## Jurnal Ilmu Farmasi dan Farmasi Klinik (JIFFK)
Vol.17, No.1, Juni 2020, Hal. 01-07 ISSN: 1693 7899; e-ISSN: 2716 3814

## AKTIVITAS ANTIPLASMODIUM EKSTRAK HIDROTROPI DAUN
SAMBILOTO ( Andrographis paniculata Ness.) SECARA In Vitro PADA Plasmodium falciparum STRAIN G-2300 RESISTEN KLOROQUIN
Yance Anas 1*) , Rita Dwi Ratnani 2) , Laeli Kurniasari 2) dan Indah Hartati 2)
1 Bagian Farmakologi dan Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim, Semarang
2 Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik Universitas Wahid Hasyim, Semarang *Email: yance.apt@gmail.com

## INTISARI
Ekstrak  daun  sambiloto  ( Andrographis  paniculata Ness.)  telah  lama  dikenal  sebagai  antimalaria. Telah  dikembangkan  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto  (EHDS)  dengan  menggunakan  larutan senyawa  hidrotop  sodium  asetat  2  mol/L.  Proses  ekstraksi  berlangsung  selama  2 jam,  lebih  cepat dibandingkan  proses  ekstraksi  secara  konvensional.  Hasilnya  adalah  dua  jenis  EHDS  dengan perbedaan suhu pengadukan, yaitu pada suhu 30°C (EHDS1) dan suhu 35°C (EHDS2). Penelitian ini  bertujuan  untuk  menentukan  dan  membandingkan  aktivitas  antiplasmodium  EHDS1  dan EHDS2  secara  in  vitro.  Uji  aktivitas  antiplasmodium  EHDS1  dan  EHDS2  (0,1-50,0)  g/mL dilakukan  secara  tripilikat  pada P.  falciparum strain  G-2300  resisten  kloroquin  yang  diinkubasi selama  48  jam.  Persentase  parasitemia  diukur  dengan  melihat  apusan  darah  setelah  diwarnai dengan  pewarna  Giemsa.  Persentase  hambatan  pertumbuhan P.falciparum dihitung  dengan membandingkan  persentase  pertumbuhan  parasitemia  dengan  kelompok  kontrol  dan  nilai  IC 50 dihitung dengan analisis probit. Hasil penelitian menunjukkan bahwa EHDS1 dan EHDS2 mampu menghambat  pertumbuhan P.  falciparum strain  G-2300  resisten  kloroquin  berturut-turut  sebesar (14,62-43,25)% dan (24,06-49,48)%. Nilai IC 50 EHDS1 dan EHDS2 adalah sebesar 59,689 μg/mL dan 44,541 μg/mL. Berdasarkan data tersebut, EHDS sebaiknya dibuat dari larutan sodium asetat 2 mol/L dengan pengadukan pada suhu 35 °C karena aktif sebagai antiplasmodium.
Kata kunci :   Antiplasmodium, ekstrak hidrotropi daun sambiloto, P. falciparum strain G-2300, in vitro

## ABSTRACT
The bitter leaf extract (Andrographis paniculata Ness.) has long been known as an anti-malarial. Our  previous  research  has  developed  a  bitter  leaf  hydrotrophy  extract  (BLHE)  using  a  sodium acetate 2 mol/L as a hydrotop compound solution. The extraction process lasts for 2 hours, faster than conventional extraction. The result is two types of BLHE with different stirring temperatures, at 30°C (BLHE1) and 35°C (BLHE2). This study meant to determine and compare the in vitro anti- plasmodial activity BLHE1 and BLHE2. The anti-plasmodial activity of BLHE1 and BLHE2 (0.1- 50.0) g/mL performed on a G-2300 strain of P. falciparum (chloroquine-resistant) after incubated for  48  hours  (triplicate).  The  percentage  of  parasitemia  determined  through  an  examination  of blood smears stained with Giemsa. The percentage of growth inhibition of P. falciparum evaluates by comparing percentage of growth with the control group and IC 50 determine by probit analysis. The  results  showed  that  BLHE1  and  BLHE2  respectively  were  able  to  inhibit  the  growth  of  P. falciparum of 14.62% - 43.25% (IC 50 : 59.689 μg/mL) and 24.06% - 49.48% (IC 50 : 44.541 μg/mL).
Based  on  these  data,  BLHE  should  produce  with  sodium  acetate  2  mol/L,  with  stirring  at  35°C, because this condition will obtain BLHE that active as anti-plasmodial.
Keywords :   Anti-plasmodial,  bitter  leaf  hydrotrophy  extract,  P.  falciparum  strain  G-2300,  in vitro
*Corresponding author:
Nama : Yance Anas Institusi : Bagian Farmakologi & Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Alamat institusi  : Jl. Menoreh Tengah X/22 Sampangan Semarang 50536 E-mail : yance.apt@gmail.com

