## ISOLASI DAN KARAKTERISASI MIKROBIA BINTIL AKAR PUTRI MALU
( Mimosa pudica ) INDIGENUS DARI LAHAN KERING PRINGGABAYA,

## LOMBOK TIMUR
Isolation and characterization of Mimosa pudica Nodule Microbes Indigenous from the Dry Land of Pringgabaya, East Lombok
Novita Hidayatun Nufus 1)* , Wayan Wangiyana 2) , Ni Wayan Sri Suliartiningsih 1)
1) Program Studi Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Mataram, Nusa Tenggara Barat 2) Program Studi Magister Pengelolaan Sumberdaya Lahan Kering, Universitas Mataram, Nusa Tenggara Barat
Diterima redaksi: 04 Juni 2022/ Direvisi: 23 Juni 2022 / Disetujui: 23 Juni 2022/Diterbitkan online: 30 Juni 2022 DOI: 10.21111/agrotecxh.v7i1.454
Abstrak. Salah satu upaya yang dapat dilakukan dalam meningkatkan kualitas tanah dalam rangka peningkatan produksi pertanian adalah melalui pemanfaatan pupuk hayati. Pupuk hayati merupakan mikroorganisme tanah yang dapat meningkatkan pertumbuhan tanaman melalui peningkatan suplai dan penyerapan unsur hara tanah. Mikrobia tersebut dapat diperoleh dari tanaman yang bersimbiosis dengannya, salah satunya adalah Putri malu ( Mimosa pudica). Penelitian dilaksanakan dengan tujuan untuk memperoleh isolat mikrobia pembentuk bintil akar yang bersimbiosis dengan tanaman Putri malu ( Mimosa pudica ) indigenus yang hidup di lahan kering Pringgabaya, Kabupaten Lombok Tmur, Nusa Tenggara Barat sebagai sumber isolate dalam produksi pupuk hayati. Untuk itu dilakukan isolasi mikrobia dari bintil akar tanaman Putri malu yang dilanjutkan dengan karakterisasi isolate yang didapat. Isolasi dilakukan dengan menginokulasi suspensi bintil akar ke dalam media tumbuh berupa Yeast Manitol Agar (YMA). Pemurnian isolate dilakukan dengan menumbuhkan isolate pada YMA ke dalam media YMA yang baru dengan teknik streak quadrant dan dilanjutkan dengan pengecatan gram. Biakan murni isolate selanjutnya diamati  morfologi  koloni  secara  makroskopis  serta  morfologi  sel  secara  mikroskopis.  Hasil  penelitian menunjukkan terdapat 7 isolat dari bintil akar tanaman Putri malu ( Mimosa pudica) , yaitu isolate A, B, C, D, E, F, dan  G.  Berdasarkan  analisis  kenampakan  koloni  secara  makroskopis,  yang  dilanjutkan  dengan  pengamatan morfologi sel secara mikroskopis, dan pengecatan gram, diduga isolat tersebut tergolong ke dalam genus Bacillus (isolat A, C, D dan G), Rizhobium (isolat D), Pseudomonas (isolate F), dan Actynomycetes (isolate E).
Kata kunci: mikrobia endofit, Putri malu, Mimosa pudica
Abstract. The  application  of  Bio-fertilizer  plays  a  main  role  in  generating  the  quality  of  land  farming  due  to increasing the agricultural production. Bio-fertilizer contained several microbes that promotes plants growth by increasing the supply and nutrient uptake. Bio-fertilizer i could be isolated from soil microbes that associated with some legume plants, i.e Mimosa pudica. The aim of this study is to find the indigenous Mimosa pudica root nodule microbes from the dry land of Pringgabaya, East Lombok, West Nusa Tenggara province. The research was carried out  to  isolates  and  characterizes Mimosa  pudica root  nodule  microbes.  Isolation  procedure  was  completed  by inoculated root nodule suspension into Yeast Manitol Agar medium for 2 days, then continued by isolate purification using streak quadrant technique due to separates the single colony. The single colony of each isolates were observed for its morphological colony, bacterial morphology, and gram stained. The result suggests seven isolates have been

## Gontor AGROTECH Science Journal
Vol. 8 No. 1, Juni 2022: 18-27 http://ejournal.unida.gontor.ac.id/index.php/agrotech
found on Mimosa pudica root nodule; isolate A, B, C, D, E, F, and G. Based on  colonies description and microscopic observation, those isolates are expected as a member of Genus Bacillus (isolate A, C, D, and G), Rhizobium (isolate D), Pseudomonas (isolate F), and Actinomycetes (isolate E).
