## Pengaruh Bekatul Beras Hitam terhadap Profil Farmakokinetika Glibenklamid  Pada Tikus Hiperglikemik

## Effect of Black Rice Bran on the Pharmacokinetics Profile of Glibenclamide in Hyperglycemic Rats
Arifah Sri Wahyuni 1,4 , Lukman Hakim 2 , Arief Nurrochmad 2 , Puji Astuti 3 1 Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinik Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta 2 Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Sekip Utara, Yogyakarta
3 Departemen Biologi Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Sekip Utara, Yogyakarta
4 Program Doktor Ilmu Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada, Sekip Utara, Yogyakarta email: arifah.wahyuni@ums.ac.id
(tanggal diterima: 11-09-2020, tanggal disetujui: 03-11-2020)

## INTISARI
Antosianin dalam bekatul beras hitam (BBH) mempunyai kemampuan untuk menurunkan gula darah.  BBH  dapat  digunakan  bersamaan  dengan  antidiabetik  oral  Glibenklamid  (Gli)  untuk mengoptimalkan  terapi  diabetes  melitus.  Glibenklamid  suatu  asam  lemah  diabsorpsi  secara  baik  di saluran  cerna.  Absorpsi  BBH  juga  baik  pada  kondisi  asam.  Tujuan  penelitian  ini  mengkaji  profil farmakokinetik penggunaan bersama Gli  dan BBH pada tikus hiperglikemik .
Penelitian kuantitatif ini dilakukan dengan rancangan acak lengkap satu arah terhadap sepuluh (10) ekor tikus yang telah hiperglikemik, dibagi dalam dua kelompok. Tikus kelompok I mendapatkan perlakuan Gli 5 mg/kgBB, dan kelompok II mendapat Gli 5 mg/kgBB bersama dengan BBH 50 mg/kgBB. Sampling dilakukan pada jam ke 1, 2, 4,6 ,8 dan 24 setelah perlakuan. Kadar Gli dalam darah ditetapkan dengan Liquid Chromatography/Mass Spectroscopy (LC/MS).
Hasil  penelitian  menunjukkan  pada  fase  absorpsi,  pemberian  BBH  bersama  Gli  tidak mempengaruhi profil Gli yang ditinjau dari parameter Tmaks, Cmaks dan AUC 0-inf . Demikian pula pada fase  distribusi  dan  eliminasi  yang  ditinjau  dari  parameter  V D ,  Cl T dan  waktu  paro  eliminasi  (t 1/2 ). Sehingga pemberian BBH tidak mempengaruhi parameter farmakokinetik Gli pada tikus hiperglikemik
Kata kunci : Antosianin; Bekatul beras hitam; Glibenklamid; Profil farmakokinetik .

## ABSTRACT
Anthocyanins in black rice bran (BBH) have the ability to lower blood sugar. BBH can be used together with the oral antidiabetic Glibenclamide (Gli) to optimize the therapy for diabetes mellitus. Glibenclamide, a weak acid, is well absorbed in the gastrointestinal tract. The absorption of BBH is also good under acidic conditions. The aim of this study was to examine the pharmacokinetic profile of Gli used with BBH in hyperglycemic rats..
The  study  was  designed  using  a  one-way  completely  randomized  design  of  ten  (10) hyperglycemic rats, divided into two groups. Group I rats received Gli 5 mg / kgBW treatment, and group II received Gli 5 mg/kgBW along with BBH 50 mg / kgBW. Sampling was carried out at 1, 2, 4,6, 8 and 24  hours  after  treatment.  Gli  levels  in  the  blood  were  determined  by  Liquid  Chromatography/Mass Spectroscopy (LC/MS).
The results showed that in the absorption phase, giving BBH with Gli did not affect the Gli profile in terms of parameters Tmax, Cmax and AUC 0-inf . Likewise, in the distribution and elimination phases in terms of parameters V D , Cl T and elimination half-time (t 1/2 ). So that the provision of BBH does not affect the pharmacokinetic parameters of Gli in hyperglycemic rats.
Key words : Anthocyanins; black rice bran; Glibenclamide; pharmacokinetic profile .

