## BUAH BIT (Beta vulgaris L.) SEBAGAI ALTERNATIF SAFRANIN PADA PEWARNAAN GRAM
Dian Adhe Bianggo NauE 1) , Karneli 2) , Anton Syailendra 3) ,
Indriyani Syafitri 4) , Syafira Wulandari 5) Widiah Julianti 6)
1,2,3,4,5,6 Teknologi Laboratorium Medis, Poltekkes Kemenkes Palembang, Jalan Sukabangun 1 No1159, Sukabangun, Kec.Sukarami, Palembang, 30151 E-mail: anggonaue@poltekkespalembang.ac.id

## Abstract
Crystal violet and Safranin are carcinogenic dyes in the Gram stain. Safe alternative materials are needed to minimize the use of carcinogenic properties. Betalain is a pigment of Beetroot (Beta vulgaris L.). The purpose  of  this  study  was  to  determine  Beetroot  (Beta  vulgaris  L.)  as  an  alternative  of  Safranin  in bacterial Gram staining. It was an experimental research, where to determine the effectiveness of natural dyes, beetroot was made with concentrations of 75%, 90% and 100% with the addition of HCL. The data in  this  study  using  the  researcher's  observation  by  looking  at  the  existence  of  bacterial  color  in  Gram staining  with  beetroot  extract  substitute  the  Safranin.  Klebsiella  pneumonia  was  used  as  the  Gram negative bacteria. Neither beetroot juice nor beetroot extract stained the Klebsiella pneumonia. However the  Klebsiella  pneumoniae  stained  by  100%  concentration  of  beetroot  maceration.  It  can  be  concluded that Beetroot is less effective for an alternative of Safranin in bacterial Gram staining.
Keywords: Beetroot, Safranin, Gram stain

## Abstrak
Crystal  violet  dan  Safranin  merupakan  pewarna  dalam  pewarnaan  Gram  yang  bersifat  karsinogenik. Bahan  alternatif  yang  aman  diperlukan  untuk  meminimalkan  penggunaan  bahan  karsinogenik.  Betalain merupakan  pigmen  yang  mempengaruhi  warna  merah  pada  umbi  bit  ( Beta  vulgaris L.).  Tujuan  dari penelitian ini adalah untuk menentukan Bit ( Beta vulgaris L.) sebagai alternatif pengganti Safranin dalam pewarnaan  Gram  bakteri.  Penelitian  ini  merupakan  eksperimental,  dimana  untuk  mengetahui  efektifitas dari  pewarna  alami  Bit  dibuat  Konsentrasi  75%,90%  dan  100%  dengan  penambahan  HCL.  Data  pada penelitian ini didapat dari observasi peneliti dengan melihat ada tidaknya warna bakteri pada pewarnaan Gram dengan ekstrak buah bit menggantikan Safranin. Klebsiella pneumonia digunakan dalam penelitian ini sebagai bakteri Gram negatif. Preparat Klebsiella pneumonia tidak terwarnai dengan Air Perasan Bit maupun  Ekstrak  Bit.  Namun Klebsiella  pneumonia dapat  terwarnai  dengan  Maserasi  Bit  konsentrasi 100%.  Dapat  disimpulkan  bahwa  Bit  kurang  efektif  digunakan  sebagai  alternatif  pengganti  Safranin dalam pewarnaan Gram bakteri.
