Vol. 9, No. 1, 35-41, Th. 2020 ISSN 2302-9218 (Print) ISSN 2620-9721 (Online)

## Pemanfaatan Limbah Agroindustri Kacang Tanah Sebagai Media Pertumbuhan Mikrobia Probiotik Lactobacillus bulgaricus

## Utilization of Peanut Agro-Industrial Waste as a Growth Media for Probiotic Bacteria
Lactobacillus bulgaricus
Esna Dilli Novianto 1,* , Monica Sonia Indri Pradipta 2 , Suwasdi 1 , Mahdalina Mursilati 1 , Surya Bagus Purnomo 2
1 Program Studi Agroteknologi, Jurusan Agronomi, Fakultas Pertanian, Universitas Tidar, Jl. Kapten Suparman No. 39, Tuguran, Potrobangsan, Kec. Magelang Utara, Kota Magelang, Jawa Tengah 56116
2 Program Studi Peternakan, Jurusan Agronomi, Fakultas Pertanian, Universitas Tidar, Jl. Kapten Suparman No. 39, Tuguran, Potrobangsan, Kec. Magelang Utara, Kota Magelang, Jawa Tengah 56116
*Penulis Korespondensi: Esna Dilli Novianto, e-mail: dilli.novianto@untidar.ac.id
Tanggal submisi: 2 April 2020; Tanggal penerimaan: 29 April 2020

## ABSTRACT
The increase of peanut-based agro-industry today, cause a significant increase in the number of waste products  in  the  form  of  peanut  shells.  This  can  cause  a  problem  to  the  environment  due  to  insoluble carbohydrate  fiber  molecules  in  peanuts.  However,  the  cellulose  in  peanut  waste  can  be  used  as  useful material, such as prebiotic, which plays a role in the growth of probiotic bacteria. Nowadays, inulin is used as a source of prebiotics in food additives or health supplements. However, its limited availability and high prices have an impact on the  cost of finished products. This research was aimed to identify and to analyze the  crude  extracts  of  peanut  shells  waste  as  a  prebiotic  substitution  material.  The  crude  extract  of  peanut shells  waste  was  used  as  a  growth  medium  for  the  probiotic,  Lactobacillus  bulgaricus.  A  completely randomized experimental design with levels of treatments, i.e., 0% (negative control), 20%, 40%, 60%, 80% of  peanut  shell  extracts,  as  well  as  inulin  as  a  positive  control  was  applied  in  this  research  to  analyze bacterial  growth.  The  parameters  observed  in  this  study  were  the  morphology  of  bacterial  colonies,  gram staining,  and  growth  curve  analysis.  The  results  showed  that  60%  concentration  of  peanut  shells  extract effectively  increased  the  growth  of  L.  bulgaricus  at  6  and  10  hours.  Cellulose  in  rough  extracts  of  peanut shells can be used as a carbon source for bacterial growth.

## Keywords: peanut shells, prebiotics, probiotics

## ABSTRAK
Peningkatan  agroindustri  berbahan  dasar  kacang  tanah  menyebabkan  jumlah  limbah  kulit  kacang tanah  meningkat  secara  signifikan,  sehingga  berdampak  pada  pencemaran  lingkungan.  Selulosa  pada  kulit kacang  tanah  masih  dapat  digunakan  sebagai  bahan  prebiotik.  Senyawa  prebiotik  berperan  dalam menumbuhkan  bakteri  probiotik.  Pada  umumnya,  inulin  digunakan  sebagai  sumber  prebiotik  pada  bahan tambahan makanan atau suplemen kesehatan. Ketersediaan yang terbatas dan harga yang mahal berdampak pada harga produk jadi yang lebih mahal. Tujuan penelitian ini untuk mengidentifikasi dan menguji ekstrak kasar limbah  agroindustri berupa kulit kacang tanah sebagai bahan substitusi prebiotik.  Ekstrak kasar yang didapatkan  dari  limbah  kulit  kacang  tanah  digunakan  sebagai  media  pertumbuhan  bakteri  probiotik, Lactobacillus bulgaricus . Rancangan acak lengkap satu faktor perlakuan digunakan untuk uji pertumbuhan bakteri L. bulgaricus. Variasi konsentrasi ekstrak kulit kacang tanah 0% (kontrol negatif), 20%, 40%, 60%, 80%  digunakan  sebagai  perlakuan  pada  penelitian  ini,  sedangkan  inulin  sebagai  kontrol  positif.  Parameter
Vol. 9, No. 1, 35-41, Th. 2020 ISSN 2302-9218 (Print) ISSN 2620-9721 (Online)
yang  diamati  pada  penelitian  inin  adalah  morfologi  koloni  bakteri,  pengecatan  gram  dan  analisis  kurva pertumbuhan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kulit  kacang  tanah  konsentrasi  60%  efektif meningkatkan  pertumbuhan  bakteri L.  bulgaricus di  jam  ke-6  dan  jam  ke-10.  Selulosa  pada  esktrak  kasar kulit kacang tanah digunakan sebagai sumber karbon untuk pertumbuhan bakteri.
