat  W arna Alami  Dari  Kulit  Buah  Naga  (Hylocereus  Undatus).” Fakultas Matematika Dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Negeri Semarang 29(18): 2616 – 27.
Hilwiyah,  Dkk.  2015. Skrining  Fitokimia  Dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Serta  Kadar  Total Fenol-Flavonoid Ekstrak Etanol Murbei (Morus Alba L.) .
Huda.  2019.  “Ekstraksi  Dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Senyawa  Aktif  Dengan  Variasi Pengeringan Alga Merah (Eucheuma Cottonii) Pantai Wongsorejo Banyuwangi.”
Islawati,  Asriyani,  Ridwan,  Rahmat  Aryandi.  2021 .  “ Ekstrak  Betasianin  Dari  Umbi  Bit ( Beta  Vulgaris )  Sebagai  Pewarna  Alami  Pada  Sediaan  Apusan  Darah  Tepi ”. Jurnal Kesehatan Panrita Husada 6(2): 152-160. Isnan, Wahyudi, And Nurhaedah Muin. 2015. “Tanaman Murbei : Sumber Hutan Multimanfaat.” Info Teknis Eboni Vol. 12(2): 111 – 19.
Kandun, I Nyoman. 2008. “Pedoman Penatalaksanaan Kasus Malaria Di Indonesia By Tim Penyusun (Z- Lib.Org).”
Kurniati,dkk.2018,Penuntun Praktikum Mikrobiologi.Jakarta: Program Studi Dan
Pendidikan  Biologi  Fakultas  Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas Negeri Jakarta
Kusuma, Wijaya Et Al. 2014. “Pemeriksaan Mikroskop Dan Tes Diagnostik Cepat Dalam Menegakkan Diagnosis Malaria.” E-Jurnal Medika Udayana 3(2): 170 – 86.
Laksmiani. 2015. “Identifikasi Dan Karakterisasi Antosianin Ekstrak Etanol 70 % Dalam Suasana Asam Dari Ubi Jalar Ungu ( Ipomoea Batatas L .) Dengan Identification And Characterization  Anthocyanins  From  70  %  Ethanol  Extract  In  Acid  Condition  Of Purple Sweet Potato ( Ipomoe.” 1.
Lestario, L ydia Ninan, Elisabeth Rahayuni, And Kris Herawan Timotius. 2011. “Kandungan Antosianin  Dan  Identifikasi  Antosianidin  Dari  Kulit  Buah  Jenitri  (Elaeocarpus Angustifolius Blume).” Agritech: Jurnal Fakultas Teknologi Pertanian Ugm 31(2): 93 – 101.
Made  Agus  Gelgel  Wirasuta,  I  Et  Al.  2015.  Seminar  Nasional  Sains  Dan  Teknologi (Senastek) Identifikasi Antosianin Ubi Ungu (Ipomoea Batatas Klt- Spektrofotodensitometri .
Nastiti, D S, N Nurhamidah, And I N Chandra. 2019. “Pemanfaatan Ekstrak Buah Morus Alba L.(Murbei) Sebagai Pengawet Alami Ikan Selaroides Leptolepis (Selar).” Alotrop 3(1): 1 – 7.
Https://Ejournal.Unib.Ac.Id/Index.Php/Alotropjurnal/Article/Viewfile/9019/4423. Priska, Melania, Natalia Peni, Ludovicus Carvallo, And Yulius Dala Ngapa. 2018. “Review : Anto sianin  Dan  Pemanfaatannya.” Indonesian  E-Journal  Of  Applied  Chemistry 6(2):
79 – 97.
Puasa,  Rony.  2018.  “Studi  Perbandingan  Jumlah  Parasit  Malaria  Menggunakan  Variasi Waktu  Pewarnaan  Pada  Konsentrasi  Giemsa  3  %  Di  Laboratorium  Rsud  Dr.  H. Chasan Boesoirie T ernate.” Jurnal Riset Kesehatan 6(2): 23. Putri. 2019. Gambaran Hasil Pemeriksaan Plasmodium Dengan Sediaan Tetes Tebal Dan Hapusan Darah Di Puskesmas Leung Keubeu Jagat Kabupaten Nagan Raya . Rasuane Noor, Nisa Yulis Tika, Putri Agustina. 2020. “Preparat Jaringan Tumbuhan
Dengan Menggunakan Pewarna Alami Sebagai Media Belajar Jaringan Tumbuhan.” 5(2): 136 – 48.
