JFFI. 2019; 6(1) 309-314 www.jurnal.farmasi.umi.ac.id/index.php/fitofarmakaindonesia
AKTIVITAS PENGHAMBATAN POLIMERISASI HEM DARI FRAKSI ETIL ASETAT DAUN MANURAN Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne
(Rubiaceae)
Arnida 1* , Sutomo 1 , Lia Rusyida 1
1 Program a Studi a Farmasi a Fakultas a MIPA, Universitas a Lambung a Mangkurat * arnida01@ulm.ac.id
Submission Date: 28-09-2018; Review Completed: 29-12-2018;
Accepted Date: 06-01-2019

## ABSTRACT
Malaria is a serious disease caused by Plasmodium parasites and is transmitted by the salivary glands of female Anopheles mosquito. The manuran (Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne ) is empirically used as a malarial  treatment.  The  study  aimed  to  determine  the  IC 50 value  of  ethyl  acetate  fraction  and  the  coumpounds contained  on  the  C.  tomentosa  Valeton  ex  K.  Heyne  leaf  ethyl  acetat  fraction.  The  identification  of  chemical composition used tube test method. The inhibitory activity of heme polymerization in vitro did by Basillico modified method. The identification of chemical contents on the ethyl acetate fraction of C. tomentosa leaf Valeton ex K. Heyne showed positive results containing flavonoid, tannin, saponin, terpenoid, and anthraquinone. The average percentage heme polymerization inhibition of C. tomentosa valeton ex K. Heyne leaf ethyl acetate fraction respectively from large to small concentrations of 97.94; 96.94; 95.01; 91.63; 86.19; 76.12; and 44.83  %. Result of probit analysis, that it has HPIA IC 50 value of 0.252±0.009 mg/mL and chloroquine diphosphate was 0.214±0.012 mg/mL. The independent sample T-test showed that there was significant difference between IC 50 value of them. The ethyl acetate fraction of C. tomentosa leaf Valeton ex K. Heyne has heme polymerization inhibition activity.
Keywords: heme polymerization, Coptosapelta tomentosa Valeton ex K. Heyne , Rubiaceae, Antimalarial

## I. PENDAHULUAN
Malaria  merupakan  penyakit  yang  sangat berbahaya yang disebabkan oleh parasit Plasmodium dan ditularkan oleh air liur nyamuk Anopheles betina (WHO,  2010).  Penyakit  ini  banyak  ditemukan  di daerah iklim tropis salah satunya seperti di Indonesia (Wahyono et  al .,  2010).  Penyakit  malaria  ini  dapat menyebabkan  kekurangan  sel  darah  merah  (anemia) dan  berkurangnya  jumlah  kandungan  hemoglobin (Hb)  di  dalam  darah.  Data  yang  ada  di  Kabupaten Banjar  mengalami  peningkatan  dari  275  orang  pada tahun 2011 menjadi 335 orang di tahun 2012 (Dinkes Kab Banjar, 2012).
Manuran, Coptosapelta  tomentosa Valeton ex K.  Heyne adalah salah satu tanaman  dari  daerah Kotabaru  Kalimantan  Selatan  yang  digunakan secara  empiris oleh  masyarakat sebagai  antimalaria. Ekstrak  etanol  daun C . tomentosa mengandung senyawa flavonoid, tanin, saponin,  antrakuinon, terpenoid, dan  glikosida.  Penelitian  Shafwatunnida (2009)  tentang  kandungan  senyawa  pada  fraksi  etil asetat  dari  akar C . tomentosa meliputi  flavonoid, tanin,  saponin,  antrakuinon,  dan  terpenoid.  Belum adanya  penelitian  mengenai  khasiat  fraksi  etil  asetat
daun C . tomentosa asal Kotabaru Kalimantan Selatan sebagai antimalaria, sehingga peneliti ingin melakukan penelitian lebih lanjut mengenai aktivitas penghambatan polimerisasi hem fraksi etil asetat daun C . tomentosa asal Kotabaru Kalimantan Selatan. Penelitian  ini  dilakukan  dengan  metode penghambatan  polimerisasi  hem.  Polimerisasi hem merupakan metode yang sederhana dan cukup akurat untuk  mengetahui adanya aktivitas antimalaria. Polimerisasi hem  juga  digunakan  sebagai  skrining awal  untuk  mempelajari  mekanisme  kerja  senyawa tanaman yang mengandung khasiat sebagai antimalaria (Huy et al., 2007).

