p-ISSN 2354-6565 /e-ISSN 2502-3438 DOI: 10.26874/kjif.v5i2.117
Aktivitas antibakteri salep ekstrak etanol daun sirih hijau ( Piper betleL .) Terhadap infeksi bakteri Staphylococcus aureus

## Rissa Laila Vifta, Muhammad Andri Wansyah P., Anita Kumala Hati
Program Studi Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Ngudi Waluyo, Semarang Corresponding author email : rissa_laila@yahoo.co.id

## Abstrak
Sirih  hijau  ( Piper betle L .) adalah tanaman  yang mudah dijumpai di  Indonesia. Secara empiris, sirih hijau    digunakan  sebagai  antibakteri  pada  luka.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas salep ekstrak  etanol daun sirih hijau sebagai  antibakteri. Pengujian  efek antibakteri dilakukan secara in vitro dan in vivo . Ekstrak etanol daun sirih hijau dibuat dengan cara maserasi. Pengujian secara in vitro dilakukan menggunakan metode mikrodilusi terhadap Staphylococcus aureus untuk mengetahui nilai konsentrasi hambat minimum ekstrak daun sirih hijau pada konsentrasi 3, 4, dan 5%.  Kemudian ekstrak dibuat salep dan diuji secara in vivo menggunakan hewan uji tikus yang terdiri dari kelompok kontrol  negatif,  kelompok  ekstrak  (konsentrasi  3,4,  dan  5%),  serata  pembanding  kontrol  positif gentamisin 0,1%. Hasil uji dianalisis menggunakan Sapiro-Wilk dan dilanjutkan dengan uji ANAVA serta  uji  LSD  untuk  mengetahui  perbandingan  hasil  kelima  kelompok  perlakuan.  Hasil  uji in  vitro menunjukkan bahwa konsentrasi hambat minimum ekstrak daun sirih yang optimal adalah 5%. Hasil uji in vivo menunjukkan lama kesembuhan luka meningkat seiring dengan bertambahnya konsentrasi ekstrak daun sirih hijau. Hasil uji normalitas, Anava, dan uji LSD pada uji in vivo memberikan hasil yang  sejalan.  Konsentrasi  4  dan  5%  merupakan  konsentrasi  efektif  dengan  aktivitas  waktu kesembuhan  luka  tidak  berbeda  bermakna  dengan  kontrol  positif  (gentamisin  0,1%)  dengan  rerata waktu  berturut-turut  6,20±0,80  dan  6,00±0,71  hari.  Dapat  disimpulkan  bahwa  hasil  uji  antibakteri pada salep sejalan dengan uji secara in-vitro ekstrak daun Sirih Hijau yang memiliki potensi sebagai antibakteri.
Kata kunci: Daun sirih hijau, Antibakteri, Salep, Luka
Antibacterial activity from ointment contains extract of green betle leaves (Piper betle l.) to Staphylococcus aureus bacterial infection

## Abstract
Green  betel  (Piper  betle  L.)  is  a  plant  that  is  easy  to  find  in  Indonesia.  Empirically,  green  betel  is used as an antibacterial to the wound. This study aims to determine the activity of ointment of ethanol extract  of  green  betel  leaves  as  antibacterial.  Tests  of  antibacterial  effects  were  performed  in  vitro and in vivo. Ethanol extract of green betel leaf is made by maceration. In vitro testing was done using micro  dilution  method  to  Staphylococcus aureus  to  determine  the  minimum  inhibitory  concentration of green leaf extract at concentrations of 3, 4, and 5%. Then the extract was made ointment and tested in vivo using rat consisting of the negative control group, the extract group (concentrations 3,4, and 5%),  the  positive  control  of  gentamicin  0.1%.  The  test  results  were  analyzed  using  Sapiro-Wilk  and continued with ANAVA test and LSD test to find out the comparison of the results of the five treatment groups. The results of in vitro test showed that the minimum inhibit concentration of  green betel leaf extract  was  5%.  The  results  of  in  vivo  test  showed  the  duration  of  wound  healing  increased  with increasing concentration of green betel leaf extract. The result of normality test, Anava, and LSD test on  in  vivo  test  give  the  same  result.  Concentrations  of  4 and  5%  were  effective  concentrations  with wound  healing  time  activity  were  not  significantly  different  with  positive  control  (gentamicin  0.1%) with  mean  time  of  6.20  ±  0.80  and  6.00  ±  0.71  days  respectively.  It  can  be  concluded  that  the antibacterial test results in ointment are in line with in vitro test of leaf green betel extract which has potential as antibacterial.
