e-issn: 2716-4608 p-issn: 2655-366X

## OPTIMIZATION OF THE GROWTH MEDIA OF Bacillus cereus BACTERIA WITH THE ADDITION OF SKIM MILK AND DIFFERENT CARBON SOURCES
Muhammad Taufan 1* , Feliatra 1 , Irwan Effendi 1
1 Department of Marine Sciences, Faculty of Fisheries and Marine, Universitas Riau Kampus Bina Widya KM. 12,5, Simpang Baru, Kec. Tampan, Kota Pekanbaru, Riau 28293
* mtaudanhyqal@gmail.com

## ABSTRACT
The goal of this research was to find the optimal media for growing B. cereus bacteria with  various  carbon  sources.  This  study  used  an  experimental  method  with  two Bacillus cereus bacterium  isolates,  namely  B.  cereus  strain  SN7  (isolate  N)  and  a  consortium  of bacteria isolates (a combination of several B. cereus isolates with different strains). The two isolates were grown in sago liquid waste media, tofu liquid waste media, and molasses liquid waste media supplemented with a protein source, skim milk, with three replications in each treatment.  Bacterial  culture  growth  was  measured  every  6  hours  for  24  hours  using  two methods: the TPC method and bacterial cell biomass measurement. According to the results of  this  study's  measurements,  molasses  waste  media  was  the  best  modified  medium  for B.cereus growth. The difference in growth between the B. cereus strain SN7 bacterial isolates and  the  consortium  cultured  on  molasses  media  was  not  significant.  The  isolates  with  the largest number of cell growth were B. cereus consortium isolates, with 2,023 x10 8 CFU/mL in the TPC method and 1,011 g/mL in the biomass measurement method at 24 hours.
Keywords: Bacillus cereus , Carbon, Molasses, Optimal growth, Skim milk.

## I. PENDAHULUAN
Susu  adalah  salah  satu  hasil  ternak yang  dikenal  sebagai  bahan  makanan bernilai  gizi  tinggi.  Kandungan  gizi  yang terkandung  di  dalam  susu  diantaranya protein  (3,5%),  lemak  (3,9%),  laktosa (4,9%),  mineral,  dan  vitamin  (0,7%). Protein  merupakan  zat  gizi  yang  sangat penting, karena
berfungsi untuk
membentuk  jaringan  baru  dalam  masa pertumbuhan  dan  perkembangan  tubuh, memelihara, memperbaiki, mengganti jaringan  yang  rusak,  dan  sebagai  cadangan energi  bila  tubuh  kekurangan  lemak  dan karbohidrat [1].
Umumnya bakteri yang dapat
memproduksi  protein  adalah Bacillus sp. [2].  Salah  satu  bakteri  dengan  genus Bacillus yang  berpotensi  sebagai  sumber
produksi  protein  yaitu Bacillus  cereus ,  hal ini  terbukti  dari  beberapa  penelitian sebelumnya  yang  menyatakan B.  cereus menjadi  probiotik  yang  dapat  menghambat beberapa bakteri patogen dan juga merupakan  bakteri  heterotrofik  yang  dapat mendegradasi  bahan  organik  yang  bersifat toksik  di  lingkungan  terutama  perairan  [3- 5].
Salah  satu  nutrisi  yang  menjadi komponen  utama  dan  dapat  dimanfaatkan oleh bakteri probiotik penghasil protein sel tunggal  seperti B.  cereus yaitu  protein.
Protein  berfungsi  sebagai  sumber  nutrisi yang dibutuhkan oleh sel sebagai penyusun struktural sel itu sendiri [6].
Salah satu media yang dapat diasumsikan  cocok  untuk  pertumbuhan bakteri B.cereus yaitu  limbah  sagu.
Pernyataan  ini  didasari  oleh  pendapat  dari [7]  yang  menyatakan  bahwa,  limbah  cair sagu  yang  mengandung  karbohidrat  cukup tinggi  dan  bersifat  asam  mempunyai prospek untuk dimanfaatkan sebagai media fermentasi bakteri.
Limbah  cair  sagu  berasal  dari  proses
penyaringan
bubur empulur sagu
(ekstraksi)  dan  pengendapan  pati.  Industri pengolahan  sagu,  baik  tradisional  maupun modern  yang  berkapasitas  besar  akan menghasilkan limbah cair sagu dan dibuang begitu  saja  di  lingkungan,  baik  di  darat maupun  di  sungai  [7].  Limbah  cair  sagu masih  mengandung  nutrien-nutrien,  seperti karbohidrat,  protein, dan  bahanbahan lainnya  yang  jika  dibiarkan  atau  dibuang begitu  saja  ke  sungai  justru  dapat mencemari air sehingga menurunkan kualitas  air  dan  menimbulkan  bau  yang tidak  sedap  di  sekitar  tempat  pengolahan sagu tersebut [8].
