## Penentuan Kandungan Etanol dalam Makanan dan Minuman Fermentasi Tradisional Menggunakan Metode Kromatografi Gas
Dhony Hermanto* 1,2 , I.G. Ayu Sri Andayani 2 , Ruru Honiar 2 , Linda Marta Shofiyana 2 , Nurul Ismillayli 1
1 Program Studi Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Mataram; Jl. Majapahit No. 62 Mataram, Nusa Tenggara Barat 83125
2 Laboratorium Kimia Analitik,Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Mataram; Jl. Majapahit No. 62 Mataram, Nusa Tenggara Barat 83125 e-mail* 1 dhony.hermanto@unram.ac.id
Diterima: 23 Maret 2020/ Disetujui: 15 Mei 2020/ Dipublikasi online: 14 Januari 2021 DOI: https://doi.org/10.22437/chp.v5i2.8979

## ABSTRAK
Penentuan kandungan alkohol dengan menggunakan metode GC dalam makanan dan  minuman  hasil  fermentasi  perlu  dilakukan  untuk  menjamin  kehalalannya. Metode  ini  dapat  mengatasi  kelemahan  metode  sebelumnya  yaitu  alkoholmeter yang  umum  digunakan  oleh  produsen  makanan  dan  minuman  walaupun sensitivitasnya  rendah.  Penentuan  kadar  alkohol  pada  beberapa  makanan tradisional  hasil  fermentasi  menggunakan  standar  etanol  dan  n-butanol  sebagai standar internal. Pengukuran menggunakan alkoholmeter juga dilakukan terhadap sampel makanan minuman fermentasi sebagai pembanding. Hasil pengukuran GC juga  dibandingkan  dengan  kadar  alkohol  yang  tertera  pada  kemasan  bir  (value declared  by  the  producer).  Hasil  pengkuran  menunjukkan  daerah  linier  pada interval  1  hingga  10%  dengan  nilai  koefisien  korelasi  (r)  adalah  0.9984,  dengan demikian  metode  GC  mempunyai  linieritas  tinggi.  Nilai  batas  deteksi  senyawa standar etanol adalah 0,5 ng, k oefisien variasi (CV) ≤ 2%, ketepatan (K) ≤ 5% dan perolehan  kembali  pada  rentang  98-102%  yang  menunjukkan  bahwa  alat  GC mempunyai  sensitifitas,  ketelitian,  validitas  dan  perolehan  kembali    yang  tinggi. Kadar  alkohol  pada  sampel  bir  yang  tertera  dalam  kemasan  menunjukkan kesesuaian  dengan  dengan  hasil  pengukuran  GC.  Hasil  uji  anova  menunjukkan bahwa antara metode GC dan alkoholmeter tidak terdapat perbedaan hasil secara signifikan  sehingga  metode  GC  dan  alkoholmeter  dapat  digunakan  sebagai alternatif yang baik dalam penentuan kadar etanol dalam makanan dan minuman fermentasi sebagai penunjang dalam verifikasi halal.
Kata kunci: alkohol, makanan, minuman, fermentasi, halal, GC, alkoholmeter

## ABSTRACT
Determination of alcohol content by using  the GC method in fermented foods and drinks was needed for halal verification. This method can overcome the weaknesses of  previous  method,  namely  alcoholmeter  which  is  commonly  used  by  food  and beverage  producers  even  though  its  sensitivity  is  low.  Determination  of  alcohol content in some traditional fermented foods used ethanol and n-butanol standards as internal standards.  Measurements using an alcoholmeter were also  conducted on fermented beverage food samples as a comparison. The GC measurement result were also compared with alcohol content printed on the packaging (value declared by the producer). The result showed that linear range in ethanol concentration was 1-10%  with  correlation  coefficient  (r)  of    0.9984,  indicated  that  GC  has  excellent linearity.  Limit  of  detection  was    0,5  ng,  coefficient    variance  (CV)  was ≤  2%, accuracy (K) was ≤ 5% and recovery was in the range of 98-102%, indicated that
GC method has high sensitivity, accuracy, validity and recovery. Alcohol content in beer samples listed in the packaging was confirmed with GC measurement results. Anova test results showed  that the GC methods with  alcoholmeter methods did not differ significantly so that the GC and alcoholmeter methods can be used as a good alternative in determining the ethanol content in fermented foods and beverages as a support in halal verification.
