STUDI KINETIKA EFEKTIFITAS MINYAK DAUN CENGKEH ( Syzigium aromaticum ) SEBAGAI ANTIFUNGI Candida albicans
Kinetic Studies Effectiveness of Clove Leaf ( Syzigium aromaticum ) Oil as Antifungal of Candida albicans
Rustam Musta* 1 , Laily Nurliana 2
1 Chemistry Department, Teacher Training dan Education Faculty, Halu Oleo University,
2 Chemitry Department, Math and Nature Science Faculty, Halu Oleo University, Kendari Kendari Kampus Bumi Tridarma ; Anduonohu Kendari, Southeast Sulawesi,
Telp. (0401)391929/Fax.(0401)390496
*Corresponding author, e-mail: rutammusta.fkip@uho.ac.id
Received: Nov. 2018 Published: Jan. 2019

## ABSTRACT
Kinetic  studies  effectiveness  clove  leaf  ( Syzigium  aromaticum )  oil  as  antifungal Candida  albicans have  been done.  The  study  have  purpose  to  determine  the  reaction  order,  reaction  constants  ( k )  and  relationship  the concentration of clove leaf ( Syzigium aromaticum ) oil every time (A t ) with the initial concentration of of clove ( Syzigium aromaticum ) oil (A o ) and time (t) and equipped determination of the minimum concentration of clove leaf ( Syzigium aromaticum) oil effective anti-fungus Candida albicans. The results shows the anti-fungal activity clove leaf ( Syzigium aromaticum ) oil on Candida albicans for each variation of the concentration 100%, 75%, 50% and 25% are 14.2 mm, 12.2 mm, 10.8 mm and 10.4 mm respectively. Reaction order as antifungal of the clove  leaf  ( Syzigium  aromaticum )  oil  on Candida  albicans is  0.2112  with k =  5.0594.  The  minimum concentration of clove leaf ( Syzigium aromaticum) oil as anti-fungal Candida albicans is 17.86%.
Keywords : Kinetic studies, clove leaf oil, Candida Albicans, antifungal , Syzigium aromaticum

## PENDAHULUAN
Cengkeh (Syzygium  aromaticum )  adalah tanaman  asli  Indonesia  yang  semua  bagian tanaman  ini  menghasilkan  minyak  atsiri,  baik dahan,  ranting,  daun  serta  bunganya.  Hal  ini menjadikan  tanaman  cengkeh  sebagai  salah  satu komoditi  ekspor  untuk  menyuplai  kebutuhan minyak  atsiri  dunia  dan  karena  itu  usaha penyulingan minyak cengkeh terus dikembangkan  dan  mempunyai  nilai  ekonomis yang  tinggi.  Secara  umum,  kandungan  utama minyak cengkeh adalah eugenol (70-80%), yang mempunyai  sifat  sebagai  stimulan,  anestetik lokal,  karminatif,  antiemetik,  antiseptik,  dan antispasmodik.  Eugenol  merupakan  cairan    tak berwarna    atau    kuning  pucat  yang  bila  terkena cahaya    matahari    berubah    menjadi    coklat hitam  yang  berbau  spesifik (Putri dkk., 2014).
Daun  cengkeh  merupakan  sumber  minyak atsiri yang sudah banyak diisolasi. Penggunaannya  sebagai  bahan  antifungi  telah banyak diteliti dengan hasil-hasil yang dilaporkan sangat potensial untuk dikembangkan secara  massif.  Minyak  cengkeh  juga  diketahui digunakan sebagai antioksidan. Aktifitas
antioksidan minyak cengkeh bahkan lebih tinggi jika  dibandingkan  dengan  antioksidan  yang terkandung dalam lemon, anggur, dan ketumbar. Minyak cengkeh dilaporkan memiliki kemampuan  yang  lebih  baik  dalam  menangkal radikal bebas bila dibandingkan dengan 45 jenis minyak  atsiri  lainnya  (Kim et.  al. ,  2011). Adapun  aplikasi  minyak  cengkeh  dalam  bidang kesehatan  dapat  digunakan  sebagai  antistres, antimikroba, antiperadangan, antigiardial, kebutuhan  pembiusan,  antibisul  dan  sebagainya (Charles, 2013).