Limbah  molase  merupakan  hasil samping dari industri pengolahan gula yang memiliki  kandungan  gula  cukup  tinggi sebanyak  48%-55%  [9].  Limbah  cair  tahu mengandung senyawa organik yang berupa protein,  karbohidrat,  lemak  dan  minyak. Selain itu, limbah cair tahu juga mengandung  gas  oksigen  (O 2 ),  hidrogen sulfida (H 2 S), amonia (NH 3 ), karbondioksida  (CO 2 )  dan  metana  (CH 4 ) [10].  Oleh  karena  itu,  dilihat  dari kandungan  karbohidrat  yang  terdapat  pada limbah molase dan limbah tahu yang cukup tinggi, maka limbah tersebut dapat dimanfaatkan secara optimal bagi
pertumbuhan B.  cereus .  Terdapat  sumber karbohidrat  yang  diasumsikan  berpotensi dalam mengoptimalkan pertumbuhan bakteri B. cereus ,  yaitu  limbah  molase  dan limbah tahu.
Pada  beberapa  industri  tahu,  tidak seluruhnya  limbah  cair  dibuang,  namun sebagian  kecil  limbah  cair  tersebut  masih digunakan kembali sebagai bahan penggumpal  sari  pati  kedelai,  yang  mana nantinya akan dicetak menjadi produk tahu.
Berdasarkan  penjelasan  tersebut  maka penulis tertarik untuk melakukan penelitian yang berjudul “Optimasi Media Pertumbuhan Bakteri Bacilus cereus Dengan  Penambahan  Sumber  Karbon Berbeda”.

## 2. METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Juni-Juli  2021  di  Laboratorium Mikrobiologi  Laut  Jurusan  Ilmu  Kelautan Fakultas
Perikanan dan Kelautan Universitas Riau.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  metode eksperimen  yang  menggunakan  isolat bakteri B.  cereus strain  N  dan  konsorsium yang terdiri dari B. cereus strain SP4 (isolat
C), B. cereus strain S5 (isolat D), B. cereus strain  Xmb051  (isolat  H), B.  cereus strain BF2  (Isolat  B),  dan B.  cereus stran  SN7 (isolat  N)  yang  ada  di  Laboratorium Mikrobiologi Laut.
Rancangan percobaan yang
digunakan  pada  penelitian  ini  adalah Rancangan  Acak  Lengkap  Faktorial  yang memiliki dua faktor yaitu media dan isolat. Untuk  media  memiliki  lima  taraf  yang terdiri dari media limbah tahu, limbah sagu, limbah molase, kontrol positif (media NB), dan  kontrol  negatif  (aquades).  Sedangkan isolat  memiliki  dua  taraf  yaitu B. cereus SN7 dan konsorsium yang diulang masing- masing sebanyak tiga kali.

## Prosedur Penelitian Penyediaan Sampel Isolat Bakteri
Persiapan  isolat  bakteri Bacillus cereus dilakukan dengan cara menginokulasibiakan  murni  bakteri B. cereus dari  koleksi  bakteri  Laboratorium Mikrobiologi  Laut  Jurusan  Ilmu  Kelautan Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas  Riau  ke  media  miring  NA secara aseptis dan diinkubasi selama 24 jam pada  suhu  36 o C.  Terdapat  2  isolat  bakteri
B.  cereus yang  diinokulasi  dan  dikultur pada  media  limbah  modifikasi,  yaitu  isolat bakteri B.  cereus strain  SN7  dan  isolat bakteri B.  cereus konsorsium,  dimana bakteri bakteri ini diharapkan dapat tumbuh dengan baik dalam satu media yang sama.

## Pembuatan Media Pertumbuhan
Limbah  cair  tahu,  limbah  cair  sagu, dan molase dicampurkan dengan mikronutrien  lain  seperti  Vitamin  B 12 , K 2 HPO 4 ,  dan  KH 2 PO 4 sebagai  larutan penyangga,  dan  juga  NaCl  sebagai  garam mineral  yang  kemudian  dilarutkan  dalam aquades  lalu  media  limbah  cair  modifikasi disterilisasi  menggunakan autoclave pada suhu  121°C,  tekanan  2  atm.    Agar mendapat formulasi campuran bahan dengan komposisi terbaik pembuatan media limbah cair dengan sumber karbon berbeda yang  ditambahkan  susu  skim  dilakukan dengan menentukan nilai C/N 20:1. Dengan formulasi  pembuatan  media  dapat  dilihat sebagai berikut:
LCT  =  5,75  mL  limbah  cair  tahu  + 15,8 gram K 2 HPO 4 + 12,8 gram KH 2 PO 4 + 5  mg  Vitamin  B 12 +  31,7  ml  susu  skim  + aquades. LCS = 6,5 ml limbah sagu + 15,8 g  K 2 HPO 4 +  12,8  g  KH 2 PO 4 +  5  mg Vitamin B 12 + 31,7 ml susu skim dilarutkan dalam  akuades.  LCM  =  42,8  ml  molase  + 15,8 gram K 2 HPO 4 + 12,8 gram KH 2 PO 4 + 5  mg  Vitamin  B 12 +  31,7  ml  susu  skim  + aquades;
Semua perlakuan tersebut dibandingkan  dengan  kontrol  positif  yaitu Nutrient  Broth (NB)  sebagai  media pertumbuhan  bakteri  dan  kontrol  negatif yaitu akuades sebagai media pertumbuhan.
