## PENGARUH PEMBERIAN EKSTRAK ETANOL
UMBI BAWANG DAYAK ( Eleuthrine Palmifolia (L.) Merr )
SECARA ORAL PADA MENCIT BALB/c  TERHADAP PENCEGAHAN PENURUNAN JUMLAH NK SEL DAN CD 8 +

## Nelly Meiliana
Program Studi S2 Imunologi, Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga Surabaya JL. Airlangga No. 4-6 Surabaya (60286) Telp. 031-5041566, Fax. (031) 5029856 Email: nelly.meiliana@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Penentuan kemampuan ekstrak etanol umbi bawang dayak ( Eleutherine Palmifolia ( L .) Merr ) sebagai imunoprotektor  dan  imunomodulator  terhadap  mencit  BALB/c  melalui  pengamatan  jumlah  sel pengekspresi  CD  56 + dan  CD  8 + dengan  menggunakan  metode  Imunohistokimia.  Analisis  statistik dengan  Anova  satu  arah  dilanjutkan  dengan  uji  Beda  Nyata  Terkecil  (BNT)  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  umbi  Bawang  Dayak  menunjukkan  hasil  beda  bermakna  (signifikan)  pada  sel pengekspresi  CD  8 + sedangkan  sel  pengekspresi  CD  56 + menunjukkan  hasil  tidak  berbeda (nonsignifikan).  Hal  ini  berarti  ekstrak  etanol  umbi  Bawang  Dayak  berpotensi  sebagai imunomodulator  dan  imunoprotektor  pada  sel  sitotoksik  (CD  8 + )  untuk  imunitas  seluler.  Ekstrak etanol  umbi  Bawang  Dayak    berdasarkan  jumlah  rerata  meningkat  pada  sel  pengekspresi  CD  56 + , namun masih sangat rendah sehingga hasil uji tidak signifikan.
Kata kunci : imunomodulator, imunoprotektor, bawang dayak, ekstrak etanol

## ABSTRACT
Determination  ability  of  the  onion  bulb  extract  dayak  (Eleutherine  Palmifolia  (L.)  Merr)  as immunoprotector and immunomodulators to mice BALB/c by observation number of CD 56+ and CD 8+ expression cells using Immunohistochemistry. Statistical analysis by one-way ANOVA followed by Least Significant Difference test (LSD) showed that the ethanol extract of onion bulbs Dayak showed significantly different results (significant) on CD 8+ cells while CD 56+ expression cells showed no different results (nonsignificant). This means that the ethanol extract of onion bulbs Dayak potentially as an immunomodulator and immunoprotector on cytotoxic cells (CD 8+) for cellular immunity. The ethanol extract onion bulbs Dayak based on the amount the average increase in CD 56+ expression cells, but there is still so low that the test results are not significant.
Keywords: immunomodulator, imunoprotektor, onions dayak, ethanol extract

## PENDAHULUAN
Pemberian  kortikosteroid  yang  juga disebut  steroid  mengubah  sistem  kekebalan secara  umum.  Pengunaan  obat  ini  jangka panjang  dapat  menekan  imun  sistem  dan gangguan  pada  tulang  (Sumarwoto,  2004). Imunoprotektor  dan  imunomodulator  adalah bahan (obat) yang dapat mempertahankan dan mengembalikan  ketidakseimbangan  sistem imun  (Chairul  dan  Praptiwi,  2008).Flavonoid berpotensi  sebagai  imunostimulan  karena mampu  meningkatkan  produksi  IL-2  yang terlibat  dalam  aktivasi  dan  proliferasi  sel  T. Flavonoid  dapat  menginduksi  Th1  untuk menghasilkan  IFN-γ.  IFN-γ  juga  merupakan mediator poten dalam regulator perkembangan sel  Th.  Interferon gama (IFN-γ)  termasuk keluarga limfokin  karena  IFN  ini  dihasilkan  oleh  limfosit  T. Hubungan ini dapat dilihat dengan koefisienkorelasi  yang  cukup  kuat  antara  IFN-γ dengan  NK  sel  dan  CD8 + . Sel  NK  yang diaktifkan  juga  merupakan  sumber  berbagai sitokin yang mengatur sel sistem imun lainnya. Sel  NK  memberikan  pertahanan  pertama sampai  sistem  imun  spesifik  seperti  sel  T CD8 + dan  antibodi  dapat  bekerja.  Sel  NK dapat memproduksi IFN-gamma dan TNF-alfa yang merupakan sitokin imunoregulator poten. Meningkatnya produksi IFN-γ meningkatkan komponen immune  surveillance  yaitu aktivitas sel NK  yang  berfungsi  sebagai  pertahanan  lini terdepan, juga peningkatan fungsi sel T sitotoksis  (CD  8 + ).  Senyawa  bioaktif  pada beberapa  ekstrak  herba  diantaranya  Flavonoid dapat  meningkatkan  proliferasi sel limfosit atau sel T,  sehingga  bawang  dayak  dapat  digunakan sebagai  imunomodulator  (Dewi  et  al,  2013). Masyarakat  Dayak  di  Kalimantan  Tengah menggunakan  tanaman  bawang  dayak  untuk meningkatkan  daya  tahan  tubuh.  Tanaman obat  ini  dapat  digunakan  sebagai  bahan  yang bersifat  modulasi  imun  sistem,  tetapi  proses pencegahan  penurunan  imun  sistem  dari tanaman  bawang  dayak  terhadap  modulasi imun  sistem  masih  belum  dapat  dijelaskan  ( Abdullah,  2015).  Berdasarkan  itu  peneliti berupaya untuk melakukan penelitian berkaitan  antara  tanaman  bawang  dayak dengan modulasi imun sistem.

