ISSN: 2460-6669
Motilitas Spermatozoa Ayam ( Galus varius ) Pada Penyimpanan Dingin Dengan Pengencer Tris, Cytrate, Kuning Telur, Filtrat Jambu Biji
( Psidium guajava ) Dan Buah Tin ( Fikus karika rob )
Motility Local Rooster Spermatozoa (Galus varius) Chilled Using Tris, Cytrate, Egg Yolk Extender With Addition Of Filtrat Guava (Psidium guajava) And Tin Fruit (Fikus karika rob)

## AS Dradjat, Lukman HY, Sumadiasya IWL
Program Study of Animal Production, Faculty of Animal Husbandry,Mataram University. Jl Majapahit Mataram NTB. E mail: adji.dradjat@yahoo.com

## ABSTRACT
The objectives of this study were to evaluate rooster semen preserved using Tris Citrate Egg Yolk-Citrate (TEYC) extender with the addition of Tin fruit and guava filtrate. Semen was collected by using plastic collector placed on cloaca, by using hen as a teaser when rooster mated hen  consequently  semen  would  remain  in  the  plastic  collector.  Fresh  semen  was  evaluated  by evaluating  volume,  smell,  color  and  spermatozoa  concentration.  Then  semen  was  split  into  7 fractions as treatment 1, 2 and 3 were extended 10 times using TEYC with 20%, 25% and 30% egg  yolk.  Then  treatment  4 and  5  were  extended  using  TEYC  contain  20% egg  yolk  with  5  % and 10% guava filtrate. Treatments 6 and 7, were extended using TECY contain 20% egg  yolk with Tin fruit filtrate of 5 and 10%. Then preserved and progressive motility was evaluated at 0, 12,  24  and  36  hours  following  chilling  under  4°C.  Results  showed  that  ejaculate  volume  was 0.38  ±  0.14  ml,  specific  smell,  milky  white color  with  concentrations  of  511.00  ±  90.07  x  107 sperms/ml.  The  results  of  progressive  motility  evaluation  of  0,  12,  24  and  36  hours  following chilling  treatments  1  to  7  were  not  significantly  different  (P>  0,05).  Percentage  motility  of chilling  0  hours  and  36  hours  of  treatments  1  to  7,  were  from  86.50  ±4.72%  to  48.83  ±5.15%, from 83.83 ±7.41% to 47.83 ±7.44%, from 88.67 ±1.86% to 49.33 ±9.35%, from 83.00 ±4.69 % to 43.50 ±7.77%, from 82.67 ± 6.06%, to 46.33 ±5.75%, from 83.83 ±7.41% to 47.83 ±7.44%, from  88.67  ±1.86%  to  49.33  ±9.35%  respectively  and  the  average  decreasing  progressive motility up to 36 hours was 37.74 ± 1.64 %. Finally, it can be concluded that addition egg yolk, guava,  and  Tin  fruit  filtrate  do  not  influence  the  progressive  motility  of  local  rooster spermatozoa.
Key words: Extender, motility, rooster, spermatozoa.
PENDAHULUAN
Ayam lokal Lombok adalah
percampuran  berbagai  jenis  ayam  sehingga variasi  genetiknya  sangat  tinggi.  Ayam  ini secara  turun  temurun  telah  menyesuaikan
diri  dengan  kondisi  lokal  yaitu  cara pemeliharaan  dilepas,  mencari  makan, sebagai  backyard  farming,  dipelihara  secara tradisional dan sambilan dan biaya pemeliharaan  juga  rendah.  Ayam  lokal  ini mempunyai rasa yang spesifik dan mempunyai  penggemar  tradisional  untuk bahan masakan ayam Taliwang.
Belakangan  kebutuhan  ayam  lokal ini tidak dapat dipenuhi, sehingga pengusaha restoran
masakan ayam Taliwangmenggunakan ayam petelur jantan, walaupun  penggemar  konvensional  ayam Taliwang  masih  fanatik  dengan  rasa  daging ayam lokal. Untuk memenuhikeaslian masakan ayam Taliwang diperlukan pengembangan ayam lokal dan
pengembangan teknologi, khusunya teknologi perkembang biakan untuk perbanyakan  ayam  kampung  secara  cepat. Pengembangan teknologi untuk perbanyakan ayam menggunakan inseminasi buatan    bibit  ayam  lokal  jantan  yang  telah terseleksi  untuk  inseminasi  ayam  betina, untuk  mengembangkan  ayam  lokal  yang yang  cepat  tumbuh  dan  dengan  rasa  daging yang spesifik.
