ISOLASI i i DAN IDENTIFIKASI i BAKTERI PENGHASIL ENZIM i GELATINASE DI MUARA i PANTAI LUBUK TUKKO TAPANULI TENGAH
Isolation i and Identification i of Gelatinase-Producing Bacteria i at The i Estuary of Lubuk Tukko Beach i Tapanuli Tengah
Gusmita Enda Lorenza Purba 1 ; Rasyidah 2 ; Ulfayani Mayasari 3
1 Program Studi i Biologi, Fakultas i Sains dan Teknologi, i UIN Sumatera i Utara Koresponden: lorenzagusmitaenda@gmail.com
i Abstrak i
Enzim ii gelatinase merupakan i i enzim yang i i berperan penting i pada sektor ii industri pangan dan i i non pangan. Enzim ii gelatinase dapat ii bersumber dari tumbuhan, hewan, dan mikro- organisme. Penelitian i ini bertujuan i untuk mengetahui apakah terdapat bakteri i penghasil enzim i gelatinase dan karakteristik yang dimiliki oleh bakteri penghasil enzim gelatinase yang  ditemukan  di  muara  Pantai  Lubuk  Tukko  Tapanuli  Tengah.  Penelitian dilaksanakan ii pada  bulan ii September  hingga  November ii 2021  di  UPT  Laboratorium Mikrobiologi Kesehatan Daerah Jl. Williem Iskandar, Medan. Penelitian ini dibagi atas beberapa  tahapan  yaitu  isolasi  dan  inokulasi,  uji  gelatin,  uji  pewarnaan  gram,  dan  uji biokimia. Isolasi bakteri ditemukan 15 isolat murni dan diketahui tujuh dari isolat murni merupakan  bakteri  penghasil  enzim  gelatinase  dengan  kode  isolat  SS141,  SS144, SS241, SS342, SS353, SS361 dan SS363. Hasil yang didapatkan dikarakterisasi dengan pewarnaan ii gram  dan i i uji  biokimia  dan  didapatkan i i hasil  1  isolat  bakteri ii jenis  genus Micrococcus i dengan i kode SS361 dan isolat bakteri lainnya dengan jenis genus Bacillus .
Kata kunci : enzim gelatinase, bakteri gelatinolitik, sedimen, dan muara pantai.

## Abstract
Gelatinase i enzyme is i an enzyme i that plays i an important i i role in the i food and i non- food industries.  Gelatinase ii enzymes  can  come  from ii animals,  plants i i and  microorganisms. This ii study  aims ii to  determine i i whether  there ii are  bacteria  that ii produce  gelatinase enzymes, and the characterization of gelatinase enzyme-producing bacteria found in the estuary  of  Lubuk  Tukko  Beach,  Tapanuli  Tengah.  The i i research  was ii carried  out i i from September to November 2021 at UPT Laboratorium Mikrobiologi Kesehatan Daerah Jl. Williem  Iskandar,  Medan.  This  research  was  divided  into  several  stages,  namely isolation and inoculation, gelatin test, gram stain test, dan biochemical test. Isolation of bacteria found 15 pure isolates  and it was known that seven of the pure isolates were bacteria producing gelatinase enzymes with isolate codes SS141, SS144, SS241, SS342, SS353,  SS361  and  SS363.  The  results  obtained  were  characterized  by  gram i i staining and  biochemical ii tests  and  obtained  the ii results  of  1 ii bacterial  isolate  of  the  genus Micrococcus with code SS361 and other bacterial isolates of the genus Bacillus.
Keywords : gelatinase enzyme, gelatinolitic bacteria, sediments, and beach estuary.

## PENDAHULUAN
Kabupaten  Tapanuli  Tengah  merupakan  sebuah  kabupaten  yang  memiliki  luas wilayah i i 2.194,98 km 2 . Letaknya berada di i pesisir barat i Pulau Sumatera i dengan i panjang garis i i pantainya  200 ii km.  Pantai  Lubuk  Tukko  ialah  pantai  yang  terdapat  di ii kecamatan Pandan  terletak  pada  Kelurahan  Lubuk  Tukko,  Tapanuli  Tengah.  Di  sekitar  daerah pantai Lubuk Tukko terdapat muara dari aliran sungai Sipansihaporas. Muara ii merupakan  wilayah i pertemuan  aktif i antara  massa i air  di  darat ii dan  air ii laut yang ii masih  mendapatkan  pengaruh ii sifat-sifat  laut, i seperti  salinitas,  pasang i surut dan i intrusi air laut. Daerah muara i kaya akan berbagai jenis unsur hara dan jasad renik makanan alami. Muara menjadi daerah ii pengasuhan dan ii daerah i i tempat mencari ii makan  bagi i ii berbagai  jenis ii i biota  laut iii seperti  ikan, i ii kerang  dan iii udang (Supriyantini  et  al.,  2017).  Keberadaan  bakteri  di ii lingkungan  muara i i berperan ii sangat penting  sebagai ii dekomposer  yang ii menguraikan  bahan  organik ii menjadi i i komponen sederhana ii sebagai  unsur ii hara  yang ii esensial  (Marwan.  A.  H  et  al.,  2015). Mikroorganisme  khususnya  bakteri  yang  ada  pada  ekosistem  muara  memiliki keanekaragaman  yang  cukup  tinggi,  contohnya  bakteri  yang  dapat  menghasilhan berbagai  jenis  enzim  seperti  bakteri  ureolitik  yang  dapat  menghasilkan  enzim  urease ((Ambarsari et al., 2020), bakteri selulolitik penghasil enzim selulase, bakteri amilolitik penghasil  enzim  amilase,  bakteri  proteolitik  penghasil  enzim  protease (Setyati  & Subagiyo,  2012) serta  bakteri  gelatinolitik  penghasil  enzim  gelatinase  (Prihanto  et  al., 2018).
