BioEksakta: Jurnal Ilmiah Biologi Unsoed Volume 2, Nomor 1 (2020): 74 - 78 E-ISSN: 2714-8564

## Efek Subletal Limbah Batik terhadap Aktivitas Enzim Superoksida Dismutase pada Serum Ikan Nila (Oreochromis niloticus)

## Annisa Nafiah Salmaa*, Hernayanti, Farida Nur Rachmawati
Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman Jalan dr. Suparno 63 Purwokerto 53122 *email: nafiahsalmaa03@gmail.com
Rekam Jejak Artikel:
Diterima  : 29/08/2019
Disetujui  : 03/03/2020

## Abstract
Batik  wastewater  is  one  cause  of  pollution  in  the  environment  because  of  known  containing several types of heavy metals. There are some types of heavy metals such as chrome (Cr), zinc (Zn), mercury (Hg), copper (Cu), lead (Pb), arsenic (As), cadmium (Cd), manganese (Mn) and nickel (Ni). Batik wastewater that is thrown into the river has an impact on fish physiologically. This response appears before the fish was dead or it’s called the sublethal effect caused by the heavy metal. A bond between the heavy metals or metal (M) with protein methallotionein it is called as a bond M+MT. The ties having the nature of a stable so that is not easily off. This is what  finally  triggers  the  formation  of  free  radicals.  When  free  radicals  in  the  body  are  much higher, so the action of an enzyme SOD could decrease. Levels of an enzyme SOD testing as an effort early detection of pollution caused by wastewaters of batik. Based on it, so this study has objective to identify the effects of its toxicity batik wastewater to a decrease in an enzyme SOD on Nila fish. Based on the results of this study, SOD activity starting from control, concentration of 17% v/v, 34% v/v and 51% v/v respectively were 29,48 ± 1,40 U/mL, 22,20 ± 1,18 U/mL, 17,77 ± 1,16 U/mL, 13,68 ± 0,56 U/mL. This research result indicates that the value of F count (218,570)  >  F  table  (4,30),  means  there  is  an  influence  of  batik  waste  to  a  decrease  in  SOD activity. The higher the concentration of batik waste and the lower activity of SOD. Keywords : Batik wastewater, Oreochromis niloticus, Superoxide Dismutase (SOD)

## Abstrak
Limbah  batik  merupakan  salah  satu  penyebab  pencemaran  di  lingkungan  perairan  karena diketahui mengandung beberapa jenis logam berat. Jenis logam berat tersebut antara lain seperti krom  (Cr),  seng  (Zn),  merkuri  (Hg),  tembaga  (Cu),  timbal  (Pb),  Arsen  (As),  kadmium  (Cd), mangan  (Mn)  dan  nikel  (Ni).  Ikan  yang  terpapar  limbah  batik  memberikan  respon  secara fisiologis. Respon yang muncul sebelum ikan mengalami kematian disebut efek subletal. Ikatan antara logam berat atau metal (M) dengan protein metalotionin ini disebut sebagai ikatan M+Mt. Ikatan  ini  bersifat  stabil  sehingga  tidak  mudah  lepas.  Hal  inilah  yang  akhirnya  memicu pembentukan radikal bebas. Ketika radikal bebas dalam tubuh semakin meningkat, maka kadar enzim Superoksida Dismutase atau SOD akan semakin menurun. Pengujian kadar enzim SOD dapat dijadikan sebagai upaya deteksi dini adanya pencemaran perairan yang disebabkan oleh limbah  batik.  Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  penelitian  ini  memiliki  tujuan  untuk  melihat pengaruh toksisitas limbah batik terhadap penurunan enzim SOD pada ikan nila. Berdasarkan hasil penelitian ini, kadar SOD mulai dari kontrol, konsentrasi 17% v/v, 34% v/v dan 51% v/v berturut-turut yaitu 29,48 ± 1,40 U/mL, 22,20 ± 1,18 U/mL, 17,77 ± 1,16 U/mL, 13,68 ± 0,56 U/mL. Hasil analisis data menunjukkan bahwa nilai F hitung (218,570) > F tabel (4,30) yang artinya  terdapat  pengaruh  paparan  limbah  batik  terhadap  penurunan  aktivitas  SOD.  Semakin tinggi konsentrasi limbah batik maka semakin rendah aktivitas SOD.
