## UJI SENSITIVITAS ANTI BAKTERI  DAN ANTI JAMUR TERHADAP MEGABACTERIUM SECARA IN VITRO
Miranti Candrarisna 1) , Edi Boedi Santosa 2) , Sudarmanto Indarjulianto 3) , Surya Amanu 4)
Laboratorium Farmasi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Wijaya Kusuma Surabaya 1 Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Gadjah Mada Yogyakarta 2.3,4

## ABSTRAK
Uji  sensitivitas  terhadap  bakteri  megabacterium  penyebab  Megabacteriosis  pada  burung import  dilakukan  dengan  menggunakan  beberapa  anti  bakteri  seperti  :  Ampisillin,  Enrofloksasin, Eritromisin,  Klindamisin,  Kloramfenikol,  Streptomisin,  dan  Tetrasiklin.  Sedangkan  anti  jamur  yang digunakan : Griseofulvin, Ketokonazol dan Nystatin. Penelitian ini bertujuan mengkaji potensi obat anti  bakterial  dan  anti  jamur  terhadap  megabacterium.  Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium Mikrobiologi  dan  Virologi  Fakultas  Kedokteran  Hewan  Universitas  Gadjah  Mada.  Pengujian sensitivitas  beberapa  obat  anti  bakterial  dan  anti  jamur  dilakukan  dengan  menggunakan  agar  disc diffusion method (metode penghambatan cakram dish pada media Muller Hilton Agar plat) secara in vitro.  Pengamatan  dilakukan  pada  suhu  37 0 C  selama  24-48  jam  dalam  suasana  anaerob.  Hasil pengamatan berupa pembentukan diameter zona hambatan di sekitar kertas cakram. Hasil penelitian yang diperoleh dianalisis secara deskriptif. Hasil penelitian menunjukkan: megabacterium resistensi terhadap  Ampisillin,  dan  megabacterium  sangat  sensitif  terhadap  Griseofulvin,  kemudian  diikuti Enrofloksasin,  Klindamisin,  Kloramfenikol,  Nystatin,  Ketokonazol,  Eritromisin,  Tetrasiklin  dan Streptomisin.
Kata kunci : antibakterial, anti jamur, zona hambatan, megabacterium

## PENDAHULUAN
Megabacterium  adalah  suatu  bakteri  yang unik, berbentuk batang memanjang menyerupai  basillus,  berukuran  besar,  dan bersifat Gram positif. Isolasi terhadap organismeini  sangat  sulit  dilakukan,  sehingga menyulitkan  taxonominya.  Organisme  ini dikategorikan sebagai bakteri selama bertahun- tahun,  namun  hasil  penelitian  yang  terbaru menunjukkan  bahwa  organisme  ini  tergolong jamur,  karena  memiliki  inti  sel  eukariotik, mengandung  komponen  selulose  dan  khitin pada lapisan dinding sel (Latimer et.al ., 2002).
Megabacterium  merupakan  penyebab utama penyakit Megabacteriosis pada burung- burung  spesies  tertentu  yaitu  :  parkit ( Melopsittacus  undulatus ),  kakatua  ( Cacatua sulphurea  sulphurea ),  kutilang  ( Pycnonotus aurigaster )  dan  kenari  ( Serinus  canaria ) (Anderson,  1993).    Burung  kenari  dan  parkit asal  import  adalah  jenis  burung  yang  paling rentan  terinfeksi  megabaterium.  Penyakit Megabacteriosis dikenal  juga  dengan  sebutan Going  Light  Syndrome . Megabacteriosis ini mempunyai  mortilitas  sedang  (35%-40%) tetapi morbiditasnya tinggi (60%-65%). Burung yang terinfeksi megabacterium menunjukkan  gejala-gejala:  kehilangan  berat badan  yang  terus-menerus  yang  berlangsung berbulan-bulan meskipun burung masi memiliki  napsu  makan  yang  baik,  burung tampak  lesu  dan  depresi,  dan  bulu  kusam. Pada  burung  parkit  Australia  yang  mengalami kasus Megabacteriosis yang kronis menunjukkan  gejala  muntah  berlendir  campur darah dan feses menunjukkan melena, kemudian  menyebabkan  kematian  tiba-tiba (Hendrikz and Filippich, 1998 ; Latimer et.al .,
2002).