C.  albicans merupakan  mikroflora  normal yang  hidup  dalam  tubuh  manusia,  namun  dapat menjadi patogen saat keseimbangan flora normal seseorang terganggu ataupun pertahanan imunnya  menurun  (Hasan,  2015).  Menurut Bahari  (2012) dalam Khafidhoh  dkk.  (2015) C . albicans merupakan  salah  satu  spesies  fungi yang  ditemukan  pada  tubuh  orang  yang  sehat, seperti  dimulut,  kerongkongan,  usus,  saluran genital,  feses,  dibawah  kuku  dan  kulit. C. albicans menimbulkan  suatu  keadaan  yang disebut  dengan  kandidiasis  yaitu  penyakit  pada mulut,  selaput  lendir,  saluran  pencernaan,
saluran  pernafasan  dan saluran  gemital  terutama pada  wanita  (Pelezar  dan  Chan,  2007). Kandidiasis  adalah  infeksi  dari  genus Candida terutama C.  albicans .  Lebih  dari  150  spesies Candida telah teridentifikasi dan 70% kandidiasis  disebabkan  oleh C.  albicans . Kandidiasis pada penyakit sistemik
menyebabkan  peningkatan  angka  kematian sekitar 71%-79% (Hasan, 2015).
Adanya  kandungan  senyawa  fenolik  maka minyak daun cengkeh berpotensi untuk dikembangkan sebagai  antijamur.  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  yang  pernah  dilakukan  oleh Widyaningrum dan Try, (2015) tentang senyawa fenol  yang  terdapat  dalam  daun  sidaguri (Sida rhombifolia) sebagai antijamur C . albicans yang ditandai dengan terbentuknya zona bening. Salni dkk.  (2013) melakukan  penelitian  tentang senyawa  fenol  yang  terdapat  dalam  rimpang lengkuas putih yang dapat menghambat pertumbuhan  jamur C . albicans dengan  zona bening maksimal yang terbentuk 21,67 mm pada konsentrasi 10%.
Kinetika  kimia  adalah  suatu  bidang  ilmu kimia  yang  mempelajari  rekasi  kimia  untuk hubungan  konsentrasi  pereaksi  dengan  waktu (Triyono  dkk.,  1998).  Hal  ini  berarti  bahwa dengan menggunakan pendekatan kinetika kimia akan  diperoleh  orde  reaksi  dan  tetapannya,  juga akan  diketahui  hubungan  variabel  konsentrasi pereaksi  dengan  aktifitas  suatu  obat  termasuk didalamnya anti fungsi. Termasuk pula dalam hal ini  adalah  penentuan  konsentrasi  bahan  anti jamur  yang  aktifitasnya  memberikan  efek setidak-tidaknya sama dengan kontrol positif.
Hal  ini  penting  karena  minyak  atsiri adalah bahan yang diperoleh dengan proses yang cukup rumit  dan  panjang  sehingga  umumnya  berharga mahal  dan  karenanya  dengan  mengetahui konsentrasi  minimum  yang  memeberikan  efek sama  dengan  kontrol  positif  tersebut  akan memberikan  pengetahuan  yang  berujung  pada penggunaan  minyak  atsiri  secara  efektif  dan efesien.  Kontrol  positif  adalah  suatu  antifungi yang  telah  digunakan  secara  luas  dan  teruji. Berdasarkan  latar  belakang  tersebut  maka dilakukan  penelitian  tentang  studi  kinetika minyak  daun  cengkeh  ( Syzigium  aromaticum ) untuk antifungi Candida albicans.

## METODOLOGI
Bahan Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  sampel  daun  cengkeh ( Syzygium aromaticum ), Escherichia coli, maltodekstrin,  Amoxcillin,  media  NA,  minyak tween,  MgSO 4. 2H 2 O,  akuades,  alkohol  96%, alkohol  70%,  kertas  saring whatman ,  kain  kasa, kapas steril, etanol dan aluminium foil.

## Alat
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  piknometer,  botol  timbang, batang  pengaduk,  erlenmeyer,  labu  ukur,  gelas kimia,  corong,  corong  pisah,  spatula,  pipet volum, pipet tetes, botol vial, botol gelap, tabung reaksi.  Alat-alat  lainnya  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  satu  set  alat  destilasi  uap- air,  kompor  seribu  mata,  KG-SM  (Kromatografi Gas-Spektrometri Massa), spray drying, refraktometer, inkubator, neraca analitik, autoklaf,  waterbath ,  lemari  pendingin, laminar air  flow  cabinet, shaker  incubator ,  lampu  UV, statif, klem, mistar, spidol, oven, vortex, pisau.
