## Efek Teratogenik Ekstrak Etanol Daun Sirsak (Annona muricata L) terhadap Fetus Tikus Putih Galur Wistar
Erjon*, Jouliyano Dwiputri, Sari Meisyayati

## STIFI Bhakti Pertiwi Palembang
Intisari: Ekstrak etanol daun sirsak ( Annona muricata L) telah terbukti efektif pada penderita kejang,  inflamasi,  asam  urat,  hiperglikemia  dan  hipertensi.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengevaluasi  efek  teratogenisitas  ekstrak  etanol  daun  sirsak  ( Annona  muricata L)  pada  tikus Wistar. Ekstrak etanol daun sirsak diberikan secara oral dengan dosis  98, 196, dan 392 mg/kg bb pada  hari  ke  8  sampai  hari  ke  18  kehamilan  tikus.  Pada  hari  ke  20  kehamilan,  dilakukan laparoktomi untuk mengambil janin. Evaluasi dilakukan terhadap kerangka janin, organ dan berat janin. Pada semua dosis tidak menyebabkan resorpsi janin, tidak menyebabkan malformasi organ dan kerangka tapi menyebabkan gangguan pertumbuhan janin. Ekstrak daun etanol daun sirsak pada dosis 98, 196, dan 392 mg/kgbb pada tikus tidak menimbulkan efek teratogenik.
Kata kunci: Sirsak, Annona muricata L, malformasi, efek teratogenic
Abstract: Ethanolic  extract  of  leaves  of  “sirsak”  (Annona  muricata L)  has  been  proven  to  be effective  in  convulsant,  inflammatory,  hiperuresemia,  hyperglycemia  and  hypertension  to patients. The aim of this study was to evaluated teratogenicity effect of ethanolic extract of leaves of sirsak (Annona muricata L) leaves in Wistar rats. Ethanolic extract of leaves of “sirsak” were administered orally at dose level of 98 mg/kgbw, 196 mg/kg bw , 392 mg/kgbw on day eighth to eighteenth  of  gestation.  At  day  20th  of  gestation,  laparoctomy  was  performed  to  retrieve  the fetuses. Evaluation was done towards the fetus skeletal, organ and fetal weight. The at all doses did not cause any fetus resorption, did not cause malformation in organ and skeleton but cause fetus growth failure. Ethanolic extract of leaves of sirsak at doses of 98, 196, and 392 mg/kgbw in rats did not have the teratogenic effect.
Keywords: sirsak, Annona muricata L, malformation, teratogenic effect.
*Corresponding Author : erjonplg@gmail.com
1 PENDAHULUAN
etiap  obat  baik  tradisional  maupun  modern harus  mempunyai  data  keamanan  berupa data toksisitasnya. Pengujian toksikologi merupakan  salah  satu  pengujian  yang  harus dipenuhi  oleh  sediaan  obat  termasuk  sediaan herbal  yang  mempunyai  grade  herba  terstandar maupun  fitofarmaka.  Salah  satu  uji  toksikologi yang penting adalah uji teratogenic (Departemen Kesehatan  RI,  1995).  Uji  teratogenik  merupakan salah satu pengujian toksikologi selektif. Pengujian teratogenik ini ditujukan untuk melihat pengaruh suatu  bahan  terhadap  perkembangan  fetus. Teratogenik  berarti  terjadinya  perkembangan tidak  normal  dari  sel  selama  kehamilan  yang menyebabkan  kerusakan  pada  embrio  sehingga pembentukan  organ-organ  berlangsung  tidak sempurna (terjadi cacat lahir) (Wilson and Freser,
1995).  Bahan-bahan  yang  bersifat  teratogenik dikontra indikasikan kegunaannya pada kehamilan (Brunton et all, 2006).
Salah  satu  obat  tradisional  yang  sering dimanfaatkan untuk pengobatan alternatif adalah daun sirsak. Kandungan kimia ekstrak etanol dari daun  sirsak  adalah  alkaloid,  flavonoid,  saponin, tannin,  steroid  antrakuinon  dan  terpenoid (Vimala et al, 2012). Sedangkan ekstrak n-butanol daun sirsak terdapat senyawa triterpenoid (Artini et  al,  2012).  Daun  sirsak  memiliki  beberapa khasiat  diantaranya  adalah  untuk  pengobatan demam, diare, antikejang, anti jamur, anti parasit, antimikroba,  sakit  pinggang,  asam  urat,  gatal- gatal, flu dan lain-lain (Gajalaksami  et all, 2011). Dilaporkan pula pada fraksi n-butanol daun sirsak dapat  menurunkan  kadar  asam  urat  tikus  wistar (Artini  et  al,  2012).  Pada  penelitian  lain  juga dilaporkan  ekstrak  daun  sirsak  memiliki  efek
S
berkhasiat  sebagai  antihipertensi,  vasodilatasi, antikonvulsi,  relaksasi  dan  sedatif  (Mishra  et  al, 2013).  Holdsworth  (1990),  melaporkan  bahwa daun sirsak juga berpotensi sebagai antihipertensi, antispasmodik,  obat  pereda  nyeri,  hipoglikemik, antiemetik  dan  antelmentik.  Menurut  (Anggina, 2014)  daun  sirsak  memiliki  efek  sebagai antikonvulsi.
Dari data penelitian ilmiah di atas belum ditemukan  data  toksikologi  terutama  data teratogenik dari daun sirsak. Untuk itu perlu diteliti pengaruh  pemberian  ekstrak  daun  sisak  pada perkembangan  fetus  atau  sifat  teratogenik  dari ekstrak daun sirsak

