Jurnal Pharmascience, Vol. 9, No.2, Oktober 2022, hal: 310-318 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience Research Article

## Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Gaharu (Aquilaria Malaccensis Lamk.) Dan Identifikasi Senyawa Dengan Metode GC-MS
Misrahanum Misrahanum 1 *, Cut Aja Dian Zahira 1 , Nurdin Saidi 2
1 Jurusan Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh, Aceh, Indonesia
2 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh, Aceh, Indonesia Email: misra.hanum@unsyiah.ac.id

## ABSTRAK
Gaharu  (Aquilaria  malaccensis  L.)  merupakan  salah  satu  tumbuhan  yang memiliki aktivitas antibakteri. Pada umumnya resin gaharu digunakan menjadi sediaan parfum.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  senyawa  kimia  dan  aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun gaharu. Senyawa yang diperoleh dari hasil analisis GC- MS  sebanyak  23  senyawa  dengan  persentase  area  terbesar  adalah  Squalene,  Phytol, Heneicosane,  9,12,15-Octadecatrienoic  acid,  methyl  ester,  1,2-Benzenedicarboxylic  acid, mono  (2-ethylhexyl)  ester,  beta.  –Sitosterol,  ICOSANE  (4,57%),  Vitamin  E  dan Hexadecanoic  acid,  methyl  ester.  Aktivitas  antibakteri  menggunakan  metode  sumuran pada variasi konsentrasi 5; 10; 15; 20 dan 30 % terhadap bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus  zona  hambat  yang diperoleh  sebesar  6,09;  6,72;  7,78;  8,65;  dan 9,63  mm  pada  bakteri  E.  coli  sedangkan  zona  hambat  S.  aureus  sebesar  10,37;  10,44; 11,63; 12,21; dan 13,34 mm. Hasil menunjukkan ekstrak etanol daun gaharu aktif dalam menghambat pertumbuhan bakteri E. coli dan S. aureus.
Kata Kunci: Gaharu, Senyawa Kimia, E. coli, S. aureus

## ABSTRACT
Agarwood  (Aquilaria  malaccensis  L.)  is  a  plant  that  has  antibacterial  activity. Generally,  resin  to  gaharu  is  used  to  make  perfume.  This  research  was  conducted  to determine the compound content and antibacterial activity of ethanol extracts of agarwood. The  results  of  the  Analysis  of  the  compound  content  using  the  GC-MS  instrument  the ethanol extract contained 23 components with a larger area Squalene, Phytol, Heneicosane, 9,12.15-Octadecatrienoic  acid,  methyl  ester,  1,2-Benzenecarboxylic  acid,  mono  (2- Ethylhexyl) ester, beta. – Sitosterol , ICOSAN, Vitamin E  and Hexadecanoic acid, methyl ester. Testing of antibacterial activity using the well method at various concentrations of 5;
10; 15; 20 and 30%. The results activity against Escherichia coli and Staphylococcus aureus bacteria. Agarwood leaves ethanol extract obtained inhibition zone diameters of 6.09; 6.72; 7.78; 8.65; and 9.63 mm on E. coli bacteria while on S. aureus the inhibition zones were 10.37; 10.44; 11.63; 12.21; and 13.34 mm. The result showed that ethanol Agarwood extract is active in inhibiting the growth of E. coli and S. aureus bacteria.

