DOI : 10.35311/jmpi.v9i2.386
Isolasi  dan  Uji  Aktivitas  Bakteri  Asam  Laktat  dari  Produk  Fermentasi Kombucha Teh Dalam Menghambat Bakteri Escherichia coli, Staphylococcus aureus , dan Salmonella thypi
Ismail  Ismail 1,2 *,  Fhahri  Mubarak 1,2 ,  Restu  Islamia  Rasyak 1,2 ,  Rusli 3 ,  Fitriana 3 ,  Harlyanti Muthma'innah Mashar 4
1 Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar
2 Program Studi Sarjana Farmasi, Universitas Almarisah Madani
3 Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia
4 Jurusan Gizi, Poltekkes Kemenkes Palangka Raya

## ABSTRAK
Bakteri  asam  laktat  atau  juga  disebut  mikroorganisme  probiotik merupakan  bakteri yang memiliki  kemampuan menghasilkan  asam  organik.  Bakteri  asam  laktat  yang terkandung pada kombucha teh diketahui mempunyai kemampuan dalam menghambat bakteri  patogen  seperti Eschericia  coli,  Staphylococcus  aureus, dan Salmonella thypi. Tujuan dari penelitian ini yaitu untuk mengetahui bagaimana bakteri asam laktat yang dihasilkan dari fermentasi kombucha teh dalam menghambat akivitas bakteri Eschericia coli, Staphylococcus aureus, dan Salmonella thypi dengan metode in vitro. Prosedur penelitian ini dilakukan dalam beberapa tahapan yaitu preparasi teh kombucha, isolasi dan seleksi bakteri asam laktat, identifikasi bakteri asam laktat dengan metode pewarnaan Gram, uji biokimia dengan  metode  uji  katalase  dan  uji  motilitas,  dan  uji  aktivitas  antibakteri menggunakan kertas  cakram.  Dari  hasil  penelitian  dengan  karakteristik  mikrosopik pewarnaan Gram menunjukkan hasil Gram positif,dan karekteristik makroskopik pada uji katalase negatif, uji motilitas negatif, dan daya hambat isolat 5 dan 6 memiliki kemampuan dalam  menghambat  bakteri  uji.  Diameter  penghambatan  yang  didapatkan  yaitu  pada Staphylococcus  aureus diameter  penghambatan  yaitu  7,1±0,52  mm  dan  7,65±0,38  mm,  pada Escherichia  coli diameter  penghambatan  yaitu  7,86±0,08  mm  dan  6,36±0,29  mm  dan  pada Salmonella thypi diameter penghambatan yaitu 6,43±0,06 mm dan 7,13±0,08 mm. Isolat yang didapatkan dari kombucha teh yaitu sebanyak 6 isolat, dan merupakan bakteri Gram positif, bentuk sel bulat, berwarna putih tulang, dengan tepi entire dan elevasi flat, yang diketahui memiliki  potensi  dalam  menghambat  bakteri Eschericia  coli,  Staphylococcus  aureus, dan Salmonella thypi.
Kata Kunci :  Bakteri  Asam  Laktat, Eschericia  coli, Kombucha  Teh, Salmonella  thypi , Staphylococcus aureus

## ABSTRACT
Lactic  acid  bacteria  also  called  probiotic  microorganisms  are  bacteria  that  can  produce organic  acids.  The  lactic  acid  bacteria  contained  in  kombucha  tea  are  known  to  have  the ability  to  inhibit  pathogenic  bacteria  such  as Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus ,  and Salmonella  thypi .  This  research  aims  to  find  out  how  lactic  acid  bacteria  produced  from fermented  kombucha  tea  inhibit  the  activity  of Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus, and Salmonella thypi bacteria using in vitro methods. This research procedure was carried out in several  stages,  namely  preparation  of  kombucha  tea,  isolation  and  selection  of  lactic  acid bacteria, identification of lactic acid bacteria using the Gram staining method, biochemical testing using the catalase test method and motility test, and antibacterial activity testing using paper  discs.  From  the  research  results,  the  microscopic  characteristics  of  Gram  staining showed  positive  Gram  results,  the  macroscopic  characteristics  of  the  catalase  test  were negative, the motility test was negative, and the inhibitory power of isolates 5 and 6 could inhibit the test bacteria. The inhibition diameters obtained in Staphylococcus aureus inhibition diameters were 7.1 ± 0.52 mm and 7.65 ± 0.38 mm, in Escherichia coli the inhibition diameters were 7.86 ± 0.08 mm and 6.36 ± 0. 29 mm and in Salmonella typhi the diameter of inhibition is 6.43 ± 0.06 mm and 7.13 ± 0.08 mm. The isolates obtained from kombucha tea were 6 isolates and were Gram-positive bacteria, round cell shape, bone white, with entire edges and flat elevations,  which  are  known  to  have  the  potential  to  inhibit  the  bacteria Escherichia  coli, Staphylococcus aureus, and Salmonella thypi.
