## PENGARUH PROSES MASERASI DENGAN VARIASI KONSENTRASI PELARUT ETANOL TERHADAP
KANDUNGAN SENYAWA EKSTRAK DAUN PEPAYA (Carica papaya L.) DAN DAUN UBI JALAR UNGU
(Ipomoea batatas L. Lam)
Submitted : 11 Juli 2020 Edited : 22 Desember 2020 Accepted : 29 Desember 2020
Herman Irawan 1 , Sevty Syera 2 , Nurlaili Ekawati 1 , Djadjat Tisnadjaja 1
1 Pusat Penelitian Bioteknologi, LIPI, Jalan Raya Bogor Km 46, Cibinong 16911
2 Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Prof. Dr. HAMKA Jakarta Korespondensi: Herman Irawan Email : herman432001@gmail.com

## ABSTRACT
Papaya (Carica papaya L.) and purple sweet potato (Ipomoea batatas L. Lam) are commonly used  empirically as traditional medicines, including for malaria, malnutrition, fever and hemorrhagic fever. The purpose of this study was to determine the effect of differences in the concentration of  ethanol solvents on  the chromatogram profile and compound content. The research method began with maceration using 50%, 70%, and 96% ethanol, then thin layer chromatography test, and determination of total phenol and flavonoid levels with Elisa at λ of 750 nm and 415 nm, where the comparator used were gallic acid and quercetin . The results of total phenol levels obtained in papaya leaf extract were 3,493 mg GAE/gram and in sweet potato leaves the results were 4,786 mgGAE/mg. While the total flavonoid yield obtained from papaya leaf extract was obtained as much as 4,630 mg QE/gram and on sweetpotato which was 4,269 mgQE/mg. Characterisation of extract compound content was carried ouy by using Gas Chromatography- Mass Spectroscopy (GC-MS), where comparison of extracts used in extract combination samples are 50:50, 75:25, and 25:75. The results showed that ethanol extract contained alkaloids, flavonoids, saponins, tannins, and triterpenoids. Characterization by using GC-MS for single extract and combination extract of papaya leaves and purple sweet potato leaves obtained the main active compounds are Phytol, Neoheptadine, and n-Hexadecanoic acid.
Keywords : Carica Papaya, Ipomoea batatas, Thin Layer Chromatography, maceration, asChromatography-Mass Spectroscopy (GC MS).

## PENDAHULUAN
Daun  pepaya  (Carica  papaya L.) dikenal pula sebagai kates atau telo di daerah Jawa,  pada  umumnya  dimanfaatkan  sebagai makanan dalam bentuk sayur maupun produk olahan lainnya. Daun pepaya sering dimanfaatkan sebagai obat hipertensi, malaria, malnutrisi,  dan  gangguan  saluran  kencing. Penelitian  lain,  menyatakan  bahwa  ekstrak daun  pepaya  mengandung  triterpenoid, dan mikronutrien seperti  vitamin A, vitamin C,
vitamin E, vitamin B12, dan β -karoten (1) . Daun pepaya  juga  memiliki  kandungan  flavonoid (kaempferol, manghaslin, dan klitorin), saponin, alkaloid (karpain, pseudokarpain, dan dehidrokarpain I dan II), glikosida, fenol (asam ferulat, asam kafeat, dan asam klorogenat) dan enzim  papain (2) .  Penelitian  yang  dilakukan dengan menggunakan karpain yang merupakan fraksi alkaloid hasil ekstraksi daun pepaya, memiliki aktivitas
antitrombositopenia pada tikus yang diinduksi dengan busulfan (3) .
Daun  ubi  jalar  ungu  (Ipomoea  batatas L.  Lam)  mempunyai  aktivitas  antioksidan karena  ada  kandungan  antosianin,  yaitu sianidin dan peonidin yang tinggi (4) . Daun ubi jalar ungu bermanfaat juga sebagai obat bisul hingga obat penurun panas (5) . Selain itu, infusa daun ubi jalar ungu dengan dosis sedang dan berat berpotensi sebagai obat demam berdarah (6) .  Penelitian  lain  menunjukkan bahwa aktivitas antioksidan pada daun ubi jalar lebih kuat dari pada umbinya (7) .
Berdasarkan  hasil  penelitian  Fu et  al (8)
diketahui  bahwa  ekstrak  daun  ubi  jalar  ungu yang diperoleh dari Nanchang, China
menghasilkan  senyawa  fenolik,  flavonoid, antosianin, dan kaya akan polifenol.
Sedangkan  pada  ekstrak  daun  ubi  jalar  ungu Cihideung,  Bandung  mengandung  senyawa fenol,  tannin,  flavonoid,  dan  karotenoid (9) .
Dalam hal ini, jenis pelarut pengekstraksi juga mempengaruhi  jumlah  senyawa  aktif  yang terkandung  dalam  ekstrak (10) .  Pelarut  etanol lebih baik dibandingkan pelarut air, methanol, dan aseton, karena etanol dapat melarutkan kandungan flavonoid terbanyak dari daun ubi jalar ungu, dan etanol aman digunakan sebagai pelarut  makanan,  ekonomis  serta  mudah didapatkan (8) .
Beberapa  peneliti  lain  menunjukkan bahwa  konsentrasi  pelarut  etanol  akan berpengaruh  terhadap  hasil  ekstraksi  bahan alam  secara  maserasi.  Agustin  &  Ismiyati (11) , menunjukkan  melalui  hasil  penelitiannya bahwa hasil ekstraksi antosianin dari kelopak bunga kembang sepatu, dengan menggunakan pelarut etanol 96% memberikan  hasil  yang lebih  baik  dibandingkan  penggunaan  pelarut etanol  60, 70  dan  80%. Sementara  Chew et al (12) , yang memvariasikan konsentrasi pelarut etanol dari 0 sampai 100%, untuk mengekstraksi senyawa fenol
dari
Orthosiphon  stamineus,  melaporkan  bahwa konsentrasi  etanol  40% memberikan hasil lebih  baik  dibandingkan  konsentrasi  lainnya. Hasil  sedikit  berbeda  dilaporkan  oleh
Setyowati et al (13) , dimana perolehan senyawa fenolik  optimum,  dari  ekstraksi secara maserasi Solanum  betaceum Cav.,  adalah dengan penggunaan pelarut etanol : air (60 : 40
v/v).
Hasil-hasil penelitian tersebut menunjukkan bahwa penggunaan pelarut etanol  dengan  konsentrasi  berbeda  bisa memberikan  hasil  maserasi  yang  berbeda. Perbedaan  hasil  juga  dipengaruhi  oleh  jenis bahan  alam  yang  diekstraksi  serta  senyawa yang  menjadi  target.  Berdasarkan  hasil-hasil penelitian tersebut, penulis merasa perlu untuk melakukan penelitian ini, yang bertujuan untuk mempelajari  pengaruh  perbedaan konsentrasi pelarut etanol  terhadap  hasil  ekstraksi  dari daun  pepaya  yang  diperoleh  dari  Yogyakarta dan daun ubi jalar yang diperoleh dari daerah Bogor, sehingga diharapkan dapat memberikan  tambahan  informasi  tentang kandungan  senyawa  dalam  ekstrak  daun papaya dan ekstrak daun ubi jalar bagi peneliti lainnya di masa yang akan datang.