## METODE PENELITIAN

## Instrumen Penelitian
1.    Alat  pemeliharaan  mencit  :  Kandang mencit  dari  kotak  plastik,  ram  kawat,  alas kandang, tempat makanan dan botol air.
2.  Alat untuk pembedahan mencit : kotak kaca dan penutup kaca pembiusan, scalpel (pisau bedah),  surgical  scissor  (gunting  bedah) dan pinset.
3.  Alat  untuk  melarutkan  dan  pemberian ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak  : timbangan  mikro  Toledo,  tabung  falcon, alumunium  foil,  vortex  mixer,  sonde lambung, spuit 1 ml terumo dan rak tabung reaksi.
4.  Mikroskop.

## Bahan Penelitian
1.  Hewan  coba  dengan  kriteria  jenis  mencit ( Mus musculus ) : BALB/c berjenis kelamin
:  jantan,  umur  12  minggu  dengan  berat badan  25  –  30  gram,  kesehatan  mencit dapat diamati dengan gerakan cukup lincah, tidak lesu, kulit bersih dan tanpa luka, mata terang dan tidak sayu.
2.  Jenis  makanan  pellet  CP  511  dan  jenis minuman aquadestila.
3.  Perawatan  mencit  pemberian  makanan pellet,  pemberian  minum  secara  ad  libitum 5  ml/ekor/4  hari,penggantian  sekam  untuk alas  tidur  2  hari  sekali,  untuk  sanitasi kandang  dibersihkan  setiap  hari  dengan suhu  sesuai  dengan  suhu  ruang,  ventilasi dan  sinar  matahari  yang  cukup  dan  tidak lembab.
4.  Pembuatan ekstrak etanol bawang dayak. Umbi  bawang  dayak  dikupas  kulit  luarnya dicuci bersih dan diiris tipis-tipis, kemudian diangin-anginkan hingga kering.
Selanjutnya  irisan  umbi  bawang  dayak tersebut  dibuat  serbuk.  Ditimbang  500 gram  serbuk  umbi  bawang  dayak  kering, ditambahkan  2  ml  etanol  kemudian disimpan  selama  24  jam  (  serbuk  bawang dayak  dilarutkan  dalam  2  ml  etanol  96  % dengan  metode  maserasi  yaitu  bahan direndam  etanol  1  x  24  jam  hingga etanolnya  menguap,  lalu  disaring  untuk diambil  fibrat  nya).  Besoknya  ditampung kemudian  dirotavator.  Ada  sisa  sari ditambahkan 1,5 liter etanol, didiamkan 24 jam.  Ampas  bawang  dayak  dimaserasi
kembali  selama  1  x  24  jam  kemudian diambil  filtratnya.  Besoknya  diambil  lagi, dirotavator  kembali,  sisanya  diberi  etanol 1,5  liter,  hal  ini  dilakukan  selama  3  hari berturut-turut.  Pembagian  filtrat  dilakukan 3 kali kemudian semua filtrat dikumpulkan menjadi  satu,  lalu  diuapkan  dengan  alat rotary  evaporator  buchi R-200  melalui penurunan  tekanan  pada  suhu  40  –  45 derajat  celcius,  sehingga  diperoleh  ekstrak kental  bawang  dayak.  Selanjutnya  dibuat sediaan ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak konsentrasi  50  mg/kgBB  dengan  cara diambil  0,1  ml  EEUBD  larutkan  bersama 0,1 ml larutan CMC Na + 0,5 %. Dibuat juga sediaan ekstrak  etanol  umbi  bawang  dayak konsentrasi  100  mg/kgBB  dengan  cara diambil  0,2  ml  EEUBD  larutkan  bersama 0,1  ml  larutan  CMC  Na + 0,5  %.  Terakhir dibuat sediaan ekstrak etanol umbi bawang dayak  konsentrasi  200  mg/kgBB  dengan cara  diambil  0,3  ml  EEUBD  larutkan bersama 0,1 ml larutan CMC Na + 0,5 %. 5.  Pembuatan larutan Metilprednisolon berdasarkan dosis oral 25 mg/kgBB Pembuatan larutan induksi metilprednisolon berupa 0,08 mg
metilprednisolon  /30  grBB  mencit/  hari dilarutkan  bersama  0,2  ml  larutan  CMC
Na + 0,5 %.
6.  Ketamin ( Ketamine HCl / 2-(0- chlorophenil) – 2 (methylamino) cyclohexanone  hydrochloride )  dengan dosis 0,025 mg/10 grBB mencit berdasarkan dosis 10 mg/kgBB. 7.  Larutan CMC Na + 0,5%
8.  Formalin 10 %, etanol 70%, 80%, 99%, xylol, Paraffin cair, kaset, cover slip, base mould, beker glass , gelas ukur, termometer, cutter , pinset panjang, tissue processor auto technicon”, hot plate, cold plate , paraffin  dispenser untuk membuat preparat.
9. Rotary microtome, disposable blad, kuas cat air kecil nomor 1, Tissue flotation bath, kaca obyek, diamond pencil, staining rack, hot plate, aquadestilata. 10. Monoklonal antibodi terhadap NK sel yaitu CD 56 + dan CD 8 + ( Rat Anti Mouse ).
