## JURNAL KAJIAN PEMBELAJARAN DAN KEILMUAN
Volume 8 Nomor 1 Tahun 2024 Halaman 35- 40 p-ISSN: 2579-4299, e-ISSN: 2621-0533, DOI: 10.26418/jurnalkpk.v8i1.63725 https://jurnal.untan.ac.id/index.php/jurnalkpk

## ANALISIS UJI KADAR β-KAROTEN PADA BUAH PATIKALA (Etlingera elatior (JACK) R.M. SMITH) SEBAGAI ALTERNATIF SUMBER VITAMIN A DAN

## ANTIOKSIDAN
Andi Ifriany Harun
Pendidikan Kimia, FKIP Universitas Tanjungpura, Pontianak
Article Info ABSTRACT Article history: Received: 15 Maret 2023 Revised: 5 April 2024 Accepted: 27 April 2024 The high level of pollution in Indonesia causes a large number of free radicals that have the potential to cause several diseases. To overcome this, antioxidants are needed which function to prevent heart disease, anti-aging, strengthen the immune system, protect the nervous system, and nourish the eyes. One known antioxidant is - carotene. This study aimed  to  analyze  the  -carotene  content  of  patikala  fruit  (Etlingera elatior (Jack) R.M. Smith) originating from Pangandaran (West Java) as  an  alternative source of  vitamin  A and  antioxidants.  The  form of research is experimental. The research parameters were linearity test, detection  limit  and  quantitation,  system  suitability  test  and determination of -carotene levels. Analysis of pure -carotene standard solution using HPLC obtained the results that the maximum absorption occurred at max 450 nm, linearity (r) was 0.9999 or close to the value 1. Determination of -carotene content was carried out in duplicate and the  retention  time  of  patikala  fruit  was  8,564  minutes  and  8,597 minutes, respectively. levels of -carotene obtained by 0.1 ppm or 10 mg/100  g,  while  the  need  for  -carotene  per  day  is  5-6  mg/100  g, consuming patikala fruit of 50 grams per day can meet the daily needs of -carotene .
Keywords: Antioxidants Β-Carotene Patikala
Provatamin A Copyright © 2024 Andi Ifriany Harun.
 Corresponding Author:
Andi Ifriany Harun Universitas Tanjungpura, Pontianak Email: andi.ifriani@fkip.Untan.ac.id

## PENDAHULUAN
Pencemaran  udara  adalah  salah  satu  sumber  pencemar  yang  sangat  mengkhawatirkan. Tingginya  tingkat  pencemaran  udara,  menyebabkan  Indonesia  menjadi  negara  ketiga  tertinggi  yang mengalami  pencemaran  udara  di  dunia.  Emisi  dari  kendaraan  bermotor  merupakan  faktor  utama pencemaran udara (85%), selebihnya adalah kebakaran hutan dan industri.
Oksigen dibutuhkan sel tubuh, tetapi oksigen yang sudah teroksidasi dan melepaskan radikal bebas,  potensial  meruak  sel-sel  tubuh  yang  sehat.  Radikal  bebas  terbentuk    dari  zat  kimia  yang kehilangan  atau  mendapatkan  elektron  sehingga  elektronnya  menjadi  tidak  berpasangan  dan    tidak stabil. Adanya radikal bebas yang tidak stabil ini, dapat menyebabkan kanker. Untuk mencegah kanker akibat  radikal  bebas,  digunakan  antioksidan,  suatu  zat  yang  berfungsi  menetralkan  radikal  bebas, dimana  antioksidan  tersebut  akan  teroksidasi  terlebih  dahulu  untuk  melindungi  sel-sel  yang  sehat, sehingga kebutuhan akan antioksidan  yang cukup sangat penting
Beberapa  buah-buah dan  sayuran  mengandung  antioksidan  yang berfungsi    bagi  kesehatan diantaranya  mencegah  penyakit  jantung,   anti  penuaan,  menguatkan  sistem  imun,  melindungi  sistem syaraf, dan menyehatkan mata. Beta karoten adalah salah satu antioksidan yang terkenal.
β karoten atau yang dikenal sebagai provitamin A merupakan pigmen yang memberi warna pada  tumbuhan,  yaitu  pigmen  orange.  Konsumsi  β-karoten  dalam  kadar  yang  diperlukan,  dapat mencegah terjadinya  penyakit arteri koroner, stroke, dan penyakit yang berhubungan dengan darah dan jantung.  Umumnya buah dan sayuran yang berwarna orange diperkirakan mengandung β karoten.
Selama ini, pemanfaatan buah patikala masih sebatas sebagai bahan tambahan pada makanan khas suatu daerah, misalnya, di Sulawesi Selatan (khususnya di Palopo), buah patikala digunakan untuk membuat  kapurung,  suatu  makanan  tradisional,  digunakan  pada  pembuatan  palu  mara.  Di  Kolaka (Sulawesi Tengah) dibuat jus herbal yang mempunyai rasa asam yang khas.
Beberapa penelitian yang terkait, menunjukkan efek antimikrobanya besar terhadap bakteri E. Coli, Stap.  Aureus,  B.  Subtilis,  Strep. mutans,  aeruginosa  dengan  nilai  Rf 0,63  dan  daun patikala mengandung  zat    antimikroba    golongan  flavonoid  (Yenni,  F.N,  2017;13).  Penelitian  lain  yang dilakukan oleh AR. Ahmad (2017;33) menunjukkan bahwa pada buah mengandung flavonoid (1,77% b/b) dan fenolik (2,29 % b/b , sedangkan pada  daun mengandung flavonoid (5,45 % b/b)dan fenolik sebesar  6,29  %  b/b.    Penelitian  lain  menunjukkan  hasil  bahwa  ekstrak  buah  patikala    memberikan konsentasi  hambat  minimal  sebesar  10  %    terhadap  pertumbuhan  Staphylococcus  aureus  (Fadel  M., 2016;25).
β-karoten memiliki 11 ikatan rangkap (rumus molekulnya C 40 H 56 ) yang menunjukkan pigmen warna  orange  pada  buah  dan  sayuran,  yang  jika  berikatan  dengan    klorofil  maupun  xantofil,  akan menyerap cahaya dalam spektrum cahaya orange atau merah dan akan menimbulkan warna hijau, ungu atau biru (Hock-Eng, et.all., 2011;35).
Berdasarkan pertimbangan  di atas, dimana belum ada penelitian tentang kandungan β-karoten pada buah patikala dan karena buah patikala berwarna kuning-orange, maka dilakukan penelitian analisis uji kadar  β-karoten pada buah patikala ( Etlingera elatior (Jack)   R.M. Smith). Tujuannya  adalah  untuk menganalisis  kadar  β-karoten  pada  buah  patikala  (Etlingera  elatior  (Jack)      R.M.  Smith)  sebagai alternatif sumber    vitamin A dan antioksidan.