## METODE PENELITIAN Ekstraksi
Ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi.  Serbuk  simplisia  daun  pepaya diperoleh  dari  CV.  Bina  Agro  Mandiri, Yogyakarta  dan  sampel  ubi  jalar  ungu, diperoleh  dari  daerah  Dramaga,  Bogor. Masing-masing  sampel  ditimbang  sebanyak 200 g dimasukkan kedalam wadah botol 5 liter kemudian dimaserasi dengan menggunakan pelarut  etanol  50,  70,  dan  96% dengan perbandingan  1:4  (b/v)  selama  1  x  24  jam, kemudian disaring, filtratnya kemudian dipekatkan  dengan  menggunakan vacuum rotary  evaporator dan  dikeringkan  dalam lemari  pengering  (suhu  50  °C)  hingga diperoleh ekstrak kental.
Rendemen Ekstrak dihitung dengan rumus:
Rendemen (%) = 100 % (1)

## Penapisan Fitokimia
(14)
Penapisan  fitokimia  dilakukan  untuk mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder (golongan alkaloid, flavonoid, tanin, terpenoid, steroid, dan saponin) dari daun pepaya dan ubi jalar ungu (15) .

## Analisis Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Analisis  KLT  dilakukan dengan  fasa diam lempeng silika GF254 menggunakan empat jenis campuran eluen dengan perbandingan yang bervariasi (Tabel 1). Analisis  dilakukan  terhadap  sampel  ekstrak daun pepaya, ekstrak daun ubi jalar, dan campuran  ekstrak  daun  pepaya  dan  daun  ubi jalar (1:1).  Bercak  noda  yang  terbentuk diamati di bawah sinar lampu UV dan dihitung nilai faktor retensinya (Rf) (16) .
Tabel 1. Variasi fase gerak
Uji Flavonoid Total Pembuatan Kurva Standar Kuersetin
Kurva  standar  kuersetin  dibuat  dengan variasi konsentrasi yaitu 4, 6, 8, 10, 12, 4, 16, 18,  20  dan  22  µg/mL.  Masing-masing konsentrasi  secara  terpisah  dipipet  sebanyak 20 µL dicampur dengan 20 µL AlCl3 10%, 20 µL natrium asetat 1M dan 180 µL air suling, kemudian  dibiarkan  pada  suhu  kamar  selama 60  menit.  Pembacaan  absorbansi  dilakukan pada  λ  415  nm  dengan  microplate  reader (17) .
Kurva  standar  dibuat  dengan  memplot  nilai konsentrasi sebagai sumbu x dan serapan pada sumbu  y  kemudian  ditentukan  persamaan regresi  linearnya  untuk  digunakan dalam penentuan  kadar  flavonoid  total.  Sehingga diperoleh persamaan:
dimana  y  adalah  absorbansi  sampel  dan  x merupakan konsentrasi standar, sementara a,b adalah konstanta.

