Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(2), Oktober 2020, 250-257 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902

## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI N-HEKSAN DAUN AFRIKA (Vernonia amygdalina Del.) DENGAN METODE DPPH
Nurul Fatimah 1* , Reksi Sundu 2
Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Samarinda
Email 1 : nurulfatimah20@mail.ugm.ac.id Email 2 : reksi.sundu@gmail.com
Artikel diterima: 10 Maret 2020; Disetujui: 30 Agustus 2020 DOI: https://doi.org/10.36387/jiis.v5i2.466

## ABSTRAK
Radikal  bebas  dan  spesies  reaktif  dipercaya  secara  luas  berkontribusi  pada pengembangan  beberapa  penyakit  dengan  menyebabkan  stres  oksidatif  dan akhirnya  oksidatif.. Vernonia  amygdalina ( Astereacea )  adalah  semak  atau  pohon kecil  tingginya  antara  1  dan  5  m  tumbuh  di  seluruh  tropis  Afrika.  Tanaman  ini umumnya dikenal sebagai daun pahit, dibudidayakan dengan baik dan merupakan tanaman  yang  banyak  ditemukan  di  pasar  umum  di  beberapa  Negara.  Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  fraksi  heksan  dari ekstrak etanol daun afrika ( Vernonia amygdalina Del.).  Metode yang digunakan pada penelitian ini adalah metode DPPH ( 1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl ).
Hasil  skrining  fitokimia  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  afrika mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  golongan  alkaloid,  flavonoid,  tanin, steroid/  triterpenoid  dan  saponin.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  fraksi  n-heksan tergolong sangat lemah dengan nilai IC 50 adalah 371,98 ppm.
Kata kunci: antioksidan, daun afrika, Vernonia amygdalina Del., fitokimia

## ABSTRACT
Free radicals  and reactive species are widely believed to  contribute to  the development  of  several  diseases  by  causing  oxidative  stress  and  eventually oxidative. Vernonia amygdalina (Astereacea) is  a small  shrub  or tree between 1 and 5m high  growing throughout tropical  Africa. Plants are generally known as bitter leaves is well cultivated and is a general market for merchandise in several countries.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  antioxidant  activity  of hexane  fraction  from  ethanol  extract  od  Frican  leaves  (Vernonia  amygdalina Del. ).  The  method  used  in  this  study  was  the  DPPH  (1,1-Diphenil-2- Picrylhydrazyl) method.
The  result  of  phytochemical  screening  showed  that  ethanolic  extract  of African  leaves  contained  a  composition  of  secondary  metabolites  of  alkaloids, flavonoids,  tannins,  steroids/triterpenoids  and  saponins.  The  antioxidant  activity of the extract of n-hexane fraction was classified as very weak with an IC 50 value of 317.98 ppm.
Keywords: antioxidant, African leaves, Vernonia amygdalina Del., phytochemical
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(2), Oktober 2020, 250-257 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902

## PENDAHULUAN
Radikal bebas  adalah atom atau molekul  yang  mengandung  satu  atau lebih  elektron  tidak  berpasangan  dan
sangat reaktif sehingga ketika menjadi stabil cenderung akan mengambil elektron dari molekul lain yang akhirnya menimbulkan ketidaknormalan  molekul  lain  dan dapat menyebabkan kerusakan jaringan (Fessenden R.J., dan Fessenden, J.S., 1986). Radikal bebas dan  spesies  reaktif  dipercaya  secara luas berkontribusi
pada pengembangan  beberapa  penyakit dengan  menyebabkan  stres  oksidatif (Adesanoye  O.  A  and  Farombi  E.  O. 2014).  Oleh  karena  itu,  diperlukan senyawa  yang  dapat  meredam  efek negatif  dari  radikal  bebas  yaitu antioksidan
Antioksidan  adalah  senyawa yang diperlukan tubuh untuk menetralisir dan mencegah kerusakan yang  ditimbulkan  oleh  radikal  bebas dengan menghambat terjadinya reaksi berantai  dari  pembentukan  radikal bebas yang dapat menyebabkan stress oksidatif  (Setiawan  B,  Suhartono, 2005). Senyawa fenolik, yang banyak didistribusikan  di  tanaman,  dianggap
memainkan  peran  penting  sebagai komponen  antioksidan  untuk  diet pencegahan kerusakan oksidatif dalam  sistem  kehidupan  (Fessenden R.J., dan Fessenden, J.S., 1986).
Salah  satu  tanaman  obat  yang digunakan sebagai antioksidan adalah daun  afrika. Vernonia  amygdalina Del.  (Astereacea)  adalah  semak  atau pohon  kecil  antara  1  dan  5  m tingginya  tumbuh  di  seluruh  Afrika tropis.  Tanaman  umumnya  dikenal sebagai  daun  pahit  karena  kepahitan daunnya  dibudidayakan  dengan  baik dan  merupakan  pasar  umum  barang dagangan  di  beberapa  negara  Afrika seperti  Nigeria,  Kamerun,  Ethiopia, dan Zimbabwe. Semua bagian tanaman  telah  ditemukan  secara farmakologis berguna (Fessenden R.J.,  dan  Fessenden,  J.S.,  1986).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  ada  tidaknya  aktivitas antioksidan  pada  daun  afrika  ektsrak etanol  fraksi  n-heksan  ( Vernonia amygdalina Del.).

