## ANALGETIC ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT OF CIPLUKAN
LEAVES ( Physalis peruviana L. ) ON MALE SWISS WEBSTER
MICE BY STRETCHING METHOD ( Sigmund )
Genialita Fadhilla 1 , I Ketut Adnyana 2 , Rizza Chaniago 1
1 Fakultas MIPA-Universitas Garut, Jl. Jati No.42B, Tarogong, Garut.
2 Fakultas MIPA-Institut Teknologi Bandung, Jl. Ganesha No.10, Coblong, Bandung.
Korespondensi: Genialita Fadhilla (genialita@uniga.ac.id)

## ARTICLE HISTORY
Received: 28 December 2019               Revised: 24 January 2020                    Accepted: 31 January 2020

## Abstract
The pattern of life of people in the world currently tend to back to nature, including in the  field  of  medicine.  The  advantage  of  using  traditional  medicines  in  principle  is relatively  small  side  effects  compared  to  modern  medicine.  One  of  the  medicinal plants  that  often  used  by  people  is  ciplukan  (Physalis  peruviana  L). This  herb  has been used in traditional medicine such as treating diabetes, bleeding gums, ulcers, ulcers,  and  reducing  heat.  In  addition,  ciplukan  leaves  are  also  efficacious  as  an antipyretic, analgesic, diuretic, anti-inflammatory, and detoxifying agent. Efforts to find new medicines sourced from natural materials have been carried out exploratively. In this research, we will examine the use of ciplukan as analgesic which can be used as alternative to sintetic analgesic such as aspirin, ibuprofen and others. This study aims to  assess  the  analgetic  activity  of  ciplukan  leaf  ethanol  ekstracts  in  male  Swiss Webster mice and to find out what dosage is most effective as analgesic. The method used in this study is stretching method (Sigmund), where the pain in mice is shown in the form of a stretchy response to the two pairs of legs fore and backward and the stomach  pressing  on  the  floor  the  appears  within  a  maximum  of  5  minutes  after induction. The dosage of ethanol extract of ciplukan leaves to be tested is 25 mg/kg of dose weight, 50 mg/kg of dose weight and 100 mg/kg of dose weight. Aspirin (500 mg/70kg of dose weight) was used as a comparison and tragakan 0,5% as a positive control.  The  biggest  and most  effective analgesic  effect  was  shown  by  the  ethanol extract of ciplukan leaves is 25 mg/kg of dose weight with a protective percentage of 61.5% and analgesic effectiveness of 99%.
Keywords : traditional medicine, ciplukan, pain, stretching (Sigmund)

## AKTIVITAS ANALGETIK EKSTRAK ETANOL DAUN CIPLUKAN
( Physalis peruviana L.) PADA MENCIT SWISS WEBSTER JANTAN DENGAN METODE GELIAT ( Sigmund )

## Abstrak
Pola kehidupan masyarakat di dunia saat ini cenderung kembali ke alam termasuk dalam bidang obat-obatan. Penggunaan obat tradisional memiliki keuntungan, salah satunya efek samping yang relatif kecil dibandingkan obat kimia. Salah satu tanaman obat  yang  digunakan  masyarakat  secara  tradisional  adalah  ciplukan  ( Physalis
peruviana L).  Tanaman  ini  telah  dimanfaatkan  untuk  pengobatan  tradisional diantaranya yaitu diabetes, gusi berdarah, bisul, tukak, dan demam. Selain itu, daun ciplukan  juga  berkhasiat  sebagai  antipiretik,  analgetik,  diuretik,  antiinflamasi,  dan detoksifikasi.  Upaya  penemuan  obat  baru  yang  bersumber  dari  bahan  alam  telah banyak  dilakukan  secara  eksploratif.  Pada  penelitian  ini,  akan  diteliti  pemanfaatan ciplukan  sebagai  analgetik  yang  dapat  dijadikan  alternatif  analgetik  sintetik  seperti aspirin, ibuprofen dan lainnya. Penelitian ini bertujuan untuk menilai aktivitas analgetik ekstrak  etanol  daun  ciplukan  pada  mencit Swiss  Webster jantan  dan  mengetahui dosis  yang  paling  efektif  sebagai  analgetik.  Metode  yang  digunakan  ialah  metode geliat ( Sigmund ), dimana rasa nyeri pada mencit diperlihatkan dalam bentuk respon gerakan  geliat  yaitu  kedua  pasang  kaki  kedepan  dan  kebelakang  serta  perut menekan lantai yang muncul dalam waktu maksimal 5 menit setelah induksi. Dosis ekstrak etanol daun ciplukan yang akan diuji adalah 25 mg/kgbb, 50 mg/kgbb dan 100 mg/kgbb.  Digunakan  aspirin  (500  mg/70kgbb)  sebagai  pembanding  dan  tragakan 0,5%  sebagai  kontrol  positif.  Efek  analgetik  terbesar  dan  paling  efektif  ditunjukkan oleh  ekstrak  etanol  daun  ciplukan  dosis  25  mg/kgBB  dengan  persentase  proteksi sebesar 61,5% dan efektifitas analgetik sebesar 99%.
Kata kunci : ekstrak, ciplukan, analgetik, geliat ( Sigmund )

