## VALIDASI METODE UNTUK PENETAPAN KADAR CIPROFLOXACIN DALAM SEDIAAN TABLET DENGAN NAMA DAGANG DAN GENERIK SECARA SPEKTROFOTOMETRI ULTRAVIOLET
Herlinda I.P Tjaboali 1) , Fatimawali 1) , Defny S. Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA UNSRAT Manado

## ABSTRACT
Ciprofloxacin  is  anantibiotic  from  fluoroquinolon  group  which  is  the  most  widely  used. Nowadays people prefer branded drugs than generic drugs. They assume that branded drugs were more effective than generic drugs. Eventhough drugs with the same active content will give  same  therapeutic  effect.  This  research  aims  to  determine  validation  and  levels  of ciprofloxacin  tablet  by  UV  spectrophotometry  and  comparing  the  results  with  levels regulation by USP30. The determination of ciprofloxacin in tablet preparation were tested its validation according to accuracy parameter used standard addition method, presisition, limits of detection and limits of quantitative. The validation with analysis method obtained standard deviation value is 13.3931, coefficient of variation is 0.0258%, and value accuracy is 96.1%. The linearity value was obtain r = 0,9978 with limits of detection is 0.54 ppm and limits of quantitative  is  1.8  ppm.  The  results  showed  that  ciprofloxacin  levels  in  tablet  preparation with trade name and generic were 929 ± 0,758 ppm, 1,030 ± 0,004 ppm, 947,3 ± 0,773 ppm and6,63  ±  0,994  ppm  .  It  showed  that  all  the  trade  name  and  generic  tablets  that  examined fulfill the standard regulation of tablets byUSP30.
Key words : Ciprofloxacin, Validation, Ultraviolet Spectrophotometry.

## ABSTRAK
Ciprofloxacin merupakan antibiotik  yang berasal dari golongan fluorokuinolon  yang paling  banyak  digunakan.  Saat  ini  masyarakat  lebih  memilih  obat  merek  dagang dibandingkan obat generik. Mereka menganggap obat merek lebih berkhasiat dibanding obat generik.  Padahal  obat  dengan  zat  aktif  yang  sama  akan  memberikan  efek  terapi  yang  sama sesuai kadarnya. Tujuan penelitian ini untuk menentukan validitas dan melakukan penetapan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan tablet secara spektrofotometri UV serta membandingkan hasil  yang  diperoleh  dengan  persyaratan  kadar  yang  ditetapkan  USP  30  (2007).  Penetapan kadar  Ciprofloxacin  dalam  sediaan  tablet  diuji  validitasnya  berdasarkan  parameter  akurasi dengan metode penambahan baku, presisi, batas deteksi (LOD) dan batas kuantitatif (LOQ). Hasil  validasi  metode  analisis  yang  dilakukan  diperoleh  nilai  standar  deviasi  (SD)  sebesar 13,3931,  koefisien  variasi  (KV)  sebesar  0,0258%,  dan  nilai  ketepatan  sebesar  96,1%. Diperoleh nilai linearitas sebesar r = 0,9978 dengan batas deteksi (LOD) 0,54 ppm dan batas kuantitatif (LOQ) sebesar 1,8 ppm. Hasil penelitian menunjukkan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan  tablet  dengan  nama  dagang  dan  generik  secara  berturut-turut  adalah  929  ±  0,758 ppm, 1,030 ± 0,004 ppm, 947,3 ± 0,773 ppm dan 6,63 ± 0,994 ppm. Ini menunjukkan bahwa semua  tablet  yang  diperiksa  baik  yang  generik  maupun  merek  dagang  memenuhi  standar persyaratan tablet menurut USP 30 (2007).
Kata kunci : Ciprofloxacin, Validasi, Spektrofotometri Ultraviolet