## 1. PENDAHULUAN
Glibenklamid  (Gli) dalam pengobatan klinis di Indonesia masih menjadi pilihan untuk mengontrol gula darah untuk diabetes melitus tipe 2. Obat ini mengontrol gula darah  dengan  meningkatkan  sekresi  insulin  oleh  sel  beta  pancreas  (1).  Efektivitas penggunaan Gli tunggal pada pasien diabetes melitus tipe 2 disebutkan tercapai 66,7% berhasil mengontrol gula darah pada hari ke-5 (2). Namun penggunaan Gli setelah 4 tahun pemakaian akan terjadi kerusakan sel beta pancreas yang lebih cepat dibanding dengan pemakaian insulin (3).  Kerusakan sel beta pancreas ini dapat dipicu dengan peningkatan  ROS  yang  diproduksi  dari  hasil  metabolisme  asam  lemak  (FA)  dan glukosa  (4).  Produksi  ROS  diperlukan  untuk  sekresi  insulin  melalui  peningkatan Glucose Stimulated Insulin Secretion (GSIS), namun jika produksi ROS berlebihan atau berkelanjutan akan berkorelasi negatif dengan proses sekresi insulin  (5).
Peningkatan ROS dapat ditekan dengan suatu antioksidan, diantaranya bekatul beras  hitam  (BBH)  yang  mengandung  flavonoid  golongan  apigenin,  kuersetin  dan antosianin  dan  telah  dibuktikan  mempunyai  aktivitas  antioksidan  yang  tinggi  (6,7). Selain sebagai antioksidan, BBH juga mempunyai kemampuan menurunkan gula darah (8). Pemakaian secara bersama gibenklamid dan BBH mempunyai keuntungan mampu menurunkan glukosa darah bahkan dapat mencegah kerusakan sel beta pankreas (9). Di  masyarakat  pemakaian  antara  Gli  dan  bahan  alam  seperti  BBH  dapat  digunakan secara  bersama  atau  diberikan  jeda.  Untuk  itu  perlu  dipelajari  lebih  lanjut  adanya interaksi farmakokinetik pemakaian kombinasi tersebut ketika digunakan pada saat bersamaan.
Gli  adalah  suatu  asam  lemah,  absorbsinya  akan  efektif  di  lambung,  dan mengalami peningkatan absorbsi pada kondisi hiperglikemik(10). Absorpsi antosianin dalam BBH juga efektif di saluran cerna. Apabila keduanya digunakan secara bersama akan  berpotensi  terjadi  interaksi  pada  fase  farmakokinetik.  Untuk  itu  pemakaian bersama  Gli  dan  BBH  perlu  ditetapkan  parameter  farmakokinetik  dibandingkan pemakaian tunggalnya pada kondisi hiperglikemik.

## 2. METODE PENELITIAN

## 2.1. ALAT DAN BAHAN
BBH  (Oriza  Sativa,  L)  yang  ditanam  di  daerah  Klaten  Jawa  Tengah, Glibenklamid  (Gli)  yang  dibeli  dari  PT.  Indofarma,  Jakarta;  alloxan  monohydrate (Sigma-Aldrich, NSW, Australia), alkohol (teknis), HCl (teknis), aquades, metanol LC- MS Grade (Merck), aqua water for injection (WFI).

