Peningkatan  Kualitas Akuakultur Menggunakan Teknologi Biofilter Mikroalga Imobil
Rini Riffiani
Bidang Mikrobiologi, Pusat Penelitian Biologi-LIPI Cibinong, Bogor

## Abstract
Immobilized   microalgae Chlorella   pyrenoidosa was   applied   initially   to   nutrient   and   heavy   metal removal   of   wastewater.   Immobilized   microalgae   using   alginate   was   then   developed   for   aquaculture application, such as controlling fish water culture quality to uptake concentration of ammonium, nitrate and to increase   oxygen   level   in   water.   During   immobilization,   algal   cells   maintained   their   respiratory   and photosynthetic activities as that in the normal condition. The objective of this research was to examine the role of immobilized C. pyrenoidosa on controlling water quality by measuring ammonium, nitrate, and dissolved oxygen contents. Five aquariums consisting of 40 litres of water were filled with 20 Nila tilapia (Oreochromis niloticus) with the average weight of 1.6 to 1.7 g. The immobilized algae cells were packaged in two nillon porous bags (pore size of 2x3 mm in diameter) and each immobilized cell had 4 millimeter in diameter. Each aquarium was added with 3000, 4000, 5000, and 6000 immobilized cells. The treatment had two replications. The results showed that the aquarium filled with 4000 beads of immobilized cells gave the best yield.
Key words: immobilized cells, Chlorella pyrenoidosa ,  aquaculture, ammonium, nitrate

## Pendahuluan
Akuakultur   merupakan   salah   satu   aktivitas   penting   untuk   memenuhi   kebutuhan manusia   berupa   produk-produk   perikanan.   Saat   ini   akuakultur   telah   memberikan kontribusi sebesar 37% dari total produksi ikan sedunia (FAO, 2000). Oleh karena itu, akuakultur merupakan usaha alternatif untuk memenuhi kebutuhan akan produk-produk perikanan, yang saat ini masih didominasi oleh perikanan air tawar.
Sistem   akuakultur   dapat   menimbulkan   dampak   baik   positif   maupun   negatif. Penerapan  sistem   intensifikasi   pada   budidaya   tanpa   memperhatikan   daya   dukung lingkungan dapat menghambat pertumbuhan dan mengganggu kesehatan ikan. Sebagai contoh,   proses   larvikultur   ikan   air   tawar   pada   umumnya   masih   menggunakan   sistem konvensional, yaitu sistem statis ( batch ). Pada sistem ini terjadi penurunan kualitas air karena relatif tidak ada pergantian air. Akibatnya, terjadi akumulasi senyawa toksik, antara lain   amonia   yang   berasal   dari   ekskresi   larva   ikan   dan   sisa   pakan   yang   diberikan (Zonneveld,1991).
Beberapa   jenis   mikroalga   yang   diimobilisasi   dilaporkan   efisien   untuk   digunakan sebagai agen pengontrol kualitas air dalam akuakultur. Hal ini karena beberapa mikroalga memiliki kemampuan dalam meningkatan kadar oksigen terlarut dan menurunan kadar amonium dalam air. Mikroalga membutuhkan nitrogen dalam bentuk amonium sebagai materi organik untuk fotosintesis (Chen, 2001).
Chlorella   sp.   merupakan   mikroalga   berklorofil   yang   membutuhkan   unsur   hara makronutrisi  berupa nitrogen dan fosfat. Mikroalga ini mampu hidup dengan baik pada lingkungan   yang   banyak   mengandung   unsur   hara   tinggi   dan   memanfaatkannya   untuk kelangsungan   proses   fotosintesis,   berkembang   biak,   dan   melakukan   aktivitas   hidup lainnya   (Becker,   1994).   Kemampuan   Chlorella   sp.   dalam   memanfaatkan   unsur   hara diharapkan   akan   menurunkan   kandungan   senyawa   toksik   seperti   amonium   sehingga dapat meningkatk0an kualitas air dalam akuakultur perikanan.
