## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 e-ISSN: 2355-7931 Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj Journal E-mail: current.biochemistry@gmail.com

## Aktivitas Antioksidan Nanopartikel Kurkuminoid  Temulawak
Balittro secara In Vivo
(In Vivo Antioxidant Activity of Curcuminoids Nanoparticles from Balittro Curcuma)
Laksmi Ambarsari 1 , Riska Febrianti 1 , Edy Djauhari Purwakusumah 1
1 Department of Biochemistry, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia
Received:12 August 2017; Accepted: 7 January 2019
Corresponding author : Dr. Laksmi Ambarsari, MS; Departemen Biokimia, Jl.Tanjung Grdung Departemen Biokimia Kampus IPB Dramaga; Telp/Fax. (0251)-8423267; Email: laksmi@apps.ipb.ac.id

## ABSTRACT
Curcuma  (Curcuma  xanthorrhiza)  is  an  Indonesian  herbs  plant  with  antioxidant  activity. This research aimed to measure the increase of curcuminoids bioavaibility through the effectivity of nanoparticle  curcuminoids  as  antioxidant  in  carbon  tetrachloride  (CCl 4 )  induced  rats. Nanoparticle  curcuminoids  was  produced  by  homogenization-ultrasonication  method  and  results showed  that  particle  size  of  curcuminoids  nanoparticle  was  141.85±38.82  nm  with  polydispersity index  of  0.233  and  entrapment  efficiency  of  71%.  During  treatment,  the  rat’s  body  weight increased.  The  clinical  symptoms  of  rats  (behavior  and  feces)  were  normal.  Nanoparticle curcuminoids  can  decrease  malondialdehide  concentrations  and  increase  peroxide,  glutathione peroxide, and superoxide dismutase activity.
Keywords: Antioxidant, Curcuma, Curcuminoid, Solid lipid nanoparticle

## ABSTRAK
Temulawak (Curcuma xanthorrhiza) merupakan tumbuhan herbal Indonesia yang memiliki aktivitas  antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan  mengukur  peningkatan  bioavabilitas  kurkuminoid melalui efektivitas nanopartikel kurkuminoid sebagai antioksidan pada tikus yang diinduksi karbon tetraklorida (CCl 4 ). Nanopartikel kurkuminoid temulawak dihasilkan dengan metode ultrasonikasi- homogenisasi  memiliki  rata-rata  ukuran  partikel  141.85+38.82  nm  dengan  nilai  indeks polidispersitas  sebesar  0.233  serta  efisiensi  penjerapan  mencapai  71%.  Selama  perlakuan,  bobot badan  tikus  mengalami  kenaikan.  Gejala  klinis  tikus  (tingkah  laku  dan  feses)  tidak  menunjukkan adanya  ketidaknormalan.  Efek  nanopartikel  kurkuminoid  tersalut  lemak  padat  dapat  menurunkan kadar malondialdehida dan meningkatkan aktivitas enzim peroksidase, glutation peroksidase serta superoksida dismutase.
Kata kunci : Antioksidan, Kurkuma, Kurkuminoid, Nanopartikel lemak padat

## 1. PENDAHULUAN
Penggunaan bahan alam, baik sebagai  obat  maupun  tujuan  lain  cenderung meningkat, terlebih dengan adanya isu back to nature .  Seiring  dengan  perkembangan  yang terjadi  saat  ini,  obat  tradisional  mendapat perhatian  lebih  bagi  alternatif  pelayanan kesehatan. Selain itu banyak orang beranggapan bahwa penggunaan tanaman obat atau  obat  tradisional  relatif  lebih  aman dibandingkan obat sintesis. Menurut BPOM RI (2005),  obat  tradisional  adalah  bahan  atau ramuan  yang  berupa  bahan  tumbuhan,  bahan hewan,  bahan  mineral,  sediaan  galenik  atau campuran  dari  bahan-bahan  tersebut,  yang secara  tradisional  telah  digunakan  untuk pengobatan  berdasarkan  pengalaman.  WHO merekomendasikan penggunaan obat tradisional termasuk herbal dalam pemeliharaan kesehatan
masyarakat, pencegahan dan pengobatan penyakit, terutama  untuk  penyakit  kronis,  penyakit degeneratif dan kanker. WHO juga mendukung  upaya-upaya  dalam  peningkatan keamanan  dan  khasiat  dari  obat  tradisional (WHO 2003).
Salah  satu  tanaman  obat  yang  sering digunakan  sebagai  obat  tradisional  adalah temulawak. Temulawak ( Curcuma xanthorriza Roxb.)  merupakan  salah  satu  tumbuhan  obat suku  Zingiberaceae  yang  banyak  tumbuh  di Indonesia.  Rimpang  merupakan  bagian  yang paling  berguna  dari  tanaman  ini  terutama untuk  tujuan  pengobatan  tradisional  yang dikenal  dengan  jamu.  Manfaat  temulawak terutama  diperoleh  dari  kurkuminoid  yang merupakan  senyawa  aktif  dalam  rimpang tanaman  temulawak.  Hasil  penelitian  Liang et al. (1985)  menyatakan  bahwa  kurkumin rimpang  temulawak  berkhasiat  menetralkan racun,  menghilangkan  rasa  nyeri  sendi, menurunkan  kadar  kolesterol  darah,  dan sebagai antioksidan.
Beberapa penelitian menunjukkan bahwa senyawa kurkuminoid memiliki
bioavabilitas  yang  rendah  baik  pada  berbagai hewan model (Wahlstrom dan Blennow 1978; Ravindranath et  al. 1980  dan  1981;  Pan et  al. 1999)  dan  manusia  (Shoba et  al. 1998). Penyebab rendahnya bioavailabilitas kurkumin dikarenakan  senyawa  tersebut  hampir  tidak larut  dalam  air  pada  pH  asam  dan  netral sehingga  sulit  sekali  terabsorpsi.  Salah  satu cara  untuk  mengatasi  masalah  tersebut  antara lain  dengan  penyatuan  kurkuminoid  ke  dalam sistem  koloid  pembawa  ( colloidal  carrier system )  membentuk  sediaan  nanopartikel kurkuminoid. Nanopartikel lemak padat memiliki  sifat  yang  unik,  yaitu  ukurannya kecil,  luas  permukaan  besar,  dan  kapasitas pemuatan  obat  yang  tinggi  (Kamble et  al. 2010). Selain itu, beberapa penelitian menunjukkan  bahwa  penggunaan  obatobatan dalam skala nano dapat mengurangi dosis obat yang dapat  mengakibatkan efek samping pada beberapa  pasien  (Malsch  2005).  Nanopartikel lemak  padat, Solid  Lipid  Nanoparticle (SLN) dikembangkan  sebagai  suatu  alternatif  untuk nanopartikel  polimer,  liposom,  dan  emulsi. SLN  merupakan  koloid  pembawa  submikron yang  terdiri  dari  lemak  fisiologis,  terdispersi dalam  air  atau  dalam  suatu  larutan  surfaktan berair  (Kamble et  al. 2010).  Diantara pembawa pengantaran obat modern, SLN telah menjadi sistem koloid pembawa yang menjanjikan.  Dibandingkan  dengan  partikel pembawa  yang  lain,  SLN  memiliki  sejumlah keuntungan  sebagai  sistem  pengantaran  obat, seperti  tolerabilitas  dan  biodegradasi  yang baik,  bioavailabilitas  yang  tinggi,  efisien mengenai  sasaran,  dan  mudah  dipersiapkan dan disterilisasi dalam skala besar (Pang et al. 2009).
Mujib (2011) telah berhasil melakukan karakterisasi nanopartikel kurkuminoid tersalut lemak padat dengan metode homogenisasi dan ultrasonikasi dengan komposisi  asam  palmitat  :  kurkuminoid terbaik adalah 1 : 0.1 dengan volume 100 mL, diperoleh  ukuran  partikel  sebesar  252.3±69.4
nm  dengan  efisiensi  penjerapan  77.65%. Formulasi  nanopartikel  kurkuminoid  lemak padat telah diketahui, namun efek nanopartikel kurkuminoid  terhadap  status  antioksidan secara in vivo belum diketahui.
Penelitian  ini  bertujuan  melakukan karakterisasi  nanopartikel  lemak  padat  dan mengukur  efek  nanopartikel  kurkuminoid temulawak terhadap aktivitas enzim antioksidan  yang  meliputi  enzim  peroksidase, superoksida dismutase, dan glutation peroksidase,  serta  kadar  malondialdehida. Selain  itu,  penelitian  ini  diharapkan  dapat memberikan  informasi  mengenai  efektivitas nanopartikel  kurkuminoid  temulawak  tersalut lemak  padat  terhadap  status  antioksidan  pada tikus Sprague-Dawley betina dengan perlakuan stres oksidatif   yang diinduksi CCl 4 serta  dapat  menjadi  langkah  awal  penggunaan nanopartikel  kurkuminoid  temulawak  asal Balittro  sebagai  obat  tradisional    yang bermanfaat sebagai antioksidan.
Hipotesis penelitian ini adalah nanopartikel  kurkuminoid  temulawak  tersalut lemak padat  dapat  meningkatkan bioavabilitas di  dalam  tubuh.  Hal  tersebut  ditunjukkan dengan penurunan kadar malondialdehida serta peningkatan  aktivitas  enzim  superoksida dismutase, peroksidase, dan glutation peroksidase.

