## JURNAL BIOSILAMPARI: JURNAL BIOLOGI
EFEKTIVITAS EKSTRAK METANOL DAUN KETEPENG CINA ( Cassia alata L.)

## DALAM MENGHAMBAT PERTUMBUHAN BAKTERI Staphylococcus epidermidis

## SECARA TUNGGAL DAN KOMBINASI
Annisa Putri Hanifa 1 , Dina Erliana 2 , Avidlyandi Avidlyandi 3 , Meika Rizka 4 , Deni Agus Triawan 5 , Sal Prima Yudha S. 6 , Morina Adfa 7* 1,2,3,4,5,6,7 Jurusan Kimia, Universitas Bengkulu, Jln. WR. Supratman, Kandang Limun, Kota Bengkulu, Bengkulu, 38371
*Corresponding author, e-mail: morina@unib.ac.id

## A B S T R A C T
The goal of this study was to determine the antibacterial activity and combined effect of a 10% w/v methanol extract of ketepeng cina leaves ( Cassia alata ) with six selected plant extracts against Staphylococcus epidermidis using the diffusion and paper strip methods. The results revealed that the average antibacterial activity of each extract inhibited the growth  of S.  epidermidis .  The  inhibition  zones  of  single  extract  of C.  alata , Excocaria cochinchinensis , Ocinum  tenuiflorum , Persea  americana , Oroxylum  indicum , Impatiens balsamina , and Peronema canescens were 6.28±0.20 mm, 7.90±0.31 mm, 2.30±0.37 mm, 3,53±0.50  mm,  4.35±0.52  mm,  and  4.69±0.17  mm,  respectively.  Furthermore,  the combination  of  ketepeng  cina  leaves  ( C.  alata )  methanol  extract  with  the  six  selected plants  extract  in  an  average  diameter  of  inhibition  zone  greater  than  the  average diameter  of  inhibition  zone  of  each  extract.  However,  the  combined  extract's  average diameter of the inhibition zone was not significantly larger than the sum of the diameters of the inhibition zones of each extract. According to the findings of this study, combining the  methanol  extract  of C.  alata with  six  selected  plant  extracts  has  an additive/indifferent effect on the growth of S. epidermidis .
Keywords : Antibacterial,  Additive/Indifferent,  Combination, Cassia  alata , Staphylococcus epidermidis

## PENDAHULUAN
Jerawat  merupakan  salah  satu  infeksi  kulit  yang  umumnya  menyerang  para remaja.  Jerawat  itu  sendiri  disebabkan  adanya  penyumbatan  pori-pori  kulit  oleh timbunan  lemak  yang  kemudian  terjadi  peradangan  yang  disebabkan  oleh Staphylococcus  epidermidis,  Propionibacterium  acnes , dan Staphylococcus  aureus . Pengobatan  jerawat  biasanya  menggunakan  antibiotik  sebagai  antiinflamasi  seperti klindamisin,  dan  tetrasiklin,  namun  karena  pemakaian  yang  tidak  tepat  dapat menyebabkan resistensi bakteri (Lestari et al., 2021).
Penggunakan  obat  herbal  atau  obat  tradisional  untuk  mengobati  berbagai penyakit  termasuk  infeksi  kulit  kembali  menjadi trend di  Indonesia.  Masyarakat mempercayai  penggunaan  obat  tradisional  memiliki  efek  negatif  yang  relatif  kecil, biasanya  mereka  mengkonsumsi  obat  tradisional  dengan  cara  merebus  satu  jenis tumbuhan  atau  dicampur  dengan  beberapa  jenis  tumbuhan  yang  dipercaya memberikan efek yang lebih baik jika dibandingkan dengan mengkonsumsi satu jenis tumbuhan  saja  (Cheesman  et  al.,  2017).  Penggunaan  kombinasi  2  jenis  herbal  atau lebih tentu saja perlu pembuktian secara ilmiah.
Pada  penelitian  Adfa  et  al.  (2021)  telah  mengombinasikan  ekstrak  metanol daun  ketepeng  cina  ( C.  alata )  (A)  dengan  ekstrak  metanol  biji  alpukat  ( Persea americana ) (B) dengan perbandingan konsentrasi A mg/mL : B mg/mL adalah 4 : 4, 4 : 8, 4 : 12, 8 : 4, dan 12 : 4 yang menghasilkan zona hambat sebesar 4,01; 5,14; 5,66; 3,81;  dan  4,33  mm  terhadap  bakteri S.  epidermidis ,  dimana  efek  kombinasi  yang dihasilkan  adalah  efek indifferent .  Untuk  melanjutkan  pencarian  kombinasi  ekstrak metanol  daun  ketepeng  cina  ( C.  alata )  dengan  beberapa  ekstrak  tanaman  herbal lainnya dengan aktivitas yang lebih baik maka perlu diselidiki efek kombinasi yang ditimbulkan  jika  ekstrak  metanol  daun  ketepeng  cina  ( C.  alata )  dikombinasikan dengan  beberapa  ekstrak  tumbuhan  terpilih  lainnya  dalam  menghambat pertumbuhan S. epidermidis.
