## Jurnal Teknik Kimia USU
Homepage : https://talenta.usu.ac.id/jtk
ISSN : 2337-4888 JURNAL TEKNIK KIMIA - USU
Departemen Teknik Kimia Fakultas Teknik Universitas Sumatera Utara

## Karakteristik Zat Warna Antosianin ( Adenanthera pavonina L) dari Kulit Biji
Saga sebagai Pewarna Alami Menggunakan Metode Sokletasi
Characteristics of Anthocyanin (Adenanthera pavonina L) from Saga Seeds as Natural Dyes Used

## Soxhletation Method
Halimatuddahliana*, Setiaty Pandia, Fira Ayu Hasmita Departemen Teknik Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Sumatera Utara
Jalan Almamater Kampus USU, Medan, 20155, Indonesia
*Email: h_dahliana@yahoo.com

## Abstrak
Pada umumnya zat warna yang digunakan dalam kehidupan sehari-hari menggunakan pewarna sintetis. Salah satu bahan yang dapat digunakan untuk zat warna alami adalah dari kulit biji saga (Adenanthera pavonina L). Saga (Adenanthera pavonina L.) merupakan pohon yang memiliki biji kecil berwarna merah berpotensi sebagai salah  satu  sumber  antosianin  yang  dapat  berfungsi  sebagai  pewarna  alami,  antioksidan  dan  antikarsinogen. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  jenis  pelarut  dan  waktu  ekstraksi  yang  terbaik  digunakan  untuk ekstraksi  antosianin  dari  kulit  biji  saga.  Ekstraksi  senyawa  antosianin  dari  kulit  biji  saga  dilakukan  dengan metode sokletasi. Adapun variabel pada penelitian ini adalah jenis pelarut (aquadest-asam sitrat 5 % dan etanol- asam sitrat 5 % (b/v)) dan waktu ekstraksi (30, 60, 120 menit).  Parameter yang digunakan yaitu analisis kualitatif dan  kuantitatif  (rendemen  ekstrak,  total  konsentrasi  antosianin,  aktivitas  antioksidan,  intensitas  warna  dan konsentrasi letal toksisitas antosianin pada ekstrak). Hasil penelitian menunjukkan bahwa ektraksi dari kulit biji saga memiliki kandungan antosianin dengan karakteristik terbaik pada perlakuan pelarut aquadest-asam sitrat 5 % rendemen ekstrak dengan waktu ekstraksi 120 menit 64,488% (b/b), total antosianin dengan waktu ekstraksi 120 menit 100,026 (mg/L), intensitas warna dengan waktu ekstraksi 60 menit 0,528, aktivitas antioksidan dengan waktu ekstraksi 60 menit (IC 50 ) 11,622 ppm dan aktivitas toksisitas 63,326 ppm.
Kata kunci : antosianin, sokletasi, kulit biji saga, pewarna alami

## Abstract
In general, dyes that are used in daily life using synthetic dyes. One material that can be used for natural pigment are from saga seeds (Adenanthera pavonina L). Saga (Adenanthera pavonina L) is a tree that has small red seeds which is one source of anthocyanin which can be used as natural dyes, antioxidants and anticarcinogens. In this research aims to find the type of solvent and the best extraction time used for the extraction of anthocyanin from saga  seeds.  Extraction  of  anthocyanin    from  saga  seeds  used  soxhletation  method.  The  variables  this research there are the type of solvent (5% citric acid 5% and citric acid 5% (w/v)) and the extraction time (30, 60, 120 minutes). The parameters used are qualitative and quantitative analysis (total yield, total anthocyanin concentration, antioxidant activity, intensity colour and lethal concentration of anthocyanin toxicity in extracts). The result observationaling show that the extraction from saga seeds that have best characteristics in aquadest- citric  acid 5%  solvent  extract  yield  with  extraction  time  120  minutes  64.448%  (w/w),  total  anthocyanin  with extractions time 120 minutes 100.026 (mg/L), color intensity with extraction time 60 minutes 0.528, antioxidant activity (IC 50 ) 11.622 ppm and toxicity activity with extraction time 60 minutes 63.326 ppm.
Keywords: anthocyanin, soxhletation, saga seeds, natutal dyes

