ADSORPSI PALADIUM (II)

## OLEH PROTEIN BAKTERI TERMOFILIK

## Laksmi Dewi Kasmiarno
Universitas Pertamina, Jalan Teuku Nyak Arief, Simprug, Grogol Selatan, RT.7/RW.8, Grogol Sel., Kby. Lama, Kota Jakarta Selatan, Daerah Khusus Ibukota Jakarta 12220 Tel : (021) 29044308 Email address : laksmi.dewi@universitaspertamina.ac.id

## Abstrak
Kebutuhan  logam  mulia  seperti  paladium  (Pd)  semakin  meningkat,  sehingga  dibutuhkan metode  pertambangan  khusus  untuk  mengambil  logam  mulia  tersebut  dari  alam,  yang  dapat menyebabkan  meningkatnya  biaya  produksi.  Salah  satu  cara  efektif  untuk  mengambil  logam  mulia dengan  biaya  rendah  namun  tingkat  selektivitas  yang  tinggi  adalah  dengan  menggunakan mikroorganisme  atau  turunannya  seperti  protein  yang  dapat  mengadsorpsi  metal  secara  langsung. Dalam penelitian ini, protein yang berasal dari bakteri termofilik digunakan sebagai biosorbent untuk mengadsorb  logam  Paladium  yang  berupa  larutan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengetahui pengaruh pH terhadap proses biosorpsi paladium terhadap protein dengan metode pengendapan oleh aseton.  Hasil  yang  diperoleh  adalah  pengendapan  oleh  aseton    merupakan  metode  analisa  dan pemulihan protein yang cocok dengan rasio protein dan aseton, 1:6. Biosorpsi paladium pada kondisi asam  dengan    pH  3  memperoleh  hasil  adsorpsi  optimal  dengan  kapasitas  adsorpsi  712.74  mg  Pd/g protein,  pada  kondisi  pH  tinggi,  kelarutan    akan  menurun  karena  cenderung  membentuk  reaksi pengendapan sehingga sukar untuk bereaksi dengan protein sebagai biosorben
Kata kunci : bakteri termofilik, paladium, protein.

## ADSORPTION OF PALLADIUM BY THERMOPHILIC BACTERIAL PROTEINS

## Abstract
The  demands  of  paladium  (Pd)  have  markedly  increased.  the  process  of  noble  metal  mining requires employment of expensive technology, making the cost of mining process higher than received economic  benefits..  One  of  the  effective  ways  to  take  metal  with  low  mining  process  cost  and  high selectivity is using microorganisms or their derived products (such as proteins) to directly adsorb the metals. In this study, proteins derived from thermophilic bacteria  were used as biosorbent  to adsorb palladium.  The  purpose  of  this  research  is  to  get  the  optimum  adsorption  using  initial  pH  variable. Protein  recovery  was  using  precipitation  method  by  acetone  with  volume  ratio  1:6.  The  optimum adsorption  condition  occurred  at  pH  3  with  an  adsorption  capacity  of  712.74  mg  Pd/g  protein.  At higher  pH  conditions,  the  solubility  of  compound  will  decrease  as  it  tends  to  form  a  precipitation reaction so it is difficult to react with proteins as biosorbents
Keywords : palladium, protein, thermophilic bacteria

## PENDAHULUAN
Paladium  termasuk  dalam  golongan  logam mulia  yang  memiliki properti  fisika dan kimia  yang sangat  unik.  Paladium  ini  mempunyai  peranan sangat  penting  dalam  berbagai  bidang  seperti perangkat  elektronik,  bahan  bakar,  dan  katalis. Sebagai katalis, paladium digunakan dalam berbagai macam  industri,  seperti  pertanian  dan  kesehatan (Ramesh  dkk.,  2008).  Katalis  paladium  digunakan pada  dunia  industri  dan  kimia  sintesis,  karena paladium  sangat  cocok  pada  penggunaan  sistem homogen  karena  tingkat  selektivitasnya  (Zeng  dkk, 2014).  Selain  itu  juga  digunakan  pada  aplikasi lampu  dan  optikal  seperti  lampu  LEDs,  laser,  dan berbagai  perangkat  elektronik  yang  ekonomis  dan ramah lingkungan.
