Formulasi Nanoemulgel Ekstrak Biji Kopi Robusta ( Coffea canephora Pierre) dengan Variasi Gelling Agent Sebagai Antioksidan
Nanoemulgel Formulation of Robusta Coffee Bean Extract (Coffea canephora Pierre) with Various Gelling Agent As Antioxidant
Raden Roro Karina Pambudi, Reni Ariastuti * , Ahwan Universitas Sahid Surakarta email: *reniariafarmasi@usahidsolo.co.id

## INTISARI
Biji  kopi  robusta  diketahui  mengandung  senyawa  polifenol  dengan  aktivitas  antioksidan. Nanooemulgel adalah sediaan gel yang ditambahkan pada basis gel dengan partikel berukuran nano. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  nanoemulgel  ekstrak  biji  kopi robusta.
Nanoemulgel  diformulasikan  dalam  5  formula  dengan  perbandingan  gelling  agent  yang berbeda.  Sediaan  nanoemulsi  dievaluasi  menggunakan  metode  teknik  kinerja  rendah  (magnetic stirrer) dan metode teknik kinerja tinggi (sonicator), analisis ukuran partikel diukur menggunakan dynamic light scattering . Aktivitas antioksidan dievaluasi menggunakan metode DPPH ( 1,1-diphenyl- 2-picrylhydrazyl ).  Penilaian  sifat  fisik  sediaan  nanoemulgel meliputi  evaluasi  daya  sebar,  evaluasi daya lekat, viskositas dan evaluasi pH. Analisis statistik menggunakan SPSS 21 uji Paired T-test dan One Way Anova.
Ukuran partikel yang dihasilkan dari nanoemulsi ekstrak biji kopi robusta adalah 12,3 nm dan  indeks  polidispersitas  0,274  nm.  Formula  dengan  aktivitas  antioksidan  terkuat  yaitu  pada formula 1 dengan gelling agent carbopol tunggal sebanyak 0,5 gram karbopol dengan rata-rata IC50 (10,678 ± 0,034) ppm.
Kata kunci : biji kopi robusta; nanoemulgel; aktivitas antioksidan

## ABSTRACT
Robusta  coffee  beans  are  known  to  contain  polyphenolic  compounds  with  antioxidant activity. Nanooemulgel is a gel preparation added to a gel base with nano-sized particles. The purpose of this study was to determine whether robusta coffee bean  extract nanoemulgel has antioxidant activity. Nanoemulgel is formulated in 5 formulas with different gelling agent ratios. Nanoemulsion preparations  were  evaluated  using  low  performance  engineering  methods  (magnetic  stirrer) and high  performance  engineering  methods  (sonicator),  particle  size  analysis  was  measured  using dynamic  light  scattering.  Antioxidant  activity  was  evaluated  using  the  DPPH  (1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl) method. Evaluation of the physical properties of nanoemulgel preparations includes evaluation of spreadability, evaluation of adhesion, viscosity and pH evaluation. Statistical analysis using SPSS 21 Paired T-test and One Way Anova
The resulting particle size of the nanoemulsion for robusta coffee bean extract was 12.3 nm and the polydispersity index was 0.274 nm. The formula with the strongest antioxidant activity is Formula 1 with one carbopol gelling agent of 0.5 grams of carbopol with an average IC50 (10.678 ± 0.034) ppm.
Keyword : robusta coffee bean; nanoemulgel; antioxidant

