PENGARUH BENZYL AMINO PURIN DAN ARANG AKTIF TERHADAP TINGGI TUNAS DAN JUMLAH TUNAS KRISAN ( Chrysanthemum daisy L.)

## SECARA IN VITRO
The Influence of Benzyl Amino Purine and Activated Carcoal Against of High and Number of In Vitro Chrysanthemum daisy L. Shoot
Nurmayulis 1 , Susiyanti 1 dan Khafas Bastian 2
1 Staf Pengajar Fakultas Pertanian Universitas Sultan Ageng
2 Alumni Jurusan Agroekoteknologi  Fakultas Pertanian Universitas Sultan Ageng Fakultas Pertanian Universitas Sultan Ageng
Jl. Raya Jakarta Km. 4 Pakupatan Serang, Banten Kode Pos 41221  Telp. 0254-280330 Fax. 0254-8285207,
Email: upik_nurma@yahoo.co.id

## ABSTRACT
This research was about the growth of in vitro Chrysanthemum daisy L.) on medium which used Benzyl Amino Purine (BAP) and activated  charcoal. Research aim to  determine the growth of Chrysanthemum plant o n  different  concentrations  of  BAP  and  active  charcoal  into  medium. This  reseach  was  done  in  culture laboratory,  in  Association  of  Plant  Forest  Seed  and  Plantation  Banten  Province.    This  research  used  factorial experiment  which arranged  in  Randomized    Complete  Design. The treathment  consist of  two factor. The first factor was BAP concentrate which were consist of five level include 0 ppm concentrate; 0.5 ppm; 1.0 ppm; 1.5 ppm; and 2.0 ppm. Second factor was activated charcoal dossage which consist four level included dossage 0 g L -1 ;  1  g  L -1 ;  2  g  L -1 ;  and  3  g  L -1 .  Based  on  the  result  of  research  showed  that  interaction  in  BAP  and  active charcoal influenced hight bud, but did not influence the number of shoots.  The best high of shoots on the age 1- 5 WAP (Week After Plants) which given BAP and activated charcoal in vitro medium consist act combination 1-5 WAP A0B1 (0.5 ppm BAP without active charcoal). Singular factor BAP and active charcoal showed that act without BAP and activated charcoal produced the best at 5 WAP.
Keywords: Chrysanthemum  plant, BAP, and Activated charcoal .