## Keywords: Agarwood, Chemical Compound, E. coli, S. aureus

## I. PENDAHULUAN
Negara  tropis  seperti  Indonesia merupakan  negara  dengan  keadaan  udara berdebu, memiliki temperatur suhu hangat dan lembab yang sangat berpotensi bakteri dapat  tubuh  subur.  Keadaan  lingkungan tersebut  menyebabkan  penyakit  infeksi semakin mudah untuk berkembang. Selain itu penggunaan obat antibakteri yang tidak tepat juga menjadi faktor yang menyebabkan terjadinya resistensi bakteri.
Sehingga  cara  tepat  untuk  mengantisipasi adalah  dengan  mengatur  pola  pemakaian antibiotik  atau  dengan  solusi  lain  dengan mencari obat-obatan yang dapat mengatasi penyakit  infeksi  dari  bahan  alam  (Hastari,
2012).
Salah  satu  jenis  tumbuhan  yang dapat  dimanfaatkan  dalam  pengobatan penyakit  infeksi  adalah  gaharu  ( A.
malaccensis ).  Secara  empiris  gaharu diketahui memiliki manfaat sebagai antiinflamasi, antidepresan, stimulant saraf,
antidiare  dan  antimalaria.  Selain  itu,  air limbah  yang  dihasilkan  dari  proses penyulingan  minyak  gaharu  dimanfaatkan untuk  menghaluskan  kulit  wajah  dan perawatan wajah (Sumarna, 2002). Ekstrak
etanol  daun A.  malaccensis mempunyai
Minimum  Bactericidal  Concentration 64 mg/mL  terhadap E.  coli dan Minimum
Inhibitory Concentration (MIC) 64 mg/Ml (Jihadi et al., 2020). Ekstrak etanol daun A.
malaccensis menghasilkan  zona  hambat terhadap S. aureus sebesar 19.90 mm pada konsentrasi 5 mg/mL (Ridwan et al., 2021).
Namun  sejauh  ini  masih  sedikit penelitian  mengenai  potensi  antibakteri daun A.  malaccensis yang  berasal  dari
Aceh.  Berdasarkan  hal  tersebut  di  atas dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak daun gaharu dengan etanol sebagai pelarut dan  dilakukan  analisis  senyawa  dengan GC-MS.

## II. METODE

## A. Preparasi Sampel
Determinasi  telah  dilakukan  di
Herbarium  Bogoriense  Bidang  Botani Pusat Penelitian Biologi LIPI, Bogor.

## B. Alat dan Bahan
Alat-Alat  yang  digunakan  meliputi bejana maserasi, rotary evaporator
( BUCHI ® ), inkubator ( Memmert ® ), timbangan  analitik  ( MATRIX ® AJ1002B), autoklaf  (Hirayama  Hiclave  HVE-50),
Laminar  Air  Flow  Cabinet ( Microbiology
Safety Cabinet ® ), Gas Chromatograph with
Auto  Samples and  5975  Mass  Selective
Detector and Chemstation data system.
Bahan-bahan yang digunakan bakteri S.aureus dan E.coli , media Nutrient
Agar  ( Merck ® ),  media  Mueller  Hinton
Agar  ( Merck ® ),  media  Simmons  Citrate
Agar ( Merck ® ), etanol dan ciprofloxacin.

## C. Penanganan Sampel
Pengambilan sampel dengan kriteria daun berwarna hijau dan daun segar ( purposive  sampling) .  Selanjutnya  daun dicuci  dengan  air  yang  mengalir  dan dikering  anginkan  pada  suhu  ruang  untuk memperoleh  simplisia  daun  (Novia et  al.,
2020).

## D. Pembuatan Ekstrak
Sebanyak 10 kg daun A.
malaccensis dicuci  dan  dilakukan  sortasi basah,  kemudian  dikering  anginkan  pada suhu  ruangan  dan  selanjutnya  simplisia diblender untuk memperkecil luas permukaannya. Serbuk simplisia kemudian dimaserasi  dengan  perbandingan  1:10 selama 7 hari. Kemudian maserat
dipekatkan  dengan  rotary  evaporator
(Anief, 2010).

