## KOMUNIKASI RINGKAS

## EKSTRAKSI  DAN  KARAKTERISASI  KOLAGEN  LARUT ASAM  DARI KULIT  IKAN  NILA  (Oreochromis niloticus)
Extraction and Characterization of Acid-Soluble Collagen from Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) Fish Skin
Nurhayati 1* , Tazwir 1 , dan Murniyati 1
1 Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan, KKP. Jl. K.S. Tubun Petamburan VI, Jakarta Pusat 10260 * Korespondensi Penulis: n_hay04@yahoo.com
Diterima: 5 November 2012, Disetujui: 29 Mei 2013

## ABSTRAK
Kulit ikan nila dapat diolah menjadi kolagen yang dapat meningkatkan nilai tambah kulit ikan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh perbedaan konsentrasi asam terhadap karakteristik kolagen yang dihasilkan. Ekstraksi kolagen dilakukan melalui perendaman dalam asam asetat dengan dua variasi konsentrasi yaitu 0,5 dan 1,5 M. Parameter yang diamati yaitu gugus fungsi, komposisi asam amino, suhu denaturasi, dan kemampuan mengembang kolagen. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan asam asetat 0,5 M memiliki komposisi asam amino dan suhu denaturasi  yang lebih tinggi dibandingkan perlakuan asam asetat 1,5 M. Namun demikian, kolagen pada perlakuan asam asetat 1,5 M ternyata memiliki kemampuan mengembang lebih cepat (15 menit) dibandingkan perlakuan asam asetat 0,5 M (60 menit). Sementara itu, spektra FTIR menunjukkan kolagen yang diperoleh dari kedua perlakuan memiliki karakteristik yang sama. Berdasarkan karakteristik kolagen yang diperoleh dengan dua perlakuan ekstraksi, perlakuan asam asetat 0,5 M menunjukkan hasil yang lebih baik dibanding 1,5 M.
KATA KUNCI: kulit ikan nila, kolagen, ekstraksi, karakterisasi

## ABSTRACT
Fish skin of nile tilapia can be improved its added value by processing to be collagen. This research aims to know the effect of different acid concentration on  collagen characteristics produced. Collagen extraction was conducted by soaking in acetic acid with two concentration of 0.5 and 1.5 M. Parameters observed were functional groups, amino acid composition, denaturation temperatures, and swelling. The results showed that the treatment of 0.5 M acetic acid had amino acid compositions and denaturation temperatures higher than that of 1.5 M acetic acid. However, collagen with 1.5 M acetic acid had faster swelling (15 minutes) compared to 0.5 M acetic acid (60 minutes). Meanwhile, the FTIR spectra showed that collagen obtained from both treatments had the same characteristics. Based on the collagen characteristics produced 0.5 M acetic acid was better than 1.5 M for collagen extraction.
KEYWORDS: fish skin of nile tilapia, collagen, extraction, characterization

