Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.9, No.2, November 2020, pp. 25-31 ISSN 2580-0191 (Online), ISSN 2338 – 5634 (Print)
Antihypertension Activity of Gynura procumbens (Lour.) Merr. Extract On Blood Pressure And Monoxide Nitrogen Levels In Male White

## Rats
Rahimatul Uthia 1 , Dina Yuliana 2 dan Widya Kardela 2 Poltekkes Kemenkes Riau 1 , STIFARM Padang 2 rahimatul@pkr.ac.id

## Abstract
Hypertension  is  closely  related  to  vasodilation  disorders  because  of  the decreased  availability  of  nitrogen  monoxide  (NO).  The  purpose  of  this study  was  to  determine  the  decrease  in  blood  pressure  and  nitrogen monoxide  (NO)  levels  in  rats  after  administration  of  Gynura  procumbens leaves  extract.  The  results  showed  that  the  administration  of  Gynura procumbens  leaves  extracts  significantly  reduced  blood  pressure  and increased NO levels. From the results of Duncan's test, it was found that the dose of 300mg / Kg BW showed a better effect on increasing NO levels (p <0.05). From the results of the study, it can be concluded that the ethanol extract  of  Gynura  procumbens  leaves  has  an  antihypertensive  activity  that can reduce blood pressure and increase the NO level.
Keywords: Gynura procumbens; Hypertension; nitrogen monoxide

## Abstrak
Hipertensi erat kaitannya dengan gangguan vasodilatasi karena adanya penurunan ketersediaan nitrogen monoksida (NO). Tujuan dari penelitian ini  untuk  mengetahui  penurunan  tekanan  darah  dan  kadar  nitrogen monoksida  (NO)  pada  tikus  setelah  pemberian  ekstrak Gynura procumbens .  Hasil  penelitian,  menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak daun  sambung  nyawa  dapat  menurunkan  tekanan  darah  dan meningkatkan  kadar  NO  secara  signifikan.  Dari  hasil  uji  lanjut  duncan, diperoleh  dosis  300mg/KgBB  menunjukkan  efek  yang  lebih  baik terhadap peningkatan kadar NO (p< 0,05). Dari hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  sambung  nyawa  memiliki aktivitas  antihipertensi  dapat  menurunkan  tekanan  darah  dan meningkatkan pada kadar NO.
Kata kunci :
Gynura procumbens; Hipertensi, nitrogen monoksida

## PENDAHULUAN
Hipertensi merupakan penyebab kematian nomor tiga, setelah stroke dan tuberkulosis. Jumlahnya  mencapai  6,8%  dari  proporsi penyebab  kematian  pada  semua  umur  di Indonesia. Prevalensi hipertensi di Indonesia  sebesar  30%  dengan  insiden komplikasi  penyakit  kardiovaskuler  lebih banyak  pada  perempuan  sebesar  52% dibandingkan pada laki-laki sebesar 48% [1].
Hipertensi  adalah  kondisi  medis  dimana terjadi peningkatan tekanan darah secara
kronis  (dalam  jangka  waktu  lama)  yang sekurang-kurangnya tiga pengukuran melebihi  140/90  mmHg  pada  saat beristirahat.  Tekanan  darah  tinggi  adalah salah  satu  satu  faktor  resiko  untuk terjadinya stroke, serangan jantung, gagal jantung dan  aneurisma  arterial dan  gagal jantung  kronis  [2].  Hipertensi  erat kaitannya  dengan  gangguan  vasodilatasi karena  adanya  penurunan  ketersediaan nitrogen  monoksida  (NO).  NO  merupakan faktor  yang  dikeluarkan  oleh  sel  endotel. Peran  disfungsi  endotel  dalam  tekanan

## Article Info

## Article history
Received date: 2021-02-15 Revised date: 2021-07-02 Accepted date: 2021-07-06
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.9, No.2, November 2020, pp. 25-31 ISSN 2580-0191 (Online), ISSN 2338 – 5634 (Print)
darah tinggi diketahui dengan meningkatkan pelepasan  beberapa faktor termasuk  prostanoid,  oksigen  radikal bebas  dan  endothelin  [3][4].  Selain  itu konsentrasi  NO  plasma  menurun  akibat adanya  asupan  garam  berlebih  [5]. Asupan  garam  (NaCl)  yang  tinggi  dapat menurunkan  produksi  NO  hal  ini  terjadi akibat  terganggunya  sintesis  NO  dari asam  amino  L-arginin  pada  endothelium pembuluh darah ginjal [6].
