Available online at BIOMA: Jurnal Ilmiah Biologi Website: http://journal.upgris.ac.id/index.php/bioma/index BIOMA: Jurnal Ilmiah Biologi, 10(2), Oktober 2021, 143-157 Doi: https://doi.org/10.26877/bioma.v10i2.6371

## UJI AKTIVITAS ANTIJAMUR EKSTRAK BLACK GARLIC TERHADAP PERTUMBUHAN JAMUR Candida albicans
Eva Agustina, Funsu Andiarna * , Irul Hidayati, Vindi Fristy Kartika Program Studi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Sunan Ampel Surabaya Jl. Ahmad Yani No.117 Surabaya, Jawa Timur, Indonesia 60237 *Corresponding author: funsu_andiarna@uinsby.ac.id
Naskah diterima: 19 Juli 2020; Direvisi: 18 November 2020; Disetujui: 18 Maret 2021

## ABSTRAK
Salah satu tanaman yang berfungsi sebagai  antijamur  adalah bawang  putih yang diinovasikan  menjadi  produk  bawang  yang  berwarna  hitam  atau black  garlic . Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antijamur ekstrak black barlic terhadap  pertumbuhan  jamur Candida  albicans .  Metoda  dalam  penelitian  ini adalah  bawang  putih  dipanaskan  selama  35  hari  pada  suhu  65°C  untuk mendapatkan black  garlic . Black  garlic diekstraksi  dengan  metode  maserasi menggunakan  pelarut  methanol.  Uji  aktivitas  antibakteri  berdasarkan  uji  zona hambat,  konsentrasi  hambat  minimal  (KHM)  dan  konsentrasi  bunuh  minimal (KBM). Uji zona hambat dengan variasi konsentrasi ekstrak 100%, 90% dan 80%. Konsentrasi  dengan  nilai  zona  hambat  yang  baik  akan  dilanjutkan  ke  uji  KHM dan  KBM  dengan  pengenceran  ke  1  sampai  5.  Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa zona hambat ekstrak Black Garlic dengan konsentrasi 100% memiliki zona hambat  paling  bagus  yaitu  3,15  mm.  Uji  KHM  optimum  diperoleh  pada pengenceran  ke-5  dengan  nilai  OD  terendah  0,460.  Uji  KBM  dari  ekstrak black garlic pada  pengenceran  ke-5  menunjukkan  koloni  jamur C.  albicans masih tumbuh,  sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  ekstrak black  garlic hanya  mampu menghambat pertumbuhan jamur namun tidak bisa membunuh jamur C. albicans .
Kata kunci : antijamur; black garlic ; maserasi

## ABSTRACT
Activity  test  of  black  garlic  extract  against  the  growth  of  the  fungi  Candida albicans. One  plant  that  functions  as  an  antifungal  is  garlic  which  is  innovated into  black  garlic.  The  aim  of  this  study  is  to  indentify  black  garlic  extract antifungal  activity  against  of  the  Candida  albicans.  The  method  in  this  research was heated garlic for 35 days at temperature of 65°C. Black garlic was extracted by maceration method using methanol solvent. Antibacterial activity test based on inhibition  zone  test,  minimal  inhibitory  concentration  (MIC)  and  minimal  kill concentration  (MBC).  Inhibition  zone  test  with  various  extract  concentrations  of 100%,  90%  and  80%.  Concentrations  with  good  inhibition  zone  values  will  be continued to the MIC and MBC tests with dilutions 1 to 5. The results showed that the inhibition zone of black garlic extract with a concentration of 100%, 3.15 mm. The optimum MIC test was obtained at the 5 dilution with the lowest OD value of absorbance  0.460.  The  MBC  test  of  the  black  garlic  extract  at  the  5  dilution
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
showed C. albicans fungal colonies were still growing, so it can be said that the black  garlic  extract  was  only  able  to  inhibit  fungal  growth  but  could  not  kill  C. albicans fungi.
Keywords : antifungal; black garlic; maceration

## PENDAHULUAN
Candida  albicans merupakan  salah  satu  spesies  dari  genus Candida yang kenal  sebagai  khamis  paling  patogenik.  Jamur Candida  albicans merupakan organisme endogen yang ditemukan dalam tubuh manusia normal sekitar 40-80%. Jamur C.  albicans dapat  dijumpai  dalam  mulut,  usus,  dan  vagina.  Pada  keadaan tertentu  jamur  ini  bertindak  sebagai  organisme  patogen.  Terjadinya  perubahan dalam imunitas selular (flora normal) menyebabkan tubuh dapat terinfeksi oleh C. albicans . Jamur ini menyebabkan infeksi oportunistik pada manusia yakni infeksi pada immunocompromised (Padoli, 2016). Infeksi yang disebabkan oleh jamur C. albicans dipengaruhi  oleh  dua  faktor  yaitu  faktor  endogen  dan  faktor  eksogen. Faktor  endogen  meliputi  terjadinya  perubahan  fisiologis  pada  tubuh  misalnya kehamilan,  obesitas,  usia,  dan  adanya  gangguan  imunologis.  Sedangkan  faktor eksogen meliputi iklim tropis, kelembaban  yang tinggi, jenis pekerjaan, personal hygiene , dan adanya kontak dengan penderita yang telah terinfeksi oleh jamur C. albicans (Liwang et  al .,  2020).  Infeksi  yang  disebabkan  oleh C.albicans yaitu infeksi  pada  mukosa  superfisial  dan  gangguan  sistemik  yang  memiliki  tingkat angka kematian tinggi (Costa et al ., 2014).
