## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN MAYANA
(Coleus atropurpureus [L] Benth) TERHADAP Staphylococcus aureus, Escherichia coli DAN Pseudomonas aeruginosa SECARA IN-VITRO
Deby A. Mpila 1) , Fatimawali 2) , Weny I. Wiyono 3)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
2) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
3) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas  antibakteri,  konsentrasi  efektif  dan  pengaruh peningkatan konsentrasi ekstrak etanol daun mayana (Coleus atropurpureus [L] Benth) terhadap daya hambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa. Ekstraksi  dilakukan  dengan  cara  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Pengujian  aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi agar (difusi Kirby dan Bauer yang dimodifikasi) dengan cara sumuran. Hasil uji aktivitas antibakteri dianalisa dengan metode One way anova, dilanjutkan dengan uji Duncan. Data Anova menunjukkan bahwa konsentrasi ekstrak 5%, 10%, 20%, 40% dan 80% telah memberikan  aktivitas  menghambat  pertumbuhan  bakteri  uji. Konsentrasi  efektif  untuk  menghambat bakteri S. aureus pada konsentrasi ekstrak 20%, 40% dan 80%, untuk bakteri E. coli pada konsentrasi ekstrak  10%,  20%,  40%  dan  80%,  sedangkan  untuk  bakteri P.  aeruginosa pada  konsentrasi  ekstrak 40%  dan  80%.  Peningkatan  konsentrasi  ekstrak  daun  mayana  menunjukkan  semakin  besar  diameter zona hambat pertumbuhan bakteri.
Kata kunci : Aktivitas antibakteri, Coleus atropurpureus [L] Benth, bakteri  patogen,  metode difusi agar
ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF ETHANOL EXTRACT OF MAYANA LEAF (Coleus atropurpureus [L] Benth) ON Staphylococcus aureus, Escherichia coli AND
Pseudomonas aeruginosa IN IN-VITRO

## ABSTRACT
The  aims  of  this  research  were  to  study  antibacterial  activity,  effective  concentration  and effect  of increasing concentrations of ethanolic extract from mayana leaf (Coleus atropurpureus [L] Benth) on bacteria growth inhibition of Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa. Extraction was done by maceration using ethanol 96%. Antibacterial activity test was done by using pitting  method, Kirby  and  Bauer  agar  difussion  with  modification.  The  result  was analyzed  by One way anova, followed by Duncan test. The result showed that extract concentrations (5, 10, 20, 40 and 80%) possess  bacterial  inhibition  activity. Extract  concentrations  (20, 40  and  80%)  were  effectively inhibit S. aureus growth and on effective concentration to inhibit E. coli were at 10, 20, 40 and 80%, while  for P.  aeruginosa were  at  5,  10,  20,  40  and  80%  extracts. The increase  concentrations  of mayana extract shows high inhibition diameter of bacterial growth.
Keywords : Antibacterial activity, Coleus atropurpureus [L] Benth, pathogen bacterial, agar difussion method

## PENDAHULUAN
Kesehatan adalah  keadaan  sejahtera  dari badan, jiwa,  dan sosial yang  memungkinkan setiap  orang  hidup produktif secara  sosial  dan ekonomis,  dimana  saat  ini  tingkat  kesehatan menghadapi  tantangan  yang  sangat  berat.  Hal ini  disebabkan  oleh  tingkat  biaya  kesehatan yang cenderung meningkat, seperti harga obat- obatan  dan  biaya  layanan  dokter/rumah  sakit yang  semakin  memperburuk  kualitas  hidup dan kesehatan masyarakat (Nurwidodo, 2006). Salah  satu  upaya  untuk  mencapai  derajat kesehatan  masyarakat  yang  optimal  melalui pengobatan tradisional (Zulkifli, 2004).
Mayana  (Coleus  atropurpureus [L] Benth)  merupakan tanaman hias  yang  dapat dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional  yang berasal dari Asia Tenggara. Corak, bentuk dan warna  mayana  beranekaragam,  tetapi  yang berkhasiat  obat  adalah  daun  yang  berwarna merah kecoklatan (Dalimartha, 2007).
Tanaman  mayana  mengandung  senyawa- senyawa  yang  berkhasiat  sebagai  antibakteri, diare,  bisul,  infeksi  telinga,  wasir  maupun sebagai
penambah nafsu makan (Syamsuhidayat dan Hutapea, 1991).
Penyakit  infeksi  masih  merupakan  jenis penyakit  yang  paling  banyak  diderita  oleh penduduk  di  negara  berkembang,  termasuk Indonesia.  Salah  satu  penyebab  penyakit infeksi  adalah  bakteri.  Bakteri  merupakan mikroorganisme  yang  tidak  dapat  dilihat dengan  mata  telanjang,  tetapi  hanya  dapat dilihat  dengan  bantuan mikroskop  ( Radji, 2011). Bakteri  patogen  lebih  berbahaya  dan menyebabkan  infeksi  baik  secara  sporadik maupun  endemik,  antara  lain Staphylococcus aureus,  Escherichia  coli dan Pseudomonas aeruginosa (Djide dan Sartini, 2008).
Peningkatan  resistensi  bakteri  terhadap antibiotik  memberikan  peluang  besar  untuk mendapatkan  senyawa  antibakteri  dengan memanfaatkan senyawa bioaktif dari kekayaan keanekaragaman hayati. Penelitian ini bertujuan  untuk  untuk  mengetahui  adanya
aktivitas  antibakteri,  konsentrasi  efektif  dan pengaruh  peningkatan ekstrak  etanol  daun mayana  (Coleus  atropurpureus [L] Benth) terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia  coli dan Pseudomonas aeruginosa secara in-vitro.

## METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Science Advance dan Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas  MIPA, Universitas Sam Ratulangi Manado pada bulan
Desember 2011 – Januari 2012.
Alat  alat  yang  digunakan  antara  lain  : erlenmeyer,  gelas  ukur,  gelas  kimia,  tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet tetes, penangas air, blender,  ayakan  mesh  65,  kaca  arloji, timbangan  analitik,  labu  ekstraksi,  batang pengaduk, stirer, cawan petri, rotary evaporator,  jarum  ose,  pinset,  inkubator, laminair  air  flow, termometer,  pencadang, autoklaf,  mikropipet,  mistar  berskala  dan  alat fotografi.
Bahan-bahan yang digunakan antara lain : daun  mayana (Coleus  atropurpureus [L]
Benth),  bakteri  uji  (Staphylococcus  aureus ATCC  25923,  Escherichia  coli ATCC  25922 dan Pseudomonas  aeruginosa ATCC  9027) yang diperoleh dari Laboratorium
Mikrobiologi  Balai  Besar  POM  Manado, Carboxy  Methyl  Cellulose (CMC), aquades steril, etanol 96% p.a, tablet Ciprofloxacin 500 mg, Nutrient  Agar (NA), H 2 SO 4 0,36  N, BaCl 2 .2H 2 O 1,175%, NaCl 0,9%, kertas saring no.1, kertas label dan aluminium foil.
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian eksperimental
laboratorium.
Sedangkan rancangan  penelitian  yang  digunakan  adalah rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan  7 perlakuan  dan  setiap  perlakuan  terdiri  atas  3 ulangan.

## Persiapan Sampel
Daun  mayana  yang  telah  dikumpulkan dibersihkan  dari  pengotor,  selanjutnya  dicuci di  bawah  air  mengalir  sampai  bersih, ditiriskan,  lalu  dikeringkan  dengan  cara diangin-anginkan.  Sampel  yang  telah  kering
diserbukkan  dengan  menggunakan blender, serbuk  yang  dihasilkan  diayak  menggunakan ayakan mesh 65 hingga diperoleh serbuk yang halus  dan  seragam.  Hasilnya  dimasukkan  ke dalam  wadah  gelas  tertutup (Gunawan  dan Mulyani, 2004).

## Pembuatan Ekstrak
Ekstrak  daun  mayana  dibuat  dengan  cara maserasi.  Sebanyak  60  gram  serbuk  simplisia daun mayana dimasukkan ke dalam erlenmeyer, kemudian direndam dengan larutan  etanol  96%  p.a  sebanyak  225  ml, ditutup  dengan aluminium  foil dan  dibiarkan selama 5 hari sambil sesekali diaduk. Setelah 5 hari,  sampel  yang  direndam  tersebut  disaring menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  1  dan  ampas  1.  Ampas  yang  ada kemudian ditambah dengan larutan etanol 96% p.a sebanyak 75 ml, ditutup dengan aluminium foil dan  dibiarkan  selama  2  hari  sambil sesekali diaduk. Setelah 2 hari, sampel tersebut disaring menggunakan kertas saring menghasilkan  filtrat  2  dan  ampas  2.  Filtrat  1 dan 2 dicampur menjadi satu, lalu dievaporasi menggunakan rotary  evaporator,  sehingga diperoleh ekstrak kental daun mayana. Ekstrak kental  yang  dihasilkan  dibiarkan  pada  suhu ruangan hingga seluruh pelarut etanol menguap.  Ekstrak  ditimbang  dan  disimpan dalam wadah gelas tertutup sebelum digunakan untuk pengujian (Depkes RI, 1986).

## Sterilisasi Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian aktivitas  antibakteri  ini  disterilkan  terlebih dahulu.  Alat-alat  gelas  disterilkan  dalam  oven pada  suhu  170 o C  selama  ±  2  jam,  jarum  ose dan  pinset  dibakar  dengan  pembakaran  diatas api  langsung  dan  media  disterilkan  dalam autoklaf  pada  suhu  121 o C  selama  15  menit (Lay dan Hastowo, 1992).

## Pembuatan Larutan Kontrol Negatif
Kontrol  negatif  dibuat  dari  CMC  1% dengan  cara  :  1  gram  serbuk  CMC  dilarutkan dalam  100  ml  aquades  steril.  Dikocok  sampai larutan homogen.

## Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Kontrol  positif  dibuat  dari  sediaan  obat tablet Ciprofloxacin 500  mg.  Satu  tablet Ciprofloxacin digerus,  lalu  ditimbang  dan disetarakan dengan 500 mg. Kemudian serbuk Ciprofloxacin dilarutkan  dalam  larutan  CMC untuk  memperoleh  larutan Ciprofloxacin 50 μg/50 μl.

