## UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK ETANOL  DAUN MAHKOTA
DEWA ( Phaleria macrocarpa Boerl.,) TERHADAP Klebsiella pneumoniae.
Submitted : 27 Mei 2020 Edited : 22 Desember 2020
Accepted : 29 Desember 2020
Aulia Nur Rahmawati, Putri Afiana Solicah

## PROGRAM STUDI D3 FARMASI STIKES NASIONAL
Email : putriafiana56@gmail.com

## ABSTRACT
Mahkota Dewa (Phaleria macrocarpa Boerl) is a medicinal plant of the Thymelaeaceae family originating from Indonesia, precisely from Papua. Phaleria macrocarpa Boerl the gods has been known in various treatments such as diabetes, cancer, liver, dysentery, allergic diabetes, eczema, or gout and others. The purpose of this study is to find out whether extract ethanolic 96% of  Phaleria  macrocarpa  Boerl  can  inhibit  the  growth  of  K.  pneumoniae,  and  to  know  what concentration  of  extract  ethanolic  96%  of  Phaleria  macrocarpa  goodnes  to  inhibit  K. pneumoniae. The extraction method used is maceration. The concentration used is 100%, 80%, 60%,  40%,  20%,  and  the  method  to  know  Phaleria  macrocarpa.,  Borl  inhibused  againts K.pneumoniae is Kirby Bauer Method. With the average inhibition zone  concentrations is 100%, 80%, 60%, 40%, 20%  respectively 17.41mm, 15.37mm, 12.60mm, 11.10mm, 6.43mm.
Keywords : Phaleria macrocarpa Boerl, inhibition test , Klebsiella pneumoniae

## PENDAHULUAN
Klebsiella  pneumoniae merupakan bakteri gram negatif Enterobacteriaceae. K. pneumoniae dapat menginfeksi di beberapa tempat seperti usus, paru-paru, dan kandung kemih.
Di negara Cina infeksi intraabdominal yang disebabkan K.
pneumoniae memiliki  prevalensi  20,1% (1) , kasus  pneumonia  di  beberapa  Rumah  sakit Indonesia  memiliki  presentase  29%,  dan pada  infeksi  saluran  kemih  di  RSUD  dr Soetomo  yang  disebabkan K.  pneumoniae memiliki  presentase  18,1% (2) .  Melalui infeksi  oleh  beberapa  anggota  tubuh tersebut, K. pneumoniae dapat juga menginfeksi hati. Di negara tropis, khususnya  Taiwan  dan  Korea  infeksi  hati yang  disebabkan K.pneumonia memiliki presentase  5% (3) .  Infeksi K.  pneumoniae
dapat  diobati  dengan  antibiotik  yang mengandung  cincin  beta-laktam.  Namun penggunaan  antibiotik  yang  sangat  tinggi dan tidak tepat
penggunaannya menyebabkan  terjadinya  resistensi  bakteri. Kp.pneumoniae mengalami resistensi sebesar  100%  terhadap  antibiotik  ampislin, amoksisilin,  dan  seftazidim  sedangkan antibotik  sefoksitin,  seftriakson,  sefepim dan  meropenen  mengalami  resistensi  40%
(4) .  Pada  tahun  2012  Cipprofloxacin memiliki  sensitifitas81,6%  dan  memiliki resisteni  50%  di  rumah  sakit  X  pada  tahun 2013  sampai  2015 (5) .  Salah  satu  alternatif pengurangan  resistensi  tersebut  dengan penggunaan  obat  herbal.  Mahkota  dewa ( Phaleria macrocarpa Boerl ) adalah tanaman  obat  dari  famili Thymelaeaceae yang berasal dari Indonesia, tepatnya berasal
dari  Papua.  Daun  mahkota  dewa  sudah dikenal  dalam  berbagai  pengobatan  seperti diabetes,  kanker,  lever,  disentri,  kencing manis alergi, eksim, maupun asam urat dan lain-lain (6) .  Pada  penelitian  ini  dipilih sampel daun mahkota dewa karena di dalam daun  mahkota  dewa  terkandung  senyawa aktif yang dapat membunuh bakteri, mudah diperoleh,  dan  tidak  musiman,  sampel berlimpah  dibanding  buahnya.    Senyawa yang  terkandung  pada  daun  mahkota  dewa ( Phaleria  macrocarpa Boerl ) adalah alkaloid, saponin, tanin, triterpenoid, minyak atsiri, dan kumarin (6) .
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut peneliti melakukan uji daya hambat ekstrak etanol  96%  daun  mahkota  dewa  ( Phaleria macrocarpa Boerl ) terhadap bakteri K.pneumoniae dengan
menggunakan
metode Kirby Bauer (difusi cakram).

