## JIFI (JURNAL ILMIAH FARMASI IMELDA)
Vol.5, No.1, September 2021, pp. 26-34 ISSN: 2597-7164 (Online), 2655-3147 (Print) https://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALFARMASI
 26

## EFEK EKSTRAK TANAMAN ASHITABA PADA KADAR SERUM ALKALIN FOSFATASE (ALP) PADA TIKUS YANG TERPAPAR LUKA BAKAR
Andrew Johan 1 , Kusmiyati Tjahjono 2 , Wenda Yoanda 3 , Dwi Ngestiningsih 4 , Lusiana Batubara 5 1,2,3,4,5 Department of Biology and Biochemistry, Faculty of Medicine, Diponegoro University, Semarang, Indonesia
Article Info ABSTRACT Article history: Received Sep 27, 2021 Revised Sep 29, 2021 Accepted Sep 30, 2021 Serum  alkaline  phosphatase  (ALP)  levels  increases  in  burn  tissue damage. The extract of  Ashitaba, are expected to reduce serum ALP levels and enhance the process of wound healing. This study aims to prove  that  administration  of  oral  Ashitaba  extract  can  reduce  serum ALP  levels  in  rats  exposed  to  burn  injury.  This  study  uses experimental  post-test  only  with  control  group  design.    A  total number of 20 male Sprague dawley rats as samples. All samples were treated  with  2nd  degree  burn  wound  and  divided  into  2  groups, treatment group (Ashitaba extract 300 mg/KgBW) and control group. Blood serum were analyzed for ALP levels on the 2nd, 8th and 14th days. Kinetic-IFCC method was used to find serum ALP levels. Data was  analyzed  using  Mann-Whitney  Test,  paired  T-test  amd independence T-test. Scalded wound size was measured macroscopically  over  the  course  of  21  days  to  find  contracture rate. In  conclusion,  Ashitaba  extract is not  proven  to  significantly  reduce the  serum  ALP  levels,  increase  contracture  rate  and  enhance  burn wound healing process. However, there was slight increase (14%) in contracture rate in treatment group as compared to control group. In addition,  there  was  a  lower  ALP  levels  (30%) in  treatment group  as compared to control group in day 8.
Keywords:
Ashitaba Extract
Serum  Alkaline  Phosphatase Burn Injury
This is an open access article under the CC BY-SA license.
Corresponding Author:
Andrew Johan, Department of Biology and Biochemistry, Diponegoro University, Jl. Jl Prof Sudharto, SH Tembalang Semarang 50275, Jawa Tengah-Indonesia. Email: andrewjohan@fk.undip.ac.id

## 1. INTRODUCTION
Luka  bakar  didefinisikan  sebagai  kerusakan  pada  kulit  dan/atau  lapisan  jaringan    dalam yang  disebabkan  oleh  api,  cairan  panas,  gigitan  beku,  listrik,  radiasi,  laser  dan  bahan  kimia. Morbiditas dan  mortalitas luka bakar cukup tinggi. Menurut Organisasi Kesehatan Dunia (WHO), 90%  dari  insiden  luka  bakar terjadi  pada  individu  dengan  status  sosial  ekonomi  rendah  di  negara berkembang  dimana  infrastruktur  dibangun  dengan  buruk.  Angka  kejadian  luka  bakar  tertinggi pada  wanita  di  Asia  Tenggara  dan  27%  pasien  luka  bakar  di  seluruh  dunia  berakhir  dengan kematian.  Data  dari  studi  epidemiologi  yang  dilakukan  di  Rumah  Sakit  Cipto  Mangunkusumo
