Uji Aktivitas Peningkatan Sensitivitas Insulin Ekstrak Biji Jintan Hitam ( Nigella sativa ) melalui Pengukuran Konsentrasi Tirosin Terfosforilasi Insulin Reseptor Substrat-1 (terhadap Tikus Wistar Model Diabetes Mellitus Tipe 2)
Fenny Kristanti Panggabean*, Efta Triastuti*, Ema Pristi Yunita*

## ABSTRAK
Biji jintan hitam ( Nigella sativa ) merupakan tanaman herbal untuk terapi dan pencegahan diabetes mellitus (DM  tipe  2).  Salah  satu  penyebab  DM  tipe  2  adalah  penurunan  konsentrasi  tirosin  terfosforilasi  IRS  ( insulin receptor  substrat )-1  yang  berefek  pada  peningkatan  resistensi  insulin.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji aktivitas  peningkatan  sensitivitas  insulin  dari  ekstrak  biji  jintan  hitam  ( Nigella  sativa )  pada  kondisi  resistensi insulin  melalui  pengukuran  konsentrasi  tirosin  terfosforilasi  pada  IRS-1  dan  hubungannya  dengan  konsentrasi glukosa darah puasa. Desain penelitian yang digunakan adalah true experimental , dengan sampel tikus wistar jantan berjumlah 24 ekor dalam 5 kelompok perlakuan dan 1 kontrol normal. Kelompok perlakuan diinduksi DM dengan diet fruktosa sebanyak 16 g yang diberikan melalui larutan fruktosa untuk penyondean dan campuran pakan  tikus.  Kelompok  Pp  mendapatkan  metformin,  Pn  tanpa  pemberian  ekstrak,  P1,  P2,  P3  mendapatkan ekstrak  jintan  hitam  24  mg/kgBB,  48  mg/kgBB,  dan  96  mg/kgBB.  Induksi  DM  dilakukan  dengan  diet  tinggi fruktosa  selama  6  minggu  dan  terapi  dilakukan  setelah  induksi  DM2  selama  30  hari.  Ekstrak  biji  jintan  hitam secara  statistik  tidak  memiliki  efek  peningkatan  sensitivitas  insulin  melalui  peningkatan  konsentrasi  tirosin terfosforilasi  pada  IRS-1  yang  berbeda  antar  kelompok  dengan  nilai  p >  0,05  (0,151)  dan  nilai  korelasi  yang bervariasi antar kelompok. Ekstrak biji jintan hitam tidak meningkatkan sensitivitas insulin melalui peningkatan konsentrasi tirosin terfosforilasi pada IRS-1. Hal ini mungkin disebabkan oleh kegagalan induksi fruktosa untuk mengkondisikan tikus menjadi tikus model DM tipe 2.
Kata kunci : Diabetes Melitus tipe 2 (DM tipe 2), Ekstrak biji jintan hitam ( Nigella sativa ), Tirosin terfosforilasi IRS- 1.
Activity Assay of Insulin sensitivity in black seed extract ( Nigella sativa ) by measuring the concentration of phosphorylated tyrosine on IRS-1 (in the Wistar Rat Model of Type 2 Diabetes Mellitus)

## ABSTRACT
Black  seed  ( Nigella  sativa )  is  a  herbal  plant  that  uses  as  treatment  and  prevention  of  type  2  Diabetes Mellitus (DM2). One of the causes of type 2 diabetes mellitus is depletion of IRS concentration (insulin receptor substrate)-1 phosphorylated tyrosine which induce insulin resistance elevation. The purpose of this study was to investigate the activity of elevation insulin sensitivity by using black seed extract on insulin resistance condition. Elevation  of  insulin  sensitivity  was  investigated  by  measuring  the  concentration  of  phosphorylated  tyrosine  on IRS-1 and its  correlation with  the concentration of fasting blood  glucose. This study used a true  experimental design, samples consisted of 24 male Wistar rats,  divided by 5 treatment groups (Pp,  Pn,  P1,  P2, P3) and 1 normal  control  group.  Pp  group  administered  by  metformin,  Pn  group  administered  none,  P1,  P2,  and  P3 administered by black seed extract 24 mg/kgBW, 48 mg/kgBW, and 96 mg/kgBW. Diabetes induction was done by high-fructose diet for 6 weeks. The therapy performed after DM2 induction for 30 days. The results showed nonparametric  Kruskall-Wallis  value p >  0.05  (0.151)  which  means  there  was  no  significant  differences  in  the concentration of phosphorylated tyrosine IRS-1 among treatment groups. The conclusion in this study was black seed extract had no significant elevation effect of insulin sensitivity through increased concentration of tyrosine phosphorylation in different IRS-1. Furthermore, it was probably caused by failure of fructose induction in order to make rat DM2 models.
