Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(2): 46-56, Juli 2022

## ISOLASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI PROTEOLITIK DARI PERAIRAN SISTEM BUDIDAYA MINA PADI
Ilham Anbari 1 , Ren Fitriadi 1 *, Mohammad Nurhafid 2 , Mustika Palupi 1 , Riviani 3
1 Program Studi Akuakultur, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Jenderal Soedirman
2 Application Scientists, Artha Genetikalab Indonesia, Bantul
3 Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Jenderal Soedirman
Jl. Dr. Soeparno, Komplek GOR Soesilo Soedarman, Purwokerto Utara * e-mail: renfitriadi@unsoed.ac.id

## Abstrak
Bakteri  proteolitik  merupakan  salah  satu  agen  pembuatan  probiotik.  Bakteri  proteolitik  ini  dapat ditemukan pada pakan maupun lingkungan perairan kolam. Isolasi bakteri sangat penting dilakukan untuk mendapatkan isolat murni dari bakteri proteolitik. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui bakteri proteolitik yang diambil dari sampel air kolam mina padi di Desa Panembangan, Kecamatan Cilongok,  Kabupaten  Banyumas.  Penelitian  dilaksanakan  pada  tanggal  27  Januari  sampai  21  April 2022  dengan  sampel  air  kolam  mina  padi  kelompok  Kridoyuwono  di  Desa  Panembangan. Pengambilan  sampel  dilakukan  dengan  metode purposive  sampling ,  kemudian  dilakukan  isolasi  di Laboratorium  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan  Universitas  Jenderal  Soedirman.  Hasil  dari perhitungan  menggunakan  teknik total  plate  count menunjukkan  kelimpahan  bakteri  pada  air sebesar 1,7 x 10³ CFU/mL. Pada penelitian ini juga ditemukan empat buah isolat memiliki aktivitas proteolitik.  Isolat  tersebut  diidentifikasi  berdasarkan  morfologi  koloni  dan  diduga  memiliki  genus Escherichia , Pseudomonas , dan Staphylococcus .
Kata kunci: Mina Padi, Isolasi bakteri, Bakteri Proteolitik

## Abstract
Proteolytic bacteria are one of the agents for making probiotics. These proteolytic bacteria can be found in feed and pond waters. Bacterial isolation is very important to do to get pure isolates from proteolytic bacteria. This research aims to determine the isolation of proteolytic bacteria taken from water  samples  from  the  Mina  Padi  pond  in  Panembangan  Village,  Cilongok  District,  Banyumas Regency. The research was carried out from January 27 to April 21, 2022 with a sample of water from the  Mina  Padi  pond  of  the  Kridoyuwono  group  in  Panembangan  Village.  Sampling  was  done  by purposive  sampling  method,  then  isolated  in  the  Laboratory  of  the  Faculty  of  Fisheries  and  Marine Sciences  Jenderal  Soedirman  University.  The  results  of  calculations  using  the  total  plate  count technique  showed  an  abundance  of  bacteria  in  the  water  of  1.7  x  10³  CFU/mL.  In  this  study,  four isolates were also found to have proteolytic activity. The isolates were identified based on the colony morphology and suspected to have the genera Escherichia , Pseudomonas , and Staphylococcus . Keywords : Rice-fish Farming, Isolation Technique, Proteolytic Bacteria.
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(2): 46-56, Juli 2022

## PENDAHULUAN
Budidaya  perikanan  merupakan  suatu sektor  bahan  pangan  yang  dapat  bertumbuh pesat  di  Indonesia.  Salah  satu  aspek  budidaya perikanan  yang  menunjang  ketahanan  pangan masyarakat  adalah  budidaya  ikan  air  tawar, diantaranya  dengan  sistem  mina  padi.    Di Indonesia  memiliki  lahan  mina  padi  yang potensial  dengan  luas  8.118.233  Ha  yang terbagi  menjadi  dua  yaitu  lahan  irigasi sebanyak  39,06%  dan  non  irigasi  sebanyak 60,94% (Direktorat Jenderal Perikanan Budidaya,  2018).  Tercatat  jumlah  produksi perikanan di Provinsi Jawa Tengah pada tahun 2021  sebesar  11.745  kg  dengan  total pendapatan  mencapai  Rp.269.124.179.  (BPS, 2021).  Sistem  budidaya  mina  padi  memiliki kontribusi  pada  nilai  produksi  ikan  nasional sekitar 1,2% dari total nilai porduksi perikanan budidaya  yakni  sebesar  83  ton  ikan  (KKP, 2020).
