## Jurnal Biology Science & Education 2019  ALBERT SEMBIRING
Isolasi Dan Uji Aktivitas Bakteri Penghasil Selulase Asal Tanah Kandang Sapi
Albert Sembiring 1
1 Program Studi Agribisnis Hortikultura, Politeknik Wilmar Bisnis Indonesia, Deli Serdang
1 Email: albertsembiring16@gmail.com
Abstrak: Biomassa  tanaman  yang  umumnya  berasal  dari  limbah  pertanian  dapat ditransformasi  menjadi  produk  yang  bermanfaat  dalam  industri  dan  pertanian,  seperti biotenol dan pupuk organik. Salah satu cara dalam mengkonversi selulosa menjadi pupuk organik  adalah  dengan  memanfaatkan  enzim  selulase  yang  dihasilkan  oleh  bakteri. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memperoleh  isolat  bakteri  penghasil  selulase  potensial yang berasal dari tanah sekitar kandang sapi di lingkungan IPB. Isolasi bakteri dilakukan dengan  metode  pengenceran  bertingkat  yang  disebar  pada  media  carboxy  methyl cellulose  1%  (CMC  1%)  yang  diinkubasi  selama  48  jam  pada  suhu  37 o C.  Pengujian bakteri penghasil selulase dilakukan secara kualitatif dengan menotolkan bakteri terpilih di tengah media CMC 1% dengan penambahan pewarna congored 1%. Dari hasil yang diperoleh terdapat tiga isolat bakteri yang mampu menghasilkan selulase yaitu KS 0.1, KS 0.7 dan KS 9.1 dengan indeks selulolitik tertinggi 1,33 pada isolat KS 0.1. Pengukuran aktivitas isolat KS 0.1 menggunakan metode spektrofometri DNS menunjukkan produksi aktivitas selulase tertinggi terdapat pada hari ke-1 dan terendah pada hari ke-8.

## Kata Kunci: Bakteri, Selulose, Tanah Sekitar Kandang
Abstract: Plant  biomass  from  waste  agricultural  can  be  transformed  to  useful  like bioethanol  and organic  fertilizer in  industry and  agriculture  using bacterial  cellulase is one  alternative  to  convert  cellulose  become  organic  fertilizer.  This  research  had  an objective to obtain potential bacterial cellulase isolated from the soil around of cowshed in Institut Pertanian Bogor. Bacteria were isolated from soil had used serial dilution that spread in 1% Carboxy Methyl Cellulose Medium (CMC 1%) and it's incubated at 37 o C for 48 hours. Qualitative test for bacteria producing cellulose was carried out by picking the selected colony in the centered of CMC medium with adding congo red 1%. Based on the results were obtained three potential isolates could produce cellulose that were KS 0.1, KS 0.7 and KS 9.1. The highest cellulolytic index is 1.33 that produced by KS 0.1. The test quantitative activity of KS 0.1 using spectrophotometry method showed that the highest of enzyme activity at the first day and lowest eighth day during incubation period. Key Words: bacteria, cellulose, soil around of cowshed

