Majalah Farmaseutik Vol. 14 No. 2: 79-86 ISSN-p : 1410-590x
ISSN-e : 2614-0063

## Aktivitas Antibakteri Minyak Sirih Merah ( Piper Crocatum Ruiz  &  Pav.)  Dalam  Bentuk  Sediaan  Emulsi  dan Mikroemulsi
Antibacterial Activities of Red Flow Oil ( Piper Crocatum Ruiz & Pav.) in The Form of Emulsion and Microemulsi
Elsa Putri Kartika, Marchaban * , Sudarsono Fakultas Farmasi, Universitas Gadjah Mada Corresponding author: Marchaban: Email: marchaban@yahoo.com
ABSTRAK
Minyak Sirih Merah (MSM) diketahui mempunyai aktivitas sebagai antibakteri dan dapat dibuat dengan cara distilasi air dan uap dari daun sirih merah ( Piper crocatum Ruiz & Pav.). Tujuan dari studi ini adalah untuk membandingkan aktivitas antibakteri dari MSM apabila diformulasi dalam bentuk sediaan yang berbeda (yaitu emulsi dan mikroemulsi). MSM dalam bentuk emulsi dibuat dengan cara mencampur 0,125 g MSM, 0,875 g paraffin cair,  0,125  g  tween-80,  0,375  g  span-80  (HLB  7),  dan  3,500  g  air.  MSM  dalam  bentuk mikroemulsi dibuat dengan mencampur 0,125 g MSM, 0,125 g paraffin cair, 0,625 g tween- 80, 0,625 g PEG-400, dan 3,500 g air. Aktivitas antibakteri terhadap Escherichia coli ATCC 25922 dilakukan dengan menggunakan metoda mikrodilusi dengan 1% w/w konsentrasi menggunakan reader ELISA pada 570 nm. Data kemudian dianalisis untuk membandingkan persentase  penghambatan  pertumbuhan  mikroba.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa hambatan  bakteri  dari  MSM  dalam  bentuk  emulsi  adalah  17,45±5,9%  sedangkan  dalam bentuk mikroemulsi 49,58±3,27%. Kesimpulannya adalah aktivitas antibakteri MSM dalam bentuk mikroemulsi lebih baik dari bentuk emulsi.
Kata kunci : daun sirih merah, emulsi, mikroemulsi, antibakteri

## ABSTRACT
The red sirih essential oil (RSEO) known has antibacterial activity and can be obtained by water and steam distillation of red betel leaf ( Piper crocatum Ruiz & Pav . ). The aim of this study is to compare its bacterial activity if the RSEO is formulated in different dosage forms (i.e. emulsion and microemulsion). The RSEO in emulsion dosage form was prepared by stirring 0.875 g of liquid paraffin, 0.125 g RSEO, 0.125 g of tween-80, 0.375 g of span-80 (HLB 7), and 3.500 g of water. The RSEO in microemulsion dosage form was prepared by stirring 0.125 g of liquid paraffin, 0.125 g RSEO, 0.417 g Tween 80, 0.833 g of PEG-400 and 3.500 g of water. Antibacterial activity against Escherichia coli ATCC 25922 was done by using microdilution method at 1% of w/w concentration using the ELISA reader at 570 nm. The data was then to be analysed to compare the percentage of inhibition of the bacterial growth. The results showed that the bacterial inhibition of RSEO in emulsion dosage form was 17.45±5.9% while in microemulsion dosage form was 49.58±3.27%. It is concluded that the RSEO had a better antibacterial activity in the forms of microemulsion than emulsion.
