Perbandingan Total Flavonoid dan Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat Biji Kelor ( Moringa oleifera L.) dan Biji Kecipir ( Psophocarpus tetragonolobus L.)
The Comparison Between Total Flavonoid and Antioxidant Activity of Ethyl Acetate Fraction of Moringa Seeds (Moringa oleifera L.) and Winged Bean Seeds (Psophocarpus tetragonolobus L.)
Annisa Krisridwany*, Miftah Rizkia Tatra, Dyani Primasari Sukamdi Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Yogyakarta,
Jalan Brawijaya, Kasihan, Bantul, Yogyakarta 55183 email: akrisridwany@umy.ac.id
(tanggal diterima: 19-05-2021 , tanggal disetujui: 14-04-2022)

## INTISARI
Masyarakat  Indonesia  banyak  memanfaatkan  tanaman  kecipir  ( Psophocarpus tetragonolobus L.)  dan  tanaman  kelor  ( Moringa  oleifera L.)  sebagai  makanan  dan  pengobatan tradisional. Kedua tanaman ini diketahui memiliki kandungan flavonoid dan senyawa antioksidan. Selain  bagian  daun,  biji  kelor  dan  biji  kecipir  juga  banyak  dikonsumsi  oleh  masyarakat.  Saat  ini, sumber  paparan  radikal  bebas  di  lingkungan  semakin  banyak  sehingga  diperlukan  senyawa antioksidan  untuk  menangkap  radikal  bebas.  Pada  studi  ini  dilakukan  pengujian  untuk  melihat perbedaan kadar total flavonoid dan aktivitas antioksidan biji kecipir dan biji kelor dari fraksi etil asetat secara in vitro.
Ekstrak  etanol  diperoleh  dari  serbuk  biji  kelor  dan  biji  kecipir  yang  masing-masing dimaserasi menggunakan pelarut  etanol 96%. Pelarut  n-heksana dan etil asetat digunakan dalam proses fraksinasi. Identifikasi senyawa flavonoid, saponin, dan alkaloid dilakukan secara kualitatif dengan reagen warna. Total flavonoid dari fraksi etil asetat diukur dengan pembacaan absorbansi dengan pembanding yang digunakan adalah kuersetin. Metode DPPH ( 1,1- diphenyl 2-picrilhidrazil ) digunakan  untuk  menguji  fraksi  etil  asetat  masing-masing  biji  dengan  vitamin  C  sebagai pembandingnya, kemudian diukur nilai IC 50 .
Total flavonoid yang  dihasilkan pada fraksi  etil asetat  biji kecipir sebesar 71.56 mgQE/g ekstrak, lebih besar daripada biji kelor yaitu 42.8 mgQE/g ekstrak. Sedangkan aktivitas antioksidan berdasarkan nilai IC 50 pada biji kelor sebesar 134.34 ppm dan biji kecipir sebesar 179.57 ppm yang menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan fraksi etil asetat biji kelor lebih besar daripada biji kecipir. Total flavonoid fraksi etil asetat biji kecipir lebih besar namun aktivitas antioksidan pada fraksi etil asetat biji kelor lebih besar dari biji kecipir hal ini menunjukkan kemungkinan terdapat lebih banyak senyawa antioksidan selain flavonoid pada biji kelor.
Kata kunci: antioksidan; flavonoid; biji Moringa oleifera L.; biji Psophocarpus tetragonolobus L.

## ABSTRACT
Moringa ( Moringa oleifera L.) and winged bean ( Psophocarpus tetragonolobus L.) plants are widely used by the community as food and traditional medicine. Both of these plants are known to contain flavonoids and antioxidant compounds. In addition to the leaves, Moringa seeds and winged bean  seeds  are  also  widely  consumed  by  the  community.  Currently,  sources  of  exposure  to  free radicals in the environment are increasing so that antioxidant compounds are needed to capture free radicals. In this study, an in vitro comparison of the total flavonoid content and antioxidant activity of the ethyl acetate fraction of the two seeds was carried out.
Ethanol extract was  obtained from Moringa seed  powder and winged bean seed, each  of which was extracted using 96% ethanol. The ethanol extract was then fractionated by n-hexane and ethyl acetate solvent. Identification of flavonoid compounds, saponins, and alkaloids was carried out qualitatively with color reagents. Total flavonoids from the ethyl acetate fraction were measured by reading the absorbance with quercetin as a comparison. The antioxidant activities of the ethyl acetate fraction  of  the  seeds  were  carried  out  by  the  DPPH  (1,1-diphenyl  2-picrylhydrazil)  method  with vitamin C as the positive control and the IC 50 value was measured.
The results showed that the total flavonoid produced in the ethyl acetate fraction of winged bean seeds was 71.56 mgQE/g extract, greater than that of Moringa seeds, which was 42.8 mgQE/g extract. While the antioxidant activity based on the IC 50 value in Moringa seeds was 134.34 ppm and winged bean seeds was 179.57 ppm which indicated that the antioxidant activity of the ethyl acetate fraction of Moringa seeds was greater than that of winged bean seeds. The total flavonoid in winged bean seeds is greater but the antioxidant activity in the ethyl acetate fraction of moringa seeds is greater  than  that  of  winged  bean,  however,  this  indicates  that  there  may  be  more  antioxidant compounds other than flavonoids in moringa seeds.