Mina padi adalah salah satu budidaya ikan yang dilakukan diantara tanaman padi, sebagai penambah antara dua musim tanam padi, atau sebagai pengganti  dalam menanam  palawija di persawahan  (Bobihoe  et  al.,  2015).  Kondisi sawah yang tergenang air sangat memungkinkan untuk dilakukan budidaya ikan, namun pada kenyataaannya sawah yang hanya dibuat untuk budidaya padi kondisinya kurang optimum  bilamana  ditambah  untuk  budidaya ikan,  dan  kualitas  air  yang  harus  selalu diperhatikan  menjadi  salah  satu  tantangannya
(Cahyaningrum  et  al.,  2014).  Lebih  lanjut dijelaskan  bahwa  kondisi  perairan  sistem budidaya  mina  padi  sangat  sulit  dikontrol dikarenakan sistem budidaya secara bersamaan dengan waktu penanaman padi. Sehingga perlu adanya  teknologi  yang  mampu  menjadi biokontrol  lingkungan  sistem  mina  padi.  Salah satunya penggunaan probiotik untuk lingkungan.
Pengembangan  probiotik  sudah  banyak dilakukan  dengan  mengambil  isolat  bakteri dari berbagai sumber. Salah satu sumber agen probiotik  yaitu  berasal  dari  lingkungan  itu sendiri.  Penggunaan  probiotik  pada  mina  padi masih belum banyak dilakukan, sehingga perlu adanya  pengembangan  probiotik  pada  sistem mina padi yang dianggap mampu memperbaiki dan  menjaga  kualitas  air.  Bakteri  yang digunakan  sebagai  agen  probiotik  lingkungan berupa  bakteri  dengan  gram  positif  seperti Enterococcus , Bacillus , Micrococcus ,
Lactococcus , Lactobacillus , Carnobacterium dan Streptococcus (Yulvizar,  2013).  Bakteri  yang menjadi  agen  probiotik  ini  memiliki  ciri-ciri salah  satunya  adalah  memiliki  aktivtias proteolitik.
Bakteri  proteolitik  merupakan  bakteri yang  dapat  menghasilkan  enzim  ekstraseluler protease  yang  berfungsi  dalam  menghidrolisis protein  menjadi lebih sederhana berupa  asam- asam amino (Zainuddin et al., 2017). Beberapa bakteri  yang  telah  diketahui  sebagai  penghasil
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(2): 46-56, Juli 2022
protease adalah Bacillus, Lactobacillus, Pyrococcus, Pseudomonas, Proteus dan Staphylococcus (Yahdiyani  et  al.,  2021).
Beberapa bakteri tersebut diisolasi dari limbah cair  cucian  ayam  atau  daging  (Andika  dan Sulistyarsi,  2017),  limbah  cair  tahu  (Asril  dan Leksikowati, 2019), sedimen ekosistem mangrove (Setyati dan Subagiyo, 2012), dan di dalam  usus  ikan  (Nurhafid  et  al.  2021).  Untuk mendapatkan  isolat  bakteri  proteolitik  harus dilakukan  isolasi  dan  identifikasi  terlebih dahulu.
Isolasi  dan  identifikasi  bakteri  dari  air sampel  dilakukan  agar  mendapatkan  kultur murni  dari  bakteri  proteolitik.  Isolasi  yang dilakukan  untuk  mendapatkan  isolat  bakteri murni yaitu dengan melakukan pengenceran air sampel,  kemudian  diinokulasikan  pada  media agar untuk memisahkan koloni tunggal. Setelah mendapat  koloni  tunggal  dilakukan  isolasi bakteri  proteolitik  pada  media  agar skim  milk .
Aktivitas proteolitik ditandai dengan terbentuknya  zona  bening  di  sekitar  bakteri yang  dikultur.  Identifikasi  bakteri  dilakukan dengan  melihat  morfologi  koloni  bakteri  yang tumbuh pada media agar, kemudian menghitung  diameter  zona  bening  yang terdapat disekitar bakteri. Adapun contoh yang dilakukan oleh Saidah (2014) dalam penelitiannya  telah  berhasil  melakukan  isolasi bakteri  proteolitik  dari  sumber  air  panas, kemudian  didapatkan  isolat  bakteri  proteolitik dengan  karakteristik  berbentuk  bulat  sedang dan bulat kecil, berwarna krem, putih susu, dan
juga  memiliki  diameter  zona  bening  paling besar 25 mm. Lebih lanjut dijelaskan oleh Asril dan  Leksikowati  (2019)  yang  telah  melakukan isolasi bakteri proteolitik dari limbah cair tahu, dimana  penelitian  tersebut  mendapatkan  dua isolat  bakteri  memiliki  aktivitas  proteolitik tinggi yang ditandai dengan terbentuknya zona bening berdiameter 21 mm dan 12,5 mm.