Pembuatan media pertumbuhan dilakukan  dalam  wadah  botol  kaca  bening dengan  volume  120  mL  yang  telah disterilisasi  terlebih  dahulu  menggunakan alkohol.  Setelah  dicampurkan  dengan tambahan  susu  skim,  media  modifikasi limbah  cair  tahu,  limbah  cair  sagu,  dan limbah  molase  disterilisasi  menggunakan autoclave yang  dipanaskan  dengan  suhu
121 o C  dan  tekanan  2  atm.  Kemudian media  didinginkan  di  tempat  yang  steril sebelum kultur dilakukan.
Kultur Bakteri pada Media Pertumbuhan Kultur dilakukan dengan cara
mensuspensikan  isolat  bakteri  terlebih dahulu. Isolat bakteri B.cereus strain N dan bakteri konsorsium diambil dari media NA sebelumnya  menggunakan  jarum  ose, disuspensikan  kedalam  20  ml  larutan fisiologis  0,9%  NaCl  secara  aseptis  dan dihomogenkan menggunakan vortex sampai kekeruhan suspensi bakteri setarakan  dengan  larutan  standar  0,5 McFarland .  Pada  bakteri  konsorsium, setiap 5 isolat bakteri B. cereus disuspensikan  kedalam  4  mL  larutan fisiologis 0,9% NaCl kemudian dicampurkan menjadi satu sehingga volumenya menjadi 20 mL. Kedua suspensi bakteri B.  cereus 20  mL  kemudian dimasukkan  kedalam  media  pertumbuhan. Media  kultur  yang  telah  berisi  bakteri diletakkan  diatas Water  Bath  Shaker yang diatur dalam suhu 37 °C dengan kecepatan 90 rpm selama 24 jam.

## Pengukuran Pertumbuhan Bakteri
Pengukuran  pertumbuhan  bakteri  ini ditentukan  berdasarkan  pernyataan  dari [11],  yaitu  Bakteri B.cereus memiliki  nilai waktu generasi 18 menit dan konstanta laju pertumbuhan  mencapai  2,27/jam,  sehingga pengukuran parameter pertumbuhan
B.cereus dilakukan  dengan  rentang  waktu yang singkat dan diharapkan dapat memperoleh  kurva  pertumbuhan  bakteri yang mencakup semua fase.
Teknik  yang  digunakan  pada  metode TPC  dalam  penelitian  ini  yaitu  teknik cawan  sebar  ( spread  plate ).  Langkah pertama dalam metode ini yaitu menyiapkan  media  PCA  ( Plate  Count Agar )  yang  telah  dibuat,  disterilkan  dan ditempatkan  pada  cawan  petri  secara aseptis.  Sampel  bakteri  pada  media
pertumbuhan  diencerkan  terlebih  dahulu sampai  pengenceran  10 -5 ,  kemudian    0,1 mL  diambil  menggunakan  mikropipet  dan dimasukkan  kedalam  cawan  petri  yang berisi  media  PCA.  Sampel  bakteri  pada media  kemudian  disebar  dan  diratakan menggunakan  batang drigalski secara aseptis  didekat  bunsen, setelah  itu  sampel bakteri  diinkubasi  selama  24  jam  dalam inkubator  kemudian  koloni  bakteri  yang tumbuh pada media PCA dihitung
menggunakan colony counter . Hasil jumlah koloni  yang  didapat  kemudian  dimasukkan kedalam rumus perhitungan bakteri berdasarkan penelitian yang telah dilakukan oleh [9], yaitu :
∑ ∑
Pengukuran biomassa bakteri dilakukan  dengan  cara  menetukan  berat kering  pada  sel  bakteri. Microtube yang menjadi  wadah  sel  bakteri  ditimbang terlebih  dahulu  dengan  timbangan  analitik, dicatat,  dan  dimasukkan  1  ml  bakteri  yang diambil pada media kultur. Microtube yang berisi  isolat  bakteri  disentrifugasi  dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit  [12]. Isolat  yang  telah  disentrifugasi  akan menghasilkan  supernatan  dan  endapan  sel bakteri  dibawahnya.  Supernatan  yang  telah terbentuk dibuang menggunakan pipet tetes yang  sudah  disterilkan  dengan  alkohol sampai  hanya  endapan  sel  bakteri  yang tersisa. Microtube yang  berisi  sel  bakteri kemudian  di  oven  dengan  suhu  100  °C selama  15  menit.  Setelah  di  oven, mikrotube  didinginkan  dalam  desikator kemudian ditimbang berat keringnya. Berat kering  yang  telah  didapatkan  dikurang dengan berat microtube sebelumnya sehingga  didapatkan  berat  kering  yang sebenarnya dari bakteri.

