Jurnal Agrotek  Tropika,  November  2022,  Vol  10,  No.  4,  pp.  517  -  525 DOI  :  http://dx.doi.org/10.23960/jat.v10i4.5849 ISSN:  2337-4993  (Print),  2620-3138  (Online)
KAJIAN KESESUAIAN LARVA HERMETIA ILLUCENS (DIPTERA: STRATIOMYIDAE) PADA PERBANYAKAN NEMATODA

## ENTOMOPATOGEN STEINERNEMA SPP. SECARA IN VITRO
STUDY ON THE COMPATIBILITY OF HERMETIA ILLUCENS LARVA (DIPTERA: STRATIOMYIDAE) IN THE PROPAGATION ENTHOMOPATHOGENE NEMATODE  OF STEINERNEMA SPP. BY IN VIVO
Wildan Muhlison * , Hari Purnomo, dan Tri Wahyu Saputra Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Jember, Jember, Jawa Timur, Indonesia *Email: wildan.muhlison@unej.ac.id
* Corresponding Author, Diterima: 26 Apr. 2022, Direvisi: 20 Jul. 2022, Disetujui: 23 Sept. 2022

## ABSTRACT
Entomopathogenic nematodes (EPN) are parasites that are effective in controlling plant pests that can be propagated in vivo. In vivo propagation requires a host because EPN is an obligate parasite, one of which is the larvae of Hermetia illucens (Diptera: Stratiomyidae). These larvae are easy to obtain, easy to culti- vate, easy to use, have a short life cycle, and have a high nutritional content. This study aimed to examine the suitability of H. illucens larvae in the entomopathogenic nematode Steinernema spp. in vivo propaga- tion. This research was conducted by examining the mortality rate and infection rate of EPN in H. illucens larvae with variations in wounds, concentrations of infective nematodes, and larval size. The test results were compared with the larvae of T. molitor which are commonly used as hosts. The results of the mortality rate study showed that injured H. illucens larvae were more susceptible to the entomopathogenic nematode Steinernema spp. There was a significant difference in mortality rates between uninjured and injured al- though there was no difference in results due to variations in EPN concentrations. The infection rate test showed a significant difference in wound variation and larval size of H. illucens although the results were not good enough when compared to the level of infection of T. molitor larvae.
Keywords: Entomopathogenic nematodes, Hermetia illucens, in vivo,  Steinernema  spp., Tenebrio molitor

## ABSTRAK
Nematoda entomopatogen (NEP) merupakan parasit  yang efektif dalam menanggulangi hama tanaman yang dapat diperbanyak dengan cara in vivo . Perbanyakan secara in vivo memerlukan inang karena NEP adalah parasit obligat yang  salah  satu  inangnya adalah  larva Hermetia illucens (Diptera: Stratiomyidae).  Larva ini  mudah diperoleh, mudah dibudidayakan, mudah digunakan, memiliki siklus hidup yang pendek, dan memiliki kandungan nutrisi  yang  tinggi.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengkaji  kesesuaian  larva H.  illucens pada  perbanyakan nematoda entomopatogen Steinernema spp. secara in vivo . Penelitian ini dilakukan  dengan menguji  tingkat mortalitas dan tingkat infeksi NEP pada larva H. illucens dengan variasi pelukaan, konsentrasi nematoda infektif, dan ukuran larva. Hasil uji tersebut dibandingkan dengan larva T. molitor yang umum digunakan sebagai inang. Hasil penelitian tingkat mortalitas menunjukkan larva H. illucens yang dilukai akan lebih rentan terhadap nematoda entomopatogen Steinernema spp. Ada  perbedaan  tingkat  mortalitas  yang  signifikan  antara  tanpa  luka  dan dilukai  walaupun  tidak  ada  perbedaan  hasil  akibat  variasi  pemberian  konsentrasi  NEP.  Uji  tingkat  infeksi menunjukkan adanya perbedaan yang signifikan pada variasi pelukaan dan ukuran larva H. illucens walaupun hasilnya tidak cukup baik apabila dibandingkan dengan tingkat inveksi larva T. molitor .
Kata kunci: Hermetia illucens, in vivo, nematoda entomopatogen , Steinernema spp., Tenebrio molitor

