## Peningkatan Kadar Fenolik Total dari Chlorella sp. Menggunakan Cekaman Radiasi Ultraviolet-B
Sri Sedjati 1* , Endang Supriyantini 1 , Sri Yulina Wulandari 2 , Nur Islamiah Sulastri 1
1 Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro 2 Departemen Oseanografi, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH. Kampus UNDIP Tembalang, Semarang 50275 Indonesia E-mail: sedjati69@gmail.com

## Abstract

## Increased Total Phenolic Content of Chlorella sp. Using Ultraviolet-B Radiation Stressing
The treatment of abiotic stressing in microalgae cultures can trigger the production of secondary metabolites that have a variety of bioactivity. Phenolic compounds are one of the secondary metabolites produced by Chlorella sp . and have been categorized as an important  antioxidants that play a role in the scavenging of free radicals.  This research uses ultraviolet (UV)- B (λ 280 -320 nm) as a stressing in Chlorella sp. cultures.  The aim is to determine the effect of UV-B radiation on the biomass production of Chlorella sp . and total phenolic content (TPC), as well as its antioxidant activity.  The research method used is experimental with a completely randomized design (RAL).  The treatment tested was UV-B radiation with different duration of 0 (control), 40, 80, and 120 minutes / day during the culture period. Chlorella sp . culture is carried out using 12 glass containers with  seawater  (salinity  35  ppt)  as  culture  media  and  enriched  by  Walne  fertilizer  (1  mL/L).    During  the  culture  period, photosynthetically active radiation (PAR) light and aeration are carried out for 24 hours.  Biomass of Chlorella sp . was harvested 1 day after the peak of growth, then determined the weight of biomass and ethanol extract, followed by TPC, and antioxidant activity. The TPC test was carried out using the Follin-Ciocalteu reagent, while antioxidant activity used an inhibition test against 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH).  The results showed that UV-B radiation  had no significant effect on the biomass (p=0.122) and its ethanol extract yield (p=0.194), but had a significant effect on TPC (p=0.003) and DPPH inhibition percentage (p=0.036). The UV-B radiation for 80 minutes/day for 10 days of the Chlorella sp . culture can be used to increase phenolic production with a TPC value of 4.906 mg GAE/g extract.
Keywords: UV-B radiation, total phenolic content, antioxidant activity

## Abstrak
Pemberian  cekaman  abiotik  pada  kultur  mikrolga  dapat  memicu  produksi  metabolit  sekunder  yang  memiliki  beragam bioaktivitas.  Senyawa fenolik adalah salah satu metabolit sekunder yang diproduksi oleh Chlorella sp. dan telah dikatagorikan sebagai  antioksidan  penting  yang  berperan  dalam  penangkalan  radikal  bebas.    Penelitian  ini  menggunakan  cahaya ultraviolet (UV)-B ( λ 280-320 nm) sebagai cekaman dalam kultur Chlorella sp.  Tujuannya adalah untuk menentukan pengaruh radiasi UV-B terhadap produksi biomassa Chlorella sp . dan kadar fenolik total/ total phenolic content (TPC), serta aktivitas antioksidannya.  Metode penelitian yang digunakan adalah eksperimental dengan desain rancangan acak lengkap (RAL). Perlakuan yang diujicobakan adalah pemberian radiasi UV-B dengan durasi yang berbeda, yaitu 0 (kontrol), 40, 80, dan 120 menit / hari selama masa kultur. Kultur Chlorella sp. dilakukan menggunakan 12 wadah kaca dengan media kultur berupa air laut (salinitas 35 ppt) dan ditambahkan pupuk Walne (1 mL/L).  Selama masa kultur, pemberian cahaya photosynthetically active radiation (PAR) dan aerasi dilakukan selama 24 jam.  Biomassa Chlorella sp. dipanen 1 hari setelah tercapai puncak pertumbuhan, kemudian ditentukan berat biomassa dan ekstrak etanolnya, dilanjutkan uji TPC, dan aktivitas antioksidannya. Uji TPC dilakukan menggunakan reagen Folin - Ciocalteu , sedangkan aktivitas antioksidan menggunakan uji inhibisi terhadap 2,2- dipheny l-1- picrylhydrazyl (DPPH). Hasil penelitian menunjukkan bahwa radiasi UV-B tidak berpengaruh signifikan terhadap biomassa Chlorella sp . (p=0,122) dan rendemen ekstrak etanolnya (p=0,194), namun berpengaruh signifikan terhadap TPC (p=0,003) dan persentase inhibisi DPPH (p=0,036).  Pemberian radiasi UV-B selama 80 menit/hari selama 10 hari masa kultur Chlorella sp. dapat digunakan untuk meningkatkan produksi fenolik dengan nilai TPC sebesar 4,906 mg GAE/g ekstrak.
Kata kunci :  radiasi UV-B, kadar fenolik total, aktivitas antioksidan

## PENDAHULUAN
Mikroalga laut telah menarik perhatian para peneliti selama puluhan tahun disebabkan oleh kandungan biomolekulnya yang memiliki beragam bioaktivitas. Saat ini, pengembangannya telah sampai  pada  tahap  pemanfaatannya  di  berbagai  bidang  seperti  industri  pangan  fungsional, nutrasetikal,  dan  suplemen  makanan  (Andrade,  2018),  maupun  industri  pakan  untuk  biota
akuakultur  (Andriopoulos et  al .,  2022).    Mikroalga  banyak  mengandung  metabolit  primer  dan sekunder yang dapat dimanfaatkan sebagai bahan pangan, obat, mapun kosmetik (Hamdy et al ., 2020). Salah satu metabolit sekunder yang disintesis mikroalga adalah senyawa fenolik.  Senyawa fenolik memiliki beragam bioaktivitas yang bisa dimanfaatkan untuk kepentingan manusia.  Fenolik dari  alga  laut  memiliki  sifat  sebagai  antimikroba,  antivirus,  antikanker,  antidiabetes,  antioksidan, ataupun anti-inflamasi (Mateos et al ., 2020 ;  Thangaraj et al ., 2022). Mikroalga yang kaya senyawa fenolik di antaranya adalah Chlorella sp. (Ali et al ., 2014; Jayshree et al ., 2016;  Azaman et al ., 2017). Senyawa fenolik juga dikenal sebagai polifenol yaitu senyawa organik yang secara kimiawi terdiri dari  satu  atau  lebih  cincin  fenolik.  Senyawa  fenolik  dianggap  sebagai  salah  satu  golongan antioksidan alami yang penting karena dapat melindungi sel makhluk hidup dari kerusakan yang disebabkan oleh radikal bebas (Andrade, 2018).
