## Fingerprints, Antioxidant Activity, and Anti-Tyrosinase of Fungus Comb Extract
Sidik Jari, Aktivitas Antioksidan, dan Anti-Tirosinase Ekstrak Fungus comb
Trisni Untari Dewi 1 , Diva Putri Diposani 2 , Eti Rohaeti 2,3 , Dodi Nandika 4,5 , Lina Karlinasari 4 , Arinana Arinana 4 , Djoko Santoso 6 , Lucia Dhiantika Witasari 7 , Yanti Rachmayanti 8 , Irmanida Batubara 2,3 *
1 Faculty of Medicine, IPB University, Bogor, Indonesia
2 Department of Chemistry, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, IPB University, Bogor, Indonesia
3 Tropical Biopharmaca Research Center, IPB University, Bogor, Indonesia 4 Department of Forest Products, Faculty of Forestry and Environment, IPB University, Bogor, Indonesia
5 Biotechnology Center, IPB University, Bogor, Indonesia 6 Faculty of Medicine, Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia 7 Faculty of Agricultural Technology, Gadjah Mada University, Yogyakarta, Indonesia 8 Division of Biochemistry, Institut Teknologi Bandung, Bandung, Indonesia
*Corresponding author: ime@apps.ipb.ac.id; (+62)8121105101
Received July 15, 2023; Accepted November 8, 2023; Available online December 22, 2023

## ABSTRACT
Fungus comb is a structure made by termite colony Macrotermitinae with lots of potential because it contains secondary metabolites such as steroids, terpenoids, and saponins and compounds containing antioxidant and anti-tyrosinase properties. This study aimed to determine fungus comb extracts' fingerprint pattern, antioxidant capacity, and anti-tyrosinase activity. Thin layer chromatography (TLC) was used to determine fingerprint patterns. The resulting TLC pattern was processed with ImageJ and converted into a densitogram. The fungus comb was extracted with n-hexane and ethyl acetate. TLC results showed that fungus comb extracts contain steroids and terpenoids and have antioxidant properties. The antioxidant capacity assay was carried out with 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl reagent. N-hexane extract had an antioxidant capacity value of 9.07 mg ascorbic acid equivalent (AAE)/g extract, while ethyl acetate extract had 6.04 mg AAE/g extract. Anti-tyrosinase activity assay was carried out with L-tyrosine and L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA) as substrates. N-hexane extract had a better anti- tyrosinase activity with IC50 of 1804 µg/mL for L-tyrosine and 6784 µg/mL for L-DOPA.
Keywords : antioxidant, anti-tyrosinase, fingerprint analysis, ImageJ, TLC

## ABSTRAK
Fungus  comb merupakan  suatu  struktur  yang  dibuat  oleh  koloni  rayap  Macrotermitinae  dengan  banyak  potensi  karena mengandung metabolit sekunder seperti steroid, terpenoid, dan saponin, serta senyawa yang memiliki sifat antioksidan dan anti-tirosinase. Tujuan penelitian ini adalah menemukan pola sidik jari serta menentukan kapasitas antioksidan dan aktivitas anti-tirosinase ekstrak fungus comb . Kromatografi lapis tipis (KLT) digunakan untuk menggambarkan pola sidik jari. Pola KLT yang dihasilkan diolah dengan ImageJ dan diubah menjadi densitogram. Fungus comb diekstraksi dengan pelarut n-heksana dan etil asetat. KLT kromatogram menunjukkan ekstrak mengandung steroid dan terpenoid serta memiliki sifat antioksidan. Kapasitas antioksidan diuji dengan pereaksi 2,2-difenil-1- pikrihidrazil. Ekstrak n-heksana memiliki nilai kapasitas antioksidan 9.07  mg  asam  askorbat  ekuivalen  (AAE)/g  ekstrak  sedangkan  ekstrak  etil  asetat  memiliki  nilai  6.04  mg  AAE/g  ekstrak. Aktivitas anti-tirosinase diuji dengan substrat L-tirosina dan L-3,4-dihidroksifenilalanin (L-DOPA). Ekstrak n-heksana memiliki aktivitas anti-tirosinase lebih baik dengan nilai IC 50 1804 µg/mL untuk substrat L-tirosina dan 6784 µg/mL untuk substrat L- DOPA.
Kata Kunci : analisis sidik jari, antioksidan, anti-tirosinase, ImageJ, KLT

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  tropis  yang memiliki  lingkungan  yang  cocok  untuk  sejumlah besar spesies rayap bawah tanah, termasuk anggota subfamili  Macrotermitinae  (Isoptera:  Termitidae). Rayap  tanah  dari  subfamili  Macrotermitinae memiliki  sebaran  geografis  yang  luas  di  Indonesia. Keberadaan  kelompok  rayap  ini  lebih  dominan dibandingkan  subfamili  lainnya.  Anggota  subfamili ini hidup dalam struktur sosial dan sarangnya berupa gundukan  dengan  nodul  yang  rumit  di  dalamnya. Sarang  ini  memiliki fungus  comb yang  menjadi sumber makanan bagi anggota koloni, substrat untuk pertumbuhan  jamur Termitomyces  sp. (Arshad  & Schnitzer,  1987).  Oleh  karena  itu,  rayap  dari subfamili  Macrotermitinae  sering  disebut  sebagai rayap penumbuh jamur (fungus) (Subekti, 2010).
