## ABSTRAK

## ABSTRACT

## BIOMEDIKA
ISSN : 1979 - 035X (printed edition)
ISSN : 2302 - 1306 (electronic/Portal e-Journal)
Available online at www.biomedika.ac.id
Volume 7, No.2, September 2014

## Pengaruh Kinetin dan Glukosa terhadap Kandungan Steviosida dalam Kalus dan Planlet Daun Stevia
Effect of Kinetin and Glucose against Content Steviosida in Stevia Leaf Callus and Plantlets
1 2 Kartinah Wiryosoendjoyo  dan Supriyadi
1 Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Setia Budi Surakarta, kartinahws@yahoo.com
2 Fakultas Farmasi, Universitas Setia Budi Surakarta email:
Tanaman Stevia merupakan salah satu tanaman sumber pemanis alami. Rasa manis daun Stevia adalah steviosida, rebaudiosida dan dulkosida. Penanaman eksplan daun Stevia pada medium New Phaleonopsis (NP) ditambah kinetin dan  glukosa  bertujuan  untuk  mendapatkan  senyawa  steviosida  dalam  waktu  yang  singkat  dalam  jumlah  banyak. Kinetin ditambahkan sebanyak 0,5; 1; 1,5 dan 2 mg/L. Glukosa ditambahkan 20 g/L dan 25 g/L. Hasil pertumbuhan berupa  kalus  atau  planlet  diekstraksi  dengan  metanol.  Pemeriksaan  kadar  steviosida  dengan  Kromatografi  Cair Kinerja  Tinggi.  Kadar  steviosida  tertinggi  diperoleh  pada  planlet  yang  tumbuh  pada  medium  NP  ditambah  kinetin 2 mg/L dan glukosa 25 g/L.
Kata kunci: eksplan daun Stevia, medium NP, glukosa, kadar steviosida.
Stevia plant is a plant source of natural sweetener. The sweet taste of stevia leaves are stevioside, rebaudioside and dulkoside. Planting of Stevia leaf explants on New Phaleonopsis (NP) medium plus kinetin and glucose was aimed to get stevioside  compounds  in  a  short  time  in  large  quantities.Kinetin  was  added  about  0.5  ;  1  ;  1.5  and  2  mg/L.  Glucose was added 20 g/L and 25 g/L.The result of the growth in the forms of callus or plantlets, were extracted with methanol. Stevioside  level  was  checked  by  High  Performance  Liquid  Chromatography.  Stevioside  highest  levelwas  obtained  in plantlet grown on medium NP plus kinetin 2 mg / L and glucose 25 g/L.
Key words: explant Stevia leaf, NP medium, glucose, steviosida level.
Stevia  rebaudiana mempunyai  daun  yang manis, karena mengandung steviosida. Terdapat kira-kira 230 jenis Stevia di Amerika Utara dan Selatan,  tetapi  hanya Stevia  rebaudiana yang mengandung  senyawa  manis  pada  konsentrasi tinggi.  Daun  tanaman Steviare  baudiana mengandung  steviosida,  rebaudisida  A,  dan senyawa  manis  lainnya  (Kinghorn,  2003). Steviosida yang terutama terdapat di dalam daun Stevia,  merupakan  pemanis  alami  yang  unggul. Keunggulannya  yaitu  tidak  toksik,  bukan senyawa  karsinogenik  dan  rendah  kalori; sehingga  aman  dikonsumsi.  Steviosida  aman dikonsumsi  oleh  penderita  diabetes  mellitus  dan penderita  obesitas.Steviosida  tidak  difermentasi oleh bakteri di mulut, sehingga tidak menyebabkan gigi berlubang (Anonim, tt ).
ini  mengandung  garam-garam  mineral  yang tinggi;  mengandung  senyawa  nitrogen  dalam bentuk  senyawa  nitrat  dan  amonium  (George  & Sherrington,  1984).  Medium New  Phaleonopsis (NP)  mengandung  garam-garam  mineral  yang baik untuk menumbuhkan eksplan. Eksplan daun Stevia  berhasil  tumbuh  baik  pada  medium  NP. Pertumbuhan  eksplan  daun  Stevia  lebih  cepat membentuk kalus bila dibandingkan pada medium MS Kartinah (2009).
Murashige Skoog (MS) merupakan medium yang baik untuk menumbuhkan herba. Medium
Dilakukan  penanaman  eksplan  daun  Stevia pada  medium  NP.  Zat  pengatur  tumbuh  yang digunakan adalah kinetin 0,5; 1; 1,5 dan 2 mg/L. Sumber karbon adalah glukosa 20 g/L dan 25 g/L. Tujuan  penanaman  eksplan  daun  Stevia  pada medium  ini  adalah  untuk  mendapatkan  senyawa steviosida  dalam  waktu  yang  singkat.  Inkubasi dilakukan selama 3 minggu. Pada minggu ke tiga pertumbuhan planlet sudah mencapai bibir botol. Hasil  pertumbuhan  berupa  planlet.  Planlet
diekstraksi dengan metanol. Pemeriksaan kadar steviosida  dengan  Kromatografi  Cair  Kinerja Tinggi.
Sterilisasi eksplan dengan larutan NaOCl 5% selama  10  –  15  menit,  dicuci  aquadest  steril, dilanjutkan dengan larutan NaOCl 2,5% selama 10 – 15 menit, dicuci aquadest steril, dilanjutkan dengan larutan alkohol 70 % selama 1 - 2 menit, kemudian  dibilas  aquadest  steril.  Eksplan