## METODE PENELITIAN EKSTRAKSI DAUN MAHKOTA DEWA
Ekstrak  diambil  dari  Kecamatan punden,  Kabupaten  Klaten,  Jawa  Tengah pada 13 September 2020 dan  di determinasi di Balai Besar Penelitian Dan
Pengembangan  tanaman  Obat  dan  Obat Tradisional  untuk  memastikan  jenis  yang sesuai.  Bahan  yang  digunakan  meliputi etanol 96% (ROFA) untuk maserasi, kristal violet,  iodium,alkohol  70%,  safranin,  Hcl 2N, pita Mg, Lp Bauchardat, Reagen Kovac, Barried,  KOH  40%,  Feclꝫ  10%,  Methyl Red,  Dragondraff,  Mayer,  Wagner,  Nacl 0,9%, Minyak emersi, kultur K. pneumoniae untuk  mengidentifikasi  bakteri,    DMSO 10%, disk Ciprofloxacin, blank disk, alkohol mikroskop, media BHI, media Mac conkey, Media  Na  plate,  Media  Na  miring  untuk menguji  daya  hambat,  media  urea,  media citrat, media KIA/TSIA, media SIM, media MR/VP, Media PAD, media gula-gula untuk mengidentifikasi bakteri.
Sebanyak  200  gram  serbuk  daun mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa Boerl )
dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  96% sebanyak 2000 ml. Dengan penambahan 7,5 bagian  etanol  96%  di  hari  pertama,  2,5 bagian  etanol  96%  ditambahkan  di  hari kedua.  Maserat  yang  diperoleh  dijadikan satu.  Penguapan  dilakukan  menggunakan evaporator dengan suhu 40˚ pada kecepatan 120rpm  sampai diperoleh ekstrak kental.

## Uji Fitokimia
Uji  fitokimia  pada  daun  mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa Boerl ) meliputi uji  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  tanin, steroid/triterpenoid, minyak atsiri.
Uji alkaloid dilakukan dengan cara  1 ml  filtrat  ditambah  2  mL  HCl  2N  dan dikocok.    Setelah  dikocok  sampel  yang sudah  ditetesi  HCl  dibagi  dalam  3  tabung yang berbeda.  Pada tabung pertama ditetesi 1  tetes  reagen  Mayer  ,  pada  pada  tabung kedua  ditetesi  1  tetes  reagen    Dragendorff, dan pada tabung reaksi ketiga ditambahkan 1  tetes  reagen  Wagner.  Adanya  senyawa alkaloid  jika  pada  penambahan  reagen Mayer  terbentuk  endapan  kuning,  pada penambahan  reagen  Dragendorff  terbentuk endapan  merah  dan  pada  penambahan reagen  Wagner  terbentuk  endapan  coklat atau merah.Uji flavonoid dengan cara 2 mL filtrat hasil penyaringan  ditambah pita Mg sebanyak  0,1  g  dan  0,5ml    HCl  pekat.  Uji positif  mengandung  senyawa  flavonoid ditandai  dengan  adanya  warna  merah.Uji saponin dilakukan dengan cara1 ml filtrat di tambahkan  1  tetes  HCI  2  N.  Jika  filtrat Positif  mengandung  saponin  maka  ditandai dengan adanya buih yang konstan. Steroid/triterpenoid dilakukan dengan cara 1 ml  filtrate  di  tambah  3-4  tetes  LP bouchardat.  Jika  filtrat  positif  mengandung steroid/triterpenoid    maka  ditandai  dengan warna merah/ungu. Fenol dilakukan dengan cara 1 ml filtrat ditetesi dengan Fecl3 2 tetes, apabila  positif  ditandai  dengan  adanya endapan putih (7) .