(RSCM) antara tahun 2012 dan 2016 menunjukkan bahwa penyebab utama luka bakar pada orang dewasa adalah api (53,1%), diikuti oleh air panas (19,1%), listrik (14%), kontak (5%) dan terakhir bahan kimia (3%) [1]. Penyebab utama luka bakar pada anak adalah air panas (52%), diikuti oleh api (26%), kontak (15%), listrik (6%) dan terakhir bahan  kimia (1%). Sebuah artikel  oleh Garcia- Espinoza  et  al  pada  tahun  2017  menyebutkan  bahwa  penyebab  luka  bakar  yang  paling  sering adalah  karena  cairan  panas  [2].  Derajat  luka  bakar  dapat  diklasifikasikan  menjadi  3  kelompok. Luka  bakar  derajat  satu  hanya  mengenai  lapisan  epitel  dengan  gejala  seperti  kemerahan  tanpa vesikel. Luka bakar tingkat dua mempengaruhi epidermis dan dermis sedangkan luka bakar tingkat ketiga  melibatkan  seluruh  lapisan  kulit  [3].  Terdapat  tiga  mekanisme  utama  dalam  patofisiologi luka  bakar  yang  meliputi  trombosis  akibat  kerusakan  pembuluh  darah,  peningkatan  mediator inflamasi  dan  faktor  proapoptosis.  Akibatnya,  terjadi  peningkatan  mediator  inflamasi  seperti makrofag,  sitokin,  dan  interleukin  [4]  [5].  Elemen  proinflamasi,  seperti  spesies  oksigen  reaktif (ROS)  dan  spesies  nitrogen  reaktif  (RNS),  juga  diproduksi  pada  luka  bakar. Selain  itu,  isoenzim, alkalin fosfatase (ALP), yang biasanya hanya ditemukan pada organ tertentu, ditemukan meningkat pada kondisi patologis seperti kerusakan jaringan terutama pada inflamasi dan granulasi [6] [7].
Angelica  keiskei  koidzumi atau  yang  juga  dikenal  sebagai  Ashitaba  merupakan  salah  satu jenis  tanaman  herbal  yang  berasal  dari  Jepang  yang  telah  dibudidaya  di  Indonesia.  Ramuan  ini terkenal  di  Asia  sebagai  obat  alami  yang  efektif  untuk  berbagai  penyakit  seperti  flu,  hepatitis, radang sendi, masalah pencernaan, demam dan infeksi mikroba [8]. Ashitaba mengandung berbagai komponen  bioaktif  yang  bermanfaat  dimana  terdapat  tiga  senyawa  bioaktif  utama  yang  meliputi prenylated  chalcones , linier  coumarine dan  sudut,  dan  flavanon  [9].  Senyawa  ini  ditemukan memiliki  unsur  sitotoksik,  antidiabetik,  antiobesitas,  antioksidan,  antiinflamasi,  antitrombotik, antihipertensi dan antimikroba. Chalcone xanthoangelol dan 4-hydroxyderricin , komponen bioaktif utama Ashitaba terbukti dapat meningkatkan proliferasi dan migrasi sel endotel serta mempercepat proses  penyembuhan  luka  [10].  Oleh  karena  itu,  dengan  banyak  elemen  bermanfaat  seperti antiinflamasi, antioksidan dan antimikroba, Ashitaba memiliki potensi tinggi dalam mengobati luka bakar.

## 2. RESEARCH METHOD
Penelitian ini terdiri dari 2 tahap utama: 1. Uji coba hewan yang dilakukan di Laboratorium Hewan Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, dan 2. Analisis serum darah yang dilakukan di  Laboratorium  Klinik  Permata,  Semarang.  Prosedur  percobaan  telah  disetujui  oleh  Komisi  Etik Penelitian  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Diponegoro  Semarang  No.102/EC/H/KEPK/FK- UNDIP/VII/2019.

## Alat dan Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain  serbuk  Ashitaba  ( Angelica  keiskei koidzumi )  siap  pakai  yang  telah  diteliti  dan  dikembangkan  oleh  Osaka-Pharmaceutical  University dan  disetujui  oleh  Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan  Indonesia.  Sebanyak  20  ekor  tikus  jantan Sprague Dawley digunakan sebagai subjek percobaan. Tikus-tikus tersebut berumur 10-12 minggu, dengan bobot badan antara 106-149 gram.

