## UJI SENYAWA FLAVONOID TOTAL DARI EKSTRAK ETANOL
HERBA BINARA ( Artemisia Annua ) MENGGUNAKAN HIGH

## PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY (HPLC) TAHUN 2019
Novandi Purba 1 Jhon Patar Sinurat 2 Romauli Anna Teresia Marbun 3
Fakultas  Farmasi Institut Kesehatan Medistra Lubuk Pakam E-mail : gultomvandi6196@gmail.com DOI : https://doi.org/10.35451/jfm.v2i1.323

## ABSTRAK
Herba  binara  (Artemisia  Annua)  is one  of  the  plants  that  contains  flavonoids which are efficacious as antioxidants and anticancer. The purpose of this study was to determine the total flavonoid compounds contained in ethanol extract of  binara  herbs  (Artemisia  Annua).  Compounds  in  ethanol  extract  of  binara herbs were identified by phytochemical screening. The results showed that the ethanol extract of binara herbs contained alkaloids, flavonoids, saponins, and tannins.  Extraction  was  carried  out  in  two  stages,  namely  maceration  stage with  96%  ethanol  and  fat  removal  stage  by  hydrolysis  using  distilled  water solvent. The extract was partitioned with ethyl acetate and n-hexane solvents, then  the  partitions  were  examined  by  TLC  using  the  mobile  phase  of chloroform  and  ethyl  acetate  (7:  3).  Ribbon  patches  that  have  the  same  Rf and color prices as the initial detection are taken and searched. Then analyzed using  High  Performance  Liquid  Chromatography  (HPLC).  Based  on  the wavelength as well as the TLC test, a partial structure which was strongly suspected of total flavonoids was 0.93 g.
Kata  Kunci  : Herba  Binara  ( Artemisia  Annua ),  flavonoid,  KLT, High Performance Liquid Chromatography (HPLC).

