## UJI DAYA ANTIMIKROBA EKSTRAK ETANOL
DAUN SIRIH MERAH ( Piper Crocatum Ruiz & Pav.) TERHADAP PERTUMBUHAN Staphylococcus aureus ATCC 6538, Eschericia coli ATCC 11229 DAN Candida albicans ATCC 10231 SECARA IN VITRO
Anika Candrasari, M. Amin Romas, Masna Hasbi, Ovi Rizky Astuti Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta Correspondence to : dr. Anika Candrasari, M.Kes Email : Anika.Candrasari@ums.ac.id

## ABSTRACT
Red  betel  leaf  contains � avonoids,  alkaloids  and  essential  oils  that  are  suspected  able  to  inhibit  the growth of microbes. This study aims to analyze antimicrobial activity of ethanol extract of red betel leaf agains to Staphylococcus aureus, Eschericia coli and Candida albicans. Subjects were red betel leaf ethanol extract at concentration of 2.5%, 5%, 10%, 20%, 40%, 80% and 100%. As a positive control used amoxycilin, chloramphenicol and ketoconazole. The study showed that concentration 10 % - 100 % inhibit the growth of Staphylococcus aureus. In Escherichia coli all the data obtained, having an average which is not much different from the mean of the negative control. While on Candida albicans average diameter of inhibition zone of extract concentration 40% p = 0.197 concluded that statistically has signi � cant antifungal power compared with ketokonazole.
Keywords : Ethanol extract, Piper Ruiz & Pav crocatum, Antimicrobial, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Candida albican

## PENDAHULUAN
Penyakit infeksi merupakan penyakit yang banyak diderita masyarakat Indonesia sejak dulu. Penyakit  infeksi  saat  ini  dapat  ditanggulangi menggunakan  obat  modern  (Dzulkarnain et al .,  2004),  yaitu  antimikroba.  Penggunaan antimikroba  (antibiotik,  antifungi)  yang  tidak rasional  telah  menyebabkan  banyak  mikroba patogen  beradaptasi  dengan  lingkungannya dan  menjadi  resisten  terhadap  obat  tersebut. Meningkatnya  masalah  resistensi  menyebabkan kebutuhan akan obat antimikroba baru yang dapat mengatasi masalah resistensi juga meningkat, oleh karena  itu  pencarian  antimikroba  baru  termasuk dari  tanaman  terus  dilakukan  (Martini  dan  Ellof 1998; Yustina 2001).
Salah satu tumbuhan yang dikenal luas oleh masyarakat adalah sirih. Sirih merupakan tanaman yang telah banyak digunakan sebagai obat di Asia Tenggara.  Sirih  di  Indonesia  ada  beberapa  jenis, yang  dibedakan  berdasarkan  bentuk  daun,  rasa dan aromanya, yaitu sirih hijau, sirih banda, sirih cengkih, sirih hitam dan sirih merah (Moeljanto & Mulyono, 2003; Sudewo, 2005).
Beberapa penelitian mengenai antimikroba alami  yang  efektif  untuk  melawan  infeksi  telah dilakukan. Salah satu tanaman yang telah diteliti adalah  sirih  hijau  ( Piper  betle  Linn ).  Daun  sirih hijau telah dibuktikan mempunyai daya antibakteri (Fadhilah, 1993; Taringan, 1994; Zakiyah, 1995; Sari & Dewi, 2006) dan daya antifungi (Sutardi, 1994;  Wulandari  &  Maretnianin,  2008).  Hasil penelitian  terdahulu  menunjukkan  bahwa  daun sirih  hijau  mengandung  minyak  atsiri  yang terdiri  dari  betelfenol,  kavikol,  seskuiterpen, hidroksikavikol, kavibetol, estragol, eugenol, dan karvakrol.  Minyak  atsiri  dan  ekstraknya  dapat melawan  beberapa  bakteri  Gram  positif  dan Gram negatif. Daun sirih hijau tidak mengandung alkaloid sedangkan daun sirih merah mengandung alkaloid (Sudewo, 2010).
Daun  sirih  merah  mengandung  senyawa kimia  seperti  alkaloid, � avonoid,  tanin,  dan minyak atsiri yang diduga berpotensi sebagai daya antimikroba  (Ebadi,  2002).  Sehubungan  dengan sirih merah dan sirih hijau berasal dari genus yang sama, diperkirakan sirih merah juga memiliki efek yang sama terhadap pertumbuhan mikroba.
Namun, evidence based medicine mengenai pemanfaatan  sirih  merah  masih  sedikit.  Hal  ini disebabkan  sirih  merah  belum  lama  dikenal masyarakat  luas  sehingga  informasi  ilmiah mengenai  tanaman  ini  terbatas,  demikian  juga dengan jurnal ilmiah di dalam negeri maupun luar negeri  (Juliantina  dkk,  2009).  Sedangkan  sirih merah  menurut  Syariefa  (2006)  seluruh  bagian tanamannya  mengandung  unsur-unsur  zat  kimia yang  bermanfaat  untuk  pengobatan,  terutama daunnya.