Pengambilan  dan  Pengolahan  Sampel  Daun Cengkeh ( Syzygium aromaticum ) Daun cengkeh yang digunakan diambil dari daerah  perkebunan  cengkeh  Desa  Pusuea, Kecamatan Poleang Utara, Kabupaten Bombana, Sulawesi  Tenggara.  Selanjutnya  sampel  daun cengkeh  kemudian  dikeringkan  selama  empat hari.  Proses  pengeringan  dilakukan  pada  suhu ruang  tanpa  terkena  sinar  matahari  langsung. Pengeringan bertujuan untuk menguapkan sebagian  air  dalam  daun  cengkeh  ( Syzygium aromaticum )  sehingga  penyulingan  berlangsung lebih mudah dan singkat. Pengeringan dilakukan Selama  4  hari  dengan  cara  diangin-anginkan. Selanjutnya daun cengkeh diisolasi menggunakan seperangkat alat destilasi uap-air.

## Isolasi  Minyak  Daun  Cengkeh  dengan Menggunakan Destilasi Uap- Air
Proses  isolasi  dimulai  dengan,  daun cengkeh  ditimbang  sebesar  2  kg  kemudian dimasukkan  dalam  wadah  alat  destilasi  uap-air menggunakan pemanasan dengan kompor seribu mata.  Daun  Cengkeh  yang  akan  disuling  hanya akan  terkena  uap,  dan  tidak  terkena  air  yang mendidih (Sastrohamidjojo, 2004). Proses destilasi uap-air dilakukan selama 4 jam. Destilat
ditampung  ke  dalam  wadah.  Selanjutnya  lapisan minyak  cengkeh  dan  lapian  air  dipisahksan menggunakan corong pisah, kemudian ditambahkan MgSO 4 .2H 2 O pada minyak cengkeh  yang  diperoleh  untuk  menghilangkan sisa air.

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Seluruh  alat  dicuci  bersih  dan  dikeringkan. Botol  vial,  tabung  reaksi,  erlenmeyer,  cawan petri  dibungkus  dengan  kertas.  Kemudian semuanya disterilkan dengan autoklaf pada suhu 121°C  selama  15  menit.  Pengerjaan  aseptis dilakukan  di  dalam Laminar  Air  Flow yang sebelumnya  telah  dibersihkan  dengan  larutan alkohol  70%,  lalu  disterilkan  dengan  lampu UV yang  dinyalakan  selama  kurang  lebih  1  jam sebelum digunakan dalam uji antijamur (Risnawati, 2017).
Peremajaan  Jamur Candida  albicans dalam Media Padat (PDA)
Media PDA dibuat dengan cara menimbang 0,2 gram dextrosa dan 0,4 gram agar dimasukkan kedalam  erlenmeyer,  kemudian  ditambahkan  20 mL  kaldu  kentang  dan  diaduk  hingga  homogen. Setelah  homogen  erlenmeyer  ditutup  dengan kasa  dan  kapas  (disumbat)  kemudian  diautoklaf pada  tekanan  121  Mpa.  Media  PDA  yang  telah dibentuk diletakkan dalam Laminar air flow dan disinari sinar Ultra Violet (UV) selama beberapa menit.  20  mL  media  PDA  dimasukkan  dalam tabung reaksi, kemudian tabung reaksi dimiringkan  hingga  memadat  dan  digoreskan  1 ose  jamur C.albicans dalam  media  PDA  pada tabung  reaksi, lalu  tabung  reaksi  ditutup  dengan kasa  dan  kapas  kemudian  diinkubasi  selama 3x24 jam pada suhu 37°C (Hidayatullah, 2012).
Peremajaan  Jamur Candida  albicans dalam Media Cair
Membuat  media  cair  dengan  menimbang 0,1 gram dekstrosa dan dimasukkan dalam botol vial.  Setelah  dimasukkan  dalam  botol  vial ditambahkan  10  mL  kaldu  kentang  kemudian diaduk  hingga  homogen.  Setelah  diaduk,  botol vial  ditutup  dengan  kasa  dan  kapas  (sumbat) kemudian  diautoklaf  pada  tekanan  121  Mpa. Media cair yang telah terbentuk diletakkan pada laminar  air  flaw dan  disinari  sinar UV selama beberapa  menit.  Digoreskan  1  ose  jamur C.albicans dalam    media  cair  dalam  botol  vial
kemudian  botol  vial  ditutup  dengan  kasa  dan kapas  (sumbat)  dan diinkubasi selama  3x24 jam pada suhu 37°C (Bangjavicenna, 2008).
