Penulis Esti Mulatsari * , Esti Mumpuni, Feriza Sandayu Afiliasi Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila, Jakarta,12640, farmasi@ffup.org, Indonesia

## Kata Kunci
 Penapisan virtual
 Cyclooxygenase-2,
 Zingiberaceae
Diterima 23 Maret 2017 Direvisi 18 Mei 2017 Disetujui 19 Juli 2017

## *Penulis korespondensi Esti Mulatsari
Fakultas Farmasi, Universitas
Pancasila, Jakarta,12640,
Indonesia Email : estimulatsari@gmail.com

## ABSTRAK
Berbagai  penelitian  tentang  sifat-sifat  anti-inflamasi  dan  anti-kanker  dari  berbagai senyawa  dalam  tanaman  familia Zingiberaceae telah  dilakukan  baik  secara in  vivo maupun in  vitro .  Enzim  yang  diinduksi  dan  diekspresikan  pada  sel-sel  inflamasi  dan kanker  dianggap  sebagai  target  obat  yang  ideal  untuk  menghambat  peradangan  dan tumorgenesis, salah satunya adalah enzim siklooksigenase-2 (COX-2). Dalam penelitian ini  telah  dilakukan  penapisan  virtual  senyawa  dalam  tanaman Kaemferia  galanga, Curcuma  domestica Val. ,  Zingiber  officinale dan Curcuma  xanthorrhiza .  Tujuan  dari penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  senyawa-senyawa  tersebut  sebagai penghambat enzim COX-2 secara in-silico . Penelitian ini menggunakan EE_COX2_V.1.0, protokol Structure Based Virtual Screening (SBVS) yang telah divalidasi oleh Mumpuni et al. 2014.  Protokol  EE_COX2_V.1.0  menggunakan  berbagai  aplikasi  terintegrasi  seperti SPORES,  PLANTS,  BkChem,  OpenBabel dan PyMOL .  Elusidasi  moda  ikatan  dilakukan terhadap senyawa representatif aktif dan tidak aktif untuk melihat interaksi asam amino dalam binding  site senyawa.  Berdasarkan  skor ChemPLP sebagai  hasil  dari  simulasi docking yang dilakukan pada 27 senyawa,  ada 3 senyawa yang berpotensi aktif dalam menghambat  COX-2,  senyawa  tersebut  antara  lain  2-butil-3-  (4-metoksifenil)  -2-  asam propenoat dengan 6 residu asam amino aktif, 6-shogaol dengan 10 residu asam amino aktif dan desmetoksikurkumin dengan 4 residu asam amino yang aktif.

## PENDAHULUAN
Beberapa penelitian telah dilakukan, baik secara in vivo maupun in vitro, mengenai aktivitas  anti-inflamasi  dan  anti-kanker  dari  berbagai  senyawa  dalam  empat  tanaman berbeda dari familia Zingiberaceae , tanaman tersebut antara lain : kencur ( Kaempferia galanga ) (Hasanah et al. 2011) kunyit ( Curcuma domestica Val.) (Muniroh et al . 2010), jahe  ( Zingiber  officinale (L.)  Rosc.)  (Hernani  dan  Winarti  2008)  temulawak  ( Curcuma xanthorrhiza) (Cahyono et al . 2011). Dasar pemilihan keempat tanaman tersebut karena banyak  ditemukan  di  Indonesia,  mudah  didapat  dan  harga  terjangkau.
