## Optimasi Dosis Enzim Glukoamilase dan Waktu Fermentasi dalam Produksi Bioetanol dari Air Cucian Beras
Optimization of Glucoamylase Enzyme Dosage and Fermentation Time in Bioethanol Production from Rice Washing Drainage
Rinette Visca 1* , Mubarokah Nuriani Dewi 1 , Marungkil Sinaga 1 , Siti Nurcahyati 1 1 Universitas Jayabaya, Jalan Raya Bogor Km. 28 Cimanggis, Jakarta Timur 13710, Indonesia
*Email korespondensi : rinettevisca@jayabaya.ac.id

## ABSTRAK
Saat ini 85% dari kebutuhan energi dunia berasal dari bahan bakar minyak. Indonesia berupaya mengurangi  ketergantungan  pada  bahan  bakar  minyak.  Salah  satu  sumber  energi  alternatif yang  dapat  mensubsitusi  transportasi  minyak  mentah  diperoleh  dari  biomassa  berupa  bahan bakar  bioetanol.  Biomassa  termasuk  beras  dimanfaatkan  untuk  pengembangan  bioetanol menggantikan  bahan  bakar  minyak.  Karbohidrat  merupakan  komponen  utama  beras  yang terdiri dari 85–90% pati. Air cucian beras yang mengandung karbohidrat dapat diubah menjadi etanol.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  waktu  fermentasi  terbaik  dalam  produksi bioetanol dari air cucian beras dengan menggunakan enzim glukoamilase dan ragi. Pembuatan bioetanol  melalui  tahap  persiapan,  hidrolisa  air  cucian  beras,  pemeriksaan  kadar  glukosa, fermentasi, distilasi dan analisa hasil. Variabel yang digunakan adalah waktu fermentasi (3, 4, 5,  6,  dan  7  hari),  dan  volume  enzim  glukoamilase    (0.5,  1.5,  dan  3.0  ml).  Hasil  penelitian diperoleh  densitas bioetanol optimum sebesar 0.998 g.ml -1 dengan enzim glukoamilase  0.5 ml. Kadar  glukosa  sesudah  inversi  tertinggi  sebesar  4.217%,  dan  kadar  etanol  tertinggi  19.387% dihasilkan dengan dosis enzim glukoamilase 3.0 ml dalam waktu fermentasi selama lima hari.
Kata kunci: air cucian beras, bioetanol, enzim glucoamilase, fermentasi, ragi

## ABSTRACT
Currently, 85% of the world's energy needs come from fuel oil. Indonesia overcomes dependence on fuel oil.  One  of  the  alternative  energy  sources  that  can  substitute  crude  oil  transportation  is  obtained from biomass in the form of bioethanol fuel. Biomass, including rice, is used for the development of bioethanol to replace fuel oil. Carbohydrates are the main component of rice which consists of 85–90% starch. Rice washing water which contains carbohydrates can be converted into ethanol. This study’s aim was to have the best fermentation time in bioethanol production from rice washing water using glucoamylase enzymes and yeast. Bioethanol production goes through the preparation stage, hydrolysis of rice washing water, checking  glucose  levels,  fermentation,  distillation,  and  yield  analysis.  The  variables  were  fermentation time  (3,  4,  5,  6,  and  7  days),  and  the  volume  of  the  glucoamylase  enzyme  (0.5,  1.5,  and  3.0  ml).  The results showed that the optimum bioethanol density was 0.998 g.ml-1 with 0.5 ml glucoamylase enzyme. The  highest  glucose  level  after  inversion  was  4.217%,  and  the  highest  ethanol  content  was  19.387%, which was produced with 3.0 ml glucoamylase enzyme dosage in five days of fermentation.