Key words :  Green betel, Antibacterial, Ointment, Wound

## Pendahuluan
Pengobatan  penyakit  melalui  penggunaan tanaman herbal memegang peranan yang penting pada sistem pencegahan dan pengobatan penyakit  infeksi  pada  masa  sekarang  ini.  Pada beberapa  negara  berkembang  seperti  Indonesia, pengobatan tradisional menjadi salah satu sistem pengobatan primer (Bhalodia dan Shukla, 2011). Pengobatan  tradisional  banyak  dikembangkan dengan  pertimbangan  faktor  ekonomis  karena harganya  yang  murah  dan  mudah  didapat  serta faktor keamanaan yang dilihat dari kecilnya efek samping  obat  tradisional  (Sartinah,  2011; Hariana,  2007).  Beberapa  tanaman  obat  telah dikaji  aktifitas  antibakterinya,  salah  satunya adalah tanaman sirih hijau ( Piper betle L .).
Kajian  mengenai  tanaman  sirih  hijau  sebagai antibakteri  telah  dibahas  oleh  beberapa  peneliti. Shetty  dan  Vijayalaxmi,  2012  menyebutkan bahwa  daun  sirih  hijau  memiliki  kandungan tanin,  saponin,  dan  flavonoid  yang  berfungsi sebagai  antimikroba  serta  mempunyai  daya antiseptik  seperti  halnya  dengan  antibiotika. Peningkatan  efektivitas  daun  sirih  hijau  sebagai antibakteri  juga  telah  dilakukan,  salah  satunya dengan  optimasi  pemilihan  metode  ekstraksi serta  formulasi  daun  sirih  hijau  dalam  bentuk sediaan fitofarmaka (Wyatt dkk., 2001).
Peningkatan efektivitas daun sirih hijau dalam formulasi  sediaan  dapat  dilakukan  dalam  bentuk salep.  Beberapa  tanaman  lain  teruji  efektif sebagai antibakteri dalam bentuk formulasi salep. Hasmila  dkk..,  2015  melakukan  uji  antibakteri pada  salep  ekstrak  daun  sirsak  pada  bakteri Staphylococcus  aureus ,  sedangkan  Paju  dkk., 2013  melakukan  uji  yang  sama  pada  ekstrak daun binahong dengan hasil menunjukkan bahwa keduanya  memberikan  efek  antibakteri  pada rentang konsentrasi 10-40%.
Berdasarkan  uraian  tersebut,akan  melakukan kajian  lebih  lanjut  mengenai  pengujian  aktivitas antibakteri  pada  ekstrak  daun  sirih  hijau  dalam bentuk sediaan salep terhadap bakteri Stapylococcus  aureus. Pengujian  dilakukan menggunakan  variasi  konsentrasi,  agar  diketahui konsentrasi  optimal  ekstrak  daun  sirih  hijau sebagai  antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  aktivitas  salep  ekstrak  etanol daun sirih hijau sebagai antibakteri.

## Metode Penelitian
Alat. Alat  ekstraksi,  Eppendorf  200µL, neraca analitik (And GR-300), rotary evaporator (Ryela  N-1000), ultrasonic  cleaner (WT-600-
40), penangas air (Eyela SB-1000), dan alat gelas yang umum digunakan di laboratorium.
Bahan. Bahan  uji  yang  digunakan  adalah daun  sirih  hijau  ( Piper  betle  L. )  dengan spesifikasi  warna  hijau  dari  Desa  Sumurrejo Kecamatan  Gunungpati  Kota  Semarang  Jawa Tengah  yang  sebelumnya  telah  dideterminasi  di Laboratorium
Biologi-MIPA
Universitas
Diponegoro.
Bahan  kimia  yang  digunakan  antara  lain AlCl 3 , NaOH 0,5 N, FeCl 3 1%, HCl p.a, HCl 2 N, H 2 SO 4 p.a,  H 2 SO 4 1  M,  NaCl  10%,  FeCl 3 1%, amoniak  25%,  n-heksan,  etil  asetat,  etanol  96%, CMC  Na  0.3%  dari  Merck,  Aquades  dari  CV. Bratachem.
