## ________________________________________________________________
Identifikasi Simultan Sildenafil Sitrat dan Tadalafil pada Kopi Herbal menggunakan Kromatografi Lapis Tipis – Densitometri
Sofia Fatmawati * , Berliana Hanifa, Almawati Situmorang 1. Department of Pharmaceutical Chemistry, Pharmacy and Sciences Faculty, Muhammadiyah Prof Dr Hamka University, Delima II Street, Perumnas Klender, Jakarta.
*Corresponding author:*sofia.fatmawati@uhamka.ac.id
Received: 16 November 2022; Accepted: 29 December 2022.
Abstract: In  Indonesia,  people  frequently  turn  to  herbal  remedies  as  an  alternative  to  conventional  medicine.  For  more convenient use, herbs are currently packed as coffee or other powdered drinks. Because the transactions were more frequent and extensive, sildenafil and tadalafil were found in herbal coffee sold in internet retailers in this investigation. Thin-layer chromatography  densitometry  tests  were  conducted  on  samples  of  herbal  coffee  and  the  standard  using  ethyl  acetate- methanol-ammonia  as  the  mobile  phase.  The  method's  selectivity  demonstrated  that  sildenafil  and  tadalafil  in  herbal beverages  may  be  distinguished  using  this  technique.  Four  samples  from  the  ten  herbal  coffee  samples  tested  positive  for sildenafil, and four samples tested positive for tadalafil, according to the test results.
Keywords: Coffee, Chromatography, Herbal, Sildenafil, Tadalafil.
Abstrak :  Di  Indonesia,  masyarakat  sering  beralih  ke  pengobatan  herbal  sebagai  alternatif  pengobatan  konvensional.  Agar lebih  nyaman  digunakan,  jamu  saat  ini  dikemas  dalam  bentuk  kopi  atau  minuman  bubuk  lainnya.  Karena  transaksi  lebih sering dan luas, sildenafil dan tadalafil ditemukan dalam kopi herbal yang dijual di pengecer internet dalam penyelidikan ini. Uji  densitometri  kromatografi  lapis  tipis  dilakukan  pada  sampel kopi herbal  dan  standar  menggunakan  etil  asetat-metanol- amonia  sebagai  fase  gerak.  Selektivitas  metode  menunjukkan  bahwa  sildenafil  dan  tadalafil  dalam  minuman  herbal  dapat dibedakan dengan menggunakan teknik ini. Empat sampel dari sepuluh sampel kopi herbal dinyatakan positif sildenafil, dan empat sampel dinyatakan positif tadalafil, menurut hasil tes.
Kata Kunci: Herbal, Kromatografi, kopi, Sildenafil, Tadalafil.
DOI: 10.15408/pbsj.v4i2. 29735

## 1. PENDAHULUAN
Minuman  herbal  merupakan  minuman  tradisional yang  mempunyai  beberapa  manfaat  jika  dikonsumsi. Minuman  herbal  terdiri  dari  beberapa  bahan tumbuhan  yang  bermanfaat  bagi  kesehatan.  Di Indonesia,  jamu  umumnya  digunakan  sebagai alternatif  penggunaan  obat  modern  pada  masyarakat ekonomi  rendah,  menengah,  dan  atas  hingga mencapai 58 persen (Andriati & Wahjudi, 2016). Saat ini  herbal  juga  dikemas  dalam  bentuk  kopi  atau minuman  serbuk  lainnya  sehingga  lebih  memberikan rasa nyaman dalam konsumsinya.
Menurut  Peraturan  Menteri  Kesehatan  Republik Indonesia  Nomor  007  Tahun  2012  tentang  registrasi
obat  tradisional  yang  menyatakan  bahwa  Obat tradisional  dilarang  mengandung  bahan  kimia  obat yang  merupakan  hasil  isolasi  atau  sintetik  berkhasiat obat  (Kementrian  Kesehatan RI,  2012).  Bahan  kimia obat  merupakan  zat-zat  kimia  yang  digunakan sebagai  bahan  utama  obat  kimiawi  yang  biasanya ditambahkan  dalam  sediaan  obat  tradisional/jamu untuk  memperkuat  indikasi  dari  obat  tradisional tersebut.  Jamu  dengan  kandungan  bahan  kimia  obat menyebabkan  citra  jamu  sebagai  budaya  Indonesia, menjadi  buruk.  Bahan  kimia  obat  yang  sering ditambahkan ke dalam jamu antara lain: Fenilbutazon, antalgin, diklofenak sodium, piroksikam,  parasetamol,  prednison,  deksametason, sibutramin hidroklorida, sildenafil sitrat, glibenklamid,  dan  teofilin  (BPOM  Padang,  2021).

