Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Kelakai  ( Stenochlaena palustris (Burm.F)  Bedd)  Terhadap Salmonella  typhi dan Staphylococcus aureus dengan Metode Difusi Agar CLSI M02-A11
Tina Rostinawati *1 , Shendi Suryana 2 , Maulida Fajrin 2 , Hanny Nugrahani 1
1) Fakultas Farmasi UniversitasPadjadjaran,Jl. Raya Bandung-Sumedang KM 21 Jatinangor 45363
2) Program Studi Farmasi, FMIPA Universitas Garut, Jl. Jati No. 42 B Tarogong, Garut 44151

## Abstrak
Tanaman kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm.F) Bedd) dikenal memiliki banyak khasiat dan digunakan sebagai tanaman obat di  Kalimantan  Tengah.  Kelakai  mengandung  senyawa  tanin,  flavonoid,  steroid,  alkaloid,  lemak,  protein,  kalsium,  mineral  Fe, vitamin C, dan vitamin A. Tujuan dari penelitian untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun kelakai terhadap S. thypi dan S. aureus dengan metode difusi agar CLSI M02-A11. Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol  96%.  Pengujian  aktivitas  antibakteri  menggunakan  metode disc  diffusion atau  difusi  cakram.  Konsentrasi  ekstrak  yang digunakan  dalam  pengujian  terhadap  kedua  bakteri  adalah  125000µg/ml,  250000µg/ml,  375000µg/ml,  500000µg/ml  dan 1000000µg/ml. Semakin meningkat konsentrasi ekstrak etanol daun kelakai  menunjukkan semakin besar diameter zona hambat pertumbuhan bakteri. Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ekstrak etanol daun kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm.F) Bedd) terhadap pertumbuhan S. aureus adalah 10,6% (b/v) dan terhadap S. thypi adalah 9% (b/v). Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM) ekstrak  etanol  daun  kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.F)  Bedd)  terhadap  pertumbuhan S.  aureus adalah  11%  (b/v)  dan terhadap S. thypi adalah 10,8% (b/v). Nilai kesetaraan aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa 1 mg tetrasiklin terhadap bakteri S. aureus setara dengan 28,21 mg ekstrak etanol daun kelakai dan terhadap S. thypi setara dengan 23,65 mg ekstrak etanol daun kelakai.
Kata kunci: kelakai, antibakteri, Staphylococcus aureus , Salmonella thypi , difusi agar

## 1. Pendahuluan
Penyakit  infeksi  merupakan  salah  satu  masalah kesehatan  yang  paling  utama  di  negara-negara berkembang  termasuk  Indonesia.  Berdasarkan  Survey Kesehatan Rumah Tangga tahun 2007, penyebab utama kematian  antara  lain  28,1  %  disebabkan  oleh  penyakit infeksi  dan  parasit.  Hal  inilah  yang  mendorong  dan mendasari  pencarian  sumber  obat-obatan  alami  yang murah dan memiliki potensi aktivitas antimikroba [1]. Pemanfaatan  tanaman  herbal  untuk  pengobatan tradisional  telah  menyatu  di  masyarakat.  Hal  ini dikarenakan  tanaman  herbal  memiliki  beberapa keuntungan, salah satunya yaitu memiliki efek samping yang  rendah  apabila  dibandingkan  dengan  obat  yang terbuat  dari  bahan  sintetik.  Selain  itu,  tanaman  herbal juga  mudah  diproduksi,  mudah  diperoleh  dan  murah dibandingkan dengan obat sintetik.
* Departemen Biologi Farmasi Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran Email: tinarostinawati@gmail.com
Tanaman kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm.F) Bedd)  sangat  dikenal  oleh  masyarakat  Kalimantan Tengah  sebagai  tanaman  obat  karena  tanaman  tersebut mudah  didapat  dan  memiliki  banyak  manfaat  seperti penambah  darah,  menunda  penuaan,  antidiare,  dan sayuran  yang  lezat.  Daun  kelakai  dapat  digunakan sebagai  obat  tradisional  karena  mengandung  golongan senyawa flavonoid dan tanin yang diantaranya berfungsi untuk  mencegah  kekurangan  darah  (pencegah  anemia), menstruasi teratur dan antidiare serta berkhasiat sebagai pereda  demam,  dan  juga  mengobati  sakit  kulit, meningkatkan  ASI,  dan  dapat  mengobati  kanker  [2]. Kandungan kimia yang terdapat pada kelakai antara lain tanin,  flavonoid,  steroid,  alkaloid,  lemak,  protein, kalsium, mineral Fe, vitamin C, dan vitamin A [2, 3, 4].
Salmonella typhi dan Staphylococcus aureus dengan Metode Difusi Agar CLSI M02-A11
Berdasarkan latar belakang di atas, peneliti tertarik untuk melakukan pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol  daun  kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.F) Bedd)  terhadap Salmonella  thypi dan Staphylococcus aureus dengan metode difusi agar.
Gambar 1. Tanaman kelakai ( Stenochlaena palustris (Burm.F) Bedd)

