## Ekstrak Patikan Kebo (Euphorbia hirta L.) Menurunkan Hitung Eosinofil Bronkus pada Tikus Wistar Model Asma Alergi

## Patikan Kebo Extract (Euphorbia hirta L.) Decrease Eosinophil Bronchial Count in Allergenic Asthma Model of Wistar Rats
Danus Hermawan 1* , Kisrini 2 , Diding Heri Prasetyo 3
1 Departemen Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Sebelas Maret
2 Departemen Farmasi RS Moewardi Surakarta
3 Departemen Ilmu Penyakit Dalam RS Moewardi Surakarta
Kontak sur-el* : dr.danush63@gmail.com

## ABSTRAK
Paparan alergen pada saluran napas secara berulang memicu terjadinya reaksi asma alergi. Asma alergi diinduksi oleh  degranulasi  sel  mast  yang  melepaskan  mediator  proinflamasi  seperti  histamin,  leukotrien,  dan  prostaglandin yang  memicu  terjadinya  inflamasi  bronkus  yang  ditandai  dengan  peningkatan  eosinofil  bronkus.  P eningkatan eosinofil bronkus dapat ditekan oleh asam kafeat dan flavonoid. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian  ekstrak  patikan  kebo  terhadap  hitung  eosinofil  bronkus  pada  tikus  Wistar  model  asma  alergi.  Subyek penelitian berupa 25 ekor  tikus Wistar  jantan dengan berat  badan ± 200 g dan berumur 6 minggu, dibagi  dalam 5 kelompok yaitu: Kontrol (K), Asma alergi (A), ekstrak patikan kebo 10 (P1), 15 (P2), 20 mg/tikus/hari (P3). Hitung eosinofil  bronkus  postes  diukur  setelah  28  hari  perlakuan.  Hitung  eosinofil  bronkus  dianalisis  dengan  SPSS  versi 23.0  menggunakan  uji One  Way  ANOVA dan  dilanjutkan  uji post  hoc  multiple  comparison  Tukey .  Tingkat kemaknaan  digunakan  p<0,05.  Hitung  eosinofil  bronkus  tikus  P1,  P2,  dan  P3  lebih  rendah  secara  bermakna dibanding  tikus  Asma  Alergi (p<0.05) .  Patikan  kebo  mampu  menurunkan  jumlah  eosinofil  bronkus  pada  tikus Wistar model asma alergi.
Kata kunci : Patikan kebo, Eosinofil, bronkus, Asma, alergi

## ABSTRACT
Repeated exposure of allergens to the airways triggers allergic asthma reactions. Allergic asthma is induced by mast  cell  degranulation  which  releases  proinflammatory  mediators  such  as  histamine,  leukotrienes,  and prostaglandins  that  trigger  bronchial  inflammation  characterized  by  increased  eosinophil  bronchial.  Increased  of eosinophil  bronchial  can  be  suppressed  by  cafeic  acid  and  flavonoids.  The  aim  with  the  present  study  was  to determine the effect of administering patikan kebo extract to eosinophil bronchial counts in allergic asthma model of Wistar rats. The subjects of the study were 25 male Wistar rats weighing ± 200 grams and aging 6 weeks, divided into  5  groups:  Control  (K),  allergic  asthma  (A),  patikan  kebo  extract  10  (P1),  15  (P2),  20  mg/rat/day  (P3).  The eosinophil bronchial posttest was measured after 28 days of treatment. Eosinophil bronchial counts were analyzed by SPSS version 23.0 using the One Way ANOVA test and continued by the Tukey multiple comparison post hoc test. The level of significance is used p <0.05. Bronchial eosinophils of P1, P2, and P3 rats was significantly lower than those of allergic asthma rats (p <0.05). Patikan kebo reduced bronchial eosinophyl count in allergic asthma model of Wistar rats.
