## VARIATION OF ANTHOCYANIN CONTENT LEVEL AMONG FOUR LOCAL VARIETIES OF BLACK RICE (Oryza sativa L.) IN INDONESIA

## VARIASI TINGKAT KANDUNGAN ANTOSIANIN PADA EMPAT VARIETAS LOKAL PADI BERAS HITAM (Oryza sativa L.) INDONESIA
Abdul Basith 1a , Shafa Noer 2 , Mazidatul Faizah 3
1 Indonesian Genetic and Biodiversity Community, Indonesia
2 Universitas Indraprasta PGRI, Indonesia
3 Universitas KH. Abdul Wahab Hasbulloh, Indonesia a Korespondensi: Abdul Basith ; E-mail: golden_bee46@yahoo.com (Diterima: 09-01-2022; Ditelaah: 10-01-2022; Disetujui: 15-03-2022)

## ABSTRACT
Anthocyanin  in  black  rice  is  a  type  of  pigment  that  is  classified  as  a  flavonoid  compound  and  has  a beneficial role as an antioxidant. This study focused on assessing the anthocyanin content level of four local  varieties  of  black  rice  from  Indonesia,  specifically  Cempo  Ireng  from  Yogyakarta,  Wojalaka  and Manggarai  from  East  Nusa  Tenggara,  and  Toraja  from  South  Sulawesi.  Analysis  of  total  anthocyanin content was carried out based on the absorbance value of rice flour extract at a wavelength of 535 nm with a spectrophotometer. Furthermore, this study was conducted in a randomized group design with varieties as groups and 20 replications of each. The total anthocyanin content measured using a UV-Vis spectrophotometer with an absorbance length of 550 nm and 700 nm. The results of this study showed that there was a significant difference in the level of total anthocyanin content of the four varieties of black rice. Based on the ranking of the average of anthocyanin content level from the lowest to the highest in the four black rice varieties are Toraja (117.2 ppm), Wojalaka (435.38 ppm), Cempo Ireng (734.86 ppm),  and  Manggarai  (1508.89  ppm).  Based  on  the  combination  with  the  result  of  previous  study,  it shows that the level of anthocyanin content of the varieties of black rice in Indonesia is at the range of 117.29 ppm to 6503.70 ppm.
Keywords: Anthocyanin, black rice, local variety, variation, antioxidant

## ABSTRAK
Antosianin merupakan jenis pigmen dalam padi beras hitam yang diklasifikasikan ke dalam kelompok senyawa  flavonoid  dan  memiliki  sifat  antioksidan.  Penelitian  ini  berfokus  untuk  mengkaji  tingkat kandungan antosianin pada empat varietas padi beras hitam lokal di Indonesia, yaitu Cempo Ireng dari Yogyakarta,  Wojalaka  dan  Manggarai  dari  Nusa  Tenggara  Timur,  serta  Toraja  dari  Sulawesi  Selatan. Rancangan Acak Kelompok (RAK) dipilih sebagai rancangan penelitian dengan memposisikan varietas sebagai kelompok dan masing-masing kelompok 20 kali ulangan. Kandungan antosianin total dianalisis menggunakan alat spektrofotometer UV-Vis dengan pengaturan panjang absorbansi 550 nm dan 700 nm. Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  terdapat  perbedaan  tingkat  kandungan  antosianin  yang signifikan pada keempat varietas padi beras hitam. Diurutkan berdasarkan rata-rata tingkat kandungan antosianin dari yang terendah hingga yang tertinggi pada keempat varietas beras hitam termaksud adalah varietas  Toraja  (117,2  ppm),  Wojalaka  (435,38  ppm),  Cempo  Ireng  (734,86  ppm),  dan  Manggarai (1508,89 ppm). Kombinasi dengan hasil penelitian sebelumnya menunjukkan bahwa tingkat kandungan antosianin  varietas-varietas  padi  beras  hitam  di  Indonesia  berada  pada  rentang  117,29  ppm  hingga 6503,70 ppm.
