## POTENCY OF EXTRACT AND FRACTION OF SPONGE Lamellodysidea herbacea OBTAINED FROM MANADO TUA ISLAND AS AN ANTIBACTERIAL
POTENSI EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Lamellodysidea herbacea YANG DIPEROLEH DARI PULAU MANADO TUA SEBAGAI ANTIBAKTERI
Angellia G. Yetto 1) , Defny S. Wewengkang 1) , Elly J. Suoth 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT, 95115 *yettoangellia@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges  has  many  kind  of  secondary  metabolites  and  has  potential  as  important  clues  in  drug development.  This  study  aims  to  determined  the  potential  level  of  Sponge  Lamellodysidea  herbacea obtained from Manado Tua Island waters as an antibacterial agent against Staphylococcus aureus and Escherichia coli bacteria. The samples were extracted using maceration method with ethanol solvent and fractionated with n-hexane, chloroform and methanol as solvents. Antibacterial activity was tested using agar diffusion method (Disc Diffusion Kirby and Bauer). The result showed that all of the fractions and crude extract had antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Escherichia coli. The best antibacterial activity was found in the n-hexane fraction against Escherichia coli bacteria with an inhibitory  power  11.05  mm  and  the  chloroform  fraction  against  Escherichia  coli  with  an  inhibitory power 21.99 mm.
Keywords : Lamellodysidea herbacea, antibacterial, extract, fraction

## ABSTRAK
Spons  memiliki  berbagai  macam  metabolit  sekunder  dan  berpotensi  sebagai  petunjuk  penting  dalam pengembangan obat. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui tingkat potensi sebagai antibakteri dari Spons Lamellodysidea  herbacea yang  diperoleh  dari  perairan  Pulau  Manado  Tua  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Sampel yang diperoleh diekstraksi menggunakan metode maserasi  dengan  pelarut  etanol  dan  di  fraksinasi  dengan  pelarut  n-heksan,  kloroform  dan  metanol. Pengujian  antibakteri  dilakukan  dengan  metode  difusi  agar  ( Disc  diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Hasil menunjukkan semua fraksi dan ekstrak memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Aktivitas antibakteri yang paling baik ditemukan pada fraksi n-heksan terhadap bakteri Escherichia  coli dengan  zona  hambat  sebesar  11,05  mm  dan  pada  fraksi  kloroform  terhadap bakteri Escherichia coli dengan zona hambat sebesar 21,99 mm.
Kata kunci : Lamellodysidea herbacea , antibakteri, ekstrak , fraksi

## PENDAHULUAN
Sebagai  Negara  dengan  keanekaragaman hayati  laut  yang  besar,  Indonesia  dapat mengolah kekayaan bahari menjadi bahan dasar obat  dengan  cara  diteliti.  Tercatat  sebanyak 1,33%  terumbu  karang  di  Sulawesi  utara ditutupi oleh spons laut (Suraji et al., 2015). Dalam dunia pengobatan, melalui perkembangan  yang  semakin  pesat,  maka beragam  jenis  obat-obatan  baru  bermunculan. Penelitian  untuk  menemukan  bahan  obat melalui  sumber  metabolit  sekunder  terus dilakukan.  Organisme  laut seperti  spons  mulai menjadi  perhatian  dunia  pengobatan  sebagai sumber daya yang sangat potensial dalam satu dekade terakhir. Penelitian pada aktivitas suatu senyawa  sebagai  antibakteri  adalah  langkah awal  untuk  mengetahui  manfaat  dari  senyawa tersebut.  Senyawa  aktif  antibakteri  dibidang kesehatan  adalah  informasi  penting  dalam menanggulangi suatu penyakit yang disebabkan oleh bakteri (Dwijendra et al., 2014).