Keywords : Patikan kebo, Bronchial, eosinophil, Allergic, Asthma

## PENDAHULUAN
Alergi adalah suatu keadaan hipersensitivitas  yang  diinduksi  oleh  pajanan terhadap suatu antigen (alergen) tertentu yang
menimbulkan  reaksi  imunologik  berbahaya pada  pajanan  berikutnya  (Dorland,  2002). Alergi  dapat  menyerang  setiap  organ  tubuh terutama  kulit,  saluran  pencernaan,  dan
saluran  pernafasan  (Gould  &  Sutton,  2008). Alergi  yang  terjadi  pada  saluran  pernafasan dapat  menimbulkan  asma  alergi  (Galli  & Tsai,  2012).  Asma  alergi  ditandai  dengan adanya peningkatan eosinofil bronkus (Rosenberg, Phipps, & Foster, 2007).
Peningkatan  eosinofil  bronkus  diinduksi oleh  inflamasi  yang  terjadi  di  bronkus  yang disebabkan  oleh  degranulasi  sel  mast  yang melepaskan  mediator-mediator  proinflamasi seperti histamin, leukotrien, dan prostaglandin  (Carter  &  Bradding,  2011). Degranulasi  sel  mast  diaktivasi  oleh cross- linking antara  IgE  dengan  alergen  pada permukaan  sel  mast  (Gangwar,  Landolina, Arpinati, & Levi-Schaffer, 2017).
Degranulasi  sel  mast  dapat  ditekan  oleh flavonoid  dan  asam  kafeat  (Yoosoo,  et  al., 2013).
Patikan  kebo  merupakan  tanaman  yang banyak ditemukan di kebun, pekarangan, dan di pinggir sawah yang berdasarkan penelitian mengandung  asam  kafeat  dan  flavonoid (Asha,  Thirunavukkarasu,  &  Mohamad, 2015).  Kuersetin  berfungsi  sebagai mast  cell stabilizer sehingga dapat mencegah degranulasi  sel  mast  (Weng,  et  al.,  2012). Flavonoid  berfungsi  sebagai  antiinflamasi maupun  antihistamin  (Toshio  &  Ryo,  2013). Asam  kafeat  yang  terkandung  pada  patikan kebo berfungsi sebagai antihistamin, antiinflamasi, antispasmotik, immuno- stimulan,  dan leukotriene-inhibitor yang dapat  menghambat  pembentukan  leukotrien sehingga  dapat  mencegah  aktivasi  dan
perekrutan eosinofil menuju tempat inflamasi (Majid  Y,  Hugh,  Akram,  Par,  &  Peter  J, 2001).

## METODE
Subjek  penelitian  dalam  penelitian  ini adalah  tikus  Wistar  jantan  yang  berusia  6 minggu  dengan  berat  rata-rata  200  gram. Tikus  tersebut  kemudian  dibagi  menjadi  5 kelompok,  yaitu  kelompok  tikus  kontrol  (K), kelompok  tikus  asma  alergi  (A),  kelompok tikus  asma  alergi  diberi  perlakuan  ekstrak patikan kebo 10 mg/tikus/hari (P1), kelompok tikus  asma  alergi  diberi  perlakuan  ekstrak patikan  kebo  15  mg/tikus/hari  (P2),  dan kelompok  tikus  asma  alergi  diberi  perlakuan ekstrak  patikan  kebo  20  mg/tikus/hari  (P3). Setiap  kelompok  terdapat  6  ekor  tikus, sehingga  jumlah  tikus  yang  dipergunakan  di dalam  penelitian  ini  sebanyak  30  ekor. Ekstraksi  patikan  kebo menggunakan  metode sokletasi dengan menggunakan pelarut etanol 70%.