## Pendahuluan
Pewarna  telah  lama  digunakan  pada  bahan makanan dan minuman untuk memperbaiki tampilan produk  pangan.  Pada  mulanya  zat  warna  yang digunakan adalah zat warna alami dari tumbuhan dan hewan. Semakin berkembangnya ilmu dan teknologi saat  ini,  penggunaan  zat  warna  alami  semakin berkurang dalam industri pangan yang digantikan oleh zat  warna  sintetik.  Hal  ini  disebabkan  bahan-bahan pewarna sintetik lebih murah dan memberikan warna yang lebih stabil dibandingkan pewarna alami [1].
Penggunaan dari pewarna sintetik menyebabkan gangguan kesehatan dan tidak stabilnyakeseimbangan  lingkungan.  Pewarna  alami adalah  salah  satu  pilihan  yang  menjanjikan  untuk mengembangkan  pewarna  tekstil  yang  prosesnya lebih  hijau  dan  alasan  tersebut  tercermin  pada peningkatan jumlah publikasi terbaru [2].
Pewarna sintetik ini biasanya bersifat karsinogenik dan berbahaya bagi lingkungan. Limbah yang  dihasilkan  dari  proses  produksi  industri  tekstil juga mengandung logam berat seperti kromium (Cr),
timah  (Sn),  tembaga  (Cu),  dan  seng  (Zn)  karena dampak  negatif  terhadap  lingkungan  dan  kesehatan manusia,  kepedulian  penggunaan  kembali  pewarna alam harus didorong [3].
Pewarna  alami  memiliki  biodegrabilitas  yang lebih  baik  dan  umumnya  memiliki  kompatibilitas tinggi  dengan  lingkungan.  Selain  itu,  tidak  beracun, non-alergi  pada  kulit,  non-karsinogenik,  mudah tersedia  dan  terbarukan  [4].  Oleh  karena  itu,  perlu dicari  sumber-sumber  pewarna  alami  yang  dapat digunakan  dalam  pengolahan  pangan  sehingga dihasilkan  pewarna  yang  aman  dengan  harga  relatif murah.Salah  satu  contoh  pewarna  alami  yang  bisa digunakan adalah antosianin.
Pada penelitian ini, kulit biji saga akan diteliti sebagai sumber antosianin. Kondisi yang optimal akan dikaji  untuk  mengekstraksi  antosianin  dari  kulit  biji saga  dengan  menggunakan metode  sokletasi. Penelitian  ini  memvariasikankondisi  operasi  yaitu jenis pelarut dan waktu ekstraksi.

## Teori
Saga ( Adenanthera pavonina L.) merupakan pohon  yang  memiliki  biji  kecil  berwarna  merah dengan batang pohon yang tinggi, dan daun yang lebih kecil  [5].  Habitat  dan  penyebaran  alaminya  di Srilangka,  Selatan  Myanmar,  Indo-China,  Selatan China,  Thailand,  Malaysia,  Kepulauan  Solomon  dan Utara Australia [6]. Biji saga berukuran hampir sama dengan kedelai, berbentuk bulat gepeng, kulit bijinya berwarna  merah  dan  keras.  Daun,  kulit  batang,  dan akar dari tanaman ini dapat dimanfaatkan sebagai obat asma, inflamasi, bisul, rematik, tumor, diarrhoea dan tonik. [7].
Menurut  Penelitian  Abu et  al., (2012) mengatakan  bahwa  kandungan  dari  biji  saga  yaitu alkaloid,  minyak,  steroid,  lektin,  flavanoid,  dan antosianin  [8].  Alkaloid  pada  biji  meliputi  abrin, hipaforin,  kholin,  dan  precatorin.Penelitian  oleh Partha et al., (2015) mengatakan bahwa kulit biji saga ( Adenanthera pavonina L ) dengan melakukan shinoda test  dengan  menggunakan  pelarut  metanol  bahwa positif terdapat kandungan flavonoid [9].
Antosinin  adalah  pigmen  yang  larut  dalam air, yang tersebar luas di buah dan sayur-sayuran dan bertanggung jawab terhadap warna merah, ungu dan biru pada bunga serta biji tanaman. Tidak kurang dari 500  jantosianin  di  alam,  dan  hanya  enam  struktur umum,  yaitu  cyanidin,  peonidin,  pelargonidin, petunidin,  delphinidin  dan  malvidin,  yang  dimiliki sejauh penemuan ini [10].
Antosianin  adalah  suatu  kelas  dari  senyawa flavonoid,  yang  secara  luas  terbagi  dalam  polifenol tumbuhan.  Flavonol,  flavan-3-ol,  flavon,  flavanon, dan flavanonol adalah kelas tambahan flavonoid yang berbeda dalam oksidasi dari antosianin. Larutan pada senyawa  flavonoid  adalah  tak  berwarna  atau  kuning pucat  [11].  Senyawa  golongan  flavonoid  termasuk senyawa  polar  dan  dapat  diekstraksi  dengan  pelarut
yang  bersifat  polar  pula.  Beberapa  pelarut  yang bersifat  polar  diantaranya  etanol,  air  dan  etil  asetat. Kondisi  asam  akan  mempengaruhi  hasil  ekstraksi [12].

