## IDENTIFIKASI SENYAWA AKTIF FRAKSI ETANOL DAUN SIRSAK (Annona  muricata Linn.) SEBAGAI INHIBITOR α-AMYLASE
Eko mugiyanto 1,2 , Partomuan simanjuntak 3 , Siswa setyahadi 4 . Email: giyan77@yahoo.co.id
1 Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila
2 Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Pekajangan Pekalongan
3 Penelitian Bioteknologi LIPI Cibinong Bogor
4 BPPT Puspitek Serpong

## Abstract
Diabetes mellitus (DM) is a chronic metabolic interference characterized by both postprandial and fasting glycemic increase with disturbances in carbohydrate, fat and protein metabolism. There has been much interest in the development of alternative medicine for type 2 diabetes. Annona muricata or sirsak has  been  use  to  cure  cancer  and  according  to  American  Association  of  Clinical  Endocrinologist  there was a significant increasing  for patient cancer  with  obesity and diabetes. The goal of the present  study was to provide in vitro evindence and chemical structure for potential inhibition of α-amylase. This was performed  using 𝛼 -amylase  from  Aspergillus  oryzae  and  the  result  was  Ethanol  fraction  from  Annona muricata  leafes  gave  the  highest  inbitory  activity  against 𝛼 -amylase  (IC 50 73,54  ppm)  furthermore inhibition  of  isolates  compounds  Fr.EtOH.4.2.3  gave  IC 50 0,12  ppm  of 𝛼 -amylase.  Analysis  data  and identification  of  active  compounds  is  done  by  LC-MS  and  FT-IR,  identification  active  compound  of 𝛼 - amylase  inhibitors  is  mixture  of  Muricatin  C,  cis-Reticulatacin-10-one  and  3-Methylquercetin  7- [galactosyl-(1->4)-glucoside].
Keywords: Diabetes, α amylase, annona muricata, sirsak

## 1. Pendahuluan
Diabetes  diartikan  sebagai  gangguan metabolisme  kronis  yang  ditandai  dengan kadar glukosa darah yang tinggi, akibat dari tidak  memadai  produksi  insulin  endogen oleh sel beta pankreas (diabetes tipe-I); atau gangguan  sekresi  dan  atau  aktivitas  insulin (diabetes  tipe-II).  diabetes  tipe-Imerupakan penyakit  autoimun  yang  ditandai  dengan kerusakan  T-sel  pada  sel  beta  pankreas sedang pada diabetes tipe-II, ada peningkatan  secara  bertahap  dari  resistensi insulin  dan  disfungsi  sel  beta  yang  sangat terkait  dengan  obesitas  dan  gaya  hidup  [1]. Karena insiden yang lebih tinggi dari faktor risiko,  prevalensi  diabetes  meningkat  di seluruh  dunia,  tetapi  lebih  jelas  di  negara- negara berkembang [2].
Gangguan metabolisme glukosa berkaitan  erat  dengan  tidak  memadainya sekresi  insulin  dimana  tingkat  glukosa dalam  plasma  adalah  abnormal,  akibat  dari gangguan
metabolisme glukosa 7 .
Peningkatan abnormal glukosa darah memainkan peran patogenik dalam
gangguan metabolism [3].
Gangguan  Toleransi  Glukosa  (GTG) atau  postprandial,  adalah  tahap  regulasi glukosa  yang  terdapat  dalam  individu dimana  toleransi  glukosa  berada  di  atas kisaran normal umumnya tetapi lebih rendah dari  tingkat  yang  dianggap  sebagai  jenis diabetes  mellitus  tipe-2.  GTG  merupakan tahap  sementara  antara  toleransi  glukosa normal  dan  tipe-II  DM.  Postprandial hiperglikemia  memainkan  peran  sentral dalam  pengembangan  dan  perkembangan komplikasi  diabetes  penyakit  terutama jantung. Tahap postprandial ditandai dengan glikemia cepat dan meningkat [4].