Kata kunci: Antosianin, beras hitam, varietas lokal, variasi, antioksidan
Basith. A., Noer., Fauzi. S., & Faizah. M,. (2023). Variasi tingkat kandungan antosianin pada empat varietas lokal padi beras hitam (Oryza sativa L) Indonesia. Jurnal Pertanian, 14 (1), 1-6.

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  banyak  varietas  padi beras  hitam  lokal  yang  ditanam  di  seluruh penjuru  tanah  air.  Varietas-varietas  padi beras hitam diberi nama sesuai dengan nama kawasan  geografis  dimana  varietas  tersebut dibudidayakan  oleh  petani-petani  lokal. Beberapa  varietas  bahkan  diberi  nama  yang spesifik  sesuai  dengan  nama  desa,  sehingga dalam  satu  kabupaten  atau  kecamatan seringkali ditemukan beberapa varietas padi beras  hitam  (Sa’adah et  al .  2013;  Pratiwi  & Purwestri  2017).  Cempo  Ireng  yang  berasal dari  Yogyakarta,  Manggarai  dan  Wojalaka yang berasal dari Nusa Tenggara Timur, dan Toraja  yang  berasal  dari  Sulawesi  Selatan merupakan  beberapa  varietas  padi  beras hitam  lokal  yang  tersebar  di  Indonesia  yang diberi  nama  sesuai  dengan  asal  wilayah varietas-varietas tersebut dibudidayakan. Varietas-varietas  padi  beras  hitam  telah diketahui  memiliki  tingkat  kandungan antosianin yang bervariasi (Zhang et al . 2010). Senyawa  antosianin  pada  padi  beras  hitam antara lain sianidin 3-O-glukosida, pelargonidin  3-O-glukosida,  malvidin  3-O- glucosida,  peonidin  3-O-glukosida,  dan delphinidin  3-O-glukosida  (Kim et  al .  2014). Namun,  sekitar  95%  antosianin  yang  paling banyak  terdapat  pada  butiran  beras  hitam berupa  senyawa  sianidin-3-O-glukosida, sedangkan  hanya  sekitar  5%  yang  berupa senyawa  peonidin-3-O-glukosida  (Park et  al . 2008). Pada tanaman padi, antosianin terlibat dalam penyerbukan untuk menarik serangga, perlindungan  terhadap  UV-B,  pengaturan terhadap  respon  hormonal,  deteksi  cahaya pada  daun  di  musim  gugur,  stabilisasi aktivitas  fotosintesis,  serta  sebagai  sistem pengaturan terhadap stres biotik dan abiotik (Xia et  al .  2021;  Dwiningsih  &  Al-Kahtani 2022)
Kandungan  antosianin  dalam  padi  beras hitam  bermanfaat  bagi  manusia  sehingga menjadikannya  sebagai  pangan  fungsional. Beberapa penelitian terdahulu telah mengungkap  potensi  padi  beras  hitam
sebagai  pangan  fungsional,  diantaranya adalah ekstrak beras hitam yang berpengaruh terhadap penurunan resiko steatosis hepatik, hiperlipidemia, hiperglikemia, dan penghambatan  proses  pertumbuhan  sel-sel kanker (Jang et al . 2012; Sayekti & Qurrohman 2018).  Selain  itu,  ekstrak  antosianin  dalam beras  hitam  juga  berpotensi  meningkatkan kesehatan  pencernaan  yang  terindikasi  dari peningkatan  aktivitas  metabolisme  bakteri prebiotik Bifidobacterium spp. dan
Lactobacillus spp. (Zhu et al . 2018). Shinta et  al .  (2014)  telah  melakukan karakterisasi  terhadap  produktivitas  dan morfologi  pada  varietas  padi  beras  hitam Cempo  Ireng,  Manggarai,  Wojalaka,  dan Toraja. Berdasarkan pada karakteristik tinggi tanaman,  jumlah  anakan,  dan  keberadaan ekor di bagian distal floret dan gabah, Shinta et  al .  (2014)  mengklasifikasikan  varietas Wojalaka  ke  dalam  kelompok  padi Indica , yaitu  kelompok  padi  dengan  karakteristik jumlah anakan yang banyak, ukuran tanaman yang  pendek,  dan  tidak  mempunyai  ekor  di bagian  distal  floret  dan  gabah.  Sedangkan varietas Toraja, Cempo Ireng, dan Manggarai diklasifikasikan  ke  dalam  kelompok  padi Javanica ,  yaitu  kelompok  padi  dengan karakteristik  ukuran  tanaman  yang  tinggi, jumlah anakan yang sedikit, dan mempunyai ekor di bagian distal floret dan gabah. Sebagai upaya  untuk  melengkapi  informasi  tentang karakteristik  keempat  varietas  beras  hitam lokal Indonesia tersebut, maka penelitian ini difokuskan pada penilaian tingkat kandungan antosianinnya.

