## PENENTUAN KAPASITAS ANTIOKSIDAN DAN KANDUNGAN FENOLIK TOTAL
EKSTRAK KASAR TERIPANG PASIR ( Holothuriascabra ) DARI PANTAI KENJERAN SURABAYA
Juliyantoro Ali Wafa, Tri Kustono Adi, Ahmad Hanapi, A. Ghanaim Fasya
Jurusan Kimia, Fakultas Saind dan Teknologi, UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
The antioxidant capacity and total phenolic compounds content of sea cucumber ( Holothuriascabra )crude extractfrom  Kenjeran,  Surabaya  was  analysed.  The  crude  extract  was  obtained  by  maceration-partition  using methanol  and n -hexane.  The  total  antioxidant  capacity  of  both  methanol  and n -hexane  crude  extract  was estimated  by  DPPH  assay  while  the  total  phenolic  was  measured  by    Folin-Ciocalteauassay.  Phytochemical reagent assay and Thin Layer Chromatography (TLC)  were also applied for early identification and separation of the unknown compound of both extract.
The  result  showed  that  the  methanol  and n -hexane  extracts  have  antioxidant  capacity  of  78.92%  and 94.82%. Total phenolic content of methanol and n -hexane extracts were obtained as 69.09 mg GAE/g and 58.01 mg  GAE/g.  Early  identification  of  the  crude  extracts  showed  the  presence  of  triterpenoid  group  in  methanol extract and saponin group in n -hexane extract. The TLC on the methanol extraxt using n -butanol:NH 4 OH (4:1) generated four spots.
Keywords : Holuthuriascabra , DPPH, Total Phenolics, Antioxidant, TLC

## ABSTRAK
Kapasitas  antioksidan  dan  fenolik  total  ekstrak  teripang  pasir  ( Holothuriascabra )  dari  Pantai  Kenjeran, Surabaya telah dianalisis. Ekstrak kasar diperoleh dengan maserasi-partisi menggunakan metanol dan n -heksana. Penentuan  kapasitas  antioksidan  dari  kedua  ekstrak  kasar  metanol  dan n -heksana  dilakukan  menggunakan  uji DPPH,  sedangkan  fenolik  total  menggunakan  metode  Folin-Ciocalteau.  Uji  reagen  dan  Kromatografi  Lapisan Tipis  (KLT)  juga  dilakukan  untuk  identifikasi  awal  dan  pemisahan  senyawa  yang  tidak  diketahui  dari  ekstrak keduanya.
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  dan n -heksana  memiliki  kapasitas  antioksidan 78,92%  dan  94,82%.  Fenolik  total  ekstrak  metanol  dan  n-heksan  yang  diperoleh  sebesar  69,09  mg  EAG/g sampel  dan  58.01  mg  EAG/g  sampel.  Identifikasi  awal  dari  ekstrak  kasar  menunjukkan  adanya  senyawa triterpenoid  pada  ekstrak  metanol  dan  senyawa  saponin  pada  ekstrak n -heksana.  KLT  pada  ekstrak  metanol menggunakan n- butanol:NH 4 OH (4:1) diperoleh empat spot.
Kata Kunci: Holothuria scabra , DPPH, Fenolik Total, Antioksidan, KLT

