## SKRINING FITOKIMIA DAN UJI TOKSISITAS DARI EKSTRAK
ETANOL DAUN MANGGIS ( Garcinia mangostana L. ) DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST (BSLT)
Meilyta Esther Pangow 1) , Widdhi Bodhi 1) , Edwin de Queljoe 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Mangosteen (Garcinia mangostana L.) is a member of Guttiferae family, its skin and fruit has been widely used for health purposes, but other parts such as leaves have not been utilized, while it has  potential  to  have  a  similar  content.  This  research  aims  to  determine  the  secondary  metabolites compound  contained  in  mangosteen  leaves  (G.  mangostana)  and  its  toxicity  activities  so  can  be processed and utilized. The obtained extract was used for phytochemical screening and toxicity test to Artemia  salina  L.  using  Brine  Shrimp  Lethality  Test  method.  Percentage  of  larval  mortality  was analyzed  by  probit  analysis  using  SPSS  23.0  (LC 50 ).  The  results  of  this  research  indicate  that  the ethanol  extract  of  mangosteen  leaves  contain  triterpenoid,  flavonoid,  tannin  and  saponin  that  can provide  pharmacological  effects.  The  mangosteen  leaves  has  a  high  toxicity  value,  is  Lethality Concentration 50 (LC 50 ) value in the amount of 30.327 µg/mL.
Keywords: Mangosteen Leaf, Phytochemicals Screening, Toxicity, BSLT, LC 50 .

## ABSTRAK
Manggis  ( Garcinia  mangostana L.)  merupakan  salah  satu  anggota  famili  Guttiferae  yang telah  banyak  dimanfaatkan  untuk  kesehatan  pada  bagian  kulit  dan  buahnya,  namun  bagian  lainnya seperti  daun  belum  dimanfaatkan  yang  dapat  berpotensi  mempunyai  kandungan  yang  serupa. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kandungan senyawa metabolit sekunder dari daun manggis ( G.  mangostana )  dan  aktivitas  toksisitasnya  agar  dapat  diolah  dan  dimanfaatkan.  Ekstrak  yang diperoleh digunakan untuk skrining fitokimia dan uji toksisitas terhadap larva udang Artemia salina L.  dengan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test .  Persentase  kematian  larva  dianalisis  dengan  analisis probit menggunakan SPSS 23.0 (LC 50 ). Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun manggis terdapat kandungan triterpenoid, flavonoid, tanin dan saponin yang dapat memberikan efek farmakologis.  Daun  manggis  mempunyai  nilai  toksisitas  yang  tinggi,  yakni  nilai Lethality Concentration 50 (LC 50 ) sebesar 30.327 µg/mL .
Kata kunci : Daun Manggis, Skrining Fitokimia, Toksisitas, BSLT, LC 50 .