## Jurnal Biology Science & Education 2019  ALBERT SEMBIRING
Selulosa merupakan polimer bahan organik jenis karbohidrat yang banyak ditemukan di alam  terutama  pada  biomassa  tanaman.  Di  dalam  tanaman,  selulosa  adalah  salah  satu komponen  penyusun  dinding  sel  (35-50%)  (Saha,  2004)  berfungsi  untuk mempertahankan struktur dan bentuk tanaman yang disusun dari ikatan β-1,4 glikosidik yang  stabil  dan  tidak  mudah  putus  (Howard,  2003).  Secara  alami  proses  pembusukan biomassa  tanaman  baik  yang  berasal  dari  limbah  pertanian  atau  limbah  rumah  tangga seperti  kulit  buah,  tongkol  jagung,  sayur  dan  buah  busuk,  jerami  padi,  rumput  terjadi dalam  waktu  yang  cukup  lama.  Proses  pembusukan  ini  dapat  dipercepat  dengan menggunakan bantuan bahan kimia atau juga biologis.
Pembusukan  dengan  bantuan  biologis  menjadi  alternatif  pilihan  yang  paling diminati  mengingat  dapat  terjadinya  pemakaian  tak  terkendali  dari  penggunaan  bahan kimia yang dapat menimbulkan bahaya bagi kesehatan. Selulase adalah enzim kompleks yang  terdiri  dari  eksoselulase,  β-1,4  endoglukanse  dan  β-1,4  glukosidase  yang  dapat menghidrolisis  selulosa  menjadi  glukosa,  selobiosa  dan  selooligosakarida  dengan memotong  secara  bertahap  ikatan  β-1,4  glikosida  (Gerhatz,  1990),  sehingga  mikroba penghasilnya sering digunakan dalam mempercepat proses pembusukan selulosa secara biologis.  Mikroba  yang  mampu  menghasilkan  selulase  (selulolitik)  sangat  banyak tersebar  di  alam  seperti  kapang,  aktinomisetes  dan  bakteri.  Beberapa  penelitian  telah berhasil  mengisolasi  mikroba  penghasil  selulase  dari  berbagai  tempat  dan  kondisi lingkungan. Sebanyak 70 isolat bakteri selulolitik berhasil diisolasi oleh dari sumber air panas  Sungai  Medang  (Sari et  al., 2012),  Purwadaria et  al., (2003)  mencoba mebandingkan  hasil  isolasi  bakteri  dan  kapang  penghasil  selulase  yang  diambil  dari rayap. Sementara itu Yosmar et al., (2013) dan Khairiah et al., (2013), Yogyaswari et al., (2016) secara berturut-turut mengisolasi jamur dari ampas tebu, bakteri tanah gambut dan eksplorasi  bakteri  dari  cairan  rumen  sapi.  Enzim  selulase  yang  berasal  dari  cendawan dahulu  menjadi  fokus  dalam  mendegradasi  selulosa  akan  tetapi  belakangan  ini  bakteri lebih  sering  digunakan  karena  pertumbuhannya  yang  lebih  cepat  bila  dibandingkan dengan  cendawan  sehingga  proses  pendegradasian  diharapkan  dapat  lebih  singkat.  (Li dan Gao 1997; Alam et al., 2004)
Penggunaan  selulase  saat  ini  cukup  besar  khususnya  di  bidang  industri  dan pertanian.  Dalam  industri  penggunaan  selulase  untuk  memproduksi  glukosa  yang  erat kaitannya  dengan  industri  alkohol,  sirup  glukosa,  sirup  fruktrosa  dan  dekstrosa (Indrawati,  2005).  Di  bidang  pertanian  penggunan  selulase  dilakukan  bersama  dengan mikroba penghasilnya dalam mendegradasi limbah pertanian berupa biomassa tanaman yang  banyak  mengandung  selulosa.  Dengan  melalui  berbagai  tahapan  dan  proses biotransformasi bahan ini nantinya dapat menghasilkan pakan ternak, biogas, bioetanol dan pupuk organik. (Mtui 2009). Pada penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi bakteri yang berasal dari tanah kandang sapi yang dianggap potensial karena terdapatnya sumber selulosa dari sisa rerumputan makan sapi.

## Jurnal Biology Science & Education 2019  ALBERT SEMBIRING

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  adalah  jenis  penelitian  deskriptif  kualitatif  melalui  pendekatan eksprimental  yang  bertujuan  untuk  mengisolasi  bakteri  penghasil  selulase  dan  melihat aktivitas harian selulase tertinggi. Variabel penelitian ini adalah  isolat bakteri dari asal tanah sapi

## Isolasi dan pemurnian bakteri selulolitik
Sebanyak  1  g  sampel  tanah  kebun  karet  IPB  dimasukkan  ke  dalam  plastik  lalu ditambahkan  larutan  NaCl  fisiologis  0,85%,  selanjutnya  dilakukan  pengenceran bertingkat  dengan  mengambil  1  ml  sampel  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang berisi 9 ml NaCl fisiologis kemudian divortex untuk menghomogenkan sampai didapat kosentrasi  10 -6 .  Pengenceran  10 -4 ,  10 -5 ,  10 -6 masing-masing  diambil  0,1  ml  lalu  tanam dengan  cara  disebar  pada  media  CMC  secara  merata  dengan  tabung  penyebar  dan dinkubasi pada suhu 37 o C selama 48 jam. Koloni yang tumbuh dihitung jumlahnya, lalu diamati warna, bentuk, elevasi, dan permukaannya dan dimurnikan berdasarkan adanya zona bening yang mengelilingi koloni. Pemurnian koloni dilakukan dengan melakukan goresan  kuadran  pada  media  CMC,  kemudian  hasil  pemurnian  dibuat  replikanya  pada agar miring di tabung reaksi dan dinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 o C.

