Jurnal Mandala Pharmacon Indonesia, Vol 5.No.1 Juni 2019 Available online at www.jurnal-pharmaconmw.com/jmpi p -ISSN : 2442-6032 e -ISSN :  2598-9979
Efek Imunomodulator Ekstrak Etanol Spons Xestospongia Sp. Terhadap
Aktivitas Fagositosis Makrofag Pada Mencit Jantan Galur Balb/C

## Wahyuni, Mesi Leorita, Adryan Fristiohady, Muhammad Ilyas Yusuf, Fadhliyah Malik, Hendra Febriansyah, Sahidin
Program Studi Farmasi, Universitas Haluoleo Kendari

## ABSTRAK
Imunomodulator  merupakan  bahan  yang  dapat mengembalikan  ketidakseimbangan  sistem  imun. Spons Xestospongia Sp.  diduga  mengandung senyawa-senyawa aktif yang berperan sebagai agen imunomodulator.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk mengetahui  pengaruh  pemberian  ekstrak  etanol Spons Xestospongia Sp.  terhadap  aktivitas fagositosis  makrofag.  Sebanyak  dua  puluh  empat ekor  mencit  jantan  galur  Balb/C  umur  2-3  bulan dengan berat badan 20-30 gram dibagi ke dalam 6 kelompok. Kelompok pertama mendapat pemberian  ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp. 100  mg/kgBB,  kelompok  kedua  mendapat pemberian  ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp. 200  mg/kgBB,  kelompok  ketiga  mendapat pemberian  ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp. 300  mg/kgBB  dan  kelompok  keempat  mendapat pemberian  ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp. 400 mg/kgBB. Kelompok kontrol positif mendapat ekstrak Phyllanthus  niruri Linn.  (Stimuno ® )  0,13 mg/gBB dan kelompok kontrol negatif mendapatkan  Na-CMC  0,5%.  Ekstrak  diberikan secara  peroral  sejak  hari  pertama  hingga  ketujuh. Pada  hari  kedelapan  masing-masing  mencit diinjeksikan  bakteri Staphylococcus  aureus (SA)
0,5  mL  secara  intra  peritoneal.  Aktivitas  sel makrofag  dihitung  dari  apusan  cairan  peritoneum mencit.  Peningkatan  dosis  ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp.  meningkatkan  jumlah  aktivitas fagositosis  makrofag  dari  24,25  %  (Na-CMC), 34,25%  (100  mg/kgBB),  47,00%  (200  mg/kgBB), 59,50  %  (300  mg/kgBB)  dan  62,75%  (400 mg/kgBB).  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp.  memiliki potensi  sebagai  imunomodulator  pada  dosis  300 mg/kgBB dan 400 mg/kgBB dengan efektivitas yang tidak  berbeda  bermakna  dengan  kontrol  positif (Stimuno ® ) dalam meningkatkan aktivitas fagositosis  sel  makrofag  berdasarkan  hasil  uji statistik post hoc TUKEY (sig. > 0,05).
Kata Kunci : Spons Xestospongia Sp.; Uji Fagositosis; Makrofag; Imunomodulator.
Penulis Korespondensi : Sahidin Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Halu Oleo E-mail : sahidin02@uho.ac.id

## PENDAHULUAN
Sistem  imun  merupakan  kumpulan mekanisme  dalam  suatu  makhluk  hidup yang    melindunginya    terhadap    infeksi dengan    mengidentikasi    dan  membunuh substansi    patogen.    Sistem  imunitas berfungsi untuk mendeteksi bahan patogen,  mulai  dari  virus  sampai  parasit serta  menghasilkan  antibodi  (sejenis protein  yang  disebut  imunoglobulin) untuk  memusnahkan  bakteri,  virus  dan benda  asing  yang  masuk  ke  dalam  tubuh
(Sudiano, 2014).
Sistem imunitas yang terganggu akan menyebabkan  pertahanan  tubuh  ikut menurun sehingga tubuh mudah terserang penyakit.  Fungsi  Sistem  imun  yang terganggu dapat ditingkatkan serta dikembalikan fungsinya menjadi lebih baik dengan  bantuan  zat-zat  yang  bersifat sebagai imunomodulator.
Imunomodulator
adalah
suatu
senyawa/  substansi/  obat  yang  dapat memodulasi  serta  meningkatkan  sistem imun tubuh. Sel target
dari
imunomodulator adalah makrofag,
granulosit,  limfosit  T  dan  B  (Praworo, 2011).
Senyawa-senyawa yang dapat memodulasi  sistem imun  dapat  diperoleh dari  tanaman  maupun  hewan  termasuk biota  laut.  Penemuan  senyawa-senyawa bioaktif  dari  biota  laut  memiliki  potensi sebagai  sumber  bahan  baku  obat.  Spons Xestospongia Sp.  merupakan  salah  satu biota  laut  dari  genus Xestospongia yang banyak  ditemukan  di  perairan  laut
Sulawesi Tenggara (Rachmat dan Rachmaniar, 2007).
Ekstrak dari Spons Xestospongia Sp. mengandung senyawa metabolit sekunder seperti  alkaloid,  flavonoid  dan  saponin (Intyani,  2014).  Senyawa  flavonoid  dan saponin,  berdasarkan  uji  secara  in  vitro telah  menunjukkan  adanya  respon  imun (Kurnianingtyas  dkk.,  2013).  Penelitian sebelumnya menunjukkan
ekstrak metanol  spons  genus Xestospongia menunjukkan adanya aktivitas
imunomodulator  pada  hewan  uji  tikus dosis  100  mg/kgBB  (El-Shitany  dkk,
2015).
Sehingga, peneliti tertarik melakukan  penelitian  ini,  untuk  menguji efek  imunomodulator  dari  ekstrak  etanol Spons Xestospongia Sp. terhadap aktivitas fagositosis makrofag pada mencit jantan galur Balb/C.

## METODE PENELITIAN

## A. Determinasi Sampel
Sampel  yang  digunakan  dilakukan determinasi  untuk  memastikan  bahwa sampel merupakan sampel yang dimaksud yaitu  Spons Xestospongia Sp.  bukan sampel lain. Determinasi sampel dilakukan di Pusat Penelitian Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Halu Oleo.

