https://doi.org/10.56064/jps.v24i1.679
Naskah diusulkan: 8 April 2022; Naskah disetujui: 15 Mei 2022 p-ISSN: 1410-7058 e-ISSN: 2597-7059 © 2022 JPS MIPA UNSRI

## Jurnal Penelitian Sains
Journal Home Page: http://ejurnal.mipa.unsri.ac.id/index.php/jps/index
Uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol-air (1:1) bunga Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.) dengan metode DPPH (1,1- difenil -2- pikrilhidrazil )

## Vitri Agustiarini* dan  Dina Permata Wijaya
Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sriwijaya, Sumatera Selatan 30862, Indonesia
Kata kunci: antioksidan, bunga rosella, DPPH, IC50,
radikal bebas ABSTRAK: Senyawa  radikal  bebas  merupakan  produk  metabolisme  normal  didalam  tubuh yang dapat menyebabkan terjadinya oksidasi seperti kerusakan membran, modifikasi protein, kerusakan DNA, dan kematian sel.  Penggunaan antioksidan dapat meredam dan menangkap radikal  bebas.  Tumbuhan  yang  memiliki  aktivitas  antioksidan  yaitu  bunga  rosella  ( Hibiscus sabdariffa L).  Tujuan penelitian ini yaitu mengetahui aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol- air  (1:1)  bunga  rosella  dan  vitamin  C  sebagai  pembanding    metode  DPPH  ( 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazine ) dengan parameter IC 50 . Penelitian ini menggunakan  konsentrasi 20,40,60,80 dan  100  ppm.  Berdasarkan  hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  nilai  IC 50 ekstrak  etanol-air (1:1) bunga rosella sebesar 43µg/ml yang termasuk kedalam antioksidan sangat kuat sedang- kan IC 50 vitamin C sebesar 2,06 µg/ml. Kesimpulan dari penelitian ini bahwa ekstrak etanol air (1:1) bunga rosella ( Hibiscus sabdariffa L) memiliki aktivitas antioksidan sangat kuat..
Keywords: antioxidants, roselle flowers,
DPPH, IC50, free radicals ABSTRACT: Free  radical  compounds  of  normal  metabolic  products  in  the  body  that  can cause  oxidation  such  as  membrane  damage,  protein  modification,  DNA  damage,  and  cell death.  The  use  antioxidants  can  reduce  and  capture  free  radicals.  Roselle  flowers  ( Hibiscus sabdariffa L.) are antioxidant-rich plants. The purpose study was to antioxidant activity of the ethanol-water  extract  (1:1)  of  rosella  flower  and  vitamin  C  using  the  DPPH  ( 1,1-diphenyl-2- picrylhydrazine ) method with parameter IC 50 . This study concentrations of 20,40,60,80 and 100 ppm. The results showed that the IC 50 value of the ethanol-water extract (1:1) of rosella flower was 43 g/ml which is a very strong antioxidant, while the IC 50 of vitamin C was 2.06 g/ml. Con- clusion  of  this  study  ethanol-water  extract  (1:1)  of  rosella  flower  ( Hibiscus  sabdariffa L)  has antioxidant activity.

