## ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA FLAVONOID DARI
BATANG CIPLUKAN ( Physalis angulata L.)
1 Dadan Ridwanuloh, 2 Fadilah Syarif
1 Prodi Farmasi Fakultas Teknologi dan Ilmu Komputer Universitas Buana Perjuangan Karawang ( dadanridwanuloh@ubpkarawang.ac.id )
2 Prodi Farmasi Fakultas Teknologi dan Ilmu Komputer Universitas Buana Perjuangan Karawang ( fm.15fadilahsyarif@mhs.ubpkarawang.ac.id )

## ABSTRAK
Pemanfaatan tumbuhan di Indonesia banyak digunakan sebagai obat-obatan herbal dan  sebagai  upaya  mempertahankan  kesehatan  masyarakat.  Dari  penelitian  yang telah  dilakukan,  baik  secara in  vitro maupun in  vivo ,  didapatkan informasi  bahwa Ciplukan  memiliki  aktivitas  sebagai  antihiperglikemi,  antibakteri,  antivirus, imunostimulan dan imunosupresan (imunomodulator), antiinflamasi, antioksidan, dan  sitotoksik.  Selain  itu  dari  berbagai  laporan  tumbuhan  ini  memiliki  banyak khasiat tidak lain karena memiliki kandungan senyawa kimia yang fungsinya dapat mengobati  suatu  penyakit,  salah  satu  senyawa  kimia  yang  terkandung  dalam tanaman  Ciplukan  ini  adalah  senyawa  flavonoid.  Berdasarkan  dari  hal  ini  maka dilakukanlah  penelitian  dengan  isolasi  dan  identifikasi  senyawa  flavonoid    yang terkandung  dalam  batang  tanaman  Ciplukan, Physalis  angulata L . Metode  yang digunakan adalah Uji Fitokomia, Kromatograpi Lapis Tipis, Kromatografi Kolom, dan  Spektrofotometri  UV-Vis.  Hasil  uji  fitokimia  menunjukan  bahwa  batang Ciplukan mengandung senyawa Kuinon, flavonoid, saponin, dan monosesquiterpeoid, dan polifenol. Uji KLT dengan eluen n-heksan-etil asetat (7:3) menunjukan kromatogram berwarna biru dengan Rf 0.8 cm. Beberapa fraksi hasil Kromatografi Kolom kemudian di Spektrofotometri UV-Vis menunjukan senyawa tersebut merupakan senyawa flavonoid jenis flavanon.
Kata Kunci : Senyawa Flavonoid, Ciplukan ( Physalis angulata L.).

## ABSTRACT
The use of plants in Indonesia is widely used as herbal medicines and as an effort to maintain public health. One type of plant that is used as herbal medicines is the Ciplukan  plant.  In  addition,  from  various  reports  of  this  plant  has  many  other properties  because  it  contains  chemical  compounds  whose  function  is  to  treat  a disease,  one  of  the  chemical  compounds  contained  in  this  Ciplukan  plant  is  a flavonoid compound. Based on this, a study was conducted with the isolation and identification of flavonoid compounds contained in the stem of the Ciplukan plant, Physalis  angulata  L.  The  methods  used  were  Phytochomia  Test,  Thin  Layer Chromatography,  Column  Chromatography,  and  UV-Vis  Spectrophotometry. Phytochemical test results show that the Ciplukan stem contains Kuinon, flavonoid, saponin, and monosesquiterpeoid compounds, and polyphenols. TLC test with n- hexane-ethyl  acetate  (7:  3)  eluent  showed  a  blue chromatogram  with  Rf  0.8  cm. Several  fractions  of  the  results  of  the  chromatography  column  later  on  UV-Vis Spectrophotometry showed that the compound was a flavonoid type of flavanone. Keynote : Flavonoid, Ciplukan ( Physalis angulata L.).