Keywords: Black seed extract ( Nigella sativa ), IRS-1 phosphorylated tyrosine, Type 2 diabetes mellitus (DM2)
*  Program Studi Farmasi, FKUB

## PENDAHULUAN
Diabetes  mellitus  tipe  2  ( non-insulin- dependent )  merupakan  kondisi  saat  tubuh tidak  menggunakan  insulin  secara  efektif. 1 Diabetes  melitus  tipe  2  dialami  oleh  90  % orang  dari  total  keseluruhan  penderita diabetes  di  seluruh  dunia  yang  rata-rata diakibatkan  oleh  kelebihan  berat  badan  dan kurangnya  aktivitas  fisik,  selain  faktor  resiko lain yang berperan sebagai penyebab penyakit ini.
Insulin merupakan hormon yang diproduksi  oleh  pankreas  yang  berfungsi meregulasi gula darah di dalam tubuh. Insulin akan  berikatan  dengan  reseptornya  untuk dapat menjalankan fungsinya, yaitu meregulasi  glukosa  darah  di  dalam  tubuh.
Resistensi  insulin  merupakan  faktor  resiko terbesar DM 2 dan mengarah kepada kondisi ketika  konsentrasi  fisiologis  insulin  bekerja kurang efektif. 2 Pemberian  produk  dengan  kandungan high-fructose  diet dapat  mengubah  tahapan awal  transduksi  sinyal  insulin  yang  memiliki peran penting dalam penginduksian resistensi insulin. 3 Pada penelitian ini, pengujian aktivitas perbaikan  resistensi  insulin  dari  ekstrak  biji jintan  hitam  dilakukan  dengan  pengukuran konsentrasi  tirosin  terfosforilasi  pada insulin receptor  substrat-1 (IRS-1)  karena  IRS-1 memiliki  konsentrasi  terbesar  dari  insulin receptor  tirosin  kinase  dan  terbukti  dapat mengaktivasi phosphatidylinositol (PI)3-kinase dan  mendukung    translokasi  GLUT-4. 4 Penurunan ambilan glukosa memiliki
hubungan  yang  signifikan  dengan  penurunan tirosin terfosforilasi pada IRS-1. 5 Biji  jintan  hitam  ( Nigella  sativa ) merupakan  tanaman  herbal  yang  banyak digunakan  sebagai  terapi  pencegahan  atau pengobatan  berbagai  macam  penyakit,  salah satunya  antidiabetes  dan  hiperglikemi  yang telah dilaporkan pada beberapa studi ilmiah in vivo dan in  vitro. 6,-14 Ekstrak  biji  jintan  hitam memiliki  berbagai  macam  kandungan,  salah satunya  thymoquinon  (komponen volatile  oil terbesar). 15 Salah  satu  penelitian  mengenai thymoquinon  membuktikan  bahwa  terjadi penurunan  serum  glukosa  dan  peningkatan pada  konsentrasi  serum  insulin  yang  rendah pada  tikus  yang  diinduksi  streptozocin  untuk menghasilkan kondisi diabet.. Aktivitas ekstrak
tanaman herbal tersebut terhadap konsentrasi tirosin  terfosforilasi  pada  IRS-1  yang  juga berperan  pada  peristiwa  pengikatan  insulin terhadap  reseptornya  belum  diketahui sehingga  penelitian  ini  menekankan  pada aktivitas  ekstrak  biji  jintan  hitam  terhadap konsentrasi tirosin terfosforilasi pada IRS-1.