## 1 PENDAHULUAN
adikal  bebas  merupakan  hasil  proses  metabo- lisme  didalam  tubuh  seperti  radikal  hidroksil, peroksil  dan  superoksida  apabila  produksi  berlebih menyebabkan timbulnya stres oksidatif [1]. Stres ok- sidatif  ini  dapat  menyebabkan  kerusakan  oksidatif baik secara langsung atau tidak langsung pada ting- kat makromolekul seperti protein, lipid, karbohidrat, asam nukleat. Selain itu, stres oksidatif dapat memi- cu  beberapa  proses  seluler  seperti  vasodilatasi, transduksi sinyal, diferensiasi sel, perkembangan dan sejumlah penyakit degeneratif [2]. Antioksidan dapat mencegah  terjadinya  kerusakan  jaringan  dan  sel yang disebabkan oleh radikal bebas [3]. Antioksidan adalah  suatu  senyawa  yang  dapat  mencegah  stress oksidatif dengan menghambat reaksi rantai oksidatif sehingga  tubuh  terlindungi  dari  berbagai  macam
penyakit  degeneratif.  Antioksidan  yang  sering  digu- nakan yaitu antioksidan sintetik. Penggunaan antiok- sidan  sintetik  dapat  menyebabkan  masalah  keseha- tan  diantaranya  rheumatoid  arthritis,  penyakit  jan- tung  kanker  dan  penuaan  dini.  Dari  permasalahan tersebut,  maka  perlu  dilakukan  penggantian  antiok- sidan  sintetik  menjadi  antioksidan  alami  dari  bahan alam [4]. Salah tanaman memiliki antivitas farmako- logi  sebagai  antioksidan  yaitu  bunganrosella  ( Hibis- cus  sabdariffa L.,).  Bunga  rosella  memiliki  metabolit sekunder berupa asam protocatechuic dan antosianin yang memiliki efek farmakologi sebagai anti  kanker, hipertensi,  peradangan,  mutase  genetik,  leukemia dan  gangguan  gastrointestinal  [5,6].  Ekstrak  bunga rosella memiliki metabolit sekunder yaitu cyanidin-3- O-sambubioside,  delphinidin-3-O-glucoside,  delphini- din-3-O-sambubiosid,  polyphenolic  compounds dan organic  acids [7,8].  Berdasarkan  penelitian  ekstrak rosella  mengandung  bioaktif  antosianin  total  senya-
R
wa  14,80  ±  0,08  mg/g,  dengan  total  fenol  23,77  ± 0,25 mg/g, vitamin C 10,74 ± 0,14 mg/g, IC 50 202.47 L/mL,  dan  aktivitas  mikroba  pada  Staphilococcus aureus  11,6  ±  0,3  dan  Escherichia  coli  12,6  ±  0,6 mm [9]. Berdasarkan penelitian ekstrak etanol kelo- pak  rosella  memiliki  aktivitas  antioksidan  IC 50 130 ppm [10]. Kemampuan suatu senyawa sebagai anti- oksidan  dalam  menghambat  radikal  dilihat  dari  ke- mampuan senyawa  dalam mendonorkan hydrogen. Berdasarkan  uraian  latar  belakang  diatas,  maka  pe- neliti  tertarik  untuk  melakukan  uji  aktivitas  antioksi- dan  ekstrak  etanol-air  (1:1)  bunga  rosella  ( Hibiscus sabdariffa L.)  dengan  metode  DPPH  ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil ).

## 2 BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimental.  Ba- han  yang  digunakan  pada  penelitian  yaitu  bunga rosella,  ascorbic  acid,  2,  2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH), aquadest, etanol pa, etanol 96%, metanol

## Waktu dan tempat
Penelitian  dilakukan  pada  Agustus  sampai  Septem- ber  2021  di  Laboratorium  Biologi  Farmasi  Jurusan Farmasi Fakultas Matematika Universitas Sriwijaya.

## Prosedur Penelitian

## Preparasi Ekstrak
Untuk persiapan sampel, sebanyak 300 g serbuk ro- sella  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  dengan perbandingan  pelarut  etanol  96%  dan  air  (1:1)  v/v selama  3  x  24  jam    kemudian  ekstrak  disaring  dan filtrat yang diperoleh dipekatkan menggunakan rota- ry evaporator pada suhu 40 C.

