## ABSTRAK
Tumbuhan asli Indonesia yang digunakan secara empiris sebagai antimalaria yaitu manuran ( Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne). Tujuan penelitian ini adalah untuk menentukan aktivitas  penghambatan  polimerisasi  hem  berdasarkan  nilai  IC 50 fraksi  etil  asetat  batang C. Tomentosa. Metode identifikasi kandungan kimia yaitu menggunakan uji tabung, dan metode aktivitas penghambatan polimerisasi hem yang digunakan yaitu Basilico secara in vitro . Hasil identifikasi  kandungan  kimia  terhadap  fraksi  etil  asetat  batang C.  Tomentosa menunjukkan adanya  senyawa  flavonoid,  terpenoid,  saponin,  tanin,  dan  antrakuinon.  Rerata  persentase penghambatan polimerisasi hem fraksi etil asetat batang C. Tomentosav dari konsentrasi 20; 10;  5;  2,5;  1,25;  0,625;  0,3125  mg/mL  berturut-turut  yaitu  98,507;  97,872;  96,407;  93,560; 88,419; 80,680; dan 45,467%. Hasil rerata IC 50 fraksi etil asetat batang C. Tomentosa sebesar 0,240  ±  0,018  mg/mL  dan  klorokuin  difosfats  sebesar  0,214  ±  0,012mmg/mL.  Hal  ini menunjukkan  fraksi  etil  asetat  batang C.  Tomentosa memiliki  aktivitas  penghambatan polimerisasi hem.  Hasil uji independent sampel t -test diperoleh nilai signifikansi 0,111 ( p lebih dari 0,05) yakni tidak terdapat perbedaan yang bermakna, yang berarti fraksi etil asetat batang C.  Tomentosa memiliki  aktivitas  penghambatan  polimerisasi  hem  yang  sebanding  terhadap klorokuin difosfat. Hal ini menunjukkan potensiasi dari fraksi etil asetat batang C. Tomentosa sebagai antilmalaria.

## ABSTRACT
The native Indonesian plant that is empirically used as an antimalarial agent is  manuran (Coptosapelta  tomentosa  Valeton  ex  K.  Heyne).  This  study  aims  to  determine  chemical compound and heme polymerization inhibitory activity of ethyl acetate fraction of C. Tomentosa stem based on IC 50 value. The method identification of chemical compound used tube test, and the method of heme polymerization inhibitory activity was Basilico through in vitro method. The results  of  chemical  compound  identification  of  the  ethyl  acetate  fraction  of  C.  Tomentosa showed  the  presence  of  flavonoids,  terpenoids,  saponins,  tannins,  and  anthraquinones.  The average percentages of heme polymerization inhibitory activity of ethyl acetate fraction of  C. Tomentosa stem from concentration 20; 10; 5; 2.5; 1.25; 0.625; 0.3125 mg / mL were 98.507; 97,872;  96,407;  93,560;  88,419;  80,680;  and  45.467%.The  averages  of  IC 50 of  ethyl  acetate fraction and chloroquine diphosphate were 0.24 ± 0.018 mg/mL and 0.214 ± 0.012 mg/mL. This shows that the ethyl acetate fraction of C. Tomentosa stem has heme polymerization inhibitory activity. The result of the independent sample t-Test obtained the significance value of 0.111 (p more than 0.05) that there was no significant difference. It means that the ethyl acetate fraction of  C.  Tomentosa  stem  has  heme  polymerization  inhibitory  activity  as  well  as  chloroquine diphosphate.  This  suggests  the  potentiation  of  the  methyl  acetate  fraction  of  the  stem  C. Tomentosa as anti-malarial.
Penulis
Arnida 1* , Siti Humairah Z.A 1 , Sutomo 1 , Fadlillahturrahmah 1
Afiliasi 1 Program Studi Farmasi Fakultas MIPA Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan, 70713, Indonesia
Aktivitas Penghambatan Polimerisasi Hem dan Skrining Fitokimia dari Fraksi Etil Asetat Batang Manuran ( Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne)
Heme  Polymerization  Inhibitory  Activity  And  Phytochemical  Screening  Of  Ethyl  Acetate  Fraction  In Manuran (Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne) Stem
Kata Kunci  Polimerisasichem
 Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne
 IC 50
Keywords  Hemellpolymerization
 Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne
 IC 50
Diterima 23 Maret 2020
Direvisi 25 Januari 2021
Disetujui 24 Maret 2021
*Penulis Koresponding Arnida email: arnida01@ulm.ac.id

