http://jurnal.utu.ac.id/
P-ISSN: 2579-4752, E-ISSN: 2620-7397
1 Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Teuku Umar Korespondensi:  Jurusan  Akuakultur,  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan,  Universitas  Teuku  Umar, Kampus UTU Meulaboh, Alue Peunyareng 23615, Telp: 085260001018, email: citradinafebrina@utu.ac.id
EFEKTIVITAS TETRAPLOIDISASI IKAN NILEM (Osteochilus hasselti Valenciennes 1842) DENGAN KEJUT TEMPERATUR DINGIN 4 o C
THE EFFECTIVENESS OF SHARK MINNOW (Osteochilus hasselti Valenciennes 1842) FISH BY 4 O C COLD SHOCK
Citra Dina Febrina 1 , Yulia Sistina 2 , Isdy Sulistyo 2
1 Program Studi Akuakultur, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Teuku Umar
2 Program Studi Biologi, Fakultas Biologi Universitas Soedirman, Purwokerto Korespondensi : citradinafebrina@utu.ac.id

## ABSTRAK
Penelitian ini melaporkan efektivitas tetraploidisasi nilem kejut dingin 4 O C pada waktu (15, 20 atau 20  menit)  dan  lama  kejut  (10  atau  20  menit)  berbeda  pada  telur  nilem  terfertilisasi  membuktikan bahwa  persentase  fertilitas  telur,  persentase  penetasan  dan  persentase  kelangsungan  hidup  antar perlakuan  berbeda  sangat  nyata  (P<0,01)  sedangkan  Hasil  pengukuran  dimensi  sel  darah  merah benih  nilem  tetraploid  hasil  perlakuan  membuktikan  efektivitas  tetraploidisasi  kejut  dingin  yang diperlakukan, yaitu bahwa panjang sel darah  merah berbeda nyata (P<0,05) antar perlakuan;  lebar sel darah merah berbeda sangat nyata (P<0,01) dengan semua perlakuan; luas dan volume sel darah merah berbeda sangat nyata (P<0,01) dengan semua perlakuan lainnya dipengaruhi oleh perlakuan kejut  dingin.  Dengan  demikian  dapat  menjadi  dasar  pengembangan  bioteknologi  rekayasa reproduksi  akuakultur  untuk  diterapkan  dalam  skala  yang  lebih  besar  dalam  rangka  memenuhi target peningkatan produksi yang ditetapkan KKP.
Kata Kunci: Sel Darah Merah, Kejut Dingin, Lama Kejut, Tetraploidisasi, Waktu Kejut.

## ABSTRACT
This  study  reports  on  shark  minnow  tetraploidization  effectiveness  from  treatment  of  4 O C  cold shocked at different time (15, 20 or 25 minutes) and different duration time (10 or 20 minutes) of fertilized  eggs  result  showed  that  fertility  percentage,  hatching  rate  and  survival  rate  were  highly significantly  different  (P<0.01)  among  treatments;  Effectiveness  of  tetraploidization  detection results,  shown  by  red  blood  cell  dimension  proven  that  the  length  of  red  blood  cells  were significantly  different  (P<0.05)  among  treatments;  the  width  of  the  cells  from  fry  treatment  was highly significantly different (P<0.01)  with all treatments; Fries’s red blood cells surface area and volume  from  treatment  were  highly  significant  different  (P<0.01)  with  all  other  treatments.  This was  the  first  report  on  nilem  tetraploid  applied  cold  shock  4 o C,  ready  for  application  in  the development  of  aquaculture  reproductive  biotechnology  resulted  in  tetraploid  fish  for  larger  scale to meet KKP targets in increasing nilem production.
