Jurnal Pharmascience, Vol 2, No. 2, Oktober 2015, hal: 1 - 14 ISSN : 2355 – 5386

## Research Article
Formulasi Mikroemulsi Ekstrak Bawang Hutan dan Uji Aktivitas Antioksidan
Evi Sulastri 1 , Cristadeolia Oktaviani 2 , Yusriadi 3 1,2, 3 Prodi Farmasi FMIPA, Universitas Tadulako Email: evisulas 3@gmail.com

## ABSTRAK
Bawang hutan  mengandung senyawa metabolit sekunder golongan  naftokuinon ( elecanacin,  eleutherin,  elutherol,  eleutherinon )  yang  diketahui  memiliki  aktivitas antioksidan.  Beberapa  penelitian  telah  melaporkan  tentang  aktivitas  antioksidan ekstrak  yang  diformulasi  dalam  bentuk  sediaan  tablet  dan  krim.  Penelitian  ini bertujuan mengembangkan formula dalam bentuk  mikroemulsi sebagai penghantaran yang  efektif  untuk  mempertahankan  aktivitas  antioksidan  ekstrak  bawang  hutan. Mikroemulsi  dibuat  dengan  menggunakan virgin  coconut  oil (VCO)  sebagai  fasa minyak,  Tween  80  sebagai  surfaktan  dan  gliserin  sebagai  kosurfaktan.  Uji  stabilitas fisik  yang  dilakukan  terhadap  sediaan  meliputi  uji  organoleptik,  pH,  viskositas, sentrifugasi  dan  ukuran  globul.  Uji  aktivitas  antioksidan  dilakukan  secara in-vitro menggunakan  metode  peredaman  DPPH  dan  menggunakan  asam  askorbat  sebagai kontrol positif. Data hasil pengukuran dianalisis secara statistik menggunakan metode t-student .  Hasil  penelitian  menunjukkan  mikroemulsi  dengan  tampilan  visual  yang jernih  dan  ukuran  globul  <  5  μm.  Meskipun  sediaan  mengalami  perubahan  pH  dan viskositas tapi tidak terjadi pemisahan fase pada penyimpanan selama 28 hari. Hasil uji aktivitas  antioksidan  mikroemulsi  ekstrak  secara  berturut-turut  pada  penyimpanan suhu  33°C  dan  40°C:  pada  hari  ke-1  menunjukkan  nilai  IC50  sebesar  101,167  μg/mL dan  89,956  μg/mL    sedangkan  hari  ke-35  sebesar  127,254  μg/mL  dan  101,996  μg/mL. Berdasarkan hasil tersebut,  aktivitas antioksidan  ekstrak bawang hutan  masuk dalam kategori kuat sampai sedang.
Kata kunci  :  Mikroemulsi,  ekstrak  bawang  hutan  ( Eleutherine  bulbosa (Mill.)Urb.), mutu fisik, antioksidan.

## A B S T R A C T
Bawang  hutan  have  contain  secondary  metabolite  naftokuinon  class  (elecanacin, eleutherin,  elutherol,  eleutherinon)  which  known  have  antioxidant  activities.  Some  of research  reported  antioxidant  activity  of  extract  which  formulated  in  tablet  and  cream dosage form. The aim of this study was to developed effectively delivery system of bawang hutan  in  microemulsion    for  maintenance  its  antioxidant  activity.  A  microemulsion  was prepared using an oil phase of  Virgin Coconut Oil (VCO), a surfactant of tween 80 and a cosurfactant  of  gliserin.  Evaluation  of  physical  stability  the  microemulsions  included analysis of organoleptic, viscosity, centrifugation and globul size. The antioxidant activities was  evaluated  by  in  vitro  experiments  using  scavenging  asssay  of  1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl (DPPH) radicals and using ascorbic acid as positif control. The evaluation result  were  statistically  analyzed  using  the  t-student.  The  results  indicated  that  a  clear microemulsion and the globul size was < 5 μm. Even though, the pH and viscosity were not
stable  but  there  are  not  separated  phase  after  centrifugation  on  28  day  storage.  The antioxidant  activity  of  microemulsion  at  33°C  dan  40°C  storage  respectively  showed  that IC50 values on day 1 is 101.167 μg/mL and 89.956 μg/mL, on day 35 is 127.254 μg/mL and 101.996  μg/mL.  According  to  the  result,  antioxidant  activity  of  bawang  hutan  extract  is categorized into the powerful to moderate antioxidants.
Keywords  :   Microemulsion,  Eleutherine  bulbosa  extract  (bawang  hutan),  Physical stability, Antioxidant.