## Pharmaceutical and Biomedical Sciences Journal
Volume 4(2),  2022, 63-68
Pada tahun 2020 beberapa produk ilegal dimusnahkan salah  satunya  obat  tradisional  ilegal  sebanyak  221 produk  (46,13%).  Dari  produk-produk  tersebut terdapat  jamu  yang  mengandung  bahan  kimia  obat yaitu Sildenafil Sitrat (BPOM RI, 2020). Obat herbal perkasa pria, atau obat kuat seperti yang lebih dikenal di masyarakat, telah banyak digunakan di masyarakat, baik  dengan  maupun  tanpa  nomor  ijin  edar BPOM.   Badan  Pengawas  Obat  dan  Makanan (BPOM)  sering  melihat  penyalahgunaan  jamu  kuat ini dan yang paling banyak adalah penambahan bahan kimia obat 9BKO) yaitu Sildenafil Sitrat (BPOM RI, 2016). Sildenafil sitrat termasuk golongan obat keras yang  hanya  dapat  diperoleh  dengan  resep  dokter. Sildenafil  merupakan  salah  satu  bahan  aktif  yang digunakan  dalam  pengobatan  disfungsi  ereksi  atau lebih  dikenal  dengan  impotensi  inhibitor  dalam kelompok  penghambat  phosphodiesterase.  Selain sildenafil,  juga  digunakan  pada  hipertensi  pulmonal (PAH) (Mehta, 2023)
Beberapa  peneliti  yang  telah  melakukan  penelitian mengenai kandungan sildenafil sitrat pada jamu kuat. Salah satunya pada penelitian yang dilakukan  (Waris et  al.,  2013)    yang  mendapatkan  hasil  dari  4  sampel jamu  kuat  yang  dianalisis  terdapat  1  sampel  yang positif  mengandung  sildenafil  sitrat,  penelitian  ini menggunakan  metode  TLC-densitometri.  Penelitian yang  telah  dilakukan  oleh  (Sarigih  et  al.,  2010) mendapatkan hasil positif mengandung BKO sildenafil  sitrat  pada  jamu  perkasa  merek  A menggunakan  metode  Kromatografi  Cair  Kinerja Tinggi.
Pada  penelitian  dilakukan  analisis  kandungan Sildenafil  Sitrat  dan  Tadalafil  pada  kopi  herbal menggunakan  alat  KLT-Densitometri.  Kromatografi lapis  tipis  merupakan  Teknik  kromatografi  yang berguna untuk memisahkan senyawa organik. Karena kemudahan dan kecepatan penggunaan KLT,  metode
ini banyak digunakan untuk memantau perkembangan  reaksi  sintesa  organik  dan  untuk memeriksa  kemurnian  produk.  Teknik  penggunaan KLT  memiliki  banyak  keuntungan  karena  KLT merupakan  teknik  serbaguna  yang  dapat  diterapkan pada  hampir  semua  senyawa.  Karena  adsorben  yang baik dan pelarut yang bersih, pemisahan dapat dicapai dengan biaya rendah. Pemisahan dapat dicapai dalam waktu singkat, menjadikan  KLT  sebagai teknik yang dijamin  berhasil  untuk  memisahkan  campuran  yang tidak diketahui (Rosamah, 2019). KLT juga memiliki tingkat  ketelitian  yang  tinggi  sehingga  menghasilkan pemisahan yang lebih sempurna dan tingkat kepekaan yang tinggi (Asmawati et al., 2019).

