## UJI AKTIVITAS ANTIINFLAMASI EKSTRAK BATANG AKAR KUNING
( Arcangelisia flava (L.) Merr.) SECARA IN VITRO
Syumillah Saepudin 1 *, Taufik Septiyan Hidayat 1 , Yunita Al-Azzahra 2 , Ade Cahyati 1
1 Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Al Ghifari, Bandung, Indonesia
2 Akademi Farmasi Bumi Siliwangi, Bandung, Indonesia *Penulis Korespondensi: symillas1221@gmail.com

## Abstrak
Inflamasi merupakan respon alami yang terjadi pada kerusakan jaringan yang disebabkan karena salah satunya  stres  oksidatif.  Tanaman  Akar  kuning  merupakan  salah  satu  tanaman  dari  famili Menispermaceae yang mengandung senyawa bioaktif dengan beberapa potensi aktivitas farmakologi, diantaranya sebagai antiinflamasi. Tujuan penelitian ini untuk menguji pengaruh pemberian ekstrak n- heksan,  etil  asetat,  dan  etanol  70%  batang  akar  kuning  terhadap  aktivitas  antiinflamasi  dan  menguji aktivitas  antiinflamasi  yang  paling  optimum  pada  jenis  pelarut  dari  ekstrak  batang  akar  kuning ( Arcangelisia  flava (L.)  Merr.).  Penelitian  ini  menggunakan  metode  stabilisasi  membran  sel  darah merah secara in vitro yang diukur menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Stabilisasi diamati melalui kemampuan  daya  hambat  ekstrak  batang  akar  kuning  terhadap  lisis  sel  darah  merah  akibat  induksi larutan  hipotonis  yang  kemudian  dibandingkan  dengan  kontrol  positif  yaitu  Ibuprofen.  Hasil menunjukkan  ekstrak  n-heksan,  etil  asetat,  dan  etanol  70%  batang  akar  kuning  dapat  menstabilkan membran sel darah merah. Analisis data menunjukkan signifikansi sebesar artinya terdapat perbedaan persen  stabilisasi  membran  sel  darah  merah  yang  signifikan  pada  empat  kelompok  uji.  Aktivitas antiinflamasi  yang  paling  optimum  terdapat  pada  ekstrak  n-heksan  batang  akar  kuning  pada konsentrasi 250 ppm yaitu 48,76% sebanding dengan kontrol positif (Ibuprofen) pada konsentrasi 50 ppm sebesar 59,09%.
Kata kunci: Antiinflamasi, Stabilisasi membran, Akar kuning, Spektrofotometri UV-Vis.

## Abstract
Inflammation  is  a  natural  response  that  occurs  in  tissue  damage  caused  by  oxidative  stress.  Yellow root  plant  is  one  of  the  plants  from  the  Menispermaceae  family  that  contains  bioactive  compounds with several potential pharmacological activities, including as anti-inflammatory. The purpose of this study  was  to  test  the  effect  of  administration  of  n-hexane,  ethyl  acetate,  and  70%  ethanol  extract  of yellow root on anti-inflammatory activity and test the most optimal anti-inflammatory activity on the type  of  solvent  of  yellow  root  extract  (Arcangelisia  flava  (L.)  Merr.).  This  study  used  a  method  of stabilizing red blood cell membranes in vitro which was measured using a UV-Vis spectrophotometer. Stabilization was observed through the inhibitory ability of yellow root extract against red blood cell lysis  due  to  the  induction  of  a  hypotonic  solution  which  was  then  compared  with  a  positive  control (Ibuprofen). Results showed that n-hexane, ethyl acetate, and 70% ethanol extracts of yellow root can stabilize  red  blood  cell  membranes.  Data  analysis  showed  significant  significance  that  there  was  a significant  percent  difference  in  red  blood  cell  membrane  stabilization  in  the  four  test  groups.  The most optimal anti-inflammatory activity was found in yellow root n-hexane extract at a concentration of 250 ppm which was 48.76% comparable to the positive control (Ibuprofen) at a concentration of 50 ppm of 59.09%.
Keywords: Anti-inflammatory, Yellow root, Stabilizing membranes, UV-Vis spectrophotometer.