Penelitian  terdahulu  berhasil  melakukan isolasi  bakteri  proteolitik  dari  berbagai sumber,  seperti  limbah  cair,  sumber  air  panas maupun  perairan  danau,  sehingga  membuat pengembangan  penelitian  terkait  isolasi bakteri  proteolitik  menjadi  lebih  terbuka.  Hal ini  yang  menjadikan  dasar  dilakukannya penelitian  terkait  isolasi  dan  identifikasi bakteri  proteolitik  dari  air  mina  padi  di  Desa Panembangan, Kecamatan Cilongok, Kabupaten Banyumas.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  dilaksanakan  pada  tanggal  20 Januari  sampai  20  Juni  2022  di  kolam  mina padi kelompok Kridoyuwono Desa Panembangan  Kecamatan  Cilongok,  analisis laboratorium  dilakukan  di  Laboratorium Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan Universitas  Jenderal  Soedirman,  dan  di Laboratorium Mikrobiologi dan Biologi Lingkungan  Fakultas  Keguruan  dan  Ilmu Pendidikan Universitas Muhammadiyah
Purwokerto.
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(2): 46-56, Juli 2022

## Alat dan Bahan
Peralatan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  cawan  petri  90x20  mm, tabung  reaksi  15  mL, beaker  glass 250  mL, gelas ukur 10 mL, autoclave , bunsen, jarum ose, mikropipet 100-1000 µL, labu erlenmeyer 250 mL, hot  plate  stirrer ,  dan vortex .  Bahan  yang digunakan  dalam  penelitina  ini  adalah Trypticase  Soy  Agar (TSA), Tryptone  Soy  Broth
(TSB), alkohol 70%, akuades, NaCl 0,9%, bubuk
skim milk 2%, dan air sampel.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  metode partisipasi  aktif,  dalam  hal  ini  mahasiswa melakukan  serangkaian  kegiatan  seperti pengambilan  sampel  di  kolam  mina  padi, isolasi  bakteri  di  laboratorium  dan  aktif berdiskusi.  Metode  pengambilan  sampel  yang dilakukan  adalah  metode purposive  sampling , yaitu  dengan  cara  mengambil  sampel  acak disetiap  kolam  budidaya  mina  padi  pada  titik tertentu. Penelitian ini terbagi dalam beberapa tahapan. Tahap yang pertama, yaitu pengambilan sampel bakteri, pembuatan media tumbuh  bakteri,  sterilisasi  alat  dan  bahan, inokulasi bakteri dan isolasi bakteri proteolitik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Lokasi Penelitian
Desa Panembangan merupakan salah satu desa  yang  berada  di  Kecamatan  Cilongok, Kabupaten  Banyumas,  Provinsi  Jawa  Tengah. Desa  Panembangan  terletak  17  km  di  sebelah barat  Ibu  Kota  Kabupaten  Banyumas  dan
berjarak  kurang  lebih  3  km  dari  Kecamatan Cilongok.  Desa  ini  terletak  di  daerah  dataran rendah  dan  dataran  tinggi  dengan  ketinggian berkisar  antara  200-300  mdpl.  Ketinggian tersebut  menjadikan  Desa  Panembangan  ini kaya akan sumber daya air bersih. Kolam mina padi  Kridoyuwono  dapat  dilihat  pada  gambar 1.
Sumber  air  Desa  Panembangan  berasal dari  mata  air  curug  Cipendok  yang  mengalir melalui  sungai  Prukut  yang  melewati  desa- desa dan selanjutnya dijadikan saluran irigasi untuk  mengairi  lahan  persawahan  dan  kolam budidaya  ikan.  Air  yang  mengalir  sepanjang tahun  membuat  lahan  pertanian  dan perikanan  di  Desa  Panembangan  berjalan dengan  baik.  Mata  pencaharian  masyarakat Desa  Panembangan  mayoritas  adalah  petani sawah  dan  pembudidaya  ikan,  sehingga banyak  lahan  persawahan  dan  kolam budidaya  ikan  di  sana.  Ada  beberapa kelompok budidaya ikan di Desa Panembangan,  salah  satunya  kelompok  mina padi  Kridoyuwono.  Kelompok  mina  padi Kridoyuwono  ini  memiliki  lima  blok  sawah
Gambar 1. Kolam Mina Padi Kridoyuwono
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(2): 46-56, Juli 2022
mina padi dengan luas total 25 ha. Komoditas yang dibudidayakan di mina padi Kridoyuwono  yaitu  ikan  nila  ( Oreochromis niloticus ).

