Abstrak — Indole-3-acetic  acid (IAA)  merupakan  salah  satu fitohormon  golongan  auksin  alami    yang  disintesis  dari triptofan yang berfungsi dalam pertumbuhan dan perkembangan tanaman. Khamir  merupakan  salah  satu  mikroorganisme  rhizosfer  yang mampu  mensintesis  IAA.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui kemampuan isolat khamir yang berasal dari rhizosfer mangrove  dalam  menghasilkan  IAA  serta  pengaruh  lama  waktu inkubasi  terhadap  konsentrasi  IAA  dan  berat  kering  sel  yang dihasilkan. Metode yang digunakan meliputi uji kualitatif dengan mengamati  perubahan  warna  yangg  terjadi  serta  seacara kuantitatif  dengan  mengukur  absorbansi  warna  yang  dihasilkan menggunakan  spektrofotometer.  Hasil  yang  diperoleh  yaitu semua isolat yang digunakan memiliki potensi dalam menghasilkan  IAA,  dimana  isolat  G8.1  memiliki  kemampuan tertinggi  dalam  menghasilkan  IAA  sebsar  11,97  ppm.  Lama waktu  inkubasi  ternyata  berpengaruh  terhadap  konsetrasi  IAA dan  berat  kering  sel  yang  dihasilkan.  Konsentrasi  IAA  paling tinggi  dihasilkan  pada  hari  ke  tujuh  (168  h)  sebesar  43,50  ppm dengan berat kering sel 0,119 gram.
Kata Kunci — IAA, Khamir, Waktu Inkubasi, Berat Kering Sel.

## I. PENDAHULUAN
NDOLE-3-ACETIC  ACID (IAA)  merupakan  salah  satu fitohormon  golongan  auksin  alami  yang  memiliki  peran penting  dalam  pertumbuhan  dan  perkembangan  tanaman  [1]. Beberapa  peran  penting  yang  dipengaruhi  oleh  kerja  IAA antara  lain,  pembesaran  sel,  pembelahan  sel,  differensiasi jaringan pengangkut, inisiasi akar, respon tropistik (pembengkokan),  dominansi  apikal,    pertumbuhan  buah, pematangan  buah,  pembungaan,  pertumbuhan  bagian-bagian bunga  dan  menginduksi  terbentuknya  bunga  betina  pada jenis bunga  dioecious  (bunga  berumah  dua)  [2].  IAA  juga  dapat meningkatkan  sintesis  DNA  dan  RNA  dengan  cara meningkatkan  aktivitas  transkripsi  DNA  untuk  membentuk template atau  dengan  mempengaruhi  efektifitas  RNA Polimerase [3].
Produksi  hormon  endogen  seperti  IAA  pada  tanaman sangat  rendah  [4].  Keterbatasan  kemampuan  tanaman  dalam mensintesis  IAA  menyebabkan  tanaman memenuhi kebutuhan akan hormon dengan bantuan dari mikroorganisme. Salah satu mikroorgasnisme  memiliki  potensi  untuk  menghasilkan  IAA yaitu yeast atau khamir.
Hasil  penelitian  sebelumnya,  telah  didapatkan  beberapa isolat  khamir  yang  diisolasi  dari  rhizosfer  mangrove  Gunung Anyar dan Wonorejo diketahui berpotensi dalam mendegradasi  selulosa,  protein,  lemak,  serta  mampu
melarutkan fosfat [5]. Akan tetapi, isolat-isolat tersebut belum diketahui  kemampuannya  dalam  menghasilkan  IAA.  Oleh karena  itu,  dilakukannya  penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui kemampuan koleksi isolat khamir di Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi ITS untuk menghasilkan IAA, serta  pengaruh  masa  inkubasi  terhadap  konsentrasi  IAA  dan berat kering sel yang dihasilkan.

## II. METODOLOGI

## A. Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Laboratorium  Mikrobiologi dan  Bioteknologi  Departemen  Biologi  Fakultas  Sains,  Institut Teknologi Sepuluh Nopember, Surabaya, Provinsi Jawa Timur pada bulan September 2018 – Januari 2019.