Keyword : Red Blood Cells, Shock Duration,Cold Shock, Shock Time, Tetraploidization

## PENDAHULUAN
Salah  satu  jenis  ikan  yang  banyak dibudidayakan  dan  diminati  adalah  jenis  ikan
Cyprynidae khususnya ikan nilem ( Osteochilus hasselti Valencienes, 1842). Ikan nilem merupakan ikan air tawar yang menjadi target  produksi  Kementrian  Kelautan  dan
Perikanan (KKP). Peningkatan jumlah produksi  yang  ingin  dicapai  dari  tahun  2009 sampai dengan tahun 2014 mencapai ±864.600  Ton  (KKP,  2010).  Perkembangan data  terbaru  dari  Kementerian  Kelautan  dan Perikanan  Indonesia  2011  dilaporkan  bahwa tingkat  konsumsi  ikan  di  Indonesia  2010 mencapai  30,47  Kg/kapita/tahun,  meningkat 29% dibanding tingkat konsumsi 2009. Sesuai data  dari  Dinas  Peternakan  dan  Perikanan Kab.  Banyumas  tahun  2011  diketahui  bahwa ikan  tawes  merupakan  ikan  dengan  jumlah tertinggi  kedua  setelah  ikan  gurami,  dengan jumlah  produksi  ikan  dari  tahun  2006-2010 sebesar  358.421  ekor.  Juga  diketahui  terjadi peningkatan  produksi  ikan  nilem  dari  tahun 2006-2010  sebesar  227.389  ekor  (Dinas Peternakan  dan  Perikanan  Kab.  Banyumas, 2011). Laboratorium Fisisologi Hewan Fakultas Biologi Universitas Jenderal
Soedirman  telah  berhasil  menginduksi  ikan nilem  poliploid  dengan  metode  kejut  panas (Sistina et  al ,  2000;  2011a;b;  Purnomo  dan Sistina  2012;  Asmarany et  al ,  2012)  dan metode kejut dingin (Susanti et al, 2012) Berbagai  teknologi  dilakukan  untuk meningkatkan  produksi  ikan  nilem  ini misalnya  melalui  program  seleksi  dan manipulasi kromosom (Mukti, 2001), termasuk  poliploidisasi.  Induksi  tetraploid pada ikan minimum memiliki dua tujuan yaitu untuk  menghasilkan  triploid  steril  dengan pertumbuhan  yang  cepat  melalui  hibridisasi dengan diploid normal dan untuk menghasilkan  ikan  yang  ukurannya  relatif lebih besar dari diploid normalnya (Thorgaard et  al .,  1981).  Teknik  manipulasi  kromosom diharapkan mampu menghasilkan ikan dengan kualitas  genetik  unggul  seperti  pertumbuhan cepat,  toleransi  tinggi  terhadap  lingkungan,
kebal  terhadap  penyakit,  dan  kandungan daging  yang  tinggi  dapat  diperoleh  dengan cara  manipulasi  kromosom  (Sumantadinata, 1987). Poliploid merupakan organisme dengan  lebih  dari  dua  set  kromosom  (Piferrer et  al. ,  2006).  Manipulasi  poliploidisasi  dapat menghasilkan  individu  triploid,  tetraploid, hexaploid  dan  poliploid  yang  lebih  tinggi (Kadi, 2007).
Poliploidisasi pada ikan dapat diperoleh dengan  perlakuan  fisik  berupa  perlakuan kejutan ( shocking ) baik pada temperatur panas maupun  pada  temperatur  dingin,  pemberian tekanan ( hydrostatic pressure ) untuk menggagalkan  peloncatan polar  body II  atau menggunakan  bahan  kimiawi  (Thorgaard, 1983).  Bahan  kimiawi  yang  biasa  digunakan yaitu kolsikin atau kolsemit, zat ini menimbulkan  kerusakan  mikrotubul  yang menyebabkan terjadinya kerusakan pembentukan  tahapan  meiosis  atau  mitosis (Adisoemarto,  1988).  Tetraploid  merupakan poliploidisasi  yang  memiliki  empat  set kromosom  (Zou et  al. ,  2004).  Individu tetraploid  memiliki  keturunan  dengan  sifat fertil  (Zou et  al. ,  2004).  Faktor-faktor  yang mempengaruhi keberhasilan proses poliploidisasi  yaitu  lama  kejut,  temperatur kejutan  (dingin  atau  panas)  pada  awal pelaksanaan (Carman, 1990). Dengan demikian maka keunggulan dari ikan poliploid  dapat  menjadikan  solusi  terhadap kesediaan  benih  ikan  air  tawar  dalam menunjang  kegiatan  budidaya  serta  dapat meningkatkan produktivitas perikanan bioteknologi reproduksi manipulasi kromosom. (Tave, 1993; Gheyas, 2001; Mukti 2001, Dunham, 2004).
Keberhasilan poliploidisasi dengan berbagai kejut panas maupun dingin merupakan dasar dalam melakukan tetraploidisasi  dengan  kejut  dingin  yang pertama  kali  dilaporkan  keberhasilannya  oleh Febrina et  al, (2012)  dilihat  dari  fertilitas, penetasan  dan  kelangsungan  hidup  dengan kombinasi  waktu  kejut  (15,20  atau  25  menit) dan  lama  kejut  (10  atau  20  menit)  pada
temperatur  dingin  4 O C  untuk  menghasilkan ikan nilem tetraploid dengan deteksi sel darah merah (panjang, lebar, luas dan volume) yang dihasilkan dari ikan tetraploid.

