## KUALITAS DAN FERTILITAS SPERMATOZOA SAPI BALI HASIL SEXING DENGAN MENGGUNAKAN METODE SWIM-DOWN
Febiang Lopulalan 1 , Takdir Saili 2 , La Ode Baa 2
1 Alumnus Program Studi Peternakan Prgram Pascasarjana UHO 2 Dosen Program Studi Peternakan Prgram Pascasarjana UHO Email : Takdir69@yahoo.com

## ABSTRAK
Metode  sexing  spermatozoa  telah  banyak  digunakan  dalam  upaya  memproduksi  anak  ternak  sapi dengan  jenis  kelamin  yang  bisa  dikendalikan.  Pada  penelitian  ini  telah  dilakukan  kajian  tentang kualitas  dan  fertilitas spermatozoa  setelah sexing menggunakan metode swim  down.  Semen  yang didapat  berasal  dari  pejantan  milik  UPTD  Balai  Perbibitan  dan  Pakan  Ternak  Provinsi  Sulawesi Tenggara.  Penelitian  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang  terdiri  dari  3  perlakuan dengan  6  kali  ulangan.  Perlakuan  adalah  lama  waktu sexing P1  (10  menit),  P2  (20  menit),  P3  (30 menit) dan ulangannya adalah 6 kali penampungan. Media sexing yang digunakan adalah Tris-Kuning Telur. Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa  perlakuan  lama  waktu  sexing  berpengaruh  nyata terhadap  konsentrasi  spermatozoa, persentase  motilitas  spermatozoa dan Post  Thawing  Motility (PTM)  spermatozoa  hasil  sexing  yang  telah  dibekukan. Persentase Non  Return  Rate (NRR)  21  hari setelah inseminasi pada  120  ekor  sapi  betina menunjukkan  persentase  kebuntingan berkisar  antara 77,5% - 87,5%.  Kesimpulan  penelitian  ini  adalah  kualitas  spermatozoa  hasil  sexing  dan  motilitas spermatozoa  hasil  sexing  yang  dibekukan  masih  baik  dan  memenuhi  syarat  untuk  digunakan  pada inseminasi  buatan.  Fertilitas  spermatozoa  hasil  sexing  yang  dibekukan  masih  mampu  menghasilkan angka kebuntingan yang tinggi berdasarkan nilai Non Return Rate.
Kata kunci: Spermatozoa, sapi bali, sexing, swim down

## ABSTRACT
Sperm sexing has been used widely in an attempt to produce the desired sex of calf. In this research, study on quality and fertility of bali bull following sexing using swin down method.  Semen was taken from  bali  bull  raised  in  UPTD Balai  Perbibitan  dan  Pakan  Ternak South-east  Sulawesi  Province. Completely Randomized Design was applied in this research with here treatment and six replications. The  treatment  was  sexing  period  consisted  of  10  minute  (P1),  20  minute  (P2)  and  30  minute  (P3). Sexing media used was Tris-Egg Yolk media. The results showed that the treatments had significant effect on sperm concentration, sperm motility after sexing and post thawing motility. Non return rate of 120 inseminated cow using sexed-thawed sperm ranged between 77.5% - 87.5%.  It was concluded that quality of sexed sperm and post thawing motility of sexed sperm were still met the requirement for artificial insemination.  The sexed-thawed sperm of bali bull still had high fertilizing ability based on the Non Return Rate results.
Keywords: Spermatozoa, bali bull, sexing, swim down

