PENGGUNAAN PERASAN JERUK NIPIS ( Citrus aurantifolia ) DALAM MENGHAMBAT BAKTERI Escherichia coli PADA BAHAN PANGAN
Zainal Berlian 1 , Awalul Fatiqin 1 , Eka Agustina 2
1 Dosen Prodi Pendidikan Biologi, Fakultas Tarbiyah dan Keguruan, UIN Raden Fatah Palembang,
Jl. Prof. K. H. Zainal Abidin Fikri No. 1A KM 3.5, Palembang 30126, Indonesia
2 Mahasiswa Prodi Pendidikan Biologi, Fakultas Tarbiyah dan Keguruan, UIN Raden Fatah Palembang,
Jl. Prof. K. H. Zainal Abidin Fikri No. 1A KM 3.5, Palembang 30126, Indonesia
Email: Ekaagustinnida@yahoo.com Telp: +6282282367415

## ABSTRACT
Bacteria in food can result from the sale of foods that do not pay attention to hygiene and safety. Pathogenic bacteria in food can cause illness gastroenteris/digestion. One of the ways to prevent the escape of pathogens is antibacterial  compounds  .  Lemon  (Citrus  aurantifolia)  contained  many  chemical  compounds  that  can  inhibit the growth of bacteria such as flavonoids and saponin. This study aims to isolate bacteria from food such as fish and chicken as a test of the effectiveness of lemon on the growth of bacteria. The study was conducted on April  2016  in  MIPA  (Science)  Laboratory  of  UIN  Raden  Fatah  Palembang  and  the  Center  for  Health Laboratory Palembang. The research method is experimental laboratory used as a pour plate in order to make the diffusion were analyzed qualitatively. Using test bacteria Escherichia coli from food that is tested by agar diffusion  method  for  determining  the  concentration  of  lemon  juice  on  the  growth  of  bacteria.  The  results showed that lemon juice can inhibit the growth of E. coli bacteria that is at a concentration of 25% average of 3,2  colonies  of  bacteria/gram;  50%  mean  bacterial  concentration  of  2,4  colonies/gram;  7%  of  the  average bacterial  concentration  of  4,2%  and  100%  means  bacterial  concentration  of  0,8  colonies/gram. Lemonsqueezemost effectively inhibits bacteria at concentrations of 100%.
Keywords : Antibacterial, Escherichia coli, Lime.

## ABSTRAK
Bakteri dalam makanan dapat diakibatkan oleh penjualan makanan  yang tidak memperhatikan kebersihan dan keamanannya.  Bakteri  patogen  pada  makanan    dapat  menyebabkan    penyakit  gastroenteris/pencernaan.  Salah satu  untuk  mencegah  agar  terhindar  dari  bakteri  patogen  adalah  senyawa  antibakteri.  Jeruk  nipis  ( Citrus aurantifolia )  terkandung  senyawa  kimia/antibakteri  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  yaitu flavonoid  dan  saponin.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengethaui  efektifitas  pemberian  perasan  jeruk  nipis terhadap bakteri pada bahan pangan.  Penelitian dilakukan pada April 2016 di Laboratorium MIPA UIN Raden Fatah Palembang dan Balai Besar Laboratorium Kesehatan Palembang. Metode penelitian bersifat eksperimen laboratorium  yang  menggunakan  difusi  agar  secara pour  plate yang  dianalisis  secara  kualitatif.  Bakteri  uji menggunakan Escherichia  coli dari  bahan  pangan  yang  di  uji  dengan  metode  difusi  agar  untuk  menentukan konsentrasi  perasan  jeruk  nipis  terhadap  pertumbuhan  bakteri  tersebut.  Hasil  penelitian  menunjukan  perasan jeruk nipis tersebut dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli yaitu pada konsentrasi 25% rerata bakteri 3,2 koloni/gram; konsentrasi 50% rerata bakteri 2,4 koloni/gram; konsentrasi 75% rerata bakteri 4,2 dan konsentrasi  100%  rerata  bakteri  0,8 koloni/gram.  Perasan jeruk nipis  yang paling  efektif menghambat  bakteri pada konsentrasi 100%.
Kata Kunci: Antibakteri, Escherichia coli, Jeruk nipis.