## 2. METODOLOGI
Penelitian ini menggunakan tikus putih ( Rattus sp.)  betina  galur    Sprague-  Dawley berasal  dari  Pusat  Studi  Satwa  Primata berumur 4-8 minggu dengan bobot 140-170 g. Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini antara lain kurkuminoid dari rimpang temulawak Balai Penelitian Tanaman Obat dan Aromatik (BALITTRO), kurkuminoid (Merck),  asam  palmitat  (Merck),  poloksamer 188  (BASF),  air  reverse  osmosis  (RO), vitamin  C,  larutan  pengukuran  superoksida dismutase,  peroksidase,  glutation  peroksidase, dan  malondialdehida  (MDA),  etanol,  n-
heksana,  standar  kurkuminoid,  metanol,  dan CCl 4 .
Alat  yang  digunakan  adalah  pengaduk magnet,  homogenizer  (Ultra  Turrax  T18), ultrasonic  processor  (130  Watt  20  kHz,  Cole- Parmer),  mikrosentrifusa  (MIKRO  200R, Hettich  Zentrifugen),  spektrofotometer  UV- Vis  (UV-1700  Pharmaspec),  particle  size analyzer  (Delsa  NanoC),  dan  microplate reader.

## Karakterisasi  Nanopartikel  Kurkuminoid
Tersalut Lemak Padat
Pembuatan Nanopartikel Kurkuminoid Tersalut Asam Palmitat (Mujib 2011)
Fase  lemak  terdiri  atas  1  g  asam palmitat  dan  0.1  g  kurkuminoid  dipanaskan pada suhu 75°C sambil diaduk. Fase air terdiri atas  0.5  g  poloksamer  188  dan  100  mL  air reverse  osmosis yang  dipanaskan  pada  suhu (75°C).  Fase  lemak  didispersikan  ke  dalam fase air sambil diaduk. Emulsi yang dihasilkan kemudian  dihomogenisasi  dengan  kecepatan 13500  rpm  selama  5  menit,  selanjutnya diultrasonikasi dengan amplitudo 20 % selama 60  menit.  Nanopartikel  kurkuminoid  yang diperoleh didinginkan pada suhu 0°C sehingga dihasilkan  nanopartikel  kurkuminoid  dalam bentuk emulsi.
Efisiensi Penjerapan (Yadav et al. 2008) Nanopartikel kurkuminoid yang dihasilkan  disentrifugasi  dengan  kecepatan 14000  rpm  (18626×G)  pada  suhu  4°C  selama 40  menit  dan  supernatannya  didekantasi. Residunya  diekstraksi  dengan  metanol  89%, kemudian  disentrifugasi  pada  kecepatan  yang sama.  Serapan  supernatan  metanol  diukur dengan spektrofotometer pada panjang gelombang  425  nm.  Efisiensi  penjerapan dihitung dengan persamaan:
Konsentrasi kurkuminoid terjerap diperoleh melalui perhitungan dengan menggunakan  persamaan  regresi  linear  dari deret standar kurkuminoid.
Analisis Ukuran Partikel (Pang et al. 2007). Emulsi kurkuminoid-SLN yang dihasilkan selanjutnya dianalisis ukuran partikelnya  ditentukan  dengan  menggunakan particle  size  analyzer berdasarkan  distribusi jumlah.
Rancangan  Percobaan  dan  Hewan  Uji (Konatham et al. 2010 modifikasi)
Penelitian  ini  menggunakan  27  ekor tikus  betina  galur Sprague-Dawley yang berasal  dari  laboratorium  Pusat  Studi  Satwa Primata,  berusia  sekitar  4-8  minggu  dengan berat  badan  sekitar  140-170  g.  Tikus  dibagi menjadi  9  kelompok  masing-masing  terdiri dari  3  ekor  tikus.  Hewan  coba  diaklimatisasi selama  minimal  1  minggu  dan  dimasukkan dalam kandang kelompok. Sebelum percobaan,  hewan  coba  ditimbang  berat badannya.  Selanjutnya  tikus  dibuat  rusak hatinya  sehingga  mengalami  oksidasi  dengan 0.7  mL/kgBB  CCL 4 33%  (dalam olive  oil ) pada hari ke 3, 6, dan 9  secara intraperitoneal kecuali kelompok normal. Kelompok 1 adalah kelompok  normal  tanpa  induksi  CCl 4 yang diberikan.  Kelompok  2  kontrol  negatif  diberi CCl 4 tanpa  pemberian  sediaan  apapun. Kelompok  3  diberi  nanopartikel  kurkuminoid temulawak Balitro dengan dosis 50 mg/kg BB. Kelompok  4  diberi  nanopartikel  kurkuminoid temulawak  Balitro  dengan  dosis  100  mg/kg BB. Kelompok 5 diberi nanopartikel kurkuminoid  temulawak  Balitro  dengan  dosis 1500  mg/kgBB.  Kelompok  6  diberi  ekstrak kurkuminoid  temulawak Balittro dengan dosis 100  mg/kgBB.  Kelompok  7  kontrol  positif vitamin  C  dengan  dosis  36  mg/kgBB. Kelompok 8 kontrol positif standar kurkuminoid  dengan  dosis  20  mg/kgBB. Kelompok  9  kontrol  nanopartikel  placebo.
Semua  sediaan  diberikan  secara  oral  dalam bentuk  larutan  dalam  air  dengan  sonde lambung.  Hari  ke-10  dilakukan euthanasia untuk diambil hatinya dan selanjutnya aktivitas  enzim  enzim  superoksida  dismutase (SOD), peroksidase (POX), glutation peroksidase (Gpx), dan kadar malondialdehida (MDA)  diukur  untuk  menentukan  efek antioksidan sediaan yang diuji.

## Pengukuran kadar MDA (Biovision 2013)
Preparasi  sampel  dengan  cara  10  mg jaringan hati dihomogenisasi dengan 3    μL  l             MDA  (3  μL BHT  100x).  Homogenat  yang  dihasilkan selanjutnya  disentrifugasi  dengan  kecepatan 13000  g  selama  10  menit.  Sedangkan  untuk standar  dilakukan  denga                 μL MDA      c               4 7  μL ddH 2 O  untuk  mempersiapkan  0.1  M  MDA. 2   μL   .   M  MDA      c 98   μL    H 2 O  untuk menyiapkan 2 mM MDA, selanjutnya ,  2,  4,  6,  8,           μL        2 mM  MDA ke tabung microcentrifuge terpisah v l            2    μL ddH 2 O.  S         6    μL  l        TBA ditambahkan  dalam  setiap  botol  berisi  standar dan  sampel.  Selanjutnya  dilakukan  inkubasi pada  suhu  95°C  selama  60  menit.  Campuran reaksi  didinginkan  sampai  suhu  kamar  dalam penangas  es  selama  10  menit.  Campuran 2    μL  (      8    μL campuran) dimasukkan ke dalam setiap sumur pada microplate untuk  analisis  dan  dibaca pada 532 nm.
Pengukuran aktivitas superoksida
dismutase (Biovison 2013)
Jaringan  hati  sebanyak  10  mg  dibilas dengan  PBS-KCl  dan  dihomogenkan  dalam 0.1  M  Tris-HCl.  Kemudian  homogenat disentrifus  pada  kecepatan  14000  g  selama  5 menit  suhu  4°C  dan  supernatan  dikumpulkan. S         2   μL  l             l
untuk  setiap  sumur  sampel  dan  blanko  2  dan 2   μL    H 2 O  pada  blanko  1  dan  blanko  3. S l                     2   μL l WST                     .  S l          2   μL larutan  bufer  pengencer  pada  blanko  2  dan l     3           2  μL l         z setiap sampel dan blanko 1. Sampel diinkubasi pada  suhu  37°C  selama  20  menit.  Absorbansi diukur pada panjang gelombang 450 nm.
Pengukuran  aktivitas  glutation  peroksidase (Biovision 2013)
Jaringan hati sebanyak 0.1 g dihomogenkan  dalam  0.2  mL  larutan  buffer dingin.  Selanjutnya  homogenat  disentrifugasi pada  10000  g  selama  15  menit  pada  4°C  dan supernatan  dikumpulkan.  Reaksi  campuran 4   μL                         - masing  sampel  uji  dan  kontrol  positif  lalu aduk. Selanjutnya campuran tersebut diinkubasi  sela     5       .  S             μL cumene  hydroperoxide ditambahkan  dan diaduk  rata.  Selanjutnya  diukur  absorbansi pada 340 nm pada T1 untuk membaca A1, dan diakhiri  dengan  pengukuran  absorbansi  pada 340 nm lagi di T2 setelah inkubasi reaksi pada 25°C  selama  5  menit  untuk  membaca  A2 dengan  melindungi  sampel  dari  cahaya. NADPH  (nikotinamida  adenin  dinukleotida )  4    M            25  μL      c 975  μL    H 2 O  untuk  menghasilkan NADPH  1  mM.  Selanjutnya  ditambahkan  0, 2 , 4 , 6 , 8 ,     μL         M NADPH ke microplate menghasilkan 0, 20, 40, 60, 80, 100 nmol/sumur.  Ke  dalam  masing-masing  sumur v l                 μL buffer,  selanjutnya  dilakukan  pengukuran absorbansi  pada  340  nm  untuk  penentuan kurva standar NADPH.

