## FORMULASI NANOPARTIKEL FRAKSI ETIL ASETAT EKSTRAK
ETANOL BUNGA TELANG ( Clitoria ternatea L.) dan UJI ANTIBAKTERI Staphylococcus aureus YANG DIISOLASI DARI JERAWAT
Zulfa Nur Fadhila 1 , Disa Andriani 2* , Didik Wahyudi 3 1-3 Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional Email: disa.andriani@stikesnas.ac.id

## ABSTRAK
Jerawat  merupakan penyakit peradangan  kronik kelenjar  pilosebasea  dengan  meningkatnya  produksi sebum,  peluruhan  keratinosit,  tumbuh  bakteri  dan  inflamasi.  Bahan  alam  terbukti  bermanfaat  bagi kesehatan dan efek samping yang jauh lebih rendah jika dibandingkan dengan obat sintesis. Salah satu tanaman  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri  yaitu  bunga  telang  ( Clitoria  ternatea L.).  Efisiensi penggunaan bahan alam dapat ditingkatkan kemampuan fungsi obat jerawat dengan membuat sediaan dalam  bentuk  nanopartikel.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  kitosan  terhadap karakteristik  fisik  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang  dan  aktivitas antibakterinya  terhadap Staphylococcus  aureus. Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah  maserasi dengan menggunakan etanol 70%. Pembuatan nanopartikel menggunakan metode gelasi ionik dengan polimer  kitosan  dan  natrium  tripolifosfat  dengan  variasi  konsentrasi  kitosan  (0,1%,  0,2%,  0,3%). Pengujian  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus dengan  metode  sumuran.  Data dianalisis  dengan One  Way ANOVA  yang  dilanjutkan  dengan  uji Post  Hoc. Hasil  karakteristik nanopartikel  F1,  F2  dan  F3  menunjukkan  ukuran  partikel  69,58±6,90  nm,  166,47±37,06  nm, 539,63±105,40  nm  dan  zeta  potensial  +46,5±0,5  mV,  +44,1±1,1  mV  dan  +37,7±0,8  mV.  Hasil  uji aktivitas  antibakteri Formula 1, Formula 2 dan Formula 3 menunjukkan diameter zona hambat yaitu 11,38±0,71  mm,  11,82±0,81  mm  dan  13,14±0,66  mm.  Semua  formula  memenuhi  sifat  fisik nanopartikel dan memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus.
Kata Kunci : antibakteri, Clitoria ternatea L., fraksi etil asetat, nanopartikel, Staphylococcus aureus.

## ABSTRACT
Acne is a chronic inflammatory disease of the pilosebaceous glands with increased sebum production, keratinocyte  decay,  bacterial  growth  and  inflammation.  Natural  ingredients  are  proven  to  be beneficial for health and have much lower side effects when compared to synthetic drugs. One plant that has antibacterial activity is the butterfly pea flower (Clitoria ternatea L.). The efficiency of using natural  ingredients  can  be  increased  by  making  preparations  in  the  form  of  nanoparticles.  This research  aims  to  determine  the  effect  of  chitosan on  the  physical  characteristics  of  nanoparticles  of the  ethyl  acetate  fraction  of  ethanol  extract  of  butterfly  pea  flower  and  its  antibacterial  activity against  Staphylococcus  aureus.  The  extraction  method  used  maceration  with  70%  ethanol. Nanoparticles  were  made  using  the  ionic  gelation  method  with  chitosan  polymer  and  sodium tripolyphosphate  with  varying  chitosan  concentrations  (0.1%,  0.2%,  0.3%).  Testing  of  antibacterial activity  against  Staphylococcus  aureus  using  the  well  method.  Data  were  analyzed  by  One  Way ANOVA followed by Post Hoc test. The results of the characteristics of nanoparticles F1, F2 and F3 show particle sizes of 69.58 ± 6.90 nm, 166.47 ± 37.06 nm, 539.63 ± 105.40 nm and zeta potential +

## Cendekia Journal of Pharmacy
ITEKES Cendekia Utama Kudus P-ISSN 2559 – 2163           E-ISSN 2599 – 2155 Vol. 8, No. 2, Mei 2024 http://cjp.jurnal.stikescendekiautamakudus.ac.id
46.5  ±  0.5  mV,  +44.1±1.1  mV  and  +37.7±0.8  mV.  The  results  of  the  antibacterial  activity  test  for Formula 1, Formula  2 and  Formula 3  showed  that  the  diameter  of  the  inhibition  zone  was  11.38 ± 0.71  mm,  11.82  ±  0.81  mm  and  13.14  ±  0.66  mm.  All  formulas  meet  the  physical  properties  of nanoparticles and have antibacterial activity against Staphylococcus aureus bacteria.
Keywords:  antibacterial,  Clitoria  ternatea  L.,  ethyl  acetate  fraction,  nanoparticles,  Staphylococcus aureus.

