## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## THE POTENCY EXTRACT AND FRACTION OF Liosina paradoxa SPONGE COLLECTED FROM MANADO TUA ISLAND WATERS AGAINST THE GROWTH OF Staphylococcus aureus AND Escherichia coli BACTERIA.
POTENSI EKSTRAK DAN FRAKSI SPONS Liosina paradoxa YANG DIKOLEKSI DARI PERAIRAN PULAU MANADO TUA TERHADAP PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Escherichia coli.
Brian G. A. Adilan 1)* , Defny S. Wewengkang 1) ,  Erladys M. Rumondor 1)
1) Program Studi Farmasi Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi Manado *Brianadilan04@gmail.com

## ABSTRACT
Sponges can be used as an antibacterial test because sponges have metabolites in them and can inhibit pathogenic bacteria that come. The purpose of this study was to determine the antibacterial activity of the extract and fraction of the sponge Liosina paradoxa obtained from the waters of Manado Tua Island against  Staphylococcus  aureus  and  Escherichia  coli  bacteria.  The  samples  were  extracted  using maceration method with 95% ethanol solvent and fractionation method. Antibacterial activity testing was carried out using the agar diffusion method. The results obtained from the antibacterial activity test on  Escherichia  coli  bacteria  had  bacterial  inhibition  in  all  fractions  at  8.81  mm  methanol  fraction, 8.55mm n-Heksan fraction, 8.34mm chloroform fraction, and 7.81mm methanol fraction all fractions in the category medium inhibition, the same results with Staphylococcus aureus with strong inhibition on the n-Heksan fraction with 10.39mm of inhibition, and 10.23mm of methanol fraction, and moderate inhibition of 9.69mm of chloroform fraction and 9.23mm of ethanol extract . Extracts and fractions of Sponge Liosina paradoxa have activity on Escherichia  coli and Staphylococcus aureus bacteria.
Keywords : Liosina paradoxa, Antibacterial, Staphylococcus aureus, Escherichia coli

## ABSTRAK
Spons atau porifera bisa untuk digunakan sebagai uji antibakteri dikarenakan spons memiliki senyawa metabolit  yang  ada  didalamnya  serta  dapat  menghambat  bakteri  pathogen  yang  datang.  Tujuan  dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui adanya aktivitas antibakteri dari ekstrak dan fraksi spons Liosina paradoxa yang diperoleh dari Perairan Pulau Manado Tua terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli. Sampel  diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  95%  dan metode  fraksinasi.  Pengujian  aktivitas  antibakteri  yang  dilakukan  menggunakan  metode  difusi  agar. Hasil  yang  didapat  dari  uji  aktivitas  antibakteri  pada  bakteri Escherichia  coli memiliki  daya  hambat bakteri  disemua  fraksi  pada  fraksi  methanol  8,81mm,  fraksi  n-Heksan  8,55mm,  fraksi  kloroform 8,34mm, dan fraki methanol 7,81mm semua fraksi dalam kategori daya hambat sedang, hasil yang sama dengan  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  daya  hambat  kuat  pada  fraksi  n-Heksan  dengan  daya hambat  10,39mm,  dan  fraksi  methanol  10,23mm,  dan  daya  hambat  sedang  pada  fraksi  kloroform 9,69mm dan ekstrak etanol 9,23mm. Ekstrak dan fraksi dari Spons Liosina paradoxa memiliki aktivitas pada bakteri Escherichia coli dan bakteri Staphylococcus aureus .
Kata kunci : Liosina paradoxa , Antibakteri, Staphylococcus aureus , Escherichia coli