Faktor  penting  yang  muncul  dalam hiperglikemia
postprandial adalah
penyerapan  cepat  glukosa  dalam  usus. Penyerapan  glukosa    dapat  ditunda  dengan mengurangi  laju  pencernaan  pati.  Pankreas α-amilase  adalah enzim  kunci dalam sistem pencernaan  yang  mengkatalisis  langkah awal  dalam  hidrolisis  pati  oligosakarida yang  lebih  kecil  yang  terdiri  dari  maltosa, maltotriosa dan sejumlah α - {l-6) dan α - (I -  4)  oligoglucans,  kemudian  dilanjutkan dengan  kerja  α  -glucosidase  yang  akan
mendegradasi  menjadi  glukosa  yang  di serap memasuki aliran darah. Degradasi pati secara  cepat  ini    mengarah  ke  peningkatan PPHG  (hiperglikemia  post-prandial).  Telah terbukti  bahwa  aktivitas  HPA  (Human Pancreatic  α-Amylase)  di  usus  kecil berkorelasi dengan peningkatan kadar glukosa post-prandial [5]. Obat-obatan dalam
pengelolaan diabetes  dapat  dikategorikan  ke  dalam  tiga kelompok.  Obat  dalam  kelompok  pertama bekerja  meningkatkan  ketersediaan  insulin endogen,  yang  termasuk  dalam  kelompok ini adalah sulfonilurea
seperti glibenclamide,    glinides,  analog  insulin, agonis glucagon-like peptide 1 (GLP-1) dan inhibitor  dipeptidyl peptidase-IV (DPP-IV). Dua  anggota  yang    pertama  dari  kelompok ini  bekerja  pada  reseptor  sulfonilurea  di pankreas untuk meningkatkan sekresi insulin.  Agonis  GLP-1  dan  inhibitor  DPP- IV  pada  sisi  lain  bekerja  pada  sel-sel  ileum dari  usus  kecil.  Kelompok  kedua  bekerja dengan meningkatkan sensitivitas insulin,seperti thiazolidinediones, yang merupakan agonis dari Peroksisom proliferatoractivated gamma receptor (PPAR) dan metformin biguanida.
Kelompok  ketiga  terdiri  dari  inhibitor  α- glukosidase  seperti  acarbose,  yang  bekerja dengan mengurangi pencernaan dan bioavailabilitas  polisakarida  [6].  Semua terapi  yang  ada  memiliki  keterbatasan efikasi, tolerabilitas terbatas dan/atau
mekanisme tertentu berdasarkan efek samping [7]
Telah  banyak  tersedia  farmakoterapi yang ada, tetapi masih sulit untuk mencapai kontrol  glikemik  yang  memadai  antara banyak  pasien  diabetes  karena  penurunan progresif  fungsi  sel-β  [8].  Disamping  itu obat-obatan  yang  telah  ada  memiliki aktivitas  penghambatan  yang  kuat  terhadap α-amylase namun memiliki  kelemahan efek samping yang tidak diinginkan seperti perut kembung,    meteorism,  dan  diare.  Beberapa inhibitor  yang  tersedia  di  pasaran  dan banyak  digunakan  adalah  acarbose,  aglitol dan  oglibose  yang  diketahui  menghambat secara  luas  glicosidase  seperti  α-amylase.
Oleh karena sifat non spesifik target tersebut sehingga  diketahui  memiliki  efek  samping seperti  gangguan  pencernaan,  kembung, diare dan flatulen.
Soursop dikenal sebagai Sirsak,
guanabana,  graviola,  zuurzak,  coração-da- India,  guyabano  atau  corossol  merupakan salah satu buah eksotis. Sirsak, yang dikenal sebagai  buah  asli  dari  Hindia  Barat, Amerika  Tengah,  dan  Brasil  sangat  banyak dijumpai  dan  merupakan  buah  yang  umum di  Asia  tropis  saat  ini.  Sirsak  atau  nama ilmiah, Annona muricata L termasuk dalam famili  Annonaceae  terdiri  dari  2300  sampai 2500  spesies  termasuk  didalamnya  lebih dari 130 genus, sehingga dapat dikatakan ini adalah  keluarga  terbesar  dari  Magnoliales. Hanya  empat  genera  (Annona,  Rollinia, Uvaria,  dan  Asimina)  yang  menghasilkan buah  yang  dapat  dimakan  seperti  Annona [9].
A.muricata L  merupakan  pohon  buah populer  yang  dibudidayakan  di  seluruh daerah  tropis  dunia,  dimana  biji  dan  daun dari  spesies  ini  ditemukan  mengandung lebih  dari  50  mono-THF  acetogenins. Beberapa  intermediet  kunci  yang  terlibat dalam  biosintesis  acetogenins  ini  telah diisolasi  dari  spesies  ini    dan  diberi  nama sebagai epomuricenins-A dan B,
montecristin, cohibins-A dan B,
muridienins-1  dan  2,  muridienins-3  dan  4  , muricadienin  dan  chatenaytrienins-1,  2  dan 3  dan  juga  senyawa  baru  yang  disebut sebagai  sabadelin  yang  mungkin  menjadi prekursor biogenetis cis-panatellin [10].
