Pengaruh Ekstrak Metanol Tomat dan Wortel Terhadap Kadar Kolesterol dan Enzim Glutation Peroksidase (GPx) Pada Tikus Hiperkolesterolemik  ( Rattus norvegicus )
The effect of Tomato and Carrot Extracts on Cholesterol Level and Glutathione Peroxidase Enzyme (GPx) in the Hypercholesterolemic Rats ( Rattus norvegicus )
Delli Lefiana 1*) , Dasrul 2) , Sugito 2)- , Rizki Ardyes 3)
1) Program Studi Paramedik Veteriner, Politeknik Pertanian Negeri Payakumbuh Jl. Raya Nagara Km 7, Tanjung Pati, 26271, Payakumbuh
* dellilefiana@yahoo.co.id
2) Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Syiah Kuala Jl. Teuku Nyak arief No.441, Kopelma Darussalam, Kec. Syiah Kuala, 23111 Banda Aceh dasruldarni@yahoo.com dan sugitosyarif@gmail.com
3) Dinas Peternakan dan Kesehatan Hewan, Kab. Padang Pariaman Jl. Dr. Suharjo No.12 Kampung Baru, Kec. Pariaman Tengah, Pariaman drh.rizki_ardyes@yahoo.com
Diterima : 21 Januari 2021 Disetujui : 24 Februari 2021 Diterbitkan : 28 Februari 2021
Abstrak : Hiperkolesterolemia merupakan penyebab penyakit kardovaskular yang ditandai dengan peningkatan kadar kolesterol dalam darah dan radikal bebas yang merusak sel endotel pembuluh darah. Resiko tersebut dapat diturunkan  dengan  pemberian  vitamin,  antioksidan,  antikolesterol  yang  terkandung  di  dalam  buah  dan  sayuran seperti  tomat  dan  wortel.  Tujuan  dari  penelitian  adalah  menguji  pengaruh  pemberian  ekstrak  tomat  dan  wortel terhadap  kadar  kolesterol  total  darah  dan  enzim  glutation  peroksidase  (GPx)  pada  hati  tikus  putih hiperkolesterolemik.  Penelitian  ini  menggunakan  24  ekor  tikus  putih  yang  dikelompokkan  menjadi  empat perlakuan,  yaitu  kelompok  kontrol  negatif  yang  diberikan  pakan  standar  (KN),  kelompok  kontrol  positif  yang diberikan  pakan  tinggi  kolesterol  (KP),    kelompok  tikus  diberikan  pakan  tinggi  kolesterol  dan  ekstrak  tomat  50 mg/kg  bb  (K  I),  dan    kelompok  tikus  diberikan  pakan  tinggi  kolesterol  dan  ekstrak  wortel  50  mg/kg  bb  (K  II). Sebelum perlakuan  tikus  diadaptasikan  selama  1 minggu,  perlakuan  diberikan selama  45 hari.  Pemicu  terjadinya hiperkolesterolemia pada hewan coba   disebabkan oleh pakan tinggi kolesterol yang diberikan sebelum perlakuan dengan ekstrak tomat dan wortel.  Pada hari ke 45 dilakukan pengambilan darah melalui ekor untuk pemeriksaan kadar kolesterol total darah, selanjutnya tikus dieuthanasia dan diambil organ hati untuk pemeriksaan enzim GPx. Data  yang  diperoleh  dilakukan  uji  normalitas  Kolmogorov-Smirnov  dan  homegenitas  menggunakan  uji  Levene. Kemudian dianalisis menggunakan ANOVA dan dilanjutkan dengan uji BNT. Hasil uji statistik menunjukkan ada perbedaan  yang  nyata  (P<0,05)  kadar  kolesterol  total  darah  dan  kadar  enzim  GPx  antara  kelompok  KP dibandingkan dengan KN, KP dengan KI dan KP dengan KII. Tetapi tidak terdapat perbedaan yang nyata (P>0,05) antara  KN  dibandingkan  dengan  KI  dan  KII.  Berdasarkan  hal  tersebut  disimpulkan  bahwa  pemberian  ekstrak tomat  50  mg/kg  bb  dan  ekstrak  wortel  50  mg/kg  bb  selama  45  hari  dapat  menghambat  peningkatan  kadar kolesterol total darah dan menghambat penurunan kadar enzim GPx pada hati tikus putih hiperkolesterolemik.
Kata Kunci: Enzim Glutation Peroksidase, Kolesterol, Tomat, Wortel.