## Uji Aktivitas Antioksidan
Pembuatan  Larutan  dan  Optimasi  Panjang  Gelom- bang DPPH
Larutan DPPH 0,1 mM dibuat  dengan cara menim- bang  DPPH  3,95  mg  dan  dilarutkan  hingga  homo- gen dalam etanol p.a 100 mL. Larutan disimpan da- lam  wadah  yang  terlindungi  cahaya  selanjutnya  di- ukur  serapannya  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 400-800 nm untuk menentukan panjang gelombang optimum [11].
Penentuan Operating Time
Siapkan  labu  ukur  5  mL  sebanyak  3  buah,  masing- masing  ditambahkan  larutan  DPPH  dan  larutan  vi- tamin  C  15  µg/mL  dan  ditambahkan  methanol  p.a sampai  tanda  batas  kemudian  divorteks  selama  30 detik,  dan  serapan  nya  diukur  menggunakan  spek-
trofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  opti- mum setiap 5 menit sekali selama 60 menit. Lakukan replikasi sebanyak 3 kali
Pengukuran Larutan Vitamin C sebagai Pembanding Pembuatan larutan induk vitamin C konsentrasi 100 ppm  dengan  cara  menimbang  1  mg  vitamin  C  dan dilarutkan dalam 10 mL aquadest kemudian dikocok hingga homogen. Larutan vitamin C dengan konsen- trasi 2, 4, 6, 8 dan 10 ppm. Setiap konsentrasi diam- bil 1 mL dan tambahkan larutan DPPH 0,1 mM 1 ml dan  dikocok  hingga  homogen  dan  diinkubasi  pada suhu  ruang berdasarkan penentuan operating time. Serapan  dari  larutan  diukur  pada  panjang  gelom- bang yang telah didapatkan dari penentuan panjang gelombang optimum DPPH [11].
Pengukuran Aktivitas Antioksidan
Larutan induk masing-masing ekstrak dibuat dengan konsentrasi 750 ppm dengan cara ekstrak etanol-air (1:1) bunga rosella  ditimbang  sebanyak 7,5 mg  dan dilarutkan dalam 10 mL aquadest kemudian dikocok hingga  homogen.  Kemudian  diencerkan  untuk memperoleh  konsentrasi  20,40,60,80  dan  100  ppm. Setiap  konsentrasi diambil 1 mL, ditambahkan  laru- tan DPPH 0,1 mM 1 mL lalu dikocok hingga homo- gen  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  ruang  sesuai penentuan operating time (OT). Serapan diukur pa- da panjang gelombang optimum DPPH [12].
Perhitungan Inhibition Concentration 50 % (IC 50 )
Uji aktivitas antioksidan data dianalisis menggunakan dengan  persamaan  regresi  linier  (y  =  bx  +  a)  dan diperoleh  nilai  IC 50 .  Penentuan  aktivitas  antioksidan berdasarkan  besarnya  serapan  radikal  DPPH  oleh sampel melalui perhitungan persentase inhibisi den- gan menggunakan rumus sebagai berikut:
% Inhibisi  = Abs. kontrol − Abs. sampel Abs. kontrol
× 100%
Serapan  DPPH  digunakan  untuk  menghitung  IC 50 . IC 50 merupakan konsentrasi sampel  yang dapat me- redam  50%  radikal..  Aktivitas  antioksidan  sebagai peredaman radikal bebas menggunakan regresi lini- er  dengan  persamaan  regresi  (y  =  a  +  bx)  dengan konsentrasi ekstrak (ppm) sebagai sumbu x dan nilai % inhibisi (antioksidan) sebagai sumbu y. Persamaan tersebut  digunakan  untuk  menentukan  IC 50 setiap sampel  dinyatakan  dengan  nilai  y  sebesar  50  dan nilai x yang diperoleh sebagai IC 50 [13].

## Analisis Data
Aktivitas  antioksidan  di  ukur  spektrovotometer  UV- Vis, dan data yang diperoleh disajikan dalam bentuk
tabel.  Pembanding  yang  digunakan  sebagai  kontrol positif adalah vitamin C.

