## Isolasi dan Identifikasi Senyawa Flavonoid Madu Hutan
(Apis dorsata) Kapuas Hulu dengan Metode KLT dan Spektrofotometri UV-Vis
Youni Syafitri 1* , Indira Ha’in Wasanti 2 , Heny Puspasari 3 1,2 Jurusan Akademi Farmasi Yarsi Pontianak
3 Departemen Farmasi Akademi Farmasi Yarsi Pontianak
Madu hutan memiliki banyak khasiat untuk kesehatan dan kecantikan. Madu hutan mengandung flavonoid yang berfungsi  sebagai  antioksidan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  jenis  senyawa  flavonoid  yang terdapat  di  dalam  madu  hutan  ( Apis  dorsata ).  Penelitian  ini  dilakukan  dengan  metode  maserasi menggunakan ekstrak etanol 96% madu hutan  Kapuas Hulu dan hasil fraksinasi menggunakan pelarut air panas  dengan  suhu  40 o C  untuk  identifikasi  KLT  dan  ekstrak  metanol  madu  hutan  Kapuas  Hulu  untuk identifikasi  spektrofotometri  UV-Vis.  Kemudian  dilakukan  uji  fitokimia  yang  menunjukkan  ekstrak  madu hutan positif mengandung senyawa flavonoid. Identifikasi flavonoid dilakukan secara kromatografi lapis tipis (KLT) menggunakan eluen BAA (3:1:1) untuk mengetahui nilai Rf. Hasil KLT menunjukkan senyawa flavonoid madu  hutan  ( Apis  dorsata ) mengandung  Luteolin  nilai  Rf  78  dan  Trisin  nilai  Rf  73  dari  jenis  flavon, Dihidrokuersetin  nilai  Rf  78  dari  jenis  flavanon,  dan  Isolikuiritigenin-4  glukosida  nilai  Rf  61  dari  jenis  khalkon. Dilanjutkan dengan ekstrak metanol diuji dengan KLT dielusi dengan beberapa pelarut yaitu n -heksan : etanol (8:2), n -heksan : etil asetat (8:2), BAA (3:1:1), dan BAA (4:1:5)  diperoleh eluen dengan pemisahan terbaik yaitu BAA (4:1:5), kemudian dilanjutkan pemisahan dengan metode kromatografi kolom gravitasi.  Hasil isolat dengan warna yang pekat dari hasil kromatografi kolom gravitasi kemudian diidentifikasi menggunakan spektrofotometri UV-Vis. Analisis UV-Vis isolat dengan puncak ter baik menghasilkan 2 puncak pada λ 235,4 nm (pita II) dan pada λ 381,9  nm  (pita  I)  yang  diduga  senyawa  khalkon  atau  auron.  Berdasarkan  hasil  penelitian  di  atas  dapat disimpulkan  bahwa ekstrak madu  hutan  mengandung senyawa  flavonoid  jenis flavanon yang berfungsi sebagai antioksidan, antiinflamasi, antijamur dan antibakteri. Jenis flavon berfungsi sebagai antioksidan atau penangkal radikal  bebas,  serta  jenis  khalkon  berfungsi  sebagai  antibakteri,  antiplatelet,  antiulceratif,  antimalaria, antikanker, antiviral, antileismanial, antioksidan, antihiperglikemik, immunomodulator, dan antiinflamasi.
Kata kunci: madu hutan, flavonoid, KLT, spektrofotometri UV-Vis
Isolation and Identification of Forest Honey Flavonoid Compounds ( Apis dorsata ) Capuas Upstream using TLC and UV-Vis Spectrophotometry
Forest  honey  has  many  properties  for  health  and  beauty.  Forest  honey  contains  flavonoids  which  function  as antioxidants.  This  study  aims  to  determine  the  types  of  flavonoids  found  in  forest  honey  (Apis  dorsata).  This research was carried out by maceration method using ethanol extract 96% of upstream Kapuas forest honey and fractionation  using  hot  water  solvent  at  a  temperature  of  40°C  for  TLC  identification  and  methanol  extract  of upstream  Kapuas forest  honey for  UV-Vis  spectrophotometric identification.  Phytochemical  test was  carried out which showed that the forest honey extract contained flavonoids. Flavonoid identification was carried out by thin layer chromatography (TLC) using BAW (3: 1: 1) eluent to determine the Rf value. The results of TLC showed that forest honey flavonoids (Apis dorsata) had several types, namely Luteolin with Rf 78 and Trisin with Rf 73 values from  flavones, Dihydroquercetin Rf  78 for flavanones, and Isolikuiritigenin-4 glucosides with Rf  61 values  from the chalcone type. Followed by the methanol extract tested by TLC eluted with several solvents, namely n-hexane: ethanol (8: 2), n-hexane: ethyl acetate (8: 2), BAW (3: 1: 1), and BAW (4: 1: 5) and it was obtained eluent that gave  the  best  separation,  namely  BAW  (4:  1:  5),  then  continued  with  the  separation  by  gravity  column chromatography  method.  The  results  of  the  isolates  with  a  thick  color  from  the  results  of  gravity  column chromatography  were  then  identified  using  UV-Vis  spectrophotometry.  UV-Vis  analysis  of  isolates  with  the  best peaks produced 2 peaks at 235.4 nm (band II) and at 381.9 nm (band I) which were suspected to be chalcone or auron  compounds.  Based  on  the  results  of  the  above  research,  it  can  be  concluded  that  forest  honey  extract contains  flavonoid  compounds  of  the  flavanone  type  which  function  as  antioxidants,  anti-inflammatory,  anti- fungal  and  antibacterial.  Types  of  flavones  function  as  antioxidants  or  free  radical  scavengers,  and  chalcone types  function  as  antibacterial,  antiplatelet,  antiulcerative,  antimalarial,  anticancer,  antiviral,  antileismanial, antioxidant, antihyperglycemic, immunomodulatory, and anti-inflammatory.
Keywords: Forest honey, flavonoid, KLT, Spectrophotometry UV-Vis.
* Corresponding author: Departemen Farmasi Akademi Farmasi Yarsi Pontianak, Jl. Panglima Aim No.2,
Dalam Bugis, Kota Pontianak, e-mail: yaunisyafitri86@gmail.com

