ISSN 2354-6565
AKTIVITAS ANTIMIKROBA EKSTRAK ETANOL  DAN FRAKSI PELEPAH AREN ( Arenga pinnata Merr) TERHADAP Propionibacterium acnes DAN Staphylococcus aureus
Mira Andam Dewi, Julia Ratnawati, Fitri Sukmanengsih Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi. miraandamdewi.91@gmail.com

## ABSTRAK
Pelepah  aren  ( Arenga  pinnata Merr)  digunakan  oleh  masyarakat  sebagai  obat  jerawat. Penggunaan  secara  empiris  di  masyarakat  pelepah  aren  dibakar  kemudian  abunya  dipakai sebagai masker. Dilakukan pengujian aktivitas antimikroba ekstrak etanol, fraksi air, fraksi etil asetat  dan  fraksi  n-heksana  terhadap  bakteri Propionibacterium  acnes dan Staphylococcus aureus dengan  metode  agar  perforasi.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi  dengan pelarut etanol. Ekstrak etanol di fraksinasi dengan pelarut air, etil asetat, dan n-heksana. Hasil ekstrak  dan  fraksi  dipekatkan  dengan  “rotary  evaporator”  dan  dikentalkan  di  penangas  air. Konsentarsi  hambat  minimum  (KHM)  ekstrak  etanol  35%  dan  fraksi  etil  asetat  7,5% memberikan diameter hambat berturut-turut (14±0,06) mm dan (14±0,04) mm terhadap bakteri Propionobacterium acnes . Konsentrasi hambat miminum (KHM) ekstrak etanol 18%, fraksi air 40%, dan fraksi  etil asetat 2,5%  memberikan  diameter hambat berturut-turut (14,6±0,13) mm, (14±0,06)  mm,  dan  (14±0,06)  mm  terhadap    bakteri Staphylococcus  aureus. Hasil  pengujian aktivitas  mikrobiologi  menunjukkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  paling  potensial  dalam menghambat kedua bakteri uji.
Kata kunci :  pelepah  aren  ( Arenga  pinnata Merr), Propionibacterium  acnes,  Staphylococcus aureus , jerawat, difusi agar perforasi.

## ABSTRACT
Palm  frond  ( Arenga  pinnata Merr)  is  used  by  the  public  as  an  acne  medication.  The  use  of empirically  in  the  community  burned  palm  frond  ashes  then  used  as  a  mask.  Testing  the antimicrobial activity of the ethanol extract, water fraction, the fraction of ethyl acetate and n- hexane  fraction  of  the  bacteria Propionibacterium  acnes and Staphylococcus  aureus with difussion perforation method. Extraction is done by the method of maceration with ethanol. The ethanol extract is fractionated by water solvent, ethyl acetate, and n-hexane. Results extracts and fractions  concentrated  by  "rotary  evaporator"  and  thickened  in  water  bath.  The  minimum inhibitory concentration (MIC) of 35%  ethanol  extract and 7.5% ethyl acetate fraction gives a row  inhibitory  diameter  (14  ±  0.06)  mm  and  (14±0.04)mm  to Propionobacterium  acnes bacteria. Miminum inhibitory concentration (MIC) of 18% ethanol extract, 40% water fraction, and 2.5% ethyl acetate fraction gave inhibitory consecutive  diameter (14.6 ± 0.13) mm, (14 ± 0.06) mm, and (14 ± 0.06) mm against Staphylococcus aureus . The test results showed that the microbiological activity of ethyl acetate fraction is the most potent in inhibiting both bacterial test.
Key words :  palm  frond  ( Arenga  pinnata Merr), Propionibacterium  acnes , Staphylococcus aureus , acne, diffusion perforation method.

## PENDAHULUAN
Acne  atau  yang  sering  kita  kenal  dengan jerawat  adalah  penyakit  kulit  yang  terjadi akibat peradangan menahun folikel
polisebasea  yang  ditandai  dengan  adanya
komedo,  papul,  pustul,  nodus  pada  tempat predileksinya.  Tempat  predileksinya  acne vulgaris  adalah  pada  muka,  bahu,  dada bagian  atas,  lengan  atas  dan  punggung bagian atas (Djuanda dkk, 1999).