## 1.  PENDAHULUAN
Salah satu komponen dalam pengendalian hayati adalah augmentasi yaitu upaya pengadaan, pelestarian, dan perbanyakan secara massal musuh alami yang telah ada di sekitar lokasi hama target dan dilepas dalam  waktu tertentu  (Susilo, 2007). Augmentasi penting untuk dilakukan karena banyak musuh alami yang tidak bisa bertahan akibat penggunaan pestisida kimia  yang  berlebih  dan  ketiadaan  habitat.
Nematoda entomopatogen (NEP) merupakan parasit yang efektif dalam menanggulangi serangga yang hidup di dalam tanah dan habitat tersembunyi (Indrayani et  al. ,  2019).  Keefektifan  nematoda entomopatogen  bergantung  pada  pasokan nematoda yang memadai dan pemahaman tentang perilaku  biologisnya  (Dolinski et  al .,  2012). Nematoda entomopatogen dapat membunuh hama sasaran dalam waktu yang relatif cepat yaitu 24- 48 jam menggunakan bantuan bakteri simbion yang dimiliki sedangkan patogen lain seperti bakteri dan jamur membutuhkan waktu lebih lama yaitu 3-7 hari (Shapiro-Ilan & Gaugler, 2002).
Nematoda  entomopatogen  umumnya diperbanyak dengan dua cara yaitu secara in vitro untuk perbanyakan skala besar dan secara in vivo untuk  perbanyakan  skala  kecil.  Perbanyakan secara in  vivo memerlukan  penggunaan  inang serangga karena nematoda entomopatogen adalah parasit obligat serangga. Kunci keberhasilan dalam perbanyakan pada karakteristik kandungan nutrisi yang dimiliki inang dan ketersediaan inang alternatif. Perbanyakan  secara in  vivo ini  relevan  untuk diterapkan  pada  petani  atau  praktisi  pertanian karena  lebih  mudah  dan  lebih  ekonomis.
Serangga inang yang umum digunakan dalam perbanyakan in  vivo adalah  larva Galleria mellonella (L.) (Lepidoptera: Pyralidae), Tenebrio molitor dan Alphitobius  diaperinus (Coleoptera: Tenebrionidae) (Shapiro-Ilan & Gaugler, 2002). Pada penerapannya,  ketiga  jenis  larva  tersebut  tidak ekonomis  apabila  digunakan  untuk  perbanyakan nematoda  terlebih  inang G.  Melonella dan A. diaperinus sulit  disediakan  dalam  jumlah  besar (Chaerani,  2011).  Perlu  ada  upaya  mendapatkan inang alternatif untuk pembiakan NEP secara in vivo yang mudah disediakan dan bernilai ekonomis dengan tetap memperhatikan kandungan nutrisi yang sesuai.
Salah  satu  kandidat  inang  alternatif  untuk pembiakan  NEP tersebut  adalah larva Hermetia illucens (Diptera:  Stratiomyidae).  Larva H. illucens dikenal  sebagai  serangga  pengurai  atau detrivor  yang  memiliki  kemampuan  dalam
mendekomposisi bahan organik termasuk limbah pertanian (Sheppard et al. , 1994; Muhlison et al. , 2021).  Siklus  hidup H.   illucens yang  tergolong pendek, mudah untuk dibudidayakan, dan memiliki kandungan nutrisi yang tinggi membuat larva ini digunakan sebagai alternatif pakan ternak (Barragan- Fonseca et al. , 2017; Miranda et al. , 2020). Hambatan  umum  yang  mempengaruhi keberhasilan pembiakan nematoda entomopatogen adalah  pencarian  makan  inang,  penetrasi  inang, keberhasilan reproduksi inang, dan perbanyakan kembali (Webster, 2009). Nematoda entomopatogen yang pernah diinokulasikan pada larva H. illucens menunjukkan sekitar setengah dari populasi larva terbunuh oleh infeksi nematoda namun hanya ada beberapa nematoda entomopatogen yang muncul dari larva H. illucens . Hal ini diduga karena larva H.  illucens dilapisi  dengan  kutikula  yang  tebal sehingga sulit dinfeksi (Tourtois, 2014).
Berdasarkan uraian sebelumnya, maka perlu adanya kajian kesesuaian larva Hermetia illucens pada  perbanyakan  nematoda  entomopatogen steinernema spp. secara in vivo. Metode perlakuan larva Hermetia illucens yang sesuai dapat menjadi solusi  untuk  pembiakan  NEP  yang  mudah, ekonomis, dan dapat diaplikasikan oleh petani atau praktisi. Penelitian ini diharapkan dapat memberi dampak positif berupa perlindungan tanaman yang alami dari serangan hama secara intensif karena menggunakan musuh alami.

## 2.  BAHAN  DAN  METODE
2.1 Perbanyakan Larva Hermetia illucens Larva Hermetia  illucens berasal  dari  hasil perbanyakan yang dipelihara dalam kotak plastik berukuran 15 x 15 x 8 cm dan diberi kain kasa di bagian  atas  untuk  sirkulasi  udara.  Setiap  kotak berisi  50  ekor  larva  yang  diberi  pakan  sebesar 1 gram/larva dengan penambahan pakan sebesar 1 gram/larva tiap 3 hari sekali berupa ampas tahu (Muhlison et  al. ,  2021). Apabila  larva  yang dipelihara  telah  mencapai  fase  pupa  maka  akan dipindahkan  ke  media  inkubasi  pupasi.  Media tersebut berupa media kering dan diletakkan pada kandang berukuran 100×40×30 cm. Sekitar 15 hari kemudian, pupa akan berubah menjadi imago dan dipindahkan  ke  media attract dan  tempat peneluran. Telur di tempat peneluran dipindahkan ke wadah penetasan menggunaan media fermentasi pur ayam. Telur akan menetas setelah 5 hari dan dipindahkan ke kotak plastik. Apabila larva tersebut telah mencapai kategori instar 2 maka sudah siap
digunakan  sebagai  sampel  penelitian.  Instar  2 merupakan kategori larva dengan karakteristik umur 3-4 hari setelah menetas.

## 2.2 Perbanyakan Larva T. molitor
Larva T.  molitor berasal  dari  hasil perbanyakan yang dipelihara dalam kotak plastik berisi pur jagung yang merupakan pakan larva dan imago serta sebagai media untuk bertelur. Setelah imago melakukan kopulasi dan menghasilkan telur, imago  dipindah  ke  tempat  biakan  lainnya,  telur diletakkan  pada  wadah  kering  dan  ditempatkan pada tempat gelap, kurang lebh 10-14 hari telur akan menetas  menjadi  larva  (Purwaningrum,  2006). Larva  awal  (instar  1  kemudian  dipindahkan  ke wadah pemeliharaan yang telah diberikan pakan pur jagung. Larva T. molitor yang diujikan adalah larva instar 2.

