AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI SAPONIN DARI KULIT BATANG TUMBUHAN KASTURI ( Mangifera casturi )
K.Rosyidah 1 , S.A.Nurmuhaimina 1 , N.Komari 1 , dan M.D.Astuti 1
1 Program Studi Kimia FMIPA Universitas Lambung Mangkurat, Jl. A. Yani KM 36,0 Banjarbaru, 70714

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  fraksi  saponin  kulit  batang  tumbuhan kasturi  terhadap  pertumbuhan  bakteri  E.coli  dan  S.aureus.  Serbuk  kulit  batang  kasturi  (512,67  g) dimaserasi dengan metanol. Ekstrak metanol (32,57 g) dipartisi dengan n-heksana, diperoleh 5,98 gram ekstrak saponin. Ekstrak saponin difraksinasi dengan kromatografi vakum cair (KVC) menghasilkan 39 fraksi. Fraksi dengan Rf sama pada KLT digabung sehingga diperoleh empat fraksi A-D. Tiap-tiap fraksi diuji  aktivitas  antibakterinya  terhadap  bakteri  E.  coli  dan  S.  aureus  dengan  metode  difusi.  Fraksi  A paling aktif antibakteri dibandingkan tiga fraksi lainnya dengan diameter hambat sebesar 10,3 ± 0,5 mm terhadap bakteri E.coli dan 10,8 ± 0,3 mm terhadap S.aureus.
Kata kunci: Antibakteri, Kasturi, Mangifera casturi, saponin,

## ABSTRACT
This research to study antibacterial activity (E.coli and S.aureus) of saponin fractions from stem bark of Mangifera  casturi.  Powdered  of  stem  bark  of  M.casturi  (512,67  g)  were  extracted  with  methanol. Methanol extract (32.57 g) was partitionated with n-hexane to give saponin extract. Saponin extract (5.98 g) was partitionated by Vacuum Liquid Chromatography (VLC) over silica gel to give 39 fractions were grouped into four major fractions A-D by combining fractions with similar TLC profile. Every fractions studied antibacterial activity with  E. coli and S. Aureus with difusi methode. Fraction A most active then other fraction with inhibition diameter 10.3 ± 0.5 mm (E.coli) and 10.8 ± 0.3 mm (S.aureus).
Keywords: kasturi, Mangifera casturi, saponin, antibacteri.

## 1. PENDAHULUAN
Tumbuhan  kasturi  ( Mangifera  casturi ) atau  mangga  kalimantan  menarik  untuk  diteliti karena tumbuhan ini merupakan tumbuhan khas Kalimantan  Selatan  dan  termasuk  tumbuhan langka.  Tumbuhan  kasturi  tersebar  di  daerah Kalimantan Selatan seperti Banjarbaru,
Martapura, Kandangan, dan Tanjung. Selain itu tersebar juga di daerah Kalimantan Tengah dan Kalimantan Timur seperti Kutai dan Tenggarong  Sebrang.  Dilihat  dari  ekologinya tumbuhan  ini  hidup  di  daerah  rawa.  Buahnya menyerupai  mangga  kecil  dan  agak  padat, baunya  tajam  dan  rasanya  khas.  Kulitnya  tipis, licin,  hijau  mengkilat  dengan  noda  gelap (Kostermans & Bompard, 1993).
Tumbuhan  dari  genus Mangifera yang sudah  diteliti  kandungan  kimianya  adalah Mangifera  indica atau  yang  dikenal  dengan sebutan  mangga.  Hasil  penelitian  tersebut
menyebutkan  bahwa M.indica mengandung flavonoid,  terpenoid,  saponin,  tanin  (Depkes, 2007),  dan  turunan  alkilfenol  ( Knödler, et  al. , 2008). Ekstrak  kulit  batang Mangifera  indica menunjukkan
aktivitas antioksidan,
antiinflamasi, dan mempunyai efek imunomodulator  dengan  sifat  racun  yang rendah sampai 2000mg/kg berat badan (Gonzalez et  al .,  2007)  serta  aktif  melindungi sel  T  dari  AICD  secara  in  vitro  (Hernandez et al., 2007). Tumbuhan  lainnya  yang  termasuk dalam  genus Mangifera tetapi  masih  belum diteliti  lebih  lanjut  adalah  tumbuhan  kasturi ( Mangifera casturi ).
