http://jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindo/index

## Aktivitas Antijamur Ekstrak Etanol Daun Cengkodok

## (Melastoma malabathricum) Terhadap Pertumbuhan Malassezia furfur
Willy Sanjaya 1 , Ambar Rialita 2 , Mahyarudin Mahyarudin 3*
1 Prodi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura, Indonesia
2 Departemen Dermatovenerologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura, Indonesia
3 Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura, Indonesia
Article info Abstract History Submission : 22-02-2020
Review : 04-09-2020 Accepted : 19-01-2021
* Email: mahyarudin@medical.untan.ac.id
DOI: 10.33096/jffi.v8i1.614
Keywords: Antifungal; Melastoma malabathricum; Malassezia furfur
Pityriasis versicolor (PV) is an infection on epidermal layer of skin and the common caused by a type of yeast that live on the skin named Malassezia furfur.  The  increasing  of  fungal  resistant  against  antifungal  and  high reccurence  rate  after  cured  in  2  years  about  80%,  requires  alternative treatment  that  come  from  plants.  Cengkodok  leaves  (Melastoma malabathricum)  is  used  conventionally  as  an  alternative  medicine. Cengkodok  leaf  produces  secondary  metabolites  which  have  antifungal activity . The aim of this study was to investigate the antifungal activity of ethanolic extract Melastoma malabathricum leaves (EEMML). Phytochemical  screening  of  EEMML  were  performed  using  Thin  Layer Chromatography (TLC). Melastoma malabathricum leaves were extracted with  maceration  method  using  96%  ethanol.  The  testing  of  antifungal activity was determined using disc-diffusion method with the concentration of 5; 20; 50; 100; 250; 500 ppm. Ketoconazole 10 ug/disc and Itraconazole 8ug/disc  was  used  as  positive  control  while  negative  control  used  10% dimethyl  sulfoxide  (DMSO). EEMML  didn’t  showed  zone  of  inhibition against  Malassezia  furfur  although  100%  concentration  extract  used. EEMML have no antifungal activity against Malassezia furfur.

## I. Pendahuluan
Pityriasis  versicolor (PV)  adalah  infeksi superfisial  pada  kulit  yang  disebabkan  oleh  jamur dengan spesies Malassezia. Kasus PV paling sering disebabkan  oleh  spesies Malassezia  furfur  (M. furfur) sebanyak 70% kasus (Crespo EV, Florencio, 2006).  Penyakit  PV  sulit  disembuhkan,  karena kekambuhan setelah perawatan setinggi 80% dalam waktu 2 tahun (Gupta and Foley, 2015). Antijamur topikal  merupakan  lini  pertama  pengobatan  untuk kasus  PV.  Sampai  saat  ini  belum  ada  pengobatan yang memberikan hasil memuaskan dalam mengontrol  tanda  dan  gejala  PV  terutama kekambuhannya,  dikarenakan  strain M.  furfur ditemukan  telah  resisten  dengan  antijamur  seperti golongan azol (Mahmoud Y et al, 2015). Tanaman cengkodok (Melastoma  malabathricum) telah digunakan  secara tradisional  untuk  mengobati luka iris, diare, disentri, wasir, sakit gigi, dan sakit perut. Secara  ilmiah,  menunjukkan  aktivitas  sebagai antiulserasi,  antinyeri,  antiinflamasi,  antioksidan, aktivitas  sitotoksik, dan antijamur. Hasil penelitian Joffry pada tahun 2012, ditemukan bahwa tanaman cengkodok memiliki kandungan flavonoid, triterpenoid,  tanin,  saponin,  alkaloid,  steroid, glikosida,  dan  fenol  (Joffry et  al. ,  2012).  Daun cengkodok  ini  diharapkan  memperbaiki  tampakan
kulit  pasien  PV  dan  menjadi  alternatif  antijamur dengan adanya kemampuan meregenerasi kulit, efek antiinflamasi,  dan  kandungan  metabolit  sekunder dari  daunnya.  Pengujian  aktivitas  antijamur  dari ekstrak  daun  cengkodok  belum  banyak  dilakukan. Pengujian  pada  jamur Fusarium  oxysporum yang merupakan  penyebab  onikomikosis,  menunjukkan aktivitas antijamur pada konsentrasi 100% sebanyak 20  ul.  Penelitian  tersebut  menunjukkan  bahwa terdapat  potensi  antijamur  yang  belum  banyak diketahui  selama  ini  (Grosvenor,  Suprinono  and Gray,  1995) . Sehingga  peneliti  tertarik  meneliti tanaman cengkodok ini, untuk mengetahui kemampuannya  sebagai  antijamur  terhadap M. furfur yang kemudian diharapkan menjadi alternatif antijamur terhadap kasus PV saat ini.
II. Metode Penelitian II.1 Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Sampel  berasal  dari  daun  cengkodok ( Melastoma  malabathricum )  segar  yang  diperoleh dari  Jalan  Ayani  II  (Pontianak).  Pengambilan sampel tanaman dilakukan pada pagi hari. Tanaman daun cengkodok ( Melastoma malabathricum ) yang telah  dideterminasi  di  Laboratorium  Biologi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas  Tanjungpura,  kemudian  disortasi  dari
bahan-bahan  pengotor.  Kemudian  daun  cengkodok ( Melastoma  malabathricum )  dicuci  dengan  air mengalir  sebanyak  3  kali  hingga  bersih  dan dikeringkan  hingga  kering  dengan  cara  diangin- anginkan  (selama  ±  2  minggu)  (Prasetyo  MS  and Entang,  2013;  Wahyuni,  Guswandi  and  Rivai, 2014).
Daun
cengkodok
( Melastoma malabathricum )  yang  telah  kering,  dihaluskan dengan menggunakan blender (Philips HR2116/00) hingga  menjadi  serbuk  dengan  ukuran  derajat kehalusan  serbuk  simplisia  yang  sesuai.  Serbuk simplisia  yang  ada  disimpan  dalam  wadah  kedap kering tertutup rapat dalam ruangan terlindung dari cahaya  matahari  dengan  suhu  kamar  (15-30°C) (Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2008).

## II.2 Ektraksi Sampel
Serbuk simplisia daun cengkodok ( Melastoma  malabathricum )  sebanyak  400  mg dimaserasi dengan menggunakan etanol 96% selama 72  jam  dan  pada  tiap  12  jam  sekali-kali  dilakukan pengadukan.  Hasil  maserasi  yang  sudah  direndam 24  jam  disaring  dengan  dan  selanjutnya  residu kembali  dimaserasi  kembali  selama  24  jam.  Filtrat daun cengkodok ( Melastoma malabathricum ) yang diperoleh,  disatukan,  dan  dipekatkan  dengan menggunakan rotary  evaporator (Rotavapor®  II BUCHI)  pada  suhu  58ºC  hingga  diperoleh  ekstrak kental.  Ekstrak  yang  didapat  disimpan  di  dalam wadah  kaca  yang  dilapisi  aluminium  (Yanti, Mudahar  and  Irawan,  2008;  Wahyuni,  Guswandi and Rivai, 2014; Andriyawan, 2015).

