## PENDAHULUAN
Indonesia,  khususnya  di  Kepulauan  Riau  memiliki kekayaan tumbuhan laut yang melimpah. Salah satunya mengandung berbagai macam metabolit sekunder yang memiliki  sifat  toksik  untuk  membunuh  sel  kanker (Mayefis  et  al.,  2021).  Salah  satu  contoh  tanaman dipesisir pantai yang dapat digunakan yaitu rumput laut. Potensi rumput laut (makroalga) Indonesia sangat besar untuk  dikembangkan  sebagai  bahan  baku  obat.  Dalam pengobatan  tradisional,  alga  laut  telah  lama  digunakan untuk  keperluan  pengobatan  berbagai  jenis  penyakit.
sehingga sekarang ini banyak penelitian yang dilakukan untuk mengeksplor manfaat rumput laut sebagai bahan dasar untuk obat-obatan.
Caulerpa racemosa merupakan salah satu jenis rumput laut  dari  kelompok  alga  hijau  yang  hidup  menyebar  di beberapa  perairan  Indonesia  khususnya  Batam, Kepulauan  Riau.  Varietas  alga  jenis  C.  racemosa termasuk  spesies  yang  belum  dibudidayakan  dan  biasa dikonsumsi  sebagai  sayuran  atau  lalapan  oleh masyarakat di daerah tropikal seperti di Indonesia.

## Uji Aktivitas Sitotoksik Ekstrak Etanol Anggur Laut (Caulerpa racemosa) dengan Metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test)

## Cytotoxic Activity Test of Sea Grape (Caulerpa racemosa) Ethanol Extract with BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) Method
Sri Hainil 1*
Ghalib Syukrilah 2
Rastria Meilandra 3
Daniel Kurniawan 4
Institut Kesehatan Mitra Bunda,
Batam, Kepulauan Riau,
Indonesia
*email: nininkda72@gmail.com

## Abstrak
Indonesia, khususnya di Kepulauan Riau memiliki sumber daya alam hayati laut yang melimpah.  Sehingga  dapat  dimanfaatkan  sebagai  bahan  dasar  dari  suatu  pencarian bahan obat atau pengobatan. Salah satunya jenis anggur laut Caulerpa racemosa dari kelompok alga hijau yang mengandung berbagai macam metabolit sekunder dengan senyawa bioaktif yang bersifat sitotoksik untuk membunuh sel kanker. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  adanya  aktivitas  sitotoksik  ekstrak  etanol  anggur  laut yang  berasal  dari  Kampung  Terih,  Pantai  Nongsa  Kepulauan  Riau.  Metode  yang digunakan  adalah  metode  BSLT  dengan  larva  Artemia  Salina  Leach  sebagai  hewan ujinya. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol anggur laut pantai Terih, Nongsa  mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  saponin  dan  fenolik.  Hasil  uji sitotoksik ekstrak etanol anggur laut menunjukkan hasil dengan nilai LC50 sebesar 2.154 ppm. Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol anggur laut tidak  bersifat  sitotoksik  dengan nilai  LC50  > 1000 ppm  sehingga  tidak  berpotensi sebagai bahan dasar pengujian antikanker. Kata Kunci: Anggur Laut
BSLT
Larva Artemia Salina Leach
Sitotoksik
Keywords : Sea grape BSLT Artemia Salina Leach larvae Cytotoxic

