Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, Vol. 8 No.2  Desember 2022 Avaiable online at www.jurnal-pharmaconmw.com/jmpi p -ISSN : 2442-6032 e -ISSN :  2598-9979
Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase dan Antioksidan Tagetes erecta L. sebagai Whitening Agent Formulasi Losio Pencerah Kulit

## Lia Puspitasari, Ni Putu Desy Ratna Wulan Dari
Program Studi Farmasi Klinik dan Komunitas, Institut Teknologi dan Kesehatan Bali

## ABSTRAK
Pencerah  kulit  merupakan  salah  satu  produk  kosmetik yang digunakan dengan tujuan untuk mencerahkan dan merubah warna kulit yang tidak diinginkan. Dewasa ini produk  pemutih  yang  mengandung  bahan  kimia berbahaya  dan  menimbulkan  banyak  dampak  negatif banyak  digunakan  secara  jangka  panjang.  Tanaman yang diduga dapat menjadi tanaman obat dan kosmetik adalah  tanaman  gemitir  ( Tagetes  erecta L.).  Bunga gemitir memiliki kandungan metabolit sekunder berupa terpenoid,  minyak  atsiri,  flavonoid  dan  karotenoid. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek antioksidan  dan  inhibitor  tyrosinase  bunga  gemitir ( Tagetes  erecta L.)  sebagai whitening  agent baru  dari bahan  alam,  serta  mengetahui  kestabilan  dari  sediaan losio  dari  ekstrak  bunga  gemitir  ( Tagetes  erecta L.). Penelitian dilakukan secara eksperimental, uji aktivitas
antioksidan  dan  inhibitor  tyrosinase  dilakukan  pada hasil ekstrasi bunga gemitir dari dua jenis pelarut yang berbeda  yaitu  metanol  96%  dan  etilasetat.  Uji  evaluasi sediaan  formulasi  losio  dilakukan  dengan  uji  stabilitas fisik  dan  uji  hedonik  menggunakan  30  orang  panelis. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol 96% dan ethyl asetat bunga gemitir ( Tagetes erecta L.) tidak  memiliki  aktivitas  penghambat  enzim  tyrosinase yang baik. Ekstrak metanol 96% dan ethyl asetat bunga gemitir  ( Tagetes  erecta L.)  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  sangat  kuat  dengan  nilai  IC 50 yaitu 17,24  µg/mL  dan  17,04  µg/mL.  Losio  ekstrak  metanol dan ekstrak etilasetat bunga gemitir ( Tagetes erecta L.) yang diformulasikan memiliki stabilitas yang baik.
Kata Kunci : Whitening, Tagetes, Gemitir, Antioksidan, Tyrosinase

## ABSTRACT
Skin  lightening  is  a  cosmetic  product  that  is  used  with the  aim  of  brightening  and  changing  unwanted  skin color.  Nowadays,  there  are  many  whitening  products that  contain  hazardous  chemicals  and  cause  many negative  impacts  on  their  use,  especially  in  long-term use. One of the plants thought to be used as medicinal and  cosmetic  is  gemitir  ( Tagetes  erecta L.).  Gemitir flowers  contain  secondary  metabolites  such  as terpenoids,  essential  oils,  phenols,  flavonoids  and carotenoids. This study aims to determine the effect of antioxidants and tyrosinase inhibitors of gemitir flower ( Tagetes erecta L.) as new whitening agents from natural ingredients,  and  determine  the  stability  of  the  lotio formulation  from  gemitir  flower  ( Tagetes  erecta L.) extract. The study was conducted experimentally, assays of  antioxidant  activity  and  tyrosinase  inhibitors  were
carried  out  on  the  extract  of  gemitir  flowers  from  two different solvents, 96% methanol and ethylacetate. The evaluation test of the lotio formulation was carried out by means of the physical stability test and hedonic test using  30  panelists.  The  results  showed  that  96% methanol  extract  and  ethyl  acetate  of  gemitir  flower ( Tagetes  erecta L.)  did  not  have  good  tyrosinase inhibitory activity. Methanol extract and ethyl acetate of gemitir  flower  ( Tagetes  erecta L.)  have  very  strong antioxidant activity with IC 50 values are 17.24 g/mL and 17.04  g/mL.  The  lotio  of  methanol  and  ethylasetat extract  gemitir  flower (Tagetes  erecta L.)  which  is formulated has good stability.
