Aktifitas Antibakteri Isolat Bakteri Asam Laktat Saluran Pencernaan Kuda Laut ( Hippocampus kuda Bleeker, 1852) Terhadap Vibrio harveyi

## Fionica May Sandi dan Subagiyo*
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. H. Soedharto, Tembalang, Semarang, 50275 Email : subagiyo.kelautan13@gmail.com

## Abstract

## Antibacterial Activity of Lactic Acid Bacteria isolated from digestive tract of seahorse (Hippocampus Kuda Bleeker, 1852) Againts Vibrio harveyi
Seahorses (Hippocampus kuda) have high economic value in global trade. Therefore, to meet market demand, cultivation efforts have been carried out. Vibriosis caused by Vibrio harveyi is a disease that is often reported to affect seahorses. In this study, lactic acid bacteria were isolated from the digestive tract of seahorses, and were selected based on their antibacterial activity  against  V,  harveyi.  Antibacterial  activity  test  was  carried  out  by  agar  diffusion  method.  Isolates  with  antibacterial activity were identified based on their morphological and biochemical characteristics. The results of this study obtained 3 (three) LAB isolates that were active against V. harveyi from a total of 45 isolates, namely SPKL 34, SPKL 08 and SPKL 58. The SPKL 34 isolate had the highest antibacterial activity. The three isolates were identified as lactobacillus sp
Keywords: Lactic acid bacteria (BAL), Seahorse (Hippocampus kuda), Vibrio harveyi

## Abstrak
Kuda laut ( Hippocampus kuda ) memiliki nilai ekonomi tinggi sebagai salah satu jenis komoditas perdagangan global. Oleh karena itu untuk memenuhi permintaan pasar diantaranya telah dilakukan upaya budidaya. Vibriosis yang disebabkan oleh Vibrio harveyi merupakan penyakit yang sering dilaporkan menyerang Kuda Laut . Pada penelitian telah dilakukan pencarian jenis-jenis  bakteri  asam  laktat  (BAL)  yang  berasal  dari  saluran  pencernaan  Kuda  Laut  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap V. harveyi. Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi agar. Isolat yang memiliki aktivitas antibakteri diidentifikasi berdasarkan karakteristik morfologi dan biokimia. Hasil penelitian ini memperoleh 3 (tiga) isolat BAL yang aktif terhadap V. harveyi dari total 45 isolat yaitu SPKL 34, SPKL 08 dan SPKL 58. Isolat SPKL 34 memiliki aktivitas yang paling tinggi yaitu  dengan  rerata  luas  zona  hambat  sebesar  4,14±0,60  mm.  Hasil  identifikasi  menunjukkan  ketiga  isolat  merupakan Lactobacillus sp. dengan tingkat kemiripan >80%.
Kata Kunci : Bakteri asam laktat, Kuda Laut ( Hippocampus kuda ), Vibrio harveyi.

## PENDAHULUAN
Kuda laut ( Hippocampus kuda ) merupakan salah satu biota laut yang memiliki nilai komersial tinggi dan banyak diperdagangkan terutama sebagai bahan baku obat tradisional dan ikan hias. Harga seekor kuda laut sebagai ikan hias berkisar Rp30.000,00 - Rp50.000,00 sedangkan harga kuda laut pada pasar online berkisar Rp7.000.000,00/kg berat kering (Setyowati et al ., 2018). Database perdagangan CITES selama periode 10 tahun (2008 – 2018) melaporkan jumlah total global kuda laut kering yang diekspor diperkirakan sebanyak 11.259.098 individu dan jumlah total global kuda laut kering impor diperkirakan mencapai 15.772.838 ekor (Louw dan Bűrgener,2020). Indo nesia termasuk 6 negara utama pengeksor kuda laut kering ke Hongkong. Data biro statistik Hong Kong yang disitasi oleh  Louw  dan Bűrgener  (2020) menunjukkan,  selama  tahun  2008-2018,  Indonesia  menempati volume 2% dari total kuda laut kering yang diimpor oleh Hongkong. Pemenuhan kebutuhan pasar ini  membawa  kepada  eksploitasi  kuda  laut  yang  berlebihan,  bersamaan  dengan  praktik penangkapan ikan yang merusak telah menyebabkan penurunan populasi kuda laut global (Xie et al., 2020 ; Pierri et al., 2022). Oleh karena itu salah satu upaya yang dilakukan untuk menjaga populasi dan kelestarian kuda laut adalah dengan melakukan budidaya (Roza, 2018). Masalah yang muncul dalam budidaya kuda laut adalah serangan penyakit, terutama disebabkan oleh V. harveyi (Binh et al., 2016; Qin et al., 2017; Xie et al., 2020).
