Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat Dari Ekstrak Metanol

## Sargassum sp .

## Hafida Salma, Sri Sedjati, Ali Ridlo
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof.H.Soedarto S.H, Tembalang,Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail : hafidasalma21@gmail.com
ABSTRAK  : Sargassum sp.  adalah  salah  satu  jenis  rumput  laut  paling  banyak  di  Indonesia  dan memiliki  manfaat  sebagai  antioksidan,  obat  penyakit  jantung,  stroke,  dll.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  menentukan  kandungan  antioksidan  fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak  metanol Sargassum sp. Sampel  diambil  dari  Pantai  Sundak,  Gunung  Kidul,  Yogyakarta.  Metode  yang  digunakan  adalah eksploratif diskriptif. Sampel dikeringkan dalam suhu ruangan selama 7 hari dan dimaserasi dengan pelarut  metanol,  lalu  dievaporasi  dengan rotary  evaporator .  Ekstrak  metanol  di  fraksinasi menggunakan  etil  asetat.  Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  menggunakan  2 metode,  yaitu  metode  penangkapan  radikal  bebas  DPPH  dan  total  kapasitas  antioksidan fosfomolibdat. Vitamin C digunakan digunakan sebagai standar penangkapan radikal bebas DPPH dan  total  kapasitas  antioksidan  fosfomolibdat.  Kadar  total  fenolat  diuji  menggunakan  larutan Folin- Ciocalteu dengan standar asam galat. Hasil penelitian menunjukkan bahwa kadar total fenolat fraksi etil  asetat Sargassum sp.  sebesar  64,42  mg  GAE/g  sampel.  Aktivitas  antioksidan  dengan  metode penangkapan  radikal  bebas  DPPH  memiliki  nilai  IC 50 1.289  ppm,  vitamin  C  memiliki  IC 50 sebesar 122,71  ppm,  sedangkan  total  kapasitas  antioksidan  adalah  39,52  mg  AAE/g  sampel. Kesimpulannya,  yaitu  kandungan  aktivitas  antioksidan  fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak  metanol Sargassum sp.  dengan  metode  penangkapan  radikal  bebas  DPPH  diduga  sangat  lemah  dan kandungan aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode fosfomolibdat diduga tinggi.
Kata Kunci : Sargassum sp.; Antioksidan; DPPH; Total Kapasitas Antioksidan (TAC)
Antioxidant activity of ethyl acetate fraction from methanol extract of Sargassum sp.
ABSTRACT : Sargassum sp. is one of the many types of seaweed in Indonesia and has benefits as an  antioxidant,  a  drug  for  heart  disease,  stroke,  etc.  This  study  aims  to  determine  the  antioxidant content  of  ethyl  acetate  fraction  of  methanol  extract  of  Sargassum  sp.  Samples  were  taken  from Sundak, Gunung Kidul, Yogyakarta. The method used is descriptive explorative. Samples were dried at  room  temperature  for  7  days  and  macerated  with  methanol,  then  evaporated  at  a  rotary evaporator.  The  methanol  extract  fractionation  using  ethyl  acetate.  Testing  the  antioxidant  activity using  two  methods,  the  method  of  catching  free  radicals  DPPH  and  total  antioxidant  capacity fosfomolibdat.  Vitamin  C  is  used  as  a  standard  arrest  DPPH  free  radical  and  total  antioxidant capacity fosfomolibdat. Levels of total phenolics were tested using the Folin-Ciocalteu solution with gallic  acid  standard.  The  results  showed  that  levels  of  total  phenolic  fraction  of  ethyl  acetate Sargassum  sp.  amounting  to  64,42  mg  GAE/g  sample.  The  antioxidant  activity  with  catching  free radicals DPPH methods have IC 50 values 1.289 ppm, vitamin C has an IC 50 of 122,71 ppm, while the total antioxidant capacity was 39,52 mg AAE/g sample. In conclusion, the content of the antioxidant activity  of  ethyl  acetate  fraction  of  methanol  extract  of  Sargassum  sp.  with  catching  free  radicals DPPH methods allegedly extremely weak and the content of the antioxidant activity using methods fosfomolibdat predictably high.
