Induksi Kalus Dari Eksplan Daun Tanaman Kawista (Limonia acidissima L.) Secara In Vitro Pada Media MS Dengan Penambahan Beberapa Konsentrasi Air Kelapa (Cocos nucifera L.)
Callus Induction from Kawista’s Leaf (Limonia acidissima L.) Explant in vitro in the Medium of MS with Various Concentrations of Coconut Water (Cocos nucifera L.)
Eka Saptiani 1*), Hayatul Rahmi 1) , dan Muharam 1)
1) Program Studi Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Singaperbangsa Karawang Jl. HS Ronggowaluyo, Teluk Jambe Timur, Kab. Karawang 41361 *Penulis untuk korespondensi: saptianieka@gmail.com
Diterima 19 Oktober 2020 / Disetujui 26 Oktober 2020

## ABSTRACT
This research was conducted to find out the best effect from the consentration of coconut water to growth of kawista leaf explant (Limonia acidissima L.) with tissue culture methods.  Research done in the laboratory of faculty of Agriculture of Singaperbangsa University. The method of research used experimental method, using a single Completely Randomized Design (CRD). Consisting of 12 treatments of coconut water, namely A control 0%, B 10%, C 20%, D 30%, E 40%, F 50%, G 60%, H 70%, I 80%, J 90%, K 100%, and L 10 ppm NAA+0,1 ppm BAP, each treatment with 3 replications. The results showed significant test done DMRT (Duncan Multiple Range Test) standard of 5%. The results showed that administration of coconut water significantly affected the percentage of callus growth, callus emergence and callus weight. The best treatment was with a treatment I (80%) with 100% growth percentage, and give callus weight of 1,22 gram. Treatment D (30%) give fastest callus growth time is 9 hsi.
Keywords: coconut water, leaf’s explant, callus induction, kawista, consentrations, tissue culture

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh konsentrasi air kelapa terhadap pertumbuhan eksplan daun  tanaman  kawista  (Limonia  acidissima  L.)  dengan  metode  kultur  jaringan.  Penelitian  dilakukan  di Laboratorium  Fakultas  Pertanian  Universitas  Singaperbangsa  Karawang.  Metode  penelitian  yang  digunakan yaitu metode eksperimen dengan menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktor tunggal. Yang terdiri dari 12 perlakuan air kelapa yaitu A kontrol 0%, B 10%, C 20%, D 30%, E 40%, F 50%, G 60%, H 70%, I 80%, J 90%, K 100%, dan  L 10 ppm NAA+0,1 ppm BAP, masing-masing perlakuan diulang sebanyak 3 kali sehingga didapat 36 satuan percobaan. Hasil yang menunjukkan signifikasi dilakukan uji DMRT (Duncan Multiple Range Test) taraf 5%. Hasil penelitian menujukkan bahwa perlakuan air kelapa berpengaruh nyata terhadap persentase tumbuh kalus, waktu tumbuh dan bobot kalus. Perlakuan terbaik adalah pada perlakuan I 80% dengan persentase tumbuh  100%,  dan  memberikan  bobot  kalus  terbesar  1,22  gram.  Pada  perlakuan  D  30%  memberikan  waktu tumbuh tercepat 9 hsi.
Keywords: air kelapa, eksplan daun, induksi kalus, kawista, konsentrasi, kultur jaringan

## PENDAHULUAN
Kawista ( Limonia acidissima L.) merupakan tanaman  buah  tropis  yang  termasuk  dalam  suku jejerukan  ( Rutaceae )  yang  memiliki  aroma  aroma khas  berbentuk  bulat  dengan  kulit  tebal  dan  keras (Apriyanto,2004).  Tanaman  ini  tumbuh  alami  di daerah  kering  di  India,  Sri  Langka,  Mynmar, Indocina,  Malaysia,  dan  Indonesia.    Di  Indonesia, tanaman  ini  tersebar  di  daerah  Rembang,  Pati, Tuban, karawang, Situbondo, Jembrana, Bima, dan Aceh (Nurdiana et al ., 2016).