Studi efikasi ekstrak fungus comb yang dilakukan Nandika  et  al.  (2023),  disimpulkan  ekstrak  etil asetat, metanol, dan air dari bioaktivitas fungus comb gundukan Macrotermes  gilvus Hagen  mengandung senyawa  aktif  yang  menghambat  pertumbuhan Aspergillus  foetidus .  Dalam  penelitian  tersebut, bioaktivitas  ekstrak  jamur  jengger  diuji  terhadap jamur  busuk  putih Schizophyllum  commune Fr  dan dihasilkan  ekstrak  etil  asetat  pada  konsentrasi berkisar  antara  2  sampai  6%  dan  ekstrak  metanol pada  konsentrasi  6%  mempunyai  bioaktivitas  yang tinggi  terhadap  S.  komune.  Studi  lainnya  juga dilakukan  oleh  Witasari  et  al.  (2022),  ekstrak  n- heksana, etil asetat, metanol, dan air dari fungus comb yang diisolasi dari gundukan rayap Indomalayan ( M. gilvus Hagen)  memiliki  aktivitas  antibakteri  dan antijamur    melawan  mikroorganisme  pembusuk makanan  termasuk Escherichia  coli ATCC  25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Staphylococcus aureus ATCC 25923, Aspergillus flavus , dan Aspergillus niger .  Aktivitas  antibakteri  terhadap  semua  bakteri uji dengan nilai konsentrasi hambat minimum (MIC) dan konsentrasi bakterisida minimum (MBC) masing- masing sebesar 0.39 dan 0.78 mg/mL, dan dihambat A. flavus dan A. niger dengan nilai MIC 0.78 mg/mL. Potensi  lainnya  dari  senyawa  bioaktif  subfamili rayap endemik Indonesia, Macrotermitinae (Isoptera: Termitidae) dilakukan studi oleh Rachmayanti et al. (2022),  Penelitian  yang  bertujuan  untuk menganalisis  potensi  jamur  jengger  dari  spesies subfamili Macrotermitinae Indonesia sebagai sumber antioksidan  disimpulkan  aktivitas  antioksidan tertinggi  terdapat  pada  ekstrak  metanol  yang dianalisis  dengan    TEAC  (Kapasitas  antioksidan
setara Trolox). Ekstrak jengger jamur dari gundukan rayap  Indo-Malaya  ( M.  gilvus (Hagen,  1858))  yang dimasukkan  ke  dalam  film  kitosan  juga  dapat menghambat  menghambat E.  coli (ATCC  25922), S.  aureus (ATCC  25923),  dan P.  aeruginosa (ATCC 27853),  yang  dapat  diterapkan  sebagai  alternatif ramah  lingkungan  untuk  memperpanjang  umur simpan produk makanan (Witasari et al., 2023).
Menurut Caesario et al. (2023) Termitomyces sp. yang  merupakan  spesies  jamur  di  hutan  tropis  di Afrika  dan  Asia  Tenggara  diteliti  dapat meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh,  yang  dapat terlihat  pada  hasil  penelitian  tersebut.  Hasil penelitian  yang  dilakukan  uji  pada  hewan  coba dihasilkan profil hematologi pada hewan coba yang mendapat  ekstrak  etil  asetat fungus  comb ( Termitomyces  sp .)  yang  diinduksi  penyuntikan lipopolisakarida (LPS)  intraperitoneal tidak disertai tanda  respon  inflamasi.  Menurut  Nandika  et  al., (2021), fungus  comb dari  sarang M.  gilvus memiliki sifat  anti-fungi  terhadap  jamur  pewarna  kayu A.  foetidus yang  menyebabkan  perubahan  warna signifikan terhadap kayu karet. Kolonisasi dari fungi tersebut menyebabkan terjadinya proses mineralisasi pada  kayu,  yang  mengakibatkan  terjadinya diskolorasi. Diskolorasi pada kayu dipengaruhi oleh kristalisasi  melanin  di  sekitar  hifa  jamur. Melanogenesis  atau  proses  pembentukan  melanin sangat dipengaruhi oleh enzim tirosinase yang dapat mengkatalisis sintesis melanin (Pillaiyar et al., 2017). Semakin  aktif  enzim  tirosinase  maka  intensitas melanogenesis  semakin  bertambah  (Zaidi  et  al., 2016).
Fungus  comb kaya  akan  asam  amino  seperti arginin  yang  terlibat  dalam  sintesis  protein, ureagenesis, sistem imun, aktivitas antioksidan, dan respons stress. Asam benzenapropanoat, 3,5-bis(1,1- dimetiletil)-4-hidroksi-metil  ester  juga  ditemukan dalam  ekstrak  n-heksana fungus  comb .  Kandungan senyawa-senyawa  tersebut  membuat fungus  comb berpotensi sebagai antioksidan alami (Nandika et al., 2021).  Pada  penelitian  ini  bertujuan  untuk membuktikan  aktivitas fungus  comb sebagai  agen antioksidan  dan  anti-tirosinase  alami  melalui  uji antioksidan dan uji anti-tirosinase.