Keywords: rice washing water, bioethanol, glucoamylase enzyme, fermentation, yeast

## PENDAHULUAN
Konsumsi  energi  semakin  meningkat dalam beberapa dekade terakhir sebagaimana  pertumbuhan  populasi  dunia bertambah  (Balat,  2008).  Pengembangan energi  baru  dan  terbarukan  di  Indonesia merupakan  program  strategis  pemerintah
Indonesia dalam mengurangi ketergantungan bahan bakar minyak. Salah satu  sumber  energi  alternatif  yang  dapat mensubsitusi  transportasi  minyak  mentah diperoleh  dari  biomassa  berupa  bahan bakar  bioetanol  atau  biofuel  (Nguyen, 2008).
Bahan  bakar  nonfosil  berbasis  bahan baku  biomassa  dan    hasil  samping  serta limbah industri pangan merupakan sumber karbon untuk energi mikroba yang mampu memproduksi  bioetanol  sebagai  alternatif sumber  energi  terbarukan.  Bahan  bakar nonfosil  diproduksi  dengan  teknologi fermentasi  berbasis  substrat  dari  limbah yang  mengandung  senyawa  kimia  organik sangat  menarik  untuk  dilaksanakan  pada skala komersial (Kiran, 2014).
Indonesia  sebagai  negara  tropis  yang kaya akan keanekaragaman hayati, tanaman  pertanian  dan  perkebunan membuka peluang besar
untuk pengembangan  bioetanol  (Arlianti,  2018). Berbagai  jenis  beras,  umbi-umbian,  dan buah-buahan  menjadi  sumber  bahan  baku, bahkan  limbahnya  dimanfaatkan  untuk pengembangan  bioetanol  menggantikan minyak mentah (Osazuwa, 2019).
Beras  sebagai  sumber  bahan  makanan pokok sebagian besar penduduk Indonesia. Karbohidrat  merupakan  komponen  utama beras  yang  terdiri  dari  85–90%  pati. Selulosa,  hemiselulosa,  dan  pentosan sebagai komponen karbohidrat pada beras. Pati  beras  merupakan  pati  yang  diperoleh dari  biji Oryza  sativa .  Pati  beras  memiliki serbuk yang berwarna putih dan bertekstur halus.  Pati  beras  tidak  larut  dalam  air dingin  dan  etanol.  Bila  diamati  dengan mikroskopik  tampak  butir  bersegi  banyak ukuran 2 µm - 5 µm, tunggal atau majemuk dan  berbentuk  bulat  telur  ukuran  10  µm  – 20  µm.  Dengan  demikian  sifat  fisikokimia beras  ditentukan  oleh  sifat  fisikokimia patinya (Istianah, 2017).
Pencucian  beras menyebabkan  sebagian kandungan  biji  beras  melarut  ke  dalam air tersebut. Air cucian beras merupakan hasil air  yang  diperoleh  dari  proses  pencucian beras  sebelum  dimasak  menjadi  nasi. Pemanfaatan  air  cucian  beras  belum optimal, misalnya untuk menyiram tumbuhan atau
dibuang.
Adapun
komposisi  air  cucian  beras  terdapat  pada tabel 1.
Tabel 1.  Komposisi  air cucian beras
Sumber : Eni et al ., 2015
Air  cucian  beras  yang  mengandung karbohidrat  dapat  diubah  menjadi  etanol Air  cucian  beras  dihidrolisis  menjadi glukosa  dengan  menggunakan  HCl  1N, kemudian  dilanjutkan  dengan  fermentasi menggunakan Saccharomyces cerevisae (ragi) dan distilasi (Chethana, 2011).  Air, karbon, nitrogen,  mineral,  diperlukan  mikroba untuk tumbuh dan berkembang biak dalam media  fermentasi  pada skala  laboratorium, maka  penyediaan  dan  pembuatan  media sangat  mudah,  namun  pada  industri  skala besar akan sulit.