Hasil  skrining  fitokimia  tanaman  ketepeng  cina  ( C.  alata )  dilaporkan mengandung flavonoid, tannin, saponin, fenol dan alkaloid (Lathifah et al., 2021), dan berhasil  diisolasi  senyawa  3,4  dihidroksi  asam  sinamat  dari  daunnya.  Disisi  lain, aktivitas antibakteri 6 ekstrak tumbuhan terpilih yang akan dikombinasikan dengan ekstrak  ketepeng  cina  sudah  banyak  dilaporkan.    Berdasarkan  penelitian  Nizar  dan Monika  (2015),  ekstrak  etil  asetat  daun  sambang  darah  ( Excocaria  cochinchinensis ) dengan  konsentrasi  terendah  0,78%  dan  tertinggi  50%  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri Escerichia  coli dengan  zona  hambat  7,1  mm  dan  12,25  mm. Ekstrak  metanol  daun  pacar  air  ( Impatiens  balsamina )  dapat  menghambat pertumbuhan S. epidermidis dan P. acnes (Dermawan et al., 2015; Yang et al., 2001). Ekstrak  tanaman  ruku-ruku  ( Ocinum  tenuiflorum )  dilaporkan  memiliki  aktivitas antibakteri  terhadap Bacillus  subtilis,  B.  cereus dan S.  aureus (Chetia  et  al.,  2021). Ekstrak  etanol  daun  sungkai  ( Peronema  canescens )  dengan  konsentrasi  25%  dapat menghambat  pertumbuhan E.  coli (Fransisca  et  al.,  2020).  Ekstrak  daun  bungli ( Oroxylum  indicum )  memiliki  daya  hambat  terhadap  bakteri  penyebab  infeksi saluran kemih, salah satunya pada bakteri S. aureus (Dubey et al., 2021), dan ekstrak biji  alpukat  ( Persea  americana )  menunjukkan  hambatan  terhadap S.  epidermidis (Adfa et al., 2021).
Berdasarkan  penelusuran  literatur,  sejauh  ini  belum  ada  laporan  aktivitas antibakteri  kombinasi  ekstrak  metanol  daun  ketepeng  cina  dengan  enam  ekstrak tumbuhan  terpilih  (sambang  darah,  pacar  air,  ruku-ruku,  sungkai,  bungli  dan  biji alpukat) dalam menghambat pertumbuhan S. epidermidis dan juga belum dilaporkan efek  apa  yang  ditimbulkannya.  Untuk  itu,  perlu  diketahui  efek  kombinasi  yang ditimbulkan dari penggunaan ekstrak metanol daun ketepeng cina dengan 6 ekstrak tumbuhan  terpilih  tersebut,  supaya  diketahui  keefektifannya  dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  epidermidis jika  digunakan  bersama-sama (kombinasi) untuk mengatasi infeksi pada penggunaan obat secara tradisional.

## METODE PENELITIAN Bahan dan Alat
Bahan-bahan  penelitian  adalah  ekstrak  metanol  daun  ketepeng  cina  ( Cassia alata ), ekstrak metanol daun pacar air ( Impatiens balsamina ), ekstrak metanol daun sambang darah ( Excoecaria cochichinensis ), ekstrak metanol daun ruku-ruku ( Ocinum tenuiflorum ), ekstrak etanol daun sungkai tua ( Peronema canescens ), ekstrak metanol daun bungli ( Oroxylum indicum ) dan ekstrak metanol biji alpukat ( Persea americana ), serta bakteri uji adalah Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228). Bahan lainnya yang digunakan  NA  ( Nutrient  Agar ,  Merck),  DMSO  (Dimetil  Sulfoksida,  Merck),  dan  NB
( Nutrient  Broth, Merck).  Alat  yang  digunakan  adalah  Spektrofotometer  UV-Vis
(Agilent Technologies  Cary  60  UV-Vis),  neraca  analitik  (caADAM),  inkubator (Froilabo), hotplate dan stirrer (Vision), rotary  evaporator (Heidolph), laminar  air flow (Telstar  AV-100),  oven  (Philip  Harris  Ltd.)  dan  autoklaf  (GEA),  serta  alat-alat gelas yang biasa digunakan untuk uji antibakteri. Alat-alat gelas  dan media tumbuh yang  digunakan  telah  disterilkan  terlebih  dahulu  (Adfa  et  al.,  2021;  Zahrah  et  al., 2018).
