## UJI PENDAHULUAN DAN KARAKTERISASI BUAH KAWISTA
( Limonia accidisima ) KHAS KARAWANG
1 Neni Sri Gunarti
1 Prodi Farmasi Universitas Buana Perjuangan Karawang neni.gunarti@ubpkarawang.ac.id

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  karakterisasi  dan  telaah  fitokimia  simplisia  buah kawista  ( Limonia  acidissima )  khas  Karawang.  Hasil  skrining  fitokimia  menunjukkan bahwa  simplisia  buah  kawista  mengandung  senyawa  polifenolat,  alkaloid,  kuinon, steroid, triterpenoid, monoterpenoid, triterpenoid dan flavonoid. Hasil penetapan standar mutu simplisia menunjukkan bahwa serbuk simplisia memiliki kadar air (5,200%), susut pengeringan (8,958%), kadar abu total (11,918%), kadar abu tidak larut asam (0,708%), kadar sari larut air (20,810%) dan kadar sari larut etanol (12,241%).
Kata Kunci : karakterisasi, penapisan fitokimia, buah kawista.

## PENDAHULUAN
Kawista ( Limonia acidissima ) merupakan tanaman yang termasuk ke dalam suku jeruk-jerukan  (Rutaceae).  Tanaman  ini  banyak  tersebar  di  daerah  Jawa  khususnya Karawang, sehingga tanaman ini menjadi tanaman khas Karawang.  Tanaman ini banyak digunakan  khususnya  bagian  buahnnya  untuk  dikonsumsi.  Penggunaan  buah  kawista untuk  pengobatan  belum  banyak  diketahui,  termasuk  mengenai  informasi  senyawa berkhasiat  dan  karakteristik  buah  kawista  jika  akan  digunakan  sebagai  bahan  baku pengobatan.
Karakteristik  bahan  baku  untuk  penggunaan  pengobatan  sangat  penting  untuk menjamin  kualitas  bahan  dan  menjaga  keseragaman  khasiat.  Informasi  metabolit sekunder sangat penting untuk mengetahui senyawa berkhasiat yang akan diaplikasikan sebagai pengobatan, bahan baku obat ataupun bahan tambahan obat. Untuk itu perlunya
dilakukan uji pendahuluan dan karakterisasi buah kawista untuk mengetahui kandungan kimia yang terkandung pada buah kawista.

## METODE PENELITIAN
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode experiment dengan menggunakan sampel simplisia dan ekstrak buah kawista dari daerah Karawang.

## III.1 Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu  alat-alat  gelas,  lemari pengering, alat penggiling,  neraca analitik, tanur, alat soxhlet , rotavapor , vial sampel, penangas  air,  plat  KLT,  penyemprot,  alumunium  foil,  bejana  kromatografi, spektrofotometer ultra violet-sinar tampak (Hewlett Packard 8435) lampu UV (Camag), cawan penguap, krus, kuvet.
Bahan  penelitian  yang  digunakan  adalah  buah  Kawista  ( Limonia  acidissima ). Bahan kimia dan pereaksi yang digunakan adalah etanol, n-heksana, etil asetat,  serbuk Mg,  natrium  asetat,  eter,  toluena,  bismuth  subnitrat,  kalium  iodida,  raksa  (II)  klorida, aluminium  (III)  klorida,  besi  (III)  klorida,  natrium  hidroksida,  natrium  karbonat,  asam sitrat, asam borat, asam format, asam asetat, pereaksi Folin-Ciocalteu, penampak bercak sitroborat,  anisaldehida,  air  suling,  silika  gel  GF 254 ,  kertas  saring,  2,2-difenil-1- pikrilhidrazil, tembaga (II) klorida, neokuproin, amonium asetat, kertas perkamen.

## III.2 Prosedur Percobaan
Pada percobaan ini dilakukan beberapa langkah percobaan sebagai berikut :

## a. Penyiapan Simplisia
Penyiapan simplisia terdiri dari beberapa tahapan yaitu pengumpulan bahan baku, pemilahan  basah,  pencucian,  pengeringan,  pemilahan    kering,  penyerbukan  dan penyimpanan.  Pemilahan  bahan  baku  basah  dilakukan  secara  manual  segera  setelah bahan  baku  dikumpulkan.  Setelah  dipilah,  bahan  baku  dicuci  di  bawah  air  mengalir hingga  bersih.  Bahan  baku  kemudian  dikeringkan  dengan  oven  pada  suhu  40-42 o C. Bahan baku kering dipilah kembali untuk memisahkan komponen asing yang masih ada. Simplisia  kemudian  digiling  menjadi  serbuk  lalu  disimpan  dalam  wadah  kering  dan tertutup rapat untuk digunakan pada tahapan penelitian selanjutnya.