## PENDAHULUAN
Ikan nila ( Oreochromis niloticus ) merupakan salah satu produk perikanan budidaya yang mengalami kenaikan volume produksi setiap tahunnya dengan kenaikan rata-rata sebesar 24,76% dari tahun 2007– 2011 (KKP, 2011). Ikan nila kini banyak diolah menjadi filet ikan yang merupakan bahan baku industri pengolahan produk perikanan. Pengolahan filet ikan
nila menghasilkan hasil samping berupa kulit ikan dengan rendemen sebesar 8,7% dari berat total ikan (Peranginangin et al., 2006). Dengan nilai rendemen tersebut, produksi ikan nila pada tahun 2011 sebesar 481.440 ton diperkirakan akan menghasilkan 41.885 ton kulit ikan nila. Pada umumnya kulit ikan nila ini diekspor ke beberapa negara ataupun dipasarkan lokal sebagai kerupuk kulit. Beberapa pemanfaatan kulit ikan nila diantaranya sebagai kulit tersamak untuk
bahan kerajinan seperti sepatu, sandal, dan dompet (Murniyati et al., 2012), pembuatan gelatin sebagai bahan pangan dan farmasi (Peranginangin, 2007). Lebih dari itu, kulit ikan nila juga dapat diolah menjadi kolagen yang dapat meningkatkan nilai tambah kulit ikan.
Pada umumnya, kolagen berasal dari bahan baku tulang dan kulit mamalia seperti sapi dan babi (Santos et al ., 2013). Bahan baku dari babi tidak dibenarkan bagi pemeluk Agama Islam dan Yahudi, sementara penggunaan tulang dan kulit sapi menjadi persoalan tersendiri bagi pemeluk Agama Hindu serta menimbulkan kekhawatiran karena adanya isu penyakit sapi gila atau mad cow disease (Jongjareonrak et al ., 2005; Kasankala et al ., 2007). Oleh sebab itu, pengolahan kolagen dari kulit ikan sangatlah berguna untuk mengatasi permasalahan tersebut (Kittiphattanabawon et al ., 2005).
Kolagen merupakan komponen struktural utama jaringan ikat putih ( white connective tissue ) yang meliputi hampir 30% total protein pada tubuh. Hingga kini terdapat sekitar 25 tipe kolagen yang telah diidentifikasi, yaitu tipe I sampai XXV (Olsen et al ., 2003). Tipe kolagen yang teridentifikasi pada ikan hanya tipe I dan V. Kolagen tipe I terdapat pada kulit, tulang, dan sisik ikan (Nagai & Suzuki, 2000), sementara kolagen tipe V terdapat pada jaringan ikat dalam kulit, tendon dan otot ikan yang juga mengandung kolagen tipe I (Sato et al ., 1989). Kolagen dapat diaplikasikan pada industri makanan, kosmetik, biomedis dan industri farmasi. Pada kosmetik, kolagen digunakan untuk mengurangi keriput pada wajah atau dapat disuntikkan ke dalam kulit untuk menggantikan jaringan kulit yang telah hilang. Pada biomedis, kolagen digunakan sebagai s ponges untuk luka bakar, benang bedah, agen hemostatik, penggantian atau substitusi pada pembuluh darah dan katup jantung tiruan. Pada industri farmasi kolagen digunakan sebagai drug carrier yaitu : mini-pellet dan tablet untuk penghantaran protein, formulasi gel pada kombinasi dengan liposom untuk sistem penghantaran terkontrol, bahan pengkontrol untuk penghantaran transdermal, dan nanopartikel untuk penghantaran gen (Lee et al ., 2001).
Beberapa penelitian kolagen hasil samping olahan ikan telah banyak dilakukan. Kulit ikan dilaporkan mengandung kolagen dengan nilai rendemen yang bervariasi antara 11–63% tergantung dari jenis ikan, bahan pengekstrak, dan teknik ekstraksi kolagen (Nagai & Suzuki, 2000). Di Indonesia, terdapat beberapa penelitian mengenai kolagen dari ikan, diantaranya Ali et al . (2011) yang telah melakukan ekstraksi kolagen  dari sisik ikan kakap merah, dan Peranginangin et al . (2008) yang juga telah melakukan ekstraksi kolagen dari kulit ikan kerapu. Sementara
itu, pada penelitian ini digunakan kulit ikan nila sebagai bahan baku kolagen dengan perlakuan perbedaan konsentrasi asam pada tahap ekstraksinya. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh konsentrasi asam yang berbeda terhadap karakteristik kolagen yang dihasilkan.

## BAHAN DAN METODE

## Bahan
Bahan utama penelitian ini adalah hasil samping perikanan berupa kulit ikan nila ( Oreochromis niloticus) yang diperoleh dari daerah Semarang, Jawa Tengah. Kulit ikan selanjutnya dibawa ke Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan dengan cara menempatkannya dalam coolbox dan diberi serpihan es. Kulit ikan dicuci dengan air dingin (5°C) selama 10 menit, kemudian dipotong-potong ukuran 2–5 cm dengan menggunakan gunting. Kulit yang telah bersih disimpan dalam cold storage sampai tahap ekstraksi dilakukan. Penghilangan protein non kolagen dilakukan dengan perendaman kulit dalam larutan 0,8 M NaCl 1:5 (b/v) selama 3 hari, diikuti pencucian dengan air mengalir.

