Efek Ekstrak Daun Kitolod ( Isotoma longiflora ) Terhadap Neovaskularisasi Kornea Tikus Wistar Model Trauma Kimia
The Effect of Isotoma longiflora Leaves Extract to The Cornea Neovascularization of Wistar Rats Chemical Trauma Model
Hasbi Maulana Arsyad 1 , Cicih Komariah 2 , Muhamad Hasan 3
1 Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran Universitas Jember
2 Laboratorium Farmakologi, Fakultas Kedokteran Universitas Jember
3 Laboratorium Anatomi, Fakultas Kedokteran Universitas Jember Jalan Kalimantan No.37 Kampus Tegalboto, Jember 68121 Alamat email korespondensi arsyadhasbi13@gmail.com

## ABSTRAK
Trauma  kimia  mata  dapat  disebabkan  oleh  pestisida.  Di  Indonesia,  78,9%  petani  mengalami  keluhan  pada  mata akibat paparan pestisida.  Kejadian trauma  kimia  basa pada  mata  dapat menyebabkan cornea neovascularization (CNV).  Trauma  kimia  basa  menyebabkan  inflamasi  hebat  sehingga  terbentuk  vaskularisasi    pada  kornea  yang seharusnya  dalam  keadaan  avaskular.  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  efek  ekstrak  daun kitolod  ( Isotoma  longiflora )  terhadap  neovaskularisasi  kornea  tikus  wistar  model  trauma  kimia.  Penelitian  ini menggunakan metode true experimental design dengan rancangan post-test only controlled group design . Sampel penelitian ini tikus wistar jantan ( Rattus norvegicus ) sebanyak 30 ekor yang dibagi menjadi enam kelompok, yaitu 1  kelompok  kontrol  positif  ( dexamethasone 0,1%),  1  kelompok  kontrol  negatif  (DMSO  0,1%),  dan  4  kelompok perlakuan ekstrak  daun kitolod (0,25 mg/ml; 0,5  mg/ml;  1 mg/ml;  2 mg/ml). Hasil uji Shapiro-Wilk dan Levene’s test menunjukkan nilai p>0,05 yang artinya data terdistribusi normal dan memiliki varian yang sama. Hasil uji One Way ANOVA  didapatkan  perbedaan  signifikan  antarkelompok  pada  hari  ke-7  (p=0,001).  Hasil  uji Post  Hoc LSD didapatkan kelompok P3 dan P4 berbeda signifikan dengan kelompok kontrol negatif, P1 dan P2. Kelompok P3 dan P4 dengan dosis ekstrak daun kitolod 1 mg/ml dan 2 mg/ml mampu menghambat neovaskularisasi kornea.
Kata kunci : ekstrak daun kitolod, CNV, trauma kimia mata

## ABSTRACT
Eye  chemical  trauma  was  an  eye  trauma  caused  by  a  substance  with  a  pH<7  (acid)  and  pH>7  (alkali).  Chemical trauma can be caused by pesticides. In Indonesia, 78.9% of farmers had eye complaints due to pesticides exposure. The  occurrence  of  alkali  chemical  trauma  of  eye  could  cause  cornea  neovascularization  (CNV).  Alkali  chemical trauma caused intense inflammation resulting a vascularization of the cornea that was supposed to be avascular. The  purpose  of  this  study  was  to  find  out  the  effect  of  Isotoma  longiflora  leaves  extract  the  cornea neovascularization of wistar rats chemical trauma model. This research used true experimental design method with post-test  only  controlled  group  design.  The  sample  of  this  study  were  30  male  wistar  rats  (Rattus  norvegicus) divided into six groups, 1 positive control group (dexamethasone 0.1%), 1  negative control group (DMSO 0,1%), and  4  treatment  groups  of  Isotoma  longiflora  leaves  extract  (0.25  mg/ml,  0.5  mg/ml,  1  mg/ml,  2  mg/ml).  The result of Shapiro-Wilk and Levene's test showed that p>0.05 that means the data was normally distributed and has the  same  variant.  One  Way  ANOVA  test  results  obtained  significant  differences  between  groups  on  the  7th  day (p=0.001).  The  result  of  Post  Hoc  LSD  test  showed  that  group  P3  and  P4  were  significantly  different  to  negative control, P1 and P2 groups. P3 and P4 groups with 1 mg/ml and 2 mg/ml Isotoma longiflora leaves extract could inhibit cornea neovascularization.
