## Spektra Fluorosens Darah Golongan A dan B dalam Pelarut Metanol dan Etanol
Estu Yoga Elmi Gesa, Fredy Kurniawan Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS) Jl. Arief Rahman Hakim, Surabaya 60111 Indonesia
e-mail : fredy@chem.its.ac.id
Abstrak —Uji fluorosensi senyawa telah digunakan untuk mempelajari darah manusia yang berguna untuk penentuan  penyakit.  Darah  dapat  mengemisikan  spektra fluorosens  yang  berbeda  dalam  kondisi  lingkungan  yang berbeda.  Karena  itu  pelu  dilakukan  studi  mengenai  darah dengan  spektrofotometer  fluorosens  untuk  mengetahui spektra  fluorosens  darah.  Penentuan  spektra  fluorosens darah golongan A dan B dalam pelarut metanol dan etanol telah dilakukan. Hasil yang didapat adalah golongan darah A  dan  golongan  B  memiliki  spektra  yang  sama  dalam pelarut metanol. Dalam pelarut metanol darah golongan A dan B memiliki spektra eksitasi dengan puncak maksimum di panjang gelombang 210 nm, 255 nm, 277 nm dan spektra emisi dengan puncak maksimum di panjang gelombang 303 nm,  557  nm,  600  nm.  Darah  golongan  A  dan  golongan  B memiliki  spektra  yang  sama  dalam  pelarut  etanol.  Dalam pelarut  etanol  darah  golongan  A  dan  B  memiliki  spektra eksitasi  dengan  puncak  maksimum  di  panjang  gelombang 221 nm, 257 nm, 342 nm dan spektra emisi dengan puncak maksimum di panjang gelombang 427 nm, 686 nm.
Kata  Kunci — Spektrofotometer  fluorosens;  Golongan darah A; Golongan darah B .

## I. PENDAHULUAN
arah  adalah  jaringan  hidup  yang  sangat  kompleks. Darah  mengandung  banyak  sel-sel  darah  dan plasma  darah.  Bagian  seluler  merupakan  45%  dari volume  darah  dan  termasuk  sel  darah  merah,  sel  darah putih,  dan  trombosit.  Sel  darah  merah  ( erythrocytes ) berfungsi  untuk  mentrasnportasikan  oksigen  ke  seluruh tubuh,  sel  darah  putih  ( leukocytes )  berfungsi  untuk sistem  kekebalan  tubuh,  dan  trombosit  ( platelet )  yang berfungsi  dalam  pembekuan  darah.  Sisanya  55%  adalah plasma  darah,  yang  merupakan  92%  air  dan  melakukan beberapa  fungsi  dalam  tubuh.  Plasma  bertindak  sebagai media  transportasi  untuk  sel-sel  darah  dan  mengandung albumin, fibrinogen (penting  untuk  pembekuan  darah), globulin dan antibodi [1].
Darah  manusia  unik  untuk  setiap  individu.  Darah digunakan  dalam  penyelidikan  forensik.  Darah  adalah bukti  yang  paling  sering  ditemukan  dan  salah  satu  yang paling  penting  dalam  penyelidikan  forensik.  Dalam praktek  klinis,  khususnya  yang  berkaitan  dengan transplantasi  organ,  transfusi  darah  dan  obat  obatan, sangat penting untuk menentukan darah dari pasien [2].
Uji  fluorosensi  senyawa  telah  digunakan  untuk mempelajari  darah  manusia  yang  berguna  untuk penentuan penyakit. Metode ini membandingkan spektra fluorosens darah orang normal dengan darah orang yang sakit  untuk  mengetahui  perbedaan  struktur  penyakit dalam  darah.  Darah  manusia  adalah  sistem  kimia  yang sangat  kompleks.  Darah  dapat  mengemisikan  spektra
fluorosens yang berbeda dalam kondisi lingkungan yang berbeda [3].
Fluoresensi  adalah  terpancarnya  sinar  oleh  suatu  zat fluorofor  yang  telah  menyerap  sinar  atau  radiasi elektromagnet  lain.  Sinar  yang  dipancarkan  memiliki gelombang  lebih  panjang  dan  energi  lebih  rendah daripada radiasi yang diserap. Fluorosensi suatu senyawa bergantung pada pelarut yang digunakan. Untuk itu darah dilarutkan  dalam  pelarut  metanol  dan  etanol  untuk mengetahui spektra fluorosens yang dihasilkan [4].

