Volume 4 No 3, 2024 (Hal. 223-233)
Sinta 5 (Decree No: 225/E/KPT/2022
Available online at https://ojs.umada.ac.id/index.php/jago_tolis/index

## PENDAHULUAN
Kawasan perikanan berperan penting dalam meningkatkan perekonomian. Komoditas ikan hias air tawar termasuk hasil perikanan air tawar yang berkontribusi  cukup besar dalam devisa  negara.  Hal  tersebut  didukung  oleh  data  penjualan ikan  hias  global  sebanyak  1.600 jenis dan sekitar 46% (750 jenis) bersumber dari ikan air tawar (Dahrudin, 2011). Jenis ikan hias  air  tawar  yang  cukup  banyak  dibudidayakan  salah  satunya  yaitu  ikan  koi  ( Cyprinus rubrofuscus ). Produksi ikan koi mengalami peningkatan di tahun 2019 yaitu mecapai 523.775

## ARTICLE INFO

## Abstract
Received:  June 19, 2024 Accepted: July 01, 2024 Published: July 03, 2024
*) Corresponding author: E-mail: aprista.widhiya.rahmawati- 2020@fpk.unair.ac.id
Keywords: Virus; PCR; KHV; Cyprinus;
Infectious diseases
Keywords: Virus; PCR; KHV; Cyprinus; Penyakit infeksius.
DOI: http://dx.doi.org/10.56630/jago.v4i3.666
This  is  an  open  access  article under  the  CC  BY  license ( https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/ )
The development of koi fish production has increased, thus spurring koi fish farmers to develop  their  cultivation  business.  Along  with  the  development  of  koi  fish  farming activities, of course there must be many problems that can interfere with the cultivation process, one of which is a disease caused by a virus. The group of viruses that often infect Koi fish ( Cyprinus rubrofucus ) is Koi Herpes Virus (KHV) which causes considerable losses. Therefore, it is necessary to check for KHV in Koi fish to prevent the spread of KHV. This activity was carried out at the Surabaya I Fish Quarantine, Quality Control, and Fisheries Product Safety Center (FQIA), East Java on June 26 to August 25, 2023. The purpose of this research activities is to find out the KHV inspection procedure and the results of the KHV inspection during the inspection process at the FQIA Surabaya I. The work method used in this research activities is a descriptive method with data collection with primary data  and  secondary  data.  Data  collection  is  done  by  interview,  observation,  active participation and literature study. KHV examination at FQIA Surabaya I uses conventional PCR  methods  consisting  of  DNA  extraction,  DNA  amplification,  electrophoresis,  and visualization  of  results.  Based  on  the  results  of  the  examination  during  the  research activities,  there  were  2  positive  samples  of  KHV  in  Koi  fish  ( C.  rubrofuscus )  out  of  48 samples examined.

## Abstrak
Perkembangan  produksi  ikan  koi  mengalami  peningkatan  sehingga  memacu pembudidaya ikan koi untuk mengembangkan usaha budidayanya. Salah satu masalah yang dapat mengganggu proses budidaya ikan koi adalah penyakit virus. Golongan virus yang sering menginfeksi ikan koi (Cyprinus rubrofucus) yaitu Koi Herpes Virus (KHV) yang menyebabkan kerugian cukup besar. Oleh karena itu diperlukan pemeriksaan KHV pada ikan koi untuk mencegah persebaran KHV. Kegiatan ini dilaksanakan di Balai Karantina Ikan,  Pengendalian  Mutu,  Dan  Keamanan  Hasil  Perikanan  (BKIPM)  Surabaya  I,  Jawa Timur pada tanggal 26 Juni sampai 25 Agustus 2023. Tujuan dari kegiatan ini yaitu untuk mengetahui  prosedur  pemeriksaan  KHV  dan  hasil  pemeriksaan  KHV  selama  proses pemeriksaan  di  BKIPM  Surabaya  I.  Metode  kerja  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu metode deskriptif dengan pengambilan data dengan data primer dan data sekunder. Pengambilan  data  dilakukan  dengan  cara  wawancara,  observasi,  partisipasi  aktif  dan studi  pustaka.  Pemeriksaan  KHV  di  BKIPM  Surabaya  I  menggunakan  metode  PCR konvensional yang terdiri dari tahap ekstraksi DNA, amplifikasi DNA, elektroforesis, dan visualisasi hasil. Berdasarkan hasil pemeriksaan selama penelitian ditemukan 2 sampel positif KHV pada ikan koi ( Cyprinus rubrofuscus ) dari 48 sampel yang diperiksa