Keyword: Antioxidant; Flavonoid; Moringa oleifera L. seed, Psophocarpus tetragonolobus L. seed

## 1. PENDAHULUAN
Saat  ini,  paparan  radikal  bebas  terhadap  manusia  sangat  tinggi  seiring dengan meningkatnya industrialisasi, banyaknya kendaraan bermotor, asap rokok dari  perokok  yang  tidak  terkendali,  paparan  sinar  matahari  yang  tinggi  serta banyaknya  polusi  udara.  Meningkatnya  paparan  radikal  bebas  ini  dapat meningkatkan  kejadian  berbagai  penyakit  seperti  penuaan  dini  penyakit kardiovaskuler,  kanker  dan  sebagainya  [1].  Reaksi  oksidasi  dapat  terjadi  akibat adanya radikal bebas yang sangat reaktif dan dapat berinteraksi dengan komponen dalam tubuh. Suatu antioksidan sangat diperlukan dalam mencegah kerusakan sel dan mencegah reaksi oksidasi tersebut [2].
Saat ini banyak peneliti yang melakukan penelitian untuk mencari sumber antioksidan dari bahan alam. Negara Indonesia memiliki biodiversitas yang tinggi yang dapat digunakan untuk sumber bahan alam dalam penemuan senyawa yang dapat dikembangkan menjadi obat baru. Tanaman Moringa oleifera L . yang dikenal dengan  nama  kelor  merupakan  satu  dari  sekian  banyak  tanaman  yang  mudah ditemui  di  negara  Indonesia.  Tanaman  ini  mudah  ditemui  di  daerah  subtropis maupun  tropis  dan  berbagai  jenis  tanah  cocok  untuk  pertumbuhan  tanaman  ini. Selain  itu,  tanaman  kelor  dapat  hidup  pada  musim  kemarau  atau  musim  kering hingga 6 bulan [3]. Senyawa antioksidan seperti asam askorbat, flavonoid, fenolat, dan  karotenoid  banyak  terdapat  dalam  Tanaman Moringa  oleifera L.  sehingga tanaman  ini  dapat  menjadi  kandidat  sebagai  sumber  antioksidan  alami  [4–6]. Berbagai bagian dari tanaman ini diketahui mengandung senyawa atau nutrisi yang bermanfaat. Zat gizi seperti lemak dan protein biji kelor paling tinggi dibandingkan dengan buah kelor dan tepung daun kelor [7].
Tanaman  yang  juga  banyak  terdapat  di  Indonesia  dan  banyak dikonsumsi masyarakat sebagai sayuran adalah tanaman kecipir ( Psophocarpus tetragonolobus L.).  Ekstrak  etanol  96%  daun  kecipir  diketahui  memiliki  aktivitas  antioksidan dengan  nilai  IC 50 sebesar  60,34  ppm  yang  merupakan  kategori  kuat  dengan kandungan  metabolit  sekunder  yang  beragam  seperti  steroid,  saponin,  tanin,
triterpenoid dan flavonoid  [8]. Kandungan protein kecipir sangat tinggi dan dapat menggantikan kacang-kacangan lain dalam makanan untuk pengayaan protein. Di sisi  lain,  tepung  kecipir  mengandung  serat  kasar  yang  tinggi,  yang  dapat menghasilkan tepung alternatif untuk diet [9].
Senyawa  flavonoid  dalam  tanaman  berfungsi  sebagai  anti  virus,  anti mikroba,  serta  berperan  dalam  proses  fotosintesis  tanaman  [10].  Kandungan flavonoid  harus  ditentukan  karena  perannya  yang  signifikan  dalam  aktivitas antioksidan  tanaman  secara  keseluruhan[11].  Peran  senyawa  flavonoid  pada manusia dapat memberikan efek antipiretik, menghambat agregasi trombosit serta perlindungan  pada  fungsi  endotel.  Resiko  penyakit  kardiovaskular  dan  penyakit jantung koroner dapat ditekan dengan senyawa ini. [12,13].
Kacang-kacangan atau biji-bijian adalah salah satu sumber bahan alam yang dapat menjadi peluang yang dapat dikembangkan dalam bidang kesehatan. Bagian biji pada tanaman berpotensi untuk dikembangkan menjadi sediaan farmasi karena memiliki  bioaktivitas  yang  baik  [14].  Dari  penelitian  sebelumnya,  ekstrak  air  biji kelor menunjukkan aktivitas antioksidan yang kuat [15]. Ekstrak methanol biji kelor diteliti  dapat  memberikan  efek  neuro  proteksi  diduga  karena  adanya  kandungan senyawa flavonoid yang tinggi [16]. Pada penelitian sebelumnya juga terdapat hasil yang baik dari ekstrak etanol daun kelor yaitu dapat mencegah kerusakan pada sel- sel yang terlibat dalam dementia dan dapat menghambat enzim asetikolinesterase yang terlibat dalam penyakit Alzeimer [17,18]. Pada biji kecipir diduga mengandung flavonoid  dan  memiliki  aktivitas  antioksidan  [19].  Pada  penelitian  sebelumnya aktivitas antioksidan yang sangat kuat ditemukan pada ekstrak daun kecipir, tetapi aktivitas  antioksidan  pada  biji  kecipir  belum  banyak  diketahui  [20].  Kedua  biji tanaman  yang  banyak  dikonsumsi  masyarakat  Indonesia  ini  perlu  diteliti  untuk mengetahui  biji  manakah  yang  memiliki  kandungan  flavonoid  dan  aktivitas antioksidan  yang  baik  dengan  harapan  konsumsi  biji  tanaman  ini  dapat  menjadi alternatif dalam mengurangi radikal bebas dalam tubuh. Pengujian perbandingan total  flavonoid  dan  aktivitas  antioksidan  dari  kedua  biji  ditujukan  untuk mendapatkan fakta yang tepat tentang sumber potensial dari biji.

