## AKTA KIMIA
INDONESIA Akta Kimindo Vol. 6(2), 2021: 162-173
Pengaruh Metode Preparasi Ekstrak Daun Waru (Hisbicus tiliaceus) Sebagai Antioksidan

## Terhadap Kadar Flavonoid dan Fenolik Total
Oktavina Kartika Putri 1 , Lina Oktavia Rahayu 1 , Gardiani Febri Hadiwibowo 1 ,
Rizki Daniar Manggarani 1
1 D3 Farmasi, Akademi Farmasi Putra Indonesia Malang, Jl. Barito No.5, Malang
*) Penulis korespondensi : oktavina.chemistry@gmail.com

## Abstract
The main problem with the use of extracts is that the active substance inside is trapped in a large extract/simplicia then it is difficult to penetrate the lipid membranes of body cells. The way to solve this problem is to reduce the particle size of the extract, one of which is by converting it into an extract suspension. The study was initiated by extracting waru leaves (Hibiscus  tiliaceus)  by  remaceration  method  using  methanol  as  a  solvent. After  that,  the suspension of Hibiscus tiliaceus leaves extract was made by ionic gelation method. Then both  (methanol  extract  and  extract  suspension)  were  measured  for  total  flavonoid  and phenolic  content  and  antioxidant  activity  by  UV-Vis  spectrophotometry  method.  The purpose of this study was to compare the total flavonoid content, total phenolic content, and antioxidant activity of methanol extract and suspension extract of Hibiscus tiliaceus leaves. The results showed that the particle size of the methanol extract and the extract suspension were 1.509 ± 0.553 µm and 0.715 ± 0.390 µm, respectively. The total flavonoid content of the  methanol  extract  was  3434.890  ±  0.008  µgQE/mL  while  the  suspension  extract  was 409.891  ±  0.001  µgQE/mL.  The  total  phenolic  content  of  the  methanol  extract  was 244352.685 ± 1016.713 µgGAE/mL while the suspension extract was 12068.316 ± 86.970 µgGAE/mL. The IC 50 value of methanol extract was 58.564 ± 1.412 µg/mL while the extract suspension was 7917.333 ± 21.385 µg/mL. In conclusion, the total flavonoid content, total phenolic  content,  and  antioxidant  activity  of  the  methanol  extract  were  higher  than  the suspension extract.
Keywords  : antioxidant  activity,  extract  suspension,  methanol  extract,  total  flavonoid content, total phenolic content, waru leaves (Hibiscus tiliaceus)

## Abstrak
Kendala pemanfaatan ekstrak yang sering terjadi adalah zat aktif di dalamnya terperangkap di dalam ekstrak/simplisia  yang  berukuran  besar  sehingga  sulit  menembus  membran  lipid  dari  sel  tubuh.
Upaya  untuk  mengatasi  masalah  ini  adalah  dengan  memperkecil  ukuran  partikel  ekstrak,  salah satunya  dengan  menjadikannya  sebagai  suspensi  ekstrak.  Penelitian  diawali  dengan  mengekstrak daun waru ( Hibiscus tiliaceus ) dengan metode remaserasi menggunakan pelarut metanol. Setelah itu  dilakukan  pembuatan  suspensi  ekstrak  daun  waru  dengan  metode  gelasi  ionik.  Kemudian keduanya  (ekstrak  metanol  dan  suspensi  ekstrak)  diukur  kadar  flavonoid  dan  fenolik  total  serta aktivitas  antioksidannya  dengan  metode  spektrofotometri  UV-Vis.  Tujuan  penelitian  ini  adalah membandingkan kadar flavonoid total, kadar fenolik total, dan aktivitas antioksidan ekstrak metanol dan suspensi ekstrak daun waru. Hasil penelitian menunjukkan ukuran partikel ekstrak metanol dan suspensi  ekstrak  secara  berturut-turut  1,509 ±  0,553  µm  dan 0,715  ± 0,390  µm.  Kadar  flavonoid total  ekstrak  metanol  adalah  3434,890  ±  0,008  µgQE/mL  sedangkan  suspensi  ekstrak  adalah 409,891  ±0,001  µgQE/mL.  Kadar  fenolik  total  ekstrak  metanol  adalah  244352,685  ±  1016,713 µgGAE/mL  sedangkan  suspensi  ekstrak  adalah  12068,316  ±  86,970  µgGAE/mL.  IC 50 ekstrak metanol  bernilai  58,564  ±  1,412  µg/mL  sedangkan  suspensi  ekstrak  bernilai  7917,333  ±  21,385 µg/mL. Kesimpulannya, kadar flavonoid total, kadar fenolik total, dan aktivitas antioksidan ekstrak metanol lebih tinggi dibandingkan dengan suspensi ekstrak.
Kata kunci :  aktivitas antioksidan, daun waru ( Hibiscus tiliaceus ), ekstrak metanol, kadar fenolik total, kadar flavonoid total, suspensi ekstrak

