## ANALISIS  KEMAMPUAN  ANTIBAKTERI  DARI  EKSTRAK  DAUN
BELIMBING WULUH ( Averrhoa bilimbi L.) TERHADAP Vibrio sp.
ANALYSIS  OF  THE  ANTIBACTERIAL  ABILITY  OF  THE  EXTRACT  OF  BILIMBI (Averrhoa bilimbi L.) LEAVES AGAINST Vibrio sp.
Hendro  Hitijahubessy *1 ,  Alicia  Royani  Dumatubun 1 ,  Marthinus  Imanuel  Halaay Hanoatubun 1 , Anggreni Sianturi 1 , Bruri Berel Tumiwa 2
1 Program Studi Bioteknologi Perikanan, Jurusan Teknologi Hasil Perikanan, Politeknik Perikanan Negeri Tual 2 Program  Studi  Manajemen  Rekayasa  Pengolahan  Hasil  Perikanan,  Jurusan  Teknologi  Hasil  Perikanan, Politeknik Perikanan Negeri Tual *Corresponding Author e-mail: hendro@polikant.ac.id

## ABSTRAK
Kata Kunci: Vibrio,  Averrhoa bilimbi L., Antibakteri, fitokimia Pengobatan vibriosis dalam budidaya ikan lebih condong  memberi makan ikan dengan obat antibiotik untuk mengobati infeksi. Pemberian antibiotik sintesis bisa menyebabkan timbulnya  resistensi  antibiotik,  dibutuhkan  antibiotik  baru  dari  bahan  alam  untuk mengurangi  dampak  bahaya  bagi  ikan,  rumput  laut,  udang  dan  lingkungan  sekitarnya. Tumbuhan  yang  daunnya  dapat  berfungsi  sebagai  antibakteri  adalah  belimbing  wuluh. Penelitian ini bertujuan untuk memperoleh rendemen, mengukur kemampuan antibakteri Vibrio sp.  dengan  metode  difusi  cakram  dan  mengkaji  kandungan  metabolit  sekunder dalam  daun  belimbing  wuluh  yang  dilakukan  proses  maserasi  dengan  menggunakan pelarut  etanol  70%.  Konsentrasi  ekstrak  yang  dipakai  dalam  penelitian  ini  adalah kosentrasi  100%  yang  kemudian  diencerkan  menjadi 75%,  50%,  25%,  12,5%,  6,25%, 3,125%. Hasil rendemen ekstrak sebesar 5%.  Dengan metode difusi cakram menunjukan aktifitas antibakteri golongan sedang dari ekstrak dengan konsentrasi 100% dengan rata- rata  zona  hambat  yang  terbentuk  yakni  16,95  mm.  Aktifitas  antibakteri  lemah  pada ekstrak  dengan  konsentrasi  75%  dengan  rata-rata  zona  hambat  yakni  11,75  mm. Konsentrasi ekstrak di bawah 75% tidak mapu dalam menghambat pertumbuhan bakteri. Kajian fitokimia yang dilakukan dalam penelitian ini untuk mendukung sifat antibakteri Vibrio sp.  Dari  ekstrak  daun  belimbing  wuluh  dan  golongan  senyawa  bioaktif  yang terkandung  dalam  ekstrak  daun  belimbing  wuluh  adalah  alkaloid,  steroid,  flavanoid, tannin dan saponin.
Article History: Dikirim: 21 Mei 2024 Diterima: 30 Mei 2024 Disetujui: 01 Juni 2024 © 2024 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Pattimura
Copyright © 2024 Biofaal Journal Homepage: https://ojs3.unpatti.ac.id/index.php/biofaal/index E-mail: biofaaljournal@gmail.com
This  article  is  an  open  access  article  distributed a  Creative  Commons  Attribution-NonCommercial-ShareAlike  4.0 International License

## BIOFAAL Journal Juni 2024   Volume 5 Nomor 1   Halaman 053-064
E-ISSN: 2723-4959
https://doi.org/10.30598/biofaal.v5i1pp053-064
How to cite:
Hitijahubessy H, Dumatubun AR, Hanoatubun MIH, Sianturi A, Tumiwa BB. 2024. Analisis Kemampuan Antibakteri dari Ekstrak Daun Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi l.) terhadap Vibrio sp. Biofaal Journal. 5(1): 053-064.