## 2 METODOLOGI

## Alat
Alat yang digunakan adalah : seperangkat alat  destilasi,  rotary  evoporator,  botol  maserasi, timbangan  analitik,  kertas  saring,  kertas perkamen, erlenmeyer, gelas ukur, corong gelas, mortir  dan  stamper,  jarum  oral,  spuit  1  cc, mikroskop, kaca objek, wadah perendaman fetus dan alat-alat bedah.

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  :  daun sirsak,  etanol  destilasi,  tween  80,  aquades,  NaCl fisiologis,  larutan  Bouin’s  (formaldehide  14%, asam  asetat  glacial,  asam  pikrat  jenuh),  larutan merah  alizarin  (KOH  1%,  merah  alizarin  6ml/L), gliserin.

## Metodologi Penelitian

## Sampel Penelitian
Sampel  penelitian  adalah  daun  sirsak ( Annona  muricata L . )  segar  yang  diambil  di daerah Bukit Lama Palembang Sumatera Selatan.

## Identifikasi Tumbuhan
Tumbuhan yang digunakan pada penelitian  ini  diklarifikasi  di  Herbarium  ANDA Jurusan  Biologi  FMIPA  Universitas  Andalas Padang.

## Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Sirsak
1000  gram  daun  sirsak  segar  dimaserasi dengan  etanol.  Maserat  yang  diperoleh dipekatkan dengan menggunakan rotary evoporator (Departemen Kesehatan RI, 2000).

## Dosis dan Pembuatan Sediaan Uji
Dosis ekstrak daun sirsak yang digunakan adalah 98, 196 dan 392 mg/kgbb. Sediaan uji yang dibuat  dihomogenkan  dengan  menambahkan tween 80 sebanyak 1% b/v.

## Pembuatan Larutan Merah Alizarin
Larutan  merah  alizarin  digunakan  untuk mewarnai bagian  skeletal  dan pertulangan tikus. Pembuatannya  adalah  dengan  menambahkan  6 mg merah alizarin pada 1 liter KOH 1%.

## Pembuatan Larutan Bouin’s
Larutan bouin’s digunakan untuk melihat bagian-bagian  visceral  fetus  tikus.  Cara pembuatannya  adalah:  asam  pikrat  dilarutkan dalam  air  panas  dan  dibuat  jenuh,  biarkan  satu malam,  kemudian  ditambahkan  formaldehide 14%  dan  asam  asetat  glacial  masing-masing dengan  perbandingan  75:20:5  (Wilson  and Freser, 1995).

## Hewan Uji
Hewan  uji  yang  digunakan  adalah  tikus betina  yang  berumur  kurang  lebih  2-3  bulan, dengan  berat  rata-rata  200  gram  dengan  siklus estrus yang teratur 4-5 hari.

## Pengawinan Hewan Uji
Hewan  dikawinkan  pada  masa  estrus dengan  perbandingan  jantan  dan  betina  1:  4. Tikus jantan dimasukkan ke kandang tikus betina estrus pada pukul empat sore dan dipisahkan lagi besok  paginya.  Dan  dilakukan  pemeriksaan sumbat vagina. Adanya sumbat vagina menunjukan  hari  pertama  dari  kehamilan (Yatim,1996).  Tikus  yang  hamil  dipisahkan,  tikus
yang  belum  hamil  dikawinkan  lagi  keesokan paginya.