## b. Karakerisasi Simplisia
Penetapan karakteristik simplisia meliputi penetapan kadar abu total, penetapan kadar sari larut etanol, penetapan kadar sari larut air dan penetapan kadar air.

## 1. Penetapan Kadar Abu Total
Sebanyak 2 gram simplisia ditimbang dalam krus yang telah ditara dan dipijarkan. Simplisia kemudian dipijarkan hingga arang habis, didinginkan dan ditimbang. Apabila dengan cara ini arang tidak habis ditambahkan air panas dan sirasing melalui kertas saring bebas abu. Residu dan kertas saring dipijarkan dalam krus yang sama. Filtrat diuapkan, dipijarkan hingga bobot tetapdan ditimbang. Kadar abu dihitung terhadap simplisia yang dikeringkan di udara (Depkes, 1989).

## 2. Penetapan Kadar Sari Larut Etanol
Sebanyak  5  gram  serbuk  simplisia  dimasukkan  ke  dalam  labu  bersumbat  dan dimaserasi dengan 100 mL etanol 95 % sambil dikocok selama 6 jam pertama, dibiarkan selama 18 jam. Campuran kemudian disaring cepat dan 20 mL filtrat diuapkan hingga kering dalam cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara dan dipanaskan pada suhu 105  °C  hingga  bobot  tetap.  Kadar  sari  larut  etanol  dihitung  dalam  persen  terhadap simplisia yang dikeringkan di udara (Depkes, 1989).

## 3. Penetapan Kadar Sari Larut Air
Sebanyak  5  gram  serbuk  simplisia  dimasukkan  ke  dalam  labu  bersumbat  dan dimaserasi  dengan  100  mL  air  kloroform  selama  24  jam.  Labu  dikocok  selama  6  jam pertama,  kemudian  dibiarkan  selama  18 jam  berikutnya.  Campuran  kemudian  disaring dan 20 mL filtrat diuapkan hingga kering dalam cawan dangkal berdasar rata yang telah ditara dan dipanaskan pada suhu 105 °C hingga bobot tetap. Kadar sari larut air dihitung dalam persen terhadap simplisia yang dikeringkan di udara (Depkes, 1989).

## 4. Penetapan Kadar Air
Untuk menetapkan kadar air simplisia digunakan metode destilasi azeotrop. Labu destilasi diisi dengan 200 mL toluena dan 2 mL air. Campuran dipanaskan selama 2 jam dan  didinginkan  selama  30  menit.  Volume  distilat  awal  dicatat  sebagai  n 0 .  Simplisia ditimbang sejumlah yang diperkirakan mengandung 2-3 mL air, dimasukkan ke dalam labu destilasi. Batu didih ditambahkan ke labu destilasi. Pemanasan dilakukan selama 15
menit. Laju destilasi diatur menjadi dua tetes per detik hingga sebagian besar air telah terdestilasi  dan  kemudian  diatur  menjadi  empat  tetes  per  detik.  Setelah  semua  air tersuling,  bagian  dalam  pendingin  dicuci  dengan  toluena  dan  penyulingan  dilanjutkan selama  5 menit.  Tabung  penerima  kemudian  dibiarkan  mendingin  hingga  suhu  kamar, bila ada tetesan air yang melekat pada pendingin maka tabung digosok dengan karet yang diikatkan pada kawat tembaga dan dibasahi toluena hingga tetesan air turun. Volume air diukur sebagai volume destilasi kedua (n 1 ). Kadar air dihitung dengan persamaan berikut (WHO, 1998).
% (v/b) kadar air = 100 (𝑛 1 − 𝑛 0 ) 𝑤
Dimana : w = bobot simplisia dalam gram n 0 = volume air hasil destilasi pertama dalam mL n 1 = volume air hasil destilasi kedua dalam mL

## c. Penapisan Fitokimia
Pemeriksaan  ini  meliputi  pemeriksaan  golongan  senyawa  kimia  meliputi golongan senyawa alkaloid, flavonoid, tanin, kuinon, saponin, steroid/triterpenoid.

