## Pertumbuhan Kalus dari Daun Belimbing Merah (Baccaurea angulata) dengan Penambahan 2,4-D (Dichlorophenoxy Acetic Acid) dan Kinetin
Murni 1 , Zulfa Zakiah 1* , Masnur Turnip 1
1 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Tanjungpura, Kota Pontianak *e-mail korespondensi: zulfazakiah@gmail.com

## ABSTRACT
Red starfruit (Baccaurea angulata) is a fruit endemic to Kalimantan which is used as a food source and natural medicinal ingredient. The fruit produced is often found without seeds, which is one of the obstacles in generative propagation . Tissue  culture  is  an  alternative  for  propagating  red  starfruit  to  obtain  seedling  or  secondary metabolites through callus culture. The objective of the research was to determine the effect of 2,4-D and kinetin on the callus growth and to obtain the best concentration to induce callus. Experimental research using factorial Completely Randomized Design  (CRD),  namely 2,4-D (0; 0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5 ppm) and kinetin (0;  0.5; 1.0; 1.5; 2.0; 2.5 ppm). Observation parameters included the time of callus emergence (days after planting), the wet and dry weight of the callus (g), color and texture of the callus. The results showed that the combination of 2,4-D and kinetin had a significant effect on the time of callus emergence, but didn’t on the wet and dry weight of the callus.  The  fastest  callus  emergence  time  was  obtained  of  2.5  ppm  2,4-D  and  0.5  ppm  kinetin,  1.5 ppm  2,4-D, and  2.5  ppm  kinetin  namely  6  DAP.  The  color  of  the  callus  produced  is  white,  brown  and  brownish    with  a friable and compact callus texture. Another response that emerged was root growth.

## Keywords: Baccaurea angulata, callus, propagation

## ABSTRAK
Belimbing  merah  (Baccaurea  angulata)  merupakan  buah  endemik  Kalimantan  yang  dimanfaatkan  sebagai sumber makanan dan bahan obat alami. Buah yang dihasilkan sering ditemukan dalam kondisi tanpa biji yang menjadi  salah  satu  kendala  dalam  perbanyakan  generatif.  Kultur  jaringan  merupakan  alternatif  perbanyakan tanaman  belimbing  merah  untuk  memperoleh  bibit  atau  metabolit  sekunder  melalui  kultur  kalus.  Tujuan penelitian  untuk  mengetahui  pengaruh  2,4-D  dan  kinetin  terhadap  pertumbuhan  kalus  daun  belimbing  merah dan mendapatkan konsentrasi terbaik untuk menginduksi kalus. Penelitian eksperimen menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktorial,  terdiri atas dua faktor perlakuan yaitu konsentrasi 2,4-D (0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 ppm) dan konsentrasi kinetin (0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 ppm). Parameter pengamatan meliputi waktu muncul kalus  (hari  setelah  tanam),  bobot  basah  dan  bobot  kering  kalus (g),  warna  dan  tekstur  kalus.  Hasil  penelitian menunjukkan bahwa kombinasi 2,4-D dan kinetin berpengaruh nyata terhadap waktu muncul kalus, namun tidak berpengaruh nyata terhadap bobot basah dan bobot kering kalus. Waktu muncul kalus tercepat diperoleh pada perlakuan kombinasi 2,5 ppm 2,4-D dan 0,5 ppm kinetin, 1,5 ppm 2,4-D dan 2,5 ppm kinetin yaitu 6 hst. Warna kalus yang dihasilkan putih, kecokelatan, dan cokelat dengan tekstur kalus remah dan kompak. Respon lain yang muncul adalah tumbuhnya akar.
Kata kunci:  Baccaurea angulata, perbanyakan, kalus
This work is licensed under a Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License .
SYMBIOTIC: Journal of Biological Education and Science
Journal homepage: http://symbiotic.jurnal.iainkerinci.ac.d
Published by: Institut Agama Islam Negeri Kerinci, Indonesia .
E-ISSN: 2721-8988 P-ISSN: 2721-8600