## B. Penyiapan Sampel
Sampel  Spons Xestospongia Sp. sebanyak  3,6  kg  disortasi  basah,  dan dipotong-potong kecil kemudian dilakukan ekstraksi.

## C. Ekstraksi
Metode  ekstraksi  yang  digunakan yaitu  metode  maserasi.  Sebanyak  3,6  kg potongan  kecil  Spons Xestospongia Sp. dimasukkan ke dalam wadah tertutup dan direndam  dengan  menggunakan  pelarut etanol  96%  selama  3  x  24 jam (Harborne, 2006).  Hasil  maserasi  kemudian  disaring. Filtrat yang diperoleh dari hasil penyaringan kemudian dipekatkan dengan penguapan  berputar  menggunakan rotary vacuum  evaporator pada  suhu  50 o C hingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Ekstrak ditimbang untuk mengetahui bobotnya.
D. Uji Kandungan
Senyawa

## Metabolit Sekunder
1. Senyawa Flavonoid
Sebanyak  1  mL  ekstrak  ditambahkan beberapa  tetes  HCl  pekat,  kemudian ditambahkan 0,2 mg serbuk Mg.
Reaksi  positif  jika  terjadi  perubahan warna  merah  tua  atau  kuning  pada lapisan amil alkohol (Ikalinus dkk., 2015)
2. Senyawa Alkaloid Sebanyak 1 mL ekstrak ditambahkan 2 tetes  pereaksi  Dragendrof,  reaksi  positif ditandai  dengan  terbentuknya  endapan menggumpal  berwarna  coklat  hingga jingga (Ikalinus dkk., 2015)
3. Senyawa Saponin
Sebanyak  1  mL  ekstrak  dimasukkan dalam  tabung  reaksi.  Kemudian  dikocok selama ± 10 detik dan dibiarkan selama 10 menit.  Setelah  itu  ditambahkan  HCl  2  N. Terbentuknya  busa  yang  stabil  berarti positif  terdapat  saponin (Ikalinus  dkk., 2015).
4.  Senyawa Tanin
Sampel  didihkan  dengan  20  mL  air lalu disaring. Ditambahkan beberapa tetes FeCl 3 1%  dan  terbentuknya  warna  coklat kehijauan atau biru kehitaman menunjukkan  adanya  tannin  (Ikalinus dkk., 2015).

## E. Uji Karakteristik Ekstrak
Karakterisasi ekstrak meliputi penetapan kadar air dan kadar abu. 1. Penetapan Kadar Air Kadar air ditentukan dengan menimbang 1 g sampel. Sampel dimasukan  ke  dalam  oven  pada  suhu
105 o C selama 3 jam, kemudian dikeluarkan  dari  oven  dan  didinginkan dalam desikator selama 30 menit, setelah itu sampel ditimbang. Perlakuan ini
dilakukan  beberapa  kali  hingga  berat sampel konstan (Sastrawan dkk., 2013). 2. Penetapan Kadar Abu
Penetapan  kadar  abu  dilakukan  dengan pengabuan  ekstrak  dalam  krus  di  dalam tanur  pada  suhu  600 o C.  Hal  ini mengakibatkan  senyawa  organik  dan turunannya  terdestruksi  dan  menguap, sehingga  yang  tertinggal  hanya  unsur mineral  atau anorganik. Tujuannya adalah untuk  memberikan  gambaran  kandungan mineral  internal  dan  eksternal  yang berasal dari proses awal sampai terbentuknya ekstrak. Selain itu penetapan kadar  abu  juga  dimaksudkan  untuk mengontrol  jumlah  pencemar  benda- benda  organik  seperti  tanah,  pasir  yang seringkali  terikut  dalam  sediaan  nabati (Azizah dan Nina, 2013).
Sebanyak 2 g ekstrak ditimbang dengan seksama  ke  dalam  krus  dan  ditimbang dahulu  (A 0 ),  dipijarkan  perlahan-lahan. Kemudian suhu dinaikkan secara bertahap hingga  600  ±  25ºC  sampai  bebas  karbon, selanjutnya  didinginkan  dalam  desikator serta  ditimbang berat  abu  (A 1 ).  Kadar  abu dihitung dalam persen
terhadap berat sampel awal (Depkes,
2008).

## F. Uji Aktivitas Imunomodulator dengan Uji Aktivitas Fagositosis
Hewan  uji  dikelompokan  menjadi  6 kelompok.  Setiap  kelompok  terdiri  dari  5 hewan uji.  Kelompok tersebut terdiri dari kelompok perlakuan (dosis 100 mg/kg BB,
dosis 200 mg/kg BB, dosis 300 mg/kg BB, dosis  400  mg/kg  BB),  kelompok  kontrol positif  (ekstrak  meniran  komersial ® )  dan kelompok kontrol negatif (Na-CMC 0,5%). Perlakuan  hewan  uji  dilakukan  setiap  1 hari  sekali  selama  7  hari  secara  peroral sesuai dengan volume pemberian.
Kelompok  I,  mencit  diberikan  ekstrak dosis  100  mg/kgBB.  Kelompok  II,  mencit diberikan  ekstrak  dosis  200  mg/kgBB. Kelompok  III,  mencit  diberikan  ekstrak dosis 300 mg/kgBB. Kelompok IV, mencit diberikan  ekstrak  dosis  400  mg/kgBB, kelompok  V  sebagai  kontrol  positif diberikan  Stimuno ® yang  mengandung ekstrak  meniran  komersial  dosis  0,13 mg/kgBB  dan  kelompok  VI  sebagai kontrol  negatif  yang  diberikan  Na-CMC 0,5%.
Pada  hari  ke  delapan  setiap  mencit diinfeksi  dengan  0,5  mL  suspensi  bakteri Staphylococcus  aureus secara  intra peritoneal, lalu dibiarkan selama satu jam sebelum  di  bedah.  Mencit  dianastesi dengan eter lalu dibedah perutnya dengan menggunakan  pisau  bedah  dan  pinset steril.  Jika  ditemukan  cairan  peritoneum pada  perut  mencit  dalam  jumlah  sedikit, maka  ditambahkan  larutan Phosphat Buffered  Saline (PBS)  pH  7,8  steril sebanyak  1-2  mL,  digoyang-goyangkan secara  perlahan  kemudian  diambil  cairan peritoneum  dengan  spoit  1  cc.    Cairan peritoneal dipulas pada kaca preparat dan difiksasi  dengan  metanol  selama 5  menit, kemudian diwarnai dengan pewarnaan
Giemsa  10%,  didiamkan  20  menit  dan dibilas dengan air mengalir.
Setelah  kaca  preparat  kering,  dilihat  di bawah  mikroskop  menggunakan  minyak emersi  dengan  perbesaran  (10x – 1000x) (Nugroho, 2012).

