ISSN: 1410-8917 e-ISSN: 2597-9914
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (3) (2019): 67 – 72

## Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi
Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa

## Isolasi Senyawa Flavonoid dari Fraksi Amil Alkohol Daun Mangga Golek ( Mangifera indica
L. cv. Golek)
Maulina Dwi Haryani a , Enny Fachriyah a,* , Dewi Kusrini a
a Organic Chemistry Laboratory, Department of Chemistry, Faculty of Science and Mathematics, Diponegoro University, Tembalang, Semarang 50275, Indonesia
* Corresponding author: enny.fachriyah@live.undip.ac.id
https://doi.org/10.14710/jksa.22.3.67-72
Art ic le   Info

## Ab s t rac t
Article history:
Received: 12 January 2019
Revised: 15 April 2019 Accepted: 24 April2019 Online: 31 May 2019
Keywords: mango  golek;  flavonoids; isoflavones;  FTIR;  UV-Vis spectrophotometer
Title: Isolation of Flavonoid Compounds from Amyl Alcohol Fraction of Golek Mango Leaf ( Mangifera indica L cv. Golek)
Mango plant  ( Mangifera  indica L.)  is  a  tropical  fruit  plant  with  high  nutrition  in  the Anacardiaceae family. One of the several varieties of mango plants spread throughout Indonesia, namely mango golek. This study aims to obtain flavonoid isolates and find out the types of flavonoids in the leaves of mango golek. In this study, maceration was carried out to obtain ethanol extract, then followed by phytochemical tests, removal of chlorophyll using distilled water (1: 1), hydrolysis using 2N HCl, followed by liquid- liquid  extraction  using  ethyl  acetate  and  amyl  alcohol.  In  the  amyl  alcohol fraction, flavonoid  was  separated  using  gravity  column  chromatography  with  a  mixture  of eluent  n-butanol:n-hexane:methanol  (4:2:1).  Phytochemical  tests  showed  positive results  for  alkaloids,  saponins,  tannins,  quinones  and  flavonoids.  UV-Vis spectrophotometer analysis provides absorption at a wavelength of 263 nm while FTIR analysis showed the presence of O-H, C=O, C-O-C aliphatic, and C-O alcohol groups. LC-MS/MS  instrument  analysis  showed  m/z  of  300  which  is  the  molecular  mass  of isoflavone compound.

## Ab s t rak
Kata Kunci: mangga golek; flavonoid; isoflavon; FTIR; spektrofotometer UV-Vis
Tumbuhan  mangga  ( Mangifera  indica L.)  merupakan  tanaman  buah  tropis  dengan nutrisi  tinggi  dalam  keluarga  Anacardiaceae.  Salah  satu  dari  beberapa  varietas tumbuhan  mangga  yang  tersebar  di  Indonesia  yaitu  mangga  golek.  Penelitian  ini bertujuan  memperoleh  isolat  flavonoid  dan  mengetahui  jenis  flavonoid  yang  ada  di dalam daun mangga golek. Pada penelitian ini dilakukan maserasi untuk memperoleh ekstrak etanol yang selanjutnya dilakukan uji fitokimia, penghilangan klorofil dengan aquades (1:1), hidrolisis menggunakan HCl 2N, dilanjutkan dengan ekstraksi cair-cair dengan  etil  asetat  dan  amil  alkohol.  Pada  fraksi  amil  alkohol  dilakukan  pemisahan flavonoid  menggunakan  kromatografi  kolom  gravitasi  dengan  campuran  eluen  n- butanol:n-heksana:metanol  (4:2:1).  Uji  fitokimia  menunjukkan  hasil  positif  pada senyawa  alkaloid,  saponin,  tanin,  kuinon,  dan  flavonoid.  Analisis  spektrofotometer UV-Vis memberikan serapan pada panjang gelombang 263 nm. Hasil analisis dengan FTIR  menunjukkan  adanya  serapan  gugus  O-H,  C=O,  C-H  alifatik, C-O-C,  dan  C-O alkohol. Hasil analisis instrumen LC-MS/MS menunjukkan m/z 300 yang merupakan massa molekul senyawa isoflavon.