## Abstract
Indonesia, especially in the Riau Islands has abundant marine biological natural resources. So  that  it  can  be  used  as  the  basic  ingredient  of  a  search  for  medicinal  or  medicinal materials. One of them is the caulerpa racemosa sea grape type from the green algae group which  contains  a  variety  of  secondary  metabolites  with  bioactive  compounds  that  are cytotoxic to kill cancer cells. This study aims to determine the cytotoxic activity of sea grape ethanol extract originating from Terih Village, Nongsa Beach, Riau Islands. The method had been used the BSLT method with Artemia Salina Leach larvae as the test animal. The results showed  that  the  ethanol  extract  of  terih  beach  sea  grape,  Nongsa  contains  alkaloid compounds, flavonoids, saponins and phenolics. The results of the cytotoxic test of sea grape ethanol extract showed results with an LC50 value of 2,154 ppm. From this study, it can be concluded that the ethanol extract of sea grapes is not cytotoxic with a value of LC50 > 1000 ppm so it does not have the potential to be a basic ingredient for anticancer testing.
© 2023 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v9i1.5200.
Penelitian  sebelumnya  oleh  (Melati,  2021)  ekstrak metanol  alga  hijau  Boergesenia  forbesii  (Harvey) Feldman  bersifat  toksik  terhadap  A.Salina  dengan  nilai LC50 yaitu 508,74 ppm.
Senyawa Sitotoksik adalah suatu senyawa atau zat yang dapat  merusak  sel  normal  atau  sel  kanker,  serta digunakan  untuk  menghambat  pertumbuhan  dari  sel tumor maligna (Purwanto et al., 2015).
Uji  sitotoksik  metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  merupakan  uji  pendahuluan  yang  dapat digunakan untuk memantau senyawa bioaktif dari bahan alami  (Anderson  et  al.,  1991).  Adanya  korelasi  positif antara metode BSLT dengan uji sitotoksik menggunakan kultur sel kanker maka metode ini sering dimanfaatkan untuk  skrining  senyawa  antikanker  (Carballo  et  al., 2002).
Metode tersebut memiliki beberapa keuntungan antara lain  lebih  cepat,  murah,  mudah,  tidak  memerlukan kondisi aseptis dan dapat dipercaya (Meyer et al., 1982; Dachriyanus, 2005; Fajarningsih et al., 2006).
Kanker  dibedakan  menjadi  dua  yaitu  sarkoma  dan karsinoma.  Sarkoma  bersifat  luas  /  mensensimal misalnya  fibrosarkoma,  limposarkoma,  osteosarkoma, sedangkan  karsinoma  bersifat  epitelial  sebagai  contoh kanker  payudara,  kanker  lambung,  kanker  uterus, kanker kulit (Khan et al., 2006).

## METODOLOGI

## Alat
Alat  yang  digunakan  adalah  Rotary  Evaporator (Heidolp®), wadah kaca, saringan, aquarium, vial, lampu, aerator,  plastik  hitam,  alumunium  foil,  gelas  ukur, erlenmeyer,  corong,  batang  pengaduk,  pipet  tetes mikro, kertas saring, spatula, timbangan analitik.

## BAHAN
Bahan  yang  akan  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah Anggur  laut  (Caulerpa  racemosa)  yang  diambil  di Kampung Terih pantai Nongsa, Batam, Kepulauan Riau. air  laut,  etanol,  larva  udang  (Artemia  salina  Leach), dimetilsulfoksida (DMSO).

## PENGAMBILAN SAMPEL
Sampel anggur laut diambil tanggal 7 Februari 2022, di Perairan  Kampung  Terih,  Kecamatan  Nongsa,  Batam, Kepulauan Riau pada pesisir pantai saat surut ±1 meter dibawah permukaan laut.

## PENYIAPAN SAMPEL
Sampel  anggur  laut  (Caulerpa  racemosa)  yang  telah terkumpul  disortir  dan  dicuci  bersih  dibawah  air mengalir  agar  terbebas  dari  lumpur,  lalu  anggur  laut ditiriskan dan ditimbang berat awalnya sebanyak 20 kg. kemudian anggur laut di rajang kecil-kecil.