Berdasarkan  pernyataan  di  atas,  maka dapat  dirumuskan  permasalahan  Apakah ektrak  etanol  daun  sirih  merah  ( Piper  crocatum Ruiz  &  Pav .)  mempunyai  daya  antimikroba terhadap  pertumbuhan Staphylococcus  aureus ATCC  6538, Eschericia  coli ATCC  11229  dan Candida  albicans ATCC  10231  secara  in  vitro  . Sedangkan tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui  daya  antimikroba  etanol  daun  sirih merah  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus aureus ATCC 6538, Eschericia coli ATCC 11229 dan Candida  albicans ATCC  10231  secara  in vitro. Penelitian ini diharapkan bermanfaat untuk memberi informasi daya antimikroba etanol daun sirih merah terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus ATCC 6538, Eschericia coli ATCC 11229 dan Candida albicans ATCC 10231 secara in vitro.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental laboratorik dengan metode post test control group design only . Subyek penelitian ini adalah ekstrak etanol  daun  sirih  merah  dengan  konsentrasi  atau dosis berturut-turut yang diperoleh dengan rumus Progresi Geometris :
N-1 N 1 Y =Y R Y N adalah dosis ke-n R N-1 merupakan faktor pemacu N adalah dosis deret pertama. (Harmita & Radji., 2004).
Berdasarkan  perhitungan  dengan  rumus  di atas maka didapatkan konsentrasi atau dosis ektrak etanol sirih merah menjadi  2,5%, 5%, 10%, 20%, 40%, 80% dan 100%.
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Biomedik  II  Sublaboratorium    Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Surakarta  pada  bulan    Agustus  2011.  Variabel
bebas  dalam    penelitian  ini  adalah  konsentrasi ekstrak etanol daun sirih merah ( Piper crocatum ) 2,5%, 5%, 10%, 20%, 40%, 80% dan 100% dengan skala  rasio.  Sedangkan  variabel  terikat  dalam penelitian  ini  adalah  efek  antimikroba  terhadap Staphylococcus  aureus  ATCC 6538, Eschericia coli  ATCC 11229  dan Candida  albicans ATCC 10231 dengan skala rasio.
Jumlah  sampel  dari  tiap  kelompok perlakuan  dihitung  dengan  menggunakan  rumus Federer .  Penelitian  ini  dilakukan  sekaligus  pada lima  kelompok  perlakuan  sesuai  dosis  (2,5%, 5%,  10%,  20%,  40%,  80%  dan  100%)  dengan tiga kontrol positif (Amoxicillin, kloramphenikol dan ketokonazole), dan satu kontrol negatif (disk kosong).
Rumus Federer:
t = jumlah kelompok n= jumlah sampel (n-1) (11-1) ≥ 15 → 10 (n-1) ≥ 15 → n ≥ 2,5 → n = 3
Berdasarkan  perhitungan  tersebut  maka jumlah  sampel  minimal  yang  diperlukan  adalah tiga sediaan. (Andries, 2009).
Alat  yang  digunakan  di  dalam  penelitian ini  adalah  tabung  reaksi  steril,  inkubator,  cawan petri,  kapas  lidi  steril,  ohse  kolong,  erlemeyer, penjepit,  pipet,  lampu  spritus.  Daun  sirih  merah dicuci  bersih  lalu  diangin-anginkan,  kemudian dikeringkan dengan oven pada suhu 40°C sampai kering, kemudian diremas dan dihaluskan sampai menjadi  serbuk  menggunakan  blender.  Serbuk kemudian  ditambahkan  dengan  larutan  etanol 70%, diaduk, didiamkan (maserasi), dan diambil � ltratnya  dengan  penyaringan.  Hasil  saringan diuapkan dalam rotary vacuum evaporator dengan suhu  40°C.  Pada  akhir  proses  ini  di  dapatkan ekstrak  etanol  sirih  merah  dengan  cairan  kental, berwarna  coklat,  dengan  bau  khas  aromatik. Selanjutnya ekstrak etanol sirih merah diencerkan dengan pelarut aquadest steril bila akan digunakan (Poelongan & Soeripto, 1998).
