## Pengaruh Konsentrasi dan Waktu Pemaparan Acyclovir untuk Eliminasi Sugarcane Mosaic Virus (SCMV) pada Kultur Tunas Apikal Tebu PS 881
The Effect of Concentration and Exposure Time Acyclovir for Elimination Sugarcane Mosaic Virus (SCMV) on The Apical Bud Culture of Sugarcane PS 881
Maisaro * ,Bambang Sugiharto ** , Parawita Dewanti *** *,** Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Jember
*** Agroteknologi, Fakultas Pertanian, Universitas Jember
*) Email: m_maisaro@yahoo.com

## ABSTRACT
SCMV (Sugarcane Mosaik Virus) is sugarcane crop disease resulting in chlorosis in leaves with the formation of the colors yellow and green intermittents. Based on survey information obtained that the air observation of all varieties of sugarcane was already stricken with the virus SCMV. Even the most formidable attack is on PS881 varieties with the intensity of the attacks reached 80%, so that it is estimated will lose up to 40% of the harvest. The sugarcane is virus free can be obtained via organogenesis in tissue culture method directly on the apical meristem, somatic embryogenesis at, and also with the addition of khemoterapeutan (acyclovir).The workings of the khemoterapi materials are the chemotherapi will interfere with replication and synthesis of genetic material of the virus but also cause the same effect against the mechanism of synthesis of nuklet acid on plants hosts. This research aims to find the best concentration and exposure time the most good in eliminating viruses SCMV in the apical bud culture of sugarcane PS881, using the antiviral acyclovir in conditions of invitro, so that the resulting plant will be virus free. The methods used to detect the presence of the virus by using the two ways, the first is by serology test through the protein content of the virus / checking nucleic acid virus with ELISA and the second is by RT-PCR. The results of the analysis showed that the interaction between the concentration of khemoterapi  and  exposure  time  produces  the  best  treatment  in  eliminating  the  virus  was  .  treatment  with acyclovir concentration of 20 ppm and exposure time  of 5 weeks.
Keywords : ELISA, RT-PCR, sugarcane Mosaic virus, SCMV, PS 881

## PENDAHULUAN
Tanaman  tebu  merupakan  bahan  baku  utama pembuatan  gula.  Gula  merupakan  komoditi penting bagi masyarakat Indonesia bahkan bagi masyarakat dunia. Kondisi geografis Indonesia sangat berpotensi untuk menghasilkan tanaman tebu  sehingga  menjadikan  Indonesia  sebagai negara  yang  berpotensi  sebagai  produsen  gula terbesar  di  dunia.  Namun  pada  tahun  2008 Indonesia mengimpor gula sebesar 2,3 juta ton setara  raw  sugar,  yang  terdiri  dari  gula  putih, gula  rafinasi  dan  gula  mentah.  Kebutuhan impor  gula  ini  akan  semakin  tinggi  seiring dengan  banyaknya  tanaman  tebu  yang terserang panyakit, sehingga dapat menurunkan produksi gula. Berdasarkan survei pengamatan lapang,  mendapatkan  informasi  bahwa  semua varietas tebu sudah terserang virus SCMV. SCMV  adalah  penyakit  pada  tanaman  tebu dengan gejala yang sangat penting yaitu adanya garis-garis  berwarna  kuning  kehijauan  dengan
latarbelakang  warna  hijau  daun  sehingga menyerupai gambaran mosaik pada daun, yang sangat  tampak  pada  daun  yang  masih  muda (Lilik  &  Tri  2009).  Penyakit  ini  adalah penyakit  yang  sangat  serius  karena  dapat menurunkan  produksi  gula  0,2%  sampai dengan  50%  tergantung  tingkat  infeksi  virus dan  ketahanan  varietas  terhadap  penyakit mosaik  (M.  Andriani et  al ., 2012).  Menurut observasi survei pengamatan lapang yang kami lakukan  bersama  petugas  di  perkebunan Jatiroto  Jember,  di  dapatkan  bahwa  sekitar 60%  dari  semua  varietas  tebu  sudah  terserang SCMV,  dengan  penampakan  daun  yang berselang  seling  hijau  kuning  sebanyak  60%, sedangkan  untuk  varietas  PS  881  telah menunjukkan  intensitas  serangan  mosaik  pada daun  mencapai  80%,  sehingga  diperkirakan akan menurunkan panen sampai dengan 40%.
