SINTESIS DAN UJI TOKSISITAS SENYAWA 2’,4’ -DIKLORO-4-

## METOKSIKALKON
Submitted: 2 Agustus 2018
Edited: 10 Desember 2018 Accepted: 20 Desember 2018
Mega Cahayani 1 , Agung Rahmadani 1,2 , Dewi Rahmawati 1 , Rolan Rusli 1,2 *
1 Laboratorium Penelitian dan Pengembang an Kefarmasian “Farmaka Tropis”, Fakultas Farmasi, Universitas Mulawarman, Samarinda
2 Kelompok Bidang Ilmu Kimia Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Mulawarman, Samarinda Email : rolan@farmasi.unmul.ac.id

## ABSTRACT
Chalcone is one of secondary metabolites included into the class of flavonoid. Chalcone can  be  obtained  from  isolation  plant  and  have  various  biological  activities.  Chalcones  are known  as  the  key  intermediate  in  the  synthesis  of  various  biologically  important  heterocyclic compounds. The aims of these research was to syntheses 2’,4’ -dichloro-4-methoxychalcone. by Claisen – Schmidt condensation. These compound was characterized by 1 H-NMR, 13 C-NMR and mass spectroscopy. LC 50 value of these compound was 864,97 ppm.
Keywords : 2’,4’ -dichloro-4-methoxychalcone, brine shrimp lethality test, chalcone, toxicity

## PENDAHULUAN
Kalkon  secara  alami  terdapat  pada beberapa  jenis  tumbuhan  di  alam  yang berperan  sebagai  senyawa  perkursor  untuk biosintesis  flavonoid  dan  isoflavonoid (1) . Senyawa  kalkon  merupakan senyawa  yang sangat penting di alam. Kalkon mengandung dua cincin aromatis (A dan B) dan satu atom karbon  a,ß-tak  jenuh.  Pada  cincin  A biasanya  terdapat  gugus  etil,  metil  atau gugus alkil lainnya yang dapat meningkatkan  aktivitas.  Cincin  B  biasanya mengandung  gugus-gugus  hidrofob  seperti halogen,  nitro  dan  siano  yang  juga  dapat meningkatkan aktivitas biologis (2) .
Kalkon  sangat  sulit  diisolasi  dari tanaman  karena  adanya  enzim  kalkon sintetase  (CSH)  yang  dengan  mudah mengubah kalkon menjadi flavanon. Kalkon dan  turunannya  memegang  peranan  penting di  dalam  bahan  alam  dan  telah  diteliti berbagai  aktivitas  biologis (3) .  Gugus  etilen keto  (-CO-CH=CH-)  yang  terkandung  pada
senyawa  kalkon  bersifat  reaktif  dan  inilah yang menyebabkan molekul kalkon
mempunyai berbagai macam aktivitas biologis (4) .  Selain  itu  senyawa  kalkon  juga dipengaruhi  oleh  jenis  substituen  yang terikat  pada  kedua  cincin  aromatiknya seperti  gugus  metoksi  (OCH 3 ),  Cl,  Br,  OH, dan lain sebagainya (5) . Kalkon dan
turunannya  mempunyai  beberapa  aktivitas seperti: antibakteri, antiplatelet, antiulceratif, antimalaria, antikanker,
antiviral, antioksidan,
antihiperglikemik,
immunomodulator,  antiinflamasi.  Sebagian besar  kalkon  memiliki  aktivitas  biologis, salah  satunya  yaitu  aktivitas  antikanker. Senyawa  kalkon  yang  memiliki  gugus metoksi  baik  pada  cincin  aromatik  A maupun  cincin  aromatik  B  memiliki  nilai toksisitas yang tinggi dan berpotensi sebagai antikanker.
Secara  umum,  kalkon  dapat  disintesis dengan  berbagai  metode  salah  satunya adalah  melalui  reaksi  kondensasi  suatu
aldehid  aromatik  dengan  suatu  keton aromatik  baik  dalam  kondisi  asam  maupun basa.  Reaksi  ini  dikenal  dengan  reaksi kondensasi  aldol  atau  lebih  khusus  reaksi kondensasi Claisen-Schmidt (6) .  Penelitian sebelumnya telah berhasil mensintesis
senyawa turunan kalkon serta uji aktivitasnya  sebagai  antikanker  dengan menggunakan  subtituen  gugus  Cl  pada cincin  aromatik  B,  dimana  dari  hasil  uji aktivitas  menunjukkan  senyawa  tersebut berpotensi sebagai antikanker dengan LC 50 <200  μg/mL (1) .  Pada  penelitian  ini dilakukan  sintesis  senyawa  turunan  kalkon dengan  bahan  dasar  2,4  dikloroasetofenon dan  4-metoksibenzaldehida  dimana  tujuan penelitian  ini  agar  dapat  diperoleh  suatu produk  senyawa  turunan  kalkon  dan mengetahui  aktivitas  toksisitas  senyawa kalkon hasil sintesis.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian ini  yaitu  seperangkat  alat  gelas,  magnetic stirrer,  lampu  UV  (254  dan  366  nm),  NMR
(Nuclear Magnetic Resonance) JEOL JNMECA  500  MHz,  dan  MS  QP2010S Shimadzu. Bahan penelitian yang digunakan pada penelitian ini yaitu
2,4 dikloroasetofenon,  4-metoksi  benzaldehida, NaOH,  metanol,  etanol,  n-heksana,  etil asetat,  HCl,  plat  KLT,  Tween  80,  larva udang  Artemia  salina  Leach,  air  laut  dan aquades.