Keywords: Isotoma longiflora leaves extract, CNV, eye chemical trauma

## Pendahuluan
Trauma  kimia  pada  mata  disebabkan  oleh  bahan- bahan  kimia  yang  tersemprot  atau  terpercik  pada wajah  yang  tidak  menggunakan  alat  perlindungan diri (APD). Di Amerika Serikat, sekitar 2,4 juta trauma okuler  setiap  tahunnya,  dimana  sebanyak  20.000- 68.000  orang  mengalami  trauma  yang  mengancam penglihatan dan 40.000 orang kehilangan penglihatan.  Trauma  kimia  pada  mata  meliputi hampir  26,5%  dari  seluruh  trauma  pada  mata  dan lebih  dari  23%  pasien  mengalami  kecacatan penglihatan permanen (Randleman, 2010). Berdasarkan  jenis  zat  kimia  yang  mengakibatkan trauma, trauma kimia pada mata dibedakan menjadi 2,  yaitu  trauma  kimia  asam  dan  trauma  kimia  basa. Angka  kejadian  trauma  kimia  basa  lebih  tinggi daripada  angka  kejadian  trauma  kimia  asam  akibat kecelakaan kerja (Schrage et al , 2011).
Trauma  kimia  dapat  disebabkan  oleh  pestisida.  Di Indonesia,  78,9%  petani  mengalami  keluhan  mata akibat  paparan  pestisida  (Maranata,  2014).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  trauma  kimia  mata  akibat pestisida  sangat  tinggi  karena  penggunaan  APD petani  yang  masih  rendah.  Trauma  kimia  basa menyebabkan  inflamasi  hebat  sehingga  terbentuk vaskularisasi  (pembuluh  darah)  pada  kornea  yang seharusnya  dalam  keadaan  avaskular  yang  disebut cornea  neovascularization (CNV).  (Shakiba et  al , 2009).
Tanaman  kitolod  yang  terbukti  dapat  digunakan sebagai  obat  tradisional,  antara  lain  untuk  penyakit asma,  bronkhitis,  radang  tenggorokan,  luka,  obat anti  kanker,  obat  mata,  anti-neoplastik,  anti- inflamasi,  hemostasis,  analgesik  (Hariana,  2013). Daun  kitolod  memiliki  kandungan  alkaloid,  saponin, flavonoida,  dan  polifenol  (Badan  Penelitian  dan Pengembangan Kesehatan, 1994). Kandungan flavonoida  dan  polifenol  yang  terdapat  pada tanaman  kitolod  tersebut  dapat  berperan  sebagai anti-inflamasi sehingga dapat menurunkan neovaskularisasi  pada  kornea  yang  terbentuk  akibat paparan  zat  kimia  basa  pada  mata.  Tujuan  dari penelitian ini adalah untuk  mengetahui efek  ekstrak daun kitolod ( Isotoma longiflora ) terhadap neovaskularisasi  kornea  tikus  wistar  model  trauma kimia.

## Metode Penelitian
Sampel  penelitian  ini  ialah  tikus  putih  jantan  galur wistar ( Rattus norvegicus ). Jumlah sampel penelitian
ini  sebanyak  30  ekor  yang  dibagi  menjadi  enam kelompok masing-masing 4 ekor tikus uji dan 1 ekor tikus  cadangan.  Kelompok  pertama  merupakan kelompok  positif  yang  diberikan  trauma  kimia  mata pestisida  Rotraz  200EC  dan  terapi dexamethasone , kelompok  kedua  merupakan  kontrol  negatif diberikan trauma kimia mata pestisida Rotraz 200EC dan  DMSO  0,1%,  kelompok  P1  sampai  P4  diberikan trauma  kimia  mata  pestisida  Rotraz  200EC  dan ekstrak  daun  kitolod  dengan  dosis  berturut-turut 0,25 mg/ml; 0,5 mg/ml; 1 mg/ml; dan 2 mg/ml.
