Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Tapak Dara ( Catharantus roseus (L.) G. Don.) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa
ABSTRAK

## ABSTRACT

## BIOMEDIKA
ISSN : 1979 - 035X (printed edition)
ISSN : 2302 - 1306 (electronic/Portal e-Journal)
Antibacterial Activities of Tapak Dara (Catharantus roseus (L.) G. Don. ) Leaf Extracts Against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa Bacteria
Selvia Indri Pratiwi Dwijayanti, Guruh Sri Pamungkas Program D-III Analis Kesehatan Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Setia Budi
Volume 9, No. 2, September 2016
Tingkat mobilitas masyarakat yang semakin tinggi, dapat memicu peningkatan potensi kecelakaan sehingga ber- akibat terjadinya luka. Luka tersebut jika tidak dirawat dengan benar maka akan sangat rentan mengalami infeksi ku- lit. Infeksi kulit umumnya disebabkan oleh bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa. Seiring de- ngan perkembangan teknologi, tanaman Tapak Dara (Catharantus roseus (L.) G. Don.) sekarang ini mulai diminati sebagai alternatif antibakteri. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak daun Tapak Dara (Catharantus roseus (L.) G. Don ) terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa dan mengetahui konsentrasi yang mempunyai daya hambat terbesar.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak daun Tapak Dara mempunyai aktivitas antibakteri yang sama terhadap bakteri  Staphylococcus  aureus  maupun  Pseudomonas  aeruginosa.  Ekstrak  daun  Tapak  Dara  (Catharantus  roseus  (L.) G.  Don  )  padakonsentrasi  100%  mempunyai  aktivitas  antibakteri  paling  baik  terhadap  Staphylococcus  aureus  dan Pseudomonas aeruginosa dengan diameter zona hambat sebesar 26,67 mm dan 25,67mm.
Daun  Tapak  Dara  diperoleh  dari  Desa  Ngumpen,  Karangpandan,  Jawa  Tengah.  Daun  yang  digunakan  adalah daun berwarna hijau dan masih segar, tidak terkena hama serta saat tanaman mulai berbunga. Sebanyak 200g serbuk daun Tapak Dara diekstraksi dengan metode perkolasi dengan pelarut etanol 70%. Perkolat kemudian ditambahkan Aquadest steril dan dibuat seri konsentrasi 25%, 50%, 75%, dan 100%. Selanjutnya dilakukan uji aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa secara difusi. Data diameter daya hambat dianalisis uji Anova 2 arah (Two Way Anova) dan diuji lanjut dengan uji SNK (Student- Newman- Keulis).
Kata kunci: aktivitas antibakteri, daun tapak Dara, zona hambat, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa
More improved mobility can lead to an increase in accident rates which cause people to be more posed to wounds. Wounds  which  do  not  receive  proper  treatments  will  be  more  prone  to  skin  infections.  Skin  infections  are  generally caused  by  Staphylococcus  aureus  and  Pseudomonas  aeruginosa  bacteria.  Today,  due  to  technology  advancements, Catharantus roseus (L.) G. Don. as alternative antibacterial plants are getting more popular among people. This study aims at finding out the actibacterial activities of Catharantus roseus (L.) G. Don. leaf extracts against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa bacteria, and investigating concentration with the highest inhibition zones.
The findings indicate that Catharantus roseus (L.) G. Don.   leaf  extracts  have  the  same  antibacterial  activities against both Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa. Tapak dara leaf extracts at 75% concentration have the best antibacterial activities against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa with inhibition zone dia- meters of 20.00 mm and 17.33 mm.
Catharantus roseus (L.) G. Don. leaves were obtained from Ngumpen Village, Karangpandan, Central Java. The leaves used in this research were the green-colored and fresh ones, which were free from pests and picked when flowers were blooming. A total of 200g Catharantus roseus (L.) G. Don. leaf powder was extracted using percolation method with ethanol 70% solution. Percolators were later added with sterilized aquadest and a series of concentrations of 25%, 50%, and 75% were prepared. Antibacterial activity tests against Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa were then carried out using diffusion method. Data on inhibition zone diameters were analized with two-way Anova test and further tested with Student-Newman-Keulist (SNK) test.
Keywords :  antibacterial activity, tapak dara (Catharantus roseus (L.) G. Don) leaves, inhibition zone, Staphylococcus aureus, and Pseudomonas aeruginosa.