## PENDAHULUAN
Antibiotik  adalah  senyawa  organik
yang dihasilkan oleh spesies mikroorganisme  tertentu  dan  bersifat toksik  bagi  spesies  mikroorganisme  lain. Sifat  toksik  senyawa  antibiotik  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  (efek bakteriostatik)  atau  langsung  membunuh bakteri  (efek  bakteriosida)    (Sumardjo, 2008).  Golongan  Fluorokuinolon  adalah antibiotik  yang  sangat  aktif,  memiliki spektrum luas dan banyak digunakan baik pada manusia maupun hewan. Fluorokuinolon memiliki kelebihan karena  dapat  melawan  berbagai  jenis patogen  multiresisten  disebabkan  cara kerjanya yang melalui target – target yang berbeda  dari  golongan  antimikroba  lain. Mekanisme resistensi  fluorokuinolon juga tidak  seperti  kebanyakan  mekanisme resistensi  dari  antibiotik  lain,  yaitu  tidak melalui plasmid atau integron.
Secara  umum  ada  dua  penggolongan obat  yang  dikenal  dimasyarakat  yaitu golongan  obat  generik  dan  obat  merek dagang.  Masyarakat  akan  memilih  obat merek  dagang  walaupun  harganya  lebih mahal karena adanya anggapan masyarakat yang cenderung  menilai kualitas  obat  dengan  melihat  harganya, dimana  mereka  beranggapan  bahwa  obat yang  mahal  lebih  baik  kualitasnya dibandingkan  obat  yang  murah  harganya. Padahal  obat  dengan  zat  aktif  yang  sama akan  memberikan  efek  terapi  yang  sama sesuai  kadarnya.  Untuk  mengatasi  hal tersebut,  Departemen  kesehatan  telah menetapkan peningkatan penggunaan obat generik  yang  didukung  dengan  peraturan menteri kesehatan
No.
085/Menkes/Per/I/1989,
tanggal 28
januari  1989  tentang  kewajiban  menulis resep dan atau  menggunakan obat generik
di fasilitas pelayanan kesehatan pemerintah (Depkes, 1989).
Menurut  Undang-undang  No.23  tahun 1992  pasal  40  ayat  1  tentang  kesehatan bahwa  obat  dan  bahan  obat  harus memenuhi  standar  farmakope  dan  buku standar lainnya. Salah satu parameter obat tersebut  dikatakan  memenuhi  standar apabila kadar zat berkhasiat yang terkandung di dalamnya memenuhi persyaratan Farmakope. Persyaratan kadar untuk sediaan tablet Ciprofloxacin menurut  USP  30  yaitu  mengandung Ciprofloxacin  tidak  kurang  dari  90,0% dan tidak lebih dari 110,0%.
Berdasarkan  penelitian  Sari  (2013) Ciprofloxacin  dapat  ditentukan  kadarnya dengan  Spektrofotometri.  Dilihat  dari strukturnya ciprofloxacin yang mempunyai gugus kromofor  (ikatan rangkap  terkonjugasi),  maka  senyawa  ini dapat  menyerap  radiasi  pada  panjang gelombang di daerah ultraviolet.
Ciprofloxacin memiliki serapan maksimum  dalam  larutan  akuades  pada panjang gelombang 278 nm.
Penelitian  ini  menggunakan  metode spektrofotometri ultraviolet karena metode  ini  memiliki  banyak  keuntungan antara  lain  dapat  digunakan  untuk  analisa suatu zat dalam jumlah kecil, pengejaannya  mudah,  sederhana,  cukup sensitif  dan  selektif,  biayanya  relatif murah  dan  mempunyai  kepekaan  analisis cukup tinggi (Munson, 1991).

## METODOLOGI PENELITIAN
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  ialah  akuades,  zat  aktif Ciprofloxacin,  tablet  dagang  Ramavex dan Mecoquin, tablet generik Ciprofloxacin  (PT.  Promedhahardjo)  dan Ciprofloxacin  (PT.  Bernofarm).  Alat-alat
yang  digunakan  pada  penelitian  ini  ialah satu  unit  alat  Spektrofotometri  UV (Shimadzu),  neraca  analitik,  mortar  dan stamper, dan alat gelas lainnya.
Pembuatan larutan induk baku

## Ciprofloxacin
Ditimbang  seksama  sejumlah  48 mg  Ciprofloxacin,  dimasukkan  kedalam labu  ukur  100  mL,  dilarutkan  dan diencerkan dengan akuades hingga 60 mL sehingga diperoleh larutan dengan konsentrasi  800ppm,  larutan  ini  disebut larutan induk baku.
Penentuan Panjang

