## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 e-ISSN: 2355-7931 Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj Journal E-mail: current.biochemistry@gmail.com

## Minimum Concentration of Stingless Bee Propolis (Trigona sp.) in Inhibiting the Growth of Dandruff Bacteria
(Konsentrasi Minimum Propolis Lebah Tanpa Sengat ( Trigona sp .) dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Penyebab Ketombe)
Akhmad Endang Zainal Hasan 1* , I Made Artika 1 , Erlank  Bagjavicenna 1
1 Department of Biochemistry, IPB University, Bogor, 16680, Indonesia
Received: 20 March 2021 ; Accepted: 20 May 2021
Corresponding author : Akhmad Endang Zainal Hasan; Departemen Biokimia IPB; e-mail: zainalhasan@apps.ipb.ac.id

## ABSTRACT
Lack of confidence in men and women, one of which is when there is dandruff on the hair and  scalp.  Hair  loss  is  a  further  symptom  of  the presence  of  white  scales  on  the  scalp  that  cause itching. The presence of excessive microorganisms can aggravate this dandruff. Ingredients such as ketocanozole,  zinc  pyrithione,  selenium  sulfide  and  sulfur  are  compounds  commonly  used  in shampoo formulas.  Propolis  is  an alternative natural ingredient  to treat dandruff.  The purpose of this study was to determine the minimum growth inhibitory concentration (MIC) of propolis against dandruff-causing  bacteria.  Dandruff-causing  microbes  were  isolated  from  dandruff  hair  and  with the  well  method  in  a  petri  dish,  the  minimum  growth  inhibitory  concentration  of  propolis  was determined.  The  microbial  colonies  produced  were  very  diverse  with  a  round  shape  like  grapes, yellowish white in color. The concentration of 6.25% is the MIC value  of propolis extract against dandruff  microbes.  The  effectiveness  values  against  ketoconazole  and  propolis  X  from  the  tested propolis extract were 223.52% and 99.59%, respectively.
Keywords: hair loss, dandruff, propolis, bacteria , Trigona

## ABSTRAK
Rasa kurang percaya diri pada laki-laki dan wanita salah satunya adalah bila ada ketombe pada  rambut  dan  kulit  kepala.    Kerontokan  rambut  merupakan  gejala  lanjutan  dari  adanya  sisik putih  pada  kulit  kepala  yang  menimbulkan  rasa  gatal.    Adanya  mikroorganisme  yang  berlebihan dapat memperparah ketombe ini.   Bahan seperti ketokanozol, zinc pyrithione, selenium sulfida dan belerang  merupakan  senyawa  yang  biasa  digunakan  dalam  formula  sampo  antiketombe.  Propolis merupakan salah satu alternatif bahan alam untuk mengatasi ketombe.  Tujuan dari penelitian ini adalah  mengetahui  konsentrasi  hambat  tumbuh  minimum  (KHTM)  dari  propolis  terhadap  bakteri penyebab ketombe.  Mikroba penyebab ketombe diisolasi dari rambut yang berketombe dan dengan metode  sumur  pada  cawan  petri  ditentukan  konsentrasi  hambat  tumbuh  minimum  dari  propolis.
Koloni  mikroba  yang  dihasilkan  sangat  beragam  dengan  bentuk  bulat  seperti  anggur,  berwarna putih  kekuningan.    Konsentrasi  6.25  %  merupakan  nilai  KHTM  dari  ekstrak  propolis  terhadap mikroba  ketombe.      Nilai  keefektifan  terhadap  ketokonazol  dan  propolis  X  dari  ekstrak  propolis yang diujikan berturut-turut sebesar 223.52% dan 99.59 %.
Kata kunci : rambut rontok, ketombe, propolis, bakteri, Trigona