## I. PENDAHULUAN
Laut  Indonesia  terdiri  atas  3,2  juta km 2 laut teritorial dan 2,9 juta km 2 perairan ZEE  (Zona  Ekonomi  Eksklusif).  Wilayah perairan 6,1 juta km 2 tersebut adalah 77 % dari  seluruh  luas  Indonesia  (Pokja,  Kadin,
& Batam, 2004). Laut mampu meningkatkan keunggulan komparatif bangsa dilihat dari segi luas dan keanekaragaman  hayatinya.  Salah  satu biota  laut  yang  berpotensi  menghasilkan senyawa  bioaktif  yang  dapat  digunakan sebagai  bahan  baku  obat-obatan  adalah teripang pasir. Matranga (2005)
menyatakan  bahwa  teripang  pasir  sudah ratusan  tahun  digunakan  sebagai  obat- obatan  di  Cina  dan  diyakini  mampu menyembuhkan berbagai jenis penyakit.
Teripang  pasir  dapat  ditemukan hampir  di  seluruh  perairan  pantai,  mulai daerah  pasang  surut  yang  dangkal  sampai perairan yang lebih dalam. Menurut Sateni (2012),  teripang  pasir  hidup  di  dasar substrat  pasir,  lumpur  pasiran,  atau  dalam lingkungan  terumbu,  dengan  pergerakan yang lambat. Di pantai Kenjeran Surabaya, teripang  pasir  sering  diolah  menjadi makanan  kerupuk.  Harga  teripang  pasir
sendiri  setelah  diolah  menjadi  kerupuk sekitar Rp.150.000,-/kg dibandingkan harga sebelum diolah yaitu sekitar
Rp.5.000,-/kg. Oleh karena itu, masyarakat Kenjeran  Surabaya  lebih  suka  menjual teripang  pasir  dalam  bentuk  kerupuk teripang
pasir.
Nurhidayati
(2009),Teripang  pasir  ( Holothuria  scabra ) diduga mengandung senyawa yang bersifat antioksidan  yaitu  vitamin  A,  C,  dan  E, senyawa  flavonoid  dan  polifenol,  DHA, EPA,  dan  kondroitin  sulfat.  Senyawa- senyawa  ini  sangat  potensial  dalam meredam  radikal  bebas  dalam  tubuh. Selain  itu,  teripang  pasir  juga  diduga senyawa  antiinflamasi  yaitu  DHA  dan EPA,  dan  kondroitin  sulfat,  sehingga  bila telah  terjadi  kerusakan  sel  akibat  radikal bebas,  kerusakan  yang  lebih  parah  dapat dihindari.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk  mengetahui  kandungan  senyawa fenolik  dan  kapasitas  antioksidan  ekstrak teripang  pasir  dari  pantai  Kenjeran Surabaya, yang diekstrak dengan dua jenis pelarut,  yaitu  metanol  dan n -heksana  hasil destilasi.  Hasil  dari  penelitian  ini  nantinya diaplikasikan  sebagai  sumber  senyawa antioksidan.

## II. METODE PENELITIAN
Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah teripang  pasir ( Holothuriascabra )  yang  diperoleh  dari pantai Kenjeran Surabaya.

## Analisis Kadar Air
Analisis  kadar  air  dilakukan  pada bagian  tubuh  teripang  pasir.  Sebelumnya cawan  dipanaskan  dalam  oven  pada  suhu 100-105˚C selama 15 menit untuk menghilangkan  kadar  airnya,  kemudian cawan  disimpan  dalam vacum desikator sekitar 10 menit. Cawan tersebut selanjutnya  ditimbang  dan  dilakukan perlakuan  yang  sama  sampai  diperoleh berat cawan yang konstan. Sampel teripang pasirbasah  dimasukkan  ke  dalam  cawan yang  telah  diketahui  berat  konstannya. Sampel  yang  sudah  dipotong  kecil-kecil
diambil  5  gram  dan  dikeringkan  ke  dalam oven  pada  suhu  100-105˚C  selama  15 menit  untuk  menghilangkan  kadar  air dalam  tubuh  teripang  pasir,  kemudian sampel  disimpan  dalam vacum desikator selama  10  menit  dan  ditimbang.  Sampel tersebut  dipanaskan  kembali  dalam  oven 15 menit, didinginkan dalam vacum desikator  dan  ditimbang  kembali. Perlakuan  ini  diulangi  sampai  berat konstan.
Uji Kadar Garam Teripang pasir basahditimbang sebanyak 10 gram.
Diekstrak menggunakan  aquades  panas  100  mL, didiamkan  selama  ±  1  menit,  kemudian disaring  dengan  kertas  saring.  Hasil  yang diperoleh  diteteskan  pada  prisma  pembaca pada salinometer ATAGO PAL-06. Garam dalam  larutan  tersebut  diukur  sebagai konsentrasi kepekatan ‰.
Preparasi Sampel Teripang pasir diambil seluruh tubuhnya  ±  500  gram,  kemudian  dicuci, diiris kecil-kecil, selanjutnya diblender.