## Pengambilan Sampel
Pengambilan  sampel  air  dilakukan  di kolam  mina  padi  kelompok  Kridoyuwono, Desa Panembangan, Kecamatan Cilongok. Titik pengambilan  sampel  dilakukan  secara  acak dengan  total  titik  sampel  berjumlah  tiga  titik, yaitu berada di aliran air masuk, aliran tengah dan  keluar.  Air  sampel  diambil  menggunakan labu  erlenmeyer  steril  sebanyak  150  mL  dan ditutup  menggunakan aluminium  foil .  Proses pengambilan air dapat dilihat pada gambar 2.
Pengambilan  sampel  dilakukan  dengan metode purposive sampling dilakukan  agar mendapatkan  hasil  yang  lebih  banyak  dari berbagai  titik  lokasi.  Pengambilan  air  di  tiga titik (inlet, tengah dan outlet) dilakukan karena pada  setiap  titik  memiliki  kelimpahan  bakteri yang  berbeda  (Hidayah  et  al.,  2016).  Menurut (Kristiawan  et  al.,  2014)  metode purposive sampling dilakukan berdasarkan pertimbangan peneliti  sebagai  penentu  lokasi  pengambilan sampel.  Namun,  metode purposuve  sampling
memiliki  kekurangan  yakni  sampel  yang diambil  hanya  mewakili  populasi,  kemudian tidak  dapat  digunakan  dalam  mengeneralisasi pada  saat  pengambilan  kesimpulan  statistik (Lenaini, 2021).
Pengambilan  sampel  yang  dilakukan  di lokasi kerja praktik telah sesuai dengan kaidah yang  berlaku,  yaitu  dengan  metode purposive sampling .  Kekurangan  dari  pengambilan sampel yang dilakukan adalah sampel air yang diambil  dari  tiga  titik  bercampur  dalam  satu wadah sehingga sampel harus segera diisolasi.

## Inokulasi Bakteri
Inokulasi  sampel  bakteri  dari  perairan mina  padi  dilakukan  di  laboratorium mikrobiologi dan biologi lingkungan Universitas Muhammadiyah Purwokerto.
Teknik  inokulasi  yang  dilakukan  yaitu  dengan menggunakan  teknik pour  plate .  Teknik  ini dilakukan  dengan  cara  menumbuhkan  bakteri dalam  media  agar  yang  masih  cair  dengan isolat bakteri yang sudah dilakukan pengenceran, sehingga isolat tersebut tersebar merata  di  permukaan  agar  (Damayanti  et  al., 2020).  Setelah  melakukan  pengenceran, sampel  diinokulasi  pada  media  agar  TSA ( Tryptic Soy Agar ) selama 24 jam dengan suhu ruang  28°C.  Pengenceran  yang  dilakukan bertujuan  agar  mengurangi  kepadatan  bakteri pada  media  tanam,  karena  tidak  mungkin dilakukan penghitungan bakteri yang berjumlah  puluhan  ribu  pada  media  yang terbatas  (Kadri  et  al.,  2015).  Namun,  berbeda
Gambar 2 . Pengambilan Sampel Air
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(2): 46-56, Juli 2022
dengan  pendapat  Seniati  et  al.  (2019)  dalam penelitiannya  yang  mengukur  kepadatan bakteri Vibrio  harveyi disebutkan  bahwa metode  pengenceran  kurang  efektif  karena membutuhkan  waktu  lama  untuk  masa inkubasi  dan  media  kultur  yang  lebih  banyak. Hasil inkubasi dapat dilihat pada gambar 3.
Hasil inokulasi selama 24 jam menunjukkan  adanya  pertumbuhan  bakteri pada cawan kemudian dihitung dengan jumlah koloni antara 30-300 cfu (Hidayah et al., 2016). Hasil dari perhitungan menunjukkan
kelimpahan  bakteri  pada  air  sebesar  1,7x10³ CFU/mL. Hasil tersebut lebih sedikit dibandingkan  dengan  penelitian  sebelumnya yang  dilakukan  oleh  Hidayah  et  al.  (2016)
dalam penelitiannya yang menghitung kelimpahan  bakteri  heterotrofik  di  perairan waduk  Jatibarang  mendapatkan  rata-rata jumlah  bakteri  sebanyak  988x10 CFU/mL. Sementara  Hanif  et  al.  (2017)  dalam penelitiannya  yang  menghitung  kepadatan bakteri  dari  air  kolam  pembenihan  ikan  lele menggunakan sistem air tertutup mendapatkan  jumlah  bakteri  aerob  sebanyak 1,2x10³  CFU/mL,  hal  ini  menandakan  bahwa kondisi  perairan  masih  memiliki  tingkat oksigen  yang  cukup.  Jumlah  bakteri  yang berbeda  pada  tiap  tempat  dipengaruhi  oleh beberapa  faktor,  seperti  tingkat  oksigen,  pH, salinitas dan suhu.

