UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK KULIT BUAH DELIMA MERAH ( Punica granatum L.) TERHADAP PERTUMBUHAN ( Vibrio cholera )
Ferdinan M. Yunus , Sonya Titin Nge, Alan Ch. Sabuna Program Studi Pendidikan Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Kristen Artha Wacana Kupang – NTT
Coressponding Author : sonyatitin_nge@yahoo.com

## ABSTRAK
Kolera  adalah  penyakit  infeksi  saluran  usus  yang  bersifat  akut  dan  disebabkan  oleh  bakteri Vibrio cholerae .  Bila  bakteri  ini  mencemari  makanan  dan  terkonsumsi  dalam  jumlah  yang  banyak,  maka  dapat menyebabkan  penyakit  diare.  Upaya  mencegah  penyakit  diare  yaitu  salah  satu  alternatif  untuk  mengatasi resistensi antibiotik  yang  berpotensi mengobati diare  adalah  kulit  buah  delima merah. Tujuan  penelitian untuk mengetahui pengaruh ekstrak  kulit  buah  delima merah  dan  konsentrasi  yang  efektif  ekstrak  kulit  buah  delima merah  terhadap  pertumbuhan Vibrio  cholerae .  Uji  antibakteri  dilakukan  dengan  metode  difusi  cakram  kertas. Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metode  Eksperimen,  yang  terdiri  dari  5  perlakuan  A0=  0 (kontrol),  A1=  25  mg/ml,  A2=  50  mg/ml,  A3=  75  mg/ml  dan  A4=  100  mg/ml  dan  3  kali  ulangan.  Hasil pengamatan  dianalisis  secara  statistik  menggunakan  analisis  variansi  (ANOVA)  satu  jalur  dengan  taraf signifikansi  5%.  Analisis  statistik  dilakukan  dengan  menggunakan  program  SPSS  versi  16.0.  Hasil  penelitian menunjukan  bahwa  adanya  pengaruh  ekstrak  kulit  buah  delima  merah  terhadap  pertumbuhan Vibrio  cholera dan  efektif konsentrasi 100 mg/ml dan  dapat  di  lihat  pada  nilai  signifikan menunjukan 0,00  dalam  hal  ini  lebih kecil dari pada 0,05 (0,00 ≤0,005) yang artinya ada perbedaan antara kontrol dengan perlakuan  A1, A2, A3 dan A4.  Sehingga dibuktikan dengan terbentuknya diameter rata-rata zona  bening pada setiap konsentrasi ekstrak kulit buah delima merah secara berturut-turut yaitu: 25 mg/ml = 6,7 mm, 50 mg/ml = 7,3 mm,75 mg/ml = 8,0 mm dan 100 mg/ml = 11,3 mm.
Kata kunci : Aktivitas antibakteri , Punica granatum L, Vibrio cholerae .

## ABSTRACT
Cholera  is  an  infectious  disease  acute  intestinal  tract  and  caused  bybacteria  Vibrio  cholerae.  If  this bacteria  contaminates  food  and  is  consumed  in  large  amounts,  it  can  cause  diarrhea.  Efforts  to  prevent diarrhea, which is one alternative to overcome antibiotic resistance that has the potential to treat diarrhea, is the skin of red pomegranates. The aim of the study was to determine the effect of red pomegranate skin extract and effective  concentration  of  red  pomegranate  peel  extract  on  the  growth  of  Vibrio  cholerae.  Antibacterial test  is done  by  paper  disk  diffusion  method.  The  method  used  in  this  research  is  the  experimental  method,  which consists of 5 treatments A0 = 0 (control), A1 = 25 mg / ml, A2 = 50 mg / ml, A3 = 75 mg / ml and A4 = 100 mg / ml and 3 repetitions. Observations were statistically analyzed usinganalysis one-way ANOVA with a significance level of 5%. Statistical analysis was performed using the SPSS version 16.0 program. The results showed that the  effect of  red  pomegranate peel extract ongrowth  Vibrio cholera and  effective concentration of  100  mg  /  ml and  can  be  seen  at  a  significant  value  shows  0.00  in  this  case  smaller  than  0.05  (0.00 ≤0.005) which  means there is  a difference between the control with the treatment of A1, A2, A3 and  A4. So that is  evidenced by  the formation  of  the  average  diameter  of  the  clear  zone  at  each  concentration  of  red  pomegranate  skin  extract, respectively: 25 mg / ml = 6.7 mm, 50 mg / ml = 7.3 mm, 75 mg / ml = 8 , 0 mm and 100 mg / ml = 11.3 mm.
Keywords: Antibacterial activity,  Punica granatum L, Vibrio cholerae.