Populasi  bakteri Vibrio sp.  yang  tinggi  dapat  menjadi  ancaman  bagi  kesehatan  dan kelangsungan hidup kuda laut. Raj et al. , (2010) menyatakan bahwa kepadatan 10 4 CFU/mL bakteri V. harveyi sudah dapat menyebabkan kematian kuda laut. Penelitian yang dilakukan oleh Qin et al. , (2016), menemukan adanya bakteri V. harveyi di setiap kuda laut yang sakit dan merupakan bakteri dominan penyebab penyakit pada kuda laut. Penggunaan bakteri probiotik sebagai agen biokontrol  patogen  pada  budidaya  kuda  laut  menawarkan  alternatif  untuk  menanggulangi masalah penyakit infeksi bakterial tersebut (Allameh et al ., 2014).
Probiotik  merupakan  mikroorganisme  yang  memiliki  kemampuan  untuk  memodifikasi komposisi bakteri, mampu menghasilkan senyawa antibakteri yang dapat mengendalikan bakteri patogen  dan  juga  mampu  menghasilkan  enzim  ekstraselluler  yang  dapat  membantu  proses pencernaan  makanan  serta  pembersihan  lingkungan  (Lara,  2011).  Saat  ini  probiotik  dipercaya sebagai  salah  satu  solusi  yang  efektif  dalam  mengendalikan  vibriosis  pada  budidaya  perikanan (Yilmaz et  al., 2022).  Probiotik  juga  telah  telah  terbukti  meningkatkan  stabilitas  gastrointestinal, menghasilkan  senyawa  antibakteri,  bersaing  dengan  patogen  untuk  mencegah  adhesi  di  usus, bersaing untuk nutrisi yang dibutuhkan untuk kelangsungan hidup patogen dan menghasilkan efek antitoksin, memodulasi sistem kekebalan tubuh dan mengontrol respons alergi tubuh (El-Saadony et al., 2022).  Bakteri  asam  laktat  (BAL)  merupakan  kelompok  bakteri  yang  selama  ini  banyak dikembangkan  sebagai  probiotik  (Ringø et  al., 2018;  Parlindungan et  al., 2021),  termasuk diantaranya adalah untuk mengendalikan penyakit vibriosis (Thompson, et al, 2022). Oleh karena itu kajian  mengenai  jenis  bakteri  asam  laktat  dalam  saluran  pencernaan  kuda  laut  untuk dikembangkan menjadi probiotik sangat menarik untuk dilakukan.

## MATERI DAN METODE
Pada penelitian ini BAL diisolasi pada intestinum kuda laut ( Hippocampus kuda ). Bakteri Vibrio yang digunakan sebagai bakteri uji adalah V. harveyi . Vibrio ini diperoleh dari laboratorium Terpadu UNDIP,  Semarang,  Jawa  Tengah.  Vibrio  ditumbuhkan  pada  medium  nutrient  agar.  Media  yang digunakan untuk isolasi  BAL adalah medium MRS ( de Man Rogosa Sharpe ) agar. Media untuk uji aktivitas antibakteri vibrio adalah medium Nutrient Agar.
Kuda  laut  yang  telah  dipuasakan  selama  48  jam,  untuk  membersihan  saluran  pencernaan (Mancuso, et al., 2015), dianastesi dengan suhu rendah (Blessing, et al., 2010). Proses isolasi mengikuti Dias, et  al.,  ( 2019).  Permukaan  tubuh  disterilkan  menggunakan  alkohol  70%  selanjutya  dilakukan pengambilan intestinum secara aseptik menggunakan peralatan seksio steril, intestinum dimasukan kedalam  cawan  petri  steril  dan  dicuci  secara  aseptik  menggunakan  air  laut  steril,  selanjutnya ditiriskan  dan  ditimbang.  Intestinum  dihancurkan  di  dalam  lumpang  porselin  hingga  halus. Homogenat  diambil  dan  disuspensikan  ke  dalam  9  ml  air  laut  steril.  Satu  ml  suspensi  homogenat intestinum diinokulasukan ke dalam 9 ml medium MRS cair. Kultur ini kemudian diinkubasi pada suhu kamar selama 48 jam.
