Eksplorasi Bakteri Termohalofilik Potensial Penghasil L-Asparaginase Sebagai Antikanker 716

## EKSPLORASI BAKTERI TERMOHALOFILIK POTENSIAL PENGHASIL L-ASPARAGINASE SEBAGAI ANTIKANKER DI SUMBER AIR PANAS WAWOLESEA

## EXPLORATION OF POTENTIAL THERMOHALOPHILIC BACTERIA PRODUCING L-ASPARAGINASE AS AN ANTI-CANCER IN WAWOLESEA HOT SPRING
Jamaluddin 1* , Alfin 2 , Muzuni 3 , Nur Arfa Yanti 4
1, 2 Mahasiswa Program Studi Biologi, Fakultas Matematika & Ilmu Pengetahuan Alam, Univ. Halu Oleo
3 Laboratorium Unit Genetika, Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Halu Oleo
4 Laboratorium Unit Mikrobiologi, Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Halu Oleo
1* Email corresponding author: jamaluddinalbuthuni09@gmail.com

## ABSTRAK
Tujuan penelitian ini adalah untuk memperoleh isolat bakteri termohalofilik penghasil enzim L-aparaginase  dari  sumber  air  panas  Wawolesea.  Bakteri  termohalofilik  penghasil  L- asparaginase  asal  sumber  air  panas  Wawolesea  diperoleh  dengan  tahapan:  survey  dan pengukuran parameter lingkungan sumber air panas Wawolesea; isolasi bakteri pada media NA  ( Nutrient  Agar )  dan  seleksi  bakteri  penghasil  enzim  L-asparaginase  pada  media  M-9. Hasil  isolasi  menunjukkan  adanya  52  isolat  bakteri  termohalofilik  dan  14  isolat  diantaranya mampu menghasilkan L-asparaginase.
Kata Kunci : Bakteri Termohalofilik, L-Asparaginase, Sumber Air Panas Wawolesea

## ABSTRACT
The objective of this study  was to obtain  isolates of thermohalophilic bacteria producing L- asparaginase enzyme from Wawolesea hot spring. L-asparaginase producing thermohalophilic bacteria from the Wawolesea hot spring are obtained by steps;  survey and environmental  parameters  measurement  of  Wawolesea  hot  spring,  isolation  of  bacteria  on NA  (Nutrient  agar)  medium  and  selection  of  L-asparaginase  producing  bacteria  on  M-9 medium.  The  isolation  results  showed  52  isolates  of  thermohalophilic  bacteria  and  14 isolates of them capable of producing L-asparaginase.
Keywords : Thermohalophilic bacteria, L-asparaginase, Wawolesea hot spring

## PENDAHULUAN
Kanker merupakan salah satu penyakit  penyebab  kematian  utama  di seluruh dunia. Data GLOBOCAN ,
International  Agency  for  Research  on Cancer ( IARC ) menunjukkan bahwa  pada tahun 2012 angka kematian akibat kanker mencapai  8.201.575  (Primadi,  2015). Selain  itu,  secara  Nasional  prevalensi penyakit  kanker  pada  penduduk  semua umur  di  Indonesia  pada  tahun  2013
adalah  sebesar  1,4%  atau  diperkirakan mencapai  347.792  jiwa  pada  semua provinsi (Kementrian Kesehatan RI, 2015).
Tingginya prevalensi kanker di Indonesia menyebabkan peningkatan angka kemiskinan dan menghambat pembangunan  yang  berkelanjutan.  Selain itu  pula,  tingginya  prevalensi  kanker menyebabkan  menurunya  angka  harapan hidup  (AHH)  yang  secara  signifikan  akan mempengaruhi  pertumbuhan  ekonomi.
Data  WHO  (2002)  menunjukkan  bahwa setiap  peningkatan  10%  dari  angka harapan  hidup  (AHH)  akan  meningkatkan pertumbuhan  ekonomi  minimal  0,3-0,4% pertahun. Oleh karena itu, solusi penanganan  penyakit  kanker  harus  lebih maksimal.