Keywords : Sargassum sp.; antioxidant; DPPH; Total Antioxidant Capacity (TAC)

## PENDAHULUAN
Sargassum mengandung  senyawa  fenolat,  klorofil  a,  klorofil  c  dan  karoten  yang  berfungsi sebagai antioksidan. Zat antioksidan dalam Sargassum menjadi mekanisme pertahanan terhadap
stres  oksidatif  atau  keadaan  di  mana  jumlah  radikal  bebas  di  dalam  tubuh  melebihi  kapasitas tubuh untuk menetralkannya (Radhika et al ., 2013). Penyakit degeneratif telah menjadi penyebab kematian  terbesar  yang  tidak  terlepas  dari  pola  hidup  manusia.  Penyakit  degeneratif  muncul karena  adanya  kerusakan  sel  akibat  reaktivitas  senyawa  radikal  bebas  (Indriyawati,  2015).  Zat antioksidan  yang  mempengaruhi  radikal  bebas  memainkan  peran  penting  untuk  mencegah penyakit  degeneratif  seperti  kanker,  diabetes  mellitus  dan  komplikasinya,  penyakit  jantung, pembuluh dara dan stroke (Sudhakar et al ., 2013). Mekanismenya dengan memperlambat proses oksidasi,  menghentikan  rantai  reaksi  oksidatif  dengan  donasi  elektron,  atom  hidrogen  dan  adisi pada radikal peroksi sebelum atau sesudah terjadi oksidasi parsial (Cahyadi, 2008).
Manusia  dapat  memproduksi  antioksidan  dengan  sendiri  melalui  proses  kimia,  tetapi manusia tidak memiliki cadangan antioksidan dalam jumlah yang lebih, sehingga apabila terbentuk radikal  bebas  maka  tubuh  membutuhkan  antioksidan  eksogen  (antioksidan  yang  bersumber  dari luar tubuh), contohnya rumput laut yang merupakan cara alternatif untuk memproduksi antioksidan (Sayuti dan Yenrina, 2016). Penelitian antioksidan dalam fraksi etil asetat sudah banyak dilakukan antara  lain, Gracilaria verrucosa dari  Kabupaten  Mangkang,  Jawa  Tengah,  Semarang  memiliki nilai  IC 50 sebesar  172,67  ppm  (Widowati et  al .,  2014). Sargassum  crassifolium dari  Pantai  Batu Karas,  Ciamis  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  86,07  ppm.  Sehingga  diperlukan  penelitian  mengenai aktivitas antioksidan dalam fraksi etil asetat  dari ekstrak metanol Sargassum sp.  Berbagai upaya harus dilakukan demi memanfaatkan kelimpahan Sargassum yang ada di perairan Indonesia.

## MATERI DAN METODE
Rumput  laut  coklat Sargassum sp.  diambil,  kemudian  dicuci  dengan  air  mengalir  untuk menghilangkan  sedimen  dan  epifit  yang  menempel. Sargassum sp.  dikeringkan  tanpa  terkena sinar  matahari  langsung,  setelah kering  di  haluskan  sampai menjadi  serbuk  dan  di masukkan ke dalam plastik ziplock dengan diisi silika gel.
Ekstraksi  dengan  metanol  berdasarkan  metode  Podungge et  al. (2018),  yaitu:  serbuk Sargassum sp.  sebanyak  250 g  direndam  dalam  pelarut  metanol  sebanyak  350  ml  selama  3x24 jam  sampai  didapat  filtrat  dan  residu,  ekstrak  disaring  menggunakan  kertas  saring Whatman  no. 42 untuk mendapatkan filtrat. Residu diekstraksi kembali dengan pelarut yang sama sampai warna ekstraknya  bening.  Hasil  filtrat  dievaporasi  dengan rotary  evaporator pada  suhu  40 0 C  hingga diperoleh ekstrak kental dan dihitung persentase rendemen.