## A. PENDAHULUAN
Vibrio sp.  yaitu  bakteri  yang  diidentifikasi  bersifat  gram  negatif,  berbentuk  batang, terdapat dimana-mana di lingkungan perairan, seperti sungai, muara sungai dan laut (Austin, 2010). Lebih dari 140 spesies Vibrio telah diteliti, 12 spesies diidentifikasi dapat menginfeksi manusia dan 16 spesies menginfeksi hewan air ( Molina-Cárdenas dkk. 2017; Wu dkk. 2011). Vibriosis  mengacu  pada  infeksi  anggota Vibrio yang  menginfeksi  manusia  dan  hewan  air (Chen,  dkk.  2020;  Zhang,  2023).  Vibriosis  pada  hewan  air  dipengaruhi  oleh V. parahaemolyticus , dan V. Vulnificus. Bakteri ini pada rumput laut menyebabkan penyakit ice- ice,  dengan  cara  menginfeksi  organ  ikan  seperti  insang,  sedangkan  pada  udang  dapat menghambat pertumbuhannya. Vibriosis pada manusia bisa menyebabkan penyakit penyakit pencernaan atau infeksi luka dan jaringan lunak di mana fasciitis nekrotikans dan sepsis atau sering  disebut  dengan  gastroenteritis  (Tsai  dkk.  2022;  Park,  dkk.  2019).  Cara  mengatasi vibriosis dalam industri budidaya perikanan yakni dengan membuat pakan makan ikan dengan campuran antibakteri atau antibiotik (Elabd, dkk. 2022).
Konsumsi  antibiotik  sintesis  secara  berlebihan  dalam  budidaya  ikan,  akibatnya  adalah resistensi terhadap antibiotik (Jenish, dkk. 2022). Kebutuhan antibiotik baru yang berasal dari bahan alami untuk yang berfungsi untuk mengurangi dampak berbahaya bagi ikan, rumput laut, udang  dan  pengaruhnya  terhadap  lingkungan  sekitar.  Antibiotik    yang  berasal  dari  tumbuh- tumbuhan adalah cara terbaik untuk mengatasi atau mengobati penyakit dengan meminimalisir efek  samping  dan  ekonomis  (Ranjani, dkk.  2022).  Biasanya  tumbuh-tumbuhan  selain digunakan  sebagai  bumbu  masak  dan  bahan  pangan  konsumsi,  dapat  dimanfaatkan  untuk proteksi tubuh dan bisa digunakan sebagai obat. Peran obat dalam tumbuh-tumbuhan, sangat dipengaruhi oleh kandungan metabolit sekunder (Sutrisna, 2016; Bangun, 2010). Tumbuhan yang berguna sebagai antibakteri adalah belimbing wuluh. Nama latin dari tumbuhan ini adalah Averrhoa bilimbi L. Bagian daun dari tumbuhan ini dapat digunakan sebagai antibakteri. Daun belimbing  wuluh  mengandung  golongan senyawa  bioaktif  berupa  flavonoid,  tanin,  saponin, dan  triterpen.  Metabolit  sekunder  dalam  daun  belimbing  adalah  senyawa  bioaktif,  dengan berbagai mekanisme kerja yang memiliki efek sebagai anti oksidasi dan anti terhadap bakteri (Yenita,  2023;  Rasab,  2016;  Riwayati,  2012).  Senyawa  flavonoid  pada  umumnya  memiliki kegunaan  untuk  perkembangan  dan  perlindungan  terhadap  dampak  infeksi  dan  kerusakan. Selain  itu,  flavonoid  berfungsi  mereaksikan  protein  ekstraseluler  dan  intraseluler  untuk membentuk  senyawa  kompleks.  Daun  belimbing  wuluh  yang  diekstrak  dengan  etanol ditemukan  dapat  berfungsi  sebagai  antibakteri  dan  menghambat  perkembangan  dari Staphylococcus  aereus ,  dengan  konsentrasi  ekstrak  80%  dan  rerata  zona  hambat  yang terbentuk sebesar 18,71 mm (Bangun, 2010).
Berdasarkan  uraian  yang  sudah  dijelaskan,  maka  peneliti  ingin  menganalisis kemampuan antibakteri Vibrio sp. dengan menggunakan ekstrak etanol dari daun belimbing wuluh dengan metode difusi cakram. Dilakukan juga perhitungan rendemen ekstrak dan kajian fitokimia  untuk  melengkapi  data  penelitian  dan  menghubungkan  sebab  akibat  kemampuan antibakteri dan golongan senyawa bioaktif dari ekstrak tersebut.

## B. METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian ini telah dilakukan di Laboratoium Hama dan Penyakit Ikan Balai Budidaya Laut  Tual dan Laboratorium Hama dan Penyakit Ikan di Politeknik Perikanan Negeri Tual dari bulan Juni 2023 sampai Agustus 2023.

## Alat dan Bahan

## Alat
Autoclave , Incubator  air  concept,  incubator  bio  concept ,  Pembakar  spirtus, hot  plate , neraca,  sarung  tangan  sterril,  oven,  saringan  40  mesh, petridish , evaporator ,  gelas  kimia, erlenmeyer, spatula, gelas ukur, labu ukur, tabung reaksi, pipet tetes, pipet volumetrik, pinset, bunsen , sarbet, neraca analitik, timbangan, colloni counter , blender , mortar dan alu.

## Bahan
Daun belimbing wuluh yang berasal dari daerah Kabupaten Maluku Tenggara, air laut berasal  dari  pesisir  lingkungan  pantai  Desa  Wearhir  di  Kota  Tual,  media  agar Thiosulfate citrate bile salts sucrose , air suling, etil alkohol 70%, swab sterill , cakram antibiotik tetrasiklin 30 mg, cakram kosong, lakmus biru dan lakmus merah, Pelarut yang digunakan untuk ekstraksi adalah  etanol  70%,  CHCl 3 (kloroform),  akuades,  amonia, larutan  H 2 SO 4 (asam  sulfat)  2  M, CH 3 COOH (asam asetat anhidrida), H 2 SO 4 (asam sulfat) pekat, bubuk magnesium, larutan HCl (asam klorida) 5 M, metanol (CH 3 OH), larutan NaCl (natrium klorida) 10%, larutan FeCl 3 (besi (III) klorida) 1%, pereaksi Dragendorf, Mayer dan Wagner.