Senyawa  fungsional  yang  terdapat  dalam  biomassa  mikroalga  telah  diketahui  merupakan sumber antioksidan alami, sehingga dapat dimanfaatkan sebagai peredam radikal bebas dalam tubuh.  Antioksidan alami yang dihasilkan mikroalga termasuk pigmen, fenolik, dan tokoferol (Safafar et al ., 2015; Canelli et al ., 2022; Yusof et al ., 2021). Chlorella vulgaris adalah contoh mikroalga yang telah  dimanfaatkan  sebagai  suplemen  makanan  dan  berperan  sebagai  mediator  yang  efektif dalam  menangkal  radikal  bebas.    Skrining  fitokimia  menunjukkan  adanya  senyawa  alkaloid, glikosida, protein, terpenoid, saponin, kumarin, fenol, dan tannin terdapat dalam ekstrak C. vulgaris (Hamdy et  al .,  2020;  Pradhan et  al .,  2021).  Senyawa  bioaktif  dalam    mikroalga  yang  bertindak sebagai peredam ampuh dari radikal bebas yaitu konstituen fenolik dan flavonoid. Ekstrak C. vulgaris telah diuji dan diketahui bersifat antioksidan kuat secara in vitro (Pradhan et al ., 2021).
Chlorella vulgaris telah banyak diteliti serta memiliki kadar fenolik total yang tinggi dan  pada konsentrasi  ekstrak  1000  μg/m L  menunjukkan  aktivitas  penghambatan  (inhibisi)  terhadap  radikal bebas diphenyl-1-picryhydrazyl (DPPH) sampai 92,57 % (Jayshree et al ., 2016). Aktivitas antioksidan didukung  oleh  adanya  kandungan  senyawa  fenolik  dalam  biomassa  mikroalga  dan  telah dievaluasi. Chlorella sp.  yang  diekstrak  dengan  etanol  menunjukkan  kadar  fenolik  total  sebesar 26,65 µg GAE/g biomassa kering, lebih tinggi dari fenolik total alga hijau lainnya, misalnya Ulva sp. yang hanya mengandung 2,29 µg GAE/g (Dimova et al ., 2019).   Keberadaan senyawa fenolik pada metabolit  sekunder  mikroalga  berkorelasi  positif  dengan  aktivitas  antioksidannya  (Fithriani et al ., 2016; Azaman et al ., 2017; Hamdy et al ., 2020).
Mikroalga menggunakan cahaya dengan panjang gelombang 400-700 nm yang merupakan bagian dari spektrum cahaya matahari  atau biasa disebut photosynthetically active radiation (PAR) untuk fotosintesis.  Satuan intensitas cahaya yang biasa digunakan adalah lumen/m 2 atau lux (lx) maupun μmol photons/m 2 /s. Jika dilakukan konversi, 1 lux setara dengan 0,0135 μmol photons/m 2 /s (Thimijan et  al .,  1983).  Paparan  cahaya  pada  panjang  gelombang  tertentu  akan  menghasilkan daya (kekuatan) radiasi yang dinyatakan dalam satuan W/m 2 . Intensitas cahaya dari sumber lampu light emitting diode (LED) sebesar 1 lx menghasilkan 0,0086 W/m 2 (Michael et al ., 2020). Chlorella spp. dapat dikultur pada kisaran intensitas cahaya PAR 1000-10.000 lx (Asadi et al ., 2020), bahkan spesies C. reinhardtii mampu hidup pada intensitas tinggi, yaitu pada kisaran 70-1.500 μmol photons/m 2 /s atau 5.185-111.111 lx. Intensitas cahaya tinggi telah terbukti dapat meningkatkan sintesis metabolit sekunder  seperti  asam  galat,  asam  klorogenat,  dan  asam  koumarat.  Ketiga  senyawa  tersebut adalah golongan fenolik (Faraloni et al ., 2021).
Penggunaan cahaya  PAR yang dikombinasikan dengan cahaya ultraviolet (UV)-A (320-400 nm)  dan  B  (280-320  nm)  pada  beberapa  spesies  diatom  yang  dikultur  sudah  pernah  diteliti sebelumnya.  Hasilnya  menunjukkan  bahwa  hanya  UV-B  yang  dapat  meningkatkan  produksi senyawa fenolik (Scholz et al ., 2014).  Pemberian paparan jenis UV lainnya,  yaitu UV-C ( <280 nm) tidak  disarankan  karena    berbahaya  bagi  kelangsungan  hidup  mikroalga.    Cahaya  dengan panjang gelombang relatif pendek  memiliki energi radiasi lebih tinggi.  Klorofil lebih sensitif terhadap radiasi UV-C dibanding UV-B, sehingga dampaknya lebih merusak  (Nassour et al ., 2017). Menurut
penelitian yang telah dilakukan oleh Lung et al . (2022), radiasi UV-C dapat mengakibatkan tingkat kematian sampai 91,76 ± 3,33% pada kultur Chlorella sp..
Cahaya  UV  menghasilkan  radiasi  gelombang  elektromagnetik  yang  lebih  tinggi  energinya dibandingkan  dengan  PAR.    Paparan  radiasi  UV-B  yang  diberikan  dengan  daya  sebesar  0,47-42 W/m 2 pada  kultur  mikroalga  masih  dapat  ditoleransi.    Dampak  yang  terjadi  adalah  penurunan tingkat  pertumbuhan,  kandungan  klorofil,  dan  kandungan  protein  yang  secara  signifikan  terlihat setelah terpapar dalam jangka panjang (30 hari).  Semua ekstrak dari kelompok spesies diatom yang diteliti  menunjukkan  respon  peningkatan  aktivitas  antioksidan  dan  akumulasi  senyawa  fenolik sebagai akibat dari paparan UV. Faktor utama yang menghasilkan respon yang berbeda adalah panjang gelombang dan durasi paparan radiasi UV.  Panjang gelombang UV yang lebih pendek dan waktu paparan yang lebih lama menyebabkan efek yang paling signifikan (Scholz et al ., 2014). Hasil  penelitian  sejenis  oleh  Ganapathy et  al .  (2017)  juga  menunjukkan  bahwa C.  vulgaris tahan terhadap efek kerusakan akibat radiasi UV-B selama masa kultur.  Hal ini diduga karena efek negatif dari radiasi UV-B terhadap pertumbuhan mikroalga telah diimbangi dengan peningkatan produksi senyawa penyerap cahaya UV, salah satunya berupa senyawa fenolik.