## Gambar 1. Struktur antosianin [13]
Antosianin adalah komponen bioaktif kelompok  flavonoid  yang  dapat  memberikan  warna merah, ungu, biru, pada bunga, daun, umbi, buah dan sayur.Antosianin  larut  dalam  air  dan  aman  untuk dikonsumsi  sehingga,  umumnya  digunakan  sebagai pewarna alami untuk produk makanan dan minuman [13].
Senyawa  antosianin  berfungsi  sebagai antioksidan  dan  penangkap  radikal  bebas,  sehingga berperan  untuk  mencegah  terjadi  penuaan,  kanker, dan  penyakit  degeneratif.  Selain  itu,  antosianin  juga memiliki  kemampuan  sebagai  antimutagenik  dan antikarsinogenik,  mencegah  gangguan  fungsi  hati, antihipertensi, dan menurunkan kadar gula darah [14].

## Metodologi Penelitian
Pada  penelitian  ini  bahan  yang  digunakan antara lain kulit biji saga ( Adenanthera pavonina L ), etanol  (C 2 H 5 OH),  asam  sitrat  (C 6 H 8 O 7 ),  aquadest (H 2 O), DPPH (1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil), methanol  (CH 3 OH),  larutan  buffer  KCl  dan  larutan buffer Na-asetat .
Adapun  alat-alat  yang  digunakan heating mantle ,  soklet,  refluks,  neraca  analitik,  aerator, blender,  kertas  saring, beaker  glass,  erlenmeyer, corong gelas, gelas ukur, tabung reaksi, kuvet, rotary evaporator RE-100  Pro  Scilogex, spektrofotometer shimadzu UV 1800 .

## Prosedur Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  dalam  tiga  tahap yaitu pretreatment bahan  baku,  proses  ekstraksi dengan  metode  soklet,  proses  pemekatan  ekstrak dengan rotary  vacuum  evaporatorr RE-100  Pro Scilogex  dan  analisis  karakterisasi  ektrak  kulit  biji saga.  Proses  ekstraksi  dilakukan  dengan  dua  tahap yaitu  ekstraksi  pigmen  antosianin  dengan  variasi waktu ekstraksi 30, 60 dan 120 menit dan rasio bahan :  pelarut yaitu 1:7  (b/v)  menggunakan  pelarut  etanol 96% dan aquadest yang ditambahkan asam sitrat 5% dimana suhu ektraksi berlangsung pada kondisi sesuai titik didih pelarut yaitu 70 o C pada pelarut etanol dan 100 o C pelarut aquadest . Kemudian ekstraksi untuk uji
toksisitas  untuk  mengetahui  kandungan  toksik  yang terdapat pada bahan yaitu sebanyak 50 gram kulit biji saga  diesktraksi  dengan  500  ml  masing-masing pelarut  pada  suhu  titik  didih  masing-masing  pelarut sampai  ekstrak  mencapai  titik  maksimum.  Setelah didapat ekstrak berupa filtrat bebas ampas kemudian dipekatkan  dengan rotary  vacuum  evaporatorr RE- 100 Pro Scilogex suhu 50 o C dan kecepatan pemutaran 80  rpm  hingga  didapat  konsentrat  pekat.  Kemudian pada  hasil  ekstrak  tersebut  dilakukan  analisis karakterisasi  berupa  analisa  kualitatif,  analisa rendemen ekstrak, analisa konsentrasi total antosianin,
analisa  intensitas  zat  warna,  analisa  aktivitas antioksidan dan analisa aktivitas toksisitas.

## Hasil
1. Uji Pembuktian Antosianin Secara Kualitatif
Uji  pembuktian  antosianin  secara  kualitatif merupakan  uji  pendahuluan  yang dilakukan  untuk mengidentifikasi  kandungan  senyawa  aktif  yang terdapat di dalam sampel. Uji kualitatif antosianin dari ekstraksi kulit biji saga dilakukan dengan menggunakan  pelarut  HCl  dan  NaOH.  Hasil  uji pembuktian antosianin dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Data Uji Pembuktian Antosianin Jenis Pelarut Senyawa Reaksi Perubahan Warna
Hasil Etanol Antosianin Esktrak + HCl 2 M + pemanasan 5 menit Merah mudah menjadi merah terang Positif Esktrak + NaOH 2 M Merah terang menjadi coklat kehitaman Positif Aquadest Esktrak + HCl 2 M + pemanasan 5 menit Merah mudah menjadi merah terang Positif Esktrak + NaOH 2 M Merah terang menjadi coklat kehitaman Positif
Berdasarkan  Tabel  1.  ekstrak  etanol  dan aquadest  kulit  biji  saga  dengan  menggunakan  HCl terjadi  perubahan  warna  dari  merah  muda  menjadi merah  terang  yang  menunjukkan  hasil  positif  bahwa antosianin pada kondisi asam memiliki gugus metoksi yang dominan menyebabkan warna merah dan relatif lebih  stabil.  Pada  penambahan  NaOH  terjadi perubahan  warna  dari  merah  terang  menjadi  coklat kehitaman  yang  menunjukkan  hasil  positif  bahwa antosianin pada kondisi basa menjadi berwarna gelap karena  adanya  gugus  hidroksi  yang  dominan menyebabkan  warna  cenderung  relatif  tidak  stabil. Hasil penelitian analisa kualitatif yang diperoleh juga tidak  jauh  berbeda  dengan  hasil  penelitian  yang dilakukan  Fauziah,  dkk.,  2016  melalui  uji  fitokimia [15]

