Journal homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/edubiosfer
AKTIVITAS ENTOMOPATOGEN Serratia marcescens Bizio TERHADAP MORTALITAS LARVA KUMBANG KELAPA ( Brontispalongissima )  Gestro Siti Ramla S Kahar a , Ani M. Hasan a , Chairunnisa J. Lamangantjo a
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika Ilmu Pengetahuna Alam, Universitas Negeri Gorontalo, Jl. Jenderal Sudirman, No. 06 Kota Gorontalo- 96128, Provinsi Gorontalo, Indonesia.
Sitiram355@gmail.com

## ABSTRACT
Entomopatogen merupakan salah satu agen hayati yang menginfeksi serangga serta dapat merusak sistem metabolisme tubuh serangga. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas entomopatogen S. marcescens terhadap mortalitas larva  kumbang  kelapa  ( B.  longissima )  Gestro,  dan  waktu  yang  dibutuhkan  untuk  mencapai  LT 50 .  Metode  yang digunakan adalah  metode  eksperimen dengan  6 perlakuan  pemberian S.marcescens dengan volume  bervariasi,  terdiri dari A (akuades sebagai kontrol), B (5 ml), C (7,5 ml), D (10 ml), E (12,5 ml), dan F (15 ml) dengan 4 ulangan. Data dianalisis  menggunakan  uji  ANAVA  dan  Probit  LT 50 .  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  volume S.marcescens berpengaruh  terhadap  mortalitas  larva  kumbang  kelapa B.  longissimi Gestro . Mortalitas  larva B.  longissima tertinggi ditunjukkan oleh pemberian 12,5 ml S. marcescens yaitu sebesar 78%, sedangkan LT 50 yaitu 42,5 jam pada perlakuan F.
S.marcescens memiliki aktivitas entomopatogen pada larva kumbang kelapa ( B. longissima ) Gestro.
Kata Kunci: Entomopatogen, Serratia marcescens, Brontispa longissima, Mortalitas
Entomopathogen  is  one  of  the  biological  agents  that  infects  the  insects.  It  shows  ability  to  damage  the  metabolic system in insects body. The objectives of the study were to determine the entomopathogenic activity of S. marcescens on mortality of coconut leaf beetles larvae ( B. longissima ) Gestro, and the time needed to reach LT 50 . The study use an experimental method with 6 treatments of varying S.marcescens volumes, consisting of A (distilled water as a control), B (5 ml), C (7.5 ml), D (10 ml), E (12.5 ml), and F (15 ml) with 4 replications. The data were analyzed using ANOVA and Probit LT50 test. The results showed that the volume of S.marcescens had an effect on mortality of coconut leaf beetle B.  longissimi larvae  Gestro.  The  highest  mortality  of B.  longissima larvae  shows  by  treatment  12.5  ml  of S. marcescens about 78%, while LT 50 was 42.5 hours on F treatment. S.marcescens has entomopathogenic activity in coconut leaf beetles ( B. longissima ) Gestro larvae.

## 1. Pendahuluan
Tanaman kelapa merupakan komoditas perkebunan di Gorontalo. Tanaman tersebutbermanfaat di bidang ekonomi masyarakat, juga aspek sosial, budaya, pangan dan papan (Lumentut & Indrawanto 2013). Namun demikian, terdapat permasalahan yang dihadapi petani kelapa adalah gangguan hama khususnya  kumbang  kelapa  ( B.longissima) ,  sehingga    menurunkan  hasil  produktivitas  kelapa  hingga 30%-40%  (Alhadad  dkk  2012).Kumbang  kelapa B.longissima memiliki siklus  hidup selama  52-60  hari yang diawali dari larva hingga mencapai fase imago (Lumentut et al., 2013). Lebih lanjut, Lumentut & Indrawanto  (2013)  melaporkan  bahwa  bahwa  fase  imago  merupakan  fase  aktif  untuk  menyerang tanaman  kelapa.  Sehingga  untuk  mencegah  terjadinya  serangan  serta  penyebaran B.longissima perlu diantisipasi dengan memotong siklus hidup B.longissima pada fase larva dengan memperkecil dampak negatif terhadap lingkungan.