Sel alga yang diimobilisasi pada awalnya digunakan untuk pengolahan limbah, yaitu dalam  proses  penurunan  kadar  logam  berat   dari  limbah  industri  (Chevalier  dan  de  la Nove,1985; Proulx dan de la Nouse, 1988; Wilkinson et al., 1990). Metode imobilisasi sel alga   kemudian   berkembang   dan   diaplikasikan   dalam   akuakultur,   antara   lain   untuk mengontrol kadar amonium dan oksigen terlarut dalam air. Sel yang diimobilisasi dapat
125
mempertahankan aktivitas respirasi, fotosintesis, dan proses metabolisme seperti halnya alga dalam keadaan normal (Chen, 2001). Penggunaan alginat dalam proses imobilisasi mempunyai   beberapa   keuntungan,   yaitu   harganya   murah,   efisien,   dan   bersifat transparan.   Keadaan   imobilisasi   menggunakan   alginat   yang   transparan   tidak menghalangi penetrasi cahaya ke dalam sel alga sehingga proses fotosintesisnya tidak terhambat (Becker, 1994). Penelitian ini dilakukan untuk menguji kemampuan mikroalga C. pyrenoidosa imobil dalam mengontrol kualitas air dengan mengukur kadar amonium, nitrat, dan oksigen terlarut, serta perubahan biomassa ikan dalam akuakultur.

## Materi dan Metode
Kultur  C . pyrenoidosa yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari koleksi Laboratorium   Pertanian   Universitas   Padjadjaran-Jatinangor.   Kultur C.   pyrenoidosa dipelihara dan diperbanyak dalam medium agar miring Chlorella pyrenoidosa I (CP-1) yang mengandung (g/L) KNO 3 50g, MgSO 4 .7H 2 O 25g, KH 2 PO 4 12,5g,  FeSO 4 .7H 2 O 0,3 g, H 3 BO 4 0,285g,   MnCl 2 .4H 2 O   0,185g,   ZnSO 4 .5H 2 O   0,022g,   CuSO 4 .5H 2 O   0,008g, 3(NH4) 2 O 7 MoO 3 .4H 2 O   0,017g   dan   disimpan   dalam   suhu   kamar.   Kultur   induk C. pyrenoidosa pada   medium   agar   miring   Cp-1   yang   telah   berumur   14   hari   kemudian disuspensikan dengan penambahan 10 mL larutan NaCl fisiologis 0,85% secara aseptis. Suspensi tersebut dijadikan inokulum untuk kultur kocok sel C. pyrenoidosa. Kultur kocok diinkubasi pada suhu kamar (26-29 O C), intensitas cahaya dari 3 buah lampu fluoresen berjarak 40 cm dari biakan (3000 lux), penambahan udara dari aerator dan agitasi pada kecepatan 80 rpm serta kondisi kultur yang terjaga agar tetap aseptik. Hasil kultur kocok digunakan sebagai inokulum untuk kultur sel di dalam fermentor sistem batch (Kurniati, 1996).
Bahan   yang   digunakan   untuk   membuat   sel   imobil   adalah   natrium   alginat   3%, sedangkan  untuk  pembuatan  gel  adalah  larutan  0,5  M  CaCl 2 .  Larutan  natrium  alginat disterilisasi   dalam   autoklaf   pada   suhu   121°C   selama   20   menit.   Sel C.   pyrenoidosa kemudian   dipisahkan   dari   medium   cair   dengan   disentrifugasi   selama   15   menit   pada kecepatan 4500 rpm. Sel C. pyrenoidosa yang telah dipisahkan kemudian dicampurkan dengan larutan natrium alginat. Proses imobilisasi sel C. pyrenoidosa dilakukan menurut Sung-Koo Kim et al. (2000) seperti ditampilkan pada Gambar 1. Campuran alginat dan sel C. pyrenoidosa diaduk secara homogen, lalu dilewatkan melalui   pompa   peristaltik   dengan   ujungnya   berupa syringe yang   akan   membentuk bulatan-bulatan.  Gel   dapat   terbentuk   dengan   cara   menampung   tetesan   dari   pompa peristaltik ke dalam larutan 0,5 M CaCl 2 . Selanjutnya, gel-gel (sel imobil) yang terbentuk dicuci   dengan   akuades   steril   dan   dapat   langsung   digunakan   atau   disimpan   di   dalam lemari pendingin pada suhu 4 O C (Romo dan Perez-Martinez, 1997; Wulandari, 1999). Lima akuarium berisi 40 liter air masing-masing diisi ikan nila sebanyak 20 ekor (rata-rata berat ikan 1,6-1,7 g). Sel alga imobil dibungkus dalam kantung nilon berpori dengan diameter 3 mm). Satu akuarium sebagai kontrol, tidak diberi sel C. pyrenoidosa , 4 akuarium lainnya masing-masing diberi kantung nilon berpori berisi 3000, 4000, 5000, dan 6000 butir sel alga imobil. Pada bagian atas akuarium dipasang 1 buah lampu floresens berjarak 40 cm (3000 lux) dan setiap akuarium diberi aerasi. Pengambilan sampel dan pemberian pakan ikan sebanyak 5 g dilakukan setiap 24 jam selama 14 hari. Penelitian ini dilakukan   dengan   4x   ulangan.   Pengukuran   dilakukan   terhadap   konsentrasi   amonium menurut metode Nessler, konsentrasi nitrat, konsentrasi oksigen terlarut menggunakan DO-meter YSI model 33, serta biomassa ikan dengan mengukur berat ikan sebelum dan sesudah diberi perlakuan (Chen, 2001).