Penggunaan  nutrien  terbatas  sebagai  cekaman  abiotik  untuk  meningkatkan  kandungan senyawa fenolik biasa dilakukan pada kultur mikroalga. Namun, cekaman nutrisi bukanlah strategi yang  efektif  untuk  meningkatkan  kandungan  antioksidan  secara  keseluruhan  pada  mikroalga, meskipun mungkin berguna untuk produksi beberapa antioksidan golongan vitamin seperti tokoferol dan asam askorbat (vitamin C) (Goiris et al ., 2015). Hal ini menjadi alasan penting untuk mencari strategi kultur autotrofik mikroalga dengan cekaman radiasi UV sehingga produksi metabolit yang diinginkan  tercapai.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  menentukan  efek  pemberian  radiasi  UV-B dengan durasi yang berbeda terhadap biomassa Chlorella sp . , serta kadar fenolik total dan potensi aktivitas antioksidannya terhadap radikal DPPH dalam ekstrak etanol.  Harapannya, hasil penelitian ini dapat diaplikasikan untuk menghasilkan biomassa Chlorella sp. yang kaya senyawa fenolik dan dapat dimanfaatkan sebagai bahan pangan fungsional.

## MATERI DAN METODE
Mikroalga yang digunakan dalam penelitian ini adalah stok murni Chlorella sp. yang diperoleh dari Laboratorium Balai Besar Pengembangan Budidaya Air Payau (BBPBAP), Jepara.  Media kultur berupa  air  laut  dengan  salinitas  35  ppt  telah  disterilisasi  dengan  cara  perebusan  selama  2  jam, merujuk pada Hartanto (2013).  Metode kultur Chlorella sp. mengacu pada Mufidah et al. (2019), dilakukan dengan menggunakan 12 wadah kaca (volume 3 L) dengan kepadatan awal 1,50 x10 6 sel/mL. Perbandingan antara bibit dan media kultur yaitu 1:4, kemudian ditambahkan pupuk Walne dengan  konsentrasi  sebanyak  1  mL/L.    Selama  masa  kultur,  pemberian  cahaya  PAR  dan  aerasi dilakukan selama 24 jam, suhu berkisar 23-25 o C, pH 8-9, dan DO 6-8 .
Wadah  kultur  diletakkan  pada  area  seluas  0,5  m 2 sesuai  rancangan  penelitiannya  (acak lengkap). Sumber cahaya PAR menggunakan lampu Phillips TL LED (60 V; 20 W) sebanyak 4 buah, kemudian diatur jarak sumber cahaya terhadap media kultur sehingga diperoleh intensitas sebesar ±4.500 lx.  Penentuan intensitas cahaya PAR yang digunakan mengacu pada Fakhri et al . (2021). Pemberian  radiasi  UV  diilakukan  pada  media  kultur  pada  ruangan  khusus  seluas  0,5  m 2 . Sumber radiasi UV-B menggunakan  lampu Phillips TL UV-B (280-320 nm; 56 V; 8 W; daya radiasi UV pada jarak 1m = 0,172 W/m 2 ). Besaran daya  radiasi UV-B yang diaplikasikan mengacu pada Zhang et al . (2015). Pemberian radiasi ultraviolet (UV-B) terbagi menjadi 4 kelompok perlakuan dengan durasi paparan yang berdeda, yaitu 0 (kontrol), 40, 80, dan 120 menit / hari selama masa kultur.
Perhitungan kepadatan sel mikroalga Chlorella sp. dilakukan setiap hari hingga masa panen. Perhitungan  kepadatan  sel  mikroalga  menggunakan haemocytometer di  bawah  mikroskop dengan perbesaran 100x dan dibantu dengan handy counter . Pemanenan biomassa Chlorella sp. dilakukan dengan cara mengendapkan mikroalga Chlorella sp. dengan aluminium sulfat (Al 2 (SO 4 ) 3 ) dengan konsentrasi 0,2 gr/L (Hidayati et al., 2015).  Pemanenan biomassa dilakukan setelah Chlorella
sp. memasuki fase stasioner, yaitu 1 hari setelah puncak pertumbuhan (Andriopoulos et al ., 2022). Sampel mikroalga yang telah diberikan larutan aluminium sulfat dihomogenkan selama 30 menit, kemudian  wadah  kaca  ditutup  dengan plastic  wrap dan  didiamkan  selama  1  malam.  Setelah Chlorella sp.  mengendap,    media  kultur  yang  bening  di  bagian  permukaan  dibuang  perlahan hingga tersisa sedikit cairan dan biomassanya saja. Biomassa Chlorella sp. disentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm dan selanjutnya dipisahkan dari supernatannya (Bariyyah et al., 2013).  Biomassa basah dikeringkan menggunakan cawan petri terbuka pada suhu dingin dalam refrigerator (4 o C) dan ditimbang beratnya menggunakan neraca analitik.
Sampel yang sudah kering diekstraksi dengan teknik maserasi menggunakan pelarut etanol p.a 99%  dengan perbandingan 1 : 10  (b:v) selama 24 jam dan disaring menggunakan kertas saring Whatmann No 42. Filtrat yang diperoleh dipekatkan dengan vacum rotary evaporator pada suhu 40 0 C hingga diperoleh ekstrak etanol dan kemudian beratnya ditimbang.
Uji  fenolik  total  atau total  phenolic  content (TPC)  dari  ekstrak Chlorella sp.  dilakukan menggunakan  reagen Folin - Ciocalteu menggunakan  metode  spektrofotometri.  Senyawa  fenolik yang digunakan sebagai standar adalah asam galat.  Kurva standar dibuat dengan seri  konsentrasi 5, 10, 15, 20, dan 25 ppm dengan pelarut etanol p.a 99%.  Larutan asam galat dengan berbagai konsentrasi  maupun  sampel  tersebut  diambil  2  mL  dan  ditambahkan  5  mL  akuades  dan  0,5  mL reagen Folin-Ciocalteau .  Larutan  didiamkan  selama  3  menit  kemudian  ditambah  1  mL  larutan Na 2 CO 3 5%, selanjutnya diinkubasi selama 1 jam. Absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 765 nm (Kurnia et al., 2020). Kadar fenolik total dihitung dari kurva kalibrasi asam galat dan dinyatakan sebagai mg gallic acid equivalent (GAE)/g ekstrak etanol.