Keywords :   Lactic  Acid  Bacteria, Eschericia  coli ,  Kombucha  Tea, Salmonella  thypi, Staphylococcus aureus
Sitasi: Ismail, I., Mubarak, F., Rasyak, R. I., Rusli, Fitriana & Mashar, H. M. (2023). Isolasi dan Uji Aktivitas Bakteri Asam Laktat dari Produk Fermentasi Kombucha Teh Dalam Menghambat Bakteri Escherichia coli , Staphylococcus aureus , dan Salmonella thypi . Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, 9(2), 335-344. https://doi.org/10.35311/jmpi. v9i2.386
Submitted: 14 September 2023 Accepted: 15 November 2023 Published: 24 Desember 2023
*Penulis Korespondensi: Ismail Ismail Email: ismail.farm27@gmail.com
Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License

## PENDAHULUAN
Bakteri asam laktat merupakan kelompok  bakteri  yang  diketahui  dapat membantu  menyehatkan  saluran  cerna (Fahmi  et  al.,  2022) .  Bakteri  asam  laktat termasuk golongan bakteri Gram positif yang dapat memproduksi asam lakat, berkembang biak  ecara  aerob  maupun  anaerob,  dan memiliki  morfologi  berbentuk  batang  atau bulat tanpa spora (Sitorus et al., 2021). Bakteri asam  laktat  atau  dikenal  mikroorganisme probiotik,  mempunyai  kemampuan  untuk memproduksi  asam  organik,  yang  mampu mengurangi  pH  saluran  pencernaan  serta mencegah  pertumbuhan  bakteri  patogen  di dalamnya (Utomo et al., 2022).
Hasil akhir dari fermentasi karbohidrat  adalah  asam  laktat,  yang diproduksi  oleh  bakteri  asam  laktat.  Bakteri asam laktat merupakan bakteri Gram positif, dengan bentuk bulat atau batang tanpa spora. Bakteri ini juga toleran terhadap mikroaerotoleran, asidotoleran, dan memiliki katalase  negatif.  Selain  itu,  bakteri  ini berperan dalam membantu proses fermentasi, juga mempunyai peran penting pada saluran pencernaan karena kompetitif dalam menghilangkan  bakteri  patogen  penyebab dari timbulnya suatu penyakit, yang memberikan  dampak  positif  bagi  kesehatan (Detha, 2019).
Kombucha  teh  merupakan  minuman fermentasi yang memiliki kandungan bakteri asam laktat. Berdasarkan penelitian (Sitorus et al.,  2021)  menemukan  bahwa  kombucha bunga telang bersifat antibakteri Gram positif, yang dapat digunakan untuk mengembangkan  produk  bioteknologi  baru. Selain itu pada penelitian (Riadi et al., 2022). Pada manusia saluran pencernaan terdiri dari berbagai  jenis  mikroba  yang  biasa  disebut dengan  mikrobiota  usus.  Telah  banyak penelitian yang membuktikan bahwa interaksi  antara  mikrobiota  usus  dan  organ tubuh  manusia  lainnya  seperti  paru-paru kulit,  bahkan  otak,  merupakan  faktor  utama dalam pathogenesis (Gebrayel et al., 2022).
Symbiotic  Culture  Of  Bactery  and  Yeast (SCOBY)  merupakan  sebutan  untuk  kultur simbiosis  kombucha  yang  biasanya  terdapat pada  bagian  bawah  larutan  teh  kombucha. Kultur ini memiliki tampilan seperti pancake putih  dengan  tekstur  kenyal  dan  bentuk seperti  gel.  Kultur  kombucha  terbuat  dari selulosa  yang  berasal  dari  bakteri  yang memetabolisme asam asetat, kultur kombucha  teh  menghasilkan  asam  amino, vitamin C, vitamin B, dan enzim yang berasal dari  gula.  Selain  itu,  kultur  kombucha memiliki  kemampuan  untuk  menghasilkan mikroorganisme  golongan  probiotik  yang bermanfaat  untuk  Kesehatan  (Firdaus  et  al., 2020).
Bakteri Staphylococcus aureus
merupakan Gram positif yang dapat menyebabkan  terjadinya  suatu  infeksi  yang dapat  ditandai  dengan  munculnya  abses bernanah  dan  kerusakan  jaringan  (Kulla  & Herrani,  2022).  Bakteri Staphylocuccos  aureus merupakan jenis bakteri yang dapat ditemukan pada manusia serta menyebabkan penyakit  kulit  dan  keracunan  makanan (Rollando,  2019).  Golongan Enterobacteriacea e terdiri  dari  bakteri  golongan  Gram  negatif Escherichia  coli. Dalam  usus  besar  manusia, Escherichia  coli banyak  ditemukan  yang berperan dalam penguraian limbah makanan. Bakteri  ini  juga  dapat  memfermentasi  gula yang  berbeda  seperti  manitol,  laktosa,  dan sukrosa  yang  dapat  berpindah-pindah  dan menghasilkan indol (Rollando, 2019).
Meskipun  tidak  berbahaya,  beberapa  jenis menyerupai O157:H7
yang dapat menyebabkan keracunan makanan dan diare berdarah karena menghasilkan verotokin, zat eksotoksin (Ariani et al., 2023). Salmonella thypi merupakan  jenis  bakteri  Gram  negatif penyebab  demam  tifoid,  bakteremia,  bahkan perburukan  yang  dapat  merusak  saluran pencernaan dan hati (Budi & Sembiring, 2022).