Upaya  pengendalian  serangan  hama  dari  kelompok  serangga  adalah  penggunaan  agen  hayati entomopatogen  (Widariyanto  dkk,2017).  Salah  satu  agen  entomopatogen  adalah  bakteri  jenis S.
marcescens atau dikenal sebagai bakteri merah. Bakteri ini diketahui bersifat patogen terhadap N. lugens (Priyatno  dkk,  2011)  dan Periplenata  americana (Rini  dkk,  2016).  Namun  demikian,  kajian  tentang penggunaan S.marcescens sebagai  entomopatogen  pada  kumbang  kelapa B.longissima belum  pernah dilaporkan.  Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan  kajian  terkait  kemampuan  patogenitas S.marcescens terhadap kumbang kelapa B.longissima . Penggunaan  bakteri  entomopatogen S.marcescens sebagai  entomopatogen  untuk  menekan  populasi B.longissima merupakan  langkah  awal  untuk  penelitian  selanjutnya.  Hal  ini  disebabkan  kajian  yang terkait  dengan  penggunaan  volume  bakteri S.  marcescens terhadap B.longissima pada  fase  larva  belum dilaporkan.  Untuk  itu,  pemanfaatan S.  marcescens diduga  memberikan  jawaban  terkait  patogenitasnya terhadap  larva B.longissima. Berdasarkan  uraian  tersebut  sehingga  perlu  kajian  untuk  mengetahui pengaruh  volume S.marcescens terhadap  mortalitas  larva  kumbang  kelapa  ( B.longissima ),  dan  untuk mengetahui waktu yang diperlukan S.marcescens mencapai LT 50 .

## 2. Metodologi

## 2.1. WaktudanTempatPenelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Januari  sampai  dengan  Februari  2019,  di  Laboratorium Biokimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Gorontalo.

## 2.2. MetodedanPengumpulan Data
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  metode  eksperimen.  Pengumpulan  data  yakni menghitung  mortalitas  larva B.  longissima yang  ditunjukkan  dengan  ciri-ciri  mengalami  perubahan warna, berbau busuk, tidak bergerak,dan berair(Salaki 2011).

## 2.3. Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain;  cawan  petri,  erlenmeyer,  jarum  ose, handsprayer ,  spektrofotometer,  oven  dan  autoklaf.  Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini diantaranya Nutrient agar (NA), Nutrient broth (NB), alkohol 75%, larva B.longgissima, dan S.marcescens.
2.4. Penyiapan kultur S.marcescens dan PengujianPetogenitasterhadap larva B.longgissima Penyiapan kultur S.marcescens -- Bakteri S.marcescens ditumbuhkan pada 100 ml medium NB pada suhu 30 o C selama 24 jam. Pertumbuhan bakteri diamati secara spektrofotometri sampai mencapai kerapatan sel 10 8 cfu/ml dan digunakan sebagai stok bakteri.Stok bakteri digunakan untuk penelitian selanjutnya dengan variasi perlakuan  sebagai berikut: A. akuades sebagai control; B. 5 ml;C. 7,5  ml; 10 ml, D. 12,5 ml; dan E. 15 ml.
Pengujian patogenitas -- Pengujian patogenitas bakteri S. marcescens terhadap B. longissima mengacu pada Rini dkk (2016). Janur kelapa sebagai media tumbuh larva B. longissima dengan panjang 5 cm dan diletakkan  pada  setiap  wadah  plastik  berdiameter  72  cm 2 .  Larva B.  longissima instar  3  sebanyak  10 individu  dimasukkan  ke  dalam  setiap  wadah  plastik  yang  telah  berisikan  janur  kelapa.  Selanjutnya disemprot  dengan  volume S.  marcescens sesuai  perlakuan  yang  telah  ditetapkan  dengan  ulangan sebanyak 4 kali. Pengamatan mortalitas larva diamati setiap interval waktu 3 jam pada hari pertama, dilanjutkan setiap interval waktu 12 jam sampai 72 jam setelah aplikasi.

## 2.5. Model Penelitian
Model  penelitian  yakni  menggunakan  Rancangan  Acak  lengkap  (RAL)  dengan  perlakuan ditentukan  menggunakan  rumus  (t  -  1)  (r  -  1)  = ≥ 15  didapatkan  6  perlakuan  dan  4  kali  ulangan. Perlakuan konsentrasi volume starter bakteri S. marcescens yang digunakan dalam penelitian ini yakni 0 ml, 5 ml, 7,5  ml, 10 ml, 12,5 ml, dan 15 ml.