## BAHAN DAN METODE
Metode  penelitian  ini  telah  mendapatkan surat  keterangan  kelaikan  etik  ( ethical clearance ) No. 236A / EC / KEPK / 05 / 2013 yang  dikeluarkan  pada  tanggal  31  Mei  2013 oleh Kementerian Pendidikan dan
Kebudayaan  Fakultas  Kedokteran  Universitas Brawijaya Komisi Etik Penelitian Kesehatan.

## Desain Penelitian
Desain penelitian yang digunakan adalah true experimental , dengan sampel tikus Wistar jantan  berjumlah  24  ekor.  Sampel  dibagi  ke dalam  6  kelompok,  yaitu  5  kelompok perlakuan  (Pp,  Pn,  P1,  P2,  dan  P3)  dan  1 kontrol  normal.  Kelompok  perlakuan  diinduksi DM dengan diet fruktosa sebanyak 16 g yang diberikan  melalui  larutan  fruktosa  untuk penyondean  dan  campuran  pakan  tikus. Kelompok  Pp  mendapatkan  metformin,  Pn tanpa pemberian ekstrak, serta P1, P2, dan P3 mendapatkan  ekstrak  jintan  hitam  24 mg/kgBB,  48  mg/kgBB,  dan  96  mg/kgBB. Induksi  DM  dilakukan  dengan  diet  tinggi fruktosa selama 6 minggu dan terapi dilakukan setelah induksi DM2 selama 30 hari.

## Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Farmakologi Fakultas
Kedokteran  Universitas  Brawijaya  Malang untuk  perawatan  dan  perlakuan  hewan  coba. Pengujian  konsentrasi  tirosin  terfosforilasi pada  IRS-1  dengan  ELISA  dilakukan  di Laboratorium  Biomedik  Fakultas  Kedokteran Universitas  Brawijaya  Malang.  Pembuatan ekstrak  biji  jintan  hitam  dilakukan  di Laboratorium  Bahan  Alam  Program  Studi Farmasi  Universitas  Brawijaya.  Waktu penelitian dimulai pada Februari 2013 setelah mendapatkan  persetujuan  etik  dan  berakhir pada  Juni  2013.  Biji  jintan  hitam  ( Nigella sativa )  yang  digunakan  berbentuk  serbuk simplisia  yang  berasal  dari  Badan  Materia Medika.
Bahan dan Alat Anti-phospho-IRS 1 (Tyr 1222) polyclonal antibody,  anti-rabbit  IgG  biotin,  simplisia  biji jintan  hitam,  alat  pengekstrak  dan  ELISA reader .

## Anastesi Hewan Coba
Digunakan Ketamin HCL secara intravena 0,2 mL di ad 0,5 mL dengan water for injection untuk semua tikus.
Analisis Data Data hasil pengamatan dianalisis dengan SPSS 16.0 dengan tingkat signifikansi 0,05 ( p = 0,05) dan taraf kepercayaan 95% (α = 0,05) Langkah-langkah  uji  hipotesis  komparatif  dan korelatif adalah sebagai berikut: uji normalitas data,  uji  homogenitas  varian,  uji  Kruskal- Wallis, dan uji korelasi.

## HASIL PENELITIAN
Hasil  Pengukuran  Konsentrasi  Tirosin Terfosforilasi IRS-1
Konsentrasi  tirosin  terfosforilasi  IRS-1 diukur dengan metode ELISA dan ditampilkan pada  Tabel  1.  Hasil  uji  normalitas  data konsentrasi tirosin terfosforilasi IRS-1 menggunakan SPSS didapatkan nilai p > 0,05 untuk 5 kelompok perlakuan dan kelompok  Pn dengan  nilai  p  <  0,05  sehingga  distribusi konsentrasi  tirosin  terfosforilasi  IRS-1  adalah tidak normal. Transformasi dengan menggunakan √x dan 1/√x didapatkan nilai p
<  0,05  pada  kelompok  Pn  tetap,  yaitu  0,00. Hasil  uji  homogenitas  data  konsentrasi  tirosin terfosforilasi  IRS-1  didapatkan  nilai p  =  0,063 untuk  seluruh  kelompok  dengan  p  >  0,05 menunjukkan data konsentrasi tirosin terfosforilasi  IRS-1  adalah  homogen.  Hasil  uji non parametrik Kruskal Wallis didapatkan p = 0,151,  nilai  p  >  0,05  dimana  tidak  terdapat perbedaan  yang  signifikan  konsentrasi  tirosin terfosforilasi IRS-1 antar kelompok perlakuan. Data  hasil  uji  korelasi  Pearson  antara konsentrasi  GDP  dengan  konsentrasi  tirosin terfosforilasi IRS-1 ditampilkan pada Tabel 3.