## METODE PENELITIAN Bahan
Tanaman  Stevia  yang  tumbuh  di  Surakarta, kinetin, glukosa, medium NP,  larutan NaOCl 5%, aquadest,  aquadest  steril,  larutan  alkohol  70  %, alkohol  96%;  metanol  Pro  HPLC,  aquadestilata Pro HPLC dan asetonitril kualitas pro HPLC.

## Alat
Bolol-botol  tanam,  otoklaf,  entkas, hot  plate stirer ,  ruang  inkubasi  yang  dilengkapi  dengan penerangan  lampu  TL;  timbangan  analitis; lemari pendingin; oven; pinset, skalpel disposible , cawan  Petri  dan  botol-botol  medium  bertutup karet;gunting, kertas Aluminium Foil; gelas ukur; pipet  tetes;  pengaduk  kaca;  lampu  spirtus;  pH stick.  Mortir,  kertas  saring,  corong  gelas, Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT).

## Cara Kerja

## Pengambilan bahan eksplan
Eksplan (bahan tanam untuk kultur jaringan) berasal dari helaian daun Stevia tumbuh di Solo. Sebagai  eksplan  digunakan  helaian  daun  yang masih muda, yaitu di nodus pertama dan ke dua dari ujung batang.

## Pembuatan Medium Tanam
Disiapkan  medium  NP.  Bahan-bahan  makro ditimbang.  Bahan-bahan  mikro  disiapkan  dalam bentuk  larutan  stok  10  mg/100  mL  atau 100 mg/100 mL. Semua bahan dilarutkan dalam aquadest. Disiapkan medium NP ditambah kinetin 0,5 ; 1; 1,5 dan 2 mg/L dan glukosa 20 g/L dan 25 g/L. Pembuatan medium dengan 3 ulangan.

## Sterilisasi dan Penanaman Eksplan
dipotong dalam cawan petri steril dengan scalpel disposable .  Selanjutnya  dilakukan  penanaman eksplan pada medium NP ditambah kinetin 0,5 ; 1; 1,5 dan 2 mg/L dan glukosa 20 g/L dan 25 g/L.
Eksplan  tumbuh  pada  hari  ke  tujuh  sampai sembilan  setelah  inkubasi.  Pada  minggu  ke  tiga pertumbuhan  eksplan  sudah  menyentuh  tutup botol. Pemanenan planlet dilakukan pada minggu ke tiga. Pada medium NP ditambah kinetin kadar 1  mg/L  dan  1,5  mg/L;  glukosa  20  dan  25  g/L eksplan tumbuh membentuk planlet. Penambahan kinetin  0,5  mg/L  dan  2  mg/L  menunjukkan pertumbuhan  eksplan  hanya  membentuk  kalus saja.

