EFEKTIVITAS PERLINDUNGAN UDANG VANAME ( Litopenaeus vannamei ) TERHADAP INFEKSI WHITE SPOT SYNDROME VIRUS (WSSV) DENGAN SUPLEMENTASI NATRIUM ALGINAT Sargassum sp. DARI PERAIRAN LAMPUNG DAN KOMBINASI DENGAN VITAMIN C
THE EFFECTIVENESS OF PACIFIC WHITE SHRIMP (Litopenaeus vannamei) PROTECTION AGAINST WHITE SPOT SYNDROME VIRUS (WSSV) INFECTION BY SUPPLEMENTATION OF SODIUM ALGINATE OF Sargassum sp. FROM LAMPUNG WATERS AND COMBINATION WITH VITAMIN C
Muhammad Darmawan 1 , Agus Setyawan 1,2,3* , Ni Luh Gede Ratna Juliasih 1,4 , Hilma Putri Fidyandini 2
1 Magister Manajemen Wilayah Pesisir dan Laut, Universitas Lampung 2 Jurusan Perikanan dan Kelautan, Universitas Lampung 3 Pusat Penelitian Pesisir, Kelautan, dan Perikanan, Universitas Lampung 4 Jurusan Kimia, Universitas Lampung Jl. Prof. Dr. Ir. Sumantri Brojonegoro No.1, Bandar Lampung, 35145, Lampung, Indonesia Email: agus.setyawan@fp.unila.ac.id

## ABSTRAK
White  spot  syndrome  virus  (WSSV)  merupakan  salah  satu  penyakit  infeksi  virus  yang  dapat menyebabkan  tingginya  mortalitas  pada  budidaya  udang  vaname.  Natrium  alginat  terbukti  dapat merangsang  dan  meningkatkan  respon  imun  nonspesifik  pada  udang.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengevaluasi efektivitas pemberian natrium alginat Sargassum sp. dari perairan Lampung dan kombinasi dengan  vitamin  C  sebagai  perlindungan  terhadap  serangan  white  spot  syndrome  virus  (WSSV)  pada udang vaname ( Litopenaeus vannamei ). Udang (±19 g) dipelihara dalam 9 kontainer dengan kepadatan masing-masing  10  ekor/kontainer  dan  diberi  pakan  3%  dari  bobot  biomassa  setiap  hari.  Udang dikelompokkan menjadi tiga perlakuan dengan masing-masing 3 ulangan yaitu pakan tanpa suplementasi alginat sebagai kontrol, suplementasi pakan natrium alginat Sargassum sp. dengan dosis 1 g/kg pakan + vitamin C 0,2 g/kg pakan, dan suplementasi pakan natrium alginat Sargassum sp. dengan dosis 2 g/kg pakan.  Setelah  14  hari  diberi  perlakuan,  udang  diinjeksikan  filtrat white  spot  syndrome  virus dan phosphate  buffer  saline (PBS)  dengan  perbandingan  1:1  untuk  uji  tantang.  Parameter  yang  diamati meliputi  kelangsungan  hidup, relative  percent  survival (RPS), mean  time  to  death (MTD),  tingkah  laku dan gejala klinis udang, histologi hepatopankreas, identifikasi white spot syndrome virus dengan PCR, dan kualitas air. Hasil penelitian menunjukkan bahwa suplementasi natrium alginat Sargassum sp. melindungi udang terhadap white spot syndrome virus 14,80 jam lebih lama dalam kelangsungan hidup dibandingkan dengan  kelompok  kontrol.  Namun  suplementasi  natrium  alginat Sargassum sp.  dari  perairan  Lampung belum  mampu  melindungi  udang  terhadap white  spot  syndrome  virus setelah  72  jam  terinfeksi.  Perlu pengujian konsentrasi virus (LD50) sebelum uji tantang untuk menghindari konsentrasi virus yang terlalu tinggi saat uji tantang.
Kata kunci : Imunoproteksi, udang vaname, Sargassum sp., natrium alginat, white spot syndrome virus

## ABSTRACT
White  spot  syndrome  virus  (WSSV)  is  a  viral  infectious  disease  that  can  cause  high  mortality  in  Pacific white shrimp culture. Sodium alginate proven to stimulate and increase nonspecific immune response in shrimp. This study aims to evaluate the effectiveness of oral administration of sodium alginate Sargassum sp. from Lampung waters and in combination with vitamin C to protect Pacific white shrimp ( Litopenaeus vannamei ) against white spot syndrome virus (WSSV). The shrimp (±19 g) were reared in 9 containers with a density each of 10 shrimp/container and fed with shrimp feed at 3% of biomass daily. Shrimp were grouped into three treatments each with triplicate, namely feeding without alginate supplementation as a
control, supplementation with sodium alginate supplementation of Sargassum sp. with a dose of 1 g/kg of feed + 0.2 g/kg feed of vitamin C, and supplementation of sodium alginate Sargassum sp. at a dose of 2 g/kg of feed. After 14 days of treatment, shrimp were injected with  white spot syndrome virus filtrat in phosphate buffer saline (PBS) (1:1 v/v) for challenge assay. Several parameters were observed included survival  rate  (SR),  relative  percent  survival  (RPS),  mean  time  to  death  (MTD),  shrimp  behaviour  and clinical  symptoms,  hepatopancreatic  histology,  confirmation  of  white  spot  syndrome  virus  infection  by PCR,  and  water  quality.  The  results  showed  that  supplementation  of  sodium  alginate Sargassum sp. protected  shrimp  against  white  spot  syndrome  virus  14.80  hours  longer  in  survival  compared  to  the control group. However the supplementation of sodium alginate Sargassum sp. from Lampung waters not yet to protect shrimp against white spot syndrome virus after 72 hours infection. There is needed the LD 50 dose of white spot syndrome virus copy number to ensure the appropriate dose in challenge assay.
Keywords : Immunoprotection, pacific white shrimp, Sargassum sp., sodium alginate, white spot syndrome virus

## PENDAHULUAN
Udang  vaname  merupakan  salah  satu produk  ekspor  perikanan  yang  memiliki banyak  peminat  dan  juga  permintaan. Menurut Kementerian Kelautan dan Perikanan (2020)  produksi  udang  nasional  per  tahun berada pada kisaran 800 ribu ton sementara kebutuhan dunia mencapai 13 sampai 15 juta ton.  Tingginya  permintaan  terhadap  udang vaname menyebabkan produksi dari budidaya harus terus ditingkatkan. Penerapan  teknologi  budidaya  intensif  dan ketersediaan  benih spesific  pathogen  free (SPF)  menjadi  kunci  keberhasilan  untuk dapat  terus  meningkatkan  produksi  dari budidaya udang vaname (Suwoyo & Mangampa, 2010). Namun penerapan sistem budidaya intensif tidak selamanya berdampak baik  karena  limbah  yang  dihasilkan  memiliki dampak buruk bagi udang maupun lingkungan budidaya.