## PENDAHULUAN
Inflamasi  adalah  salah  satu  respon  alami yang dimiliki tubuh karena luka pada jaringan atau infeksi.  Terjadinya  inflamasi  mengindikasikan
bahwa  mekanisme  perlindungan  tubuh  dalam menetralisir atau melawan paparan bahan berbahaya  di  tempat  luka  serta  melakukan pemulihan pada jaringan (Jung et al., 2013; Amalia et  al.,  2024).  Adapun  reaksi  inflamasi  terkadang
memperburuk respon inflamasi, yang mengakibatkan  terjadinya  kerusakan  jaringan  dan perkembangan  penyakit  inflamasi  sistemik.  Oleh sebab  itu,  sangat  penting  untuk remodeling jaringan untuk tindakan pertahanan tubuh (Reilkoff et  al.,  2011;  Alkandahri  et  al.,  2018).  Selama  ini, obat steroid atau nonsteroid (AINS) sudah banyak digunakan,  namun  penggunaan  obat  antiinflamasi tersebut dalam waktu lama dan tidak rasional akan menimbulkan efek samping yang dapat menimbulkan  reaksi  merugikan  bagi  tubuh.  Efek samping yang ditimbulkan karena penggunaan obat berbahan  kimia  atau  sintetik  tersebut  dapat merugikan manusia (Tavita et al., 2022; Nurulhadi et al., 2024). Oleh karena itu, perlu dikembangkan beberapa  agen  yang  aman  untuk  pengobatan penyakit inflamasi.
Salah  satu  pilihan  yang  banyak  digunakan dalam  masyarakat  luas  adalah  penggunaan tanaman  obat  yang  dinilai  lebih  aman  dan  lebih mudah  dijangkau  oleh  masyarakat  (Ihsan  et  al., 2021;  Budiyanti  et  al.,  2024).  Salah  satu  tanaman yang  dapat  dijadikan  sebagai  bahan  obat  adalah akar  kuning  ( Arcangelisia  flava (L.)  Merr.).
Ekstrak  etanol  70%  akar  kuning  memiliki  efek sebagai  antiinflamasi  dalam  pengujian  secara in vivo pada  mencit  jantan  galur Swiss  Webster (Anggraeni, 2021). Kandungan metabolit sekunder dari  senyawa  akar  kuning  ( Arcangelisia  flava (L.) Merr.) adalah alkaloid, fenolat, flavonoid, saponin, tanin dan berberin (Aprilianti et al., 2022).
Metode stabilisasi membran sel darah merah merupakan  metode  yang  banyak  digunakan  dalam penelitian  sebagai  parameter  biokimia  untuk  uji aktivitas antiinflamasi secara in vitro . Hal tersebut dikarenakan  pada  proses  inflamasi  dipengaruhi oleh sel darah merah yang mirip dengan membran
lisosom sehingga stabilisasi lisosom penting dalam membatasi  respon  inflamasi,  yaitu  dengan  cara mencegah  pelepasan  enzim  dari  dalam  lisosom selama  proses  inflamasi  berlangsung.  Dengan demikian,  stabilisasi  sel  darah  merah  yang diinduksi dengan larutan hipotonik dapat digunakan  sebagai  ukuran  untuk  mengindikasikan stabilisasi  dari  membran  lisosom  (Akmalia  et  al., 2016).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji pengaruh  pemberian  ekstrak  n-heksan,  etil  asetat, dan  etanol  70%  batang  akar  kuning  terhadap aktivitas  antiinflamasi  dan  menguji  aktivitas antiinflamasi  yang  paling  optimum  pada  jenis pelarut dari ekstrak batang akar kuning ( Arcangelisia flava (L.) Merr.).

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat
Alat-alat dan instrumen yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  Spektrofotometer  UV-Vis (Shimadzu  UV-1800),  kuvet  kaca,  timbangan analitik  (Fujitsu®), vacuum  rotary  evaporator (IKA  RV10  Digital  V®),  autoklaf  (Hirayama®), inkubator (Memmert®), sentrifuga (Oregen LC04S®), hot plate (Kris®), mikropipet (DragonLab®),  alat  sokletasi, heating  mantle , Moisture  balance ,  tabung  EDTA  dan  alat-alat kimia yang lazim digunakan di laboratorium.

## Bahan
Bahan  dan  reagen  kimia  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  batang  akar  kuning ( Arcangelisia  flava (L.)  Merr.),  etanol  70%,  n- heksan, etil asetat, aquades, Ibuprofen, Na 2 HPO 4 .2H 2 O,  NaH 2 PO 4 .  H 2 O,  NaCl,  dapar
fosfat  pH  7,4  (0,15  M),  hiposalin,  isosalin, kloroform,  amoniak,  HCl  0,1N,  serbuk  Mg,  HCl pekat,  amil  alkohol,  FeCl  5%,  HCl  2N,  pereaksi Liebermann-Bourchard, pereaksi Dragendorff.
Bahan  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah darah hewan tikus.

## Prosedur Penelitian

## Pengumpulan Bahan Tanaman
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini batang  akar  kuning  yang  telah  melalui  proses pengeringan  yang  diperoleh  dari  Perum  Perhutani Jl. A.  Yani 2  Kecamatan Sungai Raya,  Kabupaten Kubu Raya, Kalimantan Barat. Tanaman diidentifikasi di Laboratorium Taksonomi
Tumbuhan
Departemen Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam,
Universitas  Padjadjaran,  Jatinangor  dengan  nomor surat No.21/HB/03/2021 menyatakan bahwa sampel  tumbuhan  tersebut  adalah  tanaman  akar kuning  ( Arcangelisia  flava (L.)  Merr)  dari  famili Menispermaceae.