## PENDAHULUAN
Belimbing  merah  ( Baccaurea  angulata )  atau  belimbing  hutan,  adalah  tumbuhan  tropis  endemik Kalimantan  yang  menghasilkan  buah.  Tumbuhan  ini  termasuk  dalam  keluarga  Phyllantaceae  dan memiliki potensi besar sebagai sumber makanan dan obat alami. Buah belimbing merah berwarna merah dan  memiliki  bentuk  yang  mirip  dengan  belimbing.  Bagian  yang  dapat  dimakan  dari  buah  ini  adalah daging buah dan kulitnya. Masyarakat sering menggunakan daun, buah, dan kulit batang belimbing merah sebagai  obat.  Secara  empiris  tumbuhan  ini  memiliki  banyak  manfaat,  seperti  mengobati  sembelit, bengkak  pada  mata,  serta  memperlancar  haid  dan  buang  air  kecil.  Buahnya  juga  digunakan  sebagai pencegah  aterosklerosis  dan  mengurangi  stres  oksidatif,  sementara  kulit  batangnya  digunakan  sebagai obat reumatik dan bahan bangunan. Analisis fitokimia oleh Gunawan et al. (2018) menunjukkan bahwa di dalam  buah  belimbing  merah  terkandung  karbohidrat,  protein,  mineral,  serat,  dan  vitamin  A,  C,  dan  E, serta mengandung senyawa terpen, fenolik, dan alkaloid.
Beberapa hasil penelitian yang telah dilakukan dapat menjelaskan manfaat belimbing merah. Buah belimbing  merah  juga  memiliki  efektivitas  dalam  melawan  bakteri  (Ibrahim et  al. ,  2013).    Penelitian Mikail et  al .  (2015)  memperoleh  hasil  bahwa  kulit  buah  belimbing  merah  efektif  mengatasi hypercholesterolemic ,  mencegah arterosclerosis dan  mencegah  penyakit  jantung.  Hasil  penelitian (Momand et  al .  (2014)  menjelaskan  bahwa  pertumbuhan  bakteri  patogen Streptococcus pneumoniae , Klebsiella pneumoniae dan Pseudomonas  aeruginosa dihambat  oleh  senyawa  antibakteri  yang terkandung  dalam  buah.  Hazali et  al .  (2015)  menjelaskan  bahwa  jus  kulit  buah  belimbing  merah  yang mengandung  flavonoid  berpotensi  menurunkan  dan  menghambat  aktivitas  lipid  peroksidase  dan menginduksi aktivitas enzim antioksidan.
Banyaknya manfaat yang terkandung dalam belimbing merah menyebabkan eksploitasi terhadap tanaman  ini  semakin  meningkat.  Kendala  yang  dialami  adalah  tanaman  belimbing  merah  yang  tersebar belum  merata.  Masa  reproduksi  atau  waktu  berbuah  tanaman  belimbing  merah  terjadi  sekali  dalam setahun.  Setiap  musim  buah,  kendala  lainnya  ditemukan  buah  yang  tidak  berdaging  dan  tidak  berbiji (Sudarmono,  2018).  Perbanyakan  tanaman  belimbing  merah  secara in  vitro belum  ada  informasinya, sehingga  perlu  dilakukan  perbanyakan  secara in  vitro salah  satunya  dengan  kultur  kalus  dari  daun belimbing merah.
Kultur kalus dapat dilakukan untuk berbagai tujuan  diantaranya untuk perbanyakan bibit  ataupun untuk  memperoleh  metabolit  sekunder.  Kultur  daun Pimpinella  alpina pada  media  MS  berhasil menginduksi kalus untuk tujuan perbanyakan (Faramayuda et al ., 2022).  Penelitian Hemmati et al. (2020) berhasil  menginduksi  kalus  dari  daun,  petiol  dan  meristem  apikal  dari Salvia  tebesana Bunge  untuk tujuan  mendapatkan  senyawa  fenolik  yang  berfungsi  sebagai  antioksidan.  Menurut  Bhojwani  &  Dantu, (2013),  kalus  umumnya  terbentuk  pada  jaringan  yang  terluka  dan  merupakan  massa  sel  yang  belum terdiferensiasi. Kalus dapat diinduksi dari jaringan meristematik dan jaringan dewasa atau jaringan yang telah  mengalami  diferensiasi.  Namun  jaringan  meristematik  lebih  mudah  untuk  diinduksi  membentuk
kalus  karena  sel-selnya  memiliki  aktivitas  pembelahan  sel  yang  tinggi.  Astuti et  al .  (2020)  menjelaskan bahwa keberhasilan kultur untuk menginduksi kalus sangat tergantung pada sumber eksplan, tipe zpt dan kombinasi  konsentrasi  zpt.  Eksplan  potongan  daun  dari  perkecambahan in  vitro biji  dapat  digunakan untuk pembentukan kalus.
Trigiano  &  Gray  (2005)  menjelaskan  bahwa  dalam  kultur  jaringan  auksin  merupakan  zpt  yang paling sering digunakan untuk induksi kalus dan pertumbuhan  sel, sedangkan sitokinin digunakan untuk merangsang  pembelahan  sel.    2,4-D  dan  kinetin  merupakan  zpt  jenis  auksin  dan  sitokinin  sintetik  yang umum  digunakan  untuk  kultur  kalus.  Dwiyani  (2015)  menjelaskan  bahwa  rasio  zat  pengatur  tumbuh auksin  dan  sitokinin  yang berimbang  di dalam  media  akan mendorong  terbentuknya  kalus  pada  eksplan yang ditanam.  Menurut Koelling (2017)  pemilihan zpt 2,4-D dilakukan karena jumlah kandungan gugus karboksil 2,4-D yang memiliki karbon dan oksigen sehingga aktivitasnya yang lebih stabil, zpt ini mampu untuk  memacu  proses  deferensiasi  sel,  menekan  organogenesis.  Pemilihan  kinetin  digunakan  untuk mengatur  diferensiasi  kalus  menjadi  jaringan-jaringan  khusus  seperti  akar  dan  tunas.  Sitokinin  jenis kinetin bersifat tahan terhadap degradasi.
Penggunaan  zpt  pada kultur  kalus untuk  mempercepat  pertumbuhan kalus  telah  dibuktikan  dalam beberapa  penelitian.  Penelitian  yang  dilakukan  Musthofa  (2018)  menunjukkan  bahwa  waktu  muncul kalus pada kultur daun nilam Aceh ( Pogostemon cablin Benth.) dengan pemberian konsentrasi 1,3 mg/L - 1,4 mg/L 2,4-D dan 0,75 mg/L – 1 mg/L kinetin lebih baik dibandingkan perlakun kontrol. Hasil penelitian Rahayu et al . (2003) didapatkan penambahan 0,5 ppm 2,4-D dan 0,5 ppm  kinetin  pada  media MS ( Murashige Skoog ) dapat mempercepat waktu muncul kalus pada eksplan daun Acalypha indica . Berdasarkan uraian di atas, maka  dilakukan  penelitian  mengenai  pertumbuhan  kalus  dari  daun  tanaman  belimbing  merah ( Baccaurea angulata ) secara in vitro dengan  penambahan zpt 2,4-D dan kinetin.

## METODE

## Lokasi dan waktu penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimen  yang  dilakukan  di  Laboratorium  Kultur  Jaringan, UPT  Laboratorium  Terpadu  dan  Laboratorium  Kultur  Jaringan,  Jurusan  Biologi,  FMIPA,  Universitas Tanjungpura, Pontianak dari bulan April 2022 hingga Januari 2023.

## Bahan dan alat
Autoklaf  untuk  sterilsasi,  alat-alat  gelas,  hot  plate,  kompor,  Laminar  Air  Flow  Cabinet  (LAFC), kertas  saring,  magnetic  stirrer,  indikator  pH,  pinset,  pisau  skalpel,  pipet  ukur  dan  timbangan  analitik digunakan  sebagai  penunjang  penelitian.  Agar,  air  destilasi,  etanol  70%,  buah  belimbing  merah ( Baccaurea  angulata ),  2,4-D  ( Dichlorophenoxyacetic  Acid ),  kinetin  (6- furfuryl  amino  purine ),  kloroks, deterjen, gula, larutan stok, media Murashige dan Skoog (MS), asam klorida (HCl), natrium hidroksida (NaOH), dan spiritus adalah bahan penelitian yang digunakan.

## Pelaksanaan penelitian
Penelitian  ini  disusun  berdasarkan  rancangan  acak  lengkap  faktorial  yang  terdiri  dari  2  faktor. Faktor pertama: enam taraf konsentrasi 2,4-D ( 0 ppm; 0,5 ppm; 1 ppm; 1,5 ppm; 2 ppm; 2,5 ppm) dan Faktor  kedua  :  enam  taraf  konsentrasi  kinetin  (0  ppm;  0,5  ppm;  1  ppm;  1,5  ppm;  2  ppm;  2,5  ppm). Kombinasi perlakuan adalah 36  kombinasi, masing-masing perlakuan dilakukan pengulangan sebanyak 3 kali sehingga diperoleh 108 unit percobaan.