Keyword : Red betel leaf, emulsion, microemulsion, antibacterial

## PENDAHULUAN
Indonesia  termasuk  negara  dengan berbagai  tanaman  yang    mengandung metabolit  primer  dan  metabolit  sekunder, yang dipercaya mempunyai khasiat sebagai obat.  Tanaman  yang  berfungsi  pada pengobatan  disebut  juga  dengan herbal medicine (Dubick,  1986).  Salah  satu tanaman  yang  termasuk  tanaman herbal medicine adalah  Sirih  Merah  ( Piper crocatum Ruiz & Pav.). Beberapa penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa komponen yang terkandung dalam minyak atsiri mempunyai aktivitas antibakteri yaitu dapat  menghambat  atau  membunuh pertumbuhan bakteri (Yuksel dkk., 2006).
Minyak  atsiri  memiliki  sifat  mudah menguap dan mudah terdekomposisi oleh panas, kelembaban udara, cahaya, maupun oksigen  (Bilia  dkk.,  2014).  Meskipun diketahui  memiliki  aktivitas  antibakteri, sifat minyak atsiri tersebut dapat menjadi masalah apabila digunakan langsung. Oleh karena  itu,  diperlukan  pengembangan teknologi formulasi yang mampu melindungi  minyak  atsiri  dari  degradasi sehingga  dapat  mengoptimalkan  aktivitas dan efektivitasnya. Minyak atsiri ini dapat dipresentasikan menjadi sediaan konvensional  berupa  sediaan  emulsi. Emulsi merupakan sediaan heterogen yang terdiri  atas  dua  cairan  dalam  sistem dispersi dimana fase cairan satu terdispersi dengan  sangat  halus  ke  dalam  fase  cairan lainnya (Anonim, 1979). Dengan perkembangan teknologi formulasi minyak atsiri  bisa  dibentuk  juga  menjadi  sediaan dispersi  yang  lain  yaitu  mikroemulsi. Mikroemulsi  adalah  dispersi  sebagaimana emulsi namun partikel mempunyai ukuran mikro.      Akibat      dari     ukuran     partikel yang sangat berbeda akan bisa mempengaruhi  availabilitas  dan  aktivitas antibakteri,          makin       kecil         ukuran partikel fase dispers makin baik bioavailabilitasnya.

## METODOLOGI
Bahan
Daun Sirih Merah, tween-80, span-80,
PEG-400, Escherichia  coli ATCC  25922, media Mueller Hinton Broth (MHB)
Alat
Alat gelas, neraca analitik (Santorius BP 310), magnetic stirrer (Labtech ST 12), Particle Size Analyzer (Horiba Scientific SZ- 100), hotplate (Cimarec  2  Thermolyne), autoklaf (Sakura, OSK 6508 Steam Pressure Apparatus), shaker incubator (OSK Controller  Incubator),  inkubator  (Imperial III  Incubator), vortex  mixer (Thermo Scientific), pemanas listrik, almari pendingin,  spektrofotometer  (UV-1700 PharmaSpec Shimadzu), LAF cabinet (ESCO Class  II  Biosafety  Cabinet),  bunsen,  ose, Eppendorf  steril,  mikropipet, yellow  tip , blue tip , vial, tabung reaksi, wadah plastik, rak  rabung  reaksi,  seperangkat  alat destilasi.
Jalannya Penelitian Determinasi Tanaman Dilakukan oleh Laboratorium Sistematika  Tumbuhan  Fakultas  Biologi Universitas  Gadjah  Mada  Yogyakarta, menyatakan  kebenaran  tanaman  sirih merah  (Piper  crocatum  Ruiz.  &  Pav)  yang masuk dalam suku Piperaceae.
Destilasi Minyak Sirih Merah (MSM) Daun  sirih  didestilasi  selama  4  jam dengan uap dan air, minyak hasil destilasi ditampung dalam corong pisah, dipisahkan.
MSM  dibebaskan  dari  air  dengan  natrium sulfat  anhidrat,  didapat  rendemen  0,11% v/b.