Keywords: alcohol, food, beverage, fermentation, halal, GC, alcoholmeter.

## PENDAHULUAN
Produk makanan dan minuman sebagai bagian dari kehidupan kita sehari- hari, telah diatur dalam hukum Islam terkait dengan kehalalannya. Alkohol dalam produk  makanan  dan  minuman  adalah  masalah  serius  dan  haram  untuk dikonsumsi umat Muslim. Oleh karenanya, verifikasi halal dan otentikasi produk makanan  adalah  masalah  yang  menjadi  perhatian  utama  terkait  dengan kandungan  dan  kadar  alkohol  dalam  produk  makanan  dan minuman (LPPOM- MUI,  2008).  Etanol  sebagai  analit  dari  golongan  alkohol  yang  paling  umum diidentifikasi  di  laboratorium  ditemukan  pada  makanan  dan  minuman  hasil fermentasi  (Destanoglu  dan  Ates,  2019).  Analisis  etanol  untuk  mengendalikan proses fermentasi dan kualitas produknya dapat dilakukan menggunakan metode analisis yang sederhana, cepat dan ekonomis (Muchtaridi et al. , 2012).
Saat  ini,  penentuan  etanol  dalam  produk  makanan  dan  minuman  hasil fermentasi dapat dilakukan dengan beberapa cara antara lain depresi titik didih larutan etanol (Yang et al. , 2012), analisis densimetri (piknometer) (Moales et al. , 2010), metode indeks bias (Gerogiannaki-Christopoulou et al ., 2003), colorimetric spektrofotometri  oksidasi  dikromat  (Sumbhate et  al. ,  2012),  metode  enzimatik (Ishmayana et al. , 2015), biosensor (Azevedo et al., 2005; Kuswandi et al. , 2014), potensiometri  (Rotariu et  al. ,  2004),  kromatografi  gas  (GC)  (Wang et  al. ,  2003), elektroforesis  kapiler  (Frazier,  2001),  kromatografi  cair  kinerja  tinggi  (HPLC) (Parpinello dan Versari, 2000), spektrometri Raman modular (Sanford et al ., 2001), dan spektroskopi FTIR atau IR-dekat (NIR)  (Lachenmeier et al ., 2010). Prosedur pretreatment  yang  rumit  (mis.  distilasi  sampel  dan  proses  penimbangan  yang akurat) dan volume sampel yang besar diperlukan. Metode yang paling populer (mis.  analisis  piknometri  dan  analisis  densimetri)  tidak  berlaku  untuk  sampel dengan jumlah kecil. Proses oksidasi pada spektrofotometri oksidasi distilat dan dikromat diperlukan lebih dari 5 mL volume sampel untuk analisis serta reagen yang  digunakan  sangat  beracun  dan  terklasifikasi.  Stabilitas  rendah, reproduktifitas  rendah  dan  akurasi  rendah  adalah  kerugian  untuk  metode
enzimatik, biosensor, dan potensiometri. Spektrometri Raman dan elektroforesis kapiler  tidak  populer  karena  diperlukan  instrumen  mahal.  Prosedur  pra- perlakukan sampel seperti distilasi dan proses penimbangan yang akurat masih diperlukan dan spektrofotometri yang digunakan untuk deteksi analit, sehingga metode  HPLC  memiliki  sensitivitas  yang  relatif  rendah.  Spektroskopi  NIR  dan penganalisa  bir memakan  waktu  dalam  membuat  kurva  kalibrasi  dan  memiliki akurasi  rendah  karena  dapat  diganggu  oleh  alkohol  lain  dalam  sampel. Kelemahan yang ada pada beberapa metode analisis etanol di atas dapat diatasi dengan  metode  GC.  Metode  GC  digunakan  untuk  analisis  etanol  karena kemudahan  analisis,  sensitivitas,  akurasi,  spesifisitas  relatif,  pengukuran  yang cepat dan jumlah sampel yang kecil (Mohammed et al. , 2018).
