UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI FRAKSI n -HEKSAN, ETIL ASETAT, AIR DAUN RAMBUTAN (Nephelium lappaceum L ) TERHADAP BAKTERI
Escherichia coli ATCC 25922 Ana Berlinda Kayogop 1
1) Universitas Duta Bangsa Surakarta e-mail: 1) berlindakayogop@gmail.com

## ABSTRAK
Daun  rambutan (Nephelium  lappaceum L ) bertujuan  untuk  mengetahui  apakah bakteri uji Escherichia coli ATCC 25922 dengan menggunakan metode dilusi dan difusi  dengan  konsentrasi  2,5%,  5%,  10%,  20%,  40%  serta  dengan  kontrol positifnya  adalah Ciprofloxacin dan  kontrol  negatifnya  adalah  DMSO  1%.  Hasil dari pengujian ini yaitu Zona hambat fraksi daun rambutan (Nephelium lappaceum L) terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli ATCC  25922  fraksi  n-heksan konsentrasi  tertinggi 40%  replikasi  III  yaitu  9,4 ,  fraksi  etil  asetat  konsentrasi tertinggi konsentrasi 40% replikasi III yaitu 14,3 dan fraksi air konsentrasi tinggi 40% replikasi II yaitu 17,0. Konsentrasi hambat minimum (KBM) dari fraksi air daun  rambutan (Nephelium  lappaceum  L) terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli ATCC 25922 pada konsentrasi 1,25%.
Kata Kunci: Escherichia coli ATCC 25922, Nephelium lappaceum L

## ABSTRACT
Traditionally,  rambutan  leaves  (Nephelium  lapaceum  L)  aims  to  determine  whether rambutan leaves (Nephelium lappaceum L) on the growth of test bacteria Escherichia coli ATCC 25922 using the dilution and diffusion method with concentratioons of 2,5%, 5%, 10%, 20%, 40% and with positive control was 1% DMSO. The results of this test were the inhibition zone of the rambutan leaf fraction (Nephelium lappaceum L) on the growth of Escherichia coli ATCC 25922 the n-hexane fraction, the highest concentration of 40% of replication III, namely 14,3 and the high concentration water fraction of 40% replication II,  namely  17,0.  The  minimum  inhibitory  concentration  (KBM)  of  the  water  fraction  of rambutan leaves (Nephelium lappaceum L) on the growth of Escherichia coli ATCC 25922 at a concentration of 1,25%.
Keywords: Escherichia coli ATCC 25922, Nephelium lappaceum L

## PENDAHULUAN
Indonesia sebagai daerah tropis memiliki berbagai macam tanaman yang dapat dimanfaatkan sebagai obat alternatif alami. Salah satu obat tradisional dari tanaman yang sering digunakan adalah daun rambutan (Nephelium lappaceum L )
yang  secara  tradisional  masyarakat  menggunakan  daun  rambutan  sebagai alternatif  pengobatan  sebagai  antibakteri  (Napitupulu,  2015).  Secara  tradisional tanaman  rambutan  dimanfaatkan  untuk  berbagai  penyakit  seperti,  kulit  buah untuk  mengatasi  sariawan,  akar  untuk  mengatasi  demam,  serat  biji  untuk mengatasi  diabetes  melitus,  dan  daun  untuk  mengatasi  diare  serta menghitamkan rambut (Rumaolat, 2020).
Diare  merupakan  penyakit  yang  banyak  di  derita  masyarakat Indonesia sejak dulu. Diare adalah gejala penyakit-penyakit tertentu atau gangguan  lainya  dengan  keadaan  buang-buang  air,  dan  mengeluarkan banyak cairan (mencret) dengan frekuensi lebih dari 3 kali dalam 24 jam. Diare disebabkan oleh Makanan dan minuman yang terkontaminasi oleh bakteri (Wahyuni et al., 2012). Bakteri yang menjadi penyebab diare salah satunya  adalah Escherichia  coli yang  bersifat  fecal  jika  dikonsumsi  terus- menerus dalam jangka panjang akan berdampak pada timbulnya penyakit seperti  radang  usus,  diare,  infeksi  pada  saluran  kemih  dan  empedu (Patricia, 2021).
Penelitian  ini  Uji  aktivitas  antibakteri  Penelitian  ini  menggunakan  3 perlakuan konsentrasi yaitu 10%, 20%, 30% dengan nilai daya hambat dati setiap konsentrasi  yaitu  7,73  mm,  10,47  mm,  dan  13,73  mm,  serta  amoxicilin  sebagai kontrol positif dan DMSO sebagai kontrol negatif. Berdasarkan hasil uji One Way ANOVA  menunjukkan  adanya  pengaruh  aktivitas  antibakteri  pada Escherichia coli dengan  nilai  signifikansi  ( α <  0.05).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  terdapat perbedaan secara signifikan pada penggunaan berbagai konsentrasi ekstrak daun rambutan dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli . Kesimpulan dari penelitian ini yaitu konsentrasi ekstrak 30% merupakan konsentrasi paling baik  dalam  membentuk  zona  hambat  yaitu  dengan  diameter  13,73  mm (Sulistiyaningsih et al ., 2017).

## METODE PENELITIAN Bahan-Bahan Penelitian
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  sebagai  berikut:  ekstrak, aquadest, daun rambutan (Nephelium lappaceum L), bakteri Escherichia coli, etanol
96%, n -heksan,  etil  asetat,  air,    ciprofloxacin  500  mg/tablet,  media      media mueller  hinton  agar , media nutrient  brot ,  DMSO  1%, n- Heksan,  etil  asetat,
Aquadest, Serbuk Mg, HCL, FeCl3, KOH.