## METODE PENELITIAN Bahan dan Alat Penelitian
Kebutuhan bahan sebagai berikut : buah patikala, (THF), butil hidroksi toluena (BHT) 0,1 % dalam aseton, petroleum eter p.a, padatan β-karoten (E. Merck), kertas saring whatman 42, aluminium foil dan aquabidest.
Kebutuhan alat  adalah  HPLC, , sentrifuge dingin Universal 320 R, tabung sentrifuge , neraca analitik, vortex , dan chamber.

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian uji betakaroten pada buah patikala di lakukan pada bulan Mei – November 2019 bertempat di laboratorium kimia dan Laboratorium PT Saraswanti Indo Genetech (SIG) di Kabupaten Bogor, Jawa-Barat.
Prosedur Penelitian

## Preparasi Standar Induk β-karoten 1000 ppm
Larutan baku β-karoten dengan konsentrasi 1000 ppm sebagai larutan stok dibuat dengan cara 25 mg β-karoten ditimbang dan dimasukkan ke labu takar 100 mldan dicukupkan volumenya dengan heksan.
Pembuatan larutan baku β-karoten 1000 ppm dilakukan dengan cara ditimbang dengan teliti 25 mg β-karoten, dimasukkan ke dalam labu takar 100 ml, ditambahkan larutan heksan hingga tanda batas. Encerkan larutan baku sampai diperoleh konsentrasi 0,05, 0,075, 0,1, 0,25, 0,5, 1 dan 2,5 ppm.  Larutan yang sudah diencerkan tersebut, siap untuk diinjeksikan ke dalam kolom HPLC.

## Pengujian β-karoten

## Ekstraksi secara refluks
Buah  Patikala  di  timbang  sebanyak  0,5-1  g,  ditambahkan  aquabidestilata.  Kemudian ditambahkan 1 g Na-ascorbat atau 10 ml asan ascorbat atau 0,1 g pyrogallol atau 100 mg hidroquinon. Kemudian ditambahkan etanol 95% sebanyak 4x bobot sampel (≥ 40 ml) dan KOH 100% sebanyak 1
kali bobot sampel. Diaduk sampai homogen dan ditambahkan batu didih, lalu direfluks dalam penangas air suhu 80 o C selama 30 menit, aduk dan didinginkan.