Kata kunci : kulit kacang tanah, prebiotik, probiotik

## PENDAHULUAN
Aktivitas agroindustri dewasa ini menambah jumlah  limbah  organik  di  lingkungan.  Salah satunya adalah kulit kacang tanah. Limbah organik kacang  tanah  menjadi  polutan  lingkungan  jika dibiarkan  saja  dan  tidak  diolah  dengan  benar. Subtansi  karbohidrat  komplek  yang  terkandung  di dalam  limbah  kulit  kacang  dapat  mempengaruhi C/N ratio tanah sehingga mengganggu perkembangan  tanaman  yang  ada  diatasnya (Menezes et  al .,  2015).  Hal  tersebut  dikarenakan kandungan  selulosa  pada  kacang  tanah  masih tergolong  tinggi,  yaitu  sekitar  47,19%,  sedangkan kandungan  karbohidrat  komplek  yang  lain  seperti lignin,  hemiselulosa  berturut-turut  adalah  30,57% dan  7,19%  (Oktasari,  2018).  Menurut  Nathalia (2011), kulit kacang tanah juga masih mengandung serabut  xylan  sekitar  6,3%.  Kandungan serat  yang masih tinggi ini dapat digunakan sebagai prebiotik, yaitu  makanan  bagi  bakteri  probiotik  (mikroflora alami pada tubuh).
Pada  saat  ini,  inulin  digunakan  sebagai bahan  utama  prebiotik.  Senyawa  ini  bersinergi dengan  senyawa  golongan  sisi  rantai  mimosa (Oliveira et  al. ,  2012a).  Azhar  (2009)  dan Tsujikawa et  al .  (2013)  mengemukakan  bahwa penambahan  inulin  dapat  meningkatkan  jumlah mikroflora  alami  di  dalam  tubuh.  Sumber  inulin saat ini paling banyak ditemukan pada umbi dahlia dan  beberapa  bahan  organik  lain  sepeti  pisang, bawang  putih  dan  tanaman  serealia.  Namun demikian,  ketersediaan  inulin  yang  terbatas  dan harga  yang  mahal  berdampak  pada  harga  produk jadi  yang  lebih  mahal.  Pemanfaatan  limbah organik  dengan  kandungan  serat  yang  tinggi menjadi  alternatif  solusi  yang  tepat  untuk menjawab  permasalahan  tersebut.  Salah  satunya dengan  menggunakan  limbah  kulit  kacang  tanah. Suatu bahan dapat dikatakan sebagai prebiotik jika tidak  terhidrolisis  dan  dapat  melewati  saluran pencernaan  atas,  hanya  dapat  digunakan  oleh mikrobia  tertentu  yang  termasuk  probiotik  dan dapat  meningkatkan  jumlah  populasi  mikrobia menguntungkan di dalam usus seperti Bifidobacteria , Lactobacillus (Pradipta et  al. ,
2014)  dan Streptococcus (Oliveira et  al. ,  2012a). Pada penelitian ini digunakan bakteri Lactobacillus bulgaricus ,  salah  satu  mikrobia  starter  pada pembuatan minuman probiotik. Berdasarkan penjelasan  sebelumnya  diketahui  bahwa  kulit kacang tanah berpotensi sebagai alternatif prebiotik,  namun  demikian  aktivitasnya  dalam meningkatkan  pertumbuhan  bakteri  probiotik belum  pernah  diteliti.  Penelitian  ini  dilakukan untuk  mengidentifikasi  dan  menguji  ekstrak  kasar kulit  kacang  tanah  sebagai  bahan  substitusi prebiotik  selain  inulin  melalui  uji  pertumbuhan bakteri  probiotik L.  bulgaricus sebagai  salah  satu mikrobia probiotik yang paling banyak digunakan.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  April sampai  dengan  Juli  2019  di  Laboratorium Agroteknologi  Fakultas  Pertanian  Universitas Tidar.  Metode  yang  digunakan  pada  penelitian  ini seperti  dilakukan  oleh  Witchencot et  al. (2010) dengan  dimodifikasi.  Secara  keseluruhan  prosedur penelitian  dibagi  menjadi  tiga  tahap  utama  yaitu preparasi kulit kacang tanah, ekstraksi kulit kacang tanah,  dan  uji  pertumbuhan  bakteri  probiotik L. bulgaricus .  Rancangan  percobaan  menggunakan rancangan acak lengkap satu faktor.