Fermentasi  merupakan reaksi  biokatalis yang  digunakan  untuk  mengkonversi bahan  baku  substrat  oleh  enzim  dari mikroba  menjadi  produk  baru.  Mikroba terdiri  atas  bakteri,  ragi  dan  jamur. digunakan untuk memfermentasi monosakarida  yang  dilepaskan  selama degradasi pati. Ragi merupakan organisme eukariotik  dan  dapat  memfermentasi  pati (sakarifikasi) menjadi bioetanol dan karbon dioksida.  Glukosa  difermentasi  menjadi produk bahan bakar nonfosil seperti etanol, aseton-butanol dan biogas Bioetanol  merupakan  etanol  (C 2 H 5 OH) yang  diproduksi  dengan  cara  fermentasi menggunakan bahan baku nabati (Puttaswamy et al ., 2016). Etanol merupakan  cairan  tak  berwarna,  mudah menguap, mudah terbakar, larut dalam air, dan tidak karsinogenik. Produksi bioetanol melibatkan dua langkah, pertama hidrolisis pati  dalam  kondisi  aerobik  dan  fermentasi oleh ragi dalam kondisi anaerob. Hidrolisis pati  dapat  dicapai  dengan  hidrolisis
Komposisi Persentase (%) Karbohidrat 30 Protein 7 Zinc 11 Kalsium 10 Fosfor 17 Besi 8 Kalium 2 Thiamine 9 Riboflavin 6
enzimatik. Hidrolisis enzimatik merupakan proses degradasi polimer menjadi
monomer  gula  penyusunnya  dengan bantuan enzim.
Enzim  merupakan  protein  yang  berasal dari  sel  hidup  dan  berguna  untuk mengkatalisis  reaksi.  Penelitian  Hakim (2015) dinyatakan perlakuan enzim dengan varian  yaitu  (a)  2  ml  α-amilase  dan  2  ml glukoamilase  sebagai  kontrol,  (b)  2  ml  α- amilase dan 2 ml glukoamilase, (c) 4 ml α- amilase dan 4 ml glukoamilase, (d) 6 ml α- amilase dan 6 ml glukoamilase.
Beberapa  penelitian  terkait  dengan pemanfaatan  air  cucian  beras  diantaranya dilakukan  oleh  Watanabe  (2009)  yang memperoleh  kadar  etanol  6.2%  dengan menggunakan proses enzim dan ultrasonik dalam  produksi  bioetanol  dari  air  cucian beras  dan  sekam  padi.  Perlakuan penambahan HCl juga
mampu meningkatkan kadar etanol (Sari, 2013).
Hasil  penelitian  yang  dilakukan  Eni (2015) yaitu waktu hidrolisa yang lama dan penambahan  enzim  glukoamilase  sebagai katalis  dalam  proses  hidrolisa  air  cucian beras  dapat  meningkatkan  kadar  glukosa yaitu  pada  3  ml  penambahan  enzim glukoamilase  dan  6  jam  hidrolisa menghasilkan  kadar  glukosa  93.02  mg.L -1 . Waktu optimum fermentasi cucian air beras adalah  4  hari  yang  menghasilkan  kadar etanol 11.17%. Sedangkan dalam penelitian yang dilakukan Chethana (2011), dinyatakan  dengan  penambahan Bacillus
licheniformis, HCl  dan  enzim  dalam  proses sakarifikasi  menghasilkan  bioetanol    68.8 mg.L -1 setelah  melalui  proses  distilasi. Adapun  tujuan  dari  penelitian  ini  untuk mengetahui waktu fermentasi yang terbaik dalam  produksi  bioetanol  dari  air  cucian beras  dengan  variabel  volume  enzim glukoamilase dan kadar bioetanol.