## II.3 Analisis Fitokimia
Analisis  fitokimia  dalam  penelitian  ini menguji  kandungan  senyawa  metabolit  terpenoid, steroid,  flavonoid,  steroid,  dan  tanin  dilakukan secara  kualitatif  di  Laboratorium  Kimia  Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas  Tanjungpura  menggunakan  metode Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  yang  disemprot dengan  reagen  penampak  kemudian  diinterpretasi secara  kuantitatif  menggunakan  Pemindai  KLT (CAMAG TLC Scanner) di Laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Gadjahmada. Larutan ekstrak  dilarutkan  menggunakan  eluen  terbaik menyesuaikan  hasil trial  and  error berupa diklorometan  berbanding  asam  asetat  sebesar  7:3. Larutan ekstrak ditotolkan pada adsorben/ penjerap/ fase  diam  berupa  pelat  silika  gel  60  F254  (Merck) kemudian dilihat di bawah sinar lampu UV 254 nm dan 366 nm untuk melihat spot terbaik dari masing- masing  penotolan  larutan  ekstrak    (Hayati et  al. , 2013;  Auzia,  Lukmayani  and  Dasuki,  2017; Sulistyawati, Natalia and Mahyarudin, 2018).

## II.4 Penyiapan Jamur Uji
Isolat  jamur M.  furfur berasal  dari Laboratorium  Parasitologi  Fakultas  Kedokteran Universitas Indonesia diambil satu ose lalu dikultur pada  media  SDA  +  minyak  zaitun  10  ml/L.
Kemudian media SDA yang telah diinokulasi biakan jamur, diinkubasi pada suhu 28ºC selama 18-24 jam hingga didapatkan koloni jamur M. furfur (Marselia, Wibowo and Arreneuz, 2015).
Konfirmasi dilakukan secara mikroskopik, satu  sengkelit  jamur  uji  dari  koloni  biakan  murni difiksasi  pada  kaca  objek  lalu  ditetesi Lactophenol Cotton  Blue (LPCB)  dan  kemudian  diperiksa  di bawah  mikroskop  dengan  perbesaran  400x  dan 1000x.  Hasil  positif  ditunjukkan  dengan  gambaran mikroskopik pseudohifa dan spora seperti “ spaghetti and  meatballs ”.  Karakterisasi  jamur  uji  secara makroskopik  dilakukan  dengan  mengamati  koloni jamur yang terbentuk pada media peremajaan jamur (Prayitno H, 2015).
Koloni  jamur  M.  furfur  diambil  satu  ose kemudian  dimasukkan  ke  dalam  NaCl  0,9  %  dan dihomogenkan  dengan  vortex  (Thermolyne  Model M37610-33)  untuk  disamakan  kekeruhan  dengan standar Mc Farland 0.5
menggunakan spektrofotometer
(UV-2450) dengan hasil absorbansi  0.082  -  0.12  pada  panjang  gelombang 625nm sehingga diperoleh suspensi inokulum yang sesuai standar, yaitu 1-5 x 106 cfu/ml (Sutton, 2011; Marselia,  Wibowo  and  Arreneuz,  2015;  Balouiri, Sadiki and Ibnsouda, 2016).
II.5 Uji  Aktivitas  Ekstrak  Daun  Cengkodok terhadap M. furfur Pengujian daya hambat ekstrak etanol daun cengkodok  terhadap  pertumbuhan  jamur M.  furfur dilakukan dengan metode difusi cakram berdiameter 5  mm.  Sebanyak  200  ul  suspensi  jamur M.  furfur dimasukkan ke dalam cawan petri steril dengan cara diapuskan  dengan  lidi  kapas  steril  pada  15-20  ml media  MHA  yang  telah  memadat.  Kemudian diletakkan cakram dengan konsentrasi 5;20;50;100;250;500  ppm  sebanyak  15  ul,  kontrol positif  pertama  ketokonazol  10ug/disk,  kontrol positif  kedua  itrakonazol  8ug/disk,  dan  kontrol negatif  DMSO  10%    (Cantón  and  Pemán,  2009; Alastruey et  al. ,  2015;  Sarbadhikary et  al. ,  2015; Balouiri,  Sadiki  and  Ibnsouda,  2016;  Hasanah, 2017; Peano et al. , 2017).
Media yang telah berisi jamur uji kemudian ditutup  rapat  dan  diinkubasikan  pada  suhu  35ºC selama  48  jam.  Biakan  jamur  dalam  media  MHA tersebut  diamati  zona  hambat  yang  terbentuk kemudian diameter zona hambat diukur menggunakan  jangka  sorong  untuk  mengetahui aktivitas  antijamur  ekstrak  etanol  daun  cengkodok ( Melastoma malabathricum ). Diameter zona hambat pada waktu 48 jam dikategorikan tingkat responnya berdasarkan  Tabel  1  (Shukla  and  Bhalodia,  2011; Yurayart et  al. ,  2013;  Jannata,  Gunadi  and Ermawati, 2014).
1 8 6 4 2 1 3 5
7
9
Tabel 1 . Klasifikasi Respon Hambatan Pertumbuhan Jamur (Marotta et al. , 2016) Diameter Zona Hambat (mm)  Interpretasi ≤12 Lemah 13-19 Sedang ≥20 Kuat

## III. Hasil Dan Pembahasan III.1 Analisis Fitokimia
Hasil  analisis  fitokimia  pada  penelitian menunjukkan  ekstrak  etanol  daun  cengkodok mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  berupa terpenoid,  steroid,  flavonoid,  steroid,  dan  tanin. Berdasarkan  hasil  kuantitatif  kandungan  metabolit sekunder,  didapatkan  bahwa  golongan  senyawa tannin  merupakan  senyawa  paling  dominan, sehingga diprediksi aktivitas biologik ekstrak etanol daun  cengkodok  lebih  dominan  karena  pengaruh golongan senyawa tannin. Hasil kromatografi dalam bentuk pendar noda dapat dilihat pada Gambar 1 dan
Hasil analisis kromatografi dalam bentuk persentase dapat dilihat pada Tabel 2.
Gambar 1. Pendar noda metabolit sekunder ekstrak daun cengkodok pada KLT di bawah sinar UV 366 nm.