## PENDAHULUAN
Salah satu tanaman yang dapat digunakan se- bagai obat tradisional adalah Tapak Dara ( Catha- rantus roseus (L.) G. Don.). Tapak Dara memi- liki senyawa aktif alkaloid seperti alkaloid reser- pin, vindolin, katarantin, leurosin, adenosin, dan tetrahidroalstonina yang berada pada seluruh ba- gian  tanaman  (Latief  ,  2009).  Tapak  Dara  juga mengandung akuamina , β – Sitosterol dan kaem- ferol pada bagian seluruh tanaman serta saponin, flavonoid  dan  tanin  pada  bagaian  daun  (Guna- wan dalam Saln, 2013).
Tingkat mobilitas masyarakat yang semakin tinggi,  dapat  memicu  peningkatan  potensi  kece- lakaan sehingga berakibat terjadinya luka hal ini berdasarkan data WHO tahun 2011 menyebutkan bahwa  ada  67%  korban  kecelakaan  lalu  lintas. Luka  tersebut  jika  tidak  dirawat  dengan  benar maka akan sangat rentan mengalami infeksi ku- lit.  Penyakit  infeksi  kulit  pada  umumnya  dise- babkan oleh bakteri dengan cara mengontamina- si kulit. Beberapa bakteri yang dapat menyebab- kan infeksi kulit pada hewan dan manusia di an- taranya bakteri Staphylococcus aureus dan Pseu- domonas  aeruginosa .  Diperkirakan  75%  kema- tian yang diakibatkan oleh luka disebabkan kare- na infeksi, baik sistemik maupun lokal (Bowler et al., 2001).
Seiring dengan perkembangan teknologi saat ini, telah banyak diproduksi obat-obatan modern yang  dibuat  dari  bahan  kimia.  Obat-obat  kimia ini jika tidak digunakan secara tepat dan rasional dapat  menyebabkan  adanya  efek  samping  yang merugikan  bagi  kesehatan  bahkan  dapat  terjadi resistensi,  sehingga  diperlukan  alternatif  meng- gunakan tanaman obat yang lebih aman dan me- miliki  efek  samping  lebih  ringan.  Tumbuhan obat merupakan aset nasional yang perlu digali, diteliti, dikembangkan dan dioptimalkan peman- faatannya.  Namun  dari  beberapa  faktor,  banyak orang yang belum mengetahui manfaat dan efek samping  dari  tanaman  obat  tersebut  sehingga perlu dilakukan penelitian dan uji klinis (Rahmi, 2015)
Berdasarkan kandungan tersebut maka perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  pada  tanaman Tapak  Dara  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa .

## TINJAUAN PUSTAKA
A.  Tanaman Tapak Dara  ( Catharantus roseus (L.) G. Don.)
Tapak  Dara  merupakan  semak  tegak,  hidup menahun dengan akar tunggang, tinggi 0,2 m – 0,8 m dan batang bergetah.Daun bertangkai pen- dek, berbentuk bulat telur dengan ujung tumpul. Bunga  tunggal  atau  majemuk  berkarang,  mah- kota  bunga  berbentuk  terompet,  ujung  melebar, berbulu, tepi mahkota bunga rata, taju bulat telur terbalik,  dan  bunga  berwarna  merah  muda  atau putih.  Buah  berbentuk  silindris  tipis,  berbulu dan berbiji banyak (Santosa et al ., 2004)

## Morfologi tanaman

## Kandungan kimia tanaman Tapak Dara Alkaloid
Alkaloid merupakan golongan senyawa yang bersifat  basa  yang  mengandung  satu  atau  lebih atom  nitrogen  dalam  bentuk  gabungan  sebagai bagian  dari  sistem  siklik.  Alkaloid  biasanya  ti- dak  berwarna  dan  berbentuk  kristal  (Fitriana, 2008).

## Saponin
Saponin  adalah  senyawa  aktif  permukaan dan bersifat seperti sabun. Berdasarkan kemam- puannya  membentuk  busa  bila  dikocok  dalam air  dan  pada  konsentrasi  rendah  sering  menye- babkan hemolisis pada sel darah merah. Meka- nisme  sebagai  antibakteri  dengan  menurunkan tegangan permukaan sel sehingga menyebabkan kerusakan sel (Perwita, 2011).
Flavonoid  merupakan  salah  satu  kelompok senyawa metabolit sekunder yang paling banyak ditemukan dalam semua tumbuhan berpembuluh, zat  warna  dalam  bunga-bunga,  batang  maupun
Flavonoid

## SELVIA INDRI PRATIWI DWIJAYANTI GURUH SRI PAMUNGKAS
Tanin  merupakan  salah  satu  senyawa  meta- bolit  sekunder  yang  termasuk  dalam  golongan polifenol. Tanin mempunyai target pada polipep- tida  dinding  sel  sehingga  pembentukan  dinding sel menjadi kurang sempurna. Hal ini menyebab- kan  sel  bakteri  menjadi  lisis  karena  tekanan  os- motik  maupun  fisik  sehingga  sel  bakteri  akan mati (Sari, 2011).
daun-daunan.  Flavonoid  berperan  sebagai  anti- oksidan dengan cara mendonasikan atom hidro- gennya dan berada dalam bentuk glukosida atau dalam bentuk bebas yang disebut aglikon (Har- borne, 2006).