Beberapa  jenis  penyakit  yang  disebabkan  oleh  infeksi  oleh  jamur C. albicans misalnya vulvaginistis (Cassone, 2015), candida pada urin, infeksi kuku, lesi pada kulit (Taei et al ., 2019), gatric ulcer (Ince et al ., 2014), dan komplikasi kanker  (Ramirez-Garcia et  al .,  2016).  Penggunaan  antibiotik  sebagai  antijamur merupakan  penanganan  pada C.  albicans .  Antibiotik  yang  umum  digunakan sebagai  antijamur  misalnya ketokonazole,  flukonazol,  itrakonazole,  griseofulvin dan nystatin (Pusat  Informasi  Obat  Nasional,  2015).  Penggunaan  antijamur mengalami  peningkatan  sejalan  dengan  semakin  banyaknya  infeksi  yang disebabkan  oleh C.  albicans ,  sehingga  menimbulkan  resistensi.  Resistensi antijamur  mengakibatkan  tubuh  kebal  terhadap  infeksi  jamur  dimana  senyawa aktif  dalam  obat  mengalami  penurunan  dalam  membunuh  jamur  serta  hal  ini
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
terjadi  karena  penggunaan  antijamur  yang  tidak  sesuai  dosis  yang  dianjurkan. Andiarna et  al. (2020)  menyatakan  bahwa  sebanyak  44%  responden  melakukan pembelian  antibiotik  tanpa  resep  dokter  dengan  alasan  biaya  lebih  murah dibandingkan harus memeriksakan diri ke dokter dengan biaya yang lebih tinggi. Selain  itu,  terdapat    alasan  lain  seperti  karena  sudah  mengetahui  jenis  antibiotik yang akan digunakan dan antibiotik lebih mudah diperoleh. Pemberian antibiotik tanpa  diagnosa  yang  tepat  akan  memicu  terjadinya  resistensi.  Resistensi C. albicans pada flukonazole telah dilaporkan. Pemakaian dalam jangka panjang dan berulang  pada  pasien  AIDS  telah  menyebabkan  munculnya  strain C.  albicans resisten fluconazole (Pusat Informasi Obat Nasional, 2015).
Resistensi  antibiotik  terhadap  jamur C.  albicans memerlukan  perhatian khusus.  Pemanfaatan  senyawa  bioaktif  pada  bahan  alam  memberikan  alternatif untuk  digunakan  sebagai  antijamur.  Bahan  alam  misalnya  pada  tanaman  yang memiliki  antioksidan  tinggi,  dimana  antioksidan  memiliki  kemampuan  sebagai antibakteri  dan  antijamur.  Salah  satu  tanaman  dengan  antioksidan  tinggi  adalah black  garlic . Black  barlic merupakan  bawang  putih  yang  dipanaskan  pada temperatur  dan  waktu  tertentu  sehingga  diperoleh  bawang  yang  bewarna  hitam atau black garlic . Agustina et al ., (2020) menyatakan bahwa ekstrak Black Garlic mempunyai potensi aktivitas antioksidan yang meningkat drastis mencapai 25 kali lipat  dibandingkan  dengan  bawang  putih  segar.  Hal  ini  ditunjukkan  dengan adanya kandungan senyawa aktif pada ekstrak black garlic seperti tanin, saponin, sterol,  flavonoid  dan  organosulfur.  Senyawa  aktif  tersebut  memiliki  aktivitas sebagai antijamur.
Flavonoid  sangat  dikenal  sebagai  antioksidan  yang  memberikan  efek sebagai  antibakteri  dan  antijamur.  Aktivitas  antijamur  pada  senyawa  flavonoid memiliki gugus hidroksil yang bekerja dengan cara membentuk kombinasi dengan fosfolipid dari membran sel jamur yang mengakibatkan sel jamur rusak, sehingga dapat  menghambat  pertumbuhan  sel  dan  meningkatkan  permeabilitas  membran serta  sel  jamur  terdenaturasi  (Zearah,  2014).  Selanjutnya  pada  mekanisme  kerja dari senyawa tanin sebagai antijamur adalah dengan cara menghambat biosintesis ergosterol  yang  merupakan  sterol  utama  penyusun  membran  sel  jamur.  Sterol diduga  berperan  dalam  peningkatan  permeabilitas  membran  sel  jamur  (Hong et
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
al .,  2011).  Sedangkan  senyawa  saponin  sebagai  antijamur  bekerja  dengan  cara membentuk kompleks dengan sterol yang merupakan enzim penyusun dinding sel jamur  sehingga  permeabilitas  meningkat  dan  sel  jamur  mati  (Septiadi et  al. , 2013).  Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Mikaili et  al. ,  (2013)  menyatakan  bahwa senyawa  organosulfur  yaitu  alliciin  pada  bawang  putih  memiliki  aktifitas antijamur C.  albicans .  Senyawa  organosulfur  dapat  merusak  pembentukan senyawa  lipid  pada membran  plasma  sehingga  mengganggu  kestabilan  membran jamur C.  albicans .  Perasan  bawang  putih  dengan  konsentrasi  50% menghasilkan zona  hambat  terhadap  jamur C.  albicans 13,57  mm,  sehingga  tergolong  aktif sebagai antimikroba (Mahmudah et al. , 2017).
Black  garlic menghasilkan  senyawa  organosulfur  yang  lebih  banyak  dan stabil  daripada  bawang  putih  segar  karena  ada  perubahan  dari  senyawa  alliciin yang  bersifat  volatil  dari  bawang  putih  menjadi  senyawa S-Allyl  cystein tetrahydro-B-Carbolines (SAC), S -methyl- L -cysteine sulphoxide (methiin) dan S -allyl-  L  -cysteine  sulphoxide  (alline) yang  lebih  stabil  setelah  melalui  proses pemanasan  (Choi et  al .,  2014).  Peningkatan  senyawa  aktif  pada  b lack  garlic diharapkan  dapat  meningkatkan aktivitas  antijamur C.  albicans .  Oleh  karena  itu, perlu  dilakukan  penelitian  untuk  mengetahui  aktivitas  antijamur  ekstrak black garlic terhadap pertumbuhan jamur C. albicans .