## Sintesis Senyawa Kalkon
Senyawa  2,4-dikloroasetofenon  (5 mmol) dimasukkan ke dalam labu alas bulat yang  dilengkapi  dengan  magnetic  stirrer, ditambahkan  10  mL  etanol  absolut dan diaduk hingga homogen. Selanjutnya ditambahkan senyawa 4- metoksibenzaldehida (5  mmol) ke  dalam labu alas bulat. Campuran kemudian diaduk.
Selanjutnya  ditambahkan  5  mL  NaOH  40%
(b/v)  dan  distirrer  selama  6  jam.  Reaksi dikontrol dengan
menggunakan kromatografi  lapis  tipis (KLT) setiap  jam, reaksi  dihentikan  jika  diperoleh  satu  spot tunggal  pada  KLT.  Campuran  reaksi diencerkan  dengan  air  es  aquades  dan diasamkan  dengan  HCl  10%  hingga  pH  7. Padatan  kuning  gading yang  dihasilkan kemudian  disaring  dan  dicuci  dengan aquades,  dan dikeringkan  dalam  desikator vakum  selama  24  jam. Senyawa hasil sintesis ditentukan strukturnya menggunakan 1 H-NMR, 13 C-NMR, dan spektroskopi massa.

## Uji Aktivitas Toksisitas
Telur Artemia  salina yang  diambil dari  Laboratorium  Riset dan  Pengembangan Kefarmasian  “ Farmaka  Tropis ” Fakultas Farmasi, Universitas Mulawarman, ditetaskan  dalam  wadah  pembiakan  yang berisi  air  laut dan dilengkapi  dengan  aerasi dan  lampu.  Telur  dibiarkan  selama  48  jam agar telur menetas membentuk larva (naupli) yang siap  untuk  digunakan  sebagai  hewan uji.
Pengujian dilakukan dengan menggunakan  larutan  uji 2’,4’ -dikloro-4- metoksikalkon (konsentrasi 200,  400,  600, 800,  1000  μg/mL ) dan  larutan  kontrol. Larutan  uji  dan  dibuat  dengan  melarutkan senyawa  hasil  sintesis  ke  dalam 100  mL  air laut  dan ditambahkan  Tween  80, sedangkan larutan  kontrol  dibuat  tanpa  penambahan senyawa hasil sintesis.
10  ekor  larva  udang  (Artemia  salina) dimasukkan  ke  masing-masing  vial  larutan uji  dan  kontrol.  Diamati  kematian  larva udang  setelah  24  jam.  Data  hasil  pengujian dihitung  nilai  LC 50 dengan  menggunakan analisis Reed and Muench (7) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Senyawa  kalkon  disintesis  melalui kondensasi
Claisen-Shmidt dengan menggunakan  katalis  basa  dari  suatu  keton
aromatik  atau  keton  aromatik  tersubstitusi dengan  benzaldehida  atau  benzaldehida tersubstitusi (Gambar  1). Sintesis  senyawa kalkon  dilakukan  dengan  mereaksikan senyawa  2,4  dikloroasetofenon  dan  4- metoksibenzaldehida  menggunakan  pelarut etanol. Senyawa 2,4-dikloroasetofenon dimasukkan  ke  dalam  labu  alas  bulat,
ditambahkan etanol distirrer hingga homogen.