## PENDAHULUAN
Kolera  adalah  penyakit  infeksi  saluran  usus  yang  bersifat  akut  dan  disebabkan  oleh  bakteri Vibrio  cholerae .  Kolera  dapat  menular  sebagai  penyakit  yang  bersifat  epidemik.  Meskipun  sudah banyak  penelitian berskala besar  dilakukan, namun  penyakit  ini  tetap  menjadi suatu  tantangan  bagi dunia  kesehatan.  Menurut  pendataan  Dinas  Kesehatan  Provinsi  Nusa  Tenggara  Timur,  jumlah penderita penyakit diare di Kota Kupang dari tahun 2014 sampai 2016 menunjukan ada peningkatan kasus penderita penyakit diare, dimana jumlah penyakit pada tahun 2014 berjumlah 8.134 jiwa, pada tahun 2015 berjumlah 8.365 jiwa  dan  pada tahun 2016 yaitu  8.609  jiwa.  Peningkatan penyakit diare seharusnya diimbangi dengan pelayanan yang semakin baik dari waktu ke waktu. Kondisi lingkungan yang  kurang  dijaga  kebersihannya  sangat  berpengaruh  secara  signifikan  pada  tingkat  keseahatan masyarakat Kota Kupang yang mengalami masalah infeksi saluran pencernaan akibat bakteri patogen.
Penyakit kolera ditandai oleh terjadinya diare yang disertai oleh muntah-muntah yang akut dan hebat sebagai akibat dari enterotoksin (zat racun) yang dihasilkan bakteri tersebut. Bentuk gejala klinis yang  khas  pada  penderita  adalah  dehidrasi,  berlanjut  dengan  rejatan  hipovolemik  dan  asidosis metabolik yang terjadi dalam waktu singkat akibat diare sekretorik. Vibrio cholerae merupakan bakteri gram-negatif,  bakteri  ini  dapat  tumbuh  pada  pH  yang  sangat  tinggi  (8,5-9,5)  dengan  suhu  untuk pertumbuhan  yang  berkisar  antara  18  sampai  37oC. Vibrio  cholerae adalah  salah  satu  mikroba penyebab  penyakit  yang  sering  ditemukan pada  makanan (Siagan, 2002). Bila bakteri ini mencemari makanan dan terkonsumsi dalam jumlah yang banyak, maka dapat menyebabkan penyakit diare.
Upaya  mencegah  penyakit  diare,  dilakukan  dengan  pemberian  antibiotik  seperti  ampicilin, kanamisin.  Namun  tidak  semua  obat  kimia  tersebut  dapat  dijangkau  oleh  masyarakat  khususnya masyarakat pedesaan, karena faktor ekonomi, sosiologi, maupun efek samping yang dapat membunuh normal  flora (mikroba  yang  secara  alamiah  menghuni  tubuh  manusia).  Oleh   karena  itu,   selain pengobatan  obat  modern,  salah  satu alternatif untuk mengatasi masalah resistensi antibiotik  yaitu penggunaan tanaman obat tradisional dianggap relatif lebih aman dibandingkan dengan obat sintesis, hal  ini  dikarenakan tanaman atau  bahan   alam  lebih mudah  diperoleh,  lebih  murah  dan  juga  tidak memiliki  efek  samping  serta  tingkat  toksisitasnya  jauh  lebih rendah.
Kekayaan jenis tanaman herbal di Indonesia sangat melimpah, termasuk di dalamnya adalah tanaman  sumber  daya  alam  yang  berpotensi  untuk  mengobati  diare.  Salah  satu  tanaman  yang berpotensi  untuk  mengobati  diare  adalah  buah  delima  merah.  Buah  delima  merah  mengandung senyawa flavonoid  dan  tannin. Berdasarkan penelitian fitokimia  yang  dilakukan oleh  Purwani  (2015) terhadap  kulit  buah  delima  merah  dan  hasilnya  menunjukan  bahwa  kulit  buah  delima  merah mengandung  senyawa  flavonoid  dan  tanin  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri,  dan  ada  juga  yang mengatakan bahwa mengandung senyawa metabolit sekunder berupa flavonoid, saponin dan tannin, berdasarkan penelitian uji skrining fitokimia oleh Muthmainnah (2017).
Dari  penelitian  terdahulu  yang  dilakukan  oleh  Sundari  dan  Nuratmi,  (1999)  efek  antibakteri ekstrak  alkohol  70%  kulit  buah  delima  ( Punica  granatum L . )  terhadap  bakteri Vibrio dengan menggunakan konsentrasi  137,6  mg/ml  bahwa,  bahan  ekstrak  menunjukan  hasil  positif,  sehingga peneliti  melakukan  penelitian  lanjutan  dengan  perbandingan  menggunakan  pelarut  etanol  96  % dengan  variasi konsentrasi mulai  dari  25,  50,  75  dan 100  dalam  satuan  mg/ml,  dimana  lebih  kecil dari  konsentarsi  yang  dilakukan  oleh  peneliti  sebelumnya,  dari penelitian  ini  dengan  menggunakan pelarut  96%  zat  aktif  sehingga  mendapatkan  senyawa  yang  mempunyai  toksisitas  kuat  untuk menghambat pertumbuhan bakteri dari ekstrak kulit buah delima merah.
Dari  uraian  di  atas  maka  penulis  telah  melakukan  penelitian  dengan  judul  :  "Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Kulit  Buah  Delima  Merah  ( Punica  granatum L.)  Terhadap  Pertumbuhan Vibrio cholerae ". Tujuan dalam penelitian  ini  adalah  Untuk  mengetahui  pengaruh  ekstrak dan konsentrasi efektif  ekstrak   kulit  buah  delima merah ( Punica granatum L.) terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini telah dilaksanakan pada bulan Maret sampai Mei 2018, bertempat di Laboratorium Biologi Universitas Kristen Artha Wacana Kupang.

## Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini adalah timbangan analitik, oven, pisau, blender, rotary  evaporator,  erlenmeyer  250  ml,  gelas  ukur,  beaker  gelas,  tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi, mikropipet,  autoclave,  batang  L,  cawan  petri,  jarum  ose, hot  plate  with  magnetic  stirer ,  pinset, inkubator, vortex, corong kaca, penggaris berskala, log book dan kamera.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  air,  alkohol,  aquadest  steril,  Nutrient  Agar (NA), kapas steril, alumnium foil, etanol 96%, biakan bakteri Vibrio cholerae, ekstrak kulit buah delima merah ( Punica granatum L . ), kertas cakram, kertas whatman dan kertas label.

## Metode Penelitian
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metode  Eksperimen,  yang  terdiri  dari  5 perlakuan dan 3 ulangan. Dengan perlakuan sebagai berikut : A0 : Tanpa pemberian ekstrak kulit buah delima merah ( Punica granatum L . ) 0 mg/ml (kontrol) A1 : Pemberian ekstrak kulit buah delima merah ( Punica granatum L . ) 25 mg/ml A2 : Pemberian ekstrak kulit buah delima merah ( Punica granatum L . ) 50 mg/ml A3 : Pemberian ekstrak kulit buah delima merah ( Punica granatum L . ) 75 mg/ml A4 : Pemberian ekstrak kulit buah delima merah ( Punica granatum L . ) 100 mg/ml