Isolasi  BAL  dilakukan  dengan  metode pour  plate. Satu  ml  kultur  bakteri  intestinal  dalam medium  MRS  cair  diinokulasikan  ke  dalam  9  ml  air  laut  (70%)  steril  untuk  mendapatkan  faktor pengenceran  10 -1 .  Seri  pengenceran  10 -2 dibuat  dengan  menginokulasikan  1  ml  suspensi  bakteri pada  pengenceran  10 -1 ke  9  ml  air  laut  steril,  demikian  seterusnya  hingga  diperoleh  seri pengenceran 10 -3 . Suspensi bakteri pada pengenceran 10 -3 diambil sebanyak 100 µl di pipetkan ke dalam cawan petri steril, kemudian media MRS agar yang mengandung CaCO 3 1% dalam kondisi cair dituangkan ke dalam cawan petri dan diratakan. Inkubasi dilakukan secara aerob pada suhu kamar selama 72 jam. Kemudian koloni-koloni bakteri yang tumbuh menghasilkan asam (ditunjukkan dengan terbentuknya zona bening di sekitar koloni) diambil menggunakan ose dan digoreskan ke medium  MRS  agar  miring  dan  diinkubasi  selama  48  jam  pada  suhu  kamar.  Isolat  selanjutnya dimurnikan dengan metode goresan.
Uji kemampuan BAL menghasilkan senyawa antibakteri terhadap V. harveyi dilakukan dengan metode difusi agar ( disk diffusion Kirby and Bauer ) (Payangan et al ., 2018. Isolat ditumbuhkan dalam
medium MRS cair selama 24 jam pada suhu ruang. 50 µl kultur isolat dipipetkan ke atas kertas cakram steril (diameter 8 mm) yang kemudian diletakan di atas medium nutrien agar dalam cawan petri yang telah diinokulasi dengan bakteri uji V. harveyi . Kertas cakram yang membentuk zona bening di sekelilingnya menunjukkan adanya aktivitas penghambatan pertumbuhan vibrio. Diameter zona bening  yang  terbentuk  diukur  dan  digunakan  untuk  menentukan  besarnya  aktivitas penghambatan. Pengujian aktivitas antibakteri ini juga dilakukan pada supernatant yang telah di netralkan  nilai  pHnya  dengan  NaOH  1  N.  Isolat  yang  sudah  dipastikan  memiliki  kemampuan menghambat  pertumbuhan V.  harveyi ,  dilakukan  karakterisasi  dan  identifikasi  berdasarkan  sifat biokimiawinya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  isolasi  dan  pemurniaan  bakteri  penghasil  asam  pada  medium  MRS  agar,  diperoleh sebanyak 45 isolat (Gambar 1). Hasil seleksi berdasarkan aktivitas antibakteri terhadap V. harveyi didapatkan  sebanyak  3  isolat  yang  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri V.  harveyi yaitu SPKL 34, SPKL 58, dan SPKL 08. Hasil pengukuran diameter zona hambat yang terbentuk oleh ketiga isolat BAL itu berturut-turut sebesar 4,02±0,80 mm, 3,76±0,65 mm dan 4,14±0,60 mm (Tabel 1). Hasil pengujian aktivitas antibakteri supernatan kultur yang telah dinetralkan pHnya menunjukkan ke tiga isolat mampu menghambat pertumbuhan V. harveyi dengan menghasilkan zona hambat berturut- turut sebesar 3,55±0,39 mm, 3,02±0,31 mm dan 3,85±0,40 mm (Tabel 1).
Bakteri asam laktat dapat menghasilkan asam organik seperti asam propionat, asam format, asam asetat dan asam laktat. Asam organik ini akan menghasilkan kondisi lingkungan yang tidak menguntungkan  bagi  pertumbuhan  mikrobia  pembusuk  dan  mikrobia  patogen  (Bangar et  al., 2022).    Produksi  asam  dan  penurunan  pH  merupakan  mekanisme  penghambatan  BAL terhadap  bakteri  gram  negative  (Kralik et  al., 2018).  Hasil  penelitian  Minen  dan  Boopathy  (2011) menunjukkan bahwa asam format memiliki efek penghambatan terkuat terhadap V. harveyi diikuti oleh asam asetat, asam propionat, dan asam butirat. Asam laktat dalam bentuk tidak terdisosiasi dapat  menembus  membran  sitoplasma,  menghasilkan  penurunan  pH  intraseluler,  dan menyebabkan gangguan gradien proton (Lund et al., 2020).
