Uji Aktivitas Antibakteri Propionibacterium acnes Ekstrak Etanol dan Fraksi Daun Karuk ( Piper sarmetosum Roxb. Ex. Hunter) serta Analisis KLT Bioautografi
Anisa Dwi Nuraeni * , Reza Abdul Kodir
Prodi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Islam Bandung, Indonesia.
* anisanuraeni82@yahoo.com, reza.abdul.kodir@gmail.com.
Abstract. Karuk  ( Piper  sarmetosum Roxb.  Ex.  Hunter)  is  a  plant  that  is considered  to  have  antibacterial activity.  Acne  is  a  problem  in  the  skin  caused  by  the  bacteria Propionibacterium  acnes .  This  research’s aimed to determine the potential antibacterial activity of ethanol extracts and karuk leaf’s fractions, and can find  out  the  class  of  chemical  compounds  contained  from  the  ethanol  extract  and  the  fraction  of  karuk leaves which have antibacterial activity. Karuk leaf was extracted by maceration method using 96% ethanol solvent,  followed  by  fractionation  using  the  liquid-liquid  extraction  method  with  n-hexane,  ethyl  acetate, and  water  solvents.  Antibacterial  activity  test  of  ethanol  extract  and  fraction  with  a  concentration  of  2%, 4%,  6%,  and  8%  using  the  well  diffusion  agar  method.  To  identify  the  class  of  compounds  that  have antibacterial  activity,  the  TLC  Bioautography  method  is  used.  From  the  results  of  research  that  has  been done  shows  that  ethanol  extract and n-hexane  fraction can  inhibit  the  growth  of  Propionibacterium acnes with the highest inhibitory diameter of 10.11mm in the extract, and in the n-hexane fraction of 10.93 mm. in  the  ethyl  acetate  fraction  and  the  water  fraction  there  is  no  inhibitory  zone  formed  so  that  it  cannot provide antibacterial activity. The TLC Bioautography results did not show any inhibitory zones and there was  no  change  in  color  when  given  a  spotting  viewer.  So  that  compounds  cannot  be  identified  that  have antibacterial activity
Keywords: Karuk leaf , Propionibacterium acnes , Bioautography TLC
Abstrak. Karuk  ( Piper  sarmetosum Roxb.  Ex.  Hunter)  merupakan  tanaman  yang  diketahui  memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri.  Jerawat  merupakan  permasalahan  pada  kulit  disebabkan  adanya  bakteri Propionibacterium  acnes.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  potensi  aktivitas  antibakteri  dari ekstrak etanol dan fraksi daun karuk, serta dapat mengetahui golongan senyawa kimia yang terkandung dari hasil  ekstrak  etanol  dan  fraksi  daun  karuk  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri.  Daun  karuk  diekstraksi dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%,  dilanjutkan  dengan  fraksinasi  menggunakan metode  ekstraksi  cair-cair  dengan  pelarut  n-heksan,  etil  asetat,  dan  air.  Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol  dan  fraksi  dengan  konsentrasi  2%,  4%,  6%,  dan  8%  menggunakan  metode  difusi  sumuran  agar. Untuk mengetahui golongan senyawa yang memiliki aktivitas sebagai antibakteri digunakan metode KLT Bioautografi.  Dari  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  dan  fraksi  n- heksan  dapat  menghambat  pertumbuhan  Propionibacterium  acnes  dengan  diameter  hambat  tertinggi 10,11mm  pada  ekstrak,  dan  pada  fraksi  n-heksan  10,93  mm.    pada  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air  tidak terbentuk  adanya  zona  hambat  sehingga  tidak dapat  memberikan aktivitas  sebagai  antibakteri.  Hasil  KLT Bioautografi tidak menunjukan adanya zona hambat serta tidak terdapat perubahan warna ketika diberikan penampak bercak. Sehingga tidak dapat teridentifikasi senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri.