## LATAR BELAKANG
Penyakit  infeksi  kulit  merupakan  penyakit  menular  yang  disebabkan  oleh  beberapa faktor  yang  saling  berinteraksi,  antara  lain  faktor  penyebab  penyakit  (patogen),  faktor manusia (inang) dan faktor lingkungan (Mutsaqof et al , 2015). Jerawat merupakan penyakit peradangan  kronik  kelenjar  pilosebasea  yang  ditandai  dengan  keluarnya  komedo,  papula pustul dan nodul. Aspek utama yang ikut serta dalam pembentukan jerawat yaitu peningkatan produksi  sebum,  peluruhan  keratinosit,  tumbuh  bakteri  dan  inflamasi  (Syakri et  al ,  2019). Kulit  yang  berminyak  menyebabkan  pori-pori  tersumbat,  sehingga  bakteri  seperti Staphylococcus  aureus akan  berkembangbiak  dengan  cepat  dan  menyebabkan  timbulnya jerawat (Ulaen et al , 2012). Perkembangan pada saat ini pengobatan jerawat dapat dilakukan dengan  banyak  cara  untuk  menurunkan  produksi  sebum,  inflamasi  pada  kulit,  dan memperbaiki abnormalitas folikel, salah satunya yaitu dengan penggunaan antibiotik seperti Klindamisin. Namun penggunaan antibiotik yang berlebihan, akan menyebabkan peningkatan resistensi  bakteri  pada  suatu  antibiotik  tertentu.  Pengobatan  penyakit  infeksi  kulit  yang disebabkan oleh bakteri yang resisten terhadap antibiotik perlu produk yang memiliki potensi tinggi, dengan adanya temuan produk baru yang berasal dari bahan alam (Indarto et al , 2019). Bahan  alam  terbukti  bermanfaat  bagi  kesehatan,  mudah  didapat,  murah  dan  menimbulkan efek  samping  yang  jauh lebih  rendah  jika  dibandingkan  dengan  obat  sintetis.  Salah  satunya memanfaatkan  tanaman  obat  yang  efektif  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan mengoptimalkan  pemanfaatan  bunga  telang.  Bunga  telang  ( Clitoria  ternatea L.) mampu menghasilkan  metabolit  sekunder  seperti  flavonoid,  saponin,  terpenoid,  tanin,  alkaloid (Apriani,  Pratiwi,  2021)  dan antosianin  (Angriani,  L,  2019).  Flavonoid merupakan  senyawa yang berpotensi sebagai senyawa antibakteri.
Bunga  telang  mengandung  flavonoid  sebagai  antibakteri.  Flavonoid  yang  diberikan secara peroral memiliki bioavailabilitas yang kurang baik karena kelarutan yang rendah dan tidak  stabil  terhadap  faktor  lingkungan.  Salah  satu  upaya  yang  dapat  dilakukan  untuk mengatasi  masalah  tersebut  adalah  dengan  mengubah  bentuk  menjadi  ukuran  nanopartikel (Fitri et al , 2020). Manfaat bentuk nanopartikel antara lain stabilitas obat lebih baik, capaian target  spesifik  ke  dalam  sel  atau  jaringan,  mencegah  hidrasi  kulit,  meningkatkan  efek absorpsi,  meningkatkan  penetrasi  zat  aktif  dan  bersifat  lepas  terkendali  (Ahdyani et  al , 2020). Pembuatan nanopartikel dilakukan dengan metode gelasi ionik menggunakan polimer polikation  kitosan  karena  memiliki  sifat  yang  tidak  beracun,  biokompatibel, biodegradable dan  mudah  dimodifikasi  secara  kimia.  Sedangkan  polimer  polianion  tripolifosfat  berfungsi sebagai  pengikat  silang  dengan  adanya  penambahan  tripolifosfat,  kekuatan  mekanik  gel kitosan  dapat  meningkat  karena  tripolifosfat  memiliki  rapatan  muatan  negatif  yang  tinggi sehingga  interaksi  dengan  polikationik  kitosan  akan  lebih  besar  (Rismana et  al ,  2014). Penggunaan variasi komposisi kitosan menunjukkan nilai ukuran partikel meningkat dengan peningkatan konsentrasi kitosan yang digunakan (Pakki et al , 2016).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  karakteristik  fisik  nanopartikel  fraksi  etil asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang  dan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus yang diisolasi dari jerawat.

## METODE PENELITIAN

## 1.) Persiapan Sampel
Bunga telang segar disortasi, kemudian dicuci dan ditiriskan. Bunga telang dikeringkan dengan  cara  dijemur  dibawah  sinar  matahari  dan  ditutup  kain  hitam  selama  1  hari. Dilanjutkan  dengan  oven  pada  suhu  50 ⁰ C  selama  4  jam  (Frisca et  al, 2021).  Bunga kering dilakukan pengecilan ukuran dan diayak menggunakan mesh 40.

## 2.) Pembuatan Ekstrak Bunga Telang
Serbuk bunga telang ditimbang sebanyak 500 gram, kemudian dimaserasi menggunakan pelarut  etanol  70%  sebanyak  3.750  mL  selama  3  hari  sambil  sesekali  diaduk.  Maserat disaring  menggunakan  kain  flanel  hingga  diperoleh  filtrat.  Ampas  diremaserasi  dengan pelarut  etanol  sebanyak  1.250  mL  selama  2  hari  sambil  sesekali  diaduk.  Filtrat  yang diperoleh  digabungkan,  kemudian  dipekatkan  menggunakan rotary  evaporator pada suhu 50 ⁰ C sampai diperoleh ekstrak etanol kental (Puspitasari, AD, 2017).

