## Isolasi dan Identifikasi Bakteri Dekontaminasi Logam Berat Timbal (Pb) dari Tempat Pengelolaan Sampah Terpadu (TPST) Piyungan, Bantul, Yogyakarta
Isolation and Identification of Lead Metal (Pb) Decontamination Bacteria from The Integrated Waste Management Place, Piyungan, Bantul, Yogyakarta
Fitri Nur Afifah, Endah Retnaningrum*
Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada, Bulaksumur, JL. Teknika Selatan, Sekip Utara, Yogyakarta 55281
*Email korespondensi : endahr@ugm.ac.id

## ABSTRAK
Pengelolaan sampah secara open dumping dapat menimbulkan dampak buruk bagi lingkungan. Salah  satunya  adalah  air  lindi,  yang  dihasilkan  dari  dekomposisi  sampah  akibat  terjadinya presipitasi air hujan ke dalam sampah. Air lindi dapat mengandung zat berbahaya seperti logam berat, salah satunya timbal (Pb), yang bersifat karsinogenik serta dapat mencemari udara, air, tanah, tumbuhan, dan hewan. Oleh karena itu, perlu dilakukan pengelolaan lindi dengan metode yang tepat agar tidak mencemari lingkungan, salah satunya menggunakan bioremediasi dengan memanfaatkan  mikroorganisme indigenous dari  tempat  asal  polutan.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengisolasi  dan  mengidentifikasi  bakteri indigenous yang  mempunyai  kemampuan dekontaminasi  timbal  (Pb)  dari  TPST  Piyungan.  Bakteri  diisolasi  dari  air  lindi  menggunakan medium nutrient broth dan nutrien agar yang telah ditambahkan timbal dari Pb(NO 3 ) 2 . Isolat yang didapatkan  kemudian  dilakukan  seleksi  dan  skrining  untuk  mendapatkan  beberapa  isolat terbaik yang resisten timbal. Daya penurunan konsentrasi timbal diukur menggunakan Atomatic Absorption Spectrophotometer (AAS). Isolat bakteri juga diidentifikasi karakter fenotopik berupa morfologi  sel,  morfologi  koloni,  dan  sifat  fisiologisnya  untuk  menentukan  jenis  bakteri  yang diteliti.  Berdasarkan  proses  isolasi  dan  skrining,  didapatkan  tiga  isolat  yang  resisten  timbal dengan daya reduksi yang cukup tinggi 67.13%, 40.89%, dan 14.65%. Ketiga isolat berasal dari genus yang berbeda, meliputi Serratia , Proteus , dan Thiobacillus .
Kata kunci: bakteri indigenous, bioremediasi, dekontaminasi, timbal

## ABSTRACT
Waste management  by open  dumping can have a negative impact on the environment. One of them is leachate, which is produced from the decomposition of waste due to precipitation of rainwater into the waste. Leachate  can  contain  harmful  substances  such  as  heavy  metals,  one  of  which  is  lead  (Pb),  which  is carcinogenic  and  can  contaminate  air,  soil,  plants,  and  animals.  Therefore,  it  is  necessary  to  manage leachate with the right method so as not to damage the environment, one of which is using bioremediation by  utilizing  native  microorganisms  from  pollutant  origins.  This  study  aims  to  isolate  and  identify indigenous bacteria that can decontaminate lead (Pb) from Piyungan TPST. Bacteria were isolated from leachate using nutrient broth and nutrien agar medium which had been added with lead from Pb(NO 3 ) 2 . The isolates obtained were then selected and screened to obtain the best lead-resistant isolates. The reduction power  of  lead  concentration  was  measured  using  an  Atomic  Absorption  Spectrophotometer  (AAS). Bacterial isolates also identified phenotopic characters in the form of cell morphology, colony morphology, and physiological characteristics to determine the type of bacteria. Based on the isolation and screening process, three lead-resistant isolates were obtained with relatively high reducibility of 67.13%, 40.89% and 14.65%. The third isolate came from a different genus, including Serratia, Thiobacillus, and Bacillus.