Metode  yang  paling  sering  digunakan  untuk mendapatkan logam mulia adalah dengan melakukan proses  penggalian  dan  pertambangan.  Selain  itu, logam  mulia  juga  dapat  ditemukan  pada  produk sampingan  pada  aliran  limbah  di  industri  proses panas  bumi  (geotermal),  pengolahan  air  laut, pengolahan  air  industri,  dan  berbagai  jenis  industri lainnya.  Paladium  yang  terkandung  dalam  jenis industri  ini  memiliki  konsentrasi  kecil  dan  berada dalam  fasa  larutan.  Beberapa  penelitian  telah dilakukan  untuk  mendapatkan  logam  murni  yang telah larut dalam berbagai jenis pelarut, seperti yang terdapat  pada  industri  geotermal.  Ada  berbagai metode  yang  dapat  dilakukan  untuk  memurnikan logam  dari  pelarutnya  seperti  pengendapan  dengan bahan  kimia,  koagulasi,  pertukaran  ion,  dan teknologi  membran . Pengendapan  dengan  menggu- nakan bahan kimia, meskipun mudah karena logam- logam  akan  mengendap  dengan  bantuan  koagulan atau  dengan  mengatur tingkat  keasamannya,  namun membutuhkan  larutan  inorganik  dalam  jumlah banyak  dan  akan  menjadi  limbah  yang  dapat mencemari  lingkungan.  Pengolahan  dengan  cara teknologi  membran  dan  pertukaran  ion  dapat meningkatkan  kemurnian,  tingkat  selektivitas,  dan tidak  menghasilkan  limbah  kimia  seperti  proses pengendapan namun biaya yang dikeluarkan dengan menggunakan  metode  ini  sangat  tinggi  (Lo  dkk, 2014).  Metode secara biologi merupakan salah satu alternatif  untuk  mendapatkan  kembali  logam  mulia yang  berasal  dari  pengolahan  industri  limbah. Metode  ini  menggunakan  makhluk  hidup,  seperti mikroorganisme  dan  turunannya  seperti  protein  dan sel  mati  yang    dapat  mengabsorb  logam  mulia dengan  tingkat  selektifitas  yang  tinggi  (Veglio  dkk, 1997).  Salah  satu  metode  secara  biologi  yang  dapat diterapkan  untuk  mendapatkan  logam  mulia  adalah biosorpsi dan bioakumulasi.
Biosorpsi  dan  bioakumulasi  merupakan metode pengadsorpsian logam dengan menggunakan biomassa  dan  turunannya.  Bioakumulasi  dan biosorpsi  memiliki  perbedaan  yang  signifikan  yaitu
bioakumulasi  melibatkan  organisme  yang  masih hidup,  sedangkan  biosorpsi  hanya  melibatkan organisme  yang  sudah  mati  dan  turunannya. Bioakumulasi  dapat  didefinisikan  bahwa  ion-ion logam akan masuk ke dalam sel, diakumulasi dalam intraselular,  dan  akan  melewati  membran  sel kemudian akan melewati siklus metabolisme dari sel tersebut.  Sedangkan  pada  metode  biosorpsi,  ion-ion logam  diambil  oleh  orgaisme  yang  telah  mati  dan turunannya  seperti  protein,  alga,  dsb  (Romero  dkk, 2006).  Bioakumulasi  memiliki  kekurangan,  dianta- ranya dari segi biaya karena dibutuhkan penanganan dan  pemeliharaan  untuk  organisme  yang  masih hidup,  pada  bioakumulasi  terjadi  reaksi  absorpsi pada  ion-ion  logam  yang  diserap,  sedangkan  pada biosorpsi  hanya  terjadi  reaksi  adsorpsi.  Untuk regenerasi  organisme  dan  turunannya,  biosorpsi memiliki keunggulan dibandingkan dengan bioakumulasi  karena  pada  bioakumulasi  ion-ion logam akan  masuk ke dalam  sel organisme  dan  ikut bereaksi  pada  sistem  metabolisme  organisme tersebut.