## 2.3  Perbanyakan  Nematoda  Entomopatogen
Steinernema spp.
Nematoda  entomopatogen Steinernema spp. merupakan hasil isolat yang diperbanyak secara in vivo.  Perbanyakan  dilakukan  dengan  cara menginokulasikan Juvenil Infektif (JIs) pada larva T.  molitor kemudian dipindahkan  ke white  trap untuk  masa  inkubasi  (White,  1927). White  trap berbentuk  cawan  petri  berdiameter  5  cm  yang ditutup  dengan  kertas  saring  berdiameter  9  cm. White  trap  diletakkan  di  tengah  cawan  petri berdiameter 15 cm diberi sedikit air sehingga ujung kertas  saring  menyentuh  permukaan  air.  Masa inkubasi berlangsung selama 7 hari pada kondisi gelap di ruangan dengan suhu kamar. Setelah masa inkubasi,  Juvenil  Invektif  (JIs)  akan  bermigrasi keluar dari tubuh T. molitor dan tertampung pada air  di  sekitar white  trap .  Selanjutnya,  air  yang mengandung  JIs  akan  dipindahkan  ke  dalam beaker glass dan siap untuk diujikan.

## 2.4 Uji Tingkat Mortalitas
Uji tingkat mortalitas menggunakan dua variasi pelukaan yaitu larva H. illucens yang tidak dilukai dan  dilukai  sebelum  inokulasi  NEP. H.  illucens dilukai sebanyak tiga titik pada bagian dorsal, satu di  bagian  toraks  dan  dua  di  bagian  abdomen menggunakan jarum (Tourtois, 2014). Setiap variasi pelukaan diinokulasi dengan NEP menggunakan konsentrasi sebesar  400,  600,  dan  1000  JIs/mL sebanyak 20 ulangan. Pengamatan tingkat mortalitas
dilakukan pada setiap larva H. illucens yang  mati selama masa inkubasi yaitu antara 7-10 hari.

## 2.5 Uji Tingkat Infeksi NEP
Ada dua perlakuan dalam uji tingkat infeksi NEP pada penelitian yaitu perlakuan dengan variasi ukuran larva dan perlakuan dengan variasi pelukaan larva.  Perlakuan  dengan  variasi  ukuran  larva menggunakan  larva H.  illucens dan T.  molitor yang berukuran 0,05, 0,1 dan 0,15 gr/ekor. Khusus pada  larva H.  illucens dilakukan  dua  variasi pelukaan seperti pada uji tingkat mortalitas. Setiap variasi  diinokulasi  dengan  NEP  menggunakan konsentrasi 600 JIs/mL sebanyak tujuh ulangan. Setiap unit percobaan diinkubasi selama 72 jam lalu dipindah ke white trap dengan jumlah satu larva per cawan petri. Pengamatan uji infeksi dilakukan dengan menghitung jumlah NEP yang dihasilkan dari setiap unit percobaan selama 10 hari.
Uji tingkat infeksi NEP pada perlakuan variasi pelukaan larva dilakukan dengan empat variasi yaitu  tidak  luka,  luka  sebelum  inokulasi,  luka setelah inokulasi dan kombinasi pelukaan (luka sebelum dan sesudah inokulasi). Pelukaan hanya dilakukan pada larva H.  illucens sebanyak tiga titik pada bagian dorsal, satu di bagian toraks dan dua di bagian abdomen menggunakan jarum serta pelukaan setelah inokulasi dilakukan delapah hari setelah masa inokulasi. Variasi pelukaan larva H. illucens ini  juga  dibandingkan  dengan  larva T. molitor tanpa luka.
Uji tingkat infeksi NEP menggunakan ukuran larva  sebesar  0,15  gr/ekor,  konsentrasi  NEP sebesar 600 JIs/mL, dan 10 ulangan pada setiap variasi perlakuan.  Pengamatan dilakukan setelah masa inkubasi selama 5-7 hari menggunakan white trap dengan  1  larva  per  cawan  petri.  Cara pengamatan uji infeksi yaitu dengan menghitung jumlah  NEP  yang  dihasilkan  dari  setiap  panen selama 10 hari setelah diinkubasi.

## 2.6 Analisis  Data
Data akan dianalisis menggunakan tiga jenis uji statistik yaitu uji t, uji Anova, dan uji DMRT. Uji t digunakan apabila hanya terdapat dua perlakuan. Uji Anova digunakan apabila terdapat tiga atau lebih variasi perlakuan. Sedangkan uji DMRT ( Duncan Multiple Range Test ) digunakan apabila hasil uji Anova menunjukkan perbedaan yang signifikan. Ketiga  uji  statistik  tersebut  menggunakan  taraf kepercayaan  sebesar  95%.

## 3.  HASIL  DAN  PEMBAHASAN
3.1 Tingkat M or talitas L ar va H. illucens
Hasil pengamatan larva selama masa inkubasi menunjukkan persentase mortalitas pada perlakuan tanpa  luka  larva H.  illucens sebesar  7,4% sedangkan  pada  perlakuan  dengan  luka  sebesar 70,4%. Tingkat mortalitas larva pada dua variasi pelukaan diuji uji t dan menunjukkan hasil t hitung >t tabel yaitu sebesar 6,1>1,7 yang berarti ada perbedaan nyata antara tanpa luka dan luka setelah inokulasi NEP. Sedangkan hasil uji Anova satu arah pada tingkat mortalitas larva H. illucens menunjukkan hasil tidak berbeda nyata pada setiap konsentrasi NEP yang diberikan. Hasil uji Anova  yang tanpa luka  sebesar  0,5<3,4  dan  dengan  luka  sebesar 1,2<3,4  untuk  perbandingan  F hitung vs  F tabel . Perbandingan  tingkat  mortalitas  pada  larva H. illucens ditunjukkan pada Gambar 1.