Uji aktivitas antioksidan ditentukan berdasarkan persentase penghambatan (inhibisi) terhadap radikal bebas diphenyl-1-picryhydrazyl (DPPH). Ekstrak sampel Chlorella sp. yang digunakan untuk uji inhibisi  DPPH  dibuat  dengan  konsentrasi  100  ppm.  Hasil  pengenceran  ekstrak  diambil  3  mL  dan ditambahkan 1 mL larutan DPPH 0,1 mM. Larutan dihomogenkan dan ditutup dengan aluminium foil. Selanjutnya,  larutan  tersebut  diinkubasi  selama  30  menit  dalam  ruang  gelap  dan  diukur absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang maksimum DPPH (515 nm) (Sedjati et al., 2020). Kemampuan untuk meredam radikal bebas DPPH (inhibisi) dihitung dengan menggunakan rumus :

## Inhibisi DPPH (%)   =
Absorbansi Kontrol − Absorbansi Sampel Absorbansi  Kontrol 𝑥 100
Grafik  data  penelitian  digambarkan  dengan  bantuan  aplikasi Excel 17,  sedangkan  analisis statistika inferensial dilakukan dengan SPSS 25.  Data biomassa kering, rendemen, kadar fenolik total, dan  inhibisi  DPPH  dari  sampel  dianalisis  menggunakan  uji  parametrik One  Way  ANOVA yang sebelumnya  sudah  dilakukan  uji  normalitas  dan  homogenitas.  Selanjutnya,  apabila  terdapat pengaruh  signifikan  (p<0,05)  maka  dilanjutkan  dengan  uji  Tukey  untuk  menentukan  perbedaan antar kelompok perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Paparan radiasi UV-B dapat terjadi secara alamiah dari sinar matahari dan bisa berdampak bagi kehidupan fitoplankton di perairan laut. Penelitian ini menggunakan radiasi UV-B dengan daya 0,17  W/m 2 dan  terlihat  sudah  berdampak  negatif,  terlihat  dari  pola  kurva  pertumbuhannya, Kelompok populasi yang terpapar UV-B selama 80 dan 120 menit terlihat pertumbuhannya menurun mulai  hari  ke-9,  berbeda  dengan  kelompok  kontrol  dan  40  menit  yang  masih  meningkat. Berdasarkan hasil peneltian Zhang et al . (2015),  radiasi UV-B dengan daya sebesar 0,16 W/m 2 sudah berpengaruh negatif terhadap kelangsungan hidup mikroalga.  Secara umum, radiasi UV-B memiliki dampak  yang  nyata  pada  struktur  kloropoplas,    proses  fotosintesis,  termasuk  pigmentasi,  kinerja fotosintesis, dan reaksi asimilasi karbon. Kloroplas adalah target radiasi UV,  sementara di dalamnya
terdapat  grana  (tumpukan  tilakoid)  sebagai  tempat  terjadinya  reaksi  terang.  Oleh  karena  itu, kerusakan  strukturnya  dapat  menyebabkan  penurunan  kapasitas  fotosintesis.  Reaksi  terang berperan menyediakan energi untuk menggerakkan reaksi gelap yang memfasilitasi proses asimilasi karbon menjadi glukosa. Peneliti lainnya, Wong et al . (2011)  menambahkan bahwa radiasi UV-B juga  mengganngu  struktur  pusat  reaksi  fotosistem  II  (PS  II),  dan  mempengaruhi  aktivitas  rubisco, sehingga dapat mengurangi laju fotosintesis maupun pertumbuhan mikroalga.  Menurut Gruber & Feiz  (2018),  rubisco  ( ribulose-1,5-bisphosphate  carboxylase/oxygenase )  adalah  enzim  yang mengkatalis  reaksi  kimia  dalam  siklus  Calvin-Benson  (reaksi  gelap),  berfungsi  mengubah  karbon anorganik  (CO 2 )  menjadi  sumber  karbon  organik  yang  dapat  digunakan  secara  biologis  oleh tumbuhan.
Hasil  penghitungan  kepadatan  sel  dan  tercapainya  puncak  pertumbuhan Chlorella sp. selama  masa  kultur  berbeda-beda  antar  kelompok  perlakuan  seperti  terlihat  dalam  Gambar  1. Selama 4 hari di awal masa kultur, pemberian radiasi UV-B pada semua kelompok perlakuan mampu meningkatkan pertumbuhan Chlorella sp., jika dibandingkan dengan kontrolnya.  Namun, di periode selanjutnya hanya kelompok kontrol dan yang diberi 40 menit radiasi UV-B saja yang mampu tumbuh dengan baik seperti terlihat dari peningkatan kepadatan selnya.  Terjadinya puncak pertumbuhan tersingkat dicapai oleh kelompok populasi yang diberi PAR dan radiasi UV-B selama 120 menit, yaitu pada hari ke-8 dengan kepadatan sel sebesar 3,99 x10 6 sel/mL. Berikutnya, kelompok yang terpapar radiasi  UV-B  selama  80  menit  terlihat  pada  hari  ke-9  mengalami  puncak  pertumbuhan  dengan kepadatan sel  3,74x10 6 sel/mL.  Kelompok dengan paparan radiasi  UV-B  yang lebih singkat, yaitu hanya  40  menit  mencapai  puncak  pertumbuhan  lebih  lama  yaitu  pada  hari  ke-12  dengan kepadatan    9,68x10 6 sel/mL.  Sementara  itu,  kelompok  yang  hanya  diberi  PAR  saja  (kontrol) mencapai puncak pertumbuhan dengan masa terlama yaitu pada hari ke 13 dengan kepadatan sebesar 9,58 x10 6 sel/mL.  Fase stasioner mulai terjadi setelah Chlorella sp. mengalami penurunan kepadatan  sel  setelah  fase  puncak  pertumbuhan.  Berdasarkan  grafik  pertumbuhan Chlorella sp. (Gambar1) terlihat kecenderungan bahwa cekaman radiasi UV-B menurunkan kepadatan sel serta mempersingkat tercapainya puncak pertumbuhan maupun fase stasioner.