## Metode

## Ekstraksi kolagen
Ekstraksi kolagen dilakukan dengan perendaman dalam asam asetat mengacu pada Muyonga et al . (2004 a ) yang dimodifikasi. Kolagen diekstrak menggunakan asam asetat dengan konsentrasi 0,5 dan 1,5 M (1:10 b/v) pada suhu 4°C selama 3 hari disertai dengan pengadukan secara berkala. Ekstraksi diulang dengan pereaksi dan kondisi yang sama, kemudian filtrat yang diperoleh disentrifus dengan kecepatan 10.000 rpm selama 30 menit. Presipitasi kolagen dilakukan dengan penambahan NaCl ke dalam supernatan hingga konsentrasi 0,9 M, lalu disentrifus kembali. Pemurnian kolagen dilakukan melalui pelarutan kembali dengan asam asetat lalu dipresipitasi kembali seperti diatas. Kolagen basah dikeringkan dengan freeze drier sehingga diperoleh kolagen kering. Penelitian dilakukan dengan 3 kali ulangan.

## Fourier Transform Infra-Red
Karakterisasi gugus fungsi kolagen dilakukan menggunakan FTIR ( Fourier Transform Infra-Red ) Perkin Elmer Spectrum One. Gugus-gugus fungsi yang diperlihatkan pada spektrum kolagen digunakan untuk menentukan pola ikatan silang ( cross-linking )
Ekstraksi dan Karakterisasi Kolagen Larut Asam dari Kulit Ikan Nila (Oreochromis niloticus)     (Nurhayati et al.)
yang terjadi sehingga perubahan pada stuktur sekunder kolagen dapat dipelajari (Muyonga et al ., 2004 b ). Sebanyak 2 mg Kolagen dan 200 mg KBr digerus hingga homogen dan diletakkan pada alat pencetak disk, kemudian divakum untuk menghilangkan udara pada disk. Disk yang telah dicetak dimasukkan kedalam alat FTIR kemudian diukur pada panjang gelombang 400 cm-1 sampai 4.000 cm-1, kemudian spektrum IR akan muncul.

## Analisis Asam Amino
Karakterisasi jenis asam amino dilakukan untuk mengetahui jenis asam amino yang terdapat pada kolagen (Dunn, 2006). Instrumentasi yang digunakan yaitu HPLC ( High Performance Liquid Chromatography ) Waters 1525 dengan kolom Waters Bondapak NH 2 3,9 mm x 300 mm dan fasa gerak yaitu asetonitril : air (60:40). Standar asam amino yang digunakan pada analisis ini terdiri dari 15 jenis asam amino. Sejumlah 100 mg sampel kolagen ditimbang dan dimasukkan ke dalam tabung ulir dan ditambahkan 10 ml HCl 6 N. Sampel dialiri gas N 2 lalu dimasukkan ke dalam oven 110°C selama 22 jam lalu diangkat, disaring, dan diencerkan dalam labu takar 50 ml. Ambil 5 ml larutan sampel pada labu dan diuapkan 50°C selama 15 menit, dan diencerkan dalam labu 25 ml. Selanjutnya dilakukan derivatisasi, yaitu sampel sebanyak 10 ì l ditambahkan 70 ì l AccQ-Fluor Borate Buffer dan 20 ì l AccQ Fluor, vortex, biarkan ± 1 menit pada suhu kamar, lalu di masukkan dalam oven 55°C selama 10 menit.

## Suhu Denaturasi
Penentuan suhu denaturasi kolagen dilakukan sesuai metode  Kittiphattanabawon et al . (2005) dengan sedikit modifikasi. Pengukuran dilakukan dengan viskometer Brookfield LVF 88883 menggunakan spindel (No. 1) pada kecepatan 60 rpm.
kurva suhu denaturasi diperoleh dengan mengukur viskositas larutan pada beberapa temperatur dari 25°C sampai 45°C. Temperatur dinaikkan secara bertahap. Temperatur denaturasi ditentukan sebagai temperatur dimana nilai viskositas berubah menjadi setengahnya.
Fraksi viskositas = viskositas yang diukur - viskositas minimum viskositas maksimum – viskositas minimum

