## OPTIMALISASI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL 70% DAUN BINAHONG TERHADAP BAKTERI

## Staphylococcus aureus
I Putu Gede Adi Purwa Hita 1 , I Putu Riska Ardinata 2 , Zainal Firdaus Wardhana 3
1,2) Program Studi Farmasi Klinis, Fakultas Ilmu-Ilmu Kesehatan, Universitas Bali Internasional, Jl. Seroja Denpasar - Bali 80114
3) Program Studi Administrasi Rumah Sakit, Fakultas Ilmu-Ilmu Kesehatan,
Universitas Bali Internasional, Jl. Seroja Denpasar - Bali 80114
e-mail: 1) adipurwah.1@gmail.com
2) ardinata64@gmail.com
3) firdaus.unbi@gmail.com

## ABSTRAK
( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) memiliki kandungan flavonoid, alkaloid, tannin, dan  saponin  yang  berfungsi  sebagai  antibakteri  khususnya  pada  bagian  daun. Pengujian  aktivitas  antibakteri  daun  binahong  telah  dilakukan,  namun  belum didapatkan  hasil  yang  optimum  menggunakan  pelarut  ekstraksi  etanol  70%. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  optimum  dan pengaruh  peningkatan  konsentrasi  ekstrak  etanol  70%  daun  binahong  terhadap pertumbuhan Staphylococcus  aureus dalam  berberapa  konsentrasi  uji.  Daun binahong diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 70%. Diameter  zona  hambat  didapatkan  dengan  pengujian  menggunakan  metode difusi  cakram  dan  dianalisis  menggunakan  analisis  statistika.  Hasil  penelitian menunjukkan  ekstrak  mengandung  golongan  senyawa  flavonoid,  alkaloid, saponin,  dan  tannin.  Aktivitas  antibakteri  ekstrak  daun  binahong  menunjukkan hasil  signifikan  p-value<0,05  dari  uji  Kruskal  Wallis  dengan  diameter  zona hambat  pada  golongan  sedang  sampai  kuat.  Berdasarkan  hasil  penelitian  ini disimpulkan  bahwa  ekstrak  memiliki  karakteristik  ekstrak  yang  baik  dan mengandung  golongan  beberapa  golongan  senyawa  fitokimia.  Untuk  aktivitas antibakteri  didapatkan  konsentrasi  optimum  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol 70% daun binahong pada konsentrasi ekstrak 80% dengan daya hambat 12,85 mm dan  semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  maka  semakin  tinggi  aktivitas antibakterinya.
Kata  kunci:  Senyawa  Fitokimia,  Antibakteri, Staphylococcus  Aureus , Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis.

## ABSTRACT
(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) contains flavonoids, alkaloids, tannins, and saponins that  function  as  antibacterials,  especially  in  the  leaves.  Tests  of  antibacterial  activity  of binahong leaves have been carried out, but optimum results have not been obtained using 70% ethanol extraction solvent. This study aims to determine the optimum antibacterial activity and the effect of increasing the concentration of 70% ethanol extract of binahong leaves  on  the  growth  of  Staphylococcus  aureus  in  several  test  concentrations.  Binahong
leaves were extracted by maceration method using  70% ethanol solvent. The diameter of the inhibition zone was obtained by testing using the disc diffusion method and analyzed using  statistical  analysis.  The  results  showed  that  the  extract  contained  flavonoids, alkaloids,  saponins,  and  tannins.  Bactericidal  activity  of  binahong  leaf  extract  showed significant results of p-value <0.05 from the Kruskal Wallis test with the diameter of the inhibition zone in the moderate to strong group. This study concluded that the extract has good extract characteristics and contains several classes of phytochemical compounds. The optimum concentration of antibacterial activity of 70% ethanol extract of binahong leaves was obtained at 80% extract concentration with 12.85 mm inhibition and the higher the extract concentration, the higher the antibacterial activity.
Keywords: Phytochemical Compounds, Antibacterial, Staphylococcus Aureus, Anredera cordifolia (Ten.) Steenis.