## 2. Metode Penelitian
2.1 Pengambilan Sampel Tanaman dan Determinasi
Sampel  daun  kelakai  ( Stenochlaena  palustris (Burm.  F)  Bedd)  diperoleh  dari  Kota  Palangkaraya, Kalimantan  Tengah.  Determinasi  dilakukan  di  Sekolah Ilmu  dan  Teknologi  Hayati  ITB  Bandung.  Hasil determinasi  menunjukkan  bahwa  bahan  penelitian termasuk Stenochlaena  palustris (Burm.  F)  Bedd  [5]. Pengolahan  bahan  meliputi  sortasi  basah,  pencucian, pengeringan, sortasi kering, penyimpanan, dan penggilingan  hingga  diperoleh  simplisia  dalam  bentuk serbuk.

## 2.2 Karakterisasi Simplisia dan Penapisan Fitokimia
Pemeriksaan  karakterisasi  simplisia  meliputi, pemeriksaan  makroskopik,  pemeriksaan  mikroskopik, penetapan  kadar  air,  penetapan  kadar  abu  total, penetapan kadar abu larut air, penetapan kadar abu tidak larut  asam,  penetapan  kadar  sari  larut  air,  penetapan kadar sari larut etanol, dan penetapan susut pengeringan [6,  7,  8].  Penapisan  fitokimia  dilakukan  untuk pemeriksaan  senyawa  golongan  alkaloid,  flavonoid, saponin, kuinon, tanin dan steroid [8].

## 2.3 Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kelakai
Sebanyak  100  g  serbuk  simplisia  ditimbang  dan ditambahkan  dengan  1  L  etanol  96%,  kemudian dimaserasi selama 3 kali 24 jam. Ekstrak disaring dengan kain flanel, selanjutnya dengan kertas saring. Kemudian ekstrak  dipekatkan  dengan  menggunakan  evaporator agar diperoleh ekstrak kental dengan bobot tetap [9, 10].

## 2.4 Pembuatan Bakteri Uji
Sebanyak  3,8  gram  serbuk  agar  dilarutkan  dalam air  suling  steril  sebanyak  100  mL  aquadest,  kemudian dipanaskan  hingga  larut  dalam  labu  erlenmeyer,  lalu disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121 °C selama 15 menit  dengan  pH  7,2-7,4  dengan  ketebalan  media  3-4 mm  pada  saat  pembuatan  media  di  cawan  petri. Pembuatan  biakan  miring  yaitu  dengan  menggoreskan biakan dari stok bakteri ke media Mueller Hinton Agar (MHA)  miring  yang  masih baru. Diinkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam. Dari biakan tersebut diambil satu ose untuk setiap bakteri uji dan dilarutkan dalam Mueller Hinton  Broth  (MHB),  diinkubasi  selama  24  jam  pada suhu  37  °C.  Suspensi  yang  telah  diinkubasi  kemudian dikocok  menggunakan  pengocok  vortex  sehingga diperoleh absorban dengan rentang 0,08–0,10 pada 625 nm yang diukur dengan spektrofotometer.