## Alat-Alat Penelitian
Alat-Alat yang digunakan dalam penelitian ini sebagai berikut:
vakum rotary  evaporator (RE100-PRO), laminar  air  flow (LAF-K0071) , inkubator  (IKB-K0071),  spektro  UV,  penangas  air  (faithful),  moisture  balance, vortex  (ae),  neraca  analitik  (HWH),  blender  (miyako),  aluminium  foil,  corong, corong  pisah,  kertas  saring  (TBT  chemical),    autoklaf  (analog)  ,incubator (memert),  jarum  ose  (mico),  cawan  petri  (iwaki),  penggaris,  kertas  cakram (oxoid), waterbath, rak tabung reaksi (pudak), lampu spirtus (rofa), pipet ukur, pingset, batang pengaduk (pyrex), erlenmeyer (iwaki), gelas ukur (iwaki), gelas beaker, Kompor listrik (maspion), cawan porselin (laborta), ayakan mes 40, pipet tetes  (onelab),  jangka  sorong  (taffware),  masker,  tissue,  gunting,  kain  serbet, kertas label, kapas, kain kasa.

## Prosedur Kerja

## Determinasi
Determinasi  tanaman  identifikasi  dan  determinasi  tanaman  daun rambutan  di  balai  besar  penelitian  dan  pengembangan  tanaman  obat  dan  obat tradisional  (B2P2TOOT)  Tawamangu.  Pengumpulan  sampel  bagian  tanaman yang  diambil  adalah  daun  rambutan  pengambilan  sampel  diperoleh  dari kecamatan  Tawangmangu,  Desa  Tawamangu,  kabupaten  Karanganyar,  Jawa Tengah.

## Pembuatan Simplisia
Pembuatan Simplisia dan Ekstraksi Serbuk simplisia 500 gram yang telah terbentuk  dilakukan  proses  maserasi  dengan  melakukan  perendaman menggunakan  etanol  96%  selama  5  hari  dengan  perbandingan  1:10.  Filtrat ekstrak daun rambutan di pekatkan dengan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental yang bebas dari pelarut.

## Pemeriksaan Karakteristik Simplisia
Uji  bebas  etanol  dilakukan  dengan  cara  ekstrak  ditambahkan dengan H 2 SO 4 pekat dan CH 3 COOH 1% (asam asetat). Uji positif ekstrak bebas etanol jika tidak terdapat bau eter yang khas dari etanol (Maneak,
2018).  Uji  susut  pengeringan  pada  susut  pengeringan  metode  yang digunakan  adalah  gravimetri.  Dengan  alat  yang  digunakan moiusture Blance 2  gram  serbuk  kemudian  dimasukkan  kedalam  alat-alat  akan berbunyi  kemudiaan  catat  susut  pengering  (Amelia,  2021).  Uji  kadar logam  identifikasi  logam  berat  dilakukan  dengan  metode  analisis kualitatif  terhadap  ekstrak  dengan  penambahan  reagen  K 2 CrO 4 untuk identifikasi  timbal  (Pb)  dan  NaOH  untuk  identifikasi  kadmium  (Cd). Tujuan  dilakukan  identifikasi  logam  berat  adalah  untuk  memastikan bahwa  ekstrak  yang  akan  digunakan  sebagai  obat  tidak  menimbulkan efek  yang  berbahaya  terhadap  kesehatan  bagi  manusia.  Logam  berat memiliki  sifat  toksik  atau  dapat  menimbulkan  racun  dalam  tubuh  yang akan  membahayakan  kesehatan  atau  bahkan  menyebabkan  kematian (Taftazani, 2013).

## Identifikasi Senyawa Kimia Daun Rambutan
Uji flavonoid sampel ekstrak ditambahkan dengan logam Mg dan HCL 3 tetes akan terbentuk garam flavilium berwarna merah atau jingga (Kosanke, 2019).
Uji  tannin Sampel  ekstrak  ditambahkan  dengan  pereaksi  FeCl 3 5  tetes  reaksi positif ditunjukan dengan warna hijau kehitaman atau biru kehitaman (Kosanke, 2019).
Uji  saponin sampel  ekstrak  0,5  gram  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi kemudian ditambahkan 10  tetes  KOH dan  dikocok  selama  5  menit.  Hasil  yang positif  ditandai  dengan  terbentuknya  busa  tebal  1  cm  menunjukan  adanya senyawa sampinin (Astuti et al. , 2021).
Uji Alkaloid sebanyak 0,5 g ekstrak sampel hasil ekstraksi masukan ke tabung reaksi  ditambahkan  0,5  mL  HCl  1%  kemudian  ditambahkan  2  tetes  reagen dragendorf.  Apabila  timbul  warna  jingga  maka  ekstrak  positif  mengandung alkaloid (Indarani et al .,2006).
Uji  Terpenoid sebanyak  0,1 g  ekstrak  daun  rambutan  ( Nephelium  lappaceum L. ) dimasukkan  kedalam  erlenmayer  ditambah  n-heksan  sampai  terendam, dibiarkan  minimal  2  jam,  disaring.  Fitrat  10  mL  dimasukkan  kedalam  cawan porselin  diuapkan  sampai  kering,  sisanya  ditambahkan  pereaksi  Lieberman-
Bouchard  (asam  asetat  anhidridat  3  tetes  dan  asam  sulfat  pekat  3  tetes).  Bila terbentuk  warna  ungu/ungu  kemerahan  menunjukkan  adanya  terpenoid (Depkes RI, 1995).