Pembuatan Emulsi
Optimasi formula MSM dalam bentuk emulsi pada berbagai variasi HLB (Tabel I). Dimasukkan  ke  dalam  vial  paraffin cair, MSM, tween-80 dan span-80 kemudian diaduk    dengan magnetic   stirrer selama
5 menit. Emulsi yang didapatkan disimpan dalam  suhu  kamar  dan  dijaga  konstan (Mollet  dan  Grubermann,  2001).  Emulsi yang  paling  stabil  dipilih  sebagai  formula bentuk  emulsi  untuk  percobaan  aktivitas mikrobiologiknya.
Pembuatan Mikroemulsi Optimasi formula MSM dalam bentuk mikroemulsi  pada  berbagai  variasi  rasio surfaktan-kosurfaktan (Tabel II). Dimasukkan  ke  dalam  vial  MSM,  paraffin cair, tween-80, PEG-400, dan air kemudian diaduk  dengan magnetic  stirrer selama  5 menit.  Emulsi  yang  berupa  jernih  (paling
jernih)  yang  didapatkan  disimpan  dalam suhu kamar dan dijaga konstan (Mollet dan Grubermann,  2001).  Emulsi  yang  paling jernih  dipilih  sebagai  formula  bentuk mikroemulsi  untuk  percobaan  aktivitas mikrobiologiknya.
Volume Sedimentasi (F)
Tiap  formula  emulsi  yang  sudah dibuat dimasukkan ke dalam tabung reaksi berskala dan diamati pemisahan fase yang terjadi  sampai  dengan  2  jam  setelah pembuatan. Hasil pemisahan fase dinyatakan  dengan  harga F  dengan   rumus F  =   Hu/Ho ...   (1).  Keterangan:    F  =  rasio Tabel I. Formula MSM bentuk emulsi No.  MSM (g) Parafin cair (g)  Tween 80 (g)  Span 80 (g)  Air (g) HLB 1 0,125 0,875 0,500 - 3,500 15 2 0,125 0,875 0,125 0,375 3,500 7 3 0,125 0,875 - 0,500 3,500 4,3 4 0,125 0,875 0,375 0,125 3,500 12,3 5 0,125 0,875 0,250 0,250 3,500 9,65 6 0,125 0,875 - 0,500 3,500 4,3 Tabel II. Formula MSM dalam bentuk mikroemulsi No. MSM (g) Parafin cair (g)  Tween 80 (g) PEG 400 (g) Air (g) 1 0,125 0,125 1,250 - 3,500 2 0,125 0,125 0,625 0,625 3,500 3 0,125 0,125 0,417 0,833 3,500 4 0,125 0,125 0,313 0,937 3,500 5 0,125 0,125 0,25 1 3,500 6 0,125 0,125 0,208 1,042 3,500 7 0,125 0,125 0,179 1,071 3,500 8 0,125 0,125 0,156 1,094 3,500 9 0,125 0,125 0,139 1,111 3,500 10 0,125 0,125 0,125 1,125 3,500 11 0,125 0,125 - 1,250 3,500 12 0,125 0,125 0,625 0,625 3,500 13 0,125 0,125 0,833 0,417 3,500 14 0,125 0,125 0,937 0,313 3,500 15 0,125 0,125 1,000 0,250 3,500 16 0,125 0,125 1,014 0,236 3,500 17 0,125 0,125 1.071 0,179 3,500 18 0,125 0,125 1.094 0,156 3,500 19 0,125 0,125 1.111 0,139 3,500 20 0,125 0,125 1.125 0,125 3,500
pemisahan      fase,      Ho    =   tinggi    emulsi mula-mula, Hu = tinggi emulsi pada waktu pengamatan. Uji Mikrobiologi Alat-alat dan media sebelum digunakan  disterilisasi  terlebih  dahulu dengan cara yang sesuai. Stok mikroba hasil kultur  dalam  media  MHB  diukur  nilai OD 600nm (Optical  Density)  terlebih  dahulu dengan spektrofotometer UV-Vis. Selanjutnya dilakukan pengenceran dengan media agar nilai OD 600nm mikroba yang akan diuji sebesar 0,3 (untuk E.coli setara dengan 1-2  x  10 8 CFU/mL).  Suspensi  kemudian diencerkan lagi 120 kali untuk mendapatkan  nilai  akhir  10 6 CFU/mL dikarenakan  untuk  uji  mikrodilusi  ini terdapat  50µL  suspensi  bakteri  dan  50µL sampel,  sehingga  setara  dengan  5x  10 5 CFU/mL atau 5x10 4 CFU/100 µL. Uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan terhadap  bakteri Escherichia  coli ATCC