## PENDAHULUAN
Penggunaan  tanaman  obat  sebagai pengobatan  tradisional  merupakan  pilihan pengobatan  yang  kini  makin  diminati karena  relatif  aman  dan  murah,  salah satunya  adalah  untuk  terapi  kanker.  Obat kemoterapi  telah  banyak  ditemukan  untuk terapi  kanker  namun  hasilnya  belum memuaskan,  disamping  kurang  selektif dalam  penggunaan  obat  yang  ada,  juga
ditemukan efek samping yang cukup besar dari  obat  tersebut  (Hendrawati,  2009; Farida et  al., 2009).  Dari  berbagai penelitian,  obat  tradisional  telah  diakui keberadaannya  oleh  masyarakat,  dengan demikian  meningkatkan  manfaat  tanaman bagi  kesehatan  dan  menciptakan  kondisi yang  mendorong  pengembangan  obat tradisional (Hendrawati, 2009).
Manggis  merupakan  salah  satu anggota  famili  Guttiferae.  Tanaman  ini dibudidayakan  di  negara-negara  Asia Tenggara,  seperti  Indonesia,  Malaysia, Srilangka, Filipina, dan Thailand (Gutierrez et  al .,  2013).  Buah  manggis mengandung  zat  besi,  serat,  kalsium, kalium, protein, fosforus, natrium, vitamin B1, vitamin B2, vitamin C yang berkhasiat bagi kesehatan (Hermawati et al ., 2014).
Berdasarkan penelitian yang dilakukan Jung et al. (2006), kulit manggis memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi, dimana  mampu  mengikat  oksigen  bebas yang  tidak  stabil  yaitu  radikal  bebas perusak sel di dalam tubuh sehingga dapat menghambat proses degenerasi (kerusakan)  sel.  Kulit  manggis  juga berkhasiat  sebagai  antidiabetes  (Pasaribu et  al .,  2012),  antibakteri  (Nivetha et  al .,
2015), antihiperurisemia (Dira et al ., 2014)
dan  antiinflamasi  (Nakatani et  al .,  2002).
Manggis merupakan tanaman yang mempunyai  potensi  sebagai  antikanker (Hidayat et  al .,  2015).  Banyak  penelitian yang telah dilakukan pada bagian buah dan kulit  dari  manggis,  namun  bagian  daun dari  manggis  belum  banyak  diteliti khususnya  kandungan  senyawa  metabolit sekunder dan tingkat toksisitasnya.
Pengujian toksisitas dapat dilakukan  dengan  menggunakan  metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT) menggunakan  larva  udang  laut Artemia salina L.  Hasil  yang  diperoleh  dihitung sebagai  nilai  LC 50 ( Lethal  Concentration ) ekstrak  uji,  yaitu  jumlah  konsentrasi ekstrak  uji  yang  dapat  menyebabkan kematian  larva  udang  sejumlah  50%
(Meyer et  al .,  1982).  Senyawa  yang  telah diisolasi dan dimonitor aktivitasnya dengan BSLT menunjukkan adanya korelasi  terhadap  suatu  uji  spesifik antitumor.  Apabila  senyawa  tersebut dinyatakan  bersifat  toksik,  maka  dapat dilakukan  uji  lanjutan  antikanker  terhadap sel kanker (Freshney, 1986).
Berdasarkan  uraian  diatas,  penulis tertarik untuk melakukan penelitian mengenai  kandungan  senyawa  metabolit sekunder  dan    aktivitas  toksisitas  dari ekstrak etanol daun manggis menggunakan metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT).

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian dilaksanakan pada Januari-Maret  2018  di Laboratorium
Farmakologi  Program  Studi  Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu
Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi Manado.

## Jenis Penelitian
Penelitian  merupakan  penelitian eksperimental laboratorium.

## Alat
Tisu,  blender,  gunting,  tabung reaksi, rak tabung reaksi, pipet, penggaris, rotary  evaporator ,  timbangan,  sarung tangan,  masker,  gelas  beker,  batang pengaduk,  cawan  petri, waterbath ,  kertas saring,  ayakan  mesh  200,  corong,  kaca pembesar, hotplate ,  aerator,  lampu,  labu takar,  erlenmeyer,  gelas  ukur,  aluminium foil, spatula, toples kaca, pot salep, wadah plastik berukuran sedang.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  :  daun  manggis  ( Garcinia mangostana L.),  etanol  96%,  air  laut, Artemia  salina L.,  akuades,  garam  non yodium, CHCl 3 (kloroform), NH 3 (amonia),  H 2 SO 4 (asam  sulfat),  pereaksi Meyer,  pereaksi  Dragendorf,  pereaksi Wagner,  C 4 H 6 O 3 (asetat  anhidrat),  HCl (asam  klorida),  Mg  (magnesium)  dan FeCl 3 (besi (III) klorida).