Ekstrak yang diteliti berupa ekstrak etanol dari umbi  Bawang  Dayak.  Jumlah  mencit  yang
digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  30 ekor  dan  dibagi  secara  acak  menjadi  5 kelompok, masing-masing kelompok terdiri dari  6  ekor.  Kelompok  pertama  kontrol negatif  diberi  CMC  Na,  kelompok  kedua diberi  Metilprednisolon,  kelompok  ketiga, keempat  dan  kelima  diberi  ekstrak  etanol umbi  bawang  dayak  berturut-turut  dengan dosis  50,  100  dan  200  mg/kgBB  bersama Metilprednisolon  dengan  dosis  0,08  mg/30 grBB  mencit/hari.  Pemberian  perlakuan dilakukan  1  kali  sehari  pada  sore  hari. Sebelum diberikan perlakuan, semua mencit  dalam  setiap  kelompok  pelakuan diaklimatisasi  selama  1  minggu.  Proses perlakuan  berlangsung  selama  14  hari  dan pada  pagi  hari  ke  15  dilakukan  terminasi untuk  pengambilan  sampel  KGB  mencit. Pengamatan  jumlah  sel  pengekspresi  CD 56 + dan  CD  8 + dengan  menggunakan metode  Imunohistokimia.  Analisis  statistik dengan Anova satu arah dilanjutkan dengan uji Beda Nyata Terkecil (BNT).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengaruh Pemberian  Ekstrak  Etanol  Umbi Bawang Dayak (EEUBD) Terhadap Pencegahan Penurunan Jumlah NK sel (CD
56 + )
Sel  yang  mengekspresikan  CD  56 + akan  berwarna  kecoklatan  dengan  perbesaran 400 x pada 10 lapang pandang.
Gambar 5.1.2
Mikroskopi sel penghasil CD 56 + pada KGB mencit kelompok K1. Tampak sel yang menghasilkan CD 56 + berwarna cokelat. Perbesaran 400 kali, pewarnaan IHC.
Gambar 5.1.3 Rerata jumlah sel pengekspresi CD 56 + pada setiap Kelompok Perlakuan
Tabel 5.1.2 Perbedaan jumlah sel pengekspresi CD 56 + antar kelompok perlakuan
ANOVA; F=1,358; harga p=0,277
Pengaruh Pemberian  Ekstrak  Etanol  Umbi
Bawang Dayak (EEUBD) Terhadap Pencegahan Penurunan Jumlah Sel Pengekspresi CD 8 +
Sel  yang  mengekspresikan  CD  8 + akan berwarna kecoklatan dengan perbesaran 400 x pada 10 lapang pandang.
Gambar 5.2.2 Mikroskopi sel penghasil CD 8 + pada KGB mencit kelompok K1. Tampak sel yang menghasilkan CD 8 + berwarna cokelat. Perbesaran 400 kali, pewarnaan IHC.
Gambar 5.2.3 Rerata jumlah sel pengekspresi CD 8 + pada setiap Kelompok Perlakuan
Kelompok Rerata SD Minimum Maksimum K1 CMC Na 3,52 a 2,82 1,00 7,90
K2
Metiprednisolon (MP) 7,18 b 1,24 5,50 8,30
K3 MP +
EEUBD 50 mg/KgBB 7,18 b 1,48 5,50 9,30 K4 MP + EEUBD 100 mg/KgBB 8,80 b 2,12 5,80 11,70
K5 MP +
EEUBD 200 mg/KgBB 11,55 c 3,11 7,40 14,90
Tabel 5.2.2 Perbedaan jumlah sel pengekspresi CD 8 + antar kelompok perlakuan
ANOVA; F=9,890; harga p<0,0001
Catatan:    perbedaan  huruf  superscript  pada rerata menunjukkan adanya perbedaan bermakna dengan menggunakan  uji  komparasai  ganda Least  Significant  Difference (harga p<0,05)
Imunodefisiensi  merupakan  defek  pada  salah satu atau lebih komponen imunitas tubuh yang dapat  meninmbulkan  gejala  klinis,  bahkan sampai mengancam nyawa. Terdapat beberapa karakteristik  utama  imunodefisiensi,  yaitu memiliki  hasil  akhir  berupa  peningkatan suspektibilitas  terhadap  infeksi,  peningkatan suspektibilitas  terhadap  kanker,  peningkatan insidens  autoimunitas,  dan  disebabkan  oleh defek  maturasi/aktivasi  limfosit  (Kumar et  al , 2010).
Imunodefisiensi  dapat  dibagi  menjadi kelainan  imunodefisiensi  primer,  yang  hampir selalu  ditentukan  oleh  faktor  genetik,  dan imunodefisiensi  sekunder,  yang  dapat  muncul sebagai  komplikasi  dai  kanker,  infeksi, malnutrisi,  atau  efek  samping  imunosupresan, radiasi,  atau  kemoterapi.  Sebagian  besar penyakit  imunodefisiensi  primer  ditentukan secara  genetik  dan  mempengaruhi  bagian humoral  dan/atau  seluler  dari imunitas  adaptif (dimediasi  oleh  sel  limfosit  B  dan  T),  atau
dapat juga mempengaruhi mekanisme defensif dari  imunitas  bawaan  (sel  NK,  fagosit,  atau komplemen).  Defek  pada  imunitas  adaptif umumnya  disubklasifikasikan  pada  komponen yang  terutama  terkait  (sel  B/T/keduanya). Imunodefisensi  sekunder  dapat  dijumpai  pada individu  dengan  berbagai  kondisi.  Penyebab yang  paling  sering  adalah  virus  HIV.  Secara umum,  imunodefisiensi  sekunder  disebabkan oleh dua mekanisme utama, yaitu imunosupresi  yang  muncul  akibat  komplikasi dari penyakit atau keadaan  lain, dan imunodefisiensi iatrogenik yang muncul sebagai  efek  samping  dari  suatu  terapi  atau perlakuan lain (Abbas dan Lichtman, 20012).
Beberapa obat diberikan untuk menyupresi respon imun, seperti
kortikosteroid  dan  siklosporin.  Selain  itu, kemoterapi  pada  penderita  kanker  juga memliki  efek  samping  imunosupresi  berupa efek  sitotoksik  pada  limfositselama  beberapa saat,  sehingga  pasien  kanker  yang  baru menjalani  kemoterapi  akan  mengalami  satu periode  dimana  dia  akan  lebih  mudah terinfeksi suatu mikroorganisme (Kumar et al , 2010).