## Tanin
Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol 70% karena pelarut tersebut bersi- fat semi polar yang artinya dapat melarutkan se- nyawa  polar  dan  nonpolar.Pada  umumnya  zat aktif yang terkandung dalam suatu tanaman ber- sifat polar sehingga pelarut etanol tersebut diha-
Ekstraksi adalah proses melarutkan dan me- narik  senyawa  dengan  menggunakan  pelarut yang tepat. Prinsip utama ekstraksi adalah yang berkaitan dengan kelarutan, yaitu senyawa polar lebih  mudah  larut  dalam  pelarut  polar  dan  se- nyawa nonpolar akan mudah larut dalam pelarut nonpolar (Emilan, 2011).
B.  Ekstraksi
Metode perkolasi adalah cara ekstraksi yang dilakukan  dengan  mengalirkan  cairan  penyari melalui simplisia yang telah dibasahi. Perkolasi dibuat  dengan  menempatkan  serbuk  simplisia dalam suatu bejana silinder yang bagian bawah- nya diberi sekat berpori. Kekuatan yang berpe- ran pada perkolasi yaitu gaya berat, daya larut, kekentalan, tegangan permukaan, osmosis, difu- si, adhesi,daya kapiler, dan daya geseran (Dep- kes, 1986).
Metode ekstraksi Perkolasi
Pelarut
rapkan mampu mengambil sebagian metabolit sekunder  di  dalam  simplisia  dari  daun  Tapak Dara (Rahmi, 2015).

## C. Staphylococcus aureus
Kingdom : Bacteria Phylum : Firmicutes Kelas  : Bacilli Ordo  : Bacillales Family  : Staphylococcaceae Genus  : Staphylococcus Spesies : Staphylococcus aureus (Todar dalam Sulistiyaningsih, 2010)
Klasifikasi Staphylococcus aureus adalah sebagai berikut :
Staphylococcus  aureus merupakan  bakteri berbentuk bulat. Berdiameter 0,8 – 1 μ m, susun- an berkelompok, tidak beraturan, tidak bergerak, dan tidak berspora. Pada pewarnaan Gram bersi- fat Gram positif dengan koloni berbentuk menye- rupai  buahanggur. Staphylococcus  aureus mem- punyai  kemampuan  koagulase  positif  terhadap plasma dan mampu menimbulkan hemolisis ter- hadap sel darah merah.
D. Pseudomonas aeruginosa
Klasifikasi Pseudomonas aeruginosa adalah sebagai berikut :
Kingdom : Prokaryota Division : Prothophyt Subdivisi : Schizomycetae class  : Schizomycetes Ordo  : Pseudomonadales Family  : Pseudomonadaceae Genus  : Pseudomonas Spesies : Pseudomonas aeruginosa (Radji, 2010)
Pseudomonas  aeruginosa merupakan  bak- teri gram negatif berbentuk basil berukuran 0,5 – 1 μm x 3 – 4 µm dan 2 – 3 flagel tunggal bersifat polar. Pseudomonas aeruginosa dapat menghasil- kan  pigmen  piosianin  yang  berwarna  biru  kehi- jauan dan pigmen fluorescine yang berwarna ke- hijauan (Suryono, 1995).
2.    Semakin besar konsentrasi ekstrak daun Ta- pak  Dara  maka  semakin  besar  pada  zona  ham- batan terhadap Staphylococcus aureus dan Pseu- domosa aeruginosa.

## E.  Antibakteri
Antibakteri  adalah  senyawa  yang  diguna- kan untuk mengendalikan pertumbuhan bakteri yang bersifat merugikan. Mekanisme pengham batan terhadap bakteri oleh senyawa antibakteri dapat  berupa  perusakan  dinding  sel,  merubah permeabilitas sel, merubah molekul protein dan asam nukleat.

## F. Pengujian Aktivitas Antibakteri
Uji  ini  digunakan  untuk  mengukur  respon pertumbuhan populasi bakteri terhadap zat anti- mikroba  yang  diujikan  dan  untuk  memperoleh sistem pengobatan yang efektif dan efisien. Uji  kepekaan  antibakteri  dapat  dilakukan dengan 2 cara, yaitu melalui metode turbidime- tri (dilusi) dan metode difusi. Metode dilusi di- lakukan  dengan  mengukur  KHM  (Konsentrasi Hambat Minimal) atau KBM (Konsentrasi Bu- nuh Minimal) ( Pradani, 2012).

## G. Hipotesis
1.    Ada Pengaruh Ekstrak daun Tapak Dara ( Ca- tharanthus  roseus (L.)  G.  Don.)  terhadap  per- tumbuhan Staphylococcus  aureus  dan  Pseudo- monas aeruginosa.

## METODE PENELITIAN Bahan Sampel
Bahan  yang  digunakan  untuk  pembuatan sampel adalah daun Tapak Dara ( Catharanthus roseus (L.) G. Don). Daun ini diperoleh dari be- berapa  tempat  di    Desa  Ngumpen,  Karangpan- dan, Jawa Tengah.
Teknik  sampling  yang  dilakukan  dalam  pe- nelitian ini adalah non random quota sampling . Kriteria daun yang digunakan adalah daun ber- warna hijau dan masih segar, tidak terkena hama serta  saat  tanaman  mulai  berbunga  (Gunawan dan Mulyani, 2004).

## Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan De- sember 2015 - Februari 2016.

## Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Mi- krobiologi dan Laboratorium Fitokimia Univer- sitas Setia Budi, Surakarta

## Bahan dan Alat Penelitian

## Bahan penelitian
Sampel yang digunakan untuk penelitian ini adalah ekstrak perkolasi daun Tapak Dara. Bak- teri uji yang digunakan dalam penelitian ini ada- lah Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosa yang  diperoleh  dari  Laboratorium Mikrobiologi  Universitas  Setia  Budi,  Surakarta. Media yang digunakan dalam penelitian ini ada- lah  media Vogel  Johnson  Agar (VJA),  media Brain Heart Infusion (BHI), media Mueller Hin- ton  Agar (MHA),  media Pseudomonas  Selectif Agar (PSA), dan uji biokimia medium yang di- gunakan adalah KIA, LIA, SIM dan Citrat. Ba- han  kimia  yang  digunakan  untuk  penelitian  ini adalah  Spirtus,  Cat  Gram  A,  cat  Gram  B,  cat Gram C, dan cat Gram D, Minyak imersi, Etanol 70%, Alkohol 70%, Larutan H O  3%, Standard 2 2 Mc  Farland  0,5,  Aquadest,  NaCl  0,9%  steril, Aquabidest P.I, Amoxicilin syrup kering
Alat  yang  digunakan  untuk  penelitian  ini yaitu:  nampan,  mesin  penggiling,  ayakan,  alat perkolator, becker glass , evaporator, oven , nera- ca  analitik,  cawan  petri  steril,  kapas  lidi  steril, pipet ukur steril, clinipette, yellow tip , api spiri- tus, inkas, tabung reaksi steril, jarum ose dan ent, object  glass ,  pembakar  spirtus,  korek  api,  rak pengecatan,  mikroskop,  inkubator, autoclave , kompor,  botol  sampel  steril  , boorproof ,  mistar, Alat Pelindung Diri (APD) lengkap.
Alat penelitian
Metode Penelitian
Metode pengujian aktivitas antibakteri yang

## SELVIA INDRI PRATIWI DWIJAYANTI GURUH SRI PAMUNGKAS
b.    Pembuatan prosentase konsentrasi ekstrak Daun Tapak Dara.
Tabel 1. Konsentrasi Ekstrak Daun Tapak Dara
Konsentrasi ekstrak daun Tapak Dara
Ekstrak daun Tapak Dara (gram) Aquadest steril (ml) 25% 1,25 3,75 50% 2,50 2,50 75% 3,75 1,25
digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  metode difusi teknik sumuran. Pembuatan ekstrak daun Tapak Dara dilakukan dengan cara perkolasi.

## Prosedur Penelitian
a.    Pembuatan ekstrak Perkolasi Daun Tapak Dara. Ditimbang  masing-masing 200 gram serbuk daun Tapak  Dara.  Masing-masing  serbuk  dima- sukkan dalam beacker glass dan dibasahi dengan etanol 70%, ditutup plastik dan dibiarkan selama 24  jam  kemudian  dimasukkan  kedalam  suatu bejana silindris yang diberi sekat berpori. Etanol 70% dialirkan dari atas ke bawah melalui serbuk tersebut secara terus menerus dengan kecepatan 1ml  per  menit  dan  diatur  sedemikian  rupa  se- hingga cairan yang keluar seimbang dengan cair- an  yang  ditambahkan  dari  atas  perkolator.  Per- kolasi  dihentikan  jika  cairan  yang  keluar  tidak berwarna dan jika diuapkan tidak meninggalkan sisa.  Etanol  70%  akan  melarutkan  zat  aktif  sel- sel yang dilalui hingga mencapai keadaan jernih (Fatimah, 2006).
Preparasi perkolat daun Tapak Dara dibuat dalam  beberapa  seri  konsentrasi  (25%,  50%, dan 75%), Tabel 1.
c. Identifikasi bakteri Staphylococcus aureus 1) Identifikasi Staphylococcus aureus pada media Vogel Johnson Agar (VJA)
Pertama,  suspensi Staphylococcus  aureus dari media Brain Heart Infusion (BHI) diinoku- lasi  secara  goresan  pada  media Vogel  Johnson Agar (VJA) yang sebelumnya ditambah dengan kalium  tellurit  1%,  kemudian  diinkubasi  suhu o 37 C  selam  24  jam.  Koloni Staphylococcus aureus ditandai dengan warna hitam, cembung
dan mengkilap dengan media di sekitar koloni berwarna kuning.
2) Identifikasi Bakteri Staphylococcus aureus dengan Uji Katalase dan Koagulase Uji katalase dapat dibuat dengan cara men- campurkan 1 tetes H O 3% dengan 1 ohse biak- 2 2 an Staphylococcus  aureus diatas object  glass . Hasil positif akan terbentuk gelembung gas. Uji  koagulase  dapat  dilakukan  dengan  cara meneteskan  1  tetes  NaCl  0,9%  diatas object glass lalu ditambahkan 1 ohse biakan Staphylo- coccus aureus kemudian dihomogenkan. Plasma ditambahkan  sebanyak  1  tetes  dan  dihomogen- kan kembali. Reaksi positif akan terlihat agluti- nasi  berupa  presipitat  granuler  (Bruckler  dalam Dewi, 2013)
d. Identifikasi bakteri Pseudomonas aeruginosa 1) Identifikasi Bakteri Pseudomonas aerugi- nosa pada media Pseudomonas Selektif Agar (PSA)
Suspensi Pseudomonas aeruginosa diinoku- lasi secara goresan pada medium Pseudomonas Selektif Agar (PSA)  kemudian  diinkubasi  suhu 37ºC  selama  24  jam.  Koloni  yang  dihasilkan berwarna hijau dan berfluoresensi.
2) Inokulasi Bakteri Pseudomonas aeruginosa dengan Uji Biokimia Koloni Pseudomonas aeruginosa dari Pseu- domonas Selektif Agar diinokulasi dengan cara tusuk  gores  pada  media  KIA  dan  LIA,  ditusuk pada media SIM dan digores pada media Citrat,
0 kemudian diinkubasi suhu 37 C selama 24 jam.
e. Pengecatan Gram
Kultur bakteri dari media Brain Heart Infu- sion (BHI) diambil sebanyak 1-2 ohse bulat ste- ril  dan  ditempatkan  di  atas object  glass steril. Suspensi diratakan dengan membentuk area pre-
parat. Preparat dikeringkan pada suhu ruang da- lam beberapa menit. Preparat dilewatkan di atas spirtus untuk difiksasi. Selanjutnya preparat di- genangi cat Gram A selama 3 menit dilanjutkan cat Gram B selama 2 menit lalu dicuci dengan air  mengalir.  Preparat  dicuci  dengan  Gram  C hingga  warna  luntur.  Preparat  digenangi  cat Gram D selama 1 menit, lalu dicuci dengan air mengalir. Preparat dikeringkan dan diamati de- ngan mikroskop perbesaran 100x.
f. Pengujian antibakteri
1) Kapas lidi steril dicelupkan kedalam suspensi bakteri Pseudomonas aeruginosa yang sudah di- standarisasi  kekekeruhannya  dan  tunggu  seben- tar supaya cairan dapat meresap di dalam kapas. Kemudian  lidi  dapat  diangkat  dan  diperas  de- ngan  menekankan  pada  dinding  tabung  bagian dalam sambil diputar – putar.
2) Kapas lidi steril diratakan pada permukaan Mueller Hinton Agar sampai merata dan diam- kan 5 menit.
3) Pada  media Mueller  Hinton  Agar dibuat enam  lubang  sumuran  dengan  menggunakan boorprof .  Satu  sumuran  untuk  kontrol  positif, satu sumuran lagi untuk kontrol negatif dan ke- empat sumuran  diisi dengan ekstrak Tapak Dara.
4) Pengisian sumuran ekstrak daun Tapak Dara sebanyak 50 µl. Keempat sumuran diisi dengan ekstrak  perkolasi  daun Tapak  Dara  yang  sudah diencerkan  dengan  aquabidest  dalam  berbagai konsentrasi. Media yang telah diisi dengan sam- pel ekstrak daun Tapak Dara tersebut, diinkuba-
0 si pada suhu 37 C selama 24 jam, zona hambat yang  terbentuk  diukur  dengan  menggunakan mistar berskala dengan satuan milimeter (mm).