## 3 HASIL DAN PEMBAHASAN

## Uji Aktivitas Antioksidan

## Hasil Optimasi Panjang Gelombang DPPH
Pengukuran panjang gelombang maksimum diguna- kan untuk mengetahui λ yang memiliki serapan ter- tinggi.  Pengukuran  sampel  dilakukan  pada  panjang gelombang  maksimum  dengan  tujuan  untuk  mem- peroleh  kepekaan  lebih  maksimal  dan  meminimal- kan kesalahan[15]. Hasil penentuan panjang gelom- bang  DPPH  ( 1,1-diphenyl-2-  picrylhydrazyl )  konsen- trasi 0,1 mM diperoleh λ maks sebesar 515 nm. Ber- dasarkan hasil yang peroleh berbeda dengan absor- bansi λ maks secara teoritis yaitu 517 nm. Perbedaan 2  nm  masih  dalam  batas  yang  perbolehkan  yaitu kurang 3 nm.

## Waktu Operating Time
Tujuan penentuan operating time (OT)  yaitu untuk mengetahui  waktu  yang  dibutuhkan  larutan  pem- banding  dalam  penelitian  ini  yaitu  vitamin  C  tepat habis bereaksi. Konsentrasi larutan  0,1 mM  dipero- leh Panjang gelombang 515 nm. Penentuan operat- ing  time  (OT)  berdasarkan  waktu  nilai  absorbansi mulai  stabil  yang  ditunjukkan  dengan  selisih  nilai absorbansi tiap selang waktu. Adapun grafik operat- ing  time.  Berdasarkan  hasil  penentuan  OT  pada  la- rutan  pembanding  vitamin  C  terlihat  bahwa  absor- bansi mulai stabil pada menit ke-20 hingga menit ke- 25 yaitu 0,056 nm. Hasil yang diperoleh sudah sesuai dengan  absorbansi  maksimum  DPPH  yaitu    20-25 menit [16].
Hasil Pengukuran Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Berbanding  Air  (1:1)  Bunga  Rosella  dan  Larutan  Vi- tamin C (IC 50 )
Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol berband- ing  air  (1:1)  bunga  rosella  menggunakan  metode DPPH  dan  vitamin  C  sebagai  pembanding  dapat dilihat pada Tabel 1.
Penelitian  ini  menggunakan  metode  DPPH  (1,1- diphenyl-2picyhidrazyl). Prinsip metode DPPH peru- bahan warna DPPH dari violet menjadi kekuningan karena  terjadi  proses  donasi  hydrogen  elektron  se- hingga akan tereduksi dan besarnya donor elektron sebanding dengan perubahan warna dan diikuti pe- nurunan  absorbansi  DPPH  [17].  Selanjutnya  nilai  % inhibisi digunakan untuk menentukan nilai IC 50 . Nilai IC 50 merupakan  konsentrasi  ekstrak  (ppm)  yang  da- pat menghambat stress oksidatif sebesar 50%. Berda- sarkan  hasil  penelitian  diperoleh  nilai  obsorbsi  se-
makin kecil dengan peningkatan konsentrasi larutan. Penurunan  absorbansi  disebabkan  karena  semakin tinggi  konsentrasi  larutan,  karena  semakin  banyak senyawa  antioksidan  yang  menjadi  donor  eloktron dari  DPPH.  Berdasarkan  hasil  penelitian  menunju- kan  ekstrak  etanol-air  (1:1)  bunga  rosella  memiliki aktivitas  antioksidan  sangat  kuat  dengan  nilai  IC 50 43µg/ml meskipun jika dibandingkan dengan vitamin C  memiliki  hasil  aktivitas  antioksidan  yang  sangat aktif/kuat dengan nilai IC 50 2.058 µg/ml. Hal ini seja- lan dengan penelitian yang telah dilakukan pada uji aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  kelopak  bunga rosella 67,3 ppm yang termasuk dalam katagori  an- tioksidan  sangat  kuat  [18].  Persen  penangkapan  ra- dikal bebas dapat dilihat bahwa persen inhibisi vita- min  C  lebih  kuat  dibandingkan  dengan  sampel  uji yang  digunakan.  Hal  ini  disebabkan  karena  vitamin C  merupakan  senyawa  yang  murni  dan  senyawa populer dalam menangkal radikal bebas [19].
Tabel 1. Hasil pengukuran IC 50 ekstrak etanol-air (1:1)
bunga rosella dan vitamin C Sampel Konsen- trasi (ppm) Absorbansi % Inhibisi IC 50 (µg/ml) Blanko  Sampel Vitamin C 2 1.278 0.624 51.498 2.058 4 1.278 0.559 56.241 6 1.278 0.518 59.499 8 1.278 0.382 70.523 10 1.278 0.290 77.456 Ekstrak Etanol : Air (1:1) Bunga Rosella 20 1 0.704 42.121
43 40 1 0.665 45.327 60 1 0.584 51.932 80 1 0.335 72.430 100 1 0.239 80.295
Metabolit  sekunder  yang  terdapat  pada  ekstrak etanol-air  (1:1)  bunga  rosella  yaitu  flavonoid.  Se- nyawa  flavonoid  mendonorkan  atom  hidrogen  ke radikal bebas DPPH  yang dapat membentuk senya- wa DPPH tereduksi (DPPH-H) yang stabil. Pada kea- daan diamagnetik DPPH-H menjadi  stabil. Hasil do- nasi  proton  flavonoid  diberikan  pada  radikal  O* yang  diikuti  dengan  reaksi  terminasi  flavonoid.  Ke- mampuan flavonoid dalam  menurunkan  stress oksi- datif  dan  mengurangi  ROS (reactive  oxygen  species ) dapat memiliki efek sebagai antioksidan. Mekanisme flavonoid sebagai antioksidan melalui dua jalur yaitu dengan  peredam  radikal  bebas  secara  langsung dengan menyumbangkan atom hidrogen dari gugus hidroksilnya,  sehingga  flavonoid  akan  teroksidasi oleh radikal menjadi senyawa yang lebih stabil mela- lui chelating ion logam [20].