Siapkan  dua  buah  plate  media  Muller Hinton,  pada  bagian  bawah  plat  dibuat  garis- garis  pembagian  dengan  menggunakan  spidol dan  dilabeli  masing-masing  konsentrasi  ekstrak. Kemudian  masing-masing  bagian  konsetrasi dilubangi  untuk  membuat  sumuran  dengan
(n-1) (t-1) ≥ 15
diameter 6 mm. Selanjutnya plate pertama diolesi secara  merata  dengan  bakteri Staphylococcus aureus ATCC 6538 yang telah dibandingkan dengan standar  0,5  Mc.Farland.  Untuk  plate  yang  kedua diolesi  secara  merata  dengan  bakteri Eschericia coli ATCC 11229 yang telah dibandingkan dengan standar 0,5 Mc.Farland. Kemudian pada masing- masing  sumuran  diteteskan  ekstrak  etanol  sirih merah  dengan  kosentrasi  2,5%,  5%,  10%,  20%, 40%, 80% dan 100%, kontrol positif dan kontrol negatif. Selanjutnya inkubasi plate pada suhu 37 � C selama  18-24  jam. Zona  hambat yang  terbentuk diukur dengan menggunakan jangka sorong dalam satuan millimeter (mm).
Pada  masing-masing  media  Sabouraud Dekstrosa Agar dibuat sumuran berdiameter 6 mm dengan boor proof kemudian diisi 0,05 ml ekstrak etanol daun sirih merah dengan konsentrasi 2,5%,
5%,  10%,  20%,  40%,  80%,  dan  100%,  akuades steril  sebagai  kontrol  negatif,  serta  ketokonazol sebagai  kontrol  positif.  Selanjutnya  diinkubasi pada suhu kamar selama 1-2 hari. Diameter zona bening  atau  zona  hambat  yang  terbentuk  diukur dengan penggaris dengan satuan milimeter (mm). Data  yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini  akan diuji  nilai  kemaknaannya  dengan  menggunakan Oneway Anova .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Setelah  dilakukan  penelitian  mengenai daya  antimikroba  daun  sirih  merah  terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus ATCC 6538, Eschericia coli ATCC 11229 dan Candida albicans ATCC 10231 secara in vitro maka diperoleh hasil sebagai berikut:
Tabel 1.   Hasil pengukuran diameter zona hambat ekstrak etanol daun sirih merah ( Piper crocatum
Ruiz&Pav) terhadap Staphylococcus aureus ATCC 6538 dengan metode sumuran No Kontrol  (mm) Kontrol + (mm) Ekstrak etanol daun sirih merah 2,5% 5% 10% 20% 40% 80% 100% 1 6 36 6 6 6 11 12 17 18 2 6 37 6 6 6 10 13 16 18 3 6 35 6 6 7 11 13 17 17 Rata-rata 6 36 6 6 6,3 10,6 12,6 16,6 17,6
Tabel 2.    Hasil Pengukuran Diameter Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Sirih Merah ( Piper crocatum Ruiz & Pav) Terhadap Eschericia coli ATCC 11229 dengan Metode Sumuran No Kontrol - (mm) Kontrol + (mm) Ekstrak etanol daun sirih merah 2,5% 5% 10% 20% 40% 80% 100% 1 6 21 6 6 6 6
6 8 8 2 6 18 6 6 6 6
6 8 7 3 6 21 6 6 6
6 7 7 8 Rata-rata 6 20 6 6 6 6 6,3 7,6 7,6
Tabel 3.  Hasil  Pengukuran  Diameter  Zona  Hambat  Ekstrak  Etanol  Daun  Sirih  Merah  ( Piper  crocatum Ruiz & Pav) Terhadap Candida albicans dengan Metode Sumuran No Kontrol - (mm) Kontrol + (mm) Ekstrak etanol daun sirih merah 2,5% 5% 10% 20% 40% 80% 100% 1 6 14 6 6 8
10 12 11 8 2 6 14 6 6 8
10 14 13 10 3 6 15 6 6 10
12 14 13 10 Rata-rata 6 14,3 6 6 8,7 10,7 13,3 12,3 9,3
Tabel 1 menunjukkan bahwa kontrol negatif dan  kelompok  perlakuan  yang  menggunakan ekstrak etanol daun sirih merah dengan konstentrasi 2,5% dan 5%  tidak menunjukkan efek antibakteri terhadap  pertumbuhan Staphylococcus  aureus . Biakan Staphylococcus  aureus mulai  terbentuk zona  hambat  pada  konsentrasi  ekstrak  sebesar
10%  dan  semakin  meningkat  seiring  dengan meningkatnya kadar konsentrasi ekstrak.
Tabel 2 menunjukkan bahwa kontrol negatif dan  kelompok  perlakuan  yang  menggunakan ekstrak etanol daun sirih merah dengan konstentrasi 2,5%, 5%, 10% dan 20%  tidak menunjukkan daya antibakteri  terhadap  pertumbuhan Eschericia
coli .  Biakan Eschericia  coli mulai  terbentuk zona  hambat  pada  konsentrasi  ekstrak  sebesar 40%b/v  dan  sedikit  meningkat  seiring  dengan meningkatnya  kadar  konsentrasi  ekstrak  namun menetap  setelah  konsentrasi  ekstrak  tertinggi yakni 100%.