## Analisis aktivitas bakteri penghasil selulase secara kualitatif
Hasil  pemurnian  pada  agar  miring  kemudian  ditanam  menggunakan  jarum  ose dengan menotolkan koloni bakteri ditengah-tengah cawan petri yang berisi media CMC dan  diinkubasi  selama  48  jam.  Setelah  koloni  tumbuh  dilakukan  pewarnaan  dengan menuangkan  congored  1%  sampai  koloni  tenggelam  dan  ditunggu  selama  15  menit. Larutan  congored  dibuang  secara  perlahan-lahan,  setelah  benar-benar  bersih  koloni bakteri  dibilas  dengan  NaCl  fisiologis  sebanyak  tiga  kali  dan  disimpan  dalam  lemari pendingin  selama  24  jam.  Kemampuan  bakteri  dalam  menghasilkan  enzim  selulase ditandai dengan terbentuknya zona bening disekitar koloni, zona bening yang terbentuk diukur  untuk  mendapatkan  isolat  yang  potensial.  Isolat  yang  dipilih  untuk  ditentukan aktivitas enzimnya merupakan isolat yang memiliki nilai indeks potensial terbesar. Nilai indeks selulolitik (IS) dapat ditentukan dengan menghitung zona bening yang terbentuk menggunakan perhitungan berikut

## 𝐼𝑛𝑑𝑒𝑘𝑠 𝑆𝑒𝑙𝑢𝑙𝑜𝑡𝑖𝑘 = 𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑧𝑜𝑛𝑎 𝑏𝑒𝑛𝑖𝑛𝑔 − 𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑘𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖 𝐷𝑖𝑎𝑚𝑒𝑡𝑒𝑟 𝑘𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖

## Pengukuran aktivitas harian enzim selulolitik ekstrak kasar
Pengujian aktivitas enzim ekstrak kasar dengan berdasarkan kadar glukosa. Kadar glukosa diukur menggunakan metode DNS (Miller, 1959). Poduksi enzim dimulai dengan menginokulasikan  dua  ose  koloni  bakteri  yang  telah  diremajakan  pada  media  CMC berumur 48 jam, ke dalam 100 ml media CMC cair 1% lalu diinkubasi dalam inkubator

## Jurnal Biology Science & Education 2019  ALBERT SEMBIRING
BIOLOGI SEL (vol 8 no 1 edisi jAn-JUN 2019 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 24
bergoyang dengan kecepatan 120 rpm selama 11 hari. Pemanenan enzim dilakukan setiap hari dengan menginokulasikan 5 ml kultur bakteri ke dalam botol valcon steril, setelah itu supernatan yang mengandung enzim ekstrak kasar diperoleh dengan mensentrifugasi kultur bakteri tersebut pada kecepatan 6000 rpm selama 15 menit.
Uji  aktivitas  selulolitik  sampel  dilakukan  dengan  dimasukkan  sebanyak  1  ml substrat CMC 1% ke tabung reaksi lalu ditambahkan 1 ml larutan enzim ekstrak kasar kemudian divortex sampai homogen, yang diinkubasi pada suhu ruang selama 60 menit. Pada kontrol dan blanko dilakukan hal yang sama seperti pada sampel tetapi pada kontrol tanpa inkubasi  pada suhu ruang selama 60 menit, sedangkan pada blanko tanpa enzim ekstrak  kasar.  Setelah  itu  ditambahkan  2  ml  pereaksi  DNS  dan  divortex,  kemudian dipanaskan  pada  suhu  100 o C  selama  10  menit,  lalu  didinginkan  dan  diukur  nilai absorbansi  sampel,  kontrol  dan  blanko  pada  panjang  gelombang  540  nm  dengan spektofotometer.  Pengukuran  aktivitas  enzim  dilakukan  sampai  pada  hari  ke  11.  Hasil nilai absorbansi (serapan) yang diperoleh kemudian dibuat grafik sehingga diperoleh nilai persamaan  regresinya  y=  ax  +  b.  Persamaan  ini  digunakan  untuk  menghitung  nilai aktivitas  gula  pereduksi  (x)  dengan  memasukkan  nilai  absorbansi  sebagai  nilai  y. Aktivitas  enzim  selulolitik  dapat  dihitung  dengan  produk  akhir  yang  dihasilkan  yaitu glukosa dengan persamaan sebagai berikut.

