Efektivitas Ekstrak Kedelai (Glycine max L.) t erhadap Peningkatan RBP (Retinol binding protein) Tikus Putih (Rattus norvegicus)
Model Kwashiorkor
The Effectivity of Extracts Soybean on Increasing Concentration of RBP (Retinol binding protein) in White Rat (Rattus norvegicus) Kwashiorkor Model
Rizsa Aulia Danesty 1 , Heni Fatmawati 2 ,  Angga Mardro Raharjo 3
1 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran, Universitas Jember
2 Laboratorium Histologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Jember
3 Laboratorium Ilmu Kesehatan Masyarakat, Fakultas Kedokteran, Universitas Jember Jalan Kalimantan No. 37 Kampus Tegalboto Jember 68121 e-mail korespondensi: fatmawatiheni@ymail.com

## Abstrak
Kwashiorkor adalah penyakit yang disebabkan oleh kekurangan protein baik dari segi kualitas maupun kuantitasnya.  Kwashiorkor  menyebabkan  disfungsi  pada  berbagai  sistem  organ.  Tujuan  penelitian  ini adalah  mengetahui  peranan  kedelai  dalam  meningkatkan  kadar  RBP  serum  pada  tikus  model kwashiorkor. Hepar sebagai organ penting untuk sintesis protein, salah satunya RBP. Hepar sangat rentan terhadap  pengaruh  kwashiorkor.  Metode  yang  dilakukan  adalah  tikus  diberikan  diet  rendah  protein selama 30 hari kemudian diberikan ekstrak tepung kedelai selama 30 hari selanjutnya dievaluasi kadar RBP  serum  menggunakan  metode  ELISA.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kedelai  dapat meningkatkan kadar RBP pada tikus model kwashiorkor.
Kata Kunci: RBP, ekstrak  kedelai dan kwashiorkor

## Abstract
Kwashiorkor  is  a  disease  caused  by  a  deficiency  of  protein  in  terms  of  both  quality  and  quantity. Kwashiorkor cause dysfunction in various organ systems. The purpose of this study was to determine the role of soy in increasing serum RBP levels in rat models of kwashiorkor. The liver is a vital organ for protein synthesis, one RBP. The liver is particularly vulnerable to the effects of kwashiorkor. The method used is the mice given low-protein diet for 30 days and then given extract of soybean meal for 30 days subsequent serum RBP levels were evaluated using ELISA method. The results showed that the soy extract can increase the levels of RBP in mice models of kwashiorkor.
Keywords: RBP, soybean extracts and kwashiorkor

## Pendahuluan
Kwashiorkor  adalah  penyakit  yang  disebabkan  oleh kekurangan  protein  baik  dari  segi  kualitas  maupun kuantitasnya (Whitney, 2005). Berkurangnya protein dalam  diet  akan  mengakibatkan  berkurangnya berbagai  asam  amino  dalam  serum  yang  akan disalurkan  ke  jaringan  otot  sehingga  menyebabkan berkurangnya  produksi  albumin  oleh  hepar  yang kemudian  berakibat  timbulnya  edema  (Masrizal, 2003).
Kwashiorkor  menyebabkan disfungsi pada  berbagai sistem  organ.  Disfungsi  ini  dipengaruhi  oleh beberapa  faktor  seperti  terganggunya  sintesis protein.  RBP  merupakan  protein  transport  untuk mengangkut  retinol  ke  sel  atau  organ  target.  RBP memiliki peran sebagai marker untuk status gizi. RBP memiliki  waktu  paruh  yang  sangat  singkat., merupakan indikator yang lebih baik untuk penilaian status nutrisi saat ini dan juga perubahan akut pada metabolisme  protein.  RBP  menurun  pada  kondisi kurang  energi  protein  akibat  berkurangnya hepatic RBP syntesis (Bahn, 2006).
Kedelai dikenal dengan beberapa nama botani, yaitu Glycine soja dan Soja max . Namun pada tahun 1948 telah  disepakati  bahwa  nama  botani  yang  dapat diterima dalam istilah ilmiah, yaitu (Glycine max (L) Merrill) .  Tanaman  kedelai  merupakan  tanaman pangan  yang  umumnya  tumbuh  tegak,  berbentuk semak,  dan  merupakan  tanaman  semusim. Morfologi tanaman kedelai didukung oleh komponen  utamanya,  yaitu  akar,  daun,  batang, polong,  dan  biji  sehingga  pertumbuhannya  bisa optimal (Irwan, 2006).
Kedelai  mrngandung  protein,  lemak,  karbohidrat, berbagai  mineral,  dan  vitamin.  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa kedelai juga diketahui memiliki efek  sebagai  anti  inflamasi,  dan  antioksidan.  Oleh karena  itu  kedelai  dapat  dimanfaatkan  sebagai makanan alternatif pada kasus malnutrisi (Johnston, 2003).
Penelitian  tentang  efektifitas  kedelai  dalam meningkatkan  kadar  RBP  serum  belum  pernah dilakukan.  Karena  itu,  penelitian  lebih  lanjut  untuk mengetahui  efektivitas  ekstrak  kedelai  dalam meningkatkan  kadar  RBP  serum  pada  tikus  model kwashiorkor  sangat  diperlukan,  sehingga  dapat menambah  nilai  mutu  dari  kedelai  sebagai  nutrisi tinggi protein.