Keywords : Whitening; Tagetes; Gemitir; Antioxidant;
Tyrosinase Penulis Korespondensi : Informasi Artikel Lia Puspitasari Submitted : 21 Oktober 2022 Program Studi Farmasi Klinik dan Komunitas, Institut Teknologi dan Kesehatan Bali Accepted : 26 Desember 2022 E-mail : liapuspitasari0107@gmail.com Published : 27 Desember 2022 DOI :https://doi.org/10.35311/jmpi.v8i2.248

## PENDAHULUAN
Pencerah  kulit  merupakan  salah satu  produk  kosmetik  yang  digunakan dengan  tujuan  untuk  mencerahkan  dan merubah  warna  kulit  yang  tidak diinginkan.  Berbagai  produk  pencerah belakangan  ini  sangat  digemari  oleh berbagai  kalangan  terutama  kalangan remaja,  baik  wanita  maupun  pria. Kosmetik  pemutih  kulit  merupakan  jenis produk  yang  mengandung  bahan  aktif yang  bekerja dengan  menghambat pembentukan  pigmen  melanin  ataupun menghilangkan  melanin  yang  sudah terbentuk, sehingga merubah warna kulit menjadi  lebih  cerah.  Melanin  sendiri merupakan  pigmen  yang  bertanggung jawab  dalam  menentukan  warna  kulit, rambut,  dan  iris  mata  pada  seseorang (Allgisna et al., 2021).
Dewasa ini banyak beredar produk pemutih  yang  mengandung  bahan  kimia yang berbahaya dan menimbulkan banyak dampak  negatif  pada  penggunaannya, terutama pada pemakaian jangka panjang. Asam kojat, asam askorbat, dan hidrokuinon  merupakan  zat  aktif  yang sering digunakan sebagai pemutih, namun tidak  jarang  menimbulkan  efek  samping seperti  alergi,  iritasi  kulit,  hingga dermatitis.  Terlebih  lagi  banyak  produk kosmetik tanpa ijin edar yang mengandung merkuri yang menimbulkan resiko terjadinya kanker (Ripaldo, 2020).
Tanaman  yang  dapat  digunakan sebagai tanaman obat dan kosmetik yaitu
tanaman  gemitir  ( Tagetes  erecta L.). Tanaman  ini  banyak  tumbuh  dan  sangat mudah ditemui karena digunakan sebagai bahan pembuatan sarana upacara. Bunga gemitir  dikenal  dengan  nama marigold flower diketahui  memiliki  berbagai aktivitas  farmakologi  diantaranya  yaitu sebagai  hepatoprotektif,  antioksidan, antibakteri, antipiretik, antiepilepsi, karminatif  (Singh  et  al.,  2019).  Bunga gemitir  memiliki  kandungan  metabolit sekunder  berupa  minyak  atisiri,  fenol, flavonoid, dan karotenoid, terpenoid (Ayu et al., 2018).
Flavonoid  merupakan  polifenol alami  yang  mampu  mendepigmentasi kulit dengan cara melakukan penghambatan  langsung  pada  aktivitas tyrosinase  saat  proses  melanogenesis. Aktivitas  antioksidan,  serta  ikatan  yang terjadi  antara  flavonoid  dengan  tembaga diduga berperan dalam aktivitas penghambatan kerja dari enzim tyrosinase (Ohguchi  et  al.,  2003).  Pada  konsentrasi kecil antioksidan secara signifikan mampu menghambat  dan  mencegah  terjadinya oksidasi radikal bebas. Beberapa antioksidan  sintetik  seperti butylated hidroxy  toluene dan butylated  hidroxy aniline diketahui  memiliki  efek  samping yang  cukup  besar  pada  kerusakan  hati (Kikuzaki et al., 2002). Antioksidan alami relatif dapat digunakan dengan aman dan sangat banyak ditemukan di alam seperti flavonoid,  asam  askorbat,  betakaroten, dan  lain-lain  (Ripaldo,  2020).  Hal  ini
mengakibatkan  penelitian  dan  eksplorasi terhadap  bahan  alam  sebagai  sumber antioksidan sangat perlu untuk dilakukan.
Pigmen  melanin  tidak  hanya memberikan warna pada kulit, tetapi juga berfungsi  untuk  melindungi  kulit  dari paparan  sinar  matahari.  Dalam  proses melanogenesis, enzim tyrosinase memilik peranan  yang  cukup  penting.  Enzim tyrosinase  berperan  sebagai  katalis  pada proses  hidroksilasi  tirosin  menjadi dihidroksi-fenilalanin (L-DOPA) dan berperan  dalam  proses  oksidasi  L-DOPA menjadi  DOPA  kuinon.  Radiasi  sinar  UV matahari  mengaktivasi  tyrosinase  pada jaringan  kulit  sehingga  menginduksi proses produksi melanin. Aktivasi tyrosinase ini
mengakibatkan pembentukan  melanin  berlebih  yang menimbulkan hiperpigmentasi
menjadikan kulit berwarna cokelat (Fais et al., 2009). Penggunaan
senyawa
antioksidan atau suatu inhibitor tyrosinase dapat
menghambat pembentukan melanin.
Bunga  gemitir  sangat  berpotensi dikembangkan  dalam  produk  sediaaan farmasi  dalam  bentuk  losio  yang diharapkan  mampu  memberikan  efek pencerah  kulit.  Peneliti  tertarik  untuk mengembangkan sediaan kosmetika berupa losio pencerah kulit yang memiliki stabilitas sediaan farmasi yang baik, serta mengandung senyawa metabolit sekunder yang  memiliki  antioksidan  dan  inhibitor tirosinase tertinggi.