## Analisis Data
Data  hasil  pengukuran  pertumbuhan sel  bakteri  dapat  disajikan  dalam  bentuk tabel  dan  grafik  serta  dibahas  secara deskriptif.  Untuk  uji  statistik  terhadap
semua  perlakuan  yang  diberi  dilakukan dengan  uji  ANOVA,  jika  pada  hasil  pada uji  ANOVA  berbeda  nyata  pada  tingkat kepercayaan 95%, maka akan dilakukan uji lanjut menggunakan uji beda nyata ( Student Newman
Keuls ). Kemudian data pertumbuhan  bakteri B.  cereus pada  media berbeda  yang  telah  didapat  dibandingkan berdasarkan literatur yang berkaitan dengan pertumbuhan bakteri B. cereus.

## 3.     HASIL DAN PEMBAHASAN
Pertumbuhan Bakteri B. cereus Hasil  pengukukuran  jumlah  koloni bakteri  dengan  isolat B.  cereus strain  SN7 dan konsorsium menggunakan metode TPC dengan  media  modifikasi  yang  digunakan adalah  limbah  tahu,  limbah  sagu,  dan limbah molase dibagi menjadi dua berdasarkan  isolat  bakterinya.  Berdasarkan hasil yang telah didapatkan dalam pengukuran  ini  (Tabel  1), B.  cereus SN7 yang  memiliki  pertumbuhan  yang  paling optimal  yaitu  pada  media  molase  yang ditambahkan  susu  skim  sebagai  sumber proteinnya  dimana  pertumbuhan  pada media ini hampir sama dengan pertumbuhan  pada media  NB  yaitu  kontrol positifnya. Hal ini sesuai dengan pernyataan  [13],  yang  mengatakan  bahwa semakin  tinggi  penambahan  susu  skim kebutuhan nutrisi bagi pertumbuhan bakteri juga  semakin  terpenuhi,  sehingga  bakteri yang  tumbuh  lebih  banyak.  Hasil  ini menunjukkan  bahwa  molase  memiliki nutrisi terutama karbon yang baik sehingga dapat  memberi  pertumbuhan  yang  optimal pada bakteri.
Hal  ini  sesuai  dari  pernyataan  [14], “bahwa  molase  memiliki  kandungan karbohidrat  berupa  gula  yang  dapat dijadikan  sumber  energi  serta  gula-gula yang  terkandung  dalam  molase  mudah dicerna  dan  diserap  oleh  sel  bakteri”  yang artinya molase memiliki kandungan karbon atau  karbohidrat  berupa  gula  yang  tepat bagi  percernaan  dan  pertumbuhan  sel bakteri.  Hasil  pengkuran  pertumbuhan
e-issn: 2716-4608 p-issn: 2655-366X bakteri B.cereus SN7  dan  konsorsium dengan metode TPC dirata-ratakan
berdasarkan 3 ulangan pada setiap
perlakuan,  yang  kemudian  disajikan  dalam bentuk Tabel 1 dan Tabel 2.