## I. PENDAHULUAN
Daun  waru  ( Hibiscus  tiliaceus ) adalah  salah  satu  tanaman  khas  Indonesia yang  secara  empiris  digunakan  sebagai penghasil  busa.  Daun  waru  mengandung senyawa  aktif  saponin  [1],[2],  flavonoid, dan paling sedikit lima senyawa fenolik [3]. Saponin merupakan senyawa yang bersifat seperti  sabun,  penghasil  busa  stabil,  dan produk  dari  lebih  200.000  tanaman  yang telah  dikenal [4].  Senyawa  fenolik terkandung  pada  sekitar  delapan  ribu tumbuhan.  Sedangkan  senyawa  flavonoid merupakan  setengah  bagian  dari  jumlah tersebut.  Ada  atau  tidaknya  aktivitas antioksidan  ditentukan  oleh  golongan fitokimia  terbesar  pada  tumbuhan,  yaitu senyawa fenolik [5]. Hal tersebut menunjukkan  bahwa  daun  waru  memiliki potensi  sebagai  antioksidan.  Antioksidan diketahui dapat memberikan efek perlindungan  terhadap  penyakit  kanker, kardiovaskular, serta penyakit yang disebabkan  oleh  stres  oksidatif  (neoplasia,
aterosklerosis, dan penyakit neurodegeneratif) [6].
Pemanfaatan  obat  herbal  bukanlah tanpa  kendala,  kendala  yang  sering  terjadi adalah zat aktif di dalamnya terperangkap di dalam  ekstrak/simplisia  yang  berukuran besar  sehingga  sulit  menembus  membran lipid dari sel tubuh. Akibatnya, absorbsi dan bioavailabilitas zat aktif tersebut tidak dapat terjadi  dengan  baik.  Kendala  tersebut menyebabkan banyak tanaman yang memiliki  zat  aktif  potensial  tetapi  tidak dapat  digunakan  secara in  vivo meskipun pada  uji in  vitro memiliki  hasil  yang  baik [7],[8].  Hal  ini  menyebabkan  maraknya usaha  untuk  menghasilkan  ekstrak  dengan ukuran  yang  lebih  rendah.    Semakin  kecil ukuran  partikel  ekstrak  akan  memperluas permukaan  bahan  sehingga  memperbesar terjadinya  kontak  antara  partikel  ekstrak dengan  pelarut.  Akibatnya,  pelarut  akan lebih mudah memecah dinding sel sehingga zat aktif dapat dilepaskan dan mencapai sel target  yang  diinginkan.  Meningkatnya
Putri., O. K., dkk. Akta Kimia Indonesia Vol. 6(2), 2021, 162-173
rendemen  ekstrak  [9],  jumlah  zat  aktif [10],[11],  kelarutan  ekstrak  dalam  air, aktivitas antidiabetes [12], luas permukaan, viskositas  [13],  aktivitas  antibakteri  [14], efek  terapi  obat  herbal,  dan  mengurangi toksisitas  [7]  adalah  beberapa  keunggulan lain  yang  diperoleh  dengan  menurunnya ukuran partikel ekstrak.
Metode yang paling sering digunakan  untuk  memproduksi  ekstrak berukuran  partikel  rendah  adalah  metode gelasi  ionik  [15]–[17].  Proses  pembuatan yang  sederhana,  tanpa  menggunakan pelarut  organik  berbahaya,  dan  juga  tanpa pemanasan sehingga tidak merusak zat aktif dalam ekstrak merupakan beberapa keuntungan  yang  ditawarkan  oleh  metode ini.  Sintesis  ekstrak  berukuran  partikel rendah dapat dilakukan melalui pembentukan  suspensi.  Biasanya  suspensi yang  diperoleh  selanjutnya  dikeringkan untuk  dimanfaatkan  lebih  lanjut.  Namun ada  pula  peneliti  yang  langsung  menguji aktivitas  farmakologis  suspensi  ekstrak tanpa  melakukan  pengeringan  terlebih dahulu, seperti menguji aktivitas analgesik [18], [19], aktivitas penghantaran obat [16], dan  aktivitas  antioksidan  [20].  Suspensi ekstrak mengandung ekstrak kental, natrium  tripolifosfat,  asam  asetat,  etanol, dan  kitosan.  Melihat  beragam  kandungan yang dimilikinya, peneliti ingin membandingkan  kadar  flavonoid  total, kadar fenolik total, dan aktivitas
antioksidan  ekstrak  metanol  (hasil  metode remaserasi)  dan  suspensi  ekstrak  (hasil metode  gelasi  ionik)  untuk  mengetahui formula yang terbaik dan lebih aplikatif. II. METODOLOGI PENELITIAN

