Profil protein lambung tikus model ulkus peptikum hasil induksi aspirin dengan terapi ekstrak daun katuk ( Sauropus androgynus )
Janice Enola 1 , Sasangka Prasetyawan 2 , Dian Vidiastuti 3, *
1 Program Studi Pendidikan Dokter Hewan, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Brawijaya, Malang
2 Laboratorium Biokimia, Fakultas MIPA, Universitas Brawijaya, Malang
3 Bagian Klinik Veteriner, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Brawijaya, Malang
ABSTRAK: Ulkus  peptikum  dapat menyebabkan  kerusakan  jaringan  yang  menginduksi  terjadinya  perubahan  profil  protein berupa Heat Shock Proteins (HSPs). Penelitian ini memelajari efek antioksidan flavonoid daun katuk untuk pengobatan ulkus peptikum  hasil  induksi  aspirin  pada  tikus.  Tikus  putih  ( Rattus  norvegicus )  sebanyak  20  ekor  dibagi  menjadi  5  kelompok perlakuan  yaitu  kontrol  positif  (ulkus  peptikum),  kontrol  negatif,  terapi  P1  (8,1  mg/100  gram  BB),  terapi  P2  (16,2  mg/100 gram  BB),  dan  terapi  P3  (24,3  mg/100  gram  BB).  Perlakuan  diberikan  selama  14  hari.  Induksi  ulkus  peptikum  dilakukan dengan pemberian aspirin 200 mg/kg BB selama 5 hari secara peroral.  Isolasi protein lambung dan penentuan profil protein dilakukan  dengan  metode SDS-PAGE. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  protein  yang  muncul  adalah  HSP70,  HSP60, HSP47,  dan  ubiquitin.  HSP47dengan  ukuran  protein  47  kDa  muncul  pada  kelompok  P2  dan  P3  sedemikian  sehingga  dapat diduga sebagai marker dalam proses kesembulan ulcer pada kasus ulkus peptikum.
Keywords: pita protein, SDS PAGE, ulkus peptikum, daun katuk

## ■ PENDAHULUAN
Ulkus  peptikum  adalah  luka  kecil  pada  mukosa  esofagus, lambung dan duodenum (Torpy et al , 2012). Kejadian ulkus lambung pada hewan dilaporkan terjadi pada anjing (Parrah et  al ,  2013)  dan  kuda  (Nieto,  2102).  Produksi  asam lambung  berlebih  menyebabkan  inflamasi  dan  peningkatan Reactive  Oxygen  Species (ROS)  penyebab  kerusakan jaringan sehingga merubah profil protein berupa Heat Shock Proteins (HSPs). Protein tersebut memfasilitasi sintesis dan perbaikan  protein   sel  (Fornai et  al ,  2011).  Daun  katuk memiliki  flavonoid  yang  berpotensi  sebagai  antioksidan kuat  dengan  nilai  IC 50 80,81  ppm  (Zuhra  dkk,  2008). Penelitian  ini  bertujuan  memperlajari  efek  antioksidan flavonoid daun katuk untuk pengobatan ulkus peptikum.