## Examination Technique of KHV in Cyprinus rubrofuscus by PCR Method at BKIPM Surabaya I, East Java
Aprista Widhiya Rahmawati 1 *, Andini Nur Setyawati 1 , Rizqi Fitria Firdausi 1 , Laras Mariska Dewi 1 , Shafira Dwi Akmalia 1 , Pratiwi Dwi Rahmawati 1 , Arif Habib Fasya 1
1 Program studi Akuakultur, Fakultas Ilmu Kesehatan, Kedokteran, dan Ilmu Alam, Universitas Airlangga Banyuwangi
Cara mensitasi artikel:
Rahmawati, A. W., Setyawati, A. N., Firdausi, R. F., Dewi, L. M., Akmalia, S. D., Rahmawati, P. D., Fasya, A. H. 2024. Examination Technique of KHV in Cyprinus rubrofuscus by PCR Method at BKIPM Surabaya I, East Java. JAGO TOLIS : Jurnal Agrokompleks Tolis . 4(3): 223-233). http://dx.doi.org/10.56630/jago.v4i3.666
ekor dari total sasaran produksi sebanyak 350.000 ekor (DJPB 2019). Seiring berkembangnya industri  budidaya  ikan  koi,  tentu  saja  ditemukan  berbagai  permasalahan  yang  dapat menghambat  budidaya  (Yanuhar  et  al.,  2019).  Permasalahan  yang  sering  muncul  pada kegiatan  budidaya  ikan  koi  salah  satunya  penyakit.  Penyakit  dapat  disebabkan  oleh  agen infeksius dan non infeksius. Virus, bakteri, parasit  dan jamur merupakan beberapa  contoh mikroorganisme infeksius.
Virus  termasuk  salah  satu  penyakit  infeksius  yang  sering  dijumpai  di  ikan  koi. Koi Herpes  Virus (KHV)  merupakan  penyakit  virus  yang  paling  umum  menginfeksi  ikan  koi (Setyorini et al., 2008). KHV bersifat akut dan ganas yang dapat membunuh ikan dalam waktu singkat (Mayagi et al., 2023). KHV dapat menyebabkan 85-100% kematian pada ikan (Setyorini et al., 2008). Serangan KHV hingga saat ini masih terjadi di tempat budidaya ikan mas dan koi dan menimbulkan kerugian yang cukup besar (Yeni dkk, 2013). KHV tergolong jenis penyakit ikan  karantina  golongan  1  yang  harus  dicegah  agar  tidak  menyebar  dan  menjadi  endemik melalui lalu lintas hasil perikanan. Hal tersebut sesuai dengan KEPMEN KP Nomor 17 tahun 2021  tentang  Jenis  Penyakit  Ikan  Karantina,  Organisme  Penyebab,  Golongan,  dan  Media Pembawa . Oleh karena itu, diperlukan pemeriksaan KHV pada ikan koi secara cepat dan tepat. Salah satu pemeriksaan yang dapat dilakukan yaitu dengan Polymerase Chain Reaction (PCR) (Yuenleni, 2019). PCR merupakan metode deteksi virus secara biologi molekuler dengan cara melipat gandakan materi genetiknya (Sunandar et al., 2010).
Berdasarkan  penelitian  mengenai  pemeriksaan  virus  KHV  pada  ikan  koi  dilakukan dengan  metode  PCR  dilaksanakan  di  Balai Karantina  Ikan  dan  Pengendalian  Mutu (BKIPM) Surabaya  I  yang  sudah  terakreditasi  secara  nasional  dan  terakreditasi  secara  internasional oleh  International  Standard  Organisation  (ISO)  17025.  BKIPM  Surabaya  I  memiliki laboratorium uji level III dimana memiliki kemampuan mendiagnosa penyakit infeksius dengan teknik pemeriksaan secara biokimia, molekuler, imunologi, konvensional, histologi, dan kultur sel yang dapat dipertanggung jawabkan keakuratan dan kebenarannya dalam mengidentifikasi virus    KHV  tersebut  sehingga  nantinya  dapat  digunakan  sebagai  pengendalian  penyakit infeksius KHV pada ikan koi

## METODE
Waktu dan Tempat Penelitian  ini  dilakukan  di  Balai  Karantina  Ikan,  Pengendalian  Mutu  dan  Keamanan Hasil  Perikanan  (BKIPM)  Kelas  I  Surabaya,  Jawa  Timur.  Kegiatan  penelitian  ini  juga  telah dilakukan pada tanggal 26 Juni hingga 25 Agustus 2023.

## Bahan Penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini diantaranya sampel organ insang dari ikan yang terindikasi terinfeksi KHV, GT buffer ; silica kit , alkohol 70%, DEPC ddH2O, 2x PCR master mix; Primer forward (20 pMol) dan Primer reverse (20 pMol), template DNA, Nuclease Free Water ; Agarose, TAE buffer 1X, pewarna DNA, dan DNA marker .  Alat yang digunakan dalam penelitian ini diantaranya microtube 1,5 ml, microtube 0,2 ml, rak microtube, micropipet (10 µl, 20 µl, 100  µl,  1000  µl), pastle penggerus,  vortex, centrifuge ,  inkubator, cooling  block , Laminary  Air Flow ,  Thermal  Cycler  (PCR),  mini  spin  down, freezer ,  cetakan  agar  ( chamber ),  timbangan analitik, spatula, combs , microwave , beaker glass , gelas ukur, botol kaca, elektroforesis set, power supply , UV Transilluminator, dan software UV Transilluminator.

## Rancangan penelitian
Metode  penelitian  yang  digunakan  yakni  metode  deskriptif.  Metode  deskriptif merupakan cara untuk menjelaskan suatu kejadian, gejala, dan data yang telah dikumpulkan tanpa berusaha menggeneralisasi atau menarik kesimpulan yang berlaku bagi semua orang (Zellatifanny dan Mudjiyanto, 2018). Tahapan teknik pemeriksaan KHV pada ikan koi dengan metode PCR di BKIPM Surabaya I, Jawa Timur meliputi proses nekropsi, ekstraksi, amplifikasi, elektroforesis, dan visualisasi hasil.

## Analisis data
Hasil deteksi virus KHV pada ikan koi di Balai KIPM Surabaya I pada tanggal 26 Juni sampai dengan 25 Agustus 2023, diperoleh sebanyak 48 sampel ikan koi. Dari seluruh sampel diperoleh hasil sebayak 2 sampel ikan koi yang teridentifikasi positif terinfeksi KHV. Identifikasi virus KHV ini dilakukan dengan metode PCR konvensional. Hasil rinci seluruh sampel yang diuji tercantum pada Tabel 1.

## Tabel 1. Hasil Pemeriksaan KHV pada Ikan Koi dengan Metode PVR Konvensional
Tanggal Kode Sampel Hasil Keterangan 26 Juni 2023 3488 - Free 3496 - Free 3 Juli 2023 3539 - Free 3546 - Free 3569 - Free 4 Juli 2023 3592 - Free 6 Juli 2023 3624 - Free 3644 - Free 10 Juli 2023 3665 - Free 3673 - Free 11 Juli 2023 3700 - Free 13 Juli 2023 3712 - Free 3720 - Free 17 Juli 2023 3761 - Free 3774 - Free 3785 - Free 18 Juli 2023 3818 - Free 20 Juli 2023 3828 - Free 3836 - Free 24 Juli 2023 3864 - Free 3884 - Free 27 Juli 2023 3931 + Infected 3939 - Free 31 Juli 2023 3973 - Free 3979 - Free 1 Agustus 2023 3987 - Free 3988 - Free 2 Agustus 2023 4023 - Free 4025 - Free 3 Agustus 2023 4035 - Free 4041 - Free 7 Agustus 2023 4060 - Free 4068 - Free 4074 - Free 10 Agustus 2023 4131 - Free 4137 - Free 14 Agustus 2023 4152 - Free 4158 - Free 4179 - Free 15 Agustus 2023 4189 - Free 16 Agustus 2023 4199 - Free 4211 - Free 21 Agustus 2023 4242 + Infected 4249 - Free 4254 - Free 4259 - Free 24 Agustus 2023 4280 - Free 4287 - Free
Ikan  koi  yang  dinyatakan  positif  KHV  yaitu  yang  hasil  visualisasinya  menunjukkan ukuran band DNA 292 bp. Ukuran tersebut berpacu pada SNI ISO/IEC 17025:2017 yang telah digunakan  sebagai  acuan  di  Balai  KIPM  Surabaya  I.  Berdasarkan  hasil  visualisasi  dengan bantuan UV transilluminator dapat diketahui hasil elektroforesis yang menunjukkan bahwa sampel ikan Koi yang dinyatakan positif KHV yaitu pada S3 dengan ukuran band DNA 292 bp, sedangkan sampel lainnya dinyatakan negatif. Hasil rinci visualisasi sampel tercantum pada Gambar 1.
Gambar 1. Hasil Visualisasi Positif KHV dengan Metode PCR Konvensional M = Marker, K + = Kontrol Positif KHV, K − = Kontrol Negatif KHV, S1, S2, S4 dan S5 = Sampel Negatif, S3 = Sampel Positif (292 bp).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Proses sterilisasi merupakan tahap pemusnahan segala bentuk organisme hidup, dalam hal ini mikroorganisme yang ada pada suatu benda. Proses sterilisasi melibatkan proses fisik untuk  memusnahkan  mikroorganisme  (Putri  dan  Yustianara,  2023).  Sterilisasi  bertujuan untuk menjamin sterilitas produk maupun mutu produk, termasuk kestabilan produk yang diproduksi (Taufiq dan Najmudin, 2017).