## G. Menghitung Aktivitas Fagositosis
Aktivitas  imunostimulan  ditentukan dengan  menghitung  aktivitas  fagositosis sel  makrofag  peritonium  mencit.  Nilai aktivitas  fagositosis  adalah  persentase  sel makrofag  yang  aktif  melakukan  proses fagositosis  di  antara  100  sel  makrofag (Masurin dan Chairul, 2012)
% Aktivitas fagositosis =
𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑒𝑙 𝑚𝑎𝑘𝑟𝑜𝑓𝑎𝑔 𝑎𝑘𝑡𝑖𝑓 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑒𝑙 𝑚𝑎𝑘𝑟𝑜𝑓𝑎𝑔 𝑡𝑒𝑟𝑎𝑚𝑎𝑡𝑖 × 100%

## H. Analisis Data
Metode  analisis  data  yang  digunakan dalam penelitian ini yaitu metode Analysis of  Variance (ANOVA) one-way dengan syarat terdistribusi normal, taraf kepercayaan  95%  dan  tingkat  signifikansi (tingkat  kesalahan  5%  (α  =  0,05).  Metode ANOVA one  way digunakan  untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh ekstrak etanol  Spons Xestospongia Sp.  terhadap peningkatan aktivitas fagositosis makrofag. Interpretasi  data  ANOVA  yang  diamati yaitu nilai signifikansi (sig).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Determinasi Sampel
Determinasi  Spons Xestospongia Sp. dilakukan untuk memastikan kebenaran
sampel  yang  dimaksud  dalam  penelitian ini.  Determinasi  ini  bertujuan  untuk mencocokkan  ciri-ciri morfologi  yang  ada pada  sampel  yang  akan  diteliti  sehingga tidak terjadi kesalahan dalam pengambilan  sampel  untuk  penelitian (Andriyani  dkk.,  2010).  Determinasi sampel  dilakukan  di  Pusat  Penelitian Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan Universitas  Halu  Oleo.  Hasil  determinasi menunjukan  bahwa  spons  yeng  diteliti adalah Spons
Xestospongia
Sp.
(No.086/UN29.12.1.1/PP/2018)

## B. Penyiapan Sampel
Sampel  Spons Xestospongia Sp.  yang digunakan  diperoleh  dari  Perairan  Laut Soropia,  Kabupaten  Konawe  Sulawesi Tenggara.  Spons Xestospngia Sp.  yang digunakan  sebanyak  3,6  kg.  Spons Xestospongia Sp. yang didapatkan selanjutnya dilakukan sortasi basah untuk membersihkan  kotoran  atau  binatang- binatang  yang  masih  melekat  pada permukaan spons. Spons Xestospogia Sp . kemudian  dipotong  kecil-kecil  dengan tujuan  untuk  menambah  luas  permukaan sampel sehingga ketika diekstraksi pelarut dapat  terabsorpsi  maksimal  ke  dalam sampel,  sehingga  hasil  ekstraksi  dapat optimal.

## C. Ekstraksi
Potongan-potangan kecil
Spons
Xestospongia Sp.  yang  masih  segar dimasukkan  ke  dalam  wadah  tertutup sebanyak  3,6  kg.  Sampel  dimaserasi
jgjjjjjjj selama  3x24  jam,  dengan  pergantian pelarut  tiap  24  jam.  Hal  ini  bertujuan untuk  memaksimalkan  proses  ekstraksi serta  waktu  maserasi  dilakukan  selama 3x24  jam  karena  waktu  tersebut  dianggap efisien  untuk  berlangsungnya  kontak antara sampel dan pelarut serta menghindari terjadinya penguapan.
Pengulangan  proses  perendaman  dalam maserasi  dilakukan  agar  mendapatkan sebanyak mungkin senyawa yang terekstraksi.  Setelah  proses  maserasi, pelarut  dipisahkan  dari  sampel  dengan penyaringan (Anam dkk., 2013).
Hasil  maserasi  yang  berupa  maserat dipekatkan  dengan  penguapan  berputar menggunakan
Rotary
Vacuum
Evaporator pada  suhu  50 o C  hingga diperoleh  ekstrak  cair.  Ekstrak  cair  yang diperoleh dimasukan dalam cawan porselen  yang  kemudian  disimpan  dalam water  bath pada  suhu  50°C. Water  bath berfungsi  untuk  menguapkan  pelarut etanol  sehingga  terpisah  dari  ekstrak hingga  diperoleh  ekstrak  kental.  Ekstrak Spons Xestospongia Sp.  yang  diperoleh sebanyak  42,53  gram  dengan  nilai rendamen 1,18%.
D. Uji

## Kandungan Senyawa Metabolit Sekunder
Skrining  kimia  merupakan  tahap pendahuluan dalam suatu penelitian kimia yang bertujuan untuk memberikan gambaran tentang golongan senyawa yang terkandung dalam sampel yang sedang
diteliti seperti senyawa flavonoid, alkaloid, saponin, tanin dan terpenoid. Metode skrining kimia dilakukan dengan melihat reaksi pengujian warna dengan menggunakan suatu pereaksi warna (Minarno, 2015). Hasil skrining kimia Spons Xestopongia Sp. dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Skrining Kimia Spons Xestospongia Sp .
Uji Kimia Pereaksi Penanda Positif Penanda Positif Kesimpulan Alkaloid Dragendorf Endapan jingga/coklat (Ikalinus dkk., 2015) Terbentuk endapan coklat merah Positif Flavonoid Mg + HCl P Terjadi perubahan warna menjadi merah tua atau kuning pada lapisan amil alkohol (Ikalinus dkk., 2015) Terbentuk warna merah tua pada lapisan amil alkohol Positif Saponin HCl 2 N Gelembung/Busa/Buih (Ikalinus dkk., 2015) Terbentuk busa yang stabil Positif Tanin FeCl 3 Terbentuk warna coklat kehijauan atau biru kehitaman (Ikalinus dkk., 2015) Terbentuk warna coklat kehijauan Positif Terpenoid Liebermann- Buchard Coklat kemerahan (Setyowati dkk., 2014) Tidak terbentuk warna coklat kemerahan Negatif

