## PENGARUH SUHU DAN pH TERHADAP HIDROLISIS CMC OLEH
ENZIM SELULASE DARI ISOLAT  BAKTERI LARVA KUPU-

## KUPU COSSUS COSSUS
Maswati Baharuddin 1 , Abd. Rauf Patong 2 , Ahyar Ahmad 2 , Nursiah La nafie 2
1 Dosen Jurusan Kimia Fak. Sains dan Teknologi UIN Alauddin Makassar 2 Jurusan Kimia FMIPA Universitas Hasanuddin
Email: bmaswati@gmail.com
Abstract : Cellulase  enzymes  can  be  isolated  from  microorganisms that are resistant to high pH and temperature. Cellulase enzyme has a different  character  depending  on  the  source  and  the  enzyme environment.  This  study  aimed  to  characterize  the  cellulase  enzymes from bacteria isolates CC2 dan CC4 which includes the determination of  the  optimum  pH  and  temperature  of  the  enzyme  activity.  In  this study,  an  enzyme  produced  from  isolates  of  bacteria  larva  Cossus cossus  by  centrifugation cold  4  °  C  with a  speed  of  3000  rpm  for  15 min to obtain a crude extract of the enzyme cellulase. Determination of  pH  performed  using  sitrat  acid  buffer (3;    3,6;  4;  4,6;    5;5,  dan  5) and phosphate  buffer  with  pH  variation (6,0;  6,5;  7,0;  7,5;  dan  8,0) , while  for  the  determination  of  done  an  optimum  temperature variations  in  temperature  (20,  30,  40,  50,  60,  70,  80,  dan  90)  °  C enzyme  activity  were  further  tested  using  the  Nelson-Samogy measured  on  a  UV-Vis  spekrofotometer  at  a  wavelength  of  545  nm. Result showed greatest activity isolat CC2 at pH 7,5 enzyme cellulase activity of 15,8806 x 10 -4 U / mL while the optimum temperature of 70
°  C  with  the  activity  obtained  at 19,4121  x  10 -4 U  /  mL.  Greatest activity isolat CC4 at pH 4 enzyme cellulase activity of 15,4069 x 10 -4
U  /  mL  while  the  optimum  temperature  of  70  °  C  with  the  activity obtained at 20 ,3487 x 10 -4 U / mL
Key words: Cossus cossus, Cellulase, pH, Temperature.

## I. PENDAHULUAN
ikroorganisme  selulolitik  dari  kelompok  bakteri  memiliki  tingkat pertumbuhan  yang  cepat  sehingga  waktu  yang  dibutuhkan  untuk produksi  enzim  lebih  pendek.  Selain  itu,  tingkat  variasi  genetik kelompok  bakteri  sangat  beragam  sehingga  memungkinkan  dilakukan  rekayasa genetik untuk optimasi produksi maupun aktivitas selulasenya.
M
344 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains )
Mikroorganisme  mempunyai  masa  pertumbuhan  yang  bervariasi  dimana dalam  aktivitas  metabolisme  tersebut  mikroorganisme  memiliki  beberapa  fase dalam  pertumbuhnnya.  Pada  awal  pertumbuhan  fase  yang  dilalui  adalah  fase pertumbuhan kemudian aktivitas metabolisme akan menurun setelah mikroorganisme  melewati  fase  puncak  pertumbuhannya,  fase  penurunan  ini disebut death  phase .  Fase–fase  pertumbuhan  tersebut  sangat  berpengaruh terhadap  enzim  yang  dihasilkan  oleh  mikroorganisme  untuk  membantu pencernaan  makanannya.  Pertumbuhan  mikroorganisme  dipengaruhi  oleh  faktor lingkungan  seperti  suhu,  pH  dan  ketersediaan  nutrisi  untuk  pertumbuhan mikroorganisme.
Bakteri  selulolitik  menghasilkan  enzim  secara  induktif,  yaitu  enzim  yang dihasilkan  karena  adanya  induktor  dari  senyawa  kimia  tertentu  dalam  media produksinya. Salah satu contoh enzim induktif yaitu enzim yang dihasilkan karena di  dalam  media  pertumbuhan  hanya  ada  selulosa  sebagai  satu-satunya  sumber karbon,  maka  untuk  mempertahankan  hidupnya  mikroorganisme  tersebut  harus menghasilkan  selulase  agar  dapat  menghidrolisis  selulosa  menjadi  glukosa. Glukosa  merupakan  gula  sederhana  yang  dapat  langsung  digunakan  tanpa  harus didegradasi  terlebih  dahulu  sebagai  sumber  karbon  untuk  memasuki  jalur glikolisis  dalam  proses  metabolismenya.  Akibatnya  pembelahan  sel  berlangsung dengan cepat dan jumlah sel bertambah banyak sehingga konsentrasi enzim yang dihasilkan akan meningkat dan aktivitas enzim yang dihasilkan juga akan semakin besar.
