Screening Of C14-Urea Tetrandrine Derivatives From Herbal Vine ( Stephania Tetrandra ) As Candidates In Silico Anti-Cancer Leukimia
1 Richa Mardianingrum * , 1 Mia Nurfazriah, 2 Nur Aji 1,2,3 Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Perjuangan Tasikmalaya *Coresponding author: richamardianingrum@unper.ac.id
Info Artikel

## Abstrak
Disubmit 28-11-2023
Direvisi 19-01-2023 Diterbitkan 30-11-2023
Kata Kunci: 1OPJ,  C 14 -urea  tetrandrin, in silico , leukimia, Tetra6.
P-ISSN : 2086-3292
E-ISSN : 2655-9900 Kanker  darah  (leukimia)  merupakan  kanker  yang  merusak  darah  dan sumsum  tulang  dimana  sel-sel  darah  diproduksi.  Sebagian  besar penanganan  dan  pengobatan  kanker  leukimia  dilakukan  dengan  cara kemoterapi. Salah satu obat yang digunakan yaitu ibrutinib (Imbruvica®). Ibrutinib  efektif  untuk  pengobatan  Leukimia  Limfositik  Kronis  (LLK), namun  apabila  berlangsung  selama  bertahun-tahun    pengobatan  tersebut dapat menimbulkan efek merugikan jangka panjang. Tujuan dari penelitian ini adalah  untuk mencari kandidat  bahan  obat dari senyawa turunan  C 14 - urea  tetrandrin  terhadap  reseptor  antikanker  leukimia  (1OPJ)  secara in silico .  Penelitian  ini  dilakukan  secara in  silico diantaranya  skrining toksisitas,  farmakokinetik  dan Lipinski  rule  of  five ,  setelah  dilakukan skrining  dilanjutkan  dengan  penambatan  molekul  ( docking )  dan  simulasi dinamika molekular. Dari  24 senyawa turunan diperoleh  7 senyawa lolos skrining  (tetra1,  tetra4,  tetra5,  tetra6,  tetra7,  tetra23,  dan  tetra24) sehingga  diperoleh  perhitungan  energi  total  kompleks  (MM-GBSA)    yang paling  kecil  terdapat  pada  senyawa  tetra6  dengan  nilai  sebesar  -68,82 kkal/mol,  yang  mana  nilai  ini  lebih  kecil  dan  stabil  jika  dibandingkan dengan kontrol positif (ibrutnib) dengan nilai -30,74 kkal/mol. Maka dapat disimpulkan semyawa tetra6 memiliki aktivitas biologis terhadap reseptor antikanker leukimia (1OPJ).

## Abstract
Keywords: 1OPJ,  C14-urea  tetrandrin,  in silico, leukemia, Tetra6. Blood  cancer  (leukemia)  is  a  cancer  that  damages  the  blood  and  bone marrow  where  blood  cells  are  produced.  Most  of  the  treatment  and treatment of leukemia cancer  is  done  by  chemotherapy.  One of the drugs used  is  ibrutinib  (Imbruvica®).  Ibrutinib  is  effective  for  the  treatment  of
Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL), but if it is continued for years it can have long-term adverse effects. The purpose of this study was to search for candidate  drugs  from  C14-urea  tetrandrin  derivative  compounds  against the  leukemia  anticancer  receptor  (1OPJ)  in  silico.  This  research  was conducted in silico including screening for toxicity, pharmacokinetics and Lipinski  rule  of  five,  after  screening  followed  by  molecular  docking  and molecular  dynamics  simulations.  Of  the  24  derived  compounds,  7 compounds  passed  the  screening  (tetra1,  tetra4,  tetra5,  tetra6,  tetra7, tetra23, and tetra24) so that the smallest total complex energy calculation (MM-GBSA)  was  found  in  the  tetra6  compound  with  a  value  of  -68.82 kcal/mol,  which  is  smaller  and  more  stable  than  the  positive  control (ibrutnib)  with  a  value  of  -30.74  kcal/mol.  So  it  can  be  concluded  that tetra6  compounds  have  biological  activity  against  leukemia  anticancer receptors (1OPJ)

## MEDIA INFORMASI

## Unit Penelitian dan Pengabdian Masyarakat Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Tasikmalaya
https://ejurnal2.poltekkestasikmalaya.ac.id/index.php/bmi