## MATERI DAN METODE

## Pengambilan Sampel
Sampel varietas lokal padi beras hitam Toraja, Cempo Ireng, Wojalaka, dan Manggarai dalam penelitian ini didapatkan dari petani lokal di masing-masing  daerah  tersebut.  Selain  itu dilakukan  wawancara  terhadap  petani  lokal tersebut  untuk  memastikan  bahwa  sampel yang  didapatkan  benar-benar  varietas  lokal
yang  digunakan  dalam  budidaya  di  daerah tersebut.  Rancangan  Acak  Kelompok  (RAK) merupakan  rancangan  yang  dipilih  dalam penelitian ini dengan memposisikan varietas lokal padi beras hitam sebagai kelompok dan dilakukan  20  kali  ulangan  pada  setiap kelompok. Hipotesis penelitian yang diajukan adalah terdapat perbedaan tingkat kandungan  antosianin  pada  varietas  lokal padi  beras  hitam  Toraja,  Cempo  Ireng, Wojalaka, dan Manggarai.

## Ekstraksi Antosianin
Ekstraksi  antosianin  padi  beras  hitam mengacu pada metode Suliartini et al . (2011). Beras  hitam  dikupas  sehingga  beras  hitam terpisah dari sekamnya. Sebanyak 25 g beras hitam  dihancurkan  menggunakan blender , kemudian ditambah 200 mL pelarut (1% HCl dalam ethanol). Bubur padi beras hitam yang telah didapatkan selanjutnya disaring dengan cara  mengalirkan  air  bersih  supaya  ampas dan  filtrat  terpisah.  Filtrat  yang  telah didapatkan  selanjutnya  disaring  dengan kertas whatman nomer  41  melalui  corong burner.  Filtrat  bersih  yang  telah  didapatkan selanjutnya  disaring  dengan  bentonit  untuk menghilangkan gula bebas. Filtrat jernih yang telah  didapatkan  selanjutnya  diekstrak menggunakan petrolium eter dan didiamkan selama  6  jam  untuk  menghilangkan  lipid. Filtrat  jernih  bebas  lipid  yang  didapatkan selanjutnya dipekatkan menggunakan evaporator  vakum  pada  suhu  50  °C  hingga terbentuk filtrat kental ekstrak pigmen beras hitam.
Penentuan Tingkat Kandungan Antosianin Penentuan  tingkat  kandungan  antosianin varietas lokal padi beras hitam menggunakan fasilitas di Laboratorium Pengujian Mutu dan Keamanan  Pangan  yang  bertempat  di Fakultas  Teknologi  Pertanian,  Universitas Brawijaya.  Penentuan  tingkat  kandungan antosianin  setiap  varietas  padi  beras  hitam dalam  penelitian  ini  menggunakan  metode diferensial pH yang mengacu pada Yodmanee et al . (2011). Alat yang dipergunakan adalah
spektrofotometer  UV-Vis Genesys 10 dengan pengaturan  panjang  gelombang  absorbansi 550  nm  dan  700  nm.  Kandungan  antosianin (ppm) pada masing-masing sampel dikalkulasi  berdasarkan  pada  rumus  yang disetarakan  dengan  ekspresi  sianidin-3- glukosida.
