Regenerasi Tanaman dari Eksplan Kalus Bawang Putih (Allium sativum L.) secara

## In Vitro
Arbaul Fauziah 1) dan Wahyu Widoretno 2)
Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya, Malang 1), 2)
Email : arbaulfauziah@ymail.com 1) , wahyu_widoretno@yahoo.com 2)

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  zat  pengatur  tumbuh  auksin  dan  sitokinin terhadap induksi kalus dan regenerasi tanaman bawang putih (Allium sativum L.) secara in vitro. Medium Murashige  and Skoog (MS) dengan  penambahan kombinasi 2,4-D dan  kinetin  digunakan  untuk induksi kalus  dari  eksplan  meristem  basal,    sedangkan  NAA  dan  BAP  digunakan  untuk  regenerasi  planlet  dari eksplan  kalus. Pertumbuhan  kalus  pada  medium  kultur  yang  mengandung  2,4-D  dan  kinetin  pada konsentrasi rendah lebih baik daripada konsentrasi tinggi. Kalus yang dikulturkan pada medium kultur yang  mengandung  NAA  0.1  ppm  dikombinasikan  dengan  BAP 0.5-2  ppm mampu  membentuk  tunas. Jumlah tunas  meningkat  seiring  dengan  peningkatan  konsentrai  BAP. Di  antara  berbagai  macam konsentrasi  NAA  dan  BAP,  jumlah tunas  terbanyak  diperoleh  pada  medium  kultur  yang  mengandung NAA 0.1 ppm dan BAP 2 ppm. Tunas-tunas dipindahkan ke medium kultur dengan penambahan BAP 10 ppm untuk  menginduksi  pemanjangan  tunas.  Planlet  bawang  putih  dihasilkan  dari  tunas yang dikulturkan pada medium kultur dengan penambahan IBA 2 ppm.
Kata kunci: bawang putih, kalus, meristem basal, regenerasi in vitro

## ABSTRACT
This research was to find out the effect of growth regulator auxin and cytokinin on callus induction and in  vitro plant  regeneration  in  garlic  (Allium  sativum L.).  Murashige  and  Skoog  (MS)  medium supplemented with combination  of 2,4-D and  kinetin were used to callus induction from basal  meristem explant, whereas NAA and BAP were used for plant regeneration from callus explant. Growth of callus on medium culture containing 2,4-D and kinetin on lower concentration was better than high concentration. Callus were cultured on medium culture containing 0.1 ppm NAA combined with 0.5-2 ppm BAP formed shoot.  The number  of shoots increased  with  the  increasing  concentration  of  BAP. Among  the  different concentration  of NAA  and  BAP,  the  highest number  of shoots  were achieved  on  medium  culture containing 0.1 ppm NAA and 2 ppm BAP. The shoots transferred on medium culture containing 10 ppm BAP to  induced  shoot  elongation.  The  planlet  of  garlic  were  achieved  from  shoot  when  cultured  on medium culture supplemented with 2 ppm IBA.
Key words: Allium sativum L., basal meristem, callus, in vitro regeneration

## PENDAHULUAN
Bawang putih (Allium sativum L.) merupakan  salah  satu  famili Alliaceae  yang dapat  digunakan  sebagai  bahan  masakan  dan obat-obatan [1].  Kebutuhan  bawang  putih  saat ini  semakin  meningkat,  namun  rata-rata produksi  bawang  putih  di  Indonesia  hanya mampu  memenuhi  20%  dari  kebutuhan nasional, yaitu pada tahun 2013 sebesar 15.766 ton/ha [2]. Pemenuhan  kebutuhan  bibit tanaman  dalam  jumlah  besar,  berkualitas, bebas  hama  dan  penyakit,  serta  harus  tersedia dalam  waktu  singkat  seringkali  tidak  dapat
dipenuhi  dengan  metode  konvensional.  Oleh sebab itu, pemenuhan kebutuhan bibit bawang putih  nasional  dapat  dilakukan  melalui  kultur in  vitro [3]. Perbanyakan  bawang  putih  secara in vitro telah berhasil dilakukan pada sebagian besar spesies Allium, seperti Allium tuberosum Rottl. [4], Allium  sativum L. [5],  dan Allium ampeloprasum L. [6].
Regenerasi tanaman bawang putih secara in vitro salah satunya dipengaruhi oleh kombinasi zat  pengatur  tumbuh  (ZPT) auksin  dan sitokinin  yang  ditambahkan  pada  medium kultur.  Pemberian  NAA  dan  BAP  untuk regenerasi  tunas  bawang  putih  telah  dilakukan
dari  eksplan  akar [7] dan  kalus [8]. Namun, hingga  saat  ini  efisiensi  penggunaan  ZPT untuk  memacu  regenerasi  tanaman  bawang putih  dari  kalus  masih  belum  optimal.  Oleh sebab  itu  perlu  dilakukan  penelitian  tentang kombinasi  ZPT  yang  sesuai  untuk  regenerasi tunas  bawang  putih.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  pengaruh  zat  pengatur tumbuh auksin dan sitokinin terhadap pembentukan  kalus  dan  regenerasi  tanaman bawang putih secara in vitro.