## PENDAHULUAN
Teknologi reproduksi yang ditujukan untuk
meningkatkan produktivitas  ternak  ada  beberapa  macam, antara lain Insmeinasi Buatan (IB), Embrio Transfer  (ET)  dan  In  Vitro  Fertilisasi (IVF).  Keberhasilan  penerapan  teknologi reproduksi    tersebut  di  lapangan  sangat bervariasi  dan  sangat  tergantung  dari peruntukannya. Namun demikian, penerapan teknologi  IB  di lapangan sudah sangat  luas.    Pada  awalnya,  teknologi  IB hanya diaplikasikan pada ternak sapi perah karena  umumnya  ternak  sapi  perah dipelihara secara intensif sehingga memudahkan untuk pengamatan berahinya.  Seiring  dengan  perkembangan teknologi  sinkronisasi  dan  keinginan peningkatan produktivitas ternak sapi lokal di  masyarakat,  maka  teknologi  IB  juga sudah  banyak  diaplikasikan  pada  ternak sapi potong.  Sapi induk dapat dikawinkan baik secara alam (menggunakan penjantan)  maupun  melalui  penggunaan teknologi  IB.    Pada  wilayah  yang  basis sistem pemeliharaan sapinya masih bersifat  ekstensif,  ketersediaan  sapi  jantan menjadi  kunci  keberhasilan  program  ini. Pada sisi lain, penjualan sapi jantan masih cukup banyak dilakukan masyarakat karena  mempunyai  nilai  ekonomi  yang lebih  tinggi  dibanding  ternak  sapi  betina. Oleh  karena  itu,  perlu  diterapkan  sistem manajemen  perkawinan  ternak  agar  lebih banyak jantan yang dilahirkan dalam suatu kebuntingan  dibandingkan  ternak  sapi betina.
Upaya mengendalikan jenis kelamin anak ternak yang dilahirkan sudah banyak  dilakukan  dengan  merekayasa  sel spermatozoa sebelum digunakan  untuk membuahi  sel  telur.    Salah  satu  teknologi tersebut  adalah sexing sperma,  yaitu teknologi  yang  berupaya  memisahkan spermatozoa Y dari X dengan menerapkan berbagai  macam  metode.    Beberapa  jenis metode sexing yang telah dilakukan antara lain metode sedimentasi (albumin column),  sentrifugasi  gradien  densitas
Percoll,  elektroforesis,  H-Y  antigen,  flow cytometri  dan  filtrasi  dengan  sephadex column.  Metode sexing yang  mudah diaplikasikan  adalah  separasi  dengan albumin (Saili dkk., 2000). Sexing dengan metode  kolom albumin  didasarkan  pada perbedaan  motilitas  antara spermatozoa  X dan  Y  (Saili dkk., 2000;  Saili dkk., 2006; Purwoistri, 2013).
Upaya memodifikasi metode pemisahan  spermatozoa  dilakukan  untuk mendapatkan kualitas dan kuantitas sperma  yang  memenuhi  syarat  untuk digunakan  pada  program  IB.    Pada penelitian  ini  akan  dilakukan  modifikasi baik  terhadap  medium sexing maupun metode sexing. Medium sexing yang akan digunakan  adalah  medium  Tris-Kuning Telur  yang  telah  digunakan  secara  luas sebagai  pengencer  semen,  sedangkan metode  yang  digunakan  adalah  metode swim down.
Metode swim  down yaitu sperma dibiarkan  berenang  ke  arah  bawah  tabung sexing Sepermatozoa  Y  lebih  cepat bergerak  atau  mempunyai  daya  penetrasi yang  tinggi  untuk  masuk  kesuatu  larutan seperti pengencer Tris-kuning telur.

## MATERI DAN METODE

## Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  di  Unit Pelaksana  Teknis Daerah  Balai  Perbibitan dan Pakan Ternak Dinas Tanaman Pangan dan Peternakan Provinsi Sulawesi Tenggara  di  Desa  Morome  Kecamatan Konda Kabupaten Konawe Selatan Provinsi Sulawesi Tenggara.  Penelitian ini dilaksanakan pada bulan April-Juni 2018.

## Materi Penelitian
Materi utama yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  semen/spermatozoa yang diperoleh dari sapi bali jantan dengan umur ±4 tahun dan berat ±350kg. Medium Tris-Kuning  Telur  (Tris-KT)  sebagai
medium sexing spermatozoa dan  juga medium  pengencer  spermatozoa,  vagina buatan, tabung  reaksi,  haemocytometer, water  bath,  mikroskop,  alat  pendingin dengan suhu 2-5 0 C, IB kit untuk keperluan inseminasi, dan lain-lain.

## Prosedur Penelitian Penampungan Semen
Penampungan  semen  dilakukan dengan  menggunakan  vagina  buatan  yang terbuat  dari  rangkaian  tabung  karet  yang berlubang  pentil,  karet inner  liner,  karet pengikat,  corong  karet,  dan  tabung penampung bersekala. Air panas (40-52 0 C) dimasukkan  ke  dalam  vagina  buatan melalui  lubang  pentil  hingga  mencapai setengah  bagian,  kemudian  lubang  pentil ditutup  dan  dipompa. Kekenyalan  vagina buatan  diukur  dengan  jari  jika  dirasakan cukup,  karet  bagian  luar  vagina  buatan diberi pelicin hingga 1/3 bagian panjangnya. Semen  yang  tertampung segera  dievaluasi  secara  makroskopis  dan mikroskopis.