## PENDAHULUAN
Kanker  darah  (leukimia) merupakan  kanker  yang  merusak  darah  dan sumsum  tulang  dimana sel-sel darah diproduksi (Sung et al ., 2021). Sebagian besar perawatan dan pengobatan pada penderita kanker  leukimia  dilakukan  dengan  cara  kemoterapi.  Salah  satu  obat  yang  digunakan  yaitu  ibrutinib (Imbruvica®) (Muttaqin, 2019). Ibrutinib efektif untuk pengobatan Leukimia Limfositik Kronis (LLK), Namun  apabila  berlangsung  selama  bertahun-tahun    pengobatan  tersebut  dapat  menimbulkan  efek merugikan  jangka  panjang  ( adverse event =  AE)  dan  mengakibatkan  penurunan  kualitas  hidup  bagi pasien, sehingga diperlukan suatu trobosan cara pengobatan kanker leukimia dengan efektifitas tinggi dan efek samping yang minimal (Wati & Qoyyimah, 2018).
Berdasarkan latar belakang tersebut, peneliti bermaksud untuk menganalisis senyawa turunan C 14 -urea  tetrandrin  yang  berjumlah  24  senyawa  terhadap  reseptor  1OPJ.  Reseptor  1OPJ merupakan dasar struktur untuk autoinhibition c-Abl tyrosine kinase . c-Abl diatur oleh mekanisme autoinhibitory , gangguan yang menyebabkan leukimia myelogenous kronis (Nagar et al ., 2003). Penelitian dilakukan sebagai upaya pengembangan kandidat obat baru terhadap kanker leukimia yang berasal dari bahan alam yang diharapkan memiliki efektifitas tinggi dan efek samping yang  minimal  untuk pengobatan kanker  leukimia.  Jenis  penelitiannya  ialah  penelitian  eksperimental  yang  dilakukan  secara in silico . Dilakukan    studi  toksisitas,  farmakokinetik  dan  Lipinski  terhadap  ligan  uji.  Ligan  uji  yang  terpilih dilakukan  penambatan  ulang  terhadap  reseptor  untuk  selanjutnya  dilakukan  molekular  dinamika untuk mengetahui senyawa terpilih secara in silico sebagai kandidat baru untuk antikanker leukimia.

## METODE Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  seperangkat  Laptop  untuk  studi in silico (Spesifikasi  CPU  Intel  Celeron  N4000,  up  to  2.6GHz  Memory  4GB  HDD  1  TB)  dan  untuk  proses Molecular Dynamics digunakan PC ( Personal Computer) dengan sistem oprasi Linux Ubuntu 12.04 LTS 64-bit, Processor pentium (R) Dual-Core CPU E660 @ 3,06 GHz, 2048 MB of RAM. Bahan yang digunakan adalah 24 Senyawa turunan C 14 -urea tetrandrin,  1 kontrol positif dan reseptor 1OPJ (Nagar et al ., 2003).

## Preparasi Ligan dan Protein
Analisis  reseptor  dilakukan  dengan  melihat  statistik  plot Ramachandran dari PDBsum pada situs web http://www.ebi.ac.uk/pdbsum/ (In et al ., 2015).  Menggambar 24 struktur senyawa turunan C 14 -urea  tetrandrin menggunakan  aplikasi Chemdraw Ultra 8.0 ,  gambar  ligan  di copy paste ke  dalam aplikasi MarvinSketch, kemudian diprotonasi pada pH 7,4. Dilanjut Conformational search, lalu dipilih nilai yang terkecil  (Arwansyah & Hasrianti, 2014).

## Prediksi Aspek Farmakokinetika dan Toksisitas
Setelah  24  senyawa  turunan  C 14 -urea  tetrandrin  dipreparasi  kemudian  dilakukan  skrining farmakokinetik  pada  program PreADMET ( https://preadmet.bmdre.kr )  dan  toksisitas  senyawa menggunakan perangkat lunak ToxTree (Ruswanto et al ., 2018).