## PENDAHULUAN
Sambiloto  merupakan  salah  satu  sumber  bahan  obat  tradisional  yang  sangat  popular  di berbagai  negara  kawasan  asia,  termasuk  di  Indonesia.  Tanaman jenis  perdu  yang  dikenal  sabagai “Raja Pahit” ini diyakini memiliki banyak khasiat untuk menyembuhkan berbagai macam penyakit, seperti  influenza,  penyakit  saluran  cerna  dan  pernafasan,  herpes,  demam,  infeksi  saluran pernafasan,  dan  berbagai  penyakit  infeksi  lainnya,  termasuk  malaria  (Prapanza  dan  Marianto, 2003).  Berbagai  ekstrak  dari  tanaman  ini  telah  diuji  khasiatnya  dalam  menghambat  pertumbuhan plasmodium  sebagai  penyebab  penyakit  malaria.  Ekstrak  terstandar  sambiloto  terbukti  mampu menghambat pertumbuhan Plasmodium berghei pada mencit (Kusumawardhani dkk., 2005). Hasil penelitian  Resi  (2014),  juga  menyebutkan  bahwa  ekstrak  etanol  herba  sambiloto  memiliki  efek antimalaria  pada Plasmodium  falciparum secara  in  vitro.  Senyawa  aktif  yang  banyak  terkandung dalam daun sambiloto adalah andrografolid, neoandrografolid, 14-deoksi-11,12- didehidroandrografolid,  14-deoksiandrografolid,  isoandrografolid,  homoandrografolid,    14- deoksiandrografolid  19  β–D-glukosida,    andrografan,  andrografosterin,  dan  stigmasterol. Andrografolid  telah  terbukti  memiliki  efek  hepatoprotektor,  menghambat  replikasi  DNA  virus HIV,  efek  virisidal  terhadap  virus  herpes,  menghambat  proliferasi  berbagai  sel  kanker,  efek antiinflamasi  dan  antipiretik,  efek  antimalaria  dengan  menghambat  pertumbuhan Plasmodium berghei dan Plasmodium  falciparum ,  serta  efek  antidiare  dengan  menghambat  motilitas  usus (Jarukamjorn dan Nemoto, 2008).
Sampai saat ini, belum ada satupun senyawa aktif dari sambiloto yang telah dikembangkan dan dipasarkan untuk keperluan pengobatan malaria. Sediaan yang telah ada adalah dalam bentuk jamu  yang  berisi  esktrak  daun  sambiloto  yang  diformulasikan  dalam  sediaan  kapsul  (Ardhyani, 2012).  Jika  masih  dikembangkan  dalam  bentuk  jamu  atau  obat  herbal  terstandar  yang  bermutu, maka  kualitas  proses  ekstraksi  harus  terus  ditingkatkan,  terutama  perlu  dilakukan  optimasi  yang bertujuan  untuk  mencegah  kerusakan  senyawa  aktif  dalam  daun  sambiloto,  terutama  pada  saat proses  ekstraksi.  Sampai  saat  ini,  beberapa  metode  ekstraksi  konvensional  sambiloto  masih menyisakan masalah. Sambiloto dapat diekstraksi dengan cairan penyari alkohol, seperti dimaserasi menggunakan  etanol  85% selama  2 jam  pada  suhu  75-80  °C  (Yan  dkk.,  2008)  dan  metanol  60% selama  1  jam  (Avanigadda  dan  Vangalapati,  2010).  Meskipun  efektif,  metode  konvensional tersebut  dapat  mengakibatkan  degradasi  pada  senyawa  andrografolid,  karena  senyawa  tersebut dapat rusak oleh panas berlebih (Lomlin dkk., 2003). Selain itu, adrografolid juga dapat mengalami reaksi  esterifikasi  dengan  alkohol  (Wongkittipong  dkk.,  2004)  yang  dapat  berdampak  pada penurunan intensitas efek farmakologi andrografolid.
Salah  satu  alternatif  yang  dapat  diterapkan  dalam  ekstraksi  daun  sambiloto  adalah menggunakan teknik ekstraksi hidrotropik. Beberapa keunggulan ekstraksi daun sambiloto dengan metode ini antara lain tidak menggunakan pelarut alkohol, proses ekstraksi dilakukan pada kondisi suhu  dan  tekanan  rendah  sehingga  diharapkan  dapat  mencegah  degradasi  andrografolid,  serta
menggunakan  medium  air  yang  dapat  menghemat  biaya  produksi  (Ratnani  dkk.,  2012).  Ekstraksi hidrotropik  dilakukan  dengan  menggunakan  senyawa  hidrotop  yang  mampu  meningkatkan kelarutan senyawa aktif kurang larut air atau bahkan tidak larut dalam air (Dandeekar dkk., 2008). Metode  ekstraksi  ini  diprediksi  cukup  tepat  digunakan  untuk  produksi  ekstrak  daun  sambiloto karena senyawa andrografolid merupakan senyawa yang sukar larut dalam air.
Penelitian  sebelumnya  telah  menghasilkan  ekstrak  hidrotropik  daun  sambiloto  dengan menggunakan larutan senyawa hidrotop sodium asetat 2 mol/L. Ekstrak yang didapatkan berbentuk serbuk kering padat, berwarna hijau tua, tidak berbau dan berasa sangat pahit. Ekstrak tersebut juga telah dipastikan mengandung senyawa andrografolid (Ratnani dkk., 2015). Penelitian ini bertujuan untuk  menguji  aktivitas  antiplasmodium  ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto  secara  in  vitro  pada Plasmodium  falciparum strain  G-2300  (resisten  kloroquin).  Ekstrak  hidrotropi  daun  sambiloto dibuat  dengan  dua  kondisi  yang  berbeda  berdasarkan  suhu  pengadukan,  yaitu  pada  suhu  30°C (EHDS1) dan 35°C (EHDS2).