Abstract : Hypercholesterolemia  is  the  main  factor    generating    cardovascular  disease  characterized  by increasing levels of cholesterol in the blood and free radicalsIt leads to damage the endothelial cells of blood vessels. This risk can be reduced by  consuming vitamins, antioxidants, anti-cholesterol contained in fruits and vegetables such  as tomatoes and carrots. The  goal  of  the study was to examine the effect  of  tomato and carrot  extracts  on total blood cholesterol levels and the enzyme glutathione peroxidase (GPx) in the  hypercholesterolemic rat (Rattus norvegicus). A total of 24 rats was used in this study. They randomly divided into 4 groups with 6 replications i.e. a
negative control group fed standard feed (KN), a positive control group fed high cholesterol feed (KP), a group fed high cholesterol feed and treated using tomato extract  50mg/kg body weight (K I) and a group fed high cholesterol feed and treated using carrot extract  50mg/kg body weight (K II). The treatment was administered for 45 days. The trigger  of  hypercholesterolemia  in  experimental  animals  was  caused  by  high  cholesterol  feed  which  was  given before treatment with tomato and carrot extracts. On the 45 th day blood sample of rats were  collected from the tail for  cholesterol    analysis,  and  then  all  rats  were  euthanized  and  the  livers  were  taken  for  GPx  enzyme  testsusing spectrophotometer.  The  data  obtained  was  previouslytested  for  normalityand  homogeneity  using  Kolmogorov- Smirnov test and the  Levene test, respectively.  Then, all data were  analyzed using one way  ANOVA, followed by LSD (least significance different) test. BNT test. The statistical test result showed there was a significant difference (P<0,05)  in  the  total  blood  cholesterol  levels  and  GPx  enzyme  levels  of  the  KP  group  were  significantly  different from  the  KN,  KI  dan  K  II  groups  (p<0.05).  However,  there  was  no  significant  difference  between  KN  group compared  to  K  I  and  K  II  (p>0.05).    All  results  indicated  that  tomato  and  carrot  extracts  potentially  inhibit enhancement of blood total cholesterol level and  increase the GPx enzyme level  in the hypercholesterolemic rats. It might prevent hypercholesterolemia leading to cardiovascular disease.
Keywords  : Carrot, Cholesterol, Gluthathion Peroksidase enzyme, Tomato.

## 1. Pendahuluan
Kolesterol adalah senyawa lemak kompleks yang berwarna kekuningan dengan tekstur seperti zat lilin dan  merupakn  komponen  semua  membran  sel  di dalam tubuh . Kolesterol dalam jumlah yang adekuat diperlukan  oleh  tubuh  sebagai  prekursor  senyawa steroid  seperti  kortikosteroid,  hormon  seks,  asam empedu  dan  vitamin  D [2]  [3].  Namun,  apabila kadarnya melebihi batas normal didalam darah dapat menyebabkan  hHiperkolesterolemia  yang  ditandai dengan meningkatnya kadar Low Density Lipoprotein (LDL – kolesterol jahat), trigliserida, dan kolesterol  total.  Hiperkolesterolemia  telah  dikenal sebagai  faktor  resiko  penyakit  kardiovaskular (CVD)[4].
Penyakit  kardiovaskular  seperti  aterosklerosis dapat  dipicu  oleh  stres  oksidatif  sebagai  akibat meningkatnya  jumlah  radikal  bebas  di  dalam  tubuh yang tidak diimbangi dengan kandungan antioksidan untuk  menetralisirnya[5].  Keadaan  stres  oksidatif dipengaruhi oleh reactive oxygen species (ROS), yaitu molekul  oksidan  reaktif  tinggi  yang  bersifat  tidak stabil  sehingga  cepat  bereaksi  dengan  molekul  lain. Reaksi ROS dapat terjadi secara endogen dan eksogen melalui  aktifitas  metabolik  regular  yang  dapat dinonaktifkan oleh antioksidan sebagai agen protektif untuk mencegah kerusakan oksidatif [6][7].
Tubuh memiliki kemampuan untuk memproduksi
antioksidan endogen seperti superoksida  dismutase  (SOD),  katalase  (CAT),  dan glutation peroksidase  (GPx). Dalam keadaan normal, terdapat  keseimbangan  antara  antioksidan  endogen dan  produksi  radikal  bebas  dalam  tubuh.  Tetapi, mekanisme  kerja GPx akan meningkat pada keadaan stress oksidatif  [8]. Enzim GPx terdiri atas empat sub unit  protein  yang  mengkatalis  reaksi  reduksi hidrogen  peroksida  (H2O2)  menjadi  air  (H2O). Enzim  tersebut  banyak  ditemukan  dalam  hati (sitosol)  [9],  karena  hati  merupakan  organ  utama yang  berfungsi  untuk  membersihkan  zat-zat  toksin yang  merupakan  hasil  dari  metabolism  bakteri
maupun  zat  kimia  seperti  indotoksin,  radikal  bebas, dan oksidan [10].
Antioksidan eksogen yang berasal dari makanan sehari-hari  terdapat  pada  buah-buahan  dan  sayuran seperti  tomat  dan  wortel  [11][12][13].  Asupan antioksidan  dapat  menghambat  atau  menunda oksidasi substrat seluler sehingga mencegah terjadinya  stres  oksidatif.  Oleh  karena  itu,  penting untuk  memperkaya  diet  dengan  antioksidan  dalam melindungi tubuh terhadap berbagai penyakit [14].