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Salah satu yang menjadi  negara dengan penyebaran  spons  terbesar didunia  yaitu Indonesia. Indonesia sendiri mempunyai kurang lebih  ribuan  pulau  dan  memiliki  garis  wilayah laut  yang  besar,  itulah  sebabnya  Indonesia memiliki  keanekaragaman  ekosistem  spons yang  banyak  bisa ditemukan  didalamnya, hingga  menjadikan  spons  memiliki  beragam jenisnya (Ismail, 2018).
Spons atau porifera adalah hewan hidup yang  dapat  menyaring  makanan  yang  ada disekitarnya  atau  yang  disebut  sebagai Filter Feeder dan  spons  juga  hidup  dengan  tidak berpindah  pindah  disuatu  tempat.  Spons biasanya hidup di sub tropik dan tropik (Iwenda, 2013).  Spons  atau  porifera  bisa  untuk digunakan  sebagai  uji  antibakteri  dikarenakan spons  memiliki  senyawa  metabolit  yang  ada didalamnya  serta  dapat  menghambat  bakteri pathogen yang datang (Angelina, 2016).
Pada  penelitian  sebelumnya  diketahui bahwa  spons  yang  digunakan  yaitu  Spons Liosina paradoxa mempunyai aktivitas antibakteri.  Pada  penelitian  tersebut  bakteri Escherichia  coli  yang  memiliki  daya  hambat bakteri  yang  sedang  dengan  pada  methanol sedangkan pada bakteri Staphylococcus aureus memiliki  daya  hambat  yang  kuat,  jadi  dengan penelitian  ini  peneliti  ingin  membandingkan aktivitas  antibakteri  pada  spons  yang  sama dengan perbedaan tempat pengambilan (Joshua, 2021)
Di  Negara  berkembang  sekarang  ini seperti salah satunya Indonesia, masyarakatnya memiliki  penyakit  infeksi  diketahui  bersama bahwa  yang  menjadi  penyebab  infeksi  adalah adanya bakteri yang ada dan berkembang dalam tubuh manusia. (Radji, 2011).
Salah  satu  yang  menjadi  perwakilan dengan  berbentuk  seperti  anggur  dari  Gram positif  yaitu Staphylococcus  aureus dan perwakilan  dengan  bentuk  batang  dari  Gram negatif  yaitu Escherichia  coli untuk  bakteri yang satu ini merupakan pathogen  yang bersifat tidak  menguntungkan  untuk  manusia  terlebih dalam  bidang  kesehatan.  (Septiyawati  dkk, 2020)
Berdasarkan  penjelasan  diatas,  maka peneliti  tertarik  untuk  melakukan  pengujian dimana  bertujuan  untuk  mengetahui  adanya aktivitas antibakteri dari Spons Liosina
paradoxa yang  diambil  dari  perairan  Pulau Manado Tua.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Pengambilan sampel dilakukan di perairan Pulau  Manado  Tua.  Pada  penelitian  ini  akan dilaksanakan pada bulan Oktober 2021 sampai selesai  di  Laboratorium  Farmakognosi  dan Fitokimia  dan  Laboratorium  Mikrobiologi Program  Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.

## Bentuk Penelitian
Penelitian ini dilakukan dengan eksperimental  laboratorium  yang  dimana dengan  cara  menguji  senyawa  yang  diekstrak dari  spons Liosina  paradoxa untuk  antibakteri pada Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia Coli .

## Alat dan Bahan Alat
Alat- alat yang digunakan dalam penelitian ini  yaitu Scuba  diving (peralatan  selam), plastic zipper lock bag , gunting, sarung tangan, masker,  botol  air  kemasan  600  ml,  pisau, talenan,  corong  pisah,  corong  gelas,  wadah kaca,  Erlenmeyer,  gelas  ukur  (pyrex),  gelas kimia (pyrex), tabung reaksi, rak tabung reaksi, microtubes ,  cawan  petri,  timbangan  analitik, spatula,  oven,  pinset,  batang  pengaduk, pembakar  spiritus,  pipet  tetes,  jarum  ose,  vial, lemari pendingin, incubator inucell (N-Biotek), laminary  air  flow ,  autoklaf  (autoklaf  KT-30s), mikropipet,  jangka  sorong,  jas  lab,  kamera, cakram  ( paper  disc ),  kertas  label,  dan  spidol permanen.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu Spons Liosina paradoxa , bakteri uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli , etanol, akuades, metanol, n-heksan, kloroform , pepton, natrium klorida , ekstrak  daging, nutrien agar, kloramfenikol paper disc , tissue , aluminium foil , kertas saring dan kapas.

## Pengambilan Sampel
Sampel  Spons Liosina  paradoxa yang diambil  dari  perairan  Pulau  Manado Tua  yang dimana dengan alat bantu (masker,  snorkel, fins dan  tabung  oksigen).  Sampel  yang  di  dapat sebelumnya diambil gambar terlebih dahulu di dalam  laut,  kemudian  Sampel  yang  diperoleh

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
diambil  dan  dimasukkan  ke  dalam zipper  lock bag lalu  diberi  tanda  atau  nomor  yang  sesuai dengan sampel, dibersihkan lalu dipotong kecil untuk  di  masukkan  kedalam  wadah  dan kemudian  di  ekstraksi  dengan  etanol  96% lalu sampel diletakkan di dalam cool  box , kemudian langsung dibawa ke Laboratorium
Farmakognosi  dan  Fitokimia  Program  Studi Farmasi  Universitas  Sam  Ratulangi  untuk selanjutnya dideterminasi