## PENDAHULUAN
Krisan  ( Chrysanthemum  daisy L.) merupakan tanaman hias sebagai bunga potong dan bunga pot  yang mempunyai warna, bentuk dan  ukuran  yang  menarik.  Tanaman  krisan dapat diperbanyak  secara generatif  dan vegetatif.  Perbanyakan  krisan  secara  generatif jarang  dilakukan  karena  sulit  dan  bersifat heterozigot  (keturunan  tidak  sama  dengan induk). Selain itu, perbanyakan secara generatif membutuhkan waktu yang lama dan penanganan khusus. Perbanyakan krisan secara vegetatif biasanya dari anakan, setek pucuk dan kultur jaringan.
Adapun  kendala  dalam  budidaya  dan peningkatan  produksi  bunga  krisan  adalah sulitnya mendapatkan bibit  dalam jumlah  yang banyak dalam waktu yang singkat, bebas hama
penyakit dan
berproduksi tinggi. Pengembangan  tanaman  krisan  ini  diperlukan penanaman  dalam  jumlah  yang  banyak  dan  ini tidak  bisa  mengandalkan  bibit  dari  anakan maupun  setek.  Untuk  mengatasi  kendala tersebut adalah dengan kultur jaringan.
Perbanyakan  krisan  dengan  kultur jaringan  dapat  menghemat  waktu,  bebas  hama dan penyakit, pertumbuhannya seragam, mampu  menghasilkan  bibit  dengan  jumlah besar dan dalam waktu yang singkat, kesehatan dan mutu bibit lebih terjamin, tidak tergantung pada iklim dan musim, kecepatan tumbuh bibit lebih  cepat  dibandingkan  dengan  perbanyakan konvensional,  bibit  yang  dihasilkan  identik dengan  induknya,  serta  banyak  dan  seragam (Anonimous, 2007).
Menurut  Santoso  dan  Nursandi  (2003) pilihan  media  yang  digunakan  merupakan  hal
penting  dalam  kegiatan  kultur  jaringan. Beberapa  faktor  yang  harus  dipertimbangkan dalam  pemilihan  media  adalah  tanaman memerlukan  hara  makro  dan  mikro,  sumber energi  (gula),  pemadat,  vitamin,  asam  amino dan  N-organik,  zat  pengatur  tumbuh  dan persenyawaan  kompleks  alamiah  (arang  aktif, air kelapa, ekstrak ragi).
Zat  pengatur  tumbuh  (ZPT)  adalah senyawa  organik  bukan  nutrisi  yang  dalam konsentrasi rendah (<1 mM) dapat mendorong, menghambat  atau  secara  kualitatif  mengubah pertumbuhan dan perkembangan tanaman. BAP merupakan  golongan  sitokinin  yang  berfungsi dalam  pembelahan  sel.  Peranannya  yang terpenting  adalah  menginduksi  pembentukan kalus,  merangsang  pembentukan  tunas  dan memecah  dormansi  sel  (Hartmann  dan  Kester, 1983).  Hasil  penelitian  Maryani  dan  Zamroni (2005) menunjukkan bahwa media yang terbaik dalam penggandaan tunas  krisan adalah 1 ppm BAP dan 1 ppm IAA.
Arang  aktif  dapat  ditambahkan  pada berbagai  tahap  perkembangan    eksplan  yaitu tahap inisiasi, regenerasi, atau media perakaran. Arang aktif dalam media kultur berfungsi untuk mengasorbsi  senyawa-senyawa  toksik  yang dapat menghambat pertumbuhan dan embriogenesis eksplan dalam media regenerasi tanpa auksin dan merangsang perakaran dengan mengurangi  tingkat  cahaya  yang  sampai  pada eksplan  (Gunawan,  1987).  Hasil  penelitian Widiastuty  dan  Marwoto  (2004),  pemberian arang aktif dengan dosis 2 g/L ke dalam media MS  dapat  meningkatkan  pertumbuhan  tinggi plantlet,  luas  daun,  jumlah  tunas  anakan,  dan jumlah akar.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan Balai Perbenihan Tanaman
Kehutanan  dan  Perkebunan  Provinsi  Banten. Pelaksanaan  penelitian  dari  Bulan  Januari- Maret 2009.
Bahan  tanam  yang  digunakan  sebagai eksplan  adalah  tunas  krisan  ( Chrysanthemum daisy L.)    yang    telah    disubkulturkan    secara in    vitro selama      5  minggu.  Bahan  lain  yang digunakan  adalah  Media  Murashige-Skoog (MS),  zat  pengatur  tumbuh  BAP,  arang  aktif, aquades , detergen, alkohol dan spiritus.
Alat  yang  digunakan  untuk  membuat media  terdiri  dari autoclave ,  kompor  gas,  rak botol,  pipet,  neraca  analitik,  pH-meter,  labu takar, erlenmeyer, pengaduk, botol kultur, gelas ukur, hot plate , oven, magnetic stirrer , sprayer, aluminium  foil .  Penanaman  eksplan  dilakukan di  dalam laminar  air  flow ,  dengan  alat-alat seperti:  cawan  petri,  pinset,  lampu  spiritus, scalpel, plastik wrapping dan rak kultur dengan lampu fluorescent .  Alat  untuk  pengamatan diantaranya ballpoin, tabel pengamatan, penggaris, kertas tabel dan kamera.
Rancangan  yang  digunakan  adalah Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  dua faktor perlakuan, faktor pertama yaitu BAP dan faktor kedua adalah arang aktif. Faktor pertama adalah  konsentrasi  zat  pengatur  tumbuh  BAP (B)  yang  terdiri  dari  5  taraf  yaitu:  (1)  B0  = tanpa BAP, (2) B1 = 0,5 ppm BAP, (3) B2 = 1 ppm  BAP, (4)  B3 =  1,5 ppm  BAP, (5)  B4 =  2 ppm  BAP.    Faktor  kedua  adalah  perlakuan arang  aktif  (A)  yang  terdiri  dari  4  taraf  yaitu: (1)  A0  =  tanpa  arang  aktif  (2)  A1  =  1  g L -1 arang aktif, (3) A2 = 2 g L -1 arang aktif , (4) A3 =  3  g L -1 arang  aktif.  Kombinasi  perlakuan diulang  sebanyak  5  kali  sehingga  terdapat  100 unit  botol  percobaan  5  x  4  x  5  =  100),  setiap satuan  percobaan  terdapat  1  eksplan  sehingga total  eksplan  yang  digunakan  adalah  100 eksplan.
Data hasil pengamatan dilakukan analisis  ragam,  bila  dalam  uji  F  berbeda  nyata atau  berbeda  sangat  nyata,  maka  analisis dilanjutkan dengan Uji Jarak Berganda Duncan (DMRT) pada taraf signifikansi 5 % dan 1 %.