Kata kunci : Limbah Batik, Oreochromis niloticus, Superoksida Dismutase (SOD)

## PENDAHULUAN
Industri batik merupakan salah satu penyumbang limbah pada perairan yang diperkirakan mengandung  unsur logam berat. Logam berat dapat menimbulkan  efek  racun  terhadap  makhluk  hidup, contohnya  krom  (Cr),  timah  hitam  (Pb),  kadmium (Cd),  tembaga  (Cu),  nikel  (Ni),  seng  (Zn)  serta merkuri  (Hg)  (Palar,  2008).  Limbah  hasil  produksi batik  juga  banyak  menggunakan  air  sehingga menghasilkan  limbah  cair.  Limbah  cair  tersebut mengandung  zat  pewarna  tekstil  yang  berasal  dari proses pewarnaan (Handayani et al., 2019). Logam- logam berat yang berada di perairan mengakibatkan
terjadinya  perubahan  sifat  fisik,  kimia  dan  biologi perairan.  Hal  ini  dapat  mengganggu  keseimbangan ekosistem  perairan  serta  menimbulkan  dampak negatif  bagi  kesehatan  manusia  (Muammar,  2019). Logam  berat  atau  metal  (M)  berada  di  lingkungan masuk  ke    tubuh  dalam  bentuk  ion  melalui  proses difusi pasif. Logam berat sebagai benda asing dapat mengganggu  stabilitas  tubuh  sehingga  dilakukan pengikatan  oleh  protein  darah  yang  disebut Metallothionein.  Metallothionein  adalah  salah  satu protein  yang  bersifat  sangat  peka  terhadap  adanya pencemaran.  Memiliki  fungsi  dalam  mengikat logam-logam  berat  yang  berada  di  lingkungan  ke
dalam  jaringan  tubuh  makhluk  hidup.  ikatan  antara logam dengan metallothionein sangat kuat dan stabil. Hal inilah yang memicu radikal bebas terutama anion superoksida  (O 2 - )  dalam  tubuh  sehingga  aktivitas enzim  antioksidan  seperti  Superoksida  Dismutase pun semakin menurun (Lasut, 2002).
Logam  berat  masuk  ke  tubuh  organisme menyebabkan  terjadinya  peningkatan  kadar  radikal bebas.  Semakin  meningkat  radikal  bebasnya  maka semakin  menurun  kadar  enzim  antioksidannya. Kondisi  semacam  ini  mengakibatkan  terjadinya stress  oksidatif  yang  mengganggu  kinerja  sel, merusak sel dan juga DNA (Dewi, 2018). Mekanisme pertahanan  di  dalam  tubuh  memiliki  kemampuan untuk  mengatasi  bahaya  yang  disebabkan  oleh radikal  bebas  yaitu  dengan  cara  memproduksi golongan enzim antioksidan endogen. Enzim tersebut antara lain Katalase, Glutation Peroksidase, Superoksida Dismutase (SOD) (Winarsi, 2007). Superoksida  Dismutase  (SOD)  merupakan salah satu enzim pertahanan  pertama  ketika  muncul serangan  dari  radikal  bebas. Cara  kerja  enzim  SOD dalam  menangani  radikal  bebas  yaitu  dengan mengkatalisis dismutasi dari ion radikal bebas (Mates et al., 1999). Reaksi yang terjadi yaitu molekul anion superoksida bersama molekul hidrogen diproses oleh enzim  SOD  (O 2 - +  O 2 - +  H  +  SOD)  kemudian menghasilkan  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 ).  Proses selanjutnya  yaitu  terjadi  pemecahan  hidrogen peroksida  (H 2 O 2 )  oleh  enzim  katalase  menjadi molekul air (H 2 O) dan oksigen (O 2 ) (Winarsi, 2007). Aktivitas  enzim  antioksidan  dengan  intensitas  yang rendah    mengindikasikan  tingginya  kadar  radikal bebas  dalam  tubuh.  Terjadinya  hal  tersebut disebabkan oleh SOD yang tidak mampu mengimbangi tingginya radikal bebas anion superoksida (O 2 - ) yang seharusnya dapat dinetralkan, sehingga aktivitas SOD pun menjadi turun Ikan  adalah  hewan  perairan  yang  dapat digunakan  sebagai  salah  satu  bioindikator  pada lingkungan  yang  tercemar.  Ikan  yang  dapat digunakan  dalam  penelitian  bioindikator  salah satunya adalah ikan nila. Ikan nila adalah salah satu ikan  yang  dibudidaya  untuk  tujuan  konsumsi  dan menjadi komoditas yang paling diminati di berbagai negara  (Fadri et  al., 2016).  Menurut  Carman  & Sucipto  (2009)  ikan  nila  memiliki  kelebihan  yaitu harganya  yang  terjangkau,  pertumbuhan  cepat, perkembangbiakannya  mudah,  kadar  proteinnya tinggi,  ukuran  tubuh  yang  cukup  besar,  lebih  tahan terhadap  penyakit,  memiliki  nilai  gizi  yang  tinggi serta mudah beradaptasi.