## PENDAHULUAN
Islam  mengajarkan  kepada  manusia  untuk memakan  makanan  yang  halal  dan  sehat,  ikan termasuk  makanan  yang  menyehatkan  tubuh
manusia. Menurut Susanto (2009), ikan merupakan salah  satu  makanan  yang  halal  dan  baik  untuk kesehatan  ditinjau  dari  aspek  gizi,  ikan  merupakan bahan  pangan  sumber  protein  hewani  yang  cukup
Jurnal Bioilmi Vol. 2 No. 1 Januari  2016 | 52 potensial  karena  kandungan  protein  yang  sangat tinggi  yaitu  16-24%,  selain  itu  mengandung  lemak 0,2  –  2,2  %.    Selain  daging  ikan  menurut Kusumaningrum dkk (2013), daging ayam merupakan  salah  satu  bahan  pangan  yang  bernilai gizi  tinggi,  karena  mengandung  karbohidrat, protein,  lemak,  mineral  dan  zat  lainnya  yang berguna  bagi  tubuh.  selain  nutrisi  yang  lengkap daging  ayam  yang  segar  berkadar  air  cukup  tinggi sehingga pada suhu ruang kondisi ini menyebabkan daging  segar  menjadi  media  yang  baik  bagi pertumbuhan bakteri patogen.
Menurut  Syifa dkk (2013),  ikan  merupakan sumber  protein  hewani  yang  mudah  mengalami kerusakan  yang  diakibatkan  oleh  bakteri,  khamir maupun  jamur.      Mudahnya  kerusakan  makanan menjadi  kendala  bagi  konsumen  dan  penjual  di pasaran.  Oleh  karena  itu  perlu  adanya  upaya  untuk mengawetkan  bahan  makanan  tersebut  sehingga layak  dikonsumsi.  Pengawetan  yang  umumnya digunakan untuk mempertahankan kesegaran daging  ikan  adalah  dengan  cara  pendinginan, pengeringan dan penambahan suatu zat.
Proses  pengawetan  dapat  dilakukan  dengan menggunakan  jeruk  nipis  sesuai  dalam  penelitian Fajarwati  (2013),  ekstrak  daun  jeruk  nipis didapatkan aktivitas  antioksidan kuat sebesar 93,41 ppm  menurut  kriteria  Blois.  Rahardjo  (2012), menyatakan  bahwa  dekontaminasi  perasan  jeruk nipis  akan  menurunkan  bakteri Salmonella dan E. coli sampai dengan 96,43% pada dada karkas ayam broiler.
Perasan  jeruk  nipis  segar  mengandung  asam sitrat  6,15%,  asam  laktat  0,09%,  serta  sejumlah kecil  asam  tartarat  (Nour et al ,  2010).  Aktivitas antibakteri  dari  buah  jeruk  nipis  disebabkan  oleh kandungan  sejumlah  asam  organik  seperti  asam
sitrat  yang merupakan komponen utama, kemudian asam  malat,  asam  laktat  dan  asam  tartarat. Penghambatan  sebagai  antibakteri  dari  asam organik  karena  penurunan  pH  dibawah  kisaran pertumbuhan  mikroorganisme  dan  penghambatan metabolisme oleh molekul asam yang terkondisosiasi (Barbut, 2002).

## METODOLOGI PENELITIAN

## Tempat dan Waktu
Penelitian dilakukan pada 6 – 9 April 2016 di Laboratorium  MIPA  UIN  Raden  Fatah  Palembang dan Balai Besar Laboratorium Kesehatan
Palembang.

## Metode Penelitian
Metode penelitian bersifat eksperimen laboratorium  yang  menggunakan  difusi  agar  secara pour  plate yang  dianalisis  secara  kualitatif. Penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimen melalui  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan lima perlakuan (t).