Beberapa  penelitian  membuktikan  bahwa biosorpsi  merupakan  metode  yang  efektif  dalam menghilangkan  kandungan  logam  pada  limbah dengan  biaya  yang  rendah  dan  tidak  mencemari lingkungan  (Kumar,  dkk,  2009).  Mikroorganisme seperti  bakteri,  yeast,  dan  alga  terbukti  dapat mengambil  logam  dari  berbagai  larutan  limbah (Ibrahim  dkk,  2004;  Gutnick  dkk,  2000;  Aksu  dkk, 2005).  Biosorpsi  logam  adalah  metode  pengikatan ion-ion  logam  dengan dinding sel atau membran sel organisme karena perbedaan gugus fungsi elektronegativitas,  pada  dinding  sel  atau  mebran  sel terdapat protein  membran  yang dapat mengikat ion- ion  logam  tersebut  (Huang  dkk,  2003).  Interaksi antara  protein  dengan  ion-ion  logam  ini  memegang peranan  penting  dalam  sistem  biologi  untuk penyerapan  nutrisi  dan  zat  besi  (Isab  dkk,  1997). Beberapa  penelitian  melaporkan  bahwa  protein murni  yang  berasal  dari  ovalbumin,  lisozim,  dan bovine  serum  albumin  (BSA)  dapat  mengadsorbsi logam  mulia  (Maruyama  dkk,  2007).  Dari  hasil penelitian tersebut diketahui bahwa protein merupakan  salah  satu  alternatif  bahan  pengadsorbsi untuk ion metal.
Penelitian  ini  memfokuskan  pada  proses biosorpsi logam paladium menggunakan protein dari bakteri  termofilik.  Metode  untuk  pemurnian  protein digunakan pengendapan dengan aseton.

## METODE PENELITIAN
Bahan dan alat .
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah protein, tripton, ekstrak  yeast, MgSO 4 ·7H 2 O, NaCl,  KNO 3 ,  NaNO 3 ,  Na 2 HPO 4 ,  Asam  Nitrilotri- asetic,  FeCl 3 ·6H 2 O,  MnCl 2 ·4H 2 O,  COCl 2 ·6H 2 O,
CaCl 2 ·2H 2 O, ZnCl 2 , CuCl 2 ·2H 2 O, H 3 BO 3 , Na 2 MoO 4 ·2H 2, larutan paladium, HCl, NaOH.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  membran  ultrafiltasi Amicon 10  kDa, Bradford assay (Sigma) , ELISA OD 595 .
Prosedur Penelitian .
Percobaan  ini  menggunakan  protein  yang berasal  dari  perkembangbiakan  bakteri  termofilik yang  tahan  terhadap  suhu  tinggi.  Bakteri  termofilik dikultivasi  pada  medium-  termus  (Tenreiro,  1995). Kandungan  pada  1  liter  media  thermus  adalah  1  g tripton,  1  g  ekstrak  yeast,  0.1  g  MgSO 4 ·7H 2 O, 0.008  g  NaCl,  0.1  g  KNO 3 ,  0.690  NaNO 3 ,  0.110   g Na 2 HPO 4 ,  dan  10  ml  larutan  trace  elements  yang terdiri  dari  12.8  g  Asam  Nitrilotriasetic,  1.35  g FeCl 3 ·6H 2 O, 0.1 g MnCl 2 ·4H 2 O, 0.024 g COCl 2 ·6H 2 O,  0.1  g  CaCl 2 ·2H 2 O,  0.1  g  ZnCl 2 , 0.025  g  CuCl 2 ·2H 2 O,  0.010  g  H 3 BO 3 ,  dan  0.024  g Na 2 MoO 4 ·2H 2 O.  Kemudian  protein  dipisahkan dengan  cara  sentrifugasi  dengan  kecepatan  10,000 rpm  pada  suhu  4 0 C  selama  10  menit.  Setelah  itu, protein yang didapatkan ditingkatkan konsentrasinya hingga  10  kali  dari  konsentrasi  awalnya  dengan menggunakan  membran  ultrafiltasi Amicon 10  kDa. Konsentrat  protein  kemudian  dibilas  dengan  air terdeionisasi sebanyak 3 kali.

## Pemurnian protein menggunakan metode pengendapan dengan aseton
Protein dengan konsentrasi 50mg/L sebanyak 5mg/L  ditambahkan  larutan  aseton  murni  (99%) dengan  perbedaan  rasio  volum  antara  protein  dan aseton  yaitu  1:1;  1:2;  1:3;  1:4;  1:5;  1:6;  1:7;  1:8 (Crowell,  2013).  Campuran  larutan  aseton  dan protein  didiamkan  selama  60  menit.  Kemudian disentrifugasi  selama  10  menit  dengan  kecepatan 10,000  rpm  pada  suhu  4 0 C.  Pelet  protein  yang didapatkan dipisahkan dari  larutan supernatan. Pelet protein tersebut kemudian dikeringkan pada oven 30 0 C  selama  20menit.  Kemudian  ditambahkan  air terdeionisasi  sebanyak  5  ml.  Protein  kemudian dianalisa  dengan  menggunakan Bradford  assay (Sigma) dan  diukur  konsentrasi  protein  dengan ELISA OD 595 .
