www.jtkl.polinema.ac.id Corresponding author: Sri Rulianah Diterima: 06 November 2018 Jurusan Teknik Kimia Disetujui: 11 Februari 2019 Politeknik Negeri Malang, Malang, Indonesia © 2019 Politeknik Negeri Malang
E-mail: rulianahpolinema@yahoo.com

## Produksi Crude Selulase dari Limbah Kayu Mahoni Menggunakan Phanerochaete chrysosporium

## Sri Rulianah*, Christyfani Sindhuwati, Prayitno Prayitno
Jurusan Teknik Kimia, Politeknik Negeri Malang, Jl. Soekarno Hatta No. 9, Malang 65141, Indonesia
*E-mail: rulianahpolinema@yahoo.com

## ABSTRAK
Limbah kayu mahoni dapat dikategorikan sebagai limbah lignoselulosa yang dapat dimanfaatkan sebagai bahan baku pembuatan biofuel , seperti bioetanol. Selulosa pada limbah kayu mahoni dapat dimanfaatkan sebagai bahan baku produksi crude selulase dengan bantuan kapang Phanerochaete chrysosporium. Crude selulase  yang  dihasilkan  memiliki  nilai  ekonomis  yang  tinggi  dan  dapat  dimanfaatkan  dalam  berbagai bidang. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh waktu fermentasi dan penambahan konsentrasi  serbuk kayu mahoni terhadap aktivitas crude selulase, dan untuk mengetahui kondisi operasi terbaik  sehingga  diperoleh crude selulase  dengan  aktivitas  yang  tertinggi. Produksi crude selulase  dari limbah kayu mahoni melalui beberapa tahapan yaitu, size reduction , peremajaan dan pembuatan inokulum kapang Phanerocheate chrysosporium , produksi crude selulase dan uji aktivitas selulase dengan metode DNS.  Variabel  berubah  pada  penelitian  ini  adalah  %  penambahan  serbuk  kayu  mahoni  pada  media pembuatan crude selulase yaitu 5%, 6% dan 7%, dan waktu inkubasi pembuatan crude selulase yaitu 9, 11, 13,  15  dan  17  hari.  Hasil  penelitian  menunjukkan,  semakin  lama  waktu  fermentasi,  dan  semakin  tinggi jumlah penambahan serbuk kayu mahoni, maka aktivitas selulase yang dihasilkan semakin tinggi. Kondisi operasi terbaik diperoleh pada waktu inkubasi selama 17 hari, dan  jumlah penambahan serbuk kayu mahoni 7% , diperoleh aktivitas crude selulase sebesar 39,034 U/ml.
Kata kunci : crude selulase, kayu mahoni, lignoselulosa, Phanerochaete chrysosporium , selulosa

## ABSTRACT
Mahogany waste can be categorized as lignocelluloses waste which can be used as raw material of  biofuel such as bioethanol. Cellulose in mahogany can also be utilized as crude cellulose raw material with the help of Phanerochaete chrysosporium . Crude selulase produced has high economic value and can be utilized in many  sectors. This  research  is  aim  to  determine  the  effect  of  fermentation  time  and  the  addition  of mahogany concentration on crude cellulase activity, and to determine the best operating conditions. Crude cellulase production from waste of mahogany through several steps, those are size reduction, rejuvenation and  inoculum  production  of Phanerocheate  chrysosporium, crude  cellulase  production  and  activity  test with DNS method. The variable in this experiment was the precentage of mahogany powder added on crude cellulase production media which was 5%, 6% and 7%, and incubation time of crude cellulase production which  were  9,  11,  13,  15  and  17  days.  The  experiment  shows  that  the  highest  cellulase  activity  was  at concentration of mahogany powder of 7% with incubation time of 17days as 39,034 U/ml.