## 3.) Pembuatan Fraksi Bunga Telang
Ekstrak kental ditimbang 50 gram dilarutkan 50 mL air hangat, kemudian dimasukkan ke dalam corong pisah dan ditambahkan n-heksan 50 mL dengan ekstraksi cair-cair hingga fraksi n-heksan berwarna jernih. Kemudian fraksi n-heksan dan air dipisahkan dan fraksi n-heksan.  Residu  sisa  fraksinasi  n-heksan  ditambahkan  etil  asetat  (1:1)  difraksinasi sampai  fraksi  etil  asetat  berwarna  jernih.  Hasil  filtrat  fraksi  etil  asetat  diuapkan menggunakan rotary  evaporator kecepatan  200  rpm  dan  dipekatkan  menggunakan waterbath dengan suhu 50 ℃ hingga diperoleh fraksi etil asetat yang kental (Wicaksono et al , 2021).

## 4.) Skrining Fitokimia
a. Flavonoid
Ekstrak  kental  fraksi  etil  asetat  bunga  telang  ditimbang  sebanyak  40  mg ditambahkan 100 mL air panas. Kemudian didihkan selama 5 menit dan disaring lalu 5  mL  dari  filtrat  ditambahkan  0,05 mg  serbuk  Mg  dan  1 mL  HCl  pekat,  selanjutnya dikocok  kuat.  Hasil  positif  ditunjukkan  dengan  adanya  perubahan  larutan  menjadi warna merah, kuning atau jingga (Cahyaningsih et al , 2019).
Uji  flavonoid  pada  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang dilakukan  dengan  cara  diambil  sebanyak  1  mL,  kemudian  ditambahkan  0,05  mg serbuk Mg dan 1 mL HCl pekat, selanjutnya dikocok kuat. Hasil positif ditunjukkan dengan adanya perubahan larutan menjadi warna merah, kuning atau jingga.
b. Saponin
Ekstrak  kental  fraksi  etil  asetat  bunga  telang  ditimbang  sebanyak  50  mg ditambahkan air sebanyak 10 mL, kemudian dikocok selama 1 menit dan ditambahkan 2 tetes HCl 1 N. Bila busa yang terbentuk tetap stabil dalam waktu ± 1 menit, maka menunjukkan hasil positif mengandung saponin (Putri et al , 2021).
Uji  saponin  pada  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang dilakukan dengan cara diambil sebanyak 1 mL kemudian dikocok selama 1 menit dan ditambahkan 2 tetes HCl 1 N. Bila busa yang terbentuk tetap stabil dalam waktu ± 1 menit, maka menunjukkan hasil positif mengandung saponin.
c. Tanin
Ekstrak  kental  fraksi  etil  asetat  bunga  telang  ditimbang  sebanyak  40  mg ditambahkan air sebanyak 4 mL. Kemudian diambil sebanyak 2 mL dan ditambahkan 1 mL FeCl 3 1%. Reaksi positif ditunjukkan dengan terbentuknya warna biru tua atau hitam kehijauan (Cahyaningsih et al , 2019).
Uji  tanin  pada  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang dilakukan  dengan  cara  diambil  sebanyak  1  mL  kemudian  ditambahkan  1  mL  FeCl 3 1%.  Reaksi  positif  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna  biru  tua  atau  hitam kehijauan.
d. Alkaloid
Ekstrak  kental  fraksi  etil  asetat  bunga  telang  ditimbang  0,1  g  ditambahkan  air sebanyak  2  mL.  Kemudian  ditambahkan  2  mL  kloroform  dan  2  mL  amonia,  lalu dikocok  ditambahkan  HCl  2N.  Larutan  yang  didapatkan  dibagi  menjadi  3  tabung reaksi.  Tabung  A  ditambahkan  pereaksi  Mayer,  positif  ditunjukkan  dengan terbentuknya  endapan  putih.  Tabung  B  ditambahkan  pereaksi  Dragendroff,  positif ditunjukkan dengan terbentuknya endapan merah atau jingga. Tabung C ditambahkan pereaksi Wagner, positif ditunjukkan dengan terbentuknya endapan coklat (Kursia et al , 2016).
Uji  alkaloid  pada  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang dilakukan  dengan  cara  diambil  sebanyak  1  mL  kemudian  ditambahkan  2  mL kloroform  dan  2  mL  amonia,  lalu  dikocok  ditambahkan  HCl  2N.  Larutan  yang didapatkan  dibagi  menjadi  3  tabung  reaksi.  Tabung  A  ditambahkan  pereaksi  Mayer, positif  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  endapan  putih.  Tabung  B  ditambahkan pereaksi  Dragendroff,  positif  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  endapan  merah  atau jingga.  Tabung  C  ditambahkan  pereaksi  Wagner,  positif  ditunjukkan  dengan terbentuknya endapan coklat.

