Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969

## BANYAK YEAST YANG TERKANDUNG PADA PROSES FERMENTASI MOLASSES: DAMPAKNYA TERHADAP KUANTITAS ETHANOL YANG DIHASILKAN DI PT INDO ACIDATAMA KARANGANYAR
Dian Farkhatus Solikha 1) , Fathin Firyal Abir 2)
1) Akademi Minyak dan Gas Balongan,Indramayu, farkhatussolikhadian@gmail.com
2) Akademi Minyak dan Gas Balongan, Indramayu, iyalfathin20@gmail.com
Diterima 16 Januari 2020, disetujui 18 April 2020, diterbitkan 30 April 2020 Pengutipan:    Solikha,  D.F  &  Abir,  F.F.  (2020). Banyak Yeast Yang  Terkandung  Pada  Proses Fermentasi Molasses: Dampaknya Terhadap Kuantitas Ethanol Yang Dihasilkan Di Pt Indo Acidatama Karanganyar. Gema Wiralodra , Vol 11, No 1, Hal 107-123, April 2020

## ABSTRAK
Fermentasi  merupakan  proses  yang  memanfaatkan  kemampuan  mikroba  untuk menghasilkan  metabolit  primer  dan  metabolit  sekunder  dalam  suatu  lingkungan  yang dikendalikan Mikroba itu mengunakan Saccharomyces cereviceae .Tujuan penelitian ini yaitu mengetahui proses pembuatan ethanol dari Molasess, mengetahui pengaruh banyak yeast  yang  terhadap  kuantitas  ethanol  yang  dihasilkan,  dan  faktor-faktor  yang mempengaruhi  pertumbuhan  yeast  pada  proses  pembuatan ethanol .  Metode  yang digunakan  yaitu  metode  eksperimen.  Berdasarkan  hasil  penelitian  maka  dapat disimpulkan bahwa Proses pembuatan ethanol dari Molasess pada plant alkohol di PT. Indo Acidatama Tbk mencakup tiga proses yaitu Seed Fermenter yang Seed Fermentor , Pre Fermentor dan Main Fermentor . Tanki Seed Fermentor terdiri atas tiga tanki, yaitu tanki dengan kode 209 A,B dan C. Tanki Pre Fermentor terdiri atas tanki dengan kode FB  210,  211  dan  212.  Sedangkan  untuk  tanki Main  Fermenter memiliki  enam  tanki dengan  tiga  tanki  berkapasitas  750  m 3 (tanki  dengan  kode  FB  213,  214  dan  215), sedangkan tiga tanki lainnya memiliki kapasitas 1000 m 3 (tanki dengan  kode FB 216, 217 dan 218). Selain itu pengaruh banyak yeast yang terkandung pada proses fermentasi molasses  berbanding  lurus  dengan  kuantitas  ethanol  yang  dihasilkan.  Maka  dapat disimpulkan  bahwa  apabila  jumlah  yeast  yang  terkandung  (Cell/ml)  memiliki  jumlah yang  tinggi  maka  persentase  alkohol  yang  dihasilkan  semakin  tinggi.  Sedangkan terbentuknya yeast sangat dipengaruhi faktor pendukung  yaitu faktor eksternal berupa suhu ruang inkubasi saat fermentasi sedang berlangsung, pH air campuran, untuk faktor internal berupa campuran dari Urea dan asam fosfat.
Kata kunci : ethanol , fermentasi, kadar alkohol, molasses ,

## ABSTRACT
Fermentation  is  a  process  that  utilizes  the  ability  of  microbes  to  produce  primary metabolites and secondary metabolites in an environment that is controlled by microbes using Saccharomyces cereviceae. The purpose of this study is to find out the process of making  ethanol from Molasess, determine the effect of many  yeast on the quantity of ethanol  produced,  and  the  factors  that  influence  the  growth  of  yeast  in  the  process  of making ethanol. The method used is the experimental method. Based on the results of the study it can be concluded that the process of making ethanol from Molasess in an alcohol plant at PT. Indo Acidatama Tbk covers three processes namely Seed Fermenter which is Seed Fermenter, Pre Fermenter and Main Fermenter. The Seed Fermenter tank consists  of  three  tanks,  namely  tank  with  code  209  A,  B  and  C.  Pre  Fermenter  tank consists of tank with code FB 210, 211 and 212. Whereas for Main Fermenter tank has six tanks with three 750 m 3 tanks (tank with FB codes 213, 214 and 215), while the other three  tanks  have  a  capacity  of  1000  m 3 (tanks  with  codes  FB  216,  217  and  218).  In
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
addition, the influence of many yeasts contained in the molasses fermentation process is directly proportional to the quantity of ethanol produced. It can be concluded that if the amount  of  yeast  contained  (Cell  /  ml)  has  a  high  amount,  the  percentage  of  alcohol produced  will  be  higher.  While  the  formation  of  yeast  is  strongly  influenced  by supporting factors, namely external factors such as incubation room temperature when fermentation is taking place, the pH of the mixed water, for internal factors in the form of a mixture of urea and phosphoric acid.
Keywords : ethanol, fermentation, alcohol content, molasses,

## PENDAHULUAN
Fermentasi adalah proses yang dilakukan microba atau jasad renik, dimana dengan  proses  fermentasi  dapat  mengubah  bahan  yang  mengandung  gula  seperti sari buah, tetes, dll menjadi alkohol (C 2 H 5 OH). (Masturi, 2017). Produksi alkohol dari  biomassa,  telah  dilakukan  orang  sekurang-kurangnya  sudah  2.000  tahun. Adanya  kendaraaan  mobil  dalam  skala  komersial  pada  akhir  abad  yang  lampau, alkohol digunakan pula sebagai bahan bakar. Setelah banyaknya ditemukan sumber bahan bakar minyak, maka pengunaan alkohol menjadi berkurang. Meningkatnya harga  bahan  bakar  minyak,  maka  alkohol  menjadi  penting  lagi.  Pada  PT.  Indo Acidatama Tbk, Kemiri, Kebakkramat, Karanganyar yang mulai beroperasi tahun 1989 dengan peralatan yang serba modern dan canggih sehingga mampu mengolah tetes  tebu  sebagai  hasil  samping  pabrik  gula  menjadi  produk-produk  kimia  yang mempunyai  nilai  ekonomi  tinggi.  Produk  utama  yang  dihasilkan  di  PT.  Indo Acidatama  Tbk,  Kemiri,  Kebakkramat,  Karanganyar  antara  lain Ethanol. .  Pada proses fermentasi yang dilaksanakan di PT. Indo Acidatama menggunakan bahan baku tetes tebu/ Molasse dengan Brix serta kadar gula tertentu.