Meningkatkan sistem imun bisa dilakukan  dengan  pemberian  suatu  senyawa yang dapat memodulasi sistem imun (imunomodulator).  Senyawa  yang  mempunyai bioaktifitas sebagai agen imunostimulan adalah golongan senyawa polisakarida, terpenoids,  alkaloid  dan  polifenol  (Wagner, 1985).  Senyawa  bioaktif  pada  beberapa  ekstrak herba diantaranya Flavonoid berpotensi sebagai imunostimulan karena mampu meningkatkan  produksi  IL-2  yang  terlibat dalam aktivasi dan proliferasi sel limfosit atau sel T (Dewi et al, 2013). Bahan ini terkandung dalam salah satu tanaman berkhasiat obat dari Kalimantan  Tengah  yaitu  tanaman  bawang dayak (Yusni, 2008; Muliatie, 2013). Sehingga pada  penelitian  ini  digunakan  tumbuhan Bawang  Dayak  ( Eleutherine  palmifolia Merr. ) sebagai  bahan  uji  untuk  membuktikan  efek terhadap peningkatan sistem imun seluler pada mencit  model  imunodefisiensi  khususnya pencegahan  penurunan  jumlah  NK  Sel  (CD 56 + ) dan CD 8 + .
Pada penelitian ini menggunakan sampel  mencit  strain  BALB/c  sebagai  model
Kelompok
Rerata SD Minimum Maksimum K1 CMC Na 6,23 2,77 2,10 9,40
K2 Metiprednisolon (MP) 7,08 1,71 4,90 9,40 K3 MP +
EEUBD 50 mg/KgBB 7,67 1,79 5,90 10,90
K4 MP + EEUBD 100 mg/KgBB 8,92 1,17 7,70 10,60 K5 MP + EEUBD 200 mg/KgBB 8,43 3,15 6,10 14,60
imunosupresi dengan pemberian obat kortikosteroid (Metilprednisolon). Penggunaan Metilprednisolon  pada  penelitian  ini  dengan alasan  pertimbangan  obat  tersebut  banyak digunakan  dan  merupakan  kortikosteroid  oral yang  paling  sering  digunakan  dalam  terapi supresi  penyakit  jangka  panjang  (PIO  Nas, 2015).
Kelompok  I  merupakan  perlakuan kontrol  tanpa  perlakuan  ekstrak  etanol  umbi bawang dayak dan tanpa diinduksi metilprednisolon  hanya  diberi  CMC  Na + 0,5 %.  Kelompok  II  merupakan  kontrol  positif yaitu  kelompok  perlakuan  yang  diinduksi kortikosteroid  jenis  metilprednisolon  0,08 mg/30  grBB  mencit/  hari  terlarut  dlm  0,2  ml aquades  tanpa  perlakuan  ekstrak  etanol  umbi bawang  dayak.  Sedangkan  kelompok  III-V dengan perlakuan ekstrak etanol umbi bawang dayak  dengan  dosis  0,25  ml/30  g  berat  badan mencit konsentrasi 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB  dan  200  mg/kgBB,  diberikan  sekali sehari  selama  14  hari  bersamaan  pemberian induksi metilprednisolon pada sore hari secara per-oral (sonde intragastrik)

## 6.1    Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Etanol Umbi  Bawang  Dayak  (EEUBD)  Terhadap Pencegahan Penurunan Jumlah NK Sel
Hasil  penelitian  yang  tampak  pada Gambar  5.1.3  menunjukkan  bahwa  pemberian Ekstrak Etanol Umbi Bawang Dayak (EEUBD)    dosis  0,25  ml/30  g  dengan konsentrasi  50  mg/kgBB,  100  mg/kgBB  dan 200  mg/kgBB  bersama  Metilprednisolon dengan  dosis  0,08  mg/30  grBB  mencit/  hari yang  diberikan  sekali  sehari  selama  14  hari, mampu mempertahankan jumlah sel pengekspresi  CD  56 + pada  semua  kelompok mencit  yang  diinduksi  EEUBD  (Tabel  5.1) dibandingkan dengan kontrol negatif (K1/CMC  Na)  dan  K2  (Metilprednisolon) yaitu  pemberian  induksi  metilprednisolon dengan  dosis  0,08  mg/30  grBB  mencit/  hari. Pada  induksi  metilprednisolon  (K2)  terjadi peningkatan  jumlah  sel  pengekspresi  CD  56 + dibandingkan dengan kontrol negatif (K1), tapi pemberian  EEUBD  bersama  metilprednisolon (K3-K4-K5) meski terjadi peningkatan dibandingkan K1 dan K2 namun tidak banyak sehingga  dianggap  mampu  mempertahankan
atau mencegah penurunan jumlah sel pengekspresi  CD  56 + meski  pada  K4  terjadi sedikit  peningkatan  .  Ini  ditunjukkan  dari grafik  rerata jumlah  tertinggi  sel  pengekspresi CD  56 + pada  setiap  kelompok  perlakuan, dimana  semakin  tinggi  dosis  EEUBD  (K5) yang  diinduksikan  mampu  mempertahankan jumlah  CD  56 + tidak  jauh  melebihi  jumlah kelompok K1.