## Bahan
Bahan  utama  yang  digunakan  dalam percobaan adalah limbah kulit kacang tanah dan L. bulgaricus strain FNCC 0041 koleksi Laboratorium Pangan dan Gizi Universitas Gadjah Mada.  Limbah  kulit  kacang  tanah  diperoleh  dari limbah  agroindustri  bumbu  kacang  di  daerah Salaman, Kabupaten Magelang.

## Preparasi Kulit Kacang Tanah
Pencucian  kulit  kacang  menggunakan  air suling mengalir. Tujuan pencucian adalah menghilangkan  kotoran  berupa  tanah  yang menempel  pada  kulit  kacang  tanah.  Setelah dilakukan  pencucian  kulit  kacang,  dilakukan
Vol. 9, No. 1, 35-41, Th. 2020 ISSN 2302-9218 (Print) ISSN 2620-9721 (Online)
pengeringan  pertama  yaitu  dijemur  dibawah  sinar matahari selama 24 jam (± 3 hari). Kemudian kulit kacang  ditimbang  dan  dilanjutkan  dengan  proses pengeringan menggunakan oven (Memmert, Germany)  dengan  suhu  60°C.  Berat  kulit  kacang diukur  menggunakan  timbangan  analitik  secara periodik  hingga  mendapatkan  berat  konstan.  Kulit kacang  tanah  yang  telah  melewati  proses pengeringan  kemudian  dibuat  serbuk  ( crude ) dengan menggunakan blender untuk mempermudah proses ekstraksi.

## Ekstraksi dan Formulasi
Ekstraksi menggunakan pelarut air. Ekstraksi  dengan  air  pada  suhu  kamar  dilakukan dengan mencampurkan air dan serbuk kulit kacang tanah  dalam  perbandingan  5  :  1.  Pengadukan dilakukan  selama  1  jam.  Campuran  didiamkan selama 24 jam dalam wadah tertutup. Selanjutnya, campuran  disaring  menggunakan  filter  kapas kemudian  dilanjutkan  dengan  kertas  saring Whatman 42 dengan frekuensi tiga kali penyaringan sampai residu filtrat minimal (jernih). Ekstrak  yang  diperoleh  selanjutnya  dicampurkan pada  media  pertumbuhan  basal  sesuai  level perlakuan dan dilakukan proses sterilisasi menggunakan autoclave (YXQ280  YXQ-280, China)  selama  15  menit  pada  suhu  121°C bertekanan  1  atm.  Hasil  tahapan  ekstraksi  berupa ekstrak kasar kulit kacang tanah yang dikombinasikan  dengan  media  basal  pertumbuhan bakteri,  MRSB  (Merck,  Germany)  sesuai  dengan kadar crude masing-masing  perlakuan  dan  siap dilakukan  inokulasi.  Perlakuan  kontrol  terdiri  atas kontrol  negatif  (KN)  menggunakan  medium  basal dan  kontrol  positif  (KP)  dengan  inulin  ex-  Belgia yang  didapatkan  dari online  marketplace .  Setiap perlakuan  diulang  tiga  kali.  Formulasi  media pertumbuhan disajikan dalam Tabel 1.

## Pengamatan Morfologi Bakteri dan Pengecatan Gram
Bakteri L.  bulgaricus strain  FNCC  0041 ditumbuhkan  pada  media  MRSB  padat  dan  di inkubasi  pada  inkubator  (Memmert,  Germany) dengan  suhu  37°C  selama  2  ×  24  jam.  Morfologi sel  bakteri  di  amati  menggunakan  mikroskop cahaya (Hayear, China). Pengecatan gram dilakukan  untuk  mengetahui  bahwa  isolat  murni yang digunakan sudah sesuai dan bukan merupakan kontaminan. Prosedur pengecatan gram yang  digunakan  adalah  prosedur  standar  sesuai yang  dilakukan  oleh  Suwasdi et  al. (2019).  Satu koloni bakteri diambil menggunakan ose. Kemudian  isolat  di  fikasi  diatas  api  bunsen  dan dilanjutkan dengan pengecatan berturut-turut Gram A  (kristaln  violet),  Gram  B  (Iod),  Gram  C (Alkohol 70%) dan Gram D (Safranin). Kenampakan warna bakteri di amati menggunakan mikroskop cahaya pada perbesaran 400 kali.