Kata Kunci: Daun karuk , Propionibacterium acnes , KLT Bioautografi

## A. Pendahuluan
Masa  remaja  merupakan  masa  dimana  berlangsungnya  proses  perubahan  dari  anak–anak menjadi  dewasa,  perubahan  tersebut  dipengaruhi  salah  satunya  karena  hormonal. Ketidakseimbangan  hormon  di  dalam  tubuh  dapat  menyebabkan  masalah  pada  kulit,  masalah yang banyak terjadi pada remaja adalah munculnya jerawat. Jerawat merupakan suatu penyakit kulit  akibat  adanya  peradangan  kelenjar  sebasea  yang  berkaitan  dengan  folikel  rambut  atau disebut juga pilosebasea.  Jerawat dapat terjadi pada umur sekitar 14  – 17 tahun pada wanita, 16  –  19  tahun  pada  pria  yang  ditandai  dengan  adanya  komedo,  papul,  pustul  dan  nodul (Djuanda,1999:232).
Faktor penyebab terjadinya jerawat diantaranya faktor genetik, hormonal, atau adanya infeksi  bakteri.  Bakteri  penyebab  jerawat  diantaranya  bakteri Propionibacterium  acnes dan Staphylococcus epidermidis .
Pengobatan  untuk  jerawat  diperlukan  waktu  yang  lama  sehingga  penggunaan  obat kimia    dalam  jangka  waktu  lama  dapat  menimbulkan  efek  samping  seperti  iritasi  kulit, resistensi terhadap antibiotik, serta dapat menimbulkan kerusakan organ (Swanson,2003:359). Maka  untuk  mengurangi  efek  samping  dari  penggunaan  obat  kimia  perlu  dikembangkan pengobatan  alternatif  menggunakan  tumbuhan  herbal  yang  memiliki  aktivitas  sebagai  anti bakteri. Salah satu tanaman yang berfungsi sebagai anti bakteri adalah Piper sarmetosum atau yang lebih dikenal sebagai karuk.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  adanya  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak etanol  dan  fraksi  daun  karuk  terhadap  Propionibacterium  acnes.  Dapat  mengetahui  golongan senyawa  kimia  yang  terkandung  dari  hasil  fraksi  ekstrak  daun  karuk  yang  memiliki  aktivitas antibakteri dengan menggunakan KLT bioautografi.

## B. Landasan Teori
Piper  sarmetosum  Roxb.  Ex.  Hunter  merupakan  tanaman  herba  dari  suku  piperaceae  yang tersebar luas diseluruh selatan Asia timur (Taweechaisupapong,2010:224).
Gambar 1.1 Piper sarmetosum Roxb. Ex. Hunter
Klasifikasi tanaman karuk (Piper sarmetosum Roxb. Ex. Hunter) sebagai berikut: Divisi         : Magnoliophyta Kelas          : Magnoliopsida Anak kelas : Magnoliidae Bangsa        : Piperales Suku           : Piperaceae Marga         : Piper Jenis           : Piper sarmetosum Roxb. Ex. Hunter. Chavia sarmentosa Roxb. Ex Hunter Nama  lain    :  Karuk  atau  seserehan  (Sunda),  cabean  (Jawa),  kado  –  kado,  sirih  tanah (Maluku), amelun une (Ambon), gafu (Ternate) (Hutapea,J.R,1994:215;Cronquist,1981:105; Syamul, 2005:178). Di dalam tanaman karuk mengandung saponin, polifenol, flavonoid dan minyak atsiri. Kandungan karuk lainnya yaitu kalsium, kalium,  magnesium,  karoten, niasin, vitamin B1, B2 dan C serta dikenal sebagai antioksidan alami (Syamsul, 2005:178).
Propionibacterium  acnes  merupakan  kelompok  bakteri  gram  positif  yang  memiliki bentuk  seperti  batang  pleomorfik  yang  dapat  memfermentasi  gula  untuk  menghasilkan  asam propionat,  termasuk  kedalam  organisme  anaerobik.  Pertumbuhan  bakteri  Propionibacterium acnes membutuhkan waktu 7 hari pada suhu 35 – 37°C (Jappe, 2003:242).
Pembentukan  jerawat  diawali  dengan  penyumbatan  pada  kelenjar  pilosebasea.  Dalam jerawat  saluran  kelenjar  melebar  menyebabkan  sebum  bercampur  dengan  sel–sel  kulit  mati yang  berlebih sehingga  dapat  membentuk  sumbatan keratin.    Sebum  yang  terakumulasi  dapat menjadi sumber nutrisi bagi pertumbuhan Propionibacterium acnes sehingga memicu terjadinya inflamasi (Dipiro,2008:1529).