Hewan  percobaan. Hewan  percobaan  yang digunakan  adalah  tikus  jantan  galur  Wistar berumur  2-3  bulan  dengan  berat  badan  180-200 gram,  sehat,  tidak  cacat.  Hewan  uji  diperoleh dari Fakultas MIPA Universitas Negeri Semarang.
Jenis  dan  Rancangan  Penelitian. Penelitian yang dilakukan merupakan penelitian eksperimental  dengan  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL).  Penelitian  menggunakan tikus putih galur wistar dengan menghitung lama kesembuhan  luka  yang  menjadi  indikator  efek antibakteri ekstrak daun sirih hijau.
Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun  Sirih Hijau. Ekstraksi  dengan  metode  maserasi diawali  dengan  sortasi  bahan  dengan  tujuan untuk  memisahkan  kotoran-kotoran  atau  bahan- bahan  asing  sehingga  dapat  mengurangi  jumlah pengotor  yang  ikut  terbawa  dalam  bahan  uji, selanjutnya dibuat simplisia. Simplisia daun sirih hijau  ( Piper  betle L . ) sebanyak  500  gram dimaserasi  selama  5  hari  dalam  ruangan  yang terlindung  cahaya  matahari  dan  dilakukan pengadukan  1x24  jam.  Maserat  diuapkan menggunakan rotary  evaporator dengan  suhu 45°C.
Penapisan  Fitokimia. Penapisan  fitokimia dilakukan untuk mengidentifikasi senyawa flavonoid,  alkaloid,  tanin,  dan  saponin  yang terkandung dalam daun sirih hijau.
1) Identifikasi Flavonoid Identifikasi flavonoid dilakukan dengan penambahan H 2 SO 4 pada sampel dan dilakukan pengamatan  sampai  ada  perubahan  warna  dari kuning menjadi merah.
DOI: 10.26874/kjif.v5i2.117
2) Identifikasi Saponin Identifikasi saponin dilakukan dengan uji Forth, yaitu  dengan  diamati  pembentukan  buih. Ekstrak  ditambah  air  panas  sebanyak  10  ml. Selanjutnya  dikocok  kuat  selama  10  detik, akan  terbentuk  buih  yang  mantap  setinggi  1- 10 cm selama 10 menit. Kemudian ditambahkan  1  tetes  HCl  pekat  dan  diamati perubahannya.
3) Identifikasi Tanin Identifikasi  tanin  dilakukan  dengan  metode Ferri  Klorida  yaitu  dengan  meneteskan larutan besi (III) klorida 1% ke dalam larutan cuplikan  yang  menimbulkan  warna  hijau, merah, ungu, biru, atau hitam yang kuat.
Pengujian In  Vitro Antibakteri  Ekstrak Daun  Sirih  Hijau. Uji in  vitro aktivitas antibakteri  dengan  metode  cara  mikrodilusi dilakukan  untuk  mengetahui  %  MIC  (Minimum Inhibitor  Concentration)  atau  Kadar  Hambat Minimum  (KHM)  ekstrak  daun  sirih  hijau terhadap bakteri Staphylococcus aureus .
Pengujian
dilakukan secara kualitatif menggunakan mikroplate dengan  pengamatan kekeruhan.  Konsentrasi  ekstrak  dibuat  ke  dalam tiga  konsentrasi  yang  berbeda,  yakni  3,  4,  dan 5%.  Indikator  %MIC  ditentukan  berdasarkan timbulnya  warna  jernih  pada mikroplate yang sudah  diisi  dengan  ekstrak  daun  sirih  hijau  pada berbagai  konsentrasi.  Pengujian  mikrodilusi mengacu  pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh Juwitaningsing dkk. (2014).
Pembuatan  Salep  Ekstrak  Daun  Sirih Hijau. Pembuatan  salep  dilakukan  dengan membuat leburan PEG 400 78%, PEG 6000 22% dan  propylenglikol  dilebur  diatas  waterbath. Ekstrak  Daun  Sirih  hijau  dimasukkan  dalam mortir  hangat,  kemudian  ditetesi  spiritus  fortior dan diaduk hingga menguap. Kemudian ditambahkan  campuran  PEG  400  78%,  PEG 6000  22%,  dan  propylenglikol  yang  telah dilebur,  kemudian  diaduk  hingga  dingin.  Salep yang  telah  dihasilkan,  diletakkan  dalam  wadah pot salep kering bebas kontaminan.