## B. Peremajaan Isolat Khamir
Kultur  masing-masing  koleksi  isolat  khamir  diambil  1  ose dan  diinokulasikan  ke  medium  YMEA.  Kultur  dinkubasi selama  24-48  jam  dalam  suhu  ruang.  Tujuan  penginokulasian isolat  ke  medium  YMEA  adalah  untuk  meremajakan  isolat supaya isolat menjadi aktif kembali. Keberhasilan peremajaan isolat ditandai dengan tumbuhnya isolat pada medium YMEA.

## C. Pembuatan Kurva Standart IAA
Pertama, dibuat larutan stok dengan konsentrasi 100 µg/ml (100  ppm)  dengan  melarutkan  0,01  gram  IAA  dalam  100  ml akuades.  Larutan  stok  ini  kemudian  diencerkan  dengan pengenceran  untuk  membuat  larutan  IAA  standart  dengan konsentrasi 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 dan 0 ppm. Selanjutnya, disiapkan 11 tabung reaksi. Masing-masing tabung ditambahkan  dengan  2  ml  reagen  Salkowski  dan  1  ml  larutan standart  (10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 dan 0 ppm). Setelah itu, tabung  -  tabung  reaksi  tersebut  didiamkan  selama  30  menit pada  ruangan  gelap  [6].  Kemudian,  setelah  terjadi  perubahan warna  pada  larutan  menjadi  pink  atau  merah,  intensitas perkembangan  warna  diukur  dengan  spektrofotometer  pada panjang  gelombang  530  nm  (OD 530 )  [7].  Absorbansi  tiap larutan  standart  dicatat.  Data  tersebut  kemudian  akan digunakan sebagai pembuatan kurva standart IAA.

## D. Pembuatan Starter Khamir
Masing-masing  isolat  diinokulasikan  sebanyak  3  ose  penuh ke dalam botol kaca yang telah berisi medium YMB sebanyak 50  ml.  Kultur  diinkubasi  dalam  shaker  dengan  kecepatan  130 rpm  pada  suhu  26 0 C  atau  suhu  ruang  selama  48  jam.

## Uji Potensi Isolat Khamir Dari Rhizosfer Mangrove Wonorejo dan Gunung Anyar Sebagai Agen Penghasil IAA (Indole Acetic Acid)
Faifta Nandika Maya dan Nur Hidayatul Alami Departemen Biologi, Fakultas Sains, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
e-mail : hidayatulalami@bio.its.ac.id
I
Selanjutnya,  kultur  cair  tersebut  diamati  pertumbuhannya hingga mencapai OD600 nm = 0,6 [6] (kepadatan sekitar 107 sel/ml).

## E. Uji Kualitatif dan Kuantitatif Isolat Khamir
Sebanyak 12 botol kaca ukuran 150 ml diisi dengan 50 ml medium  YMB  yang  telah  ditambah  dengan  L-tryptophan  200 ppm  (200  µg/ml).  Selanjutnya,  sebanyak  10%  starter  dari  6 isolat  yeast  yang  terpilih  diambil  dan  diinokulasi  ke  dalam medium  YMB  yang  telah  diberi  L-tryptophan.  Kemudian, kultur  diinkubasi  dalam  shaker  dengan  kecepatan  130  rpm pada suhu 26 0 C atau suhu ruang selama 48 jam dengan ditutup aluminium  foil.  Setelah  inkubasi  selesai,  kultur  diambil sebanyak  5  ml  dan  disentrifugasi  8000  rpm  selama  10  menit lalu  supernatan  diambil.  Selanjutnya,  1  ml  supernatan dicampur  dengan  2  ml  reagen  Salkowski.  Campuran  tersebut kemudian  didiamkan  selama  30  menit  dalam  ruangan  gelap. Uji  kualitatif  dilakukan  dengan  mengamati  adanya  perubahan warna  larutan  menjadi  pink  hingga  merah.  Sedangkan,  uji kuantitatif  dilakukan  dengan  mengukur  intensitas  perubahan warna  dengan  spektrofotometer  pada  panjang  gelombang  530 nm (OD 530 ) [7].