Data dianalisis secara statistik menggunakan one-way ANOVA. Dilanjutkan dengan Tukey- HSD. dengan tingkat kepercayaan 95% digunakan untuk mengetahui signifikasi perbedaan rata-rata.
*
Magnet pengaduk

## 126
Larutan NA Alginat 3% + sel Chlorella dengan jumLah inokulum 107 sel / mL
magnet pengaduk jarum Larutan CaCl2 0.3M Pompa peristaltik
Gambar 1. Skema proses imobilisasi sel C. pyrenoidosa Figure 1. Schematic process of immobilizing C pyrenoidosa cell

## Hasil dan Pembahasan
Proses   imobilisasi   menggunakan   kultur  cair C.   pyrenoidosa berjumlah   5,8  x   10 7 sel/mL  yang berumur 7 hari  menghasilkan sel imobil dengan diameter 4 mm (Gambar 2). Setiap butir sel imobil berisi 5,8 x 10 6 sel.
Penggunaan imobilisasi sel alga antara lain bertujuan untuk menghindari alga dari pemangsaan   oleh   herbivora,   terutama   ikan   dalam   kultur.   Selain   itu,   sel   alga   yang diimobilisasi dapat disimpan dalam suhu yang rendah, yaitu 4 O C, dan dalam keadaan gelap dapat tumbuh normal setelah 12 bulan ( Faafent et al., 1994). Hal ini karena selama proses penyimpan pada suhu rendah sel mikroalga menggunakan makanan cadangan berupa pati dan protein yang tersimpan di dalam organel pirenoid.  Pirenoid terdapat di dalam kloroplas dalam bentuk butiran padat, berfungsi dalam proses pembentukan pati. Pada   suhu   rendah   sel   yang   diimobilisasi   mempunyai   pirenoid   berukuran   kecil,   tetapi apabila   disubkultur   kembali   pada   medium   pertumbuhan,   pirenoid   menjadi   berukuran besar kembali (Chen, 2001).
Gambar 2.  Sel C. pyrenoidosa imobil Figure 2. Immobilized C. pyrenoidosa cells
Hasil pengukuran amonium pada kultur ikan setelah 14 hari dengan konsentrasi sel yang   berbeda   tertera   pada   Gambar   3,   yang   menunjukkan   bahwa   penambahan C. pyrenoidosa imobil   mampu   menurunkan   konsentrasi   amonium   pada   kultur   ikan. Pemberian alga imobil sebanyak 4000 butir paling efektif dalam menurunkan konsentrasi amonium   bila   dibandingkan   dengan   pemberian   alga   imobil   sebanyak   3000,   5000   dan 6000 butir. Hal ini menunjukkan bahwa daya dukung lingkungan pada akuarium dengan 4000 alga imobil lebih optimal bila dibandingkan dengan pemberian 5000 dan 6000 alga imobil.   Pemberian   alga   yang   terlampau   melimpah   dapat   menyebabkan   kompetisi   di antara   sesama   alga   terhadap   nutrisi,   cahaya,   dan   faktor-faktor   lainnya   yang menyebabkan ketidakefektifan jumlah sel yang diberikan. Pemberian 3000 sel alga imobil kurang efektif dalam penurunan konsentrasi amonium karena jumlah sel alga imobil yang terlalu   sedikit.   Uji   statistik   menunjukkan   bahwa   seluruh   perlakuan   berbeda   nyata   bila dibandingkan dengan kontrol.