Keywords : cellulose, crude cellulose, lignocellulose waste, mahogany, Phanerochaete chrysosporium

## 1. PENDAHULUAN
Enzim  selulase  adalah  suatu  enzim  yang bisa  memecah  selulosa  (menghidrolisis) ikatan β(1-4) pada selulosa)[1].  Selulase merupakan enzim extra seluler yang terdiri atas complex endo β-1,4-glukonase, ekso β-1,4-glukonase,  dan  β-1,4-glukosidase [2,3].  Enzim  ini  digunakan  secara  luas dalam  industri  tekstil,  deterjen,  pulp  dan kertas,  pakan ternak, pengolahan kopi dan kadang-kadang  digunakan  dalam  industri farmasi  sebagai  zat  untuk  membantu sistem  pencernaan.  Saat  ini,  enzim selulase juga digunakan sebagai pengganti bahan  kimia  pada  proses  pembuatan alkohol  dari  bahan  yang  mengandung selulosa [4].
Enzim mempunyai dua fungsi pokok yaitu mempercepat  atau  memperlambat  reaksi kimia dan mengatur sejumlah reaksi yang berbeda-beda  dalam  waktu  yang  sama. Enzim  dapat  meningkatkan  kecepatan reaksi kimia berkali-kali lipat. Studi telah menemukan bahwa enzim dapat mempercepat  reaksi  kimia  sampai  10 milyar  kali  lebih  cepat.  Zat  kimia  yang hadir  pada  awal  proses  biokimia  disebut sebagai substrat, yang mengalami perubahan kimia membentuk produk akhir [5,6].
Crude selulase  dapat  dihasilkan  dari substrat yang memiliki kandungan selulosa. Kandungan selulosa bisa ditemukan  pada  biomass  atau  bahan lignoselulosa. Lignoselulosa adalah komponen organik di alam yang berlimpah  dan  terdiri  dari  tiga  tipe polimer,  yaitu  selulosa,  hemiselulosa  dan lignin.  Lignoselulosa  bisa  diperoleh  dari bahan  kayu,  jerami,  rumput-rumputan, limbah  pertanian/hutan,  limbah  industri (kayu, kertas) dan bahan berserat lainnya. Kandungan dari ketiga komponen lignoselulosa  bervariasi  tergantung  dari jenis bahannya [7]. Selulosa dan hemiselulosa  membentuk  hampir  70% dari keseluruhan biomassa dan terikat
kuat  dengan  komponen  lignin  melalui ikatan  kovalen  dan  hydrogen  yang menyebabkan  strukturnya  sulit  dipecah dan  tahan  terhadap  berbagai  macam perlakuan.
Tabel  1 .  Karakteristik  lignoselulosa  dari berbagai sumber bahan [8]
Bahan 1 2 3 (%) (%) (%) Limbah perkebunan 25-50  37-50 5-15 Kayu keras 25-40  46-47  20-25 Kayu lunak 25-29  40-45  30-60 Bagas 20 52,7 24,2 Jerami 24 32 13 Rerumputan 35-50  25-40  11-30 Kertas koran 25-40  40-55  18-30
Keterangan:  1=  Hemiselulosa,  2  =  Selulosa, 3 = Lignin
Kayu  mahoni  termasuk  dalam  golongan kayu keras dengan kandungan selulosa 40 –  54%,  kandungan  lignin  18  -33%,  dan kadar  air  13%  [9].  Menurut    referensi [10], kayu  mahoni  mengandung  42,86% selulosa, 23,75% lignin, dengan kadar air 10,36%. Melihat  dari  kandungan selulosa yang cukup tinggi tersebut maka serbuk kayu mahoni mempunyai potensi yang  cukup  bagus  untuk  bahan  baku produksi crude selulase yang mempunyai nilai ekonomi tinggi. Rulianah pada tahun 2014 menggunakan bagas sebagai media untuk  pembuatan crude selulase  dengan rentang    waktu  5,7,9  hari,  dan  jumlah media  yang  ditambahkan  1-5  %,  maka diperoleh  hasil  yang  terbaik  pada  waktu fermentasi  9  hari  dan  %  penambahan media 5 % diperoleh crude selulase yang aktivitasnya  tertinggi  [11].  Rulianah (2017)  melanjutkan  penelitian  dengan menggunakan variabel  waktu  (9, 11, 13, 15, dan 17 hari), dan penambahan bagas (5, 6, dan 7 %) diperoleh kondisi terbaik
pada  waktu  fermentasi  17  hari  dan penambahan  bagas  7%  dengan  aktivitas enzim sebesar 91,304 U/mL [12] .