Penurunan kepadatan sel pada kelompok populasi Chlorella sp.  yang terkena radiasi  UV-B ternyata tidak berdampak signifikan terhadap berat biomassa yang dihasilkannya setelah  melalui uji statistik (Tabel1).  Hasil ini terlihat seperti bertolak belakang dengan hasil perhitungan kepadatan selnya. Hal ini diduga karena perbedaan ukuran/volume selnya berbeda antar kelompok perlakuan. Kelompok kontrol dan yang diberi radiasi UV-40 menit memiliki kepadatan sel tinggi, tetapi ukurannya
0 2 4 6 8 10 12 1 2 3 4
5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Ke pa d a ta n ( X 1 0 6 sel/ m l) Lama Kultur (Hari) PAR (kontrol)
PAR+40 menit UV-B
PAR+80 menit UV-B
PAR+120 menit UV-B
lebih kecil dibanding kelompok yang diberi radiasi 80 dan 120 menit, sehingga setelah ditimbang berat biomassanya relatif sama. Hasil ini serupa dengan penelitian  Singh et al . (2019), pemberian radiasi UV-B dengan daya 15 W/m 2 dengan durasi 2 jam/hari selama 15 hari pada kultur Chlorella sp. dapat meningkatkan kadar protein dan lipidnya. Al-Rashed et al . (2016) juga mengamati efek serupa tetapi pada spesies yang berbeda, yaitu pemberian radiasi UV-B terhadap pertumbuhan Spirulina platensis dan Dunaliella salina . Efek yang terlihat ketika mikroalga terpapar radiasi  UV-B (daya 0,5 W/m 2 selama 3 hari dengan durasi 2 jam/hari) adalah penurunan tingkat pertumbuhan karena  terjadi  kerusakan  pigmen  fotosintesis.    Namun,  dampak  positifnya  adalah    peningkatan produksi protein. Peningkatan sintesis lipid mapun protein diduga berkaitan dengan penambahan massa sel sehingga ukurannya menjadi lebih besar.
Rendemen ekstrak etanol dari Chlorella sp. juga tidak terpengaruh oleh paparan radiasi UV-B (Tabel 1).  Rendemen ekstrak mencerminkan banyaknya senyawa metabolit sekunder yang terambil oleh pelarut etanol secara keseluruhan.  Banyaknya metabolit yang terambil tergantung jenis dan polaritas  pelarut  yang  digunakan.  Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan,  ekstrak Chlorella sp.  mengandung  asam  amino/protein,  asam  lemak/lipid,  klorofil,  karotenoid,  vitamin, mineral, enzim, asam nukleat, dan senyawa fitokimia lainnya yang menguntungkan bagi manusia (Singh et al ., 2019; Malothu, 2020). Senyawa fitokimia atau metabolit sekunder yang ditemukan di antaranya alkaloid, terpenoid, fenolik, flavonoid, tannin, kuinon, glikosida, dan saponin (Hamdy et al ., 2020; Pradhan et al ., 2021; Thangaraj et al ., 2022).  Metabolit sekunder terbesar yang teridentifikasi dalam ekstrak metanol C. vulgaris oleh Prabakaran et al . (2018) adalah golongan fenolik, diikuti oleh alkaloid, terpenoid, glikosida, flavonoid, dan yang paling kecil adalah tannin. Sementara itu, ekstrak etanol C.  vulgaris yang  diteliti  oleh  Fithriani et  al .  (2015)  mengandung  fenolik,  flavonoid,  tannin, alkaloid, steroid, glikosida, dan saponin.
Pemberian radiasi UV-B tidak berpengaruh terhadap  rendemen ekstrak Chlorella sp., namun menghasilkan efek signifikan terhadap TPC. Uji TPC dianalisis menggunakan reagen Folin-Ciolcateu , prinsip  kerjanya  adalah  reaksi  oksidasi  dan  reduksi  kolorimetrik  untuk  mengukur  semua  senyawa fenolik dalam sampel uji. Asam galat adalah senyawa dari golongan fenol yang biasa digunakan sebagai  pembanding  atau  standar.  Setelah  dilakukan  analisis  regresi  terhadap  kurva  kalibrasi standar asam galat maka diperoleh persamaan y = 0,026x + 0,072 dan r² = 0,921 dan digunakan untuk menentukan nilai TPC yang terdapat pada Gambar 2.  Kelompok populasi Chlorella sp. yang terpapar 80 menit radiasi UV-B/hari selama 10 hari menghasilkan kadar fenolik total tertinggi, yaitu sebesar  4,906  mg  GAE/g  ekstrak  etanol.  Hasil  terendah  terdapat  pada  pemberian  radiasi  UV-B dengan durasi 120 menit/hari selama 9 hari dengan nilai 1,667 mg GAE/g ekstrak etanol.
Menurut beberapa literatur, senyawo golongan fenolik yang terdapat dalam ekstrak Chlorella sp. di antaranya adalah asam ferulat, asam koumarat, asam kafeat (Zakaria et al ., 2020), kuarsetin, dan asam galat (Dahmen-Ben et al ., 2021).  Senyawa fenolik sangat berperan dalam mekanisme penangkalan oksidan (radikal bebas) sehingga termasuk sebagai antioksidan. Selama penelitian, cahaya PAR yang diberikan adalah dengan intensitas sedang secara terus-menerus 24 jam tanpa periode gelap. Harapannya adalah agar dapat memicu produksi senyawa antioksidan.   Menurut Yusof et al . (2021), mikroalga kaya akan antioksidan alami, namun jenis  senyawa, kuantitas, dan kualitas  metabolit  yang  disintesis  tergantung  spesies  miroalga  dan  kondisi  kulturnya.  Selama fotosintesis,  peningkatan  intensitas  cahaya  PAR  dapat  digunakan  untuk  menginduksi  produksi banyak  metabolit  sekunder  pada  tanaman.  Metabolit  yang  disintesis  tersebut  berperan  dalam penanggulangan stres oksidatif dan mekanisme toleransi saat kondisi lingkungan berubah.  Radiasi aktif  oleh  PAR  dan  lamanya  pencahayaan  (fotoperiod)  mempengaruhi  akumulasi  senyawa antioksidan.  Respon  terhadap  cahaya  terus  menerus  selama  24  jam  memicu C.  vulgaris meningkatkan mekanisme perlindungan dengan cara memproduksi antioksidan alami.
Selanjutnya,  cekaman  radiasi  UV-B  yang  diterapkan  selama  kultur Chlorella sp.  dalam penelitian  ini  terbukti  dapat  meningkatkan  produksi  antioksidan,  yaitu  golongan  senyawa  fenolik sampai dengan durasi  80 menit/hari.   Namun, ketika durasi radiasi  UV-B  ditingkatkan sampai 120
menit/hari terlihat sudah terjadi penurunan kadar TPC (Gambar 2), sehingga senyawa fenolik yang berperan  menanggulangi  tekanan  lingkungan  termasuk  radiasi  UV  semakin  berkurang.  Dampak yang  terjadi  yaitu  sel  mikroalga  sudah  tidak  mampu  lagi  beradaptasi  yang  menyebabkan menurunnya kepadatan sel akibat kematian (Gambar 1). Menurut Zhang et al . (2015), kerentanan akibat  peningkatan  radiasi  UV-B  sangat  bervariasi  di  antara  spesies  mikroalga,  ditentukan  oleh interaksi kompleks antara mekanisme perlindungan dan perbaikan sistem sel terhadap faktor-faktor lain yang dapat menyebabkan kerusakan sel.