Dalam menjaga kelangsungan hidup, spons melakukan  pertahanan  diri  dengan  cara menghasilkan  metabolit  primer  dan  juga metabolit  sekunder  (Liem et  al., 2019).  Spons memiliki  berbagai  macam  metabolit  sekunder dan berpotensi sebagai petunjuk penting dalam pengembangan  obat.  Senyawa  yang  telah dilaporkan,  yaitu  peptida,  piridin,  diterpenoid, alkaloid  lektin,  karotenoid,  steroid,  dan  sterol dengan  bioaktivitas  dalam  farmasi  sebagai antimikroba, antitumor, aktivator ATPase anti- inflamasi,  sitotoksisitas,  neuroprotektif  (Faisal et al., 2021). Berdasarkan penelitian sebelumnya  yang dilakukan oleh Dwijendra et al . (2014), menyatakan bahwa spons Lamellodysidea  herbacea yang  diperoleh  dari perairan  Teluk  Manado  memiliki  aktivitas sebagai antibakteri.
Antibakteri  dibutuhkan  sebagai  obat  dari infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri.  Adapun bakteri uji yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli adalah  contoh  bakteri  yang  dapat menyebabkan  infeksi.  Kedua  bakteri  tersebut merupakan flora normal, namun dapat menjadi pathogen  dalam  keadaan  tertentu  (Irianto, 2006).
Berdasarkan  uraian  latar  belakang  di  atas, maka  peneliti  tertarik  untuk  melakukan pengujian  antibakteri  Spons Lamellodysidea herbacea yang  diperoleh  dari  Perairan  Pulau Manado Tua.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Bentuk Penelitian
Jenis  penelitian  ini  yaitu  eksperimen laboratorium  yang  akan  menguji  komponen yang  diekstrak  dari  Spons Lamellodysidea herbacea yang  diperoleh  dari  perairan  Pulau Manado Tua yang berperan sebagai antibakteri.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini sudah dilaksanakan dari bulan Oktober  2021  sampai  Maret  2022  di Laboratorium  Penelitian  Lanjutan  Program Studi  Farmasi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi.

## Alat dan Bahan Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  sarung  tangan,  gunting,  pisau,  talenan, scuba diving , kertas label, tisu, spidol permanen, zipper  lock  bag ,  kamera underwater ,  botol plastik, cool  box ,  spatula,  timbangan  analitik, cawan  petri,  gelas  ukur,  autoklaf,  batang pengaduk, inkubator Inucell (N-Biotek), corong pisah,  kertas  saring,  mikropipet,  pipet  tetes, lemari pendingin, Laminary air flow , rak tabung reaksi,  tabung  reaksi,  pinset,  vortex, micro tubes , digital  caliper ,  pembakar  spritus,  gelas kimia, alumunium foil, magnetic stirrer , rotary evaporator , mistar berskala.

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu  Spons Lamellodysidea  herbacea ,  bakteri uji Staphylococcus aureus dan Escherichia coli , etanol  95%,  akuades,  metanol,  n-heksan, kloroform,  agar,  pepton,  ekstrak  daging  ( beef extract ),  kertas  cakram  kloramfenikol,  kertas cakram ( blank papper disc ).

## Pengambilan Sampel
Sampel  Spons Lamellodysidea  herbacea diambil  dari  perairan  Pulau  Manado  Tua dengan  menggunakan  alat  bantu scuba  diving dan  kamera underwater .  Sampel  difoto  dan kemudian  diambil,  lalu  dimasukkan  kedalam zipper lock bag dan disimpan didalam cool box . Kemudian  sampel  langsung  dibawa  ke Laboratorium  Penelitian  Lanjutan  Program Studi Farmasi Universitas Sam Ratulangi untuk dilakukan determinasi sampel.