## Ekstraksi Sampel
Ekstrak  spons Liosina  paradoxa dibuat dengan  cara  maserasi.  kemudian  sampel dibersihkan  secara  menyeluruh  lalu  dipotong kecil-kecil  dimasukkan  ke  dalam  botol, kemudian  sampel  yang  telah  di  cuci  dan dipotong-potong akan direndam dengan pelarut etanol  95%  sampai  sampel  terendam  merata kemudian dibiarkan selama 24 jam. Selanjutnya  Sampel  yang  telah  direndam dilakukan  penyaringan  dengan  menggunakan kertas saring yang dengan menghasilkan filtrat 1  dan  juga  debris  1.  Debris  1  kemudian diremaserasi  lagi  dengan  pelarut  etanol  95% sampai sampel terendam merata dan kemudian dibiarkan  selama  24  jam,  yang  kemudian berikutnya  sampel  yang  telah  direndam dilakukan penyaringan lagi dengan menggunakan  kertas  saring menghasilkan filtrat 2 dan debris 2. Yang kemudian Debris 2 diremaserasi  kembali  dengan  menggunakan pelarut  etanol  95%  sampai  terendam  merata secara  keseluruhan  dan  dibiarkan  selama  24
sebanyak  100  mL.  Setelah  itu  saat  telah  larut, dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan ditambahkan  pelarut  n-heksan  sebanyak  100 mL  maka  setelah  itu  dikocok  didalam  corong pisah  hingga  homogen.  Selanjutnya  dibiarkan sampai  terbentuk  lapisan  metanol  dan  juga lapisan n-heksan, selanjutnya pada wadah yang berbeda  masing-masing  lapisan  ditampung. Yang  kemudian  lapisan  n-heksan  dimana dievaporasi  menggunakan Rotary  Evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang  dan  diperoleh fraksi  n-heksan.  Pada  tahap  berikutnya,  pada lapisan metanol ditambahkan akuades sebanyak  100  mL  yang  kemudian  dipartisi dengan pelarut kloroform  dengan perbandingan 1:1 v/v dalam corong pisah, kemudian dikocok kembali  hingga  homogen.  Dibiarkan  sampai tebentuk dua lapisan yaitu lapisan metanol dan kloroform,  kemudian  masing-masing  lapisan ditampung  dalam wadah yang berbeda. Lapisan kloroform selanjutnya dikeringkan menggunakan oven hingga  kering  setelah  itu ditimbang  berat  sampel  dan  diperoleh  fraksi kloroform. Lapisan metanol kemudian dievaporasi  menggunakan Rotary  evaporator hingga  kering,  lalu  ditimbang  dan  diperoleh fraksi metanol (Silap dkk, 2020). Menurut Ortez (2005)  Pada  tahap  selanjutnya  ketiga  fraksi yang  telah  diperoleh  akan  digunakan  dalam pengujian  antibakteri.  Rendemen  dari  fraksi dihitung berdasarkan persamaan sebagai berikut:
𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 ℎ𝑎𝑠𝑖𝑙 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘
jam,  Yang  kemudian  sampel  debris  2  tadi dilakukan penyaringan kembali dengan menggunakan  kertas saring yang dengan itu 𝑅𝑒𝑛𝑑𝑒𝑚𝑒𝑛 = 𝑏𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘 𝑎𝑤𝑎𝑙 × 100%
menghasilkan    filtrat     3     dan     debris     3. Selanjutnya Filtrat 1, 2, dan 3 dicampur menjadi satu  yang  kemudian  dilakukan  penyaringan, yang kemudian dievaporasi dengan menggunakan Rotary  Evaporator dengan  suhu 40°C  hingga  terbentuk  ekstrak  kental  dan selanjutnya ditimbang menggunakan timbangan  analitik.  Yang  dimana  selanjutnya ekstrak  kasar  Spons Liosina  paradoxa akan dipergunakan dalam metode fraksinasi dan juga pengujian antibakteri (Silap dkk, 2020).

## Fraksinasi
Ekstrak  kasar  Spons Liosina  paradoxa yang  dimana  telah  diperoleh  kemudian dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer,  selanjutnya ekstrak dilarutkan dengan  metanol  80%

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  akan  digunakan  dalam penelitian  aktivitas  antibakteri  ini  harus disterilkan terlebih dahulu. Alat-alat gelas akan disterilkan dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121˚C  selama  15  menit,  proses pembakaran dilakukan untuk pinset di atas api langsung dan selama 15 menit pada  suhu 121˚C media disterilkan pada autoklaf (Mpila, 2012).