## II. METODE PENELITIAN

## A. Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  adalah  alat  gelas (Pyrex ® Iwaki  Glass)  batang  pengaduk,  cawan penguap, chamber, maserator, mikrotube, pipet tetes, pipet  volume,  pisau,  pro  pipet,  rak  tabung, rotary evaporator (Heidolph),  microplate  96  sumuran (Matrix ® ), mikropipet (Effendorf), UV 254, UV 366, pH  meter,  timbangan  analitik,  sentrifuge,  inkubator
(Memmert), vortex mixer (Maxi Mix II ® ), waterbath (Memmert) dan ELISA reader (EON TM ).
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun C. tomentosa ,  aluminium  foil,  anisaldehid  asam  sulfat (teknis), ammonia (p.a), akuades, asam asetat anhidrat (teknis),  asam  asetat  glasial  (p.a),  asam  sulfat  pekat (teknis),  benzena,  besi  (III)  klorida,  DMSO  100%
(p.a),  etil  asetat  (teknis),  n-heksana  (teknis),  FeCl 3 1%,  H 2 SO 4 ,  HCl  2  N,  kalium  hidroksida  etanolik, kertas  saring,  kloroform  (teknis),  klorokuin  difosfat, kristal  hematin,  methanol  (p.a),  NaOH,  etanol  96%, pereaksi  Dragendorff,    pereaksi  Mayer,  dan  silika GF 254 .

## B. Prosedur Penelitian
1. Pembuatan Ekstrak Daun C. tomentosa Valeton ex K. Heyne
Sebanyak  193,73 gram serbuk kasar daun C.  tomentosa direndam dengan  pelarut etanol  96  % sebanyak  4  L.  Maserasi dilakukan  1x24  jam. Larutan a selanjutnya a disaring dan residu diremaserasi sebanyak  4  kali.  Hasil  maserasi  diuapkan  dengan menggunakan rotary  vacuum  evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental.
2. Pembuatan Fraksi Etil Asetat Daun C. tomentosa Valeton ex K. Heyne
Ekstrak  etanol  kental  yang  diperoleh disuspensikan menggunakan akuades dengan perbandingan  ekstrak  dan  akuades  1:4.  Sampel sebanyak  10  gram  disuspensikan  dengan  40  mL akuades sampai  homogen dan  dimasukkan  ke  dalam corong  pisah,  kemudian  ditambahkan n -heksana sebanyak  40  mL,  dihomogenkan  dan  difraksinasi dengan  cara  di  gojok,  dan  didiamkan  sampai  terjadi pemisahan  2  lapisan.  Lapisan n -heksana  dipisahkan dan  lapisan  air  yang  tertinggal  ditambahkan  pelarut etil  asetat  sebanyak  40  mL,  dihomogenkan  dan difraksinasi dalam corong pisah dengan cara digojog. Fraksinasi ini dilakukan 9x replikasi hingga pelarut n - heksana  jernih,  selanjutnya  fraksi  air  di  fraksinasi kembali  menggunakan  pelarut  etil  asetat  dengan menggunakan  cara  yang  sama  seperti  di  atas, dilakukan  3x  replikasi,  Lapisan  etil  asetat  yang terdapat  pada  bagian  atas  diambil,  kemudian diuapkan menggunakan rotary evaporator, kemudian dipekatkan  menggunakan waterbath hingga  didapat ekstrak kental.
3. Skrining Fitokimia
a. Alkaloid
Sebanyak  2  mg  fraksi  etil  asetat  dilarutkan dengan  5  mL  HCL  2  N.  Larutan  dibagi  ke  dalam  2 tabung reaksi. Tabung pertama ditambahkan pereaksi Dragendorff  sebanyak  3  tetes,  dan  tabung  kedua ditambahkan  pereaksi  Mayer  sebanyak  3  tetes. Terbentuknya  endapan  jingga  pada  tabung  pertama dan  endapan  putih  hingga  kekuningan  pada  tabung
kedua  menunjukkan  adanya  alkaloid  (Jones  & Kinghorn, 2006).
b. Flavonoid Sebanyak 2 mL fraksi etil asetat ditambahkan  beberapa  tetes  larutan  FeCl 3 ,  apabila terbentuk  warna  ungu  maka  positif  mengandung flavonoid (Atun, 2014).
