Efek Rokok Berfilter dan Tidak Berfilter terhadap Reproduksi Tikus Putih Jantan ( Rattus norvegicus L.)
Filtered and Unfiltered Cigarette Effect on White Rats Male Reproduction
( Rattus norvegicus L.)
Agung Budiantoro *) ,  Nurul Amalia Farhanah Program Studi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi Terapan, Universitas Ahmad Dahlan *E-mail: agung.budiantoro@bio.uad.ac.id

## ABSTRACT
Cigarette smoke can cause various health problems, one of which is a decrease in fertility in males. The purpose of this study was to determine the effect of smoke exposure between with and without filter  hand-rolled  kretek  cigarettes  (SKT)  and  white  cigarettes  on  white  rats  male  reproduction: sperm quality in the form of sperm motility and viability, also the structure of seminiferous tubules. This study used 5 treatment groups (KP), namely controls not given exposure to cigarette smoke (KP0), exposure to unfiltered kretek cigarette smoke (KP1), exposure to filtered kretek cigarettes (KP2),  exposure  to  unfiltered  white  cigarette  smoke  (KP3)  and  exposure  to  secondhand  smoke. filtered white cigarettes (KP4) with treatment placement arrangement in a Completely Randomized Design (CRD) and if there is a significant difference, a Duncan Multiple Range Test (DMRT) is carried out.  The results obtained on sperm quality, namely sperm motility and viability, decreased. Good quality at KP0 then the quality decreases successively starting from KP1, KP2, KP3 and KP4. The results on histpathological observations of the seminiferous tubules, there were no pathological changes  found  in  all  treatments.  In  contrast  to  the  histopathology  of  seminiferous  tubules,  the number of spermatogenic cells showed a significant difference between treatments  with the least average  spermatogenic  count  and  a  decrease  in  the  number  of  cells  from  spermatogonia  cells  to spermatid cells, namely in the treatment  group exposure to filtered  white cigarette smoke (KP4). Overall,  the  exposure  that  caused  the  most  severe  impact  on  all  measured  parameters  was  in  the treatment group of filtered white cigarette smoke (KP4).
Keywords: Cigarette smoke, spermatozoa, tubulus seminiferus.

## PENDAHULUAN
Rokok  merupakan  salah  satu  olahan  dari tanaman  genus Nicotiana yang  menjadi  salah satu  penyebab  menurunnya  kondisi  tubuh  bagi yang  mengonsumsinya.  Rokok  dianggap  salah satu  hal  yang  menimbulkan  efek  kecanduan bagi  pemakainya  karena  mengandung  zat-zat kimia  tertentu,  terutama  nicotin.  Senyawa nicotin terdapat pada tanaman genus Nicotiana. Salah  satu  spesies  dari  genus Nicotiana yang sering  digunakan  pada  olahan  rokok  yaitu Nicotiana tabacum .
Pengolahan  rokok,  terutama  rokok  kretek asli di Indonesia dengan ciri khas mengandung campuran  antara  tembakau  dan  cengkih  serta dapat  juga  ditambahkan  flavor  (Florentika  and Kurniawan,  2022).  Jenis  rokok,  selain  rokok kretek  maka  ada  jenis  rokok  putih.  Perbedaan mendasar dari kedua jenis rokok ini yaitu pada bahan baku yang digunakan. Rokok putih hanya berbahan dasar tembakau saja sedangkan rokok kretek  berbahan  dasar  tembakau  dan  cengkeh. Berdasarkan  pembuatannya,  rokok  dibuat menggunakan  mesin  dan  tangan.  Pembuatan
rokok  dengan  tangan  disebut  Sigaret  Kretek Tangan  (SKT),  sedangkan  rokok  yang  dibuat menggunakan  mesin  disebut  Sigaret  Kretek Mesin  (SKM).  Penggunaan  filter  dalam  rokok dipasarakan  dalam  bentuk  Rokok  Non  Filter (RNF) dan Rokok Filter (RF) (Aji et al ., 2015). (Marieta  &  Lestari, 2021) kandungan  senyawa sebatang rokok diantaranya adalah tar, nikotin, toluidine, ammonia, urethane, acetone, napthylamine,
methanol, pyrene,
dimethylnitrosamine, naptalene, cadmium, carbon monoxide, benzopyrene, vinyl chloride, hydrogen cyanide, oluene, arsenic, dibenzacridine, phenol, butane, polonium-210.
Asap  rokok  mengeluarkan  berbagai  gas yang  mengandung  racun  karsinogenik,  rokok dapat  menyebabkan  berbagai  penyakit  seperti katarak, alopecia areata, gangguan pendengaran,  karies,  osteoporosis,  penyakit kardiovaskular,  kemandulan  dan  impotensi, penyakit  paru  obstruktif  kronis,  kanker payudara,  kanker  kulit,  dan  kanker  paru (Marieta & Lestari, 2021). Beberapa penelitian mengenai  dampak  buruk  dari  asap  rokok
terhadap sistem reproduksi, salah satunya yang dilakukan  oleh  Osadchuk et  al .  (2023), menunjukkan  bahwa  berkurangnya  tingkat kualitas parameter air mani, terutama kadar seng mani,  serta  terjadi  peningkatan  fragmentasi DNA sperma dan teratozoospermia.
Kualitas  spermatozoa  yang  dihasilkan berpengaruh  terhadap  fertilitas  suatu  individu.
Pembentukan spermatozoa yang dimulai dari sel spermatogonium disebut dengan spermatogenesis.  Proses  spermatogenesis  yang terjadi di tubulus seminiferus menjadi hal yang perlu  diperhatikan  karena  akan  berpengaruh terhadap kualitas sepermatozoa yang dihasilkan. Terdapat banyak faktor yang dapat mempengaruhi  struktur  histologi  testis  serta kualitas  sperma.  Berbagai  dampak  yang dihasilkan  rokok  terhadap  struktur  histologi tubulus  seminiferus  maupun  kualitas  sperma sudah banyak diketahui oleh masyarakat.