Uji Aktivitas Antijamur Candida albicans
Medium  PDA  dipipet  sebanyak  20  mL, kemudian  dimasukkan  dalam  tabung eppendorf dan  ditambahkan  10  µL  inokulum    jamur C. albicans lalu  dikocok  hingga  homogen.  Setelah homogen  dituang  dalam  cawan  petri  dengan gerakan  memutar  hingga  media  merata  pada permukaan cawan petri, lalu didiamkan beberapa menit  hingga  memadat.  Kemudian  diletakkan kertas  cakram  (diameter  0,5  cm)  yang  telah direndam  dalam    larutan  uji  (Minyak  daun cengkeh  dalam  konsentrasi  100%  ,  75%,    50%, 25%,), kontrol positif (ketokonazol 2%), kontrol negatif  (minyak  tween)  pada  permukaan  media agar  yang  telah  memadat.  Setelah  itu,  cawan petri ditutup dengan rapat dan dibungkus dengan plastik  wrap.  Kemudian  diinkubasi  selama  3x24 jam  dalam  suhu  ruang  dan  diukur  zona  hambat yang terbentuk (Risnawati dkk., 2017).

## Pengolahan dan Analisis Data
Data yang diperoleh adalah ukuran besarnya zona  bening  yang  dihasikan  dalam  uji  antijamur yang  menggunakan  pendekatan  regrase  linear namun diturunkan dari persamaan kinetika kimia dengan  bentuk  umum  (Firmana  dan  Tjahjani, 2004):
r = k [A] n
Keterangan  : r  =  Laju ,  k =  Konstanta  laju  reaksi , [A]  = Kosentrasi zat, n = Orde reaksi.
Besarnya  laju  dapat  ditentukan  dengan  r  = zona  bening  (zb)/waktu  inkubasi  (t);  namun karena  t  merupakan  waktu  inkubasi  yang besarnya  konstan  maka  dapat  dipandang  bahwa laju  identik  dengan  zona  bening.  Berdasatkan persamaan  tersebut,  dengan  menghitung  nilai logaritmanya  maka  akan  diperoleh  bentuk persamaan regresi linear:
log r = log k + n log [A]
identik dengan persamaan:
log zb = log k + n log [A]
persamaan  ini  merupakan  bentuk  persamaan garis  lurus  dengan  bentuk  umum:  y  =  a  +  bx
maka  dari  persaman  tersebut  jika  dibuat  plot hubungan log [A] sebagai sumbu x terhadap log zb sebagai sumbu y maka akan diperoleh :
intersep a = log k maka k = 10 a slope b = n = orde

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi minyak cengkeh
Minyak  cengkeh  diperoleh  melalui  proses destilasi  uap  air  yaitu  proses  hidrodifusi  dimana uap  air  akan  masuk  kedalam  jaringan  sel tanaman  yang  menyebabkan  pecahnya  dinding sel  tanaman  sehingga  minyak  yang  terkandung didalamnya  akan  terdorong  keluar.  Campuran uap  air  dan  minyak  cengkeh  akan  mengalir  ke kondensor  sehingga  terjadi  pengembunan  dan dihasilkan  destilat.  Ciri  khas  model  ini  adalah uap selalu dalam keadaan basah, jenuh, dan tidak terlalu panas. Bahan tanaman yang akan disuling hanya berhubungan dengan uap dan tidak dengan air panas.
Proses  hidrodifusi  terjadi  ketika  suhu  air mendidih, sebagian minyak yang mudah menguap  larut  dalam  air  ini  berdifusi  ke  luar dengan  peristiwa  osmosis,  melalui  selaput membran yang sedang mekar sampai dipermukaan  bahan,  dan  selanjutnya  menguap oleh  uap  yang  dilewatkan  ke  kondensor.  Proses ini  berlangsung  terus  menerus  hingga  semua senyawa  yang  mudah  menguap  terdifusi  dari kelenjar-kelenjar minyak dan kemudian teruapkan  oleh  air  yang  lewat  (Sastrohmidjojo, 2004). Destilat kemudian ditampung lalu air dan minyak  dipisahkan  sehingga  diperoleh  minyak atsiri  daun  cengkeh.  Minyak  atsiri  kemudian dimurnikan  lagi  dengan  diberi  MgSO 4 agar  air yang  masih  ada  benar-benar  habis,  akhirnya diperoleh minyak atsiri murni dari daun cengkeh dengan  perhasil  sekitar  4,2%  berat  kering  daun cengkeh.