## 2. BAHAN DAN METODE

## 2.1 BAHAN
Serbuk kering kecipir ( P. tetragonolobus L .) dari Bantul Yogyakarta, serbuk kering biji kelor ( M. oleifera L.) dari Blora Jawa Tengah, serbuk kering, n-heksana, etil asetat, etanol 96%, AlCl 3 10%, asam asetat 5%, kuersetin, magnesium bubuk, reagen DPPH, air suling, metanol p.a, HCl, asam asetat glasial, asam sulfat, reagen Dragendroff digunakan dalam penelitian ini.

## 2.2 METODE
Ekstraksi dan fraksinasi Serbuk biji kelor dan biji kecipir ( P. tetragonolobus L.) ditimbang sebanyak 650  gram.  Serbuk  masing-masing  biji  direndam  dalam  etanol  96%  dengan perbandingan 1:5 (serbuk:etanol) selama 6 hari dan dilakukan pengadukan secara
berkala. Serbuk yang telah direndam dilakukan penyaringan dengan kain flanel dan kertas saring sebanyak dua kali untuk mendapatkan ekstrak cair. Rotary evaporator digunakan  untuk  menguapkan  esktrak  cair  dengan  kecepatan  75  rpm pada  suhu 65ºC  hingga  diperoleh  ekstrak  kental  etanol.  Ekstrak  kental  etanol  kemudian dipekatkan  pada  penangas  air  pada  suhu  70ºC  untuk  selanjutnya  dilakukan fraksinasi.
Sebanyak  5  gram  ekstrak  etanol  dari  sampel  dilarutkan  dalam  pelarut etanol:air dengan perbandingan 7:3 sebagai proses pada fraksinasi pertama. Corong pisah digunakan untuk memisahkan larutan tersebut. Selanjutnya ditambahkan 30 ml n-heksana. Dilakukan penggojokan pada campuran larutan dan setelah beberapa saat akan terbentuk terbentuk dua lapisan larutan, kemudian dipisahkan. Pelarut etil asetat digunakan untuk proses fraksinasi kembali. Hasil fraksi diuapkan di atas penangas air pada suhu 70 0 C untuk menghilangkan sisa pelarut.
Skrining Fitokimia
Metode  pemeriksaan  flavonoid  yang  digunakan  adalah  uji  Shinoda  yang dilakukan  dengan  mengambil  sampel  ditambah  beberapa  tetes  HCl  pekat  dan beberapa  butir  serbuk  Mg.  Apabila  terbentuk  warna  oranye  hingga  merah  maka menandakan terdapatnya senyawa flavonoid [21,22].
Metode  Forth  digunakan  dalam  pengujian  saponin.  Pengujian  saponin dengan  metode  ini  menunjukkan  hasil  positif  dengan  terbentuknya  busa  pada perlakuan  dengan  pelarut  metanol,  etanol,  air  suling  dan  aseton.  Dilakukan pengocokan  larutan  hingga  terbentuk  buih,  dan  dilakukan  pengamatan.  Apabila buih  tidak  hilang  hingga  10  menit  setelah  pengocokan  dan  stabil  dengan  adanya penambahan senyawa HCl 2M menjadi tanda terdapatnya senyawa saponin [23].
Pemeriksaan alkaloid dilakukan dengan melarutkan sampel dengan HCl dan menambahkan 3 tetes reagen Dragendroff ke sampel. Jika terbentuk endapan jingga, sampel positif mengandung alkaloid [24].
Pengujian  senyawa  steroid  dilakukan  dengan  menambahkan  0,5  mL  asam asetat anhidrida. Sebanyak 2 mL asam sulfat yang pekat diteteskan melalui dinding tabung.  Terdapatnya  warna  berupa  hijau  kebiruan  merupakan  tanda  adanya senyawa steroid [25].