## Pendahuluan
Pola  kehidupan  masyarakat  di  dunia  saat  ini  cenderung  kembali  ke  alam termasuk  dalam  bidang  obat-obatan. 1 Secara  empiris  obat  tradisional  mampu menyembuhkan berbagai macam penyakit, akan tetapi khasiat dan kemampuannya belum  banyak  dibuktikan  secara  ilmiah  maupun  klinis.  Selain  itu,  belum  banyak diketahui  senyawa  kimia  yang  dapat  berkhasiat  yang  terkandung  didalam  obat tardisional.  Salah  satu  keuntungan  dari  penggunaan  obat  tradisional  ialah  efek samping yang dihasilkan relatif kecil jika dibandingkan dengan obat modern. 2
Nyeri  adalah  suatu  kodisi  yang  menandakan adanya  kerusakan  pada jaringan yang  biasanya  ditandai  dengan  inflamasi.  Nyeri  merupakan  kondisi  yang  tidak mengenakan  bagi  penderitanya,  sehingga  memerlukan  obat  untuk  mengendalikan nyeri tersebut karena nyeri dapat merugikan. 3
Terdapat  berbagai  macam  obat  analgetik  yang  sudah  digunakan  oleh masyarakat,  baik  berupa  obat  sintetik  maupun  tradisional.  Beberapa  contoh  obat analgetik  sintetik  yaitu  aspirin,  ibuprofen,  asam  mefenamat  dan  lainnya.  Aspirin adalah  salah  satu  jenis  obat  yang  paling  sering  digunakan.  Efek  samping  yang ditimbulkan  dapat  berupa  efek  ringan  yaitu  berupa  reaksi  alergi  maupun rash dan efek  yang  lebih  berat  yaitu  berupa  gangguan  pada  sistem  gastrointestinal  seperti dispepsia, nyeri epigastrik, mual, dan muntah hingga pendarahan lambung. 4 Aspirin mempunyai  mekanisme  kerja  dengan  cara  menghambat  enzim  siklooksigenase sehingga sintesis prostaglandin terhambat. Prostaglandin menyebabkan sensitisasi reseptor nyeri terhadap rangsangan (stimulus) mekanik dan kimiawi. 3
Upaya  penemuan  obat  baru  yang  bersumber  dari  bahan  alam  telah  banyak dilakukan secara eksploratif. Indonesia adalah negara yang kaya dengan tumbuhan (lebih kurang 30.000 spesies) dan baru 940 jenis tumbuhan telah diketahui berkhasiat sebagai  obat. 5 Salah  satu  tanaman  obat  yang  telah  digunakan masyarakat  adalah Physalis  peruviana L.  Tanaman  ini  termasuk  dalam  keluarga Solanaceae ,  dan merupakan  tanaman  yang  banyak  tumbuh  liar  di  kebun  atau  tanah  kosong  yang kondisinya  sedikit  basah.  Tanaman  ini  telah  dimanfaatkan  dalam  pengobatan tradisional seperti mengobati diabetes, gusi berdarah, bisul, maag, dan menurunkan panas.  Selain  itu,  daun  ciplukan  juga  berkhasiat  sebagai  antipiretik,  analgetik,
diuretik,  antiinflamasi,  dan  detoksifikasi. 5. Senyawa-senyawa  aktif  yang  terkandung dalam tanaman ini antara lain steroid, alkaloid, flavonoid, dan saponin. 6
Senyawa flavonoid merupakan suatu senyawa fenol terbesar yang ditemukan di alam dan menunjukkan lebih dari 100 jenis bioaktivitas. Senyawa flavonoid diduga memiliki efek yang dapat berkhasiat pada daun ciplukan diantaraya efek analgesik, diuretik, antiinflamasi, dan menurunkan kadar gula darah. Salah satu efek flavonoid yaitu  berkhasiat  sebagai  analgetik  karena  flavonoid  dapat  bekerja  dengan  cara menghambat  enzim  siklooksigenase  sehingga  pembentukan  prostaglandin  dan tromboksan menjadi terhambat. 4
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut,  peneliti  akan  melakukan  penelitian  untuk menguji aktivitas analgetik ekstrak etanol daun ciplukan dengan meggunakan metode geliat. Pada penelitian  ini masalah yang dapat diidentifikasi adalah apakah ekstrak etanol daun ciplukan ( Physalis peruviana L.) memiliki aktivitas analgetik pada mencit Swiss Webster jantan serta dosis berapakah yang paling efektif sebagai analgetik. Penelitian ini bertujuan untuk menilai aktivitas analgetik ekstrak etanol daun ciplukan ( Physalis peruviana L.) pada mencit Swiss Webster jantan serta untuk mengetahui dosis berapakah yang paling efektif sebagai analgetik. Sehingga hasil dari penelitian ini  diharapkan  dapat  memberikan  informasi  kepada  masyarakat  tentang  aktivitas analgetik  ekstrak  etanol  daun  ciplukan  ( Physalis  peruviana L.)  dan dapat  dijadikan alternatif lain dalam upaya pengobatan.

## Metode

## Alat
Alat yang digunakan yaitu timbangan mencit, timbangan analitik, tabung reaksi, labu erlenmeyer, batang pengaduk, cawan penguap, penangas, gelas kimia, hotplate, rotary evavorator , corong kaca, corong pisah, spuit injeksi intraperitonial dan peroral, stopwatch, mortir dan stamper dan kandang mencit.

## Bahan
Bahan yang digunakan yaitu daun ciplukan yang  diambil dari daerah lembang, aspirin,  asam  asetat  0,5%  sebagai  zat  penginduksi,  tragakan  0,5%,  mencit  putih jantan,  etanol  96%,  pereaksi  Mayer,  pereaksi  Dragendrof,  serbuk  Mg,  aquadest, ammonia, pereaksi FeCl 3 , eter, kloroform, CHCL 3 , HCL 10%, Na 2 SO 4 , NaOH 30%, H 2 SO 4 ,  amil  alcohol,  larutan  besi  (III)  klorida  1%,  gelatin  dan  pereaksi steasny (formaldehid : HCL = 2:1).

## Prosedur Rinci

## Pengumpulan Bahan
Pengumpulan bahan penelitian yaitu berupa daun pada tanaman ciplukan yang diperoleh dari kebun percobaan Manoko Lembang Jawa Barat.

## Determinasi Bahan
Tujuan dilakukan determinasi untuk mengidentifikasi  tanaman dari bahan yang diambil. Determinasi dilakukan di Sekolah Tinggi Ilmu Hayati, ITB.

## Pengolahan Bahan
Pengolahan  simplisia  dilakukan  dengan  cara  bahan  segar  disortasi  basah, pencucian,  pengeringan,  sortasi  kering,  kemudian  digiling  menjadi  serbuk.  Serbuk yang diperoleh disimpan ke dalam wadah bersih dan tertutup rapat.

## Pembuatan Ekstrak
Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  ciplukan  dilakukan  dengan  cara  maserasi menggunakan  etanol  96%.  Simplisia  dimasukkan  ke  dalam  wadah  yang  tertutup kedap,  kemudian  ditambahkan  etanol  96%  sampai  seluruh  simplisia  terendam dan diaduk  sesekali.  Perendaman  dilakukan  selama  3x24  jam  dalam  wadah  tertutup kedap,  kemudian  disaring,  dan  ampas  dimaserasi  kembali  sampai  3  kali.  Hasil maserasi  yang  diperoleh  yang  masih  dalam  bentuk  cairan  diambil  dan  dipekatkan dengan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental, kemudian ditimbang untuk perhitungan rendemen.