## 1. PENDAHULUAN
Biji  kopi  robusta  tedapat  senyawa  alkaloid,  tanin,  saponin,  dan  polifenol sebagai metabolit sekunder. [1]. Biji kopi robusta mengandung bahan kimia yang
disebut  polifenol  yang  memiliki  sifat  antioksidan.  [2].  Biji  kopi  robusta  memiliki aktivitas  antioksidan  lebih  banyak  dibandingkan  arabika  maupun  campuran  biji kopi  robusta  dan  arabika  [3].  Kopi  dan  ekstrak  tanaman  lainnya  sering  diteliti aktivitas antioksidannya dengan menggunakan metode pengukuran radikal bebas dan DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ). Nilai IC50 adalah parameter yang diukur. Metode ini menentukan konsentrasi molekuler yang diperlukan untuk menghambat 50%  aktivitas  radikal  bebas 1,1-diphenyl-2-picrylhidrazyl dilakukan  dengan menggunakan  prosedur  produksi  senyawa  uji. [4].  Biji  kopi  Robusta  dari Wonosobo, Jawa Tengah, digunakan dalam penelitian ini. Menurut penelitian yang mengamati aktivitas antioksidan ekstrak biji kopi robusta dari beberapa lokasi di Pulau  Wonosobo,  Jawa  Tengah,  memiliki  aktivitas  antioksidan  terkuat  saat dibudidayakan pada ketinggian 620 mdpl, 599 mdpl, dan 800 mdpl. 50,18 ppm per satu,  9,88  ppm,  dan  42,63  ppm  adalah  nilai  IC50  [5].  Formulasi  optimum mengandung 0,5 gram ekstrak biji kopi robusta, dan metode DPPH digunakan untuk mengukur aktivitas antioksidan. Nilai IC50 dilaporkan sebesar 68,89 ppm. Ekstrak etanol biji kopi robusta telah digunakan dalam sediaan serum sebagai antioksidan. Menurut ini, serum ekstrak biji kopi robusta menghasilkan antioksidan kuat [6].
Karena barrier membran epidermis, ukuran adalah salah satu karakteristik yang mempengaruhi pemberian obat [7]. artikelnano dengan ukuran partikel kecil dan  meningkatkan  lipofilisitas  dapat  menembus  lebih  efisien  ke  dalam  stratum korneum  [8].  Oleh  karena  itu,  ekstrak  biji  kopi  robusta  harus  digunakan  untuk membuat  pengobatan  topikal  berupa  nanopartikel,  salah  satunya  nanoemulgel. Sediaan  nanoemulsi  yang  disebut  nanoemulgel  ditambahkan  ke  basis  gel. Nanoemulsi bersifat stabil secara termodinamika dan transparan, namun Meskipun nanoemulsi jelas dan stabil secara termodinamika, kompatibilitas kulit yang buruk dan  viskositas  yang  rendah  membuat  perlu  untuk  menambahkan  gel  untuk meningkatkan viskositas dan kenyamanan penggunaan [9]. Gelling agent gel adalah zat yang berpengaruh terhadap karakteristik fisik gel
Dengan formula terbaik berupa ekstrak biji kopi robusta 0,5 gram, ekstrak etanol biji kopi robusta dikembangkan oleh Mardhiani et al (2018) dalam sediaan serum sebagai aktivitas antioksidan dengan nilai IC50 sebesar 68,89 ppm. Formula ini diuji aktivitas antioksidannya menggunakan metode DPPH. Pembuatan serum ekstrak biji kopi robusta diduga menghasilkan antioksidan yang kuat.
Berdasarkan uraian tersebut di atas, maka dibuatlah formulasi nanoemulgel dengan  menggunakan  berbagai gelling  agent untuk  mendapatkan  sistem nanoemulgel  yang  stabil  dan  menghasilkan  sediaan  yang  dapat  menghantarkan kandungan  yang  lebih  optimal.  Sifat  fisik  nanoemulgel  ekstrak  biji  kopi  robusta dapat diketahui dari hasil evaluasi yang meliputi uji organoleptik, uji dispersi, uji daya lekat, uji pH, uji viskositas, dan uji aktivitas antioksidan yang diukur dengan teknik DPPH.
2. METODE PENELITIAN
2.1. ALAT DAN BAHAN
Peralatan  yang  digunakan  pada  pembuatan  nanoemulgel  ekstrak  biji  kopi robusta diantaranya toples maserasi, alat gelas ( Pyrex ), timbangan analit ( OHAUS ), rotary evaporator ( Dragonlab ), labu, watter bath ( Memmert ), watter bath ( Maxim ),
hot plate stirrer ( Thermo ), sonicator ( Digital Pro ), sentrifugasi ( DS Lab ), rerigerator ( RSA ),  spektrofotometer UV-Vis ( GenesysTM ), moisture  analyzer ( OHAUS ),  oven ( Memmert ). Bahan utama kopi Rabusta ( Coffea canephora ) dari daerah Wonosobo (Jawa Tengah), etanol 96% ( Mitra medika ). Formula nanoemulgel meliputi isopropil miristat  ( Brataco ),  tween  80  (Agung  Jaya),  gliserin  (Agung  Jaya),  propilen  glikol (Agung Jaya), metil paraben (Agung Jaya), Hidroksi Propil Metil Selulosa (HPMC) ( Brataco ),  karbopol  (Agung  Jaya)  dan aquadest .  Untuk  pengujian  aktivitas antioksidan antara lain serbuk DPPH ( Smartlab ), etanol pa ( Emsure ) dan vitamin C.

## 2.2.  CARA KERJA
Determinasi Biji Kopi Robusta Dan Pembuatan Ekstrak Biji Kopi Robusta Biji kopi robusta dibawa ke lab UPT Universitas Setia Budi dari Wonosobo, Jawa Tengah, dan dievaluasi di Jl. Letnan Jenderal Sutoyo Mojosongo-Solo. Ekstraksi dilakukan  dengan  cara  maserasi  bubuk  biji  kopi  robusta  menggunakan  pelarut etanol 96% selama 24 jam.

## Uji Susut Pengeringan
Ekstrak  biji  kopi  robusta  seberat  1  gram dimasukkan  ke  dalam  wadah. Ekstrak dimasak  selama  lima  jam  pada  suhu  105°C  dalam  oven  lalu  ditimbang.  Setelah  itu, pengeringan  dilanjutkan  dan  diukur  dengan  interval  1  jam  hingga  terjadi  perubahan kurang  dari  0,25%  antara  dua  penimbangan  berikutnya .  Susut  pengeringan  dalam persen terhadap berat awal sampel [10].

## Identifikasi
Flavonoid Menggunakan  reagen  bubuk  Mg  dan  5-6  tetes  H2SO4  pekat,  flavonoid ditemukan.  Adanya  flavonoid  ditunjukkan  dengan  warna  merah  atau  jingga.  [11]. Alkaloid Menggunakan  pereaksi  Mayer  dan  Dragendroff,  senyawa  alkaloid diidentifikasi.  [11]. Saponin Adanya  busa  yang  stabil  dengan  penambahan  HCl berfungsi  sebagai  petunjuk  adanya  senyawa  saponin.    [11]. Tanin Senyawa  tanin dideteksi menggunakan larutan besi (III) klorida 3%, hasill positif ditandai dengan warna biru kehijauan dan hitam [11].

## Formulasi Nanoemulsi Ekstrak Biji Kopi Robusta
Komponen  nanoemulsi  ekstrak  biji  kopi  robusta  tercantum  pada  Tabel  1. Ekstrak biji kopi robusta dengan berat total 90 miligram dibuat menjadi nanoemulsi menggunakan magnetic stirrer berputar dengan kecepatan 3800 rpm pada suhu 50 °C dan sonikator yang beroperasi pada suhu 45 °C untuk 15 menit.
Table 1. komposisi formula nanoemulsi telah dilakukan optimasi oleh Rahman dan Erindyah (2018 ) [12] Bahan Formula Ekstrak Biji Kopi Robusta 90 mg IPM (Isopropil Miristat) 5 Tween 80 27,5 Etanol 96% 27,5 Aquadest 40

## Uji Karakteristik Nanoemulsi Ekstrak Biji Kopi Robusta Uji Transmitansi
Spektrofotometer UV-Vis digunakan untuk mengukur nilai transmisi dengan air suling yang digunakan sebagai blanko dan  panjang gelombang visible 650 nm. [13].
Uji Sentrifugasi
Menggunakan sentrifugasi selama 30 menit pada 3800 rpm, dilakukan untuk pengujian sentrifugasi.  [12].