Peningkatan kadar fenolik total berkorelasi positif dengan aktivitas antioksidannya (Fithriani et al ., 2016; Azaman et al ., 2017; Hamdy et al ., 2020).  Namun, berdasarkan Gambar 2 terlihat bahwa aktivitas antioksidan justru menurun di saat kadar TPC meningkat. Kondisi ini bisa dijelaskan dari sudut pandang  cara  kerja  senyawa  antioksidan  dalam  menangkal  radikal  bebas.  Uji  TPC  mengukur secara  keseluruhan  (total)  senyawa  yang  termasuk  golongan  fenolik.    Zhang et  al .  (2022) menyatakan bahwa fenolik dapat diklasifikasikan menurut struktur kimianya menjadi asam fenolik, flavonoid,  tanin,  lignan  dan  stilben.    Masing-masing  kelompok  tersebut  tidak  semuanya  memiliki mekanisme penangkalan radikal bebas yang bisa terukur dengan uji DPPH. Uji DPPH hanya dapat mengukur  kemampuan  mendonorkan  elektron  tunggal  dari  senyawa  antioksidan  dalam  sampel untuk  menetralkan  radikal  bebas  DPPH.  Menurut  Zeb    (2020),  selain  transfer  elektron,  aktivitas antioksidan yang dapat dilakukan oleh senyawa fenolik adalah dengan cara mentransfer hidrogen dan sebagai pengkelat logam transisi (oksidator) penyebab terbentuknya oksidan.  Beberapa hasil penelitian sebelumnya mengungkapkan bahwa bioaktivitas fenolik tidak terbatas sebagai antioksidan
Gambar 2 . Kadar fenolik total (TPC) dan persentase inhibisi DPPH dari ekstrak etanol Chlorella sp. Keterangan: n=3, notasi huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh signifikan (p<0,05)
Tabel 1. Berat biomassa ( dry weight ) dan rendemen ekstrak etanol Chlorella sp.
Durasi Paparan UV-B (menit) Biomassa (g dw)* Rendemen Ekstrak (%)* 0 0,90±0,10 1,92±0,07 40 0,75±0,05 1,46±0,15 80 0,70±0,08 1,68±0,30 120 0,73±0,12 1,54±0,32
Keterangan: -  Nilai merupakan rerata ± SD (n=3); *Tidak ada pengaruh signifikan (p≥0,05)
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 0 1 2 3 4 5 6 7 0 40 80 120 In h ib isi DPPH ( % ) TP C ( mg G A E/ g) Durasi Paparan UV-B (menit) TPC Inhibisi DPPH a a b a a a b b
saja, tetapi dapat juga sebagai antimikroba, antivirus, antikanker, antidiabetes, dan anti-inflamasi (Mateos et al ., 2020 ;  Thangaraj et al ., 2022).  Hasil penelitian ini dapat digunakan sebagai acuan dalam pemanfaatan cekaman radiasi UV-B untuk memicu peningkatan produksi senyawa fenolik, meskipun tidak berdampak terhadap peningkatan aktivitas penangkalan radikal bebas.  Senyawa fenolik  memiliki  beragam  bioaktivitas,  sehingga  bisa  diaplikasikan  untuk  tujuan  selain  sebagai antioksidan.

## KESIMPULAN
Pemberian  cekaman  radiasi  UV-B  dengan  daya  0,17  W/m 2 dengan  durasi  40,  80,  dan  120 menit/hari  selama  masa  kultur  tidak  berpengaruh  signifikan  terhadap  biomassa  (p=0,122),  dan rendemen  ekstrak Chlorella sp . (p=0,194),  namun  berpengaruh  signifikan  terhadap  kadar  fenolik total (TPC) (p=0,003) dan potensi aktivitas antioksidan terhadap radikal DPPH (p=0,036) pada ekstrak etanolnya. Paparan radiasi UV-B selama 80 menit/hari selama 10 hari masa kultur Chlorella sp. dapat meningkatkan  produksi  senyawa  fenolik  dengan  nilai  TPC  sebesar  4,906  mg  GAE/g  ekstrak. Cekaman  radiasi  UV-B  selama  masa  kultur  dapat  diaplikasikan  untuk  meningkatkan  produksi senyawa fenolik pada Chlorella sp.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali, H.E.A., Shanab, S.M.M., Abo-State, M.A.M., Shalaby, E.A A., el Demerdash, U.M.N., & Abdullah, M.A.    (2014).    Screening  of  Microalgae  for  Antioxidant  Activities,  Carotenoids  and  Phenolic Contents. Applied  Mechanics  and  Materials ,  625,  156 – 159.  doi:  10.4028/www.scientific.net/ AMM.625.156.
Al-Rashed,  S.A.,  Ibrahim,  M.M.,  El-Gaaly,  G.A.,  Al-Shehri,  S.,  &  Mostafa,  A.    (2016).    Evaluation  of Radical  Scavenging  System  in  Two  Microalgae  in  Response  to  Interactive  Stresses  of  UV-B Radiation  and  Nitrogen  Starvation. Saudi  Journal  of  Biological  Sciences ,  23(6),  706 – 712.  doi:
10.1016/ j.sjbs.2016.06.010.
Andrade,  L.M.  (2018).  Chlorella  and  Spirulina  Microalgae  as  Sources  of  Functional  Foods, Nutraceuticals, and Food Supplements; an Overview. MOJ Food Processing & Technology , 6(1), 45-58.  doi: 10.15406/mojfpt.2018.06.00144.
Andriopoulos,  V.,  Gkioni,  M.D.,  Koutra,  E.,  Mastropetros,  S.G.,  Lamari,  F.N.,  Hatziantoniou,  S.,  & Kornaros, M. (2022).  Total Phenolic Content, Biomass Composition, and Antioxidant Activity of Selected  Marine  Microalgal  Species  with  Potential  as  Aquaculture  Feed. Antioxidants ,  11(7),
p.1320.  doi: 10.3390/antiox11071320.