## 1. Pemeriksaan Alkaloid
Bahan  simplisia  dan  ekstrak  sebanyak  2  g  ditambahkan  5  mL  amonia  21  % kemudian  digerus  dalam  mortar,  selanjutnya  25  mL  kloroform  ditambahkan  kedalam campuran  tersebut  dan  digerus  dengan  kuat.  Campuran  disaring  kemudian  filtratnya digunakan  sebagai  larutan  percobaan  (larutan  A).  Larutan  A  diekstraksi  2  kali  dengan asam  klorida  10%  (larutan  B).  Larutan  A  diteteskan  pada  kertas  saring,  lalu  ditetesi pereaksi  Dragendorff,  bahan  positif  mengandung  alkaloid  bila  timbul  warna  merah jingga. Larutan B sebanyak 5 mL dalam tabung reaksi diuji denganpereaksi Mayer dan Dragendorff,  bahan  positif mengandung  alkaloid jika  timbul  endapan merah  bata pada penambahan pereaksi Dragendorff dan endapan putih pada penambahan pereaksi Mayer.

## 2. Pemeriksaan Flavonoid
Bahan  simplisia  dan  ekstrak  sebanyak  1  g  ditambahkan  100  mL  air  panas, didihkan selama 15 menit kemudian disaring. Filtrat sebanyak 5 mL ditambah serbuk Mg dan  ditambah  2  mL  larutan  alkohol-asam  klorida  (1:1),  kemudian  ditambahkan  amil
alkohol,  dikocok  kuat-kuat  kemudian  dibiarkan  memisah.  Bahan  positif  mengandung flavonoid jika timbul warna merah/kuning/jingga pada lapisan amil alkohol.

## 3. Pemeriksaan Saponin
Bahan  simplisia  dan  ekstrak  1  g  ditambahkan  100  mL  air  panas,  dididihkan selama 15 menit kemudian disaring. Filtrat sebanyak 10 mL dalam tabung reaksi dikocok vertikal  selama  10  detik  dan  diamkan  selama  10  menit.  Bahan  positif  mengandung saponin bila terbentuk buih yang mantap selama tidak kurang dari 10 menit setinggi 1 cm dan buih tidak hilang ketika ditambah HCl 2N.

## 4. Pemeriksaan Kuinon
Bahan simplisia dan ekstrak 1 g ditambahkan 100 ml air panas, dididihkan selama 15 menit kemudian disaring. Bila sampel tidak mengandung tanin, maka kedalam 5 mL filtrat ditambah beberapa tetes NaOH 1N. Bahan positif mengandung kuinon jika timbul warna merah. Jika bahan mengandung tanin, maka serbuk bahan sebanyak 2 g dimaserasi dalam  HCl  10  %  selama  beberapa  jam,  lalu  larutan  disaring  dan  dibagi  2.  Tabung  1 sebanyak  5  mL  diekstraksi  dengan  benzena  dan  tabung  2  sebanyak  5  mL  diekstraksi dengan  campuran  eter-kloroform  (2:1),  kedua  fase  organik  masing-masing  diuapkan sampai sepersepuluh (0,5 mL). Kedua fase masing-masing dikocok dengan larutan NaOH 30  %.  Bahan  positif  mengandung  kuinon  jika  pada  fase  air  timbul  warna jingga/merah/violet.

## 5. Pemeriksaan Tanin
Bahan  simplisia  dan  ekstrak  1  g  ditambahkan  100  mL  air  panas,  dididihkan selama 15 menit kemudian disaring.  Filtrat sebanyak 5 mL direaksikan dengan larutan FeCl 3 1 %. Dalam tabung lain, 5 mL filtrat ditambahkan larutan gelatin. Bahan positif mengandung tannin jika timbul warna hijau violet pada penambahan FeCl 3 dan terbentuk endapan pada penambahan larutan gelatin. Untuk pemeriksaan tannin galat dan katekat dilakukan  dengan  cara  berikut.  Filtrat  ditambahkan  pereaksi  Steasny,  kemudian dipanaskan  dalam  tangas  air.  Bahan  positif  mengandung  tanin  katekat  jika  terbentuk endapan merah muda.

