Jurnal Kedokteran Universitas Palangka Raya ISSN 2355-0015 EISSN 2723-5890
https://e-journal.upr.ac.id/index.php/JK
DOI: 10.37304/jkupr.v12i1.13189
UJI EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN KAYU HITAM ( Diospyros celebica Bakh.) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Salmonella typhi
TESTING THE ANTIBACTERIAL EFFECTIVENESS OF KAYU HITAM LEAF EXTRACT (Diospyros celebica Bakh.) AGAINST THE BACTERIA Staphylococcus aureus AND Salmonella typhi
Musjaya M. Guli 1 *, Nabila Priyandini 1 , Orryani Lambui 1 ,  Muh.Akbar Ardiputra 1 , Agnes Immanuela Toemon 2
1 Program Studi Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengentahuan Alam, Universitas Tadulako, Kota Palu, Sulawesi Tengah, Indonesia. *e-mail: musmedik@gmail.com
2 Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Palangka Raya, Palangka Raya, Kalimantan Tengah, Indonesia
( Naskah diterima: 11 Maret 2024. Disetujui: 28 April 2024)
Abstrak. Ekstrak  daun Diospyros  celebica dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  Staphylococcus aureus  dan Salmonella  typhi .  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  kemampuan  ekstrak  daun D. celebica dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri S.  aureus dan S.  typhi . S.  aureus dan S.  typhi ditumbuhkan pada media NA dan kemudian diberi ekstrak daun dengan konsentrasi 10%, 20%, 30% dan 40%  dengan  metode  sumuran.  Kloramfenikol  2%  yang  ditambahkan  pada  media  tumbuh  bakteri digunakan sebagai kontrol. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak daun dari  D. celebica memiliki daya hambat kuat untuk menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dan S. typhi .
Kata kunci: Antibakteri, Diospyros celebica, Staphylococcus aureus, Salmonella typhi .
Abstract. Diospyros  celebica  leaf  extract  can  inhibit  the  growth  of Staphylococcus  aureus and Salmonella  typhi .  This  research  aims  to  determine  the  ability  of D.  celebica leaf  extract  to  inhibit  the growth of S. aureus and S. typhi bacteria. S. aureus and S. typhi were grown in NA media and then given leaf extract with concentrations of 10%, 20%, 30% and 40% using the well method. 2% chloramphenicol added to the bacterial growth medium was used as a control. The results showed that the leaf extract from D. celebica has a strong inhibitory power to inhibit the growth of S. aureus and S. typhi .
Keywords: Antibacterial, Diospyros celebica, Staphylococcus aureus, Salmonella typhi .

## PENDAHULUAN
Beberapa  peneliti  melaporkan  bahwa tumbuhan  sejenis  dengan  kayu  eboni    ini mengandung  senyawa  golongan  metabolit sekunder,  daun  kesemek  ( Diospyros  kaki Thun B.) mengandung flavonoid, tanin, asam organik, dan    fenol 1 .  Tumbuhan  daun  Diospyros  bateri Gurke dilaporkan mengandung alkaloid, saponin  dan  tanin 2 ,  sedangkan  tumbuhan Diospyros  anisandra pada    kulit    kayunya dilaporkan  adanya  plumbagin 3 . Pada penelitian sasmita 2019 diketahui bahwa pada kulit batang kayu  hitam    memiliki  senyawa  metabolit sekunder  dan  berpotensi  sebagai  senyawa antioksidan  dan  tergolong  antioksidan  kuat. Penyakit infeksi merupakan salah satu penyebab utama  terjadinya  gangguan  kesehatan  di  negara berkembang,  termasuk  Indonesia 4 .  Beberapa
contoh  bakteri  gram  negatif  dan  gram  positif yang  dapat  menyebabkan  infeksi  diantaranya adalah Staphylococcus  aureus dan Salmonella typhi . Staphylococcus  aureus adalah  salah satu  bakteri  gram  positif  berbentuk  bulat  dan bersifat patogen bagi manusia. Bakteri ini dapat menginfeksi  setiap  jaringan  pada  tubuh  dan menyebabkan  timbulnya  penyakit  dengan  tanda khas berupa peradangan, nekrosis, dan pembentukan  abses.  Infeksi  Staphylococcus aureus dapat  berasal dari kontaminasi langsung dari  luka,  misalnya  infeksi  pasca  operasi 5 . Salmonella  typhi dapat  menginfeksi  manusia biasanya  menyerang  saluran  gastrointestin  yang mencakup  perut,  usus  halus  dan  usus  besar. Infeksi  muncul  dalam  bentuk  diare  akut  yang dapat  sembuh  sendiri.  Delapan  sampai  empat puluh  delapan  jam  setelah  mengkonsumsi
makanan yang tercemar oleh Salmonella, timbul rasa  sakit  perut  yang  mendadak  dengan  diare