Setelah  adaptasi  selama  7  hari,  tikus kontrol (K) diberikan diet standar tikus tanpa diberi  perlakuan  sedangkan  tikus  A,  P1,  P2, dan P3 diberikan perlakuan berupa sensitisasi ovalbumin  (OVA)  selama  28  hari.  Setelah perlakuan  28  hari,  tikus  A  tidak  diberi intervensi,  sedangkan  tikus  P1,  P2,  dan  P3 diberikan  intervensi  berupa  ekstrak  patikan kebo  10  (P1),  15  (P2),  dan  20  mg/tikus/hari (P3).
Hari  ke-28  setelah  intervensi,  semua kelompok  tikus  diterminasi  dengan  cara
cervical  dislocation dan  diambil  jaringan bronkus utama didekat percabangan ( bifurcatio )  sepanjang  1,5  cm,  kemudian direndam  dalam  larutan  formalin  buffer  10% selama 10 jam, setelah itu dibuat blok parafin. Selanjutnya dilakukan potongan serial terhadap  blok  parafin  tersebut  untuk  dibuat slide.  Setelah  itu  dilakukan  pewarnaan dengan  Hematoksilin  Eosin  (HE)  untuk melihat  dan  menghitung  jumlah  eosinofil bronkus,  untuk  selanjutnya  diidentifikasi dengan  mikroskop  cahaya  dengan  perbesaran 10 x 40.
Hasil  penelitian  dianalisis  menggunakan program  analisis  statistik  SPSS  versi  23.0. Data  disajikan  dalam  bentuk mean ± standard deviation (SD). Data diuji distribusi normalnya  menggunakan  uji  Saphiro-Wilk. Apabila  data  terdistribusi  normal,  analisis hitung  eosinofil  bronkus  menggunakan  uji
Anova  dilanjutkan  dengan post  hoc  multiple comparison  Tukey untuk  membandingkan perbedaan mean antar  kelompok.  Jika  data tidak  memenuhi  syarat  untuk  uji  Anova, sebaran  data  tidak  normal  (p<0,05)  dan varians  data  tidak  sama  meskipun  sudah ditransformasi,  digunakan  uji  alternatifnya yaitu uji Kruskal Wallis untuk membandingkan  perbedaan mean lebih  dari dua  kelompok.  Pengujian  dilanjutkan  uji Mann Whitney, untuk membandingkan perbedaan mean antar kelompok.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hitung  eosinofil  bronkus  masing-masing kelompok  disajikan  dalam  bentuk Mean±SD pada  gambar  1. Hitung  eosinofil  bronkus tikus  Asma  alergi  (A)  secara  signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan tikus kontrol (K), dan  juga  secara  signifikan  lebih  tinggi
Keterangan :
Sebaran  data  hitung  eosinofil  bronkus  diuji  menggunakan  Shapiro-Wilk  (p≥0,05).  Uji One  Way ANOVA (p>0,05). Post  hoc  test dengan  uji Tukey ( p <0.05) . *berbeda  signifikan  dengan  kelompok  Kontrol.    #  berbeda signifikan dengan kelompok Asma alergi.
K= kelompok Kontrol Normal | A=kelompok Asma alergi | P1 : kelompok Asma alergi + ekstrak patikan kebo 10  mg/tikus/hari  |  P2  :  kelompok  Asma  alergi  +  ekstrak  patikan  kebo  15  mg/tikus/hari  |  P3  :  kelompok  Asma alergi + ekstrak patikan kebo 20 mg/tikus/hari p < 0,05 dikategorikan nilai yang bermakna
Gambar 1. Hitung Eosinofil Bronkus Tikus
dibandingkan  dengan  tikus  asma  alergi  yang diberi  ekstrak  patikan  kebo  berbagai  dosis  (p <0,05).  Hitung  eosinofil  bronkus  pada  tikus asma  alergi  yang  diberi  ekstrak  patikan  kebo secara  signifikan  lebih  rendah  dibandingkan dengan  tikus  asma  alergi  (A)  dan  tikus kontrol  (K),  dan  tidak  ada  perbedaan  yang signifikan antara tikus asma alergi yang diberi ekstrak patikan kebo pada dosis yang berbeda (P1, P2, dan P3).