## Pengambilan dan Persiapan Sampel
Sampel yang digunakan ialah daun manggis  ( Garcinia  mangostana L.)  yang diambil  di  kelurahan  Paniki,  kecamatan Mapanget,  kota  Manado,  Sulawesi  Utara. Selanjutnya sampel dibersihkan dan dikeringanginkan  hingga  sampel  kering. Setelah  kering  sampel  diblender  hingga sampel  menjadi  halus  lalu  diayak  dengan ayakan mesh 200.
Identifikasi Tanaman
Identifikasi  tanaman  dilakukan  di
Laboratorium Taksonomi Tumbuhan Program Studi Biologi Fakultas
Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,
Universitas Sam Ratulangi Manado.
Ekstraksi Daun Garcinia mangostana L.
Ekstraksi  bahan  aktif  dilakukan dengan  metode  maserasi  dengan  pelarut etanol  96%.  Serbuk Garcinia  mangostana L.  ditimbang  sebanyak  200  g  dan dimasukkan  ke  dalam  wadah,  kemudian ditambahkan  pelarut  hingga  volume  akhir mencapai 1000 mL dengan perbandingan 1 : 5 (b/v). Hasil maserasi kemudian disaring dengan  kertas  saring  sehingga  dihasilkan filtrat  dan  residu.  Perendaman  dilakukan lagi  1  kali  remaserasi.  Filtrat  yang diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan rotary  evaporator pada  suhu  40 0 C  hingga diperoleh ekstrak kental berupa pasta.

## Uji Fitokimia
Uji fitokimia merupakan uji kualitatif yang dilakukan untuk mengetahui  komponen  bioaktif  yang terkandung dalam ekstrak etanol 96% daun Garcinia mangostana L. Analisis fitokimia yang  dilakukan  meliputi  uji  alkaloid, triterpenoid/steroid,  flavonoid,  tanin  dan saponin.  Metode  analisis  yang  digunakan berdasarkan pada Harborne (1987).

## a. Alkaloid
Sebanyak 0,5 g ekstrak etanol daun manggis ( Garcinia mangostana L.) dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi kemudian  ditambahkan  2  mL  kloroform (CHCl 3 )  dan  10  mL  amonia  (NH 3 )  lalu ditambahkan 10 tetes asam sulfat (H 2 SO 4 ). Campuran  dikocok  dan  dibiarkan  hingga membentuk 2 lapisan. Lapisan asam sulfat (H 2 SO 4 )    dipindahkan  dalam  3  tabung
reaksi  dengan  volume  masing-masing  2,5 mL.  Ketiga  larutan  diuji  dengan  pereaksi Meyer,
Dragendorf
dan Wagner.
Terjadinya  endapan  putih  (untuk  pereaksi Meyer),  merah  jingga  (untuk  pereaksi Dragendorf)  dan  coklat  (untuk  pereaksi Wagner) menandakan adanya alkaloid.

## b. Triterpenoid/Steroid
Sebanyak 0,5 g ekstrak etanol daun manggis ( Garcinia mangostana L.) ditambahkan  dengan  1  mL  kloroform (CHCl 3 ).  Setelah  itu  campuran  dikocok. Ditambahkan masing-masing asetat anhidrat  (C 4 H 6 O 3 )  dan  asam  sulfat (H 2 SO 4 )  pekat  sebanyak  2  tetes.  Larutan dikocok  perlahan  dan  dibiarkan  selama beberapa  menit.  Jika  mengandung  steroid maka larutan memberikan warna biru atau hijau dan apabila mengandung triterpenoid maka  larutan  memberikan  warna  merah atau ungu.

## c. Flavonoid
Sebanyak 0,5 g ekstrak etanol daun manggis ( Garcinia mangostana L.) dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi, ditambahkan  5  mL  etanol  dan  dipanaskan selama  5  menit  dalam  tabung  reaksi. Setelah  dipanaskan,  ditambahkan  10  tetes asam  klorida  (HCl)  pekat.  Kemudian ditambahkan  0,2  g  serbuk  magnesium (Mg).  Adanya  flavonoid  ditunjukkan  oleh timbulnya warna merah.