Keywords: indigenous bacteria, bioremediation, decontamination, lead

## PENDAHULUAN
Aktivitas  manusia  sehari-hari  menyebabkan pengeluaran  sampah.  Volume  sampah  yang dibuang  berbanding  lurus  dengan  tingkat konsumsi  manusia  terhadap  barang  yang digunakan.  Peningkatan  jumlah  penduduk dan  gaya  hidup  menjadi  faktor  penting dalam  mempengaruhi  tingkat  konsumsi masyarakat  yang  berdampak  pada  volume sampah yang dihasilkan (Kasam, 2011). Pada tahun  2021,  di  Yogyakarta  diperkirakan menghasilkan  sampah  sebanyak  1,133  ton setiap  hari.  Sebagian  dari  sampah  tersebut terdapat  893,53  ton  sampah  yang  dapat ditangani per harinya (Bappeda, 2021). TPST Piyungan  merupakan  salah  satu  tempat pembuangan  sampah  utama  di  Yogyakarta. Metode  pengelolaan  sampah  di  TPST Piyungan  dilakukan  secara open  dumping yaitu  pembuangan  sampah  yang  dibuang begitu saja dalam sebuah tempat pembuangan  akhir  tanpa  perlakuan  lebih lanjut  (Parasista,  2020).  Penggunaan  metode tersebut  cenderung  menyebabkan  sampah menjadi menumpuk dan ketika musim hujan, air  akan  merembes  ke  dalam  sampah kemudian akan keluar sebagai air lindi yang berpotensi  untuk  mencemari  lingkungan (Said & Hartaja, 2018). Air lindi hasil dekomposisi sampah dapat mencemari  lingkungan  dan  mempengaruhi kesehatan  manusia  karena  kandungan  zat- zat  berbahaya,  salah  satunya  logam  berat (Rahadi et al., 2020; Lundgren, 2012). Timbal (Pb) merupakan salah satu logam berat yang mempunyai  sifat  karsinogenik  dan  dapat mencemari  udara,  air,  tanah,  tumbuhan, hewan, bahkan manusia apabila terakumulasi  dalam  akuifer  atau  air permukaan  karena  adanya  paparan  polutan yang ikut terkonsumsi (Juniawan et al., 2013; Colin et al., 2012). Meskipun demikian, belum semua orang memahami tentang pengolahan lindi,  sehingga  masih  ditemukan  lindi  yang mencemari lingkungan karena belum diolah secara  maksimal  sebelum  dibuang.  Lindi umumnya diolah menggunakan suatu bahan kimia  atau  dibersamai  dengan  perlakuan fisik  untuk  menghilangkan  kontaminasi logam  berat  (Siregar,  2009).  Akan  tetapi, penanggulangan  menggunakan  metode kimia  dan  fisika  mempunyai  beberapa kekurangan,  seperti  membutuhkan  biaya
instalasi  dan  operasional  yang  tinggi, menghasilkan sisa buangan yang tidak ramah lingkungan,  dan  tidak  dapat  mengolah semua jenis logam berat, seperti Pb, Cd, dan Hg  (Ratnawati et  al., 2010;  Tiquia-Arashiro, 2018).
Salah  satu  alternatif  penanggulangan pencemaran logam berat dapat memanfaatkan proses
bioremediasi. Bioremediasi  merupakan  suatu  teknologi yang  menggunakan  suatu  mikroorganisme dan  hasil  produksinya  untuk  mengurangi, menghilangkan,  dan  mengubah  berbagai macam kontaminan yang berasal dari tanah, air, sedimen, dan udara (Adams et al. , 2015). Dalam bioremediasi, proses degradasi dapat dilakukan dengan memanfaatkan
mikroorganisme indigenous dari  daerah  asal kontaminasi  tersebut.  Menurut  Tiquia- Arashiro, (2018) bakteri mempunyai berbagai mekanisme resistensi yang dapat digunakan untuk  mengurangi  konsentrasi  Pb  di lingkungan, yang meliputi biosorpsi, presipitasi,  bioakumulasi,  dan  pengikatan dengan  siderophores.  Penggunaan  bakteri indigenous yang dapat menurunkan Pb perlu diuji  sehingga  dapat  digunakan  sebagai alternatif  dalam  penanganan  pencemaran. Oleh  karena  itu,  untuk  mengetahui kemampuan  mikroorganisme indigenous , terutama  bakteri,  yang  berpotensi  dapat menurunkan  logam  Pb,  diperlukan  suatu proses  isolasi  dan  identifikasi  bakteri  di wilayah  tercemar  yang  kemudian  dapat dikembangkan sebagai agen bioremediasi .

## BAHAN DAN METODE

## Lokasi Pengambilan Sampel
Pengambilan sampel dilakukan di kolam lindi di  Tempat  Pembuangan  Sampah  Terpadu (TPST) Piyungan, Sitimulyo, Piyungan, Bantul. Sampel lindi diambil dari empat titik berbeda yang  meliputi  selokan  selatan  (A),  kolam penampungan  lindi  inlet  (tanpa  perlakuan)  1 (B), kolam inlet 2 (C) serta selokan utara (D). Sampel air lindi diambil dari kolam lindi tanpa perlakuan  sebanyak  50  mL  dan  dimasukkan dalam conical  tube . Conical  tube kemudian dimasukkan  dalam ice  box berisi  ice  gel untuk menjaga  agar  sampel  tidak  rusak  selama perjalanan menuju laboratorium.