## Penetapan Kadar Flavonoid Total
Ekstrak sebanyak 50  mg di tambahkan metanol hingga volume 10 mL, kemudian dipipet sebanyak 20 µL di campur dengan 20 µL AlCl3 10%, 20 µL dari natrium asetat 1M dan 180 µL air suling, dan di biarkan pada suhu kamar  selama  60  menit.  Absorbansi  dibaca pada  λ  415  nm (17) .  Kadar  flavonoid  dihitung berdasarkan kurva standar kuersetin, sehingga kadar flavonoid dihitung sebagai mg ekuivalen kuersetin  per  gram  sampel.  Adapun  rumus perhitungan  kadar  flavonoid  total  dalam sampel adalah:
Uji Fenol Total Pembuatan  Kurva  Kalibrasi  Asam Galat – Folin Ciocalteu
Kurva kalibrasi asam galat dibuat dengan konsentrasi 15, 30, 45, 60, 75, dan 90 µg/ml asam galat dan diambil sebanyak 10 µL kemudian  dicampurkan  ke  dalam  sumur (96- well  microplate)  yang  sudah  berisi  160 µL aquades.  Sebanyak  10  µL  reagen  Folin- Ciocalteu 10% dan 20 µl larutan Na2CO3 10% ditambahkan  ke  dalam  tiap  sumur  lalu diinkubasi selama 60 menit pada suhu ruang. Kandungan  fenol  total  ditentukan  dengan pembacaan  absorbansi  pada  λ  750  nm
menggunakan  microplate  reader  mengikuti metode  Wan-Ibrahim et  al dengan  sedikit modifikasi (18) .

## Penentuan Kandungan Fenol Total
Ekstrak ditimbang sebanyak 20 mg,
dilarutkan dalam metanol sehingga
membentuk konsentrasi 2 mg/mL dan diambil sebanyak  10  µL,  kemudian  dicampurkan  ke dalam sumur (96-well microplate) yang sudah berisi  160  µL  aquadest.  Sebanyak  10  µL reagen Folin- Ciocalteu 10% dan 20 µL larutan Na2CO3 10%  ditambahkan  ke  dalam  tiap sumur  lalu  diinkubasi  selama  60  menit  pada suhu ruang. Kandungan total fenolik ditentukan dengan pembacaan absorbansi pada λ 750 nm  menggunakan  microplate reader (18) . Kandungan  fenol  total  dihitung  berdasarkan kurva standar asam galat, sehingga kadar fenol sampel  dihitung  sebagai  mg  ekuivalen  asam galat  untuk  tiap  g  sampel.  Adapun  rumus perhitungan  kadar  fenol  total  dalam  sampel adalah:

## Analisis GC-MS  (Gas Chromatography-

## Mass Spectrometry)
Ekstrak  etanol  96%  daun  pepaya  dan daun ubi jalar ditimbang masing-masing sebanyak  1  g,  kemudian dilarutkan  dengan metanol (p.a). Ekstrak dipipet sebanyak 1 dan ditambah  sebanyak  methanol  9  mL.  Larutan kemudian diambil dengan menggunakan spuit untuk disaring dan siap dianalisis menggunakan  GC.  Pada  penelitian  ini digunakan GCMS merk Shimadzu QP 2010 dengan detektor FTD/BID (Fl a me T h e r mi o  n  i  c De  t  e  c  t  o  r  /  Barrier Discharge Ionization Detectors) , fase diam Rtx-5MS (30 m  x  0.25  mm)  dan  fase  gerak  gas  helium. Kondisi  analisis  menggunakan  mode  tekanan konstan, temperatur kolom  60 °C-10  °C/min-
240  °C  (15  min),  temperature  injeksi  200  °C dan  volume  injeksi  sebanyak  3  µL. Analisis juga  dilakukan  terhadap  campuran  ekstrak pepaya dan daun ubi jalar dengan perbandingan 25:75; 50:50 dan 75:25. Analisis kromatogram senyawa yang diperoleh dilakukan  dengan  cara  membandingkan terhadap library.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Ekstraksi Simplisia
Hasil ekstraksi dengan berbagai konsentrasi  pelarut  menunjukkan  bahwa makin tinggi konsentrasi etanol yang digunakan,  rendemen  ekstrak  yang  diperoleh semakin  sedikit. Hasil  ini  sejalan  dengan penelitian yang dilakukan oleh Chew et al. (12)
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  kandungan senyawa  dari  daun  pepaya  maupun  daun  ubi jalar  lebih  mudah  larut  dalam  air  atau  dalam pelarut polar (Tabel 2).
Tabel 2. Hasil Penentuan  Bobot  dan Rendemen Ekstrak
Keterangan: bobot ekstrak yang diperoleh(g);rendemen ekstrak(%)