Hitung eosinofil bronkus tikus asma alergi lebih  tinggi  secara  bermakna  (p<0,05) dibandingkan jumlah eosinofil bronkus kelompok  kontrol.  Hasil  ini  menunjukkan pemberian Ovalbumin (OVA) dapat meningkatkan  jumlah  eosinofil  bronkus  tikus Wistar.  Sesuai  dengan penelitian  (Laprise,  et al.,  2004)  yang  menyatakan  bahwa  paparan OVA  dapat  menginduksi  proses  alergi  pada hewan percobaan, sehingga mengalami
perkembangan hiperresponsifitas saluran nafas  dan  perekrutan  eosinofil  ke  dalam jaringan  bronkus  melalui  mekanisme  bahwa OVA  mengaktivasi  sel  mast  dan  sel  CD4 +
Th2  pada  saluran  nafas  (Busse  &  Lemanske, 2001).  Sel  mast  yang  terdegranulasi  dan  sel CD4 + Th2  tersebut  akan  menginduksi produksi  mediator-mediator  inflamasi  seperti histamin,  leukotrien  dan  IL-5  yang  dapat menyebabkan eosinofilia. Eosinofilia dipandang  sebagai  tanda  penyakit  alergi (Rosenberg, Phipps, & Foster, 2007).
Jumlah eosinofil bronkus tikus P1, P2, dan P3  menunjukkan  angka  yang  lebih  rendah dibandingkan  tikus  asma  alergi.  Hasil  ini menunjukkan secara bermakna ekstrak patikan  kebo  mampu  menekan  proses  asma alergi  ditandai  dengan  penurunan  jumlah eosinofil  bronkus.  Patikan  kebo mempunyai kandungan  kimia  flavonoid  dan  asam  kafeat
Gambar 1. Hitung Eosinofil Bronkus Tikus
Keterangan : a. Tikus kelompok asma alergi (A)
b. Tikus kelompok asma alergi + patikan kebo (P2)
Gambar 2. Gambaran bronkus tikus dengan pengecatan Hematoksilin Eosin dalam perbesaran 10 x 40. Eosinofil ditunjukkan dengan anak panah.
yang  memiliki  efek  farmakologis  sebagai antagonis kalsium,
antileukotrien, antihistamin, prostaglandin-synthesis inhibitor dan antiinflamasi (Asha, Thirunavukkarasu,  &  Mohamad,  2015). Menurut  Toshio  &  Ryo  (2013)  flavonoid dapat menghambat  enzim lipooksigenase  dan berperan  dalam  menghambat  degranulasi  sel mast  melalui  mekanisme  penghambatan pelepasan  Ca  intraseluler  (Yoosoo,  et  al., 2013). Dengan dihambatnya enzim lipooksigenase dan degranulasi sel mast maka mediator  yang  menstimulasi  perekrutan eosinofil  ke  jaringan,  seperti  histamin, leukotrin,  dan  prostaglandin,  tidak  terbentuk. Menurut  Weng  et  al.  (2012)  kuersetin menghambat  degranulasi  sel  mast  sehingga pelepasan mediator inflamasi seperti histamin, leukotrien, dan prostaglandin terhambat menyebabkan aktivasi dan perekrutan  eosinofil  bronkus  berkurang. Kuersetin dan asam kafeat dapat menghambat leukotrin,  histamin,  dan  Prostaglandin  D2 yang  dilepaskan  oleh  sel  mast  sehingga menurunkan aktivasi dan perekrutan eosinofil menuju  bronkus  serta  inflamasi  saluran  nafas (Majid  Y,  Hugh,  Akram,  Par,  &  Peter  J, 2001).