## METODE
Bahan  uji fungus  comb diperoleh  dari  sarang rayap M. gilvus di lokasi Hutan Percobaan Yanlappa (Y), kampus Institut Pertanian Bogor (BD), dan Hutan Cifor (SC). Bahan lainnya juga digunakan etil asetat
(Merck),  n-heksana  (Merck),  asam  sulfat  (Merck), akuades,  2,2-difenil-1-pikrihidrazil  (DPPH),  enzim tirosinase, L-tirosina dan L-3,4-dihidroksifenilalanin (Sigma Aldrich, Steinheim, Jerman). Sampel fungus comb sebanyak 5 g diekstraksi menggunakan 10 mL pelarut. Sampel fungus comb pertama kali diekstraksi dengan  pelarut  n-heksana  untuk  mendapatkan  zat ekstraktif  non-polar.  Ekstraksi  dilanjutkan  pada ampas  hasil  ekstraksi  sebelumnya  dengan menggunakan pelarut etil asetat untuk mendapatkan ekstrak  semipolar.  Ekstraksi  dari  masing-masing pelarut dilakukan selama 3x24 jam (Nandika et al., 2021).
Proses selanjutnya dilakukan penotolan ekstrak sampel fungus comb pada pelat dengan menggunakan pelat  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  silika  gel  60  F 254. Penotolan sampel menggunakan KLT aplikator semiotomatis,  yaitu  Camag  Linomat  5.  Pelat kemudian  dikembangkan  dengan  fase  gerak diklorometana  di  dalam  bejana  kromatografi.  Pita- pita  yang  dihasilkan  selanjutnya  diamati  di  bawah sinar lampu UV dengan panjang gelombang (λ) 254 dan 366 nm. Pelat KLT kemudian disemprot dengan asam sulfat 10% dan dikeringkan dalam oven pada suhu 100°C selama 10 menit dan diamati di bawah sinar lampu UV dengan panjang gelombang 366 nm. (Syafi’i et al., 2018).
Kromatogram ekstrak fungus comb diolah dengan peranti lunak ImageJ. Kromatogram ditandai dengan bentuk  kotak.  Proses  penandaan  pita  komponen dilakukan untuk setiap pita yang terpisah. Setiap pita yang  telah  ditandai  diubah  menjadi  densitogram. Setelah itu, dilakukan proses smoothing sebanyak 10 kali pada kromatogram KLT dan dibuat densitogram. Setiap puncak pada densitogram menghasilkan nilai area  under  curve  (AUC).  Nilai  AUC  ini  dihasilkan berdasarkan intensitas warna yang ditimbulkan oleh masing-masing  pita  pada  kromatogram  KLT.  Nilai AUC yang dihasilkan diplot dengan retardation factor (Rf) masing- masing pita. Nilai Rf pada sumbu X dan nilai AUC pada sumbu Y. (Fitrianti, 2011).
Proses  selanjutnya  dilakukan  penentuan kapasitas antioksidan. Proses ini ditentukan dengan pereaksi  DPPH.  Sebanyak  100  µL  ekstrak ditambahkan  dengan  100  µL  DPPH  (5  mg  DPPH dalam 100 mL etanol p.a.) ke dalam masing-masing sumur  dari  mikroplat.  Setelah  itu,  mikroplat diinkubasi  selama  30  menit  pada  ruang  gelap. Absorbans  diukur  menggunakan microplate  reader pada  panjang  gelombang  517  nm.  Konsentrasi ekstrak yang digunakan, yaitu 1000, 500, 250, 125, dan  62,5  µg/mL  Asam  askorbat  digunakan  sebagai
kontrol  positif.  Kapasitas  antioksidan  dilaporkan sebagai mg asam askorbat ekivalen (AAE) /g ekstrak. (Batubara et al., 2020).
Penelitian  ini  juga  melakukan  penentuan aktivitas tirosinase. Ekstrak fungus comb sebanyak 70 μL  (1000,  3000,  5000,  7000,  dan  9000  µg/mL) dimasukkan  ke  dalam  mikroplat  dan  ditambahkan 30 μL enzim tirosinase. Pelat disimpan dalam ruang inkubasi  (37  ºC)  selama  5  menit.  Substrat  2  μM L-tirosina  atau  2  μM  L-DOPA  sebanyak  110  μL ditambahkan  ke  pelat.  Pelat  kemudian  diinkubasi selama  30  menit.  Nilai  absorbans  ditentukan menggunakan microplate  reader pada  panjang gelombang  492  nm.  Aktivitas  anti-tirosinase dilaporkan sebagai konsentrasi penghambatan enzim tirosinase 50% (IC 50 ). Asam kojat digunakan sebagai kontrol positif (Batubara et al., 2010).