Keywords: root nodule microbes, Mimosa pudica
* E email: novitahnufus@unram.ac.id Alamat : Jl. Majaphit No. 62 Mataram, Nusa Tenggara Barat

## PENDAHULUAN
Kualitas tanah pada suatu lahan merupakan  salah  satu  faktor  penentu produktivitas  pertanian.  Kualitas  tanah ditentukan  oleh  sifat  fisik  tanah,  kondisi kimia  tanah,  serta  kondisi  biologi  tanah. Penurunan kualitas tanah dapat berimplikasi pada penurunan hasil pertanian. Penurunan kualitas tanah pada areal persawahan antara lain disebabkan oleh pola tanam monokultur dan  olah  tanah  yang  intensif  yang  yang disertai  dengan  penggunaan  pupuk  kimia sintetik dalam jumlah besar.
Upaya  peningkatan  kualitas  tanah  pada lahan  persawahan  dapat  dilakukan  melalui pemanfaatan  mikroba  tanah  sebagai  pupuk hayati (Nurhidayati, 2017 ). Menurut
Permentan  No.2  tahun  2006,  pupuk  hayati didefinisikan sebagai sekumpulan mikroorganisme hidup yang berfungsi untuk membantu  memperbaiki  kesuburan  tanah. Pupuk hayati diinokulasikan ke dalam tanah dan  berperan  dalam  membantu  atau memfasilitasi penyerapan unsur hara dalam bentuk  unsur  hara  tersedia  yang  dapat diserap tanaman dan mampu meningkatkan pertumbuhan  dan  hasilnya.  Pupuk  hayati yang digunakan dapat berupa isolat tunggal suatu  jenis  mikrobia  maupun  konsorsium mikrobia tertentu yang diisolasi dari daerah perakaran tanaman (rizosfir) yang bersimbiosis dengan tanaman.
Salah  satu  jenis  tanaman  yang  diketahui kaya akan simbion mikrobia pada rizosfirnya adalah  Putri  Malu  ( Mimosa  pudica). Putri malu  dikenal  sebagai  gulma  penutup  tanah yang  bersifat  invasif  karena  berkembang
relatif  lebih  cepat  dibanding  tanaman  lain dan tahan terhadap berbagai cekaman abiotik (BBPOPT,  2020).  Kemampuan  yang  dimiliki Putri  Malu  ditengarai  disebabkan  karena putri  malu  membentuk  simbion  dengan konsorsium  mikrobia  pada  rizosfirnya. Beberapa  jenis  mikrobia  yang  diketahui bersimbiosis  dengan  dengan  Putri  Malu antara  lain  berasal  dari  Genus  Rhizobium, Bacillus,  Pseudomonas,  dan  beberapa  jenis Actinomycetes.  Diketahui,  mikrobia  yang bersimbiosis dengan putri malu tersebut ada yang merupakan mikrobia penambat Nitrogen  (Genus  Rhizobium),  mikrobia pelarut posfat (genus Bacillus dan Pseudomonas),  dan  mikrobia  yang  bersifat antagonis  terhadap  beberapa  jenis  pathogen tular  tanah  (contoh; Pseudomonas  pudica) (Harahap, 2008; Nivya, 2015; Sari et al, 2018 ). Produksi  pupuk  hayati  menggunakan isolat mikrobia memiliki peluang besar untuk dikembangkan  dalam  skala  besar.  Akan tetapi terdapat kemungkinan adanya inkompatibilitas  antara  isolat  konsorsium mikrobia  yang  digunakan  dengan  tanaman sasaran.  Sumber  isolat  mikroba  yang digunakan merupakan salah satu faktor yang berpengaruh  terhadap  efektifitas  isolat mikrobia pupuk hayati.