Metode bioautografi merupakan metode sederhana yang digunakan untuk menunjukkan adanya aktivitas antibakteri atau antijamur. Metode ini menggunakan teknik kromatografi lapis tipis  dengan  respon  mikroorganisme  yang  diuji  berdasarkan  aktivitas  biologi  dari  suatu  zat yang  diuji  berupa  bakteri,  jamur  dan  protozoa.  Bioautografi  dapat  digunakan  untuk  mencari senyawa  antibakteri  atau  antijamur  yang  terkandung  dalam  suatu  sampel  tumbuhan (Choma,2011:2684).
Keuntungan  metode  bioautografi  mudah  dilakukan,  cepat,  dapat  digunakan  untuk mengevaluasi senyawa dalam bentuk ekstrak yang masih kompleks.

## Metodologi Penelitian
Penelitian mengenai uji aktivitas antibakteri Propionibacterium acnes ekstrak etanol dan fraksi daun  karuk  dilakukan  di  Laboratorium  Riset  Universitas  Islam  Bandung.  Pada  tahap  pertama pengumpulan  bahan  dan  determinasi  tanaman.  Bahan  baku  yang  digunakan  yaitu  daun  karuk yang  diperoleh  dari  daerah  Cariu,  Cianjur,  Jawa  Barat.  Kemudian  dilakukan  determinasi tanaman  di  herbarium  Bandungese  sekolah  ilmu  dan  teknologi  hayati,  Institut  Teknologi Bandung (SITH, ITB)
Tahap  kedua  dilakukan  pembuatan  simplisia.  Tahap  ketiga  dilakukan  pembuatan ekstrak etanol daun karuk dengan metode maserasi, pelarut yang digunakan yaitu etanol 96%. Tahap  keempat  adalah  fraksinasi  terhadap  ekstrak  kental  etanol  96%  dengan  metode  ECC menggunakan  pelarut  n-heksan,etil  asetat,  air.  Tahap  kelima  dilakukkan  pengujian  aktivitas antibakteri. kemudian fraksinat dengan zona hambat paling tinggi dilakukan pemantauan KLT. Untuk  mendeteksi  senyawa  aktif  yang  mempunyai  aktivitas  sebagai  antibakteri  dilakukkan dengan metode bioautografi.

## C. Hasil Penelitian dan Pembahasan
Daun  karuk  segar  sebanyak  3,5  kg  dilkakukan  determinasi.  Tujuan  dilakuannya  determinasi yaitu untuk memastikan kebenaran bahan yang digunakan dalam penelitian. Hasil determinasi menunjukan  bahan  yang  digunakan  benar  merupakan  tanaman  dari  suku  piperaceae  dengan jenis Piper sarmentosa Roxb ex Hunter, dengan nama umum karuk atau cabean.
Ekstraksi dilakukan dengan cara dingin berdasarkan kandungan senyawa dalam bahan yang mengandung minyak atsiri sehingga untuk menjaga senyawa yang mudah menguap tidak rusak maka dipilih metode maserasi, prinsip dari maserasi yaitu perendaman simplisia dengan pelarut dapat menyebabkan terjadinya pemecahan dinding sel akibat adanya perbedaan tekanan antara  di  dalam  dan  luar  sel,  sehingga  senyawa  metabolit  sekunder  di  dalam  simplisa  akan terlarut dengan pelarutnya (Yulianti,2016:7). Pelarut yang digunakan yaitu etanol 96% karena dapat  menarik  senyawa  polar  maupun  non  polar  Rendemen  ekstrak  yang  diperoleh  yaitu 22,394%.
Fraksinasi  dilakukan  dengan  metode  ekstraksi  cair-  cair  dengan  tujuan  untuk memisahkan  senyawa  berdasarkan  tingkat  kepolarannya.  Pelarut  yang  digunakan  n-heksan untuk  melarutkan  senyawa  non  polar,  etil  asetat  untuk  melarutkan  senyawa  semi  polar,  air untuk  senyawa  polar.  Prinsip  dari  fraksinasi  yaitu  penarikan  senyawa  dengan  menggunakan pelarut  yang  tidak  bercampur,  pada  fraksinasi  dilakukan  proses  penggojogan  searah  dan konstan untuk memaksimalkan penarikan senyawa.