Pengobatan  penyakit Megabacteriosis dengan  pemberian  obat  antibiotika  /  anti bakterial  (golongan  Amoxillin)  ini  tidak efektif karena struktur karakteristik bakteri ini menyerupai  jamur/fungi,  maka  memungkinan organisme ini dapat dihambat pertumbuhannya dengan  obat-obatan  anti  jamur  (Talltree, 2000).
Berdasarkan struktur dan sifat megabacterium tersebut di atas, maka megabacterium sangat menarik diuji sensitivitasnya  terhadap  obat-obatan  anti bakterial dari golongan lain dan anti jamur
Tujuan  penelitian  ini  adalah  :  untuk  mengkaji potensi  beberapa  antibakterial  dan  anti  jamur terhadap  pertumbuhan megabacterium secara in  vitro.Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat memberikan  informasi  yang  penting  dalam melakukan tindakan pengobatan megabacteriosis pada burung-burung import di Indonesia.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan Agustus  2004  sampai  Oktober  2004  di Laboratorium  Mikrobiologi  dan  Virologi Fakultas  Kedokteran Hewan  Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Sampel  Megabacterium  : sampel  berupa feses  yang  diambil  di  kloaka  burung  kenari import yang diduga positif terinfeksi megabacterium.  Sampel  feses  burung  kenari import diperoleh dari beberapa pasar burung di kota Yogyakarta. Sebelum digunakan untuk uji sensitivitas  obat, Megabacterium diisolasikan dan  dikultur  pada  media  MRS  broth  (Difco), Brain  heart  infusion  broth (merck), NBS (Nitrobenzoyl  Chloride  for  Syntesis) 20%
(Oxoid) dan Saccharosa 5% (oxoid).
Uji  Sensitivitas  (Uji  Daya  Hambat)  Anti Bakterial Dan Anti Jamur
Uji  sensisitivitas  (uji  daya  hambat) anti  bakterial  dan  anti  jamur  secara  in  vitro dilakukan  dengan agar  disc  diffusion  method (metode  penghambatan  cakram  dish  pada media  agar  plat).  Sebelum  digunakan  semua peralatan  dicuci  dan  disterilkan  di  dalam inkubator. Isolat biakan bakteri megabacterium yang sudah diuji patogenitasnya,  dikultur  pada  media  agar  plat MHA  (Muller  Hilton  Agar)  dan  diratakan dengan  menggunakan  kapas  steril.  Kertas cakram antibiotik diletakkan di atas plat MHA yang  telah  ditanami  bakteri,  kemudian diinkubasikan  pada  suhu  37 0 C  selama  24-48 jam  di  dalam  suasana  anaerob.  Setelah diinkubasikan  pembentukan  diameter  zona hambatan diamati dan diukur dengan penggaris, kemudian dapat ditentukan sensitivitasnya  menurut  standart  Avid  X (1998) / Unesco Cida (Carter, 1979 ; Jang and Biberstein, 1978).
Obat-obatan  antibiotika/  anti  bakterial (Enrofloksasin,  Klindamisin,Tetrasiklin)  dan anti  jamur  (Griseofulvin,  Ketokonazol,  dan Nystatin) yang tidak terdapat pada cakram dish antibiotik,  terlebih  dulu  dilarutkan  dan
disentrifuse,  kemudian  masing-masing  larutan anti bakteri dan anti jamur dimasukkan dengan pipet ke dalam satu lubang sumuran  pada plat MHA  dan  diinkubasikan  pada  suhu  37 0 C selama  24-48  jam  di  dalam  suasana  anaerob. Sebagai  kontrol  negatif  digunakan  larutan Phosphat Buffer Saline (PBS). Setiap