Sejauh ini belum diperoleh data mengenai  jenis  mikrobia  endofit  Putri  Malu yang diperoleh dari Pulau Lombok. Berdasarkan hal tersebut perlu dilaksanakan penelitian yang bertujuan untuk memperoleh isolat mikroba endofit Putri Malu dari Pulau Lombok.  Penelitian  dilakukan  di  lahan kering Pringgabaya, Lombok Timur.
Isolasi Dan Karakterisasi Mikrobia Bintil Akar Putri Malu ( Mimosa Pudica ) Indigenus Dari Lahan Kering Pringgabaya, Lombok Timur
Pringgabaya  terletak  pada  ketinggian  5-250 m di atas permukaan laut (Lomboktimurkab.go.id).  Lokasi  kawasan ini,  baik  secara  topografi  dan iklim , memenuhi syarat tumbuh Putri Malu.

## BAHAN DAN METODE
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain; bintil akar tanaman Putri  malu yang  diambil  pada  daerah lahan kering  Pringgabay,  media  Yeast  Manitol Agar  (YMA),  aquades  steril,  larutan  alcohol 96%, larutan  crystal violet, larutan safranin, dan larutan lugol.
Peralatan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  antara  lain;  sekop  kecil, gunting,  plastik  klip,  Laminar  Air  Flow, mortar dan pistil, mikropipet, lampu Bunsen, kawat  ose,  mikroskop,  alat  gelas,  dan  alat tulis.
Penelitian dilaksanakan dengan menggunakan  metode  deskriptif  dan  terdiri atas  tiga  tahap;  pengambilan  sampel  bintil akar,  isolasi  mikrobia,  dan  karakterisasi isolate mikrobia.
Pengambilan sampel dilakukan dengan  mengadaptasi  metode  Harahap (2008) dan Nivya (2015). Tanaman Putri malu diambil  dari  lahan  terbuka  di  Desa Pringgabaya, Kecamatan Pringgabaya, Kabupaten  Lomobk  Timur  Nusa  Tenggara Barat. Pengambilan sampel dilakukan dengan  mencabut  tanaman  Putri  malu hingga  akarnya  kemudian  memasukkannya ke  dalam  plastik  zip  lock  dan  dibawa  ke laboratorium.
Isolasi  bintil  akar  Putri  malu  akan dilakukan dengan adaptasi metode Harahap (2008)  dan  Nivya  (2015).  Sebelum  isolasi dimulai,  akar  putri  malu  akan  terlebih dahulu dibersihkan dari tanah dan dicuci di bawah  air  mengalir  dengan  hati-hati kemudian  dilanjutkan  dengan  mengambil bintil akar dari akar yang telah bersih untuk disterilisasi. Sterilisasi diawali dengan
menggojog  bintil  akar  di  dalam  Aquades steril selama 2 menit kemudian meniriskannya  pada  tissue  steril.  Sterilisasi dilanjutkan dengan menyemprotkan larutan Alkohol 96% pada bintil akar dan membiarkannya  selama  10  detik  untuk kemudian  dibilas  dengan  aquades  steril selama  2  menit.  Selanjutnya,  bintil  akar digiling kemudian disuspensikan ke dalam 5 mL.  Isolasi  diakhri  dengan  menuang  1  mL suspense  isolate  bakteri  ke  dalam  media YMA  dan  mengingkubasi  selama  48  jam pada suhu 28 º C.
Karakterisasi isolat mikrobia diawali dengan pemurnian isolat untuk mendapatkan isolate tunggal. Pemurnian isolate dilakukan dengan memindahkan masing-masing isolat yang  tumbuh  pada  media  YMA  ke  dalam media  YMA  yang  baru.  Setelah  didapatkan biakan  tunggal,  dilakukan  karakterisasi morfologi  koloni  yang  dilanjutkan  dengan pengecatan gram, serta pengamatan morfologi sel mikrobia dengan menggunakan mikroskop.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Sampel  tanaman  putri  malu  diambil dari  2  lokasi  yang  berbeda  pada  lahan terbuka  Pringgabaya  pada  lokasi  -8.53138, 116.63768,  70.6mdpl,  166 o dan  -8.53085, 166.63744,  60.2m  dpl,  354 o (gambar  1).  Dari kedua lokasi tersebut didapatkan bintil akar Putri Malu yang serupa dengan karakteristik berwarna kemerahan (merah muda) (gambar 2).