Berdasarkan  uraian  di  atas,  rumusan  masalah yang dibahas dalam penelitian ini yaitu apakah efek subletal  limbah  batik  dengan  konsentrasi  berbeda berpengaruh terhadap penurunan enzim Superoksida Dismutase  pada  serum  ikan  Nila  ( Oreochromis niloticus )  serta  konsentrasi  limbah  batik  berapakah yang  paling  mempengaruhi  penurunan  enzim Superoksida Dismutase pada serum ikan nila
1. Mengetahui  efek  subletal  limbah  batik  dengan konsentrasi  berbeda  yang  berpengaruh  terhadap penurunan  enzim  Superoksida  Dismutase  pada serum ikan Nila ( Oreochromis niloticus ).
2. Mengetahui konsentrasi limbah batik yang paling berpengaruh terhadap penurunan enzim Superoksida  Dismutase  pada  serum  ikan  Nila ( Oreochromis niloticus )
Manfaat  adanya  penelitian  ini  adalah  dapat memberikan  informasi  ilmiah  serta  sebagai early warning  system terhadap  adanya  pengaruh  subletal limbah batik pada lingkungan perairan.

## MATERI DAN METODE
Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain  ember  dengan  diameter  46,5  cm  dan  tinggi  23 cm, aerator, selang aerasi, batu aerasi, spektrofotometer UV-VIS dengan panjang gelombang  520  nm,  mikropipet  ukuran  100  µl    & 1000  µl,  yellow  tip,  blue  tip,  tabung  reaksi,  kuvet, vacutainer  tube  EDTA  ukuran  3  mL,  alat sentrifugator, vortex, tabung eppendorf, spuit injeksi 1  mL,  alat  tulis,  gelas  ukur  500  mL,  jaring  ikan, timbangan  analitik,  penggaris,  milimeter  blok,  dan kamera. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu  ikan  Nila  yang  didapatkan  dari  Balai  Benih Ikan,  Dinas  Peternakan  dan  Perikanan,  Jalan  Raya Baturraden,  Dusun  II  Pandak  dengan  rata-rata panjang 13,5 ± 0,75 cm dan rata-rata bobot 47,26 ± 10,34  gram,  pakan  ikan  dengan  kadar  protein sebanyak 33 %, pH universal, Kalium Permanganat (PK),  larutan  buffer  SOD,  larutan  standar  SOD, reagen xantin oksidase serta limbah batik naftol yang didapatkan  dari  daerah  Jalan  Pesarean,  Kebutuh, Dusun 1, Sokaraja
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  April sampai Juni 2019 di stasiun percobaan program studi D3, Laboratorium Ekotoksikologi, dan Laboratorium Fisiologi  Tumbuhan  Fakultas  Biologi  Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto.
Metode  penelitian  yang  digunakan  adalah metode  eksperimental  dengan  rancangan  percobaan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Berdasarkan Lumban  &  Ridwan  (2016)  nilai  LC50  96  jam didapatkan dari analisis probit hasil uji toksisitas letal atau data mortalitas ikan. Nilai LC50 96 jam paparan limbah batik terhadap ikan nila yaitu sebesar 67,61% v/v  menjadi  dasar  penentuan  konsentrasi,  namun dihitung  terlebih  dahulu  sebesar  25%,  50%,  serta 75%  dari  nilai  LC50  96  jam  tersebut.  Hasil perhitungan  didapatkan  4  seri  konsentrasi  limbah batik  (0%  v/v,  17%  v/v,  34%  v/v  dan  51%  v/v) dengan  6  kali  ulangan,  sehingga  terdapat  24  unit percobaan dengan masing- masing unit berisi 4 ekor ikan.