Tabel 2. Persentase noda klt ekstrak etanol cengkodok pada pemindai klt
No.  Noda ke-  Persentase (%) Golongan 1. 1 1,47 Terpenoid 2. 2 1,79 Terpenoid 3. 3 1,01 Terpenoid 4. 4 3,98 Terpenoid 5. 5 4,98 Steroid 6. 6 4,68 Flavonoid 7. 7 5,67 Steroid gula 8. 8 10,33 Terpenoid gula 9. 9 23,21 Flavonoid gula 10. 10 42,88 Tanin
Berdasarkan  hasil  skrining  fitokimia, didapatkan bahwa tanin merupakan senyawa paling dominan  yang  terdapat  didalam  ekstrak  yaitu sebesar 42.88%. Tanin memiliki kemampuan untuk mengganggu  membran  sitoplasma,  mengganggu PMF  (Proton  Motive  Force) ,  transpor  aktif,  dan aliran elektron untuk mengganggu pembuatan ATP pada jamur. Tanin juga mengkoagulasi substansi sel (Ali et al. , 2018). Namun tanin dibagi menjadi dua kelompok yaitu  tanin  “hydrolysable”  (HT)  yang  berarti  tanin yang  dapat  dihidrolisis  dan  tanin  “condensaded” (CT) yang berarti tanin yang terkondensasi (Singh, Jha  and  Kumar,  2014).  HT  dan  CT  merupakan polifenol dengan berat molekul sedang hingga berat yang menempel dan mempresipitasi protein terlarut. HT  memiliki  berat  molekul  yang  lebih  ringan dibanding  CT.  Kemampuan  biologik/  aktivitas antijamurnya  bergantung  dari  kemampuan  untuk menangkal  radikal  bebas.  Efisiensi  kerjanya bergantung  dari  berat  molekul,  jumlah  cincin aromatisnya,  dan  lebih  dominan  dipengaruhi    oleh subtitusi  gugus  hidroksilnya  dibanding  dengan
gugus  fungsional  spesifiknya  (Singh,  Jha  and Kumar, 2014; Naumann et al. , 2017).
CT merupakan tanin dengan berat molekul besar  dan  memiliki  aktivitas  biologik  lebih  baik dibanding  HT,  sehingga  dapat  digunakan  sebagai antimikrob.  Hal  ini  dikarenakan  CT  memiliki kemampuan  untuk  berikatan  pada  polimer  dinding sel  patogen  dan  membentuk  kompleks  yang  akan menghambat  kerja  enzim  proteolitik  dari  patogen sehingga  melemahkan  sistem  imun  patogen. Perubahan  morfologi  diakibatkan  oleh  intoksikasi dinding  sel  target  oleh  tanin.  Selain  itu,  CT  juga mampu  melakukan penetrai  menembus dinding sel dalam konsentrasi yang cukup yang mengakibatkan inhibisi sintesis dinding sel (Singh, Jha and Kumar, 2014; Ali et al. , 2018).
HT  merupakan  tanin  dengan  komponen fenol  sederhana  yang  memiliki  inti  tengah  berupa glukosa.  HT  juga  bisa  merupana  fenol  yang memiliki inti tengah berupa poliol yang teresterifikasi  dengan  asam  galik  (gallotanin) maupun  asam  heksahidroksidifenat  (elagitanin) (Singh,  Jha  and  Kumar,  2014;  Altemimi et  al. ,
2017). Hingga saat ini tanin yang berhasil ditemukan pada tanaman cengkodok
( Melastoma malabathricum ) adalah tujuh tanin monomer (1,4,6- tri -O- galloyl- β -D-glucoside, 1,2,4,6-tetra -O- galloyl- β -D-glucoside, strictinin, casuarictin, pedunculagin, nobotanin D, and pterocarinin C ) dan empat  tanin  oligomer  (nobotanins  B,  G,  and  H (dimers)  and  nobotanin  J  (trimer)),  dan  3  tanin spesifik bernama malabathrins B, C, and D. Semua ke-14  tanin  tersebut  merupakan  tanin  yang  dapat dihidrolisis (HT) (Joffry et al. , 2012).

## III.2 Uji Aktivitas Antijamur
Uji  aktivitas  antijamur  pada  penelitian  ini dilakukan  di  Laboratorium  Parasitologi  dan Mikroskopik  Fakultas  Kedokteran.  Pengujian
dilakukan  menggunakan  6  kelompok  perlakuan dengan  variasi  konsentrasi  ekstrak  etanol  daun cengkodok  yaitu:  5;  20;  50;  100;  250;  500  ppm. Cakram  yang  direndam  sampai  terserap  pada keenam  esktrak  etanol  daun  cengkodok  tersebut diujikan  pada  media  MHA  yang  telah  diinokulasi jamur M.  furfur sebanyak  200uL.  Pengamatan dilakukan  setelah  inkubasi  3x24  jam  pada  suhu sesuai.  Hasil  inkubasi  menunjukkan  zona  hambat sebesar  0  mm  pada  setiap  konsentrasi  dan  kontrol positif  pertama.  Sedangkan  pada  kontrol  positif kedua  didapatkan  zona  hambat  sebesar  36.79  mm. Hasil uji antijamur dapat dilihat pada Gambar 2 dan Tabel 3.
Gambar 2. Hasil uji aktivitas antijamur dengan variasi konsentrasi ekstrak etanol daun cengkodok (A) 5 ug/ml; (B) 20 ug/ml; (C) 50 ug/ml; (D) 100 ug/ml; (E) 250 ug/ml; (F) 500 ug/ml; (G) kontrol negatif; (H) kontrol positif pertama (ketokonazol); dan (I) kontrol positif kedua (itrakonazol)
A B C D E F G H I
Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Antijamur Ekstrak Etanol Daun Cengkodok ( Melastoma malabathricum ) Terhadap Pertumbuhan M. furfur .
No Konsentrasi Diameter Zona Hambat (mm) Rata-rata (mm) Keterangan Pengulangan ke- I II III 1 5 ppm 0 0 0 0 Tidak ada zona hambat 2 20 ppm 0 0 0 0 Tidak ada zona hambat 3 50 ppm 0 0 0 0 Tidak ada zona hambat 4 100ppm 0 0 0 0 Tidak ada zona hambat 5 250 ppm 0 0 0 0 Tidak ada zona hambat 6 500 ppm 0 0 0 0 Tidak ada zona hambat 7 Kontrol (-) 0 0 0 0 Tidak ada zona hambat 8 Kontrol (+)1 0 0 0 0 Resisten 8 Kontrol (+)2 36,38 35,86 38,15 36,79 Sensitif
Uji  aktivitas  antijamur  pada  penelitian  ini menggunakan metode difusi cakram. Terdapat lima kelompok  perlakuan  dengan  variasi  konsentrasi ekstrak etanol daun cengkodok 5; 20; 50; 100; 250; dan  500  ppm  serta  dua  kelompok  kontrol  yaitu kontrol  positif  menggunakan  itrakonazol  8ug/disk dan  kontrol  negatif  DMSO  10%.  Penggunaan ketokonazol  dan  itrakonazol  karena  memiliki  MIC terendah  dibandingkan  dengan  antijamur  lainnya menjadikannya  dipilih  sebagai  antijamur  topikal yang luas digunakan, namun dikarenakan penggunaan  yang  luas  dan  tidak  sesuai  dosis meningkatkan  risiko  resistensinya  jamur M.  furfur (Alastruey et  al. ,  2015).  Resistensi  terhadap ketokonazol  ditemukan  pada  saat  perlakuan diinterpretasikan  dari  tidak  adanya  zona  hambat yang terbentuk (0mm).