## Penentuan Kadar Flavonoid Total
a. Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Larutan  AlCl 3 10  %  sebanyak  1  mL  dan  asam  asetat  5%  sebanyak  8  mL ditambahkan  pada  larutan  stok  kuersetin  100  g/mL  sebanyak  1  mL.  Panjang gelombang 330-450 nm digunakan untuk pengukuran nilai absorbansi.
b. Penentuan Operating Time (OT) Setelah  didapat  panjang  gelombang  maksimum,  dilakukan  pengukuran absorbansi  terhadap  larutan  stok  kuersetin  larutan  stok  kuersetin  100  ppm sebanyak 1 mL ditambahkan 1 mL AlCl 3 10% dan 8 mL asam asetat 5%. Pembacaan absorbansi  dilakukan  setiap  2  menit  hingga  didapat  nilai  absorbansi  yang  tidak berubah.
c. Kurva Baku Kuersetin Pembuatan seri konsentrasi larutan kuersetin dilakukan dengan pembuatan konsentrasi  70,  80,  90  dan  100  µg/mL.  Larutan  AlCl 3 10%  sebanyak  1  mL  dan larutan asam asetat 5% sebanyak 8 mL ditambahkan ke dalam berbagai konsentrasi kuersetin.  Waktu  pengujian  dilakukan  sesuai operating  time yang  didapat,  untuk selanjutnya diukur nilai absorbansi menggunakan panjang gelombang maksimum.
d. Penetapan Kadar Flavonoid Total Masing-masing  sampel  ekstrak  kental  biji  kelor  dan  biji  kecipir  dibuat konsentrasi  sebesar  10.000  µg/mL.    Sebanyak  1  mL  masing-masing  sampel ditambahkan dengan 1 mL AlCl 3 10% dan 8 mL asam asetat 5%. Sampel didiamkan sesuai operating time yang telah didapat. Panjang gelombang maksimum digunakan dalam  pengukuran  absorbansi  setiap  sampel  dan  pengulangan  pengukuran absorbansi dilakukan sebanyak 3 kali.

## Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPH 0,2 mM
a. Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Larutan DPPH 0,2 mM sebanyak 1 mL ditambah larutan metanol p.a hingga 5  ml  menggunakan  labu  ukur.  Larutan  yang  telah  dibuat  ditempatkan  dalam ruangan  yang  gelap  dan  dibiarkan  selama  setengah  jam.  Pengukuran  absorbansi dilakukan menggunakan panjang gelombang 450-550 nm [26,27].

## b. Pengujian Aktivitas Antioksidan Vitamin C
Sebagai pembanding dalam pengukuran ini adalah dengan larutan Vitamin C. Vitamin C sebanyak 5 mg dilarutkan dengan metanol hingga 5 ml (konsentrasi 1000 ppm).  Pengenceran  dilakukan  menggunakan  berbagai  variasi  konsentrasi  10,  20, 30,  40,  50  ppm.  Pengukuran  nilai  absorbansi  dilakukan  menggunakan  panjang gelombang maksimum.
c. Penentuan Nilai IC 50 Biji Kelor dan Biji Kecipir dari Fraksi Etil Asetat Setiap  fraksi  sampel  dibuat  seri  konsentrasi  10,  20,  30.  40,  dan  50  ppm. Larutan DPPH 0,2 mM sebanyak 1 ml ditambahkan pada masing-masing konsentrasi hingga 5 ml menggunakan labu ukur. Larutan tersebut didiamkan pada tempat yang gelap  selama operating  time .  Pengukuran  nilai  absorbansi  dilakukan  pula  pada panjang gelombang maksimum.
Analisis Data
Rendemen ekstrak kelor dan kecipir dihitung menggunakan persamaan  1.
% 𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = 𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑏𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑥 100% ....... persamaan 1
Persamaan  regresi  linier  untuk  menentukan  kadar  flavonoid  ditunjukkan  pada persamaan 2:
𝑦 = 𝑏𝑥 + 𝑎
........... persamaan 2
Kadar  flavonoid  yang  diperoleh  dari  persamaan  2  kemudian  disubstitusikan  ke persamaan 3 untuk mendapatkan kadar flavonoid total
Kadar (μg/g) = (C x V x Fp) / W ........... persamaan 3
Keterangan: C = kadar senyawa larutan sampel (μg/ml) V = volume sampel (ml) FP = faktor pengenceran W = berat sampel (g)
Persen  inhibisi  dihitung  berdasarkan  persamaan  4.  Regresi  linier  menyatakan keterkaitan  antara  persen  inhibisi  dengan  kadar  sampel  digunakan  untuk menghitung nilai IC 50 . Pada persamaan regresi linier, angka 50 dimasukkan sebagai y sedangkan perhitungan nilai x yang didapat merupakan Nilai IC 50.
% 𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 = (𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜−𝑎𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙) 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑠𝑖 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 x 100% ........... persamaan 4

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi and Skrining Fitokimia Ekstrak  etanol  masing-masing  biji  dipartisi  dengan  menggunakan  pelarut nonpolar  dan  polar.  Rendemen  masing-masing  fraksi  ditunjukkan  pada  Tabel  1 dengan  rendemen  fraksi  etil  asetat  baik  pada  biji  kelor  maupun  kecipir menghasilkan  rendemen  terbanyak  dibandingkan  dengan  fraksi  lainnya.  Hasil penapisan  fitokimia,  biji  kelor  dan  biji  kecipir  mengandung  senyawa  metabolit seperti tercantum pada Tabel 2. Pada fraksi etil asetat baik pada biji kecipir dan biji kelor  mengandung  flavonoid.  Senyawa  semipolar  seperti  aglikon  flavonoid  pada dinding sel dapat mudah larut pada pelarut  etil asetat [28]. Berdasarkan penelitian fitokimia pada fraksi etil asetat daun kelor juga mengandung flavonoid. Komponen β  karoten  pada  fraksi  n-heksana  merupakan  komponen  yang  paling  banyak ditemukan  pada  purifikasi  ekstrak etanol 50%  daun  kelor  [29].  Tanaman  kecipir diketahui  memiliki  banyak  kandungan  senyawa  peptide,  fenolik,  dan  flavonoid. Penelitian  terdahulu  menunjukkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  tanaman  kecipir memiliki paling banyak fenolik konten dibandingkan 75% methanol dan kloroform [30,31]. Kemudian, fraksi etil asetat dari masing-masing biji dipertimbangkan untuk dianalisis lebih lanjut.
