## EFEKTIFITAS EKSTRAK DAUN KEMBANG BULAN (Tithonia diversifolia) TERHADAP GAMBARAN HISTOPATOLOGI PANKREAS PADA TIKUS YANG DIINDUKSI ALOKSAN
Rondius Solfaine 1 , Dian Ayu Kartika Sari 1 , Anisa Novia Wati 1 , Roeswandono 1 *
1 Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Wijaya Kusuma Surabaya *Email : atmajaros@uwks.ac.id

## Abstract
This study was conducted to determine the histopathological picture of the pancreas by induction of alloxan and extracts of the moon flower (tithonia diversifolia) in wistar rats (rattus norvegicus). A total of 24 male Wistar rats with 4 treatments were control P0, alloxan P1 with 1% CMC Na, P2 alloxan with 100mg / kgBB extract, alloxan P3 with 200mg / kgBB extract. Mice after said diabetes mellitus with a number> 135 mg / dL were then given treatment with 1% CMC Na on P1 and lunar leaf extract at P2 and P3, necropsy was carried out on the 15th day and the pancreatic organs were taken to be made in the form of preparations with coloring. HE, lesions observed Degeneration, Inflammatory Cells and Necrosis using a microscope, the results were analyzed using Kruskal wallis followed by Mann withney. The data obtained by degeneration in the kruskal wallis test were very significantly different because there were significant differences (P = 0.01), inflammation cells in the Kruskal wallis test were very significantly different because there were significant differences (P = 0.00), and for necrosis in the Kruskal wallis test significantly different because there are significant differences (0.02).
Keywords : Alloxan, Extracts of the moon flower (Tithonia diversifolia), Pancreas Histopathology, Wistar rat.