## a. Alat dan bahan
Serbuk  daun  waru  didapatkan  dari Materia Medica Batu, Jawa Timur dan telah mengalami  uji  otentisitas.  Bahan-bahan yang  digunakan  antara  lain  akuades,  asam asetat  anhidrat,  asam  galat,  FeCl 3 10%, H 2 SO 4 pekat,  kloroform,  metanol,  Na 2 CO 3 7,5%,  reagen  Folin-Ciocalteu,  serbuk  Mg, dan  2,2-difenil-1-pikrilhidrazil  (DPPH). Alat utama yang digunakan adalah spektrofotometer UV-Vis (Hitachi U-2900).

## b. Prosedur kerja
Secara  garis  besar  penelitian  diawali dengan ekstraksi daun waru dengan metode remaserasi  menggunakan  pelarut  metanol. Filtrat  yang  diperoleh  dipekatkan  dengan rotary evaporator hingga didapatkan ekstrak metanol  yang  bertekstur  kental.  Ekstrak metanol yang didapatkan dibagi menjadi dua bagian.  Setengah  bagian  ekstrak  metanol digunakan  untuk  menyintesis  suspensi ekstrak  dengan  metode  gelasi  ionik. Kemudian  keduanya  diuji  kadar  flavonoid total,  kadar  fenolik  total,  dan  aktivitas antioksidannya.

## Pembuatan Ekstrak Metanol Daun Waru
Serbuk  daun  waru  diayak  kemudian diekstrak dengan metode remaserasi
Putri., O. K., dkk. Akta Kimia Indonesia Vol. 6(2), 2021, 162-173
menggunakan  pelarut  metanol.  Proses remaserasi dilakukan berulang kali hingga didapatkan  filtrat  yang  mendekati  warna metanol  (tidak  berwarna).  Setelah  itu, filtrat  disatukan  kemudian  dipekatkan dengan alat rotary evaporator dengan suhu maksimal 50 o C hingga berbobot tetap dan didapatkan ekstrak bertekstur kental.
Pembuatan  Suspensi  Ekstrak  Daun Waru
1  g  ekstrak  metanol  daun  waru dilarutkan  dalam  12,5  mL  etanol  96% sambil  disonikasi  pada  40  kHz  selama  10 menit  (Campuran  1).  Kemudian  12,5  mL aquadest dituangkan ke dalam beaker glass berisi  0,013  g  natrium  tripolifosfat  dan disonikasi  pada  40  kHz  selama  5  menit (Campuran  2).  Setelah  itu  75  mL  larutan asam  asetat  1%  di  dalam beaker  glass ditambah dengan 0,225 g kitosan kemudian disonikasi  pada  40  kHz  selama  25  menit (Campuran  3).  Campuran  1  kemudian dituangkan  ke  dalam  Campuran  2  sambil disonikasi  pada  40  kHz  selama  20  menit (Campuran 4). Proses pembuatan suspensi diakhiri  dengan  menuangkan  Campuran 4 ke dalam campuran 3 kemudian disonikasi pada 40 kHz selama 50 menit.
Penentuan  Ukuran  Partikel  Ekstrak Metanol  dan  Suspensi  Ekstrak  Daun Waru
Ukuran partikel ekstrak metanol dan suspensi  ekstrak  ditentukan  dengan  alat mikroskop cahaya yang dilengkapi dengan
mikrometer.  1  sampai  2  tetes  ekstrak metanol atau suspensi ekstrak diteteskan di atas kaca preparat kemudian ditutup dengan cover  glass lalu  diamati  di  bawah mikroskop  hingga  partikel-partikel  ekstrak terlihat dengan jelas.