Kata Kunci: Buah Bit, Safranin, Pewarnaan Gram

## PENDAHULUAN
Mikrobiologi  merupakan  suatu  ilmu  yang  mempelajari  tentang  kehidupan mikroorganisme meliputi morfologi, struktur, fungsi serta metabolisme yang tidak dapat dilihat dengan mata telanjang. Dibutuhkan pewarnaan yang baik bagi agar bisa melihat morfologi  dari  bakteri  yang  akan  diteliti.  Bakteri  mempunyai  morfologi,  struktur  dan sifat-sifat yang khas. Bakteri merupakan mikroorganisme yang berukuran mikroskopik. Selain  mikroskopik,  bakteri  juga  hampir  tidak  berwarna  atau  transparan  dan  kontras dengan  air. Sehingga melihat dan mengamati bakteri dalam kedaan hidup sangat sulit. Untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri. Ini  merupakan  salah  satu  cara  yang  paling  utama  dalam  penelitianpenelitian mikrobiologi.  Hal  itu  untuk  mempermudah  proses  identifikasi  bakteri.  Untuk  lebih mudah  dilihat  sebaiknya  bakteri  diwarnai  dengan  zat  warna,  beberapa  zat  yang digunakan  untuk  mewarnai  bakteri  juga  dapat  digunakan  untuk  mengamati  struktur bagian  dalam  sel.  Dengan  adanya  pewarnaan  terutama  bakteri  yang  mempunyai  sel dengan  ukuran  yang  retif  kecil  akan  lebih  mudah  terlihat  di  bawah  mikroskop  dengan menggunakan lensa objektif minyak imersi yang mempunyai tingkat pembesaran yang relatif tinggi. Untuk mengidentifikasi suatu biakan murni bakteri hasil isolasi mulamula diamati  morfologi  sel  secara  mikroskopik  melalui  pengecatan  atau  pewarnaan,  salah satunya adalah dengan pewarnaan gram.
Pewarnaan gram merupakan salah satu prosedur yang paling banyak digunakan untuk  mencirikan  banyak  bakteri.  Dari  pewarnaan  gram  dapat  diketahui  morfologi  sel antara lain sifat gram, bentuk sel, dan penataan sel. Pewarnaan gram atau metode gram adalah suatu metode empiris untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar,  Gram  positif  dan  gram  negatif,  berdasarkan  sifat  kimia  dan  fisika  dinding  sel mereka,  metode  ini  diberi  nama  berdasarkan  penemunya,  ilmuwan  Denmark  Hans Christian  gram  1884.  Pewarnaan  Gram  dibagi  menjadi  dua  yaitu  pewarnaan  majemuk karena  menggunakan  lebih  dari  satu  macam  zat  warna.  Dan  pewarnaan  diferensial karena  pewarnaan  ini  mampu  mendiferensiasi  atau  membedakan  bakteri,  sehingga bakteri dapat digolongkan menjadi dua yaitu Gram negatif dan Gram positif.
Bit  merupakan  salah  satu  bahan  pangan  yang  sangat  bermanfaat.  Salah  satu manfaatnya adalah memberikan warna alami dalam pembuatan produk pangan. Pigmen yang  terdapat  pada  bit  merah  adalah  betalain.  Betalain  merupakan  golongan
antioksidan.  Pigmen  betalain  sangat  jarang  digunakan  dalam  produk  pangan dibandingkan dengan antosianin dan betakaroten (Putri, 2016). Kandungan vitamin dan mineral  yang  ada  dalam  bit  merah  seperti  vitamin  B  dan  kalsium,  fosfor,  nutrisi,  besi merupakan  nilai  lebih  dari  penggunaan  bit  merah.  Antioksidan  merupakan  substansi yang diperlukan tubuh untuk menetralisir radikal bebas dan mencegah kerusakan yang ditimbulkan oleh radikal bebas dengan melengkapi kekurangan elektron yang memiliki radikal  bebas.  Antioksidan  akan  menghambat  terjadinya  reaksi  berantai  dari pembentukan  radikal  bebas  yang  dapat  menimbulkan  stres  oksidatif.  Antioksidan banyak terdapat pada buahbuahan dan sayur-sayuran (Putri, 2016). Antioksidan dari bit merah  juga  mempengaruhi  oleh  suhu  dan  pH  (Setiawan  et  al.,  2016).  Oleh  karena  itu peneliti  bermaksud  untuk  membuat  pewarnaan  gram  modifikasi  dengan  bahan  alami untuk  mendapatkan  alternative  penggunaan  pewarnaan  pengganti  pabrikan  yang terlampau  mahal,  dengan  melimpahnya  sumber  daya  alam  yang  dapat  digunakan sebagai  pengganti  pada  pewarnaan  gram  di  karenakan  bahan-bahan  tersebut  mudah  di dapat  dan  harganya  relatif  murah  sehingga  bisa  mendapatkan  alternatif  pengunaan pewarnaan gram bakteri pengganti Safranin.