## Pemisahan Spermatozoa
Pada penelitian ini semen sapi yang ditampung  (ejakulat)  dicampurkan  dengan larutan  NaCl  fisiologis  0,9% hingga konsentrasi  spermatozoa menjadi 200  juta sel  per  milliliter. Medium  pengencer  Tris- KT telah  dipersiapkan  pada  tabung  reaksi kemudian  pada  bagian  atas  dengan perlahan dimasukan larutan NaCl fisiologis yang  telah  dicampur  dengan cairan  spermatozoa,  kemudian  dibiarkan selama  10  menit, 20 menit  dan 30 menit sesuai perlakukan pada suhu kamar. Fraksi semen  bagian  atas  yaitu  larutan  NaCl fisiologis  dan  spermatozoa  selanjutnya dipisahkan dari fraksi semen bagian bawah dengan  menyedot  masing-masing  fraksi menggunakan  pipet.    Fraksi  semen  bagian bawah kemudian dievaluasi secara mikroskopis  yang  meliputi konsentrasi, viabilitas, motilitas dan keutuhan membran plasma spermatozoa.
Pengenceran, Pengemasan dan Pembekuan Semen
Semen yang memenuhi persyaratan kemudian diencerkan  dengan  konsentrasi 20x10 6 (  menggunakan  pengencer  tris- kuning  telur.  Proses sexing spermatozoa dengan  menggunakan  medium  pengencer tris-kuning  telur  sekaligus  tahap  awal pengenceran  pada  suhu  ruang.    Tabung yang  digunakan  sebagai  wadah sexing disimpan  dalam  lemari  pendingin  dengan suhu  2-5 0 C.    Setelah  3  jam  dibiarkan kemudian tabung  yang berisi sperma hasil sexing dipisahkan  antara  endapan  dan supernatan.    Supernatan  dibuang  dan endapan  spermatozoa  digabung  untuk dihitung konsentrasinya.  Setelah diketahui konsentrasi spermatozoa tersebut ditambahkan pengencer tris-kuning telur + gliserol  yang  dibuat  dengan  total  gliserol adalah  7%  dari  volume  total  pengenceran sperma  pada  suhu  2-5 0 C. Setelah  itu dikemas dalam ministraw 0,25 ml.

## Volume
Setelah penampungan semen dilanjutkan  pengukuran  volume  yang diejakulasikan  oleh  pejantan.    Volume semen  dapat  dilihat  melalui  tabung pengumpul  yang  telah  dilengkapi  dengan garis volume.

## Warna
Warna pada semen dapat dievaluasi secara visual setelah penampungan,  semen  yang  baik berwarna putih sampai krem.

## Derajat Keasaman (pH)
Derajat  Keasaman  (pH)  diukur dengan  cara  mengambil  sedikit  semen segar  kemudian  dilakukan  pengukuran dengan  alat  pengukur  pH  elektrik.  pH normal  semen 6,4-7,8  (Garner  dan  Hafez, 2000).  pH  sangat  menentukan  status kehidupan spermatozoa di dalam semen.
Sedangkan evaluasi kualitas spermatozoa  secara  mikroskopis  baik sebelum  maupun  sesudah sexing terdiri atas :
Konsentrasi
Evaluasi terhadap konsentrasi dilakukan  dengan  menggunakan  pipet haemocytometer dan kamar hitung Neubauer.  Semen  diisap  sampai  skala  0.5 kemudian  ditambah  dengan  larutan  NaCl 3%  dan  diisap  sampai  mencapai  angka 1.01.  Larutan  dalam  pipet  digoyang- goyang membentuk angka delapan selama 2-3 menit agar larutan homogen, selanjutnya larutan tersebut dibuang beberapa tetes. Setelah itu semen diteteskan  pada  kamar  hitung  Neubauer yang  ditutup  dengan  gelas  penutup, kemudian  diamati  dengan  mikroskop cahaya  pembesaran 400x.  Menghitung spermatozoa  yang  terdapat  di  dalam  lima kotak dengan arah diagonal. Hasil perhitungan konsentrasi spermatozoa dalam  jumlah  kamar  yang  dihitung  lima kotak dengan 80 ruangan Konsentrasi  semen  di  dalam  setiap  straw adalah  25x10 6 sperma  motil.  Semen dibekukan  dalam  uap  N2  cair  selama  9 menit dengan  jarak  antara  permukaan  N2 cair  dengan  straw  semen  adalah  ±  2  cm. Proses  terakhir  adalah  pencelupan  straw yang  berisi  semen/sperma  ke  dalam  N2 cair yang mempunyai suhu -196°C.

## Inseminasi Buatan
Sebanyak 120  ekor sapi  bali
akseptor dengan  persyaratan minimal  satu kali  melahirkan  diinseminasi dengan semen  beku sexing dengan  uraian  40  ekor diinseminasi  dengan  semen  beku  yang disexing  selama 10  menit  (P1), 40  ekor dengan semen  beku  yang  disexing  selama 20 menit (P2), dan 40  ekor dengan semen beku yang disexing selama 30 menit (P3).

## Rancangan Percobaan
Penelitian ini menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan tiga  perlakuan  dan  6  ulangan. Perlakuan dalam  penelitian  ini  adalah  waktu sexing yang  terdiri  atas  10  menit  (P1), 20 menit (P2)  dan 30 menit  (P3).  Ulangannya adalah  penampungan semen sebanyak enam  kali. Data  yang  dikumpulkan
selanjutnya  dianalisis  dengan  sidik  ragam dan  perbedaan  antar  perlakuan  dianalisis dengan uji beda nyata terkecil (Mattjik dan Sumertajaya, 2013).