Variabel  yang  diamati  terdiri  dari  variabel bebas  dan  variabel  terikat.  Variabel  bebas  pada penelitian  ini  adalah  konsentrasi  limbah  batik  dan lama  waktu  pemaparan.  Variabel  terikat  pada penelitian ini  yaitu aktivitas enzim SOD. Parameter
utama  yang  diukur  adalah  kadar  enzim  SOD (Superoksida Dismutase) pada ikan nila menggunakan  metode  RAN-SOD  serta  parameter pendukungnya yaitu pH (Randox laboratories, 2009).

## Aklimasi ikan Nila (Oreochromis niloticus)
Aklimasi  ikan  uji  selama  7  hari.  Tempat pemeliharaan  sebelumnya  disterilisasi  dengan  cara direndam larutan PK (Kalium Permanganat) selama 24  jam.  Ikan  diaklimasi  selama  7  hari  pada  ember berdiameter 46,5 cm dan tinggi 23 cm. Jumlah ikan yang digunakan sebanyak 96 ekor karena terdapat 24 unit  percobaan    yang  masing-masing  diisi  4  ekor ikan.  Panjang  tubuh  beserta  bobot  tubuh  ikan  juga diukur.

## Pembuatan Media Uji dan Pemaparan   Subletal 48 jam
Konsentrasi limbah batik yang digunakan yaitu kontrol,  17%  v/v,  34%  v/v  serta  51%  v/v.  Total volume  media  uji  setiap  perlakuannya  adalah  10  L. Perlakuan  konsentrasi  17%  v/v  mengandung  1700 mL limbah cair naftol  dan air tanah sebanyak 8300 mL.  Perlakuan  konsentrasi  34%  v/v  mengandung 3400  mL  limbah  cair  naftol  dan  air  tanah  sebanyak 6600 mL. Perlakuan konsentrasi 51% v/v mengandung  5100  mL  limbah  cair  naftol  dan  air tanah  sebanyak  4900  mL.  Media  uji  berupa  larutan limbah batik berbagai konsentrasi selanjutnya diukur pH –nya dengan menggunakan pH universal. Media uji  yang  telah  dibuat  kemudian  digunakan  untuk pemaparan subletal selama 48 jam.

## Pengambilan Darah Ikan Nila
Teknik  pengambilan  darah  yang  dilakukan  ini sebagaimana  Samsisko et  al. (2014),  yakni  sampel darah  diambil  dengan  menggunakan  teknik  punctie cardiac  yaitu  melalui  organ  jantung  menggunakan spuit injeksi berukuran 1 mL kemudian dimasukkan ke  dalam  vacutainer  tube  berukuran  3  mL.  Darah yang telah ditampung kemudian dipipetkan ke dalam tabung  eppendorf  untuk  dilakukan  disentrifuge dengan kecepatan 6000 rpm selama 10 menit  untuk mendapatkan serumnya. Serum yang telah diperoleh dipindahkan ke eppendorf baru agar tidak tercampur dengan endapan atau debris di bagian bawah tabung

## Pengukuran Kadar SOD
Disiapkan  2  buah  tabung  reaksi  untuk  blanko dan standar serta tabung reaksi sesuai jumlah sampel. Pada tabung reaksi ditambah reagen xantin oksidase sebanyak  100  µl,  dan  larutan  buffer  SOD  sebanyak 1000  µl,  untuk  tabung  sampel  ditambahkan  sampel serum  sebanyak  20  µl.  Pada  tabung  standar  tidak ditambahkan  sampel  tetapi  ditambahkan  larutan standar SOD sebanyak 20 µl, sedangkan pada tabung blanko  tidak  perlu  ditambahkan  larutan  standar maupun  sampel  serum.    Semua  bahan  tersebut dihomogenkan  dengan  menggunakan  vortex,  jika sudah  homogen  larutannya  dapat  langsung  dibaca absorbansi dengan spektrofotometer panjang gelombang 520 nm. Hasil yang didapatkan kemudian
dihitung menggunakan rumus (Randox laboratories, 2009) sebagai berikut:
Data yang telah diperoleh dianalisis dengan uji ANOVA. Data tersebut digunakan untuk mengetahui bagaimana  pengaruh  paparan limbah  batik  terhadap kadar SOD (Superoksida Dismutase) pada ikan Nila. Analisis  dengan  ANOVA  ini  menggunakan  taraf kepercayaan  95%  dan  tingkat  kesalahan  5%.  Uji lanjut yang digunakan yaitu uji Duncan.