Dewasa  ini,  penanganan  kanker  di Indonesia  dilakukan  dengan  mengunakan obat-obatan  dan  operasi.  Penggunaan obat-obatan  di  Indonesia  masih  belum mampu mengatasi permasalahan penyakit kanker  (Kementrian  Kesehatan  RI,  2015). Oleh  karena  itu,  penanganan  kanker membutuhkan  alternatif  lain  yang  lebih maksimal.  Saat  ini,  dibeberapa  negara telah  mengembangkan  L-asparaginase sebagai  agen  terapi  kanker.  Akan  tetapi pemanfaatan L-asparaginase untuk penggunaan terapi kanker belum diproduksi  di  Indonesia,  sehingga  masih diperoleh penggunaan produksi L- asparaginase dari luar negeri (Aprigiyonis, 2011). Oleh sebab itu, kegiatan eksplorasi sumber  L-asparaginase  penting  untuk dilakukan.
L-asparaginase  adalah  salah  satu jenis  enzim  hidrolase  yang  mengkatalisis reaksi hidrolisis L-asparagin menjadi asam aspartat  dan  amonia  (Masri,  2014).  L- asparaginase  merupakan  enzim  yang digunakan sebagai agen kemoterapi pada pengobatan  kanker  sistem  limfatik,  ALL ( Acute  Lymphoblastic  Leukimia ),  dan melanosarkoma  (Singh et  al. ,  2013).
Kemampuan L-asparaginase sebagai agen  anti  kanker  karena  L-asparaginase
mampu  mendeplesi  jumlah  asparagin yang bersifat esensial terhadap pertumbuhan sel kanker (Nagarethinam et al. , 2012).
Enzim  L-asparaginase  terditribusi secara  luas  pada  sel  eukariotik  dan prokariotik.  E-Moharam et  al (2010) melaporkan bahwa jumlah L-asparaginase dihasilkan  dalam jumlah  yang  besar  pada mikroorganisme Candida  utilities,  Erwinia cartova,  Enterobacter  aerogenes,  E.coli dan Bacillus sp. Akan tetapi pada saat ini, yang  dituntut  dalam  industri  berbasis enzim  adalah  kapabilitas  dan  stabilitas dari  enzim  tersebut.  Organisme  yang dapat memproduksi enzim dengan kapabilitas  dan  stabilitas  tinggi  yaitu organisme  yang  hidup  pada  kondisi ekstrim  seperti  suhu  dan  salinitas  tinggi (Sianturi, 2008).
Bakteri  termohalofilik  merupakan salah  satu  kelompok  bakteri  yang  hidup pada  suhu  dan  salinitas  tinggi.  Bakteri termohalofilik dapat ditemukan pada lingkungan  bersuhu  dan  salinitas  tinggi misalnya  pada  pasca  erupsi  gunung berapi  dan  sumber  air  panas  yang bersalinitas. Kebanyakan bakteri termohalofilik tumbuh pada suhu lebih dari 45 0 C  dan  kadar  salinitas  diantara  1%-5%
(Madigan,  2000).  Patta  dkk.  (2013) melaporkan bahwa bakteri termofilik Bacillus  licheniformis dari  sumber  air panas Sulawesi Selatan dapat memproduksi L-asparaginase.
Sulawesi  Tenggara  memiliki  panas bumi yang berasosiasi dengan lingkungan
non-vulkanik  (Hermawan  dkk.,  2011). Oleh  karena  itu  Sulawesi  Tenggara berpotensi untuk menghasilkan sumber air panas.  Salah  satu  sumber  panas  bumi yang  ada  di  Sulawesi  Tenggara  yaitu sumber  air  panas  Wawolesea  di  Konawe Utara.  Sumber  air  panas  Wawolesea terletak diantara pegunungan kapur dengan  mata  air  yang  mengeluarkan  air panas  dengan  temperatur  dan  salinitas tinggi.  Umar  dkk  (2010)  melaporkan bahwa  sumber  air  panas  Wawolesea memiliki  temperatur  berkisar  antara  48- 53 0 C  dan  berasa  asin.  Oleh  karena  itu, sumber  air  panas  Wawolesea  dapat digunakan  sebagai  sumber  daya  lokal diperolehnya bakteri termohalofilik
penghasil enzim L-asparaginase. Berdasarkan latar belakang tersebut maka penelitian “Eksplorasi Bakteri
Termohalofilik  Potensial  Penghasil  L- asparaginase  di  Sumber  Air  Panas Wawolesea  sebagai  Anti  Kanker ”  penting dilakukan  sebagai  langkah  awal  dalam pengembangan  sains  untuk  penanganan penyakit kanker di Indonesia.