## Pembuatan Larutan Uji
Dibuat  larutan  uji  5%;  10%;  20%;  40%; dan  80% b/v  dengan  cara  ditimbang  0,05  g; 0,1  g;  0,2  g;  0,4  g;  dan  0,8  g ekstrak  etanol daun mayana kemudian masing-masing dilarutkan dalam 1 ml larutan CMC.

## Pembuatan Media

## a. Media Agar Miring
Nutrient  Agar (NA)  sebanyak  0,46  gram dilarutkan dalam 20 ml aquades (23 g/1000 ml)  menggunakan  erlenmeyer.  Setelah  itu dihomogenkan dengan
stirer diatas penangas air sampai mendidih. Sebanyak 5 ml  dituangkan  masing-masing  pada  3 tabung  reaksi  steril  dan  ditutup  dengan aluminium  foil.  Media  tersebut  disterilkan dalam outoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit,  kemudian  dibiarkan  pada  suhu ruangan  selama  ±  30  menit  sampai  media memadat pada kemiringan 30 o . Media Agar miring  digunakan  untuk  inokulasi  bakteri (Lay, 1994).
b. Media Dasar dan Media Pembenihan Media  dasar  dibuat  dengan  cara  ditimbang
Nutrient  Agar (NA)  sebanyak  2,3  gram, lalu dilarutkan  dalam  100  ml  aquades  (23 g/1000  ml)  menggunakan  erlenmeyer. Sedangkan media pembenihan dibuat dengan  cara  ditimbang 5,75  gram NA,  lalu dilarutkan  dalam  250  ml  aquades  (23 g/1000  ml)  menggunakan  erlenmeyer. Setelah itu, masing-masing media dihomogenkan dengan stirer diatas penangas  air  sampai  mendidih.  Media- media yang  sudah  homogen  ini  disterilkan dalam outoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit,  kemudian  didinginkan  sampai  suhu ±  45-50 o C.  Media  dasar dan  media pembenihan digunakan  dalam  pembuatan media  pengujian  sebagai  lapisan  dasar dan lapisan kedua.

## Inokulasi Bakteri pada Media Agar Miring
Bakteri  uji  diambil  dengan  jarum  ose steril, lalu ditanamkan pada media agar miring dengan cara menggores. Selanjutnya diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu  37 o C selama  24  jam. Perlakuan  yang  sama dilakukan pada setiap jenis bakteri uji (Siregar, 2009).

## Pembuatan Standar Kekeruhan Larutan
(Larutan Mc. Farland)
Larutan  H 2 SO 4 0,36  N  sebanyak  99,5  ml dicampurkan  dengan  larutan  BaCl 2 .2H 2 O 1,175%  sebanyak  0,5  ml  dalam  erlenmeyer. Kemudian  dikocok  sampai  terbentuk  larutan yang  keruh.  Kekeruhan  ini  dipakai  sebagai standar kekeruhan suspensi bakteri uji (Victor, 1980).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji  yang  telah  diinokulasi  diambil dengan  kawat  ose  steril  lalu  disuspensikan kedalam tabung yang berisi 2 ml larutan NaCl 0,9%  hingga  di  peroleh  kekeruhan  yang  sama dengan standar kekeruhan larutan Mc.
Farland. Perlakuan yang sama dilakukan pada setiap jenis bakteri uji.

## Pembuatan Media Pengujian
Lapisan  dasar  dibuat  dengan  menuangkan masing-masing 10 ml NA dari media dasar ke dalam  9  cawan  petri,  lalu  dibiarkan  sampai memadat. Setelah  memadat,  pada  permukaan lapisan  dasar  diletakkan  7  pencadang  baja yang  diatur  sedemikian  rupa  jaraknya  agar daerah  pengamatan  tidak  saling  bertumpuh. Kemudian,  suspensi  bakteri  dicampurkan  ke dalam  media  pembenihan NA. Setelah  itu, dituangkan  25  ml campuran  suspensi  dan media  pembenihan  tersebut  ke  dalam tiap cawan  petri  yang  diletakkan  pencadang sebagai lapisan kedua. Selanjutnya, pencadang diangkat secara  aseptik  dari  cawan  petri, sehingga  akhirnya  terbentuklah  sumur-sumur yang akan digunakan dalam uji antibakteri.

## Uji Aktivitas Antibakteri secara In-vitro
Larutan  uji  ekstrak  etanol  daun  mayana dengan  berbagai  konsentrasi  (5%,  10%,  20%, 40%  dan 80%);  larutan  CMC  1%  sebagai
kontrol negatif; larutan Ciprofloxacin 50 μg/50 μl  sebagai  kontrol  positif ,  masing-masing diteteskan pada sumur yang berbeda sebanyak 50 μl. Kemudian cawan petri diinkubasi dalam inkubator pada suhu 37 o C selama 1x24 jam.