Telur Cossus  cossus disisipkan  diantara  celah-celah  kulit  kayu  dimana perkembangan  embrio  telur  berlangsung  selama  12  sampai  15  hari.  Larva Cossidae memiliki  karakteristik  yang  mencerminkan  cara  hidup  mereka, mengebor  pada  kayu  dan  batang.  Kepala  besar,  lebih  panjang  dan  lebar  dengan rahang  besar. Prothorax berbentuk  seperti  plat  yang  khas  atau  perisai  yang memiliki ekor margin halus pada Cossus (Southdene Sdn,1986 : 11 ).
Gambar 1. Siklus hidup Coccus coccus
Maswati dkk. , Pengaruh Suhu dan pH Terhadap Hidrolisis Cmc Oleh Enzim Selulase … _ 345
Bakteri selulolitik adalah bakteri yang memiliki kemampuan menguraikan selulosa  menjadi  monomer  glukosa  dan  menjadikannya  sebagai  sumber  karbon dan sumber energi. Pemanfaatan bakteri selulolitik yaitu sebagai penghasil enzim selulase  yang  digunakan  untuk  menghidrolisis  selulosa.  Setiap  bakteri  selulolitik menghasilkan kompleks enzim selulase berbeda, tergantung gen yang dimiliki dan sumber  karbon  yang  digunakan.  Pemanfaatan  bakteri  sebagai  penghasil  enzim dipilih  karena  mempunyai  beberapa  keuntungan  antara  lain:  biaya  produksi murah,  dapat  diproduksi  dalam  waktu  singkat,  mempunyai  kecepatan  tumbuh tinggi serta mudah dikontrol (Dyah dkk, 2012: 34-45).
Mikroorganisme  selulolitik  adalah  mikroorganisme  penghasil  selulase, selulase  merupakan  kelompok  enzim  yang  mampu  memutus  ikatan  β-1,4 glukosidik  dalam  molekul  selulosa,  selodekstrin,  selobiosa  dan  turunan  selulosa lainnya.  Selulosa  merupakan  biomolekul  yang  paling  banyak  ditemukan  di  alam dan  merupakan  unsur  utama  penyusun  kerangka  tumbuhan.  Hidrolisis  selulosa dialam berlangsung sangat lambat, hal ini disebabkan karena selulosa mempunyai struktur yang rapat pada bagian kristalin selulosa resisten terhadap aksi individual selulase  (Faisal,  2013).    Kristalinitas  selolusa  merupakan  faktor  utama  yang menentukan  biodegradibilitas  selulosa  oleh  enzim  selulolitik  sehingga mikroorganisme  yang  memiliki  kemampuan  menghidrolisis  Kristal  yang  tinggi berpotensi untuk menghidrolisis selulosa yang terdapat di alam.
Gambar 2. Struktur Selulosa
Hidrolisis  selulosa  secara  enzimatis  dengan  enzim  selulase  akan menguraikan  selulosa  menjadi  bentuk  yang  sederhana  antara  lain  selobiosa  dan
346 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains )
glukosa.  Kompleks  selulase  digunakan  secara  komersial  dalam  pengolahan  kopi, industri tekstil, deterjen, pulp dan kertas bahkan kadang-kadang digunakan dalam industri  farmasi.  Mikroba  selulolitik  adalah  mikroba  yang  mempunyai  enzim untuk menghidrolisis selulosa dan kristalin selulosa. Ada tiga enzim selulase yang berperan  dalam  hidrolisis,  yaitu  (1)  endo-1,4-β-D-glukanase  yang  bekerja  secara acak sepanjang rantai selulosa menghasilkan situs baru untuk selobiohidrolase, (2) ekso-1,4-β-D-glukan  yang  bekerja  sebagai  eksoglukanase  melepas  selobiosa sebagai produk utama, dan (3) 1,4-β-D-glukosidase yang menghidrolisis selobiosa menjadi glukosa.