## Ekstraksi Sampel
Metode  ekstraksi  yang  digunakan untuk mengekstrak teripang pasir menggunakan  dua  macam  ekstraksi  yaitu ekstraksi  maserasi  dilanjutkan  dengan ekstraksi  cair-cair.  Langkah  pertama, teripang pasir diekstraksi maserasi, teripang  pasir  ditimbang  150  gram, kemudian  direndam  dalam  metanol  : aquades (9:1) sebanyak 300 mL selama 24 jam  dan  di shakker selama  5  jam  dengan kecepatan  150  rpm.  Selanjutnya,  ampas direndam  kembali  sampai  filtrat  yang didapat bening.Filtrat disaring dari ampasnya  menggunakan vacum  buchner , filtrat yang diperoleh digabungkan,
kemudian di rotary evaporator dan diuapkan  sisa  pelarutnya  menggunakangas N 2 .  Selanjutnya  ekstrak  yang  diperoleh dihitung rendemennya.
Ekstrak pekat yang diperoleh dilakukan  pemisahan  senyawa  aktifnya berdasarkan  kepolarannya  menggunakan ekstraksi cair-cair, dengandua pelarut yang berbeda  yaitu  metanol  dan n -heksana(1:1)
sebanyak  150  mL  masing-masing  sebagai pelarut  polar  dan  nonpolar.  Filtrat  yang diperoleh  di rotary  evaporator ,  kemudian ekstrak  yang  diperoleh  diuapkan  sisa pelarutnya menggunakan gas N 2 . Rendemen dari masing-masing ekstrakdihitung. Ekstrak  yang  diperoleh  dari  proses
ekstraksi diuji kapasitas antioksidan danfenolik  totalnya  untuk  mengetahui ekstrak yang mengandung kapasitas antioksidan dan fenolik total tertinggi.
Uji  Antioksidan  Menggunakan  Metode DPPH

## 1. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Larutan  DPPH  0,2  mM  sebanyak  3 mL,  didiamkan  ±  10  menit.  Larutan  dicari λ maks nya dan dicatat hasil pengukuran λ maks untuk  digunakan  pada  tahap  selanjutnya (Rahayu, dkk, 2010).
2. Penentuan Waktu Kestabilan

## Pengukuran Antioksidan
Larutan  ekstrak  200  ppm  diambil sebanyak  6,75  mL,  ditambahkan  sebanyak 2,25 mL larutan DPPH 0,2 mM, kemudian dicari waktu kestabilan tanpa inkubasi dan setelah  inkubasi  dengan  interval  5  menit sampai  waktu  yang  diperoleh  stabil. Sampel  diukur  pada  λ maks dan  waktu kestabilan yang telah diperoleh.
3. Pengukuran Kapasitas Antioksidan Pada Sampel
Sampel ekstrak pekat metanol dan n - heksana  masing-masing  dilarutkan  dalam pelarutnya dengan konsentrasi 1, 5, 10, 25, 50, 100, 200 dan 400 ppm. Kemudian tiap- tiap  konsentrasi  diambil  2,25  mL  dan ditambahkan DPPH 0,2 mM sebanyak 0,75 mL  (larutan  DPPH  :  Ekstrak  yang dilarutkan dengan konsentrasi tertentu 1:3). Diinkubasi suhu 37 o C pada waktu kestabilan  yang  didapatkan  pada  tahap sebelumnya,  kemudian  dimasukkan  ke dalam kuvet untuk mengukur absorbansinya pada λ maks . Data
absorbansinya  yang  diperoleh  dari  tiap konsentrasi
masing-masing
ekstrak dihitung  nilai  %  kapasitas  antioksidan.
Nilai  tersebut  diperoleh  dengan  rumus (Arindah, 2010) :
Keterangan : A o = Absorbansi kontrol A c = Absorbansi sampel
Setelah  didapatkan  nilai  %  kapasitas antioksidan sampel, selanjutnya dibandingkan kapasitasnya dengan pembanding (Vitamin C dan BHT). Kontrol yang digunakan hanya larutan  DPPH  0,2  mM  tanpa  penambahan sampel  tetapi  pembuatannya  bersamaan dengan  pembuatan  sampel.  Pembanding dibuat dengan cara yang sama tetapisampel diganti dengan asam  askorbat  (Vitamin C) dan BHT. Apabila % kapasitas antioksidan sampel sama atau mendekati nilai kapasitas antioksidan pembanding maka dapat dikatakan bahwa sampel berpotensi sebagai  salah  satu  alternatif  antioksidan (Yuliani, 2010).