## Subjek Penelitian
Dua puluh ekor tikus jantan Sprague Dawley dibagi dan ditempatkan dalam tiga kandang. Selama  percobaan,  siklus  terang/gelap  12  jam  yang  terkontrol,  suhu  kamar  29°C  dan  kelembaban relatif  60%  dipertahankan.  Untuk  tujuan  aklimatisasi,  tikus  dibiarkan  beradaptasi  1  minggu sebelum percobaan dimana mereka diberi akses cukup terhadap diet pelet dan air dalam botol. Satu hari  sebelum  proses  perlakuan  luka  bakar,  seluruh  bagian  punggung  tikus  dicukur  untuk mendapatkan  area  yang  tidak  berbulu  seluas  5cm  x  5cm.  Kemudian  tikus  dibius  dengan menyuntikkan  ketamin  0,1  ml/100  mg  secara  intraperitoneal  (i.p.).  Setelah  5  menit  anestesi,  area yang  tidak  berbulu  disiram  air  panas  dengan  menggunakan  corong  mulut  berukuran  5cm  x  5cm selama 15 detik. Kemudian, tikus diacak  menjadi 2 kelompok yang sama terdiri dari sepuluh  ekor yang  meliputi  kelompok  kontrol  (10  tikus  diberi  pakan  standar  tanpa  ekstrak  tanaman  Ashitaba) dan  kelompok  perlakuan  (10  tikus  diberi  pakan  standar  dan  ekstrak  tanaman  Ashitaba  dosis
28
300mg/kgBB) [11]. Setiap hari, daerah luka bakar akibat tersiram air panas dibilas dengan larutan natrium klorida 0,9%. Ekstrak tanaman Ashitaba dosis 300 mg/kgBB diberikan secara oral setiap 2 hari selama 21 hari pengamatan.

## Pengukuran Kadar Alkalin Fosfatase (ALP)
Untuk  mengetahui  kadar  ALP,  digunakan  sampel  serum  darah retroorbital.  Darah  diambil tiga  kali  melalui  retroorbital  pada  hari  ke-2,  8  dan  14  setelah  terpapar  air  mendidih.  Darah retroorbital kemudian disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 1500 rpm. Metode Kinetic- IFCC (tanpa pyridoxal-5-phosphate ) [12] digunakan dalam analisis kadar ALP. Prinsip analisis ini adalah  menentukan  aktivitas  kinetik  ALP  dengan  mengukur  P-nitrofenol  menggunakan spektrofotometer.
Campuran reagen pada metode ini dihomogenkan pada suhu 37 0 C selama 30 detik. Tingkat absorbansi  diukur  pada  panjang  gelombang  400-420  nm  menggunakan aquadest sebagai  blanko. Tingkat  absorbansi  kemudian  diukur  kembali  pada  menit  pertama,  kedua  dan  ketiga  dan  dihitung kenaikan  rata-rata  absorbansi  per  menit.  Aktivitas  ALP  kemudian  dapat  ditemukan  dengan menggunakan persamaan berikut: Rata-rata peningkatan Absorbansi per  menit x 3298 = Aktivitas ALP (U/I)

## Evaluasi Proses Penyembuhan Luka Bakar
Setiap  hari,  luka  bakar  didokumentasikan  dan  dievaluasi  pada  hari  ke-1,  5,  8,  12,  15,  18 dan 21. Luka bakar dievaluasi berdasarkan parameter berikut: warna dasar luka, keluarnya cairan, kekencangan  kulit  dan  adanya  edema.  Diameter  luka  diukur  untuk  tujuan  menghitung  laju kontraktur yang mengikuti rumus berikut [13]:

## 3. RESULTS AND ANALYSIS Tingkat Alkaline Fosfatase
Pada  penelitian  ini,  rata-rata  kadar  serum  ALP  pada  kelompok  kontrol  pada  hari  ke-2 adalah 511 IU L-1 sedangkan rata-rata kadar ALP serum pada kelompok perlakuan pada hari ke-2 adalah  871  IU.  Pada  hari  ke-8,  rata-rata  kadar  ALP  serum  pada  kelompok  kontrol  adalah  809 sedangkan  pada  kelompok  perlakuan  adalah  612.  Rata-rata  kadar  serum  ALP  pada  kelompok kontrol pada hari ke-14 adalah 894 sedangkan pada kelompok perlakuan adalah 890.
Tabel 1. Kadar Serum ALP Pada Kelompok Kontrol Dan Perlakuan Pada Hari Ke 2, 8 dan 14
Kelompok N Mean ± SD (U/I) Hari ke-2 Kontrol 6 511,00 ± 341,92 Perlakuan 6 871,00 ± 144,32 Hari ke-8 Kontrol 6 809,00 ± 244,20 Perlakuan 6 612,00 ± 154,46 Hari ke-14 Kontrol 6 894,00 ± 223,50 Perlakuan 6 890,00 ± 111,39
Pada hari ke-8: Penurunan kadar serum ALP pada kelompok Perlakuan: 30%.