## 2.5 Pembuatan inokulum standar
Dalam  membuat  stok  bakteri  ini  digunakan inokulum  standar  yaitu stok bakteri 10 8 CFU/mL sama dengan  standar  0,5  McFarland.  Diambil  0,5  mL  dari larutan BaCl 2 dengan konsentrasi 0,048 mol/L, yang di tambahkan 99,5 mL larutan H2SO4 dengan konsentrasi 0,18  mol/L  (0,36  N)  (1%  v/v).  Diukur  dengan spektrofotometri  Uv-Visibel,  panjang  gelombang  625 nm  dan  rentang  absorban  antara  0,08-0,10  [11,  12]. Koloni diinkubasi selama 1 kali 24 jam sampai terbentuk koloni. Kemudian ambil kurang lebih 3-5 koloni dengan kawat  ose,  masukan  ke  dalam  4-5  mL  MHB.  Inkubasi pada suhu 37 °C selama 2-6 jam. Setiap satu jam sekali diambil  dan  dicek  dalam  spektrofometri  sampai menghasilkan absorban yang konstan atau sama dengan nilai absorban inokulum standar.

## 2.6 Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  daya  hambat  ekstrak  etanol daun kelakai dilakukan pada konsentrasi 12.5 %, 25 %, 37.5  %,  50  %  dan  100  %.  Sebanyak  10  µL  suspensi bakteri S.  typhi dan  10  µL  suspensi  bakteri S.  aureus ditambahkan  ke  dalam  20  mL  media  Mueller-Hinton Agar  (MHA)  di  dalam  cawan  petri  steril.  Campuran kemudian dihomogenkan lalu didinginkan dan dibiarkan memadat.  Kertas  cakram  yang  mengandung  ekstrak etanol daun kelakai ditempelkan pada media yang sudah memadat.  Diinkubasi  pada  suhu  37  °C  selama  24  jam, diameter  hambat  diamati  setelah  periode  inkubasi  dan dilakukan 3 kali replikasi.
2.7 Penentuan  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) dan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM)
Ekstrak  yang  diperoleh  diuji  Konsentrasi  Hambat Minimumnya  terhadap  bakteri S.  thypi dan S.  aureus .
Salmonella typhi dan Staphylococcus aureus dengan Metode Difusi Agar CLSI M02-A11
Ekstrak  dicampur  pada  media  MHA,  didinginkan  dan dibiarkan  memadat.  Selanjutnya  media  yang  telah memadat  digoreskan  dengan  bakteri  menggunakan cottonbud steril  yang  diambil  dari  suspensi  bakteri. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 37 °C selama selama 24 jam untuk pengamatan konsentrasi hambat minimum daun  kelakai.  Kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37  °C selama  24  jam.  Diamati  zona  bening,  apabila  terdapat zona bening maka diinkubasi kembali selama 24 jam dan dimati kembali zona bening pada petri tersebut apabila tidak  ditumbuhi  bakteri  maka  zona  bening  tersebut merupakan Konsentrasi Bunuh Minimum (KBM).