## Hasil dan Pembahasan
Berdasarkan hasil uji toksisitas subletal pada gambar  1.  dapat  dilihat  aktivitas  Superoksida Dismutase  atau  SOD  mengalami  penurunan  mulai dari kontrol hingga konsentrasi limbah naftol paling tinggi.  Kadar  SOD  mulai  dari  kontrol,  konsentrasi 17% v/v, konsentrasi 34% v/v, konsentrasi 51% v/v berturut-turut yaitu 29,48 ± 1,40 U/mL, 22,20 ± 1,18 U/mL,  17,77  ±  1,16  U/mL,  13,68  ±  0,56  U/mL. Berdasarkan  penelitian  Vasile et  al. (2018), pemaparan  logam  berat  Zn  dari  konsentrasi  10% menjadi  25%  terhadap  ikan  Acipenser  stellatus menyebabkan penurunan enzim SOD yakni dari 0,24 U/mg menjadi 0,19 U/mg.
Gambar 1. Rerata Aktivitas SOD pada Darah Ikan Nila yang Terpapar Limbah Batik
Penurunan  aktivitas  SOD  ini  disebabkan paparan  limbah  batik  yang  semakin  tinggi.  Hal  ini sesuai  dengan  pernyataan  Mardliyah  (2017)  bahwa ketika radikal bebas anion superoksida yang berasal dari limbah batik jumlahnya sudah melampaui batas, maka akan menyebabkan persentase SOD menurun. Logam  berat  pada  limbah  pewarna  batik  dapat berikatan  dengan  suatu  protein  yang  disebut metallothionein membentuk ikatan M + MT. Hal ini dapat  mengakibatkan  enzim  yang  berikatan  dengan protein  menjadi  tidak  aktif.  Ketika  kerja  enzim menurun maka akan mempengaruhi proses fisiologis serta  mengacaukan  struktur  sel  dalam  suatu  organ. Logam-logam  yang  terakumulasi  di  dalam  sel  juga mampu  menurunkan  kadar  enzim  antioksidan  (Al Aziz & Marianti, 2014).
Aktivitas SOD = Absorbansi Sampel Absorbansi Standar x  30,65 U/mL
Berdasarkan  Vasile et  al. (2018)  Superoksida Dismustase sebagai enzim yang pertama menangani radikal  bebas  memiliki  respon  yang  bervariasi tergantung  pada  paparan  logam,  konsentrasi  serta durasi  pemaparan.  Xavier et  al. (2019)  menyatakan bahwa  penghambatan  SOD  oleh  logam  berat menyebabkan  peningkatan  stress  oksidatif  dalam jaringan  sebagai  akibat  dari  aktivitas  merusak  yang dilakukan  oleh  radikal  anion  superoksida.  Stres oksidatif  merupakan  kondisi  yang  terjadi  ketika jumlah  radikal  bebas  lebih  tinggi  dibandingkan dengan sistem pertahanan tubuh (Sinaga, 2016).
Berdasarkan  Hasil  ANOVA  dengan  tingkat kesalahan  5%  menunjukkan  bahwa  nilai  F  hitung yakni 218,570 lebih besar dibandingkan dengan nilai F  tabel  yakni  4,30  dan  nilai  p  <  0,05.  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  hasil  penelitian  ini  signifikan. Pemaparan  limbah  batik  yang  dilakukan  terhadap ikan  nila  memberikan  pengaruh  yang  nyata  bagi penurunan  aktivitas  SOD.  Pada  uji  lanjut  Duncan didapatkan  hasil  bahwa  konsentrasi  yang  paling berpengaruh adalah 17% v/v.