## PENDAHULUAN
Suatu  gangguan  karbohidrat,  lipid  dan protein  dengan  berbagai  penyebab  penyakit kronik  yaitu  Diabetes  Mellitus  (Wisudanti, 2016). Pada penderita diabetes mellitus terlihat gejala  khasnya  yaitu  poliuria,  polidipsi  dan polifagia,  yang  disertai  hasil  pemeriksaan glukosa  darah  sewaktu  lebih  dari  200  mg/dL atau glukosa darah puasa lebih dari 126 mg/dL. Kerusakan  yang dapat disebabkan oleh infeksi virus, reaksi autoimun berupa serangan antibodi terhadap sel-sel β, zat diabetogenik (Stroptozotosin,  Aloksan),  toksisitas  glukosa, kegemukan dan faktor genetik. Kerusakan yang disebabkan  oleh  virus,  autoimun  dan  zat diabetogeneik  dapat  menyebabkan  Diabetes Mellitus tipe 1 (Madihah dkk, 2016).
Hiperglikemia  yang  terjadi  terus  menerus mengindikasikan terjadinya Diabetes Mellitus. Sejalan dengan perkembangan zaman, pemberian  pakan  dan  pola  pemeliharaan  juga berubah. Kucing diberi pakan siap saji, camilan dari pemilik seperti coklat, sehingga berpengaruh sebagai pemicu Diabetes Mellitus.
Kejadian  Diabetes  Mellitus  pada  kucing  di Inggris  dilaporkan  sangat  tinggi  yaitu  1  ekor dari  200  ekor  populasi  kucing.  Faktor  pemicu diabetes  mellitus  pada  kucing  di  Inggris dilaporkan karena terjadinya obesitas, kurangnya  latihan  (terutama  pada  kucing rumah),  dan  umur  terutama  pada  kucing yang  lebih  tua  (Fitriani  dkk,  2016). Keadaan ini terjadi akibat ketidakseimbangan antioksidan dalam tubuh sedangkan tubuh tidak mempunyai  sistem  pertahanan  antioksidatif yang berlebihan sehingga membutuhkan antioksidan  eksogen  sebagai  penghambat kerusakan oksidatif dalam tubuh (Dewi, 2018). Penggunaan obat-obat hipoglikemik dapat menyebabkan beberapa efek samping. Berbagai efek  samping  obat  kimia  sintetik  yang memerlukan biaya yang relatif mahal menyebabkan pengobatan tradisional mendapat tempat  dimasyarakat  dan  menjadi  alternatif pengobatan.  Salah  satu  tumbuhan  yang memiliki potensi obat adalah tanaman kembang bulan  ( Tithonia  diversifolia ).  Kembang  bulan secara tradisional digunakan sebagai obat sakit perut,  kembung,  diare,  dan  anti  radang  atau antiinflamasi. Bagian tanaman kembang bulan
yang  dimanfaatkan  sebagai  sumber  zat  kimia adalah daun, akar, batang, buah, dan biji. Daun kembang bulan mengandung senyawa alkaloid, terpenoid, flavonoid, saponin, tanin, polifenol, dan  golongan  seskuiterpen.  Pembuatan  daun kembang bulan ( Tithonia diversifolia ) menjadi bentuk  ekstrak  dengan  menggunakan  pelarut etanol  dikarenakan  etanol  dapat  mengikat senyawa-senyawa  kimia  dalam  daun  yang bersifat  polar  misalnya  flavonoid,  flavonoid adalah senyawa polar karena mempunyai gugus hidroksil atau gula sehingga dapat larut dalam pelarut  polar  seperti  etanol,  metanol,  aseton, dimetilsulfoksida dan air (Oktaria, 2013).
Sebagai  salah  satu  kelenjar  endokrin, pankreas  bertanggung  jawab  dalam  mengatur kadar glukosa darah. Perubahan kadar glukosa dalam  plasma  mengakibatkan  penyesuaian sekresi  insulin  untuk  mengembalikan  kadar glukosa  darah  pada  rentang  yang  normal. Insulin  merupakan  hormon  anabolik  utama yang  meningkatkan  cadangan  energi  (Erwin, 2013). Untuk mengetahui gambaran histopatologi yang terjadi pada organ pankreas tikus  wistar  setelah  pemberian  aloksan  dan ekstrak  daun  kembang  bulan  ( Tithonia diversifolia ) belum diketahui secara pasti, oleh karena itu perlunya penelitian lebih lanjut untuk menjawab pertanyaan tersebut.
Tikus putih memiliki beberapa keuntungan sebagai  hewan  uji  penelitian  diantaranya perkembangbiakan  cepat,  mempunyai  ukuran yang lebih besar dari mencit, mudah dipelihara dalam jumlah yang banyak. Ciri-ciri dari tikus putih  ( Rattus  norvegicus )  adalah  seperti  tikus pada  umumnya,  namun  pada  umumnya  tikus putih  ( Rattus  norvegicus )  mempunyai  warna albino,  kepala  kecil  dan  ekor  yang  lebih panjang dibandingkan badannya, pertumbuhannya  cepat,  temperamennya  baik, kemampuan  laktasi  tinggi  dan  tahan  terhadap arsenik tirosid (Akbar, 2010).
Aloksan  digunakan  untuk  menginduksi diabetes  pada  hewan  model  diabetes  seperti kelinci,  tikus,  mencit  dan  anjing.  Pada  hewan coba, aloksan menginduksi respon keseimbangan  kadar  glukosa  dalam  darah sehingga  akan  mempengaruhi  konsentrasi plasma  darah  yang  diikuti  dengan  perubahan struktur  pada  sel  β  pankreas  dan  dapat menimbulkan kematian sel (Rohilla,dkk. 2012). Tingkat  keparahan  penyakit  diabetes  yang ditimbulkan  aloksan  bisa  diatur  dengan
memvariasikkan  dosis  aloksan  yang  diberikan pada hewan coba (Etuk, 2010).
Tingginya  konsentrasi  aloksan  tidak mempunyai pengaruh pada jaringan percobaan lainnya.  Mekanisme  aksinya  menimbulkan perusakan  selektif  sel  beta  pankreas  belum diketahui  dengan  jelas.  Efek  diabetogeniknya bersifat  antagonis  terhadap  glutathion  yang bereaksi dengan gugus SH.
Daun  kembang  bulan  ( T.  diversifolia ) mengandung  flavonoid,  glikosida,  saponin, tanin  dan  steroid  menurut  hasil  skrining fitokimia oleh Purba (2003). Menurut Taofik et al. (2010),  ekstrak  air  daun  kembang  bulan mengandung  flavonoid,  alkaloid,  dan  tanin. Tanin memiliki aktivitas hipoglikemik dengan meningkatkan glikogenesis (Dalimartha, 2005). Saponin mempu menghambat GLUT-1 sehingga menurunkan absorbsi glukosa (Blasiak et  al .,  2003).  Flavonoid  sebagai antioksidan dapat melindungi kerusakan progresif sel ß pankreas karena stress oksidatif sehingga dapat menurunkan DM tipe 2 (Song et al ., 2005).
Diabetes  Mellitus  (DM)  adalah  suatu kelompok  penyakit    metabolik  dengan karakteristik hiperglikemia yang terjadi karena kelainan  sekresi  insulin,  gangguan  kerja insulin,  atau  keduanya  yang  menimbulkan berbagai  komplikasi  kronik  pada  mata,  ginjal, syaraf dan pembuluh darah (PERKENI, 2011). Menurut American  Diabetes  Association (2015),  DM  merupakan  suatu  penyakit  kronis komplek yang membutuhkan perawatan medis yang  lama  atau  terus  menerus  dengan  cara mengendalikan  kadar  gula  darah  untuk mengurangi resiko multifaktoral.
Pankreas  tikus  terletak  di  samping duodenum,  memanjang  dari  lambung menuju  limpa  (Dolensek,  J.,  dkk.  2015). Pankreas  merupakan  organ  tubuh  yang istimewa  yang  memiliki  fungsi  ganda sebagai kelenjar eksokrin dan endokrin.

