## EKSTRAKSI, UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN IDENTIFIKASI GOLONGAN SENYAWA AKTIF ALGA MERAH Eucheuma spinosum DARI PERAIRAN BANYUWANGI

## Ulfatul Mardiyah, A. Ghanaim Fasya, Begum Fauziyah, Suci Amalia
Jurusan Kimia, FakultasSainsdanTeknologi, UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
Antioxidant activity assay and active compound identification red algae Euchemaspinosum extract was conducted.  Active  compound  extraction  was  conducted  using  maceration  method  with  methanol.  Metabolite separation  was  conducted  using  hydrolyzed  process  with  HCl  2  N,  continued  with  partition  extraction  using various solvent 1-buthanol, ethyl acetate, chloroform, petroleum ether and n-hexane. Antioxidant activity assay using DPPH method with determining EC 50 value. The highest antioxidant activity at petroleum ether, followed by  chloroform  fraction,  methanol,  ethyl  acetate,  1-buthanol  and  n-hexane  with  EC 50 value  respectively  12.65 ppm,  19.23  ppm,  22.13  ppm,  41.94  ppm,  73.02  ppm  and  80.32  ppm.  Containing  compounds  that  exist  in petroleum ether fraction were flavonoid, triterpenoid, alkaloid and ascorbic acid.
Key Word : antioxidant activity, DPPH method, Eucheuma spinosum

## ABSTRAK
Pengujian aktivitas antioksidan dan identifikasi senyawa aktif ekstrak alga merah Eucheuma spinosum telah dilakukan. Ekstraksi senyawa aktif dilakukan dengan metode maserasi menggunakan  metanol. Pemisahan metabolitnya  dilakukan  dengan  proses  hidrolisis  dengan  HCl  2  N,  dilanjutkan  dengan  ekstraksi  partisi menggunakan  pelarut  1-butanol,  etilasetat,  kloroform,  petroleum  eterdan  n-heksana.  Pengujian  aktivitas antioksidan  menggunakan  metode  DPPH  dengan  menentukan  nilai  EC 50. Aktivitas  antioksidan  tertinggi  pada fraksi  petroleum  eter,  diikut  ioleh  fraksi  kloroform,  metanol,  etilasetat,  1-butanol  dan  n-heksanadengan  nilai EC 50 masing-masing  12,65  ppm,  19,23  ppm,  22,13  ppm,  41,94  ppm,  73,02  ppm  dan  80,32  ppm.  Kandungan golongan senyawa yang terdapat dalam ekstrak petroleum eter adalah flavonoid, triterpenoid, alkaloid dan asam askorbat.
Kata Kunci : aktivitas antioksidan, metode DPPH, Eucheuma spinosum