## Kemampuan Mengembang (Swelling)
Uji kemampuan mengembang dilakukan dengan merendam kolagen kering ke dalam buffer fosfat pH 5,8 (British Standard 757, 1975). Penimbangan dilakukan terhadap kolagen sebelum dan sesudah perendaman pada interval waktu 15 menit. Indeks swelling diukur dengan rumus:
Indeks Swelling =    (W2 – W1) W1
Keterangan: W1 = Berat kolagen awal W2 = Berat kolagen setelah direndam dalam buffer

## HASIL DAN BAHASAN

## Gugus Fungsi Kolagen
Kolagen kulit nila dianalisis gugus fungsinya untuk melihat pengaruh konsentrasi asam terhadap karakteristik kolagen (Tabel 1). Spektra yang diperoleh dapat dilihat pada Gambar 1.
Berdasarkan spektrum kolagen yang diperoleh, kedua kolagen mempunyai karakteristik spektra yang sama. Tabel 1 menunjukkan bahwa kolagen dari kulit ikan nila memiliki 5 daerah amida, yaitu amida A, B,
Tabel 1.   Posisi puncak spektra FTIR kolagen Table 1.   FTIR Spectra of collagen peak position
0.5 M 1.5 M 0.5 M 1.5 M Amida A 3279 3283 59.35 58.42 -NH perenggangan Amida B 2928 2932 64.38 65.81 -CH 2 - perenggangan asimetrik Amida I 1659 1659 52.43 50.23 -C=O perenggangan Amida II 1535 1532 55.63 53.90 Ikatan –NH Amida III 1242 1242 60.19 59.97 Ikatan –NH
Daerah/Range Gugus Fungsi/
Functional Groups
Bilangan gelombang/
Wave Number (cm- 1 )
Transmitans/ Transmitans (%)
Gambar 1. Spektum inframerah kolagen kulit ikan nila. Figure 1. Infrared spectrum of nile tilapia skin collagen.
Tabel 2.  Komposisi asam amino kolagen kulit ikan nila
Table 2.  Amino acid composition of nile tilapia skin collagen
I, II, dan III sama halnya dengan penelitian Liu et al . (2007) pada ikan lele. Spektrum kolagen yang dihasilkan dapat dilihat pada Gambar 1. Daerah amida A menunjukkan adanya gugus NH serta menunjukkan adanya ikatan hidrogen. Daerah amida B menunjukkan adanya gugus CH. Daerah amida I menunjukkan adanya gugus C=O yang merupakan struktur
sekunder protein (Muyonga et al ., 2004 a ; Muyonga et al ., 2004 b ).  Daerah amida II menunjukkan adanya ikatan NH dan daerah amida III menunjukkan adanya ikatan N-H yang memperlihatkan adanya struktur heliks (Muyonga et al ., 2004 a ; Muyonga et al ., 2004 b ). Berdasarkan hasil tersebut dapat diketahui bahwa spektrum infrared mengidentifikasikan struktur-
Perlakuan Asam Asetat 0,5 M/
0.5 M  Acetic Acid Treatment Perlakuan Asam Asetat 1,5 M/ 1.5 M  Acetic Acid Treatment Asam aspartat/ Aspartic acid 1.55 0.77 Asam glutamat/ Glutamic acid 2.77 1.38 Serin/ Serine 0.92 0.47 Histidin/ Histidine 0.24 0.12 Glisin/ Glycine 5.32 2.66 Treonin/ Threonine 0.65 0.32 Arginin/ Arginine 2.46 1.21 Alanin/ Alanine 2.79 1.37 Tirosin/ Tyrocine 0.18 0.08 Metionin/ Methionine 0.40 0.20 Valin/ Valine 0.60 0.30 Fenilalanin/ Phenylalanine 0.51 0.27 I-leusin/ I-leucine 0.42 0.27 Leusin/ Leucine 1.09 0.76 Lisin/ Lycine 0.98 0.87 Kandungan/Amount  (%w/w) Jenis Asam Amino/ Type of Amino Acid
struktur pada protein kolagen. Struktur sekunder kolagen adalah struktur protein tiga dimensi yang menggambarkan hubungan antar atom yang dipengaruhi ikatan nonkovalen seperti ikatan hidrogen.
Selain gugus fungsi, komposisi asam amino juga menentukan karakteristik kolagen. Kolagen merupakan protein fibrin (protein berbentuk serabut) yang tersusun atas beberapa asam amino. Pada umumnya glisin menjadi asam amino penyusun kolagen terbanyak (Hwang et al ., 2005; Kittiphattanabawon et al ., 2005; dan Muyonga et al ., 2004 a ). Hal ini sesuai dengan hasil penelitian dimana asam amino glisin mempunyai nilai yang dominan baik pada kolagen dengan perlakuan 0,5 M dan 1,5 M yaitu berturut-turut sebesar 5,32 dan 2,66 %w/w dari total asam amino. Tingginya konsentrasi asam asetat yang digunakan saat ekstraksi ternyata berpengaruh terhadap proporsi asam amino. Asam amino pada kolagen dengan perlakuan asam 1,5 M memiliki proporsi yang lebih rendah dibanding 0,5 M. Hal itu terjadi karena penggunaan asam dengan konsentrasi yang lebih tinggi dapat memicu terjadinya subtitusi ion negatif pada garam dengan ion positif pada asam lebih cepat, sehingga dapat memutuskan struktur protein.