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan
Alat-alat
gelas, spektrofotometer  UV-Vis,  corong
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(2), Oktober 2020, 250-257 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
pisah, kertas saring, rotary evaporator dan micro  pipet ,  amil alkohol,  asam  asetat  anhidrat,  asam klorida  2N,  aquadest,  besi  (III) klorida  1%,  daun  putat,  DMSO, etanol  70%,  n-heksan,  kertas  saring, kloroform,  larutan  DPPH,  n-butanol, pereaksi bouchardat, pereaksi dragendrof,    pereaksi  meyer,  serbuk magnesium, vitamin C Pengambilan  Bahan  Baku  dan Pembuatan Simplisia
Sampel  pada  penelitian  ini
adalah daun afrika ( Vernonia
Amygdalina Del.)  yang  diperoleh  di Samarinda,  Kalimantan  Timur.  Daun afrika  yang  sudah  bersih  kemudian dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan selama 7 hari. Kemudian di sortasi  kering  untuk  memisahkan kotoran-kotoran  atau  bahan-bahan lainya.  Daun  yang  telah  kering  , dibuat  serbuk  menggunakan  blender lalu  diayak  menggunakan  ayakan mesh  60  kemudian  di  simpan  dalam wadah.  Diperoleh  750  g  serbuk  daun afrika.
Skrining Fitokimia
Uji fitokimia
dilakukan berdasarkan  Marjoni,  2016.  Dimana senyawa  yang  diskrining  adalah
alkaloid,  flavonoid,  tanin,  steroid/ triterpenoid dan saponin.

## Uji senyawa alkaloid
Sebanyak  0,5  gram  serbuk simplisia  ditimbang,  ditambahkan  1 ml  asam  klorida  2N  dan  9  ml  air suling, dipanaskan diatas penangas air selama  2  menit,  dinginkan  kemudian disaring, hasil filtrat digunakan untuk pengujian berikut :
a. Pereaksi meyer
Sebanyak 3 tetes filtrat, ditambahkan  2  tetes  pereaksi meyer, amati perubahan menghasilkan endapan putih/kuning. b. Pereaksi Bounchardat
Sebanyak 3
tetes filtrat,
ditambahkan  2  tetes  pereaksi bounchardat,  amati  perubahan menghasilkan endapan coklat hitam.
c. Pereaksi dragendrof
Sebanyak
3 tetes filtrat, ditambahkan  2  tetes  pereaksi dragendrof, amati perubahan menghasilkan endapan merah bata Uji senyawa flavonoid
Ditimbang  sebanyak  10  gram
serbuk
simplisia kemudian
ditambahkan  100  mL  air  panas
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(2), Oktober 2020, 250-257 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
didihkan  selama  kurang  lebih  5 menit, lalu disaring. Filtrat yang telah diperoleh sebanyak 5 ml ditambahkan 0,1 gram serbuk Mg, 1 ml HCl pekat dan  2  ml  amil  alkohol,  di  kocok  dan dibiarkan  memisah.  Jika  terbentuk warna  merah,  kuning,  jingga,  pada lapisan  amil  alkohol  maka  ekstrak tersebut posotif mengandung senyawa flavonoid.

## Uji senyawa tanin
Sebanyak  0,5  gram  sampel diekstrak menggunakan 10 ml aquades.  Disaring  hasil  ekstraksi kemudian  filtrat  diencerkan  dengan aquades  sampai  tidak  berwarna. Kemudian  diambil  sebanyak  2  ml, lalu  tambahkan  1-2  tetes  besi  III klorida 1%. Jika terbentuk warna biru atau  hijau  kehitaman  menunjukkan bahwa  ekstrak  positif  mengandung senyawa tanin.
Uji senyawa steroid / triterpenoid
Sebanyak 1 gram sampel dengan  20  ml  n-heksan  dimaserasi selama  2  jam,  disaring.  Filtrat diuapkan diatas  penangas  air,  sisanya ditambahkan  2  tetes  asam  asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat. Terbentuk  warna  ungu  atau  merah kemudian berubah menjadi hijau biru
menandakan positif mengandung senyawa steroid/terpenoid.