Kontrol  positif  pertama  ketokonazol  tidak menunjukkan  zona  hambat  yang  berarti M.  furfur telah  resisten  terhadap  ketokonazol.  Mekanisme kerja  golongan  azol  adalah  dengan  menarget  jalur biosintesis  ergosterol  melalui  penghambatan  dari enzim  utama  yaitu  enzim  14  α-sterol  demetilase yang  berfungsi  untuk  mengonversi  lanosterol menjadi  ergosterol  (Alastruey et  al. ,  2015). Penghambatan  yang  terjadi  mengarahkan  enzim tersebut  melakukan sintesis  komponen toksik  yang tidak dapat mengganti ergosterol sebagai penyusun utama  membran  sel,  akumulasi  komponen  toksik tersebut  membuat  membran  sel  menjadi  rentan, mudah  lisis,  dan  mengarah  kepada  kematian  sel jamur. Namun karena penggunaan yang tidak tepat seperti  dosis  yang  kurang  dan  durasi  penggunaan yang  kurang  tepat,  dapat  menyebabkan  tempat perlekatan/alosterik  enzim  α-sterol  demetilase tersebut  bermutasi  sehingga  tidak  dikenal  oleh golongan azol dan resistensi  pun terjadi  (Center of Disease  Control  and  Prevention,  2018).  Resistensi yang  terjadi  terhadap  ketokonazol  (golongan imidazol) tidak menutup kemungkinan akan terjadi resistensi  silang  terhadap  itrakonazol  (triazol) (Muller,  2000;  Vandeputte,  Ferrari  and  Coste, 2012).
Kontrol positif kedua itrakonazol 8 ug/disk menunjukkan adanya zona hambat dengan diameter rata-rata  36.79  mm  dengan  interpretasi  sensitif. Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan,  ditemukan bahwa M.  furfur sudah  tidak  sensitif  pada ketokonazol  dan  masih  sensitif  pada  itrakonazol. Hal  ini  didukung  oleh  mekanisme  kerja  golongan azol  yang  menghambat  kerja  enzim  14  α-sterol demetilase  dengan  cara  mengikatkan  nitrogen  dari cincin azolnya pada gugus heme enzim 14  α-sterol demetilase.  Ketokonazol  merupakan  golongan imidazol  karena  memiliki  2  atom  nitrogen  dan itrakonazol  merupakan  golongan  triazol  karena memiliki 3 atom nitrogen. Ketokonazol memiliki 2 atom nitrogen yang tidak berdekatan pada senyawa kimianya  sedangkan  triazol  memiliki  3  atom nitrogen  yang  berdekatan.  Resistensi  akibat  mutasi yang  terjadi  pada  enzim  menyebabkan  penurunan afinitas terhadap golongan azol. Hal ini terjadi pada ketokonazol  karena  struktur  kimia  ketokonazol memiliki  hanya  2  atom  nitrogen  dengan  jarak berjauhan,  berbeda  dengan  itrakonazol  yang memiliki  struktur  kimia  yang  lebih  aktif  dengan  3 atom  nitrogen  dan  berdekatan  menyebabkan penurunan  afinitas  tidak  mempengaruhi  proses mekanisme  kerjanya  sehingga  masih  sensitif (Vandeputte, Ferrari and Coste, 2012; Campestre et al. , 2017).
Sedangkan pada kontrol negatif menggunakan  DMSO  10%  tidak  menunjukkan adanya zona hambat yang terbentuk disekitar kertas cakram.  DMSO  10%  adalah  zat  yang  digunakan untuk  melarutkan  ekstrak  saat  pembuatan  berbagai konsentrasi  larutan  uji,  maka  dari  itu  DMSO  10% harus  bersifat  negatif  dan  tidak  memberikan aktivitas antijamur (Rojas et al. , 2017).
Hasil pengujian aktivitas antijamur menggunakan  ekstrak  etanol  daun  cengkodok ( Melastoma  malabathricum )  menunjukkan  tidak adanya  zona  hambat  yang  terbentuk  (0mm)  yang berarti ekstrak etanol daun cengkodok tidak efektif dalam  menghambat  pertumbuhan M.  furfur. Ada tiga faktor yang dapat mempengaruhi tidak adanya
aktivitas  antijamur  tersebut,  yaitu  faktor  teknis seperti kurangnya konsentrasi ekstrak,  kontaminasi koloni pada petri, suspensi jamur yang tidak sesuai standar,  suhu  yang  tidak  sesuai  standar,  lama inkubasi  yang  tidak  sesuai  standar.  Faktor  ekstrak etanol  daun  cengkodok,  dapat  berupa  pengaruh pelarut,  maupun  kandungan  metabolit  sekunder dominan  yang  mempengaruhi  hasil  uji.  Faktor ketiga adalah faktor biologis seperti kepekaan jamur uji  dan  properti  khusus  yang  dimiliki  patogen (Jenkins and Schuetz, 2012; Altemimi et al. , 2017; Li et al. , 2017; Bayot and Bragg, 2019).
Uji  konfirmasi  menggunakan  konsentrasi ekstrak  yang  lebih  tinggi  yaitu  5000  ppm,  10%, 20%, 30%. 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% telah dilakukan dan tidak ditemukan zona hambat (0 mm). Kontaminasi pada petri juga tidak ditemukan sehingga tidak mengganggu hasil pengujian. Hal ini berarti faktor teknis pertama dan kedua telah dapat peneliti  singkirkan  (Vandeputte, Ferrari and Coste, 2012).
Penggunaan  suspensi  jamur  juga  telah distandarkan  kekeruhannya  menggunakan  larutan standar Mc.  Farland 0.5  kemudian  dikonfirmasi menggunakan  spektrofotometer  dan  didapatkan serapan  pada  0.103  yang  menunjukkan  bahwa suspensi  jamur  uji  berkonsentrasi  1-5  x  10 6 dan berada  dalam  fase  logaritmik  (tetap  membelah) sehingga  cocok  digunakan  dalam  pengujian aktivitas  antijamur,  jumlah  suspensi  jamur  yang diinokulasikan  pada  media  MHA  juga  sama  yaitu 200ul  suhu  inkubasi  juga  berada  pada  suhu  ideal 30±2 o C selama 48 jam. Hal ini berarti faktor teknis ketiga,  keempat,  dan  kelima  telah  dapat  peneliti singkirkan  (Vandeputte,  Ferrari  and  Coste,  2012; Alastruey et al. , 2015).