## 6. Pemeriksaan Steroid/Triterpenoid
Bahan simplisia dan ekstrak 1 gram dimaserasi dengan  25 mL eter selama 2 jam kemudian  disaring.  Filtrat  sebanyak  5  mL  diuapkan  dalam  cawan  penguap,  kedalam residu ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrat kemudian ditambah 1 tetes asam sulfat pekat.  Bahan  positif  mengandung  steroid/triterpenoid  jika  terbentuk  warna  ungu  – biru/hijau.

## d. Pemantauan pola kromatogram ekstrak
Ekstrak 2 g yang telah dilarutkan dipantau pola kromatogramnya menggunakan plat KLT 254 dengan 10 pengembang berbeda kepolaran lalu disemprot dengan penampak bercak untuk identifikasi senyawa pada kromatogram.

## PEMBAHASAN
Bahan  tumbuhan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Buah  Kawista ( Limonia accidisima ) yang diperoleh dari Kota Karawang.  Proses pembuatan simplisia buah kawista dimulai dari pengumpulan bahan, sortasi basah, pencucian, pengeriangan, sortasi kering, pengepakan. Sortasi untuk memisahkan kotoran atau bahan asing lain dari simplisia,  pencucian  menggunakan  air  mengalir  untuk  mengurangi  kemungkinan kontaminasi  yang  mempengaruhi  hasil  akhir,  perajangan/pengecilan  ukuran  untuk memperbesar  luas  permukaan  sehingga  proses  pengeringan  lebih  optimal,  kemudian dilakukan pengeringan menggunakan sinar matahari hingga dihasilkan simplisia kering. Penapisan fitokimia atau skrining fitokimia merupakan tahapan awal dalam identifikasi kandungan  kimia  yang  terdapat  dalam  simplisia  maupun  ekstrak.  Hasil  penapisan fitokimia dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil penapisan fitokimia
Golongan Senyawa Identifikasi Simplisia (+) (-) Alkaloid √ - Polifenolat √ -
Flavonoid √ - Tanin - √ Kuinon √ - Saponin - √ Monoterpenoid dan Sesquiterpenoid √ - Triterpenoid dan Steroid √ - Keterangan: (+) Terdeteksi (-) Tidak Terdeteksi
Berdasarkan  hasil  yang  tercantum  dalam  tabel  diatas,  menunjukkan  bahwa simplisia  buah  kawista  mengandung  senyawa  polifenolat,  alkaloid,  kuinon,  steroid, triterpenoid,  monoterpenoid,  triterpenoid  dan  flavonoid.    Penetapan  standar  mutu dilakukan  untuk  menjamin  keamanan,  khasiat  dan  kualitas  dari  simplisia  dan  ekstrak. Parameter  non  spesifik  yang  dilakukan  pada  simplisia  diantaranya,  parameter  susut pengeringan, kadar air, kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam. Parameter spesifik yang dilakukan pada simplisia, meliputi  kadar sari larut air dan kadar sari larut etanol. Hasil penetapan standar mutu dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil penetapan standar mutu Pengujian Identifikasi Simplisia Susut Pengeringan 8,958% Kadar air 5,200% Kadar abu total 11,918% Kadar abu tidak larut asam 0,708% Kadar sari larut air 20,810% Kadar sari larut etanol 12,241%
Parameter  non  spesifik  merupakan  parameter  yang  terkait  dengan  factor lingkungan  dalam  pembuatan  simplisia  meliputi  uji  terkait  dengan  pencemaran. sedangkan  parameter  spesifik  merupakan  parameter  yang  terkait  langsung  dengan senyawa  yang  ada  didalam  tanaman.  Parameter  non  spesifik  diantaranya  susut pengeringan, prinsipnya adalah pengukuran sisa zat setelah pengeringan pada temperatur
105ºC selama 30 menit atau sampai berat konstan, yang dinyatakan dalam nilai persen. Dengan  tujuan  memberi  batas  maksimum  tentang  besarnya  senyawa  yang  hilang  pada proses  pengeringan(Departemen  Kesehatan  RI,  2000:  13).  Susut  pengeringan  yang diperoleh  dari  sampel  adalah  8,958%.  Kadar  air  merupakan  banyaknya  air  yang terkandung dalam bahan yang dinyatakan dalam persen. Parameter kadar air bertujuan untuk  memberikan  batasan  minimal  tentang  besarnya  kandungan  air  didalam  bahan. Berdasarkan hasil penetapan, diketahui bahwa kadar air sampel adalah sebesar 5,200%. Hasil  tersebut  sesuai  dengan  pustaka  dimana  kadar  air  tidak  boleh  lebih  dari  10% (Departemen  Kesehatan  RI,  1977:140).  Kadar  air  adalah  salah  satu  karakteristik  yang mempengaruhi  penampakan  tekstur  serta  menentukan  kesegaran  dan  daya  awet  bahan simplisia, karena air merupakan media utama untuk pertumbuhan bakteri sehingga dapat mempercepat  pembusukan,  mempercepat  reaksi  hidrolisis,  dan  menyebabkan  mutu simplisia menurun. Hasil parameter susut pengeringan lebih besar dibandingkan dengan hasil penetapan kadar air. Hal tersebut dikarenakan pada saat proses susut pengeringan, senyawa yang hilang tidak hanya air tetapi senyawa-senyawa lain yang mudah menguap juga ikut hilang. Parameter kadar abu bertujuan untuk memberikan gambaran kandungan senyawa anorganik baik internal maupun eksternal yang berasal dari proses awal sampai menjadi simplisia sehingga dapat menetapkan tingkat pengotor suatu bahan oleh logam dan silikat. Hasil kadar abu total yang diperoleh adalah 11,918%. Sedangkan kadar abu tidak larut  asam  dilakukan  untuk  menentukkan  abu  yang  berasal  dari  pasir  atau tanah. Hasil yang diperoleh adalah 0,708%. Parameter kadar sari bertujuan untuk memberikan gambaran  awal  jumlah  kandungan  senyawa  yang  terlarut  atau  tersari  dalam  pelarut tertentu  (Departemen  Kesehatan  RI,  2000:  31).  Parameter  kadar  sari  yang  dilakukan meliputi kadar sari larut air dan kadar sari larut etanol. Pada  parameter kadar sari larut air,  ditambahkan  kloroform  untuk  mencegah  pertumbuhan  mikroba,  dimana  air merupakan media utama pertumbuhan mikroba. Berdasarkan hasil yang diperoleh nilai dari kadar sari larut air lebih besar dari kadar sari larut etanol, karena senyawa-senyawa dalam daun paitan lebih banyak bersifat polar (sebesar 20,810%), sehingga dapat tertarik oleh pelarut air. Senyawa yang diduga tertarik dalam kadar sari larut air adalah alkaloid, polifenol, tanin dan saponin. Sedangkan hasil kadar sari larut etanol lebih rendah (sebesar 12,241%). Senyawa yang diduga tertarik dalam pelarut etanol yaitu senyawa flavonoid, monoterpen dan sesquiterpen.

