Pengaruh Antikoagulan dan Waktu Penyimpanan terhadap Profil Hematologis Tikus ( Rattus norvegicus Berkenhout, 1769) Galur Wistar
Laksmindra Fitria 1*) , Lia Lavi Illiy 2) , dan Indah Riwantrisna Dewi 2)
1) Laboratorium Fisiologi Hewan Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada
2) Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada Jalan Teknika Selatan, Sekip Utara, Yogyakarta 55281 – Telp/Faks: (0274) 580839 *e-mail: laksmindraf@ugm.ac.id

## Abstract
Blood  is  important  component  since  it  reflects  individual  physiological  condition. Therefore,  blood  becomes  one  of  fundamental  parameters  in  preclinical/biomedical  test. Hematology  is  the  study  of  peripheral  blood  cells  condition  in  normal  and  disease. Erythrocytes  and  leukocytes  profiles  are  main  parameters  in  routine  hematological evaluation.  Blood  samples  sometimes  cannot  be  examined  immediately  for  various reasons. To keep the condition, anticoagulant is added and then stored in refrigerator for several  hours  to  several  days.  This  research  was  carried  out  to  study  the  profiles  of erythrocytes and leukocytes in healthy/normal Wistar rats ( Rattus norvegicus Berkenhout, 1769)  blood  samples  with  EDTA  or  Heparin  and  different  storage  duration  (0,  6,  18,  24, and  48  hours).  For  further  discussion,  data  were  statistically  analyzed  using  two-factor ANOVA  ( P <0.05).  Results  showed  that  anticoagulants  significantly  affected  erythrocytes and  leukocytes  profiles  ( P <0.05).  Erythrocytes  profile  in  EDTA-blood  sample  was  lower than  which  with  Heparin.  In  contrast  to  the  leukocytes  profile,  EDTA-blood  sample  was higher  than  which  with  Heparin.  With  increasing  storage  duration,  erythrocytes,  total leukocytes,  neutrophils,  and  lymphocytes  counts  decreased  significantly  ( P <0.05). Storage  duration  did  not  significantly  affect  hematocrit  value,  hemoglobin  concentration, as well as monocytes, eosinophils, and basophils counts ( P >0.05). In conclusion, the best hematological examination is using plain blood (without anticoagulant), however it must be accomplished  immediately  after  the  sample  is  obtained.  If  it  is  impossible,  EDTA-  or Heparin-blood samples can be used, in which the anticoagulant type must be stated in the report. Likewise, hematological examination using anticoagulant also should be performed soon after the sample is received.
Keywords: hematology, anticoagulant, storage, Wistar rats

## Pendahuluan
Darah  merupakan  jaringan  ikat khusus  yang  beredar  di  seluruh  tubuh, berperan  dalam  pengangkutan  gas-gas pernafasan, hasil pencernaan, komponen-komponen  fungsional  seperti enzim,  hormon,  dan  berbagai  molekul lainnya, serta pembuangan limbah metabolisme. Darah tersusun dari komponen  sel  dan  cairan  yang  disebut plasma. Sel-sel darah terdiri atas eritrosit, leukosit,  dan  trombosit.  Masing-masing sel  memiliki  tugas  yang  penting  untuk
menunjang  aktivitas  tubuh  (Keohane et al. ,  2015).  Oleh  karena  itu,  pemeriksaan darah dapat menunjukkan kondisi fisiologis  suatu  individu  sebagai  bentuk tanggapan  terhadap  perubahan  status fisiko-kimia  di  lingkungannya.  Karena alasan  ini,  maka  darah    menjadi  salah satu  parameter  pokok  dalam  penelitian praklinik/biomedik (Fitria dan Sarto, 2014).
Menurut  Keohane et  al. (2015), hematologi adalah ilmu yang mempelajari pemeriksaan  kondisi  sel-sel  darah  perifer dalam  kondisi  normal  maupun  patologis.