c. Steroid
Larutan  fraksi  etil  asetat  sebanyak  0,5  mL ditambah dengan 2 mL pereaksi Lieberman Burchard. Hasil  positif  adanya  steroid  ditandai  dengan perubahan  warna  dari  violet  menjadi  biru  atau  hijau (Handayani, 2010).
d. Terpenoid
Sebanyak  0,10  mg  fraksi  etil  asetat dilarutkan  dengan  kloroform  kemudian disaring, ditambahkan beberapaatetes  asam a sulfat  pekat,  lalu dikocok.  Jika a campuran  berbentuk  endapan  cincin coklat hasil positif triterpen (Tiwari et al. , 2011).
e. Tanin
Sebanyak  3  mL  larutan  fraksi  etil  asetat ditambahkan 5 tetes NaCl 10%, dan 3 tetes pereaksi FeCl 3 . Terbentuknya campuran berwarna biru tua atau hijau kehitaman (Marliana, 2005).
f. Saponin
Sebanyak 0,5 g fraksi etil asetat ditambahkan 5 ml akuades. Larutan dikocok kemudian terbentuknya buih yang stabil selama 30 menit maka dapat  dinyatakan  senyawa  positif  mengandung saponin (Atun, 2014).
g. Antrakuinon
Sebanyak  1  mL  larutan  fraksi etil  asetat ditambahkan  dengan  2  mL  ammonia.  Jika  terbentuk warna  merah  maka  senyawa  tersebut  mengandung antrakuinon  dan  kuning  untuk  antron  dan  diantron (Setyawaty et al ., 2014).
4. Kromatografi Lapis Tipis
Fase diam yang digunakan adalah plat silika GF 254 . Pengamatan dilakukan di bawah sinar UV 254 nm  dan  366  nm  sedangkan  fase  gerak  dan penampakan  noda  yang  digunakan  adalah  sebagai berikut:
a. Alkaloid
Fase gerak n-heksana (p.a) – etil asetat (p.a) (7:3). Hasil positif apabila timbul bercak warna coklat atau jingga pada hasil kromatografi setelah disemprot dengan  Dragendorff.  Penampakan  bercak  tanpa pereaksi kimia di bawah lampu UV 366 nm alkaloid akan  berfluoreseni  biru,  biru  hijau,  atau  ungu (Marliana, 2007).
b. Flavonoid
Fase  gerak  n-heksana  (p.a)  –  etil  asetat  (p.a) (7:3).  Penampak  noda  berupa  uap  ammonia  yang menimbulkan  warna  kuning  muda pada  hasil kromatografi menunjukkan adanya flavonoid (Marliana, 2007).
c. Steroid dan Terpenoid
Fase  gerak  n-heksana  (p.a)  –  etil  asetat  (p.a) (7:3). Penampakan  bercak  yang  digunakan  adalah pereaksi  semprot  anisaldehid  asam  sulfat.  Hasil positif apabila timbul bercak warna ungu -merah atau ungu  pada  hasil  kromatografi  ( Wagner  &  Bland, 1996).
d. Tanin Fase  gerak  n-heksana (p.a)  –  etil  asetat (p.a)
(7:3).  Jika  timbul  warna  ungu  kehitam pada  hasil kromatografi setelah  penyemprotan  pereaksi  FeCl 3 10%  menunjukkan  adanya  senyawa  tanin  (Hayati et al ., 2012).
e. Antrakuinon Fase  gerak  n-heksana (p.a)  –  etil  asetat (p.a)
(7:3).  Pereaksi  semprot  kalium  hidroksida  etanolik. Hasil  dikatakan  positif  apabila  memberikan  warna violet  merah pada  hasil  kromatografi (Wagner  & Bland, 1996).