## Pengamatan dan Pengukuran
Pengamatan  dilakukan  setelah  1x24  jam masa  inkubasi.  Daerah  bening  merupakan petunjuk  kepekaan  bakteri  terhadap  antibiotik atau bahan antibakteri lainnya yang digunakan sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan  dengan lebar  diameter  zona  hambat (Vandepitte et  al, 2005).  Diameter  zona  hambat  diukur  dalam satuan  milimeter  (mm)  menggunakan  mistar berskala  dengan  cara  diameter  keseluruhan dikurangi diameter sumuran 7 mm. Kemudian diameter  zona  hambat  tersebut  dikategorikan kekuatan  daya  antibakterinya  berdasarkan penggolongan Davis and Stout (1971).

## Analisa Data
Data  hasil  pengujian  aktivitas  ekstrak etanol  daun  mayana  (Coleus  atropurpureus [L] Benth)  terhadap diameter  zona  hambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923, Escherichia  coli ATCC  25922 dan Pseudomonas  aeruginosa ATCC  9027 dianalisa secara statistik menggunakan metode One  way  anova (analisa  varians  satu  arah) dengan  program Statistical  Product  Services Solution (SPSS  17)  dengan  taraf  kepercayaan 95%  atau  α  =  0, 05,  dilanjutkan  dengan  uji Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi
Hasil  maserasi  berupa  filtrat  berwarna hijau  kehitaman  sebanyak  225  ml.  Kemudian diuapkan  menggunakan rotary  evaporator hingga diperoleh ekstrak kental sebanyak 5,37 gram  berwarna  hijau  kehitaman.  Ekstrak  ini akan digunakan dalam uji aktivitas antibakteri.
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Daun  Mayana (Coleus  atropurpureus [L] Benth)
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  yang menggunakan metode difusi agar (difusi Kirby dan  Bauer  yang  dimodifikasi)  dengan  cara
sumuran  dan  hasil  pengukuran  rata-rata diameter  zona  hambat ekstrak  etanol  daun mayana  (Coleus  atropurpureus [L] Benth) terhadap Staphylococcus  aureus, Escherichia coli dan Pseudomonas  aeruginosa dapat dilihat pada Gambar 1 dan Tabel 1.

## a                                                 b                                               c
Gambar  1. Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Mayana  (Coleus atropurpureus [L] Benth)  terhadap  Bakteri  :  (a) Staphylococcus  aureus ATCC  25923,  (b) Escherichia  coli ATCC  25922  dan  (c) Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Keterangan gambar : 1 : Konsentrasi ekstrak 5% 2 : Konsentrasi ekstrak 10% 3 : Konsentrasi ekstrak 20% 4 : Konsentrasi ekstrak 40% 5 : Konsentrasi ekstrak 80% 6 : Kontrol negatif (CMC 1%) 7 : Kontrol positif (Ciprofloxacin 50 μg/50 μl)
Tabel 1. Hasil Pengukuran Rata- rata Diameter Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Mayana terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 Konsentrasi Rata-rata Diameter Zona Hambat Pertumbuhan Bakteri (mm) S. aureus E. coli P. aeruginosa 5% 8,17 9,17 6,00 10% 9,83 10,33 8,00 20% 10,67 11,17 9,33 40% 11,17 12,50 11,00 80% 12,33 14,17 11,83 Kontrol (+) 26,33 29,17 31,83 Kontrol (-) 0,00 0,00 0,00

