## SKRINING FITOKIMIA, UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN, DAN
TOKSISITAS DARI EKSTRAK DAUN KERSEN ( Muntingia calabura L . ) DENGAN METODE 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) dan Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Selin R. Widjaya 1) , Widdhi Bodhi 1) , Adithya Yudistira 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95116

## ABSTRACT
Kersen  (Muntingia  calabura  L.)  is  a  plant  that  has  begun  to  be  eliminated  and  was  rarely used  because  it  is  often  considered  to  have  no  economic  value  and  lack  of  knowledge  about  its utilization,  whereas  kersen  plants  contain  flavonoids,  saponins,  and  tannins  which  were  have  high benefit for health. The content of metabolites is affected by soil nutrient elements and difference place of growth. This study aims to determine the potential of kersen leaves grown in North Minahasa based on  phytochemical  content, ability  of  antioxidant  activity,  and  toxicity.  Kersen leaves  were  extracted using  sequential  maceration  method  with  n-hexane,  ethyl  acetate,  and  ethanol  as  solvents. Phytochemical Screening using several reagents which tailored to the type of phytochemical test. 1.1- diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) method is used to evaluate antioxidant activity, and Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method is used to evaluate toxicity. The result of this study indicate that the n- hexane  extract  contains  phenols,  flavonoids,  and  tannins,  with  IC 50 value  12.54  μg/mL,  and  LC 50 value 881 μg/mL. Ethyl acetate extract contains phenols, flavonoids, tannins, and saponins, with IC 50 value  61.3  μg/mL,  and  LC 50 value  1758  μg/mL.  Ethanol  extract  has  phenol,  flavonoid,  tannin, saponin, and terpenoid content, with IC 50 value 9.01 μg/mL, and LC 50 value 106 μg/mL.
Keywords : Kersen leaves, Antioxidant, Toxicity, IC 50 , LC 50

## ABSTRAK
Kersen  ( Muntingia  calabura  L.) merupakan  tanaman  yang  sudah  mulai  tersingkirkan  dan jarang dimanfaatkan karena sering dianggap tidak punya nilai ekonomis dan kurangnya pengetahuan tentang pemanfaatannya, padahal tanaman kersen memiliki kandungan flavonoid, saponin, dan tanin yang bermanfaat tinggi untuk kesehatan. Kandungan senyawa metabolit dipengaruhi oleh unsur hara tanah  dan  perbedaan  tempat  tumbuh.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  potensi  dari  daun kersen  yang  tumbuh  di  Minahasa  Utara  berdasarkan  kandungan  fitokimia,  kemampuan  aktivitas antioksidan,  dan  toksisitasnya.  Ekstrak  daun  kersen  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  sekuensial menggunakan  pelarut  n-heksan,  etil  asetat,  dan  etanol.    Skrining  fitokimia  menggunakan  beberapa reagen  yang  disesuaikan  dengan  jenis  uji  fitokimia.  Metode 1.1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) digunakan untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan, dan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) digunakan  untuk  mengevaluasi  toksisitas.  Hasil  penelitian ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  n-heksan memiliki kandungan fenol, flavonoid, dan tanin, nilai  IC 50 12,54 μg/mL, dan nilai LC 50 881 μg/mL. Ekstrak  etil  asetat  memiliki  kandungan  fenol,  flavonoid,  tanin,  dan  saponin,  nilai  IC 50 61,3  μg/mL, dan nilai LC 50 1758 μg/mL. Ekstrak etanol memiliki kandungan fenol, flavonoid, tanin, saponin, dan terpenoid, nilai IC 50 9,01 μg/mL, dan nilai LC 50 106 μg/mL.
Kata kunci : Daun Kersen, Antioksidan, Toksisitas, IC 50 , LC 50