5. Uji Aktivitas Penghambatan Polimerisasi Hem
Kelompok  bahan  uji  dan  kontrola  ositif (klorokuin  difosfat)  masing-masing  dibuat  seri konsentrasi  20;  10;  5;  2,5;  1,25;  0,625;  dan  0,3125 mg/mL. Diambil masing-masing 100 μL dimasukkan ke  dalam  mikrotube.  Penambahan  200  μL  larutan hematin  ke  dalam  masing  masing  seri  konsentrasi, selanjutnya ditambahkan 100 μL larutan asam asetat glasial  100  %  (pH  2,6).  Kemudian,  diinkubasi  pada suhu  37 o C  selama  24  jam.  Setelah  inkubasi  selesai, tiap-tiap  uji  dalam  mikrotube  disentrifugasi  dengan kecepatan  8000  rpm  selama  10  menit.  Endapan  dan supernatant dipisahkan, supernatant dibuang. Endapan dicuci dengan menambahkan 400 μL DMSO 100%, disentrifuse berkecepatan 8000 rpm selama 10 menit,  setelah  itu  dibuang  supernatant  dibuang,  lalu ditambahkan  lagi  dengan  400  μL  DMSO  100%. Pencucian  diulangi  sebanyak  3  kali.  Endapan  yang diperoleh  ditambahkan  NaOH  0,1  M  sebanyak  400 μL, kemudian diambil sebanyak 100 μL dimasukkan
ke  dalam  microplate  96  sumuran  dan  dibaca  nilai absorbansinya pada Elisa reader.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan Fraksinasi
Ekstrak yang diperoleh dari proses a ekstraksi m aserasi sebanyak  12,35  gram,  sehingga  diperoleh persen rendemen sebesar 6,37%. Dari 10 gram ekstrak etanol  yang  difraksinasi  dengan  cara  corong  pisah diperoleh  fraksi  etilasetat  sebesar  0,817  gram sehingga diperoleh persen rendemen 8,17%.

## Skrining Fitokimia
Golongan  senyawa  yang  positif  dari  hasil skrining fitokimia  yaitu  golongan  flavonoid,  tanin, saponin, steroid, terpenoid, dan antrakuinon (Tabel 1). Tabel  1 . Hasil a skrining  fitokimia  fraksi  etil  asetat daun C. tomentosa
No Golongan a senyawa  Jenis a pereaksi  Hasil 1 Alkaloid Dragendorff Mayer - - 2 Flavonoid FeCl 3 + 3 Tanin FeCl 3 + 4 Saponin Tes buih + 5 Steroid Lieberman Burchard - 6 Terpenoid Salkowski’s Test + 7 Antrakuinon Ammonia +

## Kromatografi Lapis Tipis
Kromatografi  lapis  tipis  dilakukan  untuk mempertegas  hasil  skrining  fitokimia  yang  telah dilakukan  (Tabel  1).  Hasil  identifikasi  dengan  KLT diperoleh  senyawa  yang  bereaksi  positif  adalah flavonoid,  terpenoid  dan  steroid,  tanin,  antrakuinon, dan saponin (Tabel 2).
Tabel 2. Hasil kromatogram fraksi etil asetat daun C. tomentosa setelah disemprot dengan pereaksi.
No. Senyawa Pereaksi Semprot Warna Bercak Kesimpulan 1 Alkaloid Dragendorff - (-) 2 Flavonoid Uap ammonia Biru terang (+) 3 Terpenoid dan Steroid Anisaldehid asam Sulfat Merah (+) 4 Tanin FeCl 3 Hitam-hijau (+) 5 Antrakuinon KOH-etanolik Violet-Merah (+) 6 Saponin Anisaldehid as. sulfat Violet (+)
Aktivitas Penghambatan Polimerisasi Hem Fraksi Etil  Asetat  Daun  C.  tomentosa  Valeton  Ex.  K.
Heyne Pengujian aktivitas
penghambatan polimerisasi  hem  diawali  dengan  penentuan  kurva baku hematin,  dengan  cara  pembacaan absorbansi pada ELISA a reader dengan Panjang gelombang 405
nm  (Basilico et  al .,  1998).  Hasil  kurva  baku  yang diperoleh menunjukkan persamaan linear y = 0,014x +  0,024  dengan  nilai a koefisien a kolerasi  (r)  =  0,999 dan  nilai  r 2 = 0,998  (Gambar a 1).  Nilai  koefisien kolerasi menunjukkan bahwa adanya hubungan linear yang terjadi antara konsentrasi dan absorbansi sebesar 99,9%.
Gambar 1 . Kurva baku hematin
Persamaan  kurva baku  y = 0,014x + 0,024 digunakan  untuk  menentukan kadar beta -hematin masing-masing  konsentrasi.  Penetapan kadar β - hematin  ditentukan  dengan  cara  memasukkan  nilai absorbansi  sampel  uji  sebagai  nilai ’y’ pada persamaan y = a 0,014x a + a 0,024. Kadar beta- hematin
yang diperoleh adalah nilai ‘x’ pada persamaan (Tabel 3).  Persen  penghambatan  akan  diperoleh  dari  nilai kadar beta -hematin  yang  diperoleh.  Semakin  tinggi konsentrasi sampel maka semakin tinggi nilai persen penghambatannya (Tabel 3).