Uji  Pertumbuhan  Bakteri  Probiotik  Asam Laktat
Inokulum L.  bulgaricus strain  FNCC  0041 disiapkan  dengan  inokulasi  pada  formulasi  media pertumbuhan  (sesuai  perlakuan)  diinkubasi  pada incubator (Memmert, Germany) dengan suhu 37°C dan  dilakukan  perhitungan  koloni  menggunakan haemocytometer (Marienfeld, Germany) selama 12 jam  masa  inkubasi  dengan  interval  perhitungan  2 jam.  Data  hasil  perhitungan  bakteri  pada haemocytometer kemudian dihitung untuk mendapatkan  CFU/mL  ( Colony  Forming  Units ) dan  dikonversi  dalam  bentuk  kurva  pertumbuhan untuk  memperoleh  pola  pertumbuhan  dengan  fase logaritmik optimal.
Tabel 1. Formulasi media pertumbuhan bakteri L. bulgaricus
Kode Jenis Bakteri Jenis Perlakuan LKN L.20 L.40 L.60 L.80 LKP Lactobacillus bulgaricus Media 100% MRSB
Media 20% ekstrak kasar + 80% MRSB
Media 40% ekstrak kasar + 60% MRSB Media 60% ekstrak kasar + 40% MRSB
Media 80% ekstrak kasar + 20% MRSB Media 100% inulin
Vol. 9, No. 1, 35-41, Th. 2020 ISSN 2302-9218 (Print) ISSN 2620-9721 (Online)
Terakreditasi RISTEKDIKTI Peringkat SINTA 4, SK. 30/E/KPT/2019

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Morfologi Bakteri dan Pengecatan Gram
Teknik pewarnaan membagi bakteri berdasarkan  struktur  senyawa  penyusun  dinding sel. Dinding sel bakteri Gram positif  tersusun atas senyawa karbohidrat kompleks peptidoglikan yang berbentuk seperti jala. Peptigoglikan menyumbang 50-90%  berat  selubung  sel.  Bakteri  Gram  negatif memiliki dinding sel dengan lapisan peptidoglikan yang  lebih  tipis  sekitar  10%  berat  selubung  sel (Putri et al ., 2018).
Gambar 1. Pewarnaan probiotik dengan perbesaran 400  kali: a) Lactobacillus  bulgaricus biakan;  b) Lactobacillus  bulgaricus
murni
Hasil  pewarnaan  isolat  yang  ditumbuhkan dalam  media  kandidat  prebiotik ekstrak  kasar limbah  kulit  kacang  tanah  menunjukkan  jenis bakteri  gram  positif  dengan  warna  keunguan.  Hal tersebut dapat dilihat pada gambar 1 yang ditunjuk oleh anak panah. Struktur morfologi Lactobacillus bulgaricus sesuai  dengan  data  strain  yang diperoleh  dari  Laboratorium  Pusat  Studi  Pangan dan  Gizi  Universitas  Gadjah  Mada  dengan  bentuk sel  memanjang  (batang)  dan  bentuk  koloni berkelompok (Oliveira et al. , 2012b; Takagi et al. , 2014).  Hasil  dari  pengamatan  morfologi  (koloni ataupun  sel)  dan  pengecatan  Gram  menunjukkan bahwa  bakteri  yang  ditumbuhkan  adalah  benar bakteri  probiotik L.  bulgaricus dan  bukan  bakteri kontaminan  sehingga  penelitian  dapat  dilanjutkan ke tahap berikutnya. Populasi koloni yang teramati antara  media  MRSB  lebih  tinggi  dibandingkan dengan  media  ekstrak  kulit  kacang  tanah.  Hal  ini disebabkan  media  MRSB  merupakan  media  basal dengan  nutrisi  cukup  yang  dibutuhkan  bagi pertumbuhan  bakteri  probiotik  asam  laktat.  Kadar selulosa  dalam  ekstrak  kulit  kacang  tanah  dapat digunakan  sebagai  media  pertumbuhan  probiotik asam  laktat  walaupun  populasi  koloni  yang teramati  belum  setara  dengan  media  basal MRSB.