Penapisan Virtual Senyawa–Senyawa dalam Famili Zingiberaeae sebagai Antiinflamasi Menggunakan Protokol EE_COX2_V.1.0

## Penapisan Virtual Senyawa–Senyawa dalam Famili Zingiberaeae sebagai Antiinflamasi Menggunakan Protokol EE_COX2_V.1.0
Enzim  yang  diinduksi  dan  diekspresikan  pada  sel inflamasi  dan  sel  kanker  dianggap  sebagai  target  obat yang  ideal  untuk  menghambat  inflamasi  dan tumorgenesis, salah satunya adalah enzim siklooksigenase  (COX).  Enzim  COX  terdiri  dari  dua isoenzim  yaitu  COX-1  dan  COX-2.  Enzim  COX-1 berperan  dalam  memelihara  fisiologi  normal  dan homeostasis, sedangkan COX-2 merupakan enzim yang terinduksi  pada  sel  yang  mengalami  inflamasi  oleh sitokin,  endotoksin,  dan  faktor  pertumbuhan.  Ekspresi COX-2  dapat  memacu  terjadinya  kanker  melalui peningkatan  produksi  prostaglandin  yang  akan meningkatkan  proliferasi  sel  kanker.  Oleh  karena  itu, menjadikan  enzim  COX-2  sebagai  target  merupakan strategi  penemuan  obat  yang  tepat  dan  layak dilakukan. Penemuan obat golongan coxib (penghambat selektif enzim siklooksigenase-2) merupakan terobosan baru dalam terapi inflamasi dan kanker  (Meiyanto  2011).  Hal  ini  terlihat  pada mekanisme kerja celecoxib yang menginduksi apoptosis,  menekan  proliferasi,  dan  mengurangi angiogenesis  serta  melemahkan  invasi  sel  kanker lambung (Eko 2012).
Studi komputasi dikenal dengan terminologi in silico merupakan  analog in  vi vo  dan in  vitro yang menggunakan  aplikasi  komputer,  sehingga  waktu  dan biaya  menjadi  lebih  efisien  (Navya et  al .  2011).  Pada penelitian  ini  akan  dilakukan  uji in  silico senyawa– senyawa  yang  terkandung  dalam  famili Zingiberaceae melalui  proses  penapisan  virtual  dengan  protokol tervalidasi  EE_COX2_V.1.0.  Protokol  EE_COX2_V.1.0 telah  dinyatakan  valid  dan  dapat  digunakan  untuk mengidentifikasi  senyawa  inhibitor  COX-2,  dengan didapatkan  nilai  Root  Mean  Square  Deviation  (RMSD) sebesar  0,525  Å.  Berdasarkan  nilai  RMSD  yang diperoleh, protokol ini dikategorikan “sangat baik” oleh Huang et  al. (2006)  dan  Yuniarti et  al. (2011).  Dalam penelitian ini, digunakan protokol SBVS EE_COX2_V.1.0 untuk melakukan penapisan virtual senyawa uji dengan target  enzim  COX-2,  struktur  kristal  enzim  COX-2  ini diperolah  dari data  base Protein  Data  Bank  (PDB) dengan  kode  3LN1.pdb  dengan  resolusi  :  2.40  Å.  Hasil penelitian  ini  diharapkan  dapat  diperoleh  senyawa  – senyawa  dalam  tanaman  famili Zingiberaceae yang mempunyai  aktivitas  sebagai  penghambat  COX-2 secara in-silico serta  mengetahui  moda  ikatan  yang terbentuk  antara  senyawa  dan  enzim,  sehingga  bisa dianalisis  lebih  lanjut  sebagai  kandidat  obat  golongan coxib (penghambat COX-2).

## METODE Bahan
Struktur  2D  dari  senyawa  uji  yaitu  senyawa  – senyawa  dalam  tanaman  :  kencur  ( Kaempferia galanga )  antara  lain  senyawa  etil  p-metoksisinamat, etil  sinamat,  2,4,6-trimetil  oktana  dan  2-butil-3-(4- metoksifenil) 2-asam propenoat (Hasanah et al . 2011); kunyit ( Curcuma domestica Val.) yaitu senyawa sinamil tiglat,  eukaliptol,  metilol  pinen,  seskuifelandren,  1- felandren,  dan  aril-turmeron  (Muniroh et  al .  2010); jahe  ( Zingiber  officinale (L.)  Rosc.)  yaitu  senyawa  4- gingerol, 6-gingerol, 8- gingerol, 10-gingerol, 6-shogaol, 8-shogaol,
10-shogaol, 6-paradol, 8-paradol,
zingiberen,  dan  α-farnesen  (Hernani  &  Winarti  2008); temulawak  ( Curcuma  xanthorrhiza )  yaitu  senyawa kurkumin, desmetoksikurkumin, bis- desmetoksikurkumin, kamfer, borneol, dan xanthorrizol (Cahyono et  al .  2011).  Struktur  2D  Senyawa pembanding  ZINC03814547  yang  terintegrasi  dalam protokol EE_COX2_V.1.0.

