UJI KEMAMPUAN BAKTERI ( Pseudomonas aeruginosa) DALAM PROSES BIODEGRADASI PENCEMARAN LOGAM BERAT TIMBAL (Pb), DI PERAIRAN TIMUR KAMAL KABUPATEN BANGKALAN
ABILITY TEST OF BACTERIA (Pseudomonas aeruginosa) IN BIODEGRADATION PROCESS OF LEAD HEAVY METAL (Pb) Pollution, IN EAST KAMAL WATERS, BANGKALAN REGENCY

## Anestya Anggraeni dan Haryo Triajie²
Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Universitas Trunojoyo Madura
*Corrersponden author email: haryotriajie@trunojoyo.ac.id
Submitted: 08 September 2021 / Revised: 27 September 2021 / Accepted: 28 September 2021
http://doi.org/10.21107/juvenil.v2i3.11754

## ABSTRAK
Perairan  selat  Madura  merupakan  perairan  yang  rentan  tercemar  bahan-bahan  limbah  berbahaya, salah  satu  sumber  pencemar  adalah  logam  berat.  Adanya  logam  berat  di  perairan  berbahaya  baik secara  langsung  terhadap  kehidupan  organisme,  maupun  efeknya  secara  tidak  langsung  terhadap kesehatan  manusia.  Hal  ini  berkaitan  dengan  sifat-sifat  logam  berat  yaitu  sulit  terurai,  sehingga mudah terakumulasi dalam lingkungan perairan dan keberadaannya secara alami sulit terurai, untuk mengatasi  pencemaran  logam  timbal  (Pb)  adalah  dengan  memanfaatkan  bakteri  Pseudomonas aeruginosa.  Tujuan  dari  penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui  aktifitas  bakteri  Pseudomonas aeruginosa dalam menurunkan logam timbal (Pb) pada perairan Timur Kamal. Penelitian ini dilakukan pada  bulan  November  2020-Februari  2021.  Metode  yang  digunakan  yaitu  uji  degradasi  dengan analisa  kandungan  logam  timbal  (Pb),  pengukuran  optikal  density  dan  uji  degradasi  menggunakan bakteri  Pseudomonas  aeruginosa.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  Aktifitas  bakteri Pseudomonas  aeruginosa  dalam  menurunkan  kandungan    logam  timbal  (Pb)  dipelabuhan  Timur Kamal  yaitu  sampel  1.1  penurunan  sebesar  92,3%,  sampel  1.2  penurunan  sebesar  92,8%,  sampel 2.1  penurunan  sebesar  95,5%,  sampel  2.2  penurunan  sebesar  97,3%,  sampel  3.1  penurunan sebesar  91,3%  dan  untuk  sampel  3.2  penurunan  sebesar  87,5%.  Waktu  inkubasi  optimum  untuk menurunkan kadar logam timbal (Pb) yaitu pada hari ke 4 waktu inkubasi.

## Kata Kunci: Logam Timbal, Bakteri Pseudomonas aeruginosa, uji degradasi

## ABSTRACT
The waters of the Madura Strait are waters that are prone to being contaminated by hazardous waste materials. One of the sources of pollution is heavy metals. The presence of heavy metals in waters is dangerous, either directly to the life of organisms, or its effect on human health. This is related to the properties  of  heavy  metals, which  are  difficult to  decompose,  so  that they  are  easily  accumulated  in the  aquatic  environment  and naturally  difficult  to  decompose. To  overcome  lead  metal  (Pb) contamination  is  to  use  the Pseudomonas  aeruginosa bacteria . The  purpose  of  this  study  was to determine  the  activity  of  the Pseudomonas  aeruginosa bacteria in  lowering  lead  metal  (Pb)  in  the waters of East Kamal. This research was conducted in November 2020-February 2021. The method used was the degradation test with analysis of lead (Pb) metal content, optical density measurement and degradation test using Pseudomonas aeruginosa bacteria . The results showed that the activity of the Pseudomonas aeruginosa bacteria in reducing the metal content of lead (Pb) in East Kamal port was  sample  1.1  decreased  by  92.3%,  sample  1.2  decreased  by  92.8%,  sample  2.1  decreased  by 95.5%, sample 2.2 decreased of 97.3%, for sample 3.1 the decrease was 91.3% and for sample 3.2 the decrease was 87.5%. The optimum incubation time to reduce levels of lead (Pb) is on the 4th day of incubation .
Keywords: Lead Metal, Pseudomonas aeruginosa Bacteria , degradation tes