Pencatatan profil hematologis pada hewan-hewan  sehat  atau  normal  secara berkala  dapat  digunakan  sebagai  acuan nilai  awal (baseline) atau  kontrol  dalam suatu  penelitian  (Fitria  dan  Sarto,  2014). Di  wilayah  Biologi,  kajian  hematologis menyediakan deskripsi profil darah organisme, baik hewan ataupun manusia. Di  kajian  praklinik,  data  hematologis menjadi acuan sebelum penelitian dilanjutkan ke tahap berikutnya. Di bidang medis/klinis,  uji  hematologis  digunakan untuk  kepentingan  diagnosis,  prognosis, dan  pemantauan  selama  proses  terapi dan pengobatan (Keohane et al. , 2015). Salah  satu  parameter  pemeriksaan hematologis  yang  rutin  dilakukan  adalah hitung darah lengkap atau complete blood count (CBC). Variabel pengamatan berdasarkan  rekomendasi International Committee for Clinical
Pathology Harmonization meliputi: Profil  eritrosit: jumlah  eritrosit,  hemoglobin,  hematokrit, perhitungan mean  corpuscular  volume (MCV), mean  corpuscular  hemoglobin (MCH), dan mean corpuscular hemoglobin concentration (MCHC); Profil leukosit: jumlah  leukosit  total  dan diferensial  yang  tersusun  dari  neutrofil, limfosit,  monosit,  eosinofil,  dan  basofil); serta Profil  trombosit: jumlah  trombosit dan  perhitungan mean  platelet  volume (MPV) (Reagan et al. , 2010).
Penanganan sampel darah
menentukan
hasil pemeriksaan hematologis,  antara  lain  medium,  pH, suhu,  tonisitas,  perlakuan  mekanik,  dan lain-lain.  Hal-hal  yang  perlu  diperhatikan dalam  pengujian  hematologis  terutama adalah  antikoagulan,  jeda  waktu  setelah sampel diperoleh hingga dilakukan
pemeriksaan,  dan  penyimpanan  (Cora et al. ,  2012;  Lindstrom et  al. ,  2015).  Luka pada  pembuluh  darah  mengakibatkan keluarnya  darah  (perdarahan).  Darah yang  keluar  dari  pembuluh  akan  segera mengalami  koagulasi (clotting) .  Oleh karena  itu  diperlukan  penambahan  zat untuk  mencegah  koagulasi  darah  yang dikenal sebagai antikoagulan. Jenis antikoagulan  yang  sering  digunakan adalah ethylene  diamine  tetra  acetic  acid (EDTA)  dan  Heparin.  EDTA  bekerja dengan  cara  mengikat  kalsium  yang dibutuhkan untuk proses koagulasi, sedangkan  Heparin  bekerja  dengan  cara mengikat  antitrombin  dan  menghambat aktivasi trombin (Keohane et al. , 2015). Sampel darah yang diterima kadangkala  tidak  langsung  diperiksa karena  berbagai  alasan.  Untuk  menjaga kondisi supaya tidak rusak, maka sampel darah  biasanya  disimpan  di  dalam  lemari pendingin (refrigerator) bersuhu  4  C selama  beberapa  jam  hingga  beberapa hari.  Penyimpanan  sampel  darah  dan penggunaan  antikoagulan  yang  berbeda menentukan reliabilitas dan validitas hasil pengujian hematologis. Penundaan pemeriksaan  menyebabkan  perubahan hasil  uji  karena  sifat  darah  yang  cepat rusak  apabila  dibiarkan  di  kondisi  yang tidak ideal (Queen et al. , 2014).
Penelitian ini bertujuan untuk mempelajari  profil  eritrosit  dan  leukosit pada sampel darah tikus ( Rattus norvegicus Berkenhout,  1769)  Galur Wistar yang sehat/normal dengan antikoagulan  EDTA  atau  Heparin  dan variasi  waktu  penyimpanan,  yaitu  6,  18, 24, dan 48 jam di dalam lemari pendingin.

## Materi dan Metode
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  tikus  putih  ( Rattus norvegicus Berkenhout, 1769) galur Wistar  jantan  yang  telah  dewasa  atau berumur  8  minggu.  Hewan  uji  diperoleh dari  LPPT-UGM  Unit  IV  dengan  rerata berat badan 200 g sebanyak 5 ekor. Tiga buah tabung koleksi darah kapiler Greiner
Bio-One VACUETTE  MiniCollect 
disiapkan,  terdiri  atas  tabung  yang  telah mengandung  K3-EDTA  (tutup  warna
lavender), tabung yang telah mengandung  Li-Heparin  (tutup  warna hijau), dan sebagai kontrol adalah tabung tanpa  antikoagulan  (tutup  warna  putih). Sampel  darah  dikoleksi  dari sinus  retro- orbitalis setelah  hewan  uji  dianestesi menggunakan  Ketalar  dosis  50  mg/kg berat badan.