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Identifikasi  organoleptis  serbuk  daun Tapak Dara yang dilakukan di Laboratorium Fitokimia Universitas Setia Budi diamati secara visual (Ta- bel 2).
1. Hasil Identifikasi Organoleptis Daun Tapak Dara
Tabel 4. Hasil Pemeriksaan Organoleptis
No. Identifikasi Spesifik Hasil Penelitian
Tapak Dara 1 Bentuk Serbuk 2 Warna Hijau Tua 3 Bau Langu 4 Rasa Pahit
Tabel 5. H asil Identifikasi Kandungan Kimia Perkolat etanol 70% Daun Tapak Dara Kandungan
kimia Test Hasil Pustaka Ket Alkaloid 5 ml filtrat + 5 ml kloroform + 3 tetes amoniak, dipanaskan + 5 tetes H 2 SO 4 2 N + 3 tetes larutan meyer Terbentuk endapan putih Terbentuk endapan putih
+
Saponin 5 ml filtrat + air panas. Dinginkan lalu kocok kuat selama 10 detik. Diamkan.
Terbentuk buih yang stabil setelah ditambah 1 tetes HCI 2N Terbentuk buih stabil setelah ditambah 1 tetes  HCI 2N + Flavonoid 5 ml filtrat + etanol, dikocok,dipanaskan + Mg 0,2 g + 3 tetes HCI
Warna merah pada lapisan etanol Warna merah pada lapisan etanol + Tanin 5 ml filtrat + 20 ml air. Disaring + 5 tetes Fecl 3 Warna hijau kehitaman
Warna hijau kehitaman +
Identifikasi  terhadap  kandungan  kimia  per- kolat etanol 70% daun Tapak Dara meliputi iden- tifikasi terhadap alkaloid, saponin, flavonoid dan tanin (Kabesh, 2015) (Tabel 3).
2. Hasil Identifikasi Kandungan Kimia Daun Tapak Dara
Hasil identifikasi Staphylococcus aureus 3.   Hasil Inokulasi Staphylococcus aureus pada Media Vogel Johnson Agar (VJA)