## Uji Kadar Fenolik Total
1. Penentuan Konsentrasi Standar dan Waktu Kestabilan Fenolik Total
Asam  galat  dilarutkan  dalam  buffer fosfat  dengan  konsentrasi  0,  25,  50,  100, 200,  400,  600,  1000,  1200,  1400,  1600, 1800  dan  2000  ppm,  kemudian  dicari waktu  kestabilan  pengukuran  fenolik  pada rentangan  0-130  menit  interval  10  menit. Sampel  diukur  pada  panjang  gelombang 655 nm menggunakan blanko buffer fosfat. Sampel  diukur  dengan  dua  alat  yang berbeda yaitu menggunakan
spektrofotometer  UV-Vis  Varian  dan Spektrofotometer Elisa.
2. Pembuatan Larutan Standar
Asam  galat  dilarutkan  dalam  buffer fosfat dengan konsentrasi optimum, kemudian diinkubasi selama waktu optimum  dari  penentuan  konsentrasi  dan waktu  kestabilan  di  atas.  Standar  diukur dengan  panjang  gelombang  655  nm menggunakan buffer fosfat sebagai blankonya.

## 3. Pengukuran Kadar Fenolik Total
Kandungan total fenol diukur dengan uji  Folin-Ciocalteu  menggunakan  asam galat sebagai standar. Sampel ekstrak kasar metanoldan n -heksana masing-masing dilarutkan dalam pelarutnya dengan konsentrasi  75,  150,  300,  600,  800,  dan 1000  ppm.  Ekstrak  diambil  50  µL  dari tiap-tiap konsentrasi, ditambahkan aquades (3  mL),  250  µL  larutan  Folin-Ciocalteu dan  7  %  NaCO 3 (750  µL)  divortex  dan diinkubasikan  selama  8  menit  pada  suhu kamar. Langkah selanjutnya adalah penambahan  950  µL  aquades.  Larutan didiamkan  selama  80  menit  pada  suhu ruang. Diukur nilai absorbansi menggunakan panjang gelombang 655 nm. Kandungan  total  fenol  dinyatakan  dengan ekuivalen asam  galat (mg EAG/g sampel). Kandungan fenolik total yang tertinggi dan hasil  uji  reagen  yang  positif  dilakukan pemisahan  senyawa  aktif  dengan  metode KLT (Kromatografi Lapis Tipis) menggunakan eluen terbaik. Uji  Kandungan  Senyawa  Aktif  dengan Uji Reagen
Ekstrak teripang pasir diuji kandungan senyawa aktifnya menggunakan  uji  reagen  (uji  fitokimia) sehingga diketahui hasilnya secara kualitatif.  Uji  reagen  diantaranya  yaitu  uji alkaloid, flavonoid, saponin dan triterpenoid/steroid (Indrayani dkk, 2006).

## Uji Alkaloid
Ekstrak  teripang  pasir  dimasukkan dalam tabung reaksi, ditambah 0,5 mL HCl 2%  dan  larutan  dibagi  dalam  dua  tabung. Tabung  I  ditambahkan  2-3  tetes  reagen Dragendorff,  tabung  II  ditambahkan  2-3 tetes reagen Mayer. Jika tabung I terbentuk endapan  jingga  dan  pada  tabung  II terbentuk  endapan  kekuning-kuningan, menunjukkan adanya alkaloid.