## E. Uji Karakteristik Ekstrak
Karakterisasi  ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp.  dilakukan  sebagai  upaya untuk  mendapatkan  ekstrak  yang  bermutu baik  dan    memenuhi  standarisasi  Materia Medika  Indonesia  (1989).  Karekterisasi yang  dilakukan  dalam  penelitian  ini meliputi  parameter  non  spesifik  yaitu penentuan  kadar  air  dan  kadar  abu  yang dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Karakterisasi Ekstrak
Jenis Karakterisasi Rujukan (%)  Hasil (%)
Kadar Air <10 6,51 Kadar Abu <7 7,40
Penetapan  kadar  air  pada  ekstrak bertujuan  untuk  mengetahui  besarnya kandungan  air,  terkait  dengan  kemurnian dan  kontaminasi  yang  mungkin  terjadi. Kandungan air yang banyak akan menyebabkan ekstrak cepat ditumbuhi oleh jamur (Saifuddin dkk, 2011). Menurut ditjen POM  (1979)  kadar  air  pada  ekstrak  yang memenuhi persyaratan tidak boleh melebihi 10%.  Berdasarkan  hasil  karakterisasi  kadar air  ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp. adalah 6,51%. Hasil ini telah sesuai dengan persyaratan dimana kadar air untuk ekstrak kental tidak melebihi 10%
Penentuan  kadar  abu  bertujuan untuk    memberikan  gambaran  kandungan mineral internal dan eksternal pada ekstrak. Ekstrak dipanaskan pada suhu tinggi hingga senyawa organik dan turunannya terdestruksi dan menguap hingga tersisa
unsur mineralnya saja (Anam dkk., 2013).
Menurut Depkes (2008) kadar abu tidak lebih dari 7%. Berdasarkan hasil karakterisasi  diperoleh  kadar  abu  dalam ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp. sebesar 7,40%. Hasil ini tidak sesuai dengan yang  dipersyaratkan  dimana  kadar  abu untuk  ekstrak  kental  tidak  melebihi  7%.  Hal ini  terjadi  karena  masih  terdapatnya kandungan garam yang masih terdapat pada ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp., sehingga  kedepannya  diperlukan  proses ekstraksi  yang  dapat  mengurangi  kadar garam yang ada pada ekstrak.

## F. Aktivitas Fagositosis
Pengujian  efek  imunomodulator  pada penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui efek  imunomodulator  ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp.  terhadap  peningkatan aktivitas fagositosis makrofag pada hewan uji dengan  menggunakan  metode  perwarnaan Giemsa.  Pengujian  efek  imunomodulator pada  penelitian  ini  dilakukan  dengan  empat variasi  dosis.  Pemilihan  variasi  dosis  ini didasarkan pada uji pendahuluan yang telah dilaksanakan  pada  tanggal  07  September 2017,  bertempat  di  Laboratorium  Farmasi UHO.  Pada  uji  pendahuluan  digunakan ekstrak  etanol  spons  kelas  yang  sama  yaitu Demospongiae dengan  dosis  50  mg/kgBB, 100 mg/kgBB dan 200 mg/kgBB.
Berdasarkan  uji  pendahuluan  tersebut dosis  200  mg/kgBB  menunjukan  adanya peningkatan  aktivitas  fagositosis  makrofag pada  mencit  jantan  galur  Balb/C  yang