## SELVIA INDRI PRATIWI DWIJAYANTI GURUH SRI PAMUNGKAS
4.    Hasil Identifikasi Staphylococcus aureus dengan Pengecatan Gram
Morfologi bakteri yang ditemukan pada pre- parat pengecatan Gram (Gambar 1) adalah: Bentuk                 : coccus Susunan               : bergerombol Warna sel             : ungu Latar Belakang   : merah muda Cat                        : Gram Sifat Cat               : Gram positif
yang  diinokulasikan  pada  media Vogel  Johnson Agar (VJA) dengan penambahan Kallium Telurit 0 1% kemudian diinkubasikan pada suhu 37 C se- lama  24  jam  dihasilkan  koloni  berwarna  hitam, cembung dan mengkilap  dengan daerah sekitar koloni berwarna kuning.
Gambar 1. Identifikasi Staphylococcus aureus dengan Pengecatan Gram
5.   Hasil  Identifikasi  Bakteri Staphylococcus aureus dengan Uji Koagulase  dan Uji Katalase a.    Uji Katalase
Hasil  uji  katalase  dengan  menggunakan  la- rutan H O 3% adalah positif terbentuk gelembung 2 2 gas. Hasil ini membuktikan genus dari Staphylo- coccus.
b.    Uji Koagulase Hasil uji koagulase dengan penambahan plas- ma  adalah  positif  terbentuk  aglutinasi.  Hasil  ini
6.     Hasil  Inokulasi Pseudomonas  aeruginosa pada Media Pseudomonas Selektif Agar (PSA)
7.   Hasil Identifikasi Pseudomonas aeruginosa dengan Pengecatan Gram
Gambar 2. Identifikasi Pseudomonas aeruginosa dengan Pengecatan Gram
Morfologi bakteri yang ditemukan pada pre- parat  pengecatan  Gram  (Gambar  2)  adalah: Bentuk               : basil Susunan             : menyebar Warna sel           : merah Latar Belakang : merah muda Cat                      : Gram Sifat Cat            : Gram negatif
8.   Identifikasi Bakteri Pseudomonas aerugi- nosa dengan Uji Biokimia
Gambar 3.I dentifikasi Pseudomonas aeruginosa dengan Uji Biokimia
menunjukkan adanya enzim koagulase bakteri Staphylococcus aureus .
Hasil identifikasi Pseudomonas aeruginosa yang diinokulasikan pada media Pseudomonas Selektif  Agar (PSA)  dan  diinkubasi  pada  suhu 0 37 C selama 24 jam dihasilkan koloni berwarna kehijauan dan berfluoresensi.
Hasil uji biokimia (Gambar 3) dengan meng- gunakan medium KIA menunjukkan hasil K/K s (-),  medium  SIM  menunjukkan  hasil  -  ++,  me- dium LIA menunjukkan hasil K/K s (-), dan me-
Jenis Diameter Zona Hambatan (mm) Rata-rata diameter zona hambatan (mm)
Cawan 1 Cawan 2 Cawan 3 Konsentrasi
Ekstrak Tapak dara 25 % 10 13 13 12 50 % 16 15 16 15,67 75% 18 17 17
17,33 Kontrol Amoxicilin (+)
38 38 39 38,33 Aquabidest PI (-) - - - -
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri  ekstrak daun Tapak  Dara  terhadap Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa dengan  metode  di- fusi menggunakan konsentrasi 25%, 50%, dan 75% dengan  menggunakan  kontrol  positif  Amoxicilin
0 kemudian diinkubasi 37 C selama 24 jam dan di- lihat ada tidaknya zona hambat di sekitar sumuran, Tabel 4 dan 5.
dium Citrat menunjukkan hasil (+)

## 9.   Hasil Uji Aktivitas Antibakteri
Tabel 4. Hasil Pengamatan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Tapak Dara Terhadap Staphylococcus aureus
Jenis
Diameter Zona Hambatan (mm)
Rata-rata diameter zona hambatan (mm)
Cawan 1 Cawan 2 Cawan 3
Konsentrasi Ekstrak Tapak dara 25 % 12 13 15 13,33 50 % 16 18 18 17,33 75% 18 21 21 20 Kontrol Amoxicilin (+)
35 36 35 35,33 Aquabidest PI (-) - - - -
Tabel 5. Hasil Pengamatan Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Tapak Dara Terhadap Pseudomonas aeruginosa
10. Pembahasan
Pada  penelitian  dengan  metode  difusi  ini menggunakan konsentrasi ekstrak 25%, 50%, dan 75% menunjukkan adanya zona hambat pada ma- sing-masing konsentrasi. Pada ekstrak daun Tapak Dara terhadap bakteri Staphylococcus aureus de- ngan konsentrasi 25% adalah 13,33 mm, konsen- trasi 50% adalah 17,33 mm, dan konsentrasi 75% adalah 20 mm. Ekstrak daun Tapak Dara terhadap bakteri Pseudomonas aeruginosa dengan konsen-
têasi 25%  adalah 12 mm, konsentrasi 50% adalah 15,67 mm, dan konsentrasi 75% adalah 17,33 mm. Berdasarkan  hasil  penelitian  tersebut  terda- pat senyawa metabolit  sekunder yang terkandung di  dalam  daun  Tapak  Dara  diantaranya  alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin (Saln, 2013).
Alkaloid  pada  daun  Tapak  Dara  mengham- bat pertumbuhan bakteri dengan cara menggang- gu  komponen  penyusunan  lapisan  peptidoglikan pada sel bakteri sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel tersebut (Rahmi, 2015).
Flavonoid pada daun Tapak Dara mengham- bat  pertumbuhan  bakteri  dengan    cara  inaktivasi protein  pada  membran  sel  sehingga  mengakibat- kan  struktur  protein  menjadi  rusak.  Ketidaksta- bilan  pada  dinding  sel  dan  membran  sitoplasma bakteri menyebabkan sel bakteri menjadi tergang- gu. Hal ini akan  berakibat pada hilangnya makro- molekul dan ion dari sel sehingga sel menjadi ke- hilangan bentuk dan lisis (Rahmi, 2015)