## Penapisan Fitokimia
Tujuan  penapisan  fitokimia  adalah untuk mengetahui golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung di dalam ekstrak  dan  kaitannya  dengan  khasiat  yang memiliki  aktivitas  biologis  atau  aktivitas farmakologisnya.  Hasil  penapisan  fitokimia dapat dilihat pada Tabel 3.
Berdasarkan hasil uji terhadap kandungan  alkaloid  diketahui  bahwa  ekstrak positif mengandung alkaloid, dimana pada
penambahan  pereaksi  Bouchardat,  terbentuk endapan putih. Hasil positif pada ekstrak daun pepaya dan ubi jalar ungu juga ditunjukan pada uji  Dragendorff,  dimana  terbentuk  endapan merah  bata. Pemeriksaan  alkaloid dengan penambahan pereaksi Mayer, Bouchardat dan Dragendorf sebelumnya  ditambahkan  HCl karena  alkaloid  bersifat  basa,  sehingga  harus diekstraksi  dengan  pelarut  yang  mengandung asam (14).
Pada uji flavonoid filtrat yang ditambahkan  dengan  logam  Mg  memberikan warna merah setelah penambahan HCl (p), ini menunjukkan  hasil  yang  positif  adanya flavonoid, hal ini terjadi karena adanya interaksi  antara  senyawa  flavonoid  dengan logam Mg membentuk garam flavilium yang menyebabkan perubahan warna (19) .
Hasil uji identifikasi fenol menunjukan hasil yang positif dimana uji ini menghasilkan warna  coklat  kehitaman setelah  penambahan FeCl3,  dimana  senyawa  FeCl3 akan  bereaksi dengan  gugus  hidroksil yang  terdapat  dalam senyawa  fenol  dan  menimbulkan  perubahan warna (20) .  Sedangkan  hasil  uji  identifikasi tannin  terdapat endapan  putih  yang  terbentuk dari  penambahan  gelatin  dikarenakan  tanin akan  berinteraksi  dengan  gelatin  membentuk kopolimer yang tidak larut air (21) .
Ekstrak  memberikan  hasil  positif  pada uji saponin. Buih yang dihasilkan sekitar 5 cm setelah  didiamkan  selama  10  menit  dan  buih tidak hilang dengan penambahan HCl 2N, buih yang dihasilkan akibat dari gugus hidrofil yang berikatan dengan air dan gugus hidrofob yang berikatan dengan udara. Setelah terbentuk buih ditambahkan  HCl  yang  menambah  kepolaran sehingga gugus hidrofil akan berikatan dengan buih (22) .  Uji  terpenoid  juga  menunjukan  hasil yang  positif  dimana  terbentuk  cincin  merah kecoklatan,  perubahan  warna  ini  disebabkan karena  terjadinya  reaksi  oksidasi  pada golongan  triterpenoid  atau  steroid  melalui pembentukan ikatan rangkap terkojugasi (23) .
Tabel 3. Hasil Penapisan fi tokimia