## 1. PENDAHULUAN
Salah  satu  hal  yang  penting  untuk penampilan  dan  kesehatan  ada  pada  kondisi rambut.    Rasa  kurang  percaya  diri  lebih  dari 85%  pada  laki-laki  dan  wanita  ada  pada masalah  kulit  kepala  dan  rambut.    Di  daerah tropis  dengan  suhu  dan  kelembaban  yang tinggi merupakan penyebab terjadinya ketombe ini, terutama pada kulit  kepala  yang berminyak.    Keberadaan  mikroba  yang berlebihan  di  rambut  dapat  memperparah terjadinya ketombe ini.
Menurut  Sahraie-Rad  et  al.  (2015) bahan  seperti zinc  pyrithione ,  selenium sulfida,  ketokonazol  dan  belerang  merupakan bahan  biasa  digunakan  dalam  produk  sampo antiketombe.  Umumnya bahan tersebut tidak dapat  mengatasi  penyebab  ketombe,  tapi hanya sebatas menghilangkan adanya ketombe.
Menurut  Indriyanti  et  al.  (2013)  dan Puspitasari  et  al.  (2001)  ekstrak  tanaman seperti daun sirih atau seledri dapat digunakan sebagai  bahan  penghambat  bakteri  penyebab ketombe  dengan  aktivitas  yang  hampir  sama pada sampo yang mengandung senyawa kimia tersebut.  Propolis  dapat  dijadikan  sebagai bahan      alami      alternatif  berfungsi  sebagai antimikrob  ketombe.    Beberapa  peneliti menemukan bahwa propolis bersifat antimikrob  (Wasu  et  al.,  2020),  antibakteri (Przybyłek  &  Karpiński,  2019)(Ngatu  et  al., 2011), antifungal dan anti bakteri (Petruzzi et al.,  2020)(Kurek-Gorecka  et  al.,  2020), antikaries  gigi  (Hasan  et  al.,  2014).  Bahan lain yang berfungsi sebagai antibakteri adalah Spirulina (Pannindrya et al., 2021).
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah mengetahui  konsentrasi  hambat  tumbuh minimum  (KHTM)  dari  propolis  terhadap bakteri penyebab ketombe.

## 2. METODOLOGI

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada penelitian ini terdiri dari sample ketombe dari kulit  kepala  laki-laki,  propolis  mentah  dari Bukittinggi,  Sumatera  Barat,  etanol  70%, media  cair  Nutrient  Broth  (NB),  media  padat Nutrient  Agar  (NA),  minyak  kelapa  sebagai pelembab,  propilen  glikol  teknis,  propolis komersial  (Merk  X),  ketokonazol  2%,  NaCl 0.9% dan akuades.

## Isolasi Mikrob Ketombe
Ketombe  diambil  dari  kulit  kepala manusia  dan  dimasukkan  ke  dalam  10  ml media  cair  NB  steril  yang  telah  ditambahkan 2  ml  minyak  kelapa.  Setelah  itu  dilakukan inkubasi  pada  suhu  30°  C  selama  3  hari. Koloni  yang  terbentuk  merupakan  bahan mikroba  untuk  pengujian.    Kultur  pada  saat pengujian  dilakukan  dengan  mengambil koloni tersebut dengan ose lalu digoreskan ke agar  miring  kemudian  diinkubasi  selama  3 hari pada suhu 30°C.

## Uji Aktivitas Anti-mikroba Pendahuluan
Kontrol positif (propolis merk X dan ketokonazol 2%), kontrol negetaif (aquadest), propilen  glikol  dan  etanol  70%  sebagai kontrol  pelarut  digunakan  adalah  propolis merk  X  (kontrol  positif),  akuades  (kontrol
negatif), dan sebagai kontrol pelarut digunakan propilen glikol dan etanol 70%.

## Regenerasi Mikrob
Isolat mikroba yang sudah dibiakkan dalam NB diambil sebanyak 50 µL (Hadioetomo,  1990)  dan  disebarkan  dalam cawan  petri,  lalu  ditambahkan  20  mL  media agar  NB  bersuhu  ±45  oC.  Kemudian  cawan petri  digoyang  agar  isolat  mikrob  merata. Lalu  minyak  kelapa  sebanyak  20  µL disebarkan pada permukaan agar-agar dengan bantuan batang pengaduk.  Minyak kelapa ini berfungsi sebagai bahan pelembab.
Ekstrak   propolis    yang digunakan diperoleh dengan mencampur ekstrak propolis pekat      dengan  propilen  glikol  satu  kali volume  sehingga  konsentrasi  murni  propolis sebesar  50%  dari  total  ekstrak  propolis  dan untuk  selanjutnya  disebut  sebagai  propolis 100%.  Kertas  cakram  ditetesi  dengan  15  µL ekstrak propolis kemudian dilakukan inkubasi pada   suhu   30ºC selama 3 hari. Pengukuran zona bening sekitar kertas cakram merupakan aktivitas antimikroba dari propolis.