## Identifikasi Senyawa Kimia Secara KLT
Skrining yang dilakukan menggunakan KLT dan dilakukan dengan cara :
Identifikasi  flavonoid identifikasi  senyawa  flavonoid  menggunakan  fase  diam silika gel GF 254 dan fase gerak kloroform methanol (2:3) dengan pereaksi semprot sitoborat  UV  366  nm.  Hasil  positif  mengandung  flafoniod  jika  menggunakan warna bercak kuning (Arnida et al ., 2019).
Identifikasi  tannin untuk  mengidentifikasi  tanin  menggunakan  kromatografi lapis  tipis,  fase  diam  yang  digunakan  yaitu  silika  gel  GF 254 dan  fase  geraknya yang  digunakan adalah  toluen:etil  asetat  (3:1)  UV  366  nm  akan teerlihat  warna hijau kehitaman dengan pendeteksi FeCl 3 (Arnida et al ., 2019).
Identifikasi  alkaloid identifikasi  alkaloid  menggunakan  ekstrak  etanol  daun rambutan menggunakan kromatografi lapis tipis, fase diam yaitu silica gel GF 254 dan  fase  gerak  yang  digunakan  yaitu  eluen  toluen:etil  asetat:  n-heksan  (5:4:1). dan UV 366 nm. Setiap plat KLT disemprot FeCl 3 5% untuk mendeteksi adanya alkaloid dengan terlihat tampak warna biru atau kuning.
Identifikasi terpenoid identifikasi terpenoid menggunakan ekstrak etanol daun rambutan menggunakan kromatografi lapis tipis, fase diam yaitu silica gel GF 254 dan  fase  gerak  yang  digunakan  yaitu  eluen  toluen:etil  asetat:  n-heksan  (5:4:1). dan UV 366 nm. Setiap plat KLT disemprot liberman burchard untuk mendeteksi adanya terpenoid dengan terlihat tampak warna hijau atau biru.

## Fraksinasi
Fraksinasi  dilakukan  dengan  cara  menimbang  10  gram  ekstrak  daun rambutan. larutkan dengan pelarut air 75 ml, kemudian di fraksinasi sebanyak 3 kali  dengan n -heksana  menggunakan  corong  pisah,  fraksi n -heksana  yang didapat  diuapkan.  Residu  yang  didapkan  dari  fraksi n -heksana  dilanjutkan dengan  fraksinasi  3  kali  dengan  pelarut  etil  asetat  masing-masing  75  ml.  hasil yang  didapat  adalah  fraksi  etil  asetat  kemudian  diuapkan  dan  residu  yang didapatkan  dari  farksi  etil  asetat  adalah  fraksi  air  kemudian  diuapkan  sampai pekat (Rizky dkk, 2018).

## Sterilisasi Alat
Sterilisasi  alat  dan  bahan  dilakukan  dengan  cara  menggunakan  uap jenuh bertekanan dalam suatu alat yang disebut autoklaf bersuhu 121°C selama 15 menit dan media dilakukan memakai erlenmayer yang tertutup dengan kapas dan dibungkus dengan aluminium foil (Delfiyanti,2016).

## Pembuatan Media Nutrient Agar (MHA)
Sebanyak 4,59,gram media MHA agar dilarutkan dalam 135 ml aquadest dipanaskan  sampai  larut.  Media  distrerilkan  menggunkan  autoklaf  selama  15 menit  pada  suhu  121 0 C.  Dinginkan  sampai  suhu  ±  50 0 C  selanjutnya  dibagi kedalam cawan petri steril setelah dingin medium padat disimpan dalam kulkas (Trisia et al ., 2018).

## Pembuatan Medium Nutrient Broth (NB)
Sebanyak 2 gram bubuk NB dilarutkan dengan 250 liter aquadest dalam erlenmeyer kemudian diaduk dengan menggunakan magnetic stirrer, setelah itu medium  NB  disterilkan  dengan  autoklaf  pada  suhu  121 0 C  selama  15  menit (Raisitah, 2018)

## Pembuatan Agar Miring
Ditambahkan 5 ml media NA kedalam 1 tabung reaksi, kemudian ditutup dengan kapas lalu dilapisi dengan aluminium foil, setelah itu disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15 menit. Diamkan pada suhu kamar sampai sediaan  membeku  pada  posisi  miring  ±  45 0 .  Media  agar  digunakan  untuk peremajaan bakteri (Robiansyah,2018).

## Peremajaan Bakteri
Diambil  satu  ose  biakan  murni Escherichia  coli dengan  menggunakan jarum  ose  steril  dengan  dipijarkan,  kemudian  dilakukkan  strek  zig-zag  pada media nutrient agar miring selanjutnya diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0 C (Robiansyah,2018).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Biakan bakteri Escherichia coli didalam media MHA yang telah diinkubasi selama  24  jam  diambil  sebanyak  1  ose  berisi  NaCl  steril  1  ml.  Kemudian dihomogenkan dengan menggunakan vortex dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 0 C selanjutnya kekeruhan dibandingkan dengan 0,5 Mc Farland (Hapsari, 2015).