Sebelum  perlakuan,  tikus  diaklimatisasi  selama  7 hari.  Tikus  dianastesi  intraperitoneal  dengan Midazolam  dan  Pantocain  0,5%  topikal.  Permukaan kornea  dikeringkan  terlebih  dahulu  menggunakan cotton  bud .  Pada  sentral  kornea  mata  kanan  tikus ditempel dengan kertas filter dengan diameter 1 mm yang telah direndam dalam larutan insektisida Rotraz 200EC  selama  2  menit.  Kornea  tikus  kemudian dibilas  dengan  aquadest  selama  2  menit  hingga  pH netral  (Hepsen,  1998).  Perlakuan  diberikan  segera setelah tikus diinduksi trauma kimia yaitu 1 tetes dan diberikan  kembali  dalam  1  jam  kemudian.  Setelah itu,  perlakuan  dilakukan  secara  rutin  dengan frekuensi  4  kali  1  tetes  per  hari  selama  7  hari menggunakan  botol  tetes  mata  komersial.  Rincian waktu  pemberian  perlakuan  setiap  harinya,  yaitu pada  pukul  08.00;  11.30;  15.00;  dan  18.30  pada sentral mata kanan tikus.
Pengukuran  luas  area  neovaskularisasi  dilakukan pada  hari  terakhir  perlakuan  atau  hari  ke  7 pascatrauma kimia. Tikus dianestesi dengan metode yg sama saat dilakukan induksi trauma kimia. Jari-jari kornea  dan  panjang  neovaskularisasi  diukur menggunakan Castroviejo  caliper dalam  satuan milimeter  dengan  bantuan loop .  Luas  area neovaskularisasi  dihitung  menggunakan  rumus C /12 x  π  x  [ r 2 -(r-L) 2 ]  dan  dinyatakan  dalam  satuan  mm 2 . Data  yang  didapat  kemudian  dianalisis  dengan  uji normalitas Shapiro-wilk, uji  homogenitas Levene test , uji One Way Anova , dan uji Post-Hoc LSD untuk mengetahui kelompok yang berbeda signifikan.

## Hasil Penelitian
Hasil  gambaran  kornea  hewan  coba  yang  diberi perlakuan  trauma  kimia  mata  menggunakan pestisida menunjukkan neovaskularisasi kornea pada tiap  kelompok  yang  didokumentasikan  dengan perbesaran 30x dan dapat dilihat pada Gambar 1.
Pre Trauma Pasca Trauma Hari 1 Hari 3 Hari 5 Hari 7 Kontrol (+)
Kontrol (-) (P1) 0,25 mg/mL
(P2)
0,5 mg/mL
(P3)
1 mg/mL
(P4)
2 mg/mL
Gambar 1. Neovaskularisasi pada kornea
Hasil gambaran masing-masing kelompok didapatkan  pembentukan  neovaskularisasi  pada kornea  mata  tikus.  Neovaskularisasi  kornea  dapat terbentuk  karena  trauma  kimia  pada  mata  yang mengakibatkkan inflamasi hebat yang akan mengakibatkan ketidakseimbangan faktor angiogenik  dan  faktor  antiangiogenik  pada  kornea sehingga terjadi metabolisme asam arakhidonat dan siklooksigenase  yang  menghasilkan  prostaglandin (PG)  yang  berperan  penting  dalam  neovaskularisasi kornea  (Heynes et  al ,  1989).  Kelompok  P4  dengan dosis  ekstrak  daun  kitolod  tertinggi  (2mg/ml) merupakan kelompok dengan pertumbuhan pembentukan neovaskularisasi paling lambat, sedangkan  kelompok  P1  dengan  dosis  ekstrak  daun kitolod terendah (0,25 mg/ml) merupakan kelompok dengan pembentukan neovaskularisasi paling cepat.
Hasil  luas  neovaskularisasi  kornea  hari  ke  7 didapatkan  data  rata-rata±standar  deviasi  pada masing-masing  kelompok  dan  hari  yang  disajikan dalam Tabel 1.
Tabel  1.  Hasil  rata-rata  luas  dan  standar  deviasi neovaskularisasi Kelompok Rata-rata ± Standar Deviasi Kontrol + 17,61±1,15 Kontrol – 20,66±1,18 P1 20,59±2,05 P2 20,66±1,08 P3 16,50±1,80 P4 16,43±1,40
Hasil  penelitian  yang  telah  didapatkan  selanjutnya dianalisis dengan tingkat kepercayaan 95% (α=0,05). Rata-rata  luas  neovaskularisasi  kornea  dianalisis
persebaran data dan homogenitasnya menggunakan uji Shapiro-Wilk dan Levene’s test yang dapat dilihat pada Tabel 2 dan 3.