## I. PENDAHULUAN
Berbagai  tumbuhan  di  Indonesia yang  dimanfaatkan  secara  tradisional untuk penanggulangan
masalah kesehatan,
salah satunya adalah Tumbuhan  Herba Binara  ( Artemisia Annua ). Artemisia  Annua dari  familia Asteraceae merupakan  salah  satu  jenis Artemisia  yang  banyak  ditemukan  di Jawa  Tengah  khususnya  di  daerah Kopeng  dan  Tawang  mangu.  Jenis  ini kurang banyak dieksplorasi karena kandungan  artemisianya  relatif  rendah dibanding jenis   Artemisia  yang  lain. Selain  itu  tumbuhan  ini  juga  dikenal memiliki efek merangsang rahim sehingga  dapat  meningkatkan  efek sehingga  dapat  meningkatkan  efek menstruasi.Tumbuhan  binara  berkhasiat
untuk  mengobati  disentri,  keputihan, muntah  darah,  mimisan,  pendarahan usus, menghilangkan rasa sakit, mencegah  keguguran  dan  mengatur menstruasi.  Survey  yang  dilakukan  di Masyarakat  Simpang  Empat  Kabupaten Karo,  masyarakat  menggunakan  Herba Binara dengan cara mengunyah beberapa daun kemudian ditempelkan pada bagian  luka  diluar  tubuh  seperti  luka tersayat.  Pengobatan  diare  dan  perut yang  kram,  herba  binara  diambil sebanyak 5 lembar yang telah dipanaskan  diatas  api  dan  kemudian ditempelkan  disekitar  perut  yang  sakit (Widyaningrum,  2011;  Marbun,  et  al, 2018).
Flavonoid  merupakan  sekelompok besar  senyawa  polifenol  tanaman  yang
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.1 Edisi Mei-Oktober 2019 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 05 September 2019 :: Accepted: 14 September 2019 :: Published: 31 Oktober 2019
tersebar  luas  dalam  berbagai  bahan makanan  dan  berbagai  konsentrasi. Flavonoid memiliki kerangka dasar karbon yang terdiri atas 15 atom karbon, dimana  dua  cincin  benzen  (C6)  terikat pada  suatu  rantai  propan  (C3)  sehingga membentuk susunan
C6-C3-C6. Flavonoid dapat berperan sebagai antibakteri  dengan  mengganggu  fungsi dari  mikroorganisme  bakteri.  Flavonoid menghambat pertumbuhan
bakteri
dengan menyebabkan terjadinya kerusakan  permeabilitas  dinding  sel bakteri, mikrosom dan
lisosom (Yunukawati, 2013).
Berdasarkan laporan penelitian yang  telah  dilakukan,  tumbuhan  binara
( Artemisia  Annua )  mengandung  senyawa bioaktif berupa flavonoid dan minyak  atsiri,  saponin.  Dari  penelitian sebelumnya,  dilaporkan  herba  binara memiliki  bahan  aktif  berupa  flavonoid yang dapat digunakan sebagai antibakteri (Lia  Febrina  dkk,  2017).  Berdasarkan penelitian sebelumnya, menujukkan bahwa  herba  binara  ( Artemisia  Annua ) mengandung  flavonoid  dan  mempunyai aktivitas antioksidan yang sedang sampai kuat (Linta,2018). Dari penelitian sebelumnya,  dilaporkan  bahwa  herba binara  memiliki  aktivitas  antioksidan ekstrak  daun  tiga  genus  Artemisia  sp dengan  metode  DPPH  serta  penetapan kadar  flavonoid,  fenol  dan  karotenoid (Asep, 2017).
Menurut survey literature menunjukkan  bahwa  konstituen  bioaktif Artemisia  sp,  tersebut  memberikan keuntungan  bagi  kesehatan manusia  dan beberapa  spesies  lain  telah  dilaporkan memiliki  aktivitas  antimalaria,  sitotoksik, antihepatolitik, antibakteri, antijamur dan antioksidan (Tan, et al, 1999).
Oleh karena itu, dalam penelitian ini akan  dilakukan  identifikasi  senyawa Flavonoid  Total  yang  terkandung  pada ekstrak  etanol  herba  binara  dengan
Metode High Performance Liquid Chromatography (HPLC) (Parhan, 2018).
II. METODE PENELITIAN

## A. Bahan
Bahan – bahan  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah ekstrak etanol herba binara (Artemisia Annua), Kloralhidrat,  Etanol  96%,  Etil  astet, Metanol,  Chloroform,  n-Heksan,  FeCl, pereaksi  bourchardat,  pereaksi  mayer, NaOH,  H2SO4,  Aquadest  dan  pereaksi Dragendorf.

## B. Alat
Alat – alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah Rotary Evaporator(B- ONE), Hot Plate (VELP AREC), Timbangan neraca analitik (Shimadzu), High Performance Liquid Chromatography (LANSIDA),  Plat  KLT,  Corong  pisah (SCHOOT DURAN, Waterbath (MEMMERT).

## C. Pembuatan Ekstrak
Pembuatan ekstrak etanol dilakukan dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut  etanol  96%.  Sebanyak  5  kg serbuk  simplisia  dimasukkan  kedalam wadah kaca,  lalu  ditambahkan  pelarut  etanol sampai serbuk simplisia  terendam, kemudiandidiamkan  selama  1  hari  lalu ekstrak  disaring,  setelah  itu  ekstrak dimaserasi kembalisampai ketika diskrining  pada  ekstrak  tidak  terdapat lagi  mengandung  flavonoid,kemudian diuapkan menggunakan
rotary evaporator  dengan  suhu  sekitar  40ºC, hasilnya diperoleh ekstrak kental (Depkes RI, 1979).