encer  atau  berair,  kadang-adang  dengan  lendir atau darah. Seringkali mual dan muntah, demam dengan  suhu  38 0 C  sampai  39 0 C  umum  terjadi 6 . Salmonella  typhi dan Staphylococcus  aureus merupakan bakteri patogen penyebab timbulnya penyakit  infeksi.  Pengobatan  penyakit  infeksi pada  umumnya  menggunakan  obat  antibiotik. Namun, penggunaan antibiotik secara berlebihan  dapat  menimbulkan  risiko  seperti resistensi  bakteri.  Selain  itu,  penggunaan antibiotik  juga  sering  menyebabkan  efek samping seperti reaksi alergi, reaksi toksik, serta perubahan biologis dan metabolis pada hospes 7 . Hal  tersebut  membuat  masyarakat  cenderung memilih  tumbuhan  herbal  untuk  digunakan sebagai obat tradisional karena mudah diperoleh serta  memiliki  efek  samping  yang  minim. Tumbuhan  herbal  adalah  tumbuhan  atau tanaman  obat  yang  dapat  dimanfaatkan  untuk pengobatan tradisional terhadap penyakit. Pengobatan tradisional terhadap penyakit tersebut  menggunakan  ramuan-ramuan  dengan bahan  dasar  dari  tumbuh-tumbuhan  dan  segala sesuatu  yang  berada  di  alam.  Sampai  sekarang, hal  itu  banyak  diminati  oleh  masyarakat  karena bahan-bahannya dapat ditemukan dengan mudah  di  lingkungan  sekitar.  Salah  satu  herbal yang  sering  dimanfaatkan  oleh  masyarakat adalah tanaman kayu hitam ( Diospyros celebica Bakh.) 8 .  Tujuan  penelitian  ini  yaitu  untuk mengetahui  apakah  ekstrak  daun  kayu  hitam ( Diospyros  celebica Bakh.)  efektif  sebagai antibakteri  dalam  menghambat  pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Salmonella typhi .

## METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Desember  2022  sampai  Februari  2023  yang bertempat  di  Laboratorium  Biologi  Sel  dan Molekul  Jurusan  Biologi.  Fakultas  Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas Tadulako.  Sampel  penelitian  diambil  di  kota Palu,  Sulawesi  Tengah.  Jenis  penelitian  adalah Jenis  penelitian  adalah  eksperimental  dengan pendekatan kuantitatif. Rancangan yang digunakan  adalah  rancangan  acak  lengkap (RAL) untuk efektivitas. Penelitian ini dilakukan 5 perlakuan dengan konsentrasi 10%, 20%, 30%, 40% dan kontrol negatif menggunakan  akuades.  Perlakuan  diulang sebanyak  3  kali,  sehingga  terdapat  12  unit percobaan.  Semua  alat  dan  bahan  yang digunakan  dibersihkan  dan  dicuci  dengan detergen.  Alat  berbahan  logam  disterilkan dengan  cara  dipijarkan  menggunakan  bunsen, sedangkan  alat  yang  tidak  tahan  pemanasan suhu  tinggi,  disterilkan  dalam  autoklaf  pada
suhu 121 0 C dan tekanan 2 atm selama 15 menit. Media  tumbuh  mikroba  uji  serta  etanol disterilkan dengan
sterilisasi basah menggunakan  autoklaf 9 .  Sampel  daun  kayu hitam  ( Diospyros  celebica Bakh.)  diambil  dari Kota  Palu.  Tumbuhan  daun  kayu  hitam ( Diospyros  celebica Bakh.),  bagian  tumbuhan yang  diambil  adalah  bagian  daun  yang  sudah agak  tua  dengan  cara  dipetik.  Daun  yang  telah dikumpulkan  dicuci  dengan  air  mengalir, kemudian  dikeringkan  menggunakan  oven. Setelah  sampel  kering  lalu  diblender  hingga menjadi  serbuk.  Selanjutnya  sampel  simplisia dimasukkan  ke  dalam  toples  sesuai  dengan perlakuan  untuk  dilakukan  proses  ekstraksi dengan menggunakan metode maserasi 10 . Pembuatan  ekstrak  daun  kayu  hitam
( Diospyros  celebica Bakh.)  dilakukan  dengan metode  maserasi.  Serbuk  simplisia  ditimbang sebanyak 500 gr dimasukkan dalam satu toples, ditambah  pelarut    etanol  96%.  Proses  maserasi dilakukan  secara  berulang  sebanyak  3  kali. Proses penggantian pelarut dilakukan setelah 24 jam,  sebelum  dilakukan  penyaringan  ekstrak  di aduk selama 10 menit. Perendaman hari pertama menggunakan  pelarut  etanol  96%  sebanyak 2000  mL  dipastikan  serbuk  simplisia  terendam dan  setelah  24  jam  filtrat  disaring,  kemudian perendaman  hari  kedua  digunakan  pelarut etanol  96%  sebanyak  1600  mL  dipastikan serbuk  simplisia  terendam  dan  setelah  24  jam filtrat disaring lagi, dan dilanjutkan perendaman hari  ketiga  digunakan  pelarut    etanol  96% sebanyak  1200  mL  astikan  serbuk  simplisia terendam  dan  setelah  24  jam  filtrat  disaring. Setelah  proses  maserasi  selesai  selama  3  hari maka  hasil dari ekstrak cair  yang telah disaring tersebut  disatukan  dalam  satu  wadah.  Filtrat kemudian diuapkan menggunakan rotary evaporator  pada  suhu  45oC  hingga  diperoleh ekstrak kental etanol 10 .