Jerawat  dapat  disebabkan  oleh  bakteri Propionibacterium acnes dan Staphylococcus  aureus. Kedua  bakteri tersebut  menghasilkan  lipase  yang  memecah asam  lemak  bebas  dari  lipid  kulit.  Asam lemak tersebut dapat menimbulkan peradangan  jaringan  yang  berperan  dalam timbulnya jerawat (Jawetz dkk, 1996).
Pelepah aren  yang telah lama bermanfaat dalam  pengobatan  tradisional  antara  lain untuk  pengobatan  jerawat.  Hasil  pengujian fitokimia yang pernah dilakukan melaporkan bahwa  tepung  pelepah  aren  mengandung senyawa  metabolit  sekunder  alkaloid, terpenoid  dan  tanin  yang  merupakan golongan  polifenol  (Meiske  dkk,  2002), senyawa-senyawa tersebut mempunyai kemampuan sebagai antibakteri.
Berdasarkan angka kejadian acne vulgaris yang  tinggi  serta  penggunaan  pelepah  aren secara  tradisional  sebagai  obat  jerawat  dan metabolit  sekunder  yang  terdapat  dalam pelepah  aren,  maka  dilakukan  penelitian untuk  mengetahui  aktivitas  antimikroba  dari ekstrak  dan  fraksi  pelepah  aren  terhadap bakteri Propionibacterium acnes dan Staphylococcus aureus.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui  aktivitas  antimikroba  ekstrak etanol  dan  fraksi-fraksi  pelepah  aren  yang ditunjukkan  dengan  adanya  penghambatan pada  mikroba  uji  ( Propionibacterium  acnes dan Staphylococcus  aureus )  serta  untuk menetapkan  konsentrasi  hanbat  minimum (KHM)  yang  dapat  diberikan  oleh  ekstrak dan fraksi-fraksi tersebut.
Penelitian ini diharapkan dapat memberikan  informasi  bagi  masyarakat mengenai  aktivitas  antimikroba  dari  ekstrak etanol  dan  fraksi-fraksi  pelepah  aren terhadap  bakteri Propionibacterium  acnes dan Staphylococcus  aureus. Selain  itu diharapkan  dapat  dijadikan  bahan  acuan dalam  penelitian  lebih  lanjut  terhadap formulasi  sediaan  yang  mengandung  ektrak etanol  dan  fraksi-fraksi  dari  tanaman tersebut.

## METODE
Tahap  penyiapan  simplisia  meliputi pengumpulan simplisia pelepah aren ( Arenga pinnata Merr),  pembersihan,  pengeringan, dan  pembuatan  serbuk  simplisia.  Simplisia diperoleh  dari  Kemang,  Cianjur,  Jawa  barat. Dilakukan  determinasi  di  Laboratorium Biosistematik  dan  Ekologi,  Sekolah  Tinggi Ilmu  dan  Teknologi  Hayati,  Institut Teknologi  Bandung  (ITB).  Pelepah  aren yang dikumpulkan adalah pelepah aren yang tidak terlalu muda dan tidak terlalu tua yaitu pelepah yang ke 3 hingga pelepah yang ke 6. Simplisia kemudian diserbukkan dan dilalukan  pemeriksaan  makroskopik  dan mikroskopik,  penapisan  fitokomia  yang meliputi:  pemeriksaan  alkaloid,  flavonoid, tanin,  polifenol,  steroid  dan  triterpenoid, monoterpenoid  dan  seskuiterpenoid,  saponin dan  kuinon,  serta  dilakukan  karakteristik simplisia  yang  meliputi  penetapan  kadar  air, kadar abu, dan kadar sari.
