## Artikel Penelitian
Pengaruh  Ekstrak  Daun  Kersen  Terhadap  Kadar  Malondialdehid  Rattus  norvegicus Model Diabetes Tipe II Induksi Streptozotocin-Nicotinamide
Dewi Karita 1* , Refni  Riyanto 2 , Indrasto Histopaedianto 3 , Yusuf Indra Kusuma 1 ,  Galih Rosfianto Putra 1 , Yoni Trismawan 1
1) Departemen Biokimia, Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Purwokerto, Indonesia 2) Departemen Anestesi, Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Purwokerto, Indonesia 3) Departemen Bedah, Fakultas Kedokteran Universitas Muhammadiyah Purwokerto, Indonesia
* Corresponding author : dewikarita@gmail.com

## ABSTRACT
Background:  the  prevalence  of  Diabetes  Mellitus  continues  to  increase  every  year. Pharmacological therapy that has been carried out with synthetic drugs and insulin injections tends to be expensive and can have a hypoglycemic effect. The use of traditional medicine in type 2 DM is  considered to  have lower side effects,  is  easy to obtain and many plants have more than one pharmacological effect. Purpose: kersen leaf contain various types of flavonoid compounds  that  have  the  potential  to  be  used  as  antioxidants  to  prevent  the  increase  in Malondialdehyde (MDA) due to cell damage caused by the effects of type II diabetes mellitus. Methods: 3 groups  of  rats  were given 3 different  doses (0,3 mg/gBW, 0,5 mg/gBW dan 0,7 mg/gBW  of  kersen  leaves  while  the  other  3  groups  were  negative  control  (were  only  given aquabidest),  normal  control  (no  treatment)  and  positive  control  (were  given  metformin). Result:  there  is  an  effect  on  the  administration  of  ethanol  extract  of  cherry  leaves  with  an optimal dose of 0.7 mg/gBW. Conclusion: kersen ethanol extract can lower MDA level in rat with type II diabetes mellitus.

## Keywords: kersen leaf, malondialdehyde, type II diabetes mellitus

## ABSTRAK
Latar  Belakang: prevalensi  Diabetes  Melitus  terus  meningkat  setiap  tahunnya.  Terapi farmakologi yang selama ini dilakukan dengan obat  sintetik dan suntikan insulin  cenderung mahal dan dapat menimbulkan efek hipoglikemik. Penggunaan obat tradisional pada DM tipe 2 dinilai memiliki efek samping yang lebih rendah, mudah diperoleh dan banyak tanaman yang memiliki efek farmakologi lebih dari satu. Tujuan: daun kersen mengandung berbagai jenis senyawa  flavonoid  yang  berpotensi  digunakan  sebagai  antioksidan  untuk  mencegah peningkatan Malondialdehid (MDA) akibat kerusakan sel akibat efek diabetes mellitus tipe II. Metode: 3 kelompok tikus diberi 3 dosis (0,3 mg/gBB, 0,5 mg/gBB dan 0,7 mg/gBB) daun kersen  yang  berbeda  sedangkan  3  kelompok  lainnya  kontrol  negatif,  kontrol  normal  (tanpa perlakuan) dan kontrol positif (diberi metformin). Hasil: ada pengaruh pada pemberian ekstrak etanol daun kersen dengan dosis optimal 0,7 mg/gBB. Simpulan: ekstrak etanol kersen dapat menurunkan kadar MDA pada tikus dengan diabetes melitus tipe II.
Kata kunci: daun kersen, malondialdehid, diabetes melitus tipe II

## PENDAHULUAN
Diabetes  melitus  (DM)  adalah  penyakit metabolik  kronik  yang  ditandai  dengan peningkatan kadar gula darah dan berakibat jangka  panjang  pada  kerusakan  jantung, vaskular, ginjal, mata dan juga saraf (1,2). Berdasarkan  prevalensi  penyakit  diabetes di  Indonesia,  provinsi  DKI  Jakarta menempati urutan tertinggi dengan (3,4%) diikuti  Kalimantan  Timur  (3,1%),  dan Daerah Istimewa Yogyakarta (3,1%)(3).