## PENDAHULUAN
Penyakit  malaria  disebabkan  oleh Plasmodium dan ditularkan  oleh  nyamuk Anopheles  betina  sebagai vektor (Hakim 2011). Kasus malaria di Kabupaten Banjar Propinsi  Kalimantan  Selatan  mengalami  peningkatan yaitu 275 jiwa padastahun 2011 menjadi 355 jiwa pada tahun 2012 (Dinkes Kab. Banjar 2012). Faktor penyebab sulitnya penanggulangan penyakit malaria salah satunya adalah  belum  ditemukannya  antimalaria  yang  ideal, selain itu adanya kasus resistensi obat. Oleh karena itu, perlu upaya penelitian untuk mendapatkan antimalaria baru  yang  dapat  berupa  obat-obatan  sintesis  maupun bersumber  dari  bahan  alam.  Penemuan  obat  malaria baru didasarkan pada penggunaan obat tradisional oleh masyarakat yang dilanjutkan melalui pengujian aktivitas polimerisasi  hem  (Basilico et  al .  1998).  Klorokuin memiliki  mekanisme  kerja  sebagai  antimalaria  pada penghambatan  polimerisasi  hem  (Syamsudin et  al . 2013). Proses polimerisasi hem terjadi di dalam vakuola makanan Plasmodium . Hematin yang terbentuk menjadi toksik  bagi Plasmodium . Plasmodium mendetoksifikasi hematin  menjadi  hemozoin  sehingga  tidak  toksik. Metabolit sekunder dari tanaman antara lain flavonoid, tanin,  saponin,  dan  tergpenoid  dapat  berinteraksi dengan sistem elektronik hem serta membentuk ikatan dengan  ion  besi  hem  (Wijaya et  al .  2013).  Interaksi tersebut  dapat  menghambat  terbentuknya  hemozoin (Purwanto 2011).
Manuran  ( C.  Tomentosa )  (Gambar  1)  merupakan tumbuhan  asli  Indonesia  asal  Kotabaru  Kalimantan
Selatan  yang  digunakan  secara  empiris  sebagai antimalaria.  Ekstrak  etanol  dari  batang C.  Tomentosa mengandung  senyawa  golongan  flavonoid,  tanin, terpenoid,  antrakuinon,  dan  saponin  serta  memiliki aktivitas  penghambatan  polimerisasi  hem  dengan  nilai IC 50 sebesar  1,56  ±  0,07  mg/mL  (Arnida et  al .  2017). Metabolit  sekunder  dari  tanaman  yang  mampu memberikan  efek  sebagai  penghambatan  polimerisasi hem  adalah  flavonoid,  tanin,  saponin,  dan  terpenoid karena  berinteraksi  dengan  sistem  elektronik  hem sertabmembentukbikatan denganbion besiihem, interaksi  tersebutndapat  menghambat  terbentuknya hemozoin  (Purwanto  2011;  Wijaya et  al .  2013). Berdasarkan  informasi  tersebut  penulis  tertarik melakukan penelitian identifikasi golongan senyawa dan aktivitasnya  sebagai  penghambatan  polimerisasi  hem terhadap fraksi etil asetat batang C. Tomentosa. Hal ini dimaksudkan  sebagai  eksplorasi  dan  penelusuran golongan senyawa yang beraktivitas sebagai penghambata polimerisasi hem.
Pemisahan  kandungan  kimia  dan  aktivitasnya sebagai Heme Polymerization  Inhibitory  Activity (HPIA) terhadap  fraksi  etil  asetat  batang C.  Tomentosa perlu dilakukan.  Hal  ini  dimaksudkan  sebagai  eksplorasi  dan penelusuran  golongan  senyawa  yang  beraktivitas sebagai  penghambatan  polimerisasi  hem.  Pemisahan dilakukan  dengan  fraksinasi  dengan  menggunakan pelarut n -heksan, etil asetat, dan n -butanol atau dengan pelarut lainnya (Arnida 2015).
Gambr 1. Tumbuhan C. Tomentosa

## BAB II

## TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Tumbuhan Manuran ( Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne)