## Identifikasi Bakteri Gram Negatif
Identifikasi  bakteri  dilakukan  dengan pengecatan gram dan uji biokimia. Pengecatan  dilakukan  dengan  Gram  A (kristal  violet),iodium  (Gram  B),  ditetesi dengan alkohol 70% hingga air yang menetes jernih.  Preparat  ditetesi  Safranin  dicuci dengan  air  mengalir  dan  dikeringkan  dan diamati perbesaran 100x dengan penambahan minyak  emersi (8) .  Uji  Biokimia  dilakukan dengan  menginokulasikan  suspensi  bakteri pada media uji biokimia. Media ujibiokimia terdiri, dari KIA/TSIA,SIM,UREA, CITRAT, MR/VP, PAD, dan media
Fermentasi  Karbohidrat.  Sampel  bakteri kemudian  ditanam  di  media  Na  miring. Setelah itu diinkubasi pada suhu 37˚C selama 24 jam (9) .
Uji antimikroba metode Kirby bauer
Pada  tahap  ini  dilakukan  inokulasi suspensi bakteri K.pneumoniae pada  media Na Plate dengan cara menyelupkan kapas lidi steril    ke  dalam  suspensi  bakteri  yang  telah dibandingkan dengan standar MC Farland 0,5 secara  aseptis.  Cakram  Ciprofloxacin  yang berukuran 6mm ditanam di setiap permukaan dengan  memperhatikan  jarak  yang  sesuai (tidak terlalu dekat atau terlalu jauh). Cakram blangko  direndam  ekstrak  etanol  daun mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa Boerl ) dengan  berbagai  variasi  konsentrasi  dengan berbagai konsentrasi kemudian ditanam pada Na  Plate.  kemudian  diinkubasi  pada  suhu 37˚C selama 24 jam (10) .

## ANALISIS DATA
Data  yang  di  gunakan  adalah  ukuran diameter  zona  bening  yang  menunjukan besaran daya hambat setiap variasi konsentrasi  ekstrak  etanol  daun  mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa Boerl ) terhadap bakteri K.pneumoniae dan dianalisis dengan Microsoft  Excel  untuk  memperoleh  grafik pertumbuhan K.pneumoniae.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Fitokimia
Daun mahkota dewa memiliki beberapa  zat  aktif  yang  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri K.  pneumoniae (Tabel 1) .