## D. Pembuatan Larutan Standar
Sebanyak  1,25  gram  standar  yang tersedia  dilarutkan  dalam  10  ml  Metanol 62,5%,  sehingga  diperoleh  standar stock dengan konsentrasi 500µg/ml. Setelah itu 2,5ml dari standar stock dilarutkan dalam 20  ml  Metanol  62,5%.  Kemudian dicampurkandengan  5  ml  HCL  6M untukmenjaga  kondisi  asamnya  supaya komponen flavonoid tersebut tidak terdegradasi. Penambahan methanol
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.1 Edisi Mei-Oktober 2019 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 05 September 2019 :: Accepted: 14 September 2019 :: Published: 31 Oktober 2019
dilakukan  hingga  volume  mencapai 50  ml  sehingga  konsentrasi  yang diperoleh adalah 25µg/ml. Larutan standar yang digunakan dalam penelitian ini terdiri atas lima konsentrasi, yaitu 0.5, 2.5,  10,  20  dan  25µg/ml.  Sampel  yang larut  dalam  fase  gerak  diinjeksikan  ke dalam kolom kromatografi dengan menggunakan  syringe.  Volume  yang ditampung  adalah  0,2  ml,  juk  berlebih akan  dikeluarkan.  Fase  gerak  akan dialirkan  dengan  menggunakan  pompa. Sampel yang masuk kedalam kolom akan didorong  oleh  fase  gerak  sehinggazat – zat  yang  terkandung  dalam  sampel  akan dianalisis  dan  bereaksi  dengan  fasediam. Oleh detektor akan dibaca dan dihasilkan keluaran  berupara  grafik  dan  data  tinggi beserta luas puncak dalam bentuk angka.

## E. Injeksi  Larutan  Standar  ke kolom HPLC
Larutan  standar  dengan  berbagai konsentrasi tersebut diinjeksikan kekolom HPLC  C-18 phase; Develosil  ODS-UG-3 yang  memiliki  dimensi  panjang  75mm dan  diameter  4,6  mm.  Fase  gerak  yang digunakan adalah 25% acetonitril didalamKh2PO4  0,025M,  dengan  laju aliran  0,9  ml/menit.  Diinjeksikan  pula larutan standard campuran pada berbagai konsentrasi.

## F. Pembuatan Kurva Standar
Hasil  dari  kromatogram  standar pada  berbagai  konsentrasi  tersebut kemudian  dimasukkan  kedalam  satu grafik.  Dari  data  masing – masing,  dibuat persamaangaris  yang  akan  digunakan pada  perhitungan Limit  of  Detection masing – masingstandar.
Dari data kromatogram  standar  campuran,  dibuat persamaan  garis  yangdigunakan  pada perhitungan kandungan
komponen flavonoid pada sampel.
G. Perhitungan Limit Deteksi Limit  of  Detection (LOD)  atau limitdeteksi  diperoleh  dengan  caram enginjeksikannya masing – masing sebanyak  standar  sebanyak  sepuluh  kali. Konsentrasi yang digunakan untuk
menentukan  LOD  adalah  konsentrasi yang terendah.Setelah
diperoleh kesepuluh  area  tersebut,  dimasukkan kedalam persamaan kurva standar masing – masing,  sehingga  diperoleh konsentrasi  dan  standard  deviasinya. Besarnya  LOD  adalah  tiga  kali  dari  nilai standar deviasi.