Antimikroba  merupaan bahan  kimia yang  dihasilan oleh  bakteri  dan  fungi  yang dapat  membunuhkan  bahkan menghentikan
pertumbuhan bakteri. Namun apabila penggunaan  antimikroba  yang  tidak  bijak dapat menyebabkan resistensi, yang didefinisikan  sebagai  kemampuan  mikroba untuk bertahan terhadap tindakan
antimikroba. Akibatnya, penggunaan antimikroba
dalam penggunaan kliniknya tidak  efektif  (Darmawati,  2021). Antimikroba  juga  dapat  digunakan  untuk menghambat agar tidak terjadi pertumbuhan dari suatu bakteri maupun kapang (bakteriostatik  atau  fungistatic)  serta  dapat membunuh  suatu  bakteri  maupun  kapang (bakterisidal  atau  fungisidal)  (Yanis  et  al., 2020).  Hasil  penelitian  ini  diharapkan  dapat memberikan manfaat bagi industri minuman untuk  menghasilkan  teh  fermentasi  sehat dengan kualitas lebih tinggi.

## METODE PENELITIAN
Alat
Alat-alat yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu  autoklaf,  erlenmeyer (Pyrex),  inkubator  (Memmert®),  kertas saring,  alat  pemanas  (Rinnai),  lemari pendingin  (Sharp  dan  Midea),  mikroskop (XSZ-107BN),  oven  (Falc),  saringan,  dan tabung reaksi (Pyrex).
Bahan Bahan-bahan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  yaitu  aquadest,  bakteri  uji Escherecia  coli ATCC ® 25922, Salmonella  typhi
ATCC ® 14028 dan Staphylococcus aureus ATCC ® 25923  yang  diperoleh  dari Indonesian FDA  Laboratory  Services -  BPOM,  blank  disk (Oxoid),  CaCO 3 1  %,  decolorizer,  gula (Gulaku),  kain  kasa,  medium  Man  Ragosa Sharpe  Broth  (MRSB)  (GranuCult),  Nutrient Agar (NA) (BD) , medium Muller Hinton Agar (MHA) (Milipore), pewarna iodium, pewarna safranin,  pewarna  violet,  teh  hitam,  tissue, dan Symbiotic  Culture  Of    Bacteria  and  Yeast (SCOBY).

## Preparasi Sampel Kombucha Teh
Pembuatan  media  starter  dilakukan dengan  memanaskan  1  L  aquadest  hingga mendidih, kemudian ditambahkan sampel teh
sebanyak  150  g,  ditambahkan  150  g  glukosa, dan  dituang  ke  dalam  wadah  toples  yang telah  steril,  selanjutnya  disterilkan  dalam autoklaf  suhu 121 0 C, 1 atm dengan durasi  15 menit.  Setelah  dingin,  media  starter  bibit scoby  ditambahkan  dan  diinkubasi  dalam waktu  14  hari  pada  suhu  ruangan  (Wahyu Adhinugraha et al., 2022).

## Isolasi dan Seleksi Bakteri Asam Laktat
1mL suspensi kombucha teh diencerkan  dengan  menggunakan  tabung reaksi  yang diisi dengan 9 mL air steril yang digunakan  sebagai  pengenceran  10 -1 ,  dan proses ini dilanjutkan hingga pengenceran 10 -
3 .  Hasil  pengenceran  sebanyak  1  ml diinokulasi di medium MRSA yang sebelumnya  telah  ditambahkan  dengan CaCO 3 1%,  lalu  diremajakan  di  inkubator dalam  jangka  waktu  48  jam  dan  suhu  37 o C. Kemudian  mengamatii adanya  pertumbuhan koloni  yang  ditandai  terbentuknya  zona bening  di  sekitarnya,  Dengan  menggunakan pendekatan  kontinu,  inokulasi  dilakukan dengan menggunakan medium MRSA dengan tujuan untuk melakukan pemurnian, dan  kemudian  diinkubasi  selama  24  jam. Setelah  isolat  murni  diperoleh,  pemurnian diulangi  dengan  menggunakan  media  dan lingkungan yang sama kemudian diinokulasi ke  agar  miring  untuk  disimpan  sebagai  stok (Ismail et al., 2023).
Identifikasi Bakteri
Asam Laktat

## Menggunakan Pewarnaan Gram
Pewarnaan  Gram  dapat  dilakukan menggunakan  kaca  objek  yang  telah  dibilas dengan  alkohol  96%.  Mengambil  isolat  dari bakteri asam laktat yang aktif r lalu kemudian diletakkan  dengan  cara  aseptik.  di  atas  kaca objek,  dan  kemudian  disebar secara  merata. Selain  itu,  kaca  objek  difiksasi  untuk menghindari kehilangan kultur saat pembilasan.  Kemudian,  2 tetes  pewarna kristal  violet  disebut  sebagai  Gram  A dioleskan  pada  kaca  objek  selama  60 detik. 2 tetes larutan pewarna iodium sebagai Gram B  juga  dioleskan  di  atas  kaca  objek  dan diamkan selama  60  detik.  Setelah  itu,  air
mengalir  digunakan  untuk  membersihkan sisa  air.  Selanjutnya,  sebagai Gram  C larutan dechlorizer atau alkohol 96%, diteteskan pada kaca objek dan dibilas dengan air. Selanjutnya, larutan safranin, yang sebagai Gram  D,  diteteskakan  pada  kaca objek. Diamkan selama 45 detik dan bersihkan dengan air mengalir. Selanjutnya, bentuk dan warna dari bakteri asam laktat dapat diamati dengan menggunakan mikroskop pembesaran 100 kali agar dapat melihat hasil pewarnaan  bakteri  asam  laktat  (Ismail  et  al., 2023).

