## AKTIVITAS ANTIMIKROBA EKSTRAK DAN FRAKSI TUNIKATA
( Polycarpa aurata ) YANG DIKOLEKSI DI SELAT LEMBEH, BITUNG TERHADAP Escherichia coli, Staphylococcus aureus DAN Candida albicans
Cinlye Juen Manoppo 1) , Adithya Yudistira 1) , Defny Silvia Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi, FMIPA UNSRAT, MANADO

## ABSTRACT
Tunicate  is  an  invertebrate  that  lives  in  a  coral  reef  ecosystem  and  produces  many compounds such as, antibacterial, antitumor and anticancer. This study aimed to determine the antimicrobial activity of extracts and fraction of tunicate (Polycarpa aurata) collected in the  Lembeh  Strait,  Bitung  against  Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus  and  Candida albicans.  Tunicate  (Polycarpa  aurata)  was  extracted  by  maceration  method  using  96% ethanol solvent,  fractination using liquid-liquid  partition method  with n-hexane,  chloroform and methanol solvent, and antimicrobial testing using Kirby Bauer’s disk diffusion method. The  results  showed  that  ethanol  extract  of  tunicate  (Polycarpa  aurata)  had  antimicrobial activity  againts  Escherichia  coli  with  an  inhibition  of  15.12  mm,  and  againts  Candida albicans with an inhibition of 15 mm. While the methanol fraction showed antimicrobial with a strong category and inhibition of 16.17 mm againts Staphylococcus aureus.
Keyword: Tunicate (Polycarpa aurata), Extraction, Fractination, Antimicrobials

## ABSTRAK
Tunikata  merupakan  invertebrata  di  ekosistem  terumbu  karang  yang  banyak menghasilkan senyawa seperti, antibakteri, antitumor dan antikanker.  Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui aktivitas antimikroba ekstrak dan fraksi tunikata (Polycarpa aurata) yang dikoleksi  di  Selat  lembeh,  Bitung  terhadap Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans. Tunikata (Polycarpa aurata) diekstraksi  menggunakan metode  maserasi dengan pelarut etanol 96% , fraksinasi menggunakan metode partisi dengan pelarut n-heksan, kloroform  dan  metanol,  dan  pengujian  antimikroba  menggunakan  metode  difusi  agar Kirby Bauer .  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  tunikata (Polycarpa  aurata) memiliki  aktivitas  antimikroba  kategori  kuat  pada  fraksi  metanol  dengan  daya  hambat sebesar  16,  17  mm  terhadap Escherichia  coli ,  pada  ekstrak  etanol  dengan  daya  hambat sebesar  15,  12  mm  terhadap Staphylococcus  aureus sedangkan  pada Candida  albicans aktivitas yang sangat baik terjadi pada ektraksi etanol sebesar 15 mm.
Kata Kunci : Tunikata (Polycarpa aurata), Ekstraksi dan Fraksinasi, Antimikroba

## PENDAHULUAN
Hasil penelitian menunjukkan bahwa  organisme  laut  memiliki  potensi yang  sangat  besar,  dalam  menghasilkan senyawa-senyawa aktif yang dapat digunakan  sebagai  bahan  baku  obat- obatan.  Beberapa  organisme  laut  yang diketahui  dapat  menghasilkan  senyawa aktif  antara  lain  ialah  spons,  moluska, bryozoa, tunikata dan lain-lain (Radjasa et al., 2011;  Mans,  2016).  Invertebrata  laut menyediakan  nutrient  yang  baik  bagi berbagai mikroba (Erwin et al,. 2014).
Tunikata merupakan invertebrata di ekosistem  terumbu  karang  yang  banyak menghasilkan senyawa seperti, antibakteri, antitumor  dan  antikanker.  Sekitar  1.000 bahan  aktif  telah  diisolasi  dari  tunikata (Schmidt  and  Donia  2010).  Salah  satu komponen  terumbu karang yang hidupnya sesil  di  terumbu,  substrat  dan  batu  adalah tunikata  ( Polycarpa  aurata) (Lambert, 2010).