Skrinning  fitokimia  daun  kayu  hitam ( Diospyros celebica Bakh.)
Uji  flavonoid,  sebanyak  1  ml  sampel dimasukkan kedalam tabung reaksi dan ditambahkan  2  tetes  HCl  dan  0,2  gram  serbuk Mg. Senyawa flavonoid ditandai dengan adanya perubahan  warna  menjadi  kuning.  Uji  alkaloid, sebanyak  1  ml  sampel  dimasukkan  kedalam tabung  reaksi  dan  ditambahkan  2  tetes  larutan pereaksi  Mayer.  Senyawa  alkaloid  ditandai dengan  terbentuknya  endapan  menggumpal berwarna  putih  atau  kuning.  Uji  steroid, sebanyak 1 ml sampel dimasukkan pada tabung reaksi  dan  ditambahkan  2  tetes  asam  asetat
anhidrida  dan  1  tetes  asam  sulfat  pekat. Perubahan warna hijau-biru menunjukkan
adanya  steroid.  Uji  terpenoid,  sebanyak  1  ml sampel  dimasukkan  pada  tabung  reaksi  dan ditambahkan 2 tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes  asam  sulfat  pekat.  Perubahan  warna merah-ungu menunjukkan adanya terpenoid. Uji saponin,  sebanyak  1  ml  sampel  dimasukkan pada  tabung  reaksi  dan  ditambahkan  20  ml akuades  panas  lalu  didinginkan.  Kemudian dikocok  selama  10  detik  hingga  terbentuk  buih atau busa setinggi 1-10 cm, kurang lebih selama 10  menit.  Uji  tanin,  sebanyak  1  ml  sampel ditambahkan 20 ml akuades panas lalu disaring. Ditambahkan  2  tetes  FeCl3  dan  terbentuknya warna  coklat  kehijauan  atau  biru  kehitaman menunjukkan adanya tanin 11 .

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Pembuatan suspensi bakteri uji Sebanyak 1  ose  isolat  bakteri  uji  disuspensikan  kedalam medium  Luria  Bertani  Broth  lalu  di  shaker selama 18 jam hingga kepadatan sel bakteri 107 Sel/mL.  Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah S. aureus dan S.  typhi ,  masing-masing  mewakili kelompok  bakteri  patogen  Gram  positif  dan Gram negatif.

## Pengujian Efetivitas Antibakteri
Pengujian  dilakukan  dengan  metode sumuran  (well  diffusion  agar).  Tahap  pertama disiapkan suspensi bakteri S. aureus dan S. typhi yang telah ditentukan densitas/kerapatan sel 107
sel/mL,  yang  selanjutnya  dilakukan  metode cawan  tuang  (pour  plate)  yaitu  diinokulasi-kan suspensi  bakteri  sebanyak  1  mL  dan  dituang media  nutrient agar (NA) sebanyak 20  ml  yang dhomogenkan  dengan  cara  membuat  gerakan cawan  membentuk  angka  delapan.  Setelah  agar memadat  dibuat  lubang  atau  sumuran  pada media  NA  dengan  diameter  6  mm.  Kemudian daerah sumuran diberikan perlakuan P1, P2, P3, P4,  K0,  K1  masing  masing  sebanyak  80  µL. Selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu  37oC  selama 24 jam dan diamati adanya daerah zona hambat. Data  hasil  pengukuran  zona  hambat  akan  diuji dengan  one  way  anova  (Analysis  of  Varian) menggunakan  program  SPSS  25.0  tingkat singnifikasi  yang  digunakan  P  <  0,05.  Apabila hasil uji anova menunjukkan adanya signifikasi, maka  akan  diuji  lanjut  menggunakan  Uji Duncan pada taraf uji 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil yang diperoleh dari uji skrining  fitokimia  ekstrak  daun  kayu  hitam  ( D . celebica ) menunjukkan adanya golongan senyawa  flavonoid,  alkaloid,  steroid  terpenoid saponin  dan  tanin.  Hasil  yang  diperoleh  dari skrining fitokimia dapat dilihat pada tabel 1.1
Tabel 1. Hasil Uji Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Kayu Hitam ( Diospyros celebica Bakh.) Golongan Senyawa Perubahan warna Hasil Flavonoid Kuning Positif Alkaloid Putih Positif Steroid Biru Positif Terpenoid Tidak ada perubahan warna Negatif Saponin Berbusa Positif Tanin coklat kehijauan Positif

## Uji  Efektivitas Antibakteri
Hasil  uji  antibakteri  ekstrak  daun  kayu hitam  ( Diospyros  celebica Bakh.)  terhadap pertumbuhan bakteri staphylococcus aureus dan Salmonella  typhi dengan  perlakuan  konsentrasi ekstrak  10%,  20%,  30%,  40%  menunjukan adanya aktivitas penghambat terhadap pertumbuhan S.  aureus dan S.  typhi ,  baik dengan  menggunakan  kontrol  akuades  dan kontrol kloramfenikol. Berdasarkan hasil penelitian  dapat  diketahui  bahwa  daya  hambat ekstrak daun
kayu hitam terhadap
Staphylococcus aureus dan Salmonella  typhi mengalami  kenaikan  seiring  dengan  besarnya konsentrasi  yang  digunakan.  Penghambatan juga  terlihat  pada  kontrol  positif  dengan menggunakan larutan kolamfenikol 2%. Namun, berbeda pada kontrol negatif dalam hal ini  menggunakan  akuades  steril  yang  mana tidak terlihat adanya zona hambat. Hasil dari uji aktivitas  ekstrak  daun  kayu  hitam  dalam menghasilkan  senyawa  antibakteri,  ditandai dengan  terbentuknya  zona  hambat  disekitar sumuran yang ditunjukan pada gambar 1.1.