Uji fitokimia pendahuluan dari tanaman kasturi yang dilakukan Mustikasari dan Ariyani (2007)  mengindikasikan  bahwa  batang  kasturi mengandung  senyawa  terpenoid,  steroid,  dan saponin. Beberapa hasil penelitian
menunjukkan  bahwa  senyawa    terpenoid
(Gunawan,  2008),  steroid  (Islam, et  al .,  2003), dan  saponin  (Prihatman, 2001)   mempunyai aktivitas sebagai antibakteri.
Suatu  antibakteri  adalah  senyawa  yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri tertentu.  Bakteri  tersebut  dapat  menyebabkan timbulnya penyakit tertentu misalnya
Escherichia  coli yang  merupakan  penyebab diare  dan Staphyloccocus  aureus sebagai penyebab penyakit kulit.  Menurut Jones (2004) penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri  seperti diare  dapat  menyebabkan  kematian  sekitar  tiga juta penduduk setiap tahun sehingga diperlukan pengobatan  secara  intensif  terhadap  diare. Makalah  ini  memaparkan  tentang  kemampuan fraksi  saponin  tumbuhan  kasturi  sebagai antibakteri.

## 2. METODE PENELITIAN
Bahan  Penelitian. Bahan-bahan  yang digunakan  adalah  kulit  batang  kasturi,  pelarut organik yang mempunyai kualitas teknis seperti CH 3 OH (metanol), CH 3 (CH 2 ) 4 CH 3 ( n -heksana), CH 3 COOC 2 H 5 (etil asetat) dan CH 2 Cl 2 (metilen klorida),  pelarut  organik  yang  mempunyai kualitas  p.a  yaitu  CHCl 3 (E.Merck),  H 2 SO 4 pekat  (97%,  bj  1,84  kg/l),  silika  gel  G60 (E.Merck),  silika  gel  GF 254 (E.Merck),  plat KLT  alumunium  berlapis  Kieselgel  GF 254 setebal  0,25  mm  (E.Merck),  akuades,  media nutrient  broth (NB) (E.Merck), nutrient  agar (NA)  (E.Merck),  biakan E.  coli, biakan S. aureus, paper disk dengan diameter 6 mm, dan tetrasiklin.
Persiapan  Sampel. Sampel  berupa kulit  batang  tumbuhan  kasturi  dikumpulkan, dicuci  dan  dikeringkan  di  udara  terbuka. Sampel  yang  sudah  kering  dibuat  menjadi potongan kecil lalu dihaluskan dengan blender.
Ekstraksi .  Sebanyak  500  gram  serbuk kulit  batang  tumbuhan  kasturi  dimaserasi dengan 10L metanol sebanyak 2 kali selama 24 jam. Selanjutnya disaring, filtratnya dipekatkan dengan rotary  vaccum  evaporator hingga diperoleh ekstrak metanol kering.
Partisi. Ekstrak metanol kering dilarutkan  dalam  metanol  kemudian  dipartisi
dengan n -heksana dalam corong pisah sehingga terbentuk  busa  stabil.  Busa  yang  stabil dipekatkan  dengan  penguap  putar  sampai kering  sehingga  diperoleh  ekstrak  saponin padat.
Fraksinasi. Ekstrak  saponin  padat diimpregnasi  menggunakan  silika  gel  60 kemudian  dimasukkan  ke  dalam  kolom  KVC. Kolom dielusi dengan pelarut kloroform:aseton (7:3).  Eluat  yang  dihasilkan  dari  proses  elusi ditampung  dalam  wadah  terpisah  sehingga menghasilkan  sejumlah  fraksi.  Fraksi  yang harga  Rf  nya  sama  digabungkan  sehingga diperoleh  beberapa  fraksi  gabungan.  Setiap fraksi gabungan diuji aktivitas antibakterinya.