Tabel  3  menunjukkan  bahwa  tidak terdapat  daya  antifungi  pada  kontrol  negatif maupun  konsentrasi  ekstrak  2,5%  dan  5% terhadap Candida  albicans .  Zona  hambat  pada biakan Candida  albicans mulai  terbentuk  pada konsentrasi ekstrak 10% dengan diameter 8 mm. Dari  beberapa  macam  konsentrasi  ekstrak  yang telah  dibuat  terlihat  bahwa  konsentrasi  ekstrak 40%  mempunyai  diameter  zona  hambat  paling besar yaitu mencapai 14 mm. Diameter konsentrasi ekstrak ini hampir mendekati diameter maksimum dari kontrol positif yang digunakan (ketokonazol) yaitu sebesar 15 mm.
Pada  bakteri Staphylococcus  aureus hasil  analisis  varian  data  didapatkan  hasil  tidak homogen  dan  distribusi  data  tidak  normal,  maka data  tidak  bisa  diuji  dengan Anova ,  sehingga digunakan  Uji  Non  Parametrik Kruskal  Wallis . Pada uji ini didapatkan p (Asymp. Sig) = 0.001. Oleh karena nilai p < 0,05 maka dapat disimpulkan bahwa  terdapat  perbedaan  yang  bermakna  daya antibakteri antara kesepuluh kelompok perlakuan.

## Tabel 4.   Hasil  Uji  Non  Parametrik  Kruskal
Wallis
Hasil Chi-Square Df Asymp. Sig. 28.298 9 .001
Pada  uji  Non  Parametrik  Mann  Whitney, dilakukan perbandingan antara kelompok konsentrasi ekstrak sirih merah (2,5%, 5%, 10%, 20%,  40%,  80%,  dan  100%)  dengan  kontrol negatif  (disk  kosong)  dan    perbandingan  antara ekstrak  dengan  konsentrasi  terbesar  100% dengan kontrol positif (Amoxicillin) dapat ditarik kesimpulan  bahwa  kelompok  yang  memiliki perbedaan  zona  hambat  yang  bermakna  secara statistik bila dibandingkan dengan kontrol negatif (disk kosong) adalah kelompok (20%, 40%, 80%, dan 100%) yakni p < 0,05. Selain itu konsentrasi 100%  juga  memiliki  perbedaan  zona  hambat yang bermakna bila dibandingkan dengan kontrol positif (Amoxicillin) dengan p < 0,05.
Tabel 5.   Uji  Non  Parametri  Mann-Whitney  antara kelompok  konsentrasi  ekstrak  sirih  merah dengan  kontrol  negatif  (disk  kosong) dan    perbandingan  antara  ekstrak  dengan konsentrasi  terbesar  100%  dengan  kontrol positif (Amoxicillin).
No Kelompok Perlakuan N P (Asymp.Sig) 1 Kontrol (-) 2,5 % 3 1,000 2 Kontrol (-) 5% 3 1,000 3 Kontrol (-) 10% 3 0,317 4 Kontrol (-) 20% 3 0,034 5 Kontrol (-) 40% 3 0,034 6 Kontrol (-) 80% 3 0,034 7 Kontrol (-) 100% 3 0,034 8 Kontrol (+) 100% 3 0,043
Pada  kelompok Eschericia  coli semua data  yang  diperoleh,  memiliki  rerata  yang  tidak jauh  berbeda  dari  rerata  kontrol  negatif  maka data  tersebut  tidak  dilanjutkan  dengan  penilaian data  secara  statistik.  Sementara  untuk Candida albicans pada uji Kruskal Wallis didapatkan nilai p (asymp. sig.) = 0,002. Nilai p tersebut < 0,05 maka dapat  disimpulkan  bahwa  terdapat  perbedaan daya antifungi yang bermakna antara kesembilan kelompok perlakuan.
Tabel  6.  Uji  Non  Parametri  Mann-Whitney  antara kelompok  konsentrasi  ekstrak  sirih  merah dengan  kontrol  negatif  (disk  kosong) dan    perbandingan  antara  ekstrak  dengan konsentrasi  terbesar  100%  dengan  kontrol positif (Ketokonazol).
No Kelompok Perlakuan N P (Asymp.Sig) 1 Kontrol (-) 10% 3 0,034 2 Kontrol (-) 20% 3 0,034 3 Kontrol (-) 40% 3 0,034 4 Kontrol (-) 80% 3 0,034 5 Kontrol (-) 100% 3 0,034 6 Kontrol (+) 10% 3 0,043 7 Kontrol (+) 20% 3 0,043 8 Kontrol (+) 40% 3 0,197 9 Kontrol (+) 80% 3 0,043 10 Kontrol (+) 100% 3 0,043 Pada uji yang dilakukan dengan pembanding  kontrol  negatif  (-)  digunakan  untuk menilai  daya  antifungi  secara  statistik.  Pada  uji yang  dilakukan  dengan  pembanding  kontrol
positif  (+)  digunakan  untuk  menilai  besarnya potensi daya antifungi (konsentrasi ekstrak 10%, 20%, 80%, dan 100%) dapat disimpulkan bahwa potensi  daya  antifungi  pada  konsentrasi  ekstrak ini masih kurang efektif. Namun, pada konsentrasi ekstrak dengan daya antifungi tertinggi yaitu 40% didapatkan nilai p (asymp. sig.) = 0,197 sehingga dapat  disimpulkan  bahwa  potensi  daya  antifungi pada konsentrasi ekstrak 40%  tidak jauh berbeda apabila dibandingkan dengan kontrol positif.