## METODE PENELITIAN

## Prosedur Penelitian
Induk-induk  diinduksi  melalui  injeksi intramuskular  dengan  GnRH-analog  dan  anti dopamin  domperindon  (Syndel,  Vancauver, Canada)  dengan  dosis  0,2  mL/Kg  bobot pejantan  dan  0,3  mL/Kg  bobot  betina,  dalam rangka  memperoleh  spermatozoa  dan  telur segar  untuk  fertilisasi in  vitro .  Kemudian zigot dikejut temperatur 4 O C dengan menggunakan  chiller  (Nema  type-4x).  Telur dan  spermatozoa  terfertilisasi,  pada  15,  20 atau  25  menit  pasca  fertilisasi,  dikejut  dingin 4 o C  selama  10  atau  20  menit  dengan  rincian perlakuan  sebagai  berikut  fertilisasi  tanpa kejut/kontrol  (P0),  fertilisasi  15  menit  lama kejut  10  menit  (P1),  fertilisasi  15  menit  lama kejut  20  menit  (P2),  fertilisasi  20  menit  lama kejut  10  menit  (P3),  fertilisasi  20  menit  lama kejut  20  menit  (P4),  fertilisasi  25  menit  lama kejut  10  menit  (P5),  fertilisasi  25  menit  lama kejut  20  menit  (P6).  Selesai  dikejut  maka zigot ditempatkan kedalam wadah kultur yang telah  diberi  aerasi  dan  dipelihara  dengan metode  yang  sama.  Penentuan  tetraploidisasi dievaluasi  setelah  3  jam  dari  fertilisasi dihitung persentase fertilitasnya, kemudian 25 jam  kultur  dihitung  persentase  penetasan  dan 21  hari  pemeliharaan  dihitung  persentase kelangsungan  hidup  benih.  Keberhasilan tetraploidisasi  dievaluasi  berdasarkan  hasil pengukuran  dimensi  sel  darah  merah  benih umur  21  hari  melalui  pengukuran  panjang, lebar, luas dan volumenya.
Cara  pengukuran  dimensi  sel  darah  merah  ini sesuai dengan laporan penelitian  Sistina et al. (2000),  Sistina et  al .  (2001a),  Purnomo  dan Sistina  (2012)  dan  penghitungan  luas  dan volume  sel  darah  merah    sesuai  dengan laporan  penelitian  Gheyas et  al. (2001)  dan Alawi et  al. (2009).  Ikan  sampel  diambil  dari
wadah  kultur  sebanyak  3  ekor  untuk  setiap perlakukan.  Tiap  ekor  ikan  dilukai  untuk diambil  darahnya,  kemudian  darah  diteteskan di  atas  kaca  objek,  lalu  kaca  objek  lainnya diletakkan  dengan  sudut  45 o terhadap  kaca objek  di  depan  tetes  darah,  kemudian  ditarik ke  belakang  membuat  apusan  darah,  hingga darah  menyebar  pada  kaca  sampai  terbentuk apusan  sepanjang  3-4  cm  pada  kaca  objek. Lalu  apusan  darah  difiksasi  menggunakan methanol absolute, selama 3 menit dan apusan dibiarkan  mengering  pada  temperatur  ruang. Preparat  apusan  darah  diwarnai  dengan pewarna  giemsa  dengan  cara  apus  darah ditetesi  larutan  giemsa,  dibiarkan  selama  20 menit.  Kemudian  preparat  dibilas  dengan  air mengalir  dan  dikeringkan.  Setelah  kering maka  dilakukan  pengamatan  ukuran  panjang dan  lebar  sel  darah  merah  menggunakan mikroskop  cahaya  (Olympus  CH-20)  dengan lensa  obyektif  40x  lensa  okuler  10x  yang dilengkapi mikrometer okuler.

## Parameter
Panjang  dan  lebar  sel  darah  merah yang  diamati  minimal  100  butir  per  slide. Luas  dan  volume  sel  darah  merah  dihitung dengan  menggunakan  rumus  Gheyas et  al.
(2001):
Keterangan: a : Mean Values of Major Axes (Panjang)
b : Mean Values of Minor Axes (Lebar)

## Analisis Data
Data  dianalisis  dengan  menggunakan ANOVA dan data yang signifikan dilanjutkan dengan  uji  beda  nyata,  bila  data  terbukti homogen maka dilanjutkan dengan Uji Tukey atau  Beda  Nyata  Jujur  dan  bila  data  terbukti heterogen  maka  dilanjutkan  dengan  Uji  LSD atau  Beda  Nyata  Terkecil  (Sokal  dan  Rohlf,
1997).  Analisis  menggunakan  program  SPSS versi  17.  Data  kualitas  air  dianalisis  secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  induksi  tetraploidisasi  ikan  nilem (Osteochilus  hasselti Valenciennes,  1842) dengan kejut temperatur 4 o C pada 15, 20 atau 25  menit  dari  waktu  fertilisasi  dengan  lama kejut  10  atau  20  menit  secara  keseluruhan menunjukkan bahwa rerata persentase
fertilitas, persentase penetasan, dan persentase kelangsungan  hidup  umur  21  hari  larva bervariasi  (Tabel  1)  dan  hasil  analisis statistiknya
menunjukkan perlakuan tetraploidisasi yang diteliti berpengaruh sangat nyata ( P<0,01 ) menentukan persentase fertilitas, persentase penetasan, dan persentase kelangsungan hidup umur 21 hari larva (Tabel 1).