## Preparasi Sampel Ekstrak
Daun belimbing wuluh yang dipetik, selanjutnya dibersihkan dengan menggunakan air yang  mengalir,  hal  ini  bertujuan  yakni  membersihkan  cemaran  yang  menempel  pada  daun tersbut.  Selanjutnya  ditempatkan  di  atas  wadah  dengan  permukaan  besar  untuk  ditiriskan, digunting  berukuran  kecil  dan  dikeringkan  dengan  cara  dikering-anginkan  pada  suhu  ruang sampai berat kering hanya 30% dari berat basah.

## Pembuatan Ekstrak
Daun  kering  yang  dihasilkan,  dihaluskan  dan  ditapis  memakai  ayakan  60  mesh  untuk mendapatkan  bubuk  daun  yang  halus . Proses  ektsraksi  dengan  metode maserasi  dilakukan dengan  menyiapkan  500gram  bubuk  daun  untuk  ditimbang  dan  dimasukkan  dalam beaker glass , kemudian ditambahkan pelarut etanol sebanyak 1 liter. Maserasi dilakukan pada suhu ruang  dengan  kurung  waktu  5  hari.  Selanjutnya  hasil  ekstrak  disaring  menggunakan  kertas saring, dimana akan menghasilkan filtrat dan residu. Filtrat dimasukkan ke dalam beaker glass untuk evaporasi dengan evaporator sehingga didapatkan ekstrak dalam bentuk pasta.

## Analisa Aktivitas Antibakteri

## Sterilisasi alat
Untuk  peralatan  gelas  contohnya  pipet, petridish ,  erlenmeyer  dan  tabung  reaksi  yang telah  dicuci,  dikeringkan  dan  dibungkus  dengan  kertas crab ,  selanjutnya  dilakukan  proses
sterilisasil dengan metode sterilisasi kering dalam oven dengan suhu rata-rata ±170 o C dengan durasi waktu 2 jam (Irmawati dan Sudirjo, 2012).

## Preparasi Sampel Air Laut
Sampel diambil menggunakan perlakuan dengan botol kaca steril di pesisir pantai Desa Wearhir di Kota Tual dan langsung dipakai untuk analisis selanjutnya.

## Pembuatan Media Tiosulfate Citrate Bila Salt Sucrose (TCBS)
Media TCBS untuk isolasi bakteri Vibrio sp. ditimbang sebanyak 8,8 gram, kemudian dilarutkan  dengan  aquades  100ml  dalam  erlenmeyer.  Tabung  erlenmeyer  ditutup  rapat menggunakan  kapas  dan  lembaran alumunium  foil ,  selanjutnya  dipanaskan  di  atas hot  plate hingga media larut sempurna dan berbusa (Iskandar, 2009).

## Pengenceran Ekstrak, kontrol positif dan kontrol negatif
Ekstrak daun yang masih berupa pasta, selanjutnya dikeringkan sampai menjadi  bubuk kering dengan menggunakan oven dengan suhu 78 o C. Ekstrak 75% dibuat dengan melarutkan 3,75 gram ekstrak dalam 5ml aquades. Selanjutnya dilakukan pengenceran bertingkat. Kontrol positif berasal dari cakram antibiotik tetrasiklin 30 mg dan kontrol negatif berasal dari cakram kosong yang direndam selama ±10 menit dalam aquades.

## Metode Difusi Cakram
Uji aktivitas antibakteri dari ekstrak daun menggunakan cara sederhana yaitu metode difusi cakram. Difusi cakram ini diharapkan dapat menunjukan kemapuan aktivitas antibakteri ekstrak daun dalam menghambat pertumbuhan bakteri. Bakteri Vibrio sp. yang telah diisolasi yang telah dikultur dari air laut dan diisolasi, selanjutnya dipindahkan dalam media Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose (Difco, 1977). Sebelum proses inkubasi, bagian permukaan media ditempelkan  kertas  cakram  kontrol  positif  dan  negatif,  serta  ekstrak.  Selanjutnya  proses inkubasi  dilakukan  dengan  menggunakan  suhu  37°C  sampai  ±24  jam.  Pengamatan  akan dilakukan  setelah  ±24  jam  proses  inkubasi,  dimana  parameter  yang  diukur  adalah  zona berwarna bening (Sari, 2015).

## Kajian Fitokimia (Sangi dkk. 2008)

## Analisis senyawa alkaloid
Tambahkan  kloroform  secukupnya  pada  4g  ekstrak  daun  dan  haluskan  kembali. Kemudian tambahkan 10 ml amonia dan 10 ml kloroform. Larutan disaring ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan 10 tetes asam sulfat 2N ke dalam filtratnya. Filtratnya dikocok secara berkala dan didiamkan beberapa saat hingga terbentuk dua lapisan. Lapisan atas dipindahkan ke tiga tabung masing-masing 2,5 ml. Ketiga larutan tersebut dianalisis menggunakan pereaksi Mayer, Dragendorff, dan Wagner. Endapan putih terbentuk jika direaksikan dengan pereaksi Mayer,  endapan  merah  jingga  dengan  pereaksi  Dragendorff,  dan  endapan  coklat  dengan pereaksi Wagner.