Penapisan fitokimia  merupakan suatu cara evaluasi untuk  mendeteksi  senyawa kimia yang  terkandung  di  dalam  tanaman.  Golongan  senyawa  ini  merupakan  kelompok  metabolit
sekunder  yang dapat memberikan efek farmakologi (Dash, 2016:38).
Tabel 1. Hasil Penapisan Fitokimia Simplisia dan Ekstrak Daun Karuk
Keterangan: (+) = Terdeteksi (-) = Tidak Terdeteksi
Hasil  yang  diperoleh  dari  penapisan  fitokimia  pada  simplisia  dan  ekstrak  terdapat senyawa alkaloid, flavonoid, kuinon, saponin, polifenolat, steroid dan monoterpenoid. Senyawa tanin tidak terdeteksi kemungkinan terjadi akibat dipengaruhi oleh pH tanah, karena pH tanah yang rendah atau asam dapat mengurangi produksi tanin oleh tanaman (Ridha,2014:17).
Simplisia dan ekstrak selanjutnya dilakukan penetapan parameter standar yang terbagi menjadi  dua  parameter,  yaitu  parameter  standar  spesifik  dan  parameter  standar  non  spesifik. Penetapan  parameter  standar  ini  bertujuan  untuk  menjamin  keseragaman  mutu  simplisia  dan keamanan bahan dalam memberikan efek farmakologi (Patel,2011:1152).
Tabel 2. Penetapan parameter standar
Pemeriksaan  organoleptis  merupakan  tahapan  yang  bertujuan  untuk  mengenali simplisia dan ekstrak dengan menggunakan panca indera (Yuri,2017:35).
Penetapan kadar sari larut air dan larut etanol bertujuan untuk  mengetahui kandungan senyawa  awal yang terlarut dengan perbedaan polaritas pelarut, pelarut yang digunakan yaitu campuran  antara  aquadest  dengan  kloroform,  kegunaan  kloroform  yaitu  untuk  mencegah tumbuhnya mikroba pada saat bahan di maserasi (Rizka,2018:81). Hasil yang diperoleh rata  – rata  pada  kadar  sari  larut  air  yaitu  20,64%  sedangkan  kadar  sari  larut  etanol  20,00%,  hal tersebut  menandakan  bahwa  kemampuan  senyawa  melarut  di  dalam  air  lebih  tinggi dibandingkan pada etanol.
Hasil  pengujian  susut  pengeringan  yang  diperoleh  yaitu  11,754%.  Hasil  susut pengeringan lebih besar dibandingkan dengan kadar air karena pada susut pengeringan terdapat senyawa lain yang mudah menguap selain air.
Kadar  abu  merupakan  zat  anorganik  sisa  hasil  pembakaran,  kadar  abu  berhubungan dengan  kemurnian  suatu  bahan,  kandungan  mineral  dan  keamanan  bahan.  Pengukuran  kadar abu bertujuan untuk mengetahui kandungan mineral internal dan eksternal (Sandjaja,2009:107). Nilai abu total yang diperoleh yaitu 12,132%. Tingginya kadar abu total menunjukan semakin tinggi  kandungan  mineral  di  dalam  nya.  Kadar  abu  tidak  larut  asam  menggambarkan terdapatnya kandungan logam yang tidak larut asam, adanya kontaminasi mineral. Nilai kadar
abu  tidak  larut  asam  yaitu  1,543%  hasil  tersebut  cukup  besar,  pada  (Kemenkes  RI,2010:107) mengatakan abu tidak larut asam tidak lebih dari 1,1%, kemungkinan karena faktor lingkungan, pada  bahan    terdapat  tanah,  kerikil  yang  masih  menempel  sehingga  mempengaruhi  hasil pengujian.
Parameter  standar  ekstrak  dilakukan  pengujian  bobot  jenis.  Penetapan  bobot  jenis dilakukan  untuk  menentukan  kerapatan  ekstrak  sehingga  memberikan  batasan  ukuran  massa per  satuan  volume,  bobot  berhubungan  kemurnian  dan  ekstrak  (Sholihah,2018:17).  Pengujian bobot  jenis  menggunakan  piknometer  dengan  melarutkan  ekstrak,  hasil  bobot  jenis  ekstrak yang diperoleh sebesar 1,045.