## BAHAN DAN METODE
Bahan  dan  peralatan  yang  diperlukan dalam  penelitian  ini  diantaranya  beras putih,  asam  klorida  (HCl),  asam  sulfat (H 2 SO 4 ),  kalium  iodida  (KI),  natrium hidroksida (NaOH), Saccharomyces cereviseae (ragi),  narium  tiosulfat  (Na 2 S 2 O 3 ),  kalium permanganat  (KMnO 4 )  erlenmeyer,  labu
leher  tiga,  saringan,  gelas  ukur, stirrer,  hot plate dan perangkat distilasi. Enzim yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  enzim  glukoamilase  dengan merek  dagang Dextrozyme  GA .  Aktivitas glukoamilase  didasarkan  pada  hidrolisis maltosa dan dinyatakan dalam Amyloglucosidase  Units .g -1 (AGU.g -1 )  yang tertera  pada  data  bahan  (product  data sheet).  Data  spesifikasi  bahan  dari Novozymes (2005) menyebutkan Dextrozymes  GA mengandung Aspergillus niger dengan  aktivitas  270  AGU.g -1 dan densitas  1.17  g.ml -1 .  Produk  ini  sesuai dengan spesifikasi kemurnian yang direkomendasikan  untuk  enzim  kategori makanan  (food  grade)  yang diberikan  oleh Joint FAO/WHO Expert  Committee  on  Food Additives  (JECFA) dan Food  Chemical  Codex (FCC) . Pada  tahap  pembuatan  bioetanol  dari biomassa diperlukan beberapa proses yaitu tahap persiapan, tahap hidrolisis air cucian beras,  tahap  pemeriksaan  kadar  glukosa, tahap  fermentasi, tahap  distilasi  dan  tahap analisa.  Variasi  penelitian  dilakukan terhadap waktu fermentasi (3, 4, 5, 6, dan 7 hari) dan variasi volume enzim glukoamilase  aktivitas 270  AGU .g -1 dari Novozymes (0.5, 1.5, 3.0 ml). Tahap  persiapan  dilakukan  dengan perendaman  beras  dengan  air  dengan perbandingan  1:1  v/v  (3000  gram  beras dalam  3000  ml  air)  selama  6  jam  guna mendapatkan  kadar  pati  yang  lebih banyak. Lalu dilakukan penyaringan untuk memisahkan beras dengan air cucian beras.
Tahap  hidrolisis  air  cucian  beras dilakukan  dengan  penambahan  HCl  1N dan  enzim  glukoamilase.  Air  beras  yang sudah disaring kemudian diukur kadar pH nya lalu ditambahkan HCl 1N sedikit demi sedikit  sambil  diaduk  hingga  pH  air  beras asam.  Air  cucian  beras  yang  sudah  asam dimasukkan  ke  dalam  tiga  gelas  ukur dengan  volume  masing  masing  1000  ml, lalu  ditambahkan  enzim  ke  dalam  masing masing air cucian beras dengan volume 300 ml dan variasi enzim 0.5 ml, 1.5 ml, 3.0 ml, selanjutnya diaduk hingga homogen (Eni et al ., 2015).
Berikutnya  dimasukkan  kedalam  labu leher  tiga  1000  ml dan dipanaskan  dengan hot plate pada suhu tetap 60°C selama 6 jam.
Pengukuran  kadar  glukosa  dengan  cara mengambil  50  ml  dan  dianalisa  dengan metode luff  schrool (Masturi,  2017). Perhitungan  prosentase  kadar  glukosa menggunakan  menggunakan  rumus  pada persamaan 1.
Kadar glukosa (%) = 𝑎𝑛𝑔𝑘𝑎 𝑡𝑎𝑏𝑒𝑙 𝑥 𝑓𝑎𝑘𝑡𝑜𝑟 𝑝𝑒𝑛𝑔𝑒𝑛𝑐𝑒𝑟𝑎𝑛
𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 (𝑚𝑔)
𝑥 100 % …..…. ( 1)
Selanjutnya  tahap  fermentasi  diawali dengan  mendinginkan  air  beras  yang sudah  di  hidrolisis.  Air  beras  dimasukkan ke  dalam  erlenmeyer  sebanyak  200  ml (sampel  air  beras  masing  masing  variasi enzim  dimasukkan  sebanyak  200  ml  ke dalam  5  buah  gelas  Erlenmeyer).  Lalu difermentasi secara anaerob dan dilakukan pengukuran setelah 3, 4, 5, 6, dan 7 hari. Tahap distilasi  dengan langkah sebagai berikut:
1. Peralatan distilasi dirangkai selanjutnya hasil fermentasi dimasukkan ke dalam labu leher tiga. 2. Ditambahkan  50  ml  aquadest,  aduk rata.