## hddhdg
diinduksi  dengan  bakteri Staphylococcus aureus .
Pemberian  ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp.,  Stimuno ® ,  dan  Na-CMC pada  hewan  uji  dilakukan  selama  7  hari berturut-turut  secara  per  oral untuk memberikan  kesempatan  bagi  sampel  dalam meningkatkan  respon  imun  non  spesifik  (Aldi dkk.,  2013) .  Pada  hari  kedelapan  setiap mencit  diinfeksi  dengan  suspensi  bakteri Stapylococcus aureus sebayak  0,5  mL secara intra peritoneal.
Setelah  diinjeksikan  dengan  suspensi bakteri, seluruh kelompok perlakuan didiamkan selama 1 jam sebelum dilakukan pembedahan.  Hal  ini  bertujuan  untuk mengetahui  sejauh  mana  kemampuan makrofag  dalam  mengaktivasi  bakteri (Santoso  dkk.,  2013).  Makrofag  mampu menahan  infeksi  selama  periode  sekitar  1 jam  pertama  sebelum  mekanisme  imunitas lain  dapat  dimobilisasi.  Oleh  karena  itu, pengambilan  makrofag  dilakukan  sekitar  1 jam  setelah  induksi  bakteri,  sehingga  akan diketahui sejauh mana kemampuan makrofag  dalam  mengatasi  invasi  bakteri (Sriningsih dan Wibawa, 2006).
Cairan  peritoneum  yang  diperoleh kemudian dibuat apusan tipis menggunakan kaca  preparat,  yang  selanjutnya  dapat dilihat  di  bawah  mikroskop  cahaya  pada perbesaran  1000  kali  dengan  minyak emersi.  Makrofag  aktif  ditandai  dengan bentuk  dan  ukuran  makrofag  yang bertambah besar dengan penjuluran pseudopodi yang sangat bervariasi.
Fagosomnya muncul membran yang menjadi lebih  berliku-liku,  lisosom  menjadi  lebih banyak,  aparat  golgi  membesar  dan retikulum  endoplasma  kasar  berkembang, sedangkan  makrofag  tidak  aktif  memiliki bentuk  dan  ukuran  yang  lebih  kecil dibanding  makrofag  aktif  (Bratawijaya  dan Rengganis,  2014). Perbedaan  makrofag  aktif dan  tidak  aktif  dari  6  kelompok  dosis pemberian dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1.
Kelompok I (Dosis 100 mg/kgBB)
Kelompok II  (Dosis 200 mg/kgBB) A B A Kelompok III (Dosis 300 mg/kgBB) B A
G.
Pengujian imunomodulator dilakukan dengan menghitung nilai aktivitas fagositosis makrofag  peritoneum  mencit.  Nilai  aktivitas  fagositosis  makrofag  peritoneum  mencit dapat  dihitung  dari  makrofag  yang  aktif  melakukan  fagositosis  diantara  100  jumlah  sel yang dinyatakan dalam bentuk persen dan dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3 Hasil Aktivitas Fagositosis Makrofag Aktif
Kelompok/perlakuan Jumlah sel yang teraktivasi (%) Rata- Rata (%) 1 2 3 4 Kontrol Negatif (Na-CMC 0,5%) 24 23 25 25 24,25 Kontrol Positif (Stimuno ® 0,13 mg/gBB) 60 66 67 61 63,50 Kelompok I (Dosis 100 mg/kgBB) 33 36 29 39 34,25 Kelompok II (Dosis 200 mg/kgBB) 44 47 43 54 47,00 Kelompok III (Dosis 300 mg/kgBB) 57 60 62 59 59,50 Kelompok IV (Dosis 400 mg/kgBB) 59 62 67 63 62,75
Gambar 1 Apusan Darah Tipis Perbesaran 1000x (A) Makrofag Aktif dan (B) makrofag Tidak Aktif
B B Kelompok IV (Dosis 400 mg/kgBB ) A A A B
Berdasarkan Tabel 3 diperoleh nilai rata-rata persen fagositosis makrofag dosis 100 mg/kgBB adalah 34,25%, dosis  200 mg/kgBB adalah 47,00%, dosis 300 mg/kgBB adalah 59,50%, dosis 400 mg/kgBB adalah 62,75%, kelompok kontrol positif sebesar 63,50% dan kelompok kontrol negatif adalah 24,25%. Peningkatan aktivitas fagositosis makrofag dapat dilihat pada Gambar 2.
Berdasarkan Gambar  2 dapat dilihat bahwa aktivitas fagositosis makrofag  semakin  meningkat  seiring dengan  peningkatan  dosis  ekstrak.  Pada kelompok  kontrol  positif  memiliki persen  aktivitas  fagositosis  tertinggi sebesar  63,50%  diikuti  kelompok  IV dosis  400  mg/kgBB  yaitu  sebesar 62,75%,  kelompok  III  dosis  300 mg/kgBB  sebesar  59,50%,  kelompok  II dosis 200 mg/kgBB sebesar 47,00% dan kelompok  I  dosis  100  mg/kgBB  sebesar 34,25%.
Persen aktivitas fagositosis terendah terdapat  pada  kelompok  kontrol  negatif yaitu  sebesar  24,25%.  Hal  ini  karena kelompok kontrol negatif hanya diberikan  Na-CMC  0,5%  yang  tidak mengandung  zat  aktif  sehingga  efek imunomodulator yang ditimbulkan kurang  baik.  Sementara  kontrol  positif memiliki  aktivitas  fagositosis  paling tinggi  dibandingkan  semua  kelompok perlakuan.
Hal ini terjadi karena kontrol positif yang berupa stimuno ® mengandung
Ket: Kontrol Negatif Kelompok II (Dosis 200 mg/kgBB) Kontrol Positif Kelompok III (Dosis 300 mg/kgBB) Kelompok I (Dosis 100 mg/kgBB) Kelompok VI (Dosis 400 mg/kgBB)
