## PENGUKURAN KEPADATAN BAKTERI Vibrio harveyi SECARA CEPAT DENGAN MENGGUNAKAN SPECTROFOTOMETER
MEASUREMENT STANDARD OF POPULATION DENSITY OF Vibrio harveyi USING METHODS OF PLATE COUNT (TPC) AND SPECTROPHOTOMETER
Diterima tanggal 06 Februari 2019,  Disetujui tanggal 30 Maret 2019
Seniati, Marbiah dan Andi Irham Jurusan Budidaya Perikanan, Politeknik Pertanian Negeri Pangkep Emal : seniati.pasca@gmail.com

## ABSTRAK
Bakteri Vibrio  harveyi adalah  salah  satu  jenis  bakteri  yang  sering  digunakan sebagai  bahan  praktikum  maupun  bahan  penelitian  di  Laboratorium  Kesehatan  Ikan, Jurusan  Budidaya  Perikanan,  Politeknik  Pertanian  Negeri  Pangkep.    Penggunaan bakteri V.  harveyi biasanya  dalam  kepadatan  tertentu  sesuai  dengan  kebutuhan. Untuk  menentukan  kepadatan  bakteri V.  harveyi dapat  menggunakan  metode Total Plate  Count (TPC).    Metode  ini  membutuhkan  waktu  minimal  24  jam  untuk  dapat menentukan  kepadatan  bakteri,  sehingga  metode  ini  dianggap  kurang  efektif digunakan  untuk  kebutuhan  waktu  yang  lebih  cepat.    Untuk  itu  perlu  melakukan pengembangan  metode  yang  lebih  cepat  dan  akurat  dengan  menggunakan spektrofotometer  untuk  melihat  tingkat  kekeruhan  ( Optical  Density )  yang  terbaca melalui  nilai  absorbansi  yang  dihasilkan.  Penelitian  dilakukan  di  Laboratorium Kesehatan Ikan selama kurang lebih 3 bulan dengan menggunakan V. harveyi sebagai sampel uji yang bersumber dari BBRBAP Maros.  Populasi bakteri V. harveyi dihitung dengan  metode  TPC  dan  dalam  waktu  yang  bersamaan  juga  dilakukan  pengukuran OD  dengan  menggunakan  spectrofotometer  panjang  gelombang  620  nm.    Untuk mendapatkan  nilai  akurasi  tinggi  maka  kegiatan  yang  sama  dilakukan  sebanyak  tiga kali  ulangan.  Hasil  analisis  regresi  dari  nilai  TPC  dengan  nilai  OD  menunjukkan  pola linier,  hal  ini  menunjukkan  ada  hubungan  korelasi  antara  nilai  OD  dengan  kepadatan bakteri.      Semakin  tinggi  kepadatan  bakteri  maka  nila  OD  juga  semakin  tinggi. Hubungan  kedua  parameter  tersebut  mempunyai  persamaan  y  =  6,2818x  +  1,7026 dengan nilai korelasi (r) = 0,9506.   Artinya bahwa, setiap peningkatan nilai absorbansi (OD)  akan  diikuti  oleh  meningkatnya  jumlah  bakteri.    Perhitungan  populasi  bakteri V. harveyi dapat  dilakukan  dengan  meregresikan  nilai  OD  dan  jumlah  bakteri  kedalam persamaan garis kurva standar y = = ax + b, dimana y = jumlah kepadatan bakteri, dan x = besarnya nilai OD..
Kata kunci : Standard, TPC, Spectrofotometer, Vibrio harveyiii, OD.