Isolasi mikrobia dari bintil akar Putri malu  menghasilkan  7  isolat  mikrobia (gambar  3).  Karakterisasi  kelima  isolate tersebut  dilakukan  dengan  mengamati karakter  kenampakan  koloni,  morfologi  sel, serta  pengecatan  gram.  Secara  umum didapatkan koloni dengan beberapa bentuk; titik (Isolat B dan F), bulat (Isolat A, C, D, dan G),  dan  berbenang  (isolate  E).  Permukaan koloni ada yang cembung (Isolat A, B, C, D,
F,  dan  G)  dan  ada  yang  datar  (Isolat  E). Koloni  sebagian  besar  bewarna  putih  susu dengan pinggiran bening dan berkilau (A, B, F, G), putih susu tanpa pinggiran bening (C,
dan  D)  namun  ada  koloni  yang  berwarna putih (isolat E). Deskripsi koloni isolat secara jelas pada tabel 1.
Gambar 2. Bintil akar tanaman Putri malu
Gambar 3. Hasil isolasi mikrobia bintil akar Putri Malu
Gambar 1. Sampling   Putri Malu di lahan terbuka Pringgabaya
Isolasi Dan Karakterisasi Mikrobia Bintil Akar Putri Malu ( Mimosa Pudica ) Indigenus Dari Lahan Kering Pringgabaya, Lombok Timur
Karakterisasi  isolate  dengan  pewarnaan gram dan pengamatan bentuk sel menunjukkan  sebagian  besar  merupakan mikrobia gram positif (isolate A, C, D, E, dan G)  dan  didapatkan  2  isolat  mikrobia  gram negative (B dan F). Hampir seluruh isolat (A, B, C, D, F, dan G) menunjukkan karakteristik sel bakteri yaitu berbentuk bulat (coccus, baik
monococcus  dan  diplococcus)  dan  batang (Bacillus). Namun demikian terdapat 1 isolat (E)  yang  menunjukkan  karakteristik  seperti actynomycetes yaitu berbentuk tidak beraturan dengan struktur menyerupai hyfa.
Berdasarkan kenampakan morfologi koloni,  ketujuh  isolat  mikrobia  tersebut dideskripsikan pada tabel 1. berikut:

## Tabel 1. Deskripsi koloni mikrobia bintil akar Putri Malu
No Foto Isolat Foto sel Deskripsi isolat 1 Isolat A. Bentuk koloni bulat, permukaan koloni mengkilat,
tepi koloni utuh, warna koloni putih susu, permukaan koloni cembung. Tipe pertumbuhan
fast growing. Bentuk sel batang tunggal, gram positif 2 Isolat B. Bentuk koloni titik, permukaan koloni mengkilat, tepi koloni utuh, warna koloni putih kekuningan,
permukaan koloni mencembung. Tipe pertumbuhan fast growing. Bentuk sel batang
( bacillus) , gram negative.
3 Isolat C. Bentuk koloni bulat, permukaan koloni mengkilat, tepi koloni utuh, warna koloni putih susu, permukaan koloni mencembung. Tipe pertumbuhan fast growing. Bentuk sel batang, gram positif 4 Isolat D. Bentuk koloni bulat, permukaan koloni mengkilat,
tepi koloni utuh, warna koloni putih susu dengan pinggiran bening, permukaan koloni cembung. Tipe pertumbuhan fast growing. Bentuk batang (bacillus). Gram positif. 5 Isolat E. Bentuk koloni berbenang, permukaan koloni suram, tepi koloni tidak rata, warna koloni putih kekuningan, permukaan koloni datar. Tipe pertumbuhan fast growing. Sel panjang tidak beraturan, gram positif
Kemungkinan
Isolasi Dan Karakterisasi Mikrobia Bintil Akar Putri Malu ( Mimosa Pudica ) Indigenus Dari Lahan Kering Pringgabaya, Lombok Timur
merupakan actynomycetes 6 Isolat F Bentuk koloni titik, permukaan koloni mengkilat, tepi koloni utuh, warna koloni putih dengan pinggiran bening, permukaan koloni cembung.