Salah  satu  dampak  buruk  yang ditimbulkan dari penerapan budidaya intensif adalah  munculnya  penyakit  pada  udang seperti  white  spot  syndrome  virus  (WSSV). Menurut  Rahma et  al .  (2014)  pada  udang windu  ( Panaeus  monodon )  penyakit  white spot  syndrome  virus  menyebabkan  kematian massal dalam waktu singkat antara 6-11 hari pasca  gejala  klinis.  Upaya  yang  dapat dilakukan  untuk  dapat  mencegah  dan menanggulangi  penyakit  pada  udang  adalah dengan  meningkatkan  sistem  pertahanan tubuh  udang  menggunakan  imunostimulan (Rosyida et  al .,  2022).  Imunostimulasi  yang umum  dilakukan  adalah  dengan  pemberian komponen  mikrobia  seperti  β -glukan  dan lipopolisakarida  atau  sel  bakteri  yang  telah dimatikan (Ekasari et al ., 2016). Namun jenis imunostimulan  tersebut  memiliki  harga  yang relatif  mahal,  sehingga  diperlukan  alternatif imunostimulan lain untuk penanganan penyakit pada udang tersebut.
Salah satu sumber imunostimulan yang relatif lebih murah dan mudah penerapannya
adalah  dari  alga  coklat Sargassum sp. Dinding  sel  pada Sargassum sp.  diketahui terdapat  suatu  substansi  yang  memiliki aktivitas  immunomodulator  yakni  alginat. Pemanfaatan  alginat Sargassum sp.  pada bidang  perikanan  sudah  cukup  umum digunakan  untuk  meningkatkan  respon  imun baik  pada  ikan  maupun  udang.  Penelitian oleh
Isnansetyo et al . (2014)
mengungkapkan  bahwa  alginat Sargassum sp.  dari  spesies  lokal  Indonesia  mampu meningkatkan  ketahanan  nonspesifik  pada ikan lele ( Clarias batrachus ). Aplikasi natrium alginat Sargassum  siliquosum pada  udang vaname juga terbukti dapat mengaktifkan sel dan respon imun humoral, serta ekspresi gen terkait  kekebalan  tubuh  sehingga  udang terlindungi  dari  infeksi  white  spot  syndrome virus  (Yudiati et  al .,  2016;  Yudiati et  al ., 2019).  Perairan  Lampung  merupakan  salah satu  sumber  habitat  Sargassum  dan  sejauh ini  masih  sedikit  pemanfaatannya.  Penelitian sebelumnya
menunjukkan bahwa suplementasi  beberapa  jenis  alginat  seperti kalsium  laginat  (Setyawan et  al .,  2020) maupun  natrium  alginate  (Setyawan et  al ., 2021)  dari  Perairan  Lampung  secara  efektif mampu  meningkatkan  respon  imun  udang vannamei yang dipelihara skala laboratorium.
Peningkatan  respon  imum  nonspesifik udang  vaname  juga  dapat  dilakukan  dengan penambahan suplemen lainnya seperti vitamin  C.  Aplikasi  vitamin  C  telah  terbukti efektif meningkatkan respon imun nonspesifik  dan  tingkat  kelulushidupan  pada udang  (Maharani,  2014;  Wu et  al .,  2016). Meskipun  penelitian  pemanfaatan  natrium alginat Sargassum sp.  dan  vitamin  C  pada bidang  perikanan  telah  banyak  dilakukan, namun  masih  sangat  sedikit  sekali  informasi mengenai  dosis  efektif  dari  natrium  alginat Sargassum sp.  tersebut  terutama  spesies alga  coklat  lokal  dari  perairan  Lampung maupun  kombinasi  dengan  vitamin  C  yang mampu  mencegah  serangan  white  spot syndrome  virus  khususnya  pada  udang
vaname.  Oleh  karena  itu  penting  untuk mengkaji  potensi  natrium  alginat  dari Sargassum sp.  dan  vitamin  C  sebagai antivirus penyakit white spot syndrome virus pada udang vaname.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Januari-Maret
2021,
bertempat
di
Laboratorium  Budidaya  Perikanan,  Jurusan Perikanan,  Fakultas  Pertanian,  Universitas Lampung.  Bahan  dan  alat  yang  digunakan meliputi:  udang  vaname  dengan  bobot  19 gram,  air  laut, Sargassum sp.,  etanol  96%, asam  klorida  (HCl)  12N,  natrium  karbonat (Na 2 CO 3 ),  kalium  klorida  (KCl)  0,13  M, alcohol  70%,  progol,  akuades,  pakan komersil  dengan  kandungan  protein  30%, Asam  etilenadiaminatetraasetat  (EDTA)  2N, vitamin  C, phosphate  buffer  saline (PBS), formalin  10%,  wadah  berupa  kontainer bervolume 70 L dengan ukuran 54 x 36 x 29 cm,  syringe  1  cc,  spatula,  centrifuge  Hanil MF-300,  gelas  ukur  Iwaki  pyrex,  erlenmeyer Iwaki  pyrex,  toples  kaca  2  L,  tabung  falcon, oven  Memmer  UN  260,  mikroskop  DM500 Leica,  shacker  PSU-15i,  corong  kaca,  DO meter,  pH  meter  ATC  pH-009,  blower  Turbo 2HP,  selang  dan  batu  aerasi,  refractometer Atago Hand-Held, dan timbangan digital.
Metode penelitian
menggunakan
rancangan  acak  lengkap  (RAL)  dengan  3 perlakuan  dan  3  ulangan  yang  terdiri  dari: Perlakuan 1: Pakan komersial tanpa penambahan  natrium  alginat  (kontrol); Perlakuan  2:  Pakan  komersial  dengan penambahan natrium alginat 1 g/kg pakan + vitamin  C  0,2  g/kg  pakan;  Perlakuan  3: Pakan komersial dengan penambahan natrium alginat 2 g/kg pakan. Setelah 14 hari diberi  perlakuan,  udang  diinjeksikan  filtrat white  spot  syndrome  virus dan phosphate buffer saline (PBS) dengan perbandingan 1:1 untuk uji tantang.
Variabel
yang diamati meliputi rendemen  alginat Sargassum sp.,  gejala klinis,  kelangsungan  hidup,  kelangsungan hidup  relatif  atau relative  percent  survival (RPS),  rerata  waktu  kematian  atau mean time  to  death (MTD),  uji  PCR,  dan  histologi jaringan.  Parameter  kualitas  air  yang  diukur meliputi:  suhu,  pH,  oksigen  terlarut,  dan salinitas.  Data  kelangsungan  hidup, relative percent  survival (RPS),  dan  rerata  waktu kematian  atau mean  time  to  death (MTD) diuji  secara  statistik  menggunakan  Anova dan  uji  lanjut  Duncan  dengan  bantuan program  SPSS  26.0.  Data  kualitas  air  (suhu,
pH,  oksigen  terlarut,  dan  salinitas)  dianalisis secara deskriptif.