## Hasil Uji Aktifitas Antifungi
Aktivitas  antifungi  minyak  daun  cengkeh menggunakan  metode  difusi  cakram  steril. Pengujian  menggunakan  ketokonazol  sebagai kontrol positif dan minyak tween sebagai kontrol negatif.  Ketokonazol  sebagai  kontrol  positif dipilih karena merupakan antijamur berspektrum luas  golongan  imidazol  yang  bekerja  dengan menghambat biosintesis ergosterol yang merupakan komponen penting dari pembentukan
membran  sel  jamur.  Ketokonazol  menghambat enzim cytochromp  450 yang  menyebabkan akumulasi 14-alfa-methylsterol yang  tidak  dapat menggantikan  fungsi  ergosterol  membran  sel jamur.  Penurunan  ergosterol  membran  sel  jamur menyebabkan  rusaknya  permeabilitas  membran, akibatnya  sel  jamur  kehilangan  komponen intraselulernya.  Mekanisme  seperti  itulah  yang dipakai ketokonazol dalam menghambat pertumbuhan  jamur C  .albicans (Jawetz et  al., 1995).  Adapun  Minyak  tween  sebagai  kontrol negatif  berperan  sebagai  emulgator  antara minyak nilam dan media PDA.
Media  PDA  merupakan  media  yang  cocok untuk  digunakan  untuk  pertumbuhan  jamur. Media  ini  mengandung  nutrisi  yang  dibutuhkan oleh  jamur  yaitu potato (kentang), dextrose dan agar.  Kentang  yang  terdapat  dalam  media  PDA dapat mempercepat proses sporulasi dan pigmentasi  bagi  jamur.  Disamping  itu  juga mengandung  antibiotik  yang  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri,  sehingga  diharapkan  tidak terjadi kontaminasi oleh bakteri dan hanya jamur saja yang dapat tumbuh didalammnya.
Hasil analisis uji aktivitas antifungi minyak daun  cengkeh  dalam  menghambat  pertumbuhan jamur C. albicans dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1.  Hasil uji antifungi minyak daun cengkeh dalam menghambat pertumbuhan jamur
C. albicans
Gambar 1 memperlihatkan aktivitas ketokonazol  sebagai  kontrol  postif  lebih  kecil dibandingkan  aktivitas  minyak  daun  cengkeh. Berdasarkan data tersebut juga terlihat perbedaan  aktifitas  antifungi  tiap-tiap  variasi konsentrasi minyak daun cengkeh yang berbeda-beda  yakni  berturut-turut  konsentrasi 25;  50,  75  dan  100%  dengan  luas  zona  bening berturut-turut  10,4;  10,8;  12,20  dan  14,2  mm 2 ,
10.4 10.8 12.2 14.2 0 9.3 0 4 8 12 16 25% 50% 75% 100% Kontrol (-) Kontrol (+)
L u as zo n a b em in g ( m m 2 ) Konsentrasi
memperlihatkan  bahwa  terdapat  peningkatan zona  bening  seiring  bertambahnya  konsentrasi minyak  daun  cengkeh.  Konsentrasi  100% minyak  daun  cengkeh  emerikan  rata-rata diameter  zona  bening  tertinggi  sebesar  14,2 mm 2 .  Menurut  Mbatu  dkk.,  (2018)  diameter zona  bening  11-20  mm  memberikan  respon hambatan  pertumbuhan  kuat.  Dengan  demikian aktifitas  antifungi  minyak  daun  cengkeh  pada penelitian  ini  memberikan  respon  daya  hambat kuat pada konsentrasi 75% dan 100% serta daya hambat  kategori  sedang  untuk  konsentrasi  25% dan 50%.
Minyak  daun  cengkeh  dapat  menghambat pertumbuhan  jamur C.  albicans disebabkan adanya  senyawa  fenol  dan  asam-asam  organik yang  terkandung  didalam  fraksi  hasil  pirolisis. Mekanisme  senyawa  fenol  sebagai  antifungi yaitu  dengan  cara  mendenaturasi  ikatan  protein pada  membran  sel,  sehingga  membran  sel menjadi lisis dan senyawa fenol dapat masuk ke dalam  inti  sel.  Hal  ini  dapat  menghambat pertumbuhan  jamur  bahkan  akan    mati (Sulistiyawati dan Mulyati 2009). Senada dengan itu, Siswandono dan Sukardjo (1995)
menyatakan  bahwa  mekanisme  senyawa  fenol dalam  menghambat  pertumbuhan  fungi  yaitu dengan  cara  berinteraksi  dengan  dinding  sel fungi,  dimana  pada  kadar  yang  rendah  akan mendenaturasi  protein  dan  pada  kadar  yang tinggi  akan  menyebabkan  koagulasi  protein sehingga  sel  akan  mati  (Siswandono  dan Sukardjo,1995).    Menurut  Sulistiyawati  dan Mulyati (2009) dalam Putu (2016) senyawa fenol berfungsi  sebagai  antijamur  karena  ion  H + fenol dapat menyerang gugus polar (gugus fosfat) pada fosfolipid membran sel jamur seperti C. albicans sehingga  fosfolipid  akan  terurai.  Hal  tersebut menyebabkan  fosfolipid  tidak  dapat  mampu mempertahankan bentuk membran sel, akibatnya membran akan bocor dan jamur akan mengalami penghambatan pertumbuhan bahkan akan mati.