(a) (b) (c)
Gambar 1 .  (a) Koloni bakteri penghasil asam, membentuk zona bening pada medium MRSA yang diperkaya  dengan  CaCO 3 ,  (b)  aktivitas  antibakteri  kultur  isolate  SPKL-34,  SPKL-58  dan SPKL-08 tanpa netralisasi pH, (c) aktivitas antibakteri kultur isolate SPKL-34, SPKL-58 dan SPKL-08 yang telah dinetralisasi pH nya dengan NaOH 1N
Tabel 1. Aktivitas antibakteri isolat bakteri penghasil asam terhadap V. harveyi yang ditunjukkan
Kode Isolat Perlakuan Tanpa netralisasi pH Netralisasi pH SPKL-34 4,02±0,80 3,55±0,39 SPKL-58 3,76±0,65 3,02±0,31 SPKL-08 4,14±0,60 3,85±0,40
Nilai adalah rerata + sd dari n=3
Aktivitas antibakteri dalam penelitian ini juga ditunjukkan oleh supernatant kultur isolate bakteri SPKL 34, SPKL 58, dan SPKL 08 yang telah dinetralkan pHnya (Tabel 1). Aktivitas penghambatan ini menggambarkan bahwa ada senyawa antibakteri lain yang mampu menghambat pertumbuhan V. harveyi juga dihasilkan oleh ke-tiga isolat bakteri itu. Menurut Farzanfar (2006) dalam review-nya menjelaskan  bahwa  bakteri  asam  laktat  selain  menghasilkan  asam  organik  yang  mampu menghambat pertumbuhan mikrobia, juga menghasilkan senyawa antibakteri lain seperti hidrogen peroksida dan bakteriosin. Dalam kondisi aerobik, BAL mensintesis hidrogen peroksida (H 2 O 2 ) tanpa adanya katalase intraseluler, pseudokatalase, atau peroksidase (Ibrahim et al., 2021). H 2 O 2 dapat menghambat pertumbuhan bakteri yang tidak menghasilkan katalase (Vieco-Saiz et al., 2019). Hasil peneltian  Ito et  al., (2003)  menunjukkan  akumulasi  H 2 O 2 dalam  suspensi  sel  efektif  menurunkan jumlah bakteri patogen. Bakteriosin adalah zat antimikroba yang berupa polipeptida, atau senyawa mirip  protein.  Umumnya  bakteriosin  dapat  menyebabkan  kebocoran  sel  yang  dapat mengakibatkan kematian sel bakteri (Fauziah et al ., 2014). Akan tetapi karena dalam penelitian ini tidak  dilakukan  pengujian  untuk  deteksi  produksi  peroksida  atau  bakteriosin  maka  belum  dapat dipastikan senyawa non asam dengan aktivitas antibakteri yang dihasilkan ke-tiga isolat BAL apakah peroksida atau bakteriosin atau senyawa lain. Hasil pengukuran diameter zona hambat terhadap kultur  bakteri  tanpa  dinetralkan  pHnya  dan  yang  dinetralkan  pHnya  menunjukkan  hasil  diameter zona hambat kultur yang tidak dinetralkan pHnya cenderung lebih besar. Asam laktat, selain sifat antimikrobanya karena penurunan pH, juga berfungsi sebagai permeabilizer membran luar bakteri gram negatif dan dapat bertindak sebagai potensiator efek zat antimikroba lainnya (Alakomi et al., 2000).