## METODE PENELITIAN Bahan dan Alat
Bahan  utama  yang  digunakan  adalah  herba  sambiloto  yang  dipanen  dari  desa  Sadeng, Kecamatan  Gunungpati,  Semarang,  Jawa  Tengah.  Determinasi  tanaman  ini  dilakukan  di Laboratorium  Biologi,  Fakultas  MIPA  Universitas  Diponegoro,  Semarang.  Bahan  lain  yang digunakan  adalah  sodium  asetat  anhidrat  (Merck),  isolat  beku Plasmodium  falciparum strain  G- 2300  (Laboratorium  Parasitologi  FK-UGM),  buffer  Hepes (N-(2-hidroksietil)piperazin-N-(2-asam etansulfonat))  (Sigma),  medium  kultur  malaria  lengkap  RPMI  1640  (Sigma)  yang  terdiri  dari NaHCO 3 , D-sorbitol, gentamisin sulfat, serum dan sel  darah manusia golongan O ± (sukarelawan, laboratorium  Farmakologi  dan  Terapi,  Fakultas  Kedokteran  UGM),  akuades  (Otsuka),  DMSO (Sigma), dan pewarna Giemsa (Merck). Alat yang digunakan diantaranya oven (Memmert), ayakan 40 Mesh, pengaduk magnetik (IKA ® C-MAG HS7), pipet ukur, pipet mikro (Gilson), pipet Pasteur, microplate 96  sumuran  (NunclonTM),  tabung  heparin  (Vacuette), dissosable  conical  tubes (NuncTM), tissue culture flask (TCF) 50 mL (NunclonTM), sentrifus (Eppendorf), inkubator CO 2 (Napco), laminar  air  flow (Labconco),  filter  0,22µm  (Achrodisc), waterbath , candle  jar dan mikroskop (Zeiss).