Kawista memiliki prospek yang sangat besar untuk  dikembangkan,  selain  dapat  diolah  menjadi makanan,  seperti  dodol,  jus  dan  sirup,  tanaman kawista bisa dijadikan sebagai bahan obat. Menurut Dewi (2013) buah kawista mengandung flavonoid, glikosida,  saponin,  tanin  kumarin,  dan  turunan tiramin  yang  dapat  digunakan  seperti  menurunkan panas,  sakit  perut.  Duri  dan  kulit  kayunya digunakan  untuk  mengobati  menstruasi  yang berlebihan, ganguan hati, gigitan dan sengatan serta mabuk  laut.  Kayunya  dapat  dimanfaatkan  sebagai bahan  bangunan  rumah  dan  peralatan  pertanian.
Getah  yang  berasal  dari  kulit  batangnya  dapat digunakan sebagai pengganti gum arab.
Kultur  jaringan  tumbuhan  adalah  suatu teknik  menumbuhkan  sel,  jaringan,  ataupun  irisan organ  tanaman  di  laboratorium  pada  suatu  media buatan  yang  mengandung  nutrisi  aseptik  ( steril ) untuk  menjadi  tanaman  utuh.  Kultur  jaringan tanaman didasari oleh teori totipotensi sel ( Cellular totipotency )  yang  menyebutkan  bahwa  setiap  sel tanaman  memiliki  kapasitas  untuk  beregenerasi membentuk  tanaman  secara  utuh  serta  tanaman yang  dihasilkan  bersifat  identik  dengan  induknya. Keunggulan teknik jaringan yaitu penyediaan bibit dapat diprogram sesuai kebutuhan dan jumlah, sifat unggul  tertus  tetap  dimiliki,  bibit  yang  dihasilkan lebih  bebas  hama  dan  penyakit  (perbanyakan aseptik),  memiliki  keseragaman  bahan  tanaman yang bagus (Dwiyani, 2015).
Salah  satu  faktor  penentu  keberhasilan kultur  jaringan  tumbuhan  adalah  pengaruh komposisi  media.  Pada  penelitian  ini  peneliti menggunakan  penambahan  air  kelapa  sebagai alternative  pengganti  zat  pengatur  tumbuh  pada media.  Menurut    Yunita  (2011),  air  kelapa merupakan  senyawa  organik  yang  mengandung banyak  nutrisi  seperti  1,3 diphenilurea,  zeatin, zeatin  gluoksida,  zeatin  ribosida ,  kadar  K  dan  Cl yang  tinggi,  sukrosa,  fruktosa,  glukosa,  protein, karbohidrat, mineral, vitamin, sedikit lemak, Ca dan P. Zeatin,  zeatin  gluoksida,  dan  zeatin  ribosida merupakan  ZPT  yang  dapat  meningkatkan pembelahan  dan  perpanjangan  sel.  Asam  amino, gula  dan  vitamin  digunakan  untuk  meningkatkan metabolisme  sel  yang  berperan  dalam  sebagai energi,  enzim  dan  co-faktor. Pemberian  air  kelapa dengan konsentrasi 45% mampu memberikan hasil kalus  terbaik  pada  inisiasi  ekspan  daun  tanaman kawista  (Bahtiar,  2019),  sedangkan  berdasarkan penelitian  Julianita  (2019)  pemberian  air  kelapa konsentrasi  15%  mampu  memberikan  hasil pertumbuhan  planlet  terbaik  untuk  eksplan  biji tanaman  kawista.  Berbekal  penelitian  tersebut peneliti  melakukan  penelitian  lanjutan  untuk mengetahui  pengaruh  konsentrasi  air  kelapa terhadap pertumbuhan eksplan daun kawista secara in vitro.

## BAHAN DAN METODE
Percobaan ini dilaksanakan di Laboratorium
Bioteknologi Fakultas Pertanian Universitas Singaperbangsa Karawang. Waktu percobaan pada bulan Mei sampai Juli 2020. Bahan yang digunakan selama penelitian adalah eksplan daun kawista hasil in  vitro ,  media  MS  ( Murashige  and  Skoog ),  agar- agar, aquades, air kelapa, sukrosa, spirtus, alkohol 70%, NaOH 1 N, HCl 1 N dan alumunium foil. Alat yang digunakan selama penelitian adalah autoclave, laminar  air  flow, timbangan  analitik,  cawan  petri, kompor, panci, scapel, blade , bunsen, pinset, gelas
ukur,  labu  ukur,  spayer,  sarung  tangan  karet, masker, suntikan, karet gelang, tissue , plastik wrap , botol kultur, kertas sampul, kertas label, korek api, alat tulis, PH meter, spatula dan kamera.