Penggunaan  obat  tradisional  dinilai relatif  lebih  aman  dibandingkan  dengan obat  konvensional.  Kelebihan  lainnya adalah  obat  tradisional  memiliki  efek samping yang relatif minimal pada ramuan yang  kandungannya  beraneka  ragam  serta memiliki  efek  sinergis,  banyak  tumbuhan yang mungkin memiliki lebih dari satu efek farmakologis,  hal  ini  lebih  sesuai  untuk berbagai penyakit metabolik dan generatif. Kelemahannya  dari  obat  tradisional  antara lain  efek  farmakologisnya  lemah,  bahan baku  yang  belum  terstandar,  dan  belum dilakukan  serangkaian  penelitian  untuk memastikan  efektivitas  dosis  terapi  dan keamanannya (4).
Peroksidasi lipid adalah suatu proses yang terjadi akibat proses pembakaran yang tidak sempurna sehingga terjadi peningkatan Reactive  Oxygen  Species (ROS) yang merupakan suatu radikal bebas dan  akan  menghasilkan  produk  hydrogen peroksida.  Hidrogen  peroksida  dapat menyebabkan dekomposisi produk aldehid yang  bersifat  toksik.  Salah  satu  produk aldehid  utama  yang  terbentuk  ialah Malondialdehida (MDA) (5). MDA merupakan  salah  satu biomarker yang menandakan adanya kondisi stress oksidatif dalam  tubuh,  seperti  penyakit  kronis contohnya  diabetes.  Mudah  diukur  dan reliable .  MDA  sendiri  merupakan  produk peroksidasi  lipid  yang  paling  mutagenik
atau memiliki potensi menimbulkan mutasi gen (6).
Daun Kersen (Muntingia calabura L) merupakan  tanaman  yang  mudah  untuk tumbuh,  berasal  dari  selatan  Mexico, Amerika Selatan dan negara-negara di asia tenggara  contohnya  Indonesia,  Malaysia dan  Filipina.  Kersen  ( Muntingia  calabura L. folium ) adalah tanaman yang mengandung  berbagai  senyawa  flavonoid, tanin  dan chalcone .  Hasil  penelitian sebelumnya,  daun  kersen  mengandung berbagai  macam  jenis  senyawa  flavonoid yang  berpotensi  untuk  pengobatan,  seperti antidiabetik, anti-inflamasi, antikanker dan antipiretik (7). Pada penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek ekstrak daun kersen terhadap  kadar  MDA  pada  tikus  diabetes mellitus tipe II yang diinduksi streptozotocin-nicotinamide.

## METODE
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan menggunakan rancangan posttest  only  with  randomized controlled group design. Tempat pelaksanaan penelitian di Fakultas Kedokteran  Universitas  Muhammadiyah
Purwokerto.  Penelitian  ini  menggunakan hewan coba Tikus Putih ( Rattus norvegicus) Galur  Wistar  dengan  kriteria inklusi:1) Tikus jantan 2) Umur 2-3 bulan, 3) Berat  badan 100-200g  4) Kondisi sehat (aktif  dan  tidak  cacat).  Penelitian  ini  telah disetujui  oleh  komisi  etik  Fakultas Kedokteran  Universitas  Muhammadiyah Purwokerto  Nomor:  KEPK/FK/047/IX/ 2021,  30  ekor  tikus  dibagi  menjadi  6 kelompok,  setelah  aklimatisasi  selama  7 hari  masing-masing  kelompok  diberi perlakuan (kecuali kelompok normal) yaitu pemberian streptozotocin-nicotinamide dengan dosis 65 mg/kgBB secara
intraperitoneal dan ditunggu 5 hari setelah induksi dilakukan.