## I. LATAR BELAKANG
Bawang hutan merupakan tanaman yang umumnya digunakan oleh masyarakat  pedalaman  sebagai  obat  atau ramuan tradisional. Tanaman ini mempunyai  ciri  spesifik  yaitu  umbi tanaman  berwarna  merah  menyala  dan berbentuk kerucut dengan permukaan yang sangat  licin.  Bawang  hutan  sudah  secara turun temurun (secara empiris) dipergunakan masyarakat Sulawesi Tengah  sebagai  tanaman  obat  berbagai jenis  penyakit  seperti  kanker  payudara, obat  penurun  darah  tinggi  (hipertensi), penyakit kencing manis (diabetes melitus), menurunkan  kolesterol,  obat  bisul,  kanker usus  dan  mencegah  stroke. Kandungan yang  terdapat  dalam  bawang  hutan  terdiri dari senyawa alkaloid, glikosida, flavonoid,  fenolik,  saponin,  triterpenoid, tannin,  steroid  dan  kuinon  (Firdaus,  2006; Galingging,  2010;  Sharon,  2013).  Dari beberapa penelitian, bawang hutan diketahui  mengandung  senyawa  metabolit sekunder golongan naftokuinon (elecanacin, eleutherin, elutherol, eleutherinon)  yang  diketahui  memiliki aktivitas  sebagai  antioksidan  (Kuntorini,
2013). Penelitian sebelumnya membuktikan adanya aktivitas antioksidan yang  kuat  pada  ekstrak  etanol  bulbus bawang  hutan  dengan  nilai  IC 50 sebesar 25,3339 µg/ml (Kuntorini & Astuti, 2010). Pengujian  secara in  vivo telah  dilakukan terhadap  struktur  mikroanatomi  tubulus seminiferus testis tikus dan pada gambaran histopatologis paru-paru tikus yang dipapar asap rokok dan telah membuktikan bahwa ekstrak etanol bulbus bawang hutan dapat memberikan efek antioksidan (Nurliani dan Ernawati, 2012).
Antioksidan  merupakan  senyawa yang menghambat, mencegah atau menghilangkan  kerusakan  oksidatif  pada molekul  target.  Antioksidan  dapat  berupa molekul  kompleks  seperti  superoksida dismutase,  katalase  dan  peroksiredoksin, atau  bisa  berupa  senyawa  sederhana  yaitu asam urat dan glutation, vitamin (misalnya vitamin  E,  C,  A,  dan  β-karoten),  dan senyawa lain (misalnya flavonoid, albumin,  bilirubin,  seruloplasmin,  dan lain-lain).  (Gutteridge  dan  Halliwell, 2010). Disamping antioksidan yang bersifat  enzimatis,  ada  juga  antioksidan non-enzimatis  yang  dapat  berupa  senyawa
nutrisi  maupun  non-nutrisi.  Antioksidan non-enzimatis  banyak  ditemukan  dalam sayuran  maupun  buah-buahan,  biji-bijian, serta  kacang-kacangan  (Winarsi,  2007). Senyawa  kimia  yang  tergolong  dalam kelompok  antioksidan  dan  dapat  ditemui pada  tanaman  antara  lain  berasal  dari golongan  polifenol,  bioflavonoid,  asam askorbat,  vitamin  E,  betakaroten,  katekin, dan lain sebagainya.
Pada  beberapa  penelitian  terdahulu mengenai  formulasi  ekstrak  bawang  hutan dalam  bentuk  sediaan  seperti  tablet  dan krim, menghasilkan sediaan dengan aktivitas  antioksidan  yang  mengalami penurunan aktivitas yang signifikan selama penyimpanan. Sehingga pada penelitian ini dikembangkanlah  metode  penghantaran obat dalam bentuk mikroemulsi.
Penggunaan  sistem  mikroemulsi  dalam bidang farmasi dan kosmetik telah banyak dilakukan.  Mikroemulsi  merupakan  suatu sistem  dispersi  minyak  dan  kosurfaktan dengan  air  yang  distabilkan  oleh  lapisan antar  muka  dari  molekul  surfaktan. Mikroemulsi  dikembangkan  dari  sediaan emulsi, tetapi karakteristik sediaan mikroemulsi  memiliki  banyak  kelebihan dibandingkan  dengan  emulsi  biasa  yaitu bersifat  lebih stabil secara termodinamika, jernih,  transparan , viskositasnya  rendah, serta  mempunyai  tingkat  solubilisasi  yang tinggi (Bakan, 1995; Lawrence et al, 2000; Ping  Li et  al, 2005).  Mikroemulsi  dapat
dibuat  untuk  pemberian  perkutan,  peroral, topikal, transdermal, okular dan parenteral (Paul et  al ,  2001).  Sediaan  mikroemulsi lebih  disukai  karena  bersifat  transparan dan  stabilitasnya  lebih  baik.  Penelitian  ini tidak hanya fokus pada usaha pengembangan formula obat dalam bentuk sediaan mikroemulsi tapi juga mempertahankan stabilitas ekstrak bawang hutan  dalam  sediaan  sehingga  aktivitas antioksidannya terjaga.

## II. BAHAN DAN METODE

## A. BAHAN
Bawang hutan ( Eleutherine bulbosa (Mill.)  Urb.)  diperoleh  dari kelurahan  Donggala  Kodi,  Kecamatan Ulujadi  Sulawesi  Tengah.,  etanol  absolut pro  analisis,  etanol  96%,    akuades,  asam askorbat  (asam  askorbat),  tween  80, gliserin,  VCO  ( Virgin  Coconut  Oil ), minyak  zaitun,  kertas  saring,  alumunium foil, serbuk Mg, asam klorida pekat, FeCl 3 1%,  H 2 SO 4 2N,  pereaksi  dragendorf, kloroform.

## B.  METODE

## 1. Ekstraksi umbi bawang hutan
Sebanyak  1500  g  serbuk  simplisia bawang  hutan  diektraksi  menggunakan etanol  96%  secukupnya  dengan  direndam selama  3  x  24  jam  dalam  wadah  maserasi dan  dilakukan  pengadukan  secara  berkala kemudian  disaring.  Filtrat  yang  diperoleh
diuapkan  menggunakan rotary  evaporator (rotavapor)  sehingga  diperoleh  ekstrak kental.