## II. METODOLOGI PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  neraca  analitik  Ohauss,  gelas  kimia,  labu  ukur 10mL,  pipet  ukur  1mL  dan  2mL,  pipet  tetes,  pengaduk kaca,  kuvet  Parkin  Elmer,  botol  semprot,  botol  vial, propipet,  corong  gelas,  kertas  saring.  Sedangkan instrument  yang  digunakan  adalah  PerkinElmer  LS  55 spektrofotometer  fluoresens  yang  terhubung  dengan software  FL  Winlab.  Bahan  yang  dipakai  dalam penelitian  ini  adalah  darah  golongan  A  dari  3  orang pendonor darah yang telah dipastikan golongan darahnya dengan  antisera  komersial,  darah  golongan  B  dari  3 orang  pendonor  darah  yang  telah  dipastikan  golongan darahnya  dengan  antisera  komersial,  etanol  98%,  dan metanol.

## Pembuatan Larutan Darah dengan Pelarut Metanol dan Etanol
Sampel yang digunakan adalah darah golongan A dari 3  orang  pendonor  darah  dan  darah  golongan  B  dari  3 orang  pendonor  darah.  Setiap  satu  orang  diambil darahnya  sebanyak  3  tetes  (masing  masing  2mg-10mg). Untuk  pelarut  metanol,  Masing  masing  darah  dilarutkan dengan  metanol  dan  ditimbang  massa  darah  yang mengendap untuk menghitung massa darah yang terlarut. Masing masing darah diencerkan dengan metanol hingga konsentrasi 0,0011 mg/mL. Untuk pelarut etanol, Masing masing  darah  dilarutkan  dengan  etanol  dan  ditimbang massa  darah  yang  mengendap  untuk  mengitung  massa darah  yang  terlarut.  Masing  masing  darah  diencerkan dengan etanol hingga konsentrasi 0,1 mg/mL.

## Uji Fluorosensi Larutan Darah yang Sudah Dibuat
3  tetes  darah  yang  sudah  diencerkan  dengan  masing masing pelarut di uji fluorosensinya dengan menggunakan  spektrofotometer  fluorosens.  Penentuan panjang gelombang pada intensitas maksimum menggunakan  alat  spektrometer  fluoresens.  Sebelum dilakukan  pengukuran,  terlebih  dahulu  alat  diatur  dalam kondisi scan speed = 500nm/min, Slit Ex/Em = 10nm/10nm.
D
Kemudian dilakukan prescan pada λ eks = 200-800, λ em = 200-900nm  untuk  menentukan  parameter  eksitasi  dan emisi  maksimum.  Setiap  tetes  darah  di  uji  3x menggunakan spektrofotometer fluorosens.

## Uji F dan Uji t
Uji  F  dilakukan  untuk  mengetahui  apakah  kedua spektrum  fluorosens  pada  setiap  pendonor  darah  yang dibandingkan sebanding atau tidak. Uji t dilakukan untuk mengetahui  apakah  golongan  darah  mempengaruhi spektrum  fluorosens  pada  setiap  pendonor  darah  yang dibandingkan.  Kedua  uji  dikerjakan  menggunakan Microsoft  Excel  2013 .  Dua  puluh  tujuh  data  spektrum fluorosens  pada  setiap  golongan  darah  dilakukan  uji  F melalui data  analysis→F-Test  Two  Sample  for Variances . Jika H 0 diterima maka dilakukan uji t dengan cara data analysis→t-Test: Two Sample Assuming Equal variances .  Jika  H 0 ditolak  maka  dilakukan  uji  t  dengan cara data  analysis→t-Test:  Two  Sample  Assuming Unequal  variances .  H 0 adalah  tidak  ada  perbedaan  data yang signifikan dari kedua data yang dibandingkan.