## 2.6. Analisis Data
Data  persen  mortalitas  diuji  statistik  untuk  melihat  pengaruh  volume S.marcescens terhadap mortalitas B.longissima. Nilai persen mortalitas dianalisis statistik menggunakan  uji Fisher (F) dengan nilai  signifikan  pada  taraf  5%,  kemudian  dilanjutkan  dengan  uji    lanjut  Duncan  untuk  melihat perbedaan yang signifikan antar perlakuan dengan bantuan aplikasi SPSS 16. Data jumlah mortalitas larva B.longissima setiap jam setelah aplikasi (3, 6, 9, 12, 24, 36, 48, 60 dan 72 jam) pada masing-masing
perlakuan dianalisis menggunakan analisis probit untuk mengetahui nilai LT 50 Nilai persen mortalitas didapatkan dari rumus sebagai berikut (Yus dkk, 2014):
%Mortalitas=( ∑ serangga yang mati
∑ serangga uji ) x 100% (1)
jika kontrol mengalami kematian lebih dari 20% maka perlu dilakukan uji mortalitas terkoreksi dengan rumus:
P=( X-y X ) × 100%
(2)
dimana,  P  adalah  presentasi  kematian  yang  terkoreksi,  X  adalah  presentasi B.longissima yang  hidup pada kontrol dan y adalah presentasi B.longissima yang hidup pada perlakuan.

## 3. Hasil dan Pembahasan
3.1. Pengaruh Aktivitas S.marcescens terhadap Nilai Presentase Mortalitas Larva B.longissima Nilai  persen  mortalitas  merupakan  presentase dari hasil  pembagian  antara  nilai  total  larva  yang mati  pada  setiap  jam  perlakuan  dengan  total  larva  uji.  Hasil  penelitian  menunjukkan  pada  masing- masing perlakuan larva mengalami mortalitas pada 12 jsa (jam setelah aplikasi). Presentase nilai persen mortalitas larva B. longissima pada setiap perlakuan selama waktu pengamatan 72 jam disajikan pada Tabel 3.1.
Tabel  3.1. Presentase mortalitas larva B.longissima pada setiap perlakuan selama pengamatan 72 Jsa Waktu (Jam) Persen Mortalitas (%) pada setiap Perlakuan Kontrol 5 ml 7,5 ml 10ml 12,5 ml 15 ml 3 0 0 0 0 0 0 6 0 0 0 0 0 0 9 0 0 0 0 0 0 12 0 3 5 8 10 10 24 0 5 13 15 18 18 36 0 8 15 20 35 28 48 0 15 30 28 50 50 60 0 25 40 45 65 70 72 0 40 50 63 78 93
Tabel 3.1 menunjukkan nilai mortalitas tertinggi rata-rata terdapat pada waktu pengamatan 72 jam setelah aplikasi (jsa). Nilai persen mortalitas pada setiap perlakuan setelah aplikasi tertinggi yakni pada perlakuan 15 ml yaitu 93% dan yang paling rendah pada perlakuan kontrol 0% kemudian nilai terendah kedua dan seterusnya diikuti oleh 5 ml 7,5  ml; 10 ml; dan 12,5 ml berturut-turut adalah  40%, 50%, 63%,  dan  78%.  Perlakuan  kontrol  selama  waktu  pengamatan  berlangsung  larva  tidak  mengalami mortalitas.  Aktivitas  mortalitas  larva B.  Longissima terjadi  pada  waktu  pengamatan  12  jsa  sedangkan pada waktu pengamatan 9 jam pertama larva tidak mengalami mortalitas.
Pengaruh  aktivitas    bakteri S.  marcescens terhadap  mortalitas  larva  kumbang  kelapa  ( B.  longissima ) berdasarkan analisis statistik One Way Anova dengan nilai signifikan pada taraf 5% menunjukkan bahwa perlakuan  volume S.marcescens berpengaruh  terhadap  persentase  mortalitas  larva B.longissima. Hasil analisis  statistik  uji  F  menunjukkan  nilai  F  hitung  41.301  pada  taraf  signifikan  0,05.  Hal  ini membuktikan  bahwa  terdapat  pengaruh  volume S.marcescens terhadap  mortalitas  larva B.  longissima . Perlakuan volume S. marcescens mempengaruhi tingkat patogenitas bakteri. Yus dkk (2014) melaporkan bahwa perlakuan kerapatan sel bakteri entomopaogen mempengaruhi tingkat mortalitas larva uji.