Rulianah (2014) sudah melakukan penelitian pembuatan crude s elulase dari serbuk  kayu  mahoni  menggunakan kapang Aspergilus niger
dengan delignifikasi  menggunakan  NaOH  8%, dengan variabel suhu delignifikasi 100 o C, dan 120 o C selama 150 menit, dan konsentrasi penambahan media bagas  (2, 3,  4,  5,  dan  6%),  diperoleh  hasil  terbaik pada  suhu  delignifikasi  120 o C,  dan konsentrasi  penambahan  substrat  kayu mahoni  sebesar  5  %,  diperoleh  aktivitas crude selulase sebesar 117,013  units/mL [13] .
Pada  kesempatan  ini  akan  dilakukan pembuatan crude selulase  dari  serbuk kayu  mahoni  dengan  menggunakan kapang Phanerochaete  chrysosporium sehingga tidak diperlukan proses delignifikasi  karena  kapang  ini  mampu mendegradasi lignin, sehingga diharapkan  prosesnya  lebih  sederhana.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh waktu fermentasi dan konsentrasi  media  terhadap  aktivitas crude  selulase  yang  dihasilkan.  Pada penelitian  ini  akan  dilakukan  perubahan variabel  penelitian  waktu  fermentasi dengan rentang waktu 9, 11, 13, 15, dan 17 hari, dan penambahan media 5%, 6% dan 7 %.

## 2.  METODE PENELITIAN
Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium Bioproses  dan  Laboratorium  Analisa Instrumental Jurusan Teknik Kimia Politeknik Negeri Malang. Media pembuatan crude selulase  dihasilkan  dari limbah serbuk kayu mahoni. Kapang yang digunakan adalah Phanerochaete chrysosporium. Phanerochaete chrysosporium diregenerasi dengan bantuan PDA ( Potato Dextrosa Agar ) dan dibuatkan inokulumnya dengan
menggunakan  media  NLM  ( Nitrogen Limited Media ). Larutan Neutral Detergent Fiber (NDF) dan Acid Detergent Fiber (ADF) digunakan sebagai bahan pelengkap dalam tahapan karakterisasi  bahan  baku. Buffer yang digunakan  adalah buffer Asetat  pH  5. Crude selulase  yang  dihasilkan  akan dianalisa dengan spektrofotometer menggunakan  CMC  (Carboxy  Methyl
Cellulose) dan larutan DNS (3,5- dinitrosalicylic  acid).  CMC  digunakan sebagai  substrat  pada  analisa  aktivitas crude selulase [2].
Penelitian  diawali  dengan pretreatment bahan (limbah serbuk kayu mahoni) yaitu dengan mengeringkan serbuk kayu mahoni  dan  mengecilkan  ukuran  partikel sampai  42 mesh , serta analisa awal bahan baku  yaitu  kadar  air,  kadar  lignin  dan kadar selulosa dengan metode Van Soest. Tahap  berikutnya  meremajakan starter dengan cara mengembangkan bibit dalam media  cair  dengan  menggunakan  media NLM  yang  sudah  diadaptasikan  dengan serbuk  kayu  mahoni.  Tahap  selanjutnya membuat kurva pertumbuhan. Pembuatan kurva  pertumbuhan  dilakukan  dengan cara, membuat suspensi spora Phanerochaete  chrysosporium ,  kemudian suspensi spora tersebut  diinokulasikan ke dalam  masing-masing  erlemeyer  yang sudah  diisi  dengan  media  NLM.  Jumlah erlemeyer  yang  digunakan  sebanyak  20 erlemeyer.  Suspensi  yang  ditambahkan jumlahnya  10  %  dari  media.  Setelah diinokulasi,  semua  erlemeyer  diinkubasi sesuai dengan waktunya mulai dari 1 hari sampai 20 hari. Kemudian dianalisa massa sel  kering  kapang  tiap-tiap  erlemeyer, yang  kemudian  datanya  untuk  membuat kurva pertumbuhan.
