e-ISSN : 2656-7474 DOI:https://doi.org/10.47685/barakuda45.v4i2.278 2022

## AKTIVITAS PENGHAMBATAN ENZIM ALFA-GLUKOSIDASE DAN TOKSISITAS DARI EKSTRAK ETANOL RUMPUT LAUT Caulerpa
Inhibition Activity Alpha-Glucosidase Enzyme And Toxicity From Ethanol Extract Of Caulerpa Seaweed
Anisa Mulyani 1) , Warsidah 1*) ,  Mega Sari Juane Sofiana 1) , Sukal Minsas 1) , Riza Linda 2) Ikha Safitri 1)
1 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tanjungpura, Pontianak, Indonesia
2 Program Studi Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tanjungpura, Pontianak, Indonesia
*) Korespondensi: warsidah@fmipa.untan.ac.id
Diterima: 11 September 2022; Disetujui: 4 November 2022

## ABSTRAK
Caulerpa adalah salah satu spesies dari rumput laut hijau yang terdapat di Pulau Lemukutan, Kalimantan  Barat. Caulerpa memiliki  kandungan  senyawa  bioaktif  yang  berpotensi  dapat menghambat  enzim  alfa-glukosidase  bagi  penderita  diabetes  melitus.  Penghambatan  pada enzim alfa-glukosidase akan memberikan dampak penundaan penyerapan glukosa. Selain itu, perlu dilakukannya uji toksisitas untuk melihat medeteksi efek toksik dan menilai keamanan dalam  suatu  penggunaan  senyawa.  Oleh  karena  itu,  tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui aktivitas penghambatan enzim alfa-glukosidase dan toksisitas dari ekstrak etanol rumput laut Caulerpa di  Perairan  Pulau  Lemukutan.  Pengujian  kandungan  metabolit  sekunder  secara kualitatif  ditentukan  dari  uji  fitokimia.  Pengujian  aktivitas  penghambatan  enzim  alfa- glukosidase  menggunakan  reaksi  enzimatis,  sedangkan  uji  toksisitas  menggunakan  metode BSLT. Hasil  persentase  rendemen  ekstrak etanol Caulerpa yaitu sebesar  3,66%. Kandungan senyawa  bioaktif  dalam  ekstrak  etanol Caulerpa mengandung  positif  senyawa  alkaloid, flavonoid,  saponin,  tanin,  steroid,  dan  fenolik.  Penghambatan  enzim  alfa-glukosidase memiliki  persentase  penghambatan  tertinggi  dengan  konsentrasi  300  ppm  menunjukkan persen inhibisi sebesar 16,85%. Toksisitas memperoleh nilai  LC 50 sebesar 598,19 ppm  yang tergolong toksik rendah.
Kata Kunci : caulerpa , penghambatan enzim alfa-glukosidase, toksisitas

## ABSTRACT
Caulerpa  is  a  green  macroalgae  found  on  Lemukutan  Island,  West  Kalimantan.  Caulerpa contains bioactive compounds that have potential to inhibit the alpha-glucosidase enzyme for people with diabetes mellitus. Inhibition of the alpha-glucosidase enzyme will have an impact on  delaying  glucose  absorption.  In  addition,  it  is  necessary  to  carry  out  a  toxicity  test  to detect toxic effects and assess safety in the use of compounds. Therefore, the purpose of this study was to determine the inhibitory activity of the alpha-glucosidase enzyme and the toxicity of  the  ethanolic  extract  of  Caulerpa  seaweed  in  Lemukutan  Island  waters.  Identification  of secondary  metabolites  was  determined  from  phytochemical  tests.  Inhibitory  activity  of  the alpha-glucosidase  enzyme  determined  by  using  enzymatic  reactions,  while  the  toxicity  by method  of  BSLT.  The  showed  that  the  percentage  yield  of  Caulerpa  ethanol  extract  was 3.66%.  The  content  of  bioactive  compounds  in  the  ethanolic  extract  of  Caulerpa  contains
e-ISSN : 2656-7474 DOI:https://doi.org/10.47685/barakuda45.v4i2.278 2022
positive alkaloids, flavonoids, saponins, tannins, steroids, and phenolics. The inhibitory of the alpha-glucosidase  enzyme  had  the  highest  percentage  of  inhibition  with  a  concentration  of 300  ppm  indicating  a  percent  inhibition  of  16.85%.  Toxicity  obtained  LC 50 value  of  598.19 ppm which is classified as low toxic.
Keywords : caulerpa, inhibition of alpha-glucosidase enzyme, toxicity