Aktivitas  patogenitas  bakteri S.  marcescens ditandai  dengan  adanya  mortalitas  yang  berlangsung secara  bertahap.  Pada  satu  jam  setelah  aplikasi  (jsa),  tubuh  larva  bergerak  cepat  dan  menggulung. Selanjutnya, pengamatan 3 jsa, beberapa larva menjauhi daerah yang tergenang air yang berisi bakteri. Pengamatan 6 - 9 jsa, larva memiliki gerakan yang lambat dan kurang beraktivitas. Gerakan larva yang lambat diduga bakteri S. Marcescens sudah menginfeksi larva B. longissima sehingga terjadi penurunan
aktivitas  larva  akibat  paralisis . Bakteri  membutuhkan  waktu  untuk  menyesuaikan  diri  dengan lingkungan  baru  sehingga  proses  patogenitas  bakteri  belum  terlihat  secara  langsung  melainkan bertahap.  Hal  ini  sesuai  dengan  pendapat  Hidayat  dkk  (2006)  bahwa  bakteri  membutuhkan penyesuaian diri dengan lingkungan baru hingga keadannya memungkinkan terjadinya pertumbuhan lebih lanjut.
Mortalitas  larva B.  longissima yang  didapatkan  dari  setiap  perlakuan  menunjukkan,  perlakuan kontrol terlihat larva tidak mengalami mortalitas sehingga larva yang berada pada perlakuan kontrol terus  mengalami  proses  perkembangan.  Ciri  larva  yang  tidak  terinfeksi  ditandai  dengan  tubuh  larva berwarna kuning serta tidak mengeluarkan bau busuk. Perlakuan volume starter bakteri S. marcescens terhadap larva B. longissima menunjukkan adanya aktivitas mortalitas bakteri dari volume perlakuan B (5ml), C (7,5  ml), D (10 ml), E (12,5 ml), dan F (15 ml). Aktivitas mortalitas larva dari masing-masing perlakuan terlihat pada 12 jsa dan nilai mortalitas semakin bertambah hingga pengamatan 72 jsa.
Mortalitas  larva  ditandai  dengan  perubahan  warna  tubuh  menjadi  merah  muda  di  bagian cercus larva dan hitam dibagian cepal (Gambar 1 a), bagian tubuh larva lainnya berwarna hitam dan berbau busuk (Gambar 1 b, c). Bagian tubuh larva terlihat mengalami perubahan warna menjadi merah muda kemudian  menjadi  warna  hitam  dan  menyebar  ke  seluruh  tubuh  larva.  Pigmen  merah  muda  yang muncul pada tubuh larva diduga senyawa prodigiosin,metabolit sekunder dari S. marcescens. Bidari et al . (2017)  Prodigiosin  yang  dihasilkan  oleh S.  marcescens memiliki  senyawa  larvasida.  Wicaksono  dkk (2014)menyatakan  bahwaprodigiosin  mulai  disintetis  saat  bakteri  memasuki  fase  eksponensial,  yang bersifat antibakteri dan antifungal.
Gambar  1. Ciri-ciriPatogenitas S.marcescens :  a)  tubuh  larva  kemerahan,  b)  pinggirantubuh  larva menghitam, c) seluruhtubuh larva hitam (Data Primer, 2019).
Hasil penelitian menunjukkan larva lebih banyak berwarna hitam dibandingkan berpigmen merah muda.  Perubahan  warna  hitam  diduga  disebabkan  pecahnya  sel-sel  larva  akibat  nekrosis  atau pembengkakkan  pada  membran  plasma  sel  larva.  Pendapat  ini  didukung  oleh  Jumiarti  (2012) melaporkan  bahwa  larva  yang  mengalami  mortalitas  setelah  diaplikasi  dengan S.  marcescens juga ditandai dengan adanya perubahan warna menjadi hitam. Pendapat ini  didukung oleh Salaki (2011) bahwa  gejala  umum  yang  timbul  saat  larva  terinfeksi  bakteri  yakni,  gerakan  melambat,  terjadi perubahan warna tubuh serta adanya cairan yang berbau busuk.

## Tabel 3.2. Hasil Analisis Uji Duncan padasetiapPerlakuan
Keterangan:  Notasi  huruf  yang  berbeda  menunjukkan  terdapat  perbedaan  signifikan  dengan  nilai α =0,05.