Namun, dampak dari kedua jenis rokok dan pengaruh  filter  yang  menimbulkan  dampak paling  buruk  terhadap  kerusakan  reproduksi individu jantan,
khususnya terhadap histopatologis tubulus seminiferus dan kualitas sperma belum diketahui (Singh and Kathiresan, 2015).  Filter  berperan  dalam  penyaringan senyawa-senyawa berbahaya pada rokok seperti tar  dan  nikotin.  Dampak  rokok  berfilter  juga masih  berbahaya  terhadap  penurunan  jumlah spermatozoa di tikus putih (Putra, 2014).
Tujuan  penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui pengaruh paparan asap antara rokok Sigaret Kretek Tangan (SKT) dengan dan tanpa filter  dan  rokok  putih  berfilter  dan  tanpa  filter terhadap  reproduksi  tikus  jantan  putih  ( Rattus norvegicus L.)  dengan  parameter    kualitas Spermatozoa  dan  Stuktur  Tubulus  Seminiferus Tikus Putih.

## METODE
Alat  dan  bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  satu  buah  alat  pelinting  rokok,  gagang pelinting  rokok,  lima  buah  kandang  tikus  putih berukuran  50  x  40  x  40  cm 3 ,  dua  buah smoking chamber ukuran 50 x  40 x 40 cm 3 dengan ventilasi sebesar 5 x 15 cm 2 , spidol permanen, botol minuman tikus,  neraca  Ohauss,  dua  buah  neraca  analitik,  dua buah syringe 50 ml, empat buah selang plastik 40 cm, pipet  tetes,  pipet  ukur  1  ml,  propipet,  gelas  arloji, bunsen,  pinset,  kotak  parafin,  perangkat  alat  bedah, kuas, mikroskop, rotary mikrotom, mikropipet 10 µL, Hemositometer Double  Improved  Neubeur ,  gelas obyek, cover  glass,  hand  counter , hot  plate ,  botol flakon ,  embedding  cassete,  paraffin  embedding , cawan  petri,  kamera  optiLab,  kamera,  komputer,
gunting,  baskom, staining  jar  vertical ,  alat  tulis kantor,  25  ekor  tikus  putih strain Wistar  jantan ( Rattus  norvegicus L.)  yang  berumur  dua  bulan dengan  berat  130-160  gram  yang  berasal  dari peternakan tikus di Condong Catur Yogyakarta yang telah bersertifikat, pakan tikus putih berupa pelet, air keran,  asam  pikrat,  rokok  putih  merk  SA  ,  rokok kretek,  kain  kasa,  rajangan  tembakau,  rajangan cengkeh,  kertas  sigaret,  lem  kertas,  kapas,  aquades, NaCl  0,90%,  paraffin  murni,  bouin,  alkohol,  xylol, toluol, entelan, mayers albumin, pewarna hematoxylin,  pewarna  eosin  2  %,  korek  api,  label, tisu.
Penelitian  ini  sudah  mendapatkan  persetujuan dari  Komisi  Etik  Penelitian  (KEP)  Universitas Ahmad Dahlan No.011801012. Parameter penelitian dibatasi pada kualitas spermatozoa; Motilitas sperma, viabilitas sperma serta jumlah sel-sel spermatogenic dan  juga  struktur  histologi  tubulus  seminiferus. Penelitian  ini  dilakukan  pada  hewan  uji  tikus  putih jantan  ( Rattus  norvegicus L . ) strain wistar  yang dibagi  dalam  lima  kelompok  perlakuan.  Kelompok perlakuan  tersebut;    kontrol  (KP0)  yaitu  tanpa pemaparan  asap  rokok,  kelompok  perlakuan pemaparan  asap  rokok  kretek  tanpa  filter  (KP1), kelompok  perlakuan  pemaparan  asap  rokok  kretek berfilter  (KP2),  kelompok  perlakuan  pemaaran  asap rokok  putih  tanpa  filter  (KP3),  kelompok  perlakuan pemaparan asap rokok putih berfilter (KP4). Masing- masing kelompok terdiri dari lima ekor tikus putih.
Langkah  kerja  yang  dilakukan  antara  lain pembuatan  rokok  kretek,  aklimatisasi  tikus  putih, rancangan  pembuatan smoking  chamber ,  penentuan dosis  rokok  putih  dan  rokok  kretek,  perlakuan pemaparan asap rokok, proses pembedahan, pembuatan  suspense  sperma,  pengamatan  motilitas sperma,  pengamatan  viabilitas  sperma,  pembuatan preparat sayatan melintang testis tikus putih, analisis histopatologis  tubulus  seminiferus  serta  perhitungan jumlah  sel-sel  spermatogenik.  Perlakuan  pemaparan asap  rokok  dilakukan  selama  32  hari  dengan pemaparan  asap  rokok  selama  30  menit  setiap harinya. Parameter pengamatan kualitas sperma yaitu pada motilitas sperma dan viabilitas sperma.
Parameter motilitas sperma, viabilitas sperma dan jumlah  sel-sel  spermatogenik  dianalisis  dengan  uji Anova Apabila F hitung <F tabel 0,05% maka dilanjutkan uji Post  Hoccomparison dengan  menggunakan  Uji Duncan Multiple Range Test (DMRT) untuk melihat perbedaan antar perlakuan. Gambaran histopatologis tubulus seminiferus dianalisis secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Baik  tidaknya  tingkat  reproduksi  tikus  putih yang dipapar rokok berfilter maupun tidak dapat dilihat salah satunya dengan parameter kualitas spermatozoa.  Kualitas  spermatozoa  dianalisis dengan  mengukur;  motilitas  sperma  dan viabilitas sperma.