Pengendalian penyebaran virus dilaksanakan  dengan  penggunaan  varietas tahan  virus,  dari  pemulaiaan  konvensional
maupun  transformasi  genetik  (Zhang et  al ., 2006).  Tanaman  bebas  virus  dapat  diperoleh melalui metode kultur jaringan. Metode kultur jaringan  organogenesis  langsung  untuk mendapatkan  tanaman  bebas  virus  antara  lain pada  meristem  apikal  (Naz et  al .,  2009),  dan oleh  (Subba  Reddy  Ch.V  2011  & Sreenivasulu,P    2011),  pada  embryogenesis somatik  (Ramgareeb et  al .,  2010)  dan  juga dengan  penambahan  bahan  khemoterapeutan, (Balamuralikrisnan et  al .,  2001).  Khemoterapi adalah  metode  yang  sangat  tepat  untuk memperoleh tanaman bebas virus dari indukan yang terinfeksi. Karena cara kerja khemoterapi adalah  menghambat  terjadinya  replikasi  virus, menghambat  transport virus antarsel dan antar jaringan  tanaman. Beberapa jenis bahan  kimia antiviral banyak dimanfaatkan dalam  kultur in vitro adalah analog sintetik dari guanosin, yaitu ribavirin (Al Maari, et al ., 2012),  dithiouracyl (Loythala et al .,  2008)  dan  saat  ini  yang banyak  dipakai  adalah  acycloguanin  atau acyclovir.  Acyclovir  berfungsi  sebagai antimetabolite  yang  dapat  bersifat  sebagai inhihibitor DNA Polymerase dari virus. Cowell (2013). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mencari konsentrasi  dan  waktu  pemaparan  acyclovir yang  paling  baik  dalam  mengeliminasi  virus SCMV  pada  kultur  tunas  apikal  tebu  PS881, dengan menggunakan antiviral acyclovir dalam kondisi  invitro,  sehingga  akan  dihasilkan tanaman tebu bebas virus SCMV.

## METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  laboratorium  divisi biologi molekuler dan bioteknologi, cdast (center for development  of  advanced  science  and  technology) Universitas Jember, pada bulan april sampai dengan Desember 2014.

## Alat dan Bahan
Alat  dan  bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini meliputi:  bahan  tanam  berupa  pucuk  tunas  apikal yang di ambil dari tebu jenis PS 881 yang terserang virus  dari  kebun  Jatiroto  umur  5-6  bulan.  Media tanam  adalah  media  Murashige  and  Skoog(MS) standart  +  PVP  300ppm+  Acyclovir  sesuai perlakuan yaitu:20ppm, 40ppm, dan tanpa acyclovir +  BA  2  ppm+  Kinetin  0,5  ppm  yang  digunakan untuk  mengeliminasi  virus  SCMV.    Media  yang kedua  adalah  MS0  +PVP  300ppm  +  BA2  ppm +Kinetin  0,5  ppm  +Arginin  100ppm  yang dipergunakan  untuk  media  induksi  pertunasan    dan media ke tiga  adalah media untuk induksi perakaran yang terdiri dari½ MS0 +PVP 300ppm + BA 2 ppm +  kinetin  0,5  ppm  +  Arginin  100  ppm,  Alat  dan
Bahan untuk ELISA Kit, Alat dan Bahan untuk RT- PCR.

## Rancangan Penelitian
Rancangan  Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Faktorial  yang  terdiri  dari  2  faktor.  Faktor  kesatu adalah  faktor  khemoterapi  dengan  kombinasi konsentrasi khemoterapi yaitu K0 : 0ppm (kelompok tanpa acyclovir), K1 : 20 ppm, (konsentrasi acyclovir 20 ppm) K2 : 40ppm, (konsentrasi acyclovir 40 ppm) Faktor  kedua  adalah  waktu  pemaparan  dalam media Acyclovir adalah W1  :  4 minggu, (waktu  pemaparan 4 minggu). W 2  :  5 minggu , (waktu pemaparan 5 minggu). W 3  :  6 minggu, (waktu pemaparan 6 minggu).