Mortalitas larva B. longissima dapat dipengaruhi dari dua faktor utama, yaitu jumlah sel S. marcescens dari setiap  perlakuan,  dan lama  waktu  aplikasi.  Hal  ini ditunjukan  dengan  hasil analisis Duncan dan analisis Probit LT 50 . Hasil analisis Duncan (Tabel 2) didapatkan perbedaan signifikan antara perlakuan
Volume Starter Persen Mortalitas (%) Notasi Perlakuan A (Kontrol) 0 A Perlakuan B (5 ml) 40 B Perlakuan C (7,5 ml) 50 Bc Perlakuan D (10 ml) 62,5 Cd Perlakuan E (12,5 ml) 77,5 De Perlakuan F (15 ml) 92,5 E a b c
82.28 62.73 57.28 45.44 42.15 0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 B (5) C (7.5) D (10) E (12.5) F (15) Ni la i L T 5 0% (J am) Perlakuan (ml) LT50%
A  (kontrol),  E  (12,5  ml),  dan F  (15 ml).  Data  tersebut  menunjukkan  perlakuan  volume S.  marcescens mempengaruhi mortalitas larva, perlakuan E (12,5 ml) dapat membunuh larva sebanyak  92,5% pada waktu 72 jam. Hasil analisis probit LT 50 didapatkan nilai R 2 rata-rata pada semua perlakuan 0,87, hal ini membuktikan sebanyak 87% mortalitas larva dipengaruhi oleh lama waktu pengamatan. Pendapat ini  didukung  oleh  Tinuki  (2010)  bahwa  regresi  probit  digunakan  untuk  menggambarkan  suatu hubungan antara respon (Y) dan prediktor (X).
3.2.  Analisis  Probit Lethal  Time (LT)  50%  Larva B.  longissima pada  setiap  Perlakuan  Selama Pengamatan
Nilai LT 50 didapatkan dari hasil analisis probit pada setiap perlakuan. Analisis probit bertujuan untuk  melihat  pada  jam  atau  waktu  berapa  volume  starter  pada  masing-masing  perlakuan  dapat mematikan  larva  sebanyak  50%.  Nilai  probit  LT 50 didapatkan  dari  transformasi  persen  mortalitas  ke unit  probit  kemudian  diregresikan  dengan  transformasi  log  t  (waktu)  sehingga  didapatkan  garis persamaan  linier.  Rata-rata  nilai R  square (R 2 )  dari  semua  perlakuan  yakni  0,87  (Tabel  2).  Hal  ini membuktikan bahwa transformasi log t pada setiap perlakuan berpengaruh terhadap nilai probit. Hasil analisis probit nilai LT 50 pada setiap perlakuan dapat dilihat pada Gambar 4.1.
Tabel 3.2. Nilai R Square padamasing-masingperlakuan
Gambar 2. Grafik Nilai LT 50 padasetiapPerlakuan
Hasil  yang  didapatkan  adalah  kontrol  pada  perlakuan  tidak  menunjukkan  aktivitas  mortalitas sehingga nilai LT 50 yang didapatkan adalah 0, disebabkan nilai persamaan x dan y = 0. Perlakuan B (5 ml)  memiliki  nilai  LT 50 tertinggi  dibandingkan  dengan  perlakuan  lainya  yakni  82,28  jam  sedangkan nilai LT 50 terendah yakni pada perlakuan F (15 ml) 42,15 jam. Sehingga dapat disimpulkan yang paling efektif terhadap mortalitas larva B. longissima yakni perlakuan F (15 ml) pada waktu 42,15 jam dapat membunuh larva sebanyak 50%.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  semakin  tinggi  perlakuan  volume  starter  bakteri S.  marcescens maka nilai persen mortalitas semakin tinggi dan nilai LT 50 yang didapatkan semakin rendah. Hal ini diduga  dipengaruhi  oleh  jumlah  sel  bakteri  yang  diaplikasi  pada  larva B.  longissima .  Menurut Tampubolon  dkk  (2013)  jumlah  sel  bakteri  entomopatogen  akan  mempengaruhi  tingkat  mortalitas larva. Penelitian ini menunjukkan semakin banyak sel bakteri maka tingkat mortalitas semakin tinggi.
Bakteri S. marcescens dikenal dengan bakteri yang dapat menginfeksi serangga. Senyawa sekunder dan beberapa enzim hidrolitik yang dihasilkan oleh bakteri ini menjadikan bakteri ini patogen terhadap serangga. Keberadaan berbagai jenis ini diduga sebagai penyebab kematian larva. Menurut Ishi et al .
Perlakuan Nilai R Square B (5 ml) 0.86 C (7,5  ml) 0.86 D (10 ml) 0.85 E (12,5 ml) 0.87 F (15 ml) 0.88
(2014) Bakteri S. marcescens dapat mensekresikan senyawa sekunder seperti prodigiosin dan Serralysin . Sekresi enzim hidrolitik lainnya oleh bakteri S. marcescens yakni menurut Bidari et al . (2014) kitinase, protease dan karbohidrase. Jumiarti (2012) juga menyatakan enzim hidrolitik yang dihasilkan oleh S. marcescens adalah nuklease.