Peremajaan Bakteri Staphylococcus epidermidis Biakan  bakteri S.  epidermidis (ATCC  12228)  didapatkan  dari  Laboratorium Mikrobiologi Institut Pertanian Bogor (IPB).  Biakan bakteri S. epidermidis dilakukan peremajaan  terlebih  dahulu  pada  cawan  petri  dan  tabung  reaksi,  kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam (Adfa et al., 2021; Zahrah et al., 2018).
Uji Skrining Awal Penentuan Efek Kombinasi dengan Metode Difusi Sumuran Uji  aktivitas  antibakteri  pada  penelitian  ini  dilakukan  dengan  metode  difusi sumuran.  Media  NA  yang  telah  steril  diambil  sebanyak  15  mL  lalu  dimasukkan  ke dalam  cawan  petri  kemudian  ditambahkan  sebanyak  1  ml  suspensi  bakteri  dengan OD 0,1 dan diaduk dengan memutar cawan secara perlahan-lahan membentuk angka delapan. Setelah media memadat dibuat lubang sumuran dengan menggunakan cork borer berdiameter  6  mm  sebanyak  9  sumuran  dalam  satu  cawan  petri.  Masing- masing  sumuran  ditambahkan  sebanyak  10  L  larutan  sampel  uji  yang  dilarutkan dalam  DMSO  50%  untuk  membuat  konsentrasi  10%  b/v.  Untuk  sumuran  pertama ditambahkan  larutan  sampel  utama  yaitu  ekstrak  metanol  daun  ketepeng  cina  ( C. alata ), kemudian untuk sumuran kedua dimasukkan ekstrak tunggal daun bungli ( O. indicum ).  Untuk  sumuran  ke-tiga  dikombinasikan  antara  ekstrak  metanol  daun ketepeng  cina  ( C.  alata )  dengan  ekstrak  metanol  daun  bungli ( O.  indicum ),  untuk sumuran  selanjutkan  dibuat  perlakuan  yang  sama  terhadap  5  ekstrak  tumbuhan terpilih lainnya. Klindamisin 250 ppm digunakan sebagai kontrol possitif, sedangkan DMSO 50% (v/v) sebagai kontrol negatif. Setelah ekstrak terpenetrasi kedalam media kemudian  diinkubasi  selama  24  jam  pada  incubator  dengan  suhu  37  °C.  Zona bening/zona  hambat  yang  terbentuk  diukur  menggunakan  jangka  sorong  dengan cara  mengurangi  zona  bening  yang  terbentuk  dengan  diameter  lubang  sumuran (Haryati  et  al.,  2017),  uji  skrining  awal  penentuan  efek  kombinasi  dilakukan  3  kali pengulangan.

## Penentuan Pola Efek Kombinasi Ekstrak dengan Metode Pita Kertas
Penentuan pola efek kombinasi ekstrak metanol daun ketepeng cina ( C. alata ) dengan  6  ekstrak  tanaman  terpilih  menggunakan  metode  pita  kertas.  Pola  efek interaksi yang terjadi dapat ditentukan dengan melihat efek kombinasi secara visual. Masing-masing ekstrak uji yang diteteskan sebanyak 30  L dengan konsentrasi 10% b/v  pada  pita  kertas  berukuran  3  cm  x  0,5  cm,  kemudian  pita  kertas  diletakkan  di atas media agar NA yang telah diinokulasi bakteri uji dengan membentuk sudut 90° dan saling tumpang tindih pada sudut  siku-siku. Setelah itu,  cawan petri diinkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam.  Pola  efek  yang terbentuk dapat menunjukkan efek synergistic , additive/indifferent atau antagonist dilihat  dari  pola  zona  bening  yang terbentuk pada pertemuan 2 buah pita kertas membentuk sudut 90°. Efek synergistic dapat  dilihat  jika  adanya  peningkatan zona  hambat  yang  terbentuk  pada  sudut  90° pertemuan  2  buah  pita  kertas,  sedangkan antagonist sebaliknya  dan  untuk  efek additive / indifferent dapat  dilihat  dari  tidak  ada  peningkatan  maupun  pengurangan zona  bening  yang  terbentuk  pada  sudut  90°  jika  dibandingkan  dengan  zona  bening
pada  masing  masing  pita  kertas  (Laishram  et  al.,  2017).  Uji  penentuan  pola  efek kombinasi menggunakan pita kertas dilakukan duplo.

## Analisis Data
Analisis data zona hambat dilakukan secara kuantitatif dengan merata-ratakan hasil  pengukuran  daya  hambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  epidermidis dengan  metode  sumuran dari  3  kali  pengulangan  dan  dihitung  juga  standar deviasinya  menggunakan  exel.  Data  uji  pita  kertas  berupa  visual  pola  zona  bening yang  terbentuk  dari  2  kali  pengulangan  dideskripsikan  dengan  efek synergistic , additive/indifferent atau antagonist.