## Uji Biokimia
Uji katalase dapat dilakukan menggunakan isolat murni dari bakteri asam laktat kemudian diletakkan di atas kaca objek, lalu  dilajutkan  dengan  ditetesi  dengan  H 2 O 2 3% lalu didiamkan selama 60 detik (Ismail et al., 2023).
Uji Motilitas dapat dilakukan menginkubasi isolat murni dari bakteri asam laktat selama 48 jam pada media tegak dengan suhu 30°C. Setelah itu, gerak motilitas bakteri diamati (Ismail et al., 2023).

## Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  aktivitas antibakteri  asal bakteri asam laktat diuji menggunakan kertas cakram.  Dibuat  fermentasi  isolat  dengan menggunakan media MRSB ditambah dengan 1  ose  isolat  bakteri  asam  laktat  pada  tabung reaksi, kemudian di fermentasi selama 24 jam. Suspensi  dari  bakteri  uji Eschericia  coli, Salmonella  thypi serta Staphylococcus  aureus disebarkan  di  atas  media  MHA  dan didiamkan.  Setelah  itu,  kertas  cakram direndam  dalam  fermentasi  isolat  dan dibiarkan hingga kering. Setelah itu, diletakkan  secara  aseptik  pada  bagian  atas media MHA dan disimpan dengan waktu 24 jam  dengan  suhu  37°C.  Setelah  waktu inkubasi  selesai,  diameter  hambat  diukur menggunakan  jangka  sorong  (Ismail  et  al., 2023).
HASIL DAN PEMBAHASAN
Bakteri  asam  laktat   dikenal  sebagai bakteri  jenis  Gram  positif  diketahui  dapat memproduksi  asam  laktat  dari  karbohidrat yang  bermanfaat  bagi  tubuh  secara  umum dan  saluran  pencernaan  pada  khususnya. Selain  itu  bakteri  asam  laktat  juga  diketahui dapat  membantu  pencernaan,  meningkatkan system kekebalan tubuh, menghindari sembelit  dan  menghasilkan  zat  antimikroba (Nasution et al., 2022).
Dalam saluran pencernaan hewan dan manusia,  makanan  kaleng,  produk  susu, buah-buahan,  sayuran,  dan  makanan  yang difermentasi,  diketahui  mengandung  bakteri asam laktat (Gebrayel et al., 2022). Kelompok bakteri yang banyak terdapat pada kombucha teh  yaitu Acetobacter  xylinum,  Saccharomyces ludwigii, Saccharomyces cerevisiae serta golongan bakteri asam laktat seperti Lactobacillus (Wahyu  Adhinugraha  et  al., 2022) .
Pada penelitian ini, bakteri dari fermentasi  kombucha  teh  diisolasi  dengan menggunakan  metode  tuang,  setelah  sampel terlebih  dahulu  diencerkan.  Bakteri  asam laktat  diisolasi  menggunakan Man  Rogosa Sharpe  Broth (MRSB)  karena  memiliki  nutrisi yang  dibutuhkan  organime  untuk  tumbuh (Riadi et al., 2022).
Setelah diisolasi dan diinkubasi selama dua  hari,  enam  koloni  menunjukkan  zona bening di sekitarnya. Ini menunjukkan bahwa bakteri  asam  laktat  dapat  dipilih  melalui reaksi  dengan  CaCO 3 (Ismail et  al .,  2023). Bakteri  asam  laktat  kemudian  akan  terikat dengan CaCO 3 dan merubah CaCO 3 menjadi Ca-laktat dan akan larut setelah menghasilkan asam  laktat,  sehingga  memberikan zona bening  di  mana  koloni  bakteri  asam  laktat dapat dilihat (Lawalata et al., 2020).
Kemudian dilakukan dengan pengamatan secara makroskopis, pengamatan berupa warna, bentuk, tepi dan elevasi. Hasil penelitian ini menunjukkan karaktristik yang sama  dengan  bakteri  asam  laktat.  Keenam isolat  (Tabel  1)  menunjukkan  bentuk  koloni
yang  berbentuk  bulat,  berwarna  putih  susu, dengan  tepian  rata  dan  elevasi  yang  timbul hasil yang didapatkan mirip dengan karakteristik bakteri asam laktat. Hasil  isolat
yang didapatkan sama dengan hasil penelitian  oleh  Riadi  et  al.,  (2022)  yaitu memiliki  warna  putih  tulang,  tepan  rata, bentuk bulat dan elevasi timbul.