Larva  yang  akan  mengalami  mortal  mulanya  mengalami  paralisis.  Hasil  pengamatan menunjukkan larva mengalami aktivitas bergerak kurang namun masih terindikasi hidup yang ditandai dengan bagian oral larva masih bergerak sedangkan bagian lainnya tidak. Paralisis ini di duga karena adanya aktivitas dari enzim nuklease. Enzim Nuklease yang disekresikan oleh S. marcescens diduga jenis Deoxyribonuclease  (DNAse)  dapat  memecah  ikatan  rantai  polinukleotida  pada  DNAmenjadi mononukleotida  sehingga  menyebabkan  proses  perkembangan  larva  terganggu.  Nestle  &  Roberts (1969)  menjelaskan  proses  pemecahan  DNA  menjadi  5-  monolukleotida  terjadi  apabila Deoxyribonuclease  berikatan  dengan  Mg 2+ dan  Ca 2+ .  Hal  ini  disebabkan  DNAse  membutuhkan kofaktor sehingga harus berikatan dahulu dengan Mg 2+ dan Ca 2+ agar enzim ini aktif. Muliawan (2007) juga  melaporkan  bahwa  Deoxyribonuclease  (DNAse)  berperan  membantu  bakteri  dalam  melakukan penetrasi ke jaringan inang yang menyebabkan aktivitas sel-sel terganggu.
Enzim kitinase merupakan enzim yang dapat mendegradasi senyawa kitin pada bakteri, sehingga dalam penelitian ini terlihat bagian cercus di bagian tubuh larva menjadi warna merah muda, Gambar 1 a. Pratiwi dkk (2015) berpendapat bahwa enzim kitinase bekerja dengan melisis kulit larva dengan mengubah  senyawa  kitin  menjadi  N-asetilglukosamin.  Senyawa  N-asetilglukosamin  hasil  dari degradasi kitin kemudian dimanfaatkan oleh bakteri sebagai sumber karbon dalam pemenuhan nutrisi. Hal ini menyebabkan tubuh larva mengalami kerusakkan akibat pemanfaatan karbon oleh bakteri.
Enzim  hidrolitik  lainnya  yang  mempengaruhi  kematian  larva  yakni  enzim  protease.  Menurut Bhargavi  &  Prakasham  (2012)  protease  adalah  enzim  hidrolitik  yang  aktif  pada  sistem  pencernaan larva  yang  mengubah  protein  gologan  peptida  menjadi  asam  amino.  Hasil  penelitian  Bhargavi  & Prakasham  (2012)  melaporkan  bahwa  jenis  protease  yang  disekresikan  oleh  bakteri Serratia adalah serralysin .  Ishi et  al .  (2014)  menjelaskan  bahwa  sekresi serralysin oleh S.  marcescens dapat  menekan imunitas seluler dengan menurunkan sifat adesif sel immuno surveillance . Lebih lanjut Tambupulon dkk (2013) menyatakan bahwa kristal protein bakteri yang masuk ke dalam tubuh akan menempel di usus larva, protein yang aktif akan diterima oleh reseptor protein di usus sehingga memicu terjadinya respon seluler seperti berhentinya proses metabolisme sel.
Enzim  hidrolitik  lainnya  yang  disekresikan  oleh  bakteri S.  marcescens adalah  karbohidrase. S. marcescens mensekresikan enzim karbohidrase untuk mendegradasi karbohidrat menjadi senyawa yang lebih  sederhana  guna  untuk  memenuhi  kebutuhan  nutrisi.  Seperti  yang  telah  dilaporkan  oleh Wicaksono,  dkk  (2017)  bahwa  pada  masa  pertumbuhan S.  marcescens akan  mensekresikan  enzim karbohidrase jenis maltase dan laktase. Kedua jenis enzim ini akan digunakan bakteri dalam memecah maltosa menjadi glukosa serta laktosa menjadi glukosa dan galaktosa.
Kerusakan yang terjadi secara anatomi pada larva B. longissima setelah diaplikasi dengan bakteri entomopatogen jenis Serratia marcecscens belum diketahui lebih jelas. Hasil penelitian yang didapatkan hanya lebih memfokuskan mortalitas larva dan perubahan secara morfologi dengan variabel X volume starter bakteri. Hasil yang didapatkan keberadaan enzim hidrolitik dan senyawa sekunder memberikan alasan  penting  terkait  perubahan  morfologi  dari  segi  warna  dan  mortalitas  larva B.  longissima. Patogenitas  bakteri terhadap  larva  juga dipengaruhi  oleh  faktor lingkungan,  namun dalam  penelitian ini tidak dijadikan sebagai objek utama melainkan hanya sebagai data pendukung penelitian.