## Pembuatan Ekstrak Hidrotropi Daun Sambiloto
Pembuatan  simplisia  kering  daun  sambiloto  dimulai  dari  pemisahan  daun  dari  bagian  lain (sortasi  basah),  pencucian  dengan  air  mengalir,  pengeringan  dalam  oven  (suhu  40±5  °C)  hingga kadar air kurang dari 10%. Ukuran simplisia daun sambiloto diperkecil dan diayak dengan ayakan 40 Mesh. Sebanyak masing-masing 20 g serbuk simplisia daun sambiloto direndam dalam 200 mL larutan  sodium  asetat  2  mol/L,  diaduk  menggunakan  pengaduk  magnetik  selama  dua  jam (kecepatan:  1.100  rpm  pada  suhu  30°C  (EHDS1)  dan  35°C  (EHDS2),  dibiarkan  selama  satu  jam dan  disaring.  Ampas  dicuci  kembali  dengan  akuades  dan  selanjutnya  larutan  ekstrak  dibiarkan selama  satu  jam  hingga  terbentuk  endapan  ekstrak.  EHDS1  dan  EHDS2  disentriguasi  dengan kecepatan 3.000 rpm, diambil dan dikeringkan dalam oven pada suhu suhu 40±5 °C (Ratnani dkk., 2015).

## Kultur Plasmodium falciparum secara In Vitro
Modifikasi  metode  Trager  dan  Jensen  (1976)  digunakan  untuk  menumbuhkan Plasmodium falciparum strain  G-2300  resisten  kloroquin.  Plasmodium  ditumbuhkan  secara  in  vitro  dalam  sel darah merah manusia (O ± ), kemudian dilarutkan dengan hematokrit 1% dalam medium RPMI 1640 (gentamisin  20  g/mL,  23,78  mM  NaHCO 3 ,  7,68  mM  buffer  Hepes  dan  10%  serum  darah  merah manusia  (O ± )).  Cawan  petri  yang  berisi  kultur  plasmodium  dimasukkan  ke  dalam candle  jar dan selanjutnya  diinkubasi  dalam  inkubator  CO 2 pada  suhu  37°C.  Pengamatan  pertumbuhan plasmodium dilakukan setiap hari.

## Uji Aktivitas Antiplasmodium EHDS secara In Vitro
Sebelum  dicampur  dengan  EHDS,  kondisi  parasitemia  harus  dipastikan  sebesar  1%  dan hematokrit  sebesar  5%  dengan  cara Plasmodium  falciparum strain  G-2300  disuspensikan  dengan media  RPMI  1640.  Sebanyak  100  μL  suspensi  parasit  tersebut  selanjutnya  dimasukkan  ke  dalam lempeng  mikrokultur  96-sumuran.  Sementara  itu,  EHDS1  dan  EHDS2  dilarutkan  dengan  DMSO untuk  mendapatkan  konsentrasi  (0,1;  0,5;  1,0;  5,0;  10,0  dan  50,0)  μg/mL  dan  masing-masing diambil  sejumlah  100  μL  untuk  dimasukkan  ke  dalam  sumuran  yang  mengandung  parasit. Pengujian  ini  dilakukan  secara  triplikat.  Mikrokultur  yang  telah  berisi  parasit  dan  peringkat konsentrasi EHDS1 dan EHDS 2 diinkubasi dalam inkubator CO 2 pada suhu 37°C selama 48 jam. Selanjutnya, kultur dipanen dan dibuat sediaan apusan darah menggunakan pewarna Giemsa 10%. Pengamatan  dan  penghitungan  jumlah  eritrosit  yang  terinfeksi  dari  1000  eritrosit  dilakukan menggunakan mikroskop.

## Analisis Data
Data  yang  didapatkan  adalah  persentase  parasitemia  (1)  dan  persentase  hambatan pertumbuhan  parasit  (2).  Nilai  IC 50 yang  menggambarkan  aktivitas  antiplasmodium  EHDS1  dan EHDS2 dihitung menggunakan analisis probit pada taraf kepercayaan 95% (α: 0,05) menggunakan software SPSS versi 16.00
……(1) . ….. (2)