## Analisis Kromatografi Lapis Tipis
Ekstrak etanol 50, 70, dan 96% daun ubi jalar ungu dan pepaya dianalisis dengan KLT menggunakan  lempeng  silika  GF245  dengan fase gerak:
I. asam asetat glasial:butanol:air (1:4:5) II. n-heksan:etil asetat (3:7) III. metanol:air (6:4) IV. kloroform:metanol (9:1)
Noda diamati dibawah sinar lampu UV 254 nm dan kemudian dilakukan penyemprotan dengan serium sulfat.
Hasil uji KLT tidak sejalan dengan hasil perolehan rendemen, dimana pada perhitungan rendemen ekstrak terlihat bahwa pelarut etanol 50% memberikan rendemen paling tinggi dan rendemen  yang  diperoleh  makin  kecil  seiring dengan  meningkatnya  konsentrasi  etanol. Namun  demikian  dari  hasil  KLT  terlihat bahwa  jumlah  komponen  yang  terekstraksi makin  banyak  dengan  makin  tingginya konsentrasi etanol (Tabel 4, 5, dan 6).
Hasil KLT terhadap ekstrak etanol 50% daun  pepaya  dan  daun  ubi  jalar  ungu  pada beberapa  eluen  tersebut  menghasilkan  lebih sedikit  spot  atau  noda  bila  dibandingkan dengan hasil KLT ekstrak daun pepaya dan ubi jalar ungu dengan konsentrasi etanol 70% dan 96%. Ini menunjukkan bahwa komponen dari ekstrak lebih banyak tertarik pada konsentrasi etanol  70%  dan  96%.  Hasil  terbaik  yang didapatkan dari beberapa eluen yang digunakan  yaitu  dengan  eluen  kombinasi klorofom  dan  metanol  dengan  perbandingan
(9:1),  dimana  spot  atau  noda  paling  banyak dapat ditemukan pada penotolan ekstrak 96% pada  daun  pepaya  dan  daun  ubi  jalar  ungu. Banyaknya noda pada lempeng KLT
menunjukkan  jumlah  komponen  kimia  yang dikandung  oleh  suatu  ekstrak  tanaman  yang dapat dipisahkan menggunakan eluen tertentu.
Tabel 4. Nilai Rf Ekstrak Etanol Ubi Jalar Ungu
Keterangan: I: asam asetat glasial:butanol:air (1:4:5), II: n-heksan:etil asetat (3:7), III: metanol:air (6:4), dan IV: kloroform:metanol (9:1)
Tabel 5. Nilai Rf Ekstrak Etanol Pepaya
Keterangan: I: asam asetat glasial:butanol:air (1:4:5), II: n-heksan:etil asetat (3:7), III: metanol:air (6:4), dan IV: kloroform:metanol (9:1)
Tabel 6. Nilai Rf Campuran Ekstrak Etanol daun Ubi Jalar Ungu dan Pepaya (1:1)
Keterangan: I: asam asetat glasial:butanol:air (1:4:5), II: n-heksan:etil asetat (3:7), III: metanol:air (6:4), dan IV: kloroform:metanol (9:1)
Penetapan Kadar Fenol Total Fungsi senyawa fenol diketahui
sebagai  bagian  dari struktur dinding  sel, pigmen bunga dan enzim (24) . Metode penentuan kadar dalam suatu sampel ada berbagai cara, salah satu metode yang sering digunakan adalah menggunakan kurva standar.  Proses  pembuatan kurva standar dilakukan dengan waktu inkubasi selama  2 jam kemudian serapannya diukur pada λ 750 nm menggunakan microplate reader. Hasil penentuan  kurva standar kuersetin  yang diperoleh dengan cara memplotkan kadar kuercetin  sebagai sumbu  x  dan  absorbannya sebagai sumbu y, diperoleh persamaan regresi linear yaitu y = 0,0244x + 0,2636 dengan nilai R²  yang  diperoleh  yaitu  0,9968.  Persamaan kurva  kalibrasi asam galat dapat  digunakan sebagai pembanding  untuk menentukan konsentrasi senyawa flavonoid total pada ekstrak daun pepaya dan daun ubi jalar (Tabel 7).
Larutan standar yang digunakan adalah asam galat yang merupakan salah satu fenolik alami dan  stabil. Menurut Viranda (25) asam galat termasuk dalam  senyawa fenolik turunan asam hidroksibenzoat yang tergolong asam fenolik sederhana. Asam galat direaksikan  dengan reagen  Folin Ciocalteau menghasilkan warna biru  yang menandakan bahwa mengandung fenolik,  setelah itu
ditambahkan dengan larutan Na2CO3 sebagai pemberi suasana basa.  Selama reaksi berlangsung,  gugus  hidroksil pada senyawa fenolik bereaksi dengan  pereaksi Folin Ciocalteau, membentuk kompleks molibdenum tungsten berwarna biru, dengan struktur yang belum diketahui dan dapat dideteksi dengan  spektrofotometer.  Warna biru yang terbetuk akan semakin pekat, setara dengan konsentrasi ion fenolat yang terbentuk, artinya semakin  besar konsentrasi senyawa fenolik maka semakin  banyak ion fenolat yang akan mereduksi asam heteropoli (fosfo molibdat fosfo tungstat) menjadi kompleks molibdenum tungsten sehingga warna yang dihasilkan semakin pekat.
Berdasarkan hasil peneltian ini diperoleh kadar fenol total ekstrak etanol daun pepaya adalah 3,490 mgGAE/gram, dan ekstrak etanol daun  ubi jalar sebesar 4,786 mgGAE/gram. Senyawa fenolik yang terkandung dalam ekstrak etanol daun pepaya dan daun ubi jalar ungu merupakan hasil metabolit sekunder yang memiliki aktivitas antioksidan (26) . Menurut Sulastri (25) aktifitas antioksidan  ekstrak etanol  daun  pepaya  dan daun ubi jalar ungu memiliki aktifitas antioksidan yang lebih besar daripada kontrol positif yaitu α -Tokoferol  dan DPPH (1,1- diphenyl-2-picrylhydrazil).

## Tabel 7. Hasil Penentuan Kadar Fenol Total
Keterangan : GAE = galic acid equivalent.
Penetapan Kadar Flavonoid Total Flavonoid merupakan senyawa metabolit sekunder dengan dua cincin aromatik yang dihubungkan dengan 3 atom C yaitu struktur inti C6-C3-C6, biasanya dengan ikatan  atom O yang berupa ikatan  oksigen heterosiklik. Senyawa ini dapat  disebut sebagai
senyawa polifenol karena
mengandung  dua  atau lebih gugus  hidroksil, bersifat agak asam sehingga dapat larut dalam basa (24) .
Hasil penentuan kurva standar
kuersetin  pad a  λ  415 nm menghasilkan persamaan regresi linear, y = 0,0677x + 0,0122 dengan nilai R² yang diperoleh yaitu 0,9976. Persamaan ini digunakan  sebagai pembanding untuk menentukan konsentrasi senyawa flavonoid total pada ekstrak etanol 96% daun pepaya dan daun ubi jalar.
Berdasarkan  hasil penelitian  diperoleh kadar flavonoid total ekstrak etanol daun pepaya  didapatkan  hasil 4,613 mgQE/gram dan ekstrak etanol daun ubi jalar didapatkan hasil 4,634 mgQE/mg (Tabel 8). Menurut Sriningsih (27) , senyawa flavonoid merupakan salah satu metabolit sekunder pada tumbuhan yang dapat  digunakan sebagai anti mikroba, obat infeksi pada luka, anti jamur, anti virus, anti kanker, dan anti tumor. Pada pengukuran senyawa flavonoid total, larutan sampel, ditambahkan AlCl3 yang dapat membentuk kompleks, sehingga terjadi pergeseran panjang gelombang kearah visible (28) . Menurut Azizah (29) perlakuan inkubasi selama 1 jam sebelum pengukuran dimaksudkan agar reaksi dapat berjalan
sempurna,  sehingga intensitas warna yang dihasilkan lebih maksimal.