Bakteri  gelatinolitik  adalah  bakteri iii yang  berpotensi  menghasilkan iii enzim gelatinase i yang  dapat i i menghidrolisis  gelatin ii menjadi  senyawa ii yang  lebih ii sederhana seperti i asam amino i (Rori et al., 2020). Gelatin banyak digunakan dalam industri pangan maupun i i non-pangan  karena i i memiliki  sifat ii yang  khas, ii yaitu  dapat ii berubah ii secara reversibel i dari bentuk sol ke i gel, mengembang i dalam air i dingin, dapat i membentuk film, mempengaruhi ii viskositas  suatu ii bahan  dan ii dapat  melindungi i i sistem  koloid ii sehingga banyak  digunakan  sebagai  pembentuk  gel,  pengental,  pengemulsi,  edible  film,  dan stabilizer.  sedangkan  pada  bidang  farmasi  sebagai  bahan  pembuatan  kapsul  lunak  dan keras (Gunawan et al., 2017). Bakteri-bakteri yang telah ditemukain berpotensial dalam menghasilkan enzim gelatinase antara lain Lysinibacilus sp., Enterobacter sp., Proteus sp.  (Prihanto  et  al.,  2018), Pseudomonas sp., Staphylococcus sp., Clostridium sp., i dan Serratia i sp. (Balan et al., 2012).
Data i yang  dipublikasikan i untuk  mengidentifikasi  penghasil i enzim  gelatinase i dari bakteri ii di  lingkungan i muara  dan ii pesisir  masih  terbilang  sedikit.  Beberapa  penelitian terdahulu menemukan bakteri penghasil enzim gelatinase yang diisolasikan dari sampel yang  berada  dekat  dengan  laut  atau  daerah  pantai.  (Prihanto  et  al.,  2018)  dalam penelitiannya  menemukan  3  isolat  bakteri  penghasilkan  enzim  gelatinase  dari  sampel akar,  batang,  dan  daun  mangrove  dengan  isolat  dari  daun  mangrove  memiliki kemampuan  memecah  gelatin  paling  tinggi. (Nursyam  &  Prihanto,  2018) menemukan bahwa  mikroorganisme  endofit  mangrove  memiliki  kemampuan  memecah  gelatin
dengan  aktivitas  gelatinase  tertinggi  berasal  dari  daun  mangrove.  Selain  itu  (Sai-Ut  et al.,  2012)  telah  menemukan  500  isolat  bakteri  pemecah  gelatin  dengan  6  isolat menunjukkan  aktivitas  gelatinase  tertinggi  yang  diisolasi  dari  permukaan  kulit  ikan yang ada di dermaga. Oleh karena itu penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah terdapat bakteri penghasil enzim gelatinase dan karakteristik yang dimiliki oleh bakteri penghasil  enzim  gelatinase  yang  ditemukan  di  muara  Pantai  Lubuk  Tukko  Tapanuli Tengah.

## METODE i PENELITIAN
Alat i dan i Bahan i Penelitian
Alat i dan bahan i yang digunakan i dalam penelitian i ini adalah i cooler box, timbangan digital, i pinset,  spatula, i gelas  ukur, i gelas  beaker,  erlenmeyer,  pH-meter, i bunsen, i tabung reaksi, pipet volume, pipet tetes, bola hisap, jarum ose, corong kaca, autoklaf, inkubator, Laminar Air Flow (LAF), mikroskop, sampel sedimen lumpur yang diambil dari Muara Pantai  Lubuk  Tukko,  Sibolga,  Tapanuli  Tengah.  Aquades,  alkohol  70%,  media  MA ( Marine Agar ), SCA ( Simmon Citrate Agar ), SIM ( Sulfida Indol Motility ), TSIA i ( Triple Sugar i Iron i Agar ) dan media i Gelatin dengan komposisi pepton dan beef extract.