## d. Tanin
Sebanyak 0,5 g ekstrak etanol daun manggis ( Garcinia mangostana L.) dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi kemudian  ditambahkan  dengan  10  mL  air panas,  kemudian  ditetesi  menggunakan besi (III) klorida (FeCl 3 ), keberadaan tanin
dalam  sampel  ditandai  dengan  timbulnya warna hijau kehitaman.

## e. Saponin
Sebanyak 0,5 g ekstrak etanol daun manggis ( Garcinia mangostana L.) ditambahkan  dengan  10  mL  akuades kemudian  dikocok  selama  kurang  lebih  1 menit.  Selanjutnya  didiamkan  selama  10 menit  dan  diamati  buih  atau  busa  yang terbentuk.  Keberadaan  senyawa  saponin dalam sampel ditandai dengan terbentuknya  buih  yang  stabil  selama  10 menit.

## Uji Toksisitas dengan Metode BSLT
Penyiapan Larva Artemia salina L.
Penetasan  telur Artemia  salina L. dilakukan dengan cara merendam sebanyak  50  mg  telur A.  salina dalam wadah yang berisi air laut dibawah cahaya lampu  25  watt.  Telur A.  salina akan menetas  dan  menjadi  larva  setelah  24  jam (Mudjiman,  1988).  Larva A.  salina yang baik digunakan untuk uji BSLT yaitu yang berumur  48  jam  sebab  jika  lebih  dari  48 jam  dikhawatirkan  kematian A.  salina bukan  disebabkan  toksisitas  melainkan oleh  terbatasnya  persediaan  makanan (Meyer et al ., 1982).

## Pembuatan Konsentrasi Sampel Uji
Konsentrasi  larutan  uji  untuk BSLT  adalah  1000  μg/mL,  500  μg/mL, 250  μg/mL,  l00  μg/mL,  10  μg/mL,  dan larutan  kontrol.  Untuk  pembuatan  larutan stok,  ekstrak  kental  etanol  96%  ditimbang sebanyak  50  mg,  kemudian  dilarutkan dengan ke dalam air laut sebanyak 50 mL, hingga  diperoleh  konsentrasi  larutan  stok 1000 μg/mL (lampiran 4).
a. Larutan  konsentrasi  1000  μg/mL adalah larutan stok.
b. Larutan konsentrasi  500 μg/mL dibuat dengan  cara  diambil  25  mL  dari larutan stok  dan dimasukkan ke dalam 25 mL air laut.
c. Larutan konsentrasi  250 μg/mL dibuat dengan  cara  diambil  25  mL  dari larutan 500 μg/mL dan dimasukkan ke dalam 25 mL air laut.
d. Larutan konsentrasi  100 μg/mL dibuat dengan  cara  diambil  20  mL  dari larutan 250 μg/mL dan dimasukkan ke dalam 30 mL air laut.
e. Larutan  konsentrasi  10  μg/mL  dibuat dengan cara diambil 5 mL dari larutan 100μg/mL  dan  dimasukkan  ke  dalam 45 mL air laut.
f. Larutan kontrol dibuat dengan mengambil 50 mL air laut saja.

## Pelaksanaan Uji Toksisitas
Pada  uji  toksisitas  masing-masing konsentrasi  dilakukan  3  duplikasi  dengan tiap  kelompok  sebanyak  l0  ekor  larva Artemia  salina L.  Disiapkan  wadah  untuk pengujian, untuk masing - masing konsentrasi  ekstrak  sampel  membutuhkan 3  wadah  dan  3  wadah  sebagai  kontrol untuk masing –  masing  duplikasi.
Selanjutnya  pada  tiap  konsentrasi  larutan dimasukan  10  ekor  larva A.  salina . Pengamatan  dilakukan  selama  24  jam terhadap  kematian  larva A.  salina dimana setiap  konsentrasi  dilakukan  3  duplikasi dan dibandingkan dengan kontrol. Kriteria standar  untuk  menilai  kematian  larva A. salina yaitu  bila  larva A.  salina tidak menunjukkan pergerakkan selama beberapa detik observasi.