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  wilayah  sebagian  besar laut,  tidak  bisa  dipungkiri  kekayaan  Indonesia sangatlah  besar.  Luas  laut  Indonesia  yang mencapai 5,8 juta km 2, terdiri dari 0,3 juta km 2 perairan  teritoral,  2,8  juta  km 2 perairan pedalaman  dan  kepulauan.  Pulau  Madura merupakan  pulau  yang  terletak  di  sebelah timur laut Jawa Timur. Pulau Madura besarnya kurang  lebih  5.250  km 2 dengan  penduduk sekitas  4  juta  jiwa,  merupakan  salah  satu pulau  yang  memiliki  kekayaan  biota  yang tinggi.    Perairan  selat  Madura  merupakan perairan  yang  rentan  tercemar  bahan-bahan limbah  berbahaya,  sumber  bahan  pencemar berasal dari berbagai kegiatan industri rumahan.  Jumlah  industri  di  Jawa  Timur  yang menyumbang  bahan  pencemar  ke  Selat Madura  melalui  beberapa  muara  sungai  yaitu 483 industri (Khoiroh, 2014).
Pencemaran  air  adalah  masuknya  atau dimasukkannya  makhluk  hidup,  zat,  energi dan  atau  komponen  lain  ke  dalam  air  oleh kegiatan  manusia,  sehingga  kualitas  air  turun sampai ke tingkat tertentu yang menyebabkan air  tidak  dapat  berfungsi  sesuai  dengan peruntukkannya. Salah satu sumber pencemar  adalah logam  berat. Adanya  logam berat  di  perairan  berbahaya  baik  secara langsung  terhadap  kehidupan  organisme, maupun  efeknya  secara  tidak  langsung terhadap kesehatan manusia. Hal ini berkaitan dengan  sifat-sifat  logam  berat  yaitu  sulit terurai,  sehingga  mudah  terakumulasi  dalam lingkungan perairan dan  keberadaannya secara  alami  sulit  terurai.  Berdasarkan  sudut pandang  toksikologi,  logam  berat  ini  dapat dibagi  menjadi  dua  jenis.  Jenis  pertama adalah  logam  berat  esensial  di  mana keberadaannya  dalam  jumlah  tertentu  sangat dibutuhkan  oleh  organisme  hidup,  namun dalam jumlah yang berlebihan dapat menimbulkan  efek  racun,  sedangkan  jenis kedua  adalah  logam  berat  non  esensial  atau beracun, dimana keberadaannya dalam tubuh masih  belum  diketahui  manfaatnya  atau bahkan  dapat  bersifat  racun  seperti  timbal (Pb) (Mohiuddin, 2011)
Salah satu metode untuk mengatasi pencemaran logam timbal (Pb) adalah dengan memanfaatkan bakteri. Seperti penelitian yang dilakukan  oleh  (Panuntun  &  Yulianto,  2012) yang  menemukan  3  isolat  bakteri  yaitu  genus Entrococcus,  Lactobacillus dan Pseudomonas dengan  kemampuan  toleran  timbal  hingga kadar  0,3  ppm.  Beberapa  jenis  bakteri dilaporkan memiliki aktifitas penyerapan
terhadap  logam  Pb.  Bakteri-bakteri  tersebut berasal  dari  beberapa  genus  yang  berbeda. Beberapa  bakteri  yang  sudah  dilaporkan mempunyai  kemampuan  untuk  menyerap logam  Pb  yaitu Bacillus  sp,  Corynebacterium glutamicum,  Enterobacter  sp,  pseudomonas putida, Streptomyces rimosus, Streptoverticillium cinnamoneum , dan Symphortcarpus albus . Mikroorganisme mampu  bertahan  dalam  lingkungan  dengan kadar  logam  berat  yang  tinggi  bergantung pada kemampuan
detoksifikasi mikroorganisme  tersebut.  Bakteri  memiliki mekanisme yang berbeda-beda dalam toleransi  dan  dalam  proses  bioremediasi logam  berat  dari  lingkungan.  Beberapa mekanisme  yang  sudah  diketahui  digunakan oleh  bakteri  dalam  mentoleransi  kadar  logam berat. Pseudomonas aeruginosa adalah bakteri  gram  negatif  aerob  obligat,  berkapsul, mempunyai  flagella  polar  seingga  bakteri  ini bersifat  motil,  berukuran  sekitar  0,5-1,0  um. Pseudomonas secara  umum  tidak  memiliki enzim hidrolitik yang penting dalam mendegradasi  polimer  menjadi  monomer namun  bakteri  ini  memiliki system  inducible operon yang  mampu  menghasilkan  enzim tertentu  dalam  proses  metabolisme  sumber karbon    yang  tidak  biasa  digunakan  oleh karena  itu  bakteri  ini  memiliki  peran  penting dalam  proses  biodegradasi  (Sriningsih et  al.,
2015).

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini dilaksanakan pada bulan November  2020-  Februari  2021  yang  meliputi pengambilan  sampel  air  laut.  Metode  yang digunakan  adalah  menggunakan  metode Atomic Absorption Spectrometry (AAS) dengan dua titik pengambilan sampel. Analisa dilaksanakan  di  Laaboratorium  Manajemen Sumberdaya Perairan.
Metode  pengambilan  data  menggunakan metode  purposive  sampling  yang  merujuk pada  kondisi  lingkungan  diperairan  Timur Kamal. Secara geografis letak lokasi stasiun 1 dan  2  ialah  S  07.10452 o E  112.43906 o dan  S 07.10553 o E 112.435071 o . Pengambilan sampel  pada  perairan  sebagai  bahan  uji pendegradasi tingkat pencemar Pb. Pengambilan  sampel  air  di  lakukan  pada masing  masing  stasiun.  Sampel  air  dilakukan pengambilan  pada  setiap  bulannya  selama  3 bulan. Kemudian sampel air disimpan didalam cool  box dan  dibawa  ke  laboratorium  untuk dianalisa keberadaan Pb. kurva standar logam timbal  Pb  yang  digunakan  sebagai  standar analisa logam.

## Anggraeni dan Triajie, Uji Kemampuan Bakteri (Pseudomonas aeruginosa)
Gambar 1 . Peta Lokasi Penelitian

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  penelitian  baik  dilapang maupun laboratorium disterilkan terlebih dahulu.  Sterilisasi  yang  digunakan  yaitu  oven, sterilisasi  dengan  metode  ini  digunakan  untuk benda-benda  dari  kaca  atau  gelas,  seperti pipet  ukur,  Erlenmeyer  dan  tabung  reaksi, tidak boleh bahan yang terbuat dari karet atau plastic.  Oven  Suhu  180 o C  selama  30  menit. Alat-alat  tersebut  terlebih  dahulu  dibungkus menggunakan kertas sebelum dilakukan sterilisasi. Sterilisasi dengan pemanasan yaitu bunsen  yang  digunakan  untuk  sterilisasi berupa  jarum  ose  dengan  memanaskan peralatan  tersebut  diatas  nyala  api  bunsen sampai berpijar. Autoklaf merupakan sterilisasi panas basah, sterilisasi menggunakan autoklaf  terlebih  dahulu  peralatan  yang  akan disterilisasi di bersihkan dengan air, dibersihkan dengan tissue, sedangkan sterilisasi  bahan  yaitu  berupa  media  NA  dan media  NB  yang  sebelumnya  ujung  botol ditutup  menggunakan  kapas,  alumunium  foil dan  cling  wrap.  Sterilisasi  menggunakan autoklaf  membutuhkan  waktu  15  -20  menit dengan suhu 121 o C (Andriani et al ., 2016)
Pembuatan  Larutan  atau  Kurva  Standar Logam (Pb)
kurva standar logam timbal Pb yang digunakan  sebagai  standar  analisa  logam. Kurva  standar  logam  timbal  (Pb)  dibuat  dari larutan standar Pb 1000ppm. larutan kemudian  dibuat  stok  10  ppm  sebanyak  250 ml.  Pembuatan  Larutan  stok  melalui  rumus pengenceran (Mulyono, 2006).
M 1 x V 1 = M 2 x V 2
Keterangan = V 1 =  Volume  larutan  standar  yang diencerkan V 2 = Volume larutan pengenceran M 1 = Konsentrasi larutan yang diengenceran M 2 =Konsentrasi larutan pengenceran