## MATERIAL DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium  Terintegrasi  UIN  Sunan Ampel Surabaya pada bulan Agustus tahun 2020. Subyek penelitian yaitu ekstrak black garlic.

## Alat dan Bahan
Bahan  yang digunakan  yaitu bawang putih, metanol 96%, aquades, spirtus, jamur C. albicans , ketoconazole, media PDA ( Potato Dextrose Agar ), media PDB ( Potato Dextrose Broth ), dan alkohol 70%
Alat  yang digunakan  yaitu timbangan analitik, beaker glass , tabung reaksi, gelas  ukur,  pengaduk  kaca  corong,  kaca  arloji,  spatula,  erlenmayer,  autoklaf, inkubator, kertas saring, bunsen, cawan petri, papper disk , jarum ose, mikropipet,
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
coloni  counter,  stirer,  jangka  sorong,  kertas  cakram, hot  plate , rotatory evaporator , spektrofotometer UV-Vis.
Metode Penelitian

## Ekstrak Black Garlic
Pembuatan black  garlic dengan  cara  bawang  putih  dioven  selama  35  hari pada  suhu  65°C  sehingga  diperoleh  bawang  yang  berwarna  hitam. Black  garlic selanjutnya  dihaluskan  untuk  mendapatkan  serbuk.  Serbuk  sebanyak  100  gram dimaserasi dengan pelarut metanol sebanyak 300 mL dan direndam selama 3 hari dengan  sesekali  dilakukan  pengadukan  pada  suhu  ruang.  Campuran  kemudian disaring,  residu  diremaserasi  lagi  sedangkan  filtrat  ditampung.  Remaserasi dilakukan  sebanyak  3  kali.  Filtrat  dirotary  evaporator  dengan  suhu  dan  tekanan tertentu untuk mendapatkan ekstrak black garlic .

## Pembuatan Media
Pembuatan media PDB ( Potato Dextrose Broth ) dan PDA ( Potato Dextrose Agar )  dengan  cara  media  PDB  ditimbang  sebanyak  24  gram,  sedangkan  media PDB  sebannyak  39  gram.  Masing-masing  media  dilarutkan  dalam  aquades sebanyak  1  L.  Larutan  dihomogenkan  dengan  memanaskan  diatas hot  plate . Selanjunya  disterilkan  dalam  autoklaf  dengan  suhu  121°C  pada  tekanan  2  atm selama 15 menit (Warsinah et al ., 2011).

## Peremajaan Jamur C. albicans
Peremajaan  jamur C.  albicans dilakukan  dengan  cara  media  PDA  cair dipindahkan  pada  3 tabung  reaksi  dan  dimiringkan  untuk menjadi  media miring. Setelah media miring memadat, 1 ose biakan murni di streak dan diinkubasi pada suhu  37°C  selama  24  jam.  Setelah  diremajakan C.  albicans diinokulasi  dengan cara  mensuspensikan  1  ose  dari  hasil  peremajaan  dalam  25  mL  media  PDB. Selanjutnya diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Setelah diinkubasi, diukur dengan spektrofotometer sampai absorbansinya 0,39 atau setara dengan 1,25.107 CFU (Mutammima, 2017).

## Uji Antijamur C. albicans
Uji aktivitas antijamur C. albicans dengan metode difusi dan dilusi. Metode difusi  menggunakan  kertas  cakram  yang  ditempatkan  pada  media  yang  telah diberi jamur. Jamur C. albicans yang telah  diinokulasi diambil sebanyak 100 µL
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
dan  dimasukkan  dalam  media  PDA  cair  sebanyak  10  mL.  Setelah  itu  dicampur dengan membentuk angka 8 dan media ditunggu memadat. Kertas cakram ukuran 6 mm direndam dengan ekstrak black garlic dengan konsentrasi 100%, 90%, dan 80%.  Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah ketoconazol 100%,  90%,  dan  80%, kontrol  negatif  metanol  masing-masing  sebanyak  100  mL  selama  1  jam.  Setelah itu  kertas  cakram  yang  telah  direndam,  diletakkan  diatas  media  PDA  yang  telah ditambahkan  jamur.  Kultur  diinkubasi  selama  24  jam  dan  zona  jernih  yang terbentuk  diukur.  Aktivitas  antijamur  ditandai  dari  zona jernih  atau  zona  hambat yang  terbentuk  (Mutammima,  2017).  Suatu  ekstrak  memiliki  sifat  antimikroba dengan uji difusi dikategorikan apabila zona hambatnya 1-5 mm  : sangat lemah; 6-10 mm : lemah; 11-20 mm : aktif, dan 21-30 mm : sangat aktif (Muharni et al ., 2017).