## PENDAHULUAN
Penduduk di negara berkembang, termasuk Indonesia, paling sering menderita penyakit  infeksi  karena  bakteri  yang  berasal  dari  komunitas  atau  nosokomial. Bakteri  Staphylococcus  aureus,  yang  merupakan  bakteri  gram  positif  yang ditemukan  pada  40%  orang  yang  sehat,  adalah  penyebab  infeksi  bakteri  yang paling umum (Jawetz et al. , 2005). Bakteri Staphylococcus aureus yang sering kita temui dalam kehidupan sehari-hari terkadang dapat menyebabkan infeksi parah pada  hidung,  nasofaring,  orofaring,  mulut,  usus  besar,  kulit,  dan  traktus genitourinarius (Jawetz et al. , 2005). Infeksi bakteri ini berasal dari luka terbuka dan barang-barang yang terkena luka tersebut. Bahkan, karena peralatan medis seperti stetoskop digunakan pada pasien dengan berbagai kondisi dan memiliki kontak  langsung  dengan  kulit,  bakteri  ini  dapat  menyebabkan  infeksi nosokomial di rumah sakit (Nurseha, 2013).
Pilihan  terbaik  untuk  mengobati  infeksi  nasokomial  yang  disebabkan  oleh bakteri Staphylococcus  aureus adalah  penggunaan  terus  menerus  antibiotik.
Namun,  penggunaan  terus  menerus  antibiotik  dapat  menyebabkan  resistensi antibiotik,  yang  berarti  pengobatan  infeksi  dengan  antibiotik  yang  sama  tidak menunjukkan efisiensi yang tinggi (Amirah et al. , 2019). Penemuan senyawa baru sebagai  alternative  pengobatan  biasanya  didapatkan  dari  tanaman  obat tradisional. Salah satu tanaman obat tradisional yang sudah sering dimanfaatkan di  Indonesia  adalah  binahong.  Daun  binahong,  juga  dikenal  sebagai Anredera cordifolia (Ten.)  Steenis,  adalah  tanaman  tradisional  Indonesia  yang  digunakan secara empiris untuk mengobati berbagai penyakit (Samirana, 2016). Kandungan senyawa flavonoid dalam daun binahong memiliki kemampuan antibakteri pada
MEDFARM: Jurnal Farmasi dan Kesehatan, Vol. 12, No. 1, 2023, Hal, 58-66 e-ISSN : 2715-9957 p-ISSN: 2354-8487
pertumbuhan Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa (Sulistyarsi  dan Pribadi,  2018).  Selain  itu,  dalam  penelitian  tahun  2020  oleh  Hita et  al. menemukan  bahwa  sifat  antibakteri  ekstrak  etanol  70%  daun  binahong  dapat menghentikan  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus .  Namun  belum ditemukan  konsentrasi  optimum  ekstrak  etanol  70%  daun  binahong  dalam aktivitas antibakterinya pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus .

## METODOLOGI PENELITIAN

## Bahan
Simplisia  daun  binahong,  Nutrient  Agar  (Oxoid),  bakteri Staphylococcus  aureus , aquadestilata, etanol 70% (PT. Brataco), larutan saline (NaCl) steril, cakram disk, kloramfenikol, dan reagen untuk skrining fitokimia.

## Alat
Maserator,  rotary  evaporator  (IKA),  corong  Buchner  (Merk),  autoklaf  (GEA),
Biological Safety Cabinet (Biobase), timbangan analitik (Acic AD- 2100H), dan alat- alat gelas (Pyrex).

## Pembuatan ekstrak
1000  gram  simplisia  dari  daerah  Bangli  diekstraksi  menggunakan  metode maserasi selama 3 hari dengan pelarut etanol 70% sebanyak 5 liter dan dilakukan dua  kali  proses  remaserasi  dengan  2,5  liter  etanol  70%.  Sampai  ekstrak  kental diperoleh, filtrat dipekatkan dengan rotary evaporator pada suhu 50 °C.