Proses  penyiapan  sampel  uji  berupa ekstrak  serta  fraksi.  Pembuatan  ekstrak dilakukan dengan cara ekstraksi dingin yaitu secara  maserasi  dalam  pelarut  etanol redestilasi,  kemudian  didiamkan  selama  24 jam  dengan  pengadukan  sesekali  dan diulangi  sebanyak  4  kali  hingga  ekstrak bening. Pemekatan ekstrak dilakukan dengan cara menguapkan pelarut
ekstrak menggunakan  alat rotary  evaporator pada suhu  50°C,  sedangkan  pengentalan  ekstrak dilakukan  dengan  menguapkan  sisa  pelarut pada waterbath dengan  suhu  50°C  hingga diperoleh ekstrak kental. Kemudian dilanjutkan  dengan  proses  fraksinasi  seecara ekstraksi cair-cair (ECC) untuk mendapatkan fraksi  air,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  n- heksan.  Semua  sampel  uji  yang  berupa ekstrak serta fraksi pelepah aren diidentifikasi  kembali  dengan  penapisan fitokimia  untuk  mengetahui  jenis  metabolit sekunder  yang  terdapat  dalam  ekstrak  dan fraksi tersebut.
Pengujian aktivitas ekstrak, fraksi pelepah aren  ( Arenga  pinnata Merr)  dan  antibiotik pembanding  terhadap  bakteri  penyebab jerawat Propionibacterium  acnes dalam media  Triptone  Soya  Agar  (TSA)  dan Staphylococcus aureus dalam  media  Nutrien
Agar  (NA)  dengan  metode  difusi  agar perforasi.  Konsentrasi  ekstrak  dan  fraksi yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  uji  diukur  dengan  menggunakan jangka  sorong.  Media  agar  yang  masih  cair dicampur  dengan  suspensi  satu  jenis  bakteri dalam  cawan  petri,  dan  biarkan  membeku. Media yang telah padat dibuat lubang dengan menggunakan  perforator.  Setiap  cawan dibuat 4-5 lubang untuk diisi 4-5 konsentrasi zat uji yang berbeda-beda yaitu : 20%, 40%, 60%,  dan  80%  masing-masing  50  μL. Pembuatan  beberapa  konsentrasi  uji  tersebut dilakukan  dengan  menggunakan  pelarut DMSO.  serta  dilakukan  uji  terhadap Tetrasiklin HCl sebagai pembanding. Semua cawan  yang  telah  diisi  zat  uji  diikubasikan pada  suhu  35-37°C  selama  24  jam  untuk media  NA  dan  48  jam  untuk  media  TSA. Diameter  hambat  yang  terbentuk  diukur dengan menggunakan jangka sorong. Parameter
yang digunakan dalam menunjukkan  aktivitas  ekstrak  dan  fraksi pelepah aren terhadap bakteri jerawat adalah besarnya diameter hambat yaitu antara 14-16 mm.  Ekstrak  serta  fraksi  yang  aktivitasnya paling  potensial  kemudian  ditentukan konsentrasi hambat minimum (KHM).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kandungan  metabolit  sekunder  dalam pelepah  aren  adalah  flavonoid,  polifenol, tanin, saponin, kuinon, alkaloid,  monoterpen dan  seskuiterpen.  Hasil  dapat  diilihat  pada tabel 1.
Pada  pemeriksaan  karakteristik  simplisia pelepah  aren  dimana  didapat  hasil  bahwa Kadar  abu  16,21%,  Kadar  abu  larut  air 1,43%,  kadar  abu  tidak  larut  asam  12,88%, kadar  sari  larut  air  15,51%,  kadar  sari  larut etanol  10,36%  dan  kadar  air  1,98%.  Hasil pengamatan dapat dilihat pada Tabel 1
Tabel 1 .   Hasil Pemeriksaan Karakteristik Simplisia  Pelepah  Aren  ( Arenga  pinnata Merr) No Karakteristik Hasil b/b 1 Kadar Abu Total 16,12% 2 Kadar Abu Larut Air 1,43% 3 Kadar Abu Tidak Larut Asam 12,88% 4 Kadar Sari Larut Air 15,51% 5 Kadar Sari Larut Etanol 10,36% 6 Kadar Air 1,98%

## Pengujian  Aktivitas  Antimikroba  Metode Difusi Agar Perforasi
Hasil  pengujian  terhadap P.  acnes menunjukan nilai  konsentrasi  hambat minimum  (KHM)  dari  ekstrak  etanol  (35% b/v), dan fraksi etil asetat (7,5% b/v) dengan diameter  hambat  14  mm.  Sedangkan hambatan  terhadap Staphylococcus  aureus menunjukan nilai  konsentrasi  hambat minimum  (KHM)  dari  ekstrak  etanol (18%  b/v),  fraksi  air  (40%  b/v),  dan  fraksi etil  asetat  (2,5%b/v)  dengan  diameter hambat  berturut-turut  14,6  mm;  14  mm; 14  mm.  Fraksi  n-heksan  tidak  memberikan hambatan  terhadap  kedua  bakteri  tersebut. Tetrasiklin  0,005%  memberikan  konsentrasi hambat minimum (KHM) terhadap Propionibacterium  acnes dengan  diameter hambat  14  mm,  sedangkan  konsentrasi Tetrasiklin 0,0005% memberikan konsentrasi hambat minimum (KHM) terhadap
Staphylococcus  aureus dengan  diameter hambat 14 mm.