Selain  senyawa  fenol,  asam  organik  juga berperan  dalam  menghambat  aktivitas  jamur seperti  jamur C.albicans .  Asam  organik  adalah asam  lemah,  yang  berarti  bahwa  proporsi molekul tertentu tetap tidak terdisosiasi, bergantung  pada  nilai  pKa  asam  dan  tingkat  pH sekitar.  Molekul  tak  beraturan  yang  tidak terkoordinasi  ini  melewati  membran  sel  ke mikroorganisme  dengan  lebih  mudah.  Saat berada  dalam  sel  mikroba,  asam  melepaskan
protonnya (H + ) di lingkungan alkalin yang lebih basa dari sitoplasma, sehingga terjadi penurunan pH  intraselular  jamur.  Ini  mempengaruhi metabolisme  mikroba,  menghambat  aksi  enzim penting mikroba. Sel jamur dipaksa mengeluarkan energi untuk mengeluarkan proton,  yang  menyebabkan  akumulasi  anion asam intraselular, tergantung pada gradien pH di seluruh  membran.  Anion  di  dalam  sel  mikroba diperkirakan  mengganggu  proses  metabolisme dalam  sel  (Luckstadt  dkk.,  2014  dalam Rahadi, 2017).
Kinetika  Minyak  Daun  Cengkeh  ( Syzigium aromaticum ) sebagai Antifungi Candida albicans
Kajian  kinetika  minyak  daun  cengkeh (Syzigium aromaticum) sebagai antifungi Candida  albicans dilakukan  setelah  mengukur zona  bening  tiap-tiap  konsentrasi  yang  telah ditentukan  yakni  25%,  50%,  75%  dan  100%. Hasil pengukuran zona bening tiap-tiap konsentrasi  tersebut  dapat  diperlihatkan  pada Gambar 2.
Gambar 2. Zona bening tiap-tiap konsentrasi
Konsentrari minyak daun cengkeh ( Syzigium  Aromaticum )  minimum  yang  efektif untuk  antifungi Candida  albicans ditentukan dengan  lebih  dahulu  menentukan  orde  dan tetapannya  menggunakan  persaamaan  regresi linear  yang  diturunkan  dari  persamaan  kinetika kimia.  Analisis  mengunakan  regresi  linear tersebut  menghasilkan  grafik  sebagai  mana ditunjukkan pada Gambar 3.
Gambar 3 memperlihatkan hubungan variabel  x  yaitu  nilai  logaritma  konsentrasi minyak  daun  cengkeh  (%)  dengan  variabel  y yaitu  luas  zona  bening  (mm).  Hasil  perhitungan memberikan  nilai  a=  0,7041  dan  b  =  0,2112 dengan  nilai  r 2 =  0,8175  yang  berarti  bahwa kedua  variabel  berkorelasi  positif  dan  masuk kategori  sangat  kuat.  selanjutnya  nilai  tetapan aktifitas  dapat  ditentukan  dengan  menggunakan rumus  10 a =  10 0,7041 =  5,0594.  Nilai  tetapan aktifitas  tersebut  berlaku  untuk  aktifitas  minyak daun  cengkeh  pada  antifungi Candida  albicans yang waktu inkubasinya 3 hari atau 72 jam pada
temperatur  37 o C.  Adapun  orde  rekasinya  (n)= 0,2112. Orde yang diperoleh merupakan pecahan yang nilainya terletak antara nol dan satu.
Gambar 3. Plot log konsentrasi terhadap log zona bening
Prayitno  (2007)  menyatakan  bahwa  orde reaksi  dapat  berupa  bilangan  bulat  positif,  nol atau  pecahan.  Orde  sebesar  0,2112  juga menandakan  bahwa  ada  peningkatan  aktifitas antifungi (zona bening) sebagai akibat peningkatan  konsentrasi  minyak  daun  cengkeh karena  orde  tidak  tepat  nol  namun  peningkatan tersebut  juga  tidak  berbanding  lurus  dengan konsentrasi  minyak  daun  cengkeh.  Petrucci (1992)  menyatakan  bahwa  untuk  reaksi  berorde nol  maka  laju  pereaksi  tidak  bergantung  pada konsentrasi  pereaksi  sama  sekali.  Sementara itu, Keenan  (1984)  mengemukakan  bahwa  jika  laju suatu  reaksi  kimia  berbanding  lurus  dengan pangkat satu konsentrasi dari hanya satu pereaksi maka reaksinya merupakan orde satu.