## Pengukuran aktivitas peroksidase (Biovison
2013)
Homogenat  hati  disentrifugasi  selama 15  menit  pada  1000  g  dalam  waktu  30  menit untuk  menghilangkan  partikulat  pelet.  Sampel
2  μL                  l v l            5   μL dengan  bufer.  Sebanya   5   μL campuran  ditambahkan  pada  masing-masing sampel  uji  dan  kontrol  positif  hidrogen peroksida  (HRP).  Selanjutnya  diaduk  dan diinkubasi  selama  3  menit  pada  37°C  dan dilakukan pengukuran absorbansi pada 570 nm utuk  pengukuran  A0.  Selanjutnya  diinkubasi selama  90  menit  pada  suhu  37°C  untuk pengukuran  absorbansi  pada  570  nm  untuk A . S                      ,             μL subtrat  H 2 O 2 12.5  mM  diencerkan  dengan 24   μL                      H 2 O 2 substrat  0.1  mM.  Substrat  hasil  pengenceran ,   , 2 , 3 , 4 , 5  μL pada  sumur  dan  ditepatkan  volume  akhir  50 μL
menghasilkan  0,  1,  2,  3,  4,  5  nmol/sumur standar H 2 O 2 . Untuk setiap sumur, dipersiapkan  total  5   μL          c 2  μL Probe  OxiRed 48  μL HRP  kontrol  positif.  Campuran  diinkubasi selama 5 menit dan mengukur absorbansi pada 570 nm dalam microplatereader.

## Analisis  Data  (Mattjik  dan  Sumertajaya
2000)
Rancangan  acak  lengkap  digunakan pada  rancangan  penelitian  ini.  Data  yang diperoleh  dianalisis  dengan  metode  ANOVA ( analysis of variance ) pada tingkat c       95               α      . 5.  M   l rancangan tersebut adalah sebagai berikut.
Y     µ + τ + ε i

## Keterangan:
Yij = pengamatan perlakuan ke-i dan ulangan ke-j µ = Pengaruh rataan umum τ   P                 -i ε i = Pengaruh galat perlakuan ke-i dan ulangan ke-j
Uji  lanjut  yang  digunakan  adalah  uji D  c          l         c      9  ,       α
= 0.05. Semua data dianalisis dengan program SPSS 11.5.

## 3. HASIL

## Karakteristik  Nanopartikel  Kurkuminoid tersalut Lemak Padat
Karakterisasi nanopartikel
kurkuminoid  memiliki  tiga  parameter  dalam pengukurannya  yang meliputi  rata-rata ukuran partikel,  indeks  polidispersitas,  dan  efisiensi penjerapan. Hasil pengukuran partikel
nanopartikel
kurkuminoid dianalisis menggunakan alat particle size analyzer Delsa NanoC  (Beckman  Coulter).  Ukuran  partikel yang  dihasilkan  adalah  141.85+38.82  nm dengan indeks polidispersitas sebesar
0.233+0.06  (Tabel  1).  Efisiensi  penjerapan emulsi  nanopartikel  kurkuminoid  70.96%. Gambar  1  menunjukkan  formulasi  emulsi nanopartikel  kurkuminoid  yang  baik  yang ditandai dengan warna kuning cerah yang larut sempurna  tanpa  ada  gumpalan  didalamnya (homogen).
Tabel 1. Distribusi ukuran partikel dan efisiensi penjerapan Jenis Sampel Rata-Rata Ukuran Partikel
Jenis Sampel Rata—rata Ukuran Partikel (nm)* Indeks Polidispersitas (IP)* [kurkuminoid] terjerap (mg/mL) [kurkuminoid] ditambahkan (mg/mL) Efisiensi Penjerapan (%)* Nanopartikel kurkuminoid 141.85+38.82 0.233+0.06 0.7096 1 70.96+9.3 0
Keterangan (*): n= 3 kali ulangan

## Bobot Badan dan Kondisi hewan coba
Pengamatan kondisi hewan coba dilakukan  selama  10  hari  yang  meliputi  pola tingkah  laku,  bobot  badan,  dan  keadaan  fisik hewan  coba.  Selama  perlakuan,  tidak  terjadi keabnormalan  perilaku  dan  feses  pada  tikus. Feses tikus tidak mengalami perubahan warna (feses  tetap  berwarna  hitam).  Parameter  yang diamati  selanjutnya  adalah  perubahan  bobot badan selama perlakuan. Tabel 2 menunjukkan bahwa  secara  umum  bobot  badan  semua kelompok cenderung meningkat selama pemberian  perlakuan.  Tetapi,  di  hari  ke-4 kelompok
perlakuan
CCl 4 , ekstrak kurkuminoid 100 mg/kgBB, dan vitamin C 36 mg/kgBB  mengalami  penurunan  berat  badan, jika dibandingkan dengan kelompok perlakuan lain  yang  cenderung  mengalami  kenaikan
bobot  badan.  Secara  statistik,  bobot  badan kelompok  normal  berbeda  nyata  (p<0.05) dengan  kelompok  nanopartikel  kurkuminoid 1500  mg/kgBB,  ekstrak  kurkuminoid  100 mg/kgBB, dan kelompok perlakuan vitamin C 36  mg/kgBB.  Parameter  terakhir  yang  dapat diamati  setelah  perlakuan  adalah  pengamatan fisik  hati  tikus  yang  dilakukan  setelah euthanasia .  Hati  tikus  yang  diinduksi  CCl 4 terlihat mengalami abnormalitas berupa pustula  (Gambar  2b),  sedangkan  tikus  yang tidak  diinduksi  CCl 4 (kelompok  normal)  tidak ditemukan adanya pustula di  hatinya (Gambar 2a).

## Status Antioksidan Tikus Percobaan
Status  antioksidan  suatu  bahan  secara in  vivo dapat  dilakukan  dengan  pengukuran
Gambar 1 . Emulsi nano partikel kurkuminoid tersalut lemak padat
terhadap  kadar  MDA,  aktivitas  superoksida dismutase (SOD), aktivitas glutation peroksidase  (GPx)  dan  aktivitas  peroksidase hati  tikus.  Kadar  MDA  yang  terukur    dari kelompok    pemberian  nanopartikel  dosis  50 mg/kgBB,  nanopartikel  dosis  100  mg/kgBB, dan  nanopartikel  dosis  1500  mg/kgBB  dapat menurunkan kadar MDA hati tikus dibandingkan  dengan  kelompok  normal  dan
CCl 4 . Hasil pengukuran pemberian nanopartikel  ini  menunjukkan  hasil  yang hampir  sama  dengan  kelompok  ekstrak kurkuminoid. Kadar MDA terendah ditunjukkan  pada  kelompok  nanopartikel kosong.  Sedangkan  kadar  MDA  tertinggi ditunjukkan pada kelompok vitamin C. Tetapi, secara  statistik  pengukuran  kadar  MDA  dari keseluruhan kelompok tidak berbeda nyata.

