## ALCHEMY : JOURNAL OF CHEMISTRY

## Artikel Penelitian
Variasi Diameter Kolom dan Rasio Sampel-Silika pada Isolasi Steroid dan Triterpenoid Alga Merah Eucheuma cottonii dengan Kromatografi Kolom Basah
Ahmad Ghanaim Fasya* , Ariska Purwaning Tyas, Fitroh Annisaul Mubarokah, Rachmawati Ningsih, Armeida Dwi Ridhowati Madjid
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, Indonesia, 65144
INFO ARTIKEL ABSTRAK

## Riwayat Artikel
Direvisi 28 September 2018 Diterima 15 Oktober 2018 Tersedia online 30 Desember 2018
* Email penulis korespondensi:
fasya.organik@kim.uin-malang.ac.id
Optimizing of steroids and triterpenes isolation from red algae Eucheuma cottonii was done using column chromatography by varying of column diameter (1, 1.5 and  2  cm)  and  a  ratio  of  sample  :  silica  (1:50,  1:100,  and  1:150).  Active compound of E. cottonii was extracted by maceration with methanol. Then, the extract was hydrolyzed using HCl 2 N and partitioned with petroleum ether. The extract after partitioned was separated using wet column chromatography. The result  of  separation  was  monitored  using  analytical  thin  layer  chromatography (Analytical TLC) and identified using  fourier-transform infrared (FTIR). The best separation was aimed using diameter column 1 cm and a ratio of sample : silica 1:150. Based on FTIR analysis, the petroleum ether fraction from extract had a functional  group  –OH,  –C–H,  C=O,  -C(CH 3 ) 2 , and  C-OH  alcohol  and  the triterpenoid  from  extract  had  a  functional  group  –OH,  C–H,  C=O,  C=C, - C(CH 3 ) 2 and C-OH alcohol.
Keywords: E. cottonii , column chromatography, steroid, triterpenoid, column size, sample : gel silica ratio
Optimasi  isolasi  senyawa steroid  dan  triterpenoid  dalam  alga  merah Euchema cottonii telah  dilakukan  menggunakan  kromatografi  kolom  dengan  variasi diameter  kolom  (1;  1,5;  dan  2  cm)  dan  rasio sampel :  silika  (1:50;  1:100;  dan 1:150).  Ekstraksi  senyawa  aktif  pada E.  cottonii dilakukan  dengan  maserasi menggunakan pelarut metanol. Ekstrak pekat metanol dihidrolisis menggunakan HCl  2  N  dan  dipartisi  dengan  petroleum  eter.  Hasil  pemisahan  dimonitoring menggunakan  kromatografi  lapis  tipis  analitik  (KLTA)  dan  diidentifikasi menggunakan  fourier-transform  infrared  (FTIR).  Hasil  penelitian  menunjukkan pemisahan kromatografi  kolom  terbaik  diperoleh  dengan  diameter  kolom  1 cm dan  rasio  sampel  :  silika  sebesar  1:150.  Berdasarkan  analisis  FTIR,  fraksi petroleum eter memberikan informasi gugus –OH, –C–H, C=O, -C(CH 3 ) 2 , dan C- OH alkohol, sedangkan senyawa triterpenoid memberikan informasi gugus –OH, –C–H, C=O, C=C, -C(CH 3 ) 2 dan C-OH alkohol.
Kata Kunci: E. cottonii , kromatografi kolom, steroid, triterpenoid, ukuran kolom, rasio sampel : silika gel