## H. Teknik  Pengumpulan  Data  dan Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  hasil penelitian yaitu golongan senyawa metabolitsekunder yang terkandung dalam  ekstrak  etanol  dari  hasil  skrining fitokimia. Penentuan fasa diam dan eluen dengan menggunakan KLT akan diperoleh data  berupa  spot – spot  hasil  pemisahan dan  nilai  Rf  untuk  tiap  perbandingan eluen  nheksan  dan  etil  asetat,  yang selanjutnya  hasil  pemisahan  yang  baik untuk menentukan metabolit sekunder.
Pemisahan  komponen  polar  herba binara  menggunakan HPLC  menghasilkan data  berupa  profil  kromatogram,  waktu retensi,  dan  luas  puncak.Jumlah  puncak menunjukkan jumlah komponen senyawa dalam  ekstrak  etanol  (kualitatif).Luas puncak  digunakan  untuk  menghitung  % kandungan  masing – masing  komponen polarsenyawa dalam ekstrak etanol herba binara (kuantitatif).
Dalam  proses  pemisahan,  metode pemisahan  yang  paling  tepat  untuk memisahkan  komponen  polar  herba binara adalah metode yang menghasilkan data  terbaik  dari  sisi  kualitatif  ataupun kuantitatifnya.  Komponen  polar  yang teridentifikasi  baik  dengan  menggunakan metode  pemisahan  tersebut  kemudian dianalisis golongan senyawa lebih lanjut.
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.1 Edisi Mei-Oktober 2019 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 05 September 2019 :: Accepted: 14 September 2019 :: Published: 31 Oktober 2019
Gambar  4.1 Spektrum  Hasil  Analisis dengan Menggunakan HPLC (Baku
Pembanding.)
Dari  beberapa  perbandingan  fase gerak  yang  digunakan    diperoleh  hasil terbaik    dengan  menggunakan    fase gerak  chloroform    :    etil  asetat padaperbandingan 7 : 3 dan sistem KCKT partisi  fase  terbalik    RP  18  (250  x  4,6 mm,  5  µm),  detektor  UV    pada  panjang gelombang  360  nm  dan  kecepatan  alir  1 mL/menit.    Dari  kromatogram  dapat dilihat bahwa senyawa rutin terlihat pada waktu  retensi  3,225    menit,  sedangkan pada kromatogram pembanding kuersetin  terdapat    duapuncak  yaitu isokuersitrin  terlihat  pada  waktu  retensi 4,450    menit  dan  kuersetin  terlihat  pada waktu retensi 5,683
menit.
Kromatogram  campuran  kedua  senyawa pembanding  tersebut  menunjukkan  tiga puncak  pada  waktu  retensi  3,250,  4,533 dan 5,808 menit. Pada pengukuran KCKT senyawa  pembanding  secara  berulang diperoleh waktu retensi seperti pada Dari kromatogram  hasil  pengukuran  ekstrak etanol  herba  binara  dapat  dilihat  bahwa pada  fraksi  chloroform  dan  etil  asetat dapat terdeteksi beberapa senyawa.
Gambar  4.2 Spektrum  Hasil  Analisis dengan  Menggunakan  HPLC  (Sampel ekstrak  etanol  herba  binara  ( Artemisia Annua ).
Berdasarkan  hasil  pengujian  pada sampel  maka  didapatkan  kromatogram dari  chloroform  dan  etil  asetat.  Pada kromatogram    fraksi  etil  asetat  dari ekstrak  etanol    herba  binara( Artemisia
Annua )    terdapat    limapuncak.  Pada kromatogram  fraksi  butanol  terdapat tujuh    puncak.  Bila  puncak-puncak  yang didapatkan  pada  kromatogram  fraksi- fraksi  dari  ekstrak  etanol    herba  binara ( Artemisia  Annua )  dibandingkan  dengan waktu  retensi  senyawa  pembanding (Gambar  4.1)  terlihat  bahwa  beberapa puncak  mendekati  waktu  retensi  untuk rutin, isokuersitrin dan kuersetin.
Dari hasil penelitian ini dapat dilihat bahwa    ekstrak  etanol    herba  binara ( Artemisia  Annua )  memiliki  kandungan kimia flavonoid, terutama rutin, isokuersitrin  dan  kuersetin.  Hal  ini ditunjukkan  dari    puncak    rutin  yang terdapat  pada  fraksi  cloroform  dan  etil asetat  yang  lebih  dominan  sehingga dapat dijadikan sebagai senyawa penanda  untuk  penentuan  mutu  ekstrak etanol    herba  binara  ( Artemisia  Annua ). Dengan  demikian    pola  KCKT  ini  dapat dipakai  untuk  identifikasi  dan  pemastian mutu  ekstrak  etanol    herba  binara ( Artemisia Annua ).