Pembuatan Suspensi  dan Identifikasi Bakteri Staphylococcus Aureus. Bakteri
Staphylococcus  aureus sebelumnya  dibiakkan pada  media Mannitol  Salt  Agar (MSA)  dan dilakukan  peremajaan  dalam  media Blood  Agar (BA),  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37°C selama  24  jam.  Pembuatan  suspensi  bakteri dilakukan  dengan  mengambil  beberapa  koloni
Staphylococcus aureus kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang telah berisi 10 ml NaCl 0,9%.  Penentuan  dosis Staphylococcus  aureus dilakukan dengan membandingkan dengan kekeruhan larutan standar Mc Farland.
Pembuatan larutan Standar Mac Farland mengacu pada penelitian Hasmila dkk. (2015).
Pengujian Salep terhadap Bakteri Staphylococcus  Aureus. Pengujian  dilakukan terhadap  Tikus  sebanyak  25  ekor  diacak  dalam lima perlakuan dengan masing-masing perlakuan terdiri  dai  5  replikasi.  Pengujian  diawali  dengan pemberian  luka  infeksi  bakteri  pada  masing- masing tikus dan selanjutnya dilakukan uji sesuai kelompok  perlakuan.  Kelompok  I  meruupakan kontrol  positif,  Kelompok  II  kontrol  negatif, Kelompok  III  konsentrasi  3%,  Kelompok  IV konsentrasi  4%,  dan  Kelompok  V  konsentrasi 5%.
Analisis  Statistik. Analisis  data  penelitian secara  statistik  dengan  menggunakan  SPSS ( Statistical Product  and  Service  Solutions )  versi 16 didahului dengan uji normalitas menggunakan rumus  dari Shapiro-Wilk dan  uji  homogenitas menggunakan rumus dari Lavene Test . Kemudian,  data  dianalisis  dengan  statistik parametik  ANAVA  satu  jalan  dan  dilanjutkan dengan uji LSD.

## Hasil dan pembahasan
Penapisan  Fitokimia. Penapisan  fitokimia dilakukan dengan tujuan mengidentifikasi adanya  senyawa  aktif  yang  berpotensi  sebagai antibakteri  pada  ekstrak  etanol  daun  sirih  hijau. Hasil  penapisan  fitokimia  pada  Tabel  1. menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  sirih hijau  mengandung  senyawa  flavonoid,  saponin, dan tanin.
Tabel 1.   Hasil  Penapisan  Fitokimia  Ekstrak
Etanol Daun Sirih Hijau Zat aktif Hasil uji Hasil Bebas etanol 70% Tidak tercium bau ester yang khas Terbentuk warna hitam pekat + Flavonoid Merah + Saponin Berbuih + Tanin Hitam kuat + Keterangan : + = mengandung senyawa yang diuji – = tidak mengandung senyawa yang diuji
Senyawa flavonoid merupakan senyawa fenol yang  terdapat  pada  hampir  semua  tanaman (Evans,  2009).  Hasil  uji  positif  flavonoid ditandai  dengan  terbentuknya  warna  merah  dari senyawa kalkon yang terurai melalui uji wilstater sianidin.  Sedangkan  hasil  uji  positif  saponin ditunjukkan  dengan  munculnya  buih  sebagai karakter  khas  saponin  (Pelegrini  dkk. , 2008). Senyawa  tanin  teridentifikasi  melalui  rekasi hidrolisis  dengan  FeCl 3 yang  membentuk  tanin terhidrolisis  dengan  adanya  perubahan  warna menjadi hitam (Shah dan Seth, 2010).
Senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam  daun  sirih  hijau  memiliki  kemampuan sebagai  antimikroba  (Paju  dkk. , 2013).  Aktivitas antimikroba dapat diketahui berdasarkan kemampuan  penghambatan  terhadap  bakteri  dan khamir.  Penghambatan  mikroba  terjadi  karena adanya  penghambatan  dinding  sel,  pengubahan permeabilitas membran sel, penghambatan sintesis protein dan asam nukleat (Wibowo dkk., 2009).