Penelitian  yang  telah  dilakukan oleh  Pham et  al,. (2013)  menunjukkan bahwa  hasil  ekstraksi  tunikata  ( Polycarpa aurata) mengandung  senyawa  kimia berupa peptida dan golongan alkaloid yang bersifat sitotoksik dan memiliki kemampuan  sebagai  antibakteri  terhadap beberapa  bakteri  patogen.  Penelitian  yang dilakukan    oleh  Christine  (2015)  dan Litaay dkk., (2015)  menunjukkan  bahwa isolat  bakteri  yang  berasal  dari  tunikata ( Polycarpa aurata)
berpotensi menghasilkan  senyawa  antibakteri  berifat bakteriosidal
maupun bersifat bakteriostatis.

## METODOLOGI PENELITIAN
Jenis  penelitian  ini  merupakan penelitian  eksperimental  laboratorik.  Alat- alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu scuba  diving (Peralatan  Selam),
ziplok,  gunting,  sarung  tangan,  botol  air kemasan  600  mL,  pisau,  telenan,  corong pisah, corong gelas, wadah kaca, erlenmeyer,  gelas  ukur  (Pyrex),  gelas kimia  (Pyrex),  tabung  reaksi,  rak  tabung reaksi, micro tubes , cawan petri, timbangan  analitik, vortex (Benchmark), spatula,  oven,  pinset,  batang  pengaduk, pembakar  spritus,  pipet  tetes,  jarum  ose, vial,  lemari  pendingin, incubator incucell (N-Biotek), laminary  air  flow (Clean Bench), autoklaf (autoklaf KT-30 S ), mikropipet,  jangka sorong, digital caliper , jas  laboratorium  dan  kamera.  Bahan- bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini yaitu Tunikata Polycarpa aurata ,
Staphylococcus  aureus, Escherichia  coli , Candida  albicans, aquades,  etanol,  n- heksan, kloroform, metanol, pepton, ekstrak  daging  ( meat  extract ),  natrium klorida, nutrient  agar ,  kloramfenikol ( paper disc ), kertas label, spidol permanen, kertas  saring,  kapas, aluminium  foil dan tissue .
Prosedur Penelitian Pembuatan Ekstrak Ekstrak tunikata ( Polycarpa aurata) 530 g  dibuat dengan cara maserasi sebanyak  3  kali.  Sampel  yang  sudah dipotomg  kecil-kecil  dimasukan  kedalam botol  lalu  direndam  dengan  larutan  etanol 96%  selama 1x24 jam. Kemudian sampel disaring menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 1 dan debris 1. Debris 1  kemudian  ditambah  dengan  larutan etanol  lalu  ditutup  dengan aluminium  foil dan  dibiarkan  selama  1x24  jam,  sampel tersebut  disaring  menggunakan  kertas saring menghasilkan filtrat 2 dan debris 2.
Debris  2  kemudian  ditambah  dengan larutan etanol lalu ditutup dengan aluminium  foil selama  1x24  jam,  sampel tersebut  di  lalu  disaring  menggunakan
kertas  saring  menghasilkan  filtrat  3  dan debris  3.  Filtrat  1,  2,  dan  3  dicampur menjadi  satu  kemudian  disaring,  lalu diuapkan  menggunakan  oven  hingga diperoleh ekstrak kental etanol.

## Pembuatan Fraksi
Ekstrak  kental  etanol  tunikata ( Polycarpa  aurata) sebanyak  1,00  g dimasukkan  dalam  Erlenmeyer,  dilarutkan dengan  campuran  metanol  :  air    (MeOH  : H 2 O)  (80:20)  sebanyak  100  mL.  Setelah sampel  larut,  dimasukkan  kedalam  corong pisah  lalu  ditambahkan  pelarut  n-heksan dengan  jumlah  yang  sama,  setelah  itu dikocok  berulangkali  sampai  homogen. Dibiarkan sampel sampai terbentuk lapisan metanol  :  air    (MeOH  :  H 2 O)  dan  n- heksan. Masing –  masing  lapisan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan n- heksan dievaporasi menggunakan Oven hingga  kering,  lalu ditimbang  dengan  timbangan  analitik  dan diperoleh fraksi n-heksan 0,1 g.