Pada penelitian ini penentuan kadar etanol pada berbagai produk makanan dan minuman hasil fermentasi dilakukan dengan metode GC. Analisis kuantitatif untuk etanol dengan metode GC (Anghelescu et al. , 2017; Tiscione et al. , 2011) didapatkan dengan membandingkannya dengan etanol standar dan digunakan n- butanol sebagai standar internal (Fu et al. , 2015; Hönig et al. , 2015). Hasil dari metode  GC  digunakan  untuk  memverifikasi  penentuan  kadar  etanol  yang  ada pada  industri  rumahan  yaitu  menggunakan  alkoholmeter.  Penentuan  kadar etanol dengan alkoholmeter ini didasarkan pada berat jenis larutan. Verifikasi dan otentifikasi kehalalan menggunakan GC terhadap produk makanan dan minuman hasil  fermentasi  dapat  menghilangkan  keraguan  umat  muslim  untuk mengkonsumsi produk tersebut.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Etanol absolut  (99%, Merck) digunakan sebagai material pembanding dari sampel  target  dengan  analit  etanol.  n-Butanol  (0,5%  V/V,  Merck)  digunakan sebagai standar internal untuk memastikan bahwa tidak ada gangguan dengan puncak etanol pada pengukuran metode GC. Kertas saring Watman No. 1. Sampel adalah makanan dan minuman tradisional Lombok hasil fermentasi yaitu poteng ambon  (tape  singkong)  dan  poteng  jaje  tujak  (tape  beras  ketan)  dan  minuman fermentasi dengan lama pemeraman 24 jam seperti tuak (fermentasi air nira dan kayu bakah) dan brem (air hasil fermentasi beras ketan dan kayu bakah) .
GC dilengkapi dengan oven yang mampu beroperasi secara isotermal pada suhu 115 °C. Auto-sampler GC untuk menyuntikkan 0,5 – 1 µL sampel cairan, atau jarum suntik dengan perpindahan positif 10 µL. Peralatan lain yaitu auto-diluter
yang  mampu  diencerkan  10±0,1%,  bak  air  dengan  kontrol  hingga  20±0,5  °C, termometer  akurat  hingga  0,1  °C,  kolom  kromatografi  Rtx®-5MS  dengan  5% difenil/95% dimetil polisiloksan (semi polar) panjang 30 m dan id 0,25 mm.

## Prosedur pengukuran
Preparasi sampel , Sampel tuak dan brem yang  berupa cairan dipreparasi dengan  menyesuaikan  suhu  sampel  hingga  20  °C.  Sedangkan  sampel  padatan yaitu  poteng  ambon  dan  poteng  jaje  tujak  ditimbang  sebanyak  25  gram, dihaluskan  dan  ditambahkan  25  mL  aquades.  Campuran  kemudian  disaring sehingga  diperoleh  filtrat.  Filtrat  disesuaikan  suhunya  hingga  20  °C.  Masing- masing  sampel  sebanyak  25  ml  disaring  ke  dalam  tabung  berbentuk  kerucut. Corong saringan ditutup dengan penutup kaca untuk mencegah hilangnya etanol. Tempatkan  labu  di  bak  ultrasonik  dan  sonicate  untuk  menghilangkan  karbon dioksida yang tersisa. Tutup labu sampai dilakukan analisis.
Preparasi standar , standar etanol dibuat dengan konsentrasi 1, 2, 5, 8 dan 10 %V/V. Pastikan pipet, jarum suntik, etanol, air dan larutan etanol encer yang dihasilkan semuanya ada pada 20±0,1 °C. Periksa kandungan etanol dari larutan standar  dengan  mengukur  gravitasi  spesifik  baik  dengan  botol  atau  meter gravitasi.