Hambatan yang terjadi pada kedua bakteri tersebut  disebabkan  oleh  metabolit  sekunder yang dikandung oleh pelepah aren, metabolit sekunder  seperti  flavonoid,  polifenol,  tanin, alkaloid dan terpenoid  mampu menghambat aktivitas mikroba. Mekanisme penghambatan pertumbuhan bakteri oleh golongan senyawa metabolit  memiliki  aktivitas  yang  berbeda.
Golongan senyawa flavonoid dapat mendenaturasi  protein  akibatnya  dinding  sel bakteri  rusak  dan  gugus  hidroksil  tersebut masuk  kedalam  inti  sel  bakteri  sehingga menyebabkan  bakteri  tersebut  mati  (Trease dan  Evans,  1978).  Ketersediaan  alkaloid pada  pelepah  aren  dapat  mengganggu
komponen penyusun  peptidoglikan pada sel bakteri,  menyebabkan  sel  bakteri  menjadi lisis. Terpenoid dapat menyebabkan terjadinya  lisis  pada  sel  bakteri  dengan mengikat protein, lipid dan karbohidrat yang terdapat  pada  mikroba.    Polifenol  dan  tanin dapat  menghambat  aktivitas  enzim  protease, menghambat  enzim  pada  protein  transpor selubung  sel  bakteri,  dan  destruksi  atau inaktivasi  fungsi  materi  genetik  (Cowan, 1999). Tanin juga diduga mampu mengkerutkan  dinding  sel  bakteri  sehigga dapat mengganggu permeabilitas sel.
Terganggunya  permeabilitas  sel  bakteri menyebabkan  sel  tersebut  tidak  dapat melakukan aktivitas hidup sehingga pertumbuhan terhambat dan
mati (Harbourne, 1978).
Fraksi  etil  asetat  merupakan  yang potensial  menghambat  pertumbuhan  kedua bakteri  hal  ini  didukung  dengan  data penapisan  fitokimia  dimana  metabolit sekunder  yang  terdapat  dalam  fraksi  etil asetat  lebih  banyak  di  bandingkan  ekstrak etanol,  fraksi  air  dan  fraksi  n-heksan.  fraksi air  memberikan  hambatan  hanya  terhadap Staphylococcus  aureus dengan  konsentrasi hambat  minimum  yang  besar  sedangkan fraksi  n-heksan  tidak  memberikan  hambatan terhadap  kedua  bakteri  uji,  hal  ini dikarenakan  kandungan  senyawa  yang terdapat  pada  fraksi  n-heksan  hanya monoterpen  dan  seskuiterpen  sehingga  tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri.