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  adalah cawan  petri,  oven,  autoklaf,  alumunium  foil,  gelas ukur,  erlenmeyer,  corong  penyaring,  kertas  saring, neraca analitik, jarum ose, tabung reaksi, rak tabung reaksi, bunsen, pinset, mikroskop, objek glass, pipet tetes, kamera, kapas, dan alat tulis.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  bahan  pangan  (daging  ayam  dan  ikan)  yang terkontaminasi bakteri baik Salmonella sp., Shigella maupun E.  coli, perasan  buah  jeruk  nipis  ( Citrus aurantifolia ),  aquades  steril,  media Salmonella Shigella  Agar ( SSA ), Nutrient  Agar (NA), Lactosa
Borth (LB),  alkohol  96%,  dan  pewarna  gram bakteri.

## Cara Kerja

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Seluruh  alat  yang  akan  digunakan  dicuci bersih  dan  dikeringkan.Tabung  reaksi,  gelas  ukur dan  erlenmeyer  ditutup  mulutnya  dengan  kapas. Cawan  petri  dibungkus  dengan  kertas,  Kemudian semuanya  dimasukkan  dalam  plastik  tahan  panas dan sterilkan pada autoklaf pada suhu 121 0 C selama 30  menit. Pinset  dan  jarum  ose  disterilkan  dengan cara  memijarkan  pada  api  bunsen.  Seluruh  media pembenihan  disterilkan  dengan  autoklaf  pada  suhu 121 0 C selama 15 menit.

## Pembuatan media SSA
Sebanyak  63  gram  Salmonella  shigella  Agar (SSA)  dilarutkan  dalam  1000  ml  aquades, Kemudian diaduksampai larutdan dipanaskan hingga  mendidih.  Lalu  disterilkan  selama  15  menit di  autoklaf  dengan  tekanan  udara  1  atm  dan  suhu 121 0 C.
Pembuatan media NA Serbuk nutrien agar
Ditimbang  sebanyak  20  gram  yang  terdiri dari 5 gram  pepton,  3 gram  ekstrak daging, dan  12 gram serbuk agar ditambah aquades sampai dengan 1000  mL,    Kemudian  dipanaskan  sambil  diaduk dengan  magnetic  stirer  sampai  homogen.    Medium agar  yang telah siap dimasukkan dalam erlenmeyer tahan  panas  kemudian  ditutup  dengan  kapas  dan kertas  sampul  coklat.    Kemudian  disterilkan  dalam autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit  dengan tekanan  1  atm.  Dinginkan  media  dan  media  siap dipakai.

## Pemeriksaan Bakteri pada Bahan Pangan
Sampel  yang  digunakan  dari  daging  ayam, ikan,  pempek  dan  bakso  ayam  diambil  secara
representatif  yang  dimasukkan  kedalam  wadah steril.  Setiap  sampel  ditimbang  sebanyak  10  g dilakukan  pengenceran  secara  berseri  (10 -1 ,  10 -2 , dan 10 -3 ) menggunakan aquades  steril.
Kemudian  hasil enrichment (pengkayaan) ditanam  menggunakan spread  plate pada  media selektif  (SSA),  disteril  lalu  diinkubasi  pada  suhu 37 0 C  selama  48  jam.    Lalu  diisolasi  untuk mendapatkan biakan murni bakteri dengan menggoreskan  0,1  ml  pada  lempengan  SSA, kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  24 jam.  Identifikasi terhadap koloni yang tumbuh pada isolasi meliputi ciri-ciri makroskopis dan mikroskopis  sesuai  dengan  ciri-ciri  bakteri  patogen pada makanan.

## Peremajaan Bakteri
Biakan  murni  bakteri  di  remajakan  pada media nutrien  agar yang  diletakkan  dalam  posisi miring  dengan  cara  menggoreskan  jarum  ose  yang mengandung  bakteri  patogen  secara  aseptis  yaitu dengan  mendekatkan  mulut  tabung  pada  nyala  api saat  menggoreskan  jarum  ose.  kemudian  tabung reaksi ditutup kembali dengan kapas dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0 C dalam inkubator.

## Pembuatan Suspensi Bakteri
Satu  ose  kultur  bakteri  dari  biakan  murni bakteri  uji  tersebut  disuspensikan  dalam  larutan NaCl  0,9  %  pada  tabung  reaksi  steril.  Kemudian suspensi  bakteri  divorteks  hingga  homogen  sampai diperoleh  kekeruhan  sesuai  standar Mc  Farland atau  sebanding  dengan  jumlah  bakteri  1  X 10 8 CFU/ml.