## II. METODOLOGI  PENELITIAN

## A. Produksi Enzim
Isolat  enzim  selulase  diperoleh  dari  larva  Cossus  cossus.  Selanjutnya  dua isolat terpilih (Isolat CC2 dan CC4) diproduksi untuk karakterisasi suhu dan pH. Produksi  enzim  dilakukan  dengan  cara  menuangkan  10  mL  biakan  bakteri  (stok inokulum)  pada  media  produksi  yang  telah  disterilisasi  terlebih  dahulu  dalam autoklaf pada suhu 121 o C selama 15 menit, kemudian diinkubasi pada suhu 40 o C selama 48 jam dengan kecepatan 180 rpm. Untuk memperoleh supernatan enzim dilakukan  sentrifugasi  dingin  dengan  kecepatan  3000  rpm  selama  15  menit  pada suhu 4 o C. (Emy Fitriani, 2003)

## B. Karakterisasi enzim selulase
1. pH Optimum
pH  optimum  ditentukan  dengan  cara  menyediakan  7  tabung  reaksi  yang berisi  1  mL  larutan  CMC  1%,  kemudian  ditambahkan  1  mL    buffer  dengan  pH berbeda (buffer fosfat pH 6,0; 6,5; 7,00; 7,5 dan 8,0 serta buffer asam borat-borax pH 8,6 dan 9,0). Kedalam masing-masing tabung ditambahkan 1 mL ekstrak kasar enzim  selulase,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu  50 o Cselama  1  jam.Selanjutnya dilakukan  pemanasan  selama  20  menit  pada  penangas  air  mendidih.  Kadar  Gula reduksi ditentukan menggunakan metode Nelson-Semogy.

## 2. Suhu Optimum
Suhu optimum ditentukan dengan cara menyediakan 5 buah tabung reaksi yang  berisi  1  ml  CMC  1%  dan  1  mL  larutan  buffer  pH  optimum  kemudian ditambahkan 1 ml ekstrak kasar  enzim selulase. Campuran diinkubasi pada suhu
Maswati dkk. , Pengaruh Suhu dan pH Terhadap Hidrolisis Cmc Oleh Enzim Selulase … _ 347
berbeda  (30 o C,  40 o C,  50 o C,  60 o C,  dan  70 o C)  selama  1  jam.  Setiap  campuran dalam  tabung  reaksi  dipanasan  dalam  penangas  air  mendidih  selama  20  menit. Kadar  Gula  reduksi  dalam  hidrolisat  ditentukan  dengan  menggunakan  metode Nelson-Samogy. (Masfufatun, 2012)

## C. Pengukuran aktivitas enzim selulase
Pada  pengukuran  aktivitas  enzim  diawali  dengan  Pembuatan  larutan standar.  Pembuatan  larutan  standar  glukosa  diawali  dengan  membuat  larutan induk glukosa 1000 ppm yang dibuat dengan cara menimbang 0,01 gram glukosa kemudian  dilarutkan  dengan  aquades  sampai  volume  10  mL.  larutan  induk kemudian diencerkan hingga diperoleh konsentrasi (10 ppm, 20 ppm, 30 ppm, 40 ppm dan 50 ppm) dalam 10 mL.
Larutan  standar  yang  telah  disiapkan  (10  ppm,  20  ppm,  30  ppm,  40  ppm dan  50  ppm)  serta  blanko  dipipet  1  mL  kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi  yang  berbeda,  ditambahkan  1  mL  reagen  Nelson  dan  dikocok.  Setiap tabung  reaksi  dipanaskan  dalam  penangas  air  mendidih  selama  20  menit  lalu didinginkan  kemudian  ditambahkan  1  mL  reagen  Arsenomolybdat.  Campuran dikocok  hingga  homogen  lalu  ditambahkan  7  mL  aquades,  dikocok  kembali sebelum  diukur  pada  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang maksimum.  Perlakuan  yang  sama  dilakukan  pada  sampel  (variasi  pH  dan suhu).Satu  unit  aktivitas  enzim  didefinisikan  sebagai  banyaknya  enzim  yang menghasilkan 1 µmol glukosa per menit (U/mL).
Aktivitas Enzim =
x x

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengukuran  aktivitas  CMC-ase  dilakukan  dengan  mengukur  gula pereduksi yang dihasilkan selama proses hidrolisis substrat oleh enzim. Salah satu tujuan  pengukuran  aktivitas  enzim  dalam  studi  mikrobiologi  yaitu  untuk menyeleksi  strain  mikroba  yang  dapat  menghasilkan  enzim  dengan  aktivitas tertinggi  dalam  menghidrolisis  substratnya  (Dewi,  2003).  Aktivitas  enzim ditentukan  dengan  mengukur  ekstrak  kasar  enzim  menggunakan  metode  Nelsom Samogy.  Metode  Nelsom  Samogy  merupakan  metode  yang  digunakan  dalam penentuan  kadar  glukosa  sebagai  gula  pereduksi  hasil  aktivitas  enzim  selulase.
348 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains )
Metode  ini  didasarkan  pada  reaksi  reduksi  tembaga  (II)  menjadi  tembaga  (I) dalam  larutan  yang  mengandung  K-Na  tartrat,  kemudian  penambahan  reagen arsenomolibdat  menghasilkan  senyawa  kompleks  berwarna  biru  yang  dapat diukur serapannya pada spektrofotometer UV-Vis. (Musfufatun, 2012).