## Prosedur Penelitian 1.  Tahap persiapan Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan dalam  penelitian ini  disiapkan dan  dicuci  bersih  dengan  air  mengalir dan dikeringkan kemudian disterilisasi dengan menggunakan oven  dengan suhu 180oC selama ±  1  jam. Sedangkan bahan yang digunakan adalah kulit buah delima merah ( Punica granatum L . ) yang diperoleh dari lingkungan sekitar Manulai I  kecamatan  Kupang  Barat,  diambil  sebanyak  400  gram,  dan  bakteri Vibrio  cholerae diperoleh  dari  BPOM Kupang (Badan Pengawasan Obat dan Makanan).
2.  Tahap pembuatan ekstrak kulit buah delima merah ( Punica granatum L . ) Kulit buah delima merah ( Punica granatum L . ) segar dicuci dan dikeringkan. Setelah kering dibuat serbuk  halus  dengan  menggunakan  blender  serbuk  kulit  buah  delima  merah  ( Punica  granatum L . ) dimaserasi dengan pelarut etanol 96%  sebanyak 1000 ml dan diamkan selama ±24 jam. Serbuk kulit buah  delima merah  ( Punica  granatum L . )  yang  sudah  dimaserasi  disaring  dengan  menggunakan kertas  whatman  sehingga  memperoleh filtrat,  selanjutnya filtrat tersebut dimasukan ke  dalam  rotary evaporator  dengan  suhu  40oC,  selama  ±2  jam  sehingga  memperoleh  ekstrak  pekat  sebanyak  30,8 gram. Kemudian ekstrak diencerkan dengan aquadest sehingga memperoleh konsentrasi 0 mg/ml, 25 mg/ml, 50 mg/ml, 75 mg/ml, dan 100 mg/ml.

## 3.  Tahap pembuatan medium Nutrient Agar (NA)
Timbang sebanyak 20 gram Nutrient Agar (NA) dan dimasukan kedalam Erlenmeyer, kemudian ditambahkan  aquadest  dengan  volume  1  liter.  Selanjutnya  dipanaskan  di  atas hot  plate sehingga larutan homogen.  Untuk  pembuatan  agar  miring,  masukan  NA  kedalam  5  tabung  reaksi  dengan masing-masing  sebanyak  5  ml  kemudian  tabung  di  tutup  dengan  kapas  dan  disterilisasi  dengan autoclave (121oC, selama 15 menit). Setelah disterilisasi tabung segera di miringkan pada rak tabung sampai dingin. Untuk pembuatan Medium NA setelah dilakukan sterilisasi, medium larutan agar dalam erlenmeyer kemudian secara aseptik dituang ke dalam cawan petri dengan masing-masing petridish ± 15 ml dan diamkan pada suhu ruang.

## 4.  Tahap Uji Antibakteri
Menginokulasi isolat bakteri Vibrio cholerae pada 4 agar miring dan di inkubasi pada  suhu 37 o C selama 48 jam. Setelah mendapat biakan murni bakteri Vibrio cholerae, ambil bakteri tersebut dari agar miring ke dalam tabung reaksi yang berisikan aquadest dengan menggunakan jarum ose kemudian di vortex  setelah  itu  di  pindahkan ke 5  petridish steril (agar plate) dengan mengunakan mikropipet dan metode spread plate . Kemudian encerkan ekstrak kulit buah delima merah ( Punica granatum ) dengan
konsentrasi 0  mg/ml,  25  mg/ml,  50  mg/ml,  75  mg/ml,  dan  100  mg/ml.  yang  mana  setiap  perlakuan terdapat  3  ulangan, kemudian direndam kertas  cakram steril  (3  mm),  selama  15  menit.  Selanjutnya, meletakkan kertas cakram tersebut dengan mengunakan pinset diatas inokulum bakteri dalam petridish yang mana totalnya terdapat 5 perlakuan termasuk kontrol dan 3 ulangan. Kemudian menginkubasikan pada suhu 37o  C  selama 24  jam. Kemudian mengamati dan mengukur lebar  diameter  zona  hambat  ekstrak  kulit  buah  delima  merah  ( Punica  granatum L . )  terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholera yang ditandai dengan adanya zona bening.

## Parameter yang diukur
Adapun parameter yang akan diamati dalam  penelitian ini  yaitu diameter zona hambat ekstrak kulit buah delima merah ( Punica granatum L . )  terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae berupa daerah bening pada permukaan medium.