Hasil  penelitian  Boegehold  &  Kotchen menunjukkan bahwa anion yang menyertai natrium  memainkan  peran  penting  dalam menentukan  besarnya  kenaikan  tekanan darah  sebagai  respons  terhadap  asupan makanan yang tinggi dari NaCl [7]. Obat Tradisional  (OT)  merupakan  salah  satu warisan  budaya  bangsa  Indonesia  yang telah  digunakan  selama  berabad-abad untuk  pemeliharaan  dan  peningkatan kesehatan serta pencegahan dan pengobatan  penyakit.  Berdasarkan  bukti secara  turun  temurun  dan  pengalaman (empiris), obat tradisional hingga kini masih digunakan  oleh  masyarakat  di  Indonesia dan banyak negara lain [8].
Salah  satu  tanaman  yang  digunakan sebagai  antihipertensi  adalah  daun sambung  nyawa  ( Gynura  procumbens ( L.). Dimana sambung nyawa diketahui memiliki beberapa metabolit sekunder diantaranya alkaloid,  flavonoid,  antraquinon,  saponin, glikosida,  asam  klorogenat,  dan  minyak atsiri  [9].  Senyawa  yang  berkhasiat antihipertensi  dari  daun  sambung  nyawa adalah senyawa flavonoid (kaemferol dan auron)  dan  asam  klorogenat  dengan mekanisme kerja memvasodilatasi pembuluh  darah  dengan  peningkatan produksi NO [10].

## METODE
Peneltian  dilaksanakan  pada  bulan  Maret
2019 sampai Februari 2020 di Laboratorium Farmakologi Padang, Laboratorium  Farmakologi  STIFI  Perintis Padang  dan  Laoratorium  Biomedik  RSUP Dr. M. Djamil Padang. Penelitian
menggunakan metode
eksperimental
laboratorium menggunakan hewan  uji tikus putih  jantan  sebanyak  15  ekor  dengan  5 kelompok perlakuan. Kelompok terdiri dari kelompok kontrol positif dan negatif, serta tiga kelompok dosis ekstrak yaitu 75; 150; 300 mg/kg.
Sampel  yang  digunakan  adalah  daun sambung  nyawa  ( Gynura  procumbens (Lour.) Merr.) sebanyak 3 kg yang diambil di daerah Kampung Jua, Kecamatan Lubuk Begalung, Kota Padang, Propinsi Sumatera Barat.  Ekstrak  dibuat  dari  serbuk  kering simplisia dengan cara maserasi menggunakan  pelarut  yang  sesuai  (etanol 70  %).  Sebanyak  300  g  serbuk  kering simplisia  dimasukkan  ke  dalam  maserator dengan  menambahkan  3  L  etanol  70  %. Kemudian  direndam  selama  6  jam pertama  sambil  sekali-sekali  diaduk,  dan didiamkan  selama  18  jam.  Maserat dipisahkan dengan cara filtrasi menggunakan kain planel. Proses penyarian  dilakukan  sekurang-kurangnya dua  kali  dengan  jenis  dan  jumlah  pelarut yang  sama.  Kemudian  semua  maserat dikumpulkan, dan diuapkan dengan vakum atau  penguap  tekanan  rendah  hingga diperoleh  ekstrak  kental.  Setelah  itu menghitung  rendemen  yang  diperoleh yaitu persentase berat (b/b) antara berat ekstrak  dengan  berat  serbuk  simplisia yang  digunakan  dengan  penimbangan [11 ].