## Penentuan  Konsentrasi  Hambat  Tumbuh Minimum (KHTM)
Pertama dilakukan pengenceran propolis  dengan  akuades  steril  sehingga diperoleh  konsentrasi  mulai  100%  hingga 3.13%  v/v.  Kemudian  diambil  20  µL  larutan isolate  dan  dimasukkan  ke  media  NA  yang sudah  diolesi  dengan  minyak  kelapa,  lalu diratakan permukaannya dengan menggunakan batang pengaduk. Larutan   uji sebanyak  15  µL  diteteskan  ke  cakram  lalu dilakukan  inkubasi  pada  suhu  30ºC  selama  3 hari.  Diameter  zona  bening  yang  terbentuk sekitar  kertas  cakram  diukur  menggunakan jangka sorong.
Analisis Statistik
Data KHTM diolah dengan rancangan percobaan satu faktor dalam Rancangan Acak Lengkap  (RAL).      Model  rancangannya adalah:
Yij = µ + τi + εij
Yij = Pengamatan   pada    perlakuan    ke-i dan ulangan ke-j µ   = Pengaruh rataan umum τ    = Pengaruh perlakuan ke-i ε    =  Pengaruh  acak  pada  perlakuan  ke-i ulangan   ke-j
Data  dianalisis  dengan  ANOVA ( Analysis of variance ) pada tingkat kepercayaan 95% dan taraf α 0.05, kemudian uji lanjut menggunakan uji Duncan.

## HASIL
Hasil  dari  isolasi  mikroba  ketombe menunjukkan  bentuk  koloni  mikroba  yang beragam  dengan  bentuk  bulat  menyerupai buah  anggur  dan  berwarna  putih  kekuningan (Gambar 1). Koloni  yang tumbuh merupakan isolat  tunggal  hasil  isolasi  dari  ketombe  pada kulit  manusia  laki-laki  dewasa.    Konsentrasi
Hambat Tumbuh Minimum (KHTM) disajikan pada Gambar 2.