## Analisis senyawa tannin
Sebanyak 20 mg ekstrak ditimbang, ditambahkan dengan larutan etanol sampai sampel terendam semuanya. Kemudian 1 ml larutan tersebut dipindahkan kedalam tabung reaksi, lalu ditambahkan 2-3 tetes FeCl 3 1%. Adanya tannin dengan terbentuknya warna hitam kebiruan atau hijau.

## Analisis senyawa triterpenoid dan steroid
Sebanyak 50–100 mg ekstrak daun ditempatkan pada pelat tetes dan ditambahkan asetat anhidrida hingga sampel terendam seluruhnya. Kemudian didiamkan selama kurang lebih 15 menit,  6 tetes  larutan  dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  dan  ditambahkan  2-3 tetes asam sulfat  pekat.  Adanya  triterpenoid  ditunjukkan  dengan  warna  merah  jingga  atau  ungu,  dan adanya steroid ditunjukkan dengan warna biru.

## Analisis senyawa flavanoid
Sebanyak 200 mg ekstrak daun dilarutkan kembali dalam 5 mL etanol dan dipanaskan dalam  tabung  reaksi  selama  5  menit.  Kemudian  tambahkan  beberapa  tetes  HCl  pekat. Kemudian ditambahkan 0,2 g bubuk Mg. Hasil positif ditunjukkan dengan munculnya warna merah tua (magenta) dalam waktu 3 menit.

## Analisis senyawa saponin
Sebanyak  2  g  ekstrak  daun  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  air  suling hingga  menutupi  seluruh  sampel,  direbus  selama  2  sampai  3  menit,  didinginkan,  kemudian dikocok kuat. Hasil yang baik ditunjukkan dengan pembentukan busa yang stabil.

## Analisis Data
Penentuan Rendemen (Sudarmadji, dkk., 1997)
Rendemen adalah hasil bagi berat produk  (ekstrak) yang dihasilkan dan dibagi dengan berat bahan baku, kemudian dikalikan dengan 100%. Rumus perhitungan rendeemen ekstrak adalah sebagai berikut :
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 = 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑘𝑒𝑛𝑡𝑎𝑙 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑏𝑢𝑏𝑢𝑘 𝑑𝑎𝑢𝑛 𝑥100%

## Pengukuran zona bening dan Perhitungan zona hambat (Davis and Stout. 1971)
Gambar 1 Area perhitungan zona bening
Zona hambat = (𝐷𝑉 − 𝐷𝐶) + (𝐷𝐻 − 𝐷𝐶)
2
Keterangan : DV : Diameter panjang; DH : Diameter lebar; DKC : Diameter cakram

## Klasifikasi zona hambat bakteri
Dari uji aktivitas antibakteri dengan menggunakan metode difusi cakram didapati data zona  hambat,  selanjutnya  digolongkan  daya  hambat  sesuai  dengan  klasifikasi  yang dikemukakan dalam penelitian Greenwood dkk. (1995) pada tabel 1.

## Tabel 1. Diameter zona dan daya hambat
Zona hambat (diameter) Golongan Daya hambat bakteri d >20 Golongan Kuat 15 < d < 20 Golongan Sedang 10 < d <15 Golongan Lemah d <10 Tidak mempunyai daya hambat Keterangan: d = zona hambat (diameter)

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Perhitungan rendemen ekstrak
Ekstrak daun belimbing wuluh dibuat dengan menggunakan metode maserasi. Maserasi adalah perendaman sampel ekstrak pada suhu ruang tanpa ada proses mekanik. Hasil ekstraksi yakni ekstrak yang selanjutnya dilakukan penentuan rendemen dari ekstrak tersebut. Rendemen ekstrak diperoleh dengan cara membagi massa hasil dari  ekstrak dengan massa serbuk  daun untuk  ekstraksi  dan  dikalikan  100%.  Rendemen  ekstrak  dari  sampel  daun  belimbing  wuluh adalah 5%, dengan massa ekstrak sebanyak 26 gram dan massa dari serbuk daun sebanyak 511 gram. Pelarut yang digunakan dalam melakukan penelitian ini adalah etanol 70%. Rendemen yang diperoleh tidak terlalu banyak, karena sangat dipengaruhi oleh proses pembuatan sampel daun  menjadi  bubuk.  Hal  ini  terjadi  karena  alat blender yang  digunakan  masih  belum  bisa menghaluskan sampel dengan baik.
Pelarut  etanol  70%  adalah  pelarut  polar  terbaik  kedua  setelah  metanol  yang menghasilkan rendemen terbanyak dalam suatu ekstraksi. Selain itu, etanol 70% adalah pelarut terbaik yang dapat mengikat banyak metabolit sekunder untuk terikut dalam proses estraksi. Hal ini dibuktikan dengan tingginya total flavanoid dan kemampuan antioksidan ketika pelarut ini digunakan dalam proses ekstraksi jika dibandingkan dengan methanol, akuades dan aseton (Verdiana dkk., 2018).