## 2.1.1  Morfologi tumbuhan C. tomentosa
Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne (Gambar 1a) merupakan salah satu  tumbuhan  yang  tumbuh  di  daerah  Kalimantan.  Tumbuhan C.  tomentosa
memiliki arah pertumbuhan batang memanjat dengan jenis batang berkayu, berwarna hijau  jika  muda  dan  berwarna  coklat  setelah  tua.  Daun  tipis  berwarna  hijau  muda sampai hijau tua dengan ujung meruncing (Rezeky, 2009; Handayani, 2010). Sistem perakaran  tunggang  dan  membulat  seperti  bonggol  berkayu,  berwarna  coklat kekuningan  (Gambar  1b).  Secara  mikroskopik,  akar C.  tomentosa memiliki  berkas pembuluh, trikoma, parenkim korteks dan epidermis.  Bau akar, batang, dan daunnya sangat khas seperti karet dan memiliki rasa agak sepat dan pahit (Handayani, 2010).
a b
Gambar 1. a. Tumbuhan C. tomentosa ; b. Akar C. tomentosa (Al’Amrie, 2011)

## 2.1.2  Klasifikasi tumbuhan C. tomentosa
Klasifikasi tumbuhan C. tomentosa adalah sebagai berikut: Kingdom : Plantae Divisi : Magnoliophyta Kelas : Magnoliopsida Ordo : Rubiales Famili : Rubiaceae
Aktivitas Penghambatan Polimerisasi Hem dan Skrining Fitokimia dari Fraksi Etil Asetat Batang Manuran ( Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne)

## METODE Alat
Alat-alat yang digunakan rotary evaporator Hei-VAP Core (Heidolph, Schwabach), incubator IN30 (Memmert, Skandinavia),  vortexomixer  M37615  (Maxi  Mix  II®, Langenselbold, German), waterbath (Memmert,
Skandinavia),  dan  ELISAn reader (EON™  Winooski  UT, USA).

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  batang C. Tomentosa ,  diambil  di  Desa  Sungai  Buah,  Kotabaru, Kalimantan  Selatan,  DMSO  100%  (pa), n -heksana  (pa), FeCl 3 (pa) 10%,  HCl  (pa) 2 N,  kloroform (pa), klorokuin difosfat  (pa),  KOH-metanol  10%  (pa),  kristal  hematin (pa), pereaksi Dragendorf (pa), pereaksi Mayer (pa), dan silika GF 254 (pa).

## Determinasi
Determinasi terhadap herbarium tumbuhan manuran  pada  Pusat  Penelitian  Biologi  LIPI  (Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia) Bogor, sehingga diketahui spesies tumbuhan  manuran  adalah C.  Tomentosa dengan determinasi nomor 202/IPH.1.01/If.07/I/2016.
1. Pembuatan Ekstrak Batang C. Tomentosa Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah  metode maserasi.  Sebanyak  1  kg  serbuk  simplisa  batang C. Tomentosa dimaserasi  menggunakan  pelarut  etanol 96% sebanyak 1 cm di atas permukaan rendaman serbuk atau dengan perbandingan sampel dan pelarut 3:1 yaitu sebanyak  3  L  pelarut  untuk  1  kg  serbuk.  Maserasi dilakukan  5x24  jam  dan  pergantian  pelarut  dilakukan setiap  1x24  jam  disertai  dengan  pengadukan.  Maserat yang diperoleh diuapkan dengan rotary evaporator pada suhu  58 0 C  (Tanaya et  al. 2015).  Ekstrak  tersebut kemudian  dikentalkan  dengan waterbath pada  suhu 60 0 C.
2. Pembuatan Fraksi Etil Asetat Batang C. Tomentosa
Ekstrak kental etanol sebanyak 50 gram disuspensi- kan  dalam  akuades.  Campuran  dimasukkan  ke  dalam corong  pisah  dan  dilakukan  fraksinasi  menggunakan pelarutk n- heksana sebanyak 150 mL. Campuran digojog dan  ditunggu  sampai  terbentuk  2  lapisan.  Fraksi n- heksana berada pada lapisan atas dan lapisan air berada pada lapisan bawah. Proses fraksinasi dengan pelarut n- heksana  dilakukan  sebanyak  7  kali  replikasi.  Fase  air yang  diperoleh  kemudian  difraksinasi  menggunakan pelarut etil asetat sebanyak 3 kali replikasi. Hasil fraksi etil  asetat  yang  diperoleh  diuapkan  dengan  cara
dianginkan  pada  suhu  kamar  hingga  diperoleh  fraksi kental (Azhari 2016).