## Studi Lipinski (Drug Scan)
Senyawa  hasil skrining  farmakokinetik    dan  toksisitas  dilanjutkan  skrining Lipinski rule of five ( drug scan ) dengan tujuan untuk mengetahui obat tersebut dapat digunakan atau tidak sebagai obat oral.  Pengamatan  obat  dilakukan  dengan  memperhatikan the rule of good medicine ( Lipinski’s rule of five ) dan bioavaibilitas oral dari ligan
pada situs web http://www.scfbio- itd.res.in/software/drugdesign/lipinski.jsp (Ruswanto et al ., 2018) .
Validasi Metode Penambatan Molekul ( Docking )
Validasi metode penambatan molekul meliputi proses penambatan ulang ( redocking ) ligan dan reseptor  terkompleks.  Penambatan  ulang  molekul  ini  dinyatakan  valid  apabila  menghasilkan  nilai RMSD ≤ 2Å (Puratchikody et al ., 2016). Penambatan Molekul Menggunakan AutoDockTools 1.5.6
Docking dilanjutkan  antara  reseptor  terhadap  ligan  uji  lainnya  dengan  ketentuan  yang  sama dalam  pengaturan  parameter grid  box yang  telah  diperoleh  dari  hasil  validasi  reseptor (Mardianingrum et al ., 2021).

## Simulasi Dinamika Molekul
File yang digunakan pada simulasi  dinamika molekuler adalah hasil dari penambatan molekul dengan  format  (.dlg)  dibuat  kompleks  ligan  dan  reseptor  dengan  menggunakan  konformasi  terbaik. Setelah  dilakukan  konformasi  kemudian  dilakukan  simulasi  dinamika  molekuler  dengan menggunakan software AMBER 16 (Nusa et al ., 2015).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Studi Toksisitas
Selain memberikan efek terapi suatu senyawa obat juga dapat memberikan efek samping atau racun,  sehingga  prediksi  toksisitas  dari  suatu  kandidat  senyawa  obat  baru  diperlukan  untuk mengetahui  potensi  toksik  dari  senyawa  obat  sebagai  bahan  pertimbangan  dalam  penggunaannya (Bhatia et al ., 2015). Uji toksisitas dilakukan secara in silico menggunakan software ToxTree 3.1.0. Tabel 1. Hasil Studi Toksisitas No Senyawa Parameter Cramer Rules Benigni / Bosaa Rulebase Kroes TTC 1 tetra 1 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 2 tetra 2 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 3 tetra 3 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 4 tetra 4 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 5 tetra 5 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 6 tetra 6 High (Class III) Structural Alert for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicit Negligible risk (low probability of a life- time cancer risk greater than 1 in 10^6 7 tetra 7 High (Class III) Structural Alert for genotoxic carcinogenicity Negligible risk (low probability of a life-
No Senyawa Parameter Cramer Rules Benigni / Bosaa Rulebase Kroes TTC Negative for nongenotoxic carcinogenicity time cancer risk greater than 1 in 10^6 8 tetra 8 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 9 tetra 9 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 10 tetra 10 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 11 tetra 11 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 12 tetra 12 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 13 tetra 13 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 14 tetra 14 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 15 tetra 15 High (Class III) Structural Alert for genotoxic carcinogenicity Negligible risk (low probability of a life- time cancer risk
No Senyawa Parameter Cramer Rules Benigni / Bosaa Rulebase Kroes TTC Negative for nongenotoxic carcinogenicity greater than 1 in 10^6 16 tetra 16 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 17 tetra 17 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 18 tetra 18 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 19 tetra 19 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 20 tetra 20 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 21 tetra 21 High (Class III) Structural Alert for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Negligible risk (low probability of a life- time cancer risk greater than 1 in 10^6 22 tetra 22 High (Class III) Negative for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Substance would not be expected to be a safety concern 23 tetra 23 High (Class III) Structural Alert for genotoxic carcinogenicity Negative for Negligible risk (low probability of a life- time cancer risk greater than 1 in 10^
No Senyawa Parameter Cramer Rules Benigni / Bosaa Rulebase Kroes TTC nongenotoxic carcinogenicity 24 tetra 24 High (Class III) Structural Alert for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Negligible risk (low probability of a life- time cancer risk greater than 1 in 10^6 25 Ibrutinib High (Class III) Structural Alert for genotoxic carcinogenicity Negative for nongenotoxic carcinogenicity Negligible risk (low probability of a life- time cancer risk greater than 1 in 10^6
Berdasarkan Analisis dari 24 senyawa turunan C 14 -urea tetrandrin yang lolos kriteria toksisitas yaitu diantaranya tetra1, tetra4, tetra5, tetra6, tetra7, tetra23, dan tetra24 serta obat ibrutinib sebagai obat pembanding. Pada parameter Cramer Rules menghasilkan prediksi toksisitas yang tinggi dengan keterangan High (Class III) .  Berdasarkan  parameter Kroes TTC senyawa  turunan  C 14 -urea  tetrandrin dan  obat  ibrutinib  masih  dalam  ambang  batas  aman  di  dalam  tubuh  manusia.  Pada  parameter Beningni/Bossa Rulebase semua senyawa di prediksi tidak memiliki potensi karsinogenik namun dapat berpotensi mutagenik, dengan demikian senyawa turunan C 14 -urea tetrandrin dinyatakan memenuhi kriteria parameter toksisitas yang cukup baik (Benigni et al ., 2008).