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  merupakan  molekul yang  sangat  reaktif,  sehingga  dapat merusak  struktur  serta  fungsi  sel,  dan mengakibatkan  penyakit  seperti  kanker dan  penyakit  kardiovaskular  (Balsano  dan Alisi, 2009).
Antioksidan  merupakan  senyawa yang  dapat  menginaktivasi  radikal  bebas serta  menghambat  pembentukan  radikal bebas  baru  dengan  cara  mendonorkan elektron    dan  mengikat  radikal  bebas.  Di dalam  tubuh  manusia  sudah  terdapat antioksidan  yang  diproduksi  secara  alami oleh  tubuh  berupa  enzim-enzim  seperti superoksida  dismutase,  katalase, dan glutation  peroksida yang  dikenal  sebagai antioksidan  endogen  (Youngson,  1998). Namun  karena  jumah  radikal  bebas  yang masuk  ke  dalam  tubuh  melebihi  kapasitas yang  mampu  dinetralisir  oleh  antioksidan alami  dalam  tubuh,  maka  diperlukan senyawa
antioksidan eksogen.
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan, penggunaan senyawa antioksidan  sintetik  dapat  menyebabkan penyakit  kronis  seperti  kanker  dan kerusakan  hati  (Handayani  dan  Sulistyo, 2008). Maka dari itu perlu adanya sumber antioksidan alami yang efektif dan aman.
Kersen  ( Muntingia  calabura  L.) merupakan salah satu tanaman yang sudah mulai tersingkirkan karena sering dianggap  tidak  punya  nilai  ekonomis  dan kurangnya pengetahuan tentang pemanfaatannya.  Secara  ilmiah  daun kersen terbukti  memiliki efek  farmakologi antiulser  (Ibrahim et  al .,  2012),  aktivitas antipiretik  dan  anti-inflamasi  (Zakaria et al ., 2007). Total kandungan senyawa metabolit  suatu  tanaman  ditentukan  oleh unsur  hara  tanah  makro  seperti  Nitrogen
(N),  Kalium  (K),  Bahan  Organik  (BO), dan Karbon organik (C) sehingga perbedaan unsur hara ini akan mempengaruhi  senyawa  yang  terkandung dalam  tanaman  tersebut  (Suryawati  dan Murniyanto,  2011).  Menurut  penelitian yang  dilakukan  oleh  Irawan  dan  Hidayah (2015), diketahui bahwa tanah di Minahasa  Utara  memiliki  kandungan karbon  organik  dan  nitrogen  yang  dapat dikategorikan  tinggi,  yaitu  berturut-turut 3,6% dan 0,23%.
Berdasarkan  hal  tersebut,  peneliti bermaksud  untuk  mengetahui  kandungan senyawa  metabolit  sekunder  ekstrak  daun kersen  yang  ada  di  Kabupaten  Minahasa Utara, serta potensinya sebagai antioksidan dan toksisitasnya.

## METODOLOGI PENELITIAN
Alat  yang  digunakan  ialah  ayakan 100  mesh,  kertas  saring  (Whatman  42), tabung  reaksi  (Pyrex),  rak  tabung,  pipet tetes,  mikropipet  1000  μL  dan  200  μL (SHCHEER),  cawan  petri  (Pyrex),  gelas piala  (Iwaki),  gelas  ukur  (Pyrex),  labu takar  (Iwaki),  batang  pengaduk,  corong, alumunium  foil,  timbangan  analitik  (AE Adam),  blender  (Philips),  vacuum  rotary evaporator  (Steroglass  Strike  300)  dan spektrofotometer UV-Vis (Shimazu).
Bahan  yang  digunakan  ialah  daun kersen , metanol,  etanol,  etil  asetat,  n- heksan,  DPPH,  vitamin  C,  air  laut, naupilus Artemia salina , aquadest, DMSO,
HCl  pekat,  FeCl 3 1%  dan 5%,  serbuk magnesium, reagen Dragendorf, kloroform, CH 3 COOH anhidrat, dan H 2 SO 4 pekat.

## PENGAMBILAN DAN PERSIAPAN SAMPEL
Sampel yang digunakan ialah daun kersen  ( Muntingia  calabura L.)  yang diambil di desa Likupang, Minahasa Utara, Sulawesi Utara. Selanjutnya sampel dibersihkan  dan  dikering  anginkan  hingga sampel  kering.  Setelah  kering  sampel diblender  hingga  sampel  menjadi  halus lalu diayak dengan ayakan 100 mesh.

## IDENTIFIKASI TANAMAN
Identifikasi  tanaman  dilakukan  di Bagian  Taksonomi  Tumbuhan  Program Studi  Biologi  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi.