Lapisan MeOH : H 2 O ditambahkan akuades sebanyak 100 mL dipartisi dengan pelarut  kloroform  dengan  perbandingan 1:1  v/v  dalam  corong  pisah,  lalu  dikocok berulangkali  sampai  homogen.  Dibiarkan sampai terbentuk dua lapisan yaitu lapisan MeOH  dan  kloroform.  Masing  –  masing lapisan  ditampung  dalam  wadah  yang berbeda.  Lapisan  kloroform  dievaporasi menggunakan Oven hingga  kering  lalu ditimbang  dan  diperoleh  fraksi  kloroform 0,28  g.  Lapisan  MeOH  yang  ditampung pada wadah yang lain dievaporasi menggunakan Oven hingga  kering  lalu ditimbang  berat  sampel,  dan  diperoleh fraksi MeOH 0,51 g. Rendemen-rendemen fraksi  dihitung  dengan  persamaan  sebagai berikut :
Rendemen = x 100%

## Pembuatan Media Cair B1
Ditimbang  Pepton  0,5  g,  ekstrak daging  0,3  g  ( meat  extract )  ,  Natrium klorida  0,3  g  dilarutkan  dalam  akuades sebanyak 100 mL menggunakan Erlenmeyer,  dikocok  sampai  homogen. Media  yang  telah  homogen  kemudian disterilkan  dengan  menggunakan  autoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit. Dipipet 1  mL  media  cair  B1,  kemudian  masukkan dalam  tabung  reaksi  dan  tutup  dengan aluminium  foil .    Media  cair  B1  siap digunakan  sebagai  media  kultur  mikroba (Ortez, 2005).

## Kultur Mikroba
Mikroba yang sudah dikultur ( Escherichia  coli , Staphylococcus  aureus dan Candida albicans ) ditambahkan media cair  B1  yang  disiapkan  sebelumnya sebanyak  100  µL  kedalam  tabung  reaksi yang  berbeda  –  beda.  Masing  –  masing tabung  reaksi  ditutup  dengan  aluminium foil  dan  dimasukkan  kedalam  incubator selama 1x24 jam dengan suhu 37 ºC.

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5 g,  ekstrak  daging ( meat extract )  0,3  g,  natrium  klorida  0,3  g,  agar 1,5  g  dan  dilarutkan  dalam  akuades sebanyak 100 mL menggunakan Erlenmeyer,  dikocok  sampai  homogen.
Media  yang  telah  homogen  kemudian disterilkan  dengan  menggunakan  autoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit. Media agar B1 siap digunakan untuk uji aktivitas antimikroba.

## Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontol Negatif
Kontrol  positif  dalam  pengujian antimikroba ini menggunakan kloramfenikol  paper  disc. Kontrol  negatif yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu
menggunakan  pelarut  methanol,  dengan cara membuat larutan stok metanol dengan mengambil  sebanyak  200  µL  metanol kemudian ditotolkan pada kertas cakram.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  cara melarutkan ekstrak etanol tunikata ( Polycarpa  aurata) sebanyak  1  mg kedalam  200  µL  metanol  sehingga menghasilkan    konsentrasi  larutan  uji sebanyak  250  µg/50  µL.  Perlakuan  yang sama  dilakukan  untuk  fraksi  n-heksan, fraksi  kloroform  dan  fraksi  metanol (Ortez,2005).

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar ( disc diffusion Kirby and Bauer ). Aktivitas ini diuji pada mikroorganisme Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans. Pada  pengujian aktivitas  antibakteri  ini,  kertas  cakram ( paper  disc )  yang  digunakan  berukuran  6 mm dengan daya serap 50μL tiap cakram. Kosentrasi yang digunakan pada pengujian ini hanya satu kosentrasi yaitu 250μg/50μL pada  setiap  sampel  yang  terdiri  dari ekstrak  kental,  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform,  fraksi  metanol-air,  kontrol positif  dan  kontrol  negatif.  Sampel  yang telah ditentukan kosentrasinya 250μg/50μL  ditotolkan  pada  masing- masing  cakram  dengan  menggunakan mikropipet.