## Morfologi Koloni Bakteri Air
Hasil  inokulasi  dari  sampel  air  mina  padi selama  24  jam  selanjutnya  dilalukan  skrining. Proses  skrining  ini  dilakukan  berdasarkan kesamaan  pada  morfologi  koloni  bakteri  baik dari  segi  bentuk,  warna,  tepian  dan  elevasi (Rizaldi,  2016).  Sebanyak  tujuh  isolat didapatkan  dari  hasil  inokulasi  memiliki morfologi  koloni  bakteri  yang  berbeda-beda. Morfologi  koloni  bakteri  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Gambar 3. Hasil Inkubasi Selama 24 Jam
Tabel 1 . Morfologi Koloni Bakteri Air
Kode
Sampel Morfologi Bentuk Elevasi Tepi Warna Ukuran BA1 Bulat Entire Convex Putih Gelap Kecil BA2 Irregular Lobate Raised Putih Krem Besar BA3 Entire Entire Crateriform Putih Krem Kecil BA4 Bulat Entire Pulvinate Putih Krem Kecil BA5 Filamentous Filamentous Flat Putih Kecil BA6 Bulat Entire Convex Putih Sedang BA7 Irregular Undulate Flat Kuning Putih Kecil
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(2): 46-56, Juli 2022
Berdasarkan  tabel  1  isolat  bakteri memiliki  bentuk  yang  beragam.  Bentuk  isolat diantaranya  bulat, irregular , entire ,  dan f ilamentous . Elevasi dari bakteri berupa entire , lobate , filamentous dan undulate .  Tepi  bakteri berupa convex , raised , crateriform , pulvinate , dan flat . Isolat bakteri ini juga memiliki warna beragam  diantaranya  putih  gelap,  putih  krem, putih,  dan  kuning  putih.  Ukuran  bakteri  pun beragam,  diantaranya  berukuran  kecil,  sedang dan  besar.  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan Hengkengbala  et  al.  (2021)  bahwa  hasil  dari identifikasi  bakteri  secara  makroskopik didominasi  oleh  koloni  dengan  bentuk  tidak beraturan,  tepian  bergelombang,  ketinggian berbeda,  warna  koloni  putih  susu,  tekstur seperti  mentega  dan  tidak  tembus  cahaya. Selain  itu,  dalam  penelitian  Fitri  dan  Yasmin (2011)  menyebutkan  bahwa  morfologi  koloni bakteri  yang  berasal  dari  kawasan  sungai memiliki  bentuk  bulat  dengan  tepian  rata  dan bergerigi,  serta  berwarna  putih  susu.  Bentuk dan  warna  morfologi  bakteri  lain  juga didapatkan oleh (Nisa, 2022) yang diambil dari air  dan  sedimen  tambak  udang  vaname memiliki bentuk spindle dengan warna kuning.
Isolat  bakteri  yang  sudah  didapat kemudian  dilakukan  pemurnian  pada  cawan petri.  Pemurnian  dilakukan  dengan  teknik gores  pada  media  agar  ( streak  plate ), selanjutnya  diinkubasikan  pada  suhu  kamar selama  24  jam  dan  diamati  pertumbuhannya. Pemurnian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan
isolat  murni  dari  setiap  perwakilan  kelompok bakteri dengan ciri morfologi koloni yang sama (Marista  et  al.,  2013).  Pemurnian  bisa dilakukan  sekali  ataupun  berulang  hingga mendapat  koloni  tunggal  yang  benar-benar murni (Dajoh et al., 2020). Koloni bakteri yang sudah tumbuh kemudian dapat dipindahkan ke media  agar  miring  untuk  pemeliharaan  kultur murni (Setyati dan Subagiyo, 2012).

## Isolasi Bakteri Proteolitik
Berdasarkan  pemurnian  bakteri  yang dilakukan sebelumnya, didapatkan enam isolat murni  yang  dapat  diuji  aktivitas  proteolitik. Isolat  diambil  menggunakan  jarum  ose  steril kemudian  ditanam  pada  media  agar skim  milk dan  diinkubasikan  selama  48  jam.  Menurut Yuniati  et  al.  (2015),  bakteri Bacillus sp. menghasilkan enzim protease optimalnya pada jam  ke  30.  Hasil  dari  uji  aktivitas  proteolitik dapat dilihat pada gambar 4.
Uji  proteolitik  bertujuan  untuk  melihat aktivitas  proteolitik  isolat  bakteri  yang diperoleh.  Hasil  pengujian  dari  enam  isolat
Gambar 4. Hasil Uji Enzim Protease. Isolat Bakteri (A), Zona Bening (B), dan Isolat yang Tidak Menghasilkan Enzim (C)
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(2): 46-56, Juli 2022
bakteri  yang  didapatkan  menunjukkan  ada sebanyak  empat  isolat  bakteri  uji  yang memiliki aktivitas proteolitik.