## Analisis Data
Data  hasil  penelitian  dari  uji toksisitas  akan  dianalisis  dengan  analisis
probit  menggunakan SPSS  23.0 untuk menentukan nilai LC 50 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Persiapan Sampel
Daun  manggis  yang  digunakan pada  penelitian  diperoleh  dari  pohon manggis yang berada di halaman perumahan  masyarakat  kelurahan  Paniki, kecamatan Mapanget, kota Manado,
Sulawesi Utara.
Daun  yang  diperoleh  dilakukan sortasi, pencucian dan pengeringan. Sortasi  dan  pencucian  dilakukan  dengan tujuan  untuk  membersihkan  dari  kotoran- kotoran yang melekat atau bagian tanaman lain  yang  tidak  akan  digunakan  yang terbawa saat pengumpulan daun menggunakan air bersih.
Pengeringan bertujuan untuk menghilangkan  kadar  air  dalam  sampel yang dapat menyebabkan terjadinya reaksi enzimatis  yang  mengakibatkan  rusaknya sampel  karena  susunan  senyawa  yang terdapat dalam daun tersebut telah berubah (Ningsih et  al .,  2016).  Pengeringan dilakukan  di  tempat  yang  terlindung  dari cahaya  matahari  langsung  atau  pada  suhu kamar  dengan  diangin-anginkan,  hal  ini dilakukan untuk menghindari terjadi kerusakan pada kandungan zat aktif akibat pemanasan.
Setelah  daun  manggis  menjadi kering,  dilakukan  proses  penghalusan dengan  alat  blender  kemudian  diayak menggunakan  ayakan  mesh  200.  Sampel berupa serbuk bertujuan untuk memperluas permukaan sehingga interaksi pelarut dengan senyawa yang akan diambil lebih efektif dan senyawa dapat  terekstrak sempurna.  Semakin  kecil  ukuran  bahan yang digunakan maka semakin luas bidang
kontak  antara  bahan  dengan  pelarut. Kondisi  ini  akan  menyebabkan  kecepatan untuk  mencapai  kesetimbangan  sistem menjadi  lebih  besar.  Jaringan  bahan  atau simplisia  dapat  mempengaruhi  efektivitas ekstraksi.  Ukuran  bahan  yang  sesuai  akan menjadikan  proses  ekstraksi  berlangsung dengan  baik  dan  tidak  memakan  waktu yang lama (Ningsih et al ., 2016).

## Ekstraksi
Serbuk kering daun manggis diekstraksi  dengan  metode  maserasi. Serbuk  daun  manggis  yang  digunakan sebesar  200  g  dan  diekstraksi  dengan pelarut  etanol  96%  mencapai  1000  mL selama  5  hari  dan  dilakukan  lagi remaserasi  1  kali  selama  2  hari  dengan ditambahkan pelarut etanol 96% mencapai 600 mL.
Pemilihan metode maserasi dikarenakan  pelaksanaannya  lebih  mudah dan  tidak  memerlukan  peralatan  yang spesifik. Selain itu, metode maserasi dapat digunakan untuk jenis senyawa yang tahan panas maupun  yang tidak tahan panas dan dapat digunakan untuk jenis senyawa yang belum  diidentifikasi  (Herawati et  al .,
2012).  Proses  ini  sangat  menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam, karena selama  perendaman  terjadi  peristiwa plasmolisis  yang  menyebabkan  terjadi pemecahan  dinding  sel  akibat  perbedaan tekanan  didalam  dan  diluar  sel,  sehingga senyawa  yang  ada  dalam  sitoplasma  akan terlarut dan proses ekstraksi senyawa akan sempurna  karena  dapat  diatur  lama perendaman  yang  diinginkan  (Ningsih et al ., 2016).
Besar rendemen hasil ekstraksi 200 g  serbuk  daun  manggis  dalam  1000  mL etanol  dihitung  dalam  persen  rendemen. Hasil  ekstraksi  daun  manggis  diperoleh ekstrak  kental  sebanyak  30,45  g.  Persen rendemen  ekstrak  daun  manggis  didapat dengan membagi jumlah rendemen ekstrak dengan  berat  serbuk  sebelum  ekstraksi kemudian dikalikan 100%. Persen rendemen yang didapat yaitu 8,46%.