## 3. Identifikasi Senyawa Kimia
Identifikasi  yang  dilakukan  terhadap  keberadaan senyawa  kimia  flavonoid,  alkaloid,  terpenoid  dan steroid,  tannin,  dan  antrakuinon.  Identifikasi  yang digunakan dengan cara reaksi tabung dan kromatografi lapis tipis (Tiwari et al. 2011).
4. Uji Aktivitas Penghambatan Polimerisasil Hem
Bahan  uji  dengan  berbagai  tingkatan  kadar ditambahkan sebanyak 100 μL, yaitu 20; 10; 5; 2,5; 1,25; 0,625;  dan  0,3125  mg/mL.  Masing-masing  kadar konsentrasi direplikasi sebanyak 3 kali. Hematin 1 mM sebanyak  100  μL  dalam  NaOH  0,2  M  dimasukkan  ke dalam microtube . Reaksi dimulail dengan penambahan 100 μL larutan asam asetat glasial 100 % (pHh2,6) pada mikrotube  yang  sudah  berisi  larutan  hematin  dan sampel. Campuran kemudian diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 24 jam. Klorokuin difosfat sebagai kontrol positif digunakan  konsentrasi  20;  10;  5;  2,5;  1,25;  0,625;  dan 0,3125  mg/mL,  dan  sebagai  kontrol  negatif  digunakan larutan  dimetil  sulfoksida  (DMSO)  10%  dan  aquades. Pada  saat  inkubasi  selesai,  mikrotube  dikeluarkan selanjutnya  disentrifuse  dengan  kecepatan  8000  rpm selama  sepuluh  menit.  Supernatan  dan  endapan dipisahkan,  endapan  dicuci  sebanyak  3  kali  dengan masing-masing 400  μL  DMSO  100%. Setiap  kali pencucian  disentrifuse  dengan  kecepatan  8000  rpm selamaa10  menit.  Endapan  terakhir  yang  diperoleh ditambah  NaOH  0,1  mg sebanyak  400  μL sehingga terbentuk larutan.  Larutan yang diperoleh diambil  200 μL dari masing-masing microtube dimasukkan ke dalam mikroplate 96 sumuran. Absorbansi dibaca ELISA reader pada  panjang  gelombang  405  nm.  Nilai  absorbansi diplot  ke  persamaan  garis  regresi  linear  kurva  standar sehingga  dapat  ditentukan  konsentrasi 𝛽 -hematin bahan uji pada setiap sumuran (Purwanto 2011).

## Analisis Data
Aktivitas penghambatan polimerasi hem dinyatakan dalam Inhibition  Concentration 50%  (IC 50 )  yaitu  kadar yang  mampu  menghambat  polimerisasi  hem  hingga 50%. Metode penentuan nilai IC 50 menggunakan analisis probit.  Nilai  persen  penghambatan  polimerisasi  hem untuk  masing-masing  perlakuan  dianalisis  dengan menggunakan  SPSS  16.0  (IBM,  New  York,  Amerika Serikat)  uji IndependentllSample  t-test. Perhitungan presentase  penghambatan  polimerisasi  hem  dilakukan dengan menggunakan rumus berikut:
%Penghambatan= (𝛽−hematin)KN−(𝛽−hematin)BU (𝛽−hematin)KNf x 100%
Keterangan:
KN = Kontrol Negatif, BU = Bahan Ujid

## HASIL & PEMBAHASAN

## 1. Pembuatan Ekstrak Batang C. Tomentosa
Bobot  ekstrak  kental  etanol  batang C.  Tomentosa yang  didapatkan  dari  1000  gram  serbuk  kasar  yaitu sebesar  54,30  gram  dengan rendemen sebesar  5,43 % b/b. Rendemen menunjukkan banyaknya zat yang dapat ditarik oleh pelarut dari dalam sel tumbuhan. Semakin besar  nilai  rendemen,  maka  semakin  banyak  zat  yang dapat ditarik oleh pelarut yang berarti proses ekstraksi zat  berlangsung  efektif  (Maulida  &  Guntarti  2015). Rendemen  ekstrak  etanol  dari  batang C.  Tomentosa terbilang  lebih  kecil  apabila  dibandingkan  dengan rendemen  pada  ekstrak  etanol  akar C.  Tomentosa . Rendemen yang diperoleh untuk ekstrak  etanol kental akar C.  Tomentosa sebesar  15,28  %  (Arnida  &  Lingga 2016).  Ekstrak  kental  etanol  96%  yang  didapatkan berwarna coklat kehitaman.
2. Pembuatan Fraksi; Batang C. Tomentosa Bobot  fraksi  etil  asetat  batang C.  Tomentosa yang didapatkan  sebesar  5,15  gram  dengan  persentase rendemen yang didapat yaitu 10,3 % b/b.