## F. Pengaruh  Lama  Waktu  Inkubasi  terhadap  Produksi  IAA dan Massa Sel yang Dihasilkan
Sebanyak 3 botol kaca ukuran 500 ml diisi dengan 100 ml medium  YMB  yang  telah  ditambah  dengan  L-tryptophan  200 ppm  (200  µg/ml).  Selanjutnya,  sebanyak  10%  starter  dari isolat  yeast  yang  terbaik,  diinokulasi  ke  dalam  medium  YMB yang  telah  diberi  L-tryptophan.  Kemudian,  kultur  diinkubasi dalam shaker dengan kecepatan 130 rpm pada suhu 26 0 C atau suhu  ruang  dengan  ditutup  aluminium  foil.  Lama  waktu inkubasi berlangsung dari 24-168 jam (7 hari) dan konsentrasi IAA  yang  dihasilkan  diukur  setiap  24  jam.  Setelah  inkubasi selesai,  kultur  diambil  sebanyak  5  ml  dan  disentrifugasi  8000 rpm  selama  10  menit  lalu  supernatan  diambil.  Selanjutnya,  1 ml supernatan dicampur dengan 2 ml reagen Salkowski. Isolat diamati dan diukur konsentrasi IAA yang dihasilkan.
Dari  hasil  sentrifugasi  kultur,  selain  supernatan  juga terdapat pelet (endapan) yang akan ditimbang berat keringnya. Hal  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  jumlah  berat  kering  sel. Pertama,  pelet  dalam  tabung  sentrifugasi  diberi  sedikit akuades,  kemudian  tabung  sedikit  digoyang  agar  pelet  yang mengendap  pada  bagian  dasar  tabung  dapat  tercampur. Kemudian, pelet dituangkan di atas kertas saring Whatman dan dioven  dengan  suhu  90 O C  selama  24  jam  [8].  Sebelumnya, kertas  saring  tanpa  pelet  dioven  dengan  suhu  90 O C  dan ditimbang beratnya. Berat kering sel merupakan selisih antara
berat  kertas  saring  dengan  pelet  setelah  dioven  dengan  berat kertas saring tanpa pelet setelah dioven.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil  Uji  Kualitatif  dan  Kuantitatif  Isolat  Khamir  dalam Menghasilkan IAA
Kemampuan  isolat-isolat  khamir  dalam  menghasilkan IAA diuji secara kualitatif dan kuantitatif. Uji secara kualitatif dilakukan  dengan  menggunakan  reagen  Salkowski  yang diteteskan pada supernatan yang dihasilkan setelah disentrifugasi.  Hasil  positif  uji  kualitatif  dicirikan  dengan berubahnya  warna  larutan  menjadi  merah  atau  merah  muda setelah  diberi  reagen  Salkowski  [9].  Hasil  uji  kualitatif  isolat khamir  dalam  menghasilkan  IAA  dapat  dilihat  pada  Tabel  1 dan reaksi warna pada masing-masing isolat pada Gambar 1.
Dari  Tabel  1  dan  Gambar  1,  dapat  dilihat  bahwa  semua isolat  khamir  yang  digunakan  memiliki  potensi  dalam menghasilkan  IAA.  Hampir  80%  mikroorgnisme  rhizosfer mampu  menghasilkan  IAA  [10].  Semua  isolat  menunjukkan hasil  positif  terhadap  uji  kualitatif  yang  ditunjukkan  dengan kemampuannya  dalam  menghasilkan  warna  merah  dengan intensitas  kepekatan  warna  yang  berbeda-beda.  Warna  merah terbentuk karena adanya interaksi antara IAA dengan ion Fe 3+ dalam  reagen  Salkowski  membentuk  kompleks  tris  ( indole-3- aceto)  iron (III)  Fe[(C 8 H 6 N)CH2COO] 3 melalui  reaksi kompleks dan reaksi redoks [11]. Warna merah yang semakin pekat  menunjukkan  kandungan  IAA  yang  dihasilkan  semakin tinggi [9].
Isolat  khamir  yang  mampu  menghasilkan  warna  merah pada uji kualitatif, akan dilanjutkan dengan uji kuantitatif. Uji kuantitatif  dilakukan  dengan  mengukur  intensitas  perubahan warna  dengan  spektrofotometer  pada  panjang  gelombang  530 nm  (OD 530 )  [7].  Nilai  konsentrasi  IAA  dihitung  dengan persamaan  garis  yang  diperoleh  dari  kurva  standar  (Gambar 2),  dimana  sumbu  X  menyatakan konsentrasi IAA dan sumbu Y  menyatakan  nilai  absorbansi  [12].  Nilai  konsentrasi  IAA yang dihasilkan tiap isolat dapat dilihat pada Gambar 3.