Tabel 1. Hasil Identifikasi Koloni Isolat Bakteri Asam Laktat dari Kombucha Teh

## Gambar 1. Hasil Pewarnaan Gram Positif Isolat Bakteri Asam Laktat
Setelah pengamatan makroskopik dari kultur  murni  diperoleh,  keenam  isolat  yang menunjukkan  karakteristik  bakteri  asam laktat  diamati  secara  mikroskopik,  yaitu dengan  pengujian  pewarnaan  tujuan  dari pewarnan Gram yaitu untuk mengidentifikasi bakteri, dan menentukan isolat yang didapatkan termasuk Gram positif atau Gram negatif,  dengan  melihat kemampuan  dari bakteri  untuk  menyerap  reagen  warna. Bakteri  golongan  Gram  negatif  melepaskan warna  ungu  dari  kristal  violet  yang  telah
dibersihkan  dengan  menggunakan  larutan alkohol dan kemudian akan terjadi penyerapan  safranin  yang  menghasilkan warna  merah,  sedangkan  bakteri  golongan Gram  positif  menyerap  warna  ungu  yang berasal dari kristal violet yang kemudian akan manghasilkan  warna  ungu  (Sianipar  et  al., 2020).
Kelompok  bakteri  Gram  positif  dapat mempertahankan  zat  kristal  violet  karena pada dinding sel dari kelompok bakteri Gram positif  mengandung  lemak  yang  lebih
No. Pengujian Bakteri
Asam Laktat (Riadi et al , 2020) Isolat
1 2 3 4 5 6 1 Makroskopik
- Warna
- Bentuk
- Tepi
- Elevasi - Putih Tulang - Bulat
- Entira
- Timbul
- Putih Susu
- Bulat - Entire - Timbul
- Putih
Susu - Bulat - Entire - Timbul - Putih Susu - Bulat - Entire - Timbul
- Putih Susu
- Bulat
- Entire - Timbul
- Putih
Susu - Bulat
- Entire - Timbul
- Putih Susu
- Bulat
- Entire - Timbul 2 Mikroskopik Gram (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) 3 Biokimia - Katalase - Motilitas (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-)
sederhana jika dibandingkan dengan kelompok  bakteri  Gram  negatif,  oleh  karena itu dinding sel dari bakteri dapat lebih mudah mengalami degradasi setelah diberi perlakuan menggunakan  alkohol.  Dinding  sel  yang mengalami degradasi dapat membuat ukuran pori  dari  sel  mengecil  sehingga  daya permeabilitasya  sel  juga  menurun,  sehingga sel  akan  terus  memproduksi  warna  ungu karena zat kristal violet sulit dikeluarkan dari sel.  Selain  itu,  karena  bakteri  Gram  negatif kehilangan  zat  kristal  violet  selama  proses pembilasan  alkohol,  bakteri  akan  berwarna merah, tetapi pewarna safranin akan terserap
di  akhir  proses.  Apabila  dibandingkan dengan  kelompok  bakteri  Gram  positif, kelompok bakteri Gram negatif mengandung banyak lipid (Yanti, 2022).
Hasil pengamatan mikroskopik setelah  pewarnaan  Gram  memperlihatkan hasil  dari  keenam  isolat  yaitu  sel  bakteri memiliki  kadungan  yang  berwarna  ungu yang menunjukkan Gram positif (Gambar 1). Hasil dari penelitian yang telah dilakukan ini selaras  dengan  studi  yang  telah  dilakukan oleh  Al-Mohammadi  et  al.,  (2021)  yaitu bakteri  asam  yang  didapatkan  masuk  dalam golongan bakteri Gram positif.

## Gambar 2. Hasil Uji Motilitas Isolat Bakteri Asam Laktat
Uji motilitas mikroba bertujuan untuk melihat kemampuan mikroba untuk bergerak. Dengan adanya gerakan berwarna putih yang menyerupai  akar  di  sekitar  inokulasi, menandakan pertumbuhan menyebar di sekitar tempat penusukan kultur dan  menunjukkan  bahwa  bakteri  yang didapatkan  memiliki  flagel  (Detha,  2019). Pengujian motilitas bertujuan untuk mengukur  pergerakan mikroorganisme  yang juga disebut sabagai motilitas (Sianipar et al., 2020).
Hasil  pengamatan  dari  keenam  isolat menunjukkan bahwa keenam isolat yaitu non-motil  karena  tidak  ada  rambatan yang  terlihat  di  sekitar  bekas  tusukan  dari jarum  ose  (Gambar  2).  Penemuan  ini  sejalan dengan  studi yang telah  dilakukan Wang et al.,  (2022)  yaitu  pada  pengujian  uji  motilitas
negatif  motil  dengan  ditandai  bahwa  tidak terbentuk  rambatan  disekitar  bekas  tusukan. Hasil ini juga sejalan oleh penelitian Wang et al.,  (2022)  yaitu  pengujian  menunjukkan bahwa bakteri probiotik tidak dapat menghasilkan  biosintesis,  sehingga  bersifat non-motil.  Hasil  uji  motilitas  juga  sesuai dengan  sifat  bakteri  asam  laktat,  yang  non motil (Ismail et al., 2023).
Uji  katalase  menggunakan  enzim katalase yang betujuan untuk menghidrolisis hidrogen  peroksida  menjadi  dihydrogen (H 2 O)  dan  oksigen  (O 2 ). Hasil  positif  dari  uji ini menunjukkan bahwa terbentuk gelembung  udara,  sedangkan  hasil  negatif menunjukkan     bahwa       tidak      terbentuk
gelembung udara sama sekali (Sianipar et al., 2020).