Ethanol atau yang disebut juga etil alkohol (C 2 H 5 OH) yang diproduksi oleh PT  Indo  Acidatama  merupakan bio-ethanol dari  tetes  tebu  ( molases )  yang difermentasikan  oleh yeast dari Saccharomyces  cereviseae .  Tetes  tebu  ( molases ) merupakan  cairan  kental  berwarna  cokelat  kehitaman  yang  merupakan  buangan akhir proses pengolahan gula setelah mengalami proses kristalisasi berulang. Pada produksi  yeast,  beberapa  subtrat  dapat  digunakan.  Subtrat  ini  meliputi  n-alkana, methanol,  ethanol,  minyak  diesel,  limbah  industri  bir,  pati,molasses.Yeast  yang diproduksi adalah Candida , Hansenula , Rhodotorula dan Torulopsis .
Beberapa  penelitian  telah  dilakukan  mengenai  pembuatan  bioethanol diantaranya  yaitu  (1)  penelitian  oleh  Jayus  dkk  (2016)  produksi  etanol  tertinggi
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
ketika  digunakan Saccharomyces  cereviseae ,  (2)  penelitian  oleh  Wardani  (2013) menyatakan  bahwa  salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi  produksi etanol adalah penanmbahan Saccharomyces  cereviseae ,  (3)  penelitian  oleh  Agustina  (2016) menyatakan  bahwa  salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi  produksi etanol adalah waktu  fermentasi,  (4)  penelitian  oleh    Anggraini  dkk  (2017)  menyatakan  bahwa salah satu faktor yang mempengaruhi produksi etanol adalah pH, (5) penelitian oleh Kusmiati (2010) menyatakan bahwa salah satu faktor yang mempengaruhi produksi etanol  adalah  substrat  nutrisi,  dan  sedangkan  penelitian  oleh    (6)  Ari  (2016) menyatakan bahwa terdapat tiga faktor yang mempengaruhi produksi etanol yaitu waktu fermentasi, penambahan urea, dan penambahan saccharomyces cereviceae. Perlu dilakukan penelitian tentangpengaruh banyak yeast yang terhadap kuantitas ethanol yang dihasilkan, dan faktor-faktor yang mempengaruhi pertumbuhan yeast pada proses pembuatan ethanol .
Perlu  dilakukan  penelitian  tentang  pengaruh  banyak  yeast  yang  terhadap kuantitas  ethanol  yang  dihasilkan,  dan  faktor-faktor  yang  mempengaruhi pertumbuhan yeast pada proses pembuatan ethanol . Maka tujuan penelitian ini yaitu mengetahui proses pembuatan ethanol dari Molasess, mengetahui pengaruh banyak yeast  yang  terhadap  kuantitas  ethanol  yang  dihasilkan,  dan  faktor-faktor  yang mempengaruhi pertumbuhan yeast pada proses pembuatan ethanol .
Saccharomyces  cereviceae merupakan  jenis Yeast yang  paling  umum digunakan  pada  pembuatan  roti  atau  Pada  produksi Saccharomyces  cerevisae , digunakan  media  yang  mengandung  gula,  seperti  molases.Media  dasar  Gula. Khamir ini sangat mudah ditumbuhkan, membutuhkan nutrisi yang sederhana, laju pertumbuhan  yang  cepat,  sangat  stabil,  dan  aman  digunakan  ( food-grade organism ).  Berdasarkan  karakteristik  tersebut, S.  cereviceae lebih  banyak digunakan dalam pembuatan Ethanol dibandingkan penggunaan jenis khamir yang lain. (Nuryoto, 2008).

## METODE PENELITIAN
Metode eksperimen yang dilakukan yaitu dengan cara pengujian sampel yang diambil setiap 4 jam sekali dan diuji pada laboratorium dan mengumpulkan data record yang berada pada ruang operator.
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
Pengujian sampel dibagi menjadi dua tahapan analisis yaitu :

## Tahap Penelitian
Pada  tahapan  ini  menggunakan  berbagai  macam  percobaan,  meliputi Membuat Media Yield, Membuat YMP  Medium, Inokulasi TT Seed, Inokulasi TT Seed  kedalam  Media  Yield,  analisa Brix ,  perhitungan  pH,  dan  Analisa  Alkohol Content.
Adapun prosedur pembentukan yeast akan di jelaskan sebagai berikut :
a. Membuat Media Yield
1) Menimbang :
0,25 gr d.A.P
0,5 gr urea
2,5 gr Yeast Extract
2,5 gr Pepton
Tetes 10 % molases dijadikan 600 ml
2) Memasukan semua bahan ke dalam beaker glass 250 ml
3) Larutkan dengan aquadest
4) Menyiapkan labu takar 500 ml dan 100 ml
5) Memasukkan ke labu leher angsa
6) Menutup dengan silicon plack, dan tutup dengan alumunium foil kemudian diikat dan disterilkan dalam autoclave dengan suhu 120 ºC selama 20 menit pada tekanan 1 atm.
b. Membuat YMP (Yeast Media Pepton)
1) Menimbang:
Yeast Extract Powder : 0,6 gr/200 ml
Malt Extract Powder : 0,6 gr/200 ml Pepton : 0,1 gr/200 ml Glukosa : 2 gr/200 ml
2) Larutkan dengan aquadest
3) Mencampurkan  masing-masing  larutan  diatas  dan  menjadikan  volumenya menjadi 200 ml
4) Memasukkan dalam test tube masing-masing 10 mL, lalu menutup test tube tersebut.