Identifikasi  ke-tiga  isolat  bakteri  penghasil  asam  dilakukan  berdasarkan  hasil  karakteristik morfologi dan biokimia (Table 2). Tiga isolat tersebut bersifat Gram positif dan memberikan reaksi negatif  pada  uji  katalase.  Berdasarkan  hasil  uji  motilitas,  ke-tiga  isolat  bersifat  nonmotil.  Menurut Ismail et  al., (2017)  hasil  negatif  motil  jika  tidak  terdapat  pertumbuhan  yang  berentuk  rambut- rambutan  disekitar  bekas  tusukan  jarum  ose  pada  medium.  Uji  TSIA  ( Triple  Sugar  Iron Agar)  yang terdiri  atas  laktosa,  glukosa  dan  sukrosa.  Uji  TSIA  dilakukan  untuk  mendeteksi  bakteri  yang  dapat memfermentasikan  laktosa,  glukosa  dan  sukrosa.  Hasil  uji  TSI  menunjukkan  ke-tiga  isolat  mampu memfermentasi  gula  dengan  menghasilkan  asam,  tetapi  tidak  menghasilkan  gas  dan  H 2 S  Uji  LIA ( Lysine Iron Agar) menunjukkan hasil positif pada isolat dengan kode SPKL 34 dan SPKL 08, hal ini menunjukkan isolat bakteri memiliki kemampuan dalam memecah lisin yang terdapat pada media uji. Uji VP (Voges Proskauer) dilakukan untuk mengetahui pembentukan asetil metil karbinol (aseton) dari hasil fermentasi gula. Hasil uji VP yang didapatkan adalah  negative, dengan tidak terjadinya perubahan  warna.  Pada  uji  gula-gula,  hanya  media  glukosa  dan  maltosa  yang  mengalami pembentukan asam yang ditandai dengan perubahan warna media dari biru menjadi kuning yang artinya  bakteri  asam  laktat  membentuk  asam  dari  fermentasi  glukosa.  Sedangkan  kemampuan memfermentasi sukrosa menunjukkan positif untuk isolat SPKL 34 dan SPKL 58, tetapi negatif untuk SPKL 08.
Berdasarkan  hasil  pengujian  sifat  Gram  dan  aktivitas  biokimia  yang  disajikan  pada  tabel  2 . yang dicocokan dengan Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology menunjukan bahwa ketiga

## Tabel 2. Karakteristik biokimia isolat bakteri asam laktat dari saluran pencernaan Kuda laut
Karakteristik SPKL 34 SPKL 58 SPKL 08 Karakteristik Lactobacillus sp. berdasarkan buku acuan Gram (KOH 3%) Positif Positif Positif Positif Katalase Negatif Negatif Negatif Negatif Oksidase Positif Positif Positif Positif TSIA ( Triple Sugar Iron Agar )
A/A, Gas -, H2S -  A/A, Gas -, H2S -  A/A, Gas -, H2S - A/A,Gas-,H 2 S- LIA ( Lysine Iron Agar ) Positif Negatif Positif Positif O/F (Uji Oksidatif/Fermentatif) Fermentatif Fermentatif Fermentatif Fermentatif Indol Negatif Negatif Negatif Negatif Citrat Negatif Negatif Negatif Negatif Urea Negatif Negatif Negatif Negatif MR (Metil Red) Negatif Negatif Negatif Negatif VP (Voges Proskauer) Negatif Negatif Negatif Positif Motility Negatif Negatif Negatif Negatif Glukosa Negatif Negatif Negatif Positif Sukrosa Positif Positif Negatif Positif Maltosa Positif Positif Positif Positif Laktosa Positif Positif Positif Positif Prosentase kesamaan dengan acuan 87,5% 81,25% 81,25% Kesimpulan Lactobacillus sp. Lactobacillus sp. Lactobacillus sp.
isolat yaitu SPKL 08, SPKL 34 dan SPKL 58 merupakan kelompok bakteri asam laktat yang teridentifikasi dalam  genus Lactobacillus . Lactobacillus SPKL  08,  SPKL  34  dan  SPKL  58  potensial  untuk dikembangkan  sebagai  probiotik  dalam  upaya  pengendalian  vibriosis  pada  kuda  laut  yang disebabkan oleh seragan V. harveyi. Quinto et al., (2014) dalam review-nya menyebutkan bahwa beberapa spesies Lactobacillus telah dilaporkan mempunyau efek probiotik yaitu L. acidophilus, L. casei, L. johnsonii, L. fermentum, L. rhamnosus, L. plantarum, L. reuteri, L. salivarius, L. paracasei, dan L. elbrueckii subsp. bulgaricus. Lactobacillus juga dapat hidup dalam saluran pencernaan kuda laut. Hasil  penelitian  Lin et  al., (2019)  menunjukkan  bahwa  kuda  laut  yang  sakit  enteritis  mengalami defisiensi populasi Lactobacillus spp dibandingkan yang sehat. Selain itu dalam percobaanya lebih lanjut didapatkan bukti bahwa Lactobacillus spp mampu mencegah penyakit enteritis pada kuda laut.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  bakteri  asam  laktat  merupakan kelompok mikrobia penyusun mikrobiom saluran pencernaan kuda laut. Pada penelitian ini berhasil diisolasi  sebanyak  45  isolat  bakteri  penghasil  asam,  3  isolat  diantaranya  mampu  menghasilkan senyawa  antibakteri  terhadap V.  harveyi .  Hasil  identifikasi  secara  morfologi  dan  biokimiawi menunjukkan ke-3 isolat adalah Lactobacillus sp SPKL 08, Lactobacillus sp SPKL 34, dan Lactobacillus
sp. SPKL 58. Lactobacillus sp ini mampu menghambat bakteri V. harveyi melalui mekanisme produksi asam  organik  dan  senyawa  antibakteri  lain.  Mekanisme  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  zona penghambatan  terhadap V.  harveyi baik  oleh  supernatant  kultur  isolat  BAL  (memiliki  pH  rendah) maupun supernatant isolat BAL yang telah dinetralkan pH nya (pH 7).