Tomat  ( Solanum  lycopersicum )  mengandung berbagai komponen penting, yaitu vitamin C, likopen dan  β  karoten  yang  diyakini  mempunyai  efek antioksidan. Kandungan  likopen pada tomat berkisar antara 30-100 ppm [15].Berdasarkan studi sebelumnya diketahui bahwa likopen berfungsi sebagai antioksidan kuat yang dapat bereaksi dengan radikal bebas untuk  mengurangi kerusakan sel [16].  Likopen pada tomat diduga memiliki perana dalam mencegah terjadinya  hiperkolesterolemia  serta  berperan  dalam mengatur metabolisme kolesterol dengan menghambat  kerja  enzim  HMG-KoA  reduktase (enzim  yang  berperan  dalam  sintesis  kolesterol  di hati)  dan  meningkatkan  degradasi  kolesterol  LDL [17].
Wortel  ( Daucus  carota )  memiliki  peranan penting  bagi  kesehatan  tubuh,  karena  kandungan gizinya  yang  kompleks.  Buah  ini  mengandung senyawa  karotenoid  dalam  jumlah  besar  berkisar antara  6000-54800  µg/100  g  [18].  Senyawa  α-  dan  β- karoten  adalah  pigmen  karotenoid  utama  yang menyebabkan  warna  kuning  dan  jingga  pada  wortel. [19].  Kandungan  β-karoten    pada  wortel  merupakan sumber provitamin A yang dipercaya dapat mencegah hiperkolesterolemia.  Vitamin  C  dan  senyawa  β- karoten  pada  wortel  juga  dilaporkan  berkhasiat sebagai  antioksidan  yang  melindungi  kolesterol  LDL dari  proses  oksidasi  sehingga  tidak  menghasilkan radikal bebas yang menjadi pemicu timbulnyaberbagai  penyakit  degeneratif  [20].  Selain kandungan  provitamin  A  yang  tinggi,  wortel  juga
mengandung  vitamin  B  dan  mineral  terutama kalsium dan fosfor.
Beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa  tomat dan wortel memiliki kandungan senyawa antioksidan yang  dapat  menurunkan  kadar  kolesterol  [21]. Disamping  itu,  tomat  dipercaya  memiliki  efek antioksidan  terhadap  aktifitas  enzim  GPx  dalam tubuh  [22].  Namun  sejauh  ini,  perbandingan  antara pemberian  tomat  dan  wortel  terhadap  kadar kolesterol  dan  enzim  antioksidan  terutama  GPx belum  pernah  dilaporkan.  Tujuan  studi  ini  adalah membandingkan  pengaruh  pemberian  ekstrak  tomat ( Solanum  lycopersicum )  dan  ekstrak  wortel  ( Daucus carota) terhadap  kadar  kolesterol  dan  enzim  GPx pada  hati  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus) yang mengalami hiperkolesterolemik.

## 2. Materi dan Metode

## 2.1. Waktu dan Tempat Pelaksanaan
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Mei sampai  Juli  2015.  Pemeriksaan  kadar  kolesterol  total dilakukan  di  UPT  hewan  coba  Fakultas  Kedokteran Hewan  Universitas  Syiah  Kuala  dan  pemeriksaan enzim  GPx  dilkukan  di  Laboratorium  Fisiologi Fakultas Kedokteran Hewan (FKH) Institut Pertanian Bogor.

## 2.2. Alat dan Bahan
Sebanyak 24 ekor tikus putih ( Rattus norvegicus ) digunakan  pada  studi  ini.  Hewan  coba  tersebut berjenis  kelamin  jantan,  berumur  3-4  bulan  dengan bobot  badan  berkisar  180-200  gram.  Hewan  coba diberi  pakan  standar  jenis  T79-4  dan  minum  secara ad libitum dan diletakan pada kandang per kelompok perlakuan.  Setelah  diadaptasi  selama  1  minggu,  tikus diberi pakan tinggi kolesterol dengan campuran  25 % mentega,  25  %  keju,  25  %  minyak  kelapa  dan  25  % kuning telur itik untuk memicu terjadinya hiperkolesterolemia.
Buah  tomat  dan  wortel  segar  diperoleh  dari pasar  Peunayong  Banda  Aceh.  Kriteria  buah  tomat dan  wortel  yang  digunakan  antara  lain  tomat  yang sudah  berwarna  merah  dan  kedua  buah  tersebut tidak  busuk  dan  layu.  Alat  yang  digunakan  untuk pembuatan  ekstrak  tomat  pada  penelitian  ini  adalah penyaring, blender,  tabung  reaksi, rak tabung reaksi, pipet  tetes,  pisau,  gelas  ukur,  dan  batang  pengaduk, serta vacum rotary evaporator .