## Uji Flavonoid
Ekstrak  teripang  pasir  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  kemudian  dilarutkan dalam 1-2 mL metanol panas 50%. Setelah itu  ditambah  logam  Mg  dan  4-5  tetes  HCl
pekat. Larutan berwarna merah atau jingga yang  terbentuk,  menunjukkan  adanya flavonoid.

## Uji Saponin
Ekstrak  teripang  pasir  dimasukkan dalam  tabung  reaksi  ditambah  air  (1:1) sambil  dikocok  selama  1  menit,  apabila menimbulkan  busa  ditambahkan  HCl  1  N, busa yang terbentuk dapat bertahan selama 10 menit  dengan ketinggian 1-3  cm,  maka ekstrak positif mengandung saponin.

## Uji Triterpenoiddan Steroid
Ekstrak  teripang  pasir  dimasukkan dalam  tabung  reaksi,  dilarutkan  dalam  0,5 mL  kloroform  kemudian  ditambah  dengan 0,5 mL asam asetat anhidrat. Campuran ini selanjutnya  ditambah  dengan  1-2  mL H 2 SO 4 pekat  melalui  dinding  tabung tersebut.  Jika  hasil  yang  diperoleh  berupa cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan dua pelarut menunjukkan adanya triterpenoid, sedangkan jika terbentuk
warna hijau kebiruan menunjukkan adanya steroid. Pemisahan  Kandungan  Senyawa  Aktif Menggunakan KLT Identifikasi
dengan
KLT menggunakan  plat  silika  gel  F 254 sebagai fase diamnya. Masing-masing plat disiapkan  dengan  ukuran  1x10  cm  setelah diaktivasi  selama  ±  15  menit  dalam  oven suhu  100 o C.  Ekstrak  teripang  pasir ditotolkan  pada  jarak  ±1  cm  dari  tepi bawah  plat  dengan  pipa  kapiler,  kemudian dikeringkan  plat  silika  gel  dan  ditotolkan kembali  ekstrak  teripang  pasir  dengan menggunakan pipa kapiler sebanyak 1 mL. Perlakuan  ini  dihentikan  sampai  dirasa sudah  cukup.Kemudian  hasil  penotolan akan  dielusi  dengan  menggunakan  eluen atau  fase  gerak  seperti  yang  ditunjukkan pada  lampiran  1.  Setelah  gerakan  fase gerak  sampai  pada  garis  batas,  elusi  dapat dihentikan.
Noda-noda  pada  permukaan  plat diperiksa di bawah sinar UV pada panjang gelombang 254 nm dan 366 nm, kemudian diamati  masing-masing  hasil  nodanya. Bercak noda yang dihasilkan pada masing-
masing plat KLT selanjutnya dihitung nilai Rf-nya.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Analisis Kadar Air
Hasil  uji  kadar  air  teripang  pasir diperoleh sebesar 79,97 %. Uji kadar air ini dilakukan untuk acuan penambahan pelarut yang  digunakan  dalam  ekstraksi  maserasi. Tingginya kadar air pada sampel (79,97 %) menyebabkan daya simpan sampel menjadi rendah.  Jika  sampel  segar  disimpan  dalam waktu  lama  kemungkinan  sampel  akan ditumbuhi  jamur  atau  mikroba  yang  dapat berpengaruh  terhadap  senyawa  aktif  dari sampel.

## Analisis Kadar Garam
Hasil pengukuran kadar garam teripang  pasir  diperoleh  sebesar  15,45  %. Tujuan  dari  uji  kadar  garam  ini  sebagai informasi  tambahan  untuk  pengaruh  hasil rendemen yang diperoleh.

## Preparasi Sampel
Sampel yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  teripang  pasir ( Holothuria  scabra )  masih  segar  yang diperoleh dari Pantai Kenjeran Surabaya.Sampel  teripang  pasir  dicuci sampai bersih kemudian dihaluskan dengan blender bertujuan untuk memperluas permukaan sampel agar memudahkan kontak antara pelarut dengan sampel pada saat ekstraksi maserasi.