## 2.2. Hewan UJI
Tikus Wistar jantan dengan bobot (160–180 ), umur 2-3 bulan yang diperoleh dari  Laboratorium  Farmakologi  Universitas  Muhammadiyah  Surakarta.  Tikus diberikan  pakan  standard  yang  seimbang  dan  minum  ad  libitum,  dipelihara  dalam kondisi  ruang  pemeliharaan  dengan  suhu  (25±1  C)  dan  mendapat  pencahayaan
dengan  siklus  gelap/terang  12  jam  gelap/12  jam  terang.  Tikus  diaklimatisasikan selama  seminggu  sebelum  digunakan  dalam  penelitian  ini.  Prosedur  eksperimental yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  telah  mendapat  persetujuan  dari  komisi  etik penelitian kesehatan (KEPK) FK UMS dengan nomor surat KEPK (No. 1742/A.1/KEPK- FKUMS/XI/2018).

## 2.3. CARA KERJA
2.3.1. Pembuatan ekstrak bekatul beras hitam diperkaya sianidin-3-glukosida Bekatul  beras  hitam  (BBH)  yang  telah  dikeringkan,  direndam  selama  2  jam pada 50°C dengan etanol : air : asam klorida (50:50:0,5,v/v/v) dengan rasio serbuk: penyari  (01:10)(11). Filtrat  diuapkan  dengan  vakum  evaporator  selama  6  jam  dan dilanjutkan  dengan  dry  exhauser  selama  24  jam  hingga  didapatkan  ekstrak  kental. Ekstraksi ini dilakukan sebagai upaya memperkaya kandungan sianidin-3-glukosida. Ekstrak  ini  telah  ditetapkan  kandungan  antosianin  totalnya  sebesar  (292,79±6,96)  g/g.

## 2.3.2. Pemodelan hewan uji hiperglikemik
Sepuluh (10) ekor tikus diinduksi dengan aloksan 150 mg/kgBB (0,3% dalam larutan saline) secara intraperitoneal. Dua (2) jam berikutnya diberikan glukosa 20% secara peroral untuk menghindari hipoglikemik. Kadar gula darah dipantau pada hari ke 0 sebagai data awal dan hari ke-5 induksi. Hewan uji dijadikan model tikus diabetes jika menunjukkan kadar gula darah > 200  mg/dL. Pengambilan darah melalui  vena conjunctiva  dengan  menggunakan  mikrokapiler  pada  mata.  Penetapan  kadar  gula darah dilakukan sebelum perlakuan dan setelah induksi aloksan hari ke 4. Penetapan Kadar gula darah dilakukan dengan metode spektrofotometri dengan reagen Glucose Oxsidase – Peroxidase Aminoantypirin (GOD-PAP) (12).

## 2.3.3. Perlakuan dengan Glibenklamid tanpa dan dengan BBH
Sepuluh (10 ekor) tikus yang telah menunjukkan hiperglikemik dibagi menjadi 2 kelompok, masing-masing terdiri dari 5 ekor. Kelompok I diberi Gli (5 mg/kgBB), kelompok II diberi Gli (5 mg/kgBB) + ekstrak BBH (50mg/kgBB). Semua perlakuan diberikan  secara  oral.  Sampling  dilakukan  pada  jam  ke-1,  2,  4,  6,  8,  24.  Setiap pengambilan darah, tikus diganti cairan dengan saline 1 mL. Serum yang terkumpul disimpan pada suhu -21°C. Kadar Gli dalam serum ditetapkan dengan LC-MS.