Kedua  faktor  tersebut  dikombinasikan  sehingga akan    menghasilkan  9  kombinasi  perlakuan.  Setiap kombinasi  perlakuan  diulang    3  kali  sehingga didapat 27 unit percobaan. Data yang diperoleh akan dianalisis menggunakan ANOVA, jika menunjukkan berbeda  nyata  maka  di  lanjutkan  dengan  uji  Tukey /Uji Beda Nyata Jujur 5%.
Kultur  tunas  apikal  pada  media  perlakuan khemoterapi. Kultur tunas apikal tebu akan dimulai dengan  pengambilan  pucukan  tebu  PS  881  yang mempunyai  ciri-ciri  morfologi  daun  yang  terserang virus  SCMV,  kira-kira  berukuran  panjang  15  cm, kemudian  dikupas  daunnya  dengan  4  kali pengelupasan  dan  akan  di  dapatkan  tunas  apikal berukuran kira-kira 0,5cm-1cm.
Bahan  tanam  ini  kemudian  akan  di  tanam  pada media  khemoterapi  yang  telah  disiapkan sebelumnya,  yaitu  dengan  konsentrasi  kemoterapy Acyclovir  untuk  K0  :  0ppm  tanpa  acyclovir,  K1: 20ppm  dan  K2  :  40ppm.  Perlakuan  ini  akan dilakukan  dengan  lama  pemaparan  di  dalam  media kemoterapi  acyclovir  selama  4  minggu  (W  1),  5 minggu (W 2) dan 6 minggu (W 3). Komposisi  media  antiviral  tersebut  adalah:  MS +PVP  300ppm  +BA2  ppm  +Kinetin  0,5  ppm +Acyclovir.

## Induksi Pertunasan dan Induksi Perakaran
Penanaman pada induksi pertunasan akan dilakukan setelah  tanaman  melewati  perlakuan  pada  media khemoterapi sesuai dengan lama perlakuan masing- masing. Kemudian diinduksi pada media pertunasan (MS + PVP 300ppm +BA 2 ppm +Kinetin 0,5 ppm +Arginin)  selama  6  minggu.  Perlakuan  selanjutnya adalah  penanaman  pada  media  induksi  perakaran (½MS +PVP  300  ppm  +BA2ppm+Kinetin  05ppm) selama  6  minggu.  Panjang  akar  yang  akan  diukur minimal 2 cm.

## Analisa Data
Analisa Statistik Untuk mengetahui pengaruh khemoterapi Acyclovir terhadap  respon  pertumbuhan  tanaman  dilakukan analisis  Statistik  analisis  Sidik  Ragam  dan  Uji Lanjut Tukey / Uji Beda Nyata Jujur 5% .
Parameter pengamatan
Parameter  pengamatan  yang  akan  diamati  adalah tinggi tanaman , panjang akar dan jumlah tunas.
Uji  ELISA  (Enzyme  Linked  Immunosorbent Assay)
Langkah  pertama  prosedur  ELISA  adalah  sampel daun  ditimbang  seberat  0,2  gr,  kemudian dimasukkan  kedalam  mortar  yang  di  beri  nitrogen cair  dan  digerus  sampai  halus.  Setelah  itu  masing masing sampel, baik  yang positif control atau yang negatif  control  di  larutkan  dengan  SB1(sampel buffer  1)  buffer  1  yang  terdiri  dari:SB1  powder dengan  perbandingan  1:3  .Keterangan  preparasi reagen Elisa ada di lampiran. Langkah kedua adalah dengan  perlakuan  uji  ELISA  dengan  menggunakan KIT ELISA.