## Analisa Data
Data  ANOVA  diameter  zona  hambat bakteri Staphylococcus  aureus, Escherichia
coli
dan
Pseudomonas
aeruginosa,
menunjukkan  nilai  signifikan  0,000  (p<0,05) yang  berarti  terdapat  perbedaan  signifikan pengaruh perlakuan  yang  diberikan  pada bakteri  uji.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa
kontrol  positif  dan  kelima  konsentrasi  ekstrak etanol  daun  mayana  baik  konsentrasi  5%, 10%, 20%, 40% maupun 80% telah memberikan  aktivitas  yang  menghambat pertumbuhan  bakteri S.  aureus,  E.  coli dan P. aeruginosa.
Uji  lanjut  yang  digunakan  adalah  uji Duncan.  Uji Duncan digunakan untuk melihat perlakuan mana yang memiliki efek yang sama atau  berbeda  dan  efek  yang  terkecil  sampai efek  yang terbesar  antara  satu  dengan  lainnya (Simanjuntak, 2008).
Uji  Duncan  terhadap  diameter  zona hambat  bakteri S.  aureus,  E.  coli dan P.
aeruginosa
untuk kontrol negatif, menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  terhadap kontrol  positif  dan  berbagai  konsentrasi ekstrak.  Kontrol  negatif  yang  digunakan adalah  CMC  yang  menunjukkan  tidak  adanya zona  hambat.  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa kontrol  yang  digunakan  tidak  berpengaruh pada uji antibakteri.
Kontrol  positif  menunjukkan  perbedaan yang  nyata  dalam  uji  Duncan,  karena menghasilkan aktivitas antibakteri yang paling besar  terhadap  bakteri  uji  dibandingkan dengan kontrol negatif dan berbagai konsentrasi ekstrak. Antibiotik yang digunakan  sebagai  pembanding  atau  kontrol positif  adalah  Ciprofloxacin.  Menurut  Jawetz et  al (2007),  Ciprofloxacin  memiliki  efek antibakteri  yang  besar  (spektrum  luas).  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  diameter  zona hambat  yang  dibentuk  oleh  Ciprofloxacin lebih  besar  pada  bakteri  Gram  negatif Pseudomonas  aeruginosa (31,8333  mm)  dan Escherichia  coli (29,1667  mm)  dibandingkan bakteri  Gram  positif Staphylococcus  aureus (26,3333  mm). Mekanisme  kerjanya  dengan menghambat topoisomerase II (= DNA girase) dan topoisomerase VI pada bakteri.
Uji  Duncan  terhadap  diameter  zona hambat  bakteri Staphylococcus  aureus untuk konsentrasi  ekstrak  5%  (8,1667  mm),  10% (9,8333  mm)  dan  80%  (12,3333  mm) menunjukkan perbedaan nyata terhadap konsentrasi  ekstrak  yang  lain.  Hal  ini  berarti konsentrasi
ekstrak tersebut telah
menunjukkan  efek  yang  berbeda  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri S.  aureus. Sedangkan  konsentrasi  ekstrak  20%  (10,6667 mm)  menunjukkan  tidak  ada  perbedaan  yang nyata  dengan  konsentrasi  ekstrak  40% (11,1667  mm).  Hal  ini  berarti  konsentrasi ekstrak tersebut menunjukkan efek  yang  sama dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri S. aureus.
Uji  Duncan  terhadap  diameter  zona hambat  bakteri Escherichia  coli untuk  setiap konsentrasi  ekstrak  baik  5%  (9,1667  mm), 40%  (12,5000  mm)  maupun  80%  (14,1667 mm)  menunjukkan  perbedaan  yang  nyata terhadap konsentrasi ekstrak yang lain. Hal ini berarti  konsentrasi  ekstrak  tersebut  telah menunjukkan  efek  yang  berbeda  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri E.    coli. Namun,  pada  konsentrasi  ekstrak  10% (10,3333  mm)  menunjukkan  tidak  ada perbedaannya  yang  nyata  dengan  konsentrasi ekstrak  20%  (11,1667  mm).  Hal     ini   berarti, konsentrasi ekstrak tersebut menunjukkan efek yang sama dalam dalam menghambat
pertumbuhan bakteri E. coli.
Uji  Duncan  terhadap  diameter  zona hambat  bakteri Pseudomonas  aeruginosa untuk  setiap  konsentrasi  ekstrak  baik  5% (6,0000 mm), 10% (8,0000 mm) maupun 20% (9,3333  mm)  menunjukkan  perbedaan  yang nyata terhadap setiap konsentrasi ekstrak yang lain.  Hal  ini  berarti  konsentrasi  ekstrak tersebut telah menunjukkan efek yang berbeda dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri P. aeruginosa.  Pada  konsentrasi  ekstrak  40% (11,0000  mm)  menunjukkan  tidak  ada perbedaan  yang  nyata  dengan  konsentrasi ekstrak  80%  (11,8333  mm).  Hal  ini  berarti konsentrasi ekstrak 40% dan 80%
menunjukkan efek yang sama dalam menghambat pertumbuhan bakteri P.
aeruginosa.
Efek  antibakteri  yang  paling  baik  terlihat pada  konsentrasi  ekstrak  80%  untuk  bakteri Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli dan
Pseudomonas
aeruginosa.
Sedangkan konsentrasi terkecil yang masih dapat menghambat  pertumbuhan  ketiga  bakteri
tersebut terdapat pada konsentrasi ekstrak 5%. Untuk menunjukkan perubahan rata-rata diameter  zona  hambat  pertumbuhan  bakteri S.
aureus, E. coli dan P. aeruginosa dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar    2.  Kurva  Hubungan  Konsentrasi  Ekstrak Etanol  Daun  Mayana  terhadap  Diameter Zona  Hambat  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923, Escherichia coli ATCC 25922 dan Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Menurut  Davis  and  Stout  (1971),  kriteria kekuatan  daya  antibakteri  sebagai  berikut  : diameter  zona  hambat  5  mm  atau  kurang dikategorikan  lemah,  zona  hambat  5-10  mm dikategorikan sedang, zona hambat 10-20 mm dikategorikan  kuat  dan  zona  hambat  20  mm atau lebih dikategorikan sangat kuat.
Berdasarkan  kriteria  tersebut,  maka  daya antibakteri  ekstrak  daun  mayana  pada  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  konsentrasi ekstrak  5%  (8,17  mm),  10%  (9,83  mm) termasuk  sedang  dan  konsentrasi  ekstrak  20% (10,67  mm),  40%  (11,17  mm),  80%  (12,33 mm) termasuk kuat. Daya antibakteri
Escherichia  coli pada  konsentrasi  ekstrak  5%
(9,17  mm)  termasuk  sedang  dan  konsentrasi ekstrak  10%  (10,33  mm),  20%  (11,17  mm), 40%  (12,50  mm)  dan  80%  (14,17  mm) termasuk  kuat.  Sedangkan  daya  antibakteri Pseudomonas  aeruginosa pada  konsentrasi ekstrak  5%  (6,00  mm),  10%  (8,00  mm),  20% (9,33  mm)  termasuk  sedang  dan  konsentrasi ekstrak  40%  (11,00  mm),  80%  (11,83  mm) termasuk  kuat.  Dengan  demikian,  diketahui bahwa konsentrasi ekstrak 20%, 40% dan 80% merupakan konsentrasi efektif untuk
menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus. Konsentrasi ekstrak 10%, 20%, 40% dan 80% merupakan konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri Escherichia coli. Sedangkan  konsentrasi  ekstrak  40%  dan  80% merupakan konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri Pseudomonas aeruginosa. Sebab, pada konsentrasi- konsentrasi ekstrak tersebut daya antibakterinya dikategorikan kuat untuk menimbulkan zona hambatan yang besar.
Aktivitas  ekstrak  etanol  daun  mayana (Coleus  atropurpureus [L]  Benth)  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram negatif Escherichia  coli lebih  peka  bila dibandingkan  dengan  bakteri  Gram  positif Staphylococcus  aureus, yang  dapat  dilihat pada Gambar 2. Menurut Radji (2011), hal ini disebabkan adanya perbedaan struktur dinding sel  kedua  jenis  bakteri  tersebut.  Dinding  sel bakteri  Gram  positif  terdiri  atas  beberapa lapisan peptidoglikan yang membentuk struktur yang tebal dan kaku serta mengandung  substansi  dinding  sel  yang disebut  asam teikoat,  sedangkan  dinding  sel bakteri Gram negatif terdiri atas satu atau lebih
tersebut terdapat pada konsentrasi ekstrak 5%. Untuk menunjukkan perubahan rata-rata diameter  zona  hambat  pertumbuhan  bakteri S.