Rendeman  natrium  alginat Sargassum sp. dihitung menggunakan rumus (Dharmayanti et al ., 2021):
Rendemen = 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝐵𝑜𝑏𝑜𝑡 𝑠𝑖𝑚𝑝𝑙𝑖𝑠𝑖𝑎 𝑥 100% Kelangsungan hidup (KH) udang dihitung  menggunakan  rumus  Daniels et  al . (2010):
KH = 𝑁𝑡 𝑁𝑜 𝑥 100%
Keterangan:  KH  =  kelangsungan  hidup  (%); Nt = jumlah udang akhir (ekor); N0 = Jumlah udang  awal  (ekor);  jumlah  udang  pada  awal masa pemeliharaan (ekor)
Relative percent survival (RPS) dihitung
dengan menggunakan rumus Marbun et al . (2019):
RPS = (1 − % 𝑘𝑒𝑚𝑎𝑡𝑖𝑎𝑛 𝑖𝑘𝑎𝑛 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖𝑣𝑎𝑘𝑠𝑖𝑛 % 𝑘𝑒𝑚𝑎𝑡𝑖𝑎𝑛 𝑖𝑘𝑎𝑛 𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑡𝑖𝑑𝑎𝑘 𝑑𝑖𝑣𝑎𝑘𝑠𝑖𝑛 𝑥 100%
Keterangan: RPS = relative percent survival
Rerata waktu kematian dihitung menggunakan  rumus  Olga  dan  Fatmawaty (2016):
𝑀𝑇𝐷 = ∑ 𝑎𝑖𝑏𝑖 𝑛 𝑖=1 ∑ 𝑏𝑖 𝑛 𝑖=1 Keterangan:  MTD  = mean  time  to  death (rerata  waktu  kematian);  ai  =  waktu kematian pada waktu ke-i (jam); bi = jumlah ikan uji yang mati pada jam ke-i (ekor)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  dari  hasil  ekstraksi  yang telah dilakukan pada 100 g bubuk Sargassum sp.  dari  perairan  Lampung  didapatkan  total berat  kering  natrium  alginat  sebanyak  12,02 gram dan rendemen 12,02%. Hasil rendemen Sargassum sp.  pada  penelitian  ini  termasuk lebih  rendah  jika  dibandingkan  dengan penelitian  sebelumnya.  Menurut  Amir et  al . (2016), Sargassum sp.  yang  diekstraksi dengan metode konvensional dapat menghasilkan  rendemen  natrium  alginat sebesar  19,25%.  Yudiati et  al .  (2016), menyatakan  bahwa  rendeman Sargassum siliquosum yang  diekstraksi  dengan  metode yang  sama  menghasilkan  rendeman  natrium
alginat  sebesar  40,34%.  Adapun  penelitian Rifandi et  al .  (2014),  menyatakan  bahwa ekstraksi Sargassum sp.  dengan  konsentrasi Na 2 CO 3 7%  rendemen  natrium  alginat  yang didapatkan  sebanyak  8,24-15,14%  untuk perairan Teluk Awur dan 7,19-14,44% untuk perairan Portunggal.
Jumlah  rendeman  suatu  ekstrak  yang dihasilkan  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor yaitu  ukuran  simplisia,  jenis  pelarut,  tingkat kepolaran  pelarut,  dan  lama  maserasi (Hidayat et al ., 2017).  Menurut Jayanudin et al .  (2014),  menambahkan  bahwa  kenaikan suhu dapat menyebabkan terjadinya kenaikan  hasil  rendemen,  hal  ini  karena semakin tinggi suhu ekstraksi maka konversi asam  alginat  menjadi  natrium  alginat  akan semakin tinggi. Besar kecilnya nilai rendemen natrium  alginat  juga  dapat  dipengaruhi  oleh jenis,  iklim  dan  habitat  rumput  laut,  serta metode  ekstraksi  yang  digunakan  (Rhein- Knudsen et al ., 2017). Selain itu, konsentrasi Na 2 CO 3 juga  dapat  berpengaruh  terhadap tinggi  rendahnya  rendemen  natrium  alginat yang  dihasilkan.  Hal  ini  karena  semakin banyak  Na 2 CO 3 yang  digunakan  pada  proses ekstraksi maka semakin banyak alginat yang dilarutkan menjadi natrium alginat (Tambunan et al ., 2013).

## Kelangsungan Hidup
Tingkat  kelangsungan  hidup  udang vaname  setelah  injeksi white  spot  syndrome virus dapat  dilihat  pada  Gambar  1. Berdasarkan pada pengamatan yang dilakukan, pada 24 jam setelah injeksi white spot  syndrome  virus baik  kontrol  maupun yang  diberi  perlakuan  suplementasi  natrium alginat  memiliki  tingkat  kelangsungan  hidup yang tidak berbeda nyata (p>0,05). Selanjutnya pada 48-72 jam setelah diinjeksi white spot syndrome virus , udang yang diberi pakan  dengan  suplementasi  natrium  alginat sebanyak  2  g/kg  menghasilkan  tingkat kelangsungan  hidup  tertinggi.  Namun  pada 48-72  jam  setelah  injeksi white  spot syndrome  virus tidak  terdapat  perbedaan yang  signifikan  pada  udang  kontrol  maupun udang  yang  diberi  natrium  alginat  dengan dosis yang berbeda (p>0,05).
Suplementasi  natrium  alginat  dengan dosis  yang  berbeda  telah  menunjukkan mekanisme  perlindungan  yang  cukup  baik pada awal infeksi white spot syndrome virus , namun  pertahanan  tubuh  udang  tidak bertahan  lama.  Pemberian  dosis  natrium alginat Sargassum sp.  yang  lebih  tinggi dimungkinkan  dapat  lebih  meningkatkan kelangsungan hidup udang vaname.
Gambar 1. Kelangsungan hidup udang vaname setelah infeksi white spot syndrome virus
Penelitian  Yudiati et  al .  (2019)  melaporkan bahwa  udang  vaname  yang  disuplementasi natrium alginat Sargassum siliquosum dengan dosis 4 g/kg pakan dan 6 g/kg pakan menghasilkan  tingkat  kelangsungan  hidup >50%  setelah  72  jam  diinfeksi white  spot syndrome virus .
Pemberian
alginat Sargassum sp.  dengan  dosis  sebesar  6  g/kg pakan  pada  udang  vaname  juga  terbukti menghasilkan  nilai  kelangsungan  hidup >50% setelah 96 jam uji tantang white spot syndrome  virus (Yudiati,  2016).  Selain  itu, dilaporkan  juga  bahwa  natrium  alginat Sargassum wightii yang diaplikasikan pada PL udang  windu  dengan  dosis  100,  200,  300, dan  400  mg/L  melalui  pengkayaan  pakan dengan  artemia  juga  mampu  meningkatkan resistensi  terhadap white  spot  syndrome virus (Immanuel et al ., 2012).