## 1. Pendahuluan
Tanaman  mangga  ( Mangifera  indica L.,)  merupakan tanaman  buah  tropis  dengan  nutrisi  tinggi  dalam keluarga Anacardiaceae .  Daun  mangga  sangat  terkenal sebagai  Obat  Tradisional  Cina  digunakan  untuk pencegahan  dan  penyembuhan  sakit neurophatic dan maag [1, 2, 3]. Kandungan metabolit sekunder dalam daun mangga  adalah  alkaloid,  flavonoid,  saponin  [4],  kuinon [5], tanin, steroid [6] dan triterpenoid [7]. Ekstrak daun mangga  fraksi  metanol  memiliki  aktivitas  antioksidan dan  anti-inflamasi  [8].  Teknik  ekstraksi  daun  mangga dengan  tekanan  tinggi  menggunakan  subkritikal  air sebagai  pelarut  memperoleh  senyawa  mangiferin  dan senyawa  fenol  lainnya  yang  menunjukkan  potensi aktivitas  antioksidan  [9].  Ekstrak  etanol  dari  daun mangga  diperoleh  senyawa  mangiferin  [10].  Kandungan senyawa fenol dari fraksi etil asetat daun mangga adalah asam  benzoat,  pirogalol,  asam  para  hidroksibenzoat, asam vanilat, asam siringat, asam ferulat, etil galat, dan asam  galat  [11].  Penelitian  daun  mangga  gedong,  golek, apel,  dan  arumanis  didapatkan  hasil  bahwa  keempat varietas  daun  mangga  tersebut  memiliki  aktivitas antioksidan  [12].  Daun  mangga  mengandung  lima flavonoid  yaitu,  epikatekin  glikon,  isoflavon,  trikuspid, kuersetin, dan epikatekin aglikon [13].

## 2. Metodologi

## 2.1. Persiapan Sampel
Sampel  daun  mangga  dikumpulkan  dari  Sambiroto, Semarang  pada  Bulan  September  2017.  Daun  mangga golek  sebanyak  4  kg  dibersihkan  dengan  air,  dipotong kecil-kecil,  dan  dikeringkan  dengan  diangin-anginkan tanpa  terkena  sinar  matahari  langsung  dan  dihaluskan menjadi serbuk. Hal ini bertujuan agar senyawa metabolit sekunder  yang terkandung  dalam  daun  mangga  golek tidak  mengalami  kerusakan  akibat  terpapar  sinar matahari langsung.

## 2.2. Pembuatan Ekstrak
Serbuk daun mangga golek sebanyak 2 kg dimaserasi menggunakan pelarut etanol 96%. Setiap 24 jam pelarut diganti  kemudian  dipisahkan  ekstrak  dan  ampasnya. Ekstrak  yang  diperoleh  kemudian  dipekatkan  dengan rotary  evaporator sehingga  diperoleh  ekstrak  etanol  dan ditimbang.

## 2.3. Penapisan Fitokimia
Penapisan fitokimia meliputi uji flavonoid, saponin, fenolik, tanin, alkaloid, triterpenoid dan steroid [14, 15].

## 2.4. Isolasi Flavonoid
Ekstrak  etanol  yang  diperoleh  dilarutkan  kembali dengan etanol kemudian dilakukan penghilangan klorofil dengan  menambahkan  aquades  (1:1), didiamkan  selama 24  jam  dan  disaring.  Ekstak  etanol-air  yang  didapat dipekatkan  dan  ditimbang.  Selanjutnya  dilakukan  uji kandungan gula menggunakan pereaksi Benedict. Hal ini dilakukan dengan mengambil satu tetes  ekstrak etanol- air yang pekat ditambahkan etanol hingga sedikit encer. Adanya  kandungan  gula  dalam  ekstrak  ditandai  dengan
terbentuk  endapan  merah  bata.  Selanjutnya  dihidrolisis menggunakan  HCL  2N  selama  satu  jam  pada  suhu  85°C [16, 17]. Setelah proses hidrolisis berakhir, dilakukan uji kandungan gula menggunakan pereaksi Benedict, hal ini dilakukan  untuk  memastikan  bahwa  flavonoid  di  dalam ekstrak sudah bebas gula.
Fraksi etanol-air hasil hidrolisis difraksinasi dengan etil  asetat,  terbentuk  dua  lapisan,  lapisan  atas  adalah fraksi etil asetat dan lapisan bawah adalah fraksi etanol- air,  kemudian  dipisahkan.  Fraksi  etil  asetat  dipekatkan dengan rotary  evaporator sehingga  diperoleh  fraksi  etil asetat.  Selanjutnya  fraksi  etil  asetat  difraksinasi  dengan amil alkohol, terbentuk dua lapisan. Lapisan atas adalah fraksi  amil  alkohol  dan  lapisan  bawah  adalah  fraksi  etil asetat,  kemudian  fraksi  amil  alkohol  dilakukan rotary evaporator sehingga  diperoleh  fraksi  amil  alkohol  dan ditimbang.