Tabel 1. Hasil Rendemen Setiap Fraksi
Sampel Rendemen (%) Fraksi Etanol Fraksi Etil Asetat Fraksi n- Heksana Biji Kelor 16.46 33,2 19,19 Biji Kecipir 14,96 45,15 33,33
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Metabolit Sekunder Metode Hasil (Kelor) Hasil (Kecipir) Ethanol Ethyl acetate n-Heksana Ethanol Ethyl acetate n-Heksana Alkaloid Dragen- droff - + + - - + Saponin Forth + + + + + - Steroid Acetic acid anhidrous HCl - - - - - - Flavonoid Shinoda test - + - - + -
Penetapan Kadar Flavonoid Total
Berdasarkan  hasil  spektrofotometer UV-Vis,  panjang  gelombang maksimal yang  dihasilkan  adalah  446  nm  dengan  hasil operating  time pada  menit  ke-14. Panjang gelombang dan operating time tersebut digunakan untuk pengukuran nilai absorbansi larutan kuersetin dengan konsentrasi 70, 80, 90 dan 100 ppm yang telah ditambahkan  asam  asetat  5%  dan  AlCl3  10%.  Nilai  koefisien  korelasi memperlihatkan  hubungan  yang  kuat  antara  nilai  absorbansi  (y)  dan  nilai konsentrasi (x). Selanjutnya dilakukan penambahan  AlCl 3 10% dan asam asetat 5% pada fraksi etil asetat ekstrak etanol biji kecipir dan biji kelor konsentrasi 10.000 ppm.  Pengukuran  absorbansi  dilakukan  dengan  pengulangan  tiga  kali  yang dilakukan  pada  panjang  gelombang  maksimum  selama  waktu  operasi.  Kadar flavonoid  total  pada  fraksi  etil  asetat  biji  kecipir  dan  fraksi  etil  asetat  biji  kelor ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1. Kadar Flavonoid Total Fraksi Etil Asetat Biji Kecipir dan Biji Kelor
Berdasarkan hasil uji kadar total flavonoid, kadar fraksi etil asetat biji kecipir sebesar  71.56  mgQE/g  ekstrak  lebih  tinggi  dibandingkan  biji  kelor  yaitu  42.8 mgQE/g ekstrak karena adanya beberapa senyawa flavonoid yang terdapat pada biji kecipir. Beberapa penelitian menyebutkan pada ekstrak etanol biji tanaman kecipir memiliki  kandungan  total  flavonoid  antara  105.2  hingga  112.4  mg  QE/  100  g. Kapasitas  antioksidan  dari  biji  kecipir  diduga  karena  tingginya  kandungan total phenolic  content yang  terdapat  didalamnya  [32].  Dibandingkan  dengan  total flavonoid pada  ekstrak  etanol dari  kulit  batang  tanaman  kelor,  yang  ditunjukkan dengan nilai 20,17 mgQE/g [33], fraksi etil asetat biji kelor lebih tinggi. Pelarut etil asetat diduga dapat menyari flavonoid pada bagian biji dengan lebih baik.
Uji Aktivitas Antioksidan
Pembacaan  absorbansi  dalam  uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan menggunakan  panjang  gelombang  maksimum  dari  hasil  penetapan  sebelumnya yaitu  517  nm.  Aktivitas  antioksidan  menunjukkan  kemampuan  fraksi  etil  asetat dalam mengeliminasi suatu radikal bebas DPPH. Kontrol positif atau pembanding yang  digunakan  adalah  vitamin  C  dimana  merupakan  antioksidan  kuat.  Persen inhibisi    menunjukkan  bahwa  aktivitas  antioksidan  dari  biji  kelor  lebih  kuat dibandingkan dengan biji kecipir dapat terlihat pada Gambar 2.

## Gambar 2. Aktivitas Penangkapan Radikal Bebas DPPH
Kontrol  positif  menunjukkan  adanya  efek  penangkapan  radikal  yang  kuat dan  kekuatan  antioksidan  [26,31,34].  Konsentrasi  dari  suatu  zat  yang  dapat mengeliminasi 50% radikal bebas DPPH ditunjukkan oleh Nilai IC 50 dimana Nilai IC 50 berbanding terbalik dengan zat antioksidan dalam sampel. Nilai IC 50 fraksi etil asetat biji kecipir dan biji kelor dihitung dengan persamaan regresi linier. Aktivitas antioksidan suatu senyawa dinyatakan dalam beberapa kategori berdasarkan nilai IC 50. Apabila nilai IC 50 < 50 ppm maka suatu senyawa termasuk kategori sangat kuat, nilai IC 50 antara 50-100 ppm termasuk kategori kuat, nilai IC 50 berkisar antara 50- 150 ppm termasuk sedang, nilai IC 50 di antara 150-200 ppm termasuk lemah dan apabila nilai IC 50 di atas 250 ppm maka termasuk antioksidan sangat lemah [26].