Pemeriksaan  kadar  kolesterol  menggunakan strip  test  kolesterol  dengan  alat  GCU  ( Glucose, Cholesterol,  Uric )  merk  Nesco.  Pemeriksaan  enzim GPx menggunakan teknik spektrofotometri ( Spektrofotometer  Coleman ).  Beberapa  alat  yang digunakan  antara  lain  sentrifuge  10000  rpm, sentrifuge 3000 rpm, mikropipet, vortex, cuvet, oven, pipet  kapiler,  tabung  ependrof, ice  bath ,  gelas  ukur dan  tabung  Erlenmeyer.  Adapun  bahan  yang digunakan  antara  lain  buffer  phosfat  pH  7,0
mengandung 0,1 mM EDTA, H2O2, glutation terduksi (GSH),  enzim  glutation  reduktase,  NADPH  1,5  mM, sampel darah dan organ hati dari 24 ekor tikus putih.

## 2.3. Pelaksanaan Penelitian
Sebelum  perlakuan  tikus  putih  diadaptasikan selama 1 minggu. Hewan coba dikelompokkan secara acak  menjadi  empat  perlakuan  dengan  6  ulangan pada  setiap  perlakuannya,  yaitu  kelompok  kontrol negatif yang diberikan pakan standar (KN), kelompok kontrol positif yang diberikan pakan tinggi kolesterol (KP),    kelompok  tikus  diberikan  pakan  tinggi kolesterol dan ekstrak tomat 50  mg/kg  bb (K I), dan kelompok tikus diberikan pakan tinggi kolesterol dan ekstrak  wortel  50  mg/kg  bb  (K  II).  dan  diberi perlakuan selama 45 hari. dengan cara menggunakan lanset.  Selanjutnya  semua  tikus  dieuthanasia  dan dibedah  kemudian  diambil  organ  hati  untuk pemeriksaan  enzim  GPx.  Sampel  yang  digunakan pada  studi  ini  adalah  darah  dan  organ  hati  dari  24 ekor tikus putih, dikelompokkan secara acak menjadi empat perlakuan

## 2.3.1. Pemeriksaan kadar kolesterol
Sebanyak  1  –  2    tetes  darah  tikus  digunakan untuk  pemeriksaan  kadar  kolesterol  total.    Darah dikoleksi  dari  ekor  tikus  dengan  cara  menusukkan lanset  pada  ekornya.  Pengambilan  darah  dilakukan melalui ekor pada hari ke-45.
2.3.2. Pemeriksaan enzim glutation peroksidase
Sebanyak  100  µl  homogenat  hati  tikus  putih ditambah  200  µl  larutan  buffer  phosfat  pH  7,0  dan divortek  hingga  homogen.  Selanjutnya,  larutan disentrifuse  pada  3.000  rpm  selama  5  menit  dalam kondisi  dingin.  Supernatan digunakan  untuk mengukur  aktivitas  glutation  peroksidase  (GSH-Px). Kemudian  200  µl  buffer  phosfat  0,1  M  pH  7,0  yang mengandung 0,1 Mm EDTA ditambahkan dengan 200 µl  sampel,  200  µl  glutation  tereduksi  (GSH)  10  mM dan  200  µl  enzim  glutation  reduktase  2,4  unit kemudian  diinkubasikan  selama  10  menit  pada  suhu 37 o C.  Sebanyak  200  µl  NADPH  1,5  mM  ditambahkan kedalam  larutan  tersebut,  kemudian  diinkubasikan lagi  pada  suhu  yang  sama  selama  3  menit  dan ditambahkan.  200  µl  H2O2  1,5  mM.  serapan  larutan dibaca  antara  waktu  1-2  menit  pada  panjang gelombang 340 nm. Penentuan glutation peroksidase dihitung  dengan  menggunakan  koefisien    6.22  mM -1 cm- 1 dan  dinyatakan  sebagai  U  GPx/mg  protein  (1 unit  GPx  didefinisikan  sebagai  jumlah  enzim  yang dibutuhkan  untuk  mengkonversi  1  nmol  NADPH  ke NADP + per menit)[23].