## IV. KESIMPULAN
Adapun  kesimpulan  dari  penelitian sebagai berikut :
1. Hasil pemeriksaan golongan senyawa kimia  serbuk  simplisia  herba  binara menunjukkan  adanya  kandungan senyawa kimia seperti alkaloid,flavonoid,saponin, dan tanin. 2. Kadar  total  flavonoid  dalam  sample ekstrak etanol herba binara ( Artemisia  Annua )  sebesar  0,93 gram.
3. Dari  hasil  penelitian  ini  dapat  dilihat bahwa  ekstrak  etanol  herba binara ( Artemisia Annua ) memiliki kandungan  kimia  flavonoid  yang dilihat  dari  beberapa  puncak  yang mendekati waktu retensi baku pembanding yang memiliki kandungan  flavonoid  yaitu  rutin, isokuersitrin dan kuersetin.
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.1 Edisi Mei-Oktober 2019 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 05 September 2019 :: Accepted: 14 September 2019 :: Published: 31 Oktober 2019

## DAFTAR PUSTAKA
Ditjen POM RI . (1979) . Farmakope Indonesia. Edisi III . Jakarta:Departemen Kesehatan RI. Halaman 9.
Goodman  &  Gilman.  (2014).  Dasar Farmakologi  Terapi.  Edisi  10 Volume  2.  Jakarta:  Penerbit  Buku Kedokteran  EGC.  Halaman  666- 675, 688-689.
Katno,  Pramono,  S.(2005).  Tingkat
Manfaat  dan  Keamanan  Tanaman Obat  dan  obat  Tradisional.  Balai Penelitian Tanaman Obat Tawangmangu  Fakultas  Farmasi, UGM. Yogyakarta. Http/www.google.com  [25  April 2011]. P 1-3
Hariana,  Arief.(2013).  Tumbuhan  Obat dan  Khasiatnya  Seri  I,  Jakarta:
Penerbit Swedaya Grup Harborne,  J.B.  (1987).  Metode  Fitokimia Penuntun Cara Modren Menganalisa  Tumbuhan.  Edisi  1. Penerjemah: Kosasih Padmawinata  dan  Iwang  Soediro. Bandung: ITB. Halaman 152.
Lia  Febriana.  (2017). Obat  Tradisional dalam  Zaman  Teknologi. Majalah Kesehatan  Masyarakat  No.  56, Hal:3-5.
Marbun,  R.,  Situmorang,  N.,  &  Wahyuni,
S. (2018). The efect of immunomodulator
by extract ethanol  of  herba  binara  (artemisia vulgaris l.) Toward the response of delayed-type  hypersensitivity  in rat male. Jurnal Penelitian Farmasi &  Herbal , 1 (1),  17-21.  Retrieved from
http://ejournal.delihusada.ac.id/in dex.php/JPFH/article/view/59 .
Parhan,  P.  (2018).  Penetapan  Kadar  Na-
Siklamat  Pada  Minuman  Serbuk Instan  Dan  Minuman  Kemasan Kaleng  Yang  Diperdagangkan  Di Delitua Dengan Metode Alkalimetri. JURNAL  FARMASIMED (JFM) , 1 (1), 11-15. https://doi.org/10.35451/jfm.v1i1.
88.
Tan,  R,X.,  Zhang,  W.F.,  Tang.  (1999).
Biologically active substances from the  genus  artemisia, planta  med 64, hal.295-302.
Widyaningrum.,  Herlina.,  Tim  Solusi Alternatif.(2011). Kitab  Tanaman Obat Nusantara. Cetakan Pertama. Yogyakarta: Med Press(Anggota  IKAPI).  Halaman 209-210. Yunukawati.(2013). Analisis  Senyawa Metabolit  Sekunder  dari  Ekstrak Metanol   daun Surian yang berpotensi sebagai Antioksidan. Makara, Sains :48-52.