## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL DAUN MURBEI

## ( Morus alba L) ASAL KUPANG, NUSA TENGGARA TIMUR DENGAN METODE DPPH (2,2 DIPHENIL-1- PICRYLHYDRAZYL)
Megawati 1 , Muhammad Aswad 2 , Yohanes D.P. Agung Embu 1 , Khadijah 3
1 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar, Daya Kota Makassar 2 Fakultas Farmasi Universitas Hasanuddin, Makassar
3 Prodi Pendidikan Kimia, Universitas Khairun, Ternate Coresponding Author : megasyahruddin@yahoo.co.id Manuscript recieved:18-01-2019 Revision Accepted: 01-05-2019

## Abstrak
Murbei ( Morus alba L.) merupakan salah satu tanaman yang tumbuh di Indonesia dan  banyak digunakan  dalam  pengobatan  tradisional.  Beberapa  khasiat  dari  murbei  kemungkinan berhubungan  dengan  daya  antioksidannya.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun  murbei  yang  berasal  dari  Kupang. Daun murbei diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 70%. Ekstrak diuji  terhadap  DPPH  sebagai  radikal  bebas  dan  diukur  pada  panjang  gelombang  517  nm dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis.  Hasil  penelitian  menunjukkan  ekstrak etanol  daun  murbei  dari  Kupang  Nusa  Tenggara  Timur,  memiliki  aktivitas  antioksidan sangat  kuat  dengan  nilai  IC50   8,35  µg/mL,  namun  masih  lebih rendah  dibandingkan kuersetin  sebagai  kontrol  positif  dengan  nilai  IC50  0,82  µg/mL.  Penelitian  ini menyimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  murbei  dari  Kupang  memiliki  aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
Kata   Kunci:   Antioksidan,   murbei   ( Morus   alba L.),   DPPH (2,2- dipheny l- 1-
picrylhydrazyl )

## Abstract
Mulberry  ( Morus  alba L.)  is  one  of  the  plants  growing  in  Indonesia  and  widely  used  as traditional  medicine.  Some  efficacy of  mulberry might  be  related  to  its  antioxidant activity. The aim of this study was to determine  the antioxidant potency of ethanol extract of mulberry leaves from Kupang. Mulberry leaves was extracted by maceration method using ethanol 70% as solvent. The extract was evaluated against DPPH as free radical and  measured  at  517 nm wavelength  using    UV-Vis  spectrophotometer.  The    results  showed  that  ethanol  extract  of mulberry leaves from Kupang Nusa Tenggara Timur, had a  very strong antioxidant activity with  IC50  value  was  8,35  µg/mL, However it still  lower than  quercetin as  positive  control with  IC50 value  about  0,82  µg/mL.  The  study  can  be concluded  that   ethanol  extract   of mulberry  leaves  from  Kupang  had  a very strong antioxidant activity.
Keywords:    Antioxidant,    mulberry ( Morus    alba L.),  DPPH ( 2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl)
E-ISSN-2580-7129 Print- ISSN-1978-6107

## TECHNO: JURNAL PENELITIAN
Jurnal homepage : http://ejournal.unkhair.ac.id/index.php/Techno Volume 08 Nomor 01 Mei 2019 DOI: http://dx.doi.org/10.33387/tk.v8i1.947