## 3. DISKUSI
Mikroba yang berperan sebagai penyebab  ketombe  adalah  Streptococcus, Staphylococcus, Pityrosporum dan
Propionebacterium.
Menurut Lederberg
(2000)  terdapat  pengaruh  dalam  jumlah ketombe karena usia, jenis kelamin, suku dan ras, penyakit serta lokasi.
Berdasarkan    data  pada  Gambar  2 ekstrak  propolis  100%  mempunyai  aktifitas yang  hampir  sama  dengan    propolis    merk  X (komersial).      Hal  ini  menunjukkan  bahwa propolis  merk  X  dan  ekstrak  propolis  100% memiliki  kemampuan  yang  sama    dalam menghambat  pertumbuhan mikroba ketombe. Nilai  efektifitas  ekstrak  propolis  terhadap propolis merk X adalah sebesar 99,59%.  Hal
ini sesuai dengan hasil penelitian Hasan et al. (2011)  bahwa  efektifitas  ekstrak  propolis terhadap    propolis    merk    X  terdapat perbedaan  walaupun  tidak  nyata  terhadap bakteri Streptococcus  mutans yaitu  sebesar
96.05%. Sensitifitas setiap mikroba
menunjukkan  perbedaan  terhadap  ekstrak propolis  karena  kandungan  propolis  yang diperoleh  berbeda  yang  diakibatkan  oleh waktu  panen  propolis  dan  lokasi  dimana propolis diperoleh (Hasan et al., 2016).
Gambar 1 Hasil isolasi mikroba ketombe
Gambar 2 Pengaruh propolis dan bahan lain terhadap mikroba ketombe
Oleh  karena  kemampuan  ketokonazol dalam  menghambat  pertumbuhan  ketombe maka  bahan  ini  digunakan  dalam  sampo antiketombe  (Lederberg,  2000).    Konsentrasi ketokonazol      2%  (%b/v)  tidak  menunjukkan
perbedaan  yang nyata dengan dengan kontrol negatif  (akuades,  etanol  70%,  dan  propilen glikol). Apabila dibandingkan dengan ekstrak propolis 100%, ketokonazol 2% menunjukkan perbedaan nyata dengan diameter zona bening
ekstrak propolis 16,887  mm  dan  7,555  mm untuk  larutan    ketokonazol    2%.    Tingkat efektifitas  ekstrak  propolis  100%  terhadap ketokonazol  2%  adalah    sebesar    223,52%. Hal  ini  membuktikan  bahwa  ekstrak  propolis 100% memiliki kemampuan  yang lebih besar dibandingkan dengan ketokonazol 2%. Dengan demikian disimpulkan bahwa ekstrak propolis  dapat  digunakan  sebagai  bahan alternatif dalam sampo antiketombe,
Konsentrasi terkecil yang dapat menghambat  pertumbuhan  mikroba  ketombe dinyatakan dengan konsentrasi hambat tumbuh  minimum.  Makin  kecil  nilai  KHTM yang  diperoleh  maka  makin  peka  mikroba ketombe  tersebut  terhadap  suatu  bahan  uji. Berdasarkan  data  pada  Gambar  2,  terlihat bahwa  konsentrasi  6.25%  merupakan  nilai KHTM. Hal ini berarti pertumbuhan mikroba ketombe  dapat  dihambat  dengan  konsentrasi ekstrak  propolis  6.25%.  Walaupun  demikian, konsentrasi  6.25%  memiliki  diameter  zona bening  yang  tidak  berbeda  nyata  dengan kontrol  negatif  (akuades,  propilen  glikol,  dan etanol 70%). Adanya penghambatan terhadap mikroba  ketombe  terjadi  pada  konsentrasi ekstrak propolis 12.5%. Hal ini sesuai dengan pendapat  (Przybyłek  &  Karpiński,  2019; Shruthi  dan  Suma,  2012)  bahwa  propolis dapat  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus dan E.  coli .  Untuk  bakteri  lain
( Streptococcus  mutans )  nilai  KHTM  ekstrak propolis  bisa  dicapai  pada  konsentrasi  6.25% (Hasan et al ., 2011).  Hal ini disebabkan oleh sensitifitas  dari  mikroba  terhadap  zat  yang dikandung  dalam  bahan  yang  berfungsi sebagai  antimikroba.  Adanya  nilai  yang berbeda  tersebut  kemungkinan  disebabkan oleh  sifat  bakteri  yang  diuji.      Menurut Sukandar  (2006)  bahwa  nilai  KHTM  dari ekstrak  etanol  daun  gandapura  dan  daun mangkokan  terhadap  mikrob  ketombe  adalah 16  µg/ml.    Sedangkan  menurut  penelitian yang  dilakukan  Puspitasari  (2001),  nilai
KHTM  sebesar  0.2%  dari  bahan  kimia selenium  yang  terdapat  pada  ekstrak  daun sirih. Menurut Sahraie-Rad et al . (2015) pada propolis terdapat senyawa flavonoid dan asam kafeat  yang  merupakan  senyawa  antibakteri terpenting.  Hal  ini  didukung  pula  oleh  hasil penelitian Hasan et al . (2014) yang menunjukkan  bahwa  flavonoid  dan  tannin banyak  terdapat  pada  propolis  asal  dari Bukittinggi.    Namun  menurut  Fatoni et  al . (2008),  senyawa cycloartenol merupakan  zat aktif tertinggi yang berfungsi sebagai detoksifikasi  dan  antibakteri.    Kemampuan propolis sebagai bahan untuk produk kesehatan kulit dan gigi telah dipaparkan oleh Kurek-Gorecka et al. (2021).
Konsentrasi  ekstrak  propolis  sebesar 6.25  %  merupakan  nilai  Konsentrasi  Hambat Tumbuh  Minimum  dari  ekstrak  propolis terhadap  bakteri  ketombe.  Nilai  keefektifan terhadap  ketokonazol  dan  propolis  X  dari ekstrak  propolis  yang  diujikan  berturut-turut sebesar 223.52% dan 99.59 %.