## Pengukuran Kadar Flavonoid Total
Metode yang digunakan untuk menentukan  kadar  flavonoid  total  adalah Metode  Kolorimetri  AlCl 3 dengan  larutan standar  kuersetin  [21].  Setelah  diperoleh panjang  gelombang  maksimum  larutan standar  kuersetin,  kemudian  kurva  standar kuersetin  ditentukan.  Setelah  itu  sampel dipreparasi dengan cara 4 mL metanol dan 1 mL larutan AlCl 3 2% ditambahkan ke dalam ekstrak metanol atau suspensi ekstrak daun waru.  Setelah  diinkubasi  selama  30  menit pada suhu ruang, campuran diukur absorbasinya  pada  panjang  gelombang maksimum.

## Pengukuran Kadar Fenolik Total
Metode yang digunakan untuk menentukan  kadar  fenolik  total  adalah Metode  Folin-Ciocalteu  dengan  larutan standar asam galat [22]. 2,5 mL akuades, 0,5 mL  metanol,  dan  2,5  mL  pereaksi  Folin- Ciocalteu  50%  ditambahkan  ke  dalam ekstrak  metanol  dan  suspensi  ekstrak  daun waru.  Setelah  didiamkan  selama  5  menit, campuran  ditambahkan  dengan  2  mL larutan  Na 2 CO 3 7,5%.  Setelah  campuran tersebut  diinkubasi  selama  15  menit  pada suhu  45 o C,  absorbasinya  diukur  pada
Putri., O. K., dkk. Akta Kimia Indonesia Vol. 6(2), 2021, 162-173
panjang gelombang maksimum 765 nm.

## Pengukuran Aktivitas Antioksidan
Metode  yang  digunakan  untuk menentukan  aktivitas  antioksidan  adalah Metode DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidazil) dengan  penentuan  IC 50 [23].  Ekstrak metanol  dan  suspensi  ekstrak  dilarutkan hingga  mencapai  lima  konsentrasi  yang berbeda yaitu antara 5 ppm sampai dengan 20  ppm.  Kemudian  ke  dalam  masing- masing larutan ditambahkan dengan larutan DPPH dan dihomogenkan. Setelah diinkubasi  selama  30  menit  pada  kondisi gelap,  absorbansi  campuran  diukur  pada Panjang  gelombang  maksimum  DPPH. Aktivitas antioksidan diketahui dari perhitungan persentase inhibisi serapan.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak  Metanol  dan  Suspensi  Ekstrak Daun Waru
Ekstrak  metanol  daun  waru  yang dihasilkan  berwarna  hitam  kecoklatan  dan berwujud  sangat  kental  dengan  rendemen sebesar  10,495  ±  1,280  %.  Rendemen  ini lebih  besar jika  dibandingkan  dengan  hasil rendemen ekstrak metanol daun waru yang telah  diteliti  sebelumnya  yaitu  sebesar 9,885±0,524% dan 7,483±0,282% [24]. Hal ini  karena  proses  remaserasi  dilakukan berulang  kali  hingga  didapatkan  filtrat mendekati tidak berwarna sehingga semakin maksimal  jumlah  senyawa-senyawa  yang tersari.  Suspensi  ekstrak  daun  waru  yang dihasilkan  berwarna  cokelat  muda  dan berwujud  cair.  Penampakan  keduanya tersaji pada Gambar 1.
Gambar 1. Penampakan (a) Ekstrak Metanol (Hasil Metode Remaserasi) dan (b) Suspensi Ekstrak Daun Waru (Hasil Metode Gelasi Ionik)
Ukuran  Partikel  Ekstrak  Metanol  dan
Suspensi Daun Waru
Putri., O. K., dkk. Akta Kimia Indonesia Vol. 6(2), 2021, 162-173
Hasil pengamatan menunjukkan
terjadinya  penurunan  ukuran  partikel ekstrak. Gambar pada Tabel 1.
menunjukkan  perbandingan  citra  ekstrak metanol dan suspensi ekstrak daun waru di bawah mikroskop. Setelah dianalisis dengan  menggunakan Software ImageJ didapatkan  nilai  ukuran  partikel  masing- masing seperti tersaji pada Tabel 1.
Ukuran partikel ekstrak metanol lebih besar  dua  kali  lipat  jika  dibandingkan dengan suspensi ekstrak. Hal ini menandakan  bahwa  tujuan  pembuatan suspensi  ekstrak  dengan  metode  gelasi ionik  untuk  mendapatkan  ukuran  partikel yang  lebih  rendah  telah  tercapai  dengan baik.  Namun,  perlu  dilakukan  beberapa optimasi  agar  didapatkan  ekstrak  dengan ukuran  berskala  lebih  kecil  atau  berskala nano.