## Uji Ukuran Partikel
Uji  ukuran  partikel  nanoemulsi  diukur  menggunakan Dynamic  Light Scattering (DLS)  di  Laboratorium  Pengujian  Obat  dan  Kosmetika  Makanan Universitas  Islam  Indonesia  (LPOMK  UII),  berlokasi  di  Jl.  Kaliurang  Km.  145, Yogyakarta.

## Formulasi Nanoemulgel Ekstrak Biji Kopi Robusta
Tabel 2 digunakan untuk membuat formulasi nanoemulgel ekstrak biji kopi robusta. ini mengacu pada karya Baviskar et al (2013) [14].
Tabel 2. Formula nanoemulgel ekstrak biji kopi robusta dengan variasi gelling agent Bahan Berat Bahan (gram) F1 F2 F3 F4 F5 Nanoemulsi ekstrak biji kopi robusta 1 1 1 1 1 HPMC 2 - 1 1,5 2,0 Carbopol - 0,5 0,5 0,75 1 TEA 1 1 1 1 1 Propilenglikol 10 10 10 10 10 Gliserin 15 15 15 15 15 Metil Paraben 0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 Aquadest Ad 100 Ad 100 Ad 100 Ad 100 Ad 100
Uji Stabilitas Fisik Nanoemulgel Ekstrak Biji Kopi Robusta
Setiap  formulasi  nanoemulgel  ekstrak  biji  kopi  disimpan  pada  suhu  -10°C dan 27 ± 3°C (1 siklus) selama 24 jam.  Uji freeze thaw dilakukan sebanyak 3 siklus. Sebelum  dan  sesudah freeze-thaw ,  stabilitas  fisik  nanoemulgel  ekstrak  biji  kopi robusta  dinilai.  Pengujian  dilakukan  pada uji  organoleptis ,  pH,  daya  lekat,  daya sebar, dan viskositas.
Uji  Aktivitas  Ekstrak  Biji  Kopi  Robusta  Dan  Nanoemulgel  Ekstrak  Biji  Kopi Robusta
Larutan DPPH 1MM
Labu ukur 100 mL diisi serbuk DPPH setelah ditimbang sebanyak 39,432 mg yang  telah  dilapisi  aluminium  foil  dan  diisi  etanol  hingga  tanda  batas  p.a  hingga tanda batas [5].

## Larutan Blanko
Larutan DPPH 1 mM sebanyak 1 mL dipipet kemudian ditambahkan etanol p.a sampai 10 ml.  30 menit  dihabiskan untuk menginkubasi larutan blanko  pada suhu 25–30 °C. [5].

## Larutan Induk Vitamin C 100 ppm
100  miligram  vitamin  C  harus  ditimbang dimasukkan  dan  kemudian dilarutkan seluruhnya dalam etanol dalam labu ukur 100 mL (1000 ppm). Untuk membuat  larutan  induk  yang  mengandung  100  ppm  vitamin  C,  encerkan  10  mL larutan vitamin 1000 ppm dengan 100 mL etanol per jam.  [5].

## Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
1 mL larutan DPPH 1 mM diencerkan dengan etanol dan ditempatkan dalam labu ukur 10 mL yang dialasi dengan aluminium foil hingga kekuatan maksimum sebelum diinkubasi selama 30 menit pada suhu kamar. Kemudian ukur absorbansi pada λ 500-600 nm . [5].

## Penentuan Waktu Inkubasi Optimum
Labu volumetrik 10 ml yang diselimuti aluminium foil diisi dengan bahan- bahan berikut: 1 ml cairan induk vitamin C 100 ppm, 1 ml larutan DPPH 1 mM dan 1 ml etanol p.a diencerkan sampai tanda yang diperlukan. Absorbansi diukur 10, 20, 30, 40, 50, dan 60 menit kemudian pada λ maks untuk mendapatkan waktu absorbansi maksimum [5].
Pembuatan deret larutan standar Vitamin C dan pembuatan variasi larutan uji Standar vitamin C dibuat menggunakan larutan induk pada konsentrasi 2, 4, 6, 8, dan 10 ppm. cairan induk pada 100 ppm. Larutan standar dibuat dengan larutan induk vitamin C 1000 ppm pada konsentrasi 10, 15, 20, dan 25 ppm. Tambahkan 1 ml larutan DPPH 1 mM, lalu encerkan secara bertahap dengan etanol hingga tanda. Pada  waktu  yang  ideal,  standar  asam  askorbat  diinkubasi,  dan  diukur absorbansinya λ maks [5].

## Analisis Data
Analisis  kualitatif  dilakukan  dengan  output  hasil  penyelidikan  ini dibandingkan dengan literatur. Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan software SPSS 21 . Uji homogenitas Levene dan uji normalitas Shapiro Wilk dilakukan untuk masing-masing formula. Tes ANOVA satu arah digunakan untuk menunjukkan perbedaan antara formula ketika data normal dan homogen. Uji post hoc  selanjutnya  dapat  digunakan  untuk  menentukan  formula  mana  yang menghasilkan  perbedaan  yang  signifikan  jika  hasil  uji  one  way  ANOVA menunjukkan  perbedaan  yang  mencolok.  Saat  menganalisis  data  yang  tidak homogen atau terdistribusi secara teratur, uji Kruskal-Wallis digunakan..