Azaman,  S.N.A.,  Nagao,  N.,  Yusoff,  F.M.,  Tan,  S.W.,  &  Yeap,  S.K.  (2017).  A  Comparison  of  The Morphological  and  Biochemical  Characteristics  of Chlorella  sorokiniana and Chlorella zofingiensis Cultured Under Photoautotrophic and Mixotrophic Conditions. PeerJ , 5, e3473. doi: 10.7717/peerj.3473.
Asadi, P., Amini Rad, H., & Qaderi, F.  (2020).  Lipid and Biodiesel Production by Cultivation Isolated Strain Chlorella  sorokiniana pa.91  and Chlorella  vulgaris in  Dairy  Wastewater  Treatment  Plant Effluents. Journal  of  Environmental  Health  Science  and  Engineering ,  18,  573 – 585 doi:
10.1007/s40201-020-00483-y/Published.
Bariyyah, S. K.,  Hanapi. A, Fasya, A.G., & Abidin, M. (2013). Uji Aktivitas Antioksidan Terhadap DPPH dan  Identifikasi  Golongan  Senyawa  Aktif  Ekstrak  Kasar  Mikroalga Chlorella sp.  Hasil  Kultivasi dalam Medium Ekstrak Tauge. Jurnal Kimia , 2(3), 195-204.
Canelli, G., Tevere, S., Jaquenod, L., Dionisi, F., Rohfritsch, Z., Bolten, C. J., Neutsch, L., & Mathys, A. (2022).  A  Novel  Strategy  to  Simultaneously  Enhance  Bioaccessible  Lipids  and  Antioxidants  in Hetero/Mixotrophic Chlorella  vulgaris as  Functional  Ingredient. Bioresource  Technology ,  347, p.126744.  doi: 10.1016/j.biortech.2022.126744.
Dahmen-Ben,  M.I.,  Masmoudi,  M.  A.,  Choura,  S.,  Chamkha,  M.,  &  Sayadi,  S.  (2021).  Extraction Optimization  Using  Response  Surface  Methodology  and  Evaluation  of  The  Antioxidant  and Antimicrobial Potential of Polyphenols in Scenedesmus sp. and Chlorella sp. Biomass Conversion and Biorefinery . pp.1-14 doi: 10.1007/s13399-021-01850-x.
Dimova,  D.,  Dobreva,  D.,  Panayotova,  V.,  &  Makedonski,  L.  (2021).  DPPH  Antiradical  Activity  and Total Phenolic Content  of Methanol and Ethanol Extracts from  Macroalgae ( Ulva rigida ) and Microalgae  ( Chlorella sp.). Scripta  Scientifica  Pharmaceutica , 6 (2),  37-41.  doi:  10.14748/ ssp.v7i2.7369.
Fakhri, M., Riyani, E., Ekawati, A.W., Arifin, N.B., Yuniarti, A., Widyawati, Y., Saputra, I.K., Samuel, P.D., Arif, M.Z., & Hariati, A.M.  (2021).  Biomass, Pigment Production, and Nutrient Uptake of Chlorella sp. Under Different Photoperiods. Biodiversitas , 22(12), 5344 – 5349. doi: 10.13057/biodiv/d221215. Faraloni,  C.,  di  Lorenzo,  T.,  &  Bonetti,  A.  (2021).  Impact  of  Light  Stress  on  The  Synthesis  of  Both Antioxidants  Polyphenols  and  Carotenoids,  as  Fast  Photoprotective  Response  in Chlamydomonas reinhardtii : New Prospective for Biotechnological Potential of This Microalga.
Symmetry , 13 (11), p.2220.  doi: 10.3390/sym13112220.
Fithriani, D., Amini, S, Susiana Melanie, S., & Susilowati, R.  (2016).  Phytochemical Screening, Total Phenol  Content  and  Antioxidant  Activity  of  Microalgae Spirulina sp., Chlorella sp.  and Nannochloropsis sp.  J PB Kelautan dan Perikanan, 10(2), 101 – 109 .
Ganapathy, K. Chidambaram, K, Janarthanan, R., & Ramasamy, R.  (2017).  Effect of UV-B Radiation on  Growth,  Photosynthetic  Activity  and  Metabolic  Activities  of Chlorella  vulgaris . Journal  of Microbiology and Biotechnology, 6(2), 53-60.
Goiris, K., van Colen, W., Wilches, I., León-Tamariz, F., de Cooman, L., & Muylaert, K. (2015). Impact of Nutrient Stress on Antioxidant Production in Three Species of Microalgae. Algal Research , 7, 51 – 57. doi: 10.1016/j.algal.2014.12.002.
Gruber,  A.V.,  &  Feiz,  L.    (2018).    Rubisco  Assembly  in  The  Chloroplast. Frontiers  in  Molecular Biosciences, 5(24), 1-11.  doi: 10.3389/fmolb.2018.00024.
Hamdy,  O.,  Karim,  A.,  Farouk  Gheda,  S.,  Ismail,  G.A.,  &  Abo-Shady,  A.M.  (2020).  Phytochemical Screening and antioxidant activity of Chlorella vulgaris. Delta Journal of Science, 41 , 81-91. Hartanto, H.S.B., Hariyati, R., & Retnaningsih, T.   (2013).  Pertumbuhan Populasi Chlorella beijerinck dengan Perlakuan Penambahan Logam Berat Tembaga (Cu) pada Skala Laboratorium. Jurnal Biologi , 2(1), 19-27.
Hidayati, S., Nawansih, O., & Febiana, V.  (2015).  Harvesting Techniques Microalgae Nannochloropsis sp. Cultivated in Liquid Waste Rubber Crumb Media by Aluminium Sulphate Floccullant. Jurnal Teknologi Industri & Hasil Pertanian , 20(2), 97-108. Jayshree,  A.,  Jayashree,  S.,  &  Thangaraju,  N.  (2016). Chlorella  vulgaris and Chlamydomonas reinhardtii :  Effective  Antioxidant,  Antibacterial  and  Anticancer  Mediators. Indian  Journal  of Pharmaceutical Sciences, 78(5), 575-581.
Kurnia, D., Rosliana, E., Juanda, D., & Nurochman, Z.  (2020).  Aktivitas Antioksidan dan Penetapan Kadar Fenol Total dari Mikroalga Laut Chlorella vulgaris , Jurnal Kimia Riset , 5(1), 14-21. Lung, W.Q.C., Yeh, H.Y., Yang, S.J., Huang, C.Y., Nan, F.H., & Lee, M.C. (2022). Delayed Signs of UV-C Damage  to Chlorella sp.  Observed  through  Fluorescent  Staining. Diversity ,  14(5),  p.376.  doi: 10.3390/d14050376.