## 3.2 Tingkat Infeksi NEP pada Larva
Hermetia illucens dan Larva T. molitor
Pengujian  tingkat  infeksi  pada  larva H. illucens dan T. molitor berdasarkan variasi ukuran larva menunjukkan hasil yang ditunjukkan pada Gambar 2. Hasil uji anova menunjukkan bahwa variasi ukuran larva memberikan perbedaan yang nyata pada tingkat infeksi NEP sehingga dilakukan uji lanjut DMRT. larva H. illucens yang dilukai pada  ukuran  0,05  gr/ekor  tidak  berbeda  nyata dengan ukuran 0,1 gr/ekor sedangkan keduanya berbeda nyata dengan ukuran 0,15gr/ekor. Hasil uji pada larva T. molitor berbeda nyata pada setiap perlakuan yang dibuktikan dengan perbedaan notasi huruf  DMRT  dengan  jumlah  nematoda  sebesar
Gambar 1. Tingkat mortalitas larva H. illucens pada variasi konsentrasi NEP.
Gambar 2. Jumlah Nematoda di setiap ukuran larva pada H. illucens dan T. molitor.
8.970,  13.200,  dan  18.621  secara  berturut-turut pada ukuran 0,05, 0,1, dan 0,15 gr/ekor.
Gambar 3 menunjukkan uji pengaruh pelukaan larva H. illucens secara signifikan mempengaruhi jumlah nematoda yang dibiakkan namun jumlah ini tetap  di  bawah  hasil  uji  larva T.  molitor yang setidaknya berjumlah 6 kali lebih banyak daripada nematoda pada H.  illucens .  Pelukaan H.  illucens saat sebelum dan sesudah  infeksi NEP menunjukkan peningkatan  nematoda  yang  dibiakkan.  Namun secara  notasi  DMRT,  pelukaan  pasca  infeksi merupakan  perlakuan  paling  efisien  apabila dibandingkan  dengan semua perlakuan pelukaan. Terlebih, perlakuan pasca infeksi tidak berbeda nyata pada pelukaan kombinasi (pra dan pasca infeksi).
Penelitian ini juga mengamati jumlah nematoda yang  keluar  dari  inang  setiap  harinya  selama sepuluh hari pengamatan seperti pada Gambar 4. Jumlah nematoda mengalami peningkatan sampai puncak  pada  hari  kelima  pada  variasi  sebelum pelukaan, setelah pelukaan dan kombinasi pelukaan kemudian menurun sampai pada hari ke sepuluh. Adapun larva T. molitor tetap mengalami peningkatan sampai jumlah nematoda tertinggi pada hari kedelapan kemudian menurun sampai hari ke sepuluh.
Penelitian ini bertujuan untuk mengkaji kesesuaian penggunaan larva H. illucens sebagai inang dalam pembiakan nematoda entomopatogen Steinernema spp. terkait dengan modifikasi fisik berupa pelukaan. Pertimbangan dalam penggunaan H. illucens sebagai inang pemeliharaan karena memiliki kegunaan dalam proses pertanian termasuk pengomposan dan pakan ternak.  Larva H.  illucens yang  tidak  dilakukan pelukaan  tidak terlalu  rentan  terhadap  nematoda entomopatogen Steinernema spp.  (Gambar  1) sehingga modifikasi inang meningkatkan tingkat infeksi, tetapi tidak cukup meningkatkan kualitas inang untuk
Gambar 3. Grafik jumlah nematoda yang keluar dari inangnya  pada  tiap  variasi  pelukaan H . illucens dan T. molitor tanpa pelukaan.
dijadikan  sebagai  sebagai  inang  alternatif  bagi nematoda entomopatogen.
Tingkat mortalias larva H. illucens dengan status pelukaan  menunjukkan  bahwa  larva H.  illucens memiliki kutikula  yang sulit untuk ditembus  oleh Steinernema spp. Pelukaan pada larva H. illucens sebelum aplikasi nematoda meningkatkan mortalitas (Gambar 1) dan tingkat infeksi (Gambar 2). Namun tingkat kematian pada larva H. illucens yang dilukai tidak  berbeda  nyata  pada  beberapa  konsentrasi nematoda (JIs) yang diberikan. Dengan demikian, kutikula H. illucens merupakan penghalang utama pertama  bagi  masuknya  nematoda  (JIs)  pasca infeksi nematoda entomopatogen.
Nematoda entomopatogen menginfeksi melalui beberapa  celah  yang  ada  di  tubuh  serangga, diantaranya  adalah  melalui  mulut,  spirakel  dan bukaan alami lainnya. Semakin banyak celah yang dimiliki  oleh  serangga  maka  semakin  cepat nematoda  untuk  dapat  melakukan  penetrasi  dan mengakibatkan  kematian  serangga.  Hal  ini menunjukkan bahwa H. illucens diduga memiliki kutikula  yang  tebal  dibandingkan  dengan  larva lainnya  yang  umum  digunakan.  Hal  ini  sesuai dengan hasil penelitian Barros et al. (2019) dan Ushakova et al. (2017) bahwa jumlah spirakel dari larva H. illucens lebih sedikit dan kutikula yang lebih tebal. Kutikula H. illucens tersusun dari kitin dan asam amino dengan kadar yang lebih tinggi dari pada serangga dari golongan ordo Lepidoptera dan Coleoptera. Hal ini didukung dari penelitian (Lewis et al., 1996) bahwa kesesuaian nematoda Steinernema  carpocapsae pada  serangga  dari ordo Diptera yang diwakili oleh Musca domistica menghasilkan  tingkat  mortalitas  yang  rendah dibandingkan  serangga  dari  ordo  Lepidoptera, Coleoptera, Orthoptera dan Blattodea. Selain itu, kutikula larva H. illucens tersusun dari kitin, kalsium
dan  adanya  kandungan  melanin  yang  berfungsi sebagai pertahanan dari masuknya infeksi pathogen (Johannsen, 1922; Ushakova et al. , 2017).
Spirakel  pada  larvae H.  illucens dapat menutup  ketika  kondisi  dalam  kondisi  basah (Lalander et  al. ,  2020).  Larva H.  illucens memiliki lebih sedikit spirakel daripada Galleria mellonella , sehingga lebih sedikit bukaan alami bagi nematoda untuk masuk dan keluar (Tourtuis et al. , 2014). Hal ini terkait dengan habitat hidup dari  larva H.  illucens yang  hidup  pada  limbah organik dan jasad organik, mekanisme tersebut dapat menunjang untuk tetap dapat hidup diantara banyaknya mikroba patogen dan menunjang pada kondisi  media  organik  yang  basah  dan  berair. Infeksi nematoda entomopatogen pada larva H. illucens tidak  dipengaruhi  oleh  jumlah  awal nematoda entomopatogen yang diberikan. Faktor utama pertama ada pada kutikula larva uji. Hal ini  menunjukkan  dengan  adanya  pelukaan memberikan  akses  bagi  nematoda  untuk  dapat masuk, penetrasi dan menginfeksi serangga  uji (Tourtuis et al. , 2014).
Beberapa  penelitian  menjelaskan  bahwa respon nematoda entomopatogen terhadap inang yang  terluka  atau  dimodifikasi.  Dalam  sebuah penelitian  dengan bollworm  pink Pectinophora gossypiella (Saunders) (Lepidoptera: Gelechiidae), pupa tidak terinfeksi oleh S. carpocapsae kecuali kutikula  ditusuk  (Henneberry et  al. ,  1995; Lindegren et al. , 1993). Stresor kimia dan termal juga telah dievaluasi potensinya untuk membuat inang lebih rentan. Sebaliknya van Zyl & Malan (2014)  menemukan  bahwa  melukai H.  illucens tidak diperlukan untuk masuknya nematoda untuk H.  bacteriophora , Steinernema  riobrave atau Steinernema  feltiae tetapi  sangat  meningkatkan masuknya S.  carpocapsae.
Gambar 4. Grafik periodik jumlah nematoda pada tiap variasi  pelukaan H. illucens dan T. molitor tanpa pelukaan.