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Determinasi  Biji  Kopi  Robusta,  Pembuatan  Serbuk  Biji  Kopi  Robusta  Dan Pembuatan Ekstrak Biji Kopi Robusta
Berdasarkan hasil identifikasi, sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah Coffea  canephora Pierre.  ex.  A.  Frohner.  Identifikasi Identifikasi  biji  kopi Robusta dilakukan di laboratorium UPT Universitas Setia Budi. Ekstraksi dilakukan dengan  cara  maserasi.  Tahap  pertama  sampel  dihaluskan  menggunakan  blender dengan tujuan memperbesar luas permukaan agar kontak antara sampel dan pelarut meningkat pada saat ekstraksi. Maserasi dilakukan selama 24 jam. Metode maserasi  dipilih  karena  tidak  memerlukan  proses  pemanasan  untuk  mengurangi kemungkinan  senyawa  sampel  terdegradasi  [17].  Karena  bahan  kimia  polifenol dalam biji kopi Robusta, yang menunjukkan aktivitas antioksidan, bersifat polar dan larut  dalam  pelarut  polar,  etanol  96%  digunakan  sebagai  pelarut  ekstraksi.  [18]. Setelah  proses  maserasi  selesai  dilakukan  penyaringan  untuk  mendapatkan maserat.  Untuk  mendapatkan  hasil  maserasi  yang  besar,  pelarut  yang  masih tercampur dengan komponen aktif dikeluarkan dari maserasi menggunakan rotary evaporator.[19]. Jumlah biji kopi  Robusta yang  diekstraksi adalah 22,5214 gram, dan rendemen ekstraknya adalah 11,26. Hasil rendemen  yang diperoleh berbeda dengan hasil penelitian Kiattisin et al yang menghasilkan rendemen ekstrak etanol biji  kopi  robusta  sebesar  2,17%.  Perbedaan  ini  disebabkan  sampel  berasal  dari tempat yang berbeda. Pada penelitian Kiattisin et al (2016) menggunakan biji kopi robusta yang berasal dari Thailand sedangkan biji kopi robusta dalam penelitian ini berasal  dari  Indonesia  [20].  Perbedaan  tempat  tumbuhnya,  suhu  dan  ketinggian dapat berdampak pada kandungan kimianya.[5].

## Uji Organoleptis Ekstrak Biji Kopi Robusta
Ekstrak  biji  kopi  robusta  yang  dihasilkan  pada  uji  organoleptik  memiliki konsistensi kental, warna hijau, dan aroma kopi hijau yang khas.

## Uji Kadar Air Ekstrak Biji Kopi Robusta
Tujuan pengukuran kadar air adalah untuk menetapkan ambang minimum kadar air ekstrak [5]. Kadar air yang diperoleh dari ekstrak kopi robusta adalah 8%. Hasilnya berada dalam  kisaran  kadar air yang dibutuhkan  < 10%  untuk ekstrak kental [21].

## Uji Susut Pengeringan
Ukuran  non-spesifik  yang  disebut  kerugian  pengeringan  digunakan  untuk menetapkan batas atas jumlah zat yang dapat hilang. (air, minyak atsiri, dan pelarut) dalam  proses  pengeringan  [19].  Hasil  uji  susut  pengeringan  yang  dicapai  dari ekstrak  kopi  robusta  rata-rata  11,308%  Hasil  yang  diperoleh  tidak  memenuhi syarat untuk susut pengeringan ekstrak yaitu 10%

## Uji Skrining Fitokimia
Flavonoid,  saponin,  tanin,  dan  alkaloid  dalam  ekstrak  biji  kopi  robusta terdeteksi positif dengan uji skrining fitokimia, menurut hasil kualitatif. Temuan ini mendukung  studi  oleh  Utami  et  al.  (2018)  menunjukkan  Alkaloid,  flavonoid, saponin, dan tanin semuanya ada dalam ekstaksi kopi Robusta.. [5].

## Uji Karakteristik Nanoemulsi Uji Transmitansi
Untuk  memastikan  apakah  nanoemulsi  yang  dihasilkan  berukuran nanometer  maka  digunakan  uji  transmitansi.  Tetesan  emulsi  yang  dihasilkan dianggap berada dalam kisaran skala nano jika nilai transmisi lebih dari 90%. [14]. Tetesan kecil dalam nanoemulsi membuat warna larutan tampak transparan saat cahaya melewatinya, menghasilkan nilai transmitansi yang tinggi. [13]. Uji transmisi dilakukan pada λ 650 nm karena jika suatu emulsi dapat melewatkan cahaya dengan panjang gelombang 650 nm maka dikatakan berukuran nanometer. [13]. Aquadest tidak  mengandung  partikel  yang  dapat  menghalangi  cahaya  untuk  melewatinya, Aquadest digunakan sebagai blanko, sehingga nilai transmisi yang dihasilkan lebih dari 100% [13]. Nanoemulsi ekstrak biji kopi robusta memiliki nilai transmitansi rata-rata  99,768%  setelah  tiga  kali  pengulangan.  Nanoemulsi  ekstrak  biji  kopi robusta  diduga  sudah  berukuran  nanometer  karena  nilai  transmitansi  yang dihasilkan lebih dari 90%.

## Uji Sentrifugasi
Uji  sentrifugasi  dilakukan  untuk  mengetahui  stabilitas  nanoemulsi berdasarkan  ada  tidaknya  pemisahan  yang  diinduksi  gravitasi  [12].  Hasil  uji sentrifugasi  nanoemulsi  ekstrak  biji  kopi  robusta  menunjukkan  tidak  adanya pemisahan.

## Uji Ukuran Partikel
Tujuan dari uji ukuran partikel yaitu untuk melihat apakah nanoemulsi yang dihasilkan sudah berukuran nano. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak biji kopi  robusta  memiliki  partikel  berukuran  rata-rata  12,3  nm  dalam  nanoemulsi. Pengukuran  ukuran  partikel  yang  kurang  dari  90  nm  menunjukkan  nanoemulsi yang  stabil  terhadap  sedimentasi[22].  ndeks  polidispersitas  digunakan  untuk menunjukkan  kisaran  distribusi  ukuran  partikel  dalam  sampel  dan  menentukan apakah terjadi agregasi. Indeks polidispersitas nanoemulsi ekstrak biji kopi robusta adalah 0,274. Indeks PDI yang diperoleh memenuhi kriteria PDI yaitu kurang dari 0,7 yang berarti nanoemulsi stabil dan homogen [23].