Gambar 1. Perbandingan Antara Kadar Serum ALP Pada Kelompok Yang Berbeda Berdasarkan  gambar  1,  diagram  batang  menunjukkan  bahwa  rata-rata  kadar  serum  ALP menurun saat hari ke-8 pada kelompok perlakuan.
Tabel 2 . Uji Beda Kadar ALP Serum Antara Kelompok Kontrol Dan Perlakuan Pada Hari Ke-2, 8
Dan 14 Kelompok Sig. Day 2 0,051* Day 8 0,126* Day 14 0,969* *Independence T-test (p<0,05)
Data  dari  tabel  2  menunjukkan  bahwa  tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  antara kelompok  kontrol dan  kelompok perlakuan pada hari ke-2 (p = 0,051), hari ke-8 (p = 0,126), dan hari ke-14 (p = 0,969).
Kemudian  untuk  mengetahui  apakah  ada  perbedaan  yang  signifikan  antara  kelompok kontrol  pada  hari  ke-2  dan  hari  ke-8,  kelompok  kontrol  pada  hari  ke-8  dan  hari  ke  14,  dan kelompok  perlakuan  pada  hari  ke-8  dan  hari  ke-14  digunakan  uji-t  berpasangan.  Perbedaan dianggap signifikan jika p-value < 0,05 [14-16].
Tabel 3. Uji Perbedaan Kadar ALP Serum Antara Hari Ke-2 Dan Hari Ke-8, Hari Ke-8 Dan Ke- 14, Serta Hari Ke-2 Dan Ke-14 Baik Kelompok Kontrol Maupun Kelompok Perlakuan
Group Sig. Kontrol Hari ke-2 dan 8 0,023* Kontrol Hari ke-8 dan 14 0,587* Kontrol Hari ke-2 dan 14 0,097* Perlakuan Hari ke-2 dan 8 0,071* Perlakuan Hari ke-8 dan 14 0,004* Perlakuan Hari ke-2 dan 14 0,825* * Paired T-test (p<0,05)
Mengacu dari tabel 3, perbedaan bermakna hanya ditemukan antara kadar ALP serum pada kelompok  kontrol  pada  hari  ke-2  dan  hari  ke-8  (p  =  0,023),  dan  antara  kelompok  perlakuan  pada hari ke-8 dan hari ke-14 (p = 0,004).

## Laju Kontraktur Luka
30
Tabel 4. Rata-Rata Tingkat Kontraktur Luka Kontrol Mean Kontrol Perlakuan Hari ke-5 72,594 83,84 Hari ke-8 69,211 74,28 Hari ke-12 66,788 64,6 Hari ke-15 63,131 60,76 Hari ke-18 59,703 50,2 Hari ke-21 57,829 45,2
Peningkatan  kontraktur  luka  saat  hari  ke-5  mencapai  14%  pada  kelompok  perlakuan apabila dibandingkan dengan kelompok kontrol.
Gambar 2 . Laju Kontraktur Luka Berdasarkan  Gambar  2,  kecenderungan  menurun  terlihat  pada  luas  luka  bakar  pada kelompok  kontrol  dan  perlakuan  selama  21  hari.  Secara  keseluruhan,  selama  21  hari,  gradien tingkat  kontraktur  kelompok  perlakuan  lebih  curam  daripada  kelompok  kontrol.  Namun,  diamati bahwa  tingkat  kontraktur  kelompok  kontrol  lebih  cepat  daripada  kelompok  perlakuan  selama sepuluh hari pertama.