## Ekstraksi karotenoid ke Petroleum Eter (PE) dalam Corong pisah
Diekstraksi  dalam  corong pisah  dengan 70 ml  Petroleum  eter  atau  50  ml heksan  atau  70 ml petroleum  eter  :  heksan  (2:1)  atau  100  ml heksan  :  aseton  (60  : 40)  lalu dikocok.  Lapisan  atas  yang terbentuk  ,  dipindahkan  ke  dalam  corong  pisah  untuk  sampel  yang  mengandung  lemak  tinggi ditambahkan  50  ml  KOH  5%  ke  dalam  corong  pisah.  Diekstrak  kembali  dengan  2  x  40  ml  larutan pengekstrak.  Ekstrak  di  cuci  denga  aquabidestilata  hingga  bebas  basa.  Lalu  ditambahkan    Natrium Sulfat  dana disaring melalui kertas saring.
Ekstrak di evaporator (40 o C) dan dialirkan gas nitrogen. Residu yang terbentuk ditambahkan dengan fase gerak dan dimasukkan ke dalam labu takar 10 ml, lalu di saring menggunakan kertas saring whatman  0,45 µm ke dalam vial untuk diinjeksikan ke HPLC.

## Uji Linieritas
Uji ini dilakukan dengan membuat kurva antara konsentrasi dan luas puncak dengan persamaan y = a + bx. Larutan baku dibuat beberapa konsentrasi yaitu 0.2; 0.4; 0.6; 0.8; 1.0; 2.5; 5; 7.5 dan 10 ppm,  lalu  disuntikkan  ke  dalam  HPLC  sebanyak  20  μl.  Persamaan  ya=garis  yang  sudah  diregresi, dihitung nilai korelasinya (r).

## Uji Batas deteksi dan batas kuantitasi
Uji ini dilakukan dengan cara menimbang 10 mg β-karoten dan dicukupkan volumenya dengan kloroform  dalam  labu  takar  50  ml,  selanjutnya  diencerkan  dengan  kloroform  hingga  diperoleh konsentrasi 10 dan 0,5 ppm. Masing-masing konstentrasi disuntikkan ke HPLC sebanyak 20 μl. Dengan kondisi HPLC optimum, di ukur luas puncak dan dilakukan perhitungan nilai simpangan baku relatif. Uji ini dilakukan untuk mengetahui kadar terendah yang dideteksi oleh HPLC.

## Analisis kuantitatif dengan HPLC Uji kesesuaian sistem
Uji ini dilakukan dengan cara menyuntikkan 20 μl larutan baku sebanyak 5 kali ke HPLC. Nilai simpangn  baku  diperoleh  dengan  cara  mengukur  luas  puncak  dari  hasil  HPLC  (kondisi  optimum). Tujuan uji ini adalah untuk melihat apakah memberikan hasil analisis tunggal dengan kondisi, metode dan alat yang digunakan.
Penentuan konsentrasi β -karoten.
Larutan baku dan uji yang sudah disonikasi (10 menit) disuntikkan ke HPLC. Kromatogram yang terbentuk, dilakukan pengukuran luas puncak dan dihitung konsentrasinya menggunakan rumus :
𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝛽 − 𝑘𝑎𝑟𝑜𝑡𝑒𝑛 ( 𝑚𝑔 𝑙 ) = {( Area slop ) 𝑥 𝑉𝐿 𝑥 𝐹𝑃} Bobot sampel Dimana:
VL = Volume Sampel
FP = Faktor Pengenceran

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Buah  patikala  berasal  dari  Pangandaran  (Jawa-Barat).  Pada  waktu  penelitian,  terdapat kesulitan dalam memperoleh buah ini, karena kebetulan belum berbuah. Di kota Pontianak sendiri, buah ini bisa ditemukan di pasar-pasar traditional, walaupun belum banyak orang yang mengenal keberadaan buah patikala. Buah patikala yang berasal dari Pangandaran ini adalah buah patikala yang tumbuh di hutan atau sering disebut honje hutan, yang memiliki warna merah kehitaman atau merah maron.
HPLC yang digunakan untuk analisis kadar β-karoten menggunakan kolom kromatografi Lichrospher Rp18  125 x 4 mm; 5 µm dengan detektor PDA. Gradien yang digunakan adalah gradien isokratik. Serapan maksimum terjadi pada λ 450 nm, dan perbandingan fase gerak 50:40:5 (metanol : acetonitril : THF), jumlah yang diinjeksikan sebanyak  20 µl dengan laju alir 1.0 ml/menit. Kombinasi fase gerak memberikan resolusi naik dan waktu retensi cepat.
Dari hasil linieritas, larutan baku β-karoten murni mempuyai nilai r sebesar 0,9999 atau mendekati nilai 1. Hal ini menunjukkan bahwa luas puncak yang terdeteksi oleh HPLC dan konsentrasi larutan mempunyai koefisien korelasi baik dan dapat digunakan untuk penelitian (tabel 1).