0,00 10,00 20,00 30,00 40,00 50,00 60,00 70,00 Kontrol Negatif Kontrol
Positif Kelompok dosis I Kelompok dosis II Kelompok dosis III Kelompok dosis IV 24,25% 63,50 % 34,25 % 47,00 % 59,50 % 62,75 % % A kt ivi ta s Fa g os it os is M a krof a g Gambar 2 Peningkatan Aktifitas Fagositosis Makrofag
senyawa murni yaitu flavonoid sehingga efek  yang  ditimbulkan  lebih  tinggi dibandingkan
semua kelompok
perlakuan. Peningkatan fagositosis yang
bermakna  terdapat  pada  kelompok perlakuan dibandingkan
dengan kelompok  yang  tidak  diberi  perlakuan. Pada kelompok perlakuan, diberi ekstrak Spons Xestospongia Sp.  yang  diinfeksi dengan  bakteri Staphylococcus  aureus sehingga  dapat  menimbulkan  efek fagositosis  yang  lebih  baik.  Jumlah makrofag  peritoneum  yang  memfagosit setelah  pemberian  ekstrak  etanol  Spons Xestospongia Sp.  selama  tujuh  hari menunjukkan bahwa kelompok perlakuan  yang  diberi  ekstrak  Spons Xestospongia Sp.  lebih  tinggi  dari  pada kelompok yang tidak diberi perlakuan.
Peningkatan  aktivitas  fagositosis makrofag  yang  ditimbulkan  pada  hewan uji  tersebut  diakibatkan  karena  adanya kandungan senyawa kimia yang terdapat pada  ekstrak  Spons Xestospongia Sp. yang  diduga  dapat meningkatkan sistem imun. Hasil uji skrining kimia menunjukan bahwa Spons Xestospongia Sp.  mengandung  senyawa  flavonoid. Senyawa  flavonoid  yang  terdapat  pada ekstrak  Spons Xestospongia Sp.  dapat meningkatkan  sistem  imun  seluler dengan meningkatkan efektivitas
proliferasi
limfokin. Flavonoid
berpotensi  bekerja  terhadap  limfokin yang dihasilkan oleh sel T sehingga akan
merangsang sel – sel fagosit untuk melakukan  respon  fagositosis  (Chiang dkk., 2003).
Senyawa  flavonoid  telah  terbukti dapat  meningkatkan  IL-2  dan  proliferasi limfosit. Proliferasi limfosit akan mempengaruhi  sel  CD4 + ,  yang  akan menyebabkan sel Th1 teraktivasi. Sel Th1 yang telah teraktivasi akan mempengaruhi SMAF ( Spesific
Makrofag  Activating  Factor ).  SMAF ( Spesific  Makrofag  Activating  Factor) merupakan  molekul-molekul  multipel, salah  satunya  adalah  IFN- γ.  IFN - γ (Interferon- γ) akan mengaktifkan
makrofag,  sehingga  makrofag  akan mengalami peningkatan aktivitas fagositosis. Hal ini akan menyebabkan makrofag dapat membunuh bakteri lebih cepat. Flavonoid juga memiliki mekanisme kerja dengan cara mengaktivasi  sel  NK  untuk  merangsang produksi  IFN- γ.  IFN - γ  (Interferon - γ)
merupakan sitokin utama MAC ( Macrophage  Activating  Cytokine )  yang akan mengaktifkan makrofag dan memacu peningkatan
aktivitas fagositosis.  Makrofag  dan  neutrofil  yang teraktivasi  akan  menghasilkan  beberapa enzim  proteolitik  di phagolysosome seperti elastase dan cathepsin  G yang berfungsi  untuk  menghancurkan  bakteri (Sulistiani dan Hesti, 2015).
Infeksi  bakteri  Stapylococcus aureus yang  diberikan  secara  intra  peritoneal
dapat dapat  merangsang  makrofag  melakukan aktivasi dan bergerak ke sumber infeksi. Makrofag  diaktifkan  oleh  berbagai rangsangan, dapat menangkap,
memakan dan mencerna antigen eksogen, seluruh mikroorganisme, partikel  tidak  larut  dan  bahan  endogen seperti  sel  penjamu  yang  cedera  atau mati.
Kandungan  lipopolisakarida  pada dinding  sel  bakteri  merupakan  sinyal bagi makrofag untuk melakukan aktivasi. Aktivasi
makrofag ini mempunyai  kemampuan  yang  tinggi dalam  melakukan  penelanan  benda asing  melalui  proses  fagositosis.  Sel-sel ini  akan  menghancurkan  semua  benda asing  seperti  kuman,  bakteri,  sel-sel yang rusak, maupun benda asing lainnya (Besung dkk., 2016).
Sinyal  inflamasi  yang  terjadi  akan memicu  fagosit  seperti  makrofag  dan neutrofil  berikatan  dengan  dinding pembuluh  darah,  keluar  dari  pembuluh darah  dan  bergerak  ke  tempat  infeksi untuk  memakan  mikroba  penyebab infeksi.  Selama  proses  ini  sinyal inflamasi lainnya meningkatkan mobilisasi larut CRP ( C-Reactive Protein ),  MBL  ( Manan  Binding  Lectin ) dan  komplemen  melalui  arus  darah  ke tempat infeksi.
SD  (Sel  Dendritik)  memakan  dan
memproses
komponen mikroba, bermigrasi  melalui  saluran  limfe  ke kkkkk
kelenjar limfoid yang dekat dan mempresentasikan antigen ke sel T. Sel T yang  diaktifkan  bermigrasi  ke  tempat infeksi  dan  memberikan  bantuan  ke  sel NK  ( Natural  Killer )  dan  makrofag. Sitokin  yang  diproduksi  selama  respon non spesifik mendukung dan mengarahkan  respon  imun  spesifik  ke tempat infeksi (Bratawijaya dan Rengganis, 2014).