## 1. PENDAHULUAN
Ciplukan, Physalis  angulata L.  adalah  tumbuhan  asli  Amerika  yang  kini  telah tersebar  secara  luas  di  daerah  tropis  di  dunia.  Ciplukan  mengandung  senyawa- senyawa  aktif  yang  ada  antara  lain  saponin  (pada  tunas),  flavonoid  (daun  dan tunas),  polifenol,  dan  fisalin  (buah),  Withangulatin  A  (buah),  asam  palmitat  dan stearat (biji), alkaloid (akar), Asam Chlorogenik (batang dan daun), tannin (buah), kriptoxantin (buah), vitamin C dan gula (buah) (Ramesh & Mahalakshmi, 2014). Dari penelitian salah satu tanaman yang diteliti sebagai antikanker adalah tanaman Ciplukan ( Physalis  angulata L).
Berdasarkan dari hasil fitokimia beberapa referensi  bahwa kandungan  kimia daun tanaman  Ciplukan  mengandung  senyawa  Fisalin  dan  Withanolid  yang  disinyalir dari  berbagai  laporan  mengandung  aktivitas  antikanker  (Widodo et  al .,  2010). Selain itu dari berbagai laporan tumbuhan ini memiliki banyak khasiat tidak lain karena memiliki kandungan senyawa kimia yang fungsinya dapat mengobati suatu penyakit, salah satu senyawa kimia yang terkandung dalam tanaman Ciplukan ini adalah  senyawa  flavonoid.  Flavonoid  merupakan  salah  satu  metabolit  sekunder yang terdapat pada tumbuhan. Senyawa ini dapat digunakan sebagai anti mikroba, obat infeksi pada luka, anti jamur, anti virus, anti kanker, dan anti tumor. Selain itu flavonoid juga dapat digunakan sebagai anti bakteri, anti alergi, sitotoksik, dan anti hipertensi  (Sriningsih,  2008).  Akan  tetapi,  belum  dilaporkan  jenis  senyawa flavonoid  yang  terdapat  pada  batang  tanaman  Ciplukan.  Oleh  karena  itu  perlu diketahui jenis senyawa flavonoid  yang terdapat pada batang tanaman Ciplukan.

## 2. METODE PENELITIAN

## 3.1 Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimen  yang  dilaksanakan  di  Laboratorium Bahan  Alam  Program  Studi  Farmasi  Fakultas  Teknologi  dan  Ilmu  Komputer, Universitas  Buana  Perjuangan  Karawang    pada  bulan  Desember  2018  sampai Februari 2019.

## 3.2 Alat dan Bahan

## 3.2.1 Alat
Peralatan  yang  digunakan  untuk  identifikasi  dan  karakterisasi  senyawa  metabolit sekunder yaitu seperangkat alat Maserator, rotary evaporator (Heidolph  Laborota 4000), oven, beaker glass, tabung reaksi, batang pengaduk, spatula, botol coklat, kolom kromatografi, neraca analitik, chamber , pipa kapiler, plat KLT, dan lampu UV  (λ  254  dan  366  nm)  sebagai  pengungkap  noda.  Untuk  proses  karakterisasi dengan  spektrum  ultraviolet  digunakan  spektrofotometer  ultraviolet  visible (Shimadzu PharmaSpec UV-1700).

## 3.2.2 Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  untuk  isolasi  senyawa  metabolit  sekunder  ialah batang  tanaman  ciplukan  yang  didapatkan  dari  daerah  karawang  timur.  Bahan- bahan kimia yang digunakan adalah etanol 96% sebagai pelarut saat maserasi, etil asetat, dan n-heksan sebagai eluen pada kromatografi lapis tipis dan sebagai pelarut untuk  kromatografi  kolom.  Absorben  yang  digunakan  pada  kromatografi  kolom adalah silika gel 60 F 254 (0,063-0,200 mm), untuk analisa kromatografi lapis tipis (KLT) digunakan plat jadi yaitu DC-Alufolien Kieselgel 60 F 254 Merck (20x20 cm), kertas saring dan aluminium foil. Bahan yang digunakan untuk uji fitokimia yaitu pereaksi  Mayer  dan  Dragendorf  dipakai  untuk  identifikasi  alkaloid,  pereaksi Lieberman  Burchad (anhidrida  asetat  dan  asam  sulfat  pekat) untuk  identifikasi terpenoid  dan  steroid,  (asam  klorida  pekat  dan  bubuk  Magnesium)  untuk identifikasi flavonoid dan besi (III) flourida (FeCl 3 ) untuk identifikasi fenolik.

