## Indonesian Journal of Chemical Research
http://ojs3.unpatti.ac.id/index.php/ijcr
Karakterisasi Biopolimer Kitosan Hasil Deasetilasi Limbah Kepiting Rajungan ( Portunus Sanginolentus ) Menggunakan NaBH 4 Dalam NaOH
Characterization of Chitosan Biopolymers as Result of Deacetylation of Rajungan Crab Waste (Portunus sanginolentus) using NaBH 4 in NaOH
Nurani Hasanela * , Matheis F.J.D.P. Tanasale, Helna Tehubijuluw
Chemistry Department, Faculty of Mathematics and Natural Sciences Pattimura University, Kampus Poka, Jl. Ir. M. Putuhena, Ambon-Indonesia 97134
* Corresponding Author: hasanela.nurani@yahoo.co.id
Received: 2019-12-12
Received in revised: 2020-2-1
Accepted:2020-5-20
Available online: 2020-5-31

## Abstract
The chitosan isolation from crab waste (Portunus sanginolentus) has been carried out. Chitin  production  is  carried  out  by  the  de-proteination,  demineralization  and depigmentation  processes.  Chitosan  biopolymer  is  produced  from  chitin  through  de- acetylation method using base solution (NaOH) and the addition of NaBH 4 which aims to increase the degree of de-acetylation (DD) of chitosan. The results of 25 g of chitin obtained chitosan amounted to 16.67 g (66.68%). Chitin and Chitosan were identified by a Fourier Transform Infrared (FT-IR) spectrophotometer.
Keywords: Chitin, chitosan, de-proteination, de-mineralization, de-pigmentation.

## Abstrak (Indonesian)
Telah  dilakukan  isolasi  kitosan  dari  limbah  kepiting  rajungan  ( Portunus sanginolentus ).    Produksi  kitin  dilakukan  dengan  proses  deproteinasi,  demineralisasi dan  proses  depigmentasi.  Biopolimer  kitosan  dihasilkan  dari  kitin  melalui  metode deasetilasi  menggunakan  larutan  basa  (NaOH)  dan  penambahan  NaBH 4 yang bertujuan untuk menaikkan derajat deasetilasi (DD) dari kitosan. Dari hasil 25 g kitin diperoleh  kitosan  sebesar  16,67  g  (66,68%).  Kitin  dan  Kitosan  diidentifikasi  dengan spektrofotometer fourier transform infrared (FT-IR).
Kata Kunci: Kitin, kitosan, de-proteinasi, de-mineralisasi, de-pigmentasi.

## PENDAHULUAN
Selain  ikan  yang  merupakan  salah  satu  sumber protein  bernilai  tinggi,  banyak  juga  dari    golongan Crustacea yang  dijadikan  andalan  komuditi  ekspor produk  perikanan.  Salah  satu  golongan Crustacea yang  paling  digemari  dan  melimpah  adalah  kepiting rajungan ( Portunus sanginolentus ). Rajungan merupakan  jenis  kepiting  yang  paling  terkenal diantara  kepiting  lainnya.  Kepiting  rajungan  yang akan  diekspor  diproses  terlebih  dahulu.  Pada  proses ini,  daging  rajungan  dipisahkan  dari  cangkangnya, sehingga  cangkang  yang  dihasilkan  akan  menjadi limbah. Hasil limbah dari cangkang kepiting rajungan ini,  jika  tidak  dikelola  dengan  baik  maka  akan mencemari  ekosistem  laut  (Adriana  dkk.,  2001). Pemanfaatan  limbah  cangkang  kepiting  rajungan dapat  memiliki  nilai  guna  salah  satunya  yaitu dijadikan  produk kitosan (Sartika dkk ., 2016).
Kitin  adalah  polisakarida  kedua  terbanyak  di alam  setelah  selulosa.  Kitin  disamakan  dengan selulosa  dengan  gugus  hidroksil  pada  posisi  C-2 digantikan  dengan  satu  gugus  asetamida  (Kumar, 2000;  Ali-komi,  2016).  Kitin  dapat  ditemukan  dalam struktur  seluler  jamur,  bakteri,  serangga,  arakhnida, krustasea,  nematoda,  dan  invertebrata  lainnya  seperti annelida,  muloska,  cumi  dan  hemichordata  (Ramírez dkk.,  2010;  Agustina  dkk.,  2015;  Teli  dan  Sheikh 2012). Kitin dapat didegradasi dengan enzim kitinase. Seperti  halnya  selulosa,  fungsi  alami  kitin  juga sebagai  struktur  polisakarida.  O l e h   k arena  kitin mempunyai  sifat  kristalinitas  tinggi,  maka  kitin  tidak larut  dalam  pelarut  air,  dan  pelarut  organik  (Sartika dkk., 2016). Kitin tidak beracun dan mempunyai  berat molekul (BM) sekitar 1,2 x 10 6
g/mol (Purwatiningsih  dkk.,1993).  Struktur  monomer  kitin dapat ditujukkan  pada Gambar 1.
