Uji Antipiretik Patch Ekstrak Etanol Bawang Merah ( Allium ascalonicum L.) dengan Matriks Kitosan dan Enhancer SPAN-80 terhadap Temperatur dan Jumlah Makrofag pada Tikus Putih
Vivi Kariyaningtias (a)* , Iwan Sahrial Hamid (b) , Teguh Widodo (a)
(a) Fakultas Farmasi, Universitas Katolik Widya Mandala, Surabaya, Indonesia
(b) Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga, Surabaya, Indonesia
Penggunaan  obat  tradisional  dapat  digunakan  untuk  pengobatan  berbagai  macam  penyakit,  salah  satunya bawang  merah  ( Allium  ascalonicum L.)  sebagai  bahan  antipiretik.  Pada  penelitian  ini  dilakukan  uji  antipiretik patch ekstrak etanol bawang merah ( Allium ascalonicum L.) dengan menggunakan matriks kitosan dan enhancer Span-80 terhadap temperatur dan jumlah makrofag pada tikus putih yang diinduksi vaksin DPT-Hb. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah ada pengaruh signifikan dari pemberian ekstrak etanol bawang merah dan penambahan  enhancer  Span-80  dalam  kecepatan  penurunan  temperatur  dan  makrofag  intraperitoneal  tikus putih.  Penelitian  ini  menggunakan  20  tikus  putih  jantan  galur  Wistar  yang  diinduksi  vaksin  DPT-Hb  secara intraperitoneal  kemudian  dibagi  dalam  empat  kelompok,  yaitu  kontrol  positif  (paracetamol  peroral),  kontrol negatif ( patch kosong tanpa ekstrak dan tanpa enhancer), formula 1 (dengan ekstrak dan tanpa enhancer), dan formula  2  (dengan  ekstrak  dan  enhancer).  Data  dianalisis  dengan  uji  statistik One  Way  Anova dilanjutkan  uji Duncan  5%.  Perhitungan  korelasi  digunakan  untuk  mengetahui  hubungan  antara  penurunan  temperatur  dan jumlah makrofag intraperitoneal. Hasil penurunan temperatur tidak ada perbedaan bermakna dari kontrol positif (paracetamol  peroral)  dan  formula  2  (dengan  ekstrak  dan  enhancer),  sedangkan  pada  kontrol  negatif  (tanpa ekstrak  dan  tanpa  enhancer)  tidak  ada  perbedaan  bermakna  dengan  formula  1  (dengan  ekstrak  dan  tanpa enhancer)  dengan  signifikasi  >0,05  untuk  semua  kelompok  perlakuan.  Hasil  jumlah  makrofag  intraperitoneal berbeda bermakna pada semua kelompok dengan signifikan >0,05.
Kata  Kunci: Allium  ascalonicum L., patch ,  matriks  kitosan,  enhancer  Span-80,  makrofag  intraperitoneal, temperatur.

## Antipiretic Test Patch Extract Ethanol Onion ( Allium ascalonicum L.) with Chitose Matrix and SPAN-80 Enhancer on Temperature and Amount of Macrophage in White Rat
Traditional medicine can be used to treat various diseases, one of which is onion ( Allium ascalonicum L.) as an antipyretic  agent.  In  this  study,  the  antipyretic  potency  of  ethanol  extract  of  onion  ( Allium  ascalonicum L.)  was tested  using  chitosan  and  Span-80  as  enhancer  matrix  with  temperature  and  number  of  intraperitoneal macrophages in white rats as parameters. This study used 20 male white rats Wistar that were induced with DPT- Hb  vaccine  intraperitoneally  and  then  divided  into  four  groups  namely  positive  control  group  (paracetamol), negative  control  (placebo  without  extract  and  without  enhancer),  formulation  1  (with  extract  and  without enhancer), and formulation 2 (with extracts and enhancers). The results were analyzed using One Way Anova and if  the  results  were  significant,  then  the  test  continued  with  Duncan  5%.  Correlation  calculations  were  used  to determine  the  relationship  between  temperature  reduction  and  total  intraperitoneal  macrophages.  The  results showed  that  the  temperature  reduction  did  not  provide  a  significant  difference  between  the  positive  control (paracetamol) and formulation 2 (with extracts and enhancers), whereas in the negative control (without extract and without enhancer) there was no significant difference with formulation 1 (with extract and without enhancers). The total results of intraperitoneal macrophages were significantly different in all groups with a significant> 0.05.