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara yang  terdapat  beberapa  jenis  madu,  salah satunya madu hutan (Apis dorsata). Jenis Apis dorsata merupakan jenis lebah yang  hidup liar di hutan dan sangat ganas. Apis dorsata sering disebut  lebah  raksasa,  karena  lebah  ini membuat sarang yang sangat besar dan ukuran tubuhnya besar.  Lebah  ini  membuat sarangnya hanya  satu  lembar.  Jumlah  anggota  koloni dapat  mencapai  ratusan  ribu  ekor  (Ungerer, 1985).  Selain  itu,  jenis  lebah  ini  merupakan jenis  lebah  yang  paling  produktif    di    Asia Tropis  (Smith  1960  dalam  Yatap  1998). Menurut  Kuntadi  (2001),  potensi Apis  dorsata sebagai  penghasil  madu  merupakan  suatu  hal tertinggi  di  antara  jenis-jenis  lebah  madu  lokal lainnya.  Madu  hutan (Apis  dorsata) umumnya ditemukan  di  hutan,  meskipun  terkadang dapat    pula  ditemukan  di  kota  atau  di  daerah sekitar hutan.
Madu  hutan  biasa  digunakan  sebagai campuran  pada  jamu  tradisional  untuk meningkatkan  khasiat  penyembuhan  penyakit seperti  infeksi  pada  saluran  pencernaan  dan pernafasan,  serta  meningkatkan  kebugaran tubuh.  Madu  hutan  juga  memiliki  kemampuan untuk  meningkatkan  kecepatan  pertumbuhan jaringan  baru  akibat  luka.  Madu  hutan  yang berasal  dari  sentra  madu  hutan  Kapuas  Hulu merupakan produk madu pertama di Indonesia yang  mendapatkan  sertifikat  organik  dari BioCert (Purwanto, 2007).
Berdasarkan uji daya antioksidan dengan menggunakan  metode  DPPH  (1-diphenyl-2- picrylhydrazil),  madu  hutan  teridentifikasi positif  sebagai  antioksidan.  Madu  hutan mengandung  senyawa  aktif  saponin,  alkaloid, fenolik,  flavonoid,  triterpenoid  dan  glikosida. Alkaloid  dalam  bidang  kesehatan  dapat digunakan  untuk  mengobati  infeksi  mikroba, saponin dapat digunakan sebagai zat antibiotik pada  jamur,  anti  influenza  dan  peradangan tenggorokan,  triterpenoid  dapat  digolongkan menjadi  empat  golongan  senyawa  yaitu triterpena,  steroid,  saponin  dan  glikosida  yang berkhasiat menurunkan kadar kolesterol dalam darah, beberapa ada juga yang beracun, sebagai antibiotik  dan  fungisidal.  Selain  itu,  golongan senyawa  fenolik,  seperti  flavonoid,  tanin  juga dapat  berfungsi  sebagai  antioksidan  (Sholihah, 2013).  Kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  ialah suatu metode pemisahan komponen menggunakan  fase  diam  berupa  plat  dengan lapisan  bahan  adsorben  inert.  Kromatografi lapis  tipis  (KLT)  merupakan  salah  satu  jenis kromatografi  analitik  dan  sering  digunakan untuk identifikasi awal.