Faktor  ketersediaan  nutrisi  yang  menjadi  faktor pembatas  bagi  pertumbuhan  probiotik  asam  laktat yang  dikulturkan.  Media  basal  MRSB  memiliki kandungan  glukosa  sebanyak  20  g/L.  Menurut Suwasdi et  al .  (2019)  bakteri  asam  laktat  lebih mudah menggunakan karbohidrat sederhana daripada  karbohidrat  kompleks  seperti  pada ekstrak kulit kacang. Hal inilah yang menyebabkan koloni L. bulgaricus lebih banyak tumbuh di media MRSB  daripada  media  dengan  tambahan  ekstrak kulit kacang tanah.
Analisis  Kurva  Pertumbuhan  Bakteri  Asam Laktat
Rohan et  al. (2016)  menyebutkan  kurva pertumbuhan  bakteri  dibagi  kedalam  empat tahapan  yaitu  fase  initial  ( lag  phase ), fase kuadratik  ( log  phase ), fase  stasioner  ( stasioner phase ), dan fase deklinasi ( death phase ).
Gambar 2. Kurva pertumbuhan bakteri Lactobacillus bulgaricus Hasil penelitian yang
dilakukan menunjukkan fase initial ( lag phase ) terjadi antara jam  ke-0  sampai  ke-4  setelah  inokulasi  untuk semua  perlakuan. Lag  phase merupakan  fase mikroba  menyesuaikan  diri  dengan  kondisi lingkungan  di  sekitarnya  dalam  hal  ini  media pertumbuhan  yang  baru  (Cobas et  al .,  2011). Faktor  yang  mempengaruhi  fase  initial  ini diantaranya  adalah  jumlah  sel  pertama  yang  di inokulasi,  kondisi  fisiologis  dan  morfologis mikrobia  itu  sendiri  dan  jenis  media  pertumbuhan yang  digunakan.  Takagi et  al. (2014)  melaporkan
Vol. 9, No. 1, 35-41, Th. 2020 ISSN 2302-9218 (Print) ISSN 2620-9721 (Online)
DOI: 10.30598/jagritekno.2020.9.1.35
fase  initial  ( lag  phase ) L.  bulgaricus terjadi  pada jam ke- sampai dengan jam ke-4 setelah dilakukan inokulasi  pada  media  pertumbuhan  baru.  Fase logaritmik  ( log  phase) terjadi  karena  bakteri melakukan  pembelahan  biner  pada  laju  konstan, dimana jumlah bakteri menjadi dua kali lipat pada periode  waktu  tertentu,  keadaan  pertumbuhan seimbang,  serta  memiliki  laju  metabolism  tetap. Fase  tersebut  merupakan  fase  yang  tepat  untuk mengambil  isolat  bakteri  sebagai  bahan  starter (Sharah et al. , 2015; Suwasdi et al ., 2019).
Fase logaritmik L.  bulgaricus yang teramati pada  percobaan  berkisar  antara  2-5  jam.  Hal tersebut  terlihat  pada  grafik  perlakuan  kontrol positif  dan  perlakuan  penambahan  ekstrak  kulit kacang  60%  (L.60).  Minj  dan  Vij  (2012) memaparkan bahwa bakteri probiotik L. bulgaricus LB144  memiliki  fase  pertumbuhan  logaritmik optimal  pada  jam  ke-3  sampai  jam  ke-6  pada inokulasi  media  MRS  dengan  penambahan  3% inulin.  Hasil  percobaan  yang  dilakukan  diperoleh fase  logaritmik  optimal  terdapat  pada  perlakuan media  inulin  dengan  titik  optimum L.  bulgaricus adalah  1,04  ×  10 5 . L.  bulgaricus media  inulin mecapai  titik  optimum  logaritmik  antara  jam  ke-6 sampai jam ke-8 (Gambar 2, grafik LKP dan L.60) setelah  inokulasi.  Pada L.  bulgaricus media pertumbuhan ekstrak kasar kulit kacang tanah pada perlakuan  konsentrasi  60%  (L.60)  dengan  jumlah bakteri  (CFUs/mL)  pada  titik  optimum  9,4  ×  10 5 antara  jam  ke-4  sampai  ke-6.  Ekstrak  kasar  kulit kacang  tanah  digunakan  oleh  bakteri  asam  laktat sebagai  bahan  karbon  dalam  metabolisme  sel. Senyawa karbon diperoleh dari kandungan selulosa dalam  kulit  kacang  tanah  yang  dihidrolisis bersamaan  dengan  media  basal.  Pada  konsentrasi diatas  60%,  bahan  karbon  yang  terdapat  pada media memiliki konsentrasi terlalu tinggi sehingga akan menghambat proses pembelahan sel.
