## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA ALKALOID YANG TERKANDUNG DALAM HERBA KOMFREY
( Symphytum officinale L . ) ASAL TANA TORAJA

## Wa Ode Rustiah
Dosen Jurusan Kimia, Fak. Sains dan Teknologi. UIN Alauddin Makassar Email:tia_devina@yahoo.com
Abstract: Has  done  research  on  the  isolation  and  identification  of compounds alkaloids contained in the komfrey (Symphytum officinale L.)  from  Toraja.  The  aim  of  this  research  is  to  determine  alkaloid contained  in  komfrey  with  infra  red  spectrophotometry  the  results from  two  dimensional  thin  layer  Chromatography  a  fraction  using silica  gel  GF254  stationary  phase  and  mobile  phase  chloroform: methanol (8:2) form a blue color staining with Rf value of 0.82 and a positive result is suspected alkaloids. From the results of identification using  infrared  spectroscopy,  results  show  komfrey  suspected  to contain alkaloid compounds. mean 0,81 % .
Key  words: Komfrey  (Symphytum  officinale  L.)  ,Alkaloids,  Infrared Spectroscopy.

## I. PENDAHULUAN
ekayaan  herbal  di  Indonesia  memang  dapat  dibanggakan.  Sekitar 30.000 jenis tumbuhan obat dimiliki Indonesia. Dengan kekayaan flora tersebut,  tentu  Indonesia  memiliki  potensi  untuk  mengembangkan produk herbal yang kualitasnya setara dengan obat modern. Tetapi, sumber daya alam  (SDA)  tersebut  belum  dimanfaatkan  secara  optimal  bagi  kepentingan masyarakat. Baru sekitar 1.200 spesies tumbuhan obat yang dimanfaatkan dan di teliti sebagai obat tradisional. (Khoirul & Arifah, 2010).
Keberadaan  tanaman  sebagai  obat  sudah  dikenal  sejak  ribuan  tahun lampau.  Resep  diwariskan  turun-temurun,  yang  tadinya  hanya  dikenal  kalangan tertentu  kemudian  menyebar  hingga  masyarakat  luas.  Dunia  mencatat  tradisi herbal  berkembang  pesat  di  dunia  timur.  Modernisasi  mentautkan  tanaman  obat dengan  dunia  farmasi.  Perlahan  –  lahan  keampuhannya  diakui  kalangan  ilmiah. Walaupun  begitu  pemakaian  obat  tradisional  tetap  mendapat  tempat.  Dengan

## K
334 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains )
langkah  dan  cara  pengolahan  yang  benar,  khasiat  tanaman  obat  tidak  akan berubah (Trubus, Vol.08).
Agar  penggunaan  obat  tradisional  dalam  upaya  kesehatan  dapat ditingkatkan  dan  lebih  dipertanggung  jawabkan  perlu  didukung  dengan  upaya penelitian  dan  pengembangan  setiap  tanaman  obat.  Tanaman  yang  sering digunakan  oleh  masyarakat  sebagai  tanaman  obat  berkhasiat  diantaranya  adalah tanaman  komfrey (Symphytum  officinale L .) .  Tanaman  ini  banyak  digunakan untuk  pengobatan  pada  rematik,  luka  memar,  hemostatik,  batuk  berdahak, diabetes, dan hipertensi (Dalimartha, 2006).
Berdasarkan  pada  penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  Amrizal  (1988) FMIPA  program  studi  farmasi  menyatakan  bahwa  efek  Farmakologis  lnfus  daun komfrey  20%  dengan  takaran  25  dan  40 ml/kg  bb  mempunyai  efek  menurunkan kadar  gula  darah  tikus  putih  jantan  yang  sebanding  dengan  suspensi klorpropamida 22,5 mg/kg bb.
Alkaloid  merupakan  sekelompok  metabolit  sekunder  alami  yang mengandung nitrogen  yang aktif secara farmakologis  yang berasal dari tanaman, mikrobia,  atau  hewan.  Alkaloid  secara  biosintesis  diturunkan  dari  asam  amino. Sejumlah  alkaloid  alami  dan  turunannya  telah  dikembangkan  sebagai  obat, misalnya obat mata, pengobatan bradikardia, antipiretik, analgesik, anti-inflamasi, obat  malaria  dan  antitusiv.  Alkaloid  juga  bisa  digunakan  sebagai  insektisida (Rohman, 2009).

## A. Tujuan Penelitian
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  senyawa  alkaloid  yang terkandung dalam herba komfrey secara spektrofotometri infra merah.