## Evaluasi ekstrak dan Skrining Fitokimia
Metode  evaluasi  ekstrak  dalam  penelitian  ini  menggunakan  paduan  dalam Farmakope  Herbal  Indonesia  dan  Materia  Medika  seperti  pemeriksaan organoleptis, uji kadar air, uji kadar abu total, dan uji kadar abu tidak larut asam. Untuk  skrining  fitokimia,  senyawa  metabolit  sekunder  seperti  flavonoid, saponin,  alkaloid,  dan  tannin  diuji  secara  kualitatif.  Metode  skrining  fitokimia kualitatif  pada  penelitian  ini  mengacu  pada  metode  kualitatif  menggunakan reagen tertentu (Hita et al. , 2022).

## Uji aktivitas antibakteri
Sampel  uji  dalam  pengujian  aktivitas  antibakteri  daun  binahong  ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) menggunakan empat varian konsentrasi ekstrak uji yaitu 20%, 40%, 60%, dan 80% (b/v). Setelah bahan dan media telah siap, sampel uji
dalam  berbagai  konsentrasi  dan  kontrol  uji  kemudian  dijenuhkan  kedalam cakram  disk.  Cakram  disk  yang  telah  jenuh  diletakkan  pada  media  NA  yang sudah  diinokulasikan  dengan  bakteri Staphylococcus  aureus dan  dimasukkan kedalam inkubator selama 48 jam pada suhu 37°C (pengujian dilakukan dengan replikasi  4  kali).  Zona  hambat  yang  kemudian  dihasilkan  oleh  masing-masing sampel dan kontrol uji diukur diameternya dan dianalisis menggunakan analisis statistika.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Hasil krining Fitokimia Ekstrak Etanol 70% Daun Binahong
Golongan Senyawa Uji Pereaksi Kesimpulan Hasil Perubahan Flavonoid NaOH + Warna merah Alkaloid Mayer Dragendrof + Endapan putih Endapan jingga Saponin Aquadest + Terbentuk busa Tannin FeCl3 + Warna hijau kehitaman
Determinasi  daun  binahong  di  Lembaga  Ilmu  Pengetahuan  Indonesia  (LIPI)
Kebun  Raya  “Eka  Karya”  Bedugul  Bali  mendapatkan  hasil  bahwa  benar  daun binahong  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  dengan  jenis Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis  yang  memiliki  suku Basellaceae .  Organoleptis  ekstrak  etanol  70% daun  binahong  menunjukkan  hasil  bahwa  ekstrak  memiliki  warna  hijau kehitaman,  bau  khas  aromatic,  bentuk  kental,  dan  rasa  yang  pahit.  Kadar  air, kadar  abu  total,  dan  kadar  abu  tidak  larut  asam  dari  ekstrak  etanol  70%  daun binahong  berturut-turut  adalah  sebagai  berikut  7,36%±0,87;  5,25%±0,37;  dan 3,48%±0,63.  Hasil  kadar  air  ekstrak  telah  sesuai  dengan  batas  maksimum kandungan ekstrak kental yaitu 10% karena jika lebih besar dapat meningkatkan kecenderungan  ekstrak  dikontaminasi  oleh  jamur  (Hita et  al. ,  2020;  Hita et  al. ,
2022). Sedangkan untuk kadar abu total dan kadar abu tidak larut asam memiliki nilai  batas  maksimal  10,20%  dan  1,71%  (Farmakope  Herbal  Indonesia,  2008; Handayani et al. , 2019) yang memiliki tujuan pengujian yaitu untuk mengetahui sisa kotoran dari tanaman yang masih tersisa pada ekstrak (Ratnani et al. , 2015).
Uji skrining fitokimia ekstrak etanol 70% daun sambiloto menemukan senyawa metabolit sekunder, termasuk flavonoid, alkaloid, saponin, dan tannin (Tabel 1).
Gambar 1. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 70% Daun Binahong pada kontrol uji positif-negatif (kiri) dan sampel uji (kanan)