Interpretasi hasil ELISA yang akan mendapatkan hasil  kualitatif  dan  kuantitatif.  Secara  kualitatif yaitu  dengan  melihat  perubahan  warna  menjadi kuning  pada  reaksi  pengujian  di  mikroplate  jika sampel  yang  di  uji  mengandung  virus.  Semakin tinggi  intensitas  warna  yang  terbentuk,  maka semakin tinggi pula konsentrasi virus yang terdapat pada  sampel.  Secara  kuantitatif  berdasarkan  nilai absorbansi  yang  di  ukur  dan  terekam  pada  kertas hasil  print  out  alat  ELISA  reader  dengan  panjang gelombang  405  nm.  Penentuan  sampel  positif terinfeksi  dilakukan  dengan  membandingkan  hasil ELISA  dengan  kontrol  positif  dan  atau    kontrol negatif .

## RT-PCR  (Reverse  Transcription-Polymerase Chain Reaction)
Proses  RT-PCR  diawali  dengan  tahap  isolasi  RNA yang  dilakukan  dengan  mengikuti  panduan  dalam RNAprep  Pure  Plant  Kit  prodik  TianGen.  Sintesis cDNA  dilakukan  dalam  dua  tahap  yaitu  denaturasi RNA  dan  reverse  transcription  (RT)  berdasarkan panduan  yang  ada  pada  Transcriptor  First  Strand cDNA Synthesis Kit Roche. cDNA  yang  diperoleh  kemudian  diamplifikasi melalui  reaksi  PCR  sebanyak  30  siklus  dengan reaksi  meliputi  initial  denaturation  selama  7 menit,denaturation  pada  94ºc  selama  10  detik, annealing  56ºc  selama  30  detik,  Extention  68ºc selam 55 detik dan Elongation 68ºc selam 5 menit. Produk PCR divisualisasi dengan elektroforesis pada gel agarosa 1% .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh  Interaksi  Konsentrasi  Antiviral dan Waktu pemaparan Respon  pertumbuhan  tanaman  pada  media induksi pertunasan membuktikan bahwa semua tanaman hasil perlakuan dapat tumbuh menjadi tanaman normal.
Pengaruh  faktor  konsentasi  kemoterapi acyclovir    menunjukkan  berbeda  sangat  nyata
pada  variabel  pengamatan  jumlah tunas, panjang  akar,  dan  tinggi  tanaman.  Pengaruh faktor  perbedaan  lama  waktu  pemaparan menunjukkan  berbeda  sangat  nyata  terhadap variabel  pengamatan  jumlah  tunas,  panjang akar, dan tinggi tanaman.
Selanjutnya  hasil  yang  berpengaruh  nyata atau  sangat  nyata  akan  dilanjutkan  dengan  uji beda nyata jujur (Uji Tukey-HSD) taraf 5%.
Rata-rata  tinggi  tanaman  yang  dipengaruhi oleh  interaksi  konsentrasi  antiviral  dan  waktu pemaparan  disajikan pada Gambar 1.
8,67 de 16,00 b 21,00 a 6,33 def 9,33 cd 12,33 c 3,33 f 5,67 ef 7,67 de 0 5 10 15 20 25 Ti n gg i T an ama n ( cm ) 0 ppm 20 ppm
40 ppm Konsentrasi Antiviral 4 minggu 5 minggu 6 minggu Gambar 1. Rata-rata  tinggi  tanaman  yang dipengaruhi kombinasi konsentrasi antiviral dan waktu pemaparan.