Gambar 1.   Aktivitas antibakteri keempat ekstrak daun dengan konsentrasi berbeda terhadap bakteri uji S. aureus dan S . typhi . Penghambatan diukur berdasarkan diameter zona jernih  yang terbentuk disekitar sumuran setelah diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C.
Pada kontrol positif menggunakan larutan  kloramfenikol  2%  menunjukkan  hasil zona hambat paling besar dengan diameter pada S.  aureus dan S . typhi berturut-turut  adalah 35,71  mm  dan  35,89  mm.  Hal  ini  disebabkan karena  kloramfenikol  merupakan  antibiotik yang  berspektrum  luas,  sehingga  mampu membunuh  bakteri  Gram  positif  dan  Gram negatif.  Sedangkan  zona  hambat  paling  kecil terdapat pada kontrol negatif yang menggunakan  akuades  dengan  diameter  0  mm pada  setiap  bakteri  uji.  Hal  ini  disebabkan karena  pada  akuades  tidak  terdapat  senyawa yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri patogen.  Hasil  pengujian  senyawa  fitokimia (Tabel  1)  menunjukkan  daun  kayu  hitam mengandung senyawa metabolit sekunder berupa  flavonoid,  alkaloid,  steroid,  saponin, tanin  dan  tidak  terdapat  terpenoid.  Senyawa flavonoid,  alkaloid,  steroid,  saponin,  tanin  dan terpenoid.  Melalui  skrining  ekstrak  pada  daun dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun  kayu hitam  memiliki  aktivitas  antibakteri.  Pada penelitian daun  kayu  hitam  memiliki  senyawa flavonoid,  alkaloid,  steroid,  saponin,  tanin  dan terpenoid 12 .
Flavonoid  adalah  senyawa  polar  karena memiliki  banyak  gugus  hidroksil  yang  tidak tersubstitusi. Beberapa pelarut polar yang dapat digunakan  untuk  mengekstrak  flavonoid  adalah etanol,  metanol,  etil  asetat,  atau  campuran  dari pelarut  ini.  Flavonoid  dapat  diekstrak  dari jaringan  tumbuhan.  Flavanoid  termasuk  dalam kelas alkaloid, terpenoid, dan fenolik. Flavonoid memiliki efek sebagai antibakteri dan dapat  membentuk  senyawa  kompleks  dengan protein  sel  bakteri  sehingga  membran  sel
mengalami  kerusakan  (Ngelu  et  al.,  2022).  Hal ini  sejalan  dengan  hasil  penelitian  Tobi  dan Pratiwi  (2023)  bahwa  flavonoid  memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri  pada S.  aureus 13 . Kemampuan  flavonoid  sebagai  antibakteri tergantung  pada  struktur  cincin  aromatiknya 14 . Secara  umum,  mekanisme  kerja  flavonoid dibagi  menjadi  tiga  yaitu  menghambat  sintesis asam  nukleat,  menghambat  fungsi  membran sel dan menghambat metabolis energi.