Langkah  selanjutnya  adalah  pembuatan crude selulase: serbuk kayu mahoni yang sudah dikeringkan dan dihaluskan dimasukkan ke dalam media NLM sesuai dengan variasi konsentrasi, yaitu 5, 6, dan
7  %  b/v  dari  volume  media,  kemudian disterilisasi dengan menggunakan autoclave ,  setelah  dingin,  diinokulasi dengan starter Phanerochaete chrysosporium. Media yang sudah diinokulasi  kemudian  diinkubasi  dengan lama  waktu  sesuai  dengan  variabel penelitian  (9,  11,  13,  15,  dan  17  hari). Hasil fermentasi dihomogenkan kemudian disaring  menggunakan  pompa  vakum, filtratnya merupakan ekstrak kasar enzim selulase yang kemudian dianalisa aktivitas selulasenya  menggunakan  metode  DNS untuk tiap variabel[14].

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian ini dilakukan untuk mengembangkan pemanfaatan bahan berlignoselulosa yaitu serbuk kayu mahoni  sebagai  bahan  baku  pembuatan crude selulase.  Mikroorganisme  yang digunakan  adalah  kapang Phanerochaete chrysosporium.
Penggunaan kapang Phanerochaete  chrysosporium bertujuan untuk memecah ikatan lignin dan selulosa yang  terdapat  di  dalam  bahan  atau substrat. Karakterisasi bahan baku (serbuk kayu mahoni) dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel  2. Karakterisasi  serbuk  kayu mahoni
Kandungan % NDF 88,0877 ADF 66,0363 Lignin 42,7218 Selulosa 42,6057 Hemiselulosa 22,0514 Air 13,6524
Tabel  2,  menunjukkan  bahwa  limbah serbuk kayu mahoni mengandung selulosa yang  cukup  tinggi  yaitu  sebesar  42,6%. Selulosa  yang  terkandung  dalam  serbuk kayu mahoni tersebut dapat dimanfaatkan sebagai  bahan  baku  pembuatan crude selulase.  Kandungan  lignin  yang  cukup besar  pada  serbuk  kayu  mahoni  yaitu
sebesar  42,7%  dapat  menggangu  proses produksi crude selulase.  Lignin  pada biomassa  berfungsi  sebagai  pertahanan awal  dari  masuknya  air  dan  bahan-bahan lain  dari  luar.  Lignin  memiliki  struktur amorf,  membungkus  hemiselulosa  dan selulosa,  sehingga  supaya  selulosa  dapat dimanfaatkan  dengan  baik,  maka  lignin serbuk kayu mahoni harus dihilangkan.
Upaya pengurangan kadar lignin biomassa dikenal  dengan  sebutan pretreatment . Pretreatment dapat  dilakukan  dengan berbagai  macam  cara,  yaitu  secara  fisik, kimia dan biologi. Kelebihan dari kapang Phanerochaete chrysosporium, selain mampu  memutus  ikatan  selulosa,  juga mampu  mendegradasi  lignin,  sehingga penggunaan  serbuk  kayu  mahoni  dalam pembuatan crude selulase tidak memerlukan pretreatment lanjutan  cukup dengan size reduction untuk mendapatkan ukuran  media  yang  seragam  mengingat kelebihan  yang  dimiliki  oleh  kapang Phanerochaete chrysosporium dalam mendegradasi lignin [13,14]. Karakterisasi bahan  baku  menggunakan  metode  Van Soest [17].
Gambar 1. Kurva Pertumbuhan Phanerochaete chrysosporium pada media kayu mahoni
Pada  penelitian  ini  dilakukan  pembuatan kurva pertumbuhan Phanerochaete
chrysosporium menggunakan media serbuk kayu mahoni dengan kurun waktu
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 M a ssa sel k er in g ( g ra m )
Waktu (Hari)
dari  1  samapai  20  hari,  dan  hasilnya disajikan pada Gambar 1.