## Pengukuran Kadar Logam Timbal (Pb)
Pengukuran  kadar  logam  berat  timbal  (Pb) dilakukan menggunakan AAS.

## Pembuatan Media Padat
Pembuatan  media  padat  yaitu  menggunakan media Nutrien Agar (NA). Menimbang sebanyak 2,3 NA dilarutkan ke dalam 100 mL aquades  dan  di  aduk  sambil  dipanaskan  di hotplate sampai panas sempurna, Selanjutnya disterilisasi  media  padat  pada  autoklaf  pada suhu  121 o C  selama  15  menit  ( Caesar et  al ., 2014).

## Peremajaan dan Pembuatan Starter  Bakteri
Peremajaan isolat bakteri Pseudomonas aeruginosa dilakukan  menggunakan  media padat miring yaitu Nutrien Agar (NA). Di ambil 1 ose bakteri dari stok atau koleksi, kemudian di  streak  menggunakan  media  NA  miring  dan inkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam. Peremajaan bakteri Pseudomonas aeruginosa bertujuan untuk memperoleh stok bakteri yang ditumbuhkan  dari  media  satu  ke  media lainnya. Isolat murni bakteri yang diremajakan diperoleh dari Balai besar lingkungan kesehatan  Surabaya.  Bakteri  diremajakan dengan cara metode gores pada tabung reaksi yang  sebelumnya  telah  dituangkan  media  NA ( Nutrient agar ).

## Pembuatan Media Cair
Pembuatan  Media  Cair  yaitu  menggunakan media NB ( Nutrien
Broth ) dengan menambahkan 0,8 gram NB dan dilarutkan ke dalam  100  mL  aquades  diaduk  sambil dipanaskan sampai larut sempurna, selanjutnya  disterilisasi  didalam  autoklaf  pada suhu  121 o C  selama  15  menit  (  Caesar et  al., 2014).

## Pembuatan Inokulum Bakteri
Inokulasi mikroorganisme adalah suatu pekerjaan  untuk  memindahkan  bakteri  dari media  lama  ke  dalam  media  yang  baru. Pembuatan  Inokulum  bakteri  dimulai  dari memipet 15 ml NB yang kemudian dimasukkan  kedalam  botol  kultur,  selanjutnya mengambil  1  ose  isolat  bakteri Pseudomonas aeruginosa dimasukkan  ke  dalam  botol  kultur dan  ditutup  menggunakan  kapas,  alumunium foil  dan  cling  wrap.  Diamkan  dalam  suhu ruang selama 1x24 jam.
Inokulasi mikroorganisme adalah suatu pekerjaan  untuk  memindahkan  bakteri  dari media  lama  ke  dalam  media  yang  baru. Mikroorganisme  yang  digunakan  sebagai bahan  inokulum  adalah  bakteri  dengan spesies Pseudomonas  aeruginosa .  Inokulasi dilakukan  pada  media  cair  ( Nutrient  Broth ) dengan  cara  mengambil  1  ose  bakteri Pseudomonas  aeruginosa dari  kultur  stok yang di masukkan dalam media cair sebanyak 15  ml.  Media  yang  telah  berisi  bakteri diinkubasi  pada  suhu  ruang  selama  24  jam, setelah  24  jam  inokulum  pada  media  yang awalnya  bening  dan  setelah  penambahan bakteri  terdapat  lapisan  yang  berwarna  putih pucat yang berada dipermukaan media NB hal tersebut  dikarenakan  adanya  pertumbuhan bakteri. Setelah itu, akan terlihat penambahan dari koloni sel bakteri Pseudomonas aeruginosa yang  dapat  dilihat  dengan  mata telanjang.  Setelah  di  inkubasi  selama  24  jam, inokulum  dimasukkan  kedalam  botol  kultur sebanyak  36  botol  dengan  masing-masing botol ditambahkan inokulum sebanyak 1% (0,3 ml).  Penambahan  inokulum  sebanyak  0,5  ml berdasarkan rumus sebagai berikut:
1%= 1/100 x (Jumlah Media yang digunakan)
Berdasarkan  rumus  diatas,  dapat  diketahui penambahan inokulum sebanyak 1%
didapatkan dari jumlah media yang digunakan yaitu 30 ml media NB dalam proses degradasi dibagi dengan 100 yang hasilnya adalah 0,3