Pencampuran  sampel  dengan  pereaksi  Nelson,  dilakukan  pemanasan selama  20  menit  untuk  mempercepat  reaksi  dan  mempertegas  warna  yang menunjukkan  adanya  gula  reduksi.  Pemanasan  tidak  akan  meningkatkan  kadar gula  pereduksi  sebab  CMC  tidak  terhidrolisis  dengan  adanya  pemanasan. Penambahan  reagen  arsenomolybdat  mengakibatkan  terjadinya  oksidasi  ion tembaga  (I)  menjadi  tembaga  (II)  yang  disertai  terbentuknya  komplek molybdenum berwarna biru kehijauan. Semakin tinggi konsentrasi glukosa maka semakin  pekat  intensitas  warna  yang  dihasilkan.  Hasil  yang  diperoleh  dari penelitian ini yakni sampel berwarna hijau muda, hal ini menunjukkan konsentrasi glukosa dalam sampel rendah.
Kemampuan  selulolitik  dapat  berbeda  disebabkan  masing-masing  spesies mikroba  yang  membutuhkan  kulturoptimum  seperti  pH,  suhu  dan  nutrisi  yang berbeda  untuk  memproduksi  enzim  dalam  jumlah  maksimal.Selain  itu,  faktor genetik  juga  mempengaruhi  besarnya  produksi  enzim.  Gen  menentukan suatupembentukan  enzim  yang  berperan  dalam  rangkaian  reaksi  kimia  pada  saat berlangsungnya  metabolisme  selyaitu  anabolisme  dan  katabolisme.  Gen  setiap mikroorganisme  berbeda-  beda  sehingga  masing-  masingmikroorganisme memiliki  sifat  yang  berbeda.  Dari  tiap  gen  memiliki  sifat  yang  spesifik  untuk mengkodeenzim- enzim tertentu. Beberapa jenis gen menurut fungsinya yaitu gen pengatur  dan  gen  struktural.  Genstruktural  menentukan  struktur  enzim  yaitu urutan asam aminonya sedangkan gen pengatur mengarahkanlaju sintesis enzim.

## A. Pengaruh pH Terhadap Aktivitas Enzim
Enzim  yang  dihasilkan  oleh  mikroorganisme  mempunyai  karakteristik yang  berbeda-beda,  hal  ini  dipengaruhi  oleh  faktor  lingkungan  seperti,  suhu,  pH lingkungan  tempat  enzim  bekerja,  konsentrasi  substrat  tertentu  dan  waktu inkubasi.  Semua  enzim  bekerja  dalam  rentang  suhu  tertentu  pada  tiap  jenis mikroorganisme.  Peningkatan  suhu  eksternal  secara  umum  akan  meningkatkan kecepatan  reaksi  kimia  enzim,  tetapi  kenaikan  suhu  yang  terlalu  tinggi  akan menyebabkan terjadinya denaturasi enzim.
Maswati dkk. , Pengaruh Suhu dan pH Terhadap Hidrolisis Cmc Oleh Enzim Selulase … _ 349
Kondisi pH dan temperatur yang optimum akan mendukung enzim dalam melakukan katalisa suatu reaksi dengan baik. Sedangkan temperatur dan pH yang kurang  sesuai  akan  mengakibatkan  kerusakan  atau  tidak  aktifnya  protein  dalam suatu  enzim  sehingga  menyebabkan  fungsi  dan  aktifitas  dari  enzim  tersebut berkurang.
Tabel 1. Penentuan pH optimum enzim selulase Isolat CC2
pH Absorbansi Konsentrasi glukosa / mg/L  Aktivitas enzim/ U/mL 3 0.0506 7.7325 7.1597 x10 -4 3,5 0.0785 10.9767 10.1636 x 10 -4 4 0.0736 10.4069 9.6360 x10 -4 4,5 0.1259 16.4883 15.2669 x 10 -4 5 0.1061 14.1860 13.1351 x10 -4 6 0,0708 10,0813 9.3345  x 10 -4 6,5 0,0777 10.8837 10.0775 x 10 -4 7,0 0,0627 9,1395 8.4625 x 10 -4 7,5 0,1316 17,1511 15,8806 x 10 -4 8,0 0,1075 14,3488 13,2859 x 10 -4
Tabel 2. Penentuan pH optimum enzim selulase Isolat CC4
pH Absorbansi Konsentrasi glukosa / mg/L  Aktivitas enzim/ U/mL 3 0.0944 12.8255 11.8754 x10 -4 3,5 0.0460 7.1976 6.6644 x 10 -4 4 0.1272 16.5395 15.4069 x10 -4 4,5 0.0907 12.3953 7.3965 x 10 -4 5 0.0903 12.3488 11.4340 x10 -4 6 0,1151 15,2325 14.1041 x 10 -4 6,5 0,0871 11,9767 11,0895 x 10 -4 7,0 0,0681 9,7674 9,0438 x 10 -4 7,5 0,1244 16,3139 15,1054 x 10 -4 8,0 0,1194 15,7325 14,5671 x 10 -4
350 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains )
Pada isolat CC2 diperoleh aktivitas tertinggi pada pH 7,5 sebesar 15,8806 x  10 -4 sedangkan  isolat  CC4  diperoleh  aktivitas  tertinggi  pada  pH  4  sebesar 15.4069  x10.Berdasarkan  hasil  penelitian,  bakteri  yang  mempunyai  aktivitas optimum  pada  pH  4-7  termasuk  dalam  golongan  bakteri  asidofil,  yaitu  golongan yang  mampu  tumbuh  pada  pH  asam.  Penelitian  lain  dilakukan  oleh  Evi  Fitrianti (2011),  menggunakan Bacillus  circulans sebagai  penghasil  selulase  dengan aktivitas  sebesar  97,22  x  10 -3 U/mL  pada  pH  7.  Menurut  Meryandini  (2009), kisaran  pH  untuk  selulase  tergolong  luas Bacillus  sp .  galur  N-4  menghasilkan selulase  yang  aktif  pada  rentang  5  –  10.  Immanuel  dkk.  (2006),  melaporkan bahwa enzim selulase dari Cellulomonas menghidrolisis substratnya pada pH 9.