## Hasil Delta Glukosa Darah Puasa
Hasil  delta  glukosa  darah  puasa sebelum  dan  setelah  perlakuan  ditampilkan pada  Tabel  1.  Uji  normalitas  delta  glukosa darah  puasa  tikus  didapatkan  nilai  p  >  0.05 pada  tiap  kelompok  perlakuan  sehingga perubahan  glukosa  darah  puasa  dalam penelitian  ini  adalah  normal.  Uji  homogenitas delta  glukosa  darah  puasa  tikus  didapatkan nilai p = 0,004, dimana nilai p < 0,05 sehingga data  delta  glukosa  darah  puasa  tikus  tidak homogen.  Kemudian  dilakukan  uji  non parametrik  Kruskal-Wallis  didapatkan  p  = 0,420,  dimana  nilai  p  >  0,05  sehingga  tidak terdapat  perbedaan  yang  signifikan  dari  data glukosa  darah  puasa  tikus  antar  kelompok perlakuan.
Tabel 1. Konsentrasi tirosin terfosforilasi IRS-1 dan delta GDP sebelum dan setelah perlakuan
Kelompok Perlakuan Nomor Tikus Konsentrasi Tirosin Terfosforilasi IRS-1 (μg/mL) Delta GDP Pp 1 0,006 11 2 0,009 8 3 0,063 -27 Pn 4 0,014 15 5 0,005 18 6 0,014 -38 P1 7 0,020 36 8 0,043 25 9 0,029 50 P2 10 0,047 20 11 0,023 53 12 0,024 5 P3 13 0,053 34 14 0,026 6 15 0,026 -47 16 0,113 -5 P0 17 0,020 - 18 0,018 - 19 0,036 - 20 0,079 -
Keterangan:  Pp  =  kelompok  positif,  Pn  =  kelompok  negatif,  P1  =  kelompok  perlakuan  1,  P2  =  kelompok  perlakuan  2,  P3 kelompok perlakuan 3, P0 = kontrol normal, delta GDP = delta glukosa darah puasa.
Tabel  2. Hasil pengukuran delta GDP dan konsentrasi tirosin terfosforilasi IRS-1
Kelompok Perlakuan Deskripsi Delta GDP Konst.Fosfo Tir IRS-1 (μg/mL) Pp -2,667+21,127 0,009 (0,006-0,063) Pn -1,667+31,501 0,014 (0,005-0,14) P1 37+12,530 0,029 (0,020-0,043) P2 28+20,445 0,036 (0,023-0,053) P3 -15,333+27,970 0,052 (0,026-0,113)
Keterangan: Pp = kelompok positif, Pn = kelompok negatif, P1 = kelompok perlakuan 1, P2 = kelompok perlakuan 2, P3 = kelompok perlakuan 3, delta GDP = delta glukosa darah puasa, Konst. Fosfo Tir IRS-1 = konsentrasi tirosin terfosforilasi di IRS-1.
Tabel 3. Hasil uji korelasi Pearson konsentrasi GDP dengan konsentrasi tirosin terfosforilasi IRS-1
Kelompok Jumlah Sampel (n) Kekuatan Korelasi (r) Signifikansi (p) Pp 3 -1,000 >0,05 Pn 3 -0,541 >0,05 P1 3 0,573 >0,05 P2 4 0,128 >0,05 P3 3 0,994 >0,05
Keterangan: Pp = kelompok positif, Pn = kelompok negatif, P1 = kelompok perlakuan 1, P2 = kelompok perlakuan 2, P3 = Kelompok Perlakuan 3, delta GDP = delta glukosa darah puasa.