Pembuatan  ekstrak  daun  kersen
(Muntingia  calabura  L.  folium) dilakukan dengan  metode  maserasi  (8).  Kemudian diberikan  ekstrak  daun  kersen  secara intraperitoneal selama 14 hari dengan dosis 0,3 mg/gBB, 0,5 mg/gBB dan 0,7 mg/gBB. Pengambilan sampel darah dilakukan pada hari  ke  15  penelitian.  Darah  diambil  dari sinus  orbitalis  dengan  pipet  hematokrit sebanyak  3  ml  dan  ditampung  dalam vacutainer EDTA.

## Tabel 1. Pengukuran sampel MDA
Blanko  Standar  Sampel Aquabidest  400 µL  - - Standard - 400 µL - Serum - - 400 µL Reagen 1600 1600 1600
Blanko, standar, dan sampel di vortex kemudian  diinkubasi  pada  suhu  90 o C selama 80 menit. Didinginkan dengan air es batu selama 10 menit lalu ditambahkan tiap tabung  dengan  1600  µL  reagen  ekstrak butanol  kemudian  divortex.  Selanjutnya dilakukan sentrifugasi 3500 rpm selama 15 menit.  Supernatan  diambil  750  µL  dan dibaca pada panjang gelombang 510, 532, 560  nm  pada  alat  spektrofotometer shimadzu  u-vis 1280.  Dari  hasil  yang didapat  kemudian  dimasukan  ke  pengolah data statistik, lalu diuji dengan saphiro-wilk dan One way Anova test dengan confidence interval 95%.

## HASIL
Hasil uji normalitas dengan uji saphiro wilk dengan  p  value  >0,05  pada  seluruh kelompok  perlakuan  sehingga  sebaran datanya  normal.  Untuk  mengetahui  hasil
dari  uji  beda  hasil  MDA  antar  kelompok perlakuan dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Kadar MDA
Kelompok MDA (µmol/L) mean±SD *P I (kontrol positif) II (kontrol negatif) III (kontrol normal) IV (dosis 0,3mg/gBB) V (dosis 0,5 mg/gBB) VI (dosis 0,7 mg/gBB) 85.02 ± 21.93 32.14 ± 13.83 54.75 ± 42.77 81.47 ± 28.98 40.71 ± 19.18 25.06 ± 10.09 0,012
*uji dengan One way anova, CI 95%
Tabel  2  menunjukkan  bahwa  terdapat perbedaan yang signifikan antar kelompok perlakuan.  Nilai  tertinggi  kadar  MDA terdapat pada kelompok 1 yang merupakan kelompok  kontrol  positif,  sedangkan  pada kelompok  yang  diberi  ekstrak  etanol  daun kersen  kelompok  dengan  kadar  MDA tertinggi  yaitu  pada  kelompok  yang  diberi dosis 0,3 mg/gBB. Sementara, kadar MDA terendah  terdapat  pada  kelompok  6  yaitu kelompok yang diberi ekstrak daun kersen dengan dosis 0,7 mg/gBB.

## PEMBAHASAN
Pada  keadaan  normal,  radikal  bebas terbentuk di dalam tubuh sangat lambat dan perlahan.  Kondisi  radikal  bebas  yang meningkat  melebihi  kemampuan  per- tahanan  endogen,  maka  akan  terjadi ketidakseimbangan  antara  jumlah  radikal bebas dengan antioksidan endogen, sehingga  terjadilah  ketidakstabilan  (stres) oksidatif.  Stres  oksidatif  menyebabkan peroksidasi  lipid  yang  berlebihan.  Hasil dari  peroksidasi  lipid  adalah  MDA, sehingga  meningkatnya  peroksidasi  lipid dapat  menyebabkan  kadar  MDA  dalam tubuh meningkat (6).