## METODE PENELITIAN Alat
Timbangan  analitik,  oven,  rotary evaporator,tabung  reaksi,  toples  kaca, mikro  tube,  96  well-microtiter  plate, microplate reader, rotary evaporator

## Bahan
Bunga  gemitir,metanol,  enzim tirosinase,  asam  kojat,  etanol,  aquadest, substrat L-DOPA, pereaksi mayer, pereaksi dragendorf, bouchardat, kloroform,  asam  asetat,  FeCl3,  H2SO4, HCL, Mg, DPPH.
Pembuatan  Ekstrak  Bunga  Gemitir ( Tagetes erecta L . )
Sebanyak  masing-masing  1000 gram  serbuk  kering  simplisia  bunga gemitir  dimaserasi  dengan  pelarut metanol  96%  dan  etillasetat  ,  masing- masing  sebanyak  3  liter  selama  5  hari. Filtrat  hasil  maserasi  diuapkan  dengan rotary  evaporator  pada  suhu  50ºC,  dan dilanjutkan  penguapan  pada  oven  pada suhu 60ºC.
Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Bunga gemitir ( Tagetes erecta L . )
1. Pembuatan Stok DPPH 125 μM
DPPH  ditimbang  sejumlah  2,5  mg dilarutkan  dengan  etanol  p.a  kedalam labu  ukur,  ditara  hingga  volume  50  mL. Kemudian  labu  ukur  dilapisi  dengan aluminium foil.
2. Preparasi  Sampel  dan  Asam
Askorbat
Sampel dan asam askorbat masing- masing  ditimbang  sebanyak  10  mg  dan
dilarutkan dengan DMSO sebanyak 1 mL.
Selanjutnya  disonikasi  hingga  larut, kemudian divorteks.
3. Perlakuan Uji
Sampel sebanyak 100 μL dimasukkan kedalam microplate.
Pengujian  dilakukan  dengan  melakukan pengulangan  sebanyak  2  kali.  Untuk sampel  ulangan  1  dan  2  ditambahkan DPPH sebanyak 100μL dan untuk kontrol negatifnya hanya ditambahkan etanol p.a sebanyak  100  μL.  Kemudian,  di  inkubasi di  suhu  ruangan  pada  kondisi  gelap selama  30  menit.  Lalu  diukur  di  alat ELISA  pada  panjang  gelombang  517  nm. Untuk blanko pada ulangan 1 dan 2 hanya berisi 100 μL etanol p.a dan ditambahkan sebanyak  100  μL.  Sedangkan  untuk kontrol negatifnya hanya berisi etanol p.a sebanyak  200  μL  (Salazar-Aranda  et  al., 2011).
Uji  Aktivitas  Inhibitor  Tyrosinase Ekstrak  Bunga  gemitir  ( Tagetes erecta L . )
1. Pembuatan Larutan NaOH 1 M
Sebanyak  4  g  serbuk  NaOH
(BM=40) ditimbang, kemudian
dilarutkan  dalam  100  mL  akuades  bebas CO 2 .
2. Pembuatan  Larutan  Dapar  Fosfat  50 mMpH 6,5
Sebanyak 3,402 g KH2PO4 (BM=136,09) ditimbang, kemudian dilarutkan  ke  dalam  450  mL  akuades bebas  CO2.  Nilai  pH  diatur  hingga  6,5 dengan  cara  penambahan  larutan  1  M
NaOH  kurang  lebih  25  mL.  Lalu ditambahkan  akuades  bebas  CO2  hingga 500 mL.
3. Pembuatan Larutan Substrat L-DOPA 2 mM Sebanyak 3,94 mg L-DOPA (BM=197,19)  ditimbang,  dimasukkan  ke dalam  labu  ukur  10,0  mL,  dilarutkan dalam 10 mL 50 mM dapar fosfat pH 6,5, sehingga  diperoleh  larutan  L-DOPA dengan  konsentrasi  2  mM.  Larutan  L- DOPA dihindarkan dari cahaya.
4. Pembuatan  Larutan  Enzim  Tirosinase 333 Unit
Konsentrasi larutan tirosinase yang digunakan  pada  uji  penghambatan aktivitas tirosinase mengacu pada penelitian  Batubara  (2010)  yaitu  333
Unit/mL. Sebanyak 5 mg (5771 Unit/mg) tirosinase ditimbang, kemudian dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  5,0  mL, dilarutkan dengan 50 mM dapar fosfat pH 6,5.  Tirosinase  yang  terlarut  memiliki aktivitas  5771  Unit/mL.  Larutan  ini digunakan  sebagai  larutan  stok.  Larutan stok  dipipet  sebanyak  577  μl,  kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 10,0 mL, sehingga  diperoleh  tirosinase  dengan aktivitas 333 Unit/mL. Larutan tirosinase (333 Unit/mL) dan larutan stok tirosinase (5771  Unit/mL)  disimpan  pada  suhu  - 20ºC.