Isolasi i Bakteri
Proses  isolasi i i diawali  dengan ii melakukan  pengenceran i i sampel  sedimen  muara pantai. Pengenceran i dilakukan dengan i cara memasukkan i 1 g sampel i sedimen ke i dalam tabung i reaksi  berisi i 9  ml i NaCl  lalu  dihomogenkan  dengan  vortex  selama  30  detik  dan diperoleh i pengenceran i 10 -1 . Kemudian i dipipet sebanyak i 1 ml untuk diencerkan kembali secara  bertingkat  hingga  didapatkan  pengenceran iii 10 -6 .  Masing-masing iii hasil pengenceran ii 10 -4 sampai ii 10 -6 diinokulasi  ke  dalam  media  MA  dengan  metode  sebar ( spread  plate )  kemudian i diinkubasi i selama  1  x  24  jam.  Isolat ii bakteri  yang ii ditemukan kemudian  diinokulasikan  kembali  dengan  metode radiant pada  media  MA  yang  baru, tujuannya agar didapatkan isolat murninya (Prihanto et al., 2018).

## Karakterisasi Morfologi Isolat Bakteri
Isolat  bakteri  yang  ditemukan  dari  hasil  isolasi  secara spead  plate sebelum dimurnikan diamati terlebih dulu karakteristik morfologinya. Karkateristik yang diamati antara lain bentuk, i warna, ukuran, tepian i dan elevasi i koloni (Sabdaningsih et al., 2013).
Uji i Gelatin
Bertujuan ii untuk  mengetahui ii kemampuan  isolat  bakteri iii dalam  menghasilkan enzim ii gelatinase.  Sebanyak ii satu  ose ii isolat  bakteri ii diinokulasikan  pada ii media  cair gelatin i dan diinkubasi i selama 24 i jam pada i suhu 29ºC. i Uji positif i ditandai dengan media cair i i tetap  mencair i i apabila  telah i diletakkan  di i dalam  lemari i i es  selama i beberapa  menit dan ii uji  negatif ii ditandai  dengan ii membekunya  media ii gelatin  jika ii diletakkan  di ii dalam lemari i es (Ginting et al., 2018).

## Pewarnaan Gram
Dicuplik  sebagian  kecil  dari  koloni  isolat  kemudian  disuspensikan  ke  dalam  1 tetes aquades steril di atas objek gelas, lalu i difiksasi di i atas bunsen i sampai i mengering. Kemudian ii ditetesi  pewarna  gentian ii violet,  didiamkan  1  menit  dan ii dibilas ii dengan aquades.  Setelah  itu  ditetesi ii iodin,  didiamkan ii 1  menit  dan  dibilas ii dengan ii aquades, selanjutnya  ditetesi  dengan  alkohol  96%  lalu  dibilas  kembali  dengan  aquades. Pewarnaan  terakhir  dilakukan  dengan  safranin  dan  didiamkan  15  detik  sebelum akhirnya  dibilas ii dengan  aquades ii dan  diamati  dibawah  mikroskop.  Ketika  ditetesi alkohol, ii bakteri  gram ii negatif  akan ii melunturkan  kristal ii violet  dan  mengikat ii safranin sehingga warna akhir yang ditunjukkan ialah warna merah (Prihanto et al., 2018).
Uji i tsia
Sebanyak ii 1 ose lurus isolat ii bakteri diinokulasikan ke i dalam media i TSIA miring yakni dengan i cara ditusukkan tegak ii lurus terhadap media. Kemudian dicuplik kembali isolat  bakteri  menggunakan  ose  bulat  lalu  diinokulasikan  pada  bagian  miring  media TSIA secara streak plate dengan pola zig-zag, lalu i diinkubasi selama i 1-2 x 24 i jam i pada suhu i 29 o C (Nurbaiti et al., 2016).

## Uji Motilitas
Media yang digunakan ialah media SIM ( Sulfida Indol Motility ). Sebanyak 1 ose lurus  isolat i bakteri  diinokulasikan  ke i dalam i media  SIM  yakni  dengan i cara  ditusukkan secara  tegak ii lurus  terhadap  media  dan  menyisahkan  seperempat  bagian  dari  dasar media. Kemudian media diinkubasi selama 24 jam, 27 o C (Ginting et al., 2018).
Uji i katalase
Isolat i bakteri dicuplik sebanyak i 1 ose i lalu dicelupkan dan disuspensikan ke dalam 1  tetes  reagen  H 2 O 2 ( Hidrogen  Peroksida )  di  atas  objek  gelas.  Hasil i positif i apabila terbentuk i gelembung gas i pada saat i proses suspensi dilakukan  dan hasil negatif apabila tidak i terbentuk gelembung i gas (Ginting et al., 2018).