## 1. Pendahuluan
Alga  merah  merupakan  salah  satu  jenis  tanaman  perairan  yang  mengandung  berbagai  jenis  zat-zat  yang bermanfaat. Salah satu jenis alga yang mengandung banyak manfaat adalah Eucheuma cottonii . E. cottonii digunakan sebagai  makanan  alternatif  untuk  terapi  kanker  payudara  [1],  antitumor  dan  antimikroba  [2].  Alga  merah  ini  memiliki banyak  manfaat  karena  mengandung  banyak  senyawa  metabolit  sekunder  diantaranya  steroid  dan  triterpenoid  [2]. Steroid sendiri memiliki banyak manfaat yaitu sebagai penghambat kanker prostat [3], antimikroba [4], antiinflamasi dan agen analgesik [5]. Triterpenoid digunakan untuk mengobati diabetes, gangguan menstruasi, gangguan kulit, antimalaria dan  antitumor  [6].  Dari  banyaknya  manfaat  yang  terkandung  dalam  senyawa  steroid  dan  triterpenoid,  penting  untuk dilakukan isolasi terhadap senyawa metabolit sekunder tersebut dari alga merah .
Isolasi  senyawa  metabolit  sekunder secara  umum  dilakukan  dengan  metode  ekstraksi maserasi yang  dilanjutkan dengan  hidrolisis  untuk  memutuskan  ikatan  glikosida  antara  glikon  (gugus  gula)  dan  aglikon  (senyawa  metabolit sekunder).  Untuk  mendapatkan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terpisah  dari  glikon,  keduanya  dipisahkan  dengan partisi. Hasil dari proses partisi biasanya masih dalam bentuk campuran. Untuk memisahkan dan mendapatkan senyawa metabolit sekunder yang lebih murni dapat dilakukan isolasi dengan menggunakan kromatografi kolom.
Kromatografi kolom merupakan metode pemisahan preparatif yang dapat menghasilkan isolat dalam jumlah  yang cukup besar. Efisiensi pemisahan menggunakan kromatografi kolom dipengaruhi oleh adsorben, eluen, diameter kolom dan laju alir [7]. Adsorben berperan penting sebagai fase diam dari suatu kolom kromatografi sebagaimana pengaruhnya dalam  efisiensi  pemisahan  yang  berkaitan  dengan  teori plate dan  teori  kelajuan  [8].  Pemisahan  yang  efisien menggunakan kromatografi kolom dapat dilakukan salah satunya dengan cara memperkecil jumlah sampel dalam proses elusi  serta  memperpanjang  kolom  (adsorben)  [9].  Menurut  Kondeti  dkk.  [10],  ukuran  diameter  kolom  dapat mempengaruhi keefisiensian pemisahan dalam kolom, dimana semakin tinggi fase diam yang dihasilkan maka semakin baik  hasil  pemisahannya.  Efisiensi  pemisahan  dapat  diketahui  dengan  nilai  resolusi.  Nilai  resolusi  yang  tinggi menunjukkan  kesempurnaan  keterpisahan  antar  senyawa  dalam  campuran  [9].  Pada  penelitiaan  ini  akan  dilakukan optimasi pemisahan hasil isolasi alga merah dengan memvariasi diameter kolom (1,0; 1,5; dan 2 cm) serta variasi rasio sampel :  silika  (1:50,  1:100,  1:150).  Monitoring  hasil  pemisahan  dilakukan  menggunakan  kromatografi  lapis tipis  (KLT) dan identifikasi hasil pemisahan dilakukan menggunakan fourier-transform infrared (FTIR).

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1. Bahan
Bahan utama dalam penelitian ini adalah alga merah Eucheuma cottonii dari Wongsorejo Banyuwangi. Bahan kimia yang digunakan adalah metanol (Merck), HCl 2 N (Merck), petroleum eter (Merck), n-heksana merck, etil asetat (Merck), asam asetat anhidrat (Merck), H 2 SO 4 pekat (Merck), kloroform (Merck), plat silika gel GF 254 (Merck) dan silika gel 60.