## Analisa aktivitas antibakteri
Air laut adalah sampel yang digunakan dalam proses isolasi bakteri Vibrio sp. diambil di pesisir pantai Desa Wearhir di Kota Tual. Sampel air laut yang diambil adalah sampel yang langsung dilakukan pengujian laboratorium untuk isolasi bakteri Vibrio sp. Zona hambat yang diperoleh  dapat  berupa  data  rata-rata  pengukuran  zona  bening  dari  cakram  yang  direndam dalam konsentrasi ekstrak daun belimbing wuluh dalam variasi konsentrasi yakni 100%, 75%, 50%, 25%, 12,5%, 6,25% dan 3,125% dengan perlakuan sebanyak dua kali (duplo). Kontrol positif berasal dari cakram antibiotik tetrasiklin 30 mg dan kontrol negatif berasal dari cakram yang direndam dalam pelarut aquades, hasil perhitungan zona hambat dapat dilihat pada grafik dalam gambar 2.
Gambar 2. Data rata-rata hasil pengukuran zona hambat
Berdasarkan data pada gambar 2 dapat ditentukan bahwa dari ekstak daun mempunyai aktivitas sebagai antibakteri. Aktivitas antibakteri ini ditunjukkan dengan adanya zona hambat yang terbentuk. Sebagai pembanding maka diguankan kontrol positif dan kontro negatif, maka kontrol positif yang digunakan dalam penelitian ini adalah tetrasiklin 30 mg dan kontrol negatif adalah aquades. Klasifikasi daya hambat dari masing-masing konsentrasi ekstrak dan kontrol sebagai  pembanding.  Hal  ini  dapat  dilihat  pada  tabel  2  yang  menyatakan  klasifikasi  daya hambat.
Tabel 2. Klasifikasi daya hambat
No Perlakuan Sampel Diameter Zona Hambat (mm) Klasifikasi daya hambat 1 Ekstrak 100% 16,95 Sedang 2 Ekstrak 75% 11,75 Lemah 3 Ekstrak 50% 9,775 Tidak ada 4 Ekstrak 25% 6,875 Tidak ada 5 Ekstrak 12,5% 6 Tidak ada 6 Ekstrak 6,25% 4,95 Tidak ada 7 Ekstrak 3,125% 0 Tidak ada 8 Kontrol (+) (Tetrasiklin) 27,8 Kuat 9 Kontrol (-) (aquades) 0 Lemah
Hasil  penelitian  didapati  adanya  aktivitas  sebagai  antibakteri  oleh  ekstrak  daun belimbing  wuluh  yang  sedang  pada  konsentrasi  100%,  dengan  zona  hambat  16,95mm. Aktifitas antibakteri yang lemah berada pada konsentrasi 75% dengan zona hambat  11,75mm. Konsentrasi ekstrak  daun belimbing wuluh dibawa 75% tidak ada kemampuan menghambat bakteri.  Jika aktivitas antibakteri ekstrak daun belimbing wuluh dibandingkan dengan kontrol
0 5 10 15 20 25 30 Ekstrak 100% Ekstrak 75% Ekstrak 50% Ekstrak 25% Ekstrak 12,5% Ekstrak 6,25% Ekstrak 3,125% Kontrol (+) (Tetrasiklin) Kontrol (-) (aquades) DIAMETER ZONA HAMBAT (MM) P ER LAK UK AN SAM O EL Rata-rata Diameter Zona Hambat
positif yang merupakan antibiotik tetrasiklin dosis 30mg, maka hasil antibiotik masih tergolong kuat  sebagai  antibakteri  dengan  zona  hambat  27,8mm  sedangkan  ekstrak  daun  belimbing wuluh yang bersifat lemah pada konsentrasi tertinggi (100%). Tetrasiklin digunakan sebagai kontrol positif dibuat sebagai pembanding yang terukur, karena tetrasiklin sudah merupakan antibiotik  yang  sudah  pasti  dapat  membentuk  zona  hambat.  Sedangkan  aquades  digunakan sebagai  kontrol  negatif  dimaksudkan  sebagai  pembanding  yang  tidak  mungkin  membentuk zona bening atau dapat menghambat bakteri karena sudah bersifat sebagai pelarut ekstrak atau bersifat netral.