## I. PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  bahari dengan keanekaragaman hayati laut terbesar di  duniayang  memiliki  total  luas  perairan Nusantara  seluas  2,8  juta  Km 2 , dan  laut teritorial seluas 0,3 juta mm 2
(Kusumastanto,  2011).  Salah  satu  sumber daya  alam  yang  terdapat  di  laut  dan  dapat dimanfaatkan adalah alga merah.
Alga  baik  yang  liar  maupun  yang telah  dibudidayakan  secara  tradisional digunakan  sebagai  obat  diet  (Wibowo, 2001),  bahan  makanan  dan  obat-obatan, karena kaya akan protein, lipid, vitamin dan mineral  yang  sangat  penting  bagi  manusia. Temuan  terakhir  membuktikan  bahwa
rumput  laut  berpotensi  sebagai  antivirus (Manilal,  dkk.,  2009),  antibakteri  (Izzati, 2007),  antijamur  (Khazanda,  dkk ., 2007), antitumor (Zandi, dkk., 2010) dan antioksidan (Lestario, dkk., 2008). Yan dkk.(1998) menyebutkan bahwa antioksidan memiliki peranan penting  dalam  mencegah  oksidasi  radikal bebas  yang  dapat  menyebabkan  berbagai penyakit  seperti  karsinogenik  dan  penuaan. Radikal  bebas  adalah  molekul  yang memiliki satu atau lebih elektron yang tidak berpasangan  di  orbital  terluar.  Banyak  dari radikal  bebas  adalah  dalam  bentuk  oksigen dan nitrogen reaktif (Wong, 2000). Saat ini antioksidan yang umum digunakan merupakan  antioksidan  sintetik  diantaranya
butil hidroksianisol (BHA), butilated hidroksitoluena  (BHT), propylgallate (PG) dan  tetrabutil  hidroksitoluena  (TBHQ) (Sherwin,  1990).  Akan  tetapi,  senyawa tersebut  dicurigai  dapat  menyebabkan kerusakan  hati  dan  karsinogenik  pada hewan uji (Wichi, 1988; Grice, 1986). Oleh karena itu, pengembangan
serta pemanfaatan  antioksidan  yang  lebih  efektif dan  berasal  dari  alam  sangat  penting  untuk dilakukan (Oktaydkk., 2003).
Berdasarkan Faten dkk. (2009), ekstrak  alga  merah gracilariaverrucosa fraksi  metanol  yang  dipartisi  menggunakan etil  asetat,  1 - butanol  dan  petroleum  eter, menunjukkan  bahwa  fraksi  metanol,  etil asetat dan petroleum  eter merupakan fraksi yang  cukup  aktif  dalam  menghambat radikal  bebas  menggunakan  DPPH  dengan nilai  IC 50 masing-masing  85,  130  dan  135 ppm.  Selain  itu,  Nihlati  dkk.  (2008) melaporkan  bahwa  senyawa  kuersetin  dari golongan flavonoid larut baik dalam pelarut eter, dan hasil pengujian aktivitas antioksidannya didapatkan nilai IC 50 sebesar  4,60  ppm  yang  mencerminkan bahwasanya  fraksi  petroleum  eter  yang mengandung  kuersetin  memiliki  aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
Beberapa  penelitian  menunjukkan bahwa  kandungan  senyawa  antioksidan pada  rumput  laut  terutama  berupa  senyawa antioksidatif polifenol yang dapat menghambat oksidasi radikal bebas. Halimada  sp. yang  tergolong  alga  coklat menunjukkan  tentang  adanya  bermacam- macam senyawa antioksidan, seperti catechin, epicatechin,  epigallocatechin, catechin  gallate,  epigallocatechin  gallate, rutin,  quercitrin (Sriwardhana2003),  alga merah  jenis Laurencia  obtuse mengandung senyawa  triterpenoid  (Gamal,  2011).Hasil uji  fitokimia  metabolit  sekunder  dalam ekstrak alga merah Gelidium acerosa menggunakan  pelarut  etanol  dan  aseton menunjukkan  adanya  beberapa  golongan senyawa seperti alkaloid, saponin, flavonoid,  steroid  dan  tanin    (Elsie  dkk., 2011).
Sebagai  salah  satu  upaya  untuk mengungkapkan  sifat  biologis  dan  medis dari  flora  laut  serta  untuk  mengoptimalkan pemanfaatan  bahan  alam  laut  Indonesia, khususnya  di  daerah  Banyuwangi  maka sangat  perlu  dilakukan  penelitian  tentang aktivitas antioksidan alga merah Eucheuma spinosum.

## II. METODE PENELITIAN

## Pelaksanaan Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kimia Organik dan
Laboratorium  Bioteknologi  Jurusan  Kimia Universitas  Islam  Negeri  (UIN)  Maulana Malik  Ibrahim  Malang  pada  bulan  Maret– Agustus 2012.

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah seperangkat alat gelas, neraca analitik, mortar, pisau, kertas saring, corong  buchner vacum ,  inkubator, rotary evaporator  vacum ,  shaker,  vortex,  corong pisah, desikator, oven dan spektrofotometer UV-Vis Varian Carry, spektronik 20+ . Bahan  sampel  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah alga merah jenis ( Eucheuma  spinosum )  berasal  dari  laut Wongsorejo Banyuwangi.
Bahan-bahan  kimia  yang  digunakan adalah  metanol,  kloroform, n -heksana,  etil asetat,  1-butanol  DPPH,  KMnO 4 0,1  %, petroleum  eter,  BHT,  standar  vitamin  C, HCl  37  %,  HCl  2  N,  etanol  95  %,  H 2 SO 4 pekat,  natrium  bikarbonat,  asam  asetat anhidrida,  amonia,  aseton,  pereaksi  Mayer dan Dragendorff, dan serbuk logam Mg.
Cara Kerja

## PreparasiSampel
Alga  merah  sebanyak  4  kg  dicuci dengan  air,  kemudian  diiris  kecil-kecil  lalu dioven  pada  suhu  38 o C  selama  24  jam  dan dihaluskan  menggunakan  blender  hingga halus . Serbuk alga merah diayak menggunakan  ayakan  yang  berukuran  60– 250 mesh.