## Pembuatan Perasan Buah Jeruk Nipis
Jeruk  nipis  dipotong  menjadi  2  bagian. kemudian, peras airnya kedalam tabung erlenmeyer lalu  disaring  menggunakan  kertas  saring  sampai didapatkan cairan sebanyak 5 ml.

## Pembuatan Konsentrasi perasan jeruk nipis
Menurut  Permadani  (  2014),  penentuan konsentrasi  perasan  jeruk  nipis  yaitu  dengan menggunakan rumus pengenceran; V 1 x M 1 = V 2 x M 2. Sehingga  didapatkan  masing-masing  perlakuan dalam penelitian ini yaitu: K0n (aquades 2 ml), K1n (perasan jeruk nipis 0,5 ml + aquades 1,5 ml), K2n (perasan  jeruk  nipis  1  ml  +  aquades  1  ml),  K3n (perasan jeruk nipis 1,5 ml + aquades 0,5 ml), K4n (perasan jeruk nipis 2 ml).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri Escherichia coli
Media  SSA  steril  sebanyak  10  ml  dalam cawan petri diberikan perasan buah jeruk nipis yang telah  diencerkan  sesuai  dengan  konsentrasi  yang sudah ditentukan mulai 25%, 50%, 75%, 100% dan
satu  media  tanpa  perasan  buah  jeruk  nipis. Kemudian  dituangkan  suspensi  bakteri  sesuai dengan  standar  kekeruhan Mc  Farland 0,5.  Secara perlahan  cawan  petri  digoyang  dengan  gerakkan memutar  tanpa  diangkat  dari  permukaan  meja, sehingga  bahan  bakteri  uji  tercampur  rata  dalam medium  agar  dan  diamkan  sampai  memadat. Kemudian  diinkubasi  selama  48  jam  pada  suhu 37 0 C.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilaksanakan,  yaitu  pengujian  perasan  jeruk  nipis terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli pada makanan  dapat  dilihat  pada  tabel  berikut:
Tabel 1. Hasil Perasan Jeruk Nipis Terhadap Bakteri Escherichia coli
Perlakuan (%) Ulangan Jumlah koloni (koloni/gram) Rerata (CFU/ml) I II III IV V 0 0 0 0 0 0 0 0 25 3 0 4 4 5 16 3,2x10 1 50 0 3 5 2 2 12 2,4x10 1 75 15 3 0 2 1 21 4,2x10 1 100 2 0 1 0 1 4 0,8x10 1
Berdasarkan  Tabel  1.  dapat  terlihat  bahwa jumlah  mikroorganisme  yaitu  banyaknya  populasi bakteri  yang  terdapat  pada  media.  Hasil  yang diperoleh adalah terdapat perbedaan antara pemberian  konsentrasi  25%,  50%,  75%  dan  100%. Hal  tersebut  dapat  disebabkan  karena  adanya perbedaan  senyawa  yang  terkandung  dalam  air jeruk  nipis.  Sesuai  dengan  Razak  (2013),  air perasan  buah  jeruk  nipis  memiliki  daya  antibakteri yang  sangat  kuat  sehingga  dalam  waktu  yang singkat  air  perasan  jeruk  nipis  dapat  menghambat
pertumbuhan  bakteri  secara  optimal.  Keasaman pada  buah  jeruk  nipis  disebabkan  oleh  kandungan asam organik berupa asam sitrat dengan konsentrasi yang  tinggi  juga  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri tersebut. pH juga mempengaruhi pertumbuhan bakteri oleh karena setiap konsentrasi memiliki  pH  yang  berbeda-beda  pada  konsentrasi 25%  pHnya  2,33;  50%  sebesar  2,30;  75%  sebesar 2,27 dan 100% sebesar 2,26.
Menurut  Hariana  (2006),  adanya  senyawa aktif  antibakteri  dalam  air  perasan  jeruk  nipis