## MATERI DAN METODE
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium  Hewan  Coba  FK  Unair, Laboratorium Farmakologi FKH Universitas
Airlangga, Laboratorium
Patologi  Anatomi  Fakultas  Kedokteran UGM  dan  Laboratorium  Patologi  FKH Universitas  Wijaya  Kusuma  Surabaya.
Jurnal Vitek Bidang Kedokteran Hewan Vol.11 No.1, Mei 2021
Penelitian  ini  berlangsung  dari  bulan Maret-April 2020.
Penelitian  ini  adalah true  experimental laboratories dengan Rancangan Acak Lengkap (RAL)  dengan  teknik  pengambilan  sampel dilakukan  secara  random/  acak  dengan  4 perlakuan.  Daun  Kembang  Bulan  ( Tithonia diversifolia ) yang akan di ekstrakkan sebanyak 500g dalam keadaan kering. Kemudian digiling untuk  menjadi  dalam  bentuk  serbuk.  Serbuk tersebut  di  maserasi  dengan  menggunakan larutan  etanol  96%  .  Penambahan  larutan maserasi dilakukan berkali-kali sampai terlihat larutan bening. Larutan hasil maserasi disaring menggunakan  kapas  dan  kertas  saring, kemudian filtrate yang diperoleh, dikumpulkan dan  dikentalkan  dengan  menggunakan  alat penguap  berputar  ( rotary  evaporator )  yang dilengkapi  penangas  air  dan  pompa  vakum dengan  temperatur  penangas  60°C  sampai bebas  etanol.  Ekstrak  daun  kembang  bulan yang diperoleh diencerkan dengan CMCNa 1% setelah  itu  diberikan  pada  tikus  sesuai  dengan perlakuan.  Proses  maserasi  dilakukan  di Laboratorium Farmakologi FKH Unair.
Pemberian  ekstrak  daun  kembang  bulan ( Tithonia diversifolia ) pada tikus wistar secara peroral  selama  tujuh  hari.  Langkah  yang dilakukan pertama di mulai dengan pengambilan  ekstrak  dengan  sonde  yang ujungnya terbuat dari karet, untuk mengencerkan  ekstrak  Daun  Kembang  Bulan ( Tithonia  diversifolia )  dengan  menggunakan larutan CMC Na 1%.
Aloksan  terbukti  dapat  menimbulkan diabetes  melitus  dengan  cara  merusak  sel  β pankreas  sehingga  pankreas  tidak  dapat menghasilkan  insulin  yang  cukup.  Dosis Aloksan yang diberikan setiap tikus percobaan dari  P1,  P2  dan  P3  diberikan  dosis  100 mg/kgBB. Pembuatan aloksan dengan ditambahkan  aquadest  injeksi  karena  nantinya zat  diabetogenik  tersebut  akan  disuntikkan secara  intraperitoneal.  Berat  tikus  yang digunakan  dalam  penelitian  adalah  150g sampai  200g,  dibawah  ini  contoh  perhitungan dosis aloksan, jika berat tikus 200g maka dosis perekor tikus sebesar 200 g= 0,2 kg, maka 100 mg/kgBB X 0,2kg = 20 mg (perekor tikus) pada P1,  P2  dan  P3  di  berikan  aloksan  selama  tiga hari  secara  intraperitoneal  dan  diberikan ekstrak daun kembang bulan secara per oral.
Tikus berumur dua sampai tiga bulan dan berat  badan  150-200  gram  sebanyak  24  ekor, yang  dikelompokkan  dalam  4  kelompok  yang dilakukan  selama  empat  belas  hari.  Macam perlakuan sebagai berikut:
P0=  Diberikan  aquades  setiap  hari  secara  per oral (kontrol).
P1= Diberikan aloksan 100 mg/kgBB per tikus secara peritoneal pada hari ke 1 sampai hari ke 7. Kemudian dihari ke 8-14 diberikan suspensi CMC Na 1%.
P2= Diberikan aloksan 100 mg/kgBB per tikus secara peritoneal pada hari ke 1 sampai hari ke 7. Kemudian di hari ke 8 sampai hari ke 14 di berikan  ekstrak  daun  kembang  bulan  dengan dosis 100 mg/kg BB.
P3= Diberikan aloksan 100 mg/kgBB per tikus secara peritoneal pada hari ke 1 sampai hari ke 7. Kemudian di hari ke 8 sampai hari ke 14 di berikan  ekstrak  daun  kembang  bulan  dengan dosis 200 mg/kg BB.
Pada pemberian aloksan hanya di lakukan pada  hari  ke  1  setelah  itu  di  tes  gulanya menggunakan alat cek gula darah atau disebut blood glucose meter. Berdasarkan Wolfenshon and Lloyd, (2013) kadar gula darah normal 50- 135 mg/dL dan dikatakan terkena diabetes lebih dari  150  mg/dL.  Terdapat  juga  menurut Oktaria, (2013) tikus atau hewan lain dikatakan diabetes dengan kadar gula darah lebih dari 200 mg/dL.
Empat  belas  hari  setelah  perlakuan, dilakukan pembedahan secara laparatomi pada tikus  yang  telah  dinekropsi  dan  dieutanasi dengan ether secara inhalasi dengan cara setiap interval  5  menit  suntikan  0,2  ml  eter  kedalam kapas  kemudian  masukkan  kapas  tersebut kedalam aquarium kecil yang tertutup dan tikus dimasukkan  kedalamnya  dan  lakukan  setiap  5 menit  sampai  semua  tikus  mati  (Yanti  dkk, 2015).  Mengambil  organ  pankreasnya.  Organ yang  diperoleh  kemudian  difiksasi  kedalam Buffer  Neutral  Formalin  (BNF)  10%  sebelum akhirnya  dibuat  preparat  histopatologi  dengan pewarnaan Hematoxyline  Eosin (HE)  untuk pemeriksaan secara mikroskopik.
Metode  skoring  yang  diamati  dalam perubaan  histopatologi  dilihat  dari  derajat kerusakan  pada  jumlah  dari  semua  jenis  lesi yang terjadi, kerusakan tersebut di berikan skor dari  0  hingga  10.  Data  tersebut  diperoleh  dari gambaran histopatologi yang dianalisis dengan
Jurnal Vitek Bidang Kedokteran Hewan Vol.11 No.1, Mei 2021
mikroskop cahaya oleh ahli patologi (Solfaine, 2019).
Lesi-  lesi  yang  diamati  berdasarkan parameter yang akan di teliti antara lain yaitu:

## Degenerasi
Dikategorikan dalam lima skala antara lain yaitu :
a) Skor  0  :  jika  tidak  ditemukan perubahan degeneratif
b) Skor  1:  jika  jumlah  sel  degeneratif dengan  derajat  kerusakan  (<  1-25%) dari seluruh LP (Lapang Pandang).
c) Skor  2:  jika  jumlah  sel  degeneratif dengan  derajat  kerusakan  (26-50%) dari seluruh LP ( Lapang Pandang).
d) Skor 3: jika jumlah sel dengan derajat kerusakan (51% - 75%) dari seluruh LP (Lapang Pandang).
e) Skor  4:  jika  jumlah  sel  degeneratif    > 76 dari seluruh LP

## Nekrosis
Dikategorikan  dalam  5  skala  antara  lain yaitu :
a) Skor  0  :  tidak  terjadi  perubahan nekrotik
b) Skor 2 : jika jumlah sel nekrotik < 25% dari seluruh LP.
c) Skor 4 : jika jumlah sel nekrotik antara 26%-50% dari seluruh LP.
d) Skor 6 : jika jumlah sel nekrotik antara 51% – 75% dari seluruh LP.
e) Skor  8  :  jika  jumlah  sel  nekrotik 76% dari seluruh LP.

## Sel Radang
Dikategoriakan  dalam  5  skala  antara  lain yaitu :
a) Skor 0 : jika tidak ditemukan sel radang pada seluruh ruang interstitial pankreas.
b) Skor  1  :  jika  jumlah  sel  radang  <  10
pada seluruh ruang interstitial pankreas.
c) Skor  2  :  jika  jumlah sel  radang  antara
11-50  pada  seluruh  ruang  interstitial pankreas.
d) Skor  3:  jika  jumlah  sel  radang  antara
51-100  pada  seluruh  ruang  interstitial pankreas.
e) Skor  4 :  jika jumlah sel  radang  >  100
pada seluruh ruang interstitial pankreas.

## HASIL
Berdasarkan hasil penapisan fitokimia ekstrak  daun  kembang  bulan  (Tithonia diversfolia) kandungan flavonoid, saponin, tanin, sesquerterpen dapat di lihat di tabel 1
Tabel  1. Hasil  analisis  kandungan  senyawa flavonoid,  saponin,  tanin  dan  sesquerterpen data dianalisis secara kuantitatif.
Senyawa Kandun gan % Flavonoid 2,86% Saponin 2,10% Tanin 4,03% Sesquerte 1,98% Tabel 2. Kadar Gula Darah Saat Diinduksi Aloksan .
Tabel  3 Persentase  (%)  hasil  skoring pemeriksaan  histopatologi  kelompok  kontrol, perlakuan I, perlakuan II, perlakuan III.
Data  skoring  diatas  telah  didapatkan, kemudian  akan  dibuat  diagram  batang untuk  diamati  tiap  derajat  kerusakan  agar mempermudah  dalam  menganalisis  tiap perubahan lesi yang terjadi.
Perlakua n Rata-rata ±Std. Deviation Rata- rata±Std. Deviation P0 111.1 ±17.371  85.64±20.47 1 P1 328.8±144.46 5 150.1±49.42 2 P2 240.5±159.42 5 87.17±8.819 P3 313.6±164.01 8 82.33±7.967 Total 248.5±153.96 2 101.3±38.54 2 Kelompok Degenerasi Sel Radang Nekrosis P0 0% 100% 100% P1 100% 100% 100% P2 100% 100% 100% P3 100% 82.5% 100%
Gambar 1. Diagram persentase Scoring Organ Pank reas Setelah dilakukan perlakuan kontrol, P1, P2 dan P3.
Tabel 4 Uji Kruskal Wallis , degenerasi. Perlakuan Mean  ±Standar Deviasi P0 .00      ± .000ᵃ P1 4.00    ± .000ᵇ P2 3.33    ± .816ᵇ P3 3.17    ± .753ᶜ Total 2.63    ± 1.6633
Keterangan :
Apabila  nilai  Sig  P>0.05,  maka  tidak  ada perbedaan antar perlakuan. Apabila nilai sig. < 0.05, maka terdapat berbedaan yang signifikan pada rata- rata  peradangan  antar  kelompok  kontrol  dengan perlakuan.  Berdasarkan  pengujian  yang  dilakukan pada  uji  untuk  degenerasi  nilai  Sig  0,001  maka (P<0,001)  maka  terdapat  perbedaan  yang  sangat signifikan antar perlakuan, atau dapat di simpulkan jika P0 kontrol dengan Perlakuan ada perbedaan, P0 dengan P1 berbeda, P1 dengan P2 tidak berbeda, P2 dengan  P3  berbeda.  Sehingga  H0  di  tolak  dan  H1 diterima.  Untuk  mengetahui  perbedaan  yang  lebih signifikan dilanjutkan dengan uji Mann- Whitney.
Tabel 5. Uji Krustal Wallis , Sel radang
Perlakuan Mean  ±Standar Deviasi P0 1.33    ± .516ᵃ P1 4.00    ± .000ᵇ P2 4.00    ± .000ᵇ P3 3.33    ± .516ᵇ Total 3.17    ± 1.167
Kerterangan:
Apabila  nilai  Sig  P>0.05,  maka  tidak  ada perbedaan  antar  perlakuan.  Apabila  nilai  sig. P<0.05,  maka  terdapat  berbedaan  yang signifikan  pada  rata-rata  peradangan  antar perlakuan  kontrol  dan  perlakuan.  Berdasarkan pengujian  yang  dilakukan  pada  uji  untuk  sel radang  nilai  Sig  0,000  maka  (P<0,001)  maka terdapat perbedaan yang sangat signifikan antar perlakuan.  Atau  daat  disimpulkan  P0  kontrol dengan  P  perlakuan  berbeda,  tetapi  antar perlakuan tidak berbeda.. Sehingga H0 di tolak dan H1 diterima. Untuk mengetahui perbedaan yang  lebih  signifikan  dilanjutkan  dengan  uji Mann- Whitney.
Tabel 6. Uji Krustal Wallis , Nekrosis Perlakuan Mean  ±Standar Deviasi P0 .00      ± .000ᵃ P1 7.33    ± 1.033ᵇ P2 7.00    ± .1.095ᵇ P3 6.67    ± .1.033ᵇ Total 5.25    ± 3.220 Keterangan:
Apabila  nilai  Sig  P>0.05,  maka  tidak  ada perbedaan  antar  perlakuan.  Apabila  nilai  sig. P<0,05,  maka  terdapat  berbedaan  yang signifikan antar perlakuan. Berdasarkan pengujian  yang  dilakukan  pada  uji  untuk nekrosis  nilai  Sig  0,002  maka  (P<0,05)  maka terdapat perbedaan yang signifikan apada rata- rata  peradangan  antar  kelompok  kontrol  dan kelompok  perlakuan,  atau  dapat  disimpulkan P0 dengan antar perlakuan berbeda tetapi antar perlakuan tidak berbeda. Sehingga H0 di tolak dan H1 diterima. Untuk mengetahui perbedaan yang  lebih  signifikan  dilanjutkan  dengan  uji Mann- Whitney.