Uji  aktivitas  antibakteri. Metode yang  digunakan  metode  difusi.  Biakan  bakteri yang  sudah  diremajakan  terlebih  dahulu dimasukkan  ke  dalam  media Nutrien  broth (NB)  kemudian  diinkubasi  selama  24  jam. Sebanyak 0,1 ml bakteri dalam NB dimasukkan ke  dalam  media  NA  yang  telah  disterilkan terlebih dahulu. Selanjutnya paper disk diameter  6  mm  yang  sudah  berisi  2%  (b/v) sampel  tiap  fraksi,  0,25%  (b/v)  tetrasiklin  dan kontrol  metanol  diletakkan  di  atas  NA.  Cawan petri  yang  berisi  media  NA  diinkubasi  pada suhu  37  °C  selama  24  jam  kemudian  diukur diameter hambatnya.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1 Persiapan Sampel
Sebanyak  512,67  g  serbuk  batang kasturi dimaserasi dengan 10 L metanol selama 24 jam kemudian disaring (maserat I). Maserasi diulang  dengan  pelarut  metanol  yang  baru, kemudian  disaring  (maserat  II).  Masert  I berwarna  coklat  tua  sedangkan  maserat  II berwarna  coklat  muda,  hal  ini  menunjukkan bahwa  metabolit  sekunder  yang  ada  pada sampel batang kasturi sudah banyak terekstrak. Pengulangan proses maserasi ini bertujuan agar seluruh  senyawa  metabolit  sekunder  dalam sampel  larut  dalam  pelarut  metanol.  Maserat  I dan  II  diuapkan  dengan  alat  penguap  putar bertekanan  ( rotary  vacum  evaporator )  hingga diperoleh 32,57 g ekstrak metanol kering.
Ekstrak metanol yang diperoleh dilarutkan        kembali        dalam      100ml metanolkemudian  dipartisi  dengan  100  ml n - heksana  dalam  corong  pisah.  Campuran dikocok  dan  didiamkan  sampai  terbentuk lapisan yang memisah. Ketika dikocok ternyata terbentuk  busa  yang  permanen  dan  tebal,  ini menunjukkan  bahwa  fraksi  metanol  kaya  akan senyawa  saponin.  Lapisan  busa  yang  terbentuk dipisahkan  dan  dilakukan  kembali  partisi dengan  100  ml n -heksana  terhadap  fraksi metanol sisa, kemudian dikocok dan didiamkan. Busa  stabil  dipisahkan  dan  disatukan  dengan hasil  partisi  pertama.  Pengulangan  partisi  ini dimaksudkan  agar  senyawa  metabolit  sekunder larut n -heksana  yang  tertinggal  di  fraksi metanol  sisa  dapat  terekstrak.  Busa  stabil  yang dihasilkan dari proses partisi dipekatkan dengan rotary  vacum  evaporator sehingga  diperoleh ekstrak saponin sebanyak 5,98 g.

## 3.2 Fraksinasi
Ekstrak  saponin  dipisahkan  dengan kromatografi  vakum  cair  (KVC)  menggunakan 50,02  g  silika  gel dengan fase  gerak  kloroform dan  aseton  dengan  polaritas  meningkat.  Eluat ditampung dalam botol dan diperoleh 39 fraksi. Fraksi-fraksi yang diperoleh dari KVC dipantau dengan KLT untuk mengetahui pola kromatogram dari masing-masing fraksi. Fraksi yang memiliki pola noda yang sama digabungkan  dan  diperoleh  4  fraksi  gabungan yaitu  fraksi  A  sebanyak  0,34  g,  fraksi  B sebanyak  1,22  g, fraksi  C sebanyak  3,16  g  dan fraksi D sebanyak 0,13 g. masing–masing fraksi gabungan  diuji  aktivitas  antibakterinya  dengan metode difusi.

## 3.3  Uji Aktivitas Antibakteri dengan Metode
Difusi Uji aktivitas antibakteri fraksi gabungan dari ekstrak saponin batang tumbuhan  kasturi  bertujuan  untuk  mengetahui kemampuan fraksi-fraksi tersebut dalam menghambat pertumbuhan bakteri E. coli dan S. aureus. Kemampuan  penghambatan  ditandai dengan  terbentuknya  zona  hambat  (zona bening) di sekitar paper disk yang mengandung ekstrak saponin.