5. Pembuatan  Larutan  Asam  Kojat sebagai Kontrol Positif
Sebanyak  5  mg  serbuk  asam  kojat ditimbang,  dimasukkan  ke  dalam  labu
ukur  10,0  mL,  dilarutkan  dalam  50  mM larutan  dapar  fosfat  pH  6,5,  sehingga didapatkan  larutan  asam  kojat  dengan konsentrasi 500 µg/mL. Sebanyak 5,0 mL larutan  asam  kojat  500  μg/mL  dipipet, lalu dimasukkan ke dalam labu ukur 10,0 mL,  didapatkan  larutan  asam  kojat dengan konsentrasi
250 µg/mL.
Selanjutnya dilakukan pengenceran hingga  didapatkan  larutan  asam  kojat dengan  konsentrasi  500;  250;  125;  62,5; 31,25;  15,625;  dan  7,8125  µg/mL  sebagai variasi konsentrasi pada pengujian untuk mendapatkan nilai IC 50 .
6. Pembuatan  Larutan  Ekstrak  Bunga Gemitir
Sebanyak  400  mg  ekstrak  kental hasil  maserasi  pelarut  etanol  bunga gemitir  dan  400  mg  ekstrak  kental  hasil maserasi  ethil  asetat  bunga  gemitir ditimbang dan dilarutkan dengan masing- masing 1 mL DMSO,  ditambahkan dapar fosfat  50  mM  pH  6,5  hingga  diperoleh volume 10 mL (4.000 μg/mL) dalam labu ukur. Selanjutnya dilakukan pengenceran
hingga  diperoleh  variasi  konsentrasi larutan  ekstrak  2.000;  1.000;  500;  250; 125; 62,5 dan 31,25 μg/mL pada pengujian untuk  mendapatkan  nilai  IC 50 .  Variasi konsentrasi  tersebut  diperoleh  melalui orientasi konsentrasi.
Pembuatan Losio Bunga
Gemitir ( Tagetes erecta L . )
Semua  bahan  fase  minyak  (As. Stearate,  Lanolin,  Setil  Alkohol,  Propil paraben) dilarutkan pada suhu 65˚ -75˚ C di  atas  waterbath.  Bahan  fase  air (Aquadest,  Gliserin,  Trieanolamin,  Metil paraben)  dilarutkan  terpisah  pada  suhu 65˚-75˚C.  Setelah  semua  fase  terlarut, ditambahkan  fase  air  ke  dalam  fase minyak  sedikit  demi  sedikit  sambil dilakukan  pengadukan  yang  konstan hingga  membentuk  emulsi.  Campuran tersebut  kemudian  ditambahkan  ekstrak bunga  gemitir  (zat  aktif)  dan  lavender essential  oil  (corringent  odoris).  Sediaan losio  dimasukkan  ke  dalam  wadah  dan dilakukan evaluasi sediaan. Formula yang digunakan dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Formulasi Losio Bunga Gemitir ( Tagetes erecta L . ) No. Nama Bahan Formula (%) 1 Ekstrak Bunga Gemitir 3 2 Setil Alkohol 6 3 Asam Stearat 6 4 Lanolin 3 5 TEA 3 6 Gliserin 3 7 Propil Paraben 30,18 8 Metil Paraben 0,02 9 Lavender q.s 10 Aquadest 150 (Megantara et al., 2017)
Evaluasi  Sediaan  Losio  Bunga Gemitir ( Tagetes erecta L . )
1. Uji Organoleptik
Pengamatan  terhadap  bentuk, warna  dan  bau  dari  sediaan  yang  telah dibuat.
2. Uji Homogenitas
Dengan  cara  losio  dioleskan  pada kaca  transparan  dimana  sediaan  diambil tiga bagian yaitu atas, tengah dan bawah. Homogenitas  ditunjukkan  dengan  tidak adanya butiran kasar.
3. Uji pH
Uji pH dilakukan menggunakan pH meter. Sebanyak 1 g sediaan dimasukkan dalam gelas kimia dan diencerkan dalam 100  ml  aquades.  pH  sediaan  diukur menggunakan pH meter. Sediaan kosmetik yang digunakan pada kulit harus memiliki pH yang sesuai dengan pH kulit, berkisar antara 4,5-6,5.
4. Uji Stabilitas
Masing-masing formula krim dimasukkan kedalam pot plastik, ditutup bagian  atasnya,  dan  diukur  parameter- parameter kestabilan meliputi pemisahan fase,  warna,  dan  bau  dari  sediaan  secara visual pada suhu kamar 25 o C-30 o C selama 4 minggu.
5. Uji Tipe Emulsi
Uji  tipe  sediaan  dilakukan  dengan metode  penambahan  warna  dilakukan dengan  penambahan  sedikit  metil  biru kedalam  sediaan  diatas  objek  gelas.  Bila metil biru tersebar merata berarti sediaan tersebut  tipe  emulsi  minyak  dalam  air
(m/a), tetapi bila hanya bintik-bintik biru berarti  sediaan  tersebut  tipe  emulsi  air dalam minyak (a/m).