## Isolasi dan Skrining Bakteri Resisten Pb
Bakteri diisolasi dengan metode pengenceran bertingkat pada medium NB cair yang telah ditambahkan Pb dari Pb(NO 3 ) 2 sebanyak 0.5 ppm.  Pengenceran  dilakukan  menggunakan NaCl  0.85%.  Sebanyak  1  mL  sampel dimasukkan  dalam  9  mL  NaCl  0.85%  steril hingga tingkat pengenceran 10 -3 . Setelah itu, 5 mL dari pengenceran terakhir diinokulasikan  dalam  45  mL  medium  cair yang  telah  ditambahkan  Pb  kemudian diinkubasi dalam suhu ruang selama 7 hari. Resubkulturing  dilakukan  sebanyak  dua kali  menggunakan  komposisi  medium  yang sama  dengan  waktu  inkubasi  yang  sama. Isolat
yang tumbuh
kemudian diinokulasikan  ke  media  nutrien  agar  (NA) secara spread  plate menggunakan  metode pengenceran bertingkat. Koloni yang tumbuh dan menunjukkan morfologi koloni berbeda selanjutnya  dipindahkan  ke  media  nutrien agar  menggunakan  metode quadrant  streak plate untuk memurnikan bakteri. Isolat murni yang  telah  didapatkan  kemudian  dilakukan skrining  untuk  mendapatkan  isolat  terbaik yang resisten Pb.
Skrining  dilakukan  pada  medium  NB yang  ditambahkan  Pb  0.5  ppm.  Sebanyak  1 ose  bakteri  diinokulasikan  dalam  10  mL medium  cair  yang  telah  ditambahkan  Pb. Isolat  yang  tumbuh  ditunjukkan  dengan adanya kekeruhan dalam medium, kemudian  ditumbuhkan  kembali  pada medium  NB  dengan  konsentrasi  Pb dinaikkan sebanyak 0.5 ppm dari konsentrasi sebelumnya. Proses skrining terus dilakukan hingga mendapatkan tiga isolat terbaik yang resisten Pb.

## Kurva Pertumbuhan Bakteri
Kurva  pertumbuhan  bakteri  resisten  Pb dilakukan  dengan  menumbuhkan  bakteri pada  medium  NB  dan  medium  NB  yang ditambahkan  Pb  10  ppm.  Isolat  bakteri ditumbuhkan  pada  medium  cair  terlebih dahulu  untuk  dijadikan  sebagai  starter. Starter  kemudian  diukur  nilai optical  density (OD)  menggunakan  spektrofotometer  UV- Vis  panjang  gelombang  625  nm  untuk menyetarakan  konsentrasi  setiap  isolat bakteri  mengacu  pada  Mc-Farland  0.5 (Eduardo et al., 2018).
Starter bakteri diambil sebanyak 10% dari total  medium  yang  digunakan.  Kemudian
diinkubasi  pada shaker  incubator selama  48 jam  dengan  kecepatan  160  rpm  dan  suhu 30ºC.  Setiap  selang  waktu  6  jam  dilakukan analisis  pertumbuhan  menggunakan Total
Plate Count (TPC) dengan tingkat pengenceran yang digunakan adalah 10 -6 dan 10- 7 .  Pengukuran  pertumbuhan  bakteri dianalisis  dengan  rumus  mengacu  pada Maier et al., (2009).

## Uji penurunan Konsentrasi Pb oleh Bakteri
Uji penurunan Pb dilakukan pada tiga isolat hasil  skrining.  Uji  dilakukan  dengan menumbuhkan  ketiga  isolat  pada  medium cair  yang  ditambahkan  Pb  10  ppm  dan diinkubasi  dalam incubator  shaker selama  48 jam  dengan  kecepatan  160  rpm  dan  suhu 30ºC. Kultur tersebut kemudian diukur daya reduksinya  menggunakan  AAS  ( Atomatic Absorption  Spectrophotometer )  (Lewaru et  al., 2012).  Perhitungan  konsentrasi  logam  Pb terserap  mengacu  pada  Yanti et  al., (2021) dengan Persamaan 1.