Rizky Ardila, Zahara Afnita, Ayu Nirmala Sari, Diky Setya Diningrat. 2021. “ Ekstrak Kulit Buah Jamblang (Sygyzium Cumini) Sebagai Pewarnaan Alternatif Preparat Sediaan Apusan Darah Tepi (SADT) .” Webinar Nasional VII Biologi : 313-318.
Ronald Y. Koromath (2021). "Penggunaan Ekstrak Metanol Dari Buah Murbei Buah Merah Dan  Kulit  Buah  Manggis  Sebagai  Zat  Warna  Alternatif  Pada  Pemerisaan  Malaria Sediaan Apus Darah Tebal Metode Pewarnaan Giemsa". Prodi Kimia Konsentrasi Analis Medis Sekolah Tinggi Analis Kesehatan Bandung .
Sitepu,  Rehmadanta,  Tatas  H  P  Brotosudarmo,  And  Leenawaty  Limantara.  2016.
“Karakterisasi Antosianin Buah Murb ei Spesies Morus Alba Dan Morus Cathayana Di Indonesia  (  Anthocyanin  Characterization  Of  Morus  Alba  And  Morus  Cathayana  In Indonesia ).” Online Journal Of Natural Science 5(2): 158 – 71.
Sitohang,  Vensya.  2016.  “Buku  Saku  Tatalaksana  Kasus  Malaria.” Jurnal  Ekologi Kesehatan 13(3 Sep): 201-209 – 209.
Sitti Wahyuni, Md, Phd. 2015. “Csl5 _ Manual Apusan Darah Tepi _ Swahyuni 2015 Page 1 Csl5 _ Manual Apusan Darah Tepi _ Swahyuni 2015 Page 2.” Manual Apusan Darah Tepi : 1 – 7.
Subakir Salnus; Dzikra Arwie. 2020. “E kstrak Antosianin Dari Ubi Ungu (Ipomoea Batatas L.) Sebagai Pewarna Alami Pada Sediaan Apusan Darah Tepi.” Jurnal Media Analis Kesehatan 11(2): 96 – 103.
Sulistyarini, Indah Et Al. 2020. “Skrining Fitokimia Senyawa Metabolit Sekunder Batang Buah  Naga  Skrining  Fitokimia  Senyawa  Metabolit  Sekunder  Batang  Buah  Naga (Hylocereus Polyrhizus).”
Supriyatin,Yati.,(2014)."Diktat   Kuliah   &  Petunjuk   Praktikum   Parasitologi   II".
Staba:Bandung
Tamara, Sri Wantini, dan Sri Ujiani. 2019. “Perbandingan Hitung Jenis Leukosit Pada Penderita  Malaria  Falciparum  Dengan  Malaria  Vivax  Di  Puskesmas  Sukamaju Bandar Lampung.”
Vanadis,  Putu  Aurora,  Ni  Made  Suartini,  And  Ni  Putu  Ariantari.  2013.  “Analisis Antimalaria Ekstrak Metanol Daun Murbei ( Morus Alba ) Pada Mencit Terinfeksi.” Jurnal Farmasi Udayana 2(1): 45 – 51.
Wahyuningsih, S. Et Al. 2017. “The Effect Of Ph And Color Stability Of Anthocyanin On Food Colorant.” Iop Conference Series: Materials Science And Engineering 193(1). Wijayanti.(2015)."Teknik   Survei   Darah   Filaria   Dan   Malaria".Balai   Litbang P2b2:Banjarnegara
Wulandari, Lestyo. 2011. Kromatografi Lapis Tipis . Jember.
Yani, Gita Fitri, Muachiroh Abbas, And Siti Samiyarsih. 2020. “Pemanfaatan Ekstrak Kulit Buah Manggis (Garcinia Mangostana L.) Sebagai Pewarna Alami Jaringan Daun Dan Batang Krokot (Portulaca Oleracea L.).” Bioeksakta : Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed 2(2): 288.
Yuni,  Fajriyah,  Sri  Wulandari,  Shintya  Devi  Widiyani,  And  Arya  Iswara.  2019.  “Caesar (Caesalpinia Extract) : Pewarna Alami Tanaman Indonesia Pengganti Giemsa .” 3: 45– 49.