## Ekstraksi Alga Merah
Sebanyak100  g  dan  diekstraksi secara  maserasi  menggunakan  300  mL
pelarut  metanol  selama  24  jam  dan dilakukan pengocokan menggunakan shaker dengan kecepatan 150 rpm ( rotation per  minutes ),  proses  ekstraksi  dilakukan sebanyak  5  kali  pengulangan.  Sebanyak  5 gram  ekstrak  pekat  metanol  kemudian dihidrolisis  dengan  10  mL  HCl  dan dinetralkan  dengan  NaHCO 3. hidrolisat yang diperoleh dipartisi (ekstraksi cair-cair) dengan pelarut 1-butanol, etilasetat, kloroform, petroleum eterdan n- heksana.
UjiAktivitas Antioksidan dengan DPPH Penentuan Panjang Gelombang

## Maksimum
Larutan  DPPH  0,2  mM  sebanyak  5 mL  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi lalu  didiamkam  ±  10  menit.  Kemudian dimasukkan  ke  dalam  kuvet.  Dicari  λ maks larutan  dan  dicatat  hasil  pengukuran  λ maks untuk  digunakan  pada  tahap  selanjutnya (Rahayudkk., 2010).
Penentuan Waktu Kestabilan
Larutan  ekstrak  200  ppmdibuat sebanyak  25  mL,  kemudian  diambil sebanyak  4,5  mL.  Ditambahkan  0,2  mM larutan  DPPH  sebanyak  1,5  mL,  lalu diinkubasi,  dan  dicari  waktu  kestabilan pada  rentangan  waktu  5–120  menit  dengan interval  5  menit.  Sampel  diukur  pada  λ maks dan waktu kestabilan yang telah didapatkan. Pengukuran Potensi Antioksidan Sampel
Absorbansi  kontrol:  Larutan  DPPH dengan konsentrasi 0,2 mM sebanyak 5 mL dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  lalu diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  waktu kestabilan yang telah didapatkan pada tahap sebelumnya, setelah itu larutan dimasukkan ke  dalam  kuvet  hingga  penuh  dan  diukur absorbansinya pada  λ maks yang didapatkan. Sampel  dari  masing-masing  fraksi dilarutkan dalam pelarutnya dengan konsentrasi  1,  5,  25,  50,  100,  150  dan  200 ppm.  Dimasukkankedalamtabungreaksi  4.5 mL  ekstrak  dan  ditambahkan  DPPH sebanyak  1.5  mL  (perbandingan  larutan DPPH  :  ekstrak  yang  dilarutkan  dengan konsentrasi tertentu 1:3). Perlakuan tersebut diulangi  sebanyak  tiga  kali.  Setelah  itu diinkubasi  dengan  suhu  37 o C  pada  waktu kestabilan  yang  didapatkan  pada  tahap
sebelumnya,  lalu  diukur  absorbansinya pada  λ maks .  Data  absorbansinya  yang diperoleh  dari  tiap  konsentrasi  masing- masing  ekstrak  dihitung  nilai  persen  (%) aktivitas antioksidannya. (Arindah, 2010).

## Identifikasi Senyawa Aktif Flavonoid
Ekstrak  kasar  5  mg  ditambahkan dengan  air  panas  1-2  mL  air  panas  dan sedikit  serbuk  Mg.  Kemudian  ditambahkan 4-5 tetes HCl 37 % dan etanol 95 % dengan volume  yang  sama  lalu  dikocok.  Jika menunjukkan  warna  merah,  kuning  atau jingga maka ekstrak kasar positif mengandung flavonoid (Febriany, 2004).