Gambar 1. Struktur monomer  kitin (Kumar, 2000).
Melalui  proses  deasetilasi,  kitin  dapat  dijadikan kitosan.  Kitosan  adalah  modifikasi  dari  senyawa polimer  karbohidrat yang  berasal kitin  yang  banyak terdapat  dalam  kulit  luar  hewan Crustacea seperti udang  dan  kepting.  Kitosan  hasil  deasetilasi  dapat digunakan  sebagai  zat  penyerap  logam-logam  berat dan  zat-zat  pencemar lainnya yang terdapat  dalam air (Adriana dkk., 2001).
Pada  proses  deasetilasi  kitin  menghasilkan kitosan,  digunakan  larutan  basa  NaOH  dan  NaBH 4 . Penggunaan  NaBH 4 ini  akan berpengaruh  pada  berat molekul  (BM)  dan  derajat deasetilasi  (DD). Penambahan NaBH 4 pada waktu deasetilasi menghasilkan  kitosan  dengan  BM  dan  DD  yang besar.  Hal ini disebabkan  karena  kondisi  terbaik  dari preparasi kitosan didapat dengan menggunakan   suatu larutan  NaOH  dan  NaBH 4 yang  berfungsi  sebagai reduktor  yang  menyumbangkan  H + pada  proses reaksi  deasetilasi menjadi kitosan (Beaulieu,  2006).
Gambar 2.  Struktur mono mer  kitosan
Kitosan merupakan produk dari proses deasetilasi  kitin  melalui  reaksi  kimia  dengan menggunakan enzim kitin deasetilase. Unit penyusun  kitosan  merupakan  disakarida  (1,4)-2- amino-2-deoksi-D-glukosa  yang  saling  berikatan  ß. Seperti  halnya  polisakarida  lain,  kitosan  memiliki kerangka  gula,  tetapi  dengan  sifat  yang  unik  karena polimer  ini  memiliki  gugus  amina  bermuatan  positif (Kumar dkk., 2000). Struktur monomer  kitosan  dapat ditujukkan  pada Gambar 2.

## METODOLOGI
Alat dan Bahan Alat-alat yang digunakan yaitu
spektrofotometer  UV-Vis  Spectronik  20 + series,. spektrofotometer  FT-IR  (Perkin  Elmer)  1600  series, viskometer  Ostwald,  timbangan  analitik,  corong pisah,  pipet  vakum,  pipet  volum,  oven  (Memert), termometer,  penyaring  Buchner, hot  plate ,  ayakan ukuran  40  mesh.  Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu limbah  cangkang  kepiting  rajungan,  NaOH  p.a  (E. Merck),  HCl  p.a  (E.  Merck),  H 2 SO 4 p.a  (E.  Merck), K 2 S 2 O 8 p.a (E. Merck) dan NaBH 4 p.a (E. Merck).

## Prosedurkerja
Isolasi  kitin  dari  limbah  cangkang  kepiting rajungan
Tahap deproteinasi  dimulai dengan penimbangan 400  g  limbah  cangkang  kepiting  rajungan  yang  suda dihaluskan  ditambah  100  g/L  NaOH,  kemudian dibiarkan pada suhu kamar  selama 3  hari  selanjutnya disaring dengan kertas  saring, residu yang  dihasilkan dicuci  dan  dikeringkan  pada  suhu  40 o C.  Dalam tahap demineralisasi  residu hasil  deproteinasi ditambahkan 172  mL  HCl  1  N,  kemudian ditambahkan  2  L  H 2 O  kemudian  dipanaskan  pada suhu  40 o C selama  3  jam  selanjutnya  disaring dengan kertas  saring. Residu yang  dihasilkan  dicuci dan dikeringkan pada suhu 40 o C. Tahap depigmentasi diakhiri dengan residu hasil depigmentasi  ditambahkan  500  mL  H 2 O  dan  50  mL H 2 SO 4 kemudian  dilakukan  pemutihan  dengan penambahan  K 2 S 2 O 8 100  g/L  kemudian  dicuci  dan dikeringkan dalam oven pada suhu 40 o C. Kitin  yang dihasilkan dikarakterisasi dengan  spektrofometer  FT- IR.