## HASIL DAN DISKUSI
Aktivitas Antibakteri Kombinasi Ekstrak Metanol Daun Ketepeng Cina ( C. alata ) dengan 6 Ekstrak Tumbuhan Terpilih Menggunakan Metode Sumuran Uji aktivitas antibakteri yang dilakukan menggunakan metode difusi sumuran. Pemberian  ekstrak  metanol  daun  ketepeng  cina  ( C.  alata )  baik  secara  tunggal maupun dikombinasi dengan 6 ekstrak tumbuhan terpilih memberikan zona hambat yang  ditandai  dengan  zona  bening  yang  terbentuk  di  sekitar  lubang  sumuran  yang dapat dilihat pada (Gambar 1 dan Gambar 2).
Aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  metanol  daun  ketepeng  cina  dengan  6 ekstrak tanaman terpilih secara keseluruhan menghasilkan zona hambat yang lebih besar  jika  dibandingkan  dengan  ekstrak  tunggal  namun  tidak  lebih  besar  dari penjumlahan  keduanya.  Seperti  terlihat  pada  Gambar  3,  rata-rata  diameter  zona hambat ekstrak tunggal ketepeng cina, ekstrak metanol daun sambang darah, ekstrak metanol daun ruku-ruku dan ekstrak metanol biji alpukat adalah sebesar 6,28±0,20 mm;  7,90±0,31  mm;  2,30±0,37  mm;  dan  1,30±0,05.  Zona  hambat  yang  dihasilkan ketika ekstrak metanol daun ketepeng cina dikombinasikan dengan ekstrak metanol daun  sambang  darah,  ekstrak  metanol  daun  ruku-ruku,  dan  ekstrak  metanol  biji alpukat  menghasilkan  zona  hambat  sebesar  9,41±0,14  mm;  6,73±0,30  mm;  dan 6,95±0,61, berturut-turut.
Rata-rata  diameter  zona  hambat  ekstrak  metanol  daun  ketepeng  cina  secara tunggal  bersama  dengan  ekstrak  metanol  daun  bungli,  ekstrak  metanol  daun  pacar air  dan  ekstrak  etanol  daun  tua  sungkai  adalah  sebesar  7,43±0,35  mm;  3,53±0,50 mm,  4,35±0,52  mm;  dan  4,69±0,17  mm.  Zona  hambat  yang  dihasilkan  ketika kombinasi antara ekstrak metanol daun ketepeng cina dengan ekstrak metanol daun bungli,  ekstrak  metanol  daun  pacar  air,  dan  ekstrak  etanol  daun  tua  sungkai menghasilkan  zona  hambat  sebesar  8,72±0,24  mm;  7,81±0,20  mm;  dan  7,93±0,39 mm yang dapat dilihat pada Gambar 4.
Kemampuan  menghambat  pertumbuhan  bakteri  oleh  ekstrak  metanol  daun ketepeng cina dan enam ekstrak tumbuhan terpilih lainnya diduga karena kandungan kimianya, terutama senyawa metabolit sekunder. Senyawa metabolit sekunder yang berhasil diisolasi dari daun ketepeng cina ( C. alata ) oleh Paul et al. (2013) adalah 3,4 dihidroksi  asam  sinamat  yang  merupakan  golongan  fenol.  Hubungan  struktur senyawa 3,4 dihidroksi asam sinamat dengan aktivitas antibakteri dipengaruhi oleh gugus  hidroksil  yang  mengendalikan  pertumbuhan  bakteri  dengan  mengubah permeabilitas  membran  atau  mengurangi  pH  sehingga  menyebabkan  pertumbuhan bakteri menjadi tidak stabil (Sabir, 2005).
Hasil skrining fitokimia daun sambang darah ( E. cochinchinensis ) mengandung senyawa  flavonoid  dan  saponin  (Oktariza  et  al.,  2013).  Hasil  isolasi  yang  dilakukan oleh Giang et al. (2005) pada daun sambang darah ( E. cochinchinensis ) menunjukkan
adanya  senyawa excoecariosides A  dan excoecariosides B  yang  merupakan  senyawa glikosida.
Publikasi  Yang  et  al.  (2001)  melaporkan  daun  pacar  air  ( I.  balsamina ) mengandung  senyawa  2-metoksi-1,4  naftaquinon  yang  termasuk  golongan  kuinon yang  tersubstitusi  gugus  metoksi.  Hubungan  struktur  senyawa  2-metoksi-1,4 naftaquinon dengan aktivitas antibakteri dipengaruhi oleh cincin aromatik dengan 2 gugus  ketonnya,  dimana  kuinon  ini  berperan  sebagai  agen  inaktifasi  protein  yang menyebabkan  metabolisme  mikroorganisme  tidak  berfungsi  dengan  baik,  selain  itu juga  dapat  membuat  substrat  tidak  tersedia  bagi  mikroorganisme  (Cowan,  1999). Kitagawa  et  al.  (1994)  mengisolasi  salah  satu  metabolit  sekunder  yang  dikandung daun  sungkai  ( P.  canescens )  adalah  peronemins  B 1 yang  merupakan  golongan diterpenoid.  Hubungan  mekanisme  kerja  struktur  peronemins  B 1 dengan  aktivitas antibakteri  tidak  sepenuhnya  diketahui,  namun  berdasarkan  (Cowan,  1999) dijelaskan bahwa mekanisme kerja terpenoid diduga melibatkan gangguan membran oleh senyawa lipofilik.