## Ekstraksi
Sampel  Spons Lamellodysidea  herbacea sebanyak    300   g    diekstraksi    dengan    cara
maserasi. Sampel dipotong kecil-kecil kemudian  dimasukkan  kedalam  botol  plastik dan dierndam dengan etanol 95% hingga sampel terendam  secara  keseluruhan  selama  24 jam. Sampel  yang  direndam  kemudian  disaring menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 1 dan debris 1. Debris 1 direndam dengan etanol 95% sampai sampel terendam secara keseluruhan selama  24 jam.  Sampel  kemudian disaring menggunakan kertas saring menghasilkan  filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2 direndam  dengan  etanol  95%  sampai  sampel terendam  secara  keseluruhan  selama  24  jam. Sampel kemudian disaring menggunakan kertas saring  menghasilkan  filtrat  3  dan  debris  3. Filtrat  1,  2  dan  3  dicampur  menjadi  satu kemudian disaring, lalu dikeringkan menggunakan rotary  evaporator pada  suhu 40ºC  sehingga  diperoleh  ekstrak  kasar  dari Spons Lamellodysidea  herbacea .  Kemudian ekstrak  ditimbang  menggunakan  timbangan analitik dan diperoleh sebanyak 17 g, kemudian ekstrak sampel spons Lamellodysidea herbacea yang  diperoleh  digunakan  dalam  fraksinasi sebanyak  10  g  dan  pengujian  antibakteri sebanyak 7 g (Silap et al ., 2020).

## Fraksinasi
Ekstrak  etanol  Spons Lamellodysidea herbacea dimasukkan  kedalam  corong  pisah, kemudian  dilarutkan  menggunakan  metanol 80% dan ditambahkan pelarut n-heksan dengan perbandingan 1:1 v/v setelah itu dikocok hingga homogen.  Dibiarkan  hingga  terbentuk  lapisan metanol  dan  lapisan  n-heksan.  Masing-masing lapisan ditampung dalam wadah yang berbeda. Lapisan heksan kemudian diuapkan menggunakan  penguap  hingga  kering,  lalu ditimbang  dan  diperoleh  fraksi  heksan. Selanjutnya,  lapisan  MeOH  ditambahkan dengan  aquades  sebanyak  100  mL  dipartisi menggunakan pelarut kloroform dengan perbandingan  1:1  v/v,  dikocok  dalam  corong pisah  sampai  homogen.  Dibiarkan  hingga terbentuk  dua  lapisan  MeOH  dan  kloroform. Masing-masing  lapisan  ditampung  dalam wadah  yang  berbeda.  Lapisan  kloroform kemudian  diuapkan  menggunakan  penguap hingga  kering,  lalu  ditimbang  dan  diperoleh fraksi  kloroform.  Kemudian  lapisan  MeOH yang ditampung pada wadah yang lain diuapkan menggunakan  penguap  hingga  kering,  lalu ditimbang  berat  sampel  dan  diperoleh  fraksi MeOH. Ketiga fraksi yang diperoleh digunakan dalam pengujian antibakteri (Luntungan et al ., 2021).
Ortez (2005), menyatakan bahwa rendemen fraksi  yang  diperoleh  dapat  dihitung  melalui persamaan berikut.
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑑𝑖𝑔𝑢𝑛𝑎𝑘𝑎𝑛
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = × 100%
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 ℎ𝑎𝑠𝑖𝑙 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  akan  digunakan  dalam penelitian  antibakteri  ini  disterilkan  terlebih dahulu.  Untuk  alat-alat  gelas  dan  media disterilkan menggunakan autoklaf dengan suhu 121ºC  selama  15  menit,  sedangkan  pinset disterilkan  dengan  cara  dibakar  diatas  api langsung (Ortez, 2005).

## Pembuatan Larutan Uji
Digunakan  200  µL  pelarut  metanol  untuk melarutkan  1  mg  ekstrak  kasar  Spons Lamellodysidea  herbacea ,  kemudian  larutan dikocok  dengan  menggunakan  vortex  hingga diperoleh  larutan  homogen.  Dilakukan  proses yang  sama  untuk  fraksi  n-heksan,  fraksi metanol dan fraksi kloroform (Ortez, 2005).