Kandungan antosianin (ppm) =
A x MW x DF x 1000
ε x 1
Keterangan  untuk  rumus  diatas  adalah:  A  = (A λ700 - λ550 ) pH 1.0 - (A λ700 - λ550 ) pH 4,5; MW = berat  molekul  sianidin-3-glukosida  (449,2 g/mol);  DF  =  faktor  dilusi  (20  μl  sampel didilusi  menjadi  2  ml,  DF  =  1000);  ε  = Koefisien atenuasi molar (L x cm -1 x mol -1 ) = 26,900 untuk sianidin-3-glukosida, dimana L (panjang lintasan dalam cm) = 1.

## Analisis Data
Data  kandungan  antosianin  ditabulasi menggunakan  program Microsoft  Excel  for Windows 2010 . Uji Kruskal-Wallis test dan uji lanjut Games-Howell menggunakan perangkat lunak IBM SPSS versi 22.0 for Windows .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian  statistik  tingkat  kandungan antosianin  pada  keempat  varietas  lokal  padi beras hitam lokal diawali dengan uji asumsi. Hasil  uji  asumsi  memperlihatkan  bahwa karakteristik  data  dalam  penelitian  ini  tidak homogen,  namun  terdistribusi  normal.  Hasil uji asumsi tersebut mendasari penentuan uji beda  yang  dipilih  dalam  penelitian  ini,  yaitu uji  statistik  non  parametrik Kruskal-Wallis pada taraf signifikansi 0,05 (Ostertagová et al . 2014). Jika uji statistik tersebut memperlihatkan  perbedaan  yang  signifikan maka  berikutnya  dilakukakan  uji  lanjut Games-Howell (Games & Howell 1976). Hasil uji Kruskal-Wallis yang dilanjutkan dengan uji lanjut Games-Howell menunjukkan  bahwa tingkat  kandungan  antosianin  antar  varietas padi beras hitam dalam penelitian ini berbeda sangat signifikan. Rata-rata tingkat kandungan  antosianin  varietas  padi  beras
4 Basith, at. al.
hitam  dari  yang  terendah  hingga  yang tertinggi secara berturut-turut yaitu varietas Toraja  dengan  kandungan  antosianin  117,2 ppm, Wojalaka dengan kandungan antosianin 435,38 ppm, Cempo Ireng dengan kandungan antosianin  734,86  ppm,  dan  Manggarai dengan  kandungan  antosianin  1508,89  ppm sebagaimana  yang  diilustrasikan  pada Gambar 1.
Gambar  1.  Diagram  hasil  pengujian statistik  dan  perbandingan tingkat kandungan antosianin  pada  keempat varietas  lokal  padi  beras hitam
Berdasarkan  pada  karakteristik  morfologi dan  produktivitasnya,  Shinta et  al .  (2014) telah  mengklasifikasikan  varietas  padi  beras hitam dalam penelitian ini ke dalam kelompok padi Indica dan Javanica ( Japonica tropis). Frank et al . (2012) melaporkan bahwa tingkat kandungan  antosianin  yang  diekspresikan dalam  bentuk  senyawa  sianidin-3-glukosida pada  kelompok  varietas  padi  beras  hitam Indica lebih  rendah  dibandingkan  dengan kelompok  padi Japonica .  Namun  hasil penelitian  ini  tidak  sejalan  dengan  laporan Frank et  al .  (2012).  Hasil  penelitian  ini menunjukkan  bahwa  pengklasifikasian  padi beras  hitam  ke  dalam  kelompok  padi Indica dan Javanica tidak  relevan  dengan  tingkat kandungan  antosianin  pada  setiap  varietas tersebut.  Tingkat  kandungan  antosianin tertinggi  dan  terendah  dalam  penelitian  ini (varietas  Manggarai  dan  Toraja)  adalah kelompok  padi Javanica ,  sedangkan  varietas Wojalaka  yang  diklasifikasikan  ke  dalam kelompok  padi Indica mempunyai  tingkat kandungan  antosianin  pada  peringkat  ketiga dibandingkan dengan varietas-varietas lainnya.