## ABSTRACT
Use  of  bacteria V.  harveyi in  laboratory  experiments  usually  in  certain  density based  on  the  needs.  In  order  to  determine  density  of  bacteria,  it  can  be  used  TPC method. This method takes at least 24 h to determine the density of bacteria, so  that this  method  is  considered  ineffective  in  rush  and  urgent  activities.  Therefore,  it  is necessary  to  develop  faster  and  accurate  methods  using  spectrophotometer  to determine  absorbent  density  (absorbance)  of  each  serial  of  bacterial  dilution.  The research has carried out in Fish Health Laboratory of Pangkep State Polytechnic of
Agriculture  for  3  months  using V.  harveyi as  tested  bacteria  collected  from  BBRBAP Maros. Population of bacteria was counted by method of Total Plate Count (TPC) and in the same time absorbent density of bacteria was measured using spectrophotometer at 620 nm. In order to gain accurate data, the measurement was done twice. Results of TPC measurement were compared with results of absorbent density   measurement by spectrophotometer.
Kata kunci : Standard,  Spectrofotometer, Vibrio harveyi, Optical dencity.

## PENDAHULUAN
Bakteri Vibrio merupakan  salah  satu bakteri  yang  sangat  familiar  khususnya dalam lingkup budidaya perikanan, dimana  bakteri  ini  merupakan  salah  satu penyebab
penyakit yang dapat
menimbulkan  kematian  massal  pada budidaya  udang  (Feliatra,  dkk ., 2011). Penyerangannya  sangat  cepat  sehingga terkadang petani belum sempat mengambil tindakan penggendalian, organisme  budidaya  telah  mengalami kematian  dalam  prosentasi  yang  cukup tinggi.
Kasus  penyakit  vibriosis  banyak terjadi di berbagai daerah, dan penyebarannya sudah sangat luas, sehingga  banyak  peneliti  yang  berupaya mengkaji  lebih jauh sifat dan karakteristik dari Vibrio untuk dapat menemukan teknik atau  cara  pengendalian  dengan  cepat dan tepat. Nasmia (2007) mengemukakan bahwa Vibrio
sp menyebabkan  mortalitas  sebesar  90  % pada  larva  udang  windu,  menyebabkan kematian sampai 100% pada larva udang windu  ( Penaeus  monodon )  di  hatchery ( Manefield et.al , 2000).      Sedangkan Mariyono,  dkk. (2002)  dalam  melakukan uji terhadap tingkat mortalitas larva udang windu  (zoea)  meyimpulkan  bahwa V. harveyi dapat  menyebabkan  kematian sebesar 100% dengan konsentrasi bakteri  10 7 ,  10 6 ,  10 5 CFU/mL  dan  terjadi kematian sebesar 96%  pada konsentrasi bakteri  10 4 ,  10 3 CFU/mL  yang dilakukan selama  24  jam  perendaman.    Bakteri V. vulnificus dapat  menjadi  patogen  pada ikan  sidat  dan  manusia  apabila  bersifat indol  negatif  dan  serologik  homogen sedangkan  pathogen  pada  manusia apabila  bersifat  indol  positif  (Desrina, 2006).
Kajian  penyakit  vibriosis  semakin sering  dilakukan  sehingga  keberadaan bakteri  ini  sangat  mudah  ditemukan  di laboratorium khususnya laboratorium mikrobiologi  dan  laboratorium  kesehatan ikan.  Intensitas  penggunaan  bakteri  ini sangat tinggi, oleh karenanya stok biakan bakterinya  senantiasa  harus  ada  di laboratorium. Selain  itu,  laboratorium juga sebaiknya dapat menyediakan vibrio dengan  kepadatan  sesuai  kebutuhan pendidikan  maupun  penelitian  dalam waktu  yang  singkat  dan  tepat.    Metode yang  sering  digunakan  selama  ini  adalah metode  Mack  Farland  yaitu  suatu  larutan dengan  deretan  tingkat  kekeruhan  yang berbeda yang digunakan sebagai standar kepadatan populasi
10 1
hinggga kepadatan  10 10 .    Metode  ini  sangat sederhana dan setidaknya dapat membantu dalam kondisi yang mendesak,    namun  memiliki  kekurangan yaitu  warna  larutan  terkadang  berbeda dengan  warna  bakteri  yang  ditumbuhkan pada media cair sehingga sering membingungkan laboran dalam menentukan kepadatan populasi.  Metode lain  yang  biasa  digunakan  adalah Total Plate Count (TPC). Metode ini menghasilkan  data  yang  cukup  akurat, namun  waktu  penyajiannya  cukup  lama yaitu sekitar 24 jam,  sehingga terkadang dalam suatu
penelitian yang membutuhkan  data  kepadatan  bakteri dalam  waktu  singkat,  maka  hal  ini  akan menjadi  suatu  kendala.    Oleh  karena  itu, dianggap  perlu  melakukan  penelitian  di laboratorium terkait pengembangan metode  perhitungan  populasi  bakteri khususnya  bakteri V.  harveyi yang waktunya lebih cepat dan hasilnya akurat yaitu dengan menggunakan spectrofotometer.
Seniati.,  dkk.    Pengukuran  Kepadatan  Bakteri  Vibrio  Harveyi  Secara  Cepat  dengan Menggunakan Spectrofotometer