## Pembuatan Media Cair
Dimulai  dengan  pepton  0,5  g, meat extract (Ekstrak daging) 0,3 g, natrium klorida
0,3 g, dan aquades sebanyak 100 mL yang

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
semuanya  itu  diaduk  sampai  merata  yang kemudian  dengan  menggunakan magnetic stirrer dibuat sampai homogen, kemudian pada suhu  121  ˚C  selama  15  menit  diautoklaf,  dan diukur  pH  dengan  menggunakan  kertas  pH.  1 mL  media  cair  B1  dipipet,  selanjutnya dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  dan  tutup dengan  alminium  foil.  Media  cair  B1  akan dipergunakan  sebagai  media  kultur  bakteri (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri Uji
Media  cair  B1  yang  telah  jadi  pada tahap sebelumnya, ditambahkan dengan masing-masing  bakteri  yang  akan  dikultur ( Staphylococcus  aureus dan Escherichia  Coli) kemudian  sebanyak  100  µL  dipipet  kedalam tabung  reaksi  yang  berbeda-beda.  Selanjutnya ditutup  dengan  aluminium  foil  tiap  tabung reaksi dan kemudian dimasukkan selama 1x24 jam pada suhu 37 ˚C kedalam  inkubator (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Positif dan Negatif
Dengan  menggunakan Kloramfenikol paper disc dilakukan pada Kontrol positif , dan pelarut methanol untuk dilakukan pada Kontrol negatif, yang dimana untuk cara pembuatannya dengan  mengambil  sebanyak  200  µL  metanol untuk membuat larutan stok metanol kemudian ditotolkan  pada  kertas  cakram  (Silap.,dkk, 2020).

## Pembuatan Larutan Uji
25  mg  ekstrak  dan  fraksi  kasar  Spons Liosina  paradoxa kemudian  dilarutkan  dalam 5 mL metanol sehingga menghasilkan konsentrasi  larutan  uji  sebesar  250  μg/50 μLuntuk pembuatan larutan uji.  Perlakuan yang sama  dilakukan  pada  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform dan fraksi metanol (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Agar
Dimulai  dengan  pepton  0,5  g, meat extract (Ekstrak daging) 0,3 g, agar 0,45 g, dan aquades  sebanyak  100  mL  yang  semuanya  itu diaduk  sampai  merata  yang  kemudian  dengan menggunakan magnetic  stirrer dibuat  sampai homogen, kemudian pada suhu 121 ˚C selama 15  menit  diautoklaf,  dan  diukur  pH  dengan menggunakan  kertas  pH.  1  mL  media  cair  B1 dipipet,  selanjutnya  dimasukkan  kedalam tabung reaksi dan tutup dengan alminium foil.
Media  cair  B1  akan  dipergunakan  sebagai pengujian aktivitas antibakteri (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode difusi agar ( disc diffusion Kirby and  Bauer )  yang  akan  digunakan  dalam penelitian  ini.  Cakram  ( paper  disc )  yang digunakan berukuran 6 mm dengan daya serap 50  µL  tiap  cakram  yang  digunakan  pad pengujian aktivitas antibakteri ini.  Sampel yang telah  diketahui  dan  ditentukan  kosentrasinya 250  µg/50  µL  selanjutnya  ditotolkan  pada masing-masing  cakram  dengan menggunakan mikropipet.  Pada  media  agar B1  yang  sudah diautoklaf pada suhu 121 ˚C selama 15 menit, selanjutnya  didinginkan  sampai  pada  suhu  40 ˚C.  Kemudian  tuangkan  media  agar  B1  ke cawan  petri,  diambil  sebanyak  100  µL  bakteri yang telah di kultur dalam tabung reaksi, yang kemudian  dipipet  dan  selanjutnya  diinokulasi pada media agar B1 dan tunggu sampai media agar  B1  mengeras.  Kemudian  diberi  label  dan nomor  sampel  pada  masing-masing  cawan petri.  Letakkan  kertas  cakram  yang  telah ditotolkan  sampel  uji  spons Liosina  paradoxa dengan  pinset  kedalam  cawan  petri  kemudian diinkubasi  selama  1x24  jam  pada  suhu  37°C (Ortez, 2005).

## Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter Zona Bening
Selama  24  jam  masa  inkubasi  dilakukan pengamatan.  Perhatikan  didaerah  sekitaran cakram  yang  akan  menunjukkan  kepekaan bakteri terhadap antibiotik atau bahan antibakteri  yang  digunakan  sebagai  bahan  uji yang dinyatakan dengan diameter zona bening. Dengan  menggunakan  mistar  berskala  untuk pengukuran  diameter  zona  bening  horizontal yang ditambahkan dengan zona bening vertical lalu  dibagi  dua.  Dengan  ukuran  diameter  ≤  5 mm memiliki kekuatan daya hambat lemah, 6- 10  mm  daya  hambat  sedang,  10-20  mm  daya hambat kuat dan ≥21 mm daya hambat sangat kuat (Susanto et al , 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Determinasi Sampel
Determinasi  spons Liosina  paradoxa dilakukan  di  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam  Program  Studi  Farmasi Universitas  Sam  Ratulangi.  Determinasi  ini dilakukan  bertujuan  untuk  mendapatkan

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
informasi  identitas  dengan  jelas  atas  sampel spons Liosina paradoxa yang di ambil itu sesuai agar tidak terjadi kesalahahan proses pengumpulam  bahan  yang  nantinya  akan dipakai untuk penetilian.
Dan  berdasarkan  hasil  determinasi dapat  diperoleh  hasil  bahwa  adalah  benar sampel  yang  digunakan  yaitu  spons Liosina paradoxa . Ekstraksi dan Fraksinasi Spons Liosina  paradoxa merupakan sampel  yang  diambil  dari  perairan  pulau Manado Tua, sampel diambil dengan menggunakan  peralatan  selam  dengan  sampel yang  dimasukkan  kedalam Zipper  Lock  bag. Sampel  spons Liosina  paradoxa kemudian dipotong  kecil-kecil  agar  supaya  memperluas permukaan sampel yang dimana supaya semua permukaan dari sampel mendapat ikatan dengan semua  pelarut  yang  akan  digunakan  dan senyawa  yang  akan  ditarik  oleh  pelarut juga akan  banyak.  Metode  Maserasi  digunakan dalam  proses  ekstraksi  dikarenakan  peralatan yang  mudah  untuk  didapatkan  dan  tidak menggunakan  panas  dalam  proses  ekstraksi sehingga  tidak  membuat  senyawa  yang  ada tidak  terurai  (Puspitasari,  2017).  Maserasi  ini dalam  setiap  proses  pengerjaannya  dapat menguntungkan  karena  pada  saat  sampel direndam  dalam  pelarut  dinding  dan  membran sel  akan  terurai  karena  tidak  bisa  menahan tekanan  dari  perbedaan  konsentrasi  maka  dari itu sitoplasma akan larut dan pada saat itu juga ekstraksi  senyawa  akan  terlarut  dengan  baik (Koirewoa, 2012).
Proses Maserasi dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan dalam 1 kali pengulangan selama 24 jam yang dengan remaserasi dengan pelarut yang baru, dilakukan agar setiap senyawa aktif yang terikut bisa maksimal (Luntungan, 2021). Maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  95%, penggunaan  etanol  95%  pada  proses  maserasi ini  dikarenakan  etanol  95%  merupakan senyawa yang  bersifat polar dan  etanol ini
mudah menguap sehingga baik dipakai sebagai pelarut ekstrak. Selanjutnya setelah mendapatkan hasil dari proses maserasi ekstrak spons Liosina  paradoxa sampel  dilakukan penyaringan  dan  dimasukkan  kedalam Rotary Evaporator yang  dimaksudkan  agar  terbentuk ekstrak kental karena terjadinya penguapan air dan pelarut pada ekstrak, dan dengan  suhu 40˚C pada  suhu  ini  dikarenakan  pada  suhu  yang tinggi  senyawa  yang  ada  di  dalamnya  akan hilang  jadi  digunakan  40˚C  agar  supaya  tetap melindungi  senyawa  yang  ada  pada ekstrak (Kowal et al ., 2018).
Hasil  ekstrak  kasar  yang  didapatkan  dari maserasi  tadi  kemudian  dipakai  untuk  proses fraksinasi  yang  dimana  Fraksinasi  yang digunakan  yaitu  fraksinasi  cair-cair  yang dimana senyawa kimia dari suatu  sampel hanya dapat larut dalam pelarut dengan sifat kepolaran yang  sama,  maka  dari  itu  sebuah  golongan senyawa  bisa  diuraikan  dari  senyawa lainnya. Fraksinasi ini juga bertujuan agar senyawa yang ada  dalam  ekstrak  yang  mempunyai  sifat kepolaran  yang  berbeda  akan  di  pisahkan (Dwijendra, 2014).
Pelarut  yang  digunakan  dalam  proses fraksinasi  ini  adalah  Methanol  yang  memiliki sifar  polar,  N-Heksan  dan  Kloroform  yang memiliki  sifat  non  polar  berdasarkan  tingkat perbedaan kepolaran. Proses pengerjaan fraksinasi  ini  memerlukan  pengocokan  yang bertujuan  agar  sampel  yang  digunakan  dapat ditarik  secara  selektif  bagi  pelarut  yang digunakan,  dan  memisahkan  pelarut-pelarut dan pelarut satu dengan yang lainnya  yang akan terbentuk  2  lapisan  (Dwijendra , 2014). Setelah itu  hasil  dari  fraksinasi  akan  dievaporasi  pada suhu  40˚C,  yang  setelahnya  itu  hasilnya  akan digunakan pada proses pengujian antibakteri.
Untuk  hasil  dari  Rendemen  Ekstrak  dan Fraksinasi  Spons Liosina  paradoxa dapat dilihat dari Tabel 1.
Tabel 1. Rendemen ekstrak dan fraksi Spons Liosina paradoxa No Sampel Berat (g) Rendemen (%) Warna 1 Ekstrak Etanol 45,0 3,38 Coklat tua 2 Fraksi n-Heksan 3,00 13.3 Coklat tua 3 Fraksi Kloroform 1,00 4,04 Hijau muda 4 Fraksi Metanol 12,00 53,3 Coklat Hasil  yang  didapatkan  dari  ekstraksi maserasi  etanol  di  atas  diketahui    bahwa diperoleh