Berdasarkan hasil penelitian ini, fraksi etil asetat biji kelor memiliki aktivitas antioksidan  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  fraksi  etil  asetat  biji  kecipir. Fraksi  etil  asetat  biji  kecipir  termasuk  kategori  aktivitas  antioksidan  yang  lemah (179.57  ppm)  sedangkan  fraksi  etil  asetat  biji  kelor  termasuk  dalam  kategori aktivitas  antioksidan  sedang  (134.34  ppm).  Adapun  aktivitas  antioksidan  sangat kuat  (19,74  ppm)  didapat  dari  vitamin  C    [26,34,35].  Pengujuan  aktivitas antioksidan  fraksi  etil  asetat  tanaman  kecipir  dengan  metode  Ferric  Thiocyanate (FTC) dan ABTS diketahui paling tinggi dibandingkan dengan fraksi methanol dan kloroform dan sejalan dengan tingginya kandungan fenolik pada fraksi etil asetat tersebut [30]. Penelitian pada fraksi etil asetat biji kecipir dan kelor belum banyak dilakukan,  namun  demikian  diketahui  bahwa  ekstrak  methanol  biji  kelor  banyak mengandung flavonoid dan komponen fenolik karena keberadaan gugus hidroksi bebas dan gugus karboksil pada strukturnya [16].
Total  flavonoid  biji  kecipir  lebih  tinggi  daripada  biji  kelor,  namun  tidak sebanding  dengan  aktivitas  antioksidannya.  Hal  ini  dapat  dimungkinkan  karena terdapat senyawa yang berbeda yang memiliki aktivitas antioksidan. Berdasarkan hasil skrining fitokimia, senyawa alkaloid ditemukan di dalam fraksi etil asetat biji kelor, seperti yang dilaporkan pada penelitian Arwande at al tahun 2021 [36]. Biji kelor mengandung senyawa fenolik yang tinggi sehingga mempengaruhi aktivitas antioksidannya [37]. Alkaloid dan senyawa fenol adalah senyawa yang bertanggung jawab  pada  aktivitas  antioksidan,  dan  memberikan  efek  sinergistik  [38].  Hasil aktivitas  antioksidan  in  vitro  fraksi  etil  asetat  biji  kelor  menunjukkan  aktivitas antioksidan  yang  paling  kuat  dibandingkan  ekstrak  n-butanol,  etanol,  petroleum eter dan air [39]. Namun demikian, berdasarkan studi yang dilaporkan oleh Jahan et al (2018), fraksi air dari biji kelor memiliki flavonoid dan aktivitas antioksidan yang tinggi  dibandingkan  dengan  fraksi  methanol  dan  aceton  [15].  Zat  antioksidan lainnya, seperti vitamin E, rutin, quercetin, catechin, epicatechin, resveratrol, dan lain-lain, mungkin terdapat pada fraksi etil asetat dengan jumlah yang berbeda. Oleh karena itu, fraksi etil asetat dari bagian biji sangat disarankan untuk diteliti lebih lanjut.

## 4. KESIMPULAN
Kadar total flavonoid biji kecipir lebih tinggi daripada fraksi etil asetat biji kelor. Meskipun demikian, pada fraksi etil asetat biji kelor didapatkan hasil aktivitas antioksidan lebih tinggi dibandingkan biji kecipir. Fraksi etil asetat biji kelor dapat menjadi sumber antioksidan yang potensial dan dapat dikembangkan lebih lanjut.

## 5. UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  kepada  Lembaga  Penelitian,  Publikasi  dan  Pengabdian Masyarakat (LP3M) Universitas Muhammadiyah Yogyakarta atas support dana yang telah diberikan pada penelitian ini.

## 6. DAFTAR PUSTAKA
[1]  Kikuzaki  H,  Hisamoto  M,  Hirose  K,  Akiyama  K,  Taniguchi  H.  Antioxidant Properties  of  Ferulic  Acid  and  Its  Related  Compounds.  J  Agric  Food  Chem 2002;50:2161–8. https://doi.org/10.1021/jf011348w.
[2]  Reynertson KA. Phytochemical Analysis Of Bioactive Constituents From Edible Myrtaceae Fruits. Dissertation. The City University of New York, 2007.
[3]  Mendieta-Araica B, Spörndly E, Reyes-Sánchez N, Salmerón-Miranda F, Halling M.  Biomass  production  and  chemical  composition  of  Moringa  oleifera  under different planting densities and levels of nitrogen fertilization. Undefined 2012. /paper/Biomass-production-and-chemical-composition-of-and-Mendieta- Araica-Sp%C3%B6rndly/7bf4ca739baa91e17544b9d34217e31142822bac (accessed September 3, 2020).
[4]  Fahey J. Microbiological Monitoring of Laboratory Mice. In: Sundberg J, editor. Genetically  Engineered  Mice  Handbook,  vol.  20051540,  CRC  Press;  2005,  p. 157–64. https://doi.org/10.1201/9781420039078.ch12.