## Tabel 2. Pengamatan bobot badan tikus
Kelompok Hari ke- % perubahan 0 2 4 6 8 Normal 149.76 156.40 157.63 159.30 158.77 6.02 ab CCl 4 178.23 187.60 186.37 189.13 189.077 6.08 ab Nanopartikel  kurkuminoid 50 mg/kgBB 160.03 170.27 170.27 169.13 165.83 3.62 ab Nanopartikel kurkuminoid 100 mg/kgBB 146.03 150.63 152.87 153.40 156.87 7.42 ab Nanopartikel kurkuminoid 1500 mg/kgBB 152.83 164.30 165.60 166.37 171.70 12.35 ab Ekstrak kurkuminoid 100 mg/kgBB 143.53 163.40 160.93 162.83 161.60 12.59 ab Vitamin C 36 mg/kgBB 141.97 155.37 153.10 159.57 160.93 13.35 ab Standar kurkuminoid 100 mg/kgBB 147.87 149.83 151.93 155.60 158.87 7.44 ab Nanopartikel  kosong 158.3 163.50 169.83 169.83 168.00 6.17 ab
Angka-angka pada kolom yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 5% (uji selang berganda Duncan).
Gambar 2. Hati tikus Sprague dawley Betina setelah euthanasia dengan perlakuan Keterangan: A=normal, B=induksi CCl 4
Gambar 3. Keadaan feses tikus setelah diberi perlakuan

## Status Antioksidan Tikus Percobaan
Status  antioksidan  suatu  bahan  secara in  vivo dapat  dilakukan  dengan  pengukuran terhadap  kadar  MDA,  aktivitas  superoksida dismutase (SOD), aktivitas glutation peroksidase  (GPx)  dan  aktivitas  peroksidase hati  tikus.  Berdasarkan  pengukuran  kadar MDA  menunjukkan  bahwa  pemberian  CCl 4
dapat meningkatkan kadar MDA jika dibandingkan  dengan  kelompok  pemberian nanopartikel  (Gambar  4).  Kadar  MDA  yang terukur dari kelompok pemberian nanopartikel  dosis  50  mg/kgBB,  nanopartikel dosis  100  mg/kgBB,  dan  nanopartikel  dosis 1500 mg/kgBB dapat menurunkan kadar MDA hati  tikus  dibandingkan  dengan  kelompok
Pustula
Fesses
normal dan CCl 4 . Hasil pengukuran pemberian nanopartikel  ini  menunjukkan  hasil  yang hampir  sama  dengan  kelompok  ekstrak kurkuminoid. Kadar MDA terendah ditunjukkan  pada  kelompok  nanopartikel kosong.  Sedangkan  kadar  MDA  tertinggi ditunjukkan pada kelompok vitamin C. Tetapi,
secara  statistik  pengukuran  kadar  MDA  dari keseluruhan kelompok tidak berbeda nyata.
Hasil pengukuran aktivitas superoksida dismutase (SOD) menunjukkan semua kelompok  perlakuan  memiliki  aktivitas  yang lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  kelompok normal (Gambar 5).
Gambar 4. Kadar MDA tikus Sprague-Dawley Betina 1) Normal; 2) CCl 4 ; 3) Nanopartikel  kurkuminoid 50 mg/kgBB;
4)  Nanopartikel  kurkuminoid  100  mg/kgBB;  5)  Nanopartikel  kurkuminoid  1500  mg/kgBB;  6)  Ekstrak kurkuminoid  100  mg/kgBB;  7)  Vitamin  C  36  mg/kgBB;  8)  Standar  kurkuminoid  20  mg/kgBB;  9) Nanopartikel  placebo.
Keterangan: Angka-angka pada grafik yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 5% (uji Duncan).
Gambar  5. Aktivitas  enzim  superoksida  dismutase  hati  tikus Sprague-Dawley Betina  1)  Normal;  2)  CCl 4 ;  3) Nanopartikel    kurkuminoid  50  mg/kgBB;  4)  Nanopartikel  kurkuminoid  100  mg/kgBB;  5)  Nanopartikel kurkuminoid  1500  mg/kgBB;  6)  Ekstrak  kurkuminoid  100  mg/kgBB;  7)  Vitamin  C  36  mg/kgBB;  8) Standar kurkuminoid 20 mg/kgBB; 9) Nanopartikel  placebo.
Keterangan: Angka-angka pada grafik yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 5% (uji Duncan).
Pemberian  CCl 4 dapat  menurunkan aktivitas  SOD.  Ketiga  kelompok  perlakuan dengan  nanopartikel  kurkuminoid  diketahui meningkatkan  aktivitas  superoksida  dismutase dibandingkan  kelompok  normal  dan  CCl 4 . Hasil  pengukuran  dengan  pemberian  ekstrak kurkuminoid  menunjukkan  hasil  yang  hampir sama dengan pemberian naopartikel kurkuminoid  dosis  1500  mg/kgBB.  Aktivitas
tertinggi  terdapat  pada  kelompok  5.  Secara statistik,  aktivitas  enzim  menunjukkan  hasil yang  berbeda  nyata.  Artinya,  pemberian nanopartikel kurkuminoid dosis 1500 mg/kgBB memiliki efek meningkatkan aktivitas SOD.
Hasil  yang  sama  juga  ditunjukkan pada pengukuran aktivitas glutation peroksidase (Gambar 7).
Gambar  6. Aktivitas  enzim  glutation  peroksidase  hati  tikus Sprague-Dawley Betina  1)  Normal;  2)  CCl 4 ;  3) Nanopartikel  kurkuminoid  50  mg/kgBB;  4)  Nanopartikel  kurkuminoid  100  mg/kgBB;  5)  Nanopartikel kurkuminoid  1500    mg/kgBB;  6)  Ekstrak  kurkuminoid  100  mg/kgBB;  7)  Vitamin  C  36  mg/kgBB;  8) Standar kurkuminoid 20   mg/kgBB; 9) Nanopartikel  placebo.
Keterangan: Angka-angka pada grafik yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji  5% (uji Duncan).
Gambar  7. Aktivitas  enzim  peroksidase  hati  tikus Sprague-Dawley Betina  1)  Normal;  2)  CCl 4 ;  3)  Nanopartikel kurkuminoid  50  mg/kgBB;  4)  Nanopartikel  kurkuminoid  100  mg/kgBB;  5)  Nanopartikel  kurkuminoid 1500  mg/kgBB;  6)  Ekstrak  kurkuminoid  100  mg/kgBB;  7)  Vitamin  C  36  mg/kgBB;  8)  Standar kurkuminoid 20 mg/kgBB; 9) Nanopartikel  placebo.
Keterangan: Angka-angka pada grafik yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 5% (uji Duncan).
Akti v ita s G lu ta tio n p er o k sid a se
Kelompok
dengan perlakuan pemberian CCl 4 sebagai agen radikal eksogen menunjukkan aktivitas yang lebih rendah jika dibandingkan kelompok pemberian nanopartikel  kurkuminoid.  Ketiga  perlakuan dengan  pemberian  nanopartikel  kurkuminoid dapat meningkatkan aktivitas glutation peroksidase.  Aktivitas  GPx  pada  pemberian ekstrak  kurkuminoid  lebih  rendah  jika dibandingkan  dengan  kelompok  CCl 4 dan pemberian  nanopartikel  kurkuminoid,  tetapi masih  jauh  lebih  tinggi  aktivitasnya  jika dibandingkan  dengan  kelompok  normal. Dosis  nanopartikel  kurkuminoid  sebesar  100 mg/kgBB  memberikan  hasil  yang  berbeda nyata  dibandingkan  dengan  normal  dalam meningkatkan aktivitas glutation peroksidase.
Berdasarkan pengukuran aktivitas peroksidase,  diketahui  bahwa  pemberian nanopartikel  kurkuminoid  dosis  50  mg/kgBB dan  1500  mg/kgBB  pada  tikus  meningkatkan aktivitas peroksidase dibandingkan kelompok normal  walaupun  secara  statistik  hasil keduanya  tidak  berbeda  nyata.  Aktivitas enzim  peroksidase  tertinggi  terdapat  pada kelompok  8  dengan  aktivitas  sebesar  3.2532 mU/mL. Sedangkan, aktivitas enzim peroksidase terendah ditunjukkan oleh kelompok  2  dengan  perlakuan  pemberian CCl 4 . Kelompok perlakuan lainnya menunjukkan  hasil  yang  tidak  berbeda  jauh dengan  kelompok  normal.  Secara  statistik, secara keseluruhan aktivitasnya tidak menunjukan  perbedaan  yang  nyata  antar kelompoknya (p<0.05).