## Perhitungan Optical Density (OD)
Penghitungan  nilai  Optical  density  (OD) dilakukan  dengan  mengukur  nilai  absorbansi masing-masing  sampel  yang  telah  diambil. Hasil  pengukuran  nilai  OD  ( optical  density ) dengan  menggunakan  spektrofotometer  (λ 610  nm)  menunjukkan  nilai  absorbansi  yang berbeda  dari  setiap  sampel  yang  diamati (Lizayana et  al., 2016).  Hasil  perhitungan Optical Density dianalisis menggunakan software Ms. Excel dan SPSS.
Uji  degradasi  logam  timbal  (Pb)  oleh bakteri Pseudomonas aeruginosa
Menimbang media NB sebanyak 1,5 gram dan melarutkannya  dengan  150  ml  aquades  steril. Menambahkan  timbal  asetat  (Pb(CH 3 COO) 2 ) hingga konsentrasi 1 ppm. memasukkan isolat bakteri  sebanyak  2  ose  ke  dalam  media tersebut  kemudian  dishaker  dan  diinkubasi selama  72  jam.  Dilakukan  pengambilan sampel  setiap  24  jam.  Selanjutnya  sampel disentrifus  (12000  rpm,  5  menit)  dan  di  ambil supernatannya  (Chaterjee et  al .,  2012).  5  mL supernatan  kemudian  didestruksi  dengan  0,5 ml asam nitrat (HNO 3 ) pekat sambil dipanaskan  dengan  jernih,  setelah  itu  sambil disaring  menggunakan  labu  takar  50  mL  , ditambahkan  standar  timbal  (Pb)  hingga konsentrasi  1  ppm,  dan  di  impitkan  dengan aquades  steril.  Sebelum  proses  analisis terlebih  dahulu  dibuat  larutan  standar  timbal (Pb)  dengan  membuat  larutan  baku  100  ppm dari  larutan  induk  1000  ppm,  kemudian diencerkan  menjadi  10  ppm  dan  dibuat  deret standar  1  ppm,  1,2  ppm,  1,4  ppm,  1,6  ppm, 1,8  ppm,  dan  2  ppm.  sampel  yang  telah selesai  di  preparasi  beserta  standar  tersebut dianalisis menggunakan instrumen spektrofotometer  serapan  atom  (AAS)  (Basha & Rajaganesh, 2014).
Perhitungan % penurunan kadar logam
Penentuan presentase logam berat Pb dengan menghitung daya reduksi (DR) sesuai persamaan (Husain dan Irna, 2005) :
𝐷𝑅 = 𝐶(𝑎) − 𝐶(𝑏) 𝐶(𝑎) × 100% …………………(1)
Keterangan :
C(a) = Konsentrasi awal Pb (ppm) C(b) = Konsentrasi akhir Pb (ppm) DR = Daya reduksi

## Anggraeni dan Triajie, Uji Kemampuan Bakteri (Pseudomonas aeruginosa)

## HASIL DAN PEMBAHASAN Parameter Kualitas Air
Hasil  pengamatan  kualitas  air  dapat  dilihat pada Tabel  1. berdasarkan  pengukuran salinitas,  salinitas  tertinggi  berada  pada stasiun  1  dan  stasiun  2  yaitu  dengan  nilai  35 ppt  terjadi  pada  bulan  November.  Nilai salinitas  sesuai  baku  mutu  air  laut  menurut KMNLP  no  51  tahun  2004  sebesar  33 –  34
°/ₒₒ.  Salinitas  stasiun  1  dan  2  di  bulan November melebihi baku mutu. Menurut Nova (2012) laut yang dipengaruhi arus panas maka nilai  salinitasnya  tinggi,  Semakin  banyak terjadi  penguapan,  maka  udara  di  sekitar menjadi  lembab.  Maka  semakin  tinggi  pula salinitas  air  laut.  Berdasarkan  pengukuran suhu  diperairan  pelabuhan  timur  kamal,  suhu pada  stasiun  1  berkisar  antara  30-32 o C  dan pada stasiun 2 suhu berkisar antara 25-27 o C. Mukhtasor  (2007)  mengemukakan  jika  kadar Pb pada air dipengaruhi oleh suhu, pada suhu yang  tinggi  senyawa  logam  berat  akan  larut dalam air. Suhu tertinggi terdapat pada stasiun
1  dengan  waktu  pengamatan  02.00-02.30 sedangkan  suhu  terendah  terdapat  pada stasiun  2  dengan  waktu  pengamatan  02.30- 03.00.  Happy et  al., (2012)  menerangkan bahwa intensitas tertinggi dari panas matahari yang menyebabkan suhu dipermukaan meningkat.  Nilai  DO  tertinggi  terjadi  pada bulan  November  sedangkan  DO  rendah terletak  pada  bulan  Desember  dan  Januari, DO  rendah  diakibatkan  hujan  yang  terus menerus  selama  2  hari  sebelum  pengambilan sampel.  Namun,  pada  bulan  November  nilai DO masih di bawah ambang batas baku mutu KMNLP No.51 tahun 2004 yang diperuntukkan untuk  biota  laut  berkisar  antara  >5.  Jika  pH rendah kelarutan logam berat akan lebih tinggi sehingga akan menyebabkan toksisitas logam berat semakin besar. (Pescod, 1973). Nilai pH pada stasiun 1 yaitu berkisar antara 6,96- 7,90 dan  pada  stasiun  2  berkisar  5,3-6,75.  Nilai kedua  stasiun  masih  normal  dari  baku  mutu yang ditentukan sesuai dengan KMNLP No 51 tahun 2004 yaitu 7 – 8,5.
Tabel 1 . Parameter Kualitas Air November Desember Januari KMNLH No 51 Tahun 2004 Parameter Kualitas Air Stasiun 1 Stasiun 2 Stasiun 1 Stasiun 2 Stasiun 1 Stasiun 2 Salinitas (ppt) 35 35 30 30 30 31 33-34 Suhu ( 0 C) 32 25 31,7 25 30 27 28-32 DO (ppm) 8,77 9,37 0,3 0,4 0,5 0,4 >5 pH 7,86 6,08 6,96 6,75 5,90 5,34 7- 8,5 Tabel 2 . Data Absorbansi Larutan Standart Pb No. Konsentrasi (ppm) Absorbansi 1. 5 0,0003 2. 10 0,0005 3. 15 0,0011 4. 30
0,0018
Gambar 1 . Grafik Kurva Standart Pb y = 0,0061x + 0,004 R² = 0,965 0 0,0005 0,001 0,0015 0,002 0 10 20 30 40 A b so rb an si Konsentrasi (ppm) absorbansi Linear (absorbansi)
Gambar 2 . Grafik Optikal Density (OD)
Tabel 3 . Uji Anova Waktu  pengamatan (Bulan) OD Hari ke- 1 2 3 4 5 6 7 B1 0,071  0,267  b  0,331  B 1,428  0,734  0,404  0,143  A B2 0,069  0,273  b  0,258  Ab  1,183  0,796  0,411  0,244  B B3 0,072  0,145  a  0,176  A 1,196  0,751  0,433  0,175  Ab Standart Deviasi 0,001  0,072 0,077 0,138  0,032  0,016  0,051
Tabel  4 .  Perbandingan  Kandungan  Timbal  Sebelum  dan  Setelah  Penambahan  Isolat  Bakteri Pseudomonas aeruginosa
No. Nama Sampel Lokasi Konsentrasi Sebelum Degradasi (ppm) Konsentrasi Sesudah Degradasi (ppm) Berdasarkan Keputusan Menteri Negara Lingkungan Hidup No. 179 Tahun 2004 1. 1.1 0,131 0,010 0,008 2. 1.2 0,084 0,006 3. 2.1 0,174 0,007 4. 2.2 0,115 0,003 5. 3.1 0,186 0,016 6. 3.2 0,096 0,012
Gambar 3 . Rasio Setiap Bulan di Kedua Lokasi