## 2.3.4. Penetapan kadar Glibenklamid dalam serum dengan LCMS
Sebanyak 100 µL serum yang mengandung Gli dalam tabung effendorf 1,5 mL ditambahkan methanol LC-MS grade sampai  1000 µL. Campuran disentrifuge dengan kecepatan  8000  rpm  selama  10  menit.  Supernatan  dipisahkan  dan  disaring menggunakan  filter  0,2  µm.  Sampel  dimasukkan  dalam  screw  top  vial  LC-MS,  siap diinjekkan ke LCMS.
Parameter  Alat  LC-MS:  Waters  UPLC-XevoTQD  Tandem  Mass  Spectroscopy. Cappillary  Voltage  3750  V,  Cone  Voltage  25  V,  Dessolvation  Temperature  500oC, Collision Energy 20 V, Ionisasi ES+, Parent Ion Glibenclamide 493,88 m/z, daughter ion 368,9 m/z. Kolom/fase diam: ACQUITY UPLC BEH C18 1.7 µm 2.1x100 mm column. Fase gerak: Metanol : Air (80:20) LCMS Grade (Merck), flow rate 0,3 mL per menit.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Pemodelan  hiperglikemik  dengan  induksi  aloksan  150  mg/kgBB intraperitoneal
Kondisi hiperglikemik tikus dibuat dengan memberikan aloksan sebagai agen diabetogenik.  Aloksan  secara  cepat  dapat  masuk  ke  sel  beta  pancreas  dan    dapat mengakibatkan gangguan sensitivitas insulin perifer dalam waktu singkat (13). Semua hewan  uji  yang  diinduksi  dengan  aloksan  150  mg/kgBB  secara  intraperitoneal menunjukkan hiperglikemik ke 5. Rata-rata kadar gula darah seluruh hewan uji yang diinduksi adalah (288,5 ±67,87) mg/dL (Tabel 1).
Tabel 1. Data glukosa dalam darah sebelum dan setelah diinduksi aloksan 150 mg/kgBB
Kelompok Data kadar gula dalam darah (mg/dL) pada saat Sebelum induksi (n= 5) Setelah induksi (n=5) I. Gli 5 mg/kgBB 115,2 ± 11,82 287,4 ± 51,97 II. Gli 5 mg/kgBB + BBH 50 mg/kgBB 88,4 ± 8,14 289,6 ± 87,53 Rata-rata seluruh kelompok (n=10) 101,8 ± 17,06 288,5 ±67,87