Uji  sensitivitas  antijamur  telah  dilakukan dan  menunjukkan  bahwa  strain M.  furfur pada penelitian  ini  sudah  resisten  terhadap  ketokonazol dan masih sensitif terhadap itrakonazol (Vandeputte, Ferrari and Coste, 2012). Tidak adanya zona hambat yang terbentuk diduga karena kandungan metabolit sekunder  yang  tidak  adekuat  untuk  menembus pertahanan M.  furfur kemudian  dengan  adanya properti  struktur  dinding  sel M.  furfur yang kompleks,  kemampuan  membedakan  self  dan  non- self  dengan  adanya Nucleotide  oligomerization domain  (NOD)-like  receptors (NLRs),  fasilitas “ drug efflux pumps ”,  dan  didukung  oleh kemampuan  membentuk  biofilm.  Properti  tersebut diduga memberikan proteksi kepada jamur M. furfur terhadap  agen  antijamur.  Faktor  biologis  tersebut berada diluar kendali peneliti.
Pengujian  aktivitas  antijamur  terhadap jamur M. furfur yang menggunakan pelarut lain juga menunjukkan tidak ada aktivitas meskipun menggunakan  berbagai  pelarut  seperti  ekstrak kloroform, heksan, air buah Punica granatum yang menunjukkan  tidak  ada  zona  hambat  (0  mm), ekstrak  kloroform,  metanol,  air  dari  buah Illicium
veruk (Hook) yang menunjukkan tidak adanya zona hambat  (0  mm),  ekstrak  kloroform,  air  dari  daun Nycanthes arbor-tristis (L) yang menunjukkan tidak adanya  zona  hambat  (0  mm),  ekstrak  kloroform, heksan,  metanol, air dari daun Thespesia populnea (L) dan daun Piper betle (L) juga menunjukkan tidak adanya zona hambat (0 mm). Hal ini menunjukkan bahwa  pelarut  tidak  memiliki  pengaruh  signifikan, begitu  pula  etanol  yang  digunakan  pada  penelitian ini (Lalitha et al. , 2016).
Berdasarkan  hasil  KLT  didapatkan  bahwa pendar noda tanin yang terletak di bawah plat silika (polar)  yang  menunjukkan  kepolaritasannya  yang sangat polar, hal ini dikarenakan adanya gugus gula yang ada pada tanin. Sehingga sejalan dengan teori bahwa  tanaman  cengkodok  memiliki  tanin  yang dapat  dihidrolisis  (HT).  Adapun  HT  merupakan tanin  yang  lemah  dikarenakan  penyusunnya  hanya berupa  fenol  sederhana,  memiliki  berat  molekul ringan  dibanding  CT,  sehingga  tanin  pada  ekstrak cengkodok memiliki aktivitas antijamur yang tidak baik. HT juga mudah dipengaruhi oleh beberapa hal seperti  komponen  alkalin  dan  asam  mineral  yang mampu berikatan dan mengganggu kerja tanin. Metabolit sekunder utama yang diharapkan adalah flavonoid, karena kemampuannya yang dapat mendenaturasi protein dan bekerja dengan meningkatkan  permeabilitas  membran  sel  secara langsung  dan  berikatan  dengan  protein  melalui ikatan  hidrogen  yang  menyebabkan  terganggunya struktur  protein  yang  mengarah  pada  lisis  sel  dan kematian  sel  (Ronaa et  al. ,  2018).  Pengujian aktivitas  antijamur  ekstrak  daun Eucalyptus globulus terhadap  jamur M.  furfur menunjukkan zona hambat yang kuat terhadap  yaitu sebesar (30 ± 1.63)  mm  dengan  metabolit  sekunder  dominan berupa  flavonoid  sebesar  35.88%  (Vijayakumar et al. , 2006; Kaur, Gupta and Gautam, 2019). Adapun enzim yang mampu merusak tanin seperti Tannin  acyl  hydrolase (tanase)  yang  dapat pula dihasilkan oleh jamur filamentosa. Hingga saat ini penelitian mengenai jamur penghasil tanase juga masih dikembangkan. Jamur penghasil tanase yang paling  banyak  diteliti  adalah  jamur  filamentosa (Aboubakr,  2012;  Altemimi et  al. ,  2017).  Dalam penelitian  Mahada  pada  tahun  2012  berhasil menemukan  jamur  filamentosa  yang  telah  berhasil ditemukan  memiliki  kemampuan  memproduksi enzim  tanase  adalah Aspergillus  niger,  Aspergilus flavus,  Aspergilus  sp.,  Fusarium  spp.,  Penicillium spp.,  Trichoderma  spp .,  dan  ada  dua  yang  belum berhasil  diidentifikasi. M.  furfur merupakan  jamur filamentosa  pada  fase  patogeniknya,  namun  masih membutuhkan penelitian lebih lanjut untuk membuktikan M.  furfur mampu  memproduksi tanase (Gayen and Ghosh, 2013).
Aktivitas  antijamur  terhadap  jamur M. furfur juga  tidak  ditemukan  dengan  penggunaan ekstrak etanol umbi bawang dayak (Diana, Sari and Aisyah,  2017).  Namun  perbedaan  hasil  ditemukan
pada pengujian pada jamur yang berbeda pada jamur Trichophyton mentagrophytes menunjukkan adanya zona  hambat  sebesar  9.15  mm,  dan  pada  jamur Trichophyton  rubrum menunjukkan  zona  hambat sebesar  14.03  mm  (Puspadewi,  Adirestuti  and Menawati, 2013; Christoper, Diana and Sari, 2017). Hal ini didukung dengan hasil penelitian pengujian aktivitas  antijamur  daun  cengkodok  ( Melastoma malabathricum )  terhadap jamur T.  mentagrophytes dan Candida  albicans yang  menunjukkan  zona hambat sebesar 30 mm dan 21 mm (Gholib, 2009). Hal  ini  diduga  dipengaruhi  oleh  dinding  sel  yang dimiliki  oleh  kedua  jamur  tersebut  yang  berbeda. Agen antijamur harus berkontak dengan dinding sel jamur  dan  berdifusi  masuk  ke  dalam  sitoplasma jamur  untuk  dapat  bekerja,  namun  apabila  proses tersebut terganggu maka agen antijamur tidak dapat bekerja dan tidak menunjukkan adanya zona hambat dalam  hal  ini  diinterpretasikan  tidak  memiliki aktivitas antijamur (Scorzoni et al. , 2017). Genus Malassezia memiliki  dinding  sel multilamelar  yang  tebal,  secara  biokimia  relatif inert,  dan  pada  bagian  bawah  dinding  selnya terdapat konfigurasi gerigi yang menginvaginasi ke bagian membran sel. Genus Malassezia adalah satu satunya jamur dengan dinding sel berpola helikoid, sangat  kompleks,  sehingga  memiliki  struktur dinamis yang tidak mudah rusak untuk melindungi sel  dari  perubahan  tekanan  osmotik  dan  stres lingkungan  (Stalhberger et  al. ,  2014).  Lapisan dinding  sel  multilamerlar  seperti  kapsul  tersebut mengandung  lemak  dan  dibutuhkan  pelarut  untuk merusaknya  (Ashbee,  2007).  Kekuatan  dinding  sel jamur ini penting untuk integritas dan kelangsungan hidup  sel  jamur  terutama  karena  adanya  ikatan silang  antara  polisakarida  dengan  berat  molekul tinggi.  Penelitian  mengenai  komposisi  dinding  sel genus Malassezia masih  sedikit  dilakukan,  yang ditemukan  dalam  dinding  sel  setelah  difraksi menggunakan  air  adalah β-(1,3)-glukans,  β-(1,6)- glukans, galaktofuran, dan struktur manan (Shibata et  al. ,  2009) .  Polimer-polimer  tersebut  saling berhubungan dengan ikatan kovalen (ikatan terkuat) dan  membentuk  kompleks  yang  kuat.  Struktur  β- (1,6)-glukans yang berlimpah merupakan penyusun dominan  dinding  sel  jamur  dibanding  struktur lainnya dan diperkirakan memiliki molekul sebesar 1500 unit glukosa/ rantai dengan rata-rata 500 kDa untuk kompleks β glukans, 80 kDa untuk β- (1,6) - glukans, dan 10 kDa untuk β- (1,3) -glukans (Shibata et al. , 2009) .