## METODE PENELITIAN Bahan dan Alat
Bahan  baku  yang  digunakan  adalah NA  ( Nutrient  Agar )  sebagai  media  isolasi bakteri  termohalofilik,  media  M-9  sebagai media selektif bakteri termohalofilik potensial penghasil  L-asparaginase. Alat- alat yang digunakan adalah  GPS Garmin , laminar air-flow ,  autoklaf,  cawan  petri, erlenmeyer ,  mikropipet  dan  tip  serta inkubator.
Kegiatan  isolasi  dan  seleksi  bakteri termohalofilik potensial penghasil L- asparaginase  diawali  dengan  survey  dan pengukuran parameter lingkungan sumber air  panas  Wawolesea  yang  meliputi pengukuran suhu, salinitas dan pH air. Survey  dan  Pengukuran  Parameter Lingkungan
Sumber Air Panas Wawolesea Survey  lokasi  pengambilan  sampel sebagai sumber isolat bakteri termohalofilik dilakukan untuk menentukan zona pengambilan sumber isolat. Penentuan  zona  pengambilan  sampel sebagai sumber isolat dilakukan berdasarkan adanya perbedaan suhu dan salinitas lingkungan. Penentuan titik koordinat  lokasi  pengambilan  sampel dilakukan menggunakan GPS Garmin.
Isolasi Bakteri Termohalofilik
Sumber  isolat  bakteri  termohalofilik diperoleh dari air dan sedimen sumber air panas Wawolesea. Isolasi bakteri termohalofilik potensial penghasil L- asparaginase menggunakan dua pengenceran  yaitu  pengenceran  90  mL dan  9  mL.  Pengenceran  90  mL  dihitung sebagai  pengencaran  10 -1 untuk  sampel sedimen  dan  9  mL  dihitung  sebagai pengenceran  10 -1 untuk  sampel  air.
Sampel  sedimen  diambil  sebanyak  10 gram  sedangkan  sampel  air  diambil sebanyak  1  mL  dan  dimasukan  kedalam pengencer
10 -1 . Isolasi
bakteri termohalofilik menggunakan metode tuang ( Pour  Plate )  dengan  tiga  pengencer terakhir  diambil  masing-masing  1  mL  dan
dituang  kedalam  cawan  petri.  Kemudian media NA ( Nutrient Agar ) dituang kedalam masing-masing  cawan  petri  yang  berisi sampel. Setelah itu, dihomogenkan membentuk angka delapan dan diinkubasi pada  suhu  48 0 C,  50 0 C  dan  54 0 C  selama 24 jam. Selanjutnya,  bakteri  yang  tumbuh dimurnikan berdasarkan koloni yang berbeda.
Seleksi Bakteri

## Termohalofilik Potensial Penghasil L-asparaginase
Seleksi  bakteri  potensial  penghasil  L- asparaginase  dilakukan  secara in  vitro .
Isolat  bakteri  termohalofilik  asal  sumber air panas Wawolesea yang telah dimurnikan  ditumbuhkan  pada  media  M-9 dengan menggunakan teknik cawan gores.  Selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu 48 0 C,  50 0 C  dan  54 0 C  selama  24  jam.
Bakteri  yang  memiliki  kemampuan  untuk menghasilkan L-asparaginase akan tumbuh  dan  dapat  mengubah  media  M-9 dari  warna  kuning  menjadin  warna  pink (Talluri et al , 2013).