## HASIL & PEMBAHASAN

## 1. Sidik Jari Koromatografi Lapis Tipis
Hasil
pemisahan
menggunakan eluen diklorometana untuk enam sampel yang terdiri atas tiga  sampel  ekstrak  n-heksana  dan  tiga  sampel ekstrak  etil  asetat  dapat  dilihat  pada Gambar  2 . Sampel  dengan  kode  Y  diperoleh  dari  Hutan Percobaan Yanlappa, kode BD dari kampus Institut Pertanian  Bogor,  dan  kode  SC  dari  Hutan  Cifor. Sampel fungus  comb ditemukan  di  area  dengan kelembapan tinggi, yaitu 75% hingga 90%. ImageJ digunakan  untuk  mengubah  kromatogram  menjadi densitogram.  ImageJ  digunakan  karena  merupakan platform  yang  sering  digunakan  untuk  pemrosesan gambar,  biasanya  digunakan  dalam  bidang  sains. ImageJ  dikembangkan  oleh  Wayne  Rasband  di Institut Kesehatan National (NIH) di Amerika Serikat. ImageJ  memiliki  banyak  kegunaan,  seperti memisahkan warna primer (merah, hijau, biru) suatu gambar,  mengubah  hasil  kromatogram  gambar  ke dalam bentuk plot, atau melakukan pengukuran dari suatu  gambar  (Rueden  et  al.,  2017).  ImageJ  dapat menampilkan,  mengedit,  menganalisis,  memproses, menyimpan, dan mencetak gambar 8-bit, 16-bit, dan 32-bit.
Program ini didukung dengan berbagai pengatur gambar,  seperti  pengatur  ketajaman,  kehalusan, kecerahan, warna, sudut, dan filter dari gambar yang akan  diolah.  Selain  itu,  dapat  membantu  dalam melakukan  transformasi  geometris,  seperti  scaling, rotasi, dan membalik (Ferreira & Rasband, 2010).
(a) (b) (c) (d) (e)
Gambar 1 . Kromatogram ekstrak fungus comb pada UV 254 nm (a), UV 366 nm (b), pewarnaan dengan asam sulfat  (c),  pewarnaan  dengan  asam  sulfat  pada  UV  366  nm  (d),  dan  pewarnaan  dengan  DPPH  (e). Sampel Y5 n-heksana (1), BD n-heksana (2), SC n-heksana (3), Y5 etil asetat (4), BD etil asetat (5), dan SC etil asetat (6)
(a)
(b)
Gambar 2 . Rentang Rf kromatogram KLT ekstrak fungus comb pada sinar UV 254 dan 366 nm. Dari kiri ke kanan: lajur 1 ekstrak Y5 NH, lajur 2 BD NH, lajur 3 SC NH, lajur 4  Y5 EA, lajur 5 BD EA, dan lajur 6 SC EA Sebelum  diolah,  dipilih  gambar  profil  KLT dengan pemisahan yang paling baik. Gambar diolah dengan  penandaan  pita KLT,  proses smoothing , dan normalisasi  densitogram  agar  diperoleh  nilai  AUC yang lebih konsisten. Nilai AUC adalah nilai luas area di bawah kurva puncak densitogram. ImageJ dapat memperlihatkan  besar  kecilnya  kandungan  suatu senyawa  dalam  sampel  melalui  nilai  AUC  pada densitogram.  Profil  kromatogram  KLT  dari  ekstrak n-heksana  dan  etil  asetat fungus  comb membentuk berbagai  pita  terpisah.  Hal  tersebut  juga  didukung dengan  hasil  densitogram  yang  menghasilkan puncak-puncak pada pita yang terpisah. Berdasarkan densitogram  yang  terbentuk,  dihitung  nilai  Rf  dan AUC-nya  untuk  memberikan  informasi  lebih  lanjut mengenai profil KLT masing-masing ekstrak.
Berdasarkan penelitian sebelumnya, hasil analisis fitokimia pada fungus  comb menunjukkan bahwa fungus comb mengandung senyawa metabolit sekunder seperti  fenol  hidrokuinon,  steroid, terpenoid,  dan  saponin.  Sedangkan  alkaloid, flavonoid,  dan  tanin  tidak  terdeteksi  dalam fungus
comb (Nandika et al., 2021). Pengamatan pita pada KLT dilakukan di bawah lampu UV dengan panjang gelombang 254 nm dan 366 nm, pereaksi asam sulfat, dan pereaksi DPPH. Gambar 1 menunjukkan perbedaan  jumlah  dan  warna  pita  yang dihasilkan dari  masing-masing  perlakuan  KLT.  Pengamatan pada lampu UV 254 nm menghasilkan fluoroesensi pada  latar  belakang  kromatogram  dan  pita  sampel berwarna gelap. Pengamatan pada lampu UV 366 nm menghasilkan  latar  belakang kromatogram yang gelap dan pita sampel yang berfluoroesensi. Nilai Rf dan warna pita  yang dihasilkan digunakan untuk mengidentifikasi senyawa metabolit sekunder yang terkandung. Pereaksi asam sulfat digunakan untuk mendeteksi senyawa metabolit sekunder saponin (Gleńsk et al., 2005), steroid, dan terpenoid (Gerlach et  al.,  2018).  Pereaksi  DPPH  digunakan  untuk mendeteksi senyawa yang memiliki sifat antioksidan (Agatonovic-Kustrin et al., 2019).