## Ekstraksi Sampel
Ekstraksi yang  digunakan  pada penelitian  ini  untuk  mengekstrak  teripang pasir menggunakan ekstraksi  maserasi  dan dilanjutkan dengan ekstraksi partisi (ekstraksi cair-cair).
Rendemen hasil ekstraksi pada penelitian ini masing-masing yaitu metanol (11,28 %) dan n -heksana (1,38 %).
Uji  Antioksidan  Menggunakan  Metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrasil) 1. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Langkah  awal  yang  dilakukan  dalam pengujian  dengan  metode  DPPH  yaitu menentukan panjang gelombang maksimum  dari  DPPH  menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Hasil penentuan panjang  gelombang  DPPH  0,2  mM diperoleh  panjang  gelombang  maksimum sebesar  515  nm.  Hasil  spektra  UV-Vis larutan DPPH adalah sebagai berikut :
Gambar 1 Spektra  UV-Vis  larutan  DPPH

## dalam etanol
2. Penentuan Waktu Kestabilan Pengukuran Antioksidan Penentuan  waktu kestabilan  ini bertujuan untuk mengetahui waktu kestabilan  reaksi  antara  DPPH  dengan sampel antioksidan yang digunakan. Pengukuran waktu kestabilan ini dilakukan dengan  dua  cara,  yaitu  larutan    diinkubasi pada  suhu  ruang  (25–27 o C)  dan  larutan diinkubasi  pada  suhu  37 o C  dilakukan sampai  larutan  stabil  dengan  interval  5 menit.  Hasil  penentuan  waktu  kestabilan dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel  1Hasil  Penentuan  Waktu  Kestabilan Pengkuran Antioksidan
Berdasarkan Tabel 1 dapat dijelaskan bahwa  pengujian  antioksidan  sangat  baik jika  menggunakan  inkubasi  pada  suhu
37 o C,  karena  cenderung  menghasilkan absorbansi  yang  tidak  jauh  berbeda  dan lama.Berbeda  dengan  absorbansi  sampel pada suhu ruang (25–27 o C) yang
cenderung  berubah  dan  kurang  stabil  pada rentang  waktu  yang  berbeda.  Diduga  suhu yang telah terkondisikan dapat mempercepat berlangsungnya reaksi antara radikal DPPH dan senyawa antioksidan.

## 3. Pengukuran  Kapasitas  Antioksidan Sampel dengan Metode DPPH
Data % kapasitas antioksidan ekstrak teripang  pasir  serta  pembanding  BHT  dan asam askorbat ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2  Hasil  pengukuran  %  kapasitas antioksidan ekstrak teripang pasir
Berdasarkan data  pada Tabel  2 dapat diketahui bahwa ekstrak metanol mempunyai  aktivitas  antioksidan  yang sedang,  ha1  ini  ditunjukkan  dengan kemampuan ekstrak methanol dalam menghambat  perkembangan  radikal  bebas sebesar  79,82%.  Sedangkan  ekstrak n - heksana  mempunyai  aktivitas  sangat  kuat, karena  mampu  menghambat  radikal  bebas sebesar 94,82%. Ekstrak n -heksana memiliki kapasitas antioksidan yang berbanding terbalik dengan ekstrak metanol,  yaitu  dari  konsentrasi  rendah ketinggi  semakin  kecil.  Perbedaan  ini diduga  karena  ekstrak  yang  digunakan masih  berupa  ekstrak  kasar,  sehingga senyawa yang terkandung di dalam ekstrak kasar  sampel  fraksi  metanol  maupun n - heksana diduga masih mengandung gugus- gugus  lain  yang  dapat  mempengaruhi pengukuran
antioksidan
maupun prooksidan.
Hasil % kapasitas antioksidan sampel (ekstrak  fraksi  metanol  dan n -heksana) dapat  dibandingkan  dengan  pembanding (BHT  dan  Vitamin  C)  menggunakan persamaan regresi linear. Hasil % kapasitas antioksidan  dari  masing  –  masing  ekstrak dapat  dilihat  pada  lampiran  6.  Hasil  dari perbandingan  %  kapasitas  antioksidan sampel dengan pembanding yang memiliki nilai terbaik dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3  Hasil  perbandingan  %  kapasitas antioksidan sampel dengan pembanding Berdasarkan  data  Tabel  3  yang diperoleh  menunjukkan  bahwa  ekstrak fraksi n -heksana memiliki nilai % kapasitas antioksidan tertinggi dibandingkan dengan ekstrak fraksi metanol.  Hal  ini  dapat  dilihat  bahwa ekstrak fraksi n -heksana dengan konsentrasi  1  ppm  mampu  menghasilkan % kapasitas antioksidan tinggi dibandingkan dengan ekstrak fraksi metanol.
Ekstrak  fraksi n -heksana  dengan konsentrasi  1  ppm  mampu  menghasilkan %  kapasitas  antioskidan  sebesar  94,82% setara dengan > 50% kapasitas antioksidan BHT dan 7,75% kapasitas antioksidan Vit. C,sedangkan ekstrak fraksi metanol dengan konsentrasi  400  ppm  menghasilkan  % kapasitas  antioksidan  sebesar  79,82% setara dengan 10,17%
kapasitas antioksidan  BHT  dan  <1%  Kapasitas antioksidan Vitamin C.