## Kelangsungan Hidup Relatif
Pengamatan  RPS  pada  penelitian  ini dilakukan di akhir penelitian setelah pemeliharaan  udang  selama  14  hari  dengan pemberian  natrium  alginat Sargassum sp. dengan dosis yang berbeda-beda. Berdasarkan  hasil  uji  T,  diketahui  bahwa tidak  terdapat  perbedaan  pengaruh  yang nyata  antara  pemberian  natrium  alginat  1 g/kg  pakan  +  vitamin  C  0,2  g/kg  pakan dengan  natrium  alginat  2 g/kg   pakan
terhadap  nilai  kelangsungan  hidup  relatif udang  vaname  yang  diuji  tantang  dengan virus white  spot  syndrome  virus (p>0,05). Dimana  nilai  RPS  perlakuan  2  sebesar 10±10% dan nilai  RPS  perlakuan 3 20±10% (Gambar 2).
Nilai  RPS  berdasarkan  pada  mortalitas udang,  jika  respon  imun  meningkat  maka mortalitas udang rendah, karena meningkatkan  ketahanan  udang  terhadap infeksi  virus.  Pada  penelitian  ini  mortalitas udang belum dapat ditekan dengan pemberian perlakuan natrium alginat Sargassum sp.  maupun  dengan  pemberian kombinasi Sargassum sp. dan vitamin C yang dibuktikan  dengan  rendahnya  nilai  RPS. Menurut  Ellis  (1988),  pemberian  suatu perlakuan  dianggap  efektif  apabila  nilai  RPS pasca  vaksinasi  memiliki  nilai  >50%. Berdasarkan  acuan  tersebut  maka  perlakuan 2  dan  3  belum  cukup  efektif  untuk melindungi  udang  vaname  dari  infeksi white spot  syndrome .  Menurut  Rahmawati  (2017), nilai  kelangsungan  hidup  relatif  dipengaruhi oleh  respon  imun,  semakin  meningkatnya respon  imun  maka  nilai  kelangsungan  hidup relatif juga akan meningkat. Semakin rendah nilai  kelangsungan  hidup  relatif  maka semakin kecil kemampuan perlakuan tersebut untuk  melindungi  udang  vaname  dari  infeksi white spot syndrome .

## Rerata Waktu Kematian
Perhitungan  rerata  waktu  kematian diperlukan  untuk  mengetahui  perbedaan rata-rata  waktu  kematian  udang  vaname yang  diberi  pakan  tanpa  natrium  alginat Sargassum sp.  (perlakuan  1),  pakan  dengan natrium alginat Sargassum sp. 1 g/kg pakan +  vitamin  C  0,2  g/kg  pakan  (perlakuan  2), dan pakan dengan natrium alginat Sargassum sp.  2  g/kg  pakan  (perlakuan  3) pasca uji tantang oleh virus white spot . Hasil perhitungan mean  time  to  death setelah  5 hari  uji  tantang  menunjukkan  bahwa  udang vaname  yang  diberi  pakan Sargassum sp.  2 g/kg  pakan  memiliki  rerata  waktu  kematian tertinggi  yakni  64±6,15  jam.  Nilai  tersebut 14,80  jam  lebih  tinggi  dibandingkan  udang vaname  yang  tidak  diberi  natrium  alginat Sargassum sp.  yakni  dengan  nilai  rerata waktu kematian 49,20±5,49 jam. Mean time to  death /rata-rata  waktu  kematian  udang vaname  setelah  injeksi white  spot  syndrome virus dapat dilihat pada Gambar 3. Berdasarkan  uji  statistik  diketahui bahwa pemberian natrium alginat Sargassum sp.  terhadap  rerata  waktu  kematian  udang vaname  yang  terinfeksi  virus white  spot syndrome  virus berbeda  nyata  (P<0,05). Hasil  uji  lanjut  Duncan  diketahui  bahwa pemberian  pakan  dengan  natrium  alginat Sargassum sp.  2  g/kg  dan  pakan  dengan natrium alginat Sargassum sp. 1 g/kg pakan +  vitamin  C  0,2  g/kg  pakan  tidak  berbeda nyata,  namun  perlakuan  natrium  alginat Sargassum sp. 2 g/kg berbeda nyata dengan perlakuan  kontrol/tanpa  pemberian  natrium alginat Sargassum sp.

## Pengamatan Histologi
Pengamatan  histologi  dilakukan  untuk dapat memberikan informasi tingkat kerusakan  jaringan  organ  akibat  infeksi bakteri  (Li et  al .,  2012).  Berikut  hasil pemeriksaan  histologi  hepatopankreas  pada udang setelah diinjeksi white spot syndriome virus dapat dilihat pada Gambar 4. Hasil  pengamatan  gambaran  histologi hepatopankreas  udang  uji  pada  semua perlakuan yang diinfeksi white spot syndriome  virus terlihat  adanya  perubahan histologis  berupa  badan  inklusi.  Terjadinya badan  inklusi  atau  hipertrofi  pada  inti  sel dimungkinkan  terjadi  akibat  serangan white spot syndriome virus . Badan inklusi merupakan  timbunan  benda  asing  yang bentuk  dan  ukurannya  bervariasi,  berwarna merah keunguan, eosinofilik, basofilik ataupun amfofilik yang umumnya terdapat di dalam  nukleus  atau  intranuklear  (Madeali et al .,  1998).  Lightner  (1996)  menambahkan jika  badan  inklusi  dapat  terbentuk  akibat serangan  virus.  Menurut  Nazaruddin et  al . (2014),  infeksi  virus  dalam  suatu  jaringan dapat  membentuk  area-area  kosong  yang menjadi  tempat  sel-sel  virus  hidup,  akan tetapi area kosong tersebut ditinggalkan oleh virus  dan  inti  sel  kemudian  mengalami hipertrofi basofilik.
Berdasarkan pengamatan histologi diketahui  bahwa  terjadi  perubahan  jaringan pada  organ  hepatopankreas  yang  ditandai dengan adanya sebagian besar sel memperlihatkan  badan  inklusi  berbentuk
bulat  dengan  berwarna  kebiruan  di  dalam nukleus  dan  letaknya  tidak  teratur.  Nukleus tersebut  membesar  melebihi  dari  ukuran normalnya dengan berwarna kebiruan (basofilik) karena dominan menyerap basofil. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  baik  udang  uji kontrol  maupun  tersuplementasi  natrium alginat  dan  kombinasi  dengan  vitamin  C setelah  diinfeksi white  spot  syndriome  virus belum  mampu  melindungi  diri  dari  serangan virus,  akibatnya  organ  hepatopankreas tersebut  mengalami  kerusakan.  Menurut Nazaruddin et  al .  (2014),  semakin  tinggi tahap  infeksi  juga  dapat  menyebabkan semakin  pekat  warna  dan  besar  diameter badan inklusi.