Metode  penelitian  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah metode eksperimen Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  faktor  tunggal  yang  terdiri dari  12  perlakuan  yaitu  A  kontrol  0%,  B  10%,  C 20%, D 30%, E 40%, F 50%, G 60%, H 70%, I 80%, J  90%,  K  100%,  L  10 ppm NAA+0,1 ppm BAP yang  masing-masing  perlakuan  dengan  3  ulangan sehingga  didapat  36  unit  percobaan.  Pengamatan peubah  yang  diamati  dalam  penelitian  ini  adalah persentase tumbuh kalus, waktu tumbuh kalus, dan bobot  kalus.  Data  hasil  pengamatan  dianalisis dengan  analisis  ragam  uji  F  5%,  apabila  terdapat beda  nyata  maka  dilanjutkan  dengan  DMRT ( Duncan’s Multiple Range Test ) taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Persentase Tumbuh Kalus
Persentase  tumbuh  kalus  merupakan  salah satu  parameter  pengamatan  yang  menentukan keberhasilan pertumbuhan kalus. Penentuan persentase tumbuh kalus tanaman kawista diperoleh dengan  cara  menghitung  eksplan  kawista  yang berkalus  dibagi  dengan  banyaknya  eksplan  yang ditanam, kemudian dikalikan 100%. Hasil persentase  tumbuh  kalus  pada  eksplan  daun tanaman  kawista  akibat  penambahan  air  kelapa terdapat pada Tabel 1;
Tabel  1.  Rata-rata  persentase  tumbuh kalus  akibat pemberian air kelapa terhadap eksplan daun tanaman kawista (%)
Kode Perlakuan (%) Persentase Berkalus (%) A 0 (Kontrol) 66.67 ab B 10 100 a C 20 100 a D 30 33.33 ab E 40 66.67 ab F 50 66.67 ab G 60 100 a H 70 100 a I 80 100 a J 90 0 b K 100 33.33 ab L 10 ppm NAA + 0.1 ppm BAP ( ZPT Sintesis) 100 a KK (%) 7.44%
Keterangan:  Angka  yang  diikuti  huruf  yang  sama pada  kolom  yang  sama  tidak  berbeda nyata pada taraf uji DMRT 5%
Berdasarkan  pada  Tabel  1,  pemberian  air kelapa  menunjukkan  adanya  pengaruh  nyata
terhadap  persentase  tumbuh  kalus  pada  eksplan daun tanaman kawista secara in vitro. Perlakuan B, C, G, H, I dan L memberikan pengaruh yang paling tinggi,  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  J,  tetapi tidak berbeda nyata pada perlakuan A, D, E, F, dan K.  Hal  ini  sejalan  dengan  pernyataan  Hendaryono dan  Wijayani  (1994)  menyebutkan  bahwa  air kelapa mangandung diphenil urea yang mempunyai aktifitas seperti sitokinin sintetik sehingga mampu mendorong induksi kalus pada penelitian ini.
Pada  perlakuan  dengan  penambahan  air kelapa  konsentrasi  90%  (J)  menunjukkan  tidak terjadi  pertumbuhan  kalus,  hal  ini  dikarenakan eksplan  tersebut  mengalami browning atau pencoklatan  sehingga  pertumbuhan  kalus  menjadi terhambat. Browning adalah  proses  terjadinya perubahan  warna  menjadi  coklat  dalam  kultur jaringan karena akumulasi polifenol oksidase yang dilepas  atau  disintesis  jaringan  dalam  kondisi teroksidasi ketika dilukai (Hutami, 2008). Tanaman kawista  merupakan  tanaman  berkayu  dan  tahunan sehingga diduga penyebab itulah yang menyebabkan tanaman tersebut mengalami browning .  Berdasarkan  George  dan  Sherrington (1984) menyebutkan bahwa pencoklatan umumnya terjadi pada spesies tanaman berkayu, terutama bila eksplan  diambil  dari  pohon  dewasa  hal  ini dikarenakan  penghambatan  pertumbuhan  biasanya sangat kuat pada beberapa spesies yang umumnya mengandung  senyawa  tanin  atau  hidroksifenol dengan  konsentrasi  tinggi.  Pencoklatan  pada jaringan  muda  lebih  sedikit  dibandingkan  dengan jaringan tua.