## III. HASIL/PEMBAHASAN

## Uji Fluorosensi Darah dengan Pelarut Metanol
Setiap sampel tetes darah yang sudah diencerkan di uji fluorosensinya  dengan  menggunakan  spektrofotometer fluorosens  sebanyak  tiga  kali.  Hasil  spektra  fluorosens dari  golongan  darah  A  dengan  pelarut  metanol ditunjukkan  pada  Gambar  1  dan  golongan  darah  B dengan pelarut metanol ditunjukkan pada Gambar 2.
Gambar 1. Spektra Fluorosens Golongan Darah A dengan Pelarut Metanol
Berdassarkan Gambar 1 pada spektra eksitasi golongan darah  A  dengan  pelarut  metanol  terdapat  tiga  puncak  di panjang  gelombang  210  nm,  255  nm  dan  277  nm. Spektra emisi golongan darah A dengan pelarut metanol memiliki tiga puncak di panjang gelombang 303 nm, 557 nm  dan  600  nm.  Tidak  terjadi  pergeseran  panjang gelombang  pada  setiap  pedonor,  hal  ini  menunjukkan bahwa spketra fluorosens larutan darah yang menggunakan pelarut metanol golongan darah A sama di setiap  pendonor  darah.  Spektra  fluorosens  golongan darah  B  dengan  pelarut  metanol  ditunjukkan  pada Gambar 2.
Gambar 2. Spektra Fluorosens Golongan Darah B dengan Pelarut Metanol
Berdasarkan Gambar 2 pada spektra eksitasi golongan darah  B  dengan  pelarut  metanol  terdapat  tiga  puncak  di panjang  gelombang  210  nm,  255  nm  dan  277  nm. Spektra  emisi golongan darah  B dengan pelarut metanol memiliki tiga puncak di panjang gelombang 303 nm, 557 nm  dan  600  nm.  Tidak  terjadi  pergeseran  panjang gelombang  pada  setiap  pedonor,  hal  ini  menunjukkan bahwa  spketra  fluorosens  golongan  darah  B  dengan pelarut  metanol  sama  di  setiap  pendonor  darah.  Spektra fluorosens golongan darah A yang menggunakan pelarut metanol  memiliki  puncak  yang  sama  dengan  golongan darah  B  yang  menggunakan  pelarut  metanol,  spektra fluorosens  larutan  darah  yang  menggunakan  pelarut metanol  golongan  darah  A  dengan  golongan  darah  B ditunjukkan pada Gambar 3.

## Gambar 3. Spektra Fluorosens Darah dengan Pelarut Metanol Golongan Darah A dan Golongan Darah B
Berdasarkan Gambar 3 pada spektra eksitasi golongan darah  A  dengan  pelarut  metanol  terdapat  tiga  puncak  di panjang  gelombang  210  nm,  255  nm  dan  277  nm. Spektra emisi golongan darah A dengan pelarut metanol memiliki tiga puncak di panjang gelombang 303 nm, 557 nm  dan  600  nm.  Spektra  eksitasi  golongan  darah  B dengan pelarut metanol memiliki tiga puncak di panjang gelombang  210  nm,  255  nm  dan  277  nm.  Spektra  emisi golongan  darah  B  dengan  pelarut  metanol  memiliki  tiga puncak di  panjang gelombang 303 nm,  557 nm dan 600 nm. Spektra fluorosens larutan darah yang menggunakan pelarut  metanol  golongan  darah  A  dengan  golongan darah B memiliki bentuk spekta yang sama dan memiliki puncak  maksimum  yang  sama.  Untuk  membuktikan bahwa spektra fluorosens golongan darah A dan B yang menggunakan  pelarut  metanol  berbeda  atau  tidak  maka dilakukan uji F dan t. Kesimpulan dari hasil uji F dan uji t  pada  setiap  puncak  eksitasi  spektra  fluorosens  darah yang  menggunakan  pelarut  metanol  golongan  darah  A dengan  golongan  darah  B  dapat  dilihat  pada  Tabel  1. Kesimpulan dari hasil uji F dan  uji t pada setiap puncak emisi  spektra  fluorosens  darah  yang  menggunakan pelarut  metanol  golongan  darah  A  dengan  golongan darah B dapat dilihat pada Tabel 2.
T ABEL 1. H ASIL U JI F DAN U JI T SETIAP P UNCAK E KSITASI S PEKTRA F LUOROSENS D ARAH YANG M ENGGUNAKAN P ELARUT M ETANOL G OLONGAN D ARAH A DENGAN G OLONGAN D ARAH B
Spektra Uji Golongan Darah A dengan Golongan Darah B Eksitasi Puncak Pertama Uji F Ditolak Uji t Diterima Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima
T ABEL 2. H ASIL U JI F DAN U JI T SETIAP P UNCAK E MISI S PEKTRA
F LUOROSENS D ARAH YANG M ENGGUNAKAN P ELARUT M ETANOL G OLONGAN D ARAH A DENGAN G OLONGAN D ARAH B Spektra Uji Golongan Darah A dengan Golongan Darah B Eksitasi Puncak Pertama Uji F Diterima Uji t Diterima Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima
Pada  Tabel  1  dan  Tabel  2  dapat  disimpulkan  bahwa seluruh  puncak  spektra  fluorosens  larutan  darah  yang menggunakan  pelarut  metanol  golongan  darah  A  tidak berbeda  dengan  spektra  fluorosens  larutan  darah  yang menggunakan pelarut metanol golongan darah B.