Tabel 1. Hasil Pengukuran TPC bakteri Bacillus cereus SN7 Media Limbah Jumlah Sel Bakteri (x10 8 CFU s/mL) pada Waktu Inkubasi (Jam ke-) 0 6 12 18 24 R ± SD R ± SD R ± SD R ± SD R ± SD T 2,063 ± 1,13 2,640 ± 1,25 2,410 ± 1,25 2,160 ± 1,07 1,800 ± 0,88 S 1,770 ± 0,61 2,550 ± 0,73 2,060 ± 0,36 1,523 ± 0,23 1,163 ± 0,18 M 1,570 ± 0,31 2,006 ± 0,39 2,650 ± 0,24 1,840 ± 0,41 1,540 ± 0,51 K (+) 1,283 ± 0,13 1,816 ± 0,13 2,513 ± 0,22 3,126 ± 0,12 2,460 ± 0,19 K (-) 1,703 ± 0,24 1,373 ± 0,16 1,873 ± 0,23 1,803 ± 0,25 1,753 ± 0,25
Tabel 2. Hasil Pengukuran TPC bakteri Bacillus cereus Konsorsium Media Limbah Jumlah Sel Bakteri (x10 8 CFU s/mL) pada Waktu Inkubasi (Jam ke-) 0 6 12 18 24 R ± SD R ± SD R ± SD R ± SD R ± SD T 1,400 ± 0,12 2,116 ± 0,54 1,766 ± 0,33 1,486 ± 0,53 1,456 ± 0,65 S 1,373 ± 0,26 1,766 ± 0,05 1,713 ± 0,15 1,390 ± 0,13 1,233 ± 0,05 M 1,276 ± 0,14 1,536 ± 0,49 1,793 ± 0,14 2,013 ± 0,34 2,023 ± 0,67 K (+) 1,730 ± 0,17 1,896 ± 0,16 2,100 ± 0,13 2,156 ± 0,14 1,770 ± 0,16 K (-) 1,766 ± 0,03 1,500 ± 0,09 1,903 ± 0,08 1,913 ± 0,11 1,833 ± 0,10
Keterangan: T : Media Limbah Cair Tahu, S : Media Limbah Cair Sagu, M : Media Limbah Molases,
K (+) : Kontrol Positif, K(-) : Kontrol Negatif, R : Rata-rata, dan SD : Standar Deviasi
Hasil pertumbuhan yang didapat pada isolat B.  cereus konsorsium  menunjukkan pertumbuhan  yang  bagus,  yaitu  melebihi dari dengan pertumbuhan kontrol positifnya sendiri. Pertumbuhan dari isolat
konsorsium  tidak  jauh  berbeda  dengan yaitu pada media molase yang ditambahkan susu skim.
Pertumbuhan  isolat  bakteri B.  cereus konsorsium  pada  setiap  media  mengalami fase  yang  sama  setiap  waktu  inkubasinya dengan B.  cereus SN7,  hanya  saja  pada isolat  konsorsium ini jumlah  koloni  diawal pengukuran sedikit lebih banyak. Selain itu, pertumbuhan  pada  fase  eksponensial  isolat bakteri ini juga tidak terlalu signifikan jika dibandingkan  dengan B.  cereus SN7, terutama pada media molase yang ditambahkan  susu  skim.  Hal  ini  sesuai dengan  pernyataan  dari  [15]  bahwa hubungan  antar  bakteri  konsorsium  dalam keadaan  media  dengan  nutrient  yang mencukupi  tidak  akan  saling  mengganggu,
tetapi saling bersinergi sehingga menghasilkan  efisiensi  perombakan  yang lebih tinggi selama proses pengolahan, oleh karena itu  pada  penelitian  ini  isolat  bakteri konsrosium  memiliki  jumlah  bakteri  yang lebih  banyak  karna  mampu  bersinergi dengan  baik  satu  sama  lain  sehingga  dapat melakukan  proses  metabolisme  secara efisien dan optimal.
Perbandingan  pertumbuhan  antara isolat bakteri B. cereus SN7 dan konsorsium memiliki perbedaan yang tidak terlalu  signifikan.  Jumlah  koloni  yang paling banyak yaitu pada isolat konsorsium. Hal ini diperkuat oleh pernyataan dari [15], yang  mengatakan  penggunaan  konsorsium mikroba cenderung memberikan hasil yang lebih  baik  dibandingkan  penggunaan  isolat tunggal, karena diharapkan kerja enzim dari tiap jenis mikroba dapat saling melengkapi untuk  dapat  bertahan  hidup  menggunakan sumber  nutrien  yang  tersedia  dalam  media pembawa  tersebut.  Namun  berdasarkan
e-issn: 2716-4608 p-issn: 2655-366X pada hasil pengukuran
tersebut, pertumbuhan  isolat  konsorsium  pada  fase eksponensial tidak terlalu signifikan dibandingkan dengan B. cereus SN7 karena isolat  konsorsium  yang  sudah  memiliki jumlah koloni yang cukup tinggi pada awal inkubasi.
Hasil uji statistik pada pengukuran ini juga  dibagi  menjadi  dua,  yaitu  pada  isolat B. cereus SN7 dan konsorsium
menggunakan  uji  ANOVA  dengan  metode Rancangan  Acak  Lengkap  Faktorial.  Hasil uji  homogenitas  pada  isolat B.  cereus SN7 menunjukkan  bahwa  data  pertumbuhan bakteri  pada  semua  media  dan  setiap konsentrasi  homogen,  dimana  semua  nilai signifikansinya  menunjukkan  nilai  yang lebih  dari  0,05,  begitu  juga  dengan  isolat konsorsium  yang  juga  memiliki  data  yang
homogen  pada  setiap  waktu  inkubasinya sama  seperti  isolat B.  cereus SN7. Berdasarkan  hasil  uji  ANOVA  yang  telah dilakukan,  maka  dapat  dikatakan  bahwa pemberian  konsentrasi  protein  dan  media yang  berbeda  tidak  terlalu  berpengaruh terhadap  pertumbuhan  dari  bakteri  isolat B.cereus SN7 dan konsorisum.