## Uji Fitokimia
Pengujian fitokimia dilakukan menggunakan  metode  yang  berdasarkan pada  Harborne  (1987).  Hasil  pengujian dapat dilihat pada   Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia dari Ekstrak Etanol Daun Manggis ( Garcinia mangostana L.) Senyawa Metabolit Penambahan Perubahan Positif Perubahan Warna Hasil Pengujian Alkaloid 2 mL kloroform + 10 tetes asam sulfat pereaksi Meyer: endapan putih pereaksi Dragendorf: merah jingga pereaksi Wagner: coklat warna kuning
-
Triterpenoid/Steroid 1 mL kloroform + 2 tetes asetat anhidrat + 2 tetes asam sulfat pekat triterpenoid: warna merah atau ungu steroid: warna biru atau hijau
warna merah +
triterpenoid - steroid Flavonoid 10 tetes asam klorida pekat + 0,2 g serbuk magnesium warna merah  warna merah + Tanin 10 mL air panas + 6 tetes besi (III) klorida warna hijau kehitaman warna hijau kehitaman + Saponin 10 mL akuades terbentuknya buih yang stabil selama 10 menit terbentuknya buih yang stabil selama 10 menit + Pengujian fitokimia tersebut menunjukkan bahwa ekstrak daun manggis positif memiliki senyawa metabolit sekunder  yakni,  triterpenoid,  flavonoid, tanin  dan  saponin.  Dan  memperoleh  hasil negatif  pada  pengujian  alkaloid  dan steroid.  Keberadaan  metabolit  sekunder tersebut    menunjukkan  bahwa  daun manggis  mempunyai  efek  farmakologis dan  berpotensi  untuk  dijadikan  sebagai bahan obat-obatan.

## Pengujian  Toksisitas  dengan  Metode BSLT
Pengujian toksisitas dilakukan dengan  metode  BSLT  ( Brine  Shrimp Lethality Test ) menggunakan larva Artemia  salina L.  Kemampuan  toksisitas dari  ekstrak  etanol  daun  manggis  dalam mematikan  larva  udang yang  telah diberikan  perlakuan  dengan  konsentrasi 10, 100, 250, 500 dan 1000 μg/mL beserta
larutan  kontrol  yang  hanya  berisi  air  laut dapat  dilihat  dalam  Tabel  2.  Penambahan larutan kontrol dilakukan untuk mengetahui  pengaruh  air  laut  maupun faktor  lain  terhadap  kematian  larva, sehingga  kematian  larva  dapat  dipastikan karena efek dari ekstrak yang ditambahkan. Air laut yang digunakan merupakan  air  laut  sintetik  yang dibuat  dengan  cara  melarutkan  garam  non yodium  sebanyak  20  g  dalam  1000  mL akuades.  Dapat  diketahui  bahwa  masing- masing  konsentrasi  ekstrak  daun  manggis yang digunakan memperlihatkan pengaruh yang berbeda. Jumlah larva tiap uji adalah 10 ekor dan tiap konsentrasi dilakukan tiga duplikasi.  Jumlah  total  larva  udang A. salina yang  digunakan  adalah  180  ekor larva.
Larva yang digunakan adalah larva yang  berumur  48  jam  dan  aktif  bergerak.
Pada  fase  ini  disebut  dengan  fase  nauplii atau  telur  menjadi  larva,  dimana  fase  ini merupakan  fase  paling  aktif  membelah secara mitosis sehingga identik dengan sel kanker. Nauplii  yang berumur dibawah 48 jam  mempunyai  epitel  saluran  pencernaan yang  belum  dapat  berkontak  dengan
medium  eksternal  dan  nauplii  ini  hanya hidup  dari  kantung  kuning  telurnya sehingga  dikhawatirkan  kematian  larva tidak  berhubungan  dengan  efek  toksisitas dari ekstrak etanol daun manggis Garcinia mangostana L. (Panggabean, 1984).