perlakuan  memiliki  tiga  ulangan.  Setelah diinkubasikan selama 24-48 jam, pembentukan diameter  zona  hambatan  diamati  dan  diukur dengan  penggaris,  kemudian  dapat  ditentukan sensitivitasnya.Data  hasil  pemeriksaan  uji sensitivitas  yang  diperoleh  dianalisis  secara desriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel  1. Batasan  resistensi,intermediate,  dan sensitivitas  obat  antibiotika  /  anti bakterial  sesuai  standart  sensitivitas Kirby  Bauer  /  Unesco  (Jang  and
Biberstein, 1979) Nama obat antibiotik/ Anti bakterial Resiste n (R) Intermediat e (I) Sensitive (S) Ampisillin 10  g < 20 21 – 28 > 29 Enrofloksasin 50 g < 17 18 – 21 > 22 Eritromisin 15 g < 13 14 – 17 > 18 Klindamisin 50 g <  9 10 – 14 > 15 Kloramfenikol 30 g < 12 13 – 17 > 18 Streptomisin 10 g < 11 12 – 14 > 15 Tetrasiklin 50 g < 14 15 – 18 > 19
Tabel  2.Hasil  uji  sensitivitas  obat  antibiotika  /  anti bakterial terhadap Megabacterium Nama Antibiotik / Anti bakterial Zona Bebas Hambatan A (mm) Zona Bebas Hambatan B (mm) Zona Bebas Hambatan C (mm) Rata-Rata Zona Bebas Hambatan (x) Ampisillin 10  g 18,1 18,6 18,3 18,2 (R) Enrofloksasin 50 g 39,5 36,9 39,5 38,6 (S) Eritromisin 15 g 25,5 26,1 25,6 25,7 (S) Klindamisin 50 g 36,6 30,3 33,0 33,3 (S) Kloramfenikol 30 g 30,4 37,0 30,1 32,4 (S) Streptomisin 10 g 15,0 15,3 15,6 15,3 (S) Tetrasiklin 50 g 21,0 21,2 21,9 21,3 (S)
Tabel 2. Hasil uji sensitivitas obat jamur terhadap
Megabacterium
No Nama obat anti jamur Zona Bebas Hambatan A (mm) Zona Bebas Hambatan B (mm) Zona Bebas Hambatan C (mm) Rata-Rata Zona Bebas Hambatan (x) 1. Griseofulvin 50 g 36,6 39,9 39,6 38,7 (S) 2. Nystatin 50 g 30,6 31,1 31.8 31,2 (S) 3. Ketokonazol 50 g 25,2 25,5 28,6 26,4 (S) Hasil uji sensitivitas ampisillin terhadap megabacterium menunjukkan resisten.  Ampisillin  merupakan  antibiotik golongan betalaktam yang  memiliki cincin  - laktam.  Resistensi  disebabkan megabcterium memiliki enzim
-laktamase / enzim penicillinase  yang  dapat  merusak  cincin - laktam  yang  terdapat  di  dalam  gugus  molekul ampisillin  (By  water,  1991).  Resistensi megabacterium kemingkinan  juga  disebabkan karena  didapatkan  secara  perolehan,  yaitu burung yang terinfeksi megabacterium tersebut  sebelum  dilakukan  isolasi  bakteri sudah pernah mendapatkan pengobatan dengan ampisillin.
Hasil  uji  sensitivitas  Enrofloksasin terhadap
megabacterium menunjukkan
sensitive.  Enrofloksasin  merupakan  antibiotik golongan
Quinolon yang
memiliki kemampuan  kerja  menghambat  enzim  DNA girase yang berperanan dalam proses pembentukan DNA bakteri sehingga pertumbuhan  dan  kemampuan  hidup  sel bakteri megabacterium dapat dihambat (Amabile, 1996).
Hasil  uji  sensitivitas  Klindamisin terhadap megabacterium menunjukkan sensitive.  Klindamisin  merupakan  antibiotik yang  berspektrum  luas  untuk  bakteri  anaerob dan  memiliki  mekanisme  kerja  menghambat sintesis  protein  bakteri  (Rahardja  dan  Tjay, 1991  ;  Setiabudy  dkk.,  1995).Klindamisin mampu  bekerja  menghambat  sintesis  protein bakteri megabacterium yang  bersifat  anaerob, sehingga  mampu  menghambat  pertumbuhan dan kemampuan hidup sel bakteri megabacterium (Rahardja  dan  Tjay,  1991  ; Setiabudy dkk., 1995).