Untuk  media  agar  B1  yang  sudah diautoklaf  pada  suhu  121  ºC  selama  15 menit,  kemudian  dinginkan  sampai  suhu 40  ºC.  Tuangkan  media  agar  ke  cawan petri,  Ambil  sebanyak  100μL  mikroba yang  telah  di  kultur  dalam  tabung  reaksi, dipipet  dan  diinokulasi  pada  media  agar dan  tunggu  sampai  media  agar  mengeras.
Masing-masing  cawan  petri  diberi  label dan  nomor  sampel  yang  sesuai.  Letakkan kertas  cakram  yang  telah  ditotolkan sampel  uji  tunikata  ( Polycarpa  aurata). Cawan  petri  lalu  diinkubasi  selama  1x24 jam pada suhu 37 ºC (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Bening
Pengamatan dilakukan dengan mengukur  diameter  zona  hambat  yang terjadi  pada  media  dengan  menggunakan jangka  sorong  beralaskan  kertas  berwarna gelap.  Diameter  zona  hambat  yang  diukur yaitu  daerah jernih yang  terbentuk disekitar disk/cakram (tidak ada pertumbuhan  bakteri)  diukur  dari  ujung yang  satu  ke  ujung  yang  lain  melalui tengah-tengah  disk/cakram  atau  diukur diameter vertikal dan horizontalnya (Soemarno,2000).  Diameter  zona  hambat diukur  dalam  satuan  millimeter  (mm) menggunakkan mistar berskala (Davis and Stoud, 1971) dengan sedikit modifikasi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak tunikata ( Polycarpa aurata ) Ekstraksi  adalah  proses  pemisahan zat dari campurannya dengan menggunakan  pelarut  tertentu.  Ekstraksi terdiri  dari  beberapa  metode  di  antaranya yaitu metode maserasi. Maserasi merupakan  metode  ekstraksi  sederhana yang  sering  digunakan  (Mukhriani,  2014). Proses maserasi ini dilakukan dengan cara merendam  sampel  tunikata  ( Polycarpa aurata )  sebanyak  3x24  jam  dengan menggunakan larutan etanol 96%.
Sebelum  maserasi  dilakukan,  sampel  di bersihkan dari kotoran dan dipotong kecil- kecil. Pemotongan sampel dilakukan untuk memperluas  permukaan  sentuh  sampel, karena luas permukaan berpengaruh terhadap  hasil  yang  optimal  dari  proses
maserasi.  Semakin  kecil  ukuran  sampel maka  semakin  besar  luas  permukaannya sehingga memudahkan senyawa aktif yang ada  pada  tunikata  ( Polycarpa  aurata ) dapat  larut  ke  dalam  pelarut  yang digunakan.  Pelarut  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  pelarut  etanol  96%. Menurut  Trifani  (2012),  etanol  digunakan sebagai  pelarut  karena  bersifat  polar, universal, dan mudah didapat.
Fraksi tunikata ( Polycarpa aurata ) Fraksinasi  adalah  proses  penarikan suatu  senyawa  dengan  menggunakan beberapa  pelarut yang  tidak  saling
bercampur. Senyawa-senyawa yang bersifat non polar akan larut  dalam pelarut yang nonpolar sedangkan senyawa- senyawa  yang  bersifat  polar  akan  larut dalam  pelarut  yang  bersifat  polar  (Sari, 2012).  Pelarut  yang  digunakan  untuk fraksinasi  yaitu    n-heksan,  kloroform,  dan metanol.  Pelarut  n-heksan  digunakan untuk  menarik  senyawa  yang  bersifat  non polar,  pelarut  kloroform  digunakan  untuk menarik senyawa  yang bersifat  semi polar sedangkan  pelarut  metanol  digunakan untuk  menarik  senyawa-senyawa  yang bersifat polar.