## Perangkat Keras
Satu  set  komputer  dengan  prosesor  Intel®  Core  ™ i3-2350  CPU  @2.30  GHz,  RAM  4  GB,  64  bit Operating System .

## Perangkat Lunak
Sistem operasi  LINUX  Ubuntu  10.04  LTS  – the  lucid lynx-  released  in April  2010  yang  dapat  diunduh  di: http://releases.ubuntu.com/lucid/ , SPORES (Structure PrOtonation  and  REcognition  System)  Versi  untuk LINUX dari :
http://www.tcd.uni- konstanz.de/index.php , PLANTS (Protein-Ligand  ANT
System) 1.2 Versi untuk LINUX dari :
http://www.tcd.uni-konstanz.de/index.php , BkChem 0.13.0 dari : http://www. BkChem .zirael.org/index.html , Open  Babel Versi  2.3.0  dari  : http://openbabel.org/ , PyMOL (Python-Enhanced  Molecular  Graphics  Tool) dari : http://www. PyMOL .org/, Protokol SBVS
EE_COX2_V.1.0, Software  statistical  analysis R  i386 3.0.1 dari : www.r-project.com .
Konstruksi senyawa uji dengan Software BkChem Pada  terminal  digunakan  aplikasi  EE_COX2_V.1.0 dengan moda command line interface dengan perintah sebagai  berikut  ./EECOX2_V.1.0.sh.  Secara  otomatis akan  muncul  jendela BkChem .  Langkah  berikutnya adalah  konstruksi  senyawa  uji  menggunakan software BkChem , di jendela BkChem tersebut digambar struktur
2D  senyawa  uji,  Setelah  selesai  menggambar  struktur 2D  senyawa  uji  berkas  dieksport  dengan  klik File>Export>Molfile agar  data  yang  disimpan  dalam bentuk teks dapat di baca oleh PLANTS maupun aplikasi lainnya.  Pastikan  ada  setidaknya  satu  bagian  dari gambar  struktur  2D  yang  dipilih  sebelum  prosedur export ini dijalankan jika tidak  ingin prosedur berhenti dan  muncul  pesan  galat.  Jika  prosedur  benar  akan muncul  jendela Export  Molfile yang  sudah  di  setting dengan  nama “uji.mol”. Langsung  klik  “ save ”. Lalu  klik tanda silang (tutup) di ujung kiri atas. Selanjutnya akan muncul jendela konfirmasi dan klik “ close” . Setelah itu aplikasi EE_COX2_V.1.0 akan memberikan hasil berupa score ChemPLP senyawa  uji  dan  ligan  pembanding. Langkah–langkah  tersebut  dilakukan  dengan  replikasi setidaknya  3  kali.  Selanjutnya  dilakukan  uji  statistika one-tailed t-test menggunakan aplikasi statistik versi R i386  3.0.1.  Dilakukan  pula  uji  kontrol  positif menggunakan senyawa dari obat golongan coxib .