## 2.2. Preparasi dan Ekstraksi Sampel
Alga merah dicuci bersih, kemudian dipotong kecil-kecil, dan dikeringanginkan lalu dioven pada suhu 38°C selama 24 jam. Sampel yang sudah kering dihaluskan hingga didapatkan serbuk alga merah. Sampel alga merah sebanyak 100 g diekstraksi secara maserasi menggunakan 500 mL pelarut metanol selama 24 jam disertai dengan pengocokan, dan kemudian  disaring.  Ampas  yang  diperoleh  selanjutnya  dimaserasi  kembali  dengan  menggunakan  pelarut  yang  sama. Filtrat yang diperoleh dipekatkan menggunakan rotary evaporator .
Ekstrak pekat metanol alga merah dihidrolisis dengan ditambahkan HCl 2 N dan diaduk dengan bantuan magnetic stirer pada suhu ruang selama 1 jam. Hidrolisat yang diperoleh ditambahkan NaHCO 3 sampai pH netral (pH 7). Hidrolisat dengan  pH  7  kemudian  dipartisi  dengan  petroleum  eter  :  metanol  (50:50),  dan  diambil  fasa  organiknya.  Ekstrak  hasil partisi  kemudian  dipekatkan  dengan rotary  evaporator sehingga  diperoleh  ekstrak  pekat  yang  kemudian  ditimbang beratnya dan ditentukan rendemennya [11].

## 2.3. Penentuan Kadar Air
Serbuk sampel sebanyak 1 g dimasukkan dalam cawan porselen yang sudah diketahui berat konstannya, kemudian dioven pada suhu 100-105°C dan didinginkan dalam desikator. Perlakuan ini diulangi sampai berat konstan. Kadar air dalam alga merah dapat dihitung menggunakan Persamaan 1 [12].
Kadar air = x 100% ( B – C )
( B – A )
(1)
Dimana  A  =  bobot  cawan kosong,  B  =  bobot  sampel  +  cawan  sebelum  dikeringkan,  dan  C  =  bobot  cawan  +  sampel setelah dikeringkan.

## 2.4. Uji Steroid dengan Lieberman Burchard
Sebanyak  5  mg  ekstrak  petroleum  eter  alga  merah  dilarutkan  dalam  kloroform,  lalu  ditambahkan  asam  asetat anhidrida dan H 2 SO 4 pekat melalui dinding tabung. Jika terbentuk warna hijau kebiruan menunjukkan adanya golongan senyawa  steroid  dan  Jika  terbentuk  cincin  kecoklatan  atau  violet  pada  pembatas  dua  pelarut  menunjukkan  adanya golongan senyawa triterpenoid.

## 2.5. Isolasi Steroid dengan Kromatografi Kolom

## 2.5.1. Isolasi Steroid dan Triterpenoid dengan Variasi Diameter Kolom
Proses Isolasi menggunakan kromatografi kolom basah dengan fase diam silika  gel 60 dan fase gerak berupa n- heksana  :  etil  asetat  (4,25:0,25).  Bubur  silika  dibuat  dengan  cara  merendam  silika  sebanyak  10  gram  dengan  eluen kemudian dimasukkan ke dalam kolom dan didiamkan selama 24 jam [13]. Setelah itu, 0,1 g sampel dimasukkan dalam kolom  berdiameter  1  cm.  Perlakuan  yang  sama  diulangi  untuk  diameter  kolom  dengan  1,5  dan  2  cm.  Kecepatan  alir diatur 2 mL/menit dan proses elusi dilakukan hingga vial ke 200.

## 2.5.2. Isolasi Steroid dan Triterpenoid dengan Variasi Rasio Sampel dan Silika gel
Persiapan  kolom  dilakukan  prosedur  yang  sama  seperti  pada  tahapan  2.5.1. Kemudian,  sampel  diambil  sesuai variasi dalam kolom A, B, dan C dengan ditimbang 0,067; 0,1; 0,2 g (perbandingan rasio sampel dengan silika gel 1:150; 1:100; 1:50) . Eluat ditampung pada botol vial tiap 2 mL.