## 5.) Pembuatan Nanopartikel
a. Pembuatan larutan kitosan 0,1%, 0,2% dan 0,3% dengan volume 50 mL Kitosan  ditimbang  sebanyak  50,  100,  dan  150  mg  dengan  menggunakan  kaca arloji. Kemudian didispersikan ke dalam gelas kimia yang berisi asam asetat glasial 0,5%  sebanyak  50  mL  dan  diaduk  menggunakan magnetik  stirrer hingga  kitosan larut.
b. Pembuatan larutan natrium tripolifosfat 0,1% dengan volume 10 mL Natrium  tripolifosfat  ditimbang  sebanyak  10  mg  dengan  menggunakan  kaca arloji.  Kemudian  dilarutkan  dengan  aquadest  10  mL  di  dalam  gelas  kimia. Selanjutnya, diaduk menggunakan magnetik stirrer hingga natrium tripolifosfat larut.
c. Pembuatan nanopartikel frak si etil asetat ekstrak etanol bunga telang Dimasukkan  larutan  kitosan  0,1%,  0,2%  dan  0,3%  sebanyak  50  mL  ke  dalam gelas kimia. Ditambahkan larutan tween 80 sebanyak 0,5 mL dengan cara tetes demi tetes dan dihomogenkan menggunakan magnetik stirrer . Kemudian ditambahkan 10 mg  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang,  homogenkan.  Setelah  itu,  larutan natrium tripolifosfat 0,1% dimasukkan sebanyak 10 mL dengan cara tetes demi tetes dan sambil diaduk dengan magnetik stirrer kecepatan 1500 rpm (tabel 1).
Tabel 1. Formula nopartikel Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Bunga Telang
Bahan Formula 1 Formula 2 Formula 3 Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Bunga Telang 10 mg 10 mg 10 mg Larutan Kitosan 0,1% b/v 50 mL - - Larutan Kitosan 0,2% b/v - 50 mL - Larutan Kitosan 0,3% b/v - - 50 mL Larutan Natrium Tripolifosfat 0,1% 10 mL 10 mL 10 mL Tween 80 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL
d. Uji karakteristik nanopartikel
Karakteristik  sifat  fisik  nanopartikel  yang  diamati  antara  lain  ukuran  partikel dan zeta potensial. Penentuan ukuran partikel dilakukan menggunakan alat Particle
Size Analyzer (Malvern Instruments, UK) dan zeta potensial dianalisis menggunakan Zetasizer (Malvern Instruments, UK).

## 6.) Isolasi dan Identifikasi Bakteri Staphylococcus aureus dari Sampel Jerawat
Sampel jerawat probandus diambil dengan cara mengusap darah jerawat. Kemudian dilakukan  isolasi  dengan  identifikasi  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  metode  uji biokimia  meliputi  uji  katalase,  uji  pigmentasi  dan  fermentasi  media  MSA  serta  uji koagulase.

## 7.) Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dalam  penelitian  ini  dengan  metode  sumuran. Suspensi  bakteri  uji  sebanyak  1000  µL  dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  steril,  lalu ditambahkan  media  MHA  sebanyak  20  mL  dihomogenkan  dan  dibiarkan  memadat. Setelah itu, dibuat lubang sumuran sebanyak 5 lubang dengan ukuran diameter sumuran sebesar 6 mm. Tiap lubang ditetesi sediaan nanopartikel sebanyak 50 µL. kontrol positif digunakan  antibiotik  Klindamisin  1%  dan  kontrol  negatif  menggunakan  basis  sediaan nanopartikel.  Selanjutnya  cawan  petri  diinkubasi  pada  suhu  37 ⁰ C  selama  24  jam. Diamati zona hambat yang terbentuk dengan interpretasi daerah bening di sekitar lubang yang  menunjukkan  tidak  adanya  pertumbuhan  bakteri  dan  diukur  diameter  hambatnya menggunakan  jangka  sorong.  Percobaan  dilakukan  sebanyak  5  replikasi  pada  masing- masing sampel.