## Pertumbuhan  Biomassa  Sel  Bakteri B.cereus
Hasil  pengkuran  biomassa  bakteri Bacillus  cereus SN  dan  Konsorsium  yang telah  didapat  kemudian  dirata-ratakan  dan ditentukan  standar  deviasinya  berdasarkan 3 ulangan pada setiap perlakuan. Data hasil pengukuran  disajikan  dalam  bentuk  tabel dengan satuan (g/mL)
Tabel 3. Hasil Pengukuran Biomassa Bakteri Bacillus cereus SN7 Media Limbah Waktu Inkubasi (Jam ke-) (g/mL) 0 6 12 18 24 R ± SD R ± SD R ± SD R ± SD R ± SD T 0,972 ± 0,06 0,990 ± 0,05 0,981 ± 0,06 0,977 ± 0,07 0,974 ± 0,07 S 0,985 ± 0,05 1,023 ± 0,05 1,006 ± 0,07 1,000 ± 0,06 0,998 ± 0,06 M 1,008 ± 0,04 1,013 ± 0,05 1,014 ± 0,04 1,013 ± 0,03 1,009 ± 0,04 K (+) 1,002 ± 0,03 1,010 ± 0,03 1,022 ± 0,03 1,035 ± 0,03 1,016 ± 0,03 K (-) 0,980 ± 0,03 0,966 ± 0,03 0,992 ± 0,03 0,985 ± 0,03 0,972 ± 0,04
Tabel 4. Hasil Pengukuran  Biomassa Bakteri Bacillus cereus Konsorsium Media Limbah Waktu Inkubasi (Jam ke-) (g/mL) 0 6 12 18 24 R ± SD R ± SD R ± SD R ± SD R ± SD T 0,975 ± 0,04 0,999 ± 0,01 0,986 ± 0,02 0,979 ± 0,01 0,973 ± 0,03 S 0,995 ± 0,07 1,037 ± 0,04 1,024 ± 0,02 1,007 ± 0,06 1,001 ± 0,05 M 1,007 ± 0,04 1,020 ± 0,02 1,009 ± 0,02 1,011 ± 0,02 1,011 ± 0,02 K (+) 1,009 ± 0,03 1,018 ± 0,06 1,024 ± 0,05 1,025 ± 0,04 1,012 ± 0,04 K (-) 1,005 ± 0,07 0,999 ± 0,07 1,010 ± 0,06 1,010 ± 0,07 1,000 ± 0,07
Keterangan: T : Media Limbah Cair Tahu, S : Media Limbah Cair Sagu, M : Media Limbah Molases,
K (+) : Kontrol Positif, K(-) : Kontrol Negatif, R : Rata-rata, dan SD : Standar Deviasi.
Berdasarkan hasil yang telah didapatkan  dalam  pengukuran  ini  (Tabel  3 dan  4), B.  cereus SN7  dengan  biomassa yang  paling  banyak  yaitu  pada  media  susu ditambah  limbah  cair  sagu. B.  cereus SN7 pada media tersebut menghasilkan
biomassa  yang  paling  besar  yaitu  sebesar
1,023  g/mL  pada  inkubasi  jam  ke-6  dan isolat B. cereus konsorsium yang menghasilkan  biomassa  tertinggi  pada media  limbah  cair  sagu  ditambah  susu dengan nilai 1,037 g/mL, pada inkubasi jam ke-6.
Pada  pengukuran  ini,  isolat  yang memiliki  lebih  banyak  fase  pertumbuhan terdapat  pada  isolat B.  cereus konsorsium di  media  modifikasi  limbah  molase. Pertumbuhan  dengan  fase  eksponensial  ini terjadi  dari  jam  ke-0  sampai  dengan  jam ke-18.  Sedangkan  pada  jam  ke-18  sampai dengan 1jam ke-24 bakteri sudah mengalami  fase  stasioner.  Pada  isolat B.cereus strain  SN7  hanya  mengalami  fase eksponensial  mulai  dari  jam  ke-0  s/d  jam ke-24.