D = 𝐶(𝑎)−𝐶(𝑏) 𝐶(𝑎) 𝑥 100% (1) Keterangan: D = Daya penurunan kadar Pb (%) C( 𝑎 ) = Konsentrasi awal Pb (ppm) C(b) = Konsentrasi akhir Pb (ppm)

## Identifikasi Karakter Fenotipik
Identifikasi  karakter  dilakukan  dengan pengamatan mikroskopik, makroskopik, dan pengujian biokimiawi.
Pengamatan mikroskopik meliputi pengamatan bentuk sel dan  sifat  gram  serta  pengecatan  endospora.
Pengamatan
mikroskopik dilakukan menggunakan mikroskop dengan perbesaran 100×.  Pengamatan  makroskopik  berupa pengamatan morfologi koloni pada agar plate dan  agar  miring.  Karakter  yang  diamati meliputi bentuk, warna, tepi, dan elevasi. Uji biokimiawi  yang  dilakukan  meliputi  uji katalase,  uji  pembentukan  indol,  uji  reduksi nitrat,  uji  fermentasi  karbohidrat,  uji fementatif-oksidatif,  uji  motilitas  dan pembentukan  H 2 S,  uji  hiidrolisis  kasein,  uji hidrolisis  pati,  uji  hidrolisis  urea,  serta  uji sitrat. Karakteristik yang didapatkan kemudian  dibandingkan  dengan  literatur ( Bergeys Manual of Determinative Bacteriology ) untuk menentukan jenis bakteri yang diteliti.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi dan Skrining Bakteri Proses  isolasi  dilakukan  dengan enrichment
dengan tujuan untuk menumbuhkan mikroorganisme tertentu saja yang diinginkan dan menghambat
mikroorganisme  lain  yang  tidak  diinginkan (Gu,  2021).    Dalam  penelitian  ini, mikroorganisme  yang  diinginkan  adalah mikroorganisme yang mampu mereduksi Pb. Oleh karena itu, proses enrichment dilakukan dengan menambahkan Pb dalam medium. Proses isolasi dan pemurnian bakteri dari TPS Piyungan, diperoleh sebanyak 10 isolat. Tiga  isolat  bakteri  yaitu  isolat  PyA1,  PyA2, PyA3  diperoleh  dari  titik  sampling  pada selokan  selatan.  Lima  isolat  bakteri  yaitu isolat  PyB1,  PyB2,  PyB3,  PyB4  dan  PyB5 diperoleh  dari  titik  sampling pada  kolam inlet 1, sedangkan 2 isolat bakteri yaitu isolat PyD1 dan PyD2 diperoleh dari titik sampling pada selokan utara. Proses isolasi dilakukan secara quadrant  streak .  Tujuan  dilakukannya penggoresan  secara  kuadran  adalah  untuk mengurangi  jumlah  bakteri  sehingga  akan didapatkan koloni yang terpisah atau koloni tunggal  (Brown  &  Smith,  2012;  Sumbali  & Mehrotra, 2009).
Isolat  bakteri  kemudian  dilakukan skrining  untuk  mendapatkan  isolat  terbaik yang resisten Pb. Skrining dilakukan dengan menumbuhkan  bakteri  dalam  medium  cair yang telah ditambahkan Pb 0.5 ppm. Bakteri yang  mampu  tumbuh  ditunjukkan  dengan terdapatnya kekeruhan pada medium. Isolat bakteri  yang  menunjukkan  pertumbuhan kemudian dibandingkan tingkat kekeruhannya  satu  sama  lain  secara  visual. Isolat  yang  mempunyai  tingkat  kekeruhan lebih  tinggi  akan  digunakan  untuk  proses resubkulturing berikutnya. Proses resubkulturing  dilakukan  secara  bertahap dengan menaikkan konsentrasi Pb sebanyak 0.5  ppm.  Setelah  dilakukan  resubkulturing hingga  mencapai  konsentrasi  Pb  20  ppm, didapatkan  tiga  isolat  bakteri  yang  masih bertahan. Isolat bakteri tersebut adalah isolat PyB1 dan isolat PyB2 yang diperoleh dari titik sampling pada kolam inlet 1 serta isolat PyA3 yang diperoleh  dari  titik  sampling  pada selokan selatan.
Laju Pertumbuhan pada Medium Tanpa Pb dan Medium dengan Pb Laju  pertumbuhan  dilakukan  menggunakan Total Plate Count (TPC). TPC merupakan salah satu  metode  perhitungan  mikroorganisme secara  tidak  langsung.  Prinsip  dari  metode TPC  yaitu  menghitung  jumlah  koloni mikroorganisme pada suatu agar plate dengan tingkat pengenceran tertentu (Nelce Mailoa et al. , 2017).