## 2.5. Pemisahan Senyawa Flavonoid dengan Kromatografi Kolom Kolom Gravitasi
Fraksi  amil  alkohol  dipisahkan  komponennya dengan  kromatografi  kolom  gravitasi  menggunakan eluen campuran n-butanol : n-heksana : metanol (4:2:1). Eluat  ditampung  dalam  vial  15  mL.  Masing-masing  vial dilakukan  KLT,  vial  dengan  pola  noda  yang  sama digabungkan  menjadi  satu  fraksi  besar  (A,  B,  C,...). Fraksi-fraksi  yang  diperoleh  diuji  flavonoid  dengan diuapi ammonia [18]. Fraksi yang positif flavonoid paling dominan  dipisahkan  dengan  KLT  preparatif.  Pita  yang dominan  dikerok  dan  dilarutkan  dengan  eluen  yang sesuai. Isolat flavonoid diuapkan dan ditimbang.

## 2.6. Uji Kemurnian
Isolat flavonoid yang didapatkan dari KLT preparatif diuji kemurnian dengan KLT berbagai eluen dan KLT dua dimensi.  Noda  tunggal  yang  terbentuk  menunjukkan bahwa  flavonoid  yang  didapatkan  telah  murni.  Uji kemurnian selanjutnya adalah menentukan titik leleh.

## 2.7. Identifikasi Struktur
Isolat  flavonoid  yang  diperoleh  diidentifikasi strukturnya  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis, FTIR, dan LC-MS/MS.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Hasil Ekstrak
Ekstrak  etanol  daun  mangga  golek  berwarna  coklat sebanyak 256 g dengan rendemen sebesar 12,8%.

## 3.2. Hasil Determinasi sampel tanaman dan Skrining Fitokimia
Hasil determinasi sampel tanaman yang dilakukan di Laboratorium Sistematika Fakultas Biologi UGM sebagai berikut:
Divisi : Tracheophyta Sub Divisi : Spermatophyta Kelas : Magnoliospida Ordo : Sapindales Familia : Anarcardiaceae
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (3) (2019): 67 – 72 69 Genus : Mangifera Spesies : Mangifera indica L. cv. Golek Nama Lokal  : Mangga golek
Hasil  skrining  fitokimia  terhadap  serbuk  daun  dan ekstrak  etanol  daun  mangga  golek  menunjukkan  tes positif  terhadap  alkaloid,  saponin,  kuinon,  tanin,  dan flavonoid.

## 3.3. Hasil Isolasi Flavonoid dari Daun Mangga Golek
Ekstrak  etanol  diuji  adanya  gula  menggunakan pereaksi  Benedict.  Hasil  uji  positip  mengandung  gula dengan  terbentuknya  endapan  merah  bata.  Uji  adanya gula  diulang  setelah  dilakukan  hidrolisis,  hasilnya menunjukkan  negatif  gula,  karena  gula  yang  terikat sudah  dibebaskan.  Hasil  hidrolisis  dipartisi  dengan  etil asetat  sehingga  diperoleh  fraksi  etil  asetat.  Untuk mengisolasi flavonoid yang relatif polar, fraksi etil asetat dipartisi dengan amil akohol, diperoleh 26 g.