Tabel 5. Uji Normalitas Area Luka Bakar ( Saphiro-Wilk )
Kelompok Sig. Kontrol Perlakuan Hari ke 5 0,252* 0,236* Hari ke 8 0,265* 0,063* Hari ke 12 0,222* 0,067* Hari ke 15 0,033 0,592* Hari ke 18 0,113* 0,903* Hari ke 21 0,031 0,155*
*p > 0,05
Uji  normalitas  Saphiro-Wilk  dilakukan  pada  luas  luka  bakar  pada  kelompok  kontrol  dan kelompok perlakuan pada hari ke-5, 8, 12, 15, 18 dan 21. Hasil pengujian menunjukkan bahwa data yang berdistribusi  normal adalah kelompok kontrol pada hari 5 (p=0,252), kelompok  kontrol pada hari ke-8 (p=0,265), kelompok kontrol pada hari ke-12 (p=0,222), kelompok kontrol pada hari ke- 18  (p=0,113),  kelompok  perlakuan  pada  hari  ke-5  (p=0,236),  kelompok  perlakuan  hari  ke-8 (p=0,063),  kelompok  perlakuan  hari  ke-12  (p=0,067),  kelompok  perlakuan  hari  ke-15  (p=0,592), kelompok  perlakuan  hari  ke-18  (p=0,903)  dan  kelompok  perlakuan  hari  ke-21  (p=0,155). Sedangkan, data kelompok kontrol pada hari ke-15 (p=0,033) dan kelompok kontrol pada hari ke- 21 (p=0,031) menunjukkan distribusi yang tidak normal.
Selanjutnya dilakukan uji independent t-test untuk mengetahui apakah ada perbedaan yang signifikan antara kelompok kontrol dan  kelompok perlakuan pada hari ke-5, 8, 12 dan 18, dimana perbedaan  tersebut  dianggap  signifikan  jika  p-value  <  0,05.  Di  sisi  lain,  uji  Mann-Whitney  [16] dilakukan  untuk  menemukan  perbedaan  yang  signifikan  antara  kelompok  kontrol  dan  kelompok perlakuan pada hari ke-15 dan hari ke-21.
Tabel 6. Uji Beda Luas Luka Bakar Kelompok Kontrol Dan Kelompok Perlakuan Pada Hari Ke-5,
8, 12, 15, 18 dan 21 Kelompok Sig. Hari ke 5 0,272* Hari ke 8 0,552* Hari ke 12 0,758* Hari ke 15 0,924** Hari ke 18 0,345* Hari ke 21 0,412** * Independent T-test (p<0,05)
** Mann Whitney Test (p<0,05)
Mengacu  dari  tabel  6,  tidak  ada  perbedaan  yang  signifikan  antara  angka  kontraktur kelompok kontrol dan kelompok perlakuan pada semua hari.

## Analisis Alkalin Fosfatase
Data  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  tidak  terdapat  perbedaan  yang  bermakna  antara kadar ALP serum pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan pada hari ke-2, 8 dan 14. Hal ini mungkin disebabkan karena kurangnya variasi dosis yang digunakan dalam percobaan karena dosis yang  digunakan  hanya  300  mg/KgBB.  Akibatnya,  dosis  optimal  untuk  percobaan  ini  tidak  dapat ditentukan.  Pemilihan  dosis  didasarkan  pada  beberapa  penelitian  sebelumnya  terkait  dengan Ashitaba. Dalam penelitian sebelumnya yang dilakukan di Atsugi Breeding Center di Jepang, dosis oral 300 mg/KgBB terbukti sebagai dosis efek non-genotoksik [11]. Selain itu beberapa penelitian lain  yang  dilakukan  menggunakan  dosis  antara  100-500  mg/kgBB.  Namun,  belum  ada  penelitian yang membuktikan dosis optimal ekstrak tanaman Ashitaba dan hubungannya dengan luka bakar.