## Variabel Penelitian
Variabel yang diukur pada penelitian  ini  adalah  kualitas  semen  segar meliputi  pengamatan  secara  makroskopis dan  mikroskopis, kualitas spermatozoa sesudah sexing yaitu evaluasi motilitas dan viabilitas spermatozoa hasil  sexing dan evaluasi motilitas spermatozoa yang dibekukan serta fertilitas  spermatozoa hasil sexing.
Pengamatan kualitas semen dan spermatozoa secara makroskopis adalah :

## Viabilitas
Satu  tetes  semen  dengan  dua  tetes pewarna  eosin  dihomogenkan,  dibuat dengan preparat ulas pada gelas obyek dan difiksasi di atas heating table. Perhitungan dilakukan di  bawah mikroskop  dengan pembesaran lensa obyek sebesar 40X pada 5 lapangan  pandang  dengan  jumlah spermatozoa minimal  200  sel  (Arifiantini, 2012).  Spermatozoa yang  mati  akan menyerap  warna  sedangkan  yang  hidup tidak menyerap warna (transparan). Persentase  motilitas  spermatozoa dinilai dari 0-100%.

## Persentase Motilitas
Evaluasi persentase motilitas spermatozoa  dilakukan  baik  terhadap spermatozoa pada semen segar, spermatozoa hasil sexing maupun spermatozoa  beku.    Evaluasi  dilakukan pada  5  lapangan  pandang  (Arifiantini, 2012)

## Evaluasi  Fertilitas  Spermatozoa  Beku Hasil Sexing
Pengujian fertilitas  spermatozoa beku  hasil  sexing  dilakukan  dengan  cara menginseminasikan spermatozoa ke betina akseptor. Evaluasi dilakukan pada hari ke- 21  setelah  IB  dengan  menghitung  jumlah sapi  betina  yang  tidak  minta  kawin  lagi
(non  return  rate  atau  NRR).  Sapi betina yang  telah  diinseminasi  dan  tidak  minta kawin  lagi  pada  hari  ke  21  setelah  IB dikategorikan sebagai sapi yang diprediksi bunting.
Rataan  hasil  evaluasi  makroskopis dan  mikroskopis  semen  dan  spermatozoa segar  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini pada kisaran yang baik. Bila dibandingkan dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Arifiantini  dkk.,  (2006)  pada  10  ekor  sapi bali  di  UPTD  Baturiti,  Denpasar-Bali didapatkan kualitas semen segar yaitu rata- rata volume semen segar 6,30 ml, rata-rata warna  semen  segar  adalah  krem,  rata-rata konsistensi semen segar adalah sedang,