## Uji Stabilitas Fiisik Nanoemulgel Ekstrak Biji Kopi Robusta

## Evaluasi Organoleptis
Tidak  berwarna,  tidak  berbau,  dan  konsistensinya  kental,  hasil  evaluasi organoleptik nanoemulgel ekstrak biji  kopi robusta  pada masing-masing formula sebelum  dan  sesudah  freeze-thaw  tidak  menunjukkan  perbedaan.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  setiap  formulasi  nanoemulgel  ekstrak  biji  kopi  robusta mempertahankan kualitas organoleptiknya dari waktu ke waktu.

## Evaluasi pH
Tujuan  pengukuran  pH  adalah  untuk  memastikan  bahwa  nanoemulgel berada  dalam  rentang  pH  4,5-7  yang  dibutuhkan  kulit  untuk  menghindari menyebabkan  iritasi  saat  digunakanPH  nanoemulgel  dapat  mengiritasi  kulit  jika terlalu asam, dan dapat mengeringkan kulit jika terlalu basa.[24].
Tabel 3. Hasil uji pH nanoemulgel ekstrak biji kopi robusta
Formula Rata-rata ± SD sebelum freeze thaw Rata-rata ± SD sesudah freeze thaw F1 7 ± 0 7 ± 0 F2 6 ± 0 6 ± 0 F3 5 ± 0 5 ± 0 F4 5 ± 0 5 ± 0 F5 4 ± 0 4 ± 0

## Evaluasi Daya Lekat
Tujuan evaluasi daya lengket adalah untuk memastikan berapa lama sediaan akan tetap melekat pada kulit. Lebih dari 4 detik memenuhi persyaratan kepatuhan yang efektif terhadap pengobatan topikal. [25].
Tabel 4. Hasil uji daya lekat nanoemulgel ekstrak biji kopi robusta
Formula Rata-rata ± SD sebelum freeze thaw Rata-rata ± SD sesudah freeze thaw F1 1,41 detik ± 0,01 1,44 detik ± 0,0152 F2 1,46 detik ± 0,0152 1,48 detik ± 0,01 F3 1,59 detik ± 0,01 1,61 detik ± 0,01 F4 1,76 detik ± 0,0152 1,78 detik ± 0,0208 F5 1,91 detik ± 0,0152 1,89 detik ± 0,0152
Hasil uji-t berpasangan untuk masing-masing formula menunjukkan bahwa formula 1 dan 5 menunjukkan perubahan daya lekat antara sebelum dan sesudah freeze-thaw  (sig.<0,05),  formula  2,  3,  dan  4  tidak  menunjukkan  perbedaan  yang signifikan antara daya  lekat sebelum dan setelah freeze-thaw (sig.>0,05). Uji post hoc  dilakukan  untuk  melengkapi  analisis  karena  hasil  uji  one  way  ANOVA menunjukkan adanya perbedaan daya lekat yang signifikan antara formulasi (sig. = 0,000).  Analisis  post  hoc  mengungkapkan  bahwa  formula  2  dan  4  keduanya menunjukkan perbedaan yang signifikan (sig. = 0,000) dalam data.
Berbeda dengan formula 1, formula 3, 5, dan 1 tidak menunjukkan perbedaan yang  signifikan  (sig  >  0,05).  Dapat  dikatakan  bahwa  variasi  gelling  agent mempengaruhi  nilai  daya  rekat  nanoemulgel,  dengan  semakin  lama  daya  rekat semakin  besar.  variasi  konsentrasi  gelling  agent.  Formula  dengan  variasi gelling agent memiliki  daya  lekat  lebih  lama  dibanding  formula  dengan gelling  agent tunggal.  Diasumsikan  jika  nilai  daya  lekat  nanoemulgel  semakin  tinggi  maka absorbsi  zat  aktif  ke  dalam  tubuh  juga  semakin  tinggi  karena  ikatan  antara nanoemulgel dengan kulit semakin kuat [26].

## Evaluasi Daya Sebar
Untuk menilai daya sebar nanoemulgel pada kulit dilakukan evaluasi daya sebar, dimana semakin mudah nanoemulgel diaplikasikan maka semakin menyebar pada kulit dan daya serap bahan aktif semakin tinggi [23]. Kisaran 5-7 cm adalah standar untuk daya sebar yang optimal untuk pengobatan topikal. [25]. Uji paired t-test menunjukkan bahwa tidak ada  perbedaan yang signifikan antara daya sebar sebelum freeze thaw dan sesudah freeze thaw untuk formula 3 ( sig .  >  0,05)  tetapi  pada  formula  1,  2,  4,  dan  5  terdapat  perbedaan  daya  sebar sebelum freeze thaw dan daya sebar setelah freeze thaw ( sig . > 0,05). Uji post hoc dilakukan setelah hasil uji one way Anova menunjukkan bahwa formula 1, 2, 4, dan
5 memiliki perbedaan yang signifikan. Terdapat perbedaan yang signifikan antara formula 3 dengan formula 1, 2, 4, dan 5 pada hasil uji post hoc (sig = 0,000). Ada perbedaan yang cukup besar antara rumus 5 dan rumus 1, 2, 3, dan 4 (sig. = 0,000).
Tabel 5. Hasil uji daya sebar nanoemulgel ekstrak biji kopi robusta
Formula Rata-rata ± SD sebelum freeze thaw Rata-rata ± SD sesudah freeze thaw F1 6,03 cm ± 0,152 5,73 cm ± 0,152 F2 5,87 cm ± 0,152 5,7 cm ± 0,1 F3 6,7 cm ± 0,1 6,6 cm ± 0,1 F4 6,3 cm ± 0,1 6,03 cm ± 0,152 F5 5,4 cm ± 0,1 5,16 cm ± 0,152
Pada penelitian ini, formula dengan konsentrasi HPMC dan carbopol dengan perbandingan terkecil memiliki daya sebar paling luas yaitu pada formula 3 (1 gram HPMC : 0,5 gram carbopol). Hal  tersebut dipengaruhi oleh sifat carbopol sebagai polimer  dan  menyerap  air.  Sehingga  apabila  jumlah  carbopol  kecil,  maka  akan menyebabkan kemampuan daya sebar carbopol maksimal.

