UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOl DAUN KAMBOJA ( Plumeria sp ) TERHADAP BAKTERI Escherichia coli SECARA IN VITRO
Susanti Erikania 1 , Yetty Hariningsih 2
1Program Studi DIII Farmasi, Stikes Bhakti Husada Mulia Madiun 2Program Studi S1 Farmasi, Stikes Bhakti Husada Mulia Madiun
E-mail : newerikania@gmail.com

## ABSTRAK
Tanaman  obat  menjadi  sumber  utama  ditemukannya  senyawa  kimia  baru  yang  memiliki  khasiat secara  farmakologi,  salah  satunya  adalah  tanaman  kamboja  ( Plumeria  sp ).  Tanaman  kamboja  adalah  salah satu tanaman tradisional yang dilaporkan mempunyai berbagai khasiat, antara lain daunnya sebagai pencahar, antigatal dan antibakteri, buah dan kulit batangnya dilaporkan berefek antiinflamasi. Tujuan dari penelitian ini adalah    mengetahui  aktivitas  daun  kamboja  sebagai  antibakteri  terhadap Escherichia  coli secara in  vitro . Penelitian  ini  menggunakan  metode  difusi  cakram  dengan  5  kelompok  perlakuan  meliputi  kontrol  negatif yaitu DMSO dengan konsentrasi 10 %, kontrol positif yaitu kloramfenikol konsentrasi 30 µg/disk dan ekstrak etanol  daun  kamboja  ( Plumeria  sp )  masing-masing  sebesar  25  %,  50  %  dan  100  %.  Media  yang  digunakan adalah  media  nutrient  agar  (NA).  Media  steril  yang  telah  diinokulasi  dengan Escherichia  coli selanjutnya diberi perlakuan dengan kertas cakram yang terdiri dari kontrol negatif, kontrol positif dan sampel, kemudian diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam.  Selanjutnya  dilakukan  pengukuran  zona  hambat  menggunakan jangka  sorong.  Penelitian  menunjukkan  adanya  zona  hambat  pada  kelompok  perlakuan  ekstrak  etanol  daun kamboja    pada  konsentrasi  25%,  50%,  100  %  dan  kontrol  positif,  dan  tidak  tedapat  zona  hambat  pada kelompok perlakuan dengan kontrol negatif. Ekstrak etanol daun kamboja mampu menghambat pertumbuhan Escherichia  coli dengan  daya  hambat  minimal  adalah  konsentrasi  25%  yaitu  menghasilkan  zona  hambat sebesar  7,13  mm,  konsentrasi  50  %  menghasilkan  zona  hambat  sebesar  10,17  mm  dan  konsentrasi  100% memiliki nilai zona hambat paling besar yaitu 14,50 mm.
Kata Kunci : Ekstrak etanol daun kamboja, Metode difusi cakram, Streptococcus mutans , Uji aktivitas antibakteri

## ABSTRACT
Medicinal  plants  are  the  main  source  of  the  discovery  of  new  chemical  compounds  that  have pharmacological  properties,  one  of  which  is  frangipani  (Plumeria  sp).  Frangipani  plants  are  one  of  the traditional plants that are reported to have various benefits, including laxative, and antibacterial leaves, fruit and bark reported to have anti-inflammatory effects. The purpose of this study was to determine the activity of frangipani leaves as an antibacterial against Escherichia coli in vitro. This study uses a disk diffusion method with  5  treatment  groups  including  negative  control,  namely  DMSO  with  a  concentration  of  10%,  positive control  that  is  chloramphenicol  concentration  of  30  µg  /  disk  and  ethanol  extract  of  frangipani  leaves (Plumeria sp) each by 25%, 50% and 100% . The media used is nutrient agar (NA). Sterile media that have been inoculated with Escherichia coli are then treated with disc paper consisting of negative controls, positive controls and samples, then incubated at 37 ° C for 24 hours. Furthermore, inhibition zone measurements were made using calipers. The study showed that there were inhibitory zones in the treatment group of frangipani leaf ethanol extract at concentrations of 25%, 50%, 100% and positive control, and there were no inhibitory zones  in  the  treatment  group  with  negative  controls.  Ethanol  extract  of  frangipani  leaves  can  inhibit  the growth of Escherichia coli with a minimum inhibitory concentration of 25% which produces a inhibition zone of 7.13 mm, a concentration of 50% produces an inhibitory zone of 10.17 mm and a concentration of 100% has the greatest inhibition zone value of 14 50 mm.
Keywords: Frangipani leaf ethanol extract, Disc diffusion method, Streptococcus mutans, activity test antibacterial