Adanya  aktivitas  antijamur  pada  ekstrak daun  cengkodok  pada  penggunaan  konvensional masyarakat  dalam  menangani  onikomikosis  yang disebabkan  oleh Fusarium oxysporum juga didasarkan pada ketebalan dinding sel F. oxysporum yang  tipis  jika  dibanding  dengan  dinding  sel M. furfur .  Apabila  ditinjau  menggunakan  mikroskop elektron,  ketebalan  dinding  sel M.  furfur sebesar 0.1803 um dan ketebalan dinding sel F. oxysporum
adalah  0.0404  um  sehingga  menunjukkan  bahwa dinding  sel M.  furfur memiliki  ketebalan  4,46  kali dari ketebalan dinding sel F. oxysporum (Schoffelmeer et al. , 1999; Boekhout et al. , 2010).
Jamur M.  furfur juga  memiliki  ketebalan  4,05  kali dari  ketebalan  dinding  sel Trichophyton  rubrum (0.0445  um)  (Aala et  al. ,  2014).  Tebalnya  dinding sel M.  furfur beserta  penyusunnya  yang  kompleks, diduga  sebagai  penyebab  perbedaan  hasil  yang ditampakkan  pada  pengujian  aktivitas  antijamur ekstrak daun cengkodok terhadap berbagai jamur. Metabolit  sekunder  termasuk  komponen yang  memiliki  berat  molekul  rendah  (<900dalton) memungkinkan dirinya untuk dapat masuk menembus  dinding  sel M.  furfur ,  namun M.  furfur mampu  memproteksi  dirinya  dengan  memompa keluar  agen  antijamur  berupa  metabolit  sekunder tersebut menggunakan fasilitas “ drug efflux pumps ”. Penelitian  yang  dilakukan  Uehling  J  pada  tahun 2017,  menunjukkan  bahwa  jamur  juga  memiliki sistem  pertahanan  yang  sama  dengan  tanaman  dan binatang  yaitu Nucleotide  oligomerization  domain (NOD)-like  receptors (NLRs)  yang  mampu membedakan  self  dan  non-self  bagi  jamur.  Ini diduga sebagai penyebab jamur M. furfur memompa keluar  kandungan  metabolit  sekunder  cengkodok akibat  terdiskriminasi  oleh  NRLs  tersebut  (Iatta  R and Otranto D, 2017; Uehling, Deveau and Paoletti, 2017). Jamur M.  furfur dalam  kondisi  bertahan hidup  melawan  stres  lingkungan  juga  membentuk biofilm yang  berfungsi  untuk  mekanisme  protektif terhadap  mikrob  lain,  mampu  menghindar  dari sistem  imun  manusia,  menyediakan  kondisi  aman untuk  proliferasi  dirinya,  dan  berperan  sebagai barier/pelindung  dari  agen-agen  antijamur  seperti metabolit  sekunder.  Perlindungan  yang  ada  ini memproteksi jamur dari destruksi yang disebabkan oleh  metabolit  sekunder  dengan  mencegah  difusi metabolit sekunder menuju sitoplasma atau bahkan menghinaktivasi dengan berikatan langsung. Adanya  barier  ini  juga  menyediakan  kondisi  pH rendah,  dan  tinggi  konsentrasi  ion  metalik.  Hal  ini diduga  yang  menyebabkan  kandungan  metabolit sekunder  tidak  mampu  masuk  berdifusi  menuju kedalam sel jamur (Allen, Goyal and Ogrich, 2015).

## IV. Kesimpulan
Kandungan  metabolit  sekunder  yang terdapat pada ekstrak etanol daun cengkodok adalah flavonoid,  terpenoid,  steroid,  dan  tanin.  Metabolit sekunder  dominan  adalah  tanin.  Tidak  ada  zona hambat  yang  dihasilkan  oleh  ekstrak  etanol  daun cengkodok  terhadap  jamur M.  furfur meskipun konsentrasi telah ditingkatkan hingga 100%. Tidak ada  konsentrasi  efektif  dari  ekstrak  etanol  daun cengkodok dalam menghambat pertumbuhan jamur M.  furfur .  Saran  bagi  peneliti  selanjutnya, disarankan melakukan modifikasi dengan penambahan  pelarut/solven  pada  ekstrak  untuk
merusak  lapisan  dinding  sel M.  furfur yang  tebal berlemak  dan  merusak  biofilm  yang  dibentuk M. furfur sebagai proteksi dari agen antijamur, sehingga metabolit  sekunder  dapat  berdifusi  lancar  ke intrasel,  kemudian  menggunakan  strain M.  furfur yang  masih  baru  diremajakan  dari  sumbernya  dan tidak  resisten  terhadap  ketokonazol  sebagai  lini pertamanya.  Serta  melakukan  kombinasi  pada ekstrak etanol daun cengkodok dengan bahan alam lainnya yang bekerja sinergis sehingga meningkatkan kemampuan antijamurnya.
Daftar Pustaka Aala, F. et al. (2014) ‘Inhibitory effect of allicin and garlic  extracts  on  growth  of  cultured hyphae’, Iran J Basic Med Sci , 17(March), pp. 150–154.
Aboubakr, H. A. (2012) Tannase-producing fungi : isolation,  screening,  identification  and optimizing the enzyme production . 1st edn.
USA: LAP lambert academic publishing.
Alastruey et al. (2015) ‘Susceptibility test for fungi: clinical  and  laboratorial  correlations  in medical mycology’, Revista do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo , 57(suppl 19),  pp.  57–64.  doi:  10.1590/s0036- 46652015000700011.
Ali,  S. et  al. (2018)  ‘Phytochemical  investigation and antimicrobial appraisal of Parrotiopsis jacquemontiana  (  decne  )  rehder’, BMC Complementary and Alternative Medicine , 18(1),  p.  43.  doi:  10.1186/s12906-018- 2114-z.