## PEMBUATAN EKSTRAK ANGGUR LAUT
Sampel segar anggur laut Caulerpa racemosa sebanyak 20  kg  yang  sudah  dicuci,  ditiriskan,  dirajang  kemudian dimaserasi dengan ethanol sampai terendam seluruhnya dalam  wadah  kaca  dan  disimpan  ditempat  yang terlindung cahaya selama 3x6 hari sambil sesekali diaduk dan  disaring  dengan  kertas  saring.  Maserat  ethanol tersebut  digabung  dan  dipekatkan  dengan  Rotary Evaporator sampai terbentuk ekstrak kental kemudian ditimbang (Handayani, 2016; Krisyanella,2011).
Rendemen  yang  diperoleh  dihitung  berdasarkan persentase  bobot  (b/b)  dengan  menggunakan persamaan berikut :
= 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝐸𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑌𝑎𝑛𝑔 𝐷𝑖𝑑𝑎𝑝𝑎𝑡 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑌𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑔𝑢𝑛𝑎𝑘𝑎𝑛 𝑥100%

## KARAKTERISASI EKSTRAK
a. Pemeriksaan Organoleptis
Dilakukan identifikasi secara fisik dengan panca indera meliputi bau, bentuk, dan warna dari ekstrak (Sri Hainil, Sammulia, et al., 2021).
b. Pemeriksaan Kadar Air
Dibersihkan cawan porselin dan dikeringkan dalam oven selama  15  menit  pada  suhu  105ºC,  kemudian didinginkan  dalam  desikator  selama  30  menit  dan ditimbang beratnya. Ditimbang sampel sebanyak 2 gram di letakkan  dalam cawan porselin yang telah  diketahui beratnya. Kemudian dikeringkan dalam oven pada suhu 100-105oC selama 3 jam, didinginkan di dalam desikator selama  15  menit  lalu  ditimbang.  Perlakuan  ini  diulangi
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛
sampai  tercapai  lalu  ditimbang.  Perlakuan  ini  diulangi sampai tercapai berat konstan.
c. Pemeriksaan Kadar Abu Timbang  ekstrak  kental  sebanyak  2  gram  lalu dimasukkan  kedalam  krus  porselin  yang  sebelumnya sudah dipanaskan pada suhu 1050C selama 30 menit dan telah  ditara.  Setelah  itu  krus  porselin  dimasukkan  ke dalam furnace lalu dipijarkan pada suhu 6000C selama 7 jam,  dikeluarkan  dan  didinginkan  dalam  desikator selama  15  menit  dan  timbang  kembali  (Sri  Hainil, Sammulia, et al., 2021).

## SKRINING FITOKIMIA
1. Uji Alkaloid
Sebanyak  10  tetes  ekstrak  anggur  laut  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi,  kemudian  ditambahkan  3  tetes amoniak,  klorofom,  dan  H2SO4.  Lapisan  atas  yang terbentuk dipipet dan dimasukkan ke tabung reaksi yang baru, lalu tambahkan pereaksi Mayer sebanyak 2 tetes. Positif adanya alkaloid jika menghasilkan endapan putih atau kuning.
2. Uji Flavonoid
Sebanyak  10  tetes  ekstrak  anggur  laut  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi,  lalu  tambahkan  aquadest  dan didihkan kemudian ditambahkan 0,1 g serbuk Mg dan 2 tetes  Asam  Klorida  pekat  dikocok  dan  dibiarkan memisah.  Mengandung  Flavonoid  jika  ekstrak  positif berubah menjadi warna merah, kuning, jingga.
3. Uji Saponin
Sebanyak  10  tetes  ekstrak  anggur  laut  dimasukkan  ke dalam tabung reaksi, ditambahkan air hangat kemudian dikocok selama 15 menit. Di teteskan 1 tetes HCl 2 N, apabila  terbentuk  busa  permanen  dapat  dikatakan bahwa ekstrak mengandung saponin.
4. Uji Fenolik
Sebanyak  10  tetes  ekstrak  anggur  laut  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi,  lalu  ditambahkan  10  tetes  FeCl3 1%, apabila menghasilkan warna hijau, merah, ungu, biru atau hitam pekat positif mengandung senyawa fenolik.
5. Uji Steroid dan Terpenoid
Sebanyak  10  tetes  ekstrak  anggur  laut  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi,  kemudian  ditambahkan  pereaksi Liebermann  Burchard  apabila  terbentuk  warna  hijau kebiruan  maka  positif  mengandung  senyawa  steroid, apabila  terbentuk  warna  merah/ungu  maka  positif mengandung senyawa terpenoid.