Selanjutnya ditambahkan senyawa  4-metoksi  benzaldehida  yang  telah dilarutkan  dengan  etanol.  Penambahan katalis  NaOH  40%  sebanyak  5  mL,  katalis yang  ditambahkan  dilakukan  dengan  tetes demi  tetes.  Selanjutnya  campuran  diaduk dengan magnetic stirrer selama 6 jam, hal ini dilakukan  untuk  memaksimalkan  reaksi yang berlangsung. Uji KLT senyawa kalkon dengan  menggunakan  eluen  n-heksana:  etil asetat  (9:1).  Hasil  sintesis  senyawa  kalkon diperoleh  rendemen  sebesar  87,62%  dengan berat  1,345  g,  dimana  warna  padatan senyawa  yaitu  kuning  gading. Selanjutnya untuk  mengetahui  struktur  yang  disintesis sesuai  dengan  yang  diinginkan  maka senyawa  hasil  sintesis  dilakukan  analisis dengan  menggunakan  NMR  ( 1 H-NMR  dan 13 C-NMR)  serta  menggunakan  analisis spektroskopi massa.
1 H-NMR (CDCl 3 ,  ppm): δ H 3,8482 (3H, s, C3-OCH 3 ); 6,91 (2H, d, J = 8,45 Hz, H3/H5); 6,97 (1H, d, J = 15,5 Hz, H- α ); 7,33 (1H, dd, J = 1,95; 7,8 Hz, H5’); 7,40 (1H, d,
J =  16,2  Hz,  H- β );  7,41  (1H,  d, J =  8,45
H6’);  7,47  (1H,  d, J =  1,9  Hz,  H3’);  7,52
(2H,  d, J =  9,1  H2/H6). 13 C-NMR (CDCl 3 , ppm): δ C 55,9  (C3-OCH 3 );  114,2  (C3/C5); 121,4  (C- α );  127,4  (C2/C6);  127,5  (C1);
127,5 (C5’); 130,9 (C3’); 132,7 (C6’); 136,1
(C2’); 141,5 (C4’); 145,2 (C - β ); 159,9 (C4); 189,7 (C=O).
Spektrum 1 H-NMR  senyawa  hasil sintesis  menunjukkan  adanya  hasil  integrasi senyawa kalkon sebanyak  12 proton. Gugus metoksi di cincin B ditunjukkan pada δ 3,84 ppm  dengan  hasil  integrasi  sebanyak  3
proton.  Proton  olefin  dari  a,ß-keton  tak jenuh  diamati  pada  δ  6,97  ppm  dan  7,40 ppm.  Empat  proton  aromatik  pada  cincin  B diamati  pada  δ  7,52  ppm  (2H,  H -2/H-6); 6,91  ppm  (2H,  H-3/H-5),  sedangkan  tiga proton aromatik pada cincin A diamati pada δ 7,47 ppm (1H, H - 3'); δ 7,33 ppm (1H, H - 5'); δ 7,41 ppm (1H, H -6').
Spektrum 13 C-NMR  senyawa  hasil sintesis  menunjukkan  adanya  14  karbon. Pita karbonil ditunjukkan pada δ 189,7 ppm, dan pita untuk karbon yang terikat metoksi δ 55,9  ppm.  Pita  serapan  menunjukkan  δ 135,2  ppm  (C- 1’),  δ  127,5  ppm  (C - 1),  δ 136,1 ppm (C- 2’), δ 127,4 ppm (C -2/C- 6), δ 114,2  ppm  (C- 3/C5),  δ  130,9  ppm  (C - 3’),  δ 141,5  ppm  (C- 4’),  δ  159,9  ppm  (C - 4),  δ 127,5  ppm  (C- 5’),  dan  δ  132,7  ppm  (C - 6’). Pita karbon alfa ditunjukkan pada pita 121,4 ppm (C- α) dan karbon beta ditunjukkan pada pita serapan δ 145,2 ppm (C -ß). Selanjutnya senyawa kalkon dianalisis dengan menggunakan spektroskopi massa, diketahui bahwa  spektra  massa  dengan  ion  molekular yaitu  m/z  306  sesuai  dengan  berat  molekul dari  senyawa  2’,4’ -dikloro-4-metoksikalkon hasil  sintesis.  Hasil  analisis  NMR  dan  MS ini  menunjukkan  bahwa  senyawa  kalkon hasil sintesis telah terbentuk
Sintesis senyawa 2’,4’ -dikloro-4- metoksikalkon  dengan  menggunakan  reaksi Claisen-schmidt berhasil  dilakukan.  Reaksi kondensasi aldol dengan katalis basa diawali dengan  hidrogen  yang  terletak  pada  atom karbon  yang  berdekatan  dengan  gugus karbonil  bersifat  asam  dan  dapat  dengan mudah  dipindahkan  oleh  basa.  Bila  suatu hidrogen  alfa  direaksikan  dengan  basa seperti  NaOH  akan  membentuk  ion  enolat yang  dapat  bereaksi  dengan  gugus  karbonil dari  molekul  aldehida  yang  lain.  Reaksi  ion enolat terjadi melalui reaksi adisi nukleofilik dengan senyawa karbonil 4- metoksibenzaldehida  yang  pada  akhirnya akan melepaskan molekul air dan membentuk  ikatan  rangkap  dua  (C=C). Mekanisme  Reaksinya  dapat  dilihat  pada Gambar 2.