Keberhasilan  induksi  tetraploid  ikan nilem (Osteochilus  hasselti Valenciennes,
1842)  dideteksi  secara  tidak  langsung  dengan
mengukur  dimensi  sel  darah  merah  berupa pengukuran  panjang,  lebar,  luas  ( Surface area )  dan  volume  sel  darah  merah  yang terbukti  secara  sangat  nyata  ( P<0,01 )  lebih besar  dimensi  sel  pada  benih  perlakuan tetraploid daripada kontrol diploid (Tabel 2).
Secara`keseluruhan hasil perlakuan kejut dingin 4 0 C dengan lama kejut 10 atau 20 menit  pada  15,  20  atau  25  menit  pasca fertilisasi  berhasil  menginduksi  ikan  nilem tetraploid  dari  data  dimensi  sel  darah  merah perlakuan  waktu  kejut  25  pasca  fertilisasi dengan  lama  kejut  10  dan  20  menit  memiliki hasil  analisis  lebih  besar  secara  sangat  nyata ( P <0,01)  berbeda  dari  kelompok    nilem kontrol diploid (Tabel 2).
Hasil  pengamatan  dan  pengukuran  sel darah  merah  benih  nilem  hasil  perlakuan, selengkapnya  disajikan  dalam  Tabel  2  yang membuktikan adanya efektifitas tetraploidisasi  kejut  dingin  yang  dilakukan. Deteksi  ploidisasi  secara  tidak  langsung
dengan  pengukuran  sel  darah  merah  seperti ini,  diklaim  paling  akurat  dibandingkan  cara deteksi tidak langsung lain seperti perhitungan
jumlah  nukleolus  (Dunham,  2004).  Deteksi ploidisasi seperti  ini  sudah banyak dilaporkan
baik  untuk  nilem  (Sistina et  al. ,  2011;
Purnomo  dan  Sistina,  2012;  Purnomo,  2012; Susanti, 2013) atau ikan  lain (Dunham, 2004; Tiwary et al. , 2004; Pradeep et al. , 2011).
Menurut  Thorgaard  dan  Gall  (1979) bahwa  eritrosit  pada  ikan  triploid  lebih  besar.
Laporan Fankhauser (1979)
juga mengemukakan  bahwa  ukuran  sel  yang  lebih besar  terjadi  karena  adanya  penambahan jumlah  set  kromosom  ikan  triploid  sehingga mengakibatkan peningkatan ukuran diameter sel  dan  volume  dari  sitoplasma.  Perlakuan triploidisasi  juga  dapat  menambahkan  ukuran sel darah merah dikarenakan adanya penambahan  jumlah  kromosom  DNA  di dalam sel darah merah  (Suzuki et al., 1994).
Peningkatan  ukuran  sel  tidak  hanya terjadi pada sel darah merah tetapi juga terjadi pada  sel  darah  putih  berupa  peningkatan seluruh  sel  dari  jaringan  polipolid  pada  ikan triploid  coho  salmon  dan  atlantik  salmon (Small dan Benfey, 1987).
Garcia-Abiado et  al .  (1999)  juga melaporkan  bahwa  ukuran  sel  darah  merah dan inti ikan Saugeyes triploid lebih besar dari diploid  dengan  persentase  keakuratan  93,8%.
Ploidisasi yang meningkat dapat
membuktikan  bahwa  perlakuan  temperatur
dingin terbukti meningkatkan ukuran eritrosit. ukuran tubuh ikan selama penelitian yang diberi  kejut  dingin  juga  dapat  dijadikan pembanding antara benih nilem ikan diploid
dan  ikan  tetraploid.  Laporan  Suzuki et  al. (1984) mengemukakan bahwa ukuran panjang sel  darah  merah  1,2  sampai  1,3  kali  lebih besar  dari  pada  ikan  diploid  sedangkan  untuk perlakuan  triploidisasi  memiliki  volume  sel darah  merah  1,5  kali  lebih  besar  daripada triploid  (Purdom,  1983;  Alawi et  al., 2009). Hasil  penelitian  ini  juga  membuktikan argumentasi tersebut bahwa  keseluruhan hasil pengukuran  dan  perhitungan  memiliki  nilai ratio  sel  darah  merah  ikan    tetraploid  secara sangat nyata ( P <0,01) berbeda dari kelompok nilem kontrol diploid (Tabel 2).