Tabel 2. Rendemen ekstrak dan fraksi tunikata ( Polycarpa aurata ) No Sampel Rendemen (%) Warna Sampel 1 Ekstrak Etanol 0,47 Coklat kemerahan 2 Fraksi n-Heksan 10 Bening 3 Fraksi Kloroform 2,8 Coklat Pekat 4 Fraksi Metanol 5,1 Kuning Kecoklatan Menurut  Nuhayati et  al. ,  (2009)
bahwa nilai rendemen yang tinggi menunjukan banyaknya komponen bioaktif  yang  terkandung  didalamnya. Nilai  rendemen  yang  paling  tinggi  adalah rendemen  yang  menggunakan  pelarut metanol,  sehingga  memungkinkan  bahwa senyawa  bioaktif  yang  terkandung  dalam tunikata  ( Polycarpa  aurata) lebih  bersifat polar. Jenis pelarut menghasilkan rendemen  yang  berbeda  karena  Semakin tinggih  rendemen  yang  dihasilkan  maka semakin  tinngih  pula  komponen  bioaktif yang terkandung dalam tunikata ( Polycarpa aurata).
Aktivitas  antimikroba  ekstrak  dan fraksi tunikata ( Polycarpa aurata ) Uji  aktivitas  antimikroba  ekstrak dan  Fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  dan fraksi metanol tunikata ( Polycarpa aurata) terhadap bakteri Escherichia coli, Staphylococcus aureus dan Candida albicans dengan metode difusi agar (Difusi Kirby-Bauer)  yang  telah  dimodifikasi. Berikut  adalah  hasil  pengukuran  aktivitas antimikroba  ekstrak  dan  Fraksi  n-heksan, fraksi  kloroform  dan  fraksi  metanol tunikata  ( Polycarpa  aurata) terhadap bakteri Escherichia  coli, Staphylococcus aureus dan Candida albicans.
Tabel 3. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak dan fraksi tunikata ( Polycarpa aurata ) terhadap Escherichia coli.
Ulangan Diameter zona hambat (mm) terhadap Escherichia coli Ekstrak EtOH Fraksi n-Heksan Fraksi CHCl 3 Fraksi MeOH Kontrol (+) Kontrol (-) I 13,53 - 9,54 16, 94 29,77 - II 13,10 - 10,10 15,78 III Total 12,39 39,02 - - 7,44 27,08 15,78 48,50 ̅ 13,70 - 9,03 16,17
Tabel 4. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak dan fraksi tunikata ( Polycarpa aurata ) terhadap Staphylococcus aureus.
Ulangan
Diameter zona hambat (mm) terhadap Staphylococcus aureus Ekstrak EtOH Fraksi n-Heksan Fraksi CHCl 3 Fraksi MeOH Kontrol (+) Kontrol (-) I 14,06 - 11,17 10,53
18,06 - II 15,06 - 11,76 14,28 III Total 16,25 45,37 - - 11,27 34,20 10,70 35,51 ̅ 15,12 - 11,40 11,83
Tabel 5. Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak dan fraksi tunikata ( Polycarpa aurata ) terhadap Candida albicans.
Ulangan Diameter zona hambat (mm) terhadap Candida albicans Ekstrak EtOH Fraksi n-Heksan Fraksi CHCl 3 Fraksi MeOH Kontrol (+) Kontrol (-) I 15 - 8 12 19
-
II 15
- 8 12 III Total 15 45 - - 8 24 12 36 ̅ 15 - 8 12
Berdasarkan hasil pengamatan yang dilakukan terhadap mikroba Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans masing-masing sebanyak tiga kali pengulangan
memperlihatkan adanya zona hambat yang terbentuk  disekitar  disk/cakram  kecuali pada fraksi n-heksan. Pada fraksi n-heksan tidak menunjukan adanya aktivitas antimikroba  yang  terbentuk,  ini  berarti
tidak ada kandungan senyawa antimikroba yang  bersifat  non  polar  pada  sampel  uji tunikata  ( Polycarpa  aurata), sedangkan pada ekstrak etanol memperlihatkan adanya  aktivitas  antimikroba  terhadap Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans. Hal  ini  ditunjukan dengan terbentuknya zona hambat disekitar  cakram  sebesar  13,70  mm  pada Escherichia coli tergolong kuat , 15,12 mm pada Staphylococcus  aureus tergolong kuat dan  15  mm  pada Candida  albicans tergolong  kuat . Hasil  ini  menunjukan bahwa  fraksi  metanol  memiliki  aktivitas sebagai  antimikroba.  Pada  fraksi  metanol memperlihatkan aktivitas antimikroba terhadap Escherichia  coli,  Staphylococcus aureus dan Candida  albicans yang tergolong  kuat . Hal  ini  ditunjukan  dengan terbentuknya zona hambat disekitar cakram sebesar 16,17 mm pada Escherichia coli, 11,83 mm pada Staphylococcus  aureus dan  12  mm  pada Candida  albicans. Jika  dibandingkan dengan  ekstrak  etanol  dan  fraksi  metanol, fraksi  kloroform  memperlihatkan  daya hambat  yang  lebih  rendah.  Hal  ini ditunjukan  dengan  aktivitas  antimikroba sebesar  9,03  mm  pada Escherichia  coli tergolong sedang, 11,40 mm pada
Staphylococcus  aureus tergolong  kuat  dan
8  mm  pada Candida  albicans tergolong sedang.