Kromatogram KLT yang dilihat di bawah sinar UV 254 nm menghasilkan pita - pita berwarna hijau tua-kehitaman. Pita - pita tersebut diduga merupakan
senyawa steroid (Fasya et al., 2020). Kromatogram KLT pada sinar UV 366 nm menghasilkan pita - pita berwarna  biru  tua,  biru  terang,  dan  merah.  Pita merah pada sinar UV 366 nm tidak tampak di bawah sinar UV 254 nm. Pita merah ini diduga merupakan senyawa metabolit sekunder terpenoid (Mutiah et al., 2022).    Pita  merah muncul  pada  rentang  Rf  0.02- 0.04,  Rf  0.07-0.10,  dan  Rf  0.23-0.25  seluruh  KLT ekstrak kecuali ekstrak SC etil asetat. Pita-pita biru yang terlihat di bawah sinar UV 366 nm diduga merupakan senyawa metabolit sekunder steroid (Mutiah et al., 2022) . Pita biru terlihat pada rentang Rf 0.28-0.30 dan Rf 0.97-0.98. KLT ekstrak SC etil asetat hanya menghasilkan pita-pita biru yang artinya ekstrak tersebut hanya mengandung steroid.
Kromatogram  dengan  pereaksi  asam  sulfat  di bawah  cahaya  sinar  tampak menghasilkan  pita berwarna coklat tua, pita - pita ini diduga merupakan senyawa terpenoid.  Pita-pita  berwarna  ungu  muda diduga  merupakan  senyawa  golongan triterpenoid (Paul et al., 2012). KLT setelah penyemprotan asam sulfat  di  bawah sinar UV 366 nm menghasilkan hingga 10 pita dan merupakan yang paling banyak dibandingkan perlakuan KLT lain. Warna-warna pita yang dihasilkan, yaitu coklat, kuning, biru, merah, dan ungu. Pita biru, ungu dan merah yang dihasilkan diduga  merupakan  senyawa  terpenoid (Agatonovic-Kustrin  et  al.,  2019).  Pada  pelat  KLT setelah penyemprotan dengan DPPH, senyawa yang memiliki sifat antioksidan akan memunculkan warna pita kuning terhadap warna ungu pelat KLT (Agatonovic-Kustrin et al., 2019) . Berdasarkan hasil KLT,  dapat  dilihat  bahwa hampir  seluruh  ekstrak n-heksana dan etil asetat memiliki sifat antioksidan.
Hanya ekstrak BD n-heksana yang  tidak  memiliki sifat antioksidan.
Kromatogram  KLT  ekstrak Y5  n-heksana  pada deteksi sinar UV 254 nm menunjukkan 5 pita yang terpisah, sedangkan kromatogram ekstrak BD dan SC n-heksana hanya menghasilkan 2 pita yang terpisah. Menggunakan  ImageJ,  nilai  AUC  tiap  pita ditentukan.  Nilai AUC dapat menunjukkan konsentrasi senyawa pada fungus  comb . Semakin tinggi nilai AUC, maka semakin besar konsentrasi senyawa yang terkandung. Nilai AUC dan rentang Rf ekstrak pada UV 366 nm dapat dilihat pada Tabel 1 . Berdasarkan kromatogram, ekstrak Y5 NH memiliki nilai AUC pada pita 4 yang lebih tinggi dibandingkan ekstrak  n-heksana  lainnya.  Hal  ini  menunjukkan ekstrak Y5 NH memiliki konsentrasi steroid yang paling tinggi. Sementara ekstrak SC EA memiliki nilai AUC pada pita 4  yang  lebih  tinggi  dibandingkan ekstrak etil asetat lainnya. Ekstrak SC NH memiliki konsentrasi terpenoid yang tinggi  yaitu  pada  pita pertamanya,  sedangkan ekstrak BD EA  memiliki kandungan  terpenoid  lebih  tinggi  dibandingkan ekstrak etil asetat lainnya terutama pada pita 1 dan 3. Perbedaan pada nilai AUC dan senyawa  yang terkandung pada  masing-masing ekstrak dapat disebabkan oleh perbedaan  lokasi  ditemukannya fungus  comb .  Selain  itu,  pelarut  yang  digunakan untuk mengekstraksi sampel juga dapat mempengaruhi  hasil  tersebut.  Pelarut  n-heksana bersifat  nonpolar  dan  pelarut  etil  asetat  bersifat semipolar yang dapat melarutkan metabolit sekunder steroid,  terpenoid,  fenol  hidrokuinon,  dan  saponin yang terkandung  dalam  sampel (Nandika  et  al., 2021) .
Tabel 1 . Nilai AUC dan rentang Rf kromatogram KLT pada UV 366 nm Ekstrak Pita (Rentang Rf) Pita 1 (0.02-0.04) Pita 2 (0.07-0.10) Pita 3 (0.23-0.25) Pita 4 (0.28-0.30) Pita 5 (0.97-0.98) Y5 NH 3211.397 1242.841 - 11194.882 1320.355 BD NH 798.355 434.163 171.385 1428.841 1173.477 SC NH 1572.891 1108.012 243.456 2575.719 2276.305 Y5 EA 4744.355 466.698 62.607 954.062 541.406 BD EA 3715.719 562.355 804.548 531.719 350.799 SC EA 4147.619 534.991 284.991 3646.276 747.042

## 2. Kapasitas Antioksidan
Penentuan  kapasitas  antioksidan  dapat dilakukan  dengan  beberapa  metode  seperti DPPH, FRAP,  dan  ABTS.  Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah metode DPPH  dan  hanya dilakukan  pada ekstrak  dengan fungus  comb yang
berasal  dari  Hutan  Percobaan  Yanlappa.  Ekstrak tersebut dipilih karena pada kromatogram KLT menunjukkan hasil pemisahan yang lebih  baik dibandingkan  ekstrak  dari  2  tempat  lainnya.  Data kapasitas antioksidan dua ekstrak fungus comb dapat dilihat pada Tabel 2 . Kapasitas antioksidan ekstrak n-heksana lebih tinggi dibanding ekstrak etil asetat.