Hasil  Pengujian  Aktivitas  Antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus. Pengujian aktivitas  antibakteri  dilakukan  dalam  dua  tahap, yakni  kualitatif  secara in  vitro dan  dilanjutkan dengan  pengujian  antibakteri  pada  salep. Berdasarkan hasil uji pada Tabel 2 menunjukkan bahwa  pada  konsentrasi  5%  ekstrak  daun  Sirih Hijau  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri secara optimum, dengan asumsi %MIC ( Minimum  Inhibition  Concentration )  terlihat pada konsentrasi 5%.
Kemampuan antibakteri pada daun sirih hijau dipengaruhi  oleh  kandungan  senyawa  metabolit sekunder flavonoid, saponin, dan tannin. Flavonoid  dapat  berperan  sebagai  antibakteri melalui  mekanisme  perusakan  membran  sel (Bhalodia  dan  Shukla,  2011).  Mekanisme antibakteri pada flavonoid mempengaruhi proses enzimatis  bakteri  dengan  cara  menginaktifkan enzim  pada  sel  mikroba  (Darmawi  dkk.,  2013). Proses  lain  yang  tidak  kalah  penting  dalam proses  antibakteri  adalah  kinerja  tannin  dengan merusak  dinding  sel  karena  sifatnya  yang lipofilik  (Sudira  dkk.,  2011).  Mekanisme antibakteri  dari  ekstrak  daun  sirih  hijau  juga ditunjukkan  oleh  senyawa  metabolit  sekunder saponin yang memiliki sifat bakterisida, mengganggu  kestabilan  sitoplasma  sel  sehingga dapat  menyebabkan  kematian  pada  bakteri (Cavalieri dkk., 2005).
Tabel 2.   Hasil  Uji  Antibakteri  Ekstrak  Etanol
Daun Sirih Hijau Secara In Vitro Konsentrasi (%) Staphylococcus aureus Rep 1 Rep 2 Rep 3 Kontrol Media + + + Kontrol Negatif + + + Kontrol Positif - - - SEDSH 1% + + + SEDSH 3% + + + SEDSH 5% + - - Keterangan : Kontrol negatif: (basis salep)
Kontrol positif    : Gentamicin 0,1% SEDSH 3%: Salep Ekstrak Daun Sirih Hijau 3% b / b SEDSH 4%: Salep Ekstrak Daun Sirih Hijau 4% b / b SEDSH 5%: Salep Ekstrak Daun Sirih Hijau 5% b / b + = bakteri dapat tumbuh pada media kultur – = bakteri tidak dapat tumbuh pada media kultur
Hasil  Pengujian  Aktivitas  Antibakteri Salep Ekstrak Daun Sirih Hijau. Hasil uji lama kesembuhan  luka  setelah  pemberian  salep dengan  konsentrasi  3,  4,  dan  5%  terhadap Stapylococcus aureus dengan lima kali perulangan  disajikan  pada  Tabel  3.  Data menunjukkan  bahwa  terjadi  perbedaan  waktu sembuh  pada  ketiga  konsentrasi  tersebut.  Hasil perhitungan  rerata  waktu  sembuh  menunjukkan bahwa  konsentrasi  3%  dapat  menyembuhkan rata-rata  7  hari,  konsentrasi  4%  rata-rata  6  hari, dan  konsentrasi  5%  rata-rata  6  hari.  Konsentrasi 4%  memiliki  waktu  sembuh  dengan  rerata  yang tidak berbeda signifikan dengan konsentrasi 5%.
Hasil  uji  antibakteri  menunjukkan  bahwa salep  ekstrak  daun  Sirih  Hijau  berpotensi menghambat pertumbuhan Stapylococcus aureus. Perbandingan  hasil  uji  antibakteri  pada ketiga  konsentrasi  memberikan  hasil  pada konsentrasi  4%  dan  5%  memiliki  daya antibakteri  lebih  efektif  dengan  memberikan waktu kesembuhan luka lebih cepat dibandingkan  konsentrasi  3%.  Konsentrasi  3% kurang  efektif  memberikan  kesembuhan  luka karena  senyawa  aktif  yang  diberikan  terlalu, sehingga  pelepasan  zat  aktif  pada  basis  salep sedikit (Halima, dkk., 2015). Senyawa aktif yang diduga  memberikan  efek  antibakteri  adalah flavonoid  dan  tannin  dengan  mekanisme  yang berbeda.  Senyawa  lainnya  adalah  saponin  yang dapat  memacu  pembentukan  kolagen,  yakni protein  struktur  yang  berperan  dalam  proses kesembuhan luka (Wibawati, 2012).