Key  Words: Allium  ascalonicum L., patch ,  matriks  chitose,  enhancer  Span-80,  macrophage  intraperitoneal, temperatur .
*Corresponding  author:  Fakultas  Farmasi Universitas  Katolik  Widya  Mandala  Surabaya , Jl.  Raya  Kalisari Selatan No. 1 Surabaya, e-mail: viviankarya@gmail.com

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  potensi  alam  yang beraneka  ragam,  lebih  dari  30.000  jenis tumbuhan  terdapat  di  Indonesia  dan  7.000 diantaranya  diperkirakan  memiliki  khasiat  untuk pengobatan berbagai macam penyakit (Saifuddin, Rahayu  dan  Teruna,  2011)  salah  satunya  bawang merah  ( Allium  ascalonicum L.).  Penggunaan bawang merah sebagai obat tradisional berhubungan  dengan  kandungan  zat  aktif  yang dimilikinya,  salah  satu  zat  tersebut  adalah flavonoid,  alkaloid,  polifenol,  seskuiterpenoid, monoterpenoid, steroid, triterpenoid, dan kuinon. Berbagai  penelitian  menunjukkan  flavonoid memiliki  efek  antipiretik.  Flavonoid  mampu menghambat enzim siklooksigenase yang berperan  dalam  metabolisme  asam  arakhidonat menjadi  prostaglandin  (Amila,  Rusnadi  dan Lukmayani, 2008). Prostaglandin berperan dalam proses  inflamasi  dan  peningkatan  suhu  tubuh, apabila  prostaglandin  tidak  dihambat  maka terjadi  peningkatan  suhu  tubuh  yang  akan mengakibatkan demam (Suwertayasa, Bodhy, and Edy  2013).  Meningkatnya  prostaglandin  akan menginduksi  terjadinya  kenaikan  suhu  tubuh sehingga terjadi demam (Guyton and Hall, 2007). Demam  yang  berarti  suhu  tubuh  di  atas batas  normal,  dapat  disebabkan  oleh  kelainan  di dalam  otak  sendiri  atau  oleh  bahan-bahan  toksik yang  mempengaruhi  pusat  pengaturan  suhu. Penyebab  demam  meliputi  penyakit  yang disebabkan oleh bakteri, tumor otak, dan keadaan lingkungan yang dapat berakhir dengan
heartstroke (Guyton
and Hall, 2007). Peningkatan  suhu  tubuh  pada  keadaan  patologi diawali  dengan  melepaskan  suatu  zat  pirogen endogen atau sitokin misalnya interleukin-1 (IL-1) yang memacu pelepasan prostaglandin (PG) yang berlebih  di  daerah  proptik  hipotalamus.  Pada suhu  37°C  limfosit  dan  makrofag  menjadi  lebih aktif.  Bila  suhu  melampaui  40-41°C  maka  akan terjadi  situasi  kritis  yang  bisa  menjadi  fatal, karena  tidak  terkendalikan  lagi  oleh  tubuh  (Tjay dan  Rahardja,  2007).  Obat  antipiretik  yang digunakan  adalah  parasetamol  meskipun  relatif aman,  parasetamol  tetap  memiliki  efek  samping berupa  hepatotoksisitas,  nekrosis  hepar  yang fatal,  nekrosis  tubuler  ginjal  dan  koma hipoglikemik  pada  penggunaan  jangka  panjang atau  dalam  dosis  yang  berlebihan.  Efek  samping dari  penggunaan  parasetamol  dengan  dosis  yang cukup besar dapat terjadi pusing, ketegangan, dan disorientasi  (Soedibyo  dan  Souvriyanti,  2006). Formulasi patch ekstrak  etanol  Bawang  merah dapat  mengatasi  permasalahan  tersebut  karena pemberian  obat  melalui  topikal  masuk  ke peredaran  sistemik.  Penggunaan  enhancer  span- 80  diharapkan  meningkatkan  penetrasi  absorpsi obat karenaspan-80 berfungsi sebagai emulsifying  agent tunggal  dalam  pembuatan krim, emulsi dan salep untuk penggunaan topikal yang menghasilkan emulsi air dalam minyak yang
stabil  dan  mikroemulsi  (Rowe,  Sheskey and Quinn, 2009).