Hasil  pengukuran  biomassa  dibagi menjadi  dua  berdasarkan  isolat  bakterinya. Nilai  biomassa  tertinggi  dari  isolat B. cereus SN7  dan  konsorsium  terdapat  pada media  dan  waktu  yang  sama,  yaitu  pada media  limbah  cair  molase  ditambahkan dengan  susu  skim.  Hal  ini  menunjukkan bahwa kedua isolat bakteri tumbuh optimal pada media yang tepat dengan pertumbuhan  yang  cepat  dengan  jumlah yang  lebih  banyak  dari  kontrol  positifnya. Berdasarkan penelitan yang telah dilakukan oleh [12], media limbah cair dengan nutrien yang  cukup  dalam  kadar  tertentu  dapat menghasilkan  kultur mikroalga  dan  bakteri heterotrofik  yang  mampu  mengkonversi bahan  organik  menjadi  sel-sel  baru  dari limbah  itu  sendiri  sehingga  meningkatkan pertumbuhan biomassa dari kultur mikroba, hal  ini  menujukkan  bahwa  limbah  cair molase  dapat  menjadi  sumber  bahan organik  sebagai  nutrien  bagi  isolat  bakteri B.cereus yang dibuktikan dari pertambahan biomassa  isolat B.  cereus SN7  dan konsorsium yang diikubasi selama 24 jam.
Media dengan nilai biomassa tertinggi pada kedua isolat ini memiliki fase adaptasi ( lag phase ) yang lebih singkat dari pada masing-masing kontrol positifnya. Hal ini  sesuai  dengan  pernyataan  dari  [16], yang menyatakan bahwa media pertumbuhan  bakteri  harus  mengandung nutrisi  yang  sesuai  kebutuhan  bakteri  dan harus  memiliki  kesamaan  dengan  media produksi  sehingga  dapat  meminimalkan waktu adaptasi dari kultur starter,
mengurangi  fase  lag  dan  mengoptimalkan waktu  dari  fase  stasioner.  Berdasarkan pernyataan  tersebut,  maka  dapat  dikatakan bahwa  media  molase  ditambah  susu  skim menjadi media yang optimal diantara media perlakuan  lainnya.  Sama  halnya  dalam pengukuran TPC, pertumbuhan pada pengukuran  ini  kurang  lebih  menunjukkan hasil  dengan  pola  pertumbuhan  yang serupa.
Pertumbuhan  bakteri  pada  media molase dan susu skim, mengalami fase-fase yang  hampir  sama  yaitu  pada  jam  ke  0,  6 dan  12  merupakan  fase  eksponensial sehingga  dapat  dikatakan  fase  adaptasinya cenderung  singkat,  dan  dengan  fase stasioner  yang  cukup  lama  yaitu  pada  jam ke  18  sampai  24.  Sedangkan  pada  media lainnya,  rata-rata  pertumbuhannya  tidak terlalu  bagus  karena  fase  eksponensial  dan stasionernya  yang  lebih  singkat,  dimana pada  waktu  inkubasi  jam  ke  12  sampai  24 sebagian  besar  isolatnya  sudah  mengalami fase kematian.
Hasil uji statistik pada pengukuran ini juga  dibagi  menjadi  dua,  yaitu  pada  isolat B.cereus SN dan konsorsium menggunakan uji  ANOVA  dengan  metode  Rancangan Acak Lengkap Faktorial. Hasil uji homogenitas pada isolat B. cereus SN7 dan Konsorsium  menunjukkan  bahwa  data pertumbuhan  bakteri  pada  semua  media dan  setiap  konsentrasi  homogen  dimana semua  nilai  signifikansinya  menunjukkan nilai  yang  kurang  dari  0,05.  Hasil  uji ANOVA  pada  isolat  SN7  menunjukkan bahwa  tidak  ada  perbedaan  pertumbuhan bakteri  antar  perlakuan  hampir  pada  setiap waktu  inkubasi.  Hal  ini  dibuktikan  dari semua  nilai  signifikansinya  yang  kurang dari 0,05. Hal ini menunjukkan bahwa pada isolat B.  cereus SN7  sumber  protein  dan konsentrasi  yang  berbeda  berpengaruh terhadap pertambahan biomassa.
Pertumbuhan bakteri isolat
menunjukkan hasil dengan nilai signifikansi  kurang  dari  0,05.  Hal  ini menunjukkan bahwa media dan konsentrasi
sumber protein dapat mempengaruhi pertumbuhan  bakteri  pada  hampir  setiap waktu inkubasinya.

## 4.     KESIMPULAN DAN SARAN
Media  pertumbuhan  optimal  untuk bakteri B. cereus strain SN7 dan konsorsium adalah media modifikasi limbah  molase  yang  diinkubasi  selama  24 jam, dibandingkan dengan media
modifikasi  limbah  sagu  dan  limbah  tahu.
Untuk  perbandingan  isolat B.  cereus strain
SN7  masih  memiliki  potensi  pertumbuhan yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan isolat B.  cereus konsorsium  yang  telah diinkubasi selama 24 jam.