3. Larutan  dipanaskan  hingga  suhu mencapai 80-85°C
4. Distilat  ditampung  dan  diukur volumenya.
Menurut  Hanum et  al .  (2013)  prosedur analisa produk distilat sebagai berikut:
1.  Penentuan Jumlah Bioetanol (ml)
 Distilat  (bioetanol)  diukur  dengan meggunakan gelas ukur.
 Volume  dicatat    pada  tiap perlakuan
2.  Densitas Bioetanol (gr.ml -1 )
 Piknometer  diisi  bioetanol  lalu ditimbang massanya.
 Selisih  massa  piknometer  kosong dan    berisi  bioetanol  merupakan massabioetanol.
 Densitas  bioetanol  diperoleh  dari hasil bagi massa bioetanol terhadap volumenya.
 Penentuan  kadar  etanol  dengan cara  membandingkan  massa  jenis etanol  hasil  distilasi  dengan densitas  bioetanol  absolut  sebesar
0.789 g.ml -1 .
Penelitian  yang  dilakukan  Khodijah (2015) dinyatakan bahwa adanya perbedaan waktu fermentasi pada
pembuatan  bioetanol  mempengaruhi  besar kecilnya  nilai  densitas  yang  dihasilkan. Semakin  lama  waktu  fermentasi  maka aktivitas mikroba mengalami pertumbuhan berkembang biak semakin banyak,
sehingga semakin banyak pula karbohidrat yang  terurai  menjadi  alkohol  dan  massa jenis  campuran  alkohol-air  akan  semakin rendah.  Oleh  karena  itu  dilakukan  pula analisa  pengaruh  waktu  fermentasi  dan enzim  glukoamilase  terhadap    uji  densitas bioetanol.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kadar  Glukosa  Pada  Air  Cucian  Beras Setelah Hidrolisis
Berdasarkan pengamatan  data pada tabel 2 kadar  gula  yang  terkandung  dalam  air cucian  beras  masih  sedikit,  sehingga  jika langsung    difermentasi  kemungkinan  akan menghasilkan  jumlah  etanol  yang  sangat sedikit  sekali  atau  bahkan  tidak  akan menghasilkan  etanol.  Kadar  glukosa  awal sebesar 1.145 %.
Tabel  2.  Analisa  air  cucian  beras  sebelum dan setelah hidrolisa
Air  cucian  beras  memiliki  kandungan  pati atau  karbohidrat  yang  cukup  tinggi. Karbohidrat  tersebut  dapat  dirombak menjadi  glukosa  melalui  proses  hidrolisis secara  enzimatis  dengan  menggunakan enzim  glukoamilase  pada  suhu tetap  60°C. Suhu  rendah  mendekati  titik  beku  tidak merusak  enzim,  namun  enzim  tidak  dapat bekerja.
Pada tabel dapat diamati semakin besar dosis  enzim  glukoamilase  maka  kadar glukosa  setelah  hidrolisis  (sesudah  inversi) mengalami  peningkatan.  sehingga  akan menghasilkan peningkatan bioetanol Kode Sampel pH Berat Jenis Kadar Glukosa Setelah Hidrolisa (%) 0.5 ml 6 1.007 2.058 1.5 ml 6 1.021 2.173 3.0 ml 6 1.013 4.217
setelah  fermentasi.  Hasil  kadar  glukosa sesudah  inversi  tertinggi  sebesar  4.217% diperoleh  dengan  penambahan  enzim glukoamilase  3  ml.  Penelitian  yang dilakukan  Istianah  (2017)  terhadap  kadar glukosa  setelah  hidrolisis  pada  air  cucian beras  diperoleh  konversi  glukosa  sebesar 21%  dan  yield  etanol  yang  dihasilkan sebesar 42%.