## B. Manfaat Penelitian
Manfaat penelitian ini adalah untuk memperoleh data kimia herba komfrey sehingga  penggunaannya  sebagai  obat  tradisional  tidak  hanya  berdasarkan pengalaman tetapi telah didukung dengan data ilmiah.
Wa Ode Rustiah , Isolasi dan Identifikasi Senyawa Alkaloid yang terkandung dalam … _ 335

## II. METODE PENELITIAN

## A. Bahan yang digunakan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  aquades  (H 2 O), Amonium hidroksida, Asam klorida (HCl), Herba Komfrey ( Symphytum officinale L . ), Kloroform, KBr, dan Metanol.

## B. Alat yang digunakan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu neraca analitik, aluminium foil,  batang  pengaduk,  botol  selai,  botol  semprot,  botol  vial,  chamber,  corong kaca,  corong  pisah,  spatula,  erlemeyer,  gelas  kimia,  gelas  ukur,  kertas  saring, kertas whatman, lampu UV, oven, pipa kapiler, pipet tetes, rotavapor ,water bath dan instrument IR.

## C. Prosedur Penelitian

## 1. Preparasi sampel
Sampel yang digunakan adalah herba Komfrey ( Symphytum officinale L . ) yang  berasal  dari  daerah  Toraja,  Sulawesi  Selatan  diambil  langsung  pada  pagi hari.  Herba  Komfrey  yang  telah  diperoleh  disortasi  basah  dengan  air  yang mengalir hingga bersih kemudian dipotong – potong kecil dan dikeringkan dengan cara  diangin  –  anginkan.  Selanjutnya  dibuat  serbuk  dengan  derajat  halus  yang sesuai.

## a. Ekstraksi sampel
Herba komfrey diambil sebanyak 1 kg dimasukkan dalam wadah maserasi, ditambahkan metanol hingga simplisia tersebut terendam, dibiarkan selama 5 hari dalam bejana tertutup dan terlindung dari cahaya sambil berulang – ulang diaduk. Setelah  5  hari  simplisia  disaring  dan  ampasnya  direndam  lagi  dengan  metanol. Hal  ini  dilakukan  sebanyak  3  kali,  hasil  penyarian  yang  telah  didapat  kemudian dikumpulkan  dan  diuapkan  dengan  menggunakan  retavapor  sampai  diperoleh ekstrak metanol kental.

## b. Ekstraksi dengan pelarut kloroform
Ekstrak  metanol  yang  diperoleh  disuspensikan  dengan  air  suling  dan ditetesi dengan HCL lalu di ukur pH(1 - 3). Kemudian diekstraksi dengan pelarut kloroform  sebanyak  50  ml  dengan  menggunakan  alat  corong  pisah.  Setelah diekstraksi terjadi dua lapisan yaitu lapisan air dan lapisan kloroform, selanjutnya
336 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains )
lapisan  air  ditambahkan  NH 4 OH  diukur  pH(8  -  10).  Kemudian  diekstraksi kembali  dengan  pelarut  kloroform  sebanyak  50  ml  dengan  menggunakan  alat corong pisah. Ekstrak kloroform  yang diperoleh diuapkan dengan cara diangin  – anginkan.

## c. Identifikasi dengan pereaksi kimia
Ekstrak  kloroform  yang  diperoleh  diuji  dengan  menggunakan  pereaksi kimia  yaitu  Dragendroff,  positif  alkaloid  jika  timbul  endapan  merah  bata  dan pereaksi Mayer, positif alkaloid jika timbul endapan putih.
d. Kromatografi lapis tipis
Ekstrak kloroform yang diperoleh kemudian dipantau dengan menggunakan kromatografi lapis tipis dengan fase diam silica gel 60 GF254 dan fase gerak Kloroform :  Heksan perbandingan 6:4, 7:3, 8:2, dan 9:1. Bercak  yang diperoleh diamati dibawah sinar UV dengan panjang gelombang 254 nm.

## e. Kromatografi Lapis Tipis Preparatif
Ekstrak  kloroform  yang  diperoleh  kemudian  dipisahkan  dengan  metode kromatografi lapis tipis preparative dengan pengembang Kloroform : Heksan dan diperoleh  beberapa  pita.  Masing-masing  pita  yang  diperoleh  dikerok  dan dilarutkan  dalam  kloroform  kemudian  disaring  dan  ditampung  sebagai  fraksi- fraksi.