## 4. PEMBAHASAN
Karakterisasi  Nanopartikel  Kurkuminoid tersalut Lemak Padat
Penyalut yang digunakan dalam pembuatan  nanopartikel  kurkuminoid  adalah asam  palmitat.  Penggunaan asam  palmitat  ini mengacu pada pembuatan nanopartikel kurkuminoid yang telah dilakukan oleh Mujib
(2011).  Selain  itu,  asam  palmitat  merupakan asam lemak yang
meningkat bioavailabilitasnya  pada  mencit  (Xie  2011). Perbandingan penggunaan antara kurkuminoid dengan asam palmitat adalah 1 : 0.1  dengan  volume  100  mL.  Formula  yang dihasilkan  berupa  emulsi  dengan  warna kuning cerah dan homogen (Gambar 1).
Emulsi nanopartikel kurkuminoid yang telah dihasilkan selanjutnya diultrasonikasi pada amplitudo 20% selama 1 jam.  Metode  ultrasonikasi  ini  bertujuan memecah  partikel  dalam  emulsi  menjadi partikel yang lebih kecil sehingga menghasilkan  ukuran  partikel  yang  seragam (Mujib  2011).  Keseragaman  ukuran  partikel berkaitan  erat  dengan  dengan  penyerapan nanopartikel di dalam tubuh. Kecilnya ukuran partikel  akan  meningkatkan  luas  permukaaan yang menyebabkan kelarutan tinggi. Tingginya  kelarutan  memudahkan  partikel tersebut untuk diserap ke dalam tubuh (Awad et  al. 2008).  Ukuran  partikel  nanopartikel kurkuminoid ditentukan dari alat Particle Size Analyzer dengan  metode photon  correlation spectroscopy (PCS).  Tabel  1  memperlihatkan ukuran  partikel  nanopartikel  kurkuminoid yang  kecil  yaitu  141.85+38.82  nm,  ukuran tersebut masuk dalam rentang ukuran partikel nanopartikel lemak padat  yang baik  yaitu 50- 1000 nm (Ristanti 2008).
Nilai indeks polidipersitas (IP)
nanopartikel kurkuminoid adalah 0.233+0.06.
Indeks  polidipersitas  adalah  parameter  yang menyatakan  distribusi  ukuran  partikel  dari sistem  nanopartikel,  bila  nilai  IP  kurang  dari 0.3  maka  ukuran  partikel  memiliki  distribusi yang  sempit  (Mujib  2011).  IP  nanopartikel kurkuminoid  memiliki  nilai  yang  kurang  dari 0.3  (Tabel  1),  hal  tersebut  menunjukkan distribusi  ukuran  partikel  yang  sempit  dan mengindikasikan proses pembuatan nanopartikel telah berhasil.
Efisiensi penjerapan merupakan parameter penting dalam karakterisasi nanopartikel  tersalut  lemak  padat.  Metode efisiensi  penjerapan  yang  digunakan  adalah metode langsung, yaitu dengan mengekstraksi kurkuminoid  yang  terjerap  dalam  matriks lemak  menggunakan  metanol  setelah    lemak padat  dipisahkan  dari  medium  pendispersi dengan sentrifugasi. Konsentrasinya kemudian ditetapkan dengan spektrofotometri UV-Vis  pada  panjang  gelombang  maksimum 425  nm  menggunakan  persamaan  regresi linear  dari  kurva  kalibrasi  kurkuminoid standar  (Lampiran  2).  Efisiensi  terjerap didefinisikan sebagai  persentase kurkuminoid yang  terjerap  ke  dalam  lemak  padat dibandingkan dengan total  kurkuminoid  yang ditambahkan.  Presentase  efisiensi  penjerapan kurkuminoid  pada  nanopartikel  lemak  padat diperoleh sebesar 70.96+9.30% (Tabel 2). Hal tersebut sesuai dengan standar sistem penghantaran obat yang baik yaitu diatas 60% (Konatham et  al. 2010).  Nilai  efisiensi penjerapan  bergantung  pada  seberapa  besar zat  aktif  yang  ditambahkan  pada  saat pembuatan  nanopartikel  lemak  padat,  karena merupakan  perbandingan  jumlah  zat  aktif yang  terjerap  dengan  yang  ditambahkan (Mujib  2011).  EP  juga  dipengaruhi  oleh kelarutan  zat  aktif  dalam  lemak  cair  (Parhi dan Suresh 2010).