Berdasarkan  uji  subletal  yang  dilakukan,  ikan mampu  bertahan  hanya  dalam  waktu  48  jam. Menurut Bosman et al. (2013) ketahanan organisme terhadap zat toksik berbeda-beda karena dipengaruhi oleh  konsentrasi  bahan  toksik,  spesies  serta  ukuran organisme. Ditambah juga dengan faktor internal dan eksternal  dari  ikan  tersebut.  Faktor  internal  berarti dari dalam tubuh ikan dan eksternal berupa sifat fisik, kimiawi  dan  biologis  dari  lingkungan  tempat  ikan hidup. Efek paparan subletal logam berat selama 96 jam  terhadap  ikan  lele  perak  menunjukkan  bahwa akumulasi  logam  yang  signifikan  terdapat  pada insang,  usus  dan  hati.  Pada  jaringan  otot  tidak ditemukan  akumulasi  logam  karena  kemungkinan waktu pemaparan dan konsentrasi yang kurang cukup untuk menyebabkan akumulasi. Hal ini terjadi karena akumulasi  pada  jaringan  otot  membutuhkan  waktu pemaparan  yang  lebih  lama.  Namun,  dari  hasil tersebut dapat diketahui bahwa dalam waktu singkat yakni  96  jam,  logam  berat  sudah  mampu terakumulasi  dalam  beberapa  jaringan  khususnya pada jaringan lemak organisme akuatik. Berdasarkan penelitian  Javed  &  Usmani  (2017)  secara  umum akumulasi  logam  berat  terdapat  pada  semua  organ vital  ikan,  namun  yang  paling  sering  ditemukan dalam konsentrasi tertinggi adalah pada hati, ginjal, dan  insang.  Pada  ikan  nila,  logam  berat  seperti  Fe, Cu,  Zn,  Pb,  Cd  dan  Co  terakumulasi  pada  jaringan hati, insang, otot, usus, jantung dan testis.
Kondisi  ikan  nila  saat  uji  dilakukan  terlihat berbeda  dengan  sebelum  pengujian.  Pada  saat dilakukan  uji,  gerakan  ikan  cenderung  semakin lemah  dan  tidak  lincah  atau  bergerak  tidak  normal, badannya  atau  warna  sisik  menjadi  kusam, menyendiri,  sedangkan  ikan  yang  masih  sehat bergerak  dengan  lincah  dan  normal,  warna  masih cemerlang  selalu  bergerombol  dan  tidak  ada perubahan  fisik  lain.  Sisik  ikan  nila  yang  menjadi
kusam  dapat  disebabkan  oleh  terlalu  lama  paparan limbah  batik.  Fungsi  sisik  sebagai  pelindung  untuk mencegah  masuknya  toksik  atau  racun  ke  dalam tubuh  ikan.  Terdapat  penempelan  zat  asing  yang berasal dari toksikan juga pada ikan tersebut. Limbah batik  dengan  konsetrasi  tinggi  juga  menyebabkan peningkatan  frekuensi  pernafasan  dan  konsumsi oksigen  kemudian  disertai  dengan  ritme  bernafas yang  semakin  turun,  hilangnya  kesimbangan  dan akhirnya  ikan  mengalami  kematian  (Andriani  & Hartini, 2017).
Berdasarkan pengamatan pada ikan yang mati, ditemukan juga ciri tubuh ikan yang berlendir. Hal ini disebabkan akumulasi racun yang berasal dari logam berat akan menyebabkan gejala stres pada ikan yakni suatu  kondisi  yang  tidak  mampu  mengatur fisiologisnya  dengan  normal  dan  hal  tersebut  juga dipengaruhi  oleh  faktor  yang  merugikan.  Ikan  yang diberi perlakuan dengan limbah memproduksi lendir yang  lebih  banyak  jika  dibandingkan  dengan  ikan yang  tidak  terpapar  perlakuan.  Lendir  atau  mukus tersebut  merupakan  salah  satu  respon  ikan  yang mengalami  stres  yang  berfungsi  sebagai  sistem perlindungan diri (Irianto, 2005). Berdasarkan Vasile et  al. (2018)  akumulasi  logam  mengakibatkan peningkatan  produksi  lendir.  Lendir  ini  berguna untuk  menyerap  logam  dan  menjebaknya  dekat dengan permukaan epitel, seperti yang tampak pada lendir usus.