## 2. Penapisan fitokimia
Penapisan fitokimia meliputi pemeriksaan  alkaloid,  flavonoid,  fenolik, saponin, steroid, dan tanin.
3.  Evaluasi aktivitas antioksidan
ekstrak bawang hutan
Sebanyak  10  mg  ekstrak  bawang hutan dilarutkan dengan etanol p.a. hingga 10  ml.  Dipipet  0,4  ml,  0,8  ml,  0,12  ml, 0,16 ml kemudian masing-masing dimasukkan  dalam  labu  ukur  10  ml.  Ke dalam  tiap  labu  ukur  ditambahkan  1,5  ml larutan  DPPH  blanko  kemudian  di cukupkan dengan etanol pa hingga didapat konsentrasi  40  μg/mL,  80  μg/mL,  120 μg/mL,  160  μg/mL.  Dari  masing-masing konsentrasi  dipipet  4  ml  lalu  didiamkan selama 30 menit kemudian diukur absorbansinya  pada  panjang  gelombang 517 nm. Asam askorbat digunakan sebagai standar.

## 4. Formulasi mikroemulsi

## Optimasi Basis
Optimasi  basis  dilakukan  untuk menentukan kondisi percobaan dan komposisi  bahan  yang  sesuai  untuk menghasilkan  sediaan  mikroemulsi  yang jernih  dan  stabil.  Pada  optimasi  ini,
mikroemulsi dibuat dengan memvariasikan minyak,  surfaktan  dan  kosurfaktan.  Basis mikroemulsi  meliputi:  VCO  digunakan sebagai  fasa  minyak,  tween  80  sebagai surfaktan,  gliserin  dan  etanol  sebagai kosurfaktan.  Pengadukan  dilakukan  pada kecepatan  rendah  menggunakan  magnetik stirrer dengan waktu pengadukan 30 menit pada suhu ruang.

## Formula mikroemulsi dan emulsi ekstrak bawang hutan
Berdasarkan  hasil  optimasi  basis yang telah dilakukan, dipilih formula yang menghasilkan  mikroemulsi  yang  jernih dan  stabil  kemudian  pada  formula  terpilih tersebut ditambahkan ekstrak etanol bawang  hutan  sebanyak  0,71% lalu ditambahkan  tween  80  kemudian  diaduk dengan  menggunakan  magnetik  stirer dengan kecepatan rendah selama 10 menit. Setelah  itu  ditambahkan  VCO  ke  dalam campuran  tersebut  dan  dihomogenkan. Selanjutnya  ditambahkan  gliserin  dan  air suling, lalu dihomogenkan. Sediaan mikroemulsi  yang  diperoleh  dimasukkan ke dalam wadah tertutup rapat.
Dalam  penelitian  ini  dibuat  juga sediaan  emulsi  dengan  bahan  yang  sama, namun  tidak  menggunakan  kosurfaktan. Emulsi  dibuat  untuk  dijadikan  suatu pembanding terhadap sediaan mikroemulsi.
5.  Evaluasi stabilitas sediaan mikroemulsi ekstrak bawang hutan Stabilitas
fisik mikroemulsi bawang  hutan  dilakukan  pada  suhu  ruang dan  suhu  40°C  pada  hari  ke-0,  7,  14,  21 dan  28.  Parameter  yang  diuji  yaitu organoleptik, pengujian sentrifugasi, pengukuran pH, viskositas, ukuran partikel/  globul  dan  aktivitas  antioksidan sediaan.
6.  Evaluasi aktivitas antioksidan sediaan mikroemulsi ekstrak bawang hutan Uji aktivitas
mikroemulsi antioksidan ekstrak bawang hutan dilakukan  selama  28  hari  penyimpanan. Sebanyak  10  mg  mikroemulsi  dilarutkan dalam  etanol  hingga  volumenya  10  ml, dimana  konsentrasi  yang  diperoleh  adalah 1.000 μg/mL.  Lalu dipipet  0,4 ml, 0,8 ml, 1,2 ml dan 1,6 ml dilarutkan dengan etanol hingga  10  ml  didapatkan  konsentrasi  40 μg/mL,  80  μg/mL,  120  μg/mL  dan  160 μg/mL.  Masing-masing  larutan  sampel dipipet  sebanyak  2  ml  ditambahkan  2  ml DPPH  blanko  lalu  didiamkan  selama  30 menit.  Selanjutnya  diukur  serapannya dengan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  517  nm.  Mikroemulsi asam askorbat digunakan sebagai pembanding.

## 7. Analisis data
Semua  data  yang  ditampilkan disajikan dalam bentuk rata- rata±simpangan  baku  (SB).  Pengambilan data  dilakukan  secara  triplo  (n  =3). Analisis  statistik  dilakukan  menggunakan uji t-student berpasangan.