## METODE PENELITIAN

## Persiapan  eksplan. Bawang  putih  varietas
Taiwan dari  Malang,  Jawa  Timur  digunakan sebagai  bahan  penelitian.  Umbi  bawang  putih dicuci  dengan  air  mengalir  dan  disterilisasi dengan  5.25%  sodium  hypochlorite  (NaOCl) selama 15 menit, kemudian umbi bawang putih dibilas  dengan  akuades  steril  sebanyak  3  kali. Bagian  meristem  basal  dari  masing-masing suing  pada  umbi  bawang  putih  digunakan sebagai eksplan.
Induksi  kalus. Eksplan  meristem  basal  ± 0.1  cm  dikulturkan  pada  medium  MS  dengan penambahan  kombinasi  2,4-D  (0.3  dan  0.5 ppm)  dan  kinetin  (0.5,  1,  1.5,  dan  2 ppm). Kultur diinkubasi dengan intensitas cahaya 600 lux  pada  suhu  25-26ºC  selama  8  minggu. Setiap perlakuan diulang empat kali dan setiap botol  terdiri  dari  dua eksplan.  Parameter pengamatan adalah pembentukan dan pertumbuhan  kalus  berupa  berat  basah dan berat kering kalus bawang putih.

## Induksi  tunas  dan  regenerasi  planlet.
Induksi  tunas  dilakukan  melalui  2  tahapan, yaitu  induksi  mata  tunas  dan  pemanjangan tunas.  Induksi  tunas  dilakukan  dengan  cara kalus  dikulturkan  pada  medium  MS  dengan penambahan  kombinasi  NAA  0.1  ppm  dan BAP  (0.5,  1,  1.5,  dan  2  ppm).  Kultur diinkubasi  dengan intensitas cahaya 600  lux pada suhu 25-26 0 C selama tiga bulan sehingga dihasilkan  mata-mata  tunas.  Setiap  perlakuan diulang lima kali dan setiap ulangan terdiri dari 0,1  g kalus. Mata-mata  tunas  hasil  regenerasi dipindahkan  ke  medium  MS  +  BAP  10  ppm untuk  pemanjangan  tunas.  Kultur diinkubasi dengan intensitas cahaya 600  lux pada  suhu 25-26 0 C selama dua bulan. Parameter pengamatan adalah pembentukan dan pertumbuhan tunas pada setiap perlakuan.
Regenerasi  planlet  dilakukan  dengan  cara tunas  dipindahkan  pada  media  MS +  IBA  2 ppm.  Kultur diinkubasi  dengan intensitas cahaya 600  lux pada  suhu 25-26 0 C selama dua  bulan sehingga  diperoleh  planlet  bawang putih.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Induksi  kalus.  Eksplan  meristem  basal yang  dikulturkan  pada  medium MS  dengan penambahan  2,4-D  (0.3  dan  0.5  ppm)  dan kinetin (0.5-2 ppm) mampu membentuk kalus. Kalus  terbentuk  pada  seluruh  permukaan dan bagian tepi eksplan meristem basal serta mulai terbentuk 1.5  bulan setelah  kultur. Kalus  yang terbentuk berwarna kuning, kuning kecoklatan, putih, dan bening (Gambar 1).
Gambar  1.  Pertumbuhan kalus  dari  eksplan  meristem basal  (MB) bawang  putih  pada  medium MS dengan  penambahan  kombinasi  2,4-D  dan kinetin.  (A)  Eksplan  meristem  basal  (B)
Eksplan belum membentuk kalus (C) Eksplan membentuk kalus
Penambahan  auksin  dan  sitokinin  pada medium kultur berpengaruh terhadap pembentukan  dan  pertumbuhan  kalus  bawang putih. Semakin  tinggi  konsentrasi  2,4-D dan kinetin yang ditambahkan pada medium kultur semakin  menurunkan  berat  basah  dan  berat kering  kalus. Berat  basah  kalus  pada  medium MS  +  2,4-D  0.3  ppm  +  kinetin  2  ppm  adalah 0.09  g,  sedangkan  berat  basah  kalus  pada medium MS + 2,4-D 0.5 ppm + kinetin 2 ppm adalah  0.04  g. Basah  dan  berat  kering  kalus pada  media  kultur  dengan  penambahan  2,4-D 0.3  ppm  lebih  tinggi  daripada  2,4-D  0.5  ppm pada  setiap  konsentrasi  kinetin  yang  sama.
Dengan demikian, pembentukan dan pertumbuhan  kalus  yang  baik  pada  penelitian ini terdapat  pada  medium  kultur dengan penambahan  kombinasi  auksin  dan  sitokinin pada konsentrasi rendah. Berat basah dan berat kering kalus  tertinggi  terdapat  pada  medium MS  +2,4-D  0.3  ppm  +  kinetin  0.5  ppm,  yaitu 0.13 dan 0.019 g (Gambar 2).
dari  eksplan  akar [7] dan  kalus [8]. Namun, hingga  saat  ini  efisiensi  penggunaan  ZPT untuk  memacu  regenerasi  tanaman  bawang putih  dari  kalus  masih  belum  optimal.  Oleh sebab  itu  perlu  dilakukan  penelitian  tentang kombinasi  ZPT  yang  sesuai  untuk  regenerasi tunas  bawang  putih.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  pengaruh  zat  pengatur tumbuh auksin dan sitokinin terhadap pembentukan  kalus  dan  regenerasi  tanaman bawang putih secara in vitro.