Beberapa  faktor  yang  dapat  mempengaruhi kemampuan  ikan  dalam  bertahan  hidup  menurut Kafuku  (1983)  yaitu  kualitas  air,  seperti  suhu, oksigen  terlarut  (DO)  serta  tingkat  keasaman  (pH). Berikut  ini  hasil  pengukuran  faktor  lingkungan berupa pH air yang normal dan air limbah batik.
Tabel  1 .  Hasil  Pengukuran  pH  Air  Tanah  dan  Air Limbah Batik Naftol
Jenis air pH Air tanah 7 Cairan Limbah Batik Naftol 8
Berdasarkan  pengukuran  pH  pada  tabel  1.  air tanah  yang  digunakan  untuk  pemeliharaan  atau aklimasi  ikan  adalah  6-7.  Menurut  Suyanto  (2003) ikan  nila  dapat  hidup  pada  kisaran  pH  antara  6-8, namun untuk pertumbuhan optimal memerlukan pH 7-8  dan  suhu  25-30 o C.  Cairan  limbah  batik  yang digunakan  untuk  ketiga  uji  bersifat  basa  yakni  8. Mengacu  pada  Hernayanti  &  Proklamasiningsih (2004)  nilai  pH  yang  masih  diperbolehkan  sesuai baku  mutu  limbah  batik  adalah  6-9.  Menurut  Perda Jawa Tengah (2012) memberikan standar baku mutu maksimum untuk limbah yaitu nilai BOD 150 mg/L, COD 300 mg/L. Berdasarkan Handayani et al. (2019) Kadar logam yang terdapat pada limbah batik seperti Zn  memiliki  standar  sebesar  5  mg/L  sedangkan berdasarkan hasil di lapangan kadar Zn sangat tinggi yaitu 40,97 mg/L.

## SIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan, maka  dapat  ditarik  kesimpulan  yaitu  efek  subletal limbah batik dengan konsentrasi berbeda memberikan  pengaruh  terhadap  penurunan  enzim Superoksida  Dismutase  pada  serum  ikan  Nila ( Oreochromis  niloticus ).  Konsentrasi  limbah  batik yang paling berpengaruh terhadap penurunan enzim Superoksida  Dismutase  pada  serum  ikan  Nila ( Oreochromis niloticus ) adalah 51% v/v.

## DAFTAR  REFERENSI
Al  Aziz,  R.,  &  Marianti,  A.,  2014.  Efek  paparan kronik  timbal  (Pb)  per  oral  pada  struktur histopatologik  lambung  tikus  putih,  Unnes journal of life science, 3(2), pp. 87-92.
Andriani,  R.,  &  Hartini.,  2017.  Toksisitas  Limbah Cair  Industri  Batik  terhadap  Morfologi  Sisik Ikan Nila Gift ( Oreochromis niloticus ). Jurnal sainhealth, 1(2), pp. 32-40.
Bosman, O., Taqwa, F. H., Marsi., 2013. Toksisitas Limbah  Cair  Lateks  terhadap  Kelangsungan Hidup,  Pertumbuhan  dan  Tingkat  Konsumsi Oksigen  Ikan  Patin  (Pangasius  sp.).  Jurnal Akuakultur  Rawa  Indonesia,  1(2),  pp.  148- 160.
Carman,  O.,  &  Sucipto,  A.,  2009.  Panen  nila  2,5 bulan. Jakarta: PT. Penebar Swadaya.
Dewi,  N.  K.,  2018.  Efek  Paparan  Logam  Berat terhadap Kadar Malondialdehid dan Aktivitas Katalase  Ikan  Mas  dan  Ikan  Nila  di  Sungai Kaligarang. Jurnal Mipa, 41(2), pp. 69-75.
Fadri,  S.,  Muchlisin,  Z.  A.,  &  Sugito.,  2016. Pertumbuhan, Kelangsungan Hidup dan Daya
Cerna Ikan Nila (Oreochromis niloticus) yang Mengandung Tepung Daun Jaloh
(Salixtetrasperma  roxb)  dengan  Penambahan Probiotik  EM-4.  Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa Kelautan  Dan  Perikanan  Unsyiah,  1(2),  pp. 210-221.
Handayani,  P.  A.,  Cholifah,  U.,  Ulviana,  R.,  & Chafidz, A., 2019. Batik Industry Wastewater Treatment via Coagulation-Flocculation Process  and  Adsorption  using  Teak  Sawdust based  Activated  Carbon.  Jurnal  Bahan  Alam Terbarukan, 8(1), pp. 9-13.