Hasil  induksi  tetraploid  nilem  ini mengkonfirmasi efektifitas keberhasilan pencegahan cleavage pertama embrio sehingga  dihasilkan  nilem  tetraploid  kejut dingin pada waktu sesuai perlakuan penelitian ini,  yaitu  25  menit  paling  efektif.  Laporan sebelumnya kejut panas dilakukan pada waktu 15,  20  dan  25  menit  terbukti  efektif  menahan cleavage pertama  nilem  dengan  kejut  panas
dari deteksi diameter sel darah merah (Sistina et  al. ,  2011a;  Purnomo  dan  Sistina,  2012), dibandingkan  waktu  kejut  pada  39,41  menit yang hasilnya tidak 100% dari deteksi jumlah nukleolus  (Agustaman,  2012).  Efektivitas waktu  kejut  temperatur  panas  40 o C  pada  25 menit  dari  waktu  fertilisasi  juga  efektif menahan cleavage pertama dalam
mitoginogenesis  nilem  (Praninda et  al. ,  2012; Nurceha et  al. ,  2012)  dan  efektif  untuk tetraploidisasi kejut panas nilem (Asmarany et al. ,  2012).  Efektivitas  waktu  kejut  pada  20 menit  dengan  temperatur  panas  dilaporkan juga  efektif  menghasilkan  tetraploid  nilem (Asmarany et al. , 2012).
Tetraploid  nilem  kejut  dingin  ini merupakan laporan pertama, yang menghasilkan data sangat signifikan khususnya  untuk  kejut  pada  25  menit,  sesuai data  volume  sel  darah  merah  dan  dimensi  sel lain  (Tabel  2).  Hasil  uji  lanjut  membuktikan bahwa  lama  kejut  dingin  10  atau  20  menit sama-sama  efektif  menghasilkan  fertilitas, penetasan  dan  kelangsungan  hidup  umur-21 hari nilem tetraploid. Sudah dilaporkan bahwa nilem  tetraploid  hasil  kejut  panas  sudah terbukti  memiliki  laju  pertumbuhan  secara mencolok lebih tinggi dari diploid dan triploid kejut panas akibat paling tidak laju metabolisme  tetraploid  lebih  besar  dari  data konsumsi  oksigennya  (Purnomo  dan  Sistina, 2012;  Purnomo  2012).  Dengan  demikian secara  keseluruhan  dapat  dibuktikan  hasil penelitian  ini  membuktikan  bahwa  hipotesis kejut  dingin  pada  waktu  dan  lama  kejut berbeda  mempengaruhi  fertilitas,  penetasan, kelangsungan  hidup  benih  dan  dimensi  sel darah.
Pengukuran  kualitas  air  pada  perlakuan kejut  dingin  4 o C  nilem  ( Osteochilus  Hasselti Valenciennes  1842 ) membuktikan  bahwa selama  kegiatan  pengkulturan  serta  kesediaan materi  (spermatozoa  dan  telur)  berkualitas baik.  Tingginya  nilai  persentase  fertilitas, penetasan  dan  kelangsungan  hidup  umur  21 hari  terbukti  dipengaruhi  kualitas  air  berupa temperatur,  pH  serta  suplai  oksigen  yang diperoleh  dari  aerasi  terus  menerus  pada
media  kultur  selama  pemeliharaan.  Menurut Gheyas et  al. (2001)  keberhasilan  penetasan dan  pengkulturan  dipengaruhi  kesesuaian kualitas  air  terutama  temperatur.  Temperatur merupakan  faktor  yang  mempengaruhi  laju metabolisme  dan  kelarutan  gas  dalam  air (Zonneveld et al. , 1991).
Temperatur  kultur  selama  penelitian memiliki  kisaran  26-28 o C  dan  masih  berada pada  kisaran  optimum  untuk  penetasan  dan pemeliharaan  nilem.  Hal  ini  juga  sesuai dengan  penelitian  Wijayanti et  al. (2010) temperatur  yang  baik  untuk  kelangsungan hidup  ikan  nilem  berkisar  26-29 0 C.  Menurut Cahyono  (2001),  Sumantadinata    (1981),  dan Susanto  (2001)  memiliki  temperatur  berkisar 18-28 o C  sangat  baik  untuk  pertumbuhan  dan kelangsungan  hidup  ikan,  sedangkan  untuk perkembangan  embrio  ikan  nilem  memiliki kisaran temperatur 27-29 o C.