## Sterilisasi Alat
Semua  alat  gelas  dan  alat  tanam  seperti  pinset,  tangkai  skalpel  sebelum  digunakan dicuci  dengan sabun  cair  dan  dibilas  dengan  air  mengalir  hingga  bersih  dan  dikeringanginkan.  Selanjutnya  alat-alat dibungkus dengan plastik mika dan dimasukkan ke dalam alat untuk sterilisasi (autoklaf).  Alat sterilisasi diatur pada suhu 121°C, tekanan 1 atm selama 30 menit.

## Pembuatan dan Sterilisasi Media
Media  yang  digunakan  terdiri  atas  media  perkecambahan  dan  media  kultur  (media  agar). Pembuatan  media  perkecambahan  dilakukan  dengan  cara  membasahikan  kapas  dengan  akuades  steril selanjutnya  dimasukkan  pada  botol  kultur.  Botol  ditutup,  kemudian  disterilisasi  pada  suhu  121°C  dan tekanan 1 atm selama 30 menit.  Media kultur dibuat  dengan cara menimbang gula pasir (30 g/L ) yang dilarutkan dengan akuades di dalam gelas beaker menggunakan alat pengaduk magnetic stirer . Larutan stok    hara  MS  dalam  bentuk  stok  A,  B,  C,  D,  E,  F,  G  dan  H  dipipet  dengan  volume  sesuai  tingkat kepekatan larutan dan volume media yang akan dibuat.  Agar dilarutkan dengan akuades dan dipanaskan sampai mendidih. Larutan hara dan gula dicampur dengan larutan agar dan dicukupkan volumenya sesuai jumlah kombinasi yang akan dibuat dengan menambahkan akudes.
Langkah  berikutnya,  media  dibagi  ke  dalam  wadah  yang  berbeda.  Media  ditambah  2,4  D  dan kinetin  sesuai  perlakuan,  selanjutnya  masing-masing  media  perlakuan  ditepatkan  sesuai  volume  yang akan  dibuat  dengan  penambahan  akuades,  setelah  itu  diukur  pH  larutan  hingga  pH  5-6.  Penaturan  pH menggunakan  NaOH  dan  HCl.  Sterilisasi  media  diatur  pada  suhu  121°C  dan  tekanan  1  atm  selama  30 menit menggunakan autoklaf.

## Sterilisasi Buah
Buah  belimbing  merah  dicuci  dengan  sabun  cair  dan  dibilas  dengan  air.  Sterilisasi  permukaan dilanjutkan  di  bawah  air  mengalir  selama  30  menit.  Buah  yang  telah  dicuci  kemudian  disterilkan menggunakan  kloroks  bertingkat  yaitu  5%,  10%,  15%,  alkohol  70%.    Setelah  itu,  buah  dibilas  3  kali dengan  akuades  steril  masing-masing  selama  1  menit. Prosedur  sterilisasi  buah  yang  dilakukan  menurut prosedur Gultom et al. (2012) yang dimodifikasi.

## Perkecambahan Biji
Perkecambahan biji diawali dengan penanaman biji pada media perkecambahan yang dilakukan di Laminar Air Flow Cabinet .  Buah yang telah steril kemudian dibelah untuk mengambil bijinya.  Bagian kulit ari biji dibuang, selanjutnya biji ditanam pada media perkecambahan. Setiap botol ditanam sebanyak
2-3  biji.  Botol  ditutup  dengan  plastik  mika  dan  diikat  lalu  diberi  label  tanggal  penanaman,  di  inkubasi selama 28 hari dan disimpan pada rak kultur.

## Penanaman Eksplan
Eksplan yang digunakan adalah daun dari kecambah belimbing merah. Proses penanaman diawali dengan mengeluarkan kecambah dari media kapas. Selanjutnya kecambah diletakkan di cawan petri dan dilakukan  pemotongan  eksplan  daun.  Ukuran  eksplan  daun  yang  digunakan  ±  1x1  cm.  Eksplan  daun kemudian ditanam  pada  media  sesuai  perlakuan  yang  sudah  ditentukan.  Satu botol  ditanam  2-3  eksplan daun. Eksplan yang sudah ditanam pada media diberi label tanggal penanaman.