Namun,  apabila  dibandingkan  dengan  senyawa antioksidan alami, seperti vitamin C, vitamin E,  α- tokoferol,  β-karoten  nilai-nilai  tersebut  relatif  kecil (Mansour-Gueddes & Saidana-Naija, 2021).
Hasil  kapasitas  antioksidan  sesuai  dengan kromatogram  KLT  setelah  diaplikasikan  pereaksi DPPH.  Kromatogram  KLT  menunjukkan  bahwa ekstrak  n-heksana  lebih  banyak  mengandung
senyawa  yang  memiliki  sifat  antioksidan.  Dapat dilihat  dari Tabel  3 bahwa  ekstrak  Y5  n-heksana adalah satu-satunya ekstrak yang menghasilkan lebih dari satu pita dengan sifat antioksidan. Hasil tersebut juga sesuai dengan penelitian Nandika et al. (2021) yang menyatakan bahwa senyawa dominan dengan sifat  antioksidan  hanya  muncul  pada  ekstrak n-heksana.
Tabel 2 . Kapasitas antioksidan dua ekstrak fungus comb Sampel Kapasitas antioksidan (mg AAE/g ekstrak) Ekstrak n-heksana 9.07 Ekstrak etil asetat 6.04 Tabel 3 . Nilai AUC dan rentang Rf kromatogram KLT pewarnaan DPPH Ekstrak Pita (Rentang Rf) Pita 1 (0.02-0.03) Pita 2 (0.08) Pita 3 (0.24-0.29) Pita 4 (0.82) Pita 5 (0.93-0.94) Y5 NH 2527.497 1529.891 725.406 596.163 - BD NH - - - - - SC NH - - - - 2880.083 Y5 EA 1883.376 - - - - BD EA 3414.983 - - - - SC EA 4637.480 - - - -

## 3. Inhibisi Tirosinase
Penentuan  aktivitas  penghambatan  tirosinase menunjukkan  bahwa  ekstrak  n-heksana  memiliki aktivitas  penghambatan  yang  lebih  tinggi  dalam substrat L-tirosina dan L-DOPA dibandingkan dengan ekstrak etil asetat. Nilai IC50 kedua ekstrak tersebut masih  sangat  tinggi  yang  artinya  kedua  ekstrak merupakan  inhibitor  tirosinase  yang  sangat  lemah
dibandingkan  dengan  standar,  yaitu  asam  kojat. Asam kojat umum digunakan sebagai standar karena telah diketahui merupakan inhibitor tirosinase yang sangat  kuat.  Data  tersebut  dapat  dilihat  dari  nilai IC50  masing-masing  sampel  yang  disajikan  pada Tabel 4 . Berdasarkan  hasil  yang  didapat  diduga diskolorasi pada kayu hanya sedikit disebabkan oleh aktivitas penghambatan tirosinase.
Tabel 4 . IC 50 penghambatan tirosinase dua ekstrak fungus comb Sampel Rerata IC50 (µg/mL) ± SD pada substrat L-tirosina L-DOPA Ekstrak n-heksana 1804 ± 5.91 6784 ± 38.3 Ekstrak etil asetat 2711 ± 18.8 9074 ± 67.1 Asam kojat 47.7 ± 3.55 74.0 ± 7.88

## KESIMPULAN
Hasil  analisis  sidik  jari  ekstrak  n-heksana  dan etil  asetat fungus  comb menunjukkan  keterpisahan yang  cukup  baik.  Kapasitas  antioksidan  dan penghambatan  tirosinase  ekstrak  n-heksana fungus comb lebih tinggi, yaitu 9.07 mg AAE/g ekstrak, nilai IC50 1804 µg/mL untuk substrat L-tirosina dan 6784 µg/mL untuk substrat L-DOPA dibandingkan dengan ekstrak etil asetat (6.04 mg AAE/g ekstrak, IC 50 2711 µg/mL  untuk  substrat  L-  tirosina  dan  9074  µg/mL untuk substrat L-DOPA). Penelitian lebih lanjut perlu dilakukan dengan memperbanyak jenis sampel yang digunakan.  Perlu  dilakukan  isolasi  dan  identifikasi
senyawa aktif yang berperan sebagai antioksidan dan inhibitor tirosinase. Perlu dilakukan uji antioksidan dan anti-tirosinase dengan konsentrasi sampel lebih tinggi untuk hasil yang lebih baik.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  di  danai  oleh IPB  University, Institut Teknologi Bandung, Universitas Gajah Mada dan Universitas Airlangga Negara Republik Indonesia melalui Riset Kolaborasi Program Pendanaan Tahun 2022 (Nomor Kontrak 13326/IT3.L1/PT.01.03/P/B/2022).