## Gambaran Histopatologi Pankreas
Berikut  adalah  gambaran  histopatologi pankreas  tikus  wistar  ( rattus  norvegicus ) percobaan yang diinduksi aloksan dan ekstrak daun  kembang  bulan  ( Tithonia  diversifolia ) dengan  pewarnaan  HE  ( Haematoxylin  Eosin ) pada kelompok perlakuan P0, P1, P2, P3.
0% 50% 100% P0 P1 P2 P3 P er sent a se (%) Perlakuan

## Diagram Persentase
Scoring Degenerasisel radang
Sel radang
Nekrosis
Gambar  1. Gambaran  Histopatologi  pankreas pada kelompok kontrol yang menunjukkan (a) pulau langerhans normal ( Haematoxylin Eosin : 40X).
Gambar  2 Gambaran  histopatologi pankreas pada kelompok kontrol (P0) yang menunjukkan (b)  sel parenkim  normal  ( Haematoxylin eosin :40X).
Gambar  3. Gambaran  histopatologi  pankreas pada kelompok perlakuan (P2) yang menunjukkan    (a)  degenerasi.  ( Haematoxylin eosin : 40X).
Gambar  4. Gambaran  histopatologi  pankreas pada kelompok perlakuan (P1) yang menunjukkan  (a)  sel  radang.  ( Haematoxylin eosin : 40X).
Gambar  4. Gambaran  histopatologi pankreas  pada  kelompok  perlakuan  (P2) yang  menunjukkan  (a)  piknosis  (b)  sel yang mengalami regenerasi.
Gambar  5 Gambaran  histopatologi pankreas pada kelompok perlakuan (P2) yang  menunjukkan  (b)  karioreksis  (c) kariolisis .
a a a a a b

## PEMBAHASAN
Ekstraksi Daun Kembang Bulan ( Tithonia diversifolia ) Pada tabel 4.1 di data hasil terdapat besar persen senyawa flavonoid, saponin, tanin dan sesquerterpen. Menurut Chon et al (2000) yang memiliki peran antidiabetik atau antihiperglikemik  pada  kandungan  ekstrak daun  kembang  bulan  ( Tithonia  diversifolia ) yaitu flavonoid dan suskuiterpen. Dimana dari hasil  analisis  fitokimia  secara  kuantitatif  di dapatkan  senyawa  flavonoid  memiliki  nilai 2.86%  dan  suskuiterpen  memiliki  nilai  1.98% dimana nilai itu adalah nilai yang cukup besar, untuk  mengatasi  diabetes  melitus.  Fungsi  dari flavonoid  sendiri  diketahui  berperan  secara signifikan meningkatkan aktifitas enzim antioksidan dan mampu meregenerasi sel-sel β pankreas yang rusak sehingga defisiensi insulin dapat  diatasi.  Flavonoid  yang  terkandung  di dalam tumbuhan diduga juga dapat memperbaiki  daya  kerja  reseptor  insulin, sehingga memberikan efek yang menguntungkan pada keadaan diabetes mellitus (Eryuda, dkk., 2016).
Fungsi  seskuiterpen  yang  diisolasi  dari ekstrak  daun  kembang  bulan  ( Tithonia diversifolia )  memiliki  daya  sebagai  agen fitoterapik melawan infeksi bakteri pada organ (Pradeep  et  al.,  2010).  Seskuiterpen  yang diisolasi  dari  tanaman  menunjukkan  aktivitas penghambat  α-glukosidase  yang  signifikan (Choudhary,  2001).  Seskuiterpen  juga  bisa menghambat  ekspresi  induksi  glukosa  tinggi pada inflamasi sitokinin pada sel mesangial.
Pada  tabel  1  juga  diketahui  nilai senyawa  dari  tanin  dan  saponin,  dimana  nilai tanin  4.03%  dan  saponin  2.10%.  fungsi  tanin sebagai  penghambat    α-glukosidase  yang bermanfaat  untuk  menunda  absorpsi  glukosa setelah  makan  sehingga  menghambat  kondisi hiperglikemia postprandial. Enzim α- glukosidase  meliputi  maltese,  isomaltase, sukrase, laktase, dan α-dekstrinase.
Karbohidrat  akan  dicerna  oleh  enzim  didalam mulut  dan  usus  menjadi  gula  yang  lebih sederhana  yang  kemudian  akan  diserap kedalam  tubuh  dan  meningkatkan  kadar  gula darah (Eryuda, 2016).
Saponin sendiri memiliki kecenderungan  melepaskan  insulin  dari  sel  β pankreas  dan  memiliki  kemampuan  untuk
melindungi  sel  β  pankreas  dan  membuat besarnya  degranulasi  dari  insulin  berkurang sedikit  dari  yang  sebelumnya  dan  saponin secara  signifikan  memperbaiki  gejala  klinik dari  diabetes  termasuk  kadar  glukosa  darah yang  tinggi  dan  menyerupai  mekanisme  kerja penghambat  enzim  α-glukosidase  (Anwar, 2016).