Mekanisme
flavonoid sebagai bakterisidal  yaitu  dengan  cara  menyebabkan kerusakan  pada  membran  sitoplasma  dan dinding  sel  bakteri.  Mekanisme  flavonoid merusak membran sitoplasma yaitu dengan cara menyerang fosfolipid pada membran sitoplasma bakteri,  sehingga  fosfolipid  tidak  mampu mempertahankan  membran  sitoplasma  yang akhirnya  mengakibatkan  terjadinya  kebocoran pada  membran  sitoplasma  dan  zat-zat  yang berfungsi  untuk  metabolisme  sel  bakteri terbuang  keluar  sehingga  terjadi  kematian  pada bakteri dan untuk mekanisme kerusakan dinding sel  yaitu  dengan  membentuk  gugus  alkohol, yang mana gugus alkohol tersebut akan bereaksi dengan  lipid  dan  asam  amino  yang  merupakan struktur  dinding  sel  bakteri  sehingga  terjadi kerusakan  dinding  sel  bakteri,  ketika  terjadi kerusakan dinding sel bakteri senyawa flavonoid akan terus masuk hingga kedalam inti sel  bakteri,  di  dalam  inti  sel  senyawa  favonoid berkontak dengan DNA yang akhirnya menyebabkan  kerusakaan  pada  struktur  lipid DNA  sehingga  bakteri  lisis  dan  sel  akan  mati 1
Flavonoid pada konsentrasi tinggi memiliki  efek  bakterisidal  baik  pada  bakteri gram  negatif  ataupun  bakteri  gram  positif. Mekanisme flavonoid sebagai bakterisidal  yaitu dengan  cara  menyebabkan  kerusakan  pada membran  sitoplasma  dan  dinding  sel  bakteri. Antibakteri merupakan zat yang dapat menggangu pertumbuhan atau bahkan mematikan  bakteri  dengan  cara  mengganggu metabolisme  mikro  yang    merugikan 16 .  Selain flavonoid,  fitokimia  lain  yang  berperan  sebagai antibakteri yaitu Tanin.
Tanin  adalah  polifenol  yang  dapat berfungsi  sebagai  senyawa  antibakteri  juga. Meskipun  dapat  larut  dalam  air,  gliserol, metanol, hidroalkoholik, propilena glikol, tetapi tidak  larut  dalam  benzena,  kloroform,  eter, petroleum eter, dan karbondisulfida. mekanisme yang mencegah senyawa tanin bertindak sebagai antibakteri:  mereka  bereaksi  dengan  membran sel,  menghentikan  enzim-enzim  penting,  dan menghancurkan  atau  menghentikan  fungsi material  genet 17 .  Tanin  memiliki  kemampuan sebagai  antibakteri.  Selanjutnya  fitokimia  yang turut  berperan  pula  sebagai  antibakteri  yaitu Saponin. Saponin adalah jenis senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam tanaman  yang  merupakan  fitomikia  yang mempunyai  karaktristik  berupa  mempunyai kemampuan  membentuk  busa  dan  mengandung aglikon  poliiklik  yang  berikatan  satu  atau  lebih gula 18 .  Kemampuan  antibakteri  saponin mencakup perlindungan terhadap patogen potensial dan pengurangan tegangan permukaan dinding  sel.  Cara  kerja  saponin  sebagai  agen antibakteri  adalah  dengan  berinteraksi  dengan kolesterol pada membran sel, yang menyebabkan  perubahan  lipid  pada  membran sel,  yang  mencegah  bakteri  untuk  berinteraksi dengan  membran  sel 19 .  Pernyataan  tersebut memperkuat  hasil  penelitian  sebelumnya  oleh Mahyuni  dan  Sofihidayati  (2018)  bahwa saponin memiliki kemampuan sebagai antibakteri.
Alkaloid  adalah  senyawa  yang  terdiri dari  satu  atau  lebih  atom  nitrogen  dan  biasanya hadir  dalam  bentuk  gabungan  dalam  sistem siklik.  Alkaloid  memiliki  kemampuan  untuk menghentikan pertumbuhan bakteri gram positif dan  gram  negatif  dengan  memicu  lisis  sel  dan perubahan  bentuk  bakteri 20 .  Pada  penelitian Cesari  et  al.  (2013)  bahwa  senyawa  alkaloid memiliki  aktivitas  antibakteri 2 .    Kerusakan membran oleh senyawa lipofilik diduga merupakan mekanisme kerja senyawa terpenoid sebagai antibakteri. Terpenoid memiliki kemampuan  untuk  bereaksi  dengan  porin,  yang merupakan  protein  transmembran  yang  terletak
di  membran  luar  dinding  sel  bakteri.  Reaksi  ini menghasilkan  ikatan  polimer  yang  kuat  yang merusak  porin  dan  mengurangi  permeabilitas dinding  sel  bakteri.  Karena  kekurangan  nutrisi, sel bakteri akan mati atau terhambat pertumbuhannya 21 .
Pada  penelitian  ini  mendapatkan  hasil bahwa  ekstrak  daun  kayu  hitam  ( Diospyros celebica Bakh.)  pada  konsentrasi  10%,  20%, 30%  dan  40%  memiliki  kemampuan  untuk menghambat S. aureus dan S.  typhi hal  ini dikarenakan  adanya  zona  hambat  di  sekitar sumuran,  sedangkan  pada  kontrol  negatif  tidak terdapat  zona  hambat  yang  artinya  larutan akuades tidak berpengaruh terhadap pertumbuhan bakteri. Semakin tinggi konsentrasi  yang  digunakan  maka  semakin besar  zona  hambat  yang  terbentuk.  Diameter zona  hambat  meningkat  dengan  konsentrasi yang  digunakan  dan  konsentrasi  yang  memiliki diameter  zona  hambat  yang  lebih  besar dianggap  memiliki  aktivitas  antibakteri  yang lebih  tinggi.  Pada  konsentrasi  40%,  zona hambat  memiliki  diameter  terbesar,  sehingga efektif  menghambat S.  aureus dan S.  typhi sebagai antibakteri 22 .