## Sterilisasi Botol dan Alat
Botol  kultur,  pinset,  dan  cawan  petri yang  akan  digunakan  dicuci  menggunakan detergen  kemudian  disimpan  dalam  rak  agar kering.  Setelah  kering  Botol  dan  alat-alat tersebut  disterilisasi  dalam autoclave yang sebelumnya  telah  dibungkus  rapi  dengan kertas, adapun alat-alat yang dibungkus terlebih dahulu adalah pinset, gagang skapel, dan cawan petri.  Temperatur  yang  digunakan  untuk sterilisasi dengan autoclave adalah dengan suhu 121 o C, tekanan 15 psi  selama 15 menit.
Laminar  air  flow sebelum  digunakan terlebih dahulu disterilkan dengan
menyemprotkan  alkohol  70  %  pada  dinding
dan  alasnya  kemudian  didiamkan  selama kurang lebih 30 menit.  Lampu ultraviolet  yang berada  didalamnya  dinyalakan  selama  30-60 menit dengan tujuan untuk membunuh kontaminan  yang  berada  di  dalam laminar  air flow .

## Pembuatan Media
Tiap  tanaman  membutuhkan  unsur makro  dan  mikro  seperti  nitrogen,  kalium, magnesium,  belerang,  fosfat,  besi,  mangan, seng,  tembaga,  boron,  molibdenum  dan  klor dalam bentuk ikatan kimia dengan perbandingan  yang  sesuai.  Komposisi  dari media MS terdiri dari unsur mineral yaitu unsur makro  dan  unsur  mikro,  unsur  organik  yaitu gula,  vitamin,  dan  asam  amino  (Komposisi media  MS  bisa  dilihat  pada  Lampiran  1). Media yang digunakan adalah media yang telah dimodifikasi  yaitu  media  MS  yang  telah diberikan  zat  pengatur  tumbuh  BAP  dan  arang aktif  sesuai  perlakuan.  Media  kemudian dimasukkan ke dalam botol-botol kultur dengan volume  masing-masing  lebih  kurang  20  ml, kemudian botol-botol media disterilkan dengan autoclave  pada  tekanan  15  psi,  suhu  121 o C selama  15  menit,  setelah  selesai  disimpan dalam ruangan dengan suhu kamar     20-27 o C.

## Penanaman Eksplan
Sumber eksplan adalah setek pucuk tanaman krisan hasil perbanyakan kultur jaringan yang telah tumbuh dalam media dasar MS tanpa ZPT selama 5 minggu.
Penanaman  dilakukan  pada laminar  air flow (kotak  tanam)  yang  telah  distrerilkan dengan  cara  disemprot  alkohol  70  %  dan sinar ultraviolet.  Pada  saat  kita  akan  melakukan proses penanaman eksplan didalam laminar air flow ,  tubuh  kita  harus  steril  dengan  cara menyemprotkan alkohol ke pakaian dan tangan
memakai  sarung  tangan,  serta  wajah  memakai masker.
Bahan  tanaman  hasil  perbanyakan dikeluarkan  dari  botol  kultur  dan  dimasukkan ke dalam cawan petri, bahan tersebut dipotong- potong  di  dalam  cawan  petri  sepanjang  1  cm. Potongan eksplan ditanam pada media perlakuan yang telah disiapkan, kemudian botol ditutup  direkat  dengan  plastik  wraping, selanjutnya  disimpan  di  rak  kultur.  Inkubasi kultur  dilakukan  dalam  ruangan  yang  suhunya antara  20-28 o C,  intensitas  cahaya  24  jam  per hari, selama 5 minggu.
Peubah  yang  diamati,  dilakukan  pada setiap  minggu  mulai  dari  1-5    minggu  setelah tanam  (MST)  dan  data  yang  diperoleh dilakukan analisis sidik ragam.
1.  Tinggi  tunas  (cm),  yaitu  dengan  cara mengukur  tinggi  tunas  yang  terbentuk pada  setiap  eksplan  dari  permukaan media  kultur  sampai  pada  titik  tumbuh tunas pada umur 1-5 MST.
2.  Jumlah  tunas,  yaitu  dengan  menghitung jumlah  tunas  yang  tumbuh  pada  setiap eksplan pada umur 5 MST.