## SELVIA INDRI PRATIWI DWIJAYANTI GURUH SRI PAMUNGKAS
Saponin  pada  daun  Tapak  Dara  mengham- bat pertumbuhan bakteri dengan cara membentuk senyawa  komplek  dengan  membran  sel  melalui ikatan  hidrogen  sehingga  dapat  menghancurkan permeabilitas dinding sel dan akhirnya menimbul- kan kematian sel (Perwita, 2011).
Tanin  pada  daun  Tapak  Dara  menghambat pertumbuhan bakteri dengan cara menginaktivasi adhesin sel mikroba yang terdapat pada permuka- an  sel  sehingga  polipetida  dinding  sel  akan  me- nyebabkan kerusakan dinding sel kemudian bak- teri  akan  terdenaturasi  dan  metabolisme  bakteri akan terganggu yang kemudian sel akan menga- lami kerusakan (Sari, 2011)
Kontrol  positif  yang  digunakan  adalah Amoxicilin  yang  merupakan  antibiotik  dalam golongan  penisilin  dengan  aktivitas  antibakteri yang spektrum luas yang bersifat bakterisid. Go- longan  penisilin  sangat  aktif  terhadap  bakteri Gram positif dan Gram negatif. Mekanisme ker- janya  dengan  menggunakan  zat  aktif  dalam amoxicilin  yaitu  beta  laktam  yang  mencegah sintesis dinding sel bakteri dengan menghambat enzim DD-transpeptidase bakteri akibatnya bak- teri tidak dapat berkembang biak (Dewi, 2013). Pengujian statistika menggunakan uji Anova dengan Klasifikasi 2 arah ( Two Way Anova ) me- nunjukkan  bahwa  pada  perbandingan  antara Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeru- ginosa menunjukkan  nilai  Sig  sebesar  0,075 (>0,05),  hal  ini  menunjukkan  bahwa  tidak  ter- dapat perbedaan yang nyata diameter zona ham- bat  antara Staphylococcus  aureus  dan  Pseudo- monas aeruginosa. Hal ini menunjukkan ekstrak daun  tapak  dara  memiliki  aktivitas  antibakteri yang sama terhadap Staphylococcus aureus dan

## Pseudomonas aeruginosa.
Pada  perbandingan  antara  konsentrasi  ek- strak menunjukkan nilai Sig sebesar 0,00 (<0,05), hal  ini  menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan yang  nyata  diameter  zonahambat  antara  konsen- trasi ekstrak, kontrol negatif, dan kontrol positif. Hal tersebut menunjukkan semakin besar konsen- trasi ekstrak daun Tapak Dara maka semakin be-
sar terbentuk zona hambatan terhadap Staphylo- coccus aureus dan Pseudomonas aeruginosa.
Setelah  mengetahui  ada  perbedaan  diantara perlakuan  kemudian  dilanjutkan  uji  PostHoc Student-Neuman-Keuls  untuk  mengetahui  ek- strak dan konsentrasi yang mempunyai aktivitas antibakteri paling baik. Hasil perhitungan statis- tik  menunjukkan  bahwa  ekstrak  yang  mempu- nyai aktivitas antibakteri paling baik adalah ada- lah  konsentrasi  75%  dengan  nilai mean sebesar 18.67 mm, akan tetapi masih lebih rendah diban- dingkan kontrol positif Amoxicilin yaitu sebesar 36.83 mm.

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
a. Ekstrak daun Tapak Dara ( Catharantus roseus (L.) G. Don ) mempunyai aktivitas antibakteri ter- hadap bakteri Staphylococcus aureus dan Pseudo- monas aeruginosa .
b. = Ekstrak daun Tapak Dara ( Catharantus roseus (L.) G. Don ) pada konsentrasi 75% mempunyai aktivitas antibakteri paling baik terhadap Staphy- lococcus  aureus dan Pseudomonas  aeruginosa dengan  nilai  rata-rata  zona  hambat  masing-ma- sing sebesar 20,00 mm dan 17,33 mm.

## Saran
a. Perlu dilakukan pengujian aktivitas antibak- teri  ekstrak  daun  Tapak  Dara  pada  konsentrasi yang lebih kecil (< 25%) dengan menggunakan bagian tumbuhan yang lain terhadap bakteri pa- togen lainnya yang menyebabkan penyakit pada manusia.
b. Perlu  dilakukan  uji  kimia  dengan  metode KLT agar dapat diketahui kadar bahan kimia an- tibakteri yang terdapat pada ekstrak Tapak Dara secara lebih tepat.