## Suhu Denaturasi
Denaturasi adalah hilangnya struktur tersier dan sekunder dari protein dengan penerapan beberapa tekanan eksternal atau senyawa, seperti asam kuat, basa, pelarut organik (alkohol atau kloroform), dan panas.
Pada Gambar 2 dapat dilihat bahwa viskositas relatif kolagen terus menurun seiring dengan meningkatnya suhu. Pada perlakuan asam asetat 0,5 M, penurunan viskositas relatif paling signifikan terjadi antara suhu 27–29 o C, sedangkan pada perlakuan asam asetat 1,5 M penurunan suhu yang signifikan terjadi antara suhu 25–27 o C. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada kolagen dengan perlakuan asam asetat 0,5 M memiliki suhu denaturasi sebesar 28 o C, lebih tinggi bila dengan perlakuan asam asetat 1,5 M sebesar 26 o C. Nilai suhu denaturasi ini lebih rendah bila dibandingkan dengan penelitian Muyonga et al . (2004 a ) pada kulit ikan nile perch . Tinggi rendahnya suhu denaturasi kolagen disebabkan dari perbedaan habitat tempat ikan berasal dan tingginya kandungan asam amino kolagen (Kittiphattanabawon et al ., 2005; Noitup & Morrisey, 2005). Berdasarkan nilai suhu denaturasi yang diperoleh, pemanfaatan kolagen kulit ikan nila sebaiknya lebih diarahkan untuk sediaan-sediaan farmasi yang dalam pembuatannya tidak memerlukan suhu tinggi, karena dapat menyebabkan kolagen kehilangan sifat fisika, kimia, dan fungsionalnya.