Berdasarkan  hasil  pada  Gambar  1, menunjukkan  bahwa  uji  beda  nyata  jujur kombinasi  perlakuan  konsentrasi  antiviral  0 ppm  dengan  waktu  pemaparan  6  minggu berbeda  nyata  dengan  kombinasi  perlakuan lainnya.  Demikian  halnya  dengan  kombinasi perlakuan  konsentrasi  antiviral  0  ppm  dengan waktu pemaparan 5 minggu juga berbeda nyata dengan kombinasi perlakuan lainnya. Kombinasi  perlakuan  konsentrasi  antiviral  20 ppm  dengan  waktu  pemaparan  6  minggu berbeda  tidak  nyata dengan  kombinasi perlakuan konsentrasi antiviral 20 ppm dengan waktu  pemaparan  5  minggu,  tetapi  berbeda nyata dengan kombinasi perlakuan lainnya. Kombinasi  perlakuan  konsentrasi  antiviral 20  ppm  dengan  waktu  pemaparan  5  minggu berbeda  tidak  nyata  dengan kombinasi perlakuan  konsentrasi  antiviral  0  ppm  dengan waktu  pemaparan  4  minggu,  konsentrasi antiviral  40  ppm  dengan  waktu  pemaparan  6 minggu  dan  konsentrasi  antiviral  20  ppm dengan  waktu  pemaparan  4  minggu,  tetapi berbeda  nyata  dengan  kombinasi  perlakuan konsentrasi  antiviral  40  ppm  dengan  waktu pemaparan  5  minggu  serta  kombinasi
perlakuan konsentrasi antiviral 40 ppm dengan waktu  pemaparan  4  minggu.  Kombinasi perlakuan  konsentrasi  antiviral  0  ppm  dengan waktu pemaparan 6 minggu menghasilkan rata- rata tinggi tanaman yang tertinggi yaitu sebesar 21,00  cm.  Berdasarkan  hasil  tersebut menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi  antiviral  yang  diberikan,  maka tinggi tanaman akan semakin menurun. Pengaruh Konsentrasi Antiviral
Rata-rata tinggi tanaman, jumlah tunas dan panjang  akar  yang  dipengaruhi  perlakuan konsentrasi  antiviral  dengan  uji  beda  nyata jujur  (uji  Tukey)  taraf  5%  disajikan  pada Gambar 2, 3, dan 4. Gambar 2. Pengaruh  perbedaan  konsentrasi antiviral pada tinggi tanaman.
Gambar  2  menunjukkan  bahwa  pengaruh konsentrasi  antiviral  menunjukkan  berbeda sangat  nyata  pada  variabel  tinggi  tanaman. hasil pengamatan menunjukkan bahwa semakin tinggi  konsentrasi  antiviral  yang  di  berikan maka semakin menurun pertumbuhan tanaman. pada  variabel  tinggi  tanaman, hal  ini membuktikan  bahwa  pemberian  antiviral acyclovir  berpengaruh  signifikan  terhadap pertumbuhan  tinggi  tanaman.  Senyawa antiviral dapat menghambat replikasi virus dan dapat  mengeliminasi  virus  secara  keseluruhan atau sebagian.
Gambar 3. Pengaruh  perbedaan  konsentrasi antiviral pada jumlah tunas.
Dari  hasil  pengamatan  Gambar  3  tentang jumlah  tunas  pada  berbagai  konsentrasi antiviral  didapat  kan  bahwa  semakin  tinggi pemberian  konsentrasi  antiviral  maka  terjadi penurunan  pada  pertumbuhan  jumlah  tunas. Diduga  bahwa  semakin  tingginya  konsentrasi antviral  yang  diberikan  maka  terjadi penghambatan  pada  pertumbuhan  jumlah tunas/  Menurut  Pahan  (2006),  tanaman  yang diberi  cekaman  (konsentrasi  antiviral)  dapat menyebabkan terjadinya klorosis pada jaringan tanaman yang akan berakibat pada pertumbuhan  tanaman,  meski  demikian tanaman  dapat  kembali  tumbuh  normal  bila dikembalikan  pada  kondisi  normal  (tidak) diberi cekaman.
Gambar 4. Pengaruh  perbedaan  konsentrasi antiviral pada panjang akar.
Gambar  4  menunjukkan  bahwa  pemberian antiviral  acyclovir  menghambat  pertumbuhan panjang  akar.  Terlihat  bahwa  terdapat perbedaan  panjang  akar  yang  sangat  berbeda nyata  pada  pemberian  konsentrasi  aniviral acyclovir  yang  semakin  tinggi.  Menurut  (Al Maari et al., 2012) bahwa konsentrasi antiviral yang  semakin  tinggi  akan  mengakibatkan pertumbuhan  yang  melemah  sebagai  akibat dari  kematian  meristem  atau  penurunan metabolisme seluler pada tanaman inang.
