Pengaruh Jenis Pelarut Terhadap Daya Antibakteri Hasil Ekstraksi Daun Sirih Hijau (Piper Betle L.)

## pada Aktivitas Staphylococcus Epidermidis
Luthfi Kurnia Dewi 1,2* , Aji Hendra Sarosa 1,2 , Christina Wahyu 1 , Nur Hayati 1 , Risang Parasu 1 , Ersa Amalia 1
1 Jurusan Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Brawijaya, Malang, Indonesia 2 Institut Atsiri, Universitas Brawijaya, Malang, Indonesia
* Coresponding author : luthfikurnia@ub.ac.id

## PENGANTAR
Infeksi  merupakan  salah  satu  penyebab penyakit  yang  sering  terjadi  di  daerah  yang beriklim tropis seperti Indonesia. Infeksi didefinisikan sebagai suatu proses saat organisme (misalnya: bakteri, virus, jamur) yang mampu menyebabkan penyakit masuk ke dalam tubuh  atau  jaringan  dan  menyebabkan  trauma atau kerusakan [2].  Penyakit infeksi yang cukup sering terjadi adalah infeksi pada kulit atau organ tubuh  lain  yang  disebabkan  oleh  aktivitas bakteri,  seperti Staphylococcus  epidermidis . Bakteri Staphylococcus  epidermidis tergolong jenis bakteri gram positif. Bakteri Staphylococcus  epidermidis terdapat  sebagai flora  normal  pada  kulit  manusia  dan  pada umumnya  tidak  menjadi  masalah  bagi  orang
normal  yang  sehat  [7].  Tetapi,  kini  bakteri  ini menjadi pathogen oportunis yang menyebabkan infeksi  nosokomial  pada  persendian  dan pembuluh darah.
Pada  awalnya,  infeksi  beberapa  bakteri masih  bisa  diobati  dengan  berbagai  macam antibiotik.  Namun,  sejak  lima  puluh  tahun terakhir  pengobatan  terhadap  infeksi  ini  mulai mengalami  kesulitan,  karena  bakteri  sudah menjadi  resisten  terhadap  antibiotik  [1].  Oleh karena itu, perlu alternatif lain untuk mengobati infeksi  bakteri-bakteri  tersebut  menggunakan bahan alam seperti daun sirih hijau ( Pipper Betle L. ). Beberapa keuntungan menggunakan bahan alam  antara  lain  relatif  lebih  aman,  mudah diperoleh,  relatif  lebih  murah,  dan  tidak menimbulkan resistensi.

## ABSTRAK
Ekstrak  daun  sirih  hijau  (Piper  betle  L.)  mengandung  senyawa  antibakteri  yang  terdiri  dari senyawa  fenol  dan  turunannya.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  aktivitas  antibakteri ekstrak daun sirih hijau pada berbagai jenis pelarut terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis. Penelitian ini menggunakan metode refluks dengan tiga jenis pelarut yaitu etanol yang bersifat polar, etil asetat bersifat semi polar, dan n-heksana yang bersifat non polar. Uji antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus  epidermidis  dilakukan  dengan  metode  difusi  kertas  cakram.  Rendemen  ekstrak daun  sirih  hijau  tertinggi  terdapat  pada  variabel  pelarut  etanol  yaitu  sebesar  4,083%.  Hasil  uji fitokimia  menunjukkan  bahwa  semua  hasil  ekstrak  positif  mengandung  tannin  dan  menunjukkan hasil  negatif  pada  senyawa  saponin.  Diameter  zona  hambat  tertinggi  didapatkan  pada  variabel pelarut  etanol  pada  aktivitas  bakteri  Staphylococcus  epidermidis  yaitu  sebesar  23,13 mm.  Kadar fenol tertinggi terdapat pada variabel pelarut n-heksana yaitu sebesar 6,85%..