## Penetapan Karakteristik Simplisia Penetapan Kadar Air
Sejumlah  simplisia  dimasukkan  ke dalam  labu  kering  yang  berisi  1-4  mL  air, dan  masukkan  kurang  lebih  200-300  mL  toluen  yang  telah  dijenuhkan  dengan aquadest lalu hubungkan dengan kondensor dan penampung berskala, setelah itu dipanaskan  dengan  hati-hati  selama  15  menit.  Setelah  toluen  mendidih,  suling dengan kecepatan 2 tetes perdetik hingga sebagian besar air tersuling, kemudian dinaikkan  kecepatan  penyulingan  hingga  4  tetes  perdetik.  Setelah  semua  air tersuling,  dibilas  bagian  dalam  kondensor  dengan  toluen  kemudian  dibersihkan dengan  sikat  yang  telah  dibasahi  toluen  jenuh  air.  Kemudian  dilanjutkan penyulingan  selama  5  menit  kemudian  hentikan  pemanasan  dan  didinginkan sampai  suhu  kamar.  Setelah  air  dan  toluen  memisah  sempurna,  dibaca  volume akhir. Dihitung kadar air dalam %v/b. 7

## Penetapan Kadar Abu Total
Sejumlah serbuk simplisia sebanyak 2-3 g ditimbang dan dimasukkan ke dalam cawa krus silikat yang telah dipijar dan ditara, kemudian dipijarkan perlahan-lahan hingga arang habis, didinginkan dan ditimbang. Apabila dengan cara ini arang tidak hilang, maka ditambahkan air panas lalu disaring melalui kertas saring bebas abu. Sisa dan kertas saring dipijarkan di dalam cawan krus yang sama. Dimasukkan filtrat ke dalam krus, diuapkan dan dipijarkan hingga bobot tetap. Dihitung kadar abu total terhadap berat bahan uji dinyatakan dalam %b/b. 7

## Penetapan Kadar Abu Larut Air
Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu total, dididihkan dengan 25 mL air selama 5 menit, kemudian kumpulkan bagian yang tidak larut air, disaring melalui kertas  saring  bebas  abu.  Bahan  yang  tidak  larut  dicuci  dengan  air  panas,  lalu dimasukkan ke dalam cawan krus, dipijarkan dan ditimbang hingga didapat bobot tetap. Perbedaan bobot sesuai dengan jumlah abu yang larut dalam air. Kadar abu yang larut dalam air dihitung terhadap bahan yang telah dikeringkan di udara. 8

## Penetapan Kadar Abu Tidak Larut Asam
Abu yang diperoleh pada penetapan kadar abu total dididihkan dengan 25 mL HCl  encer selama  5 menit,  kemudian  bagian  yang  tidak  larut  asam dikumpulkan, disaring melalui kertas saring bebas abu, dicuci dengan air panas, dipijarkan dalam krus hingga didapat bobot tetap. Dihitung kadar abu yang tidak larut asam terhadap berat bahan uji, dinyatakan dalam %b/b. 7

## Penetapan Susut Pengeringan
Simplisia  kering  ditimbang  sebanyak  1-2  g  dalam  cawan  krus  tertutup  yang sebelumnya  telah  dipanaskan  terlebih  dahulu  pada  suhu  105°C selama  30 menit dan ditara. Simplisia dalam cawan krus ditara dengan cara menggoyangkan cawan sehingga membentuk lapisan tebal 5-10 mm. kemudian dimasukkan ke dalam oven dengan tutup terbuka, dikeringkan pada suhu 105°C hingga bobot tetap. Sebelum setiap pengeringan, cawan krus dibiarkan dalam keadaan tertutup dalam desikator hingga suhu ruang. 8

## Kadar Sari Larut Air
Sebanyak  5  g  serbuk  yang  telah  dikeringkan  di  udara  dimasukkan  ke  dalam labu bersumbat, ditambahkan 100 mL air jenuh kloroform, kocok berkali-kali selama 6 jam pertama, dibiarkan selama 18 jam. Disaring dan diuapkan 20 mL filtrat hingga kering  di  dalam  cawan  yang  telah  dipanaskan  pada  suhu  105°C  dan  ditara, dipanaskan sisa pada suhu 105°C hingga didapat bobot tetap. Dihitung kadar dalam % sari larut air. 7

## Kadar Sari Larut Etanol
Sebanyak  5  g  serbuk  yang  telah  dikeringkan  di  udara  dimasukkan  ke  dalam labu bersumbat, ditambahkan 100 mL etanol 96% P, dikocok berkali-kali selama 6 jam  pertama,  dibiarkan  selama  18  jam.  Disaring  cepat  untuk  menghindari penguapan  etanol,  diuapkan  20 mL  filtrat  hingga  kering  dalam  cawan  yang  telah dipanaskan  105°C  dan  ditara,  dipanaskan  sisa  pada  suhu  105°C  hingga  didapat bobot tetap. Dihitung kadar dalam % sari larut etanol. 7

## Penapisan Fitokimia Alkaloid
Sebanyak  0,5  g  sampel,  dilembabkan  dengan  5  mL  ammoniak  30%  digerus dalam mortir, kemudian ditambahkan 20 mL kloroform dan digerus kuat. Kemudian disaring.  Diambil  filtrat  sebagai  larutan  A  dimaserasi  dengan  larutan  HCl  (1:10). Diambil  larutan  atas  sebagai  larutan  B.  larutan  A  diteteskan  pada  kertas  saring beberapa  tetes  kemudian  ditambahkan  pereaksi  dragendroff  positif  apabila terbentuk warna merah atau jingga. Larutan B dibagi menjadi 2 tabung, tabung 1 ditambahkan perekasi dragendroff positif apabila terbentuk endapan merah, tabung 2 ditambahkan pereaksi mayer positif apabila terbentuk endapan putih. 9

## Flavonoid
Sebanyak  2  g  sampel  ditambahkan  100  mL  air  panas,  dididihkan  selama  5 menit  kemudian  disaring.  Filtrat  sebanyak  5  mL  ditambahkan  serbuk  Mg  dan ditambahkan  1  mL  larutan  alkohol-HCl,  ditambahkan  5  mL  amil  alkohol,  dikocok kuat-kuat  kemudian  dibiarkan  sampai  memisah.  Pengamatan  positif  bila  timbul warna merah, kuning, jingga pada lapisan atas. 9

## Saponin
Sebanyak  2  g  sampel  ditambahkan  100  mL  air  panas,  dididihkan  selama  5 menit  kemudian  disaring.  Sebanyak  10  mL  filtrat  dalam  tabung  reaksi  dikocok vertikal selama 10 detik dan didiamkan selama 10 menit. Hasil positif ditunjukkan dengan  terbentuknya  busa  yang  stabil,  meskipun  sudah  ditambahkan  beberapa tetes HCl 1%. 9