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan  dengan  difusi  agar  metode  sumuran  karena dapat menampung konsentrasi lebih tinggi dibandingkan  metode cakram sehingga lebih cepat berdifusi  pada  media  Uji  aktivitas  antibakteri  terhadap  Propionibacterium  acnes  dilakukan menggunakan  4  larutan  uji  meliputi,  ekstrak  etanol  daun  karuk,  fraksi  n-heksan,  fraksi  etil asetat dan fraksi air dengan konsentrasi  2%, 4%, 6%, 8%,. Sebagai kontol negatif digunakan etanol 96%, klindamisin digunakan sebagai kontrol positif.
Tabel 3. Hasil uji aktivitas antibakteri
Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas  pada  fraksi  n-heksan  menunjukan  zona  hambat  yang terbentuk  lebih  baik  dibandingkan  pada  ekstrak  etanol,  karena  pada  ekstrak  etanol  senyawa yang  terbentuk  masih  dalam  gabungan  senyawa,  maka  daya  difusi  dari  ekstrak  akan  lambat karena  gabungan  senyawa  tersebut  dapat  menutupi  atau  menghalangi  aktivitas  antibakteri. Sedangkan pada fraksi n-heksan kandungan senyawa yang dihasilkan dalam bentuk campuran senyawa yang lebih sederhana dengan sifat non polar, seperti golongan monoterpen, alkaloid. Efek  yang  dihasilkan  dari  adanya  pemisahan  senyawa  berdasarkan  perbedaan  kepolaran memiliki  hasil  yang  lebih  baik  dibandingkan  dengan  efek  komplementer  pada  ekstrak (Yulianti,2016:7).
Menurut Davis (1971) termasuk kategori sedang apabila diameter yang dihasilkan 5-10 mm,  maka  uji  aktivitas  dari  ekstrak  dan  fraksi  n-heksan  memiliki  kategori  sedang,  dengan diameter  zona  hambat  tertinggi  pada  konsentrasi  8%  pada  sampel  ekstrak  etanol  dengan diameter 10,11 mm dan 10,93 pada fraksi n-heksan,
Pada  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air  tidak  terlihat  adanya  zona  hambat,  hal  tersebut terjadi karena kurang  mampu nya sampel berdifusi dengan baik pada media. Karena senyawa yang  tertarik  pada  pelarut  etil  asetat  dan  air  lebih  kecil  sehingga  tidak  dapat  mengambat pertumbuhan Propionibacterium acnes (Isti,2018:105).
Fraksi  n-heksan  dipilih  untuk  dilakukan  analisis  senyawa  antibakteri  dengan  metode kromatografi  lapis  tipis  bioautografi.  Fase  gerak  yang  digunakan  untuk  fraksi  n-heksan  yaitu kloroform:etil asetat (2:1), Hasil KLT diamati dibawah lampu UV 366, spot pertama teramati pada Rf 0,27, spot kedua dengan nilai Rf 0,68.
(a) (b)
Gambar 1. pemantauan KLT fraksi n-heksan dengan fase diam silica gel GF254 dan fase gerak kloroform: etil asetat (2:1). (a) pengamatan dibawah sinar tampak, (b) pengamatan dibawah lampu uv 366 nm.
Pada metode bioautografi, senyawa antibakteri dari plat KLT akan berdifusi ke dalam media TSA yang telah berisi suspensi bakteri Propionibacterium acnes dan menghasilkan zona hambat.  Pada  fraksi  n-heksan  zona  hambat  pada  media  agar  tidak  terbentuk  zona  bening disekitar media yang telah ditempelkan plat KLT hasil elusi fraksi n-heksan, hal tersebut dapat terjadi karena konsentrasi senyawa yang terdapat pada plat KLT terlalu rendah sehingga tidak mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  (Mukhriani,2017:30).  Hasil  penelitian  setelah disemprotkan  penampak  bercak  pada  plat  KLT  yang  telah  di  totolkan  fraksi  n-heksan  tidak terjadi  perubahan  warna,  hal  tersebut  terjadi  karena  pereaksi  yang  digunakan  sudah  rusak karena penyimpanan yang terlalu lama.