Deasetilasi  kitin menghasilkan  biopolimer  kitosan Sebanyak 25 g kitin yang dihasilkan ditambahkan  150  g/L  NaOH  kemudian  dipanaskan pada  suhu 110 o C selama 2  jam,  selanjutnya disaring dan  dicuci  kemudian  dikeringkan.  Kitosan  yang dihasilkan dikarakterisasi  dengan  spektrofometer  FT- IR  dan  berat  molekul  dengan  viskometer  Ostwald. Sebanyak  25  g  kitin  yang  dihasilkan  ditambahkan 150  g/L  NaOH  dan  0,75  g/L  NaBH 4 kemudian dipanaskan  pada  suhu  110 o C selama  2  jam, selanjutnya disaring dan dicuci kemudian dikeringkan.  Kitosan  yang  dihasilkan  dikarakterisasi dengan  spektrofometer  FT-IR  dan  berat  molekul dengan viskometer  Ostwald.
Sebanyak 25 g kitin yang dihasilkan ditambahkan  150  g/L  NaOH  kemudian  dipanaskan pada  suhu  110 o C    selama    2  jam,  selanjutnya disaring dan  dicuci kemudian dikeringkan.  Proses  ini dilakukan  sebanyak  2  kali  pengulangan.  Kitosan yang dihasilkan dikarakterisasi dengan spektrofometer  FT-IR  dan  berat  molekul  dengan viskometer Ostwald.
Sebanyak 25 g kitin yang dihasilkan ditambahkan  150  g/L  NaOH  dan  0,75  g/L  NaBH 4 kemudian  dipanaskan  pada  suhu  110 o C  selama  2 jam,  selanjutnya  disaring  dan  dicuci  kemudian dikeringkan.  Proses  ini  dilakukan  sebanyak  2  kali pengulangan.  Kitosan yang  dihasilkan  dikarakterisasi dengan  spektrofometer    FT-IR  dan  berat  molekul dengan viskometer  Ostwald.

## Penentuan  bobot  molekul  kitosan  dengan  metode viskometri
Larutan  berisi  0,001  g  kitosan  dalam  100  mL HCl  0,02  mL  disiapkan    kemudian  dibuat    100  mL larutan  kitosan  dengan  masing-masing  konsentrasi:
0,001%, 0,002%, 0,003%, 0,004%, 0,005%.
Selanjutnya  5  mL  dari  masing-masing  larutan kitosan  dipipet  ke  dalam  viskometer  yang  kering, bersih  dan  yang  telah  dipasang dalam  penangas  air dengan  suhu  tetap  dijaga  30  ±  0,1 o C.  Waktu    alir diukur dan dilakukan dengan 2 x pengulangan.
Penentuan derajat  deasetilasi (DD)  dengan metode UV-Vis (Liu dkk., 2006)
Sebanyak  4  mg  kitosan  hasil  deasetilasi  yang dihasilkan, dipisahkan  pada masing- masing  K1,  K2,
K3 dan  K4. Kemudian  dilarutkan dengan  HCl  0,1  M dan  dikarakterisasi dengan  spektrofotometer  UV-Vis pada panjang  gelombang  201 nm. Derajat deaseitalasi ditentukan  dengan  menggunakan  persamaan  1  dan  2. Untuk  berat  molekul  kitosan  dihitung  dengan menggunakan persamaan 3.
(1)
DD = (1- DA )100%                    (2)
[ɳ] = KM a atau log [ɳ]= log K + a log M (3)

## HASIL DAN PEMBAHASAN Isolasi kitin dari limbah kepiting rajungan.
Proses  isolasi  kitin  dari  limbah  kepiting rajungan  ( Portunus  sanginolentus )  diperoleh  melalui tiga  tahap yaitu  tahap  penghilangan  protein (deproteinasi),  pada  tahap  ini  secara  visual  terjadi perubahan  warna  pada  serbuk  cangkang  kepiting rajungan  yang  awalnya  berwarna  kecoklatan  menjadi kuning  kecoklatan.  Selanjutnya  tahap  penghilangan mineral  (demineralisasi)  ditandai  dengan  perubahan warna menjadi putih kecoklatan.