## Bobot Badan dan Kondisi Hewan Coba
Hewan  coba  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  tikus  varietas  Rattus norvegicus  galur  Sprague  Dawley  betina sebanyak  27  ekor  berumur  delapan  minggu dengan bobot badan 153.1644+11.23 g. Tikus dikandangkan pada kandang Rodentia Laboratorium  Pusat  Studi  Satwa  Primata. Penggunaan  tikus  Sprague  Dawley  sebagai hewan coba dalam penelitian ini, karena tikus ini  banyak  digunakan  dalam  penelitian mengenai  imunitas.  Selain  itu,  tikus  ini  tidak
dapat  muntah  sehingga  lebih  mudah  dalam melakukan  pencekokan.  Pengandangan  tikus dibagi  secara  berkelompok.  Hewan  coba dikandangkan  dengan  kandang  khusus  yang terbuat  dari  plastik  yang  beralaskan  beeding. Penerangan  kandang  diatur  secara  otomatis pada kondisi 12 jam terang dan 12 jam gelap dengan suhu ruangan 230C.
Sebelum  memulai  perlakuan,  tikus diadaptasi  selama  satu  minggu.  Adaptasi bertujuan  menghindari  resiko  timbulnya  stres selama proses transportasi serta menyeragamkan  pola  makan  ataupun  pola hidup  dengan  lingkungan  baru.  Selama adaptasi  hewan  coba  diberikan  pakan  standar sebanyak  +  20  g.  Pemberian  pakan  ini  sudah sesuai  dengan  angka  kebutuhan  konsumsi pakan  tikus  per  hari  (Puspawati  2009). Penentuan  banyaknya  sisa  pakan  dilakukan dengan cara scoring .
Berdasarkan  data  pengamatan  bobot badan  hewan  coba,  keseluruhan  hewan  coba pada  setiap  perlakuan  mengalami  kenaikan bobot  badan  sebesar  8.21%  (Tabel  3).  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  pemberian sediaan  nanopartikel  kurkuminoid  tidak mengakibatkan penurunan bobot badan hewan  coba,  sebaliknya  meningkatkan  bobot badan.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian Puspawati  (2009)  yang  menyatakan  bahwa pemberiaan  sediaan  antioksidan  pada  hewan coba  tidak  memberikan  efek  negatif  maupun penurunan  bobot  badan  hewan  coba,  tetapi memberikan  efek  kenaikan  bobot  badan hewan coba. Selain itu, kenaikan bobot badan ini  dipengaruhi  oleh  tingkat  konsumsi  pakan dan  umur  tikus  yang  berada  dalam  masa pertumbuhan  ( mature  point ),  yaitu  kurang dari 6 bulan. Umur tikus yang digunakan pada awal  adaptasi  adalah  ±2  bulan.  Kondisi  ini menunjukkan  tikus  dalam  keadaan  sehat, tidak  ada  gangguan  pertumbuhan,  dan kalorinya tercukupi (Lu 2006).
Perlakuan  hewan  coba  kemudian dilanjutkan dengan induksi atau cekok karbon tetraklorida. Karbon tetraklorida (CCl 4 ) merupakan  sumber  radikal  bebas  eksogen yang  dapat  menyebabkan  stres  oksidatif (Simanjuntak  2007).  Simanjuntak  (2007) menyatakan  bahwa,  apabila  tubuh  terpapar CCl 4 dapat  menyebabkan  kerusakan  hati. Penelitian  lain  menyebutkan  bahwa  CCl 4 merupakan  penyebab  kerusakan  hati  yang ditandai  dengan peradangan  akut  pada sel-sel hati,  yakni  terjadinya  nekrosis  yang  ditandai pustula  pada  hati  (Shanmugasundaram  dan Venkataraman  2006).  Pernyataan  ini  sesuai dengan  pengamatan  kondisi  hati  tikus  yang diinduksi  dengan  CCl 4 yang  menunjukan abnormalitas  berupa  pustula,  sedangkan  hati tikus kelompok normal (tidak diinduksi CCl 4 ) tidak menunjukkan ketidaknormalan (Gambar 2).
Induksi  CCl 4 dilakukan  pada  hari  ke- 3.  Kelompok  tikus  yang  diinduksi  dengan CCl 4 mengalamai  penurunan  bobot  badan pada  penimbangan  bobot  badan  di  hari  ke-4 dari  187.60  g  menjadi  186.37  g  (Tabel  2). Jeon  et  al  (2003)  menyatakan  bahwa pemberian CCl 4 mengacaukan proses oksidasi dan  menurunkan  bobot  badan.  Hal  ini menunjukkan  adanya  pengaruh  pemberian CCl 4 terhadap bobot badan tikus.
Secara fisik semua tikus tetap memiliki mata merah yang jernih, bulu putih, tidak  rontok,  serta  feses  padat  dan  hitam (Gambar 3). Warna feses normal mengindikasikan  nanopartikel  kurkuminoid dapat  terserap  dengan  baik  oleh  tikus  karena warna  feses  tidak  berubah  menjadi  kuning (warna  kurkumin).  Selain  pengamatan  feses, pada  tingkah  laku  tikus  tidak  ditemukan adanya  kelainan,  selama  pengamatan  tidak ditemukan  adanya  tikus  yang  gelisah  dan hiperaktif.
Kadar MDA pada Hati Tikus
Keadaan  stres  oksidatif  terjadi  bila jumlah radikal bebas dalam tubuh lebih tinggi dari jumlah sistem antioksidan. Stres oksidatif yang  ditimbulkan  oleh  radikal  bebas  tersebut dapat ditentukan dengan mengukur salah satu parameter  berupa  kadar  malondialdehida (MDA).  Bila  kadar  MDA  tinggi,  maka  dapat dipastikan  sel  mengalami  stres  oksidatif (Valko 2006). Sehingga kadar MDA merupakan  indeks  parameter  tidak  langsung terjadinya  stres  oksidatif.  Sumber  radikal bebas  yang  dihasilkan  dari  luar  yang  dapat menimbulkan  stres  oksidatif  adalah  karbon tetraklorida (CCl 4 ).
Pengukuran kadar MDA pada penelitian ini menggunakan metode tiobarbiturat  (TBA).  Prinsip  pengukuran MDA adalah reaksi  satu molekul  dengan dua molekul  TBA  yang  membentuk  kompleks MDA-TBA  yang  berwarna  merah  muda sehingga dapat dikuantifikasi melalui spektrofotometri  pada  panjang  gelombang 532  nm  (Yagi  1998).  Alasan  penggunaan metode  ini  adalah  metode  TBA  mempunyai tingkat  kepekaan  yang  tinggi  pada  radikal bebas dan mudah diaplikasikan. MDA adalah produk  peroksidasi  lipid  dan  kadarnya  dapat ditekan  oleh  keberadaan  senyawa-senyawa antioksidan  (Prangdimurti et  al. 2006). Dengan  kata  lain,  kadar  MDA  yang  rendah menunjukkan adanya penghambatan terhadap oksidasi  lipid  oleh  antioksidan  (Simanjuntak 2007).
Gambar 4 menunjukkan bahwa pemberian CCl 4 sebagai agen radikal eksogen dapat meningkatkan kadar MDA jika dibandingkan  dengan  perlakuan  pemberian nanopartikel  kurkuminoid,  walaupun  masih lebih  tinggi  jika  dibandingkan  dengan kelompok normal. Hal ini sesuai dengan teori yang menyatakan bahwa CCl 4 dapat meningkatkan peroksidasi hati yang mengakibatkan kenaikan kadar MDA
(Simanjuntak  2007).  Pemberian  nanopartikel
dosis  50  mg/kgBB,  100  mg/kgBB,  dan  1500 mg/kgBB  serta  ekstrak  kurkuminoid  100 mg/kgBB  menurunkan  kadar  MDA  dengan kadar  MDA  yang  hampir  sama.  Sehingga dapat diketahui bahwa pemberian nanopartikel kurkuminoid memiliki efek yang sama dengan pemberian ekstrak kurkuminoid. Menurunnya kadar MDA pada tikus dikarenakan  karena  kurkuminoid  merupakan senyawa  fenolik  yang  akan  mendonorkan elektron  kepada  senyawa  radikal  yang dihasilkan oleh senyawa CCl 4 , sehingga akan menurunkan  oksidasi  lipid  yang  secara langsung  akan  menurunkan  kadar  MDA sebagai produk akhir proses tersebut (Puspawati 2009).
Pemberian  nanopartikel  placebo  yang terdiri  dari  asam  palmitat  dan  air  reverse osmosis pada tikus menunjukkan kadar MDA yang  lebih  rendah  jika  dibandingkan  dengan kelompok  normal,  tetapi  masih  lebih  tinggi jika  dibandingkan  pemberian  nanopartikel dan ekstrak kurkuminoid. Hal ini membuktikan pemberian nanopartikel placebo tidak  toksik,  karena  asam  palmitat  yang merupakan bahan pokok pembuatan nanopartikel  placebo  merupakan  produk normal  dari  sistem  asam  lemak  dalam  sel hewan  dan  berfungsi  sebagai  prekursor  asam lemak  rantai  panjang  lainnya  dan  dua  asam lemak  tidak  jenuh  (,  yaitu  asam  palmitoleat dan asam oleat (Lehninger 1982).
Berdasarkan  pengukuran  diketahui bahwa  pemberian  vitamin  C  yang  diketahui sebagai  antioksidan  eksogen  tidak  dapat menghambat  peroksidasi  lipid,  hal  itu  dapat terlihat  dari  meningkatnya  kadar  MDA  pada perlakuan  tersebut.  Sehingga  dapat  dikatakan vitamin  C  36  mg/kgBB  tidak  lebih  baik sebagai antioksidan jika dibandingkan kelompok pemberian nanopartikel kurkuminoid,  padahal  dosis  vitamin  C  yang digunakan  berdasarkan  dosis  toleransi  perut manusia  dalam  keadaan  normal  sebesar  400
mg  (Pauling  dalam  Fonorow  2008)  yang dikonversikan  pada  dosis  tikus  yaitu  sebesar 36 mg/KgBB. Peristiwa ini diduga disebabkan  penyerapan  senyawa  vitamin  C dalam  tubuh  tikus  tidak  optimal  karena  sifat senyawanya  mudah  larut  dalam  air  sehingga mudah  dikeluarkan  dari  dalam  tubuh  melalui urin (Almatsier 2004).
Secara  statistik  baik  kelompok  CCl 4 maupun  kelompok  perlakuan  pemberian nanopartikel  tidak  memiliki  perbedaan  yang nyata  (p<0.05).  Sehingga  dapat  dikatakan, pemberian  nanopartikel  kurkuminoid  belum maksimal sebagai antioksidan.