## METODE PENELITIAN

## Persiapan  eksplan. Bawang  putih  varietas
Taiwan dari  Malang,  Jawa  Timur  digunakan sebagai  bahan  penelitian.  Umbi  bawang  putih dicuci  dengan  air  mengalir  dan  disterilisasi dengan  5.25%  sodium  hypochlorite  (NaOCl) selama 15 menit, kemudian umbi bawang putih dibilas  dengan  akuades  steril  sebanyak  3  kali. Bagian  meristem  basal  dari  masing-masing suing  pada  umbi  bawang  putih  digunakan sebagai eksplan.
Induksi  kalus. Eksplan  meristem  basal  ± 0.1  cm  dikulturkan  pada  medium  MS  dengan penambahan  kombinasi  2,4-D  (0.3  dan  0.5 ppm)  dan  kinetin  (0.5,  1,  1.5,  dan  2 ppm). Kultur diinkubasi dengan intensitas cahaya 600 lux  pada  suhu  25-26ºC  selama  8  minggu. Setiap perlakuan diulang empat kali dan setiap botol  terdiri  dari  dua eksplan.  Parameter pengamatan adalah pembentukan dan pertumbuhan  kalus  berupa  berat  basah dan berat kering kalus bawang putih.

## Induksi  tunas  dan  regenerasi  planlet.
Induksi  tunas  dilakukan  melalui  2  tahapan, yaitu  induksi  mata  tunas  dan  pemanjangan tunas.  Induksi  tunas  dilakukan  dengan  cara kalus  dikulturkan  pada  medium  MS  dengan penambahan  kombinasi  NAA  0.1  ppm  dan BAP  (0.5,  1,  1.5,  dan  2  ppm).  Kultur diinkubasi  dengan intensitas cahaya 600  lux pada suhu 25-26 0 C selama tiga bulan sehingga dihasilkan  mata-mata  tunas.  Setiap  perlakuan diulang lima kali dan setiap ulangan terdiri dari 0,1  g kalus. Mata-mata  tunas  hasil  regenerasi dipindahkan  ke  medium  MS  +  BAP  10  ppm untuk  pemanjangan  tunas.  Kultur diinkubasi dengan intensitas cahaya 600  lux pada  suhu 25-26 0 C selama dua bulan. Parameter pengamatan adalah pembentukan dan pertumbuhan tunas pada setiap perlakuan.
Regenerasi  planlet  dilakukan  dengan  cara tunas  dipindahkan  pada  media  MS +  IBA  2 ppm.  Kultur diinkubasi  dengan intensitas cahaya 600  lux pada  suhu 25-26 0 C selama dua  bulan sehingga  diperoleh  planlet  bawang putih.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Induksi  kalus.  Eksplan  meristem  basal yang  dikulturkan  pada  medium MS  dengan penambahan  2,4-D  (0.3  dan  0.5  ppm)  dan kinetin (0.5-2 ppm) mampu membentuk kalus. Kalus  terbentuk  pada  seluruh  permukaan dan bagian tepi eksplan meristem basal serta mulai terbentuk 1.5  bulan setelah  kultur. Kalus  yang terbentuk berwarna kuning, kuning kecoklatan, putih, dan bening (Gambar 1).
Gambar  1.  Pertumbuhan kalus  dari  eksplan  meristem basal  (MB) bawang  putih  pada  medium MS dengan  penambahan  kombinasi  2,4-D  dan kinetin.  (A)  Eksplan  meristem  basal  (B)
Eksplan belum membentuk kalus (C) Eksplan membentuk kalus Penambahan  auksin  dan  sitokinin  pada medium kultur berpengaruh terhadap pembentukan  dan  pertumbuhan  kalus  bawang putih. Semakin  tinggi  konsentrasi  2,4-D dan kinetin yang ditambahkan pada medium kultur semakin  menurunkan  berat  basah  dan  berat kering  kalus. Berat  basah  kalus  pada  medium MS  +  2,4-D  0.3  ppm  +  kinetin  2  ppm  adalah 0.09  g,  sedangkan  berat  basah  kalus  pada medium MS + 2,4-D 0.5 ppm + kinetin 2 ppm adalah  0.04  g. Basah  dan  berat  kering  kalus pada  media  kultur  dengan  penambahan  2,4-D 0.3  ppm  lebih  tinggi  daripada  2,4-D  0.5  ppm pada  setiap  konsentrasi  kinetin  yang  sama. Dengan demikian, pembentukan dan pertumbuhan  kalus  yang  baik  pada  penelitian ini terdapat  pada  medium  kultur dengan penambahan  kombinasi  auksin  dan  sitokinin pada konsentrasi rendah. Berat basah dan berat kering kalus  tertinggi  terdapat  pada  medium MS  +2,4-D  0.3  ppm  +  kinetin  0.5  ppm,  yaitu 0.13 dan 0.019 g (Gambar 2).
dari  eksplan  akar [7] dan  kalus [8]. Namun, hingga  saat  ini  efisiensi  penggunaan  ZPT untuk  memacu  regenerasi  tanaman  bawang putih  dari  kalus  masih  belum  optimal.  Oleh sebab  itu  perlu  dilakukan  penelitian  tentang kombinasi  ZPT  yang  sesuai  untuk  regenerasi tunas  bawang  putih.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  mengetahui  pengaruh  zat  pengatur tumbuh auksin dan sitokinin terhadap pembentukan  kalus  dan  regenerasi  tanaman bawang putih secara in vitro.