## PENDAHULUAN
Pemanfaatan  tumbuhan  sebagai  obat  sudah  dilakukan  sejak  dahulu.  Tumbuhan memiliki  sejuta  manfaat,  salah  satunya  adalah  sebagai  obat  untuk  berbagai  penyakit (Prasetyono,2012).
Murbei  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  tumbuh  di  Indonesia  dan  banyak digunakan  dalam  pengobatan  secara  tradisional.  Daun  murbei  digunakan  dalam masyarakat  untuk  mengobati  berbagai  penyakit  seperti  demam,  batuk,  sakit    kepala, darah  tinggi, kencing manis, kaki gajah, sakit kulit, dan gangguan pencernaan (Djamil dan Fatimah, 2015). Kandungan senyawa  aktif  yang terdapat pada  daun murbei  yaitu alkaloid,  flavonoid,  polifenol  dan  terpenoid  yang  mempunyai  peranan  sebagai antioksidan (Jurian,dkk., 2016).
Aktivitas antioksidan dapat ditentukan dengan beberapa metode. Salah satunya adalah metode  peredaman  radikal  bebas  DPPH. Pengujian  akivitas  antioksidan  ekstrak  daun murbei  pernah  dilakukan  dengan  metode  DPPH  yang  sampelnya  diambil  dari Agrotechnopark Universitas  Jember  dengan  persen  penghambatan  tertinggi  terhadap DPPH  sebesar 43,95%  (Jurian, dkk.,  2016).  Namun, pengujian antioksidan  murbei dari daerah Nusa Tenggara Timur khususnya Kota  Kupang  yang  juga  banyak ditumbuhi murbei  belum  pernah  dilakukan.  Hal  ini  disebabkan  pemanfaatan  murbei  sebagai pengobatan  sendiri  masih  belum  banyak    diketahui  oleh  masyarakat  disana  pada umumnya.
Menurut Ghasemi et al ., (2011), perbedaan kondisi geografis  dan  keadaan  iklim dapat menyebabkan  perbedaan  komponen  bioaktif  dan  bioaktivitas  suatu  tanaman. Penelitian yang dilakukannya membuktikan bahwa ekstak metanol Jugians regia L. yang berasal  dari  11  wilayah  di  Iran  memiliki  aktivitas    antioksidan  yang  berbeda.    Dari semua  sampel  yang  diuji,  sampel  dari  daerah  Chogholondi  memiliki  aktivitas penghambatan  radikal  bebas  yang  paling  kuat  dengann  IC50  122  µg/mL,  sedangkan sampel yang berasal dari daerah Imam Reza Park menunjukan aktivitas penghambatan paling  lemah  dengan  IC50  302  µg/mL.  Berdasarkan  uraian  ini  maka  peneliti  tertarik untuk  melakukan    penelitian    mengenai  uji  aktivitas  antioksidan  daun  murbei  yang berasal dari Kota Kupang, Nusa Tenggara Timur dengan menggunakan metode DPPH.

## METODE PENELITIAN

## Cara Kerja

## 1. Penyiapan Sampel
Sampel  daun  murbei  dikumpulkan,  lalu  disortasi  basah  dengan  tujuan  untuk memisahkan  kotoran  atau  bahan  asing  lainnya  dengan  cara  dibersihkan  dengan menggunakan  air  mengalir  selanjutnya  dirajang,  dikeringkan,  kemudian  disortasi kering setelah itu diserbukkan dan siap diekstraksi.

## 2. Ekstraksi     Sampel     Secara Maserasi
Sebanyak 300 gram simplisia daun murbei dimaserasi menggunakan pelarut etanol 70% selama  3  x  24  jam  diaduk  sesekali  kemudian  disaring  lalu  dilakukan  remaserasi  lagi selama  2  x  24    jam.    Ekstrak  cair  yang  telah  diperoleh  dikumpulkan  dan  diuapkan pelarutnya dengan  alat rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental daun murbei.
Selanjutnya dilakukan uji kualitatif ekstrak.

## 3. Uji Aktivitas Antioksidan
a.  Pembuatan Larutan DPPH Larutan  DPPH  0,4  mM  dibuat dengan cara menimbang DPPH  sebanyak  0,0157  g dilarutkan  dengan  100  mL etanol  absolut  dalam  labu ukur.
b. Pembuatan Larutan Sampel Dibuat  larutan  stok  1000 µg/mL dengan  cara menimbang ekstrak daun murbei 10 mg  dan  dilarutkan  dengan  etanol  absolut  sambil  diaduk  dan  dihomogenkan  lalu dicukupkan  volumenya  hingga 10 mL.
c.  Pembuatan Larutan Pembanding Kuersetin Dibuat  larutan  stok  1000  µg/mL  disiapkan  dengan  cara  menimbang  10  mg Kuarsetin dan dilarutkan dengan etanol absolut, volume akhir dicukupkan hingga 10 mL.