## Kajian Fitokimia
Telah  dilakukan  penelitian  analisis  fitokimia  pada  daun  belimbing  wuluh  dan  hasil analisis kualitatif fitokimia dalam penelitian ini dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Analisis fitokimia Daun Belimbing Wuluh ( Averrhoa bilimbi L ) No Uji fitokimia Hasil uji Keterangan 1 Alkaloid: Wagner + Endapan coklat Mayer + Endapan putih Dragendorff - Tidak terbentuk endapan merah jingga 2 Triterpen - Tidak muncul warna ungu atau merah jingga 3 Steroid + Biru 4 Flavonoid + Warna magenta 5 Saponin + Terbentuk buih yang stabil 6 Tanin + Biru tua kehitaman
Keterangan:  (+):  hasil  uji  menunjukan  adanya  golongan  senyawa  bioaktif;  (-):  hasil  uji  tidak menunjukan adanya golongan senyawa bioaktif.
Terbentuknya  zona  bening  menampakan  bahwa  memuungkinkan  adanya  aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol daun belimbing wuluh . Antibakteri dari daun belimbing wuluh berasal dari golongan senyawa bioaktif seperti flavonoid, fenol, alkaloid, tannin dan kumarin (Valsan dan Raphael, 2016). Hal ini mempunyai kesesuaian dengan hasil penelitian ini untuk analisis kualitatif  fiktokimia dari daun belimbing wuluh yaitu diperoleh hasil positif adanya golongan  senyawa  bioaktif  yakni  alkaloid,  steroid,  flavanoid,  saponin  dan  tannin.  Hasil  uji secara kualitatif fitokimia dapat dilihat pada gambar 3.
Pemisahan senyawa uji alkaloid Pereaksi Mayer (+). Pereaksi Dragendrof (-). Pereaksi Wagner (+). Steroid (+) Triterpen (-) Flavanoid (+). Saponin (+). Tanin (+).

## Gambar 3. Hasil uji fitokimia
Adapun  kajian  analisis  fitokimia  dalam  hubungan  sebagai  antibakteri  adalah  sebagai berikut:

## Alkaloid
Alkaloid diduga dapat berfungsi sebagai antibakteri dengan cara medegradasi membran dari sel bakteri dan merusak struktur protein sel dari bakteri yang mengakibatkan bakteri akan mati (Brooks dkk. , 2005). Mekanisme  reaksi dari alkaloid yang berfungsi menjadi antibakteri yakni dengan membentuk protein ekstraseluler dari senyawa kompleks dan terlarut yang dapat mendegradasi  membran  sel  dari  bakteri  dan  akan  diikuti  oleh  keluarnya  senyawa  dari intraseluler  dalam  sel  bakteri  (Cowan,  1999).  Senyawa  alkaloid  dapat  menghambat  energi darinsistem pernafasan bakteri, karena bakteri membutuhkan energi untuk menyerap berbagai senyawa biokatif dan membantu proses biosistesis dari senyawa makromolekul dalam sel.

## Flavanoid
Flavanoid sebagai antibakteri diduga yang dapat membentuk protein ekstraseluler dalma sel bakteri dari senyawa kompleks dan terlarut, yang dapat merusak membran sel bakteri dan diikuti oleh keluarnya senyawa intraseluler (Rijayanti, 2014).

## Tannin
Tannin  diduga  dapat  mengentikan  aktivasi  adhesi  sel  dan  juga  enzim  pada  bakteri. Tannin dapat mendistorsi jalanya protein pada lapisan di dalam sel. Tannin dapat juga berperan sebagai  antibakteri  dengan  menghancurkan  cara  dinding  sel  atau  membran  sel,  sehingga menganggu saluran permeabilitas dari sel dalam bakteri. Akibat dari tannin, dimana sel bakteri akan mati dengan sendirinya (Jannah, 2020).

## Steroid
Steroid dalam tumbuh-tumbuhan diduga berfungsi untuk memperlambat penuaan daun, sehingga daun tidak cepat gugur (Harborne, 1987). Steroid diduga dapat merusak sel bakteri secara utuh (Robinson, 1995).

## Saponin
Menurut Robinson (1995), saponin memiliki aktivitas sebagai antibakteri. Saponin dapat berguna sebagai antibakteri, dengan mekanisme kerja saponin sebagai antibakteri yakni dapat menyebabkan kerusakan dari potein dan enzim dalam sel melalui pengrusakan dinding sel dari bakteri tersebut.
Dengan demikian dari hasil kajian analisis fikokimia dapat diduga senyawa-senyawa metabolit  sekunder  dalam  ekstrak  daun  belimbing  wuluh  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri Vibrio sp.

## D. KESIMPULAN
Kesimpulan yang ditarik dari penelitian Analisis Kemampuan Antibakteri Vibrio sp. dari ekstrak  etanol  daun  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.)  dan  kajian  fitokimianya  adalah sebagai berikut:
1. Rendemen  ekstrak  dihitung  dengan  maksud  untuk  melihat  kemampuan  pelarut  dalam proses ekstraksi, hasil rendemen ekstrak etanol daun belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi L.)  sebesar 5%.
2. Hasil penelitian diperoleh adanya sifat antibakteri dengan daya hambat sedang dari ekstrak daun  belimbing  wuluh  pada  konsentrasi  100%,  dengan  zona  hambat  16,95mm.  Daya hambat yang lemah berada pada konsentrasi 75% dengan zona hambat sebesar 11,75mm. Konsentrasi  ekstrak  daun  belimbing  wuluh  dibawa  75%  tidak  ada  kemampuan menghambat bakteri.
3. Kajian  fitokimia  yang  dilakukan  dalam  penelitian  ini  untuk  mendukung  kemampuan antibakteri Vibrio sp.  dari  daun  ekstrak daun  belimbing  wuluh  dan metabolit  sekunder yang terkandung dalam daun belimbimg wuluh adalah Alkaloid, Steroid, Flavanoid, Tanin dan Saponin.