## Kemampuan Mengembang
Kemampuan mengembang atau swelling adalah suatu peristiwa mengembangnya suatu bahan. Kemampuan suatu bahan untuk mengembang dipengaruhi oleh sifat hidrofilisitas bahan tersebut yang ditentukan oleh gugus-gugus hidrofil pada rantai polimernya. Pada swelling test, berat kolagen setelah perendaman dengan buffer fosfat pH 5,8 meningkat
Gambar 2.  Suhu denaturasi kolagen pada perlakuan asam asetat. Figure 2.  Denaturation temperature of collagen in acetic acid treatment.
Suhu/ Temperature (°C) Fraksi Viskositas/ Viscosity Fraction
dengan bertambahnya waktu (Gambar 3). Kolagen dengan 0,5 M asam asetat menghasilkan  penyerapan air yang signifikan pada menit ke-15, namun penyerapan tertinggi terjadi pada menit ke-60. Hal ini disebabkan pada menit ke-15 gugus hidrofil pada kolagen menyerap air dalam jumlah yang besar. Pada menit selanjutnya penyerapan air masih tetap berlanjut. Proses tersebut disebabkan kolagen dalam kondisi hampir jenuh sehingga penyerapan air pada menit ke-120 tidak optimal. Lain halnya dengan kolagen hasil ekstraksi 1,5 M asam asetat yang menunjukkan penyerapan air tertinggi pada menit ke- 15, dan mengalami penurunan pada menit selanjutnya. Hal ini dikarenakan penyerapan air terjadi secara cepat sehingga cepat pula terjadi kejenuhan penyerapan. Kemampuan mengembang kolagen disebabkan karena banyaknya komposisi amino yang bersifat polar dalam kolagen yaitu glisin, serin, treonin, dan  tirosin, yang  memiliki gugus fungsi polar sehingga dapat membentuk ikatan dengan air (Kittiphattanabawon et al., 2005). Proses swelling juga dapat cepat terjadi karena pengaruh permukaan partikel kolagen yang tidak rata. Luas permukaan yang tidak rata dan bergelombang dapat memperluas permukaan kontak dengan air dan memungkinkan terjadinya hidrasi dengan segera. Kolagen dengan perlakuan konsentrasi asam 1,5 M memiliki permukaan yang bergelombang sehingga lebih mudah mengembang.
Pengolahan kulit ikan nila menjadi kolagen merupakan langkah tepat dalam mengatasi lonjakan hasil samping industri pengolahan perikanan sehingga dapat meningkatkan nilai tambah kulit ikan. Kolagen kulit ikan diharapkan dapat mensubstitusi kolagen
Waktu (menit)/ Time (minute)
Indeks Pengembangan/ Swelling Index

## Gambar 3. Kemampuan pengembangan kolagen.
Figure 3. The swelling of collagen.
sapi dan babi yang banyak digunakan dalam industri makanan, kosmetik, biomedis dan farmasi. Ekstraksi kolagen merupakan tahapan penting dalam memperoleh kolagen dengan karakteristik yang sesuai dengan spesifikasi industri. Tinggi rendahnya konsentrasi asam asetat tidak mempengaruhi gugus fungsi dan jenis asam amino kolagen, namun berpengaruh terhadap proporsi jenis asam amino. Kolagen dengan perlakuan asam 0,5 M memiliki proporsi asam amino yang lebih tinggi dibanding perlakuan 1,5 M.  Penggunaan konsentrasi asam yang lebih tinggi ternyata menghasilkan kolagen dengan suhu denaturasi yang lebih rendah, namun mempunyai kemampuan mengembang yang lebih cepat.