## III. HASIL
A. Ekstraksi dan p enapisan fitokimia Simplisia  bawang  hutan  diekstraksi secara  remaserasi  dengan  menggunakan pelarut  etanol  96%.  Maserasi  merupakan metode  ekstraksi  dingin  yaitu  proses penyarian  simplisia  dengan  menggunakan pelarut  dengan  beberapa  kali  pengocokan atau  pengadukan  pada  temperatur  ruang, sehingga zat-zat yang terkandung di dalam simplisia relatif lebih aman jika dibandingkan dengan penggunaan ekstraksi panas.
Hasil  ekstrak  kental  etanol  bawang hutan  yang  diperoleh  sebanyak  52,4  gram dengan rendamen 3,49%.
Penapisan fitokimia dilakukan untuk mengetahui kandungan metabolit sekunder dalam simplisia uji, yang meliputi pemeriksaan golongan alkaloid, flavonoid, fenolik, tanin, dan steroid. Hasil penapisan fitokimia simplisia ditunjukkan pada Tabel I berikut ini.
Tabel I. Hasil penapisan fitokimia terhadap ekstrak bawang hutan Komponen Hasil Flavonoid + Fenolik + Saponin + Triterpenoid + Alkaloid + Tanin + Keteragan  :  +  =Positif  mengandung  senyawa  yang diuji B. Evaluasi aktivitas antioksidan
ekstrak bawang hutan
Pengukuran  aktivitas  antioksidan menggunakan  metode  peredaman  DPPH dengan  menghitung  IC 50 dari  ekstrak etanol  bawang  hutan  dan  dibandingkan dengan  asam  askorbat.  Aktivitas  inhibisi DPPH  ditampilkan  dalam  bentuk  persen rasio  penurunan  absorbansi  sampel  pada panjang  gelombang  517  nm  seperti ditunjukkan tabel II.
Tabel  II. Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan ekstrak bawang  hutan dan asam askorbat (rata-rata ± SB, n =3)
Sampel Konsentrasi (μg/mL) % peredaman IC50 (μg/mL) Ekstrak bawang hutan 40 41,44±0,31 70,993 80 60,19±0,58 160 62,26±0,86 Asam askorbat 4 47,21±2,32 4,33 8 57,74±0,16 16 61,87±0,12

## C. Optimasi basis dan formulasi
mikroemulsi ekstrak bawang hutan
Dari  hasil  optimasi  basis  optimum yang diperoleh dapat ditentukan komposisi sediaan mikroemulsi  yang  menghasilkan  sediaan dengan penampilan  jernih  yaitu  tween  80
sebesar 40%, gliserin sebesar 35%, minyak kelapa  murni  (VCO)  15%  (tabel  III). Sedangkan komposisi sediaan emulsi yang digunakan  sebagai  pembanding  adalah tween  80  sebesar  20%,  minyak  kelapa murni  (VCO)  30%  dan  air  suling sampai100% (gambar 1).
Gambar  1 .    Penampilan  Fisik  mikroemulsi  (kiri) dan emulsi konvensional (kanan) dengan konsentrasi ekstrak bawang hutan yang sama.
Tabel  III. Optimasi Basis Mikroemulsi
Keterangan: F4 dipilih sebagai basis yang optimum
D. Evaluasi stabilitas sediaan
mikroemulsi ekstrak bawang hutan
Untuk  mempelajari  stabilitas  fisik sediaan  mikroemulsi  selama  penyimpanan dilakukan pengamatan terhadap organoleptik, pengujian sentrifugasi, pengukuran pH, viskositas, ukuran partikel/  globul  dan  aktivitas  antioksidan sediaan  selama  28  hari.  Hasil  pengamatan dapat dilihat pada tabel IV dan tabel V.
Bahan Baku
(b/b) Basis F1 F2 F3 F4 Tween 80 30% 35% 35% 40% Gliserin 30% 30% 35% 35% VCO 30% 30% 25% 15% Air Suling 10% 5% 5% 10% Penampilan Keruh  Keruh  Keruh  Jernih
Tabel IV. Hasil evaluasi stabilitas fisik mikroemulsi ekstrak bawang hutan Suhu Parameter Pengamatan Hari ke- 1 7 14 28 Suhu Ruang Warna Merah Merah Merah Merah Bau Khas Aromatik Khas Aromatik Khas Aromatik Khas Aromatik Pertumbuhan mikroba (visual) Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada Sentrifugasi Tidak ada pemisahan fase Tidak ada pemisahan fase Tidak ada pemisahan fase Tidak ada pemisahan fase Kejernihan Jernih Jernih Jernih Jernih Ukuran globul <5 µm <5 µm <5 µm <5 µm Suhu 40°C Warna Merah Merah Merah Merah Bau Khas Aromatik Khas Aromatik Khas Aromatik Khas Aromatik Pertumbuhan mikroba (visual) Tidak ada Tidak ada Tidak ada Tidak ada Sentrifugasi Tidak ada pemisahan fase Tidak ada pemisahan fase Tidak ada pemisahan fase Tidak ada pemisahan fase Kejernihan Jernih Jernih Jernih Jernih Ukuran globul <5 µm <5 µm <5 µm <5 µm E. Evaluasi aktivitas antioksidan sediaan mikroemulsi ekstrak bawang hutan
Pengukuran  aktivitas  antioksidan menggunakan  metode  peredaman  DPPH dengan  menghitung  IC 50 dari  sediaan mikroemulsi  ekstrak  bawang  hutan  dan dibandingkan  dengan  kontrol  positif  yaitu asam  askorbat  yang  juga  dibuat  dalam sediaan  yang  sama.  Berdasarkan  Tabel  6, dapat disimpulkan bahwa potensi hambatan  radikal  dari  esktrak  pada  DPPH meningkat dengan peningkatan konsentrasi ekstrak bawang hutan.
Penentuan  konsentrasi  hambatan radikal 50% (IC 50 ) ekstrak dan pembanding  asam  askorbat  dilakukan untuk  mengetahui  konsentrasi  ekstrak yang  menyebabkan  aktivitas  hambatan terhadap DPPH sebesar 50%. Berdasarkan
persamaan garis kurva aktivitas antioksidan,  didapatkan  pada  hari  ke  1 menunjukkan  IC 50 mikroemulsi  ekstrak bawang hutan pada suhu ruang, mikroemulsi  ekstrak  bawang  hutan  pada suhu 40°, mikroemulsi asam askorbat pada suhu ruang  dan  mikroemulsi asam askorbat  pada  suhu  40°  berturut-turut adalah  101,167  μg/mL,  89,956  μg/mL, 45,176  μg/mL  dan  43,51  μg/mL.  Setelah penyimpanan  selama  35  hari,  aktivitas antioksidan sediaan menurun dan menunjukkan  IC 50 mikroemulsi  ekstrak bawang hutan pada suhu ruang, mikroemulsi  ekstrak  bawang  hutan  pada suhu 40°, mikroemulsi asam askorbat pada suhu  ruang  dan  mikroemulsi asam askorbat  pada  suhu  40°  berturut-turut sebesar  127,254  μg/mL,  101,996  μg/mL, 106,138  μg/mL  dan  108,771  μg/mL.
Walaupun terjadi penurunan aktivitas pada sediaan,  namun  sediaan  mikroemulsi  ini tetap  memiliki  efek  antioksidan  karena memiliki  nilai  IC 50 <  200  µg/ml  (Blois,
1958).
Tabel 5. Hasil pengukuran aktivitas antioksidan mikroemulsi ekstrak bawang hutan dan mikroemulsi asam askorbat (rata-rata ± SD, n =3).
Sediaan Suhu Pengujian Konsentrasi % peredaman Hari ke-1 Hari ke-35 Mikroemulsi ekstrak bawang hutan Suhu ruang 40 49,34±0,00 47,50±0,00 80 49,53±0,05 49,31±0,10 120 50,26±0,05 49,91±0,00 160 50,81±0,08 50,59±0,05 Suhu 40°C 40 49,42±0,00 47,94±0,00 80 49,83±0,00 50,20±0,05 120 50,48±0,00 50,47±0,05 160 50,73±0,00 51,19±0,05 Mikroemulsi asam askorbat Suhu ruang 40 50,13±0,5 48,21±0,00 80 50,29±0,12 49,97±0,05 120 50,40±0,00 50,17±0,00 160 51,51±0,05 51,69±0,00 Suhu 40°C 40 49,69±0,05 48,83±0,00 80 50,86±0,12 49,82±0,09 120 51,03±0,05 49,91±0,00 160 51,38±0,00 50,89±0,00