## 3.2. Profil  farmakokinetik  glibenkalmid  (Gli)  dalam  darah  tanpa  dan  dengan pemberian Bersama BBH pada tikus hiperglikemik
Kadar Gli dalam darah yang ditetapkan dengan LC-MS dari jam ke 1 sampai jam ke 24 menunjukkan kadar puncak pada jam ke-4. Baik kelompok Gli  dan kelompok Gli+BBH menunjukkan profil kadar obat dalam darah yang sama (Tabel 2, Gambar 1).
Tabel 2. Data kadar Gli dalam darah (ng/mL) kelompok I dan II pada sampling dari jam 1 sampai jam ke-24 pada tikus hiperglikemik
Jam ke- Data kadar Gli (ng/mL) dalam darah masing-masing kelompok setelah pemberian I. Gli  5 mg/kgBB II. Gli 5 mg/kgBB + BBH 50 mg/kgBB 1 5,50 ± 0,04 5,48 ± 0,00 2 10,97 ± 1,39 14,17 ± 4,33 4 35,52 ± 2,59 41,52 ± 9,29 6 20,15 ± 3,89 20,97 ± 1,60 8 6,52 ± 0,14 9,62 ±  2,83 24 6,01 ± 0,16 6,09 ± 0,34
0 1 0 2 0 3 0 0 1 0 2 0 3 0 4 0 5 0 W a k t u   ( j a m ) K a d a r G l i d a l a m d a r a h ( n g / m L ) G l i   5   m g / k g B B G l i   5   m g / k g B B   +   B B H   5 0 m g / k g B B
Gambar  1. Kurva kadar Gli dalam darah pada kelompok I. Gli 5 mg/kgBB dan kelompok II. Gli + BBH 50 mg/kgBB
Parameter farmakokinetik yang ditetapkan adalah Tmaks, Cpmaks dan AUC 0- inf untuk membandingkan kefektifan absorpsinya dan parameter ClT dan t1/2 untuk keefektifan eliminasinya ( Tabel 3 ). Kedua kelompok menunjukkan parameter farmakokinetik yang tidak berbeda (p>0,05). Waktu mencapai puncak kedua kelompok tercapai pada jam ke-4. Dengan nilai Cpmaks yang tidak berbeda signifikan, yaitu (35,52 ± 7,04) ng/mL pada kelompok  Gli  dan  (41,52  ±  9,29)  ng/mL.  Jumlah  Gli  dalam  darah  yang  ditunjukkan dengan  nilai  AUC 0-inf tidak  mengalami  perbedaan  (p>0,05),  yaitu    (329,77  ±  0,02) ng/ml.  jam  pada  kelompok  Gli  dan  (379,44  ±  49,72)  ng/ml.  jam  pada  kelompok Gli+BBH.
Rata-rata lama tinggal molekul obat dalam sirkulasi sitemik dan jaringan yang ditunjukkan dengan nilai Mean Residence Time (MRT), ditemukan bahwa BBH tidak memberikan pengaruh. Hasil MRT pada kelompok Gli (17,10 ±0,98) jam dan kelompok Gli+BBH sebesar (16,39 ± 1,89) jam ( Tabel 3 ). Nilai MRT ini tidak tergantung pada jalur pemberian, ketersediaan hayatinya. Nilai ini akan akurat pada pemberian obat dengan ekstravaskuler dengan absorbsi yang cepat (14). Parameter ini dapat digunakan untuk memperkirakan durasi efek untuk molekul yang bekerja langsung pada tempat aksinya.
Pada fase distribusi, profil farmakokinetik Gli yang diberikan tunggal maupun bersama dengan BBH menunjukkan nilai V D yang tidak berbeda signifikan (p>0,05). Berturut-turut nilai VD (mg/kgBB/ng/mL) pada kedua kelompok adalah (0,27 ± 0,02) dan (0,24 ± 0,03) ( Tabel 3 ).
Keefektivan fase eliminasi dapat dinilai dari parameter Cl T dan t 1/2 eliminasinya. Kedua parameter ini tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan (p>0,05). Nilai parameter Cl T keduanya kelompok Gli dan kelompok Gli+BBH meunjukkan nilai yang sama, yaitu (0,02 ± 0,00) (mg/kg)/(ng/ml)/jam. Demikian
pula nilai T 1/2 eliminasi kedua kelompok berturut-turut (10,21 ± 0,71) dan (10,44 ± 1,94) jam ( Tabel 3 ).
Tabel 3. Nilai parameter farmakokinetika Gli setelah pemberian Gli oral 5 mg/kgBB (kontrol) dan adanya praperlakuan bersama BBH oral 50 mg/kgBB pada tikus hiperglikemik
Parameter farmakokinetik Satuan Nilai (X ± SD) Kelompok Gli Kelompok Gli+ BBH T maks jam 4,00 ± 0,00 4,00 ± 0,00 Cp maks ng/mL 35,52 ± 7,04 41,52 ± 9,29 AUC 0-inf ng/ml. jam 329,77 ± 0,02 379,44 ± 49,72 V D mL/kg 0,27 ± 0,02 0,24 ± 0,03 T 1/2 eliminasi jam 10,21 ± 0,71 10,44 ± 1,94 Cl T mL/jam/kg 0,02 ± 0,00 0,02 ± 0,00 MRT ( Mean Residence Time ) jam 17,10 ±0,98 16,39 ± 1,89