## E. UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis menghaturkan rasa terima kasih ditujukan untuk Kepala Balai Budidaya Laut Tual dan seluruh pegawai atau laborannya dan juga terima kasih penulis haturkan kepada Kepala
Laboratorium Hama dan Penyakit Ikan Politeknik Perikanan Negeri Tual. Ucapan terima kasih patut  diberikan  untuk  kegiatan  Pekan  Ilmiah  Mahasiswa  Politeknik  Perikanan  Negeri  Tual Tahun 2023 untuk memberi bantuan dana penelitian dan semua pihak yang sudah menolong kami dalam melaksanakan penelitian yang dimaksud.

## F. DAFTAR PUSTAKA
Austin B. 2010. Vibrios as causal agents of zoonoses. Veterinary microbiology , 140 (3-4), pp.310-317. Bangun D. 2010. Pengaruh Pemberian Ekstrak Jahe (Zingiber Officinale Rosc.) terhadap Kadar Malondialdehid (Mda)  dan  Gambaran  Histopatologis  Tubulus  Proksimal  Ginjal  Mencit  yang  Diberi  Plumbum Asetat (Doctoral dissertation, Universitas Sumatera Utara). Brooks GF, Butel JS and SA Morse. 2005. Mikrobiologi kedokteran (Medical microbiology). Salemba Medika . Chen J, Lu Y, Ye X, Emam M, Zhang H and H Wang. 2020. Current advances in Vibrio harveyi quorum sensing as drug discovery targets. European Journal of Medicinal Chemistry , 207 , p.112741. Cowan MM. 1999. Plant products as antimicrobial agents. Clinical microbiology reviews , 12 (4), pp.564-582. David,  WW  and  TR  Stout.  1971.  Disc  plate  method  of  microbiological  antibiotic  assay. Microbiology , 22 (4), pp.659-665.
Difco L. 1977. Difco manual of dehydrated culture media and reagents for Microbiology and Clinical laboratory procedures. Difco Laboratories .
Elabd H, Youssuf H, Mahboub HH, Salem SM, Husseiny WA, Khalid A, El-Desouky HS and C Faggio. 2022. Growth,  hemato-biochemical,  immune-antioxidant  response,  and  gene  expression  in  Nile  tilapia (Oreochromis  niloticus)  received  nano  iron  oxide-incorporated  diets. Fish  &  Shellfish Immunology , 128 , pp.574-581.
Greenwood D, Finch R, Davey P and M. Wilcox. 1995. Antibiotics, susceptibility (Sensitivity) test antimicrobial and chemoterapy. United State of America: Mc Graw Hill Company .
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia, diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata dan Iwang Soediro, hal. 47, 70, 99. Institut Teknologi Bandung Press, Bandung .
Irmawati Y and F Sudirjo. 2017. Infection Vibrio sp. bacteria on Kappaphycus seaweed varieties brown and green.
In IOP  Conference  Series:  Earth  and  Environmental  Science (Vol.  89,  No.  1,  p.  012016).  IOP Publishing.
Iskandar. 2009. Metodologi Kualitantif . Gaung Persada (GP Press), Jakarta. Jannah  M.  2020. Uji  aktivitas  antibakteri  fraksi  etil  asetat  dan  petroleum  eter  hasil  hidrolisis  ekstrak  metanol Hydrilla  verticillata  terhadap  bakteri  Escherichia  coli  dan  Staphylococcus  aureus (Doctoral dissertation, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim).
Jenish  A,  Ranjani  S  and S  Hemalatha S.  2022. Moringa  oleifera  nanoparticles  demonstrate  antifungal  activity against plant pathogenic fungi. Applied biochemistry and biotechnology , 194 (10), pp.4959-4970.
Molina-Cárdenas  CA,  and M  del Pilar Sánchez-Saavedra.  2017. Inhibitory effect of benthic diatom species on three aquaculture pathogenic vibrios. Algal Research , 27 , pp.131-139.
Park  SY.,  Yu  SN,  Lee  EJ,  Kim  T,  Jeon  MH,  Choo  EJ.,  ...  &  TH  Kim.  2019.  Monomicrobial  gram-negative necrotizing  fasciitis:  an  uncommon  but  fatal  syndrome. Diagnostic  Microbiology  and  Infectious Disease , 94 (2), 183-187.
Ranjani  S  and  S  Hemalatha.  2022.  Triphala  decorated  multipotent  green  nanoparticles  and  its applications. Materials Letters , 308 , p.131184.
Rasab S. 2016. Uji aktivitas antimikroba fraksi daun belimbing wuluh (Averrhoa bilimbi L.) terhadap beberapa mikroba  uji. Skripsi,  Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu  Kesehatan,  Universitas  Islam  Negeri  Alauddin Makassar .
Rijayanti RP. 2014. Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun mangga bacang (Mangifera Foetida L.) terhadap Staphylococcus aureus secara in vitro. Jurnal Mahasiswa PSPD FK Universitas Tanjungpura , 1 (1). Riwayati D. 2012. Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) Terhadap Escherichia coli dan Bacillus sp (Doctoral dissertation, Universitas Muhammadiyah Surakrta). Robinson T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi, Edisi VI , Hal 191-216, Diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinata, ITB. Bandung.
Sangi M, Runtuwene MR, Simbala HE and VM Makang. 2019. Analisis fitokimia tumbuhan obat di Kabupaten Minahasa Utara. Chemistry Progress , 1 (1), pp.47-53.
Sari K. 2015. Kandungan senyawa kimia dan aktivitas antibakteri ekstrak kulit buah alpukat (Persea americana P. Mill) terhadap bakteri Vibrio alginolyticus. Jurnal Kajian Veteriner , 3 (2), pp.203-211.
Sudarmadji S, Haryono B dan Suhardi. 1997. Prosedur untuk Analisa Bahan Makanan dan Pertanian . Penerbit Liberty. Yogyakarta.
Sutrisna EM. 2016. Herbal medicine: suatu tujuan farmakologis . Muhammadiyah University Press. . Tsai YH, Huang TY, Kuo LT, Chuang PY, Hsiao CT. and KC Huang. 2022. Comparison of surgical outcomes and  predictors  in  patients  with  monomicrobial  necrotizing  fasciitis  and  sepsis  caused  by  Vibrio vulnificus, Aeromonas hydrophila, and Aeromonas sobria. Surgical Infections , 23 (3), pp.288-297. Valsan A and KR Raphael. 2016. Pharmacognostic profile of Averrhoa bilimbi Linn. leaves. South Indian J. Biol. Sci , 2 (1), pp.75-80.
Verdiana  M,  Widarta  IWR,  Gede  ID  and  M  Permana.  2018.  Gelombang  Ultrasonik  Terhadap  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Kulit  Buah  Lemon  (Citrus  limon  (Linn.)  Burm  F.). J.  Ilmu  dan  Teknol. Pangan , 7 (4), pp.213-222.
Wu  CJ,  Wang  H,  Chan  YL  and  TL  Li.  2011.  Passive  immune-protection  of  small  abalone  against  Vibrio alginolyticus  infection  by  anti-Vibrio  IgY-encapsulated  feed. Fish  &  shellfish  immunology , 30 (4-5), pp.1042-1048.
Yenita Y. 2023. Perbandingan Antibakteri Ekstrak Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.) Terhadap Daya Hambat Pertumbuhan Staphylococcus Aureus dan Klebsiella Pneumonia Secara In Vitro. Innovative: Journal Of Social Science Research , 3 (3), 10479-10487.
Zhang Y, Lin M, Qin Y, Lu H, Xu X, Gao C, Liu Y, Luo W and X Luo. 2023. Anti-Vibrio potential of natural products from marine microorganisms. European Journal of Medicinal Chemistry , 252 , p.115330.