Berdasarkan  tabel  hasil  uji  aktivitas proteolitik, diperoleh isolat yang menghasilkan enzim  protease  yaitu  isolat  dengan  kode  BA1, BA2, BA3, dan BA6. Aktivitas proteolitik dilihat berdasarkan  zona  bening  yang  terbentuk  di sekitar  isolat  bakteri  yang  ditanam.  Secara berturut-turut  diameter  zona  bening  yang dihasilkan  dari  empat  isolat  bakteri,  yaitu sebesar  20,  42,  29  dan  44  mm.  Zona  bening yang  terbentuk  menunjukkan  secara  kualitatif tingginya  kemampuan  proteolitik  dari  enzim protease  yang  dihasilkan  oleh  bakteri  (Setyati dan  Subagiyo,  2012).  Enzim  protease  ini berfungsi  dalam  katalisis  pemutusan  ikatan peptida pada protein (Yempita et al., 2017).
Isolat  dengan  kode  BA1  memiliki diameter  zona  bening  paling  kecil  diantara isolat  lain.  Isolat  ini  diduga  merupakan  genus bakteri Escherichia ,  hal  ini  dikarenakan karakteristik  morfologi  yang  dimiliki  sama dengan  penelitian  Mushoffa  (2012)  yang mendapat isolat bakteri dengan morfologi yang sama  yakni  berbentuk circular ,  elevasi entire ,
tepian convex , dan memiliki gram negatif. Pada isolat BA2 didapatkan bentuk morfologi koloni irregular ,  elevasi lobate dan  tepian raised . Bentuk  morfologi  bakteri  tersebut  mirip dengan  genus  bakteri Pseudomonas, dimana bakteri  gram  negatif  ini  memiliki  bentuk morfologi  tidak  beraturan, raised ,  dan  juga berwarna  putih  krem  (Yuliyani  et  al.,  2015). Isolat  dengan  kode  BA6  memiliki  zona  bening paling tinggi, berdasarkan morfologi koloni dan zona bening yang terbentuk bakteri ini diduga tergolong  ke  dalam  genus Staphylococcus ,  hal ini sesuai dengan pendapat Funty et al. (2020) yang  dalam  penelitiannya  menyampaikan bahwa karakteristik morfologi bakteri Staphylococcus aureus yaitu  berbentuk  bulat, elevasi entire ,  tepian convex ,  berwarna  putih dan memiliki gram positif.

## KESIMPULAN
Isolat  bakteri  yang  didapat  berjumlah enam  isolat,  dengan  empat  diantaranya memiliki  aktivitas  proteolitik.  Perhitungan jumlah bakteri proteolitik dengan
menggunakan  metode Total  Plate  Count
didapatkan hasil jumlah bakteri dari pengenceran 10 -1 yaitu 1,7 x 10³ CFU/mL Isolat bakteri dengan kode BA1, BA2, dan BA6 diduga merupakan  genus  dari  bakteri Escherichia , Pseudomonas , dan Staphylococcus .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  Program  Riset Keilmuan Perguruan Tinggi Hibah Riset Tahun
Tabel 2 . Hasil Uji Aktivitas Proteolitik
Kode Isolat Bakteri Uji Aktivitas Proteolitik Diameter Zona Bening (mm) BA1 + 20 BA2 + 42 BA3 + 29 BA5 - - BA6 + 44 BA7 - - Keterangan : ada (+)/tidak (-)
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(2): 46-56, Juli 2022
2021  yang  telah    memberikan  dukungan pendanaan pada kegiatan penelitian ini

## DAFTAR PUSTAKA
Andika,  Z.  P.,  &  Sulistyarsi,  A.  (2017).  Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Proteolitik pada Limbah  Air  Cucian  Ayam  Potong  dan Cucian  Ikan  sebagai  Penyusun  Modul Biologi  SMA  Kelas  X. Prosiding  Seminar Nasional SIMBIOSIS II , 357 – 367.
Asril, M., & Leksikowati, S. S. (2019). Isolasi dan Seleksi  Bakteri  Proteolitik  Asal  Limbah Cair Tahu Sebagai Dasar Penentuan Agen
Pembuatan Biofertilizer.
Elkawnie :
Journal of Islamic Science and Technology , 5 (2), 86 – 99. https://doi.org/10.22373/ekw.v5i2.4356
Bobihoe, J., Asni, N., & Endrizal.  (2015). Kajian Teknologi  Mina  Padi  di  Rawa  Lebak  di Kabupaten  Batanghari  Provinsi  Jambi.