## 2. MATERIAL AND METODA

## 2.1 Alat dan Bahan Penelitian
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah neraca analitik, peralatan gelas, silika gel 60 GF 254, chamber,  oven,  lemari  asam,  hair  dryer,  microliter syringe,  mikropipet,  pensil,  penggaris  dan  UV- Visible  254  nm  dan  Densitometer.  Bahan  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  sampel  kopi herbal  yang  diperoleh  dari online  shop Shopee, metanol  99,8%  (Merck),  kloroform  (Merck),  etil asetat(Merck),  propanol  (Merck),  standar  sildenafil sitrat (BPOM), standar Tadalafil (BPOM).

## 2.2 Metode Penelitian
Metode  penelitian  terdiri  dari  pengumpulan  sampel kopi  herbal,  pembuatan  sampel  simulasi,  optimasi fase gerak, uji selektivitas, LOD, dan uji sampel kopi herbal.

## a. Pengumpulan sampel kopi herbal
Pemilihan dan pembelian sampel ini dilakukan secara
purposive  sampling ,  yaitu  adalah  salah  satu  cara menentukan  sampel  dengan  pertimbangan  tertentu (Sugiyono,  2018).  Pemilihan  sampel  kopi  dilakukan pembelian  di online  shop Shopee  dengan  kriteria sebagai berikut:
Kriteria inklusi sampel jamu kuat pria
a. Kopi  yang  memiliki  atau  tidak  memiliki nomor  izin  edar  BPOM  atau  tidak  terdaftar di  BPOM,  tetapi  mencantumkan  nomor  izin edar fiktif pada kemasan.
b. Kopi mempunyai kandungan herbal.
c. Kopi  menyatakan  narasi  “Kuat”,  “Tahan Lama”, dan/atau “Perkasa”.
d. Produk yang terjual di toko sudah lebih dari 1000 produk.
b. Pembuatan sampel kopi herbal simulasi
Kopi herbal dibuat dengan komposisi :
1. Pasak bumi ( Eurycoma longifolia ) 1,25 gr
2. Ginger powder ( Zingiberis rhizoma ) 1,25 gr
3. Purwoceng ( Pimpinella pruatjan ) 1 gr
4. Ginseng ( Panax ) 0,25 gr
5. Tribulus ( Tribulus terrestris ) 0,25 gr
6. Kopi dan Gula ad 25 gr

## c. Pembuatan Larutan Baku
Baku  sildenafil  dan  baku  tadalafil  masing-masing dilarutkan  dalam  metanol  dengan  konsentrasi  1000 ppm.

## d. Optimasi fase gerak
Pengujian  berbagai  macam  variasi  fase  gerak  yang terdiri  dari  methanol,  etanol,  etil  asetat,  asetonitril, amonia, diklorometana pada plat silika gel 60 GF254 yang berisi baku sildenafil, baku tadalafil, kopi herbal simulasi dan spiked kopi herbal.

## e. Uji Selektifitas
Pengujian  menggunakan  fase  gerak  yang  paling optimum  pada  plat  silika  gel  60  GF254  yang  berisi baku  sildenafil,  baku  tadalafil,  baku  campuran,  kopi herbal simulasi dan spiked kopi herbal.

## f. Limit Deteksi
Pengujian  menggunakan  fase  gerak  yang  paling optimum  pada  plat  KLT  yang  berisi  baku  sildenafil konsentrasi  20,  30,  40,  50  dan  60  ppm  sedangkan untuk baku tadalafil 5, 10, 15, 20 dan  30 ppm. Hasil AUC puncak dihitung dengan metode standar deviasi residual.