6. Uji Kesukaan (Hedonic Test)
Panelis pada penelitian ini berjumlah 30 orang. Pengujian dilakukan secara visual, setiap panelis diminta untuk menggosokkan sediaan pada kulit punggung  tangan  dan  memberikan penilaian  terhadap  parameter  aroma, tekstur,  warna,  kesan  lengket  dan  kesan lembab  di  kulit.  Penilaian  panelis terhadap  sediaan  losio  dikategorikan  ke dalam 5 tingkatan yaitu: sangat suka (5), suka (4), cukup suka (3), kurang suka (2) dan  tidak  suka  (1),  selanjutnya  dihitung persentase tingkat kesukaan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Bunga  gemitir  yang  digunakan pada  penelitian  ini  yaitu  bunga  gemitir yang  diambil  dari  Desa  Plaga,  Badung, Bali.  Bunga  gemitir  yang  digunakan diidentifikasi  terlebih  dahulu  dengan melakukan  determinasi  tanaman  di Laboratorium  Karakterisasi  Kebun  raya “Eka Karya” Bali-BRIN. Hasil identifikasi menunjukkan bahwa sampel yang digunakan  benar  merupakan  tanaman gemitir ( Tagetes erecta L . ).
Bunga  gemitir  yang  digunakan, yaitu  bunga  gemitir  yang  telah  mekar dengan  sempurna,  memiliki  ukuran  dan warna  yang  relatif  sama.  Bunga  gemitir selanjutnya  dikeringkan  dengan  oven pada suhu 40˚C hingga menjadi simplisia.
Simplisia  bunga  gemitir  di  maserasi selama  5  hari  menggunakan  pelarut metanol  96%  dan  pelarut  ethyl  asetat dengan  perbandingan  1:3.  Ekstrak  yang diperoleh  selanjutnya  diuapkan  dengan menggunakan vacuum rotary
evaporator . Berdasarkan hasil skrining fitokimia  yang  dilakukan  pada  ekstrak bunga gemitir terdapat perbedaan kandungan  kimia  pada  hasil  maserasi
dengan  etanol  96%  dan  pelarut  ethyl asetat.  Ekstrak  bunga  gemitir  hasil maserasi  ethyl  asetat  mengandung berbagai  macam  metabolit  sekunder seperti  alkaloid,  flavonoid,  saponin, tannin  dan  polifenol,  serta  steroid  dan triterpenoid,  sedangkan  ekstrak  etanol 96%  bunga  gemitir  hanya  mengandung flavonoid,  saponin,  steroid,  tannin  dan polifenol.

## Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Bunga Gemitir
No. Uji Fitokimia Hasil Ekstrak Metanol Tagetes Erecta (EMTE) Ekstrak Etilasetat Tagetes Erecta (EETE) 1 Alkaloid (-) (+) (-) (-) 2 Flavonoid (+) (+) 3 Saponin (+) (+) 4 Tanin (+) (+) 5 Polifenol (+) (+) 6 Steroid (+) (+) 7 triterpenoid (-) (-)
Uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak bunga  gemitir  pada  penelitian  ini dilakukan  dengan  menggunakan  metode 1,1-difenil-2-pikrilhidrazin
(DPPH).
Aktivitas  antioksidan  dinyatakan  dalam IC 50 , yang merupakan jumlah konsentrasi zat  antioksidan  yang  memberikan  efek penghambatan  DPPH  sebesar  50%. Aktivitas  antioksidan  dinilai  berdasarkan adanya penurunan intensitas warna ungu DPPH yang sebanding dengan penurunan konsentrasi  larutan  DPPH.  Perubahan warna  terjadi  setelah  pemberian  sampel kedalam  larutan  DPPH,  yang  berwarna ungu  menjadi  ungu  kemerahan  sampai
kuning.  Hal  ini  terjadi  karena  terdapat reaksi antara difenil pikrihidrazil dengan atom hidrogen yang dilepaskan oleh satu molekul  sampel  (Pratiwi  et  al.,  2015). Suatu  senyawa  dikatakan  memiliki aktivitas  antioksidan  sangat  kuat  jika memiliki  nilai  IC 50 kurang  dari  50  bpj, aktivitas  antioksidan  kuat  dengan  nilai IC 50 50-100 bpj, dan aktivitas antioksidan lemah jika nilai IC 50 151-200 bpj (Pratiwi et al., 2015).
Pada penelitian ini ekstrak metanol 96%  dan  ethyl  asetat  bunga  gemitir memiliki  aktivitas  antioksidan  yang sangat kuat dengan nilai IC 50 yaitu 17,24
µg/mL  dan  17,04  µg/mL  dengan persamaan  regresi  linear  yang  dapat dilihat  pada  Tabel  3.  Kandungan  kimia yang  terkandung  pada  ekstrak  bunga gemitir dan memberikan efek antioksidan yaitu adanya kandungan senyawa
flavonoid.  Pembanding  yang  digunakan dalam penelitian ini yaitu asam ascorbate, yang  memiliki  nilai  IC 50 yang  lebih  kuat dibandingkan ekstrak bunga gemitir yang digunakan yaitu sebesar 5.11 µg/mL.