Tipe pertumbuhan fast growing. Bentuk bulat, gram negatif 7 Isolat G. Bentuk koloni bulat, permukaan koloni mengkilat,
tepi koloni utuh,
warna koloni putih
susu dengan pinggiran bening, permukaan koloni cembung. Tipe pertumbuhan fast growing. Bentuk sel batang, gram positif.
Karakteristik  bintil  akar  yang  diperoleh dan digunakan sebagai sampel sumber isolat mikrobia  berwarna  merah  muda.  Warna  ini disebabkan oleh pigmen merah yang disebut leghaemoglobin . Keberadaan pigmen leghaemoglobin terkait dengan fiksasi Nitrogen yang dilakukan bakteri pada bintil akar tersebut. Walaupun leghaemoglobin tidak berperan langsung dalam pengikatan Nitrogen,  pigmen  tersebut  berperan  dalam mengatur  pasokan  Oksigen  bakteri  pada kondisi optimum. Keadaan ini memungkinkan  enzim  Nitrogenase,  yang sensitive  terhadap  Oksigen,  dapat  berfungsi
secara  optimal  (Kannan et  al ,  2015  dan Shentilkumar et al , 2020).
Hasil karakterisasi koloni secara makroskopis  menunjukkan  penampakan beberapa koloni yang serupa; bentuk koloni bulat,  tepi  koloni  rata,  permukaan  koloni cembung dan mengkilat, serta warna koloni putih  susu  (isolat  A,  C,  D,  dan  G).  Namun demikian, koloni isolat B dan F menunjukkan kenampakan  koloni  yang  sedikit  berbeda yaitu,  bentuk  koloni  titik,  dimana  karakter lainnya serupa dengan isolat A, C, D, dan G. Selain  itu,  didapatkan  isolate  E  yang kenampakan  koloninya  jauh  berbeda,  yaitu
seperti  benang,  dengan  permukaan  koloni datar,  tepi  koloni  tidak  rata,  serta  warna koloni  putih  kekuningan.  Berdasarkan  hasil tersebut  diduga  terdapat  setidaknya  3 kelompok  mikrobia  pada  bintil  akar  Putri Malu di Pringgabaya.
Untuk  menegakkan  analisis,  dilakukan karakterisasi secara mikroskopis yang disertai  dengan  pengecatan  gram.  Hasil pengamatan morfologi dan pengecatan gram menunjukkan  adanya  3  kelompok  mikrobia yaitu;  berbentuk  batang,  gram  posistif (isolate  A,C,  D,dan  G);  berbentuk  batang, gram  negative  (isolate  B);  berbentuk  bulat, gram  negative  (isolate  F);  serta  berbentuk seperti  batang,  ada  struktur  seperti  hyfa, gram positif (isolate E).
Berdasarkan  kenampakan  makroskopis koloni dan morfologi bakteri secara mikroskopis, diduga mikrobia yang diisolasi dari bintil akar Putri malu termasuk ke dalam genus Bacillus (isolate A, D, G, C), Rhizobium (isolat  D),  Pseudomonas  (isolat  F),  serta Actynomycetes  karena  berbentuk  memiliki struktur  seperti  hyfa  dan  bentuknya  tidak beraturan.