## Uji senyawa saponin
Sebanyak  0,5  gram  sampel dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi tambahkan  10  ml  air  suling  panas, dinginkan  lalu  dikocok  kuat-kuat selama  10  detik,  jika  terbentuk  buih atau  busa  tidak  kurang  dari  10  menit setinggi 1-10 cm, pada penambahan 1 tetes HCl 2N,  buih tidak hilang maka positif mengandung  senyawa saponin
Perhitungan Uji Aktivitas Antioksidan Uji antikosidan dilakukan menggunakan  metode  Wang et  al , 2017. Sebanyak 1 ml sampel fraksi n- heksan  dengan  berbagai  konsentrasi (50  ppm,  100  ppm,  200  ppm,  300 ppm dan 400 ppm) ditambahkan 1 ml DPPH  0,1  mM  dalam  etanol  dan dibiarkan  selama  30  menit  dalam ruang  gelap  pada  suhu  kamar. Panjang  gelombang  yang  diperoleh adalah 519 nm. Vitamin C digunakan sebagai  kontrol  positif.  Persentase antioksidan  terhadap  radikal  bebas dihitung menggunakan rumus berikut:
% Aktivitas antioksidan = [1 – (A 1 -A 2 ) / A 0 ] x 100 % Dimana A 0 adalah absorbansi kontrol
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(2), Oktober 2020, 250-257 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
negatif (tanpa ekstrak) dan A1 adalah absorbansi dengan adanya ekstrak, A 2 adalah absorbansi tanpa DPPH.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Skrining Fitokomia
Skrining fitokimia ekstrak
etanol daun Afrika ( Vernonia amygdalina Del.)  bertujuan  untuk
memastikan adanya metabolit sekunder pada sampel sehingga
mempermudah  pengujian  aktivitas antioksidan.  Hasil  skrining  dapat
dilihat pada Tabel 1.
Hasil
skrining fitokimia menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol daun  afrika  ( Vernonia  amygdalina Del.)  positif  mengandung  alkaloid, flavanoid,  tanin,  saponin  dan  steroid atau  triterpenoid.  Menurut  Hirata, et al (2000)  metabolit  sekunder  yang menunjukkan  hasil  positif  pada  uji skrining fitokimia diduga mendukung aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak daun afrika tersebut. Senyawa senyawa tersebut yang dapat memiliki potensi  sebagai  antioksidan  alami (Hirata T, et al , 2000).
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak  Etanol Daun Afrika
No Senyawa Hasil 1 Alkaloid + 2 Flavonoid + 3 Tanin + 4 Steroid / triterpenoid + 5 Saponin + Keterangan:  (+) = Terdapat senyawa kimia (-) = Tidak terdapat senyawa kimia Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH Pengujian  aktivitas  antioksidan dengan DPPH bertujuan untuk mengetahui kemampuan ekstrak etanol  fraksi  daun  afrika  dalam menangkap  senyawa  radikal  atau kemampuan sebagai senyawa antioksidan.  Adapun  prinsip  metode ini  yaitu  DPPH  akan  tereduksi  oleh
proses  donasi  hidrogen  atau  elektron sehingga  warna  akan  berubah  dari violet  ke  kuning  dengan  perubahan intensitas  warna  yang  sebanding dengan  jumlah  donasi  elektron  yang diikuti  dengan  absorbansi  DPPH (Dris  R  and  Jain  S.  M,  2004). Kemampuan  ekstrak  etanol  fraksi  n- heksan  daun  afrika  dan  vitamin  C sebagai pembanding untuk
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(2), Oktober 2020, 250-257 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
menghambat dan meredamkan radikal bebas dapat dilihat pada tabel 2.
Hasil  penelitian  pada  tabel  2 menunjukkan bahwa
semakin
meningkatnya  konsentrasi sampel ekstrak  fraksi  n-heksan  daun  afrika ataupun  vitamin  C  (kontrol  positif) yang digunakan diikuti dengan semakin  meningkat  juga  aktivitas antioksidannya. Hal tersebut dikarenakan  pada  konsentrasi  yang tinggi, kemampuan antioksidan untuk menangkap  radikal  bebas  semakin besar.
Perhitungan IC 50 digunakan untuk  mengetahui  seberapa  besar
aktivitas antioksidan ekstrak fraksi  n- heksan  daun  afrika.  Konsentrasi senyawa antioksidan yang menyebabkan hilangnya 50%
aktivitas  DPPH  disebut  sebagai  IC 50 . Nilai IC 50 ditentukan dengan menggunakan persamaan regresi
linier yang diperoleh. Adapun persamaan regresi linier yang diperoleh  pada  ekstrak  fraksi  n- heksan daun afrika adalah y = 0,128x +  2,387  dengan  nilai  koefisien  relasi (r)  =  0,984  sedangkan  untuk  vitamin C  adalah  y  =  4,177x  +  0,874  dengan nilai  koefisien  relasi  (r)  =  0,986.
Tabel 2. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Fraksi Heksan Daun Afrika dan Vitamin C Sampel Konsentrasi (ppm) Aktivitas antioksidan  (%) IC 50 (ppm) Ekstrak fraksi n-heksan 50 9,71 371,98 100 12,24 200 30,14 300 43,13 400 52,03 Vitamin C (kontrol positif) 2 7,56 11,76 4 16,51 6 24,24 8 30,07 10 42,55 Nilai IC 50 pada ekstrak fraksi n- heksan  daun  afrika  adalah  sebesar 371,98  ppm  sedangkan  vitamin  C adalah sebesar 11,75
ppm.
Berdasarkan Molyenux, 2004,
semakin  kecil  nilai  IC 50 maka semakin  besar  aktivitas    antioksidan. Dari  hasil  penelitian  diatas  aktivitas
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(2), Oktober 2020, 250-257 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
antioksidan  ekstrak  fraksi  n-  heksan daun afrika termasuk golongan sangat lemah karena nilai IC 50 lebih dari 200 ppm  sedangkan  vitamin  C  termasuk golongan sangat kuat (IC 50 < 50 ppm) (Molyneux P, 2004).
Hal  ini  terjadi  karena  metabolit sekunder  mudah  larut  dengan  pelarut yang  bersifat  polar  seperti  etanol sehingga  dapat  menarik  metabolit sekunder  lebih  banyak  dibanding pelarut yang bersifat non polar seperti n-heksan (Harborne J.B., 1987).