## DAFTAR PUSTAKA
Alakomi, H. L., Skyttä, E., Saarela, M., Mattila-Sandholm, T., Latva-Kala, K. & Helander, I.M. (2000). Lactic acid  permeabilizes  gram-negative  bacteria  by  disrupting  the  outer  membrane. Applied  and environmental microbiology , 66(5), 2001 – 2005. doi: 10.1128/AEM.66.5.2001-2005.2000 Allameh, S.K., Ringo, E., Yusof, F.M., Daut, H.M. & Ideris, A. (2014). Properties of Enterococcus faecalis , A New Probiotic Bacterium Isolated From The Instine of Snakehead Fish ( Channa striata Bloch). African Journal of Microbiology Research , 8(22), 215-2222. doi: 10.5897/AJMR 2013.5830 Balcázar, J., Loureiro, S., Da Silva, Y.  Pintado, J. & Planas, M. (2010). Identification and characterization of bacteria with antibacterial activities isolated from seahorses ( Hippocampus guttulatus ). Journal Antibiotic, 63, 271 – 274. doi: 10.1038/ja.2010.27 Bangar, S.P., Suri, S., Trif, M. & Ozogul, F. (2022). Organic acids production from lactic acid bacteria:
A preservation approach. Food Bioscience, 46, 101615. doi: 10.1016/j.fbio.2022. 101615. Binh, D.T., Quyen, V.D.H., Sang, T.Q., & Oanh, T.T. (2016). Vibriosis in Cultured Seahorse ( Hippocampus spp.)  in  Khanh  Hoa  Province,  Vietnam, International  Journal  of  Innovative  Studies  in  Aquatic Biology and Fisheries , 2(2), 43-50
Blessing, J.J., Marshall, J.C. & Balcombe, S.R. (2010). Humane killing of fishes for scientific research: a comparison of two methods. Journal of Fish Biology , 76(10), 2571-2577, doi: 10.1111/j.1095-8649. 2010.02633.x
Dias, J.A.R., Abe, H.A., Sousa, N.C., Silva, R.D.F., Cordeiro, C.A.M., Gomes, G.F.E., Ready, J.S., Mouriño, J.L.P., Martins, M.L., Carneiro, P.C.F., Maria, A.N. & Fujimoto, R.Y. (2019). Enterococcus faecium as  potential  probiotic  for  ornamental  neotropical  cichlid  fish, Pterophyllum  scalare (Schultze, 1823). Aquaculture International , 27(2), 463-474. doi: 10.1007/s10499-019-00339-9
El-Saadony, M.T., Swelum, A.A., Abo Ghanima, M.M., Shukry, M., Omar,A.A., Taha, A.E., Salem, H.M., El-Tahan, A.M., El-Tarabily, K.A. & Abd El-Hack, M.E. (2022). Shrimp production, the most important diseases  that  threaten  it,  and  the  role  of  probiotics  in  confronting  these  diseases:  A  review, Research in Veterinary Science , 144, 126-140. doi: 10.1016/j.rvsc.2022.01.009.