## IV. DISKUSI

## A. Ekstraksi dan penapisan fitokimia
Bawang  hutan  diekstraksi  secara remaserasi  dengan  menggunakan  pelarut etanol  96%.  Maserasi  merupakan  metode ekstraksi  dingin  yaitu  proses  penyarian simplisia  dengan  menggunakan  pelarut dengan  beberapa  kali  pengocokan  atau pengadukan pada temperatur ruang, sehingga zat-zat yang terkandung di dalam simplisia relatif lebih aman jika dibandingkan dengan penggunaan ekstraksi panas. Remaserasi berarti dilakukan pengulangan penambahan
pelarut  setelah  dilakukan  penyaringan maserat  pertama,  dan  seterusnya.  Metode ini paling sederhana dan tidak memerlukan biaya  yang besar. Prinsip kerja metode ini yaitu cairan penyari akan  masuk ke dalam dinding  sel  dan  rongga  sel  yang  di dalamnya  terkandung  zat  aktif,  zat  aktif akan  larut  karena  adanya  perbedaan konsentrasi  antara  larutan  zat  aktif  di dalam  sel  dan  di  luar  sel  maka  larutan yang  pekat  didesak  keluar  hingga  terjadi keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar  dan  di  dalam  sel  yaitu  dengan  cara dikocok  atau  diaduk.  Cairan  penyari  yang
digunakan adalah etanol. Pemilihan pelarut didasarkan  pada  tingkat  keamanan  dan kemudahan  saat  diuapkan.  Dalam  hal  ini etanol lebih aman digunakan dan mempunyai  sifat  dapat  menarik  metabolit sekunder  dalam  simplisia  dan  efektif dalam  menghasilkan  jumlah  bahan  aktif yang optimal (Voight, 1994).
Hasil  penapisan  fitokimia  pada  uji pendahuluan  menunjukkan  bahwa  ekstrak etanol bawang hutan mengandung alkaloid,  flavonoid,  fenolik,  tanin,  steroid dan  tanin  (lampiran  3).  Penapisan  ini dilakukan  untuk  mengetahui  berbagai macam  kandungan  kimia  yang  terdapat  di dalam jaringan tanaman.
B. Evaluasi aktivitas antioksidan
ekstrak bawang hutan .
Sebelum dibuat sediaan mikroemulsi, ekstrak etanol bawang hutan terlebih dahulu diuji aktivitas antioksidannya dengan menggunakan metode  peredaman  DPPH  (2,2-difenil-1- picrilidrazil).  DPPH  adalah  senyawa radikal  bebas  berwarna  ungu.  Apabila direaksikan  dengan  senyawa  peredam radikal bebas, maka intensitas warna ungu akan  berkurang.  Berdasarkan  hasil  yang diperoleh  ekstrak  etanol  bawang  hutan memiliki  aktivitas  antioksidan  (IC 50 )  yang kuat yaitu sebesar 70,993 µg/ml. Dibandingkan dengan penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh Kuntorini
dan  Astuti  (2010),  ekstrak  etanol  bawang hutan memiliki aktivitas antioksidan (IC 50 ) yang jauh lebih kuat  yaitu 25,3339 µg/ml. Perbedaan  nilai  IC 50 ini  dapat  disebabkan karena usia tanaman yang masih muda dan juga tempat tumbuh yang berbeda.
C. Optimasi basis dan formulasi mikroemulsi ekstrak bawang hutan Mikroemulsi terdiri dari fase minyak,  air,  surfaktan  dan  kosurfakan. Dalam  penelitian  ini  mikroemulsi  yang dibuat  adalah  mikroemulsi  m/a,  dimana minyak  adalah  fase  dalam  dan  air  adalah fase luar. Karakteristik sistem mikroemulsi adalah  konsentrasi  surfaktan  yang  tinggi. Tween  80  tergolong  surfaktan  hidrofilik yang memiliki HLB sebesar 14-16 (Rowe, 2009). Tween 80  juga tergolong surfaktan nonionik sehingga memiliki toleransi yang baik  jika  digunakan  secara  topikal,  tidak menimbulkan  iritasi  dan  toksisitas  rendah (Padmini,  2011).  Surfaktan  nonionik diketahui kurang terpengaruh oleh pH dan kekuatan  ionik,  secara  umum  aman  dan biokompatibel  jika  dibandingkan  dengan surfaktan ionik (Azeem dkk., 2009).
Berdasarkan  hasil  optimasi  basis maka rasio minyak, surfaktan dan kosurfaktan  yang  digunakan  selanjutnya untuk formula mikroemulsi ekstrak bawang  hutan  adalah  sebesar  40%  tween 80:  35%  gliserin:  15%  VCO  terhadap
jumlah  sediaan  yang  diproduksi  yang menunjukkan tampilan visual yang jernih.
Pada umumnya, penggunaan surfaktan saja tidak cukup dalam menurunkan  tegangan  permukaan  pada pembuatan mikroemulsi sehingga diperlukan molekul rantai pendek ampifilik yang berfungsi sebagai kosurfaktan. Kosurfaktan akan berpenetrasi  diantara  molekul  surfaktan pada  film  globul  dan  mengganggu  fase kristalin  cair  yang  terbentuk  ketika  film surfaktan  yang  dihasilkan  terlalu  rigid sehingga  dapat  meningkatkan  fluiditas lapisan  antarmuka.  Penggunaan  gliserin sebagai kosurfaktan pada beberapa formulasi  mikroemulsi  disebabkan  karena sifatnya  tidak  rentan  terhadap  oksidasi pada  penyimpanan  serta  dapat  digunakan sebagai  peningkat  penetrasi  untuk  sediaan topikal (Rowe, 2009).
Dalam sistem mikroemulsi kecepatan pengadukan yang sesuai diperlukan untuk dapat membentuk mikroemulsi yang stabil. Energi pengadukan  berfungsi  sebagai  sumber energi permukaan serta menimbulkan efek turbulensi  pada  medium  sehingga  akan menghamburkan globul-globul yang terbentuk. Kecepatan pengadukan divariasikan  antara  kecepatan  rendah  dan kecepatan  tinggi  dengan  menggunakan magnetik stirrer. Pengadukan pada kecepatan rendah dapat membentuk
mikroemulsi yang jernih, sedangkan dengan kecepatan tinggi terbentuk mikroemulsi yang keruh.
D. Evaluasi stabilitas sediaan mikroemulsi ekstrak bawang hutan