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
5) Menyeterilkan  dengan  autoclave  pada  suhu  120ºC  selama  20  menit  pada tekanan 1 atm.
c. Inokulasi TT Seed
1) Menyeterilkan ruang inokulasi dengan lampu UV minimal 2 jam.
2) Menyeterilkan inkas dengan lampu UV minimal 2 jam
3) Menyeterilkan tangan dengan detol.
4) Secara aseptis menginokulasikan 1 ose yeast dari stock slant ke dalam media YMP kemudian mencampurkan.
5) Menginkubasikan pada incubator dengan suhu 30ºC selama 24 jam.
d. Inokulasi TT Seed kedalam Media Yield
1) Mengambil  YMP  media  yang  telah  diinkubasi,  kemudian  masukkan kedalam Media Yield, tetapi sebelumnya pada saat memindahkan panaskan dahulu mulut tabung dengan pembakar spiritus dengan tujuan agar steril.
2) Menutup  menggunakan muffle leher angsa  dan  diberi aquadest kemudian menginkubasi selama 3 hari.
Adapun prosedur pendataan sampel molasse pada setiap unit akan di jelaskan sebagai berikut:
e. Analisa Alkohol Content
1) Mengambil 250 ml mash dengan labu takar, lalu masukkan ke dalam labu destilasi  volume  1000  ml  dan  membilas  labu  takar  dengan aquadest sebanyak ± 125 ml.
2) Mendestilasi  dan  menampung  destilat  dengan  erlenmeyer  sampai  volume 250 ml, dan memindahkan ke labu takar 500 ml dan menjadikan volumenya 500  ml  dengan aquadest mengaduk  hingga  homogen,  lalu  simpan  dalam freezer sampai suhu dibawah 20ºC lalu aduk lagi.
3) Masukkan ke gelas ukur volume 250 ml dan memasukkan spindle alcohol meter range 0 – 7 % dan membaca tepat pada suhu  20ºC.
f. Analisa kadar Brix
1) Mengambil mash dalam fermenter lalu memasukkan mash ke dalam pipa uji yang telah diberi indikator saccharimeter
2) Dalam  indikator  saccharimeterrate  10-25  untuk  melihat  kekentalan  dari mash.
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969

## g. Analisa kadar pH
1) Mengambil 250 ml mashdari botol sampel lalu memasukkan ke dalam labu takar, lalu masukkan ke dalam gelas beakeryang telah dibilas aquadest
2) Pengeceken kadar pH menggunakan pH meter

## Tahap Pengamatan
Pada tahapan ini melakukan berbagai macam pengamatan, meliputi :
1) Jenis yeast yang digunakan
2) Jumlah yeast yang diinokulasi dalam skala lab dan operasional
3) Kadar molase pada Tanki
4) Jenis nutrien yang digunakan
5) Jumlah kadar nutrien yang digunakan
6) Kadar ethanol yang keluar setiap proses fermentasi

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  unit  fermentasi  (area  200)  ada  beberapa  proses  dalam  pembentukan Ethanol  mulai  dari  fase seed  fermenter,  pre  fermenter,  dan  main  ferementer. Saccharomyces  cereviseae digunakan  untuk  produksi  ethanol  pada  fermentasi  di penelitian  ini  sesuai  dengan  tinjauan  penelitian  dari  Jayus  dkk  (2016)  yang menyatakan  bahwa  produksi  etanol  tertinggi  ketika  digunakan Saccharomyces cerevisea .  Fermentasi  di  PT  INDO  ACIDATAMA  Tbk.  ini  dilakukan  dengan sistem  batch.Dimana  dalam  satu  batch  terdiri  atas  satu seed  fermentor , pre fermentor dan main fermentor . Tanki seed fermentor terdiri atas tiga tanki, yaitu tanki 209 A, B dan C. Tanki pre fermentor terdiri atas tanki FB 210, 211 dan 212. Sedangkan  untuk  tanki main  fermentor memiliki  enam  tanki  dengan  tiga  tanki berkapasitas  750  m 3 (tanki  FB  213,  214  dan  215),  sedangkan  tiga  tanki  lainnya memiliki kapasitas 1000 m 3 (tanki FB 216, 217 dan 218).
a. Seed fermentor
Seed fermentor merupakan tempat starter pertama pembenihan ataupertumbuhan jasad renik dalam skala operasional. Proses dalam seed fermentor terdiri  dari Cleaning ,  Sterilisasi  Tanki,  pembuatan  media,  Sterilisasi  media, pendinginan media, pembiakan media, dan kondisi operasional selama inkubasi.
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969

## 1) Cleaning
Merupakan  proses  pencucian  tanki seed yang  akan  dipergunakan  untuk membersihkan sisa-sisa yeast dan sisa anti- foam dari proses sebelumnya. Dimana proses cleaningseed  fermenter  tank dilakukan  dengan  cara  menyemprotkan  air kedinding  tanki  lewat sparger yang  dilakukan  selama  5  menit,  kemudian  diberi deterjen  dan  dibilas  kembali  dengan  air  sampai  deterjen  hilang.  Kemudian  buka valve  steam untuk flashing (menghilangkan  kotoran  yang  menyumbat  lubang sparger ) selama 1 menit. Kemudian masukan larutan formalin sebagai desenfektan. Pemberian larutan formalin hanya dilakukan untuk cleaning tanki kosong, jika tanki telah melalui proses dan baru saja kosong, maka penyemprotan dengan desinfektan tidak  perlu  dilakukan  lagi,  hanya  langsung  saja  melakukan  sterilisasi  pada  tanki yang akan digunakan dengan memakai steam .