## Pembuatan Ekstrak
Pembuatan  ekstrak  batang  akar  kuning dilakukan  dengan  metode  soxhletasi  bertingkat yang  merujuk  pada  prosedur  Poncowati  et  al., 2022,  dengan  sedikit  modifikasi.  Ekstraksi  secara bertingkat  dilakukan  dengan  menggunakan  tiga pelarut  dengan  tingkat  kepolaran  yang  berbeda. Pelarut  yang  digunakan  dalam  proses  ekstraksi adalah  n-heksan,  etil  asetat,  dan  etanol  70%  yang ketiganya  berturut-turut  merupakan  senyawa  non- polar, semipolar, dan polar.
Setelah diperoleh filtrat, kemudian dievaporasi  dengan vacuum  rotary  evaporator . Setelah  didapatkan  filtrat  senyawa  ekstrak  akar
kuning  dari  masing-masing  pelarut.  Hasil  ekstrak encer  dipekatkan  dengan  menggunakan  waterbath pada  suhu  40℃  hingga  menjadi  ekstrak  kental. Kemudian  ekstrak  kental  dihitung  rendemennya dengan rumus sebagai berikut:
( ) ( )
(                ( )

## Skrining Fitokimia
Skrining fitokimia merupakan tahap pendahuluan untuk mengetahui kandungan metabolit  sekunder  seperti  alkaloid,  flavonoid, tannin,  saponin  dan  steroid.  Sampel  yang digunakan adalah ekstrak n-heksan, etil asetat, dan etanol 70% batang akar kuning ( Arcangelisia flava (L.)  Merr.).  Prosedur  yang  dilakukan  berdasarkan metode Harborne, 1998.

## Uji  Aktivitas  Antiinflamasi  Menggunakan Stabilisasi Membran Sel Darah Merah Pembutan Larutan
Pembuatan  larutan  untuk  uji  antiinflamasi  pada metode  stabilisasi  membran  sel  darah  merah merujuk pada prosedur Dewi et al., 2020.

## 1. Larutan Dapar Fosfat pH 7,4
Sebanyak  2,671  gr  Dinatrium  hidrogen fosfat  (Na 2 HPO 4 .2H 2 O)  dilarutkan  dalam aquades  sampai  tanda  batas  100  mL  (0,15 M).  Sebanyak  2,070  gr  natrium  dinitrogen fosfat  (NaH 2 PO 4 .H 2 O)  dilarutkan  dalam aquedes add 100 mL (0,15 M) dicampurkan dengan 19 mL larutan NaH 2 PO 4 .H 2 O (0,15
M)  pada  suhu  20-  25℃,  kemudian disterilisasi  dengan  autoklaf  pada  suhu 115℃.

## 2. Larutan Isosalin
Sebanyak  0,85  gr  NaCl  dilarutkan  dan dapar fosfat pH 7,4 (0,15  M) sampai tanda
batas 100 ml pada suhu 20-25℃, kemudian disterilisasi  menggunakan  autoklaf  pada suhu 115℃.

## 3. Larutan Hiposalin
Sebanyak  0,85  gr  NaCl  dilarutkan  dan dapar fosfat pH 7,4 (0,15  M) sampai tanda batas 100 ml pada suhu 20-25℃, kemudian disterilisasi  menggunakan  autoklaf  pada suhu 115℃.

## Pengambilan Sampel Darah
Pengambilan darah dilakukan terhadap tikus jantan galur  Wistar.  Sebanyak  5  ekor  tikus  jantan  galur Wistar  di  aklimatisasi  selama  7  hari  dilingkungan laboratorium.  Sebelum  pengambilan  darah,  tikus dipuasakan  dan  hanya  diberi  air  minum.  Ujung ekor  tikus  dibersihkan  menggunakan  alkohol kemudian dilukai menggunakan pisau bedah, darah ditampung  sebanyak  2  mL  ke  dalam vacutainer tube EDTA.

## Pembuatan Suspensi Sel Darah Merah
Metode  pembuatan  suspensi  sel  darah  merah  ini mengacu pada  Wiranto et al., 2016 dengan sedikit modifikasi.  Sebanyak  10  ml  darah  dimasukkan kedalam  tabung,  kemudian  disentrifugasi  pada 3000 rpm selama 10 menit, selanjutnya supernatan yang  terbentuk  dipisahkan  menggunakan  pipet steril.  Endapan  darah  yang  tersisa  dicuci  dan disuspensi dengan larutan isosalin, lalu disentrifugasi kembali. Proses tersebut diulang 3-4 kali  sampai  isosalin  jernih.  Volume  sel  darah diukur  dan  ditambah  dengan  isosalin  sehingga didapatkan  suspensi  sel  darah  merah  dengan konsentrasi  10%  (v/v)  dengan  cara  mencampur  1 ml  darah  ditambah  larutan  isosalin  9  ml.  Jika
Suspensi sel darah tersebut belum digunakan maka disimpan pada suhu 4℃.

## Pembuatan Larutan Sampel dan Ibuprofen 1. Larutan Sampel
Prosedur pembuatan sampel mengacu pada Sukmawati et al., 2022. Dibuat larutan stok masing-masing  ekstrak  batang  akar  kuning dengan  ditimbang  sebanyak  50  mg,  lalu sampel dilarutkan dalam isosalin sampai 50 mL  (1000  ppm).  Dibuat  berbagai  variasi konsentrasi 50, 100, 150, 200, dan 250 ppm dari larutan stok.
2. Larutan Ibuprofen (Pembanding)
Prosedur  pembuatan  larutan  Ibuprofen mengacu  pada  Sukmawati  et  al.,  2022 dibuat  larutan  stok  Ibuprofen  dengan ditimbang  sebanyak  10  mg,  lalu  dilarutkan dalam  10  mL  isosalin  (1000  ppm).  Dibuat berbagai  variasi  konsentrasi  50,  100,  150, 200, dan 250 ppm dari larutan stok