## Analisis data
Waktu  muncul  kalus,  bobot  basah  dan  bobot  kering  kalus  yang  merupakan  data  kuantitatif dianalisis secara statistik menggunakan ANOVA ( Analysis of Variance ) menggunakan aplikasi SPSS 26. Warna  dan  tekstur  kalus  yang  diperoleh  dianalisis  secara  deskriptif.  Perlakuan  yang  berpengaruh nyata, diuji lanjut menggunakan Duncan’s Multiple Range Test (DNMRT) pada taraf 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Waktu muncul kalus
Berdasarkan  analisis statistik faktor tunggal 2,4-D, faktor tunggal kinetin dan faktor interaksi 2,4- D  dan  kinetin  memperlihatkan  pengaruh  yang  signifikan  terhadap  rerata  waktu  muncul  kalus  (Tabel  1, Gambar  1).  Perlakuan  yang  menunjukkan  rerata  waktu  muncul kalus  tercepat  adalah  perlakuan D0K0,5 ppm; D2,5K0,5 ppm dan D1,5K2,5 ppm dengan rerata waktu muncul kalus 6 hst. Sedangkan rerata waktu muncul  kalus  terlama  adalah  14  hst  ditunjukkan  oleh  perlakuan  kombinasi  D1K1,5;  D2,5K2;  dan D0,5K2,5 ppm yang juga berbeda nyata terhadap kontrol dan beberapa perlakuan lainnya.
Tabel 1. Rerata waktu muncul kalus pada kultur daun B. angulata umur 28 hst dengan penambahan 2,4-D dan kinetin Rerata Waktu Muncul Kalus (hst) 2,4-D (ppm) Kinetin (ppm) Rerata 0 0,5 1 1,5 2 2,5 0 7,67±0, 58 cde 6,00 ±0, 00 a 12,33±0, 58 ijk 11,67± 1,16 ij 12,67±0, 58 jk 9,33±0 .58 fgh 9,94 B 0,5 7,67±0, 58 cde 8,67±0, 58 efg 13,33±0, 58 kl 11,67±0, 58 ij 6,67 ±0, 58 ab
14,00±0, 00 l 10,33 C 1 7,00±0, 00 bc 12,33±0, 58 ijk 7,33±0, 58 bcd 14,00±0, 00 l 11,67±0, 58 ij 12,67±0, 58 jk 10,83 D 1,5 10,00± 1,00 h 6,67 ±0, 58 ab 11,33±0, 58 i 10,00±0, 00 h 13,33±0, 58 kl 6,00 ±0, 00 a 9,56 B 2 7,00±0, 00 bc 9,67±0, 58 gh 8,33±0, 58 def 12,33± 1,16 ijk 7,67±0, 58 cde 9,33±0, 58 fgh 9,06 A 2,5 11,33±0, 58 i 6,00 ±0, 00 a 10,00±0, 00 h
9,33±0, 58 fgh 14,00±0, 00 l 8,67±0, 58 efg 9,89 B Rerata 8,44 A 8,22 A 10,44 C 11,50 E 11,00 D 10,00 B
Keterangan:  Nilai  rata-rata  yang  diikuti  oleh  huruf  besar  dan  huruf  kecil  yang    sama  menunjukkan  hasil  yang tidak berbeda nyata pada taraf 5% berdasarkan uji lanjut Duncan.
Gambar 1. Waktu muncul kalus kultur daun B. angulata pada perlakuan D 1,5 K 2,5 ppm . A. eksplan daun setelah tanam; B. eksplan daun berkalus (Keterangan dilingkari=kalus).
Waktu  muncul  kalus  diamati  setelah  satu  hari  penanaman  (Gambar  1A).  Awal  munculnya  kalus ditandai  dengan  eksplan  yang  mengalami  pembengkakan.  Hal  tersebut  terjadi  karena  eksplan  menyerap zpt dan unsur hara yang ada pada media. Kombinasi zpt yang ditambahkan pada media menyebabkan air dapat  masuk  secara  difusi  ke  dalam  sel  karena  permeabilitas  dinding  sel  yang  berubah.  Masuknya  air akan  menyebabkan  terjadinya  pembesaran  pada  sel  daun.  Perkembangan  selanjutnya,  kalus  mulai terbentuk  pada  eksplan  di  bagian  tepi  bekas  sayatan  daun  ditandai  dengan  adanya  pertambahan  sel berwarna  putih yang  tumbuh  di  tepi  eksplan yang  terluka  (Gambar  1B). Pembengkakan dan  munculnya kalus putih tersebut diduga bahwa eksplan sudah merespon media yang diberikan yang selanjutnya akan melakukan  pembelahan  sel  (proliferasi).  Sel-sel  eksplan  yang  berkontak  langsung  dengan  media  secara aktif  akan  membelah  membentuk  kalus  yang  merupakan  jaringan  penutup  luka.  Hal  tersebut  sesuai dengan pernyataan yang dikemukakan oleh Indah & Ermavitalini (2013) bahwa pada bagian eksplan yan dilukai akan menunjukkan respon berupa munculnya sel putih atau bening yang akan terus membelah dan tumbuh membentuk kalus.
Berdasarkan  Tabel  1,  Perlakuan  kombinasi  D 2,5 K 0,5; D 0 K 0,5 ;  D 1,5 K 2,5 ;  D 1,5 K 0,5 ;  dan  D 0,5 K 2 ppm merupakan  konsentrasi  yang  menginduksi  kalus  paling  cepat.  Perlakuan  tersebut  menunjukkan  bahwa 2,4-D  dan  kinetin  berfungsi  untuk  menginduksi  kalus  pada  eksplan.  Pemberian  2,4-D  dan  kinetin  pada media  sudah  efektif  dan  seimbang  untuk  pembentukan  kalus.  Penelitian  Novitasari  &  Isnaini  (2021), memperoleh  hasil  bahwa  penggunaan  2,4-D  2  mg/L  dan  kinetin  0,5  mg/L  mampu  menghasilkan  waktu tercepat induksi kalus daun Nepenthes gracilis , karena saat zpt eksogen yang diberikan dan zpt endogen dalam  keadaan  setimbang  dan  tepat  sehingga  mampu  merangsang  pembelahan  sel  dalam  jaringan tanaman  dengan  cepat.  Berdasarkan  perlakuan  tunggal  2,4-D  waktu  muncul  tercepat  ditunjukkan  pada konsentrasi 2 ppm dengan rerata waktu muncul kalus yaitu 9,06 hst, sedangkan perlakuan tunggal kinetin waktu  muncul  tercepat  ditunjukkan  pada  konsentrasi  0,5  ppm  dengan  rerata  waktu  muncul  kalus  yaitu 8,22 hst. Sehingga untuk mempercepat waktu tumbuh kalus dibutuhkan kombinasi yang tepat antara 2,4- D  dan  kinetin.  Menurut  Lestari  (2011)  penggunaan  zpt  dalam  kultur  jaringan  memiliki  peran  mengatur kecepatan pertumbuhan kalus.
Perlakuan yang menunjukkan respon tumbuh kalus paling lama adalah D 2,5 K 2 ; D 0,5 K 2,5 dan D 1 K 1,5 ppm, diduga karena zpt yang diberikan belum tepat dan sesuai.  Hasil ini menunjukkan bahwa kombinasi
zpt  yang  diberikan  tidak  menghasilkan  perimbangan  rasio  auksin  dan  sitokinin  endogen  jaringan, sehingga  pertumbuhan dan perkembangan  kalus  terhambat  dan  menjadi  lebih  lama  dibanding perlakuan D 2,5 K 0,5 D 0 K 0,5 ;  D 1,5 K 2,5 ;  D 1,5 K 0,5 ;  dan  D 0,5 K 2 ppm. Hasil  penelitian  Karimian et  al .  (2014)  menjelaskan bahwa  ada  batasan  konsentrasi  2,4-D  dan  kinetin  yang  dapat  menyebabkan  peningkatan  pertumbuhan pada  kalus Taxus  brevifolia Nutt.    Dijelaskan  bahwa  2,4-D  pada  konsentrasi  lebih  tinggi  1  mg/L  masih memberikan pengaruh meningkatkan bobot basah kalus, namun pada konsentrasi 1,5 mg/L menyebabkan pertumbuhan kalus yang melambat.  Sementara itu, kinetin pada konsentrasi di atas 0,5 mg/L mempunyai efek  menghambat  pertumbuhan  kalus.  Menurut  Asra  et  al.  (2020)  pertumbuhan  dan  perkembangan jaringan  tanaman  dapat  ditingkatkan,  dihambat  ataupun  diubah  oleh  zpt  yang  aktif  bekerja  pada kosentrasi rendah.