Hasil percobaan menunjukkan fase stasioner L. bulgaricus berkisar antara jam ke-6 sampai jam ke-7  (Gambar  2,  grafik  LKP  dan  L.60).  Fase stasioner bakteri terjadi karena jumlah bakteri yang hidup  sama  hampir  sama  dengan  jumlah  bakteri yang  mati.  Hal  ini  disebabkan  berkurangnya nutrien dan terbentuknya senyawa hasil metabolisme  yang  cenderung  bersifat  racun  bagi
bakteri.  Fase  ini  terjadi  penumpukan  asam  laktat, sebagai  hasil  metabolisme  bakteri L.  bulgaricus . Selain  itu,  penyusutan  kandungan  nutrien  pada media  pertumbuhan,  mengakibatkan  terjadinya kompetisi  perebutan  nutrisi  sehingga  hanya  sel yang  mampu  bertahan  yang  akan  tetap  tumbuh, sedangkan  sel  yang  tidak  mampu  berkompetisi akan  mati  (Reiny,  2012).  Fase  stasioner  bakteri asam  laktat  cenderung  singkat  karena  hasil metabolit  berupa  asam  laktat  akan  menjadi  zat penghambat pada pembelahan sel bakteri.
Fase  kematian L.  bulgaricus mulai  terjadi setelah  jam  ke-7  setelah  inkubasi  (Gambar  2, grafik  LKP  dan  L.60).  Fase  kematian  ( death phase) sel  yang  mati  menjadi  lebih  banyak  dari pada  terbentuknya  sel-sel  yang  baru.  Rohan et  al. (2016)  dan  Pradipta et  al. (2017)  memaparkan mikroba  pada  fase  kematian  disebabkan  oleh beberapa  faktor  antara  lain  jumlah  nutrisi  yang telah  habis,  umur  sel  mikroba,  dan  adanya  hasil metabolit  sekunder  dari  proses  metabolisme  sel yang  antara  lain  asam  laktat,  alkohol  dan sebagainya.
Hasil analisis pertumbuhan probiotik bakteri asam  laktat L.  bulgaricus disajikan  pada  Tabel  2. Berdasarkan  hasil  analisis  yang  telah  dilakukan konsentrasi  ekstrak  kulit  kacang  tanah  pada berbagai  level  tidak  menunjukkan  perbedaan signifikan  ( P >  0,05)  pada  pertumbuhan L. bulgaricus pada  0,  2,  dan  4  jam . Hal  ini  sesuai dengan dugaan awal bahwa pada jam-jam tersebut, bakteri L.  bulgaricus sedang  berada  pada  fase initial  ( lag  phase ).  Fase  ini  umum  terjadi  pada semua  bakteri  ketika  dipindahkan  ke  dalam media pertumbuhan yang baru.
Pertumbuhan L.  bulgaricus pada  fase  lag dan  log tidak  dipengaruhi  perbedaan  konsentrasi ekstrak kulit kacang tanah yang diberikan. Namun pada waktu 6 jam hingga 10 jam terlihat perbedaan yang  signifikan  ( P <  0,05)  di  antara  perlakuan yang  diberikan  pada  fase  stasioner L.  bulgaricus. Penambahan ekstrak kasar kulit kacang tanah 60% (L.60) pada fase tersebut, menunjukkan hasil yang tidak berbeda nyata dibandingkan perlakuan inulin (kontrol  positif).  Artinya  pada  konsentrasi  ekstrak kasar  kulit  kacang  tanah  60%  (L.60),  media  ini mampu  menggantikan  inulin  untuk  mempertahan- kan pertumbuhan bakteri L. bulgaricus.