Tabel 1. Hasil uji DMRT motilitas sperma berbagai kriteria pada setiap perlakuan
Perlakuan Motilitas Sperma(%) Kriteria I Kriteria II Kriteria III Kriteria IV KP0 22,71 ± 6,016 c 18,92 ± 3,658 bc 22,87 ±3,209 a 35,51 ± 5,532 a KP1 25,73 ± 4,496 c 26,87 ± 3,685 ab 22,31 ± 1,643 ab 25,11 ± 8,456 b KP2 43,94 ± 14,691 b 20,72 ± 5,778 bc 18,63 ± 2,073 ab 13,70 ± 4,650 c KP3 45,63 ± 5,155 b 32,30 ± 9,542 a 14,96 ± 2,222 b 7,12 ± 2,995 c KP4 73,12 ± 16,327 a 15,73 ± 5,823 c 5,20 ± 2,624 c 5,95 ± 7,810 c
Keterangan: Uji Anova dilanjutkan dengan Uji DMRT (p<0.05). Huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak ada beda nyata antar perlakuan
Tabel 2. Rerata viabilitas sperma pada setiap perlakuan
Perlakuan Viabilitas Sperma±SE Kontrol 86.938 ± 3.135 a KP1 17.138 ±5.531 b KP2 16.150 ± 6.175 b KP3 16.322 ± 3.096 b KP4 14.814 ± 4.104 b
Keterangan: Uji Anova dilanjutkan dengan Uji DMRT (p<0.05).  Huruf yang sama menunjukkan tidak ada beda nyata antar perlakuan

## Motilitas sperma
Penentuan motilitas sperma dibedakan menjadi beberapa kriteria yaitu Kriteria I: Immotil (tidak bergerak), Kriteria II: motilitas rendah, sperma tidak bisa berpindah dari tempatnya dan hanya bisa  menggerakkan  ekornya  ( vibrating-like movement ),  Kriteria  III:  Pergerakan  sperma tidak  linier  ( non-linier  motility ),  sperma bergerak  lambat  dan  hanya  bergerak  memutar atau  tidak  lurus,  dan  Kriteria  IV:  Motilitas sperma progresif, sperma berenang sangat kuat dan  cepat  serta  pergerakannya  lurus.  Motilitas tersebut berdasar kemampuan menuju ke ovum (Moradpour,  2019).    Berdasarkan  hasil  yang didapatkan, uji ANOVA pada motilitas sperma pada semua kriteria menunjukkan p value < 0,05 sehingga dilakukan uji lanjut untuk mengetahui beda  nyata  antar  perlakuan.  Hasil  uji Post-hoc Duncan  Multiple  Range  Test (DMRT)  pada setiap kriteria motilitas sperma disajikan dalam Tabel 1.
Hasil  uji  DMRT  pada  motilitas  sperma kriteria I yaitu pergerakan sperma immotil atau tidak  bergerak  menunjukkan  terdapat  beda nyata  antara  kelompok  perlakuan  KP4  (rokok putih berfilter) dengan kelompok kontrol (KP0) dan  kelompok  perlakuan  (KP2,  KP3,  KP4). Antara  kelompok  kontrol  dan  KP1  tidak terdapat beda nyata. Kelompok perlakuan rokok putih  berfilter  (KP4)  terlihat  memiliki  rerata kriteria  I  (immotil)  terbesar  yaitu  mencapai 73,12%, sedangkan rerata terkecil immotil yaitu pada  kelompok  kontrol  sebesar  22,71%. Tinginya  kriteria  I  (immotil)  pada  kelompok
perlakuan KP4 (rokok putih berfilter)
menunjukkan bahwa rokok ini pengaruh paling buruk  berbeda  nyata  dibandingkan  semua perlakuan.  Motilitas  sperma  dipengaruhi  oleh morfologi sperma. Dalam
proses spermatogenesis jika terganggu senyawa kimia beracun  dari  asap  rokok  maka  sperma  yang terbentuk  akan  mengalami  kecacatan  sehingga motilitas  semakin  jelek.  Efek  senyawa  kimia dari  rokok  menyebabkan  gangguan  pada spermatogenesis.  Terjadi peningkatan produksi radikal  bebas  dapat  menurunkan  antioksidan pada  semen.  Lebih  lanjut  dapat  menimbulkan kerusakan  DNA  melalui  fragmentasi  DNA seluler  dan  abnormalitas  morfologi  (kepala, leher  dan  ekor)  spermatozoa.  Abnormalitas  ini menyebabkan  motilitas  sperma  terganggu (Aina, 2005).
Rerata  motilitas  paling  tinggi  ditunjukkan oleh  kelompok  kontrol.  Rerata  pada  motilitas sperma kriteria IV (motilitas baik) pada kontrol menunjukkan  hasil  yang  berbanding  terbalik dengan  motilitas  sperma  pada  perlakukan lainnya. Rerata kontrol menunjukkan presentase sperma  dengan  motilitas  progresif,  sperma berenang sangat kuat dan cepat serta pergerakannya lurus sebesar 35,51% sedangkan pada KP4 sangat kecil, sebesar 5,95%. Motilitas spermatozoa  sangat  penting  karena  berkaitan erat dengan kemampuan spermatozoa di dalam proses  pembuahan.  Semakin  baik  motilitas spermatozoa maka semakin besar kemungkinan pembuahan bisa terjadi  dan sebaliknya (Ariani et al. , 2023).

## Viabilitas Sperma
Data  hasil  uji  ANOVA  pada  viabilitas  sperma menunjukkan  p value <  F  tabel    yang  berarti terdapat  beda  nyata  antar  perlakuan.  Uji selanjutnya  yaitu pos-hoccomparison yaitu  uji Duncan  Multiple  Range  Test (DMRT)  untuk mengetahui  beda  nyata  pada  setiap  perlakuan. Analisis pada uji DMRT diketahui bahwa pada nilai  p<0.05  terdapat  beda  nyata  antara perlakuan kontrol (KP0) dengan perlakuan lain (KP1, KP2, KP3 dan KP4). Terlihat jelas bahwa paparan  asap  rokok  menurunkan  secara signifikan viabilitas sperma. Tabel 2 berikut ini merupakan  hasil  yang  didapatkan  dari  uji DMRT  viabilitas  sperma  dengan  teknis  apus yang  memakai  pewarna  eosin  2  %  dengan minimal  sperma  yang  dihitung  yaitu  sebanyak 200 sperma.