Faktor lain yang mendukung keberhasilan persentase tumbuh kalus pada penelitian ini adalah karena  penggunaan  media  MS  yang  mengandung komposisi  seperti  vitamin,  unsur  hara  mikro  dan makro, serta besi dan sukrosa sehingga cukup untuk memicu  pertumbuhan  kalus.  Hal  ini  karena pertumbuhan  organ  vegetatif  dipengaruhi  oleh aktivitas  auksin  dan  nitrogen  dalam  media  dan sumber nitrogen organik paling tinggi terdapat pada media  MS  dibandingkan  media  lainnya  (Ardiana, 2009).

## Waktu Tumbuh Kalus
Munculnya kalus pada eksplan merupakan salah  satu  indikator  adanya  pertumbuhan  dalam kultur in vitro . Kalus merupakan kumpulan materi atau zat-zat amorf terbentuk pada eksplan yang sel- selnya  membelah  terus-menerus.  Khaniyah et  al.,
(2012)  menyatakan  bahwa  munculnya  kalus ditandai  dengan  pembengkakan  eksplan  disertai munculnya  bercak-bercak  putih.  Waktu  tumbuh kalus diamati secara visual pada eksplan setiap hari, kemuadian  data  hasil  dilakukan  analisis  dengan analisis  varian  dan  hasilnya  menunjukkan  nilai koefisien  keragaman  sebesar  15,06%.  Untuk mengetahui  perbedaan  antar  perlakuan  maka dilakukan uji lanjut menggunakan uji DMRT taraf
5%.  Berikut  hasil  waktu  tumbuh  kalus  akibat pemberian  air  kelapa  terhadap  eksplan  daun tanaman kawista pada Tabel 2;
Tabel 2. Rata-rata waktu tumbuh kalus (hsi) akibat pemberian konsentrasi air kelapa terhadap eksplan daun tanaman kawista Kode Perlakuan (%) Waktu Tumbuh Kalus (hsi) A 0 (Kontrol) 50 a B 10 37 ab C 20 19.33 abc D 30 9 dc E 40 11.50 bcd F 50 12.50 abcd G 60 12 abcd H 70 18.67 abc I 80 18.67 abc J 90 0 c K 100 29 bcd L 10 ppm NAA + 0.1 ppm BAP ( ZPT Sintesis) 5.67 bcd KK (%) 15,06%
Keterangan: Angka yang menunjukkan angka yang sama  pada  kolom  yang  sama  tidak berbeda nyata pada taraf uji DMRT 5%
Hasil  uji  lanjut  DMRT  5%  pada  Tabel  2, menunjukkan  hasil  waktu  tumbuh  kalus  berbeda nyata terhadap penambahan air kelapa untuk media tumbuh  eksplan  daun  tanaman  kawista  secara  in vitro. Perlakuan A berbeda nyata dengan perlakuan J, D, E, K, dan L, tetapi tidak berbeda nyata dengan perlakuan B, C, F, G, H dan I. Pembentukan kalus pada  eksplan  daun  tanaman  kawista  tercepat diperoleh  pada  perlakuan  L  yaitu  5,67  hsi. Perlakuan ini merupakan perlakuan ZPT sintesis 10 ppm  NAA+0,1  ppm  BAP  sebagai  variabel pembanding  untuk  penelitian  ini.  Sedangkan perlakuan  pemberian  air  kelapa  yang  memperoleh hasil waktu tumbuh kalus tercepat yaitu perlakuan D  (konsentrasi  air  kelapa  30%)  dengan  rata-rata waktu  tumbuh  kalus  9  hsi.  Semakin  tinggi konsentrasi air kelapa yang diberikan menunjukkan semakin  lambat  pertumbuhannya  namun  jika konsentrasi  air  kelapa  kurang  dari  30%  juga menunjukkan  semakin  lambat  juga  pertumbuhan kalus  sehingga  diperlukan  konsentrasi  yang seimbang  untuk  memicu  pertumbuhan  kalus  pada eksplan daun tanaman kawista.