## PENDAHULUAN
Rumput laut adalah salah satu sumber daya hayati laut yang mempunyai senyawa bioaktif.  Salah  satu  rumput  laut  yang terdapat  di  Pulau  Lemukutan  adalalah Caulerpa (Trianasta et al ., 2021). Caulerp a dikenal dengan anggur laut yang bersifat edible yaitu  dapat  dikonsumsi sebagai  bahan  pangan  oleh  masyarakat Indonesia  (Ridhowati  and  Asnani,  2016). Caulerpa memiliki senyawa bioaktif yang berpotensi  sebagai  pangan  fungsional. Caulerpa memiliki senyawa seperti alkaloid,  flavonoid,  tanin,  fenol,  dan steroid (Marraskuranto et al ., 2021).
Diabetes melitus adalah suatu penyakit  dengan  gangguan  metabolisme karbohidrat menjadi glukosa yang ditandai meningkatnya  kadar  gula  dalam  darah melebihi  kadar  normal.  Penghambatan enzim alfa-glukosidase cara untuk mengendalikan  kadar  gula  darah.  Enzim ini  dapat  mengubah  karbohidrat  menjadi glukosa  di  dalam  sistem  pencernaan. Penghambatan enzim  alfa-glukosidase akan  memberikan  dampak  penundaan penyerapan  glukosa  (Rachmatiah et  al ., 2015).  Selain  itu,  perlu  dilakukannya  uji toksisitas  untuk  melihat  mendeteksi  efek toksik dari suatu penggunaan senyawa dan menilai keamaan dari dosis penggunaanya bagi manusia (Badan POM, 2014).
Penelitian mengenai aktivitas penghambatan enzim alfa-glukosidase sudah terdapat pada rumput laut
Gracilaria  gigas (Hardoko et  al .,  2015),
Sargassum polycystum , Turbinaria conoides (Puspantari et  al .,  2020),  dan Eucheuma cottonii (Nosa et  al .,  2020). Penelitian  Ikbal  dan  Zainuddin  (2015) telah dilaporkan tentang toksisitas Caulerpa racemosa dengan  nilai  LC 50
6760829,75  ppm.  Namun,  penelitian rumput  laut  hijau  khususnya Caulerpa dari  Pulau  Lemukutan  masih  terbatasnya informasi  ilmiah.  Oleh  karena  itu,  perlu dilakukan penelitian ini untuk mengetahui aktivitas penghambatan enzim alfa- glukosidase  dan  toksisitas  ekstrak  etanol rumput  laut Caulerpa dari  Perairan  Pulau Lemukutan, Kalimantan Barat.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan Oktober  2021-Maret  2022.  Pengambilan sampel Caulerpa diperoleh  dari  Perairan Pulau  Lemukutan,  Bengkayang.  Pengujian ekstraksi dan uji toksisitas di Laboratorium Ilmu  Kelautan,  Universitas  Tanjungpura Pontianak.  Pengujian  fitokimia  dilakukan di Laboratorium Politeknik Negeri Pontianak. Pengujian penghambatan enzim alfa-glukosidase di Laboratorium Biofarmaka, Institut Pertanian Bogor. Sampel Caulerpa dicuci bersih menggunakan air tawar. Kemudian sampel dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan dengan  suhu  ruang.  Setelah  itu,  sampel yang sudah dihaluskan kecil-kecil ditimbang  sebanyak  178  g  di  maserasi dengan pelarut etanol sebanyak 3 L selama 3x24  jam.  Selanjutnya  hasil  maserasi disaring  dan  filtrat  dievaporasi.  Uji fitokimia dilakukan secara kualitatif meliputi  uji  flavonoid,  saponin,  steroid, alkaloid, fenolik, dan tanin.
Uji penghambatan enzim alfa- glukosidase  dilakukan  secara in  vitro . Ekstrak  etanol Caulerpa sebanyak  10  μL dilarutkan  dalam  DMSO.  Selanjutnya ditambahkan  50  μL  larutan  buffer  fosfat, 25  μL  pNPG,  dan  25  μL  larutan  enzim alfa-glukosidase.  Setelah  itu,  diinkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit kemudian
e-ISSN : 2656-7474 DOI:https://doi.org/10.47685/barakuda45.v4i2.278 2022
ditambahkan  100  μL  Na 2 CO 3 .  Kemudian diukur absorbansi menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang 410 nm.
Uji  toksisitas  dilakukan  menggunakan metode Brine  Shrimp  Lethality  Test .  Telur Artemia  salina ditetaskan  1  g  ke  dalam gelas  beaker  berisi  air  laut  500  mL  dan diaerasi  dengan  penerangan  lampu  selama 48 jam. Setelah itu, pembuatan larutan stok sampel  ditimbang  sebanyak  0,035  mg  dan ditambahkan tween 80  sebanyak  3  tetes.
Kemudian  dari  larutan  stok  dimasukan  ke dalam masing-masing botol vial 10 mL air laut  dan  masukkan  sebanyak  10  larva A. salina. Setelah  itu,  botol  vial  disimpan pada  suhu  kamar  selama  24  jam  di  bawah lampu Tube lamp .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Preparasi dan Ekstraksi Sampel
Sampel Caulerpa dicuci  dengan  air tawar  untuk  menghilangkan  pasir  dan kotoran  yang  menempel  pada  talus. Sampel  dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan  dan  tidak  terkena  sinar  matahari secara  langsung  agar  kandungan  senyawa bioaktif tidak mengalami kerusakan. Simplisia Caulerpa dipotong  kecil-kecil dikarenakan interaksi kontak pelarut dengan  sampel  lebih  besar  sehingga ekstrak  yang  ada  di  dalam  sampel  mudah larut  ke  dalam  pelarut  supaya  penarikan senyawa  berlangsung  secara  maksimal. Mekanisme  kerja  metode  maserasi  yaitu melakukan  proses  perendaman  sampel Caulerpa yang  mengakibatkan terjadi perbedaan tekanan di dalam dan di luar sel yang  akan  terjadi  pemecahan  dinding  sel, sehingga senyawa yang berada di sitoplasma  akan  terlarut  dalam  pelarut (Mokoginta et al ., 2021).