Gambar 2. pengamatan KLT bioautografi

## D. Kesimpulan
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan pada ekstrak etanol dan fraksi n-heksan    memiliki  respon  hambatan  lemah  terhadap  aktivitas  Propionibacterium  acnes.  Pada konsentrasi  8%  dari  ekstrak  memberikan  hasil  diameter  10,11mm,  dan  pada  fraksi  n-heksan 10,93 mm. Pada pengujian KLT bioautografi hasil yang diperoleh tidak terbentuk zona bening serta  tidak  terdapat  perubahan  warna  ketika  diberikan  penampak  bercak.  Sehingga  belum teridentifikasi senyawa yang memiliki aktivitas antibakteri.

## E. Saran
Disarankan  untuk  melakukan  pengujian  KLT  biautografi  lainya  disertai  dengan  penampak bercak  yang  lebih  spesifik.  Disarankan  pula  melanjutkan  penelitian  ke  tahap  isolasi  untuk mengetahui senyawa yang berperan.

## Daftar Pustaka
[1]    Choma.  Irena  M.,  Edyta  M.  Grzelak.  (2011).  Bioautography  detection  in  thin  layer chromatography. Journal of chromatography A, 1218. Poland.
[2] Cronquist, A.,(1981). An Integrated System of Classification of Flowering Plants, Columbia University Press, New York.
[3] Dash, Pritesh Ranjan. (2016). Phytochemical screening and pharmacological investigations
on Hedychium coronarium, Hamburg, Anchor Academic Publising [4] Davis, W.W dan T. R Stout. (1971). Disc plate method of microbiological antibiotic assay. Applied microbiology.
[5] Dipiro. J.T. (2008). Pharmacoteraphy Handbook 7 th edition, Mc Graw Hill, New York.
[6]  Djuanda,A.  Hamzah,  M  dan  Aisah,  S.  (2009).  Ilmu  Penyakit  Kulit  dan  Kelamin.  Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia, Jakarta.
[7] Hutapea, J.R. dkk. (1994). Inventaris Tanaman Obat Indonesia (III), Depkes RI,Jakarta.
[8]  Indah  Solihah  et  all,  (2018).  Standardization  of  ethanol  extract  of  Tahongai  leaves (Kleinhovia hospita L). Science & technology Indonesia 14-18.
[9]  Kementrian  kesehatan  RI.  (2010).  Suplemen  I  farmakope  herbal  indonesia.  Jakarta. Direktorat jendral bina kefarmasian dan alat kesehatan
[10] Mukhriani, dkk. (2017). Uji aktivitas antibakteri fraksi etil asetat korteks kayu jati (Tectona grandis  L.F)  terhadap  beberapa  bakteri  uji.  Jurnal  kesehatan  fakultas  ilmu  kesehatan Universitas Islam Alaudin Makasar. Vol 5 no 1.
[11]  Patel  Parthik,  et  al.  (2011).  WHO  Guidlines  On  Quality  Control  of  Herbal  Medicines. International Journal of Research in Ayurveda&Pharmacy, 2(4).
[12]  Rizka  F  Lestari,  (2018).  Penetapan  parameter  standar  simplisia  dan  ekstrak  etanol  daun kratom  (Miragyna  speciosa  Korth)  yang  tumbuh  di  kabupaten  Kapuas  Hulu  dan kabupaten Melawi.
[13]  Sandjaja,  Atmarita,  (2009).  Kamus  gizi  pelengkap  kesehatan  keluarga.  Jakarta.  Penerbit kompas.
[14]  Swanson,  I.K.  (2003),  Antibiotik  Resistance  of  Propionibacterium  acnes  in Acne  vulgari. Dermatol Nurs, 15 (4).
[15]  Syamsul  Hidayat,  rodame.  M,  Napitulu.  (2005).  Kitab  tumbuhan  obat,  penebar  swadaya grup, Jakarta.
[16]  Uta  Jappe.  (2003).  Pathological  mechanism  of  acne  with  special  emphasis  on Propionibacterium acnes and related theraphy.  Departement of dermatology university of Heidelberg, Germany. Acta derm venereol 83.
[17]  Yulainti  Lestari.,  dkk.  (2016).  Aktivitas  antibakteri  gram  positif  dan  negatif  dari  ekstrak dan  fraksi  daun  nipah  (Nypa  fruticans  Wurmb.)  asal  pesisir  sungai  kakap  Kalimantan Barat. Jurnal kesehatan kefarmasian volume 5 (4). Universitas Tanjungpura.