## Alkaloid
Ekstrak  kasar  dimasukkan  dalam tabung  reaksi,  ditambah  0,5  mL  HCl  2  % dan  larutan  dibagi  dalam  dua  tabung. Tabung  I  ditambahkan  2-3  tetes  reagen Dragendorff,  tabung  II  ditambahkan  2-3 tetes reagen Mayer. Jika tabung I terbentuk endapan  jingga  dan  pada  tabung  II terbentuk endapan kekuning-kuningan, menunjukkan adanya alkaloid.
Steroid/Terpenoid
Ekstrak kasar diambil 5 mg dilarutkan  dalam  2-3  mL  kloroform,  lalu ditambahkan 10 tetes asam asetat anhidrida dan  2-3  tetes  H 2 SO 4 pekat  melalui  dinding tabung,  jika  terbentuk  warna  biru  sampai hijau menunjukkan adanya steroid, sedangkan jika hasil  yang diperoleh berupa cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan  dua  pelrut  menunjukkan  adanya triterpenoid (Auterhoff dkk., 1987).
Asam Askorbat
Ekstrak kasar diambil 5 mg dilarutkan dalam aquadest 5 mL, kemudian ditambahkan 10 mL larutan KMnO 4 0,1 %. Jika terbentuk warna cokelat maka menunjukkan adanya asam askorbat (Auterhoff dkk., 1987).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN Preparasi Sampel
Alga  merah (Eucheuma  spinosum) dicuci  hingga  bersih  untuk  menghilangkan pasir maupun lumpur  yang menempel pada
tallusnya, kemudian dioven pada suhu 38 o C selama  24  jam,  tujuan  pengeringan  ini untuk  meminimalisir  kadar  air  yang terkandung  dalam  alga  merah  dan  untuk menghambat aktivitas mikroorganisme (jamur maupun bakteri) agar dapat disimpan  dalam  jangka  waktu  yang  cukup lama (Winarno, 1995).
Alga  merah  yang  sudah  kering dipotong  kecil-kecil  untuk  memudahkan proses  pemblenderan,  setelah  itu  sampel diblender  hingga  halus,  dan  disaring menggunakan  penyaring  (ayakan)  dengan ukuran  60-250  mesh.  Tujuan  penghalusan sampel  yaitu  untuk  memperbesar  ukuran permukaan sampel sehingga proses ekstraksi  berjalan  optimal  karena  semakin luas  permukaan  sampel  maka  interaksi antara  pelarut  dan  sampel    semakin  besar. Hasil  yang  diperoleh  dari  proses  ini menunjukkan  bahwa  dari  4  kg  sampel basah didapatkan serbuk alga merahsebanyak  350  gram.  Selain  itu, serbuk  alga  merahberwarna  coklat  dan berbau menyengat.

## Ekstraksi Alga Merah
Ekstrak  pekatfraksimetanol  yang diperoleh  berupa  padatan  berwarna  hijau pekat.  Sedangkan  rendemen  ekstrak  pekat metanol ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel  1.  Hasil  ekstraksi  dan  rendemen ekstrak metanol Ekstrak Rendemen % (b/b) EkstrakMetanol 1 19,17 EkstrakMetanol 2 14,35 EkstrakMetanol 3 15,29 Rata-rata 16,25
Hidrolisis  ekstrak  pekat  metanol dengan  HCl  2N  berfungsi  untuk  memecah ikatan  glikosida  antara  komponen  gula (glikon)  dan  metabolit    sekunder  (aglikon), karenaumumnya di alam metabolit sekunder
ditemukan dalam
bentuk glikosida.  Dugaan  reaksi  yang  terjadi  saat proses hidrolisis ditunjukkan Gambar 1.
Gambar 1 Hidrolisis glikosida
Selanjutnya hidrolisat dipartisi menggunakan variasi pelarut yang memiliki kepolaran  yang  berbeda,  yaitu  1-butanol, etil asetat, kloroform, petroleum eter dan n - heksana, pemilihan pelarut ini dimaksudkan agar  senyawa-senyawa  yang  memiliki kepolaran  berbeda  dapat  terekstrak  ke dalam  pelarut  yang  sesuai  (Voight,  1994), sehingga  dalam  proses  ini  terdapat  dua lapisan  yang  tidak  saling  bercampur,  dan diduga palarut yang bersifat polar (fase air) akan mengekstrak komponen gula (glikon), sedangkan  pelarut  semi  polar  maupun  non polar  (fase  organik)  akan  mengekstrak metabolit  sekunder  (aglikon)  yang  sudah terpisah  dengan  komponen  gula  yang diduga  aktif sebagai  antioksidan.Rendemen masing-masingfraksiyang  diperoleh  dari  5 gram  berat  ekstrak  pekat  metanol  disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2 Hasil ekstraksi dan rendemen untuk masing-masing fraksi hasil partisi
Pelarut Warna ekstrak pekat Rendemen (%) (b/b) 1-butanol Hitam 6 ,04 Etil asetat Hijau 16,20 Kloroform Coklat kehitaman 6,24 Petroleum eter Hijau kehitaman 10,62 n -heksana coklat kehitaman 11,28
+     H 2 O HCl
+ Metabolit Sekunder
Uji Aktivitas Antioksidan dengan DPPH Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Pengujian aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH diawali dengan  penentuan  panjang  gelombang maksimum.  Tujuan dari penentuan panjang gelombang  maksimum  untuk  mengetahui panjang  gelombang  yang  memiliki  serapan tertinggi. Hasil yang diperoleh menunjukkan  bahwa  panjang  gelombang maksimum larutan DPPH sebesar 515,1 nm dengan nilai serapan 0,831.