## Tabel 2. Persentase Jumlah Kematian Larva Udang
Pengujian Larutan Kontrol Jumlah Kematian Setiap Konsentrasi 10µg/mL 100 µg/mL 250 µg/mL 500 µg/mL 1000 µg/mL 1 0 3 7 9 10 10 2 0 2 7 10 10 10 3 0 3 6 10 10 10 Total Kematian Larva 0 8 20 29 30 30 Rata-rata 0 3.3 6.6 9.6 10 10 Persentase Kematian 0 33% 66% 96% 100% 100%
Berdasarkan  Tabel  2,  dapat  dilihat bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  maka semakin besar juga tingkat  kematian larva udang,  dimana  diperoleh  tingkat  kematian tertinggi pada konsentrasi 1000 µg/mL dan kematian  terendah  pada  konsentrasi  10 µg/mL.
Mekanisme  kematian  larva  udang berhubungan  dengan  senyawa  metabolit sekunder ekstrak yang bersifat toksik yang dapat  menghambat  daya  makan  larva udang.  Ketika  senyawa  tersebut  tertelan oleh  larva,  alat  pencernaannya  akan terganggu. Selain itu, senyawa ini menghambat  reseptor  perasa  pada  daerah mulut  larva  udang.  Sehingga  larva  udang tidak  bisa  makan,  sehingga  menyebabkan larva udang mati (Meyer et al ., 1982).
Menurut  Meyer et  al. (1982),
ekstrak  dapat  disebut  bersifat  toksik
apabila  memiliki  nilai  LC 50 dengan konsentrasi  kurang  dari  1000  µg/mL, semakin  kecil  nilai  LC 50 menunjukkan bahwa  senyawa  metabolit  sekunder  yang terkandung dalam ekstrak tersebut semakin  kuat.  Hasil  dari  analisis  probit menggunakan SPSS  23.0 menunjukkan nilai  LC 50 dari  ekstrak  etanol  daun manggis  adalah  30.327 µg/mL  dan menunjukkan bahwa ekstrak daun manggis bersifat toksik. Sehingga berdasarkan nilai LC 50 yang  diperoleh  dengan  metode BSLT,  tanaman  ini  dapat  dilakukan penelitian  lanjutan  untuk  dikembangkan sebagai obat antikanker.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah dilakukan dapat disimpulkan sebagai berikut:
1. Ekstrak  etanol  96%  daun  manggis ( Garcinia  mangostana L.)  terdapat senyawa  metabolit  sekunder  yakni, triterpenoid,  flavonoid,  tanin  dan saponin yang dapat memberikan aktivitas farmakologis.
2. Ekstrak  etanol  96%  daun  manggis ( Garcinia  mangostana L.)  memiliki sifat  toksik  dengan  nilai  LC 50 sebesar 30.327 µg/mL.

## SARAN
Dengan  hasil  penelitian  yang dilakukan  ini,  perlu  dilakukan  penelitian yang lebih lanjut mengenai daun manggis, karena  daun  manggis  memiliki  berbagai senyawa metabolit sekunder yang bermanfaat  dan  pula  bersifat  toksik  yang sangat  berpotensi  sebagai  bahan  obat antikanker.