## DAFTAR PUSTAKA
Bowler, P.G, Duerden, B.I, Armstrong, D.G.2001. Wound Micro- biology and Associated Approaches to Wound Management . Clinical MicrobiologyReviews. April vol l4 (2);hal: 244-269.
Darmawi,  Z.  H.  Manaf  dan  F.  Putranda.  2013.  “Daya  Hambat Getah Jarak Cina ( Jatropha multifida L.) terhadap Staphylo- coccus aureus secara In Vitro ”. Jurnal Medika Veterinaria. VII(2): 113-115
Departemen Kesehatan RI. 1986. Sediaan Galenik . Jakarta: De- partemen Kesehatan Republik Indonesia, hal. 6-7 Dewi, A.K. 2013. Isolasi, Identifikasi dan Uji Sensitivitas Sta- phylococcus aureus terhadap Amoxicillin dari Sampel Su- su Kambing Peranakan Ettawa (PE) Penderita Mastitis di Wilayah Girimulyo, Kulonprogo, Yogyakarta. Jurnal Sain Veteriner 31(2)  ISSN  :  0126  –  0421.  Universitas  Gadjah Mada
Emilan, T., A. Kurnia, B. Utami, L.N. Diyani dan A. Maulana. 2011. “Konsep Herbal Indonesia: Pemastian Mutu Produk Herbal”. Depok: Progam Studi Magister Ilmu Herbal Fa- kultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universi- tas Indonesia Fatimah,Cut,  U.  Harahap , I.  Sinaga,  Safrida  dan  Ernawati.  2006. “Uji Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Daun Angsana  ( Pterocar- pus indicus Willd) Secara In Vitro”. Jurnal Ilmiah PANNMED . 1(1):1-8
Fitriana, S. 2008. Penapisan Fitokimia dan Uji Aktivitas Anthel- mintik  Ekstrak  Daun Jarak  ( Jatropha curcas L.)  terhadap Cacing Ascaridia galli secara in vitro. Skripsi . Fakultas Pe- ternakan. Institut Pertanian Bogor Gunawan dan Sri Mulyani. 2004. Ilmu Obat Alami (Farmakog- nosi) Jilid 1. Bogor: Penerbit Swadaya Harborne, J.B..2006. Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan Edisi II Terbitan kedua. Bandung: ITB Bandung, hal. 70 – 71 Hernani  dan  R.  Nurdjanah.  2009.  ” Aspek  Pengeringan  Dalam Mempertahankan Kandungan Metabolit Sekunder Pada Ta- naman Obat”. ISSN , Vol.21 (2): 33-39
Kabesh. K, P. Senthilkumar1, R. Ragunathan  and R. Raj Kumar. 2015.    “Phytochemical  Analysis  of Catharanthus  roseus Plant Extract and its Mawaddah, R. 2008. Kajian Hasil Riset Potensi Antimikroba Alami dan Aplikasinya dalam Bahan Pangan di Pusat In- formasi Teknologi Pertanian Fateta IPB. Skripsi . Bogor
Perwita, F.A.. 2011. “ Teknologi Ekstraksi Daun Ungu ( Grapto- phyllum pictum ) Dalam Etanol 70% Dengan Metode Per- kolasi”  Skripsi.  Surakarta:Fakultas  Pertanian,  Universitas Sebelas Maret
Pradani, N. R. 2012. “ Uji Aktivitas Antibakteri Air Perasan Je- ruk Nipis ( Citrus aurantifolin, Swingle ) Terhadap Pertum- buhan  Bakteri Staphylococcus  aureus Secara  In  Vitro”. Skripsi. Jember: Fakultas Kedokteran, Universitas Jember Radji.  M.  2010.  Buku Ajar  Mikrobiologi  Panduan  Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran. Jakarta : Buku Kedokteran EGC, hal 179-205
Rahmi A. 2015. “Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Beluntas ( Pluchea  indica (L.)  Less.)  Terhadap Propionibacterium acnes Penyebab Jerawat”. ISSN , Vol. 9(1):141-161. Saln, M dan V. Sharma. 2013. “ Catharanthus roseus (An anti- cancerous  drug  yielding  plant)  - A  Review  of  Potential Therapeutic Properties”. International Journal of Pure & Applied Bioscience 1 (6): 139-142 Santoso, Djoko dan D. Gunawan. 2004. Ramuan Tradisional Untuk Penyakit Kulit . Jakarta: Penebar Swadaya. Sari, F.P dan S.M. Sari. 2011. Ekstraksi Zat Aktif Antimikroba dari Tanaman Yodium (Jatropha Multifida Linn ) sebagai Bahan  Baku Alternatif Antibiotik Alami. Artikel  Ilmiah. Universitas Diponegoro
Sugiyono, 2014. Metode Penelitian Manajemen. Bandung: Al- fabeta.
Sulistiyaningsih.  2010.  “  Uji  Kepekaan  Beberapa  Sediaan Anti- septik Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Staphy- lococcus  aureus Resisten  Metisilin  (MRSA)”.  Tesis.  Jati- nangor: Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran Suryono, Bambang. 1995. Bakteriologi Umum dan Bakteriologi Klinik . Kediri: Akademi Analis Kesehatan Bhakti Wiyata.

## SELVIA INDRI PRATIWI DWIJAYANTI GURUH SRI PAMUNGKAS