Patogenesis  diabetes  mellitus  tipe  2 klasik  biasanya  dimulai  dengan  resistensi insulin, yang secara bertahap meningkatkan kebutuhan sel beta untuk melakukan sekresi insulin.  Normoglikemia  berhasil  diper- tahankan  oleh  peningkatan  kompensasi dalam  sekresi  insulin  pada  sebagian  besar orang.  Namun,  pada  individu  yang  rentan menjadi DM, sel beta akhirnya gagal untuk melakukan  kompensasi  resistensi  insulin, mengakibatkan  intoleransi  glukosa,  dan akhirnya,  hiperglikemia  puasa  dan  gejala diabetes  yang  jelas  terlihat  (9). Keadaan tersebut  disebut  sebagai  resistensi  insulin yang merupakan penyebab dari DM tipe 2. Resistensi insulin dapat ditemukan sebagai hasil  dari  keadaan  obesitas,  penuaan  serta kurangnya aktivitas fisik (10).
Kerusakan yang terjadi pada sel beta pankreas dapat meningkatkan radikal bebas termasuk ROS melalui beberapa jalur yaitu advanced  glycation  end-products (AGEs), ekspresi dari reseptor, jalur poliol, aktivasi dari isoform protein kinase dan penurunan antioksidan,  (11)  sehingga  akan  mening- katkan produksi MDA. Diperlukan adanya antioksidan  untuk  dapat  menurunkan  dan menyeimbangkan  efek  negatif  dari  radikal bebas.  Penderita  DM  dengan  peningkatan produksi  radikal  bebas  yang  disebabkan oleh mekanisme yang melibatkan hiperglikemia  mengakibatkan  peningkatan produksi  superoksida  pada  mitokondria. Selain  itu,  auto-oksidasi  glukosa  juga menghasilkan superoksida dan juga terjadi peningkatan Low  Density  Lipoprotein teroksidasi  pada  endotel.  Stres  mekanik pada hipertensi akan menginduksi translokasi p47 phox dan kemudian terjadi aktivasi NADPH oksidase. Aktivasi reseptor  AT1  oleh  angiotensin  II  juga mengakibatkan  aktivasi  NADPH  oksidase dan  superoksid  juga  diproduksi  akibat aktivasi oleh 12-LO (lipooksigenase) dalam
VSMCs ( vasculer smooth muscle
cells )(12).
Malondialdehida (MDA) adalah produk  sekunder  utama,  lebih  mutagenik dan  lebih  stabil  dibanding  aldehid  lainnya sehingga dianggap sebagai petanda terbaik untuk mendeteksi stres oksidatif pada lipid (13).  Beberapa  pendekatan  obat  secara konvensional hingga mencakup epigenetik sudah  mulai  dilakukan,  termasuk  mulai dikembangkannya beberapa penelitian dengan bahan-bahan herbal untuk diabetes.
(14)  Pada  penelitian  Syahara et  al .,  yang menyimpulkan bahwa ada pengaruh pemberian  ekstrak  ethanol  daun  kersen ( Muntingia  calabura  L.  folium )  mampu menurunkan kadar glukosa darah pada tikus putih galur wistar dengan dosis 500 mg/kg yang  diberikan  14  hari,  hal  ini  juga mendukung  dari  indikator  perbaikan  DM yang  lain.  (15)  Demikian  juga  penelitian yang  dilakukan  oleh  Herlina  bahwa  efek ekstrak  ethanol  daun  kersen  ( Muntingia calabura  L.  folium )  dapat  menurunkan kadar  glukosa  darah  dengan  dosis  260 mg/kgBB (16).
Studi  ini  menemukan  dosis  0,7 mg/gBB  memberikan  perbedaan  diantara kelompok  perlakuan  dengan  hasil  kadar MDA  paling  rendah,  yaitu 25.06 ± 10.09 µmol/L.  Perbandingan  kadar  MDA  tikus antar  kelompok  perlakuan  menunjukan bahwa kerusakan sel yang diakibatkan oleh efek  diabetes  menyebabkan  peningkatan radikal  bebas.  Belum  diketahuinya  kadar normal  MDA  tikus  menyebabkan  kami menggunakan  kelompok  kontrol  normal untuk  mengetahui  kadar  MDA  pada  tikus yang tidak diberi perlakuan, yaitu
54,75 ± 42,77 µmol/L.