## Uji Antibakteri Metode Difusi Kertas Cakram
Metode Difusi Disiapkan 9 cawan petri dan dituang medium MHA yang telah  dicairkan  pada  suhu  45 0 C  sebanyak  ±  20  ml  kedalam  cawan  petri, dibiarkan  memadat.  Suspensi  bakteri Escherichia  coli diambil  sebanyak  150 mikroliter  kemudian  dituangkan  pada  permukaan  media,  diratakan menggunakan  cotton  bud  steril.  Suspensi  dibiarkan  selama  5  menit  supaya suspensi bakteri meresap ke dalam media agar. Setelah itu diambil kertas cakram menggunakan pinset steril, dimasukkan kedalam ekstrak, fraksi n -heksan, fraksi etil  asetat  dan  fraksi  air  dengan  konsentrasi  2,5%,  5%,  10%,  20%,  40%  yang sebelumnya  telah  dilarutkan  dengan  larutan  DMSO  1%  kemudian  diletakan dipermukaan  media  dan  pada  masing-masing  konsentrasi  dibuat  3  kali pengulangan pada setiap cawan petri. Kemudian dilakukan hal yang sama pada perlakuan  kontrol  positif  menggunakan  ciprofloxacin  5  µg  dan  kontrol  negatif DMSO 1% (Trisia et al ., 2018).

## Uji Antibakteri Metode Dilusi
Metode dilusi cair dilakukan dengan menyiapkan beberapa tabung rekasi yang  sudah  steril,  larutan  uji  dan  bakteri  uji  sebagai  kontrol  negatif,  larutan antibiotik  pembanding  dan  bakteri  uji  sebagai  kontrol  positif.  Selanjutnya  tiap- tiap tabung diisi dengan 0,5 mL medium NB. Selanjutnya ditambahkan 0,5 mL larutan  uji  pada  tabung  reaksi  pertama  di  vortex.  Tabung  pertama  diambil  0,5 mL  dipindahkan  kedalam  tabung  kedua  dan  seterusnya  sampai  konsentrasi 0,3125%.  Lalu  diambil  0,5  mL  larutan  pada  tabung  terakhir  dan  dibuang, sehingga masing-masing tabung berisi 0,5 mL. Kemudian masing-masing tabung ditambahkan  1  mL  suspensi  bakteri  Selanjutnya  diinkubasi  dalam  inkubator pada suhu 37ºC selama 24 jam.
Menentukan Konsentrasi hambat minimum (KHM) yaitu mengamati ada atau tidaknya kekeruhan pada seri pengenceran dari sejumlah tabung yang telah diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Tabung reaksi dengan larutan jernih setelah  tabung  keruh  terakhir  merupakan  konsentrasi  hambat  minimum (Indrayati & Sugiarto, 2020).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Determinasi Daun Rambutan (Nephelium lappaceum L)
Berdasarkan  hasil  determinasi  daun  rambutan  yang  dilakukan  di  B2P2TOOT  ( Balai  Besar  Penelitian  dan  Pengembangan  Tanaman  Obat  Tradisional  )  dapat diketahui  bahwa  tanaman  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  benar- benar daun rambutan (Nephelium lappaceum L) dari spesies Nephellium lappaceum L , sinonim Scytalia ramboutan Roxb , Familia Sapindaceae. Determinasi bertujuan untuk  mencocokan  ciri  morfologis  serta  mengidentifikasi  kebenaran  tanaman yang digunakan.

## Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun  rambutan segar (Nephelium  lappaceum  L) daerah  lain  sampel  diperoleh  dari  kecamatan Tawangmangu, Desa Tawamangu, kabupaten Karanganyar, Jawa Tengah.

## Pembuatan Simplisia
Pada pembuatan simplisia daun rambutan, diperoleh 5 kg tanaman yang masih  segar  kemudian  disortasi  basah.  Daun  rambutan  yang  telah  dicuci selanjutnya  ditiriskan  lalu  dirajang  untuk  mempercepat  proses  pengeringan pada daun, kemudian daun rambutan dikeringkan, simplisia yang telah kering dan bersih kemudian diperkecil ukurannya dengan menggunakan blender untuk mendapatkan  derajat  kehalusan  tertentu  Serbuk  simplisia  dapat  dilihat  pada tabel 1.
Tabel. 1. Perhitungan Presentase Bobot Kering Simplisia Daun Rambutan
Bobot Basah (g)                   Bobot Kering (g)               Presentase (%b/b) 5000                                         1.280                                            25,6%

## Pembuatan Ekstrak Daun Rambutan
Pembuatan  ekstrak  etanol  daun  rambutan    dilakukan  dengan  menimbang serbuk simplisia kemudian dilakukan penyarian pertama menggunakan pelarut etanol 96% sebanyak 2000 ml, dilanjutkan dengan masing-masing pengulangan 2 kali  menggunakan  pelarut  etanol  96%  sebanyak  3000  ml.  Maserasi  dilakukan selama 5 hari dengan sesekali di aduk, kemudian disaring menggunakan kertas saring  sehingga  diperoleh  maserat.  Hasil  maserasi  dilakukan  penguapan
menggunakan rotary evaporator , dilanjutkan penguapan menggunakan waterbath suhu 60 0 C untuk mendapatkan ekstrak kental dapat dilihat pada tabel 2.

## Tabel. 2. Hasil Pembuatan Ekstrak Kental Daun Rambutan
Berat Serbuk (g)                   Berat Ekstrak (g)                 Rendemen Ekstrak % 500gr                                            49.252gr                                     9,850%

## Pemeriksaan Karakteristik Simplisia

## Uji Bebas Etanol
Hasil  uji  bebas  etanol  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  rambutan  sudah bebas dari pelarut etanol 96% yang ditunjukkan dengan tidak terbentuknya bau ester  yang  khas  dari  etanol,  sehingga  dapat  disimpulkan  bahwa  diperoleh ekstrak yang dapat digunakan untuk pengujian tahap selanjutnya dapat dilihat pada tabel 3.