Tabel  2.  menunjukkan  nilai  viabilitas spermatozoa  KP0  (kontrol,  tanpa  asap  rokok) sangat  tinggi,  berbeda  nyata  dengan  kelompok perlakuan dengan pemberian asap rokok (KP1, KP2,  KP3  dan  KP4).  Kedua  jenis  rokok  yang menggunakan  filter  ataupun  tanpa  filter  sama- sama menunjukkan hasil yang negatif terhadap viabilitas  sperma.  Viabilitas  semakin  tinggi maka kualitas sperma semakin baik. Hasil yang didapatkan  pada  viabilitas  sperma,  terjadi penurunan  berturut-turut  dari  KP1,  KP2,  KP3, dan  KP4  sehingga  yang  terburuk  adalah  KP4. Viabilitas menunjukkan ketahanan hidup sperma  di  lingkungan  luar.  Viabilitas  sperma pada  tikus  kontrol  (tanpa  pemeparan  asap rokok)  paling  tinggi,  hal  ini  menunjukkan bahwa  asap  rokok  berdampak  negatif  terhadap viabilitas  sperma.  Viabilitas  yang  kurang  baik ini,  pada  penelitian  Unitly  (2022),  dapat ditingkatkan dengan terapi sirup cengkeh.
Penurunan  viabilitas  sperma  tikus  putih dikarenakan  terjadinya  stress  oksidatif  yang ditimbulkan  oleh  asap  rokok.  Stress  oksidatif mempengaruhi  daya  tahan  dari  spermatozoa yang dihasilkan. Radikal bebas khususnya dapat bersifat  sitotoksik  yang  dapat  menghambat pembentukan Adenosin Trifosfat (ATP) mitokondria sehingga pembentukan mitokondria  sperma  akan  terhambat  (Anbarasi et  al .,  2005;  Anbarasi et  al .,  2005)). Terhambatnya pembentukan ATP pada
mitokondria  akan  menurunkan  metabolisme yang terjadi pada sperma. Penurunan metabolisme  ini  akan  menyebabkan  gerakan sperma  melambat  bahkan  tidak  terdapat pergerakan sama sekali atau sperma mengalami kematian  karena  ATP  yang  berfungsi  sebagai sumber  energi  ada  dalam  jumlah  yang  sedikit atau tidak terbentuk sama sekali.

## Gambaran  struktur  histopatologi  tubulus seminiferus
Penilaian gambaran histologis tubulus seminiferus dilakukan oleh Expert Judgment di Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gajah Mada.  Hasil  yang  diperoleh  dari  pengamatan pada 5 tubulus seminiferus pada setiap ulangan yaitu  semua  perlakuan  tidak  menunjukkan adanya  perubahan  patologik.  Semua  perlakuan memiliki  skor  pada  kriteria  (Johnsen,  1970) sebesar  10,  karena  tidak  didapatkan  kerusakan yang berarti.
Gambar 1 menunjukkan evaluasi histopatologi tubulus seminiferus yang dilakukan  oleh expert  judgment .  Tubulus seminiferi pada Gambar 1a dan 1b menunjukkan  kriteria  Jhonsen score yang memenuhi nilai 10. Parameter yang terlihat pada kontrol  maupun  pada  perlakuan  KP1  yaitu terlihat  masih  terdapat  sel-sel  spermatogenik dan  spermatozoa  yang  berkumpul  di  tengah lumen. Walaupun terlihat jelas diameter lumen diantara kedua kelompok perlakuan ini berbeda sehingga  jumlah  sel  nya  pun  akan  berbeda. Jumlah  spermatozoa  pada  KP0  terlihat  juga lebih  banyak  daripada  KP1  pada  gambaran histologis tersebut.
Gambar  1c.  menunjukkan  pada  lumen tubulus  seminiferous  terutup  oleh  spermatozoa yang  berkumpul  di  tengah,  sedangkan  pada Gambar  1d  menunjukkan  diameter  lumen terlihat  lebih  lebar  meskipun  masih  terdapat beberapa  spermatozoa  berada  di  tengah  lumen tersebut. Kedua gambar ini menunjukkan score Jhonsen  dengan  nilai  10  meskipun  terdapat perbedaan  lebar  dari  lumen.  Gambar  1e menunjukkan  lumen  yang  berada  di  tengah tubulus seminiferus terlihat lebih lebar dibandingkan  dengan  Gambar  1c  maupun Gambar 1d.
Gambar 1. Penampang melintang tubulus seminiferus testis pewarnaan HE dengan menggunakan mikroskop pada perbesaran 10x10: (a) KP0(b) KP1, (c) KP2, (d) KP3, (e) KP4
Berdasarkan  gambaran  histologis  tubulus seminiferus  pada  semua  perlakuan  tidak menunjukkan adanya perubahan patologik yang signifikan dilihat dari susunan sel-sel spermatogenik.  Hanya  sedikt  berbeda  pada jumlah spermatozoa yang berkumpul di tengah lumen  pada  KP0  dengan  kelompok  perlakuan lainnya. Pemaparan asap rokok ini mempengaruhi jumlah dari
sel-sel
spermatogenik yang dihasilkan pada KP1, Kp2, Kp3,  dan  Kp4  karena  lebar  lumennya  berbeda namun  perlakuan  yang  diberikan  belum mencapai  kerusakan  histopatologi  tubulus seminiferus.  Pemberian  paparan  asap  rokok selama  32  hari  tidak  menunjukkan  kerusakan patologik  yang  terlihat  signifikan  pada  tubulus seminiferus secara menyeluruh sehingga perhitungan  jumlah  sel-sel  spermatogenik menjadi  penentu  bagaimana  pengaruh  paparan asap rokok pada tiap perlakuan pada spermatogenesis yang terjadi.