Farzanfar,  A.  (2006).  The  use  of  probiotics  in  shrimp  aquaculture, FEMS  Immunology  &  Medical Microbiology, 48 (2), 149 – 158, doi: 10.1111/j.1574-695X.2006.00116.x
Fauziah, P.N., Nurhajati, J. & Chrysanti. (2014). Daya Antibakteri Filtrar Asam Laktat dan Bakteriosin Lactobacillus  bulgaricus KS1  dalam  Menghambat  Pertumbuhan Klebsiella  Pneumniae Strain ATCC 70603, CY1538 dan S941. Majalah Kedokteran Bandung , 47(1), 35-41.
Holt,  J.G.,  Krieg,  N.R.,  Sneath,  P.H.A.J.,  Staley,  J.T.  &  Williams,  S.T.  (1994).  Bergeys  manual  of Determinative Bakteriology. Nine edition. Lippicolt Williams and Wilkins, New York.
Ibrahim,  S.A.,  Ayivi,  R.D.,  Zimmerman,  T.,  Siddiqui,  S.A.,  Altemimi,  A.B.,  Fidan,  H.,  Esatbeyoglu,  T.  &
Bakhshayesh,  R.V.  (2021).  Lactic  Acid  Bacteria  as  Antimicrobial  Agents:  Food  Safety  and Microbial Food Spoilage Prevention. Foods , 10(12), p.3131. doi: 10.3390/ foods10123131
Ismail, Y.S., Yulvizar, C. & Putriani. (2017). Isolasi, Karateristik dan Uji Aktivitas Antimikroba Bakteri Asam Laktat dari Fermentasi Biji Kakao ( Theobroma Cacao L .). Bioleuser, 1(2), 45-53.
Ito, A., Sato, Y., Kudo, S. Sato, S., Nakajima, H. & Toba, T. (2003). The Screening of Hydrogen Peroxide- Producing Lactic Acid Bacteria and Their Application to Inactivating Psychrotrophic Food-Borne Pathogens. Current Microbiology , 47, 0231 – 0236. doi: 10.1007/s00284-002-3993-1 Koning,  S.  &  Hoeksema,  B.W.  (2021). Diversity  of  Seahorse  Species  ( Hippocampus spp.)  in  the International Aquarium Trade. Diversity , 13(5), p.187. doi: 10.3390/d13050187 Kralik, P., Babak, V. & Dziedzinska, R. (2018). The Impact of the Antimicrobial Compounds Produced by  Lactic  Acid  Bacteria  on  the  Growth  Performance  of Mycobacterium  avium subsp. paratuberculosis . Frontiers in Microbiology, 9, p.638. doi: 10.3389/fmicb.2018.00638
Lara, F.M. (2011). The Use of Pobiotic in Aquaculture: an Overview. International Research Journal of Microbiology, 2(2), 471-478. Lin, T., Liu, X., Xiao, D., Zhang, D., Cai, Y. & Zhu, X. (2019). Lactobacillus spp. as probiotics for prevention and treatment of enteritis in the lined seahorse ( Hippocampus erectus ) juveniles. Aquaculture , 503, 16-25, doi: 10.1016/j.aquaculture.2018.12.083. Louw, S. & Bűrgener, M. (2020). Seahorse Trade Dynamics from Africa to Asia, TRAFFIC International, Cambridge, United Kingdom.
Lund, P.A, De Biase, D., Liran, O., Scheler, O., Mira, N.P., Cetecioglu, Z., Noriega Fernández, E., Bover- Cid S, Hall, R., Sauer, M. & O’Byrne, C. (2020). Understanding How Microorganisms Respond to Acid  pH  Is  Central  to  Their  Control  and  Successful  Exploitation. Frontiers  in  Microbiology, 11, p.556140. doi: 10.3389/fmicb.2020.556140
Mancuso, M., Rappazzo, A.C., Genovese, M., El Hady, M., Ghonimy, A., Ismail, M., Reda, R., Cappello, S., Genovese, L. & Maricchiolo G. (2015). In Vitro Selection of Bacteria and Isolation of Probionts from Farmed Sparus aurata with Potential for Use as Probiotics. International Journal of Animal Biology, 1(4), 93-98
Mine, S. & Boopathy, R. (2011). Effect of organic acids on shrimp pathogen, Vibrio harveyi . Current Microbiology , 63(1), 1-7. doi: 10.1007/s00284-011-9932-2.