## Larutan Standart Logam Berat Timbal (Pb)
Uji  linieritas  penentuan  regresi  dari  standar kurva, diperoleh koefisien  korelasi dan diketahui  kondisi  alat  spektrofotometer  yang digunakan  sudah  mewakili  semua  sampel.
Hasil  dari  kurva  standar  dapat  di  lihat  pada Gambar  1.  diperoleh  nilai  korelasi  R  sebesar 0,965.    Nilai  R  dari  hasil  analisis  larutan standar dalam penelitian ini menunjukkan hasil yang  baik  karena  mendekati  1.  Hal  ini memperlihatkan  bahwa  terdapat  hubungan
0 0,5 1 1,5 2 1% 1, 50 % 1%
1, 50 % 1%
1, 50 % 1%
1, 50 % 1%
1, 50 % 1%
1, 50 % 1% 1, 50 % OD1 OD2 OD3 OD4 OD5 OD6 OD7 Op tical De n sit y Lokasi 1.1 Lokasi 1.2 Lokasi 2.1 Lokasi 2.2 Lokasi 3.1 Lokasi 3.2
0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00 12,00 14,00 B1L1 B1L2 B2L1 B2L2 B3L1 B3L2 (% ) Bulan-Lokasi

## Anggraeni dan Triajie, Uji Kemampuan Bakteri (Pseudomonas aeruginosa)
yang  proporsional  antara  serapan  (respon analitik)  dengan  konsentrasi  yang  diukur. Menurut Kartikasari (2016) menyatakan bahwa  nilai  koefisien  korelasi  R  >  96  maka dapat  dikatakan  baik.  Oleh  karena  itu  nilai koefisien  korelasi  kurva  standart  yang  dibuat dapat digunakan untuk mengukur kadar timbal dalam sampel dengan spektrofotometer serapan atom (SSA).

## Pengukuran Optical Density (OD)
Grafik  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas aeruginosa yang dapat dilihat pada Gambar 2. bertujuan untuk mengetahui fase pertumbuhan bakteri  pada  media  berisi  sampel  yang mengandung  limbah  timbal.  Berdasarkan pengukuran  kepadatan  bakteri Pseudomonas aeruginosa yaitu  berada  pada  fase  logaritmik dengan  waktu  inkubasi  4  hari,  dimana  pada fase  tersebut  merupakan  waktu  inkubasi optimum yang dibutuhkan oleh bakteri Pseudomonas  aeruginosa untuk  mengikat logam  timbal  yaitu  pada  hari  ke-4  inkubasi yang  ditandai  dengan  adanya  penurunan konsentrasi timbal yang ada dalam limbah cair yang  digunakan  dan  bakteri  ini  juga  dapat menyusun  bahan  anorganik  menjadi  senyawa organik yang lebih kompleks.
Pengukuran  OD  ( optical  density )  pada  hari ke-4  Nilai  tertinggi  dari  sampel  lokasi  1.1, konsentrasi  1%  sebesar  1,7877  terjadi  pada ulangan  ke-3,  sedangkan  nilai  tertinggi  pada konsentrasi 1,5% sebesar 1,6541 terjadi pada ulangan  ke-2.  Nilai  OD  tertinggi  pada  lokasi 1.2  dengan  konsentrasi  1%  sebesar  1,7651, sedangkan  nilai  tertinggi  pada  konsentrasi 1,5%  sebesar  1,2748.  Nilai  OD  tertinggi  pada lokasi  2.1  dengan  konsentrasi  1%  sebesar 1,4089, sedangkan nilai tertinggi pada konsentrasi  1,5%  sebesar  1,5021.  Nilai  OD tertinggi  pada  lokasi  2.2  dengan  konsentrasi 1%  sebesar  1,8911,  sedangkan  nilai  tertinggi pada  konsentrasi  1,5%  sebesar  1,2101.  Nilai OD tertinggi pada lokasi 3.1 dengan konsentrasi  1%  sebesar  1,6501,  sedangkan nilai  tertinggi  pada  konsentrasi  1,5%  sebesar 1,7632.  Nilai  OD  tertinggi  pada  lokasi  3.2 dengan  konsentrasi  1%  sebesar  1,3165, sedangkan  nilai  tertinggi  pada  konsentrasi 1,5%  sebesar  1,7521.  Hari  ke-  empat  bakteri Pseudomonas aeruginosa sudah berada pada fase  logaritmik  ditandai  dengan  nilai  OD  atau kepadatan  bakteri  yang  pertumbuhannya  naik secara  cepat.  Menurut  Reiny  (2012)  fase logaritmik  menggambarkan  sel  membelah  diri dengan  ditandai  laju  yang  konstan,  masa menjadi  dua  kali  lipat  dengan  laju  sama, aktifitas  metabolisme  konstan,  serta  keadaan pertumbuhan seimbang.