## 4. Pengukuran Aktivitas Antioksidan
a. Pengukuran Antioksidan Blanko Pengujian  dilakukan  dengan  cara  memipet  1  mL  DPPH  0,4  mM    dan  dicukupkan volumenya  dengan  etanol  absolut  hingga  5  mL,  larutan  dihomogenkan  dan didiamkan  selama  30  menit,  selanjutnya  diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm.

## b. Pengukuran Antioksidan Ekstrak Etanol daun Murbei.
Pengujian  dilakukan  dengan  cara  membuat  5  seri  konsentrasi  ekstrak,  masing- masing  dipipet  10  µl,  20  µl,  30 µl, 40 µl, dan 50 µl dari larutan stok sampel ekstrak daun  murbei  1000  µg/mL  kemudian  ditambahkan  1  mL  DPPH  lalu  dicukupkan volumenya  5  mL  dengan    etanol  absolut  sehingga  diperoleh  larutan  dengan konsentrasi  2  µg/mL,  4  µg/mL,  6  µg/mL,  8  µg/mL,  dan  10  µg/mL.  Selanjutnya dihomogenkan  dan  didiamkan  selama  30  menit  kemudian  diukur  dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm.

## c.  Pengukuran Antioksidan Dengan Larutan Pembanding Kuersetin.
Larutan stok   kuersetin  1000 µg/mL  dipipet 100 µl dilarutkan  dalam  10  ml etanol absolut  sehingga    diperoleh  larutan  stok  10  µg/mL.  Pengujian  dilakukan  dengan cara  membuat  5  seri  konsentrasi  larutan  pembanding  kuarsetin,  masing-masing dipipet  100  µl, 200  µl,  300  µl,  400  µl,  dan  500 µl   dari   larutan   stok   kuarsetin 10 µg/mL,  campuran  ditambah  1  mL  larutan  DPPH  lalu  dicukupkan  volumenya sampai  5  mL  dengan  etanol  absolut  sehingga  diperoleh  larutan  0,2  µg/mL,  0,4 µg/mL,  0,6  µg/mL,  0,8  µg/mL,  dan  1  µg/mL.  Selanjutnya  dihomogenkan  dan didiamkan selama 30 menit kemudian diukur dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 517 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah daun murbei ( Morus alba L.)   yang berasal  dari  Kupang-NTT  yang  diekstraksi  dengan  menggunakan  metode  maserasi. Metode  penyarian  yang  digunakan  adalah  metode  maserasi  sederhana.  Metode
Megawati, Aswad, M., Embu, Y.D.P.A, Khadijah. Antioksidan,   murbei   ( Morus   alba L.),   DPPH (2,2- dipheny l- picrylhydrazyl )
maserasi  merupakan  cara  ekstraksi  yang  mudah  dilakukan  dan  dalam  tahapannya tidak  dilakukan  proses  pemanasan  sehingga  menghindari  kerusakan  zat  aktif  yang dikandung oleh simplisia (Agoes, 2007). Metode ini cocok untuk mengekstraksi sampel yang  mengandung  senyawa  yang  bersifat  termolabil (Pandey dan  Shalini, 2014).  Pada metode maserasi, sampel yang telah dikeringkan terlebih dahulu dirajang kecil dengan tujuan  untuk  memperbesar  luas  permukaan  sampel.  Sampel  daun  murbei  yang  telah dirajang  kecil ditimbang sebanyak 300  g kemudian  direndam dalam bejana  maserasi dengan cairan penyari  etanol 70% selama 3 hari. Etanol 70% digunakan sebagai penyari karena memiliki kemampuan menyari senyawa pada rentang polaritas yang luas mulai dari  senyawa  polar  hingga  non  polar  (Padmasari et  al ,  2013).  Sehingga  diharapkan senyawa-senyawa  yang  berpotensi  sebagai  antioksidan  dapat  tersari  secara  maksimal. Cairan  penyari  akan  menembus dinding sel sampel dan masuk ke dalam rongga sel yang mengandung zat aktif, zat aktif akan  larut  dalam  cairan  penyari sehingga terjadi perbedaan konsentrasi   antara   larutan zat aktif di dalam sel dan diluar sel, dan proses ini terjadi  berulang kali sampai terjadi keseimbangan antara konsentrasi cairan zat aktif di  dalam  sel  dan  di  luar  sel  (Ansel,  1989).  Untuk  mengoptimalkan  proses  ini,  maka ekstraksi    dilakukan  sebanyak  2  kali  (remaserasi).  Ekstrak  cair  kemudian  diuapkan sehingga diperoleh  ekstrak  kental sebanyak  34,663  g  dengan rendemen 11,553%.
Tabel 1. Hasil Perhitungan Rendemen Ekstrak Daun Murbei Sampel Simplisia (g) Bobot Ekstrak (g) Rendemen(%) Ekstrak Etanol Daun Murbei (Morus alba L.) 300 34,663 11,55%
Setelah  ekstrak  diperoleh  kemudian  dilakukan  identifikasi  kandungan  kimia.  Hasil identifikasi  kandungan kimia  dari ekstrak etanol daun murbei dapat dilihat pada tabel berikut:

## Tabel 2. Hasil Identifikasi Kandungan Kimia
No Senyawa Pereaksi Hasil Keterangan 1 Alkaloid Mayer Terbentuk endapan putih Positif Wagner Terbentuk   warna coklat kemerahan Positif Dragendorf Terbentuk  warna orange kemerahan Positif 2 Flavanoid Serbuk Mg  +  HCl pekat Terbentuk warna merah Positif 3 Saponin Aquadest panas +HCl 2 N Terbentuk     busa yang stabil selama 10 menit Positif 4 Tanin FeCl3 Terbentuk    warna hijau kehitaman Positif 5 Terpenoid Kloroform  +    asam sulfat pekat + 2 mL asam asetat anhidrat. Terbentuk  warna merah tua Positif
6 Steroid Kloroform  +    asam sulfat  pekat  +  2  mL asam asetat anhidrat. Lapisan coklat yang terbentuk  pada pertemuan dua lapisan Positif
Hasil skrining fitokimia (Tabel 2) menunjukkan bahwa senyawa yang terkandung dalam ekstrak  etanol  daun  murbei  adalah  alkaloid,    flavonoid,  tanin,  saponin,  steroid,  dan terpenoid.  Pengukuran  daya  antioksidan  terhadap  ekstrak  etanol  daun  murbei dilakukan  dengan  metode  DPPH.  Metode  DPPH  dipilih  karena  memerlukan  sedikit sampel,  sederhana,  mudah,  cepat,  dan peka  untuk mengevaluasi  aktivitas antioksidan dari senyawa bahan alam (Hanani, dkk.2005). Secara kimia senyawa  antioksidan adalah senyawa  pemberi  elektron  (elektron  donor).  Antioksidan  bekerja  dengan  cara mendonorkan  satu  elektronnya  kepada  senyawa  yang  bersifat  oksidan  sehingga aktivitas senyawa oksidan tersebut dapat dihambat (Winarti,2010). Senyawa antioksidan yang  bereaksi  dengan  radikal  DPPH  menyebabkan  absorbsi  DPPH  akan  berkurang yang  ditandai  dengan  adanya  perubahan  warna  radikal  bebas  DPPH  yang  berwarna ungu  menjadi  kuning  pucat  (Haeria,  dkk.,  2016).).  Panjang  gelombang  maksimum DPPH  yang  didapat  untuk  pengukuran  aktivitas  antioksidan  ekstrak    etanol  daun murbei  adalah  517  nm.  Parameter  yang  digunakan  untuk  menunjukan  aktivitas antioksidan  adalah Inhibition  concentration (IC50).  Nilai  IC50  adalah  nilai  yang menunjukan  konsentrasi  antioksidan  yang  mampu  menghambat  50%  oksidasi  atau aktivitas radikal bebas (Haeria, dkk., 2016).
Kategori  penentuan  kekuatan  aktivitas  antioksidan  menurut  Molyneux  (2004) menyatakan  suatu  senyawa  memiliki  antioksidan  sangat  kuat  apabila  nilai  IC50  <  50 ppm,  kuat  apabila 50-100 ppm, sedang apabila 101- 150  ppm  dan  lemah  apabila  nilai IC50 > 150 ppm.