Hasil  uji  sensitivitas  Kloramfenikol terhadap megabacterium menunjukkan sensitive.  Kloramfenikol  merupakan  antibiotic yang  berspektrum  luas  memiliki  mekanisme kerja  menghambat  enzim  peptidil  transferase yang  berperan  sebagai  katalisator  untuk
membentuk ikatan-ikatan peptide dalam proses sintesis protein. Jika sintesis protein sel bakteri dihambat,  maka  akan  dapat  memyebabkan bakteri  tidak  berkembang,  dan  akhirnya  mati (Setiabudy dkk., 1995). Megabaterium peka/sensitive  terhadap  Kloramfenikol  karena kloramfenikol  menghambat  enzim  peptidil transferase  yang  berperan  sebagai  katalisator untuk membentuk ikatan-ikatan peptide dalam proses  sintesis  protein,  sehingga  pertumbuhan dan  perkembangan  sel  bakteri  dapat  dihambat dan akhirnya Megabaterium mati Hasil uji sensitivitas  Eritromisin terhadap megabacterium menunjukkan sensitive.  Eritromisin  merupakan  antibiotik golongan  maklrolid  yang  berspektrum  luas untuk bakteri Gram positif dan Gram negative. Eritromisin memiliki mekanisme kerja menghambat  sintesis  protein  bakteri  dengan jalan  gangguan  ikatan  ribosom  sub  unit  50S sel bakteri (Setiabudy dkk., 1995). Megabaterium merupakan  gram  positive  yang peka  terhadap  Eritromisin,  maka  Eritromisin dapat  menghambat  sintesis  protein  bakteri dengan  jalan  menyebabkan  gangguan  ikatan ribosom  sub  unit  50S  sel  bakteri,  sehingga dapat  terjadi  efek  kelethalan/kematian  pada Megabaterium.
Hasil uji sensitivitas Tetrasiklin terhadap megabacterium menunjukkan
sensitive.  Tetrasiklin  merupakan  antibiotik yang berspektrum luas untuk bakteri aerob dan anaerob  serta  memiliki  mekanisme  kerja menghambat sintesis protein bakteri (Setiabudy  dkk.,  1995).  Tetrasiklin  mampu bekerja  menghambat  sintesis  protein bakteri megabacterium yang bersifat anaerob, sehingga  mampu  menghambat  pertumbuhan dan kemampuan hidup sel bakteri megabacterium.
Hasil  uji  sensitivitas  Streptomisin terhadap megabacterium menunjukkan sensitive.  Streptomisin  merupakan  antibiotic golongan  aminoglikosida  untuk  membunuh bakteri Gram negative dan memiliki mekanisme  kerja  menghambat  sintesis  protein bakteri dengan jalan gangguan ikatan ribosom sub  unit  50S  sel  bakteri  (Setiabudy  dkk., 1995). Megabaterium yang  merupakan  gram positive tidak terlalu peka terhadap Streptomisin, tetapi dapat menyebabkan gangguan  ikatan  ribosom  sub  unit  50S  sel bakteri, sehingga dapat terjadi efek kelethalan/kematian pada Megabaterium.
Hasil  uji  sensitivitas  Griseofulvin terhadap megabacterium menunjukkan sensitive.  Griseofulvin  memiliki  mekanisme kerja  menghambat  proses  pembelahan  inti  sel dalam  proses  mitosis  pada  tahap  metaphase dan  menghambat  sintesis  asam  nukleat  yang terdapat  pada  dinding  sel Megabaterium , sehingga  akhirnya  terjadi  kematian  pada Megabaterium (Adam, 1995; Tennat, 2002) . Hasil uji sensitivitas Nystatin terhadap megabacterium
menunjukkan sensitive.
Nystatin merupakan anti jamur yang berspektrum  luas  dan  memiliki  mekanisme kerja  menghambat  ergosterol  yang  terdapat pada  membrane  sel,  sehingga  menyebabkan kebocoran pada membrane sel yang mempengaruhi  keseimbangan  permeabilitas membrane  sel,  sehingga  dapat  mengakibatkan terjadinya kematian sel Megabaterium (Adam, 1995; Tennat, 2002) .
Hasil  uji  sensitivitas  Ketokonazol terhadap
megabacterium menunjukkan sensitive.  Ketokonazol  merupakan  anti  jamur yang berspektrum luas dan memiliki mekanisme kerja menghambat ergosterol yang terdapat  pada  membrane  sel  jamur/fungsi dengan jalan  mengahmbat  enzim  Citokrom  P- 450, sehingga menyebabkan penurunan permaibilitas  membrane  sel  yang  akhirnya mengakibatkan kematian pada sel Megabaterium (Adam, 1995; Tennat, 2002) .

## SIMPULAN
Obat  anti  bakterial  dan  anti  jamur mempunyai potensi menghambat pertumbuhan bakteri Megabacterium secara in  vitro . Megabacterium  resisten  terhadap  Ampisillin, dan mempunyai daya hambat yang paling baik (paling  sensitif)  dengan  Griseofulvin,  diikuti Enrofloksasin,  Klindamisin,  Kloramfenikol, Nystatin, Ketokonazol, Eritromisin, Tetrasiklin dan Streptomisin. Griseofulvin dan Enrofloksasin  adalah  pilihan  obat  yang  tepat dipergunakan  untuk  terapi  pengobatan  kasus Megabacteriosis pada burung.