Dari  Gambar  2  dan  3,  terlihat  bahwa  setiap  khamir memiliki kemampuan yang berbeda dalam menghasilkan IAA. Isolat  khamir  yang  menghasilkan  IAA  paling  tinggi  selama inkubasi 48 jam yaitu G8.1 sebesar 11,97 ppm dan yang paling rendah W5.1 sebesar 3,56 ppm. Hal ini dipengaruhi oleh sifat fisiologis masing-masing khamir dalam mengkonversi triptofan  menjadi  IAA  [13].  Akan  tetapi,  dalam  penelitian  ini tidak  dilakukan  identifikasi  terhadap  isolat  khamir  yang digunakan, sehingga tidak diketahui genusnya.
Tabel 1.
Hasil Uji Kualitatif Isolat Khamir dalam Menghasilkan IAA.
No Kode Isolat Reaksi Warna 1 W5.1 + 2 W7.3 + 3 G8.1 + 4 G4.1 + 5 G10.1 + 6 G3.3 +
Keterangan:    +:  ada  perubahan  warna  (potensi  menghasilkan  IAA),  -: tidak ada perubahan warna (tidak berpotensi menghasilkan  IAA).
Gambar  1.  Reaksi  Perubahan  Warna  Isolat  Setelah  Diberi  Reagen Salkowski Keterangan  :  (a)  W5.1,  (b)  W7.3,  (c)  G8.1,  (d)  G4.1,  (e)  G10.1,  (f)  G3.3, (g) Medium Kontrol (YMB+Reagen Salkowski)

## Gambar 2. Kurva Standart IAA.
Gambar 3. Konsentrasi IAA yang Dihasilkan oleh Isolat Khamir.
Prekursor  utama  dalam  biosintesis  IAA  adalah  triptofan. Oleh  sebab  itu,  fungsi  penambahan  L-triptofan  sebesar  200 ppm  pada  medium  kultur  adalah  agar  IAA  dapat  dihasilkan. Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  [14]  menggunakan Saccharomyces  cerevisae ,  didapatkan  3  gen  utama  yang berperan  terhadap  biosintesis  IAA  pada  khamir.  Ketiga  gen tersebut  yaitu ALD2 (Aldehid  dehidrogenase), ARO9 (Aromatik  transminase)  dan ADH2 (Alkohol  dehidrogenase). ALD2 berfungsi mengoksidasi indol asetaldehid menjadi IAA, ARO9 berfungsi  untuk  mengkonversi  triptofan  menjadi  indol piruvat  dan ADH2 berfungsi  untuk  mengkonversi  indol asetaldehid  (IAD)  menjadi  menjadi  indol-3-etanol  [14]. Isolat G8.1 memiliki kemampuan tertinggi dalam menghasilkan IAA kemungkinan berkaitan dengan aktivitas ketiga gen tersebut.
Terdapat 6 jalur biosintesis IAA yang melibatkan triptofan secara  langsung  sebagai  prekursor  utama.  Berdasarkan penelitian  yang  telah  dilakukan,  jalur  IPA  ( Indole  Pyruvic Acid )  merupakan  jalur  yang  umum  digunakan  oleh  khamir dalam  menghasilkan  IAA  [15].  Tingginya  konsentrasi  IAA yang dihasilkan oleh isolat G8.1 dapat disebakan karena isolat tersebut  mampu  memproduksi  IAA  melalui  lebih  dari  satu jalur  sehingga  proses  pembentukan  IAA  berlangsung  lebih efektif  dan  jumlah  IAA  yang  dihasilkan  jauh  lebih  tinggi. Sedangkan  konsentrasi  IAA  terendah  dihasilkan  oleh  isolat W5.1,  dimana  kemungkinan  isolat  tersebut  hanya  mampu menjalankan  satu  jalur  saja  sehingga  IAA  yang  dihasilkan lebih sedikit.
IAA  pada  beberapa  jenis  khamir  berfungsi  untuk membentuk  filamen  yang  berguna  untuk  invasi  serta pemanjangan  hifa/pseudohifa  untuk  memperluas  daerah penyerapan  nutrisi  [16].  Contohnya  pada Saccharomyces cerevisae ,  IAA  berfungsi  sebagai  sinyal  untuk  mengatur filamentasi  yang  berfungsi  untuk  invasi.  Sedangkan  pada kebanyakan  khamir  patogen  seperti Candida  albicans ,  IAA berfungsi  untuk  menginduksi  pembentukan  hifa  dan  transisi dimorfik [13].