## Gambar 1. Regresi linier β-karoten murni
Dari  HPLC terhadap larutan standar betakaroten murni pada λmax  dengan  detektor PDA, hasilnya terlihat sebagai berikut (tabel 2).
Tabel  2. Larutan  standar  β-karoten  murni dengan  Luas  Area  Di  Bawah  Kurva  dan Waktu Retensi
Penentuan  kadar  β-karoten  menggunakan  HPLC  diperoleh  melalui  perbandingan  waktu retensi  dan  luas  area  di  bawah  kurva  kromatogram  larutan  standar  β-karoten  murni  dengan kromatogram  sampel  buah  patikala.  Pengujian  sampel  dilakukan  2  kali  (duplo).  Hasilnya,  diperoleh pada pengujian pertama, waktu retensi buah patikala sebesar 8.564 menit, seperti pada kromataogram berikut :
Gambar 2. Kromatogram 1 analisis kadar β-karoten buah patikala.
Konsentrasi β-karoten (ppm) Waktu Retensi (menit) Luas Area Di Bawah Kurva 0,05 8.543 4.944,28 0.075 8.527 7349.69 0,10 8.535 10015.71 0,25 8.528 30344.85 0,50 8.523 55764.56 Konsentrasi β-karoten (ppm) Waktu Retensi (menit) Luas Area Di Bawah Kurva 1,00 8.512 119758.78 2,50 8.472 305903.62
Sedangkan pada pengujian kedua, diperoleh waktu retensi sebesar 8.597 menit, hasilnya dapat dilihat pada kromatogram berikut :

## Gambar 3. Kromatogram 2 analisis kadar β-karoten buah patikala
Dari  hasil  pengujian  tersebut,  kadar    β-karoten  pada  buah  patikala  asal    dari  Pangandaran (Jawa Barat) sebesar 0.1 ppm atau 10 mg/100 g, sedangkan kebutuhan β-karoten perhari adalah 5 - 6 mg/100 g. Sehingga disimpulkan bahwa mengkonsumsi buah patikala sebesar 50 gram per hari sudah dapat memenuhi kebutuhan β-karoten harian. β-karoten pada buah patikala lebih tinggi kadarnya  dari β-karoten yang terdapat pada talas ungu (asal Pontianak).

## KESIMPULAN DAN SARAN
Simpulan  menyatakan  jawaban  dari  hipotesis  dan/atau  tujuan  penelitian  yang  telah Konsentrasi β-karoten yang terdapat pada buah patikala  (Etlingera  elatior (Jack)   R.M. Smith) yang berasal dari Pangandaran (Jawa Barat) sebesar 10 mg/100 g sampel.

## SARAN
Setelah melakukan penelitian analisis uji kadar  β-karoten pada buah patikala sebagai alternatif sumber vitamin A dan antioksidan disarankan melakukan penelitian lanjutan tentang :
a. perbandingan kadar β-karoten dari buah patikala yang berasal dari beberapa daerah, mengingat adanya perbedaan warna buah patikala dari masing-masing daerah penghasil buah tersebut.
b. Membuat  sediaan  buah  patikala  dalam  bentuk  serbuk  yang  akan  dikembangkan  menjadi minuman kesehatan.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad  AR.,  2017, Penetapan  kadar  fenolik  dan  flavonoid  total  ekstrak  metanol  buah  dan  daun patikala, Pharm  Sci  Res  !SSN  2407-2354,  april  2015  (vol  2  no.1),  Lab  farmakognosi  fak farmasi UMI Makassar
Andarwulan, N. dan Koswara, Sutrisno. 1992. Kimia Vitamin. Rajawali Press. Anonim. 1979. Farmakope Indonesia . Edisi III. Jakarta. Departemen Kesehatan Republik Indonesia Cappuccino,  J.C.  and  N.  Shjerman,  1987,  “Microbiology:  Laboratory  Manual”,  The  Benjamin Cummings Publishing Company, Inc.
Fadel, M., 2016, Daya Hambat ekstrak buah patikala terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus, Skripsi, Universitas Hasanuddin, Makassar.
Kristianingrum S, 2010, Tinjauan Berbagai Metode Analisis Karoten dalam Bahan pangan, Prosiding Seminar Nasional penelitian, Pendidikan, dan Penerapan MIPA, Fakultas MIPA, Universitas Negeri Yogyakarta.
Mangunsong  S.,  et.all.,  2019, Penentuan  β-Karoten  Dalam  Buah  (Daucus  Carota)  Secara Kromatografi Cair  Kinerja Tinggi ( U-HPLC), AcTion Journal, P-ISSN : 2527-3310 E-ISSN : 2548-5741, Volume 4, Nomor 1
Yenni,  F.N.,  dkk,  2017, Uji  anti  mikroba  hasil  fraksinasi  ekstrak  etanol  daun  patikala  terhadap beberapa mikroba uji , Journal.uin-alaudidin.ac.id, Makassar.