## Viskositas
Tujuan dari uji viskositas yaitu untuk mengetahui kekentalan nanoemulgel yang  akan  berhubungan  dengan  kemudahan  dalam  penggunaan  nanoemulgel. Kriteria sediaan gel yang baik yaitu apabila nilai viskositasnya dalam rentang 2000- 4000 cPs [27].
Tabel 6. Hasil uji viskositas nanoemulgel ekstrak biji kopi robusta
Formula Rata-rata ± SD sebelum freeze thaw Rata-rata ± SD sesudah freeze thaw F1 1500 cPs ± 0 2000 cPs ± 0 F2 2000 cPs ± 0 3000 cPs ± 0 F3 3500 cPs ± 0 4000 cPs ± 0 F4 5000 cPs ± 0 8000 cPs ± 0 F5 7000 cPs ± 0 9000 cPs ± 0
Uji non parametrik Kruskal Wallis dilakukan karena Uji normalitas viskositas menggunakan Kolmogorov antar formula menunjukkan bahwa data berdistribusi normal (sig. > 0,05), dan uji homogenitas antar formula menunjukkan bahwa data tidak  homogen  (sig.  =  0,000),  maka  uji  Kruskal  Wallis  non  parametrik  telah dilakukan. Hasil  uji Kruskal Wallis menunjukkan bahwa  terdapat  perbedaan  nilai viskositas yang signifikan antar formulasi ( asimp sig < 0,05). Berdasarkan analisis statistik  penelitian  ini,  perubahan gelling  agent berdampak  pada  viskositas nanoemulgel.  Formula  dengan  konsentrasi  variasi gelling  agent yang  tinggi menghasilkan viskositas yang tinggi  yaitu pada formula 5 (2 gram HPMC: 1 gram karbopol).
Hal ini dikarenakan sifat karbopol yang merupakan polimer sehingga apabila konsentrasinya  semakin  tinggi  maka  konsistensinya  semakin  kental  sehingga viskositasnya  semakin  tinggi.  HPMC  adalah  adalah  turunan  selulosa  yang memungkinkan  molekul  dasar  memasuki  ruang  yang  dibentuk  oleh  molekul  air, menghasilkan  ikatan  hidroksil.  Ikatan  hidrogen  ini  yang  ikut  serta  dalam  proses
hidrasi  dan  pengembangan  HPMC  sehingga  peningkatan  konsentrasi  HPMC membuat gugus hidroksi semakin tinggi dan viskositas semakin tinggi.

## Uji Aktivitas Antioksidan Metode DPPH
Penelitian ini menetapkan bahwa 30  menit  dengan  nilai  absorbansi 0,603 dan λ maks larutan DPPH maksimum 515 nm adalah waktu yang ideal untuk vitamin C. Reaksi perubahan warna yang dihasilkan dapat digunakan untuk menunjukkan bagaimana  radikal  bebas  antioksidan  DPPH  bereaksi.  Larutan  DPPH  1  mM berwarna  ungu,  bila  ditambahkan  ke  dalam  larutan  ekstrak  dan  nanoemulgel ekstrak biji kopi robusta akan berubah warna menjadi kuning yang menunjukkan adanya  aktivitas  antioksidan.  Perubahan  warna  kuning  terjadi  karena    terdapat gugus pikril yang mmasih ada dengan penambahan satu elektron dari antioksidan dan  radikal  DPPH  [28].  Parameter  aktivitas  antioksidan  yaitu  nilai  IC 50 .  Dengan menggunakan  perhitungan  persentase  radikal  bebas,  nilai  IC50—yang  mewakili jumlah  sampel  yang  diperlukan  untuk  mereduksi  radikal  DPPH  sebesar  50%— ditentukan,  dan  data  yang  dihasilkan  kemudian  dihitung  dengan  menggunakan regresi  linier [29].  Aktivitas  antioksidan  dikategorikan  menjadi  lima  kategori berdasarkan  kekuatannya:  50  ppm  (kuat),  50–100  ppm  (kuat),  100–150  ppm (sedang), 150–200 ppm (lemah), dan >200 ppm (lemah) [5].
Berdasarkan  hasil  nilai  IC50,  ekstrak  biji  kopi  robusta  dan  nanoemulgel ekstrak biji kopi robusta pada semua formulasi memiliki nilai antioksidan yang kuat ditunjukkan dengan nilai IC 50 < 50 (Tabel 6). Ketika konsentrasi agen pembentuk gel yang  berbeda  dinaikkan,  nilai  IC50  dalam  formula  nanoemulgel  meningkat,  yang juga berdampak pada viskositas sediaan. Formula 1 yang paling tidak kental juga memiliki  aktivitas  antioksidan  paling  sedikit.  Formula  5  memiliki  nilai  viskositas paling tinggi, namun memiliki aktivitas antioksidan paling kuat.
Tabel 7. Hasil uji aktivtas antioksidan vitamin C, ekstrak dan nanoemulgel ekstrak biji kopi robusta
Sampel Rata-rata ±SD nilai IC50 Vitamin C 2,27 ppm ± 0,024 Ekstrak biji kopi robusta 15,31 ppm ± 0,051 Formula 1 nanoemulgel 10,67 ppm ± 0,028 Formula 2 nanoemulgel 11,59 ppm ± 0,059 Formula 3 nanoemulgel 12,23 ppm ± 0,043 Formula 4 nanoemulgel 13,42 ppm ± 0,036 Formula 5 nanoemulgel 15,51 ppm ± 0,061
Uji  post  hoc  dilakukan  karena  hasil  uji  one  way  ANOVA  menunjukkan perbedaan  yang  signifikan  (sig.  =  0,05)  antara  masing-masing  ekstrak  biji  kopi robusta nanoemulgel dengan kontrol positif. Berdasarkan hasil uji post hoc, ekstrak biji kopi robusta dan nanoemulgel memiliki perbedaan nilai IC50 yang nyata untuk kontrol positif vitamin C, dan untuk formula 1, 2, 3, dan 4 (sig. = 0,000), namun tidak untuk formula 5, ekstrak biji kopi robusta memiliki nilai IC50 yang berbeda nyata. Formulasi  nanoemulgel  ekstrak  biji  kopi  robusta  memiliki  nilai  IC50  yang  jauh berbeda (sig. =  0,000), dan aktivitas antioksidan menurun  dengan meningkatnya konsentrasi gelling agent. Perbedaan konsentrasi zat pembentuk gel dalam formula, yang  dihubungkan  dengan  nilai  viskositas,  dapat  menjadi  penyebab  penurunan
aktivitas antioksidan pada setiap  pendekatan. Nilai viskositas sediaan meningkat dengan variasi konsentrasi gelling agent. Daya tahan untuk menghambat pelepasan komponen aktif yang akan menurunkan aktivitas antioksidan nanoemulgel semakin besar  semakin  tinggi  nilai  viskositas  sediaan  [30  Aktivitas  antioksidan  juga dipengaruhi oleh ukuran partikel, dan ekstrak biji kopi robusta dalam nanoemulsi memiliki partikel yang lebih kecil daripada ekstrak biji kopi robusta dalam ekstrak kasar.  Karena  ukuran  partikelnya  yang  lebih  kecil,  ekstrak  dari  biji  kopi  robusta Nanoemulgel mengungguli ekstrak biji kopi robusta dalam hal aktivitas antioksidan. Penyerapan  akan  meningkat  seiring  dengan  penurunan  ukuran  partikel, menghasilkan aktivitas antioksidan yang lebih tinggi.