Uji aktivitas antijamur dengan metode dilusi dengan melihat nilai KHM dan KBM.  Uji  KHM  (Konsentrasi  Hambat  Minimum)  dilakukan  dengan  cara pembuatan  seri  pengenceran  dari  konsentrai  ekstrak  yang  paling  bagus  dari  uji kertas  cakram  (zona  hambat  yang  paling  besar).  Seri  pengenceran  uji  KHM sebanyak  5  kali  menggunakan  tabung  reaksi.  Pengenceran  1  (P1)  dilakukan dengan cara masukkan 8 mL PDB ditambahkan 1 mL ekstrak dan 1 mL suspensi jamur C.  albicans .  Pengenceran  2  (P2)    9  mL  PDB  ditambah  1  ml  P1. Pengenceran 3 (P3) 9 mL PDB ditambah 1 mL P2. Pengenceran 4 (P4) 9 mL PDB ditambah  1  mL  (P3),  dan  pengenceran  5  (P5)  9  mL  PDB  ditambah  1  mL  P4. Kontrol  positif    dibuat  dengan  cara  8  mL  PDB  ditambah  1  mL  suspensi  jamur ditambah  1  mL ketoconazole .  Kontrol  negatif  dibuat  dengan  cara  8  mL  PDB ditambah 1 mL ditambah 1 mL metanol. Masing-masing perlakuan diambil 3 mL dan  diinkubasi  selama  24  jam  dengan  suhu  37ºC.  Larutan  divortex  dan  diukur nilai  absorbansi  dengan  spektrofotometer  sebelum  dan  setelah  diinkubasi.  Nilai KHM ditentukan dari nilai OD ( Optical Density ):
Nilai OD (KHM) = Absorbansi setelah inkubasi – Absorbansi sebelum inkubasi
Nilai OD ( Optical Density ) mendekati  0 menandakan penghambatan jamur yang  paling  optimum.  Konsentrasi  dengan  nilai  OD  minimum  dilanjutkan  untuk
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
uji  KBM  (Konsentrasi  Bunuh  Minimum).  Uji  KBM  dilakukan  dengan  cara menumbuhkan  jamur  dalam pour  plate pada  media  PDA.  Jamur  yang ditumbuhkan  berasal  dari  jamur  yang  digunakan  untuk  uji  KHM  yang  memiliki nilai  OD  paling  kecil.  Sebanyak  1  mL  campuran  dari  uji  KHM  ditambahkan  10 mL Sabouraud Dextrose Agar (SDA).  Kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu  37ºC  selanjutnya  diamati  pertumbuhan  jamur  pada  media  (Mutammima, 2017).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Black  Garlic diperoleh  dari  pemanasan  bawang  putih  pada  suhu  65ºC selama 35 hari. Morfologi black garlic berwarna coklat kehitaman secara merata, struktur  umbi  cenderung  keras,  dan  aroma  khas  bawang  putih  berkurang.  Pada proses  pemanasan  65ºC  selama  35  hari  dapat  meningkatkan  kandungan  gula reduksi  (Zhang et  al .,  2015).  Proses  pencoklatan  pada black  garlic dipengaruhi oleh  adanya  peningkatan  gula  reduksi  karena  proses  non-enzimatik  reaksi Maillard .  Mekanisme  reaksi Maillard ada  3  tahapan  yaitu  (1)  proses  kondensasi gula  reduksi  dan  amina  serta  terbentuknya  amadori,  kondisi  ini  umbi  bawang putih masih berwarna putih. (2) Proses dehidrasi gula terjadinya fragmentasi gula dan  degradasi  asam  amino,  tahap  ini  umbi  bawang  putih  mulai  berubah  warna menjadi  coklat  muda.  (3)  Kondensasi  aldehid  dan  aminaserta  terbentuknya senyawa Hydroxymethyl-2-furfuraldehyde yang membentuk warna umbi menjadi coklat dan hitam (Dedin, 2011).
Black  garlic hasil  pemanasan  dihaluskan  menjadi  serbuk  untuk memperbesar luas permukaan. Proses maserasi black garlic menggunakan pelarut metanol yang bersifat polar. Tujuan penggunaan pelarut metanol dalam ekstraksi black garlic untuk mengambil senyawa aktif yang bersifat polar seperti senyawa fenolik. Pelarut metanol akan merusak dan masuk dalam dinding sel black garlic sehingga  kandungan  metabolit  sekunder  akan  berdifusi  menuju  pelarut,  proses difusi  akan  terhenti  apabila  sudah  tercapai  keadaan  setimbang  oleh  karena  itu perlu  dilakukan  maserasi  ulang  atau  remaserasi.  Senyawa  prekursor  yang terkandung  dalam black  garlic didominasi  oleh  senyawa S-Ally  Cystein (SAC) dan senyawa metabolit sekunder jenis flavonoid, saponin, dan tannin (Bae et al. ,
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
2014). Rendemen hasil ekstraksi black garlic sebanyak 5% dengan warna coklat kehitaman.
Uji  aktivitas  antijamur  ekstrak black  garlic pada  jamur C.  albicans menggunakan  dua  pengujian  yaitu  uji  difusi  dan  uji  dilusi.  Uji  difusi  dengan kertas cakram untuk menentukan nilai zona hambat, sedangkan uji dilusi dengan menentukan nilai OD Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan uji Konsentrasi Bunuh  Minimum  (KBM).  Uji  zona  hambat  digunakan  untuk  mengetahui konsentrasi  yang  dibutuhkan  untuk  mengetahui  aktivitas  jamur C.  albicans dengan  cara  melihat  pembentukan  zona  jernih  disekitar  kertas  cakram.  Semakin lebar zona bening yang terbentuk maka aktivitas antijamur suatu ekstrak semakin bagus.  Senyawa  aktif  ekstrak black  garlic yang  ada  dalam  kertas  cakram  akan berdifusi  menuju  media  padat  yang  telah  ditumbuhi  jamur.  Apabila  ekstrak tersebut  mampu  menghambat  pertumbuhan  jamur  maka  akan  terbentuk  zona jernih yang mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan jamur C. albicans di sekitar cakram ( Tabel 1 ).