## Gambar 3. Hasil Uji Katalase Isolat Bakteri Asam Laktat
Uji  katalase  dari  keenam  isolate  yaitu menunjukkan  hasil  negatif (Gambar  3),  yang menunjukkan  bahwa  gas  H 2 O 2 tidak  muncul setelah  isolat  bakteri  disuspensikan.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa keenam isolat tersebut  bersifat  homofermentative.  Hasil penelitian ini sejalan dengan penelitian Pei et al., (2019) yang menunjukkan hasil negatif ada uji katalase setelah isolat ditambahkan dengan H 2 O 2 yang  mana  hasil  yang  diperoleh menunjukkan  tidak  adanya  gelembung  yang
muncul. Hal  ini  selaras dengan  Khushboo et al.,  (2023)  yang  mengatakan  bahwa  bakteri asam  laktat  setelah  diujikan  dengan  H 2 O 2 didapatkan  hasil  yaitu  negatif  dengan ditandainya  bakteri  tidak  menghasilkan gelembung-gelembung.  Hal  tersebut  sesuai dengan  studi  yang  dilakukan  oleh  Falakh  & Tri  Asri  (2022)  yaitu  bahwa  bakteri  asam laktat  tidak  mampu  memperoduksi  enzim katalase yang diketahui memiliki kemampuan dalam memecah H 2 O 2 . d. a. b. c.
Gambar 4.  Hasil Uji Aktivitas Antimikroba Terhadap bakteri patogen a. Escherechia coli ; b. Staphylococcus aureus ; c. Salmonella thypi; d.aktivitas Isolat Bakteri Asam Laktat  Asal Kombucha Teh  Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Salmonella thypi
0 2 4 6 8 10 Isolat 1 Isolat 2 Isolat 3
Isolat 4 Isolat 5 Isolat 6 Salmonella thypi x ̄ Esherechia coli x ̄ Staphylococcus aureus x ̄
Uji  daya  hambat  pada  bakteri  uji dilakukan  untuk  melihat  apakah  keenam isolat,  yang  dikenal  sebagai  probiotik  asam laktat, memiliki kemampuan untuk menghambat adanya pertumbuhan dari suatu  bakteri  patogen. Escherichia  coli, Salmonella  thypi , dan Staphylococcus  aureus, merupakan bakteri uji dengan masa inkubasi masing-masing 24 jam. Patogenisitas mikroorganisme menjadi pertimbangan ketika memilih bakteri uji.
Pada  Gambar  4  menunjukkan  hasil penelitian  dari aktivitas  bakteri  asam  laktat. Hal  ini  menunjukkan  adanya daya  hambat bakteri  asam  laktat  terhadap  bakteri  uji. Adapun  hasil  dari  zona  hambat  yang didapatkan  menunjukkan  daya  yang  lemah. Hal ini dipengaruhi oleh pH yang menurun. Semakin  lama  proses  fermentasi,  semakin meningkat  kadar asam  organik  yang  ada, sehingga  pH  menurun  dan suhu  akan meningkat dan bakteri asam laktat kehilangan aktivitas  antmikrobanya,  karena pH  tidak sesuai  dengan  lingkungan  pertumbuhan bakteri asam laktat (Wang et al., 2022). Namun demikian isolat dari bakteri asam laktat dapat menghentikan  pertumbuhan  dari  bakteri seperti ,  Escherichia  coli,  Salmonella  thypi , dan Staphylococcus aureus.
Kemampuan terbaik untuk
menghambat  bakteri  uji  ditunjukkan  pada isolat 5 dan 6, dengan diameter penghambatan  yaitu  pada Staphylococcus aureus diameter penghambatan yaitu 7,1±0,52 mm  dan  7,65±0,38  mm,  pada Escherichia  coli diameter  penghambatan  yaitu  7,86±0,08  mm dan  6,36±0,29  mm  dan  pada Salmonella  thypi diameter  penghambatan  yaitu  6,43±0,06  mm dan 7,13±0,08 mm. Hasil yang didapat sesuai dengan  penelitian  Imade  et  al.,  (2021)  yaitu adanya  zona  hambat  bakteri Staphylococcus aureus , Escherichia  coli , Bacillus  cereus , Salmonella  thypi ,  dan Klebsiella  pneumonia menunjukkan  bahwa  bakteri  asam  laktat mampu  mencegah  bakteri  patogen  dengan adanya  zona  bening  di  sekitar  paper disk. Hasil yang didapatkan sejalan oleh penelitian Manan  et  al.,  (2023)  dengan  temuan  bahwa
bakteri  asam  laktat  dapat  mencegah  bakteri patogen  berkembang  biak.  Dalam  penelitian ini,  bakteri  yang  digunakan  yaitu Escherichia coli O517:H7 UPMEC32, Listeria monocytogenes ATCC®51772TM ,  Salmonella  enterica  serovar Typhimurium ATCC®53648TMI  MDC15,  dan Streptococcus gallolyticus ATCC®9809TM (Abdul Manan et al ., 2023).