Pengaruh Waktu pemaparan Hasil uji beda nyata jujur (uji Tukey) taraf 5%  menunjukkan  bahwa  perlakuan  waktu pemaparan berpengaruh terhadap panjang akar tanaman,jumlah  tunas,  dan  tinggi  tanaman semakin lama waktu pemaparan maka semakin tinggi  nilai  panjang  akar  tanaman,  jumlah tunas, dan tinggi tanaman(Gambar 5, 6, 7).
Gambar  5.  Pengaruh  waktu  pemaparan  pada tinggi tanaman Gambar  6.  Pengaruh  waktu  pemaparan  pada jumlah tunas Gambar  7.  Pengaruh  waktu  pemaparan  pada panjang akar. Pengaruh waktu pemaparan terhadap tinggi tanaman  menghasilkan  tinggi  tanaman  yang semakin tinggi dengan semakin lamanya waktu pemaparan,  Hal  ini  berkaitan  dengan  proses pertumbuhan  tanaman,  semakin  lama  waktu pemaparan,  tanaman  semakin  tumbuh  dan berkembang karena lingkungan yang mendukung  untuk  pertumbuhan  seperti  media dengan mineral-mineral yang ada dalam media. Diduga  juga  bahwa  semakin  lama  waktu pemaparan    maka  semakin  besar  adaptasi tanaman  untuk  menahan  efek  dari  pemberian antiviral pada media tanaman. Menurut mekanisme kerja acyclovir analog guanosin,  bahwa  acyclovir  dapat  mengganggu biosintesis dari guanosin 5´−fosfat. Terganggunya  biosintesis  guanosin5´−fosfat dapat  mengakibatkan  terganggunya  sintesis
RNA  dan  DNA  dalam  sel  yang  terinfeksi. Terhambatnya  sintesis  RNA  dan  DNA    pada sel yang mengandung acyclovir tentu saja akan
menghambat  replikasi RNA  dari  virus  yang berada  dalam  jaringan  terinfeksi  .Menurut Cowell  (2013),  Acyclovir  berfungsi  sebagai antimetabolit  yang  dapat  bersifat  sebagai inhibitor  DNA  polymerase  dari  virus.  Hal  ini juga terjadi  pada variabel pengamatan jumlah tunas  dan  tinggi tanaman  yang  menunjukkan perlakuan  lama  inkubasi  yang  terbaik  adalah pada  6  minggu.  Hasil  tersebut  menunjukkan semakin lama  waktu pemaparan, pertumbuhan tanaman  semakin  baik  karena  diduga  sudah terjadi  pengurangan  atau  bahkan  pemutusan replikasi  virus  dengan  indikasi  semakin  besar pula  tingkat  adaptasi  tanaman  terhadap  bahan antiviral pada media pertumbuhan.
Uji Protein  Virus  dengan  Metode  ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) Pengujian  sampel  daun  dilakukan  pada  semua tanaman,  yaitu  pada  tanaman  yang  diberi perlakuan  khemoterapi  acyclovir  dan  pada tanaman  kontrol  atau    tanaman  yang  0  ppm acyclovir  perlakuan  khemoterapi.    Pengujian ini  dilakukan  untuk  mengetahui  keberhasilan dalam  mengeliminasi  SCMV.  Data  hasil  uji ELISA  pada  semua  sampel    daun  setelah perlakuan khemoterapi dapat dilihat pada Tabel 1. Data  hasil  uji  ELISA  menunjukkan  bahwa efektifitas  antiviral  acyclovir  berbeda-beda pada  masing-masing  perlakuan  khemotrapi pada  kultur  tunas  apikal  tebu  PS  881.  Dari tabel  tersebut  dapat  ditunjukkkan  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  antiviral  yang diberikan maka efektifitas kemoterapi semakin baik  yang  ditunjukkan  dengan  nilai absorbansinya  lebih  kecil  dibanding  nilai absorbansi  pada  kontrol  negatif,  begitu  juga dengan pengaruh waktu pemaparan Tabel  1.  Data  hasil  uji-ELISA  pada  semua perlakuan khemoterapi Sampel Nilai Absorbansi ± Standart Deviasi Interpretasi Tanaman Kontrol 0,137 ± 0,125 Positif Tanaman Kontrol 0,122 ± 0,052 Positif Tanaman Kontrol 0,109 ± 0,108 Positif Aciclovir 20 ppm 4 minggu 0,106 ± 0,117 Positif Aciclovir 20 ppm 5 minggu 0,082 ± 0,119 Negatif Aciclovir 20 ppm 6 minggu 0,082 ± 0,037 Negatif Aciclovir 40 ppm 4 minggu 0,090 ± 0,023 Negatif Aciclovir 40 ppm 5 minggu 0,050 ± 0,006 Negatif Aciclovir 40 ppm 6 minggu 0,050 ± 0,052 Negatif Kontrol Negatif 0,092