## Nekropsi
Nekropsi merupakan proses pembedahan dan pengambilan organ dari sampel yang akan digunakan  untuk  proses  uji  selanjutnya  yang  akan  dilakukan  (Rahmawati  et  al.,  2021). Sampel yang digunakan untuk pengujian KHV adalah organ insang ikan koi. Organ insang, ginjal, otak dan hati ikan merupakan organ yang paling sering terinfeksi KHV karena memiliki prevalensi (populasi virus) yang lebih besar dibandingkan organ lainnya (Mayagi et al., 2023). Secara  histopatologi,  KHV  menyebabkan  terjadinya  nekrosis  pada  hati,  ginjal,  limpa,  sisik, sirip, ekor, dan ginjal serta hyperplasia dan hipertrofi sel epitel padaorgan  insang (Pikarsky, 2004).  Sampel  organ  insang  diambil  sebanyak  20  mg  dengan  cara  membedah  ikan  koi menggunakan  section  set.  Proses  tersebut  dilandasi  berdasarkan Keputusan  Kepala  Balai Karantina Ikan Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan Nomor 32/KEP-BKIPM/2015 tentang Petunjuk Teknis Pemantauan Hama dan Penyakit Ikan Karantina, ukuran sampel yang akan diuji menentukan organ target yang akan diambil untuk diperiksa .