## Gelombang Serapan Maksimum
Dipipet 6,25 mL dari larutan baku (800  ppm)  dimasukkan  ke  dalam  labu ukur  10  mL,  diencerkan  dengan  akuades hingga  garis  tanda.  Lalu  dikocok  sampai homogen  sehingga  diperoleh  larutan dengan  konsentrasi  500ppm.  Kemudian ukur  serapan  pada  panjang  gelombang 200-400 nm.
Penetapan Operating Time
Dari  larutan  baku  Ciprofloxacin 800  ppm  dibuat  larutan  baku  dengan konsentrasi  500  ppm  dengan  cara  seperti pada  pembuatan  seri  konsentrasi.  Larutan baku dengan konsentrasi 500 ppm tersebut dikocok hingga homogen dan dimasukkan ke dalam kuvet kemudian dibaca absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum  sampai  diperoleh  absorbansi yang  relatif  konstan  dengan  rentang pembacaan setiap 1 menit sekali.
Pembuatan Kurva Kalibrasi

## Ciprofloxacin
Dipipet larutan induk baku dengan seri  konsentrasi  500,  550,  600,  650,  700 ppm  didiamkan  selama  waktu operating time kemudian dibaca absorbansinya pada
panjang  gelombang maksimum.  Dari data hasil  absorbansi,  selanjutnya  dihitung persamaan kurva bakunya sehingga diperoleh persamaan garis y = bx + a.
Penentuan Limit  of  Detection (LOD) dan Limit of Quantitation (LOQ)
Batas  deteksi  atau Limit  of Detection (LOD)  adalah  jumlah  terkecil analit dalam sampel  yang dapat dideteksi. Batas kuantitasi atau Limit of Quantitation (LOQ) merupakan kuantitas terkecil analit dalam sampel.

## Ketelitian ( Precision )
Dari  larutan  baku  Ciprofloxacin 800  ppm  dibuat  larutan  baku  dengan konsentrasi  500  ppm  dilakukan  dengan cara  seperti  pada  pembuatan    seri konsentrasi.  Larutan  baku  Ciprofloxacin dengan  konsentrasi  500  ppm  tersebut dibaca absorbansinya pada panjang gelombang  maksimum.  Uji  ketelitian  ini dilakukan dengan lima kali pengulangan.
Ketepatan ( Accuracy )
Ditimbang  48  mg  zat  aktif Ciprofloxacin  secara  duplo,  masing- masing  dimasukkan  kedalam  labu  ukur. Pada salah satu labu takar ditambahkan 22 mL larutan baku Ciprofloxacin konsentrasi  800  ppm.  Kedua  sampel tersebut  ditambahkan  akuades  hingga volume 60 mL. Dikocok hingga homogen kemudian  dari  masing-masing  larutan tersebut  diambil  6,25  mL  kemudian diencerkan dengan akuades hingga volumenya  tepat  10  mL  lalu  dibaca absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum  dan operating  time .  Uji ketepatan  dilakukan  dengan  penambahan larutan  baku  800  ppm  dengan  5  kali pengulangan. Hasil absorbansinya
digunakan  untuk  menghitung  persen perolehan kembali ( recovery ).