## Uji Anova
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  acak lengkap  (RAL)  dengan  2  (dua)  faktor  yaitu faktor waktu (bulan) dan faktor Dosis dengan 3 ulangan.  Pengolahan  Data  OD  ( optical density ) menggunakan uji anova yang terdapat pada  pengambilan  sampel  bulan  pertama (B1), bulan ke-dua (B2) dan bulan ke-tiga (B3). OD dari uji anova pada hari ke-2, hari ke-3 dan hari ke 7 berpengaruh nyata dan pada B1 hari ke-2,  ke-3  dan  ke-4  berbeda  nyata  dengan perlakuan  pada  B3.  Jumlah OD  tertinggi  pada Hari ke-2 sebesar 0,267 pada B1 dan pada B2 sebesar  0,273  sedangkan  terendah  pada  B3 sebesar 0,145. OD hari ke-3 tertinggi pada B1 sebesar  0,331  sedangkan  terendah  pada  B3 sebesar  0,176.  OD  pada  hari  ke-7  tertinggi berada  pada  B2  sebesar  0,244  dan  terendah pada  B1  yaitu  sebesar  0,413.  dan  pada  hari ke-1,  hari  ke-4,  hari  ke-5,  dan  hari  ke-6  tidak berbeda nyata.
Hasil Uji Degradasi Logam Timbal Sebelum dan Sesudah
Penambahan Bakteri
Pseudomonas aeruginosa
Hasil  pengukuran  dapat  dilihat  pada Tabel  4. diketahui  bahwa  kadar  logam  timbal  (Pb) dalam  media  semakin  menurun  dengan semakin lamanya  waktu  kontak  antara  bakteri dengan media. Setelah waktu inkubasi selama 7  hari  didapatkan  hasil  pengukuran  kadar logam  timbal  (Pb)  dari  sampel  lokasi1.1 konsentrasi  logam  timbal  (Pb)  dalam  media berkurang dari konsentrasi sebelum degradasi berkisar  0,131  ppm  dan  sesudah  degradasi mengalami  penurunan  sebesar  0,010.  Hasil dari  stasiun  2  atau  sampel  lokasi  1.2 konsentrasi  Pb  sebelum  degradasi  sebesaar 0,084  ppm  dan  setelah  degradasi  mengalami penurunan  sebesar  0,006  ppm.  Pada  sampel lokasi  2.1  konsentrasi  Pb  sebelum  degradasi bekisar  0,174  ppm  dan  sesudah  degradasi mengalami  penurunan  sebesar  0,007  ppm. Pada  sampel  lokasi  2.2  konsentrasi  Pb sebelum  degradasi  berkisar  0,115  ppm  dan sesudah  degradasi  mengalami  penurunan sebesar  0,003.  Pada  sampel  lokasi  3.1 konsentrasi  Pb  sebelum  degradasi  berkisar 0,186 ppm dan sesudah degradasi mengalami penurunan  sebesar  0,016  ppm.  Pada  sampel lokasi  3.2  konsentrasi  Pb  sebelum  degradasi berkisar  0,096  ppm  dan  sesudah  degradasi mengalami  penurunan  sebesar  0,012  ppm. Pada  lokasi  1  konsentrasi  Pb  lebih  tinggi diduga  karena  stasiun  1  dekat  dengan  lokasi pencemar  dan  juga  galangan  kapal.  Menurut Palar  (2004) logam Pb  berasal  dari  tumpahan bahan bakar kapal yaitu mesin yang mengandung  TEL  ( Tetra  Ethyl  Lead ).  TEL
adalah  paduan  kimia  yang  terdiri  dari  ikatan antara karbon (C) dan timbal (Pb).