## 4 KESIMPULAN
Dari  hasil  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol-air (1:1)  bunga  rosella  ( Hibiscus  sabdariffa L)  memiliki aktivitas  antioksidan  sangat  kuat  dengan  nilai  IC 50 43µg/ml dan IC 50 Vitamin C 2.058 µg/ml.

## Ucapan Terima Kasih
Fakultas  Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas  Sriwijaya  Nomor  0265/UN9.FMIPA/ TU.SK/2021,  yang  telah  membantu  memberikan bantuan biaya penelitian melalui skema dana inovasi 2021.

## REFERENSI ______________________________
[1] Benharlal PS, Arumughan C.2007., Chemical composi- tion and in vitro antioxidant studies on Syzigium cumini fruit . J Sci Food Agr 2560–2569. doi: 10.1002/jsfa.2957.
[2] Islam S, Nasrin S, Khan MA, Hossain ASMS, Islam F, Khandokhar P, Mollah MNH, Rashid M, Sadik G, Rah- man MAA, Alam AHMK.2013., Evaluation of antioxi- dant and anticancer properties of the seed extracts of Sy- zigium fruticosum Rox b. Growing in Rajshahi, Bangla- desh. BMC Compl Altern Med.142–151. doi: 10.1186/1472-6882-13-142.
[3] Saefudin, Marusin, S. dan Chairul, 2013., Aktivitas An- tioksidan pada Enam Jenis Tumbuhan Sterculiaceae . Bogor: Jurnal Penelitian Hasil Hutan. Vol 31(2): 103- 104.
[4] Sen S, Chakraborty R, Sridahar C, Reddy YSR, De B. 2010., Free radical, antioxidant, disease and phytomedi- cines : current status and future prospect.  International Journal of Pharmaceutical Sciences Review and Re- search.3(1):91-100.
[5] Mohd-Esa N, Hern FS, Ismail A, Yee CL. 2010., Anti- oxidant activity in different parts of roselle (Hibiscus sabdariffa L.) extracts and potential exploitation of the seeds. Food Chem 122:1055–1060
[6] Yin G, Cao L, Xu P, Jeney G, Nakao M, 2011., Hepato- protective and antioxidant effects of Hibiscus sabdariffa extract against carbon tetrachloride-induced hepato- cyte damage in Cyprinus carpio. Vitro Anim Cell Dev Biol 47:10–15
[7] Formagio ASN, Ramos DD, Vieira MC, Ramalho SR, Silva MM, Zarate NAH, Foglio MA, Carvalho JE. 2015., Phenolic compounds of Hibiscus sabdariffa and influence of organic residues on its antioxidant and antitumoral properties . Braz J Biol 75(1):69–76
[8] Tahir HE, Xiaobo Z, Jiyong S, Mariod AA, Wiliam T. 2016., Rapid determination of antioxidant compounds and antioxidant activity of Sudanese Karkade (Hibiscus
sabdariffa L.) using near infrared spectroscopy. Food Anal Method 9:1228–1236