## PERSIAPAN HEWAN PERCOBAAN
Hewan percobaan yang digunakan adalah larva Artemia salina  L.  Telurnya  dibiakan  terlebih  dahulu  didalam wadah  pembiakan  yang  berisi  air  laut  yang  telah dilengkapi aerator dan cahaya. Dimana wadah ini diberi sekat  dibagi  dua,  satu  dibuat  gelap  untuk  penetasan larva, dan satunya lagi terang.
Dimana  nantinya  larva  yang  sudah  menetas  akan berenang  ketempat  yang  terang.  Temperatur  untuk penetasan larva berkisar 25- 30°C. Telur akan menetas dalam waktu 48 jam dan akan bergerak secara alamiah menuju daerah terang sehingga larva udang terpisah dari kulit telur. Larva yang sehat bersifat fototropik dan siap dijadikan  hewan  uji  pada  umur  36-48  jam.  Larva dipisahkan dari telurnya dengan pipet ke dalam vial yang berisi air laut (Harmita dan Radji, 2008).
PENGUJIAN AKTIVITAS SITOTOKSIK EKSTRAK ANGGUR LAUT DENGAN METODA  BRINE  SHRIMP  LETHALITY  TEST (BSLT) Pengujian pendahuluan
dengan  terlebih dahulu  membuat  larutan  induk  sampel  dengan  cara ekstrak kental ditimbang sebanyak 1g dilarutkan didalam 100 ml air laut. Selanjutnya dari larutan induk dibuat 3 konsentrasi  yaitu  1000,  100,  dan  10  ppm,  dan  setiap konsentrasi dibuat pengulangan sebanyak 3 kali. Larutan uji  ini  dibuat  dengan  cara  memipet  500,  50,  5  µl  dari larutan  induk  dan  dimasukan  kedalam  vial,  kemudian tiap  vial  ditambahkan  50  µl  larutan  DMSO.  Masing- masing  vial  ditambahkan  10  ekor  larva  yang  sudah dibiakan tadi lalu dicukupkan volumenya 5 ml dengan air laut.  Jumlah  larva  yang  hidup  dihitung  setelah  24  jam, maka dapat diketahui jumlah larva yang mati. Nilai LC50
dihitung  dengan  menggunakan  metoda  kurva (Handayani,2016,Sukmarianti,2013,Handayani,20 11).