## EKSTRAKSI DAN FRAKSINASI
Ekstraksi  bahan  aktif  dilakukan dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  n-heksan,  etil  asetat,  dan  etanol 96%  selama  24  jam.  Serbuk  daun  kersen
( Muntingia calabura L.) ditimbang sebanyak  200  gram  dan  dimasukkan  ke dalam baker glass, kemudian ditambahkan pelarut  n-heksan  hingga  volume  akhir mencapai  800  mL  dengan  perbandingan  1 :  4  (w/v).  Hasil  maserasi  kemudian disaring  dengan  kertas  saring  sehingga dihasilkan  filtrat  n-heksan  dan  residu. Residu yang diperoleh ditambahkan pelarut  etil  asetat  hingga  hingga  volume akhir mencapai 800 mL dengan perbandingan  1  :  4  (w/v).  Hasil  maserasi kemudian  disaring  dengan  kertas  saring sehingga  dihasilkan  filtrat  etil  asetat  dan residu. Residu yang diperoleh ditambahkan  pelarut  etanol  96%  hingga hingga  volume  akhir  mencapai  800  mL dengan  perbandingan  1  :  4  (w/v).  Hasil maserasi  kemudian disaring dengan kertas saring  sehingga  dihasilkan  filtrat  etanol 96%  dan  residu.  Perendaman  dengan masing-masing pelarut dilakukan
remaserasi  sebanyak  1  kali.  Filtrat  etanol 96%,  etil  asetat,  dan  n-heksan  yang diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan evaporator  pada  suhu  40 o C  hingga diperoleh tiga ekstrak kental.

## SKRINING FITOKIMIA
Skrining  fitokimia  ekstrak  etanol 96%, etil asetat, dan n-heksan daun kersen ( Muntingia calabura L.) meliputi senyawa yang  berpotensi  sebagai  antioksidan  dan berpotensi  toksik,  yaitu  pemeriksaan gologan  fenol,  flavonoid,  dan  alkaloid berdasarkan  Harbone  (1987),  golongan tanin  berdasarkan  Sangi  dkk.  (2008), golongan  saponin  berdasarkan  Depkes  RI (1979), dan terpenoid berdasarkan Padmasari dkk. (2013).

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN METODE DPPH
Untuk  pengujian  dengan  metode DPPH menggunakan metode yang dikemukakan  oleh  Molyneux  (2004), yakni  masing-masing  larutan  stok  ekstrak etanol  96%  etil  asetat,  dan  n-heksan  daun kersen  ( Muntingia  calabura L.)  dibuat konsentrasi  1000  μg/mL  dengan  cara sebanyak  masing-masing  10  mg  ekstrak etanol  96%  etil  asetat,  dan  n-heksan  daun kersen  ( Muntingia  calabura L.),  masing- masing  dimasukkan  ke  dalam  10  mL pelarutnya.  Masing-masing  ekstrak  etanol 96%, etil asetat, dan n-heksan daun kersen ( Muntingia  calabura L.) dibuat  dalam beberapa  konsentrasi,  yaitu  l0  μg/mL,  20 μg/mL,  30  μg/mL,  40  μg/mL,  dan  50 μg/mL  untuk  ekstrak  etil  asetat,  serta konsentrasi 2 μg/mL, 4 μg/mL, 6 μg/mL, 8 μg/mL,  dan  10  μg/mL  untuk  ekstrak heksan dan etanol 96%.
a. Konsentrasi  50  μg/mL  dibuat  dengan cara  diambil  0,5  mL  larutan  stok  dan dimasukkan ke dalam 9,5 mL pelarutnya.
b. Konsentrasi  40  μg/mL  dibuat  dengan cara  diambil  0,4  mL  larutan  stok  dan dimasukkan ke dalam 9,6 mL pelarutnya.
c. Konsentrasi  30  μg/mL  dibuat  dengan cara  diambil  0,3  mL  larutan  stok  dan dimasukkan ke dalam 9,7 mL pelarutnya.
d. Konsentrasi  20  μg/mL  dibuat  dengan cara  diambil  0,2  mL  larutan  stok  dan dimasukkan ke dalam 9,8 mL pelarutnya.
e. Konsentrasi  10  μg/mL  dibuat  dengan cara  diambil  0,1  mL  larutan  stok  dan dimasukkan ke dalam 9,9 mL pelarutnya.
Larutan  DPPH  0,4  mM  dibuat dengan  cara  ditimbang  7,88  mg  DPPH (BM  394,32  g/mol)  dilarutkan  dengan metanol hingga 50 mL dalam labu takar 50 mL  di  tempat  gelap.  Kedalam  tiap  tabung reaksi  ditambahkan  1  mL  larutan  DPPH 0,4  mM  dalam  metanol.  Masing-masing ekstrak etanol 96%, ekstrak etil asetat, dan ekstrak  n-heksan  berbagai  konsentrasi dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  yang telah  diisi  1  mL  larutan  DPPH  0,4  mM dalam  metanol,  sampai  volume  5  mL, kemudian  diinkubasi  pada  suhu  27°C selama  30  menit  selanjutnya  serapan diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gerombang 517 nm. Vitamin C  digunakan  sebagai  pembanding  dengan konsentrasi 2 μg/mL, 4 μg/mL, 6 μg/mL, 8 μg/mL, 10 μg/mL.