## 3.3. Pembahasan
Induksi  aloksan  150  mg/kgBB  pada  tikus  mampu  meningkatkan  kadar  gula dalam darah naik, dengan kadar gula darah tertetapkan  >200 mg/kg BB pada hari ke- 4  baik  kelompok  I  maupun  II (Tabel  1 ).  Rata-rata  gula  darah  Aloksan  akan meningkatkan  glukosa  darah  melalui  peningkatan  konsentrasi  ion  kalsium  bebas sitosolik  pada  sel  beta  pankreas.  Akibatnya,  konsentrasi  insulin  meningkat  secara signifikan dengan ada atau tiadanya glukosa. Lebih lanjut, kenaikan insulin ini akan menimbulkan gangguan pada sensitivitas insulin perifer dalam waktu singkat (13,15). Sensitivitas  insulin  yang  menurun  inilah  yang  menyebabkan  kadar  glukosa  dalam darah meningkat.
Pada  kondisi  hiperglikemik  parameter  farmakokinetik  Gli  mengalami perubahan, diantaranya fase absorbsi akan mengalami peningkatan untuk parameter Cpmaks, Tmaks dan AUC( 0–720 min ) (10). Gli adalah suatu asam lemah dengan nilai pKa =  4,32  akan  mudah  diabsorbsi  pada  saluran  cerna  (16).  Disamping  itu  rendahnya ekspresi  P-glycoprotein  (P-gp)  pada  kondisi  diabetes  menyebabkan  efflux  dari  Gli menjadi rendah pula (17). Sampling dilakukan sampai dengan 24 jam yang didasarkan pada waktu paruh eliminasi Gli 2-6 jam (1), sehingga jam ke 24 atau 4 kali T1/2 nya diharapkan kadar obat di dalam darahnya sudah tereliminasi lebih dari 95% (Tabel 2, Gambar  1).
Gli yang diberikan secara oral pada tikus yang hiperglikemik tanpa dan dengan BBH menunjukkan profil farmakokinetik yang hampir mirip, dengan waktu tercapainya puncak terjadi sekitar jam ke-4. Parameter farmakokinetik Gli tidak berubah dengan pemberian bersama BBH baik pada fase absorbsi maupun fase eliminasi. Kadar puncak Gli tercapai pada kadar (35,52 ± 7,04) ng/mL, sementara adanya BBH yang diberikan bersama tidak meningkatkan Cpmaks secara signifikan, yaitu (41,52 ± 9,29) ng/mL (
Tabel 3 ).  Hal  ini  kemungkinan  tidak  ada  interaksi  farmakokinetik  diantara kedua  senyawa  itu.  BBH  dengan  kandungan  sianidin-3-glukosida  (C3G),  suatu antosianin  yang  mencapai  kadar  puncak  pada  jam  ke    (1,8  ±  0,2)  (18).  Antosianin dalam bentuk glikosida akan diserap oleh di lambung dan usus secara cepat dan efisien (19,20).  Antosianin  seperti cyanidin-3-glukosida dan pelargonidin-3-glukosida dapat diserap  dalam  bentuk  utuh  di  gastrointestinal  (21).  Glikosida  antosianin  tidak  lagi terdeteksi di saluran GI setelah 8 jam pemberian  (22). Antosianin dapat diserap ke dalam  sel  epitel  usus  melalui  transporter  glukosa  seperti glukosa  transporter 2 (GLUT2) dan Sodium-Dependent Glucose Transporter 1 (SGLT1) (23). Gambaran fase distribusi Gli ditunjukkan oleh parameter V D , yang nilainya tidak berbeda dengan kelompok yang diberikan BBH. Nilai V D yang ditemukan berturut-turut kelompok Gli dan kelompok Gli+BBH adalah (0,27 ± 0,02); (0,24 ± 0,03) mL/kgBB ( Tabel 3 ).    Nilai  tersebut  tergolong  kecil,  hal  ini  dikarenakan  Gli  secara  luas terikat  pada  protein  plasma  (16).  Pengikatan  obat  oleh  protein  darah  akan mempengaruhi volume distribusinya (14).
Waktu paruh eliminasi Gli yang diberikan oral pada tikus didapatkan nilai (10,21 ± 0,71) jam. Nilai ini tidak terpengaruh dengan pemberian BBH yang menunjukkan nilai t 1/2 nya sebesar (10,44 ± 1,94) jam. Pada fase eliminasi ini nilai klirens Gli juga tidak terpengaruh dengan pemberian BBH ( Tabel 3 ). Hal ini terkait dengan pelibatan enzim pemetabolisme yang berbeda diantara Gli dan BBH. Glibenklamid melibatkan CYP3A4 sebagai enzim utama dalam metabolisme Gli secara in vitro dengan kontribusi lebih dari 50%, meskipun isoform CYP lainnya seperti CYP2C19  dan CYP2C8 juga berkontribusi pada metabolisme Gli (24).  Sementara  antosianin  banyak  ditemukan  dalam  plasma  sebagai  glukuronida, sulfat dari sianidin, dan sebagai bentuk yang tidak berubah (22). Hal ini menunjukkan kemungkinan tidak terjadi interaksi pada proses metabolisme.
Ditinjau  dari  proses  absorpsi  dan  eliminasinya,  pemberian  BBH  tidak mempengaruhi  profil  farmakokinetik  Gli,  maka  perlu  dikaji  lebih  lanjut  untuk pengaruh  pada  farmakodinamik  Gli  dalam  mengontrol  gula  darah,  mengingat kemampuan BBH yang dapat berlaku sebagai antioksidan, mempunyai potensi untuk menghambat  dan  memperbaiki  kerusakan  sel  yang  ditimbulkan  pada  kondisi hiperglikemik.