## Tabel. 3. Hasil Uji Bebas Etanol Ekstrak Daun Rambutan
Uji Bebas Etanol            Hasil Pengamatan               Pustaka (Maneak , 2018) Ekstrak daun rambutan         (+) Tidak terdapat                      Tidak terbentuk bau ester + H 2 SO 4 pekat                         bau ester                                     yang khas dari etanol + CH 3 COOH 1%, Dipanaskan

## Uji Susut Pengeringan
Susut pengeringan serbuk daun rambutan diperoleh sebesar 9,07%. Data susut  pengeringan  serbuk  daun  rambutan  memenuhi  standar  yang  ditetapkan yaitu  tidak  lebih  dari  10%.  Uji  parameter  susut  pengeringan  serbuk  daun rambutan  dilakukan  dengan  menimbang  serbuk  sebanyak  2  gram,  kemudian diukur  menggunakan  alat Moisture  Balance dengan  suhu  105◦C,  pengujian dilakukan  sampai  alat  berbunyi  secara  otomatis  yang  menandakan  bahwa analisis telah selesai dapat dilihat pada tabel 4.
Tabel.  4.  Hasil  Penetapan  Susut  Pengeringan  Serbuk  Daun  Rambutan Menggunakan Moisture Balance
Berat Awal (g)                              Pustaka (FHI 2016)        Susut Pengeringan (%)
1 < 10%                                   9,07%

## Uji Kadar Logam
Hasil uji kadar logam 5 gram ekstrak daun rambutan di tambahkan 1 ml K 2 CrO 4 tidak  memiliki  endapan  warna  kuning Penambahan  Indikator  kalium kromat  (K 2 CrO 4 ) bertujuan  untuk  mengetahui  warna  dari  titik  akhir titrasi kemudian pengujian kadar logam Cd dengan menggunakan 5 gr ekstrak tambahkan NaOH 1 ml tidak terbentuk endapan warna putih Logam tembaga (Cu)  terdapat  dalam  air,  tanah  dan  udara  baik  dalam  bentuk  ion  maupun senyawa.  Logam  Cu  termasuk  logam  berat  esensial,  jadi  meskipun  beracun tetapi dibutuhkan manusia ( Sudjadi, 2018).
Hasil  identifikasi    logam  berat  timbal  (Pb)  dan  kadmium  (Cd) menunjukan  bahwa  dalam  ekstrak  daun  rambutan  tidak  terdapat  kandungan logam berat timbal (Pb) dan kadmium (Cd). Menurut BPOM kandungan timbal (Pb) dan (Cd) dalam ekstrak dapat disebabkan oleh proses pengeringan simplisia yang akan digunakan sebagai tanaman obat. Pengeringan dengan sinar matahari langsung  di  udara  terbuka  dapat  menyebabkan  simplisia  tersebut  mengalami pencemaran lingkungan termasuk logam berat timbal (Pb) (Hernani, 2009)

## Skrining Fitokimia
Pengujian  identifikasi  kandungan  senyawa  flavonoid  esktrak  daun rambutan  didapatkan  hasil  terbentuknya  lapisan  hijau  kehitaman  atau  biru kehitaman,  Hal  ini  menandakan  adanya  senyawa  tanin  (  Ergina  dkk,  2014). Pengujian  kandungan  tanin  terhadap  ekstrak  daun  rambutan  sampel menunjukan  hasil  positif  dengan  ditandai  perubahan  warna  hijau  kehitaman karena FeCl 3 bereaksi dengan gugus – OH aromatis ( Harry dkk, 2015 ).
Berdasarkan  hasil  identifikasi  ekstrak  daun  rambutan  positif  mengandung saponin yang ditandai terbentuknya buih pada saat sampel ditambahkan KOH lalu  dikocok.  Identifikasi  kandungan  alkaloid  hasil  positif  alkaloid  pada  uji Dragendorff  juga  ditandai  dengan  terbentuknya  endapan  coklat  muda  sampai kuning.  Identifikasi  kandungan  terpenoid  Reaksi  terpenoid  dengan  pereaksi liebermann  menghasilkan  warna  merah  atau  ungu  (  Marliana  &  Saleh,  2011  ) dapat dilihat pada tabel 5.
Tabel. 5. Uji Kandungan Kimia Daun Rambutan (Nephelium lappaceum L)
Kandungan         Test               Hasil            ket                              Pustaka Kimia                                                                                      (DepKes RI, 2018) Flavonoid        Ekstrak+          jingga           +                            Garam flafilium logam mg                                                               merah atau 0,05 mg+                                                                   jingga HCL 3 tets Tanin               Ekstrak+           Hijau            +                       Hijau kehitaman FeCl 3 5%          Kehitaman                                   atau biru 5 tetes                                                                         kehitaman
Saponin            Ekstrak+         Busa             +                                     Busa
10 tetes KOH Alkaloid           Ekstrak+                              +                               Timbul warna Hcl 0,5ml+ Reagen                                coklat muda sampai kuning Dragendrof Terpenoid          Ekstrak+                            +              terbentuk warna ungu atau
n -Heksan+                                                         kemerahan lieberman bouchard