Jurnal Bioilmi Vol. 2 No. 1 Januari  2016 | 55 diduga  diperoleh  dari  kandungan  kimia  yang terdapat didalamnya seperti minyak atsiri, diantaranya  fenol  yang  bersifat  bakterisidal  yang dapat menghambat pertumbuhan Escherichia coli.
Berikut
merupakan hasil pengujian antimikroba Escherichia coli pada jeruk nipis  yang diinkubasi selama 48 jam:
Gambar 1. Pengamatan Hasil Uji Perasan Buah Jeruk Nipis Terhadap bakteri Escherichia coli (A= Konsentrasi perasan 25%, B = konsentrasi perasan 50%,  C= konsentrasi perasan 75%, D= konsentrasi perasan 100% ) (Sumber: Doc. Pribadi, 2016)
Pada K 4 (100%) jumlah populasi bakteri lebih sedikit  dibandingkan  dengan  perlakuan  lainnya sehingga  bahan  pangan  masih  layak  dikonsumsi, sedangkan  pada  K 3 (75%)  jumlah  populasi  koloni sebanyak  4,2  koloni/gram  artinya  makanan  tidak layak dikonsumsi, hal ini karena menurut BPOM RI setiap makanan berupa daging ayam atau ikan harus <3/g,  apabila  >3/g  maka  makanan  itu  tidak  layak dikonsumsi  lagi.  Sesuai  dengan  penetapan  batasan maksimum cemaran mikroba pada makanan.
Penggunaan  perasan  jeruk  nipis  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli sangat efektif karena pada konsentrasi 25% dengan dilakukan  5  kali  ulangan  jumlah  bakteri  yang tumbuh  sebanyak  16  koloni.  Sedangkan  pada konsentrasi  yang  lebih  tinggi  yaitu  100%  hanya tumbuh  sebanyak  6  koloni  pada  5  kali  ulangan. Penghambatan  bakteri E.  coli disebabkan  oleh senyawa  kimia  yang  berasal  dari  air  jeruk  nipis. Sesuai  dengan  hasil  penelitian  Khanifah  (2015), pengujian  penapisan  fitokimia  menunjukan  bahwa
air  perasan  jeruk  nipis  memiliki  kandungan senyawa saponin, dan flavonoid.
Menurut  Nuria dkk (2009),  mekanisme  kerja saponin  sebagai  antibakteri  adalah  menurunkan tegangan  permukaan  sehingga  mengakibatkan naiknya permebilitas atau kebocoran sel bakteri dan diikuti  dengan  keluarnya  senyawa  intraseluler. Dalam  Nuraini  (2007),  saponin  menghambat pertumbuhan atau membunuh mikroba dengan cara berinteraksi  dengan  membran  sterol.  Efek  utama saponin  terhadap  bakteri  adalah  adanya  pelepasan protein dan enzim dari dalam sel-sel.
Sedangkan mekanisme kerja flavonoid sebagai  antibakteri  adalah  membentuk  senyawa kompleks  dengan  protein  ekstraseluler  dan  terlarut sehingga dapat merusak memban sel bakteri (Nuria dkk, 2009).  Flavonoid  dapat  merusak  membran  sel dengan  cara  menghambat  sintesis  makromolekul. Flavonoid juga dapat mendepolarisasi membran sel dan  menghambat  siintesis  DNA,  RNA  maupun protein  (Hudri,  2014).  Selain  itu  flavonoid  juga dapat menghambat fungsi membran sitoplasma dan
A
B C
A
D
Jurnal Bioilmi Vol. 2 No. 1 Januari  2016 | 56 menghambat  metabolisme  energi  pada  bakteri (Cushnie et a l, 2005).
Flavonoid  menurut  Sirait  (2007  “ dalam”
Benigna,  2015),  terdapat  pada  seluruh  bagian tanaman termasuk pada buah, tepung sari dan akar. Sedangkan  mekanisme  kerja  flavonoid  dengan mengganggu  aktivitas  transpeptidase  peptidoglikan sehingga  pembentukan  dinding  sel  terganggu  dan sel mengalami lisis.