## Tanin
Sebanyak 0,4 g sampel ditambahkan air panas 100 mL, dididihkan selama 5 menit  kemudian  disaring.  Disiapkan  2  tabung  reaksi  masing-masing  berisi  5  mL
filtrat. Tabung I :  direaksikan  dengan  FeCl 3 1%  (positif  senyawa polifenol  bila terbentuk warna biru tinta atau hitam kehijauan) Tabung II :  ditambahkan  pereaksi Steasny (positif  tannin  bila  terbentuk endapan merah). 9
Steroid/Triterpenoid
Sebanyak 1 g simplisia dimaserasi dengan 20 mL eter selama 2 jam, kemudian disaring.  Sebanyak  5  mL  filtrat  diuapkan  di  dalam  cawan  penguap  kemudian  ke dalam residu ditambahkan 2 tetes CH 3 COOH anhidrat dan satu tetes H 2 SO 4 pekat. Positif mengandung steroid atau triterpenoid bila terbentuk warna hijau atau merah. 9

## Penyiapan Sediaan uji
Digerus 1 tablet aspirin dan ditambahkan tragakan yang telah dibuat suspensi sebanyak 20 mL dengan konsentrasi 25 mg/mL. Yang ingin dibuat ialah konsentrasi 6,5  mg.  Maka  dilakukan  pengenceran  dan  didapatkan  5,2  mL. Jadi diambil 5,2 mL dari  20  mL  aspirin  yang  telah  disuspensikan  dan  kemudian  ditambahkan  suspensi tragakan sebanyak 20 mL.
Perhitungan kebutuhan ekstrak dosis 100 mg dengan cara 20 ml x 10  mg/ml= 200 mg.  Ditimbang  ekstrak  200 mg kemudian  suspensikan dengan  tragakan 0,5% sampai 20 ml. Dosis 50 mg yaitu untuk dapat membuat konsentrasi 5 mg/ml dilakukan pengenceran dari konsentrasi 10 mg/ml. Diambil 10 ml tambahkan dengan tragakan 0,5% sampai 20 ml. Dosis 25 mg yaitu untuk dapat membuat konsentrasi 2,5 mg/ml dilakukan pengenceran dari konsentrasi 5 mg/ml. Diambil 10 ml tambahkan dengan tragakan 0,5% sampai 20 ml.

## Penyiapan Induktor nyeri
Induktor  nyeri  yang  digunakan  adalah  asam  asetat  0,5%.  Asam  asetat  dibuat dengan cara pengenceran. Diambil asam asetat sebanyak 0,5 mL dan ditambahkan aqua pro injeksi sedikit demi sedikit sampai 100 mL.

## Penyiapan Hewan Uji
Hewan uji yang digunakan adalah mencit putih jantan galur Swiss Webster yang diperoleh  dari  Pusat  Budidaya  Tikus  Putih  Untuk  Penelitian,  Karanganyar,  Jawa Tengah  dengan  berat  badan  sekitar  20-35  gram.  Mencit  yang  dinilai  sehat  yang digunakan untuk percobaan yaitu mencit yang bobot badannya tetap atau bertambah dan perlakuannya normal selama masa adaptasi.

## Pengujian Aktivitas Analgetik
Hewan uji dibagi dalam 5 kelompok yaitu kontrol positif, pembanding, kelompok uji I (dosis 25 mg/kgBB), kelompok uji II (dosis 50 mg/kgBB) dan kelompok uji III (dosis 100  mg/kgBB)  ekstrak  etanol  daun  ciplukan.  Masing-masing  kelompok  diberikan sediaan uji secara peroral, 30 menit kemudian mencit diberi perangsang nyeri (asam asetat 0,5%) secara intraperitonial dan dihitung jumlah geliatnya.
Rasa  nyeri  ini  pada  mencit  diperlihatkan  dalam  bentuk  respon  gerakan  geliat yaitu kedua pasang kaki ke depan dan ke belakang serta perut menekan lantai yang muncul dalam waktu maksimal 5 menit setelah induksi. 10
Daya  analgetik  dinilai  menggunakan  persen  penghambatan  terhadap  geliat menggunakan persamaan menurut Handershot dan Forsaith. 3
% Proteksi rangsangan nyeri = (100 – [( 𝑃 𝐾 ) x 100])%
Keterangan: P : Jumlah kumulatif geliat mencit yang di beri perlakuan K: Jumlah kumulatif geliat mencit kelompok kontrol
Dari rumus persentase proteksi tersebut dapat menggambarkan potensi bahan uji,  makin  tinggi  nilai  persentase  proteksi  makin  tinggi  efek  analgetiknya.  Dari  data perhitungan persentase proteksi dapat pula dihitung persentase efektifitas analgetik, yaitu  harga  keefektifan  bahan  uji  bersifat  analgetik.  Harga  tersebut  dapat  dihitung dengan rumus: 11
% Proteksi bahan uji % Efektifitas analgetik =
x 100%
% Proteksi asetosal
Data  yang  diperoleh  berupa  jumlah  geliat,  %  proteksi  terhadap  induksi  nyeri asam  asetat  dan  %  efektifitas  analgetik  dianalisis  secara  statistic  dengan Kolmogorov-Smirnov untuk melihat kenormalan distribusi data. Jika data terdistribusi normal maka dianalisis dengan ANOVA satu arah taraf kepercayaan 95%, kemudian dilanjutkan  dengan  uji  LSD  untuk  melihat  perbedaan  antar  kelompok  bermakna (p<0,05)  atau  tidak  bermakna  (p>0,05).  Sedangkan  bila  data  tidak  memenuhi persyaratan  distribusi  normal  dan  homogenitas  varian  maka  dilakukan  analisis dengan Kruskal Wallis taraf kepercayaan 95%. Perbedaan signifikan pada analisis ini dilanjutkan dengan analisis Mann Whitney. 3