[5]  Jegadeesan  GB,  Srimathi  K,  Santosh  Srinivas  N,  Manishkanna  S,  Vignesh  D. Green  synthesis  of  iron  oxide  nanoparticles  using  Terminalia  bellirica  and Moringa  oleifera  fruit  and  leaf  extracts:  Antioxidant,  antibacterial  and thermoacoustic  properties.  Biocatalysis  and  Agricultural  Biotechnology 2019;21:101354. https://doi.org/10.1016/j.bcab.2019.101354.
[6]  Saleem  A,  Saleem  M,  Akhtar  MF.  Antioxidant,  anti-inflammatory  and antiarthritic  potential  of  Moringa  oleifera  Lam:  An  ethnomedicinal  plant  of Moringaceae  family.  South  African  Journal  of  Botany  2020;128:246–56. https://doi.org/10.1016/j.sajb.2019.11.023.
[7]  Aminah  S,  Ramdhan  T,  Yanis  M.  Kandungan  Nutrisi  dan  Sifat  Fungsional Tanaman Kelor (Moringa oleifera). Buletin Pertanian Perkotaan 2015;5:35–44.
[8]  Safitri  V.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Fase  n-Hexan,  Etil  Asetat,  dan  Air  Dari Ekstrak Etanol 96% Daun Kecipir (Psophocarpus tetragonolobus (L.). Skripsi. Universitas Pancasila, 2018.
[9]  Adegboyega  TT,  Abberton  MT,  AbdelGadir  AH,  Dianda  M,  Maziya-Dixon  B, Oyatomi  OA,  et  al.  Nutrient  and  Antinutrient  Composition  of  Winged  Bean  ( Psophocarpus  tetragonolobus (L.)  DC.)  Seeds  and  Tubers.  Journal  of  Food Quality 2019;2019:1–8. https://doi.org/10.1155/2019/3075208.
[10] Robinson.  Kandungan  organik  tumbuhan  tingkat  tinggi.  Bandung:  Institut Teknologi Bandung; 1995.
[11] Dai J, Mumper RJ. Plant Phenolics: Extraction, Analysis and Their Antioxidant and Anticancer Properties. Molecules 2010;15:7313–52.
https://doi.org/10.3390/molecules15107313.
[12] McCullough ML, Peterson JJ, Patel R, Jacques PF, Shah R, Dwyer JT. Flavonoid intake  and  cardiovascular  disease  mortality  in  a  prospective  cohort  of  US adults.  The  American  Journal  of  Clinical  Nutrition  2012;95:454–64. https://doi.org/10.3945/ajcn.111.016634.
[13] Ningsih D, Rejeki ES. Assessment of Antypiretic Activity and Total Flavonoid Contents  of  Carica  papaya,  L.  leaf  Extract.  jfi  2018;15:101–8. https://doi.org/10.31001/jfi.v15i2.451.
[14] Widyapranata R. Penggunaan Basis Salep Ekstrak Etanolik Biji Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa ) Sebagai Anti Bakteri Terhadap Staphylococcus aureus ATCC 25923 n.d.:4.
[15] Jahan IA, Hossain MH, Ahmed KS, Sultana Z, Biswas PK, Nada K. Antioxidant activity of Moringa oleifera seed extracts. Orient Pharm Exp Med 2018;18:299– 307. https://doi.org/10.1007/s13596-018-0333-y.
[16] Amina M, Bhat RS, Al-Dbass AM, Musayeib NM, Fahmy R, Alhadlaq L, et al. The protective  effect  of Moringa  oleifera plant  extract  against  glutamate-induced DNA damage and reduced cell viability in a primary retinal ganglion cell line. PeerJ 2021;9:e11569. https://doi.org/10.7717/peerj.11569.
[17] Susilowati AA. Efek Ekstrak Etanol Daun Kelor (Moringa oleifera, Lamk.) Pada Mencit  Model  Demensia:  Kajian  Memori  Spasial,  Kadar  Malondialdehid  Dan Jumlah Sel Piramidal Hipokampus Area CA1 Dan CA2-CA3. jfi 2019;16:64–78. https://doi.org/10.31001/jfi.v16i2.612.
[18] Reubun  YTA,  Kumala  S,  Setyahadi  S,  Simanjuntak  P.  Penghambatan  Enzim Asetilkolinesterase Pada Penyakit Alzheimer Dari Ekstrak Etanol Daun Kelor (Moringa oleifera Lam.) 2021;18:10.
[19] Bassal H, Merah O, Ali AM, Hijazi A, El Omar F. Psophocarpus tetragonolobus: An  Underused  Species  with  Multiple  Potential  Uses.  Plants  2020;9:1730. https://doi.org/10.3390/plants9121730.
[20] Masaenah  E,  Roswiem  AP,  Putri  D.  AKTIVITAS  ANTIOKSIDAN  EKSTRAK ETANOL 70% DAN INFUSA DAUN KECIPIR (Psophocarpus tetragonolobus (L.) DC.)  DENGAN  METODE  PERENDAMAN  RADIKAL  BEBAS.  JF  2019;4:11–7. https://doi.org/10.47219/ath.v4i1.53.