## PENUTUP
Metabolit sekunder dalam kawista adalah alkaloid, polifenolat, flavonoid, kuinon, monoterpenod/sesquiterpenoid  dan  steroid/triterpenoid.  Hasil  penetapan  standar  mutu simplisia  menunjukkan  bahwa  serbuk  simplisia  memiliki  kadar  air  (5,200%),  susut pengeringan (8,958%), kadar abu total (11,918%), kadar abu tidak larut asam (0,708%), kadar  sari  larut  air  (20,810%)  dan  kadar  sari  larut  etanol  (12,241%).  Perlu  dilakukan pengujian aktivitas farmakologi dan isolasi senyawa berkhasiat.

## DAFTAR PUSTAKA
Depkes, 1989, Materia Medika Indonesia Jilid V , Jakarta : Direktorat Jenderal
Pengawasan Obat dan Makanan.
Depkes,  2000, Parameter  Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan  Obat ,  Jakarta  :
Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan.
Farnsworth, N. R., 1966, Biological and Phytochemical Screening of Plants, J. Pharm. Sci. , 55(3), 243-268.
Harborne,  J.  B.,  1987, Metode  Fitokimia  :  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan , Bandung : Penerbit ITB.
List,  P.  H.  and  P.  C.  Schmidt.  1989. Phytopharmaceutical  Technology .  CRC  Press, Boca Raton,  99-107
Sukamto, L.A. 1999. Morfogenesis Berbagai Eksplan Kawista (Limonia acidissima L.)  yang  Ditumbuhkan  secara  Kultur  Jaringan. Prosiding  Seminar  Biologi Menuju Milenium III. Fakultas Biologi UGM.