## Ekstraksi
Ekstraksi  DNA  merupakan  teknik  pemisahan  DNA  dari  komponen  seluler  lainnya (Ariyanti  dan  Sianturi,  2019).  Tahapan  ekstraksi  dimulai  dari  memasukkan  sampel  organ insang ikan koi sebanyak 20 mg kedalam microtube ukuran 1,5 ml dan melakukan lisis sampel secara fisik yaitu dengan cara menghancurkan sampel menggunakan pastle penggerus untuk memecah dinding sel dan membran sel (Nurekawati et al., 2023). Memasukkan GT Buffer 900 µl yang berfungsi untuk membantu proses lisis sel dan nukleous dapat keluar dari dalam sel (Nurekawati et al., 2023). Kemudian, melakukan sentrifugasi pada sampel dengan kecepatan
12.000  rpm  selama  3  menit  yang  bertujuan  untuk  memisahkan  campuran  menurut  berat molekul  bagian  penyusunnya.  Supernatanya  akan  berada  di  bagian  atas  hasil  sentrifugasi, sedangkan  peletnya  berada  di  bagian  bawah  (Damayanti  et  al.,  2021).  Tahap  kedua  yakni proses  purifikasi  yang  dilakukan  dengan  cara  menambahkan  40  µl  silica  (1  gr/ml)  yang sebelumnya dicampurkan, kedalam tabung baru. Silica extraction kit merupakan suatu reagen yang  terdiri  dari  jaringan  yang  diawetkan  dalam  larutan  etanol  absolut  (Soelistyoadi  et  al., 2020).  Penggunaan  silica  bertujuan  untuk  mengikat  DNA  (Ariyanti  dan  Sianturi,  2019). Memindahkan  600  µl  sampel  yang  telah  di  centrifuge  pada  bagian  atas  larutan  ke  dalam microtube ukuran 1,5 ml yang telah berisi silica sebanyak 40 µl (1 gr/ml).  Sampel kemudian di vortex hingga merata. Sampel di centrifuge dengan kecepatan 12.000 rpm selama 15 detik untuk  memisahkan  partikel  berdasarkan  berat  molekulnya  sehingga  dapat  diketahui supernatant dan pelet (Iqbal et al., 2016).
Tahap ketiga yakni pembuangan larutan atas dengan cara mencuci pelet silica dengan 500 µl GT Buffer yang bertujuan untuk mencuci DNA agar terpisah dari pengotor (Utami et al., 2013). Larutan buffer berfungsi untuk mempertahankan struktur DNA selama prosedur lisis dan pemurnian (Iqbal et al., 2016). Pelet silica di vortex hingga terlarut, kemudian di centrifuge dengan kecepatan 12.000 rpm selama 15 detik dan larutan atas dapat dibuang. Tahap keempat yaitu proses presipitasi yang dilakukan dengan cara mencuci pelet silica menggunakan 1 ml etanol 70% yang bertujuan untuk membersihkan DNA dari pengotor-pengotornya (Kurniawati et al., 2019). Sampel di vortex pelet silica hingga terlarut semua, kemudian di centrifuge dengan kecepatan 12.000 rpm selama 15 detik dan buang etanol hingga kering. Tahap terakhir yakni pelarutan dengan menambahkan 400 µl DEPC ddH2O kedalam pelet silica untuk  mencegah rusaknya struktur RNA dan menonaktifkan aktivitas enzim RNAase (Kurniawati et al., 2019). Sampel  kemudian  di  vortex  sampai  pelet  silica  terlarut  sempurna.  Sampel  diinkubasi  pada suhu 55oC selama 10 menit. Setelah itu, sampel di vortex dan di centrifuge dengan kecepatan 12.000 rpm selama 2 menit. Memindahkan 200 µl larutan atas kedalam microtube ukuran 1,5 ml baru, dan larutan siap untuk tahap reaksi. Uji jualitas dan kuantitas DNA hasil ekstraksi dengan menggunakan spektrofotometer. Hasil ekstraksi DNA yang memenuhi syarat mutu siap untuk dilakukan tahap reaksi amplifikasi.
Amplifikasi
Amplifikasi merupakan proses memperbanyak DNA target secara eksponensial sehingga dapat  dianalisis dengan elektroforesis. Amplifikasi dapat  menghasilkan jutaan molekul DNA selama 30-40 siklus dengan tiap satu kali siklus menghasilkan 2 DNA (Fitriatin dan Manan, 2015).  Proses  amplifikasi  diawali  dengan  pembuatan  master  mix  (reagen  aplifikasi)  yang dimasukkan pada microtube 1,5 ml yang dilakukan di PCR Work Station yang telah dilengkapi lampu UV sehingga kondisi lingkungan steril dan mencegah adanya kontaminasi. Pembuatan master mix dengan cara menghitung jumlah volume yang akan dibuat. Langkah pertama yakni memasukkan primer forward (20 pMol) sebanyak 0,75 µl dengan susunan basa  nitrogen 5’ - GAC-ACC-ACA-TCT-GCA-AGG-AG- 3’  dan  primer  reverse  (20  pMol)  sebanyak  0 ,75 µl  dengan susunan basa nitrogen 5’ -GAC-ACA-TGT-TAC-AAT-GGT-CGC- 3’.
Master  mix  tersebut  digunakan  karena  telah  di  design  komplemen  dengan  basa nukleotida sesuai dengan yang dimiliki KHV. Tujuan primer adalah untuk membatasi jumlah fragmen DNA target yang akan diamplifikasi (Handoyo dan Rudiretna, 2000). Langkah kedua yaitu  memasukkan  reagen  2X  PCR  Master  Mix  sebanyak  12,5  µl.  2X  PCR  Master  Mix merupakan reagen yang mengandung beberapa senyawa yang berperan penting dalam proses amplifikasi yaitu Taq polymerase, dNTPs ( deoxyribonucleotide triphosphates ), MgCl2 dan buffer . Enzim  Taq  polymerase  berfungsi  sebagai  katalisator  pada  reaksi  polymerase  DNA  serta membantu pelekatan DNA pada primer (Wijaya, 2016). dNTPs bertindak sebagai building block DNA yang diperlukan pada proses pemanjangan untai DNA dengan cara menempel pada gugus -OH primer dan membentuk untai baru yang komplemen dengan DNA template. Buffer dan MgCl2 berfungsi sebagai larutan stabilisasi ion dan sebagai kofaktor yang dapat meningkatkan aktivitas DNA Polymerase (Handoyo dan Rudiretna, 2000). Langkah ketiga yaitu memasukkan Nuclease Free Water sebanyak 7 µl. Nuclease Free Water berfungsi sebagai pelarut DNA (Yusiati,
2014).  Tahap  berikutnya  yaitu  memasukkan  template  DNA  sebanyak  4  µl.  Kemudian, dimasukkan ke dalam Thermal Cycler untuk tahap amplifikasi dan mengatur mesin dengan memilih jenis virus yang akan diperiksa.
Total  siklus  dari  tahap  ekstraksi  yaitu  sebanyak  35  siklus  yang  dapat  menghasilkan berjuta-juta  DNA.  Setiap  siklus  amplifikasi  terdiri  atas  3  tahapan  reaksi  yang  berlangsung dalam  1-2  menit  antara  lain  denaturasi,  anneling,  dan  extension.  Denaturasi  merupakan proses  pengubahan  DNA  target  dari  DNA  beruntai  ganda  (double-stainded  DNA)  menjadi beruntai  tunggal  ( single-strainded DNA)  (Mayagi  et  al.,  2023).  Proses  denaturasi  DNA  KHV menggunakan suhu 94oC selama 30 detik. Hal tersebut sejalan dengan pernyataan Handoyo dan Rudiretna (2000) tergantung pada panjang cetakan DNA dan fragmen DNA target, suhu dan  waktu  denaturasi  berkisar  antara  93-85°C  selama  30-90  detik.  Efisiensi  PCR  akan menurun jika suhu denaturasi terlalu tinggi, dan cetakan DNA mungkin rusak. Sebaliknya, suhu yang terlalu rendah dapat menyebabkan denaturasi parsial pada cetakan DNA.
Annealing  merupakan  proses  menempelkan  primer  pada  DNA  untai  tunggal.  Primer dilekatkan pada dasar dan ujung setiap DNA untai tunggal komplementer sehingga berdekatan dengan daerah tertentu dari rangkaian DNA target (Mayagi et al., 2023). Proses Annealing di Balai KIPM Surabaya I dilakukan dengan pemanasan pada suhu 55°C selama 30 detik. Hal tersebut sesuai dengan pernyataan Zedta dan Setyadji (2019) bahwa waktu anneling yang biasa digunakan dalam PCR adalah 30-45 detik. Suhu annealing optimal dari primer yang digunakan untuk DNA KHV yaitu pada suhu 55°C (Novita et al., 2020).
Extention merupakan proses pemanjangan primer dengan bantuan enzyme polymerase. Dua  DNA  untai  Tunggal  baru  yang  saling  melengkapi  dengan  urutan  DNA  target  akan terbentuk  pada  akhir  prosesnya  (Mayagi  et  al.,  2023).  Proses  extantion  menggunakan pemanasan dengan suhu 72°C selama 60 detik. Hal tersebut sesuai dengan pernyataa Novita et al. (2020) suhu extation yang optimal yaitu pada suhu 72°C dengan waktu 1 menit.

## Elektroforesis Pembuatan larutan TAE Buffer 1X
Tris – acetate – EDTA buffer (TAE buffer ) merupakan larutan penyangga yang biasa digunakan dalam elektroforesis (Masek et al ., 2005). TAE Buffer 1X digunakan sebagai bahan pembuatan gel agarose dan merendam gel agarose saat perlakuan elektroforesis. Pembuatan TAE Buffer 1X sebanyak 500 ml dibuat dengan cara mencampurkan TAE buffer 10X 50 ml dengan 450 ml aquades steril, kemudian dihomogenkan.