## Uji Efek Teratogenik
1. Pada hari ke 8 sampai 18 kehamilan dilakukan pemberian sediaan uji
a. Kelompok I :  diberikan  ekstrak  daun sirsak dengan dosis 98 mg/ kgbb
b. Kelompok II
:  diberikan  ekstrak  daun sirsak dengan dosis 196 mg/ kgbb
c. Kelompok III :  diberikan  ekstrak  daun sirsak dengan dosis 392 mg/ kgbb
d. Kelompok kontrol  : diberikan air suling 100 g/kgbb
2. Pada  hari  ke  20  kehamilan,  dilakukan laparaktomi pada induk tikus yang sebelumnya induk  tikus  dimatikan  dengan  cara  dislokasi leher.  Setelah  mati  dilakukan  pembedahan pada  bagian  abdomen  perutnya  kearah  atas sampai terlihat uterus yang berisi fetus.
3. Fetus  yang  telah  dikeluarkan  dibersihkan kemudian  dicatat  jumlah  fetus  betina  dan jantan  dan  ditimbang  berat  masing-masing fetus.
4. Selanjutnya  dilakukan  pengamatan  visual terhadap  adanya  kelainan.  Misalnya,  bentuk ekor, telinga, kelopak mata, jumlah kaki depan dan  belakang  (Departemen  Kesehatan  RI, 1995 ; Wilson and Freser, 1995).
5. Setelah  diamati  secara  visual,  sepertiga  dari fetus dilakukan fiksasi dengan larutan Bouin’s selama  dua  minggu  sampai  fetus  berwarna kuning dan keras. Setelah itu fetus dikeluarkan dan  dikeringkan,  kemudian  diperiksa  bagian luar fetus yang meliputi telinga, mata, kaki dan ekor.
6. Dua  pertiga  fetus  lagi,  direndam  dengan larutan
merah alizarin yang akan menyebabkan  fetus  menjadi  transparan. Perendaman  dalam  larutan  merah  alizarin dilakukan selama 2 sampai 3 hari sambil sekali- kali digoyang. Kemudian fetus dikeluarkan dan disimpan dalam larutan yang terdiri dari etanol 70%, gliserin dan formaldehid 14%. Pengamatan dilakukan di tulang dada, tulang punggung, tulang ekor, tulang kaki dan jari-jari kaki.  Semua  hasil  pengamatan  dibandingkan dengan kontrol ( Wilson and Freser, 1995).

## Pengumpulan dan Analisa Data
Data  kuantitatif  diperoleh  dengan melakukan  pengamatan  jumlah  fetus  hidup, jumlah fetus mati, berat fetus, panjang fetus. Data kualitatif diperoleh dengan mengamati morfologi fetus (mata, telinga, ruas jari, tengkorak, ekor dan lainnya  yang  dianggap  abnormal)  dan  sistem skeletonnya  (bentuk  tulang,  jumlah  tulang,  dan hasil  proses  penulangan).  Data  dianalisis menggunakan analisis varian (ANOVA) satu jalur dan Pearson Correlation.

## 3 HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil penelitian dapat dipaparkan sebagai berikut :
Tabel 1.  Rata-rata jumlah fetus  dan berat badan fetus  dari  kelompok  kontrol  dan  kelompok pemberian  ekstrak  daun  sirsak  dengan  dosis  98, 196 dan 392 mg/kgbb.
Tabel 2. Parameter pengamatan fetus secara visual kelompok kontrol dan kelompok pemberian ekstrak daun sirsak dengan dosis 98,
196 dan 392 mg/kgbb.