Perbedaan  zona  hambat  yang  dihasilkan antara  bakteri  Staphylococcus  aureus  dan Eschericia coli disebabkan karena diameter zona hambat  yang  terbentuk  sangat  dipengaruhi  oleh beberapa  faktor  antara  lain  toksisitas  bahan  uji, kemampuan difusi bahan uji pada media, interaksi antar kompomen medium, dan kondisi lingkungan mikro in vitro. Menurut Siswandono & Soekardjo (2000)  konsentrasi  suatu  bahan  yang  berfungsi sebagai  antibakteri  merupakan  salah  satu  faktor penentu  besar  kecil  kemampuanya  dalam menghambat  pertumbuhan  mikroba  yang  diuji. Selain itu, ukuran zona hambat dipengaruhi oleh beberapa  faktor  yaitu  mikroorganisme  uji  (strain dan � siologi uji bakteri), medium kultur , metode uji serta kecepatan difusi zat.
Perbedaan  zona  hambat  tersebut  juga dikarenakan  adanya  perbedaan  struktur  dinding sel antara kedua bakteri yang mempengaruhi kerja ekstrak etanol daun sirih merah sebagai senyawa antibakteri.  Struktur  dinding  sel  bakteri  gram positif  lebih  sederhana,  yaitu  berlapis  dengan kandungan  lipid  yang  rendah  (1-4  %)  sehingga memudahkan bahan bioaktif masuk ke dalam sel (Hawley,  2003).  Staphylococcus  aureus  sebagai bakteri  gram  positif  memiliki  3  lapisan  yaitu selaput  sitoplasma,  lapisan  peptidoglikan  yang tebal  dan  simpai.  (Jawetz  et  al,  2001).  Struktur dinding sel bakteri gram negatif lebih kompleks, berlapis tiga, yaitu lapisan luar lipoprotein, lapisan tengah  lipopolisakarida  yang  berperan  sebagai penghalang  masuknya  bahan  bioaktif  antibakteri dan  lapisan  dalam  berupa  peptidoglikan  dengan kandungan lipid tinggi (11-12%) (Hawley, 2003). Eschericia  coli  sebagai  gram  negatif  memiliki lapisan  yang  lebih  kompleks  dan  berlapis lapis  yaitu  selaput  sitoplasma,  lapisan  tunggal peptidoglikan  dan  selaput  luar  yang  terdiri  dari lipoprotein dan lipopolisakarida.
Dinding sel bakteri gram negatif berisi tiga komponen yaitu lipoprotein membran terluar yang
mengandung molekul protein yang disebut porin dan lipopolisakarida. Porin pada membran terluar dinding sel bakteri gram negatif tersebut bersifat hidro � lik. Porin yang terkandung pada membran terluar  tersebut  menyebabkan  molekul-molekul komponen ekstrak lebih sukar masuk ke dalam sel bakteri.
Selaput  luar  Eschericia  coli  bersifat menolak  molekul  hidrofobik  sekaligus  hidro � lik dengan  baik  namun  selaput  ini  memilik  saluran khusus  yang  disebut  porin,  yang  menyebabkan difusi  pasif  senyawa  hidro � lik  dengan  berat molekul rendah seperti glukosa, dan asam amino, sedangkan  molekul  dengan  berat  molekul  besar seperti molekul antibiotik termasuk molekul aktif ekstrak etanol daun sirih merah akan mengalami kesulitan  menembus  selaput  ini.  Adanya perbedaaan  struktur  dan  komponen  dinding sel  tersebut  yang  menyebabkan  Eschericia  coli sebagai gram negatif lebih resisten ( Jawetz, et al, 2001).
Pada  konsentrasi  ekstrak  2,5%  dan 5%  terhadap  pertumbuhan  Candida  albicans menunjukkan  diameter  6  mm  pada  setiap replikasi  yaitu  sama  dengan  diameter  sumuran, hal  ini  menunjukkan  bahwa  konsentrasi  tersebut tidak  mempunyai  daya  antifungi,  yang  mungkin disebabkan  oleh  konsentrasi  yang  terlalu  kecil sehingga  belum  dapat  mengakibatkan  terjadinya perubahan  sistem � siologis  sel  jamur  uji  dan jamur  tersebut  masih  dapat  tumbuh  pada  media (Gholib,  2009;  Noveriza  &  Khurohmah,  2010). Diameter  zona  hambat  semakin  meningkat  pada konsentrasi  ekstrak  10%,  20%,  dan  40%  dengan rata-rata  diameter  zona  hambat  tertinggi  pada konsentrasi  ekstrak  40%.  Zona  hambat  yang terbentuk  meningkat  seiring  dengan  peningkatan konsentrasi  ekstrak.  Semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak  maka  semakin  luas  zona  hambat  berarti menunjukkan  semakin  tinggi  efektivitas  untuk membunuh atau menghambat pertumbuhan jamur (Sulistyawati & Mulyati, 2009).