## PEMBAHASAN
Hasil  uji  statistik  dari  penelitian  ini didapatkan  bahwa  tidak  terdapat  perbedaan delta  glukosa  darah  dan  konsentrasi  tirosin terfosforilasi IRS-1 yang dapat menggambarkan efek biji jintan hitam ( Nigella sativa ),  terutama  kandungan  thymoquinon sebagai  penurun  glukosa  darah  puasa  tikus yang berdampak pada peningkatan konsentrasi tirosin terfosforilasi IRS-1.
Model DM 2 dicapai dengan menginduksi tikus  dengan  fruktosa  selama  30  hari. Pemberian  produk  dengan  kandungan high- fructose  diet dapat  mengubah  tahapan  awal transduksi  sinyal  insulin  yang  memiliki  peran penting dalam penginduksian resistensi insulin sehingga  diharapkan  dengan  pemberian fruktosa  selama  6  minggu  pada  tikus  dapat memberikan  kondisi  DM  2. 3 Kelebihan konsumsi  fruktosa  dapat  mengakibatkan resistensi  insulin  hepatik,  penurunan  oksidasi lipid, dan peningkatan trigliserida. Peningkatan trigliserida  hepatik  (lipid  hepatik)  dapat menginduksi  resistensi  insulin  hepatik, kemungkinan  melalui  peningkatan  kadar intrahepatik dari diacylglycerol, yang mengaktivasi novel-PKC. Novel-PKC  menurunkan  tirosin  terfosforilasi dari IRS-1, menyebabkan penurunan sensitivitas  insulin,  peningkatan  produksi glukosa  hepatik,  dan  peningkatan  glukosa puasa dan konsentrasi insulin, serta gangguan toleransi glukosa. 16
Pada  umumnya,  diketahui  bahwa pemberian  ekstrak  biji  jintan  hitam  akan menurunkan  glukosa  darah  puasa  dan kemudian  akan  meningkatkan  konsentrasi tirosin  terfosforilasi  sebagai  respon  untuk meningkatkan sensitivitas insulin. Dari data di atas dapat disimpulkan bahwa biji jintan hitam dosis 96 mg/kgBB memiliki efek meningkatkan konsentrasi tirosin terfosforilasi IRS.
Peningkatan  konsentrasi  tirosin  terfosforilasi tertinggi  pada  tikus  16  (0,716  μg/dL)  jika dibandingkan  dengan  kelompok  normal  yang berkisar 0,197-0,591 μg/dL. Namun pada nilai delta  glukosa  darah  puasa  tikus  memberikan data  minus  pada  tikus  15  dan  16.  Data tersebut  juga  menunjukkan  bahwa  terdapat perbedaan  konsentrasi  tirosin  terfosforilasi IRS-1  di  tiap  kelompok  dari  nilai  terendah hingga  tertinggi,  tetapi  tidak  signifikan. Penurunan  ambilan  glukosa  dalam  darah (hiperglikemi)  memiliki  hubungan  erat  dengan penurunan  konsentrasi  tirosin  terfosforilasi
IRS-1  sehingga  pada  penelitian  ini kemungkinan  proses  ambilan  glukosa  dalam darah  pada  tikus masih  berlangsung normal. 5
Proses  ambilan  glukosa  darah  pada  tikus masih  berlangsung  normal  kemungkinan disebabkan  konsentrasi  glukosa  dalam  darah belum  mencapai  kondisi  hiperglikemi  yang dipengaruhi  oleh  induksi  fruktosa  yang  tidak maksimal,  pengambilan  glukosa  darah  puasa pada  saat  yang  tidak  bersamaan,  dan  tikus yang bergerak aktif.