Menurut  Pratama  (2005),  zona  bening di  sekitar  kertas  disk  menunjukkan  adanya aktivitas  antibakteri.  Luas  zona  bening  itu sendiri sangat dipengaruhi oleh daya antibakteri fraksi  tersebut.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri terhadap fraksi A, B, C dan D dapat dilihat pada Tabel 1.
(a) (b)
Gambar 1. Uji aktivitas terhadap E.coli (a) dan S.aureus (b), A=fraksi A, B=fraksi B, C=fraksi C, D=fraksi D, M=metanol (kontrol negatif), T=tetrasiklin (kontrol positif)
Tabel  1  menunjukkan  bahwa  fraksi  A memiliki aktivitas antibakteri yang paling besar karena memiliki luas zona hambat bakteri yang paling besar. Fraksi A merupakan fraksi paling non  polar.  Pada  Tabel  1  hasil  uji  aktivitas antibakteri  fraksi-fraksi  menunjukkan  bahwa
Tabel 1. Hasil uji aktivitas antibakteri dari tiap fraksi
No Kontrol Diameter hambatan zona bakteri (mm) E. coli S. aureus 1 2 3 4 5 6 Fraksi A Fraksi B Fraksi C Fraksi D Tetrasiklin Metanol 10,3 ± 0,5 mm - - - 20,6 ± 0 mm - 10,8 ± 0,3 mm 10,3 ± 0,2 mm 10,1 ± 0    mm - 30,6 ± 0    mm -
aktivitas  terhadap S.  aureus lebih  besar dibandingkan terhadap E. coli.
Menurut  Pelczar et  al .,  (1988)  untuk dapat  membunuh  mikroorganisme,  bahan  uji harus  masuk  ke  dalam  sel  melalui  dinding  sel. Kedua  jenis  mikroorganisme  uji  tersebut memiliki  komposisi  dinding  sel  yang  berbeda. Dinding  sel S.  aureus yang  merupakan kelompok  bakteri  Gram  positif  memiliki struktur dengan sedikit lipid sedang pada E.coli yang  merupakan  bakteri  Gram  negatif  relatif lebih  banyak  mengandung  lipid.  Senyawa terpenoid  mudah  larut  dalam  lipid  sifat  inilah yang  mengakibatkan  senyawa  ini  lebih  mudah menembus dinding sel bakteri Gram positif dan sel bakteri Gram negatif.
Menurut Jawetz et al., (2001) pertumbuhan  bakteri  yang  terhambat  atau kematian  bakteri  akibat  adanya  penghambatan terhadap  sintesis  protein.  Mekanisme  kerja tertrasiklin  sebagai  kontrol  positif,  yaitu menghambat  sintesis  protein  dengan  mencegah terikatnya  tRNA  di  ribosom  (Brooks et  al ., 2001),  sehingga  dapat  dikatakan  bahwa senyawa  terpenoid,  steroid  dan  saponin  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri S.  aureus dengan  mekanisme  penghambatan  terhadap sintesis  protein  karena  terakumulasi  dan menyebabkan  perubahan  komponen-komponen penyusun sel bakteri itu sendiri.
Beberapa tumbuhan dari famili
Anacardiaceae  dilaporkan  aktif  antibakteri diantaranya ekstrak etanol biji Mangifera indica (Kabuki et  al ,  2000),  senyawa  etil  gallat  dari Mauria  heterophylla (Anacardiaceae)  bersifat
antibakteri Escherichia coli 35992, Staphylococcus aureus 20213 dan Pseudomonas  aeruginosa 15442  (Mori et  al , 2006).

## 4. KESIMPULAN
Pertumbuhan  bakteri S.  aureus dan E. coli dapat  dihambat  dengan  baik  oleh  fraksi  A yang  diperoleh  dari  ekstrak  saponin  pada  kulit batang  tumbuhan  kasturi  ( Mangifera  casturi ) dengan diameter hambat sebesar 10,3 ± 0,5 mm
terhadap  bakteri E.coli dan  10,8  ±  0,3  mm terhadap S.aureus. .

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Brooks, G.F., Butel, J.S. dan S.A Morse. 2001.