## Analisis GC-MS
Analisis GC-MS  dilakukan  untuk identifikasi senyawa yang terdapat pada ekstrak daun pepaya dan daun ubi jalar ungu. Berdasarkan hasil analisis terlihat bahwa kandungan senyawa dalam ekstrak etanol 95% untuk daun pepaya maupun daun ubi jalar ungu terdiri dari 10 peak, dimana kandungan senyawa tertinggi adalah Phytol, yang memiliki luas area paling besar yaitu 100657 dan 50294 dengan waktu retensi 29,168 dan 29,164 menit, untuk ekstrak daun pepaya dan ubi ungu secara berurutan (Tabel 9 dan 10). Senyawa Phytol pada tanaman Ophiorrhiza rugosa var. prostrata (D.Don) memiliki aktivitas sebagai regulator metabolisme lemak, anti inflamasi, antiparasitik, antihelmintik,  antiprotozoal (Leishmania), histamine relase inhibitor, dan
spasmolitik (30) .
Pada analisis GC MS ini,  selain menentukan kandungan ekstrak daun pepaya dan daun ubi jalar ungu, juga dilakukan terhadap campuran  ekstrak  daun pepaya  dan daun ubi jalar ungu dengan perbandingan 25:75; 50:50 dan 75:25.
Alasan dilakukan kombinasi sampel yaitu untuk mengetahui apakah ketika ekstrak tersebut dikombinasi dapat mempengaruhi nilai luas  area serta untuk mengetahui apakah kombinasi tersebut dapat menghasilkan senyawa lainnya selain yang terdapat pada sampel tunggal.
Tabel 8. Hasil Penentuan Kadar Flavonoid Total
Keterangan : QE = quecertin equivalent
Tabel 9. Kandungan senyawa ekstrak etanol 96% daun pepaya
Tabel 10. Kandungan senyawa ekstrak etanol 96% daun ubi jalar ungu
Kandungan senyawa campuran ekstrak etanol 96% dari kombinasi daun pepaya dan daun ubi jalar ungu dengan perbandingan 25:75 dapat dilihat pada Tabel 11. Diketahui bahwa ekstrak memiliki peak tertinggi dengan luas area paling besar adalah senyawa asam n- heksadekanoat/n-Hexadecanoic acid.
Senyawa ini pada ekstrak  etanol tanaman
Asclepias curassavica L. memiliki potensi farmakologis  sebagai asam palmitat (asam lemak jenuh)
dan antioksidan,
hipokolestrolemik, nematisida, pestisida, anti androgenik, pengaroma, hemolitik, serta 5 ‑ alpha ‑ reductase inhibitor (31) .
Ketika kombinasi antara ekstrak daun pepaya dan daun ubi jalar ungu setara, yaitu
50:50, diketahui bahwa senyawa dominan tertinggi  adalah phytol, sama  seperti pada analisis terhadap sampel  ekstrak tunggal. Adapun nilai luas area  senyawa phytol kombinasi lebih besar dari luas  area sampel ubi jalar tunggal namun lebih kecil dari luas area sampel daun pepaya tunggal,  yaitu sebesar 64878. Selain itu, pada kombinasi ini muncul senyawa baru  pada urutan 10  besar yang memiliki peak tertinggi yaitu azulene, dimana senyawa ini tidak muncul pada urutan 10 peak tertinggi sampel ekstrak tunggal daun pepaya maupun daun ubi jalar ungu.
Sedangkan untuk senyawa lainnya merupakan gabungan  dari  kandungan  senyawa pada ekstrak daun pepaya ataupun dari daun ubi jalar ungu. (Tabel 12).

## Tabel 11. Kandungan senyawa kombinasi  ekstrak etanol 96% daun pepaya dan  daun ubi
jalar ungu (25:75)
Tabel 12. Kandungan senyawa kombinasi ekstrak etanol 96% daun pepaya dan daun ubi jalar ungu (50:50)
Analisis kandungan senyawa  kimia sampel kombinasi ekstrak  etanol 96% daun pepaya dan  daun  ubi jalar ungu (75:25) menunjukkan bahwa dari  10 peak tertinggi, yang memiliki luas area paling besar yaitu sebesar 129343 adalah senyawa neophytadiene (Tabel 13). Pada tanaman Asclepias Curassavica L., senyawa ini memiliki potensi farmakologi sebagai
hidrokarbon, antipiretik, analgetik, anti inflamasi, anti mikroba, dan  antioksidan (32) . Pada kombinasi ini terlihat pada urutan 10 senyawa yang memiliki peak tertinggi selain neophytadiene, juga muncul senyawa- senyawa baru yang tidak muncul pada sampel
ekstrak tunggal maupun kombinasi lainnya, kecuali n-hexadecanoic acid, hexadecanoic acid methyl ester, dan 9,12-Octadecadienoic acid (Z,Z)-. Hasil kombinasi terbaik yaitu kombinasi ekstrak daun pepaya dan ubi jalar ungu dengan perbandingan (75:25) (Tabel 13). Dimana kombinasi ini memiliki luas area yang cukup besar yaitu 646652. Pengukuran kadar kuantitatif dapat dilakukan dengan cara menghitung luas area puncak sampel dibandingkan  dengan luas  area  puncak standart dikalikan dengan konsentrasi
standar (32) .