Secara  umum  diketahui  bahwa  tingkat glukosa  darah  dipengaruhi  oleh  tingkat aktivitas,  konsumsi  makanan  yang  tidak seimbang,  dan  tingkat  stres.  Pada  penelitian ini, ketiga hal tersebut memiliki peran penting dalam menentukan tingkat glukosa darah tikus dimana  konsumsi  makanan  yang  tidak seimbang  diwakili  dengan  induksi  fruktosa yang  berlebih  pada  tikus.  Peningkatan konsentrasi  glukosa  darah  puasa  tikus  terjadi pada  kelompok  tikus  P3,  tetapi  peningkatan tersebut masih  dalam  rentang  normoglikemik, yaitu  85-132  mg/dL.  Penurunan  konsentrasi pada  glukosa  darah  puasa  tikus  setelah perlakuan  terjadi  pada  kelompok  tikus  P2. Hasil  yang  tidak  merata  ini  kemungkinan disebabkan  pengukuran  insulin  yang  tidak bersamaan  sehingga  waktu  puasa  tikus  satu dengan yang lain tidak sama yang diperburuk dengan  jumlah  sisa  makanan  yang  cukup banyak.  Ketika  waktu  puasa  diperpanjang, proporsi  dari  proses  glukoneogenesis  akan meningkat dan setelah puasa overnight , tidak ada  simpanan  glukosa  dan  semua  glukosa telah  dipakai  oleh  jaringan  untuk  dioksidasi sempurna atau dikonversi menjadi laktat, yang secara  sederhana  dapat  dinyatakan  bahwa glukosa  dalam  darah  akan  menurun  dengan dilakukannya puasa. 17
Selain itu,  aktivitas  dari  tikus yang cukup tinggi  (salah  satu  penanda  tikus  sehat) kemungkinan  menjadi  penyebab  penurunan glukosa  darah  puasa  tikus.  ADA  ( American Diabetes  Association )  menyatakan  bahwa aktivitas  dapat  mempengaruhi  penurunan glukosa darah melalui peningkatan sensitivitas insulin,  sehingga  sel  dapat  menggunakan insulin  dengan  lebih  baik  untuk  ambilan glukosa  selama  dan  setelah  aktivitas  untuk menghasilkan  energi.  Hal  lain  yang  dapat menyebabkan  fluktuasi  glukosa  darah  puasa
tikus setelah induksi fruktosa adalah konsumsi makanan  yang  berbeda  pada  tiap  tikus sehingga fruktosa yang masuk ke dalam tubuh tikus  tidak  mencapai  16  g  seperti  yang  telah direncanakan semula. Sedangkan tujuan awal dari  induksi  fruktosa  yaitu  memberikan  efek peningkatan  glukosa  yang  berlebih  atau hiperglikemi  justru  menurunkan  sensitifitas insulin.
Sensitivitas  insulin  yang  seharusnya dihambat  oleh  pemberian  fruktosa  secara berlebih  tidak  tercapai  karena  konsumsi fruktosa  per  harinya  tidak  mencapai  16  g sehingga  dalam  penelitian  ini  insulin  masih bekerja  dengan  baik  dan  berdampak  pada penurunan  glukosa  darah  puasa  setelah pemberian induksi fruktosa selama 6 minggu. Hal  ini  diperburuk  dengan  perlakuan pemberian  ekstrak  biji  jintan  hitam  yang memiliki  fungsi  salah  satunya  sebagai  terapi antidiabetes  melalui    mekanisme  penurunan glukoneogenesis  oleh  zat  thymoquinon  yang terkandung  dalam  ekstrak  biji  jintan  hitam. Selain  itu,  zat  thymoquinon  juga  terbukti meningkatkan  ambilan  glukosa  di  jaringan perifer.