Hasil pengamatan organoleptik sediaan  mikroemulsi  selama  penyimpanan pada  suhu  ruang  dan  suhu  40 o C  secara keseluruhan  memiliki  konsistensi/bentuk yang  kental,  tetap  memiliki  bau  khas ekstrak  bawang  hutan  dan  sedikit  berbau minyak  kelapa.  Pengamatan  warna  secara visual menunjukkan bahwa sediaan mikroemulsi  tidak  mengalami  perubahan warna selama 28 hari penyimpanan.
Uji  sentrifugasi  dilakukan  untuk mengetahui kestabilan mikroemulsi selama pendistribusian dan penyimpanan. Mikroemulsi ekstrak bawang hutan disentrifugasi  dengan kecepatan 3750 rpm selama  5  jam  dengan  pengamatan  setiap 15 menit. Uji sentrifugasi ini menggambarkan kestabilan sediaan karena pengaruh  gravitasi  bumi  yang  setara dengan satu tahun.
Nilai pH sediaan mikroemulsi pada penyimpanan  suhu  ruang  menunjukkan tidak  adanya  perubahan  yang  bermakna selama 7 hari penyimpanan, namun setelah hari ke 7 sampai hari ke 28 penyimpanan, terlihat adanya perubahan  yang bermakna. Pada pengamatan suhu 40°C menunjukkan tidak  adanya  perbedaan  selama  14  hari
1 3 5 7 9 1 5 9 13 17 21 25 29 suhu ruang suhu 40°C Waktu (hari) pH 0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1 5 9 13 17 21 25 29 suhu ruang suhu 40°C Waktu (hari) V iskosit as ( cps )
penyimpanan,  namun  setelah  hari  ke  14 terlihat  perubahan  yang  signifikan.  Hasil pengukuran  pH  menunjukkan  terjadinya penurunan pH pada hari ke-14 penyimpanan  dan  mengalami  peningkatan kembali pada hari ke-28 (gambar 3A).
Nilai viskositas
sediaan berdasarkan  hasil  analisis paired  samples T  test terlihat  terjadi  perubahan  bermakna selama  penyimpanan  pada  suhu  ruang, sedangkan  pada  pengamatan  suhu  40 o C tidak  terjadi  perubahan  yang  bermakna
selama penyimpanan (gambar 3B). Dilihat dari karakteristiknya, mikroemulsi memiliki  viskositas  yang  rendah,  namun dalam  penelitian  ini  kosurfaktan  yang digunakan yaitu gliserin dapat meningkatkan  viskositas  dari  sediaan karena  gliserin  mampu  mengikat  air sehingga  dapat  meningkatkan  ukuran  unit molekul. Meningkatnya ukuran unit molekul akan meningkatkan tahanan untuk mengalir dan menyebar (Patrick, 2006).
Gambar 3. Grafik pengaruh lama penyimpanan terhadap (A) pH mikroemulsi ekstrak bawang hutan dan (B) Viskositas mikroemulsi ekstrak bawang hutan pada suhu ruang dan suhu 40 0 C (rata-rata + SB,
n =3).
Pengukuran ukuran
globul
mikroemulsi
dilakukan dengan menggunakan  mikroskop  optik  yang  telah dipasang  alat  mikrometer  dan  telah dikalibrasi.  Pengukuran  dilakukan  dengan menggunakan  perbesaran  100  kali.  Hasil yang  diperoleh  secara  kualitatif  yaitu  <5 µm,  karena  ukuran  mikroemulsi  yang
sangat  kecil  dan  tidak  dapat  terlihat dibawah mikroskop.
Pada  penelitian  ini  dibuat  juga sediaan  emulsi  (konvensional)  ekstrak yang digunakan sebagai pembanding. Pada tabel  6  dapat  dilihat  bahwa  ukuran  globul sediaan emulsi  jauh lebih besar (12,5 µm- 175 µm) dibandingkan sediaan mikroemulsi.  Sediaan  akhir  mikroemulsi (A) (B)
dengan  ukuran  globul  sekitar  <5  µm membuat penampilan fisik sediaan jernih.
Ukuran  tetesan  dan  distribusi ukuran merupakan parameter yang mempengaruhi stabilitas mikroemulsi.
Saito dkk. melaporkan bahwa tetesan kecil
cenderung lebih stabil terhadap
pembentukan  koalesens  daripada  tetesan yang lebih besar. Tentu saja ukuran tetesan yang  kecil  dari  mikroemulsi  memberikan stabilitas terhadap kriming dan sedimentasi  karena  pergerakan  brownian yang tinggi.
Gambar  4.    Morfologi  globul  mikroemulsi  (kiri)  dan  emulsi  (kanan)  ekstrak  bawang  hutan  hasil  pengamatan menggunakan mikroskop optik (Perbesaran 100 kali).
E. Evaluasi aktivitas antioksidan sediaan mikroemulsi ekstrak bawang hutan Metode
pengujian aktivitas antioksidan  mikroemulsi  yang  dilakukan dalam penelitian ini sama dengan pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak bawang  hutan  yaitu  dengan  metode peredaman DPPH (2,2-difenil-1- picrilidrazil).  DPPH  merupakan    radikal bebas  yang  stabil  di  mana  warna  DPPH berubah  dari  ungu  menjadi  kuning  bila kadarnya  berkurang  baik  melalui  proses donasi  hidrogen  ataupun  donasi  elektron. Senyawa  yang  memiliki  aktivitas  tersebut dapat dianggap sebagai antioksidan, dengan demikian disebut sebagai
penangkap radikal bebas. Aktivitas hambatan  pada  DPPH  telah  diketahui memiliki  korelasi  yang  baik  dengan kapasitas  hambatan  radikal  bebas  dari senyawa  uji  (Liu  dkk.,  2007).  Aktivitas inhibisi  DPPH  ditampilkan  dalam  bentuk persen  rasio  penurunan  absorbansi  sampel pada panjang gelombang 517 nm.
Pengujian  ini  dilakukan  untuk mengetahui  IC 50 dari  sediaan  mikroemulsi antioksidan  yang  telah  dibuat.  Nilai  IC 50 adalah  suatu  konsentrasi  yang  dapat meredam  radikal  bebas  sebanyak  50%. Dalam  penelitian  ini  digunakan  asam askorbat  sebagai  pembanding  yang  juga diformulasi  dalam  sediaan  mikroemulsi
agar  lebih  mudah  untuk  dibandingkan.
Dari  hasil  pengukuran,  terlihat  adanya penurunan aktivitas yang signifikan selama  35  hari  penyimpanan  pada  suhu ruang  maupun  suhu  40°C.  Tapi  peneliti hanya  mengambil  dua  titik  pemeriksaan sehingga  tidak  diketahui  pasti  kapan penurunan aktivitas mulai terjadi.
Walaupun terjadi penurunan aktivitas pada sediaan,  namun  sediaan  mikroemulsi  ini tetap  memiliki  efek  antioksidan  karena memiliki  nilai  IC 50 <  200  µg/ml  (Blois, 1958).