## Pembahasan
Ekstrak  kental  etanol  dari  daun  sirsak memenuhi  persyaratan  dan  dapat  digunakan
sebagai  bahan  uji  pada  penelitian.  Sediaan  uji yang dibuat dihomogenkan dengan menambahkan tween 80 sebesar 1%v/v. Sediaan uji diberikan pada ke 8 sampai hari 18 kehamilan tikus,  karena  pada  priode  ini  merupakan  priode pematangan  organ-organ  pada  fetus  selama  di dalam rahim.
Pada hari ke 20 kehamilan dari tikus atau satu  hari  sebelum  kelahiran  normal  dilakukan laparaktomi.  Laparaktomi  dilakukan  untuk mencegah  induk  tikus  memakan  anaknya  yang mengalami  kecacatan,  mati,  atau  yang  hampir mati,  sehingga  akan  mengakibatkan  perubahan data  yang  didapat.  Disamping  itu  dengan dilaparaktomi  dapat  juga  dapat  diamati  tapak resorpsi  dan  hemoragi  yang  terjadi  pada  fetus (Wilson and Freser, 1995).
Dari  hasil  laparaktomi  tidak  ditemukan tapak  resorpsi,  tetapi  ditemukan  hemoragi. Hemoragi yag ditemukan yang berbeda dari dari setiap  kelompok  perlakuan  (Tabel  2).  Hemoragi merupakan peristiwa keluarnya darah dari sistem kardiovaskuler yang disertai dengan penimbunan didalam  jaringan  tubuh  (Wilson  and  Freser, 1995).  Kemungkinan  hemoragi  dapat  terjadi karena ekstrak diberikan berulangkali pada dosis cukup tinggi, sehingga konsentrasi didalam darah tinggi,  akibatnya  terjadi  ketidakseimbangan osmotik.  Pada  keadaan  normal,  embrio berkembang  dalam  cairan  amnion  yang  isotonis dengan cairan tubuh. Masuknya zat asing dalam jaringan  dapat  mengubah  tekanan  osmosis. Ketidakseimbangan  osmotik  dapat  mnyebabkan gangguan  tekanan  dan  viskositas  cairan  pada bagian  embrio  yang  berbeda,  antara  plasma darah dan ruang ekstra kapiler atau cairan ekstra dan intra embrionik. Perbedaan ini menyebabkan pembuluh  darah  pecah  dan  terjadi  hemoragi (Wilson  and  Freser,  1995).  Dari  hasil  uji  T  tes menunjukkan  adanya  perbedaan  bermakna antara dosis dengan adanya efek hemoragi pada fetus tetapi pada dosis 196 mg/kgbb dengan 392 mg/kgbb tidak berbeda bermakna (p > 0,05).
Pengamatan terhadap jumlah fetus pada pemberian ekstrak etanol daun sirsak pada dosis 392  mg/kgbb,  196  mgkgbb,  96  mg/kgbb menunjukkan  adanya  penurunan  jumlah  fetus dapat dilihat pada (Tabel 1). Setelah dilakukan uji One  Way  Anova terlihat  bahwa  tidak  terdapat perbedaan  bermakna  (p  >  0,05)  antara  kontrol
dengan  semua  kelompok  uji  terhadap  jumlah fetus.  Hasil  uji  statistik  lanjut  denagn Duncan menggunakan SPSS untuk parameter pengamatan  jumlah  fetus  kelompok  ekstrak  98 mg/kgbb dan 196 mg/kgbb terlihat tidak berbeda bermakna  terhadap  kelompok  kontrol,  untuk dosis 392 mg/kgbb menunjukkan ada perbedaan bermakna terhadap kelompok kontrol.
Pengamatan  terhadap  berat  badan  rata- rata  fetus  menunjukkan  penurunan  berat  badan rata-rata  fetus  (Tabel  1).  Analisa  menggunakan One  way  Anova menunjukkan  hasil  perbedaan bermakna  disetiap  kelompok  dosis  terhadap kontrol    (  p  <  0,05  ).  Hasil  uji Duncan secara statistik kelompok 98 mg/kgbb dan 196 mg/kgbb terlihat tidak berbeda makna terhadap kelompok kontrol, tetapi pada kelompok dosis 392 mg/kgbb menunjukkan  perbedaan  bermakna  terhadap kelompok  kontrol  (p  <  0,05).  Penurunan  berat badan  fetus  merupakan  bentuk  teringan  dari suatu  efek  senyawa  yang  bersifat  teratogenik (Wilson  and  Freser,  1995).  Berat  badan merupakan parameter yang cukup sensitif untuk mengetahui  pengaruh  senyawa  asing  terhadap pertumbuhan  fetus.  Penurunan  rata-rata  berat badan fetus dapat disebabkan karena berkurangnya  transfer  nutrisi  pada  masa perkembangan  fetus  yang  dapat  menyebabkan penurunan berat badan fetus.
Hasil  uji Pearson  Corellation baik  untuk parameter  jumlah  fetus  dan  berat  badan  fetus menunjukkan korelasi negatif antara peningkatan dosis dengan jumlah fetus dan berat badan fetus. Hal ini menunjukkan dengan adanya peningkatan dosis  pemberian  ekstrak  daun  sirsak  akan menyebabkan  penurunan  jumlah  dan  berat badan  fetus.  Dari  uji  Pearson  Corellation  juga terlihat  hubungan  yang  sedang  (r=0,563)  dari peningkatan dosis pemberian ekstrak daun sirsak terhadap  jumlah  fetus.  Sedangkan  untuk penurunan  berat  badan    rata-rata  fetus  terlihat hubungan  yang  sangat  kuat  (r=0,939)  dari peningkatan dosis pemberian ekstrak daun sirsak terhadap penurunan berat badan  rata-rata fetus ( p<0,05).
Bentuk  tulang  diamati  setelah  fetus direndam  dengan larutan alizarin  yang menyebabkan fetus berwarna transparan dengan tulang  berwarna  merah  keunguan.  Hasil penelitian  tidak  menunjukkan  ada  kelainan
bentuk  tulang  pada  semua  tingkatan  dosis pemberian,  sehingga  ekstrak  etanol  daun  sirsak diperkirakan  tidak  mempengaruhi  pertumbuhan tulang.
Parameter  yang  diamati  setelah  fetus direndam  dalam  larutan  Bouin’s  antara  lain bentuk  ekor,  kelopak  mata,  bentuk  telinga,  kaki depan  dan  kaki  belakang  tidak  menunjukkan adanya  cacat  morfologis  dibanding  dengan kelompok kontrol.