Profil  hematologis  yang  diamati meliputi: Profil  eritrosit: jumlah  eritrosit (x10 6 /µL),  nilai  hematokrit  (%),  dan kadar hemoglobin (g/dL); Profil leukosit: jumlah  leukosit  total  dan  diferensial
(x10 3 /µL).  Cara  penghitungan  dilakukan secara manual berdasarkan metode yang dikembangkan  oleh  Rodak  (Keohane et al. , 2015), yaitu menggunakan
hemositometer double improved Neubauer  untuk  penghitungan  jumlah eritrosit dan leukosit,
sentrifus mikrohematokrit  untuk  penentuan  nilai hematokrit, hemoglobinometer Sahli untuk pengukuran kadar hemoglobin, dan preparat  apus  darah  tipis  (hemogram) dengan  pewarna  Giemsa  1:20  untuk pengamatan  leukosit  diferensial  yang terdiri  atas  neutrofil,  limfosit,  monosit, eosinofil, dan basofil. Pemeriksaan hematologis  dilakukan  di  Laboratorium Fisiologi Hewan Fakultas Biologi
Universitas  Gadjah  Mada  Yogyakarta. Pengamatan  dilakukan  pada  sampel darah  kondisi  segar  atau  jam  ke-0  dan setelah disimpan di dalam lemari pendingin (refrigerator) bersuhu    4  C  , yaitu pada jam ke-6; 18; 24; dan 48.
Hasil  pemeriksaan  profil  eritrosit dan  leukosit  ditabulasi  untuk  dihitung rerata  dan  penyimpangannya,  kemudian disajikan  dalam  bentuk  histogram.  Untuk mempelajari lebih lanjut hasil pemeriksaan hematologis, maka dilakukan analisis secara statistik berdasarkan ANOVA two-factor ( P <0,05) menggunakan  piranti  lunak  Microsoft 
Excel  2010.

## Hasil dan Pembahasan
Penentuan  profil  hematologis  yang terbaik  adalah  yang  menggunakan  darah tanpa  antikoagulan  dan  dilakukan  segera setelah  sampel  diperoleh.  Berdasarkan Schermer  (1967)  dalam  Ringler  and Dabich  (1979),  waktu  koagulasi  pada tikus  laboratorium  berkisar  antara  2-5 menit.  Dengan  demikian,  sampel  darah tanpa  antikoagulan  hanya  dapat  diuji pada  kondisi  segar  (jam  ke-0),  yaitu segera  setelah  sampel  diperoleh  atau kurang dari 2 menit. Darah setelah keluar dari pembuluhnya akan segera mengalami  koagulasi.  Oleh  karena  itu sampel darah tanpa penambahan antikoagulan tidak dapat disimpan karena telah rusak sehingga tidak dapat dilakukan pemeriksaan hematologis. Menurut  Butenas  and  Mann  (2002), koagulasi  darah  dimulai  sesaat  setelah endotelium  mengalami  kerusakan  secara fisik  (luka)  atau  akibat  efek  zat  kimia seperti  sitokin  dalam  proses  inflamasi sehingga  terjadi  perdarahan (bleeding) . Kondisi  ini  mengaktivasi  faktor  jaringan (kofaktor)  untuk  membentuk  kompleks dengan protease serin (faktor VIIa) dalam darah  yang  menginisiasi  reaksi cascade koagulasi dari  jalur  ekstrinsik.  EDTA mengikat  kalsium  yang  diperlukan  untuk
aktivasi  faktor  X  bersama-sama  dengan faktor VIIa, sementara Heparin
menghambat  aktivasi  faktor  XII  yang merupakan awal reaksi cascade koagulasi dari jalur intrinsik.