## 3. PEMBAHASAN

## 4.1 Determinasi Tanaman
Determinasi tumbuhan dimaksudkan untuk memperoleh kepastian jenis tumbuhan yang digunakan. Determinasi ini dilakukan di Institut Teknologi Bandung Fakultas Sekolah Ilmu dan Teknologi Hayati. Determinasi dilakukan dengan mencocokkan tanaman  dengan  ciri-ciri  morfologi  batang  ciplukan  yang  digunakan  penelitian dengan  acuan  pustaka.  Hasil  determinasi  Nomor  6325/11.CO2.2/PL/2018 menunjukan bahwa tanaman yang digunakan adalah Physalis angulata L.

## 4.2 Ekstraksi Sampel
Hasil  ekstraksi  mendapatkan  ektrak  kental  13.06  gram  beraroma  tidak  khas  dan berwarna hijau kehitaman. Persentase rendemen ekstrak yang didapatkan sebesar 6.5%, hal ini tidak sesuai dengan literatur yang menyantakan bahwa rendemen tidak kurang dari 9.65% (FHI, 2010). Faktor yang mempengaruhi jumlah rendemen yang dihasilkan adalah metode ekstraksi yang digunakan yaitu maserasi, karena maserasi tidak  menggunakan  bantuan  panas  (tidak  adanya  bantuan  dari  gaya  lain),  pada metode maserasi ini  hanya  menggunakan  perendaman  sehingga  tekanan  osmosis pelarut  kedalam  padatan  berlangsung  statis  meskipun  telah  remaserasi  dengan pelarut (Nurasiah, 2009).

## 4.3 Parameter Standar
Uji  parameter  standar  dilakukan  terhadap  simplisia  batang  Ciplukan  ( Physalis angulata L.)  yang  meliputi  susut  pengeringan  dan  kadar  air.  Hasil  uji  susut pengeringan  merupakan  indikator  tentang  besarnya  senyawa  yang  hilang  pada proses  pengeringan.  Hasil  uji  susut  pengeringan  adalah  8%  hasil  tersebut  sesuai dengan  literatur  bahwa  hasil  susut  pengeringan  tidak  boleh  melebihi  10%  (FHI, 2008).
Adapun hasil uji kadar air adalah 4.8%, hasil tersebut sesuai dengan literatur bahwa kadar air dalam ekstrak tidak boleh melebihi 10% (Depkes. RI, 2008), dan tidak boleh lebih dari 11.7% (FHI, 2010). Hal ini bertujuan untuk menghindari cepatnya pertumbuhan jamur dalam ekstrak (Soetarno dan Soediro, 1997).

## 4.4 Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  dilakukan  terhadap  simplisia  dan  ekstrak  etanol  batang Ciplukan.  Adapun  hasil  uji  skrining  fitokimia  serbuk  dan  ekstrak  etanol  batang Ciplukan yang diperoleh selanjutnya dilakukan uji pereaksi secara kualitatif seperti pada tabel 4.1 dan 4.2.