Hingga  sekarang  masalah  dalam menyimpan  spermatozoa  beku  semen  ayam adalah motilitas dan kesuburan spermatozoa rendah.  Penurunan  motilitas  dan  fertilitas spermatozoa  ayam  beku  disebabkan  karena gliserol menurunkan motilitas dan kesuburan  spermatozoa  (Bacon et  al ,  1986;
Westfall  and  Howarth,  1977).  Sifat  toksik gliserol menurunkan daya hidup spermatozoa  (Delee et  al ,  1991)  dan menurunkan motilitas spermatozoa.
Dilaporkan  bahwa  motilitas frozen  thawed spermatozoa  ayam  hanya  sekitar  18,9%. (Gliozzy et  al ,  2011).  Oleh  karena  itu penyimpanan  spermatozoa  untuk  keperluan Inseminasi buatan dilakukan dengan penyimpanan  dingin  semen  cair  dengan temperatur 4˚C.
Untuk  itu  diperlukan  uji  bahan pengencer  untuk  keberhasilan  menyimpan semen  cair,  diperlukan  bahan  pengencer
yang  memenuhi  syarat  yaitu  1.  sebagai media, 2. Sumber energy, 3. Penahan pH, 4. Tekanan  osmose    yang  isotonis.  Media utama untuk spermatozoa ayam adalah telur ayam,  tetapi  masih  dibutuhkan  sumber energy, penahan perubahan pH, dan tekanan osmose    yang  isotonis  bisa  digunakan standart  pengencer  yang  telah  digunakan pada  ternak  yang  lain  yaitu  Tris  Cytrate Kuning  Telur  (TCKT)  (Evans,  1989).  Anti oksidanfiltrat  buah  tin  sudah  digunakan  dan dapat  meningkatkan  motilitas  spermatozoa kambingdan  filtrate  jambu  biji  dapat meningkatkan  motilitas  spermatozoa  sapi (Zainury et al, 2017).
Dari  uraian  di  atas  maka  dilakukan penelitian semen ayam lokal lombok berupa pengambilan
penilaian,
pengenceran,penyimpanan  dengan  media utama  Tris  Cytrat  Kuning  Telur  (TCKT) dengan  tambahan  antioksidanfiltrat  jambu biji dan filtrat buah Tin.

## MATERI DAN METODE
Ayam lokal jantan dewasa dan betina masing2  sebanyak  3  ekor  digunakan  dalam penelitian  ini.  Ayam  dipelihara  pada kandang  individu,  masing  masing  diberi makan dan minum setiap hari dengan pakan komersial yang dicampur dengan dedak dan jagung giling.

## Pembuatan pengencer spermatozoa.
Pengencer Tris Citrate Kuning Telur, standart  pengencer  untuk  spermatozoa domba  (Evans  1989)  digunakan  sebagai pengencer dasar.
Tabel  1.  Pengencer  Tris  Cytrate  Kuning  Telur(TCKT)  (Evans,  1989)  untuk  penyimpanan  beku spermatozoa ayam
No Bahan (Satuan) Volume 1 Tris (hydroxymethyl) amino methane (gr) 4,361 2 Glucose (gr) 0,600 3 Citric acid (monohydrate) (gr) 2,388 4 Kuning telur (ml) 20 6 Penicilin (IU) 100,000 7 Streptomycin (mg) 100 8 Air destilasi (ml) Hingga 100 ml
Pembuatan  filtrat  buah  Tin  dan  jambu Biji.
Buah  Tin  ( Fikus  karika  rob )  dan jambu  biji  ( Guava )  di  ektrasi  dengan  cara sebagai berikut. Buah Tin atau jambu biji di blender hingga halus, kemudian ditambahkan  aquabides  2  bagian  atau volume 1banding 2. dan di sentrifuse selama 5  menit.  Selanjutnya  bagian  atas  dilakukan filtrasi dengan 0,42 µm milipore, berikutnya diulang dengan milipore 0,2 µm. Setelah itu dilakukan  Pasteurilisasi  pada  temperature 60˚C selama 3 menit.