Mikrobiologi  Kedokteran. Terjemahan Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Salemba Medika.Jakarta. Depkes.    2007. Mangifera  indica L.  (diakses tanggal  20 Juli 2007) http://www.warintek.ristek.go.id/pangan_keseh atan/tanamanobat/depkes González,  J.E.,  Rodriguez,  M.D.,  Rodeiro,  I.,
Morffi,  J.,  Guerra,  E.,  Leal,  F.,  Garcia, H.,  Goicochea,  E.,  Guerrero,  S., Garrido,  G.,  2007. Food  and  Chemical
Toxicology . in press. Gunawan,  IW.G.,  Gede,  B.IW.A  dan  N.L Sutrisnayanti. 2008. Isolasi Dan Identifikasi  Senyawa  Terpenoid  Yang Aktif  Antibakteri  Pada  Herba  Meniran ( Phyllanthus  niruri linn). Jurnal  Kimia 2(1) .Jurusan Kimia FMIPA Universitas Udayana, Bukit Jimbaran. Hernandez,  P.,  Rodriguez,  P.C.,  Delgado,  R., and Walczak, H. 2007. Pharmacological  Research .  55.  167- 173
Islam,  N.A.K.M.,  Abbas,  A.M.,  Sayeed,  A.,
Abdus  Salam-Syed,  M.,  Islam,  A., Rahman,  M.,  Mohal-Khan,  A.M.G.R. dan S. Khatun. 2003. An Antimicrobial Terpenoid From Caesalpinia pulcherrima Swartz: Its Characterization,  Antimicrobial  and Cytotoxic  Activities. Asian  Journal  of Plant Sciences 2 (17-24): 1162-1165 Jawetz,  E.,  Melnick  G.E.  and  C.A  Adelberg.
2001. Mikrobiologi kedokteran. Edisi I. Diterjemahkan oleh Penerjemah Bagian Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. SalembaMedika. Surabaya. Jones,  A.C.C.  dan  M.J.G  Farthing.  2004. Management  of  infectious  diarrhoea . Gut. 53:296-305. Kabuki, T., Nakajima, H., Arai, M., Ueda, S., Kuwabara, Y., Dosako, S.2000. Food Chemistry. 71. 61-63
Kno¨ dler, M., Ju¨rgen Conrad , Eva M. Wenzig, Rudolf Bauer, Markus Lacorn, Uwe Beifuss, Reinhold Carle, Andreas Schieber.  2008. Anti-inflammatory 5- (110Z-heptadecenyl)- and 5- (80Z,110Z-heptadecadienyl)- resorcinols from mango (Mangifera indica L.) peels. Phytochemistry. 69. 988–993 Kostermans,  A.J.G.H  &  J.M.  Bompard.  1993.
The Mangoes. Their Botany, Nomenclature, Horticulture and Utilization .  Academic  Press  Harcourt
Brace & Company, London Mori  T,  Chang  C,  Maurtua  D,  Hammond  GB. 2006. Phytother Res., 20 (2):160-161 Mustikasari, K. dan D. Ariyani. 2007. Skrining
Metabolit  Sekunder  Pada  Akar  Binjai ( Mangifera caesia ) dan Kasturi ( Mangifera casturi ). Laporan Penelitian  Dosen .  FMIPA  Universitas
Lambung Mangkurat. Banjarbaru. Pelczar, M. F, Pelczar M.J.Jr  & E. C. S. Chan.
1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi
Terjemahan  Ratna  S  Hadioetomo,  Teja
Imas,  S.Sutami,  Tjitiosomo,  Sri  Lestari Angka.  Universitas  Indonesia  (U  I
Press). Jakarta Plantamor. 2007. Klasifikasi Mangga kasturi . http://www.plantamor.com/spcdtail.php ?recid=1762&popname=Mangga%20ka sturi. Diakses tanggal 27 april 2008
Pratama,  M.R.  2005.  Pengaruh  Ekstrak  Serbuk Kayu Siwak ( Salvadora persica ) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Streptococcus mutans dan Staphylococcus aureu s Dengan Metode
Difusi  Agar. Laporan  Hasil  Penelitian
Program Studi Biologi. Fakultas Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan Alam Institut Teknologi Sepuluh Nopember . Prihatman,  K.  2001.  Saponin  Untuk  Pembasmi Hama Udang. Laporan Hasil Penelitian. Pusat Penelitian Perkebunan Gambung. Bandung.