2) Sterilisasi Tanki
Sterilisasi  tanki  dilakukan  untuk  membunuh  kontaminan  yang  mungkin terdapat  dalam  tanki  fermentor  maupun  media  masuk  kedalam  tanki.Sterilisasi tanki  dilakukan  dengan  prosedur manhole ditutup  rapat, shipon  pot diisi  air  1/3 bagian (untuk mengeluarkan uap air dari sterilisasi). Kemudian valvesteam dibuka perlahan-lahan  ¼  putaran.  Dan valvedrain dan valve sampel cook dibuka  sedikit untuk mengeluarkan kondensat. Waktu yang dibutuhkan untuk sterilisasi tanki ini adalah 2 jam dan suhu 99-100  C.
3) Pembuatan Media
Pembuatan media pada seed fermentor dilakukan bersamaan dengan pengisian ( filling ) pre  fermenter maupun main  fermenter .  Adapun  pembuatan  media seed meggunakan eslang hose/pipe yang telah direndam dalam larutan formalin sehigga selalu dalam keadaan steril. Pembuatan media seed fermenter dilakukan oleh dua orang, dengan cara tanki penyimpanan sementara FC 207 ( molasess ) dan FC 206 (air)  akan  dipompa  dan  dialirkan  ke  tanki seed  fermenter melalui valve yang berhubungan dengan hose pipe . Air dan molasess akan tercampur dengan volume molasess yaitu 0,25 m 3 dan air 2 m 3.

## 4) Sterilisasi Media
Media  fermentasi  berupa  campuran molasess dan  air  juga  penting  untuk disterilisasi untuk menghilangkan kontaminan dalam media. Dimana sterilisasi ini
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
berfungsi  agar  tidak  ada  kontaminan  bakteri  atau  jasad  renik  selain yeast yang digunakan. Sterilisasi media dalam seedfermentor dilakukan dengan menggunakan steam .  Media  panaskan  dengan steam hingga  mencapai  temperatur  99-100ºC selama 2 jam. Kemudian matikan steam dan biarkan konstan selama 30 menit
5) Pendinginan Media
Pendinginan  media  dalam  sistem  fermentasi  diperlukan  untuk menjaga  agar kondisi fermentasi tetap pada suhu optimal (32-35  C). Secara alami, suhu ketika fermentasi akan terus naik karena aktivitas fermentasi itu sendiri.  Pada tanki seed fermentor , sistem pendinginan yang digunakan adalah dengan menggunakan jacket cooler .  Cara  menggunakan  dan  membuka  aliran  pada  j acket  cooler dilakukan dengan  membuka valvecooling  water .Waktu  untuk  mendinginkan  tanki  adalah sekitar 2-3 jam hingga temperatur tanki menunjukkan angka 31-32  C. Kemudian menambahkan  nutrien  berupa  urea  cair  sebanyak  2  liter,  asam  fosfat  3  liter  dan antifoam  ( Polypropylene  glycol )  sebanyak  1  liter.  Antifoam  berfungsi  untuk menghilangkan buih yang mana menghambat proses pengembangbiakan yeast .
6) Pembiakan Media dalam Seed Fermenter (Proses Inokulasi)
Sebelum  media  diberi  “ yeast ”  atau  ragi  maka  2  jam  sebelumnya  diambil dahulu  sampel  dari  media  ( mash )  untuk  dianalisa  persentase  TS  ( Total  Sugar ), kekentalan  (Brix)  dan  juga  pH  media.  Dengan  persyaratan  kandungan  TS  awal adalah  10-12%,  Brix  awal  adalah  16-18  BX,  dan  pH  berkisar  5-5,2.  Jika persyaratan  tersebut  sudah  terpenuhi,  maka  inokulasi  baru  akan  dilaksanakan. Proses  inokulasi  dilakukan  dengan  cara  menyemprot  lubang  inokulum  dengan alkohol 70% agar steril. Kemudian memasukan inokulum ( yeast ) dari laboratorium mikrobiologi sebanyak 16 liter (4 labu) melewati lubang inokulum. Selama proses pemasukkan yeast kultur  disekeliling  lubang  inokulum  harus  selalu  disemprot dengan alkohol 70% agar seteril.

## b. Prefermentor
Tanki pre fermentor merupakan tangki biakan kedua setelah seed fermenter yang  digunakan  untuk  mengembang-biakkan  yeast  yang  akan  digunakan  dalam main fermentor . Alkohol yang terbentuk pada prefermentor masih berkadar 3-6%.
Adapun proses yang terdapat dalam pre fermentor meliputi:
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
1) Cleaning Tanki
Proses cleaning pada pre fermenter sama dengan proses cleaning pada seed fermenter yaitu  dengan  menyemprotkan  air  kedinding  tanki  lewat  sparger  yang dilakukan selama 5 menit, kemudian diberi deterjen dan dibilas kembali dengan air sampai deterjen hilang. Kemudian buka valvesteam untuk flashing (menghilangkan kotoran  yang  menyumbat  lubang sparger) selama  1  menit.  Kemudian  masukan larutan formalin sebagai desenfektan.
Pemberian  larutan  formalin  hanya  dilakukan  untuk cleaning tanki  kosong, jika tanki telah melalui proses dan baru saja kosong, maka penyemprotan dengan desinfektan tidak perlu dilakukan lagi, hanya langsung  saja melakukan sterilisasi pada tanki yang akan digunakan dengan memakai steam .
2) Sterilisasi Tanki
Proses sterilisasi tanki sama dengan proses sterilisasi pada seed fermenter yaitu dengan menggunakan steam . Valve steam dibuka perlahan-lahan 1/4 putaran. Tanki di  sterilisasi  sampai  temperatur  99-100  C,  mengguakan surface  area jika  sudah tercapai,  tutup valve  steam .Sterilisasi  dilakukan  selama  1  jam.Jika sudah 1  jam, buka valve aerasi  1/2  putaran  untuk  mengeluarkan  sisa-sisa steam melalui  pipa drain agar kondensat terbuang.