## 2. Pengaruh  Waktu  Ekstraksi  dan  Jenis  Pelarut Berdasarkan Rendemen Ekstrak
Rendemen  ekstrak  antosianin  menunjukkan persen  perolehan  antosianin  dari  kulit  biji  saga . Rendemen  dilakukan  dengan  cara  berat  hasil  dibagi dengan  berat  awal.  Setelah  proses  penyaringan, ekstrak  kulit  biji  saga  dimasukkan  ke  dalam  alat rotary  vacum  evaporator hal  ini  bertujuan  untuk menguapkan pelarut dengan suhu dibawah titik didih pelarut dengan menaikkan tekanan karena antosianin dapat rusak pada suhu 60 o C.  Ekstrak tersebut dirotary hingga  kering  hingga  diperoleh  konsentrat  pekat kemudian  rendemen  dapat  dihitung  dengan  rumus yang tertera pada lampiran. Pengaruh waktu ektraksi dan  jenis  pelarut  terhadap  rendemen  ekstrak ditunjukkan pada gambar 3 sebagai berikut:
Gambar 2. Pengaruh Waktu Ekstraksi dan Jenis Pelarut Terhadap Persen Rendemen Ekstrak Antosianin
Pada  Gambar  2.  dapat  dilihat  bahwa rendemen  ekstrak  yang  dihasilkan  cenderung meningkat  dengan  peningkatan  waktu  ekstraksi. Semakin  lama  waktu  ekstraksi,  rendemen  yang diperoleh  pun  akan  meningkat,  hal  tersebut dikarenakan semakin banyak senyawa yang terlarut ke dalam  pelarut  [16].  Semakin  lama  waktu  ekstraksi yang  digunakan,  waktu  kontak  antara  sampel  dan pelarut semakin lama sehingga jumlah senyawa yang terekstraksi  semakin  banyak.  Kondisi  ini  akan  terus berlanjut  hingga  tercapai  kondisi  kesetimbangan antara  konsentrasi  senyawa  di  dalam  bahan  baku dengan  konsentrasi  senyawa  di  pelarut  [17].  Dari gambar  3,  rendemen  ekstrak  kulit  biji  saga  yang dihasilkan berbanding lurus dengan semakin lamanya waktu ekstraksi.
0 20 40 60 80 30 60 120 Rendem en E k st ra k ( %) Waktu Ekstraksi (menit) Etanol Aquadest
Hasil yang diperoleh memperlihatkan bahwa untuk jenis pelarut pada pelarut etanol dengan waktu ekstraksi  selama  120  menit  55,692%  menghasilkan rendemen  ekstrak  yang  lebih  banyak  dibandingkan waktu  60  menit  51,592%  dan  30  menit  36,424%. Sedangkan  pada  pelarut  aquadest  dengan  waktu ekstraksi  selama  120  menit  68,488%  menghasilkan rendemen  ekstrak  yang  lebih  banyak  dibandingkan waktu 60 menit 50,856% dan 30 menit 51,028%. Dari data yang diperoleh dapat diambil kesimpulan bahwa nilai  rendemen  ekstrak  pada  pelarut  aquadest  lebih tinggi  dibandingan  dengan  pelarut  etanol  hal  ini disebabkan  aquadest  merupakan  pelarut  yang  lebih polar daripada etanol dalam mengekstraksi antosianin serta  semakin  lama  waktu  ekstraksi,  rendemen  yang diperoleh juga akan semakin banyak.

## 3. Pengaruh  Waktu  Ekstraksi  dan  Jenis  Pelarut Berdasarkan Analisis Kadar Total Antosianin
Uji  kuantitatif  kadar  antosianin  dilakukan dengan metode differential pH yaitu pH 1 dan pH 4,5 dan  diukur  absorbansinya  dengan spektrofotometer shimadzu UV 1800 pada panjang gelombang 510 nm dan  panjang  gelombang  700  nm.  Pengaruh  waktu ekstraksi  dan  pelarut  terhadap  kadar  total  antosianin ditunjukkan pada gambar 3 sebagai berikut:
Gambar 3. Pengaruh Waktu Ekstraksi dan Jenis Pelarut Terhadap Kadar Total Antosianin
Pada  Gambar  3.  dapat  dilihat  bahwa  kadar total antosianin yang dihasilkan cenderung meningkat dengan  peningkatan  waktu  ekstraksi.  Hal  ini disebabkan  karena  semakin  lama  waktu  ekstraksi maka  kontak  antar  bahan  dan  pelarut  semakin  lama sehingga  semakin  banyak  antosianin  yang  terlarut didalamnya [18].
Hasil yang diperoleh memperlihatkan bahwa untuk variasi jenis pelarut pada etanol dengan waktu ekstraksi selama 120 menit 98,857 (mg/L) menghasilkan  antosianin  dengan  kadar  lebih  tinggi dibandingkan waktu 60 menit  42,749 (mg/L) dan 30 menit  12,691  (mg/L).  Sedangkan  pada  pelarut aquadest  dengan  waktu  ekstraksi  selama  120  menit 100,026  (mg/L)  menghasilkan  antosianin  dengan kadar  lebih  tinggi  dibandingkan  waktu  60  menit 62,120 (mg/L)  dan 30 menit 18,369 (mg/L).