## RUMUSAN MASALAH
Perhitungan kepadatan populasi bakteri V. harveyi selama ini menggunakan metode TPC, membutuhkan  waktu  sekitar  24-48  jam, sehingga apabila dibutuhkan data kepadatan  populasinya  dalam  waktu cepat untuk kepentingan praktikum ataupun  penelitian,  maka  hal  ini  akan menjadi suatu masalah.   Oleh karena itu, dianggap perlu melakukan pengembangan metode pengukuran populasi  bakteri V.  harveyi yang  lebih cepat  dan  akurat  dengan  menggunakan spectrofotometer.

## TUJUAN PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk  mendapatkan  kurva  standar  dan persaman  regresi  dari  nilai  TPC  dan  nilai OD  yang  dapat  dijadikan  sebagai  dasar dalam  menghitung  kepadatan  bakteri V. harveyi dengan menggunakan spectrofotometer. Manfaat yang
diharapkan  dari  penelitian  ini  adalah perhitungan  populasi  bakteri V.  harveyi menjadi  lebih  cepat  dan  lebih  akurat. Pelaksanaan praktikum
ataupun penelitian  dapat  berjalan  dengan  normal sesuai dengan target waktu yang ditetapkan.

## METODE PENELITIAN Lokasi Penelitian dan lama Penelitian
Penelitian  ini  berlangsung  selama kurang  lebih  6  bulan  yang    dilaksanakan di  Laboratorium  Kesehatan  Ikan    dan Laboratorium  Basah  Jurusan  Budidaya Perikanan  Politeknik  Pertanian  Negeri Pangkep.

## Bahan  Dan Alat Penelitian
Bakteri V.  harveyi sebagai  bakteri  uji bersumber  dari  BBBAP  Maros,  media TSA  sebagai  media  tumbuh,  larutan fisiologis  sebagai  larutan  pengencer, alkohol untuk sterilisasi, akuades sebagai pelarut  media  dll.    Peralatan  yang dibutuhkan adalah inkubator, oven, autoclove,  vortex  mixer,  laminar  air  flow dan peralatan penunjang untuk inokulasi.

## Kegiatan Penelitian
Persiapan bakteri V. harveyi
V.  harveyi dikulutr pada  media  plate selama  24  jam,  selanjutnya  dipanen sebanyak 1 ose dimasukkan ke dalam 10 ml  larutan  fisiologis,  divortex  hingga homogen.    Dilakukan  seri  pengenceran hingga  10  kali.    Masing-masing  seri pengenceran  dikultur  pada  media  plate (duplo) untuk menghitung populasi bakteri di  setiap  pengenceran.    Dalam  waktu yang  sama  juga  dilakukan  perhitungan absorban dari setiap seri pengenceran.