## Tabel 13. Kandungan senyawa kombinasi ekstrak etanol 96% daun  pepaya dan  daun  ubi
jalar ungu (75:25)

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, hasil kromatogram pada beberapa ekstrak tunggal  dan kombinasi  didapatkan spot atau noda terbanyak pada ekstrak etanol 96% dengan  eluen kloroform metanol (9:1) bila dibandingkan dengan  ekstrak  50% dan 70%. Hasil analisis  kandungan senyawa menggunakan GC-MS  diketahui bahwa
senyawa utama yang terdapat pada ekstrak tunggal daun pepaya dan ubi jalar ungu, serta kombinasi keduanya  dengan  perbandingan 50:50 adalah senyawa phytol. n-
Heksadecanoic  acid dan Neophytadiene adalah senyawa utama untuk  kombinasi ekstrak daun pepaya dan ubi jalar ungu 25:75 dan  75:25. Kadar flavonoid total  ekstrak etanol  96%  daun pepaya didapatkan  hasil yaitu 4,630 mgQE/gram dan pada  ekstrak etanol daun ubi jalar ungu  yaitu  4,269 mgQE/mg.  Sedangkan kadar fenol total ekstrak daun pepaya yaitu 3,490
mgGAE/gram dan pada  ekstrak etanol daun ubi jalar ungu didapatkan  hasil 4,786
mgGAE/mg. Dapat disimpulkan  bahwa perbedaan konsentrasi berpengaruh terhadap profil kromatogram dan kandungan senyawa kimia dari ekstrak  daun pepaya dan  ekstrak daun ubi jalar ungu.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Rini Prastiwi, selaku dosen Fakultas, Farmasi Universitas  Muhammadiyah Prof. Dr. HAMKA Jakarta, atas bantuan, masukan dan sarannya.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Suresh K, Deepa P, Harisaranraj R,
Vaira A V. Antimicrobial and Phytochemical Investigation  of the Leaves of Carica papaya L., Cynodon dactylon (L.) Pers.,  Euphorbia hirta L.,
Melia azedarach L. and Psidium guajava L. Ethnobot Leafl. 2008;12:1184 – 91.
2. Anjum V, Ansari SH, Naquvi KJ, Arora P, Ahmad A. Development of quality standards of Carica Papaya Linn . leaves. Scolar Res Libr. 2013;5(July 2012):370 – 6.
3. Zunjar V, Dash RP, Jivrajani M, Trivedi
B, Nivsarkar M. Antithrombocytopenic activity of carpaine and alkaloidal extract of Carica papaya Linn. leaves in busulfan induced thrombocytopenic Wistar rats. J Ethnopharmacol.
2016;181:20 – 5.
4. Yuzhi Jiao. Studies on antioxidant capacity of anthocyanin extract from purple sweet potato (Ipomoea batatas L.). African J Biotechnol. 2012;11(27):7046 – 54. 5. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Inventaris Tanaman Obat Indonesia (I). Jilid 2. Jakarta: Depkes RI; 2001.
6. Prasetyaningsih Y, Sari N, Prasetya
HR, Naer VG.  Potensi Etnomedicine Daun Ubi Jalar Ungu (Ipomoea batatas