## Tabel 3. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Bunga Gemitir
No. Konsentrasi (ppm) % Inhibisi Persamaan (y=bx+a) IC 50 (ppm) EMTE EETE EMTE EETE EMTE EETE 1 250 95,01 95,54 y=19,357ln(x)- 5,1098 R2= 0,9915 y=19,19ln(x)- 4,4122 R2= 0,9954 17,24 17.04 2 200 92,91 92,39 3 150 89,50 90,03 4 100 85,83 85,03 5 50 72,44 72,18 6 25 56,69 57,21 7 12.5 43,04 43,30 8 0 - - Keterangan:
EMTE: Ekstrak Metanol Tagetes erecta ) EETW: Ekstak Etilasetat Tagetes erecta )
Gambar 1.   Grafik persen inhibisi aktivitas antioksidan terhadap konsentrasi eksrak metanol 96%, ethyl asetat dan asam askorbat
0; 0 0 20 40 60 80 100 0 100 200 300 % Inh ib isi Konsentrasi (µg/mL) % Inhibisi EMTE 0 20 40 60 80 100 120 0 50 100 150 200 250 300 % Inh ib isi Konsentrasi µg/mL % Inhibisi EETE

## Gambar 3. Grafik persen inhibisi aktivitas antioksidan terhadap konsentrasi asam askorbat
Pada  ekstrak  bunga  gemitir  yang diperoleh  juga  dilakukan  uji  aktivitas enzim tyrosinase. Pengujian ini dilakukan di Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka Tropika LPPM-IPB. Prinsip dari pengujian  aktivitas  inhibitor  tyrosinase ini  yaitu  terjadinya  hambatan  dalam pembentukan  produk  dopakrom  hasil reaksi  substrat  L-DOPA.  Penghambatan pembentukan dopakrom ditandai dengan terjadinya  penurunan  intensitas  warna yang  diukur  dengan  microplate  reader dengan  panjang  gelombang  510  nm, sehingga dipernoleh nilai absorbasi yang digunakan untuk melakukan perhitungan besar penghambatan reaksi L-DOPA.
Ekstrak bunga gemitir menunjukkan inhibisi yang sangat lemah terhadap kerja enzim tyrosinase.
Konsentrasi  500  ppm,  ekstrak  metanol 96% bunga gemitir menunjukkan penghambatan  enzim  tyrosinase  sebesar 5,26%  dan  ekstrak  etilasetat  bunga gemitir  yaitu  sebesar  5,01%.  Hasil tersebut  jika  dibandingkan  dengan
senyawa kontrol positif (asam kojat) pada konsentrasi  yang  sama,  ekstrak  bunga gemitir menunjukkan aktivitas penghambatan  yang  sangat  lemah  jika dibandingkan dengan asam kojat. Perbandingan aktivitas penghambat ezim tyrosinase dari ekstrak bunga gemitir dan asam gojat dapat dilihat pada Gambar 5.5. Pada  ekstrak  metanol  96%  dan  ethyl asetat  bunga  gemitir  tidak  dapat ditentukan  nilai  IC 50 sedangkan  asam kojat  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  21,51 ppm.
Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas antioksidan dan uji aktivitas penghambat enzim tyrosinase yang diperoleh, ekstrak metanol  96%  bunga  gemitir  memiliki aktivitas  yang  lebih  baik  dibandingkan dengan ekstrak ethylasetat yang digunakan;  sedangkan  untuk  aktivitas penghambat  enzim  tyrosinase  kedua ekstrak  tersebut  tidak  memberikan aktivitas  penghambatan  yang  baik, sehingga hanya akan dilakukan formulasi
0 20 40 60 80 100 0 5 10 15 20 25 % Inh ib isi Konsentrasi % Inhibisi Asam askorbat
losio  pada  ekstrak  metanol  96%  bunga gemitir.
Losio  yang  telah  dibuat  kemudian dilakukan  uji  stabilitas  diantaranya  yaitu uji organoleptic, uji pH, Uji Bebas Partikel
Asing,  Uji  Homogenitas,  Uji  Kesukaan, untuk  mengetahui  apakah  formula  dari losio  yang  dibuat  sudah  sesuai  dengan standar sediaan losio yang baik.
Gambar 4. Losio Ekstrak Metanol 96% Bunga Gemitir
Uji Organoleptik Organoleptik merupakan salah satu parameter
yang penting untuk
mengetahui tingkat suatu produk sediaan kosmetika.  Pemeriksaan  organoleptis losio  dilakukan  dengan  tujuan  untuk
melihat adanya kemungkinan ketidakstabilan  fisik  dari  sediaan  losio selama  proses  penyimpanan,  kestabilan bau,  warna,  maupun  homogenitas.  Hasil pengujian organoleptis pada sediaan losio dapat dilihat pada tabel 4.