## Keterangan
Pk : % Pertumbuhan parasitemia kelompok kontrol negatif Pe : % Pertumbuhan parasitemia kelompok EHDS

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil uji aktivitas antiplasmodium secara in vitro menunjukkan bahwa EHDS1 dan EHDS2 mampu  menghambat  pertumbuhan Plasmodium  falciparum strain  G-2300  resisten  kloroquin. Penghambatan  pertumbuhan  plasmodium  akibat  perlakuan  EHDS1  dan  EHDS2  selama  48  jam dapat dilihat pada Gambar 1, Tabel I dan Tabel II.
Gambar 1. Penghambatan  pertumbuhan P.  falciparum strain  G-2300  setelah  mendapat  perlakuan EHDS1 dan EHDS2 selama 48 jam
Tabel I.  Persentase Parasitemia dan Hambatan Pertumbuhan P. falciparum Strain G-2300 setelah Perlakuan EHDS1 selama 48 jam
Kons. (μg/mL) Rep. % Parasitemia % Pertumbuhan % Hambatan Pertumbuhan Rata- rata IC 50 (μg/mL) jam ke-0 jam ke-48
0,10 1 0,7 8,06 7,36 9,88 14,62 59,689 2 0,7 7,32
6,62 18,94 3 0,7 7,64 6,94 15,04 0,50 1 0,7 5,98 5,28 35,34 24,61 2 0,7 7,80 7,10 13,07 3 0,7 6,79 6,09 25,42 1,00 1 0,7 5,81
5,11 37,37 29,11 2 0,7 7,25 6,55 19,72 3 0,7 6,39 5,69 30,24 5,00 1 0,7 5,99 5,29 35,21
40,30 2 0,7 5,90 5,20 36,26 3 0,7 4,83 4,13 49,42 10,00 1 0,7 5,20 4,50 44,83 41,18 2 0,7 5,22 4,52 44,63 3 0,7 6,08 5,38 34,09 50,00 1 0,7 4,78 4,08
50,03
43,25 2 0,7 6,90 6,20 24,05 3 0,7 4,32 3,62 55,69 Kontrol (-) 1 0,7 9,50 8,80 2 0,7 8,59 7,89 3 0,7 8,50 7,80 Rata-rata % Pertumbuhan Kontrol (-) 8,163
Tabel II. Persentase Parasitemia dan Hambatan Pertumbuhan P. falciparum Strain G-2300 setelah Perlakuan EHDS2 Selama 48 jam
Kons. (μg/mL) Rep. % Parasitemia
%
Pertumbuhan % Hambatan Pertumbuhan Rata- rata IC 50 (μg/mL) jam ke-0 jam ke-48 0,10
1 0,7 5,82 5,12 37,28 24,06 44,541 2 0,7 8,04
7,34 10,04 3 0,7 6,83 6,13 24,87 0,50 1 0,7 6,47 5,77 29,34 20,89 2 0,7 7,14 6,44 21,16 3 0,7 7,87 7,17 12,18 1,00 1 0,7 6,79
6,09 25,42 23,47 2 0,7 5,86 5,16 36,79 3 0,7 8,19 7,49 8,19 5,00 1 0,7
4,45
3,75 54,05 41,37 2 0,7 6,27 5,57 31,79 3 0,7 5,74 5,04 38,27 10,00 1 0,7 4,09 3,39 58,45 44,57 2 0,7 5,25 4,55 44,22 3 0,7 6,33 5,63 31,06 50,00 1 0,7 4,42 3,72 54,44 49,48 2 0,7 5,59 4,89 40,12 3 0,7 4,47 3,77 53,87 Kontrol (-) 1 0,7 9,50 8,80 2 0,7 8,59 7,89 3 0,7 8,50 7,80 Rata-rata % Pertumbuhan Kontrol (-) 8,163
Data hasil uji antiplasmodium menunjukkan bahwa penghambatan pertumbuhan Plasmodium falciparum strain  G-2300  resisten  kloroquin  setelah  mendapat  perlakukan  EHDS1  dan  EHDS2 secara  in  vitro  berturut-turut  adalah  sebesar (14,62-43,25)%  dan  (24,06-49,48)%  dengan IC 50 sebesar  59,689  μg/mL  dan  44,451  μg/mL.  Berdasarkan  nilai  IC 50 tersebut,  dapat  disimpulkan bahwa  EHDS2  aktif  sebagai  antiplasmodium  terhadap P.  falciparum Strain  G-2300  resisten kloroquin. Sementara itu, EHDS1 kurang aktif karena memiliki nilai IC 50 di atas 50 μ g/mL. Kohler