Fraksi  etil  asetat  yang  merupakan  fraksi yang paling potensial dari bahan uji  aktivitas antimikrobanya  tidak  sebanding  dengan antibiotik  Tetrasiklin.  Akan  tetapi  efek resistensi  dari antibiotik Tetrasiklin terhadap
Propionibacterium
acnes dan Staphylococcus  aureus cukup  tinggi  jika penggunaan  obat  tersebut  tidak  sesuai  dosis yang  dianjurkan.  Aktivitas  antimikroba dipengaruhi oleh beberapa faktor antara lain, konsentrasi  ekstrak,  kandungan  metabolit senyawa  antimikroba  pada  bahan  uji,  dan jenis  bakteri  yang  dihambatnya.  Konsentrasi ekstrak  yang  semakin  tinggi  membentuk zona  bening  yang  semakin  besar.  Hasil penelitian  ini  sesuai  dengan  pernyataan Pelczar  dan  Chan  yang  dalam  bukunya menyebutkan bahwa semakin tinggi
konsentrasi ekstrak maka akan semakin besar efek  yang  ditimbulkan.  Semakin  pekat konsentrasi  bahan  uji  maka  senyawa metabolit sekunder yang terkandung didalamnya  akan  semakin  banyak  sehingga memberikan  pengaruh  terhadap  diameter hambat  (Holt  dkk,  1994  dan  Tim  penyusun, 1986).
Propionibacterium acnes dan Staphylococcus aureus menunjukkan perbedaan  sensitivitas  terhadap  bahan  uji (ekstrak  dan  fraksi  pelepah  aren)  karena setiap jenis bakteri  memiliki sensitivitas dan respon  sel  yang  berbeda  (Nester,  2001). Staphylococcus  aureus mempunyai  faktor koagulase (+) yang menyebabkan peptidoglikan  pada  dinding  sel  bakteri tersebut  mudah  menggumpal  oleh  karena itu Staphylococcus aureus lebih mudah dihambat  dibandingkan Propionibacterium acnes ,  hal  ini  ditunjukkan  oleh  variasi diameter zona bening yang terbentuk (Jawetz dkk, 1996).
Konsentasi  terkecil  zat  uji  yang  masih menghambat  pertumbuhan  mikroba  uji denggan  diameter  14-16  mm  merupakan konsentrasi hambat minimum (KHM). Bagan pengujian  antimikroba  ekstrak  dan  fraksi- fraksi  pelepah  aren  dapat  dilihat  pada  Tabel 2.
Tabel 2. Perbandingan  Nilai  KHM  Ekstrak Etanol,  Fraksi  Air,  Fraksi  Etil  Asetat  dan Fraksi n-Heksan
Bahan Uji KHM (% b/v) Propionibacterium acnes Staphylococcus aureus KHM (%b/v) Diameter (mm) KHM (%b/v) Diameter (mm) Ekstrak Etanol 35 14 ± 0,06 18 14,6 ± 0,13 Fraksi Air - - 40 14 ± 0,06 Fraksi Etil Asetat 7,5 14 ± 0,04 2,5 14 ± 0,06 Fraksi n- Heksan - - - - Tetrasiklin  0,005  14 ± 0,04  0,0005  14 ± 0,04 Keterangan : (-) = tidak memberikan hambatan
Gambar I. Pengukuran KHM fraksi etil asetat pelepah aren terhadap bakteri Staphylococcus aureus (a) dan Propionibacterium acnes (b)
Gambar  II. Pengukuran  KHM  kontrol  Tetrasiklin  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus (a)  dan Propionibacterium acnes (b)

## KESIMPULAN
Dari  penelitian  yang  dilakukan  dapat disimpulkan  bahwa  pelepah  aren    memiliki aktivitas  sebagai    antimikroba  terhadap bakteri  penyebab  jerawat Staphylococcus aureus dan Propionibacterium  acnes. Fraksi etil  asetat  merupakan  fraksi  yang  paling potensial menghambat pertumbuhan mikroba
Propionibacterium acnes dan Staphylococcus aureus .

## DAFTAR PUSTAKA
Agoes,  Goeswin.  2007. Teknologi  Bahan Alam. Penerbit ITB. Bandung. 21-27. Tim Penyusun.  Sediaan  Galenik.  Departemen Kesehatan  Republik  Indonesia.  Jakarta. 1986, 10-13, 16, 28.
Cowan,  M.M.  1999. Plant  Product  as Microbial  Agent. Clinical  Microbilogy. 564-584.