Pembuatan Media Cair ( Beef Extract Digunakan  ekstrak  daging  ( beef  extract ) sebanyak 0,3 g, pepton 0,5 g dan aquades 100 mL.  Bahan-bahan  tersebut  diaduk  hingga homogen  dengan  menggunakan  alat magnetic stirrer dan kemudian disterilkan menggunakan autoklaf  pada  suhu  121ºC  selama  15  menit. Kemudian ke dalam tabung reaksi dimasukkan sebanyak 1 mL media cair dan ditutup dengan alumunium  foil.  Kemudian  diperoleh  media cair yang dapat digunakan sebagai media kultur bakteri (Dwijendra et al ., 2014).

## Kultur Bakteri
Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli merupakan bakteri yang akan digunakan di dalam penelitian ini. Sebanyak 100 µL bakteri yang diambil dari lemari pendingin dimasukkan ke  dalam  tabung  reaksi  yang  masing-masing telah  terisi  sebanyak  1  mL  media  cair,  lalu tabung  reaksi  masing-masing  ditutup  dengan alumunium  foil  dan  selanjutnya  diinkubasi menggunakan  inkubator  selama  24  jam  pada suhu 37 ºC (Ortez, 2005).
Pembuatan Media Agar ( Beef Extract ) Digunakan  ekstrak  daging  ( beef  extract ) sebanyak  0,3  g,  pepton  0,5  g,  agar  0,45  g  dan aquades 100 mL. Bahan-bahan tersebut diaduk hingga  homogen  dengan  menggunakan  alat magnetic  stirrer dan  kemudian  disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121ºC selama
15  menit.  Diperoleh  media  agar  yang  akan digunakan untuk pengujian aktivitas antibakteri (Dwijendra et al ., 2014).

## Kontrol Positif dan Kontrol Negatif
Kontrol  positif  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah Klroamfenikol paper disc . Sedangkan  yang  digunakan  sebagai  kontrol negatif adalah pelarut metanol dengan mentotolkan  50  µL  larutan  stok  metanol  pada kertas cakram (Tompunu et al ., 2022).

## Pengujian Antibakteri
Metode difusi agar ( disc diffusion Kirby and Bauer )  adalah  metode  yang  digunakan  dalam pengujian  antibakteri  ini.  Digunakan  masing- masing  cakram  ( paper  disc )  ukuran  6  mm dengan  daya  serap  50  µL.  Kemudian  pada masing-masing  cakram  ditotolkan  sampel konsentrasi  250  µg/50  µL  menggunakan mikropipet.  Lalu  dinginkan  hingga  suhu  40ºC media agar yang sudah disterilkan menggunakan autoklaf selama 15 menit dengan suhu  121ºC.  Media  agar  dituangkan  ke  dalam cawan  petri,  lalu  bakteri  yang  sudah  di  kultur dalam tabung reaksi diambil sebanyak 100 µL menggunakan pipet dan diinokulasi pada media agar  hingga  mengeras.  Diberikan  label  dan nomor  sampel  pada  masing-masing  cawan petri. Lalu menggunakan pinset, kertas cakram yang  sudah  ditotolkan  sampel  uji  Spons Lamellodysidea herbacea dimasukkan ke dalam cawan  petri  kemudian  diinkubasi  selama 1×24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukran Diameter Zona Hambat
Setelah  selesai  masa  inkubasi,  dilakukan pengamatan.  Kepekaan  dari  bakteri  terhadap antibiotik atau bahan antibakteri sebagai bahan uji  yang  digunakan  ditunjukkan  di  daerah sekitaran  cakram,  daerah  tersebut  dinyatakan sebagai  diameter  zona  hambat.  Pengukuran diameter  zona  hambat  dilakukan  dengan mengukur  dengan  mistar  berskala,  diukur  dua kali jari-jari. Kekuatan daya hambat dinyatakan lemah apabila memiliki diameter ≤ 5 mm, daya hambat sedang dengan diameter 6-10 mm, daya hambat  kuat  dengan  diameter  11-20  mm,  dan
daya  hambat  sangat  kuat  apabila  diameter diperoleh ≥ 21 mm (Susanto et al., 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Determinasi sampel dilakukan di Laboratorium  Penelitian  Lanjutan  Program Studi  Farmasi  Universitas  Sam  Ratulangi. Determinasi  dilakukan  diperoleh  hasil  sampel yang  diambil  dan  digunakan  dalam  penelitian adalah  sampel  yang  sesuai,  yaitu  Spons Lamellodysidea herbacea .