## V. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  maka  dapat  disimpulkan bahwa  formula  dengan  rasio  40%  tween 80:  35%  gliserin:  15%  VCO  dapat membentuk  sistem  mikroemulsi  yang menunjukkan  tampilan  visual  yang  jernih dan  memiliki  stabilitas  fisik  yang  relatif baik selama 14 hari penyimpanan (mengalami penurunan aktivitas setelahnya).  Mikroemulsi  ekstrak  bawang hutan memiliki aktivitas antioksidan dengan  IC 50 pada  hari  ke-1  sebesar 101,167  ppm  dan  hari  ke-35  sebesar 127,254 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
Azeem,  A.,  (2009):    Nanoemulsion
Components  Screening  and  Selection: A Technical Note, AAPS PharmSciTech , 10(1), 69-76.
Bakan, J.A., 1995,
Microemulsion, Encyclopedia of pharmaceutical technology, Volume  Marcel  Dekker Inc, New York. Blois, M.S., 1958, Antioxidant
Determinations By The Use Of A Stable Free    Radical,  Nature, 181  :  1199- 1200.
Firdaus,  R.  2006, Telaah  Kandungan Kimia  Ekstrak  Metanol  Umbi  Bawang Tiwai  (Eleutherine  americana (Aubl.) Merr .) ,  Skripsi,  Institut  Teknologi Bandung, Bandung.
Galingging,  Y,  R,  2010, Bawang  dayak (eleutherine palmifolia) Sebagai Tanaman Obat Multifungsi ,http://kalteng.litbang.depta n.go.id/data/bawang-dayak.pdf), diakses 15 November 2013. Gutteridge,  J.M.,  Halliwell,  B.  (2010): Antioxidants:  Molecules,  Medicines, and Myths, Biochemical and Biophysical Research Communication 393 561-564 Karmini, 2014, Formulasi Tablet
Antioksidan  Ekstrak  Bawang  Hutan ( Eleutherine  bulbosa (Mill.)  Urb.), Skripsi, Prodi Farmasi, FMIPA, Universitas Tadulako, Palu. Kuntorini,  E.M  dan  Astuti,  M.D,  2010, Penentuan Aktivitas
Antioksidan
Ekstrak  Etanol  Bulbus  Bawang  Dayak ( Eleutherine  americana Merr.), FMIPA
Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru.
Kuntorini, E.M, 2013, Kemampuan Antioksidan  Bulbus  Bawang  Dayak (Eleutherine  americana  Merr)  Pada Umur  Berbeda, FMIPA  Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru.
Lawrence,  M.J  &  G.D.  Rees,  2000, Microemulsion-based  media  as  novel drug  delivery  systems, Advance  Drug Delivery Reviews, 45:89-121.
Liu,  X.,  Zhao,  M.,  Wang,  J.,  Yang,  B., Jiang,  Y.,  2007, Antioxidant  activity  of methanolic  extract  of  emblica  fruit (Phyllanthus  emblica  L.)  from  six regions  in  China ,  Journal  of  Food