## 3. Skrining Fitokimia
Hasil skrining fitokimia ( Tabel 1 ) pada penelitian ini memberikan  hasil  positif  pada  uji  flavonoid,  saponin, tanin,  antrakuinon,  dan  terpenoid,  sedangkan  uji alkaloid  dan  steroid  memberikan  hasil  negatif.  Ekstrak
etanol  batang C.  Tomentosa positif  mengandung golongan  senyawa  flalonoid,  antrakuinon,  saponin, tanin,  dan  terpenoid  (Arnida et  al .  2017).  Berdasarkan skrining  fitokimia  yang  dilakukan  diketahui  ekstrak etanol  dan  fraksi  etil  asetat  batang C.  Tomentosa Valetonnex  K.  Heyne  memiliki  kandungan  golongan senyawa yang sama.

## 4. Kromatografi Lapis Tipis
Tujuan dilakukan  identifikasi kandungan kimia yang terdapat  pada  fraksi  etil  asetat  batang C.  Tomentosa dengan metode  KLT  ini adalah untuk mendukung hasil skrining  fitokimia  dengan  metode  reaksi  tabung  yang telah  dilakukan  sebelumnya  pada  penelitian  ini. Identifikasi  dilakukan  terhadap  senyawa  alkaloid, flavonoid,  tanin,  saponin,  antrakuinon,  terpenoid,  dan steroid. Hasil KLT fraksi etil asetat batang C. Tomentosa dapat dilihat pada Tabel 2.