Hanphakphoom et  al. ,  2016  mengemukakan  pendapat  bahwa  aktivitas antibakteri  daun  binahong  sangat  dipengaruhi  oleh  kandungan  senyawa metabolit  sekundernya  dimana  dalam  penelitian  ini  ditemukan  kandungan senyawa  metabolit  sekunderseperti  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  dan  tannin (Tabel  1).    Flavonoid  memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri  melalui  mekanisme penghambatan  sintesis  asam  nukleat  membran  sel  bakteri,  penghambatan metabolisme  energi  sel,  dan  penghambatan  polimerisasi  sel  inang  oleh  bakteri (Liantari,  2014;  Parwata et  al. ,  2022).  Sedangkan  tanin  memiliki  kemampuan untuk  menghentikan  enzim  reverse  transkriptase  dan  proses  DNA topoisomerase sel bakteri (Mukhlisoh, 2010; Savitri, 2014). Alkaloid, saponin, dan terpenoid  memiliki  mekanisme  antibakteri  dengan  cara  membuat  kebocoran protein,  menghambat  produksi  komponen  dinding  sel,  dan  merusak  porin sehingga terjadi lisis pada sel bakteri (Amirah et al. , 2019; Tim et al. , 2014).
Pada  ( Gambar  1. )  pengujiaan  antibakteri  ekstrak  etanol  70%  daun  binahong terhadap bakteri Staphylococcus aureus metode difusi cakram digunakan dengan 4 varian  konsentrasi  ekstrak  (20%,  40%,  60%  dan  80%b/v),  kontrol  positif antibiotik kloramfenikol dan kontrol negatif aquadest dengan replikasi sebanyak
4 kali.
MEDFARM: Jurnal Farmasi dan Kesehatan, Vol. 12, No. 1, 2023, Hal, 58-66 e-ISSN : 2715-9957 p-ISSN: 2354-8487
Tabel 2. Rata-rata zona hambat ekstrak etanol 70% daun binahong
Kelompok Uji R1 (mm) R2 (mm) R3 (mm) R4 (mm) Rata-Rata (mm) Kontrol Positif 30,18 30,1 30,13 30,3 30,18 Kontrol Negatif 0 0 0 0 0 20% 8,33 7,73 7,85 7,88 7,95 40% 9,88 9,78 9,33 9,73 9,68 60% 13,04 11,81 12,18 11,88 12,23 80% 13,68 12,15 12,85 12,7 12,85
Menurut Hapsari tahun 2015, menyatakan bahwa diameter zona bening bakteri >20 milimeter memiliki zona hambat yang sangat kuat, 10-20 milimeter memiliki zona hambat yang kuat, 5-10 milimeter memiliki zona hambat yang sedang dan 0-5  milimeter  memiliki  zona  hambat  lemah.  Pada Tabel  2. konsentrasi  20% memiliki  rata-rata  zona  hambat  7,95  milimeter,  konsentrasi  40%  memiliki  rata- rata  zona  hambat  9,68  milimeter,  konsentrasi  60%%  memiliki  rata-rata  zona hambat  12,23  milimeter  dan  pada  konsentrasi  80%  memiliki  rata-rata  12,97 milimeter  dari rata-rata zona hambat yang dihasilkan dapat digolongkan dalam daya  hambat  yang  sedang  pada  konsentrasi  20%,  40%  dan  daya  hambat  kuat pada  konsentrasi 60% dan 80% karena berada dalam rentang 10-20 milimeter.
Hasil  uji  antibakteri  kemudiaan  dianalisis  menggunakan  aplikasi  SPSS  dengan tahapan uji normalitas dan homogenitas menggunakan saphiro wilk dan levene statistic.  Hasil  uji  normalitas  Saphiro  Wilk  didapatkan  hasil ˂ 0,05  yaitu  data terdistribusi  tidak  normal.  Oleh  karena  itu  digunakan  metode  Kruskal-Wallis (Sujono,  2017).  Hasil menggunakan  Uji Kruskal-Wallis  yaitu  nilai  p-value  0.000 dimana  memiliki  arti  bahwa  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  karena  p- value<0,05.
Berdasarkan  dari  Uji  Kruskal-Wallis  terhadap  kelompok  perlakuan  ekstrak etanol  daun  binahong  terdapat  berbeda  sigifikan  karena  p-value<0,05,  yaitu 0,000  sehingga  dilakukan  analisis  post-hoc  untuk  mengetahui  perbedaan bermakna antarkelompok perlakuan. Pada uji post-hoc digunakan uji LSD ( Least Significant  Difference )  didapatkan  hasil  berbeda  signifikan  setiap  kelompok perlakuan,  daya  hambat  yang  paling  efektif  dilihat  atau  dibandingkan  dengan daya hambat yang dihasilkan oleh kontrol positif dari tabel diatas dilihat bahwa antara  kontrol  positif,  kontrol  negatif,  konsentrasi  ekstrak  20%,  40%,  60%  dan
80%  hasilnya  p-value<0.05  yaitu  artinya  setiap  perlakuan  berbeda  signifikan,
Perbedaan  zona  hambat  dipengaruhi  oleh  konsentrasi  ekstrak  karena  semakin tinggi  konsentrasi  ekstrak  maka  nilai  zona  hambat  semakin  luas  akibat peningkatan  konsentrasi  zat  aktif  yang  beraktivitas  sebagai  zat  antibakteri (Kusmiati et al. , 2017).