## (𝑥 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 − 𝑥 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙) 𝑥 𝑓𝑎𝑘𝑡𝑜𝑟 𝑝𝑒𝑛𝑔𝑒𝑛𝑐𝑒𝑟𝑎𝑛 𝑥 1000 𝑇 𝑥 𝐵𝑒𝑟𝑎𝑡 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑘𝑢𝑙 𝑔𝑙𝑢𝑘𝑜𝑠𝑎
Keterangan X sampel: kadar glukosa sampel, X kontrol: kadar glukosa kontrol, T: waktu inkubasi

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel tanah yang digunakan dalam penelitian ini berasal dari tanah di sekitaran peternakan  kandang  sapi  di  lingkungan  IPB.  Pemilihan  tempat  pengambilan  sampel berdasarkan perkiraan adanya isolat bakteri yang potensial dalam mendegradasi selulosa dikarenakan tanah banyak mengandung substrat selulosa lewat dedaunan yang jatuh dan pembusukan rumput yang menjadi makanan sapi. Berdasarkan hasil isolasi diperoleh tiga isolat  bakteri  yang  mampu  menghasilkan  enzim  selulase  bersifat  ekstraseluler  dengan ditandai adanya zona bening pada media CMC 1% yang telah di tetesi pewarna congored (Gambar  1).  Hasil  pengukuran  dar  diameter  zona  bening  yang  dihasilkan  oleh  ketiga isolat memperlihatkan kemampuan yang berbeda-beda dalam menghasilkan selulase pada media CMC, berdasarkan hasil pengukuran indeks selulolitik diperoleh bahwa isolat KS

## Jurnal Biology Science & Education 2019  ALBERT SEMBIRING
BIOLOGI SEL (vol 8 no 1 edisi jAn-JUN 2019 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 25
0.1  memiliki  nilai  tertinggi  dibandingkan  dua  isolat  lainnya,  sehingga  pengukuran aktivitas enzim harian dilakukan pada isolat KS 0.1.
Gambar 1. Variasi zona bening yang dihasilkan isolat bakteri setelah penambahan Congo Red . (A) Isolat KS 0.1, (B) Isoat KS 0.7, (C) Isolat KS 9.1
Menurut Goto et al. (1992) selulosa amorf seperti yang tedapat pada media CMC sangat  mudah  dipecah  oleh  bakteri  penghasil  selulase.  Menurut  Enari  (1983) terbentuknya zona bening pada sumber karbon CMC tersebut menunjukkan zona tempat terputusnya ikatan β-1,4 glikosida yang menghubungkan monomer D-glukosa pada CMC menjadi  rantai  amorf  selulosa.  Zona  bening  akan  semakin  jelas  setelah  penambahan Congo Red . Pewarna Congo Red 1% berfungsi untuk mengetahui besarnya zona bening yang muncul pada masing-masing isolat yang memiliki aktivitas selulase pada substrat spesifik akan menghasilkan zona bening di sekitar koloninya (Sazci et al., 1986). Zona bening  yang  dihasilkan  oleh  setiap  bakteri  selulolitik  bervariasi  karena  setiap  bakteri menghasilkan kompleks enzim selulase yang berbeda-beda, tergantung dari gen yang di miliki dan sumber karbon yang digunakan (Meryandini et al., 2009).
Tabel 1. Hasil pengukuran indeks potensial isolat bakteri selulolitik
Isolat Bakteri Diameter koloni bakteri (cm) Diameter zona bening (cm) Indeks selulolitik KS 0.1 0.75 1.89 1.33 KS 0.7 0.75 1.5 1 KS 9.1 0.75 1.4 0.86
Pengukuran aktivitas enzim isolat KS 0.1 secara harian bertujuan untuk melihat waktu optimum dalam menghasilkan selulase dari, berdasarkan gambar 2 menunjukkan bahwa pada hari ke-1 kurva menunjukkan aktvitas tertinggi sebesar 0,001144 U/ml dan terus mengalami penurunan hingga pada pengamatan hari ke 4 yaitu -0,001818677 U/ml hingga mencapai titik terendah pada hari ke 8 sebesar -0,000141104 U/ml.
A B C