## 4. KESIMPULAN
Komposisi  3  dengan  konsentrasi  HPMC:  karbopol  merupakan  formulasi nanoemulgel paling andal yang terbuat dari biji kopi robusta (1 gram : 0,5 gram). Uji aktivitas antioksidan nanoemulgel ekstrak biji kopi robusta menggunakan metode DPPH diperoleh nilai rata-rata IC50 dari Formula 1 sampai Formula 5 berturut-turut 10,67 ± 0,028 ppm; 11,59 ppm ± 0,059; 12,23 ppm ± 0,043; 13,427 ppm ± 0,036; 15.53 sore ± 0.061. Formula dengan aktivitas  antioksidan  yang  paling kuat  yaitu formula 1 dengan nilai IC50 10,67 ± 0,028 ppm.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
[1] Chairgulprasert, V., & Kongsuwankeeree, K. (2017). Preliminary Phytochemical Screening  and  Antioxidant  Activity  of  Robusta  Coffee .  1–8. https://doi.org/10.14456/tijsat.2017.1
[2]   Hanani, E. (2015). Analisis Fitokimia . Buku Kedokteran EGC.
[3] McClements, D. J. (2012). Nanoemulsions versus microemulsions: Terminology, differences, and similarities. Soft Matter , 8 (6), 1719–1729. https://doi.org/10.1039/c2sm06903b
[4]   Abbas, B., Dehpour, A., & Ebrahimzadeh, A. (2009). Antioxidant Activity Of The Methanol  Extract  Of  Ferula  Assafoetida  And  Its  Essential  Oil  Composition . 60 (4), 405–412
[5] Novi Fajar Utami, Nhadira Nhestricia, Sri Maryanti, Tien Tisya, S. M. (2018). Uji Aktivitas  Antioksidan  Dari  Biji  Kopi  Robusta  ( Coffea  canephora P.) Berdasarkan Perbedaan Ekologi Dataran Tinggi Di Pulau Jawa. Fitofarmaka Jurnal Ilmiah Farmasi , 8 (1), 67–72
[6] Mardhiani Y., Yulianti H., A. D. (2018). Forulasi dan Stabiltas Sediaan Serum dari Ekstrak Kopi Hijau (Coffe Canephora) . 2 (2), 19–33.
[7] McClements, D. J. (2012). Nanoemulsions versus microemulsions: Terminology, differences, and similarities. Soft Matter , 8 (6), 1719–1729. https://doi.org/10.1039/c2sm06903b
[8] Schneider, M., Stracke, F., Hansen, S., & Schaefer, U. F. (2009). Nanoparticles and their  interactions  with  the  dermal  barrier. Dermato-Endocrinology , 1 (4),
197–206. https://doi.org/10.4161/derm.1.4.9501
[9]  Khurana,  S.,  Jain,  N.  K.,  &  Bedi,  P.  M.  S.  (2013).  Nanoemulsion  Based  Gel  For
Transdermal  Delivery  Of  Meloxicam :  Physico-chemical  ,  mechanistic investigation. Life Sciences , 92 (6–7), 383–392.
https://doi.org/10.1016/j.lfs.2013.01.005
[10] Rahmayani, U., Pringgenies, D., & Djunaedi, A. (2013). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar Keong Bakau ( Telescopium telescopium ) dengan Pelarut yang Berbeda terhadap Metode DPPH ( Diphenyl Picril Hidrazil ). Journal of Marine Research , 2 (4), 36–4
[11] Hanani, E. (2015). Analisis Fitokimia . Buku Kedokteran EGC
[12] Rahman, A., Farmasi, P. S., Farmasi, F., & Surakarta, U. M. (2018).  Formulasi Sediaan Nanoemulgel Ekstrak Kayu Secang (Caesalpinia sappan L.) Serta Uji Stabilitas Fisiknya. Naskah Publikasi Skripsii Universitas Muhammadiyah Surakarta
[13] Wahyuningsih, I., & Putranti, W. (2015). Optimasi Perbandingan Tween 80 Dan Polietilenglikol  400  Pada  Formula Self  Nanoemulsifying  Drug  Delivery System (SNEDDS) Minyak Biji Jinten Hitam. Pharmacy , 12 (02), 223–241.
[14] Baviskar, D. T., Biranwar, Y. A., Bare, K. R., Parik, V. B., Sapate, M. K., & Jain, D. K. (2013). In Vitro And In Vivo Evaluation Of Diclofenac Sodium Gel Prepared With Cellulose Ether And Carbopol 934P. Tropical Journal of Pharmaceutical Research , 12 (4), 489–494. https://doi.org/10.4314/tjpr.v12i4.7