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  fase  lag (terjadi mulai hari ke 1 sampai hari ke 3, fase log dimulai dari hari ke 3 sampai hari ke 5 dan fase stasioner dimulai dari hari ke 6  sampai  hari  ke  20  fase  stasioner  masih tetap berlangsung. Kapang Phanerochaete chrysosporium menghasilkan enzim- enzim yang bisa mendegradasi lignin dan selulosa  pada  metabolit  sekundernya seperti enzim selulase, lignin peroksidase, dan  mangan  peroksidase.  Gambar  1 menunjukkan  mulai  hari  ke  6  kapang tersebut  sudah  selesai  fase  lognya  dan memulai  fase  stasioner,  ini  menunjukkan bahwa  mulai  hari  ke  6  kapang  tersebut sudah  memulai  untuk  memproduksi enzim-enzim  yang  bisa  mendegradasi lignin,  selulosa  dan  hemiselulosa.  Proses produksi  metabolit  sekunder  dimulai  dari hari ke 6 sampai hari ke 20. Pada hari ke 20  belum  menunjukkan  tanda-tanda adanya  fase  kematian,  sehingga  perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk mengetahui  sampai  berapa  lama  fase stasioner  berlangsung.    Pada  penelitian yang  dilakukan  oleh  Mahyeti  (2013) degradasi  lignin  oleh Phanerochaete chrysosporium bisa  mencapai  95  %  pada waktu inkubasi 30 hari. Hal ini menunjukkan  bahwa  sampai  hari  ke  30 kapang  ini  masih  mampu  bertahan  hidup untuk mempertahankan fase stasionernya.
Keberhasilan  suatu  fermentasi  sangat dipengaruhi oleh dosis inokulum dan lama fermentasi  yang  diberikan.  Abu  Hassan (2007),  menyatakan  bahwa  kandungan lignin kayu tanpa perlakuan adalah 50,9% dengan  lama  waktu  fermentasi  20  hari mampu  memberikan  hasil  yang  baik dalam  menurunkan  kandungan  lignin dengan kapang
Phanerochaete chrysosporium [18].
Phanerochaete chrysosporium merupakan
salah satu kapang yang dapat
mendegradasi lignin secara lebih cepat dan ekstensif  dibanding  mikroorganisme  lain. Kandungan substrat yang diperlukan bagi pertumbuhan  mikroorganisme  ini  adalah selulosa  dan  hemiselulosa.  Degradasi lignin  terjadi  pada  akhir  pertumbuhan primer  melalui  metabolisme  sekunder dalam  kondisi  defisiensi  nutrien  seperti nitrogen,  karbon  atau  sulfur  [19].  Selain itu Phanerochaete chrysosporium mampu menghasilkan senyawa pengoksidasi yang digunakan  untuk  membelah  ikatan  lignin [20].
Menurut  Kodri  (2013),  pada  dasarnya mekanisme pemotongan rantai ikatan oleh enzim  selulase  sangat  kompleks  karena melibatkan  sinergitas  kerja  3  komponen besar  yaitu  endo-1,4-β-D-glukanase  yang berfungsi  memutuskan  ikatan  selulosa secara  random  dengan  memulai  serangan acak  pada  sisi  internal  daerah  amorf  dari serat  selulosa  sehingga  sisi  yang  terbuka dapat  diserang  oleh cellobiohydrolase. E kso-β-1,4-glukanase  akan  memotong ujung-ujung  rantai  individu  selulosa  dan ekso-β-1,4-glukanase atau cellobiohydrolase menyerang  bagian  luar dari selulosa sehingga dihasilkan selobiosa  sebagai  struktur  utamanya. Setelah itu β-glukosidase  berfungsi memotong  selobiosa  menjadi  molekul- molekul glukosa [21].
Glukosa  dan  selobiosa  adalah  inhibitor enzim  dalam  menghidrolisis  selulosa. Selobiosa menghambat
enzim sellobiohidrolase  pada  komplek  enzim selulase  dan  glukosa  menghambat  enzim penghidrolisis selobiosa.
Selobiosa mempunyai  potensi  menjadi  inhibitor yang  lebih  kuat  dibandingkan  dengan glukosa pada mekanisme hidrolisis selulosa [22]. Pengaruh konsentrasi media serbuk  kayu  mahoni  terhadap  aktivitas crude selulase dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar  2. Hubungan  antara  waktu fermentasi  dan  konsentrasi  penambahan kayu  mahoni,  terhadap  aktivitas  crude selulase yang dihasilkan.