## Penentuan Waktu Kestabilan
Pengukuran waktu kestabilan dilakukan  untuk  mengetahui  waktu  dimana sampel  dan  DPPH  sudah  bereaksi  secara stabil  yakni  sempurnanya  reaksi  antara sampel dan DPPH yang ditunjukkan dengan tidak  adanya  lagi  penurunan  absorbansi (Ludkk.,2001).  Setiap  senyawa  memiliki waktu kestabilan  yang berbeda untuk dapat bereaksi secara sempurna (Brand- Williamdkk.,  2001),  sehingga  penentuan waktu  kestabilan  masing-masing  sampel sangat penting untuk dilakukan. Pengukuran  ini  dilakukan  dengan  proses inkubasi  pada  rentang  waktu  5–120  menit, sedangkan  rentang    waktu  yang  digunakan untuk  fraksi n- heksana  dan  1-butanol adalah 5–150 menit. Hasil penentuan waktu kestabilan dari masing-masing fraksi disajikan pada Tabel 3.
Tabel  3  Waktu  kestabilan  masing-masing ekstrak Sampel Waktu kestabilan (Menit) Vitamin C 25 – 50 BHT 80 – 120 Metanol 25 – 75 1-butanol 125 – 150 Ekstrak Etil Asetat 20 – 80 Kloroform 90 – 120 Petroleum Eter 70 – 90 Ekstrak n -heksana 120 – 150