## 3.4. Hasil Pemisahan Senyawa Flavonoid
Profil  KLT  fraksi  amil  alkohol  daun  mangga  golek hasil  kromatografi  kolom  gravitasi  (KKG)  ditampilkan pada  gambar  1.  Eluen  terbaik  untuk  pemisahan  noda- noda  setelah  dipisahkan  dengan  kromatografi  kolom gravitasi, yaitu eluen campuran n-butanol : n-heksana : metanol  (4:4:1).  Pemberian  penampak  bercak  uap ammonia  menunjukan  hasil  noda  tidak  mengalami perubahan, yaitu tetap berfluoresensi biru muda.
Gambar 1 . Profil KLT fraksi amil alkohol hasil KKG (A, B, C, D, E, F, G, H, dan I) dengan eluen campuran n-butanol : n-heksana : metanol (4:4:1) pada UV λ 365 nm
Berdasarkan hasil KLT, fraksi F, G, H, dan I digabung menjadi satu fraksi (Fraksi J) karena memiliki kemiripan pola noda dan juga hasil positif flavonoid pada penampak bercak uap amonia. Fraksi J dilakukan KLT kembali untuk memastikan  noda  terpisah  dan  adanya  noda  dominan. Hasil KLT dari fraksi J setelah diberi penampak bercak uap ammonia warna tetap ungu gelap pada UV λ 254 nm dan tidak  ada  perubahan  warna  pada  UV λ 365  nm  yang sebelumnya berfluoresensi biru muda.
Gambar 2. Profil KLT fraksi J pada UV λ 254 nm dan 365 nm dengan eluen campuran n-butanol : n-heksana : metanol (4:4:1)
Fraksi J selanjutnya dilakukan KLT preparatif. Profil KLT preparatif fraksi J ditunjukkan pada gambar 3.
Gambar 3. Profil KLT preparatif fraksi J dengan eluen campuran n-butanol : n-heksana : metanol (4:4:1) pada UV λ 365 nm
Dari  gambar  di  atas  dapat  dilihat  bahwa  terjadi pemisahan  senyawa  menghasilkan  4  pita  yang  muncul pada lampu UV λ 365 nm. Eluen c ampuran n-butanol : n- heksana : metanol (4:4:1) tetap digunakan karena mampu memisahkan noda-noda. Pengerokan pada pita 3 dengan Rf  sebesar  0,475  dilakukan  karena  pita  3  memiliki intensitas warna lebih kuat dan konsentrasi paling besar dibandingkan dengan pita lainnya. Hasil pengerokan pita 3  dilarutkan  ke  dalam  n-butanol  dan  disebut  sebagai isolat flavonoid J3.