Hasil  pengukuran  zona  hambat  dari berbagai konsentrasi memiliki kriteria antibakteri 22 . Daya hambat antibakteri memiliki kekuatan  antibakteri  yang  bermacam-macam yaitu apabila diameter zona hambat <5 mm zona hambat  dapat  dikatakan  lemah,  5-10  mm  zona hambat  sedang,  11-20  mm  zona  hambat  kuat dan  >  20  mm  zona  hambat  sangat  kuat.  Zona hambat  ekstrak  daun  kayu  hitam  ( Diospyros celebica Bakh.)  terhadap  pertumbuhan S. aureus memiliki  kategori  zona  hambat  kuat dengan  konsentrasi  10%  dan  20%  (diameter zona  hambat  17,88  mm  dan  19,70  mm)  zona hambat  pada  konsentrasi  30%  dan  40%  dapat dikategorikan  sebagai  zona  hambat  sangat  kuat (diameter  zona  hambat  20,97  mm  dan  22,30 mm).  Sedangkan  pada S.  typhi memiliki kategori  zona  hambat  kuat  dengan  konsentrasi 10%,  20%,  30%  dan  40%  (diameter  zona hambat 15,95 mm, 16,89 mm, 18,44 mm, 19,59 mm).
Semakin  besar  konsentrasi  ekstrak  daun kayu  hitam  maka  semakin  besar  pula  daya hambat  yang  dihasilkan,  dikarenakan  jumlah komponen  zat  aktif  didalamnya  juga  semakin besar. Hal ini disebabkan karna semakin banyak senyawa  aktif  yang  terkandung  pada  ekstrak tersebut.  Suatu  penelitian  menyatakan  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  maka semakin banyak kandungan bahan aktif antibakterinya 17 . Penambahan konsentrasi
senyawa antibakteri diduga dapat meningkatkan penetrasi  senyawa  antibakteri  ke  bagian  dalam sel  mikroba  yang  akan  merusak  sistem metabolisme  sel  dan  dapat  mengakibatkan kematian  sel.  Pertumbuhan  bakteri  sebagian besar  akan  semakin  menurun  seiring  dengan meningkatnya  konsentrasi  antibakteri  yang ditambahkan. Semakin tinggi konsentrasi ekstrak  maka  jumlah  senyawa  antibakteri  yang dilepaskan semakin besar, sehingga mempermudah  penetrasi  senyawa  tersebut  ke dalam  sel 11 .  Flavonoid  merupakan  kelompok fitokimia  fenolik  yang  berfungsi  sebagai antimikroba.  Flavonoid  juga  berperan  dalam menghambat metabolisme energi dimana senyawa  ini  akan  mengganggu  metabolisme energi  dengan  cara  yang  mirip  dengan menghambat  sistem  respirasi,  karna  dibutuhkan energi  yang  cukup  untuk  penyerapan  aktif berbagai  metabolit  dan  untuk  biosintesis  makro molekul 23,24 .  Kerusakan  yang  ditimbulkan flavonoid yaitu kerusakan permeabilitas dinding sel  bakteri,  mikrosom  dan  lisosom.  Sinergisme dari  komponen  fitokimia  dalam  ekstrak  etil asetat diduga lebih mudah berdifusi dan mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri,  karena memiliki  polaritas  yang  optimum.  Semus senyawa  fitokimia  tersebut  berperan  sebagai imunomodulator  dalam  respon  imun.  Alasan menggunakan kloramfenikol sebagai pembanding  dan  juga  sebagai  kontrol  positif sebab  kloramfenikol  merupakan  antibiotik bakteriostatik  berspektrum  luas  yang  aktif terhadap  organisme-organisme  aerobik  dan anaerobik  gram  positif  maupun  negatif 7,19,22,25– 27 .

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  dari Diospyros  celebica
memiliki efektivitas sebagai antibakteri terhadap  pertumbuhan S.  aureus dan S.  typhi . Daya  hambat  terbentuk  memiliki  nilai  rata-rata yang berbeda pada setiap kosentrasi. Nilai rata- rata  diameter  zona  hambat  pada S . aureus yaitu17,88  mm,  19,70  mm,  20,97  mm,  dan 22,30  mm.  Sedangkan  pada S . typhi nilai  rata- rata  diameter  zona  hambat  yaitu  15,95  mm, 16,89 mm, 18,44 mm, dan 19,59 mm.  Semakin tinggi  konsentrasi  esktrak  daun  kayu  hitam maka  semakin  besar  zona  hambat  yang diperlihatkan  untuk  menghambat  pertumbuhan bakteri.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Zhang S hai, Wang Y zi, Meng F yun, Li Y  lin,  Li  C  xia,  Duan  F  peng,  et  al.