Uji i Indol
Uji i ini dilakukan i dengan menginokulasikan 1 ose biakan bakteri keidalam media Sulfit i Indol i Motility (SIM),  lalu i diinkubasi  selama i 24  jam, i 37 o C,  setelah i itu  diteteskan 0,2-0,3 i ml pereaksi i indol lalu i diamati ada tidaknya cincin merah yang terbentuk setelah beberapa menit didiamkan (Sari et al., 2019).
Uji i Sitrat
Uji i sitrat  dilakukan ii dengan i menginokulasi i isolat  pada ii media Simmon’s ii Citrate Agar (SCA).  Pengujian ii ini bertujuan iii untuk  melihat iii kemampuan  bakteri iii dalam menggunakan i sitrat  sebagai i satu-satunya  sumber i karbon  dan i energi.  Hasil i positif  akan ditunjukkan i dengan adanya i perubahan warna i media dari i hijau menjadi i biru (Ulfa et al., 2016).
Analisis i Data
Dpata ii hasil  pengujian isolat ii bakteri  penghasil  enzim  gelatinase  dianalisis  secara deskriptif i didukung  dengan  adanya  tabel  hasil  serta  gambar.  Hasil  karakterisasi  baik secara morfologi  maupun  biokimia  kemudian  digunakan  untuk mengidentifikasi i genus dari  bakteri i dengan  bantuan  buku i Bergey’s  Manual i of  Determinative ii Bacteriology  8 th edition serta jurnal-jurnal sebelumnya sebagai panduan.
HASIL i DAN 1 PEMBAHASAN
Isolasi ii bakteri
Dari  prosedur  isolasi  bakeri  diperoleh  biakan  murni  yang  diisolasi  dari  sedimen pantai  Lubuk  Tukko,  Tapanuli  Tengah  sebanyak  15  biakan  yang  masing-masing dihasilkan dari tiga titik sampling yang diberi nama titik 1, titik 2, dan titik 3. Pada titik 1 dihasilkan 4 isolat murni dengan kode isolat SS141, SS142, SS143, SS144, pada titik 2 dihasilkan 3 isolat murni dengan kode isolate SS241, SS242, SS252, dan pada titik 3 dihasilkan  8  isolat  murni  dengan  kode  isolat  SS342,  SS343,  SS344,  SS351,  SS353, SS361, SS362 dan SS363.
Biakan murni selanjutnya dilakukan uji gelatin untuk mengetahui apakah terdapat isolat yang mampu menghasilkan enzim gelatinase. Hasil positif diketahui dengan tetap mencairnya  media  gelatin.  Wujud  media  gelatin  yang  tetap  mencair  setelah  proses penyimpanan  dalam  lemari  pendingin  disebabkan  oleh  adanya  aktivitas  enzim gelatinase  sebagaimana  ditunjukkan  pada  gambar  1.  Keberadaan  enzim  gelatinase  ini dijadikan sebagai indikasi tumbuhnya bakteri penghasil enzim gelatinase dalam media. Diketahui  bahwa  terdapat tujuh  kode  isolat  yang  positif  uji  gelatin  dengan  kode  isolat SS141, SS144, SS241, SS342, SS353, SS361, SS363. (Cruz & Torres, 2012) . Isolat asal dari  titik  3  ialah  isolat  yang  paling  banyak  menunjukkan  hasil  positif  uji  gelatin. Diketahui titik 3 memiliki nilai pH yang paling tinggi dari semua lokasi yakni ada pada angka 6,5. Titik 1 memiliki nilai pH 5 sedangkan titik 2 memiliki ph 6. Hal ini sesuai dengan  penelitian  Sidabutar  (2018)  bahwa  kisaran  pH  bakteri  penghasil  enzim gelatinase ialah berkisar antara 6,5-8.
Gambar 1: (a) hasil positif; (b) hasil negatif uji gelatinase
a b

## Karakterisasi Morfologi Isolat Bakteri
Parameter  biologi  yang  masih  digunakan  dalam  mengkarakterisasi  isolat  bakteri diantaranya ialah bentuk, tepian, elevasi, ukuran dan warna koloni. Empat isolat bakteri teridentifikasi memiliki bentuk circular yaitu SS141, SS241, SS342, SS353 dan SS361 sedangkan  dua  isolat  lainnya  SS144  dan  SS363  memiliki  bentuk  irregular.  Sementara itu tepian koloni bakteri ditemukan terdiri dari dua variasi yaitu lobate pada SS144 dan SS363  serta  entire  pada  SS141,  SS241,  SS342,  SS353  dan  SS361.  Elevasi  koloni bakteri  tergolong  sangat  bervariasi.  Karena  terdapat  tiga  macam  elevasi  koloni  yang ditemukan,  yaitu  SS141,  SS144,  SS342  dan  SS363  memiliki  elevasi  flat,  SS241  dan SS361 memiliki elevasi pulvinate, dan SS353 berelevasi convex. Ukuran koloni bakteri juga ditemukan dalam keadaan sangat bervariasi yaitu moderate pada SS141, SS144 dan SS241,  punctiform  pada  SS353  dan  SS361,  small  pada  SS342  dan  large  pada  SS363. Sedangkan warna ke tujuh koloni seluruhnya tergolong seragam yaitu berwarna cream.