## DAFTAR PUSTAKA
Agatonovic-Kustrin, S., Kustrin, E., Gegechkori, V., & Morton,
D. W. (2019). High-performance thin-layer chromatography  hyphenated  with  microchemical  and biochemical  derivatizations  in  bioactivity  profiling  of marine
species. Marine Drugs , 17 (3). https://doi.org/10.3390/md17030148
Arshad,  M.  A.,  &  Schnitzer,  M.  (1987).  The  chemistry  of  a termite  fungus  comb. Plant  and  Soil , 98 (2),  247–256. https://doi.org/10.1007/BF02374828
Batubara, I., Darusman, L. K., Mitsunaga, T., Rahminiwati, M., &  Djauhari,  E.  (2010).  Potency  of  Indonesian  medicinal plants  as  tyrosinase  inhibitor  and  antioxidant  agent. Journal  of  Biological  Sciences , 10 (2),  138–144. https://doi.org/10.3923/jbs.2010.138.144
Batubara, I., Maily, Wahyuni, W. T., Tilaar, K., Nurcholis, W., Junardy, F. D., Priyadi, Y. S., Subroto, E. M., Egra, S., & Zamany, N. (2020). Tyrosinase Inhibition, Antiglycation, and  Antioxidant  Activity  of  Xylocarpus  granatum. Biosaintifika ,
12 (1), 70–75.
https://doi.org/10.15294/biosaintifika.v12i1.22676 Caesario,  J.,  Hertanto,  D.  M.,  Susanto,  H.,  Sudiana,  K., Nandika,  D.,  Karlinasari,  L.,  Arinana,  A.,  Batubara,  I., Witasari, L. D., Rachmayanti, Y., Firmasyah, D., & Santoso, D.  (2023).  Hematological  Profile  of  Mice  After  Ethyl Acetate Extract of Fungus Comb of Indo-Malayan Termite (Macrotermes  gilvus  Hagen)  Mound  Supplementation  in Regulating  Lipopolysaccharide-induced  Inflammatory Response. Malaysian  Journal  of  Medicine  and  Health Sciences , 19 (SUPP3), 57–63.
Fasya, A. G., Amalia, S., Megawati, D. S., Salima, F., Kusuma, V. A., & Purwantoro, B. (2020). Isolation, identification, and  bioactivity  of  steroids  isolates  from  Hydrilla verticillata petroleum ether fraction. IOP Conference Series: Earth  and  Environmental  Science , 456 (1),  012009. https://doi.org/10.1088/1755-1315/456/1/012009
Ferreira, T., & Rasband, W. (2010). The ImageJ User Guide -
Version 1.43 . http://rsbweb.nih.gov/ij/docs/user- guide.pdf Fitrianti,  S.  A.  (2011). Diferensiasi  Temulawak,  Kunyit,  dan Bangle  Berdasarkan  Interpretasi  Kromatografi  Lapis  Tipis Menggunakan Imagej [IPB University]. http://repository.ipb.ac.id/handle/123456789/52592
Gerlach, A. da C. L., Gadea, A., Silveira, R. M. B. da, Clerc, P.,
& Dévéhat, F. L. (2018). The use of anisaldehyde sulfuric acid as an alternative spray reagent in TLC analysis reveals three  classes  of  compounds  in  the  genus  Usnea  Adans. (Parmeliaceae,  lichenized  Ascomycota). Preprints , 2018020151 (February),
1–9. https://doi.org/10.20944/PREPRINTS201802.0151.V1
Gleńsk,  M.,  Włodarczyk,  M.,  Radom,  M.,  &  Cisowski,  W. (2005). TLC as a rapid and convenient method for saponin investigation. Journal of Planar Chromatography - Modern TLC ,
18 (2), 167–170.
https://doi.org/10.1556/JPC.18.2005.2.15 Mansour-Gueddes, S. Ben, & Saidana-Naija, D. (2021). Vitamin E:  Natural  Antioxidant  in  the  Mediterranean  Diet . https://doi.org/10.5772/intechopen.99705.  Di  dalam: Erkekoglu  P,  Santos  JS,  Blumenberg  M,  editor.  2021.
Vitamin E in Health and Disease  - Interactions, Diseases and Health Aspects. London: IntechOpen.
Mutiah,  R.,  Ulfah,  J.,  Amrulloh,  M.  F.,  Suryadinata,  A., Indrawijaya, Y. Y. A., & Rahmawati, A. (2022). Induction of Helianthus annuus Leaves Extract to HeLa cell Apoptosis and Cell Cycle Arrest in S, G2-M and M5 Phase. Indonesian
Journal
of Cancer Chemoprevention , 13 (1). https://doi.org/10.14499/indonesianjcanchemoprev13iss 1pp1-11
Nandika, D., Arinana, A., Karlinasari, L., Batubara, I., Santoso, D.,  Witasari,  L.  D.,  Rachmayanti,  Y.,  Firmansyah,  D., Sudiana, I. K., Hertanto, D. M., Hadi, Y. S., & Rahman, M.