Biosorpsi  logam  paladium  dan  analisa  protein yang bereaksi dengan paladium
Protein  dengan  konsentrasi  50  mg/L  ditam- bahkan  100  mg/L  larutan  paladium  dengan  rasio volum  yang  sama,  masing-masing  sebanyak  2.5 ml. Larutan  paladium  digunakan  larutan  standar  dari High  Purity  Standard  Inc,  USA,  pada  percobaan  ini digunakan  kontrol  variabel  yaitu  2.5  ml  larutan paladium  100  mg/L  yang  ditambahkan  2.5  ml  air terdeionisasi. Setelah itu dilakukan pengontrolan pH awal dengan  menambahkan asam klorida (HCl) dan Natrium  hidroksida  (NaOH).  pH  yang  digunakan dengan range pH 1, pH 2, pH 3, pH 4, pH 5,  pH 6,
pH  7,  dan  pH  8.  Masing-masing  campuran  larutan protein dengan logam paladium dan kontrol variabel yang  telah  diatur  pH-nya  kemudian  didiamkan selama  60  menit  dalam  suhu  ruangan.  Kemudian campuran  larutan  ditambahkan  aseton  murni  (99%) dengan  rasio  1:6.  Setelah  itu  didiamkan  selama  30 menit  dalam  suhu  ruangan.  Campuran  larutan  dan aseton  disentrifugasi  selama  10  menit  dengan kecepatan10,000  rpm  pada  suhu  4 0 C.  Kemudian pelet  yang  telah  didapatkan  dikeringkan  pada  suhu 30 0 C  selama  20  menit.  Metode  penelitian  ini dilakukan  sebanyak  2  kali  untuk  dilakukan  analisa adsorpsi  logam  dan  analisa  kadar  protein  yang bereaksi  dengan  logam.  Untuk  analisa  adsorpsi logam  ditambahkan  5  M  Asam  Nitrit  sebanyak  5ml untuk  pengukuran  kandungan  logam  paladium dengan  ICP  ( Inductively  Coupled  Plasma )  merek Jobin-Yvon  ICP  Optical  Emission  Spectrometer  JY 2000-2 oleh Horiba Scientific. Inc. ICP menggunakan  gas  argon  dan  Photoluminescence (PL) diatur pada 12-13, G pada 0.2-0.3, dan tekanan gas  argon  pada  6psig.    Untuk  analisa  kadar  protein yang bereaksi dengan paladium dilakukan penambahan dengan air terdeionisasi sebanyak 5 ml. Kemudian dianalisa dengan Bradford assay menggunakan ELISA OD 595 .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Protein  dihasilkan  dari  kultivasi  bakteri kemudian dianalisa kadar protein dengan menggunakan  metode Bradford  assay dan  ELISA OD 595 . Pemulihan protein ( Protein recovery ) dilaku- kan  dengan  metode  pengendapan  menggunakan larutan aseton murni (Ma et al ., 1996).

## Pemurnian protein menggunakan metode pengendapan dengan aseton
Dalam  penelitian  ini  kondisi  pengendapan protein  dengan  menggunakan  aseton  akan  diuji dengan  menggunakan  perbedaan  rasio  volum  antara protein  dan  aseton,  dengan  rasio  yang  digunakan adalah  1:1;  1:2;  1:3;  1:4;  1:5;  1:6;  1:7;  dan  1:8. Sebagai  contoh,  untuk  rasio  volum  1:1,  2.5  ml larutan  protein  dengan  konsentrasi  50  mg/l ditambahkan dengan larutan aseton sebanyak 2.5 ml, pada suhu ruangan dan didiamkan selama 30  menit. Dari  Gambar  1 . diperoleh  hasil  bahwa  semakin banyak  aseton  yang  ditambahkan  pada  larutan protein,  maka  semakin  tinggi  tingkat  pemulihan proteinnya,  pada  rasio  volum  protein-aseton  1:1 didapatkan  pemulihan  proteinnya  mencapai  64.8%. Nilai  pemulihan  protein  terus  meningkat  hingga mencapai  81.6%  pada  rasio  volum  1:6.  Kemudian pada rasio 1:8 dan 1:10, pemulihan protein mencapai angka yang hampir sama yaitu 82.6% dan 83.7%.