Kalibrasi, standar  internal  n-butanol  dan  standar  kalibrasi  etanol  dijaga pada suhu 20±0,1 °C. Kondisikan GC sesuai kondisi umum antara lain suhu oven 115  °C,  suhu  injector  150  °C,  suhu  detektor  200  °C,  gas  pembawa  digunakan nitrogen,  kecepatan aliran gas pembawa  45 mL/mnt.  Setiap  mL  standar etanol diencerkan  dengan  20  mL  standar  internal  n-butanol  menggunakan  diluter otomatis  atau  dengan  pipetting  ke  dalam  labu  kerucut  50  mL.  Pastikan  kedua larutan berada pada 20±0,1 °C sebelum diencerkan, hal ini penting untuk akurasi metode ini. Suntikkan 0,5-1 µL dari setiap larutan etanol standar ke dalam GC. Tentukan luas puncak standar internal etanol dan n-butanol.
Penentuan alkohol dalam sampel dengan metode GC , filtrat  sampel dijaga pada suhu 20±0,1 °C. Larutkan 2 mL sampel dengan 20 mL n-butanol standar internal.  Suntikkan  0,5-1  µL  dari  setiap  larutan  etanol  standar  ke  dalam  GC. Perlakuan yang sama juga dilakukan pada larutan sampel dalam n-butanol. Luas puncak standar internal etanol dan n-butanol dihitung.
Perhitungan ,  plot  grafik  dari  luas  puncak  etanol  luas  puncak  standar internal  terhadap  konsentrasi  etanol  %  V/V  (setelah  dikoreksi  untuk kemurnian)  dari  hasil  yang  diperoleh  untuk  masing-masing  standar  kalibrasi.
Grafik  harus  linier  dan  harus  melewati  titik  asal.  Hitung  koefisien  korelasi  (r) (untuk akurasi r ∼ 0,99) dan hitung gradien untuk memberikan faktor F. F adalah perbandingan  konsentrasi  etanol  dengan  luas  puncak  etanol  atau  luas puncak standar internal.
Validasi  metode  analisis  GC ,  dilakukan  dengan  menentukan  beberapa karakteristik metode seperti  liniearitas,  batas  deteksi,  ketelitian  dan  ketepatan. Uji  linieritas  dilakukan  dengan  mengukur  rasio  luas  area  etanol  terhadap  n- butanol pada suatu seri larutan standar etanol dengan konsentrasi 1, 2, 5, 8 dan 10 % (V/V). Masing-masing larutan sebanyak 0,5-1 µL diinjeksikan ke dalam GC dan  dilakukan  penentuan  luas  puncak  etanol  dan  n-butanol.  Masing-masing perlakuan  dilakukan  3  kali  pengulangan.  Grafik  konsentrasi  etanol  diplotkan dengan rasio luas puncak etanol terhadap n-butanol sehingga didapatkan suatu garis  lurus  dengan  persamaan  y  =  ax  +  b,  dengan  r ∼ 0,99  agar  memenuhi parameter  linieritas.  Batas  deteksi  ditentukan  dari  data  persamaan  regresi sedangkan  Ketelitian  ditentukan  dari simpangan  baku  dan  koefisien variasinya dan Ketepatan (K) tergantung pada besarnya penyimpangan data dari nilai rata- rata dengan nilai sebenarnya.