## Perhitungan  dengan  Total  Plate  Count (TPC)
1.  Menyiapkan  alat  dan  bahan  yang digunakan.
2.  Mengencerkan media  PCA  dalam air mendidih.
3.  Mendinginkan agar antara 5-10 menit.
4.  Menuangkan    agar  ke  cawan  petri dan biarkan membeku.
5.  Menyiapkan  10  tabung  reaksi  dan beri kode 1 -10.
6.  Tabung  1 diisi  dengan  TSB  + biakan murni V.  harveyii dan  tabung  2-10 masing-masing  diisi  dengan  9  ml media TSB
7.  Sebanyak  1  ml  dari  tabung  1 dipindahkan  ke  tabung  ke-2,  lalu dihomogenkan.
8.  Sebanyak  1  ml  dari  tabung  2 dipindahkan  ke  tabung  ke-3,  lalu dihomogenkan.
9.  Kegiatan yang sama dilakukan hingga mencapai tabung ke-10. 10.  Masing-masing  0,1  ml  di  ambil  dari tabung  1-10  kemudian  dikultur  pada masing-masing  media  plate  yang berbeda.
11.  Cawan  petri  di  beri  label  sesuai pengencerannya dan direkatkan dengan para filem. 12.  Inkubasi selama 18-24 jam 13.  Setelah diinkubasi lakukan pengamatan. Menghitung cawan yang tumbuh bakteri 30-300 saja. 14.  Membersikan dan membereskan  alat dan bahan yang digunakan
Populasi V.  harveyi dari  setiap pengenceran  dihitung  dengan  metode TPC.      Rumus  menghitung  populasi bakteri menggunakan SNI-01-2332-2006. Pengukuran menggunakan metode spectrophotometer
a)  Menyiapkan semua alat dan bahan yang akan digunakan.
b)  Memastikan  alat  dalam  kondisi baik,  nyalakan  mesin  dengan menekan tombol ‘power’ di bagian belakang mesin.
c)  Menekan tombol A/T/C, pilih absorbance (A). d)  Membersihkan cuvet dengan aquades, keringkan dengan tisu. e)  Mengukur absorbansi blanko dengan memasukkan larutan blanko  (TSB)  ke  dalam  cuvet
(volume  minimal  hingga  ¾  dari tinggi  cuvet).  Bersihkan  bagian luar cuvet yang transparan menggunakan tissue.
f)  Memasukkan  cuvet  ke  dalam  cell holder  pada  sample  chamber. Cuvet  harus  diletakkan  hingga sampai  dasar  cell.  Tutup  sample chamber.
g)  Tekan  tombol    ABS  100%T  untuk mengatur blanko pada konsentrasi 0
h)  Pilih  panjang  gelombang  yang akan  digunakan  untuk  mengukur sampel 550-600 nm.
i)  Mebersikan cuvet dan menyiapkan sampel  yang  akan  diukur  (seri pengenceran  dari  metode  TPC),
pastikan sampel homogen sebelum  memasukkan  ke  dalam cuvet.
j)  Memasukkan  sampel  ke  dalam cuvet  hingga  volume  minimal  ¾ dari  tinggi  cuvet.  Pastikan  bagian luar  cuvet  besih.  Memasukkan cuvet  ke  dalam  cell  holder,  tutup sample chamber.
k)  Membaca absorbansi-nya lalu mencatat  datanya  setelah  selesai ambil  kuvet  dan  membersihkan semua  alat  dan  bahan  yang digunakan.

## Pengumpulan data
Untuk  mendapatkan  data  yang  akurat maka  pengambilan  data  dilakukan  tiga siklus.Siklus pertama adalah pengambilan data  perhitungan TPC dan absorban dari 10  seri  pengenceran.    siklus  kedua  dan ketiga adalah meengulangi kembali kegiatan  perhitungan  TPC  dan  absorban dari 10 seri pengenceran.