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Evaluasi  Kualitas  Sperma  sebelum
Sexing (semen segar)
Pemeriksaan makroskopis dan mikroskopis semen segar merupakan salah satu  syarat  untuk  menentukan  kualitas semen segar setelah penampungan. Berikut ini  adalah  rata-rata  hasil  pemeriksaan makroskopis dan mikroskopis semen segar pada 6 (enam) kali penampungan.
Tabel  4.1.  Rataan hasil  penilaian  kualitas
semen segar sapi bali Parameter Nilai Warna Bau Volume (ml) Konsistensi pH Motilitas (%) Konsentrasi (juta/ml) Krem Khas 6,57±1,63 Kental 6,42±0,23 86,67±5,16 1.518,50±424,05
Keterangan:
Pengamatan dilakukan di Laboratorium  UPTD  BPPT  Prov. Sultra
Rataan  hasil  evaluasi  makroskopis  dan mikroskopis semen dan spermatozoa segar yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  pada kisaran  yang  baik.  Bila  dibandingkan dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Arifiantini  dkk.,  (2006)  pada  10  ekor  sapi
bali  di  UPTD  Baturiti,  Denpasar-Bali didapatkan kualitas semen segar yaitu rata- rata volume semen segar 6,30 ml, rata-rata warna  semen  segar  adalah  krem,  rata-rata konsistensi  semen  segar  adalah  sedang, rata-rata  persentase  motilitas  semen segar adalah  71,04%  dan  rata-rata  konsentrasi semen segar adalah 1340 juta/ml.  Hasil ini sangat  memungkinkan  diperoleh  karena ditunjang oleh kualitas dan kuantitas pakan yang  diberikan  kepada  jantan  tersebut berupa  rumput  gajah  sebanyak  10%  dari bobot  badan  dan  konsentrat  4-5  kg  per hari.    Selain  itu,  umur  pejantan  tersebut juga  masih  tergolong  pada  usia  produktif. Kebutuhan protein ransum pejantan minimal 12% dengan TDN pakan minimal 65%  (Standar  Nasional  Indonesia,  2009). Menurut  Fathul  dkk.  (2013)  rumput  gajah memiliki  kandungan  protein  kasar  8,69% dan  TDN  52,40%.  Sedangkan  konsentrat yang  diberikan  kepada  sapi  pejantan  pada penelitian  ini  mengandung  protein  kasar 13%  dan  TDN  70%. Direktorat  Jenderal Peternakan  dan  Kesehatan  Hewan  (2007) merekomendasikan  bahwa  pejantan  yang tidak  dapat  digunakan  lagi  dan  harus diafkir  atau  dikeluarkan  apabila  telah digunakan  selama  6-7  tahun.    Toelihere (1993)  menyatakan  bahwa  kualitas  pakan dan  umur  pejantan  sangat  berpengaruh terhadap  kualitas  semen  yang  dihasilkan. Selanjutnya  dikatakan  bahwa  kandungan plasma  semen  dipengaruhi  oleh  faktor bangsa dan variasi individu. Plasma semen sebagai  indicator  kualitas  spermatozoa karena sekitar 90% semen sapi terdiri atas plasma semen yang memiliki fungsi utama sebagai  medium pembawa  spermatozoa dari  saluran  reproduksi  hewan  jantan kedalam  saluran  reproduksi  hewan  betina, plasma  semen  juga  mengandung  bahan penyangga  dan  makanan  sebagai  sumber energi bagi spermatozoa (Toelihere, 1985). Semen  pejantan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  berwarna  krem.    Nursyam (2007)  dan  Feradis  (2010)  mengatakan bahwa  semen  sapi  normal  berwarna  putih susu  atau  krem  keputihan  dan  keruh. Semen  segar  sapi  bali  hasil  penampungan
di  UPTD  BPPT  memiliki  bau  yang  khas. Toelihere  (1993)  mengatakan  bahwa  sapi pejantan menghasilkan semen yang berbau khas.  Rata-rata  volume  semen  sapi  bali yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  adalah 6,57  ml.  Menurut  Toelihere  (1993), volume  semen  sapi  yaitu  1-15  ml, sedangkan  Feradis  (2010)  melaporkan bahwa volume semen sapi berkisar 5-8 ml.
Konsistensi  atau  kekentalan  semen segar  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini adalah  pekat  dengan  rata-rata  konsentrasi spermatozoa  yang  diperoleh  sebanyak 1.518,5x10 6 /ml  sperma.  Hal  tersebut sesuai  dengan  pendapat  Toelihere  (1993) bahwa  semen sapi  dikatakan  pekat  bila konsentrasi  spermatozoa  >  1.500  juta  (di atas  1.500  juta).  Menurut  Evans  dan Maxwell (1987) konsistensi semen tergantung  pada  konsentrasi  spermatozoa dan seminal plasma. Semen yang mengandung  konsistensi  kental  lebih banyak mengandung spermatozoa
dibanding dengan semen yang konsistensinya encer.  Rata-rata pH semen segar  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini adalah  6,42.    Hasil  pH  tersebut  sesuai dengan  pendapat  Butar  (2009)  bahwa  pH
semen segar adalah 6,4-7,8. Feradis (2010) mengatakan  bahwa  setiap  bangsa  sapi mempunyai  nilai  pH  semen  segar  yang berbeda-beda.  Jadi  pH  semen  segar  sapi bali  yang  digunakan  sebagai  bahan penelitian  ini  dapat  dikatakan  normal. Rata-rata persentase motilitas semen segar yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  adalah 86,67%.    Susilawati  (2011)  menyatakan bahwa motilitas semen segar sapi berkisar antara  70-90%.  Hal  tersebut  berarti motilitas  individu  yang  didapat  masih dalam kisaran normal dan dapat digunakan untuk  produksi  semen  beku.  Sedangkan motilitas  spermatozoa  di  bawah  40% menunjukan nilai semen yang kurang baik karena  kebanyakan  persentase  yang  fertil itu  50-80%  spermatozoa  yang  motil  aktif progresif (Feradis, 2010).
Evaluasi Spermatozoa setelah Mengalami Sexing

## Evaluasi Konsentrasi Spermatozoa
Pemeriksaan kualitas  semen  hasil sexing dengan metode swim down meliputi konsentrasi, viabilitas, persentase motiilitas  dan  membran  plasma  utuh (MPU).
Tabel 4.2. Rataan konsentrasi spermatozoa hasil sexing pada fraksi bawah
Ulangan Perlakuan P1 P2 P3 1 15 26 43 2 17 30 46 3 14 25 41 4 14 24 42 5 8 22 39 6 15 27 42 Rataan 13,83±3,06 a 25,67±2,73 b 42,17±2,32 c
Keterangan : Superskrip  dengan  huruf  yang  berbeda  pada baris yang  sama  menunjukkan  perbedaan yang nyata (P<0,05).
Data pada Tabel 4.2. menunjukkan bahwa  lama  waktu sexing berpengaruh nyata (P<0,05) terhadap konsentrasi spermatozoa.    Sedangkan  hasil  uji  beda nyata  menunjukkan  bahwa  lama  waktu sexing  30  menit  (P3)  menghasilkan konsentrasi  spermatozoa  yang  nyata  lebih banyak  dibandingkan  dengan  lama  waktu sexing 20 menit (P2) dan 10 menit (P1).
Nilai  konsentrasi  spermatozoa  pada  lama waktu sexing 10  menit  menunjukkan angka  konsentrasi  spermatozoa  terkecil bila  dibandingkan  dengan  lama  waktu sexing 20 menit dan 30 menit dikarenakan waktu  yang  cepat  sehingga  konsentrasi spermatozoa hasil sexing sangat sedikit.