## METODE PENELITIAN

## Persiapan  eksplan. Bawang  putih  varietas
Taiwan dari  Malang,  Jawa  Timur  digunakan sebagai  bahan  penelitian.  Umbi  bawang  putih dicuci  dengan  air  mengalir  dan  disterilisasi dengan  5.25%  sodium  hypochlorite  (NaOCl) selama 15 menit, kemudian umbi bawang putih dibilas  dengan  akuades  steril  sebanyak  3  kali. Bagian  meristem  basal  dari  masing-masing suing  pada  umbi  bawang  putih  digunakan sebagai eksplan.
Induksi  kalus. Eksplan  meristem  basal  ± 0.1  cm  dikulturkan  pada  medium  MS  dengan penambahan  kombinasi  2,4-D  (0.3  dan  0.5 ppm)  dan  kinetin  (0.5,  1,  1.5,  dan  2 ppm). Kultur diinkubasi dengan intensitas cahaya 600 lux  pada  suhu  25-26ºC  selama  8  minggu. Setiap perlakuan diulang empat kali dan setiap botol  terdiri  dari  dua eksplan.  Parameter pengamatan adalah pembentukan dan pertumbuhan  kalus  berupa  berat  basah dan berat kering kalus bawang putih.

## Induksi  tunas  dan  regenerasi  planlet.
Induksi  tunas  dilakukan  melalui  2  tahapan, yaitu  induksi  mata  tunas  dan  pemanjangan tunas.  Induksi  tunas  dilakukan  dengan  cara kalus  dikulturkan  pada  medium  MS  dengan penambahan  kombinasi  NAA  0.1  ppm  dan BAP  (0.5,  1,  1.5,  dan  2  ppm).  Kultur diinkubasi  dengan intensitas cahaya 600  lux pada suhu 25-26 0 C selama tiga bulan sehingga dihasilkan  mata-mata  tunas.  Setiap  perlakuan diulang lima kali dan setiap ulangan terdiri dari 0,1  g kalus. Mata-mata  tunas  hasil  regenerasi dipindahkan  ke  medium  MS  +  BAP  10  ppm untuk  pemanjangan  tunas.  Kultur diinkubasi dengan intensitas cahaya 600  lux pada  suhu 25-26 0 C selama dua bulan. Parameter pengamatan adalah pembentukan dan pertumbuhan tunas pada setiap perlakuan.
Regenerasi  planlet  dilakukan  dengan  cara tunas  dipindahkan  pada  media  MS +  IBA  2 ppm.  Kultur diinkubasi  dengan intensitas cahaya 600  lux pada  suhu 25-26 0 C selama dua  bulan sehingga  diperoleh  planlet  bawang putih.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Induksi  kalus.  Eksplan  meristem  basal yang  dikulturkan  pada  medium MS  dengan penambahan  2,4-D  (0.3  dan  0.5  ppm)  dan kinetin (0.5-2 ppm) mampu membentuk kalus. Kalus  terbentuk  pada  seluruh  permukaan dan bagian tepi eksplan meristem basal serta mulai terbentuk 1.5  bulan setelah  kultur. Kalus  yang terbentuk berwarna kuning, kuning kecoklatan, putih, dan bening (Gambar 1).
Gambar  1.  Pertumbuhan kalus  dari  eksplan  meristem basal  (MB) bawang  putih  pada  medium MS dengan  penambahan  kombinasi  2,4-D  dan kinetin.  (A)  Eksplan  meristem  basal  (B)
Eksplan belum membentuk kalus (C) Eksplan membentuk kalus
Penambahan  auksin  dan  sitokinin  pada medium kultur berpengaruh terhadap pembentukan  dan  pertumbuhan  kalus  bawang putih. Semakin  tinggi  konsentrasi  2,4-D dan kinetin yang ditambahkan pada medium kultur semakin  menurunkan  berat  basah  dan  berat kering  kalus. Berat  basah  kalus  pada  medium MS  +  2,4-D  0.3  ppm  +  kinetin  2  ppm  adalah 0.09  g,  sedangkan  berat  basah  kalus  pada medium MS + 2,4-D 0.5 ppm + kinetin 2 ppm adalah  0.04  g. Basah  dan  berat  kering  kalus pada  media  kultur  dengan  penambahan  2,4-D 0.3  ppm  lebih  tinggi  daripada  2,4-D  0.5  ppm pada  setiap  konsentrasi  kinetin  yang  sama.
Dengan demikian, pembentukan dan pertumbuhan  kalus  yang  baik  pada  penelitian ini terdapat  pada  medium  kultur dengan penambahan  kombinasi  auksin  dan  sitokinin pada konsentrasi rendah. Berat basah dan berat kering kalus  tertinggi  terdapat  pada  medium MS  +2,4-D  0.3  ppm  +  kinetin  0.5  ppm,  yaitu 0.13 dan 0.019 g (Gambar 2).
Gambar  2. Berat  basah  dan  berat  kering  kalus  bawang putih 2 bulan setelah kultur pada medium MS dengan  penambahan  kombinasi  2,4-D  dan kinetin. (A)  Berat  basah  kalus  (B)  Berat kering  kalus.  Ket:  huruf  yang  sama    pada setiap  warna  batang  menunjukkan  tidak berbeda nyat a pada uji BNT (α=0.05)
Auksin atau kombinasi auksin dan sitokinin dapat mamacu pembentukan kalus [9]. Eksplan yang  dikulturkan  pada  medium  dengan penambahan  auksin  mampu  membentuk  kalus sebesar 56%, sedangkan pada  medium dengan penambahan  kombinasi  auksin  dan  sitokinin hanya  sebesar  33%.  Beberapa  penelitian menyebutkan bahwa 2,4-D atau kombinasi 2,4- D  dan  kinetin  efektif  untuk  induksi  dan pertumbuhan kalus. Pembentukan kalus bawang  putih  telah  berhasil  dilakukan  pada medium  kultur  dengan  penambahan  2,4-D seperti  pada  eksplan akar [9] dan daun [10]
atau  kombinasi  2,4-D  dan  kinetin  seperti  pada eksplan daun [11] dan tunas [12].