Selain  tidak  relevan  dengan  tingkat kandungan antosianin, secara umum pengklasifikasian  varietas  padi  ke  dalam kelompok padi Indica dan Japonica juga tidak relevan  ditinjau  dari  sudut  pandang molekuler. Hal ini dilaporkan oleh Anggraini et  al .  (2020)  dan  Basith et  al .  (2021)  bahwa penggunaan  sekuen  parsial  gen rbc L  dan mat K  ternyata  mengelompokkan  padi Indica dan Japonica secara acak dalam rekonstruksi pohon  filogenetiknya.  Selanjutnya,  menurut Gaufo  &  Trindade  (2014)  kelompok  padi Japonica ditemukan  lebih  kaya  kandungan senyawa  antioksidan  dibandingkan  dengan kelompok  padi Indica .  Namun,  relevansi antara  kandungan  senyawa  antioksidan  dan pengklasifikasian  padi  beras  hitam  dalam penelitian  ini  nampaknya  perlu  dikaji  dalam penelitian berikutnya.
Kandungan  antosianin  varietas-varietas lokal padi beras hitam hasil penelitian ini juga dibandingkan hasil penelitian terdahulu yang telah dilakukan oleh Kristamtini et al . (2014), secara ringkas diilustrasikan pada Gambar 2. Secara  keseluruhan  varietas-varietas  lokal padi  beras  hitam  Indonesia  mempunyai tingkat  kandungan  antosianin  yang  tinggi. Variasi  tingkat  kandungan  antosinin  pada varietas-varietas  lokal  padi  beras  hitam  di Indonesia berada dalam rentang 117,29 ppm hingga  6503,70  ppm.  Variasi  tingkat kandungan  antosianin  rupanya  tidak  hanya ditemukan pada keempat varietas lokal padi beras hitam dalam penelitian ini saja, namun juga  ditemukan  pada  hasil  penelitian Kristamtini et  al .  (2014).  Variasi  kandungan antosianin  pada  varietas-varietas  lokal  padi beras hitam sebagaimana yang diilustrasikan pada Gambar 2 sejalan dengan hasil penelitian Zhang et al . (2010) pada menunjukkan variasi kandungan antosianin pada varietas-varietas padi beras hitam yang ada di Cina. Contohnya pada  varietas  Longjin  01  dengan  rata-rata kandungan antosianin 51010 ppm, Heizhenzhu  dengan  rata-rata  kandungan antosianin 34500 ppm, dan Heixian 3 dengan rata-rata kandungan antosianin 29590 ppm.
Gambar 2. Diagram perbandingan kandungan antosianin  pada  beberapa  varietas lokal  padi  beras  hitam  Indonesia. Keterangan: diagram arsir horizontal adalah sampel penelitian ini, diagram arsir diagonal adalah hasil penelitian Kristamtini et al . (2014), NTT = Nusa Tenggara  Timur,  DIY  =  Daerah Istimewa  Yogyakarta,  Jateng  =  Jawa Tengah.