## Tekstur dan Warna Kalus
Tekstur kalus yang terbentuk pada penelitian ini yaitu kalus kompak dan remah. Warna kalus yang dihasilkan  bervariasi  yakni  warna  putih,  kecokelatan  dan  cokelat  (Tabel  2,  Gambar  2,  Gambar  3  dan Gambar 4).
Tabel 2. Tekstur kalus dan warna kalus kultur daun B. angulata pada media MS dengan penambahan 2,4-D dan kinetin umur 84 hst konsentrasi ZPT (ppm) warna kalus tekstur kalus Respon lain 2,4-D Kinetin 0 0 putih, cokelat kompak - 0,5 kecokelatan, cokelat kompak - 1,0 kecokelatan remah - 1,5 putih, kecokelatan kompak - 2,0 cokelat kompak - 2,5 kecokelatan remah - 0,5 0 cokelat kompak - 0,5 cokelat kompak - 1,0 kecokelatan kompak - 1,5 putih, cokelat kompak - 2,0 putih, kecokelatan kompak - 2,5 putih, kecokelatan kompak akar 1,0 0 putih, kecokelatan, cokelat remah - 0,5 cokelat kompak - 1,0 cokelat kompak - 1,5 kecokelatan, cokelat kompak akar 2,0 cokelat kompak - 2,5 putih, kecokelatan kompak - 1,5 0 putih, kecokelatan kompak - 0,5 cokelat, kecokelatan kompak -
1,0 Cokelat kompak - 1,5 Cokelat kompak - 2,0 putih, kecokelatan kompak - 2,5 Cokelat remah - 2,0 0 putih, kecokelatan kompak - 0,5 putih, cokelat remah - 1,0 putih, kecokelatan remah akar 1,5 Cokelat remah - 2,0 Cokelat remah - 2,5 putih, cokelat kompak - 2,5 0 putih, kecokelatan remah - 0,5 putih, cokelat remah - 1,0 putih, kecokelatan kompak - 1,5 kecokelatan kompak akar 2,0 Cokelat kompak - 2,5 putih, kecokelatan kompak -
Gambar  2 .  Warna  kalus  pada  kultur  daun B.  angulata umur  84  hst  dengan  penambahan  2,4-D  dan  kinetin.
A. Perlakuan D 2,5 K 0,5 ppm. B. Perlakuan D 0 K 1 ppm. C. Perlakuan D 2 K 1,5 ppm. (a. Putih; b. kecokelatan; c.cokelat).
Gambar 3 . Tekstur kalus pada kultur daun B. angulata umur 84 hst dengan penambahan 2,4-D dan kinetin. A. Perlakuan D 1 K 2,5 ppm. B. Perlakuan D 0 K 2,5 ppm (a. kalus kompak; b. kalus remah).
Respon  lain  yang  diperoleh  selain  kalus,  warna  kalus  dan  tekstur  kalus  adalah  adanya pertumbuhan akar pada beberapa perlakuan (Gambar 4).
Gambar 4 .  Akar dari kalus daun B. angulata pada  perlakuan A. D 1 K 1,5 ; B. D 2,5 K 1,5 (lingkaran=akar).
Warna  kalus  diperoleh  dengan  pengamatan  secara  visual.  Secara  umum  pada  semua  perlakuan warna kalus yang terbentuk di akhir pengamatan berwarna putih, kecokelatan hingga cokelat. Arieswari et al. (2018); Martinez et al. (2021),  menjelaskan  bahwa keadaan warna kalus pada akhir pengamatan dapat bervariasi  ditentukan  oleh  beberapa  faktor  seperti  adanya  pigmentasi,  cahaya  dan  eksplan.  Perubahan warna  kalus  terjadi  karena  adanya  perubahan  tahapan  pertumbuhan  sel.    Pada  tahap  awal  sel-sel  muda berwarna  putih  menunjukkan  karakter  sel  yang  aktif  membelah.  Tahap  pertumbuhan  selanjutnya  kalus akan  memperlihatkan  warna  putih-kekuningan  hingga kecokelatan  dan  cokelat.  Hasil  yang  diperoleh di akhir pengamatan pada Tabel 2 warna kalus yang terbentuk adalah putih, cokelat dan kecokelatan. Warna kalus  yang  terbentuk  berwarna  putih  dan  setelah  itu  menjadi  putih  kehijauan,  putih  kekuningan  hingga kecokelatan.  Menurut  Ariati et  al .  (2012)  kalus  yang  berwarna  putih  umumnya  tersusun  atas  sel embrionik  dengan  kandungan  butir  pati  yang  tinggi.  Hal  ini  sesuai  dengan  Rasud  &  Bustaman  (2020), bahwa kalus yang karakteristiknya berwarna putih merupakan sel-sel yang sedang aktif membelah. Kalus yang  berwarna  kecokelatan  disebabkan  oleh  kondisi  eksplan  yang  diduga  secara  internal  mempunyai kandungan  fenol  tinggi, penyebab  lainnya  adalah  penambahan  zpt  auksin  sehingga dapat  menyebabkan kalus  berwarna  lebih  gelap  atau  cokelat.    Hasil  penelitian  Setiawati et  al .  (2019)  menjelaskan  bahwa warna  kalus  yang  berubah  menjadi  cokelat  menunjukkan  kondisi  kalus  yang  memasuki  fase  stasioner (penuaan),  selain  itu  karena  kandungan  fenol  yang  ada  dalam  kalus.  Selanjutnya  Dar et  al .  (2021) menjelaskan  bahwa  kalus  yang  berwarna  hijau,  kuning,  cokelat  hingga  kecokelatan  dapat  mengandung senyawa seperti tannin, sehingga baik untuk menghasilkan metabolit sekunder .
Tekstur kalus yang diperoleh berdasarkan pengamatan secara visual menunjukkan hasil kalus yang bertekstur  kompak  dan  bertekstur  remah  (Tabel  2).  Kalus  yang  memiliki  tekstur  remah  dihasilkan  dari perlakuan  pemberian  1,5  ppm,  2  ppm  dan  2,5  ppm  2,4-D  yang  dikombinasikan  dengan  berbagai konsentrasi  kinetin.  Perbedaan  tekstur  tersebut  diduga  karena  adanya  perbedaan  konsentrasi  zpt  yang diberikan pada media. Pemberian konsentrasi 2,4-D yang lebih tinggi memungkinkan terbentuknya kalus remah  yang  semakin  besar.  Hasil  yang  sama  diperoleh  dari  penelitian  Khalida et  al .  (2019)  yang menyatakan  bahwa  kalus  bertekstur  remah  yang  dihasilkan  pada  kultur  anggrek  lilin  ( Aerides  odorata
Lour.)  dengan  penambahan konsentrasi  2,4-D yang  semakin  tinggi. Auksin  2,4-D  yang diberikan  dalam konsentrasi  tinggi,  dapat  merangsang  pembelahan  sel  yang  tidak  terkendali  dan  mengarah  pada pembentukan  sejumlah  besar  sel  yang  belum  matang  dan  tidak  memiliki  fungsi  yang  spesifik.  Sel-sel kalus tidak mengalami diferensiasi normal, sehingga kalus yang terbentuk menjadi lebih remah atau tidak terstruktur. Kalus bertekstur kompak karena pertumbuhan sel dalam kalus terjadi dengan lebih teratur dan terkendali.  sel-sel  cenderung  mengalami  diferensiasi  lebih  lanjut  menjadi  jaringan  yang  lebih  mirip dengan  jaringan  tanaman  normal  seperti  terbentuknya  akar,  tunas  dan  lainnya.  Kalus  yang  memiliki tekstur kompak diduga karena adanya kemampuan yang berbeda pada jaringan tanaman dalam menyerap unsur  hara  dan  zpt yang  diberikan dalam  media.  Selain  itu  pada  kalus  kompak  terjadi  proses  lignifikasi yaitu  terbentuknya  lignin  pada  dinding  sel.  Menurut  Anniasari et  al .  (2016)  bahwa  kalus  yang  keras, kompak dan padat terbentuk saat sel kalus yang tumbuh mengalami lignifikasi.
Selain  warna,  tekstur,  bobot basah,  dan  bobot  kering  pada  kalus,  respon  lain  yang  muncul  adalah adanya  pertumbuhan  akar  pada  beberapa  perlakuan  yakni  D 2 K 1 ;  D 1 K 1,5 ;  D 2,5 K 1,5 ;  dan  D 0,5 K 2,5 ppm. Pertumbuhan  akar  tersebut  mulai  terlihat  pada  subkultur  kedua.  Sel-sel  kalus  cenderung  mengalami diferensiasi  lebih  lanjut  menjadi  jaringan  yang  lebih  mirip  dengan  jaringan  tanaman  normal  seperti terbentuknya akar, tunas dan lainnya. Hal ini diduga auksin eksogen dan auksin endogen sudah tepat dan sesuai sehingga pada perlakuan tersebut eksplan merespon dengan pembentukan akar adventif pada kalus. Bhojwani  &  Razdan  (1996)  menjelaskan  bahwa  eksplan  yang  tumbuh  dan  berdiferensiasi  serta beregenerasi  membentuk  organ  sangat  ditentukan  oleh  perbandingan  auksin  dan  sitokinin  di  dalam jaringan. Hal ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan Setiawati et al . (2019) yang menyatakan bahwa apabila  auksin  yang  ditambah  sudah  tepat  dan  sesuai  maka  akan  memacu  pembentukan  akar  adventif pada kalus.