Faktor  lingkungan  suhu  dan  kelembaban  merupakan  salah  satu  faktor  pendukung  keberhasilan patogenitas bakteri, karena suhu mempengaruhi aktivitas kerja enzim yang dihasilkan oleh S. marcescens dalam mendegradasi  sel  inang.  Suhu  yang  tinggi dapat  merusak  enzim  sedangkan suhu  yang  terlalu rendah  menyebabkan  enzim  menjadi  inaktif.  Pendapat  ini  sesuai  dengan  Priyatno  dkk  (2011) menyatakan  bahwa  suhu  35 0 C  merupakan  suhu  optimum  genus S.  marcescens untuk  mensekresikan senyawa  sekunder  berupa  prodigiosin.  Pratiwi  dkk  (2015)  juga  menjelaskan  suhu  optimum  yang dibutuhkan  untuk  kerja  enzim  hidrolitk  adalah  30-40 0 C.  Suhu  yang  rendah  <10 0 C  dapat  memicu inaktivasi enzim sedangkan suhu yang semakin tinggi >40 0 C menyebabkan enzim terdegradasi dengan sendirinya.
Pengukuran  faktor  lingkungan  menunjukkan  rata-rata  nilai  suhu  dan  kelembaban  udara  di laboratorium Biokimia mendukung pertumbuhan dan perkembangan larva B. longissima dan bakteri S. marcescens . Hal ini disebabkan nilai rata-rata suhu dan kelembaban rata-rata setiap hari mencapai 28- 31 0 C  dan  81-84%.Giang  &  Nakamura  (2009)  menjelaskan  suhu  dan  kelembaban  optimum  dan
maksimum  untuk  keberlangsungan  hidup B.  longissima adalah  25-30 0 C  dan  45 0 C  sedangkan kelembaban yakni <95%. Suhu optimum dan maksimum yang mendukung keberlangsungan hidup S. marcescens menurut Pratiwi dkk(2015) yakni  30 0 C dan maksimum 40 0 C. Hasil  penelitian  menunjukkan  banyaknya  volume S.  marcescens mempengaruhi  nilai  mortalitas larva. Berdasarkan analisis probit LT 50 menunjukkan bahwa volume starter tertinggi F 15 ml memiliki nilai  LT 50 lebih  rendah  yakni    42,15  jam  dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya.  Indikator  yang mempengaruhi terjadinya mortalitas larva yakni kerapatan bakteri, hal ini disebabkan kerapatan bakteri sangat berpengaruh terhadap akumulasi produksi enzim hidrolitik yang dapat menyebabkan kematian pada larva.

## 4. Kesimpulan
Aktivitas  entomopatogen S.  marcescens berpengaruh  terhadap  mortalitas  larva  kumbang  kelapa  ( B. longissima ) dengan nilai F hitung 73,584 dan  waktu yang dibutuhkan untuk mencapai  LT 50 . Perlakuan volume starter F (15 ml) mampu membunuh larva dengan LT 50 42,15 jam.

## 5. Ucapan Terima Kasih
Ucapan terimakasih penulis sampaikan kepada Bpk Prof. Dr. Ir. Meldy L.A. Hosang, M.Si dan Ibu Dra. Novalisa T.E. Lumentut, SP, M.Sc yang telah memberikan ide penelitian sekaligus membimbing penulis  dalam  melakukan  pralaboratorium  di  Balai  Penelitian  dan  Pengembangan  Tanaman  Palma, Manado (Balit Palma).

## 6. Referensi
Bhargavi,  P,  L.  &RS.Prakasham,.  2012.  Proteolytic  Enzyme  Production  by  Isolated Serratia sp. RSPB11: Role of Environmental Parameters. Current Trends in Biotechnology and Pharmacy. 6(1): 55-
65
Bidari, F., M. Shams-Bakhsh& M.Mehrabadi. 2018. Isolation and Characterization of a S. marcescens with  Insecticidal  Activity  from Polyphylla  olivieri (Col.:  Scarabaeidae). Journal  of  Applied Entomology . 142(2): 162–172.
Giang,  H.  T.&S.  Nakamura.  2009.  The  Study  on  Biological  Characteristics  of Brontispa  longissima (Gestro) (Coleoptera: Chrysomelidae). J. Sci. Dev . 7(2): 159–164.
Herdatiarni, F., T. Himawan& Rachmawaty, R. 2014. Eksplorasi Cendawan Entomopatogen Beauveria sp. Menggunakan Serangga Umpan pada Komoditas Jagung, Tomat dan Wortel Organik di Batu, Malang. Jurnal HPT. 1(3): 1-11
Hidayat, N., MC.Padaga& S. Suhartini. 2006. Mikrobiologi Industri. Edisi 1. Andi Offest. Yogyakarta.