Berdasarkan nilai orde dan tetapan (k) yang telah diketahui maka dapat ditentukan hubungan variabel  konsentrasi  setiap  saat  (A t )  dengan konsentrasi mula-mula (A o ) dan waktu (t).
r = k.[A] 0,2112 - ∫ ∫
- ∫ ∫
∫ Oleh karena nilai k = 5,0594 maka:
Jika: k ’= k  x 0,7888=  5,0594  x  0,7888  =  3,99 maka:
Apabila  0,7888  ≈  0,8  dan  3,99  ≈  4  maka diperoleh hubungan yang lebih sederhana yaitu:
A t 0,8 = A o 0,8 – 4t
Sehingga besarnya konsentrasi minyak daun cengkeh  untuk  antifungi Candida  albicans yang aktifitasnya sama dengan kontrol positif yaitu 9,3 mm  seperti  ditunjukkan  pada  Gambar  1,  dapat dihitung dengan persamaan berikut ini:
9,3  = 5,0594 [A] 0,2112
[A] 0,2112 =
[A] = (1,8382) 1/0,2112
[A] = 17,86
Berdasarkan hasil perhitungan yang diperoleh di atas dapat dihitung nilai konsentrasi minyak  daun  cengkeh  dengan  aktifitas  yang sama  dengan  kontrol  positif  dan  diperoleh 17,86%.  Hal  ini  memperlihatkan  bahwa  agar diperoleh  aktifitas  yang  sama  dengan  kontol positif atau aktifitas bahan minyak daun cengkeh ( Syzigium  aromaticum )  minimum  yang  efektif untuk  antifungi Candida  albicans maka  setidak- tidaknya  harus  digunakan  konsentrasi  sebesar 17,86%.
y = 0.2112x + 0.7041 R² = 0.8175 0.96 1.00 1.04 1.08 1.12 1.16 1.20 1.70 2.20 L o g k o n se n tra si (% ) Log zona bening (mm)

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  maka  dapat disimpulkan  bahwa  aktivitas  antifungi  minyak daun  cengkeh  ( Syzigium  aromaticum )  pada Candida  albicans berbeda  untuk  tiap  variasi konsentrasi  100%,  75%,  50%  dan  25%  yakni berturut-turut sebesar 14,2 mm 2 , 12,2 mm 2 , 10,8 mm 2 dan  10,4  mm 2 .  Orde  reaksi  antifungi minyak  daun  cengkeh  ( Syzigium  aromaticum ) pada Candida albicans sebesar 0,2112 dengan k = 5,0594. Hubungan variabel konsentrasi minyak daun cengkeh ( Syzigium aromaticum ) setiap saat (A t )  dengan  konsentrasi  minyak  daun  cengkeh ( Syzigium  aromaticum )    mula-mula  (A o )  dan waktu (t) diberikan oleh persamaan: A t 0,8 = A o 0,8 – 4t.  Konsentrasi  minyak  daun  cengkeh (Syzigium aromaticum) minimum  yang  efektif  untuk antifungi Candida albicans sebesar 17,86%.

## DAFTAR PUSTAKA
Bangjavicenna, E., 2008, Potensi Propolis Lebah Trigona  spp  sebagai  Bahan  Antimikroba Ketombe. Skripsi ,  Program  Studi  Biokimia.
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor, Bogor. Charles,  D.J.,  2013, Clove  in  Antioxidant Properties  of  Spices  Herbs  and  Other Sorces , Springer, New York (US).
Firmana, A.A.N., Thjahjani, S, 2014, Karakterisasi  Hasil  dan  Penentuan  Laju Reaksi  Fermentasi  Bonggol  Pisang  (Musa paradisiaca) Menjadi Etanol dengan Saccharomyces  cerevisiae, UNESA  Journal of Chemistry , 3(3), 21-26.
Hasan,  M.N.,  2015,  Pengaruh  Ekstrak  Rimpang Jeringau  ( Acorus  calamus L)  dalam Beberapa Pelarut Organik Terhadap Aktivitas Antioksidan dan Antifungi Secara In Vitro , Skripsi, Fakultas MIPA, Universitas Islam Negeri, Malang.
Hidayatullah,  M.,  2012,  Uji  Daya  Antifungi Minyak  Atsiri  Bawang  Merah  ( Allium ascalonicum L) Terhadap Candida albicans ATCC  10231  Secara  In  Vitro ,  Skripsi .
Fakultas Kedokteran.Universitas Muhammadiyah Surakarta. Surakarta. Jawetz,  M.,  Adelberg  S.,  2001, Mikrobiologi Kedokteran .  Edisi  I.  Salemba  Medika. Jakarta.