## Pengaruh  Waktu  Fermentasi  dan  Enzim Glukoamilasi  Terhadap  Uji  Densitas Bioetanol
Berdasarkan  data  yang  diperoleh,  dibuat grafik  hubungan  waktu  fermentasi  dan enzim  glukoamilase  terhadap  uji  densitas yang disajikan pada Gambar 1. Massa jenis sampel  akan  semakin  menurun  seiring pertambahan  waktu  fermentasi.  Hal tersebut  dikarenakan  semakin  lama  waktu fermentasi maka mikroba berkembang biak semakin banyak, sehingga dengan semakin meningkatnya  jumlah  mikroba  maka semakin  banyak  pula  polimer  karbohidrat yang terurai menjadi alkohol.
Gambar  1.  Hubungan  waktu  fermentasi dan  enzim  glukoamilase    terhadap  uji massa jenis bioetanol
Semakin tinggi persentase enzim
glukoamilase  maka  semakin  rendah  nilai densitas.  Dengan  meningkatnya  jumlah alkohol  maka  massa  jenis  campuran alkohol-air  akan  semakin  rendah.  Hal  ini disebabkan
Saccharomyces
cerevisiae merubah  glukosa  menjadi  etanol,  dimana jika  ragi  yang  diberikan  banyak  maka etanol  yang  dihasilkan  juga  akan  semakin banyak  dan  begitu  juga  sebaliknya, sehingga densitasnya akan semakin rendah.  Dengan  kata  lain  jika  jumlah Saccharomyces cerevisiae yang terdapat  pada ragi   semakin  menurun, makanan  mikroba
semakin  berkurang  dan  mikroba  menju fase  kematian  dan  etanol  yang  dihasilkan akan semakin banyak.
Berdasarkan  hasil  penelitian  diperoleh densitas  bioetanol  optimum  sebesar  0.998 g.ml -1 yang  dihasilkan  pada  dosis  enzim glukoamilase    0.5  ml.  Sedangkan  densitas terendah  sebesar  0.993  g.ml -1 yang dihasilkan dengan enzim glukoamilase  3.0 ml. Densitas bioetanol absolut sebesar 0.789 g.ml -1 (Hanum et  al .,  2013),  sehingga  nilai densitas  0.998  g.ml -1 pada  penelitian  ini menunjukkan etanol yang dihasilkan masih belum  murni  karena  masih  bercampur dengan air.
Penelitian  yang  dilakukan  Khodijah et al. (2015)  menyebutkan  bahwa  waktu fermentasi  optimum  selama  7  hari diperoleh  densitas  etanol  0.9438  g.ml -1 . Sedangkan jumlah bioetanol optimum yang diperoleh Hanum et al . (2013) sebesar 3.7 ml dengan  densitas  0.9669  g.ml -1 dalam waktu 2  hari  dan  pemberian  jumlah  ragi  6%. Adanya    perbedaan  waktu  fermentasi  dan volume enzim glukoamilase dalam produksi  bioetanol  mempengaruhi  besar kecilnya nilai densitas yang dihasilkan.

## Pengaruh Enzim Glukoamilasi dan Waktu Fermentasi Terhadap Uji Kadar Etanol
Berdasarkan  grafik  pada  Gambar  2  dapat dianalisa  bahwa  kadar  etanol  paling tinggi (19.387%)  dihasilkan  pada  volume  enzim glukoamilase  3.0  ml  dan  waktu  optimum fermentasi  selama  lima  hari.  Hasil penelitian  ini  tidak  jauh  berbeda  dengan yang  dilakukan  Hatami et  al. (2020), diperoleh  konsentrasi  etanol  maksimum 18.65%.  Sementara  konsentrasi  etanol tertinggi  dalam  penelitian  yang  dilakukan Watanabe et al. (2009) sebesar 6.2% dengan bahan  baku  air    cucian  beras  dan  sekam padi.