## HASIL DAN DISKUSI Gambaran Umum Lokasi Penelitian
Lokasi pengambilan sampel sebagai sumber
isolat bakteri
termohalofilik    penelitian  ini  dilakukan  di sumber air panas Wawolesea. Sumber air panas  Wawolesea  adalah  sumber  air panas  yang  berada  di  Desa  Wawolesea Kecamatan  Lasolo,  Kabupaten  Konawe Utara,  Sulawesi  Tenggara.  Sumber  air panas  Wawolesea  memiliki  tipe  endapan travertin atau  endapan  batu  kapur  yang berwarna kuning kecoklatan dan berwarna putih. Umar dkk. (2010) menyatakan,  endapan  yang  terbentuk pada  sumber  air  panas  Wawolesea tergolong  endapan travertin yang  banyak mengandung unsur-unsur mineral.
Keberadaan  unsur-unsur  mineral  tersebut dapat menjadi sumber nutrisi bagi kehidupan bakteri.
Lokasi pengambilan sampel dilakukan  di  tiga  zona  dengan  parameter lingkungan yang berbeda. Sampel diambil pada  zona  A  dengan  titik  koordinat  S  3 0
41 ’  53.210”,  E 122 0 18 ’  04.92”,  zona  B di titik  koordinat  S  3 0 41’  54.90”,  E  122 0 18’ 07.54 ”  dan  zona  C  pada  titik  koordinat  S
3 0 41’  53.55”,  E  122 0 18’  03.06”.  Lokasi pengambilan sampel disajikan pada
Gambar1. (a) (b) (c)
Gambar 1. Lokasi pengambilan sumber isolat; (a) zona A, (b) zona B, (c) zona C
Gambar  1  menunjukkan  bahwa zona pengambilan sampel sebagai sumber isolat bakteri termohalofilik tampak  memiliki  perbedaan.  Zona  A memiliki  endapan  berwarna  kekuningan sedangkan  zona  B  dan  C  memiliki endapan  berwarna  putih.  Zona  A  dan  C merupakan  zona  yang  jauh  dari  sumber mata  air,  sedangkan  zona  B  tepat  di sekitar  mata  air  yang  mendidih.  Hal tersebut menyebabkan suhu air dan udara pada  zona  B  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  zona  A  dan  C.  Selain  itu,  zona  B memiliki  jarak  yang  dekat  dengan  laut dibandingkan  dengan  zona  A  dan  C sehingga  pada  zona  B  memiliki  kadar salinitas yang tinggi dibandingkan dengan zona  A  dan  C.  Hasil  pengukuran parameter suhu, salinitas dan pH lingkungan  air  panas  Wawolesea  pada tiap zona disajikan pada Tabel 1.
Tabel  1. Hasil  pengukuran  parameter lingkungan  sumber  air  panas Wawolesea
No Zona Titik Parameter Lingkungan Suhu air ( o C) Salinitas (‰) pH air 1 2 3 4 6 7 1. A 1 48 15 5,78 2 48 15 5,78 3 48 15 5,78 2. B 1 54 16 5,91 2 54 16 5,91 3 54 16 5,91 3. C 1 50 15 5,84 2 50 15 5,84 3 50 15 5,84
Suhu  pertumbuhan  bakteri  dapat dibedakan menjadi suhu minimum, optimum dan maksimum. Oleh karena itu, Pelczar et  al. (1988)  membagi  tiga kelompok  bakteri  berdasarkan  perbedaan
suhu  pertumbuhannya,  yaitu  kelompok bakteri  psikrofilik  atau  kelompok  bakteri yang  tumbuh  pada  kisaran  suhu  0 0 C- 20 0 C,  kelompok  bakteri  mesofilik  yaitu kelompok  bakteri  yang  tumbuh  pada kisaran  suhu  21 0 C-40 0 C  dan  kelompok bakteri  termofilik  yaitu  kelompok  bakteri yang  tumbuh  pada  suhu  di  atas  40 0 C. Hasil  pengukuran  suhu  pada  Tabel  1 menunjukkan  bahwa  di  zona  A  hingga zona  C  memiliki  suhu  air  berkisar  antara 48 0 C sampai 54 0 C. Data pengukuran suhu tersebut dapat menunjukkan bahwa bakteri yang tumbuh di lingkungan sumber air  panas  Wawolesea  (zona  A  hingga zona  C)  tergolong  ke  dalam  kelompok bakteri termofilik.