% Rendemen =
Pemeriksaan  karakteristik  spesifik  ekstrak meliputi: identitas,
pemeriksaan organoleptis,  penentuan  kadar  senyawa yang  larut  dalam  air,  penentuan  kadar senyawa  yang  larut  dalam  etanol. Pemeriksaan  karakteristik  non  spesifik ekstrak meliputi: penentuan susut pengeringan,  penetapan  kadar  air, penetapan kadar abu total, dan penetapan kadar abu tidak larut asam.
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.9, No.2, November 2020, pp. 25-31 ISSN 2580-0191 (Online), ISSN 2338 – 5634 (Print)

## Pengujian aktivitas Antihipertensi
a. Pengujian Tekanan darah Hewan percobaan yang sudah dikelompokkan atas lima kelompok diberikan  larutan  uji  secara  oral  yang masing-masing  kelompok  terdiri  dari kelompok  pertama  diinduksikan  NaCMC 0,5  %  (kontrol  negatif),  kelompok  kedua diinduksikan  dengan  NaCl  3  %  + Prednison (kontrol positif), kelompok ketiga ekstrak etanol daun sambung nyawa untuk dosis  75  mg/kgBB,  kelompok  ke  empat ekstrak  daun  sambung  nyawa  150 mg/kgBB,  dengan  kelompok  dosis  ke  lima 300  mg/kgBB.  Pada  hari  1  sampai  7, setelah  diaklimatisasi  semua  tikus  diukur teknanan darah awal setelah didapat hasil tekanan darah awal tikus diinduksi dengan NaCl  3%  +  prednison  kecuali  kontrol negatif  selama  7  hari. k emudian  diukur tekanan darah nya, didapat hasil tekanan darah.  jika  tekanan  darah  meningkat maka  dilanjutkan  dengan  pemberian suspensi  ekstrak  etanol  daun  sambung nyawa  dengan  masing-masing  dosis  yang telah ditetapkan. Pada hari ke 14, 21, dan 28  diukur  tekanan  darah  kembali  semua kelompok  dengan  menggunakan  alat  non invasif CODA.
b. Pengukuran Kadar NO
1) Penyiapan serum Setelah perlakuan, tikus dikorbankan untuk  mengambil  darah  dari  pembuluh darah  leher.  Darah  tikus  ditampung dengan  tabung hematokrit dan  didiamkan selama  15  menit  lalu  disentrifus  dengan kecepatan  5000  rpm  selama  20  menit. Bagian atas atau serum diambil,
kemudiaan dimasukkan kedalam microtube dan disimpan dalam freezer pada suhu -4 °C.
2) Penyiapan Nitric  Oxide  Colorimetric AssayKit
Pereaksi  yang  digunakan  adalah
BioVision ® Nitric  Oxide  Assay  Kit yang terdiri dari beberapa pereaksi. Semua reagen dipersiapkan sesuai dengan prosedur  yang dikeluarkan  oleh  produsen, yaitu :
a. Enzyme  Cofactor :  direkonstitusi  dengan
1,1  mL  larutan Assay  Buffer, disimpan pada  suhu-20  °C  dan  ditempatkan dalam  wadah  berisi  es  selama penggunaan.
b. Enhancer: direkonstitusi  dengan  1,1  mL aquadest,disimpan pada suhu   4 °C.
c. Nitrate  Reductase: direkonstitusi  dengan 1,1 mL larutan Assay Buffer , di- vortex 2- 3  kali  selama  15  menit  sampai  larut dan  ditempatkan  dalam  wadah  berisi es selama penggunaan.
d. Nitrate and Nitrite Standards : direkonstitusi  dengan  100  mL  larutan Assay Buffer, di- vortex sampai larut dan diperoleh  larutan  standar  100  mM, disimpan pada suhu 4 °C.
e. Griess  Reagents  R1  and  R2: siap pakai,di simpan pada suhu 4 °C.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Daun  sambung  nyawa  diidentifikasi  di Herbarium Andalas (ANDA), jurusan biologi Fakultas MIPA Universitas Andalas Padang, Sumatera  Barat,  Indonesia,  dengan  hasil identifikasi  daun  sambung  nyawa  ( Gynura procumbens L.) dan  family Compositae . Pemeriksaan ekstrak daun sambung nyawa diperoleh  data:  ekstrak  berwarna  coklat, berbau  khas,  dengan  rasa  yang  agak pahit. Kadar abu total ekstrak etanol daun sambung nyawa adalah 2,2871 %. Kadar abu  tidak  larut  asam  ekstrak  etanol  daun sambung  nyawa  0,4637  %.  Kadar  air ekstrak  etanol daun  sambung nyawa 9,41
% . Hasil  penetapan  susut  pengeringan ekstrak  etanol  daun  sambung  nyawa adalah 9,26 %.