## Induksi  tunas  dan  regenerasi  planlet.
Kombinasi  NAA  dan  BAP  yang  ditambahkan pada  medium  kultur  mampu  menginduksi mata-mata  tunas pada  kalus  bawang  putih.
Eksplan  kalus  yang  dikulturkan  pada  medium dengan  penambahan  BAP  pada  konsentrasi yang lebih tinggi mampu memacu pembentukan mata tunas lebih banyak daripada  pada  medium  dengan  penambahan BAP  pada  konsentrasi  yang  lebih  rendah. Kemampuan  induksi  mata  tunas  dari  kalus bawang  putih  meningkat  seiring  dengan peningkatan konsentrai BAP. Kombinasi NAA 0.1  ppm dan BAP (0.5  dan  1) ppm  hanya mampu  menginduksi  calon-calon  mata  tunas, sedangkan  BAP  1.5  dan  2  ppm  mampu menginduksi  mata-mata  tunas.  Mata  tunas terbanyak  dan  terbaik dengan  warna  hijau diperoleh pada medium MS + NAA 0.1 ppm +
BAP  2  ppm.  Bahkan,  sebagian  kalus  pada medium  MS  +  NAA  0.1  ppm  +  BAP  2  ppm tumbuh menjadi tunas-tunas kecil (Gambar 3).
Gambar 3. Pembentukan  mata tunas dari  kalus  3 bulan setelah subkultur  pada  medium MS  dengan penambahan  kombinasi NAA  0.1  ppm  dan BAP. (A) BAP 0.5 ppm (B) BAP 1 ppm (C)
BAP 1.5 ppm (D) BAP 2 ppm
Beberapa  penelitian  menyebutkan  bahwa induksi akar bawang putih secara in vitro dapat dilakukan pada  medium  MS  tanpa  ZPT [12]. Namun,  beberapa  penelitian lain melaporkan bahwa  akar  dapat  terbentuk  ketika  tunas dikulturkan  pada  medium  yang  mengandung auksin.  Salah  satu  jenis  auksin  yang  sering digunakan  untuk  induksi  akar  adalah  IBA. Penambahan  IBA  2  ppm  pada  medium  kultur menunjukkan respon terbaik dalam
menginduksi  akar Allium  sativum L. [1]. Pada penelitian ini, tunas bawang putih dipindahkan pada medium MS + IBA 2 ppm selama 2 bulan sehingga diperoleh  planlet  bawang  putih (Gambar 4).
Gambar 4. Pembentukan tunas dan regenerasi planlet.
(A) Kalus (B) Induksi  mata  tunas (C) Pemanjangan tunas (D) Regenerasi planlet
Regenerasi tanaman bawang putih secara in vitro dipengaruhi  oleh  konsentrasi  NAA  dan BAP  yang  ditambahkan  pada  medium  kultur. Beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa peningkatan  persentase  jumlah  tunas  pada eksplan  terjadi  ketika  konsentrasi  BAP  dan NAA  ditingkatkan.  Penambahan  BAP pada medium kultur mampu meningkatkan proliferasi sel pada golongan Allium spp. [3].
Regenerasi tunas dari eksplan kalus bawang putih  telah  berhasil  dilakukan  pada  medium
Aa Aa Aa Aa Aa Ba Aab Bb Aa 0.000 0.020 0.040 0.060 0.080 0.100 0.120 0.140 0.5 1 2 0.5 A B er at B as ah / B er at K er in g K al u s (gr am ) Konsentrasi Kinetin (ppm ) 2,4-D 0.3 ppm 2,4-D 0.5 ppm
Gambar  2. Berat  basah  dan  berat  kering  kalus  bawang putih 2 bulan setelah kultur pada medium MS dengan  penambahan  kombinasi  2,4-D  dan kinetin. (A)  Berat  basah  kalus  (B)  Berat kering  kalus.  Ket:  huruf  yang  sama    pada setiap  warna  batang  menunjukkan  tidak berbeda nyat a pada uji BNT (α=0.05)
Auksin atau kombinasi auksin dan sitokinin dapat mamacu pembentukan kalus [9]. Eksplan yang  dikulturkan  pada  medium  dengan penambahan  auksin  mampu  membentuk  kalus sebesar 56%, sedangkan pada  medium dengan penambahan  kombinasi  auksin  dan  sitokinin hanya  sebesar  33%.  Beberapa  penelitian menyebutkan bahwa 2,4-D atau kombinasi 2,4- D  dan  kinetin  efektif  untuk  induksi  dan pertumbuhan kalus. Pembentukan kalus bawang  putih  telah  berhasil  dilakukan  pada medium  kultur  dengan  penambahan  2,4-D seperti  pada  eksplan akar [9] dan daun [10] atau  kombinasi  2,4-D  dan  kinetin  seperti  pada eksplan daun [11] dan tunas [12].