## Pengukuran Kadar Fenolik Total
Kandungan  senyawa  fenolik  pada ekstrak  teripang  pasir  diukur  dengan menggunakan reagen Folin-Ciocalteu pada panjang gelombang 655 nm.
Hasil  pengujian  fenolik  total  dari ekstrak  teripang  pasir  dari  masing-masing fraksi yaitu metanol (69,09 EAG/g sampel) dan n -heksana (58,01 EAG/g sampel).
Uji Kandungan Senyawa Aktif Menggunakan Uji Reagen
Hasil  uji  reagen  ekstrak  teripang pasir ditunjukkan pada Tabel 4.
Tabel 4  Hasil  uji  reagen  ekstrak  teripang
pasir Uji Reagen Fraksi metanol Fraksi n -heksana Saponin - + Triterpenoid + - Steroid - - Alkaloid : - R. Mayer - R. Dragendroff - - - - Flavonoid - -

## Pemisahan Senyawa Aktif pada Ekstrak Teripang Pasir Menggunakan KLT
Pemisahan  senyawa  aktif  dengan KLT  ini  bertujuan  untuk  mencari  eluen terbaik  dari  beberapa  eluen  yang  baik dalam  pemisahan  senyawa  triterpenoid. Eluen  yang  baik  adalah  eluen  yang  dapat memisahkan  senyawa  dalam  jumlah  yang banyak ditandai dengan munculnya banyak spot.
Hasil  dari  data  spot  KLT  analitik ekstrak teripang pasir fraksi metanol dapat dilihat  di  Tabel  5.  Diantara  keseluruhan campuran  eluen  terdapat  5  eluen  yang menghasilkan  pemisahan  spot  yang  baik yaitu  eluen  metanol  :  kloroform  (5:2), metanol  :  kloroform  (1:2),  metanol  : kloroform  (7:3), n -butanol  :  NH 4 OH  (4:1) dan  kloroform  :  metanol  :  aquades (20:60:4). Hasil KLT analitik dapat dilihat pada Tabel 5.
Spot  hasil  KLT  menggunakan  eluen n -butanol  :  NH 4 OH  (4:1)  menghasilkan spot  lebih  baik,  karena  spot  yang dihasilkan tidak berekor dan menghasilkan spot yang lebih banyak.
Hasil  KLT  analitik n -butanol  :  NH 4 OH (4:1) disajikan dalam Gambar 3 dan Tabel 6.
Tabel 5  Hasil KLT dengan masing-masing eluen
Gambar 3  Profil  plat  hasil  KLT  ekstrak teripang  pasir  fraksi  metanol eluen n -butanol : NH 4 OH (4:1).
Keterangan:
(a) hasil elusi setelah disemprot reagen Lieberman-
Burchard
(b) gambar hasil pengamatan
(c) hasil  pengamatan  sinar  UV  pada  λ  366nm setelah disemprot reagen Lieberman-Burchard.
Tabel 6  Hasil  KLT  ekstrak  teripang  pasir fraksi  metanol  denganeluen n - butanol : NH 4 OH (4:1)
Golongan  senyawa  triterpenoid  hasil KLT  setelah  desemprot  dengan  reagen Lieberman-Burchard  ditunjukkan  dengan terbentuknya  bercak  noda  berwarna  hijau
kebiruan  (Handayani,  2008)  hijau  tua sampai  ungu  tua  (Bawa,  2009),  merah kecoklatan  sampai  merah  ungu  (Halimah, 2010).  Spot-spot  hasil  KLT  pada  ekstrak teripang  pasir  fraksi  metanol  ini  diduga merupakan golongan senyawa triterpenoid.