Metode ini mempunyai keuntungan  berupa  memberikan  hasil  yang lebih akurat dikarenakan hanya menghitung koloni  yang  hidup  saja  (Alfiyanti  &  Putri, 2020). Hasil perhitungan menggunakan TPC kemudian  digunakan  untuk  menyusun  laju pertumbuhan.
Tabel  1 . Laju  Pertumbuhan  pada  Medium
Tanpa Pb Isolat PyB1 Isolat PyB2 Isolat PyA3 X0 (CFU/mL) 6,05×10 7 2,25×10 7 4,725×10 7 X (CFU/mL) 52,25×10 7 72,25×10 7 83,2×10 7 t (jam) 12 12 12 μ 0,180 0,290 0,239 Berdasarkan Tabel 1, isolat PyB2
menunjukkan  laju  pertumbuhan  tertinggi pada medium NB tanpa penambahan Pb.
Tabel  2.  Laju  Pertumbuhan  pada  Medium dengan Pb 10 ppm
Isolat PyB1 Isolat PyB2 Isolat PyA3 X0 (CFU/mL) 0,975 ×10 7 6,25×10 7 4×10 7 X (CFU/mL) 96,325×10 7 102,9×10 7 71,675×10 7 t (jam) 12 24 18 μ 0,383 0,117 0,160 Berdasarkan Tabel 2, isolat PyB1
menunjukkan  laju  pertumbuhan  tertinggi pada medium NB dengan penambahan Pb 10 pppm.
Laju  pertumbuhan  bakteri  pada  medium Pb  lebih  kecil  daripada  medium  tanpa  Pb. Pertumbuhan  bakteri  dipengaruhi  oleh ketersediaan nutrisi dan kondisi lingkungan (Lewaru et al., 2012; Rahadi et al., 2020). Hal ini  mengindikasikan  bahwa  pada  medium dengan Pb kurang mendukung pertumbuhan bakteri  yang  dimungkinkan  terjadi  karena
adanya pengaruh Pb terhadap pertumbuhan sel bakteri. Pada konsentrasi yang tinggi, Pb dapat  diinduksi  ke  dalam  sel  dan  berikatan dengan  protein  sehingga  mengakibatkan rusaknya  DNA,  menghambat  aktivitas enzim,  merusak  permeabilitas  sel  serta menyebabkan  keluarnya  sitoplasma  yang dapat mengubah morfologi sel (Jaishankar et al., 2014; Ratnawati et al. , 2010). Akan tetapi, untuk isolat PyB1 menunjukkan  hasil  berbeda  yang  mana  laju pertumbuhan pada medium Pb lebih tinggi. Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  isolat  PyB1 tahan  terhadap  paparan  Pb  menggunakan mekanisme resistensi yang dimilikinya. Isolat PyB1 dimungkinkan mempunyai kemampuan biosorpsi Pb lebih baik daripada kedua  isolat  lainnya.  Kemampuan  biosorpsi bakteri  dipengaruhi  oleh  struktur  dan komponen  dinding  sel  bakteri  yang mengandung gugus fungsi yang berinteraksi dengan logam (Ratnawati et al., 2010).

## Penurunan Konsentrasi Pb oleh Bakteri
Tabel 3. Presentase Penurunan Pb oleh Bakteri
Isolat Bakteri Pb awal (ppm) Pb akhir (ppm) Daya penurunan Pb (%) Isolat PyB1 10 8.535 14.65 Isolat PyB2 10 5.911 40.89 Isolat PyA3 10 3.287 67.13
Ketiga  isolat  menunjukkan  kemampuan penurunan  Pb  yang  cukup  tinggi.  Tingkat penurunan  Pb  yang  cukup  tinggi  pada beberapa  isolat  bakteri  mengindikasikan bahwa  di  TPST  Piyungan  terdapat  bakteri indigenous yang  berpotensi  sebagai  agen bioremediasi. Kemampuan penurunan logam oleh  bakteri  dipengaruhi  oleh  beberapa  hal yang  meliputi  konsentrasi  Pb,  waktu inkubasi, dan jenis bakteri (Utami et al., 2020). Bioremediasi  yang  dilakukan  bakteri  akan memodifikasi  struktur  kompleks  polutan beracun  menjadi  bentuk  yang  sederhana sehingga  menjadi  melabolit  yang  tidak berbahaya  (Priadie,  2012).    Mekanisme bakteri  dalam  menurunkan  konsentrasi  Pb umumnya  meliputi  presipitasi,  pengikatan
Pb  dengan  siderophores,  bioakumulasi,  dan biosorpsi (Tiqua-Arashiro, 2018). Biosorpsi  dapat  terjadi  di  permukaan  sel ataupun menggunakan extracellular polymeric substances (EPS)  dengan  mekanismenya melakukan  pengikatan  kation  logam  (Pb 2+ ) sehingga  menghasilkan  imobilisasi  logam untuk  memasuki  sel.  Berbeda  dengan biosorpsi  yang  terjadi  pada  permukaan  sel, bioakumulasi merupakan mekanisme pengikatan  logam  yang  terjadi  secara intraseluler dan
biasanya melibatkan senyawa  yang  disebut  metallothioneins (Joutey et  al., 2015;  Tiquia-Arashiro,  2018). Presipitasi
dilakukan
bakteri untuk menurunkan  konsentrasi  logam  bebas menjadi kompleks yang tidak larut sehingga akan  mengurangi  toksisitasnya.  Pengikatan Pb  dengan  siderophores  dilakukan  dengan membentuk  kompleks  logam-ligand  yang stabil  (Tiqua-Arashiro,  2018).  Menurut Halttunen et  al., (2007),  mekanisme  utama dalam  penurunan  konsentrasi  Pb  adalah melalui biosorpsi pada permukaan sel.