## METODE PENELITIAN
Penelitian yang dilakukan bersifat eksperimen. Buah Bit diolah menjadi 3 bentuk yaitu  perasan,  maserasi  dan  ekstraksi.  Setiap  bentuk  itu  dibuat  pengenceran  dengan konsentrasi  75%,  90%  dan  100%.  Biakan  bakteri Klebsiella  sp dalam  inokulan dijadikan  kontrol  dalam  penelitian  ini  karena Klebsiella  sp merupakan  bakteri  Gram negatif  yang  akan  menyerap  warna  merah  Safranin  pada  pewarnaan  Gram.  Setiap konsentrasi  olahan  Bit  dijadikan  pengganti  Safranin  pada  beberapa  kali  percobaan kemudian  dinilai  gambaran  bakteri Klebsiella  sp dari  hasil  pewarnaan  menggunakan olahan  Bit  dibandingkan  dengan Klebsiella  sp yang  diwarnai  dengan  Safranin.  Data ditampilkan dalam bentuk tabel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Tabel 1. Hasil Pewarnaan Klebsiella pneumonia Menggunakan Safranin (Pewarnaan Gram)
Konsentrasi Waktu Penggunaan Safranin 2 Menit 3 Menit 5 Menit 1% Terwarnai Terwarnai Terwarnai Tabel 2. Hasil Pewarnaan Klebsiella pneumonia Menggunakan Air Perasan Buah Bit Konsentrasi Waktu Penggunaan Air Perasan Daging 2 Menit 3 Menit 5 Menit 75% Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai 90% Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai 100% Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai Tabel 3. Hasil Pewarnaan Klebsiella pneumonia Menggunakan Maserasi Buah Bit Konsentrasi Waktu Penggunaan Maserasi Daging Buah Bit 2 Menit 3 Menit 5 Menit 75% Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai 90% Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai 100% Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai Terwarnai Tabel 4. Hasil Pewarnaan Klebsiella pneumonia Menggunakan Ekstrak Buah Bit Konsentrasi Waktu Penggunaan Ekstrak Daging Buah Bit 2 Menit 3 Menit 5 Menit 75% Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai 90% Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai 100% Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai Tidak Terwarnai
Tabel 2 dan 4 menunjukkan bahwa Klebsiella pneumonia tidak menyerap warna merah  ketika  diwarnai  dengan  air  perasan  maupun  ekstrak  Bit  pada  semua  tingkat
konsentrasi. Klebsiella pneumonia dapat menyerap warna merah ketika diwarnai dengan hasil maserasi Bit pada konsentrasi 100% seperti terlihat pada table 3.
Betasianin adalah pigmen tumbuhan yang memberi warna kuning, jingga, merah dan  ungu  pada  bagian  daun  dan  buah.  Dimana  yang  memberikan  warna  merah keunguan  adalah  betasianin  dan  yang  memberikan  warna  kuning  adalah  betaxantin merupakan  bagian  dari  pigmen  betalain  (Sharan,  2017).  Larutan  buah  bit  terdapat kandungan betasianin yang lebih banyak dibandingkan dengan larutan buah naga merah (Nunki et al., 2020) Betasianin akan stabil pada pH 4-4,5 dan pada temperature dibawah 40◦C  (Castellar  et  al.,  2008).  Betasianin  yang  kemudian  akan  menghasilkan  warna merah  atau  merah  muda/pink  Banyak  faktor  yang  dapat  mempengaruhi  warna  pada betasianin selama proses penyimpanan, salah satunya yaitu suhu. Pigmen betalain dalam bentuk betanin dapat terdegradasi karena isomerisasi dan dekarboksilasi atau arah coklat muda.  Larutan  buah  bit  dan  larutan  buah  naga  yang  di  diamkan  pada  suhu  ruangan selama  3  hari  maka  akan  menjadi  asam  dan  berubah  warna  menjadi  kuning,  hal  ini sesuai  dengan  penelitian  yang  menyatakan  dehidrogenasi  betanin  menyebabkan pembentukan  neobetanin,  yaitu  pergeseran  warna  ke  arah  kuning.  Pemecahan  struktur betanin  dan  isobetanin  dapat  menghasilkan  komponen  asam  betalamik  yang  berwarna kuning terang (Tamansari et al., 2019).