## 8.) Analisis Data
Data  yang  telah  diperoleh  dari  hasil  pengamatan  uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan analisis  statistik  menggunakan  analisis One  Way ANOVA  dengan  syarat  uji  normalitas ( Shaphiro-Wilk ) dan uji homogenitas (uji Levene ) menunjukkan nilai signifikansi > 0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  karakteristik  fisik  nanopartikel  fraksi  etil asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang  dan  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus yang  diisolasi  dari  jerawat.  Simplisia  bunga  telang  terlebih  dahulu dijadikan  ekstrak  kental  dengan  metode  maserasi.  Hasil  rendemen  ekstrak  adalah  30,94% dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil % Rendemen Ekstrak dan Fraksi Bunga Telang Sampel Rendemen (%) Ekstrak Etanol 30,94% Fraksi Etil Asetat 1%
Berbeda dengan penelitian sebelumnya  yang dilakukan oleh  Frisca et al (2021) yaitu sebesar  48,30%.  Perbedaan  hasil  rendemen  disebabkan  karena  perbedaan  pelarut  yang digunakan  yang  memiliki  polaritas  berbeda  dalam  menarik  senyawa  yang  ada  pada  bunga telang.  Hasil  organoleptis  dari  ekstrak  etanol  bunga  telang  yaitu  memiliki  tekstur  kental, warna biru keunguan yang pekat dan bau khas bunga telang. Hasil rendemen fraksi 1%. Hasil ini  berbeda  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Wicaksana  (2021)  yaitu  sebesar  2,16%. Hal  ini  disebabkan  karena  adanya  perbedaan  perlakuan  yang  tidak  sama  pada  proses fraksinasi.
Hasil uji identifikasi memperlihatkan bahwa Fraksi mengandung senyawa metabolit sekunder  yaitu  flavonoid,  saponin,  tanin  dan  alkaloid  dapat  dilihat  pada  tabel  3.  Kemudian
nanopartikel yang sudah diperoleh juga dilakukan identifikasi kandungan senyawa. Hasil uji identifikasi  memperlihatkan  nanopartikel  mangandung  senyawa  yang  sama  dengan  yang diubah bentuk menjadi ukuran nanopartikel.
Ukuran  partikel  dan  indeks  polidispersitas  adalah  karakteristik  paling  penting  di dalam suatu sistem nanopartikel. Suatu formula nanopartikel dapat diketahui ukuran partikel dan  indeks  polidispersitas  sampel  dengan  menggunakan  alat Particle  Size  Analyzer (PSA). Hasil  karakteristik  nanopartikel  dapat  dilihat  pada  tabel  4.  menunjukkan  sampel  dengan ukuran  nanopartikel  (<1.000  nm)  yang  paling  kecil  adalah  formula  1  dengan  konsentrasi kitosan  0,1%  diperoleh  ukuran  nanopartikel  sebesar  69,58±6,90  nm  dengan  hasil  indeks polidispersitas 0,682±0,076 dan nilai zeta potensial sebesar +46,5±0,5 mV.

## Tabel 3. Hasil Identifikasi Kandungan Senyawa Kimia
Kandungan Senyawa Kimia Hasil Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Bunga Telang Nanopartikel Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Bunga Telang Flavonoid + + Saponin + + Tanin + + Alkaloid + +
Distribusi  ukuran  partikel  dinyatakan  dalam  indeks  polidispersitas.  Semakin  kecil nilai  indeks  polidispersitas  maka  menggambarkan  semakin  stabil  juga  rentang  indeks polidispersitas  yang  baik  berada  dalam  rentang  0  sampai  dengan  1.  Nilai  indeks polidispersitas  mendekati  0  menunjukkan  dispersi  ukuran  yang  homogen.  Nilai  indeks polidispersitas yang baik berada dalam rentang < 0,7 (Nugroho et al , 2020). Hasil dari ketiga formula  memiliki  indeks  polidispersitas  yang  cukup  baik  yaitu  0,65-0,75,  namun  karena masih jauh di bawah nilai 1 maka dapat diartikan tingkat keseragaman cukup baik.