Makrofag memiliki fungsi fagositosis yang akan  menyebabkan  demam.  Mekanisme  kerjanya yaitu  ketika  pirogen  masuk  kedalam  tubuh  akan menimbulkan reaksi langsung dan tidak langsung, reaksi langsung yaitu segera mempengaruhi pusat hipotalamus untuk meningkatkan setpoint , untuk reaksi tidak langsung akan membutuhkan periode laten  untuk  menimbulkan  efek.  Pirogen  akan dilepaskan  ke  dalam  jaringan/darah  dan  akan difagositosis  oleh  makrofag.  Seluruh  sel  ini selanjutnya  mencerna  hasil  pemecahan  bakteri dan  melepaskan  zat interleukin-1 yang  disebut juga leukosit pirogen atau pirogen endogen pada cairan  tubuh.  Saat interleukin-1 mencapai hipothalamus  akan  segera  mengaktifkan  proses demam (Guyton and Hall, 2007). Bahan  penyusun  matriks patch yang digunakan  dalam  percobaan  ini  adalah  kitosan yang  merupakan  senyawa  dengan  rumus  kimia poli  2-amino-2-dioksi-ß-D-Glukosa  yang  dapat dihasilkan  dengan  proses  hidrolisis  kitin menggunakan  basa  kuat  yang  disebut  deasetilasi. Kitosan  sebagai  biomaterial  cocok  untuk dikembangkan  dan  diaplikasikan  pada  banyak bidang,  sebab  kitosan  bersifat biocompatible dan biodegradable .  Selain  itu  hasil  degradasi  dari kitosan tidak berbahaya dan non-antigenik (tidak menyebabkan  respon  kekebalan  pada  organisme (Bailey dan David, 1987).

## METODE PENELITIAN

## Alat
Alat-alat  gelas,  mortir,  stemper,  cawan petri, timbangan analitik, batang pengaduk, kertas perkamen,  sendok  tanduk,  oven,  pipet  tetes, lemari  asam,  kandang  tikus,  wadah  untuk makanan  tikus,  wadah  untuk  minuman  tikus, label,  sekam,  penutup  kandang,  timbangan hewan, spuit , gunting, kapas, plester, kasa, toples, ear termometer  Activita  ET  Braun, stopwatch , tissue , serbet, sarung tangan, masker, mikroskop, opti lab , laptop, dan kaca objek.

## Bahan
Ekstrak  etanol  Bawang  merah  ( Allium ascalonicum L.),  enhancer  Span-80,  matriks Kitosan,  Propilen  Glikol,  akuades , parasetamol drop, pakan tikus, vaksin DPT-Hb, larutan Wright stain ,  buffer Wright  stain ,  minyak  emersi  dan kloroform.
Pembuatan  patch  ekstrak  etanol  Bawang merah (Allium ascalonicum L.)
Pembuatan patch diawali dengan mengkalibrasi  cawan  petri  dengan  air  untuk mengukur berapa kapasitas cawan petri. Timbang semua  bahan  sesuai  formula  pada  tabel  1.  dan larutan  diukur  menggunakan  gelas  ukur, kemudian patch dibuat dengan cara mengasamkan  akuades  dengan  asam  asetat kemudian  taburkan  kitosan  ke  atas  larutan  dan
biarkan  mengembang  hingga  24  jam.  Kemudian tambahkan  Span-80  dan  ektrak  etanol  Bawang merah di mortir kemudian aduk homogen dengan perlahan  untuk  menghindari  aerasi  dan patch tetap jernih. Setelah itu tambahkan Propilen glikol san  aduk  homogen.  Tuang  campuran  ke  dalam cawan  petri  kemudian  masukkan  ke  dalam  oven dengan  suhu  37°C,  suhu  oven  harus  dijaga  agar