Beberapa  faktor  lain  yang  juga  dapat  mempengaruhi biosintesis  IAA  pada  khamir  yaitu  nilai  pH  pada substrat/medium,  suhu,  penggunaan  sumber  karbon  dan nitrogen  serta  ketersediaan  triptofan  pada  medium.  Selain  itu, khamir  kelompok  Ascomycetes  mampu  menghasilkan  IAA lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  kelompok  Basidiomycetes [17].  Pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Sun,  dengan mengisolasi  khamir  dari  filosfer  tanaman Drosera  indica , didapatkan  hasil  bahwa  secara  umum,  khamir  mampu
menghasilkan  IAA  pada  kondisi  lingkungan  yang  asam  atau netral, bukan pada kondisi alkalin. Selain itu, konsentrasi IAA yang  tinggi  dapat  dihasilkan  pada  suhu  28 0 C  yang dibandingkan dengan suhu 37 0 C dan 16 0 C [18].

## A. Pengaruh  Lama  Waktu  Inkubasi  terhadap  Produksi  IAA dan Massa Sel yang Dihasilkan
Isolat  khamir  yang  menghasilkan  konsentrasi  IAA  paling tinggi  yaitu  isolat  G8.1  dipilih  untuk  uji  lebih  lanjut  dengan memanipulasi lama waktu inkubasi selama 7 hari dan dihitung konsentrasi serta berat kering sel perharinya. Besar konsentrasi IAA  yang  dihasilkan  dan  berat kering sel selama 7 hari dapat dilihat pada Gambar 4.
Dari  Gambar  4  dapat  dilihat  bahwa  terdapat  peningkatan pada  berat  kering  sel  dan  konsentrasi  IAA  yang  dihasilkan sampai  hari  ke-4.  Sel  khamir  mulai  memproduksi  IAA  pada hari  pertama  atau  setelah  diinkubasi  24  jam.  Pada  hari  ke-5, pertambahan berat kering  sel terlihat stagnan  atau pertambahannya  sangat  sedikit  sekali  yang  dapat  dilihat  dari grafik  yang  berbetuk  mendatar  (Gambar  4)  dan  kembali meningkat sampai hari ke-7.
Konsentrasi  IAA  akan  meningkat  seiring  dengan  umur kultur  sel  mikroorganisme  hingga  mencapai  fase  stasioner [19].  Jadi,  konsentrasi  IAA  akan  terus  meningkat  sampai  sel memasuki fase stasioner, hal ini terlihat pada hari ke-4 dan ke- 5 (Gambar 4), dimana berat kering sel mengalami peningkatan yang  sedikit  sekali  dan  garis  pada  grafik  terlihat  datar,  tetapi terjadi  peningkatan  paling  tinggi  terhadap  konsentrasi  IAA yang  dihasilkan.  Sehingga,  ada  kemungkinan  pada  hari  ke-4 dan  ke-5,  sel  telah  memasuki  fase  stasioner.  Peningkatan produksi  IAA  pada  fase  stasioner  pada  khamir  berhubungan dengan  menurunnya  sumber  karbon  untuk  memenuhi kebutuhan nutrisi bagi metabolisme sel [16].
Pada hari ke-6 dan ke-7 (Gambar 4) berat kering  sel terus bertambah  diikuti  dengan  meningkatnya  konsentrasi  IAA. Dalam  pengukuran  berat  kering  sel,  tidak  dapat  dibedakan antara  sel  yang  hidup  dan  yang  mati,  sehingga  tidak  dapat dijadikan  acuan  apakah  berat  sel yang bertambah berasal dari pertumbuhan jumlah sel yang hidup. Sel yang mati juga dapat terakumulasi  saat  perhitungan  berat  kering,  sehingga menyebabkan  peningkatan  berat  sel  kering.  Selain  itu,  saat kekurangan  energi  atau  mulai  memasuki  fase  stasioner,  sel khamir  akan  melakukan  adaptasi  dengan  cara  membentuk filamen.  Dari  penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  [20] menggunakan Saccharomyces  cerevisae ,  sel  yang  memasuki
fase  stasioner  akan  menampakkan  filamen  yang “ lebih  nyata ” [20]. Adanya pertambahan berat kering sel pada hari ke-6 dan ke-7,  kemungkinan  dapat  berasal  dari  filamen-filamen  yang dibentuk  oleh  sel  khamir,  dimana  salah  satu  fungsi  IAA  bagi khamir yaitu untuk menginduksi filamentasi.