## f. Identifikasi dengan KLT 2 dimensi
KLT  2  dimensi  dilakukan  terhadap  fraksi  noda  tunggal.  Fraksi  tunggal yang  diperoleh  ditotolkan  pada  silica  Gel60F254  ukuran  10  x  10  cm  dengan cairan pengelusi Kloroform : Metanol (7:3) dan setelah terelusi di keluarkan dari chamber,  dikeringkan  kemudian  dideteksi  dengan  penampak  noda  sinar  UV  254 nm  selanjutnya  lempeng  diputar  90°  kemudian  di  elusi  kembali  dengan  cairan pengelusi  Kloroform  :  Metanol  (8:2)  untuk  arah  2.  Setelah  terelusi  di  keluarkan dari chamber lalu dikeringkan.
1) Deteksi noda dengan Lampu UV-254 nm
Masing  –  masing  fraksi  yang  diperoleh  dipantau  kembali  dengan menggunakan  kromatografi  lapis  tipis,  selanjutnya  diidentifikasi  dengan menggunakan  kromatografi  lapis  tipis  2  dimensi  dan  diamati  dibawah  sinar  UV dengan panjang gelombang 254 nm untuk mendapatkan noda tunggal.
Wa Ode Rustiah , Isolasi dan Identifikasi Senyawa Alkaloid yang terkandung dalam … _ 337