## Induksi  tunas  dan  regenerasi  planlet.
Kombinasi  NAA  dan  BAP  yang  ditambahkan pada  medium  kultur  mampu  menginduksi mata-mata  tunas pada  kalus  bawang  putih.
Eksplan  kalus  yang  dikulturkan  pada  medium dengan  penambahan  BAP  pada  konsentrasi yang lebih tinggi mampu memacu pembentukan mata tunas lebih banyak
daripada  pada  medium  dengan  penambahan BAP  pada  konsentrasi  yang  lebih  rendah. Kemampuan  induksi  mata  tunas  dari  kalus bawang  putih  meningkat  seiring  dengan peningkatan konsentrai BAP. Kombinasi NAA 0.1  ppm dan BAP (0.5  dan  1) ppm  hanya mampu  menginduksi  calon-calon  mata  tunas, sedangkan  BAP  1.5  dan  2  ppm  mampu menginduksi  mata-mata  tunas.  Mata  tunas terbanyak  dan  terbaik dengan  warna  hijau diperoleh pada medium MS + NAA 0.1 ppm +
BAP  2  ppm.  Bahkan,  sebagian  kalus  pada medium  MS  +  NAA  0.1  ppm  +  BAP  2  ppm tumbuh menjadi tunas-tunas kecil (Gambar 3).
Gambar 3. Pembentukan  mata tunas dari  kalus  3 bulan setelah subkultur  pada  medium MS  dengan penambahan  kombinasi NAA  0.1  ppm  dan BAP. (A) BAP 0.5 ppm (B) BAP 1 ppm (C) BAP 1.5 ppm (D) BAP 2 ppm
Beberapa  penelitian  menyebutkan  bahwa induksi akar bawang putih secara in vitro dapat dilakukan pada  medium  MS  tanpa  ZPT [12]. Namun,  beberapa  penelitian lain melaporkan bahwa  akar  dapat  terbentuk  ketika  tunas dikulturkan  pada  medium  yang  mengandung auksin.  Salah  satu  jenis  auksin  yang  sering digunakan  untuk  induksi  akar  adalah  IBA. Penambahan  IBA  2  ppm  pada  medium  kultur menunjukkan respon terbaik dalam
menginduksi  akar Allium  sativum L. [1]. Pada penelitian ini, tunas bawang putih dipindahkan pada medium MS + IBA 2 ppm selama 2 bulan sehingga diperoleh  planlet  bawang  putih (Gambar 4).
Gambar 4. Pembentukan tunas dan regenerasi planlet. (A) Kalus (B) Induksi  mata  tunas (C) Pemanjangan tunas (D) Regenerasi planlet
Regenerasi tanaman bawang putih secara in vitro dipengaruhi  oleh  konsentrasi  NAA  dan BAP  yang  ditambahkan  pada  medium  kultur. Beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa peningkatan  persentase  jumlah  tunas  pada eksplan  terjadi  ketika  konsentrasi  BAP  dan NAA  ditingkatkan.  Penambahan  BAP pada medium kultur mampu meningkatkan proliferasi sel pada golongan Allium spp. [3].
Regenerasi tunas dari eksplan kalus bawang putih  telah  berhasil  dilakukan  pada  medium
Aa Aa Aa Aa 1 2 B Konsentrasi Kinetin (ppm )
Gambar  2. Berat  basah  dan  berat  kering  kalus  bawang putih 2 bulan setelah kultur pada medium MS dengan  penambahan  kombinasi  2,4-D  dan kinetin. (A)  Berat  basah  kalus  (B)  Berat kering  kalus.  Ket:  huruf  yang  sama    pada setiap  warna  batang  menunjukkan  tidak berbeda nyat a pada uji BNT (α=0.05)