## SARAN
Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang potensi anti bakterial dan anti jamur secara in vivo / pemberian langsung pada burung.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  tesis  ini  sebagian  didanai dan diberikan fasilitas dari Pusat Studi Jerman di  Universitas  Gadjah  Mada,  Yogyakarta. Penulis  mengucapkan  terima  kasih  yang sebesar-besarnya  kepada  Dr.  Edi  Boedi Santosa . selaku ketua Pusat Studi Jerman Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

## DAFTAR PUSTAKA
Adam,
H.R. 1995. Veterinary and
Pharmacology and Therapeutics. Edited  by  H.R.  Adam.7 th Edition.
Lowa  State  University  Press,  Lowa 50014.
Amabile, C.F. 1996. Medical Intelligence Unit Antibiotic  Resistance  From  Molecular Basics  to  Therapeutic  Option.  R.G.
Landes  Company  Austin,  Texas, U.S.A.  Copyright  1996  Springer- Verlag, Heidelberg, Germany. Andersone, N.L. 1993. Candida / Megabacteria  Proventikulitis  in  a Lesser Sulphur-Crested Cockatoo (Cacatua  sulphure  sulphurea).  Journal of  American  Avian  Veterinarian  1993 : Florida. Bywater, R.J. 1991. The Control  of Infectious Disease : Chemotherapy in Veterinary Apllied Pharmacology
dan
Therapeutics.  Edited  by  G.C.  Brader,
D.M.  Pugh,  R.J.  Bywater  and  W.L. Jenkins.  5 th Edition.  ELBS,  Bailliere Tindal, London.
Carter,  G.R.1979.  Diagnostic  Procedure  in Veterinary Bacteriology and
Micology.8 th Edition.  Charles  C.
Thomas Publisher, Illionis.
Hendrikz,  J.K.  and  Philippich,  L.J.  1998.
Prevalence of Megabacteria in Budgerigar Colonies. School Veterinary  Science  and  statistics Office. The University of Queensland. Queensland 4072.
Jang,  S.S.  and  Biberstein,  E.L.  1978.  A Diagnostic Manual of Clinical Bacteriology and Micology. Unesco/Cida Regional Training Course  in  Veterinary Diagnostic
Microbiology.  Paradeniya,  4 th -22 nd
August 1980. Latimer,  S.K.,  Wilson,  G.H.  and  Son,  T.T. 2002. Clinical and Pathological
Features  of  Megabacteriosis  in  Bird.
Departement  of  Pathology  (Latimer). College  of  Veterinary  Madice.  The University  of  Georgia.  Athens.  GA 30602-7388.
Levine,  M.  1954.  An  Introduction  to Laboratory Technique In Bacteriology, Third Edition. Copyright 1954 by The
Macmillan Company, Newyork. Rahardja,  K  dan  Tjay,  T.H.  1991.  Obat-obat Penting  Khasiat,  Penggunaan  dan Efek-efek Sampingnya. Direktur Jendral Pengawasan Obat dan Makanan Departemen Kesehatan Republik  Indonesia.  Edisi  kedua. Cetakan keempat. Jakarta. Setiabudy,  R.,  Sjamsudin,  U.,  dan  Bustami, Z.S.  1995.  Famakologi  dan  Terapi, Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia
Jakarta,  Edisi  ketiga.  PT  Gaya  Baru.
Jakarta.
Talltree,  C.  2000.  Megabacteria  a  Review  of The  Literature.  Journal  of  Association of  Veterinarians-Australia.  Email  at Talltree@nwnet.net
Tennant,  B.  2002.  BSVA  Small  Animal Furmulary.  4 th Edition.  Copyright 2002  BSVA.  Published  by  British Small Veterinary Association Woodrow House, Telford Way, Waterwells Bussiness Park, Quedgeley, Gloucester GL24B. Werther,  K.S.I.,  Verona  C.E.S.,  and  barros, L.S.S.  1997.  The  Occurence  of  an Megabacterium-like Organism at Small Bird from the Northeast area of Sao  Paulo  State  brazil,  Depto  de Patologia Veterinaria / FCAV UNESP Via  de  Acesso  Prof  Paulo  Donato Castellane  s/n  14870-000-Jaboticabal- SP-Brazil.