Gambar  1 .    Zona  hambat  pertumbuhan  bakteri S.  epidermidis pemberian  ekstrak  daun ketepeng cina ( C. alata ) (KC), daun sambang darah (SD), daun ruku-ruku (RK) dan  biji  alpukat  (BA)  secara  tunggal  dan  kombinasi  menggunakan  metode sumuran.  Catatan:  K+  =  Kontrol  positif  klindamisin  250  ppm,  K-  =  Kontrol negatif larutan DMSO 50% (v/v).
Gambar  2 .  Zona  hambat  pertumbuhan  bakteri S.  epidermidis pemberian  ekstrak  daun ketepeng cina ( C. alata ) (KC), daun bungli (BU), daun pacar air (PA) dan daun tua sungkai (ST) secara tunggal dan kombinasi menggunakan metode sumuran. Catatan: K+ = Kontrol positif klindamisin 250 ppm, K- = Kontrol negatif larutan DMSO 50% (v/v).
KC KC-BA SD RK BA KC-SD KC-RK K- K+ KC v BU v KC-BU KC-PA KC-ST PA ST K+ K-
Hasil uji fitokimia biji alpukat ( P. americana ) menunjukkan adanya kandungan flavonoid,  tanin,  alkaloid,  antosianin,  polifenol,  triterpenoid,  kuinon,  saponin  dan steroid  (Ekom  et  al.,  2022;  Leite  et  al.,  2009).  Serta,  menurut  Yamani  et  al.,  (2016) minyak  atsiri  daun  ruku-ruku  ( O.  tenuiflorum )  mengandung  senyawa  volatil  yang terdiri  dari  monoterpena  dan  seskuiterpena  dengan  kandungan  utamanya  adalah metil  eugenol.  Eswari  et  al.,  (2018)  melakukan  uji  fitokimia  pada  daun  bungli  ( O. indicum) yang  menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  bungli  mengandung  senyawa metabolit  sekunder  flavonoid,  fenol  dan  tanin.  Berdasarkan  laporan  Ngazizah et  al. (2016)  mekanisme  kerja  senyawa  tanin  yang  memiliki  gugus  hidroksil  akan menyebabkan bakteri menjadi inaktif akibat perbedaan polaritas antara lipid dengan gugus hidroksil. Keberadaan senyawa-senyawa metabolit sekunder tersebutlah yang diduga  mempunyai  peranan  terhadap  aktivitas  antibakteri  ke-7  ekstrak  tanaman yang diuji, dimana interaksi senyawa-senyawa tersebut ketika dikombinasikan juga berbeda-beda.
Gambar  3 .    Rata-rata  diameter  zona  hambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus epidermidis setelah diaplikasikan ekstrak daun ketepeng cina ( C. alata ) (KC), daun sambang darah (SD), daun ruku-ruku (RK) dan biji alpukat (BA)  secara tunggal dan kombinasi. Catatan: K+ = Kontrol positif klindamisin 250 ppm, K- = Kontrol negatif larutan DMSO 50% (v/v).
Gambar 4 . Rata-rata diameter zona hambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis setelah  diaplikasikan  ekstrak  daun  ketepeng  cina  ( C.  alata )  (KC),  daun  bungli (BU),  daun  pacar  air  (PA)  dan  daun  tua  sungkai  (ST)  secara  tunggal  dan kombinasi.  Catatan:  K+  =  Kontrol  positif  klindamisin  250  ppm,  K-  =  Kontrol negatif larutan DMSO 50% (v/v).
9,99 6,28 7,90 9,41 2,30 6,73 1,30 6,95 0 0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00 12,00 K+ KC SD KC-SD RK KC-RK BA KC-BA K- D ia me te r zo n a h amb at p er tu mb u h an b ak te ri S . ep id er mi d is ( mm) Variasi Sampel 10,41 7,43 3,53 8,72 4,35 7,81 4,69 7,93 0 0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00 12,00 K+ KC BU KC-BU
PA KC-PA ST KC-ST K- D ia m et er z o n a h a m b a t
b akt e ri S . e p id e rm id is (m m )
Gambar  5. Visual  Zona  hambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  epidermidis kombinasi  ekstrak  metanol  daun  ketepeng  cina  ( C.  alata )  (KC)    dengan  6 ekstrak tanaman terpilih (a) sambang darah (SD), (b) ruku-ruku (RK), (c) biji alpukat  (BA),  (d)  pacar  air  (PA),  (e)  bungli  (BU),  dan  (f)  sungkai  (ST) menggunakan metode pita kertas.