## Uji Biokimia
Setelah  dilakukan  karakterisasi  morfologi  terhadap  ke  7  isolat  selanjutnya dilakukan  pewarnaan  gram  dan  karakterisasi  lanjutan  secara  biokimia.  Berdasarkan tabel 1 diketahui bahwa 3 dari 7 isolat merupakan bakteri basil-gram positif diantaranya ialah  SS144,  SS241,  dan  SS363  dan  1  isolat  berupa  coccus-gram  positif  yaitu  SS363 sedangkan SS141, SS342 dan SS353 merupakan basil-gram negratif. Pewarnaan Gram adalah  metode  yang  digunakan  untuk mengelompokkan  bakteri  gram  positif  dan  gram negatif.  Bakteri  gram  positif  akan  menghasilkan  warna  ungu  setelah  dilakukan pewarnaan,  sedangkan  bakteri  gram  negatif  akan  menghasilkan  warna  merah,  hal  ini adalah akibat dari kemampuan bakteri dalam mempertahankan atau kehilangan pewarna utama  (kristal  violet)  dan  menerima  pewarna  tandingan  (safranin)  (Baniyah  et  al., 2017).
Tabel 1. Hasil pewarnaan gram dan uji biokimia
No. Kode Isolat Pewarnaan Gram Uji Biokimia Bentuk Gram TSIA Motil Katalase Sitrat Indol 1. SS141 Basil Negatif A/K + + - + 2. SS144 Basil Positif A/K - + + + 3. SS241 Basil Positif A/K + + + + 4. SS342 Basil Negatif A/A + + - - 5. SS353 Basil Negatif K/A gas + + + - 6. SS361 Coccus Positif K/K - + + + 7. SS363 Basil Positif K/A + + + +
Keterangan: A/A
: Asam/Asam
K/A : Basa/Asam
A/K : Asam/ Basa
K/K : Basa/ Basa K/A Gas : Basa/Asam + Menghasilkan Gas
Hasil pengujian TSIA diketahui 1 isolat bersifat Asam/Asam (A/A) yaitu seluruh medianya  baik  bagian  slunt/miring  maupun  bagian  butt/tegaknya  berubah  warna menjadi kuning dan bersifat asam, isolat tersebut ialah SS342. Kemudian 3 isolat yaitu SS141, SS144,  dan  SS241  bersifat  Asam/Basa  (A/K)  yakni  bagian slunt nya  berwarna kuning  sedangkan  bagian butt nya  berwarna  merah.  SS363  bersifat  Basa/Asam  (K/A), SS353  bersifat  Basa/Asam  dan  menghasilkan  gas  (K/A  gas)  dan  SS361  bersifat Basa/Basa (K/K). Dengan uji TSIA diketahui kemampuan isolat dalam memfermentasi 3  jenis  karbohidrat  yang  ada  di  dalam  media  yaitu  glukosa,  sukrosa  dan  maltosa. Perubahan  warna  media  menjadi  kuning  menandakan  hasil  positif  dan  bersifat  asam, apabila  perubahannya  hanya  terjadi  pada  bagian slunt /miring  maka  berarti  karbohidrat yang  dapat  difermentasikan  hanya  lah  glukosa  sedangkan  perubahan  media  menjadi warna  merah  menandakan  hasil  negatif  dan  bersifat  basa.  Adanya  endapan  berwarna hitam  menunjukkan  bahwa  bakteri tersebut dapat  membentukan  H 2 S  dan  terangkatnya media  menunjukkan  bahwa  bakteri  tersebut  dapat  menghasilkan  gas  (Edi  &  Rahmah, 2018).
Pada  uji  Motil  dihasilkan  5  isolat  bersifat  motil,  diantaranya  SS141,  SS241, SS342,  SS353,  SS363  dan  2  isolat  bersifat  nonmotil.  Penelitian  sebelumnya menunjukkan bahwa bakteri penghasil enzim gelatinase umumnya bersifat motil  yakni dapat  melakukan  pergerakan  dalam  usahanya  untuk  memperoleh  makanan  dan  hal  ini dapat  dilihat  pada  media  yakni  dengan  adanya  rambatan-rambatan  disekitar  jejak tusukan  jarum  ose.  Rambatan  ini  mengindikasikan  bahwa  isolat  bakteri  tersebut memiliki  flagella  untuk  bergerak.  Maka  sebaliknya  isolat  nonmotil  berarti  isolat  yang tidak  memiliki  alat  gerak  (Isnan  et  al.,  2017).  Kepada  7  isolat  juga  dilakukan  Uji Katalase dan diketahui bahwa seluruh isolat merupakan positif katalase. Uji ini adalah uji  yang  bertujuan  untuk  mengetahui  kemampuan  isolat  dalam  mensintesis  enzim katalase yang sebenarnya merupakan bentuk pertahanan dirinya dari toksisitas hidrogen peroksida  yang  sengaja  diberikan.  Enzim  katalase  bekerja  dengan  cara  memecah hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  menjadi  dihidrogen  oksida  (H 2 O)  dan  oksigen  (O 2 ).  Oleh karena itu hasil uji akan bernilai positif apabila terlihat gelembung-gelembung oksigen (Dewi, 2013).