Hasil  pengukuran  diameter  zona hambat digolongkan berdasarkan klasifikasi zona hambat menurut Davis and Stout  (Tabel  1).  Ekstrak  etanol  dan  fraksi metanol  merupakan  ekstrak  dan  fraksi yang efektif terhadap mikroba Escherichia  coli dan Candida  albicans karena  memiliki  daya  hambat  mikroba yang  kuat,  hal  ini  dikarenakan    gram negatif cenderung peka terhadap
antimikroba yang bersifat polar. sedangkan pada  ekstrak  etanol,  fraksi  kloroform  dan fraksi metanol terhadap bakteri
Staphylococcus aureus memiliki kemampuan  menghambat  mikroba  dengan kategori kuat. Hal ini menerangkan bahwa bakteri gram positif lebih peka dibandingkan dengan bakteri gram negatif.
Penelitian  mengenai  aktivitas  antibakteri dan  karakteristik  gugus  fungsi  dari tunikata ( Polycarpa aurata) yang dilakukan  oleh  Kumayas dkk., (2015) menyatakan  bahwa  gram  positif  lebih sensitif terhadap antibakteri karena struktur  dinding  sel  yang  sederhana sehingga mempermudah senyawa antibakteri  masuk  kedalam  sel  sedangkan struktur  dinding  sel  gram  negatif  lebih kompleks.
Kontrol  positif  memperlihatkan aktivitas  antimikroba  yang  paling  besar terhadap mikroba Escherichia coli, Staphylococcus aureus dan Candida albicans. Kontrol  positif  yang  digunakan yaitu Kloramfenikol. Kloramfenikol merupakan antibiotik yang memiliki spekrum  luas  terhadap  bakteri  (Katzung, 2004).  Kontrol  negatif  tidak  menunjukan terbentuknya  zona  hambat.  Hal  tersebut menandakan  bahwa  tidak  ada  pengaruh kontrol  negatif  terhadap  antimikroba  yang diuji.  Kontrol  negatif  yang  digunakan yaitu metanol.
Aktivitas antikiroba yang terbentuk disekitar  disk/cakram  ini  disebabkan  oleh aktivitas  senyawa  yang  terkandung  dalam ekstrak  dan  fraksi  Tunikata  ( Polycarpa aurata). Semakin besar  zona hambat yang terbentuk  maka  semakin  kuat  senyawa yang terkandung dalam tunikata ( Polycarpa  aurata) untuk  menghambat pertumbuhan mikroba.

## DAFTAR PUSTAKA
Christine,  G.  2015.  Potensi  Tunikata Polycarpa  aurata Sebagai  Sumber
Inokulum  Bakteri Endosimbion
Penghasil  Antibakteri. [ Skripsi].
Universitas Hasanuddin, Makassar.
Davis,  W.W  and  Stout,  T.R.  1971.  Disc
Plate  Methods  of  Microbiological Antibiotic  Assay. Microbiology . 22(4): 659-665.