## Teknik Analisis  Data
Analisis  data  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  analisis  deskriptif  kuantitatif  dengan didapatkan  data  berupa  diameter  zona  bening  yang  terbentuk  pada  cawan  petri  berisi  NA  yang terinokulasi bakteri Vibrio cholerae yang telah diberi ekstrak kulit buah delima merah ( Punica granatum L . ). Aktivitas antibakteri dapat digolongkan berdasarkan besarnya zona hambat yang terbentuk akibat pengaruh ekstrak kulit buah delima merah dengan menggunakan pelarut etanol 96 %. Susanto. dkk , (2012) menyebutkan kategori zona hambat dapat diketahui pada Tabel 1.
Tabel 1. Kategori Diameter zona Hambat
Diameter Kekuatan Daya Hambat ≤ 5mm Lemah 6 - 10 mm Sedang 11 – 20 mm Kuat ≥ 21 mm Sangat kuat
Diameter zona hambat diukur dengan menggunakan rumus (Torar dkk, 2015) :
𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑧𝑜𝑛𝑎 ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡 = (DV − DC) + (DH − DC)
2

## Keterangan
DV:   Diameter vertikal DH:   Diameter horisontal DC:   Diameter cakram Data  hasil  pengamatan  dianalisis  secara  statistik  menggunakan  analisis  variansi  ANOVA  satu  jalur dengan  taraf  signifikansi  5%.  Analisis  statistic  dilakukan  dengan  menggunakan  program  SPSS  versi 16.0.  ANOVA  merupakan  suatu  uji  yang  dilakukan  menurut  distribusi  F.  ANOVA  dimaksudkan  untuk menguji pengaruh faktor dari setiap perlakuan terhadap data hasil percobaan (Hanafiah, 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kulit  buah  delima  terhadap  pertumbuhan  bakteri Vibrio cholera dimulai dari tanpa pemberian ekstrak sebagai kontrol, dan variasi konsentrasi yang digunakan 25  mg/ml,  50  mg/ml, 75 mg/ml  dan  100  mg/ml.  Berdasarkan  data  rekapitulasi  pada  tabel  2,  pada konsentrasi 0 mg/ml (kontrol) menunjukkan tidak adanya zona bening yang terbentuk di sekitar kertas cakram.  Hal  ini  disebabkan  karena  aquadest  steril  yang  digunakan  tidak  mengandung  senyawa antibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan sel bakteri Vibrio cholera.
Tabel 2. Hasil Pengukuran zona bening bakteri Vibrio cholerae .
No Konsentrasi ekstrak kulit buah delima (mg/ml) Diameter zona bening (mm) Jumlah (mm) Rata-rata (mm) U 1 U 2 U 3 1 0 0 0 0 0 0 2 25 7 6 7 20 6,7 3 50 7 7 8 22 7,3
4 75 8 7 9 24 8,0 5 100 11 11 12 34 11,3
(Sumber : Data Olahan Penulis, 2018)
Pada  penambahan  ekstrak  kulit  buah  delima  dengan  konsentrasi  25  mg/ml  memiliki kemampuan untuk menghambat pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dengan rata-rata diameter zona bening  6,7  mm  sehingga  dinyatakan  memiliki  aktivitas  penghambatan  sedang.  Suatu  senyawa digolongkan  memiliki  aktivitas  penghambatan  sedang  jika  pada  hasil  pengujian  menunjukan pembentukan zona bening berkisar pada 6 sampai 10 mm (Susanto dkk , 2012).