## IV. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Hasil penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa sebagai berikut :
1. Kandungan fenolik total pada teripang pasir ( Holothuria scabra ) fraksi metanol  sebesar  69,09  mg  EAG/gr sampel,  sedangkan  pada  fraksi n - heksana  sebesar  58,01  mg  EAG/gr sampel.
2. Kapasitas  antioksidan  pada  teripang pasir  fraksi  metanol  sebesar  79,82  %, sedangkan  pada  fraksi n -heksana sebesar 94,82 %.
3. Hasil uji reagen pada fraksi metanolekstrak teripang pasir menunjukkan adanya golongan senyawa  triterpenoid,  sedangkan  pada fraksi n -heksana  menunjukkan  adanya golongan senyawa saponin.
4. Eluen yang terbaik untuk
memisahkansenyawa aktif ekstrak teripang pasir fraksi metanol
menggunakan  metode  KLT  yaitu n - butanol : NH 4 OH (4:1). Saran Penelitian ini agar mendekati sempurna  saran  yang  perlu  diperbaiki  dari penelitian ini, diantaranya yaitu:
1. Diperlukan  penelitian  lebih  lanjut sampai  pada  tahap  identifikasi  agar dapat  mengetahui  senyawa yang
berpotensi sebagai
antioksidan
tersebut.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Bawa,  I.  G.  A.  G.  2009 .  Isolasi  dan Identifikasi  Golongan  Senyawa Toksik  dari  Daging  Buah  Pare (Momordica  charantia  L.). Bukit Jimbaran:  Jurusan  Kimia  FMIPA Universitas Udayana. Jurnal
Kimia  3(2) .  ISSN  1907-9850: 1117-124. Halimah,  N.  2010. Uji  Fitokimia  dan  Uji Toksisitas Ekstrak Tanaman Anting-Anting  (Acalypha  indica  L.) Terhadap  Larva  Udang  Artemia salina Leach . Skripsi Tidak
Diterbitkan. Malang: Jurusan Kimia Fakultas  Sains  dan  Teknologi Universitas  Islam  Negeri  Maulana Malik Ibrahim Malang.
Kadin.  2004. NKRI:  Negara  Kepulauan Republik Indonesia . http://www.kadinbatam.or.id/imu/t mi.pdf.  diakses  pada  tanggal  05
Oktober 2011.
Nurhidayati. 2009. Efek Protektif Teripang
Pasir (Holothuria scabra) terhadap Hepatotoksistas  yang  Diinduksi Karbon Tetraklorida (CCl 4 ) . Surabaya: Universitas Airlangga. Sateni. 2012. Wawancara Pribadi dilakukan pada tanggal 16 September 2012. Surabaya. Yuliani, D. 2010. Kajian Aktivitas Antioksidan  Fraksi  Etanol  Jinten
Hitam (Nigella sativa, L.) . Malang: Jurusan Kimia UIN MALIKI Malang.