## Studi Farmakokinetik
Pada penelitian ini dilakukan uji farmakokinetik terhadap tujuh senyawa uji yang lolos kriteria pada  pengujian  toksisitas.  Parameter  yang  dianalisis  pada  pengujian  ini  adalah  Caco-2, Human Intestinal  Absorption (HIA),  dan  protein  plasma  yang  terikat  dalam Protein  Plasma  Binding (PPB) (Kartasasmita et al ., 2015)
Tabel 2. Hasil Studi ADME No Nama Ligan Parameter CaCO 2 HIA (%) Plasma Protein Binding (%) 1 tetra1 56,16 97,39 86,73 2 tetra 4 35,08 94,89 80,00 3 tetra 5 56,79 97,84 85,46 4 tetra 6 32,55 97,62 86.20 5 tetra 7 53,94 97,13 86,98 6 tetra 23 22,36 97,38 65,32 7 tetra 24 56,59 97,78 78,55 8 Ibrutinib 38,58 97,27 86,64 Keterangan:Caco-2(nm/sec)<4=permeabilitasrendah,4-70=permeabilitassedang,>70=permeabilitas tinggi;HIA(%)=0–20=tidakdiabsorpsidenganbaik,20–70=cukupterabsorpsi,70–
100=terabsorpsidenganbaik;PBB(%)>90=terikat kuat,<90= terikat lemah Berdasarkan Tabel 2 hasil pengujian farmakokinetik pada senyawa turunan C 14 -urea tetrandrin, menyatakan bahwa senyawa uji secara keseluruhan memiliki permeabilitas yang sedang berada pada rentang  nilai  4-70  nm/sec.  Penyerapan  pada  usus  kecil  manusia  menyatakan  senyawa  obat terabsorpsi dengan baik yakni pada rentang 70-100%. Pengikatan protein plasma memiliki nilai yang menunjukan  senyawa  uji  dengan  protein  plasma  membentuk  ikatan  yang  terikat  lemah  yakni  pada rentang <90% (Harvey et al ., 2013).

## Studi Lipinski’s Rule of Five
Senyawa  uji  yang  lolos  kriteria  farmakokinetik  selanjutnya  dilakukan  uji Lipinski .  Pada umumnya  obat  dirancang  supaya  dapat  digunakan  dengan  penggunaan  oral.  Menurut Lipinski et al . (2001)  studi Lipinski’s  Rule  of Five  merupakan  prediksi  secara in  silico yang  menggambarkan kelayakan suatu struktur kimia kandidat obat untuk dapat dibuat kedalam bentuk sediaan oral
Tabel 3. Hasil Studi Lipinski’s Rule Of Five No Nama Senyawa Parameter Berat Molekul (<500 g/mol) Ikatan Hidrogen (<5) Ikatan Akseptor (<10) Log P (<5) Refaktori Molar (40-130) 1 tetra 1 766 2 11 7.2 217,28 2 tetra 4 710 4 11 6.2 199,68 3 tetra 5 766 1 11 7.2 217,29 4 tetra 6 786 2 11 7.1 217,70 5 tetra 7 836 2 13 7.6 234,57 6 tetra 23 900 1 16 7.6 242,25 7 tetra 24 823 1 13 7.1 230,95 8 Ibrutinib 440 2 7 4.0 126,07
Berdasarkan  Tabel  3  dapat  dinyatakan  bahwa  ke  tujuh  senyawa  turunan  C 14 -urea  tetrandrin tidak memenuhi syarat aturan Lipinski’s Rule Of Five. Dilihat dari nilai LogP ke tujuh senyawa turunan C 14 -urea  tetrandrin  diatas  lima,  dengan  demikian  sifat  hidrofobiknya  tinggi sehingga  obat  akan tertahan  lama  dilipid  dan  dapat  menyebabkan  toksik  (Lipinski,  2001).  Sehingga  diprediksi  ke  tujuh turunan  senyawa  ini  tidak  untuk  didistribusikan  sebagai  obat  oral,  dengan  demikian  senyawa  uji sebagai  kandidat  obat  untuk  antikanker  leukimia  dapat  didistribusikan  sebagai  obat  injeksi (intravena).