## 4. KESIMPULAN
Pemberian  BBH  secara  oral  pada  tikus  diabetes  tidak  mempengaruhi  profil farmakokinetika Gli baik fase absorbsi (Tmaks, Cpmaks, AUC 0-inf ), fase distribusi (V D ) maupun fase eliminasi (T 1/2 dan Cl T ).

## 5. UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Universitas  Muhammadiyah Surakarta yang telah mensupport dan mendanai penelitian ini.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
(1).   Soelistijo S, Novida H, Rudijanto A, Soewondo P, Suastika K, Manaf A, et al. 2015. Konsesus  Pengelolaan  Dan  Pencegahan  Diabetes  Melitus  Tipe2  Di  Indonesia. Perkeni. 82 p.
(2).   Lestari W. 2013. Gambaran Efektivitas Penggunaan Obat Antidiabetik Tunggal dan Kombinasi Dalam Mengendalikan Gula Darah Pada Pasien Diabetes Mellitus Tipe II di Rumah. Skripsi.
(3).   Alvarsson M, Sundkvist G, Lager I, Berntorp K, Fernqvist‐Forbes E, Steen L, et al. 2008.  Effects  of  insulin  vs.  glibenclamide  in  recently  diagnosed  patients  with type 2 diabetes: a 4‐year follow‐up. Diabetes Obes Metab;10(5):421–9.
(4).   Graciano M., Valle M, Kowluru A, Curi R, Carpinelli A. 2011. Regulation of insulin secretion  and  production  of  reactive  oxygen  species  by  free  fatty  acids  in pancreatic islets. Islets;3(5):213–23.
(5).   Pi J, Bai Y, Zhang Q, Wong V, Floering LM, Daniel K, et al. 2007. Reactive oxygen species as a signal in glucose-stimulated insulin secretion. Diabetes;56(7):1783– 91.
(6).   Kaneda I, Kubo F, Sakurai H. 2006. Antioxidative Compounds in the Extracts of Black Rice Brans. J Heal Sci;52(5):495–511.
(7).   Ghasemzadeh  A,  Karbalaii  MT,  Jaafar  HZE,  Rahmat  A.  2018.  Phytochemical constituents, antioxidant activity, and antiproliferative properties of black, red, and brown rice bran. Chem Cent J;12(1):1–13.
(8).   Hlaing EE, Piamrojanaphat P, Lailerd N, Phaonakrop N, Roytrakul S. 2017. Anti- Diabetic Activity and Metabolic Changes in Purple Rice Bran Supplement Type 2 Diabetic Rats by Proteomics. Int J Pharmacogn Phytochem Res;9(3):428–36.
(9).   Wahyuni AS, Hakim L, Nurrochmad A, Astuti P.  2020. The sinergistic effect of black  rice  bran  extract  and  glibenclamide  on  protecting  renal,  hepatic,  and pancreatic cells in alloxan induced rats. Int J Pharm Res;12(1):509–17.
(10).   Li Y, Wei Y, Zhang F, Wang D, Wu X. 2012. Changes in the pharmacokinetics of glibenclamide in rats with streptozotocin-induced diabetes mellitus. Acta Pharm Sin B;2(2):198–204.