Pada  kontrol,   tanpa   penambahan C.   pyrenoidosa , terlihat   adanya   akumulasi amonium yang sangat tinggi. Hal ini disebabkan oleh tidak terdapatnya C. pyrenoidosa imobil yang dapat menyerap amonium sebagai sumber nitrogen. Pada hari ke-9 terjadi penurunan konsentrasi amonium. Hal ini diduga disebabkan oleh adanya proses oksidasi amonium menjadi nitrit yang merupakan tahap pertama proses nitrifikasi. Proses ini dapat dilakukan oleh bakteri Nitrosomonas yang dapat tumbuh secara alami dalam kultur ikan.

## 128
Pertumbuhan   bakteri Nitrosomonas secara   alamiah   dipicu   oleh   kehadiran   amonium sebagai   sumber   makanannya.   Sebelum   bakteri   ini     tumbuh,   amonium     terakumulasi dalam   akuarium.   Pada   saat Nitrosomonas mulai   tumbuh,   secara   perlahan   amonia menurun karena amonia mulai dikonsumsi oleh bakteri tersebut . Bakteri Nitrosomonas membutuhkan   waktu   sekitar   10-14   hari   untuk   dapat   mengubah   amonia   menjadi   nitrit (Chen, 2001).
0 2 4 6 8 1 0 1 2 1 4 1 6 1 8 2 0 2 2 2 4 2 6 0 2 4 6 8 1 0 1 2 1 4 1 6 W a k t u   I n k u b a s i   ( h a r i ) K o s en tr as i A m o n iu m ( p p m ) 0   (   k o n tr o l ) 3 0 0 0   b u t ir 4 0 0 0   b u t ir 5 0 0 0   b u t ir 6 0 0 0   b u t ir
Gambar 3. Perubahan konsentrasi amonium pada kultur ikan dengan perlakuan sel C. pyrenoidosa imobil   pada   berbagai   konsentrasi,   suhu   23-25 O C,   aerasi   1,2 L/menit, intensitas cahaya 3000-4000 lux
Figure 3.  The change of ammonium concentration in fish culture with various immobilized C. pyrenoidosa cell  concentrations at 24-25ºC, aeration of 1.2 L/minute, light intensity of 3000-4000 lux
Hasil  pengukuran  nitrat   pada   kultur   ikan   setelah   14   hari   menunjukkan   adanya peningkatan konsentrasi nitrat baik pada kontrol maupun pada perlakuan di awal inkubasi (Gambar   4).   Hal   ini   karena   amonium   terlebih   dahulu   digunakan   oleh C.   pyrenoidosa sebagai sumber nitrogen.  Pemanfaatan amonium lebih besar bila dibandingkan dengan pemanfaatan nitrat oleh C. pyrenoidosa (MacDonald, 1978).
Terjadinya   akumulasi   nitrat   pada   awal   inkubasi   diduga   karena   sebagian   besar amonium dapat dimanfaatkan oleh C. pyrenoidosa secara langsung dan sebagian lagi mengalami proses oksidasi yang disebabkan oleh adanya donor oksigen yang berasal dari   aerasi.  Pengocokan   oleh   udara   tersebut   dapat   mengoksidasi   amonium   karena amonium merupakan struktur yang tidak stabil. Oksidasi amonium menjadi nitrit kemudian menjadi nitrat menyebabkan terjadinya akumulasi nitrat yang dapat meningkatkan kadar nitrat (Grant dan Long, 1985).
Pemberian  alga imobil sebanyak 4000 butir paling efektif menurunkan konsentrasi nitrat pada kultur ikan. Tanpa penambahan C. pyrenoidosa akan mengakibatkan adanya akumulasi   nitrat   yang   sangat   tinggi.   Hal   ini   disebabkan   oleh   tidak   terdapatnya C. pyrenoidosa imobil yang dapat menyerap nitrat sebagai sumber nitrogen bagi alga. Uji statistik menunjukkan bahwa seluruh perlakuan berbeda nyata bila dibandingkan dengan kontrol.