## Evaluasi Persentase Viabilitas Spermatozoa
Rataan persentase spermatozoa hidup  setelah  proses sexing dengan menggunakan metode swim down
menunjukkan perlakuan lama waktu sexing tidak  berpengaruh  nyata  (P ˃0.05)
terhadap persentase spermatozoa hidup.
Tabel 4.3. Rataan Persentase Spermatozoa Hidup Sapi Bali setelah Sexing
Ulangan Perlakuan P1 P2 P3 1 98,68 99,08 97,54 2 99,01 95,53 96,37 3 98,81 95,17 97,84 4 98,13 96,49 87,55 5 98,57 96,50 90,82 6 99,05 97,23 96,29 Rataan 98,71±0,34 a 96,67±1,40 a 94,40±4,22 a Keterangan : Superskrip dengan huruf yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang tidak nyata (P ˃0,05)
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa waktu sexing belum memberikan pengaruh yang  nyata  terhadap  persentase  viabilitas spermatozoa.    Namun  demikian  ada kecenderungan penurunan rataan persentase  viabilitas  spermatozoa  sejalan dengan lama watu sexing. Bila dibandingkan dengan hasil penelitian yang dilakukan  oleh  Purwoistri  dkk.  (2013) menyebutkan nilai persentase hidup spermatozoa dengan menggunakan
pengencer CEP-2 ditambah dengan kuning telur  10%  pada  lapisan  atas  dan  lapisan bawah masing-masing adalah 93,30±4,03% dan 92,90±2,04%. Perbedaan ini menunjukkan bahwa medium  Tris  Kuning  telur  sangat  baik digunakan untuk media pengencer maupun media sexing spermatozoa.
Evaluasi Persentase Motilitas

## Spermatozoa
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa perlakuan  lama  waktu sexing berpengaruh nyata (P<0,05) terhadap persentase motilitas spermatozoa. Sedangkan hasil uji
BNT menunjukkan bahwa motilitas spermatozoa  pada  perlakuan  lama  waktu
sexing 10 menit nyata lebih besar (P<0,05) dibandingkan  dengan  perlakuan  lama waktu sexing 20 menit dan 30 menit. Menurut  Dixon et  al. (1980)  bahwa motilitas spermatozoa hasil sexing mencapai  70%,  sedangkan  Afiati  (2004) melaporkan  bahwa  persentase  motilitas spermatozoa  hasil sexing menggunakan metode  gradient  albumin  yang  diprediksi membawa kromosom Y mencapai 75,00%. Berbeda dengan penelitian yang dilakukan oleh  Saili  dkk. (2016)  perlakuan  lama waktu sexing 20  menit,  35  menit,  dan  50 menit masing-masing mendapatkan persentase motilitas 60,27±1,15%, 60,00±21,31%,  dan  52,50±21,21%  untuk koleksi  spermatozoa  Y  pada  medium albumin konsentrasi 30%.
Bila dibandingkan  dengan  beberapa  penelitian terdahulu    maka  persentase  motilitas  hasil penelitian    dengan  metode swimc  down yang    menggunakan    media    Tris  Kuning Telur  sangat  baik  dan  layak    untuk dijadikan  semen  beku.    Persentase motilitas  spermatozoa  sesudah sexing ditampilkan pada Tabel 4.4.

## Tabel 4.4. Rataan Persentase Motilitas Spermatozoa setelah Sexing
Ulangan Perlakuan P1 P2 P3 1 90 80 80 2 80 70 70 3 80 80 70 4 90 80 70 5 90 80 70 6 90 80 80 Rataan 86,67±5,16 a 78,33±4,08 b 73,33±5,16 b Keterangan: Superskrip dengan huruf yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05) Evaluasi  Fertilitas Spermatozoa Beku Sapi Bali hasil sexing

## Evaluasi Semen Beku
Hasil sidik ragam menunjukkan perlakuan berpengaruh  nyata  (P<0,05)  terhadap persentase post  thawing  motility (PTM) spermatozoa.    Sedangkan  hasil  uji  BNT menunjukkan bahwa perlakuan
P1
menghasilkan  spermatoz oa  dengan  PTM yang nyata lebih baik dibandingkan perlakuan  P3  tetapi  tidak  berbeda  nyata dengan  perlakuan  P2.  Sedangkan  nilai  PTM spermatozoa  pada  perlakuan  P2  tidak menunjukkan  perbedaan  nyata  baik  dengan spermatozoa  pada  perlakuan  P1  maupun perlakuan P3.