Dalam  penelitian  ini  tidak  dilakukan pemeriksaan  profil  trombosit  dan  faktor- faktor  yang  mempengaruhi  hemostasis seperti waktu perdarahan, waktu koagulasi, kadar  kalsium  darah,  dan  lain- lain.  Menurut  Vagdatli et  al. (2010),  profil trombosit lengkap meliputi jumlah trombosit, mean  platelet  volume (MPV), mean  platelet  component (MPC)  dan platelet  distribution  width (PDW).  Untuk mendapatkan  profil  hematologis  yang baik,  maka  disarankan  adanya  penelitian lanjutan dengan parameter profil trombosit  lengkap,  sehingga  diperoleh data pendukung untuk menjelaskan kondisi sampel darah dengan
antikoagulan  yang  berbeda.  Apabila semua indeks trombosit tersebut ditentukan,  maka  dapat  digunakan  untuk mempelajari aktivasi proses koagulasi.
Profil  hematologis  yang  terdiri  dari profil  eritrosit  dan  leukosit  dari  sampel darah tikus ( Rattus norvegicus
Berkenhout,  1769)  Galur  Wistar  dengan variasi antikoagulan dan waktu penyimpanan  disajikan  pada  Gambar  1 berikut ini :
Gambar  1.  Profil  hematologis  sampel  darah  tikus  ( Rattus  norvegicus Berkenhout,  1769) Galur Wistar dengan variasi antikoagulan dan waktu penyimpanan.
Keterangan:  A=  Jumlah  eritrosit;  B=  Nilai  hematokrit;  C=  Kadar  hemoglobin;  D=  Jumlah  total leukosit;          E=  Jumlah  neutrofil;  F=  Jumlah  limfosit;  G=  Jumlah  monosit;  H=  Jumlah  eosinofil;  I= Jumlah basofil.
Berdasarkan  jenis antikoagulan, nilai  profil  eritrosit  pada  sampel  darah- EDTA  lebih  rendah  daripada  sampel darah-Heparin. Sebaliknya pada pemeriksaan profil leukosit, sampel darah-EDTA memiliki kecenderungan nilai lebih  tinggi  daripada  sampel  darah- Heparin.  Walencik  and  Witeska  (2007) menyatakan bahwa EDTA dapat menyebabkan eritrosit
mengalami hemolisis sehingga jumlahnya berkurang. Oleh karena itu tidak disarankan menggunakan  EDTA  untuk  pemeriksaan profil  eritrosit.  EDTA  dapat  digunakan untuk  pemeriksaan  profil  leukosit,  namun Heparin  adalah  yang  terbaik.  Namun demikian,  menurut    Stokol et  al. (2014), Heparin juga dapat menyebabkan agregasi sel-sel darah sehingga menganggu  pemeriksaan  hematologis.
Untuk mengantisipasi terjadinya hemolisis atau  agregasi  ini,  maka  konsentrasi antikoagulan harus
diperhatikan, sehingga sesuai dengan kondisi lingkungan  yang  dibutuhkan  oleh  sel-sel darah (Ekanem et al. , 2012).
Seiring bertambahnya waktu penyimpanan, jumlah eritrosit, nilai hematokrit, jumlah total leukosit, neutrofil, limfosit, dan monosit mengalami penurunan (Gambar 1.A-B, F-G).
Sementara  itu,  kadar  hemoglobin  relatif stabil  (Gambar  1.C),  jumlah  eosinofil mengalami  peningkatan  (Gambar  1.H), dan jumlah basofil fluktuatif (Gambar 1.I). Penelitian  oleh  Al-Nuaimy  (2008)  pada samkple darah manusia juga memberikan hasil  yang  serupa.  Adanya  perubahan pada  profil  eritrosit  dan  leukosit  selama penyimpanan berkaitan dengan
perubahan  fisiko-kimiawi  yang  dikenal sebagai storage lesion .
Untuk  mempelajari lebih lanjut hasil pemeriksaan hematologis, maka di-
lakukan  analisis  secara  statistik  ber- dasarkan  ANOVA two-factor ( P <0,05). Rangkuman  hasil  analisisnya  disajikan pada Tabel 1 berikut ini :
Tabel 1. Rangkuman hasil analisis statistik profil  hematologis  sampel darah tikus ( Rattus norvegicus Berkenhout,  1769)  Galur  Wistar  dengan  variasi  antikoagulan  dan waktu penyimpanan.