## Uji Fluorosensi Darah dengan Pelarut Etanol
Setiap sampel tetes darah yang sudah diencerkan di uji fluorosensinya  dengan  menggunakan  spektrofotometer fluorosens  sebanyak  tiga  kali.  Hasil  spektra  fluorosens dari golongan darah A dengan pelarut etanol ditunjukkan pada  Gambar  4  dan  golongan  darah  B  dengan  pelarut etanol ditunjukkan pada Gambar 5.
Gambar 4. Spektra Fluorosens Golongan Darah A dengan Pelarut Etanol
Berdasarkan Gambar 4 pada spektra eksitasi golongan darah  A  dengan  pelarut  etanol  terdapat  tiga  puncak  di panjang  gelombang  221  nm,  257  nm  dan  342  nm. Spektra  emisi  golongan  darah  A  dengan  pelarut  etanol memiliki dua puncak di panjang gelombang 427 nm dan 686  nm.  Tidak  terjadi  pergeseran  panjang  gelombang pada setiap pedonor, hal ini menunjukkan bahwa spektra fluorosens golongan darah A dengan pelarut etanol sama di  setiap  pendonor  darah.  Tidak  terjadi  pergeseran panjang  gelombang  pada  setiap  pedonor,  hal  ini menunjukkan  bahwa  spketra  fluorosens  larutan  darah yang  menggunakan  pelarut  etanol  golongan  darah  A sama  di  setiap  pendonor  darah.  Spektra  fluorosens golongan  darah  B  dengan  pelarut  etanol  ditunjukkan pada Gambar 5.
Gambar 5. Spektra Fluorosens Golongan Darah B dengan Pelarut Etanol
Berdassarkan Gambar 5 pada spektra eksitasi golongan darah  B  dengan  pelarut  etanol  terdapat  tiga  puncak  di panjang  gelombang  221  nm,  257  nm  dan  342  nm. Spektra  emisi  golongan  darah  B  dengan  pelarut  etanol memiliki dua puncak di panjang gelombang 427 nm dan 686  nm.  Tidak  terjadi  pergeseran  panjang  gelombang pada setiap pedonor, hal ini menunjukkan bahwa spektra fluorosens golongan darah B dengan pelarut etanol sama di  setiap  pendonor  darah.  Spektra  fluorosens  larutan darah  yang  menggunakan  pelarut  etanol  golongan  darah A dengan golongan darah B ditunjukkan pada Gambar 6.
Gambar 6. Spektra Fluorosens Darah dengan Pelarut Etanol Golongan Darah A dan Golongan Darah B
Berdasarkan Gambar 6 pada spektra eksitasi golongan darah  A  dengan  pelarut  etanol  terdapat  tiga  puncak  di panjang  gelombang  221  nm,  257  nm  dan  342  nm. Spektra  emisi  golongan  darah  A  dengan  pelarut  etanol memiliki dua puncak di panjang gelombang 427 nm dan 686  nm.  Spektra  eksitasi  golongan  darah  B  dengan pelarut  etanol  memiliki  tiga  puncak  di  panjang gelombang  221  nm,  257  nm  dan  342  nm.  Spektra  emisi golongan  darah  B  dengan  pelarut  etanol  memiliki  dua puncak  di  panjang  gelombang  427  nm  dan  686  nm. Spektra  fluorosens  larutan  darah  yang  menggunakan pelarut  etanol  golongan  darah  A  dan  B  memiliki  bentuk spektra yang sama dan memiliki puncak maksimum yang tidak  berbeda.  