## Analisis Data
Data  dianalaisis  menggunakan  exel dengan membuat  kurva  standar  dari  nilai TPC  dengan  nilai  OD  dari  setiap pengenceran, sehingga lahir suatu persamaan  regresi  dan  nilai  koofisien untuk  melihat  tingkat  kepercayaan  dari data yang ada.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Perhitungan Populasi Bakteri V. harveyi dengan Metode TPC Metode TPC merupakan analisis untuk menguji jumlah mikroba dengan menggunakan  metode  pengenceran  dan metode cawan tuang. Metode ini dilakukan  dengan mengencerkan  sumber isolate  yang  telah  diketahui  beratnya  ke dalam  9  ml  larutan  garam  fisiologis, larutan  yang  digunakan  sekitar  1  ml suspense  ke  dalam  cawan  petri  steril, dilanjutkan  dengan  menuangkan  media penyubur  (nutrient  agar),  NA  /  media penyubur merupakan nutrisi untuk makanan mikroba.
Perhitungan  kepadatan  populasi V. harveyi dengan  menggunakan  metode TPC dilakukan secara duplo. Perhitungan  TPC  berdasarkan  lempeng total,  merupakan  cara  yang  paling  umum digunakan  untuk  menentukan  jumlah mikroba  yang  masih  hidup,  berdasarkan jumlah  koloni  yang  tumbuh.    Metode  ini diawali  dengan  pengenceran  sampel secara  seri,  dengan  kelipatan  1  :  10. Masing-masing  suspensi  pengenceran ditanam  dengan  metode  tuang  (pour plate) atau sebar (spread plate).   Bakteri akan  bereproduksi  pada  medium  agar dan membentuk koloni setelah 18-24 jam masa  inkubasi  (Arifanto,  2008).    Hasil perhitungan  dari  setiap  seri  pengenceran bakteri dapat dilihat pada tabel 1 berikut:
Seniati.,  dkk.    Pengukuran  Kepadatan  Bakteri  Vibrio  Harveyi  Secara  Cepat  dengan Menggunakan Spectrofotometer
Tabel  1.  Rata-rata  kepadatan V.  harveyi dari  setiap  seri  pengenceran  yang dinayatakan dalam sell/ml No. Seri pengenceran Rata-rata kepadatan V. harveyi (sell/mL) 1 10 -0 1,7  x  10 10 2 10 -1 2,3  x 10 9 3 10 -2 1.5  x 10 8 4 10 -3 7,4  x 10 7 5 10 -4 6,7  x 10 6 6 10 -5 5.8  x 10 5 7 10 -6 1,6  x 10 4 8 10 -7 3,9  x 10 3 9 10 -8 5,3  x 10 2 10 10 -9 2,6  x 10 1
Data pada tabel menunjukkan bahwa seri  pengenceran  berbanding  terbalik dengan  kepadatan  bakteri V.  harveyi. Semakin  tinggi  seri  pengenceran  maka hasil perhitungan kepadatan bakteri semakin  kecil.  Hal  ini  disebabkan  karena kandungan  sel  bakteri  yang  terlarut semakin encer atau semakin berkurang.
Pengenceran  sel  dapat  membantu untuk  memperoleh  perhitungan  jumlah mikroorganisme  yang  benar.  Namun pengenceran  yang  terlalu  tinggi  akan menghasilkan  lempengan  agar  dengan jumlah  koloni  yang  umumnya  relatif rendah (Hadioetomo, 1996). Pada metode  perhitungan  cawan  dilakukan pengenceran yang bertingkat yang bertujuan  untuk  membentuk  konsentrasi dari suatu suspensi bakteri.  Sampel yang telah  di  encerkan  ini  dituang  ke  dalam cawan  baru  kemudian  di  tuang  ke mediumnya  (metode  tuang).    Selanjutnya diinkubasi  selama  24-  48  jam,  amati koloni  yang  tumbuh  dan  koloni  yanng diamati  hanyalah  koloni  yang  berjumlah 30- 300 koloni (Gobel, 2008).
Tingkat pengenceran yang diperlukan didasarkan  pada  pendugaan  populasi bakteri  yang  ada  dalam  sampel.  Hasil yang  baik  adalah  jika  pada  pengenceran yang  lebih  rendah  sampel  yang  diduga lebih banyak menunjukkan hasil uji positif (adanya  pertumbuhan  bakteri)  dan  pada pengenceran  lebih  tinggi  contoh  yang diduga lebih sedikit menunjukkan hasil uji negatif (tidak ada atau kurang