DOI: 10.26874/kjif.v5i2.117
Tabel 3.   Uji Antibakteri Terhadap Salep Ekstrak
Etanol Daun Sirih Hijau Kelompok Perlakuan Waktu Sembuh (Hari) Kontrol Negatif 9,00±0,71 Kontrol Positif 5,80±0,84 SEDSH 3% b / b 7,00±0,71 SEDSH 4% b / b 6,20±0,84 SEDSH 5% b / b 6,00±0,71
Keterangan : n=5 Kontrol negatif: (basis salep) Kontrol positif    : Gentamicin 0,1% SEDSH 3%: Salep Ekstrak Daun Sirih Hijau 3% b / b SEDSH 4%: Salep Ekstrak Daun Sirih Hijau 4% b / b SEDSH 5%: Salep Ekstrak Daun Sirih Hijau 5% b / b
Analisis Statistik. Data uji waktu kesembuhan luka dianalisis normalitas menggunakan  Shapiro-Wilk  yang  menunjukkan nilai  p-value  lebih  dari  0,05  yang  berarti  data terdistribusi normal, kemudian dilanjutkan dengan  uji  Anava  yang  hasilnya  disajikan  pada Tabel  4.  Hasil  uji  Anava  menunjukkan  nilai  p- value  kurang  dari  0,05,  dengan  F-hitung  lebih besar  daripada  F-tabel,  sehingga  data  dapat diterima.  Oleh  karena  itu,  hasil  uji  dilanjutkan menggunakan uji LSD dengan tujuan menentukan  perbandingan  efektifitas  kelima kelompok perlakuan.
Tabel 4.   Hasil  Uji  ANAVA  Lama  Kesembuhan Luka  Salep  Ekstrak  Etanol  Daun  Sirih
Hijau Variabel dependen F hitung F tabel p Lama Kesembuhan Luka 14,828 2,87 0,000 (Berbeda signifikan)
Hasil  uji  LSD  menunjukkan  perbedaan  pada masing-masing  konsentrasi  terhadap  kontrol positif  dan  kontrol  negatif.  Konsentrasi  3% memberikan  hasil  yang  tidak  berbeda  signifikan dengan  kontrol  negatif,  sedangkan  konsentrasi 5%  memberikan  hasil  tidak  berbeda  signifikan dengan  kontrol  positif.  Hasil  lain  terlihat  bahwa antara konsentrasi 4 dan 5% memiliki perbedaan tidak  signifikan.  Hasil  tersebut  sejalan  dengan hasil  rerata  waktu  kesembuhan  luka  pada  salep ekstrak  daun  sirih  hijau.  Aktivitas  antibakteri yang  efektif  terlihat  pada  konsentrasi  4  dan  5%. Semakin  besar  konsentrasi  yang  diberikan,  efek waktu kesembuhan luka yang diberikan  semakin baik  karena  semakin  banyak  senyawa  aktif  yang terkandung  didalamnya.  Flavonoid  dan  tannin pada  ekstrak  daun  sirih  sijau  yang  bersifat
lipofilik  dapat  merusak  membran  sel  bakteri, sehingga mengakibatkan kematian bakteri (Sudira dkk., 2011; Darmawi dkk.. 2013).

## Kesimpulan
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  terhadap salep ekstrak etanol daun  sirih hijau ( Piper betle L.)  menunjukkan  konsentrasi  sebanding  dengan kontrol  positif  (gentamicin),  dengan  indikasi lama  kesembuhan  luka  tidak  berbeda  signifikan, ditunjukkan  oleh  konsentrasi  4  dan  5%  dengan rata-rata  lama  kesembuhan  luka  berturut-turut 6,20±0,80  dan  6,00±0,71  hari..  Hasil  tersebut sejalan  dengan  hasil  uji  LSD  dan  uji  antibakteri terhadap Staphylococcus aureus secara in vitro.

## Ucapan terima kasih
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada Lembaga  Penelitian  dan  Pengabdian  Kepada Masyarakat  (LPPM)  Universitas  Ngudi  Waluyo yang  telah  memberikan  fasilitas  pendanaan Internal demi tercapainya penelitian ini.

## Daftar pustaka
Bhalodia, N.R., Shukla, V.J., 2011. Antibacterial and Antifungal Activities From Leaf Extracts of Casia  fistula I.  :  An  ethonomedical  Plant, J.  Adv.  Pharm  Technol  Res .  Vol  :2(2),  page 104-109.