Menurut Bey dan Sutisna (2006) air kelapa merupakan  endosperm  dalam  bentuk  cair  yang mengandung unsur hara dan zat pengatur tumbuh. unsur  hara  dan  ZPT  yang  terkandung  didalam  air kelapa  terdiri  dari  ZPT  golongan  sitokinin  seperti kinetin  273,  63  mg/l  dan  zeatin  290,47  mg/l  serta ZPT  auksin  198,55  mg/l,  sedangkan  unsur  hara
yang terkandung yaitu N 43 mg/l, P 13,17 mg/l, K 14,11 mg/l, Fe 0,2 mg/l, Ca 24,67 mg/l, dan Zn 1,05 mg/l.  Selain  itu,  air  kelapa  mengandung  sukrosa 4,89  mg/l  sebagai  sumber  karbon  pertumbuhan tanaman  in  vitro,  sehingga  bermanfaat  untuk menginduksi  kalus  serta  menginduksi  proses morfogenesis (Kristina, 2012).
Hormon  sitokinin  berperan  penting  dalam merangsang  proses  pembelahan  sel  tumbuhan sehingga mempercepat pertumbuhan tunas maupun kalus  (Annisa,  2018).  Unsur hara  nitrogen  beserta unsur  hara  lainnya  dalam  air  kelapa  berperan penting untuk pertumbuhan eksplan dan diferensiasi  jaringan  protokorm  membentuk  tunas (Setiawati,  2010).  Ditambahkan  oleh  Sari et  al.,
(2011)  bahwa  air  kelapa  mengandung  vitamin, mineral, asam amino, asam nukleat, fosfor, auksin dan  giberilin  yang  berfungsi  sebagai  stimulator proliferasi  jaringan,  memperlancar  metabolisme dan respirasi.

## Kecepatan Tumbuh Kalus
Kecepatan  tumbuh  kalus  merupakan  data kecepatan  pertumbuhan  kalus  yang  diperoleh  dari selisih  diameter  kalus  dibagi  dengan  waktu pengamatan  saat  diameter  kalus  pada  tiap pengamatan.  Hasil  kecepatan  tumbuh  kalus  pada eksplan daun tanaman kawista akibat penambahan beberapa konsentrasi air kelapa terdapat pada Tabel 3;
Tabel 3 Rata-rata kecepatan tumbuh kalus (cm/msi) akibat  pemberian  air  kelapa  pada  eksplan daun tanaman kawista Kode Perlakuan (%) Kecepatan Tumbuh Kalus (cm/msi) A 0 (Kontrol) 0.004 bc B 10 0.015 abc C 20 0.017 abc D 30 0.007 bc E 40 0.014 abc F 50 0.013 abc G 60 0.019 ab H 70 0.016 abc I 80 0.020 ab J 90 0 c K 100 0.006 bc L 10 ppm NAA + 0.1 ppm BAP (ZPT Sintesis) 0.029 a KK (%) 3.77% Keterangan:  Angka  yang  diikuti  huruf  yang  sama pada  kolom  yang  sama  tidak  berbeda nyata pada taraf uji DMRT 5%
Berdasarkan data Tabel 3 diatas, menunjukkan  terdapat  pengaruh  nyata  antara perlakuan  L  dengan  A,  D,  J  dan  K,  tetapi  tidak berbeda nyata dengan perlakuan B, C, E, F, G, H, dan  I.  Perlakuan  tertinggi  terdapat  pada perlakuan dengan menggunakan zat sintesis 10 ppm NAA+0,1 ppm BAP sebagai pembanding dalam penelitian ini. Perlakuan pemberian air kelapa pada eksplan daun kawista yang mampu menyamai tingginya kecepatan tumbuh kalus dari perlakuan ZPT sintesis yaitu  pelakuan  I  dengan  penambahan  air  kelapa sebesar 80%.
Hal  ini  diduga  karena  kandungan  sitokinin yang  ada  pada  air  kelapa  memiliki  aktifitas  yang sama  dengan  sitokinin  sitokinin  sintetik  yang terkandung didalam BAP, sejalan dengan pernyataan  Wattimena et.al. (1988)  menyebutkan bahwa  difenilurea  yang  terkandung  dalam  air kelapa  memiliki  aktifitas  yang  sama  seperti sitokinin  sintetik  sehingga  mampu  merangsang pembentukan kalus dengan nilai yang tidak berbeda nyata  dengan  perlakuan  sitokinin  sintetik.  Air kelapa  pada  media  kultur  jaringan  memperbaiki pertumbuhan tunas, mendorong pertumbuhan kalus dan morfogenesis sehingga efektifitas pembelahan sel  semakin  tinggi  dan  pertumbuhan  serta perkembangan tanaman menjadi optimal (Tuhateru et.al ., 2012). Pertumbuhan  kalus  diawali  dari  bagian pinggir  eksplan  dan  dilanjutkan  pada  bagian  luka eksplan yang bersentuhan langsung dengan media. Kalus yang tumbuh memiliki tekstur yang hamper sama  (membulat  dan  keras).  Auksin  dan  sitokinin merupakan jenis hormone yang dapat menyebabkan pembengkakan pada eksplan. Pembengkakan yang terjadi  pada  eksplan  merupakan  suatu  proses pertumbuhan awal akibat penyerapan air dan nutrisi dari  media  yang  selanjutnya disertai  dengan  tahap amproliferasi  (perbanyakan  sel).  Proses  ini  sesuai dengan  pernyataan  Salisbury  dan  Ross  (1995), bahwa  sel  tumbuh  memiliki  kemampuan  untuk menyerap air dan unsur hara sehingga menyebabkan  terjadinya  pertambahan  ukuran  dan jumlah  sel  yang  pada  akhirnya  menyebabkan pembengkakan jaringan.