## Elusidasi Moda Ikatan
Elusidasi  moda  ikatan  dilakukan  dengan  aplikasi PyMOL untuk  senyawa  representatif  aktif  dan  tidak aktif  yang  berasal  dari  tanaman  yang  sama,  kemudian senyawa representatif aktif divisualisasi secara 3D dan ditentukan  sebagai  senyawa  rekomendasi  yang  dapat dikembangkan untuk diteliti lebih lanjut.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Penapisan Virtual Senyawa Uji
Penapisan  virtual  senyawa  uji  dimulai  dengan menyiapkan sejumlah 27 senyawa uji dan sebuah ligan pembanding.  Masing-masing  senyawa  uji  digambar menggunakan  aplikasi BkChem yang  terbuka  secara otomatis  saat  menjalankan  protokol  SBVS.  Ligan pembanding yang digunakan ialah ZINC03814547. Ligan pembanding tersebut telah terintegrasi dalam protokol SBVS.  Proses  penapisan  virtual  dilakukan  untuk menghasilkan score ChemPLP. Score tersebut merupakan  energi  total  yang  dihitung  dari  satu  kali proses docking (Huang et  al. 2006).  Setiap  satu  kali simulasi docking pada  penapisan  virtual  berlangsung dihasilkan  masing-masing  satu score senyawa  uji  dan ligan pembanding. Score tersebut  dapat  berbeda pada simulasi  berikutnya  meskipun  menggunakan  senyawa
uji  dan  ligan  pembanding  yang  sama.  Oleh  karena  itu, perlu dilakukan replikasi dalam tahap ini.
Langkah  selanjutnya, score hasil  simulasi docking dari  27  senyawa  uji  dibandingkan  dengan  ligan pembanding.  Senyawa  uji  dikatakan  aktif  secara in silico pada binding pocket COX-2 apabila memiliki score yang lebih kecil (lebih negatif) dibandingkan score ligan pembanding, hal ini berarti senyawa tersebut memiliki kestabilan  yang  lebih  baik  dalam  berikatan  dengan reseptor.  Hasil  simulasi docking berikut  keterangan aktivitasnya  secara in  silico disajikan  dalam  Tabel  1. Tabel  1  menunjukkan  bahwa  berdasarkan score ChemPLP yang  diperoleh,  dari  27  senyawa  uji  hanya terdapat 3 senyawa  uji yang aktif pada binding pocket COX-2  secara in  silico ,  yakni  senyawa  2-butil-3-(4- metoksifenil)-2-asam  propenoat  yang  terkandung dalam rimpang kencur dengan rata-rata score sebesar - 652.8467,  senyawa  6-shogaol  yang  terkandung  dalam rimpang  jahe  dengan  rata-rata score -385.4167  dan senyawa  desmetoksikurkumin  yang  terkandung  dalam rimpang  kunyit  dengan  rata-rata score -385.1950. Perhitungan ChemPLP juga  dilakukan  pada  senyawa golongan etoricoxib dan celecoxib sebagai  control positif  dengan  senyawa  pembanding  ZINC03814547. Skor  yang  didapat  dari etoricoxib adalah  -392.1117 sedangkan  skor  ligan  pembanding  adalah  -380.8727. Skor yang didapat dari celecoxib adalah -398.1853 skor ligan pembanding adalah -380.8700.
Selanjutnya  dilakukan  analisa  secara  statistik one- tailed  paired  t-test pada  tiap  score  senyawa  uji  dan ligan  pembanding  yang  telah  didapat.  Pada  pengujian secara statistik, apabila didapatkan p-value kurang dari 0.05  pada  taraf  kepercayaan  95%,  maka  dapat dinyatakan rata - rata score senyawa uji signifikan atau bermakna  yang  berarti  dapat  mewakili  keseluruhan populasi.  Senyawa  2-butil-3-(4-  metoksifenil)-2-asam propenoat memiliki p-value sebesar 0.000008, senyawa 6-shogaol  memiliki p-value sebesar  0.0498  dan senyawa desmetoksikurkumin memiliki p-value sebesar 0.0129.  Berdasarkan  pengujian  statistik  terhadap  27 senyawa  uji,  hanya  ketiga  senyawa  tersebut  yang memiliki p-value kurang dari 0.05. Hal ini menunjukkan bahwa  ketiga  senyawa  tersebut  memiliki  aktifitas sebagai penghambat COX-2 yang aktif.