Rendemen%  = x 100%
Fraksinasi etil asetat dilakukan berdasarkan metode Al-Mola (2009), ekstrak Sargassum sp. ditambah  240  mL  metanol,  480  mL  kloroform,  dan  180  mL  akuabides,  kemudian  dihomogenkan dan  didiamkan  pada  suhu  ruang  selama  ±24  jam,  setelah  terbentuk  2  lapisan,  lapisan  kloroform yang berada di atas dipisahkan menggunakan corong pisah dan ditambahkan 300 mL etil asetat, lalu  didiamkan  selama  24  jam.  Lapisan  atas  yang  didapat,  yaitu  fraksi  etil  asetat  dipisahkan dengan corong pisah dan diuapkan dengan rotary evaporator, setelah itu di freeze dryer . Asam  galat  dibuat  dengan  seri  konsentrasi  5,  10,  15,  20  dan  25  ppm.  Kurva  asam  galat dibuat untuk menghitung kandungan senyawa fenolat dengan persamaan regresinya. Sebanyak 5 mg ekstrak ditimbang dan dilarutkan dalam 2 ml etanol p.a kemudian ditambahkan 5 ml akuades dan  0,5  ml  reagen Folin –Ciocalteu 50%  dan  diinkubasi  selama  5  menit  dan  selanjutnya ditambahkan Na 2 CO 3 5% sebanyak 1 ml. Larutan dihomogenkan dan diinkubasi pada kondisi yang gelap selama 1 jam. Absorbansi diukur pada panjang gelombang 517 nm. Nilai total fenolat yang didapatkan  dinyatakan  dalam  mg Galic  Acid  Equivalent (GAE)/g  sampel  dengan  rumus perhitungan sebagai berikut (Yangthong et al ., 2009):
Keterangan : a :Konsentrasi asam galat dalam sampel uji (mg/L); V :Volume total larutan uji (mL); G :Berat ekstrak yang digunakan (g); 1000   :Faktor konversi terhadap volume total larutan (mL)
Ekstrak dengan konsentrasi (25, 50, 100 dan 200 ppm) diambil sebanyak 0,2 ml, kemudian dimasukkan kedalam tabung reaksi yang sudah dibungkus alumunium foil, kemudian ditambahkan 4 ml larutan DPPH. Larutan dikocok sampai homogen dan dibiarkan selama 30 menit dalam suhu ruang.  Absorbansinya  diukur  pada  panjang  gelombang  517  nm  menggunakan  spektrofotometer UV-Visible.  Nilai  persentase  inhibisi  (penghambatan)  yang  diwakili  oleh  nilai  %  inhibisi  dihitung dengan rumus, sebagai berikut: (Banerjee et al ., 2005).
Inhibisi= x100
Nilai  IC 50 dihitung  dengan  menggunakan  rumus,  yaitu  dengan  memasukkan  persamaan regresi yang diperoleh dari hasil grafik histogram. Kapasitas antioksidan dapat ditentukan dengan menggunakan  metode  fosfomolibdat  dengan  kurva  standar  asam  askorbat  atau  Vit.  C  dengan konsentrasi 25, 50, 75, 100 dan 150 ppm.
Fraksi  etil  asetat Sargassum sp.  di  timbang  sebanyak  0,023  g  dan  di  campur  dengan pelarut  metanol  sebanyak  25  ml,  kemudian  dibuat  3  ml  reagen  (berupa  campuran  0,6  M  asam sulfat, 28 mM natrium fosfat dan 4 mM amonium molibdat dengan perbandingan 150:7:1), setelah reagen tercampur kemudian dihomogenkan dengan fraksi etil asetat Sargassum sp. dan diinkubasi selama 90 menit pada suhu 5˚C, setelah campuran didinginkan lalu di vortex , absorbansi dibaca menggunakan spektofotometer pada panjang gelombang 695 nm. Nilai total kapasitas antioksidan yang di dapatkan dinyatakan dalam mg Ascorbic Acid Equivalent (AAE)/g sampel, total kapasitas antioksidan dapat dihitung dengan rumus, sebagai berikut: Patel et al ., (2016).
Total Kapasitas Antioksidan =
Keterangan : a :Konsentrasi Vit. C dalam sampel uji (mg/L); V  :Volume total larutan uji (mL); G  : Berat ekstrak yang digunakan (g); 1000   :Faktor konversi terhadap volume total larutan (mL)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kandungan Total Fenolat Fraksi Etil Asetat dari Ekstrak Metanol Sargassum sp. Kandungan  total  fenolat  fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak  metanol Sargassum sp.  mempunyai nilai  sebesar  64,42  mg  GAE/g  sampel.  Pengukuran  total  fenolat  fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak metanol  Sargassum  sp.  didasarkan  pada  kurva  standar  menggunakan  asam  galat.  Asam  galat dijadikan sebagai pembanding dalam uji total fenol karena pada umumnya tumbuhan mengandung asam  galat.  Dilihat  dari  hasil  absorbansi  ekstrak  maka  diperoleh  hasil  total  kandungan  fenolat, yaitu sebesar 64,42 mg GAE/g sampel termasuk tinggi bila dibandingkan dengan penelitan Sedjati et al ., (2017), sebesar 57,97 mg GAE/g kandungan totalnya lebih rendah. Kandungan fenolat yang tinggi  berarti  menunjukkan  adanya  aktivitas  antioksidan  yang  tinggi,  dan  sebaliknya  jika kandungan  fenolat  rendah  berarti  menunjukkan  bahwa  rumput  laut  tersebut  memiliki  potensi fenolat yang rendah juga.