Sirsak  adalah  tanaman  obat  yang  telah digunakan  sebagai  obat  alami  untuk berbagai penyakit. Beberapa studi oleh para peneliti  yang  berbeda  menunjukkan  bahwa kulit  kayu  serta  daunnya  memiliki  aktivitas anti-hipertensi,  vasodilator,  anti-spasmodik (relaksan  otot  polos)  dan  aktivitas  depresi cardio  (memperlambat  denyut  jantung) pada hewan.  Sifat dan aktivitas A. muricata lainnya  didokumentasikan  oleh  penggunaan tradisional  termasuk  penggunaan  sebagai anti-kanker,  anti-bakteri,  anti  jamur,    anti- malaria,  anti-mutagenik  (pelindung  seluler), muntah (menginduksi muntah), anti-
convulsant,  obat  penenang,  insektisida  dan stimulan rahim. Padma et al [11] menegaskan aktivitas  anti-virus dari  ekstrak etanol A.  muricata terhadap  virus  Herpes simpleks. Ekstrak A. muricata telah terbukti memiliki anti-parasit, anti-rematik, astringent, anti-leishmanial dan efek sitotoksik  [12]. A.  muricata juga  telah terbukti efektif melawan resisten (MDR) sel kanker  multi-obat  [13].  Annona  muricata telah digunakan secara tradisional di banyak bagian  dunia  di  mana  akses  ke  pelayanan kesehatan  formal terbatas  [14].  Ada beberapa  alasan  mengapa  penggunaan tanaman  obat  harus  dipelajari  diantaranya adalah  obat  herbal  mungkin  memiliki  efek terapi  tertentu,  mereka  juga  mungkin memiliki efek samping beracun [15].
Studi Annona  muricata L.  Sebagai ihibitor  α-amylase  telah  dilakukan  oleh beberapa peneliti sebelumnya, namun terbatas  pada  aktivitas  ekstraknya  sehingga masih terbuka untuk mengidentifikasi senyawa  aktif  yang  bertanggung  jawab.
Oleh  karena  itu  pada  penelitian  ini  akan mengidentifikasi
senyawa yang menghambat α-amylase.
2. Metode Penelitian
 Bahan
Penelitian  ini  menggunakan  bahan  dan reagen kimia sebagai berikut, etanol 95%, n- heksan, etil asetat, diklorometan, dimetilsulfoksida  (DMSO),  kalium  fosfat monobasa,  asam  klorida  (HCl),  FeCl3, pereaksi Meyer, pereaksi Dragendorf, pereaksi  Bourchadat,  serbuk  Mg,  lempeng KLT  silika  gel  GF254,  silika  60  mesh, acarbose,  α-amylase,  iodin.  Semua  bahan yang  digunakan  berasal  dari  GR  Merck dengan  kualitas  p.a.  Fasa  gerak  yang digunakan dalam kromatografi kolom (etanol, etil asetat, heksana, dan diklorometan)  menggunakan  pelarut  teknis yang telah didestilasi.
 Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah seperangkat alat gelas laboratorium,  waterbath,  timbangan  analitik
(Metler Toledo), rotary evaporator (Hedolph), spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu), spektrofotometer Fourier- transform  Infrared  (FTIR,  Shimadzu  IR
Prestige  21),  dan  Liquid  chromatography-
Mass Spectrometry (LC-MS, Mariner Biospectrometry).