Cavalieri,  S.J.  2005  I.D.  Rankin.,  R.J.  Harbeck., R.S.  Sautter.,  Y.S.  McCarter.,  S.E.  Sharp., J.H.  Ortez.,  dan  C.A.  Spiegel, Manual  of Antimicrobial Susceptibility Testing . American Society for Microbiology, USA.
Darmawi,  Zakiyah  H.M.,  Fahri  P.,.  2013.  Daya Hambat Getah Jarak Cina ( Jatropha multifida L . ) terhadap Staphylococcus aureus Secara In Vitro . Jurnal  Medika  Veterinaria .  Banda
Aceh : Universitas Syiah Kuala.
Evan, W.C., 2009. Trease and Evans pharmacognosy. 16 th ed, W.B. Saunders.
Hasmila, I.  Amaliah.  M.  Danial.  2015. Efektivitas  Salep  Ekstrak  Ekstrak  Daun Sirsak  ( Annona  muricata L.)  Pada  Mencit yang  Terinfeksi  Bakteri Staphylococcus aureus.
Prosiding Seminar Nasional Mikrobiologi  Kesehatan  dan  Lingkungan , Makassar, 54-62.
Hariana,  A.H.  2007. Tumbuhan  Obat  dan Khasiatnya . Penebar Swadaya. Jakarta
Juwitaningsih,  T.  Y.  M.  Syah,  L.  D.  Juliawaty.
2014.  Aktifitas  Antibakteri  Dari  Ekstrak
Alphina malaccensis (Burm.f) Roxb.
Prosiding  Seminar  Nasional  Kimia  dan Pendidikan Kimia VI , Surakarta, 495-500. Pelegrini,  E.  Carucci,  M.  G.,  Campanella,  A., Lorenzini, G., Nali, C. 2011. Ozone Stress  In Melissa  officinalis  Plants  Assessed  by Photosynthetic  Function. Environ.  Exp.Bot . 73, 94-101.
Paju,  N.,  Yamlean,  P.V.Y.,  Kojong,  Novel., 2013.  Uji  Efektivitas  Salep  Ekstrak  Daun Binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis ) Pada Kelinci ( Oryctolagus cuniculus ) yang Terinfeksi Bakteri
Staphylococcus  aureus . Jurnal .  FMIPA UNSRAT. Manado.
Sartinah,  A.  2011.  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Antibakteri  Dari  Daun  Petai  Cina,‖ Tesis .  Fakultas  Farmasi  Sains  dan  Teknologi UGM, Yogyakarta.
Shah  B,  Seth,  A.K.  2010.  Textbook  of Pharmacognosy  and  Phytochemistry.  India  :
Elsivie
Shetty, S. & Vijayalaxmi, KK. 2012. Phytochemical Investigation of Extract/Solvent Fractions of Piper ningrum
Linn.  Seeds  and Piper  betle Linn.  Leaves. International  Journal  of  Pharma  and  Bio Sciences . 3(2): 344-349.
Sudira,  I. W., Merdana,  I., Wibawa,  I. 2011.  Uji Daya  Hambat  Ekstrak  Daun  Kedondong (Lannea Grandis Engl) Terhadap Pertumbuhan  Bakteri Erwinia  carotovora .
Buletin Veteriner Udayana , 3(1), 45-50.
Wibawati,  P.A.  2012.  Pengaruh  Ekstrak  Daun Sirih  Merah  Terhadap  Waktu  Kesembuhan Luka  Insisi  yang  Diinfeksi  Pada  Tikus  Putih.
Skripsi . Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga. Surabaya. Wibowo,  M.,  Eni  C.,  dan  Tepy  U.  2009. Ekstraksi dan Identifikasi Senyawa
Antimikroba  Herba  Meniran  (Phyllanthus niruri  L.) .  Depok:  Departemen  Biologi, Fakultas MIPA Universitas Indonesia
Wyatt,  E.,  Sutter,  S.  H.,  Drake,  L.  A.,  2001,
Dermatology  Pharmacology,  in  Goodman and  Gilman’s  The  Pharmacological basic  Of Therapeutics ,  Hardman,  J.  G.,  limbird,  L.  E.,
Gilman,  A.  G.,  (editor),  10  th,  1801-1803, McGraw-hill, New York.