## METODE Alat dan bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian yaitu  timbangan  analitik,  corong  Buchner, hot plate , penangas air, cawan porselin, gelas ukur,
Erlenmeyer,  kertas  saring,  pipa  kapiler,  lampu ultraviolet  254  dan  366  nm,  seperangkat  alat Kromatografi  Kolom  Gravitasi  (KKG)  dan seperangkat  alat  spektrofotometri  UV-Vis. Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  madu yang  diambil  sebanyak  500  gram,  etanol  96%, aquadest, n -heksana, HCl, logam Mg, etil asetat, pelarut n -butanol,  asam  asetat,  plat  KLT, ammonia,  metanol   (Puspitasari  dan  Suwijiyo, 2015).

## Prosedur kerja Kromatografi Lapis Tipis Ekstraksi dan fraksinasi
Sampel  madu  hutan  sebanyak  500  gram ditambahkan  etanol  96%  sebanyak  3750  mL sebagai  pelarut  untuk  proses  maserasi.  Di  awal proses  maserasi  dilakukan  pengadukan  dan dilanjutkan dengan perendaman selama 5 hari. Untuk  1  hari  digunakan  etanol  96%  sebanyak 750  mL,  kemudian  dilakukan  penyaringan dengan corong Buchner dan kertas saring untuk memisahkan  filtrat  dari  ampas  ke  dalam  labu Erlenmeyer.  Filtrat  diuapkan  hingga  diperoleh ekstrak  kental  dan  dihitung  persen  rendemen ekstrak (Puspitasari dan Suwijiyo, 2015).
Kemudian  ditimbang  20  gram  ekstrak etanol  96%  kental,  dituangkan  ke  dalam Erlenmeyer  dan  ditambah  air  panas  dengan suhu  40 0 C  sebanyak  400  mL  dan  diaduk. Suspensi  dimasukkan  dalam  corong  pisah  dan ditambah  etil asetat  400  mL dengan perbandingan  (1:1).  Dilakukan  penggojogan kurang  lebih  1  menit,  kemudian  didiamkan. Penambahan etil asetat dilakukan sebanyak dua kali fraksinasi hingga diperoleh fraksi etil asetat yang  bening,  kemudian  dipekatkan  sehingga diperoleh  ekstrak  kental  dan  dihitung  persen rendemen  ekstrak  (Puspitasari  dan  Suwijiyo, 2015).