## KESIMPULAN
Hasil  isolasi  menunjukkan  diperoleh bakteri  asam  laktat  dari  kombucha  teh  yaitu sebanyak  6  isolat,  yang  merupakan  bakteri Gram  positif,  dengan  bentuk  sel  bulat, berwarna putih tulang, tepi entire dan elevasi flat.  Isolat  yang  diperolah  berpotensi  dalam menghambat  bakteri  patogen,  yaitu  mampu menghambat bakteri Escherechia coli, Staphylococcus  aureus ,  dan Salmonella  thypi dengan daya hambat lemah.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Mohammadi,  A.-R.,  Ismaiel,  A.  A.,
Ibrahim,  R.  A.,  Moustafa,  A.  H.,  Abou Zeid,  A.,  &  Enan,  G.  (2021).  Chemical Constitution  and  Antimicrobial  Activity of  Kombucha  Fermented  Beverage. Molecules  (Basel,  Switzerland) , 26 (16). https://doi.org/10.3390/molecules261650 26
Ariani, S. R. D., Fahma, I. N., Wijaya, F. N. A., &  Prasetyawati,  A.  N.  (2023). Minyak Atsiri  Temu  Putih,  Temu  Ireng  dan  Temu Mangga (1st  ed).  Uwais  Inspirasi Indonesia.
Budi,  A.,  &  Sembiring,  N.  L.  (2022).
Polaresistency  Of  Salmonella  Typhi Bacteria  To  Antibiotic  Ceftriaxone  And Ciprofloxacin. Journal  Health  &  Science : Gorontalo  Journal  Health  and  Science
Community , 6 (2), 58–67. https://doi.org/10.35971/GOJHES.V5I3.1 3624
Darmawati,  S.  .  (2021). Mengenal  Karakter MOlekuler  dan  Imunogenesis  Flagella Salmonell typhi penyebab Demam Tifoid .
Detha,  A.  (2019).  Karakteristik  Bakteri  Asam
Laktat  yang  Diisolasi  dari  Susu  Kuda Sumba. Jurnal  Kajian  Veteriner , 7 (1),  85– 92. https://doi.org/10.35508/jkv.v7i1.1058
Fahmi, A., Syukur, S., Chaidir, Z., & Melia, S.
(2022).  Isolasi  dan  Karakterisasi  Bakteri Asam Laktat dari Teh Hijau Fermentasi.
Lumbung Farmasi: Jurnal Ilmu Kefarmasian ,
3 (2),
325–330. https://doi.org/10.31764/LF.V3I2.9645
Falakh, M. F., & Tri Asri, M. (2022). Potential Test of Lactic Acid Bacteria Isolates from Palm  Sap  (Borassus  flabellifer  L.)  as Antimicrobial  against  Salmonella  typhi. LenteraBio :  Berkala  Ilmiah  Biologi , 11 (3 SE-), 514–524. https://doi.org/10.26740/lenterabio.v11n3 .p514-524 Firdaus, S., Anissa, I., Livia, I., & Siti, A. (2020). “Review” Teh Kombucha Sebagai
Minuman  Fungsional  dengan  Berbagai Bahan  Dasar  Teh. Prosding  Seminar Nasional Unimus , 3 (2013), 715–730.
Gebrayel, P., Nicco, C., Al Khodor, S., Bilinski, J.,  Caselli,  E.,  Comelli,  E.  M.,  Egert,  M., Giaroni, C., Karpinski, T. M., Loniewski, I.,  Mulak,  A.,  Reygner,  J.,  Samczuk,  P., Serino,  M.,  Sikora,  M.,  Terranegra,  A.,
Ufnal,  M.,  Villeger,  R.,  Pichon,  C.,  … Edeas,  M.  (2022).  Microbiota  medicine: towards  clinical  revolution. Journal  of
Translational Medicine , 20 (1), 111.
https://doi.org/10.1186/s12967-022-
03296-9
Imade, E. E., Omonigho, S. E., Babalola, O. O.,
&  Enagbonma,  B.  J.  (2021).  Lactic  acid bacterial bacteriocins and their bioactive properties against food-associated antibiotic-resistant  bacteria. Annals  of Microbiology , 71 (1), 44. https://doi.org/10.1186/s13213-021-
01652-6
Ismail,  I.,  Riski,  R.,  &  Salsabila,  N.  (2023). Isolasi,  Formulasi,  dan  Uji  Efektivitas Antibakteri  Granul  Liofilisat  Bakteri Asam  Laktat  Asal  Kimchi  terhadap Bakteri  Penyebab  Diare. PHARMACY:
Jurnal  Farmasi  Indonesia  (Pharmaceutical
Journal of Indonesia) , 19 , 171. https://doi.org/10.30595/pharmacy.v19i1. 12842
Khushboo,  Karnwal,  A.,  &  Malik,  T.  (2023). Characterization and selection of probiotic  lactic  acid  bacteria  from different dietary sources for development of functional foods. Frontiers  in  Microbiology , 14 ,  1170725. https://doi.org/10.3389/fmicb.2023.11707 25
Kulla,  D.  P.  K.,  &  Herrani,  R.  (2022).  Uji
Aktivitas  Antibakteri  dari  Dari  Ekstrak Bawang  Lanang  (Allium  sativum  L.) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia coli. Journal Of Health Educational Science And Technology , 8 (2), 1–15.