## Jurnal Biology Science & Education 2019  ALBERT SEMBIRING

## Gambar 2. Kurva Aktivitas Selulase
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan  kemampuan  isolat  dalam memecah  substrat  perharinya.  Kurva  pada  hari  ke-0  memperlihatkan  bahwa  belum adanya  enzim  selulolitik  yang  dihasilkan  sehingga  substrat  tidak  dipecah  menjadi molekul glukosa. Aktivitas enzim yang mengalami naik turun hal ini dapat disebabkan karena fase pertumbuhan sel yang berbeda. Pada saat aktivitas meningkat kemungkinan sel juga mengalami fase eksponensial sedangkan ketika terjadi penurunan aktivitas maka sel  telah  mencapai  fase  stasioner  yang  kemudian  dilanjutkan  fase  kematian  yang menyebabkan turunnya aktivas enzim yang dihasilkan selain itu juga sel pada dasarnya lebih  menyukai  substrat  yang  sederhana,  ketika  glukosa  habis  maka  akan  digunakan selulosa  sebagai  sumber  karbonnya  sehingga  pemecahan  ini  menyebabkan  glukosa menumpuk dan menghambat sisi sisi aktif enzim selulase ( feedback inhibition ) disamping itu juga terjadi represi sintesis selulase karena sel menggunakan glukosa sebagai sumber karbonnya yang berefek pada tidak diproduksinya enzim selulolitik (Abalos et al., 1997), disamping  itu  menurut  Martina et  al., (2002)  pada  saat  fase  stasioner  dihasilkan  juga enzim protease yang dapat merusak aktivitas dari enzim selulase.

## KESIMPULAN
Dari penelitian ini diperoleh tiga isolat yang memiliki kemampuan menghasilkan selulase yaitu isolat KS 0.1, KS 0.7 dan KS 9.1 pada media agar CMC 1%. Nilai indeks potensi  selulolitik  yang  tertinggi  terdapat  pada  isolat  KS0.1  dengan  nilai  IS  1.33. Pengukuran  aktivitas  enzim  ekstrak  kasar  dilakukan  pada  isolat  KS  0.1  dengan  nilai aktivitas selulase tertinggi diperoleh pada hari ke-1 sebesar 0,001144 U/ml dan terendah pada  hari  ke-8  -0,023939237.  Penelitian  berikutnya  yang  dapat  yaitu  melakukan karakterisasi  enzim  selulase  berdasarkan  pengaruh,  pH,  temperatur,  jenis  substrat  dan inhibitor.
-0,015 -0,01 -0,005 0 0,005 0 2 4 6 8 10 12 A kt iv itas En zi m U/ m l) Waktu Inkubasi (Hari ke-) Unit aktivitas

## Jurnal Biology Science & Education 2019  ALBERT SEMBIRING
BIOLOGI SEL (vol 8 no 1 edisi jAn-JUN 2019 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 27