## Rendemen
Hasil  persentase  rendemen  ekstrak etanol Caulerpa yaitu 3,66%, dengan berat sampel  sebesar  178  g  dan  berat  ekstrak sebanyak  6,51  g  (Tabel  1).  Berdasarkan penelitian  Marfuah et  al .  (2018)  hasil
rendemen ekstrak etanol Caulerpa racemosa sebesar  2,18%  dengan  berat sampel  yaitu  600  g  dan  berat  ekstrak sebesar 13,09 g.
Tabel 1. Hasil Rendemen Ekstrak Etanol
Caulerpa Berat sampel awal (g) Berat ekstrak (g) Rendemen (%) 178 6,51 3,66 Semakin  tinggi  persentase  rendemen rumput laut menunjukan senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  di dalamnya juga semakin banyak. Perbedaan banyak sedikitnya hasil persentase rendemen  yang  dihasilkan  dari  suatu sampel  hasil  ekstraksi  dipengaruhi  oleh beberapa  faktor  seperti  waktu  ekstraksi, lamanya  perendaman,  jenis  pelarut,  suhu, rasio  berat  bahan  dengan  volume  pelarut, dan pengadukan (Gazali et al ., 2018).

## Uji Fitokimia
Pengujian  fitokimia  dilakukan  secara kualitatif  untuk  mengidentifikasi  senyawa metabolit sekunder  yang terdapat di dalam ekstrak  etanol Caulerpa .  Berdasarkan (Tabel  2)  menunjukan  ekstrak  etanol Caulerpa mengandung  positif  senyawa fenolik,  tanin,  steroid,  flavonoid,  alkaloid, dan  saponin.  Penelitian  Marraskuranto et al. (2021)  bahwa  hasil  ekstrak  metanol Caulerpa  racemosa mengandung  positif senyawa  tanin,  alkaloid,  fenol,  flavonoid, dan steroid.
Tabel 2. Hasil Fitokimia Ekstrak Etanol
Caulerpa Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Alkaloid + Flavonoid + Saponin + Tanin + Steroid + Fenolik +
Keterangan : (+) = ada senyawa (  ) = tidak ada senyawa
e-ISSN : 2656-7474 DOI:https://doi.org/10.47685/barakuda45.v4i2.278 2022 Pengujian fitokimia berdasarkan perubahan  warna  dan  endapan  yang dihasilakan.  Senyawa  alkaloid  terdapat hasil  positif  dengan  perubahan  warna menjadi  orange.  Senyawa  flavonoid  dan fenolik  menghasilkan  hasil  positif  degan perubahan  warna  kehitaman.  Senyawa saponin  memiliki  hasil  positif  dengan ditandai  buih.  Senyawa  tanin  mengandung hasil  positif  dengan  perubahan  warna  biru kehitaman. Senyawa steroid memiliki hasil positif  berubah  warna  menjadi  hijau kebiruan.