## UJI TOKSISITAS DENGAN METODE BSLT

## Pengujian  tuksisitas  ekstrak  daun
Solanum tuberosum menggunakan metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  yang mengacu  pada  Meyer et  al .  (1982)  dan Krishnaraju  et  al.  (2005)  dengan  cara mengujikan  senyawa  yang  diduga  toksik terhadap larva A. salina .

## PENYIAPAN LARVA Artemia salina
Penetasan telur A. salina dilakukan dengan  cara  sebanyak  100  mg  telur A. salina direndam  dalam  wadah  yang  berisi air  laut    dibawah  cahaya  lampu  25  watt. Telur A. salina akan menetas dan menjadi larva kurang lebih setelah 24 jam. Setelah berumur  48  jam  larva  udang  siap digunakan  untuk  uji  toksisitas  (Halimah, 2010).

## PEMBUATAN KONSENTRASI SAMPEL UJI
Pembuatan  konsentrasi  larutan  uji untuk  BSLT  adalah  1000  μg/mL,  100 μg/mL, l0  μg/mL, 1 μg/mL, dan 0 μg/mL (sebagai  kontrol  negatif)  sesuai  metode yang dipakai oleh Surya (2018).
a. Masing-masing  ekstrak  etanol  96%, etil  asetat,  dan  n-heksan  daun  kersen ( Muntingia  calabura L.)  ditimbang sebanyak  50  mg,  kemudian  dilarutkan dengan air laut sebanyak 50 mL untuk memperoleh konsentrasi 1000 μg/mL.
b. Dari  larutan  dengan  konsentrasi  1000 μg/mL  diambil  5  mL  dan  dilarutkan dengan  air  laut  hingga  50  mL  untuk mendapatkan konsentrasi 100 μg/mL.
c. Dari  larutan  dengan  konsentrasi  100 μg/mL  diambil  5  mL  dan  dilarutkan dengan  air  laut  hingga  50  mL  untuk mendapatkan konsentrasi 10 μg/mL.
d. Dari  larutan  dengan  konsentrasi  10 μg/mL  diambil  5  mL  dan  dilarutkan
dengan  air  laut  hingga  50  mL  untuk mendapatkan konsentrasi 1 μg/mL. e. Untuk
mendapatkan larutan konsentrasi  0  μg/mL  dibuat  dengan mengambil 10 mL air laut.

## PELAKSANAAN UJI TOKSISITAS
Masing-masing  konsentrasi  dari tiap ekstrak dilakukan uji toksisitas dengan 3  replikasi  menggunakan  10  ekor  larva A. salina pada setiap kelompok uji. Sebanyak 45  wadah  yang  telah  diisi  masing-masing 10  ekor  larva A.  salina disiapkan.  Ekstrak etanol  96%,  etil  asetat,  dan  n-heksan masing-masing  menggunakan  15  wadah. Sebanyak  3  wadah  digunakan  untuk konsentrasi  100  μg/mL,  3  wadah  untuk konsentrasi  10  μg/mL,  3  wadah  untuk konsentrasi  1  μg/mL,  dan  3  wadah  untuk konsentrasi  0  μg/mL  sebagai  kontrol negatif.  Pengamatan  dilakukan  selama  24 jam  terhadap  kematian  larva A.  salina. Kriteria  standar  untuk  menilai  kematian larva A.  salina yaitu  bila  larva A.  salina tidak  menunjukkan  pergerakkan  selama beberapa  detik  observasi  (Meyer et  al ., 1982; Krishnaraju et al ., 2005).