pertumbuhan  bakteri).    Oleh  karena  itu jumlah  populasi  bakteri  yang  ada  dalam sampel  diduga  tinggi  maka  contoh  harus diencerkan  sampai  diperoleh  tingkat pengenceran  yang  lebih  tinggi  sehingga nilai  maksimum  dapat  dihitung.  Metoda pengenceran  yang  paling  mudah  dengan melakukan  pengenceran  10  kali  lipat dengan  menggunakan  3  atau  5  tabung pengenceran  sekaligus  (Fardiaz  dan Srikandi, 1992). Beberapa cara penghitungan  jumlah  mikrobia  yaitu  cara penghitungan  pada  lempeng  pembiakan, cara  menghitung  langsung  (metode  kaca objek),  metode  ukur  kekeruhan,  metode turbidimetri  dan  nefelometri  serta  dengan jumlah  perkiraan  terdekat  (JPT).    Cara penghitungan  pada  lempeng  pembiakan disebut juga metode penghitungan bakteri hidup  atau  metode  penghitungan  koloni.
Penghitungan koloni dilakukan penyimpanan  pada  suhu  yang  sesuai. Oleh  karena  itu,  suatu  bakteri  dapat tumbuh menjadi satu koloni yang terhitung  mewakili  jumlah  bakteri  hidup yang terdapat dalam tiap volum pengenceran yang digunakan. Pengukuran Optical Density (OD) Menggunakan spectrophotometer Pengukuran OD menggunakan
Spektorofotmeter  dengan  melihat  nilai absorbansinya.  Kerja  spektrofotometer yakni  dengan  cara  melewatkan  cahaya dengan panjang gelombang tertentu
sesuai jenis atom pada suatu obyek kaca yang  disebuit  kuvet.    Sebagian  cahaya akan diserap dan sisanya akan dilewatkan.    Nilai  absorbansi  dari  cahaya yang dilewatkan sebanding dengan konsentrasi  larutan  OD  dalam  kuvet. Aplikasi  absorbansi  ini  digunakan  untuk menganalisa kandungan bahan tertentu.
Absorbansi  larutan  bakteri V.  harveyi yang  diukur  dengan  spectrofotometer menggunakan  panjang  gelombang  620 nm  dengan  larutan  standar  ddH 2 O menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  seri pengenceran  maka  semakin  rendah  nilai absorbansinya.  Pengukuran seri
pengenceran  dimulai  dari  larutan  stok hingga pengenceran yang ke 9.  Kegiatan pengukuran  absorban  dari  kultur  biakan bakteri V.  harveyi dilakukan  dua  kali pengulangan. Kegiatan ulangan dilakukan di lain waktu dengan mengulangi kembali semua deretan kegiatan yaitu persiapan bakteri, membuat  seri  pengenceran,  perhitungan dengan  TPC  dan  pengukuran  absorban dengan spectrotfotometer dengan harapan  bahwa  data  rata-rata  TPC  dan absorban  yang  dihasilkan  lebih  akurat. Data  hasil  pengukuran  absorban  dari larutan V. harveyi dapat dilihat pada tabel
2 berikut:
Tabel  2.    Nilai  absorbansi  larutan V.  harveyi dengan  menggunakan  panjang gelombang 620 nm. No . Seri pengenceran Nilai rata-rata absorbansi density dengan panjang gelombang 620 nm 1 10 -0 1,470 2 10 -1 1,399 3 10 -2 1,102 4 10 -3 0,828 5 10 -4 0,570 6 10 -5 0,392 7 10 -6 0,265 8 10 -7 0,187 9 10 -8 0,111 10 10 -9 0,079 Keuntungan utama metode spektrofotometer  adalah  bahwa  metode ini  memberikan  cara  sederhana  untuk menetapkan  kuantitas  zat  yang  sangat kecil.  Selain  itu,  hasil  yang  diperoleh cukup akurat, dimana angka yang terbaca langsung  dicatat  oleh  detector  dan tercetak  dalam  bentuk  angka  digital ataupun grafik yang sudah diregresikan Demikian  halnya  dengan  bakteri, kepadatan populasi akan terbaca berdasarkan kekeruhannya, Mikroba dalam  suatu  bahan  cair  dapat  dideteksi berdasarkan kekeruhannya. Pertumbuhan  sel  bakteri  didalam  suatu medium cair akan meningkatkan
kekeruhan media,
yang akan
mempengaruhi  jumlah  sinar  yang  dapat
ditransmisikan  menembus  medium  (Widi, 2012).
Dalam  penelitian  ini,  absorban  dari setiap  seri  pengenceran V.  harveyi terdeteksi  dengan  baik,  interval  kenaikan absorban  juga  tidak  berbeda  nyata  yakni setiap  kenaikan  seri  pengenceran  maka interval nilai penurunan absorban berkisar ±  0,034  -  0,331  atau  dengan  kata  lain bahwa pengenceran terendah ke pengenceran setingkat lebih tinggi mengalami  interval  penurunan  absorban ±  0,331  dan  pengenceran  tertinggi dengan  setingkat  ke  bawah  mengalami penurunan absorban  ± 0,034.