## 2.8 Penentuan Kesetaraan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol  Daun  Kelakai  terhadap  Antibakteri Pembanding
Penentuan kesetaraan aktivitas ekstrak etanol daun kelakai  terhadap  antibakteri  pembanding  dilakukan dengan  metode  difusi  agar  dengan  menggunakan paperdisk. Antibakteri yang digunakan adalah Tetrasiklin.  Dari  hasil  pengukuran  diameter  hambatan antibakteri,  dibuat  persamaan  garis  antara  logaritma konsentrasi  (x)  dengan  diameter  hambatan  (y). Persamaan  yang  didapat  selanjutnya  digunakan  untuk melihat kesetaraan antara ekstrak uji dengan antibakteri pembanding.  Hasil  yang  diharapkan  adalah  diperoleh nilai  kesetaraan  nilai  aktivitas  ekstrak  uji  dengan antibakteri pembanding.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Pengolahan  daun  kelakai  menjadi  simplisia meliputi sortasi basah, pencucian, perajangan, pengeringan,  sortasi  kering  dan  kemudian  dibuat menjadi serbuk simplisia. Proses pengeringan dilakukan dengan  menggunakan  sinar  matahari  secara  tidak langsung  yang  ditutup  dengan  menggunakan  kain berwarna  hitam,  penggunaan  kain  berwarna  hitam bertujuan  agar  simplisia  tidak  langsung  terpapar  oleh sinar matahari dan mencegah kerusakan kandungan zat aktif  yang  ada  dalam  tanaman.  Pengeringan  dilakukan untuk  mengurangi  kadar  air  dan  mencegah  tumbuhnya jamur  atau  bakteri  sehingga  simplisia  yang  diperoleh dapat disimpan lebih lama dan tidak mudah rusak serta komposisi kimianya tidak mengalami perubahan, bahan kering  yang  diperoleh  kemudian  di  haluskan  untuk  di dapat  serbuk  simplisia  daun  kelakai.  Setelah  dilakukan pengolahan  bahan  hingga  menjadi  serbuk  simplisia kering,  100  g  serbuk  simplisia  diekstraksi  dengan  cara maserasi  selama  3  kali  24  jam  dengan  menggunakan pelarut  etanol  96%.  Ekstrak  cair  yang  diperoleh kemudian  diuapkan  dengan  menggunakan  penguap vakum putar dan waterbath sehingga dihasilkan ekstrak kental dengan bobot tetap.
Selanjutnya  dilakukan  penapisan  fitokimia  yang bertujuan  untuk  pemeriksaan  kandungan  kimia  secara kualitatif  untuk  mengetahui  golongan  senyawa  yang terkandung  dalam  suatu  tumbuhan.  Hasil  positif terdeteksi  pada  golongan  senyawa  flavonoid,  alkaloid, tannin,  dan  steroid.  Hasil  negatif  terdeteksi  pada golongan  senyawa  kuinon  dan  saponin.  Daun  kelakai mengandung  senyawa  flavonoid,  alkaloid  dan  steroid merupakan senyawa yang mempunyai efek farmakologi sebagai antibakteri [11]. Flavonoid dengan kemampuannya  membentuk  kompleks  dengan  protein dan  merusak  membran  sel  dengan  cara  mendenaturasi ikatan protein pada membran sel, sehingga membran sel menjadi lisis dan senyawa tersebut menembus ke dalam inti  sel  menyebabkan  bakteri  tidak  berkembang  [2]. Sedangkan  aktivitas  antibakteri  dari  senyawa  tanin adalah  dengan  cara  mengkerutkan  dinding  sel  atau membran sel sehingga mengganggu permeabilitas sel itu sendiri.  Akibat  terganggunya  permeabilitas,  sel  tidak dapat melakukan aktivitas hidup sehingga pertumbuhannya terhambat atau bahkan mati.