Aktivitas  enzim  dipengaruhi  oleh  pH,  karena  sifat  ionik  gugus  karboksil dan  gugus  amino  mudah  dipengaruhi  oleh  pH.  Perubahan  pH  yang  tidak  sesuai akan  menyebabkan  daerah  katalitik  dan  konformasi  enzim  berubah  (Sumardi, 2010).  Perubahan  pH  juga  menyebabkan  perubahan  tingkat  ionisasi  pada  enzim. Sebagai protein enzim, tidak berbeda dengan protein lain yang berarti mekanisme kerjanya sangat dipengaruhi oleh pH. Jika pH terlalu rendah, maka enzim menjadi tidak aktif, demikian juga jika pH terlalu tinggi, kemungkinan akan menyebabkan denaturasi pada enzim.
Perubahan  pH  berpengaruh  terhadap  aktivitas  enzim  melalui  pengubahan struktur  atau  muatan  residu  asam  amino  yang  berfungsi  dalam  pengikatan substrat.  pH  yang  bervariasi  juga  dapat  menyebabkan  perubahan  struktur  enzim. Hal ini terjadi karena gugus bermuatan (-NH3 + atau –COO - ) yang jauh dari daerah terikatnya  substrat,  yang  mungkin  diperlukan  untuk  mempertahankan  struktur tersier,  akan  mengalami  perubahan  muatan  pada  pH  yang  berbeda.  Hal  ini  akan menyebabkan  terganggunya  ikatan  ionik  sehingga  struktur  dasar  enzim  berubah. Perubahan  konformasi  enzim  akan  menyebabkan  aktivitas  enzim  menjadi menurun. Aktivitas enzim ditentukan oleh gugus aktif pada rantai samping enzim. Proses katalisis hidrolisis selulosa oleh selulase terjadi pada sisi aktif asam amino glutamat. Fraksi gugus –COOH dari asam amino glutamat akan bermuatan negatif membentuk  –COO-  pada  kondisi  pH  6-7,5  (Diah,  2007).  Kisaran  pH  ini  sesuai dengan aktivitas optimum enzim selulase dalam menghidrolisis substratnya.