## 5. Aktivasi Penghambatan Polimerasi Hem
Hasil pembacaan absorbansi hermatin menghasilkan persamaan kurva baku yaitu y = 0,014 x + 0,024 (Gambar 2).  Persamaan  kurva  baku  ini  merupakan  hubungan antara  sumbu  x  dan  y  dimana  sumbu  x  adalah konsentrasi  fraksi etil asetat batang C. Tomentosa dan sumbu y adalah absorbansi. Sebelum menentukan kadar β -hematin,  koefisien  korelasi  (r)  harus  diperhatikan terlebih dahulu. Nilai koefisien korelasi yang memenuhi syarat  yaitu  jika  lebih  dari  0,997  (Gandjar  &  Rohman 2013). Koefisien korelasi (r) dan r 2 yang diperoleh pada persamaan  regresi  kurva  baku  di  atas  berturut-turut adalah  0,999  dan  0,998  yang  berarti  telah  memenuhi syarat dan dapat digunakan untuk menentukan kadar β - hematin.
Tabel 1. Hasil Uji Skrining Fitokimia Fraksi Etil Asetat Batang C. Tomentosa
Golongan Senyawa Uji Reagen Hasil Kesimpulan Alkaloidd Meyer Tidak berbentuk endapan putih - Dragendorff Tidak terbentuk endapan kuning/merah - Flavonoidc Uap amonia Kuning + Antrakuinonv KOH-metanol 10% Endapan merah + Saponinb Tes buih Terbentuk busa yang bertahan selama 10 menit + Steroidd Lieberman Burchard Kuning - Terpenoidx Lieberman Burchard Cincin coklat + Taninx FeCl 3 Hitam +
Aktivitas Penghambatan Polimerisasi Hem dan Skrining Fitokimia dari Fraksi Etil Asetat Batang Manuran ( Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne)
Bahan uji pada penelitian ini adalah fraksi etil asetat batang C.  tomentose Valeton  ex  K.  Heyne.  Perlakuan dalam polimerisasi hem menyesuaikan dengan suasana pada  sel  hidup.  Saat  eritrosit hospes terinfeksi Plasmodium , kristal β -hematin dapat membentuk dapat terbentuk  optimal  pada  suhun  37 0 C  selama  24  jam (Basilico et  al .  1998).  Hal  lain  yang  mempengaruhi adalah suasana asam pada vakuola digestif Plasmodium. Suasana  asam  dibuat  dengan  menambahkan  asam asetat  glasial  pH  2,6  pada  larutan  hematin  1  mM (Wahyono et al . 2010; Purwanto 2011). Bahan uji yang telah  diinkubasi  selama  24  jam  kemudian  dikeluarkan dan disentrifuge untuk mengendapkan kristal β -hematin yang  terbentuk  dan  endapan  yang  terbentuk  dicuci. Pencucian dilakukan sebanyak 3 kali dan menggunakan DMSO  100  %  karena  tidak  menimbulkan  busa  selama proses  pencucian  (Wahyono et  al .  2010;  Purwanto 2011).  Kristal  β -hematin  kemudian  dilarutkan  dengan menggunakan  NaOH  0,1  M,  selanjutnya  dibaca absorbansinya dengan menggunakan ELISA reader pada panjang gelombangr405 nm.
Kadar β -hematin ditentukan dengan cara memasukkan  nilai  absorbansi  bahan  uji  ke  dalam persamaan kurva baku (Gambar 1) y = 0,014 x + 0,024, dengan  y  merupakan  absorbansi  bahan  uji  dan  x merupakan kadar β -hematin. Kadar β -hematin replikasi
1,  2  dan  3  yang  diperoleh  berbanding  terbalik  dengan konsentrasi  fraksi  etil  asetat  batang C.  Tomentosa Valetonfex K. Heyne. Semakin rendah konsentrasi maka semakin  tinggi  kadar β -hematinnya.  Kadar β -hematin yang diperoleh kemudian digunakan untuk menentukan persentase  penghambatan  polimerisasi  hem.  Kadar β - hematin  senyawa  uji  dibandingkan  dengan  kadar β - hematin kontrol negatif untuk menentukan persentase penghambatan polimerisasi hem senyawa uji.
Berdasarkan data Tabel 3 dapat dilihat bahwa rata- rata  persen  penghambatan  antara  fraksi  etil  asetat batang C.  Tomentosa dengan  kontrol  positif  klorokuin difosfat  memiliki  aktivitas  dalam  menghambat polimerisasi  hem.  NilaihIC 50 antara  fraksi  etil  asetat batang C.  Tomentosa dan  klorokuin  difosfat  berturut- turut  adalah  0,240 ± 0,018;  0,214±0,012.  Hal  ini  berarti pada  fraksibetil  asetat  batang C.  Tomentosa dengan konsentrasi  0,240  mg/mL  mampu  memberikan  persen penghambatan  50%.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka semakin  besar  aktivitasnya  terhadap  penghambatan polimerisasi  hem  (Syamsudin et  al .  2007).  Menurut Baelsman et  al .  (2000),  sampel  yang  mempunyai  nilai IC 50 lebih kecil dari nilai IC 50 klorokuin sulfat, yaitu 37,5 mM  (12  mg/mL),  maka  sampel  tersebut  dapat diketagorikan memiliki aktivitas penghambatan polimerisasi  hem.  Uji independent sampel  T- test
Tabel 2. Hasil Identifikasi Kromatografi Lapis Tipis Fraksi Etil Asetat Batang C. Tomentosa
Golongan Senyawa Uji Pereaksi Semprot Hasil Kesimpulan Alkaloidc Dragendorff Tidak terjadi perubahan warna - Flavonoidc Uap amonia Kuning + Antrakuinonv KOH-metanol 10% Violet merah + Saponinl Vanilin asam sulfat Hijau-kuning + Steroid & Terpenoidl Anisaldehid asam sulfat Merah-ungu + Taninf FeCl 3 Ungu kehitaman + Kromatogram Keterangan: Sampel      : Fraksi etil asetat batang C. tomentosa Valeton ex K. Heyne Fase diam  : Plat silika GF254 Fase gerak n-heksana p.a : etil asetat p.a (7 : 3 ) (v/v) a. Identifikasi Alkaloid b. Identifikasi Flavonoid c. Identifikasi Steroid-terpenoid d. Identifikasi Tanin e. Identifikasi Antraquinon f. Identifikasi Saponin
selanjutnya  dilakukan  untuk  mengetahui  IC 50 hantara fraksi etil asetat C. signifikansi nilai tomentosa Valeton ex  K.  Heyne  dengan  klorokuin  difosfat.  Hasil  uji  ini diperoleh  nilai  signifikan  0,111  yang  berarti  bahwa  H 0 diterima  sehingga  tidak  terdapat  perbedaan  yang bermakna ( p >0,05) pada IC 50 fraksihetil asetat batang C. Tomentosa dan  klorokuin  difosfat.  Hal  ini  menyatakan bahwa  fraksi  etil  asetat  batang C.  Tomentosa memiliki aktivitas  penghambatan  polimerisasi  hem  yang sebanding  karena  tidak  terdapat  perbedaan  yang bermakna dengan klorokuin difosfat.
Mekanisme  kerja  yang  diperkirakan  terjadi  sebagai aktivitas  penghambatan  polimerisasi  hem  yaitu  terjadi interaksi antara senyawa dalam sampel dengan sistem elektronik  hem  dan  terjadinya  ikatan  antara  ion  besi hem  dengan  senyawa-senyawa  yang  memiliki  gugus hidroksil yang terkandung dalam ekstrak. Hasil skrining fitokomia, fraksihetil asetat batang C. Tomentosa positif mengandung  golongan  senyawa  flavonoid,  tanin,
saponin,  dan  terpenoid.  Gugus  hidroksil  dari  senyawa golongan  tanin,  saponin,  dan  flavonoid  diperkirakan memiliki  aktivitas  penghambatan  polimerisasi.  Jenis flavonoid  yang  memiliki  gugus  hidroksil  diantaranya adalah  flavanol,  flavanon,  khalkon  (Eddy  &  Tambunan 2007) dan flavon (Wijono, 2003). Mekanisme aksi gugus hidroksil  dari  senyawa  ekstrak  memungkinkan  akan berikatan  dengan  ion  besi  hem  sehingga  mencegah perubahan molekul hem yang toksik menjadi hemozoin (Purwanto 2011; Wijaya et al . 2013).

## SIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian ini adalah fraksi etil asetat batang C.  Tomentosa asal  Kalimantan  Selatan mengandung  senyawa  flavonoid,  tanin,  antrakuinon, saponin,  dan  terpenoid  yang  memiliki  aktivitas penghambatan  polimerisasi  hem  dengan  nilai  IC 50 sebesar 0,240 ± 0,018 mg/mL.
Tabel 3. Nilai IC 50 , Rerata Persentase Penghambatan Polimerisasi dari Fraksi Etil Asetat Batang C. Tomentosa dan Klorokuin Sulfat
Sampel Konsentrasi (mg/mL) Rerata Kadar 𝜷 -hematin (µM) ± SD Rerata Penghambatan (%) ± SD IC 50 (mg/mL) ± SD Fraksi 20 1,928±0,071 98,507±0,055 0,240 ± 0,018 etil asetat 10 2,750±0,178 97,872±0,138 Batang 5 4,643±0,357 96,407±0,276 C.jtomentosa 2,5 8,321±0,464 93,560±0,359 ValetonjexlK. 1,25 14,964±1,107 88,419±0,857 Heyned 0,625 24,964±0,250 80,680±0,193 0,3125 70,464±3,393 45,467±2,625 Klorokuin 20 2,310±0,109 98,170±0,086 0,214±0,012 Difosfat 10 3,476±0,149 97,246±0,118 5 5,667±0,230 95,510±0,182 2,5 9,619±0330 92,379±0,261 1,25 15,738±0,918 87,531±0,728 0,625 27,024±0,723 78,589±0,572 0,3125 64,452±1,940 48,934±1,537
Ket: data disajikan dalam rata-rata + SD dengan jumlah n=3
Gambar 2 . Kurva Baku Hermatin
Aktivitas Penghambatan Polimerisasi Hem dan Skrining Fitokimia dari Fraksi Etil Asetat Batang Manuran ( Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne)

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  atas  segala bantuan  dan  dukungan  kepada  Kepala  Balai  Veterania Kalimantan Selatan, tim laboratorium Silfi, Usna, dan Lia.