## Pengujian Aktivitas Antiinflamasi

## 1. Pembuatan Larutan Uji
Larutan  uji  dibuat  dengan  menambahkan  1 mL  dapar  fosfat  pH  7,4  (0,15  M),  lalu ditambahkan  2  mL  hiposalin,  0,5  mL suspensi sel darah merah, dan 1 mL larutan sampel (50, 100, 150, 200, dan 250 ppm).
2. Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Larutan  kontrol  positif  dibuat  dengan menambahkan  1  mL  dapar  fosfat  pH  7,4 (0,15 M), lalu ditambahkan 2 mL hiposalin,
0,5 mL suspensi sel darah merah, dan 1 mL larutan  Ibuprofen  (50,  100,  150,  200,  dan 250 ppm).

## 3. Pembuatan Larutan Blanko
Larutan blanko dibuat dengan penambahan 1  mL  dapar  fosfat  pH  7,4  (0,15  M),  lalu ditambahkan  2  mL  hiposalin,  0,5  mL isosalin  sebagai  pengganti  suspensi  sel darah  merah,  dan  1  mL  larutan  uji/kontrol positif sesuai konsentrasi masing-masing.

## 4. Pembuatan Larutan Kontrol Negatif
Pembuatan  larutan  kontrol  negatif,  larutan kontrol negatif
dibuat dengan
menambahkan  1  mL  dapar  fosfat  pH  7,4 (0,15 M), lalu ditambahkan 2 mL hiposalin,
0,5 mL suspensi sel darah merah, dan 1 mL larutan  isosalin  (sebagai  pengganti  larutan sampel).

## 5. Pengukuran Stabilisasi Sel Darah Merah
Metode  pembuatan  suspensi  sel  darah merah  ini  mengacu  pada  Dewi  et  al.,  2020 dengan  modifikasi,  masing-masing  larutan yang  telah  dibuat,  kemudian  diinkubasi pada  suhu  56℃  selama  30  menit.
Selanjutnya, disentrifugasi dengan kecepatan  3000  rpm  selama  20  menit. Cairan supernatan yang didapat diambil dan kandungan  hemoglobinnya  diperhitungkan dengan  menggunakan  Spektrofotometer UV-Vis  pada  panjang  gelombang  560  nm. Persen  stabilisasi  sel  darah  merah  dapat dihitung dengan rumus, sebagai berikut:
[ ]                 [
]
Keterangan:
A1 = Absorbansi Lar. Uji A2 = Absorbansi Lar. Kontrol Positif B1 = Absorbansi Blangko Lar. Uji

## C = Absorbansi Kontrol Negatif

## Analisis Data
Data persentase stabilisasi membran dianalisis  secara  statistik  menggunakan  analisis variasi  ANOVA  dengan  aplikasi  SPSS  versi  26 dan dilanjutkan dengan uji LSD.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi  batang  akar  kuning  dilakukan secara  bertingkat  dengan  menggunakan  tiga  (3) pelarut  yang  berbeda.  Ekstraksi  soxhletasi  adalah ekstraksi  cara  panas  dengan  prinsip  penyaringan secara berulang (berkesinambungan) untuk mendapatkan hasil yang sempurna dengan penggunaan  pelarut  yang  relatif  sedikit.  Adapun prinsip  penggunaannya  yaitu  labu  soxhlet  pelarut akan  dipanaskan  dengan  menggunakan  titik  didih yang  sesuai  sampai  menguap,  melalui  kondensor uap  akan  mengembun  dan  menetes  pada  bahan atau sampel (Poncowati et al., 2022).
Pelarut  yang  digunakan  dalam  proses ekstraksi  adalah  n-heksan,  etil  asetat,  dan  etanol 70%.  Ketiga  pelarut  memiliki  kepolaran  yang berbeda-beda,  sehingga  dapat  dilihat  pelarut  mana yang lebih efektif untuk proses ekstraksi. Menurut prinsip  “ like  dissolves  like ”  suatu  pelarut  akan cenderung  melarutkan  senyawa  dalam  zat  aktif yang  mempunyai  tingkat  kepolaran  yang  sama (Rachmawati  A  et  al.,  2020).  Setelah  selesai dilakukan  ekstraksi  bertingkat  dengan  ketiga pelarut,  didapatkan  tiga  (3)  bentuk  larutan  yang selanjutnya  melalui  tahap  pemekatan.  Ketiga ekstrak  yang  didapatkan  kemudian  dihitung
rendemennya. Hasil perhitungan rendemen ekstrak batang akar kuning dapat dilihat pada Tabel 1 .
Tabel 1 . Nilai rendemen ekstrak n-heksan, etil asetat,
dan etanol 70% batang akar kuning Ekstrak Ekstrak Kental (gram) Rendemen (%) n-Heksan 0,20 0,17 Etil Asetat 0,50 0,42 Etanol 70% 6,62 5,66
Skrining fitokimia dilakukan terhadap ekstrak  n-heksan,  etil  asetat,  dan  etanol  70% batang akar kuning menggunakan reagen (ammonia pekat, pereaksi Dragendorff, kloroform, FeCl 3 ,  serbuk  Mg,  HCl  pekat,  larutan  gelatin  1%, Eter, pereaksi Liebermann-Bouchard). Dari skrining fitokimia ekstrak n-heksan, etil asetat, dan etanol  70%  batang  akar  kuning  dapat  dilihat  pada Tabel 2 .
Tabel 2 . Hasil penapisan fitokimia ekstrak n-heksan,
etil asetat, dan etanol 70% batang akar kuning Metabolit Sekunder Pereaksi Hasil Etanol 70% Etil Asetat n- Heksan Alkaloid Dragendorff ++ ++ ++ Flavonoid Wilstater +++ ++ - Tanin FeCl 3 +++ + - Saponin H 2 O + - - Steroid Lieberman Burchard + +++ +++ Keterangan:
(+++):  terdeteksi  kuat  mengandung  metabolit sekunder (++):  terdeteksi  sedang  mengandung  metabolit sekunder (+):  terdeteksi  lemah  mengandung  metabolit sekunder (-): tidak terdeteksi mengandung metabolit sekunder