Daun  kersen  banyak  mengandung senyawa  flavonoid  antara  lain  flavon, flavonon,  flavan,  dan  biflavan  yang memberikan efek antidiabetes dan
sitotoksik.  Senyawa  fenolik,  tannin  dan flavon  merupakan  senyawa  utama  yang berperan  sebagai  antioksidan  (17).  Studi lain  juga  menunjukkan  efek  hipoglikemik yang signifikan pada mencit Mus musculus L setelah  pemberian  selama  2  jam, menunjukkan  penurunan  hingga  24  % kadar  glukosa  darah  hewan  coba  yang mendapat    perlakuan  pemberian  ekstrak daun  kersen  (18).  Penelitian  oleh  Jamal menyimpulkan flavonoid sebagai antioksidan dapat memiliki efek hipoglikemik dengan beberapa mekanisme memberikan  rangsangan  pelepasan  dan sensitasi  insulin,  menghambat  absorbsi glukosa, berperan meregulasi enzim-enzim untuk metabolisme  karbohidrat serta peningkatan ambilan glukosa pada jaringan perifer (19).
Daun kersen juga memiliki kandungan  saponin  yang  cukup  dominan. Saponin merupakan inhibitor dari enzim α- glukosidase dengan  mengubah  glukosa menjadi  karbohidrat,  menjadikan  glukosa darah menurun, zat ini juga memiliki fungsi inhibitor untuk GLUT-2 sehingga menurunkan absorbsi glukosa di intestinal. Kandungan  saponin  ini  akan  berperan menurunkan  stres  oksidatif  dikarenakan fungsinya  sebagai  antioksidan  tersebut (20).

## SIMPULAN
Ekstrak  etanol  kersen  dapat  menurunkan kadar  MDA  pada  tikus  dengan  diabetes melitus tipe II.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didanai  oleh  dana  hibah LPPM Universitas Muhammadiyah Purwokerto No:  A.11-III/622-S.Pj./LPPM/ XII/2020.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis menyatakan mereka tidak memiliki konflik  kepentingan,  dan  tidak  ada  afiliasi atau  koneksi  dengan  atau  dengan  entitas atau  organisasi  apa  pun,  yang  dapat menimbulkan  pertanyaan  bias  dalam diskusi dan kesimpulan naskah.

## REFERENSI
1. Stumvoll  M,  Goldstein  BJ,  Haeften TW  Van.  Haeften_Pathogenesis  of type 2 diabetes.pdf. Lancet.
2005;365:1333–46.
2. Chatterjee S, Khunti  K, Davies MJ.
Type 2 diabetes. Lancet. 2017;389(10085):2239–51.
3. RISKESDAS NBP dan P. Laporan_Nasional_RKD2018_FIN AL.pdf. Badan Penelitian dan Pengembangan  Kesehatan.  2018.  p. 123–30.
4. Katno.  Tingkat  manfaat,  keamanan dan efektifitas tanaman obat dan obat tradisional. Karanganyar: Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Tanaman Obat dan Obat Tradisional (B2P2TOOT).  Badan  Penelit  dan Pengemb  Kesehat  Dep  Kesehat  RI.
2018;
5. Kashinakunti,  Kollur,  Kallaganada, Rangappa, Ingin. Comparative study of serum MDA and vitamin C levels in  non-smokers,  chronic  smokers and  chronic  smokers  with  acute myocardial infarction in men. 2011.
p. 993–998.