Tabel 1 . Hasil uji zona hambat ekstrak black garlic terhadap jamur C. albicans
Ulangan Uji Zona Hambat (mm) Ekstrak Black Garlic Kontrol Positif ( Ketoconazole ) Kontrol Negatif (Metanol) 100% 90% 80% 100% 90% 80% 1 3,1 2,33 2,3 25,22 20,5 19,4 - 2 3,15 2,1 2,2 25,3 21,6 19,2 - 3 3,2 2,51 2,4 25,4 20,8 19 - Rata-rata 3,15 2,31 2,30 25,31 20,97 19,20 -
Berdasarkan uji zona hambat konsentrasi paling bagus adalah ekstrak black garlic dengan konsentrasi 100%. Hal ini sesuai dengan pernyataan  Lingga et al. ,
(2016)  yang  menyatakan  bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  suatu  senyawa  aktif, maka  kemampuan  untuk  menghambat  pertumbuhan  mikroba  semakin  tinggi. Ekstrak black  garlic 100%  menghasilkan  nilai  zona  hambat  3,15  mm, ketoconazole  25,31  mm,  dan  kontrol  negatif  metanol  96%  tidak  terbentuk  zona hambat. Aktivitas antijamur berdasarkan ukuran zona jernih pada uji zona hambat adalah  1-5  mm  berarti  sangat  lemah;  6-10  mm  berarti  lemah;  11-20  mm  berarti aktif,  dan  21-30  mm  berarti  sangat  aktif  (Muharni,  2017).  Zona  bening  dengan ukuran diameter yang bervariasi terbentuk di sekeliling kertas  cakram yang telah
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
direndam  ekstrak black  garlic dengan  konsentrasi  100%  ( Gambar  1a ),  90% ( Gambar  1b ),  dan  80%  ( Gambar  1c ).  Perbedaan  ukuran  diameter  tersebut menunjukkan perbedaan daya hambat terhadap jamur C. albicans .
(a) (b)                                        (c)
Gambar 1 . Hasil uji zona hambat ekstrak black garlic terhadap jamur C. albicans (a) ekstrak black  garlic 100%, (b) ekstrak black  garlic 90%,  dan (c) ekstrak black garlic 80%
Penggunaan  aktivitas  antijamur  menggunakan  ekstrak black  garlic menunjukkan  hasil  yang  sangat  lemah  dibandingkan  dengan ketoconazole yang menghasilkan  zona  hambat  yang  lebih  kuat.  Hasil  kontrol  negatif  dengan menggunakan  metanol  tidak  terbentuk  zona  hambat.  Hal  ini  berarti  bahwa  daya hambat  jamur C.  albicans berasal  dari  kandungan  senyawa  ekstrak black  garlic bukan berasal dari senyawa lain seperti metanol yang mana merupakan salah satu pelarut  dalam  pembuatan  ekstrak black  garlic .  Mekanisme  terbentuknya  zona hambat atau zona jernih pada kertas cakram yaitu senyawa aktif dari suatu ekstrak akan  berdifusi  dari  kertas  cakram  menuju  ke  dalam  media  agar  dan  akan membunuh atau menghambat pertumbuhan jamur. Semakin lama proses inkubasi suatu  ekstrak  pada  media  maka  akan  semakin  terlihat  pembentukan  zona  jernih karena kontak antara senyawa aktif dan jamur akan semakin lama. Terbentuknya zona  jernih  mengindikasikan  tidak  adanya  pertumbuhan  koloni  dari  jamur C. albicans pada kertas cakram karena pertumbuhannya dihambat oleh senyawa aktif dari  ekstrak  tanaman  (Bagul  &  Sivakumar,  2016).  Uji  aktivitas  antijamur  secara difusi  dengan  kertas  cakram  belum  menunjukkan  konsentrasi  terkecil  suatu ekstrak  dalam  menghambat  atau  membunuh  pertumbuhan  jamur  oleh  karena  itu perlu dilakukan uji dilusi.
Uji dilusi dengan menentukan nilai Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) dan  Konsentrasi  Bunuh  Minimum  (KBM).  Uji  KHM  dilakukan  dengan menggunakan  konsentrasi  terendah  yang  menghasilkan  zona  hambat  terluas  dari
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
uji  difusi.  Konsentrasi  tersebut  dilakukan  pengenceran  sebanyak  5  kali  dan ditentukan  nilai  OD  ( Optical  Density ).  Pengenceran  pada  metode  ini  bertujuan untuk  menentukan  konsentrasi  terendah  dengan  daya  hambat  yang  paling  bagus pada  media cair  secara  kuantitatif  (Balouiri et  al .,  2016).  Penentuan  nilai    KHM dengan   melakukan   pengukuran nilai OD  dengan menghitung selisih absorbansi setelah  dan  sebelum  inkubasi.  Nilai  absorbansi  diketahui  dari  spektrofotometer dengan panjang  gelombang 600 nm dengan blanko aquades. Panjang gelombang 600  nm  merupakan  panjang  gelombang  maksimum  dalam  penentuan  absorbasi larutan uji.