 Penyiapan Ekstrak
Proses ekstraksi dilakukan dengan  cara maserasi  dengan  beberapa  pelarut  dan infudasi  dengan  air.    Serbuk  daun  sirsak diekstraksi berturut-turut dengan n-heksana, etil  asetat,  etanol  96%  dan  air.  Filtrat  yang diperoleh  diuapkan  dan  dipekatkan  serta dihitung  rendemennya  seperti pada  gambar Gambar 1 berikut:
Gambar 1. Skema ekstraksi dan uji

##  Isolasi  dan  Penentuan  Senyawa Kimia
Ekstrak  Etanol  difraksinasi  dengan kromatografi  kolom  silica  gel  dengan perbandingan  eluen  CH 2 Cl 2 -MeOH  (20  :  1) sampai  (1  :  1),  dihasilkan  6  fraksi.  Fraksi dengan aktivitas inhibisi α-Amylase tertinggi  (Fr.EtOH.4)  dilakukan  fraksinasi pada  kromatografi  kolom  silica  gel  dengan eluen CH 2 Cl 2 -MeOH (10:1) menghasilkan 4 fraksi.  Selanjutnya  Fr.EtOH.4.2  dimurnikan
dengan  KLT  preparative  dengan  eluen CH 2 Cl 2 -MeOH  (20:1)    dihasilkan  isolat yang  selanjutnya  diidentifikasi  dengan analisis data spektrum IR dan LCMS.
 Uji  Aktivitas  α-Amylase  secara  In

## Vitro
Uji  inhibisi  α-Amylase  secara  In  Vitro mengikuti  prosedur  seperti  yang  dilakukan oleh  peneliti  sebelumnya  [16].  Aktivitas inhibisi  alfa-amilase dapat diukur secara in- vitro  dengan  cara  hidrolisis  pati  oleh  enzim α  -amilase.  Proses  ini  dihitung  dengan menggunakan yodium, yang memberi warna biru dengan pati. intensitas warna biru yang berkurang  menunjukkan  hidrolisis  pati menjadi  monosakarida  oleh.  Jika  ekstrak memiliki  aktivitas  penghambatan  α  - amilase,  intensitas  warna  biru  akan  lebih. Dengan  kata  lain,  intensitas  warna  biru dalam  sampel  uji  berbanding  lurus  dengan aktivitas penghambatan α amylase [17]. aktivitas  alfa-amilase  dilakukan  dengan metode pati-yodium. 500 µL sampel dengan berbagai  konsentrasi  dan  500  µL  enzim  α- amylase  kemudian    diinkubasi  selama  10 menit pada suhu 37 o C. Selanjutnya Kedalam sampel  ditambahkan  500  µL  Amylum  1%, diinkubasi  kembali  selama  15  menit  pada suhu  37 o C.  Setelah  masa  inkubasi  selesai ditambahkan  10  µL  iodine  1%  .  Diukur absorbansinya dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 614 nm.
 Analisis  Data  Uji  Aktivitas  inhibisi α-Amylase
Serapan  blangko,  kontrol  positif  dan serapan  larutan  uji  yang  telah  diukur  pada spektrofotometer  UV-Vis  dicatat  kemudian dicari  persen  inhibisinya  dengan  cara memasukkan  hasil  serapan  masing-masing konsentrasi sebagai berikut :

## 3. Hasil Dan Pembahasan
α-amilase  merupakan  salah  satu  enzim utama  yang  bertanggung  jawab  terhadap katabolisme  pati  menjadi  gula  yang  lebih sederhana. α-Amilase menghidrolisis polisakarida  kompleks  guna  menghasilkan oligosakarida  dan  disakarida.  Inhibitor amilase  juga  dikenal  sebagai  pati  blockers karena    mencegah  pati  diserap  oleh  tubuh sehingga kadar glukosa postprandial menjadi  rendah.  Dengan  memperlambat pencernaan dan pemecahan pati dimungkinkan memiliki efek menguntungkan  pada  resistensi  insulin  dan kontrol  indeks  glikemik  pada  penderita diabetes. α-Amilase digolongkan dalam kelompok enzim hydrolase, hidrolase glikosida (GHs), GHs mengkatalisis
pemutusan  ikatan  glikosidik  baik  dengan mekanisme    retensi  atau  inversi  pada konfigurasi anomerik.