## Pengukuran  Potensi  Antioksidan  Pada Sampel
Pengukuran  aktivitas  antioksidan tiap-tiap  konsentrasi  pada  sampel  harus menggunakan  larutan  kontrol  yang  berupa larutan  DPPH  0,2  mM.  Larutan  DPPH kontrol  digunakan  untuk  memberikan kestabilan  pada  saat  pengukuran  aktivitas antioksidan  pada  sampel  (Arindah,  2010). Menurut  Molyneux  (2003)  nilai  absorbansi kontrol  dapat  berkurang  dari  hari  ke  hari dikarenakan  kehilangan  aktivitasnya  saat dalam  stok  larutan  DPPH,  tetapi  nilai absorbansi  kontrol  tetap  dapat  memberikan baseline untuk pengukuran saat itu Absorbansi
kontrol maupun
absorbansi sampel yang diperoleh selanjutnya  digunakan  untuk  menentukan persen  (%)  aktivitas  antioksidan.  Persen (%)  aktivitas  antioksidan  merupakan  salah satu parameter yang menunjukkan kemampuan suatu antioksidan dalam menghambat  radikal  bebas.  Semakin  tinggi persen (%) aktivitas antioksidan menunjukkan  banyaknya  atom  hidrogen yang  diberikan  senyawa  aktif  kepada radikal  DPPH  sehingga  tereduksi  menjadi
DPPH-H (1,1-difenil-2-pikrilhidrazin) (Rahayu, et  al .,  2010).  Banyaknya  atom hidrogen  yang  didonorkan  oleh  molekul antioksidan dapat diketahui secara kualitatif dengan  terjadinya  perubahan  warna  radikal DPPH  dari  ungu  menjadi  kuning.  Hasil pengukuran  masing-masing  ekstrak  ketika ditambahkan larutan DPPH tidak
mengalami  perubahan  warna  dari  ungu menjadi  kuning,  melainkan  hanya  terjadi pemudaran  warna  dari  ungu  menjadi  pink keunguan.  Berikut  nilai  persen  aktivitas masing-masing fraksi.
Tabel  4  Persen  aktivitas  antioksi  dan masing-masing fraksi Sampel Persen Aktivitas antioksidan (%) Vitamin C 82,208 –  99,254 BHT 80,355 – 99,017 Metanol 76,301 –78,338 1-butanol 68,161 – 72,165 Etilasetat 72,812 – 68,904 kloroform 82.837 – 86,717 Petroleum eter 73.088 – 74,361 n-heksana 78.910 – 87,138
Persen  (%)  aktivitas  antioksidan yang diperoleh selanjutnya dianalisis menggunakan persamaan regresi non linear menggunakan GraphPad  prism5  software, Regression  for  analyzing  dose-response data ,  sehingga  nantinya  didapatkan  nilai EC 50 dari masing-masing fraksi. EC 50 (Effective  concentration) merupakan parameter  yang  menunjukkan  konsentrasi ekstrak uji yang mampu menangkap radikal sebanyak  50  %.  Semakin  kecil  nilai  EC 50 suatu  senyawa  uji  maka  senyawa  tersebut semakin aktif sebagai penangkap radikalbebas  atau antioksidan. Dengan kata lain  EC 50 merupakan  konsentrasi  yang dibutuhkan  untuk  menurunkan  sebesar  50 % dari konsentrasi substrat (radikal DPPH). Nilai EC 50 masing-masing ekstrak ditunjukkan pada Tabel 5.
Tabel 5. Nilai EC 50 masing-masing fraksi Ekstrak Nilai EC 50 (ppm) Metanol 22,13 1-butanol 73,02 Etilasetat 41,94 Kloroform 19,23 Petroleum eter 12,65 n- heksana 80,32 Vitamin C 3,702 BHT 38,25
Sampel  yang  memiliki  aktivitas antioksidan  tertinggi  ada  pada  fraksi petroleum  eter,  hal  itu  diduga  karena pelarut  petroleum  eter  dapat  mengekstrak senyawa-senyawa  fenol  yang  memiliki tingkat kepolaran yang rendah dan berfungsi  sebagai  antioksidan.  Nihlatidkk.
(2008) melaporkan bahwa senyawa kuersetin dari golongan flavonoid larut baik dalam  pelarut  eter,  dan  hasil  pengujian aktivitas  antioksidannya  didapatkan  nilai IC 50 sebesar  4,60  ppm  yang  mencerminkan bahwasanya  fraksi  petroleum  eter  yang mengandung  kuersetin  memiliki  aktivitas antioksidan yang sangat kuat.
Identifikasi Senyawa Aktif
Identifikasi senyawa aktif yang terdapat  dari  ekstrak  metanol,  1-butanol, etil asetat, kloroform, petroleum eter dan n - heksana  dilakukan  dengan  penambahan reagen-reagen dan diamati secara kualitatif. Hasil  identifikasi  golongan  senyawa  aktif yang terdapat dalam masing-masing ekstrak ditunjukkan pada Tabel 6.
Tabel  6.  Hasil  identifikasi  senyawa  aktif estrak alga merah E. spinosum
Golongan Senyawa Pelarut Metan ol 1- butan ol Etil asetat Klorof orm Petrole um eter n- Heksan a Flavonoid +++ - - - + - Triterpeno id ++ + +++ +++ +++ +++
Steroid - - - ++ - + Alkaloid
- Mayer - Dragen drof - - - + + - - ++ ++ - + + Asam askorbat + + + + + +
Berbagai  golongan  senyawa  yang terdapat  dalam  alga  merah E.  spinosum sangat  berperan  penting  dalam  pengujian aktivitas  antioksidan.  Hasil  pengujian aktivitas  antioksidan  menunjukkan  bahwa sampel alga merah E. spinosum sangat aktif sebagai  antioksidan  dengan  melihat  dari nilai  EC 50 masing-masing  fraksi  yang berkisar antara 12-80 ppm yang menunjukkan  alga  merah E.  spinosum memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  sangat kuat.