## Ekstraksi dan Frakasinasi
Ekstraksi  dengan  metode  maserasi  spons Lamellodysidea herbacea menggunakan pelarut etanol.  Pelarut  etanol  95%  dapat  menarik kandungan senyawa aktif sampel dengan baik, etanol  merupakan  pelarut  yang  bersifat universal  cocok  untuk  menjadi  pelarut  dalam proses  ekstraksi  semua  golongan  senyawa metabolit sekunder dan memiliki sifat toksisitas yang  rendah  sehingga  senyawa  aktif  yang  ada pada sampel tidak rusak (Kristanti et al ., 2008). Proses maserasi dilakukan dengan durasi 3×24 jam. Remaserasi dilakukan dengan tujuan untuk lebih mengoptimalkan hasil penarikan kandungan senyawa aktif yang ada pada sampel melalui  pelarut  yang  digunakan  (Luntungan et al ., 2021).
Sampel  Spons Lamellodysidea  herbacea yang diekstraksi menggunakan metode maserasi selanjutnya dievaporasi dan diperoleh 17 gram dengan nilai rendemen sebesar 5,66% dan  memiliki  warna  coklat  pekat,  kemudian ekstrak sampel diambil sebanyak 10 gram untuk dilakukan  fraksinasi  dengan  metode  fraksinasi cair-cair melalui penggunaan tiga pelarut, yaitu n-heksan, kloroform dan metanol dimana ketiga pelarut  memiliki  tingkat  kepolaran  yang berbeda  (Engka,  2016).  Pada  proses  fraksinasi yang  dilakukan  kemudian  terbentuk  dua lapisan, yaitu lapisan atas adalah pelarut dengan massa  jenis  lebih  kecil  dan  lapisan  bawah adalah  pelarut  dengan  massa  jenis  lebih  berat. Tujuan terbentuknya dua lapisan pelarut adalah untuk menarik kandungan senyawa aktif sampel secara  selektif  oleh  pelarut  yang  digunakan. Berat  dan  rendemen  fraksi  yang  diperoleh ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Rendemen ekstrak dan fraksi Spons Lamellodysidea herbacea No Sampel Berat (g) Rendemen (%) Warna 1 Ekstrak Etanol 17,00 5,66 Coklat pekat 2 Fraksi n-Heksan 1,00 10,00 Kuning 3 Fraksi Kloroform 2,00 20,00 Kuning kecoklatan 4 Fraksi Metanol 4,00 40,00 Coklat kemerahan Hasil  rendemen  yang  berbeda  disebabkan karena masing-masing pelarut memiliki tingkat kepolaran yang berbeda-beda yang mempengaruhi  banyaknya  senyawa  aktif  yang terlarut dalam ekstraksi dan fraksinasi (Mujipradhana et  al .,  2018).  Besar  rendemen ekstrak  suatu  pelarut  sangat  dipengaruhi  oleh tingkat  polaritas  dari  pelarut,  suhu,  waktu ekstraksi  dan  tingkat  kepolaran  dari  sampel dengan  polaritas  yang  sama.  Tabel  1. menunjukkan  rendemen  terbanyak  setelah ekstrak  adalah  fraksi  metanol  sebesar  40,00%, sehingga  diduga  senyawa  aktif  yang  terdapat pada  sampel  lebih  banyak  memiliki  sifat kepolaran yang tinggi (Kereh et al ., 2018) .