## Bobot Basah dan Bobot Kering Kalus
Berdasarkan  analisis  statistik  faktor  tunggal  2,4-D  (F5,72)  =  1,65,  p  =  0,157;  ANOVA),  faktor tunggal  kinetin  (F5,72)  =  2,29,  p  =  0,054;  ANOVA)  dan  faktor  interaksi  antara  2,4-D  dan  kinetin (F25,72) = 0,74, p = 0,793; ANOVA) tidak menunjukkan pengaruh yang signifikan terhadap rerata bobot basah kalus (Tabel 3).
Tabel 3. Rerata bobot basah kalus pada kultur daun B. angulata umur 84 hst dengan penambahan 2,4-D dan kinetin
Rerata Bobot Basah Kalus (g) 2,4-D (ppm) Kinetin (ppm) Rerata 0 0,5 1 1,5 2 2,5 0 0,400±0,10 0,433±0,15 0,400±0,17 0,433±0,06 0,467±0,06 0,500±0,26 0,439 0,5 0,267±0, 06 0,600±0, 26 0,367±0, 11 0,267±0, 06 0,400±0, 20 0,367±0, 06 0,378 1 0,267±0, 06 0,667±0, 23 0,333±0, 15 0,400±0, 17 0,433±0, 15 0,300±0, 10 0,400 1,5 0,367±0, 15 0,433±0, 15 0,400±0, 20 0,333±0, 23 0,300±0, 17 0,400±0, 17 0,372 2 0,567±0, 06 0,500±0, 26 0,367±0, 06 0,300±0, 10 0,400±0, 00 0,300±0, 00 0,406 2,5 0,367±0, 21 0,433±0, 25 0,467±0, 21 0,533±0, 21 0,433±0, 15 0,467±0, 15 0,450 Rerata 0,372 0,511 0,389 0,378 0,406 0,389
Berdasarkan  analisis  statistik  faktor  tunggal  2,4-D  (F5,72)  =  1,65,  p  =  0,157;  ANOVA),  faktor tunggal  kinetin  (F5,72)  =  2,29,  p  =  0,054;  ANOVA)  dan  faktor  interaksi  antara  2,4-D  dan  kinetin (F25,72)  =  0,74,  p  =  0,793;  ANOVA)  tidak  menunjukkan  pengaruh  nyata  terhadap  rerata  bobot  kering kalus (Tabel 4).
Tabel 4 . Rerata bobot kering kalus pada kultur s daun B. angulata 84 hst dengan penambahan 2,4-D dan kinetin
Rerata Bobot Kering Kalus (g) 2,4-D (ppm) Kinetin (ppm) Rerata 0 0,5 1 1,5 2 2,5 0 0,023±0,00 0,013±0,01 0,020±0,01 0,010±0,00 0,017±0,01 0,023±0,01 0,018 0,5 0,010±0,01 0,040±0,04 0,013±0,01 0,017±0,01 0,033±0,03 0,010±0,00 0,021 1 0,013±0,01 0,040±0,01 0,017±0,01 0,033±0.03 0,020±0,02 0,023±0,02 0,024 1,5 0,013±0,01 0,030±0,01 0,023±0,01 0,010±0,00 0,010±0,01 0,011±0,01 0,016 2 0,030±0,01 0,037±0,03 0,013±0,01 0,020±0,01 0,037±0,04 0,013±0,01 0,025 2,5 0,014±0,01 0,040±0,03 0,027±0,02 0,043±0,03 0,043±0,04 0,020±0,02 0,031 Rerata 0,017 0,033 0,019 0,022 0,027 0,017
Pengamatan  bobot  basah  dan  bobot  kering  kalus  dilakukan  di  akhir  pengamatan  pada  hari  ke-84 hst.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan 2,4-D dan kinetin yang diberikan tidak berpengaruh terhadap bobot basah dan bobot kering kalus.  Hasil ini menunjukkan bahwa perlakuan 2,4-D dan kinetin baik  secara  tunggal  ataupun  kombinasi    mampu  menyebabkan  perubahan  rasio  auksin  dan  sitokinin endogen  jaringan  menjadi  berimbang.  Perimbangan  rasio  auksin  sitokinin  endogen  jaringan  akan menyebabkan  pembesaran  sel  kalus.    Pembesaran  sel  disebabkan  oleh  peningkatan  permeabilitas  sel terhadap air akibat 2,4-D yang diberikan sehingga air dan nutrisi akan berdifusi masuk ke dalam sel  dan menyebabkan pertambahan berat basah kalus. Penambahan kinetin berperan dalam pembelahan sel. Ulva et  al .  (2019)  menjelaskan  bahwa  terjadinya  pertambahan  bobot  basah  kalus  disebabkan  karena bertambahnya  jumlah  sel  dan  masuknya  air  dari  media  ke  dalam  sel    yang  mengakibatkan  pembesaran sel.    Air  dapat  masuk  ke  dalam  karena  terjadinya  peningkatan  permeabilitas  sel  terhadap  air  diiringi menurunnya  tekanan  dinding  sel  yang  dipengaruhi  oleh  auksin  sehingga  terjadi  kenaikan  volume  sel. Pertumbuhan sel kalus terjadi karena meningkatkan pembelahan sel akibat pengaruh sitokinin.
Pertumbuhan  kalus  didasarkan  pada  bobot  kering  kalus.  Hasil  analisis  Anova  yang  dilakukan (Tabel  4)  diketahui  bahwa  pemberian  zpt  2,4-D  dan  kinetin  tidak  berpengaruh  nyata  terhadap  bobot kering  kalus,  namun  menghasilkan  rerata  bobot  kering  yang  berbeda  pada  setiap  perlakuan.  Secara fisiologis  bobot  basah  kalus  terdiri  atas  kandungan  air  dan  karbohidrat.  Karbohidrat  digunakan  dalam sintesis protein untuk produksi metabolit sekunder. Air yang ada pada kalus ketika di keringkan menguap, hilang  dan  mengurangi  ukuran  kalus,  sehingga  perlakuan  kombinasi  yang  diberikan  tidak  berpengaruh nyata  terhadap  bobot  kering  kalus.  Sanchez  &  Demain  (2011)  menjelaskan  bahwa  sebagian  nutrisi  di dalam media seperti sumber  karbon, nitrogen dan energi digunakan oleh sel untuk membentuk senyawa
metabolit  sekunder  yang  tidak berfungsi  secara  langsung  terhadap pertumbuhan,  namun  berperan  dalam mekanisme pertahanan terhadap cekaman lingkungan.