## 2.6. Monitoring dengan Kromatografi Lapis Tipis Analitik
Identifikasi  fraksi  hasil  isolasi  kromatografi  kolom  dilakukan  dengan  kromatografi  lapis  tipis  analitik  (KLTA).  Fase diam  yang  digunakan  plat  silika  gel  GF 254 dan  eluen  sebagai  fase  gerak  berupa  pelarut  campuran  n-heksana  dan  etil asetat  dengan  perbandingan  4,25:0,75.  Fraksi  ditotolkan  pada  plat  silika  gel  yang  telah  diaktivasi  dan  dimasukkan  ke dalam  bejana  pengembang  yang  berisikan  eluen  yang  sudah  dijenuhkan  dan  dielusi  sampai  tanda  batas  atas. Noda/bercak  hasil  pemisahan  kemudian  diamati  di  bawah  sinar  UV  (254  nm)  dan  dihitung  Rf  ( retention  factor )  serta resolusinya (Rs). Resolusi pemisahan ditentukan menggunakan Persamaan 2.
Resolusi =
Dimana, d = jarak antar 2 pusat noda, W 1 dan W 2 = rata-rata lebar noda.

## 2.7. Identifikasi Gugus Fungsi dengan Spektrofotometer FTIR
Senyawa  hasil  isolasi  diidentifikasi  dengan  menggunakan  spektrofotometer  FTIR.  Isolat  yang  diperoleh  dijadikan pelet KBr dan dipress dengan tekanan 80 Torr. Sampel yang sudah berupa pelet dimasukkan ke dalam spektrofotometer FTIR untuk dianalisis gugus fungsi pada spektra yang dihasilkan.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Preparasi dan Ekstraksi Sampel
Sampel  dikeringanginkan  untuk  menghilangkan  kadar  air  dalam  sampel.  Sampel  yang  telah  kering  dihaluskan. Hasilnya  sampel  dalam  bentuk  serbuk  untuk  dimaserasi.  Kemudian  serbuk  alga  merah  dianalisis  kadar  airnya  untuk mengetahui kandungan air dalam sampel tersebut. Kandungan kadar air pada sampel alga merah sebesar 5,41% yang memenuhi syarat untuk maserasi yaitu kadar air maksimal <11% [15]. Rendemen ekstraksi alga merah menggunakan metode  maserasi  dengan  pelarut  metanol  diperoleh  sebesar  15,59%.  Ekstrak  metanol  tersebut  yang  selanjutnya dihidrolisis  dengan  katalis  asam  (HCl  2  N)  untuk  memutus  ikatan  antara  glikon  dengan  aglikon  (metabolit  sekunder). Pemisahan  metabolit  sekunder  (aglikon)  yang  sudah  terputus  ikatannya  pada  proses  hidrolisis  dilakukan  dengan menggunakan  campuran  petroleum  eter  dan  metanol  menghasilkan  dua  lapisan,  yaitu  fase  organik  dan  air.  Bagian aglikon (metabolit skeunder) akan terdistribusi dalam petroleum eter (fase organik) sedangkan yang lainnya ke fasa air. Fasa organik yang didapatkan dipisahkan dari pelarutnya dengan menggunakan rotary evaporator vacuum. Rendemen yang diperoleh pada tahapan partisi sebesar 9,25%.
d (W 1 + W 2 ) x 0,5 (2)

## 3.2. Uji Steroid dengan Lieberman Burchard
Ekstrak pekat petroleum eter yang dilarutkan dengan reagen Lieberman Burchard menghasilkan warna hijau yang menunjukkan senyawa steroid dan adanya cincin coklat menunjukkan senyawa triterpenoid.