Fluktuasi  data  glukosa  darah  puasa  juga dapat disebabkan gangguan yang terjadi pada alat pengukur glukosa darah tikus yang dalam penelitian  ini  digunakan  glukosemeter  digital. Beberapa  faktor  yang  mungkin  dapat mempengaruhi  hasil  dari  pengukuran glukosa menggunakan glucometer pada  penelitian  ini menurut  AADE  ( American  Association  of Diabetes Educators ) tahun 2013, yaitu kualitas strip yang menurun yang berhubungan dengan masa  kadaluarsa  atau  kualitas  produksi  dari strip  tersebut,  pengguna  alat  tidak  mencuci tangan terlebih dahulu sebelum menggunakan alat,  kadar  hematokrit  yang  dipengaruhi  oleh kondisi  dehidrasi  atau  anemia,  pengaruh temperatur  dan  kelembapan,  penyimpanan dan perawatan alat yang tidak benar, dan alat yang  tidak  dikalibrasi  dengan  baik.  Kalibrasi alat  dengan  larutan  kontrol  dilakukan  sesuai dengan  petunjuk  yang  ada  pada  alat  untuk memastikan keakuratan alat pengukuran.
Secara  normal,  tubuh  akan  memberikan respon  terhadap  peningkatan  glukosa  darah dengan meningkatkan sekresi insulin. Sekresi insulin ini akan menstimulasi ambilan glukosa dan  sintesis  glikogen,  serta  inhibisi
glikogenolisis  dan  glukoneogenesis,  sehingga dicapai  kondisi  normoglikemi.  Pada  penelitian ini,  induksi  fruktosa  digunakan  untuk meningkatkan  glukosa  darah  tikus  untuk mencapai model DM 2, yaitu resistensi insulin dan  menggunakan  ekstrak  biji  jintan  hitam untuk  menghambat  proses  resistensi  insulin tersebut  yang  ditandai  dengan  peningkatan tirosin  terfosforilasi  IRS-1  pada  jaringan  otot tikus.  Induksi  fruktosa  pada  tikus  yang  tidak mencapai  16  g  dan  pemberian  ekstrak  biji jintan  hitam  serta  faktor  lainnya  seperti  telah dijelaskan  sebelumnya,  membuat  kondisi resistensi  insulin  belum  terjadi  dan  insulin bekerja  secara  normal  pada  tubuh  tikus.  Hal ini mengakibatkan fluktuasi data baik dari data glukosa  darah  setelah  induksi  fruktosa maupun  data  konsentrasi  tirosin  terfosforilasi IRS-1.

## KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  adalah ekstrak  biji  jintan  hitam  secara  statistik  tidak memiliki  efek  peningkatan  sensitivitas  insulin melalui  peningkatan  konsentrasi  tirosin terfosforilasi  pada  IRS-1  yang  berbeda  pada tiap  perlakuan  dengan  nilai p >  0,05  (0,151). Adanya  signifikansi  korelasi  dan  kekuatan yang bervariasi pada tiap kelompok perlakuan. Kedua hasil tersebut kemungkinan disebabkan kegagalan induksi fruktosa untuk mengkondisikan tikus menjadi tikus model DM
2.

## SARAN
Hendaknya  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  mengenai  efek  pemberian  biji  jintan hitam terhadap konsentrasi tirosin terfosforilasi IRS-1 dengan induksi DM 2 melalui diet tinggi fruktosa.  Metode  lain  diperlukan  untuk mengetahui  efektivitas  metode  meliputi  biaya serta waktu yang digunakan  untuk menjalankan  penelitian.  Pemberian  diet  tinggi fruktosa  untuk  induksi  DM  2  hendaknya dioptimasi meliputi cara pemberian, dosis, dan lama  waktu  yang  diperlukan  untuk  mencapai kondisi DM 2.
DAFTAR PUSTAKA
1. [WHO]  World  Health  Organization.
Diabetes  Fact  and  Sheet.  No.  132.  2012.
(online).<http://www.who.int/mediacentre/fa ctsheets/fs312/en/index.html>. diakses tanggal 25 November 2012.
2. Han YK, Jung HW, Park YK. The Roots of Atractylodes  Japonica  Koidzumi  Promote Adipogenic Differentiation Via Activation of the  Insulin  Signaling  Pathway  In  3T3-L1
Cells. BMC Complementary and Alternative Medicine . 2012; 12:154. 3. Qin  B,  Nagasaki  M,  Ren  M,  Bajotto  G, Oshida  Y,  Sato  Y.  Cinnamon  Extract Prevents the Insulin Resistance Induced by A  High-Fructose  Diet. Horm  Metab  Res. 2004; 36:119-125.