Malothu,  R.  (2020).  Fatty  Acids  Extraction  from  Algae Chlorella  vulgaris . International  Journal  of Engineering Research & Technology , 9(7), 171-178.
Mateos,  R.,  Pérez-Correa,  J.R.,  &  Domínguez,  H.  (2020).  Bioactive  Properties  of  Marine  Phenolics. Marine Drugs , 18(10), p.501. doi: 10.3390/md18100501.
Michael, P.R., Johnston,  D.E., &  Moreno, W.  (2020). A Conversion  Guide:  Solar Irradiance and Lux Illuminance. Journal  of  Measurements  in  Engineering , 8 (4),  153 – 166. doi: 10.21595/jme.2020. 21667.
Mufidah,  A.,  Agustono,  A.,  Sudarno,  S.,  &  Nindarwi,  D.  D.  (2019).  Teknik  Kultur Chlorella sp.  Skala Laboratorium dan Intermediet di Balai Perikanan Budidaya Air Payau (BPBAP) Situbondo Jawa Timur. Journal of Aquaculture and Fish Health , 7(2), 50 – 56. doi: 10.20473/ jafh.v7i2.11246. Nassour,  R.,  Ayash,  A.,  &  Mohamad,  I.  (2017).  The  Effect  of  Ultraviolet  Radiation  on  Chlorophyll  in Chlamydomonas reinhardtii . International Journal of Agriculture & Environmental Science , 4(6),
23 – 27.  doi: 10.14445/23942568/IJAES-V4I6P105.
Prabakaran, G., Moovendhan, M., Arumugam, A., Dineshkumar, R., Matharasi, A., & Sampathkumar,
P. (2018). Quantitative Analysis of Phytochemical Profile in Marine Microalgae Chlorella vulgaris . International Journal of Pharmacy and Biological Sciences , 8(2), 562-565.
Pradhan, B., Patra, S., Dash, S. R., Nayak, R., Behera, C., & Jena, M.  (2021). Evaluation of The Anti- Bacterial Activity of Methanolic Extract of Chlorella vulgaris Beyerinck [Beijerinck] with Special Reference to Antioxidant Modulation. Future Journal of Pharmaceutical Sciences , 7 (1), 1-11. doi: 10.1186/s43094-020-00172-5.
Safafar, H., Wagenen, J. van, Møller, P., & Jacobsen, C. (2015). Carotenoids, Phenolic Compounds and Tocopherols Contribute to The Antioxidative Properties of Some Microalgae Species Grown on Industrial Wastewater. Marine Drugs , 13 (12), 7339 – 7356. doi: 10.3390/md13127069.
Scholz, B., Rúa, A., & Liebezeit, G. (2014). Effects of UV Radiation on Five Marine Microphytobenthic Wadden Sea Diatoms Isolated from The Solthörn Tidal Flat (Lower Saxony, Southern North Sea) - Part I: Growth and Antioxidative Defence Strategies. European Journal of Phycology , 49 (1), 68 – 82. doi: 10.1080/09670262.2014.889214.
Sedjati, S., Pringgenies, D. & Fajri, M. (2020). Determination of the Pigment Content and Antioxidant Activity of the Marine Microalga Tetraselmis suecica. Jordan Journal of Biological Sciences , 13(1), 55-58.
Singh, R., Upadhyay, A.K., Singh, D.V., Singh, J.S., & Singh, D.P.  (2019).  Photosynthetic Performance, Nutrient  Status  and  Lipid  Yield  of  Microalgae Chlorella  vulgaris and Chlorococcum  humicola Under  UV-B Exposure. Current  Research  in Biotechnology , 1, 65 – 77. doi: 10.1016/j.crbiot.2019. 10.001.
Thangaraj, M., Saravana, B.P., Thanasekaran, J., Joen-Rong, S., Manubolu, M., & Pathakoti, K. (2022). Phytochemicals of Algae, Arthospira platensis (Spirulina) Chlorella vulgaris (Chlorella) and Azolla pinnata (Azolla). GSC  Biological and Pharmaceutical Sciences , 19(2), 023 – 043. doi:  10.30574/ gscbps.2022.19.2.0167.
Thimijan,  R.  W.,  Heins,  R.D.,  Thimijan,  R.W.,  &  Heins,  R.D.  (1983).  Photometric,  Radiometric,  and Quantum Light Units of Measure A Review of Procedures for Interconversion. Hortscmnce , 18(6),
818-820.
Wong  C.Y.,  Teoh  M.L.,  Phang  S.M,  &  Chu  W.L.  (2011).  Effect  of  Ultraviolet  Radiation  (UVR)  on  The Tropical Microalga Chlorella vulgaris . Malaysian Journal of Science , 30(1), 3-5.
Yusof, N.S., Yeong, Y.S., Zakeri, H.A., Wahid, M.E.A., Ghafar, S.N.A., & Yusuf, N.  (2021). Photoperiod Influenced  The  Growth  and  Antioxidative  Responses  of Chlorella  vulgaris , Isochrysis  galbana , and Tetraselmis  chuii . Journal  of  Applied  Pharmaceutical  Science ,  11(4),  125 – 134.  doi: 10.7324/JAPS.2021.110415.
Zakaria, S.M., Kamal, S. M. M., Harun, R., Omar, R., & Siajam, S. I. (2020). Characterization on Phenolic Acids  and  Antioxidant  Activity  of Chlorella sp.  Microalgae  Using  Subcritical  Water  Extraction. Sains Malaysiana , 49(4), 765 – 774.  doi: 10.17576/jsm-2020-4904-05.
Zeb, A. (2020). Concept, Mechanism, and Applications of Phenolic Antioxidants in Foods. Journal of Food Biochemistry , 44(9), e13394.  doi: 10.1111/jfbc.13394.
Zhang,  X.,  Tang,  X.,  Zhou,  B.,  Hu,  S.,  &  Wang,  Y.  (2015).  Effect  of  Enhanced  UV-B  Radiation  on Photosynthetic  Characteristics  of  Marine  Microalgae Dunaliella  salina (Chlorophyta, Chlorophyceae). Journal  of  Experimental  Marine  Biology  and  Ecology ,  469,  27 – 35.  doi: 10.1016/j.jembe.2015.04.002.
Zhang, Y., Cai, P., Cheng, G., & Zhang, Y. (2022).  A Brief Review of Phenolic Compounds Identified from  Plants:  Their  Extraction,  Analysis,  and  Biological  Activity. Natural  Product Communications, 17(1), 1-14. doi: 10.1177/1934578X211069721.