Pemberian  ekstrak  etanol  daun  sambung nyawa  terhadap  aktivitas  antihipertensi tikus  putih  jantan  didapatkan  tekanan darah  kelompok  uji  III  (300  mg/kgBB) hasilnya  mendekati  kelompok  kontrol negatif  (p<0,05),  sedangkan  untuk  hasil pengukuran  kadar  NO  kelompok  uji  III (300  mg/kgBB)  terjadinya  peningkatan kadar NO lebih tinggi dari kontrol negatif yang  hanya  diberi  Na  CMC  (p<0,05) yang menandakan bahwa dosis ini memiliki efek dalam meningkatkan kadar NO.
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.9, No.2, November 2020, pp. 25-31 ISSN 2580-0191 (Online), ISSN 2338 – 5634 (Print)
Pengujian  efek  antihipertensi  hewan  uji alat  Adinstrumen  NIBP  ini  sebelum digunakan  harus  dikalibrasi  terlebih dahulu,  hal  ini  bertujuan  untuk  memastikan bahwa  alat  ini  bekerja  dengan  baik. Tekanan darah ditentukan melalui pembuluh  darah  arteri  ekor  hewan  uji. Keunggulan  dengan  menggunakan  alat  ini pengukuran tekanan darah hewan uji lebih akurat,  tidak  dipengaruhi  oleh  gelap terangnya  lingkungan,  pergerakan  hewan coba  sebagian  besar  dapat  dikurangi, dapat  menggunakan  banyak  hewan  coba dan waktu yang tidak lama.
Kelompok  kontrol  negatif,  merupakan kelompok  tikus  yang  dijadikan  sebagai acuan  pada  penelitian  ini  karena  hanya diberikan  perlakuan  dengan  pemberian sediaan  Na  CMC  selama  28  hari,  disebut juga  sebagai  kelompok  normal.  Kelompok positif  diberikan  NaCl  3  %  +  prednison selama 28 hari, dosis 75 mg, 150 mg, 300 mg  diberi  ekstrak  selama  21  hari  dengan masing-masing dosis setelah diberi NaCl 3 %  +  prednison  selama  1  minggu.  Pada hari ke-1, diukur tekanan darah rata-rata, dan  didapatkan  tekanan  darah  sistolik 117  mmHg  dan  diastolik  76  mmHg. Dilanjutkan  dengan  pemberian  Na  CMC selama  7  hari,  lalu  diukur  tekanan  darah rata-rata  diperoleh  hasil  tekanan  darah sistol  114  mmHg  dan  diastol  70  mmHg. Pemberian  Na  CMC  pada  kelompok kontrol  negatif  ini  bertujuan  untuk  melihat apakah  penggunaan  Na  CMC  sebagai pensuspensi  mempengaruhi  tekanan  darah hewan uji.
Kelompok  hewan  uji  diinduksi  prednison dan  NaCl  3  %  pada  hari  ke-7  diukur tekanan  darahnya,  pada  kelompok  uji  1 (75  mg/kgBB),  uji  2  (150  mg/kgBB),  uji  3
(300 mg/kgBB), kelompok positif (penginduksi prednson + NaCl 3 %). Pada tekanan  darah  diastol  pada  hari  ke-7 setelah  diinduksi  didapat  hasil  tekanan darah  diastol  rata-rata  sebesar  143 mmHg,  131  mmHg,  137  mmHg,  134 mmHg.