Berdasarkan Tabel 1. antara K 1 (25%) dengan K 2 (50%) terjadi penurunan jumlah populasi bakteri Escherichia  coli .  Hal  tersebut  dapat  dinyatakan bahwa  semakin  banyak  konsentrasi  jeruk  nipis maka  semakin  besar  pula  daya  hambat  bakteri. Sedangkan antara K 2 (50%) dengan K 3 (75%) tidak mengalami  penurunan  jumlah  bakteri  akan  tetapi terjadi  peningkatan  jumlah  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli. Kemudian dari K 3 (50%) dengan K 4 (100%)  terjadi  penurunan  jumlah  populasi bakteri Escherichia coli. Adanya pengaruh pertumbuhan  bakteri  yang  lebih  banyak  pada konsentrasi  75%  khususnya  diulangan  pertama disebabkan  oleh  adanya  pengaruh  kandungan senyawa air jeruk nipis tersebut.
Berdasarkan  penelitian  Lathifah  (2008), flavonoid  merupakan  senyawa  yang  cenderung bersifat  polar,  kepolaran  senyawa  inilah  yang mengakibatkan  senyawa  lebih  mudah  menembus dinding  sel  bakteri S.  aureus karena  struktur dinding sel bakteri ini berlapis tunggal dan tersusun atas  peptidoglikan  (protein  dan  gula)  serta  lipid dengan  kadar  rendah  (1-4  %),  sehingga  ekstrak etanol  lebih  mudah  menembus  dinding  sel  bakteri ini. Dinding sel  bakteri E. coli lebih sulit  ditembus senyawa yang bersifat polar karena struktur dinding sel  bakteri  ini  berlapis  tiga  yang  tersusun  atas
peptidoglikan  dan  lipid  dengan  kadar  yang  tinggi (11-22 %).
Selain  perbedaan  setiap  senyawa  yang terkandung  didalam  air  jeruk  nipis  dapat  pula pertumbuhan  bakteri  tersebut  dipengaruhi  oleh perbedaan jumlah mikroba yang ditumbuhkan pada media.  Karena  pada  penelitian  tersebut  peneliti menggunakan  suspensi  bakteri  sebanyak  10  ml untuk  10  cawan  petri  yang  sebanding  dengan larutan MC  Farland 0,5.  Akan  tetapi  dalam  1  ml suspensi jumlah sel bakteri belum tentu sama.
Adapun  salah  satu  faktor  yang  sangat mempengaruhi aktivitas antimikroba adalah takaran inokulum,  pada umumnya semakin besar inokulum bakteri  maka  kesensitifan  organisme  akan  semakin rendah. Populasi bakteri yang besar akan menghambat tumbuhnya bakteri lebih kurang cepat dan  kurang  sempurna  daripada  populasi  yang  lebih kecil.  Disamping  itu,  kemungkinan  terjadinya mutan  resisten  adalah  lebih  besar.  Semakin  besar inokulum,  daerah  hambat  akan  semakin  kecil,  oleh karena itu densitas dari inokulum harus disesuaikan sedemikian  rupa,  sehingga  pertumbuhan  koloni tampak  bersatu  dan  tidak  sebagai  suatu  filum  yang bersinambungan (Irianto, 2006).
Sedangkan  pada  perlakuan  kontrol  (K 0 )  yang dijadikan sebagai pembanding media dan konsentrasi  perasan jeruk nipis tidak adanya  tanda pertumbuhan  koloni  bakteri.  Kontrol  ini  digunakan agar  diketahui  bahwa  media  yang  digunakan  steril dan lingkungan tidak mengkontaminasinya. Sehingga  media  dan  lingkungan  tidak  berpengaruh terhadap  perlakuan  atau  pengujian  perasan  jeruk nipis.