## Skrining Fitokimia
Uji  spesifik  golongan  senyawa  flavonoid dilakukan terhadap ekstrak kental madu hutan. Untuk mengetahui adanya kandungan senyawa flavonoid pada madu hutan, maka dilakukan uji fitokimia, sebagai berikut:
1. Shinoda test Sebanyak 1 mL sampel ditambahkan  alkohol kemudian    bubuk    Mg    dan  3  tetes  HCl menghasilkan  warna  merah-kekuningan (flavon), merah muda (flavanol), merah (2,3 dihidroflavanol),  ungu  (xanthone)  (Hanani, 2014).
2. Tes H 2 SO 4
Sebanyak 1  mL  sampel ditambahkan 3  tetes asam  sulfat  pekat  menghasilkan  larutan kuning  tua,  larutan  merah  kebiruan,  merah kekuningan – merah (flavanon) (Hanani,
2014).
Setelah  itu  analisis  dengan  KLT  dilakukan menggunakan eluen n -butanol, asam asetat dan air  dengan  perbandingan  (BAA)  (3:1:1).  Bejana
kromatografi  sebelum  digunakan  untuk  elusi, dibuat  fase  gerak  sebanyak  20  mL  dan  bejana dijenuhkan  dengan  fase  gerak  secukupnya. Setelah  kering  plat  KLT  dimasukkan  ke  dalam bejana.  Bila  fase  gerak  mencapai  batas  yang ditentukan,  plat  diangkat  dan  noda  yang terbentuk  diamati  di  bawah  sinar  UV  254  nm dan UV 366 nm  (Puspitasari dan Suwijiyo, 2015).

## Analisis data
Hasil  analisis  uji  fitokimia  pada  isolat yang  positif  menunjukkan  dugaan  adanya senyawa  flavonoid  dan  dianalisis  lebih  lanjut dengan  metode  Kromatografi  Lapis  Tipis. Analisis dilakukan dengan cara memperhatikan adanya bercak atau noda pada lempeng silika di bawah  sinar  UV  254  nm  dan  366  nm  serta menghitung  nilai  Rf-nya.  Nilai  Rf  terhitung dikalikan  100  dan  dibandingkan  dengan golongan senyawa flavonoid.

## Prosedur kerja Spektrofotometri UV-Vis Ekstraksi
Sebanyak 250 mL sampel madu dimaserasi dengan  metanol  sebanyak  kira-kira  1  Liter  atau sampai  semua  sampel  madu  terendam  dalam pelarut  selama  24  jam,  dimaserasi  kembali dengan pelarut yang baru diulangi sebnyak 3 kali (Asih et al. , 2012). Selanjutnya filtrat disaring dan diuapkan  pada  tekanan  rendah  menggunakan rotary  evaporator dan  pemanasan  di  atas water bath dengan  suhu  50 ͦ C  hingga  diperoleh  ekstrak kental metanol (Prestianti, Maswati dan
Sappewali,  2018).  Kemudian  dihitung  rendemen ekstrak dengan rumus : Rendemen ekstrak (%) = x 100%

## Skrining Fitokimia
Pemeriksaan  golongan  flavonoid  dapat  dilakukan dengan uji warna yaitu :
1. Test Wilstatter
Beberapa  mililiter  sampel  dalam  alkohol ditambahkan  2-4  tetes  larutan  HCl  dan  2-3 potong kecil logam Mg. Perubahan warna yang terjadi  diamati  dari  kuning  tua  menjadi oranye.
2. Test dengan NaOH 10% Beberapa  mililiter  sampel  dalam  alkohol ditambahkan  2-4  tetes  larutan  NaOH  10%. Perubahan  warna  yang  terjadi  diamati  dari kuning hingga coklat.
3. Test dengan H 2 SO 4 (pekat) Beberapa  mililiter  sampel  dalam  alkohol ditambahkan  2-4  tetes  larutan  H 2 SO 4 (pekat). Hasil  positif  jika  perubahan  warna  menjadi warna  kuning,  merah  atau  coklat  (Munte, Runtuwene dan Citraningtyas, 2015).

## Kromatografi Lapis Tipis
Pemisahan  dengan  KLT  digunakan  untuk mencari  fase  gerak  yang  terbaik  yang  akan
digunakan  dalam  kromatografi  kolom.  Fase  diam yang  digunakan  pada  KLT  adalah  silika  gel  60  F 254 dan sebagai fase gerak digunakan n - heksan : etanol  (8:2), n -heksan  :  etil  asetat  (8:2),  BAA (3:1:1),  dan  BAA  (4:1:5)  sebanyak  20  mL.  Bejana kromatografi  sebelum  digunakan  untuk  elusi terlebih dahulu dijenuhkan dengan fase geraknya. Sedikit  ekstrak  positif  flavonoid  dilarutkan dengan  pelarutnya  (eluen  yang  akan  dipakai) kemudian ditotolkan pada plat kromatografi lapis tipis  dengan  menggunakan  pipa  kapiler.  Setelah kering  lalu  dimasukkan  dalam  bejana.  Bila  fase gerak  telah  mencapai  batas  yang  ditentukan,  plat diangkat,  dan  dikeringkan  di  udara  terbuka. Sebagai  penampak  noda  digunakan  asam  sulfat. Noda  yang  terbentuk  diamati  dengan  lampu  UV 254  nm  dan  366  nm  (Mabruroh,  Sri  dan Ersanghono,  2019;  Puspitasari  dan  Suwijiyo, 2015;  Suhendi,  Landyyun  dan  Dedi  2011; Theodora, Gunawan dan Swantara, 2019).