## Simulasi Penambatan Molekular
Penambatan  molekul  ( Docking )  merupakan  penambatan  yang  melihat  interaksi  ligan  dan protein  yang  digunakan  untuk  memprediksi  posisi  dari  ligan  ketika  terikat  pada  reseptor (Siswandono,  2016).  Hasil  dari  penambatan  molekul  adalah  nilai  energi  bebas  Gibbs  (∆G)  dan konstanta inhibisi (Ki) (Listyani et al ., 2019) Tabel 4. Hasil penambatan molekul senyawa turunan C 14 -urea tetrandrin beserta ibrutinib sebagai obat pembanding No Nama Ligan Binding Energi (kkal/mol) Intermol Energi (kkal/mol) Internal Energi (kkal/mol) Torsional Energi (kkal/mol ) Unbound Energi (kkal/mol) Ki (nM) Run 1 tetra 1 -8,01 -12,78 +2,24 +4,77 +2,24 1,35 90 2 tetra 4 -11,55 -15,73 -3,29 +4,18 -3,29 3,39 84 3 tetra 5 -8,90 -13,37 -0,51 +4,47 -0,51 299,49 30 4 tetra 6 -11,77 -16,54 -3,54 +4,77 -3,54 2,37 21 5 tetra 7 -8,4 -14,07 -2,52 +5,67 -2,52 689,39 51 6 tetra 23 -9,34 -13,82 -4,38 +4.47 -4,38 141,70 22 7 tetra 24 -9,36 -13,83 +7,40 +4,47 +7,40 138,67 18 8 Ibrutinib -10,67 -12,46 -1,08 +1,79 -1,08 15,03 19
Afinitas ikatan ligan dengan reseptor 1OPJ dapat diketahui dari parameter free binding energy atau energi bebas Gibbs (∆G). Dari ke tujuh ligan uji, nilai ∆G terendah terdapat pada tetra4 (-11,55 kkal/mol) dan pada tetra6 (-11,77 kkal/mol) sedangkan nilai ∆G ibrutinib sebagai obat pembanding (- 10,67  kkal/mol).  Dengan  demikian  menyatakan  bahwa  ikatan  ligan  uji  dengan  reseptor  kanker leukimia lebih stabil dibandingkan dengan obat pembanding.

## Visualisasi Penambatan Molekul
Hasil penambatan molekul didapat  2 senyawa terpilih yang memiliki free binding energy atau energi  bebas  Gibbs  (∆G)  terendah,  terdapat  pada  tetra6  (-11,77  kkal/mol)  dan  pada  tetra4  (-11,55 kkal/mol) sedangkan nilai ∆G ibrutinib sebagai obat pembanding (-10,67 kkal/mol). Visualisasi tetra4, tetra6  beserta  ibrutinib  dilakukan  menggunakan  program BIOVIA  Discovery  Studio  2017 yang bertujuan untuk melihat interaksi antara asam amino dengan ligan (Noviardi & Fachrurrazie, 2015).
Dapat  dilihat  interaksi  residu  asam  amino  dari  tetra4,  tetra6  dan  ibrutinib  pada  Tabel  5 berikut :
Tabel 5. Interaksi residu asam amino dari tetra4, tetra6 dan ibrutinib hasil penambatan molekul No Nama Senyawa Asam amino Ikatan Hidrogen Ikatan Van der Waals 1 tetra4 - His380, Ile312 ,  Leu317, Val398,  Tyr412,  Asn387, Leu403,  Ser404,  Gly402, Glu301 2 tetra6 Asp400 Gly402,  Ser404,  Tyr412, Lye403, Asn387, Phe378, Ile312 , Phe401 ,  Thr334, Ile332 3 Ibrutinib Thr334, Met337 Asp400 , Glu305 ,  Val275, Glu335,  Gly340, Phe401 ,
Tyr272, Ile312 ,  Leu317, Val398
Berdasarkan Tabel 5 senyawa tetra4 menunjukkan memiliki ikatan yang mirip dengan reseptor 1OPJ yaitu pada asam amino Ile312. Senyawa tetra6 dan ibrutinib menunjukkan memiliki ikatan yang mirip dengan reseptor 1OPJ yaitu pada asam amino Asp400, Ile312, Phe401 dan Glu305. Asam amino Glu305 merupakan sisi aktif reseptor 1OPJ yang terletak pada helix-3 (Nagar et al ., 2003).