## 4. Pengaruh Waktu Ekstraksi dan Jenis Pelarut Berdasarkan Analisis Intensitas Warna
Intensitas  warna  menunjukkan  kepekatan warna  merah  dalam  kulit  biji  saga.  Penentuan intensitas warna dari ekstrak kulit biji saga ditentukan dalam  panjang  gelombang  maksimum  515  nm. Pengaruh  waktu  ekstraksi  dan  pelarut  terhadap intensitas warna antosianin ditunjukkan pada gambar 4 sebagai berikut:

## Gambar 4. Pengaruh Waktu Ekstraksi dan Jenis Pelarut Terhadap Intensitas Warna Antosianin
Pada Gambar 4. dapat dilihat bahwa intensitas warna  antosianin  yang  dihasilkan  mengalami kenaikan  dan  penurunan  seiring dengan peningkatan waktu  ekstraksi.  Hal  ini  disebabkan  karena  waktu ekstraksi  pigmen  antosianin  berpengaruh  terhadap kadar  antosianin  maupun  kestabilan  warna  pigmen. Semakin lama waktu ekstraksi maka terjadinya kontak antara pelarut dengan bahan akan semakin lama.
Hasil yang diperoleh memperlihatkan bahwa pada  ekstraksi  selama  30  menit  nilai  intensitas  zat warna untuk jenis pelarut etanol dan aquadest (0,298 dan 0,391). Kemudian pada waktu ekstraksi selama 1 jam memberikan nilai intensitas warna tertinggi yaitu 0,311  pada  pelarut  etanol  dan  0,528  pada  pelarut aquadest. Hal ini dikarenakan ekstraksi selama  1  jam  memberikan  waktu  yang  cukup  untuk menembus dinding sel dan menarik keluar senyawa- senyawa  yang  terkandung  dalam  bahan,  sehingga dihasilkan  nilai  intensitas  warna  yang  paling  tinggi. Namun  pada  waktu  ekstraksi  2  jam  nilai  intensitas warna mengalami penurunan yaitu untuk jenis pelarut etanol  dan  aquadest  (0,294  dan  0,330)  hal  ini disebabkan,  semakin  lama  waktu  ekstraksi  pigmen antosianin  mengalami  degradasi  (dekomposisi) antosianin  dan  perubahan  struktur  pigmen  sehingga terjadi pemucatan dari bentuk aglikon menjadi kalkon (tidak berwarna) [19].
Dari  data  yang  diperoleh  dapat  diambil kesimpulan  bahwa  waktu  ekstraksi  selama  1  jam merupakan  waktu  relatif  baik  untuk  memperoleh banyaknya pigmen warna antosianin.
0 20 40 60 80 100 120 30 60 120 K a da r Ant o sia nin ( m g /L ) Waktu Ekstraksi (menit) Etanol Aquadest 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 30 60 120 Inte ns it a s Wa rna Waktu Ekstraksi (menit) Etanol Aquadest