## ANALISIS DATA
Data  hasil  penelitian  akan  diolah dan  disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan grafik.  Data  dari  uji  antioksidan  dan toksisitas  akan  dianalisis  dengan  analisis regresi  linier  menggunakan  Microsoft Excel  2013  untuk  menentukan  nilai  IC 50 dan LC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN EKSTRAKSI DAN FRAKSINASI
Sampel  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  daun  kersen  yang diambil di Likupang, Kabupaten Minahasa
Utara. Sebelum dilakukan proses ekstraksi, sampel  dicuci  dan  dikeringkan  kemudian diserbukkan  dengan  menggunakan  alat blender  dan  diayak  dengan  ayakan  100 mesh.  Proses  pencucian  sampel  bertujuan memisahkan  bahan  asing  yang  menempel pada  sampel.  Proses  pengeringan  sampel bertujuan  untuk  menghilangkan  kadar  air dalam  sampel  karena  dapat  mengganggu proses  penarikan  zat  aktif,  dan  kadar  air yang  tinggi  juga  dapat  membuat  sampel mudah  rusak  oleh  adanya  pertumbuhan jamur.  Proses  penyerbukkan  bertujuan memperbesar  luas  permukaan  kontak dengan  pelarut  sehingga  mengoptimalkan proses ekstraksi. Proses pengayakan bertujuan  menyeragamkan  ukuran  partikel yang mempengaruhi keseragaman tahapan ekstraksi zat aktif.
Proses ekstraksi serbuk daun kersen  dilakukan  dengan  cara  maserasi sekuensial menggunakan tiga jenis pelarut yang  berbeda  tingkat  kepolarannya,  dari yang  kurang  polar  ke  polar,  yaitu  n- heksan,  etil  asetat,  dan  etanol  96%. Maserasi  dilakukan  selama  3  x  24  jam pada  suhu  kamar  dengan  satu  kali remaserasi  tiap  pelarut  dan  diaduk  sekali sehari.  Penggunaan  metode  maserasi dipilih  karena  selain  mudah  dan  murah, perendaman  yang  lama  memungkinkan terjadi  pemecahan  dinding  dan  membran sel akibat perbedaan tekanan di dalam dan di  luar  sel,  sehingga  metabolit  sekunder yang  ada  dalam  sitoplasma  akan  terlarut dalam pelarut (Harbone, 1987).
Metode  maserasi  dilakukan  secara sekuansial supaya selama proses maserasi, komponen  yang  diekstraksi  sekaligus terfraksinasi  berdasarkan  kepolarannya. Penggunaan pelarut n-heksan untuk melarutkan  senyawa  yang  non-polar, sedangkan  etil  asetat  untuk  melarutkan
senyawa semipolar, dan etanol 96% untuk melarutkan  senyawa  yang  lebih  polar.
Selama  perendaman  dilakukan  sesekali pengadukan untuk menyeragamkan konsentrasi zat aktif dalam pelarut.

## SKRINING FITOKIMIA
Skrining  fitokimia  bertujuan  untuk mengetahui  kandungan  golongan  senyawa suatu  tumbuhan  sebagai  informasi  awal untuk meramalkan aktivitas biologi. Skrining  fitokimia  dalam  penelitian  ini
dilakukan  untuk  menguji  ada  tidaknya enam  golongan  senyawa  yang  berpotensi sebagai  antioksidan  dan  berpotensi  toksik, yaitu  fenol,  flavonoid,  tanin,  saponin, alkaloid,  dan  terpenoid.  Hasil  penujian fitokimia dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil skrining fitokimia