## Tabel 4. Hasil Uji Karakteristik Nanopartikel
Formula Replikasi Uji Karakteristik Ukuran Partikel (nm) Indeks Polidispersitas Zeta Potensial (mV) Formula 1 1 67,76 0,668 +45,9 2 77,21 0,613 +46,9 3 63,78 0,764 +46,7 Rata-rata±SD 69,58±6,90 0,682±0,076 +46,5±0,5 Formula 2 1 161,90 0,664 +42,9 2 131,90 0,688 +44,3 3 205,60 0,561 +45,0 Rata-rata±SD 166,47±37,06 0,638±0,067 +44,1±1,1 Formula 3 1 461,00 0,634 +37,6 2 498,50 0,835 +38,6 3 659,40 0,686 +37,0 Rata-rata±SD 539,63±105,40 0,718±0,104 +37,7±0,8
Pengukuran zeta potensial suatu koloid perlu dilakukan untuk mengetahui kestabilan suatu koloid saat penyimpanan. Zeta potensial menunjukkan muatan permukaan dari partikel koloid  yang  berhubungan  dengan  tolak-menolak  elektrostatik  antar  partikel  sehingga mencegah  terjadinya  agregasi  partikel  koloid.  Kekuatan  tolak  menolak  yang  dibawa  oleh
muatan  ion  serupa  pada  partikel  permukaan  akan  mencegah  gaya  tarik  menarik  yang ditentukan  oleh  ikatan  hidrogen  dan  ikatan  Van  der  Waals.  Zeta  potensial  juga  dapat menentukan stabilitas dari nanopartikel. Suatu koloid dapat stabil saat penyimpanan apabila nilai zeta potensialnya lebih besar dari +30 mV atau lebih kecil dari -30mV ( Mappamasing et al ,  2015).  Pada  formula  1  nilai  zeta  potensial  +46,5±0,5,  Formula  2  +44,1±1,1,  Formula  3 +37,7±0,8. Nilai zeta potensial semakin tinggi maka semakin stabil koloid nanopartikel yang terbentuk.  Hal  ini  berhubungan  dengan  pengikatan  gugus  anionik  oleh  gugus  amin  yang panjang dari kitosan untuk menjaga elektrik yang tinggi sehingga dapat mencegah terjadinya agregasi.  Nilai  zeta  potensial  yang  positif  disebabkan  karena  kontribusi  dari  muatan  parsial pada  permukaan  yang  didominasi  oleh  kitosan  (bermuatan  positif)  sehingga  beda  potensial antara electrical double layer dan medium bernilai positif. Nilai zeta potensial yang lebih dari 30  mV  menunjukkan repulsion force lebih  besar  daripada attractive  force sehingga  mampu meningkatkan  stabilitas  sistem  dispersi  (Fitri et  al ,  2020).  Sistem  dispersi  dengan  nilai  zeta potensial yang rendah lebih mudah membentuk agregat seiring dengan gaya Van der Waals dalam interaksi antar partike. Besarnya nilai zeta potensial yang dihasilkan erat hubungannya dengan kompaktibilitas sediaan dengan sel target.
Hasil  identifikasi  bakteri Staphylococcus  aureus yang  diisolasi  dari  jerawat  dapat dilihat  pada  Tabel  5.  Hasil  Uji  katalase  menunjukkan  adanya  gelembung  gas  hal  ini  terjadi karena bakteri Staphylococcus menghasilkan enzim yang dapat memecah hidrogen peroksida. Uji  pigmentasi  menunjukkan  penyebaran  bakteri  yang  baik  pada  permukaan  media  NA miring  dan  berwarna  kuning,  sedangkan  pada  media  MSA  menunjukkan  perubahan  media dari  merah  menjadi  kuning  karena  kemampuan  fermentasi mannitol dengan  asam  yang dihasilkan menyebabkan perubahan phenol red. Jika pada bakteri Staphylococcus epidermidis yang  diujikan  pada  meida  MSA  tidak  akan  terjadi  perubahan  warna  (media  MSA  tetap merah).  Hasil  pengecatan  gram  menunjukkan  adanya coccus berwarna  ungu  bergerombol karena  bakteri  mempertahankan  warna  kristal  violet  dan  pada  media  BAP  menunjukkan koloni berwarna kuning. Jika pada bakteri S. epidermidis koloni akan berwarna putih keruh. Hal ini yang menunjukkan bahwa identifikasi bakteri adalah S. aureus bukan S. epidermidis (Dewi AK, 2013).
Tabel 5. Hasil Identifikasi Bakteri Staphylococcus aureus dari Jerawat
Uji Hasil Pengecatan Gram + Media BAP + Katalase + Pigmentasi + Fermentasi media Mannitol Salt Agar + Koagulase +
Uji  aktivitas  antibakteri  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus hasil  isolasi  dari  jerawat  dilakukan  dengan  metode difusi  agar  menggunakan  metode  sumuran.  Metode  digunakan  dalam  penelitian  ini  karena memiliki kelebihan yaitu dapat memberikan akurasi yang tinggi dan lebih mudah mengukur luas  daerah  hambat  yang  terbentuk  karena  efek  penetrasi  senyawa  aktif  tidak  hanya  di permukaan atas media agar tetapi juga sampai ke bawah (Hidayah, SN, 2015).