## PENDAHULUAN
Indonesia  adalah  negara  beriklim tropis  yang  kaya  akan  keanekaragaman hayati  sehingga    terkenal  akan  kekayaan flora berupa tanaman obat. Obat tradisional  berasal  dari  bahan  alam  yang terbukti  secara  empiris  dapat  digunakan sebagai  upaya  preventif,  promotif  dan rehabilitative  (Ningsih  DR,  2014).  Obat tradisional  dari  bahan  alam  memiliki kelebihan dibandingkan obat-obat modern yaitu    dinilai  lebih  aman  dari  pada penggunaan obat modern. Hal ini disebabkan karena obat tradisional memiliki  efek  samping  yang  relatif  lebih sedikit  dari  pada  obat  modern  (Sari, 2006).  Salah  satu  tanaman  yang  dapat dimanfaatkan  untuk  upaya  penyembuhan penyakit  yang  disebabkan  infeksi  adalah tanaman  kamboja  ( Plumeria  acuminata ).
Tanaman  ini  adalah  salah  satu  tanaman tradisional Indonesia yang pernah dilaporkan  mempunyai  berbagai  khasiat, antara lain daunnya sebagai pencahar dan antigatal,  buah  dan  kulit  batangnya dilaporkan berefek antiinflamasi (Gupte et
al ,  2006).  Sedangkan  ekstrak etanol  daun
kamboja ( Plumeria
acuminata ) dilaporkan  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri  pada Streptococcus  mutans
(Putra AH dkk, 2017) dan Staphylococcus epidermidis (Saputri devita, 2018)
Adapun  tujuan  dari  penelitian  ini adalah untuk mengetahui aktivitas
antibakteri  lainnya  dari  daun  kamboja ( Plumeria  acuminata )  terhadap  bakteri Escherichia  coli. Dalam  penelitian  ini, akan  dilakukan  ekstraksi  daun  kamboja secara  maserasi  dengan  pelarut  etanol  96 %  kemudian  dilakukan  uji  aktivitas antibakteri  secara  difusi  mengetahui Konsentrasi  penghambatan  paling  tinggi dan  penentuan  golongan  senyawa  kimia apa  saja  yang  terdapat  dalam  ekstrak etanol daun kamboja.
.

## METODE

## Alat dan bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  beaker glass,  erlenmeyer,  gelas  ukur,  aluminium foil, timbangan analitik, oven, rotaryevaporator ,  batang  pengaduk,  labu ukur,  serbet,  sarung  tangan,  masker, cawan  petri,  ose  bulat,  tabung  rekasi,  rak tabung reaksi dan incubator.
Bahan yang digunakan adalah simplisia  daun  kamboja,  etanol  96  %, media  nutrient  agar,  DMSO,  Cakram kloramfenikol dan cakram kosong.

## Pembuatan ekstrak
Daun  kamboja  ( Plumeria  acuminata ), dibersihkan,  disortasi  kering  dan  basah, dikeringkan  menggunakan  oven  pada suhu  50 0 C  sampai  diperoleh  kadar  air dibawah  10%,  diserbuk  menggunakan blender sampai diperoleh serbuk.
Serbuk  yang  diperoleh  diekstraksi secara  maserasi  menggunakan  etanol  96 %  selama  3  hari,  disaring,  dipekatkan menggunakan rotaryevaporator sampai diperoleh ekstrak kental.

## Identifikasi fitokimia
1) Steroid/triterpen.
Sampel ekstrak kental ditambahkan 20 tetes asam asetat anhidrida dan 1 tetes asam sulfat pekat (pereaksi
Liebermann Burchard) terbentuk warna biru atau biru hijau menunjukkan adanya steroid, sedangkan warna merah, merah muda atau ungu menunjukkan adanya triterpenoid (Harborne, 1987).
2) Flavonoid.
Sampel  ditambah  dengan  sedikit  air dalam  tabung  reaksi,  ditambahkan sedikit  logam  magnesium  dan  5  tetes HCl  2  N,  dipanaskan  selama  5–10 menit,  disaring  panas–panas  dan dibiarkan dingin, filtrat ditambah amil alkohol,  dikocok  kuat.  Reaksi  positif dengan  terbentuknya  warna  merah pada lapisan amil alkohol (Depkes RI,
1986).
3) Alkaloid.
Ekstrak  dibasakan  dengan  amonia, ditambahkan kloroform. Cairan kloroform disaring, filtrat ditempatkan dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan  HCl  2  N,  dikocok,
sampai  terjadi  pemisahan.  Filtrat ditambah pereaksi Dragendorff menunjukkan  adanya  endapan  atau kekeruhan  berwarna  hingga  coklat, dan filtrat lainnya ditambahkan pereaksi Mayer menunjukkan endapan atau kekeruhan berwarna putih.
4) Saponin.
1  g  ekstrak  ditambah  dengan  air hangat,  dikocok  vertikal  selama  10 detik,  dibiarkan  selama  10  detik. Pembentukan  busa  setinggi  1–10  cm yang  stabil  selama  tidak  kurang  dari 10 menit, menunjukkan adanya saponin.  Pada  penambahan  1  tetes HCl  2  N,  busa  tidak  hilang  (Depkes RI, 1994).
5) Tanin .
Sebanyak  200  mg  ekstrak  dilarutkan dengan  20  ml  air  panas  lalu  dikocok hingga  homogen. setelah  dingin ditambah  FeCl 3 3  %  menunjukkan hasil positif jika terbentuk larutan biru kehitaman atau hijau kecoklatan.