(11).   Bae IY, An JS, Oh IK, Lee HG. 2017. Optimized preparation of anthocyanin-rich extract  from  black  rice  and  its  effects  on  in  vitro  digestibility.  Food  Sci Biotechnol;26(5):1415–22.
(12).   Ambade  V.,  Sharma  Y.,  Somani  B.  1998.  Methods  for  Estimation  of  Blood Glucose : a Comparative Evaluation. Med J Armed Forces India;54(2):131–3.
(13).   Nugroho  AE.  2006.  Animal  Models  of  Diabetes  Mellitus :  Pathology  and Mechanism of Some Diabetogenics. Biodiversitas, J Biol Divers;7(4):378–82.
(14).   Hakim L. 2010. Farmakokinetik. Yogyakarta: Bursa Ilmu; 361 p.
(15).   Szkudelski T. 2001. The Mechanism of Alloxan and Streptozotocin Action in β Cells of Rat Pancreas. Minireview, Physiol Res;50:536–46.
(16).   Chang  CT,  Ying  AJ,  Woei  WJ,  Siew  TS,  Kuen  CS,  Beoy  LA,  et  al.  2020. Bioequivalence and pharmacokinetic comparison of two fixed dose combination of  metformin/glibenclamide  formulations  in  healthy  subjects  under  fed condition. Med J Malaysia;75(3):286–91.
(17).   Nawa  A,  Wakako  F.,  Kishioka  S,  Tokuyama  S.  2011.  Decreased  Expression  of Intestinal P-glycoprotein Increases the Analgesic Effects of Oral Morphine in a Streptozotocin-induced Diabetic Mouse Model. Drug Metab Pharmacokinet;Volume 26(Issue 6):Pages 584-591.
(18).   De Ferrars RM, Czank C, Zhang Q, Botting NP, Kroon PA, Cassidy A, et al. 2014. The  pharmacokinetics  of  anthocyanins  and  their  metabolites  in  humans.  Br  J Pharmacol;171(13):3268–82.
(19).   Talavéra S, Felgines C, Texier O, Besson C, Manach C, Lamaison JL, et al. 2004. Anthocyanins  are  efficiently  absorbed  from  the  small  intestine  in  rats.  J Nutr;134(9):2275–9.
(20).   Fernandes I, de Freitas V, Mateus N. 2014. Anthocyanins and human health: How gastric absorption may influence acute human physiology. Nutr Aging;2(1):1– 14.
(21).   Fang J. 2014. Bioavailability of anthocyanins. Drug Metab Rev;46(4):508–20.
(22).   Olivas-Aguirre FJ, Rodrigo-García J, Martínez-Ruiz N del R, Cárdenas-Robles AI, Mendoza-Díaz  SO,  Álvarez-Parrilla  E,  et  al.  2016.  Cyanidin-3-O-glucoside: Physical-Chemistry, Foodomics and Health Effects. Molecules;21(9):1–30.
(23).   Zou T Bin, Feng D, Song G, Li HW, Tang HW, Ling WH. 2014. The role of sodium- dependent glucose transporter 1 and glucose transporter 2 in the absorption of cyanidin-3-O-β-glucoside in caco-2 cells. Nutrients;6(10):4165–77.
(24).   Zhou  L,  Naraharisetti  S.,  Liu  L,  Wang  H,  Lin  Y.,  Isoherranen  N,  et  al.  2011. Contributions  of  human  cytochrome  P450  enzymes  to  glyburide  metabolism. Biopharm Drug Dispos;31(4):228–42.