## 522 Jurnal Agrotek Tropika 10(4): 517-525, 2022
Pada  pengujian  dengan H.  illucens dengan tanpa luka dan dengan luka serta T. molitor tanpa luka  pada  setiap  perlakuan  ukuran  larva  yang digunakan  menunjukkan  jumlah  nematoda  yang keluar  pada  setiap  perlakuan  (Gambar  2).  Pada H.  illucens tanpa  luka  tidak  menunjukkan kematian, sehingga tidak ada nematoda yang keluar. Pada H . illucens yang dilukai pada setiap ukuran menunjukkan pada ukuran 0.05 gram tidak berbeda nyata  pada  ukuran  0,1  gram  dan  berbeda  nyata dengan  ukuran  0,15  gram.  Sedangkan  pada T. molitor berbeda  nyata  pada  setiap  perlakuan, dengan hasil nematoda pada setiap ukuran.
Ukuran serangga menentukan jumlah nutrisi dan kandungan  yang  dibutuhkan  bagi  nematoda entomopatogen untuk tumbuh dan memperbanyak diri. Hal  ini  termasuk  pada serangga H.  illucens yang dilukai dan T. molitor tanpa pelukaan. Menurut de Leij (1995) dan Baliadi et al. (2012) melaporkan bahwa  ukuran  larva T.  molitor memengaruhi fekunditas  dan  jumlah  nematoda  yang  dipanen. Namun, jumlah nematoda yang dihasilkan pada larva H.  illucens yang  dilukai  masih  lebih  kecil dibandingkan pada larva T. molitor pada ukuran yang sama.  Jumlah  nematoda  yang  dipanen  ini  terkait dengan kemampuan dari nematoda entomopatogen untuk berkembang biak di dalam tubuh serangga.
Perlakuan  pelukaan  inang  secara  signifikan mempengaruhi  jumlah  nematoda  yang  dipanen. Pada  pelukaan  pra  infeksi  dimaksudkan  untuk memberikan jalan bagi nematoda entomopatogen untuk  dapat  menginfeksi  ke  dalam  nematoda, sedangkan  perlakuan  pasca  infeksi  untuk memberikan jalan bagi nematoda entomopatogen untuk  keluar  dari  tubuh  serangga,  begitu  pula dengan  perlakuan  kombinasi  (Gambar  3  dan Gambar 4). Pelukaan H. illucens pada pra infeksi tidak berbeda nyata dengan pelukaan setelah infeksi, sedangkan pelukaan setelah infeksi tidak berbeda nyata  dengan  pelukaan  kombinasi.  Pelukaan H. illucens pra  dan  pasca  infeksi  menunjukkan peningkatan nematoda yang keluar dari inang.
Pada perbandingan H. illucens yang dilukai dengan beberapa perlakukan berbeda nyata dengan T. molitor yang tidak dilukai. Setidaknya enam kali lebih  banyak  nematoda  yang  dipanen  pada T. molitor daripada H. illucens (Gambar 3). Begitu pula dengan jumlah nematoda yang keluar setiap harinya,  larva H.  illucens mengalami  jumlah nematoda tertinggi pada hari kelima sedangkan pada larva T. molitor pada hari kedelapan.
Rendahnya mortalitas dan jumlah nematoda yang keluar dari inang pada larva H. illucens tidak
hanya dipengaruhi oleh faktor akses masuk namun juga ada faktor lain yang mengakibatkan nematoda entomopaotgen tidak berkembang biak dengan baik di  dalam  tubuh  larva H.  illucens .  Perkembang biakan nematoda entomopatogen di dalam tubuh serangga  inang  dipengaruhi  beberapa  faktor diantaranya adalah kesesuaian nutrisi, ukuran larva, dan adanya faktor penghambat. Kesesuaian nutrisi yang memengaruhi perkembang biakan nematoda entomopatogen adalah adanya kandungan protein dan  karbohidrat.  Dari  segi  kesesuaian  nutrisi berdasarkan kandungan proksimat antara larva H. illucens dan T. molitor menunjukkan H. illucens sebesar  37%-63%  (Zozo et  al. 2022)  dan T. molitor sebesar 25-46% (Ravzanaadii et al. , 2012). Tingginya kandungan protein H. illucens tidak menjadi salah satu faktor dari keberlangsungan dan produksi nematoda entomopatogen di dalam tubuh inang. Faktor lain yang memengaruhi adalah adanya senyawa yang bersifat racun atau adanya imunitas dari  serangga  dari  adanya  infeksi.  Seperti  yang dijelaskan oleh (Brivio & Mastore, 2018) bahwa dasar dari perkembangan nematoda entomopatogen adalah  kesesuaian  inang  termasuk  di  dalamnya adalah imunitas dari serangga uji. Larva H. illucens diduga  memiliki  senyawa  antimikroba  yang menunjang larva H. illucens untuk hidup di antara limbah  dan  bahan  organik  untuk  tidak  mudah terinfeksi oleh mikroba tidak baik.
Nematoda entomopatogen memiliki hubungan simbiosis dengan bakteri yang sangat toksik bagi serangga. Pada Steinernema spp. memiliki bakteri simbion  yaitu  bakteri  Xenorhabdus.  Bakteri  ini dilepaskan dari usus nematoda remaja infektif setelah memasuki  serangga  inang  melalui  anus,  mulut, spirakel, atau kutikula, bakteri cepat berkembang biak menyebabkan kematian inang dalam waktu 24-48 jam.  Nematoda  remaja  memakan  bakteri, berkembang  menjadi  dewasa,  dan  bereproduksi menghasilkan penyelesaian satu hingga tiga generasi di dalam inang. Ketika sumber daya inang habis, ribuan remaja infektif (IJs) muncul dari serangga inang yang telah mati (Kaya & Gaugler, 1993).
Adanya  senyawa  antimikroba  dalam  bentuk Peptida antimikroba fungsional (AMPs) menunjang bagi larva H. illucens untuk dapat hidup di limbah organik tanpa terinfeksi pathogen dan senyawa ini dapat menginduksi ketahanan dari H. illucens dari pathogen (Xia et al. , 2021). Selain itu penelitian lainnya menjelaskan bahwa kandungan senyawa antimikroba  yang  terdiri  dari  anti  jamur  dan antimikroba dapat menghambat pertumbuhan dan perkembangan dari Salmonella typhimurium dan
E. coli (Auza et al. , 2020) . Selain adanya senyawa antimikroba di dalam tubuh larva H. illucens , juga didukung dengan adanya aktifitas aktivitas lisozim di lumen daerah anterior dan tengah usus tengah, enzim ini bersama dengan pH luminal asam kuat memainkan peranan penting dalam mengeliminasi adanya bakteri yang masuk ke dalam tubuh (Bonelli et al. , 2019).
Keberhasilan  infeksi  ini  tergantung  pada seberapa kuatnya bakteri simbion nematoda dalam menekan dan mengeliminasi ketahanan dari tubuh serangga inang, ketika bakteri simbion ini tidak dapat mengeliminasi  adanya  bentuk  ketahanan  dari serangga  uji  maka  nematoda  tidak  dapat berkembang biak (Devi, 2018). Senyawa melatonin yang  mengakibatkan  adanya  enkapsulasi  pada bakteri simbion nematoda entomopatogen di dalam tubuh inang (Dunphy & Thurston, 1990). Bakteri simbion  nematoda  ini  dapat  disekresi  oleh Nematoda setelah berhasil masuk ke tubuh inang, yang  kemudian  bakteri  ini  akan  melakukan perombakan jaringan inang atau dikenal dengan istilah septisemia. Dengan adanya antimikroba ini, membuat  bakteri  simbion  nematoda  mengalami enkapsulasi sehingga tidak  dapat bekerja  secara optimal. Hal ini membuat nematoda tidak dapat maksimal dalam berkembang biak. Seperti hasil penelitian  Castillo et  al. (2015)  bahwa  lalat Drosophila melanogaster memiliki respon imun melawan adanya infeksi dari bakteri Photorhabdus luminescens yang merupakan bakteri simbion dari nematoda H.  bacteriophora .