Adapun  peningkatan  pertumbuhan bakteri semakin pesat pada saat fermentasi di  hari  keempat  dan  kelima,  dan  akan mengalami  penurunan  pada  hari  keenam. Hal ini disebabkan mikroba telah masuk ke fase  pertumbuhan  lambat.  Pada  fase  ini pertumbuhan populasi jasad renik diperlambat  karena  zat  nutrisi  di  dalam medium  sudah  sangat  berkurang  atau adanya  hasil  metabolisme  yang  mungkin
0,99 0,991 0,992 0,993 0,994 0,995 0,996 0,997 0,998 0,999 1 3 4 5 6 7 M as s a Je n is S am p e l (g/ m l) Waktu Fermentasi (hari) 0.5 v/v 1,5 v/v 3 v/v
beracun atau dapat menghambat
pertumbuhan jasad renik.
Gambar 2.  Hasil pengamatan kadar etanol yang dihasilkan
Oleh  karena  massa  jenis  etanol  lebih  kecil dibandingkan  air maka  hubungan  densitas dengan  kadar  etanol  berbanding  terbalik, semakin  rendah  nilai  densitas  etanol menunjukkan  kadar  etanol  semakin  tinggi. Konsentrasi  enzim  glukoamilase  akan sangat  berpengaruh  terhadap  konsentrasi etanol yang didapat pada proses fermentasi.  Semakin  besar  volume  enzim glukoamilase  yang  digunakan  pada  saat proses  hidrolisis,  maka  semakin  banyak jumlah etanol yang dihasilkan. Hal tersebut disebabkan oleh peningkatan hidrolisa pati menjadi  glukosa  jika  volume  enzim glukoamilase semakin tinggi.
Berdasarkan hasil analisa data diperoleh kesimpulan sebagai berikut:
1. Hasil  kadar  glukosa  sesudah  inversi tertinggi sebesar 4.217% dengan penambahan enzim glukoamilase 3 ml.
2. Densitas  bioetanol  optimum  sebesar 0.998 g.ml -1 dihasilkan pada dosis enzim glukoamilase  0.5 ml.
3. Kadar etanol tertinggi 19.387% dihasilkan dengan dosis enzim glukoamilase  3.0  ml  dan  waktu optimum fermentasi selama lima hari.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  atas bantuan  Universitas  Jayabaya  yang  telah berkontribusi  sehingga  penelitian  ini terlaksana dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
Arlianti,  L.  (2018).  Bioetanol  sebagai sumber  green  energy  alternatif  yang potensial di Indonesia. Jurnal Keilmuan dan Aplikasi Teknik UNISTEK , 5(1),  16- 22 http://ejournal.unis.ac.id/index.php/ UNISTEK/article/download/280/Uni stek%20Januari%202018- 4%20Lily%20Arlianti Balat,  M.  (2011).  Production  of  bioethanol from  lignocellulosic  materials  via  the biochemical pathway: a review. Journal Energy  Conversion  and  Management , 52(2), 858-875. https://www.sciencedirect.com/scien ce/article/abs/pii/S0196890410003791
Chethana,  Pratap,  B.,  Roy,  S.,  Jaiswal,  A., Shruthi,  &  Vedamurthy.  (2011). Bioethanol production from rice water waste  :  a  low  cost  motor  fuel. Journal
Pharmacogyonline , 3(1), 125–134. https://pharmacologyonline.silae.it/fi les/newsletter/2011/vol3/015.sonali.
pdf Eni,  Sari,  W.,  &  Moeksin,  R.  (2015). Pembuatan  bioetanol  dari  limbah cucian  beras  menggunakan  metode hidrolisis  enzimatik  dan  fermentasi. Jurnal  Teknik  Kimia ,  21(1),  14-21. http://ejournal.ft.unsri.ac.id/index.ph p/jtk/article/download/100/90 Hakim, M., Hastuti, E., & Parman, S. (2015). Pengaruh  pemberian  enzim  amilase terhadap  kadar  bioetanol  dari  limbah sagu  padat. Jurnal  Akademika  Biologi , 4(2), 17-24. https://ejournal3.undip.ac.id/index.p hp/biologi/article/view/19407 Hanum,  F.,  Pohan,  N.,  Rambe,  M.,
Primadony,  R.,  &  Ulyana,  M.  (2013). Pengaruh  ragi  dan  waktu  fermentasi terhadap  bioetanol  dari  biji  durian. Jurnal  Teknik  Kimia  USU ,  2(4),  49-54. https://jurnal.usu.ac.id/index.php/jt k/article/view/5620
Hatami,  M.,  Younesi,  H., &  Bahramifar,  N.