Pemberian nikotin berpotensi menyebabkan perubahan degeneratif pada seminiferus tubulus, yang dimanifestasikan oleh perubahan arsitektur  umum  dan  pengurangan  jumlah diameter danketebalan epitel sebanding dengan dosis (Nesseim et al. , 2011 dalam Zulfikar et al. , 2022). Kerusakan  yang disebabkan asap rokok tidak  sampai  menimbulkan  efek  yang  dapat dilihat  secara  jaringan,  namun  dampaknya cukup untuk menurunkan mekanisme fisiologinya  (Holgate,  1999).  Hal  ini  berarti, pemaparan  asap  rokok  dalam  waktu  32  hari
sudah dapat menurunkan jumlah sel spermatogeniknya meskipun kerusakan tersebut belum  dapat  diidentifikasi  jika  hanya  dilihat secara jaringan. Senyawa beracun dalam rokok mengakibatkan reaksi histologis akibat hipoksemia  yang  disebabkan  oleh  asap.  Pada penelitian    Iring et  al .,  (2023),  terdapat penurunan  diameter  dari  tubulus  seminiferus pada  tikus  yang  terpapar  rokok,  baik  rokok konvensional maupun vapor.

## Jumlah sel-sel spermatogenik
Data  yang  diperoleh  dari  perhitungan  sel-sel spermatogenik dianalisis menggunakan Analysis  of  Variant (ANOVA)  dengan  p value <0,05  pada  semua  sel  spermatogenik sehingga  dilakukan  uji  lanjutan  yaitu  Uji Duncan  Multiple  Range  Test (DMRT)  untuk diketahui  perbedaan  antar  perlakuan.  Hasil penelitian  pada  Tabel  3  menunjukkan  bahwa pada  kontrol  (KP0)  berbeda  nyata  dengan perlakuan  pemarapan  asap  rokok  KP1,  KP2, KP3  dan  KP4.  Jumlah  sel  spermatogenik paling  banyak  pada  perlakuan  kontrol  tanpa paparan  asap  rokok.  Penurunan  jumlah  sel spermatogenik  pada  kelompok  perlakuan, salah satunya kemungkinan disebabkan karena turunnya  hormon  testoteron  karena  senyawa beracun  rokok.  Penurunan  hormon  testoteron yang dihasilkan oleh sel Leydig ini mengakibatkan penurunan pada
spermatogenesis.
Tabel 3. Hasil Uji DMRT Jumlah Sel-Sel Spermatogenik pada Setiap Perlakuan
Perlakuan Rerata Jumlah Sel Spermatogonia Spermatosit Spermatid KP0 65,40 ± 9,44987 a 176,60 ± 21,11398 a 208,60 ± 39,04869 a KP1 44,60 ± 12,83745 b 64,00 ± 4,30116 b 83,20 ± 29,07232 b KP2 48,80 ± 9,95992 b 58,40 ± 10,01499 b 68,40 ± 13,72224 bc KP3 43,20 ± 10,56882 b 60,00 ± 6,20484 b 96,20 ± 29,53303 b KP4 41,80 ± 5,11859 b 43,20 ± 5,89067 c 45,20 ± 9,57601 c
Keterangan:    Uji  Anova  dilanjutkan  dengan  Uji  DMRT  (p<0.05).  Huruf  yang  sama  pada  kolom  yang  sama menunjukkan tidak ada beda nyata antar perlakuan
Senyawa  kimia  yang  terkandung  di  dalam rokok seperti hidrokuinon atau kuinon, Reactive Oxygen Species (ROS) dan Nitrite Oxide (NO) mempengaruhi  terjadinya  penurunan  sel-sel germinal  di  dalam  tubulus  seminiferus. Nitrite Oxide (NO) memiliki efek terhadap biosintesis yang terjadi pada sel leydig yang mengakibatkan  turunnya  testoteron. Reactive Oxygen  Species (ROS)  memiliki  dampak negatif  pada  reproduksi  individu  jantan meskipun  jika  jumlahnya  tidak  terlalu  banyak dapat  dihambat  oleh  enzim Superoxide Dismutase (SOD)  (Hayati et al ., 2006). Dalam kondisi  normal,  ROS  berfungsi  mengatur kapasitas sperma yang dihasilkan. Adanya ROS yang  berlebihan  menunjukkan  terjadinya  stres oksidatif. Stres oksidatif sendiri mempengaruhi sekresi Gonadotrophin  Realising  Hormone (GnRH) yang akan mempengaruhi produksi dari LH  dan  FSH.  Penurunan  LH  dan  FSH  ini kemudian  menghambat  sel  sertoli  dalam menghasilkam Androgen  Binding  Protein (ABP) yang berperan dalam memacu spermatogonium dalam
melakukan
spermatogenesis (Hayati et al ., 2006). Sel-sel  spermatogenik  yang  berada  di tubulus  seminiferus  berasal  dari  sel  germinal spermatogonium. Pembentukan sel germinal ini merupakan  proses  panjang  dari  mekanisme hipotalamus-hipofisis dan hormon yang dihasilkan. Spermatogenesis sangat dipengaruhi oleh  hormon  yang  dihasilkan,  salah  satunya hormon testoteron (Rahmawati, 2015).