Hasil pengaruh ekstrak kulit buah delima terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dengan penambahan  ekstrak  pada  konsentrasi  75  mg/ml   menunjukkan  adanya  zona  bening  lebih  besar dibanding konsentrasi 25 mg/ml dan 50 mg/ml. Aktivitas penghambatan ekstrak kulit buah delima pada konsentrasi  75  mg/ml  dikategorikan memiliki  aktivitas  penghambatan sedang,  karena  menghasilkan zona bening rata-rata pada kisaran  8,0  atau  ≤  10  mm.  Selanjutnya  pada  penambahan  ekstrak  kulit buah  delima  dengan  konsentrasi  100  mg/ml memiliki kemampuan untuk  menghambat pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae dengan rata-rata diameter  zona  bening  yaitu  11,3  mm,  sehingga  dinyatakan memiliki aktivitas penghambatan kuat atau ≥  10 mm. Karena pada hasil pengujian pengaruh ekstrak kulit buah delima terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholera menunjukan pembentukan zona bening berkisar pada 11 mm sampai 20 mm (Susanto dkk ., 2012).
Berdasarkan Hasil  analisis  ANOVA  satu  jalur   (SPSS  16.0),  yang  di  lanjut  dengan  LSD  nilai signifikan  menunjukan 0,00  dalam  hal  ini  nilai  signifikan lebih  kecil  dari  pada  0,05 (0,00<0,05) yang artinya ada perbedaan antara perlakuan dengan kontrol, perlakuan A1 dan perlakuan A2  menunjukan nilai signifikan 0,226. Dalam hal ini 0,226   lebih besar dari pada 0,05 (0,226>0,05) yang artinya tidak ada perbedaan antara perlakuan A1 dan perlakuan A2, perlakuan A1 dan perlakuan A3 menunjukan nilai signifikan 0,27. Dalam hal ini 0,27 lebih besar  dari pada 0,05 (0,27>0,05) yang artinya tidak ada perbedaan antara perlakuan A1 dan perlakuan A3, perlakuan A1 dan perlakuan A4 menunjukan nilai signifikan 0.00. Dalam hal ini 0.00 lebih kecil dari pada 0,05 (0.00<0,05) yang artinya ada perbedaan antara perlakuan A1  dan  perlakuan A4,  perlakuan A2 dan  perlakuan A1 menunjukan  nilai  signifikan 0,226. Dalam hal ini 0,226 lebih besar dari pada 0,05 (0,226>0,05) yang artinya tidak ada perbedaan antara perlakuan A2  dan  perlakuan A1,  perlakuan A2  dan  perlakuan A3  menunjukan nilai signifikan 0,226. Dalam hal ini 0,226 lebih besar dari pada 0,05 (0,226>0,05) yang artinya tidak ada perbedaan antara perlakuan A2  dan  perlakuan A3,  perlakuan A2  dan  perlakuan A4  menunjukan nilai signifikan 0.00. Dalam  hal  ini  0.00  lebih  kecil  dari  pada  0,05  (0.00<0,05)  yang  artinya  ada  perbedaan  antara perlakuan  A2  dan  perlakuan  A4,  selanjutnya  perlakuan  A3  dan  perlakuan  A1  menunjukan  nilai signifikan  0,027.  Dalam  hal  ini 0,027 lebih besar dari pada 0,05 (0,027>0,05) yang artinya tidak ada perbedaan antara perlakuan A3 dan perlakuan A1,  perlakuan A3  dan  perlakuan A2  menunjukan nilai signifikan  0,226.  Dalam  hal  ini  0,226  lebih besar dari pada 0,05 (0,226>0,05) yang artinya tidak ada perbedaan antara perlakuan A3 dan perlakuan A2, perlakuan A3 dan perlakuan A4 menunjukan nilai signifikan 0.00. perlakuan A3 dan perlakuan A4 menunjukan nilai  signifikan  0.00.  Dalam  hal  ini  0.00 lebih  kecil  dari  pada  0,05  (0.00<0,05)  yang  artinya  ada  perbedaan  antara  perlakuan  A3  dan perlakuan A4, Dalam  hal ini  0.00  lebih kecil dari  pada  0,05 (0.00<0,05) yang  artinya ada perbedaan antara  perlakuan  A3  dan  perlakuan  A4,  sedangkan  pada  perlakuan  A4  perlakuan  A1,  A2,  dan perlakuan  A3  menunjukan  nilai  signifikan  0.00.  Dalam  hal  ini  0.00  lebih  kecil    dari  pada  0,05 (0.00<0,05) yang artinya ada perbedaan antara perlakuan A1, A2, A3 dan perlakuan A4.
Berdasarkan data rekapitulasi pada Tabel 2, dari setiap variasi konsentrasi maka dapat dilihat diameter zona bening pada gambar 1.