## Pembuatan gel agarose 1,5%
Konsentrasi agarose yang digunakan di Balai KIPM Surabaya I yaitu 1,5%. Pembuatan gel agarose  diawali  dengan  penimbangan  1,8  gram  omnipure  agarose  dan meletakkannya  pada beaker glass. Mengukur TAE Buffer 1X sebanyak 120 ml dan memasukkannya pada beaker glass yang sudah terisi oleh omnipure agarose, kemudian dihomogenkan. Selanjutnya larutan tersebut  dipanaskan  hingga  mendidih  menggunakan  microwave  selama  4  menit.  Setelah dipanaskan,  larutan  tersebut  ditambahkan  pewarna  DNA  sebanyak  5  µl,  kemudian dihomogenkan. Larutan agarose tersebut  dituangkan kedalam cetakan ( chamber ) yang telah dipasangi sisir ( chomb ) dan baki, kemudian didiamkan hingga memadat dan cukup dingin.

## Elektroforesis sampel
Elektroforesis  merupakan  metode  pemisahan  fraksi  suatu  zat,  yang  didasarkan  pada migrasi partikel bermuatan atau ion mikromolekul, dibawah pengaruh medan listrik dengan media  gel  agarose  (Slamat  et  al.,  2012).  Prinsip  dari  elektroforesis  yaitu  makromolekul bermuatan  listrik  ditempatkan  dalam  media  yang  mengandung  energi  listrik.  Berdasarkan muatan  yang  terkandung,  molekul-molekul  ini  akan  bermigrasi  menuju  kutub  positif  atau negatif.  Bergantung  pada  muatan  yang  dibawahinya,  molekul-molekul  ini  akan  bergerak  ke arah positif atau negatif. Sebuah molekul dengan bermuatan negatif (anion) bergerak menuju kutub positif, dan sebuah molekul dengan bermuatan positif (kation) bergerak menuju kutub negatif. Ukuran molekul DNA, kepadatan gel yang dilaluinya, dan arus listrik yang digunakan
untuk  menggerakkan  molekul  DNA  semuanya  mempengaruhi  seberapa  cepat  mereka bermigrasi. Migrasi DNA terjadi lebih lambat saat semakin kecil ukurannya dan semakin tinggi proporsinya.  Semakin  besar  arus  yang  diterapkan,  semakin  cepat  migrasi  DNA.  Apabila elektroforesis selesai maka hasil dapat terdeteksi melalui band yang terbentuk (Artati, 2013).
Tahapan  proses  running  elektroforesis  yaitu  meletakkan  gel  agarose  1,5%  yang  sudah memadat  kedalam  tangki  elektroforesis  dengan  posisi  sumur  berada  pada  kutup  anoda. Menambahkan TAE buffer 1X ke dalam tangka elektroforesis hingga gel agarose terlihat sudah terendam sempurna. Memasukkan DNA marker sebanyak 5 µl ke sumur paling tepi pada gel agarose sebagai penanda berat molekul DNA target. Marker berfungsi sebagai penanda atau acuan nilai bp ( basepare ), yang mana setiap garis putih marker bernilai 100. Sundari dan Priadi (2019) menambahkan bahwa untuk mengetahui perkiraan ukuran DNA sampel, DNA marker juga  berfungsi  sebagai  pembanding.  Memasukkan  produk  amplifikasi  PCR  kontrol  positif, kontrol negatif dan sampel uji dengan urut  ke dalam sumur masing-masing sebanyak 8 µl. Tangki  elektroforesis  ditutup  dan  dihubungkan  pada power  supply .  Mengatur  elektroforesis dengan voltase 120 volt dan dengan waktu 40 menit.

## Visualisasi Hasil
Visualisasi  hasil  dilakukan  setelah  proses  running  elektroforesis.  Visualisasi  hasil dilakukan dengan menggunakan UV Transilluminator untuk visualisasi hasil pita band DNA sampel  dengan  sinar  UV.    Berdasarkan  visualisasi  hasil,  didapatkan  bahwa  ikan  koi  yang diperiksa dinyatakan positif KHV. Hasil visualisasi menunjukkan ukuran band DNA 292 bp. Ukuran tersebut berpacu pada SNI ISO/IEC 17025:2017 yang telah digunakan di Balai KIPM Surabaya 1 hingga saat ini. Berdasarkan hasil visualisasi dengan bantuan UV transilluminator dapat  diketahui  hasil  elektroforesis  yang  menunjukkan  bahwa  sampel  Ikan  Koi  yang dinyatakan positif KHV yaitu pada S3 dengan ukuran band DNA 292 bp, sedangkan sampel lainnya dinyatakan negatif. Berdasarkan data yang terlampir terdapat 2 dari 48 Sampel ikan koi yang dinyatakan positif KHV selama dilakukan pemeriksaan. Data tersebut menunjukkan bahwa infeksi dari KHV di daerah Jawa Timur masih tergolong rendah.

## KESIMPULAN
Pemeriksaan  Koi  Herpes  Virus  pada Cyprinus  rubrofuscus di  Balai  Karantina  Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan Surabaya 1 dilakukan dengan metode PCR yang  meliputi  beberapa  tahap  yaitu:  nekropsi,  ekstraksi,  amplifikasi,  elektroforesis  dan visualisasi hasil. Hasil pemeriksaan sampel C. rubrofuscus yang diuji Koi Herpes Virus selama periode 26 Juni 2023 hingga 25 Agustus 2023 dapat disimpulkan bahwa terdapat 2 sampel ikan  koi  yang  menunjukkan  hasil  positif  terinfeksi  KHV,  sedangkan  48  sampel  lainnya menunjukkan hasil negatif atau tidak terinfeksi KHV.