aureus, E. coli dan P. aeruginosa dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar    2.  Kurva  Hubungan  Konsentrasi  Ekstrak Etanol  Daun  Mayana  terhadap  Diameter Zona  Hambat  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923, Escherichia coli ATCC 25922 dan Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Menurut  Davis  and  Stout  (1971),  kriteria kekuatan  daya  antibakteri  sebagai  berikut  : diameter  zona  hambat  5  mm  atau  kurang dikategorikan  lemah,  zona  hambat  5-10  mm dikategorikan sedang, zona hambat 10-20 mm dikategorikan  kuat  dan  zona  hambat  20  mm atau lebih dikategorikan sangat kuat.
Berdasarkan  kriteria  tersebut,  maka  daya antibakteri  ekstrak  daun  mayana  pada  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  konsentrasi ekstrak  5%  (8,17  mm),  10%  (9,83  mm) termasuk  sedang  dan  konsentrasi  ekstrak  20% (10,67  mm),  40%  (11,17  mm),  80%  (12,33 mm) termasuk kuat. Daya antibakteri
Escherichia  coli pada  konsentrasi  ekstrak  5%
(9,17  mm)  termasuk  sedang  dan  konsentrasi ekstrak  10%  (10,33  mm),  20%  (11,17  mm), 40%  (12,50  mm)  dan  80%  (14,17  mm) termasuk  kuat.  Sedangkan  daya  antibakteri Pseudomonas  aeruginosa pada  konsentrasi ekstrak  5%  (6,00  mm),  10%  (8,00  mm),  20% (9,33  mm)  termasuk  sedang  dan  konsentrasi ekstrak  40%  (11,00  mm),  80%  (11,83  mm) termasuk  kuat.  Dengan  demikian,  diketahui bahwa konsentrasi ekstrak 20%, 40% dan 80% merupakan konsentrasi efektif untuk
menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus. Konsentrasi ekstrak 10%, 20%, 40% dan 80%
merupakan konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri Escherichia coli. Sedangkan  konsentrasi  ekstrak  40%  dan  80% merupakan konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri Pseudomonas aeruginosa. Sebab, pada konsentrasi- konsentrasi ekstrak tersebut daya antibakterinya dikategorikan kuat untuk menimbulkan zona hambatan yang besar.
Aktivitas  ekstrak  etanol  daun  mayana (Coleus  atropurpureus [L]  Benth)  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram negatif Escherichia  coli lebih  peka  bila dibandingkan  dengan  bakteri  Gram  positif Staphylococcus  aureus, yang  dapat  dilihat pada Gambar 2. Menurut Radji (2011), hal ini disebabkan adanya perbedaan struktur dinding sel  kedua  jenis  bakteri  tersebut.  Dinding  sel bakteri  Gram  positif  terdiri  atas  beberapa lapisan peptidoglikan yang membentuk struktur yang tebal dan kaku serta mengandung  substansi  dinding  sel  yang disebut  asam teikoat,  sedangkan  dinding  sel bakteri Gram negatif terdiri atas satu atau lebih
tersebut terdapat pada konsentrasi ekstrak 5%. Untuk menunjukkan perubahan rata-rata
diameter  zona  hambat  pertumbuhan  bakteri S.
aureus, E. coli dan P. aeruginosa dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar    2.  Kurva  Hubungan  Konsentrasi  Ekstrak Etanol  Daun  Mayana  terhadap  Diameter Zona  Hambat  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923, Escherichia coli ATCC 25922 dan Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027
Menurut  Davis  and  Stout  (1971),  kriteria kekuatan  daya  antibakteri  sebagai  berikut  : diameter  zona  hambat  5  mm  atau  kurang dikategorikan  lemah,  zona  hambat  5-10  mm dikategorikan sedang, zona hambat 10-20 mm dikategorikan  kuat  dan  zona  hambat  20  mm atau lebih dikategorikan sangat kuat.
Berdasarkan  kriteria  tersebut,  maka  daya antibakteri  ekstrak  daun  mayana  pada  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  konsentrasi ekstrak  5%  (8,17  mm),  10%  (9,83  mm) termasuk  sedang  dan  konsentrasi  ekstrak  20% (10,67  mm),  40%  (11,17  mm),  80%  (12,33 mm) termasuk kuat. Daya antibakteri
Escherichia  coli pada  konsentrasi  ekstrak  5%
(9,17  mm)  termasuk  sedang  dan  konsentrasi ekstrak  10%  (10,33  mm),  20%  (11,17  mm), 40%  (12,50  mm)  dan  80%  (14,17  mm) termasuk  kuat.  Sedangkan  daya  antibakteri Pseudomonas  aeruginosa pada  konsentrasi ekstrak  5%  (6,00  mm),  10%  (8,00  mm),  20% (9,33  mm)  termasuk  sedang  dan  konsentrasi ekstrak  40%  (11,00  mm),  80%  (11,83  mm) termasuk  kuat.  Dengan  demikian,  diketahui bahwa konsentrasi ekstrak 20%, 40% dan 80% merupakan konsentrasi efektif untuk
menghambat  bakteri Staphylococcus  aureus. Konsentrasi ekstrak 10%, 20%, 40% dan 80% merupakan konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri Escherichia coli. Sedangkan  konsentrasi  ekstrak  40%  dan  80% merupakan konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri Pseudomonas aeruginosa. Sebab, pada konsentrasi- konsentrasi ekstrak tersebut daya antibakterinya dikategorikan kuat untuk menimbulkan zona hambatan yang besar.
Aktivitas  ekstrak  etanol  daun  mayana (Coleus  atropurpureus [L]  Benth)  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  Gram negatif Escherichia  coli lebih  peka  bila dibandingkan  dengan  bakteri  Gram  positif Staphylococcus  aureus, yang  dapat  dilihat pada Gambar 2. Menurut Radji (2011), hal ini disebabkan adanya perbedaan struktur dinding sel  kedua  jenis  bakteri  tersebut.  Dinding  sel bakteri  Gram  positif  terdiri  atas  beberapa lapisan peptidoglikan yang membentuk struktur yang tebal dan kaku serta mengandung  substansi  dinding  sel  yang disebut  asam teikoat,  sedangkan  dinding  sel bakteri Gram negatif terdiri atas satu atau lebih
lapisan peptidoglikan yang tipis dan membran di  bagian  luar  lapisan  peptidoglikan.  Karena hanya mengandung
sedikit lapisan peptidoglikan  dan  tidak  mengandung  asam teikoat, maka dinding sel bakteri Gram negatif lebih  rentan  terhadap  guncangan  fisik,  seperti pemberian  antibiotik  atau  bahan  antibakteri lainnya. Selain itu, perbedaan struktur dinding sel  inilah  yang  menyebabkan  kedua  jenis bakteri  tersebut  memberikan  respon  terhadap pewarnaan Gram.
Perbedaan  kepekaan  juga  terlihat  pada bakteri  Gram  positif Staphylococcus  aureus yang  lebih  peka dibandingkan bakteri  Gram negatif Pseudomonas  aeruginosa. Perbedaan kepekaan  ini  dapat  dilihat  pada  Gambar  2. Walaupun merupakan bakteri Gram negatif, P. aeruginosa memiliki  daya  tahan  yang  kuat terhadap  lingkungan  fisik  dan  bahan  kimia daripada bakteri lain (Radji, 2011). Bakteri P. aeruginosa memproduksi  eksopolisakarida (EPS)  berupa  alginat  yang  berbentuk  gel kental di sekeliling bakteri. Alginat memungkinkan  bakteri  untuk  membentuk biofilm,  yaitu  kumpulan  koloni  sel-sel  bakteri yang  menempel  pada  suatu  permukaan (Mayasari,  2006).  Menurut  Todar  (2009), kecenderungan  berkolonisasi  dalam  bentuk biofilm  membuat  bakteri P.  aeruginosa tahan terhadap antibiotik atau bahan antibakteri lain.
Kemampuan  suatu  bahan  antimikroba dalam meniadakan kemampuan hidup
mikroorganisme  tergantung  pada  konsentrasi bahan mikroba itu (Schlegel, 1994).
Berdasarkan  uji  Duncan  dan  kurva  pada Gambar  2,  menunjukkan  diameter  zona hambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia  coli dan Pseudomonas aeruginosa yang  terbentuk  pada  konsentrasi ekstrak  80%  lebih  besar  dibandingkan  dengan konsentrasi ekstrak  5%,  10%,  20%  dan  40%. Ini  membuktikan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi  ekstrak  daun  mayana  yang diberikan,  maka  semakin  besar  pula  diameter zona  hambat  yang  terbentuk  disekeliling sumur.
Menurut  Ajizah  (2004),  selain  faktor konsentrasi,  jenis  bahan  antimikroba  juga menentukan kemampuan menghambat pertumbuhan  kuman.  Dalam  penelitian  ini, aktivitas  antibakteri  daun  mayana  (Coleus atropurpureus [L]  Benth)  diduga  karena adanya kandungan senyawa-senyawa berkhasiat, seperti flavonoid, polifenol, saponin, alkaloid dan minyak atsiri.