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  dapat  dilihat  dari  rata-rata  diameter  zona  hambat antibakteri  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus tertera  pada  tabel  6.  Selanjutnya,  hasil  uji  statistik menggunakan  uji One  Way ANOVA  menunjukkan  bahwa  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  bunga telang dengan konsentrasi kitosan 0,1%; 0,2%; 0,3% dengan klindamisin 1% memiliki nilai
signifikansi  0,000  <  0,05  sehingga  menunjukkan  bahwa  rata-rata  daya  hambat  dari  semua sampel  terdapat  perbedaan  dan  dapat  disimpulkan  bahwa  nanopartikel  fraksi  etil  asetat ekstrak etanol bunga telang dalam menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus berbeda nyata.  Kemampuan  penghambatan  yang  dimiliki  oleh  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak etanol bunga telang karena terdapat senyawa metabolit flavonoid, saponin, tanin dan alkaloid. Senyawa flavonoid berperan langsung sebagai zat antibiotik dengan mengganggu fungsi dari mikroorganisme, seperti bakteri dan virus.
Mekanisme  penghambatan  senyawa  flavonoid  terhadap  pertumbuhan  bakteri  karena adanya  kemampuan  senyawa  tersebut  untuk  membentuk  kompleks  dengan  protein ekstraseluler,  mengaktivasi  enzim  dan  merusak  membran  sel.  Senyawa  flavonoid  dapat menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram  positif  dan  gram  negatif  (Indarto et  al ,  2019). Mekanisme  saponin  sebagai  antibakteri  yaitu  dengan  menurunkan  tegangan  permukaan dinding  sel  bakteri  dan  merusak  permeabilitas  membran.  Rusaknya  membran  sel  sangat menggangu  pertumbuhan  bakteri.  Saponin  berdifusi  melalui  membran  luar  dan  dinding  sel yang rentan kemudian mengikat membran sitoplasma sehingga mengganggu dan mengurangi kestabilan  membran  sel.  Hal  ini  menyebabkan  sitoplasma  bocor  keluar  dari  sel  yang mengakibatkan  kematian  pada  sel.  Mekanisme  kerja  senyawa  tanin  sebagai  antibakteri dengan cara mengkoagulasi dan mendenaturasi protein. Senyawa tanin akan berikatan dengan protein  membentuk  ion  H + dan  mengakibatkan  pH  menjadi  asam  sehingga  protein terdenaturasi. Kondisi asam menginaktif enzim pada bakteri dan menyebabkan metabolisme terganggu  dan  kerusakan  sel  hingga  mengalami  kematian.  Tanin  dapat  menghambat  enzim reverse  transcriptase dan  DNA topoisomerase sehingga  sel  bakteri  tidak  dapat  terbentuk, karena  adanya  kompleksasi  dari  ion  besi  yang  kuat  pada  tanin.  Tanin  memiliki  target  pada polipeptida dinding sel sehingga pembentukan dinding sel menjadi kurang sempurna. Hal ini menyebabkan  sel  bakteri  menjadi  lisis  karena  tekanan  osmotik  maupun  fisik  sehingga  sel bakteri  akan  mati  (Rijayanti,  R.  K,  2024).  Sedangkan  mekanisme  senyawa  alkaloid  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  cara  mengganggu  komponen  penyusun peptidoglikan pada sel bakteri, sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan akan menyebabkan kematian pada sel bakteri (Hafsari et al , 2015).
Tabel 6. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Nanopartikel Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Bunga
Telang Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus Replikasi Dianeter Zona Hambat (mm) Kontrol Negatif Formula 1 (0,1%) Formula 2 (0,2%) Formula 3 (0,3%) Klindamisin 1% I 6,9 10,9 11,4 13,9 28,5 II 6,2 11,4 10,7 12,8 28,2 III 7,6 12,3 11,9 13,3 29,9 IV 7,3 10,5 12,8 13,5 29,5 V 6,7 11,8 12,3 12,2 28,9 Rata-rata±SD 6,94±0,54 a 11,38±0,71 b 11,82±0,81 b 13,14±0,66 c 29,00±0,70 d
Keterangan : Huruf yang sama menunjukkan tidak adanya perbedaan aktivitas antibakteri yang signifikan antara konsentrasi dengan kontrol positif