Bakteri  yang  termasuk  ke  dalam  Bacillus memiliki  morfologi  berbentuk  batang,  gram positif,  koloni  berbentuk  bulat,  permukaan cembung,  tepian  rata,  dan  berwarna  putih (Puspita et al, 2017) seperti yang ditunjukkan oleh  mikrobia  isolate  A,  D,  C,  dan  G.  Isolat Rhizobium pada  umumnya  menunjukkan kenampakan koloni berbentuk bulat, ukuran besar,  berwarna  putih  susu,  permukaan cembung  dan  mengkilap,  bentuk  sirkular dengan  pinggiran  rata,  serta  marginnya entire,  bersifat  gram  negatif  dengan  sel berbentuk  batang  (Sari et  al ,  2018),  serupa dengan karakter isolat D. Isolat F menunjukkan  karakter  makroskopis  koloni dan mikroskopis sel sesuai dengan deskripsi bakteri  dari  genus  Pseudomonas,  yaitu koloni  berbentuk  sirkular  kecil,  permukaan cembung, berwarna putih susu/krem,
berbentuk  bulat  dan  bersifat  gram  negative (Tapia-Garcia, et  al ,  2020).  Hasil  penelitian yang diperoleh sejalan dengan beberapa hasil penelitian  lainnya.  Sari et  al,  (2018 ) menyebutkan berhasil mengisolasi beberapa strain Rhizobium dari bintil akar Putri malu pada kebun kacang, Bogor.  Tapia-Garcia et al (2020)  melaporkan  temuan  keberadaan bakteri Bacillus  sp dan Pseudomonas sp  pada bintil  akar  Putri  malu  yang  tumbuh  di Mexico.
Isolat  E  menunjukkan  karakter  morfologi koloni dan sel yang berbeda secara signifikan dengan  isolate  lainnya;  koloni  berbentuk seperti kumparan/benang, permukaan koloni datar dengan pinggir koloni tidak rata, warna koloni  kekuningan,  bentuk  sel  memanjang dengan  struktur  seperti  hifa  dan  bersifat gram  positif.  Karakteristik  tersebut  lebih mengarah pada genus Actynomycetes dibandingkan  dengan  genus  bakteri.  Ini sesuai  dengan  deskripsi  Li et  al (2015). Keberadaan Actynomycetes dalam  bintil  akar tanaman  legume  juga  telah  dikonfirmasi sejak lama. Sebagai contoh, Gunasekera et al (2016)  melaporkan  terdapat  3  kelompok Genus Actynomycetes ditemukan pada bintil akar  tanaman Casuarina  equisetifolia yang berperan  dalam  peningkatan  pertumbuhan tanaman tersebut.
Karakteristik  morfologi  masing-masing isolat  dapat  menjadi  landasan  awal  dalam identifikasi  jenis  isolat  mikrobia  bintil  akar Putri malu yang didapat. Namun demikian, untuk  menegakkan  hasil  karakterisasi  dan identifikasi  isolat,  perlu  dilakukan  analisis lanjutan  berupa  analisis  aktivitas  biokimia dan  analisis  molekuler  untuk  mengetahui dengan  pasti  jenis  isolat  yang  ditemukan. Penelitian dapat dilanjutkan untuk mengetahui kemampuan isolat untuk fiksasi Nitrogen,  pelarutan  posfat,  uji  antagonis dengan bakteri pathogen secara in vitro serta kemampuan  isolat  dalam  meningkatkan
Isolasi Dan Karakterisasi Mikrobia Bintil Akar Putri Malu ( Mimosa Pudica ) Indigenus Dari Lahan Kering Pringgabaya, Lombok Timur
pertumbuhan dan hasil tanaman dalam skala lapang.

## KESIMPULAN
Isolasi  dan  karakterisasi  mikrobia bintil  akar  tanaman  Putri  malu  ( Mimosa pudica) menghasilkan  7  isolat.  Berdasarkan analisis kenampakan koloni secara makroskopis,  pengamatan  morfologi  sel secara  mikroskopis,  dan  pengecatan  gram, diduga  isolat  tersebut  tergolong  ke  dala genus  Bacillus,  Rizhobium,  Pseudomonas, dan  Actynomycetes.  Untuk  menegakkan hasil  karakterisasi  dan  identifikasi  isolate, perlu  dilakukan  analisis  lanjutan  berupa analisis aktivitas biokimia, analisis molekuler,  kemampuan  fiksasi  Nitrogen, pelarutan  posfat,  dan  uji  antagonis  dengan pathogen  secara in  vitro ,  serta    kemampuan isolate  dalam  meningkatkan  pertumbuhan dan hasil tanaman dalam skala lapang.

## ACKNOWLEDGEMENT
Penulis berterimakasih kepada Lembaga Penelitian  dan  Pengabdian  Masyarakat (LPPM)  Universitas  Mataram  yang  telah memberikan  dukungan  dana  melalui  skim Penelitian Dosen Pemula sehingga penelitian ini dapat terlaksana.