25922  secara  in  vitro  dengan  metode mikrodilusi  cair  ( broth  microdillution method ). Uji ini dilakukan untuk mengetahui persentase pengambatan sampel  terhadap  bakteri  uji.  Minyak  atsiri sirih merah dibuat kadar 2,5% b/b dengan dilarutkan menggunakan DMSO 5%. Karena sampel  uji  dalam  tiap well sebesar  50µL sedangkan  volume  total  tiap well sebesar 100µL  maka  kadar  minyak  atsiri  sirih merah dalam tiap well menjadi 1,25 % b/b. Sampel  yang  diujikan  antara  lain  sediaan MSM  dalam  bentuk  emulsi,    minyak  atsiri daun  sirih  merah  kadar  2,5%  b/b,  blanko emulsi,  MSM  bentuk  mikroemulsi  kadar 2,5%,  blanko  mikroemulsi,  akuades  dan DMSO sebagai kontrol pelarut, amoksisilin kadar 2,5%b/b sebagai kontrol positif, dan kontrol media.
Pengujian dilakukan terhadap 1 plate uji dan 1 plate blanko. Plate uji berisi 50 µL sampel  dan  50  µL  suspensi  bakteri. Sedangkan plate blanko berisi 50µL sampel dan 50 µL larutan salin tanpa ditambahkan suspensi  bakteri. Microplate diletakkan dalam kotak yang dilapisi tisu yang dibasahi
selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu  37°C selama  18-24  jam  menggunakan shaker incubator . Microplate dikeluarkan  dari shaker  incubator kemudian  ditambahkan pada masing-masing well 10 µL, konsentrasi 5mg/mL dan diinkubasi selama 4 jam pada temperatur 37°C. Setelah inkubasi, microplate ditambahkan  DMSO  1%  dan diinkubasi  kembali  selama  30  menit  pada temperatur 37°C kemudian diukur nilai OD dengan  ELISA reader pada  panjang gelombang 570nm.
% Penghambatan =
(1 − 𝑂𝐷 𝑠𝑒𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑢𝑗𝑖 − 𝑂𝐷 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 𝑂𝐷 𝑝𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 𝑢𝑗𝑖 − 𝑂𝐷 𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 𝑝𝑒𝑙𝑎𝑟𝑢𝑡 ) 𝑥 100%
…………………………..… (2) (Quave dkk, 2008)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Formulasi Sediaan Emulsi Hasil  dari  pembuatan  emulsi  yang paling stabil (harga F paling tinggi) adalah yang  mempunyai  nilai  HLB  7,  yang  terdiri atas    MSM  0,125g,  paraffin  cair  0,875g, tween-80  0,125g,  span-80  0,375g  dan  air 3,500g. Hasil ini ditunjukan dengan harga F =  1  selama  pengamatan  2  jam.  Kepada formula  ini  kemudian  ditetapkan  ukuran partikelnya dengan PSA dan diperoleh rata- rata  ukuran  partikel  yaitu  684,6  nm (Gambar 1).