P ro te in R e c o v e ry ( % ) 0 20 40 60 80 100 Rasio volum protein : aseton 1 : 1 1 :2 1:4 1:6 1:8 1:10
Gambar 1. Pengaruh perbandingan rasio volum protein : aseton dalam pemurnian protein.

## Adsorpsi logam paladium dan analisa protein yang bereaksi dengan paladium
PH  awal  pada  penellitian  ini,  divariasikan dari  pH  1  hingga  pH  8  untuk  mengetahui  kondisi optimal  dari  reaksi  biosorbsi  logam  paladium  dan protein. Natrium oksida dan asam klorida digunakan untuk  mengatur  pH  larutan  sesuai  dengan  pH  awal yang  dikehendaki.  Saat  pengaturan  pH  rendah (rentang  1-3),  larutan  logam  paladium  dan  protein akan  terlarut  dengan  baik.  Hasil  yang  berbeda didapatkan  pada  saat  pH  mendekati  suasana  basa. Larutan  logam paladium dan protein, ketika pH nya semakin  meningkat,  semakin  banyak  pelet  yang terbentuk  pada  larutan.  Hal  ini  dapat  dijelaskan karena  logam  paladium  akan  berekasi  dengan  ion- ion  oksida  yang  berasal  dari  natrium  oksida  dan membentuk  logam  oksida,  dimana  ini  akan  sangat mudah  untuk  terbentuk  endapan,  pada  sampel kontrol,  semakin  tinggi  pH  awal  maka  semakin banyak  terbentuk  endapan.  Namun  pada  rentang pH  4-pH  8,  perbedaan  endapan  tidak  terlalu signifikan seperti pada Gambar 2.
Gambar 2. Pengaruh pengaturan pH awal pada adsorpsi paladium oleh protein
Logam  paladium  yang  terserap  oleh  protein dianalisa  dengan  menggunakan  metode  pengenda- pan  oleh  aseton.  Metode  ini  juga  dapat  mengetahui jumlah  pemulihan  protein (protein  recovery ).  pH merupakan  salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi proses adsorpsi, yang tidak hanya berpengaruh pada ikatan  antara  logam  dan  biosorben,  tetapi  juga kondisi  larutan  dimana  terjadi  ikatan  logam  dengan biosorben (Fiol et al., 2006). Setiap logam memiliki perbedaan  kondisi  optimum  untuk  pH  awal,  karena pH  mempengaruhi  kondisi  pengendapan,  dan ketersediaan ion-ion logam pada larutan tersebut.
pH 1 2 3 4 5 6 7 8 P e rs e n tas e P d yan g ti d ak t e rad sor p p rot e in ( %) 0 20 40 60 80 100 K ap as it as A d sor p si ( m g P d /g P rot e in ) 0 500 1000 1500 2000 2500 Prosentase Pd yang tidak teradsorp protein (%) Kapasitas adsorpsi (mg Pd/ g Protein)
Gambar 3. Persentase protein dan kapasitas adsorpsi paladium oleh protein pada perbedaan pH awal
Kapasitas adsorpsi dari logam paladium yang berikatan dengan protein dihitung dengan menggunakan persamaan :
𝑞 = logam Pd yang teradsorpsi di protein ( mg L ) Analisa protein dengan 𝐸𝐿𝐼𝑆𝐴 𝑂𝐷 595 ( g L ) – variabel kontrol (logam Pd dan air) ( mg L ) Analisa protein dengan 𝐸𝐿𝐼𝑆𝐴 𝑂𝐷 595 ( g L ) .