Ekstrak  etil  asetat  dapat  menghasilkan  kandungan  fenolat  paling  tinggi,  dimana  etil  asetat lebih  efektif  melarutkan  senyawa  fenolat  daripada  metanol  dan  n –heksan.  Etil  asetat merupakan salah  satu  pelarut  yang  sering  digunakan  untuk  mengekstrak  senyawa  fenolat  (Mardawati et  al ., 2008). Nilai total fenolat memiliki peran yang penting terhadap aktivitas antioksidan dan ekstrak etil asetat memiliki kemampuan aktivitas antioksidan yang kuat (Widowati et al., 2014).

## Aktivitas Antioksidan Penangkapan Radikal Bebas DPPH
Hasil  kandungan  aktivitas  antioksidan  penangkapan  radikal  bebas  DPPH  yang  diperoleh pada penelitian ini, yaitu IC 50 sebesar 1.289 ppm yang termasuk sangat lemah bila dibandingkan dengan  penelitian  (Widowati et  al., 2014), Gracilaria  verrucosa dari  Kabupaten  Mangkang,  Jawa
Tengah, Semarang memiliki  nilai IC 50 sebesar 172,67 ppm yang tergolong tinggi. Hasil IC 50 pada kontrol  positif  yang  digunakan  dalam  pengujian  aktivitas  antioksidan  ini  menggunakan  standar asam  askorbat  atau  vitamin  C,  yaitu  sebesar  122,71  ppm.  Suatu  senyawa  dikatakan  sebagai antioksidan sangat kuat jika nilai IC 50 kurang dari 50 ppm dan sangat lemah jika nilai IC 50 lebih dari 200 ppm (Sandhiutami et al., 2010). Lemahnya kandungan antioksidan dalam fraksi etil asetat dari ekstrak  metanol Sargassum sp.  ini  bisa  diakibatkan karena  suhu saat  proses  pengeringan  dapat menyebabkan kandungan antioksidan berkurang.
Rendahnya  antioksidan  dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  lainnya,  seperti  zat pengotor, parameter lingkungan lokasi pengambilan sampel dan jenis sampel, seperti kedalaman, suhu  dan  salinitas  cahaya  matahari  akan  mempengaruhi  kandungan  antioksidannya.  Proses biosintesis  senyawa  antioksidan  akan  menghasilkan  senyawa  yang  optimal  apabila  kondisi lingkungan juga mendukung (Wikanta et al., 2005).
Gambar 1. Grafik Standar Asam Galat
Gambar 2. Grafik % Inhibisi Standar Vit. C
Gambar 3. % Inhibisi Fraksi Etil Asetat dari Ekstrak Metanol Sargassum sp.
Journal of Marine Research Vol.8, No.1 Februari 2019, pp. 41-46

## Uji Total Kapasitas Antioksidan Menggunakan Metode Fosfomolibdat
Total  kapasitas  antioksidan  fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak  metanol Sargassum sp.  sebesar 39,52  mg  AAE/g  sampel,  seperti  yang  dilakukan  oleh  Rode  dan  Sabale  (2018)  dengan  total kapasitas antioksidan sebesar 0,31 mg AAE/g sampel dari ekstrak metanol Gracilaria yang diambil di pantai Kunakeshwar, India. Penelitian dari Salamah dan Farahan (2014) dengan total kapasitas antioksidan  sebesar  43,198  mg  AAE/g  sampel  yang  diambil  dari  daerah  Karangmalang, Yogyakarta.
Gambar 4. Grafik Standar Vit. C Metode Fosfomolibdat

## KESIMPULAN
Fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak  metanol Sargassum sp.  diprediksi  mempunyai  aktivitas penangkal radikal bebas sangat lemah dengan nilai IC 50 sebesar 1.289 ppm. Fraksi etil asetat dari ekstrak metanol Sargassum sp. mempunyai total kapasitas antioksidan sebesar 39,52 mg AAE/g sampel.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Mola,  H.F.  2009.  Antibacterial  activity  of  crude  extracts  and  phlorotannin  isolated  from  the Diatom Cymbella spp. Journal of Pharmacy Research , 2(1):304-308
Banerjee, A., Dasgupta, N. & De, B. 2005. In Vitro Study Of Antioxidant Activity of syzigium Cumini Fruit. Journal Food Chemistry , 90(4):727-733
Cahyadi,  W.  2008.  Analisis  dan  Aspek  Kesehatan  Bahan  Tambahan  Pangan.  Bumi  Aksara, Jakarta, 400 p.