## Penetapan  Kadar  Ciprofloxacin  dalam Sediaan Tablet
Ditimbang  48  mg  zat  aktif Ciprofloxacin kemudian dilarutkan dengan akuades hingga volumenya 60 mL dari  larutan  tersebut  diencerkan  dengan akuades  seperti  pada  pembuuatan  seri konsentrasi hingga 1 ppm. Selanjutnya 20 tablet  yang  telah  memenuhi  keseragaman bobot  digerus  hingga  halus  dan  homogen lalu  sampel  serbuk  ditimbang  dan dilarutkan, dibuat perhitungan penimbangan  sampel  untuk  menentukan berat  sampel  dan  volume  larutan  yang dibutuhkan  masing-masing  sampel  dan dilartkan hingga konsentrasi 800 ppm lalu encerkan  hingga  konsentrasi  1  ppm, kemudian  dibaca  absorbansinya  pada panjang gelombang maksimum dan operating time . Penetapan kadar dilakukan  dengan  pengulangan  sebanyak 3  kali  dan  dilakukan  terhadap  2  sampel tablet Ciprofloxacin generik dan 2 sampel tablet Ciprofloxacin dagang.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari  hasil  yang  diperoleh  panjang gelombang maksimum adalah pada panjang gelombang 276 nm dan konsentrasi  yang  optimum  yaitu  pada konsentrasi  500  ppm  dengan  absorbansi 0,24.  Konsentrasi  ini  dipilih  karena peak pada  konsentrasi  ini  menunjukkan  hasil yang baik dan sesuai dengan literatur yang ada  akan  tetapi  sedikit  mengalami pergeseran  panjang  gelombang  dengan literature  yaitu  278  nm.  Karena  adanya gugus auksokrom pada struktur Ciprofloxacin yang mengakibatkan terjadi
pergeseran  pada  panjang  gelombang tersebut.
Penentuan operating time ditentukan dengan  menggunakan  panjang  gelombang maksimum yaitu 276 nm dengan konsentrasi 500 ppm menggunakan spektrofotometri
ultraviolet. Hasil penetapan operating  time diambil  dari absorbansi  yang  stabil  yaitu  0  –  5  menit. Operating  time yang  digunakan  adalah setiap 1 menit selama 10 menit.
Koefisien korelasi (r) yang diperoleh  dari  kurva  kalibrasi  tersebut adalah 0,9978 dengan persamaan regresi y =  0,0004x  +  0,0274.  Persamaan  kurva kalibrasi  merupakan  hubungan  antara sumbu  x  dan  y.  Konsentrasi  yang diperoleh dari hasil pengukuran dinyatakan  sebagai  sumbu  x  sedangkan serapan yang diperoleh dari hasil pengukuran  dinyatakan  sebagai  sumbu  y dan  persamaan  regresi  linear  dari  kurva kalibrasi  yang  diperoleh  hubungan  yang liniear  antara  konsentrasi  dan  serapan dengan koefisien korelasi. Harga koefisien korelasi (r) yang mendekati 1 menyatakan hubungan  yang  linear  antara  konsentrasi dengan  serapan  yang  dihasilkan  dengan arti  peningkatan  nilai  absorbansi  analit berbanding  lurus  dan  signifikan  dengan peningkatan konsentrasinya sesuai dengan kriteria penerimaan untuk koefisien korelasi  yang  baik  adalah  r  ≥  0,997. (Shargel, 1985).
y = 0.0004x + 0.0274 r² = 0.9957 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0 200 400 600 800
a b s o r b a n s i
Gambar 1. Kurva Baku Larutan Baku Ciprofloxacin
Setelah mendapatkan kurva kalibrasi yang  memenuhi  persyaratan  analisis, selanjutnya  menentukan  batas  deteksi (LOD)  dan  batas  kuantitas  (LOQ).  Batas deteksi  yang  diperoleh  adalah  0,54  ppm artinya  pada  konsentrasi  tersebut  masih dapat  dilakukan  pengukuran  sampel  yang memberikan  hasil  ketelitian  suatu  alat berdasarkan  tingkat  akurasi  individual hasil  analisis, sedangkan  batas  kuantitas yang  diperoleh  adalah  1,8  ppm  artinya pada  konsentrasi  tersebut  bila  dilakukan pengukuran  masih  dapat  memberikan kecermatan analisis. Batas deteksi merupakan  konsentrasi  analit  terendah dalam  sampel  yang  masih  dapat  dideteksi (Harmita, 2006).
Uji  ketelitian  dilakukan  dengan menggunakan  larutan  baku  Ciprofloxacin dengan  konsentrasi  500  ppm  yang  dibuat sebanyak 5 kali untuk dilihat absoransinya pada panjang gelombang maksimum. Hasil absorbansi  digunakan  untuk  menghitung harga absorbansi dan konsentrasi rata-rata,
standar  devisiasi  (SD),  koefisien  variasi (KV)  serta  ketelitian  alat.  Dari  hasil  yang diperoleh  menunjukkan  nilai  koefisien variasi  (KV)  adalah  0,0258%  sehingga ketelitian  alat  yang  diperoleh  yaitu 99,97%.  Menurut  Harmita  (2004),  nilai KV  <  2%  menunjukkan  bahwa  metode tersebut memberikan presisi yang baik.
Hasil  uji recovery yaitu 96,1%. Dari  data  tersebut  menunjukkan  bahwa metode yang digunakan memiliki ketepatan  yang  baik  ditunjukkan  dengan nilai recovery berada  pada  kisaran  80  – 110%  sesuai  dengan  yang  disyaratkan. Nilai recovery menunjukkan  kemampuan metode  untuk  memberikan  ketepatan pengukuran  terhadap  analit  berdasarkan angka perolehan kembali.
Hasil penetapan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan tablet dengan nama dagang dan generik secara berturut- turut  adalah  929  ±  0,758  ppm,  1,030  ± 0,004 ppm, 947,3 ± 0,773 ppm dan 6,63 ± 0,994  ppm.  Berdasarkan  data  yang diperoleh menunjukkan kadar Ciprofloxacin dalam sediaan tablet generik maupun dagang memenuhi persyaratan kadar yang tertera dalam USP 30  (2007)  yaitu  tidak  kurang  dari  90,0% dan tidak lebih dari 110%.