Parameter  lingkungan  lain  yang diukur pada penelitian  ini adalah salinitas. Salinitas  dapat  mempengaruhi  tekanan osmotik  pada  sel  bakteri,  sehingga salinitas  dapat  menentukan  daya  hidup bakteri.  Hasil  pengukuran  salinitas  pada Tabel  1  menunjukkan  bahwa  zona  A  dan C memiliki kadar salinitas air sebesar 15‰ atau setara dengan 1,5% sedangkan pada zona B diperoleh kadar salinitas air panas Wawolesea  sebesar  16  ‰  atau  setara dengan  1,6%.  Data  pengukuran  salinitas tersebut menunjukkan bahwa bakteri yang hidup  di  sumber  air  panas  Wawolesea (zona  A  hingga  zona  C)  tergolong  bakteri yang  tahan  terhadap  kadar  salinitas  atau bakteri  halofilik.  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Madigan et  al. (2000)  bahwa bakteri yang dapat tumbuh pada lingkungan  dengan  kadar  salinitas  1-5%
merupakan  bakteri  halofilik  ringan.  Oleh karena  itu,  berdasarkan  data  parameter suhu dan salinitas dapat dikatakan bahwa bakteri  yang  hidup  di  sumber  air  panas Wawolesea  adalah  kelompok  bakteri termohalofilik.
Parameter  lingkungan  yang  juga diukur  dalam  penelitian  ini  adalah  pH. Potensial  hidrogen  (pH)  didefinisikan sebagai  aktivitas  ion  hidrogen  (H + )  yang terlarut.
Potensial hidrogen (pH) lingkungan sangat mempengaruhi keberadaan  suatu  bakteri  di  lingkungan. Hasil  pengukuran  pH  pada  Tabel  1 menunjukkan  bahwa  zona  A  hingga  zona C  memiliki  pH  air  sebesar  5,78,  5,91  dan 5,84.  Data  pengukuran  pH  tersebut  dapat menunjukkan bahwa bakteri dapat tumbuh
atau hidup di sumber air panas Wawolesea.  Menurut  Lay  (1994)  bakteri memiliki  pH  pertumbuhan  berkisar  antara 4-9.
Seleksi bakteri termohalofilik asal sumber air panas Wawolesea Penghasil  L-asparaginse  pada  media M-9
Sebanyak  empat  belas  isolat  bakteri termohalofilik  asal  sumber  air  panas
Wawolesea dapat berpotensi
menghasilkan L-asparaginase.
Kemampuan  tersebut,  ditandai  dengan adanya  perubahan  media  M-9  dari  warna kuning  menjadi  warna  pink  hingga  ungu tua  di  sekitar  koloni  bakteri.  Hasil  seleksi bakteri termohalofilik penghasil L- asparaginase  disajikan  pada  Tabel  2.
Tabel 2 . Hasil seleksi bakteri penghasil L-asparaginase secara kualitatif pada media M-9
No Sumber isolat Nama isolat Aktivitas hidrolisis L-asparaginase 1 2 5 6 1. Sumber air panas Wawolesea pada Zona A, sampel air, titik 1 AAT1.1 +++ AAT1.2 - AAT1.3 + AAT1.4 ++ 2. Sumber air panas Wawolesea pada Zona A, sampel air, titik 3 AAT3.1 - AAT3.2 +++ AAT3.3 - AAT3.4 - 3. Sumber air panas Wawolesea pada Zona A, sampel sedimen, titik 1 AST1.1 - AST1.2 ++ AST1.3 - 4. Sumber air panas Wawolesea pada Zona A, sampel sedimen, titik 2 AST2.1 - AST2.2 + AST2.3 -

## Lanjutan Tabel 2
5. Sumber air panas Wawolesea pada Zona A, sampel sedimen, titik 3 AST3.1 +++ AST3.2 - AST3.3 +++ 6. Sumber air panas Wawolesea pada Zona B, sampel air, titik 1 BAT1.1 - BAT1.2 - 7. Sumber air panas Wawolesea pada Zona B, sampel air, titik 2 BAT2.1 - BAT2.2 -