[9] Maksum, A. and I.S.M. Purbowati.2017., Optimasi Ek- straksi Senyawa Fenolik dari Kelopak Bunga Roselle (Hibiscus sabdariffa) Berbantu Gelombang Mikro. Agrin, 21(2): 91-104.
[10] Hutami, R.A.P., Joshita, D., Abdul, M.2014., Pemanfaa- tan Ekstrak Kelopak Bunga Rosella ( Hibiscus sabdariffa L.)  sebagai Pewarna dan Antioksidan Alami dalam Formulasi Lipstik dan Sediaan Oles Bibir.  Depok. Fa- kultas Farmasi UI. Halaman 2-5.
[11] Febriani, K. 2012., Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi Daun Gambir ( Cocculus orbiculatus (L.) DC dengan Metode DPPH dan Indentifikasi Golongan Se- nyawa Kimia dari Fraksi yang Aktif’, Skripsi, S.Farm., Farmasi, FMIPA, Universitas Indonesia, Depok
[12] Bendira, A. 2012., Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Premna oblongata Miq dengan Metode DPPH dan Identifikasi Golongan Senyawa Kimia dari Fraksi Teraktif’, Skripsi, S.Farm, Program Studi Ekstensi Far- masi, FMIPA, Universitas Indonesia, Depok.
[13] Ulfah Rahmayani, Delianis Pringgenies, Ali Djunaedi, 2013., Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar Keong Bakau ( Telescopium telescopium ) dengan Pelarut yang Berbeda terhadap Metode DPPH ( Diphenyl Picril Hi- drazil ). Journal Of Marine Research, Halaman 36-45
[14] Isnindar. 2011., Isolasi dan Identifikasi Senyawa Anti- oksidan Daun Kesemek ( Diopyroskaki Thunb ) dengan Metode DPPH. Majalah Obat Tradisional. 16 (3). 157- 164.
[15] Gandjar, I.G.,dan Rohman, A.2007., Kimia Farmasi Analisis. Cetakan II. Yogyakarta.
[16] Buanasari., Eden, W.T., dan Solichah, A.I., 2017., Ex- traction of Phenolic Compound from Petai Leaves (Parkia speciosa Hassk.) Using Microwave and Ultra- sound Assisted Methods, JBAT, 6 (1), 25-31.
[17] Dris, R. And Jain, S.M., 2004., Production Practices and Quality Assexment of Food Crops: Quality Han- dling and Evaluation,kluwer Academic Publisher, New York, pp. 58-60
[18] Maria Inggrid, Yansen Hartanto dan Jesslyn Fedora Widjaja,2018., Karakteristik Antioksidan pada Kelopak Bunga Rosella ( Hibiscus sabdariffa Linn.), Jurnal Re- kayasa Hijau Vol 2 No 3, pp 283-289
[19] Ika Juniawati Putri, Fauziyah dan Elfita,2012., Aktivitas Antioksidan Daun dan Biji Buah Nipah ( Nypa fruticans )
Asal Pesisir Banyuasin Sumatera Selatan Dengan Me- tode DPPH, Maspari Journal, 2013, 5 (1), 16-21
[20] Nijveldt, R.J., Van Nood, E., & Van Hoorn, D.E.C., 2001, Flavonoids: a review of probable mechanisms of action and potential applications , American Journal of Clinical Nutrition, 74/4, pp 418-425 _________________