## Identifikasi Bakteri
Secara  mikroskopis K.pneumoniae berbentuk  batang  pendek,  tersusun  tersebar, dan  koloni  merah. K.pneumoniae adalah bakteri gram negatif yang mengandung lipid cukup tinggi, sehingga pada saat pewarnaan gram lipid terlarut dengan alkohol (gram C), setelah  itu  pori  pori  pada  dinding  sel membesar  dan  zat  cristal  violet  (gramyang telah diserap sel dilepas kembali,bakteri tidak terwarnai.  Ketika  digenangi  zat  D(safranin) bakteri  akan  menyerap  warna  tersebut  dan warna  bakteri  menjadi  merah (11) .  Pada pengecatan didapatkan bentuk batang warna merah, cat gram, sifat bakteri gram Negatif, latar  belakang  putih,  perbesaran  100x (Objektif) (Gambar 1).
Tabel 1. Hasil uji fitokimia ekstrak etanol daun mahkota dewa Uji Fitokimia Uji Fitokimia Pereaksi Hasil Keterangan Flavonoid HCl,Serbuk Mg + Warna jingga Alkaloid Wagner Mayor Dragondraff + + + Endapankuning Endapan coklat Merah/endapan coklat Saponin HCl 2N + Buih konstan Tanin Fenol Steroid/terpenoid Gelatin Fecl ₃ LP Baucardat + + - Endapan Putih Warna kehitaman Tidakterjadi perubahan
Gambar  1. Sel  bakteri  gram  negatif K. pneumoniae Pada pengujian biokimia, KIA diperoleh hasil  Fermentasi  yaitu  AC/AC
(Acid/Acid). Ditandai dengan media berwarna  kuning.  Terjadi  warna  kuning karena media KIA mengandung Karbohidrat yang  difermentasikan  bakteri  membentuk suasana  asam. SIM H ₂ s,  motil,  dan  indol negatif.  Tidak  terjadi  pertumbuhan  yang menyebar di sekitar tusukan dan tidak terjadi warna  merah  setelah  ditambahkan  pereaksi Kovac. Uji pada media urea positif, ditandai dengan perubahan warna pada media menjadi merah.  Pada  media Citrat  diperoleh  hasil positif  karena  terbentuk  warna  biru  pada
media.  Pada  media  MR  diperoleh    positif, terjadi  perubahan  warna  media  menjadi merah. Pada media VP negatif, tidak terjadi perubahan  warna  pada  media  setelah ditambahkan  reagen  barried  dan  KOH.
Bakteri  tidak  memfermentasikan  butandiol (12) . Pada media PAD diperoleh hasil negatif. Tidak  terjadi  perubahan  warna  media menjadi  hijau. Pada  uji  fermentasi  glukosa diperoleh  hasil  positif.  Ditandai  dengan perubahan warna dari merah menjadi  orange.

## UJI DAYA HAMBAT
Pada  penelitian  ini  didapatkan  zona bening yang  relatif  besar,  dimana  diperoleh hasil  uji  daya  hambat  ekstrak  etanol  daun mahkota dewa terhadap K.pneumoniae yang membentuk  zona  hambat  disekitar  disk (Gambar 2).
Berdasarkan  data  diatas  dibuat  grafik yang  menggambarkan  rata-rata  bebagai perlakuan  pemberian  ekstrak  etanol  daun mahkota dewa (Gambar 3).
Gambar 2. Hasil zona bening ekstrak etanol daun mahkota dewa terhadap K. pneumoniae
Gambar 3. Grafik diameter zona hambat yang dihasilkan
17.41mm 15.37mm 12.60mm 11.10mm 6.43mm 23.70mm 6.00mm 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 DIAMETER(mm) X(mm) Y(%)
Keterangan : Y : Diameter yang dihasilkan X : Konsentrasi ekstrak etanol daun mahkota
dewa.
Grafik tersebut menggambarkan bahwa  pada  konsentrasi  100%  ekstrak  daun mahkota dewa memiliki kemampuan menghambat  terbesar,  dan  pada  konsentrasi 20%  menunjukan  daya  hambat  yang dihasilkan  paling  kecil.  Pada  konsentrasi 100%  memiliki  kandungan  senyawa  yang lebih  besar  dibandingkan  konsentrasi  lain, sehingga  konsentrasi  100%  menghasilkan daya hambat yang paling baik. Adanya daya hambat disebabkan oleh kandungan senyawa kimia  yang  terdapat  pada  ekstrak  daun mahkota dewa. Terdapat senyawa flavonoid, tanin,  alkaloid,  saponin,  dan  fenol  yang positif  dalam  pengujian  fitokimia  ekstrak daun  mahkota  dewa.  Pada  kontrol  positif dihasilkan  zona  hambat  yang  berbeda  beda, hal  tersebut  terjadi  karena  aktivitas  bakteri. Berdasarkan  grafik  diatas      kontrol  positif ciprofloxacin  memiliki  kemampuan  yang intermediate (13) untuk menghambat K.pneumoniae. Ciprofloxacin    dikatakan resisten apabila zona bening yang terbentuk ≤ 21 mm, intermediate apabila terbentuk zona hambat  22-25  mm  dan  sensitif  apabila terbentuk  zona  hambat    ≥  26mm(CLSI, 2019), sedangkan pada kontrol negatif tidak terdapat zona hambat.