8. Sumber air panas Wawolesea pada Zona B, sampel air, titik 3 BAT3.1 - BAT3.2 - BAT3.3 - BAT3.4 - 9. Sumber air panas Wawolesea pada Zona B, sampel sedimen, titik 1 BST1.1 - BST1.2 - 10. Sumber air panas Wawolesea pada Zona B, sampel sedimen, titik 2 BST2.1 - BST2.2 - 11. Sumber air panas Wawolesea pada Zona B, sampel sedimen, titik 3 BST3.1 - BST3.2 - BST3.3 - 12. Sumber air panas Wawolesea pada Zona C, sampel air, titik 1 CAT1.1 +++ CAT1.2 - CAT1.3 - CAT1.4 + CAT1.5 - 13. Sumber air panas Wawolesea pada Zona C, sampel air, titik 2 CAT2.1 - CAT2.2 ++ CAT2.3 - CAT2.4 + 14. Sumber air panas Wawolesea pada Zona C, sampel air, titik 3 CAT3.1 - CAT3.2 ++ CAT3.3 - CAT3.4 +++ 15. Sumber air panas Wawolesea pada Zona C, sampel sedimen, titik 1 CST1.1 - CST1.2 - CST2.1 - CST2.2 - CST2.3 - CST3.1 - CST3.2 - Keterangan; - : Tidak memiliki aktivitas L-asparaginase + : Memiliki aktivitas L-asparaginase rendah ++
: Memiliki aktivitas L-asparaginase sedang +++ : Memiliki aktivitas L-asparaginase tinggi
Hasil  seleksi  secara  kualitatif  pada Tabel  2  menunjukkan  bahwa  keempat belas  isolat  bakteri  termohalofilik  asal sumber  air  panas  Wawolesea  memiliki aktivitas  L-asparaginase  yang  berbeda- beda.  Aktivitas  L-asparaginase  yang berbeda pada masing-masing isolat bakteri termohalofilik dilihat dari kemampuannya  mengubah  media  yang berwarna  kuning  menjadi  warna  pink hingga  ungu    tua.  Isolat  bakteri  yang mampu  mengubah  semua  warna  kuning media  M-9  menjadi  warna  ungu,  secara
kualitatif dikategorikan memiliki aktivitas L- asparaginase  tinggi.  Isolat  bakteri  yang hanya mampu mengubah sebagian warna kuning media M-9 menjadi pink dikategorikan memiliki aktivitas L- asparaginase  yang  sedang  dan  rendah. Hal  tersebut  sesuai  dengan  pernyataan Yamaguchi (1997) bahwa semakin berwarna  ungu  media  M-9  menunjukkan bahwa  banyaknya  jumlah  amonia  pada media  tersebut  sebagai  produk  dari hidrolisis L-asparagin oleh L-
asparaginase.  Visualisasi  aktivitas  L-
asparaginase  bakteri  termohalofilik  asal sumber air panas Wawolesea pada media M-9 disajikan pada Gambar 1.
Hasil  seleksi secara  kualitatif  pada Tabel 1 menunjukkan bahwa isolat bakteri dari Zona B dengan suhu lingkungan 54 0 C tidak  menghasilkan  L-asparaginase.  Hal tersebut  diduga  karena  sisi  aktif  L- asparaginase  rusak  pada  suhu  54 0 C  atau
gen L-asparaginase tidak terekspresi pada isolat  bakteri  tersebut.  Patta  dkk.  (2013) menyatakan  bahwa  sisi  aktif  enzim tersusun  atas  protein  sehingga  memiliki sifat  mudah  rusak  akibat  kenaikan  suhu atau  panas.  Oleh  karena  itu,  dengan rusaknya  sisi  aktif  enzim  L-asparaginase maka  L-asparagin  pada  media  M-9  tidak terhidrolisis.