Karakteristik  betasianin  ini  yang  mungkin  mempengaruhi  pewarnaan  pada bakteri Klebsiella pneumonia dimana pada proses ekstraksi betasianin terpaapr suasanan asam dan suhu yang tinggi sehingga merusak pigmen tersebut. Hal berbeda terjadi pada maserasi dimana konsentrasi 100% dapat mewarnai Klebsiella pneumonia karena pada proses maserasi tidak merusak zat pigmen betasianin tersebut.

## SIMPULAN
Buah  Bit  dapat  dipertimbangkan  untuk  menjadi  alternatif  Safranin  pada pewarnaan Gram namun pengolahannya hanya dengan maserasi saja. Penelitian lanjutan dapat dilakukan dengan kontrol bakteri Gram negatif yang berbeda.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  kami  haturkan  kepada  Bapak  Muhamad  Taswin,  S.Si,Apt, MM, M.Kes., Selaku Direktur Poltekkes Kemenkes Palembang

## DAFTAR PUSTAKA
Castellar,  M.  R.,  Obón,  J.  M.,  Alacid,  M.,  &  Fernández-López,  J.  A.  (2008).
Fermentation  of  Opuntia  stricta  (Haw.)  fruits  for  betalains  concentration. Journal of Agricultural and Food Chemistry , 56 (11), 4253–4257.
https://doi.org/10.1021/jf703699c
Nunki,  N.,  Titik  Mutiarawati,  D.,  &  Prayekti,  E.  (2020).  PURPLE  SWEET  POTATO (Ipomoea  batatas  L.)  PEELS  EXTRACT  AS  AN  ALTERNATIVE  DYE  FOR BACTERIA  GRAM  STAINING. Indonesian  Journal  of  Medical  Laboratory Science and Technology , 2 (2), 76–84. https://doi.org/10.33086/ijmlst.v2i2.1655
Putri,  S.  M.  N.  P.  (2016).  IDENTIFIKASI  DAN  UJI  ANTIOKSIDAN  SENYAWA BETASIANIN  DARI  EKSTRAK  BUAH  BIT  MERAH  (  Beta  vulgaris  L  ). Skripsi. FMIPA UNNES, Semarang .
Setiawan,  M.  A.  W.,  Nugroho,  E.  K.,  &  Lestario,  L.  N.  (2016).  EKSTRAKSI BETASIANIN  DARI  KULIT  UMBI  BIT(Beta  vulgaris)  SEBAGAI  PEWARNA ALAMI. Agric , 27 (1), 38. https://doi.org/10.24246/agric.2015.v27.i1.p38-43
Sharan. (2017). Ekstrak etanol buah naga merah (Hylocereus polyrhizus) memperbaiki profil lipid tikus (Rattus Norvegicus) wistar jantan dislipidemia sama aktif dengan statin. Intisari Sains Medis , 8 (2), 102–109. https://doi.org/10.1556/ism.v8i2.117
Tamansari,  J.,  No,  G.,  Tamansari,  K.,  &  Tasikmalaya,  K.  (2019). ARSA  (Actual Research Science Academic) . 4 (3), 24–30.