## Karakterisasi dan Identifikasi Bakteri
Data
karakteristik mikroskopik, makroskopik, dan biokimia dapat digunakan sebagai acuan untuk identifikasi jenis bakteri. Pada  pengamatan  mikroskopik  diketahui bahwa  ketiga  isolat  bakteri  bersifat  gram positif dengan bentuk sel coccobacil.
Isolat PyB1
Isolat PyB2
Isolat PyA3 Gambar 1. Pengamatan mikroskopik bakteri
Berdasarkan  pengamatan  makroskopik menunjukkan  bahwa  ketiga  isolat  bakteri mempunyai  bentuk  koloni circular dengan tepi koloni entire . Isolat PyB1 berwarna merah muda/magenta dengan elevasi convex. Isolat PyB2  berwarna  putih  transparan  dengan elevasi  flat.  Isolat  PyA3  berwarna  putih dengan elevasi flat.
Isolat PyB1 Isolat PyB2
Isolat PyA3 Gambar 2. Pengamatan makroskopik bakteri
Selain  uji  pewarnaan  gram  dan pengamatan pengamatan makroskopik,
isolat  bakteri  juga  diuji  endospora,  uji katalase,  uji  pembentukan  indol,  uji  reduksi nitrat,  uji  fermentasi  karbohidrat,  uji fementatif-oksidatif,  uji  motilitas  dan pembentukan  H 2 S,  uji  hiidrolisis  kasein,  uji hidrolisis  pati,  uji  hidrolisis  urea,  serta  uji sitrat.

## Tabel 3. Pengujian biokimia
Uji Biokimia Isolat Bakteri PyB1 PyB2 PyA3 Uji Katalase + + + Penggunaan Oksigen Aerob  Anaerob  Aerob Fermentasi Karbohidrat a. Glukosa - - - b. Sukrosa + - - c. Laktosa - + - d. Manitol + + + Pembentukan indol - + - Reduksi nitrat + - + Motilitas + + + Pembentukan H2S - + + Hidrolisis protein - + - Hidrolisis pati - - - Hidrolisis urea - + + Penggunaan sitrat + + + Oksidatif- fermentatif + + + Berdasarkan uji lanjut tersebut menunjukkan bahwa isolat PyB1 merupakan genus Serratia , isolat PyB2 merupakan genus Proteus ,  dan  isolat  PyA3  merupakan  genus Thiobacillus .  Identifikasi  genus  bakteri didasarkan  pada  literatur Bergeys  Manual  of Determinative Bacteriology .
Genus Serratia mempunyai  karakteristik bakteri  gram  negatif,  bentuk  sel  basil  dan
terkadang  basil  yang  hampir  menyerupai bulat, menghasilkan pigmen yang umumnya merah  atau  magenta,  bersifat  aerob  atau fakultatif  anaerob,  motil,  tidak  membentuk indol, mampu mereduksi nitrat, sitrat positif, serta dapat memfermentasi manitol. Genus Proteus mempunyai  karakteristik berupa  sel  berbentuk  basil,  gram  negatif, bersifat  motil,  aerob/fakultatif  anaerob, mampu
memfermentasi
karbohidrat, katalase
positif,
umumnya mampu menghidrolisis  urea,  membentuk  H 2 S,  serta umumnya  mampu  menggunakan  sitrat sebagai sumber energi. Genus
Thiobacillus
mempunyai karakteristik  berupa  bakteri  gram  negatif, bentuk  sel  batang  pendek  atau  elipsoidal, bentuk  koloni circular dengan  warna  putih dan mengkilap, bersifat aerob atau fakultatif anaerob,  umumnya  motil  tetapi  terdapat beberapa  spesies  yang  non-motil,  mampu mengoksidasi  thiosulfate  membentuk  H 2 S, mampu  mereduksi  nitrat,  tidak  membentuk indol.