6. Ayala  A,  Muñoz  MF,  Argüelles  S, Ayala A, Mu&#xf1;oz MF,
Arg&#xfc;elles  S,  et  al.  Lipid
Peroxidation: Production, Metabolism, and Signaling Mechanisms  of  Malondialdehyde and  4-Hydroxy-2-Nonenal.  Oxid Med  Cell  Longev.  2014;2014(May
2014):1–31.
7. Mahmood  ND,  Nasir  NLM,  Rofiee MS, Tohid SFM, Ching SM, Teh LK et al. Muntingia calabura : A review of  its  traditional  uses,  chemical properties, and  pharmacological observations. Pharm Biol. 2014;52(12):1598–623.
8. Herlina.  Science  &  Technology Indonesia Antidiabetic Activity Test Of  Ethanolic  Seri  Leave  ’  s  ( Muntingia  Calabura  L  .)  Extract  In Male Rats  Induced By  Alloxan. Sci Technol Indones. 2018;3:7–13.
9. Wysham  C,  Shubrook  J.  Beta-cell failure in type 2 diabetes: mechanisms,  markers,  and  clinical implications. Postgrad Med.
2020;132(8):676–86.
10. PERKENI.  Pedoman  pengelolaan dan pencegahan diabetes melitus tipe 2 di Indonesia. Perkeni. 2019. 133 p.
11. Oliveira  S,  Monteiro-Alfredo  T, Silva  S,  Matafome  P.  Curcumin derivatives  for  Type  2  Diabetes management  and  prevention  of complications.  Arch  Pharm  Res. 2020;43(6):567–81.
12. Siswonoto  S.  Hubungan  Kadar Malondialdehid Plasma Stroke Iskemik Akut Correlation of Plasma
Malondyaldehyde  With  Program Pasca  Sarjana  Program  Pendidikan
Dokter Spesialis I. 2008;1–116.
13. Anggraeni  S,  Setyaningrum  T, Listiawan MY. Significant Different Level  of  Malondialdehyde  (MDA)
as  Oxydative  Stress  Marker  in
Severity  Groups  of  Acne  Vulgaris.
Berk  Ilmu  Kesehat  Kulit  dan
Kelamin. 2017;29(1):36–43. 14. Ling  C.  Epigenetic  regulation  of insulin action and secretion – role in the pathogenesis of type 2 diabetes. J Intern Med. 2020;288(2):158–67.
15. Syahara S, Harahap U, Widyawati T. Activity  of  Muntingia  calabura Leaves Ethanolic Extract on Glucose and  Insulin  Blood  Levels  in Streptozotocin-induced Rat. Asian J Pharm Res Dev. 2019;7(4):8–11.
16. Herlina  H.  Antidiabetic  Activity Test  of  Ethanolic  Seri  Leave’s (Muntingia  Calabura  L.)  Extract  in Male  Rats  Induced  by  Alloxan.  Sci Technol Indones. 2018;3(1):7–13.
17. Puspitasari  AD,  Wulandari  RL. Aktivitas Antioksidan dan Penetapan  Kadar  Flavonoid  Total Ekstrak  Etil  Asetat  Daun  Kersen (Muntingia calabura). J Pharmascience. 2017;4(2):167–75.
18. Stevani  H.,  Thamrin  H.  A.  BNH. Efektivitas  Rebusan  Daun  Kersen (Muntingia  calabura  L.)  Terhadap Penurunan  Kadar  Glukosa  Darah Pada Mencit (Mus musculus). Media Farm. 2017;13(1).
19. Jamal H, Ansari WH RS. Chalcones: Differential  effects  on  glycogen contents  of  liver,  brain  and  spinal cord in rats. Bio Med. 2015;1(2):107–15.
20. Fiana  N,  Oktaria  D.  Pengaruh Kandungan  Saponin  dalam  Daging Buah  Mahkota  Dewa  (  Phaleria macrocarpa  )  terhadap  Penurunan Kadar  Glukosa  Darah.  Majority. 2016;5(4):128–32.