## 4.  KESIMPULAN
Kajian  kesesuaian  larva H.  illucens pada perbanyakan nematoda entomopatogen steinernema spp. secara in vivo berdasarkan hasil pengamatan dan  pembahasan  yang  dilakukan  maka  dapat disimpulkan bahwa (1) hasil analisis menunjukkan bahwa  perlakuan  pelukaan  dan  ukuran  larva memberikan pengaruh signifikan dalam pembiakan NEP sedangkan tidak untuk perlakuan konsentrasi NEP pada tingkat mortalitas dan tingkat infeksi NEP, (2) modifikasi inang dengan pelukaan mampu meningkatkan  tingkat  mortalitas  dan  infeksi Steinernema spp.,  tetapi  tidak  meningkatkan kualitas inang jika dibandingkan dengan larva T. Molitor , (3) larva H. illucens dapat menjadi inang dalam pengembangbiakkan nematoda entomopatogen Steinernema  spp.  secara in  vivo, namun  tingkat kesesuaian  inangnya  masih  lebih  rendah dibandingkan dengan larva T. molitor.

## 5.  UCAPAN TERIMA  KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Universitas Jember melalui skema Hibah Penelitian Dosen Pemula dari PNPB tahun 2021 yang telah memberi dukungan finansial sehingga penelitian ini dapat terlaksana dengan baik.