Data  pada  Tabel  3  menunjukkan  pada  sel spermatogonia  terdapat  beda  nyata  antara kontrol dengan semua kelompok perlakuan. Hal ini  mengindikasikan  bahwa  pemaparan  asap rokok  jenis  rokok  putih  ataupun  rokok  kretek akan mempengaruhi pembentukan sel spermatogonia. Semua perlakuan menunjukkan penurunan  jika  dibandingkan  dengan  kontrol. Menurut Hayati et al . (2006), spermatogonium
lebih  tahan  terhadap  kerusakan  atau  masuknya toksik kedalam testis dikarenakan spermatogonium dilindungi oleh sel sertoli yang berperan sebagai pelindung dari masuknya zat- zat  berbahaya  seperti  merkuri  (Hg),  kadmium dan  senyawa  lain  yang  terdapat  di  dalam  asap rokok.  Lain  halnya  dengan  sel  spermatogonia, sel  spermatosit  dan  sel  spermatid  lebih  rentan terhadap  perubahan  fisiologis  testis.  Hal  itu menjadikan  sel  spermatosit  dan  sel  spermatid memiliki  jumlah  sel  yang  lebih  menunjukkan adanya bahan berbahaya yang masuk ke dalam tubuh.  Salah  satunya  stres  oksidatif.  Hasil menunjukkan bahwa sel spermatosit pada Tabel 3 terdapat beda nyata pada taraf p<0,05 antara kontrol (KP0) dengan perlakuan (KP1, KP2 dan KP3 dan KP4). Jumlah spermatosit yang paling sedikit  dihasilkan  yaitu  pada  perlakuan pemaparan  asap  rokok  putih  berfilter  (KP4). Stres  oksidatif  serta  polimer  berbahaya  pada rokok  putih  berfilter  lebih  tinggi  dibandingkan dengan perlakuan lainnya. Stres oksidatif dapat mengganggu  terjadinya  pembelahan  sel  dan sintesis  RNA  yang  sedang  dilakukan  oleh spermatid pakiten. Hal ini menjadikan spermatid  sedang  dalam  posisi  yang  rawan diserang  oleh  senyawa  yang  berbahaya  yang terdapat  di  dalam  rokok  seperti  radikal  bebas (Unitly et al ., 2022). Perlakuan pemaparan asap rokok  kretek  berfilter  (KP2)  dan  perlakuan pemaparan  asap  rokok  putih  berfilter  (KP4) menunjukkan  hasil  paling  buruk  dari  semua perlakuan.  Hal  ini  menjadi  jelas  karena  data yang  diperoleh  dari  perhitungan  jumlah  sel-sel spermatogenik  sebanding  dengan  kriteria motilitas  sperma  serta  viabilitas  sperma. Gambar  sayatan  melintang  testis  tikus  putih strain  Wistar  semua  perlakuan  yang  diwarnai menggunakan  Hematoxilyn-Eosin  dan  diamati pada  mikroskop  perbesaran  10  x  40  dan didokumentasikan  menggunakan  optilab  dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Penampang melintang tubulus seminiferus testis pewarnaan HE dengan menggunakan mikroskop.  pada  perbesaran  100x:  (1)  KP,  (2)  KP1,  (3)  KP2,  (4)  KP3,  (5)  KP4. Keterangan: (a) membran basalis. (b) spermatogonium. (c) spermatosit. (d) spermatid. (e) spermatozoa. (f) lumen
Terlihat  dari  kelima  gambar  di  atas menunjukkan luas lumen dan kerapatan sel-sel spermatogenik  yang  berbeda.  Perbedaan  ini menunjukkan  jumlah  yang  yang  berbeda  pula (Tabel 3.). Perlakuan paparan rokok menyebabkan penurunan drastis jumlah spermatozoa. Kandungan senyawa yang bersifat toksik  pada  rokok  kretek  lebih  tinggi  ataukah lebih rendah dari dari rokok putih, karena putih juga mengandung saus rahasia yang kandungan senyawanya  belum  diketahui.  Hal  ini  dapat diasumsikan  bahwa  selain  dari  penggunaan bahan  tambahan  cengkeh,  senyawa  saus  yang terdapat  pada  rokok  putih  menyebabkan  rokok putih berdampak lebih buruk terhadap reproduksi individu jantan (jumlah spermatozoa signifikan lebih sedikit).
Perbedaan mendasar rokok putih dan rokok kretek  yaitu  pada  bahan  tambahan  cengkeh. Cengkeh  mengandung  senyawa  eugenol  yang tinggi, teruatama pada kuncup bunganya. Salah satu  fungsi  dari  eugenol  sendiri  yaitu afrodisiaka yang  berperan  sebagai  salah  satu penyedia testoteron eksogen. Testoteron eksogen  ini  berfungsi  sebagai  stimulan  pada reseptor  androgen  dengan  sistem  syaraf  dan berhubungan  dengan  mekanisme  hipotalamus dan  hipofisis  (Dipiro et  al .,  2015).  Bahan tambahan cengkeh pada rokok kretek yang bila dibakar  akan  menghasilkan  senyawa  fenol berupa  eugenol.  Senyawa  fenol  ini  berfungsi sebagai  antioksidan.  Cengkeh  walaupun  telah
melewati  pembakaran,  senyawa  fenol  masih belum  mengalami  kerusakan.  Fenol  sendiri berfungsi sebagai antioksidan dan pemberi rasa yang  khas  pada  rokok.  Hal  ini  yang memungkinkan  efek  buruk  rokok  kretek  lebih kurang daripada efek buruk rokok putih.
Filter  digunakan  pada  rokok  sebagai penyaring  senyawa-senyawa  kimia  berbahaya seperti  tar  dan  nikotin.  Filter  rokok  berbahan dasar  95%  senyawa  anorganik  selulosa  asetat. Selulosa  asetat  sebagai  filter  menyerap  racun yang  ada  pada  rokok  saat  dihisap.  Daya  serap pada  selulosa  asetat  dimanfaatkan  untuk mengurangi CO dan HC yang juga terkandung dalam  asap  rokok.  Selain  dari  asap  rokok,  CO dan  HC  merupakan  senyawa  kimia  yang  biasa berasal dari gas buangan kendaraan bermotor.