Pola  Efek  Kombinasi  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Metanol  Daun  Ketepeng Cina ( C. alata ) dengan 6 Ekstrak Tumbuhan Terpilih Menggunakan Metode Pita Kertas
Pada  uji  aktivitas  kombinasi  ekstrak  metanol  daun  ketepeng  cina  ( C.  alata ) sebagai  sampel  utama  dikombinasikan  dengan  6  jenis  ekstrak  tanaman  obat menggunakan metode pita kertas. Pita kertas yang telah dibuat dengan ukuran 3 x 0,5 cm  diletakkan  di  atas  media  yang  telah  diinokulasikan  bakteri  dengan  membentuk sudut  90 ° dan  saling  tumpang  tindih.  Pada  Gambar  5  dapat  dilihat  visual  pola  efek interaksi  yang  dihasilkan  dari  enam  kombinasi  ekstrak  sampel  uji,  terjadi  sedikit peningkatan  zona  hambat  atau  disebut  memiliki  efek additive / indifferent .  Sejalan dengan  laporan  yang  disampaikan  oleh  Yang  et  al.  (2017),  ketika  kedua  ekstrak dikombinasikan  terjadi  sedikit  peningkatan  zona  hambat  meskipun  tidak  sebesar efek synergism dikatakan  memberikan  efek additive/indifferent .  Efek  kombinasi keenam  ekstrak  tidak  dapat  dikatakan antagonism karena  saat  kedua  ekstrak dikombinasikan tidak menunjukkan penurunan zona hambat yang lebih rendah dari zona  hambat  kedua  ekstrak  secara  individual,  dan  tidak  juga  menunjukkan
KC BU (b) (c) (d) (e) (f) (a)
peningkatan zona hambat yang signifikan ( synergism ) (Cheesman et al., 2017). Pola efek  kombinasi  yang  diberikan  dengan  metode  pita  kertas  ini  memperkuat  hasil pengamatan  pengaruh  pemberian  2  ekstrak  secara  bersama/kombinasi  dengan metode sumuran bahwa tidak terjadi peningkatan zona hambat pertumbuhan bakteri secara signifikan, namun juga tidak terjadi penurunan diameter zona hambat secara signifikan.  Pengamatan  secara  kuantitatif  efek  kombinasi  dalam  penghambatan pertumbuhan  bakteri  dapat  ditentukan  dengan  menghitung  indeks Fractional Inhibitory Concentration (FIC) yang didapat dengan menentukan Minimum Inhibition Concentration (MIC) kombinasi ekstrak dan MIC ekstrak tunggal. Efek synergism jika FIC ≤  0,5; additive jika FIC > 0,5-1; indifferent jika FIC > 1 atau < 2, dan antagonism jika FIC ≥ 2 (ESCMID, 2000).
SIMPULAN
Aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak metanol daun ketepeng cina ( C. alata ) dengan  6  jenis  ekstrak  tanaman  terpilih  menggunakan  metode  sumuran  dan  pita kertas  mengalami  kenaikan  diameter  zona  hambat  dibandingkan  aplikasi  ekstrak secara  tunggal,  walaupun  diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan  tidak  lebih  besar dari penjumlahan diameter zona hambat dari kedua ekstrak secara tunggal terhadap bakteri S. epidermidis . Visualisasi penghambatan pertumbuhan bakteri S. epidermidis dengan pita kertas mempertegas kesimpulan bahwa kombinasi ekstrak metanol daun ketepeng  cina  ( C.  alata )  dengan  enam  ekstrak  tumbuhan  terpilih  (daun  sambang darah,  biji  alpukat,  daun  ruku-ruku,  daun  pacar  air,  daun  bungli,  dan  daun  sungkai tua) menghasilkan efek additive / indifferent . Untuk mengetahui efek kombinasi secara kuantitatif perlu dihitung indeks FIC.

## REFERENSI
Adfa, M., Gusatyana, N. M. C., Mudyanto, A., Avidlyandi, A., Oktiarni, D., & Yudha S., S.