## 2) Identifikasi dengan spektrofotometer Infra merah
Untuk  analisis  spektroskopi  infra  merah  dilakukan  terhadap  hasil  isolasi sebanyak 1 mg yang dicampur dengan 10 – 100 mg KBr dalam kondisi tanpa air. Bahan  dibuat  pellet  dengan  menggunakan  cetakan.  Pellet  KBr  tersebut  diukur serapannya pada gelombang 4000 – 667 cm -1 (Giwangkara, 2007).
Spektrofotometer  secara  otomatis  membaca  sejumlah  radiasi  yang menembus  sampel  dengan  kisaran  frekuensi  tertentu  dan  merekam  pada  kertas berapa  persen  radiasi  yang  ditransmisikan.  Radiasi  yang  diserap  oleh  molekul muncul sebagai pita spektrum.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Serbuk  herba  Komfrey  ( Symphytum  officinale L.)  dimaserasi  dengan menggunakan  pelarut  Metanol  bertujuan  untuk  mengikat  senyawa-senyawa metabolit sekunder herba Komfrey yang bersifat polar dan non polar. Filtrat yang diperoleh kemudian dipekatkan dengan  alat rotavapor sehingga diperoleh ekstrak metanol.  Ekstrak  metanol  yang  diperoleh  kemudian  diuji  golongan  senyawa alkaloid.
Tabel 1. Hasil Uji pendahuluan
Kode sampel Pereaksi Pengamatan Ket Ekstrak Kloroform Menurut pustaka Hasil pengamatan Dragendroff  Endapan Merah bata Endapan Merah bata + Mayer Endapan Putih Endapan Putih +
Keterangan : + = Positif mengandung Alkaloid
338 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains )
Tabel  2.  Hasil  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  ekstrak  Kloroform  Komfrey (Symphytum officinale L. ) dengan cairan pengelusi Kloroform : Heksan
(6:4)
Noda Nilai Rf Warna bercak pada UV 254 nm Warna bercak dengan H 2 SO 4 10 % + UV 254nm 1 2 0,65 0,25
Biru
Kuning muda
Merah
Kuning kecoklatan
Tabel 3. Hasil identifikasi KLTP dan warna noda (pita)  Fraksi A dan B dan KLT ekstrak  Kloroform  Komfrey  ( Symphytum  officinale L.)  dengan  cairan pengelusi Kloroform : Heksan (6 : 4)
Pita  Warna pita Fraksi Jumlah noda Nilai Rf Warna noda 1 Kuning A 1 0,62 Hijau tua 2 Orange B 2 0,72 0,82 Ungu Kuning tua
Isolasi  secara  Kromatografi  Lapis  Tipis  Preparatif  senyawa  alkaloid  dari ekstrak  kloroform  dengan  cairan  pengelusi  kloroform  :  metanol  (7:3) menghasilkan  2  fraksi.  Dari  2  fraksi  tersebut  pada  fraksi  A  yang  menampakkan noda  tunggal  yang  diduga  senyawa  Alkaloid  setelah  diidentifikasi  dengan  KLT kemudian dibuktikan dengan Kromatografi Lapis Tipis Dua Dimensi.
Tabel 4.  Hasil  identifikasi  KLT  dua  dimensi  Fraksi  A  ekstrak  Kloroform Komfrey ( Symphytum officinale L.) dengan cairan pengelusi kloroform: metanol (7:3) dan (8:2)
Fraksi A Kloroform :metanol Warna noda Jumlah noda Sinar UV 1 2 arah I arah II
Biru
Biru 1 noda 1 noda
Wa Ode Rustiah , Isolasi dan Identifikasi Senyawa Alkaloid yang terkandung dalam … _ 339
Tabel 5. Hasil analisis spektrum Infra Merah senyawa dari isolat fraksi A
No Bilangan gelombang (cm -1 ) Bentuk pita Kemungkinan Pada spektra Pada pustaka Stanley dkk (1988) Gugus fungsi 1 3415,93 3200-3600 Sedang N – H 2 2924,09 2700-3000 Tajam C – H 3 2360,87 2400-2100 Sedang C – N 4 1712,79 1900-1650 Sedang C = O 5 1465,90 1475-1300 Tajam C = C Aromatik 6 1095,57 1050-1270 Tajam C=O 7 802,39 802,39 Tajam C – H
Penelitian  ini  diawali  dari  pengambilan  sampel  yang  berasal  dari  daerah Tana  Toraja.  Kemudian  dilakukan  ekstraksi  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut metanol. Metanol digunakan sebagai pelarut karena metanol dapat menarik senyawa polar dan nonpolar yang terkandung dalam daun komfrey selanjutnya  diuapkan  dengan  alat  rotavapor  hingga  diperoleh  ekstrak  metanol kental.  Kemudian  diekstraksi  dengan  menggunakan  corong  pisah  dengan menggunakan  pelarut  kloroform.  Digunakan  kloroform  karena  kloroform memiliki  daya  larut  besar  untuk  melarutkan  alkaloid  dan  kemungkinan  terurai lebih kecil dibanding dengan pelarut yang lain. Selanjutnya ekstrak kloroform (I) kemudian  ditambahkan  larutan  HCl  hingga  pH  larutan  1-3  agar  terbentuk  garam alkaloid,  sehingga  alkaloid  dapat  tertarik  dari  larutannya.  Larutan  yang  telah bersifat  asam  kemudian  diekstraksi  menggunakan  kloroform  dan  air.  Hasil ekstraksi  membentuk  2  lapisan,  yaitu  lapisan  bawah  yang  merupakan  lapisan kloroform dan lapisan atas merupakan lapisan air.  Hal ini dikarenakan berat jenis kloroform lebih besar dibanding dengan berat jenis air.
Kedua  lapisan  tersebut  dipisahkan,  selanjutnya  lapisan  air  diekstraksi kembali  dengan  kloroform  dan  ditetesi  NH 4 OH  hingga  pH  larutan  mencapai  (8- 10).  Perlakuan  tersebut  dilakukan  agar  garam  alkaloid  membentuk  basa  bebas alkaloid. Penambahan NH 4 OH berfungsi sebagai senyawa aktif yang berada pada sampel  yang  terekstraksi  dalam  kloroform  dalam  suasana  basa.  Hasil  ekstraksi
340 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains )
membentuk dua lapisan, lapisan air dengan lapisan kloroform. Kemudian lapisan kloroform diambil dan diuapkan hingga ekstrak kering.
Kemudian dilakukan uji pendahuluan dengan pereaksi kimia yaitu pereaksi Dragendroff  menghasilkan  endapan  merah  bata  dan  uji  pereaksi  Mayer menghasilkan endapan putih. Hasil ini sesuai dengan literatur  yang artinya positif mengandung senyawa alkaloid.
Hasil  KLT  menggunakan  lempeng  yang  mengandung  silika  gel 60GF254 dan fasa gerak yang digunakan adalah campuran pelarut kloroform : heksan (6:4). Hasil yang diperoleh pada lampu UV 254 nm yakni dua buah noda yang berwarna biru  dan  kuning  muda  dengan  nilai  Rf  0,65  dan  0,23.  Berdasarkan  hasil  KLT, diketahui  noda  berwarna  biru  merupakan  alkaloid.  Menurut  (Wagner,  W.L., Herbst, D.R., Sohmer, S.H., 1999) di bawah lampu UV 254 nm senyawa alkaloid pada umumnya berwarna biru, biru kehijauan atau ungu berfluoresensi.
Selanjutnya  dilakukan  pemisahan  komponen  kimia  dengan  menggunakan metode  kromatografi  lapis  tipis  preparatif  (KLTP)  dengan  eluen  kloroform  : heksan (6:4) dan diperoleh 2 pita/fraksi yaitu fraksi A berwarna kuning dan fraksi B  berwarna  orange  kemudian  di  KLT  kembali  menggunakan  pengembang  yang sama.
Selanjutnya  Fraksi  A diidentifikasi lagi dengan kromatografi dua dimensi untuk  membuktikan  senyawa  tersebut  tunggal  dengan  menggunakan  pelarut kloroform  :  metanol  (7:3)  dan  (8:2)  dan  hasilnya  adalah  bahwa  fraksi  A memperlihatkan noda tunggal baik arah pertama maupun arah kedua.
Kemudian  diidentifikasi  lanjut  dengan  menggunakan  spektrofotometer infra  merah  dan  hasil  analisis  menggunakan  spektroskopi  Infra  merah menunjukkan adanya  gugus  N-H  pada  daerah  bilangan  gelombang  3415,93  cm -1 dan  diperkuat  dengan  adanya  gugus  C-N  pada  daerah  bilangan  gelombang 2360,87  cm -1 .  Kemudian  pada  daerah  bilangan  gelombang  2956,87cm -1 dan 2924,09cm -1 terdapat  dua  pita  merupakan  gugus  C-H  dan  diperkuat  dengan adanya  gugus  C-H  pada  daerah  bilangan  gelombang  802,39  cm -1 .  Pada  bilangan gelombang 1739,79 cm -1 dan 1712,79 cm -1 merupakan gugus C=O, pada bilangan gelombang 1465,90 cm -1 merupakan gugus C=C dari senyawa aromatik. Adanya gugus  C=0  pada  daerah  bilangan  gelombang  1095,57cm -1 dan  1024,20  cm -1 memberikan  kekuatan  adanya  gugus  ester.  Maka  dari  hasil  identifikasi  dengan menggunakan  spektroskopi  infra  merah  pada  sampel  herba  komfrey teridentifikasi mengandung senyawa alkaloid.
Wa Ode Rustiah , Isolasi dan Identifikasi Senyawa Alkaloid yang terkandung dalam … _ 341