## Rasio Degradasi
Berdasarkan  grafik  selisih  degradasi  dapat dilihat  pada Gambar  3. bahwa  persentase sebelum dan sesudah degradasi pada sampel pengambilan  bulan  pertama  lokasi  pertama dengan  kode  B1L1  memiliki  rasio  sebesar 7,63  %  dengan  penurunan  kandungan  timbal (pb)  sesudah  degradasi  sebesar  92,3% sedangkan  pada  lokasi  kedua  dengan  kode B1L2  memiliki  rasio  sebesar  7,14%  dengan penurunan  kandungan  timbal  (pb)  sesudah degradasi  sebesar  92,8%.  Pada  sampel pengambilan bulan ke-dua dengan kode B2L1 memiliki  rasio  antara  sebelum  dan  sesudah degradasi  sebesar  4,02%  yang  artinya menurun  dibandingkan  pada  pengambilan bulan pertama yaitu dengan persen penurunan 95,5% sedangkan pada kode B2L2 memiliki  rasio  degradasi  sebesar  2,61% dengan  penurunan  kandungan  timbal  (pb) sesudah  degradasi  sebesar  97,3%.  Pada sampel  pengambilan  bulan  ke-3  dengan  kode B3L1  didapatkan  rasio  degradasi  sebesar 8,60%  dengan  persen  penurunan  sebesar 91,3%, sedangkan pada kode B3L2 didapatkan  rasio  degradasi  sebesar  12,50 dengan  persen  penurunan  kandungan  timbal (pb)  sesudah  degradasi  sebesar  87,5%.  Jadi perbedaan  pada  grafik  tersebut  dipengaruhi oleh  beberapa  faktor  yaitu  faktor  abiotik  dan faktor biotik.
Kemampuan bakteri Pseudomonas aeruginosa dalam  menurunkan  logam  timbal (Pb) dapat disebabkan karena bakteri memiliki permukaan sel yang bermuatan negatif karena terbentuk  dari  berbagai  sturuktur  anion sedangkan logam berat adalah ion bermuatan positif  sehingga  dapat  terjadi  ikatan  antara permukaan  sel  bakteri  dan  ion  logam  berat, selain  itu  mikroorganisme  dapat  melakukan proses  reduksi  logam  berat  sehingga  dapat membentuk  kompleks  ion  logam  berat  yang tidak toksik (Junopia, 2015). Pengikatan logam Pb  oleh  bakteri  dipisahkan  menjadi  fase pengikatan dan transport aktif. Fase pengikatan  yaitu  absorbsi  melalui  dinding  sel atau  permukaan  eksternal  yang  tergantung pada  metabolisme  sel.  Kemudian  diikuti dengan  transport  aktif  yang  tergantung  pada metabolisme sel. Logam Pb dapat terakumulasi
pada membran sel (ekstraseluler) dan pada sitoplasma (intraseluler)  yang  terdapat  pada  proses metabolisme (Arizzal, 2013).
Bakteri Pseudomonas  aeruginosa merupakan bakteri  gram  negatif  yang  umumnya  mampu tumbuh  dalam  media  tercemar  logam  berat dan  mempunyai  kemampuan  mengakumulasi logam  berat  dalam  dinding  selnya.  bakteri yang  resisten  terhadap  logam  disebabkan kemampuan  untuk  mendetoksifikasi  pengaruh logam  berat  dengan  adanya  protein  seperti polifosfat  di  dalam  sel  yang  mampu  mengikat timbal.  Sel  bakteri  sangat  berlimpah  sisi-sisi yang  mengandung  muatan  negatif  yang terletak  pada  dinding  selnya,  seperti  karboksil (COO-)  dan  hidroksil  (OH-),  sehingga  akan terjadi  interaksi  ion  logam  dengn  muatan negatif.  Mekanisme  biosorpsi  logam  berat secara  alami  mempunyai  dua  mekanisme yang  terjadi  secara  bolak  balik  yaitu  pertama- tama  akan terjadi  penukaran ion  logam  timbal yang  berada  disekitar  permukaan  sel  dengan ion monovalen ataupun divalent (misalnya Na) dan yang terakhir yaitu pembentukan senyawa kompleks  antara  ion  logam  dengan  gugus fungsi  yang  terdapat  dalam  sel  (Khoiroh, 2014).

## KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Kandungan logam timbal (Pb) diperairan Timur Kamal setelah di lakukan Analisa dengan AAS didapatkan hasil kandungan Pb yang berbeda- beda,  pada  sampel  lokasi  1.1  sebesar  0,131 ppm, lokasi 1.2 sebesar 0,084 ppm, lokasi 2.1 sebesar  0,174  ppm,  lokasi  2.2  sebesar  0,115 ppm, lokasi 3.1 sebesar 0,186 ppm, lokasi 3.2 sebesar  0,096  ppm.  Waktu  inkubasi  optimum untuk  menurunkan  kadar  logam  timbal  (Pb) yaitu  pada  hari  ke  4  waktu  inkubasi,  dimana dihari ke 4 bakteri berada pada fase logaritmik yang  ditandai  dengan  nilai  OD  ( Optical densit y) atau kepadatan bakteri yang pertumbuhannya  naik  secara  cepat.  Aktifitas bakteri Pseudomonas aeruginosa dalam menurunkan  kandungan    logam  timbal  (Pb) dipelabuhan  Timur  Kamal  selama  7  hari inkubasi yaitu didapat nilai penurunan tertinggi pada  sampel  lokasi  2.2  dengan  penurunan sebesar 97,3%.

## Saran
Perlu  adanya  penelitian  tentang  pemakaian bakteri Pseudomonas aeruginosa dalam menurunkan kadar logam berat lainnya seperti logam  kadmium  (Cd)  dan  merkuri  (Hg)  dan Perlu  adanya  penelitian  lebih  lanjut  mengenai optimalisasi degradasi logam berat timbal (Pb) oleh  bakteri  dengan  memperhatikan  berbagai aspek  seperti  karakteristik  limbah  (pH,  BOD dan COD).

## Anggraeni dan Triajie, Uji Kemampuan Bakteri (Pseudomonas aeruginosa)

## UCAPAN TERIMAKASIH
Bismillahirrahmanirrahim, puji syukur sehingga penulis  mampu  menyelesaikan  artikel  ini dengan banyak bimbingan, bantuan, dukungan  baik  dalam  bentuk  fikiran,  doa ataupun finansial  dari  beberapa  pihak. Terima kasih  kepada  keluarga,  dosen  dan  teman- teman yang telah membantu selama penelitian berlangsung. Semoga artikel bermanfaat untuk semua kalangan.