Tahap  terakhir  yaitu  penghilangan  zat  warna (depigmentasi)  warna  yang  terbentuk  lebih  putih. Dari  hasil  isolasi  kitin,  dapat  diketahui  komponen- komponen  kimia  yang  terkandung  dalam  limbah kepiting  rajungan  ( Portunus  sanginolentus )  yang ditunjukkan  pada Tabel 1.
Gambar 3. Spektrum  FT-IR kitin hasil
Tabel 1. Komponen dalam limbah kepiting rajungan Kandungan Bobot (g) % Protein 26,67 6,66 Mineral 220,11 58.95 Zat warna 27,31 17,82 Kitin 125,91 16,57
Hasil  isolasi  kitin  yang  diperoleh  selanjutnya dikarakterisasi  gugus fungsinya dengan menggunakan spektrofotometer  FT-IR,  yang  diperlihatkan  pada Gambar  3.  Spektra  FT-IR  kitin  memperlihatkan beberapa  pola  serapan  antara  lain  serapan  yang muncul  pada  3109,25  cm -1 merupakan   serapan  dari gugus  hidroksil,  serapan  pada  1681,55  cm -1 adalah vibrasi bending –N-H.  Menurut  Kusumaningsih dkk.,2004  serapan  yang  merupakan  ciri  khas  dari kitin  yaitu  gugus  –N-H  dalam  –NH-CO-  (gugus amina  yang  terasetilasi).  Gugus  metil  (CH 3 )  muncul pada  daerah  1311,59  – 1371,39  cm -1 .  Serapan  gugus amina  kitin  pada  3100,00  -1371,39  cm -1 ,  serapan 2829,57  –  2  879,72 cm -1 dari  vibrasi streaching –CH alifatik  yang  menyatu    dengan  pita  serapan  ulur  – OH.  Adanya  pita  serapan  pada  1004,51  –  1255,66 cm -1 menunjukkan  vibrasi  –C-O  dari  cincin  kitin sedangkan  serapan –CH 2 muncul pada 1450  cm -1 .
Tabel 2. Daerah serapan gugus fungsi hasil analisa
FT-IR dari kitin hasil isolasi Gugus fungsi Bilangan gelombangan (cm -1 ) OH 3109,25 CH alifatik 2829,57-2879,72 C=O 1681,93 CH 2 1450 CH 3 1311,59-1371,39 C-O 1004,91-1255,66 N-H (stretching) 3100,00-3631,96 N-H (binding) 1556,55
Proses deasetilasi  kitin menghasilkan  kitosan .
Transformasi  kitin  menjadi  kitosan  dilakukan dengan  proses  penghilangan  gugus  asetil  dari  kitin menjadi  amina  pada  kitosan  yang  dikenal  dengan proses  deasetilasi.  Pada  penelitian  ini,  proses deasetilasi  dilakukan  dengan    cara  hidrolisis    gugus asetoamida  oleh  basa  kuat  NaOH  0%  dan  NaBH 4 pada  suhu  110 o C.  Kondisi  ini  digunakan  karena struktur sel-sel kitin kuat. Menurut Chang dkk. (1997) tingkat  deasetilasi    meningkat  dengan  meningkatnya
suhu    atau    konsentrasi  NaOH.    Kitosan  hasil deasetilasi kitin dapat ditunjukkan pada Gambar 4.
Gambar 4. Kitosan hasil deasetilasi  kitin
Kitosan yang diperoleh dari proses deasetilasi kitin  sebesar 16,67 g (66,68%)  selanjutnya dianalisis  gugus  fungsinya    dengan  menggunakan spektrofotometer  FT-IR.  Hasil  karakterisasi  FT-IR kitosan  tidak  berbeda  jauh    dengan  kitin.  Perbedaan yang  terjadi  setelah proses deasetilasi  adalah pergeseran  spektrum  serapan  kitin  pada  gugus  C=O pada  daerah  1681,93  cm -1 yang  muncul  sebagai  pita serapan  baru  pada  daerah  1691,57  cm -1 dan  pita serapan  N-H  dalam    bidang    CO-N-H  pada  1556,55 cm -1 muncul    pada  spektrum  kitosan  pada  serapan 1583,56  cm -1 .  Masih  adanya  serapan  gugus  karbonil pada  daerah  1691,57  cm -1 menunjukan sampel belum sepenuhnya  terdeasetilasi.  Hal  ini  disebabkan  karena proses  deasetilasi  yang  dilakukan  belum  mencapai waktu dan  suhu maksimum. Menurut Ramadhan dkk., (2010) proses deasetilasi kitin secara bertahap dengan peningkatan  waktu  dan  suhu  dapat  meningkatkan derajat  deasetilasi  karena  faktor  morfologi  rantai kitin  pada  gugus  asetamidanya  semakin  berkurang. Hasil  spektrum  FT- IR  kitosan  dapat  dianalisa  gugus fungsinya  seperti yang ditampilkan  pada Tabel 3.