Identifikasi  WSSV  dengan  Uji  PCR Konvensional pada Masing-Masing Perlakuan
Hasil  identifikasi  virus white  spot dengan  PCR  konvensional  akan  didapatkan berupa  gambar  hasil  akhir  dari  proses elektroforesis.  Hasil  pendokumentasian  gel elektroforesis  pada  sampel  udang  dapat dilihat pada
Gambar 5. Hasil
pendokumentasian  gel  elektroforesis  akan
menentukan  sampel  udang  positif  atau negatif terserang virus white spot . Berdasarkan hasil identifikasi virus white spot pada udang vaname dengan PCR menunjukkan
bahwa semua sampel teridentifikasi positif (+) virus white spot . Hal ini  dibuktikan  dengan  adanya  perpedaran band yang sejajar dengan kontrol positif yang berukuran  296  bp  pada  sumuran  4,  5,  6,  7, 8, 9, 10, 11, 12, sehingga disimpulkan bahwa semua  udang  uji  baik  perlakuan  kontrol maupun dengan suplementasi natrium alginat semuanya  terinfeksi  virus white  spot .  Positif standar  virus white  spot yang  digunakan sebagai  kontrol  positif  merupakan  stok kontrol  positif  virus white  spot Laboratorium Penguji  Balai  Karantina  Ikan,  Pengendalian Mutu  dan  Keamanan  Hasil  Perikanan Lampung.
Hasil elektroforesis biasanya tidak hanya pita DNA hasil saja, tetapi juga DNA genom akan menunjukkan  adanya  materi  ikutan  lain ( smear )  yang  masih  terbawa.  Menurut Mulyani et  al .  (2011),  proses  homogenisasi menggunakan  vortex  mix  akan  sangat membantu  pada  proses  pelisisan,  namun juga  dapat  menyebabkan  DNA  terpotong- potong  sehingga  menyebabkan  terbentuknya
Gambar 4 .  Histologi hepatopankreas setelah infeksi white spot syndrome virus pada masing masing perlakuan
Keterangan  :  Tanda  panah  dengan  huruf  In  =  inti  sel  normal;  St  =  saluran  tubulus;  T  = tubulus; L = lumen; Bi = badan inklusi. Perbesaran 40x. A = hepatopankreas udang normal (Sukenda et  al .,  2009);  B  =  hepatopankreas  udang  setelah  infeksi  virus white  spot pada perlakuan 1; C = hepatopankreas udang setelah infeksi virus white spot pada perlakuan 2; D = hepatopankreas udang setelah infeksi virus white spot pada perlakuan 3
beberapa  pita  DNA  ( smear )  ketika  di elektroforesis.  Kualitas  DNA  yang  baik ditentukan  oleh  beberapa  faktor  yang mempengaruhi  seperti  suhu  penyimpanan dan  lamanya  waktu  penyimpanan.  Suhu penyimpanan  yang  lebih  efektif  untuk mempertahankan  DNA  agar  tetap  baik  dan tidak rusak yaitu pada suhu -20 o C dibandingkan dengan suhu 4 o C (Ngaliyatun et al .,  2013).  Virus white  spot umumnya menginfeksi  udang  pada  tingkat  rendah  dan pada  beberapa  tingkatan.  Infeksi  tingkat rendah terjadi jika DNA virus hanya ada dan sejajar  pada  pendaran  band  296  bp  yang berarti  terdapat  20  copies,  infeksi  tingkat sedang sejajar pada band 650 bp dan 296 bp yang berarti terdapat 200 copies, dan infeksi tingkat  berat  terdapat  pendaran  band  pada 910,  650,  dan  296  bp  yang  berarti  terdapat 2000 copies (Rahma et al ., 2014).
Gejala  Klinis  Udang  Vaname  Pasca Infeksi White Spot Syndrome Virus
Gejala  klinis  awal  yang  teramati  pada udang pasca 24 jam diinfeksi virus white spot antara  lain  pergerakan  yang  tidak  terlalu aktif, penurunan konsumsi pakan dan respon terhadap  gangguan,  tetapi  warna  tubuh masih  putih  segar.  Perubahan  tingkah  laku udang uji pasca 24 dan 72 jam diinjeksi virus white spot dapat dilihat pada Tabel 1. Gejala- gejala  klinis  yang  teramati  setelah  24  jam udang  diinfeksi  virus white  spot dapat
diketahui  bahwa  udang  belum  menunjukkan gejala  bintik  putih  maupun  kemerahan  pada tubuhnya namun secara umum udang-udang tersebut telah terinfeksi virus white spot . Hal ini  sesuai  dengan  ciri  gejala  klinis  serangan white  spot yang  dilaporkan  oleh  Vlak et  al . (2002), yaitu terjadi letargi pada udang yang terinfeksi  virus white  spot seperti  penurunan nafsu  makan  dan  aktifitas  renang.  Menurut Lilisuriani  (2020),  udang  yang  sudah terinfeksi  virus white  spot namun  belum terdapat  tanda  bintik  putih,  dikategorikan pada  tipe  III  (kronis)  dimana  infeksi  masih dialami  oleh  jaringan  rendah  sehingga  bintik putih  dan  kemerahan  pada  udang  tidak tampak.  Selanjutnya  dilakukan  pengamatan gejala  klinis  pada  udang  vaname  pasca  72 jam diinjeksi virus white spot .
Setelah 72 jam udang vaname diinjeksi virus white  spot ,  udang-udang  uji  kontrol yang  masih  hidup  seluruh  bagian  tubuhnya mengalami kemerahan, dengan nafsu makan dan  respon  terhadap  gangguan  menurun serta  pergerakan  yang  pasif.  Adapun  udang yang  disuplementasi  natrium  alginat  1  g/kg pakan  +  vitamin  C  0,2  g/kg  pakan  yang masih  hidup  menunjukkan  pergerakan  yang cukup  aktif,  nafsu  makan  menurun,  warna tubuh  putih  segar  dengan  respon  terhadap gangguan  normal.  Selanjutnya  untuk  udang uji  pada  perlakuan  natrium  alginat  2  g/kg pakan  yang  masih  hidup  menunjukkan pergerakan  yang  cukup  aktif,  nafsu  makan menurun,  warna  tubuh  putih  segar  dengan
Gambar 5 . Hasil gel elektroforesis sampel udang
Keterangan:  Tanda  panah  putih  merupakan  sumuran  dan  tanda  panah  merah  merupakan perpendaran band yang dihasilkan oleh masing-masing sampel. Sumuran 1 = DNA marker 848 bp, 630 bp, 333 bp; Sumuran 2 = kontrol positif; Sumuran 3 = kontrol negatif; Sumuran 4-6 : sampel uji perlakuan 1 dengan 3 kali ulangan; Sumuran 7-9 = sampel uji perlakuan 2 dengan 3 kali ulangan; Sumuran 10-12 = sampel uji perlakuan 3 dengan 3 kali ulangan
respon terhadap gangguan menurun. Menurut  Lilisuriani  (2020)  gejala  klinis  pada udang  vaname  yang  terserang  virus white spot tidak  hanya  bintik  putih  namun  juga terdapat gejala klinis lainnya seperti kemerahan  pada  bagain  tubuh  udang vaname.