Tabel 1. Hasil Penapisan Fitokimia Simplisia Daun Kelakai
No Pemeriksaan Hasil Pengamatan 1 Alkaloid + 2 Flavonoid + 3 Saponin - 4 Tannin + 5 Kuinon - 6 Steroid/Triterpenoid + Aktivitas ekstrak etanol daun kelakai
( Stenochlaena palustris (Burm.F) Bedd) dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram  negatif Salmonella  thypi lebih  peka  bila  dibandingkan  dengan bakteri  Gram  positif Staphylococcus  aureus .  Hal  ini disebabkan adanya perbedaan struktur dinding sel kedua jenis  bakteri  tersebut.  Dinding  sel  bakteri  Gram  positif terdiri  atas  beberapa  lapisan  peptidoglikan  yang membentuk  struktur  yang  tebal  dan  kaku  serta mengandung  substansi  dinding  sel  yang  disebut  asam teikoat,  sedangkan  dinding  sel  bakteri  Gram  negatif terdiri  atas  satu  atau  lebih  lapisan  peptidoglikan  yang tipis dan membran di bagian luar lapisan peptidoglikan, sehingga  dinding  sel  bakteri  Gram  negatif  lebih  rentan terhadap  guncangan  fisik,  seperti  pemberian  antibiotik atau  bahan  antibakteri  lainnya.  Selain  itu,  perbedaan struktur  dinding  sel  inilah  yang  menyebabkan  kedua jenis  bakteri  tersebut  memberikan  respon  terhadap pewarnaan Gram [13].
Penghambatan  pertumbuhan  bakteri  disebabkan oleh senyawa kimia yang terkandung pada ekstrak etanol daun kelakai. Daun kelakai mengandung zat aktif berupa alkaloid,  flavonoid,  dan  steroid.  Hasil  pengujian aktivitas  antibakteri  ditunjukkan  dengan  adanya  zona
bening di sekitar cakram ekstrak uji. Hasil uji aktivitas antibakteri  ekstrak  etanol  daun  kelakai  ( Stenochlaena palustris (Burm.F) Bedd) memiliki aktivitas antibakteri yang  lebih  besar  terhadap  bakteri Salmonella  thypi dibandingkan  bakteri Staphylococcus  aureus .  Hal  ini dapat  dilihat  dari  diameter  hambat Staphylococcus aureus sebesar  17,20  mm  sedangkan  pada Salmonella thypi sebesar  18,16  mm  dengan  konsentrasi  125.000 µg/mL.
Gambar 2. Hasil pengujian aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun  kelakai  (Stenochlaena  palustris  (Burm.F) Bedd)  terhadap  bakteri  S.  aureus  (a)  dan S.  typhi (b); (I) Kontrol positif; Konsentrasi ekstrak etanol daun  kelakai  (II)  1000000  µg/ml;  (III)  500000 µg/ml; (IV) 375000 µg/ml; (V) 250000 µg/ml; (VI) 125000 µg/ml; (VII) Kontrol negatif.
Penentuan  nilai  Konsentrasi  Hambat  Minimum (KHM)  dilakukan  pada  rentang  konsentrasi  1-14% terhadap  bakteri S.  aureus dimana  nilai  KHM  yang didapatkan sebesar 10,6% dan nilai KBM yang diperoleh sebesar 11% sedangkan pada bakteri S. thypi nilai KHM yang  diperoleh  sebesar  9%  dan  nilai  KBM  yang diperoleh  sebesar  10,8%.  Nilai  kesetaraan  ekstrak terhadap antibakteri pembanding menunjukkan bahwa 1 mg  ekstrak  etanol  daun  kelakai  terhadap  bakteri S. aureus setara dengan 28,21 mg tetrasiklin sedangkan S. thypi setara dengan 23,65 mg tetrasiklin.
Gambar 3. Kesetaraan  antibiotik  tetrasiklin  dengan  ekstrak etanol  daun  kelakai  terhadap  bakteri S.  aureus (a); dan S. typhi (b)