## Penghambatan Enzim Alfa-Glukosidase
Pengujian enzim alfa-glukosidase menghidrolisis  substrat  pNPG  menjadi glukosa  dan  p-nitrofenol  yang  berwarna kuning. Aktivitas enzim diukur berdasarkan  hasil  absorbansi  p-nitrofenol yang terbentuk. Apabila memiliki kemampuan  menghambat  aktivitas  enzim alfa-glukosidase,  maka  p-nitrofenol  yang dihasilkan  akan  menyebabkan  intensitas warna kuning semakin sedikit.
Tabel 3. Hasil Penghambatan Alfa-

## Glukosidase Ekstrak Etanol

## Caulerpa
Sampel Konsentrasi (ppm) % Inhibisi Ekstrak Etanol Caulerpa 100 5,48 150 7,80 200 10,80 250 11,82 300 16,85 Pada  Tabel  3.  menunjukkan  bahwa nilai  persentase penghambatan enzim alfa-
glukosidase mengalami peningkatan seiring dengan kenaikan konsentrasi sampel  ekstrak Caulerpa .  Persentase penghambatan  tertinggi  pada  ekstrak etanol Caulerpa dengan  konsentrasi  300 ppm  dengan  persen  inhibisi  sebesar 16,85%. Berdasarkan penelitian Nosa et al.
(2020)  bahwa  kappa  karaginan Eucheuma cottonii memiliki  konsentrasi  teringgi 10.000  ppm  dengan  nilai  inhibisi  58,50%
dan  memperoleh  nilai  IC 50 sebesar  5,46 g/mL.  Ekstrak  etanol Caulerpa pada konsentrasi 300 ppm belum dapat menghambat 50% aktivitas enzim sehingga tidak  dapat  diketahui  nilai  IC 50 yang disebabkan  oleh  konsentrasi  yang  tidak terlalu tinggi sehingga kemungkinan dengan konsentrasi yang lebih tinggi dapat menghambat 50% aktivitas enzim.

## Toksisitas
Pengujian  toksisitas  pada  ekstrak etanol Caulerpa untuk  uji  pendahuluan guna  mengetahui  adanya  bioaktivitas  dari ekstrak Caulerpa .  Pada  uji  toksisitas menggunakan  hewan  uji  larva  udang  yang ditetaskan selama 48 jam di dalam air laut dan  diketahui  sifat  toksik  selama  24  jam berdasarkan  jumlah  kematian A.  salina.
Larva A.  salina saat  48  jam  sudah  aktif bergerak  dan  pada  fase  naupli  serta memiliki  struktur  anatomi  seperti  mulut, lapisan kulit, dan saluran pencernaan  yang masih sederhana (Jelita et al ., 2020).
Gambar 1. Grafik Nilai Probit Dengan Log Konsentrasi Ekstrak Etanol
Caulerpa
Berdasarkan  (Gambar  1)  ekstrak etanol Caulerpa memperoleh  nilai  LC 50 sebesar  598,19  ppm  yang  tergolong  toksik rendah karena termasuk ke dalam klasifikasi  LC 50 rentang  500-1000  ppm. Menurut  penelitian  Melati,  (2021)  bahwa rumput  laut  hijau Boergesenia  forbesii diperoleh  nilai  LC 50 sebesar  508,74  ppm. Oleh  karena  itu,  ekstrak  etanol Caulerp
e-ISSN : 2656-7474 DOI:https://doi.org/10.47685/barakuda45.v4i2.278 2022
berpotensi sebagai bioaktivitas yang lainnya  seperti  antifungi,  antibakteri,  dan dapat  dikembangkan  untuk  bahan  baku obat.

## SIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian ini ekstrak etanol Caulerpa positif
mengandung  senyawa  bioaktif  seperti saponin, alkaloid, flavonoid, steroid, tanin, dan  fenolik.  Persentase  rendemen  ekstrak etanol Caulerpa yaitu  sebesar  3,66  %, penghambatan enzim alfa-glukosidase ekstrak  etanol Caulerpa pada  konsentrasi 300  ppm  yaitu  sebesar  16,85  %,  dan toksisitas  sebesar  LC 50 598,19  ppm  yang tergolong toksik rendah.