IAA  pada  konsentrasi  tinggi dapat meningkatkan produksi filamen.  Pada  saat  konsentrasi  IAA  diluar  sel  tinggi,  faktor transkripsi Yap1 akan  berpindah  ke  nukleus  dan  menginduksi pembentukan  protein-Avt  yang  menyebabkan  peningkatan IAA  yang  ditransfer  ke  dalam  sel,  kemudian  protein permukaan  sel FLO11 akan  meningkatkan  produksi  filamen, begitu juga sebaliknya  [21]. Bagian dari IAA yang digunakan saat  pembentukan  filamen,  kemungkinan  terletak  pada  gugus karboksil  (RCOOH).  Hal  ini  karena,  salah  satu  protein pembentuk filamen mengandung gugus karboksil, yaitu Acc1p ( Acetyl-CoA  carboxylase )  yang  mampu  membentuk  filamen berukuran besar [22].
Dari Gambar 5 dan 6 terlihat bahwa pada hari ke-2 menuju ke-3  (48-72  h)  sampai  hari  terakhir  (144-168  h),  ketika pertambahan  berat  kering  menurun,  maka  pertambahan konsentrasi IAA meningkat, begitu juga sebaliknya. Dari pola tersebut,  terdapat  kemungkinan  bahwa  konsentrasi  IAA  yang tinggi  mampu  menghambat  pertumbuhan  sel.  Menurut  [18], pada  filum  Ascomycota,  IAA  pada  konsentrasi  tinggi  (1250- 5000  µM)  dapat  menghambat  pertumbuhan  sel  khamir  dan menginduksi  fiamentasi,  tetapi  pada  konsentrasi  rendah (312,5-625  µM)  tidak  berefek  atau  dapat  meningkatkan pertumbuhan sel khamir, sedangkan pada filum Basidiomycota, spesies yang berbeda atau strain yang berbeda pada  spesies  yang  sama,  menunjukkan  respon  berbeda terhadap  konsentrasi  optimal  IAA  yang  dibutuhkan  untuk
menghambat atau meningkatkan pertumbuhan selnya. Pengaruh  konsentrasi  IAA  terhadap  pertumbuhan  sel  juga dipengaruhi oleh spesies atau bahkan strain dari isolat khamir tersebut. Selain itu, pada hari ke-4 menuju hari ke-5 (96-120h), pertambahan  berat  kering  hanya  sebesar  0,03  gram.  Akan tetapi, pertambahan konsentrasi IAA yang dihasilkan (Gambar 5)  menunjukkan  peningkatan  yang  paling  tinggi  (96-120h), yaitu  sebesar  10,81  ppm.  Kemungkinan,  pada  jangka  waktu tersebut, sel telah memasuki fase stasioner yang menyebabkan peningkatan produksi IAA [19].
Selain  analisis  secara  deskriptif,  dilakukan  juga  analisis secara  statistik  dengan  uji ANOVA-One  Way .  Hasil  uji ANOVA-One  Way diperoleh  nilai p-value <  0,05,  sehingga dapat  disimpulkan  terdapat  perbedaan  antar  perlakuan,  yaitu lama  waktu  inkubasi  dengan konsentrasi IAA yang dihasilkan dan berat kering sel. Karena terdapat perbedaan pada hasil uji ANOVA-One  Way ,  maka  dilakukan  uji  lanjutan  menggunakan uji Duncan. Hasil dari uji Duncan dapat dilihat pada Tabel 2. Dari  Tabel  2,  terlihat  bahwa  terdapat  perbedaan  yang signifikan antara lama waktu inkubasi dengan konsentrasi IAA yang  dihasilkan  dan  berat  kering  sel.  Selain  itu,  dari  hasil regresi  juga  diperoleh  nilai  R 2 pada  konsentrasi  IAA  sebesar 0,991 dan pada berat kering sel sebesar 0,981. Sehingga dapat dikatakan  bahwa  baik  konsentrasi  IAA  dan  berat  kering  sel mengalami  peningkatan.  Semakin  lama  waktu  inkubasi, semakin  tinggi  dan  besar  konsentrasi  IAA  serta  berat  kering sel yang dihasilkan. Berat kering sel tidak menjadi acuan untuk menentukan pertumbuhan sel, karena di dalam berat kering sel selain  sel  yang  hidup,  terdapat  pula  sel  yang  sudah  mati  dan juga  filamen-filamen  yang  dibentuk  sehingga  mempengaruhi berat  yang dihitung. Konsentrasi IAA paling tinggi dihasilkan
Gambar  4.  Konsentrasi  IAA  dan  Berat  Kering  Sel  Khamir  Isolat    G.81 Selama Tujuh Hari.