## Kadar Flavonoid Total
Kadar flavonoid total ekstrak metanol delapan  kali  lebih  besar  dibandingkan dengan  suspensi  ekstrak  sebagaimana tersaji pada Gambar 2. Hal ini terjadi karena selain  ekstrak  metanol,  suspensi  ekstrak juga  mengandung  natrium  tripolifosfat, asam asetat, etanol, dan kitosan.
Penambahan  zat-zat  tambahan  tersebut semakin menurunkan kadar flavonoid total
karena  menurunnya  kandungan  ekstrak metanol yang terkandung di dalam suspensi ekstrak.

## Kadar FenolikTotal
Senyawa  fenolik  terkandung  pada sekitar delapan ribu tumbuhan. Sedangkan senyawa  flavonoid  merupakan  setengah bagian  dari  jumlah  tersebut  [5].  Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada ekstrak  metanol  daun  waru,  senyawa flavonoid  merupakan  satu  per  tujuh  puluh bagian  dari  jumlah  senyawa  fenolik.  Hal tersebut mengindikasikan bahwa senyawa- senyawa  turunan  fenolik  lain  (non- flavonoid) lebih dominan terkandung dalam ekstrak  metanol  daun  waru.  Diperlukan analisis lebih lanjut untuk mengidentifikasi dengan  pasti  senyawa-senyawa  turunan fenolik apa saja yang terkandung di dalam ekstrak metanol daun waru.
Kadar  fenolik  total  ekstrak  metanol dua  puluh  kali  lebih  besar  dibandingkan dengan  suspensi  ekstrak.  Sama  halnya dengan  kadar  favonoid  total,  adanya senyawa-senyawa tambahan pada suspensi menyebabkan jumlah senyawa fenolik yang terkandung menurun. Adapun kadar fenolik total ekstrak  metanol  dan  suspensi  ekstrak secara lengkap tersaji pada Gambar 3.
Tabel 1. Perbandingan Partikel Ekstrak Metanol dan Suspensi Ekstrak Daun Waru
Putri., O. K., dkk. Akta Kimia Indonesia Vol. 6(2), 2021, 162-173
Ekstrak Metanol
Suspensi Ekstrak Citra Rata-rata Ukuran Partikel (µm) 1,509 ± 0,553 0,715 ± 0,390 Ukuran Partikel Terkecil (µm) 0,517 0,291 Ukuran Partikel Terbesar (µm) 3,236 1,820
Gambar 2. Kadar Flavonoid Total Ekstrak Metanol dan Suspensi Ekstrak Daun Waru
Gambar 3. Kadar Fenolik Total Ekstrak Metanol dan Suspensi Ekstrak Daun Waru
Gambar 4. Aktivitas Antioksidan (IC 50 ) Ekstrak Metanol dan Suspensi Ekstrak Daun Waru