Elusidasi Moda Ikatan Senyawa Representatif
Senyawa
2-butil-3-(4-metoksifenil)-2-asam propenoat  yang  terkandung  dalam  rimpang  kencur, 6- shogaol  yang  terkandung  dalam  rimpang  jahe  dan senyawa  desmetoksikurkumin  yang  terkandung  dalam rimpang  kunyit  dijadikan  senyawa representatif aktif, karena  memiliki score lebih  kecil  (lebih  negatif)  dari score  ligan  pembanding.  Dilakukan  pula  pemilihan masing-masing  satu  senyawa  dengan score terbesar
(kurang negatif) yang berasal dari tanaman yang sama dengan senyawa representatif aktifnya untuk dijadikan sebagai  senyawa representatif tidak  aktif.  Pada rimpang  kencur,  dipilih  senyawa  2,4,6-trimetil  oktana, pada  rimpang  jahe  dipilih  senyawa  fernasen  dan  pada rimpang  kunyit  dipilih  senyawa  kamfer  sebagai senyawa representatif tidak aktif. Selanjutnya dilakukan  elusidasi  moda  ikatan  terhadap  senyawa representatif aktif maupun tidak aktif.
Tabel 1 Nilai ChemPLP dan aktivitas penghambatan COX-2 senyawa uji dan pembanding
Nama Senyawa Uji Rata-rata score ChemPLP Aktivitas penghambatan COX-2 secara in silico Uji Pembanding Kencur ( Kaemferia galanga ) Etil p- metoksisinamat -360.1750 -380.9100 Tidak aktif Etil sinamat -352.8650 -380.8813 Tidak aktif 2,4,6- trimetil oktana -5.9054 -380.8720 Tidak aktif 2-butil-3-(4-metoksifenil)-2-asam propenoat -652.8467 -380.8707 Aktif Kunyit ( Curcuma domestica Val.) Sinamil tiglat -353.4030 -380.8660 Tidak aktif Kurkumin -373.7450 -380.8763 Tidak aktif Eukaliptol -149.2933 -380.8680 Tidak aktif Metilol pinen -301.9810 -380.8710 Tidak aktif Seskuifelan dren -87.4063 -380.7734 Tidak aktif 1-felandren 266.4500 -380.8853 Tidak aktif Aril- turmeron -355.1623 -380.9140 Tidak aktif Jahe ( Zingiber officinale (L) Rosc.) 4-gingerol -375.0373 -380.8783 Tidak aktif 6-gingerol -377.8817 -380.8930 Tidak akif 8-gingerol -376.5933 -380.8863 Tidak Aktif 6-shogaol -385.4167 -380.8817 Aktif 10- gingerol -377.0567 -380.8613 Tidak aktif 8-shogaol -376.2560 -380.8910 Tidak aktif 10- shogaol -378.3980 -380.8807 Tidak aktif 6-paradol -374.6620 -380.8860 Tidak aktif 8-paradol -380.1687 -380.8853 Tidak aktif Zingiberen -87.1412 -380.7567 Tidak aktif Farnesen -16.2445 -380.8707 Tidak aktif Temulawak ( Curcuma xanthorrhiza ) Kurkumin -373.7450 -380.8763 Tidak aktif Demetoksikurkumin -385.1950 -380.8993 Aktif Bisdemetoksikurkum in -370.6513 -380.8573 Tidak aktif Kamfer -275.1710 -380.8957 Tidak aktif Borneol -280.7877 -380.8783 Tidak aktif Xanthorrh izol -288.2827 -382.6080 Tidak aktif Obat Golongan Celocoxib Etoricoxib -392.1117 -380.8727 Aktif Celecoxib -398.1853 -380.8700 Aktif
Mulatsari et al.