## DAFTAR PUSTAKA
Dira,  E.  Fitrianda,  N.  Sari.  2014.  Uji
Aktivitas Antihiperurisemia Ekstrak Etanol Kulit Buah Manggis  (Garcinia  mangostana  L.)
dan  Buah  Asam  Gelugur  Garcinia atroviridis  Griff.  ex.  T.  Anders.)
Secara  In  Vitro. Jurnal  Scientia . 4 (2): 66-70.
Farida,  Y.,  T.  Martati,  B.  Edward.  2009.
Uji Aktivitas Biologi Secara BSLT dan  Uji  Sitotoksik  dengan  Metode MTT  dari  Ekstrak  n-Heksana  dan Ekstrak  Metanol  Daun  Keladi Tikus (Typhonium divaricatum (L)
Decne). Jurnal  Ilmu  Kefarmasian Indonesia . 8 (2) : 118-124.
Freshney, R. I. 1986. Animal Cell Culture: a  Practical  Approach,  1 st Ed .  IRL
Press, Washington D.C.
Gutierrez,  F.  and  M.  L.  Failla.  2013. Biological Activities
and
Bioavailability of Mangosteen
Xanthones  :  A  Critical  Review  of The  Current  Evidence. Nutrients .
5 : 3163-3183.
Harborne,  J.  B.  1987. Metode  Fitokimia, Edisi ke-2 . ITB, Bandung.
Hendrawati,  A.  R.  S.  2009.  Uji  Toksisitas
Akut Ekstrak Etanol Daun
Kemangi (Ocimum  sanctum Linn.) Terhadap  Artemia  salina  Leach dengan  Metode  Brine  Shrimp Lethality  Test  (BSLT).  [skripsi]. Fakultas  Kedokteran  Universitas Diponegoro,  Semarang.
Herawati,  D.,  L.  Nuraida,  Sumarto.  2012.
Cara  Produksi  Simplisia  yang Baik . Seafast Centre IPB, Bogor.
Hermawati et  al., 2014. Berkat  Herbal Penyakit Jantung Koroner Kandas . FMedia, Jakarta.
Hidayat et  al .,  2015. Kitab  Tumbuhan Obat .  AgriFlo  Penebar  Swadaya Grup, Jakarta.
Jung, H., B. Su, W. J. Keller, R. G. Mehta,
A. D. Kinghorn. 2006. Antioxidant
Xanthones  from  The  Pericarp  of Garcinia mangostana (Mangosteen). Journal of Agricultural  Food  Chemical . 54 : 2077-2082.
Meyer,  B.N.,  Ferrigni,  Putnam,  J.E. Jacobsen, L.B. Nichols,
Mclaughin.  1982. Brine  Shrimp:  A Cowenient  General  Bioassay  for Active  Plant  Constituents .  Planta Medica. 45: 31-34.
Mudjiman, A. 1988. Udang Renik Air Asin (Artemia  salina) .  Bhatara  Karya Aksara, Jakarta.
Nakatani,  K.,  M.  Atsumi,  T.  Arakawa,  K.
Oosawa,  S.  Shimura,  N.  Nakahata, Y.  Ohizumi.  2002.  Inhibiton  of Histamine Release and Prostaglandin  E 2 Synthesis  by Mangosteen,  a  Thai  Medicinal
Plant. Pharmaceutical  Society  of Japan . 25 (9): 1137-1141.
Ningsih,  D.R.,  Zusfahair,  D.  Kartika. 2016. Identifikasi Senyawa
Metabolit  Sekunder  Serta  Uji
Aktivitas  Ekstrak  Daun  Sirsak
Sebagai  Antibakteri. Molekul . 11 (1): 101-111.
Nivetha,  S.  and  D.V.  Roy.  2015.
Antioxidant Activity and
Antimicrobial  Studies  on  Garcinia mangostana. American  Journal  of Biological  and  Pharmaceutical
Research . 2 (3) : 129-134. Panggabean, M. G. 1984. Teknik Penetasan dan Pemanenan Artemia salina  L.  Pusat  Penelitian  Ekologi Laut Lembaga Oseanologi Nasional-LIPI, Jakarta.
Pasaribu, F., P. Sitorus, S. Bahri. 2012. Uji
Ektrak Etanol Kulit Manggis (Garcinia  mangostana  L.)  terhadap
Penurunan  Kadar  Glukosa  Darah.
Journal  of  Pharmaceutics  and Pharmacology . 1 (1) : 1-8.