## Hasil  Pengukuran  Stabilisasi  Membran  Sel
Darah  Merah  menggunakan  Spektrofotometer UV-Vis
Mekanisme  pengukuran  stabilisasi  membran sel  darah  merah  dapat  dilihat  saat  diberi  stres oksidatif  atau  stress  hipotonik.  Stres  oksidatif dibuat  dengan  cara  larutan  yang  akan  diuji diinkubasi  pada  suhu  56°C,  dimana  pada  suhu
56°C  jumlah  radikal  bebas  atau  senyawa pengoksidasi  di  dalam  tubuh  melebihi  kapasitas tubuh  untuk  menetralkannya  (Askandari,  2015). Alat  yang  digunakan  untuk  mengukur  stabilisasi membran  sel  darah  merah  yaitu  spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang serapan maksimum  400-800  nm.  Sebelum  pengukuran larutan  uji,  terlebih  dahulu  ditentukan  panjang gelombang maksimum dengan tujuan agar memiliki kepekaan yang tinggi, sehingga absorbansi  untuk  setiap  satuan  konsentrasi  adalah yang  paling  besar (Gandjar  &  Rohman,  2007) .  Hasil panjang  gelombang  serapan  maksimum  yang didapat  untuk  hemoglobin  adalah  577  nm.  Hasil serapan maksimum didapat serupa dalam penelitian Hardi et al., 2019.
Kontrol  positif  yang  digunakan  dalam penelitian  adalah  Ibuprofen  karena  merupakan salah  satu  agen  terapeutik  obat  antiinflamasi nonsteroid  yang  umum  digunakan  dan  bekerja dengan  cara  mencegah  pelepasan  mediator  anti inflamasi  sehingga  dapat  menghambat  sintesis prostaglandin atau siklooksigenase (Mediansyah & Rahmanisa,  2017;  Zulkarnaen  et  al.,  2024). Ibuprofen dipilih karena merupakan obat antiinflamasi  golongan  NSAID  yang  banyak digunakan untuk mengobati inflamasi serta mudah didapatkan.  Dari  hasil  pengamatan  yang  telah dilakukan, didapatkan persentase stabilisasi membran  sel  darah  merah  yang  dapat  dilihat  pada Tabel 3 dan Gambar 1 .
Tabel  3. Persentase  Stabilisasi  Membran  Sel  Darah
Merah Konsentrasi (ppm) Persen Stabilisasi(%) L-KP LU-I LU-II LU-III 50 59,09 26,93 28,11 46,20 100 60,03 28,11 30,19 47,18 150 60,97 29,25 30,34 48,12
200 62,85 29,99 31,18 48,17 250 64,33 32,21 32,41 48,76 Keterangan : L-KP = Kelompok yang diberikan Ibuprofen (Pembanding)
LU-I  =  Kelompok  yang  diberikan  ekstrak  etanol  70% batang akar kuning
LU-II  =  Kelompok  yang  diberikan  ekstrak  etil  asetat batang akar kuning LU-III  =  Kelompok  yang  diberikan  ekstrak  n-heksan batang akar kuning
Gambar 1 Hubungan antara konsentrasi antiinflamasi ekstrak n-heksan, etil asetat, dan etanol 70% batang akar kuning terhadap persen stabilisasi
Persentase  stabilisasi  merupakan  ukuran untuk  melihat  kemampuan  suatu  sampel  dalam menstabilkan  membran  sel  darah  merah  yang didapatkan  dari  perbandingan  serapan  antara absorbansi  larutan  uji  dengan  absorbansi  kontrol negatif  (Oyedapo  et  al.,  2010).  Hasil  analisis terhadap  sampel  uji  yang  memiliki  aktivitas antiinflamasi  dapat  dilihat  dari  adanya  penurunan absorbansi hemoglobin pada campuran larutan uji, dimana  semakin  kecilnya  serapan  hemoglobin yang  terdeteksi  pada  campuran  larutan  uji  maka semakin  kecil  hemoglobin  yang  keluar  sehingga membran sel darah merah semakin stabil dan tidak mengalami  lisis.  Nilai  hemolisis  membran  sel darah berbanding terbalik dengan persen stabilisasi artinya  semakin  kecil  nilai  absorbansi  maka menghasilkan  nilai  persen  stabilisasi  yang  besar (Ilyas  et  al.,  2022).  Aktivitas  antiinflamasi  ekstrak dilihat  pada  persentase  penghambatan  lisis  sel darah merah dengan menggunakan rumus
persentase  stabilisasi.  Nilai  persentase  stabilisasi ekstrak  yang  mendekati  atau  melebihi  kontrol positif  dapat  dikatakan  efektif  karena  memiliki aktivitas  antiinflamasi  yang  sebanding  atau  lebih dari pada kontrol positif (Oyedapo et al., 2010).
Berdasarkan  data  pada Gambar  1 hasil persentase stabilisasi terhadap konsentrasi menunjukkan  konsentrasi  sampel  uji  berbanding lurus  dengan  efek  antiinflamasi,  dimana  semakin meningkatnya  konsentrasi  ekstrak  meningkat  pula potensi  ekstrak  dalam  menstabilkan  membran  sel darah merah, artinya potensi antiinflamasinya juga semakin  meningkat.  Hasil  yang  didapat  sejalan dengan  penelitian  (Hardi  et  al.,  2019).  Persen stabilisasi  sampel  uji  tertinggi  pada  ekstrak  n- heksan  konsentrasi  250  ppm  yaitu  48,76% sebanding  dengan  kontrol  positif  konsentrasi  50 ppm dalam menstabilkan membran sel. Sedangkan, persen stabilisasi sampel uji terendah terdapat pada ekstrak  etanol  70%  batang  akar  kuning  sebesar 26,93%.
Aktivitas  metabolit  sekunder  yang  diduga dapat  berpotensi  sebagai  uji  antiinflamasi  adalah senyawa  golongan  alkaloid  dan  steroid.  Hasil penelitian yang diperoleh sejalan dengan penelitian yang  dilakukan  oleh (Pratiwi  &  Harlia,  2017) yang menyatakan bahwa, senyawa steroid yang berperan sebagai  antiinflamasi  yang  merupakan  senyawa regulator  seluruh  sistem  homeostatis  organisme tubuh  agar  dapat  bertahan  menghadapi  perubahan lingkungan  dan  infeksi.  Alkaloid merupakan  salah satu  senyawa  biokatif  mengandung  senyawa nitrogen  heterosiklik.  Mekanisme  alkaloid  sebagai antiinflamasi  dengan  cara  menekan  pelepasan histamin  oleh  sel  mast  serta  mengurangi  sekresi interleukin-1 oleh monosit (Luliana et al., 2017).