## Tabel 4.5. Evaluasi semen beku berdasarkan nilai Post Thawing Motility (PTM)
Ulangan Perlakuan P1 P2 P3 1 40 40 30 2 30 30 20 3 40 40 30 4 40 30 30 5 40 40 30 6 40 40 30 Rataan 36,33±4,08 a 36,67±5,16 ab 28,33±4,08 bc Keterangan : Superskrip  dengan  huruf  yang  berbeda  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05) Rataan  nilai  PTM  spermatozoa  beku  hasil sexing  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini masih  sedikit  di  bawah  persyaratan  nilai PTM  spermatozoa  beku  yang  layak  untuk IB  seperti yang  dikemukakan  oleh Toelihere (1987). Namun demikian, dengan melakukan inseminasi yang double dosis sperma  beku  hasil  sexing  masih layak  digunakan    untuk  IB. Susilawati (2004)  menjelaskan  bahwa  semen  segar setelah  dilakukan  sexing  dan  pembekuan akan  mengalami  penurunan  motilitas. Lebih  lanjut  dijelaskan  bahwa  persentase motilitas  spermatozoa  setelah thawing akan menurun sampai ≥ 10%.
Evaluasi  Keberhasilan  IB  berdasarkan Non Return Rate (NRR) Non Return Rate (NRR)
merupakan alat deteksi kebuntingan berupa persentase jumlah betina yang tidak menunjukkan berahi kembali setelah di-IB dengan  spermatozoa  hasil sexing dengan observasi 21 hari setelah IB.   Prinsip dari NRR (Non Return Rate) adalah melakukan pengamatan  berahi  selang  siklus  berahi pasca IB.  Toelihere  (1985)  dan  Linsay et al. (1982)  menyatakan  bahwa  NRR merupakan  persentase  jumlah  ternak  yang tidak  kembali  estrus  atau  berahi  kembali selang  siklus  estrus  ke-1,  ke-2  dan  ke-3 pasca  IB.    Hasil  pengamatan  NRR  pada penelitian ini dapat dilihat pada Tabel 4.6.

## Tabel 4.6. Hasil pengamatan NRR pada sapi bali yang diinseminasi semen sexing
Perlakuan Jumlah Akseptor NRR 0-21 hari % P1 P2 P3 40 40 40
36 32 31 87,5 80,0 77,5 Secara deskriptif terjadi korelasi yang baik antara lama waktu sexing dengan persentase kebuntingan berdasarkan perhitungan  NRR.  Persenntase NRR perlakuan lama waktu sexing 10 menit, 20 menit, dan 30 menit masing-masing adalah 87,5%,  80%,  dan  77,5%.  Nilai ini  sesuai dengan pendapat
Iswoyo dan Widiyaningrum (2006) menyebutkan bahwa  nilai  NRR  yang  baik  adalah
79,53±18%.  Nilai  NRR ˃50%  masih dalam  kategori  baik  (Rosita  E.A. et  al., 2013).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  pembahasan  dapat disimpulkan bahwa :
1. Evaluasi  kualitas  spermatozoa  setelah mengalami proses sexing menunjukkan hasil yang sesuai dengan standar untuk diproses  lebih  lanjut  menjadi  semen beku.
Kualitas post thawing motility spermatozoa  Sapi  Bali  hasil sexing dengan lama waktu sexing 10 menit, 20 menit,  dan  30  menit  menunjukkan terjadi penurunan motilitas tetapi semen beku  masih  layak  digunakan  untuk inseminasi buatan.
2. Persentase non  return  rate didapat sangat baik yaitu 87,5% pada perlakuan (P1)  dengan  lama  waktu  sexing  10 menit.