## Kesimpulan
1. Metode  spektrofotometri  ultraviolet dapat  digunakan  untuk  penetapan kadar  ciprofloxacin  dalam  sediaan tablet  karena  dari  hasil  uji  validasi, metode  ini  menunjukkan  akurasi  dan presisi  yang  baik  yaitu  nilai  SD sebesar  13,3931,  KV  sebesar  0,0258 dan  nilai  ketepatan  sebesar  96,1% dengan batas deteksi (LOD) 0,54 ppm dan batas kuantitatif (LOQ) 1,8 ppm.
2. Hasil  penetapan  kadar  Ciprofloxacin dalam  sediaan  tablet  dengan  nama dagang  dan  generik  secara  berturut- turut  adalah  929  ±  0,758  ppm,  1,030 ± 0,004 ppm, 947,3 ± 0,773 ppm dan
6,63 ± 0,994 ppm.
3. Dari  hasil  penelitian  menunjukkan bahwa  semua  tablet  yang  diperiksa baik  yang  generik  maupun  nama
dagang memenuhi standar persyaratan  tablet  menurut  USP  30 (2007) yaitu
mengandung Ciprofloxacin tidak  kurang  dari
90,0%  dan tidak lebih dari 110,0%.

## DAFTAR PUSTAKA
Sumardjo, D. 2008. Buku Panduan Kuliah Mahasiswa  Kedokteran  Program Strata  1. Fakultas  Bioeksata. Jakarta : EGC
Undang-Undang RI. 1992. No.23 Tentang
Kesehatan. Presiden Republik
Indonesia, Jakarta
Departemen  Kesehatan  RI.  1989. No.  085
Tentang  Kewajiban  Menulis  Resep dan  atau  Menggunakan  Obat
Generik  di  Fasilitas  Pelayanan Kesehatan Pemerintah . Kementerian Kesehatan RI. Jakarta
Sari, I. 2013. Analisis Kadar Ciprofloxacin dalam  Sediaan  Tablet  dengan Metode Spektroskopi Near-Infrared dan  Kemometrik .  Artikel  Ilmiah Hasil Penelitian Mahasiswa.
Fakultas Farmasi UNEJ. Jember
Munson,  J.  W.  1991. Analisis  Farmasi Metode  Modern .  Penerjemah  :
Harjana. Parwa B. Surabaya.
Airlangga  University  Press.  Hal 334 Shargel,  L.  1985. Biofarmasetika  dan Farmakokinetika Terapan . Penerjemah  Fasich.  Edisi  Kedua. Surabaya  :  Penerbit  Universitas Airlangga. Halaman 16
Harmita.  2004. Petunjuk  Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungan . Majalah Ilmu
Kefarmasian .  Vol.  I,  No.  3. Halaman 117-128
Pharmacopeia  USP,  2007. The  National Formulary . Edition 30. The United State  Pharmacopeia  Convention. Page 1759-1760
Direktorat  Jendral  Pengawasan  Obat  dan
Makanan, 1995. Farmakope Indonesia .  Edisi  IV.  Departemen Kesehatan RI. Jakarta