Pada  penggunaan  metilprednisolon (steroid)  dalam  kurun  waktu  lama  dapat menyebabkan  gangguan  sistem  kekebalan tubuh  (penurunan  imunitas)  dan  penghentian penggunaan  steroid  akan  berdampak  buruk jika  tanpa  tapering  off.  Rangsangan  steroid dapat  mengganggu  sistem  kekebalan  tubuh dan  dampak  buruk  yang  ditimbulkannya kemudian  menstimulasi  sel  T  dari  kelenjar getah  bening  (KGB)  menghasilkan  interferon- γ  (INF-γ)  yang  mengaktivasi  NK  sel  dan  CD 8 + (Campbell dalam Sulistiyana, 2015). NK sel dan  CD  8 + berfungsi  membunuh  sel-sel  yang terinfeksi  dan  tidak  diinginkan  oleh  tubuh (Abbas dan Lichtman, 2012).
Berdasarkan hasil jumlah rerata (Gambar  5.1.3)  menunjukkan  bahwa  induksi EEUBD dosis 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB dan 200  mg/kgBB  bersama  metilprednisolon  pada mencit  selama  14  hari  secara  oral  mampu meningkatkan jumlah sel pengekspresi CD 56 + dibandingkan kelompok perlakuan K1 dan K2. Didapatkan  adanya  lonjakan  peningkatan jumlah sel pengekspresi CD 56 + pada K4 yaitu pemberian  induksi  EEUBD  100  mg/kgBB bersama  metilprednisolon pada  mencit  selama 14  hari  secara  oral.    Peningkatan  jumlah  sel pengekspresi  CD  56 + dengan  penambahan EEUBD mampu mengurangi dampak gangguan  imunitas  akibat  Metilprednisolon sehingga  mampu  berperan  dalam  imunitas seluler.
Hasil tersebut di atas ternyata berdasarkan  uji  statistik  tidak  bermakna (signifikan)  dengan  nilai  p>0,05  meski  pada Gambar  5.1.3  jumlah  rerata  menunjukkan peningkatan  jumlah  rerata  sel  pengekspresi CD  56 + untuk  K3,  K4  dan  K5  dibandingkan K1 dan K2. Pada tabel 5.1.1 uji normalitas ada peningkatan  sel  pengekspresi  CD  56 + untuk K4  yaitu  pemberian  induksi  EEUBD    dosis 100  mg/kgBB  bersama  metilprednisolson dengan  nilai  p  0,821 . Meski  hasil  ini  secara statistik  tidak  menghasilkan  perbedaan  yang
bermakna namun dimungkinkan EEUBD dosis 100 mg/kgBB yang diberikan mampu memenuhi  standar  karena  hasil  yang  ada menunjukkan peningkatan jumlah sel pengekspresi  CD  56 + menyamai  hasil  kontrol K1  (nilai  p  0,856)  sehingga  dianggap  mampu mencegah  terjadinya  penurunan  sel  CD  56 + dan  dapat  berperan  sebagai  imunoprotektor maupun imunomodulator yang dapat memodulasi dan mengontrol produksi Sel NK.
Sel  NK  berperan  penting  dalam imunitas nonspesifik pada patogen intraseluler yang  memiliki  kemampuan  mengenal  dan membunuh sel abnormal, serta menghancurkan  sel  yang  mengandung  virus atau  sel  neoplasma.  Sel  NK  diaktifkan  oleh interferon  yang  biasanya  diproduksi  dan dilepaskan  oleh  sel  yang  terinfeksi  virus  itu sendiri..  Interferon  mempunyai  pengaruh dalam  mempercepat  pematangan  dan  efek sitolitik Sel NK. Interferon juga menyebabkan peningkatan  daya  tahan  terhadap  virus  pada sel-sel  yang  tidak  terinfeksi  (Abbas  dan Lichtman, 2012).
Penelitian  ini  dapat  menjadi  solusi untuk  menentukan  standar  dosis  terapi  yang nantinya digunakan untuk memodulasi produksi  Sel  NK pada  manusia    yang mengalami  gangguan  sistem  imun  akibat kortikosteroid    dengan  mengkonversi  hasil yang  didapatkan  dari  penelitian  ini  sehingga mampu  memodulasi  dan  mengontrol  produksi NK  sel  tetap  dalam  kondisi  normal  atau mendekati  normal  agar  sistem  imun  tetap stabil. Jika  terjadi  imunodefisiensi  berat  maka pemberian  EEUBD  dengan  dosis  bertahap dapat ditingkatkan sehingga mampu memodulasi dan mengontrol produksi  CD 56 + dan  diharapkan  imunitasnya  kembali  stabil atau normal.

## 6.2  Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Etanol
Umbi  Bawang  Dayak  (EEUBD)  Terhadap Pencegahan Penurunan Jumlah CD 8 +
Hasil penelitian ini berdasarkan Gambar  5.2.3    menunjukkan jumlah rerata  sel pengekspresi  CD  8 + meningkat  pada  setiap perlakuannya  dibandingkan  dengan  K1  yaitu mencit  yang  hanya  diberikan  CMC  Na  secara oral.  Pemberian  metilprednisolon  pada  K2 menyebabkan peningkatkan jumlah sel pengekspresi  CD  8 + dibandingkan  K1. Pada
kelompok  perlakuan  dengan  Ekstrak  Etanol Umbi  Bawang  Dayak  (EEUBD)    dosis  50 mg/kgBB  (K3)  mampu  mempertahankan jumlah  sel  pengekspresi  CD  8 + memiliki kisaran  yang  sama  dengan  rerata  K2  yang hanya  diinduksi  Metilprednisolon.  Kelompok perlakuan  K4  dengan  Ekstrak  Etanol  Umbi Bawang Dayak (EEUBD)  dosis 100 mg/kgBB terjadi peningkatan rerata jumlah sel pengekspresi  CD  8 + dibandingkan  dengan kelompok  mencit  yang  tidak  diinduksi  yaitu hanya  diberikan  CMC  Na  secara  oral  (K1), kelompok  mencit  yang  hanya  diinduksi Metilprednisolon  (K2).  Lonjakan  peningkatan tampak  pada  K5  yaitu  kelompok  mencit  yang diinduksi Ekstrak Etanol Umbi Bawang Dayak (EEUBD)    dosis  200  mg/kgBB  bersama Metilprednisolon  dengan  dosis  0,08  mg/30 grBB mencit/ hari yang diberikan sekali sehari selama  14  hari  memiliki  jumlah  rerata  sel pengekspresi  CD  8 + sangat  tinggi  sehingga tampak  peningkatan  bermakna  dibandingkan dengan  kelompok  K1-K4.  Hal  tersebut  secara penghitungan  uji  statistik  menghasilkan  nilai p<0,05 yang menunjukan hasil signifikan yaitu berbeda bermakna.