## DAFTAR PUSTAKA
Fatoni,  A.  M.  I.  N.,  Artika,  I.  M.,  Hasan,  A.
E. Z., & Kuswandi. (2008).
Antibacterial Activity of Propolis
Produced  by  Trigona  spp.  Against
Campylobacter spp. HAYATI Journal of Biosciences , 15 (4), 161–164.
https://doi.org/10.4308/hjb.15.4.161
Hadioetomo.  (1990). Mikrobiologi  Dasar dalam Praktek. Gramedia.
Hasan, A. E. Z., Artika, I. M., Kuniatin, P. A., &  Lasmiyanti,  M.  (2011).  Propolis Sebagai  Alternatif  Bahan  Antikaries Gigi. Metty Lasmiyant , 4 (11), 45–53.
Hasan,  A.  E.  Z.,  Made  Artika,  I.,  &  Diri Tukan,  G.  (2014).  Analysis  of  Active Components  of  Trigona  spp  Propolis from  Pandeglang  Indonesia. Global Journal  of  Biology,  Agricultura  & Health Sciences , 3 (1), 215–219.
Indriyanti, N., Adnyana, I. K., & Sukandar, E. Y. (2013). Aktivitas Ekstrak Etanol dan
Fraksi  Akar  Singawalang  (Petiveria alliacea  L.  )  Terhadap  Jamur  Penyebab Ketombe dengan Metode Broth Microdilution. Journal  Of  Tropical Pharmacy  And  Chemistry , 2 (2),  113–
117.
https://doi.org/10.25026/jtpc.v2i2.56.
Kurek-Górecka,  A.,  G.  Rzepecka-Stojko,  A. Balwierz,  R.  Stojko,  Jerzy.  2020.  Bee
Products  in  Dermatology  and  Skin Care. Molecules. 25. 556. 10.3390/molecules25030556.
Kurek-Górecka,  A.;  Walczyńska-Dragon,  K.; Felitti,  R.;  Nitecka-Buchta,  A.;  Baron, S.; Olczyk, P. The Influence of Propolis on  Dental  Plaque  Reduction  and  the Correlation  between  Dental  Plaque  and Severity of COVID-19 Complications—A  Literature  Review. Molecules 2021, 26, 5516. https://doi.org/10.3390/molecules26185 516.
Lederberg,  J.  (2000). Encyclopedia  of microbiology . Academic Press.
Nlandu  Roger  Ngatu,  Takao  Saruta,  Ryoji Hirota,  Masamitsu  Eitoku,  Basilua Andre  Muzembo,  Tomomi  Matsui, Luzitu Severin Nangana, Muaka
Anselme  Mbenza,  Naoko  Kumagai, Narufumi Suganuma. 2011.  Antifungal efficacy  of  Brazilian  green  propolis extracts and honey on Tinea capitis and Tinea  versicolor.  European  Journal  of Integrative  Medicine.  Volume  3,  Issue 4.  2011,  281-287,  ISSN  1876-3820, https://doi.org/10.1016
/j.eujim.2011.10.001.
Pannindrya,  P.,  Safithri,  M.,  &  Tarman,  K.
(2021). Antibacterial Activity of Ethanol  Extract  of  Spirulina  platensis. Current  Biochemistry , 7 (2),  47–51. https://doi.org/10.29244/cb.7.2.1
Petruzzi,  L.,  Corbo,  M.  R.,  Campaniello,  D., Speranza, B., Sinigaglia, M., &
Bevilacqua,  A.  (2020).  Antifungal  and antibacterial  effect  of  propolis:  A
comparative hit for food-borne pseudomonas,  enterobacteriaceae  and fungi. Foods , 9 (5).
https://doi.org/10.3390/foods9050559
Przybyłek,  I.,  &  Karpiński,  T.  M.  (2019).
Antibacterial  properties  of  propolis.
Molecules , 24 (11), 11–13. https://doi.org/10.3390/molecules24112 047 Puspitasari,  T.  (2001). Analisis  kandungan selenium  pada  tanaman  yang  potensial untuk
dimanfaatkan sebagai
antiketombe . Institut Pertanian Bogor.
Sahraie-Rad, M.,  Izadyari, A., Rakizadeh, S., & Sharifi-Rad, J. (2015). Preparation of strong  antidandruff  shampoo  using medicinal plant extracts: A clinical trial and chronic dandruff treatment. Jundishapur Journal of Natural Pharmaceutical Products , 10 (4). https://doi.org/10.17795/jjnpp-21517.
Shruthi,  E.  and  B.  S.  Suma.  2012.  "Health from  the  Hive:  Potential  Uses  of Propolis in General Health," International Journal of Clinical Medicine, Vol. 3 No. 3,  2012, pp. 159- 162. doi: 10.4236/ijcm.2012.33033.
Sukandar,  E.  (2006).  Aktivitas  ekstrak  etanol daun  gandapura  ( Gaulteria  leucocarpa BI.)  dan  mangkokan  [Nothopanax scutellarius  (Burm.f.)  Merr.]  terhadap Pityrosporum ovale.
ACTA Pharmaceutica Indonesia , 31 , 13–17.
Wasu,  M.,  Ramarau,  N.,  Yahya,  M., Mahmod,  S.,  Halim,  N.,  &  Kutty,  R. (2020).  Formulation  and  evaluation  of propolis  extracts  based  shampoo  on dandruff  causing  bacteria. Malaysian Journal of Microbiology , 16 (1), 44–57.
Ogbolu  DO,  Oni  AA,  Daini  OA,  Oloko  AP.
(2006). In vitro antimicrobial properties  of  coconut  oil  on  Candida species in Ibadan, Nigeria. J Med Food. 2007 Jun;10(2):384-7. doi: 10.1089/jmf.2006.1209. PMID: 17651080.
Kurek-Górecka,  A.,  G.  Rzepecka-Stojko,  A. Balwierz,  R.  Stojko,  Jerzy.  2020.  Bee
Products  in  Dermatology  and  Skin Care. Molecules. 25. 556.
10.3390/molecules25030556.