Lawalata,  Joane,  H.,  Rompas,  Ferdina,  C., Kansile,  &  Fridayanti,  E.  (2020). Isolasi dan  Identifikasi  Bakteri  Asam  Laktat  dari Fermentasi  Anggur  Buah  Pala  (Myristica fragrans Houtt) Sebagai Penghasil Eksopolisakarida . Universitas Negeri Manado.
Manan, M., Abd Rashid, N. Y., Lazim, M., Abd Razak,  D.,  Ghazalli,  M. N.,  Md  Sah, M., Mohmad  Sabdin,  Z.  H.,  Hassan,  H.,  & Mat Ali, M. S. (2023). Prebiotic properties of fermented  ceri  Terengganu  (Lepisanthes fruticosa) beverage by survival of lactic acid bacteria and its antibacterial activity . 6 , 171–
181.
https://doi.org/10.26656/fr.2017.6(S2).029
Nasution, A. Y., Rasyidah, R., & Mayasari, U.
(2022).  Potensi  Bakteri  Asam  Laktat Sebagai Penghasil Eksopolisakarida Dari Dekke  Na  Niura. JURNAL  Al-AZHAR
INDONESIA SERI SAINS DAN TEKNOLOGI , 7 (3), 214–220. https://doi.org/10.36722/SST.V7I3.1236
Pei,  J.,  Jin,  W.-G.,  Baranenko,  D.,  Gou,  X., Zhang, H., Geng, J., Jiang, L., Chen, D., & Yue, T. (2019). Isolation, purification, and structural  identification  of  a  new
bacteriocin made by Lactobacillus plantarum found in conventional kombucha. Food  Control , 110 ,  106923.
https://doi.org/10.1016/j.foodcont.2019.1
06923
Riadi,  S.,  Setiyawati,  D.,  &  Situmeang,  S.
(2022).  Isolasi  Dan  Uji  Potensi  Bakteri Asam  Laktat  Asal  Kimchii  Dan  Teh Kombucha  Dalam  Menghambat  Bakteri Patogen. Jurnal  Kesmas  Prima  Indonesia ,
2 (1),
25–29. https://doi.org/10.34012/jkpi.v2i1.891
Rollando.  (2019). Senyawa  Antibakteri  Dari Fungi Endofit . CV. Seribu Bintang.
Sianipar,  G.,  Sartini,  S.,  &  Riyanto,  R.  (2020). Isolasi dan Karakteristik Bakteri Endofit pada  Akar  Pepaya  (Carica  papaya  L).
Jurnal  Ilmiah  Biologi  UMA  (JIBIOMA) , 2 , 83–92. https://doi.org/10.31289/jibioma.v2i2.312
Sitorus, A., Devianti, D., & Bulan, R. (2021). a
Review on the Engineering Properties of Soybean  To  Support  the  Tofu  Agro- Industrial  Machinery  Development  and Important  Highlights. Agrointek :  Jurnal Teknologi  Industri  Pertanian , 15 (3),  921–
931.
https://doi.org/10.21107/agrointek.v15i3. 10496
Utomo, G. S. M., Hidanah, S., Al Arif, M. A., Lokapirnasari,  W.  P.,  &  Yuniarti,  W.  M.
(2022).  Business  Analysis  of  Probiotic Administration of Lactic Acid Bacteria on
The  Performance  of  Kampung  Super Chicken. Jurnal Medik Veteriner , 5 (1), 87–
93.
https://doi.org/10.20473/jmv.vol5.iss1.20 22.87-93
Wahyu  Adhinugraha,  S.,  Mayun  Permana,  I. D. G., Indri Hapsari Arihantana, N. M., & Puspawati,  N.  N.  (2022).  Potensi  Isolat Bakteri  Asam  Laktat  dari  Kombucha Sebagai  Antihiperkolesterol  Secara  In Vitro. Jurnal  Ilmu  Dan  Teknologi  Pangan (ITEPA);  Vol  11  No  4  (2022):  Jurnal ITEPADO - 10.24843/Itepa.2022.V11.I04.P13 . https://ojs.unud.ac.id/index.php/itepa/ar ticle/view/97582
Wang,  B.,  Rutherfurd-Markwick,  K.,  Zhang, X.-X.,  &  Mutukumira,  A.  N.  (2022). Isolation and characterisation of dominant  acetic  acid  bacteria  and  yeast isolated  from  Kombucha  samples  at point  of  sale  in  New  Zealand. Current Research  in  Food  Science , 5 ,  835–844. https://doi.org/10.1016/j.crfs.2022.04.013
Yanis,  I.,  Alamsjah,  F.,  Agustien,  A.,  & Maideliza, T. (2020). Antibacterial Potency  of  Fresh  Extract  Leaves  of Jamaican Cherry (Muntingia calabura L.) in  Inhibiting  the  Growth  of  Shigella dysenteriae. Jurnal Biologi UNAND , 8 , 14. https://doi.org/10.25077/jbioua.8.1.14- 19.2020
Yanti,  N.  (2022).  Bakteri  Asam  Laktat  Dari Buah  Mangga  Arum  Manis  (Mangifera indica L. var. Arum manis). Bionature , 23 ,
132.
https://doi.org/10.35580/bionature.v23i2.
37860