Tabel 3. Pengaruh pemberian fraksi etil asetat daun C. tomentosa Valeton ex K. Heyne terhadap aktivitas penghambatan polimerisasi hem
No Bahan Uji Konsentrasi (mg/mL) Rerata Kadar Hemozoin ± SD Rerata % Penghambatan ± SD IC 50 (mg/mL) 1 Fraksi etil asetat daun C. tomentosa 20 2,67±0,27 97,94±0,21 0,252±0,009 10 3,95±0,29 96,94±0,22 5 6,45±0,48 95,01±0,37 2,5 10,81±0,62 91,63±0,48 1,25 17,83±0,46 86,19±0,36 0,625 30,86±0,31 76,12±0,42 0,3125 71,29±1,18 44,83±0,91 2 Kontrol positif Klorokuin difosfat 20 2,31±0,11 98,17±0,09 0,214±0,012 10 3,48±0,15 97,25±0,12 5 5,67±0,23 95,51±0,18 2,5 9,62±0,33 92,38±0,26 1,25 15,74±0,92 87,53±0,73 0,625 27,02±0,72 78,59±0,57 0,3125 64,45±1,94 48,93±1,54
0 1 2 3 4 0 50 100 150 200 250 300 Kurva Baku y y = 0,014x + 0,024 Konsentrasi  β-hematin Absorbansi r 2 = 0,998
Nilai IC 50 didapatkan melalui analisis probit. Hasil  penelitian  pada  fraksi  etilasetat  daun C.
tomentosa memiliki aktivitas penghambatan polimerisasi hem dengan nilai  IC 50 0,252  ±  0,009 mg/mL,  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  fraksi etilasetat  daun C.  tomentosa memiliki  aktivitas penghambatan polimerisasi hem. Nilai IC 50 klorokuin difosfat pada penelitian ini sebesar 0,214±0,012 a mg/mL. Analisis hasil pengujian aktivitas penghambatan polimerisasi hem ini dilakukan dengan uji independent sampel T- test yang digunakan untuk mengetahui  signifikasi  nilai  IC 50 antara  fraksi  etil asetat dengan klorokuin difosfat. Hasil uji menunjukkan  terdistribusi  normal  karena  tidak  ada perbedaan antara bahan uji dengan klorokuin difosfat karena nilai signifikansi > 0,05 yaitu secara berturut- turut  0,600  dan  0,312.  Homogenitas  data  dapat diketahui  melalui  uji  homogenitas  varians.  Hasil  uji tersebut  menunjukkan  nilai  signifikansi  0,013  yang berarti  <  0,05  sehingga  H 0 ditolak.  H 0 ditolak  yang artinya  menunjukkan  adanya  perbedaan  yang bermakna  atau  signifikan  nilai  IC 50 fraksi  etil  asetat daun C.  tomentosa dengan  klorokuin  difosfat. Aktivitas  penghambatan  polimerisasi  hem  antara fraksi etil asetat daun C. tomentosa dengan klorokuin difosfat  dapat  dikatakan  tidak  sebanding,  karena klorokuin difosfat memiliki aktivitas yang lebih besar dalam menghambat a polimerisasi a hem a dibandingkan fraksi etil asetat daun C. tomentosa .

## IV. KESIMPULAN
1. Identifikasi  kandungan  kimia  pada  fraksi  etil asetat daun C. tomentosa menunjukkan hasil yang positif  mengandung  senyawa  flavonoid,  tanin, saponin, terpenoid, dan antrakuinon.
2. Persentase  pengambatan  polimerisasi  hem  fraksi etil asetat daun C. tomentosa pada konsentrasi 20; 10;  5;  2,5;  1,25;  0,625;  0,3125  mg/mL secara berturut-turut  yaitu  97,94;  96,94;  95,01;  91,63; 86,19; 76,12; dan 44,83 %
3. Fraksi  etil  asetat  daun C.  tomentosa memiliki aktivitas penghambatan polimerisasi hem dengan nilai IC 50 sebesar 0,252±0,009 mg/mL .