## 3.3. Isolasi Steroid dan Triterpenoid dengan Variasi Diameter Kolom
Berdasarkan  hasil  monitoring  pada Tabel  1 , 2 dan 3 dapat  diketahui  bahwa  kolom  dengan  diameter  1  cm merupakan variasi diameter kolom terbaik fraksi tunggal terbanyak yaitu satu steroid dan dua triterpenoid dengan resolusi yaitu Rs = 1,650; Rs = 0,825 dan Rs = 0,990. Dengan jumlah fasa diam (silika) yang sama yaitu 10 gram maka pada kolom diameter 1 cm, tinggi fasa diamnya adalah yang paling tinggi jika dibandingkan dengan kolom dengan diameter yang lebih besar (1,5 dan 2 cm). Sesuai dengan teori kromatografi pada teori piringan, yaitu H = L/N dimana H adalah tinggi  piringan  teoritis  yang  menyatakan  efisiensi  pemisahan,  L  adalah  panjang  kolom  dan  N  adalah  jumlah  piringan, maka dengan fasa diam yang sama maka tinggi H untuk tiap-tiap kolom adalah sama tetapi karena kolom dengan d = 1 cm lebih tinggi maka jumlah piringan yang dimiliki akan semakin banyak dan pemisahan menjadi lebih baik (jumlah fraksi tunggal yang dihasilkan dan resolusi lebih baik).
Tabel 1. Hasil Monitoring Diameter Kolom 2 cm
Fraksi Warna Senyawa Retention Factor (Rf) Resolusi 1 – 7 - - - - 8 – 9 Hijau Steroid 0,688 1,060 10 – 14 Hijau Steroid 0,669 1,060 Merah Triterpenoid 0,475 15 – 22 Hijau Steroid 0,388 0,353 Ungu Triterpenoid 0,388 23 – 31 Hijau Steroid 0,388 0,353 0,795 Ungu Triterpenoid 0,388 Merah Triterpenoid 0,225 32 – 42 Hijau Steroid 0,388 0,353 0,795 Ungu Triterpenoid 0,388 Merah Triterpenoid 0,238 43 – 90 Merah Triterpenoid 0,150 0,533 Merah Triterpenoid 0,225 Merah Triterpenoid 0,150 91 – 125 Merah Triterpenoid 0,144 0,533 Tabel 2. Hasil Monitoring Diameter Kolom 1,5 cm Fraksi Warna Senyawa Retention Factor (Rf) Resolusi 1 – 8 - - - - 9 – 10 Hijau Steroid 0,656 1, 100 11 – 12 Hijau Steroid 0,650 1, 100 Merah Triterpenoid 0,469 13 – 16 Merah Triterpenoid 0,475 0, 530 17 – 19 Merah Triterpenoid 1,283 0, 530 0, 404 Hijau Steroid 0,394 Ungu Triterpenoid 0,338 20 – 29 Hijau Steroid 0,388 0, 404 Ungu Triterpenoid 0,338 30 – 37 Hijau Steroid 0,400 0, 636 Ungu Triterpenoid 0,225 38 – 39 - - - - 40 – 67 Merah Triterpenoid 0,225 0, 441 Merah Triterpenoid 0,144 68 – 90 Merah Triterpenoid 0,150 0, 441
Tabel 3. Hasil Monitoring Diameter Kolom 1 cm
Fraksi Warna Senyawa Retention Factor (Rf) Resolusi 1 – 7 - - - - 8 Hijau Steroid 0,669 1,650 9 – 11 Hijau Steroid 0,663 1,650 Merah Triterpenoid 0,488 12 – 13 Merah Triterpenoid 0,488 0,825 14 – 16 Merah Triterpenoid 0,488 0,825 Hijau Steroid 0,388 17 – 24 Ungu Triterpenoid 0,350 0,471 Hijau Steroid 0,388 25 Ungu Triterpenoid 0,350 0,471 Hijau Steroid 0,393 Ungu Triterpenoid 0,356 1,296 Merah Triterpenoid 0,238 26 – 31 Hijau Steroid 0,413 1,414 Merah Triterpenoid 0,225 32 – 33 Hijau Steroid 0,400 1,414 0,707 Merah Triterpenoid 0,238 Merah Triterpenoid 0,161 34 – 60 Merah Triterpenoid 0,238 0,990 Merah Triterpenoid 0,161 61 – 115 Merah Triterpenoid 0,163 0,990