## DAFTAR PUSTAKA
Andriani, M. D., Purnawarman, T., Damayanti, R., Daulay, S., Magister, P., Kesehatan, B., Veteriner, M., Hewan, F. K., Hewan, F. K., Besar, B., Standar, U., Pertanian, K.,  &  Timur,  J.  (2016). Identifikasi Listeria  monocytogenes  pada  Susu Kambing  di  Kabupaten  Purworejo  Jawa Tengah . 34 (7388), 16 –23.
Arrizal,  S.  (2013).  Identifikasi  Rhizobakteri pada Semanggi (Marsilea crenata Presl.)  yang  Terpapar  Logam  Berat Timbal  (Pb). LenteraBio:  Berkala  Ilmiah Biologi , 2 (1), 165-169.
Basha,  S.  A.,  &  Rajaganesh,  K.  (2014). Original  Research  Article  Microbial Bioremediation  of  Heavy  Metals  From Textile  Industry  Dye  Effluents  using Isolated  Bacterial  Strains . 3 (5),  785 – 794.
Bidayani, E., Rosalina, D., & Utami, E. (2017).
Kandungan  logam  berat  timbal  (pb) pada  lamun  cymodocea  serrulata  di Daerah Penambangan Timah Kabupaten  Bangka  Selatan. Maspari Journal: Marine Science Research , 9 (2), 169-176.
Caesar,  R.  Y.,  Hapsari,  I.,  &  Dhiani,  B.  A. (2014). Formulasi dan aktivitas antibakteri  lotion  minyak  atsiri  buah adas  (Foeniculum  vulgare  mill). Media Farmasi: Jurnal Ilmu Farmasi , 11 (1). Darmono.  (1995). Logam  Dalam  Sistem Biologi Mahluk Hidup . Universitas Indonesia. Press. Jakarta
Darmono.  (2008). Lingkungan  Hidup  dan Pencemaran, Hubungan dengan Toksikologi  Senyawa  Logam .  UI  Press. Jakarta.
Dwidjoseputro. (2005). Dasar-Dasar Mikrobiologi .Yogjakarta: Djambatan. Effendi,  H.  (2003). Telaah  Kualitas  Air  Bagi
Pengelolaan Sumber Daya dan Lingkungan Perairan . Penerbit Kanisius. Yogyakarta. Keputusan  Menteri  Lingkungan  Hidup  No.  51
Tahun  2004  Tentang  Baku  Mutu  Air
Laut.
Keputusan  Menteri  Negara  Lingkungan  Hidup No.51  Tahun  2004  yang  telah  diralat pada Nomor 179 Tahun 2004 Khoiroh, Z. (2014) . “Bioremediasi Logam Berat Timbal  (Pb)  dalam  Lumpur  Lapindo menggunakan Campuran Bakteri ( Pseudomonas pseudomallei
dan Pseudomonas  aeruginosa )”.  Jurusan Biologi  UIN  Maulana  Malik  Ibrahim Malang. H. 1-10. Landecker dan Moore. (1996). Fundamental of The  Fungi .  Prentice  Hall.  New  Jersey. 470-476.
Levinson,  W.,  &  Jawetz,  E.  (2003). Medical Microbiology & Immunology . Mohiuddin,  K.  M.,  Ogawa,  Y.  Z.  H.  M.,  Zakir, H.  M.,  Otomo,  K.,  &  Shikazono,  N. (2011).  Heavy  metals  contamination  in water and sediments of an urban river in a  developing  country. International journal  of  environmental  science  & technology , 8 (4), 723-736. Panuntun, M.S. (2014). ”Isolasi dan Identifikasi Bakteri  Toleran  Terhadap  Timbal  (Pb) dari  Tanah  Bekas  Cetakan  Pengecoran Logam  di  Desa  Jeblokan,  Kab.Klaten”.
Skripsi. Yogyakarta:  Fak.Sains  dan Teknologi UIN Sunan Kalijaga.
Sulistijowati, R. (2012). Potensi filtrat Lactobacillus  acidophilus  ATCC  4796 sebagai  biopreservatif  pada  rebusan daging ikan tongkol. Indonesian Journal of Applied Sciences , 2 (2), 604 –613. Refdinal, Endah dan Meita. (2014) . “Pengaruh pH  dan Temperatur  pada  Pembentukan Biosurfaktan oleh Bakteri Pseudomonas aeruginosa ”. Prosiding Seminar Nasional Kimia ISBN. H. 41-48. Ridwan.  (2005). Rumus  dan  Data  dalam Analisis Statistika . Bandung: Alfabeta.
Rizkiana,  L.  dan  Karina.  (2017).  Analisis Timbal (Pb) Pada Sedimen Dan Air Laut Di Kawasan Pelabuhan Nelayan
Gampong  Deah  Glumpang  Kota  Banda
Aceh  Analysis  Of  Lead  (Pb)  In Sediment  And  Seawater  At  Fishing
Port  Of  Gampong  Deah  Glumpang,
Banda Aceh. Jurnal Ilmiah
Mahasiswa  Kelautan  Dan  Perikanan Unsyiah, 2 (1), 89-96.
Sanusi,  H.S.  (2006). Kimia  Laut,  Proses  Fisik
Kimia dan Interaksinya dengan Lingkungan . Bogor: Departemen Ilmu  dan  Teknologi  Kelautan,  Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan. Institut Pertanian Bogor. 188h. Sudarwin, (2008). Analisis Spasial Pencemaran  Logam  Berat  (Pb  Dan  Cd) Pada Sedimen Aliran Sungai Dari Tempat Pembuangan Akhir (TPA)
Juvenil, 2(3), 176-185, (2021)
Sampah  Jatibarang  Semarang, Tesis , Program  Pasca  Sarjana  Universitas
Diponegoro, Semarang.
Suharto,  B., Susanawati,  L.  D.,  & Wilistien,  B. I.  (2011).  Penurunan  kandungan  logam Pb dan Cr leachate melalui fitoremediasi bambu  air  (Equisetum  hyemale)  dan zeolit. Agrointek , 5 (2), 148-158. Suyono, Y., & Salahudin, F. (2011). Identifikasi dan  karakterisasi  bakteri  Pseudomonas pada tanah yang terindikasi terkontaminasi  logam. Jurnal  Biopropal Industri , 2 (1), 8-13. Todar,  K.  (2011). Fermentation  of  Food  By Lactic  Acid  Bacteria .  Todars  Online Textbook of Bacteriology. Umar,  M.  T.  (2001).  Kandungan  Logam  Berat
Tembaga  (Cu)  pada  Air,  Sedimen  dan
Kerang  Marcia  sp  di  Teluk  Parepare
Sulawesi
Wijayati,  N.,  Astutiningsih,  C.,  &  Mulyati,  S. (2014).  Transformasi?-Pinena  dengan
Bakteri Pseudomonas
aeruginosa ATCC  25923. Biosaintifika:  Journal  of Biology  &  Biology  Education , 6 (1),  24- 28. Yulaipi, S., & Aunurohim, A. (2013).
Bioakumulasi  logam  berat  timbal  (Pb) dan
hubungannya dengan laju pertumbuhan  Ikan  mujair  (Oreochromis mossambicus). Jurnal  Sains  dan  Seni ITS , 2 (2), E166-E170.