## Metode Penelitian
Penelitian yang dilaksanakan pada bulan September- Februari  2012  merupakan  penelitian experimental
laboratotis dengan rancangan post test only control group  design .  Sampel  penelitian  ini  menggunakan tikus putih jantan strain wistar sebanyak 5 ekor tikus untuk masing-masing kelompok, berumur 4 minggu dengan  rentang  berat  badan  sekitar  100-150  gram dan ditempatkan di Laboratorium Fisiologi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Jember.
Sebanyak 25 ekor tikus digunakan dalam penelitian ini  kemudian  dibagi  menjadi  5  kelompok.  Masing- masing  kelompok  terdiri  dari  5  ekor  tikus  yaitu kelompok K-, kelompok K+, kelompok P1, kelompok P2, dan kelompok  P3. Kelompok K- dan K+ diberikan diet  pakan  standar  selama  30  hari  sedangkan kelompok  P1,  P2,  dan  P3  diberikan  diet  rendah protein yaitu 1%, 5%, dan 8% selama 30 hari.
Pemberian  ekstrak  tepung  kedelai  sebanyak  0,5 cc/ekor/hari  untuk  kelompok  K+,  P1,  P2,  dan  P3 selama  30  hari,  diberikan  secara  sonde.  Setelah dilakukan pemberian ekstrak kedelai selama 30 hari, kadar  RBP  tikus  diukur.  Kadar  RBP  tikus  diukur melalui serum darah menggunakan metode ELISA.
Pembuatan  ekstrak  kedelai  dilakukan  dengan  cara kedelai  kering  diblender  hingga  menjadi  tepung. Selanjutnya dituangkan etanol dengan perbandingan 1:4,  lalu  digoyang.  Hasil  tersebut  kemudian diendapkan  selama  semalam  dan  diambil  fraksi terlarutnya.  Prosedur  tersebut  diulangi  sampai larutan jernih, kemudian hasil dievaporasi.
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dan  disajikan  dalam bentuk  grafik  setelah  sebelumnya  dilakukan  uji normalitas menggunakan Shapiro-Wilk test, dilanjutkan dengan uji statistik Post Hoc LSD . Untuk perbedaan  kadar  dari  masing-masing  kelompok perlakuan dianalisis dengan One Way ANOVA , yang kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  statistik Post  Hoc LSD.