## Uji aktivitas antibakteri
1) Pembuatan larutan uji
Dibuat larutan uji dari masing-masing ekstrak yaitu konsentrasi  25 %, 50 % dan  100  %.  Larutan  uji  tersebut dilarutkan dengan DMSO.
2) Uji aktivitas antibakteri
a. Pertama,  Pembuatan  media  agar miring  yaitu  ditimbang  nutrient  agar
(NA)  sebanyak  2,8  g  ditambahkan
100 ml aquades, dipanaskan menggunakan hot plate sampai mendidih.  dituang  5  ml  NA  ke  dalam tabung  reaksi  steril,  disterilkan  dalam autoclave selama  15  menit  dengan suhu  121 0 C,  diletakkan  dengan kemiringan  yang  diinginkan  lalu tunggu hingga mengeras.
b. Kedua,  penanaman  bakteri  uji  pada media  agar  miring.  Kultur  bakteri Escherichia coli diambil menggunakan jarum ose bulat, digoreskan  rapat  pada  media  agar miring  secara  zig-zag  dari  bawah sampai  atas,  diinkubasi  pada  suhu kamar (37 0 C) selama 24 jam.
c. Ketiga pembuatan media nutrient agar (NA). Menimbang media NA sebanyak 20 gram, kemudian ditambahkan aquades 1000 ml, diaduk dan  dipanaskan  menggunakan  hot plate,  di  autoclave  selama  15  menit dengan suhu 121 0 C. Kemudian media dituang  kedalam  cawan  petri  steril sebanyak  15  ml  dan  dilakukan  di dalam LAF.
d. Keempat  uji  daya  hambat.  Merendam cakram  kosong  selama  5  menit  pada masing-masing  larutan  uji  sebagai sampel  dan  DMSO  sebagai  kontrol negatif. Kontrol positif yang digunakan  adalah  kloramfenikol  dan dilakukan 3 kali replikasi. Selanjutnya
diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu 37 0 C.  Amati  zona  hambatan  dengan melakukan  pengukuran  menggunakan jangka  sorong.  Diameter  zona  bening dalam satuan millimeter (mm)
(Romas, Rosyida, & Aziz, 2015).
b. Analisis data
Analisa  data  secara  statistik,  uji distribusi normal (Kolmogorov- Smirnov)  akan  digunakan  untuk menguji  apakah  data  terdistribusi normal  atau  tidak.  Jika  data  tidak terdistribusi  normal  (p  <  0,05),  maka dilanjutkan dengan uji non parametik. Jika  data  terdistribusi  normal  (p  > 0,05),  maka  dilanjutkan  dengan  uji parametrik  analisis  varians  satu  arah (ANOVA). Uji dilanjutkan dengan tes Post  Hoc  untuk  melihat  apakah terdapat  perbedaan  di  antara  masing- masing kelompok perlakuan.
Sedangkan  untuk  analisis  korelasi antara besarnya zona hambat terhadap aktivitas  antibakteri  akan  dilakukan dengan  analisis  uji  korelasi  taraf kepercayaan 95% (Sugiyono, 2008)