## Kosentrasi Gula Darah
Kadar gula darah normal tikus menurut Wolfenshon  dan  Lloyd,  (2013)  kadar  gula darah  normal  50-135mg/dL  dan  dikatakan terkena diabetes mellitus lebih dari 150 mg/dL. Pada tikus uji rerata kadar gula darah pada tikus uji  setelah  diberikan  perlakuan  aloksan 100mg/kgBB  P1  (328.8),  P2  (240.5),  P3 (313.6)    pada  pemberian  zat  diabetogenik aloksan  menunjukkan  kadar  gula  darah  tikus meningkat melebihi 135mg/dL sehingga dapat dikatakan tikus uji mengalami diabetes mellitus sedangkan  untuk  perlakuan  setelah  diberikan ekstrak  mengalami  penurunan  sehingga  P1 (158,6),  P2  (87,7),  P3  (82,3)  pada  pemberian ekstrak  mengalami  penurunan  gula  darah hingga dibawah 135mg/dL.

## Penilaian hasil histopatologi pankreas pada tikus hewan coba pada perlakuan P0,P1, P2,
P3.
Pada  tabel  2  adalah  rerata  scoring pemeriksaan  histopatologi  pankreas  tikus  uji yang  mana  diamati  lesi  -  lesinya  yaitu degenerasi, sel radang dan nekrosis.

## Degenerasi
Lesi degenerasi pada perlakuan P0 tidak di temukan  tetapi  di  perlakuan  P1,P2,  dan  P3 ditemukan degenerasi setelah diberikan perlakuan  dengan  aloksan  dan  daun  kembang bulan  ( Tithonia  diversifolia )  untuk  scor tertinggi perlakuan yang mengalami degenerasi adalah  P1  dengan  bobot  scor  4  dengan  nilai presentase (100%) dimana P1 adalah perlakuan yang diberikan aloksan 100mg/kgBB selama 7 hari  dan  CMC  Na  1%  selama  7  hari  setelah dikatakan  tikus  mengalami  diabetes  mellitus, untuk  P2  yang  mengalami  degenerasi  rerata nilai  scornya  3.3  dengan  nilai  presentase (100%)  dan  masih  terdapat  sel  normal  yang
ditemukan,  dimana  P2  ini  adalah    perlakuan yang  diberikan  aloksan  100mg/kgBB  dan Ekstrak  daun  kembang  bulan  100mg/kgBB setelah  dikatakan  hewan  uji  mengalami diabetes mellitus, kemudian P3 memiliki bobot scor terendah yaitu 3.1 dengan nilai presentase (100%)  dimana  P3  adalah  perlakuan  yang diberikan  aloksan  100mg/kgBB  dan  Ekstrak daun  kembang  bulan  200mg/kgBB.  Sehingga dapat  disimpulkan  untuk  degenerasi  yang paling  efektif  adalah  pemberian  ekstrak  daun kembang bulan 200mg/kgBB.
Pengamatan terhadap histopatologi pankreas difokuskan pada kejadian degenerasi, sel  radang  dan  nekrosis.  Pengamatan  pada kelompok  kontrol  tidak  ditemukan  degenerasi dan nekrosis, sedangkan sel radang ditemukan sedikit.  Kejadian  yang  parah  di  tujukan  pada perlakuan  P1  dengan  diberikan  aloksan 100mg/kgBB dengan CMC Na 1%. Degenerasi sendiri  adalah  degenerasi  hidropik  ditandai dengan  sitoplama  mengalami  vakuolisasi  dan vakuola  nampak  jernih  karena  sel  menerima cairan  lebih  banyak  dari  normalnya  dan terakumulasi di dalam sitoplasma sel sehingga sel membengkak, sedangkan degenerasi lemak adalah sebagai tanda keadaan resistensi insulin dan mengakibatkan terjadinya inflamasi melalui  aktivasi  beberapa  sitokin  (Istikhomah dan Lisdiana, 2015).