Pemberian  sediaan  uji  dilakukan  selama 28 hari, dimulai pada hari ke-8, kemudian diukur  kembali  tekanan  darah  tikus  uji pada  hari  ke-14.  Pengukuran  tekanan darah sistol  hari ke-14 pada kelompok uji 1 (75 mg/kgBB), uji 2 (150 mg/kgBB), uji 3 (300  mg/kgBB),  dan  kelompok  positif (penginduksi prednson+ NaCl 3%) didapat hasil  tekanan  darah  sistol  rata-rata sebesar  136  mmHg,  129  mmHg,  124 mmHg,  170mmHg.  Pada  tekanan  darah diastol  hari  ke-14  didapat  hasil  tekanan darah  rata-rata  sebesar  94  mmHg,  93 mmHg,  87  mmHg,  136mmHg.  Pada  hari ke-21  diukur  kembali  tekanan  darah  tikus setelah  pemberian  ekstrak.  Pengukuran tekanan darah sistol pada hari ke-21pada kelompok  uji  1  (75  mg/kgBB),  uji  2  (150 mg/kgBB),  uji  3  (300  mg/kgBB),  dan kelompok  positif  (penginduksi  prednison  + NaCl  3  %)  didapat  hasil  tekanan  darah sistol  rata-rata  sebesar125  mmHg,  117 mmHg,  106  mmHg,  174  mmHg.  Pada tekanan  darah  diastol  hari  ke-21didapat hasil  tekanan  darah  rata-rata  sebesar  85 mmHg,  87  mmHg,  69  mmHg,  142  mmHg.
Tabel 1. Data hasil pengukuran NO sesudah diberi ekstrak etanol daun sambung nyawa dalam µmol/L
Nomor hewan  Kontrol negatif  Kotrol positif Dosis 75 Dosis 150 Dosis 300 1 3,06 0,18 0,65 1,34 3,50 2 3,78 0,23 0,35 1,52 2,53 3 4,66 0,17 0,38 0,89 2,16 Jumlah 11,50 0,58 1,38 3,75 8,2 rata-rata 3,83 0,19 0,46 1,25 2,73 SD 0,80 0,03 0,17 0,32 0,69
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.9, No.2, November 2020, pp. 25-31 ISSN 2580-0191 (Online), ISSN 2338 – 5634 (Print)
Tabel 2.  Data tekanan darah sebelum dan sesudah diberi ekstrak etanol daun sambung nyawa ( Gynura procumbens ) dalam mmHg Kelompok Hari ke-1 Hari ke-7 Hari ke-14 Hari ke-21 Hari ke-28 Kontrol Negatif Sistol diastol Sistol diastol sistol diastol sistol diastol sistol diastol
116 78 116 73 111 75 114 71 98 60 120 70 114 70 120 69 110 63 101 62 115 80 112 68 116 70 108 62 105 60 Rata-rata 117 76 114 70 116 71 111 65 101 61 SD 2,65 5,29 2 2,52 4,51 3,21 3,06 4,93 3,51 1,15 Kontrol Positif 113 78 174 139 175 140 162 130 165 115 116 77 164 130 177 135 175 146 167 136 115 67 163 134 157 133 186 151 200 146 Rata-rata 115 74 167 134 170 136 174 142 177 132 SD 1,53 6,08 6,08 4,51 11,02 3,61 12,01 10,97 19,66 15,82 Dosis 75 mg/kgBB 118 71 169 147 133 91 122 82 110 78 117 74 161 138 138 97 125 88 115 76 118 72 165 144 137 94 127 84 114 74 Rata-rata 118 72 165 143 136 94 125 85 113 76 SD 117,56 1,53 4 4,58 2,65 3 2,52 3,06 2,65 2 Dosis 150 mg/kgBB 116 73 166 134 130 97 118 87 95 71 117 73 170 131 127 93 114 85 108 68 120 71 165 128 129 90 118 88 114 68 Rata-rata 118 72 167 131 129 93 117 87 106 69 SD 2,08 1,15 2,65 3 1,53 3,51 2,31 1,53 9,71 1,73 Dosis 300 mg/kgBB 113 77 159 134 124 88 103 70 81 66 120 69 160 141 123 86 106 70 83 66 121 73 161 135 124 87 108 68 79 63 Rata-rata 118 73 160 137 124 87 106 69 81 65 SD 4,36 4 1 3,79 0,58 1 2,52 1,15 2 1,73
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.9, No.2, November 2020, pp. 25-31 ISSN 2580-0191 (Online), ISSN 2338 – 5634 (Print)
Setelah  diukur  diberi  lagi  ekstrak  daun sambung  nyawa  sampai  hari  ke-28  dan diukur  tekanan  darah  pada  masing-masing kelompok.  Pengukuran  tekanan  darah  sistol pada  hari  ke-28  pada  kelompok  uji  1  (75 mg/kgBB),  uji  2  (150  mg/kgBB),  uji  3  (300 mg/kgBB), dan kelompok positif (penginduksi prednson + NaCl 3 %) didapat hasil  tekanan  darah  sistol  rata-rata sebesar113  mmHg,  106  mmHg,  81  mmHg, 177 mmHg. Pada tekanan darah diastol hari ke-21didapat hasil tekanan darah rata-rata sebesar  76  mmHg,  69  mmHg,  65  mmHg, 132 mmHg.