Pada Gambar 2 terlihat bahwa
penambahan  konsentrasi  kayu  mahoni berpengaruh  terhadap  aktivitas  crude selulase.  Aktivitas  selulase  tertinggi didapatkan  pada  konsentrasi  media  7% sebesar 39,034 U/mL. Konsentrasi
penambahan  kayu  mahoni  dalam  media sangat  berpengaruh  terhadap  aktifitas enzim  yang  dihasilkan.  Semakin  besar konsentrasi  penambahan,  maka  semakin besar  pula  aktifitas  aktifitas  enzim  yang dihasilkan. Hal ini dapat dijelaskan dengan hipotesis  kompleks  enzim  substrat  oleh Michaelis-Menten  [23].  Kompleks  enzim substrat  mengalami  kesesuaian  bila  sisi afinitas  enzim  sesuai  dengan  jumlah molekul  substrat  pada  bagian  aktifnya. Jika  konsentrasi  substrat  terus  diperbesar maka  akan  terjadi  penambahan  aktivitas. Ketika penambahan substrat melebihi titik optimal  maka  terjadi  kompetisi  antara bagian aktif substrat dalam memperebutkan  sisi  afinitas  enzim,  dan akibatnya  terjadi  penghambatan  pada proses penggabungan enzim-substrat. Gambar  2  juga  menunjukkan  bahwa semakin  lama  waktu  inkubasi  maka semakin  besar  aktivitas  selulase  yang didapatkan.

## 4. KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  diperoleh  hasil: Semakin  lama  waktu  fermentasi,  dan semakin  tinggi  jumlah  penambahan serbuk kayu mahoni, maka semakin tinggi aktivitas selulase yang dihasilkan. Kondisi operasi  terbaik  diperoleh  pada  waktu fermentasi  17  hari,  dan  konsentrasi penambahan  serbuk  kayu  mahoni  7  %, diperoleh  crude  selulase  dengan  aktivitas sebesar 39,034 U/mL.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Disampaikan  ucapan  terima  kasih  pada Politeknik  Negeri  Malang  yang  telah memberikan  dana  untuk  pelaksanaan penelitian  ini  melalui  anggaran  DIPA 2018.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] I. Ul-Haq, M. M. Javed, T. S. Khan, Z.  Siddiq,  Cotton  Saccharifying Activity of Cellulases Produced by
Co-culture of Aspergillus niger and Trichoderma  viride, J.  Agric.  Biol. Sci. ,  vol.  1,  no.  3,  hal.  241–245,
2005.
[2] A.  Meryandini,  W.  Widosari,  B.
Maranatha,  T.  C.  Sunarti,  N.
Rachmania,  and  H.  Satria,  Isolasi bakteri selulolitik dan karakterisasi enzimnya, Makara  Sains ,  vol.  13, no. 1, hal. 33–38, 2009.
[3] A. Trisanti, Potensi Selulase Dalam Mendegradasi  Lignoselulosa, Ber.
Selulosa , vol. 45, no. 2, hal. 70–77,
2010.
[4] Z.  Fan,  L. R.  Lynd, Conversion of paper sludge to ethanol, II: Process design  and  economic  analysis, Bioprocess  Biosyst.  Eng. ,  vol.  30, no. 1, hal. 35–45, 2007.
[5] T.  Noviyanti,  P.  Ardiningsih, Pengaruh  Temperatur  Terhadap Aktivitas  Enzim  Protease  Daun
0 5 10 15 20 25 30 35 40 9 11 13 15 17 Ak tiv ita s S elu la se (U/m l) Waktu Inkubasi (Hari) Penambahan 5% Penambahan 6%
Penambahan 7%
Sansakgn  (Pycnarrhena  cauliflora Diels), J. Kim. Khatulistiwa , vol. 1, no. 1, hal. 1–6, 2013.
[6] Nurkhotimah, E. Yulianti, Pengaruh  Suhu  dan  pH  Terhadap Aktivitas  Enzim  Fosfatase  Bakteri
Termofilik  Sungai  Gendol,  vol.  6, no. 8, hal. 465–471, 2017.
[7] J. Pérez, J. Muñoz-Dorado, T. de la Rubia, J. Martínez, Biodegradation
and biological treatments of
cellulose, hemicellulose and lignin: an overview, Int. Microbiol. , vol. 5, no. 2, hal. 53–63, Jun. 2002.