## Kurva Standar
Setiap  bakteri  memiliki  kurva  standar pertumbuhan yang berbeda-beda.
Seniati.,  dkk.    Pengukuran  Kepadatan  Bakteri  Vibrio  Harveyi  Secara  Cepat  dengan Menggunakan Spectrofotometer
Metode  perhitungan  jumlah  sel  yang digunakan dalam pembuatan kurva standar  pada  penelitian  ini,  adalah dengan  menggunakan  metode  TPC,  dan yang kedua dengan menggunakan spektrofotometer panjang gelombang yang  digunakan  adalah  620  nm  untuk melihat  tingkat  kekeruhan  yang  terbaca melalui  nilai  absorbansi  yang  dihasilkan. Menurut  Febriyansari  (2008),  panjang gelombang  600-625  digunakan  untuk melihat  tingkat  kekeruhan  untuk  larutan yang berwarna kuning sampai coklat.
Berdasarkan  data  pada  tabel  1  dan tabel  2  kemudian  dibuatkan  kurva standar.  Kurva standar merupakan suatu kurva  untuk  menghitung  jumlah  sel bakteri  secara  tidak  langsung,  yaitu dengan meregresikan nilai OD dan jumlah bakteri  kedalam  persamaan  garis  kurva standar  y  =  ax  +  b,  dimana  y  =  jumlah koloni,  dan  x  =  besarnya  nilai  OD.  Kurva standar  dan  persamaan  dari  data  TPC dan  OD  dapat  dilihat  pada  gambar  1 berikut ini:
Gambar 1.   Kurva Standar Pertumbuhan bakteri V. harveyi
Hasil  analisis  regresi  menunjukkan bahwa,  ada  hubungan  korelasi  antara nilai  OD  dengan  jumlah  koloni  atau mempunyai  pola  linier.    Semakin  tinggi kepadatan  bakteri  maka  nilai  OD  juga semakin tinggi. Hubungan kedua parameter tersebut mempunyai persamaan y = 6,2818x + 1,7026 dengan nilai  korelasi  (r)  =  0,9506.      Artinya bahwa, setiap peningkatan nilai absorbansi (OD) diikuti oleh meningkatnya  jumlah  bakteri.    Nilai korelasi yang mendekati angka 1 menunjukkan bahwa tingkat kepercayaan pada  kurva  standar  dan  persamaan mendekati sempurna.
Berdasarkan persamaan  tersebut,  maka  kepadatan bakteri V.  harveyi dapat  diketahui dengan  menggunakan  persamaan  diatas setelah dilakukan pengukuran OD.
Beberapa  kelebihan  dari  perhitungan kepadatan  bakteri V.  harveyi dengan menggunakan persamaan diatas, diantaranya  adalah  penghematan  media
kultur  dan  waktu  yang  dibutuhkan  cukup singkat  sehingga  memudahkan  dalam kegiatan  praktikum  mahasiswa    maupun penelitian.  Metode  pengukuran  populasi bakteri V.  harveyi dengan  melihat  OD merupakan  metode  praktis  digunakan  di laboratorium.