Uji Sitrat untuk ke tujuh isolat menunjukkan hasil negatif pada SS11 dan SS342 dan  isolat  selebihnya  SS144,  SS241,  SS353,  SS361  dan  SS363  menunjukkan  hasil positif  yang  ditandai  dengan  berubahnya  media  dari  hijau  menjadi  biru.  Perubahan  ini disebabkan  karena  penggunaan  sitrat  sebagai  satu-satunya  sumber  karbon  dan  energi bagi  bakteri  sehingga  menyebabkan  asam  menghilang  dari  media  dan  terjadi peningkatan pH dan mengubah warna media dari hijau menjadi biru (Ulfa et al., 2016). Pada uji Indol, isolat yang diujikan menunjukkan hasil positif yaitu pada SS141, SS144, SS241,  SS361  dan  SS363  sedangkan  hasil  negatif  ditunjukkan  pada  isolat  SS342  dan SS353. Hasil positif indol ditandai dengan terbentuknya cincin merah menyerupai garis pemisah  antara  media  dan  reagen  yang  dapat  ditemukan  setelah  biakan  diinkubasi selama 24 jam lalu ditetesi dengan reagen Kovack’s. Terbentuknya cincin merah pada
media menandakan kemampuan isolat dalam memanfaatkan tryptophane menjadi satu- satunya sumber energi,  yakni  dengan mengubahnya terlebih dulu menjadi asam amino dengan menghasilkan enzim triptofanase (Ulfa et al., 2016).

## Identifikasi Isolat Bakteri Penghasil Enzim Gelatinase
Berdasarkan  hasil  dari  semua  uji  biokimia  terhadap  isolat  bakteri  kandidat  dan setelah dibandingkan dengan buku Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology 8 th edition ,  didapatkan  2  genus  bakteri  penghasil  enzim  gelatinase  dari  sampel  sedimen yang  diambil  dari  Muara  Pantai  Lubuk  Tukko  kecamatan  Pandan  Tapanuli  Tengah, yang dapat dilihat pada tabel 2 di bawah ini :
Tabel 2. Genus bakteri penghasil enzim gelatinase
Lokasi Ditemukan Kode Isolat Bakteri Genus Lokasi 1 SS141 Bacillus SS144 Bacillus Lokasi 2 SS241 Bacillus Lokasi 3 SS342 Bacillus SS353 Bacillus SS361 Microccus SS363 Bacillus
Dari  hasil  uji  biokimia  yang  telah  dilakukan,  bakteri  yang  tergolong  ke  dalam Genus Bacillus berasal  dari  isolat  SS141,  SS144,  SS241,  SS342,  SS353,  dan  SS363 dengan  ciri-ciri  bentuk  sel  batang,  bentuk  koloni  circular  dan  irregular,  serta  koloni berwarna putih susu. Menurut (Buchanan & Gibbon, 1974), Bacillus merupakan bakteri gram  positif,  berbentuk  basil,  katalase  positif,  anaerob  fakultatif,  mayoritas  bersifat motil,  membentuk  endospora  yang  tahan  terhadap  panas,  dapat  tumbuh  pada  kisaran suhu  25-75℃,  pH  optimum  pertumbuhan  berkisar  dari  2-8. Bacillus juga  merupakan bakteri dengan pertumbuhan optimum 37ºC (Puspita et al., 2017).
Umumnya  bakteri  ini  banyak  ditemukan  diperairan,  baik  pada  perairan  tawar ataupun  laut  namun  bakteri  dengan  genus Bacillus ini  juga  dapat  ditemukan  didalam sistem  pencernaan  hewan  (Napitupulu  et  al.,  2019).  Anggota  genus Bacillus memiliki kemampuan  menghasilkan  berbagai  enzim  seperti  enzim  amilase,  protease,  dan  lipase (Hatmanti, 2000). (Holt, 1994) juga mengatakan genus Bacillus juga merupakan bakteri penghasil enzim gelatinase.