Tabel 3. Beberapa  daerah serapan gugus fungsi hasil
analisa FT-IR kitosan Gugus fungsi Bilangan gelombangan (cm -1 ) OH 3039,81 CH alifatik 2823,79-2997,38 C=O 1691,57 CH 2 1413,82-1483,26 C-O 1151,50-1294,24 CH 3 1325,1 N-H (binding) 1583,56

## Derajat deasetilasi berdasarkan metode UV-Vis.
Kitosan  hasil  deasetilasi  dari  kitin  isolasi  dibagi menjadi    4  sampel  yaitu  K1,  K2,  K3,  dan  K4  untuk masing-masing  sampel dilarutkan dengan HCl 0,1 M.
Kemudian  hasil  sampel  kitosan  diuji  absorbansinya dengan spekrofotometer UV-Vis. Penentuan DD  pada studi  ini  diperoleh  sebesar  93,99%  terdapat  pada sampel K4. Perbedaan besarnya derajat deasetilasi ini disebabkan  kerena  pada  proses  deasetilasi    kitin menjadi  kitosan,  dilakukan  dengan  penambahan NaBH 4 dan  dilakukan  dua  kali  pengulangan.  Oleh karena  itu  kondisi  terbaik  dari  karakterisasi    kitosan didapat  dengan  menggunakan  suatu  larutan  NaBH 4 dalam  NaOH  yang  berfungsi  sebagai  reduktor  dalam menyumbangkan  H + pada  proses  reaksi    deasetilasi menjadi  kitosan    (Rinaudo,    2006,  Mohammed  dkk., 2013;  Gyliene  dkk.,  2003).  Perbedaan  kitin  dan kitosan  terletak  pada  besarnya  derajat  deasetilasi. Kitosan  memiliki    derajat    deasetilasi    antara    70- 100%  (Kusumaningsih  dkk., 2004;  Khan,  2002). Rendamen  dari    hasil    penelitian  ini,  menunjukan sudah hampir sepenuhnya merupakan kitosan. Derajat deasetilasi  dari kitosan dapat dilihat pada Tabel 4 .
Tabel. 4. Derajat deasetilasi dari kitosan hasil isolasi
Kitosan Derajat deasetilasi (%) K1 93,02 K2 92,05 K3 93,15 K4 93,99 Tabel 5 . Bobot molekul kitosan hasil isolasi dari limbah cangkang  kepiting rajungan Kitosan Berat molekul (g/mol) K1 3,9 x 10 6 K2 4,3 x 10 6 K3 3,44 x 10 6 K4 3,47 x 10 6

## Bobot  molekul  (BM)  kitosan
Selain  DD  salah  satu  karakteristik  kitosan  yang paling  penting  adalah  BM.  Pada  penelitian  ini,   berat molekul  terbaik  diperoleh  pada  K4 sebesar  3,47x10 6 . Hal  ini  disebabkan  karena  adanya  penambahan NaBH 4 dan  dua  kali  pengulangan  pada  deasetilasi kitin  menjadi  kitosan.  Bobot  molekul  kitosan  dapat ditentukan  dengan  menggunakan  metode  viskositas dan hasilnya  dapat  dilihat  pada Tabel 5.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  ini,  menunjukkan  bahwa penambahan  0,75  g  NaBH 4 dalam  25  g  kitin menghasilkan    kitosan    yang  memiliki    derajat
deasetilasi    sebesar  93,99%  dengan  nilai  bobot molekul  yaitu 3,47 x 10 6 g/mol.

## DAFTAR PUSTAKA
Adriana,   A.  A.  Mudjijati.,   Selvy  Elvira   dan  Vera Setijawati.,    2001.    Adsorpsi    Co(VI)  dengan Adsorban  Kitosan, J. Kimia  Lingkungan, 3, 31-
36.
Agustina,   S.,  Swantara,   I.M.D.,  dan Suartha,  I.N., 2015.  Isolasi   Kitin,  Karakterisasi   Dan Sintesis Kitosan  Dari  Kulit  Udang, J.  Kimia 9  (2),  271- 278.