Pengencer  perlakuan  1.  Tris,  citrate, kuning  telur  (TCKT)  yang  biasa  digunakan pada  domba  dengan  kuning  telur  20%. Pengencer perlakuan 2, TCKT dengan kadar kuning  telur  25%.  Pengencer  perlakuan  3, TCKTdengan  kadar  kuning  telur  30% (Gambar  1).  Pengencer  perlakuan  4,  TCKT 20% kuning telur dengan penambahan filtrat buah Tin 5%. Pengencer perlakuan 5, TCKT 20%  kuning  telur  dengan  penambahanfiltrat buah  tin  10  %.  Pengencer  perlakuan  6, TCKT 20% kuning telur dengan penambahan  filtrate  jambu  biji  5%  dan Pengencer perlakuan  7, TCKT 20% kuning telur  dengan  penambahan  filtrate  jambu biji 10%.

## Pengambilan semen ayam.
Merancang alat
penampung spermatozoa ayam yaitu menggunakan tutup filter  milipore  diberi  tali  karet  yang  lentur
diikatkan pada ayam jantan dan plastic tutup milipore  tersebut  menutupi  cloaca  ayam jantan. Ayam jantan dilatih untuk mengawini  betina  dengan  dipasang  cawan plastic untuk penampung semen setiap pagi, saat   ayam  jantan  tersebut  dapat  mengawini betina  pemancing.  Pada  saat  mengawini betina  maka  semen  ayam  jantan  dapat terkumpul di alat penampung.

## Pemeriksaan kualitas spermatozoa
Kualitas semen ayam  yang didapatkan diperiksa  untuk  dievaluasi  terhadap  volume (ml), motilitas (%) gerak gelombang.Volume (ml), diukur
menggunakan  spuit  berukuran  1  ml  dengan menghisap  semen  ke  dalam  spuit  sehingga volume  dapat  terbaca  pada  spuit  tersebut. Gerak gelombang dihitung dibawah mikroskop  persentase  spermatozoa  yang hidup  da  bergerak.  Warna  putih  susu,  susu encer, Volume diukur(ml), Kepadatan hemocytometer
Preservasi dan pemeriksaan spermatozoa Spermatozoa setelah dievaluasi, berikutnya dua ejakulat dari dua ayam jantan di jadikan satu dan di bagi menjadi 7 tabung. Masing  masing  diberi  pengencer  sesuai perlakuan 1 hingga 7.
Penyimpanan spemen yang telah diencerkan pada  temperatur    4°C,  dan  motilitas spermatozoa devaluasi setiap 12 jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  ini  seperti  yang terlihat pada Tabel 1. menunjukkan volume, bau,  warnadan  kepadatan  (concentration) spermatozoa  yang  normal.Hasil  evaluasi pengambilan  semen  ayamVolume  (X±  SD) 0.38  ±  0.14  ml,  bau  spesifik,  warna  putih susu,  Konsentrasi    sperma/  ml  (X±  SD) 511.00 ± 90.07 x 10 7 / ml.
Penyimpanan  dalam  bentuk  cair  dan beku  spermatozoa  ayam    telah  dilaporkan sejak th 86 (Larry et al , 1986), tetapi hingga sekarang kesuburan hasil penyimpanan beku motilitas dan viabilitas spermatozoa berkurang  lebih  dari  50%  (Lemoine etal , 2011).  Penyimpanan  spermatozoa  ayam pada penelitian ini menggunakan penyimpanan dingin (4˚C), Pada
penyimpanan  dalam  bentuk  cair  motilitas dan viabilitas hanya turun 10-15% dan peda
penyipanan  dingin  65%  atau  2  per  3 spermatozoa  mengalami  respons  reaksi akrosoma  (Lemoine etal ,  2011).  Reaksi akrosoma  adalah  perubahan  apada  kepala spermatozoa  dalam  rangka  meningkatkan kapasitasinya untuk membuahi seltelur.