## SIMPULAN
Ekstrak  etanol  70%  daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis)  memiliki karakteristik ekstrak yaitu kadar air, kadar abu total, dan kadar abu tidak larut asam  yang  baik. Selain  itu  golongan  senyawa  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  dan tannin  didapatkan  terkandung  secara  kualitatif  pada  ekstrak.  Konsentrasi optimum aktivitas antibakteri didapatkan pada konsentrasi ekstrak 80% dengan daya  hambat  12,85  milimeter  dan  terdapat  pengaruh  konsentrasi  ekstrak terhadap aktivitas antibakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
Amirah, N. M., Shun-Kai Y., Chew-Li M., Adelene A. S., Chou-Min C., Chun-Wie C., Aisha A., Swee-Hua E. L., dan Kok-Song L. 2019. Terpene Derivatives as a Potential Agent against Antimicrobial Resistance (AMR) Pathogens.
Molecules 24 (2631): 1-21
Departemen  Kesehatan  RI.  2008.  Farmakope  Herbal  Indonesia.  Jakarta: Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan
Handayani, V., Najib, A., Syarif, R.A., Mahmud, A., Asha, N., Ahmad, A.R. 2019. Standardization  of  Purified  Extract  Mahoni  Seed  and  Antioxidant Activity. International Journal of PharmTech Research 12 (02): 96 – 102
Hanphakphoom,  S.,  Thophon,  S.,  Waranusantigul,  P.,  Kangwanrangsan,  N., Krajangsan, S. 2016. Antimicrobial Activity of Chromolaena odorata Extracts Agains  Bacterial  Human  Skin  Infections. Modern  Applied  Science 10  (2):
159-171
Hapsari,  E.,  2015.  Uji  Anti  Bakteri  Ekstrak  Herba  Meniran  ( Phyllanthus  niruri ) terhadap Pertumbuhan Bakteri Bacillus cereus dan Escherichia coli . Skripsi .
Yogyakarta: Pendidikan Biologi Universitas Sanata Dharma
Hita,  I.P.G.A.P.,  Arimbawa,  P.E.,  and  Suryaningsih,  N.P.A.  2021. Characterization and Screening Active Phytochemical Compounds of 70%
MEDFARM: Jurnal Farmasi dan Kesehatan, Vol. 12, No. 1, 2023, Hal, 58-66 e-ISSN : 2715-9957 p-ISSN: 2354-8487
Ethanol Extract  of  Mahogany  Seed  ( Swietenia  mahagoni Jacq.). Ad- Dawaa’
Journal of Pharmaceutical Sciences 4 (1): 1-8
Hita,  I.P.G.A.P.,  Arimbawa,  P.E.,  Dhiancinantyan,  W.B.P.  2020.  Uji  Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol 70% Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.)
Steenis)  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus . Jurnal  Farmasi  dan Kesehatan 9 (2): 49-54
Hita,  I.P.G.A.P.,  Setiawan,  P.Y.B.,  Septiatri,  I.G.,  Putra,  I.G.N.A.W.W.  2022.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  96%  Daun  Sambiloto  ( Andrographis Paniculata (Burm.F.)  Nees  Terhadap Propionibacterium  Acnes . Jurnal Farmasi dan Kesehatan 11 (1): 115-126