3) Pembuatan Media Pre fermentor
Pada proses pembuatan media di pre fermenter ini, sebelum molasess dan air masuk, valve filling pre fermenter dibuka dan valve distribusi  ke main fermenter tank  harus  ditutup.  Kemudian  menuangkan  urea  50  kg  dan  larutan  asam  fosfat sebanyak 35 kg, dan menuangkan antifoam ( Polypropylene glycol )  sebanyak 5 L. Molasess masuk tanki sebanyak 7 m 3 , dilihat dari flowmeter dan air proses masuk tanki 37 m 3 .
4) Pasteurisasi Media Pre fermentor
Dilakukan dengan menggunakn steam melalui sparger yang ada di dasar tanki sehingga  media  akan  kontak  langsung  dengan steam .  Pasteurisasi  tersebut dilakukan dengan membuka valve steam perlahan-lahan hingga 2,5 putaran. Media yang  dipasteurisasi  dipanaskan  hingga  temperatur  mencapai  70-80  C.  Dan dilakukan selama 2-3 jam, dan lalu biarkan konstan selama 30 menit. Pasteurisasi
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
dihentikan dengan cara menutup valve steam , kemudian baru valve aerasi ditutup.
Media tetap dibiarkan dalam kondisi panas untuk mengurangi kontaminan.
5) Pendinginan Media Pre fermentor
Pendinginan  media  pre-fermenter  dilakukan  dengan  sistem surface  area (pertukaran  panas  antara  air  dingin  dengan  dinding  tanki),  yang  mana  dilakukan dengan cara memuka valve aerasi 100 m 3 /jam dan buka valvecooling water dengan bukaan penuh. Pendinginan dilakukan hingga suhu tercapai ±32  C
c. Main fermenter
Main fermenter merupakan tanki dimana proses perubahan molasesmenjadi ethanol dilakukan hingga kadar ethanol mencapai 10-12%. Tanki main fermenter merupakan  tanki  yang  paling  besar  di  unit  Fermentasi  (area  200)dan  harus dipastikan bebeas dari kontaminan seperti Acetobacter aceti,Lactobacter aceti dan Leuconosto mosenteriodes. Sehingga  pada  tahapan main  fermenter ini  dilakukan langkcah-langkah sebagai berikut:
1) Cleaning Tanki Main Fermenter
Pembersihan ( cleaning ) pada tanki main fermenter dilakukan dengan 2 cara, yaitu dengan penyemprotan dengan selang lewat manhole dan dengan sprayer yang ada di atas tanki. Dimana tahap/cara dalam melakukan cleaning tersebut adalah:
 Pasang  selang  pada valve  cleaning dan  masukkan  ke  tanki main  fermenter lewat manhole , buka valvedrain
 Nyalakan pompa sumersible
 Nyalakan P 203, selang secara manual  disemprotkan ke dasar tanki sehingga lumpur ( sludge ) di dasar tanki bersih, waktu yang diperlukan pada tahap ini  20 menit
 Tutup valve  cleaning yang  menghubungkan  selang  dan  buka valvecleaning yang menuju sprayer
 Buka valve steam ½ putaran
 Dengan P 203 tetap hidup, nyalakan pompa sirkulasi agar pompa sirkulasi dan Heat exchanger dapat bersih, sirkulasi diulang 2-3 kali
 Setelah    40  menit  , cleaning dihentikan.  Pompa  P203,  pompa  sumersible  di hentikan juga dan valve cleaning serta drain ditutup.
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
 Jika tanki dalam keadaan kosong tuang formalin 0,5 L dan bilas lagi dengan air.
2) Pembuatan Media Pre fermentor
Pembuatan media dilakukan dengan memasukkan Molasses sebesar 228,75 m 3 dan Air 525 m 3 , Setelah media siap maka proses Filling siap dilakukan.
3) Penambahan Nutrien
Feed dari prefermenter akan dialirkan menuju main fermenter , pada tahap ini merupakan  bagian  utama  dari  fermentasi  dimana yeast tidak  lagi  diberi  nutrisi melaikan hanya diberi media, dikarenakan pada tahap ini yeast mulai dipekerjakan atau  digunakan  untuk  mengurai molasis atau  tetes  tebu  menjadi  alkohol  dengan kadar presentase alkohol 8%-12% yang kemudian akan diolah kembali di Area 300 atau Unit Destilasi utntuk menaikkan kadar alkohol atau ethanol sesuai kebutuhan pasar.
Urea :  - kg
Asam Fosfat  : 34 kg
Pada  tahap  dalam  unit Main  fermenter penambahan  urea  tidak  lagi  digunakan karena  pada  tahap  ini yeast sudah  tidak  dikembang  biakan  lagi  melainkan digunakan untuk mengurai molasses atau tetes tebu agar menjadi alkohol.
4) Filling Main Fermenter
Selama filling (pengisian media maupun yeast ) tetap dilakukan aerasi selama 2 jam agar yeast dapat beradaptasi dari keadaan aerob (perkembangbiakan) menjadi anaerob  (pembentukan ethanol ). Filling dilakukan  dengan  mbuka valve  filling untuk main fermenter dan buka valve P 203, kemudian mengisi air proses. Setelah air proses ditambahkan selama 10 menit, nyalakan pompa P 107 untuk pengisian molasess . Menyalakan pompa sirkulasi dan HE, buka valvecoolong water inlet dan outlet HE. Ketika filling sudah memasuki menit ke 20, dilakukan transfer yeastmash dari  tanki pre fermentor dengan  cara  gravitasi  (dengan  membuka valvedrain  pre fermentor dan buka valve untuk transfer di main fermentor ). Waktu transfer tersebut akan berlangsung selama 15-20 menit. Ketika filling berjalan 1,5 jam, tambahkan urea  100  kg,  tanpa  penambahan  asam  fosfat.  Pada  proses filling waktu  yang dibutuhkan  sekitar  15-17  jam.  Selama filling suhu  dijaga  pada  kisaran  32-35  C, dengan pendinginan dari Plate and Frame Heat exchanger . Setelah filling berjalan
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
4 jam, tanki fermenter diberi antifoam sebanyak 10 L dan gas CO 2 akan dihisap dan dialirkan ke CO 2 Plant .