## KESIMPULAN
Hasil  analisis  regresi  dari  nilai  TPC dengan nilai OD  menunjukkan pola linier, hal  ini  berarti  bahwa  ada  hubungan korelasi  antara  nilai  OD  dengan  jumlah koloni.      Hubungan  kedua  parameter tersebut  mempunyai  persamaan  y  = 6,2818x + 1,7026 dengan nilai korelasi (r) = 0,9506.   Nilai korelasi yang mendekati angka  1  menunjukkan  bahwa  tingkat kepercayaan  pada  kurva  standar  dan persamaan mendekati sempurna.
Perhitungan populasi bakteri V. harveyi dapat dilakukan dengan meregresikan nilai OD dan jumlah bakteri kedalam persamaan garis kurva standar y

## Agrokompleks, Volume 19, Nomor 2, Juni 2019                         ISSN : 1412-811X
= 6,2818x + 1,7026, dimana y = jumlah kepadatan bakteri, dan x = besarnya nilai
OD. Metode pengukuran kepadatan populasi  bakteri V.  harveyi dengan menggunakan spectrofotometer merupakan  metode  cepat  dan  praktis digunakan di laboratorium dengan
beberapa
kelebihan diantaranya penghematan  media  kultur  dan  waktu yang dibutuhkan cukup singkat.

## DAFTAR PUSTAKA
Arifanto, 2008. Menghitung Mikroba Pada
Bahan Makanan. Farmasi FMIPA.  ITB. Bandung. Desrina, Taslihan, A., Ambarianto,
Susiani, S. 2006.  Uji Keganasan Bakteri Vibrio sp  pada  Kerapu Macan (Epinephelus fuscoguttatus).  J.Ilmu  Kelautan UNDIP: 11(3):119-125.
Fardiaz,  Srikandi.  1992.  Mikrobiologi Pangan 1. Gramedia: Jakarta. Feliatra,  F,  Titania,    Silalahi,  S.,  Octavia,
AY. 2011.  Skrining Bakteri Vibrio Sp Asli Indonesia Sebagai Penyebab Penyakit Udang Berbasis  Tehnik  16sribosomal Dna.    Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi Kelautan  Tropis,  Vol.  3,  No.  2, Hal. 85-99. Gobel,  Risco,  B.,  dkk.  2008.  Mikrobiologi Umum Dalam Praktek . Universitas Hasanuddin: Makassar. Hadioetomo, R. 1990. Mikrobiologi Dasar- Dasar Dalam Praktek. Gramedia: Jakarta. Mariyono,  Sutomo,  A.W.  2002.  Teknik Penanggulangan Penyakit Udang Menyala Melalui Pengendalian Bakteri Di Laboratorium. Buletin Teknik Pertanian. 7 (1). Nasmia.  2007.  Pathogenitas  Beberapa Bakteri Vibrio sp Terhadap Udang windu ( Penaeus
mondon ). J. Agroland: 14 (1) :82- 85.
Sinta,  S.N.  2012.   Praktikum  Mikrobiologi
Dasar.    Trans  Info  Media, Jakarta. Widi,  I.K.  2012.    Perhitungan  Bakteri. Program Studi Budidaya Perairan Fakultas Pertanian Universitas Lampung.
Seniati.,  dkk.    Pengukuran  Kepadatan  Bakteri  Vibrio  Harveyi  Secara  Cepat  dengan Menggunakan Spectrofotometer