## Tabel 4.1 Hasil Uji Pereaksi Simplisia Batang Ciplukan
Uji Pereaksi Warna Ket Pustaka Hasil Polifenol FeCl 3 Coklat kehitaman Kuning kecoklatan, ada endapan - Kuinon NaOH Kuning tua/jingga Kuning tua + Saponin HCl Busa 1 cm selama 1 menit Busa 1 cm selama 1 menit + Flavonoid Mg, HCl Merah/ jingga/ kuning Kuning + Monoseskuiter Penoid Vanilin Sulfat Warna-warna Kuning kehijauan +
Keterangan: (+) = terdeteksi, (-) = tidak terdeteksi
Tabel 4.2 Hasil Uji Pereaksi Ekstrak Pekat Batang Ciplukan
Uji Pereaksi Warna Ke t Pustaka Hasil Polifenol FeCl 3 Coklat kehitaman Coklat kehitaman + Kuinon NaOH Kuning tua/jingga Kuning tua + Saponin HCl Busa 1 cm selama 1 menit Busa 1 cm selama 1 menit + Flavonoid Mg, HCl Kuning/ hijau- hitam Kuning + Monoseskuiter Penoid Vanilin Sulfat Warna-warna Kuning kehijauan +
Keterangan: (+) = terdeteksi, (-) = tidak terdeteksi
Hasil  uji  skrining  fitokimia  menggunakan  simplisia  dan  ekstrak  etanol  batang Ciplukan  seperti  yang  tercantum  dalam  tabel  di  atas  menunjukan  bahwa  batang Ciplukan mengandung
senyawa Kuinon, Saponin, Flavonoid, Monoseskuiterpenoid, dan Polifenol. Hal ini dibuktikan dengan hasil uji simplisia batang  ciplukan  yang  mengandung  senyawa  Kuinon,  Saponin,  Flavonoid, Monoseskuiterpenoid,    sedangkan  ekstrak  etanol  batang  Ciplukan  juga mengandung  senyawa  Kuinon,  Saponin,  Flavonoid,  Monoseskuiterpenoid,  dan Polifenol.   Adanya  perbedaan  hasil  yang  didapatkan  pada  uji  Skrining  Fitokimia terhadap simplisia dan ekstrak dapat dipengaruhi oleh pelarut yang digunakan saat ekstraksi,  yaitu  pelarut  etanol  96%,  sehingga  diduga  pelarut  tersebut  dapat melarutkan  senyawa  polifenol,  yang  dapat  dibuktikan  pada  pengujian  Skrining Fitokimia  menggunakan  ekstrak  menghasilkan  positif  mengandung  senyawa polifenol.

## 4.5 Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Dari beberapa uji eluen yang dilakukan terhadap ekstrak kental Etanol, diperoleh bahwa  eluen  n.heksana-etil  asetat  (7:3)  merupakan  eluen  yang  baik.  Hal  ini ditunjukan  dengan  penampakan  noda  yang  jelas  dan  terpisah  dengan  baik.  Akan tetapi  pada  hasil  uji  KLT  ini  diduga  masih  mengandung  berbagai  komponen senyawa yang ditunjukan dengan banyaknya spot noda yaitu spot noda berwarna biru dengan nilai Rf 0.8 cm, spot noda berwarna kuning dengan nilai Rf 0.5 cm, dan spot noda berwarna ungu dengan nilai Rf 0.5 cm.
Gambar 4.1. Kromatogram Hasil KLT ekstrak etanol dari batang Ciplukan. Keterangan:  Fase  Diam:  Lempeng  KLT,  Fase  Gerak:  n-heksana-etil  asetat  (7:3) dilihat  pada  lampu  UV  dengan  panjang  gelombang  366  nm,  Penampak  bercak: Situborat.