## Simulasi Dinamika Molekular
Produksi simulasi dinamika molekular menghasilkan Root Mean Square Deviation (RMSD), Root Mean  Square  Fluctuation (RMSF), Molecular  Mechanics  Generalized  Surface  Area (MM-GBSA) (Dermawan et al ., 2019).

## Root Mean Square Deviation (RMSD)
Nilai RMSD hasil simulasi dinyatakan dalam satuan angstrom ( ) dan dapat dilihat pada grafik berikut :

## Gambar 1. Grafik RMSD senyawa tetra4, tetra6 dan ibrutinib
Dilihat dari Gambar 1,  pada senyawa tetra4 menunjukkan sistem mencapai kestabilan setelah simulasi  berlangsung  selama  13-18  ns.  Pada  tetra6  sistem  mencapai  kestabilan  setelah  simulasi berlangsung  selama  11-17  ns,  dan  untuk  ibrutinib  sistem  mencapai  kestabilan  setelah  simulasi berlangsung  selama  16-17  ns.  Secara  keseluruhan  senyawa  tetra4  memiliki  interaksi  yang  stabil dibandingkan dengan senyawa tetra6 dan ibrutinib.

## Root Mean Square Fluctuation (RMSF)
Nilai RMSF dapat dilihat pada Gambar 2 berikut :

## Gambar 2. Grafik RMSF Ibrutinib, Tetra4, dan Tetra6
Berdasarkan grafik RMSF senyawa uji tetra4, tetra6 dan ibrutinib menunjukan senyawa uji yang mengalami  fruktuasi  rendah  sesuai  dengan  sisi  aktif  reseptor  1OPJ  yaitu  senyawa  uji  tetra6  pada residu asam amino Glu305 yang berada pada helix-3 (Nagar et al ., 2003).
Kalkulasi  Energi  Ikatan  Metode  Molecular  Mechanics  Generalized  Born  Surface  Area  (MM- GBSA)
Tabel 6. Hasil kalkulasi energi bebas ikatan sistem ligan-reseptor metode MM-GBSA
Komponen Energi (kkal/mol) Sistem Ibrutinib tetra4 tetra6 Interaksi Van der Waals (Vdw) -52,61 -49,74 -85,61 Energi Elektrostatik (EEL) 210,48 152,55 0,23 Kontribusi Elektrostatik terhadap Energi Bebas Solvasi (EGB) -181,38 -139,87 26,85 Kontribusi Non-Polar terhadap Energi Bebas Solvasi (ESURF) -7,23 -7,03 -10,29 ∆Ggas (Vdw + EEL) 157,87 102,80 -85,38 ∆Gsolv (EGB + ESURF) -188,62 -146,90 16,55 ∆G TOTAL (Vdw + EEL + EGB + ESURF) -30,74 -44,09 -68,82
Dari  Tabel  6  dapat  dinyatakan  bahwa  nilai  ∆G TOTAL dari  tetra6  (-68,82  kkal/mol)  lebih  rendah dari sistem ibrutinib sebagai obat pembanding (-30,74 kkal/mol). Hal tersebut menunjukkan bahwa afinitas dan kestabilan dari tetra6 terhadap reseptor 1OPJ lebih baik dibanding ibrutinib.

## Visualisai Dinamika Molekular
Senyawa uji  tetra6 dan ibrutinib selanjutnya dianalisis  dengan menggunakan perangkat lunak Discovery studio 2017 untuk melihat posisi ligan terhadap protein (Fakih & Dewi, 2020).  Hasil analisis dari dinamika molekular senyawa uji terpilih (tetra6) serta ibrutinib sebagai  obat pembanding dapat dilihat pada Gambar 3