Langkah  elusidasi  yang  terjadi  di  dalam binding pocket dilakukan  dengan  memanfaatkan  aplikasi PyMOL .  Langkah  ini  dilakukan  untuk  melihat  interaksi asam-asam  amino  dalam binding  site senyawa representatif  aktif  maupun  tidak  aktif. Berdasarkan hasil  elusidasi  yang  dilakukan  terhadap  senyawa representatif  yang  berasal  dari  tanaman  kencur  di dalam binding  site -nya,  didapatkan  27  interaksi  asam amino  pada  senyawa  representatif  aktif  dan  30 interaksi asam amino pada senyawa representatif tidak aktif.  Pada  senyawa  representatif  aktif  yang  berasal dari rimpang jahe, didapatkan 20 interaksi asam amino dan  18  interaksi  asam  amino  pada  senyawa representatif tidak aktif di dalam binding site -nya. Pada senyawa  representatif  aktif  yang  berasal  dari  rimpang kunyit  didapatkan  25  interaksi  asam  amino  pada senyawa  representatif  aktif  dan  22  interaksi  asam
amino  pada  senyawa  representatif  tidak  aktif.  Residu- residu  asam  amino  yang  berinteraksi  dengan  senyawa representatif dapat dilihat di Tabel 2.
Residu asam amino senyawa representatif aktif yang berinteraksi  dengan  senyawa  representatif  tidak  aktif maka  residu  asam  amino  tersebut  tidak  berpengaruh atau  bahkan  berpengaruh  negatif  pada  aktifitas senyawa  representatif  aktif.  Residu  asam  amino  yang terdapat  pada  senyawa  representatif  aktif,  terdapat residu  asam  amino  yang  tidak  terdapat  senyawa representatif  tidak  aktif,  residu  asam  amino  tersebut berpengaruh  secara  determinan  terhadap  aktifitas pemnghambatan  COX-2  senyawa  representatif  aktif. Pada  senyawa  representatif  aktif  yang  berasal  dari rimpang  kencur  terdapat  6  residu  asam  amino  aktif yaitu:  LEU338,  LEU370,  PHE367,  PHE504,  SER323  dan SER516.  Adapun  senyawa  representatif  aktif  yang
Tabel 2 Residu asam amino senyawa representatif aktif dan tidak aktif
No. Tanaman Asal Senyawa Representatif (Aktif / Tidak Aktif) Asam Amino yang Berikatan 1 Kencur ( Kaempferia galanga ) 2-butil-3-(4- metoksifenil)- 2-asam propenoat Aktif ARG491, ALA502, ALA430, GLN176, GLY512, MET523, PHE264, PHE506, SER339, HIS75, HIS77, ILE501, ILE503, LEU338, LEU370, MET508, PHE367, PHE504, SER323, SER516, SER440, TYR334, TYR341, TYR371, VAL330, VAL335, VAL509. 2,4,6-trimetil oktana Tidak Aktif ARG106, ARG491, ALA502, ALA430, GLN176, GLN559, GLY512, MET523, MET332, PHE264, PHE506, SER339, HIS75, HIS77, ILE501, ILE503, TRP338, TRP380, MET508, PHE776, PHE505, SER339,SER513, SER440, LEU334, LEU341, TYR371, VAL330, VAL335, VAL509. 2 Jahe (Zingiber officinale (L) Rosc.) 6-shogaol Aktif ARG106, ARG495, ALA504, ALA513, GLN178, GLN336, GLN506, GLY505, GLY512, HIS75, ILE331, ILE503, TYR103, TYR338, LEU345, LEU370, LEU517, VAL330, VAL335, MET99. Farnesen Tidak Aktif ARG106, ARG499, ALA502, ALA513, GLY505, GLY512, MET99, MET508, PHE504, PRO514, SER339, SER516, TYR103, TYR338, TRP373, VAL330, VAL335, VAL509. 3 Kunyit (Curcuma domestica Val.) Desmetoksikurkumin Aktif ARG106, ARG499, ALA502, ALA513, GLN178, GLY512, HIS75, ILE503, LEU338, LEU345, LEU370, LEU517, LEU517, MET508, PHE367, PHE504, SER339, SER516, TYR790, TYR341, TRP331, TRP373, VAL330, VAL335, VAL509 Kamfer Tidak aktif ARG499, ALA502, ALA513, GLN178, GLY512, HIS75, ILE503, LEU338, LEU370, LEU517, LEU517, MET508, PHE367, PHE504, SER339, SER516, TYR341, TYR371, TRP373, VAL330, VAL335, VAL509
Menggunakan Protokol EE_COX2_V.1.0
berasal  dari  rimpang  jahe  terdapat  10  residu  asam amino aktif, yaitu : ARG495, ALA504, GLN178, GLU506, HIS75, ILE331, ILE503, LEU345, LEU370 dan LEU517 dan senyawa  representatif  aktif  yang  berasal  dari  rimpang kunyit  terdapat  4  residu  asam  amino  aktif  yaitu: ARG106, LEU345, TYR790 dan TRP331.