[15].  Sari,  W.Y.,  Definingsih,  Y.,  &  Maria,  U.  (2022).  Kandungan  Fitokimia  dan Aktivitas  Antioksidan  Krim  Fraksi  Etanol  Kulit  Buah  Jeruk  Manis  (Citrus sinensis (L.) Osbeck). Jurnal Famasi Indonesia 12(1), 69-79
[16].Aprilia,  E.,  Ilham,  K  dan  Siti  Aisyah.  (2012).  Optimasi  Proporsi  Campuran Carbopol 941 dan CMC-Na dalam Pembuatan Gel Lendir Bekicot (Achatina fullica Ferr.) secara Simplex Lattice Design. Jurnal Farmasi Indonesia 9(1), 30-36
[17] Susanty, S., & Bachmid, F. (2016). Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi Dan Refluks Terhadap Kadar Fenolik Dari Ekstrak Tongkol Jagung (Zea mays L.). Jurnal Konversi , 5 (2), 87. https://doi.org/10.24853/konversi.5.2.87-92.
[18] Suena, N.M.D.S., & Ni Putu, U.A. (2020). Uji Aktivitas Antioksidan Maserat Air Biji  Kopi  (Coffea  canephora)  Hijau  Pupuan  Dengan  Metode  Dpph  (2,2- difenil-1-pikrilhidrazil). Journal of Marine Research , 2 (4), 36–45
[19]. Nopiyanti, V., & Reslely, H. (2016). Analisis Stabilitas Aktif Antioksidan Kelopak Bunga Rosella (Hibiscus sabdarifa L) Pada Penggunaannya Sebagai Bahan Tambahan Pangan Alami. Jurnal Farmasi Indonesia, 13 (2), 101-110
[20] Kiattisin, K., Thanaya, N., Pimporn, P. (2016). Evaluation Of Antioxidant And Anti-Tyrosane  Activities  As  Well  As  Stability  F  Green  and  Roasted  Coffe Bean Extracts From Coffe arabica and Coffe canephora grow in Thailand. Journal  of  Pharmacognosy  and  Phytotherapy , 8 (10),  182–192. https://doi.org/10.5897/JPP2016.0413
[21] Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat . Depkes RI
[22]  Listyorini,  N.  M.  D.,  Wijayanti,  N.,  Astuti,  K.  W.  (2018).  Optimasi  Pembuatan Nanoemulsi Virgin Coconut Oil. Jurnal Kimia. Journal of Chemistry , 12 (1), 8– 12.
[23] Saputra, A. H., Haryono, A., Laksmono, J. A., & Hilman Anshari, D. M. (2011). Preparasi  Koloid  Nanosilver  Dengan  Berbagai  Jenis  Reduktor  Sebagai
Bahan  Anti  Bakteri. Jurnal  Sains  Materi  Indonesia  Indonesian  Journal  of Materials Science , 12 (3), 202–208.
[24] Solanum, L., & Nsp, A. S. (2015). Aktivitas Antioksidan Krim Ekstrak Sari Tomat (Solanum lycopersicum L.). Traditional Medicine Journal , 18 (3), 132–140. https://doi.org/10.14499/mot-TradMedJ18iss3pp132-140
[25] Ulaen, S., Banne, Y., & Suatan, R. (2012). Pembuatan Salep Anti Jerawat Dari Ekstrak Rimpang Temulawak ( Curcuma xanthorrhiza Roxb.). Jurnal Ilmiah Farmasi Poltekkes Manado , 3 (2), 96587.
[26] Hidayati, R., Opstaria, S., & Ilham L. (2022). Optimasi HPMC K15M, Karbopol 940, dan Propilen Glikol pada Formula Nanoemulgel Naringenin Metode D- Optimal Mixture Design. Jurnal Farmasi Indonesia, 19(2), 236-245.
[27] Forestryana, D., Surur Fahmi, M., & Novyra Putri, A. (2020). Pengaruh Jenis dan Konsentrasi  Gelling  Agent  pada  Karakteristik  Formula  Gel  Antiseptik Ekstrak  Etanol  70%  Kulit  Buah  Pisang  Ambon. Lumbung  Farmasi:  Jurnal Ilmu Kefarmasian , 1 (2), 45. https://doi.org/10.31764/lf.v1i2.2303
[28] Husniati, H., Sari, M. Y., & Sari, A. (2021). Kajian : Karakterisasi Senyawa Aktif Asam  Klorogenat  Dalam  Kopi  Robusta  Sebagai  Antioksidan  Review : Characterization  of  active  compounds  in  Robusta  coffee  as  antioxidants. Teknologi Argo Industri , 12 (2), 34–39.
[29]. Harjanti, R., & Anita, N. (2020). Aktivitas Antioksidan dan Potensi Tabir Surya Serum Ekstrak Terpurifikasi Daun Wangon (Olax psittacorum (Willd.) Vahl. Jurnal Farmasi Indonesia 17(1), 18-28.
[30]  Sinko,  P.  J.  (2011). Colloidal  dispersions (Sinko  PJ.().  Lippincott  Williams  & Wilkins.