## 6.  DAFTAR  PUSTAKA
Auza, F. A., S. Purwanti, J. A. Syamsu & A. Natsir. 2020. Antibacterial Activities of Black Soldier Flies ( Hermetia illucens . l) Extract Towards the Growth of Salmonella typhimurium , E. coli  and Pseudomonas  aeruginosa . IOP Conference Series: Earth and Environmental Science . 492 (1): 12–24 . Barragan-Fonseca, K. B., M. Dicke, & J. J. van Loon. 2017. Nutritional Value of the Black Soldier Fly ( Hermetia illucens L.) and Its  Suitability  as Animal Feed–a Review. Journal of Insects as Food and Feed . 3 (2): 105–120. Barros, L. M., A. L. N. Gutjahr, R. L. Ferreira- Keppler,  &  R.  T.  Martins.  2019. Morphological Description of the Immature Stages  of Hermetia  illucens (Linnaeus, 1758) (Diptera: Stratiomyidae). Microscopy Research and Technique . 82 (3): 178–189. Baliadi, Y., I. R. Sastrahidayat, S. Djauhari, & B. T. Rahardjo. 2012. Pathogenicity, Development and Reproduction of the Entomopathogenic Nematode Steinernema sp., in  Mealworm Tenebrio  molitor . AGRIVITA,  Journal  of Agricultural Science . 33 (3): 233–244. Bonelli, M., D. Bruno, S. Caccia, G. Sgambetterra,
S. Cappellozza, C. Jucker, G. Tettamanti, & M.  Casartelli.  2019.  Structural  and Functional  Characterization  of Hermetia illucens Larval  Midgut. Frontiers  in physiology . 10 : 204.
Brivio, M.  F. &  Mastore.  2018.  Nematobacterial Complexes  and  Insect  Hosts:  Different Weapons for the Same War. Insects . 9 (3): 117. Castillo, J. C., T. Creasy, P. Kumari, A. Shetty, U. Shokal, L. J. Tallon, & I. Eleftherianos. 2015. Drosophila Anti-nematode and Antibacterial Immune  Regulators  Revealed  by  RNA- Seq. BMC genomics . 16 (1): 1–21.
Chaerani, C. 2011. Pembiakan Nematoda Patogen Serangga (Rhabditida: Heterorhabditis dan Steinernema)  pada  Media  Semi  Padat. Jurnal  Hama  dan  Penyakit  Tumbuhan Tropika . 11 (1): 69–77.
524 Jurnal Agrotek Tropika 10(4): 517-525, 2022
de Leij, F. A. A. M. 1995. Survival of Entomopathogenic
Nematodes in Soil. Biotechnology,  Ecology and  Transmission  Strategies  of  Entomo- pathogenic  Nematodes’’(CT  Griffin,  RL Gwynn, and  JP Masson,  Eds.) . pp.  1–6. Devi,  G.  2018.  Mass  Production  of  Entomo- pathogenic  Nematodes  -  a  Review. International  Journal  of  Environment, Agriculture and Biotechnology . 3 (3): 1032- 1043.
Dolinski, C., H. Y. Choo, & L. Duncan. 2012. Grower Acceptance of Entomopathogenic Nematodes: Case Studies on Three Continents. Journal of Nematology . 44 (2): 226.
Dunphy,  G.  B.  &  G.  S.  Thurston.  1990.  Insect Immunity. Entomopathogenic  nematodes in biological control . pp 301–323. Henneberry, T. J., J. E. Lindegren, F. L. Jech, & R.  A.  Burke.  1995.  Pink  Boll  Worm (Lepidoptera: Gelechiidae), Cabbage Looper, and  Beet  Army  Worm  (Lepidoptera: Noctuidae)  Pupal  Susceptibility  to Steinernematid  Nematodes  (Rhabditida: Steinernematidae). Journal  of  economic entomology . 88 (4): 835–839.
Indrayani, I. G. A. A., S. Subiyakto, & C. Chaerani. 2019.  Patogenisitas  Nematoda  Entomo- patogen terhadap Hama Uret Tebu Lepidiota stigma (Coleoptera: Scarabaeidae). Buletin Plasma Nutfah . 24 (2): 83–88.
Johannsen, O. A. 1922. Stratiomyiid Larvae and Puparia  of  the  North  Eastern  States.
Journal  of  the  New  York  Entomological Society . 30 (4): 141–153.
Kaya, H. K. & R. Gaugler. 1993. Entomopathogenic Nematodes. Annual  review of  entomology . 38 (1): 181–206.
Lalander,  C.,  E.  Ermolaev,  V.  Wiklicky  &  B. Vinneras.  2020.  Process  Efficiency  and Ventilation Requirement in Black Soldier Fly Larvae Composting of Substrates with High Water  Content. Science  of  the  Total Environment . 729 : 138968.