## DAFTAR PUSTAKA
Arnida  &  Lingga,  2016,  Aktivitas  Penghambatan Polimerisasi  Hem  Fraksi n -Butanol  Akar  Manuran ( Coptosapelta Tomentosa Valeton Ex K. Heyne) Asal Kotabaru Kalimantan Selatan, Unpublish Arnida , Eka Rahmawaty Sahi, Sutomo, Fadlillaturrahma, 2017,  Aktivitas  Penghambatan  Polimerisasi  Hem Ekstrak  Etanol  Batang  Manuran  (Coptosapelta tomentosa  Valeton  Ex  K.Heyne)  Asal  Kotabaru Kalimantan  Selatan. Prosiding Seminar  Nasional Kefarmasian  dan  Publiksi  Ilmia,  Perkembangan Terapi  Obat  Herbal  Pada  penyakit  Degenaratif Banjarmasin  30  September  2017,  ISBN  978-602- 50258-0-8.
Arnida. 2015. Isolasi dan Uji Aktivitas Antiplasmodium In Vitro Senyawa  Aktif  dari  Umbi  Hati  Tanah (Angiopteris  evecta). Disertas i,  Program  Pasca Sarjana  Program  Studi  Ilmu  Farmasi,  Universitas Gajah Mada, Yogyakarta.
Azhari  A.H.  2016.  Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa Antioksidan  dari  Buah  Kasuri  ( Mangifera  casturi Kosterm.) Skripsi . Program Studi Farmasi, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru.
Baelsmans,  R.,  E.  Deharo,  V.  Munoz,  M.  Sauvain  &  H. Ginsburg. 2000. Experimental Conditions for Testing the  Inhibitory  Activity  of  Chloroquine  on  the Formation of ß -Hematin, Experimental Parasitology . 42 : 55-60.
Basilico,  N.,  E.  Pagani,  D.  Monti,  P.  Olliaro,  &  D. Taramelli.  1998.  A  Microtitre-Based  Method  for Measuring  the  Haem  Polymerization  Inhibitory Activity  (HPIA)  of  Antimalarial  Drugs. Journal  of Antimicrobial Chemotherapy .42: 55 – 60.
Dinkes  Kabupaten  Banjar.  2012. Laporan  Tahunan Bidang  Kesehatan  Keluarga  Tahun  2012 .  Seksi  KIA. Kabupaten Banjar.
Eddy, S. & R.S. Tambunan. 2007. Isolasi dan Identifikasi Senyawa Golongan Flavonoid dalam Fraksi n -Butanol dari  Ekstrak  Metanol  Daun  Sidaguri. Jurnal  Biologi Farmasi
Gandjar, I. G. & Rohman, A. 2013. Kimia Farmasi Analisis . Pustaka Pelajar, Yogyakarta.
Hakim,  L.  2011.  Malaria  :  Epidemiologi  dan  Diagnosis.
Aspirator . 3 : 107-116.
Purwanto.  2011.  Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa Penghambat  Polimerisasi  Hemdari  Fungi  Endofit Tanaman Artemisia  annua  L . Tesis .  Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Syamsudin, Supargiyono, S. Wahyuono, P. Simanjuntak, &  Mustofa.  2013.  Heme  Polymerization  Inhibitory Activities  of Xanthone  from G.  Parvifolia (Miq)  Miq Stem  Bark  as  An  Antimalarial. Asian  Journal  of Chemistry. 25 : 1-4.
Tanaya, V., R. Retnowati & Suratmo. 2015. Fraksi Semi Polar Dari  Daun  Mangga  Kasturi  ( Mangifera  casturi Kosterm ). Kimia Student Journal .1: 778-784. Tiwari,  Prashant.,  B.  Kumar.,  M.  Kaur.,  G.  Kaur,  &  H. Kaur. 2011. Phytochemical Screening and Extraction: A  Review. International  Pharmaceutica  Scienca . 1 : 98-106.
Wahyono,  Pudjono  &  P.  Widyati.  2010.  Uji  Aktivitas Senyawa  AntiPlasmodium  dari  Fungi  Endofit Tanaman Artemsia  annua L. Majalah  Farmasi Indonesia . 21: 230-235.
Wijaya,  J.,  J.  Salenussa&  J.  Marantika.  2013.  Potensi Ekstrak  Metanol  Batang  Kapur  ( Harmsiopanax aculeatus Harms)  sebagai  Obat  Antimalaria. Jurnal Kimia . 1-9.
Wijono,  S.H.  2003.  Isolasi  dan  Identifikasi  Flavonoid pada  Daun  Katu  ( Sauropus  adrogynus (L.)  Merr). Makara, Sains. 2 : 52-64.