Namun, diameter zona hambat mengalami penurunan  pada  konsentrasi  ekstrak  80%  dan 100%.  Hal  ini  mungkin  disebabkan  oleh  daya difusi  ekstrak  ke  dalam  media  yang  berkurang. Penurunan  daya  difusi  mungkin  disebabkan semakin  tingginya  konsentrasi  ekstrak  maka semakin rendah kelarutan (mengental seperti gel). Konsentrasi  bahan  suatu  antifungi  merupakan salah  satu  faktor  penentu  besar  kecilnya
kemampuan antifungi tersebut dalam menghambat pertumbuhan  jamur  yang  diuji  (Handajani  & Purwoko, 2008).
Daun  sirih  merah  mengandung  senyawa kimia  seperti  alkaloid,  senyawa  polifenolat, � avonoid, tanin, saponin, dan minyak atsiri. Daya antifungi  daun  ini  mungkin  disebabkan  oleh adanya  senyawa  alkaloid, � avonoid,  tanin,  dan minyak  atsiri  (Sudewo,  2010).  Alkaloid  adalah zat  aktif  dari  tanaman  yang  berfungsi  sebagai obat dan aktivator kuat bagi sel imun yang dapat menghancurkan  bakteri,  virus,  jamur,  dan  sel kanker  (Olivia  dkk,  2004). Alkaloid  mempunyai aktivitas  antimikroba  dengan  menghambat  estera se, DNA, RNA polimerase, dan respirasi sel serta berperan  dalam  interkalasi  DNA  (Aniszewki, 2007). Sedangkan sebagai antifungi, secara biologi alkaloid  menyebabkan  kerusakan  membran  sel. Alkaloid  akan  berikatan  kuat  dengan  ergosterol membentuk  lubang  atau  saluran  sehingga menyebabkan membran sel bocor dan kehilangan beberapa  bahan  intra  sel  seperti  elektrolit (terutama kalium) dan molekul-molekul kecil. Hal ini mengakibatkan kerusakan yang tetap pada sel dan kematian sel pada jamur (Mycek et al , 2001; Setiabudy & Bahry, 2007).
Senyawa � avonoid dan minyak atsiri  dilaporkan  berperan  sebagai  antifungi (Wiryowidagdo, 2008). Selain itu, � avonoid juga dilaporkan berperan sebagai antivirus, antibakteri, antiradang,  dan  antialergi.  Sebagai  antifungi, � avonoid  mempunyai  senyawa  genestein  yang berfungsi menghambat pembelahan atau proliferasi sel.  Senyawa  ini  mengikat  protein  mikrotubulus dalam  sel  dan  mengganggu  fungsi  mitosis gelendong sehingga menimbulkan penghambatan pertumbuhan  jamur.  Flavonoid  menunjukkan toksisitas rendah pada mamalia sehingga beberapa � avonoid  digunakan  sebagai  obat  bagi  manusia (Roller, 2003; Siswandono & Soekardjo, 2000).
Tanin  juga  diduga  mempunyai  efektivitas dalam menghambat pertumbuhan atau membunuh Candida  albicans .  Tanin  bersifat  menciutkan dan  mengendapkan  protein  dari  larutan  dengan membentuk  senyawa  yang  tidak  larut.  Selain itu,  tanin  berperan  dalam  sistem  pertahanan tubuh dan mempunyai aktivitas antioksidan serta antiseptik  (Sirait,  2007;  Sulistyawati  &  Mulyati, 2009).  Namun,  kandungan  tanin  dalam  ekstrak ini  mungkin  sangat  kecil  karena  penelitian  ini menggunakan menstruum berupa etanol sehingga
hanya sedikit atau terbatas tanin yang dapat larut (Gamse, 2002).
Pengaruh  senyawa  fenol  yang  terdapat dalam  daun  sirih  merah  terhadap Candida albicans adalah  mendenaturasi  ikatan  protein pada  membran  sel  sehingga  membran  sel  lisis dan  mungkin  fenol  dapat  menembus  ke  dalam inti  sel.  Masuknya  fenol  ke  dalam  inti  sel  inilah yang  menyebabkan  jamur  tidak  berkembang (Sulistyawati & Mulyati, 2009).