## L. Poir) dan Daun Ubi Jalar  Putih
(Ipomoea batatas L.) Sebagai Obat
Demam Berdarah di Sleman DIY.  J
Heal. 2019;6(1):6 – 11.
7. Hue SM, Boyce AN, Somasundram C. Antioxidant activity, phenolic and flavonoid contents in the leaves of different varieties  of sweet potato
(Ipomoea batatas). Aust J Crop Sci. 2012;6(3):375 – 80.
8. Fu ZF, Tu ZC, Zhang L, Wang H, Wen
QH, Huang T. Antioxidant activities and polyphenols of sweet  potato (Ipomoea
batatas  L.) leaves  extracted with solvents of various  polarities. Food
Biosci. 2016;15:11 – 8.
9. Fidrianny I, Windyaswari AS, Wirasutisna KR. Antioxidant Capacities of Various Leaves Extract from Five Colors Varieties  of Sweet  Potatoes Tubers Using ABTS, DPPH Assays and Correlation with Total  Flavonoid, Phenolic, Carotenoid Content. Res J Med Plant. 2013;7(3):130 – 40.
10. Arifianti L, Oktarina RD, Kusumawati I.
Pengaruh Jenis Pelarut Pengektraksi. E-
Journal Planta Husada. 2014;2(1):3 – 6. 11. Agustin, D., Ismiyati, Pengaruh Konsentrasi Pelarut Pada Proses Ekstraksi Antosianin Dari Bunga Kembang Sepatu, Konversi 2015; 4(2): 9 - 16. 12. Chew, K.K., Khoo,M.Z.,Ng, S.Y., Thoo,
Y.Y.,Wan Aida, W.M., Effect of Ethanol Concentration, Extraction time and Extraction temperature on the
Recovery of Phenolic Compounds  and
Antioxidant Capacity of Orthosiphon stamineus Extracts., International Food Research Journal 2011; 18(4): 1427 - 1435.
13. Setyowati,E.P., Puspitasari, A., Afini,
D.I., Nasution, F.H., Nafingah, R., Influence of Some Extraction Conditions Factor on Phenolic Content
and Antioxidant Activity of Solanum
betaceum Cav.,  Traditional Medicine Journal 2019; 24(3): 216 - 224.
14. Harborne JB. Metode Fitokimia. Bandung: ITB Press; 1987.
15. Marjoni MR. Dasar-Dasar  Fitokimia
untuk Diploma III  Farmasi. Jakarta:
Trans Info Media; 2016. 6 – 10, 39 – 40, 46 p. 16. Gritter RJ, Bobbic JN, Schwarting AE. Pengantar Kromatografi. II. Padmawinata K, editor. Bandung: ITB Press; 1991. 107 p. 17. Farasat M, Khavari-Nejad RA, Nabavi SMB, Namjooyan F. Antioxidant activity, total  phenolics  and flavonoid contents of some edible green seaweeds from northern coasts of the Persian gulf. Iran J Pharm Res. 2014;13(1):163 – 70.
18. Wan-Ibrahim WI, Sidik K, Kuppusamy
UR. A high antioxidant level in edible plants is associated with genotoxic properties. Food Chem. 2010;122(4):1139 – 44.Ergina, Nuryanti S, Pursitasari ID. Uji Kualitatif Senyawa Metabolit Sekunder pada Daun Palado (Agave Angustifolia) yanag diekstraksi Dengan Pelarut Air dan etanolQualitative Test of Secondary Metabolites Compounds in  Palado Leaves (Agave Angustifolia) Extracted
With Water and  Ethanol. J Akad  Kim. 2014;3(3):165 – 72.
19. Sangi MS, Momuat LI, Kumaunang M. Uji Toksisitas dan  Skrining  Fitokimia Tepung Gabah  Pelepah Aren (Arenga pinnata). J Ilm Sains. 2012;12(2):127.
20. Marliana E. Analisis Senyawa Metabolit Sekunder Dari Batang  Spatholobus ferrugineus (Zoll &amp; Moritzi) Benth Yang Berfungsi Sebagai Antioksidan. J Penelit Mipa. 2007;1(1):23 – 9. 21. Simaremare ES. Skrinig Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Gatal (Laportea decumana (Roxb.) Wedd).  Pharmacy.
2014;11(01):98 – 107.
22. Hayati EK, Halimah N. Phytochemical
Test and Brine Shrimp Lethality Test Againt Artemia salina Leach of Anting- Anting (Acalypha indica Linn.) Plant Extract. J Chem. 2010;1(2):53-103.
23. Hanani E. Analisis Fitokimia. Jakarta:
EGC; 2015.
24. Mariska VP. Pengujian Kandungan Fenol  Total  Tomat (Lycopersicum
esculentum) Secara In Vitro. [Skripsi]
FKUI. Universitas Indonesia; 2009.
25. Estiasih T, Kurniawan DA. Aktivitas
Oksidan Ekstrak Umbi Akar Ginseng Jawa ( Talium triangulare Willd). Vol. 18(3),  Jurnal Teknologi dan Industri Pangan. 2006. p. 166 – 75.
26. Sulastri, Erlidawati, Syahrial, Nazar M, Andayani T. Aktivitas Antioksidan
Ekstrak Etanol Daun Ubi Jalar Ungu (
Ipomea batatas L .) Hasil Budidaya Daerah Saree Aceh Besar Antioxidant Activity  of  Extracted Ethanol from Purple Sweet  Potato Leaves  ( Ipomea batatas L .) Cultivated in Saree , Aceh Besar. J Rekayasa Kim Dan Lingkung. 2013;9(3):126 – 31.
27. Sriningsih. Analisa Senyawa Golongan Flavonoid Herba  Tempuyung  (Sonchus arvensis L.).  Pus P2 Teknol Farm dan
Med Deputi Bid TAB BPPT Fak  Farm Univ Pancasila. 2008;1:4.
28. Chang CC, Yang MH, Wen HM, Chern
JC. Estimation of total flavonoid content in propolis by two  complementary colometric methods. J Food Drug Anal. 2002;10(3):178 – 82.
29. Azizah DN, Kumolowati E, Faramayuda
F. Penetapan Kadar Flavonoid Metode AlCl3 pada Ekstrak Metanol Kulit Buah Kakao (Theobroma  cacao L.). Kartika J Ilm Farm. 2014;2(2):45 – 9.
30. Adnan  M, Nazim Uddin Chy  M, Mostafa Kamal ATM, Azad MOK, Paul A, Uddin SB, et al. Investigation of the biological activities and characterization of bioactive constituents of  ophiorrhiza rugosa  var. prostrata (D.Don) &  Mondal leaves through in vivo, in  vitro, and in silico approaches. Molecules. 2019;24(7).
31. Bihana S, Dhiman A, Singh G, Satija S.
Gas chromatography-mass spectroscopy analysis of  bioactive  compounds in the whole plant parts of ethanolic extract of Asclepias Curassavica L. Int J Green Pharm. 2018;12(2):107 – 14.
32. Sudarma N, Oka IM, Parwata A.
Determination Ethanol In Arak With Gas Chromatography. Bali Med J.
2017;4(2):126 – 35.