Studies  of  the  microbial  metabolism  of flavonoids  extracted  from  the  leaves  of Diospyros  kaki  by  intestinal  bacteria. Arch Pharm Res. 2015 May 12;38(5):614–9.  doi:  10.1007/s12272- 014-0421-6 2. Cesari  I,  Hoerlé  M,  Simoes-Pires  C, Grisoli  P,  Queiroz  EF,  Dacarro  C,  et  al. Anti-inflammatory,  antimicrobial  and antioxidant  activities  of  Diospyros bipindensis  (Gürke)  extracts  and  its main  constituents.  J  Ethnopharmacol. 2013  Mar;146(1):264–70.  doi:10.1016/ j.jep.2012.12.041
3. Flota-Burgos  GJ,  Rosado-Aguilar  JA, Rodríguez-Vivas  RI,  Borges-Argáez  R, Martínez-Ortiz-de-Montellano C, Gamboa-Angulo M. Anthelmintic Activity of Extracts and Active Compounds  From  Diospyros  anisandra on Ancylostoma  caninum,  Haemonchus placei  and  Cyathostomins.  Front  Vet Sci.  2020  Sep  23;7.  doi:10.3389/ fvets.2020.565103
4. Bygbjerg IC. Double Burden of Noncommunicable and Infectious
Diseases  in  Developing  Countries.
Science  (1979).  2012  Sep  21;337 (6101):1499–501.  doi:10.1126/science. 1223466 5. Gunawan  HC,  Yusliana  Y,  Daeli  PJ,
Sarwendah S, Chiuman L. Uji Antibakteri  Air  Perasan  Daging  Buah Nanas  (Ananas  Comosus  (L)  Merr) terhadap Bakteri Staphylococcus Aureus. Jurnal Kedokteran dan Kesehatan.  2019  Aug  1;15(2):170. doi:10.24853/jkk.15.2.170-177 6. Irianto  HE,  Marpaung  DB,  Ggiyatmi, Fransiska  D,  Basriman  I.  Anti-bacterial Activity  of  Alginate  Based  Edible Coating Solution Added with Lemongrass Essential Oil Against Some Pathogenic  Bacteria.  IOP  Conf  Ser Earth Environ Sci. 2021 Nov 1;934(1):012023.  doi:  10.1088/1755- 1315/934/1/012023 7. Dharmawan  A,  Layanto  N.  Mekanisme Resistensi Acinetobacter baumannii terhadap Antibiotik Golongan Karbapenem. Jurnal Kedokteran
Meditek.  2019  Jun  24;  doi:10.36452/ jkdoktmeditek.v24i68.1704 8. Fadia  F,  Nurlailah  N,  Helmiah  TE,
Lutpiatina  L.  Efektivitas  ekstrak  etanol daun  kirinyuh  (chromolaena  odorata  l)
sebagai antibakteri salmonella typhi dan
Staphylococcus  aureus .  Jurnal  Riset Kefarmasian Indonesia. 2020 Sep 17;2(3):158–68. doi:10.33759/jrki. v2i3. 104 9. Herdiansyah  AF,  Bariun  LO,  Dewi  C. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun  Suruhan  (Peperomia  Pellucida L.Kunth) Terhadap Bakteri Staphylococcus Aureus dan Staphylococcus Epidermidis. Jurnal Pharmacia  Mandala  Waluya.  2023  Apr 30;2(2):106–16.doi:10.54883/28296850 .v2i2.67 10. Putri NR, Agustin D, Nisa K. Formulasi dan Uji Aktivitas Antioksidan Krim Biji dan  Ekstrak  Etanol  Daun  Jambu  Biji ( Psidium  guajava L.)  sebagai  Body Scrub.  Jurnal  Kefarmasian  Indonesia. 2022 Feb 25;50–7. https://doi.org/10.22435/jki.v0i0.4673 11. Tunas  TH,  Edy  HJ,  Siampa  JP.  Efek
Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Kelor ( Moringa  oleifera Lam.)  dan  Sediaan
Masker  Gel  ¬Peel-Off  Ekstrak  Etanol Daun  Kelor  (Moringa  oleifera  Lam.).
Jurnal  MIPA.  2019  Oct  18;8(3):112. doi:10.35799/jmuo.8.3.2019.25778
12. Haryoto  H,  Devi  ES.  Efek  Pemberian Ekstrak  Etanol  Daun  Dan  Batang  Ubi Jalar  Ungu  ( Ipomoea  batatas L.)
Terhadap  Penurunan  Kadar  Glukosa Darah  Pada  Tikus  Jantan  Galur  Wistar Yang Diinduksi Aloksan. Talenta Conference  Series:  Tropical  Medicine (TM). 2018 Dec 20;1(3):139–43. doi:10.32734/tm.v1i3.279 13. Tobi  CHB,  Pratiwi  ME.  Identifikasi Senyawa  Flavonoid  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Terpurifikasi  Daun Beluntas  ( Pluchea  Indica L.)  terhadap Staphylococcus aureus. Jurnal Sains dan Kesehatan.  2023  Oct  30;5(5):766–76. doi:10.25026/jsk.v5i5.2099 14. Alghazeer  R,  Elmansori  A,  Sidati  M, Gammoudi F, Azwai S, Naas H, et al. In Vitro Antibacterial Activity of
Flavonoid  Extracts  of  Two  Selected Libyan Algae against Multi-Drug Resistant  Bacteria  Isolated  from  Food Products.  J  Biosci  Med  (Irvine).