## 2.4. Analisis Data
Uji  normalitas  dilakukan  pada  data  kadar kolesterol  total  darah  dan  enzim  GPx  dengan menggunakan  uji Kolmogorov-Smirnov dilanjutkan dengan  uji  homegenitas  dengan  menggunakan  uji Levene. Data  yang  berdistribusi  normal  dianalisis dengan  menggunakan analisis of variance (ANOVA)
e-ISSN 2655-2159
satu  arah  untuk  mengetahui  adanyapengaruh perlakuan.  Apabila  hasil  ANOVA  menunjukkan  ada pengaruhperlakuan,  maka  analisis  data  dilanjutkan dengan  uji  Beda  Nyata  Terkecil  (BNT).Hasil pengolahan  data  akan  ditampilkan  dalam  bentuk tabel.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Kadar Kolesterol Total Darah Tikus Putih
Rata-rata kadar kolesterol total darah tikus putih setelah perlakuan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Rata-rata (±SD) kadar kolesterol total darah tikus putih setelah perlakuan
Kelompok Perlakuan Kadar kolesterol (mg/dl) KN 131,67±12,36 a KP 169,83±6,55 b 1K I 124,5±14,22 a K II 129,33±16,39 a
Berdasarkan  Tabel  1.  dapat  dilihat  bahwa rata- rata  (±SD)    kadar  kolesterol  total  darah  tikus  putih pada  kelompok  kontrol  positif  (KP)  dengan pemberian  pakan  tinggi  kolesterol  mengalami peningkatan dibandingkan dengan kelompok kontrol negatif  (KN).  Kelompok  tikus  yang  diberi  perlakuan ekstrak  tomat  dosis  50  mg/kg  bb  (K  I)  dan  ekstrak wortel 50 mg/kg bb (K II) juga mengalami penurunan kadar  kolesterol.  Hasil  ini  membuktikan  bahwa pemberian  ekstrak  metanol  tomat  dan  wortel  efektif dalam  menghambat  peningkatan  kadar  kolesterol total  darah  tikus  putih,  sehingga  kadar  kolesterol masih  berada  pada  batasan  normal  yaitu  40-130 mg/dl [3].
Hasil  analisis  statistik  menggunakan  ANOVA pola  satu  arah  terhadap  kadar  kolesterol  total  darah tikus  putih  memperlihatkan  adanya  pengaruh  yang nyata  (p<0,05)  pada  kelompok  perlakuan.  Uji  Lanjut BNT  menunjukkan  bahwa  kadar  kolesterol  pada kelompok  KP  berbeda  secara  nyata  (p<0,05) dibandingkan dengan KN, K I dan K II, namun tidak menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  (p>0,05) diantara  kelompok  KN,  KI  dan  KII.  Hal  ini membuktikan  bahwa  kadar  kolesterol  total  darah tikus  putih  yang  diberi  pakan  tinggi  kolesterol dengan  ekstrak  tomat  dan  wortel  tidak  mengalami peningkatan.  Hasil  penelitian  ini  sejalan  dengan penelitian Selamet dkk [24], yang melaporkan bahwa pemberian  pakan  hiperkolesterolemik  bersamaan dengan  ektrak  tomat  dosis  20  sampai  40  mg/kg  bb dapat  menghambat  peningkatan  kadar  kolesterol total serum tikus putih. Demikian juga halnya dengan pemberian  ekstrak  wortel  yang  diberikan  pada  tikus putih hiperkolesterolemik dapat menghambat peningkatan  kadar  kolesterol.  Hal  ini  juga  sejalan dengan  penelitian  yang  melaporkan  bahwa  jus  umbi
wortel  yang  diberikan  pada  tikus  putih  jantan sebanyak 1ml/100g bb dapat menghambat peningkatan kadar kolesterol total [25].

## 3.2. Kadar Enzim Glutation Peroksidase Hati Tikus Putih
Pada  akhir  penelitian  semua  tikus  putih dieutanasia untuk pengambilan organ hati kemudian dilakukan  pemeriksaan  enzim  GPx.  Rata-rata  kadar enzim  GPx  hati  tikus  putih  setelah  perlakuan  dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Rata-rata kadar enzim GPx hati tikus putih setelah perlakuan
Kelompok Perlakuan Kadar Enzim GPx (U/mg Prot) KN 30,55±17,73 a KP 7,07±5,27 b K I 30,93±18,41 a KII 26,06±14,74 a
Berdasarkan  Tabel  2.  dapat  dilihat  bahwa  rata- rata kadar enzim GPx hati tikus putih pada kelompok kontrol  positif  (KP)  dengan  pemberian  pakan  tinggi kolesterol  mengalami  penurunan  dibandingkan dengan  kelompok  kontrol  negatif  (KN).  Kelompok tikus  yang  diberi  perlakuan  ekstrak  tomat  dosis  50 mg/kg bb (K I) dan ekstrak wortel 50 mg/kg bb (K II) juga  mengalami  peningkatan  kadar  enzim  GPx.  Hal ini  membuktikan  bahwa  pemberian  ekstrak  tomat dan  wortel  efektif  dalam  menghambat  penurunan kadar enzim GPx pada hati tikus putih.