LPS (produk mikroba), IFN (produk sel  NK  dan  sel  T),  memacu  transkripsi gen APC ( Antigen Presenting Cell ) untuk memproduksi IL-12 yang memacu diferensiasi  sel  CD4 + menjadi  sel  efektor Th1  yang  memproduksi  IFN- 𝛾 .  Pada akhirnya  akan  meningkatkan  fagositosis makrofag untuk membunuh mikroba dan merangsang  sel  B  untuk  memproduksi IgG  yang  bekerja  sebagai  opsonin  dalam fagositosis  (Bratawijaya  dan  Rengganis, 2014).
Makrofag  secara  normal  selalu  ada di  dalam  tubuh  dan  tersebar  di  berbagai jaringan tubuh seperti paru-paru (makrofag  alveolar),  jaringan  hati  (sel Kupffer),  ruang  sendi  (sel  sinovial  tipe A),  sistem  saraf  pusat  (sel  Schwann  atau mikroglia),  ruang  serosa  (makrofag pleural  dan  peritoneal)  dan  jaringan pengikat  (histiosit).  Populasi  makrofag dalam  jaringan  selain  berasal  dari monosit  juga  berasal  dari  pembelahan makrofag  yang  belum  dewasa.  Jumlah makrofag  meningkat  saat  peradangan karena  meningkatnya  migrasi  monosit
jjjjj dari  peredaran  darah  ke  daerah  radang (infeksi) (Besung dkk., 2016).
Respon  imun  selain  dipengaruhi oleh  infeksi  (bakteri,  jamur,  virus),  juga dipengaruhi  oleh  usia,  asupan/status gizi,  faktor  stress  dan  sistem  endokrin. Faktor-faktor  tersebut  pada  penelitian ini dikendalikan.
Data  penelitian  ini  hanya  terbatas pada  pengukuran  berat  badan  untuk menentukan  dosis  intervensi  serta penginfeksian  bakteri  hanya  dilakukan selama 1 jam.
Data  aktivitas  fagositosis  dari  masing- masing kelompok dilakukan uji
homogenitas  diketahui  bahwa  data memiliki karakteristik yang sama (homogen)  dan  normal  (sig  >0,05) dengan  nilai  sig  0,234,  sehingga  dapat disimpulkan bahwa data aktivitas fagositosis  tiap  kelompok  bervariansi homogen,  sehingga  dapat  dilanjutkan pada pengujian One Way ANOVA.
Dilanjutkan  dengan  pengujian one- way ANOVA  ditunjukan  bahwa  data memiliki nilai sig < 0,05 yaitu sig 0,000. Hal ini berarti bahwa hipotesis H 0 (tidak
terdapat perbedaan) ditolak dan hipotesis  H 1 (terdapat  perbedaan) diterima.  Untuk  melihat  pemberian ekstrak  dosis  100  mg/kgBB,  200 mg/kgBB,  300  mg/kgBB,  400  mg/kgBB yang efektif dalam meningkatkan aktivitas  fagositosis  makrofag  maka analisis  statistik  dilanjutkan  dengan analisis Probabilitas dengan metode Post
Hoc  Tukey. Hasil  analisis  Uji  Post Hoc Tukey HSD dapat dilihat pada Tabel 4.
(I) Perla- kuan (J) Perla- kuan Mean Difference (I-J) Std. Error Sig. Kontrol Negatif Kontrol Positif -39.250 * 2.440 .000 100 mg/kgBB -10.000 * 2.440 .007 200 mg/kgBB -22.750 * 2.440 .000 300 mg/kgBB -35.250 * 2.440 .000 400 mg/kgBB -38.500 * 2.440 .000
Kontrol Positif Kontrol Negatif 39.250 * 2.440 .000 Dosis 100 mg/kgBB 29.250 * 2.440 .000 Dosis 200 mg/kgBB 16.500 * 2.440 .000 Dosis 300 mg/kgBB 4.000 2.440 .585 Dosis 400 mg/kgBB .750 2.440 1.00 0
Ket.   :
Nilai  Sig  >  0,05  artinya  tidak  terdapat perbedaan bermakna
Nilai  Sig  <  0,05  artinya  terdapat perbedaan bermakna
Dilanjutkan  dengan  Uji  Post Hoc Tukey antara  kelompok  kontrol  negatif dengan  perlakuan  dan  kelompok  kontrol positif  dan  perlakuan.  Pada  kelompok kontrol negatif dengan perlakuan menunjukkan  bahwa  pada  dosis  100 mg/kgBB,  200  mg/kgBB,  300  mg/kgBB dan  400  mg/kgBB  terdapat  perbedaan bermakna  dengan  kelompok  kontrol negatif dengan nilai Sig masing-masing < 0,05 yaitu 0,000 yang artinya pada dosis 100  mg/kgBB,  200  mg/kgBB,  300 mg/kgBB  dan  400  mg/kgBB  memiliki
jjjjj aktivitas yang berbeda bermakna dengan kontrol negatif.
Sedangkan  pada  kelompok  kontrol positif  dengan  perlakuan  menunjukkan bahwa pada dosis 100 mg/kgBB dan 200 mg/kgBB  terdapat  perbedaan  bermakna dengan kelompok kontrol positif dengan nilai  Sig  masing-masing  <  0,05  yaitu 0,000. Namun pada dosis 300 mg/kgBB dan  400  mg/kgBB  tidak  berbeda signifikan  dengan  kelompok  kontrol positif dengan nilai Sig masing-masing > 0,05 yaitu 0,585  dan 1,000 yang artinya pada  dosis  300  mg/kgBB  dan  400 mg/kgBB  memiliki  aktivitas  yang  tidak berbeda  bermakna  dengan  kontrol positif.  Namun  dosis  400  mg/kgBB menunjukkan peningkatan aktivitas yang  lebih  baik  dibanding  dengan  dosis 300 mg/kgBB.