Parlindungan, E., Lugli, G.A., Ventura, M., van Sinderen, D. & Mahony, J. (2021). Lactic Acid Bacteria Diversity and Characterization of Probiotic Candidates in Fermented Meats. Foods , 10, 1519. doi: 10.3390/foods10071519
Payangan,  G.E.,  Fatimawali  &  Rotinsulu,  H.  (2018).  Uji  Aktivitas  Antimikroba  Jamur  Laut  Yang Berasosiasi Dengan Spons Phyllospongia lamellose . Pharmacon: Jurnal Farmasi Indonesia , 7(3), 266 ‒ 275.
Pierri,  C.,  Lazic,  T.,  Gristina,  M.,  Corriero,  G.  &  Sinopoli,  M.  (2022).  Large-Scale  Distribution  of  the European Seahorses ( Hippocampus Rafinesque, 1810): A Systematic Review. Biology, 11, p.325. doi: 10.3390/ biology11020325
Qin,  G.,  Wang,  X.,  Tan,  S.  &  Lin,  Q.  (2017).  A  bacterial  infection  by Vibrio  harveyi causing  heavy reduction of cultured lined seahorse Hippocampus erectus , Journal of fish diseases , 40, 601-605, doi: 10.1111/jfd.12533
Qin, G., Wang., X., Tan, S. & Lin, Q. (2016). A Bacterial Infection by Vibrio harveyi Causing Heavy Reduction of Cultured Lined Seahorse Hippocampus erectus . Journal  of  Fish  Diseases, 40(4), 601-605. doi: 10.1111/jfd.12533.
Quinto,  E.J.,  Jiménez,  P.,  Caro,  I.,  Tejero,  J.,  Mateo,  J.  &  Girbés,  T.  (2014).  Probiotic  Lactic  Acid Bacteria: A Review. Food and Nutrition Sciences, 5, 1765-1775. doi: 10.4236/fns.2014.518190 Raj, S.T., Lipton A.T. & Chanchan, G.S. (2010). Characterization and Infectivity Evaluation of Vibrio harveyi causing White Patch Disease among Captive Reared Seahourse ( Hippocampus kuda ). Journal Marine Sciene Indian , 39(1), 151-156.
Ringø, E., Hoseinifar, S.H., Ghosh, K., Doan, H.V., Beck, B.R. & Song, S.K. (2018). Lactic Acid Bacteria in Finfish — An Update. Frontiers in Microbiology, 9, 1818. doi: 10.3389/fmicb.2018.01818 Roza, D. (2018). Diagnosa dan Pengendalian Penyakit Infeksi pada Induk Kuda Laut ( Hippocampus kuda ) di Hatchery . Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis, 10(2), 353-364.
Setyowati,  D.N.,  Diniarti,  N.  &  Cokrowati  N.  (2018).  Teknologi  Budidaya  Kuda  Laut  Skala  Rumah Tangga . Jurnal Abdi Insani Unram . 5(1), 46-50.
Thompson, J., Weaver, M.A., Lupatsch, I., Shields R.J., Plummer, S., Coates, C.J. & Rowley, A.F. (2022). Antagonistic Activity of Lactic Acid Bacteria Against Pathogenic Vibrios and Their Potential Use as Probiotics in Shrimp ( Penaeus vannamei ) Culture. Frontier Marine Science , 9, p.807989. doi: 10.3389/fmars.2022.807989
Vieco-Saiz,  N.,  Belguesmia,  Y.,  Raspoet,  R.,  Auclair,  E.,  Gancel,  F.,  Kempf,  I.,  &  Djamel,  D.  (2019). Benefits and Inputs From Lactic Acid Bacteria and Their Bacteriocins as Alternatives to Antibiotic Growth  Promoters  During  Food-Animal  Production, Frontiers  in  Microbiology ,  10,  p.57  doi: 10.3389/fmicb.2019.00057
Xie, J., Bu, L., Jin, S., Wang, X., Zhao, Q., Zhou, S. & Xu, Y. (2020). Outbreak of vibriosis caused by Vibrio harveyi and Vibrio alginolyticus in farmed seahorse Hippocampus kuda in China, Aquaculture, 523, p.735168. doi: 10.1016/j.aquaculture.2020.735168.
Yilmaz, S., Yilmaz, E., Dawood, M.A., Ringø, E., Ahmadifar, E. & Abdel-Latif, H.M. (2022). Probiotics, prebiotics, and synbiotics used to control vibriosis in fish: A review. Aquaculture , 547, p.727514. doi: 10.1016/j.aquaculture.2021.737514