Preferensi   adanya   penyerapan  amonium   lebih   dahulu   bila   dibandingkan   dengan nitrat  karena  amonium  dapat  melalui membran  sel  secara  langsung,  sedangkan nitrat mengalami proses translokasi ion karena membran tidak bersifat permiabel untuk nitrat. Pori ion yang terdapat pada membran ganda fosfolipid ( ionophorus) akan mempermudah terjadinya difusi ion, dalam hal ini nitrat bertukar posisi dengan ion klorida. Difusi nitrat
*
K o n s e n t r a s i N i t r a t ( p p m )
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 0 2 4 6 8 10 12 14 16 Waktu Inkubasi (hari) 0 (kontrol) 3000 butir 4000 butir 5000 butir 6000 butir
terjadi dengan mudah apabila konsentrasi internal ion mendekati konsentrasi eksternal. Di dalam sel, nitrat secara kontinyu direduksi menjadi amonium (Nielsen dan MacDonald, 1978).
Gambar   4.     Perubahan   konsentrasi   nitrat   pada   kultur   ikan   dengan   perlakuan   sel C. pyrenoidosa imobil   pada   berbagai   konsentrasi,   suhu   23 O -25 O C,   aerasi   1,2 L/menit, intensitas cahaya 3000-4000 lux
Figure 4.   The change of nitrate concentration in fish culture with various immobilized C. pyrenoidosa cell  concentrations   at   24-25ºC,   aeration   of   1.2   L/minute,   light intensity of 3000-4000 lux
Pengamatan  terhadap   oksigen   terlarut   setiap   hari   bertujuan   untuk   mengetahui perubahan  oksigen  terlarut selama inkubasi.  Perubahan oksigen terlarut menjadi salah satu   tolok   ukur   kualitas   air   dalam   kultur   ikan   karena   berhubungan   erat   dengan kemampuan  mikroalga  dalam   melakukan   fotosintesis.   Pada   Gambar   5   terlihat   bahwa optimasi   dengan   pemberian   alga   imobil   sebanyak   4000   butir   memiliki   nilai   rata-rata oksigen terlarut paling besar, yaitu 5,36 ppm. Konsentrasi oksigen terlarut pada kontrol lebih   rendah   bila   dibandingkan   dengan   perlakuan   pemberian   alga   imobil.   Rata-rata oksigen terlarut pada kontrol lebih kecil dari 5 ppm, sedangkan pada seluruh perlakuan dengan penambahan C. pyrenoidosa imobil rata-rata lebih besar dari 5 ppm. DO normal pada kultur ikan air tawar yaitu  5 ppm.  Hal ini menunjukkan adanya kemampuan C. pyrenoidosa untuk   berfotosintesis   yang   menghasilkan   peningkatan   oksigen   terlarut (Pandey   dan   Trivedi,   1995).   Aktivitas C.   pyrenoidosa dalam   melangsungkan   proses fotosintesis  ini  mempengaruhi   ketersediaan  oksigen  terlarut   dalam  kultur ikan  sebagai produk akhir dalam proses ini.
4 4,2 4,4 4,6 4,8 5 5,2 5,4 5,6 5,8 0 2 4 6 8 10 12 14 16 Waktu inkubasi (hari) 0 (Kontrol) 3000 butir 4000 butir 5000 butir 6000 butir O ks ig en te rla ru t ( p pm )
Gambar 5.   Perubahan konsentrasi oksigen terlarut   pada kultur ikan dengan perlakuan sel C. pyrenoidosa imobil pada berbagai konsentrasi, suhu 23 O -25 O C, aerasi 1.2 L/menit, intensitas cahaya 3000-4000 lux
Figure   5.   The   change   of   dissolved   oxygen   concentration  in   fish   culture   with   various immobilized C.  pyrenoidosa cell  concentrations,  at  24-25ºC,  aeration of  1.2 L/minute, light intensity of 3000-4000 lux
Gambar 6.   Kenaikan berat ikan pada kultur ikan dengan perlakuan sel C. pyrenoidosa imobil   dengan   berbagai   konsentrasi,   suhu   23 O -25 O C,   aerasi   1.2   L/menit, intensitas cahaya 3000-4000 lux
Figure   6.     The   increasing   weight   fish  in   fish   culture   with   various  immobilized C. pyrenoidosa cell  concentrations, at 24-25ºC, aeration of 1.2 L/minute, light intensity of 3000-4000 lux
Pengamatan  terhadap   berat   ikan   pada   hari   ke-14   bertujuan   untuk   mengetahui hubungannya   dengan   kualitas   air.   Gambar   6   menunjukkan   bahwa   pemberian   C. pyrenoidosa   imobil   sebanyak   4000   butir   dapat   meningkatan   berat   ikan   paling   tinggi dengan  laju kenaikan berat  ikan 1,56 g/ekor selama  14 hari.  Hal ini  disebabkan oleh tercapainya  kualitas air terbaik.  Dengan tingginya penurunan kadar amonium dan nitrat, kualitas air dalam akuakultur menjadi meningkat sehingga terjadi kenaikan berat ikan.