2017;05(01):26–48.  doi:  10.4236/jbm.
2017.51003 15. Putra F, Ramona Y, Wijaya IMS. Potensi madu  dan  propolis  lebah  Tetragonula laeviceps dalam menghambat pertumbuhan in vitro bakteri
Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli .  Jurnal  Biologi  Udayana.  2022  Oct 18;26(2):153. doi:10.24843/ JBIOU NUD. 2022.v26.i02.p01 16. Ginting  PA,  Faisal  H,  Hanum  SF,  Dari RW.  Uji  Efektivitas  Gel  Ekstrak  Daun
Binahong  ( Anredera  cordifolia (Ten.) Steenis)  terhadap  Penyembuhan  Luka Sayat yang Terinfeksi Bakteri
Staphylococcus  aureus pada  Kelinci ( Oryctolagus  cuniculus ).  Jurnal  Dunia Farmasi.  2020  Sep  3;4(3):116–25. doi:10.33085/jdf.v4i3.4645
17. Karnirius  Harefa,  Barita  Aritonang, Ahmad  Hafizullah  Ritonga.  Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Kulit Markisa  Ungu  ( Passiflora  Edulis Sims) Terhadap  Bakteri Propionibacterium Acnes .  Jurnal  Multidisiplin  Madani.
2022  Jun  28;2(6):2743–58.  doi:10. 55927/mudima.v2i6.469
18. Majinda  RRT.  Extraction  and  Isolation of  Saponins.  In  2012.  p.  415–26. doi:10.1007/978-1-61779-624-1_16
19. Hussain  M,  Debnath  B,  Qasim  M, Bamisile  BS,  Islam  W,  Hameed  MS,  et al.  Role  of  Saponins  in  Plant  Defense Against Specialist Herbivores. Molecules.  2019  May  30;24(11):2067. doi:10.3390/molecules24112067 20. Arlofa  N,  Ismiyati  I,  Kosasih  M,
Fitriyah  NH.  Effectiveness  of  Durian Peel Extract as A Natural Anti-Bacterial Agent.  Jurnal  Rekayasa  Kimia  & Lingkungan.  2019  Dec  20;14(2):163– 70. doi:10.23955/rkl.v14i2.14275
21. Ngelu FY, Marbun FD, Sihombing AM, Manalu Y, Ate VRKM,  Riswanto  FDO. Potensi ekstrak seledri ( Apium graveolens L) sebagai antibakteri. Jurnal Jamu Kusuma. 2022 Jun 28;2(1):23–9. doi:10.37341/jurnaljamukusuma.v2i1.2 2 22. Davis  WW,  Stout  TR.  Disc  Plate Method  of  Microbiological  Antibiotic Assay.  Appl  Microbiol.1971;22(4):666 70.doi:10.1128/AEM.22.4.666-670. 1971
23. Kostyuk VA, Potapovich AI, Kostyuk T
V.,  Cherian  MG.  Metal  complexes  of dietary flavonoids: Evaluation of radical scavenger  properties  and  protective activity  against  oxidative  stress  in  vivo.
Cell Mol Biol. 2007;53(1):62–9. doi:10.1170/T776
24. De  Souza  RFV,  De  Giovani  WF. Antioxidant  properties  of  complexes  of flavonoids  with  metal  ions.  Redox Report.  2004  Apr  19;9(2):97–104.
doi:10.1179/135100004225003897
25. Böttcher S, Drusch S. Saponins — Self- assembly  and  behavior  at  aqueous interfaces.  Adv  Colloid  Interface  Sci. 2017  May;243:105–13.  doi:10.1016/j. cis.2017.02.008
26. Chanu  KD,  Thoithoisana  S,  Kar  A, Mukherjee  PK,  Radhakrishnanand  P, Parmar  K,  et  al.  Phytochemically analysed extract of Ageratina adenophora (Sprengel) R.M.King &amp;  H.  Rob.  initiates  caspase  3- dependant apoptosis in colorectal cancer cell:  A  synergistic  approach  with chemotherapeutic drugs. J Ethnopharmacol. 2024 Mar;322: 117591. doi:10.1016/j.jep.2023.117591
27.   Yadav M, Chatterji S, Gupta K, Watal G.
Preliminary  Phytochemical  Screening
Of  Six  Medicinal  Plants  Used  in Traditional  Medicine.  Int  J  Pharm Pharm  Sci.  2014;6(5):539–42.  doi: 10.46501/ijmtst061019