## 4. Kesimpulan
Nilai  KHM  Ekstrak  daun  kelakai  terhadap S. aureus pada konsentrasi 10,6% Sedangkan S. thypi pada konsentrasi  9%.  Nilai  KBM  Ekstrak  daun  kelakai terhadap S.aureus pada  konsentrasi  11%  Sedangkan S.thypi pada  konsentrasi  10,8%.  Nilai  kesetaraan  1  mg tetrasiklin terhadap aktivitas ekstrak etanol daun kelakai untuk S.aureus adalah  sebesar  28,21  mg  ekstrak  dan untuk S.thypi adalah sebesar 23,65 mg ekstrak.

## Daftar Pustaka
1. Kumala S, Siswanto EB. 2007. Isolation and Screening of Endophylic from Morinda citrifolia and Their Avaibility
Tabel 2. Hasil Pengamatan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Kelakai
Bakteri Uji Konsentrasi (µg/ml) Diameter Hambat (mm) S. aureus Rata-rata Standar Deviasi (SD) Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 S. aureus 1000000 28,02 28,85 28,90 28,59 0,49 500000 26,30 26,48 25,88 26,22 0,30 375000 23,28 22,50 23,04 22,94 0,39 250000 20,15 20,00 20,15 20,10 0,08 125000 18,26 19,05 18,28 18,53 0,45 S. typhi 1000000 29,01 28,78 28,85 28,88 0,11 500000 26,75 26,30 26,00 26,00 0,37 375000 23,40 23,55 23,48 23,47 0,07 250000 22,30 22,70 21,98 22,32 0,36 125000 15,24 16,05 15,20 15,20 0,47
Salmonella typhi dan Staphylococcus aureus dengan Metode Difusi Agar CLSI M02-A11
to Produce Antimikrobial Subtance. Microbial Indonesia, 1(3) : 145-148.
2. Miftahul  K.  2012.  Skrining  Fitokimia  Kandungan Golongan  Senyawa  yang  terdapat  pada  Daun  Kelakai (Stenochlaena  palustris  (Burm.F)  Bedd)  sebagai  Obat Tradisional.  Tugas  Akhir  Ahli  Madya  Farmasi,  Jurusan Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. Palangkaraya.
3. Yosika  Y,  Moniktia.  2014.  Etnobotani  Tumbuhan  Obat oleh  Masyarakat  Suku  Dayak  Seruyan  Kabupaten Seruyan  Provinsi  Kalimantan  Tengah.  Tugas  Akhir Sarjana  Farmasi,  Jurusan  Farmasi,  Universitas  Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim Malang. Malang.
4. Adenan  dan  Suhartono.  2010.  Stenochlaena  palustris Aqueous Extract Reduces Hepatic Peroxidative Stress in Marmota  caligata  with  Induced  Fever. University Medicina 29.
5. Herbarium  Bandungense.  2015.  Stenochlaena  palustris (Burm.F)  Bedd.  Sekolah  Ilmu  dan  Teknologi  Hayati. Bandung.
6. Syarifah, N. 2011. Aktivitas Antibakteri Etanol dari Lima Tanaman terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dengan Metode  Mikrodilusi  M7-A6CLSI.  Tugas  Akhir  Sarjana Farmasi,  Jurusan  Farmasi,  FMIPA,  Universitas  Garut. Garut. Hlm. 20, 31-34.
7. Dirjen POM Depkes RI. 1989. Materia Medika Indonesia . Jilid  V.  Departemen  Kesehatan  RI.  Jakarta.  Hlm.  536- 553.
8. Rostinawati,  T.  2010.  Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak Herba  Tespong  (Oenanthe  javanica  D.C)  terhadap Escheria  coli,  Staphylococcus  aureus  dan  Candida albicans. Penelitian Mandiri, Jurusan Farmasi, Universitas Padjajaran. Jatinangor. Hlm. 1, 20, 23, 25.
9. Depkes  RI.  2009. Farmakope  Herbal  Indonesia . Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, Hlm. 169-172.
10. Lestari,  N.  2014.  Aktivitas  Antimikroba  Ekstrak  Etanol Daun Gingseng Jawa (Talinum triangulare (Jacq.) Willd.) terhadap  Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus,  dan Candida  albicans.  Tugas  Akhir  I,  Jurusan  Farmasi, FMIPA,  Universitas  Garut.  Garut.  Hlm.  1-3,  18-21,  13, 26.
11. Maharani,  Haidah,  dan  Haiyina.  2005. Studi  Potensi Kalakai  (Stenochlaenapalustris  (Burm.F)  Bedd)  sebagai Pangan  Fungsional .  Universitas  Lambung  Mangkurat. Banjarbaru.
12. Utami, P. 2012. Antibiotik Alami untuk Mengatasi Aneka Penyakit. Penerbit PT. Agro Media Pustaka, Jakarta, Hlm. 1, 7-8.
13. Depkes RI, 2000, “Parameter Standar Umum Pembuatan Ekstrak  Tumbuhan  Obat”,  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta, Hlm. 14-17.
14. CLSI  M02-A11.,  2012,  “Update  Standards  for Antimicrobial  Susceptibility  Testing  Advance  for Medical  Laboratory  Standards  Institute”,  Vol.  32  No.2, Yonsei University, p. 12, 13, 18, 19, 521982.