[21] Harborne  JB.  Metode  Fitokimia.  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan. 2nd ed. Bandung: Penerbit ITB; 1987.
[22] Mustikasari K, Ariyani D. THE PHYTOCHEMISTRY SCREENING OF METHANOL EXTRACT 2010:6.
[23] Setyowati  WAE,  Ariani  SRD,  Rahmawati  CP.  SKRINING  FITOKIMIA  DAN IDENTIFIKASI  KOMPONEN.  SEMINAR  NASIONAL  KIMIA  DAN  PENDIDIKAN KIMIA VI 2014:10.
[24] Mangkasa MY, Rorong JA. DAUN BAWANG KUCAI (Allium tuberosum Rottl. Ex Spreng) 2018;7:11.
[25] Evans  CW.  Pharmacognosy  Trease  and  Evans.  16th  ed.  London:  Saunders Elsevier; 2009.
[26] Molyneux P. The use of the stable free radical diphenylpicryl- hydrazyl (DPPH) for estimating antioxidant activity 2004;26:9.
[27] Nihlati  IA,  Rohman  A,  Hertiani  T.  DAYA  ANTIOKSIDAN  EKSTRAK  ETANOL RIMPANG  DAYA  ANTIOKSIDAN  EKSTRAK  ETANOL  RIMPANG  TEMU  KUNCI TEMU  KUNCI  [Boesenbergia  pandurata  (Roxb.)  Schlecth]  DENGAN  METODE PENANGKAPAN  RADIKAL  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil).  Universitas Gadjah Mada, 2008.
[28] Sulistyawati R, Nurani LH, Hidayati S, Mursyidi A. Standarisasi Kualitas Fraksi Etil Asetat Daun Kelor (Moringa oleifera Lamk.) 2017:6.
[29] Purwanto  DS,  Susanti  H,  Sugihartini  N.  Pengaruh  Purifikasi  Terhadap Kandungan Zat Aktif dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol 50% Daun Kelor
(Moringa oleifera L.). jfi 2021;18:97–108. https://doi.org/10.31001/jfi.v18i2.1232.
[30] Singh  M,  Dubey  RK,  Koley  TK,  Maurya  A,  Singh  PM,  Singh  B.  Valorization  of winged  bean  (Psophocarpus  tetragonolobus  (L)  DC)  by  evaluation  of  its antioxidant  activity  through  chemometric  analysis.  South  African  Journal  of Botany 2019;121:114–20. https://doi.org/10.1016/j.sajb.2018.10.026.
[31] Khalili RMA, Shafekh SE, Norhayati AH, Fatahudin IM, Rahimah R, Norkamalia H, et al. Total Phenolic Content and In vitro Antioxidant Activity ofWinged Bean (Psophocarpus  tetragonolobus).  Pakistan  J  of  Nutrition  2013;12:416–22. https://doi.org/10.3923/pjn.2013.416.422.
[32] Janson Calvindi, Muhamad Syukur, Nurcholis W. Investigation of biochemical characters and antioxidant properties of different winged bean (Psophocarpus tetragonolobus)  genotypes  grown  in  Indonesia.  Biodiversitas  2020;21. https://doi.org/10.13057/biodiv/d210612.
[33] Tahar  N.  PENENTUAN  KADAR  FLAVONOID  DAN  KAPASITAS  ANTIOKSIDAN EKSTRAK 2018:10.
[34] Jun  M,  Fu  H-Y,  Hong  J,  Wan  X,  Yang  CS,  Ho  C-T.  Comparison  of  Antioxidant Activities  of  Isoflavones  from  Kudzu  Root  (Pueraria  lobata  Ohwi).  J  Food Science
2003;68:2117–22. https://doi.org/10.1111/j.1365-
2621.2003.tb07029.x.
[35] Marjoni  M,  Zulfisa  A.  Antioxidant  Activity  of  Methanol  Extract/Fractions  of Senggani  Leaves  (Melastoma  candidum  D.  Don).  Pharm  Anal  Acta  2017;08. https://doi.org/10.4172/2153-2435.1000557.
[36] Arawande J. Solvent Extraction and Phytochemical Screening of Seeds, Coats,
Pods and Leaves of Moringa Plant. JPR 2021;6.
https://doi.org/10.33140/JPR.06.02.06.
[37] Unuigbe C, Okeri H, Erharuyi O, Oghenero E, Obamedo D. Phytochemical and antioxidant  evaluation  of Moringa  oleifera (Moringaceae)  leaf  and  seed.  J Pharm Bio 2015;11:51. https://doi.org/10.4314/jpb.v11i2.4.
[38] Gan J, Feng Y, He Z, Li X, Zhang H. Correlations between Antioxidant Activity and Alkaloids and Phenols of Maca (Lepidium meyenii). Journal of Food Quality 2017;2017:3185945. https://doi.org/10.1155/2017/3185945.
[39] Gu X, Yang Y, Wang Z. Nutritional, phytochemical, antioxidant, α-glucosidase and α-amylase inhibitory properties of Moringa oleifera seeds. South African Journal of Botany 2020;133:151–60. https://doi.org/10.1016/j.sajb.2020.07.021.