M. (2023). Efficacy of Fungus Comb Extracts Isolated from
Indo-Malayan  Termite  Mounds  in  Controlling  Wood- Decaying Fungi. Forests , 14 (6), 1115. https://doi.org/10.3390/f14061115
Nandika,  D.,  Karlinasari,  L.,  Arinana,  A.,  Batubara,  I., Sitanggang,  P.  S.,  Santoso,  D.,  Witasari,  L.  D., Rachmayanti,  Y.,  Firmansyah,  D.,  Sudiana,  I.  K.,  & Hertanto, D. M. (2021). Chemical Components of Fungus Comb  from  Indo-Malayan  Termite  Macrotermes  gilvus Hagen  Mound  and  Its  Bioactivity  against  Wood-Staining Fungi. Forests  2021,  Vol.  12,  Page  1591 , 12 (11),  1591. https://doi.org/10.3390/F12111591
Paul, M., Brüning, G., Bergmann, J., & Jauch, J. (2012). A thin- layer  chromatography  method  for  the  identification  of three  different  olibanum  resins  (Boswellia  serrata, Boswellia papyrifera and Boswellia carterii, respectively, Boswellia sacra). Phytochemical Analysis , 23 (2), 184–189. https://doi.org/10.1002/pca.1341
Pillaiyar, T., Manickam, M., & Namasivayam, V. (2017). Skin whitening  agents:  medicinal  chemistry  perspective  of tyrosinase  inhibitors. Journal  of  Enzyme  Inhibition  and
Medicinal Chemistry , 32 (1), 403. https://doi.org/10.1080/14756366.2016.1256882
Rachmayanti,  Y.,  Firmansyah,  D.,  Umma,  R.  R.  isatul, Hertanto, D. M., Sudiana, I. K., Santoso, D., Nandika, D., Karlinasari, L., Arinana, A., Batubara, I., & Witasari, L. D.
(2022).  Antioxidant  Activity  of  Fungus  Comb  Extracts Isolated  from  Indo-Malayan  Termite  Macrotermes  gilvus Hagen  (Isoptera:  Termitidae). Indonesian  Journal  of
Chemistry , 22 (6), 1693–1704. https://doi.org/10.22146/ijc.77227
Rueden,  C.  T.,  Schindelin,  J.,  Hiner,  M.  C.,  DeZonia,  B.  E.,
Walter,  A.  E.,  Arena,  E.  T.,  &  Eliceiri,  K.  W.  (2017). ImageJ2: ImageJ for the next generation of scientific image data. BMC Bioinformatics , 18 (1).
https://doi.org/10.1186/s12859-017-1934-z Subekti, N. (2010). Kelimpahan, sebaran, dan arsitektur sarang serta  ukuran  populasi  rayap  tanah [IPB  University]. http://repository.ipb.ac.id/handle/123456789/55276 Syafi’i,  M.,  Rohaeti,  E.,  Wahyuni,  W.  T.,  Rafi,  M.,  & Septaningsih,  D.  A.  (2018).  Analisis  Sidik  Jari Kromatografi  Lapis  Tipis  Rimpang  Temu  Mangga (Curcuma mangga). Jurnal Jamu Indonesia , 3 (3), 109–115. https://doi.org/10.29244/jji.v3i3.68
Witasari, L. D., Lizar, D. P., Florencia, O. M., Ramadhan, A., Fiana, N. A. O., Supriyadi, S., Pratiwi, S. U. T., Nandika, D., Karlinasari, L., Arinana, A., Batubara, I., Santoso, D., Sudiana,  I.  K.,  Hertanto,  D.  M.,  Rachmayanti,  Y.,  &
Firmansyah,  D.  (2023).  Designing  antimicrobial  active packaging films based on chitosan plus fungus comb ethyl acetate  extract  from  Indo-Malayan  termite  mounds. Biodiversitas , 24 (11),
5947–5955.
https://doi.org/10.13057/biodiv/d241113
Witasari, L. D., Wahyu, K. W., Anugrahani, B. J., Kurniawan,
D. C., Haryanto, A., Nandika, D., Karlinasari, L., Arinana, A., Batubara, I., Santoso, D., Rachmayanti, Y., Firmansyah, D., Sudiana, I. K., & Hertanto, D. M. (2022). Antimicrobial
activities  of  fungus  comb  extracts  isolated  from Indomalayan termite (Macrotermes gilvus Hagen) mound. AMB Express , 12 (1). https://doi.org/10.1186/s13568-022- 01359-0
Zaidi, K. U., Ali, S. A., & Ali, A. S. (2016). Effect of Purified Mushroom  Tyrosinase  on  Melanin  Content  and Melanogenic  Protein  Expression. Biotechnology  Research International , 2016 , 1–8. https://doi.org/10.1155/2016/9706214
Citation  Format :  Dewi,  T.  U.,  Diposani,  D.  P.,  Rohaeti,  E.,  Nandika,  D.,  Karlinasari,  L.,  Arinana,  A., Santoso, D., Witasari, L. D., Rachmayanti, Y., & Batubara, I. (2023). Fingerprints, Antioxidant Activity, and Anti-Tyrosinase  of  Fungus  Comb  Extract. Jurnal  Jamu  Indonesia,  8 (3),  106–113. https://doi.org/10.29244/jji.v8i3.346