Pada Tabel 5.2.2 menunjukkan jumlah rerata sel pengekspresi CD 8 + pada K2 (7,18 b ) yang hanya diinduksi Metilprednisolon memiliki jumlah rerata CD 8 + yang sama besar dengan  kelompok  K3  (7,18 b )  yang  diinduksi EEUBD    dosis  50  mg/kgBB  bersama Metilprednisolon  dengan  dosis  0,08  mg/30 grBB  mencit/  hari.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  EEUBD  dosis  50  mg/kgBB  mampu mempertahankan jumlah rerata CD 8 + , dengan mencegah penurunan maupun peningkatan CD 8 + . Dapat disimpulkan bahwa induksi EEUBD dosis  50  mg/kgBB  bersama  Metilprednisolon dengan  dosis  0,08  mg/30  grBB  mencit/  hari selama  14  hari  memenuhi  standar  terapi  yang diinginkan.
Peningkatan jumlah rerata CD 8 + pada kelompok  K4  dan  K5  menunjukkan  bahwa semakin tinggi dosis EEUBD yang diinduksikan bersama
Metilprednisolon
mampu mempertahankan jumlah dan meningkatkan  CD  8 + .    Peningkatan  yang signifikan  dari  jumlah  rerata  CD  8 + pada kelompok  K5  menghasilkan  lonjakan  yang sangat  jauh  dibandingkan  K4,  hal  ini dimungkinkan  dosis  yang  diberikan  yaitu EEUBD    dosis  200  mg/kgBB  bersama
Metilprednisolon tmerupakan dosis terapi yang dapat dipertimbangkan
untuk memicu/memodulasi peningkatan sel pengekspresi  CD  8 + secara  cepat  pada  kondisi status imun yang rendah.
Berdasarkan hasil uji normalitas (Gambar  5.2.1)  tampak  bahwa  induksi EEUBD dosis 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB dan 200  mg/kgBB  bersama  metilprednisolon  pada mencit selama 14 hari secara oral menunjukkan  hasil  yang  hampir  sama  pada nilai  p  yaitu  K3  (p=0,924),  K4  (p=0,964)  dan K5  (p=0,948).  Hal  ini  menunjukkan  khasiat EEUBD yang mampu mempertahankan peningkatkan  jumlah  sel  pengekspresi  CD  8 + dalam  jumlah  yang  hampir  sama  (seragam) dibandingkan kelompok perlakuan K1 (p=0,878)  dan  K2  (p=0,539).  Hasil  ini  secara statistik  dianggap  memiliki  perbedaan  yang bermakna  dimana  EEUBD  dosis  50  mg  yang diberikan  sudah  memenuhi  standar  terapi karena mampu mencegah terjadinya penurunan  jumlah  sel  pengekspresi  CD  8 + . Pemberian  EEUBD  dosis  100  mg  dan  200 mg/kgBB  bersama  metilprednisolon  mampu meningkatkan  jumlah  sel  pengekspresi  CD  8 + dibandingkan kelompok K1 dan K2. Peningkatan  yang  terjadi menunjukkan  bahwa pemberian  EEUBD  dosis  50,100  dan  200 mg/kgBB dapat berperan sebagai imunoprotektor  dan  imunomodulator  yang dapat  memodulasi  dan  mengontrol  produksi sel sitotoksik (CD 8 + ).
Berdasarkan  hasil  uji  normalitas  pada Tabel  5.2.1  Kelompok  K2  memiliki  nilai  p  = 0,539  sangat  rendah  dibandingkan  dengan kelompok perlakuan  lainnya.  Pada  K3
(p=0,924),  K4  (p=0,964)  dan  K5  (p=0,948) tampak  3  kelompok  tersebut  memiliki  nilai  p yang  hampir  sama  dan  tidak  jauh  dari  nilai  p yang dimiliki K1 (p=0,878) sebagai kelompok kontrol, sehingga jumlah sel pengekspresi CD 8 + dalam kisaran jumlah yang sama dan secara statistik  berbeda  bermakna  bila  dibandingkan dengan  kelompok  perlakuan  yang  hanya  di induksi  Metilprednisolon  yaitu  K2  (p=0,539) dengan  hasil  uji  statistik  nilai  p  =  0,0001 (p<0,05).
Pemberian Metilprednisolon (K2=7,18 b )  selama  14  hari  diperoleh  jumlah rerata  CD  8 + lebih  tinggi  dibandingkan kelompok  yang  hanya  diberikan  CMC  Na peroral  (K1=3,52 a ).  Pemberian  EEUBD  dosis
50  mg/kgBB  (K3)  selama  14  hari  diperoleh rerata  jumlah  CD  8 + tidak  lebih  tinggi dibandingkan  K2.    Secara  statistik  hasil  ini berbeda  bermakna  dengan  nilai  p  =  0,0001. Selanjutnya  pemberian  EEUBD  dosis  100 mg/kgBB  (K4)  dan  dosis  200  mg/kgBB  (K5) diperoleh  rerata  jumlah  CD  8 + lebih  tinggi daripada  kelompok  K3  (7,18 b )  namun  secara statistik hasil berbeda bermakna dengan nilai p (K4)  =  0,000  dan  p  (K5)  =  0,000  (p<0,05). Hal  ini  menunjukkan  bahwa  pemberian EEUBD dosis 50 mg/kgBB, 100 mg/kgBB dan dosis  200  mg/kgBB  pada  mencit  yang diinduksi  bersama  metilprednisolon pada penelitian  ini  dapat  meningkatkan  jumlah  CD 8 + secara  signifikan.    Hal  ini  kemungkinan karena dosis
EEUBD
yang diberikanmerupakan  dosis  yang  baik  sehingga mampu  meningkatkan  jumlah  CD  8 + secara signifikan.