Ishi, K., Tatsuo, A., H. Hiroshi& S. Kazuhisa. 2014. S. marcescens Suppresses Host Cellular Immunity via  the  Production  of  an  Adhesion-Inhibitory  Factor  against  Immunosurveillance  Cells. The Journal of Biological Chemistry. 289(9) :5876–5888.
Jumiarti,  P.  2012. Pemurnian  dan  Karakterisasi  Protein  Insektisidal  dari  Bakteri  Entomopatogen  Serratia marcescens. [Skripsi]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Lumentut, N. &Indrawanto, C. 2013. Biologi Brontispa longissima Varitas Frogatti , Selebensis dan Javana pada Kelapa Dalam Mapanget dan Kelapa Genjah Raja. B. Palma . 14(2): 76–81.
Lumentut,  N.,  S.  Karinda.,  L.  Sulistyowati&RD.Puspitarini.  2013.  The  Demographic  of Brontispa longissima variety of Celebensis Gestro (Coleoptera: Chrysomelidae) on Mapanget Tall Coconut and Brown Dwarf Coconut. IOSR Journal of Agriculture and Veterinary Science (IOSR-JAVS) . 6(2): 33–37.
Muliawan,  S.  2007. Bakteri  Anaerob  yang  Erat  Kaitannya  dengan  Problem  di  Klinik:  Diagnosis  dan Penatalaksanaan. Edisi 1 . Buku Kedokteran EGC.Jakara.
Nestle,  M.  &  WK.  Roberts.  1969.  An  Extracellular  Nuclease  from Serratia  marcescens . The  Journal  of Biological Chemistry. 244(19): 5219-5225.
Pratiwi, R, S.,TE. Susanto& YAK. Wardani. 2015. Enzim Kitinase dan Aplikasi di Bidang Industri: Kajian Pustaka. Jurnal Pangan dan Agroindustri . 3(3): 878-887.
Priyatno,  TP., YA.  Dahliani., Y.  Suryadi.,  IM.  Samudra.,  DN.  Susilowati.,  I.  Rusmana&  C.  Irwan. 2011. Identifikasi Entomopatogen Bakteri Merah Pada Wereng Batang Coklat (Nilaparvata lugens Stål.). Jurnal Agrobiogen . 7(2): 85–95
Purkayastha, GD., P. Mangar., A. Saha&D. Saha. 2018.Evaluation of the Biocontrol Efficacy of a S. marcescens Strain Indigenous to Tea Rhizosphere for the Management of Root Rot Disease in Tea. Plos One. 13(2):1-27.
Rini,  M.  S.,  R.  Rahardian.,  M.  Hadi&D.  Zulfiana.  2016.  Uji  Efikasi  Beberapa  Isolat  Bakteri Entomopatogen terhadap Kecoak (Orthoptera) Periplaneta americana (L.) dan Blatella germanica (L.) dalam Skala Laboratorium. Jurnal Biologi . 5(2): 1–10.
Salaki, CL. 2011. Eksplorasi Bakteri Entomopatogenik Pengendali Hama Plutella xylostella dan Spodoptera sp. PadaTanamanKubisBungadanBrokoli. Eugenia . 17(3): 209-219.
Tampubolon, DY., Y. Pangestiningsih., F. Zahara& F. Manik. Uji Patogenitas Bacillus thuringiensis dan Metarhizium  anisopliae terhadap  Mortalitas Spodoptera  litura Fabr  (Lepidoptera:  Noctuidae)  di Laboratorium. Jurnal Online Agroteknologi. 1(3):783-793.
Yus,  ID.,  BT.  Rahardjo&  T.  Himawan.  2014.  Pengaruh  Aplikasi Pseudomonas  fluorescen dan Bacillus subtilis terhadapMortalitas  Nematoda  Puru  Akar  ( Meloidogyne  javanica )  di  Laboratorium. Jurnal HPT. 2(3): 9-17.
Wicaksono, S., E. Kusdiyantini& Raharjo, B. 2017. Pertumbuhan dan Produksi Pigmen Merah oleh S. marcescens pada Berbagai Sumber Karbon. Jurnal Biologi . 6(3): 66–75.
Widariyanto, R., MI.Pinem& F. Zahara. 2017. Patogenitas Beberapa Cendawan
Entomopatogen( Lecanicillium lecanii, Metarhizium anisopliae, dan Beauveria bassiana ) terhadap Aphis glycines padaTanaman Kedelai. Jurnal Agroekoteknologi FP USU. 5(2): 8- 16