## Kromatografi Kolom
Sebanyak 20 gram silika gel 60 dikeringkan dengan  oven  pada  suhu  105 ͦ C  selama  4  jam, dinginkan  di  dalam  desikator.  Setelah  dingin, kemudian  dimasukkan  pelarutnya  sambil  diaduk hingga  menjadi  bubur.  Pelarut  dimasukkan  ke dalam  kolom  sampai  hampir  penuh  dalam keadaan kran kolom tertutup. Dimasukkan bubur sedikit  demi  sedikit  ke  dalam  kolom  sampai seluruh  bubur  masuk  ke  dalam  kolom.  Setelah bubur  masuk,  fase  diam  ini  dielusi  hingga homogen  (kolom  ini  didiamkan  selama  1  hari sehingga diperoleh pemampatan yang sempurna). Sementara  itu  sampel  yang  telah  disuspensikan dengan pelarutnya kemudian dimasukkan dengan hati-hati  melalui  dinding  kolom  sambil  keran dibuka.  Elusikan  menggunakan  pelarut  yang memberikan  pemisahan  terbaik  pada  Kromato- grafi  Lapis  Tipis.  Fase  gerak  dimasukkan  secara terus-menerus  hingga  terjadi  pemisahan,  dijaga pelarut jangan sampai habis dan ditampung hasil dalam botol vial tiap 5 mL.