## 4.6. Isolasi / Fraksinasi
Isolasi  adalah  proses  pengambilan  atau  pemisahan  senyawa  bahan  alam  dengan menggunakan  pelarut  yang  sesuai  (Djamal,  2008).  Isolat  pada  vial  ke  1-11  yang telah  diuji  dengan  KLT  dengan  perbandingan  eluen  n.heksana-etil  asetat  (7:3) menghasilkan    spot  tunggal  yang  berwarna  biru,  spot  ini  dilihat  pada lampu  UV pada  panjang  gelombang  366  nm  sehingga  senyawa  tersebut  diduga  merupakan senyawa murni golongan flavonoid. Hal ini sesuai dengan pendapat (Achmad, S.A, 1986) yang menyatakan bahwa jika senyawa yang di uji dengan KLT memberikan noda  tunggal,  maka  senyawa  hasil  isolasi  sudah  murni.  Profil  kromatogram identifikasi golongan senyawa flavonoid menunjukan bercak berwarna biru ketika dibaca pada panjang gelombang 366 nm (Marliana et al. , 2005). Kromatogram yang dihasilkan dari fraksi-fraksi hasil Kromatografi Kolom terlihat pada gambar 4.2.
Senyawa Target
a)
b) a) Kromatogram Hasil KLT (cahaya tampak), b)
Kromatogram Hasil KLT.
Gambar 4.2. Kromatografi Lapis Tipis (Vial Ke1-11) Keterangan: Fraksi Vial Ke-1 sampai 11, Fase Diam: Plat Silika Gel GF254, Fase Gerak: Campuran n.heksana-etil asetat (7:3), dilihat pada lampu UV dengan panjang gelombang 366 nm.
Adapun nilai Rf dari noda yang nampak dapat dilihat pada Tabel 4.3.
Tabel 4.3 Nilai Rf dari noda yang nampak Vial Ke- Nilai Rf 1-9 0,7 cm 10 0,68 cm 11 0,9 cm
Nilai  Rf  dapat  didefinisikan  sebagai  jarak  yang  ditempuh  oleh  komponen  dibagi dengan  jarak  yang  ditempuh  oleh  pelarut.  Senyawa  dengan  nilai  Rf  yang  rendah lebih  terdistribusi  pada  fase  diamnya,  sedangkan  nilai  Rf  yang  tinggi  akan terdistribusi pada fase geraknya. Noda dengan nilai Rf yang rendah bersifat lebih polar dibandingkan dengan niali Rf yang tinggi. Oleh karena itu bilangan Rf selalu lebih kecil dari 1 cm. Untuk memaksimalkan pemisahan rentang nilai Rf terletak antara 0.2 sampai 0.8 cm.
Senyawa target

## 4.7 Spektrofotometri UV-Vis
Isolat  yang  diperoleh  dari  hasil  KLT  diidentifikasi  secara  kualitatif  dengan Spektrofotometer UV-Vis. Spektrofotometri UV-Vis digunakan untuk mengetahui nilai  absorbansi  senyawa  pada  panjang  gelombang  maskimal.  Pengukuran spektrum dilakukan pada panjang gelombang 200-400 nm. Spektrum khas senyawa flavonoid terdiri atas dua maksimal pada rentang 240-285 nm (pita II) dan 300-550 nm  (pita  I).  Senyawa  flavonoid  golongan  flavanon  menurut  Markham  (1988) memberikan rentang serapan pada panjang gelombang 275-295 nm pada pita II dan 300-330 nm (bahu) pada pita I, hasil analisis menggunakan Spektrofotometri UV- Vis yang dilakukan Markham dapat dilihat pada gambar 4.3.
Gambar 4.3. Spektrum UV-Vis Flavonoid dengan Pelarut MeOH (Markham, 1988).
Hasil analisis menggunakan Spektrofotometri UV-Vis, senyawa isolat dalam fraksi n-heksana menunjukan 2 pita pada serapan maksimum 229,263 nm pada pita II dan bentuk  bahu  pada  301,902  nm  yang  merupakan  pita  I.  Senyawa  hasil  isolasi menunjukan  bahwa  batang  Ciplukan  diduga  mengandung  senyawa  flavonoid golongan flavanon, hal tersebut diperlihatkan dengan bentuk spektrum yang hampir sama dengan spektrum flavanon yang yang terdapat dalam pustaka. Hasil analisis menggunakan Spektrofotometri UV-Vis dapat dilihat pada Gambar 4.4.