## Identifikasi Senyawa Kimia Secara KLT
Identifikasi  senyawa  flavonoid  dengan  uji  KLT  menunjukan  hasil  bercak berwarna  kuning  dilihat  pada  sinar  UV  366  nm  sehingga  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  daun  rambutan  mengangandung  senyawa  flavonoid  dengan nilai  Rf  0,43.  Identifikasi  senyawa  tanin  dengan  uji  KLT  menunjukan  hasil bercak berwarna berwarna biru kehitmanan dilihat pada sinar UV 366 sehingga dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun rambutan mengandung senyawa tanin dengan nilai Rf 0,81. Identifikasi senyawa alkaloid dengan uji KLT menunjukan hasil  bercak  berwarna  biru  atau  kuning  dilihat  pada  sinar  UV  366  sehingga dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  rambutan  mengandung  senyawa alkaloid dengan nilai Rf 0,93. Identifikasi senyawa triterpenoid dengan uji KLT menunjukan  hasil  bercak  warna  hijau  dilihat  dari  sinar  UV  366  sehinga  bisa dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  rambutan  mengandung  senywa triterpenoid dengan nilai Rf 0,56 dapat dilihat pada tabel 6.

## Tabel. 6. Identifikasi Kandungan Kimia Ekstrak Daun Rambutan Secara KLT
Pengujian Aktivitas Antibakteri Bakteri Escherichia coli ATCC 25922
Hasil  dari  fraksinasi  yang  dibuat  konsentrasi 2,5%,  5%,  10%,  20%,  40%. Kontrol positif yang digunakan yaitu ciprofloxacin dan DMSO 1% sebagai kontrol negatif. Data  yang  diperoleh  selanjutnya  dilakukan  uji  analisis  data  dengan menggunakan  SPSS  25  dan  metode  yang  digunakan  adalah One  Way  Anova ( Analysis  of  Varians ).  Uji  tersebut  bertujuan  untuk  mengetahui  ada  tidaknya perbedaan yang signifikan antara fraksi n -heksan, fraksi etil asetat dan fraksi air dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli ATCC  25922 dengan kontrol positif antibiotik gentamisin dan kontrol negatif DMSO 1%.
Uji  yang  pertama  dilakukan  yaitu  uji  normalitas  yang  bertujuan  untuk mengetahui  apakah  data  penelitian  berdistribusi  normal  atau  tidak.  Uji normalitas yang digunakan yaitu Shapiro wilk karena data yang digunakan tidak lebih  dari  50  sampel  yang  digunakan  pengujian  ini  18  sampel.  Uji  normalitas data diperoleh  signifikansi  P<0,05 maka  H 0 ditolak  dan  data  tidak  terdistribusi normal.  Kemudian  dilanjutkan  uji  Homogenitas  ( Homogenity  of  Variances ).
Tujuan  dari  uji  homogenitas  yaitu  untuk  mengetahui  sama  tidaknya  variansi- variansi  dua  buah  distribusi  atau  lebih  dan  digunakan  sebagai  syarat  analisis independent  uji  ANOVA.  Hasil  dari  uji Homogenity  of  Variances adalah  <0,05 significant varian tidak homogen karena kurang dari 0,05%. Dilanjutkan dengan uji  OneWey  Anova  <0,05  terdapat  perbedaan yang  significat  dari  18  kelompok
Pengujian Fase Diam Fase Gerak Deteksi Daftar Pustaka Hasil Nilai Rf Flavonoid Silika Gel GF 254 Kloroform :Metanol (2:3) UV 366 Arnida et al., 2019 Kuning 0,43 Tanin
Alkaloid Triterpenoid Silika Gel GF 254
Silika Gel GF 254
Silika Gel GF 254 Toluen :Etil Asetat (3:1) Eluen Toluen:Etil Asetat :n - Heksan Eluen Toluen:Etil Asetat :n - Heksan UV 366 UV 366 UV 366 Arminda et al., 2019 Arminda et al., 2019 Arminda et al., 2019 Biru Kehitaman Biru atau Kuning Hijau atau Biru 0,81 0,93 0,56
sampel fraksi n -heksan, etil asetat, air, dan kontrol positif maka Ho ditolak dan Ha  diterima. Untuk  mengetahui  perbedaan  antara  kelompok  variabel  maka dilakukan  analisis Post  Hoc dengan  menggunakan  uji Tuckey, akan  tetapi  uji normalitas  dan  uji  homogenitas  diperoleh  signifikansi  <0,05,  jadi  dilakukan  uji non  parametrik  yaitu  uji  Kruskal-Wallis.  Uji  ini  dilakukan  karena  memiliki perbedaan yang significant Ho  ditolak dan Ha diterima.
Berdasarkan  output  “ Test  Statistics ”  di  atas,  diketahui  nilai Asymp.Sig adalah  sebesar  0,000  <  0,05.  Dengan  demikian,  dapat  disimpulkan  bahwa  H 0 ditolak  dan  H a diterima  yang  berarti  ada  perbedaan  yang  nyata  (signifikan) antara  fraksi n -heksan,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli ATCC 25922 yang memiliki perbedaan dari setiap kelompok mana saja  yaitu fraksi n -heksan 2,5% - kontrol positif 1 dengan nilai  significant  0,41  dan  fraksi n -heksan  2,5%  -  kontrol  positif  2.  Dengan  nilai signifikansi <0,005 dapat dilihat pada tabel 7.
Tabel.  7.  Hasil  Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Metode  Difusi  terhadap  Bakteri Escherichia coli ATCC 25922 . Bahan Uji Konsentrasi (%) Daya Hambat (mm) Replikasi Rata-Rata I II II (mm) ± SD I II III n -Heksan 2,5% 5% 10% 20% 40% 6,1 6,7 7,2 7,9 8,6 6,2 6,8 7,5 8,0 8,9 6,4 7,0 7,8 8,3 9,4 6,23±0,15 6,83±0,15 7,50±0,30 8,06±0,20 8,96±0,40 Etil Asetat 2,5% 5% 10% 20% 40% 10,9 11,0 13,1 14,0 14,1 10,8 11,0 13,0 14,1 14,2 10,7 11,1 12,9 14,1 14,3 10,80±0,10 11,03±0,05 13,00±0,10 14,06±0,05 14,20±0,10 Air 2,5% 5% 10% 20% 40% 10,00 11,4 12,5 13,1 15,9 10,5 10,9 12,1 13,3 17,0 10,6 12,4 13,0 14,1 16,1 10,36±0,32 11,56±0,76 12,53±0,45 13,50±0,52 16,33±0,58 Ciprofloxacin  0,5% 16,6 16,9 16,1 16,3 16,2 16,3 16,1 16,0 18,1 16,33±0,25 16,36±0,47 16,83±1,10 DMSO 1% 1% 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0±0 0±0 0±0