## Aktivitas  Superoksida  Dismutase  pada Hati Tikus
Pengukuran  status  antioksidan  secara in vivo selanjutnya adalah aktivitas superoksida dismutase. Enzim SOD merupakan  enzim  antioksidan  endogen  yang mempunyai  peranan  penting  secara  langsung melindungi  sel  dari  gangguan  radikal  bebas, dan  secara  tidak  langsung  memelihara keseimbangan  oksigen  yang  bersifat  toksik (Wresdiyati et al. 2002). Pengukuran kandungan enzim antioksidan SOD merupakan  cara  untuk  mengetahui  kondisi pertahanan sel terhadap radikal bebas. Prinsip dasar  pengukuran  superoksida  dismutase (SOD)  adalah  reaksi  antara  O2*-(radikal superoksida  dengan  Blue  tetrazolium  (NBT) sehingga  membentuk  formazan  biru  ungu. SOD  yang  berada  dalam  plasma  berlomba dengan  NBT  untuk  bereaksi  dengan  O2*- sehingga  menghambat  pembentukan  warna. Aktivitas  SOD  ini  diukur  melalui  derajat penghambatan  (inhibisi)  pembentukan  warna (Widowati et  al. 2005).  Semakin  banyak jumlah  enzim  SOD  dalam  sampel  maka warna  yang  terbentuk  pun  semakin  tidak pekat.
Kelompok
perlakuan
CCl 4
memperlihatkan  aktivitas  yang  lebih  tinggi
dibandingkan  kelompok  normal,  tetapi  masih lebih  rendah  jika  aktivitasnya  dibandingkan kelompok  nanopartikel  kurkuminoid  100 mg/kgBB dan nanopartikel kurkuminoid 1500 mg/kgBB.  Hal  ini  sesuai  dengan  karena induksi  CCl 4 akan  menurunkan  aktivitas enzim antioksidan (Jeon 2003).
Hasil pengukuran menunjukkan bahwa  nanopartikel  kurkuminoid  dosis  50 mg/kgBB,  100  mg/kgBB,  dan  1500  mg/kg BB,  ekstrak  kurkuminoid,  vitamin  C,  dan standar  kurkuminoid  dapat  meningkatkan aktivitas enzim superoksida dismutase dibandingkan  dengan  kelompok  normal (Gambar  5).  Dengan  kata  lain,  dapat dinyatakan bahwa pemberian perlakuan sudah efektif  sebagai  antioksidan.  Hal  ini  sesuai dengan pernyataan Yuan et al. (2009), bahwa senyawa  antioksidan  bekerja  secara  sinergis dengan  enzim  SOD  dalam  menetralkan radikal  bebas,  sehingga  aktivitas  enzim  SOD menjadi  tinggi.  Secara  statistik,  hanya kelompok pemberian nanopartikel kurkuminoid  dosis  1500  mg/kgBB  yang menunjukkan  hasil  berbeda  nyata  dengan kelompok normal. Artinya, pemberian nanopartikel kurkuminoid dosis 1500
mg/kgBB dapat meningkatkan aktivitas SOD.
Aktivitas  Glutation  Peroksidase  pada  Hati Tikus Selanjutnya,
penelitian ini
menganalisis  aktivitas  antioksidan  glutation peroksidase (GPx) yang terdapat di dalam hati tikus  sebagai  gambaran  pengaruh  pemberian nanopartikel kurkuminoid temulawak terhadap    aktivitas  antioksidan  GPx.  Enzim glutation  peroksidase  merupakan  enzim  yang mengatalisis reduksi H 2 O 2 dan lemak peroksida  (LOOH)  dengan  menggunakan glutation  tereduksi  (GSH)  sebagai  kofaktor (Nabet  1996).  Prinsip  pengukuran  enzim  ini adalah  glutation  peroksidase  mengatalisis glutation  tereduksi  (GSH)  menjadi  glutation
teroksidasi  (GSSG).  GSSG  yang  dihasilkan direduksi  menjadi  GSH  dengan  bantuan NADPH oleh glutation reduktase.
Hasil  analisis  menunjukkan  aktivitas GPx perlakuan CCl 4 lebih tinggi dibandingkan  kelompok  normal,  tetapi  masih lebih rendah jika dibandingkan dengan ketiga perlakuan pemberian nanopartikel kurkuminoid.  Glutation  peroksidase  yang rendah  berkorelasi  dengan  gangguan  yang berhubungan  dengan  radikal  bebas  (Judge et al. 2005).  Kelompok  normal  memiliki aktivitas  GPx  yang  terendah  sebesar  89.7436 mU/mL, sedangkan aktivitas tertinggi ditunjukkan oleh perlakuan pemberian nanopartikel kurkuminoid dosis 100 mg/kgBB. Pemberian nanopartikel kurkuminoid dosis bertingkat dapat meningkatkan  aktivitas  glutation  peroksidase secara  berbeda  nyata  (p<0.05).  Peningkatan aktivitas  glutation  peroksidase  disebabkan terjadinya peroksidasi lipid membran mitokondria  (Meister  1995).  Peningkatan aktivitas glutation peroksidase ini dimungkinkan karena kurkuminoid menetralkan radikal bebas. Secara statistik,
pemberian nanopartikel  kurkuminoid  dosis  50  mg/kgBB dan  1500  mg/kgBB  sebanding  dengan kelompok  CCl 4 ,  sehingga  mengindikasikan bahwa  pemberian  naopartikel  dosis  50  mg dan  1500  mg  belum  efektif  sebagai antioksidan.
Sedangkan
pemberian nanopartikel dosis 100 mg menunjukkan hasil meningkatkan  aktivitas  glutation  peroksidase yang berbeda nyata dengan kelompok kontrol dan  CCl 4 .  Hal  tersebut  karena  pemberian senyawa antioksidan akan menurunkan peroksidasi  lipid  yang  secara  tidak  langsung akan  meningkatkan  aktivitas  GPx  sebagai enzim penetralisirnya.