## KESIMPULAN
1. Ekstrak  etanol  daun  mayana  (Coleus atropurpureus [L] Benth) memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri  terhadap S. aureus, E. coli dan P. aeruginosa.
2. Konsentrasi  ekstrak  20%,  40%  dan  80% merupakan  konsentrasi  efektif untuk menghambat bakteri Staphylococcus aureus. Konsentrasi  ekstrak  10%,  20%, 40%  dan  80%  merupakan  konsentrasi efektif untuk menghambat bakteri Escherichia  coli.  Sedangkan  konsentrasi ekstrak 40% dan 80% merupakan konsentrasi  efektif  untuk  menghambat bakteri Pseudomonas aeruginosa.
3. Peningkatan  konsentrasi  ekstrak  daun mayana  dari  5%,  10%,  20%,  40%  dan 80% menunjukkan semakin besar diameter zona  hambat  yang  terbentuk  disekeliling sumur,  karena  semakin  meningkatnya senyawa-senyawa berkhasiat dalam ekstrak yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri.

## SARAN
1. Perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut untuk  mengetahui  senyawa  spesifik  yang berkhasiat  sebagai  antibakteri  pada  daun mayana (Coleus atropurpureus [L] Benth) dan  aktivitas  antibakterinya  terhadap bakteri patogen lain.
2. Perlu dilakukan uji pra-klinis dan toksisitas  LD 50 untuk  mengetahui  dosis ekstrak daun mayana (Coleus atropurpureus [L]  Benth) yang  tepat  dan aman dalam penggunaan.