## HASIL DAN DISKUSI
Proses ekstraksi daun kamboja ( Plumeria  acuminata )  dilakukan  secara maserasi  karena  metode  ini  merupakan metode  ekstraksi  yang  sederhana  dengan cara  merendam  serbuk  simplisia  dengan pelarut  etanol  96  %  perbandingan  1  :  10
selama  3x  24  jam.  Ekstraksi  maserasi daun  kamboja  ( Plumeria  acuminata ) mendapatkan  berat  ekstrak  sebesar  50,22 gram  dengan  rendemen  sebesar  47,76  % yang ditunjukkan pada tabel 3.
Tabel 1. Hasil Ekstraksi
No Berat kering (gram) Berat ekstrak (gram) Rendemen (%) 1 105,14 50,22 47,76
Setelah dilakukan proses ekstraksi, selanjutnya  ekstrak  etanol  daun  kamboja diuji fitokimia untuk mengetahui kandungan  senyawa-senyawa  kimia  atau metabolit sekunder didalam ekstrak etanol daun kamboja.
Tabel 2. Hasil skrining fitokimia Bahan uji Ekstrak etanol Alkaloid + flavonoid + Tannin - saponin + Steroid/triterpen -
Keterangan :
(+) mengandung metabolit sekunder,
(-) tidak mengandung metabolit sekunder
Hasil uji fitokimia ekstrak etanol daun kamboja ( Plumeria acuminata ), menunjukkan positif mengandung flavonoid, alkaloid dan saponin. Senyawa flavonoid  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri  dengan  mekanisme  yaitu menghambat sintesis asam nukleat, menghambat  fungsi  membran  sel,  dan menghambat metabolisme energi.
Flavonoid menyebabkan terjadinya kerusakan  permeabilitas  dinding  sel bakteri,  mikrosom,dan  lisosom  sebagai hasil  interaksi  antara  flavonoid  dengan DNA  bakteri  (Cushnie  dan  Lamb,  A.  J, 2005). Mekanisme kerja flavonoid menghambat  fungsi  membran  sel  adalah membentuk  senyawa  kompleks  dengan protein  ekstraseluler  yang  dapat  merusak membran  sel  bakteri  dan  diikuti  dengan keluarnya  senyawa  intraseluler  dan  tanin memiliki  khasiat  atau  aktivitas  sebagai antioksidan  dan  antibakteri.  Alkaloid sebagai  antibakteri  dengan  mekanisme mengganggu komponen penyusun peptidoglikan  pada  sel  bakteri,  sehingga lapisan  dinding  sel  tidak terbentuk  secara utuh sehingga  menyebabkan kematian sel (Darsana  dkk,  2012).  Saponin  sebagai antibakteri  yaitu  dapat  menyebabkan kebocoran  protein  dan  enzim  dari  dalam sel.  Sedangkan  senyawa  saponin  sebagai antibakteri melalui
mekanisme menurunkan tegangan permukaan
sehingga mengakibatkan naiknya permeabilitas  atau  kebocoran  sel  dan mengakibatkan  senyawa  intraseluler  akan keluar (Nuria dkk, 2009). Saponin mampu berdifusi  melalui  membran  luar  dan dinding  sel  yang  rentan  kemudian mengikat  membran  sitoplasma  sehingga mengganggu  dan  mengurangi  kestabilan membran  sel.  Hal  ini  menyebabkan sitoplasma  bocor  keluar  dari  sel  yang
mengakibatkan kematian sel. Agen antimikroba  yang  mengganggu  membran sitoplasma bersifat bakterisida (Rijayanti,2014). Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan diperoleh data sebagai berikut :
Tabel 3. Zona hambat
Bahan Uji Konsentrasi (%) Zona Hambat (mm) I II III DMSO 10 % - - - Kloramfenicol 30 µg/disk 25,20 25,00 25,30 Ekstrak etanol daun kamboja 25 % 7,10 7,20 7,10 50 % 10,20 10,22 10,19 100 % 14,50 14,51 14,50 Berdasarkan tabel tersebut,
keefektifan  aktivitas  antibakteri  dapat dilihat  dari  zona  hambat  yang  terbentuk. Davis  dan  Stout  (1971)  menjelaskan bahwa  klasiﬁkasi  respon  hambatan pertumbuhan bakteri yang dilihat berdasarkan  diameter  zona  bening  terdiri atas  4  kelompok  yaitu  respon  lemah (diameter ≤5 mm), sedang (diameter 5-10 mm),  kuat  (diameter  10-20  mm),  dan sangat kuat (diameter ≥20  mm).
Berdasarkan  uraian  diatas  didapatkan hasil bahwa pelarut DMSO tidak memberikan  respon  terhadap  bakteri E coli , sedangkan kontrol positif kloramfenicol  memberikan  respon  kuat pada  konsentrasi      30  µg/disk  dengan diameter zona hambat sebesar 25,17 mm. Sampel  uji  ekstrak  etanol  daun  kamboja memberikan respon baik pada konsentrasi 25 % yaitu dengan diameter zona hambat sebesar  7,13  mm,  pada  konsentrasi  50  %
yaitu memberikan zona hambat 10,17 mm dan  konsentrasi  tertinggi  yaitu  100  % memberikan zona hambat 14,50 mm.
Analisis  statistik  terhadap  aktivitas ekstrak  etanol  daun  kamboja  yaitu normalitas kolmogorov-smirnov yaitu p = 0,200  dan  Shapiro-wilk    yaitu  p  =  0,403 untuk  kontrol  (+),  p=0,620  untuk  ekstrak adalah  >  0,05  memiliki  makna  bahwa nilai  zona  hambat  semua  kelompok  uji terdistribusi  normal.  Test homogenity  of variance diperoleh nilai signifikansi (Sig)
0,608  >  dari  0,05  memiliki  makna  varian kelompok uji adalah sama atau homogen. Uji  annova  diperoleh  nilai  signifikansi sebesar 0,000 < dari 0,005 yang memiliki makna  rata-rata  nilai  zona  hambat kelompok  uji  adalah  berbeda  secara signifikan  yaitu  kontrol  (+)  dan  ekstrak etanol    pada  konsentrasi  25  %,  50 %  dan 100 % memiliki aktivitas antibakteri yang berbeda.