## Analisis dengan Spetrofotometri UV-Vis
Fraksi  hasil  dari  Kromatografi  kolom dianalisis secara spektrofotometri UV-Vis. Sebanyak 2 mL isolat dimasukkan ke dalam  kuvet dan dianalisis agar menunjukkan data adsorbansi maksimal  pada  panjang  gelombang  UV-Visibel (200-800  nm).  Hasil  analisis  adalah  berupa  data panjang gelombang UV-Visibel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Kromatografi Lapis Tipis
Analisis golongan senyawa flavonoid baik dengan test  reaksi  kimia  dan  KLT  ini  bertujuan  untuk mengidentifikasi kandungan senyawa metabolit sekunder  khususnya  flavonoid  yang  terdapat dalam sampel. Adapun hasil yang didapat pada uji spesifik kandungan senyawa flavonoid dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji senyawa flavonoid
Sampel Nama pereaksi Teori Hasil pengamatan Kesimpulan Gambar Fraksi etil asetat madu hutan Test Shinoda Merah-kekuningan (flavon), Merah muda (flavanol), Merah (2,3 dihidroflavanol), Ungu ( xanthone ) Terbentuk warna merah kekuningan Terdeteksi senyawa flavonoid Tes H2SO4 Kuning tua, Merah-kebiruan, Merah-kekuningan (flavanon) Terbentuk warna merah kekuningan Terdeteksi senyawa flavonoid
Pada tabel  1 dapat dilihat hasil uji senyawa flavonoid fraksi etil  asetat untuk mengetahui ada tidaknya  senyawa  flavonoid.  Uji  senyawa flavonoid dilakukan  dengan cara test Shinoda dan test  H 2 SO 4 .    Berdasarkan  perubahan  yang  terjadi diduga  fraksi  etil  asetat  mengandung  senyawa flavonoid.  Berdasarkan  hasil  uji  senyawa  fla- vonoid  pada  metode  I  yang  dilakukan  dengan menambahkan  sedikit    Mg    dan  3    tetes    HCl pada  ekstrak  etil  asetat,  sampel  dinyatakan positif  terdeteksi  senyawa  flavonoid  karena reaksi yang  terjadi menghasilkan warna merah- kekuningan (flavon) (Hanani, 2014).
Hasil    uji    senyawa    flavonoid    pada metode  II  dengan  menambahkan  H 2 SO 4 pada
ekstrak  etil  asetat  juga  menunjukkan  positif terdeteksi  senyawa  flavonoid  karena  reaksi yang  terjadi  menghasilkan  warna  kuning  tua (flavanon) (Hanani, 2014).
Selanjutnya  identifikasi  senyawa  flavor- noid  dimulai  dengan  pengelusian  pada  ekstrak fraksi  etil  asetat  madu  hutan  yang  positif flavonoid dengan kromatografi lapis tipis (KLT) menggunakan  eluen n -butanol,  asam  asetat, dan  air  dengan  perbandingan  (3:1:1)  dan  fase gerak  sebanyak  20mL  dan  penampak  noda ammonia. Bercak yang muncuk diamati dengan lampu UV 245 nm dan 366 nm. Setelah semua diuji  KLT  diperoleh  hasil  seperti  yang ditunjukkan pada tabel 2.
Tabel 2. Nilai RF (x100) hasil uji KLT Replikasi Nilai Rf pengamatan (x 100) Nilai Rf pembanding (x 100) Hasil Pengamatan pendekatan Replikasi 1 78 78 Luteolin Dihidrokuersetin Replikasi 2 73 73 Trisin Replikasi 3 61 61 Isolikuiritigenin-4 glukosida
Berdasarkan  hasil  uji  KLT  pada  masing- masing  replikasi,  nilai  Rf  (x  100)  jenis  senyawa flavonoid tersebut adalah Luteolin (Rf x 100 =78) dari jenis flavon, Dihidrokuersetin (Rf  x 100 =78) dari jenis flavanon, Trisin (Rf x 100 =73) dari jenis flavon, dan Isolikuiritigenin-4 glukosida (Rf x 100 = 61) dari jenis khalkon (Harborne, 1996). Flavon merupakan flavonoid yang sering ditemukan pada daun,  buah  dan  bunga  dalam  bentuk  glukosida. Flavon  berfungsi  sebagai  antioksidan  atau penangkal  radikal  bebas  (Harbone,  1987). Flavanon  merupakan  flavonoid  yang  terdapat pada akar,  batang, bunga,  buah, biji, dan  rizoma.
Flavanon berfungsi sebagai antioksidan, mengurangi  aritmia  jantung  dan  ukuran  infark pada  tikus,  antiinflamasi,  anti  jamur  dan antibakteri  (Nicolas,  2017).  Khalkon  merupakan senyawa  prekursor  dari  golongan  flavonoid  dan merupakan  intermediet  penting  dalam  sintesis organik.  Khalkon  berfungsi  sebagai  antibakteri, antiplatelet, antiulceratif, antimalaria, antikanker, antiviral,  antileismanial,  antioksidan,  antihiper- glikemik, immunomodulator, antiinflamasi.

## Spektrofotometri Uv-Vis Ekstraksi
Sampel  madu  sebanyak  250  mL  (350,61  gram) dimaserasi  dengan  pelarut  metanol  sebanyak 2200  mL,  akan  terbentuk  lapisan  pada  bagian dasar  wadah  setelah  24  jam.  Diperoleh  hasil maserat  berwarna  kuning  jerami  sebanyak  2000 mL,  dan  didapatkan  ekstrak  kental  berwarna
coklat keemasan sebanyak 233,87 gram dengan % randemen  ekstrak  sebesar  66,70  %  yang  artiya tiap  250  ml  madu  dapat  menghasilkan  sebanyak 233,87  gram  ekstrak  kental.  Hasil  ekstrak  yang didapat  kemudian  digunakan  untuk  identifikasi selanjutnya.
Gambar 1. Hasil uji KLT
Tabel 3. Hasil skrining fitokimia madu hutan Kapuas Hulu
Pereaksi Tanda Positif teoritis Hasil pengamatan Kesimpulan H2SO4 Kuning tua (flavon), merah kebiruan (khalkon, auron), jingga merah (flavonon), coklat (isoflavon) Coklat + (isoflavon) NaOH 10 % Terbentuk warna kuning sampai coklat (isoflavon) (Harbone, 1987) Kuning + (isoflavon) Wilstatter  Warna jingga (flavon), merah muda
(flavonol), kuning (flavonon) merah
(2,3 dihidroflavon) dan ungu ( xanthone ) Coklat muda - (negatif flavonoid)
Pada  tabel  3  ditunjukkan  bahwa  hasil  uji fitokimia  flavonoid  ekstrak  metanol  madu  hutan Kapuas  Hulu  positif  mengandung  senyawa flavonoid.  Ekstrak  madu  hutan  diperkirakan mengandung  senyawa  flavonoid  golongan  iso- flavon  karena  memberikan  perubahan  warna kuning  pada  perekasi  NaOH  10  %  hingga  coklat pada perekasi H 2 SO 4 (Harborne, 1996).

## Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi  Lapis  Tipis  digunakan  untuk menentukan eluen terbaik untuk pemisahan pada proses KKG. Eluen terbaik yang didapat yaitu fase gerak  campuran  BAA  (4:1:5),  karena  meng- hasilkan  pemisahan  noda  yang  terbaik  yang kemudian  digunakan  untuk  fase  gerak  dalam kromatografi kolom.
Gambar 2. Eluen terbaik pada proses KKG
K romatografi Kolom Gravitasi Pemisahan  terhadap  ekstrak  metanol madu  hutan  untuk  mengidentifikasi  senyawa flavonoid  menggunakan  kromatografi  kolom dengan fase diam silika gel 60 yang bersifat polar sehingga akan menyerap senyawa polar yang lebih kuat  daripada  senyawa  yang  bersifat  semi  polar dan non polar. Fase geraknya menggunakan eluen terbaik  hasil  kromatografi  lapis  tipis  yang  BAA dengan  perbandingan  (4:1:5).  Sampel  yang digunakan  sebanyak  15  gram  ekstrak  dengan panjang  kolom  setinggi  30  cm  dengan  diameter kolom  2  cm.  Pemisahan  dengan  kromatografi kolom  menghasilkan  20  botol  vial  dengan perbedaan  warna  yang  berbeda.  Eluat  yang digunakan  untuk  identifikasi  selanjutnya  adalah
pada  botol  3-10  karena  memiliki  warna  yang pekat.

## Hasil Spektofotometri UV-Vis
Berdasarkan gambar 3, menunjukkan bahwa pada isolat 8 terdapat 2 pita serapan pada panjang gelombang  235,4  nm  (pita  II)  dan  serapan  pada panjang  gelombang  381,9  nm  (pita  I).  Dari spektrum  yang  diperoleh  diduga  isolat  ini mengandung senyawa khalkon atau auron, karena kedua  senyawa  tersebut  memberikan  rentang serapan    pada  pita  II    230-270  nm  dan  340-390 nm    pada  pita  I  (khalkon)  dan  rentang  serapan spektrum  pita  II  230-270 nm  dan  380-430  nm pada pita I (auron) (Markham, 1988).
Gambar 3. Hasil spektrum madu hutan

## Tabel 4. Hasil spektrum madu hutan
Standar rentang serapan spektrum
Uv-Vis Flavonoid (Markham, 1988)
Ket. Hasil  λ  maks yang didapat Ket. Pita II (nm) Pita I (nm) Pita II (nm) Pita I (nm) 230-270 (kekuatan rendah) 230-270 (kekuatan rendah) 340-390 380-430 Khalkon auron 235,40 nm Abs.= 3,358 381,90 nm Abs.= 0,039 Khalkon atau auron
Dari  spektrum  yang  diperoleh  diduga  isolat  ini mengandung senyawa khalkon atau auron, karena kedua  senyawa  tersebut  memberikan  rentang serapan  pada  pita  II    230-270  nm  dan  340-390 nm  pada  pita  I  (khalkon)  dan  rentang  serapan spektrum  pita  II  230-270  nm  dan  380-430  nm pada pita I (auron) (Markham, 1988).