## Pengujian Antibakteri
Metode pengujian
antibakteri menggunakan metode difusi agar (Disc
diffusion Kirby  and  Bauer )  dengan  dasar pemilihan  metode  karena  waktu  pengerjaan yang cepat, proses pengerjaan yang mudah dan cukup  sederhana  (Dwijendra et  al .,  2014). Pengujian dilakukan terhadap bakteri Staphylococcus  aureus sebagai  perwakilan bakteri  Gram  Positif  dan Escherichia  coli sebagai  perwakilan  bakteri  Gram  Negatif. Tujuan  penggunaan  kedua  bakteri  ini  yaitu untuk  mengetahui  spektrum  dari  kandungan senyawa  spons Lamellodysidea  herbacea melalui ekstrak etanol maupun fraksi n-heksan, fraksi  kloroform  dan  fraksi  metanol.  Hasil pengujian antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli ekstrak  etanol  dan  masing-masing  fraksi melalui  metode  difusi  agar  (Disc  diffusion Kirby and Bauer ) dapat dilihat pada Tabel 2 dan Tabel 3.
Tabel 2 . Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak dan fraksi spons Lamellodysidea herbacea terhadap bakteri Staphylococcus aureus . Diameter Zona Hambat (mm) EtOH n-Hxn CHCl 3 MeOH C+ C- Sa 7,61 8,40 8,73 8,76 9,05 9,08 9,50 8,66 8,34 8,73 8,91 8,55 30,14 - ∑ 24,74 26,89 26,50 26,19 𝑋 8,24 8,96 8,83 8,73
Ket: C+=Kontrol Positif, C-=Kontrol Negatif, Sa=Bakteri Staphylococcus aureus , ∑=Total pengukuran, 𝑋 =Rata-rata pengukuran, mm=milimeter.
Tabel 3. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak dan fraksi spons Lamellodysidea herbacea terhadap bakteri Escherichia coli . Diameter Zona Hambat (mm) EtOH n-Hxn CHCl 3 MeOH C+ C- 8,60 12,47 22,12 8,87 Ec 7,93 10,09 22,05 8,57 30,61 - 7,33 10,60 21,80 7,69 ∑ 23,86 33,16 65,97 25,13 𝑋 7,95 11,05 21,99 8,37
Ket: C+=Kontrol Positif, C-=Kontrol Negatif, Ec=Bakteri Escherichia coli , ∑=Total pengukuran, 𝑋 =Rata-rata pengukuran, mm=milimeter.
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,  ekstrak etanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  dan fraksi  metanol  menunjukkan  adanya  aktivitas terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus sebagai  bakteri  Gram  Positif  dan Escherichia coli sebagai Gram Negatif melalui zona  hambat  yang  terbentuk  di  sekitar  cakram pada  media  agar,  sehingga  diketahui  bahwa ekstrak  dan  fraksi  dari  spons Lamellodysidea herbacea memiliki  spektrum  yang  luas. Kekuatan senyawa bioaktif yang terdapat dalam ekstrak  spons  laut  termasuk  sampel  spons Lamellodysidea herbacea dapat diamati melalui ukuran diameter zona hambat sebagai parameternya.  Semakin  besar  ukuran  diameter zona hambat yang terbentuk akan menunjukkan semakin  kuat  senyawa  bioaktif  dalam  spons Lamellodysidea herbacea menghambat pertumbuhan bakteri (Ngantung et al ., 2016).