## Tabel 4. Pengujian Organoleptis  Sediaan Losio Ekstrak Bunga Gemitir
Sediaan Losio Warna Bau 1 Kuning muda Wangi essential oil 2 Kuning muda Wangi essential oil 3 Kuning muda Wangi essential oil 4 Kuning muda Wangi essential oil 5 Kuning muda Wangi essential oil Pengujian organoleptis dilihat berdasarkan  warna  dan  bau.  Bentuk  dan konsistensi  yang  diamati  selama  30  hari tidak  mengalami  perubahan  setelah penyimpanan.  Warna  yang  diamati  yaitu kuning  muda.  Pada  pengamatan  bau, tercium aroma baccarat, karena digunakan penambahan pewangi essential oil baccarat pada sediaan losio.
Uji Homogenitas
Pengamatan  homogenitas  sediaan dilakukan  dengan  cara  mengoleskan sejumlah  tertentu  sediaan  pada  sekeping kaca yang transparan, lalu diratakan. Jika dari  dari  pengamatan  tidak  ada  butiran- butiran  maka  sediaan  dapat  dikatakan homogen.  Uji  homogenitas  bertujuan untuk  melihat  keseragaman  partikel dalam sediaan losio sehingga memberikan kualitas yang maksimal ketika digunakan.
Homogenitas merupakan salah satu faktor yang mempengaruhi kualitas dari sediaan losio.  Pemeriksaan  homogenitas  pada seluruh losio yang dibuat pada penelitian ini  menunjukkan  hasil  yang  homogen, ditandai  dengan  semua  partikel  dalam pengamatan  dikaca  objek  terdispersi secara merata dan tidak terjadi penggumpalan  pada  salah  satu  sisi.  Zat aktif yang ada di dalam sediaan losio akan terdispersi  secara  merata  pada  setiap penggunaan losio pada kulit.
Homogenitas  dipengaruhi  dengan kecepatan  pengadukan  selama  proses formulasi  sediaan  losio.  Kecepatan pengadukan bertujuan untuk memperkecil  ukuran  partikel  sehingga disetiap partikel mempunyai kesempatan yang  sama  untuk  berada  pada  setiap bagian dalam losio.
Uji pH
Pemeriksaan  pH  merupakan  salah satu parameter pengujian untuk menentukan  apakah  sediaan  tersebut masuk dalam rentang pH kulit atau tidak, yaitu  antara  3-7  (Depkes  RI,  1995). Dimana pH dari sediaan yang digunakan dapat mempengaruhi absorbsi pada kulit. Jika pH sediaan terlalu asam, maka dapat menyebabkan  iritasi  kulit  dan  bila  pH terlalu  basa  maka  dapat  menyebabkan kulit  bersisik.  Pada  penelitian  ini pengukuran pH sediaan dilakukan dengan pH meter digital. Pertama pH dikalibrasi terlebih dahulu dengan menggunakan pH netral,  kemudian  dicuci  dengan  aquades,
lalu  dikeringkan  dengan  menggunakan tisu.  Pengukuran  nilai  pH  sediaan  losio dilakukan dengan mencelupkan pH meter pada sediaan, kemudiaan tunggu beberapa saat hingga pH meter menunjukkan angka konstan.
Berdasarkan hasil pengukuran pH sediaan ekstrak losio bunga gemitir memiliki rata- rata nilai pH 6, yang telah sesuai dengan syarat pHs untuk penggunaan pada kulit

## Uji Stabilitas
Losio  yang  dibuat  selanjutnya dimasukkan ke dalam pot plastic, ditutuo bagian  atasnya  dan  diukur  beberapa parameter  setelah  4  minggu.  Dari  hasil pengamatan tidak terjadi pemisahan fase, perubahan  warna,  dan  bau  pada  sediaan losio ekstrak bunga gemitir
Uji Tipe Emulsi
Berdasarkan pengujian yang dilakukan dengan
melakukan penambahan  sedikit  meileb  blue  pada losio  yang  dibuat,  diperoleh  hasil  bahwa metilen  blue  tersebar  merata.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  losio  bunga  gemitir termasuk  kedalam  emulsi  minyak  dalam air (m/a).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa:
1. Ekstrak  metanol  96%  dan  ethyl  asetat bunga gemitir ( Tagetes erecta L.) tidak memiliki  aktivitas  penghambat  enzim tyrosinase yang baik sebesar 5,26% dan 5,01%.
2. Ekstrak  metanol  96%  dan  ethyl  asetat bunga  gemitir  ( Tagetes  erecta L.) memiliki  aktivitas  antioksidan  yang sangat  kuat  dengan  nilai  IC 50 yaitu 17,24 µg/mL dan 17,04 µg/mL.