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan bahwa  senyawa  flavonoid  jenis  flavanon  yang berfungsi  sebagai  antioksidan,  antiinflamasi, anti  jamur  dan  antibakteri,  dan  jenis  flavon yang  berfungsi  sebagai  antioksidan  atau penangkal  radikal  bebas,  serta  jenis  khalkon yang berfungsi sebagai antibakteri, antiplatelet, antiulceratif,  antimalaria,  antikanker,  antiviral, antileismanial,  antioksidan,  antihiperglikemik, immunomodulator, antiinflamasi.

## DAFTAR PUSTAKA
Asih, I.A.R.A., Ketut, R., Ida, B.S., 2012, Isolasi dan identifikasi golongan flavonoid dari madu kelengkeng ( Nephelium longata L . ), Jurnal kimia, 6(1): 72-78.
Hanani  E.,  2014, Analisis  fitokimia ,  Penerbit  Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Harborne,  J.B.,  1996, Metode  fitokimia ,  Penerbit  ITB,
Bandung.
Kuntadi,  A.H.,  2001, “ Uji  teknik  pemanenan  lebah  hutan Apis  dorsata  (Hymenoptera  :  Apidae) ”, Prosiding  Seminar Nasional  PEI  :  Pengelolaan  serangga  yang  bijaksana menuju  optimasi  produksi  cabang  Bogor ,  Bogor,  6 November 2001.
Mabruroh,  E.Q.,  Sri,  M.,  Ersanghono,  K.,  2019,  Isolasi  dan identifikasi  senyawa flavonoid  dari  daun murbei  ( Morus  alba Linn ), Indonesian Journal of Chemical Science, 8 (1): 16-22.
Markham,  K.R.,  1988, Cara  mengidentifikasi  flavonoid , diterjemahkan  oleh  Kosasih  Padmawinata,  Penerbit  ITB, Bandung, 15.
Munte,  L.,  Runtuwene,  M.R.,  dan  Citraningtyas,  G.,  2015, Aktivitas antioksidan dari ekstrak daun prasman ( Eupatorium triplinerve Vahl.), Pharmacon  Jurnal  Ilmiah  Farmasi, 4(3): 41-50.
Nicolas,  V.,  Thomas,  P.,  Rodnay,  S.,  Eric,  G.,  Elanie,  M.R., 2017, Antifungal activities of wood extractives, Fungal Biology Reviews , 3: 113-123.
Prestianti,  I.,  Maswati,  B.,  Sappewali,  S.,  2018,  Uji  aktivitas antibakteri  ekstrak  sarang  lebah  ( Apis  dorsata )  terhadap pertumbuhan Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli dan
Pseudomonas  aeruginosa , Jurnal  Penelitian  Kimia, 14(2):
314-322.
Purwanto, A., 2007, Sertifikasi madu hutan organik pertama di Indonesia, Buletin Organic , 4(16) :13-14.
Puspitasari,  A.D.  dan  Suwijiyo,  P.,  2015,  Comparison  of methods of producing bee propolis purified extract based on total flavonoid content using rutin as standard, Traditional Medicine Journal , 20(2): 76-81.
Sholihah,  J.,  2013, “ Aktivitas  antibakteri  dan  antioksidan tiga  jenis  madu  hutan  Indonesia ”, Skripsi ,  Institusi Pertanian  Bogor,  Bogor,  (Diakses  Pontianak,  17  November 2019).
Suhendi,  A.,  Landyyun,  R.S.,  Dedi,  H.,  2011,  Isolasi  dan identifikasi flavonoid dari daun dewandaru ( Eugenia uniflora L .), Pharmacon, 12(2): 73-81.
Theodora, C.T., Gunawan, I W.G.  dan Swantara, I M.D.,  2019, Isolasi  dan  identifikasi  golongan  flavonoid  pada  ekstrak  etil asetat  daun  gedi  ( Abelmoschus  manihot L.), Journal  of Chemistry, 13 (2): 131-138.
Ungerer,  T.,  1985, Pedoman  teknis  peternakan  madu hutan ,  Lembaga  Penelitian  Institusi  Pertanian  Bogor, Bogor.
Yatap,  H.,  1998, The  development  of  honey  harvesting  of the  giant  honeybee  (A.  dorsata)  at  Seginim  subdistrict, South  Bengkulu  District,  Bengkulu  Province,  Indonesia , Bogor Agricultural University, Bogor.