Vol. 9, No. 1, 35-41, Th. 2020 ISSN 2302-9218 (Print) ISSN 2620-9721 (Online)
Terakreditasi RISTEKDIKTI Peringkat SINTA 4, SK. 30/E/KPT/2019
Tabel 2.  Efek  penambahan  ekstrak  kasar  kulit  kacang  tanah  terhadap  pertumbuhan  probiotik  bakteri  asam laktat
Perlakuan Waktu Pertumbuhan Lactobacillus bulgaricus (×10 5 CFU) (jam) 0 2 4 6* 8* 10* 12* LKN L.20 L.40 L.60 L.80 LKP 0,46 0,52 0,42 0,28 0,32 0,48 0,54 0,52 0,43 0,42 0,30 0,56 0,74 0,60 0,64 0,86 0,36 0,90 0,26 a 0,46 b 0,46 b 0,94 c 0,28 a 1,04 c
0,20 a 0,26 a 0,30 a 0,84 b 0,20 a 0,88 b
0,06 a 0,16 a 0,20 a 0,54 b 0,06 a 0,60 b
0,04 a 0,05 a 0,30 b 0,32 b 0,02 a 0,54 c Keterangan: *Karakter huruf/superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata ( P < 0,05)
Menurut  Cobas et  al .  (2011)  pada  media pertumbuhan  yang  baru,  bakteri  akan  melakukan adaptasi untuk dapat bertahan hidup. Keberhasilan adaptasi  ini  ditunjukkan  dengan  terbentuknya kurva pertumbuhan logaritmik yang diikuti dengan fase  stasioner  pada  waktu  tertentu.  Inulin digunakan  sebagai  kontrol  positif  pada  penelitian ini.  Berdasarkan  penjelasan  sebelumnya,  kurva pertumbuhan  yang  dihasilkan  pada  perlakuan penambahan  ekstrak  kulit  kacang  tanah  60% menunjukkan gambar yang setara dibawah kontrol positif. Hal tersebut diperkuat dengan hasil analisa statistik pada tabel 1 yang menunjukkan tidak ada perbedaan  nyata  antara  perlakukan  L.60  dengan kontrol  positif  LKP.  Hal  tersebut  tidak  dijumpai pada  perlakuan  penambahan  ekstrak  kulit  kacang tanah konsentrasi lainnya. Dengan demikian dapat dikatakan  bahwa  konsentrasi  ekstrak  kulit  kacang tanah  sebanyak  60%  merupakan  konsentrasi  yang tepat sebagai alternatif pengganti inulin.
Uji  statistik  juga  dilakukan  pada  fase kematian  bakteri.  Perlakuan  L.60  menunjukkan perbedaan nyata dengan kontrol positif ( P > 0,05). Hal  ini  menunjukkan  bahwa  setelah  jam  ke  10, pada  perlakuan  L.60  sudah  memasuki  fase kematian  seperti  pada  perlakuan  konsentrasi ekstrak  kulit  kacang  lainnya.  Hasil  uji  ini menegaskan bahwa konsentrasi ekstrak 60% hanya dapat  digunakan  hingga  jam  ke  10  setelah  bakteri pertama  di  inokulasi.  Setelah  jam  tersebut, penambahan  ekstrak  kulit  kacang  tanah  tidak memberikan efek yang signifikan.

## KESIMPULAN
Penggunaan  ekstrak  kasar  limbah  kulit kacang  tanah  konsentrasi  60%  pada L.  bulgaricus
waktu  6  hingga  10  jam  menunjukkan  perbedaan tidak  signifikan  ( P >  0,05)  dibandingkan  inulin (kontrol positif). Artinya konsentrasi ekstrak kasar kulit  kacang  tanah  60% L.  bulgaricus mampu menggantikan  inulin  untuk  mempertahankan pertumbuhan bakteri tersebut.

## DAFTAR PUSTAKA
Azhar,  M.  2009.  Inulin  sebagai  prebiotik. Jurnal Sainsteks 8: 1-8.
Cobas,  A.C.  N.  Corzo,  A.  Olano,  C.  Peláez,  T.
Requena, and M. Ávila. 2011. Galactooligosaccharides derived from lactose  and  lactulose:  Influence  of  structure on Lactobacillus, Streptococcus, and Bifidobacterium growth. International
Journal  of  Food  Microbiology 149:  81-87. DOI: 10.1016/j.ijfoodmicro.2011.05.026 Menezes,  A.B.,  M.T.P.  Miller,  P.  Poonpatana,  M.
Farrell,  A.  Bissett,  L.M.  Macdonald,  P. Toscas,  A.E.  Richardson,  and  P.H.  Thrall. 2015.  C/N  ratio  drives  soil  actinobacterial cellobiohydrolase
gene
diversity.
Environmental Microbiology 81: 3016-3028.