Hasil  analisis  statistik  menggunakan  ANOVA pola  satu  arah  terhadap  kadar  enzim  GPx  hati  tikus putih  memperlihatkan  adanya  pengaruh  yang  nyata (p<0,05)  pada  kelompok  perlakuan.  Uji  lanjut  BNT menunjukkan  bahwa  kadar  enzim  GPx  pada kelompok  KP  berbeda  nyata  (p<0,05)  apabila dibandingkan  dengan  KN,  KI  dan  KII, namun  tidak adanya  perbedaan  yang  nyata  (p>0,05)  antara kelompok  KN,  KI  dan  KII.  Hal  ini  membuktikan bahwa  pemberian  pakan  tinggi  kolesterol  dapat menurunkan  kadar  enzim  GPx  hati  sedangkan pemberian  ekstrak  tomat  dan  ekstrak  wortel  dapat menghambat penurunan kadar enzim  GPx  hati  tikus putih yang diberi pakan tinggi kolesterol.
Adanya  penurunan  kadar  GPx  hati  tikus  pada kelompok  kontrol  positif  (KP)  yang  diberi  pakan tinggi  kolesterol  sesuai  dengan  Mahfouz  dan Kummerow [26] yang menyatakan  bahwa pemberian diet kolesterol pada kelinci dapat menurunkan sistem antioksidan  pada  hati  yaitu  dengan  menurunkan aktivitas  GPx.  Mekanisme  terjadinya  penurunan kadar  enzim  GPx  pada  hati  karena  tingginya konsentrasi  kolesterol  dalam  tubuh  pada  kondisi hiperkolesterolemia  sehingga  meningkatkan  sintesis asam  empedu  dan  terjadi  pemakaian  oksigen  dan
NADPH  lebih  banyak,  serta  terjadi  peningkatan aktivitas  sitokrom  P-450  oksidase  [27]  .  Sitokrom  P- 450  oksidase  juga  berperan  dalam  memperantarai metabolisme retikulum endoplasmik yang menghasilkan  radikal  anion  superoksida  O2-. Peningkatan aktivitas enzim sitokrom P-450 oksidase akan  menghasilkan  radikal  bebas  yang  berlebihan mengakibatkan  enzim  antioksidan  tubuh  tidak mampu  mengatasinya  sehingga  terjadi  kondisi  stres oksidatif yaitu jumlah radikal bebas melebihi jumlah dan kapasitas antioksidan tubuh [28].
Pada kondisi hiperkolesterolemia, tubuh berusaha  untuk  menyeimbangkan  kadar  kolesterol plasma  dengan  jalan  mengubah  kolesterol  menjadi asam  empedu  yang  dapat  meningkatkan  aktivitas sitokrom  P-450  oksidase.  Radikal  bebas  yang terbentuk  dari  hasil  samping  oksidasi  tersebut  juga akan meningkat. Sebagai konsekuensinya dibutuhkan antioksidan  tubuh  yang  lebih  banyak  untuk menanggulangi  radikal  bebas  tersebut.  Oleh  karena itu,  antioksidan  tubuh  seperti  enzim  SOD  pada jaringan hati menurun. Enzim tersebut akan bereaksi dengan  singlet  oksigen,  superoksida  dan  hidroksil, serta  secara  langsung  dapat  berperan  sebagai scavenger radikal bebas membentuk H2O2 yang akan dihilangkan  oleh  CAT  dan  GPx.  Semakn  banyak H2O2  yang  terbentuk  semakin  banyak  dibutuhkan enzim  CAT  dan  GPx  untuk  menetralkanya  [29].  Hal inilah  yang  menyebabkan  terjadinya  penurunan kandungan antioksidan pada tikus yang diberi pakan tinggi kolesterol.
Pemberian  ekstrak  tomat  pada  kelompok perlakuan (K1) pada penelitian ini dapat menghambat penurunan  kadar  enzim  GPx  hati  tikus  putih  yang diberi pakan tinggi kolesterol, namun kadarnya lebih rendah  daripada  penelitian  Amany  [21]  yang melaporkan  aktivitas  GPx  di  dalam  darah  menurun hingga  25,00  U/ml  pada  kelompok  tikus  yang  diberi diet  tinggi  lemak  dengan  atau  tanpa  likopen  tomat Adapun  aktivitas  GPx  lebih  tinggi    pada  kelompok tikus yang diberi pakan standar tanpa likopen tomat, yaitu sebesar  63,10  U/ml Kelompok tikus yang  diberi pakan  tinggi  kolesterol  dengan  konsentrasi  likopen tomat  100,  200,  400,  800  ppm  berimplikasi  pada kadar GPx, yaitu berturut-turut sebesar 60,00, 65,00, 83,00,  85,00  U/ml  Tingginya  kadar  GPx  pada penelitian tersebut diduga karena langsung menggunakan likopen pada tomat dengan pemberian yang lebih lama yaitu 70 hari.