Variasi  kandungan  antosianin  antar  varietas tersebut menjadi dasar yang kuat atas dugaan bahwa  varietas-varietas  lokal  padi  beras hitam  pada  suatu  wilayah  tertentu  di Indonesia  merupakan  hasil  domestikasi  dari tetua  ( ancestor )  yang  berbeda-beda.  Selain itu,  upaya-upaya  penyilangan  ( breeding ) antar varietas oleh petani-petani lokal untuk mendapatkan  padi  beras  hitam  dengan karakter-karakter  yang  unggul  juga  turut mempengaruhi keragaman kandungan antosianin. Informasi ini mempertegas posisi varietas-varietas  padi  beras  hitam  tersebut sebagai  plasma  nutfah  yang  perlu  untuk dilestarikan sekaligus menjadi dasar perlunya dilakukan  penelitian  pada  masa  mendatang tentang  dasar  genetik  berbasis  pendekatan molekuler  yang  mengungkap  tentang  jalur- jalur domestikasi varietas-varietas padi beras hitam lokal yang tersebar di Indonesia seperti yang dilakukan oleh Oikawa et al . (2019) Kandungan  dan  distribusi  antosianin  pada padi beras hitam bervariasi, bergantung pada genotip,  umur,  tahap  pertumbuhan,  dan beragam  faktor-faktor  biotik  dan  abiotik (Suliartini et al . 2011). Faktor-faktor internal dan eksternal mempengaruhi proses biosintesis  antosianin.  Faktor  internal  yang berperan dalam biosintesis antosianin adalah
faktor  genetik  yang  meliputi  gen-gen struktural  dan  gen-gen  regulator.  Tingkat ekspresi gen-gen struktural berbanding lurus dengan  kandungan  antosianin.  Faktor internal  lain  yang  turut  berpengaruh  adalah fitohormon (misalnya asam absisat), gula, dan konsentrasi  beberapa  ion  dalam  tubuh tanaman  padi  beras  hitam  yang  dapat mengubah  tingkat  ekspresi  dari  gen-gen struktural  maupun  gen-gen  regulator. Sedangkan  beberapa  faktor  eksternal  yang berpengaruh  pada  biosintesis  antosianin meliputi  cahaya,  temperatur,  curah  hujan, komposisi  mineral  dalam  tanah,  dan ketinggian tempat (Kassim et al . 2009; Xie et al . 2011; Kristamtini et al . 2018).
Berdasarkan hasil penelitian ini maka dapat direkomendasikan untuk penelitian- penelitian  selanjutnya  yang  terkait  upaya- upaya identifikasi terhadap macam atau jenis antosianin  yang  terdapat  pada  keempat verietas  padi  beras  hitam  lokal  Indonesia tersebut,  misalnya  apakah  antosianin  yang terkandung  didalam  masing-masing  varietas padi  beras  hitam  lokal  Indonesia  tersebut termasuk  dalam  struktur  kimia  malvidin, sianidin-3-glukosida, sianidin-3,5- diglukosida, atau pelargonodin -3,5- diglukosida seperti yang telah dilakukan oleh Zhang et al . (2006) pada varietas padi Longjin 01.
Kandungan  antosianin  yang  tinggi  pada empat  varietas  padi  beras  hitam  lokal Indonesia  dalam  penelitian  ini  menjadi petunjuk  bahwa  seluruh  varietas  tersebut memiliki potensi yang tinggi sebagai pangan fungsional  atau  nutrasetika.  Penelitian tentang  pengaruh  ekstrak  antosianin  padi beras  hitam  masing-masing  varietas  padi beras  hitam  lokal  tersebut  dalam  mengatasi berbagai  penyakit  degeneratif,  seperti  yang telah  dilakukan  oleh  Choi et  al .  (2012), nampaknya  sangat  layak  untuk  dilakukan pada penelitian-penelitian mendatang, namun  harus  harus  diiringi  pula  dengan upaya-upaya  pelestarian  varietas-varietas padi beras hitam tersebut.