Penggunaan  kortikosteroid  yang  lama mampu menurunkan jumlah limfosit T sitolitik (CD8+), sehingga rasio limfosit T sitolitik (CD 8+)  terhadap  limfosit  T  helper  (CD4+) menurun  dengan  akibat  kepekaan  terhadap infeksi  virus,  bakteri,   dan  jamur  meningkat. Terjadi  kegagalan fungsi dari aktivitas supresi CD8+  sel  T  suppressor  dan  sel  NK  terhadap aktivitas  sel  T.  Hal  ini  menimbulkan imunodefisiensi sehingga tubuh tidak  mampu mengontrol  imunitas  dan  menjadi    salah    satu faktor yang menyebabkan penyakit berlangsung terus (Hinrichs CS et al, 2010). Flavonoid  merupakan  salah  satu  zat aktif  yang  terkandung  dalam  beberapa tanaman  herbal.  Salah  satu  tanaman  tersebut adalah Bawang Dayak ( Eleutherine palmifolia Merr. ).  Penelitian  Abdullah  (2015) menemukan  bahwa  senyawa  flavonoid  pada ekstrak  Bawang  Dayak  dapat  menstimulasi sistem imun, antiviral, antikanker, mengurangi resiko  penyakit  kardiovaskuler,  anti  inflamasi dan penangkal radikal bebas.  Stimulasi sistem imun ini dilakukan dengan cara meningkatkan aktivitas  limfosit  T  yang  berakibat  pada meningkatnya  produksi  NK  sel  dan  CD  8 + . Dengan  demikian  kandungan  flavonoid  dalam Bawang  Dayak  nampaknya  juga  berpengaruh terhadap  peningkatan  jumlah  NK  sel  dan  CD 8 + .
Pada  penelitian  ini  menggunakan
Ekstrak Etanol Umbi Bawang Dayak
(EEUBD)  sebagai  bahan  uji,  dimana  secara
empiris mampu merangsang peningkatan daya tahan  tubuh.  Pemberian  EEUBD  dosis  50 mg,100  mg  dan  200  mg/kgBB  bersama metilprednisolon  pada  mencit  selama  14  hari ternyata  mencapai  rerata  jumlah  CD  8 + jauh lebih  tinggi  dari  pada  rerata  jumlah  CD  8 + pada  kelompok  K1  dan  K2.    Hal  ini menunjukkan bahwa pemberian EEUBD dosis 50 mg/kgBB dapat berperan sebagai imunoprotektor  dan  imunomodulator  yang dapat  memodulasi  dan  mengontrol  produksi CD  8 + .  Sedangkan  pemberian  EEUBD  dosis 100  mg  dan  200  mg/kgBB  dapat  berperan sebagai  imunoprotektor  dan  imunomodulator yang  dapat  memodulasi  sekaligus  mengontrol produksi CD 8 + .
Hal  ini  menjadi  solusi  jika  terjadi imunodefisiensi berat maka pemberian EEUBD dengan dosis bertahap dapat ditingkatkan sehingga mampu memodulasi dan mengontrol  produksi  CD  8 + dan  diharapkan imunitasnya kembali stabil atau normal.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas  AK,  Lichtman  AH,  Pillai  S.  Cellular and  Molecular  Immunology.  7 th Ed. 2012. Philadelphia : Elsevier. Pg.445-58
Abdullah.  2015.  Bawang  Dayak  untuk Penyembuhan  AUTIS  dan  Zat
Fitokimia  pada  Bawang  Dayak. http://www.trubus-online.co.id . Jakarta 2015. Diakses pada
tanggal 3 Maret 2015.
Anonim.  2008. Tanaman Obat Tradisional Bawang Dayak  ( Eleutherine americana
Merr.) . http://kalteng.litbang.deptan.  go. id/ Berita. htm . Palangkaraya, 2008.  Diakses  pada  tanggal  31 Oktober 2.
Arung  E  T,  Kusuma  I  W  et  al  /  Nat  Med
(Tokyo).  2009. Evaluation  of medicinal  plants  from  Central Kalimantan for antimelanogenesis /2009  Oct;63(4):473-80.  Epub
2009 Jul 18.
Azis, Abdul Latief 2006. Penggunaan
Kortikosteroid  Di  Klinik  (The Use  of  Corticosteroid  In  Clinics). http://old.pediatrik.com/buletin/2 0060220-uk51j3-buletin.pdf . Jakarta 2006.
Baratawidjaja, Karnen Garna, 2010. Imunologi Dasar.  Edisi  Kedelapan.  Jakarta: Universitas Indonesia Budiarto E, 2001. Biostatistika untuk Kedokteran dan Kesehatan Masyarakat. EGC: Jakarta Chairul,  Praptiwi,  2008.  Uji  Efektivitas Imunomodulator Tiga Jenis Zingiberaceae  Secara  In-Vitro Melalui Pengukuran Aktivitas Sel Makrofag Dan Kapasitas Fagositosis. Jakarta: Puslit Biologi LIPI, 1-7
Corallini F, Secchiero P, Beltrami AP, Cesselli D, Puppato E, Ferrari R, Beltrami CA,  Zauli  G.  2010. TNF-alpha modulates the migratory response of  mesenchymal  stem  cells  to TRAIL . Department of Morphology  and  Embryology,
University  of  Ferrara;.  Diakses
2010-07-29.