## BIOFAAL JOURNAL
E-ISSN 2723-4959 Volume 5 Number 1 | Juni 2024

## EDITOR IN CHIEF
Laury Marcia Ch. Huwae, S.Si., M.Si

## Associate Editor
Dr. Windi Mose, S.Pd D. E. Sahertian, S.Si., M.Si E. Samson, S.Si., M.Si Veince B. Silahooy, S.Si., M.Si

## Expert Editor Board
Prof. Dr. Pieter Kakisina, S.Pd., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. dr. Ermita I. Ibrahim Ilyas, M.S., AIFO (Universitas Indonesia, Jakarta) Sri Sumartiningsih, S.Si., M.Kes., Ph.D., AIFO (Universitas Negeri Semarang, Semarang) Dr. Ir. Alfred O. M. Dima, M.Si (Universitas Nusa Cendana, Kupang) Dr. Safrida, S.Pd., M.Si (Universitas Syiah Kuala, Aceh) Dr. dr. Yetty Machrina, M.Kes, AIFO-K (Universitas Sumatera Utara, Medan) Dr. Saidah Rauf, S.Kep., M.Sc (Politeknik Kesehatan Kemenkes Maluku, Masohi) Dr. Jusak Syaranamual, M.Pd., AIFO (Universitas Pattimura, Ambon) Dr. Theopilus W. Watuguly, M.Kes., AIFO (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. Maria Nindatu, M.Kes (Universitas Pattimura, Ambon) Dr. Martha Kaihena, M.Kes (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. La Eddy, S.Pd., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. Drs. Amos Killay, M.Kes (Universitas Pattimura, Ambon)
Dr. Ch. D. Umi Baszary, S.Si., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon) Dr. Meilissa C. Mainassy, S.Si., M.Si (Universitas Pattimura, Ambon)

## Asistant Editorial
Dr. Adrien Jems Akiles Unitly, S.Si., M.Si E. T. Apituley, S.Si., M.Si

## Publisher
Jurusan Biologi FMIPA Universitas Pattimura, bekerja sama dengan Ikatan Ahli Ilmu Faal Indonesia (IAIFI)

## Editorial Address
Jurusan Biologi - Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Pattimura
Jl. Ir. M. Putuhena, Kampus Poka, Ambon, 97234, Maluku, Indonesia E- mail : biofaaljournal@gmail.com