lapisan  film  yang  terbentuk  tidak  rusak,  hingga larutan  menguap  dan  terbentuk  sediaan patch yang lentur, jernih, dan tanpa aerasi. Lapisan film yang telah terbentuk bila belum digunakan dapat disimpan  terlebih  dahulu  pada  desikator. Lembaran  tipis  patch  dipotong  dengan  ukuran  2 cm  x  2  cm.  Komposisi  formulasi  patch  ekstrak etanol bawang merah dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Komposisi formulasi patch ekstrak etanol bawang merah Nama Bahan Konsentrasi K(+) % K(-) % F 1(%) F 2 (%) Ekstrak etanol Allium ascalonicum L . - - 9 g 9 g Kitosan - 1 g (1,5%) 1 g (1,5%) 1 g (1,5%) Asam asetat 1 ml 1 ml 1 ml Span 80 - - - 1,6 g (2%) Propilen glikol - - 0,75 ml (1,5%) 0,75 ml (1,5%) Parasetamol 0,09 ml - - - Akuades - ad 80 ml ad 80 ml ad 80 ml

## Rancangan Penelitian
Tikus  diadaptasi  terlebih  dahulu  dengan lingkungan baru selama 1 minggu, dan dipastikan tikus yang digunakan berjenis kelamin jantan dan dalam kondisi sehat. Selama masa adaptasi semua tikus  diberi  perlakuan  sama  seperti  pemberian makan,  pemberian  minum  dan  bobot  dari masing-masing  tikus  dijaga  agar  seragam  dan tetap  masuk  dalam  rentang  rata-rata  bobot  tikus yang  ditentukan.  Perlakuan  tersebut  bertujuan untuk  menghindari  adanya  kesalahan  dalam perolehan  data  akibat  variasi  biologis  dari  tikus. Setelah  diadaptasi,  masing-masing  tikus  diukur temperatur  tubuh  dengan ear thermometer. kemudian tikus diinduksi dengan vaksin DPT-Hb secara intraperitoneal . Setelah diberi vaksin DPT- Hb  diukur  suhu  tikus  dengan  menggunakan ear termometer  pada  jam  pertama,  bertujuan  untuk mengetahui  pada  menit  keberapa  tikus  mulai timbul  demam.  Setelah  satu  jam  diberi  vaksin DPT-Hb, tikus diberikan perlakuan sesuai dengan kelompok  perlakuan.  Pada  kelompok  kontrol negatif tikus hanya diberikan patch kosong tanpa ekstrak  dan  tanpa  enhancer,  pada  kelompok kontrol  positif  tikus  diberikan  sirup  parasetamol, pada  formula  1  diberi patch dengan  matriks  dan ekstrak  tetapi  tanpa  enhancer,  kemudian  pada formula  2  diberi patch dengan  matrik,  enhancer dan dengan ekstrak etanol bawang merah ( Allium ascalonicum L.).

## Evaluasi Sediaan Patch
Evaluasi sediaan patch yaitu uji penampilan fisik  meliputi  uji  kejernihan,  ada  tidaknya  aerasi, tidak  adanya  keriput,  halus  tidaknya  permukaan dan  warna.  Kemudian  dilanjutkan  dengan  uji kadar  air  ( moisture  content), uji  daya  lipat, keseragaman berat dan ketebalan patch.

## Uji Antipiretik
Hewan  percobaan  yang  digunakan  adalah 20 ekor tikus putih, masing-masing di ukur suhu telinga dengan ear termometer . Tikus tersebut di bagi  menjadi  empat  kelompok  yaitu  kelompok kontrol  negatif  hanya  diberi patch kosong  tanpa ekstrak,  kelompok  kontrol  positif  diberi  obat sediaan Parasetamol (Sanmol), kelomok perlakuan  1  (F1)  diberi patch yang  hanya  berisi ekstrak  etanol  bawang  merah  tanpa  tambahan enhancer ,  kelompok  perlakuan  2  (F2)  diberi patch ekstrak  etanol  bawang  merah  dengan enhancer .  Selanjutnya  diinduksi  dengan  vaksin DPT-Hb secara intraperitoneal. Setelah pemberian  vaksin  DPT-Hb  diukur  suhu  telinga tiap 15 menit pada satu jam awal, setelah satu jam pemberian vaksin DPT-Hb kemudian tikus diberi perlakuan  sesuai  formula  kelompok  tikus. Patch tersebut  dipasang  dipunggung  tikus  yang  telah dicukur  setelah  satu  jam  pemberian  vaksin  DPT- Hb. Ukur suhu tubuh tikus melalui telinga tiap 15 menit pada jam kedua setelah diberi vaksin DPT- Hb  dan  dilanjutkan  pengukuran  suhu  tubuh  tiap 30 menit pada jam ketiga.