Jurnal Lahan Suboptimal , 4 (1), 47 – 56.
BPS.  (2021). Produksi  dan  Nilai  Produksi Perikanan  Budidaya  Menurut  Kabupaten dan  Jenis  Budidaya  di  Provinsi  Jawa Tengah .
Cahyaningrum, W., Widiatmaka, & Soewardi, K.
(2014).  Arahan  Spasial  Pengembangan

## Mina Padi Berbasis Kesesuaian Lahan dan
Analisis  A’WOT  di  Kabupaten  Cianjur,
Jawa  Barat. Majalah  Ilmiah  Globe , 16 (1),
77 – 88.
Dajoh,  T.,  Bara,  R.  A.,  Angkouw,  E.,  Ompi,  M., Lintang, R. A. J., & Lumenta, C. (2020). Uji
Aktivitas Antibakteri dan Anti-UV Phyllidiella nigra dan Bakteri Simbiotiknya  dari  Peraian  Tanjung Mandolang. Jurnal Pesisir Dan Laut Tropis , 8 (2), 61 – 71.
Damayanti, N. W. E., Abadi, Moh. F., & Bintari, N.
W.  D.  (2020).  Perbedaan  Jumlah Bakteriuri  pada  Wanita  Lanjut  Usia Berdasarkan Kultur Mikrobiologi Menggunakan  Teknik  Cawan  Tuang  dan Cawan  Sebar. Meditory , 8 (1),  1 – 4. http://ejournal.poltekkes- denpasar.ac.id/index.php/M
Fitri,  L.,  &  Yasmin,  Y.  (2011).  Isolasi  dan Pengamatan  Morfologi  Koloni  Bakteri Kitinolitik. Jurnal  Ilmiah  Pendidikan Biologi , 3 (2), 20 – 25.
Funty,  S.,  Arniati,  M.,  Abdul,  H.,  &  Murni,  M.
(2020). Potensi Antibakteri
Staphylococcus  aureus  dan  Escherichia coli  dari  Ekstrak  Kasar  Bakteri  Asosiasi Karang  Batu  yang  Terinfeksi  Penyakit Brown Band (Brb). BIOMA , 2 (2), 9 – 17.
Hanif  Azhar,  M.,  &  Faizal  Ulkhaq,  M.  (2017).
Kelimpahan dan Keanekaragaman Bakteri  Pada  pembenihan  Ikan  Lele (Clarias  gariepinus)  dengan  Sistem  Air Tertutup (Close Water System) Abundance  and  Diversity  of  Bacteria  on Catfish Nursery Rearing (Clarias gariepinus)  With  Closed  Water  System (Close  Water  System). Journal  of Aquaculture Science , 2 (4), 81 – 89.
Hengkengbala, S. I., Lintang, R. A. J., Sumilat, D. A.,  Mangindaan,  R.  E.  P.,  Ginting,  E.  L.,  & Tumembouw,  S.  (2021).  Karakteristik Morfologi  dan  Aktivitas  Enzim  Protease Bakteri  Simbion  Nudibranch. Jurnal Pesisir Dan Laut Tropis , 9 (3), 83 – 94.
Hidayah, S. N., Widyorini, N., & Purnomo, P. W. (2016).  Analisis  Kesuburan  Perairan Waduk Jatibarang Berdasarkan Distribusi dan  Kelimpahan  Bakteri  Heterotrofik.
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(2): 46-56, Juli 2022
Management  of  Aquatic  Resources , 5 (4),
443 – 452.
Kadri,  A.  N.,  Tono,  K.,  Gelgel,  P.,  Gusti,  I.,  & Suarjana,  K.  (2015).  Perbedaan  Cara Penyebaran  Suspensi  terhadap  Jumlah Bakteri pada Media Eosin Methylene Blue Agar. Indonesia  Medicus  Veterinus  Juni , 4 (3), 205 – 212.
KKP.  (2020).  Optimalisasi  Keberhasilan  Desa Inovasi  Mina  Padi. Sosial  Ekonomi Kelautan Dan Perikanan , 1 – 4.
Kristiawan,  D.,  Widyorini,  N.,  &  Haeruddin.
(2014).  Hubungan  Total  Bakteri  Dengan Kandungan  Bahan  Organik  Total  Di Muara  Kali  Wiso,  Jepara. DIPONEGORO JOURNAL  OF  MAQUARES , 3 (4),  24 – 33. http://ejournal- s1.undip.ac.id/index.php/maquares
Lenaini, I. (2021). Teknik Pengambilan Sampel Purposive  dan  Snowball  Sampling.