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol Spons Xestospongia Sp. memiliki efek sebagai imunomodulator pada dosis 100 mg/kgBB,  200  mg/kgBB,  300  mg/kgBB dan  400  mg/kgBB  terhadap  aktivitas fagositosis makrofag pada mencit jantan galur  Balb/C  dengan  dosis  ekstrak  yang efektif sebagai imunomodulator terdapat pada  dosis  300  mg/kgBB  dan  400 mg/kgBB  dengan  rata-rata  nilai  persen aktivitas fagositosis sel makrofag sebesar 59,50 % dan 62,75%.
Kandungan  metabolit  sekunder yang  terdapat  dalam  ekstrak  etanol
lllllllll
Spons Xestospongia Sp.  adalah  alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin.

## DAFTAR PUSTAKA
Aldi,  Y.,  Nisya,  O.,  dan  Dian,  H.,  2013  Uji Imunomodulator Beberapa Subfraksi
Ekstrak  Etil  Asetat  Meniran  ( Phyllanthus niruri L.)  pada  Mencit  Putih  Jantan
Dengan  Metode Carbon  Clearance. Prosiding Seminar Nasional
Perkembangan  Terkini  Sains  Farmasi dan Klinik III 2013
Anam, S., Muhammad, Y., Alfred T., Nurlina I.,
Ahmad  K.,  Ramadanil.,  dan  Muhammad S.,  2013,  Standarisasi  Ekstrak  Etil  Asetat Kayu  Sanrego  ( Lunasia  amara Blanco),
Online Jurnal of Natural Science, 2 (3).
Andriyani, D., Pri, I.U., dan Binar, A.D., 2010,
Penetapan  Kadar  Tanin  Daun  Rambutan
(Nephelium lappaceum L.) Secara Spektrofotometri Ultraviolet Visibel, Pharmacy , 07 (02).
Azizah,  B.,  Nina,  S.,  2013,  Standarisasi Parameter Non Spesifik dan Perbandingan Kadar  Kurkumin  Ekstrak  Etanol  dan Ekstrak  Terpurifikasi  Rimpang  Kunyit, Jurnal Ilmiah Kefarmasian , 3 (1).
Besung, N.K., Nyoman, M.A., Ketut, S., dan Ni
Ketut,  S.,  2016,    Hubungan  Antara Aktivasi Makrofag dengan Kadar
Interleukin-6  dan  Antibodi  Terhadap
Salmonella  Typhi pada  Mencit, Jurnal Kedokteran Hewan , 10 (1).
Bratawidjaja,  K.G.,  dan  Rengganis.,  2014,
Imunologi Dasar , Badan Penerbit Fakultas  Ilmu  Kedokteran  Universitas Indonesia : Jakarta
Chiang,  L.C.,  Ng,  L.T.,  Chiang,  W.,  Chang,
M.Y., Lin, C.C., 2003. Immunomodulatory Activities Of Flavonoids, Momotertepoinds,
Triterpenoids,  Lridold  Glycosides  and
Phenolic Coumponds Of
Plantago  Spesies, Planta  Med ,  69:600-
604.
Depkes, 1989, Materia Medica Indonesia Jilid
5, Departemen Kesehatan RI : Jakarta.
Depkes, 2008, Farmakope Herbal Indonesia ,
Departemen Kesehatan
Republik Indonesia : Jakarta Ditjen  POM,  1979, Farmakope  Indonesia , Edisi III, Departemen Kesehatan Republik Indonesia : Jakarta.
El-Shitany.,  Shaala.,  Abbas,  A.T.,  Abdel-
dayem,  U.A.,  Azhar,  E.I.,  Ali,  S.S.,  Soest, R.W.M., Youssef, D.T.A, 2015, Evaluation of  the  Anti-inflammatory,  Antioxidant and  Immunomodulatory  Effects  of  the Organic  Extract  of  the  Red  Sea  Marine Sponge Xestospongia testudinaria
Against  Carrageenan  Induced  Rat  Paw Inflammation, PLOS ONE, 10 (9).
Febriana  M.V,  2015,  Pengaruh  Meniran
( Phyllanthus  niruri Linn.)  Terhadap
Gambaran  Histopatologi  Hepar  Tikus Putih  ( Rattus  norvegicus )  Jantan  yang Diinduksi Obat Anti Tuberkulosis
(Rifampisin  dan  Isoniazid).  Skripsi fakultas kedokteran universitas airlangga.
Harborne,  J.B.,  1987,  Metode  Fitokimia,
Penuntun  Cara  Modern  Menganalisa Tumbuhan,  Bandung:  Institut  Teknologi Bandung.
Ikalinus,  R.,  Sri,  K.W.,  dan  Ni  Luh,  2015,
Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Kulit Batang Kelor ( Moringa oleifera) , Indonesia Medicus Veterinus , 4 (1).
Intyani, W.D., 2014, Kajian Aktivitas Antibakteri  dan  Metabolit  Sekunder Beberapa  Jenis  Spons, Skripsi ,  Fakultas Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan,  Jurusan Perikanan, Universitas Halu Oleo, Kendari.
Kurnianingtyas,  E.,  Djati,  M.S.,  dan  Rifa'i,  M.,
2013, Aktivitas Imunomodulator Polyscias obtusa Terhadap  Sistem  Imunitas  Pada Bone  Marrow  Broiler  Setelah  Pemberian Salmonella  typhimurium , Jurnal  Exp. Life. Science, 3 (1).
Masurin,  S.,  Chairul,  2012,  Efek  Ekstrak  Air dan  Alkohol  pada  Siwak  ( Salvadora persica L.) Terhadap Peningkatan
Aktivitas  dan  Kapasitas  Fagositosis  Sel Makrofag, Media  Litbang  Kesehatan , 22 (1).
Minarno,  E.B,  2015,  Skrining  Fitokimia  dan Kandungan  Total  Flavanoid  pada  Buah Carica  pubescens  Lenne  &  K.  Koch  Di Kawasan  Bromo,  Cangar,  dan  Dataran Tinggi Dieng, El-Hayah , 5 (2).
Nugroho,  Y.A.,  2012,  Efek Pemberian Kombinasi  Buah  Sirih  ( Piper  betle L.) Fruit, Daun Miyana ( Plectranthus scutellarioides (L.) R. BR.) Leaf, Madu dan Kuning  Telur  Terhadap  Peningkatan Aktivitas  dan  Kapasitas  Fagositosis  Sel Makrofag, Media  Litbang  Kesehatan , 22 (1).
Prashant,  2011,  Phytochemical  Screening  and Extraction, Internationale  Pharmaceutica Sciencia, 1 (1).
Praworo.,  K,  2011,  Terapi  Medipic  Medical Picture, Penebar Plus : Jakarta.
Rachmat dan Rachmaniar, 2007, Spons Indonesia  Kawasan  Timur ,  LIPI, Jurnal Oseanologi  dan  Limnologi  di  Indonesia ,
33:123-138
Saifuddin,  A.,  Rahayu,  V.,  dan  Teruna,  HY.,
2011, Standarisasi  Bahan  Obat  Alam ,
Graha Ilmu: Yogyakarta.
Sangi,  M.S.,  Momuat,  L.I.  dan  Kumaunang,
M.,  2013,  Uji  Toksisitas  dan  Skrining Fitokimia  Tepung  Gabah  Pelepah  Aren ( Arange  pinnata ),  Manado:  Universitas Sam Ratulangi.
Santoso,  T.A.,  Diniatik,  Anjar,  M.K.,  2013,
Efek  Imunostimulator  Ekstrak  Etanol Daun  Katuk  ( Sauropus  androgynus L Merr)  Terhadap  Aktivitas  Fagositosis Makrofag, Pharmacy , 10 (1).
Sastrawan,  I.N.,  Sangi,  M.,  dan  Kamu,  V.,
2013, Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas
Antioksidan Ekstrak Biji Adas ( Foeniculum vulgare ) Menggunakan
Metode  Dpph, Jurnal  Ilmiah  Sains, 13
(2).
Simaremare,  E.S.,  2014,  Skrining  Fitokimia
Ekstrak  Etanol  Daun  Gatal  ( Laportea decumana (Roxb . ) Wedd), Pharmacy , 11
(01).
Srininigsih  dan  Wibawa,  A.E.,  2006.  Efek
Protektif  Pemberian  Ekstrak  Etanol Herba  Meniran  ( Phyllantus  niruri L)
Terhadap
Aktivitas dan Kapasitas
Fagositosis  Makrofag  Peritonium  Tikus,
Artocarpus , 6:91-96.
Sriwahyuni,  I.,  2010,  Uji  fitokimia  ekstrak
tanaman  anting-anting  ( Acalypha  indica
Linn.)  dengan  variasi  pelarut  dan  uji toksisitas  menggunakan  brine  shrimp ( Artemia salina Leach.), Skripsi, Fakultas Sains  dan  Teknologi  Universitas  Islam Negeri  (UIN)  Maulana  Malik  Ibrahim,
Malang.
Sudiano  J,  2014,  Sistem  Kekebalan  Tubuh,
EGC : Jakarta.
Sulistiani,  R.P.,  dan  Hesti,  M,R.,  2015,
Pengaruh  Ekstrak  Lompong  Mentah ( Colocasia  esculenta L  Schoot)  Terhadap Aktivitas Fagositosis dan Kadar No (Nitrit Oksida)  Mencit  Balb/C  Sebelum  dan
Sesudah Terinfeksi Listeria
monocytogene,  Journal  Of  Nutrition College, 4 (2).