Tabel 2. Tes normalitas Shapiro-Wilk Kelompok Shapiro-Wilk Statistic Df Sig. Kontrol + ,831 4 ,170 Kontrol – ,987 4 ,943 P1 ,837 4 ,188 P2 ,791 4 ,087 P3 ,826 4 ,157 P4 ,979 4 ,898 *Data terdistribusi normal p>0,05 Tabel 3. Tes homogenitas Levene Levene Statistic df1 df2 Sig. ,9480 5 18 ,475 *Data homogen p>0,05
Pada  hasil  uji Shapiro-Wilk dan Levene’s  test didapatkan  p>0,05  yang  artinya  data  terdistribusi normal dan homogen. Selanjutnya, dilakukan uji One Way  Anova untuk  mengetahui  adanya  perbedaan yang  signifikan  antar  kelompok  perlakuan.  Hasil  uji One Way Anova dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Hasil uji One Way Anova Sum of Squares df Mean Square F Sig. Antar kelompok 89,756 5 17,951 8,065 ,000 Dalam kelompok 40,067 18 2,226 Total 129,823 23 *Perbedaan rata-rata signifikan p<0,05
Hasil uji One Way Anova didapatkan nilai signifikansi sebesar p=0,000 (p<0,05) yang menunjukkan bahwa terdapat minimal dua kelompok yang memiliki rata- rata luas neovaskularisasi yang berbeda signifikan.
Hasil uji analisis Pos Hoc LSD didapatkan data  antar kelompok  signifikan  (p<0,05).  Pada  kontrol  positif didapatkan  perbedaan  yang  signifikan  dengan kontrol negatif, kelompok P1 dan kelompok P2. Pada kelompok  P3  dan  P4  didapatkan  perbedaan  yang signifikan  dengan  kontrol  negatif,  kelompok  P1  dan kelompok P2. Pada kontrol positif dan kelompok P3
serta  kelompok  P4  tidak  didapatkan  perbedaan signifikan.

## Pembahasan
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  efek ekstrak daun kitolod dalam menghambat neovaskularisasi  kornea  akibat  trauma  kimia  mata oleh  pestisida  Rotraz©  200EC  dengan  bahan  aktif amitraz.  Dosis  ekstrak  daun  kitolod  yang  diberikan yaitu 0,25 mg/ml; 0,5 mg/ml; 1 mg/ml; dan 2 mg/ml. Kontrol  negatif  diberikan  DMSO  0,1%  dan  kontrol positif  diberikan  tetes  mata Dexamethasone 0,1%. Ekstrak  daun  kitolod  dijadikan  sediaan  tetes  mata dan  diberikan  pada  mata  kanan  sebanyak  1  tetes sebanyak 4 kali sehari.
Pestisida  Rotraz©  200EC  digunakan  sebagai penyebab  trauma  kimia  basa  pada  penelitian  ini. Pestisida  Rotraz  memiliki  pH  9-10  dimana  pestisida tersebut  bersifat  basa.  Substansi  yang  bersifat  basa dapat  menyebabkan  terjadinya  neovaskularisasi kornea, dimana terbentuknya pembuluh darah baru merupakan  salah  satu  komplikasi  yang  diakibatkan karena  adanya  kontak  zat  kimia  yang  bersifat  basa pada  kornea  (Fish  &  Davidson,  2010).    Terjadinya inflamasi  karena  kontak  zat  kimia  basa  dengan permukaan kornea mengakibatkan terjadinya metabolisme asam arachidonat yang akan menghasilkan  prostaglandin  tipe  E  dan  leukotrien yang berperan dalam proses neovaskularisasi kornea (Rochels, 1984).
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  efek ekstrak daun kitolod dalam menghambat neovaskularisasi  kornea  akibat  trauma  kimia  akibat pestisida  Rotraz©  200EC.  Didapatkan  luas  rata-rata neovaskularisasi  pada  kelompok  negatif  20,66±1,18 mm 2 sedangkan  pada  kelompok  positif  didapatkan luas  rata-rata  neovaskularisasi  kornea  sebesar 17,61±1,15 mm 2 . Hasil rata-rata luas neovaskularisasi  kornea  kelompok  kontrol  positif memiliki  nilai  yang  lebih  rendah  dibandingkan dengan kelompok  kontrol negatif dan menunjukkan perbedaan  yang  signifikan.  Hal  ini  menunjukkan bahwa pemberian dexamethasone 0,1% memberikan  efek  menghambat  neovaskularisasi korena akibat trauma kimia pestisida Rotraz© 200EC dengan bahan aktif amitraz.