## Gambar 4.4. Spektrum Isolat menggunakan Spektrofotometri UV-Vis
Keterangan:  Spektrum  Isolat  Fraksi  Kromatografi  Kolom,  Larutan  Baku: n.heksana, Interval: 25 cm.
Hasil identifikasi tersebut juga dibuktikan dengan uji Skrining Fitokimia, dimana tujuan  dilakukan  Uji  Skrining  Fitokimia  ini  adalah  untuk  membuktikan  isolat tersebut merupakan senyawa flavonoid berdasarkan regaen yang tepat. Fraksi yang digunakan untuk uji Spektrofotometri UV-Vis diuji dengan penambahan serbuk Mg dan  0,5  ml  HCl  lalu  dikocok  kuat,  adanya  larutan  yang  berwarna  kuning  yang merupakan  positif  mengandung  senyawa  flavonoid  (Herborne,  1978).  Hasil  Uji fitokimia pada isolat dapat dilihat pada Gambar 4.5.
a) Blangko Fraksi Isolat b) Hasil Uji Skrining Fitokimia (Senyawa Flavonoid)

## Gambar 4.5. Hasil Fitokimia Fraksi Kromatografi Kolom
Keterangan: Uji Skrining Fitokimia pada isolat murni Kromatografi Kolom, Reagen: serbuk Mg dan 0.5 ml HCl.

## 4. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  pada  batang  Ciplukan  ( Physalis angulata L . ) maka dapat diambil kesimpulan sebagai berikut:
Terdapat senyawa Flavonoid pada batang Ciplukan. Hal tersebut dibuktikan dengan Uji  Fitokimia  baik  pada  simplisia  atau  ekstrak  batang  Ciplukan.  Adapun  jenis senyawa flavonoid yang terdapat pada batang Ciplukan adalah senyawa Flavanon. Hal tersebut dibuktikan dengan hasil Uji Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan Uji Spektrofotometri UV-Vis.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
Achamad,  S.A.  1986.  Kimia  Organik  Bahan  Alam,  Materi  4:  Ilmu  Kimia Flavonoid. Karunia Universitas Terbuka. Jakarta. Hlm 39.
Djamal,  Rusdi.  (2008).  Prinsip-prinsip  Dasar  Isolasi  Dan  Identifikasi.  Padang: Universitas Baiturrahmah.
Harborne,  J.B.  1987.  Metode  Fitokimia  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis Tumbuhan. Penerbit ITB. Bandung.
Kusumaningtyas  et  al.  2015.  Potential  Of  Ciplukan  (Physalis  angulate  L.)  As Source Of Functional Ingredient. Procedia Chemistry 14, hlm 367-372.
Markham,  K.R.,  1988,  Cara  Mengidentifikasi  Flavonoid.  Diterjemahkan  Oleh Kosasih Pandawinata, 15, Penerbit ITB, Bandung.
Marliana,  D.S.,  Venty,  S.,  dan  Suyono.  (2005).  Skrining  Fitokimia  Dan  Analisis Kromatografi Lapis Tipis Komponen Bahan Alam Buah Labu Siam (Sechium edule Jacq. Swartz.) Dalam Ekstrak Etanol. Jurnal Biofarmasi. 3(1): 29.
Nurhayati  T,  Aryanti  D,  Nurjanah.  2009.  Kajian  Awal  Potensi  Ekstrak  Spons Sebagai Antioksidan. Jurnal Kelautan Nasional 2:43-51.
Ramesh,  B.  N.,  Mahalakshmi,  A.  M.  2014. Physalis  angulata L.:  An Ethanopharmacological Review. Indo American Journal of Pharm Research 4 (03), hlm. 1479-1486.
Soetarno,  S.  dan  Soediro,  L.S.,  1997,  Standarisasi  Mutu  Simplisia  Dan  Ekstrak Bahan Obat Tradisional, Presidium Temu Ilmiah Nasional Bidang Farmasi.
Supachok, P. & Vajrodaya, S., Comparative Phytochemistry Of Physalis angulata L. (Family Solanaceae ). Short Comunication. Departemetn of Botani,  Faculty of Science, Kasetsart University Bangkok.