## (b)
Ket :         1000 ps,         5000 ps,         10000 ps,         15000 ps,          20000 ps.
Gambar 3. (a) Superimposition Hasil Simulasi Dinamika Molekular Senyawa Uji Tetra6, (b) Superimposition Hasil Simulasi Dinmika Molekular Ibrutinib (Obat Pembanding)
Semakin dekat posisi antara ligan dengan protein maka afinitas senyawa uji terhadap reseptor antikanker  leukimia  (1OPJ)  akan    semakin  stabil  dan  baik  (Fakih  &  Dewi,  2020).  Dapat  dilihat berdasarkan Gambar 3. posisi ligan uji terhadap protein dianalisis lebih dekat dibandingkan dengan posisi  ligan  pembanding  dengan  protein,  sehingga  diprediksi  ligan  uji  memiliki  interaksi  serta aktivitas biologis terhadap reseptor antikankr leukimia (1OPJ) lebih baik dibandingkan dengan ligan pembanding.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Senyawa  turunan  C 14 -urea  tetrandrin  secara in  silico yang  memenuhi  standar  toksisitas  dan farmakokinetik  dapat  diprediksi  sebagai  kandidat  obat  antikanker  leukimia  diantaranya  senyawa tetra1,  tetra4,  tetra5.  tetra6,  tetra7,  tetra23  dan  tetra24.  Hasil  penambatan  molekul  ( molecular docking ) pada senyawa turunan C 14 -urea tetrandrin yang lolos kriteria toksisitas dan farmakokinetik diperoleh nilai energi bebas Gibbs (∆G) terendah pada senyawa uji tetra4 yaitu -11,55 kkal/mol dan tetra6  yaitu  11,77  kkal/mol.  Hasil  visualisasi  penambatan  molekul  senyawa  uji  tetra6  memiliki kesamaan  atau  kemiripan  interaksi  pengikatan  residu  asam  amino    dengan  reseptor  antikanker leukimia  (1OPJ)  yaitu  pada  ikatan  hidrogen  terhadap  asam  amino  Asp400.  Hasil  simulasi  dinamika molekular senyawa  tetra6  pada  grafik  RMSF    menunjukan  fruktuasi  rendah  sesuai  dengan  sisi  aktif reseptor antikanker leukimia (1OPJ) yaitu pada residu asam amino Glu305 yang terletak pada helix-3. Diperoleh nilai total energi bebas senyawa uji tetra6 sebesar -68,82 kkal/mol yang dinyatakan lebih stabil dibandingkan dengan nilai ∆G TOTAL ibrutinib sebesar -30,74 kkal/mol. Hal tersebut menunjukkan bahwa afinitas dan kestabilan dari senyawa tetra6 terhadap reseptor antikanker leukimia (kode PDB : 1OPJ) lebih baik dibandingkan dengan obat pembanding

## DAFTAR PUSTAKA
Arwansyah,  &  Hasrianti.  (2014).  Simulasi  Molecular  Docking  Senyawa  Kurkumin  dan  Analognya Sebagai Selective Androgen Receptor Modulators (SARMs) Pada Kanker Prostat. Jurnal Dinamika ,
5 (2), 60–75.
Benigni, R., Bossa, C., Jeliazkova, N., Netzeva, T., & Worth, A. (2008). The Benigni / Bossa Rulebase for Mutagenicity and Carcinogenicity – a Module of Toxtree. Health San Francisco , January . (23) 241. Bhatia, S., Schultz, T., Roberts, D., Shen, J., Kromidas, L., & Marie Api, A. (2015). Comparison of Cramer classification  between  Toxtree,  the  OECD  QSAR  Toolbox  and  expert  judgment. Regulatory Toxicology and Pharmacology , 71 (1), 52–62.
Dermawan, D., Sumirtanurdin, R., & Dewantisari, D. (2019). Molecular Dynamics Simulation Estrogen Receptor  Alpha  againts  Andrographolide  as  Anti  Breast  Cancer. Indonesian  Journal  of Pharmaceutical Science and Technology , 6 (2), 65.
Fakih, T. M., & Dewi, M. L. (2020). In silico Identification of Characteristics Spike Glycoprotein of SARS- CoV-2  in  the  Development  Novel  Candidates  for  COVID-19  Infectious  Diseases. Journal  of