Alat yang digunakan untuk mengukur kadar alkohol pada industri rumah tangga adalah alkoholmeter atau hidrometer alkohol. Prinsip alkoholmeter adalah berdasarkan  berat  jenis  larutan,  dimana  berat  jenis  larutan  etanol  berbanding terbalik  dengan  kadarnya.  Langkah-langkah  pengukuran  menggunakan alkoholmeter  adalah  dengan  memasukkan  destilat  masing-masing  sampel  yang mengandung  etanol  sebanyak  100  mL  ke  dalam  gelas  ukur,  kemudian alkoholmeter  dicelupkan  ke  dalam  destilat  tersebut.  Batas  yang  tercelup  pada permukaan  destilat  menunjukkan  kadar  alkohol  pada  sampel  yang  diuji.  Uji anova  digunakan  untuk  melihat  perbedaan  validitas  yang  bermakna  antara metode GC dan berat jenis.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Etanol pada produk makanan dan minuman hasil proses fermentasi  yaitu hasil  yang  diperoleh  dari  peragian  karbohidrat  yang  berkataliskan  enzim.  Satu tipe enzim mengubah karbohidrat menjadi glukosa kemudian menjadi etanol, tipe yang  lain  menghasilkan  cuka  (asam  asetat),  dengan  etanol  sebagai  perantara. Peragian/fermentasi  dilakukan  dengan  bantuan  sebagian  spesies  ragi  tertentu seperti Saccharomyces Cerevisiae .  Ragi  ini  memetabolisme gula  (glukosa)  tanpa
adanya  oksigen  menghasilkan etanol  dan CO 2 ,  reaksinya  mengikuti  persamaan reaksi (1)
glukosa enzim etanol + CO 2
(1)
Penetapan kadar etanol dengan metode GC dapat dilakukan karena etanol merupakan  senyawa  mudah  menguap.  Larutan  etanol  disuntikkan  dengan menggunakan  mikro syringe ke  dalam  kolom  pemisah  GC.  Pada  tempat injeksi larutan  langsung  menguap  dan  masuk  ke  dalam  kolom  bersama  dengan  gas pembawa yang inert . Di dalam kolom terjadi pemisahan komponen-komponen gas menurut titik didih dan polaritas masing-masing senyawa. Komponen-komponen gas yang telah terpisah dan keluar dari kolom kemudian masuk ke detektor dan sinyal yang terdeteksi dicatat pada recorder atau integrator. Kadar etanol dapat diketahui dengan menghitung luas puncak area kromatogram etanol yang tercatat pada recorder .
Titik didih etanol adalah 78,3 °C dan titik didih n-butanol adalah 117-118 °C, untuk hal ini suhu injektor pada 150 °C agar terjadi penguapan sampel secara langsung  saat  sampel  disuntikkan  ke  dalam injector .  Suhu  kolom  dan  detektor diatur pada suhu 115 °C dan 200 °C bertujuan untuk menjaga eluen tetap berada pada  fase  gas.  Kondisi  kromatografi  ini  dibuat  tetap  selama  penelitian  untuk memperkecil kesalahan alat. Kromatogram larutan standar etanol dan n-butanol dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar  1 .  Kromatogram  larutan  standar  etanol  dan  n-butanol  ratio  1:1 konsentrasi 50 ppm.
Gambar  1  kromatogram  larutan  standar  menunjukkan  puncak kromatogram pada waktu retensi 4.634 (etanol) dan 8,295 (n-butanol). n-butanol digunakan  sebagai  standar  internal,  hal  ini  karena  n-butanol  mempunyai struktur  kimia  dan  sifat-sifat  fisika  yang  hampir  mirip  dengan  etanol.  Standar internal  digunakan  dalam  analisis  berdasarkan  kromatogram  disebabkan  oleh adanya fluktuasi parameter alat yang mempengaruhi keakuratan dalam analisis.
Nilai resolusi menunjukkan derajat pemisahan komponen campuran dalam analisis kromatografi gas dengan selektifitas tinggi pada kondisi optimum. Pada Gambar 1 menunjukkan komponen campuran terpisah secara sempurna (etanol dan n-butanol). Nilai selektivitas dikategorikan baik dengan Rs ≥ 1,5 ditunjukkan pada kromatogram terjadi pemisahan secara sempurna dari campurannya.