## SIMPULAN
Ekstrak  Etanol  96%  daun  mahkota dewa  dapat  menghambat    pertumbuhan Klebsiella  pneumoniae ,  dengan  rata-rata diameter  konsentrasi  100%  sebesar  17,41 mm, 80% sebesar 15,37mm, 60% sebesar12,60  mm,  40%  sebesar  11,10  mm, 20% sebesar 6,43 mm dan ekstrak etanol 96% daun  mahkota  dewa  konsentrasi  100% merupakan  konsentrasi  terbesar  yang  paling baik dalam menghambat Klebsiella pneumoniae.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Zhang H, Yang Q, Liao K, Ni Y, Yu Y,
Hu B, Sun Z, Huang W, Wang Y, Wu A, Feng X, Luo Y, Chu Y, Chen S, Cao B, Su J, Duan Q, Zhang S, Shao H, Kong
H, Gui B, Hu Z, Badal R, Xu Y. 2017. Update  of  incidence  and  antimicrobial susceptibility  trends  of  escherichia  coli and Klebsiella pneumoniae isolates from chinese intra-abdominal infection patients.  BMC  Infectious  Diseases.
17(1):1–9.
2. Sutandhio  S,  Alimsardjono  L,  Lusida MI. 2015. Distribusi dan Pola Kepekaan Enterobactericeae dari Spesimen Urin di
RSUD  DR.  Soetomo  Surabaya  Periode
Januari – Juni 2015
3. Siu  LK,  Yeh  KM,  Lin  JC,  Fung  CP, Chang FY. Klebsiella pneumoniae liver abscess:  a  new  invasive  syndrome.
Lancet Infect Dis 2012;12:881-7.
4. Dibua  U.M.E.,  Onyemerela  I.  S.  and Nweze E.I., 2014, Frequency, Urinalysis and  Susceptibility  Profile  of  Pathogens Causing  Urinary  Tract  Infections  in Enugu State, Southeast Nigeria, Revista Do  Instituto  de  Medicina  Tropical  de São Paulo, 56 (1), 55– 57.
5. Anita,  2016,  Pola  Resisteni  Bakteri
Terhadap  Antibiotik  Pada  Penderita Infeksi Saluran Kemih (ISK) Di Rumah Sakit X Periode Januari 2013– September 2015, skripsi, UMS. 6. Ratna,D.,Wiwi,W.,2014 , Identifikasi Senyawa  Flavonoid  Dalam  Fase  n-
Butanol  Dari  Ekstrak  Metanol  Daun Mahkota  Dewa  Phaleria  macrocarpa (Scheff)  BoerlRatna  Disampaikan  pada Simposium PERHIPBA, Hotel Paragon
Universitas Sebelas Maret,Solo.
7. Lully,2016, Farmakognisi dan fitokimia ,
Pusdik SDM kesehatan,Jakarta selatan.
8. Sardiani,2015,Potensi Tunikat Rhopalaea sp Sebagai sumber Inokulum Bakteri Endosibion Penghasil Antibiotik, jurnal alam lingkungan,Makasar.
9. Miranda,A.J.,dkk,2016,Uji  Efek  Anti Bakteri Air Perasan Daging Buah Nanas Terhadap Klebsiella pneumonia ,e- Biomedik,Manado. 10. Miranda,A.J.,dkk,2016,Uji  Efek  Anti Bakteri Air Perasan Daging Buah Nanas Terhadap Klebsiella pneumonia ,e- Biomedik,Manado.
11. Yusmaniar,Wardiyah, Khairun,N.,
2017, Mikrobiologi  Dan  Parasitologi , Kementrian kesehatan Republik Indonesia,Jakarta.
12. Colome, J.S. 2001. Laboratory Exercise in  Microbiology .  West  Publishing
Company, New York 13. CLSI,2019,Performance  Standards  for Antimicrobial Susceptibility Testing,26th ed. Clinical and Laboratory Standards Institute.