## ANALISA DATA
Analisis  data  dalam  penelitian  ini  adalah  menggunakan persamaan regresi linear pada ms. Excel dan juga dalam bentuk  table  dengan  melakukan  pengamatan  terhadap larva artemia.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Organoleptis Setelah ditiriskan didapatkan sampel dengan  pemerian  berupa  bulat-bulat  seperti  anggur berwarna  hijau,  tekstur  kenyal  dan  berlendir,  serta berbau  amis  seperti  ikan.  Gambar  anggur  laut  yang dijadikan sampel penelitian ditunjukan pada gambar 1.
Gambar 1 .   Anggur Laut
Sampel  lalu  disiram  dengan  ethanol  untuk  mengurangi pembusukan, dan kemudian dirajang halus untuk segera dilakukan proses ekstraksi (Handayani, 2016).
Hasil  ekstraksi  didapatkan  ekstrak  kental  anggur  laut (Caulerpa  racemosa)  sebanyak  425  gram  dari  20kg simplisia  sehingga  diperoleh  hasil  rendemen  ekstrak 2,12  %  dan  hasil  ekstrak  berwarna  hijau  kecoklatan dengan  aroma  amis  dan  rasa  asin.  Menurut  (Iswani, 2007),  persentase  rendemen  yang  dihasilkan  dari ekstraksi  makroalga  dengan  menggunakan  pelarut etanol berkisar 2-3%.
Hasil  pengujian  kadar  air  pada  ekstrak  anggur  laut sebesar  19,87%.  Hasil  tersebut  tidak  jauh  berbeda dengan  kadar  air  pada  anggur  laut  khas  Maluku
(Kepulauan Kei) dengan jenis Caulerpa lentilifera yaitu berkisar 8,82-19,22% (Topatubun, 2018).
Hasil  yang  diperoleh  pada  uji  kadar  abu  sebesar 16,91%.Menunjukkan  bahwa  hasil  kadar  abu  pada anggur   laut   cukup   tinggi   sehingga menandaka s n anggur      laut     jenis     Caulerpa racemosa mm emiliki unsur mineral yang cukup banyak. Hal ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh (Topatubun, 2018) kadar abu anggur laut jenis Caulerpa lentilifera yang diperoleh dari perairan Kei Maluku yaitu 41,83%.
Hasil dari identifikasi skrinning fitokimia yang dilakukan didapatkan  bahwa  ekstrak  kental  anggur  laut mengandung alkaloid, flavonoid, terpenoid dan saponin. Hasil  uji  BSLT  ekstrak  ethanol  anggur  laut  Caulerpa racemosa disajikan pada Tabel 1. Dari tabel dapat dilihat bahwa  persentase  kematian  larva  Artemia  salina semakin meningkat seiring dengan kenaikan konsentrasi ekstrak.  Berdasarkan  nilai  persen  kematian  yang diperoleh  dari  Tabel  1.  Dapat  dilihat  bahwa  semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka semakin besar tingkat kematian larva udang.
Tabel 1.
Hasil  Pengujian  Ekstrak  Anggur  Laut dengan  Metoda  Brine  Shrimp  Lethality Test Konsentrasi (%) Ppm Log (Ppm) Probit % Kematian Mortalitas 0,001 10 1 3,72 10% 3 0,01 100 2 4,26 23% 7 0,1 1000 3 4,82 43% 13
Berdasarkan  data  diatas  dapat  dibuat  grafik  antara konsentrasi  sampel  vs  persen  inhibisi  seperti  pada gambar  2.  Berdasarkan  kategori  toksisitas  yang dikemukakan  didalam  jurnal  Meyer  et  al,  tahun  1982 yang membagi tiga kategori toksisitas berdasarkan nilai LC50, yaitu sangat toksik dengan nilai LC50 < 30 ppm, toksik dengan nilai LC50 30-1000 ppm dan tidak toksik dengan nilai LC50 > 1000 ppm (Meyer et al, 1982).
Gambar 2. Grafik  Nilai  Probit  terhadap  Log Konsentrasi dari Ekstrak Anggur Laut
Dalam  grafik,  masing-masing  dicari  nilai  probitnya  dan dianalisis  menggunakan  analisis  regresi  linier  sehingga diperoleh persamaan regresi y = 0,550x + 3,167 dengan r  =  0,999.  Parameter y  menunjukan  angka  probit  dan parameter menunjukan log konsentrasi ekstrak ethanol. Setelah  dimasukan  nilai  y  sebesar  5  ke  persamaan tersebut maka diperoleh nilai x sebesar 3,333. Maka dari angka ini dapat ditentukan LC50 yang merupakan antilog dari  nilai  x,  yaitu  sebesar  2.154,43  ppm.  Berdasarkan dari  penelitian  (Meyer  et  al.,  1982)  suatu  ekstrak menunjukkan  aktivitas  ketoksikan  dalam  uji  sitotoksik jika  ekstrak  dapat  menyebabkan  kematian  50%  pada hewan uji pada konsentrasi <1000 ppm.

## KESIMPULAN
Ekstrak  ethanol  anggur  laut  Pantai  Terih,  Nongsa Kepulauan  Riau  tidak  mempunyai  aktivitas  sebagai antikanker dengan nilai LC50 sebesar 2.154,43 ppm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kami  ucapkan  kepada  INSTITUT KESEHATAN  MITRA  BUNDA  atas  selesainya penelitian kami.