Pada  penelitian  ini  juga  terlihat  pemberian ekstrak  wortel  pada  kelompok  (K  II)  efektif meningkatkan kadar enzim GPx pada hati tikus putih yang  diberi  pakan  tinggi  kolesterol.  Enzim  ini merupakan  salah  satu  dari  beberapa  enzim antioksidan.  Artinya  dengan  pemberian  ekstrak wortel  dapat  meningkatkan  enzim  antioksidan  di dalam  tubuh.  Hal  ini  sejalan  dengan  penelitian  Ayu [30] yang melaporkan bahwa pemberian umbi wortel
dapat  meningkatkan  antioksidan  total  serum  pada tikus  Wistar,  karena  wortel  merupakan  tanaman sayuran  umbi  yang  kaya  β-karoten,  yang  merupakan perkursor  vitamin  A  serta  mengandung  tiamin  dan riboflavin  [31].  Pemberian  ekstrak  tomat  dan  wortel dalam  penelitian  ini  dapat  membantu  kinerja  enzim GPx  dalam  melawan  radikal  bebas  sehingga penurunan  GPx  dapat  dicegah.  Hal  ini  disebabkan karena likopen dan β–karoten merupakan karotenoid yang  paling  efektif  menghilangkan  singlet  oxygen dengan  cara physical  quenching ,  yaitu  proses pengembalian status  singlet oxygen ke kadar semula tanpa  dikuti  dengan  konsumsi  oksigen    atau pembentukan  produk  sampingan.  Likopen  juga bekerja dengan menangkap radikal bebas superoksid (O2*-) sehingga membentuk ikatan yang tidak reakif dan terputusnya reaksi berantai radikal bebas [32].

## 4. Kesimpulan
Dari  penelitian  ini  dapat  ditarik  beberapa simpulan  mengenai  pengaruh    pemberian  ekstrak tomat  50  mg/kg  bb  dan  ekstrak  wortel  50  mg/kg terhadap  kadar  kolesterol  dan  enzim  glutation peroksidase pada tikus putih yang hiperkolesterolemik.
1. Pemberian ekstrak tomat dan wortel dengan dosis 50  mg/kg  bb  dapat  menurunkan  kadar  kolesterol tikus putih yang diberi pakan tinggi kolesterol.
2. Pemberian ekstrak tomat dan wortel dengan dosis 50  mg/kg  bb  dapat  meningkatkan  kadar  enzim glutation  peroksidase  pada  hati  tikus  putih  yang diberi pakan tinggi kolesterol.
3. Tidak  ada  perbedaan  yang  nyata  (P>0,05)  antara kelompok yang diberikan ekstrak tomat 50 mg/kg bb dan ekstrak wortel 50 mg/kg bb terhadap kadar kolesterol  total  darah  dan  enzim  glutation peroksidase pada hati tikus putih.

## Referensi
[1]  N. dkk S, Care Yourself Kolesterol . Jakarta: Niaga Swadaya, 2008.
[2]  A. Nagyova, V. Haban, Klvanova, and J. Kadrabova, “Effect of dietary extra virgin olive oil on serum lipid resistance to axidation and fatty acid composition in elderly lipidemic patients,” Bratisl. Lek. List. , vol. 7–8, pp. 218–21, 2003.
[3]  R. K. Murray, R. L. Dryer, T. W. Conway, and A. A. Spector, Biokimia Harper , 25th ed. Jakarta: EGC, 2003.
[4]  X. Wang et al. , “Effects of hesperidin on the progression of hypercholesterolemia and fatty liver induced by high-cholesterol diet in rats,” J. Pharmacol. Sci. , 2011.
[5]  S. Reuter, S. C. Gupta, M. M. Chaturvedi, and B. B. Aggarwal, “Oxidative stress, inflammation, and cancer: How are they linked?,” Free Radical
e-ISSN 2655-2159
Biology and Medicine . 2010.
[6]  J. S. Trilling and R. Jaber, “Selections from current literature: the role of free radicals and antioxidants in disease,” Fam. Pract. , 1996.
[7]  B. R. Bistrian, “Biochemical and Physiological Aspects of Human Nutrition,” Am. J. Clin. Nutr. , 2000.
[8]  O. Coskun, M. Kanter, A. Korkmaz, and S. Oter, “Quercetin, a flavonoid antioxidant, prevents and protects streptozotocin-induced oxidative stress and β-cell damage in rat pancreas,” Pharmacol. Res. , vol. 51, no. 2, pp. 117–123, Feb. 2005.
[9]  J. M. C. Gutteridge and B. Halliwell, “Free radicals and antioxidants in the year 2000. A historical look to the future,” in Annals of the New York Academy of Sciences , 2000.
[10]  M. Inoue, “Protective Mechanisms Against Reactive Oxygen Species,” Liver Biol. Pathobiol. , pp. 281–290, 2001.
[11]  C. L. Rock, R. Jacob, and P. E. Bowen, “Update on the biological characteristics of the antioxidant micronutrients: Vitamin C, vitamin E, and the carotenoids,” Journal of the American Dietetic Association . 1996.