## 3.5. Hasil Uji Kemurnian
KLT isolat flavonoid J3 menggunakan berbagai eluen menghasilkan  1  noda  ( Gb.  4. ),  sehingga  diperkirakan bahwa  isolat  flavonoid  telah  murni.  Isolat  flavonoid  J3 merupakan  flavonoid  bersifat  polar,  dikarenakan  dari profil  KLT  pada  gambar  4  menunjukkan  naiknya  noda saat menggunakan eluen polar, yaitu metanol, kloroform : metanol (4 : 6), dan etil asetat : metanol (1 : 1).
Gambar 4. Profil KLT pada uji kemurnian isolat flavonoid J3 dengan berbagai eluen pada UV λ 365 nm A. n-heksana ; Rf = 0 B. Kloroform ; Rf = 0 C. Metanol ; Rf =
0,78 D. Kloroform : metanol (4 : 6) ; Rf = 0,68 E. Etil Asetat : metanol (1 : 1) ; Rf = 0,7
Hasil  KLT  dua  dimensi  pada  isolat  flavonoid  J3 menunjukkan  satu  noda  ( Gb.  5. ).  Noda  dari  isolat flavonoid  J3  tidak  mengalami  perubahan  warna  setelah diberi  penampak  bercak  uap  amonia,  yaitu  tetap berfluoresensi  biru  muda  dan  diduga  isolat  flavonoid  J3 termasuk  ke  dalam  golongan  flavonoid  jenis  isoflavon [16]. Isolat flavonoid berupa padatan coklat sebanyak 3,8 mg. Hasil pengukuran titik leleh untuk isolat flavonoid J3 sebesar 225°C - 226°C. Kemurnian dari senyawa organik berdasarkan  titik  leleh  berada  pada  rentang  suhu  0°C  - 1°C  [19].  Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan, isolat flavonoid J3 telah murni.
Gambar 5. Profil KLT dua dimensi isolat flavonoid J3: (1) Eluen campuran kloroform : metanol (4 : 6) pada UV λ 365  nm  (2)  Eluen  campuran  etil  asetat  :  metanol  (1  :  1) pada UV λ 365 nm
3.6. Hasil Identifikasi Struktur
Identifikasi
isolat
flavonoid J3 dilakukan menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Isolat flavonoid J3  dilarutkan  dalam  metanol,  selanjutnya  dianalisis dengan spektrofotometer UV-Vis dan diperoleh spektrum pada gambar 6
Gambar 6. Spektrum UV-Vis isolat flavonoid J3 dalam metanol
Hasil analisis isolat flavonoid J3 dengan spektrofotometer UV-Vis menghasilkan serapan panjang gelombang  pita  II  (263  nm).  Pada  umumnya  flavonoid akan menghasilkan absorbsi pita I pada cincin B sinamoil dan pita II adalah absorbsi cincin A benzoil. Karakteristik absorbsi  untuk  isoflavon  akan  menghasilkan  absorbsi pita  II  (245 – 270  nm),  sedangkan  intensitas  absorbsi untuk pita I sangat kecil atau berupa bahu (300 – 340 nm). Hal  ini  dikarenakan  pada  umumnya  tidak  dipengaruhi oleh  pola  oksigenasi  dan  substitusi  pada  cincin  B  [20]. Serapan isolat flavonoid J3 pada panjang gelombang pita II  (263  nm)  membuktikan  bahwa  isolat  merupakan flavonoid jenis isoflavon. Penelitian mengenai kandungan  isoflavon  dalam  daun  mangga  golek  masih terbatas,  maka  dilakukan  pembandingan  pada  tingkat genus Mangifera. Kanwal dkk. [13], melakukan penelitian terhadap  daun  mangga  dan  didapatkan  senyawa isoflavon  berupa  padatan  coklat  yang  menghasilkan serapan  panjang  gelombang  pita  II  (270  nm).  Analisis FTIR  terhadap  isolat  flavonoid  J3  ditunjukkan  pada gambar 7
Gambar 7. Spektrum FTIR isolat flavonoid J3
Spektrum  inframerah  hasil  analisis  isolat  flavonoid J3  memiliki  pita  serapan  pada  bilangan  gelombang 3444,08  cm -1 menunjukkan  adanya  vibrasi  ulur  O – H intramolekul.  Pita  serapan  pada  2927,38  cm -1 dan 2856,5 cm -1 menunjukkan  adanya  vibrasi  ulur  C – H alifatik.  Pita  serapan  pada  1631,49  cm -1 menunjukkan adanya  vibrasi  C=O.  Pita  serapan  pada  1408,3  cm -1
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (3) (2019): 67 – 72 71
menunjukkan  adanya  vibrasi  tekuk  C – H  alifatik.  Pita serapan  pada  1265,3  cm -1 menunjukkan  adanya  vibrasi ulur  C – O – C.  Pita  serapan  pada  1095,48  cm -1 menunjukkan  adanya  vibrasi  C – O  alkohol.  Pita  serapan pada  798,3  cm -1 menunjukkan  adanya  vibrasi  C – H  luar bidang atau substitusi aromatik [21].
Pada  instrumen  LC-MS/MS,  isolat  flavonoid  J3 muncul pada waktu retensi 1,18 menit yang berdasarkan database merupakan  senyawa  flavonoid  jenis  isoflavon yang memiliki massa molekul relatif m/z sebesar 301.Hal ini  dikarenakan  instrumen  LC-MS/MS  menggunakan pengion  positif  [M+H].  Hasil  spektogram  berdasarkan database pada  instrumen  LC-  MS/MS  menunjukkan bahwa  m/z  300  merupakan parent  peak untuk  senyawa isoflavon.