Berikut ini adalah hal-hal yang harus diperhatikan pada saat proses fermentasi:
 Proses fermentasi dapat berjalan dengan baik jika suhu optimum < 35  C, karena jika  melebihi  batas  suhu  tersebut yeast akan  mati  dan  mengakibatkan  kadar alkohol  dalam mash masih  rendah  (tidak  mencapai  8-10%).  Untuk  mengatasi kenaikan  suhu  dalam  tanki main  fermentor digunakanlah  pengaturan valve cooling dari HE
 Setiap 4 jam diambil sampel untuk di analisa ºBx dan pH
 Pada  saat start maupun finish fermentasi  juga  diambil  sampel  untuk  dianalisa
 Bx, TS dan kadar alkohol.
 Waktu proses fermentasi berlangsung selama 36-40 jam
 4 jam sebelum di distilasi diambil sampel untuk dianalisa kadar alkoholnya.
Berdasarkan  proses  fermentasi  tersebut  didapatkan  data  tabel  perbandingan dari  setiap batch. denganbanyaknya yeast (total  Cell)  akan  mempengaruhi  kadar alkohol yang terbentuk :
Tabel 1 Hasil Pengamatan Pengaruh jumlah yeast
No Tangki Jumlah Yeast (batch 1) Range /hargasat. (Cell/ml) Jumlah yeast (batch 2) Range /hargasat. (Cell/ml) 1. Seed
Fermenter
Start Finish Alk
0,40 x 10 7 4,35 x 10 8
2,7 %
Start
Finish
Alk
0,65 x 10 7
3,10 x 10 8 2,0% 2. Pre Fermenter Start
Finish
Alk
0,40 x 10 7 4,60 x 10 8
5,3%
Start
Finish
Alk
0,70 x 10 7
4,80 x 10 8 5,0% 3. Main Fermenter
Start Finish Alk 2,20 x10 8
1,80 x 10 8 11% Start
Finish
Alk
2,60 x 10 8 1,9 x 10 8 9,4% Alkohol yang dihasilkan 11 % 9,4 %
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969

## Pembahasan
Pada tabel tersebut dapat dilihat yeast (Cell/ml)mengalami kenalikan sigifikan dalam  setiap  parameter.  Mulai  dari seed  fermenter ,  dan pre  fermenter hal  ini disebabkan karena dalam proses tersebut inkubasi dalam tangki berjenis aerob atau memerlukan oksigen. Sedangkan pada main fermenter jumlah cell yang terbentuk meningkat tetapi tidak terlalu signifikan. Hal ini terjadi karena proses ingkubasinya berjenis anaerob atau  tidak  memerlukan  oksigen.  Dan  dari  tabel  tersebut  dapat dilihat  pula,  parameter  ingkubasi  awal  dan  akhir  terhadap  banyaknya yeast mempengaruhi terbentuk alkohol tersebut.
Terlihat  pada  batch  1  proses  pada  tangki  Seed  Fermenter  memiliki  jumlah total cell yeast berjumlah 4,35 x 107 dan menghasilkan alkohol 2,7% sedangkan pada batch 2 memiliki total cellyeast 3,10 x 107 dan menghasilkan alkohol 2,0%. Lalu pada tangki Pre Fermenter memiliki jumlah total cell yeast berjumlah 4,60 x 107  dan  menghasilkan  alkohol  5,3%  sedangkan  pada  batch  2  memiliki  total  cell yeast 4,80 x 107 dan menghasilkan alkohol 5,0%. Dan  pada tangki Main Fermenter memiliki jumlah total cell yeast berjumlah 1,80 x 108 dan menghasilkan alkohol 11% sedangkan pada batch 2 memiliki total cell yeast 1,9 x 108 dan menghasilkan alkohol 9,4%. Dapat disimpulkan bahwa pada tangki seed fermenter dan tangki Pre fermenter berbanding lurus jumlah total cell yeast dengan Alkohol yang terbentuk. Namun, berbeda dengan tangki Main Fermenter.
Namun  terdapat  penyimpangan  jumlah  total  cell  pada  tangki  main fermenterdengan jumlah alkohol yang terbentuk. Berdasaran penelitian yang telah dilakukan  oleh  para  peneliti  sebelumnya  terdapat  faktor  yang  mempengaruhi terbentuknya  ethanol  yaitu  penelitian  oleh  Wardani  (2013)  menyatakan  bahwa salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi  produksi  etanol  adalah  penanmbahan Saccharomyces cereviseae . Agustina (2016) menyatakan  bahwa salah satu faktor yang  mempengaruhi  produksi  etanol  adalah  waktu  fermentasi,  sedangkan Anggraini  dkk  (2017)  menyatakan  bahwa  salah  satu  faktor  yang  mempengaruhi produksi etanol adalah pH.  Kusmiati (2010) menyatakan bahwa salah satu faktor yang  mempengaruhi  produksi  etanol  adalah  substrat  nutrisi  dan  sedangkan  Ari (2016) menyatakan bahwa terdapat tiga faktor yang mempengaruhi produksi etanol
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
yaitu  waktu  fermentasi,  penambahan  urea,  dan  penambahan saccharomyces cereviceae.
Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh penulis maka terbentuknya yeast pun sangat dipengaruhi beberapa faktor pendukung internal dan eksternal. faktor eksternal berupa suhu ruang inkubasi saat fermentasi sedang berlangsung, pH air campuran yang terlalu asam atau terlalu basa maka Saccharomyses cerevisiae tidak akan  bisa  berkembang  dengan  sempurna  seperti  yang  diharapkan,  untuk  faktor internal berupa campuran dari Urea dan asam fosfat. Urea berfungsi sebagai sumber makanan dari Saccharomyses cerevisiae, sedangkan Asam fosfat berfungsi sebagai penguat  dari  dinding  sel Saccharomyses. Maka  komparasi  antara  penelitian sebelumnya  oleh  para  peneliti  sebelumnya  dengan  penelitian  yang  dilakukan penulis maka faktor yang mempengaruhi pembentukan ethanol yaitu pH, substrat dan suhu.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  pengamatan  dan  pengambilan  data    pada  penelitian  ini maka dapat disimpulkan yaitu Proses pembuatan ethanol dari Molasess pada plant alkohol  di  PT.  Indo  Acidatama  Tbk  mencakup  tiga  proses  yaitu Seed Fermenter yang Seed Fermentor , Pre Fermentor dan Main Fermentor . Tanki Seed Fermentor terdiri atas tiga tanki, yaitu tanki dengan kode 209 A,B dan C. Tanki Pre Fermentor terdiri atas tanki dengan kode FB 210, 211 dan 212. Sedangkan untuk tanki Main Fermenter memiliki enam tanki dengan tiga tanki berkapasitas 750 m 3 (tanki dengan kode FB 213, 214 dan 215), sedangkan tiga tanki lainnya memiliki kapasitas 1000 m 3 (tanki dengan kode FB 216, 217 dan 218).
Pengaruh  banyak  yeast  yang  terkandung  pada  proses  fermentasi  molasse terhadap  kuantitas  ethanol  yang  dihasilkan  dapat  disimpulkan  bahwa  apabila jumlah  yeast  yang  terkandung  (Cell/ml)  memiliki  jumlah  yang  tinggi  maka persentase alkohol yang dihasilkan akan semakin tinggi. Proses fermentasi  pada unit  200  dapat  disimpulkan  bahwa  apabila  jumlah  Yeast  (Cell/ml)  ternyata mempengaruhi  jumlah  ethanol  yang  terbentuk  pada  prosesnya.  Namun  terdapat penyimpangan jumlah total cell pada tangki main fermenterdengan jumlah alkohol yang  terbentuk.  Terbentuknya yeast pun  sangat  dipengaruhi  beberapa  faktor
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
pendukung internal dan eksternal. faktor eksternal berupa suhu ruang inkubasi saat fermentasi sedang berlangsung, pH air campuran yang terlalu asam atau terlalu basa maka Saccharomyses  cerevisiae tidak  akan  bisa  berkembang  dengan  sempurna seperti yang diharapkan, untuk faktor internal berupa campuran dari Urea dan asam fosfat.  Urea  berfungsi  sebagai  sumber  makanan  dari Saccharomyses  cerevisiae, sedangkan Asam fosfat berfungsi sebagai penguat dari dinding sel Saccharomyses

## DAFTAR PUSTAKA
Adini,  S.,  Kusdiyantini,  E.,  &  Budiharjo,  A.  (2015).  Produksi  Bioetanol  dari Rumput  Laut  dan  Limbah  Agar  Gracilaria  sp.  dengan  Metode  Sakarifikasi yang Berbeda. Jurnal Biologi Indonesia, Vol. 16, No. 2.
Agustina,  R.,  Ratman.,  &  Said,  I.  (2016).  Pengaruh  Waktu  Fermentasi  Terhadap Kadar Bioetanol dari Kulit Jagung  Manis. Jurnal Akademika Kimia, Vol.5 No.4, 2016.
Ahmad,  R.Z.  (2005).  Pemanfaatan  Khamir  Saccharomyces  Cerevisiae  untuk Ternak . Wartazoa , Vol.15, No.1, 49-55
Anggraini,  Abrina.,  Yuningsih,  Sussy.,  &  Mauritsius.  (2016).  Pengaruh  pH Terhadap  Kualitas  Produk  Etanol  dari  Molases  Melalui  Proses  Fermentasi. Reka Buana: Jurnal Ilmiah Teknik Sipil dan Teknik Kimia , Vol 2 , No 2 ., 98- 105 ,
Arifwan., Erwin., dan Kartika, R. 2016. Pembuatan Bioetanol Dari Singkong Karet (Manihot  Glaziovii  Muell)  dengan  Hidrolisis  Enzimatik  dan  Difermentasi Menggunakan Saccharomyces Cerevisiae. Jurnal Atomik , Vol 1, No 1.
Baharuddin, M ., Sappewali., Karisma., & Fitriyani, J. (2016). Produksi Bioetanol Dari  Jerami  Padi  (Oryza  sativa  L.)  dan  Kulit  Pohon  Dao  (Dracontamelon) Melalui  Proses  Sakarifikasi  dan  Fermentasi  Serentak  (SFS). Chimica  et Natura Acta ,Vol.4, No.1.
Belitz, H. D., Grosch, W., Schieberle, P.  (2009). Food Chemistry. Edisi 4 Revisi . Berlin: springer
Bušić, A., Marđetko, N., Kundas, S., Morzak, G., Belskaya, H., Ivančić Šantek, M., ...  &  Šantek,  B.  (2018).  Bioethanol  production  from  renewable  raw materials  and  its  separation  and  purification:  A  review. Food  technology and biotechnology , 56 (3), 289-311. Fardiaz, S. 1992. Mikrobiologi Pangan I . Jakarta: Gramedia Pustaka Utama Febriyanti,  A.E.,  Sari  ,  C.N.,  dan  Adisyahputra.  2016. Efektivitas  Media Pertumbuhan  Khamir  Komersial  (Saccharomyces  Cerevisiae)  untuk
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
Fermentasi  Bioetanol  dari  Eceng  Gondok  (Eichhornia  Crassipes) .  Jurnal Biologi Indonesia 12 (2).
Fessenden,  R.J.  and  Fessenden,  J.S.,  (1982).  Kimia  Organik.  diterjemahkan  oleh Pudjaatmakan, A. H., Edisi Ketiga, Jilid 1, 237-239. Jakarta : Erlangga
Hanif, M., Mahlia, T.M.I.,  Aditiya, H.B., & Abu Bakar, M.S. (2017). Energy and environmental assessments of bioethanol production from Sri Kanji 1 cassava in Malaysia. Biofuel Research Journal , Vol 13, 537-544.