Bakteri  yang  tergolong  ke  dalam  Genus Micrococcus berasal  dari  isolat  SS361 dengan  ciri-ciri  bentuk  sel  bulat,  bakteri  gram  positif,  koloni  berbentuk  bulat  dengan tepian  yang  rata  dan  coccus,  gram  positif,  katalase  positif,  dan  non  motil,  Ciri-ciri tersebut sesuai dengan data karakteristik Micrococcus menurut (Holt, 1994) yaitu gram positif,  cocus,  katalase  positif,  oksidase  negatif  dan  motil.  (Chan  &  Pelczar,  1998) menambahkan Micrococcus merupakan  penghuni  umum  air  tawar  dan  tanah,  tumbuh optimum pada suhu 25-30 o C. Dikemukakan pula bahwa Micrococcus kadang ditemukan
tidak  berupa  tunggal  tapi  kadang  berbentuk  diplo/berpasangan,  dan  genus  ini  jarang bersifat  patogen.  (Holt,  1994)  juga  menyebutkan  genus Micrococcus termasuk  dalam bakteri penghasil enzim gelatinase.

## KESIMPULAN
Ditemukan  adanya  bakteri  penghasil  enzim  gelatinase  di  Muara  Pantai  Lubuk Tukko  di  kecamatan  Pandan  Tapanuli  Tengah  sebanyak  7  isolat.  Genus  bakteri  yang ditemukan  di  Muara  Pantai  Lubuk  Tukko  di  kecamatan  Pandan  Tapanuli  penghasil Enzim Gelatinase yaitu berasal dari genus Bacillus dan Micrococcus . Karakteristik dari bakteri penghasil Enzim Gelatinase yang ditemukan yaitu didominasi oleh bakteri gram positif berbentuk batang, koloni berwarna putih susu, serta menghasilkan enzim katalase dan menghasilkan enzim gelatinase.

## DAFTAR PUSTAKA
Ambarsari,  H.,  Luftiara,  A.,  &  Ridlo,  A.  (2020).  Isolasi  dan  Produktivitas  Bakteri Ureolitik  dari  Sedimen  Muara  Sungai  Citarum. Jurnal  Teknologi  Lingkungan , 21 (2), 147–156.
Balan, S. S., Nethaji, R., Sankar, S., & Jayalakshmi, S. (2012). Production of Gelatinase Enzyme  from  [Bacillus  spp.]  Isolated  from  The  Sediment  Sample  of  Porto  Novo Coastal Sites. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine. 811-816. , 811–816.
Baniyah, L., Jannah, S. N., & Rukmi, I. (2017). Keanekaragaman Bakteri Asam Laktat secara  Molekuler  pada  Ileum  dan  Sekum  Ayam  Broiler  yang  diberi  Makan Prebiotik Bekatul dan Bekatul Hasil Fermentasi. Jurnal Biologi , 6 (3), 38–49.
Buchanan,  R.  E.,  &  Gibbon,  N.  E.  (1974). Bergey’s  Manual  of  Determinative Bacteriology 9th Edition . William and Wilkins Co. Baltimore.
Chan,  E.  C.  S.,  &  Pelczar,  M.  J.  J.  (1998). Dasar-Dasar  Mikrobiologi  2 .  Universitas Indonesia.
Cruz, T. D., & Torres, J. (2012). Gelatin Hydrolysis Test Protocol. . American Society of Microbiology.
Dewi,  A.  K.  (2013).  Isolasi,  Identifikasi  dan  Uji  Sensitivitas  [Stapylococcus  aureus] terhadap Amoxicillin dari Sampel Susu Kambing Peranakan Ettawa (PE) Penderita Mastitis  di  Wilayah  Girimulyo,  Kulonprogo,  Yogyakarta. Jurnal  Sains  Veteriner , 31 (2), 140–141.
Edi, S., & Rahmah, R. S. N. (2018). Pengaruh Lama Penyimpanan Daging Aayam pada Suhu Ruang dan Refrigerator Terhadap Angka Lempeng Total Bakteri dan Adanya Bakteri Salmonella sp. Jurnal Biosains , 4 (1), 23–25.
Ginting,  S.  S.  B.,  Suryanto,  D.,  &  Desrita.  (2018).  Isolasi  dan  Karakterisasi  Bakteri Potensial Probiotik Pada Saluran Pencernaan Ikan Bandeng [Chanos chanos]. Acta Aquatica: Aquatic Science Journal , 5 (1), 23–29.
Gunawan,  F.,  Suptijah,  P.,  &  Uju.  (2017).  Ekstraksi  Dan  Karakterisasi  Gelatin  Kulit Ikan  Tenggiri  [Scomberomorus  commersonii]  dari  Provinsi  Kepulauan  Bangka Belitung. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 20 (3).
Hatmanti, A. (2000). Pengenalan Bacillus spp. Balitbang Lingkungan Laut LIPI , 15 (1), 31–41.
Holt,  J.  G.  (1994). Bergey’s  Manual  of  Determinative  Bacteriology  9th  Edition . Lippincott Williams and Wilkins.
Isnan, M. H., Gelgel, K. T. P., & Suarjana, G. K. (2017). Isolasi dan Identifikasi Bakteri dari  Susu  Kambing  Peranakan  EtawaTerindikasi  Mastitis  Kllinis  di  Beberapa Kecamatan  di  Kabupaten  Banyuwangi. Buletin  Veteriner  Udayana.  9(1)  73-80 , 9 (1), 73–80.