## KESIMPULAN
Pemberian 2,4-D dan kinetin menunjukkan pengaruh yang signifikan terhadap waktu muncul kalus, dan tidak berpengaruh nyata terhadap bobot basah dan bobot kering kalus daun belimbing merah.  Kalus yang  dihasilkan  bertekstur  kompak  dan  remah  dengan  warna  kalus  putih,  kecokelatan  dan  cokelat. Respon  lain  yang  muncul  yaitu  terbentuknya  akar  pada  perlakuan  D 1 K 1,5 ; D 0,5 K 2,5 ;  D 2,5 K 1,5 dan  D 2 K 1 ppm.
Untuk perbanyakan kalus daun belimbing merah  dapat digunakan konsentrasi  zpt 2,5 ppm 2,4-D dan  0,5  ppm  kinetin;  1,5  ppm  2,4-D  dan  2,5  ppm  kinetin.  Perlu  adanya  penelitian  lebih  lanjut  untuk mengetahui jenis fitokimia yang terkandung dalam kalus daun belimbing merah.  .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  penulis  ucapkan  kepada  tim  penelitian  DIPA  FMIPA  Untan  dengan  nomor kontrak 2894/UN22.8/PT.00/2022 yang telah memayungi penelitian ini.

## DAFTAR RUJUKAN
Anniasari  TD,  Putri  RBA.,  &  Muliawati  ES.  (2016).  Penggunaan  BA  dan  NAA  untuk  merangsang pembentukan tunas lengkeng dataran rendah (Dimocarpus longan) secara in vitro. Bioteknologi 13 (2): 43-53. , DOI: 10.13057/biotek/c130201
Ariati,  SN.,  Muslimin,  W.,  &  Suwastika,  I.N.  (2012).  Induksi  kalus  kakao  (Theobroma  cacao  L.)  pada media MS dengan penambahan 2,4-D, BAP dan air kelapa. Jurnal natural science. 1(1): 74-78.
Arieswari  NNN.,  Astarini  IA., Astiti  NPA., &  Pramana  J.  (2018). In  Vitro  Callus  Induction  Of ‘Shiraz’ Grape  ( Vitis  vinifera L.)  Using  Different  Medium  And  Growth  Regulator  Combination. International Journal Of Bioscience And Biotechnology , 6(1): 25-33.
Asra, R., Ririn, A.S., & Mariana, S. (2020). Hormon Tumbuhan. Jakarta. UKI Press
Astuti  RD.,  Harahap  F., &  Edi S.  (2020).  Callus  Induction  of  Mangosteen  (Garcinia  mangostana  L.)  In Vitro  with  Addition  of  Growth  Regulators..  The  International  Conference  on  Sciences  and Technology Applications. doi:10.1088/1742-6596/1485/1/012029
Bhojwani SS., & Dantu PK. (2013). Plant Tissue Culture : An Introductory Text . Springer. India.
Bhojwani  SS.,  &  Razdan  MK.  (1996). Plant  Tissue  Culture:  Theory  and  Practice,  a  Revised  Edition . Elsevier. Netherlands.
Dar  SA.,  Nawchoo  IA.,  Tyub  S.,  &  Kamili  AN.  (2021).  Effect  of  plant  growth  regulators  on  in  vitro induction  and  maintenance  of  callus  from  leaf  and  root  explants  of  Atropa  acuminata  Royal  ex Lindl. Biotechnology Reports, 32: 1-5. https://doi.org/10.1016/j.btre.2021.e00688
Dwiyani, R. (2015). Kultur Jaringan Tanaman. Bali. Percetakan dan Penerbit Pelawa Sari
Faramayuda F., Irwan M., & Syam AK. (2022). The Growth of Pimpinella alpina Host Callus at Various Treatments  of  Plant  Growth  Regulator  Concentrations  of  NAA,  2,4-D  and  Its  Combination  with BAP. AGRIC.Jurnal Ilmu Pertanian , 34(2): 171-182.
Gultom  MS.,  Anna  N.,  &  Siregar  EBM.  (2012).  Respon  Eksplan  Biji  Gaharu  (Aquilaria  malaccensis Lamk.)  terhadap  Pemberian  IAA  secara  In  Vitro.  Peronema  Forestry  Science  Journal. https://www.neliti.com/id/publications/15 6144/
Gunawan, Chikmawati T., Sobir, & Sulistiyorini. (2018). Distribution, Morphological Variation and New Variety Of Baccaurea Angulata Merr. (Phyllanthaceae). Floribunda . 6(1): 1-11. https://doi.org/10.32556/floribunda.v6i1.2018.226
Hazali N., Mohd Ali MA., Ibrahim M., & Masri M. (2015). Determination of Phytocemichal and Vitamin Content  of  Underutilized  Baccaurea  angulata  Fruit.  Journal  Pharmacognosy  And  Phytochemistry 4(4): 192-196. https://www.phytojournal.com/archives/2015/vol4issue4/PartC/4-3-81.1.pdf
Hemmati  N.,  Cheniany  M.,  &  Ganjeali  A.  (2020).  Affect  of  Plant  Regulators  and  Explants  on  Callus Induction and Study of Antioxidant Potentials and Phenolic Metabolites in Salvia tebesana Bunge. Botanica SERBICA , 44(2): 163-173.
Ibrahim D., Hazali N., Jauhari N., Nor Omar M., Yahya MNA, Ahmed IA., Mikail MA., & Ibrahim M. (2013). Physicochemical and Antioxidant Characteristic of Baccaurea angulata Fruit Juice Extract. African journal of Biotechnology. 12(34): 5333-5338