Formulasi Sediaan Mikroemulsi Hasil dari formulasi sediaan mikroemulsi diperoleh bentuk mikroemulsi/emulsi spontan dengan kriteria  sediaan  yang  secara  fisik transparan/jernih.  Hasil  itu  didapat  pada formula  yang  terdiri  atas  0,125g  MSM, 0,125g  paraffin  cair,    0,417g  tween-80, 0,833g  PEG-400,  dan  3,500g  air.  Sediaan mikroemulsi  mempunyai  ukuran  partikel rata-rata 410,0 nm yang ditetapkan dengan PSA  (Gambar  2).  Ukuran  partikel  dari mikroemulsi  bisa  lebih  kecil  dikarenakan adanya  kosurfaktan  PEG-400.  Kosurfaktan akan  menyebabkan  tegangan  lateral  (π) menjadi ti nggi. Dari rumus γ i = γ o/w – π kalau tegangan  lateral   tinggi   bisa   berakibat γ i
menjadi      negative      sehingga      terjadilah pemecahan partikel menjadi jauh lebih kecil dan secara spontan, dan terlihat transparan (Denoel, dkk, 1981)
Uji Antibakteri
Hasil  uji  penghambatan  pertumbuhan bakteri Escherichia  coli ATCC  25922 (Gambar 3) diperoleh bahwa penghambatan  pertumbuhan  E.  coli  MSM dalam bentuk mikroemulsi (49,58 %) lebih besar  dari  MSM  dalam  bentuk  emulsi
(17,45%).  Di  dalam  bentuk  emulsi  MSM terdispersi  sebagai  fase  internal  dengan ukuran partikel rata-rata adalah 684,6 nm sedangkan MSM dalam bentuk mikroemulsi terdispersi  sebagai  fase  dispers  dengan ukuran  partikel  410,0  nm.  Partikel  yang lebih  kecil  akan  menyebabkan  luas antarmuka  menjadi  lebih  besar,  dan akibatnya bioavailabilitas  obat  akan  lebih baik (Kammona dan Kiparissides, 2012). Analisis Perbandingan Aktivitas Antibakteri  MSM  dalam  bentuk  sediaan emulsi dan mikroemulsi kemudian dilakukan.  MSM  dalam  DMSO  memiliki efektivitas  yang  paling  tinggi  untuk menghambat pertumbuhan bakteri dikarenakan  droplet  MSM  nya  langsung berefek  pada  bakteri  dan  terpenetrasi kedalam  membran  dengan  lebih  efektif. Namun  dalam  penggunaan  MSM  secara langsung  dapat  memberikan  rasa  yang tidak  nyaman  karena  baunya  yang menyengat, berminyak, dan dapat menyebabkan  iritasi  pada  konsentrasi tertentu.  Oleh  karena  itu  dibuatlah formulasi  MSM  agar  lebih  nyaman  dalam penggunaannya. Untuk  mengetahui  perbedaan  dari tiap  kelompok  data  dilakukan  analisis statistik.  Uji  normalitas  yang  digunakan adalah Saphiro-Wilk. Uji ini dilakukan pada setiap kelompok hari dan didapatkan hasil bahwa data terdistribusi normal. Selanjutnya  dilakukan  uji  homogenitas varian  dengan  metode  uji  Levene. Berdasarkan  hasil  analisis,  p-value  >0,05.

## Gambar 1. Ukuran partikel fase dispers emulsi ditetapkan dengan PSA

## Calculation Results
Peak No. S.P.Area Ratio Mean S. D. Mode 1 1.00 377.7 nm 137.9 nm 298.6 nm 2 … . … . nm … . nm . … nm 3 … . … . nm . … nm . … nm Total 1.00 377.7 nm 137.9 nm 298.6 nm Cumulant Operations Z-Average : 684.6 nm; PI : 0.534
Hal  ini  berarti  ragam  antar  kelompok perlakuan  homogen.  Apabila  dilakukan  uji perbandingan berganda, maka analisis yang digunakan  Tukey  HSD.  Data  yang terdistribusi  normal  selanjutnya  dianalisis menggunakan  ANOVA,  dari  hasil  uji  dapat disimpulkan  bahwa  terdapat  perbedaan persentase penghambatan antar perlakuan. Oleh  karena  itu  dilanjutkan  dengan  uji perbandingan  berganda,  yakni  dengan  uji Tukey  HSD  untuk  mengetahui  antar perlakuan  yang  mana  yang  menghasilkan persentase  penghambatan  yang  berbeda.