Karakteristik analitik digunakan untuk memvalidasi suatu metode analisis, hal  ini  dimungkinkan  untuk  meminimalisasi  penyimpangan  data  analisis  yang diperoleh dari keadaan sebenarnya. Validasi metode dilakukan bertujuan untuk memberikan  hasil  yang  mendekati  kebenaran.  Karakteristik  analisis  dalam metode GC antara lain linieritas, batas deteksi, ketepatan dan ketelitian. Kurva kalibrasi GC larutan standar etanol dan n-butanol dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2 . Kurva kalibrasi rasio luas area etanol/n-butanol terhadap konsentrasi etanol
Nilai  koefisien  korelasi  digunakan  sebagai  parameter  untuk  menentukan linieritas,  yang  dapat  ditentukan  dari  kurva  kalibrasi.  Gambar  2  menunjukkan daerah linier pada interval 1 hingga 10% etanol mengikuti persamaan garis y = 0.2262 [etanol] + 0.1689. Berdasarkan kurva kalibrasi, nilai koefisien korelasi (r)
SD=0.34 & CV=0.7% Recovery=100,27% n=3, K=1.24% SD=0..87 & CV=1.8% Recovery=99,26% n=3, K=3.25% SD=0.88 & CV=1.8% Recovery=99.13% n=3, K=3.34% SD=0.56 & CV=1.1% Recovery=99.53% n=3, K=1.45% SD=0.64 & CV=1.2% Recovery=101,32% n=3, K=3.61% y = 0.2262x + 0.1689 R² = 0.9969 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 ra s io lu a s a re a e ta n o l/ n -b u ta n o l etanol, %v/v
adalah  0.9984  atau r  ≈  1 ,  dengan  demikian  metode  GC  mempunyai  linieritas tinggi.
Batas deteksi adalah konsentrasi analit terendah dalam sampel yang dapat dideteksi  dan  memberikan  respon  signifikan  dibandingkan  dengan  blanko. Perhitungan  dari  hasil  penelitian  menunjukkan  nilai  batas  deteksi  senyawa standar etanol adalah 0,5 ng, artinya batas deteksi standar dibawah 5,0 ng. Alat kromatografi gas dapat memberi respon pada konsentrasi yang sangat kecil yaitu 5,0 ng, maka alat kromatografi gas mempunyai sensitifitas yang tinggi.
Validasi  ketelitian  dapat  ditentukan  dari  simpangan  baku  dan  koefisien variasinya. Koefisien variasi (CV) menunjukkan suatu ketidaktelitian pengukuran. Pada Gambar 2 dapat diketahui CV sebesar ≤ 2%, yang menunjukkan pengukuran dengan metode GC telah memberikan ketelitian dengan validitas tinggi. Ketepatan (K) dapat diungkapkan dengan kesalahan yaitu nilai ketepatan tergantung pada besarnya penyimpangan data dari nilai rata-rata dengan nilai sebenarnya. Pada Gambar  2  juga  dapat  diketahui K  sebesar  ≤ 5%,  hal  ini  berarti  metode  GC mempunyai  validitas  yang  tinggi.  Validasi  parameter  akurasi  yang  lain  adalah perolehan kembali, dimana derajat persetujuan antara nilai yang terukur dengan nilai sebenarnya. Pada Gambar 2 juga menunjukkan nilai perolehan kembali yaitu pada rentang 98 – 102%, berarti metode GC memiliki perolehan kembali baik.
Kinerja metode GC untuk aplikasi praktis dalam analisis sampel makanan dan minuman hasil fermentasi ditunjukkan dengan melakukan penentuan kadar alkohol dalam bir, makanan fermentasi tradisional (poteng ambon dan poteng jaje tujak)  dan  minuman  fermentasi  tradisional  (tuak  dan  brem).  Penentuan  kadar etanol sampel makanan fermentasi yang digunakan adalah air yang ada sebagai hasil fermentasi.  Kandungan etanol dari sampel diukur dan hasil yang diringkas diberikan  pada  Tabel  1.  Akurasi  metode  GC  digunakan  untuk  menilai perbandingan  dengan  hasil  yang  diberikan  oleh  produsen  bir  dan  lainnya digunakan  untuk  memvalidasi  metode  yang  biasa  digunakan  pada  industri rumahan  dalam  memantau  kadar  etanol  produksinya.  Pada  industri  rumahan dalam  menentukan  kadar  etanol  digunakan  alkoholmeter.  Alkoholmeter  atau hidrometer  alkohol  ini  dapat  menentukan  kadar  etanol  didasarkan  pada  berat jenis  larutan  etanol  dan  air.  Berat  jenis  etanol  berbanding  terbalik  dengan konsentrasi etanol dalam larutan.