Selain  temperatur,  kualitas  air  yang memiliki  peranan  penting  lainnya  adalah  pH. Menurut  Wardoyo  (1975)  kualitas  air  pH  4 dan  11  merupakan  titik  lethal  ( death  point ) bagi  ikan.  Selama  penelitian  pH  media  kultur yang  diperoleh  berkisar  6-7,  membuktikan bahwa  nilai  pH  sangat  baik  untuk  fertilitas, penetasan dan kelangsungan hidup ikan nilem. Laporan Wijayanti et al. (2010) pH yang baik untuk    kelangsungan  hidup  larva  ikan  nilem berkisar  antara  6-8  baik  pada  wadah  berupa akuarium ataupun bak pemijahan.
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  oleh  Hariani  (2008)  terhadap kualitas  air  media  penetasan  telur  ikan  mas adalah  pH  7,03–7,8,  dan  pH  media  inkubasi telur  ikan  mas  berkisar  antara  7,9–9,6 (Blaxter, 1969). Susanto (2001) juga melaporkan  pH  6,7-8,6  merupakan  nilai  pH optimum selama pemeliharaan ikan nilem.

## KESIMPULAN
Kejut dingin 4 o C dengan waktu kejut 25 menit  dan  lama  kejut  10  atau  20  menit terbukti  efektif  dalam  menghasilkan  nilem tetraploid  yang  juga  dapat  dilihat  dari  deteksi
sel  darah  merah  berupa  panjang,  lebar,  luas dan  volumenya  lebih  besar  dibandingkan dengan  sel  darah  merah  ikan  nilem  diploid (kontrol).  Kejut  dingin  4 o C  dengan  waktu kejut  25  menit  dan  lama  kejut  10  atau  20 menit  terbukti  efektif  meningkatkan  nilai persentase fertilisasi, penetasan dan kelangsungan  hidup  benih  nilem  tetraploid. Hasil  penelitian  ini  dapat  dijadikan  acuan dasar  untuk  pengembangan  selanjutnya  yang lebih  baik  lagi  sehingga  dengan  tersedianya protokol  tetraploidisasi  kejut  dingin  4 o C  ini dapat  dijadikan  dasar  untuk  dilakukan kegiatan usaha budidaya atau projek menghasilkan nilem unggul dalam pemenuhan target  KKP  berupa  peningkatan  produksi nilem.  Dengan  kata  lain,  tindak  lanjut  proses budidaya  melalui  penggunaan  nilem  hasil bioteknologi  untuk  pemijahan  ikan  tetraploid dengan  diploid  normal  menghasilkan  triploid serta dapat dimanfaatkan untuk meningkatkan kebutuhan  masyarakat  dalam  pemenuhan  gizi yang berpotensi pada meningkatnya kesejahteraan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada Pristi, Desi, Boyng, Sastri, Syawalina, Reni, Mas Purnomo, Yusni, Ari dan Mas Eko serta  semua  pihak  yang  telah  membantu dalam  penelitian  mengikuti  proyek  Hibah Pasca  yang  diketuai  oleh  ibu  Dra.  Yulia Sistina, M.Sc.

## DAFTAR PUSTAKA
Adisoemarto,  S.  1988.  Genetika  Jilid  1.
Penerbit Erlangga, Jakarta. Agustaman.  2012.  Evaluasi  Jumlah  Nukleoli untuk Menguji Efektivitas Poliploidisasi. Tesis (Tidak dipublikasi). Universitas Jenderal Soedirman. Purwokerto. Alawi,  H.,  Nuraini  dan  Sapriana.  2009. Induksi Triploid Ikan Selais ( Krytopterus  lympok )  Menggunakan
Kejutan  Panas. Jurnal  Perikanan  dan
Kelautan 14, (1): 37-47.
Asmarany,  R;  E.  Yuwono;  dan  Y.  Sistina. 2012. Fertilitas Telur Nilem ( Osteochillus hasselti Valenciennes 1842)  yang  Dikejut  Panas  40 o C  Lama
Kejut  Berbeda.  Prosiding  Seminar
Nasional Pendidikan Biologi dan Biologi FMIPA UNY, Yogyakarta. Blaxter,  J.H.S.  1969.  Development  Eggs  and
Larvae.  In  :  Fish  Physiology.  Vol  III. (Eds.  W.S.  Hoar  dan  J.H.  Randall). Academic Press Inc. New York. USA. Cahyono, B. 2001. Budidaya Ikan di Perairan Umum . Kanisius : Yogyakarta.
Carman,  O.  1990.  Ploidy  Manipulation  in
Some Warm Waterfish. Master’s Thesis. Departement of Aquatic
Biosciences,  Tokyo  University  of Fisheries. Tokyo. 88p.
Dinas  Perikanan  dan  Peternakan  Banyumas. 2011.  Realisasi  produksi  ikan  di kabupaten Banyumas. Banyumas.
Dunham,  R.A.  2004. Aquaculture  and Fisheries Biotechnology. CABI Publishing, Wallingford. Fankhauser, G. 1945. The Effects of Changes in Chromosome Number on Amphibian Development. Quarterly  Review  of Biology : 20: 20-78.