Lewis, E. E., M. Ricci, & R. Gaugler. 1996. Host Recognition  Behaviour  Predicts  Host Suitability  in  the  Entomopathogenic Nematode  Steinernema  carpocapsae (Rhabditida: Steinernematidae). Parasitology . 113 (6): 573–579.
Lindegren, J. E., K. F. Meyer, T. J. Henneberry, P. V. Vail, L. J. Forlow Jech, & K. A. Valero. 1993.  Susceptibility  of  Pink  Bollworm
(Lepidoptera: Gelechiidae) Soil Associated Stages to the Entomopathogenic Nematode Steinernema  carpocapsae  (Rhabditida: Steinernematidae). The  Southwestern entomologist  (USA) .
Miranda, C. D., J. A. Cammack, & J. K. Tomberlin. 2020. Mass Production of the Black Soldier Fly, Hermetia  illucens (L.),(Diptera: Stratiomyidae)  Reared  On  Three  Manure Types. Animals . 10 (7): 1243.
Muhlison, W., L. Purnamasari, I. Sucipto, T. W. Saputra, & N. K. N. Ahmad. 2021. Study of  the  Bioconversion  Process  of  Black Soldier Fly ( Hermetia illucens ) Larvae in Decomposition  of  Various  Variations  of Organic Waste. Techno:  Jurnal  Penelitian . 10 (2): 115–124.
Purwaningrum,  W.  2006.  Pengaruh  Tiga  Jenis Mangsa  terhadap  Biologi  Kepik  Predator Sycanus  annulicornis Dohrn.(Hemiptera: Reduviidae). Tesis . Institut Pertanian Bogor. Ravzanaadii, N., S. H. Kim, W. H. Choi, S. J. Hong,
&  N.  J.  Kim.  2012.  Nutritional Value  of Mealworm, Tenebrio  molitor as  Food Source. International Journal of Industrial Entomology . 25 (1): 93–98. Shapiro-Ilan, D. I. & R. A. N. D. Y. Gaugler. 2002. Production  Technology  for  Entomo- pathogenic Nematodes and Their Bacterial Symbionts. Journal  of  Industrial Microbiology  and  Biotechnology . 28 (3): 137–146.
Sheppard, D. C., G. L. Newton.L., S. A. Thompson, & S. Savage. 1994. A Value  Added Manure Management  System  Using  the  Black Soldier Fly. Bioresource technology . 50 (3): 275–279.
Susilo, F. X. 2007. Pengendalian Hayati: dengan Memberdayakan  Musuh  Alami  Hama Tanaman . Graha Ilmu.
Tourtois,  J.  S.  2014. On  Entomopathogenic Nematodes  (Rhabditida:  Steinernematidae and  Heterorhabditidae):  A  Potential Rearing Host, Black Soldier Fly Hermetia illucens  (L.)(Diptera:  Stratiomyidae)  and Compatibility  with  a  Predatory  Beetle, Dalotia  coriaria (Kraatz)(Coleoptera: Staphylinidae) . Michigan State University. Ushakova, N. À., A. E. Dontsov, N. L. Sàkina, E. S. Brodsky, I. A. Ratnikova, N. N. Gavrilova, A.  I.  Bàstrakov, A. A.  Kozlova,  &  R.  V. Nekrasov. 2017. Melanin Properties at the
Different Stages Towards Life Cycle of the Fly Hermetia  illucens . Ukrainian  Journal of Ecology . 7 (4): 424–431.
Webster,  J.  P.  2009. Natural  History  of  Host- Parasite  Interactions . Academic  Press. White, G. F. 1927. A Method for Obtaining Infective Nematode  Larvae from Cultures. Science . 66 (1709): 302–303.
Xia,  J.,  C.  Ge,  &  H. Yao.  2021. Antimicrobial Peptides from Black Soldier Fly ( Hermetia illucens ) as Potential Antimicrobial Factors Representing an Alternative to Antibiotics in Livestock Farming. Animals . 11 (7): 1937.
Zozo, B., M. M. Wicht, V. V. Mshayisa, & J. van Wyk.  2022. The  Nutritional  Quality  and Structural Analysis  of  Black  Soldier  Fly Larvae  Flour  Before  and  After Defatting. Insects . 13 (2): 168. van Zyl, C. & A. P. Malan. 2014. Optimization of Inoculation  Techniques  for in  vivo Mass Culture  of  Entomopathogenic  Nematodes Through  Nematode  and  Insect  Host Manipulation. African Entomology . 22 (2): 405–416.