## REFERENSI
BBPOPT.  2020.  Manfaat  Putri  Malu  Bagi
Petani.
Diakses dari:
https://bbpopt.tanamanpangan.pertania n.go.id/index.php/2020/06/09/banyak- yang-tidak-tahu-inilah-manfaat-putri- malu-bagi-petani/ pada1 Februari 2020
Gunasekera D.T.W, D. Gunawardana dan H. Jayasinghearachchi.  2016.  Diversity  of Actinomycetes  in  Nitrogen  Fixing  Root Nodules  of  Casuarinaequisetifolia  and its Impact on Plant Growth. International Journal of Multidisciplinary Studies (IJMS) 3(1): 17-24.
Harahap, I.P. 2008. studi pendahuluan isolasi bakteri  rhizobium  dari  bintil  akar tanaman putri malu ( mimosa pudica. l) serta  pemanfaatannya  sebagai  pupuk hayati (biofertilizer)
dengan menggunakan bentonit sebagai medium pembawa. Skripsi. Universitas Sumatera Utara.
Kannan,  V.R.,  S.  Sithara.,  S.  Chandru.  2015.
Proportional analysis of leghaemoglobin concentration  in  various  nodulating plants  and  intuitive Rhizobium species.
European  Journal  of  Experimental  Biology
5(4): 15-23.
Klonowska,  A.,  C.  Chaintreul,  P.Tisseyre, L.Miche, R. Melkonian, M. Ducousso, G. Laguerre, B. Brunel, L. Moulin. Biodiversity of Mimosa pudica rhizobial symbionts  (Cupriavidus  taiwanensis, Rhizobium  mesoamericanum)  in  New Caledonia and their adaptation to heavy metal-rich soils. FEMS Microbiol Ecol, 81: 618-635
Li,  Q.,  X.  Chen,  Y.  Jiang,  C.  Jiang.  2015.
Morphological Identification of Actinobacteria.  Actinobacteria  -  Basics and  Biotechnological  Applications,  D.
Dhanasekaran  dan  Y.  Jiang  (ed.).    DOI 10.5772/60457 Diakses dari https://www.intechopen.com/books/505
6.
Nivya, R.M. 2015. A Study on Plant Growth
Promoting  Activity  of  the  Endophytic Bacteria Isolated from the Root Nodules of  Mimosa  Pudica  Plant. International Journal  of  Innovative  Research  in  Science, Engineering  and  Technology,  4  (8):  6959- 6968
Nurhidayati, 2017. Kesuburan dan Kesehatan Tanah. Intimedia. Malang
Puspita,  F.,  M.Ali,  R.Pratama.  2017.  Isolasi
dan Karakterisasi Morfologi dan Fisiologi  Bakteri Bacillus sp  Endofitik dari  Tanaman  Kelapa  Sawit  ( Elaeis

## N.H. Nufus, W. Wangiyana, Ni W. Sri Suliartiningsih
guinnensis Jacq.) Jurnal  Agroteknologi Tropika 6 (2): 44-49. Sari, E., A. N.Flatian, Z.I.Sari, E.Sulaeman.2018.Isolasi dan
Karakterisasi  Thizobium  dari  Glycine max  dan  Mimosa  pudica.  I  Ekotonia : Jurnal  Penelitian  Biologi,  Botani,  Zoologi, dan Mikrobiologi,  3 (2): 55-62. Shentilkumar, M., N. Amaresan, A. Sankaranarayan. 2020. Quantitative
Estimation of Leghemoglobin Content in
Legume  Root  Nodules. Plant  Microbes Interaction , Springer Protocols Handbooks. Humana, New York Tapia-Garcia,  E.Y.,  V.  Hernandez-Trejo,  J. Guevara-Luna, F.U. Rojas-Rojas, I.Arroyo-Herrera,  J.  Meza-Radilla,  M.S. Vasquez-Murrieta,  P.  Estrada-De  Los
Santos.  2020.  Plant  growth-promoting bacteria  isolated  from  wild  legume nodules and nodules of Phaseolus vulgaris
L.  trap  plants  in  central  and  southern Mexico. Microbial Research 23