Departemen  Kesehatan  &  Kesejahteraan Sosial  RI.  2001. Inventaris  Tanaman Obat  Indonesia  (I).  Jilid  2. Badan Penelitian  dan Pengembangan Kesehatan. Jakarta. 153-154.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia,
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. 1989. Materia Medika Indonesia. Jilid VI. Departemen Kesehatan  Republik  Indonesia  Jakarta.
245-247, 302, 321.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia. 2000. Parameter  Standar  Umum  Ekstrak
Tumbuhan  Obat. Direktorat  Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan,
Direktorat  Pengawasan  Obat  Tradisional.
Jakarta. 9, 16, 34-37.
Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia. 1977. Materia  Medika  Indonesia,  Jilid  I, Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan, Jakarta. 11.
Djuanda,  A.,  Hamzah,  M,  dan  Aisah  ,  S.
1999. Ilmu  Penyakit  Kulit  DanKelamin . Balai Penerbit FK UI. Jakarta. 3, 253-26.
Efendi dedi soleh. 2010. Prospek Pengembangan  Tanaman  Aren  (Arenga pinnata  Merr)  Mendukung  Kebutuhan
Bioetanol  di  Indonesia .  Pusat  Penelitian dan Pengembangan Perkebunan. Indonesian  Center  for  Estate  Crops Research and Development.  9(1).
36.
Goodman  and  Gilman.  2007. Dasar
Farmakologi  Terapi  Volume  2. EGC. Jakarta. 1231, 1775-1776, 1809.
Harborne,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia. Terbitan  kedua.  Terjemahan  Kosasih Padmawinata. ITB. Bandung. 47-49, 102.
Holt,J.  G.,  et.  Al.  1994. Bergeys  Manual  of Determinative  Bacteriology.  9 th ed, Williams & Wilkins . USA.572, 580, 596.
Ikatan  Apoteker  Indonesia.  2011. ISO Farmakoterapi  2. Ikatan  Apoteker Indonesia. Jakarta. 1-8.
Jawetz,  E.,  Melnick,  dan  Adelberg.  1996.
Mikrobiologi  Kedokteran .  Edisi  20.  Alih bahasa  Edi  Nugroho  &  R.F.  Maulany. EGC. Jakarta. 219.
Katzung, B.G. 1997. Farmakologi Dasar dan
Klinis,  Edisi  VI,  Terjemaah  Staf  Dosen Farmakologi Fakultas Kedokteran UNSRI. Jakarta. EKG.
Martini,  F.H.  1998. Fundamentals  of Anatomy  and  Physiology  4 th Edition , New JERSEY. prentice Hall Inc.148-157.
Meiske,  S.  Sangi.,  Lidya  I.  Momuat,  dan Maureen Kumaunang. 2002. Uji Toksisitas Dan Skrining Fitokimia Tepung Gabah  Pelepah  Aren  (Arenga  Pinnata Merr). Program  Studi  Kimia  FMIPA Universitas Sam Ratulangi-Manado. 12(2). 127-134. Nester,  E.W.,  2001. Microbiology  A  Human Perspective  3 rd Edition. Mc  Graw  Hill. New York.
Pelczar,  Michael  J,  dan  E.C.S.  Chan.  1998. Dasar-dasar  Mikrobiologi .  Terjemahan Ratna S Hadioetomo, T. Imas, S. Sutarmi Tjitrosomo,  Sri  Lestari.  UI.  Jakarta.  548- 549.
Volk & Wheeler. 1993. Mikrobiologi Dasar, Jilid  1,  Edisi  kelima,  Terjemahan Markham. Erlangga. Jakarta. 184-191.
Jawetz, E. 1991. Mikrobiologi Untuk Profesi Kesehatan, Edisi XIV, terjemahan Tonang and Gerard, B. Jakarta. EKG. 272-273. Staf Pengajar Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. 1993. Mikrobiologi
Kedokteran,  Edisi  Revisi .  Binarupa Aksara. Jakarta 111.
Tim  penyusun.  1986. Sediaan  Galenik . Departement Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta. 10-13, 16, 18. Trease  and  Evans.  1978. A  Textbook  of Pharmacognocy. Bailliere Tindal. London.