dkk. (2002) menyatakan bahwa ekstrak dan fraksi ekstrak dari suatu tanaman obat dapat dikatakan aktif  sebagai  antiplasmodium  secara  in  vitro  apabila  nilai  IC 50 ekstrak  dan  fraksi  tersebut  kurang dari 50 μg/mL dan 25 μg/mL. Sementara itu, jika nilai IC 50 suatu ekstrak tanaman lebih besar dari 50 μg/mL dapat dikatakan kurang aktif dan jika lebih besar dari 100 μg/mL dikatakan tidak aktif sebagai antiplasmodium.
Perbedaan  potensi  antiplasmodium  EHDS  tersebut  disebabkan  karena  proses  perendaman simplisia  EHDS2  dilakukan  pada  suhu  yang  lebih  tinggi  dari  pada  EHDS1.  Secara  umum,  difusi senyawa  aktif  ke  dalam  cairan  penyari  akan  lebih  cepat  pada  suhu  yang  tinggi  walaupun  juga berpotensi dapat mendegradasi senyawa aktif yang dihasilkan. Ekstraksi yang dilakukan pada suhu di atas 40 °C dapat  memicu  kerusakan  senyawa aktif, terutama senyawa polifenol dan alkaloid (Zhang dkk., 2018). Oleh karena itu, pembuatan EHDS dalam penelitian ini hanya dilakukan pada suhu di bawah 40 °C.
Secara  keseluruhan,  pembuatan  ekstrak  daun  sambiloto  dengan  menggunakan  metode ekstraksi  hidrotropi  menggunakan  larutan  hidrotop  sodium  asetat  2  mol/L  mampu  menghasilkan ekstrak  aktif  sebagai  antiplasmodium  secara  in  vitro.  EHDS2  ini  berpotensi  dikembangkan  lebih lanjut sebagai herbal antimalaria. Metode ekstraksi hidrotropi yang digunakan dapat mempercepat proses  ekstraksi  daun  sambiloto  sehingga  akan  menghemat  biaya  produksi  pada  skala  industri. Proses  perendaman  simplisia  daun  sambiloto  hanya  berlangsung  dua  jam,  lebih  cepat  dari  cara maserasi  konvensional  yang  dapat  berlangsung  hingga  lima  hari.  Selain  itu,  simplisia  daun sambiloto  direndam  dan  diaduk  menggunakan  pengaduk  magnetik  pada  suhu  rendah  (35  °C) sehingga  dapat  meminimalkan  kerusakan  senyawa  aktif  yang  terjadi  selama  proses  ekstraksi (Ratnani, dkk., 2015).
Walaupun dapat dikatakan aktif sebagai antiplasmodium, nilai IC 50 EHDS2 dapat dikatakan masih relatif tinggi. Berbagai ekstrak tanaman yang diteliti di Indonesia banyak yang telah terbukti aktif sebagai antiplasmodium dengan nilai IC 50 di bawah 10 μg/mL. Sebagai perbandingan, ekstrak etanol daun papaya yang dibuat dengan metode maserasi lebih aktif sebagai antiplasmodium secara in vitro dibandingkan dengan EHDS2. Nilai IC 50 ekstrak tersebut terhadap Plasmodium falciparum strain  G-2300  adalah  2,143  μg/mL  (Rahena,  2010).  Oleh  karena  itu,  penelitian  selanjutnya diarahkan  pada  optimalisasi  proses  ekstraksi  hidrotropi  daun  sambiloto  untuk  meningkatkan potensi  antiplasmodium  EHDS2.  Salah  satu  strategi  yang  dapat  dikembangkan  adalah  dengan mengkombinasikan  proses  ekstraksi  hidrotropi  dan  gelombang  mikro  untuk  mengoptimalkan penyarian  senyawa  aktif  ke  dalam  EHDS2. Secara  umum,  ekstraksi  dengan  memanfaatkan gelombang  mikro ini  mampu menghasilkan ekstrak dengan rendemen yang lebih tinggi dari pada metode  ekstraksi  lainnya  (Zhang  dkk.,  2018)  sehingga  diharapkan  dapat  meningkatkan  potensi antiplasmodium EHDS2.