Selain itu, data menunjukkan bahwa ada peningkatan yang signifikan rata-rata tingkat ALP pada kelompok kontrol antara hari ke-2 dan hari ke-8 tetapi tidak ada peningkatan yang signifikan yang  diamati  antara  hari  ke-2  dan  ke-14  serta  antara  hari  ke-8  dan  ke-14.  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian  yang  dilakukan  oleh  Usha  Adiga  et  al  pada  tahun  2015  [17]  yang  menyatakan  bahwa kadar serum ALP meningkat pada 7 hari pertama sejak paparan air mendidih tetapi menurun 21-35 hari kemudian. Ini menjelaskan fakta bahwa ada peningkatan yang signifikan pada hari ke-8 tetapi tingkat  peningkatannya  melambat  2  minggu  kemudian.  Hal  ini  juga  sesuai  dengan  proses penyembuhan  luka  yang  terbagi  menjadi  3  fase  yaitu  inflamasi,  proliferasi  dan  remodelling.  Fase inflamasi  terjadi  dalam  24-48  jam  pertama  [18].  Fase  proliferasi  melibatkan  proses  angiogenesis, fibroplasia  dan  reepitelisasi,  yang  terjadi  2-14  hari  kemudian.  Sesuai  dengan  jurnal  oleh  Denise Hawkins  et  al  pada  tahun  2007  [20].  Kadar  ALP  tertinggi  pada  jaringan  granulasi  dan  fibroblas ditemukan pada fase proliferasi. Akibatnya, terjadi peningkatan yang signifikan pada hari ke-8 dan terjadi  peningkatan  pada  hari  ke-14.  Fase  remodeling  terjadi  2-3  minggu  setelahnya  sehingga peningkatan kadar serum ALP melambat pada hari ke-14 [21].
Hasil yang diperoleh juga menunjukkan bahwa terdapat penurunan kadar ALP serum yang tidak  signifikan  antara  hari  ke-2  dan  ke-8.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  tanaman  Ashitaba mungkin  memiliki  beberapa  manfaat  dalam  mengobati  luka  bakar  tetapi  manfaatnya  kurang signifikan secara statistik karena kurang optimalnya pengobatan dosis yang digunakan. Sebaliknya, kadar  serum  ALP  meningkat  secara  signifikan  pada  hari  ke-14  yang  menunjukkan  progresi kerusakan  jaringan.  Hal  ini  mungkin  disebabkan  oleh  volume  darah  yang  diambil  terlalu  banyak karena  dilakukan  setiap  minggu  selama  percobaan.  Volume  darah  yang  diambil  dalam  percobaan ini  adalah  10%  dari  total  volume  darah  yang  mengikuti  pedoman  oleh National  Center  for  the Replacement  Refinement  &  Reduction  of  Animals  in  Research .  Namun,  jurnal  lain  dari  Jackson Laboratory pada tahun 2005 [22], menyatakan bahwa volume maksimum darah yang diambil tidak boleh  melebihi  7,5%  dari  total  volume  darah  jika  pengambilan  darah  dilakukan  setiap  minggu.
32
Sedangkan volume maksimal darah yang diambil tidak boleh melebihi 10% dari total volume darah jika  darah  diambil  setiap  dua  minggu.  Menurut  jurnal  ini,  kehilangan  darah  dapat  mengganggu stabilitas  fisiologis  tikus  dan  ambang  batas  maksimum  volume  darah  yang  diambil  menurun  pada tikus  dengan  meningkatnya  tingkat  stres  yang  meliputi  luka  bakar.  Kehilangan  darah  yang berlebihan dapat menyebabkan syok hipovolemik terutama pada tikus yang terkena luka bakar. Hal ini akan mempengaruhi proses penyembuhan luka.
Selain  itu,  terjadinya  infeksi  dan  sepsis  dapat  menjadi  faktor  pendukung  hasil  percobaan. Paparan luka bakar ke lingkungan yang terkontaminasi dan penularan langsung dari peneliti dapat menyebabkan invasi bakteri berbahaya dan memperlambat proses penyembuhan luka [23]. Hal ini dapat  diamati  pada  percobaan  ini  yang  dibuktikan  dengan  adanya  nanah  yang  terlihat  pada beberapa  luka  bakar.  Infeksi  dan  sepsis  juga  dapat  menyebabkan  kerusakan  sel  lebih  lanjut  yang meningkatkan kadar serum ALP sehingga mengubah hasil percobaan [17].