Gas  CO  berbahaya  bila  terhirup  oleh manusia  karena  mengakibatkana  gangguan pernapasan  dan  mempunyai  efek  jangka panjang  gangguan  syaraf  serta  jantung. Kemungkinan  yang  dapat  disimpulkan  yaitu radikal  bebas  atau  ROS  ( Reaction  Oxygen Species )  yang  terdapat  di  dalam  rokok  dapat mendegradasi  senyawa  selulosa  asetat  dan senyawa ini akan berpadu dengan senyawa lain yang  terdapat  di  dalam  rokok  sehingga menimbulkan  dampak  yang  lebih  toksik terhadap tubuh dibandingkan rokok tanpa filter. Hal  ini  bertentangan  dengan  tujuan  awal penambahan  filter  yaitu  untuk  menyaring  tar dan  nikotin  sehingga  kadar  yang  masuk  ke
dalam  tubuh  lebih  sedikit.  Namun  meskipun filter rokok dapat memfilter tar dan nikotin yang masuk  ke  dalam  tubuh,  terdapat  senyawa  lain seperti Nitrite  Oxide (NO)  dan  karbon monoksida  (CO)  yang  tidak  dapat  difilter  dan dapat  masuk  ke  dalam  tubuh  (Hendianto  & Hendrasarie 2020).
Pengaruh adanya filter rokok memiliki efek paling  destruktif  pada  semua  parameter  yang diteliti.  Filter  rokok  pada  rokok  putih menghasilkan  dampak  yang  paling  buruk terhadap reproduksi tikus, khusunya jumlah sel spermatogenik  dan  kualitas  spermatozoanya. Filter  rokok  yang  mengandung  selulosa  asetat dikatakan dapat memfilter tar dan nikotin yang masuk ke dalam tubuh. Namun pada kenyataannya,  filter  ini  tidak  dapat  menyaring semua  senyawa  kimia  toksik  di  dalam  asap rokok  yang  bersifat  toksik  ke  dalam  tubuh (Zavos et  al .,  1998).  Pada  penelitian  terbaru oleh  Zulfikar et  al .  (2022),  penuruan  diameter tubukus  seminiferus  selain  terjadi  karena terpapar  rokok  konvensional  juga  terjadi  pada penggunaan rokok vapor.
Selain bahan utama filter yaitu asetil asetat, filter  rokok  mengandung  senyawa-senyawa kimia lain diantaranya karbon monoksida (CO), sodium  serta  pemanis  buatan.  Senyawa- senyawa yang terdapat pada filter seperti karbon monoksida serta sodium dapat berikatan dengan asap rokok yang mengandung bahan berbahaya lain  sehingga  kandungan  karbon  monoksida (CO)  yang  terdapat  pada  rokok  berfilter  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  rokok  tanpa  filter. Rokok sendiri mengandung karbon monoksida, sehingga  saat  asap  rokok  yang  mengandung karbon  akan  semakin  tinggi  jika  ditambahkan filter yang juga mengandung karbon monoksida (Muzi et al ., 1998; Jaffe & Chavasse, 1999).

## KESIMPULAN
Dampak pemaparan asap rokok berbahaya bagi tubuh  yaitu dapat  menurunkan kualitas sperma baik  secara  motilitas  dan  viabilitasnya  serta penurunan  jumlah sel-sel  spermatogeniknya. Motilitas sperma yang terpapar asap rokok putih berfilter  menunjukkan  penurunan  paling  buruk dibandingkan dengan perlakuan yang lain.
Penurunan  fertilitas  individu  jantan  yang dipapari asap rokok putih berfilter dimulai dari pembentukan  sel-sel  spermatogenik  yang berlanjut  pada  tahap  spermiogenesis  atau pembentukan spermatozoa. Gambaran histologis
tubulus seminiferus tidak menunjukkan adanya perubahan histologi pada
semua  perlakuan  dikarenakan  pemaparan  yang dilakukan  belum  mencapai  kerusakan  jaringan dan  hanya  berpengaruh  terhadap  mekanisme fisiologis  dari  tubulus  seminiferus.  Secara umum,  efek  rokok  putih  berfilter  paling berbahaya bagi reproduksi daripada rokok yang lain.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada Universitas  Ahmad  Dahlan  melalui  Lembaga Penelitian  dan  Pengabdian  Masyarakat  yang membiayai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Adrien JAU, La Eddy, Maria N & Jesmendy R. 2022.  Peningkatan  Motilitas  dan  Viabilitas Spermatozoa Rattus  norvegicus Terpapar Asap Rokok Pasca Diterapi Sirup Cengkeh.
14 (1): 14-20. Aina N. 2005. Pengaruh Paparan Asap Rokok terhadap  Spermatogenesis  dan  Kualitas Spermatozoa  Mencit (Mus musculus L .) Galur Swiss . [Skripsi UNS]. 2005.
Aji A, Maulinda L, dan S. Amin. 2015. Isolasi Nikotin  dari  Puntung  Rokok  sebagai Insektis. Jurnal Teknologi Kimia . 4 (1).
Anbasari  K,  Vani  G    &  Devi  CS.  2005. Protective Effect of Bacoside A on Cigarette Smoking-Induced Brain Mitochondrial Dysfunction  in  Rats. J.  Environ  Pathol.
Toxicol. Oncol . 24 : 225- 34.
Ariani  M,  Febriana  A,  Sari  FD,  Khairunisa, Atifah Y dan Rahmatika H. 2023. Pengaruh Pemberian  Ekstrak  Mengkudu  ( Morinda citrifolia L.) terhadap Kualitas Spermatozoa Mencit  ( Mus  musculus L.). Jurnal  Natur Indonesia . 21 (22).