Pada penelitian ini kecepatan tumbuh kalus pada eksplan daun tanaman kawista beragam yang diduga  karena  kemampuan  dalam  menyerap  dan melakukan  pembelahan  sel  yang  berbeda  pada setiap eksplan. Hal ini didukung dengan pernyataan Lakitan  (1996)  dalam  Kartika et.al (2013)  yang menyatakan bahwa setiap sel mempunyai kepekaan yang  berbeda-beda  terhadap  ZPT  yang  diberikan sehingga  mempengaruhi  waktu  pembelahan  diri menjadi tidak sama karena siklus sel yang berbeda- beda.
Gambar  1.  Hasil  kalus  akibat  penambahan  air kelapa a) perlakuan ZPT sintesis (L), b) perlakuan konsentrasi 80% air kelapa (I),
c) perlakuan konsentrasi 30% (D)

## KESIMPULAN
Dari hasil penelitian yang telah dilakukan dapat  disimpulkan  bahwa  terdapat  pengaruh  nyata pemberian  air  kelapa  terhadap  persentase  tumbuh kalus, waktu tumbuh kalus dan bobot kalus eksplan daun  tanaman  kawista  ( Limonia  acidissima L) secara  in  vitro.  Perlakuan  I  (  konsentrasi  80%  air kelapa)  memberikan  hasil  terbaik  pada  persentase tumbuh  kalus  dan  kecepatan  tumbuh  yaitu  100  % dan  0,020  cm/msi,  sedangkan  perlakuan  D (Konsentrasi  30%  air kelapa)  menunjukkan  waktu tumbuh kalus tercepat yaitu 9 hsi.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih  kepada  Hayatul  Rahmi, S.Si.,M.Si  Selaku  Dosen  Fakultas  Pertanian Universitas  Singaperbangsa  Karawang  yang  telah memberikan  dukungan  terhadap  penelitian  baik secara material maupun non-material.

## DAFTAR PUSTAKA
Annisa, T. 2018. Pengaruh Lama Perendaman Biji dan Konsentrasi BAP Terhadap
Perkecambahan  Biji  Jeruk  Manis  Berastagi Lokal  ( Citrus  nobilis )  Brastapu  secara In Vitro . Skripsi .  Fakultas  Pertanian:  Aceh Utara.
Apriyanto, T. 2004. Identifikasi Character Impact Odorants Buah Kawista ( Limonia acidissima L.). Jurnal  Teknologi  Industri Pangan , Vol: 17(1): 35-46.
Ardiana  DW.  2009.  Teknik  Pemberian  Benzyl Amino  Purin  untuk  Memacu  Pertumbuhan Kalus  dan  Tunas  pada  Kotiledon  Melon ( Cucumis melo L.). Buletin Teknik
Pertanian , Vol: 14(2): 50-53.
Bahtiar.  2019.  Respon  Eksplan  Daun  Tanaman
Kawista  ( Limonia  acidissima L.)  Akibat Pemberian Air Kelapa Terhadap Pertumbuhan Kalus pada Pembibitan Tahap
Awal  dengan  Teknik  Kultur  Jaringan.