## KESIMPULAN
Pada perlakuan asam asetat 0,5 M, kolagen memiliki proporsi asam amino dan  suhu denaturasi yang lebih tinggi dibandingkan perlakuan asam asetat 1,5 M, meskipun kemampuan mengembangnya membutuhkan waktu yang lebih lama. Berdasarkan karakteristik kolagen dapat disimpulkan bahwa penggunaan 0,5 M asam asetat pada ekstraksi kolagen memberikan hasil yang lebih baik dibandingkan 1,5 M asam asetat.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali, M., Noor, N.M., dan Leksono, Y.S. 2010. Ekstraksi kolagen dari sisik ikan kakap merah ( Lutjanus sp.). Prosiding Seminar Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan . British Standard 757. 1975. Sampling and Test of Gelatin
Ekstraksi dan Karakterisasi Kolagen Larut Asam dari Kulit Ikan Nila (Oreochromis niloticus)     (Nurhayati et al.)
Dunn, B. 2006. Quantitative amino acid analysis. In: Colligan, J.E. et al. (eds.). Current Protocols in Protein .  John Wiley and Sons, New York.
Hwang, J.H., Mizuta, S., Yokoyama, Y., and Yoshinaka, R. 2005. Purification of molecular species of collagen in the skin of skate (Raja kenojei). Food Chem. 100: 921–925
Jongjareonrak, A., Benjakul, S., Visessanguan, W., Nagai, T., and Tanaka, M. 2005. Isolation and characterization of acid and pepsin-solubilised collagens from the skin of Brownstripe red snapper ( Lutjanus vitta ). Food Chemistry. (93): 475–484.
Kasankala, L.M., Xue, Y., Weilong, Y., Hong, S.D., and He, Q. 2007. Optimization of gelatine extraction from grass carp ( Catenopharyngodon idella ) fish skin by response surface methodology. Bioresource Technology . 98(17): 3338–3343.
Kementerian Kelautan dan Perikanan (KKP). 2011. Kelautan dan Perikanan dalam Angka 2011 . Pusat data statistik dan informasi Sekretariat Jenderal Kementerian Kelautan dan Perikanan, Jakarta.
Kittiphattanabawon, P., Benjakul, S., Visessaguan, W.,
Nagai, T., and Tanaka, M. 2005. Characterization of acid-soluble collagen from skin and bone of bigeye snapper ( Priacanthus tayenus ). Food Chemistry. (221): 363–372.
Lee, C.H., Singla, A., and Lee, Y. 2001. Review: Biomedical Application of Collagen. International Journal of Pharmacy. (221): 1–22
Liu, H.Y., Li, D., and Guo, S.H. 2007. Studies on collagen from the skin of channel catfish ( Ictaurus punctatus ). Food Chemistry. (101): 621–625 Murniyati, Peranginangin, R., Tazwir, Hak, N., Nurhayati, dan Dewi, F.R. 2012. Penelitian pemanfaatan limbah hasil perikanan pada Produk Pangan dan Non Pangan. Laporan Teknis Penelitian pengolahan Produk . Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan.
Muyonga, J.H., Cole, C.G.B., and Duodu, K.G. 2004 a . Characterisation of acid soluble collagen from skins of young and adult nile perch ( Lates niloticus ). Food Chemistry. (85): 81–89.
Muyonga, J.H., Cole, C.G.B., and Duodu, K.G. 2004 b . Fourier Transform infrared (FTIR) spectroscopic study of acid soluble collagen and gelatin from skins and bones of young and adult nile perch ( Lates niloticus ). Food Chemistry. (86): 325–332.
Nagai, T. and Suzuki, N. 2000. Isolation of collagen from fish waste material-skin, bone, and fins. Food Chemistry. (68): 277–281.
Noitup, P., Garnjanagoonchorn, W., and Morrisey, M.T.
2005. Fish skin type I collagen: characteristic comparison of albacore tuna ( Thunnus alalunga ) and silver-line grunt ( Pomadasys kaakan ). Journal of Aquatic Food Product Technology. (14): 17–27.
Olsen, D., Yang, C., Bodo, M., Chang, R., Leigh, S., and Baez, J. 2003. Recombinant collagen and gelatin for drug delivery. Advanced Drug Delivery Reviews. (55): 1547–1567.
Peranginangin R., Tazwir, Hak, N., Suryanti, Ayudiarti, D.L., dan Haryanto. 2006. Riset optimasi pemanfaatan limbah perikanan tulang dan kulit ikan. Laporan Teknis Penelitian pengolahan Produk. Balai Besar Riset Pengolahan Produk dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan.
Peranginangin, R. 2007. Teknologi ekstraksi gelatin secara asam dari kulit ikan sebagai bahan pangan dan farmasi. Prosiding Simposium Nasional Hasil Riset Kelautan dan Perikanan. p. 377–392.
Peranginangin, R., Kusumawati, R., dan  Apriantoro, E.W.
2008. Isolasi dan Karakterisasi Kolagen yang Diekstraksi dari Kulit Ikan Kerapu ( Epinephelus Tauvina ). Prosiding Seminar Nasional Tahunan V Hasil Penelitian Perikanan dan Kelautan Jurusan Perikanan Fakultas Pertanian Universitas Gadjah Mada .
Santos, M.H., Silva, R.M., Dumont, V.C., Neves, J.S., Mansur, H.S., and Heneine, L.G.D. 2013. Extraction and characterization of highly purified collagen from bovine pericardium for potential bioengineering applications. Materials Science and Enginering C. 33: 790–800.
Sato, K., Yoshinaka, V., Itoh, Y., and Sato, M. 1989. Molecular species of collagen in the intramuscular connective tissue of fish. Food Chemistry. (92): 87– 91.