Dipiro  JT,  Wells  BG,  Schwinghammer  TL  &
Dipiro CV. 2015. Pharmacotherapy Handbook. Ninth  edition.  USA:  The  Mc. Graw Hill Company Fitriani  EK  &  Widya  E.  2010.  The  Effect  of Cigarettes smoke Exposured Causes
Fertility  of  Male  Mice  ( Mus  musculus ). J. Natural . 10 (2): 12-17.
Florentina  R  &  W  Kurniawan.  2022.  Analisis
Kuantitatif Tar dan Nikotin Terhadap Rokok Kretek  yang  Beredar  di  Indonesia. Jurnal ERUDITIO. 2 (2).
Hayati  A,  Mangkoewidjojo  S,  Hitting  A  & Moedjopawiro  S.  2006.  Hubungan  Kadar MDA Spermatozoa dengan Integritas Membran  Spermatozoa  Tikus  ( Rattus Norvegicus ) setelah Pemaparan 2-
Methoxyethanol. J  Berkala Penelitian
Hayati. 11 : 151-154.
Hendianto  MR  &    Hendrasarie  N.  2020. Kemampuan Filter Rokok Non-Pakai
Sebagai  Adsorben  Dalam  Mengurangi  Gas Emisi  CO  Dan  HC. Jurnal  Serambi
Engineering . V :4.
Holtage S, Jonathan MS, Hillel SK, Robert LM. 1999. Air  Pollution  and  Health. London: Academic Press
Iring  AR,  Rambung  E  &  Winarso  H.  2023. Differences  in  Diameter  and  Thickness  of The  Seminiferous  Tubules  of  Male  Wistar Rats  ( Rattus  Norvegicus )  after  Being
Exposed  To  e-Cigarette  Smoke  And Conventional Cigarettes. Malahayati International Journal of Nursing and Health
Science . 06 (5).
Jaffe D & Chavasse L. 1999. Comparing the Co Content  of  Cigarette  Smoke  and  Auto Exhaust Using Gas Chromatography.
Journal of College Science Teaching . 29 (3):
172-176.
Johnsen  SG.  1975.  Testicular  Biopsy  Score Count--A  Method  For  Registration  of Spermatogenesis in Human Testes: Normal Values  and  Results  in  335  Hypogonadal Males. Hormones. 1 (1): 2-25.
Kemenkes.  2018.  Kandungan  dalam  Sebatang Rokok. https://p2ptm.kemkes.go.id/infographic- p2ptm/penyakit-paru-kronik/apa-saja- kandungan-dalam-sebatang-rokok Ludmila  MK  &  Osadchuk  A.  2023.  Effects  of Cigarette  Smoking  on  Semen  Quality,
Reproductive  Hormone  Levels,  Metabolic Profile, Zinc and Sperm DNA Fragmentation  in  Men:  Results  from  a Population-Based Study. Frontiers in Endocrinology. 14 : 1-14. Marieta  A  &  Lestari  K.  2022. Narrative Review :  Rokok  dan  Berbagai  Masalah Kesehatan  yang  Ditimbulkannya. Jurnal Farmaka. 20 (2).
Moradpour  F.  2019.  A  Review  on  Animals Semen Characteristics: Fertility, Reproduction  and  Development. Asian
Journal  of  Advances  in  Agricultural
Research . 10 (2): 1-9.
Muzi G, Dell OM & Abbritti G. 1998. Objective Assessment  of  Ocular  and  Respiratory Alterations  in  Employee  A  Sick  Building. American Journal of Industial Medicine . 34 : 79-88. Osadchuk  L,  Kleshcheve  M  &  Osadchuk  A.
2023.  Effects  of  Cigarette  Smoking  on
Semen  Quality,  Reproductive  Hormone
Levels,  Metabolic  Profile,  Zinc  and  Sperm DNA Fragmentation in Men: Results From a
Population-Based Study. Frontiers.
Frontiers in Endrocrinology.
Putra  Y.  2014.  Pengaruh  Rokok  terhadap Jumlah  Sel  Spermatozoa  Mencit  Jantan ( Mus  musculus ,  Strain  Jepang). Jurnal Sainstek . VI (01): 30-42.
Rahmawati  I.  2015.  Perbedaan  Jumlah  Sel-Sel
Spermatosit  Primer  dan  Spermatid  Setelah Pemberian Nikotin  Antara 2  Minggu dan 3 Minggu  Pada  Mencit  ( Mus  musculus ). The Indonesian Journal of Health Science. 5 (2). Singh  CR  &  Kathiresan  K.  2015 . Effect  of Cigarette  Smoking  on  Human  Health  and Promising  Remedy  by  Mangroves. Asian Pacific  Journal  of  Tropical  Biomedicine.
5 (2):162-167.
Stephen  TH,  Koren  HS,  Samet  JM.2006.  Air
Pollution and Health. Hong Kong Practitioner. 28 (9): 361-362.
Unitly  AJA,  Eddy  L,  Nindatu  M  &  Reasoa  J.
2022.  Peningkatan  Motilitas  dan  Viabilitas Spermatozoa  Rattus  norvegicus  Terpapar Asap Rokok Pasca Diterapi Sirup Cengkeh. Jurnal Biologi Edukasi. 14 (1).
Zavos  PM,  Correa  JR,  Antypas  S  & Zarmakoupis.  1998.  Effects  of  Seminal Plasma  from  Cigarrete  Smokers  on  Sperm Viabilitu  and  Longevity. Fertility  and Sterility. 69 : 425-429
Zulkifar  MA,  Hestianah  EP,  Hermadi  HA,
Utama  S,  Hernawati    T,  Kuncorojakti  S  & Luqman EM. 2022. Effect of Exposure to E- Cigarette  Vapor  and  Cigarette  Smoke  on
Seminiferous Tubules Diameter and Spermatozoa  Quality  of  Mice  ( Mus musculus). Journal of  Ecology Environment and Conservation . 28 (3): 1246-1251.
26                                                              Efek Rokok Berfilter …                           (Budiantoro, dkk)