Febrina,  C.D.,  Y.  Sistina  dan  I.  Sulistyo.
2012.  Kejut  dingin  4 o C  pada  Telur Nilem ( Osteochilus hasselti Valenciennes,1842)  Terbuahi  dengan
Lama  Kejut  Berbeda  Berefek  pada Fertilitas, Penetasan, dan Kelangsungan Hidup.  Seminar  Nasional  Taksonomi Fauna  IV  dan  Kongres  Masyarakat
Zoologi  Indonesia  ke  I.  Fakultas Biologi Universitas Jenderal Soedirman. November. Purwokerto. Garcia-Abiado,  M.A.R.,  K.  Dabrowski.,  J.E. Christensen,  and  S.  Czesny.  1999.  Use of Erythrocyte Measurements to
Identify  Triploid  Saugeyes. North
American  Journal  of  Aquaculture 61:
319-325.
Gheyas,  A.A.,  M.F.A  Mollah  and  M.G Hussain.  2001.  Triploidy  Induction  in Stinging Catfish Heteropneustes fossilis Using  Cold  Shock. Asian  Fisheries Science 14: 323-332.
Hariani,  D.  2008.  Daya  Tetas  Ikan  Mas
( Cyprinus carpio ) Hasil Triploid Menggunakan Larutan Kolkhisin. WAHANA , 51(2): 72-80.
Kadi,  A.  2007.  Manipulasi  Poliploidi  Untuk Memperoleh  Jenis  Baru  yang  Unggul. Oseana XXXII 4: 1-11 . KKP.  2010.  Rencana  Strategis  Kementrian Perikanan  dan  Kelautan  2010-2014.
Kementrian  Kelautan  dan  Perikanan, Jakarta.
Mukti,  A.T.  2005.  Perbedaan  keberhasilan tingkat poliploidisasi ikan mas
(Cyprinus carpio Linn.) melalui kejutan panas. Berkala  Penelitian  hayati :  10 133-138.
Mukti,  A.T.,  Rustidja.,  Sumitro,  S.B.  dan Djati  M.S.  2001.  Poliploidisasi  Ikan Mas  ( Cyprinus  carpio L). Biosain ,  1 (1): 111-112.
Nurceha, B., E. Yuwono dan Y. Sistina. 2012. Protokol  Mitoginogenesis  ikan  Nilem ( Osteochilus hasselti Valenciennes,
1842)  Kejut  Dingin.  Seminar  Nasional Taksonomi  Fauna  IV  dan  Kongres Masyarakat  Zoologi  Indonesia  ke  I. Fakultas  Biologi  Universitas  Jenderal
Soedirman. November. Purwokerto.
Piferrer F, Beaumont A, Falguière J-C, and L,
Colombo. 2006. I. Performance Improvements  by  Polyploidization  in Aquaculture. Dalam :  Colombo  L, Crosetti  D,  dan  Svaasand  T  (Eds.) Performance Improvements by Polyploidisation, Gene  Transfer  and DNA  Vaccination  in  Aquaculture . GENIMPACT  project:  Evaluation  of Genetic Impact of Aquaculture
Activities  on  Native  Populations.  A European  Network.  WP1  Workshop Genetics  of  Domestication,  Breeding and  Enhancement  of  Performance  of Fish and Shellfish”, Viterbo, Italy. 5. Pradeep, P.J. 2011. Production of Triploidy in
Red  Tilapia Oreochromis  mossambicus (Peters, 1852) X Oreochromis niloticus (Linnaeus,  1758). Disetasi .  University Malaysia Terengganu Malaysia. Malaysia. Praninda,  P.Y;  I.  Sulistyo;  dan  Y.  Sistina. 2012. Perbandingan Efektifitas Meioginogenesis  dan  Mitoginogenesis Ikan  Nilem ( Osteochillus  hasselti Valenciennes 1842). Prosiding Seminar Nasional  Pendidikan  Biologi  Dan Biologi FMIPA UNY. Oktober. Yogyakarta.
Purdom,  CE,  1983.  Genetic  Engineering  by The  Manipulation  of  Chromosomes. Aquaculture , 33: 287–300.
Purnomo  dan  Y.  Sistina.  2012. Oxygen consumption of shark minnow (Osteochillus  hasselti  Valenciennes,
1842) polyploid fish . Proceeding. International  Seminar  of  Indonesian
Ichtiological Society, Makassar.
Sistina, Y;  I.  Setiadi  and R. Widiastuti. 2000.
Induced  triploidy  by  heat  shock    in nilem ( Osteochilus hasselti
Valenciennes,  1842)  fish.  Proceeding, ASRB 31 th conference held in Canberra, Australia.