## Hasil Analisis
Data  Analisis  statistika  dilakukan  untuk mengetahui  perbedaan  persen  stabilisasi  tiap kelompok  uji.  Berdasarkan  uji  statistik  dengan menggunakan  SPSS  ( Statistical  Package  Social Sciences )  versi  26.  Uji  analisis  yang  digunakan yaitu  uji  parametrik Analysis  of  Variance (ANOVA)  karena  data  terdiri  dari  beberapa kelompok (> 2 kelompok).

## Tabel 4 . Hasil analisis ANOVA
Sum of Squares df Mean Square F Sig Between Groups 3553.800 3 1184.600  412.035 .00 Within Groups 46.000 16 2.875 Total 3599.800 19
Dari  Tabel  4,  diperoleh  signifikansi  sebesar 0,000.  Dengan  α  =  0,05  nilai  signifikansi  yang diperoleh  0,000  <  0,05  sehingga  terdapat perbedaan  persen  stabilisasi  membran  sel  darah merah yang signifikan pada empat kelompok uji.
Untuk  melihat  ada  atau  tidaknya  perbedaan data  persen  stabilisasi  pada  semua  kelompok perlakuan  lainnya,  dilakukan  analisis post  hoc menggunakan  uji  LSD  yang  disajikan  pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil Uji Post Hoc LSD
No Kelompok Uji L- KP LU-I LU-II LU-III 1 L-KP - 0,000*   0,000*  0,000* 2 LU-I 0,000* - 0,365   0,000* 3 LU-II 0,000* 0,365 - 0,000* 4 LU-III 0,000* 0,000*   0,000* -
Keterangan :
L-KP = Kelompok yang diberikan Ibuprofen (Pembanding)
LU-I  =  Kelompok  yang  diberikan  ekstrak  etanol  70% batang akar kuning
LU-II  =  Kelompok  yang  diberikan  ekstrak  etil  asetat batang akar kuning
LU-III  =  Kelompok  yang  diberikan  ekstrak  n-heksan batang akar kuning
*  = Berbeda bermakna secara statistik (p < 0,05)
Berdasarkan  hasil  dari  analisis  post  hoc ( Tabel  5 ).  Persen  stabilisasi  kelompok  kontrol positif terdapat perbedaan secara bermakna dengan kelompok  ekstrak  etanol  70%,  etil  asetat,  dan  n- heksan  batang  akar  kuning  (p  <  0,05).  Hal  ini menunjukkan  Ibuprofen  sebagai  pembanding memiliki  aktivitas  dalam  menstabilkan  membran sel  darah  merah  artinya  berpotensi  sebagai  anti inflamasinya,  tetapi  tidak  setara  dengan  persen stabilisasi  ekstrak  etanol  70%,  etil  asetat,  dan  n- heksan  batang  akar  kuning.  Persen  stabilisasi kelompok uji ekstrak n-heksan batang akar kuning terdapat  perbedaan  secara  bermakna  dengan kelompok ekstrak etanol 70% dan etil asetat batang akar  kuning  (p  <  0,05).  Hal  ini  menunjukkan ekstrak  n-heksan  batang  akar  kuning  memiliki aktivitas  dalam  menstabilkan  membran  sel  darah merah  artinya  berpotensi  sebagai  antiinflamasi, tetapi tidak setara dengan persen stabilisasi ekstrak etanol 70% dan etil asetat batang akar kuning. Hal tersebut  dapat  ditinjau  dari  besar  persentase stabilisasi  ekstrak  n-heksan  pada  konsentrasi  50 ppm  diperoleh  sebesar  46,20  sedangkan  persen stabilisasi ekstrak etanol 70% dan etilasetat batang akar  kuning  pada  konsentrasi  50  ppm  adalah masing-masing  sebesar  26,93%  dan  28,11%. Sedangkan,  untuk  persen  stabilisasi  kelompok  uji ekstrak  etanol  70%  batang  akar  kuning  tidak berbeda secara bermakna dengan kelompok ekstrak etil asetat batang akar kuning (p > 0,05).