## Hasil dan Pembahasan

## Tinggi Tunas Krisan
Hasil  sidik  ragam  peubah  tinggi  tunas umur  1-5  MST  akibat  penggunaan  BAP  dan arang  aktif  secara in  vitro menunjukkan pengaruh  yang  nyata  baik  secara  mandiri maupun  interaksi  keduanya.    Seperti  terlihat pada  Tabel  6,  Tinggi  tunas  terbaik  pada  umur 1-5  MST  yang  diberi  BAP  dan  arang  aktif secara in  vitro terdapat  pada  kombinasi perlakuan  A0B1  (0,5  ppm  BAP  tanpa  arang aktif).
Tabel 5. Pengaruh BAP dan arang aktif terhadap tinggi tunas eksplan krisan secara in vitro pada umur 1-5 MST (cm).
Arang aktif (g/l) BAP (ppm) 0 0,5 1 1,5 2 1 MST 0 1,35 ab 1,38 a 1,34 bc 1,36 ab 1,33 bc 1 1,35 ab 1,38 a 1,38 a 1,36 ab 1,36 ab 2 1,35 ab 1,35 ab 1,32 c 1,31 c 1,31 c 3 1,31 c 1,31 c 1,31 c 1,31 c 1,31 c KK (%) 1,559 2 MST 0 1,35 ab 1,38 a 1,34 bc 1,36 ab 1,33 bc 1 1,35 ab 1,38 a 1,38 a 1,36 ab 1,36 ab 2 1,35 ab 1,35 ab 1,32 c 1,31 c 1,31 c 3 1,31 c 1,31 c 1,31 c 1,31 c 1,31 c KK (%) 1,757 3 MST 0 1,36 bcd 1,40 a 1,34 cdef 1,36 bcd 1,33 def 1 1,35 cde 1,39 ab 1,40 a 1,37 bcd 1,37 bc 2 1,36 cde 1,35 cde 1,32 ef 1,31 f 1,31 f 3 1,31 f 1,31 f 1,31 f 1,31 f 1,31 f KK (%) 2,097 4 MST 0 1,37 cd 1,46 a 1,36 cde 1,38 cd 1,34 cde 1 1,36 cde 1,43 ab 1,43 ab 1,39 bc 1,38 cd 2 1,37 cd 1,35 cde 1,33 de 1,31 e 1,31 e 3 1,31 e 1,31 e 1,31 e 1,31 e 1,31 e KK (%) 2,541 5 MST 0 1,38 cd 1,48 a 1,37 cde 1,40 bc 1,36 cde 1 1,37 cde 1,45 ab 1,45 ab 1,40 bc 1,39 c 2 1,37 cd 1,36 cde 1,33 de 1,31 e 1,31 e 3 1,31 e 1,31 e 1,31 e 1,31 e 1,31 e KK (%) 2,920
Keterangan : Angka yang diikuti dengan huruf yang sama pada kolom  dan baris      yang sama tidak berbeda nyata pada uji DMRT dengan α 0.05. Angka-angka merupakan hasil transformasi 3 kali dengan √ x+0,5.
Interaksi  antara  BAP  dan  arang  aktif mempengaruhi  tinggi  eksplan  disajikan  pada Tabel 5. Tinggi  eksplan terbaik pada  umur 1-5 MST  terdapat  pada  perlakuan  A0B1  (0,5  ppm BAP  tanpa  arang  aktif)  (Tabel  6).  Hal  ini karena  BAP  termasuk  golongan  sitokinin dimana  peran  sitokinin  dalam  kultur  jaringan adalah mendorong pembelahan sel dan proliferasi  tunas  dari  eksplan  tunas  pucuk  atau setek mikro (Wattimena, 1992).
Faktor  tunggal  BAP  menunjukkan bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  BAP  maka
tinggi eksplan semakin rendah, yang merupakan  hasil  dari  pertumbuhan  yang lambat.  Menurut  Sofia  (2007),  menyatakan bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  BAP  yang diberikan  akan  menaikkan  diameter  batang tanaman tetapi menurunkan tinggi tanaman.
Faktor tunggal arang aktif menunjukkan hasil  bahwa  semakin  tinggi  arang  aktif  maka pertumbuhan  tunas  semakin  lambat.  Menurut Gunawan  (1987),  Arang  aktif  dalam  media kultur  berfungsi  untuk  mengasorbsi  senyawa- senyawa  toksik  yang  dapat  menghambat
pertumbuhan dan embriogenesis eksplan dalam media regenerasi tanpa auksin dan merangsang
perakaran  dengan  mengurangi  tingkat  cahaya yang sampai pada eksplan.
A B
C
Gambar 3. Jumlah tunas, dihitung berdasarkan jumlah tunas yang tumbuh. (A) tunas adventif (B) tunas lateral (C) tunas aksilar
Tabel 6. Pengaruh BAP dan arang aktif terhadap jumlah tunas eksplan krisan secara in vitro pada umur 5 MST (buah).
Arang aktif (g/l) BAP (ppm) Rata-rata 0 0,5 1 1,5 2 5 MST 0 1,45 1,44 1,42 1,46 1,42 1,44 a 1 1,42 1,37 1,37 1,39 1,43 1,40 b 2 1,40 1,42 1,40 1,42 1,41 1,41 ab 3 1,44 1,43 1,43 1,41 1,39 1,42 ab Rata-rata 1,43 a 1,42 a 1,41 a 1,42 a 1,41 a KK (%) 3,4429
Keterangan  :  Angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama  pada  kolom  dan  baris  yang  sama  tidak berbeda nyata pada uji DMRT dengan α 0.05. Angka-angka merupakan hasil transformasi
3 kali dengan √ x+1.