VARIABEL ANTIKOAGULAN WAKTU PENYIMPANAN P <0,05 P >0,05 P <0,05 P >0,05 A. PROFIL ERITROSIT 1. Jumlah eritrosit (x10 6 /  L) v v 2. Nilai hematokrit (%) v v 3. Kadar hemoglobin (g/dL) v v B. PROFIL LEUKOSIT 1. Jumlah total leukosit (x10 3 /  L) v v 2. Jumlah neutrofil (x10 3 /  L) v v 3. Jumlah limfosit (x10 3 /  L) v v 4. Jumlah monosit (x10 3 /  L) v v 5. Jumlah eosinofil (x10 3 /  L) v v 6. Jumlah basofil (x10 3 /  L) v v
Berdasarkan  Tabel  1,  antikoagulan ternyata  berpengaruh  secara  signifikan terhadap  semua  paramater  profil  eritrosit dan  leukosit  yang  diuji  ( P <0,05).  Oleh karena itu, pemeriksaan profil hematologis sebaiknya menggunakan darah  tanpa  antikoagulan  dan  dilakukan segera setelah sampel diperoleh. Mengingat  bahwa  waktu  koagulai  darah pada tikus laboratorium berkisar antara 2- 5  menit  (Schermer,  1967  dalam  Ringler and  Dabich,  1979),  maka  pemeriksaan profil  hematologis  menggunakan  darah segar  sebaiknya  dilakukan  kurang  dari  2 menit  untuk  mengantisipasi  terjadinya koagulasi.
Menurut Baker et al. (1993), Apabila pemeriksaan  tidak  memungkinkan  untuk langsung  dilakukan  karena  berbagai alasan,  maka  dapat  digunakan  anti- koagulan yang sesuai dan jenis antikoagulan  harus  dijelaskan  dalam pelaporan.  Menurut  Stokol et  al. (2014), pada umumnya pemeriksaan hematologis menggunakan antikoagulan EDTA. Heparin  tidak  disarankan  untuk  hitung darah  lengkap  karena  sel-sel  akan menggumpal (agregasi) yang me-
ngakibatkan  penghitungan  tidak  valid. Untuk  pemeriksaan  hematologis  pada Mammal  lebih  baik  menggunakan  EDTA, sedangkan Heparin lebih tepat digunakan untuk  uji  kimia  darah  (Perelman,  1999 dalam  Mafuvadze  and  Erlwanger,  2007). Penggunaan  EDTA  untuk  pemeriksaan hematologis  dan  morfologis  sel-sel  darah bahkan  telah  direkomendasikan  oleh International  Council  for  Standardization in Haematology sejak tahun 1993 (Freise et  al. ,  2009).  Apabila  dibutuhkan  nilai pembanding  sebagai  rujukan  (misalnya untuk kepentingan dignostik), maka hendaknya  juga  mengacu  pada  profil hematologis  normal  dari  sampel  darah yang diketahui menggunakan anti- koagulan  yang  sama  dengan  sampel darah yang diuji.
Menurut  Cora et  al. (2012)  dan Lindstrom et  al. (2015),  sampel  darah tikus  dan  mencit  dengan  EDTA  lebih stabil  dan  dapat  disimpan  pada  suhu ruangan maupun di dalam lemari pendingin hingga 48 jam. Namun demikian, Stokol et al. (2014) menyarankan    bahwa  apabila  tidak  bisa langsung diperiksa, darah-EDTA
sebaiknya  disimpan  di  dalam  lemari pendingin  segera  setelah  pengambilan darah  (koleksi)  dari  hewan  yang  akan diuji. Hasil penelitian menunjukkan bahwa profil  hematologis  sampel  darah  tikus mengalami  perubahan  yang  signifikan setelah penyimpanan selama 24 jam.