## B. Pengaruh Suhu Terhadap Aktivitas Enzim
Selain  pH,  suhu  memainkan  peranan  yang  sangat  penting  dalam  reaksi enzimatis.  Kisaran  suhu  untuk  aktivitas  enzim  menentukan  sifat  pertumbuhan
Maswati dkk. , Pengaruh Suhu dan pH Terhadap Hidrolisis Cmc Oleh Enzim Selulase … _ 351
mikroorganisme.  Suhu  tertinggi  dimana  mikroorganisme  masih  dapat  tumbuh disebut  suhu  maksimum,  sedangkan  minimum  adalah  suhu  terendah  di  mana mikroorganisme  masih  dapat  tumbuh.  Suhu  tidak  hanya  mempengaruhi  aktivitas enzim, namum mempengaruhi sifat fisik membran sel. Permeabilitas membran sel tergantung  pada  kandungan  dan  jenis  lipida.  Peningkatan  5-10 o C  di  atas  suhu optimum dapat menyebabkan proses lisis dan kematian sel mikro.Kenaikan suhu sampai  suhu  optimum  akan  mempercepat  reaksi  enzim  karena  energi  kinetik bertambah.  Bertambahnya  energi  kinetik  akan  mempercepat  gerak  vibrasi, translasi,  dan  rotasi  baik  enzim  maupun  substrat.Penentuan  suhu  optimum dilakukan  variasi  suhu  (20,  30,  40,  50,  60,  70,  80,  dan  90) o C  yang  selanjutnya diuji aktivitas enzimnya menggunakan metode Nelson-Samogy yang diukur pada spekrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  545  nm  sehingga  diperoleh hasil seperti pada tabel berikut:
Tabel 3. Penentuan suhu optimum enzim selulase Isolat CC2
Suhu /oC Absorbansi Konsentrasi glukosa / mg/L Aktivitas enzim/ U/mL 20 0,1082 14.4302 13.3612 x 10 -4 30 0,1196 15,7558 14,5887 x 10 -4 40 0,1191 15,6976 14,5348 x 10 -4 50 0,1201 15,8139 14,6425 x 10 -4 60 0,1262 16,5232 15,2992 x 10 -4 70 0,1644 20,9615 19,4121 x 10 -4 80 0,1201 15,8139 14,6425 x 10 -4 90 0,0902 12,3372 11,4233 x 10 -4

## Tabel 3. Penentuan Suhu optimum enzim selulase Isolat CC4
Suhu /oC Absorbansi Konsentrasi glukosa / mg/L Aktivitas enzim/ U/mL 20 0,0957 12,5359 11,6104 x 10 -4 30 0,1256 16,4534 15,2346 x 10 -4 40 0,1167 15,4186 14,6317 x 10 -4 50 0,1200 15,8139 14,6425 x 10 -4
352 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains ) 60 0,1418 18,3372 16,9788 x 10 -4 70 0,1731 21,9767 20,3487 x 10 -4 80 0,1264 16,5465 15,3208 x 10 -4 90 0,1039 13,9302 12,8983 x 10 -4
Berdasarkan  tabel  3  untuk  isolat  CC2  dan  CC4  diperoleh  suhu  optimum pada suhu 70  C dengan aktivitas untuk isolat bakteri CC2 sebesar 19,4121 x 10 -4 U/ml  sedangkan  isolat  CC4  sebesar  20,3487  x  10 -4 U/ml.  Pada  suhu  optimum reaksi  enzimatis  berlangsung  paling  cepat  karena  aktivitas  enzim  maksimum. Peningkatan suhu menyebabkan aktivitas ekstrak kasar enzim meningkat. Hal ini disebabkan  oleh  meningkatkan  energi  kinetik,  sehingga  menambah  intensitas tumbukan  antara  substrat  dengan  enzim.  Pada  suhu  optimum,  tumbukan  antara enzim  dan  substrat  sangat  efektif,  sehingga  pembentukan  kompleks  enzim- substrat  makin  mudah  dan  produk  yang  terbentuk  meningkat.  Kenaikan  suhu  di atas  suhu  optimum,  protein  enzim  akan  mengalami  perubahan  konformasi sehingga  gugus  reaktif  terhambat  bahkan  mengalami  denaturasi  dan  kehilangan aktivitas katalitiknya (inaktivasi). Proses inaktivasi enzim pada  suhu yang sangat tinggi  berlangsung  melalui  dua  tahap  yaitu  diawali  dengan  pembukaan  parsial struktur  sekunder,  tersier  dan  atau  kuartener  molekul  enzim  akibat  putusnya ikatan-ikatan kovalen maupun ikatan hidrofobik dan selanjutnya terjadi perubahan struktur  primer  enzim  karena  adanya  kerusakan  asam-asam  amino  tertentu  oleh pemanasan.Kenaikan suhu akan mengubah struktur protein yang menyusun enzim sehingga  terjadi  pemutusan  interaksi  nonkovalen  (ikatan  hidrogen,  gaya  van  der Waals dan interaksi lainnya) yang menopang struktur tiga dimensi. Suhu tertentu akan  meningkatkan  aktivitas  enzim  karena  menyediakan  kondisi  optimum  bagi kerja enzim.
Aktivitas  enzim  isolat  CC2  dan  CC4  pada  suhu  80  dan  90 o C  mengalami penurunan. Hal ini diduga karena enzim mulai terdenaturasi. Pada suhu optimum reaksi  enzimatis  berlangsung  paling  cepat  karena  aktivitas  enzim  maksimum. Kenaikan  suhu  di  atas  suhu  optimum  menyebabkan  protein  enzim  mengalami perubahan  struktur  sehingga  aktivitas  enzim  menurun.Adanya  perubahan  suhu juga akan mempengaruhi ikatan hidrogen atau interaksi hidrofobik yang berperan dalam  menjaga  struktur  molekul  enzim.  Perubahan  struktur  akan  mempengaruhi sisi aktif dari enzim.