3.4. Isolasi Steroid dan Triterpenoid dengan Kromatografi Kolom Basah Variasi Rasio Sampel dan Silika Gel
Hasil monitoring variasi rasio sampel dan silika gel 1:50; 1:100; 1:150 ditunjukkan pada Tabel 4, 5 dan 6 . Masing- masing  variasi  dikelompokkan  berdasarkan  nilai  Rf  dan  warna  noda.  Hasil  monitoring  dengan  noda  tunggal dikelompokkan dan dihitung nilai resolusinya.
Tabel 4. Hasil monitoring variasi sampel : silika (1:50) Fraksi Warna Senyawa Retention Factor (Rf) Resolusi 1 – 9 - - - - 10 Hijau Campuran 0,838 1,414 Hijau 0,700 11 – 13 Hijau Steroid 0,700 1,414 14 – 15 Hijau Campuran 0,706 1,149 Merah 0,538 16 – 20 Merah Triterpenoid 0,544 0,618 21 – 24 Merah Campuran 0,544 0,618 Hijau 0,450 25 – 35 Ungu Campuran 0,388 0,618 0,618 Hijau 0,463 Ungu 0,400 36 – 49 Hijau Campuran 0,450 1,237 Merah 0,269 50 – 75 Merah Campuran 0,263 0,618 Merah 0,169 76 – 115 Merah Triterpenoid 0,169 0,618 116 – 200 - - - -
Hasil monitoring variasi rasio sampel dan silika gel 1:50 diperoleh tiga kelompok fraksi yaitu 1 fraksi steroid  pada kelompok fraksi 11 – 13 dan 2 fraksi triterpenoid pada fraksi 16 – 20 dan 76 – 115. Begitu pula dengan hasil monitoring variasi 1:100 yang mendapatkan jumlah fraksi noda tunggal yang sama dengan variasi 1:50, vial 9  – 10 dengan fraksi steroid, dan 2 fraksi triterpenoid pada kelompok fraksi 13 – 16 dan 68 – 90.
Tabel 5. Hasil monitoring variasi sampel : silika (1:100)
Fraksi Warna Senyawa Retention Factor (Rf) Resolusi 1 – 8 - - - - 9 – 10 Hijau Steroid 0,656 1,100 11 – 12 Hijau Campuran 0,650 1,100 Merah 0,469 13 – 16 Merah Triterpenoid 0,475 1,100 17 – 19 Merah Campuran 0,481 0,530 0,404 Hijau 0,394 Ungu 0,338 20 – 29 Hijau Campuran 0,388 0,404 Ungu 0,338 30 – 37 Hijau Campuran 0,400 0,636 Merah 0,225 38 – 39 - - - - 40 – 67 Merah Campuran 0,225 0,441 Merah 0,144 68 – 90 Merah Triterpenoid 0,150 0,441 91 – 200 - - - -
Hasil  monitoring  variasi  rasio  sampel  dan  silika  gel  1:150  juga  diperoleh  tiga  kelompok  fraksi,  1  kelompok  fraksi steroid dan 2 kelompok fraksi triterpenoid. Berdasarkan nilai resolusi dari spot-spot tunggal yang diindikasikan sebagai senyawa murni steroid dan triterpenoid ditunjukkan bahwa resolusi terbaik dari ketiga variasi ialah variasi 1:150 dengan nilai  resolusi  yang  paling  besar  dibandingkan dengan  variasi  1:50  dan  1:100.  