Setelah  hari  ke  28  tikus  dikorbankan  dan diambil darahnya, kemudian disentrifus. Dari hasil  sentrifus  terdapat  dua  lapisan,  plasma dan  serum  yang  diambil  serum  yang terdapat  pada  lapisan  atas.  Sel  endotel dengan  penginduksian  kombinasi  Prednison dan NaCl dapat ditandai dengan terjadinya penurunan  kadar  NO  yang  ditunjukkan rendahnya  kadar  NO  pada  kelompok kontrol  positif  jika  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol  negatif.  Kadar  NO kelompok  kontrol  negatif  lebih  tinggi  dari kelompok  kontrol  positif,  ini  disebabkan karena kelompok kontrol negatif tidak diberi larutan  kombinasi  Prednison-NaCl  sehingga tidak terjadi disfungsi sel endotel. Penentuan adanya  aktivitas  disfungsi  sel  endotel  dari ekstrak  daun  sambung  nyawa  ditandai dengan  meningkatnya  kadar  NO  pada kelompok  pemberian  dosis  75  mg/kgBB, dosis  150  mg/kgBB,  kelompok  dosis  300 mg/kgBB  dibandingkan  dengan  kadar  NO kelompok  kontrol  positif.  Dari  hasil  yang diperoleh,  dapat  diperkirakan  bahwa pemberian  ekstrak  daun  sambung  nyawa mampu  mempengaruhi  terjadinya  disfungsi sel  endotel  dengan  pemberian  NaCl  dan
Prednison. Pemberian NaCl akan mengaktivasi sel endotel untuk menghasilkan faktor  konstriksi  (TXA 2 dan  PGH 2 )  dan radikal bebas (ROS) [7]. Begitu pula dengan pemberian prednison juga akan
menyebabkan  menurunnya  aktivitas  eNOS dan meningkatnya produksi ROS [12][13][14].
Mi-Ja et al tahun 2006 melakukan penelitian pada  dua  kelempok  tikus  (kelompok  kontrol dan kelompok ekstrak air Gynura procumbens dosis 500 mg/kgBB) mendapatkan  bahawa  dengan  pemberian ekstrak  tersebut  dapat  menurunkan  tekanan darah  sistolik,  enzim  laktat  dehidrogenase dan kreatin fosfat kinase, serta meningkatkan  kadar  NO  [15].  Pemberian ekstrak Gynura procumbens dapat meningkatkan  kadar  NO  yang  signifikan pada  tikus,  yang  mengindikasikan Gynura procumbens berpotensi  sebagai  penurun tekanan  darah,  yaitu  memberikan  efek vasodilator.