## Aktivitas Peroksidase pada Hati Tikus
Pengukuran  status  antioksidan  yang terakhir  adalah  aktivitas  enzim  peroksidase. Peroksidase  adalah  kelas  enzim  golongan oksireduktase  yang  mengkatalisis  H 2 O 2 yang bersifat  toksik  menjadi  H 2 O  yang  netral dengan  adanya  substrat  yang  bertindak sebagai  donor  hidrogen  sehingga  sel  hidup tidak  mengalami  kerusakan  (Hiner et  al. 2002). Enzim peroksidase merupakan kelompok enzim mengaitkan hubungan dengan aktivitas  katalase sebagai  enzim  yang secara  endogen  yang  diproduksi  tubuh. Pemberian  CCl 4 dapat  menurunkan  aktivitas peroksidase  dibandingkan  kelompok  normal (Gambar 7). Menurut Jeon (2003), pemberian CCl 4 dapat menurunkan aktivitas antioksidan.
Pemberian  nanopartikel  dosis  50 mg/kgBB dan 1500 mg/kgBB dapat meningkatkan
aktivitas peroksidase dibanadingkan  kelompok  normal.  Hal  yang dapat  terlihat  adalah  bahwa  pemberian nanopartikel kurkuminoid
dapat meningkatkan aktivitas peroksidase, walaupun secara statistik tidak berbeda nyata. Pengamatan  aktivitas  antioksidan  dengan parameter  enzim  peroksidase  masih  belum bisa  dilakukan  observasi  lebih  lanjut  karena mekanisme  kelompok  enzim  tersebut  dalam penangkalan  radikal  bebas  masih  belum diketahui secara pasti
Aktivitas antioksidatif
Nanopartikel
Kurkuminoid
Berdasarkan  keseluruhan  pengukuran dapat  teramati  bahwa  pemberian  CCl 4 dapat meningkatkan  kadar  MDA  dan  menurunkan aktivitas  peroksidase,  superoksida  dismutase serta glutation peroksidase. Pemberian nanopartikel kurkuminoid dapat
meningkatkan aktivitas enzim antioksidan dan menurunkan kadar MDA. Hal ini dikarenakan CCl 4 dapat  meningkatkan  kadar  MDA  yang keberadaannya  dapat  dinetralisir  oleh  enzim
antioksidan.  Hal  tersebut  sesuai  dengan hipotesis  yang  sebelumnya  dikemukakan bahwa pembentukan nanopartikel kurkuminoid dapat
meningkatkan bioavabilitas  dibandingkan  dengan  ekstrak kurkuminoid.  Selain  itu,  diketahui  bahwa perlakuan  terbaik  dalam  menekan  keadaan stres  oksidatif  adalah  pemberian  nanopartikel pada  aktivitas  superoksida  dismutase,  karena nanopartikel memberikan aktivitas yang lebih tinggi  dibandingkan  kelompok  normal  dan hampir  sama  dengan  pemberian  ekstrak kurkuminoid.
Penggunaan  nanopartikel  dosis  100 mg/kgBB  dan  1500  mg/kgBB  memberikan efek  yang  relatif  sama  atau  lebih  tinggi dengan  standar  kurkuminoid.  Nanopartikel kurkuminoid  mengandung  bahan  aktif  lebih kecil  yaitu  0.3  mg  dan  0.02  mg,  sedangkan standar  kurkumin  mengandung  bahan  aktif sebesar  1.6  mg  (pada  dosis  20 mg),  sehingga pembuatan  kurkuminoid  lemak  padat  lebih ekonomis  dibandingkan  dengan  penggunaan standar  kurkumin  karena  mengandung  bahan aktif  yang  lebih  sedikit,  tetapi  memberikan efek yang sama atau lebih tinggi.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Almatsier  S.  2004. Prinsip  Dasar  Ilmu  Gizi . Jakarta: Gramedia Pustaka Utama.
Awad  T,  Helgason  T,  Kristbergsson  K,
Decker  EA,  Weiss  J,  McClements  DJ. 2008.  Solid  lipid  nanoparticles  as delivery  systems  for  bioactive  food components. FoodBiophysic .(3):146– 154.
BPOM RI. 2005. Lampiran Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan RI Nomor  :HK.00.05.4.1380 [internet].
[diacu  2013  Desember  12].  Tersedia dari: http: // www2. pom. go. id/ public/ hukum_ perundangan/
pdf/
SK%20CPOTB(1). pdf
Biovision.  2013. Glutathione  peroxidase activity colorimetric assay kit [internet].
[diacu  2013  Desember  11].  Tersedia dari:  http:  //www.  biovision.  com/
manuals/K762.pdf
Biovision.  2013. Lipid  peroxidation  (mda) colorimetric/fluorometric assay kit
[internet].  [diacu  2013  Desember  11]. Tersedia dari: http:// www.biovision.com/manuals/K739.pdf ?osCsid=p3pondekgluik5i0v2d05ufb74. Biovision. 2013. Peroxidase activity colorimetric/fluorometric assay kit
[internet].  [diacu  2013  Desember  11].
Tersedia dari: http://www. biovision.com/manuals/K772.pdf?osCsi
d=h1ece063787ju120g3scfvfc05.
Biovision. 2011. Superoxide Dismutase (SOD)  Activity  Assay  Kit [internet].
[diacu  2013  Desember  11].  Tersedia dari: http: //www. biovision.com/manuals/K335.pdf?osCsi d=rpvapthbcklvf08m7p152jhsv0. Fonorow O. 2008. Pauling Therapy
Handbook .  Boston:  Lulu  Press.  256 hlm.
Hiner et  al. 2002.  Mechanism  of  compound information  in  heme  peroxidases. J Inorgan Biochem . (91): 27-33.
Jeon TI, Hwang SG, Park NG, Shin SI, Choi SD,  Park  DK.  2003.  Antioxidative effect  of  chitosan  on  chronic  carbon tetrachloride  induced  hepatic  injury  in rats. Toxicol . (1): 67-73.
Judge S, Mok Jang Y, Smith A, Hagen T, dan Leeuwenburg  C.  2005.  Ageassociated increases  in  oxidative  stress  and antioxidant enzyme activities in cardiac interfibrillar  mitochondria:  implication for  the  mitochondrial  theory  of  aging.
University of Florida. Faseb J . (3):419- 421.
Kamble  VA,  Jagdale  DM,  Kadan  VJ.  2010. Solid  lipid  nanoparticles  as  drug delivery system. Int J Pharm BioSci . (1)
:1–9.
Konatham  S.  2010.  Liposomal  delivery  of curcumin  to  liver. Turk  J.  Pharm    Sci . 7(2): 89-98.
Lehninger. 1982. Dasar-dasar Biokimia : Jilid
2. Jakarta: Erlangga. 386 hlm.
Liang OB, Widjaya  Y,  Asparton Y, Puspa S.
1985. Beberapa aspek isolasi, identifikasi, dan penggunaan komponen-komponen Curcuma xanthorriza Roxb. dan Curcuma domestika Val. Prosiding  Symposium Nasional Temulawak . Bandung: Lembaga Penelitian Universitas Padjajaran. Lu  F.  2002. Toksikologi  Dasar:  Asas,  Organ sasaran, dan Penilaian Risiko . Nugroho,  penerjemah.  Jakarta:  UI  Pr. Terjemahan dari: Toxicology,
fundamentals,  target  organs,  and  risk assesment. 392 hlm.
Malsch N. 2005. Biomedical Nanotechnology .
USA: T&F Group. 161 hlm.
Mattjik AA, Sumertajaya IM. 2002. Perancangan percobaan jilid 1 edisi ke- 2  dengan  aplikasi  SAS  dan  MINITAB . Bogor: IPB Press. 276 hlm.
Meister  A.  1995.  Mitochondrial  changes associated  with  glutathione  deficiency. Biochem Biophys Acta. (1): 35-42.
Mujib  MA.  2011.  Pencirian  nanopartikel kurkuminoid tersalut lemak padat
[tesis]. Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor.
Nabet  F  B.  1996.  Zat  gizi  antioksidan penangkal  senyawa  radikal  pangan dalam sistem biologis. Dalam Zakaria F R, R Dewanti, S Yasni (eds.). Prosiding Seminar  Senyawa  Radikal  dan  Sistem pangan:  Reaksi  Biomolekuler,  Dampak terhadap  Kesehatan  dan  Penangkalan, hal.  8-15.  Kerjasama  PAU  IPB  dengan Kedutaan Perancis, Jakarta.
Pan  M  H,  Huang  T  M,  Lin  JK.  1999. Biotransformation  of  curcumin  through reduction  and  glucuronidation  in  mice. Drug Metab.Dispos . 27(4): 486– 94.
Pang X, Cui F, Tian J, Chen J, Zhou J, Zhou
W. 2009. Preparation and characterization  of  magnetic  solid  lipid
nanoparticles  loaded  with  ibuprofen. Asian J Pharm Sci . (4): 132–137.
Parhi  R,  Suresh  P.  2010.  Production  of  solid lipid  nanoparticles-drug  loading  and release  mechanism. J  Chem  Pharm .  2
(1): 211-227.
Puspawati G. 2009. Kajian aktivitas proliferasi limfosit dan kapasitas antioksidan Sorgum ( Sorghum bicolor L Moench )  dan  Jewawut  ( Pennisetum  sp ) pada  Tikus Sprague  Dawley [tesis].
Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Prangdimurti  E,  Muchtadi  D,  Astawan  M, Zakaria FR. 2006. Aktivitas antioksidan ekstrak  daun  suji .  J  Teknol  Indust
Pangan . 17(2) : 79-88.
Ravindranath  V,  Chandrasekhara  N.  1980.
Absorption  and  tissue  distribution  of curcumin in rats. Toxicol. (16): 59– 65.
Ravindranath  V,  Chandrasekhara  N.  1981.
Metabolism  of  curcumin––studies  with [3H] curcumin. Toxicol . (22): 37–44.
Ristanti  E.  2008.  Potensi  lemak  dan  minyak dari tanaman perkebunan sebagai bahan baku  material  pembawa  dalam    sistem penghantaran  obat. J  Indust  Hasil Perkebunan . (3): 63-64.
Shoba  G,  Joy  D,  Joseph  T,  Majeed  M,
Rajendran  R,  Srinivas  PS.  1998. Influence of piperine on the pharmacokinetics of curcumin in animals  and  human  volunteers. Planta
Med . 64(4): 353–6.
Sidik,  Mulyono  MW,  Mutadi  A.  1995.
Temulawak (Curcuma xanthorriza Roxb) . Jakarta: Phyto Medika. 105 hlm.
Simanjuntak  K.  2007.  Radikal  bebas  dari senyawa  toksik  karbon  tetraklorida (CCl4). Bina Widya . 8(1): 25-31.
Shanmugasundaram  P,  Venkataraman  S.  J.
2006.  Hepatoprotective  and  antioxidant effects  of Hygrophila  auriculata (K. Schum)  heine  acanthaceae  root  extract.
J Ethnopharmacol . (1): 124-128.
Valko  M.  2006.  Free  radical,  metal,  and antioxidant  in  oxidative  stress  induced cancer. J Chem Biol .(160): 1-40.
Wahlstrom  B,  Blennow  G.  1978.  A  study  on the  fate  of  curcumin  in  the  rat. Acta Pharmacol Toxicol .(2): 86–92.
[WHO]  World  Health  Organization.  2003.
Traditional  medicine [internet].  [diacu 2012 Desember 27]. Tersedia dari: http: //www. who. int/ mediacentre/ factsheets/fs134/en/.
Widowati W, Ratu S, Rymond R, Marlinda S.
2005.  Penapisan  aktivitas  superoksida dismutase pada berbagai tanaman . JKM .
(5): 33-48.
Wresdiyati  T,  K  Mamba,  IKM  Adnyane,  US
Aisyah.  2002.  The  effect  of  stress condition on the intracellular
antioxidant copper,zinc-superoxide dismutase  in  the  rat  kidney:  an immunohistochemical  study. Hayati.
(3):85-88.
Xie  S  Y.  2011.  Preparation,  characterization and  pharmacokinetics  of  enrofloxacin- loaded solid lipid nanoparticles: Influences of fattyacids. Colloid Surfaces Biointerf. 83(2): 382-387.
Yadav V, Vinay P, Sarasija S, Yadav S. 2008. Curcumin Loaded Palmitic Acid Microparticles. InPharm  Communique . (1) : 15–18.
Yagi  K.  1998.Simple  assay  for  the  level  of total lipid peroxides in serum or plasma. Methods Mol Biol . (108): 101-106.
Yuan C, Huang L, Cheng Y. Bu, Liu F, Yi Z, Yang,  &  Song.  2009.  Evaluation  of antioxidant  and  immune  activity  of Phellinus  ribis  glucan  in  mice. Food Chem . (115) : 581– 584.