## Hasil Penelitian
Berdasarkan uji Shapiro-Wilk didapatkan hasil bahwa data  berdistribusi  normal  dengan  nilai  signifikansi P>0,05.  Berdasarkan  uji  homogenitas Levene Variances didapatkan  hasil  bahwa  data  memiliki populasi  homogen  dengan  nilai  signifikansi  P>0,05. Karena data memiliki distribusi normal dan populasi yang  homogen  maka  dilanjutkan  dengan  uji parametrik One Way ANOVA.
Sesuai  hasil  uji One  Way  ANOVA ,  diperoleh  nilai signifikansi  0,014  (sig  <  0,05)  yang  berarti  terdapat perbedaan  signifikan  pada  rata-rata  kadar  RBP antara kelompok K(-), K(+), P1, P2, dan P3. Data hasil analisis One Way ANOVA dilanjutkan dengan analisis Post  Hoc  multiple  comparison dengan  metode  LSD ( Least  Significantly  Difference )  untuk  mengetahui
kelompok  mana  saja  yang  mempunyai  perbedaan bermakna  satu  sama  lain.  Pada  hasil  analisa Post Hoc ,  cara  interprestasinya  yaitu  ‘terima  H 0 ’  (data normal atau tidak terdapat perbedaan) jika sig > 0,05 dan sebaliknya.
Data pemeriksaan kadar RBP pada serum darah tikus wistar  setelah  dianalisis  nilai  rata-rata  kadar  RBP dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1 Rata-rata kadar RBP (ng/mL)
Kelompok Perlakuan  Presentase Kadar RBP (ng/mL +SD)
K (-) 5436,6 + 966,57504 K (+) 6375,2 + 463,01209 P1 7239,8 + 468,47753 P2 5956,1  + 1130,67992 P3 6478,6 + 304,66260
Rata-rata kadar RBP pada kelompok perlakuan dapat dilihat dalam Gambar 1. Rata-rata persentase kadar RBP  total  P1  pada  gambar  1  menunjukkan  hasil  P1 yang diperoleh lebih tinggi dibandingkan perlakuan P2  dan  P3.  Kelompok  K(-)  dianggap  normal  karena tidak  dilakukan  perlakuan  tertentu.  Kelompok  P2 dan  P3  memiliki  nilai  persentase  lebih  kecil dibandingkan  kelompok  P1.  P1  memiliki  pengaruh besar dalam kenaikan kadar RBP.
Data  rata-rata  persentase  kadar  RBP  merupakan parameter yang dapat digunakan untuk mengevaluasi  efek  peningkatan  kadar  RBP  dengan pemberian ekstrak kedelai pada kelompok perlakuan P1, P2, dan P3 terhadap kelompok K(-).
Hasil uji LSD data rata-rata kadar RBP pada  tabel 1 menunjukkan  bahwa  kelompok  K(-)  berbeda siginifikan dengan P1 dan P3 namun tidak signifikan dengan  K(+)  dan  P2.  Kelompok  K(+)  tidak  memiliki beda signifikan dengan kelompok lainnya. Kelompok P1  memiliki  beda  signifikan  dengan  kelompok  K(-) dan P2 namun tidak signifikan dengan K(+) dan P3. Kelompok  P2  memiliki  beda  signifikan  dengan kelompok  P1  namun  tidak  signifikan  dengan kelompok  K(-)  K(+)  dan  P3.  Kelompok  P3  memiliki beda  signifikan  dengan  kelompok  K-  namun  tidak signifikan dengan kelompok lainnya.