Dewi  L.K,  Widyarti  S,  Rifai  M,  2013.
Pengaruh Pemberian Ekstrak Etanol  Daun  Sirsak  (Annona muricata Linn.) terhadap
Peningkatan  Jumlah  Sel  T  CD4+ dan  CD8+  pada  Timus  Mencit (Mus  musculus) .  Jurnal  Biologi. Malang:  Universitas  Brawijaya,
1-5
Diperta  Tan.  Pangan  &  Hortikultura  Prov.
Kalimantan  Barat.  2009.  Bawang Dayak  (Eleutherina  Americana). Kalimantan  Barat.  Diakses  pada tanggal 13 Agustus 2009.
Febrinda  A  E,  Astawan  M,  Wresdiyati  T,  and Yuliana N D. 2013. http:// Kapasitas  antioksidan  dan inhibitor alfa glukosidase.blogspot.com/2013/4/
ekstrak umbi bawang dayak html . Diakses pada April 2013.
Grammatikos  AP  (2008).  "The  genetic  and environmental  basis  of  atopic diseases". Annals  of  Medicine 40
(7):
482–95. doi : 10.1080/07853890802082096
. PMID 18608118 .
Hinrichs  CS,  Palmer  DC,  Rosenberg  SA,
Restifo NP. 2010. Glucocorticoids  do  not  inhibit antitumor  activity  of  activated CD8+  T  cells .  National  Cancer Institute (NCI), National Institutes of Health (NIH). Diakses 2010-08-05.
Hemmer  C  J,  Lehr  H  A,  Westphal  K,
Unverricht  M,  Kratzius  M,  and
Reisinger  E  C.    2005.    Infection and Immunity, p 1764-1770.
Janeway, Charles ; Paul Travers; Mark
Walport; Mark Shlomchik (2001).
Immunobiology;  Fifth  Edition .
New  York  and  London:  Garland
Science. pp. e–book. ISBN 978-0-
8153-4101-7 .
Kumar  V,  Abbas  AK,  Fausto  N,  Aster  JC.
Robbins  and  Cotran  pathologic basis  of  disease.  8th  Ed.  2010.
Philadelphia : Elsevier. Pg.230-5
Madigan MT, Martinko JM, Dunlap PV, Clark
DP. 2008. Biology of Microorganisms 12th edition. San Francisco: Pearson.
Mata  Kuliah  Biologi,  2012.  Respon  Imun.
Mata kuliah biologi. blogspot.com/2012/06/respon- imun.html .  Jakarta  2015.  Diakses
pada tanggal 24 Juni 2012. PIO Nas, 2015. Glukokortikoid.
pionas.pom.go.id/book/63kortikos teroid/  glukokortikoid. Jakarta
2015.
Ponnusamy  Y,  Chear  N  J  Y,  Ramanathan  S,
Murugaiyah  V,  and  Lai  C  S. 2013. Antioxidant and antibacterial properties of Malaysian ferns used traditionally againts  infection.  J.  Nat.  Prod. Plant Resour. 3(6): 14-18.
Prescott  LM,  Harley  JP,  Klein  DA.  2002.
Microbiology.  5th  Ed.  Boston: McGraw-Hill. Rhen T., Cidlowski J.A. , 2005, Antiinflammatory Action of Glucocorticoids — New Mechanisms  for  Old  Drugs,
Mechanisms of Disease , Vol.353 :
1711-1723
Sudiana  IK,  2005.  Teknologi  Ilmu  Jaringan dan  Imunohistokimia.  Jakarta: Sagung Seto, 1-46
Sudjarwo S A.  2005.  The Potency of Piperine as  Antiinflamatory  and  Analgesic in  Rats  and  Mice.    Folia  Medica Indonesiana, vol.41, no.3.
Sumarwoto  T,  2004.  Efek  Pemberian  Ekstrak
Kedelai Dalam Menghambat Penurunan Kepadatan Tulang Pada Terapi Kortikosteroid Jangka  Panjang  Tikus  Putih
Jantan ( Rattus norvegicus ). Tesis, Universitas Airlangga, Surabaya.
Sulistyana, M I, 2015. Pemanfaatan Polisakarida Krestin Dari Coriolus versicolor Sebagai Imunomodulator Pada Mus musculus Yang Terpapar
Mycobacterium tuberculosis Berdasarkan Indikator Konsentrasi  IL-4  Dan  Histologi Limpa. Skripsi, Universitas
Airlangga, Surabaya.
Veldkamp  JF,  2007.  Flora  Malesiana  Buletin.
National  Herbarium  Netherland
Universiteit  Leiden  branch  The
Netherlands, 54-55.
Wagner  H,  1985.  Immunostimulants  from medicinal  plants.  In  Advances  in
Chinese medicinal materials research  (Eds.)  H.M.  Chang; H.W.  Yeung;  W.W.  Tso  and  A. Koo.  World  Scientific  Publ.  Co. Singapura : 159-170.
Warta Penelitian dan Pengembangan Tanaman Industri,  Volume  15  Nomor  3, Desember 2009.
Yusni    MA,  2008.  Perbedaan  pengaruh pemberian fraksi etanolik bawang dayak  (Eleutherine  Palmifolia  L.
Merr) dengan 5-Fluorouracil terhadap penghambatan pertumbuhan  galur  sel  karsinoma kolon  HT29  dan  Ekspresi  p53 Mutan. Tesis. Universitas Sebelas Maret. Indonesia