## DAFTAR PUSTAKA
Ajizah,  A.  2004. Sensitivitas Salmonella typhimurium Terhadap  Ekstrak  Daun Psidium guajava L. Bioscientiae. 1(1):
31-38.
Dalimartha,  S.  2007.  Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia. Jilid  2.  Trubus  Agriwidya,
Jakarta.
Davis,  W.W  and  Stout,  T.R.  1971.  Disc  Plate Methods of Microbiological Antibiotic Assay. Microbiology. 22(4): 659-665.
Departemen  Kesehatan  RI.  1986.  Sediaan Galenik.  Departemen  Kesehatan  RI,
Jakarta. Djide dan Sartini. 2008. Dasar-Dasar Mikrobiologi Farmasi. Lephas,
Makasar.
Gunawan, D dan Mulyani, S. 2004. Farmakognosi. Swadaya, Jakarta.
Jawetz, et al. 2007. Mikrobiologi Kedokteran.
Edisi 23. Salemba Medika, Jakarta.
Lay,  B.W.  1994.  Analisis  Mikroba  di Laboratorium. Edisi  1.  Raja  Grafindo
Persada, Jakarta.
Lay, B.W dan Hastowo, S. 1992. Mikrobiologi. IPB, Bogor.
Mayasari,  E.  2006. Pseudomonas  aeuginosa:
Karakteristik, Infeksi dan Penanganan.
USU Repository. Nurwidodo.  2006. Pencegahan  dan  Promosi Kesehatan  Secara  Tradisonal.  Jurnal
Humanity. 1(2): 96-105.
Radji, M. 2011. Mikrobiologi. Buku Kedokteran ECG, Jakarta. Simanjuntak,  M.R.  Ekstraksi  dan Fraksinasi Komponen  Ekstrak  Daun  Tumbuhan
Senduduk  (Melastoma  malabathricum L) serta Pengujian Efek Sediaan Krim Terhadap  Penyembuhan  Luka  Bakar.
[skripsi].  Fakultas  Farmasi  USU, Medan.
Siregar,  S.F.  2009.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak Etanol dan Air Rebusan Kulit
Batang  Ingul  (Toona  sinensis M.
Roem)  Terhadap  Beberapa  Bakteri. [skripsi].  Fakultas  Farmasi  USU,
Medan. Syamsuhidayat  SS  dan  Hutapea  JR.  1991.
Inventaris  Tanaman  Obat  Indonesia.
Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Todar,  K.  2009. Pseudomonas  aeruginosa.
University  of  Wisconsin – Madison Department of Bacteriology. http://textbookofbacteriology.net/ps eudomonas.html [Diakses  tanggal  8 Februari 2012]. Vandepitte, et al. 2005. Prosedur Laboratorium Dasar untuk Bakteriologis  Klinis. Edisi  2.  Buku Kedokteran EGC, Jakarta. Victor,  L.  1980.  Antibiotics  in  Laboratory
Test.  The  Williams  and  Wilkins
Company, USA.
Zulkifli. 2004. Pengobatan Tradisional Sebagai  Pengobatan  Alternatif  harus Dilestarikan. Karya  Ilmiah.  FKM USU,Medan