## Analisis Laju Kontraktur Luka
Gambar 3. Pengamatan Makroskopik Lesi Luka Bakar Selama 21 Hari Data menunjukkan bahwa luas luka bakar pada kelompok kontrol dan kelompok perlakuan berkontraksi  dan  mengecil  selama  21  hari  pengamatan.  Hal  ini  sesuai  dengan  teori  proses penyembuhan  luka  yang  terbagi  menjadi  3  fase  yaitu  inflamasi,  proliferasi  dan  remodeling.  Fase inflamasi  biasanya  terjadi  dalam  24-48  jam  pertama  [18].  Fase  proliferasi  meliputi  angiogenesis, fibroplasia  dan  reepithelialisaton,  yang  terjadi  dalam  2-14  hari  ke  depan  [19].  Terakhir,  fase remodeling  terjadi  2-3  minggu  hingga  1  tahun  atau  lebih,  di  mana  luka  mulai  berkontraksi  [21]. Namun,  tidak  ada  perbedaan  signifikan  yang  ditemukan  antara  area  luka  bakar  pada  kelompok kontrol dan kelompok perlakuan dalam semua hari selama 21 hari. Ini mungkin karena dosis yang digunakan tidak optimal untuk menghasilkan hasil yang signifikan. Dosis Ashitaba yang digunakan hanya  berdasarkan  penelitian  sebelumnya  yang  tidak  spesifik  untuk  kasus  luka  bakar  [11]. Berbagai  dosis  diperlukan  dalam  percobaan  masa  depan  untuk  memastikan  apakah  hasil  yang signifikan dapat diperoleh.

## 4. CONCLUSION
Kesimpulannya,  ekstrak  tanaman  Ashitaba  tidak  terbukti  secara  signifikan  menurunkan kadar  ALP  serum,  meningkatkan  tingkat  kontraktur  dan  mempercepat  proses  penyembuhan  luka bakar. Namun, ada sedikit peningkatan tingkat kontraktur pada kelompok perlakuan  dibandingkan dengan  kelompok  kontrol.  Selain  itu,  terdapat  penurunan  kadar  ALP  pada  kelompok  perlakuan dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol  pada  hari  ke-8.  Penelitian  lebih  lanjut  terutama  mengenai variasi  dosis  untuk  menentukan  dosis  optimal  perlu  dilakukan  untuk  memastikan  efektivitas Ashitaba  dalam  mengobati  luka  bakar.  Tes  tambahan  seperti  pemeriksaan  histopatologi  dan indikator  laboratorium  seperti  albumin,  malondialdehid,  glutathione  dan  superoksida  dismutase juga dapat dimasukkan dalam penelitian terkait di masa mendatang.

## Ucapan Terima kasih:
Karya  tulis  ini  didukung  oleh  Departemen  Biologi  dan  Biokimia,  Fakultas  Kedokteran
Universitas Diponegoro.

## REFERENCES
[1]  Keputusan  Menteri  Kesehatan  Republik  Indonesia  Nomor  HK.01.07/MENKES/555/201  9 Tentang Pedoman Nasional Pelayanan Kedokteran Tata Laksana Luka Bakar
[2]  Garcia-Espinoza  JA,  Aguilar-  Aragon  VB,  Ortiz-Villalobos  EH,  Garcia-Manzano  RA, Antonio  BA.  Burns:  Definition,  Classification,  Pathophysiology  and  Initial  Approach, International  Journal  of  General  Medicine,  2017;  5:5,  https://doi.org/10.4172/2327- 5146.1000298
[3]  Tiwari  VK.  Burn  wound:  How  it  differs  from  other  wounds?,  Indian  Journal  of  Plastic Surgery, 2012;45(2):364–373, https://doi.org/10.4103/0970- 0358.101319
[4]  Sehirli  O, Sener  E, Sener  G,  Cetinel  S,  Erzik  C,  Yeğen  BC.  Ghrelin  improves  burn-  induced multiple organ injury by depressing neutrophil infiltration and the release of pro-inflammatory cytokines, Peptides, 2008; 29:12. 31–40, https://doi.org/10.1016/j.peptides.2008.02.012
[5]  Wang S, Huang Q, Guo J, Local thermal injury induces general endothelial  cell contraction through p38 MAP kinase  activation, Acta Pathologica,
Microbiologica,
et Immunologica Scandinavica, 2014;122:832–41, https://doi.org/10.1111/apm.12226