## g. Preparasi dan pengujian sampel
Sampel  serbuk  kopi  herbal  sebanyak  400  mg dimaserasi  1  –  2  hari  dengan  metanol  5  ml.  Ekstrak jamu  disaring  dan  ditampung  (Waris  et  al.,  2013). Plat  silika  gel  60  GF  254  disiapkan  kemudian menotolkan  baku  pembanding  sildenafil  sitrat,  baku pembanding tadalafil, baku campuran dan 10 ekstrak sampel  kopi  herbal  ditotolkan  masing-masing  5  μL dengan  jarak  antar  totolan  1  cm.  Selanjutnya dilakukan  elusi  pada  fase  gerak  optimum,  diamati dengan bantuan sinar Ultra Violet (UV) 254 nm.Noda yang  terbentuk  pada  senyawa  pembanding  dengan ekstrak  dan  standar  dibandingkan  jarak  rambatnya. Selanjutnya  diukur  menggunakan  KLT-Densitometri pada  panjang  gelombang  maksimum  292  nm,  dan dilakukan  analisis  terhadap  hasil  scan  (Waris  et  al., 2013).

## 3. HASIL DAN DISKUSI
Sampel  kopi  herbal  yang  didapatkan  sebanyak  10 kopi  herbal.  Penelusuran  Nomor  Ijin  Edar  (NIE) melalui  website  BPOM  ditemukan  bahwa  5  sampel
mempunyai NIE yang sesuai label kemasan, 1 sampel NIE fiktif dan 4 sampel tidak mempunyai NIE.
Kopi herbal simulasi dibuat dengan cara mencampurkan  beberapa  herbal  yang  tercantum dalam  komposisi  kopi  herbal  sampel  hasil  pencarian di online  shop Shopee.  Komposisi  herbal  antara  lain pasak bumi, jahe, purwoceng, ginseng dan tribulus.
Gambar 1: Kopi Herbal Simulasi
Optimasi  fase  gerak  menghasilkan  fase  gerak  etil asetat:methanol:amonia (45:5:1) yang paling optimum.  Fase  gerak  tersebut  dapat  memberikan noda  baku  sildenafil,  baku  tadalafil,  dan spiked kopi herbal simulasi yang terpisah dengan baik.
Tabel 1: Hasil Optimasi Fase Gerak
Fase Gerak Baku Sildenaf il Baku Tadalafi l Kopi Simulas i Spiked Kopi Simulasi Metanol : Kloroform 4:1 Tampak  - - - Kloroform:Metano l:Amonia (70:3;1,5) Tampak  Tampak  - - Etil asetat: Asetonitril: Ammonia (45:5:1) Tampak  Tampak Tampak (hanya sildenafil ) Etil asetat: Metanol: Ammonia (45:5:1) Tampak  Tampak Tampak Kloroform:
Metanol: Ammonia (45:5:1)
Tampak  Tampak
Diklormetan: Metanol:
Ammonia (45:5:1) Tampak  Tampak Tampak (sildenafi l tailing )