##  Uji  Aktivitas  Ekstrak  terhadap Inhibisi α-Amylase
Untuk  mengetahui  potensi  antidiabetes dari  daun Annona  muricata L  maka dilakukan  uji  inhibisi  terhadap  aktivitas enzim  α-amylase  terhadap  ekstrak  heksan, etil asetat, etanol, air dan infusa daun sirsak yang hasilnya seperti pada tabel 1 berikut: Tabel  1. Uji  aktivitas  inhibisi  α-amylase terhadap ekstrak dan infusa No. Ekstrak Nilai IC 50 (ppm) 1. Ekstrak heksana 1871.85 2. Ekstrak Etil Asetat 552.56 3. Ekstrak Etanol 73.54 4. Ekstrak Air 909.79 5. Infusa Air 5695.89
Nilai  IC 50 merupakan  satuan  standar yang  digunakan  untuk  menentukan  apakah suatu ekstrak, fraksi maupun senyawa dapat dijadikan  sebagai  obat  antidiabetes  atau tidak  berdasarkan  aktivitasnya.  Ekstrak etanol (Fr.EtOH) sebagai  ekstrak yang akan dimurnikan lebih lanjut dengan menggunakan kromatografi kolom.  Uji  Aktivitas  Inhibisi  α-Amylase Fr.EtOH Hasil Kromatografi Kolom I Hasil  uji  inhibisi  α-amylase    terhadap fraksi hasil kromatografi kolom I menunjukkan  Fr.EtOH.4  merupakan  fraksi yang  paling  aktif  yaitu  ditunjukan  dengan nilai  IC 50 yang  paling  kecil  sebesar  10.50 ppm.  Adapun  hasil  nya  seperti  pada  tabel  2 berikut:
Tabel 2 . Hasil uji inhibisi α-amylase fraksi hasil kromatografi kolom I No Fraksi IC 50 (ppm) 1. Fr.EtOH.1 67.39 2. Fr.EtOH.2 39.65 3. Fr.EtOH.3 13.762 4. Fr.EtOH.4 10.50 5. Fr.EtOH.5 13.55 6. Fr.EtOH.6 19.42  Uji  Aktivitas  Inhibisi  α-Amylase Fr.EtOH.4 Hasil Kromatografi

## Kolom II
Hasil  uji  terhadap  inhibisi  α-amylase menunjukkan bahwa sub fraksi  yang paling aktif  adalah  Fr.EtOH.4.2  dengan  nilai  IC 50 sebesar  1.  81  ppm.  Haslinya  seperti  pada tabel 3 berikut:
Tabel 3. Hasil uji inhibisi α-amylase terhadap Fr.EtOH.4 hasil kromatografi kolom II No. Fraksi IC 50 (ppm) 1. Fr.EtOH.4.1 3.72 2. Fr.EtOH.4.2 1.81 3. Fr.EtOH.4.3 3.49 4. Fr.EtOH.4.4 2.41
 Isolasi Fr.Etoh.4.2 Dengan Kromotografi Lapis Tipis Preparatif (KLTP) Isolasi sub fraksi Fr.EtOH.4.2
dilanjutkan  dengan  kromotagrafi  lapis preparatif,  digunakan  fase  diam  silika  gel GF254  dan  fase  gerak  yang  digunakan adalah    dikloromethan-methanol  dengan perbandingan 20 : 1.  Hasil KLTP diperoleh 3 spot, berdasarkan pemisahkan pada KLTP. Tiga  spot  yang  diperoleh  kemudian  diuji aktivitas inhibisi α-amylase.
 Uji  Aktivitas  Inhibisi  α-Amylase Isolat
Hasil  uji  terhadap  inhibisi  α-amylase menunjukkan bahwa sub fraksi  yang paling aktif  adalah  isolat  3  dengan  nilai  IC 50 sebesar  0.12  ppm,  sedangkan  akarbosa 0.048  ppm.  Adapun  hasilnya  tersaji  pada tabel 4 berikut:
Tabel 4 .Hasil uji α-amylase terhadap Isolat No. Fraksi IC 50 (ppm) 1. Isolat 1 0.15 2. Isolat 2 1.50 3. Isolat 3 0.12 4. Akarbosa 0.048

##  Identifikasi Senyawa Hasil Isolasi
Isolat  3  berbentuk  padatan  serbuk berwarna  kuning.  Penentuan  senyawa    dari masing-masing komponen  diidentifikasi dengan menggunakan  LC-MS dengan  eluen diklormethan-methanol (20:1) dengan
kecepatan  1  ml/menit  sedangkan  untuk mengetahui  gugus  fungsi  yang  terkandung dalam isolat 3 digunakan FT-IR.
Kromatogram    LC    menunjukkan hubungan    waktu    retensi    (Rt)    dengan intensitas  puncak  kromatogram.    Rt  yang muncul  pada  Rt  5.00,  6.17  dan  7.51,  setiap puncak    yang    muncul  pada    Rt      tertentu diduga merupakan 1 senyawa.