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Hasil  yang  didapatkan  saat  proses  fraksinasi mendapat  nilai  rendemen  yang  berbeda  beda disebabkan adanya perbedaan nilai kepoloran pada setiap  kelompok  senyawa  dan  juga  berat  fraksi yang  digunakan  sangat  dipengaruhi  oleh  adanya pelarut  yang  digunakan  (Purwanto,  2015).  Dapat dilihat bahwa nilai rendemen fraksi yang  tertinngi oleh  Metanol  yaitu  53,03%,  kemudian  n- Heksan 13,03%  dan  Kloroform  4,04%,  yang  membuat rendemen  fraksi  methanol  lebih  tinggi  yaitu pelarut methanol bersifat lebih banyak melarutkan hampir  mendekati  semua kompenen  bahan  aktif yang ada dan membuat sampel spons ini lebih ke bersifat  polar  karena  lebih  banyak  senyawa  aktif yang  berhasil  diekstrak  oleh  pelarut  ini  (Joshua, 2021).

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji aktivitas antibakteri ini bertujuan untuk menentukan  bahwa  benar  spons  Liosina paradoxa  memiliki  aktivitas  antibakteri,  dan bakteri  yang  digunakan  dalam  pengujian  ini yaitu bakteri Escherichia coli sebagai perwakilan  bakteri  Gram-negatif  dan  bakteri Staphylococcus aureus sebagai perwakilan
bakteri Gram-positif dan juga untuk mengetahui apakah  spons  yang  digunakan  mempunyai spectrum  sempit  maupun  spectrum luas  dalam hal sebagai antimikroba.
Dalam  pengujian  ini  dilakukan  dengan Metode  Difusi  agar  (Difusi  Kirby-Bauer  yang telah dimodifikasi) dimana metode ini digunakan karena selain sebagai sebagai untuk melihat sensitivitas antibakteri dalam konsentrasi  tertentu  metode  ini  juga  cepat, mudah  dan  murah  karena  tidak  memiliki  alat khusus.
Pengujian  ini  dilihat  dari  aktivitas  zona bening  yang  muncul  disekitar  cakram  pada cawan petri, jika terdapat zona bening menjadi pertanda  bahwa  sampel  yang  digunakan memperlihatkan aktivitas antibakteri.
Pada  proses  pengujian  uji  aktivitas antibakteri ini untuk hasilnya bisa dilihat pada Gambar  1  dan  sesudah  dilakukannya  uji aktivitas  antibakteri  ekstrak  dan  fraksi  Spons Liosina paradoxa terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus didapati  hasil yang dapat dilihat pada Tabel 2.
Gambar 1 . Hasil Uji Aktivitas Antibakteri dari Ekstrak dan Fraksi Spons Liosina paradoxa 5 6
1 2 3 4 5 6
1 2 3 4
Gambar a. Staphylococcus aureus Gambar b. Escherichia coli
Keterangan : (1) Ekstrak Etanol, (2) Fraksi n-Heksan, (3) Fraksi Kloroform, (4) Fraksi Metanol, (5) Kontrol Positif, (6) Kontrol Negatif.