Nilai  resolusi  yang  tinggi  menunjukkan kesempurnaan  keterpisahan  antara  dua  buah  puncak  kromatogram  dengan  nilai  Rs  mendekati  1,5  atau lebih  dari  1,5 memberikan  hasil  pemisahan  2  puncak  yang  sangat  baik  dan  minim  terjadinya  tumpang  tindih  senyawa  [9].  Dengan memperbesar  rasio  antara  sampel  dengan  silika  sebagai  fasa  diam  maka  sebenarnya  adalah  memperkecil  jumlah sampel  yang  akan  dianalisis.  Dengan  jumlah  sampel  yang  lebih  kecil  maka  terjadi  transfer  massa  yang  cukup  untuk seluruh  bagian  sampel  sehingga  jarak  antara  satu  senyawa  yang  satu  dengan  lainnya  menjadi  cukup  baik  dan  tidak tumpang  tindih.  Hal  tersebut  terbukti  bahwa  pada  dasarnya  pada  ketiga  variasi  dihaslkan  jumlah  fraksi  tunggal  yang sama yaitu 1 fraksi steroid dan 2 fraksi triterpen tetapi pada rasio 1:150 resolusinya menjadi lebih baik.
Tabel 6. Hasil monitoring variasi sampel : silika (1:150) Fraksi Warna Senyawa Retention Factor (Rf) Resolusi 1 – 9 - - - - 10 – 11 Hijau Steroid 0,619 1,799 12 Hijau Campuran 0,613 1,799 Merah 0,431 13 – 16 Merah Triterpenoid 0,438 1,799 17 – 26 Hijau Campuran 0,350 0,471 Ungu 0,300 27 Hijau Campuran 0,350 0,471 0,707 Ungu 0,313 Merah 0,225 28 – 42 Hijau Campuran 0,388 1,590 Merah 0,213 43 – 48 Hijau Campuran 0,363 1,590 0,707 Merah 0,213 Merah 0,138 49 – 67 Merah Campuran 0,206 0,707 Merah 0,131 68 – 95 Merah Triterpenoid 0,125 0,707 96 – 200 - - - -
Hasil identifikasi menggunakan FTIR pada fraksi 10 – 11 menunjukkan adanya regang C–H alifatik pada 2926,406 cm -1 yang dimungkinkan adanya gugus metil (-CH 3 ) [16]. Dugaan ini diperkuat dengan vibrasi C-H stretch pada 1381,990 dan 1462,945 cm -1 . Vibrasi gugus C=O keton pada 1731,842 cm -1 . Vibrasi C–H stretch tersebut yang mengindikasikan adanya  gugus  geminal  dimetil  (-C(CH 3 ) 2 )  yang  lazim  ditemukan  pada  senyawa  steroid.  Identifikasi  gugus  fungsi  pada fraksi 12 – 16 menunjukkan adanya serapan gugus -OH, C-OH alkohol, vibrasi C-H stretch atau geminal dimetil, C=O asam  karboksilat.  Adapun  fraksi  68  –  95  menunjukkan  adanya  serapan  gugus  -OH,  C-OH  alkohol,  C-H stretch atau geminal  dimetil,  C=C,  gugus  metil  dan  metilen.  Berdasarkan  serapan-serapan  tersebut  mengindikasikan  kedua  fraksi tersebut merupakan senyawa triterpenoid.
Gambar 1. Spektra hasil Identifikasi FTIR fraksi tunggal variasi 1:150 (A) fraksi 10 – 11 senyawa steroid, (B) fraksi 13 – 16 senyawa triterpenoid 1 dan (C) fraksi 68 – 95 senyawa triterpenoid 2.