Marwan.  A.  H,  Widyorini,  N.,  &  Nitisupardjo,  M.  (2015).  Hubungan  Total  Bakteri Dengan  Kandungan  Bahan  Organik  Total  di  Muara  Sungai  Babon  Semarang. Management of Aquatic Resources Journal (MAQUARES) , 4 (3), 170–179.
Napitupulu, H. G., Rumengan, I.  F. M.,  Wullur, S., Ginting, E.  L., Rimper, J. R. T. S. L.,  &  Toloh,  B.  H.  (2019).  Bacillus  sp.  As  A  Decomposition   Agent  in  The Maintenance of [Brachionus rotundiformis] Which Uses Raw Fish As a Source of Nutrition. Jurnal Ilmiah PLATAX , 7 (1).
Nurbaiti,  Rosyidi,  A.,  &  Ali,  M.  (2016).  Skining  Bakteri  Asam  Laktat  yang  Diisolasi dari  Usus  Ayam  Broiler  sebagai  Kandidat  Probiotik  untuk  Unggas. Jurnal  Ilmu Dan Teknologi Peternakan Indonesia , 2 (1).
Nursyam,  H.,  &  Prihanto,  A.  A.  (2018).  Identifikasi  Molekuler  Bakteri  Endofit Mangrove  [Rhizopora  mucronata]  Penghasil  Gelatinase  [MMP2]. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia , 21 (1), 143–147.
Prihanto, A. W., Timur, H. D. L., Jaziri, A. A., Nurdiani, R., & Pradarameswari, K. A. (2018).  Isolasi  dan  Identifikasi  Bakteri  Endofit  Mangrove  [Sonneratia  alba] Penghasil  Enzim  Gelatinase  dari  Pantai  Sendang  Biru,  Malang,  Jawa  Timur.  . . Indonesian Journal of Halal , 1 (1), 31–42.
Puspita,  F.,  Ali,  M.,  &  Pratama,  R.  (2017).  Isolasi  dan  Karakterisasi  Morfologi  dan Fisiologi  Bakteri  Bacillus  sp.  Endofitik  dari  Tanaman  Kelapa  Sawit  [Elaeis guineensis jacq.]. Jurnal Agroekoteknologi , 6 (2), 44–49.
Rori, C. A., Kandou, F. E. F., & Tangapo, A. M. (2020). Aktivitas Enzim Ekstraseluler dari  Bakteri  Endofit  Tumbuhan  Mangrove  Avicennia  marina. Jurnal  Bios  Logos , 11 (2), 48–55.
Sabdaningsih,  A.,  Budiharjo,  A.,  &  Kusdiyantini,  E.  (2013).  Isolasi  dan  Karakterisasi Morfologi Koloni Bakteri Asosiasi Alga Merah (Rhodophyta) dari Perairan Kutuh Bali. Jurnal Biologi , 2 (2), 11–17.
Sai-Ut,  S.,  Jonjareonrak,  A.,  &  Rawdkeun,  S.  (2012).  Re-extraction,  Recovery,  and Characteristics of Skin Gelatin from Farmed Giant Catfish. . Food and Bioprocess Technology , 5 (1), 197–1205.
Sari,  D.  P.,  Rahmawati,  &  Rusmiyanto,  E.  (2019).  Deteksi  dan  Identifikasi  Genera Bakteri Coliform Hasil Isolasi dari Minuman Lidah Buaya. Jurnal Labora Medika , 3 (1), 29–35.
Setyati,  W.  A.,  &  Subagiyo.  (2012).  Isolasi  dan  Seleksi  Bakteri  Penghasil EnzimEkstraseluler (Proteolitik, Amilolitik,  Lipotik, dan Selulolitik) yang  Berasal dari  Sedimen  Kawasan  Mangrove. Indonesian  Journal  of  Marine  Sciences.  17(3) 164-169. , 17 (3), 164–169.
Supriyantini, E., Nuraini, R. A. T., & Fadmawati, A. P. (2017). Studi Kandungan Bahan Organik  Pada  Beberapa  Muara  Sungai  Di  Kawasan  Ekosistem  Mangrove  Di Wilayah  Pesisir  Pantai  Utara  Kota  Semarang  Jawa  Tengah. Buletin  Oseonografi Marina , 6 (1), 29–38.
Ulfa,  A.,  Suarsini,  E.,  &  Al-Muhdhar,  M.  H.  I.  (2016).  Isolasi  dan  Uji  Sensitivitas Merkuri  pada  Bakteri  dari  Limbah  Penambangan  Emas  di  Sekotong  Barat Kabupaten Lombok Barat: Penelitian Pendahuluan. Proceeding Biology Education Conference , 131 (1), 739–799.