Maswati dkk. , Pengaruh Suhu dan pH Terhadap Hidrolisis Cmc Oleh Enzim Selulase … _ 353
Pengukuran  pada  spektrofotometer  UV-Vis  dilakukan  dengan  mencari panjang  gelombang  maksimal  untuk  serapan  glukosa  dalam  sampel.  Panjang gelombang maksimal yang diperoleh  yaitu 545 nm. Pada panjang  gelombang ini komponen  warna  dari  pereaksi  Nelson-Samogy  ikut  menyerap  cahaya  sehingga blanko yang digunakan juga ditambahkan dengan pereaksi tersebut.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan,  maka  dapat disimpulkan bahwa :
a. Enzim selulase dari isolat bakteri larva Cossus cossus mempunyai karakteristik pH  yaitu  pH  4  dengan  aktivitas  optimum  sebesar  15,4069 x  10 -4 U/mL  untuk isolat CC4 sedangakan isolat CC2 pada pH 7,5 dengan aktivitas 15,880 x 10 -4 U/mL
b. Enzim  selulase  dari  isolat  bakteri  termofilik  mempunyai  karakteristik  suhu yaitu 70 o C dengan aktivitas optimum sebesar 19,4121 x 10 -4 U/mL isolat CC2 dan isolat CC4 dengan aktivitas 20,3487 x 10 -4 U/mL

## DAFTAR PUSTAKA
Alam,  Sarjono,  dan  Aminin.  “Isolasi  Bakteri  Selulolitik  Termofilik  Kompos Pertanian  Desa  Bayat,  Klaten,  Jawa  Tengah”, Jurnal  Kimia 1,  No.  1,
(2013), h. 190-195.
Ayu,  Dyah  Saropah,  dkk.  “Kinetika  Reaksi  Enzimatis  Ekstrak  Kasar  Enzim Selulase Bakteri Selulolitik Hasil Isolasi Dari Bekatul”, Alchemy 2 No. 1,
(2012), h. 34-45.
Budiman,  Albar  dan  Sigit  Setyawan.  “  Pengaruh  Konsentrasi  Substrat,  Lama Inkubasi  dan  pH  dalam  Proses  Isolasi  Enzim  Xylanase  dengan Menggunakan Media Jerami Padi”, Jurnal . (2010), h. 5-6.
Diah  Natalia  Monica,  Athitya,  “Studi  Aktivitas  Spesifik  Selulase  Dari
Lactobacillus  collinoides Yang  Dimurnikan  Dengan  Pengendapan Bertingkat  Amonium  Sulfat”, Skripsi .  Malang:  Fakultas  Matematika  Dan
Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Brawijaya, 2007
Ervina  Sinaga,  Roida  “Karakterisasi  Enzim  Selulase  dan  Aplikasinya  pada Substrat Limbah Pertanian” Tesis, Bogor:  Fakultas Matematika Dan Ilmu Pengetahuan AlamIPB, 2013.
354 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains )
Fikrida.  “Isolasi  dan  Karakterisasi  Bakteri  Penghasil  Selulase  Ektremofilik  dari Ekosistem  Air  Hitam” Tesis (Bogor:  Fakultas  Matetamtika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam IPB, 2000.
Fitrianti, Emy, “Aktivitas Enzim  Karboksimetil Selulase Bassilus pumilus  Galur
55 pada Berbagai Suhu Inkubasi”, Skipsi , Bogor: Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, 2003.
Hartanti. “Isolasi dan Seleksi Bakteri Selulolitik Termofilik dari Kawah Air Panas Gunung  Pancar  Bogor”, Skipsi. Bogor:  Fakultas  Matetamtika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam IPB, 2010.
Gayang,  Faisal, “Konversi  Lignoselulosa Tandan Kosong  Kelapa Sawit Menjadi Gula Pereduksi Menggunakan Enzim Xilanase Dan Selulase Komersial”,
Skipsi, Bogor:  Fakultas  Matetamtika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  IPB,
2013.
Kusmiati  Dan  Dody  Priadi, “ Kriopreservasi  Bakteri  Selulolitik  Bacillus  pumilus dengan  Krioprotektan  Berbeda ”, Pusat  Penelitian  Bioteknologi. , Cibinong-Bogor: LIPI, 2003.
Luthfi,  Muhammad  Ramadhan,  dkk.,  “Analisis  Potensi  dan  Karakterisasi Molekuler  Gen  16S  rRNA  Bakteri  Selulolitik  yang  diisolasi  dari Makroalga  Eucheuma  sp.  dan  Sargassum  sp.  Sebagai  Penghasil  Enzim Selulase”, Jurnal Perikanan dan Kelautan 3, no. 3 (2012): h. 61-63.
Marina, Ince Dewi, “Isolasi Bakteri dan Uji Aktivitas Kitinase Termofilik Kasar dari  Sumber  Air  panas  Tinggi  Raja  Simalungun,  Sumatera  Utara”, Tesis Bogor: Fakultas Matetamtika dan Ilmu Pengetahuan Alam IPB, 2008.