Gambar 5. Grafik Pertambahan Konsentrasi IAA Selama 7 Hari.
Gambar 6. Grafik Pertambahan Berat Kering Sel Selama 7 Hari.
Tabel 2. Hasil Uji Duncan Antara Lama Waktu Inkubasi dengan Konsentrasi IAA dan Berat Sel Kering Lama Waktu (Jam) Konsentrasi IAA (ppm) Berat Kering Sel (gram) 0 h 0,000 a 0,017 a 24 h 5,89 b 0.022 b 48 h 12,14 c 0.045 c 72 h 20,35 d 0.063 d 96 h 24,60 e 0,085 e 120 h 35,41 f 0.088 f 144 h 39,71 g 0,103 g 168 h 43,50 h 0,119 h
Keterangan:  Angka  yang  diikuti  oleh  huruf  yang  berbeda  menunjukkan perbedaan  yang  signifikan  berdasarkan  Uji  Duncan  pada  taraf kepercayaan 95% (α=0,05)
pada  waktu  inkubasi  hari  ketujuh  (168h)  sebesar  43,50  ppm dengan berat kering sel 0,119 gram.

## IV. KESIMPULAN
Semua  isolat  khamir  yang  berasal  dari  rhizosfer  mangrove Wonorejo  dan  Gunung  Anyar  mampu  menghasilkan  IAA. Isolat yang menghasilkan IAA paling tinggi adalah isolat G8.1 sebesar  11,97  ppm.  Lama  waktu  inkubasi  berpengaruh terhadap konsentrasi IAA dan berat kering sel yang dihasilkan. Semakin  lama  waktu  inkubasi,  konsentrasi  IAA  dan  berat kering  sel  yang  dihasilkan  semakin  tinggi.  Konsentrasi  IAA paling  tinggi  dihasilkan  pada  waktu  inkubasi  hari  ketujuh (168h) sebesar 43,50 ppm dengan berat kering sel 0,119 gram.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] B.  Kukavica,  A.  Mitrovic,  M.  Mojovic,  and  S.  V.  Jovanovic, “ Effect  of  indole-3-acetic  acid  on  Pea  Root  Growth,  Peroxidase Profiles  and  Hydroxyl  Radical  Formation, ” Arc.Biol.Sci ,  vol.  59, no. 4, pp. 319 – 326, 2007. [2] P.  Davies, Plant  Hormones:  Biosynthesis,  Signal  Transduction,
Action , Revised Th. USA: Springer, 2007.
[3] I.  Kresnawaty,  S.  Andanawarih,  Suharyanto,  and  Tri-Panji, “ Optimisasi  dan  pemurnian  IAA  yang  dihasilkan  Rhizobium  sp. dalam  medium  serum  lateks  dengan  suplementasi  triptofan  dari pupuk kandang, ” Menara Perkeb. , vol. 76, no. 2, pp. 74 – 82, 2008.
[4] K.  Ljung et  al. , “ Sites  and  regulation  of  auxin  biosynthesis  in Arabidopsis roots, ” Plant Cell , vol. 17, pp. 1090 – 1104, 2005.
[5]
N.  Alami  and  M.  Shovitri, “ Marine  Yeast  sebagai  Biofertlizer Potensial, ” Surabaya.
[6] T.  Lasmini  and  E.  S.  Soetarto, “ Khamir  penghasil  indole-3-acetic acid  dari  rhizosfer  anggrek  tanah  Pcteilis  susannae  (L.)  Rafin, ” Biogenesis , vol. 2, no. 1, pp. 56 – 62, 2014.