## Pengujian Aktivitas Antibakteri Metode Dilusi
Hasil pengujian aktivitas antibakteri menggunakan metode difusi ekstrak etanol, fraksi n -heksan, fraksi etil asetat dan fraksi air daun rambutan terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli ATCC 25922 menunjukkan bahwa fraksi Air yang  paling  efektif  dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri.  Pengujian aktivitas antibakteri Escherichia coli ATCC 25922 secara dilusi untuk Konsentrasi Bunuh  Minimum  (KBM)  dengan  menggunakan  hasil  dari  metode  difusi  yaitu fraksi air dengan konsentrasi terendah 1,25%.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  Fraksi n -heksan  memiliki angktivitas antibakteri daun rambutan (Nephelium lappaceum L) memiliki aktivitas antibakteri  terhadap  bakteri Escherichia  coli ATCC  25922.  Konsentrasi  hambat minimum (KBM) dari fraksi air daun rambutan (Nephelium lappaceum L) terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli ATCC 25922 pada konsentrasi 1,25%.

## DAFTAR PUSTAKA
Amelia  D.  2021. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Air  Kulit  Bawang  Merah  (Allium cepa L) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus .
Apriliana E, Hawarima V. 2016. Kandungan Buah Rambutan ( Nephelium lappaceum L .) sebagai Antibakteri terhadap E . coli Penyebab Diare . Majority , 5 (2), 126 – 130.
Arnida A, Sutomo S, Khoriah U U. 2019. Identifikasi Kandungan Senyawa Kimia dan Uji  Aktivitas  Penghambatan  Polimerisasi  Hem  dari  Fraksi  n-Heksana  Daun Manuran  (Coptosapelta  tomentosa  Valeton  ex  K .  Heyne)  Asal  Kotabaru Kalimantan Selatan. Jurnal Pharmascience , 5 (2), 143 – 152.
https://doi.org/10.20527/jps.v5i2.5796
Astuti  M  T,  Retnaningsih  A,  Marcellia  S.  2021. Uji  Aktivitas  Ekstrak  Etanol  Kulit Jeruk Lemon (Citrus  limon L.) terhadap Bakteri Salmonella typhi dan Escherichia coli . Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, 7(2), 143 – 154.
Ergina dkk., 2014, Uji Kualitatif Senyawa Metabolit Sekunder Pada Daun Palado (Agave  Angustifolia)  yang  Diekstraksim  Dengan  Pelarut  Air  dan  Etanol, Jurnal  Akademika  Kimia  Volume  3,  No.  3,  2014  :  165-172,  Pendidikan Kimia/FKIP, Universitas Taduloko : Palu.
Fuentes  M. 2017. Uji Hambat Ekstrak  Etanol Daun Rambutan (Nephelium lappaceum L.) Terhadap Streptococcus mutans . 1 – 14.
Fitriana, Y. A. N., Fatimah, V. A. N. And Fitri, A. S. (2020) ‘Aktivitas Anti Bakteri Daun Sirih: Uji Ekstrak Khm (Kadar Hambat Minimum) Dan Kbm (Kadar Bakterisidal Minimum)’, Sainteks, 16(2), Pp. 101– 108.
Harry  S.J.  Koleangan,  Dkk.2017.  Skrining  Fitokimia  Dan  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak Metanol Kulit Batang Soyogik (Saurauia Bracteosa Dc). Universitas Sam Ratulangi Manado; Manado.
Herdiana, I., & Aji, N. (2020). Fraksinasi Ekstrak Daun Sirih dan Ekstrak Gambir serta Uji Antibakteri Streptococcus mutans. Jurnal Ilmiah Kesehatan, 19(03), 100 – 106. https://doi.org/10.33221/jikes.v19i03.580.
Hapsari,  M.E.  2015.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Herba  Meniran (Phyllanthus  niruri)  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri  Bacillus  cereus  Dan Escherichia coli. Skripsi. Universitas Sanata Dharma. Yogyakarta. Hal:8.
Rambutan  (NepheliumlappaceumL)  Terhadap  Bakteri  Staphylococcus  aureus ATCC  25925  dan  Escherichia  coli  ATCC25922.  Skripsi.  Fakultas KedokterandanIlmu Kesehatan. UIN Syarif Hidayatullah. Jakarta.
Hernani  dan  Rahmawati  Nurdjanah.  2009.  Aspek  Pengeringan  Dalam Mempertahankan  Kandungan  Metabolit  Sekunder  Pada  Tanaman  Obat. Jurnal Perkembangan Teknologi Tro. Vol. 21 No. 2, Desember 2009: 33-39.
Indrayani  L.  Hartati  Soetjipto,  dan  Lydia  Sihasale.  Skrining  Fitokimia  dan  Uji Toksisitas  Ekstrak  Daun  Pecut  Kuda  (Stachytarpheta  jamaicensis  L.  Vahl) Terhadap Larva Udang Artemia salina Leach. 2006 ; 12: 57 – 61.