Kromatogram      LC    isolat  3    (Gambar  2) masih    menunjukkan    campuran  senyawa, terlihat    dari    munculnya    3    puncak, selanjutnya  masing-masing  puncak  diamati pola  fragmentasi  MS-nya  seperti  pada gambar 2 berikut:
Gambar  2. Spektrum  LC-I-MS  Isolat  3  Fase gerak  :  diklormetan  :  methanol (20:1) kecepatan 1 ml/menit Sedangkan  hasil  Fragmentasi    LC-MS isolat 3  pada  Rt  5.00 menit menunjukkan nilai  m/z  639  (M+H)  sebagai  puncak  dasar (gambar  3),  sehingga  didapatkan  bobot molekul    (BM)    638    Da,  kemudian dibandingkan  kemiripan  pola  fragmentasi berdasar  senyawa  yang  telah  diketahui  dari A. muricata L.Hasilnya seperti apda gambar 3 berikut:
Gambar 3 . Fragmentasi MS isolat 3 pada Rt 5.00, Jenis fragmentasi : positive (M+H)
Pada  Rt  5.00  senyawa  mempunyai berat molekul 638 Da, dari literatut (Gloster TM,  2008  Oct  20)  diketahui  terdapat  2 senyawa  dengan  BM  638  Da  yang  telah diidentifikasi  terdapat  didalam A.  muricata L  yaitu  purpurenin  dan  Muricatin  C, selanjutnya  dibandingkan  pola  fragmentasi MS  dengan  yang  terdapat  pada  literatur. Hasil  perbandingan  fragmentasi  senyawa yang  diduga  dengan  fragmentasi  senyawa pada  literature  menunjukan  kemiripan  pola fragmentasi sama dengan senyawa
Muricatin  C  (golongan  acetogenin)  yang mempunyai rumus molekul C 37 H 66 O 8
dengan  struktur  kimia  seperti  pada  gambar 4.

## Gambar 4 . Struktur kimia Muricatin C
Spektrum    MS      pada    Rt    6.17  menit menunjukkan  nilai m/z 607 (M+H) sebagai puncak  dasar,  sehingga  didapatkan  bobot molekul    (BM)    606    Da,  kemudian    dicari kemiripan  pola  fragmentasi  m/z  berdasar literature  [18]  pembanding  seperti  pada gambar 5 berikut:
Gambar  5. Fragmentasi  MS  isolat  3  pada  Rt
6.17. Jenis  fragmentasi  :  positive (M+H) Pada Rt 6.17 diduga merupaka senyawa cis-Reticulatacin-10-one dengan rumus
molekul  C 37 H 66 O 6 dengan  pola  fragmentasi yang mirip dengan fragmentasi pembanding. Struktur kimia dari senyawa cis- Reticulatacin-10-one  seperti  pada  gambar  6 berikut:
Gambar 6. Struktur kimia cis-Reticulatacin-10- one
Spektrum  MS  isolat 3  pada  Rt  7.51 menit  menunjukkan    nilai  m/z  641  (M+H)
sebagai  puncak  dasar,  sehingga  didapatkan bobot    molekul    (BM)    640    Da,  kemudian dicari  kemiripan  pola  fragmentasi  m/z berdasar literatur pembanding.
Gambar  7. Fragmentasi  MS  isolat  3  pada  Rt 7.51  Jenis  fragmentasi  :  positive (M+H)
Pada  Rt  7.51  senyawa  kimia  yang diduga adalah 3-Methylquercetin 7- [galactosyl-(1->4)-glucoside] yang merupakan  golongan  flavonoid  dengan rumus  molekul  C 28 H 32 O 17 .  Struktur  kimia dari senyawa 3-Methylquercetin 7- [galactosyl-(1->4)-glucoside]  seperti  pada gambar 9 berikut:
Gambar 8. Struktur kimia 3-Methylquercetin 7- [galactosyl-(1->4)-glucoside]

## 4. Kesimpulan
Hasil  isolasi  menghasilkan  isolat  yang belum senyawa tunggal dengan memberikan nilai  IC 50 aktivitas    inhibisi  α-amylase sebesar 0,12 ppm. Identifikasi isolat dengan metode  FT-IR  dan  LC-MS  menghasilkan rangkuman  informasi  yang  menunjukkan isolat merupakan campuran beberapa senyawa dengan berat molekul 638 Da pada Rt  5.00  yang  diduga  Muricatin  C,  berat molekul 612 Da pada 6.17 yang diduga cis- Reticulatacin-10-one dan berat molekul 640 Da  pada  Rt  7.51  yang  diduga  3- Methylquercetin
7-[galactosyl-(1->4)- glucoside].