## HASIL PENGAMATAN DAN PEMBAHASAN
Kinetin 0,5 mg/L     Kinetin 1 mg/L     Kinetin 1,5 mg/L    Kinetin 2 mg/L Gambar 1. Pertumbuhan pada minggu ke tiga, medium NP ditambah glukosa 20 g/L dan kinetin variasi 0,5; 1; 1,5 dan 2 mg/L, ulangan ke dua.
Gambar 2. Pertumbuhan pada minggu ke tiga, medium NP ditambah glukosa 25 g/Ldan kinetin variasi 0,5; 1; 1,5 dan 2 mg/L, ulangan ke dua.
Kinetin 0,5 mg/L    Kinetin 1 mg/L     Kinetin 1,5mg/L    Kinetin 2 mg/L
54    KARTINAH WIRYOSOENDJOYO DAN SUPRIYADI Biomedika
Penambahan  kinetin  sebagai  zat  pengatur tumbuh (zpt) tunggal ternyata mampu menyebabkan pertumbuhan  eksplan  membentuk  kalus,  bahkan hampir semua eksplan tumbuh membentuk planlet. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  eksplan  daun  sudah mengandung hormon auksin. Sitokinin hanya efektif bila terdapat bersama dengan auksin (Sandra, 2013). Hasil  pertumbuhan  planlet  menunjukkan tunas tumbuh baik, sedangkan akar tumbuh kurang baik. Peristiwa ini sesuai dengan pendapat George &  Sherrington  (1984),  menyatakan  bahwa perbandingan  auksin/sitokinin  tinggi  memacu pembentukan  akar,  perbandingan  sebaliknya  akan memacu  pembentukan  tunas.  Jika  perbandingan auksin – sitokinin seimbang hanya terbentuk kalus. Dari  hasil  pertumbuhan  eksplan,  diketahui bahwa daun Stevia baik untuk digunakan sebagai eksplan.  Daun  diambil  dari  nodus  pertama  dan kedua  dari  ujung  batang,  karena  masih  muda, masih  mengandung  jaringan  meristem.  Kondisi ini  mendukung  terjadinya  proses  dediferensiasi, sehingga mudah terbentuk kalus.
Pertumbuhan yang diperoleh adalah planlet. Hal ini disebabkan karena kinetin termasuk zpt sitokinin.  Sitokinin  bermanfaat  untuk  memacu pertumbuhan  dan  morfogenesis  dalam  kultur jaringan. Perbedaan nisbah sitokinin dan auksin yang tinggi akan mendorong perkembangan sel
1  mg/L  dan  glukosa  25  g/L  adalah  1,57%; medium  NP  ditambah  kinetin  1,5  mg/L  dan glukosa  25  g/L  adalah  1,7%;  medium  NP ditambah  kinetin  2  mg/L  dan  glukosa  25  g/L adalah 1,8 %. Kadar steviosida pada daun tanaman Stevia adalah 1,09%.
Kadar steviosida tertinggi pada planlet yang tumbuh  pada  medium  NP  ditambah  kinetin 2 mg/L dan glukosa 25 g/L. Hasil analisa Anova dua jalan:
Hasil  pertumbuhan  hampir  semuanya  berupa planlet.  Hanya  medium  dengan  penambahan 0,5 mg/L dan kinetin 2 mg/L pertumbuhan eksplan ada yang hanya membentuk kalus. Kenyataan ini menunjukkan  kinetin  2  mg/L  sudah  mampu menghambat pertumbuhan planlet.
Kadar  steviosida  berturut-turut  pada  medium NP ditambah kinetin 0,5 mg/L dan glukosa 20 g/L adalah  1,21%;  medium  NP  ditambah  kinetin 1  mg/L  dan  glukosa  20  g/L  adalah  1%;  medium NP ditambah kinetin 1,5 mg/L dan glukosa 20 g/L adalah  1,21%;  Medium  NP  ditambah  kinetin 2 mg/L dan glukosa 20 g/L adalah 1,28%; medium NP ditambah kinetin 0,5 mg/L dan glukosa 25 g/L adalah  1,16%;  medium  NP  ditambah  kinetin
meristem tumbuh, berkembang menjadi kuncup, batang  dan  daun.  Jika  nisbah  diperkecil  akan memacu  pertumbuhan  akar  menjadi  tumbuhan baru (Sandra, 2013).
Tabel 1. Analisa Anova Dua Jalan Data Penelitian Univariate Analysis of Variance
Biomedika    55 Volume 7, No.2, September 2014
Kinghorn.  2003. Stevia.  The  Genus  Stevia .  Department  of Medicinal Chemistry and Pharmacognosy University of Illinois at Chicago USA. London and New York.
Dari  analisa  anova  dua  jalan  menunjukkan bahwa terdapat pengaruh glukosa terhadap kadar steviosida  dimana  kadar  glukosa  25  gr/L menaikkan  kadar  steviosid  lebih  baik  dibanding kadar 20 gr/L; dan tak ada pengaruh kadar kinetin terhadap kadar steviosida.
Rendahnya kadar steviosida dapat disebabkan karena  eksplan  berasal  dari  daun  muda  yang masih  mengandung  calon  steviosida  (steviol). Steviosida banyak didapatkan pada daun tua.

## KESIMPULAN
Kadar  steviosida  dalam  kalus  daun  Stevia yang  ditumbuhkan  pada  medium  NP  ditambah kinetin 2 mg/L dan penambahan glukosa 25 g/L memberikan  hasil  steviosida  paling  banyak.

## SARAN
Penelitian ini sebaiknya dilanjutkan dengan penanaman eksplan daun Stevia pada medium

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terimakasih  kami  sampaikan  pada Direktur Jenderal Pendidikan Tinggi, yang telah membeayai  penelitian  ini  pada  skim  Hibah Bersaing tahun ke dua di tahun 2014.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim  .tt. Mengenal  Stevia  (Sweat  Honey  Leaf)  Sebagai Pemanis .  http://www.florabiz.net/flora/mengenal-stevia- sweat-honey-leaf-sebagai-sumber- pemanis.html. Sumber: ditjenbun.deptan.go.id.  diunduh  15  Maret  2012. Sandra, Edhi. 2013. Cara Mudah Memahami dan Menguasai Kultur Jaringan . IPB Press. George & Sherrington (1984): Plant Propagation by Tissue Culture,  Handbook  and  Directory  of  Commercial Laboratories . Exegetic Limited. England.
Wiryosoendjoyo, Kartinah. 2009. Short Cut Penanaman Explant Daun Stevia Pada Medium New Phaleonopsis. Biomedika, Jurnal Ilmiah Biologi dan Kesehatan . Vol. 2. No 2. ISSN No. 1979 – 035 X. September 2009. Vol 2 no 2.
selain NP, misalnya medium Murashige Skoog dengan kadar kinetin dan glukosa yang sama.
56    KARTINAH WIRYOSOENDJOYO DAN SUPRIYADI
Biomedika