## Pengamatan Makrofag
Hewan coba dikorbankan untuk mengambilan  cairan  intraperitoneal  di  sekitar usus tikus dengan cara di euthanasi , dimasukkan kedalam  toples  berisi  kloroform.  Pengambilan cairan intraperitoneal dilakukan  dengan  cara pemurnian  yaitu  menginjeksikan  akuades  ±  5  ml kedalam intraperitoneal lalu  tunggu  ±  3-5  menit kemudian  bedah  tikus  pada  daerah  perut  dan ambil  cairan intraperitoneal dengan spuit di sekitar  dinding  usus.  Tiap  tikus  di  replikasi  hasil cairan intraperitoneal sebanyak 3 kali dan dibuat hapusan  cairan intraperitoneal yang  di  beri pewarnaan wright  stain dan  buffer wright  stain .
Hasil  makrofag  diamati  dengan  mikroskop perbesaran 100x.

## Analisis Data
Untuk  melihat  perbedaan  penurunan temperatur  dan  jumlah  makrofag  tikus  antara kelompok  kontrok  dan  kelompok  perlakuan dihitung  dengan  uji  statistik One  Way  ANOVA yang  dilanjutkan  dengan  Uji  Duncan  5%  bila terdapat perbedaan bermakna.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  evaluasi  penampilan  fisik  sediaan patch ekstrak  etanol  bawang  merah  ( Allium ascalonicum L.)  menunjukkan adanya perbedaan penampilan  fisik  pada  warna  sediaan.  Pada formulasi  kontrol  negatif  berwarna  bening, sedangkan  pada  formula  1  (tanpa  enhancer)  dan formula 2 (dengan enhancer) memiliki kesamaan warna  yaitu  berwarna  coklat  kemerahan.  Namun pada  parameter  kejernihan,  aerasi,  keriput  dan tekstur  menunjukkan  tidak  adanya  perbedaan penampilan  fisik  karena  ada  atau  tidaknya penambahan enhancer Span-80 tidak mempengaruhi penapilan fisik pada sediaan patch ekstrak etanol bawang merah ( Allium ascalonicum L.).
Berdasarkan  hasil  perhitungan  kadar  air ( Moisture Content ), yang dilakukan dengan 3 kali replikasi.  Hasil  evaluasi moisture  content pada patch kontrol negatif, Formula 1 (tanpa Enhancer) dan Formula 2 (dengan Enhancer) tidak terdapat perbedaan  bermakna. Patch dengan  nilai  kadar air  yang  kecil  akan  membuat patch lebih  stabil dan  tidak  mudah  rapuh  pada  saat  proses penyimpanan.
Uji  evaluasi  sediaan patch ekstrak  etanol bawang  merah  diperoleh  keseragaman  berat patch dengan hasil rata-rata 0,2344 – 0,2545 mg, hasil keseragaman berat pada kelompok Formula 1  (Tanpa  Enhancer  Span-80)  tidak  berbeda bermakna  dengan  kelompok  negatif  namun berbeda  bermakna  dengan  kelompok  Formula  2 (dengan  Enhancer  Span-80).  Ketebalan  patch rata-rata  0,524 - 0,842 mm. Ketebalan ketebalan patch dipengaruhi oleh teknik penuangan larutan patch ke  dalam  cetakan.  Ketebalan patch diukur pada 5 titik berbeda dengan menggunakan jangka sorong. Bobot patch berpengaruh pada kandungan  bahan  di  dalamnya.  Bila  bobot patch berkurang dari bobot yang telah ditentukan, maka kemungkinan ada salah satu bahan yang beratnya berkurang. Bila salah satu bahan yang berkurang adalah  bahan  aktif  maka  akan  berpengaruh  pada jumlah  bahan  aktif  pada  uji  penetrasi,  sehingga keseragaman  bobot  perlu  diperhatikan.  Variasi kehilangan berat patch yang mengakibatkan pada perbedaan  berat patch bisa  diakibatkan  karena metode penuangan ini menyebabkan kemungkinan  larutan patch masih  tidak  rata tebalnya  sehingga  menyebabkan  berat  tiap  sisi berbeda  sehingga  diperlukan water  pass agar permukaan patch rata.