AAT1.1 +++ AAT1.3 + AAT1.4 ++ AAT3.2 +++ AST1.2 ++
AST2.2 + AST3.1 +++ AST3.3 +++ CAT1.1 +++ CAT1.4 +
CAT2.2 ++ CAT2.4 + CAT3.2 ++ CAT3.4 +++ CST3.3 -
Keterangan: - : Tidak memiliki aktivitas L-asparaginase
+ : Memiliki aktivitas L-asparaginase rendah ++
: Memiliki aktivitas L-asparaginase sedang +++ : Memiliki aktivitas L-asparaginase tinggi
Gambar  1. Visualisasi  aktivitas  L-asparaginase  bakteri  termohalofilik  asal  sumber  air panas Wawolesea pada media M-9
Tabel  2  dan  Gambar  2  secara kualitatif menunjukkan bahwa isolat dengan aktivitas tinggi yaitu isolat AAT1.1, AAT3.2,  AST3.1,  AST3.3,  CAT1.1  dan CAT3.4 sedangkan isolat dengan aktivitas rendah  yaitu  isolat  AAT1.3,  AST2.2,
CAT1.4  dan  isolat  CAT2.4.  Perbedaan aktivitas  L-asparaginase  tersebut  diduga dipengaruhi  oleh  jumlah  inokulum  yang digoreskan pada media uji (M-9). Pudjiraharti dkk. (1997) menyatakan bahwa  jumlah  inokulum  suatu  mikroba
dapat  mempengaruhi  tingih  rendahnya aktivitas  enzim  yang  dihasilkan  pada suatu media.
Hasil  seleksi  pada  Tabel  2  dan Gambar 2 menunjukkan ada 10 isolat dari sampel  air  dan  4  isolat  dari  sampel sedimen yang memiliki kemampuan untuk menghasilkan L-asparaginase. Banyaknya isolat bakteri dari sampel air yang memiliki kemampuan menghasilkan L- asparaginase  dibandingkan  dengan  isolat bakteri dari sampel sedimen, karena pada sampel air diduga banyak tersedia kation- kation  yang  berperan  sebagai  aktivator enzim  L-asparaginase  dibandingkan  pada sedimen. Sandhika dkk. (2015) menyatakan bahwa sedimen dapat berperan  sebagai  sumber  kation  yang akan  dilepaskan  kebadan  air  sehingga kation dalam badan air meningkat dibandingkan  dengan  sedimen.  Oleh karena  itu,  secara  alamiah  isolat  bakteri dari  sampel  air  lebih  berpotensi  untuk menghasilkan  L-asparaginase.  Selain  itu, Umar  dkk.  (2010),  menyatakan  bahwa sumber  air  panas  Wawolesea  tergolong sumber  air  panas  yang  bertipe  alkali klorida.  Sumber  air  panas  tipe  alkali klorida adalah tipe sumber air panas yang memiliki kandungan unsur Cl, Na, K  yang tinggi  (Septadji,  2009).  Dengan  demikian, unsur-unsur  tersebut  dapat  berperan sebagai  kation  aktivator  L-asparaginase. Hal  ini  didukung  pula  oleh  Jha et  al .
(2012)  yang  menyatakan  bahwa  ion  Ca 2+ dan  K + dapat  berperan  sebagai  aktivator L-asparaginase.

## SIMPULAN
Empat belas isolat bakteri termohalofilik  asal  sumber  air  panas Wawolesea  memiliki  kemampuan  untuk menghasilkan L-asparaginase.

## SARAN
Perlu  dilakukanya  penelitian  lebih lanjut mengenai uji aktivitas L- asparaginase  secara  kuantitatif  pada keempat belas isolat bakteri termohalofilik potensial  penghasil  L-asparginase  asal sumber air panas Wawolesea.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Kemenristekdikti atas bantuan  dana  penelitian  melalui  Program Kreaktivitas Mahasiswa 2017.

## DAFTAR PUSTAKA
Aprigiyonis,  F.E,  2011,  Kloning  dan Sekuensing  Gen  L-Asparaginase yang Berasal dari Bakteri Erwinia raphontici dan Bacillus  circulans di E.  coli , Skripsi ,  Universitas Indonesia, Depok.
E-Moharam, M., Gamal-Eldeen, A. M. and
El-Sayed, S. T., 2010, Production,  Immobilization  and Anti Tumor Activity of L- asparaginase of Bacillus sp. R36, Journal  of  American  Science , 6(8) : 131-137
Hermawan,  D.,  Sugianto,  A.,  Yushantarti, A.,  Dahlan,  Munandar,  A.  dan Widodo,  S.,  2011,  Kajian  Panas
Bumi Non-Vulkanik Daerah Sulawesi Bagian Tenggara,
Prosiding  Hasil  Kegiatan  Pusat Sumber  Daya  Geologi, Pusat Sumber Daya Geologi.