## KESIMPULAN
Aktivitas antiinflamasi menggunakan metode stabilisasi  membran  sel  darah  merah  yang diinduksi  dengan  larutan  hipotonik  yang  paling optimum  terdapat  pada  ekstrak  n-heksan  batang akar  kuning  ( Arcangelisia  flava (L.)  Merr.)  pada
konsentrasi  250  ppm  yaitu  48,76%  sebanding dengan kontrol positif (Ibuprofen) pada konsentrasi 50 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
Akmalia, R. A., Hajrah Hajrah, & Rijai, L. (2016). Aktivitas  Antiinflamasi  Ekstrak  Rimpang Temu  Kunci  (Boesenbergia  pandurata)
Secara In-Vitro. In Proceeding of
Mulawarman Pharmaceuticals Conferences ,
4 , 289–294.
Alkandahri MY, PN Siahaan, Salim E, Fatimah C.
AntiInflammatory  activity  of  Cep-cepan leaves ( Castanopsis costata (Blume) A.DC).
Int J Curr Med Sci . 2018;8(4A):424-429.
Amalia A, Romdon DS, Kusumawati N, Salsabila MA,  Afifah  ND,  Shaomitha  R, et  al . Antihyperuricemia  activities  of  several active  compounds  from  medicinal  plants:  A review. Eur  J  Biomed  Pharm  Sci ,  2024;
11(3): 15-18.
Anggraeni, E. D. (2021). Uji Aktivitas Aniinflamasi Ekstrak Akar Kuning (Arcangelisia flaca (L.) Merr.) Pada Mencit Jantan  Galur  Swiss  Webster .  Al-Ghifari University.
Aprilianti,  R.  G.,  Permataningtyas,  T.,  & Wardana,  F.  Y.  (2022).  Oral  Subchronic Toxicity  Test  of  Yellow  Root  Ethanol Extract  (Arcangelisia  flava  Merr.)  In  Rats (Mus  musculus). Jurnal  Farmasi  Galenika (Galenika  Journal  of  Pharmacy)  (e-
Journal) , 8 (2), 154–161. https://doi.org/10.22487/j24428744.2022.v8. i2.15961 Askandari.  (2015). Uji  Aktivitas  Anti  Inflamasi Ekstrak Etanol 70% Buah Parijoto
(Medinila  Speciosa  Blume)  Secara  In  Vitro Dengan  Metode  Stabilisasi  Membran  Hrbc (Human  Red  Blood  Cell) .  Universitas  Islam Negeri Syarif Hidayatullah.
Budiyanti  LE,  Saputra  MYKA,  Wulandari  SA,
Amallia  S,  Azzahra  AJ,  Sagala  BC, et  al . Antihypertensive  effects  of  some  medicinal plants in Indonesia:  A review. Eur J Pharm Med Res , 2024; 11(3): 5-8.
Dewi, B. A., Setianto, R., & Rosita, F. (2020). Uji Aktivitas  Tanaman  Pangotan  (Microsorium
beurgerianum (Miq.) Ching) Sebagai
Antiinflamasi Secara Invitro dengan Metode
HRBC  (Human  Red  Blood  Cell). Jurnal Ilmiah Kesehatan , 1 (2), 15–20.
Gandjar,  I.  G.,  &  Rohman,  A.  (2007). Kimia Farmasi Analisis . Pustaka Pelajar. . Harborne,  J.  B.  (1998). Phytochemical  Methods (3rd ed.). Chapman and Hall.
Hardi, R. S., Slamet, S., & Kamilla, L. (2019). Uji Aktivitas  Anti  Inflamasi  Ekstrak  Bawang Dayak  (Eleutherine  Americana  L.  Merr) terhadap  Stabilisasi  Membran  Sel  Darah Merah. Jurnal  Laboratorium  Khatulistiwa ,
2 (1),
30. https://doi.org/10.30602/jlk.v2i1.324
Ihsan,  H.,  Pratama,  I.  S.,  &  Hanifa,  N.  I.  (2021).
Uji  Aktivitas  Antiinflamasi  Infusa  Bunga Pukul  Empat  Secara  In  Vitro. Acta Pharmaciae  Indonesia:  Acta  Pharm  Indo , 9 (1), 21.
Ilyas,  M.  Y.,  Saehu,  M.  S.,  Ertin,  E.,  Irma,  I.,  & Nurhikma,  N.  (2022).  Antiinflammatory Effects  of  Fraction  From  Galing  Stem Ethanol Extract (Cayratia Trifolia L. Domin) In Vitro. Jurnal Farmasi Sains Dan Praktis , 7 (3),