5. Daftar Pustaka
[1]. Zimmet, P. A. K. S. J., 2001. Global and  societal  implications  of  the diabetes  epidemic.  Nature. s.l.,  s.n.,
pp. 414, 782–787. [2]. Shaw,  J.  S.  R.  Z.  P.,  2010. Global estimates  of  the  prevalence  of diabetes  for  2010  and  2030. Diabetes  Research  and  Clinical Practice. s.l., s.n., pp. 87, 4–14. [3]. R.H Unger, S. .., 1985. Hyperglycemia  as  an  inducer  as well  as  a  consequence  of  impaired glet  cell  function  and  insulin resistance  ;  implication  for  the management of diabetes : Diabetologia,. s.l., s.n., pp. 28; 119-
121..
[4]. A.  Ceriello,  2005. Postprandial hyperglycemia and diabetes compli- cations: is it time to treat? Diabetes. s.l., s.n., pp. vol. 54, no. 1, pp. 1–7.
[5]. Tarlin CA, W. K. Z. R. B. H. B. G.
A.  R.  W.  S.,  2008. The  Search  for Human  Pancreatic  α  Amylase Inhibitors: High-Throughput Screening of Terrestrial and Marine Natural  Product  Extracts.  Chem Biochem. s.l., s.n., pp. 9;433-439. [6]. Chehade, J. M. A., 2000. A rational approach  to  drug  therapy  of  type  2 diabetes  mellitus.  Drugs. s.l.,  s.n.,
pp. 60, 95–113. [7]. Moller,  D.,  2001. New  drug  targets for  type  2  diabetes  and  the metabolic  syndrome.  Nature. s.l.,
s.n., pp. 414, 821–827.
[8]. Wallace,  T.  M.  D.,  2000. Poor glycaemic control in type 2
diabetes:  a  conspiracy  of  disease, suboptimal  therapy  and  attitude. Quarterly  Journal  of  Medicine. s.l., s.n., pp. 93, 369–374.
[9]. W.  Popenoe,  1920. Manual  of Tropical and Sub-Tropical Fruits,Hafner  Press. New  York, NY, USA, s.n.
[10]. Ivan  A.  Ross,  2003. Medicinal Plant  of  The  World. New  York:
Springer Science+Business Media .
[11]. Padma,  P.  P.  N.  T.  S.  a.  K.  R., 1998.  Effect  of  the  extract  of Annona muricata and Petunia
nyctaginiflora  on  Herpes  simplex virus.. J.  Ethnopharmacol, 61(:  81- 83.).
[12]. Jaramillo, M. C. A. G. J. G. M. R.
S.  a.  V.  I.,  2000.  Cytoxicity  and antileishmanial  activity  of  Annona muricata pericarp.. Fitoterapia., 71( 183-186.).
[13]. Oberlies,  N.  C.  C.  a.  M.  J.,  1997.
Structure–activity  relationships  of diverse  Annonaceous  acetogenins against  multidrug  resistant  human mammary  adenocarcinoma  (MCF  – 7/Adr)  cells.. J.  Med.  Chem., 40
(13)(2102-2106.).
[14]. Adewole,  S.  a.  E.  C.-M.,  2006. Morphological Changes and Hypoglycemic  Effects  of  Annona Muricata  Linn.  (Annonaceae)  Leaf
Aqueous  Extract  on  Pancreatic  Β-
Cells of Streptozotocin-Treated
Diabetic  Rats.. African  Journal  of
Biomedical Research, Volume 9.
[15]. Bailey,  C.  A.  D.  C.  (.,  1989. Traditional  treatments  for  diabetes..
Diabet Care, 12( 553-554).
[16]. BS  Ashok  kumar,  S.  K.  e.  a.,
2013.  In  vitro  antidiabetic  activity of Nisamalaki Churna. Sains Malaysiana, 5(625-628), p. 42.
[17]. Gloster TM, T. J. P. J. H. B. D. G.,
2008  Oct  20.  Divergence  of catalytic mechanism within a glycosidase  family  provides  insight into  evolution  of  carbohydrate metabolism  by  human  gut  flora.. Chem.  Biol., 15(10-3),  p.  1058– 1067. [18]. annonim,
2016. [Online] Available at: http://foodb.ca/spectra/ms_ms/6842 #documentation [Accessed 7 december 2016].