Hart, H. (1987). Organic Chemistry a Short Lecture . New York : McGraw-Hill
Jay, Jayus., N.V,Iga., & Nurhayati. (2016). Produksi Bioetanol oleh Saccaromyces Cerevisiae FNCC 3210 pada Media Molases dengan Kecepatan Agitasi dan Aerasi yang Berbeda. Jurnal Agroteknologi Vol.10 No. 02 2016.
Juwita, R. (2009). Studi Produksi Alkohol Dari Tetes Tebu . Makasar: Universitas Hasanudin.
Kusmiati, Thantowi,A., & Nuswantara, S.  (2010). Efek Sumber Karbon Berbeda terhadap Produksi á-Glukan oleh Saccharomyces Cerevisiae pada Fermentor Air Lift. Jurnal Natur Indonesia 13 (2) Februari 2011.
Kustyawati,  M.E.,  Sari,  M.,  &  Haryati,  T.  (2013). Efek  Fermentasi  dengan Saccharomyces Cerevisiae Terhadap Karakteristik Biokimia Tapioka . Jurnal Agritech Vol. 33 No. 3.
Leta.  (2009). Penerapan  Bioteknologi  dalam  Ekstraksi  Minyak  Kelapa  dengan Menggunakan Khamir Roti (Saccharomyces Cerevisiae). Jurnal Matematika, Sains, dan Teknologi Vol.10 No.2.
Manurung, E.W., Bustan, D., & Royen, H. (2013). Pembuatan Etanol dari Tepung Ubi  Kayu  dengan  Menggunakan  Metode  Hidrolisa .  Vol.19  No.3  Jurnal Teknik Kimia.
Masturi.,  Cristina,  A  .,  Istiana,A  .,  Sunarno.,    &  Dwijananti,  P.  (2017). Ethanol Production  from  Fermentation  of  Arum  Manis  Mango  Seeds  (Mangifera Indica L.) using Saccharomyces cerevisiae . Jurnal Bahan Alam Terbarukan 6 (1).
Murniati ., Handayani, S.S ., dan Risfianty, D.K. 2018. Bioetanol dari Limbah Biji Durian (Durio Zibethinus) . J. Pijar MIPA Vol. 13 No.2.
Nuryoto. (2008). Studi Kinerja Katalisator Lewatit Monoplus s-100 pada Reaksi Esterifikasi  antara  Etanol  dan  Asam  Asetat .  Vol.  2,  No.  1.  Cilegon: Universitas Sultan Ageng Tirtayasa .
Polli,  F.F.  (2016). Penelitian  Pembuatan  Etanol  dari  Serat/Ampas  Sagu .  Jurnal Penelitian Teknologi Industri Vol. 8 No. 1.
Riadi, L. (2007). Teknologi Fermentasi Cetakan Pertama . Jogjakarta: Graha Ilmu
Gema Wiralodra, Vol 11, No 1, April  2020
P-ISSN 1693-7945, E-ISSN : 2622-1969
Rizal, S., & Kustyawati, M.E. (2019). Karakteristik Organoleptik dan Kandungan Beta-Glukan  Tempe  Kedelai  Dengan  Penambahan  Saccharomyces Cerevisiae. Jurnal Teknologi Pertanian , Vol. 20 No. 2.
Reis,V.R., Bassi, A.P.G., Gomes, J.C, & Ceccato, S.R. (2013). Characteristics of Saccharomyces  cerevisiae  Yeasts  Exhibiting  Rough  Colonies  and Pseudohyphal  Morphology  with  Respect  to  Alcoholic  Fermentation. Brazilian Journal of Microbiology , Vol 44, No 4.
Rizwan, M., Diah, A.W.M.. & Ratman. (2018). Pengaruh Konsentrasi Ragi Tape (Saccharomyces  Cerevisiae)  Terhadap  Kadar  Bioetanol  Pada  Proses Fermentasi Biji Alpukat (Persea Americana Mill). Jurnal Akademika Kimia Vol 7, No 4.
Ruslina Y. D. M. (2012). Laporan Kerja Praktek pada Unit Fermentasi Pt. Indo Achidatama . Depok : Universitas Indonesia.
Rustiaty,  B.  (2018).  Optimalisasi  Sel  Saccharomyces  Cerevisiae  untuk Meningkatkan produktivitas dan Efisiensi Industri Etanol. Jurnal Teknologi & Industri Hasil Pertanian , Vol. 23, No.2.
Susmiati,  Y.  (2018).  Prospek  Produksi  Bioetanol  dari  Limbah  Pertanian  dan Sampah  Organik  the  Prospect  of  Bioethanol  Production  from  Agricultural Waste  and  Organic  Waste. Jurnal  Teknologi  dan  Manajemen  Agroindustri Vol.7, No.2.
Sofiah ., Yuniar., & Rani, D.A. (2019). Pembuatan Bioetanol dari Umbi Singkong Karet  (Manihot  Glaziovii)  yang  Dihodrolisis  Asam  dan  Enzim.  Prosiding Seminar Nasional II Hasil Litbangyasa Industri ISSN 2654-8550.
Utami, L.I. (2009). Pembuatan Etanol Dari Buah Mengkudu. Jurnal Teknik Kimia, Vol.4, No.1.
Wachid, M  & Mutia, P. (2019). Optimasi Media Kulit Singkong pada Pertumbuhan Sacharomyces Cerreviceae. Jurnal Ilmiah Teknik Sipil dan Teknik Kimia , Vol 4, No 2.
Widyanti,  E.M  &  Moehadi,  B.I.  (2016).  Proses  Pembuatan  Etanol  dari  Gula Menggunakan Saccharomyces Cerevisiae Amobil. Jurnal Metana , Vol. 12, No 2.
Wusnah., Bahri, S., dan Hartono, D. (2016). Proses Pembuatan Bioetanol dari Kulit Pisang  Kepok  (Musa  acuminata  B.C)  Secara  Fermentasi. Jurnal  Teknologi Kimia Unimal, Vol 5, No 1.