[6]  Huang QB, Relationship between the endothelial barrier and vascular permeability after burns and its mechanism, Zhonghua Shao Shang Za Zhi, 2007; 23: 324–6.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18396754/
[7]  Cotran RS, Abbas AK, Fausto N, Robbins SL, Kumar V, Robbins & Cotran: Patologia - Bases Patológicas das Doenças, 7. ed. Rio de Janeiro: Elsevier; 2005. 1592 p
[8]  Sarkar  SD,  Nahar  L,  Natural  medicine:  the  genus  Angelica,  Current  Medicinal  Chemistry, 2004; 11: 1479-1500, https://doi.org/10.2174/0929867043365189
[9]  Caesar LK, Cech NB. A Review of the Medicinal Uses and Pharmacology of Ashitaba, Planta Medica, 2016 ;82(14):1236-45. https://doi.org/10.1055/s-0042-110496
[10] Hisatome  T,  Wachi  Y,  Yamamoto  Y,  Ebihara  A,  Ishiyama  A,  Miyazaki  H,  Promotion  of Endothelial  Wound  Healing  by  the  Chalcones  4-hydroxyderricin  and  Xanthoangelol,  and  the Molecular  Mechanism  of  This  Effect,  Journal  of  Sustainable  Agriculture,  2017;  12:  25-33, https://doi.org/ 10.1262/jrd.2018-141
[11] Maronpot  RR,  Toxicological  assessment  of  Ashitaba  Chalcone,  Food  Chemical  Toxicology, 2015; 77: 111–19, https://doi.org/ 10.1016/j.fct.2014.12.021
[12] Tietz  NW,  Rinker  AD,  Shaw  LM.  IFCC  methods  for  the  measurement  of  catalytic concentration  of  enzymes,  Part  5,  IFCC  method  for  alkaline  phosphatase,  Journal  of  Clinical Chemistry and Clinical Biochemistry, 1983;21:731-748.
[13] Zhang XG, Li XM, Zhou XX, Wang  Y, Lai WY, Liu Y, et al, The Wound Healing Effect of Callicarpa  Nudiflora  in  Scalded  Rats,  Evidence  Based  Complement  Alternative  Medicine. 2019; 2019: 1-8, https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/6655448/
[14] Ghasemi  A, Zahediasl S, Normality tests for statistical  analysis: a guide for non-statisticians, International Journal of Endocrinol and Metabolism, 2012; 10(2): 486-489, https://doi.org/10.5812/ijem.3505
[15] Kim TK. T test as a parametric statistic. Korean Journal of Anesthesiology, 2015; 68(6): 540- 546, https://doi.org/10.4097/kjae.2015.68.6.540
[16] Fay  MP,  Proschan  MA.  Wilcoxon-Mann-Whitney  or  t-test?  On  assumptions  for  hypothesis tests  and  multiple  interpretations  of  decision  rules,  Statistics  Survey.  2010;  4:1-39, https://doi.org/10.1214/09-SS051
[17] Adiga  U,  Adiga  S,  Biochemical  Changes  in  Burns,  International  Journal  of  Research  Studies in Biosciences, 2015; 3(7): 88-91, https://doi.org/10.1136/pgmj.48.557.144
[18] Eming  SA,  Krieg  T,  Davidson  JM.  Inflammation  in  wound  repair  molecular  and  cellular mechanisms, Journal of Investigative Dermatology, 2007; 127: 514–525. https://doi.org/10.1038/sj.jid.5700701
[19] Li  J,  Chen  J,  Kirsner  R,  Pathophisiology  of  acute  wound  healing,  Clinics  in  Dermatology, 2007;25:9–18, https://doi.org/10.1016/j.clindermatol.2006.09.007
[20] Hawkins,  Denise,  and  Heidi  Abrahamse,  “How  Should  an  Increase  in  Alkaline  Phosphatase
34
Activity Be Interpreted?” Laser Chemistry, 2007.1–10, https://doi.org/10.1155/2007/49608 [21] Gonzalez  AC,  Costa  TF,  Andrade  ZA,  Medrado  AR,  Wound  healing  –  A  literature  review,
The journal Brazilian Annals of Dermatology,
2016; 91(5): 614–20, https://doi.org/10.1590/abd1806-4841.20164741
[22] The Jackson Laboratory, How Much Blood Can I Take From A Mouse Without Endangering Its Health? eNews, 2005, https://www.jax.org/news-and-insights
[23] Church  D,  Elsayed  S,  Reid  O,  Winston  B,  Lindsay  R,  Burn  Wound  Infections,  Clinical Microbiology Reviews, 2006; 19(2), https://doi.org/10.1128/CMR.19.2.403-434.2006.