Hasil  analisis  Tukey  HSD  menunjukkan bahwa  bentuk  mikroemulsi  MSM,  emulsi MSM dan MSM tanpa diformulasi memiliki aktivitas antibakteri yang berbeda signifikan (p<0,05). Aktivitas  mikroemulsi  blank  lebih rendah  dibandingkan  mikroemulsi.  Hasil analisis  menggunakan  uji  Tukey  HSD menunjukkan bahwa aktivitas mikroemulsi blank  dan  mikroemulsi  MSM  berbeda sigifikan  dengan  nilai  p  0,000.  Begitu  pula dengan nilai persen penghambatan emulsi
blank yang lebih rendah jika dibandingkan dengan  emulsi  yang  mengandung  MSM. Hasil analisis menunjukkan aktivitas emulsi dan emulsi blank berbeda signifikan dengan nilai signifikansi 0,000.
Komponen  dalam  emulsi  dan mikroemulsi  selain  berfungsi  untuk membentuk  dan  menstabilkan  sediaan diduga dapat mendukung aktivitas antimikroba.  Ukuran  droplet  mikroemulsi yang kurang dari 500 nm bermanfaat untuk membantu  zat  aktif  dalam  melakukan mekanisme kerja saat penetrasi kedalam sel mikroba.  MSM  yang  diformulasi  menjadi mikroemulsi memiliki aktivitas antibakteri yang  tidak  berbeda  signifikan  dengan kontrol  positif  yang  digunakan  yaitu Amoxicillin dengan nilai signifikansi 0,002. Persen  hambatan  Amoxicillin  terhadap bakteri  Escherichia  coli  adalah  74,34%. Sehingga  formulasi  MSM  mikroemulsi dapat  memberikan  efek yang  cukup  tinggi dibandingkan dengan antibiotik yang sudah ada  sebelumnya.  Dengan  melakukan formulasi  MSM  bentuk  sediaan  memiliki

## Gambar 2. Ukuran partikel fase dispers mikroemulsi ditetapkan dengan PSA

## Calculation Results
Peak No. S.P.Area Ratio Mean S. D. Mode 1 1.00 421.0 nm 99.6 nm 381.3 nm 2 …. …. nm …. nm .… nm 3 …. …. nm .… nm .… nm Total 1.00 421.0 nm 99.6 nm 381.3 nm Cumulant Operations Z-Average : 410.0 nm; PI : 0.304
beberapa  manfaat  antara  lain  menjaga stabilitas bahan berkhasiat yang dikandung, lebih  praktis,  aman  dan  menyenangkan dalam pemakaian. Akuades  dan  DMSO  yang  digunakan diuji  efek  antibakterinya,  bertujuan  untuk membandingkan aktivitas penghambatannya dengan MSM agar dapat diketahui  apakah  pelarut  yang  digunakan mempengaruhi  aktivitas  antibakteri  dari sampel  secara  signifikan  atau  tidak. Akuades  memiliki  daya  hambat  -0,02% sedangkan  DMSO  memiliki  daya  hambat sebesar -7,02% yang berarti keduanya tidak menghambat pertumbuhan bakteri. Persentase penghambatan yang negatif dapat terjadi dikarenakan absorbansi  sampel  yang  lebih  tinggi daripada  blanko.  Hal  ini  menggambarkan bahwa  selama  masa  inkubasi  terjadi pertumbuhan bakteri pada well yang berisi sampel.  Sampel  yang  digunakan  pada konsentrasi rendah tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri dengan dilakukannya  inkubasi  namun  pada konsentrasi  lebih  tinggi,  senyawa  mampu menghambat pertumbuhan sehingga didapat  nilai  persen  penghambatan  yang positif. Formulasi MSM mikroemulsi dapat
meningkatkan efektivitasnya dalam menghambat mikroba. Mikroemulsi merupakan partikel  yang memiliki ukuran mikrometer. Dengan ukurannya yang kecil maka  partikel  mikro  dapat  menembus  sel bakteri  yang mempunyai ukuran diameter hingga  skala  mikrometer  sehingga  dapat menghambat pertumbuhan bakteri dengan lebih  efektif  (Brooks  dkk.,  2007).  Ukuran partikel  yang  kecil  membuat  mikroemulsi memiliki  kestabilan  yang  lebih  baik dibandingkan emulsi.