## Sel Radang
Lesi  Sel  radang  yang  paling  sedikit di temukan  adalah  pada  perlakuan  P0  dengan bobot  scor  rerata  1.1  yang  hanya  diberikan aquades  dan  makan,  P1  dan  P2  ditemukan banyak sel radang dan bobot scor paling tinggi di  pembuluh  darah  khususnya  dimana  P1 dengan  scor  4  dan  presentase  (100%)  adalah perlakuan yang diberikan Aloksan 100mg/kgBB dan CMC Na 1% dan P2 dengan scor 4 dan presentase (100%) adalah perlakuan yang  diberikan  aloksan  100mg/kgBB  dan ekstrak  daun  kembang  bulan  100mg/kgBB sedangkan pada P3 dengan scor sel radang yang di temukan memiliki bobot scor 3.3, dimana P3 adalah  perlakuan  yang  diberikan  aloksan 100mg/kgBB dan ekstrak daun kembang bulan 200mg/kgBB.
Nekrosis
Lesi Nekrosis pada perlakuan P0 tidak ditemukan adanya inti sel mengalami (piknosis, karioreksis  dan  kariolisis)  dimana  hanya diberikan  aquades  tanpa  perlakuan.  P1 menunjukkan  scor  yang  paling  tinggi  yang diberikan perlakuan aloksan 100mg/kgBB dan CMC Na1% dengan scor 7.3 dengan presentase (100%),  kemudian  untuk  P2  juga  terdapat jumlah  nekrosis  yang  tinggi  yang  scornya  7 dengan  presentase  (100%)  dimana  diberikan perlakuan  aloksan  100mg/kgBB  dan  ekstrak daun  kembang  bulan  200mg/kgBB,  kemudian untuk  P3  adalah  scor  paling  rendah  yaitu  6.6 dengan  presentase  (100%)  dengan  pemberian aloksan  100mg/kgBB  dan  ekstrak  daun kembang bulan 200mg/kgBB. Nekrosis adalah kematian  sel  atau  jaringan  dimana  inti  sel mengalami korioreksis, kariolisis, inti sel lebih padat  atau  piknosis (Palupi,  2012).  Penurunan pada  kelompok  P3  dengan  pemberian  ekstrak dosis 200mg/kgBB.
Setelah  pengobatan  dengan  ekstrak daun kembang bulan ditemukan degenerasi, sel radang dan nekrosis berkurang secara signifikan  (P<0.05)  terutama  pada  kelompok dosis  200mg/kgBB  dan  100mg/kgBB  adanya sel  asinar  pankreas  yang  tersebar  di  beberapa bagian  jaringan  pankreas  yang  menandakan terjadinya  proses  pembentukan  baru  sel  β pankreas. Pankreas tikus diabetes mellitus yang diinduksi  aloksan  memperlihatkan  adanya degenerasi,  sel  radang  daan  nekrosis  terutama pada  kelenjar  eksokrin,  pulau  langerhans,  dan disekitar  pembuluh  darah,  sedangkan  pada kelompok  pengobatan  dengan  ekstrak  daun kembang bulan kejadian tersebut lebih sedikit. Perbaikan  kerusakan  pankreas  diduga disebabkan oleh aktivitas senyawa aktif dalam ekstrak  daun  kembang  bulan  ( Tithonia diversifolia )  yaitu  flavonoid,  siskuiterpen, alkaloid,  saponin  dan  tanin.  Adanya  aktivias antiinflamasi senyawa flavonoid serta aktivitas antioksidan  dapat  mencegah  kerusakan  sel  β lebih  lanjut.  Alkaloid  di  dalam  ekstrak  daun kembang  bulan  berperan  meregenerasi  sel dengan  memulihkan  sel  β  pankreas  yang mengalami  kerusakan  parsial  (Palupi,  2012). Pulihnya  sel  beta  pankreas  diharapkan  akan memulihkan  fungsinya  dalam  memproduksi hormon insulin. Peningkatan jumlah insulin di dalam  tubuh  akan  meningkatkan  jumlah glukosa  darah  yang  masuk  kedalam  sel,
Jurnal Vitek Bidang Kedokteran Hewan Vol.11 No.1, Mei 2021
sehingga  terjadi  penurunan  kadar  glukosa darah.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dan pembahasan yang disampaikan dapat disimpulkan bahwa:
1.  Pemberian  induksi  aloksan  melalui  i.p
100mg/kgBB dan ekstrak daun kembang bulan
( Tithonia diversifolia )  100mg/kgBB dan 200mg/kgBB  memiliki  pengaruh  terhadap gambaran histopatologi degenerasi sel pankreas tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  dengan pewarnaan  HE.  Pemberian  ekstrak  daun kembang  bulan  mampu  menurunkan  jumlah kerusakan  degenerasi  dan  signifikasi  atau berbeda nyata pada setiap perlakuan dengan uji kruskal  wallis P0  dengan  semua  perlakuan berbeda,  P1  dengan  P2  tidak  berbeda, sedangkan P2 dengan P3 berbeda.
2.  Pemberian  induksi  aloksan  melalui  i.p
100mg/kgBB dan ekstrak daun kembang bulan
( Tithonia diversifolia )  100mg/kgBB dan 200mg/kgBB  memiliki  pengaruh  terhadap gambaran  histopatologi  sel  radang  pankreas tikus putih  ( rattus norvegicus ) dengan pewarnaan  HE.  Pemberian  ekstrak  daun kembang bulan mampu menurunkan jumlah sel radang  pada  pankreas  dan  signifikan  atau berbeda nyata pada setiap perlakuan dengan uji kruskal  wallis P0  dengan  semua  perlakuan berbeda tetapi antar perlakuan tidak berbeda.
3.  Pemberian  induksi  aloksan  melalui  i.p 100mg/kgBB dan ekstrak daun kembang bulan (  Tithonia  diversifolia)  100mg/kgBB  dan 200mg/kgBB  memiliki  pengaruh  terhadap gambaran  histopatologi  nekrosis  sel  pankreas tikus  putih  (Rattus  norvegicus)  dengan pewarnaan  HE.  Pemberian  ekstrak  daun kembang  bulan  mampu  menurunkan  jumlah kerusakan nekrosis dan signifikan atau berbeda nyata pada setiap perlakuan dengan uji kruskal wallis P0  dengan  antar  perlakuan  berbeda, tetapi antar perlakuan tidak berbeda.