Tabel 3 dan 4 menunjukkan hasil pengukuran aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun murbei  ( Morus alba L ) dari  Kota Kupang  dan  kuarsetin sebagai  pembanding  dengan metode DPPH.
Tabel  3.  Hasil  perhitungan  pengukuran  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun murbei ( Morus alba L) asal Kupang-NTT Konsentrasi (ppm) Absorbansi (nm) Rata-rata % peredaman DPPH Persamaan garis Nilai IC50 (µg/mL) 2 0,50409 0,50407 19,92
Y = 4,8335x +
9,621
R 2 = 0,9987 8,35 0,50370 0,50444
4 0,45021 0,44965 28,56 0,45132 0,44744 6 0,39272 0,39001 38,04 0,38771 0,38961 8 0,32758 0,32662 48,11 0,32256 0,32973 0,26347
Megawati, Aswad, M., Embu, Y.D.P.A, Khadijah. Antioksidan,   murbei   ( Morus   alba L.),   DPPH (2,2- dipheny l- picrylhydrazyl )
10 0,25490 0,26129 58,48 0,26550 Blanko 0,62990 0,62946 0,62965 0,62883
Tabel 4. Hasil perhitungan pengukuran aktivitas antioksidan kuersetin
Konsentrasi (ppm) Absorbansi (nm) Rata-rata  % peredaman DPPH Persamaan garis Nilai IC50 (µg/mL) 0,2 0,51823
0,52024 27,21 Y= 38,055x+18,845 R 2 = 0,9967 0,82 0,5213
0,52119
0,4
0,47448 0,47462 33,59 0,47415 0,47524
0,6 0,42085
0,42078 41,13 0,42027
0,42122 0,8 0,36569 0,36589 48,80 0,36659 0,36539 1,0 0,30547 0,30256 57,66 0,30782 0,29439 Blanko 0,71443 0,71473 0,71504 0,71472
Pada  pengujian  aktivitas  antioksidan    menggunakan  metode  DPPH  menunjukkan bahwa    ekstrak  etanol  daun  murbei  ( Morus  alba L)  dari  Kota  Kupang  mempunyai aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 8,35  µg/mL  dan  kuersetin sebagai pembanding positif yang merupakan senyawa murni mempunyai aktivitas antioksidan dengan  nilai IC50  0,82  µg/mL. Hal  ini  menunjukan  bahwa ekstrak  etanol  daun  murbei ( Morus alba L)  dari  Kota  Kupang  dan  senyawa  pembanding  kuarsetin  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  sangat  kuat  karena    memiliki  nilai    IC50  <  50  µg/mL.  Pengujian akivitas antioksidan daun murbei pernah dilakukan  oleh Muslim (2017). Dengan metode ABTS  dan  FRAP  yang  sampelnya  diambil  dari  Kabupaten  Gowa,  Sulawesi  Selatan dengan  nilai  IC50 sebesar 13,146 µg/mL dan merupakan antioksidan yang sangat kuat. Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Daun  Murbei  juga  pernah  dilakukan dengan metode DPPH yang sampelnya diambil dari Agrotechnopark Universitas Jember yang  memiliki  persen  penghambatan  tertinggi  terhadap  DPPH  sebesar  43,95%  (Jurian, dkk., 2016).   Hal ini   menunjukan adanya perbedaan potensi aktivitas antioksidan daun murbei dari beberapa daerah yang berbeda.