Hasil eksplorasi pengencer pada penyimpanan  dingin  (4˚C)  spermatozoa ayam  pada  penelitian  ini  yang  terbaik  yaitu menggunakan pengencer tris, citrate, kuning telur  yang  biasa  digunakan  pada  domba dengan  kadar  kuning  telur  mencapai  20% dianding  dengan  pengencer  dengan  kadar kuning  telur  25%  dan  30%  (Gambar  1). Tidak  dipungkiri  bahwa media  yang  terbaik untuk  spermatozoa  ayang  adalah  kuning telurnya,  namun  diperlukan  hanya  20  % pada media  tris citrate kuning telur (TCKT).
Gambar  1.Motilitas  spermatozoa  ayam  perlakuan  1,2  dan  3  dengan  TCKT  kadar  kuling  telur 20%, 25% dan 30%.
Hasil penelitian ini (Gambar 1). penggunaan kuning  telur  20%,  25%  dan  30%  tidak menunjukkan perbedaan yang nyata (P>0,05),  hasil  ini  sejalan  dengan  hasil penelitian  sebelumnya  dimana  penggunaan kuning  telur  burung  dara  sebanyak  20% menghasilkan progresif motilitas yang bagus dibanding kadar yang lebih tinggi (Panahi et
al ,  2017).Penggunaan  kuning  telur  20%
telah digunakan sebagai standart penggunaan  kuning  telur  sebagai  standart bahan  pengencer  spermatozoa  kambing. Kemungkinan  penggunaan  kuning  telur lebih  tinggi  dari  20%  membuat  media  lebih kental  dan  dalam  penelitian  ini  tidak meningkatkan progresif motilitasnya.
20 40 60 80 100 0 12 24 36 M ot ili ta s (% ) Penyimpanan (jam) Tris Citrate Kuning Telur 20% (TCKT 20%) TCKT 25%
TCKT 30%
Gambar  2.  Motilitas  spermatozoa  ayam,  perlakuan  1,  4  dan  5  dengan  pengencer  dasar  TCKT, tambahan 5% dan 10% filtrat buah tin.
Gambar 3. Motilitas spermatozoa ayamperlakuan 1, 6 dan 7 dengan pengencer TCKT, tambahan 5% dan 10% filtrat jambu biji.
Hasil  penelitian  penambahan  filtrat buah Tin 5% atau 10 % (Gambar 2, Tabel 3) atau filtrat jambu biji 5% dan 10% (Gambar 3)  tidak  meningkatkan  progresif  motilitas spermatozoa pad pendinginan 4˚C hingga 36 jam. Penggunaan filtrate buat tin dan jambu biji diharapkan dapat meningkatkan
motilitas  spermatozoa.  Penggunaan  buah filtrate  buah  tin  dapat  meningkatkan capasitas  untuk    integritas  membrane  dan reaksi  (Zainuri et  al ,  2017).  Buah  buahan yang  mengandung  vitamin  C  diharapkan dapat  meningkatkan  motilitas  spermatozoa, seperti yang telah dilaporkan, bahwa dengan
20 40 60 80 100 0 12 24 36 M ot ili ta s (% ) Penyimpanan (jam) Tris Citrate Kuning Telur 20% (TCKT 20%) TCKT 20% + 5% filtrat buah Tin TCKT 20% + 10% filtrat Buah Tin 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 0 12 24 36 M ot ili ta s (% ) Pengamatan (jam) Tris Citrate Kuning Telur 20% (TCKT 20%) TCKT 20% + filtrat jambu biji 5 %
TCKT 20% + filtrat jambu biji 10 %
peningkatan  vitamin  C  dan  E  pada pengencer  dapat  meningkatkan  prograsif motilitas spermatozoa (Amini et al , 2015).Penelitian  lain  dengan  penyimpanan pada  4˚C  dengan  anti  oksidant  (oleic  acid) motilitas  awal  dari  80%  setelah  disimpan selama  48  jam  menjadi  57%  dan  41% (Eslami et  al ,  2016).  Dari  hasil  penelitian tersebut  didapatkan  bahwa  dosis  rendah oleic  acid  menguntungkan  penyimpanan spermatozoa  ayam.Anti  oksidant  yang  lain yaitu  palmitoleat  meningkatkan  kualitas spermatozoa  ayam  dengan  penyimpanan dingin (Rad et al , 2016).

## SIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  ini  dapat disimpulkan bahwa menggunakan pengencer TKTC dengan kadar kuning telur 20%,  25%  dan  30%  tidak  menunjukkan perbedaan  motilitas  spermatozoa  ayam. Penggunaan pengencer TKTC dengan kuning  telur  20%  dengan  pemberian  filtrate buah  Tin  5%  dan  10%,  filtrate  jambu  biji 5%  dan  10%  sebagai  sumber  antioksidan juga tidak menunjukkan perbedaan motilitas spermatozoa ayam local Lombok.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  disampaikan  kepada  Alfan Haris  A,  Baiq  Islahun  Nauli  dan  Azhari mahasiswa Fakultas Peternakan Unram, atas bantuan  untuk  mengambil  semen  dan evaluasi spermatozoa. Kepada kepala LPPM atas  menggunakan  dana  DIPA  BLU  Unram Nomor:  1457.W/UN18.L1/PP/2018  untuk pelaksanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Amini  MR,  Kohram  H,  Zare  Shahaneh  A, Zhandi  M,  Sharideh  H  and  Nabi MM.  2015.  The  effect  of  different
levelsof  vitamin  E  and  vitamin  C  in modified  Bestville  extender  on rooster  post-thawed  sperm  quality. Cell Tissue Bank . 16(4): 587-92. Bacon L.D., D. W. Salter, J. V. Motta, L. B. Crittenden,  F  X.  Ogasawara.  1986. Cryopreservation  of  Chicken  Semen of  Inbred  or  Specialized  Strains Poultry Science , 65 (10):1965–1971. DeleeG.J.A. C. Harris, Jr.L. B. Macy .1991. Research Note: The In Vitro Responses  of  Vaginal  Tissue  and Chicken  Spermatozoa  to  Glycerol. Poultry Science , 70 (6): 1441–1443, Eslami M, Ghaniei A, Mirzaei Rad. H.2016. Effect of the rooster semen enrichment  with  oleic  acid  on  the quality  of  semen  during  chilled storage. Poult Sci . 1;95:1418-24.
Evans  G,  1989.  Semen  processing  on Embryo  transfer  in  Goat  and  Sheep. Refreshner course  for  Veterinarians,
Proceedings 127: 1-5.
Larry  D.  Bacon,  Donald  W.,  SalterJohn  V., MottaLyman  B.,  CrittendenFrank  X. and Ogasawara. 1986. Cryopreservation  of  Chicken  Semen of  Inbred  or  Specialized  Strains. Poultry Science . 1986, 65(10) :1965–
1971, https://doi.org/10.3382/ps.0651965 Lemoine  M,S.Mignon-Grasteau,  I.Grasseau, M.Magistrini,E.Blesbois (2011) Ability  of  chicken  spermatozoa  to undergo  acrosome  reaction  after liquid  storage  or  cryopreservation. Theriogenology .  2011, 75  (1 ):  122- 130.
Panahi  F,  Niasari-Naslaji  A,  Seyedasgari  F,
Ararooti  T,  Razavi  K  and  Moosavi- Movaheddi AA. 2017.Suplementation  of  tris-based extender with plasma egg yolk of six avian  species  and  camel  skim  milk for chilled preservation of dromedary
camel  semen. Anim  Reprod  Sci . 184:11-19. Rad  HM,  Eslami  M  and  Ghanie  A.  2016. Palmitoleate  enhances  quality  of rooster semen during chilled storage. Amin Reprod Sci . 165:38-45 Thele A, Bailiard A, Seigneurin F, Zerjal T, Boichard  M  and  Blesbois  E.  2018.
Chicken semen cryopreservation and use  for  restoration  of  rare  genetic resourses. Poult Sci .
WWW.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30
165680 .
Westfall  F.  D.,  Birkett  Howarth,  Jr.  1977. Duration of the Antifertility Effect of Glycerol  in  the  Chicken  Vagina Poultry Science . 56 (3): 924–925. Zainuri  LA,  Lukman  HY,  Yanuarianto  O, Sumadiasa  IWA  dan  Rodiah.  2017. Additional  freeze  drying  Fig  fruit (Ficus carica L) filtrate into Tris egg yolk extender and its effect on sperm membrane integrity and acrosome of Kacang Buck. Animal Production 19 (3): 161-166