Untuk  biosorpsi  logam  paladium,  kapasitas adsorpsi  pada  pH  1-pH  3  meningkat  dengan  nilai 640.13  - 712.74 mg Pd/g  protein. Pada   rentang  pH 4-pH  5  cenderung  konstan,  dan  cenderung  turun pada  rentang  pH  6  -  8.  Hal  ini  dapat  dijelaskan karena  pada  saat  pH  rendah,  kondisi  larutan  berada pada suasana asam, dimana banyak ion-ion hidrogen dan  klorida.  Jumlah  ion  klorida  akan  membentuk kloro-anion yang akan bereaksi dengan gugus fungsi amino  dari  protein (Ghassary  dkk,  2005).  Protonasi dari gugus  fungsi amina dari protein akan  memben- tuk  sinyal  elektrostatis  yang  akan  menyebabkan terjadinya  pembentuk  anion  logam  kompleks  dan akan  meningkatkan  kondisi  adsorpsi  dari  protein untuk logam paladium. Dalam suasana asam, ion-ion paladium akan  berada dalam kondisi stabil  yaitu  Pd (II).  Ion-ion  ini  akan  membentuk  senyawa  yang stabil  terutama  dengan  gugus  fungsi  amino  dari protein  (Zhou  dkk,  2010).  Interaksi  pada  logam anion dan situs aktif protein ditunjukkan pada reaksi di bawah ini :
R-NH 2 + H + Cl -  RNH 3 + Cl - 2RNH 3 + Cl - + PdCl 4 2-  (RNH 3 + ) 2 PdCl 4 2- + 2Cl-
Saat  kondisi  basa,  terjadi  penurunan  pada tingkat  adsorbsi  logam  paladium  oleh  protein.  Hal ini dapat dijelaskan bahwa pada pH tinggi kelarutan senyawa  logam  kompleks  akan  menurun  dan cenderung  membentuk  reaksi  pengendapan,  sehing- ga  logam  paladium  sukar  bereaksi  dengan  protein (Ruiz  dkk,  2000).  Dalam  berbagai  literatur,  bahwa didapatkan kapasitas adsorpsi yang cenderung tinggi pada  saat  pH  rendah  (Guibal  dkk,  2002;  Ma  dkk., 2006).

## SIMPULAN
Protein yang dihasilkan dari bakteri termofilik  secara  efektif  dapat  menjadi  biosorben untuk logam paladium. Pengukuran logam paladium dan protein yang bereaksi dianalisa dengan menggu- nakan  pengendapan  oleh  aseton.  Rasio  volum optimum untuk protein dan aseton adalah 1:6. Untuk logam Pd, kondisi optimum adsorbsi berada pada pH 3  dengan  kapasitas  adsorpsi  adalah  712.74  mg  Pd/g protein,  pada  kondisi  pH  tinggi,  kelarutan  senyawa akan  menurun  karena  cenderung  membentuk  reaksi pengendapan  sehingga  sukar  untuk  bereaksi  dengan protein sebagai biosorben.

## DAFTAR PUSTAKA
Aksu,  Z.  2005. Application  of  biosorption  for  the removal  of  organic  pollutants:  A  review. Proc. Biochem. 40, 997-1026
Crowell,  A.  M.,  Wall,  M.  J.,  Doucette  A.  A.  2013. Maximizing recovery of water-soluble proteins  through  acetone  Precipitation. Analytical Chimica Acta 796 : 48-54
Fiol,  N.,  Villaescusa,  I.,  Martínez,  M.,  Miralles, N.,
Poch,  J.  2006.  ‘Serarol,  Sorption  of Pb(II),Ni(II), Cu(II) and Cd(II) from aqueous solution  by  olive  stone  waste’. Sep. Purif.Technol. 50, 132-140,
Ghassary, P., Vincent, T., Marcano, J. S., Macaskie, L.  E.,  Guibal,  E.  2005. Palladium  and
Platinum recovery from bicomponent
mixtures using chitosan derivatives . Hydrometallurgy 76 131-147
Guibal, E., Von Offenberg N., Vincent, T., Tobin, J.
M.  2002. Sulfur  derivatives  of  chitosan  for palladium  sorption. Reactive  and  Functional Polymers (50): 149-163
Gutnick,  D.  L.,  &  Bach,  H.  2000. Engineering bacterial  biopolymers  for  the  biosorption  of heavy  metals;  new  products  and  novel formulations .  Appl.  Microb.  Biotechnol.  54, 451-460.
Huang,  C.  C., Su,  C.  C.,  Hsieh,  J.  L.,  Tseng,  C. P., Lin,  P.  L.,  Chang,  J.  S.  2003. Polypeptides
for  heavy-metal  biosorption:  capacity  and specificity  of  two  heterogeneous  MerP proteins . Enzyme Microb. Technol. :33, 379- 385.