## E. Analisis GC-MS
Ekstrak  kental  daun  gaharu  ( A.
malaccensis )  dilarutkan  dalam  pelarut
etanol,  dan  dihomogenkan  dengan  vortek kemudian  didiamkan  selama  30  menit. Larutan untuk injeksi disiapkan sebanyak 5 µl  dengan  aliran  Split  8:1.  Kolom  yang digunakan HP  Ultra 2, capilarry coloumn
(30  m  X  0.20  mm  X  0.11  m)  dan  helium sebagai  gas  pembawa  dengan  laju  aliran pembawa 1.2 ml/menit. Temperatur injector pada 250˚C dan temperatur sumber ion  pada  230˚C.  Suhu  awal  oven  diatur pada  80°C  ditahan  selama  0  menit, dinaikkan 3°C/menit hingga 150°C ditahan selama  1  menit,  kemudian  dinaikkan 20°C/menit  hingga  mencapai  280°C  dan ditahan selama  26 menit. Spektrum massa diambil pada 70 eV.

## E. Aktivitas Antibakteri
Pembuatan  suspensi  bakteri  setara dengan  McFarland  0,5  (WHO,  2011).  Uji aktivitas  antibakteri  menggunakan  metode difusi sumuran pada konsentrasi 5; 10; 15; 20 dan 30%.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Nilai  rendemen  yang  diperoleh berbeda  dengan  hasil  penelitian  Eko  yaitu
29.97%  (Eko et  al., 2020)  dan  Annisa sebesar  22.8%  (Annisa,  2020). Nilai rendemen  berhubungan  dengan  senyawa aktif  yang  terkandung  dalam  suatu  bahan baku. Dimana senyawa aktif semakin tinggi dengan tingginya nilai rendemen (Hasnaeni
et al., 2019). Ekstrak A. malaccensis yang
diperoleh dapat dilihat pada Gambar 1.
Hasil  uji  aktivitas  ekstrak  terhadap
bakteri E.  coli dan S.  aureus ditunjukkan
pada Tabel I dan Tabel II.
Gambar 1. Ekstrak daun A. malaccensis
Tabel I. Hasil uji ekstrak etanol A. malaccensis terhadap bakteri E. coli
Konsentrasi Ekstrak Daun A. malaccensis (%) Rata-Rata Diameter Zona Hambat Ekstrak Etanol (mm ± SD) 5 6.09 ± 0.01 10 6.72 ± 0.02 15 7.78 ± 0.04 20 8.65 ± 0.01 30 9.63 ± 0.01 Kontrol + 32.36 ± 0.06 Kontrol - 0 ± 0
Keterangan: Kontrol +: Antibiotik Ciprofloxacin Kontrol -: Pelarut
Tabel II. Hasil uji ekstrak etanol A. malaccensis terhadap bakteri S. aureus
Konsentrasi Ekstrak Daun A. malaccensis (%) Rata-Rata Diameter Zona Hambat Ekstrak Etanol (mm ± SD) 5 10.37 ± 0.02 10 10.44 ± 0.07 15 11.63 ± 0.04 20 12.21 ± 0.06 30 13.34 ± 0.03 Kontrol + 39.28 ± 0.04 Kontrol - 0 ± 0
Keterangan:
Kontrol +: Antibiotik Ciprofloxacin Kontrol -: Pelarut
Pada  konsentrasi  30%  diameter zona  hambat  yang  dihasilkan  terhadap bakteri E.  coli dan S.  aureus rata-rata diameter  sebesar  9.63  dan  13.34  mm (Gambar  2).  Menurut  Morales  (2003) diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan  > 6mm sudah  memiliki aktivitas  antibakteri.
Hasil  uji  menunjukkan  semakin  tinggi konsentrasi ekstrak yang diberikan,
semakin besar diameter zona hambat yang terbentuk  karena  komponen  bioaktif  di dalam  suatu  ekstrak  semakin  banyak (Rahmawati et  al., 2011) . Selain  itu konsentrasi dan jenis bahan antibakteri juga akan  berpengaruh  terhadap  kemampuan menghambat pertumbuhan bakteri (Ajizah, 2004).
Perbedaan  kepekaan  antara  bakteri
Gram  positif  dan  Gram  negatif  yang menyebabkan adanya perbedaan zona yang terbentuk,dimana  penghambatan  terhadap bakteri S. aureus lebih besar dibandingkan dengan bakteri E. coli.
Lapisan  sel  bakteri  Gram  negatif yang  berlapis-lapis  dengan  kandungan lemak 11-12%, bakteri lebih tahan terhadap perubahan  lingkungan  oleh  bahan  kimia.