## DAFTAR PUSTAKA
Alim, S. dan Muahiddah, N. 2023. Analisis Kelayakan Usaha Pembenihan Ikan Koi ( Cyprinus carpio ) di Balai Benih Ikan (Bbi) Batu Kumbung, Kecamatan Lingsar. Indonesian Journal Of Aquaculture Medium, 3(2): 58-66. https://doi.org/10.29303/mediaakuakultur.v3i2.2638
Anshary, H. 2011. Identifikasi Molekuler dengan Teknik PCR-Rflp Larva Parasit Anisakis Spp (Nematoda: Anisakidae) Pada Ikan Tongkol ( Auxis Thazard ) dan Kembung ( Rastrelliger Kanagurta ) dari Perairan Makassar. Jurnal Perikanan Universitas Gadjah Mada, 13(2):
70-77. https://doi.org/10.22146/jfs.3064
Aprianto, S. dan Prasetio, E. 2020. Identifikasi dan Prevalensi Virus KHV ( Koi Herves Virus ) Pada Ikan Mas ( Cyprinus carpio ) dengan Menggunakan Metode PCR ( Polymerase Chain Reaction ). Jurnal Borneo Akuatika, 2(1): 48-60.
https://doi.org/10.35800/jplt.6.2.2018.21521
Ariyanti, Y. dan Sianturi, S. 2019. Ekstraksi DNA Total Dari Sumber Jaringan Hewan (Ikan Kerapu) Menggunakan Metode Kit For Animal Tissue. Journal of Science and Applicative Technology, 3(1): 40-45. https://doi.org/10.35472/jsat.v3i1.111
Artati, D. 2013. Sensitivitas Gel Red Sebagai Pewarna RNA Pada Gel Elektroforesis. Balitbang Teknik Akuakultur, 11(1): 11-14. http://dx.doi.org/10.15578/blta.11.1.2013.11-14 Arthur  J.  R.,  M.  G.  Bondad-Reantaso  and  R.  P.  Subasinghe.  2008.  Procedures  for  the Quarantine  Of  Live  Aquatic  Animals:  A  Manual.  FAO  Fisheries  Technical  Paper,  502: 74p.
Dahlia, D., Syahriadi, K. dan Mega, D. A. U. 2022. Perseptif Finansial Penambahan Tepung Spirulina sebagai Sumber Karotenoid dalam Pakan Juvenil Ikan Koi ( Cyprinus carpio ).
Agrokompleks, 22(1): 51-57. https://doi.org/10.51978/japp.v22i1.469 Dahruddin, H. 2011. Ikan Botia Maskotnya Ekspor Ikan Hias Asli Indonesia. Fauna Indonesia. 1(1): 17-21.
[DJPB] Direktorat Jendral Perikanan Budidadaya. 2018. Laporan Indikator Kinerja Triwulan I. Jakarta (ID). Direktorat Jendral Perikanan Budidaya
[DJPB] Direktorat Jendral Perikanan Budidadaya. 2019. Laporan Indikator Kinerja Triwulan I.
Jakarta (ID). Direktorat Jendral Perikanan Budidaya.
Damayanti, R., Fatiqin, A. dan Trismawanti, I. (2021). Teknik Ekstraksi Jaringan DNA Ikan Sidah ( Anguilla sp.) di BRPPUPP Palembang. In Prosiding Seminar Nasional Sains dan Teknologi Terapan, 4(1): 309-319).
Faezan,  I.,  Kurniawati,  K.,  Rahmawati,  A.  dan  Septian,  I.  G.  N.  2023.  Pengaruh  Pemberian Minyak  Hati  Ikan  pada  Pakan  Buatan  dengan  Dosis  yang  Berbeda  terhadap Pertumbuhan Benih Ikan Koi ( Cyprinus carpio ). Al-Aqlu: Jurnal Matematika, Teknik dan Sains, 1(1): 46-50. https://doi.org/10.59896/aqlu.v1i1.10
Fathoni, M. Z., Rahmania, R. N. R. Zakiyatul, R., M. Hamzah dan A. Fitriyah. 2019. Proses Pembuatan dan Pemanfaatan Limbah Tulang Ikan Binggul Menjadi Kerupuk Tuibee di Desa Daun Dusun Daun Barat Club Syebhen Star Sangkapura Pulau Bawean. Journal of Community Service, 1(1) : 18-34. http://dx.doi.org/10.30587/dedikasimu.v1i1.1091
Handoyo,  D.  dan  Rudiretna,  A.  2000.  Prinsip  Umum  dan  Pelaksanaan Polymerase  Chain Reaction (PCR). Unitas, 9(1): 17-29.
Heri,  H.  Nasution  &  H.  S.  Pratiw.  2003.  Diagnosis  Penyakit  Akibat  Infeksi  Virus  Certainty Factor, Pp. 1 – 6.
Husna, N., Kenconojati, H., Ulkhaq M. F. dan Habib, A. 2020. Pemeriksaan Tilapia Lake Virus (Tilv) pada Komoditas Ikan Nila ( Oreochromis niloticus) . Journal Of Aquaculture, 5(2): 77- 87. 10.31093/joas.v5i2.95
Hutoran,  M.,  A. Ronen,  A.  Perelberg,  M. Illouze,  A.  Dishon,  I.  Bejerano, N. Chen,  M. Kotler. 2005. Description of an as Yet Unclassified DNA Virus from Diseased Cyprinus carpio Species. Journal of Virology, 79(4): 1983-1991. https://doi.org/10.1128/jvi.79.4.1983- 1991.2005
Iqbal, M., Buwono, I. D., dan Kurniawati, N. 2016. Analisis Perbandingan Metode Isolasi DNA Untuk  Deteksi White  Spot  Syndrome  Virus (WSSV)  Pada  Udang  Vaname  ( Litopenaeus vannamei ). Jurnal Perikanan Kelautan, 7(1): 54-65.
Khofifah, A., Abida, I. W. dan Khusna, A. 2023. Pemeriksaan WSSV (White Syndrome Virus) Dengan  Uji  PCR  ( Polymerase  Chain  Reaction )  Pada  Udang  Vannamei  ( Litopenaeus vannamei )  di  UPT  Laboratorium  Kesehatan  Ikan  dan  Lingkungan,  Pasuruan  Jawa Timur.  Juvenil:  Jurnal  Ilmiah  Kelautan  Dan  Perikanan,  4(2):  142-151. 10.21107/juvenil.v4i2.16462
Kilawati,  Y.,  Kartikasari,  D.  P.  P.,  Bhawiyuga,  A.,  Maimunah,  Y.  dan  Muttaqin,  A.  2021. Memanfaatkan  Internet  of  Aquaculture  dalam  Meningkatkan  Kualitas  Produksi  pada Kelompok  Pembudidaya  Ikan  Koi  di  Blitar.  Journal  of  Innovation  and  Applied Technology, 7(2): 1321-1325.