1 CH 3 O Cl Cl OCH 3 O H O OCH 3 Cl Cl + NaOH Gambar 1. Reaksi Sintesis Kalkon 2’,4’ -dikloro-4-metoksikalkon
O CH 3 O CH 2 - O H OH - O H H OH Cl Cl Cl Cl Cl Cl O O - H + Cl OCH 3 Cl Cl Cl O OH 2 Cl Cl -H 2 O O Cl Cl OCH 3 OCH 3 OCH 3
Gambar 2. Mekanisme reaksi sintesis senyawa 2’,4’ -dikloro-4-metoksikalkon
Uji toksisitas dilakukan untuk mengetahui  aktivitas  senyawa  kalkon  hasil sintesis.  Uji toksisitas  dilakukan  dengan menggunakan metode BSLT (Brine Shrimp Lethality  Test),  uji  ini  merupakan  uji pendahuluan  yang  biasa  dipakai  untuk penentuan  toksisitas  dari  suatu  senyawa. Dasar  yang  digunakan  untuk  menentukan nilai toksisitas adalah Lethal Concentration (LC). Nilai LC menunjukkan nilai konsentrasi yang menghasilkan nilai kematian  sel  50%  hal  ini  menunjukkan potensi  ketoksikan  suatu  senyawa  terhadap larva Artemia  salina Leach.  Nilai  LC 50
ditentukan  dengan  analisis Reed  and  Much yang  diperoleh  dari  perhitungan  akumulasi larva yang hidup dan mati. sedangkan nilai konsentrasi  diubah  ke  dalam  nilai  log konsentrasi. Dari hasil pengujian didapatkan  nilai  LC 50 sebesar  864,97  ppm. Berdasarkan  uji  toksisitas  dengan  metode BSLT  yang  dilakukan  dapat  dikatakan bahwa senyawa 2’,4’ -dikloro-4- metoksikalkon  kurang  berpotensi  sebagai antikanker.
SIMPULAN Senyawa kalkon 2’,4’ -dikloro-4- metoksikalkon  disintesis  dengan  rendemen sebesar  87,6%. Toksisitas senyawa 2’,4’ - dikloro-4-metoksikalkon
(LC 50 864,97
ppm)  hasil  sintesis menunjukkan  bahwa senyawa tersebut kurang berpotensi sebagai antikanker.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Handayani,  Sri.,  Hilwan  Yda  Teruna dan Adel Zamri. 2013. Sintesis Analog
Kalkon (E)-3-(2-Klorofenil)-1- (4’metoksi Fenil) -Prop-2-En-1-On Dan Uji  Toksisitas  Dengan  Metode  Brine Shrimp  Lethal  Test  (BSLT). Journal. Ind. Che.Acta. 4 (1).
2. Suirta, I Wayan. 2016. Sintess Senyawa  Kalkon  Serta  Uji  Aktivitas Sebagai  Antioksidan. Jurnal  Kimia
(10) 1: 75-80. 3. Kishor V.G., Sandip V.G., Satish B.J., and  Shantilal  D.R.  2010.  Synthesis  of Some Novel Chalcones Of Phthalimidoester Possessing Good Antiinflamatory Andantimicrobial
Activity. Indian Journal  of  Chemistry. 49B:131-136. 4. Jayapal,  MR,  Prasad,  K.S.  and Sreedhar.  NY.  2010. Synthesis  and Characterization  of  2,  5-Dihydroxy Substituted Chalcones Using SoCl 2 /EtOH. Int  J  Pharma  Bio Sciences. 1: 361-6. 5. Sri,  Hilwan  Yuda  Teruna  dan  Adel Zamri.  2013.  Sintesis  Analaog  Kalkon (E) 3-(2-Klorofenil)-1-(4'Metoksi Fenil)-Prop-2-En-On dan Uji Toksisitas dengan Metode Brine
Shrimp  Lethal  Test  (BSLT). J.
Ind.Che.Acta Vol. 4 (1): 17-20.
6. Palleros,  D.  R.  1993. Experimental Organic  Chemistry.  John  Wiley  and Sons. Singapura.
7. Dewi,  N.,  Kuncoro,  H.,  &  Rijai, L. (2015).  Potensi  Sitotoksik  Ekstrak  Air Daun  Sirih  Hitam  (Piper  sp.). Jurnal
Sains dan Kesehatan Vol. 1 (1): 11-15. https://doi.org/10.25026/jsk.v1i1.9.