## SIMPULAN
Dari  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat disimpulkan  bahwa  dengan  pemberian ekstrak  etanol  daun  sambung  nyawa ( Gynura  procumbens (Lour.)  Merr)  pada semua kelompok dapat menurunkan tekanan darah  tikus  putih  jantan.  Pemberian  ekstrak etanol  daun  sambung  nyawa  ( Gynura procumbens (Lour.)  Merr)  pada  semua kelompok  dapat  mempengaruhi  kadar nitrogen monoksida (NO) tikus putih jantan.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Hipertensi Penyebab Kematian  No  3.  Semarang:  Pusat Komunikasi  Publik  Sekretariat  Jendral Depkes  RI,  Dinas  Kesehatan  Jawa Tengah, 2010.
[2]  WHO,  World  Health  Organization- International  Society  of  Hypertension Guidelines  Far  The  Management  of Hypertension,  Journal  of  Hypertension 17,151-183., 1999.
[3]  Rahimmanesh,  I,  Shahrezaei,  M.,  & Rashidi,  B,  High  blood  pressure  and endothelial dysfunction: effects of  high
Jurnal Proteksi Kesehatan Vol.9, No.2, November 2020, pp. 25-31 ISSN 2580-0191 (Online), ISSN 2338 – 5634 (Print)
blood pressure medications on endothelial  dysfunction  and  new treatments,  Journal  of  Research  in Medical Sciences, 2, 291-311, 2012.
[4]  Astutik, P., Wirjatmadi, B., Adriani, M., Peranan  kadar  nitrit  oksida  (NO) darah dan asupan lemak pada pasien hipertensi  dan  tidak  hipertensi . Jurnal Gizi  Klinik  Indonesia,  10,  (2),  55-60, 2013.
[5]  Fujiwara,  N,  Osanai,  T,  Kamada,  T, Katoh, T, Takahashi, K., & Okumura, K, Study  on  the  relationship  between plasma  nitrite  and  nitrate  level  and salt  sensitivity  in  human  hypertension modulation  of  nitric  oxide  synthesis  by salt  intake.  J.  Circ.  101,(8),  856-861, 2000.
[6]  Higashi,  Y,  Oshima,  T,  Watanabe,  M., Matsuura,  H,  &  Kajiyama,  G,  Renal response  to  L-arginine  in  salt-sensitive patients  with  essential  hypertension. Hypertension, 27, 643-648, 1996.
[7]  Boegehold,  M,  D.,  &  Kotchen,  T,  A., Importance  of  Dietary  Chloride  for Salt Sensitivity of Blood Pressure.American Heart Association , 17, (1), 158-161, 1991. [8]  Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Farmakope Herbal Indonesia. (Edisi 1). Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2008.
[9]  Kaewseejan,  N,  Puangpronpitag  D,
Nakornriab, M, Evaluation of phytochemical composition and antibacterial  property  of Gynura procumbens extract.  Asian  J.  Plant  Sci. 11, 77-82, 2012.
[10]  Firmansyah,  R.  R.,  Hakim,  R.,  & Damayanti,  D,  S.,  Efek  Antihipertensi
Dekokta  Daun  Sambung  Nyawa (Gynura Procumbens) melalui Penghambatan  ACE  (Studi  In  Silico). Malang:  Universitas  Islam  Malang, 2015. [11]  Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, Farmakope Herbal Indonesia, (Edisi 1). Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2010. [12]  Sun, J, Zhang, X, Broderick, M, & Fein, H.,  Measurement  of  nitric  oxide production  in  biological  systems  by using  griess  reaction  assay.  Sensors, 3,(8), 276-284, 2003.
[13]  Synder, S, H, & Bredt, D, S., Biological roles  of  nitric  oxide.  Scientific American, 266, (5), 68 – 77, 1992.
[14]  Taddei,  S,  Virdis,  A,  Ghiadoni,  L,  & Salvetti, A., The role of endothelium in human  hypertension.  Curr.  Opin. Nephrol.  Hypertensi,  7,(2),  203-209, 1998 .
[15]  Mi-Ja, K., Jae, L.H.,  Wiryowidagdo,  S.,
Kyung, K.H, Antihypertensive Effects of Gynura procumbens Extract in Spontaneously  Hypertensive  Rats,  J Med Food, 9(4), 587-590, 2006.