## DAFTAR PUSTAKA
Abalos, J.M.F., Arribas, A.R., Garda, A.L., Santamaria, R.I. (1997). Effect of carbon source on the expression of celA1, a cellulase-encoding from Stretomyces halstedii JM8. FEMS Microbiol Letters 153:97-103.
Alam,  M.Z.,  Manchulur,  M.A.,  dan  Anwar,  M.N.  (2004).  Isolation  Purification, Cellulolytic Characterization of by Enzyme Produced the Isolate Streptomyces omiyaensis . Pakistan Journal Biology Science. 7(10):1647-1653.
Enari, T.M., dan Paavola-Niku, M.L. (1987). Enzymatic of cellulose: Is the current of the mechanisms of hydrolysis valid CRC Crit. Rev. Biotechnology. 5:67-87.
Gerhartz,  W.  (1990).  Enzymes  in  Industry:  Production  and  Applications.  VCH Verlagsgesellschaft mbH, D. 6940 Weinheim. 81-82.
Goto,  M.,  Furukawa,  K.,  Hayashida,  S.  (1992).  An  avicel-affinity  site  in  an  avicel- digesting  exocellulase  from  Trichoderma  viride  mutant.  Bioscience Biotechnology. 56(10): 1523-1528
Howard, R.L., Abotsi, E., J. van Rensburg E.L., and Howard, S. (2003). Lignocellulose Biotechnology: Issue of Bioconversion and Enzyme Production. African Journal of Biotech. 2(12):602-619.
Indrawati,  I.  dan  S.  Djajasupena.  (2005).  Isolasi  Jamur  dari  Seresah  dan  Uji Keefektifannya dalam Penguraian Selulosa. Jurnal Ilmiah Biologi. 4(2):18 – 21. Khairiah E, Khotimah S, Mulyadi A. Karakterisasi dan Kepadatan Bakteri Pendegradasi Selulosa pada Tanah Gambut di Desa Parit Banjar Kabupaten Pontianak. Jurnal Protobiont. 2(2):87-92.
Li, X., Gao, P. (1997). Isolation and Partial Properties of Cellulose-Decomposting strain of Cytophaga sp. LX-7 from soil. Journal of Applied Microbiology. 82:73-80.
Martina, A., Yuli, N., Sutisna, M. 2002. Optimasi Beberapa Faktor Fisik Terhadap Laju
Degradasi  Selulosa  Kayu  Albasia  ( Paraserianthes  falcataria (L.)  Nielsen  dan Karboksimetilselulosa  (CMC)  secara  Enzimatik  oleh  Jamur Jurnal  Natur Indonesia. 4(2):156-163.
Meryandini, A., Widosari, W., Maranatha, B., Sunarti, T.C., Rachmania, N., Satria, H. (2009).  Isolasi  bakteri  selulolitik  dan  karakterisasi  enzimnya.  Makara  Sains. 13(1): 33-38.
Miller, G.L. (1959). Use of Dinitrosalicylic Acid Reagent for Determination of Reducing Sugar. Analytical Chemistry. 31(3): 426-428.
Mtui,  Y.S.  (2009).  Recent  Advances  in  Pretreatment  of  Lignocellulosic  Wastes  and
Production of Value Added Products.
African Journal of Biotechnology.8(8):1398-1415.
Purwadaria,  T.,  Marbun,  P.A.,  Sinurat,  A.P.,  Ketaren,  P.P.  (2003).  Perbandingan Aktivitas  Enzim  Selulase  dari  Bakteri  dan  Kapang  Hasil  Isolasi  dari  Rayap. Jurnal Ilmu Ternak dan Veteriner. 8(4):213-219.

## Jurnal Biology Science & Education 2019  ALBERT SEMBIRING
BIOLOGI SEL (vol 8 no 1 edisi jAn-JUN 2019 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 28
Saha, B.C. (2004). Lignocellulose Biodegradation and Application in Biotechnology. US Government Work. American Chemical Society. 2-14.
Sari,  U.M.,  Nurmiati,  Agustien,  A.  (2012).  Penapisan  dan  Karakterisasi  Bakteri Selulolitik Termofilik Sumber Air Panas Sungai Medang, Kerinci, Jambi. Jurnal Biologi Universitas Andalas. 1(2):166-171.
Sazci, A., Radford, A., Erenler, K. (1986). Detection of cellulolytic fungi by using Congo red as  an indicator:a comparative study with  the dinitrosalicyclic acid  reagent method. Journal of Applied Bacteriology. 61. 559-562.
Yogyaswari, S.A., Rukmi, M.G.I., Ruharjo, B. (2016). Eksplorasi Bakteri Selulolitik dari Cairan Rumen Sapi Peranakan Fries Holland (PFH) dan Limousine Peranakan Ongole (LIMPO). Jurnal Biologi. 5(4):70-80.