Ilham I A. 2010. Uji Aktivitas Antimikroba Ekstrak Metanol Larut Heksan dan Tidak Larut  Heksan  Daun  Rambutan  (Nephelium  lappaceum  L)  Terhadap  Beberapa Mikroba Patogen . Skripsi , 1 – 47.
Indrayati  S,  Sugiarto  Y  A.  2020. Uji  Efektifitas  Air  Rebusan  Daun  Rambutan (Nephelium  lappaceum  L.)  dalam  Menghambat  Pertumbuhan  Bakteri  Escherichia coli . Prosiding Seminar Kesehatan Perintis, 3(1), 12 – 12.
Kosanke  R  M.  2019. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Fraksi  n-Heksan,  Fraksi  Etil Asetat  dan  Fraksi  Air  Daun  Mangkokan  (Nothopanax  scutellarium  Merr) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus ATCC 25923 .
Kurniawati  E.  2015.  Daya  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Tunas  Bambu  Apus Terhadap  Bakteri  Escherichia  coli  dan  Staphylococcus  aureus  Secara  In Vitro. J Wiyata. Vol 2 (2).
Marlina  &  Saleh.  2011.  Uji  fitokimia  dan  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kasar etanol, fraksi n-heksan, etil asetat dan metanol dari buah labu air (Lagenaria siceraria (Molina) Standl.). Jurnal Kimia Mulawarman, 8(2), 693-5616.
Maradona  D.  2013. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Durian  (Durio zibhetinus  L.),  Daun  Lengkeng  (  Dinocarpus  longan  Lour.),  Daun  Rambutan  ( Nephelium lappaceum L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . In Skripsi.
Nurhayati,  L.  S.,  Yahdiyani,  N.,  &  Hidayatulloh,  A.  (2020).  Perbandingan Pengujian  Aktivitas  Antibakteri  Starter  Yogurt  dengan  Metode  Difusi Sumuran  dan  Metode  Difusi  Cakram.  Jurnal  Teknologi  Hasil  Peternakan, 1(2), 41. https://doi.org/10.24198/jthp.v1i2.27537.
Patricia C O S. 2021. Uji aktivitas antibakteri daun rambutan (Nephelium lappaeum L) terhadap bakteri staphilococcus aureus ATCC 25923 secara in vitro (Vol. 3, Issue 2).
Raisitah  F.  2018. Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Cengkeh  Terhadap Pertumbuhan  Bakteri  Streptococcus  mutans  DAN Klebsiella  pneumonia .  Skripsi. Universitas  Muhammadiyah  Semarang.  Fakultas  Kesehatan  Masyarakat, 53(1), 59 – 65.
Rizky  T  A,  Sogandi.  2018.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi  Daun  Jati (Tectona  grandiss  Linn.F  )Dalam  Menghambat  Pertumbuhan  Bakteri  Escherichia coli  dan  Staphylococcus  aureus  Secara  in  Vitro .  Indonesia  Natural  Research Pharmaceutical Journal, 3(1), 93 – 105.
Rumaolat  W.  2020. Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Metanol  Daun  Rambutan (Nephelium lappaceum L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus.
2-Trik: Tunas-Tunas Riset Kesehatan, 10(2), 93 – 97.
Rastina.  Mirnawati,  S,  dan  Ietje,  W.  2015.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Daun  Kari  (Murraya  Koenigii)  Terhadap  Staphylococcus  Aureus, Escherichia Coli, dan Pseudomonas sp. Jurnal Kedokteran Hewan Vol. 9 No.
2.
Sandy  M,  Wardani  T  S,  Septiarini  A  D.  2021. Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak, Fraksi  n-Heksan,  Fraksi  Etil  Asetat,    Fraksi  Air  Daun  Pegagan  (centella  asiatica (L.)  Urb)  Terhadap  escherichia  coli ATCC  25922.  Media  Farmasi  Indonesia, 16(2), 1 – 10.
Sulistiyaningsih  S  S  N,  Wicaksono  I,    Budiman  A.  2017. Antibacterial  activity  of ethanol  extract  and  fraction  of  Rambutan  leaf  (Nephelium  lappaceum)  against Pseudomonas  aeruginosa  multiresistant .  National  Journal  of  Physiology, Pharmacy and Pharmacology, 7(11), 1.
Tarman,  K.,  S.  Purwaningsih,  dan  A.A.P.P.  Negara.  2013.  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Daun  Bakau  Hitam  (Rhizophora  Mucronata)  Terhadap  Bakteri Penyebab Diare. JPHPI, 16(3):249-258.
Trisia  A,  Philyria  R,  Toemon  A  N.  2018. Uji  Akivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol Daun  Kalanduyung  (Guazuma  ulmifolia  Lam.)  Terhadap  Pertumbuhan Staphylococcus  aureus  Dengan  Metode  Difusi  Cakram  (KIRBY-BAUER) . Anterior Jurnal, 17(2), 136-143.