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  terhadap  herba  Komfrey (Symphytum officinale L .) dapat  disimpulkan bahwa:
a. Dari  hasil  Kromatografi  Lapis  Tipis  Dua  Dimensi  fraksi  A  dengan menggunakan  fase  diam  silika  gel  GF254  dan  fase  gerak  kloroform:metanol (8:2)  membentuk  bercak  noda  warna  biru  dengan  nilai  Rf  0,82  dan teridentifikasi mengandung senyawa alkaloid.
b. Dari  hasil  identifikasi  menggunakan  spektrofotometer  infra  merah  diperoleh spektrum  absorbsi  pada  bilangan  gelombang  (cm -1 )  3415,93  (gugus  N-H), 2956,87 dan 2924,09 (gugus C-H), 2360,87 (gugus C-N), 1712,79 dan 1739,79
(gugus  C=O),  1465,90  –  1653  (gugus  C=C  dari  senyawa  aromatik),  1095,57 dan 1024,20 (gugus C=O, gugus ester). Hasil ini menunjukkan herba komfrey teridentifikasi mengandung senyawa alkaloid.

## DAFTAR RUJUKAN
Dalimartha, 2006. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia . Trubus agriwidya,Jakarta.
Harbone,  J.B,  1987. Metode  Fitokimia ,  Terjemahan  oleh  K.  Padmwinata  dan Iwang Sudiro. ITB. Bandung
Khoirul.,  Fa  Alifah.  2010. Sapu  Bersih  Semua  Penyakit  Dengan  Ramuan Tradisional . Citra Media; Yogyakarta.
Kovar & Auterhoff. 2002. Identifikasi Obat Terbitan V . Penerbit ITB. Bandung
Nadjeeb,  2007.  Ringkasan  kuliah  fitokimia  2  [online],  (http:/chem.-is-try- org/artikel fitokimia/ ringkasan kuliah fitokimia 2 /) diakses 23 april 2013.
Pine, S., 1988. Kimia Organik I . Penerbit ITB; Bandung.
Plantamor,  2012.  Komfrey.  [Online].  (http://www.plantamor  .com)  Diakses  25 April 2013.
Rohman,  Abdul.  2009. Kromatografi  Untuk  Analisis  Obat .  Graha  Ilmu.

## Yogyakarta
Socrates,  G.,  1994, Infrared  Characteristic  Group  Frequencies  Tables  and Charts , New York, John Wiley and Sons.
342 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains )
Sarker & Nahar, 2007.Kimia farmasi. Penerbit Pustaka pelajar. Yogyakarta.
Trubus, Tanpa Tahun. Herbal Indonesia Berkhasiat . Vol.08.
Wagner, W.L., Herbst, D.R., Sohmer, S.H., 1999, Manual of the Flowering Plants of  Hawaii ,  University  of  Hawaii  Press  and  Bishop  Museum  Press, Honolulu