Hernayanti & Proklamasiningsih, E., 2004.
Fitoremediasi Limbah Cair Batik
Menggunakan Kayu Apu (Pistia stratiotes L.) sebagai  Upaya  untuk  Memperbaiki  Kualitas Air. Jurnal Pembangunan Pedesaan, 4(3), pp. 164-172.
Irianto, A., 2005.  Patologi Ikan Teleostei. Yogyakarta: Gajah Mada University Press.
Javed, M., & Usmani, N., 2017. An overview of The Adverse Effects of Heavy Metal Contamination on Fish Health. Proceedings of
the national academy of science, India Section B: Biological Sciences, 89(2), pp. 389-403.
Kafuku, T., & Ikenoue, H., 1983. Modern Method of Aquaculture in Japan. Tokyo: Kodansha, Ltd.
Lasut, M. T., 2002. Metallothionein: Suatu Parameter Kunci  yang  Penting  dalam  Penetapan  Baku Mutu  Air  Laut  (BMAL)  Indonesia.  Ekoton, 2(1), pp. 61-68.
Lumban, T. F. D., & Ridwan, A., 2016. Uji Toksisitas
Limbah Batik terhadap Ikan Nila
(Oreochromis  niloticus).  Journal  IPB,  21(2), pp. 1-5
Mardliyah,  N.,  2017.  Uji  aktivitas  Antiokidan Ekstrak Air Sarang Burung Wallet (Collocalia fuciphaga  Thunberg.)  terhadap  Aktivitas Enzim  Superokida  Dismutase  (SOD)  pada Tikus  Putih  Jantan  Galur  Sprague  Dawley, Skripsi. Jakarta: UIN Syarif Hidayatullah.
Mates,  J.  M.,  Gomez  C.  P.,  &  Castro.,  1999. Antioxidant  Enzyme  and  Human  Disease. Clin biochem, 32(8), pp. 595-603.
Muammar,  Rais,  M.,  &  Patang.,  2019.  Pengaruh limbah  industri  terhadap  tingkat  pencemaran timbal  di  perairan  sungai  Tallo.  Jurnal pendidikan  teknologi  pertanian,  5,  pp  230- 250.
Palar, H., 2008. Pencemaran dan toksikologi Logam Berat. Jakarta: Rineka Cipta.
Randox  Laboratories.,  2009.  Manual  procedure RanSOD.  Crumlin,  Co  Antrim,  United Kingdom: Randox Laboratories ltd.
Samsisko, R. L. W., Hari, S., & Setiawati, S., 2014. Respon  Hematologis  Ikan  Kerapu  Tikus (Cromileptes  Altivelis)  pada  Suhu  Media Pemeliharaan  yang  Berbeda.  Journal  of Agriculture and Fish Health, 3(1), pp. 36-43.
Sinaga,  F.  A.,  2016.  Stress  Oksidatif  dan  Status Antioksidan  pada  Aktivitas  Fisik  Maksimal. Jurnal generasi kampus, 9(2), pp. 176-189.
Suyanto, R., 2003. Nila. Jakarta: Penebar Swadaya.
Vasile,  D.,  Gaina,  G.,  Petcu,  L.  C.,  Coprean,  D.,
Tofan, L., Dinischiotu, A., 2018. Bioaccumulation of Copper and Zinc and The Effects  on  Antioxidant  Enzyme  Activities  in The  Liver  of  Acipenser  stellatus  (Pallas, 1771).
Bulletin
of Environmental Contamination  and  Toxicology,  102(1),  pp. 39-45.
Winarsi,  H.,  2007.  Antioksidan  Alami  dan  Radikal Bebas:  Poteni  dan  Aplikasinya  Dalam Kesehatan. Yogyakarta: Penerbit Kanisius.
Xavier, N. D. D., Nandan, S. B., Jayachandran, P. R., Anu, P. R., Midhun, A. M., Mohan, D., 2019. Chronic  Effects  of  Copper  and  Zinc  on  The Fish,  Etroplus  suratensis  (Bloch,  1790)  By Continuous  Flow  Through  (CFT)  Bioassay. Marine  Environmental  Research,  143,  pp. 141-157.