Tabel  2 .  Hasil  uji  konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)  ekstrak black  garlic terhadap jamur C. albicans Perlakuan Ulangan Seri Pengenceran P0 P1 P2 P3 P4 P5 Ekstrak Black Garlic 100% 1 0,756 0,977 0,814 0,679 0,567 0,45 2 0,754 0,974 0,813 0,69 0,565 0,46 3 0,758 0,98 0,819 0,658 0,562 0,47 rata-rata 0,756 0,977 0,815 0,676 0,565 0,460 Kontrol Positif ( Ketoconazole 100%) 1 0 0,38 0,44 0,128 0,07 0,072 2 0 0,384 0,451 0,13 0,08 0,074 3 0 0,382 0,444 0,129 0,083 0,07 rata-rata 0,000 0,382 0,445 0,129 0,078 0,072 Kontrol negatif (Metanol) 1 0,968 0,95 0,899 0,829 0,4 0,32 2 0,961 0,953 0,891 0,83 0,413 0,326 3 0,965 0,95 0,895 0,827 0,394 0,338 rata-rata 0,965 0,951 0,895 0,829 0,402 0,328
Hasil uji KHM menunjukkan nilai OD yang paling kecil pada pengenceran ke-5  ( Tabel  2 ).  Ekstrak black  garlic pada  pengenceran  ke-5  menghasilkan  OD 0,460; kontrol positif dengan ketoconazole menghasilkan OD 0,072; dan metanol 96%  memiliki  OD  0,128.  Apabila  nilai  OD  mendekati  0  mengindikasikan  tidak ada pertumbuhan koloni jamur C. albicans pada larutan uji setelah diinkubasi. Hal ini  menunjukkan  bahwa  kemampuan  ekstrak black  garlic untuk  menghambat pertumbuhan jamur semakin kuat. Pada penelitian ini, ekstrak black garlic belum dapat menghambat pertumbuhan jamur C. albicans secara optimal. Hal ini dapat dilihat  dari  nilai  OD  pada  masing-masing  pengenceran  yang  masih  jauh  dari  0. Berbeda  dengan  uji  kontrol  positif ketokenazol yang  rata-rata  nilai  OD-nya mendekati 0.
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
Uji  dilusi  selanjutnya  adalah  menentukan  Konsentrasi  Bunuh  Minimum (KBM)  dengan  mengamati  ada  tidaknya  pertumbuhan  jamur C.  albicans pada media.  Larutan  uji  ekstrak black  garlic yang  digunakan  untuk  uji  KBM  adalah konsentrasi 100% pada pengenceran ke-5 karena memiliki nilai OD paling kecil.
Tabel 3 . Hasil konsentrasi bunuh minimum (KBM) seri pengenceran ke-5 ekstrak black garlic terhadap jamur C. albicans
Ulangan Hasil Uji KBM Ekstrak Black Garlic 100% Kontrol Positif (Ketoconazole 100%) Kontrol Negatif (Metanol) Seri Pengenceran ke-5 (P5) 1 ++ + ++ 2 ++ + ++ 3 ++
+ ++
Keterangan tabel :
+ + =  tumbuh koloni banyak +    =  tumbuh koloni sedikit
Ekstrak black  garlic pada  pengenceran  ke-5  masih  terjadi  pertumbuhan koloni  jamur C.  albicans lebih  banyak  dibandingkan  dengan  kontrol  positif ketoconazole ( Tabel  3 ).  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  ekstrak black  garlic pada pengenceran ke-5 hanya mampu menghambat pertumbuhan jamur dan tidak mampu membunuh jamur C. albicans .
Senyawa aktif ekstrak black garlic yang mampu menghambat pertumbuhan jamur C.  albicans adalah  senyawa Allisin dan S-Allyl  Cystein (SAC)  (Farhana, 2018), senyawa metabolit sekunder seperti saponin, fenol, tanin  (Kulsum, 2014). Senyawa allisin dan S-Allyl Cystein dapat merusak jaringan suatu mikroba seperti bakteri  dan  jamur.  Senyawa allisin dan S-Allyl  Cystein memiliki  gugus  fungsi tiosulfinat (R-SOS-R).  Adanya senyawa  yang bersifat elektrofilik pada golongan tiosulfat dapat menghancurkan kadar lemak pada membran dinding sel dan DNA bakteri atau jamur dengan lebih mudah (Gao et al ., 2013).
Kandungan  senyawa  ekstrak black  garlic yang  juga  berperan  sebagai antijamur  adalah diallildiulfida atau ajoene . Diallildiulfida dapat  menghambat sintesis  lemak  pada  jamur  dan  mempengaruhi  pembentukan  RNA  menghasilkan bentuk yang lain. Senyawa diallildiulfida dapat merusak permeabilitas dinding sel dengan cara memutus rantai gugus SH ( sulfuhidril dan disulfida ) yang diperlukan
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
pada  saat  sintesis  asam  amino  jamur C.  albicans .  Putusnya  gugus  SH mempengaruhi sintesis enzim protease sehingga membran sitoplasma dapat rusak dan tidak terjadi proliferasi sel sehingga sintesis asam amino tidak terjadi pada C. albicans (Moulia et al ., 2018).
Kandungan  senyawa  metabolit  sekunder black  garlic seperti  saponin, fenolik,  tanin,  flavonoid,  dan  minyak  atsiri  dapat  membunuh  mikroba  dengan merusak  permeabilitas  dinding  sel.  Saponin  yang  memiliki  sifat  hidrofilik  dan hidrofobik  dapat  dengan  mudah  bereaksi  dengan  protein  membran  pada  jamur. Bagian  hidrofobik  saponin  akan  berikatan  dengan  ligan  protein  membran hidrofobik,  hal  ini  menyebabkan  protein  membran  berubah  posisi  sehingga menyebabkan kerusakan membran sel jamur.
Tanin  memiliki  kemampuan  dalam  menghambat  ekspresi  enzim transkiptase balik.  Senyawa  tanin  mampu  meningkatkan  adesi  dan  tidak mengaktifkan  kerja  enzim  yang  mengkatalisis  reaksi  transkripsi  balik  RNA tunggal  menjadi  DNA  ganda.  Selain  itu  tanin  juga  dapat  mengganggu  sintesis protein  pada  lapisan  sel  dan  polipeptida  dinding  sel.  Sehingga  pembentukan dinding  sel  jamur  menjadi  kurang  sempurna  dan  lisis.  Jamur C.  albicans merupakan  jamur  yang  tumbuh  dengan  kondisi  aerob.  Senyawa  fenolik  dan flavonoid dapat berikatan membran dinding sel jamur.