Skripsi .  Agroteknologi  Fakultas  Pertanian UNSIKA: Karawang. Bey,  Y.  2006.  Pengaruh  Pemberian  Giberelin (GA3) dan Air Kelapa Terhadap Perkecambahan Biji Anggrek Bulan ( Phalaenopsis ambiliris L.) Secara In Vitro . Jurnal Biogenesis , Vol: 2(2): 41-46
Dewi,  R.  2013.  Bioaktivitas  Buah  Kawista ( Limonia acidissima L.) Bima dan
Penentuan  Sidik  Jarinya  Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis. Skripsi . Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Institut Pertanian Bogor: Bogor.
Dwiyani,  R.  2015. Kultur  Jaringan  Tanaman .
Pelawa Sari: Bali.
George,  E.  F.,  P.  D.  Sherrington.  1984.  Plant Propagation  by  Tissue  Culture  Handbook and  Directory  of  Commercial  Laboratories Exegetics Ltd: England.
Hendaryono,  D.  1994. Teknik  Kultur  jaringan Pengenalan  dan  Petunjuk  Perbanyakan Tanaman secara Vegetatif Modern .
Kanisius: Yogyakarta.
Hutami S. 2008. Ulasan Masalah Pencoklatan pada Kultur  Jaringan. Jurnal  Agribiogen ,  Vol: 4(2): 83-88.
Julianita, JW. 2019. Respon Pertumbuhan Eksplan Kawista  ( Limonia  acidissima L.)  Akibat Penambahan  Beberapa  Konsentrasi  Air Kelapa  ( Cocos  nucifera L.). Skripsi . Fakultas Pertanian UNSIKA: Karawang.
Kartika,  Lidya.,P.  Kinanto  Atmodjo  dan  L.M. Ekawati, P. 2013. Kecepatan Induksi Kalus dan Kandungan Eugenol Sirih Merah ( Piper crocatum
Ruiz) yang Diperlakukan menggunakan variasi Jenis dan Konsentrasi Auksin. Jurnal Litri , Vol: 13: 142-145
Khaniyah,  N.  2012.  Pertumbuhan  Kalus  Daun Dewa  ( Gynura  procumbens (Lour)  Merr.) dengan Kombinasi 2,4- Dichorophenoxyacetic  Acid dan  Kinetin secara In  Vitro. Jurnal  Biosaintifika ,  Vol: 4(2): 112-115
a b
c
Kristina,  N.  2012.  Pengaruh  Air  Kelapa  terhadap Multiplikasi  Tunas In  Vitro ,  Produksi
Rimpang  dan  Kandungan  Xanthorrhizol Temulawak Di Lapangan. Jurnal Littri , Vol: 18(3): 125-126.
Nurdiana,  dkk.  2016.  Variasi  Morfologi  dan
Pengelompokan Kawista ( Limonia acidissima L.) di Jawa dan Kepulauan Sunda Kecil. Jurnal  Floribunda Vol:  5(4):  144- 156.
Salisbury,  F.B.  dan  Ross,  C,  W.  1995. Fisiologi
Tumbuhan . ITB: Bandung
Sari,  Y.P.,H.  Manurung,  Aspiah.  2011.  Pengaruh Pemberian Air Kelapa terhadap Pertumbuhan  Anggrek  Kantong  Semar
( Paphiopedilum  supardii Braem  &  Loeb) pada  Media  Knudson  secara In  Vitro . Mulawarman  Scientifie ,  Vol:  10(2).  ISSN 1412-498X.
Setiawati,  T.,S.  Sanoesi.,  S.  Muliati.  2010.  Pupuk Daun  dan  Air  Kelapa  sebagai  Medium Alternatif  untuk  Induksi  Tunas  Anggrek Dendrobium Whom  Leng In  Vitro . Jurnal Biotika , Vol: 8(1): 4-54.
Tuhuteru,  S.,  M.I.  Hehanussa,  S.H.T.  Raharjo. 2012.  Pertumbuhan  dan  Perkembangan Anggrek Dendrobium anosmum pada Media Kultur In Vitro dengan Beberapa Konsentrasi  Air  Kelapa. Agrologia ,  Vol: 1(1): 1-12
Wattimena,  G.A.  1988.  Zat  Pengatur  Tumbuh
Tanaman.  Laboratorium  Kultur  Jaringan Tanaman PAU Bioteknologi IPB: Bogor
Yunita,  R.  2011.  Pengaruh  Pemberian  Urine  Sapi,
Air Kelapa, Rootone-F terhadap Pertumbuhan Stek Tanaman Markisa ( Passiflora  edulis  var.flavicarva ). Skripsi . Pertanian Universitas Andalas: Padang.