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa bakteri hasil  isolasi  dan  skrining  dari  air  lindi  di TPST  Piyungan  yang  berpotensi  dalam dekontaminasi Pb berjumlah tiga isolat yang terdiri dari isolat PyB1, isolat PyB2, dan isolat PyA3.  Kemampuan  dekontaminasi  Pb  oleh ketiga isolate bakteri menunjukkan presentase  yang  cukup  tinggi,  yaitu  isolat PyA3  dengan  presentase  penurunan  kadar Pb  sebesar  67,  13%,  isolat  PyB2  sebesar  40, 89%  dan  isolat  PyB1  sebesar  14,  65%. Berdasarkan  hasil  identifikasi,  isolat  bakteri PyB1  termasuk  dalam  genus Serratia ,  isolat bakteri PyB2 termasuk dalam genus Proteus , dan  isolat  bakteri  PyA3  termasuk  dalam genus Thiobacillus .

## DAFTAR PUSTAKA
Adams, G. O., Fufeyin, P. T., Okoro, S. E., & Ehinomen,  I.  (2015).  Bioremediation, biostimulation  and  bioaugmention:  a review. International Journal of Environmental Bioremediation & Biodegradation , 3 (1), 28-39.
Alfiyanti, E., & Putri, D. H. (2020). Precision of  enumeration  technique  for  count  of the  number  of  bacterial  cells  with  the
spread  plate  method. Serambi  Biologi , 5 (1), 7-10. Brown,  A.,  &  Smith,  H.  (2012). Benson’s Microbiological  Applications  Laboratory Manual in General Microbiology Thirteenth Edition . Mc Graw Hill Education. Badan  Perencanaan  Pembangunan  Daerah.
(2021). Pengelolaan  Sampah  Pekerjaan Umum dan Penataan Ruang http://bappeda.jogjaprov.go.id/dataku
/data_dasar/index/208-pengelolaan- sampah?id_skpd=29
Colin,  V.  L.,  Villegas,  L.  B.,  &  Abate,  C.  M. (2012).  Indigenous  microorganisms  as potential bioremediators
for environments contaminated with heavy metals. International  Biodeterioration  & Biodegradation , 69 , 28 – 37. https://doi.org/10.1016/j.ibiod.2011.12
.001
Eduardo, G, L., Ramirez, B. S., Maribel, C. F., Pescador,  M.  G.  N.,  &  Cruz,  F.  J.  M. (2018).  Low  accuracy  of  the  McFarland method  for  estimation  of  bacterial populations. African Journal of
Microbiology Research , 12 (31), 736-740. Gu, J. D. (2021). On enrichment culturing and transferring technique. Applied
Environmental Biotechnology , 6 (1), 1-5. Halttunen,  T.,  Salminen,  S.,  &  Tahvonen,  R. (2007).  Rapid  removal  of  lead  and cadmium  from  water  by  specific  lactic acid bacteria. International Journal of Food Microbiology , 114 (1), 30 – 35.
https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2 006.10.040
Jaishankar,  M.,  Tseten,  T.,  Anbalagan,  N., Mathew,  B.  B.,  &  Beeregowda,  K.  N. (2014).  Toxicity,  mechanism  and  health effects of some heavy metals. Interdisciplinary  Toxicology , 7 (2),  60 – 72. https://doi.org/10.2478/intox-2014- 0009 Juniawan A., B. Rumhayati & B. Lamuyanto. (2013).  Karakteristik  Lumpur  Lapindo dan  Fluktuasi  Logam  Berat  Pb  dan  Cu pada  Sungai  Porong  dan  Aloo. Jurnal Sains dan Terapan Kimia , 7 (1), 1-10.