## PENUTUP
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol  daun murbei asal kota Kupang NTT yang  diuji  aktivitas antioksidannya dengan metode  DPPH  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  sangat  kuat  dengan  nilai  IC50  8,35 µg/mL.

## SARAN
Perlu  dilakukan  pengujian kadar fenolik total daun murbei dan dilakukan  isolasi lebih lanjut  untuk  mendapatkan  senyawa  murni  dari  daun  murbei  yang  berasal  dari  Kota Kupang  Nusa Tenggara Timur.

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes,  G. (2007) Teknologi Bahan Alam , ITB Press: Bandung
Ansel, H.C., (1989). Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi , diterjemahkan oleh Farida Ibrahim, UI Press, Jakarta
Djamil,  R.,  dan  Fatimah  Bakriyyah.  (2015).  Isolasi  dan  Identifikasi  Jenis  Senyawa Flavonoid  dalam  Fase  n-Butanol  Daun  Murbei  ( Morus  alba L.)  secara Spketrofotometri, Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia , 13 (2): 195.
Ghasemi,  K.,  Yousef  Ghasemi.,  Abdollah,E.,Sey  ed,  M.N.,Seyed,  F.N.,  Mohammad,  A. E., Fereshteh, P., et  al ,  (2011) Influence  of  Environmental Factors  on  Antioxidant Activity,  Phenol  and  Flavonoids  Contents  of  Walnut  ( Juglans  regia L.)  green husks, Journal of Medicinal Plants Research, 5 (7): 1130.
Haeria,  H.,  dan  Andi,  T.  U.  (2016)  Penentuan    Kadar  Flavonoid  Total  dan  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak    Etanol  Daun  Bidara  (Ziziphus  spina-  christi  L.), Journal  of Pharmaceutical and Medicinal  Science (1):  pp 57-61
Hanani, E., Mun’im, A. dan Sekarini, R. (2005) Identifikasi Senyawa Antioksidan dalam Spons Callyspongia Sp. dari Kepulauan Seribu, Majalah Ilmu  Kefarmasian , 2 (3): 127.
Jurian,  Y.  V.,  Soni  Sumasono., dan Mukhammad Fauzi. (2016) Aktivitas Antioksidan dan Antibakteri  Ekstrak  Daun  Murbei ( Morus  alba ) Terhadap  Escherichia  coli ,  Universitas Jember, Jember.
Molyneux,  P.  ( 2004)  Use  of  The  Stable  Free  Radical  Diphenylpicrylhydrazil  (DPPH) for Estimating Antioxidant Activity , Journal of  Science  and Technologi, 26 (2):   211- 219.
Muslim,   R.  ( 2017).   Uji   Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol Daun  Murbei  ( Morus alba L.)  Dengan  Metode  ABTS  (Asam  2,2-Azinobis(3-etilbenzatizolin)-6-sulfonat Dan  Metode  FRAP  (Ferric Reducing Antioxidant Power). [ Skripsi ]. Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar: Makassar.
Padmasari,   P.D.,   Astuti,   K.W., dan Wardiatini, N.K. (2013) Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol  70%  Rimpang  Bangle ( Zingiber  purpureum Roxb.),  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Udayana Bali.
Megawati, Aswad, M., Embu, Y.D.P.A, Khadijah. Antioksidan,   murbei   ( Morus   alba L.),   DPPH (2,2- dipheny l- picrylhydrazyl )
Pandey,     Amita dan Shalini Tripathi.  (2014)  Concept  of Standadardization, Extraction and  Pre  Phytochemical  Screening  Strategies  for  Herbal  Drug,  Institute  of Technology  and Management Sitapur, Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry . Prasetyono,  D.  S.  (2012)  A-Z Daftar  Tanaman  Obat  Ampuh  Di  Sekitar  Kita ,  FlashBooks, Yogyakarta.
Winarti,     S. (2010) Makanan Fungsional : Yogyakarta