## KESIMPULAN
Secara  umum  keempat  varietas  lokal  padi beras  hitam  Indonesia  dalam  penelitian  ini memiliki tingkat kandungan antosianin yang sangat  tinggi,  namun  perbedaan  tingkat kandungan antosianin pada keempat varietas padi  beras  hitam  tersebut  berbeda  sangat signifikan.  Secara  berturut-turut  kandungan antosianin  terendah  hingga  tertinggi  adalah varietas  Toraja  (117,2  ppm),  Wojalaka (435,38  ppm),  Cempo  Ireng  (734,86  ppm), dan  Manggarai  (1508,89  ppm).  Tingkat kandungan  antosianin  yang  tinggi  pada keempat  varietas  padi  beras  hitam  tersebut mendasari  potensinya  untuk  pengembangan pangan  fungsional  berbasis  sumber  daya genetik lokal.

## DAFTAR PUSTAKA
Anggraini NB , Sholihah A , Khasna EN ,
Retnaningtyas  RW , Suharti &
Listyorini D. 2020.
Genetic relationship  between  local  rice varieties  based  on MatK and rbcL genes. AIP  Conference  Proceedings ,
2260 (1): 020020-1 – 020020-7. Basith A, Arumingtyas EL, & Widodo W. 2021.  Genetic  variation  analysis  of four  local  varieties  of  indonesian black rice ( Oryza sativa L.) based on partially rbcl cpDNA gene sequence. The  Journal  of  Experimental  Life Science , 11 (1): 1 – 5.
Choi MJ, Kim, HY, & Cho EJ. 2012. Anti- aging  effect  of  black  rice  against H2O2-induced premature senescence. Journal  of  Medicinal Plants Research , 6 (20): 3672 – 3680. Dwiningsih  Y  &  Al-Kahtani  J.  2022. genetics, biochemistry and biophysical  analysis  of  anthocyanin in  rice  ( Oryza  sativa L.). Advance Sustainable Science, Engineering and Technology , 4 (1): 0220103-1 – 0220103-19.
Frank T, Reichardt B, Shu Q, & Engel K.- H.  2012.  Metabolite  profiling  of colored rice ( Oryza sativa L.) grains . Journal of Cereal Science, 55 (2): 112 – 119 .
Games PA & Howell JF. 1976. Pairwise multiple  comparison  procedures with unequal n’s and/or variances: A monte  carlo  study. Journal  of Educational Statistics , 1 (2): 113 – 125. Goufo  P  &  Trindade  H.  2014.  Rice antioxidants: phenolic acids, flavonoids, anthocyanins, proanthocyanidins, tocopherols, tocotrienols,  γ -oryzanol,  and  phytic acid. Food  Science  &  Nutrition , 2 (2):
75 – 104.
Jang  HH,  Park  MY,  Kim  HW,  Lee  YM, Hwang KA, Park JH, Park DS, & Kwon O. 2012. Black rice ( Oryza sativa L.) extract  attenuates  hepatic  steatosis in C57BL/6 J mice fed a high-fat diet via  fatty  acid  oxidation. Nutrition  & metabolism , 9 (1): 1 – 11.
Kassim  A,  Poette  J, Paterson  A,  Zait  D, McCallum  S,  Woodhead  M,  Smith  K, Hackett  C,  &  Graham  J.  2009. Environmental and seasonal influences on red raspberry anthocyanin  antioxidant  contents and  identification  of  quantitative traits loci (QTL). Molecular Nutrition & Food Research , 53 (5), 625 – 634. Kim GR, Jung ES, Lee S, Lim SH, Ha SH, &  Lee  CH.  2014.  Combined  mass spectrometry- based  metabolite  profiling  of different  pigmented  rice  ( Oryza sativa L.) seeds and correlation with antioxidant
activities. Molecules , 19 (10): 15673 – 15686.
Kristamtini K, Wiranti EW & Sutarno S. 2018. Variasi warna dan kandungan
antosianin varietas lokal beras hitam Yogyakarta  pada  dua  ketinggian. Buletin  Plasma  Nutfah , 24 (2):  97 –
106.