Uji evaluasi daya lipat menunjukkan semua formula patch yaitu  kontrol  negatif,  Formula  1 dan  Formula  2  menunjukkan  hasil  yang  sama yaitu >300 kali. Hal tersebut menunjukkan semua formula  masuk  dalam  standart  ketahanan  daya lipat  yang  mempengaruhi  ketahanan  dari patch dimana patch menjadi  lebih  elastis  sehingga dapat  meningkatkan  kenyamanan  dan  tidak mengganggu aktifitas dari penggunanya, selain itu juga  dapat  digunakan  dalam  jangka  waktu  yang lama  karena patch tidak  mudah  sobek  ketika digunakan,  hal  itu  dapat  mempengaruhi  proses penetrasi  obat  menjadi  lebih  maksimal  dan terkendali karena kondisi patch yang baik.

## Hasil Uji Antipiretik
Hasil  pengukuran  temperatur  pada  tikus putih  dapat  dilihat  pada  tabel  1  dan  gambar  1. Hasil  yang  di  dapatkan  pada menit  ke-0 kontrol negatif,  kontrol  positif,  F1  (-E)  dan  F2  (E)  tidak berbeda  bermakna. Menit  ke-15 kontrol  negatif, F2  (E),  F1  (-E)  tidak  berbeda  bermakna  tetapi berbeda  bermakna  dengan  kontrol  positif. Menit ke-30 kontrol  negatif,  F2  (E),  F1  (-E)  tidak berbeda  bermakna  tetapi  berbeda  bermakna dengan  kontrol  positif. Menit  ke-45 Kontrol negatif,  F2  (E),  F1  (-E)  dan  kontrol  positif  tidak berbeda  bermakna. Menit  ke-60 kontrol  negatif, F2  (E),  F1  (-E)  dan  kontrol  positif  tidak  berbeda bermakna. Menit  ke-75 F2  (E),  kontrol  positif, kontrol  negatif  dan  F1  (-E)  tidak  berbeda bermakna. Menit ke-90 kontrol negatif, F2 (E), F1 (-E)  dan  kontrol  positif  tidak  berbeda  bermakna. Menit  ke-105 kontrol  positif,  F2  (E)  dan  F1  (-E) tidak  berbeda  bermakna.  F1  (-E)  dan  kontrol negatif  tidak  berbeda  bermakna,  sedangkan kontrol  positif  dan  F2  (E)  berbeda  bermakna dengan  kontrol  negatif. Menit  ke-120 kontrol positif  dan  F2  (E)  tidak  berbeda  bermakna.  F1  (- E)  dan  kontrol  negatif  tidak  berbeda  bermakna, sedangkan  kontrol  positif  dan  F2  (E)  berbeda bermakna  dengan  F1  (-E)  dan  kontrol  negatif. Menit  ke-150 kontrol  positif  dan  F2  (E)  tidak berbeda  bermakna.  F1  (-E)  dan  kontrol  negatif tidak  berbeda  bermakna,  sedangkan  kontrol positif dan F2 (E) berbeda bermakna dengan F1 (- E)  dan  kontrol  negatif. Menit  ke-180 kontrol positif  dan  F2  (E)  tidak  berbeda  bermakna, sedangkan  F1  (-E)  dan  kontrol  negatif  tidak berbeda bermakna, sedangkan kontrol positif dan F2  (E)  berbeda  bermakna  dengan  F1  (-E)  dan kontrol  negatif.  Penurunan  suhu  dmulai  terlihat pada menit ke 105 dan jelas terlihat perbedaannya pada  menit  ke  120,  karena  pada  kontrol  positif dan  pada  Formula  2  (dengan  enhancer)  tidak terdapat  perbedaan  bermakna,  kemudian  pada hasil  Formula  1  (tanpa  enhancer)  dan  kontrol negatif  tidak  terdapat  perbedaan  bermakna.  Hal tersebut  menunjukkan  penurunan  suhu  antara kontrol positif dan Formula 2 (dengan enhancer) sama  dan  lebih  cepat  dari  pada  kontrol  negatif dan  Formula  1  (tanpa  enhancer).  Sehingga  dapat dibuktikan  bahwa  enhancer  Span-80  memiliki
pengaruh  dalam  membantu meningkatkan penetrasi obat ke dalam kulit.