Ibrahim,    H.,  Kandel,  S.  F.,    Moawad,  H.  2004. ‘Biosorption  of  heavy  metals  from  waste water  using Pseudomonas  sp ’. Electronic Journal of Biotechnology; 7(1):40-47.
Isab,  A.  A.,  Sadler,  P.  J.  1997. Reactions  of  gold (III) ions with ribonuclease A and methionine derivatives  in  aqueous  solution .  Biochim. Biophys. Acta: 492, 322-330.
Kumar  J.  I.  N.,  Oommen,  C.,  Kumar,  R.  N.  2009.
Biosorption  of  heavy  metals  from  aqueous solution  by  green  marine  microalgae  from Okha  Port,  Gulf  of  Kutch,  India. American- Eurasian J Agric & Environ Sci ;6(3):317-23. Lo,  Y.  C.,  Cheng,  C.  L.,  Han  Y.  L.,  Chen  B.  Y, Chang  J.  S.  2014. Recovery  of  high-value metals  from  geothermal  sites  by  biosorption and bioaccumulation . Bioresource
Technology 160 : 182-190
Ma, H.,  Liao, X. P., Liu, B., Bi, S. 2006. Recovery of  platinum  (IV)  and  palladium  (II)  by bayberry  tannin  immobilized  collagen  fiber membrane  from  water  solution. J.  Membr. Sci. 278 373–380.
Ma,  J.,  Stoter,  G.,  Verweij,  J.,  Schellens,  J.  H.  M. 1996. Comparison of ethanol plasma protein precipitation  with  plasma  ultrafiltration  and trichloroacetic  acid  protein  precipitation  for the  measurement  of  unbound  platinum concentration. Cencer  Chemother  Pharmacol 38 : 391-394
Maruyama,  T.,  Matsushita,  H.,  Shimada,  Y., Kamata,  I.,  Hanaki,  M.,  Sonokawa,  S., Kamiya,  N.,  Goto,  M.  2007. Proteins  and Protein-Rich  Biomass  as  Environmentally Friendly  adsorbents  selective  for  precious metal ions . Environ. Sci. Technol : 41, 1359- 1364.
Ramesh,  A.,  Hasegawa  H.,  Sugimoto  W.,  Maki  T., Ueda  K.  2008. Adsorption  of  gold(III), platinum(IV)  and  palladium(II)  onto  glycine modified crosslinked chitosan resin. Bioresource Technology 99(9) : 3801-9 Romera  E.,  Gonzalez  F.,  Ballester  A.,  Blazquez  M.
L.,  Munoz  J.  A.  2007. Comparative  study  of biosorption  of  heavy  metals  using  di ﬀ erent types
of algae . Bioresource Technology;98:3344–53.
Romero  M.C.,  Reinoso  E.H.,  Urrutia  M.I.,  Kiernan A.M.  2006.  ‘Biosorption  of  heavy  metal  by Talaromyces  helices:  a  trained  fungus  for copper and biphenyl detoxification’ . Electronic Journal of Biotechnology ;9(3):221-26.
Ruiz,  M.,  Sastre,  E.  2000. Palladium  sorption  on glutaraldehydecrosslinked  chitosan. React. Funct. Polym. 45  155.
Song, X., Chang, M.H., Pecht, M.  2013. Rare earth elements  in  lighting  and  optical  applications and their recycling . JOM 65 (10), 1276-1282
Tenreiro, S., Nobre M. F., and Da Costa M. S. 1995. Thermus  silvanus  sp.  nov.  and  Thermus chliarophilus  sp.  nov.,  two  new  species related  to  Thermus  ruber  but  with  lower growth  temperatures .  Int.  J.  Syst.  Bacteriol. 45633-639.
Veglio,  F.,  Beolchini,    F.  1997. Removal  of  metals by  biosorption:  a  review. Hydrometallurgy: 44, 301-316.
Zeng, M., Qi, C., Yang, J., Wang, B., Zhang, X, M. 2014.  ‘A  highly  efficient  and  stable palladium catalyst entrapped within the cross- linked chitosan membrane for heck reactions’ . Industrial and Enginering
Chemistry Journal 53 :10041-10050 Zhou,  L.,  Xu  J.,  Liang  H.  X.,  Liu  Z.  2010. ‘Adsorption
of platinum(IV) and palladium(II)  from  aqueous  solution  by magnetic cross-linking chitosan nanoparticles modified  with  ethylenediamine’. Journal  of Hazardous Materials 182: 518-524