Jha, S. K., Pasrija, D., Sinha, R. K., Singh, H. R., Nigam, V. K. and Vidyarthi,
A. S., 2012, Microbial L- Asparaginase;  A  Review  on
Current  Scenario  and  Future Prospects, Journal of Pharmaceutical Sciences and Research , 3(9) : 3076-3090 Kementrian  Kesehatan  RI.,  2015, Situasi Penyakit Kanker , Pusat Data dan
Informasi, Jakarta Selatan.
Lay,  W.B.,  1994, Analisa  Mikroba  di Laboratorium  Edisi  I ,  PT.  Raja Grafindo Persada, Jakarta.
Madigan,  M.T.,  Martinko,  J.M.,  dan Parker,  J.,  2000. Brock  Biology
Microorganism, New Jersey, Prentice Hall Inc. Masri  M,  2014.  Identifikasi  Molekuler Bakteri Penghasil Enzim L-
Asparaginase  dari  Alga  Coklat Sargasum sp, J Teknosains 8(2) : 241-253
Patta,  A.  M.,  Ahmad,  A.  dan  Natsir,  H., 2013, Produksi, Pemurnian Parsial, dan KarakterisasiL- asparaginase dari Bakteri Termofilik Bacillus  Licheniformis Strain Hsa3-1a, Tesis , Universitas Hasanuddin, Makasar. Pelczar,  M.  J.,  dan  Chan,  E.  C.,  1988, Dasar-Dasar Mikrobiologi , Universitas Indonesia Press, Jakarta.
Pudjiraharti, S., Udin, L. Z. dan Karossi, A.
T.,  1997,  Produksi  Alfa-Amilase oleh Aspergillus  oryzae dalam Media  Pati  Sagu  ( Metroxylon sp.), JKTI, 7 : 1-2
Sandhika,  I.  M.  G.  S.,  Ruhmayati,  B.  dan Atikah,  2015,  Peranan  Sedimen
Perairan Outlet DAS  Sumber Brantas  Terhadap  Ketersediaan Ca 2+ ,  Mg 2+ ,  Na + ,  K + dan  Boron dalam Badan Air sebagai Sumber Air Irigasi, Jurnal Natural B ., 3(1) : 1-7
Septadji,  N.  M.,  2009,  Karakterisasi Reservoir  Panas  Bumi, Training Advanced  Geothermal  Reservoir Engineering, ITB, Bandung.
Sianturi,  D.  C.,  2008,  Isolasi  Bakteri  dan Uji  Amilase  Termofil  Kasar  dari Sumber Air Panas Panen Sibirubiru Sumatera Utara, Tesis , Universitas Sumatera Utara, Medan. Singh,  Y.  R.,  Kumar,  V.,  Gundampati,  S., Jagannadham and S.K., Srivastava,  2013,  Extracelullar  L- asparaginase  from  a  Protease- Deficient Bacillus aryabhattai ITBHU02: Purification, Biochemical Characterization, and  Evaluation  of  Antineoplastic Activity  In  Vitro, Appl  Biochem Biocthenol,  DOI  10.1007/s12010- 013-0455-0
Talluri, V. P., Bhavana, M. and Rajagopal,
S. V., 2013, Isolation and
Screening  of  L –  Asparaginase Producing Bacteria from Visakhapatnam  Soil  Samples, Journal of Pharmaceutical,
Chimical  and  Biological  Science 3(4) : 1121-1125 Umar,  E.  P.,  Tonggiroh,  A.  dan  Irfan,  U. R.,  2010,  Manifestasi  Panas Bumi Daerah Barasanga Kabupaten Konawe Utara Provinsi Sulawesi Tenggara, artikel tidak terpublikasi, Universitas Hasanudin, Makasar. Yamaguchi, K., 1997, Instrumental
Molecular Structure of the Zwistterionic From of Phenolfsulfonphthalein Achievements,. Journal Anal. Sci , 13; 4-5