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  untuk  melihat  pengaruh  faktor pertumbuhan  lainnya  (pH,  salinitas,  dan komposisi media lainnya) bagi pertumbuhan bakteri B. cereus.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Fridawanti,  A.P.  (2016) Hubungan  antara  asupan  energi,  karbohidrat,  protein,  dan lemak  terhadap  obesitas  sentral  pada  orang  dewasa  di  Desa  Kepuharjo,  Kecamatan Cangkringan, Yogyakarta. Sanata Dharma University.
2. Inuhan,  B.,  S.  Arreneuz,  dan  M.A.  Wibowo.  2016.  Optimasi  Produksi  Protein  Sel Tunggal  (PST)  dari  Bakteri  yang  Terdapat  pada  Gastrointestinal  (GI)  Ikan  Nila ( Oreochromis  niloticus )  dan  Ikan  Kembung  ( Scomber  canagorta ). Jurnal  Kajian Komunikasi. 5(1) : 24 – 28.
3. Mukti,  P.R.,  Feliatra,  dan  I.  Effendi.  (2020).  Growth  of  Bacteria Bacillus  cereus in Liquid Media with Different Protein Sources. Journal of Coastal and Ocean Sciences, 1(1): 35-40
4. Putra, M.H.,  Feliatra, dan I. Effendi. (2021). Optimization of Bacillus cereus Growth in Media with Different Carbon Sources. Asian Journal of Aquatic Sciences , 4(3): 208- 214
5. Nasution, M.N., Feliatra, dan I. Effendi. (2021). Growth Analysis of Single Cell Protein (PST) Bacteria Bacillus cereus using Different Media. Jurnal Perikanan dan Kelautan, 26(1): 47-53
6. Afriza,  D.,  I.  Effendi,  dan  Y.I.  Siregar.  (2019).  Isolation,  Identification,  and Antagonism  Test  og  Heterotrophic  Bacteria  in  Mangrove  Plants  Againts  Pathogenic Bacteria  ( Vibrio  alginolyticus,  Aeromonas  hydrophila, and Pseudomonas sp. Jurnal Perikanan dan Kelautan, 24(1):61-68
7. Ahmad,  S.  W.,  N.  A.  Yanti,  dan  N.  H.  Muhiddin.  (2019).  Pemanfaatan  Limbah  Cair Sagu untuk Memproduksi Selulosa Bakteri. Jurnal Biologi Indonesia . 15 (1) :  33-39
8. Apriyanto, M., R. Novitasari, H. Mardesci, dan B. Rianto. (2021). Pemanfaatan Limbah Cair Pengolahan Sagu menjadi Nata De Sago. Jurnal Masyarakat Mandiri, 5(4): 1234- 1242
9. Punjungsari,  T.N.  (2017).  Pengaruh  Molase  terhadap  Aktivitas  Konsorsium  Bakteri Pereduksi Sulfat dalam Mereduksi Sulfat (SO 4 ). Jurnal Viabel Pertanian, 11(2): 39-49 10. Sally., Y.P. Budianto, M.W. Hakim, W.E. Kiyat. (2019). Potensi Pemanfaatan Limbah Cair  Tahu  menjadi  Biogas  untuk  Skala  Industri  Rumah  Tangga  di  Provinsi  Banten. Jurnal Agrointek, 13(1)
11. Feliatra., Y. Fitria dan Nursyirwani. (2012). Antagonis Bakteri Probiotik yang Diisolasi dari  Usus  dan  Lambung  Ikan  Kerapu  Bebek    ( Cromileptes  altivelis )  terhadap  Bakteri Patogen. Jurnal Perikanan dan  Kelautan . 17 (1) : 16-25.
12. Septiani,  W.D.,  A.  Slamet,  dan  J.  Hermana.  (2014).  Pengaruh  Konsentrasi  Substrat terhadap  Laju  Pertumbuhan  Alga  dan  Bakteri  Heterotropik. Jurnal  Teknik  POMITS . 3(2): 98 – 103
13. Helferich,  W.  and  D.C.,  Westhoff,  1980. All  Abaout  Yogurt .  Prentice-Hall  Inc, Westport, Conecticut.
14. Nengsih,  I.  A.,  Feliatra, F.,  dan Effendi, I. (2020).  Growth of Bacteria Bacillus cereus in  Liquid  Mediums  with  Different  Carbohydrate  Sources. Journal  of  Coastal  and Ocean Sciences , 1(1):68-73
15. Asri,  A.C.  dan  E.  Zulaika.  (2016).  Sinergisme  Antar  Isolat  Azotobacter  yang  Di konsorsiumkan. Jurnal Sains dan Seni ITS . 5(2)
16. Yeni., A. Meryandini dan T.C. Sunarti. (2016). Penggunaan Substrat Whey Tahu untuk Produksi  Biomassa  oleh Pediococcus  Pentosaceus E.1222. Jurnal  Teknologi  Industri Pertanian. 26 (3) : 284-293