## 4. Kesimpulan
Daun mangga golek mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, kuinon, dan tanin. Pita serapan pada spektrum  UV-Vis  menghasilkan  pita  II  (263  nm), menunjukkan  bahwa  senyawa  dari  fraksi  amil  alkohol daun  mangga  golek  mengandung  flavonoid,  yaitu isoflavon. Hasil  FTIR  menunjukkan  adanya  serapan gugus O-H, C=O, C-H alifatik tekuk dan ulur, C-O-C, dan C-O  alkohol.  Berdasarkan  analisis  LC-MS/MS  senyawa isoflavon memiliki massa molekul 300 m/z.

## Daftar Pustaka
[1]  Bárbara  B.  Garrido-Suárez,  Gabino  Garrido,  Rene Delgado,  Fe  Bosch,  María  del  C.  Rabí,  A  Mangifera indica L. Extract Could Be Used to Treat Neuropathic Pain and Implication of Mangiferin, Molecules , 15, 12,
(2010) 9035-9045 https://doi.org/10.3390/molecules15129035
[2]  Juliana  Aparecida  Severi,  Zeila  Pinheiro  Lima, Hélio Kushima, Alba Regina Monteiro Souza Brito, Lourdes Campaner  dos  Santos,  Wagner  Vilegas,  Clélia  Akiko Hiruma-Lima,  Polyphenols  with  Antiulcerogenic Action  from  Aqueous  Decoction  of  Mango  Leaves (Mangifera indica L.), Molecules , 14, 3, (2009) 1098- 1110 https://doi.org/10.3390/molecules14031098
[3]  Qudsia  Kanwal,  Ishtiaq  Hussain,  Hamid  Latif Siddiqui,  Arshad  Javaid,  Antifungal  activity  of flavonoids isolated from mango (Mangifera indica L.) leaves, Natural Product Research , 24, 20, (2010) 1907- 1914 https://doi.org/10.1080/14786419.2010.488628
[4]  M. T. Yakubu, S. S. Salimon, Antidiarrhoeal activity of aqueous  extract  of  Mangifera  indica  L.  leaves  in female albino rats, Journal of Ethnopharmacology , 163,
(2015)
135-141 https://doi.org/10.1016/j.jep.2014.12.060
[5]  Antony  V.  Samrot,  Bennet  Rohan,  Divya  Kumar,  K. Sahiti,  P.  Raji,  K.  Sree  Samanvitha,  Detection  of antioxidant  and  antibacterial  activity  of  Mangifera indica  using  TLC  bio-autography, International
Journal of Pharmaceutical Sciences and Research , 7, 11, (2016) 4467-4472 http://doi.org/10.13040/IJPSR.0975- 8232.7(11).4467-72 .
[6]  Pintu K. De, Arna Pal, Effects of aqueous young leaves extract of  Mangifera  indica  on  gm ( – ) microorganisms causing gastro-intestinal disorders,
Asian Journal of Plant Science and Research , 4, 1, (2014) 23-27 [7]  Kalpna Rakholiya, Sumitra Chanda, Pharmacognostic, Physicochemical and Phytochemical  Investigation  of  Mangifera  indica  L. var.  Kesar  leaf, Asian  Pacific  Journal  of  Tropical Biomedicine ,  2,  2,  Supplement,  (2012)  S680-S684 https://doi.org/10.1016/S2221-1691(12)60295-0
[8]  C. G. Mohan, M. Deepak, G. L. Viswanatha, G. Savinay, V.  Hanumantharaju,  C.  E.  Rajendra,  Praveen  D. Halemani,  Anti-oxidant  and  anti-inflammatory activity  of  leaf  extracts  and  fractions  of  Mangifera indica, Asian Pacific Journal of Tropical Medicine , 6, 4,
(2013) 311-314 https://doi.org/10.1016/S1995- 7645(13)60062-0
[9]  María  Fernández  Ponce,  Lourdes  Casas  Cardoso,  C. Mantell, Enrique Martinez de la Ossa, Potential Use of Mango  Leaves  Extracts  Obtained  by  High  Pressure Technologies  in  Cosmetic,  Pharmaceutics  and  Food Industries, Chemical  Engineering  Transactions ,  32,
(2013) 1147-1152 http://doi.org/10.3303/CET1332192