## Jumlah Tunas Krisan
Hasil  analisis  keragaman  perbanyakan krisan  secara in  vitro dengan  pemberian  BAP dan  arang  aktif  menunjukkan  pengaruh  pada peubah  jumlah  tunas  yang  tidak  berbeda  nyata secara  interaksi  namun  berbeda  nyata  secara mandiri.  Pengaruh  pemberian  BAP  dan  arang aktif terhadap jumlah tunas krisan dapat dilihat pada Tabel 7.
Interaksi  antara  BAP  dan  arang  aktif tidak  berpengaruh  nyata  terhadap  peubah jumlah  tunas  sejak  1-5  MST.  Faktor  tunggal BAP  terlihat  tidak  berbeda  nyata  terhadap peubah  jumlah  tunas.  Berdasarkan  Tabel  6, diketahui  bahwa  jumlah  tunas  tertinggi  pada umur  5  MST  terdapat  pada  perlakuan  tanpa BAP  (1,43  buah)  dan  terendah  pada  perlakuan dengan konsentrasi 1 ppm BAP dan       2 ppm BAP  (1,41  buah).  Menurut  Sofia  (2007),
menyatakan  bahwa  pemberian  zat  pengatur tumbuh  2  ppm BAP  berpengaruh  nyata terhadap  jumlah  tunas  dan  meningkatkan jumlah tunas tanaman, namun pada konsentrasi BAP  yang lebih tinggi dari 2 ppm BAP terjadi penurunan jumlah tunas yang terbentuk.
Faktor  tunggal  arang  aktif  berpengaruh nyata terhadap peubah jumlah tunas. Berdasarkan Tabel 6, diketahui bahwa perlakuan  tanpa  arang  aktif  menghasilkan jumlah tunas tertinggi (1,44 buah) pada umur 5 MST,  sedangkan  perlakuan  1  g/L  arang  aktif menghasilkan  jumlah  tunas  terendah  (1,40 buah).  Hal  ini  disebabkan  karena  fungsi  arang aktif  dapat  mengadsorbsi  zat  pengatur  tumbuh sehingga  mencegah  pertumbuhan  kalus  dan merangsang  perakaran  dengan  mengurangi tingkat  cahaya  yang  sampai  ke  bagian  eksplan yang terdapat dalam media (Gunawan, 1987).