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DENGAN METODE DPPH
Pengujian aktivitas antioksidan dengan metode DPPH yang diperkenalkan oleh  Molyneux  (2004)  dilakukan  dengan mereaksikan  larutan  ekstrak  berbagai konsentrasi  dengan  larutan  DPPH  yang
selanjutnya  dibaca  absorbansinya  dengan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang  517  nm.  Hasil  pengujian aktivitas  antioksidan  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Tabel 2. Perbandingan aktivitas antioksidan
Gambar 1. Grafik aktivitas penangkal radikal bebas ekstrak etil asetat
Gambar 2. Grafik aktivitas penangkal radikal bebas ekstrak heksan, ekstrak etanol, dan vitamin C
Pada  pengujian  terhadap  DPPH diketahui  bahwa  aktivitas  antioksidan
Senyawa
metabolit Ekstrak heksan Ekstrak etil asetat Ekstrak etanol Fenol + + + Flavonoid + + + Tanin + + + Saponin - + + Alkaloid - - - Terpenoid - + + Sampel IC 50 (μg/mL) Ekstrak Heksan 12,54 Ekstrak Etil Asetat 61,30 Ekstrak Etanol 9,01 Vitamin C 8,32
paling  kuat  terjadi  pada  ekstrak  etanol dimana  pada  konsentrasi  9,01  μg/mL sudah  dapat  menghilangkan  setengah karakteristik  radikal  dari  DPPH.  Aktivitas antioksidan  tertinggi  berikutnya  diikuti ekstrak n-heksan sebesar 12,47 μg/mL dan ekstrak  etil  asetat  sebesar  61,30  μg/mL. Hal ini membuktikan bahwa pelarut etanol merupakan  perlarut  yang  paling  efektif dalam  mengikat  senyawa  aktif  yang berfungsi sebagai antioksidan yang terdapat pada daun kersen.
Berdasarkan perubahan warna yang terjadi  dapat  diketahui  bahwa  ekstrak etanol  dan  ekstrak  n-heksan  mempunyai aktivitas antioksidan yang sangat kuat, hal ini  ditunjukkan  dengan  perubahan  warna larutan  dari  ungu  menjadi  kuning  pucat yang terjadi dengan cepat, sedangkan pada ekstrak etil  asetat perubahan  warna terjadi secara  perlahan  dan  tidak  mencapai  wana kuning pucat. Adanya perubahan warna ini disebabkan ketika larutan DPPH dicampur dengan senyawa yang dapat mendonasikan atom  hidrogen,  maka  DPPH  berubah menjadi  bentuk  tereduksi  (1,1-difenil-2- pikrihidrazin)  dengan  kehilangan  warna violet  menjadi  warna  kuning.  Perubahan warna  kuning  ini  menghasilkan  senyawa bukan  radikal  (1,1-difenil-2-pikrihidrazin) dan radikal (A . ) (Suryanto, 2012).
Antioksidan yang digunakan sebagai  pembanding  ialah  Vitamin  C. Nilai  IC 50 dari  Vitamin  C  didapat  sebesar 8,32 μg/mL, nilai ini menunjukkan bahwa kemampuan  penangkal  radikal  bebas Vitamin C lebih kuat dibandingkan ekstrak n-heksan (12,47 μg/mL), ekstrak etil asetat (61,30  μg/mL),  maupun  ekstrak  etanol (9,01  μg/mL)  daun  kersen.  Menurut Molyneux  (2004),  antioksidan  dikatakan sebagai  antioksidan  dengan  aktivitas sangat kuat ketika nilai IC 50 kurang dari 50
µg/mL (IC 50 < 50 µg/mL), kuat (50 µg/mL < IC 50 < 100 µg/mL), sedang (100 µg/mL < IC 50 < 150 µg/mL), lemah (150 µg/mL < IC 50 < 200 µg/mL), dan sangat lemah (IC 50 >  200  µg/mL).  Hal  ini  menunjukkan bahwa  vitamin  C,  ekstrak  n-heksan  dan ekstrak  etanol  daun  kersen  merupakan antioksidan  dengan  aktivitas  sangat  kuat, sedangkan  ekstrak  etil  asetat  merupakan antioksidan dengan aktivitas kuat.