(2021).  Combined  Effect  of  Methanol  Extract  of Persea  americana Seeds  and Cassia  alata Leaves  Against Staphylococcus  epidermidis . Proceedings  of  the International  Seminar  on  Promoting  Local  Resources  for  Sustainable  Agriculture and Development (ISPLRSAD
2020) , 13 (Isplrsad 2020),
36 – 40. https://doi.org/10.2991/absr.k.210609.006
Cheesman,  M.  J.,  Ilanko,  A.,  Blonk,  B.,  &  Cock,  I.  E.  (2017).  Developing  New Antimicrobial Th erapies : Are Synergistic Combinations of Plant Exctracts/Compounds with Conventional Antibiotics the Solution? Pharmacognosy Reviews , 11 (22), 57 – 72. https://doi.org/10.4103/phrev.phrev Chetia, J., Saikia, L. R., Upadhyaya, S., Khatiwora, E., & Bawri, A. (2021). Comparative Antimicrobial Study of Different Parts of Ocimum americanum L., O. basilicum L. and O.  sanctum L.  in  Comparison  to  Standard  Antibiotics  Collected  from Dibrugarh,  Assam. Journal  of  Scientific  Research , 13 (1),  195 – 208. https://doi.org/10.3329/jsr.v13i1.47322
Cowan,  M.  M.  (1999).  Plant  Products  as  Antimicrobial  Agents. Clinical  Mikrobiology Reviews , 12 (4), 564 – 582.
Dermawan, A. M.,  Pratiwi, L., & Kusharyanti, I. (2015). Efektivitas Krim Antijerawat Ekstrak  Metanol  Daun  Pacar  Air  ( Impatiens  balsamina Linn.). Traditional Medicine Journal , 20 (3), 127 – 133.
Retrieved from https://doi.org/10.22146/tradmedj.8851
Dubey, D., Sahu, M. C., & Naik, P. K. (2021). Evaluation of the Antibacterial Activity of the  Leave  Extract  of Oroxylum  indicum Against  Multidrug  Resistant  Bacteria
Causing  Urinary  Tract  Infection. International  Journal  of  Current  Research  and Review , 13 (15), 133 – 138. https://doi.org/10.31782/ijcrr.2021.131525
Ekom, S. E., Tamokou, J. D. D., & Kuete, V. (2022). Methanol Extract from The Seeds of Persea  americana Displays  Antibacterial  and  Wound  Healing  Activities  in  Rat Model. Journal of Ethnopharmacology , 282 , 1 – 14. https://doi.org/10.1016/j.jep.2021.114573
ESCMID,  E.  C.  for  A.  S.  T.  (EUCAST)  of  the  E.  S.  of  C.  M.  and  I.  D.  (ESCMID).  (2000). Terminology  Relating  to  Methods  for  the  Determination  of  Susceptibility  of Bacteria to Antimicrobial Agents. Clinical Microbiology and Infection , 6 (9), 503 – 508. https://doi.org/10.1046/j.1469-0691.2000.00149.x
Eswari, J. S., Dha-Gat, S., Naik, S., & Dibya, S. (2018). Phytochemical and Antimicrobial Studies of Oroxylum indicum Extracts. Pharmaceutical Bioprocessing , 6 (1), 7 – 14. Fransisca,  D.,  Kahanjak,  D.  N.,  &  Frethernety,  A.  (2020).  Uji  aktivitas  Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Sungkai ( Peronema canescens Jack) terhadap Pertumbuhan Escherichia  coli dengan  Metode  Difusi  Cakram  Kirby-Bauer. Jurnal  Pengelolaan Lingkungan Berkelanjutan (Journal of Environmental Sustainability Management) ,
4 (1), 460 – 470. https://doi.org/10.36813/jplb.4.1.460-470
Giang,  P.  M.,  Son,  P.  T.,  Matsunami,  K.,  &  Otsuka,  H.  (2005).  New  Megastigmane Glucosides from Excoecaria cochinchinensis Lour. var. cochinchinensis. Chemical and Pharmaceutical
Bulletin , 53 (12), 1600 – 1603. https://doi.org/10.1248/cpb.53.1600
Haryati, S. D., Darmawati, S., & Wilson, W. (2017). Perbandingan Efek Ekstrak Buah Alpukat  ( Persea  americana Mill)  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Pseudomonas aeruginosa dengan  Metode  Disk  dan  Sumuran. Prosiding  Seminar  Nasional Publikasi  Hasil-Hasil  Penelitian  Dan  Pengabdian  Masyarakat  Universitas Muhammadiyah Semarang , (September), 348 – 352. Kitagawa,  I.,  Simanjuntak,  P.,  Hori,  K.,  Nagami,  N.,  Mahmud,  T.,  Shibuya,  H.,  & Kobayashi,  M.  (1994).  Indonesian  Medical  Plants. Chemistry  Pharmacy  Bull , 42 (5), 1050 – 1055.