4. Ura  K,  Soyano  K,  Omoto  N,  Adachi  S, Yamauchi  K.  Localization  of  Na + /K + - ATPase in Tissues of Rabbit and Teleosts Using  an  Antiserum  Directed  Against  a Partial  Sequence  of  the  α-Subunit. Zool Sci . 1996; 13:219–227.
5. Griffin ME, Marcucci MJ, Cline GW, Bell K, Barucci  N,  Lee  D,  Goodyear  LJ,  Kraegen EW,  White  MF,  Shulman  GI.  Free  Fatty Acid-Induced  Insulin  Resistance  is Associated  with  Activation  of  Protein Kinase  C  Theta  and  Alterations  in  the Insulin  Signaling  Cascade. Diabetes. 1999; 48:1270-1274.
6. Meral  I,  Yener  Z,  Kahraman  T,  Mert  N. Effect  of Nigella  sativa on  Glucose Concentration, Lipid Peroxidation, Antioxidant  Defence  System  and  Liver Damage  in  Experimentally  Induced Diabetic  Rabbits. J  Vet  Med  A  Physiol Pathol Clin Med. 2001; 48( 10):593-599.
7. Al-Awadi  FM,  Gumaa  KA.  Studies  on  the Activity  of  Individual  Plants  of  An Antidiabetic  Plant  Mixture. Acta  Diabetol .
1987; 24(1):7-41.
8. Al-Hader  AA,  Aqel  MB,  Hasan  ZA. Hypoglycemic Effects of The Volatile Oil of Nigella  sativa Seeds. Int  J  Pharmacogn .
1993; 31:96–100.
9. Labhal A, Settaf  A, Zalagh  F, Cherrah Y, Hassar  M,  Slaoui  A.  Proprietes  Anti- Diabetiques des Graines  de Nigella sativa Chez  le  Merione  Shawi  Obese  et Diabetique. Esperance  Medicale. 1999;
47:72–74.
10. El-Dakhakhny  M,  Lambert  MN,    Ammon HP.  The  Hypoglycemic  Effect  of Nigella sativa O il is Mediated by Extra Pancreatic
Action. Planta Med. 2002; 68:465- 466. 11. Fararh KM, Atoji Y, Shimizu Y, Takewaki T. Isulinotropic Properties of Nigella sativa Oil in  Streptozotocin  Plus  Nicotinamide Diabetic  Hamster. Res.  Vet.  Sci .  2002;
73(3):279-282.
12. Kanter  M,  Meral  I,  Yener  Z,  Ozbek  H, Demir H. Partial Regeneration/Proliferation of  the  Beta-Cells  in  the  Islets  of Langerhans  by Nigella  sativa L.  in Streptozotocin-Induced  Diabetic  Rats. Tohoku J Exp Med. 2003; 201:213–219. 13. Rchid H, Chevassus H, Nmila R, Guiral C, Petit  P,  Chokairi  M,  Sauvaire  Y. Nigella.
sativa Seed  Extracts  Enhance  Glucose- Induced Insulin Release From Rat-Isolated Langerhans Islets. Fundam Clin Pharmacol . 2004; 18(5):525-529. 14. Le  PM,  Benhaddou-Andaloussi  A,  Elimadi A,  Settaf  A,  Cherrah  Y,  Haddad  PS.  The
Petroleum  Ether  Extract  of Nigella  sativa
Exerts  Lipidloweringand  Insulin-Sensitizing
Actions  in  The  Rat. J  Ethnopharmacol .
2004; 94:251–259.
15. El-Tahir KEH, Bakeet DM. The Black Seed Nigella  Sativa Linn.  -  A  Mine  for  Multi Cures:  A  Plea  for  Urgent  Clinical Evaluation of Its Volatile Oil. J T U Med Sc.
2006; 1(1):1-19.
16. Stanhope  KL,  Havel  PJ.  Fructose Consumption:  Recent  Results  and  Their Potential  Implications. Ann  N  Y  Acad  Sci.
2010; 1190:15–24.
17. Poretsky L. Principles of Diabetes Mellitus.
Springer Science+Business Media. 2010.