## KESIMPULAN
Emulsi  MSM  dapat  diformulasi dengan  komposisi  terbaik  MSM  0,125g, parafin  cair  0,875  gram,  tween-80  0,125g, span-80 0,375g, akuades 3,500g, mempunyai  diameter  rata-rata  partikel 684,6  nm.  Mikroemulsi  MSM  dapat diformulasi dengan komposisi terbaik MSM 0,125g,  parafin  cair  0,125g,    tween-80 0,417g,  PEG-400  0,833g,  akuades  3,500g mempunai diameter rata-rata partikel 410 nm. Mikroemulsi MSM memiliki penghambatan pertumbuhan sebesar 49,58 ±  3,27%  terhadap  bakteri  Escherichia  coli ATCC  25922  lebih  baik  dibandingkan dengan emulsi MSM dengan penghambatan
Gambar 3. Perbandingan aktivitas emulsi, minyak atsiri, dan mikroemulsi
17,45  ±  5,92%.  MSM  dalam  DMSO  5% memiliki  aktivitas  penghambatan  yang lebih  besar  daripada  bentuk  yang  telah diformulasi yaitu 66,59 ± 1,18%.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih kepada  Fakultas  Kedokteran  UGM  yang telah  memberikan  bantuan  dana  melalui Hibah Dana Masyarakat, Fakultas Kedokteran UGM Tahun 2012. DAFTAR PUSTAKA Anonim, 1979, Farmakope  Indonesia ,  Edisi
III, Departemen  Kesehatan Republik
Indonesia, Jakarta.
Bilia,  A.  R.,  Guccione,  C.,  Isacchi,  B.,
Righeschi,  C.,  Firenzuoli,  F.,  dan Bergonzi,  M.C.,  2014,  Essential  Oils Loaded in Nanosystem: A Developing Strategy for a Successful Therapeutic Approach, Evidence Based Complementary and Alternative Medicine , 1-14. Brooks,   G. F.,   Carroll,   K.C.,   Butel,   J.S.,    &
Morse,  S.A.,  2007, Jawetz,   Melnick   &
Adelsberg’s  Medical  Microbiology ,  24 th Edition, The McGraw- Hill’s Company, New York.
Denoel, A, Jaminet, Fr., and Moes, A., 1981, Pharmacy  Galenique  tome  II,  Les Press Univ Liege, Liege. Dubick, M. A, 1986, Historical perspectives on the  use of herbal  preparations to promote  health. JN  The  Journal  of Nutrition ,  University  of  California, Davis, School of Medicine, 1348-1349. Kammona, O., Kiparissides, C., 2012, Recent Advances in Nanocarrier-based Mucosal  Delivery  of  Biomolecules, Journal  of  Controlled  Release ,  161, 781-794.
Mollet,  H.,  dan  Grubermann,  A.,  2001,
Formulation  Technology:  Emulsions, Suspensions,  Solid  Form ,  261-262, Wiley-Vch, Toronto, 73. Yuksel, K., Ucan, U.C., Kartal, M., Altun, M.L., Aslan,  S.,  Sayar,  E.,  and  Ceyhan,  T., 2006, GC-MS Analysis and Antibacterial  Activity  of  Cultivated Satureja  cuneifolia Ten  Essential  Oil,
Turkey  Journal  Chemistry ,  30,  253-
259.