## Aktivitas Antioksidan
Jika  suatu  senyawa  memiliki  nilai IC 50 kurang  dari  50  maka  dikatakan sebagai antioksidan sangat kuat, jika nilai IC 50 50-100  maka  dikatakan  sebagai antioksidan  kuat,  jika  nilai  IC 50 100-150 maka  dikatakan  sebagai  antioksidan sedang,  jika  nilai  IC 50 151-200  maka dikatakan sebagai antioksidan lemah [25], dan  jika  nilai  IC 50 lebih  besar  dari  250 maka dikatakan sebagai antioksidan sangat lemah  [26].  Berdasarkan  hasil  penelitian yang tersaji pada Tabel 3.4. dapat diketahui bahwa  ekstrak  metanol  memiliki  IC 50 sebesar  58,564  ±  1,412  µg/mL  dan dikatakan sebagai antioksidan kuat. Sedangkan suspensi ekstrak memiliki IC 50 sebesar  7917,333  ±  21,385  µg/mL  dan dikatakan  sebagai  antioksidan  sangat lemah. Ekstrak metanol memiliki aktivitas antioksidan  yang  lebih  besar  135  kali dibandingkan  dengan  suspensi  ekstrak
daun  waru.  Lagi-lagi  penambahan  natrium tripolifosfat, asam asetat, etanol, dan kitosan semakin  menurunkan  aktivitas  antioksidan sebagaimana  kadar  flavonoid  total  dan kadar fenolik total.
Natrium tripolifosfat merupakan senyawa  antioksidan  [27]  sebagaimana kitosan [28]. Namun keberadaanya di dalam suspensi ekstrak daun waru tidak meningkatkan aktivitas antioksidan. Hal ini menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  daun waru yang paling dominan dalam menyumbangkan kemampuan dalam menangkap radikal bebas.

## KESIMPULAN
Kadar  flavonoid  total,  kadar  fenolik total,  dan  aktivitas  antioksidan  ekstrak metanol  (hasil  metode  remaserasi)  lebih tinggi dibandingkan dengan suspensi ekstrak (hasil metode gelasi ionik). Melalui metode gelasi ionik telah dihasilkan ukuran
Putri., O. K., dkk. Akta Kimia Indonesia Vol. 6(2), 2021, 162-173
partikel  ekstrak  yang  lebih  kecil,  namun metode  ini  belum  dapat  meningkatkan aktivitas  antioksidan  walaupun  beberapa zat  tambahan  yang  digunakan  juga memiliki kemampuan dalam menghambat radikal bebas.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih
kepada
Kementerian
Riset dan
Teknologi/Badan Riset dan Inovasi Nasional (Indonesia) yang telah mendanai penelitian  ini  dengan  skema  Penelitian Dosen Pemula Tahun 2020.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] H.  Santosa,  W.  Sari,  and  N.  A.
Handayani,  “Ekstraksi  Saponin  dari Daun Waru Berbantu Ultrasonik Suatu
Usaha  untuk  Mendapatkan  Senyawa Penghambat Berkembangnya
Sel
Kanker,” Inovasi Teknik Kimia , vol. 3,
no. 2, pp. 12–16, Oct. 2018.
[2] L. Istiqomah, H. Hardian, A. Febrisantosa, and D. Putra, “Waru Leaf
(Hibiscus  tiliaceus)  as  Saponin  Source on  In  vitro  Ruminal  Fermentation Characteristic,” J.  Indonesian  Trop.
Anim. Agric. , vol. 36, no. 1, pp. 43–49,
Mar. 2011, doi: 10.14710/jitaa.36.1.43- 49.
[3] J.  Kinho et  al. , Tumbuhan  Obat
Tradisional  di  Sulawesi  Utara ,  vol.  1.
Manado: Litbang Kehutanan, 2011.
[4] S.  T.  Mugford  and  A.  Osbourn,
“Saponin  Synthesis  and  Function,”  in
Isoprenoid  Synthesis  in  Plants  and Microorganisms ,  T.  J.  Bach  and  M. Rohmer,  Eds.  New  York,  NY:  Springer New  York,  2012,  pp.  405–424.  doi: 10.1007/978-1-4614-4063-5_28.
[5] I.  Indra,  N.  Nurmalasari,  and  M. Kusmiati,  “Fenolik  Total,  Kandungan Flavonoid,  dan  Aktivitas  Antioksidan
Ekstrak Etanol Daun Mareme
(Glochidion  arborescense  Blume.),” J Sains  Farm  Klin ,  vol.  6,  no.  3,  p.  206, Dec.  2019,  doi:  10.25077/jsfk.6.3.206- 212.2019.
[6] F.  Shahidi  and  P.  Ambigaipalan,
“Phenolics  and  polyphenolics  in  foods, beverages  and  spices:  Antioxidant activity  and  health  effects  –  A  review,” Journal of Functional Foods , vol. 18, pp.
820–897, Oct. 2015, doi:
10.1016/j.jff.2015.06.018.
[7] H.  N.  P.  Berlian  and  A.  Budiman, “Review Artikel: Penggunaan Teknologi Nano  pada  Formulasi  Obat  Herbal,” Farmaka , vol. 15, no. 2, pp. 29–41, 2017.
[8] Ajazuddin and S. Saraf, “Applications of novel  drug  delivery  system  for  herbal formulations,” Fitoterapia , vol. 81, no. 7,
pp. 680–689, Oct. 2010, doi: 10.1016/j.fitote.2010.05.001.
[9] I.  A.  Saleh,  S.  A.  Kamal,  K.  A.  Shams, N.  S.  Abdel-Azim,  E.  A.  Aboutabl, and F.  M.  Hammouda,  “Effect  of  Particle Size  on  Total  Extraction  Yield  and Silymarin Content of Silybum marianum
Putri., O. K., dkk. Akta Kimia Indonesia Vol. 6(2), 2021, 162-173