## KESIMPULAN
1. Perasan buah jeruk nipis dapat menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli dalam
waktu 48 jam
2. Konsentrasi  optimum  yang  paling  tepat yaitu  pada  konsentrasi  100%  dengan  rerata bakteri 4 koloni/gram

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Benigna,  Maria.  2015.  Uji  Daya  Hambat
Ekstrak  Daun  Keji  Beling  ( Srobilanthes Crispa Bi)  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri
Salmonella  typhi secara  in  vitro.  Yogyakarta.
Universitas Sanata Dharma. Skripsi.
[2] BPOM RI. 2014. Keracunan Makanan Akibat
Bakteri Patogen.  (online).  (http:  //  ik.  pom. go.  id/  2014/  artikel/  Keracunan-Pangan- Akibat-Bakteri-Patogen3.  pdf).  Diakses  11 agustus 2015.
[3] Cushnie,  Andrew.  J.,  Lamb.  2005.  Review Antimicrobial Activity Of Flavonoids.
International  Journal  of  Antimicrobial  Agent 26 (2005) 343-356. Elsevier.
[4] Fajarwati, N. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan Pada  Ekstrak  Daun  Jeruk  Nipis  ( Citrus aurantifolia )  dengan  Menggunakan  Metode DPPH.  Jakarta:  UIN  Syarif  Hidayatullah. Skripsi .
[5] Hariana,  Arief.  2005. Tumbuhan  Obat  dan Khasiatnya seri 3 . Depok: Penebar Swadaya.
[6] Hudri,  F.  A.  2014.  Uji  Efektivitas  Ekstrak Madu Multiflora Dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Salmonella typhi . Jakarta: UIN Syarif Hidayatullah. Skripsi .
[7] Irianto, K. 2006. Mikrobiologi Dunia Mikroorganisme .  Jilid  1.  Bandung:  Yrama
Widya.
[8] Khanifah,  Firda.  2015.  Efek  Pemberian Perasan  Jeruk  Nipis  ( Citrus  aurantifolia (christ)  swingle)  Terhadap  Pembentukan, Pertumbuhan  dan  Penghancuran  Biofilm
Staphylococcus aureus Secara Invitro. Jakarta: UIN Syarif Hidayatullah. Skripsi .
[9] Kusumaningrum,  A.,  Widyaningrum,  dan Mubarok.  2013.  Penurunan  Total  Bakteri Daging Ayam Dengan Perlakuan Perendaman Infusa  Daun  Salam  ( Syzygium  polyantum). Jurnal MIPA. Vol.36. No. 1. Hal. 14-19.
[10] Lathifah,Q.  A.  2008.  Uji  Efektivitas  Ekstrak Kasar  Senyawa  Antibakteri  Pada  Buah Belimbing  Wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.) dengan  Variasi  Pelarut.  Malang:  Universitas Islam Negeri Malang. Skripsi .
[11] Mustafa, R. M. 2006. Studi Efektivitas Bahan Pengawet  Alami  Dalam  Pengawet  Tahu .
Bogor: institut pertanian bogor. Skripsi .
[12] Nour,  V.  I.,  Trandafir,  and  Lonica.  2010.
HPLC  Organic  Acid  Analysis  In  Different Citrus Juice Under Reversed Phase Conditions.  Not.  Bot.  Hort.  Agroboth.  Cluj. Artikel.
[13] Nuraini,  A.  D.  2007.  Ekstraksi  Komponen Antibakteri dan Antioksidan Dari Biji Teratai ( Nymphaea  pubescens Willd).  Bogor:  Institut Pertanian Bogor. Skripsi.
[14] Nuria,  M.C.,  Arvin,  F.,  dan  Sumantri.  2009. Uji  Efektivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Daun  Jarak  Pagar  ( Jatropha  curcas L.) Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, dan Salmonella typhi ATCC 1408.
[15] Rahardjo,  A.  H.  D.  2012.  Efektivitas  Jeruk Nipis Dalam Menurunkan Bakteri Salmonella
Dan Escherichia coli Pada  Dada  Karkas Ayam Broiler. IJAS. Vol. 2. No. 3
[16] Razak,  A.,  Aziz,  D.,  dan  Gusti,  R.  2013.  Uji
Daya  Hambar  Air  Perasan  Buah  Jeruk  Nipis ( Citrus aurantifolia S.) Terhadap
Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus  aureus Secara In Vitro. Jurnal kesehatan Andalas .
[17] Susanto, H. 2009. Pembenihan dan Pembesaran Patin . Jakarta: Penebar Swadaya.
[18] Syifa, N., Siti,  H.B., dan Dewi. M.  2013. Uji Efektivitas Antibakteri Ekstrak Bawang Putih ( Alium  sativum Linn.)  Sebagai  Antimikroba Pada  Ikan  Bandeng  ( Chanos  chanos Forsk.) Segar. ISSN 2252-6277.