## Tabel 2. Hasil pengukuran diameter zona bening
Diameter Zona Hambat (mm) EtOH n-Heksan ChCl3 MeOH C+ C- Ec 8,57 8,86 8,12 8,10 9,10 8,80 8,60 8.14 20,66 - 8,77 8,01 8,31 7,21 ∑ 26,44 25,67 25,03 23,45 𝑿 ̅ 8,81 8,55 8,34 7,81 Sa 9,20 8,24 9,45 8,64 9,98 10,63 10,04 9,50 29,08 -
8,51 12,32 9,58 12,55 ∑ 27,69 31,19 29,07 30,69 𝑿 ̅ 9,23 10,39 9,69 10,23
Keterangan  :  ∑  =  total  pengukuran, ̅X =  rata  –  rata  pengukuran,  C+  :  Kontrol  positif,  C-  :  Kontrol negative, Ec : Escherichia coli, Sa : Staphylococcus aureus, mm : milimeter
Berdasarkan  hasil  pengamatan  yang diteliti  untuk  setiap  ukuran  dari  zona  bening dapat diukur dengan ukuran diameter ≤ 5 mm memiliki  kekuatan  daya  hambat  lemah,  6-10 mm  daya  hambat  sedang,  10-20  mm  daya hambat kuat dan ≥21 mm daya hambat sangat kuat (Susanto et al , 2012).
Antibiotik merupakan kandungan antibakteri  yang  didesain  secara  standar sehingga  membuat  kloramfenikol  menjadi control  positif  yang  dimana  bertujuan  sebagai pembanding  aktivitas  antibakteri  dan  untuk control negative yang dipakai adalah methanol (Katrin, 2015). Dari hasil yang didapati bahwa antibiotic  kloramfenikol  berspektrum  luas mempunyai  aktivitas  antimikroba  lebih  besar menghambat  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus dibandingkan dengan 4 fraksi yang digunakan yaitu Etanol, n-Heksan, Kloroform,  dan  Methanol  begitupun  dengan control negative disini tidak memiliki aktivitas antibakteri.
Hasil  yang  didapat  dari  fraksi  ethanol pada bakteri Escherichia coli 8,81 mm dan pada bakteri Staphylococcus  aureus 9,23  mm di dapat hasil dalam kategori daya hambat sedang. Hasil yang didapat pada fraksi n- Heksan pada bakteri Escherichia  coli 8,55  mm  mempunyai aktivitas  antibakteri  yang  sedang  sedangkan pada  bakteri Staphylococcus  aureus 10,39  mm dapat dilihat bahwa pada bakteri Staphylococcus aureus aktivitas antibakteri dalam kategori kuat dengan mempunyai spectrum kerja yang luas.
Hasil didapati pada bakteri
Escherichia  coli 8,34  mm  dan  pada  bakteri Staphylococcus aureus 9,69 mm yang keduanya memiliki  daya  hambat  sedang  dalam proses antibakteri  pada  fraksi  kloroform.  Dan  pada bakteri Escherichia  coli 7,81  mm  dengan kategori  daya  hambat  sedang  sedangkan  pada bakteri Staphylococcus aureus 10,23 mm yang dimana memiliki daya hambat yang kuat dengan mempunyai  spectrum  kerja  yang  luas  pada fraksi methanol.
Semua  fraksi  sampel  yang  diuji  pada bakteri  perwakilan Gram-positif  yaitu
Staphylococcus  aureus dan  bakteri  Gram- negatif  yaitu Escherichia  coli semuanya memiliki  aktivitas  antibakteri  dan  aktivitas antibakteri  yang  dalam  kategori  yang  kuat adalah  dari  fraksi  n-Heksan  dan  juga  fraksi methanol  dimana  didukung  dengan  penelitian sebelumnya  yaitu  dari  (Joshua,  2021)  dengan judul  skripsi  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak dan  Fraksi  Spons Liosina  paradoxa Dari Perairan  Pulau  Mantehage  menyatakan  bahwa pada  penelitiannya  daya  hambat  bakteri  yang paling kuat ada pada fraksi methanol, dan daya hambat  bakteri  yang  sedang  pada  fraksi kloroform dan fraksi etanol.
Staphylococcus aureus merupakan bakteri  yang  pada  beberapa  fraksi  mempunyai daya  hambat  bakteri  yang  kuat  dibandingkan bakteri Escherichia  coli dikarenakan  adanya perbedaan  dinding  sel  yang  dimana  bakteri Staphylococcus  aureus memiliki  lemak  yang lebih rendah dibdandingkan bakteri Escherichia coli (Khoiriyah, 2014).