Fraksi  n-heksan  dan  fraksi  kloroform menunjukkan  zona  hambat  yang  lebih  besar dibandingkan dengan ekstrak etanol dan fraksi metanol, walaupun persentase senyawa metabolit  sekunder  lebih  banyak  terkandung dalam  ekstrak  etanol  dan  fraksi  metanol. Persentase  rendemen  ekstrak  terbesar  bukan berarti dapat menunjukkan aktivitas antibakteri yang  besar  pula,  namun  aktivitas  antibakteri yang  terbentuk  tergantung  dari  keaktifan senyawa aktif sampel yang terkonsentrasi pada masing-masing  pelarut  (Padalia  &  Chanda, 2015).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  senyawa aktif  spons Lamellodysidea  herbacea yang terkandung  dalam  fraksi  n-heksan  dan  fraksi kloroform  memiliki  senyawa  aktif  yang memiliki aktivitas antibakteri yang sangat baik dengan kategori sedang pada bakteri Staphylococcus aureus (8,96 mm) dan kategori kuat pada bakteri Escherichia coli (11,05 mm), untuk  fraksi  n-heksan  dengan  kategori  sedang pada bakteri Staphylococcus aureus (8,83 mm) dan  kategori  sangat  kuat  pada  bakteri Escherichia  coli (21,99  mm)  untuk  fraksi kloroform,  lebih  besar  dibanding  rata-rata diameter  yang  diperoleh  untuk  ekstrak  etanol dan fraksi metanol (Josua et al ., 2021).
Diameter  zona  hambat  fraksi  n-heksan untuk bakteri Staphylococcus aureus mewakili Gram  Positif  lebih  rendah  jika  dibandingkan dengan bakteri Escherichia coli mewakili Gram Negatif dan zona hambat fraksi kloroform lebih tinggi  untuk  bakteri Escherichia  coli jika dibandingkan  dengan  bakteri Staphylococcus aureus .  Umumnya,  dinding  sel  bakteri  Gram Positif  dan  Gram  Negatif  berbeda  dan  hal  ini menunjukkan bahwa fraksi n-heksan dan fraksi
kloroform  yang  mengandung  zat  metabolit sekunder  dari  sampel  dengan  potensi  sebagai antibakteri lebih sensitif terhadap bakteri Gram Negatif (Dwijendra et al ., 2014).
Hasil  yang  diperoleh  sesuai  dengan penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan  oleh Dwijendra et  al .  (2014),  bahwa  ekstrak  dan fraksi  sampel  spons Lamellodysidea  herbacea menunjukkan  potensi  sebagai  antibakteri  yang memiliki  spektrum  luas  melalui  zona  hambat yang terbentuk terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan  bakteri Escherichia  coli .  Namun terdapat perbedaan diameter zona hambat yang terbentuk,  dapat  disebabkan  oleh  beberapa faktor  lingkungan  yang  diduga  mempengaruhi stabilitas  senyawa  aktif  dari  sampel,  beberapa diantaranya,  yaitu  suhu,  radiasi  cahaya,  udara, kelembapan, sifat air, kondisi biotik, keberadaan  bahan  kimia  lainnya  yang  menjadi kontaminan  senyawa  aktif  (Tompunu et  al ., 2022).

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang sudah dilakukan dapat disimpulkan bahwa ekstrak dan fraksi spons Lamellodysidea herbacea memiliki potensi  sebagai  antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli melalui  zona  hambat  yang  ditunjukan  dari cakram  masing-masing  ekstrak  etanol  spons Lamellodysidea herbacea yang mampu menghambat pertumbuhan
bakteri
Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dengan kategori sedang, fraksi n-heksan mampu menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dengan  kategori  sedang-kuat,  fraksi  kloroform mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli dengan kategori sedang-sangat kuat, dan fraksi metanol  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan kategori sedang.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai senyawa aktif yang terkandung dalam Spons Lamellodysidea  herbacea serta  uji aktivitas lainnya untuk mengetahui manfaat lain selain antibakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
Dwijendra,  I.M.,  D.S.  Wewengkang.,  dan  F. Wahentou.  2014.  Aktivitas  Antibakteri dan Karakterisasi Senyawa Fraksi Spons
Lamellodysidea herbacea yang diperoleh dari Teluk Manado. Pharmacon . 3(4) : 1- 9.