Kurniaji, A., Renitasari, D. P., Yunarty, Y. dan Anton, A. 2022.  Gejala Klinis dan Perubahan Tingkah Laku Ikan Mas ( Cyprinus carpio ) yang Terinfeksi Koi Herpesvirus (KHV). Jurnal Salamata, 3(1): 13-19. http://dx.doi.org/10.15578/salamata.v3i1.11258 Kurniawati, M. D., S. Sumaryam dan I. Hayati, I. 2019. Aplikasi Polymerase Chain Reaction (PCR) Konvensional Dan Real Time-Pcr Untuk Deteksi Virus VNN ( Viral Nervous Necrosis ) Pada Ikan Kerapu Macan ( Epinephelus fuscoguttatus ). Techno-Fish, 3(1): 19-30.
Linnaeus, C. (1758). Systema Naturae Per Regna Tria Naturae, Secundum Classes, Ordines, Genera,  Species,  Cum  Characteribus,  Differentiis,  Synonymis,  Locis.  Editio  Decima, Reformata [10th Revised Edition], Vol. 1: 824 Pp.
Masek,  T.,  Vopalensky,  V.,  Suchomelova,  P.  and  Pospisek,  M.  2005.  Denaturing  RNA Electrophoresis  in  TAE  Agarose  Gels.  Analytical  biochemistry,  336(1):  46-50. https://doi.org/10.1016/j.ab.2004.09.010
Mayagi, J., Kotta, R., Kurniawati, K. dan Septian, I. G. N. 2023. Studi Identifikasi Virus KHV
( Koi Herpes Virus) Pada Ikan Koi ( Cyprinus carpio ). Al-Aqlu: Jurnal Matematika, Teknik Dan Sains, 1(2): 91-98. https://doi.org/10.59896/aqlu.v1i2.24
McCleary,  S.,  Ruane,  N.  M.,  Cheslett,  D.,  Hickey,  C.,  Rodger,  H.  D.,  Geoghegan,  F.  and Henshilwood, K. 2011. Detection of Koi Herpesvirus (KHV) in Koi Carp ( Cyprinus carpio L.) Imported into Ireland. Fish Pathol., 31(3): 124-128.
http://hdl.handle.net/10793/952
Meslilesi, M. I., Anra, H. dan Pratiwi, H. S. 2017. Penerapan Augmented Reality Sebagai Media Pembelajaran  Virus  Dalam  Mata  Pelajaran  Biologi  Kelas  X  SMA  (Studi  Kasus:  SMA Negeri 7 Pontianak). JUSTIN (Jurnal Sistem Dan Teknologi Informasi), 5(2): 80-84. Novita, H., Sugiani, D., Taukhid, T. dan Sumiati, T. 2020. Duplex Polymerase Chain Reaction untuk  Deteksi  Simultan  Koi  Herpesvirus  dan  Aeromonas  Hydrophila  Pada  Ikan  Mas ( Cyprinus carpio ). Jurnal Riset Akuakultur, 15(1): 59-67. http://dx.doi.org/10.15578/jra.15.1.2020.59-67
Nurekawati, A. D., I. S. Putra dan R. N. Soelistyoadi. 2023. Deteksi Molekuler Tilv ( Tilapia Lake Virus )  Pada  Ikan  Nila  ( Oreochromis  niloticus )  yang  Dilalulintaskan  di  Balai  Karantina Ikan, Pengendalian Mutu Dan Keamanan Hasil Perikanan Surabaya I Jawa Timur. E- Jurnal Unair, 1(1): 1-12. 10.20473/mkh.v34i1.2023.1-12
Panduheriana, U. Y. 2019. Studi Kejadian Ektoparasit Pada Pembesaran Ikan Bawal Bintang ( Trachinotus blochii )  Di Balai  Layanan  Usaha  Produksi  Perikanan  Budidaya  (BLUPPB) Karawang,  Jawa  Barat.  Jurnal  Akuakultur  Rawa  Indonesia,  7(1):  46-54. https://doi.org/10.36706/jari.v7i1.9026
Pertiwi, N. P. D. Dan N. L. Watiniasih. 2015. Optimasi Amplifikasi DNA Menggunakan Metode PCR ( Polymerase Chain Reaction )  Pada  Ikan Karang  Anggota  Famili  Pseudochromidae (Dottyback) untuk Identifikasi Spesies secara Molekular. Jurnal Biologi Udayana, 19(2):
1-5. https://doi.org/10.24843/JBIOUNUD.2015.vol19.i02.p01
Pikarsky, E., Ronen, A., Abramowitz, J., Levavi-Sivan, B., Hutoran, M., Shapira, Y. and Kotler, M.  2004.  Pathogenesis  of  Acute  Viral  Disease  Induced  in  Fish  by  Carp  Interstitial Nephritis  and  Gill  Necrosis  Virus.  Journal  of  virology,  78(17):  9544-9551.
https://doi.org/10.1128/jvi.78.17.9544-9551.2004 Putri, P. K. P. D. dan Yustiantara, I. P. S. 2023. Efektivitas Sterilisasi Dengan Ozon (O3) Pada Peralatan  Laboratorium  sebagai  Upaya  Penjaminan  Kualitas  dan  Mutu.  Journal Scientific Of Mandalika (Jsm), 4(5): 62-70. https://doi.org/10.36312/10.36312/vol4iss5pp62-70
Quynh, L. T., Nguyen, N. T. T., Phu, H. V. and Tuan, H. A. 2020. Morphological Characteristics for Classification of genus Cyprinus linnaeus , 1758 in Phong nha-ke Bang National Park in the North Central part of Vietnam. Studia Universitatis Moldaviae (Seria Ştiinţe Reale şi ale Naturii), 131(1): 140 -148. https://doi.org/10.5281/zenodo.3954017 Rahardja,  U.,  E.  P.  Harahap  Dan  S.  Pratiwi.  2018.  Pemanfaatan  Mailchimp  Sebagai  Trend Penyebaran Informasi Pembayaran Bagi Mahasiswa Di Perguruan Tinggi. Technomedia Journal: 2(2): 41-54. https://doi.org/10.33050/tmj.v2i2.323
Rahmawanti. A, Setyowati. N.D. Mukhlis. A. 2021. Histopatological Of Brain, Eye, Liver, Spleen Organs  of  Grouper  Suspected  VNN  In  Penyambuan  Village,  North  Lombok.  Journal Biology Tropis, 21(1): 140 – 148.
Ristiyawan, B., S. Anggoro Dan B. Yulianto. 2013. Peranan Implementasi Kebijakan Karantina Ikan dalam Pembangunan Perikananan Berkelanjutan. In Prosiding Seminar Nasional Pengelolaan Sumberdaya Alam dan Lingkungan, Semarang: Universitas Diponegoro, 6- 12.