Indah PN., & Ermavitalini D. (2013). Induksi Kalus Daun Nyamplung (Calophyllum inophyllum Linn.) pada Beberapa Kombinasi Konsentrasi 6-Benzylaminopurine (BAP) dan 2,4-ichlorophenoxyacetic Acid (2,4-D). Jurnal Sains dan Seni Pomits , 2(1): 1-6. https://ejurnal.its.ac.id/index.php/sains_seni/article/view/2571
Karimian  R.,  Lahouti  M.,  &  Davarpanah  SJ.  (2014).  Effects  of  Different  Concentrations  of  2,  4-D  and Kinetin on Callogenesis of Taxus Brevifolia Nutt. Journal of Applied Biotechnology Report , 1(4): 167-170. https://www.biotechrep.ir/article_69158_81453a8132c66e99d0e8c6d6f96dd8cc.pdf
Khalida,  A.,  Suwirmen  dan  Z.  A.  Noli.  (2019).  Induksi  kalus  anggrek  lilin  ( Aerides  odorata Lour.) dengan pemberian beberapa konsentrasi 2,4-D. Jurnal Biologi Universitas Andalas. 7(2): 109- 117.
Koelling C. (2017) New Frontiers in Plant In Vitro Culture . Academic Pages. New York. USA.
Lestari,  E.G.  (2011).  Peranan  Zat  Pengatur  Tumbuh  dalam    Perbanyakan  Tanaman  Melalui  Kultur Jaringan. Jurnal Agro Biogen 7(1): 63-68
Martinez  ME.,   Jorquera  L.,  Poirrier  P.,  Díaz  K.,  &  Chamy  R.  (2021).  Effect  of  the Carbon  Source  and Plant Growth Regulators (PGRs) in the Induction and Maintenance of an In Vitro Callus Culture of Taraxacum officinale (L) Weber Ex F.H. Wigg. Agronomy , 11(1181): 1-17. https://doi.org/10.3390/agronomy11061181
Mikail, M.A., Ahmed, I.A., Ibrahim, M., Hazali, N., Rasad, RMSA., Ghani RA., Hashim, R., Wahab RA., Arief  SJ.,  Md  Isa,  M.L.,  Draman,  S.,  &  Yahy  MNA.  (2015).  Baccaurea  Angulata  Fruit  Inhibits Lipid Peroxidation And Induces The Increase In Antioxidant Enzyme Activities. European Journal of Nutrition. DOI.10.1007/S00394-015-0961-7
Momand,  L.,  Zakaria,  R.,  Ibrahim,  M.,  Mikail,  M.,  Jalal,  T.,.,  &  Wahab,  R.A.  (2014).  Aintimicrobial Effect  of  Baccaurea  angulata  Fruit  Extracts  Against  Human Pathogenic  Microorganisms. Medical and Aromatic Plants. 3(4): 1-5. DOI: 10.4172/2167-0412.1000172
Musthofa A. (2018). Pengaruh Kombinasi 2,4-D (2,4 Dichloropenoxyacetic Acid) Dan  Kinetin Terhadap Induksi  Kalus  Nilam  Aceh  Varietas  Sidikalang  (Pogostemon  Cablin  Benth.).  [Skripsi].  Jurusan Biologi, Fakultas Sains dan Teknologo, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang.
Novitasari,  Y.,  &  Isnaini,  Y.  (2021).  Propagation  Of  Pitcher  Plants  (Nepenthes  gracilis  KORTH.  and Nepenthes reinwardtiana MIQ.) Through Callus Induction. Agric , Jurnal Ilmu Pertanian, 33(2), 81– 92. https://doi.org/10.24246/agric.2021.v33.i2.p81-92.
Rahayu,  B.,  Solichatun,  &  Anggarwulan,  E.  (2003).  Pengaruh  Asam  2,4-Diklorofenoksiasetat  (2,4-D) Terhadap  Pembentukan  dan  Pertumbuhan  Kalus  serta  Kandungan  Flavonoid  Kultur  Kalus Acalypha indica L. Biofarmasi. 1(1): 1-6. https://core.ac.uk/download/pdf/12345765.pdf
Rasud Y., & Bustaman. (2020). Induksi Kalus secara In Vitro dari Daun Cengkeh (Syizigium aromaticum L.)  dalam  Media  dengan  Berbagai  Konsentrasi  Auksin.  Jurnal  Ilmu  Pertanian  Indonesia  (JIPI). 25(1): 67-72. https://doi.org/10.18343/jipi.25.1.67
Sanchez, S., & Demain, A.L. (2011). Secondary Metabolites. Comprehensive Biotechnology Journal. pp. 131–143. doi: 10.1016/B978-0-444-64046-8.00012-4
Setiawati,  T.,  Alma,  A.,  &  Anandira,  W.  (2019).  Induksi  Kalus  Krisan  (Chrysanthemum  morifolium Ramat.)    dengan  Penambahan  Berbagai  Kombinasi  Zat  Pengatur  Tumbuh.  Jurnal  EduMatSains, 3(2): 119-132. https://doi.org/10.33541/edumatsains.v3i2.884
Sudarmono.  (2018).  Belimbing  Darah  ( Bacaurea  angulata  Merr.), Buah  Keluarga  Menteng  Endemik Kalimantan dan Kerabatnya. Warta Kebun Raya 16(1): 55-62.
Trigiano RN., & Gray DJ. (2005). Plant Development and Biotechnology . CRC Press. Washington D.C.
Ulva  M.,  Nurchayati  Y.,  Prihastanti  E.,  &  Setiari  N.  (2019).  Pertumbuhan  Kalus  Tomat  (Lycopersicon esculentum Mill.) Varietas Permata F1 dari Jenis Eksplan dan Konsentrasi Sukrosa yang Berbeda secara In Vitro. Life Science 8 (2): 160-169. https://doi.org/10.15294/lifesci.v8i2.37103