Sedangkan  bakteri  Gram  positif  dinding selnya    90%  lapisan  peptidoglikan  dan lapisan asam teikoat (Ancela et al., 2015).
Bakteri Gram positif lebih sensitif terhadap paparan senyawa antibakteri.
(a) (b) Gambar 2. Zona hambat ekstrak (a) E. coli, (b) S. aureus
Identifikasi senyawa A. malaccensis menggunakan Gas  Chromatography-Mass Spectrometry  (GC-MS) ditunjukkan  pada Gambar 3 dan Tabel III.
Hasil  yang  diperoleh  terdapat  23 kandungan  senyawa  kimia.  Kandungan senyawa dengan komponen terbesar ekstrak etanol daun A.  malaccensis adalah
Squalene , Phytol , Heneicosane , 9,12,15- Octadecatrienoic  acid,  methyl  ester , 1,2- Benzenedicarboxylic acid, mono (2-
ethylhexyl) ester , beta. –Sitosterol ,
ICOSANE , Vitamin  E , dan Hexadecanoic acid,  methyl  ester . Squalene termasuk  ke dalam  senyawa  terpenoid  (triterpenoid)
(Huang et al., 2009). Phytol dan squalene adalah  senyawa  triterpene  yang  berperan sebagai antibakteri, antioksidan,  dan diuretik dan (Sudha et al., 2013). Squalene digunakan  sebagai  bahan  untuk  kosmetik dan obat.
Gambar 3. Kromatogram GC-MS ekstrak etanol daun A. malaccensis
Tabel III . Komponen senyawa ekstrak etanol daun A. malaccensis No. RT Quality Senyawa Area (%) 1. 27.293 96 NEOPHYTADIENE 1,75 2. 28.210 99 Hexadecanoic acid, methyl ester 4,02 3. 28.686 95 HEXADECANOIC ACID, METHYL ESTER 1,57 4. 29.189 99 HEXADECANOIC ACID 3,46 5. 29.437 98 9,12,15-Octadecatrienoic acid, methyl ester 5,85 6. 29.644 91 Phytol 11,99 7. 29.817 70 Sorbitol 2,31 8. 29.886 50 Eicosanoic acid 1,30 9. 30.051 56 HEXADECANOIC ACID 4,71 10. 31.672 91 1,2-Benzenedicarboxylic acid, mono (2-ethylhexyl) ester 5,57 11. 32.527 95 TETRACOSANOIC ACID, METHYL ESTER 1,05 12. 32.651 93 (9E)-9-OCTADECENOIC ACID 1,48
No. RT Quality Senyawa Area (%) 13. 33.257 94 Squalene 12,39 14. 33.595 97 ICOSANE 1,26 15. 34.195 93 Geranylgeraniol 1,17 16. 35.574 97 Heneicosane 6,01 17. 36.388 99 Vitamin E 4,22 18. 38.374 98 ICOSANE 4,57 19. 39.608 91 . beta. –Sitosterol 5,43 20. 40 91 4-1(1-CYCLOHEXENYL)-2- TRIMETHYLSILYLMETHYL-1- BUTEN-3-YNE 1,93 21. 42.028 86 ARISTOL-9-EN-8-ONE 2,04 22. 42.635 98 Vitamin E 2,29 23. 46.421 50 2-CYCLOHEXENE-1-METHANOL, 2,6,6-TRIMETHYL-5-(3-METHYL-2- BUTENYL)-, TRANS- (.+-.)- 4,85
Senyawa Icosane juga  memiliki aktivitas antibakteri (Hsouna et al., 2011).
Heneicosane (C 21 H 4 4) menunjukkan aktivitas  dalam  menghambat  bakteri E. coli,  Salmonella  typhi dan S.  aureus
(Vanitha et  al., 2020).  Senyawa 9,12,15-
octadecatrienoic acid, methyl ester
(C 19 H 32 O 2 )  berperan  sebagai  antibakteri (Nishanthini et al., 2011). Beta. –sitosterol merupakan  mikronutrien  alami  yang  biasa ditemukan pada sel dan membran tumbuhan  yang  memproduksi  minyak, buah,  biji-bijian  dan  pohon. Beta  – sitosterol memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap berbagai jenis  bakteri meliputi S.
aureus dan E. Coli (Mesfin et al., 2016).
Vitamin E memiliki aktivitas sebagai antibakteri, dimana bekerja sebagai adjuvant  antibiotik  dalam  pengobatan infeksi (Marwa et al., 2018). Senyawa yang diketahui  memiliki  aktivtas  antibakteri adalah hexadecanoic  acid,  methyl  ester yang  termasuk  golongan  senyawa  asam palmitate dan berpotensi sebagai antibiotik karena  mampu  menghambat  beberapa bakteri  seperti Salmonella  typhi,  Shigella
sp dan Enterococcus  faecalis .  Senyawa kimia yang teridentifikasi memiliki aktivitas dalam menghambat bakteri.