Keterangan Tabel 1: Positif :  bila  nilai  absorbansi  yang  diperoleh diatas  nilai  kontrol  negative(virus  belum tereliminasi) Negatif :  bila  nilai  absorbansi yang  dipeoleh  dibawah  nilai  kontrol  negatif (virus sudah tereliminasi) Menunjukkan  bahwa  semakin  lama  di media inkubasi yaitu selama 6 minggu didapat hasil yang lebih baik dilihat dari nilai rata-rata absorbansinya yaitu dibawah kontrol negatif. Dari hasil uji Elisa ini menunjukkan bahwa konsentrasi antiviral acyclovir 20 ppm dengan lama  inkubasi  5  minggu,  6  minggu  dan konsentrasi  antiviral  40  ppm  4  minggu,  5 minggu  dan  6  minggu  sudah  mampu mengeliminasi virus SCMV, yang ditunjukkan dengan  nilai  absorbansinya  di  bawah  nilai kontrol  negatif.  Sehingga  perlakuan  K1W2, K1W3, K2W1,  K2W2,  K2W3  mendapatkan nilai  absorbansi  nya  di  bawah  nilai  kontrol negatif, yang berarti bahwa perlakuan tersebut sudah mampu mengeliminasi virus SCMV.

## Hasil Pengujian RT-PCR
Hasil pengujian dengan RT-PCR mendapatkan data sebagaimana pada Gambar 8. Berdasarkan hasil  RT-PCR  diketahui  terdapat  perbedaan tebal  tipis  nya  band  dari  SCMV.  Semakin tingggi konsentrasi antiviral dan semakin lama waktu  pemaparan  menghasilkan  band  yang sangat tipis, ini ditunjukkan dengan band pada tanaman  kontrol  band  nya  sangat  terang  dan jelas, begitu juga pada tanaman konsentrasi 20 ppm  dangan  lama  4  minggu  menghasilkan band  SCMV  yang  masih  jelas,  demikian seterus nya band SCMV Gambar 8.Hasil visualisasi elektroforesis RT_PCR pada sampel perlakuan: M (Marker),  K1L3(Acyclovir  20  ppm 6minggu, ± 900bp), K1L2(Acyclovir 20  ppm  5  minggu,±  900bp), K1L1(Acyclovir  20  ppm  4  minggu,
±  900bp)  dan  M  (Marker), K2L1(Acyclovir 40 ppm 4 minggu,± 900bp),  K2L2(Acyclovir  40  ppm  5 mnggu,±900bp)  K2L3(Acyclovir  40 ppm 6 minggu, ±900bp) tersebut semakin  tipis  dan  tidak  jelas  pada tanaman  dengan  konsentrasi  antiviral  40ppm dengan waktu pemaparan 6 minggu. Hasil analisis RT-PCR tersebut, menunjukkan  bahwa  pada  semua  perlakuan khemoterapi masih terdeteksi adanya kandungan  virus  SCMV  meskipun  sudah terjadi  pengurangan  pada  tebal  tipisnya  band. Hal  ini  membuktikan  bahwa  deteksi keberadaan  virus  dengan  menggunakan  RT- PCR lebih akurat dibandingkan  dengan tehnik ELISA.  Ini  dibuktikan  dengan  terdeteksinya keberadaan  virus  pada  perlakuan  kemoterapi pada kultur  tunas  apikal  dengan  berbagai perlakuan,  meskipun  pada  pengujian  dengan Elisa  pada  perlakuan  kemoterapi  acyclovir  20 ppm  dengan  lama  perlakuan  5  minggu    dan konsentrasi  acyclovir  40  ppm    sudah  berhasil mengeliminasi  SCMV.  Hal  ini  juga membuktikan bahwa
metode deteksi keberadaan    virus  dengan    RT-PCR    lebih sensitif dalam mendeteksi adanya virus SCMV.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil analisis menunjukkan bahwa interaksi  antara  konsentrasi  khemoterapi  dan waktu  pemaparan  acyclovir    menghasilkan perlakuan yang paling baik dalam mengeliminasi virus SCMV pada tebu PS 881 adalah  perlakuan  K1W2,  yaitu  dengan konsentrasi  acyclovir  20  ppm  dan  waktu pemaparan 5 minggu.