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  diperoleh  ekstrak  etanol daun  afrika  ( Vernonia  amygdalina Del.) mengandung senyawa metabolit sekunder golongan alkaloid, flavonoid,  tanin,  steroid/  triterpenoid dan  saponin.  Aktivitas  antioksidan ekstrak  fraksi  n-heksan  tergolong sangat lemah dengan nilai IC 50 adalah 371,98 ppm).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Sekolah Tinggi  Ilmu  Kesehatan  Samarinda yang telah membantu dalam pendanaan lewat hibah Dosen Internal STIKSAM.

## DAFTAR PUSTAKA
Adesanoye  O.  A  and  Farombi  E.  O.
2014,  In  Vitro  Antioxidant Properties  of  Methanolic  Leaf Extract of Vernonia Amygdalina Del, Niger J
Physiol  Sci.,  Volume  29,  No  2,
Halaman 091-101.
Can-Ake,  R.,  Erosa-Rejon,  G.,  May- Pat,  F.,  Pena-Rodriguez  LM., and  Peraza-Sanchez  SR,  2004, Bioactive  terpenoids  from  roots and leaves of Jatropha gaumeri, Rev  Soc  Quim  Mex,  Volume 48, No 1, Halaman 11-14.
Dris  R  and  Jain  S.  M,  2004, Production Practice and Quality Assessment  of  Food  Crops  : Quality Handling and Evolution,  Kluwer  Academic Publisher,  New  York,  Halaman
58-60.
Fessenden  R.J.,  dan  Fessenden,  J.S., 1986,  Kimia  organik  Edisi  ke tiga” , Jilid I, Erlangga, Jakarta.
Harborne J.B., 1987, Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan.  Terbitan  Kedua. Penerbit ITB, Bandung. Hirata  T.,  Tanaka  M.,  Ooike  M., Tsunomura  T.,  and  Sakaguchi M,  2000,  Antioxidant  activities of  phycocyanobilin  prepared from Spirulina platensis,
Journal  of  Applied  Phycology. Volume 12, Halaman 435- 439.
Marjoni R., 2016, Dasar-Dasar Fitokimia,  Terbitan  pertama. TIM, Jakarta, Halaman 17-41. Molyneux  P,  2004,  The  use  of  the stable free radical
Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 5(2), Oktober 2020, 250-257 p-ISSN: 2502-647X; e-ISSN: 2503-1902
diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH) for estimating antioxidant activity,  SJST.  Volume  26,  No
2, Halaman 211-219.
Setiawan  B,  Suhartono,  2005,  Stres oksidatif  dan  peran  antioksidan pada Diabetes mellitus, Majalah Kedokteran  Indonesia,  Volume 55, No 2. Wang X., Ding, G., Liu B., and Wang Q, 2017, Analysis of flavonoids and    antioxidants    in    extracts of    ferns    from    Tianmu Mountain  in  Zhejiang  Province (China), Ind Crop Prod, Volume 97, Halaman 137-145.