## Composition  and  Analysis  21  (2008)
219–228
Nurliani,  A  dan  Ernawati,  2012, Efek Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Bulbus Bawang Dayak (Eleutherine americana Merr. )Terhadap Struktur Mikroanatomi Tubulus  Seminiferus Testis  Tikus  yang
Dipapar  Asap  Rokok, Sains  dan Terapan  Kimia,  Vol.6,  No.2:  93-100, Kalimantan Selatan.
Padmini,  R.,  (2010):  Microemulsions  for Topical  Use-A  Review, Ind  J  Pharm
Edu Res , 45(1). Pitopang,  R.,  2013, Determinasi  Bawang Hutan ( Eleutherine  Bulbosa (Mill.) Urb. ), UPT.  Sumber  Daya  Hayati, Sulawesi Tengah.
Ping  Li,  A.,  Gosh,  R.F.,  Wagner,  S.Krill, Y.M.  Joshi,  A.T.M.  Serajuddin,  2005,
Effect  of  combined  use  of  nonionic surfactant  on  formation  of  oil-in-water microemulsions, International  Journal of Pharmaceutics, 288 (1): 27-34.
Paul,  B.K.,  S.P.  Moulik,  2001, Uses  and
applications
of microemulsions , Current Science. 80 (8): 990-1001. Rowe, R.C., Sheskey, P.J., and Owen, S.C, 2009, Handbook  of  Pharmaceutical Excipients, 6th  edition,  Pharmaceutical
Press, London.
Sharon,  N.,  Anam,  S.,  Yuliet.,  2013, Formulasi  Krim  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Bawang  Hutan ( Eleutherine palmifolia L.  Merr),  Online  Jurnal  of Natural Science, Vol 2 (3) : 111-122. Patrick  J.S.,  2006, Martin’s  Physical Pharmacy and Pharmaceutical Sciences ,  Fifth  ed,  Lippicott  Williams
& Wilkins, Baltimore
Winarsi, H., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas , Kanisius, Jakarta