Berdasarkan Tabel 1, waktu penyimpanan ternyata menurunkan jumlah  eritrosit,  total  leukosit,  neutrofil, dan  limfosit  secara  signifikan  ( P <0,05). Makin  lama  penyimpanan  maka  jumlah sel-sel  terhitung  makin  berkurang  karena sel-sel  rusak  (hemolisis)  atau  mati. Selama  penyimpanan,  sel-sel  darah mengalami perubahan biokimiawi, biomekanis, dan reaksi imunologis, menyebabkan terjadinya kerusakan struktural/morfologis yang dikenal sebagai storage  lesion .  Eritrosit  adalah  sel  darah yang paling mudah mengalami kerusakan ini.  Konsentrasi  antikoagulan  yang  tidak
tepat juga dapat menyebabkan gangguan tonisitas,  menyebabkan  pembengkakan sel,  hemolisis,  atau  krenasi  (Ekanem et al. ,  2012).  Sampel  darah  tikus  Sprague- Dawley dengan EDTA yang telah mengalami proses penyimpanan menunjukkan adanya pembengkakan eritrosit  maupun  krenasi  ( echinocyte ), sementara  leukosit  rusak,  degenerasi, dan  terjadi  autolisis menjadi smudge cell . Hal  ini  terjadi  karena  kekurangan  ATP, gangguan homeostasis kalsium, pH tinggi, dan pengaruh tonisitas (Cora et al. ,
2012). Lebih lanjut dinyatakan oleh Stokol et  al. (2014)  bahwa  EDTA  bersifat hipertonik terhadap sel-sel darah, sehingga  konsentrasinya  harus  tepat.
Beberapa gambaran
morfologis kerusakan  eritrosit  dan  leukosit  akibat penyimpanan yang dijumpai dalam penelitian  ini  disajikan  pada  Gambar  2  :
Gambar 2. Perubahan morfologis eritrosit dan leukosit akibat penyimpanan yang dijumpai dalam penelitian ini (berdasarkan Cora et al. , 2012).
Keterangan: A= pembengkakan eritrosit; B= krenasi (echinocyte) ; C= hemolisis; D= smudge cell .
Perubahan  ukuran  eritrosit  dapat dipelajari secara kuantitatif dengan menghitung  MCV.  Pada  penelitian  ini tidak dilakukan perhitungan MCV.
Disarankan  untuk  menghitung  indeks eritrosit  yang  meliputi  MCV,  MCH,  dan MCHC dalam penelitian serupa.
Hemolisis  dapat  diamati  dari  warna plasma  yang  menjadi  kemerahan  karena
hemoglobin.  Makin  banyak  hemoglobin yang  dilepaskan  dari  eritrosit  yang  lisis, maka kadar hemoglobin terhitung meningkat.  Perubahan  warna  plasma sudah  tampak  pada  pengamatan  jam ke- 6, baik pada sampel darah dengan EDTA maupun Heparin.
Penyimpanan  menyebabkan  lobu- lasi,  disintegrasi,  dan  vakuolisasi  pada
leukosit  yang  mempengaruhi  penyerapan zat  warna  pada  saat  pembuatan  sediaan hemogram sehingga dapat meng- akibatkan salah interpretasi dalam mengenali  jenis  leukosit.  Oleh  karena  itu direkomendasikan untuk melakukan hitung  darah  lengkap  tidak  lebih  dari  6 jam  sejak  sampel  darah  diperoleh. Apabila pemeriksaan tidak dapat langsung dilakukan, maka sampel hendaknya  disimpan  di  dalam  lemari pendingin (Cora et al. , 2012; Stokol et al. ,
2014;  Lindstrom et  al. ,  2015).  Sementara itu, pembuatan hemogram untuk penghitungan  jumlah  leukosit  diferensial dan pengamatam morfologis sel-sel darah harus  dilakukan  segera  setelah  darah dikoleksi  dari  hewan  uji  Stokol et  al. (2014).
Berdasarkan Tabel 1, waktu penyimpanan  ternyata  tidak  berpengaruh secara signifikan terhadap jumlah monosit,  eosinofil,  dan  basofil  (P>0,05). Hal  ini  karena  ketiga  jenis  leukosit  ini secara  normal  memiliki  proporsi  yang sangat  sedikit  di  dalam  darah  perifer. Nilainya akan meningkat secara signifikan dalam  kondisi  patologis  (Reagan et  al. , 2010;  Keohane et  al. ,  2015).  Selain jumlahnya  yang  sangat  sedikit,  ketiga jenis  leukosit  ini  tidak  dapat  ditemukan lagi seiring bertambahnya waktu penyimpanan.  Neutrofil  dan  limfosit  pada tikus lebih tahan lama dalam penyimpanan daripada monosit, eosinofil, dan basofil (Cora et al. , 2012).