## Hasil
Tabel 1. Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia Daun Ciplukan Pemeriksaan Hasil (%) Standar (%) (BPOM) Kadar air 8 <10 Susut pengeringan 12 - Kadar abu total 11 - Kadar abu tidak larut asam 0,55 - Kadar abu larut air 1,03 - Kadar sari larut air 26 - Kadar sari larut etanol 27,6 - Tabel 2. Hasil Penapisan Simplisia dan Ekstrak Daun Ciplukan Metabolit Sekunder Hasil Pengamatan Simplisia Ekstrak Alkaloid - - Flavonoid + + Tanin - - Saponin + + Fenol + + Triterpenoid/Steroid + +
Keterangan :  (+) = terdeteksi (-) = tidak terdeteksi
Tabel 3. Rata-rata Jumlah Geliat Pada Uji Pendahuluan
Kelompok Perlakuan Mencit Ke X 1 2 3 Dosis 100 mg/kgBB 86 97 104 95.67 Dosis 200 mg/kgBB 113 140 104 119 Pembanding (Aspirin 500 mg/70kgBB) 41 34 39 38 Kontrol (+) Tragakan 0,5% 263 253 246 254
Tabel 4. Harga Persentase Proteksi Mencit Terhadap Induksi Nyeri Asam Asetat 0,5% Kelompok Perlakuan Rata-rata Jumlah Geliat Persentase Proteksi (%) Dosis 100 mg/kgBB 95,67 62,34 Dosis 200 mg/kgBB 119 53,15 Pembanding (Aspirin 500 mg/70kgBB) 38 85,04 Kontrol (+) Tragakan 0,5% 254 0 Tabel 5. Harga Persentase Efektifitas Analgetik Kelompok Perlakuan X Y Persentase Efektifitas (%) Dosis 100 mg/kgBB 62,34 85,04 73,3 Dosis 200 mg/kgBB 53,15 85,04 62,5
Gambar 1. Grafik Rata-rata Jumlah Geliat Selama 60 Menit.

## AKTIVITAS ANALGETIK
100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 dosis 25 mg /dosis 50 mg dosis 100 mg pembanding
kontrol (+) 5  10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
waktu pengamatan(menit)
Tabel 6. Hasil Pengujian Aktivitas Analgetik Ekstrak Etanol Daun ciplukan ( Physalis peruviana L. ) Kelompok Perlakuan Rata-rata Jumlah Geliat Dosis I 4,13±1,71* Dosis II 5,52±1,16* Dosis III 5,65±2,06* Pembanding 4,10±0,58* Kontrol Positif 10,72±1,45 Keterangan: Dosis I (ekstrak daun ciplukan dosis 25 mg/kgBB)
Dosis II (ekstrak daun ciplukan dosis 50 mg/kgBB) Dosis III (ekstrak daun ciplukan dosis 100 mg/kgBB)
Pembanding (aspirin dosis 500 mg/70kgBB)
kontrol Positif (tragakan 0,5%)
(*) : Berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol positif
Tabel 7. Persentase Proteksi dan Persentase Efektifitas Analgetik Kelompok Perlakuan Persentase Proteksi (%) Persentase efektifitas (%) Dosis 25 mg/kgBB 61,5 99 Dosis 50 mg/kgBB 48,6 78 Dosis 100 mg/kgBB 47,3 76 Pembanding (Aspirin 500 mg/kgBB) 61,75 100 Kontrol (+) Tragakan 0,5% 0 0

## Pembahasan

## Hasil Identifikasi Tanaman
Pada  penelitian  ini  tanaman  yang  digunakan  adalah  daun  ciplukan  yang diperoleh  dari  Lembang,  Kabupaten  Bandung.  Untuk  memastikan  kebenaran identitas  dari  tanaman  ciplukan  yang  digunakan,  apakah  tanaman  tersebut  benar- benar  tanaman  yang  diinginkan,  sehingga  dapat  menghindari  kesalahan  dalam pengumpulan  bahan  yang  akan  diteliti.  Oleh  karena  itu,  dilakukan  determinasi  di Sekolah  Ilmu  dan  Teknologi  Hayati  Institut  Teknologi  Bandung.  Berdasarkan  hasil determinasi,  tanaman  ciplukan  tersebut  yaitu Physalis  peruviana L  sesuai  dengan apa yang diinginkan.

## Hasil Pembuatan Simplisia dan Ekstraksi
Tahap selanjutnya dilakukan pengolahan bahan daun ciplukan menjadi simplisia dengan sortasi basah dan dilakukan pencucian sampai bersih dengan air mengalir untuk  menghilangkan  zat-zat  pengotor.  Kemudian  dilakukan  perajangan  dengan tujuan  untuk  memperkecil  luas  permukaan  sehingga  dapat  mempercepat  proses penyarian. Pengeringan simplisia dilakukan di bawah sinar matahari dengan tujuan untuk  mengurangi  kadar  air  yang  terdapat  di  dalam  simplisia  agar  simplisia  yang diperoleh dapat tahan lama selama penyimpanan. Sortasi kering dilakukan dengan tujuan  untuk  memilah  kembali  sampel  yang  akan  digunakan.  Dalam  proses pengeringan  biasanya  menghasilkan  tanaman  yang  busuk  atau  gosong  selama pengeringan sehingga perlu disortasi kembali.
Setelah  dilakukan  pengolahan  bahan  hingga  menjadi  serbuk  simplisia  kering, kemudian  diekstraksi  dengan  metode  maserasi.  Penggunaan  cara  maserasi  ini
dilakukan karena proses pengerjaan sederhana, mudah, dan tidak dilakukan proses pemanasan  untuk  menghindari  rusaknya  senyawa  yang  bersifat  termolabil  yang terkandung  dalam  simplisia.  Simplisia  diekstraksi  dengan  menggunakan  pelarut etanol 96%. Alasan pemilihan pelarut etanol karena merupakan pelarut yang dapat menarik senyawa yang bersifat polar, semi polar dan non polar.
Maserasi dilakukan dengan merendam 300 g simplisia di dalam pelarut  etanol 96%.  Proses  maserasi  dilakukan  3x24  jam  karena  dengan  3  kali  ekstraksi  diduga sudah  mampu  menyari  lebih  dari  80%  senyawa.  Titik  kritis  pada  proses  maserasi yaitu  proses  pengadukan  dan  pergantian  pelarut.  Selama  proses  perendaman sesekali diaduk dengan tujuan meningkatkan kontak serbuk dengan pelarut sehingga proses ekstraksi lebih optimal dan mencegah penjenuhan pelarut pada bagian atas. Setiap  24  jam  pelarut  etanol  tersebut  diganti  dengan  menggunakan  pelarut  etanol yang  baru  untuk  menghindari  pelarut  jenuh  sehingga tidak dapat menarik kembali senyawa kimia. Selain itu, untuk menarik sisa senyawa yang belum terekstraksi pada maserasi hari sebelumnya.
Hasil  maserasi  disaring  menggunakan  kertas  saring  dan  diuapkan  dengan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50°C sehingga didapat ekstrak cair daun ciplukan. Pada proses penguapan dengan rotary evaporator hanya menghilangkan pelarut  etanolnya  saja  namun  masih  tersisa  kandungan  airnya  sehingga  perlu dilakukan pemekatan menggunakan waterbath yang bertujuan untuk menghilangkan kandungan  airnya.  Digunakan  suhu  50°C  karena  relatif  aman  serta  mencegah terjadinya  kerusakan  pada  senyawa  metabolit  sekunder  tertentu,  khususnya flavonoid. 12 Dari hasil penguapan didapat ekstrak sebesar 33,23 g dengan rendemen ekstrak sebesar 11,07%.