Untuk  membuktikan  bahwa  spektra fluorosens  golongan  darah  A  dan  B  yang  menggunakan pelarut  etanol  berbeda  atau  tidak  maka  dilakukan  uji  F dan  t.  Kesimpulan  dari  hasil  uji  F  dan  uji  t  pada  setiap puncak eksitasi spektra fluorosens darah yang menggunakan  pelarut  etanol  golongan  darah  A  dengan golongan darah B dapat dilihat pada Tabel 3. Kesimpulan dari hasil uji F dan uji t pada setiap puncak emisi spektra fluorosens  darah  yang  menggunakan  pelarut  etanol golongan darah A dengan golongan darah B dapat dilihat pada Tabel 4.
T ABEL 3. H ASIL U JI F DAN U JI T SETIAP P UNCAK E KSITASI S PEKTRA F LUOROSENS D ARAH YANG M ENGGUNAKAN P ELARUT E TANOL G OLONGAN D ARAH A DENGAN G OLONGAN D ARAH B
Spektra Uji Golongan Darah A dengan Golongan Darah B Eksitasi Puncak Pertama Uji F Ditolak Uji t Diterima Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima Eksitasi Puncak Kedua Uji F Diterima Uji t Diterima
Tabel 4. Hasil Uji F dan Uji t setiap Puncak Emisi Spektra Fluorosens Darah yang Menggunakan Pelarut Etanol Golongan Darah A dengan
Golongan Darah B Spektra Uji Golongan Darah A dengan Golongan Darah B Emisi Puncak Pertama Uji F Ditolak Uji t Diterima Emisi Puncak Kedua Uji F Ditolak Uji t Diterima
Pada  Tabel  3  dan  Tabel  4  dapat  disimpulkan  bahwa seluruh  puncak  spektra  fluorosens  larutan  darah  yang menggunakan  pelarut  etanol  golongan  darah  A  tidak berbeda  dengan  spektra  fluorosens  larutan  darah  yang menggunakan  pelarut  etanol  golongan  darah  B.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  spektra  fluorosens  larutan  darah golongan  darah  A  dan  golongan  darah  B  tidak  terdapat perbedaan dengan menggunakan pelarut etanol.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan,  Dalam pelarut  metanol  darah  golongan  A  dan  B  memiliki spektra  eksitasi  dengan  puncak  maksimum  di  panjang gelombang  210  nm,  255  nm,  277  nm  dan  spektra  emisi dengan  puncak  maksimum  di  panjang  gelombang  303 nm, 557 nm, 600 nm.
Dalam  pelarut  etanol  darah  golongan  A  dan  B memiliki  spektra  eksitasi  dengan  puncak  maksimum  di panjang gelombang 221 nm, 257 nm, 342 nm dan spektra emisi  dengan  puncak  maksimum  di  panjang  gelombang 427 nm, 686 nm.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] S.  Lowndes,  Blood  interference  in  fluorescence  spectrum : Experiment,
analysis and
comparison with
intraoperativemeasurements on brain tumor. 2010.
[2] T.  Kanchan  and  K.  Krishan,  “Blood Grouping,”  in  Encyclopedia of  Forensic  and  Legal  Medicine  (Second  Edition),  Oxford: Elsevier, 2016, pp. 425–432.
[3] D.  A.  Skoog,  F.  J.  Holler,  and  S.  R.  Crouch,  Principles  of Instrumental  Analysis,  6  edition.  Belmont,  CA:  Cengage Learning, 2006.
[4] P.  Atkins  and  J.  de  Paula,  Atkins’  Physical  Chemistry.  Oxford University Press, 2010.