Historis , 6 (1), 33 – 39. https://doi.org/10.31764/historis.vXiY.4

## 075
Marista,  E.,  Khotimah,  S.,  &  Linda,  R.  (2013). Bakteri  Pelarut  Fosfat  Hasil  Isolasi  dari Tiga  Jenis  Tanah  Rizosfer  Tanaman Pisang  Nipah  (Musa  paradisiaca  var. nipah)  di  Kota  Singkawang. Protobiont , 2 (2), 93 – 101.
Mushoffa.  (2012). Isolasi  dan  Identifikasi Bakteri  Selulolitik  dari  Feses  Kambing [Thesis]. Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Nisa, S. K. (2022). Isolasi dan Penapisan Bakteri
Amilolitik  dari  Air  dan  Sedimen  Tambak Udang Vaname (Litopenaeus vannamei) di
Desa Bunton, Kecamatan Adipala,
Kabupaten  Cilacap [Skripsi].  Universitas Jenderal Soedirman.
Nurhafid,  M.,  Syakuri,  H.,  Oedjijono,  O., Listiowati,  E.,  Ekasanti,  A.,  Nugrayani,  D., &  Pramono,  H.  (2021).  Isolasi  dan Identifikasi  Molekuler  Bakteri  Proteolitik dari  Saluran  Pencernaan  Ikan  Nila (Oreochromis niloticus) yang
Dibudidayakan  di  Kabupaten  Banyumas.
Jurnal Perikanan Universitas Gadjah Mada , 23 (2), 95 – 105. https://doi.org/10.22146/jfs.64072
Rizaldi,  R.  (2016).  Isolasi  dan  Karakterisasi Bakteri  Proteolitik  yang  Berasosiasi dengan  Lamun  Enhalus  acoroides  di Pantai  Bama,  Taman  Nasional  Baluran, Situbondo,  Jawa  Timur  [Skripsi].  In Skripsi . Universitas Airlangga
Saidah,  A.  N.  (2014). Isolasi  Bakteri  Proteolitik Termofilik  dari  Sumber  Air  Panas  Pacet Mojokerto  dan  penguji  Aktivitas  Enzim Protease [Thesis].  Universitas  Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Seniati,  Marbiah,  &  Irham,  A.  (2019).
Pengukuran  Kepadatan  Bakteri  Vibrio harveyi Secara Cepat dengan Menggunakan Spectrophotometer.
Agrokompleks , 19 (2), 12 – 19.
Setyati, W. A., & Subagiyo, D. (2012). Isolasi dan Seleksi Bakteri Penghasil Enzim Ekstraseluler (proteolitik, amilolitik, lipolitik dan selulolitik) yang Berasal dari Sedimen  Kawasan  Mangrove. Ilmu
Kelautan , 17 (3), 164 – 168.

## www.ijms.undip.ac.id
Yahdiyani,  N.,  Hidayatulloh,  A.,  &  Nurhayati,  L. S.  (2021).  Potensi  Isolat  Bakteri Proteolitik dari Proses Pembuatan Pupuk Organik  sebagai  Starter  Pengolahan
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(2): 46-56, Juli 2022
Limbah  Peternakan. Jurnal  Teknologi Hasil Peternakan , 2 (1), 17 – 23. https://doi.org/10.24198/jthp.v2i1.3132 1
Yempita,  E.,  Yusra,  &  Vivi,  O.  E.  (2017). Optimasi Potensi Bakteri Bacillus subtilis sebagai  Sumber  Enzim  Protease. Jurnal Akuatika Indonesia , 2 (1), 87 – 94
Yuliyani, M., Sidharta, B. B. R., & Pratama, F. S.
(2015).  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Kloroform  Limbah  Padat  Daun  Serai Wangi  (Cymbopogon  nardus)  Terhadap Bakteri  Pseudomonas  aeruginosa  dan Staphylococcus  aureus. Jurnal  Fakultas Teknobiologi , 1 – 15.
Yulvizar,  C.  (2013).  Isolasi  dan  Identifikasi Bakteri  Probiotik  pada  Rastrelliger  sp. Isolation  and  Identification  of  Probiotic Bacteria  in  Rastrelliger  sp. Biospecies , 6 (2), 1 – 7.
Yuniati, R., Nugroho, T. T., & Puspita, F. (2015). Uji  Aktivitas  Enzim  Protease  Dari  Isolat Bacillus sp. Galur Lokal Riau. JOM FMIPA , 1 (2), 116 – 122.
Zainuddin,  M.,  Setyati,  W.  A.,  Person,  D.,  & Renta,  P.  (2017).  Zona  Hidrolisis  dan Pertumbuhan  Bakteri  Proteolitik  dari
Sedimen Ekosistem Mangrove Rhizophora mucronata Telukawur-
Jepara. Jurnal  Sumberdaya  Perairan ,
11 (2), 31 – 35.