Hameed
et al . (1998), menambahkan  bahwa  udang  yang  terinfeksi virus white  spot menunjukkan  perubahan tingkah laku yaitu terjadi penurunan konsumsi  makan,  lemah,  warna  kemerahan pada abdomen dan bintik putih.

## Kualitas Air
Kualitas  air  merupakan  salah  satu faktor  yang  penting  karena  menjadi  penentu ke-berhasilan dalam budidaya udang vaname. Selama penelitian, kualitas air yang diamati  meliputi  suhu,  oksigen  terlarut,  pH dan salinitas. Pengamatan kualitas air selama penelitian  diamati  pada  hari  ke-1,  7,  14  dan 17.  Hasil  pengamatan  kualitas  air  dapat dilihat pada Tabel 2.
Berdasarkan  hasil  pengukuran  kualitas air  selama  penelitian,  suhu  yang  didapatkan yakni  berkisar  antara  27,3- 29,3˚C,  nilai  ini menunjukkan  bahwa  suhu  air  ma-sih  berada dalam  kisaran  normal  yang  masih  dapat ditoleransi  oleh  udang  vaname  untuk  hidup. Hal ini sesuai dengan pendapat Rakhfid et al . (2019),  yang  menyatakan  bahwa  suhu  yang optimal  untuk  kelangsungan  hidup  udang vaname  berada  pada  kisaran  28- 32˚C. Menurut Anita et al . (2017), laju
pertumbuhan  pada  udang  meningkat  sejalan dengan  kenaikan  suhu,  dimana  semakin tinggi  suhu  maka  semakin  rendah  oksigen terlarut  dalam  air  sedangkan  kebutuhan oksigen  bagi  udang  semakin  besar  karena tingkat metabolisme semakin tinggi. Oksigen terlarut  atau dissolved  oxygen (DO)  pada lingkungan budidaya baik ikan maupun udang sangat  diperlukan  untuk  proses  pernapasan, proses metabolisme atau pertukaran zat yang kemudian menghasilkan energi untuk pertumbuhan dan perkembangbiakan
(Salmin,  2005).  Berdasarkan  pada  Tabel  2 dapat  dilihat  bahwa  kadar  DO  selama pemeliharaan  yaitu  berkisar  antara  4,2-5,6 mg/l.  Menurut  Arsad et  al .  (2017)  udang dapat  hidup  dengan  baik  di  lingkungan  yang memiliki  kandungan  oksigen  terlarut  >4 mg/l.
Adapun  nilai  pH  pada  wadah  pemeliharaan udang selama penelitian berkisar antara 7,5- 7,9.  Nilai  pH  tersebut  masih  cukup  optimal untuk  pertumbuhan  udang  karena  nilai  pH yang  optimal  berkisar  antara  7,5-8  (Supono, 2019).  pH  pada  suatu  perairan  dapat dijadikan
sebagai indikator dari keseimbangan unsur-unsur
kimia, ketersediaan  unsur-unsur  kimia  dan  unsur- unsur  hara  yang  sangat  bermanfaat  bagi kehidupan  organisme  akuatik  (Sahrijanna dan  Septiningsih,  2017).  Salinitas  juga merupakan  parameter  lingkungan  yang penting  karena  dapat  mempengaruhi  laju pertumbuhan, jumlah makanan yang dikonsumsi,  nilai  konversi  makanan,  dan
Tabel  1. Perubahan  tingkah  laku  udang  vaname  pasca  24  dan  72  jam  diinjeksi  virus white spot
No Tingkah laku Waktu (jam) Perlakuan Kontrol Natrium alginat 1 g/kg pakan + vitamin C 0,2 g/kg pakan Natrium alginat 2 g/kg pakan 1  Pergerakan 24 Pasif Cukup aktif Cukup aktif 72 Pasif Cukup aktif Cukup aktif 2  Nafsu makan 24 Menurun Normal Normal 72 Menurun Menurun Menurun 3  Warna tubuh 24 Putih segar Putih segar Putih segar 72 Udang yang masih hidup seluruh tubuhnya mengalami kemerahan Udang yang masih hidup warna tubuhnya putih segar Udang yang masih hidup warna tubuhnya putih segar 4 Respon terhadap gangguan 24 Menurun Normal Menurun 72 Menurun Normal Menurun
Tabel 2. Kualitas air media pemeliharaan udang vaname selama penelitian Parameter Kisaran Kisaran optimum Suhu (ºC) 27,3-29,3 28-32 a Oksigen terlarut (mg/l) 4,2-5,6 > 4 b pH 7,5-7,9 7,5-8 c Salinitas (ppt) 34-35 0,5-35 c
Keterangan sumber: a. Rakhfid et al . (2019); b. Arsad et al . (2017); c. Supono(2019)
daya  kelangsungan  hidup  (Sahrijanna  dan Septiningsih,  2017).  Salinitas  yang  terukur selama  penelitian  berkisar  antara  34-35  ppt. Nilai  salinitas  yang  didapatkan  selama penelitian ini sudah optimal untuk pemeliharaan  udang.  Hal  ini  disebabkan umumnya  udang  hidup  dan  tumbuh  optimal salinitas  pada  kisaran  0,5-35  ppt  (Supono, 2019).

## KESIMPULAN
Suplementasi  2  g/kg  pakan  natrium alginat Sargassum sp.  pada  udang  vaname yang  diinfeksi white  spot  syndrome  virus efektif  meningkatkan  ketahanan  udang vannamei berdasarkan rerata waktu kematian  udang  yang  secara  signifikan  lebih lama.  Namun,  infeksi white  spot  syndrome virus efektif  akut  dengan  dosis  tinggi  belum menunjukkan  perbedaan  signifikan  dalam laju  sintasan  dan  rerata  waktu  kematian udang vanamei.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  terlaksana  atas  bantuan hibah  penelitian  DIPA  Fakultas  Pertanian tahun  2021.  Terima  kasih  kami  ucapkan kepada  Hanesty  Resta,  S.Pi,  Bu  Dwi,  Bu Untari  atas  bantuan  dan  kerjasamanya selama penelitian berlangsung.

## DAFTAR PUSTAKA
Amir, A., Wiraningtyas, A., Ruslan. & Annafi,
N. 2016.
Perbandingan metode ekstraksi  natrium  alginat:  metode konvensional  dan  microwave  assisted extraction  (MAE). Chempublish  Journal . 1(2):7-13.
Anita, A.W. Agus,  M.  & Mardiana, T.Y. 2017.
Pengaruh  perbedaan  salinitas  terhadap pertumbuhan  dan  kelangsungan  hidup larva  udang  vannamei  ( Litopenaeus vannamei ) PL-13. Pena Akuatika . 17(1):12-19.  DOI:  10.31941/penaakua tika.v17i1.614.