## L. Seeds.,” Res. J. Pharm., Biol. Chem.
Sci. ,  vol.  6,  no.  2,  pp.  803–809,  Mar.
2015.
[10] H. Y. Baldosano, C. D. H. Elloran, and
F.  T.  Bacani,  “Effect  of  Particle  Size,
Solvent and Extraction Time on Tannin Extract  from  Spondias  purpurea  Bark Through
Soxhlet Extraction,”
Proceedings  of  the  DLSU  Research Congress , vol. 3, pp. 1–6, Mar. 2015.
[11] R. Tambun, H. P. Limbong, C. Pinem, and  E.  Manurung,  “Pengaruh  Ukuran Partikel,  Waktu  dan  Suhu  pada Ekstraksi Fenol dari Lengkuas Merah,”
Jurnal Teknik Kimia USU , vol. 5, no. 4, pp. 53–56, Dec. 2016.
[12] K. Hussain et al. , “Impact of Particle-
Size  Reduction  on  the  Solubility  and Antidiabetic  Activity  of  Extracts  of Leaves  of Vinca  rosea ,” tjps ,  vol.  16,
no.  3,  pp.  335–339,  Jul.  2019,  doi: 10.4274/tjps.galenos.2018.02419.
[13] S.  Sud  and  A.  Kamath,  “Methods  of Size  Reduction  and  Factors  Affecting Size Reduction in Pharmaceutics,” Int.
Res. J. Pharm. , vol. 4, no. 8, pp. 57–64,
Sep. 2013, doi: 10.7897/2230- 8407.04810.
[14] B.  Ajitha,  Y.  Ashok  Kumar  Reddy, and  P.  Sreedhara  Reddy,  “Enhanced antimicrobial activity of silver nanoparticles  with  controlled  particle size  by  pH  variation,” Powder
Technology , vol. 269, pp. 110–117, Jan.
2015,
doi: 10.1016/j.powtec.2014.08.049.
[15] A. Fadholly, A. Proboningrat, R. Dewi Iskandar,  F.  Rantam,  and  S.  Sudjarwo, “In  vitro  anticancer  activity  Annona squamosa  extract  nanoparticle  on  WiDr cells,” J Adv Pharm Technol Res , vol. 10, no. 4, p. 149, 2019, doi: 10.4103/japtr.JAPTR_10_19.
[16] Departemen  Ilmu  dan  Teknologi Pangan,  Fakultas  Teknologi  Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor, Indonesia,  N.  Ningsih,  S.  Yasni, Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas  Teknologi  Pertanian,  Institut Pertanian  Bogor,  Bogor,  Indonesia,  S. Yuliani,  and  Balai  Besar  Penelitian  dan Pengembangan  Pascapanen  Pertanian, Bogor, Indonesia, “SINTESIS
NANOPARTIKEL  EKSTRAK  KULIT MANGGIS  MERAH  DAN  KAJIAN SIFAT FUNGSIONAL PRODUK
ENKAPSULASINYA,” jtip , vol. 28, no.
1, pp. 27–35, Jun. 2017, doi: 10.6066/jtip.2017.28.1.27.
[17] A.  I.  Putri,  A.  Sundaryono,  and  I.  N. Chandra,
“KARAKTERISASI NANOPARTIKEL KITOSAN EKSTRAK DAUN UBIJALAR (Ipomoea batatas L.) MENGGUNAKAN METODE GELASI
IONIK,” atp ,  vol.  2,  no.  2,  May  2019, doi: 10.33369/atp.v2i2.7561.
[18] C. E. Kaunang, W. Bodhi, and H. J. Edi,
Putri., O. K., dkk. Akta Kimia Indonesia Vol. 6(2), 2021, 162-173
“UJI EFEK ANALGETIK NANOPARTIKEL EKSTRAK