Saragih,  M.  Dan  Junaidi.  2021.  Deteksi  Penyakit  TILV  ( Tilapia  Lake  Virus )  Pada  Ikan  Nila ( Oreochromis niloticus ) Dengan Metode RT-PCR di Balai KIPM Medan I. Jurnal Perikanan Unram, 11(2): 186-194. https://doi.org/10.29303/jp.v11i2.254
Saselah, J., E. O. Langi dan F. Hatimanis. 2019. Potensi Budidaya Ikan Air Tawar di Kabupaten
Kepulauan Sangihe. Jurnal Ilmiah Tindalung, 5(2): 43-48. https://doi.org/10.5281/jit.v5i2.254
Setyorini, N., Khusnah, A., Widajatiningrum, L. dan Bangil, M. T. L. P. B. 2008. Kelangsungan Hidup  Ikan  Koi  ( Cyprinus  carpio Koi)  Yang  Terinfeksi  Khv  ( Koi  Herpesvirus ).  Berkala Ilmiah Perikanan, 3(1): 57-65.
Slamat,  S.,  Marsoedi,  M.,  Mursyid,  A.  dan  Arfiati,  D.  2016.  Konservasi  genetik  ikan  betok ( Anabas  testudineus Bloch  1792)  di  perairan  rawa,  Kalimantan  Selatan.  Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia, 18(1): 9-15. http://dx.doi.org/10.15578/jppi.18.1.2012.9-15
Soelistyoadi, R. N., Nurekawati, A. D. dan Setyawati, D. 2020. Morfologi dan Sekuensing DNA Myxobolus koi yang Menginfeksi Ikan Koi ( Cyprinus carpio ) di Kabupaten Blitar. Journal Of Aquaculture, 5(1): 155-169. https://doi.org/10.31093/joas.v5i1.89 Sudana, I. W. 2019. Analisis Efisiensi Pemasaran Ikan Teri Segar Hasil Tangkapan Nelayan Di Desa Sanggalangit Kabupaten Buleleng. Jurnal Pendidikan Ekonomi Undiksha, 11(2): 637-648. https://doi.org/10.23887/jjpe.v11i2.21872
Sulandari, S. Dan M. S. A. Zein. 2003. Panduan Praktis Laboratorium DNA. Bidang Zoologi Pusat Penelitian Biologi LIPI, Hal 72-87.
Sunandar,  D.  Dan  I.  Imron.  2010.  Optimalisasi  Templat  DNA  Genom  Udang  Galah,
Macrobrachium  rosenbergii  Dalam  Proses  PCR-RAPD.  In  Prosiding  Forum  Inovasi Teknologi Akuakultur, Pp. 561-565.
Suprapto, H. dan Kartika, Y. 2012. Pemantauan Virus dengan Metode PCR ( Polymerase Chain Reaction ) di Pantai Utara Jawa Timur. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan, 4(1): 65- 71.
Suryanto,  H.,  Susilo,  B.  D.,  Aminnudin,  A.,  Sukarni,  S.,  Suprayitno,  S.,  Marsono,  M.  dan Yanuhar, U. 2021. Pelatihan Pemeliharaan Ikan Koi untuk Pengembangan Wisata Ikan di Kawasan Bedengan, Selorejo, Malang. Jurnal Pengabdian Pendidikan dan Teknologi (JP2T), 2(1): 14-22.
Taufiq,  R.,  dan  Najmudin,  N.  2017. Rancang Bangun  Sistem  Informasi  Sterilisasi  Alat  Pada Unit  CSSD  Berbasis  Java  di  RSUD  Kota  Tangerang.  Jurnal  Informatika:  Jurnal Pengembangan IT, 2(1): 42-49. https://doi.org/10.30591/jpit.v2i1.443 Ulfiana  R,  G.Mahasri,  dan  H.Suprapto.  2012.  Tingkat  Kejadian Aeromonas pada  Ikan  Koi Cyprinus  carpio yang  Terinfeksi  Myxobolus  koi  Pada  Derajat  Infeksi  Yang  Berbeda. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan. 4(2): 169-174.
Utami, S. T., Kusharyati, D.F. dan Pramono, H. 2013. Pemeriksaan Bakteri Leptospira Pada Sampel Darah Manusia Suspect Leptospirosis Menggunakan Metode PCR ( Polymerase Chain Reaction ). Balaba. 9(2): 74-81.
Wijaya, S. K. 2016. Gibson Assembly Piranti Enximatis Terbaru Dalam Teknologi Rekombinasi DNA. Biotrends, 6(2): 14-18.
Wijayanto,  D.  S.  M.,  Solichin,  A.  Dan  Widyorini,  N.  2013.  Pengaruh  Ekstrak  Bawang  Putih ( Allium  sativum )  dengan  Dosis  yang  Berbeda  terhadap  Lepasnya  Suckers  Kutu  Ikan ( Argulus sp.) pada Ikan Koi ( Cyprinus carpio ). Management of Aquatic Resources Journal (MAQUARES), 2(2): 46-53. https://doi.org/10.14710/marj.v2i2.4103
Yanuhar,  U.  Dan  N.  R.  Caesar.  2020.  Penyakit  Virulogik  pada  Ikan.  Universitas  Brawijaya Press, 164 Hal.
Yanuhar,  U.,  Musa,  M.  dan  Wuragil,  D.  K.  2019.  Pelatihan  dan  Pendampingan  Manajemen Kualitas Air dan Kesehatan Pada Budidaya Ikan Koi ( Cyprinus carpio ). Jurnal Karinov, 2(1): 69-74.
Yeni, M., Eri, B, dan M, Untung Kurnia, A. Peranan Senyawa Metabolit Sekunder Tumbuhan Mangrove  Terhadap  Infeksi  Bakteri  Aeromonas  hydrophila  Pada  Ikan  Mas  ( Cyprinus carpio L). Jurnal Akuatika, 4(1): 1-9.
Yuenleni. 2019. Langkah-Langkah Optimalisasi PCR ISSN 2655 4887 (Print), ISSN 2655 1624 (Online) ISSN 2655 4887 (Print), ISSN 2655 1624 (Online), 1(3): 51 – 56. Yusuf, Z. K. 2010. Polymerase Chain Reaction (PCR). Jurnal Saintek, 5(6): 1-6. Zedta, R. R. dan Setyadji, B. 2019. Optimalisasi PCR Ikan Tongkol Krai ( Auxis thazard ) Dan Lisong ( Auxis rochei ) Pada Analisis Keragaman Genetik.  Bawal Widya Riset  Perikanan Tangkap, 11(2): 95-102. http://dx.doi.org/10.15578/bawal.11.2.2019.95-102 Zellatifanny, C. M. dan Mudjiyanto, B. 2018. Tipe penelitian deskripsi dalam ilmu komunikasi. Diakom: Jurnal Media Dan Komunikasi, 1(2): 83-90.