*

## Kesimpulan
Penambahan  sel C. pyrenoidosa imobil sebanyak 4000 butir mampu menurunkan kadar amonium dan kadar nitrat dengan kenaikan oksigen terlarut tertinggi dan kenaikan biomassa ikan sebesar 1,56 g/ekor selama 15 hari.

## Daftar Pustaka
Becker,   E.W.   1994.  Microalgae;   Biotechnology   and   Microbiologi.   Cambrige   University Press. Cambrige, New York.
Chen   C.Y.   2001.   Immobilized   microalga Scenedesmus   quadricauda (Chlorophyta, Chlorococcales) for long-term storage and for application in fish culture water quality control. Aquaculture, 195 (1-2), 71-80.
Chevalier,   P.,   de   la   Noue,   J.   1985.  Wastewater   nutrient   removal   with   microalgae immobilized in carrageenan, Enzyme Microb. Techol . ,7, 621-624.
Faafent,   B.A.,   von   Donk,   Kallqvist,   S.T.   1994.  In   situ   measurement   of   algal   growth potensial in aquatic ecosystems by immobilized algae. J. Appl. Phycol., 6, 301-308.
FAO, 2000. PART 1. World Review of Fisheries and Aquaculture. Fisheries Resources: Trend in Production, Utilization, and Trade.http://www.fao/DOCREP/003/X8002E/.
Grant,W.D.   and   Long,   P.E.1985.   The   nature   environment   and   biogeochemical   cycle. Volume 1. Berlin: Springler – Verlag.
Kurniati,   T.,   1996.   Pengaruh   kadar   mikronutrien   Fe   terhadap   produksi   zat   pengatur tumbuh   dan   senyawa   antibiotika   pada   kultur   sel Chlorella   pyrenoidosa dengan sistem terbuka. Skripsi Sarjana Biologi.ITB.
Nielsen, R. Donald and MacDonald, I.G. 1978.  Nitrogen in the Environment. Academic Press,INC. pp 143-169.
Pandey, S.N. and Trivedi, P.S.  1995 . A Textbook of algae. Mandras:  Vicas Publishing House PVT.Ltd. pp 113.
Proulx,   D.,   de   la   Noue,   J.   1988.  Removal   of   macronutrients   from   wastewater   by immobilized algae. In: Moo-young M. (ed), Bioreactor immobilized   enzymes and cells: Fundamental and application. Elsevier Applied Science, 301-310.
Romo, S. and Perez-Martinez, C. 1997. The use of immobilization in alginate beads for long-term   storage   of Pseudanabaena   galeata (Cyanobacteria)   in   laboratory. J. Phycol. , 33, 1073-1076.
Sung-K.K., Kong, I., and Lee, B.H. 2000.  Removal of Ammonium-N from a recirculation aquacultural   system   using   an   immobilized   nitrifier . Aquacultural   Engineering, 21, 139-150.
Wilkonson,   C.S.,   Goulding,   K.H.,   and   Robinson,   P.K.   1990.   Mercury   removal   by immobilized algae in batch culture system . J. Appl. Phyco ., 2, 223-230.
Wulandari, W. 1999. Konservasi pati dari ubijalar menjadi glukosa secara enzimatis dan selanjutnya   menjadi   fruktosa   dengan Streptomyces   sp. imobil.   Skripsi   Sarjana. Jurusan Biologi. FMIPA. ITB.Bandung.
Zonneveld,   H.,   Huisman,   E.A.,   and   Boon,   J.   1991.  Prinsip-Prinsip   Budidaya   Perairan. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.