## Hasil Penapisan Fitokimia dan Karakteristik Simplisia
Pemeriksaan  karakteristik  simplisia  bertujuan  untuk  mengetahui  karakter  dan mutu simplisia sebagai jaminan stabilitas dan kualitas dari simplisia yang digunakan. Pemeriksaan karakteristik simplisia meliputi pemeriksaan susut pengeringan, kadar air, kadar abu total, kadar abu tidak larut asam, kadar abu larut air, kadar sari larut air, dan kadar sari larut etanol.
Pemeriksaan kadar air bertujuan untuk mengetahui jumlah air yang terkandung dalam simplisia tersebut. Pemeriksaan ini penting untuk  dilakukan karena kadar air dapat  menjadi  parameter  stabilitas  suatu  simplisia.  Kandungan  air  yang  terlalu banyak dapat menyebabkan simplisia menjadi tidak stabil  dan mudah rusak karena air merupakan media pertumbuhan mikroba.  Persyaratan kadar  air secara  umum <10%  menurut  BPOM. 13 Hasil  kadar  air  simplisia  daun  ciplukan yang didapat yaitu sebesar 8% sehingga memenuhi persyaratan kadar air simplisia.
Pemeriksaan susut pengeringan bertujuan untuk memberikan batasan maksimal atau rentang besarnya senyawa yang hilang pada  proses pengeringan. 14 Senyawa tersebut  meliputi  air  dan  senyawa  yang  mudah  menguap  dari  simplisia.  Susut pengeringan  berpengaruh  terhadap  kandungan  air  dalam  simplisia  sehingga pada umumnya  susut  pengeringan  lebih  besar  dibandingkan  kadar  air.  Kadar  susut pengeringan yang didapat sebesar 12%.
Pemeriksaan kadar abu bertujuan untuk mengetahui jumlah mineral internal dan eksternal  yang  berasal  dari  proses  selama  pengolahan.  Prinsip  pengujian  ini  yaitu bahan  dipijarkan  hingga  senyawa  organik  dan  turunannya  terdestruksi  sehingga hanya  meninggalkan  unsur  mineral  saja.  Pemeriksaan  kadar  abu  total  untuk mengetahui kadar zat anorganik yang terdapat dalam simplisia. Pemeriksaan kadar abu  tidak  larut  asam  bertujuan  untuk mengetahui  jumlah  senyawa  anorganik  yang terdapat dalam simplisia seperti kontaminasi tanah maupun logam berat. Kadar abu larut air dilakukan untuk mengetahui kandungan logam alkali tanah yang larut dalam air.  Dari  hasil  pemeriksaan,  didapat  kadar  abu  total  sebesar  11%,  kadar  abu  tidak
larut asam sebesar 0,55% dan kadar abu larut air sebesar 1,03%.
Pemeriksaan kadar sari terdiri dari kadar sari larut etanol dan kadar sari larut air. Pemeriksaan  kadar  sari  larut  etanol  bertujuan untuk mengetahui  jumlah  kadar sari yang  larut  dalam  pelarut  etanol,  senyawa  polar  maupun  semi  polar.  Sedangkan pemeriksaan kadar sari larut air untuk mengetahui kadar sari yang larut dalam pelarut yang lebih polar. Dari hasil pemeriksaan didapat kadar sari larut etanol sebesar 27,6% dan kadar sari  larut air sebesar 26%. Kadar sari larut air  lebih kecil dari kadar sari larut  etanol  sehingga  penggunaan  etanol  96%  pada  proses  ekstraksi  sudah  tepat karena diharapkan akan lebih banyak sari yang terlarut.
Penapisan fitokimia dilakukan terhadap serbuk simplisia dan ekstrak. Penapisan fitokimia dilakukan sebagai uji awal untuk mengetahui keberadaan senyawa-senyawa bioaktif  yang  memberikan  khasiat  atau  efek  biologis  yaitu  senyawa  metabolit sekunder yang diharapkan dapat berperan sebagai analgetik. Hal ini dapat dijadikan dasar  untuk  pengujian  selanjutnya.  Golongan  senyawa  yang  dianalisis  adalah alkaloid, flavonoid, tanin, saponin, fenol,  dan triterpenoid/steroid.
Hasil penapisan fitokimia yang dilakukan terhadap serbuk simplisia dan ekstrak etanol daun ciplukan menunjukkan hasil yang sama yaitu terdeteksi adanya senyawa flavonoid,  saponin,  fenol  dan  triterpenoid/steroid.  Penapisan  fitokimia  dilakukan terhadap  serbuk  simplisia  dan  juga  ekstrak  dengan  tujuan  untuk  melihat  apakah senyawa metabolit  yang  terkandung pada  serbuk  simplisia  sama  dengan senyawa metabolit  yang  terkandung  pada  ekstrak.  Hal  ini  mendukung  untuk  melakukan pengujian  aktivitas  analgetik  karena  berdasarkan  hasil  penapisan  fitokimia  yang dilakukan  diduga  mempunyai  aktivitas  analgetik  adalah  senyawa  flavonoid. Penapisan fitokimia pada ekstrak dilakukan guna untuk memastikan bahwa proses ekstraksi serta pemekatan ekstrak tidak merusak senyawa yang terkandung dalam simplisia.