## V. UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  atas dukungan  pembiayaan  kepada  Kementerian  Ristek- Dikti  melalui  hibah  PPT.  Terima  kasih  kepada  Ibu Nurlely,  M.Sc  (Pharm).,  Apt  dan  Bapak  Nashrul Wathan, M. Farm., Apt atas sumbangsih saran-saran dalam perbaikan tulisan. Terima kasih dukungan tim di laboratorium Silfi, Usna, dan Humairah.

## DAFTAR PUSTAKA
Arnida,  Eka  Rahmawaty  Sahi,  Sutomo,  2017, Aktivitas  Antiplasmodium  In  Vitro  Dan Identifikasi Golongan Senyawa Dari Ekstrak Etanol  Batang  Manuran  ( Coptosapelta tomentosa Valeton  Ex  K.Heyne)  Asal Kalimantan Selatan, Jurnal Ilmiah Ibnu Sina, 2 (2), 270-278 .
Atun,  S.  2014.  Metode  Isolasi  dan  Identifikasi Struktur  Senyawa  Organik  Bahan  Alam. Jurnal Konservasi Cagar Budaya Borobudur. 8: 53-61.
Basilico, N., E. Pagani, D. Monti, P. Olliaro, &amp; D.  Taramelli.  1998.  A  Microtitre-Based Method for Measuring the Haem
Polymerization  Inhibitory  Activity  (HPIA) of Antimalarial Drugs. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 42: 55–60.
Dinkes  Kabupaten  Banjar.  2012.  Laporan  Tahunan Bidang  Keluarga  Tahun  2012.  Seksi  KIA. Kabupaten Banjar.
Huy,  N.T.,  Maeda,  A.,  Uyen,  D.T.,  Trang,  D.T.X.,
Sasai,  M.,  Shiono,  T.,  Oida,  T.,  Harada,  S. &amp;  Kamei,  K.,  2007,  Alcohols  induce beta-hematin  formation  via the dissociation of  aggregated  hem  and  reduction  in interfacial  tension  of  the  solution.  Acta Tropica. 101:130–138.
Jones,  W.P.,  Kinghorn,  A.D.  (2006).  Extraction  of Plant  Secondary  Metabolites.  In:  Sharker, S.D. Latif Z., Gray A.L, eds. Natural Product
Isolation. 2nd edition. New Jersey, Humana Press.
Marliana,  S.D.,  V.  Suryanti  &amp;  Suyono.  2005.
Skrining Fitokimia
dan Analisis Kromatografi  Lapis  Tipis  Buah  Labu  Siam (Sechium  edule  Jacq.  Swartz.)  dalam Ekstrak  Etanol.  Jurusan  Biologi  FMIPA UNS, Surakarta.
Setyawaty, R., A. Ismunandar, &amp; N.Q. Ngaeni. 2014.  Identifikasi  Senyawa  Antrakuinon Pada  Batang  Mengkudu  (Morinda  citrifolia L) Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis.
Prosiding  Seminar  Nasional  Hasil  –  Hasil Penelitian  dan  Pengabdian  LPPM  UMP, Purwokerto.
Shafwatunnida,  L.  2009.  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Kimia  Fraksi  Etil  Asetat  Akar Tumbuhan
Manuran (Coptosapelta tomentosa  Valeton  ex  K.  Heyne)  Asala Kabupaten  Kotabaru  Kalimantan  Selatan. Skripsi,  Universitas  Lambung  Mangkurdat, Banjarbaru.
Tiwari,  Prashant.,  Bimlesh  Kumar,  Mandeep  Kaur, Gurpreet  Kaur,  Harleen  Kaur.  2011.
Phytochemical Screening and Extraction: A
Review. International
Pharmaceutica
Scienca. 1: 98-106 Wagner,  H.  &amp;  S.  Bland.  1996.  Plant  Drug Analysis;  A  Thin  Layer  Chromatography Atlas.  2nd  Edition.  Springer.  Berlin Heidelberg:
Wahyono,  Pudjono  &amp;  P.  Widyati.  2010.  Uji Aktivitas  Senyawa  Anti  Plasmodium  dari Fungi  Endofit  Tanaman  Artemsiaannua  L. Majalah Farmasi Indonesia. 21: 230-235. WHO.  2010.  World  Malaria  Report.  WHO  Library Cataloguing-in-Publication Data,
Switzerland.