[10] Tang-Bin Zou, En-Qin Xia, Tai-Ping He, Ming-Yuan Huang,  Qing  Jia,  Hua-Wen  Li,  Ultrasound-Assisted Extraction  of  Mangiferin  from  Mango  (Mangifera indica  L.)  Leaves  Using  Response  Surface Methodology, Molecules ,  19,  2,  (2014)  1411-1421 https://doi.org/10.3390/molecules19021411
[11]  Abdelnaser Abdelghany Elzaawely, Shinkichi Tawata, Preliminary  phytochemical  investigation  on  mango (Mangifera  indica  L.)  leaves, World  Journal  of Agricultural Sciences , 6, 6, (2010) 735-739
[12] Irda  Fidrianny,  Ari  Sri  Windyaswari,  Komar  Ruslan Wirasutisna,  Antioxidant  Capacities  of  Various Leaves  Extract  from  Five  Colors  Varieties  of  Sweet Potatoes  Tubers  Using  ABTS,  DPPH  Assays  and Correlation  with  Total  Flavonoid,  Phenolic, Carotenoid  Content, Research  Journal  of  Medicinal
Plants , 7, 3, (2013) 130-140
http://doi.org/10.3923/rjmp.2013.130.140
[13] Qudsia  Kanwal,  Hussain  Ishtiaq,  Hamid  Latif Siddiqui,  Arshad  Javaid,  Flavonoids  from  mango leaves  with  antibacterial  activity, Journal  of  the Serbian  Chemical  Society ,  74,  12,  (2009)  1389-1399 http://doi.org/10.2298/JSC0912389K
[14] Enny  Fachriyah,  Dewi  Kusrini,  Pratama  Jujur Wibawa, Improvement of Bioactivity with Nanoparticle Fabrication: Cytotoxic Test of Ethanol, N-Hexane  and  Ethyl  Acetate  Extract  from  Red Galangal  Rhizome  (Alpinia  purpurata  (Vieill.)  K. Schum)  in  Bulk  and  Nanoparticle  size  using  BSLT Method, Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi , 21, 1, (2018) 39-43 http://dx.doi.org/10.14710/jksa.21.1.39-43 [15] Norman R. Farnsworth, Biological and phytochemical  screening  of  plants, Journal  of Pharmaceutical  Sciences ,  55,  3,  (1966)  225-276 http://dx.doi.org/10.1002/jps.2600550302
[16] K. R. Markham, Cara Mengidentifikasi  Flavonoid, K. Padmawinata, ITB, Bandung, 1988.
[17] Kautsar  Elvira,  Enny  Fachriyah,  Dewi  Kusrini, Isolation  of  Flavonoid  Compounds  from  Eceng Gondok (Eichhornia crassipes) and Antioxidant Tests with DPPH (1,1-Diphenyl-2-Picrylhydrazyl)
Method, Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi , 21, 4, (2018) 187-192 http://dx.doi.org/10.14710/jksa.21.4.187-192
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 22 (3) (2019): 67 – 72
[18] Windi  Susmayanti,  Enny  Fachriyah,  Dewi  Kusrini, Isolasi,  Identifikasi  dan  Uji  Sitotoksik  Senyawa Flavonoid  dari  Ekstrak  Etil  Asetat  Daun  Binahong (Anredera Cordiforlia (Tenns) Stennis), Jurnal Kimia
Sains dan Aplikasi , 15, 3, (2012) 88-93 http://dx.doi.org/10.14710/jksa.15.3.88-93
[19] C.  Sandeep  Kumar  Reddy,  K.  K.  Azam  Khan,  C. Nagaraja, A Review on the Determination of Melting Point  Measurement  System, International  Journal  of Advanced  Research  in  Electrical,  Electronics  and Instrumentation  Engineering ,  5,  2,  (2016)  975-979 http://doi.org/10.15662/IJAREEIE.2016.0502059
[20] Tom  Mabry,  K.R.  Markham,  M.B.  Thomas,  The Systematic  Identification  of  Flavonoids,  Springer Berlin Heidelberg, 1970.
[21] Robert Milton Silverstein, Francis X. Webster, David J.  Kiemle,  Spectrometric  Identification  of  Organic Compounds, 7 ed., John Wiley & Sons, 2005.