Sistina, Y; N. Hidayati; Purnomo ; S. Oktavia; and  E.T.  Winarni.  2011b.  Genome Multiplication by Heat Shocked Effects Quality  of  Shark  Minnow  ( Osteochilus hasselti Valenciennes,  1842)  Fish Offspring Proceeding Regional Seminar and Workshop on Advances in Tropical Genomics : Conservation and
Suistainable  Utilization  of  Tropical Biodiversity, Bogor.
Sistina,  Y;  Purnomo;  N.  Hidayati;  and    P.H. Tjahja.  2011a.  Genome  manipulation by  heat  shocked  a  Shark  Minnow ( Osteochilus hasselti Valenciennes,
1842)  to  get  polyploidy  off  spring. Proceeding  Regional  Seminar  and Workshop  on  Advances  in  Tropical Genomics:
Conservation and
Suistainable  Utilization  of  Tropical Biodiversity, Bogor.
Small,  S.A.  and  Benfey,  T.J.  1987.  Cell  Size in Triploid Salmon. Journal of Experimental Zoology: 241, 339-342.
Sokal, R.R and F.J Rohlf. 1997. Biometry the Principle  and  Practise  of  Statistics  in Biological  Research .  Third  Edition. W.H.  Freeman  and  Company.  New York. .
Sumantadinata,  K.  1981. Perkembangbiakan Ikan-ikan peliharaan Indonesia . Fakultas perikanan. Bogor. Sumantadinata, K. 1987. Teknologi Gynogenesis, Percepatan Ikan
Peliharaan .  Kompas  23  November
1988.
Susanti,  D.,  E.  Yuwono  dan  Y.Sistina.  2012.
Triploidisasi pada Telur Nilem
( Osteochilus hasselti Valenciennes, 1842)  Kejut  Dingin  4 o C  Dengan  Lama
Kejut  Berbeda.  Seminar  Nasional
Taksonomi  Fauna  IV  dan  Kongres Masyarakat  Zoologi  Indonesia  ke  I. Fakultas  Biologi  Universitas  Jenderal Soedirman. November. Purwokerto. Susanto,  H.  2001. Budidaya  Ikan  di
Pekarangan . Penebar Swadaya: Jakarta.
Suzuki, R., T. Nakjanishi dan T. Oshiro. 1984. Survival,  Growth  and  Sterility  of induced  Triploids  in  the  Cyprinid Roach Misgurnus  angguillicaudatus . Bulletin  of  japanese  of  Scientific Fisheries 51 (6) : 889-894. Tave,  D.  1993. Genetics  For  Fish  Hatchery Managers . Avi. Publ. Co. Inc., Wesport, Connecticut. 368p. Thorgaard,  G.  H.  And  G.A.E.Gall.  1979. Adult  Triploid  in  Rainbow  Trout Family. Genetics , 98: 961-973. Thorgaard,  G.,  Jazwin,  M.E.,  Stier,  A.R.,
1981.  Polyploidy  Induced  by  Heat Shock  in  Rainbow  Trout. Trans.  Am. Fish. Soc . 110. 546-550. Thorgaard,  G.  H.  1983. Chromosome  Set Manipulation  and  Sex  Control  in  Fish. In "Fish  Physiology " (W. S. Hoar, D. J. Randall  and  E.  M.  Donaldson,  eds.) Vol.  IXB.  Academic  Press,  New  York. p.405-434.
Tiwary,  BK;  R.  Kirubagaran  and  AK.  Kay. 1997.  Induction  of  Triploidy  by  Cold
Shock in Indian Catfish, Heteropneustes  fossilis (Bloch). Asian Fisheries Science 10 : 123-129. Tiwary.B.K.,  R.  Kirubagaran,  and  Arun  K. Ray.  2004.  The  Biology  of  Triploid fish. Reviews  in  Fish  Biology  and
Fisheries , 14: 391-402. Wardoyo,  S.T.H.  1975. Pengelolaan  Kualitas
Air .  Institute  Pertanian  Bogor.  Bogor. 41p. Wijayanti, G.E., Sugiharto, P. Susatyo dan A. Nuryanto. 2010. Perkembangan Embrio dan  Larva  Ikan  Nilem  ( Ostheochilus hasselti CV) pada Berbagai Temperatur.  7 th Basic  science  National Seminar Proceeding, Malang. Zonneveld, N.; E.A. Huisman and J.H. Boon, 1991. Prinsip-prinsip  Budidaya  Ikan .
PT. Gramedia, Jakarta. 72 hal.
Zou,  S.,  S.Ca.  Li.,  W.  Zhou.,  J.  Yang  and
Huaiyu.  2004.  Establishment  of  Fertile Tetraploid  Population  of  Blunt  Snout
Bream  ( Megalobrama  ambycephala ). Aquaculture 238, 155-164.