## KESIMPULAN
Sesuai  dengan  hasil  penelitian  yang telah  diuji  pada  ekstrak  dan  fraksi  Spons Liosina paradoxa dari  Perairan  Pulau  Manado Tua dengan memiliki hasil daya  hambat sedang pada semua fraksi dan ekstrak yang telah diuji, dan  daya  hambat  bakteri  yang  kuat  ada  pada bakteri  uji Staphylococcus  aureus pada  fraksi methanol dan fraksi n-Heksan.

## SARAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan pada uji aktivitas antibakteri ekstrak dan  fraksi  Spons Liosina  paradoxa ,  maka disarankan  untuk  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  terhadap  spons Liosina  paradoxa untuk melihat  aktivitas  antibakteri  dan  meneliti senyawa  apa  saja  yang  ada  di  dalamnya  yang membuat adanya aktivitas antibakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
Angelina,   N.   dkk.   2016. Uji Aktivitas Antibakteri Sari Spons Dictynella

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
funicularis  dan  Phyllospongia  lamellose Yang  Diambil  dari  Perairan  Bunaken. Jurnal Pesisir dan Laut Tropis. Vol 2 No 1 Tahun 2016 Abdullah,  S.S.,  Djide,  N.,  Natsir,  S.  (2021). KLT  Bioautografi  Hasil  Partisi  Ekstrak Etanol  Herba  Bandotan  ( Ageratum conyzoides L. ) Terhadap Shigella dysentriae . Chem. Prog. 14(1).15-17
Dwijendra. I. M., Wewengkang D. S, Wehantou F.  2014.  Aktivitas  Antibakteri  Dan Karakterisasi  Senyawa  Fraksi  Spons Lamellodsidae herbacea Yang Diperoleh Dari  Teluk  Manado.  Jurnal  Pharmacon, Farmasi UNSRAT. Manado
Hasnaeni.,  Wisdawati.,  S.  Usman.  2019. Pengaruh  Metode  Ekstraksi  Terhadap Rendemen  Dan  Kadar  Fenolik  Ekstrak Tanaman  Kayu  Beta-Beta  (Lunasia amara Blanco. Jurnal Farmasi Galenika.
UMI. Makassar.
Ismail,  M.  2018.  Eksplorasi  Spons  Indonesia Seputar Kepulauan Spermonde. Makassar : Penerbit Nas media pustaka. Iwenda, Bella., dkk. 2013. “Struktur komuntitas  Spons  Laut  (Porifera)  di pantai  Pasir  Putih,  Situbondo”.  Jurnal Sains dan seni Pomits Vol. 2 , No.2.
Josua,  E.,  Wewengkang,  D.  S.,  dan  Suoth,  E. 2021.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak dan Fraksi Spons Liosina paradoxa dari Perairan Pulau Mantehage. PHARMACON . 10(3): 933-939.
Katrin,  D.,  N,  Idiawati.,  B,  Sitorus.  2015.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Dari ekstrak  Daun Malek ( Litesea graciae Vidal) Terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli. Jurnal Kimia Khatulistiwa. FMIPA Tanjungpura.
Koirewoa,  Y.  A.,  Fatimawali,  W.  I.  Wiyono,
2012.  Isolasi  dan  Indentifikasi  Senyawa
Flavonoid dalam daun  Beluntas (Pluchea Indica  L.)  Laporan  Penelitian.  FMIPA
UNSRAT. MANADO
Kowal,  A.,  Esther,  A.,  Nickson,  K.,  Kurniati, K., Henky, M., Deiske, H. 2018. Potensi antibakteri karang lunak lobophytum sp.
Dari perairan pangalisang  pulau bunaken terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa  dan  Staphylococcus  aureus. Jurnal Ilmiah Platax. 6(2)
Luntungan,  B.  M.,  Wewengkang,  D.  S.,  dan Rumondor,  E.  2021.  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi  Spons Mycale  vansoesti dari  Perairan  Pulau Mantehage  Minahasa  Utara  Terhadap Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus
aureus . PHARMACON . 10(2): 889-896.
Mpila,  D.A.  2012.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Mayana  ( Coleus atropurpureus Benth) Terhadap
Staphylococcus aureus, Echerichia  coli Dan Pseudomonas  aeruginosa Secara Invitro  [skripsi].  Manado:  Universitas Sam Ratulangi.
Ortez,  J.  H.  2005. Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing .  Marie  B.  Coyle  (Coord.  Ed). American  society  for  Microbiology. America.
Pelealu,  E.,  D,  Wewengkang.,  S,  Sumantri. 2021.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak dan  Fraksi  spons Leucetta  chagosensis dari Perairan Pulau Mantehage Sulawesi Utara  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli .  Program  Studi  Farmasi  Fmipa Unsrat Manado.