## 5. Pengaruh  Waktu  Ekstraksi  dan  Jenis  Pelarut Berdasarkan Analisa Aktivitas Antioksidan
Pengujian aktivitas antikosidan ekstrak kulit biji saga dalam penelitian ini dilakukan menggunakan metode DPPH. Pada penentuan aktivitas antioksidan ekstrak  kulit  biji  saga  terlebih  dahulu  dilakukan pengukuran panjang gelombang maksimum menggunakan  larutan  standar.  Panjang  gelombang maksimum  yang  diperoleh  sebesar  517  nm.  Panjang gelombang yang  diperoleh  tersebut  digunakan untuk mengukur aktivitas antioksidan sampel.
Menurut  Molyneux  (2004),  senyawa  yang memiliki  sifat  sebagai  antioksidan  yang  sangat  kuat apabila  IC 50 antara  50-100  ppm,  aktivitas  sedang apabila  nilai  IC 50 antara  100-150  ppm  dan  bersifat lemah  apabila  nilai  antara  150-200  ppm [20].  Untuk melihat  pengaruh  waktu  ekstraksi  dan  pelarut terhadap nilai IC 50 ditunjukkan pada gambar 5 sebagai berikut:
Gambar 5. Grafik Pengaruh Waktu Ekstraksi dan Jenis Pelarut Terhadap Nilai IC 50 (ppm)
Pada  Gambar  5.  dapat  dilihat  bahwa  nilai IC 50 (konsentrasi  efektif  ekstrak)  pada  jenis  pelarut etanol cenderung meningkat seiring dengan peningkatan waktu ekstraksi. Hal tersebut disebabkan waktu kontak antara sampel dan pelarut semakin lama sehingga  jumlah  senyawa  yang  terekstraksi  semakin banyak dan kemampuan antioksidan untuk menangkap  radikal  bebas  semakin  besar  [17].  Pada waktu ekstraksi selama 2 jam menunjukkan nilai IC 50 tertinggi  yaitu  15,109  yaitu  antioksidan  yang  sangat kuat (nilai IC 50 <50).
Sedangkan pada jenis pelarut aquadest nilai IC 50 mengalami  kenaikan  dan  penurunan  seiring dengan  peningkatan  waktu  ekstraksi.  Hal  ini  terjadi akibat  kerusakan  antioksidan  didalam  ekstrak  yang dipengaruhi  oleh  lamanya  waktu  kontak  antara  zat aktif dengan pelarut yang suhunya semakin meningkat akibat  pemanasan  yang  lama  [21].  Pada  waktu ekstraksi selama 1 jam memberikan waktu yang cukup untuk  menembus  dinding  sel  dan  menarik  keluar senyawa-senyawa  yang  terkandung  dalam  bahan, sehingga  dihasilkan  nilai  IC 50 tertinggi  yaitu  11,622 yaitu antioksidan yang sangat kuat (nilai IC 50 <50).

## 6. Pengaruh  Jenis  Pelarut  Terhadap  Analisis Aktivitas Toksisitas
Ekstrak kulit biji saga terhadap jenis pelarut etanol dan aquadest yang diuji dengan menggunakan metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT) yang mampu  mendeteksi  tingkat  toksisitas  sebagai  tahap awal  pengujian  aktivitas. Ekstrak  setiap  fraksi  diuji dengan menggunakan larva artemia jumlah kematian larva  dihitung  dengan  menggunakan  analisa  probit. Nilai LC 50 ( Letal Consentration ) adalah jumlah kadar yang  menyebabkan  kematian  dari  50%  hewan  uji dalam selang beberapa waktu tertentu.
Berdasarkan  nilai  toksisitas  dalam  senyawa dari  tumbuhan  jika  LC 50 ≤  30  ppm  maka  bersifat sangat  toksik,  ketika  konsentrasi  ekstrak  31  ppm  ≤ LC 50 ≤ 1000 ppm bersifat toksik jika LC 50 >1000 ppm maka  bersifat  tidak  toksik  [10].  Pada  hasil  uji menunjukkan bahwa  ekstrak aquadest  kulit  biji  saga mempunyai  aktivitas  toksisitas  yang  paling  kuat dengan  nilai  LC 50 sebesar  63,326  ppm  sedangkan ekstrak etanol dengan nilai LC 50 sebesar 334,643 ppm. Tingkat  toksisitas  tersebut  juga  dapat  menunjukkan potensi  aktivitasnya  sebagai  antikanker  dimana semakin  kecil  nilai  LC 50 maka  semakin  toksik  suatu senyawa dan berpotensi sebagai antikanker [22].
Tingkat kematian larva tidak hanya dipengaruhi oleh komponen kimia yang terkandung di dalamnya tetapi erat hubungannnya dengan konsentrasi  terhadap larva artemia .  Untuk  melihat pengaruh  tingkat  presentasi  kematian artemia  salina leach terhadap konsentrasi ditunjukkan pada gambar 6 sebagai berikut:

## Gambar  6.  Grafik  Pengaruh  Persentase  Kematian Artemia Salina Leach Terhadap Konsentrasi
Pada  Gambar  6.  dapat  dilihat  bahwa  laju mortalitas  larva  meningkat  dengan  meningkatnya konsentrasi  larutan  uji  dan  ekstrak  pelarut  etanol memiliki  tingat  persen  kematian  larva  paling  tinggi dibandingkan  ekstrak  pelarut  aquadest  bahkan dikonsentrasi  100  ppm  pada  ekstrak  pelarut  etanol mampu  mematikan  70,556  %  larva artemia  salina leach dalam  waktu  24  jam.  Tinggi  rendahnya persentasi kematian larva berbanding terbalik dengan nilai  LC 50 .  Ketika  nilai  LC 50 besar  maka  tingkat
0 10 20 30 40 50 60 70 80 30 60 120 Nila i IC 5 0 (pp m ) Waktu Ekstraksi (menit) Etanol Aquadest 0 20 40 60 80 100 0 10 100 1000 M o rt a lita s (%) Konsentrasi (ppm) Etanol Aquadest
kematian  larva  akan  semakin  rendah  begitu  juga sebaliknya.
Berdasarkan Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan RI No.37 Tahun 2013 Tentang  Batas  Maksimum  Penggunaan  Bahan Tambahan  Pewarna,  bahwa  jumlah  maksimum  zat antosianin  ditambahkan  pada  bahan  pangan  yaitu  0- 2,5  mg/kg  berat  badan  yang  dapat  dikonsumsi berdasarkan  asupan  harian  yang  dapat  diterima ( Acceptable Daily Intake ) yang biasa disingkat ADI. Hal  tersebut  jika  tingkat  konsumsi  terhadap  sampel tersebut  secara  terus-menerus  akan  menyebabkan toksisitas atau keracunan bagi tubuh manusia.
Berdasarkan data yang diperoleh dari gambar grafik  4.9  bahwa  konsentrasi  sampel  pada  0  dan  10 ppm  persen  kematian  larva  yaitu  0-5,556  %  untuk ekstrak pelarut etanol sedangkan untuk ekstrak pelarut aquadest  sebesar  0-7,222  %.  Hal  ini  sampel  dapat dikatakan  aman  ketika  konsentrasi  berada  diambang sampai 10 ppm sesuai yang ditetapkan oleh peraturan pemerintah  yaitu  ADI  zat  antosianin  sebesar  0-2,5 mg/kg.
Ketika konsentrasi sampel sebesar 100 ppm tingkat  kematian  larva  pada  ekstrak  pelarut  etanol mampu  mematikan  70,556  %  larva artemia  salina leach dalam  waktu  24  jam.  Hal  ini  disebabkan konsentrasi  sampel  terlalu  tinggi  dan  pelarut  yang digunakan  diduga  mempunyai  aktivitas  sitotoksik. Sifat  sitotoksik  dari  ekstrak  pada  pelarut  etanol mengandung flavonoida yang mengandung glikosida sehingga senyawa ini menyumbang aktivitas sitotoksik  [23].  Hal  ini  diikuti  dengan  pemakaian konsentrasi  yang  terlalu  tinggi  sehingga  tidak  aman bagi pencernaan yang dapat menyebabkan keracunan bagi hewan uji.

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  kulit  biji  saga mengandung  antosianin  dibuktikan  dengan  hasil identifikasi secara kualitatif. Pelarut yang menghasilkan  karakteristik  ekstrak  kulit  biji  saga terbaik yaitu pelarut Aquadest dengan waktu ekstraksi 120  menit.  Semakin  tinggi  konsentrasi  pada  uji toksisitas  dapat  menyebabkan  tingginya  kematian pada hewan uji sehingga konsentrasi yang aman untuk makhluk hidup yaitu konsentrasi 0 dan 10 ppm sesuai dengan  ketetapan  peraturan  zat  antosianin  dapat dikonsumsi  pada  bahan  pangan  dengan  nilai  ADI sebesar 0-2,5 mg/kg.