Pada  proses  elusidasi  ini  dapat  diketahui  pula bahwa sebuah ligan memiliki binding site dengan asam amino  tertentu  pada  reseptor,  dimana  dalam penelitian  ini  berupa  enzim  COX-2.  Interaksi  ligan- reseptor terjadi karena ada ikatan hidrogen, ikatan Van Der  Waaals,  dan  atau  interaksi  elektrostatik.  Dengan menggunakan  aplikasi PyMOL ,  ikatan  hidrogen  antara ligan  dengan  asam  amino  yang  terdapat  pada binding pocket reseptor  dapat  diketahui.  Jarak  ikatan  ligan dengan  asam  amino  reseptor  akan  mempengaruhi afinitas ikatan antara ligan dan reseptor. Semakin kecil jarak  ikatan,  maka  akan  semakin  besar  afinitas  ikatan antara  ligan  dan  reseptor.  Setelah  proses  elusidasi moda  ikatan  terhadap  senyawa  reresentatif  aktif  dan
senyawa  representatif  tidak  aktif,  kemudian  dilakukan visualisasi  secara  3D  senyawa  representatif  aktif menggunakan apikasi PyMOL . Visualisasi 3D senyawa – senyawa  representatif  aktif  ditunjukkan  Gambar  1, Gambar 2 dan Gambar 3.

## KESIMPULAN
Berdasarkan score  ChemPLP dari  proses  penapisan virtual  yang  dilakukan,  dapat  disimpulkan  ada  3 senyawa  yang  diprediksi  aktif  sebagai  penghambat COX-2  secara in  silico ,  senyawa  –  senyawa  tersebut antara lain 2-butil-3-(4- metoksifenil)-2-asam propenoat  yang  berasal  dari  tanaman  kencur (Kaempferia galanga) dengan score ChemPLP sebesar - 652.8467,  senyawa  6-shogaol  yang  berasal  dari tanaman  jahe (Zingiber  officinal) dengan score ChemPLP
sebesar -385.4167 dan senyawa desmetoksikurkumin yang berasal dari tanaman kunyit (Curcuma  domestica  Val.) dengan score  ChemPLP sebesar -385.1950.
a b c
Gambar 1 Tampilan senyawa representatif aktif yang berasal dari rimpang kencur.( 2-butil-3-(4- metoksifenil)- 2-asam propenoat) a. Tampilan 2D, b. Tampilan 3D, c. Posisi senyawa dalam binding pocket COX-2
Berdasarkan  proses  elusidasi  moda  ikatan  yang dilakukan terhadap senyawa  2-butil-3-(4-metoksifenil)- 2-asam propenoat, 6-shogaol dan desmetoksikurkumin dapat  diketahui  residu  asam-asam  amino  yang
memberikan  peran  sebagai  penghambat  COX-2.  Pada senyawa  2-butil-3-(4-metoksifenil)-2-asam  propenoat terdapat  6  residu  asam  amino  dari  tanaman  kencur, residu  asam-asam  amino  tersebut,  yaitu:  :  LEU338,
a b c
Gambar 2 Tampilan senyawa representatif aktif yang berasal dari rimpang jahe.( 6-shogaol) a. Tampilan 2D, b. Tampilan 3D, c. Posisi senyawa dalam binding pocket COX-2
a b c
Gambar 3 Tampilan  senyawa  representatif  aktif  yang  berasal  dari  rimpang  kunyit  (desmetoksikurkumin) a.Tampilan 2D, b. Tampilan 3D, c. Posisi senyawa dalam binding pocket COX-2
Menggunakan Protokol EE_COX2_V.1.0
LEU370,  PHE367,  PHE504,  SER323  dan  SER516,  pada senyawa  6-shogaol  terdapat  10  residu  asam  amino, yaitu:  ARG495,  ALA504,  GLN178,  GLU506,  HIS75, ILE331,  ILE503,  LEU345,  LEU370  dan  LEU517, sedangkan pada senyawa desmetoksikurkumin terdapat 4 residu asam amino, yaitu : ARG106, LEU345, TYR790 dan TRP331.