Keenan,  W.C.,  Klenfelter,  D.C,  Wood,  J.H, 1984, Kimia  untuk  Universitas ,  Alih
Bahasa: Pujaatmaka, A.H. Erlangga, Jakarta.
Khafidhoh,  Z.,  Dewi,  S.S.,  Iswara,  A.,  2015,
Efektivitas Infusa Kulit Jeruk Pururt ( Citrus hystrix DC.) terhadap Pertumbuhan Candida  albicans Penyebab  Sariawan secara In Vitro, Publikasi Ilmiah , Universitas Muhammadiyah Semarang: Semarang, 31-37.
Kim,  L.S.,  Yang,  M.R.,  Lee,  O.H., Kang,   S.N., 2011,  Antioxidant Activities of Hot  Water Extract from Various Species, International Jurnal  of  Molecular  Science ,  12,  4120- 4131.
Mbatu,  S.  R.T.,  Putu  B.K.,  Gede  Y.S.,  Rita,  W.
S.,  2018,  Aktivitas  Minyak  Atsiri  Daun Cengkeh  Sebagai  Antijamur  Terhadap Candida albicans , Jurnal Media Sains , 2(1 ),
61-65.
Pelezar,  M.J.  Chan,  S.,  2007, Dasar-Dasar Mikrobiologi 2 , UI Press, Jakarta.
Prayitno,  2007,  Kajian  Kinetika  Kimia  Model Matematik Reduksi Kadmium Melalui Laju Reaksi,  Konstanta  dan  Orde  Reaksi  dalam Proses  Elektrokimia, Ganendra ,  10(1),  27- 34.
Putu,  N.L.P.A.,  2016,  Uji  Aktivitas  Antifungi Minyak Atsiri Daun Sirih Hijau ( Piper betle L.)  dari  Daerah  dengan  Variasi  Ketinggian Tempat  Tumbuh  Di  Bali  Terhadap  Fungi Candida  albicans  Atcc  10231  dengan Menggunakan  Metode  Difusi  Disk, Skripsi , Universitas Udayana. Denpasar.
Salni,  Aminasih,  N.,  Sriviona,  R.,  2013,  Isolasi Senyawa Antijamur dari Rimpang Lengkuas Putih  ( Alpinia  galanga (L.)  Willd)  dan Penentuan  Konsentrasi  Hambat  Minimum Terhadap Candida  albicans , Prosiding Semirata FMIPA,  Universitas  Lampung, Lampung.
Triyono,  Setiaji,  B.,  Tahir,  I.,  1998, Buku  Ajar Kinetika  Kimia ,  Jurusan  Kimia,  FMIPA. UGM, Jogjakarta.
Rahadi,  S.,  2017, Acidifier  sebagai  Feed  Aditif,
Agripreneurship.com.  Diakses  tanggal  31 Juli 2018.
Petrucci,  R.H.,  1992, Kimia  Dasar,  Prinsip  dan Terapan Modern , Editor Penerjemah, Suminar Achmadi. Erlangga, Jakarta.
Putri,  R.L.,  Hidayat,  N.,  Rahmah,  N.L.,  2014, Pemurnian  Eugenol  dari  Minyak  Daun Cengkeh  dengan  Reaktan  Basa  Kuat  KOH
dan Ba(OH) 2 (Kajian Konsentrasi Reaktan),
Industria: Jurnal Teknologi dan Management Agroindustri, 3 (1), 1-12.
Risnawati.  Nurliana,  L.,  Kurniawati,  D.,  2017,
Mikroenkapsulasi Minyak Atsiri dari Tanaman Nilam ( Pogostemon cablin Benth) Sebagai  Antijamur Candida  albicans , Indo. J. Chem. Res ., 4(2), 386-393. Sastrohamidjojo, H., 2004, Kimia Minyak Atsiri,
Gajah Mada University Press,Yogyakarta. Siswandono Soekarjo, B., 1995, Kimia Medisinal ,  Universitas  Airlangga  Press,
Surabaya.
Sulistyawati, D., Mulyati, S, 2009, Uji Aktivitas Antijamur  Infusa  Daun  Jambu  Mete ( Anacardium  occidentale L.)  terhadap Candida albincas , Biomedika , (2) 47-51.
Widyanigrum,  T.,  Wahyuni,  T.,  2015,  Uji Aktivitas  Antifungi  Ekstrak  Etanol  Daun Sidaguri (Sida rhombifolia) Terhadap Candida  albicans , Prosiding ,  Seminar Nasional  Pendidikan  Biologi  Universitas Muhamadiyah Malang, 377-385.