## IV  KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Dari hasil penelitian efek teratogenik ekstrak etanol daun sirsak ( Annona muricata L . ) terhadap fetus  yang  dilakukan  maka  dapat  disimpulkan bahwa :
1. Pemberian  ekstrak  etanol  daun  sirsak  pada dosis  98  mgkgbb,  196  mg/kgbb  dan  392 mg/kgbb tidak  menimbulkan efek teratogenik pada fetus tikus
2. Peningkatan  dosis  pemberian  ekstrak  etanol daun  sirsak  dapat  meningkatkan  penurunan jumlah dan berat badan fetus.

## REFERENSI
[1] Anggina,  Y.  (2014). Uji  Efek  Antikonvulsi Ekstrak Etanol Daun Sirsak  (Annona muricata L.) Terhadap Mencit Putih Jantan Galur Swiss Webster .  Skripsi  sarjana  Sekolah  Tinggi Farmasi. Palembang
[2] Artini, Ni puturahayu,. Rahayu,S., wahyu dwi jani Sulihingtyas, W, D,J. (2012). Ekstrak daun sirsak  (Annona  muricata, L .)  Sebagai Antioksidan Pada Penurunan Kadar Asam Urat Tikus  Wistar .  Jurnal  kimia  6  (2)  :  127-137. Universitas udayana
[3] Brunton, L.L.; Lazo,J.S. & Parker, K.L. (2006) :
Goodman  &  Gilman’s    The  Pharmacological Basis  of  Therapeutics,  11th  Edition,  McGraw-
Hill Medical Publishing Division, USA. R
[4] Departemen Kesehatan RI, (1995). Farmakope Indonesia (Edisi  IV),  Jakarta  :  Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
[5] Departemen Kesehatan RI,.(2000). Parameter standar umum ekstrak tumbuhan obat. Jakarta :  Dirjen  POM  Direktorat  Pengawasan  Obat Tradisional
[6] Gajalakshmi.,Vijayalakshmi., & Devi Rajeswari. (2011). Phytochemical and pharmacological properties
of
AnnonaMuricata A review . Vol 4.Issue 2. India.
[7] Holdsworth D. K. (1990). Traditional Medicinal Plants of Rarotonga, Cook Islands. ‖ Part I. Int. J. Crude Drug Res. 28(3), 209-218
[8] Mishra,S., Shamim, A., Nilesh K., Brijesh K, S. (2013) . Annona  muricata (The cancer killer) :
A  Review .The Global Journal of Pharmaceutical Research Vol. 2(1), pp. 1613- 1618.
[9] Vimala,  J.  Rosaline.,  A.  Lena  Rose,  S. Raja.(2012). A  Study  On  The  Phytochemical Analisis And Corrosion Inhibitor On Mild Steel By  Annona  muricata,  L    Leaves  Extract  In  1 Hydrochloric Acid. India. 3(3):582-588.
[10] Wilson,  J.G  and  J.  Warkany.  (1995).
Teratology Principle ang Techniues , university of chicago press, Chicago IL
[11] Wilson,  J.  G.,  and  Freser,  F,  G.  (1978). Handbook  of  Teratology .  Plenum  Press,  New York.
[12] Yatim,
W., (1996).
Reproduksi dan
Embriologi. (Edisi II), Tarsito, Bandung.