289–297. https://doi.org/10.31603/pharmacy.v7i3.610
7
Jung, H. A., Jin, S. E., Ahn, B. R., Lee, C. M., & Choi,  J.  S.  (2013).  Anti-inflammatory activity  of  edible  brown  alga  Eisenia bicyclis  and  its  constituents  fucosterol  and phlorotannins in LPS-stimulated RAW264.7 macrophages. Food and Chemical Toxicology , 59 , 199–206. https://doi.org/10.1016/j.fct.2013.05.061
Luliana,  S.,  Susanti,  R.,  &  Agustina,  E.  (2017).
Uji  aktivitas  antiinflamasi  ekstrak  air  herba ciplukan  (Physalis  angulata  L.)  terhadap tikus  putih  (Rattus  norvegicus  L.)  jantan galur  wistar  yang  diinduksi  karagenan. Traditional  Medicine  Journal , 22 (3),  199– 205.
Mediansyah,  A.,  &  Rahmanisa,  S.  (2017). Hubungan Ibuprofen terhadap Ulkus Gaster. Jurnal Majority , 6 (1), 6–10.
Nurulhadi  ZF,  Mudrikah  S,  Amelia  T,  Valentina DP,  Kurniawati  I,  Yuniar  RR, et  al .  Anti- hyperuricemia  activity  of  some  medicinal plants from Karawang, West Java, Indonesia: A review. Eur J Pharm Med Res , 2024; 11(3): 9-12.
Oyedapo, O. O., Akinpelu, B. A., Akinwunmi, K. F.,  Adeyinka,  M.  O.,  &  Sipeolu,  F.  O.
(2010). Red blood cell membrane stabilizing potentials of extracts of Lantana camara and its  fractions. International  Journal  of  Plant Physiology and Biochemistry , 2 (4), 46–51.
Poncowati,  S.,  Soenardjo,  N.,  Taufiq-Spj,  N.,  & Sibero,  M.  T.  (2022).  Profil  Senyawa Metabolit Sekunder Ekstrak Daun Mangrove Lumnitzera  racemosa  Asal  Perairan  Teluk awur,  Jepara. Journal  of  Marine  Research ,
11 (4),
794–804. https://doi.org/10.14710/jmr.v11i4.34325
Pratiwi, R., & Harlia, M. A.  W. (2017).  Aktivitas Antiinflamasi  dan  Toksisitas  Dari  Ekstrak Daun  Nanas  Kerang  (Rhoeo  Discolor).
Jurnal Kimia Khatulistiwa , 6 (2).
Rachmawati A, R., Wisaniyasa, N. W., & Suter, I. K.  (2020).  Pengaruh  Jenis  Pelarut  Terhadap Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Meniran (Phyllanthus  Niruri  L.). Jurnal  Ilmu  Dan
Teknologi Pangan (ITEPA) , 9 (4), 458.
Reilkoff,  R.  A.,  Bucala,  R.,  &  Herzog,  E.  L. (2011).  Fibrocytes:  emerging  effector  cells in  chronic  inflammation. Nature  Reviews Immunology , 11 (6), 427–435.
Sukmawati,  S.,  Wati,  A.,  &  Muflihunna,  A.
(2022).  Uji  Aktivitas  Ekstrak  Kombinasi
Rimpang  Kunyit  (Curcuma  domestica  Val.) dan  Kurma  (Phoenix  dactylifera  L)  sebagai Antiinflamasi  Secara  In  Vitro. Window  of
Health: Jurnal Kesehatan , 735–744.
Tavita, G. E.,  Lestari, D., Linda, R., Apindiati, R. K.,  &  Rafdinal,  R.  (2022).  Phytochemical Testing  and  In  Vitro  Anti-inflammatory Activity on Ethanol Extract of Akar Kuning (Arcangelisia  flava  L)  Stems  from  West
Kalimantan. Jurnal  Biologi  Tropis , 22 (4),
1334–1339.
Wiranto,  E.,  Wibowo,  M.  A.,  &  Ardiningsih,  P.
(2016).  Aktivitas  antiinflamasi  secara  in- vitro ekstrak teripang butoh keling (Holothuria  leucospilota  Brandt)  dari  pulau lemukutan. Jurnal Kimia Khatulistiwa , 5 (1).
Zulkarnaen  P,  Fadila  N,  Fadhilah  LN,  Kartika,
Kardila  K,  Laely  N, et  al .  Pharmacological activity  of Selaginella  doederleinii Hieron:
An  updated  review. Eur  J  Pharm  Med  Res ,
2024; 11(3): 17-20.