Pemeriksaan profil hematologis tidak hanya dilakukan pada sampel darah
manusia dan hewan model praklinik saja, namun  juga  pada  hewan-hewan  lainnya untuk  berbagai  kepentingan,  mulai  dari penyediaan database , diagnostik kesehatan,  konservasi,  hingga  kajian genetika  dan  evolusi.  Oleh  karena  itu perlu metode yang tepat dan sesuai untuk menangani sampel darah yang akan diuji. Hal-hal  yang  harus  diperhatikan  antara lain: jenis antikoagulan, waktu penyimpanan, jeda waktu setelah sampel diperoleh  hingga  dilakukan  pemeriksaan, cara pengambilan dan penanganan sampel,  serta  parameter  yang  hendak diamati. Metode pemeriksaan
hematologis  dalam  penelitian  ini  belum tentu tepat untuk diterapkan pada sampel darah manusia, mammal lainnya, demikian juga unggas, ikan, dan sebagainya.  Hal  ini  ditegaskan  oleh Windberger  and  Baskurt  (2007)  dan Reagan et al. (2010), bahwa sel-sel darah pada hewan-hewan anggota kelas Vertebrata memiliki perbedaan morfologis dan  fisiologis.  Sel-sel  darah  bervariasi dalam  hal  bentuk,  ukuran,  dan  ada tidaknya  nukleus  pada  eritrosit.  Di samping  itu  biokimiawi  sel-sel  darah juga berbeda,  ditandai  dengan  afinitasnya dalam  menyerap  warna  saat  diproses untuk  pembuatan  preparat  hemogram. Sifat biokimiawi menunjukkan mekanisme fisiologis yang spesifik pada sel-sel darah tersebut. Oleh karena itu profil hematologis setiap species bersifat spesifik.

## Simpulan
Penentuan  profil  hematologis  yang terbaik adalah menggunakan darah tanpa antikoagulan dan dilakukan segera setelah  sampel  diperoleh  (kurang  dari  2 menit).    Apabila  tidak  memungkinkan, maka  dapat  digunakan  EDTA  atau Heparin  sebagai  antikoagulan,  dan  jenis antikoagulan  harus  dijelaskan  dalam pelaporan.  Seiring  waktu,  sampel  darah yang  disimpan  di  dalam  lemari  pendingin mengalami perubahan fisik maupun  profil hematologisnya. Oleh karena itu, pemeriksaan hitung darah lengkap
hendaknya tetap dilakukan segera setelah  sampel  diterima,  yaitu  tidak  lebih dari  6  jam.  Untuk  pembuatan  preparat hemogram  dikerjakan  langsung  setelah sample darah diterima.
Pemeriksaan  profil  eritrosit  dan leukosit saja tidak cukup untuk penyediaan data profil hematologis. Untuk mendapatkan  profil  hematologis  (hitung darah  lengkap)  yang  baik  dan  lengkap, maka disarankan untuk melakukan perhitungan  indeks  eritrosit  yang  meliputi MCV,  MCH,  dan  MCHC,  juga  jumlah trombosit  dan  indeks  trombosit  (MPV, MPC,  dan  PDW).  Di  samping  itu
dilakukan  juga  pengamatan  secara  lebih terperinci  mengenai  morfologi  sel-sel darah  dan  artifak  menggunakan  sediaan
hemogram  untuk  mengamati  adanya storage lesion .

## Daftar Pustaka
Al-Nuaimy,  K.M.I.  2008.  Haematological Changes  in  Stored  Blood. J.  Edu  & Sci 21(4): 49-56.
Butenas,  S.  and  Mann,  K.G.  2002.  Blood Coagulation.  Review. Biochemistry (Moscow) 67(1): 3-12.
Cora,  M.C.,  King,  D.,  Betz.  L.J.,  Wilson, R., and Travlos, G.S. 2012. Artifactual  Changes  in  Sprague – Dawley Rat Hematologic Parameters after Storage of Samples at 3 °C and 21 °C. Journal of  the  American  Association  for Laboratory  Animal  Science 51(5): 616-621.
Ekanem,  A.P.,  Udoh,  A.J.,  and  Inyang- Etoh,  A.P.  2012.  Effect  of  Different
Anticoagulants  on  Hematological Parameters of Oreochromis niloticus . IJSAT 2(6):  17-20.  ISSN 2221-8386. http://www.ijsat.com
Fitria,  L.  dan  Sarto,  M.,  2014.  Profil
Hematologi Tikus ( Rattus norvegicus Berkenhout, 1769) Galur Wistar  Jantan  dan  Betina  Umur  4,
6,  dan  8  Minggu. Biogenesis 2(2): 94-100. ISSN 2302-1616.