## Daftar Pustaka
[1] Laura  Olivia  Siahaan,  Elvi  Rasida  Florentina Hutapea,  and  Rondang  Tambun,  “Ekstraksi Pigmen  Antosianin  Dari  Kulit  Rambutan (Nephelium  Lappaceum)  Dengan  Pelarut Etanol,” 2014.
[2] M.  G.  Uddin,  “Extraction  of  eco-friendly natural  dyes  from  mango  leaves  and  their
application  on  silk  fabric,” Textiles  and Clothing  Sustainability ,  vol.  1,  no.  1,  Dec.
2015.
[3] A.  W.  Indrianingsih,  C.  Darsih,  and  R. Maryana,  “Pewarna  Alam  Dari  Ekstrak Tanaman  Dan  Aplikasinya  Di  Usaha  Kecil Menengah  Tekstil  Indonesia,” Seminar Nasional Kimia dan Pendidikan Kimia V , no. April, p. 684, 2013.
[4] H.  Hernani,  R.  Risfaheri,  and  T.  Hidayat, “Ekstraksi Dan Aplikasi Pewarna Alami Kayu Secang  Dan  Jambal  Dengan  Beberapa  Jenis Pelarut,” 2017.
[5] L. Sinaga, “Sifat Antirayap Ekstrak Kulit Biji Saga (Adenanthera pavonina Linn),” 2012.
[6] E. Suita, “Seri Teknologi Perbenihan Tanaman Hutan  Saga  Pohon  (Adenanthera  pavonina L.),” Balai  Penelitian  Teknologi  Perbenihan Tanaman Hutan , vol. 13, pp. 1–12, 2013.
[7] K.  C.  Kumoro,  “Potensi  Biji  Saga  Pohon (Adenanthera pavonina, Linn) Sebagai Bahan Baku  Tempe;  Sensori,  Kualitas  Gizi,  Serat Pangan  dan  Kapasitas  Antioksidan,”  in Sensori,  Kualitas  Gizi,  Serat  Pangan,  Dan Kapasitas Antioksidan , 2012, pp. 1–61.
[8] S. M. Abu, H. A. B. M. Manirul, M. A. Majid, and  I.  M.  Anwarul,  “Antifertility  studies  on ethanolic  extract  of  Abrus  precatorius  L  on swiss male albino mice,” International Journal of Pharmaceutical Sciences , vol. 3, no. 1, pp. 288–292, 2012.
[9] G.  Partha  and  C.  Habibur  Rahaman, “Pharmacognostic, phytochemical and antioxidant  studies  of  Adenanthera  pavonina L,” International  Journal  of  Pharmacognosy and Phytochemical Research , vol. 7, no. 1, pp. 30–37, 2015.
[10] Y.  Zhu et  al. ,  “Metabolism  and  prebiotics activity of anthocyanins from black rice (Oryza sativa L.) in vitro,” PLoS ONE , vol. 13, no. 4, 2018.
[11] R.  E.  Wrolstad  and  D.  Ph,  “The  Possible Health Benefits of Anthocyanin Pigments and Polyphenolics,”  Oregon  State  University, 2012.
[12] Lidya  Simanjuntak,  Chairina  Sinaga,  and Fatimah,  “Ekstraksi  Pigmen  Antosianin  Dari Kulit Buah Naga Merah (Hylocereus polyrhizus),” 2014.
[13] S. R. Paliling, “Karakteristik Fisikokimia Dan Kadar Antosianin Minuman Serbuk
Kombinasi  Susu  Sapi  Dan  Ubi  Jalar  Ungu  ( Ipomoea  batatas  L.)  Skripsi,”  Universitas Hasanuddin Makasar, 2018.
[14] N.  El  Husna,  M.  Novita,  and  S.  Rohaya, “Kandungan Antosianin dan Aktivitas
Antioksidan Ubi Jalar Ungu Segar dan Produk Olahannya,” 2013.
[15] C.  N.  Arifah,  C.  Saleh,  and  Erwin,  “Uji
Fitokimia  Dan  Uji  Stabilitas  Zat  Warna  dari Ekstrak  Biji  Buah  Alpukat  (Persea  americana Mill)  Dengan  Metode  Spektorskopis  UV- VIS,” 2016.
[16] A. E. Ramadhan and H. A. Phaza, “Pengaruh Konsentrasi  Etanol,  Suhu  dan  Jumlah  Stage pada  Ekstraksi  Oleoresin  Jahe  (Zingiber officinale  Rosc)  Secara  Batch,”  Universitas
Diponegoro, 2010.
[17] E. R. Srijanto, Bambang, Idah Rosidah and M. Gustini  Syabirin  ,  Aan,  “Pengaruh  Waktu,
Suhu  Dan  Perbandingan  Bahan  Baku-Pelarut Pada  Ekstraksi  Kurkumin  Dari  Temulawak (Curcuma Xanthorriza Roxb.) Dengan Pelarut Aseton,”  in Prosiding  Seminar  Nasional
Rekayasa Kimia dan Proses , 2004, pp. 1–5.
[18] S. Sudarmi, P. Subagyo, A. Susanti, and A. S. Wahyuningsih,
“Ekstraksi Sederhana
Antosianon dari Kulit Buah Naga (Hylocereus polyrhizus) sebagai Pewarna Alami,” Eksergi , vol. 12, no. 1, p. 05, 2015.
[19] Fitriani  and  N.  Awaliyah,  “(  the  Effect  of Extraction Temperature and Warming Time,”
Majalah  Ilmiah  Al  Ribaath,  Universitas Muhammadiyah Pontianak , vol. 12, no. 1, pp. 35–43, 2015.
[20] Molyneux P, “The use of the stable free radical diphenylpicryl-hydrazyl (DPPH)
for estimating anti-oxidant activity,” 2004.
[21] D. Tristanti, A. Ismawati, B. T. Pradana, and J. E. Jonathan, “Pengajuan Aktivitas Antioksidan Menggunakan  Metode  DPPH  pada  Daun Tanjung  (Mimosa  Elergi  L).  Prosiding
Seminar Nasional Teknik Kimia Kejauangan,”
jurnal upnyk , pp. 1–7, 2016.
[22] F. Susilowati, “Uji Brine Shrimp Lethality Test (Bslt)  Ekstrak  Etil  Asetat  Spons  Calthropella Sp. Asal Zona Intertidal Pantai Krakal Gunung Kidul Yogyakarta,” 2017.
[23] J., D. Osmeli, and . Y., “Kandungan Senyawa Kimia, Uji Toksisitas (Brine Shrimp Lethality Test)  Dan  Antioksidan  (1,1-Diphenyl-2-
Pikrilhydrazyl)  Dari  Ekstrak  Daun  Saga (Abrus precatorius L.),” 2010.