Dari  hasil  penelitian  lain,  ekstrak  etanol daun sirih hijau (Piper betle Linn) yang termasuk dalam  satu  familia  (Piperacea)  telah  terbukti mempunyai  daya  antifungi  terhadap  Candida albicans.  Daun  ini  mengandung  minyak  atsiri yang terdiri dari betelfenol, kavikol, seskuiterpen, hidroksikavikol, kavibetol, estragol, eugenol, dan karvakrol.  Daun  ini  tidak  mengandung  senyawa alkaloid  tetapi  mempunyai  kandungan  fenol total yang lebih tinggi daripada daun sirih merah (Juliantina dkk, 2009; Sudewo, 2010).

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  daun  sirih  merah  ( Piper crocatum  Ruiz  &  Pav. )  memiliki  daya  hambat terhadap  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus ATCC  6538  pada  konsentrasi  10%, 20%,  40%,  80%  dan  100%,  sedangkan  terhadap pertumbuhan  bakteri Eschericia  coli ATCC 11229  ekstrak  etanol  daun  sirih  merah  ( Piper crocatum  Ruiz  &  Pav. )  memiliki  daya  hambat pada konsentrasi 40%, 80%, dan 100% walaupun secara  statistik  tidak  bermakna.  Dan  terhadap pertumbuhan Candida  albicans ATCC  10231 memiliki  daya  hambat  pada  konsentrasi  10%, 20%, 40%, 80%, dan 100%.

## SARAN
1.  Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai kandungan zat aktif daun sirih merah ( Piper crocatum Ruiz & Pav. ) yang berakti � tas sebagai antimikroba serta mekanisme penghambatannya.
2.  Perlu dilakukan uji daya antimikroba daun sirih merah  ( Piper  corcatum Ruiz  &  Pav)  dengan menggunakan  pelarut  dan  metode  ekstrak lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Andries  Gabriela.,  2009.  Efek  Neuroterapi  Kumis Kucing  ( Acalypha  indica  Linn. )  Pada  Otot Gastroknemius  Katak Bufo  melanosticus . FK UI. Vol:1:26-28
Aniszewki,  T.  2007.  Alk  aloid  Secrets  of  Life. Amsterdam: Elsevier. pp. 18.
Dzulkarnain,  B.,  Dian  Sundari,  Ali  Chosin,  (2004) Tanaman  Obat  Bersifat  Antibakteri  di Indonesia. Cermin  Dunia  Kedokteran . 110:35-43
Ebadi,  M.  2002.  Pharmacodynamic  Basic  of  Herbal Medicine:  Alkaloids:  Manuka  and  Fungal Diseases:  Flavonoids.  New  York:  CRC press. pp. 179-84, 189-92, 393-403.
Fadhilah, R. 1993. Daya Hambat Perasan daun Sirih (Piper  betle  L)  terhadap  Pertumbuhan Bakteri Stapylococcus aureus dan Eschericia coli dalam  Penelitian  Obat  di  Berbagai Perguruan Tinggi di Indonesia. Departemen Kesehatan Republik Indonesia; 228 (Abs).
Gamse, T.  2002.  Liquid-Liquid  Extraction  and  Solid- Liquid  Extraction.  Institute  of  Thermal Process  and  Environmental  Engineering Graz University of Technology. 2-24.
Gholib,  D.  2009.  Uji  Daya  Hambat  Daun  Senggani (Melastoma  malabathricum  L.)  terhadap Trichophyton mentagrophytees dan Candida albicans.  Berita  Biologi.  Balai  Besar Penelitian Veteriner Bogor. 9: 5.
Handajani, N.S. & Purwoko, T. 2008. Aktivitas Ekstrak Rimpang  Lengkuas  (Alpinia  galanga) terhadap  Pertumbuhan  Jamur  Aspergillus sp.  Penghasil  A � atoksin  dan  Fusarium moniliforme. Biodiversitas. 9(3): 161-4. Harmita  &  Radji,  M. Analisis  Hayati .  2004., Departemen  Farmasi  FMIPA  UI,  Jakarta, pp. 62-63
Hawley,  R.,  2003, Enterotoxigenic  Escheri-chia  coli , di  akses  tanggal  26  Maret  2011  dari  http:// vm.cfsan.fda.gov/mov/chap14.html.
Jawetz,  Melnick,  &  Adelberg  s.  2007.  Medical Microbiology: Medical Mycology. 24th  Edition.  New  York:  Mc  Graw  Hill Companies. pp. 642-5.
Juliantina,  F.  ,  Citra,  D.A.,  Nirwani,  B.,  Nurmasitoh, T. , Bowo, E.T. 2009. Manfaat Sirih Merah (Piper crocatum) sebagai Agen Antibakterial terhadap  Bakteri  Gram  Positif  dan  Gram Negatif.  Jurnal  Kedokteran  dan  Kesehatan Indonesia 1(1): 12-20.
Martini,  N  dan  Ellof,  J.N.,  (1998)  The  Preliminary
Isolation of Several Antibacterial Compouns from Combietum erythrophyllum (Combretaceae), Journal of lithnopharmacology . 62: 255-263.