## A                                    B                                    C                                     D E
Gambar  1.  Diameter  zona  bening  pada  setiap  konsentrasi  ;  a).  Kontrol  (0mg/ml);  b).  Konsentrasi (25mg/ml); c).Konsentrasi (50mg/ml) ; d). Konsentrasi (75mg/ml); e). Konsentrasi (100mg/ml) dan hasil gambar ulangan 1 dari setiap konsentrasi.
Berdasarkan gambar  1  dan  hasil  rekapitulasi data  pada  tabel  2,  pengaruh ekstrak kulit  buah delima merah  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri Vibrio  cholerae dan  terlihat  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak  maka  semakin  besar  zona  bening  yang  di  terbentuk  pada  sekitar  kertas cakram . Hal ini pula disebabkan kulit  buah  delima merah  mempunyai kandungan fitokimia (Purwani, 2015).  Sama  hal  dengan  penelitian uji skrining fitokimia oleh Muthmainnah (2017) yang mengatakan bahwa  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  berupa  tannin,  saponin  dan  flavonoid  yang menunjukkan bahwa kulit buah delima memiliki aktivitas antibakteri.
Pengaruh  ekstrak  kulit  buah  delima  merah  telah  terbukti  memiliki  potensi  antibakteri  dalam spektrum yang luas, yaitu dapat menghambat pertumbuhan bakteri gram negatif, karena bakteri Vibrio cholerae termasuk  gram  negatif  dinding  selnya  tersusun  atas  peptidoglikan  sedang  dan  komponen khusus berupa lipoprotein, selaput luar dan lipopolisakarida. Dengan mekanisme kerja senyawa tanin yang  terkandung  dalam  kulit  buah  delima  merah  diperkirakan  mempengaruhi  hambatan  terhadap pertumbuhan  bakteri Vibrio  cholerae. Senyawa  tanin  juga  merusak  terbentuknya  jembatan  silang komponen  penyusun  peptidoglikan  pada  sel  bakteri,  sehingga  lapisan  dinding  sel  tidak  terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel tersebut dan mekanisme kerja antibakteri senyawa tanin dalam  konsentrasi  rendah  mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri,  sedangkan  pada  konsentrasi tinggi  senyawa  tanin  mampu  bekerja  sebagai  antibakteri  dengan  cara  mengkoagulasi  atau menggumpalkan  enzim  sehingga  terbentuk  ikatan  yang  stabil  dengan  protein  dan  mengeliminasi toksin (Lusi, 2016).
Mekanisme  kerja  antibakteri  senyawa  saponin  yaitu  zat  aktif  yang  dapat  meningkatkan permeabilitas membran sehingga  terjadi  hemolisis  sel.  Apabila  saponin  berinteraksi dengan  bakteri, maka bakteri tersebut akan mengalami lisis atau pecah. Senyawa saponin juga dapat bekerja sebagai antibakteri  yang  merusak  membran  sitoplasma  dan  membunuh  sel.  Sedangkan  senyawa  flavonoid diduga mekanisme kerjanya mendenaturasi protein sel bakteri dan merusak membran sel tanpa dapat diperbaiki  lagi  dan  menyebabkan terjadinya  kerusakan  permeabilitas dinding  sel  bakteri,  mikrosom, dan lisosom sebagai hasil interaksi antara flavonoid dengan DNA bakteri.
Antibakteri  yang  terdapat  pada  ekstrak  kulit  buah  delima  merah  yaitu  menghambat  atau merusak pembentukan dinding  sel  bakteri Vibrio cholerae dengan  mencegah bergabungnya asam  N- asetilmuramat ke dalam struktur peptidoglikan. Penghambatan biosintetik peptidoglikan menyebabkan dinding  sel  bakteri Vibrio cholerae lemah dan  dapat  pecah karena tidak  dapat menahan tekanan  dari sitoplasma. Sehingga mekanisme kerja dari ekstrak kulit buah delima merah memiliki daya sebagai zat antibakteri  yang  besar  dan      bersifat  bakteriostatis atau  kemampuan menghambat pertumbuhan dan reproduksi bakteri (Lusi, 2016).
Mekanisme  kerja  antibakteri  dari  flavonoid  yaitu  fenol  yang  cenderung  mengikat  enzim, sehingga  mengganggu  proses  metabolisme  sel  bakteri.  Antibakteri  terikat  pada  reseptor  sel  yaitu enzim  transpeptidase,  kemudian  terjadi  reaksi  transpeptidase  sehingga  sintesis  peptidoglikan terhambat  dan  mekanisme  diakhiri  dengan  penghentian  aktivitas  penghambat enzim  autolisis  pada dinding sel (Lusi, 2016).
Kulit  buah  delima  merah  memiliki  daya  hambat  yang  kuat  terhadap  pertumbuhan  bakteri Vibrio cholerae , terbukti dengan   rata-rata diameter   zona bening yang terbentuk pada sekeliling kertas cakram mencapai 11,3 mm pada konsentrasi 100mg/ml. Hasil penelitian pengaruh ekstrak kulit buah delima  merah  terhadap  pertumbuhan  bakteri Vibrio  cholera mempunyai  perbedaan  dengan penelitian  oleh  Sundari  dan Nuratmi (1999)  uji  efek  antibakteri ekstrak  kulit  buah  delima  terhadap bakteri penyebab diare dan uji toksisitas akut. Hal ini dibuktikan dengan rata-rata diameter zona bening yang  terbentuk  dari  setiap  konsentrasi  ekstrak  kulit    buah    delima,  dimana  dalam    penelitian  ini diameter  zona  bening  yang  lebih  besar  dan  efektif  pada konsentrasi 100 mg/ml yaitu 11,3 mm. Hal  ini  menunjukkan bahwa  dengan  konsentrasi  100  mg/ml  ekstrak  kulit  buah delima memiliki daya hambat yang kuat terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholera.