## Pembahasan
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh pemberian  kedelai   ( Glycine  max L.)  terhadap
peningkatan  kadar  RBP  pada  tikus  model kwashiorkor.  Hewan  yang  digunakan  dalam percobaan  ini  adalah  tikus  putih  jantan (Rattus norvegicus) dengan kondisi sehat, umur 4 minggu.
Gambar 1. Histogram rata-rata kadar RBP
Keterangan:
K(-) : Kelompok kontrol negatif dengan pemberian diet normal
K(+) : Kelompok kontrol positif dengan pemberian diet normal dan ekstrak kedelai 0,5 cc per ekor
P  1    : Kelompok perlakuan 1 dengan pemberian diet protein 1% dan ekstrak kedelai 0,5 cc per ekor
P  2    : Kelompok perlakuan 2 dengan pemberian diet protein 5% dan ekstrak kedelai 0,5 cc per ekor
P  3    : Kelompok perlakuan 3 dengan pemberian diet protein 8% dan ekstrak kedelai 0,5 cc per ekor.
Pemberian  ekstrak  kedelai  terhadap  tikus   yang diberi  diet  rendah  protein  selama  satu  bulan  telah tejadi  kenaikan  kadar  RBP  yang  diharapkan.  Pada hasil  analisis  data  tes  LSD  (lampiran  B),  didapatkan perbedaan  hasil  antara  kelompok  K(-)  dengan kelompok  P1,  P2,  dan  P3  hasil  diatas  menunjukkan bahwa  ekstrak  kedelai  mempunyai  pengaruh terhadap  peningkatan  kadar  RBP  (Gambar  1).  Hasil penelitian  ini  mendukung  penelititan   Smith et  al (2003),  bahwa  makanan  tinggi  kalori  dan  protein secara  perlahan  meningkatkan  kadar  RBP  pada kwashiorkor.
Hasil  tes  LSD  menunjukkan  bahwa  kelompok  K(-) memiliki  perbedaan  yang  bermakna  dengan kelompok  P1  dan  P3  (p<0,05).  Hal  ini  terjadi  oleh karena  K(-)  tidak  diberikan  perlakuan  tertentu dibandingkan dengan P1 yang mendapat diet rendah protein  1%  dan  ekstrak  kedelai  0.5  cc,  P3  yang mendapat  diet  rendah  protein  8%  dan  ekstrak
kedelai  0.5  cc.  RBP  akan  menurun  pada  kondisi kurang  energi  protein  akibat  dari  berkurangnya hepatic RBP syntesis [3].  Namun  peningkatan  RBP secara perlahan telah diteliti oleh Smith et al (2003), saat anak-anak dengan kwashiorkor diobati dengan makanan  tinggi  kalori  dan  protein  terjadi  kenaikan kadar  RBP.  Kedelai  mempunyai  kandungan  protein yang  tinggi,  yaitu  34-35%  per  100  gram  bahan. Kedelai  dengan  kandungan  protein  yang  tinggi mampu meningkatkan metabolisme tubuh (Masrizal 2003).
Hasil uji lanjutan dengan tes LSD pada tabel 1, dapat dilihat data  masing-masing kelompok  dibandingkan rata-rata  data  hasil  kadar  RBP  satu  sama  lain. Kelompok  P1  memiliki  beda  signifikan  dengan kelompok K(-) dan P2 namun tidak signifikan dengan K(+), P2, dan P3.  Hal ini menandakan bahwa kadar RBP pada kelompok P1 (pemberian diet protein 1% dan ekstrak kedelai 0,5 cc) mampu mencapai kadar RBP  yang  tinggi  bila  dibandingkan  kelompok  P2 (pemberian diet protein 5% dan ekstrak kedelai 0,5 cc). Hasil beda signifikan tersebut dapat disebabkan oleh  beberapa  sebab.  Pertama,  dapat  disebabkan karena rancangan penelitian yang digunakan adalah post  test  only  group  design. Metode post  test  only group  design merupakan  metode  yang  paling  baik, namun  mempunyai  sedikit  kelemahan  pada pengukuran pretest . Sulit menentukan jika perbedaan  pada  akhir  studi  merupakan  perbedaan aktual dari kemungkinan perbedaan pada permulaan studi.  Dengan  kata  lain,  randomisasi baik  untuk mencampur  subjek,  tetapi  tidak  dapat  menjamin randomisasi ini benar-benar menciptakan kesamaan antara  kedua  kelompok  (Jackson,  2010).  Kedua, pelepasan  RBP  dari  hati  bergantung  pada ketersediaan  vitamin  A.  Vitamin  A  adalah limiting factor ,  keberadaannya  akan  berdampak  pada pelepasan apo-RBP dari hati (Muhilal, 2006).

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan,  dapat
disimpulkan bahwa ekstrak kedelai dapat meningkatkan kadar RBP.
Saran yang dapat diberikan oleh penulis adalah perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  dengan  jumlah sampel  yang  lebih  besar  dengan  waktu  penelitian yang  lebih  panjang  dengan  rancangan  penelitian p retest-posttest  control  group  design untuk mendapatkan  hasil  penelitian  yang  bermakna,  dan diiperlukan penelitian lebih lanjut mengenai kedelai dengan olahan yang berbeda dan manfaat lain yang dimiliki.

## Daftar Pustaka
Bahn,  Le.  2006. Serum  Proteins  as  Markers  of Nutrition:  What  Are  We  Treating?. Nutrition Issues In GastroEnterology, 43: 1-11.
Irwan,  Wawan.  2006. Budidaya  Tanaman  Kedelai (Glycine max (L.) Merril) . Jatinangor. Hal 1-10.
Jackson,  S.L.  2010. Research  Methods  A  Modular Approach,  2nd  Edition. Canada:  Nelson Education, Ltd.
Johnston  I.  2003. Phtochem  Functional  Foods .  CRC Press Inc. Pp 66-68.
Masrizal,  M.A.  2003. Effects  of  Protein-Energy Malnutrition  on  The  Immune  System .  Makara Sains. Vol. 7(2): 69-73.
Muhilal  H,  Glover  J.  2006. Effects  of  Dietary Deficiencies  of  Protein  and  Retinol  on  the Plasma.
Smith  F.R.,  Goodman  DS,  Zaklairina  MS,  Gahr  MK, Maraghy  SE,  Patwardhan  VN.  2003. Serum Vitamin A, Retinol-Binding-Protein and
Prealbumin  Concentrations  in  Protein-Caloric Malnutrition.  I.  A.  Funtional Defect  in  Hepatic Retinol Release. Amer J Clin Nutr.
Whitney,  E. 2005. Understanding in Nutrition . Edisi Kesepuluh. USA: Thomson Wadsworth.