Arsad,  S.,  Ahmad,  A.,  Atika,  P.P.,  Betrina, M.V.,  Dhira,  K.S.,  &  Nanik,  R.B.  2017. Studi  Kegiatan  Budidaya  Pembesaran Udang Vaname ( Litopenaeus vannamei ) dengan Penerapan Sistem Pemeliharaan Berbeda. Jurnal  Ilmiah  Perikanan  dan Kelautan .  9(1):1-14.  DOI:  10.20473/ jipk.v9i1.7624.
Daniels,  C.L.,  Merrifield,  D.L.,  Boothroyd, D.P., Davies, S.J., Factor, J.R. & Arnold, K.E.  2010.  Effect  of  dietary Bacillus sp. and  mannan  oligosaccharides  (MOS)  on european  lobster  ( Homarus  gammarus L.)  larvae  growth  performance,  gut morphology and gut microbiota.
Aquaculture . 304(1-4):49-57. DOI: 10.1016/j.aquaculture.2010.03.018. Dharmayanti,  N.,  Mufida,  N.,  Permadi,  A., Asriani,  Salampessy,  R.  B.,  Nurbani,  S. Z.  &  Indrianti,  N.  2021.  Penambahan konsentrasi  alginat  dari Sargassum polycystum untuk  formulasi  krim  lulur. Jurnal  Akuatek .  2(2):81-94.  DOI:
10.24198/akuatek.v2i2.37489.
Ekasari, J., Napitupulu, J. L. F. & Surawidjaja, E.H.  2016.  Immunity  and  growth  of freshwater  prawn  fed  with  dietary  β - glucan supplementation. Jurnal Akuakultur  Indonesia .  15(1):41-48. DOI: 10.19027/1/6.
Ellis,  A.  E.  1988.  General  Principles  of  Fish Vaccination. dalam: Ellis AE, editor. Fish vaccination.  Academic  Press,  London. 19 hlm.
Hameed, A.S.S., Anilkumar, M., Raj, M.L.S. &
Jayaraman,  K.  1998.  Studies  on  the pathogenicity  of  systemic  ectodermal mesodermal baculovirus and its detection  in  shrimp  by  immunological methods. Aquaculture .  160(1-2):31- 45.  DOI:  10.1016/S0044-8486(97)00 221-4.
Hidayat, R.C., Suwarno. & Mahasri, G. 2017. Evaluasi  pemberian  crude  protein Zoothamnium  penaei  terhadap  laju pertumbuhan,  respon  imun  dan  kelu- lushidupan udang vaname ( Litopenaeus vannamei )  di  tambak. Jurnal  Biosains
Pascasarjana . 19(2):111-132.
DOI:
10.20473/jbp.v19i2.2017.111-126. Immanuel,  G.,  Sivagnanavelmurugan,  M.,
Balasubramanian,  V.  &  Palavesam,  A. 2012. Sodium alginate from Sargassum wightii retards  mortalities  in Penaeus monodon postlarvae  challenged  with white  spot  syndrome  virus .  Diseases  of Aquatic Organisms . (99):187 – 196. DOI:
10.3354/dao02466.
Isnansetyo,  A.,  Irpani,  H.M.,  Wulansari,  T.A. & Kasanah, N. 2014. Oral administration of  alginate  from  a  tropical  brown seaweed, Sargassum sp.  to  enhance non-specific  defense  in  walking  catfish ( Clarias sp.). Aquacultura  Indonesiana. 15(1):14-20. DOI: 10.21534/ai.v15i1.29. Jayanudin.,  Lestari,  A.  Z.  &  Nurbayanti,  F. 2014.  Pengaruh  suhu  dan  rasio  pelarut ekstraksi  terhadap  rendemen  dan viskositas  natrium  alginat  dari  rumput laut  cokelat  ( Sargassum sp). Jurnal Integrasi Proses . 5(1):51-55. DOI: 10.3 6055/jip.v5i1.35.
Kementerian  Kelautan  dan  Perikanan.  2020. Menteri  Edhy:  Pantai  Selatan  Jawa Berpotensi Jadi Sentra Budidaya Udang. https://kkp.go.id/artikel/20632-menteri- edhy-pantai-selatan-jawa-berpotensi-jadi- sentra-budidaya-udang. Diakses 13 Oktober 2020. Li, S., Zhang, Z., Li, C., Zhou, L., Liu, W. &Li, Y. 2012. Molecular cloning andexpression  profiles  of  nitric  oxide synthase  (NOS)  in  mud  crab Scylla paramamosain . Fish Shellfish Immunology , 32:503-12.  DOI:  10.1016/j.fsi.2011.1 2.002.
Lightner,  D.  V.  1996.  A  Handbook  of  Shrimp Pathology and Diagnostic Procedures for Diseases  of  Cultured  Penaeid  Shrimp. The  World  Aquaculture  Society.  Baton Rouge, Louisiana, USA. 304 hlm.
Lilisuriani.  2020.  Serangan  penyakit  virus pada udang di tambak tanpa memperlihatkan gejala klinis. Octopus : Jurnal Ilmu Perikana n, 9(1):25-32.
Madeali,  M.I.,  Tompo.  &  Muliani,  A.  1998. Diagnosis  penyakit  viral  pada  udang windu Penaeus monodon
secara histopatologi  dan  antibodi  poliklonal dengan  metode  elisa. Jurnal  Penelitian Perikanan  Indonesia .  4:11-18.  DOI:
10.15578/jppi.4.3.1998.11-18.
Maharani,  L.  2014.  Pengaruh  Penambahan Vitamin  C  sebagai  Suplemen  Pakan terhadap  Kelulushidupan  Udang  Vaname ( Litopaneus vannamei ). ( Tesis ). Universitas Brawijaya. Surabaya. 93 hlm.
Marbun,  J.,  Harpeni,  E.  &  Wardyanto.  2019. Penanganan  penyakit  white  feces  pada udang  vaname Litopenaeus  vannamei menggunakan  aplikasi  pakan  yang dicampur  ekstrak  lengkuas  merah Alpinia purpurata K. Shum. Jurnal Ilmu- Ilmu  Perairan,  Pesisir  dan  Perikanan . 8(2):76-86.  DOI:  10.13170/depik.8.2. 13570.
Mulyani,  Y.,  Purwanto,  A.  &  Nurruhwati,  I. 2011.  Perbandingan  beberapa  metode isolasi  DNA  untuk  deteksi  dini  koi herpes  virus  (KHV)  pada  ikan  mas ( Cyprinus  carpio L.). Jurnal  Akuatika . 8(11):1-16.
Nazaruddin., Aliza, D., Aisyah, S., Zainuddin.
&  Syafrizal.  Histopathological  changes of  tiger  shrimp  ( Penaeus  monodon ) hepatopancreas
infected
by
hepatopancreatica  parvovirus  (HPV). Jurnal  Kedokteran  Hewan ,  8(1):27-29. DOI: 10.21157/j.ked.hewan.v8i1.1251.
Ngaliyatun.,  Widianti,  T.  &  Syaifudin,  M.