## DAFTAR PUSTAKA
[BPOM]  Badan  Pengawasan  Obat  dan Makanan.  (2014).  Peraturan  Kepala Pengawas Obat dan Makanan
Republik  Indonesia  Nomor  7  Tahun 2014 Tentang Pedoman Uji Toksisitas Nonklinik  secara in  vivo .  Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia: Jakarta.
Gazali M, Nurjanah & Zamani NP. (2018).
Eksplorasi  Senyawa  Bioaktif  Alga Cokelat Sargassum sp.Agardh sebagai
Antioksidan  dari  Pesisir  Barat  Aceh.
JPHPI , 2,(1), 167–178.
Hardoko  H,  Febriani  A  &  Sirantri  T. (2015). Invitro Antidiabetic Activities of  Agar,  Agarosa,  and  Agaropectin from Gracilaria  gigas Seaweed. J Pengolah  Has  Perikan  Indones ,  18,
(2), 128–139.
Ikbal  M  &  Zainuddin  EN.  (2015).  Uji Toksisitas  Ekstrak  Metanol  Rumput Laut Hijau ( Caulerpa racemosa ) pada Larva Udang Windu ( Penaeus monodon) . Octopus, 4, (2), 417–421. Jelita  SF,  Setyowati  GW,  Ferdinand  M, Zuhrotun  A  &  Sandra  M.  (2020).  Uji Toksisitas  Infusa Acalypha  siamensis Dengan Metode Brine Shrimp
Lethality  Test (BSLT). Farmaka , 18,(1), 14–22.
Marfuah  I,  Dewi  EN  &  Rianingsih  L.
(2018). Kajian Potensi Ekstrak Anggur  Laut  ( Caulerpa  racemosa )
Sebagai Antibakteri Terhadap Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus . J  Peng  Biotek  Has  Pi ,  7,  (1)
7–14.
Marraskuranto  E,  Nursid  M,  Utami  S,
Setyaningsih  I  &  Tarman  K.  (2021). Kandungan Fitokimia, Potensi
Antibakteri  dan  Antioksidan  Hasil Ekstraksi Caulerpa  racemosa dengan Pelarut  Berbeda. JPB    Kelaut  dan Perikan , 16, (1), 1–10. Melati, P. (2021). Uji Aktivitas Antioksidan,  Sitotoksisitas  Dan  Gc-
Ms  Ekstrak  Metanol  Alga  Hijau Boergesenia  Forbesii (HARVEY) Feldmann Dari Pantai Panjang Bengkulu. J  Pengelolaan  Lab  Sains dan Teknol , 1, (1), 10–24.
Mokoginta  TA,  Yudistira  A  &  Mpila  DA.
(2021).  Uji  Aktivitas  Antioksidan
Ekstrak Etanol Rumput Laut Caulerpa racemosa Dari Pulau Mantehage Sulawesi Utara.
PHARMACON , 10, (3), 948–952. Nosa SP, Karnila R & Diharmi A. (2020).
Potensi  Kappa  Karaginan  Rumput Laut  ( Eucheuma  Cottonii )  Sebagai Antioksidan  Dan  Inhibitor  Enzim  α- Glukosidase. Berk  Perikan  Terbubuk , 48, (2), 1–10.
Puspantari  W,  Kusnandar  F,  Hanifah,  NL &  Laily  N.  (2020).  Penghambatan fraksi  fukoidan  rumput  laut  cokelat ( Sargassum polycystum dan Turbinaria  conoides )  terhadap  α- amilase  dan  α-glukosidase. JPHPI , 23, (1), 122–136.
Rachmatiah  T,  Nurvita  H,  D  RT.  (2015). Potensi  Antidiabetes  Pada  Tumbuhan Petai  Cina  ( Leucaena  leucocephala (Lam).De  Wit). Sainstech ,  25,  (1) 115–118.
Ridhowati  S  &  Asnani.  (2016).  Potensi Anggur  Laut  Kelompok Caulerpa
e-ISSN : 2656-7474 DOI:https://doi.org/10.47685/barakuda45.v4i2.278 2022
racemosa sebagai  Kandidat  Sumber Pangan Fungsional
Indonesia.
Oseana, 41, (4), 50–62.
Trianasta  M,  Warsidah  &  Sofiana  MSJ. (2021).  Aktivitas  Antibakteri  Dari
Fungi  Endofit Caulerpa  racemosa
Asal Perairan Pulau Lemukutan. Indo. J. Pure App. Chem , 4, (3), 109–115.