## KESIMPULAN
EHDS1  dan  EHDS2  mampu  menghambat  pertumbuhan P.  falciparum strain  G-2300 resisten kloroquin secara in vitro berturut-turut sebesar (14,62-43,25)% dan (24,06-49,48)%. Nilai IC 50 EHDS1  dan  EHDS2  dalam  48  jam  sebesar  59,689  μg/mL  dan  44,451  μg/mL.  EHDS2  aktif sebagai  antiplasmodium  secara  in  vitro  terhadap Plasmodium  falciparum strain  G-2300  resisten kloroquin.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Prof. Dr. Mustofa, M.Kes., Apt. beserta staf dan tenaga laboran  Laboratorium  Parasitologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas  Gadjah  Mada  yang  telah memberikan asistensi dan pelatihan serta memfasilitasi pengujian aktivitas antiplasmodium secara in vitro.

## DAFTAR PUSTAKA
Ardhyani,  R.,  2012,  Standarisasi  Bahan  Baku  Sambiloto  ( Andrographis  paniculata Ness)  pada Proses  Pembuatan  Jamu  Kapsul  di  CV.  Herba  Nirmala, Tugas  Akhir ,  Fakultas  Pertanian, Universitas Sebelas Maret, Surakarta
Avanigadda,  S.  and  Vangalapati,  M.,  2010,  Experimental  and  Modelling  of  Andrographolide Extraction from Andrographis paniculata , Int. J. Chem, Environmental and Pharmaceutical Res , 1 , 32-36
Dandeekar,  D.,  Jayaprakasha,  G.K.,  and  Patil,  B.,  2008,  Hydrotropic  Extraction  of  Bioactive Limonin From Sour Orange Seed, Food Chemistry , 109 , 515-520 Jarukamjorn,  K.  and  Nemoto,  N.,  2008,  Pharmacological  Aspect  of Andrographis  paniculata on Helath  and  Its  Major  Diterpenoid  Constituent  Andrographolide, Journal  of  Health  Science , 54 (4), 370-381
Kohler, I., Siems, K.J., Siems, K., Hernandes, M.A., Ibarra, R.A., Barendsohn, W.G., Bienzle, U. and Eich E., 2002, In Vitro Antiplasmodial Investigation of Medical Plants from El Savador. J. Bioscience , 57 (3-4), 277-281
Kusumawardhani,  D.,  Widyawaruyanti,  A.  dan  Kusumawati,  I.,  2005,  Efek  Antimalaria  Ekstrak Sambiloto  Terstandar  (Parameter  Kadar  Aandrografolida)  pada  Mencit  Terinfeksi Plasmodium Berghei , Media Majalah Farmasi Airlangga , 5 (1), 25-29 Lomlin, L., Jirayupong, N. and Plubrukan, A., 2003, Heat Accelerated Degradation of Solid State Andrographolide, Chemical Pharmaceutical Bulletin , 51 , 24-26
Prapanza, E. dan Marianto, L.M., 2003, Khasiat & Manfaat Sambiloto: Raja Pahit Penakluk Aneka Penyakit , Agro Media Pustaka, Jakarta, 3-12
Rahena,  J.F.,  2010,  Uji  Aktivitas  Ekstrak  Daun  Pepaya  ( Carica  papaya .  LINN)  sebagai Antimalaria in vitro, Jurnal Ilmu Dasar , 11 (1), 96-100
Ratnani,  R.D.,  Hartati,  I.  dan  Kurniasari,  L.,  2012,  Potensi  Produksi  Andrographolide  dari Sambiloto ( Andrographis paniculata Nees) Melalui Proses Ekstraksi Hidrotropi, Momentum , 8 (1), 6‐10
Ratnani, R.D., Hartati, I., Anas, Y., Puspaningrum, D.E. dan Khilyati, D.D.D, 2015, Standardisasi Spesifik  dan  Non  Spesifik  Ekstraksi  Hidrotropi  Andrographolid  dari  Sambiloto ( Andrographis  paniculata ), Prosiding ,  Seminar  Nasional  Peluang  Herbal  sebagai  Alternatif Medicine, Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim, Semarang
Resi,  E.M.,  2014,  Effect  of  Antimalaria  Herbal  Sambiloto  ( Andrographis  paniculata Nees)  on Morphology  Changes  of  Development  and  Parasite Plasmodium  falciparum , Jurnal  Info Kesehatan , 12 (1), 661-671 Trager, W. and Jensen, J., 1976, Human Malaria Parasite in Continuous Culture. Science , 193, 673- 675.
Wongkittipong,  R.,  Prat,  L.,  Damronglerd,  S.  and  Gourdon,  C.,  2004,  Solid  Liquid  Extraction  of Andrographolide From Plants-Experimental Study, Kinetics Reaction and Model, Separation and Purification Technology , 4 (2), 147-154
Yan,  X.,  Wang,  T.,  Ma,  Z.,  Zhang,  W.,  Duan,  J.  and  Chai,  Y.,  2008,  Crude  Extract  from Andrographis paniculata , US Patent no 7341748 , 1-8
Zhang, Q., Lin, L. and Ye, W., 2018, Techniques for Extraction and Isolation of Natural Products: a Comprehensive Review. Chin Med 13( 20), 1-26