Kandungan lain dari black garlic adalah minyak atsiri. Minyak atsiri dapat mengganggu  proses  sintesis  protein  dengan  cara  mendenaturasi  protein  dan dinding  sel.  Sehingga  transport  nutrisi  yang  melalui  membran  sel  jamur  akan terganggu.  berkurangnya  nutrisi  pada  sel  jamur  mengakibatkan  proses pembentukan koloni baru C. albicans tidak akan terjadi (Manik, 2014).

## KESIMPULAN
Aktivitas  antijamur  ekstrak  b lack  garlic terhadap  pertumbuhan C.  albicans diketahui  dari  uji  zona  hambat,  konsentrasi  hambat  minimal  (KHM),  dan konsentrasi  bunuh  minimal  (KBM).  Nilai  zona  hambat  paling  bagus  pada konsentrasi  100%  dengan  nilai  3,15  mm.  Uji  KHM  dengan  5  kali  pengenceran, nilai  OD  terendah  pada  pengenceran  ke-5  dengan  absorbansi  0,460.  Uji  KBM pada  pengenceran  ke-5  menunjukkan  koloni  jamur C.  albicans masih  tumbuh.
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
Ekstrak black garlic mampu menghambat pertumbuhan jamur namun  belum bisa mematikan C.  albicans .  Kemampuan  daya  hambat  terhadap  jamur C.  albicans disebabkan kandungan senyawa aktif yang terkandung dalam ekstrak black garlic .

## DAFTAR PUSTAKA
Agustina, E., Andiarna, F., & Hidayati, I. (2020). Uji aktivitas antioksidan ekstrak bawang hitam (black garlic) dengan variasi lama pemanasan. Al-Kauniyah: Jurnal Biologi , 13 (1), 39–50. https://doi.org/10.15408/kauniyah.v13i1.12114
Andiarna,  F.,  Hidayati,  I.,  &  Agustina,  E.  (2020).  Pendidikan  kesehatan  tentang penggunaan  antibiotik  secara  tepat  dan  efektif  sebagai  upaya  mengatasi resistensi obat. Journal of Community Engagement and Empowerment , 2 (1), 16–23. http://ojs.iik.ac.id/index.php/JCEE/article/view/317
Bae, S. E., Cho, S. Y., Won, Y. D., Lee, S. H., & Park, H. J. (2014). Changes in S-allyl  cysteine  contents  and  physicochemical  properties  of  black  garlic during  heat  treatment.  LWT  - Food  Science  and  Technology , 55 (1),  397– 402. https://doi.org/10.1016/j.lwt.2013.05.006
Bagul,  U.  S.,  &  Sivakumar,  S.  M.  (2016).  Antibiotic  susceptibility  testing:  A review  on  current  practices. International  Journal  of  Pharmacy , 6 (3),  11– 17.
Balouiri,  M.,  Sadiki,  M.,  &  Ibnsouda,  S.  K.  (2016).  Methods  for  in  vitro evaluating  antimicrobial  activity:  A  review. Journal  of  Pharmaceutical Analysis , 6 (2), 71–79. https://doi.org/10.1016/j.jpha.2015.11.005
Cassone,  A.  (2015).  Vulvovaginal Candida  albicans infections:  Pathogenesis, immunity  and  vaccine  prospects. BJOG:  An  International  Journal  of
Obstetrics and Gynaecology , 122 (6), 785–794.
https://doi.org/10.1111/1471-0528.12994
Choi,  I.  S.,  Cha,  H.  S.,  &  Lee,  Y.  S.  (2014).  Physicochemical  and  Antioxidant
Properties of Black Garlic. Molecules , 19 (10), 16811–16823. https://doi.org/10.3390/molecules191016811
Costa,  C.,  Dias,  P.  J.,  Sá-Correia,  I.,  &  Teixeira,  M.  C.  (2014).  MFS  multidrug transporters  in  pathogenic  fungi:  Do  they  have  real  clinical  impact? Frontiers in Physiology , 5 , 197. https://doi.org/10.3389/fphys.2014.00197
Dedin,  F,  R.  (2011).  Reaksi  maillard:  mekanisme  dan  peran  dalam  pangan  dan kesehatan. Yayasan Humaniora.
Farhana,  H.  (2018).  Pengaruh  suhu  dan  waktu  fermentasi  ekstrak  etanol  black garlic ( Allium sativum ) terhadap aktivitas antibakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli [Skripsi]. Universitas Jenderal Achmad Yani.
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
Gao,  C.,  Jiang,  X.,  Wang,  H.,  Zhao,  Z.,  &  Wang,  W.  (2013).  Drug  metabolism and  pharmacokinetics  of  organosulfur  compounds  from  garlic. Journal  of
Drug  Metabolism  and  Toxicology , 4 (5).  https://doi.org/10.4172/2157- 7609.1000159
Hong,  L.  S.,  Ibrahim,  D.,  Kassim,  J.,  &  Sulaiman,  S.  (2011).  Gallic  acid:  An anticandidal  compound  in  hydrolysable  tannin  extracted  from  the  barks  of R hizophora  apiculata Blume. Journal  of  Applied  Pharmaceutical  Science
(JAPS) , 01 (06), 75–79.
https://www.japsonline.com/abstract.php?article_id=127&sts=2
Ince, A. T., Kocaman, O., Ismailova, M., Tozlu, M., Gücin, Z., & Iraz, M. (2014).