## REFERENSI
Carballo,  J.L.,  Inda,  Z.L.H,  Perez,  P,  dan  Gravalos, M.D.G. 2002. A Comparison Between Two Brine  Shrimp  Assays  to  Detect  In  Vitro Cytotoxicity  in  Marine  Natural  Products. BMC Biotechnology 2 (17) : 1-5
Dachriyanus.,  Oktima.W,  dan  Stanias  J.  2005.  1,7- dihidroksixanton,  Senyawa  Sitotoksik  dari Kulit  Batang  Garcinia  griffitii. Journal
Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam:
14(1). Hal: 17-21.
Fajarningsih, N.D., Januar, H.I, Nursid, M dan Wikanta, T. 2006. Potensi Antitumor Ekstrak Spons Crella  papilata  Asal  Taman  Nasional  Laut Kepulauan  Seribu. Jurnal  Pascapanen  dan Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan :  Vol  1 (1): 35-41.
Hainil, Sri, Sammulia, S. F., Mitra, K., & Laut, A. 2021.
Aktivitas Antibakteri Staphyloccocos aureus  dan  Salmonella  thypi  Ekstrak Metanol Anggur Laut (Caulerpa racemosa ) Antibacterial Activity Staphyloccocos aureus And Salmonella typhi Sea Grapes.
Handayani,  D.,  Handayani,  C.,  &  Krisyanella,  K.  2016. Isolasi  Senyawa  Kimia  Utama  Dari  Fraksi Aktif  Sitotoksik  Spon  Laut  Petrosia  sp (MN05). Jurnal Farmasi Higea: 4(1), 24-30.
Iswani,  S.  (2007).  Proses  preparasi  ekstraksi  kasar (crude  extract)  etanol  dari  makroalga untuk  uji  farmakologi.  Buletin  Teknologi Penelitian Akuakultur 6:57-60.
Khan, Ali, M.A., Prasanta Paul, P., and Islam, M.T. 2006.
Phytochemical and pharmacological screening of Shingra (Cynometra ramiflora Linn., Family: Leguminosae) bark based on its  traditional  uses.  Department  of Pharmacy Southern University.
Mayefis,  D.,  Hainil,  S.,  &  Sari,  N.  2021.  Aktivitas Sitotoksik  Ekstrak  Spons  Laut  Natuna dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test ( BSLT ). 11(1), 56–61.
Melati, P. 2021. Uji Aktivitas Antioksidan, Sitotoksisitas Dan  Gc-Ms  Ekstrak  Metanol  Alga  Hijau Boergesenia  Forbesii  (Harvey)  Feldmann Dari  Pantai  Panjang  Bengkulu. Jurnal Pengelolaan Laboratorium Sains Dan Teknologi : 1(1), 10–24.
Meyer, B.N., Ferrigni, N.R., Putnam, J.E., Jacobsen, L.B., Nichols,  D.E,  and  Mc  Laughlin,  J.L.,  1982,

## Analisa Probit dan Kalkulasi LC 50
5
4,5 4 3,5 y = 0.55x + 3.1667 R² = 0.9999
Probi t 3 1 1,5 2 Log ppm
2,5 3
Brine  Shrimp:  A  Convenient  General Bioassay  for  Active  Plant  Constituents, Planta Medica, 45(05), 31-34.
Purwanto,  N.,  Rismawati,  E.,  &  Sadiyah,  esti  R.  2015. Ujiitotoksik  ekstrak  biji  salak  (Salacca zalacca (Gaert) Voss dengan menggunakan metode Brine Shrimp  lethality  test (Bslt). Prosiding  penelitian  SPeSIA  Unisiba prodi farmasi FMIPA : 616–622 Sukmarianti, N. W. S., Suaniti, N. M., & Swantara,
Tapotubun  AM.  2018.  Komposisi  kimia  rumput  laut Caulerpa  lentillifera  dari  Perairan  Kei Maluku  dengan  metode  pengeringan berbeda .  Jurnal  Pengolahan  Hasil  Perikanan Indonesia : 21(1): 13-2