## Biomedicine and Translational Research
, 6 (2), 48–52.
Harvey,  S.  A.,  Sealy,  I.,  Kettleborough,  R.,  Fenyes,  F.,  White,  R.,  Stemple,  D.,  &  Smith,  J.  C.  (2013).
Identification Of the Zebrafish Maternal and Paternal Transcriptomes. Development (Cambridge) , 140 (13), 2703–2710.
In,  A.,  Curcuma,  S.,  &  Histon,  P.  (2015).  In  Silico  Analysis  of  Curcuma  longa  Against. PCAF  Histon Asetiltransferase . 2 (2), 43–53.
Kartasasmita, R. E., Anugrah, R., & Tjahjono, D. H. (2015). Kajian Docking Dan Prediksi Beberapa Aspek Farmakokinetika Desain Molekul Turunan Kuinin Sebagai Upaya Menemukan Kandidat Senyawa Antimalaria Yang Baru. Kartika Jurnal Ilmiah Farmasi , 3 (1), 6–13.
Lipinski,  C.  A.  (2001).  Avoiding  investment  in  doomed  drugs  Is  poor  solubility  an  industry  wide problem? Current Drug Discovery , April , 1–19.
Listyani, T. T., Rois, M., & Prihati, S. (2019). Analisis Pengaruh Pengetahuan Investasi, Pelatihan Pasar Modal,  Modal  Investasi  Minimal  Dan  Persepsi  Risiko  Terhadap  Minat  Investasi  Mahasiswa  Di Pasar Modal (Studi Pada Pt Phintraco Sekuritas Branch Office Semarang). Jurnal Aktual Akuntansi Keuangan Bisnis Terapan (AKUNBISNIS) , 2 (1), 49.
Mardianingrum, R., Bachtiar, K. R., Susanti, S., Aas Nuraisah, A. N., & Ruswanto, R. (2021). Studi In Silico Senyawa  1,4-Naphthalenedione-2-Ethyl-3-Hydroxy  sebagai  Antiinflamasi  dan  Antikanker Payudara. ALCHEMY Jurnal Penelitian Kimia , 17 (1), 83.
Muttaqin, F. Z. (2019). Studi Molecular Docking, Molecular Dynamic, Dan Prediksi Toksisitas Senyawa Turunan Alkaloid Naftiridin Sebagai Inhibitor Protein Kasein Kinase 2-Α Pada Kanker Leukemia. Pharmacoscript , 2 (1), 49–64.
Nagar,  B.,  Hantschel,  O.,  Young,  M.  A.,  Scheffzek,  K.,  Veach,  D.,  Bornmann,  W.,  Clarkson,  B.,  Superti- Furga, G., & Kuriyan, J. (2003). Structural basis for the autoinhibition of c-Abl tyrosine kinase. Cell , 112 (6), 859–871.
Noviardi,  H.,  &  Fachrurrazie,  F.  (2015).  Potensi  Senyawa  Bullatalisin  Sebagai  Inhibitor  Protein Leukotrien  a4  Hidrolase  Pada  Kanker  Kolon  Secara  in  Silico. FITOFARMAKA:  Jurnal  Ilmiah Farmasi , 5 (2), 65–73.
Nusa,  H.  S.,  Astuti,  W.,  Kartasasmita,  A. S., Virgana,  R.,  Syakir, N.,  Bahtiar,  A.,  Safriani,  L.,  &  Risdiana.
(2015). Characterization of optical and structure properties of polydimethylsiloxanes. Materials Science Forum , 827 , 99–104.
Puratchikody,  A.,  Sriram,  D.,  Umamaheswari,  A.,  &  Irfan,  N.  (2016).  3-D  structural  interactions  and quantitative  structural  toxicity  studies  of  tyrosine  derivatives  intended  for  safe  potent inflammation treatment. Chemistry Central Journal , 10 (1), 1–20.
Ruswanto, R., Mustaqim, I., & Tuslinah, L. (2018). Kuersetin : Penghambat Uridin 5-Monofosfat Sintase sebagai  Kandidat  Antikanker  Berdasarkan  Data  Global  Burden  Cancer  (  GLOBOCAN  ) , International Agency for . 14 (2), 236–252.
Siswandono. (2016). Kimia Medisinal Edisi Kedua. Surabaya: Airlangga University Press.
Sung, H., Ferlay, J., Siegel, R. L., Laversanne, M., Soerjomataram, I., Jemal, A., & Bray, F. (2021). Global Cancer  Statistics  2020:  GLOBOCAN  Estimates  of  Incidence  and  Mortality  Worldwide  for  36 Cancers in 185 Countries. CA: A Cancer Journal for Clinicians , 71 (3), 209–249.
Wati, N. L., & Qoyyimah, D.  F. (2018). Tingkat Stres Ibu Yang Mempunyai Anak Kanker Leukemia di Rumah Cinta Bandung. Jurnal Keperawatan BSI , VI (1), 69–76.