## IV. KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun A. malaccensis memiliki  aktivitas  antibakteri  terbesar terhadap S.  aureus dan E.  coli pada konsentrasi  30%.  Kandungan  senyawa gaharu terbesar Squalene , Phytol ,
Heneicosane , 9,12,15-Octadecatrienoic acid, methyl ester , 1,2-
Benzenedicarboxylic acid, mono (2- ethylhexyl) ester , beta. -Sitosterol ,
ICOSANE , Vitamin  E ,  dan Hexadecanoic acid, methyl ester.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Seluruh penulis menyatakan bahwa tidak  ada  konflik  kepentingan  dalam penelitian ini.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih kepada FMIPA
Universitas Syiah Kuala untuk penggunaan fasilitas laboratorium.

## DAFTAR PUSTAKA
Ajizah,  A.  (2004).  Sensitivitas Salmonella Typhimurium terhadap Ekstrak Daun
Psidium  Guajava L.  Bioscientiae,  1, 8-31.
Ancela, R. L, Usman, P., & Evy R. (2015). Uji  Antibakteri  Ekstrak  Batang Kecombrang ( Nicolaia speciosa horan )  Terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia  coli .  JOM Faperta, 2, 20-26.
Anief, M. (2010). Ilmu Meracik Obat (UGM Press (ed.).
Annisa,  F.  (2020). Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Muda,  Daun
Tua  dan  Daun  Campuran  Gaharu ( Aquilaria malaccensis Lamk.) Budidaya Terhadap Bakteri Streptococcus mutans (Skripsi). Fakultas Kehutanan Universitas
Sumatera Utara, Medan. Eko,  S.,  S.,  Nadhila,  A.,  A.,  &  Dwi,  L. (2020). Perbandingan Ekstrak Lamur Aquilaria Malaccensis
dengan Metode Maserasi dan Refluks. Jurnal
Riset  Kefarmasian  Indonesia,  2,  97-
104.
Hasnaeni,  Wisdawati  &  Suriati  U.  2019. Pengaruh Metode Ekstraksi Terhadap
Rendemen Dan Kadar Fenolik
Ekstrak  Tanaman  Kayu  Beta-Beta ( Lunasia  amara  Blanco ). Jurnal Farmasi Galenika. 5, 175-182. Hastari,  R.(2012).  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak Pelepah dan Batang Tanaman  Pisang  Ambon (Musa paradisiaca var . sapientum)
Terhadap Staphylococcus  aureus .
(Skripsi). Fakultas Kedokteran
Universitas Diponegoro, Semarang Hsouna, A. B., Mohammed, T., Riadh, B. M. &  Samir.  (2011).  J.  Chemical Composition, Cytotoxicity Effect and Antimicrobial  Activity  of  Ceratonia Siliqua Essential Oil with Preservative Effects Against Listeria Inoculated in Minced Beef Meat. Int
J Food Microbiol, 148, 66-72.
Huang,  Z.  R.,  Lin,  Y.  K.,  &  Fang,  J.  Y.  (2009).