## REFERENSI
Dewi, K. E. D. P., W. J. Abdul., F. Rell., 2018. Uji  Aktivitas  Pisang  Mas  (Musa Acuminata  (AA  Group)  Terhadap Penurunan  Kadar  Glukosa  Darah Mencit  (Mus  Musculus)  Yang  Di
Induksi  Aloksan .  As-Syifaa.  10(2): 191-205.
Eryuda,  F.,  T.U.  Soleha.,  2016. Ekstrak  Daun Kluwih (Arthocarpus Camansi) dalam  Menurunkan  Kadar  Glukosa Darah Yang Pada Penderita Diabetes
Mellitus . Majoriti. Lampung. 5(4).
Erwin, E., W.M.I. Tri., 2013. Ekspresi Insulin Pada Pankreas Mencit (Mus musculus) Di Induksi Dengan Streptozotocin Berulang . Jurnal Kedokteran Hewan. Yogyakarta. 7(2). Eryuda,  F.,  T.U.  Soleha.,  2016. Ekstrak  Daun
Kluwih (Arthocarpus Camansi) dalam  Menurunkan  Kadar  Glukosa Darah Yang Pada Penderita Diabetes
Mellitus . Majoriti. Lampung. 5(4).
Etuk,  E.U.  2010. Animal Model  for  Studyting Diabetes  Mellitus .  Agriculture  and Biology Journal of Istikhomah dan Lisdiana. 2015. Efek Hepatoprotektor Ekstrak Buah
Pedada  (Sonneratia  Caseolaris)  Pada Tikus  Putih  ( Rattus  norvegicus ). Unnes  Jurnal  of  Life  Science. Semarang. 1: 1-8.
Fitriani,  A.,  I.  N.  Suartha.,  Widyastuti,  S.K., 2016. Kasus  Diabetes  Mellitus  Pada Kucing  Lokal .  Indonesia  Medicus Veternus. Bali. 5(5): 407-414.
Madihah., F. Alfina., Y.Y. Gani., 2016. Kadar Glukosa  Darah  Dan  Gambaran Histologis  Pankreas  Mencit  (Mus Musculus L.) Yang Diinduksi Aloksan Setelah  Perlakuan  Ekstrak  Rimpang Temu  Mangga  (Curcuma  Mangga Val.) . Jurnal Biologi. 20(2): 64-68.
Oktaria, Y.E., 2013. Uji Aktivitas Antidiabetes Ekstrak  Etanol  Biji  Alpukat  (Persea Americana  Mill)  Terhadap  Tikus
Galur Wistar Yang Diinduksi Aloksan. [Makalah]. Surakarta: Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Palupi,  D.H.S.,  2012. Pengaruh  Fraksi  Etil Asetat  Buah  Labu  Siam  (Sechium Edule (Sacq.)Sw) Terhadap Regenerasi  Sel  Β  Pankreas  Pada Tikus  Diabetes  Yang  Diinduksi Aloksan . Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Yayasan Pharmasi. Semarang
Perkeni.  2011. Konsensus  Pengelolaan  Dan Pencegahan Diabetes Mellitus Tipe 2 Di  Indonesia 2011.  PB  Perkeni. Jakarta.
Rohilla, A., and Ali, S. 2012. Alloxan Induced Diabetes:  Mechanism  and  Effect .
International  Journal  Of  Research  In Pharmaceutical And Biomedical Science. 3(2). Solfaine, R., 2011. P atologi Veteriner Patogenesis  Dasar  Penyakit  Hewan . Proyeksi Indonesia. Sleman.
Solfaine, R., 2019. P atologi Veteriner
Patogenesis  Dasar  Penyakit  Hewan . Proyeksi Indonesia. Sleman.
Song,  Y.,  Joann,  E.  M.,  Jullie  E.B.,  Howard, D.S., Simin, L., 2005. Association of
Dietary  Flavonoids  With  Risk  of Type  2  Diabetes,  and  Markers  Of Insulin  Resistance  and  Systemic Inflammation In Woman: A Prospective Study and Cross- Sectional  Analysis. Journal  of  The American  College  Of  Nutrition . 25(5).
Wolfenshn, S., dan Llpyd, M. 2013. Handbook of  Laboratory  Animal,  Management and Walfare, 4th ed. Wiley- blackwell. West sussex. 234.
Yanti,  A.R.,  I.  Rachmawati.,  N.A.  Fentami.,
2015. Petunjuk Praktikum Farmakologi . Esa Unggul. Jakarta.