## PENUTUP

## Simpulan
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa ekstrak kulit buah delima merah pada konsentrasi 25 mg/ml hingga 75 mg/ml menunjukkan aktivitas antibakteri kategori sedang, sedangkan 100  mg/ml  menunjukkan  aktivitas  antibakteri  kategori  kuat  terhadap  pertumbuhan  bakteri Vibrio
cholerae, dan konsentrasi ekstrak kulit buah delima merah yang efektif terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae adalah 100 mg/ml. Sehingga semakin tinggi konsentrasi ekstrak kulit buah delima merah maka semakin besar diameter zona hambat pada pertumbuhan bakteri Vibrio cholerae .

## Saran
Berdasarkan  kesimpulan  di  atas  maka  disarankan  ekstrak  kulit  buah  delima  merah  untuk dapat digunakan sebagai zat antibakteri dan disarankan untuk melakukan penelitian lanjutan terhadap jenis bakteri lain misalnya, Salmonella sp, Bacillus cereus dan Escherichia coli.

## DAFTAR PUSTAKA
Dinas kesehatan. 2017. Data penderita penyakit diare . Kota Kupang. Provinsi NTT.
Hanafiah. 2012. Kemas Ali Rancangan Percobaan ( Teori Dan Aplikasi ) . Edisi ketiga. Jakarta : PT Rajagranfino Persada.
Lusi. 2016. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Kelor ( Moringa oleifera L . ) Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus. Jurnal  Ilmiah  Farmasi –UNSRAT  Vol.  5  No.  2 MEI  2016  ISSN  2302 –2493.
Muthmainnah B.  2017. Uji  Skrining  Fitokimia Senyawa  Metabolit  Sekunder  Dari  Ekstrak  Etanol Buah Delima ( Punica granatum L . ) Dengan Metode Uji Warna . Media Farmasi Vol. XIII. No. 2. November 2017
Purwani.  2015. Efek  Ektrak  Air  Kulit  Buah  Delima ( Punica  granatum L . ) Terhadap  Salmonella Typhimurium Secara In Vivo. Jurnal pustaka kesehatan. vol 3 (no.2).
Siagan.   2002. Mikroba   Patogen   Pada   Makanan   dan   Sumber   Pencemarannya .   Fakultas Kesehatan Masyarakat. Universitas Sumatera Utara.
Sundari dan Nuratmi. 1999. Efek Antibakteri Ekstrak Kulit Buah Delima ( Punica granatum L.) Terhadap Bakteri Penyebab Diare  Secara In  Vitro  Dan  Uji  Toksisitas  Akut. Jurnal Media  Litbangkes Edisi Khusus “Obat Asli Indonesia” Vol VIII No 3 & 4.
Susanto, Sudrajat dan Ruga. 2012 . Studi Kandungan Bahan Aktif Tumbuhan Meranti Merah ( Shrea leprosula Miq ) sebagai sumber senyawa antibakteri . Mulawarman scientifie 11(2):181-190
Torar  S.  S.  Toy,  Benedictus S.  Lampus  &  Bernat  S.  P.  Hutagalung. 2015. Uji  Daya  Hambat  Ekstrak Rumput  Laut  Gracilaria  sp  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri  Staphylococcus  aureus .  Universitas Sam Ratulangi Manado. Jurnal e-GiGi (eG). Volume 3, Nomor 1, Januari-Juni 2015.