Tabel 1 . Kadar etanol dalam sampel makanan dan minuman fermentasi dengan metode GC dan alkoholmeter Sampel Makanan dan Minuman Fermentasi Etanol %(V/V) Kadar Tertera Metode GC Alkoholmeter S1- Bir S2- Poteng Ambon S3- Poteng Jaje Tujak S4- Tuak S5-  Brem 4,9 - - - - 5,00±0,5 0,50±0,7 0,45±0,5 25,5±0,2 30,1±0,2 4,3±0,3 0,7±0,2 0,5±0,2 28±0,5 31±0,4
*rerata semua pengukuran dilakukan n=3
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  pada  sampel  bir  antara  kadar  yang  tertera dalam kemasan ( value declared by the producer ) dengan metode GC diperoleh hasil yang  tidak  berbeda  secara  signifikan.  Hal  ini  tidak  berbeda  jauh  dengan  hasil penelitian  sebelumnya  yang  menggunakan  biosensor  berbasis  alkohol  oksidase terimobilisasi  dalam  membran  polianilin,  diperoleh  sampel  S1  memiliki  kadar etanol  4,27±0,03  %  (V/V)  (Kuswandi  et  al.,  2014).  Uji  anova  digunakan  untuk membandingkan hasil yang diperoleh dengan metode GC dan alkoholmeter. Hasil uji anova menunjukkan bahwa antara metode GC dan alkoholmeter tidak terdapat perbedaan hasil secara signifikan. Berdasarkan ulasan di atas, maka metode GC dan alkoholmeter dapat digunakan sebagai alternatif yang baik dalam penentuan kadar etanol dalam sampel makanan dan minuman fermentasi sebagai penunjang dalam verifikasi halal produk makanan dan minuman.

## KESIMPULAN
Penentuan  kadar  alkohol  metode  GC  menunjukkan  daerah  linier  pada interval 1-10% dengan nilai koefisien korelasi (r) adalah 0.9984, nilai limit deteksi sebesar 0,15 ng, koefisien variasi (CV) sebesar ≤ 2%, ketepatan ( K) sebesar ≤ 5% dan perolehan kembali pada rentang 98-102% yang menunjukkan bahwa alat GC mempunyai sensitifitas,  ketelitian, validitas  dan  perolehan  kembali  yang  tinggi. Kadar  alkohol  pada  sampel  bir  yang  tertera  dalam  kemasan  dengan  hasil pengukuran GC menunjukkan kesesuaian. Hasil uji anova menunjukkan bahwa antara  metode  GC  dan  alkoholmeter  tidak  berbeda  secara  signifikan  sehingga dapat  dijadikan  metode  alternatif  penentuan  alkohol  dalam  makanan  dan minuman.

## DAFTAR PUSTAKA
Anghelescu,  G.,  N.  Mirescu, A.  Tănăsescu  and  F.  Grama. 2017.  Quantitative determination of ethyl alcohol in blood, by gas chromatography. In ECAI 2017-
International  Conference  on  Electronics,  Computers  and  Artificial  Intelligence (ECAI) – 9th Edition . Turkey. (pp. 1 – 5).
Azevedo, A. M., D. M. F. Prazeres, J. M. S. Cabral and L. P. Fonseca. 2005. Ethanol biosensors based on alcohol oxidase. Biosensors and Bioelectronics . 21 :235 – 247.
Destanoglu,  O.  and  I.  Ates.  2019.  Determination  and  evaluation  of  methanol  , ethanol  and  higher  alcohols  in  legally  and  illegally  produced  alcoholic beverages. Journal of the Turkish Chemical Society Chemistry: A . 6 (1):21 – 28.
Frazier,  R.  A.  2001.  Review  Recent  advances  in  capillary  electrophoresis.
Electrophoresis . 22 :4197 – 4206.
Fu,  C.,  H.  A.  O.  Liu,  S.  Fu  and  X.  Chai.  2015.  Rapid  and  simultaneous determination of acetone , butanol and ethanol in butanol fermentation broth by full. Cellulose Chemistry And Technology . 49 (9 – 10):813 – 818.