Laishram, S., Pragasam, A. K., Bakthavatchalam, Y. D., & Veeraraghavan, B. (2017). An Update  on  Technical,  Interpretative  and  Cinical  Relevance  of  Antimicrobial Synergy  Testing  Methodologies. Indian  Journal  of  Medical  Microbiology , 35 (4), 445 – 468. https://doi.org/10.4103/ijmm.IJMM_17_189
Lathifah, Q. A., Turista, D. D. R., & Puspitasari, E. (2021). Daya Antibakteri Ketepeng Cina ( Cassia alata L.) Terhadap Staphylococcus aureus , Pseudomonas aerugenosa , dan Klebsiella  pneumonia . Jurnal  Analis  Kesehatan , 10 (1),  29 – 34. https://doi.org/http://dx.doi.org/10.26630/jak.v10i1.2718
Leite, J. J. G., Brito, É. H. S., Cordeiro, R. A., Brilhante, R. S. N., Sidrim, J. J. C., Bertini, L. M., … Rocha, M. F. G. (2009). Chemical Composition, Toxicity and Larvicidal and Antifungal  Activities  of Persea  americana (avocado)  Seed  Extracts. Revista  Da Sociedade Brasileira de Medicina
Tropical , 42 (2), 110 – 113. https://doi.org/10.1590/S0037-86822009000200003
Lestari,  R.  T.,  Gifanda,  L.  Z.,  Kurniasari,  E.  L.,  Harwiningrum,  R.  P.,  Kelana,  A.  P.  I., Fauziyah,  K.,  …  Priyandani,  Y.  (2021).  Perilaku  Mahasiswa  Terkait  Cara
Mengatasi Jerawat. Jurnal Farmasi
Komunitas , 8 (1), 15 – 19. https://doi.org/10.20473/jfk.v8i1.21922
Ngazizah,  F.  N.,  Ekowati,  N.,  &  Septiana,  A.  T.  (2016).  Potensi  Daun  Trembilungan ( Begonia  hirtella Link)  sebagai  Antibakteri  dan  Antifungi. Biosfera , 33 (3),  126 – 133. https://doi.org/10.20884/1.mib.2016.33.3.309
Nizar,  M.,  &  Monika,  A.  F.  (2015).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Sambang Darah ( Excocaria cochinchinensis Lour) Fraksi N-Heksan, Fraksi Etil Asetat  dan Fraksi  Air  Terhadap  Bakteri Escherichia  coli . Jurnal  Kesehatan  Poltekes Palembang , 11 (2), 216 – 223.
Oktariza, S., Ma’ruf, Y., & Etika, S. B. (2013). Isolasi dan Karakterisasi Flavonoid dari Daun Sambang Darah ( Excoecaria cochinchinensis L). Chemistry Journal of State University of Padang , 2 (2), 22 – 27. Paul ,  B.,  Mitra,  P.,  Ghosh,  T.,  Salhan,  R.,  Singh,  T.  A.,  Chakrabarti,  A.,  …  Mitra,  P.  K. (2013).  Isolation and Structural Determination of an Anti Bacterial Constituent from  the  Leaves  of Cassia  alata Linn. Journal  of  Pharmacognosy  and Phytochemistry , 2 (1), 326 – 333.
Sabir,  A.  (2005).  Aktivitas  Antibakteri  Flavonoid  Propolis  Trigona  sp  Terhadap Bakteri Streptococcus  mutans (in  vitro)  (In  vitro  Antibacterial  Activity  of Flavonoids  Trigona  sp  Propolis  Against Streptococcus  mutans ). Dental  Journal (Majalah Kedokteran
Gigi) , 38 (3), 135. https://doi.org/10.20473/j.djmkg.v38.i3.p135-141
Yamani, H. A., Pang, E. C., Mantri, N., & Deighton, M. A. (2016). Antimicrobial  Activity of Tulsi ( Ocimum tenuiflorum ) Essential Oil and Their Major Constituents against Three  Species  of  Bacteria. Frontiers  in  Microbiology , 7 ,  1 – 10. https://doi.org/10.3389/fmicb.2016.00681
Yang,  S.-K.,  Yusoff,  K.,  Mai,  C.-W.,  Lim,  W.-M.,  Yap,  W.-S.,  Lim,  S.-H.  E.,  &  Lai,  K.-S. (2017).  Additivity  vs.  Synergism:  Investigation  of  The  Additive  Interaction  of Cinnamon  Bark  Oil  and  Meropenem  in  Combinatory  Therapy. Molecules , 22 (1),
1 – 14. https://doi.org/10.3390/molecules22111733
Yang,  X.,  Summerhurst,  D.  K.,  Koval,  S.  F.,  Ficker,  C.,  Smith,  M.  L.,  &  Bernards,  M.  A. (2001).  Isolation  of  an  Antimicrobial  Compound  from Impatiens  balsamina L. Using  Bioassay-Guided  Fractionation. Phytotherapy  Research , 15 (8),  676 – 680. https://doi.org/10.1002/ptr.906
Zahrah,  H.,  Mustika,  A.,  &  Debora,  K.  (2018).  Aktivitas  Antibakteri  dan  Perubahan Morfologi  dari Propionibacterium  acnes Setelah  Pemberian  Ekstrak Curcuma Xanthorrhiza . Jurnal Biosains Pascasarjana ,
20 (3), 160 – 169. https://doi.org/10.20473/jbp.v20i3.2018.160-169