## KEYWORDS
Daun sirih hijau, ekstraksi refluks, daya antibakteri, Staphylococcus epidermidis.
Article Number :
290-1037-1-SM
Received :
2020-11-12 Accepted : 2021-07-09 Published : Volume : 07 Issue : 01
Mounth, Year July 2021 pp.1161-1165
Senyawa  aktif  utama  pada  daun  sirih  hijau yang  digunakan  sebagai  antibakteri  adalah senyawa  fenol  dan  turunannya.  Senyawa  aktif baik  polar  maupun  nonpolar  yang  terkandung pada  daun  sirih  hijau  bisa  didapatkan  dengan berbagai  cara  ekstraksi,  salah  satunya  adalah ekstraksi  menggunakan  pelarut.  Pemilihan pelarut  yang  sesuai  merupakan  faktor  penting dalam  proses  ekstraksi.  Proses  ekstraksi dengan pelarut didasarkan pada sifat kepolaran zat dalam pelarut saat ekstraksi. Senyawa polar hanya  akan  larut  pada  pelarut  polar,  seperti etanol, metanol, butanol dan air. Senyawa non- polar  juga  hanya  akan  larut  pada  pelarut  non- polar, seperti eter, kloroform dan n-heksana [6].
Pada  penelitian  ini,  pemilihan  pelarut  yang digunakan  untuk  proses  ekstraksi  daun  sirih hijau didasarkan pada sifat kepolaran pelarutnya.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh perbedaan  jenis  pelarut  terhadap  rendemen ekstrak daun sirih hijau ( Piper betle L. ) dan daya antibakteri  ekstrak  daun  sirih  hijau  ( Piper  betle L. )  pada  aktivitas  bakteri Staphylococcus epidermidis.

## BAHAN DAN METODE
Bahan  yang  digunakan    pada  penelitian  ini yaitu daun sirih hijau, tiga jenis pelarut (heksana, etil  asetat,  dan  etanol),  bubuk nutrient  agar , biakan  bakteri Staphylococcus  epidermidis , bubuk nutrient  broth ,  alumunium  foil,  kertas coklat,  kertas  cakram,  aquades,  BaCl 2 ,  H 2 SO 4 , alkohol 96% teknis.
Alat yang digunakan pada penelitian ini yaitu erlenmeyer, rotary  evaporator ,  beaker  glass, gunting,  neraca  digital,  botol  vial,  gelas  ukur, autoklaf,  tabung  reaksi,  cawan  petri,  inkubator, labu ukur, rangkaian alat filtrasi vacuum (corong buchner, pompa vacuum, kertas saring, buchner flask), lemari pendingin, pipet tetes, cotton swab, penggaris,  hot  plate  stirrer,  magnetic  stirrer, kondensor allihn, pompa kondensor, jarum ose, bunsen burner, spatula, spreader, dan turbidimeter.
Variabel penelitian terdiri dari variabel terikat berupa rendemen hasil ekstraksi daun sirih hijau,
kadar fenol hasil ekstraksi daun sirih hijau, dan kandungan  senyawa  aktif  saponin  serta  tanin pada  hasil  ekstraksi  daun  sirih  hijau,  dan aktivitas bakteri pada media NA ( Nutrient Agar ), dengan  melakukan  pengukuran  diameter  zona hambat  (zona  hambat)  pertumbuhan  bakteri yang terbentuk pada media NA ( Nutrient Agar ). Variabel berubah yaitu variasi pelarut (etanol, etil asetat dan n-heksana.
Prosedur  penelitian  dimulai  dari  persiapan daun sirih hijau, proses ekstraksi daun sirih hijau menggunakan  metode  refluks,  pembuatan media  Nutrient  Agar  (NA),  proses  regenerasi bakteri,  pembuatan  media Nutrient  Broth (NB), pembuatan  larutan  BaCl 2 1%,  pembuatan Larutan  Standar  0,5  McFarland,  pembuatan larutan  suspense  bakteri,  pengukuran  larutan suspense  bakteri  sesuai  larutan  baku  0,5 McFarland,  uji  antibakteri  menggunakan  difusi kertas  cakram,  dan  uji  fitokimia  saponin  dan tannin ekstrak daun sirih hijau.

## HASIL DAN DISKUSI

## Rendemen Ekstrak Daun Sirih Hijau
Gambar 1 merupakan grafik yang menunjukkan  hubungan  antara  jenis  pelarut ekstraksi  dengan  rendemen  ekstrak  daun  sirih hijau  yang  dihasilkan.  Berdasarkan  Gambar  1 rendemen  semakin  menurun  seiring  dengan menurunnya  sifat  kepolaran  dari  pelarut  yang digunakan. Sifat kepolaran (polaritas) dinyatakan sebagai konstanta dielektrik. Pelarut polar  mempunyai  konstanta  dielektrik  yang besar, sedangkan senyawa non polar mempunyai  konstanta  dielektrik  yang  kecil  [8]. Pelarut  etanol  memiliki  konstanta  dielektrik  30, pelarut etil asetat memiliki konstanta dielektik 6, sedangkan pelarut n-heksana memiliki konstanta  dielektrik  2.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  pelarut  etanol  memiliki  sifat  kepolaran yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  pelarut etil asetat dan n-heksana.
Rendemen  tertinggi  terdapat  pada  EDS-E jika  dibandingkan  dengan  pelarut  lainnya  yaitu sebesar  4,083%.  Rendemen  EDS-EA  sebesar 3,850%  dan  rendemen  terendah  terdapat  pada EDS-H yaitu sebesar 0,813%. Dari hasil tersebut
dapat  dinyatakan  bahwa  senyawa  dalam  daun sirih  hijau  memiliki  sifat  senyawa  yang  larut dalam  pelarut  polar  sehingga  pada  ekstraksi yang  menggunakan  pelarut  bersifat  polar  akan menarik  lebih  banyak  senyawa  di  dalam  daun sirih  hijau  dan  didapatkan  rendemen  tertinggi pada pelarut bersifat polar yaitu etanol (EDS-E).