## ■ BAHAN DAN METODE
Hewan coba . Tikus putih ( Rattus norvegicus ) strain Wistar jantan,  150-200  g,  umur  8-12  minggu,  sebanyak  20  ekor dibagi dalam 5 kelompok yaitu kontrol negatif (K-), kontrol positif (induksi ulkus peptikum, K+), P1 terapi ekstrak daun katuk  (8,1  mg/100  gram  BB),  P2  (16,2  mg/100  gram  BB) dan P3 (24,3 mg/100 gram BB) sekali sehari selama 14 hari. Induksi  ulkus  peptikum  dengan  aspirin  200  mg/kg  BB selama  5  hari  secara  peroral  (Acarturk et  al ,  2014).  Daun katuk diekstrak dengan pelarut etanol.
Penentuan  profil  protein  metode SDS-PAGE . Hewan coba  dieuthanasi  secara  dislokasi  leher.  Lambung  diambil dan  dicuci  dalam  NaCl  fisiologis  0,9%,  lalu  dimasukkan
PBS-azida  pH  7,4.  Lambung  ditimbang  0,50  mg,  ditambah 1 mL larutan PBS-Tween : PMSF  (9 : 1),  dan sedikit pasir kuarsa  lalu  digerus  dengan  mortar  yang  diletakkan  di  atas balok  es.  Homogenat  ditambah  2  mL  larutan  PBS-Tween  : PMSF  dalam  mikrotube  untuk  dihomogenkan  dan disentrifus  15  menit  (6000  rpm).  Supernatan  diambil, dimasukkan  mikrotube  dan  ditambah  etanol  absolut  dingin 1:1  dan  biarkan  semalam.  Sentrifugasi  campuran  pada 10.000  rpm  15  menit.  Endapan  dikeringkan  dan  ditambah larutan 0,02 M Tris-HCl pH 6,5 dingin perbandingan 1:1.
Persiapan  gel .  Plat  gel  dibuat  dua  lapis  yaitu  gel  sebagai tempat  sampel  ( Stacking  gel )  dan  sebagai  media  untuk pemisahan  protein  ( Separating  gel ). Separating  gel dituangkan dalam cetakan. Berikutnya Stacking gel dituang di  atas separating  gel yang  telah  memadat  dan  dipasang sisir hingga terbentuk sumuran gel.
Running sampel .  Ekstrak  kasar  isolasi  lambung  150  μl, ditambahkan  150  μl Reducing  Sampel  Buffer (RSB),  dan dipanaskan  pada  100  °C  (5  menit).  Setelah  dingin,  20  μl sampel  dimasukkan  sumuran,  salah  satu  sumuran  gel  diisi protein  standar marker .  Perwarnaan  dengan  merendam  gel dalam  larutan staining (30-60  menit).  Warna  latar dihilangkan dengan merendam gel dalam larutan destaining .
ISSN 2581-2416 DOI: http://dx.doi.org/10.29244/avl.2.1.9-10 http://journal.ipb.ac.id/index.php/arshivetlett
Diterima: 08-11-2017 | Direvisi: 10-12-2017 | Disetujui: 09-01-2018 © 2018 CC-BY-SA. Ini adalah artikel Open Access yang didistribusikan ber- dasarkan ketentuan dari Creative Commons Attribution ShareAlike 4.0 Inter- national License ( https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/ ).
Penentuan  berat  molekul  (BM). Penentuan  BM dilakukan dengan menghitung nilai Rf ( Retardation factor ). Kurva  standar  dibuat  dengan  Rf  sebagai  sumbu  X  dan logaritma berat molekul sebagi sumbu Y.

## ■ HASIL DAN PEMBAHASAN
Protein 72 kDa (HSP70) terekspresi pada kelompok K+, P1, P2 dan P3. HSP70 muncul pada sel yang stres (Stetler et al, 2010).  HSP70  berperan  dalam  sistem  pertahanan  mukosa lambung  dari  kematian  sel  oleh Tumor  Necrosis  Factor Alpha (TNF-α)  dan  terekspresi  akibat  radikal  bebas (Tsukimi  and  Okabe,  2001; Burkat et al ,  2000).  Protein 62 kDa  (HSP60)  muncul  pada  semua  perlakuan.  HSP60 merupakan  protein  mitokondria  sel  eukariot  untuk  regulasi pelipatan  protein,  apoptosis,  interaksi  molekul,  dan  normal pada  sel  lambung  (Cappello et  al ,  2008).  Protein  47  kDa (HSP47) muncul pada kelompok P2 dan P3 (Gambar 1) dan diduga sebagai marker proses kesembulan ulkus peptikum.
Gambar 1. Ekspresi protein lambung tikus model ulkus peptikum dengan metode SDS PAGE  dengan berat molekul 72 kDa, 62 kDa, 47 kDa dan 9 kDa. M:marker, K-:kontrol negatif, K+:kontrol positif,
P1:perlakuan 1, P2:perlakuan 2, P3:perlakuan 3
HSP47 berperan spesifik dalam biosintesis kolagen pada proses  kesembuhan  luka  (Ishida  and  Nagata,  2011). Pembentukan  kolagen  adalah  tahap  penting  dalam pembentukan  jaringan  granulasi,  sehingga  terekspresi  pada sel yang mengalami perbaikan (Tsukimi and Okabe, 2001). Daun katuk ( Sauropus androgynus ) mengandung flavonoid yang berfungsi sebagai antioksidan. Antioksidan menangkap  radikal bebas (gugus hidroksil) pada kerusakan lambung  akibat  induksi  aspirin.  Gugus  hidroksil  senyawa flavonoid memberikan atom hidrogen  kepada radikal bebas sehingga menjadi stabil dan proses kerusakan lipid lambung terhenti  (Treml  and  Smejkal,  2016).  Gugus  hidroksil  yang stabil  menghambat  aktivasi Nuclear  Factor  kappa  B (NF- kB) yaitu faktor transkripsi dari sitokin pro-inflamasi seperti TNF-α, sehingga pelepasan TNF-α berkurang (Fornai et al. , 2011).  Protein  9  kDa  (ubiquitin)  terekspresi  pada  semua perlakuan  yang  secara  normal  terdapat  pada  sitoplasma semua  sel  eukariotik  (Chiechanover,  1994).  Fungsi  utama ubiquitin  dalam  regulasi  protein  adalah  degradasi  protein dengan  kompleks  multienzimatik  pada  kasus  kesalahan pelipatan  protein,  kerusakan  atau  malfungsi  protein (Herrmann et al , 2007)