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
1. Pemberian  BAP  dengan  konsentrasi  0,5 ppm menghasilkan tinggi tunas terbaik pada umur  1-5  MST  pada  eksplan  krisan  yang dikulturkan  secara in  vitro, sedangkan jumlah tunas terbaik dengan tanpa pemberian BAP (0 ppm BAP).
2. Pemberian  0  g/L  arang  aktif  (tanpa  arang aktif) menghasilkan tinggi tunas dan jumlah tunas  terbaik  pada  umur  1-5  MST  pada eksplan  krisan  yang  dikulturkan  secara in vitro .
3. Pemberian  BAP  dengan  konsentrasi  0,5 ppm  dan  tanpa  pemberian  arang  aktif memberikan  tinggi  tanaman  terbaik  pada umur  1-5  MST  pada  eksplan  krisan  yang dikulturkan secara in vitro .

## Saran
1. Dianjurkan  penggunaan  BAP  0,5  ppm tanpa  arang  aktif  pada  perbanyakan  krisan secara in vitro .
2. Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut terhadap  penggunaan  ZPT  jenis  yang  lain sebagai  bahan perbandingan  untuk  mencari hasil  yang  lebih  mantap  pada  perbanyakan krisan secara in vitro .

## DAFTAR PUSTAKA
Abidin,  Z.  1990.  Dasar-dasar  tentang  zat pengatur tumbuh. Angkasa. Bandung. Anonimous. 2007. Kultur jaringan. http/www.Agrobiogen.co.id. Diakses tanggal 16 September 2008. Anonimous. 2009. Krisan. http://www.ibujempol.com/bunga- krisan/. Diakses tanggal 22 Januari 2009. Anonimous. 2009. Krisan.http://www.ristek.go.id/krisan/. Diakses tanggal 22 Januari 2009. Arie,  C.  2004.  Pengaruh  BAP  dan  IAA terhadap perbanyakan tanaman kubis hias
( Brassica oleraceae sub spesies acephala )  secara in  vitro .  Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Daisy,  P.S.,  dan  A.  Wijayani.  1994.  Teknik kultur jaringan, pengendalian dan
petunjuk  perbanyakan  tanaman  secara vegetatif modern. Kanisius. Yogyakarta. Farid, M. 2003. Perbanyakan  tebu ( Saccharum officinarum L.)  secara in  vitro pada berbagai  konsentrasi  IBA  dan  BAP. Jurusan Budidaya Pertanian. Unhas.
Gunawan,  L.W.  1987.  Teknik  kultur  jaringan.
Pusat  Antar  Universitas  Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Gunawan,  L.W. 1992. Teknik  Kultur Jaringan. Pusat  Antar  Universitas  Bioteknologi. Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Hartmann,  H.T.,  dan  D.E.  Kester.  1983.  Plant propagation,  principles  and  practise 4 th Ed.  Prentice  Hall  Inc.  Englewood Cliffs. New Jersey.
Maryani, Y., dan Zamroni. 2005. Penggandaan tunas  krisan  melalui  kultur  jaringan multiplication  of  crisan  bud  through tissue  culture .  Balai  Benih  Induk. Magelang. Jawa tengah.
Novita,  V.  2006.  Kultur in  vitro jarak  pagar ( Jatropha curcas L.) melalui penggunaan pemadat hidrogel (aquasorb TM ) dan  gula trehalosa  (treha TM ).  Institut  Pertanian
Bogor. Bogor. Pararaja, A. 2008. Karbon aktif . http//www.google.co.id/arang aktif/. Diakses tanggal 16 September 2008. Rukmana,  R.,  dan  A.  E.  Mulyana.  1997. Krisan. Kanisius. Yogyakarta. Santoso,  U.,  dan  F.  Nursandi.  2003.  Kultur jaringan tanaman. UMM Press. Malang.
Sofia,  D.  2007.  Pengaruh  berbagai  konsentrasi BAP  dan cycocel terhadap  pertumbuhan embrio  kedelai  ( Glycine  max L.  Merr) secara in  vitro .  Fakultas  Pertanian, Universitas Sumatera Utara. Medan.
Susiyanti.  2008.  Materi  pelatihan  kultur jaringan.  Fakultas  Pertanian,  Universitas Sultan Ageng Tirtayasa Serang. Serang.
Wattimena, G.A. 1992. Biotekhnologi tanaman. Laboratorium Kultur Jaringan. Depdikbud Dirjen DIKTI PAU Biotekhnologi IPB. Bogor. Widiastuty,  D.,  dan  Marwoto,  B.  2007. Pengaruh  berbagai  sumber  arang  dalam media kultur in vitro terhadap pertumbuhan  plantlet oncidium .  Balai Penelitian Tanaman Hias. Cianjur.