Allen, H., Goyal, K. and Ogrich, L. (2015) ‘Biofilm formation  by  malassezia  furfur/ovale  as  a possible  mechanism  of  pathogenesis  in tinea  versicolor’, Journal  of  Clinical  & Experimental Dermatology Research , 06(06), pp. 1–4. Altemimi,  A. et  al. (2017)  ‘Phytochemicals: extraction,  isolation,  and  identification  of bioactive compounds from plant extracts’, Plants (Basel) , 6(42), pp. 1–23.
Andriyawan,  F.  (2015)  ‘Uji  aktivitas  antibakteri ekstrak etanol daun cengkodok (melastoma malabathricum l.) terhadap escherichia coli secara in vitro’, Jurnal Pendidikan Dokter Kalbar , 3(1),
p. 1. doi: http://dx.doi.org/10.1016/j.rasd.2012.07.00
4.
Ashbee,  H.  R.  (2007)  ‘Update  on  the  genus malassezia’, Medical Mycology , 45(4), pp. 287–303. doi: 10.1080/13693780701191373.
Auzia,  N.,  Lukmayani,  Y.  and  Dasuki,  U.  (2017) ‘Isolasi dan identifikasi senyawa metabolit sekunder ekstrak n-heksan dari umbi lobak (raphanus sativus lamk)’, Prosiding Farmasi , 2, pp. 285–293.
Balouiri, M., Sadiki, M. and Ibnsouda, S. K. (2016)
‘Methods for in vitro evaluating
antimicrobial  activity :  a  review’, Journal of Pharmaceutical Analysis . Elsevier, 6(2), pp. 71–79. doi: 10.1016/j.jpha.2015.11.005. Bayot,  M.  and  Bragg,  B.  (2019) Antimicrobial susceptibility  testing .  Florida:  Treasure Island (FL): StatPearls Publishing. Boekhout, T. et al. (2010) Malassezia and the skin: Science  and  clinical  practice .  Springer-
Verlag Berlin Heidelberg. doi:
10.1007/978-3-642-03616-3. Campestre, C. et al. (2017) ‘Analysis of imidazoles and  triazoles  in  biological  samples  after microextraction by packed sorbent’, Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal  Chemistry .  Informa  UK  Ltd., 32(1), pp. 1–11.
doi:
10.1080/14756366.2017.1354858.
Cantón,  E.  and  Pemán,  J.  (2009)  ‘Trends  in antifungal susceptibility testing using CLSI reference  and  commercial  methods’,
Expert Rev Anti Infect Ther , pp. 107–119. Center  of  Disease  Control  and  Prevention  (2018) Antifungal resistance , National Center for Emerging and Zoonotic Infectious Diseases . doi:
https://doi.org/10.25077/jka.v6i3.758.
Christoper,  W.,  Diana,  N.  and  Sari,  R.  (2017)  ‘Uji aktivitas  antijamur  ekstrak  etanol  umbi bawang  dayak  (  eleutherine  americana  ( aubl  .)  merr  .  ex  k  .  heyne  .)  terhadap trichophyton  mentagrophytes  secara  in vitro’, Jurnal Kesehatan Andalas , 6(3), pp.
910–921.
Crespo EV, Florencio, V. (2006) ‘Malassezia yeasts and pityriasis versicolor.’, Current opinion in infectious diseases , 19(2), pp. 139–147. Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia  (2008) Farmakope herbal Indonesia , Departemen Kesehatan . Jakarta.
Diana, N., Sari, R. and Aisyah (2017) ‘Uji aktivitas antijamur  ekstrak  etanol  umbi  bawang dayak (eleutherine americana (aubl.) merr. ex  k.  heyne)  terhadap  malassezia  furfur secara  in  vitro’, Jurnal  Mahasiswa  PSPD FK Universitas Tanjungpura , 5(1), p. 3.
Gayen,  S.  and  Ghosh,  U.  (2013)  ‘Purification  and characterization  of  tannin  acyl  hydrolase produced by mixed solid state fermentation of  wheat  bran  and  marigold  flower  by penicillium  notatum  ncim  923’, Biomed Res Int. , 2013(1),
p. 1. doi:
10.1155/2013/596380.
Gholib, D. (2009) ‘Uji daya hambat daun senggani (melastoma  malabathricum  l.)  terhadap trichophyton mentagrophytees dan candida albicans’, Berita Biologi , 9(5), p. 523.
Grosvenor,  P.  W.,  Suprinono,  A.  and  Gray,  D.  O. (1995)  ‘Medicinal  plants  from  Riau Province,  Sumatra,  Indonesia-part  2:
antibacterial  and  antifungal  activity’, Journal of Ethnopharmacology , 45(94), pp. 97–111.
Gupta,  A.  and  Foley,  K.  (2015)  ‘Antifungal treatment for pityriasis versicolor’, Journal of Fungi , 1(1), pp. 13–29.
Hasanah,  K.  (2017)  ‘Uji  daya  antifungi  propolis terhadap
candida albicans
dan pityrosporum ovale’, Bioedukasi , 10(2), pp.
44–46.
Hayati,  E. et  al. (2013)  ‘Identifikasi  senyawa metabolit  sekunder  ekstrak  n-heksana batang  kesembukan  (paederia  foetida linn)’, Alchemy , 2(3), pp. 150–153.
Iatta R and Otranto D, C. C. P. M. I. D. (2017) ‘The role  of  drug  efflux  pumps  in  malassezia pachydermatis  and  malassezia  furfur defence  against  azoles’, Mycoses ,  60(3), pp. 178–82.
Jannata, R. H., Gunadi, A. and Ermawati, T. (2014) ‘Daya  antibakteri  ekstrak  kulit  apel manalagi  (malus  sylvestris  mill.)  terhadap pertumbuhan  streptococcus  mutans’, e- Journal  Pustaka  Kesehatan ,  2(1),  pp.  23– 28.
Jenkins,  S.  G.  and  Schuetz,  A.  N.  (2012)  ‘Current concepts  in  laboratory  testing  to  guide antimicrobial  therapy’, Mayo  Clin  Proc . Elsevier Inc., 87(3), pp. 290–308.
Joffry, S. M. et al. (2012)  ‘Melastoma malabathricum  (l.)  smith  ethnomedicinal uses, chemical constituents, and pharmacological  properties:  a  review’, Evidence-based
Complementary
and
Alternative  Medicine ,  2012(Table  1),  pp. 6–20.
Kaur,  S.,  Gupta,  S.  and  Gautam,  P.  B.  (2019) ‘Phytochemical  analysis  of  eucalyptus leaves extract’, Pharmacognosy and Phytochemistry , 8(January), pp. 2442–6. Lalitha,  S. et  al. (2016)  ‘Insignificant  antifungal activity  of  plant  extracts  on  malassezia furfur’, Journal of Pharmaceutical Negative Results , 7(1), p. 16.