Masduki I, 1996, Efek Antibakteri Ekstrak Biji Pinang (Areca catechu) terhadap S. Aureus dan E. Coli , Cermin Dunia Kedokteran 109 : 21-4.
Moeljanto, R.D., Mulyono. 2003. Khasiat dan Manfaat Daun  Sirih,  Obat  Mujarab  dari  Masa  ke masa . Agromedia Pustaka; 7-11, Yogyakarta. Mycek,  M.J.,  Harvey,  R.A.,  Champe,  P.C.,  Fisher,
B.D. 2001. Farmakologi Ulasan Bergambar: Obat-obat Antijamur. Edisi 2. Jakarta: Widya Medika. pp. 341-7.
Noveriza,  R.  &  Khurohmah,  M.  2010.  Efektivitas Ek  strak  Metanol  Daun  Salam  (Eugenia polyantha)  dan  Daun  Jeruk  Purut  (Cytrus histrix) sebagai Antijamur pada Pertumbuhan Fusarium  oxysporum.  Jurnal  Littri.  16(1): 6-11.
Olivia, F. , Alam, S., & Hadibroto, I. 2004. Seluk Beluk Food Suplemen. Jakarta: Gramedia. pp. 49 Poeloengan  &  Soeripto.  1998. Pengaruh  putih telur  terhadap  pertumbuhan  gram  positif dan  gram  negatif  secara  in  vitro .Media Kedokteran hewan Institut pertanian Bogor. Bogor  Robinson,  T.,  1991, Kandungan Organik  Tumbuhan  Tingkat  Tinggi ,  ITB, Bandung: 132-6.
Ridhawati, Wahyuningsih, R. , Harahap, A., Sjarifuddin,
P.K.  2006.  Penggunaan  Antigen  Germ Tube  Candida  albicans  untuk  Uji  Serologi Kandidosis  Sistemik:  Kaitan  Imunodifusi dan  Pola  Reaksi  Analisis  Western  Blott. Majalah Kedokteran Indonesia. 56(5): 364- 9.
Roller, S. 2003. Natural Antimicrobials for the Minimal Processing of Foods. Washington DC: CRC Press. pp. 211.
Sari  R.,  Dewi,  I.  2006. Studi  Efektivitas  Sediaan  Gel Antiseptik Tangan Ekstrak Daun Sirih (Piper betle  Linn) .  Majalah  Farmasi  Indonesia; 1794; 163-69.
Setiabudy,  R.  &  Bahry,  B.  2007.  Farmakologi  dan Terapi:  Obat  Jamur.  Edisi  5.  Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. pp. 571-84.
Sirait,  M.  2007.  Penuntun  Fitok  imia  dalam  Farmasi.
Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Siswandono & Soekardjo, B., 2000. Kimia Medicinal . UNAIR Press, Surabaya, pp. 115-142. Sudewo, B., 2007, Basmi Penyakit dengan Sirih Merah ,
PT Agromedia Pusat, Jakarta. pp. 37-47.
Sulistyawati,  D.  &  Mulyati,  S.  2009.  Uji  Ak  tivitas Antijamur  Infusa  Daun  Jambu  Mete (Anacardium  occidentale,  L.)  terhadap Candida albicans. Biomedika. 2(1): 47-51.
Syariefa,  E.  2006. Resep  sirih  Wulung  untuk  Putih Merona  Hingga  Kanker  Ganas ,  dalam Majalah  Trubus  No.434,  tahun  XXXVII Januari 2006, hlm 88.
Tarigan,  N.  1994. Isolasi  Minyak  Atsiri  Daun Sirih  (Piper  betle.  Linn)  dan  Penentuan Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM) terhadap  Bakteri dalam  Penelitian  Obat  di Berbagai  Perguruan  Tinggi  di  Indonesia. Departemen Kesehatan Republik Indonesia; 140 (Abs).
Wiryowidagdo, S. 2008. Kimia dan Farmakologi Bahan Alam. Jakarta: EGC. pp. 310.
Yustina  S.H.,  2001.  Isolasi  dan  Identi � kasi  Senyawa
Antimikroba  dari  Tumbuhan Lantana camara  L., Tesis  Program  Studi  Farmasi Jurusan Ilmu-Ilmu Matematika dan
Pengtahuan  Alam,  program  Pasca  Sarjana Univesitas  Gajah  Mada,  Yogyakarta.  Hal: 1-2; 13.
Zakiyah.  1995. Pembuatan  Sediaan  Krim  Minyak Atsiri  Daun  Sirih  (Piper  Betle  L)  dan  Uji Daya  Bakterinya  terhadap  Staphylococcus aureus dalam  Penelitian  Obat  di  Berbagai Perguruan Tinggi di Indonesia. Departemen Kesehatan Republik Indonesia; 330 (Abs).