2013.  Uji  daya  infektivitas Plasmodium berghei iradiasi pada hati, limpa mencit menggunakan nested-PCR. Unnes Journal of Life Science , 2(2):111-117. Olga.  &  Fatmawaty.  2016.  route  of  vaccine efficacy Aeromonas  hydrophila asb-01 on  snakehead  fish  ( Ophiocephalus striatus).  Fish  Scientiae .  4(6):131-144. DOI: 10.20527/fs.v3i6.1143.
Rakhfid,  A.,  Erna.,  Rochmady.,  Fendi.,  Ihu, M.  Z.  &  Karyawati.  2019.  Survival  rate and growth of juvenile vannamei shrimp ( Litopenaeus  vannamei )  in  different media water salinity. Jurnal Akuakultur, Pesisir,  dan  Pulau-Pulau  Kecil .  3(1):23- 29. DOI: 10.29239/j.akuatikisle.3.1.23-29. Rahma,  H.N.,  Prayitno,  S.B.  &  Haditomo, A.H.C.  2014.  Infeksi white  spot syndrom  virus (WSSV)  pada  udang windu  ( Penaeus  monodon Fabr.)  yang dipelihara  pada  salinitas  media  yang berbeda. Journal of Aquaculture Management and Technology , 3(3):25-34. Rahmawati,  E.  2017.  Ketahanan  udang vaname  ( Litopenaeus  vannamei ,  Boone 1931)  yang  diberi  probiotik Bacillus sp.
D2.2 terhadap infeksi Vibrio
alginolyticus . ( Skripsi ).  Fakultas  Pertanian Universitas  Lampung,  Lampung.  56 hlm.
Rifandi, R.A., Santosa, G.W. & Ridlo, A. 2014. Pengaruh  konsentrasi  asam  klorida (HCl)  terhadap  mutu  alginat  rumput laut coklat Sargassum sp. dari perairan Teluk Awur Kab. Jepara dan Poktunggal Kab.  Gunungkidul. Journal  of  Marine
Research ,  3(4):676-684.  DOI:  10.147 10/jmr.v3i4.11430.
Rosyida, A., Setyowati, D.N. & Azhar F. 2022. The  effect  of  adding  white  tumeric ( Curcuma  zedoaria )  extract  on  the immune  system  of  vaname  shrimp ( Litopenaeus  vannamei )  tested  against Vibrio harveyi bacteria. Jurnal Perikanan dan  Kelautan, 27(2):136-144.  DOI: 10.31258/jpk.27.2.136-144.
Rhein-Knudsen,  N.,  Ale,  M.T.,  Ajalloueian,  F.
& Meyer, A.S. 2017. Characterization of alginates from Ghanaian brown seaweeds: Sargassum spp.  and Padina spp. Food  Hydrocolloids ,  71:236-244. DOI: 10.1016/j.foodhyd.2017.05.016.
Sahrijanna,  A.  &  Septiningsih,  E.  2017. Variasi  waktu  kualitas  air  pada  tambak budidaya  udang  dengan  teknologi integrated multitrophic aquaculture (IMTA)  di  Mamuju  Sulawesi  Barat. Jurnal  Ilmu  Alam  dan  Lingkungan . 8(16):52-57.
Salmin.  2005.  Oksigen  terlarut  (DO)  dan kebutuhan oksigen biologi (BOD) sebagai  salah  satu  indikator  untuk menentukan  kualitas  perairan. Oseana , 30(3):21-26.
Setyawan,
A., Supono, Safitri, Y.B., Hudaidah,  S.  &  Fidyandini,  H.P.  2020.
Suplementasi  kalsium  alginat Sargassum sp.  dari  perairan  Lampung  untuk memicu respon imun Penaeus
vannamei. Prosiding  Semnaskan  UGM XVII,  Departemen  Perikanan  UGM. Yogyakarta , 4 September 2020, p.41-47. Setyawan, A., Riana, Supono, Hudaidah, S. & Fidyandini,  H.P.  2021.  Non-specific immune  response  of  Pacific  white shrimp Litopenaeus vannamei by supplementation  of  sodium  alginate  of Sargassum collected  from  Lampung Indonesia. IOP  Conf.  Series:  Earth  and Environmental  Science, 890:  p.012015 DOI: 10.1088/1755-1315/890/1/012015. Supono.  2019.  Budidaya  Udang  Vaname Salinitas Rendah: Solusi untuk Budidaya di Lahan Kritis. Yogyakarta (ID): Graha Ilmu, 131 Hal.
Suwoyo, H.S. & Mangampa, M. 2010. Aplikasi Probiotik dengan Konsentrasi Berbeda
pada  Pemeliharaan  Udang  Vaname ( Litopenaeus vannamei ). Prosiding Forum  Inovasi  Teknologi  Akuakultur .
p.487-494.
Tambunan,  A.P.M.,  Rudiyansyah  &  Harlia. 2013.  Pengaruh  konsentrasi  Na 2 CO 3 terhadap rendemen natrium alginat dari Sargassum  cristaefolium asal  perairan Lemukutan. Jurnal  Kimia  Khatulistiwa,
2(2):112-117.
Vlak,  J.M.,  Jean-Robert,  B.,  Tim,  W.F.,
Guang-  Hsiung,  K.,  Donald,  V.L.,  Chu- Fang L., Philip, C.L. & Peter, J.W. 2002. A  New  Virus  Family  Infecting  Aquatik Invertebrates. XIIth International Congress Of Virology . Paris. 398 hlm.
Wu, Y.S., Liau, S.Y., Huang, C.T. & Nan, F.H. 2016.  Beta  1,3/1,6-glucan  and  vitamin C  immunostimulate  the  non-specific immune  response  of  white  shrimp ( Litopenaeus  vannamei ). Fish  and Shellfish Immunology , 57:269-277. DOI: 10.1016/j.fsi.2016.08.046.
Yudiati,  E.  2016.  Ekspresi  gen  dan  laju sintasan  udang  vaname  ( Litopenaeus vannamei) yang tersuplementasi dengan  alginat  secara  oral  untuk resistensi penyakit white spot syndrome virus. Buletin  Oseanografi  Marina , 5(2):135-142.  DOI:  10.14710/buloma. v5i2.15734.
Yudiati,  E.,  Isnansetyo,  A.,  Murwantoko.,
Ayuningtyas., Triyanto. & Handayani, O.
R.  2016.  Innate  immune-stimulating and immune genes upregulating activities of three types of alginate from Sargassum  siliquosum in  pacific  white shrimp, Litopenaeus  vannamei . Fish  & Shellfish  Immunology .  54:46-53.  DOI: 10.1016/j.fsi.2016.03.022.
Yudiati,  E.,  Isnansetyo,  A.,  Murwantoko., Triyanto.  &  Handayani,  O.R.  2019. Alginate  from
Sargassum  siliquosum simultaneously stimulates innate immunity,  upregulates  immune  genes, and enhances resistance of pacific white shrimp  ( Litopenaeus  vannamei )  against white  spot  syndrome  virus  (WSSV). Marine  Biotechnology ,  21(4):503-514. DOI: 10.1007/s10126-019-09898-7.