Pemberian  ekstrak  patikan  kebo  dosis  10, 15  dan  20  mg/tikus/hari  tidak  menunjukkan perbedaan yang bermakna dalam menurunkan jumlah eosinofil bronkus. Hasil ini menunjukkan  ekstrak  patikan  kebo  dosis  10 mg/tikus/hari  memiliki  kemampuan  yang tidak  jauh  berbeda  dengan  ekstrak  patikan
kebo  dosis  15  dan  20  mg/tikus/hari  dalam menurunkan  jumlah  eosinofil  bronkus  tikus Wistar  model  asma  alergi,  sehingga  untuk penelitian lebih lanjut bisa digunakan patikan kebo dosis 10 mg/tikus/hari.

## KESIMPULAN
Patikan  kebo  mampu  menurunkan  jumlah eosinofil  bronkus  pada  tikus  Wistar  model asma alergi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Fakultas  Kedokteran  Universitas  Sebelas Maret  yang  telah  memberikan  fasilitas  untuk pelaksanaan  penelitian  ini  dan  Direktorat Jenderal  Pendidikan  Tinggi  (DIKTI)  untuk pendanaan terhadap penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Asha, S., Thirunavukkarasu, P., & Mohamad, S.  (2015).  Phytochemical  screening  of Euphorbia hirta linn leaf extracts. World J Pharm Sci , 3(6): 1104-1112.
Busse,  W.,  &  Lemanske,  R.  (2001).  Asthma. N. Engl. J. Med. , 344: 350-362.
Carter, R., & Bradding, P. (2011). The role of mast  cells  in  the  structural  alterations  of the  airways  as  a  potential  mechanism  in the  pathogenesis  of  severe  asthma. Curr Pharm Des , 17(7):685–98.
Dorland,  W.  N.  (2002). Kamus  Kedokteran Dorland. Jakarta: EGC. Galli,  S.,  &  Tsai,  M.  (2012).  IgE  and  mast cells  in  allergic  disease. Nat  Med , 18(5):693–704.
Gangwar,  R.,  Landolina,  N.,  Arpinati,  L.,  & Levi-Schaffer,  F.  (2017).  Mast  cell  and eosinophil  surface  receptors  as  targets  for anti-allergic  therapy. Pharmacol  Ther , 170:37–63.
Gould, H., & Sutton, B. (2008). IgE in allergy and asthma today. at Rev Immunol , 8:205– 17.
Laprise,  C.,  Sladek,  R.,  Ponton,  A.,  Bernier, M.,  Hudson,  T.,  &  Laviolette,  M.  (2004). Functional  classes  of  bronchial  mucosa genes  that  are  differentially  expressed  in asthma . BMC Genomics , 5: 21.
Majid Y, M., Hugh, S., Akram, J., Par, S., & Peter  J,  O.  (2001).  Caffeic  Acid, Chlorogenic  Acid,  And  Dihydrocaffeic Acid  Metabolism:  Glutathione  Conjugate Formation. DMD , 29:1432–1439.
Rosenberg,  H.,  Phipps,  S.,  &  Foster,  P.  ( 2007).  Eosinophil  trafficking  in  allergy and  asthma. J  Allergy  Clin  Immunol. , 119:1303–10.
Toshio, T., & Ryo, T. (2013). Flavonoids and Asthma,  Nutrients. Nutrients ,  5(6):  2128– 2143.
Weng, Z., Zhang, B., Asadi, S., Sismanopoulos,  N.,  A,  B.,  Fu,  X.,  .  .  . Theoharides,  T.  (2012).  Quercetin is  more effective than cromolyn in blocking human mast  cell  cytokine  release  and  inhibits contact  dermatitis  and  photosensitivity  in humans. PLoS , 7(3): e33805.
Yoosoo, Y., Jung-Mi, O., Paul, H., Jae Yoon,
S., Byoungjae, K., Jonghyeok, S., . . . Dae- Hyuk, K. (2013). Polyphenols differentially  inhibit  degranulation  of distinct subsets of vesicles in mast cells by specific  intercation  with  granule-type- dependent SNARE complexes. Biochem J , 450(3): 537-546 .