Auksin atau kombinasi auksin dan sitokinin dapat mamacu pembentukan kalus [9]. Eksplan yang  dikulturkan  pada  medium  dengan penambahan  auksin  mampu  membentuk  kalus sebesar 56%, sedangkan pada  medium dengan penambahan  kombinasi  auksin  dan  sitokinin hanya  sebesar  33%.  Beberapa  penelitian menyebutkan bahwa 2,4-D atau kombinasi 2,4- D  dan  kinetin  efektif  untuk  induksi  dan pertumbuhan kalus. Pembentukan kalus bawang  putih  telah  berhasil  dilakukan  pada medium  kultur  dengan  penambahan  2,4-D seperti  pada  eksplan akar [9] dan daun [10] atau  kombinasi  2,4-D  dan  kinetin  seperti  pada eksplan daun [11] dan tunas [12].
Induksi  tunas  dan  regenerasi  planlet. Kombinasi  NAA  dan  BAP  yang  ditambahkan pada  medium  kultur  mampu  menginduksi mata-mata  tunas pada  kalus  bawang  putih. Eksplan  kalus  yang  dikulturkan  pada  medium dengan  penambahan  BAP  pada  konsentrasi yang lebih tinggi mampu memacu pembentukan mata tunas lebih banyak daripada  pada  medium  dengan  penambahan BAP  pada  konsentrasi  yang  lebih  rendah. Kemampuan  induksi  mata  tunas  dari  kalus bawang  putih  meningkat  seiring  dengan peningkatan konsentrai BAP. Kombinasi NAA 0.1  ppm dan BAP (0.5  dan  1) ppm  hanya mampu  menginduksi  calon-calon  mata  tunas, sedangkan  BAP  1.5  dan  2  ppm  mampu menginduksi  mata-mata  tunas.  Mata  tunas terbanyak  dan  terbaik dengan  warna  hijau diperoleh pada medium MS + NAA 0.1 ppm +
BAP  2  ppm.  Bahkan,  sebagian  kalus  pada medium  MS  +  NAA  0.1  ppm  +  BAP  2  ppm tumbuh menjadi tunas-tunas kecil (Gambar 3).
Gambar 3. Pembentukan  mata tunas dari  kalus  3 bulan setelah subkultur  pada  medium MS  dengan penambahan  kombinasi NAA  0.1  ppm  dan BAP. (A) BAP 0.5 ppm (B) BAP 1 ppm (C) BAP 1.5 ppm (D) BAP 2 ppm
Beberapa  penelitian  menyebutkan  bahwa induksi akar bawang putih secara in vitro dapat dilakukan pada  medium  MS  tanpa  ZPT [12]. Namun,  beberapa  penelitian lain melaporkan bahwa  akar  dapat  terbentuk  ketika  tunas dikulturkan  pada  medium  yang  mengandung auksin.  Salah  satu  jenis  auksin  yang  sering digunakan  untuk  induksi  akar  adalah  IBA. Penambahan  IBA  2  ppm  pada  medium  kultur menunjukkan respon terbaik dalam menginduksi  akar Allium  sativum L. [1]. Pada penelitian ini, tunas bawang putih dipindahkan pada medium MS + IBA 2 ppm selama 2 bulan sehingga diperoleh  planlet  bawang  putih (Gambar 4).
Gambar 4. Pembentukan tunas dan regenerasi planlet.
(A) Kalus (B) Induksi  mata  tunas (C) Pemanjangan tunas (D) Regenerasi planlet
Regenerasi tanaman bawang putih secara in vitro dipengaruhi  oleh  konsentrasi  NAA  dan BAP  yang  ditambahkan  pada  medium  kultur. Beberapa  penelitian  menunjukkan  bahwa peningkatan  persentase  jumlah  tunas  pada eksplan  terjadi  ketika  konsentrasi  BAP  dan NAA  ditingkatkan.  Penambahan  BAP pada medium kultur mampu meningkatkan proliferasi sel pada golongan Allium spp. [3].
Regenerasi tunas dari eksplan kalus bawang putih  telah  berhasil  dilakukan  pada  medium
kultur  dengan  penambahan  BAP [13] atau kombinasi  NAA  pada  konsentrasi  rendah  dan BAP  pada  konsentrasi  tinggi [14]. Auksin dapat menginduksi pembentukan dan proliferasi  kalus,  sedangkan  sitokinin  memacu pembentukan  dan  pemanjangan  tunas  maupun akar [9].