Joutey,  N.  T.,  Sayel,  H.,  Bahafid,  W.,  &  El Ghachtouli,  N.  (2015).  Mechanisms  of Hexavalent  Chromium  Resistance  and Removal  by  Microorganisms.  In  D.  M. Whitacre (Ed.), Reviews of Environmental Contamination and Toxicology Volume 233 ,
233 , 45 – 69. https://doi.org/10.1007/978-3-319-
10479-9_2
Kasam, I. (2011). Analisis Resiko Lingkungan pada Tempat Pembuangan Akhir (TPA) Sampah  (Studi  Kasus:  TPA  Piyungan Bantul). Jurnal Sains &Teknologi Lingkungan , 3 (1), 19 – 30.
https://doi.org/10.20885/jstl.vol3.iss1. art2
Lewaru,  S.,  R.  Indah.  &  M.  Yuniar.  (2012). Identifikasi  Bakteri  Indigeneus  Logam Berat Cr (VI) dengan Metode Molekuler di  Sungai  Cikijing  Rancaekek  Jawa Barat. Jurnal Perikanan dan Kelautan , 3 (4), 81-92. Lundgren,  K.  (2012). The  global  impact  of  e- waste: addressing the challenge . International Labour Organization.
Maier,  R.  M.,  Pepper,  I.  L.,  &  Gerba,  C.  P.
(2009). Environmental Microbiology Second Edition. Academic Press.
Nelce Mailoa, M., Marthina Tapotubun, A., & Matrutty,  T.  E.  A.  A.  (2017).  Analysis Total Plate Counte (TPC) On Fresh Steak Tuna  Applications  Edible  Coating Caulerpa  sp  During  Stored  at  Chilling Temperature. IOP Conference Series: Earth and  Environmental  Science , 89 ,  012014. https://doi.org/10.1088/1755- 1315/89/1/012014
Parasista,  P.  (2020). Ombudsman  DIY Sampaikan  Saran  ke  Gubernur  Terkait Pengelolaan  Sampah  di  Karmantul  (TPST Piyungan). https://ombudsman.go.id/artikel/r/ar tikel--ombudsman-diy-sampaikan- saran-ke-gubernur-terkait-pengelolaan- sampah-di-kartamantul-tpst- piyungan#:~:text=Bahkan%20hasil%20 pengumpulan%20data%20Ombudsman ,akhir%20tanpa%20perlakuan%20lebih %20lanjut. Priadie B. (2012). Teknik bioremediasi sebagai alternatife  dalam  upaya  pengendalian pencemaran air. Jurnal Ilmu Lingkungan,
10(1), 38-48.
Ratnawati,  E.,  Ermawati,  R.,  &  Naimah,  S. (2010). Teknologi Biosorpsi oleh
Mikroorganisme, Solusi Alternatif untuk Mengurangi  Pencemaran  Logam  Berat. Jurnal  Kimia  dan  Kemasan , 32 (1),  34. https://doi.org/10.24817/jkk.v32i1.273 9
Said,  N.  I.,  &  Hartaja,  D.  R.  K.  (2018).
Pengolahan  air  lindi  dengan  proses biofilter anaerob-aerob dan denitrifikasi. Jurnal Air Indonesia , 8 (1). https://doi.org/10.29122/jai.v8i1.2380. Siregar, T. H. (2009). Pengurangan Cemaran Logam Berat Pada Perairan Dan Produk Perikanan Dengan Metode Adsorbsi. Squalen  Bulletin  of  Marine  and Fisheries Postharvest and Biotechnology , 4 (1), 24-30.
Sumbali,
G.,
& Mehrotra, R. S. (2009). Principles  of  microbiology .  Tata McGraw-Hill Education.
Tiquia-Arashiro,  S.  M.  (2018).  Lead absorption  mechanisms  in  bacteria  as strategies  for  lead  bioremediation. Applied  Microbiology  and  Biotechnology , 102 (13), 5437 – 5444.
https://doi.org/10.1007/s00253-018-
8969-6
Utami,  U.,  Harianie,  L.,  Dunyana,  N.  R.,  & Romaidi.  (2020).  Lead-resistant  bacteria isolated from oil wastewater sample for bioremediation of lead. Water Science and Technology , 81 (10), 2244 – 2249. https://doi.org/10.2166/wst.2020.281 Rahadi, B., Susanawati, L. D., & Agustianingrum, R. (2020). Bioremediasi Logam  Timbal  (Pb)  Menggunakan Bakteri Indigenous Pada Tanah
Tercemar  Air  Lindi  (Leachate). Jurnal Sumberdaya  Alam  dan  Lingkungan , 6 (3), 11-18. Yanti, D. H., Nursyirwani, N., & Yoswaty, D.
(2021).  Isolation  and  Identification  of Bacteria from Dumai Marine Waters that Have  Potencial  as Lead  Bioremediation Agents. Journal  of  Coastal  and  Ocean
Sciences , 2 (3), 217 – 222. https://doi.org/10.31258/jocos.2.3.217-
222