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Hasil  karakteristik  fisik  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang ( Clitoria ternatea L.) menunjukkan formula 1, formula 2 dan formula 3 telah memenuhi sifat fisik  karakteristik  nanopartikel  dengan  rata-rata  ukuran  partikel  yaitu  69,58±6,90  nm;
166,47±37,06  nm;  dan  539,63±105,40  nm  dengan  indeks  polidispersitas  berturut-turut sebesar  0,682±0,076;  0,638±0,067;  dan  0,718±0,104  serta  nilai  zeta  potensial  berturut-turut +49,83±1,60  mV;  +44,53±1,58  mV;  dan  +37,90±2,30  mV.  Berdasarkan  hasil  uji  aktivitas antibakteri  sediaan  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol  bunga  telang  memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus .

## Saran
Perlu  dilakukan    uji  stabilitas  sediaan  nanopartikel  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol bunga telang.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  memberikan  ucapan  terima  kasih  kepada  Sekolah  Tinggi  Ilmu  kesehatan Nasional  yang  telah  mensupport  baik  dari  pendanaan  maupun  peminjaman  alat-alat  uji laboratorium  dan  LPPM  Sekolah  Tinggi  Ilmu  Kesehatan  Nasional  yang  telah  memfasilitasi penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahdyani  R,  Rahayu  S,  Zamzani  I,  Andika  A.  (2020).  Pengembangan  Sistem  Penghantaran Berbasis  Nanopartikel  dalam  Sediaan  Kosmesetika  Herbal. Journal  of  Current Pharmaceutical Sciences .4(1):289-299.
Angriani  L.  (2019).  Potensi  Ekstrak  Bunga  Telang  ( Clitoria  ternatea )  Sebagai  Pewarna Alami  Lokal  Pada  Berbagai  Industri  Pangan. Canrea  Journal:  Food  Technology, Nutritions, and Culinary Journal .2(1):32-37.
Apriani S, Pratiwi FD. (2021). Aktvitas Antioksidan Ekstrak Bunga Telang ( Clitoria ternatea L.)  Menggunakan  Metode  DPPH  (2,  2  DIPHENY1  1-1  PICKRYLHYDRAZYL). Jurnal Ilmiah Kohesi .5(3):83-89.
Cahyaningsih  E,  Yuda  PE,  Santoso  P.  (2019).  Skrining  Fitokimia  dan  Uji  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Bunga  Telang  ( Clitoria  ternatea L.)  dengan  Metode Spektrofotometri UV-VIS. Jurnal Ilmiah Medicamento .5(1):51-57. Dewi AK. (2013). Isolasi, Identifikasi dan Uji Sensitivitas Staphylococcus aureus Terhadap Amoxicillin dari Sampel Susu Kambing Peranakan Ettawa (PE) Penderita Mastitis di Wilayah Girimulyo, Kulonprogo, Yogyakarta. Jurnal Sain Veteriner .31(2):138-150. Fitri,  D.,  Kiromah,  N.  Z.  W.,  &  Widiastuti,  T.  C.  (2020). Formulasi  Dan  Karakterisasi Nanopartikel  Ekstrak  Etanol  Daun  Salam  (Syzygium  polyanthum)  Pada  Berbagai Variasi  Komposisi  Kitosan  Dengan  Metode  Gelasi  Ionik . JPSCR:  Journal  of Pharmaceutical Science and Clinical Research . 5 (1), 61.
Frisca  IZ,  Lindawati  NY,  Murtisiwi  L.  (2021).  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Bunga Telang  ( Clitoria  ternatea L.)  Terhadap  Bakteri Escherichia  coli ESBL. Jurnal Farmasi .2(1):38-44.
Hafsari, A. R., Cahyanto, T., Sujarwo, T. dan Lestari, R. I. (2015). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Beluntas ( Pluchea indica (l.) less.) Terhadap Propionibacterium acnes Penyebab Jerawat, Jurnal Istek . 9 (1).
Hidayah  SN.  (2015).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Kombinasi  Ekstrak  Etanol  Bunga  Telang ( Clitoria  ternatea )  dan  Ekstrak  Etanol  Daun  Sirsak  ( Annona  muricata L.)  Terhadap Staphylococcus aureus dan Staphylococcus epidermidis .
Indarto I, Narulita W, Anggoro BS, Novitasari A. (2019). Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong Terhadap Propionibacterium acnes . Biosfer: Jurnal Tadris Biologi .10(1):67-78.
Kursia S, Lebang JS, Nursamsiar N. (2016). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etilasetat Daun Sirih Hijau ( Piper betle L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis . Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology . 3(2):72-77. Mappamasing F, Anwar E, Mun’im A. (2015). Formulasi, Karakterisasi dan Uji Penetrasi In Vitro  Resveratrol  Solid  Lipid  Nanopartikel  dalam  Krim  Topikal. Jurnal  Ilmu Kefarmasian Indonesia . 13(2):137-144.
Mutsaqof,  AAN,  Wiharto,  Suryani  E.  (2015).  Sistem  Pakar  untuk  Mendiagnosis  Penyakit Infeksi  Menggunakan  Forward  Chaining. Jurnal  Teknologi  dan  Informasi  ITSmart. 4(1):43-47.
Nugroho  BH,  Wardhani  MT,  Suparmi  S.  (2020).  Perbandingan  Teknik  Aerasi  dan Ultrasonikasi  Gelasi  Ionik  Nanopartikel  Deksametason  Natrium  Fosfat. Jurnal Kefarmasian Indonesia . 10(2):102-109. Pakki, E., Sumarheni, S., F, A., Ismail, I., & Safirahidzni, S. (2016). Formulasi Nanopartikel Ekstrak  Bawang  Dayak  (Eleutherine  americana  (aubl)  Merr)  Dengan  Variasi Konsentrasi  Kitosan-Tripolifosfat (TPP). Journal  Of  Tropical  Pharmacy  And Chemistry . 3 (4), 251–263.
Puspitasari AD, Proyogo LS. (2017). Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi dan Sokletasi Terhadap  Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak  Etanol  Daun  Kersen  ( Muntingia  calabura ). Cendekia Eksakta . 2(1):1-8.
Putri  BR,  Ulfa  AM,  Marcellia  S.  (2021).  Formulasi  dan  Uji  Aktivitas  Sediaan  Krim  Anti Jerawat Ekstrak Etanol Bunga Telang ( Clitoria ternatea ) Terhadap Propionibacterium acnes . Jurnal Ilmu Kedokteran dan Kesehatan . 8(4):358-366.
Rijayanti,  R.  K.  (2014).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Mangga  Bacang ( Mangifera  foetida L.)  Terhadap Staphylococcus  aureus Secara  In  Vitro, Naskah Publikasi ,  Program  Studi  Pendidikan  Dokter,  Fakultas  Kedokteran  Universitas Tanjungpura.
Rismana  E,  Kusumaningrum  S,  Bunga  O,  Nizar,  Marhamah.  (2014).  Pengujian  Aktivitas Antiacne Nanopartikel Kitosan Ekstrak Kulit Buah Manggis ( Garcinia Mangostana ). Media Penelitian dan Pengembangan Kesehatan . 24(1):19-27. Syakri S, Arsul MI, Nurlina N. (2019). Pengujian Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Buah  Semangka  Merah  (Citrullus  Lanatus  (Thunb.)  Matsum.  &  Nakai)  Terhadap Bakteri Propionibacterium acnes . Jurnal Farmasi UIN Alauddin Makassar . 7(2):24- 32.
Ulaen SP, Banne Y, Suatan RA. (2012). Pembuatan Salep Anti Jerawat dari Ekstrak Rimpang Temulawak ( Curcuma xanthorrhiza Roxb.). Jurnal Ilmiah Farmasi . 3(2):45-49.
Wicaksono  B,  Pratimasari  D,  Lindawati  NY.  (2021).  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Etanol, Fraksi Polar, Semi Polar dan Non Polar Bunga Telang ( Clitoria ternatea L.) dengan Metode ABTS. Jurnal Kesehatan Kartika . 16(3):88-94.