## KESIMPULAN
Pertumbuhan  kalus  dan  regenerasi  tunas bawang  putih  dipengaruhi  oleh  konsentrasi auksin  dan  sitokinin  dalam  media  kultur. Pertumbuhan  kalus  terbaik  terdapat  pada eksplan  meristem  basal  yang  dikulturkan  pada medium MS  +  2,4-D  0.3  ppm  +  kinetin  0.5 ppm,  sedangkan pertumbuhan  tunas terbaik diperoleh pada eksplan kalus yang dikulturkan pada medium MS  +  NAA  0.1  ppm  +  BAP  2 ppm. Penambahan BAP 10 ppm pada medium kultur  dapat  mamacu pemanjangan tunas. Planlet  diperoleh  pada  tunas  yang  dikulturkan pada medium kultur  dengan penambahan  IBA 2 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]Mehta,  J.,  A.  Sharma,  N.  Sharma,  S.  K. Meghwal,  G.  Sharma,  P.  Gehlot  &  R. Naruka.  2013.  An  Improved  Method for  Callus  Culture  and In  Vitro Propagation  of  Garlic  (Allium  sativum L.). Int. J. App. Biosci. 1(1): 1-6.
[2]Badan  Pusat Statistik  dan  Direktorat Jenderal  Holtikultura.  2013.  Produksi Bawang Putih menurut Provinsi, 2009- 2013.
[3]Hailekidan,  B.,  M.  Andargie  &  K.  Assefa. 2013. In  Vitro Planlet  Regeneration from the Bulbs of Shallot (Allium cepa Var. Group Aggregatum). Research in Plant Science. 1(2): 45-52.
[4]Alizadeh,  B.,  S.  D.  Royandazagh,  K.  M. Khawar & S. Ozcam. 2013.
Micropropagation  of  Garlic  Chives (Allium  tuberosum Rottl.  Ex  Sprang) using  Mesocotyl  Axis. J.  Anim.  Plant. Sci. 23(2): 543-549.
[5]Dixit, V., S. P. Rai & B. R. Chaudary. 2013. Allium  sativum:  Four-Step  Approach to  Efficient  Micropropagation. Int.  J. Innov. Biol. Res. 2(1): 6-14.
[6]Monemi,  M.  B.,  S.  K.  Kazemitabar,  G.  B. Khaniki, E. Yasari, F. Sohrevardi & R. Pourbagher.  2014.  Tissue  Culture Study  of  the  Medicinal  Plant  Leek
(Allium  Ampeloprasum L.). IJMCM. 3(2): 1-8.
[7]Kizil,  S.,  D.  Y.  Icgil  &  K.  M.  Khawar. 2014.  Improved In  Vitro regeneration and  Propagation  of  Tunceli  Garlic (Allium tuncelianum L.). J. Hort Sci & Biotechnol. 89(4): 408-414.
[8]Metwally,  E. I.,  M.  E.  El-Denary,  Y.  H. Dewir  &  Y.  Naidoo.  2014. In  Vitro
Propagation  of  Garlic  (Allium  sativum L.) Through Adventitious Shoot
Organogenesis. Afr.  J.  Biotechnol. 13(38): 3892-3900.
[9]Zheng,  S.  J.,  B.  Henken,  F.  A.  Krens  &  C. Kik.  2003.  The  Development of Efficient  Cultivar-Independent  Plant Regeneration  System  from  Callus Derived  from  both  Apical  and  Non- Apical  Root  Segments  of  Garlic (Allium sativum L.). J. Biol. Plant. 39: 288-292.
[10]Salam, M. A., M. R. Ali, Md. E. Ali, K. A. Alam,  M.  S.  H.  Reza,  S.  Salam  &  S. M. M. Rahman. 2008. Callus Induction and Regeneration of Indigenous Garlic (Allium sativum L.). Am. J. Plant Physiol. 3(1): 33-39. [11]Kim, S. S., D. P. Guo, D. C. Jung & S. T. Kwon. 2003. Multiple Shoots Regeneration  an In  Vitro Bulbet Formation from Garlic Callus. J. Plant Biotechnol. 5(2): 95-99.
[12]Khan,  N.,  M.  S.  Alam  &  U.  K.  Nath. In Vitro Regeneration  of  Garlic  Through Callus  Culture.  2004. J.  Bio  Sci. 4(2): 189-191.
[13]Barandiaran,  X.,  N.  Martin,  M.  F.  R. Rodziques-Conde,  A.  D.  Pietro &  J. Martin. 1999. An Efficient Method for Callus Culture and Shoot Regeneration of  Garlic  (Allium  sativum L.). J.  Hort Sci. 34(2): 348-349.
[14]Scotton,  D.  C.,  V.  A.  Benedito,  J.  B.  de Molfetta,  B.  I.  F.  P.  Rodrigues,  A.  T. Netto  &  A.  Figueira.  2013.  Response of  Root  Explants  to  In  Vitro Cultivation  of  Marketable  Garlic Cultivars. J. Hortic Bras. 31(1): 80-85.