## Keterangan:
EDS-E : Ekstrak Daun Sirih-Etanol EDS-EA  : Ekstrak Daun Sirih-Etil Asetat EDS-H : Ekstrak Daun Sirih-Heksana

## Gambar 1. Rendemen Ekstrak Daun Sirih Hijau Pada Berbagai Jenis Pelarut
Daya Antibakteri Ekstrak Daun Sirih Hijau Terhadap Bakteri Staphylococcus
epidermidis
Gambar  2  merupakan  grafik  hubungan antara  jenis  pelarut  pada  proses  ekstraksi dengan  diameter  zona  hambat  yang  terbentuk pada uji antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis . Zona hambat yang terbentuk pada uji antibakteri tersebut menunjukkan respon penghambatan pertumbuhan  bakteri  oleh  suatu  senyawa antibakteri dalam ekstrak daun sirih hijau.
Besarnya  diameter  zona  hambat  yang terbentuk  pada  media  uji  antibakteri  dapat  di gunakan untuk menentukan tingkat daya hambat pertumbuhan bakteri yang dihasilkan oleh suatu senyawa  antibakteri.  Tingkat  daya  hambat pertumbuhan  bakteri  dari  suatu  senyawa antibakteri  diklasifikasikan  menjadi  tiga  yaitu antibakteri  kuat,  sedang,  lemah  dan  tidak  ada [3].  Daya  hambat  kuat  jika  memiliki  diameter zona hambat > 20 mm, daya hambat sedang jika memiliki  diameter  zona  hambat  16 –  20  mm, daya hambat lemah jika memiliki diameter zona hambat  10 –  15  mm,  dan  diklasifikasikan  tidak
ada  daya  hambat  jika  memiliki  diameter  zona hambat < 10 mm. Berdasarkan Gambar 2, hasil bahwa  zona  hambat  tertinggi  didapatkan  pada variabel  EDS-E  yaitu  sebesar  23,13  mm (kategori  daya  hambat  kuat).  Dari  Gambar  2 dapat  dilihat  pula  bahwa  zona  hambat  yang dihasilkan  bakteri  memiliki  klasifikasi  daya hambat  yang  beragam.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  spektrum  penghambatan  tergantung pada  jenis  dan  kekuatan  senyawa  antibakteri dari  masing-masing  komponen  yang  terekstrak serta  jumlah  komponen  aktif  yang  terekstrak oleh pelarut yang digunakan [5].

## Gambar 2. Daya Antibakteri Ekstrak Daun Sirih Hijau Pada Berbagai Jenis Pelarut Terhadap Bakteri Staphylococcus epidermidis

## Senyawa Saponin dan Tanin pada Ekstrak Daun Sirih Hijau
Identifikasi  adanya  senyawa  aktif  yang mungkin  berperan  sebagai  antibakteri  dalam ekstrak  daun  sirih  hijau  dilakukan  secara kualitatif. Senyawa aktif yang diuji yaitu saponin dan tanin. Pengujian kualitatif dilakukan dengan cara  skrining  fitokimia  menggunakan  reagen yang  disesuaikan  dengan  senyawa  aktif  yang akan diuji. Skrining fitokimia pada ekstrak daun sirih ditunjukkan pada Tabel 2.
Hasil dari pengujian secara kualitatif dengan skrining  fitokimia  sesuai  dengan  Tabel  2 menunjukkan  bahwa  semua  sampel  positif mengandung  tanin.  Akan  tetapi  semua  sampel menunjukkan  hasil  negatif  pada  senyawa saponin. Pada pengujian senyawa tanin hasilnya ditandai dengan adanya perubahan warna pada ekstrak  setelah  diberi  penambahan  larutan FeCl3 1%. Hasil positif pengujian senyawa tanin ditunjukkan  dengan  adanya  perubahan  warna
4.083 3.850 0.813 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 EDS-E EDS-EA EDS-H Ren d e m e n Ek s tra k Dau n Si ri h Hi ja u (% ) Sampel 23.13 16.63 17.68 0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 EDS-E EDS-EA EDS-H kontrol negatif D iam et er Zo na H am ba t Ba k te ri (m m ) Sampel
ekstrak dari warna coklat kehijauan menjadi biru kehitaman  atau  hijau  kehitaman  beberapa  saat setelah  ditambahkan  larutan  FeCl 3 1%  [4]. Perubahan  warna  pada  sampel  EDS-H  dan EDS-EA yaitu biru kehitaman, sedangkan pada sampel EDS-E yaitu hijau kehitaman. Perubahan warna menjadi biru kehitaman merupakan hasil dari  adanya  golongan  tanin  terhidrolisis  dan perubahan  warna  menjadi  hijau  kehitaman sebagai  hasil  dari  adanya  golongan  tanin terkondensasi  atau  flavolan.  Perubahan  warna ini  terjadi  karena  adanya  reaksi  antara  FeCl 3 yang  ditambahkan  pada  uji  dengan  salah  satu gugus  hidroksil  yang  ada  pada  senyawa  tanin [9].

## Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Senyawa Aktif
pada Ekstrak Daun Sirih Hijau
*Keterangan:
+ : terdapat senyawa aktif yang diuji
- : tidak terdapat senyawa aktif yang diuji

## KESIMPULAN dan SARAN
Rendemen ekstrak daun sirih hijau tertinggi terdapat  pada  variabel  daun  sirih  hijau  yang diekstrak  menggunakan  pelarut  etanol  sebesar 4,083%.  Diameter  zona  hambat  tertinggi didapatkan  pada  variabel  pelarut  etanol  pada aktivitas  bakteri Staphylococcus  epidermidis yaitu sebesar 23,13 mm. 5.  Hasil  uji  fitokimia menunjukkan  bahwa  semua  sampel  positif mengandung  tannin  dan  menunjukkan  hasil negatif pada senyawa saponin.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terimakasih kepada Lembaga Penelian dan Pengabdian Masyarakat
Universitas  Brawijaya  (LPPM  UB)  yang  telah mendanai  penelitian  ini  melalui  skema  Hibah Peneliti Pemula (HPP) Tahun 2020.

## REFERENCES
[1] As, N., 2016. Skin Infection It's A Must Know Disease:  Infeksi  Bakteri  MRSA pada Kulit. Malang: UB Press.
[2] Grace, P. A. & Neil, R. B., 2007. At a Glance Ilmu Bedah. Jakarta: Erlangga.
[3] Greenwood, D., 1995. Antibiotics
Susceptibility  (Sensitivity)  Test,
Antimicrobial and Chemotherapy. United  States  of  America:  Mc Graw Hill Company.
[4]  Hostettmann,  K.,  2014.  Handbook  of Chemical  and  Biological  Plant Analytical  Methods.  Switzerland: Champex-Lac.
[5]  Lestari,  Y.,  Ardiningsih,  P.  &  Nurlina,  2016. Aktivitas  Antibakteri Gram  Positif dan  Negatif  dari  Ekstrak  dan Fraksi Daun Nipah (Nypa fruticans  Wurmb.)  Asal  Pesisir Sungai  Kakap  Kalimantan  Barat.
JKK, 5(4), pp. 1-8.
[6]  Najib,  A.,  2018.  Ekstraksi  Senyawa  Bahan Alam.  Yogyakarta:  Deepublish Publisher.
[7] Rosidah, S. M., Lambui, O. & Suwastika, I. N., 2018.  Ekstrak  Daun  Tumbuhan Macaranga  tanarius  (L.)  M.A menghambat  Laju  Pertumbuhan
Bakteri Staphylococcus epidermidis.  Natural  Science: Journal of Science and Technology, 7(1), pp. 64-70.
[8] Rozi, F., Abram, P. H. & M.Diah, A. W., 2018. Pengaruh  Kombinasi  dan  Rasio Pelarut  terhadap  Hasil  Ekstraksi Minyak  dari  Serabut  Kelapa Sawit. J.Akademia Kim, 7(3), pp. 146-151.
Senyawa Aktif Reagen Hasil Pada Tiap Sampel* EDS-E EDS-EA EDS-H Saponin Aquades - - - Tanin Aquades + FeCl 3 1% + +
+
[9]  Sangi, M., M.R.J, R., H.E.I, S. & V.M.A, M., 2008. Analisis Fitokimia
Tumbuhan  Obat  di  Kabupaten
Minahasa  Utara.  Jurnal  Chem.
Prog., 1(1), pp. 47-53.