## DAFTAR PUSTAKA
Cahyono  B,  Huda  MDK,  Limantara  L.  2011.  Pengaruh
Proses Pengeringan Rimpang Temulawak ( Curcuma xanthorriza Roxb) Terhadap Kandungan dan Komposisi Kurkuminoid. Reaktor . 13(3):165-169
Eko  T.  2012.  Penggunaan Coxib Dalam  Tata  Laksana Nyeri  Nosiseptif.  Denpasar. Medicina. 43(1):23- 30.
Hasanah  AN,  Nazaruddin  F,  Febrina  E,  Zuhrotun  A. 2011.  Analisis  Kandungan  Minyak  Atsiri  dan  Uji Aktivitas  Antiinflamasi  Ekstrak  Rimpang  Kencur ( Kaempferia  galanga L.). Jurnal  Matematika  & Sains . 16(3):147-152.
Hernani,  Winarti  C.  2008  (tidak  diterbitkan).
Kandungan Bahan Aktif Jahe dan Pemanfaatannya  Dalam  Bidang  Kesehatan ..
Bogor  (ID):  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Pascapanen  Pertanian.  hlm  125- 142.
Huang  N,  Shoichet  BK,  Irwin  JJ.  2006.  Benchmarking Sets for Molecular Docking. Journal of Medicinal Chemistry. 49:6789-6801.
Meiyanto E. 2011. Harapan dan Tantangan Pengembangan  Agen  Kemoprevensi  Kanker
Tepat Sasaran. [Pidato Pengukuhan Jabatan Guru Besar].  Yogyakarta  (ID)  :  Fakultas  Farmasi Universitas Gadjah Mada.
Mumpuni E, Nurrochmad A, Pranowo HD, Jenie UA dan Istyastono EP. 2014. Construction and validation of the structure based virtual screening protocols with PDB code of 3LN1 to discover cyclooxygenase-2  inhibitors .  Di  dalam  The  First International  Conference  on  Pharmaceutics  and Pharmaceuticals Science (ICPPS), 24-16
Desember 2015. Surabaya (ID): Fakultas Farmasi, Universitas Airlangga. hlm 99 – 101.
Muniroh  L,  Martini  S,  Nindya  TS,  Solfaine  R.  2010.
Minyak  Atsiri  Kunyit  Sebagai  Anti  Radang  Pada Penderita Gout Artritis Dengan Diet Tinggi Purin. Makara Kesehatan . 14(2):57-64.
Navya  A,  Jayasimha  RD,  Devi  UM.  2011.  Docking Studies  on  Xanthones  of  Mangosteen  as  COX-2 Inhibitors. International  Journal  of  Applied Biology and Pharmaceutical Technology .
2(3):264-267. [NCI]  National  Cancer  Institute  (US).  Surveillance,
Epidemiology  and  End  Result  (SEER).  2010. diperoleh dari: http://www.seer.cancer.gov/search?q=cytotoxic +test. Diakses pada 18 November 2013.
Yuniarti  N,  Ikawati  Z,  Istyastono  EP.  2011.  The Importance  of  ARG513  as  a  Hydrogen  Bond Anchor  to  Discover  COX-2  Inhibitors  in  a  Virtual Screening  Campaign. Bioinformation .  6(4):164- 166.