## Hasil Uji Pendahuluan
Uji  pendahuluan  dilakukan  pada  kontrol  positif  (tragakan  0,5%),  pembanding (aspirin) dan ektrak kental etanol daun ciplukan dengan dosis 100 mg dan 200 mg yang bertujuan untuk menentukan dosis ekstrak dan memastikan bahwa penggunaan tragakan 0,5% tidak mempunyai efek analgetik. Data yang diperoleh dihitung sebagai rata-rata jumlah geliat pada tiap kelompok dan dapat dilihat pada Tabel 3.
Data pada Tabel 3 dapat dihitung umtuk mengetahui % proteksi terhadap induksi nyeri asam asetat. Hasil perhitungan % proteksi terhadap induksi nyeri asam asetat pada masing-masing kelompok dapat dilihat pada Tabel 4.
Dari hasil perhitungan, % proteksi terbesar terdapat pada ekstrak daun ciplukan dosis 100 mg/kgBB yaitu sebesar 62,34%. Semakin tinggi nilai % proteksi semakin kecil  jumlah  geliat  yang  terjadi.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  ciplukan yang diberikan mampu menahan rangsangan nyeri asam asetat pada respon nyeri. Dari perhitungan % proteksi tersebut dapat juga menggambarkan potensi bahan uji. Semakin  tinggi  nilai  %  proteksi  semakin  tinggi  efek  analgetiknya.  Akan  tetapi  jika dibandingkan dengan pembandingnya yaitu aspirin 500 mg/70kgBB, nilai % proteksi daun ciplukan masih di bawah aspirin. Hal ini menunjukkan aspirin memiliki potensi analgetik lebih besar dibandingkan daun ciplukan.
Selanjutnya  dari  data  %  proteksi  dapat  dihitung  %  efektifitas  analgetik,  yaitu harga keefektifan bahan uji bersifat analgetik. Hasil perhitungan tersebut dapat dilihat pada Tabel 5. Efektifitas analgetik ekstrak daun ciplukan pada dosis 100 mg/kgBB lebih besar dibandingkan dengan dosis  200 mg/kgBB. Hal  ini menunjukkan bahwa semakin  kecil  dosis  ekstrak  daun  ciplukan  yang  diberikan  semakin  besar  efek analgetik yang dihasilkan.

## Hasil Uji Analgetik
Metode  yang  digunakan  untuk  uji  analgetik  adalah  metode Sigmund (metode geliat) karena metode ini cukup peka dalam menilai rangsang nyeri  yang diberikan. Penginduksi  nyeri  yaitu  asam  asetat  yang  dipilih  karena  dapat  memberikan rangsangan nyeri yang cukup baik terhadap hewan uji dengan cara memicu respon inflamasi  lokal  hasil  pelepasan  asam  arakhidonat  bebas  dari  jaringan  fosfolipid melalui  siklooksigenase  (COX),  dan  biosintesis  prostaglandin,  peningkatan  kadar prostaglandin  dari  induksi  asam  asetat  meningkatkan  nyeri  inflamasi  dengan meningkatkan  permeabilitas  kapiler  dalam  rongga  peritoneum.  Respon  nyeri  yang diberikan ditandai dengan geliat kedua pasang kaki ke depan dan ke belakang serta perut yang menempel pada lantai. 15
Sebelum  dilakukan  pengujian  aktivitas  analgetik  pada  mencit Swiss  Webster jantan terlebih dahulu dilakukan aklimatisasi hewan selama seminggu, aklimatisasi bertujuan agar mencit yang digunakan dapat menyesuaikan diri terhadap perubahan kondisi lingkungan yang baru.
Dalam  pengujian  ini  digunakan  kontrol  positif  tragakan  yaitu  untuk membandingkan ada tidaknya aktivitas analgetik terhadap pembanding yaitu aspirin dan  sampel  ekstrak  daun  ciplukan.  Asam  asetilsalisilat  atau  lebih  dikenal  sebagai asetosal  atau aspirin  adalah  obat  analgesik,  antipiretik  dan  antiinflamasi  yang  luas digunakan  dan  digolongkan  kedalam  obat  bebas  terbatas.  Aspirin  efektif  untuk mengobati nyeri ringan sampai sedang. Aspirin bekerja dengan menghambat enzim siklooksigenase,  sehingga  mencegah  sintesis  prostaglandin  dan  mengakibatkan penurunan sensitasi nosiseptor serta peningkatan ambang nyeri. 10
Pengujian analgetik dilakukan dengan cara mengelompokkan hewan uji menjadi 5 kelompok dengan masing-masing 1 kelompok terdapat 5 ekor hewan uji. Kelompok kontrol positif diberikan tragakan 0,5% dan sebagai pembanding diberi aspirin secara peroral. Kemudian pada kelompok dosis 25, 50, dan 100 mg/kgBB diberikan ekstrak etanol daun ciplukan secara peroral.
Pengamatan geliat yang ditimbulkan pada hewan uji ini dilakukan selama 1 jam setelah  hewan  uji  disuntikkan  asam  asetat  0,5%  secara  intraperitonial.  Dihitung jumlah  geliat  yang  terbentuk  pada  setiap  5  menit  selama  1  jam.  Gambar  1 menunjukkan  rata-rata  jumlah  geliat  pada  menit  ke  5  sudah  menimbulkan  respon geliat akibat pemberian zat penginduksi.
Hasil  uji Kolmogorov-Smirnov dan  uji  homogenitas  menunjukkan  bahwa  data berdistribusi normal dan memiliki varian data yang homogen (0,205>0,05). Hasil uji ANOVA menunjukkan hasil yang signifikan, hal ini ditunjukkan dengan nilai signifikan yaitu 0,000 (p<0,05), sehingga dapat disimpulkan bahwa setiap kelompok perlakuan memiliki perbedaan rata-rata jumlah geliat mencit. Pada Tabel 6 hasil pengujian dengan pemberian aspirin pada mencit menunjukkan adanya  aktivitas  analgetik  yang  dilihat  dari  rata-rata  jumlah  geliat  menunjukkan perbedaan bermakna terhadap kontrol positif  (p<0,05), hal  ini menunjukkan bahwa metode yang digunakan dalam penelitiaan ini valid. Selain itu, menunjukkan ekstrak etanol  daun  ciplukan  dengan  dosis  25,  50,  dan  100  mg/kgBB  berbeda  bermakna terhadap kontrol positif (p<0,05) dan dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun ciplukan memiliki aktivitas sebagai analgetik.
Selanjutnya dihitung % proteksi dan % efektifitas analgetik dan hasil perhitungan dapat dilihat pada Tabel 7. Dari hasil perhitungan % proteksi terbesar adalah pada ekstrak  daun  ciplukan  dosis  25  mg/kgBB  yaitu  sebesar  61,5%  yang  dapat menunjukkan semakin tinggi nilai % proteksi semakin kecil jumlah geliat yang terjadi. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak daun ciplukan yang diberikan mampu menahan rangsangan  nyeri  asam  asetat  pada  respon  nyeri.  Dari  rumus  %  proteksi  tersebut dapat  menggambarkan  potensi  bahan  uji,  dimana  semakin  tinggi  nilai  %  proteksi semakin tinggi efek analgetiknya.
Selanjutnya dari data % proteksi dapat pula dihitung % efektifitas analgetik, yaitu harga  keefektifan  bahan  uji  bersifat  analgetik.  Efektifitas  analgetik  ekstrak  daun ciplukan pada  dosis  25  mg/kgBB  lebih  besar  dibandingkan  dengan  dosis 50 dan 100 mg/kgBB. Jadi semakin kecil dosis ekstrak daun ciplukan yang diberikan semakin besar efek analgetik yang dihasilkan. Pada Tabel 7 dapat terlihat bahwa pada dosis 25 mg/kgBB menunjukkan khasiat analgetik yang hampir sama dengan aspirin dosis 500 mg/70kgBB.
Kemampuan daun ciplukan dalam mengatasi rasa nyeri diduga karena adanya kandungan  flavonoid.  Senyawa  flavonoid  sendiri  menunjukkan  lebih  dari  100  jenis bioaktivitas,  diantaranya  efek  analgesik,  diuretik,  antiinflamasi,  antihistamin, antioksidan, membunuh bakteri, dan menurunkan kadar gula darah. Mekanisme kerja flavonoid  yaitu  dengan  cara  menghambat  kerja  enzim  siklooksigenase  sehingga pembentukan  prostaglandin  terhambat,  dengan  demikian  akan  mengurangi  rasa nyeri. (15) Dari  hasil  penelitian  aktivitas  analgetik  ekstrak  daun  ciplukan  dapat menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  ciplukan  dosis  25  mg/kgBB  efektif  mengurangi nyeri  akibat  rangsangan  asam  asetat  yang  aktivitasnya  hampir  sebanding  dengan aspirin sebagai pembanding.