[12]  H. Wiseman, “Dietary influences on membrane function: Importance in protection against oxidative damage and disease,” Journal of Nutritional Biochemistry . 1996.
[13]  A. Subar and B. Patterson, “Fruit, Vegetables, and Cancer Prevention: A Review of the Epidemiological Evidence,” Nutrition and Cancer . 1992.
[14]  O. Erukainure, O. Oke, F. Owolabi, F. Kayode, E. Umanhonlen, and M. Aliyu, “Chemical properties of &lt;i&gt;Monodora myristica&lt;/i&gt; and its protective potentials against free radicals &lt;i&gt;in vitro&lt;/i&gt;,”
Oxid. Antioxid. Med. Sci. , 2012.
[15]  P. Morazzoni et al. , “United States Patent ( 19 ),” no. 19, 1999.
[16]  H. D. Sesso, S. Liu, J. M. Gaziano, and J. E. Buring, “Dietary lycopene, tomato-based food products and cardiovascular disease in women,” in Journal of Nutrition , 2003.
[17]  “Perbaikan Fraksi Lipid Serum Tikus Putih Hiperkolesterolemi Setelah Pemberian Jus dari Berbagai Olahan Tomat (Hypercholesterolemia Albino Rat Lipid Fraction Improvement After Giving Tomato Juice),” Biosaintifika J. Biol. Biol.
Educ. , 2009.
[18]  P. M. Kotecha, B. B. Desai, and D. L. Madhavi, Carrot. Dalam: Handbook of Vegetable Science and Technology: Production, Cornposition, Storage and Processing , Salunkhe D. Marcel Dekker Inc New york, 1998. [19]  C. Nicolle et al. , “Effect of carrot intake on cholesterol metabolism and on antioxidant status in cholesterol-fed rat,” Eur. J. Nutr. , 2003.
[20]  E. . Wirakusumah, Buah dan Sayur untuk Terapi . Penebar Swadaya. Jakarta, 1997.
[21]  A. M. Basuny, A. M. Gaafar, and S. M. Arafat, “Tomato lycopene is a natural antioxidant and can alleviate hypercholesterolemia,” African J. Biotechnol. , 2009.
[22]  Y. Sulistyowati, “Pengaruh Pemberian Likopen Terhadap Status Antioksidan (Vitamin C, Vitamin E Dan Gluthathion Peroksidase) Tikus (Rattus norvegicus galur Sprague Dawley) Hiperkolesterolemik,” Univ. Stuttgart , 2006.
[23]  D. E. Paglia and W. N. Valentine, “Studies on the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutathione peroxidase,” J. Lab. Clin. Med. , 1967.
[24]  R. N. Selamet and D. B. Aceh, “THE EFFECT OF TOMATO EXTRACT (Lycopersicon esculentum) ON THE FORMATION OF ATHEROSCLEROSIS IN WHITE RATS (Rattus norvegicus) MALE,” J. Nat. Unsyiah , vol. 13, no. 2, p. 115420, 2014.
[25]  Fredy, “Pengaruh pemberian jus umbi wortel (Daucus carota L) terhadap kadar kolesterol total dan trigliserida tikus putih jantan,” Universitas Katolik Widya Mandala, 2008.
[26]  M. M. Mahfouz and F. A. Kummerow, “Cholesterol-rich diets have different effects on lipid peroxidation, cholesterol oxides, and antioxidant enzymes in rats and rabbits,” J. Nutr. Biochem. , 2000.
[27]  P. . Mayes, Lipid transport and storage. Di dalam: Murry RK, Granner, D.K., P.A. Mayes, V.W. Rodwell , Harpers’s. London: Prentice-Hall, 1996.
[28]  G. S. Dhaunsi, S. Gulati, A. K. Singh, J. K. Orak, K. Asayama, and I. Singh, “Demonstration of Cu- Zn superoxide dismutase in rat liver peroxisomes. Biochemical and immunochemical evidence,” J. Biol. Chem. , 1992.
[29]  H. Winarsih, “Antioksidan Alami & Radikal Bebas Potensi dan Aplikasinya dalam Kesehatan,” Yogyakarta: Kanisius , 2007.
[30]  I. A. A. Ayu, “Suplementasi kombinasi tempa M- 2 dengan wortel (Daucus carota) meningkatkan HDL dan antioksidan total, serta menurunkan LDL, F2- isoprostan, daN IL-6 pada tikus wistar aterosklerosis,” Universitas Udayana. Denpasar, 2013.
[31]  A. Asgar and D. Musaddad, “Optimalisasi Cara, Suhu, Dan Lama Blansing Sebelum Pengeringan Pada Wortel,” J. Hortik. , 2006.
[32]  N. A. Campbell, J. B. Reece, and L. G. Mitchell., Biologi , 5th ed. Erlangga. Jakarta., 2000.