## DAFTAR PUSTAKA
Al  Maari,  K.,  R.,  Massa  &  F.  AlBiski.  2012. Evaluation of some therapies and meristem culture  to  eliminate  potato  Y  potyvirus from  infected  potato  plants. Plant Biotechnology . Vol. 29:237-243 Balamuralikrishnan,  M.,  Sabitha  Doraisany, T.  Ganapathy  &  R.  Viswanathan.  2002. Combined  effect  of  chemotherapy  and meristem culture on sugarcane mosaik virus elimination  in  sugarcane. Sugar  Tech.  Vol 1(2):19-25
Loythala., Ornusa., Ratchanee Hongprayoon & Surawit  Wannakrairoj.  2008.  Development of  Invitro  Chemotheraphy  to  Eliminate Cymbidium  Mosaik  Virus  (CymMV)  in Mokara Chark Kuan. Agricultural Sciences Journal. Vol. 39 (3): 329-336 .
M.  Andriani,  E.  Vitalina,  Nurmalasari,  2013,
Eliminasi  Sugarcane  Mosauik  Virus
Melalui Khemoterapi Pada Tebu(Saccharum  Offikinarum)  Varietas NX1-2T  secara  Invitro , Jurnal  Sains  dan Seni Pomits , Vol.2 (2):2337-3520 .
Naz, S. ,Siddiqui,F.A., Ali,A. & Iqbal,J. 2009. Virus  Indexation  of  invitro  regenerated sugarcane plant, PakistanJournal of Botany. 41(4): 1931-1039 Pahan,  P.  2006. Panduan  Lengkap  Kelapa
Sawit . Bogor. Sriwijaya. Putra.,L.K.,  Damayanti.T.A.  2009.  Penyakit Streak  mosaik  pada  tebu  di  Indonesia: survey  lapangan,  deteksi  virus,  uji penularan,  kisaran  inang  dan  ketahanan varietas. Majalah  Penelitian  Gula .  Vol 1:19-35 Ramgareeb,  S., S.J. Snyman.,  T. Van Antwerpen,  RS.  Rutherford. 2010. Elimination  of  virus  and  propagation  of disease-free  sugarcane  (Saccharum  spp cultivar  Nco376)  using  apikal  meristem culture. Plant  Cell  Tissue  Organ  Culture Journal. Vol. 100:175-181 Reddy,  Ch.V  Subba & P.  Sreenivasulu.2011.
Generation  Of  Sugarcane  Streak  Mosaik Virus- Free  Sugarcane  (Sacharum  spp hybrid)  from  infected  plant  by  invitro meristem  tip  culture, European  Jurnal  of plant Pathology. Vol . 130 : 597-604.
Cowell,  S.  J.  2013.
Virus  Elimination  From Actinidia Germplas , [Thesis tidak dipublikasikan]. University of Auckland Zhang,  M.Q,  Rao  ,  G.P,  Gaur,  R.K,  Ruan, M.H, Maneesha Singh, S.R Sharma. 2008. Sugarcane mosaik viruses. Characterization, diagnosis and management  of  plant  viruses.  Vol.1. Industrial Crop