(2020).  Fermentative  production  of ethanol  from  acid  hydrolyzate  of  rice water  waste  using  saccharomyces cerevisiae:  experimental  and  kinetic studies. Waste  Biomass  Valor  Journal , 11(8),
3465–3475.
0 5 10 15 20 25 3 4 5 6 7 K ad ar E tan ol ( % ) Waktu Fermentasi (hari) 0.5 v/v 1,5 v/v 3 v/v
https://doi.org/10.1007/s12649-019-
00697-8
Istianah,  N.  (2017).  Evaporasi  multi  tahap menggunakan  falling  film  evaporator (FFE)  untuk  meningkatkan  efisensi produksi  konsentrat  nanas  madu. Prosiding  Seminar  Nasional  Sains  dan Teknologi  Fakultas  Teknik  Universitas
Muhammadiyah Jakarta . https://jurnal.umj.ac.id/index.php/se mnastek/article/view/1922
Khodijah, S., & Abtokhi, A. (2015). Analisis pengaruh  variasi  persentase  ragi
(Saccharomyces  cerevisiae) dan  waktu pada proses fermenasi dalam pemanfaatan  duckweed (Lemna minor) sebagai  bioetanol. Jurnal  Neutrino: Jurnal Fisika dan Aplikasinya, 7(2), 71-76.
Kiran,  E.,  Trzcinski,  A.,  &    Liu,  Y.  (2014). Bioconversion  of  Food  Waste  To Energy:  A  Review. Journal Fuel , 134(1), 389–399. https://www.researchgate.net/public ation/311664110_Bioconversion_of_fo od_waste_to_energy_a_review Masturi,  Cristina,  A.,  Istiana,  N.,  Sunarno, &  Dwijananti,  P.  (2017).  Ethanol production from fermentation of arum manis  mango  seeds (Mangifera  Indica L.) using Saccharomyces cerevisiae. Jurnal Bahan Alam Terbarukan , 6(1), 56-60. Nguyen,  T.,  Gheewala  &  Bonnet, S.  (2008). Life cycle cost analysis  of  fuel  ethanol produced  from  cassava  In  Thailand. International  Journal  of  Life  Cycle Assessment , 13(1), 564-573. Novozymes  (2005). Product  Data  Sheet  of Dextrozyme GA. Novozymes. https://www.bimber.info/files/dextr ozyme-pds.pdf
Osazuwa,  C.,  &  Akinyosoye,  F.  (2019). Comparative studies  on  production of bioethanol  from  rice  straw  using Bacillus subtilis and Trichoderma virideas hydrolyzing
agents. Microbiology
Research  Journal  International, 28(3),    1- 12. https://doi.org/10.9734/mrji/2019/v 28i330134 Puttaswamy, K.,  Sagar,  Simha,  Manjappa, &  Kumar.  (2016).  Production  of bioethanol from
lignocellulosic biomass .  Indian  Journal  of  Advances  in Chemical  Science , 31(1), 239-244.
https://www.researchgate.net/public ation/334989474_Production_of_Bioet hanol_from_Lignocellulosic_Biomass Sari, C. (2013). Pembuatan Bioethanol dari Air
Cucian  Beras  (Air  Leri) [Skripsi. Universitas  Pembangunan  Nasional Veteran, Surabaya]. http://eprints.upnjatim.ac.id/5823/1/
file1.pdf Watanabe,  M.,  Takahashi,  M.,  Sasano, Kashiwamura, T., Ozaki, Y., Tsuiki, T., Hidaka,  H.,  &  Kanemoto  S.  (2009). Bioethanol  production  from  rice washing  drainage  and  rice  bran. Journal of Bioscience and  Bioengineering , 108(6), 524-526. https://www.sciencedirect.com/scien ce/article/pii/S1389172309002916