3. Losio  ekstrak  bunga  gemitir  ( Tagetes erecta L.) yang diformulasikan memiliki  homogenitas,  stabilitas  yang baik, serta pH yang sesuai untuk sedian losio

## UCAPAN TERIMA KASIH
Para  penulis  mengucapkan  terima kasih  kepada  KEMENDIKBUD  RISTEK yang  telah  menyediakan  dana  hibah Penelitian  Dosen  Pemula  sehingga penelitian ini dapat berjalan dengan baik. Penulis  juga  mengucapkan  terimakasih kepada  ITEKES  Bali  atau  dukungan  dan segala  bentuk  fasilitas  yang  disediakan sehingga  penelitian  ini  dapat  dilakukan dengan lancar.

## DAFTAR PUSTAKA
Allgisna, K. N., Hindun, S., & Rantika, N.
(2021). Review: Perbandingan Beberapa Ekstrak Kulit Buah sebagai Anti-hiperpigmentasi: Review: Comparison  of  Fruit  Skin  Extract  as Anti-hyperpigmentation. Jurnal Sains Dan Kesehatan (J. Sains Kes.) , 3 (2 SE-Review),
335–342. https://doi.org/10.25026/jsk.v3i2.4 03 Ayu,  D.,  Pramitha,  I.,  Suaniti,  N.  M.,  & Sibarani, J. (2018). Aktivitas Antioksidan  Bunga  Pacar  Air  Merah (Impatiens balsamina  L.) dan  Bunga Gemitir  (Tagates  erecta  L.)  dari Limbah  Canang. Chimica  et  Natura
Acta , 6 (1), 8–11. https://doi.org/10.24198/CNA.V6.N 1.16447
Depkes RI. (1995). Farmakope Indonesia Edisi IV . Depkes RI.
Fais, A., Corda, M., Era, B., Fadda, M. B., Matos,  M.  J.,  Quezada,  E.,  Santana, L., Picciau, C., Podda, G., & Delogu, G. (2009).  Tyrosinase  inhibitor  activity of  coumarin-resveratrol  hybrids. Molecules (Basel, Switzerland) ,
14 (7),
2514–2520. https://doi.org/10.3390/molecules1
4072514
Kikuzaki,  H.,  Hisamoto,  M.,  Hirose,  K., Akiyama, K., & Taniguchi, H. (2002). Antioxidant properties of ferulic acid and its related compounds. Journal of Agricultural  and  Food  Chemistry , 50 (7), 2161–2168. https://doi.org/10.1021/jf011348w
Megantara,  I.  N.  A.  P.,  Megayanti  K.,
Wirayanti, R., Esa, I. B. D., Wijayanti, N. P. A. D., & Yustiantara, P. S. (2017). Formulasi  Lotion  Ekstrak  Buah Raspberry(Rubus  rosifolius)  Dengan Variasi  Konsentrasi  Trietanolamin Sebagai Emulgator Serta Uji Hedonik Terhadap  Lotion. Jurnal  Farmasi Udayana;  Vol.  6  No.  1,  Tahun 2017DO - 10.24843/JFU.2017.V06.I01.P01 . https://ojs.unud.ac.id/index.php/jfu /article/view/32378
Ohguchi, K., Tanaka, T., Kido, T., Baba, K.,
Iinuma, M., Matsumoto, K., Akao, Y., &  Nozawa,  Y.  (2003).  Effects  of hydroxystilbene derivatives on tyrosinase  activity. Biochemical  and Biophysical Research Communications , 307 (4),  861–863. https://doi.org/10.1016/s0006- 291x(03)01284-1
Pratiwi, D., Wahdaningsih, S., & Isnindar, I.  (2015).  The  Test  Of  Antioxidant Activity From Bawang Mekah Leaves (Eleutherine americana Merr.) Using Dpph (2,2-Diphenyl-1- Picrylhydrazyl)  Method. Majalah Obat  Tradisional , 18 (1),  9–16. https://doi.org/10.22146/TRADME DJ.7755
Ripaldo, F. (2020). Uji Aktivitas Inhibitor
Enzim Tirosinase Dan Uji Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Buah Harendong (Melastoma malabathricum  L.)  Secara  In  Vitro. INDONESIA  NATURAL  RESEARCH PHARMACEUTICAL JOURNAL , 5 (1), 114–129.
https://doi.org/10.52447/INSPJ.V5I 1.1800 Salazar-Aranda,  R.,  Pérez-López,  L.  A., López-Arroyo, J., Alanís-Garza, B. A.,
& Waksman de Torres, N. (2011).
Antimicrobial        and       Antioxidant Activities of Plants from Northeast of Mexico.
Evidence-Based Complementary  and  Alternative Medicine , 2011 , 536139. https://doi.org/10.1093/ecam/nep12 7 Singh,  N.,  Thakur,  R.,  &  Sharma,  M. (2019). A Review on Pharmacological  aspects  of  Tagetes erecta Linn . https://doi.org/10.29161/PT.v7.i9.20 19.16