DOI: 10.1128/AEM.00067-15
Minj, J. and S. Vij. 2012. Effect of prebiotic inulin on  the  fermentation  and  growth  kinetics pattern  of  probiotic  yoghurt  bacteria. International Journal of Current
Microbiology and Applied Sciences 6: 1755- 1768. DOI:10.20546/ijcmas.2017.612.199 Nathalia,  D.N.  2011.  Produksi  Xilooligosakarida dari  Tongkol  Jagung  Sebagai  Kandidat Prebiotik  Dengan  Pemanasan  Suhu  Tinggi dan  Hidrolisis  Enzimatik.  Tesis.  Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Vol. 9, No. 1, 35-41, Th. 2020 ISSN 2302-9218 (Print) ISSN 2620-9721 (Online)
DOI: 10.30598/jagritekno.2020.9.1.35
Oktasari,  A.  2018.  Kulit  kacang  tanah  ( Arachis hypogaea L.)  sebagai  adsorben  ion  Pb(II). Jurnal ALKIMIA 2: 17-27. DOI: 10.19109/alkimia.v2i1.2258
Oliveira,  R.P.S.,  P.  Perego,  M.N.  de  Oliveira,  and A.  Converti.  2012a.  Effect  of  inulin  on  the growth and metabolism of a probiotic strain of Lactobacillus  rhamnosus in  co-culture with Streptococcus  thermophilus . LWT- Food  Science  and  Technology 47:  358-363. DOI: 10.1016/j.lwt.2012.01.031 Oliveira, R.P.S., P. Perego, M.N. De Oliveira, and A.  Converti.  2012b.  Growth,  organic  acids profile and sugar metabolism of Bifidiobacteria  lactics in  co-culture  with Streptococcus  thermophilus :  the  inulin effect. Food  Research  International 48:  21- 27. DOI: 10.1016/j.foodres.2012.02.012
Pradipta,  M.S.I.,  S.  Harimurti,  and  Widodo.  2017.
Microencapsulation  of  indigenous  poultry lactic  acid  bacteria  probiotic  on  the competitive  exclusion  against Salmonella enteritidis and Escherichia  coli in  vitro.
Bulletin  Peternakan 41:  134-141.  DOI:
10.21059/buletinpeternak.v41i2.17017 Putri,  Y.W.,  A.E.  Putra,  dan  B.I.  Utama.  2018. Identifikasi  dan  karakteristik  bakteri  asam laktat yang di isolasi dari vagina wanita usia subur. Jurnal  Kesehatan  Andalas 7:  20-25. DOI: 10.25077/jka.v7i0.864
Reiny,  S.S.  2012.  Potensi  filtrat Lactobacillus acidophilus ATCC 4796 sebagai biopreservatif  pada  rebusan  daging  ikan tongkol. Indonesian  Journal  of  Applied Science 2: 604-613. DOI: 10.24198/ijas.v2i2.2734 Rohan, H.S., N.L.P.E. Sudiwati, K. Rokhmad, dan I.R.  Rohana.  2016.  Mikrobiologi  Dasar. Yogyakarta: CV. Budi Utama.
Sharah,  A.,  R.  Kumalasari,  dan  Desmelati.  2015. Pembuatan kurva pertumbuhan bakteri asam laktat  yang  di  isolasi  dari  ikan  peda kembung  ( Rastrelliger sp.). Jurnal  Online Mahasiswa Universitas Riau 2: 1-8.
Suwasdi, M., Mursilati, S. Bagus, M.S.I. Pradipta, and  E.D.  Novianto.  2019.  Utilization  of peanut  shell  waste  ( Arachis  hypogaea )  as  a growth media for probiotic bacteria Streptococcus  thermophilus . Journal  of Livestock  Science  and  Production 3:  186- 192. DOI: 10.31002/jalspro.v3i2.2035 Takagi,  R.,  Y.  Tsujikawa,  R.  Nomoto,  and  R.
Osawa.  2014.  Comparison  of  the  growth  of Lactobacillus  delbrueckii , L.  paracasei and L.  plantarum on  inulin  in  co-culture systems. Journal  Bioscience  of  Microbiota, Food  and  Health 33:  139-146.  DOI: 10.12938/bmfh.33.139
Tsujikawa,  Y.,  R.  Nomoto,  and  R.  Osawa.  2013. Difference in degradation patterns on inulin- type fructans among strains of Lactobacillus delbrueckii and Lactobacillus  paracasei .
Bioscience  of  Microbiota,  Food  and  Health 32: 157-165. DOI: 10.12938/bmfh.32.157
Wichienchot,  A.,  M.  Jatupornpipat,  and  R.A.
Rastall.  2010.  Oligosaccharide  of  pitaya (Dragon  Fruit)  flesh  and  their  prebiotic properties. Food  Chemistry 120:  850-857. DOI: 10.1016/j.foodchem.2009.11.026