## KESIMPULAN
Berdasarkan penelitian
diatas menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun kamboja pada konsentrasi 100 % memiliki  nilai  zona  hambat  paling  besar yaitu  14,50  mm  dibandingkan  dengan konsentrasi 25 % yaitu 7,13 mm dan 50 % yaitu 10, 17 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Cushnie,  T.  P.  T.,  dan  Lamb,  A.  J.  2005. “Antimicrobial Activity of Flavonoid”.  International  Journal of  Antimicrobial  Agent.  Vol  26:
(2005) 343-356
Darsana, I. Besung,  I. Mahatmi, H.  2012. Potensi Daun Binahong (Anredera Cordifolia (Tenore) Steenis) dalam  Menghambat  Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli secara In Vitro . Indonesia Medicus Veterinus. 1 (3): 337351 Davis, W. W. dan Stout, T. R. 1971. Disc Plate  Method  of  Microbiological Antibiotic Assay. Applied Microbiology . 22 (4): 659-665
Depkes  RI.  1994. Keputusan  Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor: 661/MENKES/SK/VII/1994 tentang Persyaratan Obat Tradisional , Departemen Kesehatan  Republik  Indonesia, Jakarta Departemen Kesehatan RI. 1986. Sediaan Galenika.  Departemen  Kesehatan
RI . Jakarta. Hal. 1 – 20
Harborne,  J.B.  1987. Metode  Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan .  Penerbit
ITB. Bandung.
Ningsih Dr, Zusfahair dan Purwati, 2014,
Potensi  Ekstrak  Daun  Kamboja
(Plumeria Alba L.) Sebagai Antibakteri Dan Identifikasi Golongan    Senyawa  Bioaktifnya ,
Universitas Jenderal Soedirman Nuria,  maulita  cut,  Faizaitun,  Arvin,
Sumantri.  2009. Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Jarak  Pagar  (Jatropha  Curcas  L) Terhadap  Bakteri  Staphylococcus Aureus  Atcc  25923,  Escherichia Coli  Atcc  25922,  Dan  Salmonella Typhi Atcc 1408 , Mediagro. Vol.5:
26 – 37. Putra  AH,  Yani  Corvianindya  dan  Melok Aris  Wahyukundari.  2017. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol  Daun  Kamboja  Putih (Plumeria  acuminata)  Terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans, Fakultas Kedokteran Gigi.
Universitas Jember.
Rijayanti,  Luliana,  Trianto.  2014. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol  Daun  Mangga  Bacang (Mangifera  foetida  L.)  Terhadap Staphylococcus aureus . Tanjungpura : Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura Romas,  A.,  Rosyida,  D.  U.,  &  Aziz,  M. A.  2015. Uji  Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak Etanol Kulit Buah Manggis  (Garcinia  Mangostana L)  Terhadap  Bakteri  Echerichia Coli ATCC 11229 Dan Staphylococcus Aureus ATCC
6538  Secara  In  Vitro .  University Research Colloquium 2015.
Sari,  L.O.R.K.  2006. Pemanfaatan  Obat Tradisional  dengan  Pertimbangan Manfaat dan Keamanannya, Majalah  Ilmu  Kefarmasian .  Vol. III,  No.1,  April  2006,  01  –  07 ISSN : 1693-9883.
Saputri devita. 2018. Komparasi Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Plumeria alba dan Plumeria rubra terhadap
Staphylococcus
epidermidis ATCC 12228 . Skripsi.
UIN Sunan Kalijaga. Yogyakarta
Sugiyono. 2008. Metode Penelitian Pendidikan . Bandung : CV. ALFABETA, hlm. 131, 207