## UJI TOKSISITAS DENGAN METODE BSLT
Uji toksisitas menggunakan metode BSLT  dipilih  karena  efek  toksik  suatu senyawa  dapat  ditentukan  dalam  waktu singkat,  mudah  dikerjakan,  murah,  cukup akurat,  dan  hanya  membutuhkan  sejumlah kecil material (Meyer et al ., 1982). Hewan uji  yang  digunakan  yaitu  larva Artemia salina L.  yang  berumur  48  jam  karena pada umur ini larva sudah memiliki organ yang  terbentuk  lengkap  sehingga  lebih peka  terhadap  suatu  senyawa  (Panjaitan, 2011).  Hasil  pengujian  toksisitas  ekstrak daun  kersen  dengan  metode  BSLT  dapat dilihat  pada tabel 3.
Tabel 3. Perbandingan nilai LC 50 Sampel LC 50 (μg/mL) Ekstrak Heksan 881 Ekstrak Etil Asetat 1758 Ekstrak Etanol 106
Gambar 3. Grafik analisis probit
Berdasarkan  tabel  diatas  diketahui bahwa  ekstrak  heksan,  ekstrak  etil  asetat, maupun  ekstrak  etanol  96%  menunjukkan tingkat  kematian  larva  semakin  tinggi berbanding lurus dengan semakin tingginya konsentrasi. Persentase kematian larva paling tinggi terjadi pada konsentrasi 1000  μg/mL,  dan  persentase  kematian terendah terjadi pada konsentrasi 1 μg/mL. Pada kontrol negatif tidak terjadi kematian, sehingga dapat dikatakan bahwa kematian larva bukan dikarenakan pengaruh  air  laut,  melainkan  karena ekstrak yang diberikan.
Hasil  analisis  probit  menggunakan persamaan  regresi  linear  menunjukkan bahwa nilai LC 50 ekstrak n-heksan, ekstrak etil  asetat,  dan  ekstrak  etanol  96% berturut-turut  881  μg/mL,  1762  μg/mL, dan  106  μg/mL.  Menurut  Meyer et  al (1982),  ekstrak  dikatakan  bersifat  toksik apabila  memiliki  nilai  LC 50 dengan konsentrasi  kurang  dari  1000  μg/mL, sehingga dapat dikatakan ekstrak n-heksan dan  ektrak  etanol  daun  kersen  termasuk kategori  toksik.  Di  antara  ketiga  ekstrak didapati  ekstrak  etanol  bersifat  paling toksik  diikuti  dengan  ekstrak  n-heksan, dan ekstrak etil asetat.
Terpenoid  dan  alkaloid  merupakan senyawa  penyebab  adanya  sifat  toksik. Berdasarkan  skrining  fitokimia  yang dilakukan  didapati  ekstrak  etanol  positif mengandung terpenoid dan negatif mengandung  alkaloid,  sedangkan  ekstrak yang lainnya negatif mengandung terpenoid maupun alkaloid.
Kemampuan  ekstrak  menyebabkan kematian  larva  udang  melalui  mekanisme stomach  poisoning (racun  perut),  dimana larva  mengalami  gangguan  pada  saluran
cernanya  serta  reseptor  permukaan  mulut larva  dihambat  sehingga  larva  tidak  bisa mendeteksi  makanan  dan  mati  kelaparan (Meyer et al, 1982).

## KESIMPULAN
Ekstrak  n-heksan  daun  kersen ( Muntingia  calabura )  memiliki  senyawa metabolit sekunder fenol, flavonoid, tanin, sedangkan  ekstrak  etil  asetat  memiliki metabolit sekunder fenol, flavonoid, tanin, saponin, serta ekstrak etanol 96% memiliki metabolit sekunder fenol, flavonoid, tanin, saponin, dan terpenoid.
Ekstrak  n-heksan  daun  kersen ( Muntingia  calabura )  memiliki  aktivitas antioksidan  sangat  kuat  dengan  IC 50 sebesar  12,47  μg/mL,  ekstrak  etil  asetat memiliki aktivitas antioksidan kuat dengan IC 50 sebesar  61,30  μg/mL,  dan  ekstrak etanol    memiliki  aktivitas  antioksidan sangat  kuat  dengan  IC 50 sebesar  9,01 μg/mL,
Ekstrak  n-heksan  daun  kersen
( Muntingia calabura ) memiliki sifat toksik dengan  LC 50 sebesar  881  μg/mL,  ekstrak etil  asetat  memiliki  sifat  yang  relatif  tidak toksik  dengan  LC 50 sebesar  1758  μg/mL, dan  ekstrak  etanol  96%  memiliki  sifat toksik dengan LC 50 sebesar 106 μg/mL