Meryandini, Anja dkk., “Isolasi Bakteri Selulolitik dan Karakterisasi Enzimnya”,
Makara Sains 13, no. 1, (2009), h. 36-
Masfufatun, “Isolasi dan Karaktetisasi Enzim Selulase”, Jurnal, (2012), h. 1-11.
Muharni,  dkk.,  “Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri  Termofilik  Penghasil  Protease dari  Sumber  Air  Panas  Tanjung  Sakti  Lahat  Sumatera  Selatan”, Jurnal, (2013), h. 1.
Monica,  Athitya  Diah  Natalia,  “Studi  Aktivitas  Spesifik  Selulase  Dari Lactobacillus  collinoides Yang  Dimurnikan  Dengan  Pengendapan Bertingkat  Amonium  Sulfat”, Skripsi. Malang:  Fakultas  Matematika  Dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Brawijaya, 2007.
Mushoffa,  “Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri  Seluloliti  dari  Feses  Kambing”,
Skripsi .  Malang:  Fakultas  Sains  dan  Teknologi  UIN  Maulana  Malik Ibrahim, 2012.
Maswati dkk. , Pengaruh Suhu dan pH Terhadap Hidrolisis Cmc Oleh Enzim Selulase … _ 355
M. K. Abdushshamad, Mukjizat Ilmiah dalam Al-Quran Jakarta: Akbar Media Eka Sarana, 2003.
Pol,  Dipali  Seeta  Laxman  and  Mala  Rao,  “Purification  and  Biochemical Characterization of Endoglucanase from Penicilium Pinophilum MS 20”, Indian Jurnal of Biochemistry & Biophysics 49 (2012): h. 189.
Rahman  Razak,  Abdul,  “Optimalisasi  Hidrolisis  Sukrosa  Menggunakan  Resin Penukar Kation Tipe Sulfonat”, Jurnal Natural Science 1 no.1 (2012), h.4
Rahmi,  F.  L.  dkk.,  “Optimalisasi  Komposisi  Media  dan  Konsentrasi  Sumber Karbon Produksi Enzim Selulase Bakteri Selulolitik Strain Lokal S-16 dan S-22”, Jurnal, (2012), h. 1
Rumiris,  Mary,  dkk.,  “Optimalisasi  Suhu  dan  Waktu  Produksi  Enzim  Selulase dari Bakteri Selulolitik Strain Lokal S-16”, Jurnal, (2012), h. 1
Saraswati.  Rasti  “Penelitian  dan  pengembangan  pengomposan  dengan  DSAPlus Selulolitik  dan  Lignolitik  <  5  Hari  untuk  Pembuatan  Foliar  Biofertilizer dan  Biostimultan  yang  Mampu  Meningkatkan  Efisiensi  Pemupukan  > 25%”, Balai Penelitian Tanah, 2010, h. 17.
Satria,  Hasrul  Nur,  dkk.,  “Pemanfaatan  Bakteri  Selulolitik  dan  Xilanolitik  yang Potensial  untuk  Dekomposisi  Jerami  Padi”, J.  Tanah  Trop. 14, No.1,(2009), h. 1-11.
Sekarsari, Ike Dewi, “Seleksi Isolat Bakteri Rumen (Anaerob) Penghasil Karboksi Metil  Selulase”, Skripsi Bogor:  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam IPB Bogor, 2003.
Sianturi,  Dessy  Christina,  “Isolasi  Bakteri  dan  Uji  Aktivitas  Amilase  Termofil Kasar  dari  Sumber  Air  Panas  Penen  Sibirubiru  Sumatera  Utara ”  Tesis . Medan:  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  USU  Medan, 2008.
Sumardi  dkk.  “Isolasi  Basillus  Penghasil  selulase  dari  saluran  pencernaan  ayam kampong”, FMIPA Unila Lampung, (2013), h.5.
Sutiamiharja,  Nurhalijah,  “Isolasi  Bakteri  dan  Uji  Aktivitas  Amilase  Kasar Termofilik  dari  Sumber  Air  Panas  Gurukinayan  Sumatera  Utara”, Tesis .
Medan: Pasca Sarjana USU Medan, 2003.
Wahyuni, Vera “Aktivitas Selulase Bacillus pumilus Galur 55 yang Diisolasi dari Sumber  Air  Panas”, Skipsi, Bogor:  Fakultas  Matetamtika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam IPB, 2011
356 _ Jurnal Teknosains, Volume 8 Nomor 3 , November 2014 ( Edisi Sains )
Widayani,  Asih  “Isolasi,  Pengelompokan  warna  dan  Optimasi  Media Pertumbuhan Aktinomiset Seluloliti Asal Hutan Sulawesi Tengah”, Skipsi, Bogor: Fakultas Matetamtika dan Ilmu Pengetahuan Alam IPB,  2006.