Dexamethasone 0,1% sebagai kortikosteroid terbukti dapat  menghambat  neovaskularisasi  pada  kornea secara  signifikan.  Mekanisme  steroid  dalam menghambat neovaskularisasi yaitu dengan
menghambat  metabolisme  asam  arachidonat. Metabolisme  asam  arachidonat  menghasilkan prostaglandin tipe E pada siklus siklooksigenase dan leukotrin  pada  siklus  lipooksigenase  (Haynes et  al , 1989).  Prostaglandin  berperan  dalam  memicu pembentukan  neovaskularisasi  kornea  dengan mekanisme  vasodilatasi,  peningkatan  permeabilitas vaskular,  serta  pembebasan  histamin.  Leukotrin berperan  dalam  memicu  kemotaksis  dari  leukosit yang berperan memicu terbentuknya neovaskularisasi kornea (Smith et al , 1983).
Kelompok P1 memiliki
rata-rata luas neovaskularisasi sebesar 20,59±2,05 mm 2 , kelompok P2  sebesar  20,66±1,08  mm 2 ,  kelompok  P3  sebesar 16,50±1,80  mm 2 ,  dan  kelompok  P4  sebesar 16,43±1,40 mm 2 . Pada kelompok P1 dan P2 memiliki luas neovaskularisasi yang hampir sama luas dengan kontrol  negatif,  hal  ini  ditunjukkan  dengan  tidak didapatkannya  perbedaan  yang  signifikan  antara kelompok  kontrol  negatif  dengan  kelompok  P1  dan P2.  Pada  kelompok  P3  dan  P4  dengan  kelompok kontrol negatif, didapatkan rata-rata luas neovaskularisasi  yang  terbentuk  lebih  rendah dibandingkan pada  kontrol negatif  serta didapatkan perbedaan  yang  signifikan.  Hal  ini  menunjukkan pada dosis 0,25 mg/ml dan 0,5 mg/ml ekstrak daun kitolod belum memberikan efek dalam menghambat neovaskularisasi, sedangkan pada dosis 1 mg/ml dan 2  mg/ml  ekstrak  daun  kitolod  terdapat  efek  dalam menghambat neovaskularisasi kornea akibat trauma kimia  mata  pestisida  Rotraz©  200EC  dengan  bahan aktif amitraz.
Pada  kelompok  perlakuan,  antara  kelompok  P1  dan P2 dengan kelompok P3 dan P4 memiliki perbedaan signifikan  nilai  rata-rata  luas  neovaskularisasi kornea. Kelompok P3 dan P4 memiliki nilai rata-rata luas  neovaskularisasi  lebih  rendah  dibandingkan kelompok  P1  dan  P2.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa semakin  besar  dosis  ekstrak  daun  kitolod,  luas neovaskularisasi yang terbentuk semakin rendah.
Pada kelompok P3 dan P4 didapatkan rata-rata luas neovaskularisasi  yang  lebih  rendah  dibandingkan kontrol  positif,  akan  tetapi  tidak  didapatkan perbedaan  yang  signifikan.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  dosis  ekstrak  daun  kitolod  dengan  dosis  1 mg/ml  dan  2  mg/ml  mempunyai  efek  yang  sama dengan  pemberian dexamethasone 0,1%  dalam menghambat neovaskularisasi kornea akibat trauma kimia  Rotraz©  200EC  dengan  bahan  aktif  amitraz karena kandungan-kandungan senyawa yang terdapat  dalam  daun  kitolod  yaitu  flavonoid,
alkaloid,  saponin,  dan  polifenol  (Badan  Penelitian dan  Pengembangan  Kesehatan,  1994).  Kandungan flavonoid  dapat  menghambat  enzim  oksidatif  yaitu siklooksigenase (COX) yang mengkatalis pembentukan  prostaglandin  (PG)  (Hidayati et  al , 2008). Senyawa flavonoid juga mampu menghambat pelepasan  asam  arakhidonat  dan  sudah  terbukti memiliki  efek  antiinflamasi  dengan  menghambat siklooksigenase  dan  lipooksigenase  (Mirzoeva  & Calder, 1996). Senyawa alkaloid dapat menghambat angiogenesis secara selektif. Senyawa saponin dapat menghambat dehidrogenase prostaglandin dan juga dapat menghambat angiogenesis (Yanti, 2016), serta senyawa  polifenol  berperan  sebagai  antiinflamasi dan  antiangiogenik.  Senyawa-senyawa  tersebut berperan  dalam  menghambat  neovaskularisasi kornea akibat trauma kimia pestisida Rotraz© 200EC dengan bahan aktif amitraz.