A rare co-existence of Helicobacter pylori , Candida albicans and Candida keyfr in a giant gastric ulcer. The Turkish Journal of Gastroenterology: The Official  Journal  of  Turkish  Society  of  Gastroenterology , 25 (4),  435–436. https://doi.org/10.5152/tjg.2014.3401
Kulsum,  H.  (2014).  Aktifitas  antifungi  ekstrak  bawang  putih  dan  black  garlic varietas  lumbu  hijau  engan  metode  ekstraksi  yang  berbeda  terhadap Candida albicans [Skripsi]. Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Lingga,  A.  R.,  Pato,  U.,  &  Rossi,  E.  (2016).  Uji  antibakteri  ekstrak  batang kecombrang ( Nicolaia speciosa Horan) terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Jurnal Online Mahasiswa (JOM) Bidang Pertanian , 3 (1), 1–15. https://jom.unri.ac.id/index.php/JOMFAPERTA/article/view/9580
Liwang,  F., Yuswar, P.  W., Wijaya, E.,  & Sanjaya, N.  P. (2020).  Kapita Selekta Kedokteran Edisi V Jilid 1. Media Aesculapius Universitas Indonesia.
Mahmudah,  R.  B.,  Pribadi,  P.,  &  Agusta,  H.  F.  (2017).  Uji  aktivitas  antifungi perasan  bawang  putih  ( Allium  sativum L.)  terhadap Candida  albicans . Jurnal Farmasi
Sains dan Praktis , 3 (1), Article 1.
http://journal.ummgl.ac.id/index.php/pharmacy/article/view/2721
Manik,  W.  G.  (2014).  Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kasar  biji  buah  langsat ( Lansium  domesticum Corr.)  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus . Jurnal  Mahasiswa  PSPD  FK  Universitas  Tanjungpura , 1 (1),  Article  1. http://jurnal.untan.ac.id/index.php/jfk/article/view/8094
Mikaili, P., Maadirad, S., Moloudizargari, M., Aghajanshakeri, S., & Sarahroodi, S.  (2013).  Therapeutic  uses  and  pharmacological  properties  of  garlic, shallot,  and  their  biologically  active  compounds. Iranian  Journal  of  Basic
Medical Sciences , 16 (10), 1031–1048. https://doi.org/ 10.22038/IJBMS.2013.1865
Moulia, M. N., Syarief, R., Iriani, E. S., Kusumaningrun, H. D., & Suyatma, N. E. (2018).  Antimikroba  ekstrak  bawang  putih. Jurnal  Pangan , 27 (1),  55–66. https://doi.org/10.33964/jp.v27i1.399
Muharni,  M.,  Fitrya,  F.,  &  Farida,  S.  (2017).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Etanol Tanaman Obat Suku Musi di Kabupaten Musi Banyuasin, Sumatera
Agustina et al , Uji aktivitas antijamur ekstrak black garlic ...
Selatan. Jurnal Kefarmasian Indonesia , 7 (2), 127–135.
https://doi.org/10.22435/jki.v7i2.3493
Mutammima,  N.  (2017).  Uji  aktivitas  antijamur,  penentuan  konsentrasi  hambat minimum  (KHM)  dan  konsentrasi  bunuh  minimum  (KBM)  serta  KLT- Bioautografi  ekstrak  etanol  daun  plethekan  ( Ruellia  tuberosa L.)  terhadap Candida albicans [Skripsi]. UIN Maulana Malik Ibrahim.
Padoli.  (2016).  Modul  Bahan  Ajar  Cetak  Keperawatan:  Mikrobiologi  dan Parasitologi Keperawatan (1st ed.). Kemenkes RI Pusat Pendidikan Sumber Daya Manusia Kesehatan.
Pusat  Informasi  Obat  Nasional.  (2015).  Infeksi:  Anti  Jamur.  Badan  POM  RI. Retrieved from http://pionas.pom.go.id/ioni/bab-5-infeksi/53-anti-jamur
Ramirez-Garcia,  A.,  Rementeria,  A.,  Aguirre-Urizar,  J.  M.,  Moragues,  M.  D., Antoran, A., Pellon, A., Abad-Diaz-de-Cerio, A., & Hernando, F. L. (2016). Candida albicans and cancer: Can this yeast induce cancer development or progression? Critical  Reviews  in  Microbiology , 42 (2),  181–193. https://doi.org/10.3109/1040841X.2014.913004
Septiadi, T., Pringgenies, D., & Radjasa, O. K. (2013). Uji fitokimia dan aktivitas antijamur  ekstrak  teripang  keling  ( Holoturia  atra )  dari  Pantai  Bandengan Jepara terhadap jamur Candida albicans . Journal of Marine Research , 2 (2), 76–84. https://doi.org/10.14710/jmr.v2i2.2355
Taei, M., Chadeganipour, M., & Mohammadi, R. (2019). An alarming rise of non- albicans Candida species  and  uncommon  yeasts  in  the  clinical  samples;  a combination  of  various  molecular  techniques  for  identification  of  etiologic agents. BMC  Research  Notes , 12 (1),  779.  https://doi.org/10.1186/s13104- 019-4811-1
Warsinah, Kusumawati, E., & Sunarto. (2011). Identifikasi senyawa antifungi dari kulit  batang  kecapi  ( Sandoricum  koetjape )  dan  aktivitasnya  terhadap Candida albicans . Majalah Obat Tradisional , 16 (3), 170–178. https://doi.org/10.22146/tradmedj.8055
Zearah,  S.  A.  (2014).  Antifungal  and  antibacterial  activity  of  flavonoid  extract from Terminalia  chebula Retz.  fruits. Journal  of  Basrah  Researches (Sciences) , 40 (1A), 122–131. https://www.iasj.net/iasj/article/89405
Zhang, X.,  Li,  N.,  Lu, X.,  Liu, P., &  Qiao, X. (2015). Effects of temperature on the quality of black garlic. Journal of the Science of Food and Agriculture , 96 (7), 2366–2373. https://doi.org/10.1002/jsfa.7351