## 4. Kesimpulan
Hasil  isolasi  senyawa  steroid  dan  triterpenoid  pada  fraksi  petroleum  eter  alga  merah  terbaik  diperoleh  dengan variasi diameter 1 cm dan rasio sampel : silika terbaik adalah variasi 1:150. Jumlah senyawa yang diperoleh adalah 1 senyawa steroid dan 2 senyawa terpenoid.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  banyak  terima  kasih  kepada  Lembaga  Penelitian  Pengabdian  Masyarakat  (LP2M)  UIN Maulana Malik Ibrahim Malang melalui dana bantuan penelitian pengembangan program studi 2018.

## Daftar Pustaka
[1] F. Namvar, S., Mohamed, S. G. Fard, J. Behravan, N. M. Mustapha, N. B. M. Alitheen, & F. Othman, “Polyphenol- rich  Seaweed  ( Eucheuma  cottonii )  Extract  Suppresses  Breast  Tumour  via  Hormone  Modulation  and  Apoptosis Induction,” Food Chemistry , vol. 130, no. 2, pp. 376-382, 2012.
[2] S. Afif, “Uji Toksisitas dengan Metode BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test ) dan Identifikasi Golongan Senyawa Aktif Ekstrak Alga Merah Eucheuma cottoni dari Perairan Sumenep Madura,” Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2013.
[3] J. L. Zhang, H. Y. Tian, J. Li, L. Jin, C. Luo, W. C. Ye, & R. W. Jiang, “Steroids with Inhibitory Activity against the Prostate Cancer Cells and Chemical Diversity of Marine Alga Tydemania expeditionis, ” Fitoterapia , vol. 83, no. 5, pp.
973 – 978, 2012.
[4] A. E. Farouk, A. H. G. Faizal, & B. H. Ridzwan, “New Bacterial Species Isolated from Malaysian Sea Cucumbers with Optimized Secreted Antibacterial Activity,” American Journal of Biochemistry and Biotechnology , vol. 3, no.2, pp. 64-69, 2007.
[5] A. P. Singh, “Short Review: Distribution of Steroid like Compound in Plant Flora,” Pharmacognosy Magazine , vol. 2, no. 6, pp. 87-89, 2006.
[6] S.  T.  Lee,  P.  F.  Wong,  S.  C.  Cheah,  &  M.  R.  Mustafa,  “Alpha-tomatine  Induces  Apoptosis  and  Inhibits  Nuclear Factor-kappa B Activation on Human Prostatic Adenocarcinoma PC-3 cells,” PLoS One , vol. 6, no.4, 2011.
[7] A. V. Kristanti, N. S. Aminah, M. Tanjung, & B. Kurniadi, Buku Ajar Fitokimia . Surabaya: Airlangga University Press, 2008.
[8] I.  Sundari,  “Identifikasi  Senyawa  dalam  Ekstrak  Etanol  Biji  Buah  Merah  ( Pandanus  conoideus Lamk.),”  Skripsi, Universitas Sebelas Maret, Surakarta, 2010.
[9] S. Wonorahardjo, Metode-Metode Pemisahan Kimia: Sebuah Pengantar . Jakarta: Akademia, 2013.
[10] R. R. Kondeti, K. S. Mulpuri, & B. Meruga, “Advancements in Column Chromatography: A Review,” World Journal of Pharmaceutical Sciences, vol. 2, no. 10, pp. 1375-1383, 2014.
[11] I.  M.  Setiyawan,  “Isolasi  Senyawa  Triterpenoid  Fraksi  Petroleum  Eter  Alga  Merah  ( Eucheuma  spinosum )  Hasil Hidrolisis Ekstrak Metanol dan Identifikasinya Menggunakan FTIR,” Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2015.
[12] AOAC, Official Methods of Analysis. Washington DC: Association of Official Analytical Chemists, 1984.
[13] A. N. L. Sholikah, “Isolasi Senyawa Steroid dari Fraksi Petroleum Eter Hasil Hidrolisis Ekstrak Metanol Alga Merah ( Eucheuma spinosum ) Menggunakan Metode Kromatografi Kolom,” Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2016.
[14] Kusmiyati,  N.  Aznam,  &  S.  Handayani,  “Isolasi  dan  Identifikasi  Zat  Aktif  Ekstrak  Metanol  Rimpang  Kunyit  Putih ( Curcuma mangga Val) Fraksi Etil Asetat,” Jurnal Ilmiah Kefarmasian. vol. 1, no. 2, pp. 1-10, 2011.
[15] A. Sulistijowati & D. Gunawan, “Efek Ekstrak Daun Kembang Bulan ( Tithonia diversifolia A. Gray) terhadap Candica albicans serta  Profil  Kromatografinya,” Media  Penelitian  dan  Pengembangan  Kesehatan , vol.  8,  no.  3,  pp.  32-37, 1998.
[16] G. Socrates, Infrared Characteristic Group Frequencies 2 nd Edition. England: John Wiley and Sons Ltd, 1994 .