Keterbatasan  dalam  penelitian  ini  adalah  hanya melakukan  pengukuran  luas  neovaskularisasi  pada kornea  tikus  wistar  tanpa  melakukan  pengukuran kadar  prostaglandin  (PG),  kadar  faktor-faktor angiogenik  dan  anti-angiogenik  yang  juga  berperan dalam neovaskularisasi kornea. Penggunaan alat-alat penunjang  seperti  slit  lamp  akan  membuat penelitian ini menjadi lebih baik, namun tidak dapat diterapkan  pada  penelitian  ini  karena  keterbatasan biaya.

## Kesimpulan
Kesimpulan dari penelitian ini adalah  ekstrak etanol daun  kitolod  ( Isotoma  longiflora )  memiliki  efek menghambat neovaskularisasi kornea setelah pemberian selama 7 hari pada mata yang mengalami trauma kimia akibat pestisida Rotraz© 200EC.

## Saran
Perlu penelitian lebih lanjut mengenai penghitungan kadar  prostaglandin  (PG),  faktor-faktor  angiogenik dan  anti  angiogenik  yang  berperan  dalam neovaskularisasi  kornea  akibat  trauma  kimia.  Alat- alat  pendukung  penelitian  seperti  slit  lamp  akan sangat memudahkan penghitungan luas neovaskularisasi. Pada penelitian selanjutnya diharapkan  dapat  menentukan  dosis  efektif  tetes mata  ekstrak  daun  kitolod  pada  trauma  kimia  mata dan  diharapkan  dapat  menggunakan  hewan  coba kelinci  karena  kornea  mata  kelinci  yang  lebih  luas dibandingkan tikus.

## Daftar Pustaka
Bhanot,  A.,  R.  Sharma,  dan    M.  N.    Noolvi.  2011. Natural sources as potential anti-cancer agents:
A review. International Journal of Phytomedicine 3 (1): 09–26.
Hepsen,  I.F.,  E.  Hamdi,  O.  Cekic.  1998.  Topically
Applied  Water  Extract  of  Propolis  to  Suppress Corneal Neovascularization in Rabbits.
Opthalmic Res 31;426-431.
Heynes, W.L., A.D. Proia, dan G.K. Klintworth. 1989. Effect  of  inhibitors  of  arachidonic  acid metabolism  on  corneal  neovascularization  in the  rat. Invest  Ophthalmol  Vis  Sci .  30:1588– 1593.
Hidayati,  N.A.,  L.  Shanti,  dan  D.S.  Ahmad.  2008. Kandungan  kimia  dan  uji  antiinflamasi  ekstrak etanol Lantana  camara L.  pada  tikus  putih ( Rattus  norvegicus L.)  jantan. Bioteknologi 5(1):10-17
Hutapea,  Johnny  R,  dkk.  1994. Inventaris  Tanaman
Obat  Indonesia .  Jilid  I  .  Badan  Penelitian  dan Pengembangan Kesehatan. Departemen
Kesehatan RI.
Kecova, H., Z. Hlinomazova, P. Rauer, dan  A. Necas. 2004.  Corneal  Inflammatory  Diseases  –
Infectious  Keratitis  in  Dogs. Acta  Vet  BRNO 73:359-63.
Maranata,  R.,  I.  Chahaya,  dan  D.N.  Santi.  2014. Perilaku  Petani  dalam  Penggunaan  Pestisida dan  Alat  Pelindung  Diri  (APD)  Serta  Keluhan Kesehatan Petani  Di Desa Suka Julu Kecamatan Barus  Jahe  Kabupaten  Karo  Tahun  2014. Naskah Publikasi USU .
Mirzoeva,  O.K., dan P.C. Calder. 1996.  The  effect of propolis  and  its  components  on  eicosanoid production  during  the  inflammatory  response. Prostaglandins  Leukot  Essent  Fatty  Acids . 55:441–449.
Randleman,  JB.  2010.  Chemial  eye  burn  overview . http://www.emedicine.com.  [Diakses  tanggal 28 Agustus 2017].
Schrage  et  al.  2011. Chemical  Ocular  Burns:  New Understanding and Treatment . London: Springer.
Shakiba, Y., K. Mansouri, D. Arshadi, dan N. Rezaeni. 2009.  Corneal  Neovascularization:  Molecular Event and Therapeutic Option . Inflammation &
Allergy Drug Discovery 3(3):221.