## IV.  KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Ekstrak  alga  merah E.  spinosum yang memiliki aktivitas antioksidan tertinggi  pada  penelitian  ini  adalah  ekstrak petroleum  eter  dengan  nilai  EC 50 sebesar 12,65  ppm,  nilai  EC 50 yang  diperoleh mencerminkan  ekstrak  petroleum  eter memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  sangat kuat.  Aktivitas  antioksidan  yang  dimiliki oleh  ekstrak  petroleum  eter  didukung  oleh kandungan  berbagai  senyawa  aktif  di dalamnya seperti senyawa flavonoid, triterpenoid, alkaloid dan asam askorbat.

## Saran
Diperlukan pengujian aktivitas antioksidan  dengan  konsentrasi  yang  lebih tinggi agar dapat diketahui pada konsentrasi berapa sampel bersifat prooksidan.
Diperlukan  penelitian  lebih  lanjut dengan  memisahkan  golongan  senyawa aktif  ekstrak  kasar  alga  merah E.spinosum dan  identifikasi  senyawa  dengan  FTIR, GC/LC-MS  agar  dapat  diketahui  senyawa yang berpotensi sebagai antioksidan.

## V. DAFTAR PUSTAKA
Arindah, D. 2010. Fraksinasi dan Identifikasi Golongan Senyawa Antioksidan  pada  Daging  Buah Pepino  (Solonum  Muricatum  aiton) yang Berpotensi Sebagai Antioksidan . Skripsi Tidak Diterbitkan. Malang:  Jurusan Kimia Fakultas Sains dan Teknologi
Universitas  Islam  Negeri  (UIN) Maulana Malik Ibrahim Malang.
Auterhoff,  H.,  dan  Kovar,  K.A.  1987. Identifikasi Obat ,  Bandung: ITB. Brand,  W.W.  1995. Use  of  Free  Radical Method  to  Evaluate  Antioxidant activity .  London:  Elsivier    Applied
Science. Lebensmettel- Wissenschaftand  Technology. Elsie, B. H., Dhanarajan, M. S., &Sudha, P. N. 2011. Invitro Screening Of Secondary Metabolites And Antimicrobial  Activities  Of  Ethanol And  Acetone  Extracts  From  Red Seaweed GelidiumAcerosa . JournalOfChemistry Research. India: Department Of Bio- Chemistry, Jaya College of Arts and Science, Thirunindravur, TamilNadu. 2 (2), 1-3 .
Faten, M., Abou, E., and Emad, A.S . 2009. Antioxidant  Activity  of  Extract  and Semi-Purified  Fractions  of  Marine Red Macroalga, Gracilaria Verrucosa.Australian.  Journal  of Basic and Applied  Sciences. Kairo: Biochemistry  Department,  Faculty of  Agriculture,  Cairo  University. 3(4), 3179-3185. Febriany, S. 2004. PengaruhBeberapaEkstrak  Tunggal Bangle danGabungannya yang BerpotensiMeningkatkanAktivitasEn zim Lipase SecaraIn Vitro . Skripsitidakditerbitkan. Bogor: Fakultas MIPA IPB. Gamal, E., Ali, A. 2011. Biological Importance of Marine Algae.Biotechnology. KSA : Department of Pharmacognosy,
College  of  Pharmacy,  King  Saud
University.
Grice,  H.C.,  1986. Safety  Evaluation  of ButylatedHydroxy  Toluene  (BHT) in The Liver, Lung and Gastrointestinal  Tract .  Journal  of
Food  Chemistry  and  Toxicology. 24: 1127-1130.
Izzati, M. 2007. Skreening Potensi Antibakteri  pada  Beberapa  Spesies Rumput  Laut  terhadap  Bakteri Patogen pada Udang  Windu . Jurnal BIOMA.  Semarang:  Universitas. Vol. 9, No. 2. 62 – 67.
Khazanda,  K.A.,  Wazir,  S.T.G.,  Samina, K.,  Shahzadi,  S.  2007. Antifungal
Activity,  Elemental  Analysis  And