Indriyawati,  N.  2015.  Senyawa  Fenolik  dan  Alginat  dari  Ganggang  Coklat Sargassaceae Indo- Pasifik:  Ekstraksi,  Pemurnian,  Kuantifikasi  dan  Aktivitas  Senyawanya. Prosiding  Seminar Nasional Pendidikan Biologi 2015. Malang, pp. 276-287
Mardawati,  E.,  Filianty,  F.  &  Marta,  H.  2008.  Kajian  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Kulit  Manggis ( Garcinia mangostana L.) dalam Rangka Pemanfaatan Limbah Kulit Manggis di Kecamatan Puspahiang Kabupaten Tasikmalaya. Jurnal Industri Teknologi Pertanian , 2(3) Patel,  P.,  Sunkara,  R.,    Walker,  L.T.,    &  Verghese,  M.  2016.  Effect  of  Drying  Techniques  on Antioxidant Capacity of Guava Fruit. Food and Nutrition Sciences , (7):544-554.
Podungge,  A.,  Damongilala,  L.J.,    &  Mewengkang,  H.W.  2018.  Kandungan  Antioksidan  pada Rumput  Laut Eucheumas  Spinosum yang  Diekstrak  dengan  Metanol  dan  Etanol. Jurnal Media Teknologi Hasil Perikanan , 6(1):197-201.
Radhika,  D.,  Veerabahu,  C.  &  Priya,  C.  2013.  Invitro  Studies  on  Antioxidant  and Haemagglutination Activity of Some Selected Seaweeds. International Journal of  Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 5(1):152-155
Rode,  S.P.  &    Sabale, A.B..  2018.  Antioxidant  Activity  of  Some  Green and  Red  Seaweeds  From West  Coast  of  Maharashtra,  India. International  Research  Journal  Of  Pharmacy ,  9(6):108- 112
Salamah,  N.  &  Farahana,  L.  2014.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Herba  Pegagan ( Centella Asiatica (L.) Urb) dengan Metode Fosfomolibdat. Pharmaçiana, 4(1):23-30. Sandhiutami,  N.M.D.,  Ngatidjan  &  Kristin.  2010.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Minyak  Buah  Merah ( Pandanus  conoideus LAM.)  Secara  in  Vitro  dan  in  Vivo  pada  Tikus  yang  diberi  Beban Aktivitas Fisik Maksimal. Jurnal Sains dan Teknologi Farmasi , 15(1):18 –28.
Sayuti,  K.  &  Yenrina,  R.  2016.  Antioksidan  Alami  dan  Sintetik.  Padang.  Asosiasi  Penerbit Perguruan Tinggi Indonesia (APPTI)., 104 p.
Sedjati, S., Suryono, S., Santosa, A., Supriyantini, E. & Ridlo, A., 2017. Aktivitas Antioksidan dan Kandungan  Senyawa  Fenolik  Makroalga  Coklat Sargassum sp. Jurnal  Kelautan  Tropis , 20(2):124-130.
Sudhakar,  M.P.,  Ananthalakshmi,  J.S.  and  Nair,  B.B.,  2013.  Extraction,  purification  and  study  on antioxidant  properties  of  fucoxanthin  from  brown  seaweeds. Journal  of  Chemical  and Pharmaceutical Research , 5(7):169-175
Widowati,  I.,  Lubac,  D.,  Puspita,  M.  &  Bourgougnon,  N.  2014.  Antibacterial  and  Antioxidant Properties of the Red Algae Gracilaria verrucosa From the North Coast of Java, Semarang, Indonesia. International Journal of Latest Reserch in Science and Technology, 3 (3):179 –185 Wikanta, T., Januar, H.I., &  Nursid, M. 2005. Uji Aktivitas Antioksidan, Toksisitas, dan Sitoksisitas Ekstrak Alga Merah Rhodymenia palmate . Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia , 11(4):41 – 49
Yangthong, M., Towatana, N.H. & Phromkunthong, W.. 2009. Antioxidant Activities of Four Edible Seaweeds  From  the  Southern  Coast  of  Thailand. Journal  of  Plant  Food  Human  Nutrition , 20(2):230-237