RIMPANG  JAHE  MERAH  (Zingiber officinale  var  Rubrum)  PADA  TIKUS PUTIH  JANTAN  GALUR  WISTAR (Rattus  norvegicus),” PHA ,  vol.  9,  no.
2, p. 184, May 2020, doi:
10.35799/pha.9.2020.29269.
[19] J. Gredi, W. Taurina, and M. Andrie,
“Analgesic Effectivty Of Nanoparticles Chitosan-Ethanol  Leaf  Extract  Papaya (Carica Papaya L.) In White Male Mice
(Mus Mucculus),” jifi , vol. 15, no. 2, p.
228, Sep. 2017, doi: 10.35814/jifi.v15i2.524. [20] A.  Wijaya,  L.  H.  Nurani,  and  N. Nurkhasa, “AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SEDIAAN NANOPARTIKEL KITOSAN EKSTRAK ETANOL KELOPAK ROSELA (Hibiscus sabdariffa L)PADA TIKUS HIPERKOLESTEROL : PENGUKURAN KADAR
MALONDIALDEHID  (MDA),” kjif , vol.  2,  no.  1,  p.  5,  Sep.  2015,  doi:
10.26874/kjif.v2i1.5.
[21] O.  Putri,  “Kadar  Fenolik  Total  dan Flavonoid  Total  Seduhan  Daun  Tin (Ficus carica) Segar dan Kering dengan Air Mendidih,” JC-T , vol. 2, no. 2, pp.
7–12, Dec. 2018, doi:
10.17977/um026v2i22018p007.
[22] O. K. Putri and W. Wuryandari, “Efek
suhu penyeduhan daun tin (Ficus carica) segar  dan  kering terhadap  kadar  fenolik total,” Jurnal Teknologi Pangan , vol. 12, no. 2, pp. 1–6, Dec. 2018.
[23] A.  Surya,  Z.  Nazir,  and  A.  Syazulfa, “Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Daun  Alpukat  Menggunakan  Metode DPPH,” Photon , vol. 11, no. 2, pp. 104– 110, May 2021, doi:
10.37859/jp.v11i2.2225.
[24] A.  D.  Pangestu  and  O.  K.  Putri, “Perbandingan  Kadar  Saponin  Ekstrak Daun Waru (Hibiscus Tiliaceus L.) Hasil Pengeringan  Matahari  Dan  Pengeringan Oven  Secara  Spektrofotometri  Uv-Vis.” Repository  Akademi  Farmasi  Putra Indonesia Malang, 2019. Accessed: Sep. 15, 2021. [Online]. Available:
http://repository.poltekkespim.ac.id/id/e print/423
[25] R.  Salim,  “Uji  Aktivitas  Antioksidan Infusa  Daun  Ungu  Dengan  Metoda DPPH  (1,1-  diphenil-  2-picrylhidrazil),” J. Kat. , vol. 3, no. 2, p. 153, Oct. 2018, doi: 10.22216/jk.v3i2.3372.
[26] J.  Sarfina,  N.  Nurhamidah,  and  D. Handayani, “UJI AKTIVITAS

## ANTIOKSIDAN DAN ANTIBAKTERI
EKSTRAK DAUN Ricinus communis L (JARAK KEPYAR),” atp , vol. 1, no. 1, Aug. 2017, doi: 10.33369/atp.v1i1.2725.
[27] L.  Yuanita,  P.  R.  Wikandari,  S. Poedjiastoeti, and S. Tjahyani,
“PENGGUNAAN NATRIUM

## TRIPOLIFOSFAT UNTUK MENINGKATKAN  MASA  SIMPAN
DAGING  AYAM,” AGRITECH ,  vol.
29, no. 2, Jul. 2009.
[28] S.  R.  Sari,  A.  Baehaki,  and  S.  D. Lestari,
“AKTIVITAS ANTIOKSIDAN KOMPLEKS KITOSAN MONOSAKARIDA (Chitosan  Monossacharides  Complex),”
FishtecH , vol. 2, no. 1.