Hasil selektivitas menunjukkan pemisahan yang baik untuk  spiked  kopi  herbal  simulasi.  Tadalafil  dan sildenafil  dalam  spiked  kopi  herbal  memberikan  Rf dan  panjang  gelombang  yang  sama  dengan  baku sildenafil dan baku tadalafil. Pada sampel kopi herbal simulasi  menunjukkan  noda  pada  Rf  0,98  yang diasumsikan  sebagai  kafein  dari  komposisi  kopi dalam sampel tersebut karena sesuai dengan  Panjang gelombang  ultraviolet  kafein  yaitu  273  nm  (Dibbern et al., 2002)
Gambar  2:  Hasil  plat  silica  gel  60  GF254  uji  selektivitas menggunakan  fase  gerak  etil  asetat:methanol:ammonia (45:5:1)  (KS:kopi  simulasi,  KC:Spiked  kopi  simulasi, BS:Baku Sildenafil, BT:Baku Tadalafil, BC:Baku Campuran) Tabel 2: Hasil Uji Selektifitas Sampel Senyawa Rf λ maks Kopi Simulasi Kafein Kopi 0.98 275 Spiked Kopi Simulasi Sildenafil 0.69 304 Spiked Kopi Simulasi Kafein Kopi 0.97 275 Spiked Kopi Simulasi Tadalafil 1.21 200 Baku Sildenafil Sildenafil 0.69 304 Baku Tadalafil Tadalafil 1.21 200 Baku Campuran Sildenafil 0.72 305 Baku Campuran Tadalafil 1.21 200
Limit  deteksi  dilakukan  menggunakan  metode eksperimen  dengan  jalan  membuat  rentang  kadar baku  sildenafil  atau  tadalafil  sebanyak  5  konsentrasi dan setiap konsentrasi  diukur luas areanya.
Perhitungan  limit  deteksi  menggunakan  rumus 3.3*SD/S (European Medicines Agency, 1995). Limit Deteksi  untuk  sildenafil  adalah  8,8  ppm.  Limit deteksi untuk tadalafil adalah 5,0 ppm.
Gambar  4:  Hasil  uji  plat  silica  gel  60  GF254  sampel  kopi herbal  menggunakan  fase  gerak  etil  asetat:methanol: ammonia (45:5:1) (BS:Baku Sildenafil, BT:Baku Tadalafil, BC:Baku Campuran, A1-A10:Sampel Kopi Herbal)
Hasil  pengujian  sampel  adalah  semua  sampel  kopi memberikan  noda  pada  Rf  kafein  yang  merupakan bahan  aktif  dari  serbuk  kopi.  Dari  10  sampel  kopi herbal  tersebut  menunjukkan bahwa  4  sampel  positif tadalafil  pada  sampel  A1,  A4,  A7  dan  A8  yang memiliki  noda  pada  Rf  yang  sama  dengan  baku tadalafil  dan  panjang  gelombang  287  nm.  Sampel positif sildenafil sebanyak 4 sampel yaitu A5, A6, A9 dan  A10  yang  memiliki  noda  pada  Rf  yang  sama dengan  baku  sildenafil  panjang  gelombang  305  nm. Peneliti  juga  telah  melaporkan  sampel  kopi  yang terdeteksi  positif  baik  sildenafil  maupun  tadalafil  ke Badan  POM  melalui  mekanisme  Unit  Layanan Pengaduan Konsumen (ULPK).
Gambar 5: Hasil uji sampel kopi herbal pada Kromatografi Lapis Tipis-Densitometri