Erwin,  P.  M.,  M.  C.  Pineda,  N.Webster, X.Truon,  S.  López-Legentil.  2014. Down  under  the  tunic:  bacterial biodiversity hotspots and widespread ammoniaoxidizing archaea  in  coral  reef  ascidians.
ISME J . 8: 575-588.
Katzung,  B.  G,.  2004.  Farmakologi  Dasar dan  Klinik.  Edisi  XIII.  Buku  3. Translation  of  Basic  and  Clinical Pharmacology  Eight  Edition. Alih
Bahasa  oleh  Bagian  Farmakologi Fakultas  Kedokteran  Universitas Airlangga. Salemba Medika, Jakarta.
Kumayas,  A.R.,  D.  S.  Wewengkang.,  dan S. Sudewi. 2015. Aktifitas Antibakteri Dan Karateristik Gugus Fungsi  Dari  Tunikata Polycarpa Aurata.  Jurnal  Ilmiah  Farmasi.
Vol. 4(1).
Lambert,  G.,  Shenkar,  N.,  &  Swalla,  B,.J. 2010.  First  Pacific  record  of  the north  Atlantic  ascidian  Molgula citrina–bioinvasion  or  circumpolar distribution. Aquatic Invasions .
5(4): 369-378.
Litaay,  M,  G.  Christine,  R.G.  B,
Z.Dwyana. 2015. Bioaktivitas simbion  tunikata Polycarpa  aurata sebagai antimikroba. Prosiding
Semnas  PBI  ke  23.  Jayapura, September 2015.
Mans,  D.R.A.  2016.  Exploring  the  global animal  biodiversity  in  the  search for new drugs - marine invertebrates. J  Transl  Sci . 2(3): 170-179.  doi:  10.15761/  JTS.
1000136.
Muhkriani.  2014.  Ekstraksi,  Pemisahan
Senyawa  dan  Identifikasi  Senyawa Aktif. Makassar: Jurnal Kesehatan. 7 (2) : 361-7
Nurhayati,  T,  D.  Aryanti,  dan  Nurjanah.
2009. Kajian Awal Potensi Ekstrak Spons  Sebagai  Antioksidan.  Jurnal Kelautan Nasional. 2(2):43-51.
Ortez, J.H. 2005. Disk Diffusion testing in manual of antimicrobial susceptibility  testing .  Marie  B.
Coyle  (Coord.  Ed).  American society for Microbiology.
Pham, C. D., H., Weber, R., Hartmann, V.,
Wray,  W.,  Lin,  D.,  Lai,  and  P. Proksch.  2013.  New  Cytotoxic 1,2,4-Thiadiazole  Alkaloids  from the  Tunikata P.  aurata.  Org.  Lett.
15 (9): 2230-2233.
http://www.pubfacts.com.
Radjasa,  O.K.,  Y.M.  Vaske,  G.  Navarro,
H.C.  Vervoort,  K.Tenney,  R.G. Linington, P. Crews. 2011.
Highlights  of  marine  invertebrate- derived biosynthetic products: Their  biomedical  potential  and possible  production  by  microbial
associants. Bioorganic & Medicinal  Chemistry. 19: 6658–
6674.
Sari,  Cahyo  IP.  2012.  Kualitas  Minuman Serbuk Kersen ( Muntingia calabura L.) dengan Variasi Konsentrasi Maltodekstrin dan Ekstraksi Kayu Secang ( Caesalpinia  sappan  L. ). SKRIPSI.
Fakultas  Teknobiologi  Universitas Atma Jaya Yogyakarta, Yogyakarta.
Schmidt,  E.  W  and  M.  S.  Donia.  2010.
Life in cellulose houses: Symbiotic bacterial  biosynthesis  of  ascidian drugs  and  drug  leads. Curr.  Opin. Biotechnol. 21 : 827-833.
Soemarno.  2000.  Depertemen  Kesehatan Republik  Indonesia  Isolasi  Dan Identifikasi Bakteri Klinik. Akademi Analisis Kesehatan
Yogyakarta.. Yogyakarta. Trifani.  2012.  Ekstraksi  Pelarut  Cair-Cair. http://awjee .  Diakses  pada  tanggal 10 Oktober 2018.