Freise,  K.J.,  Schmidt,  R.L.,  Gingerich,
E.L., Veng-Pedersen, P., and Widness,  J.A.  2009.  The  Effect  of Anticoagulant, Storage Temperature  and  Dilution  on  Cord Blood Hematology Parameters Over
Time. Int J Lab Hematol 31(5): 496-
504.
Keohane, E.M., Smith, L.J., and Walenga,
J.M.  2015. Rodaks's  Hematology:
Clinical  Principles  and  Applications . 5 th Ed. Elsevier/Saunders. St. Louis. Missouri. ISBN 978-0-323-23906-6. Lindstrom, N.M., Moore, D.M.,
Zimmerman,  K.,  and  Smith.  S.A. 2015.  Hematologic  Assessment  in Pet  Rats,  Mice,  Hamsters,  and Gerbils:  Blood  Sample  Collection and  Blood  Cell  Identification. In: Campbell  T.W.  and  Rupley,  A.E. (Eds.).  2015. Hematology.  Clinics Review  Articles:  Veterinary  Clinics
of  North  America:  Exotic  Animal Practice 18(1):  21-32.  Elsevier  Inc. Philadelphia,  Pennsylvania.  ISSN 1094-9194.  ISBN-13  978-0-323- 35598-8.
Mafuvadze, B. And Erlwanger, K.H. 2007. The  Effect  of  EDTA,  Heparin,  and Storage on the Erythrocyte Osmotic Fragility,  Plasma  Osmolality,  and
Hematocrit of Adult Ostriches ( Struthio camelus ). Veterinarski Arhiv 77(5): 427-434.
Queen,  E.,  Ifeanyi,  O.E.  and  Chinedum, O.K. 2014. The Effect of Storage on Full  Blood  Count  in  Different Anticoagulant. IOSR-JDMS 13(9): 128-131.  e-ISSN:  2279-0853,  p- ISSN: 2279- 0861. www.iosrjournals.org Reagan,  W.J.,  Poitout-Belissent,  F.M., and Rovira, A.R.I. 2010. Design and Methods Used for Preclinical Hematotoxicity  Studies. In: Weiss, D.J.  and Wardop,  K.J.  (Eds.)  2010. Schalm's  Veterinary  Hematology. 6 th Ed.  Wiley-Blackwell,  A  John
Wiley  &  Sons,  Ltd.  Pub.  Ames. Iowa. ISBN 978-0-8138-1798-9. Ringler,  D.H.  and  Dabich,  L.  1979.
Hematology and Clinical Biochemistry. In: Baker, H.J.,
Lindsey,  J.R.,  and  Weisbroth,  S.H. (Eds.).  The  Laboratory  Rat.  Vol.1: Biology  and  Diseases.  American College of Laboratory Animal
Medicine  Series.  Academic  Press. New York.
Stokol,  T.,  Priest,  H.,  Behling-Kelly,  E., and Babcock, G. 2014. Samples for Hematology. Animal Health Diagnostic Center. Clinical Pathology  Laboratory.  College  of Veterinary Medicine, Cornell University.    Ithaca,  New  York. https://ahdc.vet.cornell.
edu/sects/ clinpath/sample/test/hem a.cfm Diakses 14 Oktober 2015.
Walencik,  J.  And  Witeska,  M.  2007.  The
Effects of Anticoagulants on Hematological  Indices  and  Blood Cell  Morphology  of  Common  Carp
( Cyprinus carpio L.). Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol. 146(3): 331-335.
Windberger,  U.  and  Baskurt,  O.K.  2007.
Comparative Hemorheology. In: O.K. baskurt et al. (Eds.) Handbook of Hemorheology and Hemodynamics. IOS Press. Amsterdam. Pp. 267-285.
Vagdatli,  E.,  Gounari,  E.,  Lazaridou,  E., Katsibourlia,  E.,  Tsikopoulou,  F., and  Labrianou,  I.  2010.  Platelet distribution width: a simple, practical and  specific  marker  of  activation  of coagulation. Hippokaratia 14(1): 28- 32.