[8] A. Limayem, S. C. Ricke,
Lignocellulosic biomass for bioethanol production: Current perspectives,  potential  issues  and future  prospects, Prog.  Energy Combust.  Sci. ,  vol.  38,  no.  4,  hal. 449–467, 2012.
[9] H.  Krisnawati,  M.  Kallio,  M. Kannien, Swietenia  Macrophylla King  Ecology  ,  Silviculture  and Productivity . 2011.
[10]  G.  Pari,  Hartoyo,  Analisa  Kimia  9 Jenis  Kayu  Indonesia, For.  Prod. Res. ,  vol.  7,  no.  4,  hal.  130–133, 1990.
[11]  S. Rulianah,
Hardjono, Pemanfaatan Bagasse Sebagai Crude Selulase Menggunakan Kapang Phanerochaete chrysosporium, Seminar Rekayasa Kimia dan Proses , 2014.
[12]  S.  Rulianah,  Z.  Irfin,  Mufid, Prayitno,  Produksi  Crude  Selulase dari  Bahan  Baku  Ampas  Tebu Menggunakan
Kapang Phanerochaete  chrysosporium, J. Tek. Kim. dan Lingkung. , vol. 1, no.
1, hal. 17–27, 2017.
[13]  S.  Rulianah,  D.  Melany,  D. Moentamaria, Pengaruh Suhu Delignifikasi dan Konsentrasi Penambahan Substrat Kayu Mahoni Terhadap Aktivitas Crude Selulase yang Dihasilkan pada Proses Fermentasi dengan Kapang Aspergilus  niger,  in Prosiding  Pro Poltel , 2014.
[14]  G. L. Miller, Analytical Chemistry , 31. 1959.
[15]  Mahyati, A. R. Patong, M. N. Djide,
D.  P.  Taba,  Biodegradation  Of Lignin From Corn Cob By Using A Mixture Of Phanerochaete Chrysosporium  ,  Lentinus  Edodes And Pleurotus Ostreatus, Int. J. Sci. Technol. , vol. 2, no. 11, 2013.
[16]  S.  Rulianah,  H.  Profiyanti,  Y. Maryanty, B. Irawan, The Effect of Fermentation Time and Addition of CMC to Decrease of Linin COntent
in Fermentation of Patchouli Leaves Using Phanerochaete chrysosporoium, Adv.  Sci.  Lett. , vol. 23, no. 6, 2017.
[17]  V. Soest, J. Robertson,
Standardization of Analytycal Methodology For Feeds, System of
Analysis  for  Evaluating  Fibrous
Feeds ,  International  Development Reseacrh Center, 1980, hal. 49–60.
[18]  M. Wan Zahari, O. Abu Hassan, H. K.  Wong,    J.  B.  Liang,  Utilization of oil palm frond  - Based diets  for beef  and  dairy  production  in Malaysia, Asian-Australasian  J. Anim. Sci. , vol. 16, no. 4, hal. 625– 634, 2003.
[19]  A.  Hatakka,  Biodegradation  of Lignin, Biopolymers ,  vol.  1,  hal. 129–180, 2001.
[20]  Fadilah,  S.  Distantia,  S.  R. Dwiningsih,  D.  S.  Ma’rifah,
Pengaruh Penambahan Glukosa dan Ekstrak Yeast terhadap Biodelignifikasi  Ampas  Batang Aren, Ekuilibrium ,  vol.  8  (1),  no.
0271, hal. 29–33, 2009.
[21]  K odri,  B.  D.  Argo,  R.  Yulianingsih,
Pemanfaatan  Enzim  Selulase  dari Trichoderma Reseei dan Aspergillus Niger sebagai Katalisator  Hidrolisis  Enzimatik Jerami  Padi  dengan  Pretreatment
Microwave, J.  Bioproses  Komod. Trop. , vol.  1,  no.  1,  hal.  36–43, 2013.
[22]  K. Ambriyanto, Isolasi dan
Karakterisasi Bakteri Aerob Pendegradasi Selulosa dari Serasah Daun  Rumput  Gajah,  Institut Teknologi Sepuluh November,
2010.
[23]  M.  Dixon  and  E.  C.  Webb, Enzymes .  New  York:  Academic Press, 1985.