## 4. KESIMPULAN
Kromatografi  Lapis  Tipis  –  Densitometri  dengan pelarut  etil  asetat  –  metanol  –  amonia  mampu mendeteksi  sildenafil  dan  tadalafil  pada  sampel  kopi herbal.  Dari  10  sampel  yang  dianalisis,  4  sampel terdeteksi  mengandung  sildenafil  dan  4  sampel terdeteksi mengandung tadalafil.

## 5. UCAPAN TERIMAKASIH
Terima  kasih  kepada  Lemlitbang  UHAMKA  atas pendanaan riset ini.
6. REFERENCES  (Times new roman, 10 pt, bold, 1 line, left, hanging, 2.5”)
Andriati,  A.,  &  Wahjudi,  R.  M.  T.  (2016).  Tingkat penerimaan penggunaan jamu sebagai alternatif penggunaan  obat  modern  pada  masyarakat  ekonomi rendah-menengah  dan  atas. Masyarakat,  Kebudayaan  Dan Politik , 29 (3), 133.
Asmawati,  A.,  Fajar,  D.  R.,  &  Alawiyah,  T.  (2019). Kandungan  Rhodamin  B  Pada  Sediaan  Lip  Tint  Yang Digunakan  Mahasiswi  Stikes  Pelamonia. Media  Farmasi , 15 (2), 125.
Ausó, E., Gómez‐vicente, V., & Esquiva, G. (2021). Visual side  effects  linked  to  sildenafil  consumption:  An  update. Biomedicines , 9 (3).
BPOM  Padang.  (2021). Tahukah  Kamu..  Apa  itu  Bahan
Kimia Obat?? Bbpompadang.Id.
https://bbpompadang.id/read-artikel?slug=tahukah-kamu- apa-itu-bahan-kimia-obat
BPOM  RI.  (2004).  Keputusan  Kepala  BPOM  RI  No.HK. 00.05.4.2411. Keputusan  Kepala  Badan  Pengawas  Obat Dan Makanan Republik Indonesia Nomor Hk. 00.05.4.2411 , 2.
Author A et al . BPOM  RI.  (2016). 11,4  M  Obat  Tradisional  Ilegal Diamankan Badan
POM . https://www.pom.go.id/new/view/more/berita/11400/11-4- M-Obat-Tradisional-Ilegal-Diamankan-Badan-POM-.html BPOM  RI.  (2020). Pemusnahan  Produk  Ilegal  Hasil Pengawasan  dan  Penindakan  Balai  Besar  POM  di Bandung Tahun 2020 . Brayfield,  A.  (2014). Martindale  The  Complate  Drug Reference 38th Edition (38th ed.). Pharmaceutical Press. Calabrò,  R.  S.,  Manuli, A.,  Portaro,  S.,  Naro, A.,  Maggio, M.  G.,  &  De  Luca,  R.  (2021).  Sildenafil  induced  sexual aggression:  coincidence,  rarity,  or  under-reported  side effect. International Journal of Impotence Research , 4–5. Dibbern, H.W., Muller R.M., Wirbitzki, E. (2002). UV and IR Spectra Pharmaceutical Substance . Editio Cantor Verlag für Medizin und Naturwissenschaften GmbH
Goldstein,  I.,  Burnett, A.  L.,  Rosen,  R.  C.,  Park,  P.  W.,  & Stecher, V. J. (2019). The Serendipitous Story of Sildenafil: An  Unexpected  Oral  Therapy  for  Erectile  Dysfunction. Sexual Medicine Reviews , 7 (1), 115–128.
Hermita,  K.,  Harahap,  Y.,  &  Supandi.  (2019). Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS) . Kementrian  Kesehatan  RI.  (2012). Peraturan  Menteri Kesehatan  Republik  Indonesia  Nomor  007  Tahun  2012 Tentang  Registrasi  Obat  Tradisional (Vol.  10,  Issue  9,  p. 32).
Mehta,  S.  (2003).  Sildenafil  for  pulmonary  arterial hypertension:  Exciting,  but  protection  required. Chest , 123 (4), 989–992.
Rosamah,  E.  (2019).  Kromatografi  Lapis  Tipis  Metode Sederhana dalam Analisis Kimia Tumbuhan Berkayu. In H. A. Khanz (Ed.), Mularawan University Press .
Sarigih,  A.  T.  W.,  Kusuma,  A.  mahardian,  &  Utami,  P. iswati.  (2010).  Analisis  Sildenafil  Sitrat  Pada  Jamu Tradisional  Kuat  Lelaki  Merk  a  Dan  B  Dengan  Metode Kromatografi  Cair  Kinerja  Tinggi. Pharmacy , 07 (02),  24– 34.
Sherma,  J.,  &  Rabel,  F.  (2018).  A  review  of  thin  layer chromatography  methods  for  determination  of  authenticity of  foods  and  dietary  supplements. Journal  of  Liquid Chromatography  and  Related  Technologies , 41 (10),  645– 657.
Sumati,  T.,  Lonita,  B.,  &  Nurtiyah.  (2017). Analisis Sildenafil  Sitrat  dalam  Jamu  kuat  di  Kecamatan  Bogor Barat dan Tanah Sereal dengan Menggunakan Kromatografi Cair Spektrometri Massa .
Waris,  R.,  Kadir, A.,  & Akbar,  C.  (2013).  Identifikasi  Dan Penetapan  Kadar  Sildenafil  Sitrat  Pada  Jamu  Kuat  Lelaki Yang  Beredar  Di  Kota  Makassar. Jurnal  Ilmiah  As-Syifaa , 5 (1), 95–102.