## SARAN
Dengan  hasil  penelitian  ini  perlu dilakukan penelitian lebih lanjut mengenai hubungan  kandungan  total  fenol  dan flavonoid  dengan  aktivitas  antioksidan yang sangat kuat dari ekstrak daun kersen, serta isolasi senyawa bioaktifnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Balsano,  C.,  Alisi,  A.  2009.  Antioxidant Effect of Natural Bioactive Compounds. Current
Pharmaceutical  Design . 15: 3063-
3073.
Depkes  RI.  1979. Materia Medika Indonesia  Edisi  III .  Direktorat
Pengawasan  Obat  dan  Makanan.
Depkes RI, Jakarta.
Halimah,  N.  2010.  Uji  Fitokimia  dan  Uji
Toksisitas Ekstrak Tanaman
Anting-Anting  ( Acalypha  indica
L.)  terhadap  Larva  Udang  Artemia salina  L.  [ Skripsi ].  Fakultas  Sains dan  Teknologi,  Universitas  Islam Negeri  Maulana  Malik  Ibrahim Malang.
Handayani,  R.,  Sulistyo,  J.  2008.  Sintesis
Senyawa Flavonoid-α-Glikosida Secara Reaksi Transglikosilasi Enzimatik dan Aktivitasnya sebagai Antioksidan. Biodiversitas .
9(1): 1-4.
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia Edisi ke-2 . ITB Press, Bandung.
Ibrahim, I. A.A., Abdulla, M.A., Abdelwahab, S. I., Al-Bayataty, F., Majid,  N.A.  2012.  Leaves  Extract of Muntingia  calabura Protects Against  Gastric  Ulcer  Induced  by
Ethanol  in  Sprague-dawley  Rats. Clinical and Experimental
Phamacology, USA.
Krishnaraju  A.  V.,  Rao.,  Sundraraju,  A. 2005. Assestment of Biooctivity of Indian  Medical  Plants  tlsing  Brine Shrimp  (Artemia  salina)  Lethality
Assay. lnternational Journal Applied  Science  and  Engineering.
2: 125-134.
Meyer,  B.  N.,  Ferrigni,  N.  R.,  Putnam,  J. E., Jacobsen, L. B., Nichols, D. E.,
Mclaughin,  J.  L.  1982.  Brine Shrimp:  A  Cowenient  General Bioassay for Active Plant Constituenls. Planta Medica . 45: 31-34.
Molyneux, P. 2004. The Use of The Stable
Free Radical diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for
Estimating  Antioxidant  Activity. Songklanakarin  Journal  Science Technology . 26(2): 211-219.
Padmasari,  P.  D.,  Astuti, K.  W., Warditiani,  N.  K.  2013.  Skrining Fitokimia  Ekstrak  Etanol  70% Rimpang Bangle ( Zingiber purpureum ). Jurnal Farmasi Udayana. 2(4): 1-4.
Panjaitan, R. B. 2011. Uji Toksisitas Akut Kulit  Batang  Pulasari  ( Alyxiae cortex) dengan  Metode Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT). [ Skripsi ].  Fakultas Kedokteran,
Universitas Sanata Dharma
Yogyakarta.
Sangi,  M.,  Runtuwene,  M.  R.  J.,  Simbala,
H.  E.  I.,  Makang,  V.  M.  A.  2008. Analisis Fitokimia Tumbuhan Obat di  Kabupaten  Minahasa  Utara.
Chemistry Progress. 1(1) .
Surya,  A.  2018.  Toksisitas  Ekstrak
Metanol Kulit Jengkol ( Pithecellobium  Jiringa )  dengan Metode Brine  Shrimp  Lethality Test terhadap Larva Udang ( Artemia  salina). Jurnal  Rekayasa
Sistem Industri. 3(2): 149-153.
Suryanto,  E.  2012. Fitokimia  Antioksidan . Putra Media Nusantara, Surabaya.
Suryawati,  S.,  Murniyanto,  E.  2011. Hubungan  Sifat  Tanah  Madura dengan  Kandungan  Minyak  Atsiri dan  Tingkat  Kelarutannya  pada Jahe  (Zingiber  offocinale  L.).
Agrovigor . 4(2): 33-41.
Youngson, R. 1998. Antioxidants: Vitamins  C  &  E  for  Health .
Sheldon Press, Great Britain.
Zakaria,  Z.  A.,  Nor  Hazalin,  A.  M.  N., Zaid,  S.  N.  H.  M.,  Ghani,  M.  A.,
Hassan,  M.  H.,  Gopalan,  H.  K., Sulaiman, M. R. 2007. Antinociceptive, Anti- Inflammatory and Antipyretic Effects  of Muntingia  calabura Aqueous Extract in Animal Models. Journal of Natural
Medicines . 61(4): 443-448.