Engka,  T.  2016.  Aktivitas  Antioksidan  dan Penentuan  Kandungan  Total  Fenolik dan Flavonoid dari Umbi Kuso Mafola ( Drynaria  quercifolia L.).  [Skripsi].
Program Studi Farmasi FMIPA Universitas Sam Ratulangi, Manado. Faisal Muhammad R., Matthias Y.K., S. Rohde, Masteria Y.P., T. Murniasih, C. Risdian, Kathrin  I.M.,  J.  Wink,  Dimas  F.P.,  E. Steinman,  M.  Köck,  Peter  J.S.  2021. Ecological and Pharmacological Activities  of  Polybrominated  Diphenyl Ethers  (PBDEs)  from  the  Indonesian Marine Sponge Lamellodysidea
herbacea . MDPI . 19(611) : 12-18.
Irianto, K. 2006. Mikrobiologi- Menguak Dunia Mikrobiologi  Jilid  1 .  Bandung:Yrama Widya.
Josua, E., Defny, W., Elly S. 2021. Uji Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi  Spons
Liosina  paradoxa dari  Perairan  Pulau Mantehage. Jurnal Pharmacon UNSRAT . 10(3) : 933-939. Kereh,  V.  G.,  Feri,  K.,  I  Wayan,  T.  W., Nahrowi.  2018.  Karakteristik  Kimia Ekstrak Rumput Laut Serta Kemampuannya  Menghambat  Bakteri Salmonella sp. Jurnal  Veteriner .  Vol. 19(4) :467-477.
Kristanti,  A.  N.,  Aminah,  N.  S.,  Tanjung,  M. dan  Kurniadi,  B.  2008. Buku  Ajar Fitokimia . Unair Press, Surabaya.
Liem,  J.W.,  Robert  A.B.,  Deiske  A.S.  2019.
Bioprospeksi Antibakteri beberapa jenis Spons dari Perairan Pangalisang Bunaken. Jurnal  Pesisir  dan  Laut
Tropis . 1(1) :7-12.
Mujipradhana,  V.  N.,  Defny,  S.  W.,  Edi,  S. 2018.  Aktivitas  Antimikroba  Dari Ekstrak  Ascidian Herdmania  momus Pada Mikroba Patogen Manusia. Jurnal Pharmacon UNSRAT . 7(3) : 338-347.
Ngantung, A. E. C., Deiske, A. S., Robert, A. B. 2016.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Spons
Dictyonella funicularis dan Phyllospongia  lamellosa yang  diambil pada  Perairan  Bunaken. Jurnal  Pesisir dan Laut Tropis . (2)1 : 10-16.
Ortez,  J.  H.  2005. Disc  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing .  Marie  B.  Coyle  (Coord.  Ed).
American society for Microbiology.
Padalia, H. and Chanda, S. 2015. Antimicrobial Efficacy  of  Different  Solvent  Extracts of Tagetes erecta L. Flower, Alone and in  Combination  with  Antibiotics. Applied  Microbiology:  Open  Access . 1(1) : 1-10.
Silap,  G.  E.,  D.  Wewengkang.,  H.  Rotinsulu. 2020. Uji Aktivitas Antimikroba Karang Lunak Dendronephtya Sp .,Yang Dikoleksi Dari Desa Tumbak Kecamatan Pusomaen, Kabupaten Minahasa Tenggara Terhadap Escherichia coli , Staphylococcus aureus ,  Dan Candida  albicans . Jurnal Pharmacon UNSRAT . 9(1) : 64-65.
Suraji, Rasyid N, Kenyo A.S., dkk. 2015. Profil kawasan  konservasi  Provinsi  Sulawesi Utara .  Jakarta:  Kementrian  Kelautan dan Perikanan.
Tompunu, V. F., Defny, S. W., Erladys, M. R. 2022.  Potensi  Antibakteri  Ekstrak  dan Fraksi  dari  Organisme  Laut Stylissa carteri terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Jurnal  Pharmacon  UNSRAT . (11)1 : 1255-1263.