## DAFTAR PUSTAKA
Affandy,  L.,  U.U.  Miyasih  dan  K.  Ma`sum. 1999.    Evaluasi  kualitas  semen  beku sapi  madura  dengan  berbagai  diluter dan  kandungan  kuning  telur  yang berbeda.    Prosiding  Seminar  Nasional Peternakan  dan  Veteriner.  Bogor,  1 – 2 Desember 1998. Puslitbang Peternakan, Bogor. hlm. 233 – 239.
Afiati,  F.    2004.    Proporsi  dan  karakteristik spermatozoa  X  dan  Y  hasil  separasi kolom albumin. Jurnal Media
Peternakan 27(1):16-20.
Afriani,  T.,  Z.  Udin,  Jaswandi  dan  S. Asmairicen.  2011.    Pengaruh  waktu pelapisan  spermatozoa sapi  pada media  TALP  yang  disuplementasi bovine serum albumin (BSA) terhadap jenis  kelamin  embrio in  vitro.    Jurnal Peternakan Indonesia  13(2): 141-148
Arifiantini,  R.I.,  T.  Wresdiyati  dan  E.F.
Retnani.    2006.    Pengujian  morfologi spermatozoa Sapi Bali (Bos
Sondaicus)  menggunakan  pewarnaan “Williams”. J.  Indon.  Trop.  Anim. Agric. 31(2):105-110.
Arifiantini,  R.I.    2012.    Teknik  koleksi  dan evaluasi  semen  pada  hewan.    Bogor  : IPB Press.
BSNI  .  2009.  SNI  3148.2:2009.    Pakan konsentrat - Bagian  2:  sapi  potong. Jakarta: Badan Standarisasi Nasional.
Djanuar,  R.  1985.    Fisiologi  reproduksi  dan inseminasi  buatan  pada  sapi.    Gajah Mada University Press, Yogyakarta.
Feradis.  2010. Bioteknologi Reproduksi pada Ternak. Alfabeta.  Bandung.
Hafez,  E.S.E.  and B. Hafez.   2008.   X and Y Chromosome – Bearing  Spermatozoa in  Animal  Reproduction  in  Farm Animal ed by ESE Hafez and B. Hafez 7th Editon Black well : 390 -393.
Lindsay,  D.R.,K.W.  Entswistle  dan  A.
Winantea. 1982. Reproduksi Ternak di Indonesia.
Fakultas Peternakan. Universitas Brawijaya. Malang.
Mahaputra,  L.,  M.  Maslichah,  T.  Nusdianto dan  D.A.  Rhandy.  2012.  Pemisahan spermatozoa sapi limousin yang memiliki  kromosom  X  dan  Y  dengan percoll  dan  putih  telur  ayam.    JBP.
14(3):172-175.
Purwoistri, R.F., T. Susilawati dan S. Rahayu.
2013. Kualitas  spermatozoa  hasil sexing menggunakan pengencer andromed  dan  cauda  epididymal plasma-2  (CEP-2)  ditambah  kuning telur 10%. Jurnal FKH.  7(2):78-85. Rizal,  M.  2005. Fertilitas  spermatozoa ejakulat  dan  epididimis  domba  garut hasil kriopreservasi menggunkan modifikasi  pengencer  tris  dengan berbagai krioprotektan dan antioksidan.  [Tesis].  Bogor  (ID). Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor. Rosita, EA., T. Susilawati dan S. Wahyuningsih.    2013.    Keberhasilan
IB  menggunakan  semen  beku  hasil sexing dengan  metode  sedimentasi putih telur pada sapi PO cross.  Jurnal Ilmu-Ilmu Peternakan 24(1):72-76.
Saili, T., M.R. Toelihere, A. Boediono dan B. Tappa.  1998.    Pengendalian  jenis kelamin anak melalui sexing spermatozoa  untuk  reproduksi  ternak. Warta Biotek 12(1-2):1-5.
Saili,  T.  1999.
Efektifitas  penggunaan albumin  sebagai  medium  separasi dalam  upaya mengubah  rasio  alamiah spermatozoa  pembawa  kromosom  X dan  Y  pada  sapi.    Tesis  Program
Pascasarjana.
Institut Pertanian
Bogor.  Bogor.
Saili, T., M.R. Toelihere, A. Boediono dan  B.
Tappa.  2000.    Keefektifan  albumen sebagai  media  pemisah  spermatozoa sapi  pembawa  kromosom  X  dan  Y. Jurnal Hayati 7(4):106-109.
Saili,  T.,  M.A.  Setiadi  MA,  S.A.  Priyono, M.R.  Toelihere  dan  A.  Boediono. 2006. Pengaruh pengeringbekuan
terhadap perubahan morfologi
spermatozoa domba. Agriplus 16:107- 117.
Saili,  T.,  L.  Baa,  L.A.  Sani,  S.  Rahadi,  I.W. Sura dan F. Lopulalan. 2016.
Sinkronisasi  estrus  dan  inseminasi buatan  menggunakan  semen  cair  hasil sexing  pada  sapi  bali  induk  yang dipelihara dengan sistem yang berbeda.    Jurnal  Ilmu  Ternak,  Vol.16, No.2 : 49 – 55..
Sukmawati,    E,    R.I.  Arifiantini  dan  B.
Purwantara. 2014. Daya tahan spermatozoa terhadap proses pembekuan  pada  berbagai  jenis  sapi pejantan  unggul.  Jurnal  penelitian JITV 19(3):168-175.
Susilawati,  T.  2002.  Pemisahan  spermatozoa X  dan  Y  pada sapi  brahman menggunakan  gradient  putih  telur pada  pengencer  tris  kuning  telur.
Jurnal  Ilmu-Ilmu  Hayati  14(2):176- 181.
Susilawati  T.    2005.    Tingkat  keberhasilan kebuntingan dan ketepatan jenis kelamin hasil inseminasi buatan menggunakan semen beku sexing pada sapi  peranakan  ongole.    Animal Production.    Jurnal  Produksi  Ternak. ISSN  1411-2027  Terakreditasi  No 26/DIKTI/kep/2005.    Volume  7, Nomor 3, September 2005 : 161-167.
Toelihere,  M.R.  1977. Fisiologi  Reproduksi Hewan  Ternak.  Penerbit  Angkasa.
Bandung.
Toelihere, M.R. 1985.   Ilmu Kebidanan pada Ternak  Sapi  dan  Kerbau.  Universitas Indonesia Press, Depok.

## Toelihere, M.R. 1993. Inseminasi Buatan pada
Ternak. Angkasa. Bandung.
Walson,  P.F.    and  C.A.  Martin.  1975.  The Influences  of  same  fractions  of  egg yolk on the survival of ram spermatozoa  at  5 0 C.    Repord.  Fertil. Dev. 69:856-857.