Li,  J. et  al. (2017)  ‘Antimicrobial  activity  and resistance :  influencing  factors’, Front Pharmacol , 13(8), p. 364. Mahmoud Y, Metwally M, Mubarak H, Zewawy, N. (2015)  ‘Treatment  of  tinea  versicolor caused by  malassezia furfur with dill seed extract: an experimental study’, International  Journal  of  Pharmacy  and Pharmaceutical Sciences , 7(2), pp. 1–7.
Marotta,  S.  M. et  al. (2016)  ‘Evaluation  of  the antibacterial activity of bergamot essential oils  on  different  listeria  monocytogenes strains’, Ital J Food Saf , 5(4), p. 6176.
Marselia,  S.,  Wibowo,  M.  A.  and  Arreneuz,  S.
(2015)  ‘Aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun soma  (ploiarium  alternifolium  melch)
terhadap propionibacterium acnes’, Jurnal Kimia Khatulistiwa , 4(4), p. 1.
Muller,  F.  (2000)  ‘Azole  cross-resistance  to ketoconazole,  fluconazole,  itraconazole and  voriconazole  in  clinical  candida albicans isolates from hiv-infected children with oropharyngeal candidosis’, Journal of Antimicrobial  Chemotherapy ,  46(2),  pp. 338–341. doi: 10.1093/jac/46.2.338. Naumann, H. D. et al. (2017) ‘The role of condensed tannins  in  ruminant  animal  production : advances, limitations and future directions’, R  Bras  Zootec ,  46(12),  pp. 929–949.
Peano,  A. et  al. (2017)  ‘Methodological  issues  in antifungal susceptibility testing of malassezia pachydermatis’, J Fungi (Basel). , 5(3), p. 3. Prasetyo  MS  and  Entang,  I.  (2013) Pengelolaan budidaya  tanaman  obat-obatan  (bahan simplisia) . Bengkulu.
Prayitno  H  (2015)  ‘Uji  aktivitas  antifungal  ekstrak metanol  mentah  rimpang  jeringau  merah (acorus calamus linn.) terhadap pertumbuhan  malassezia  furfur  secara  in vitro’, Mahasiswa  PSPD  FK  Universitas Tanjungpura , 3(1), p. 3.
Puspadewi,  R.,  Adirestuti,  P.  and  Menawati,  R.
(2013)  ‘Khasiat  umbi  bawang  dayak (eleutherine  palmifolia  (l.)  merr.)  sebagai herbal  antimikroba  kulit’, Kartika  Jurnal Ilmiah Farmasi , 1(1), p. 2. Rojas, F. D. et al. (2017) ‘Antifungal susceptibility testing of Malassezia yeast: comparison of two  different  methodologies’, Mycoses , 60(2), pp. 104–111.
Ronaa, H. et al. (2018) ‘Comparison of effectiveness between celery juice (apium graveolens l.) and 2% miconazole towards the growth of malassezia  furfur’, Proceedings  of  the International  Conference  on  Applied Science and Health , (3), pp. 73–77. Sarbadhikary, S. B. et al. (2015) ‘Original Research Article  Antimicrobial  and  Antioxidant Activity of leaf extracts of two indigenous angiosperm species
of tripura’,
International Journal Of Current
Microbiology  And  Applied  Sciences ,  4(8), pp. 643–655.
Schoffelmeer, E. A. M. et al. (1999) ‘The cell wall of  fusarium  oxysporum’, Fungal  Genetics and  Biology ,  27(2–3),  pp.  275–282.  doi: 10.1006/fgbi.1999.1153.
Scorzoni, L. et al. (2017) ‘Antifungal therapy: new advances  in  the  understanding  and treatment  of  mycosis’, Frontiers  in Microbiology , 8(1), pp. 1–23. Shibata,  N. et  al. (2009)  ‘The  cell  wall galactomannan  antigen  from  malassezia furfur  and  malassezia  pachydermatis
contains β-1,6-linked linear galactofuranosyl residues and its detection has  diagnostic  potential’, Microbiology ,
155(10), pp. 3420–3429. doi: 10.1099/mic.0.029967-0. Shukla,  N.  and  Bhalodia,  R.  (2011)  ‘Antibacterial and antifungal activities from leaf extracts of  cassia  fistula  l.:  an  ethnomedicinal plant’, J Adv Pharm Technol Res , 2(2), pp. 104–9. Singh, M., Jha, A. and Kumar, A. (2014) ‘Influence of  the  solvents  on  the  extraction  of  major phenolic compounds ( punicalagin , ellagic acid and gallic acid ) and their antioxidant activities in  pomegranate aril’, J Food Sci Technol ,  51(9),  pp.  2070–2077.  doi: 10.1007/s13197-014-1267-0. Stalhberger, T. et al. (2014) ‘Chemical organization of  the  cell  wall  polysaccharide  core  of malassezia restricta’, Journal of Biological Chemistry , 289(18), pp. 12647–12656. doi: 10.1074/jbc.M113.547034. Sulistyawati, L. R., Natalia, D. and Mahyarudin, M. (2018)  ‘Uji  aktivitas  antijamur  ekstrak etanol eleutherine americana. merr. terhadap  trichophyton  tonsurans  secara  in vitro’, Majalah Kedokteran Andalas , 41(1), pp. 22–31. Sutton,  S.  (2011)  ‘Determination  of  inoculum  for microbiological  testing’, Journal  of  GXP Compliance ,  15(3),  pp.  49–53.  doi: 10.1002/9780470054581. Uehling, J., Deveau, A. and Paoletti, M. (2017) ‘Do fungi have an innate immune response? an nlr-based  comparison  to  plant  and  animal immune systems’, PLoS Pathogens , 13(10), pp. 1–8.
doi: 10.1371/journal.ppat.1006578. Vandeputte, P., Ferrari, S. and Coste, A. T. (2012) ‘Antifungal resistance and new strategies to control  fungal  infections’, International Journal  of  Microbiology ,  2012.  doi: 10.1155/2012/713687. Vijayakumar,  R. et  al. (2006)  ‘Characterization  of malassezia  furfur  and  its  control  by  using plant extracts’, Indian J Dermatol , 51, pp. 145–8. Wahyuni,  R.,  Guswandi,  G.  and  Rivai,  H.  (2014) ‘Pengaruh cara  pengeringan  dengan oven, kering angin dan cahaya matahari langsung terhadap  mutu  simplisia  herba  sambiloto’, Jurnal Farmasi Higea , 6(2), p. 129. Yanti,  A.  R.,  Mudahar,  H.  and  Irawan,  I.  (2008) ‘DARI EKSTRAK ETIL ASETAT KULIT BATANG  SULATRI  (  Calophyllum soulattry Burn . f .)’, pp. 158–161. Yurayart,  C. et  al. (2013)  ‘Antifungal  agent susceptibilities and interpretation of malassezia  pachydermatis  and  Candida parapsilosis  isolated  from  dogs  with  and
without seborrheic’, Med Mycol , 51(7), pp. 721–730.