[7] S.  A.  Gordon  and  R.  .  Weber, “ Colorimetric  estimation  of  indole acetic acid, ” Plant Physiol , vol. 26, pp. 192 – 195, 1951.
[8] D.  P.  Singh  and  S.  K.  Dwivedi, Environmental  Microbiology  and Biotechnology .  New  Delhi:  New  Age  International  Publishers, 2004.
[9] T.  K.  Dewi,  E.  S.  Arum,  H.  Iamuddi,  and  S.  Antonius,
“ Karakterisasi mikroba perakaran (PGPR) agen penting pendukung
pupuk organik hayati, ” in PROS SEM NAS MASY BIODIV INDON , 2015, pp. 289 – 295.
[10] S.  Spaepen,  J.  Vanderleyden,  and  R.  Remans, “ Indole-  3-acetic Acid  in  Microbial  and  Microorganism  Plant  Signaling, ” FEMS Microbiol. Lett. , vol. 31, pp. 425 – 448, 2007.
[11] A.  Kamnev,  A.  G.  Shchelochkov,  P.  Tarantillis,  M.  G.  Polissiou, and  Y.  D.  Perfiliev, “ Complexation  of  Indole-3-acetic  Acid  with Iron(III):  Influence  of  Coordination  on  t he  π -Electronic  System  of the Ligand, ” Monatshefte für Chemie , vol. 132, pp. 675 – 681, 2001.
[12] A.  Underwood, Analisis  Kimia  Kuantitatif ,  6th  ed.  Jakarta:
Erlangga, 1990. [13] S.  F.  Fu,  J.  Y.  Wei,  H.  W.  Chen,  Y.  Y.  Liu,  H.  Y.  Lu,  and  J.  Y. Chou, “ Indole-3-Acetic Acid: A Widespread Physiological Code in Interactions of Fungi with Other Organisms, ” 2015.
[14] R.  P.  Rao,  A.  Hunter,  O.  Kashpur,  and  J.  Normanly, “ Aberrant Synthesis  of  Indole-3-Acetic  Acid  in  Saccharomyces  cerevisiae Triggers  Morphogenic  Transition,  a  Virulence  Trait  of  Pathogenic Fungi, ” Genet. Soc. Am. , vol. 185, pp. 211 – 220, 2010. [15]
P.  Nutaratat,  N.  Srisuk,  P.  Arunrattiyakorn,  and  S.  Limtong,
“ Indole ‑3‑acetic acid biosynthetic pathways in the basidiomycetous yeast Rhodosporidium paludigenum, ” Arch Microbiol , vol. 198, no. 5, pp. 429 – 437, 2016.
[16] A.  S.  de  A.  Scarcella,  R.  B.  Junior,  R.  G.  Bastos,  and  M.  M.  R. Magri, “ Affect  Drastically  Indole  Acetid  Acid  Production  Of Plant Growth Promoting Yeasts, ” Brazilian J. Chem. Eng. , vol. 34, no. 2, pp. 429 – 438, 2017.
[17] P.  Buzzini,  M.  A.  Lachance,  and  A.  Yurkov, Yeasts  in  Natural Ecosystems: Diversity . Switzerland: Springer, 2011.
[18] P.  Sun,  W.  Fang,  L.  Shin,  J.  Wei,  S.  Fu,  and  J.  Chou, “ Indole-3- acetid acid-producing yeasts in the phyllosphere of the carnivorous plant  Drosera  indica  L, ” PLoS  One ,  vol.  9,  no.  12,  p.  e114196, 2014.
[19] S.  Spaepen  and  J.  Vanderleyden, Auxin  and  Plant  Microbe Interaction . Belgium: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2011.
[20] E.  Nüske et  al. , “ Filament  Formation  By  The  Translation  Factor eIF2B  Regulates  Protein  Synthesis  In  Starved  Cells, ” 2018.
[Online]. Available: http://dx.doi.org/10.1101/467829.
[21] N. Dufour and R. P. Rao, “ Secondary Metabolites and Other Small Molecules  as  Intercellular  Pathogenic  Signals, ” FEMS  Microbiol Lett , vol. 314, pp. 10 – 17, 2011. [22] Q.  J.  Shen et  al. , “ Filamentation  of  Metabolic  Enzymes  in Saccharomyces  cerevisiae, ” J.  Genet.  Genomics ,  vol.  43,  pp.  393 – 40, 2016.