Review  Biological  and  Pharmacological Activities  of  Squalene  and  Related Compounds:  Potential  Uses  in  Cosmetic. Molecules, 14, 540-554.
Jihadi,  N.  I.  M.,  Hashim,  Rahima,  N.  A., Kamal, K. M., Noor, N. M., Sani, M. S.  A.,  &  Maifiah,  M.  H.  M.  (2020). Antibacterial  Activity  of  Ethanolic Leaf Extract of Aquilaria malaccensis Against  Multidrug-Resistant  Gram- negative Pathogen. Food Research, 4, 1962-1968.
Mesfin, M. O., Manash, K. C., & Ahmed, H. D. (2016). Structure elucidation of β- sitosterol  with antibacterial  activity
from the root bark of Malva parviflora . Springer Plus , 5, 1-11.
Morales, G., Sierra, P., Mancilla., Parades, A., Loyola LA, Gallardo O, Borquez J.  (2003).  Secondary  Metabolites from  Four  Medicinal  Plants  from
Northern Chile, Antimicrobial Activity,  and  Biotoxicity  against Artemia salina. Journal Chile Chem. 48 (2).
Nishanthini, A., A. Agnel Ruba, V.R Mohan. (2012).  Total  Phenolic,  Flavonoid Content  and  In  Vitro  Antioxidant Activity  of  Leaf  of  Suaeda  monoica Forssk  ex  Gmel  ( Cenopodiaceae ). International  Journal  of  Advanced Life Sciences (IJALS).1, 34 – 43 Novia,  A.,  Dwi,  R.,  &  Rakmadhan,  N.
(2020). Uji Aktivitas Ekstrak Etanolik  Daun  Kemangi  ( Ocimum sanctum L.) terhadap Staphylococcus aureus secara  in  Vitro.  Jurnal Pharmascience, 7, 107-105.
Rahmawati, N., Edhy, S., & Eko, W. (2014). Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak
Herbal Terhadap Bakteri Escherichia
Coli .  Jurnal  Ilmu-Ilmu  Peternakan, 24, 24-31.
Ridwanti, B., Basuki, W., Amir, H. S., Urip,
H.,  &  Tamrin.  2021.  Bioactive Compounds of Ethanol Extract from Agarwood Leaves ( Aquilaria Malaccensis ) and Antimicrobial
Activity  Against  Bacteria  and  Fungi Growing  on  the  Skin.  Biodiversitas, 22, 2884-2890.
Sudha, T., Chidambarampillai S., & Mohan, V.  R.  2013.  GC-MS  Analysis  of Bioactive  Components  of  Aerial Parts  of  Kirganelia  Reticulata  Poir ( Euphorbiaceae ). Curr. Chem. Pharm. Sc, 3, 113-122.
Sumarna,  Y.  (2002).  Budi  Daya  Gaharu.
Swadaya. Jakarta.
Vanitha, S., Vijatakumar, M., Nilavukkarasi, V.  N.,  Punitha,  E.,  Vidhya,  & Praseetha, P.K. 2020. Heneicosane A novel  microbicidal  bioactive  alkane identified  from Plumbago  zeylanica L. Industrial Crops and Product. 2(2):
154-157.
WHO.  (2011).  Quality  control  methods  for herbal materials.