## ■ SIMPULAN
Terapi  ekstrak  daun  katuk  ( Sauropus  androgynus )  dosis 16,2  mg/100  gram  BB  dan  24,3  mg/100  gram  mampu menginduksi  ekspresi  protein  marker  kesembuhan  ulkus dengan berat molekul 47 kDa.

## ■ INFORMASI PENULIS

## Penulis untuk Korespondensi
* DV: dianvidiastuti@gmail.com. Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Brawijaya. Jalan MT Haryono, Kota Malang, Jawa Timur.

## ■ UCAPAN TERIMA KASIH
Klinik  Hewan,  Fakultas  Kedokteran  Hewan  Universitas Brawijaya atas bantuan pendanaan publikasi artikel

## ■ PUSTAKA ACUAN
Acarturk  G,  Senol  A,  Akin  M,  Sutcu  R,  Sahin  O,  Isler  M.  2014.
The protective effects of kefir in aspirin induced gastric muco- sal damage: an experimental study. Acta Medica Mediterranea. 30(4): 875-879.
Burkart  V,  H.  Liu,  K.  Bellmann,  D.  Wissing,  M.  Jaattela,  M.
Cavallo.  2000.  Natural  resistance  of  human  beta  cells  toward nitric oxide is mediated by heat shock protein 70. J Biol Chem 27 5:19521-528.
Cappello  F,  Everly  C,  Lorenzo  M,  Giovanni  Z,  and  Alberto  J. 2008.  Hsp60  expression,  new  locations,  functions,  and perspectives  for cancer  diagnosis  and  therapy.  Journal  Cancer Biology and Therapy, 1555-8576.
Ciechanover A. 1994. The ubiquitine proteasome proteolytic path- way. Cell. 79:13-21
Fornai M, Antonioli L, Colucci R, Tuccori M, Blandizzi C.  2011.
Pathophysiology  of  gastric  ulcer  development  and  healing: molecular mechanisms and novel therapeutic options. In Peptic Ulcer Disease. InTech.
Herrmann J, Lilach O, and Amir L. 2007. Ubiquitin and Ubiquitin- Like  Proteins  in  Protein  Regulation.  Ahajournals;  100:1276- 1291.
Ishida Y, Nagata K. 2011. 9 Hsp47 as a collagen-specific molecu- lar chaperone. Methods in enzymology. 499:167.
Nieto  J.  2012.  Diagnosing  and  treating  gastric  ulcers  in  horse.
Center  for  equine  health-the  horses  report.http://vetmed- ucdavis.edu
Parrah JD, Moulvi BA, Gazi MA, Makhdoomi DM, Athar H, Dar S,  Mir  AQ.  2013.  Gastric  ulceration  in  dog:  a  review.  Vet world. 6(7): 449-454
Stetler  RA,  Gan  Y,  Zhang  W,  Liou  AK,  Gao  Y,  Cao  G,  Chen  J.
2010.  Heat  shock proteins:  cellular  and  molecular  mechanism in the CNS. Progress in neurobiology.  92(2): 184-211.
Torpy JM, Lynm C, Golub RM. 2012. Peptic ulcer disease. JAMA.
307(12):1329
Tsukimi  Y,  Okabe  S.  2001.  Recent  advances  in  gastrointestinal pathophysiology:  role  of  heat  shock  proteins  in  mucosal  de- fense and ulcer healing. Biological and Pharmaceutical Bulle- tin. 24(1):1-9.
Zuhra  CF,  Tarigan  JB,  Sihotang  H.  2008.  Aktivitas  Antioksidan Senyawa  Flavonoid  dari  Daun  Katuk  ( Sauropus  androgynus (L) Merr). Jurnal Biologi Sumatera. 3(1): 7-10.