## Kesimpulan

## Simpulan
Dari hasil penelitian pengujian aktivitas analgetik ekstrak etanol daun ciplukan pada  mencit  jantan  dengan metode sigmund (geliat)  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol daun ciplukan dosis 25, 50 dan  100 mg/kgBB berbeda bermakna terhadap kelompok kontrol positif (p<0,05) sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol daun ciplukan memiliki aktivitas sebagai analgetik. Efek analgetik terbesar dan paling efektif  ditunjukkan  oleh  ekstrak  etanol  daun  ciplukan  dosis  25  mg/kgBB  dengan persentase proteksi sebesar 61,5% dan efektifitas analgetik sebesar 99%.

## Saran
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut pada aktivitas analgetik dengan metode yang berbeda dengan menggunakan fraksi dari ekstrak etanol daun ciplukan untuk mengetahui  senyawa  apa  yang  terkandung  yang dapat menurunkan  respon  nyeri serta uji toksisitas untuk mengetahui keamanan penggunaannya.

## Daftar Pustaka
1.  Sangi  M, Runtuwene MRJ, Simbala HEI,  dan Makang VMA. Analisis  fitokimia tumbuhan obat di kabupaten minahasa utara. Chem Prog. 2008;1(1);47.
2.  Muhtadi, Suhendi A, Nurcahyanti W, Sutrisma EM. Uji praklinik antihiperurisemia secara in vivo pada mencit putih jantan galur BALB-C dari ekstrak daun salam dan daun belimbing wuluh. Biomedika. 2014;6(1);17.
3.  Winarti L, Wantiyah. Uji efek analgetik ekstrak rimpang temu kunci (Boesenbergia pandurata Roxb.)  schlechter pada mencit jantan galur swiss.  Maj Obat Tradis. 2011;16(1);27.
4.  Atikaningrum DA, Ediningsih E, Utari CRS. Perbandingan  efektivitas analgesik ekstrak daun sirih merah (Piper Crocatum) dan aspirin dosis terapi pada mencit. Biofarmasi [serial online]. 2013;11(2);1. DOI: 10.13057/biofar/f1 10101.
5.  Effendi  N,  Widiastuti  H.  Identifikasi  aktivitas  imunoglobulin  m  (ig.m)  ekstrak etanolik  daun  ceplukan  (Physalis  Minima  Linn.)  pada  mencit.  J  kesehat. 2014;7(2);354.
6.  Rosmainar L. Metabolit sekunder dari batang physalis peruviana (Solanaceae).
J Kim. 2018;12(2);152-153.
7.  Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  Farmakope  Herbal  Indonesia. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia; 2013. 101-106p.
8.  Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia.  Materi  Medika  Indonesia.  6rd  ed. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia; 1995. 536-540p.
9.  Djamil  R,  Anelia  T.  Penapisan  fitokimia,  uji  BSLT  dan  uji  antioksidan  ekstrak metanol  beberapa  spesies  papilionaceae.  J  Ilmu  Kefarmasian  Indones. 2009;7(2);65-71.
10.  Marlyne R. Uji efek analgesik ekstrak etanol 70% bunga mawar (Rosa chinensis Jacq.)  pada  mencit  yang  dinduksi  asam  asetat  [skripsi].  Depok:  Fakultas Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Program  Studi  Farmasi  Universitas Indonesia; 2012. 11-13.
11.  Sundari  D,  Gusmali  DM,  Nuratmi  B.  Uji  khasiat  analgetika  infusa  kayu  rapet (Parameria  laevigata  (Juss.)  Moldenka)  pada  mencit  putih.  Media  Litbang Kesehat. 2005;15(4);10.
12. Sa’adah  H,  Nurhasnawati  H,  Permatasari  V.  Pengaruh  metode  ekstraksi terhadap  kadar  flavonoid  ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak  ( Eluetherine palmifolia (L.)  Meer)  dengan  metode  spektrofotometri.  Borneo  J  Of Pharmascientech. 2017;1(1);7.
13.  POM.  Peraturan  Kepala  Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan  Republik Indonesia No. 12 Tahun 2014 tentang persyaratan mutu obat tradisional. Jakarta; 2014 p. 9.
14.  Depkes  RI.  Parameter  standar  umum  ekstrak  tumbuhan  obat.  Jakarta: Departemen Kesehatan; 2000.
15.  Syamsul ES, Andani F, Soemarie YB. Uji aktivitas analgetik ekstrak etanolik daun kerehau  (Callicarpa  longifolia  Lamk.)  pada  mencit  putih.  Tradit  Med  J. 2016;21(2);101.