Ali-Komi,  D.E., and   Hamblin,  M.  R.,  2016.  Chitin and  Chitosan:  Production  and  Application  of Versatile Biomedical Nanomaterials, Int. J.  Adv.
Res. (Indore) ., 4(3): 411–427.
Chang  K.L.B.,  Tsai  G.,  Lee  J.,  and  Fu  W.R.,  1997. Heterogeneous N -deacetylation  of  Chitin  In Alkaline  Solution, Carbohyd.  Res .,  303,  327– 332.
Mohammed,  M.H.  Peter  A.W.,  Olga  T.,  2013.
Extraction  of  Chitin  From  Prawn  Shells  and Conversion  To  Low  Molecular  Mass  Chitosan, Food Hydrocolloids , 31(2),166-171.
Gyliene,  O.,  Razmute,  I.,  Tarozoute,  R.  and Nivinskiene,  O.,  2003.  Chemical  Composition and  Sorption  Properties  of  Chitosan  Produced From  Fly  Larva  Shells,  C hemija (Villnius) ,  T. 14 Nr. 3. 121-127
Khan,  T.A.,  Peh,  K.K.,  and  Ching,  H.S.,  2002. Reporting  Degree  of  Deacetylation  Values  of Chitosan:  The  Influence  of  Analytical  Methods,
Pharmaceut  Sci, 205-212.
Kumar,   M.N.V.R,   2000.  A  review  on  Chitin  and Chitosan    Applications, Reactive    and Func. Poly, 46 : 1-27
Kusumaningsih,  T.,  Suryanti,V  dan  Permana,  W.,
2004.  Karakterisasi  Kitosan  Hasil  Deasetilasi Kitin   dari   Cangkang   Kerang   Hijau (Mytilus viridis   linneaus) , Alchemy , 3, 63-71
Liu,  D.,  Wei,  Y.,  Yoa,  P.,  Y  and  Jiang,  L.,  2006. Determination of The Degree of The Acetylation of Chitosan By Uv Spectrofotometry Using Dual Standards, Carbohydrate  Research ,  341,  782- 785.
Ramadhan, L.O.A.N.,   Wahyuningrum,   D.,   Suendo, V.,    Radiman,    L.C.,  dan  Ahmad,    L.O.,  2010. Deasetilasi    Kitin    secara    Bertahap    dan Pengaruhnya   terhadap   Derajat Deasetilasi  serta Massa  Molekul  Kitosan, J.  Kimia  Indo. 5  (1), 17-21.
Rinaudo,  M.,  2006.  Chitin  and  Chitosan:  Properties and  Applications, Progress  in  Poly.  Sci .,  31(7),
603-632.
Sarni,  2017.  Toksisitas  Oligomer  Kitosan  Derajat Deasetilasi  Rendah  Enzimatis  Menggunakan Metode  Brine  Srimp  Lethality  Test  (BSLT),
Indo. J. Chem. Res., 4(2), 373-377.
Sartika,   I.  D., Alamsjah, M.. Amin., Sugijanto, N.E.
N.,  2016.  Isolasi  dan  Karakterisasi  Kitosan  dari Cangkang  Rajungan (Portunus  pelagicus),  J. Biosains, 18(2), 1-15.
Tanasale,  M.  F.J.D.P.,    Telussa,  I.,  Sekewael,  S.  J., 2016.  Ekstraksi  Dan  Karakterisasi  Kitosan  Dari Kulit  Udang  Windu  (Penaeus  monodon)  Serta Proses Depolimerisasi Kitosan Dengan Hidrogen Peroksida Berdasarkan Variasi Suhu Pemanasan, Indo. J. Chem. Res. , 3(2), 308-318.
Tanasale,  M.  F.J.D.P.,  Bandjar,  A.,  Sewit,  N.,  2018.
Isolasi  Kitosan  Dari  Tudung  Jamur  Merang (Vollvariella Volvaceae) Dan Aplikasinya Sebagai  Absorben  Logam  Timbal  (Pb), Indo.  J.
Chem. Res. , 6(1), 44-50.
Teli,  M.D.,  Sheikh,  J.,  2012.  Extraction  of  Chitosan from  Shrimp  Shells  Waste  and  Application  In Antibacterial Finishing of Bamboo Rayon, Inter. J. Biological Macromolecules , 50(5), 1195-1200.