Gerogiannaki-Christopoulou, M., N. V. Kyriakidis and P. E. Athanasopoulos. 2003. Strength  of  Small  Volume  Samples. Journal  of  AOAC  International . 86 (6):1232 – 1235.
Hönig, V., J. Táborský, M. Orsák and R. Ilves. 2015. Using gas chromatography to determine  the  amount  of  alcohols  in  diesel  fuels. Agronomy  Research , 13 (5):1234 – 1240.
Ishmayana, S., M. Fadhlillah, Y. Y. Kristia and H. Budiman. 2015. Validation of a modified  alcohol  dehydrogenase  assay  for  ethanol  determination. Current Chemistry Letters . 4 :77 – 84.
Kuswandi, B., T. Irmawati, M. A. Hidayat, and M. Ahmad 2014. A Simple visual ethanol biosensor based on alcohol oxidase immobilized onto polyaniline film for halal verification of fermented beverage samples. Sensors . 14 :2135 – 2149.
Lachenmeier, D. W., R. Godelmann, M. Steiner, B. Ansay, J. Weigel and G. Krieg. 2010. Rapid and mobile determination of alcoholic strength in wine, beer and spirits  using  a  flow-through  infrared  sensor. Chemistry  Central  Journal ,
4 (5):1 – 10.
LPPOM-MUI. 2008. Panduan umum sistem jaminan halal LPPOM – MUI, Lembaga Pengkajian  Pangan  Obat-Obatan  dan  Kosmetika  Majelis  Ulama  Indonesia, Jakarta, Halaman 44.
Moales,  D.,  A.  F.  Spac,  M.  Prisecaru  and  E.  Butnaru.  2010.  Determining  the concentration of alcohol from the natural. Biologie . 19 :63 – 71.
Mohammed, A. H., A. K. Mohammed, F. H. Kamar, A. A. Abbas and G. Nechifor. 2018.  Determination  of  ethanol  in  fermented  broth  by  headspace  gas chromatography  using  capillary  column. Revista  de  Chimie-Bucharest , 69 (11):2016 – 2019.
Muchtaridi, M., I. Musfiroh, N. N. Hambali and W. Indrayati. 2012. determination of  alcohol  contents  of  fermentated  black  tape  ketan  based  on  different fermentation time using specific gravity , refractive index and GC-MS method.
Journal of Microbiology, Biotechnology and Food Sciences , 2 (3):933 – 946.
Parpinello,  G.  P.  and  A.  Versari.  2000.  A  Simple  high-performance  liquid chromatography method for the analysis of glucose, glycerol and methanol in a bioprocess. Journal of Chromatographic Science . 38 :259 – 261.
Rotariu, L., C. Bala and V. Magearu. 2004. New potentiometric microbial biosensor for  ethanol  determination  in  alcoholic  beverages. Analytica  Chimica  Acta .
513 :119 – 123.
Sanford, C. L., B. A. Mantooth and B. T. Jones. 2001. Determination of ethanol in alcohol  samples  using  a  modular  raman  spectrometer. Journal  of  Chemical Education . 78 (9):1221 – 1225.
Sumbhate, S., S. Nayak, D. Goupale, A. Tiwari and R. S. Jadon. 2012. Colorimetric method for the estimation of ethanol in alcoholic-drinks. Journal of Analytical Techniques . 1 :1 – 6.
Tiscione, N. B., I. Alford, D. T. Yeatman and X. Shan. 2011. Ethanol analysis by headspace gas chromatography with simultaneous flame-ionization and mass spectrometry detection. Journal of Analytical Toxicology . 35 :501 – 511.
Wang, M., Y. Choong, N. Su and M. Lee. 2003. A rapid method for determination of ethanol in alcoholic beverages using capillary gas chromatography. Journal of Food and Drug Analysis . 11 (2):133 – 140.
Yang, Y., K. Boots and D. Zhang. 2012. A sustainable ethanol distillation system. Sustainability . 4 :92 – 105.