Oikawa  T,  Maeda  H,  Oguchi  T, Yamaguchi  T,  Tanabe  N,  Ebana  K, Yano M, Ebitani T, & Izawa T. 2015. The birth of a black rice gene and its local  spread  by  introgression. The Plant cell , 27 (9): 2401 – 2414.
Ostertagová  E,  Ostertag  O  &  Kováč  J. 2014.  Methodology  and  application of  the  Kruskal-Wallis  test. Applied Mechanics  and  Materials ,  611:  115 – 120.
Park  SY,  Kim  SJ,  &  Chang  HI.  2008. Isolation  of  anthocyanin  from  black rice  (Heugjinjubyeo)  and  screening of  its  antioxidant  activities. Korean
Journal
of Microbiology and Biotechnology , 36 (1): 55 – 60.
Pratiwi R & Purwestri YA. 2017. Black rice as a functional food in Indonesia. Functional Foods  in  Health  and  Disease , 7 (3): 182 – 194.
Sa’adah IR, Supriyanta, & Subejo. 2013. Keragaman warna gabah dan warna beras varietas lokal padi beras hitam ( Oryza sativa L.) yang dibudidayakan oleh  petani  Kabupaten  Sleman, Bantul,  dan  Magelang. Vegetalika ,
2 (3): 13 – 20.
Sayekti  FDJ  &  Qurrohman  MT.  2018. Aktivitas  antiangiogenesis  ekstrak beras  hitam  ( Oryza  sativa L.  indica) pada chorioalantoic membrane (CAM)  sebagai  kandidat  antikanker. Indonesian  Journal  of  Applied Sciences , 8 (1): 7 – 9.
Shinta S, Indriyani S & Arisoesiloningsih E. 2014.
Morphological  variation  of  six
pigmented rice local varieties grown in  organic  rice  field  at  Sengguruh Village, Kepanjen Subdistrict, Malang District. Journal  of  Tropical  Life Science , 4 (2): 149 – 150. Suliartini  NWS,  Sadimantara  GR, Wijayanto,  T  &  Muhidin.  2011. Pengujian  kandungan  antosianin padi gogo beras merah hasil koleksi plasma  nutfah    Sulawesi  Tenggara. Crop Agro , 4(2): 43 – 48.
Xia D, Zhou H, Wang Y, Li P, Fu P, Wu B, &  He  Y.  2021.  How  rice  organs  are colored:  The  genetic  basis  of anthocyanin biosynthesis in rice . The Crop Journal, 9 (3): 598 – 608.
Xie  R,  Zheng  L,  He  S,  Zheng  Y,  Yi  S,  &
Deng L. 2011. Anthocyanin biosynthesis  in  fruit  tree  crops: genes  and  their  regulation. African Journal of Biotechnol ogy,
10 (86):19890 – 19897. Yodmanee S, Karrila TT, &
Pakdeechanuan  P.  2011.  Physical, chemical and antioxidant properties of pigmented rice grown in Southern Thailand. International Food Research Journal , 18 (3): 901 – 906. Zhang MW, Guo, BJ, Zhang RF, Chi JW, Wei  ZC,  Xu  ZH,  Zhang  Y,  &  Tang  XJ. 2006.  Separation,  purification  and identification of antioxidant compositions in black rice.
Agricultural  Science  in  China , 5 (6): 431 – 440.
Zhang MW, Zhang RF, Zhang FX, & Liu RH.  2010.  Phenolic  profiles  and antioxidant activity of black rice bran of  different  commercially  available varieties. Journal of Agricultural and Food Chemistry , 58 (13): 7580 – 7587. Zhu Y, Sun H, He S, Lou Q, Yu M, Tang M, &  Tu  L.  2018.  Metabolism  and
prebiotics  activity  of  anthocyanins from  black  rice  ( Oryza  sativa L.)  in vitro. PloS One , 13 (4): e0195754.