Jawetz, E., Melnick, J.L., Adelberg, E.A.. 2005. Mikrobiologi Kedokteran Edisi XXII (Mudihardi, E., Kuntaman, Wasito, E. B., Mertaniasih, N. M., Harsono, S., Alimsardjono, L.) . Jakarta : Penerbit Salemba Medika
Kusmiati, Kukihi F., Afiati F., 2017. Exopolysaccharide (EPS) activity test of lactic acid  bacteria  (LAB)  as  immunomodulatory. Jurnal  Ilmu  Ternak  dan
Veteriner 21(3): 182−189
Liantari, D.S. 2014. Effect of Wuluh Starfruit Leaf Extract for Streptococcus Mutans Growth. J Majority 3 (2): 27-33
Mukhlisoh, W.. 2010. Pengaruh Ekstrak Tunggal dan Gabungan Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi Linn) Terhadap Aktivitas Anti Bakteri Secara In Vitro. Skripsi . Malang: Universitas Islam Negri Maulana Malik Ibrahim
Nurseha, D. 2013. Pengembangan Tindakan Pencegahan Infeksi Nosokomial oleh Perawat  di  Rumah  Sakit  Berbasis  Health  Belief  Model. Jurnal  Ners 8  (1):
64 – 71
Parwata,  A.,  Angga,  K.,  Bayu  P.,  and  Putu,  G.A.P.H.  2022.  Antioxidant  and Antibacterial Properties of Flavonoids in Gyrinops Versteegii Tea Leaves in First Asian PGPR Indonesian Chapter International e-Conference 2021.
KnE Life Sciences : 306 – 318
Ratnani, R.D., Hartati, I., Anas, Y., Endah, D., Khilyati, D.D.D. 2015. Standarisasi Spesifik  dan  Non  Spesifik  Ekstraksi  Hidrotropi  Andrographolid  Dari Sambiloto  ( Andrographis  paniculata ). Prosiding Seminar  Nasional  Peluang Herbal Sebagai Alternatif Medicine : 147 – 155
Samirana,  P.O.,  Swastini  D.A.,  Subratha,  I.D.G.P.Y.,  Ariadi,  K.A.  2016.  Uji Aktivitas  Penyembuhan  Luka  Ekstrak  Etanol  Daun  Binahong  ( Anredera scandens (L.)  Moq.)  pada  Tikus  Jantan  Galur  Wistar. Jurnal  Farmasi Udayana 5 (2): 19-23
Savitri,  N.P.I.,  2014.  Efektivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Belimbing  Wuluh ( Averrhoa  bilimbi L.)  terhadap  Bakteri  MIX  Saluran  Akar  Gigi. Skripsi .
Denpasar: Universitas Mahasaraswati
Sujono, E., 2017. Metode Penelitian Adminitrasi & Manajemen . Yogyakarta: CV Budi Utama
Sulistyarsi,  A.  dan  Pribadi,  N.W.  2018.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun Binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.)  Steenis)  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus  Aureus Dan Pseudomonas  Aeruginosa . Journal  of Pharmaceutical Science and Medical Research 1 (1)
Tim, T.P.C., Benjamart C., Andrew J.L., 2014. Alkaloids: An Overview Of Their Antibacterial,  Antibiotic-enhancing,  And  Antivirulence  Activities. International Journal of Antimicrobial Agents : 1-14