Determination  Of  Total  Protein  Of Seaweed, Solieria Robusta
(Greville) Kylin From The Coast Of Karachi . National Center of Excellence for Aanalytical Chemistry .  Pakistan:  University  of Sindh, Jamshoro-76080. Kusumastanto,  T.  2011. Pengembangan Sumberdaya Kelautan Dalam Memperkokoh Perokonomian Nasional  Abad  21.Tugas  Akhir Tidak  Diterbitkan. Bogor:  Insitut Pertanian Bogor.
Lestario, N.L., Sugiarto, S., Timotius, K.H.
2008. Aktivits  antioksidan  dan Kadar Fenolik Total dari Ganggang Merah (Gracilaria Verucosa). Jurnal Teknologi dan Industri Pangan . Salatiga: Universitas
Kristen Satya Wacana. Vol XIX No
2.
Lu  Y.,  Foo  F.Y.  2000. Antioxidant  and Radical  Scavenging  Activities  of Polyphenols  from  Apple .  Journal  of Food Chemistry, 68: 81–85.
Manilal.  A.,  Sujith,  S.,  Selvin,  J.,  Kiran,
G.S.,  Shakir,  C.  2009. In  vivo Antiviral  Activity  of  Polysaccharide from  the  Indian  Green  Alga,
Acrosiphonia orientalis (J. Agardh):
Potential  Implication  in  Shrimp Disease  Management,  Journal  of Fish and Marine Sciences . Department  of  Microbiology.  India: Bharathidasan  University.  1  (4): 278-282.
Molyneux, P., 2003, The Use of The Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH), for Estimating Antioxidant Activity . Journal  of  Science  and  Technology. Institute  of  Food  Research  Colney, Norwich,  United  Kingdom.  Vol 26(2) : 211-219.
Nihlati,  I.,  Abdul,  R.,  Triana,  H.  2008.
Daya  Antioksidan  Ekstrak  Etanol Rimpang Temu Kunci [Boesenbergia  pandurata  (roxb.) Schlecth] dengan Metode Penangkapan  Radikal  DPPH  (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil) . Skripsi
diterbitkan.  Yogyakarta:  Universitas Gadjah Mada.
Oktay,  M.,  Gulcin,  I.,  and  Kufrevioglu,  O. 2003. Determination o f  In  Vitro Antioxidant  Activity  of Fennel (Foeniculum Vulgare) Seed Extract . Journal Of Food Science & Technology . London: Published/Hosted by Elsevier Science. Lebensmittel-Wissenchaft and Technology, Vol. 36: 263-271.
Rahayu,  D.S.,  Dewi,  K.,  Enny,  F.  2010.
PenentuanAktivitas Antioksidan dari Ekstrak Etanol Daun Ketapang ( Terminalia  catappa L) dengan Metode  1,1  difenil  2  Pikrilhidrazil ( DPPH ). Skripsi Diterbitkan.
Semarang:  Jurusan  Kimia  FMIPA Universitas Diponegoro.
Sherwin,  F.R.,  1990. Antioxidant.  In:  Food Additive (ed.  Branen  R).  New
York: Marcel Dekker. Wichi,  H.P.,  1988. Enhanced  Tumor Development By Butylated Hydroxyanisole  (BHA)  From  The Prospective of Effect on Forestomach and Oesophageal Squamous  Epithelium .  Journal  Of Food  Chemistry  and  Toxicology. Vol. 26: 717-723. Wibowo,  S.T.  2001. Potensi  Jenis-Jenis
Rumput  Laut  dari  Pantai  Sayang Heulang-Pameungpeuk Garut Sebagai  Antibakteri  Escherichia coli. Jurnal  Biologi . Bogor:  Jurusan biologi, Institut Pertanian Bogor Winarno  F.G.  1995. Kimia  Pangan  dan Gizi . Jakarta: PT, Gramedia Pustaka Utama.
Yan,  X.,  Nagata,  T.,  and  Xiao,  F.  1998.
Antioxidative  Activities  in  Some Common Seaweeds. Journal of Plant Foods for Human Nutrition Institute of  Oceanology.  Japan:  Academic Publisher. 52: 253–262.