Hasil yang di dapatkan pada perubahan T0 ke  T15 yaitu  F1  (-E),  F2  (E)  dan  kontrol  negatif tidak berbeda bermakna, tetapi berbeda bermakna dengan kontrol positif. T15 ke T30 yaitu F2 (E), F1 (-E), kontrol positif dan kontrol negatif tidak berbeda bermakna. T30 ke T45 yaitu F2 (E), F1  (-E),  kontrol  positif  dan  kontrol  negatif  tidak berbeda  bermakna. T45  ke  T60 yaitu  kontrol negatif,  F1  (-E),  kontrol  positif  dan  F2  (E)  tidak berbeda  bermakna. T60  ke  T75 yaitu  kontrol negatif,  F1  (-E)  dan  F2  (E)  tidak  berbeda bermakna, sedangkan F1 (-E), F2 (E) dan kontrol positif  tidak  berbeda  bermakna,  sedangkan kontrol negatif berbeda bermakna dengan kontrol positif . T75 ke T90 yaitu kontrol negatif dan F1 (- E) tidak berbeda bermakna, sedangkan F1 (-E), F2 (E)  dan  kontrol  positif  tidak  berbeda  bermakna, sedangkan  F2  (E)  dan  kontrol  positif  berbeda bermakna  dengan  kontrol  negatif. T90  ke  T105 yaitu  kontrol  negatif,  F1  (-E),  kontrol  positif  dan F2  (E)  tidak  berbeda  bermakna. T105  ke  T120 yaitu  kontrol  negatif,  F1  (-E),  F2  (E)  dan  kontrol
positif  tidak  berbeda  bermakna. T120  ke  T150 yaitu  kontrol  negatif,  F1  (-E),  F2  (E)  dan  kontrol positif  tidak  berbeda  bermakna. T150  ke  T180 yaitu  kontrol  negatif,  F1  (-E)  dan  F2  (E)  tidak berbeda bermakna, sedangkan F2 (E) dan kontrol positif  tidak  berbeda  bermakna,  sedangkan kontrol  negatif  dan  F1  (E)  berbeda  bermakna dengan  kontrol  positif.    Perbedaan  temperatur mulai  muncul  pada  T60  ke  T75  yang menunjukkan  kontrol  negatif  memiliki  hasil penurunan  yang  sama  dengan  Formula  1  (tanpa Enhancer)  sedangkan  kontrol  negatif  memiliki kesamaan dengan Formula 2 (dengan Enhancer), tetapi  Formula  1  (tanpa  Enhancer)  juga  memiliki kesamaan dengan Formula 2 (dengan Enhancer). Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  Formula  1 (tanpa  Enhancer)  juga  mempunyai  kemampuan untuk  menurunkan  temperatur  tikus  mekipun hasil  masih  dibawah  Formula  2  (dengan Enhancer)  dan  kontrol  positif.  Hasil  perhitungan rata-rata  temperatur  tubuh  tikus  dan  perubahan suhu dari menit ke menit dapat dilihat pada Tabel 2-3 dan gambar 1-2.
Tabel 2. Hasil perhitungan rata-rata temperatur tubuh tikus. Waktu (menit ke-) Temperatur tubuh tikus (rata-rata) ± SD setelah pemberian vaksin DPT-Hb 0,1 ml tiap kelompok perlakuan selama 180 menit (°C) K (-) K (+) F1 (-E) F2 (E) 0 36.42 ± 0.327 a 36.40 ± 0.212 a 36.50 ± 0.339 a 36.36 ± 0.304 a 15 36.72 ± 0.303 a 37.68 ± 0.576 b 36.98 ± 0.294 a 36.84 ± 0.364 a 30 37.20 ± 0.367 a 38.20 ± 0.452 b 37.60 ± 0.282 a 37.48 ± 0.363 a 45 37.70 ± 0.524 a 38.42 ± 0.697 a 38.14 ± 0.450 a 38.02 ± 0.443 a 60 38.20 ± 0.620 a 38.68 ± 1.035 a 38.64 ± 0.507 a 38.28 ± 0.481 a 75 38.12 ± 0.449 a 37.92 ± 0.605 a 38.26 ± 0.541 a 37.86 ± 0.517 a 90 37.92 ± 0.486 a 37.32 ± 0.687 a 37.84 ± 0.517 a 37.34 ± 0.439 a 105 37.70 ± 0.418 b 36.98 ± 0.544 a 37.52 ± 0.486 * 37.00 ± 0.412 a 120 37.40 ± 0.524 b 36.30 ± 0.122 a 37.12 ± 0.249 b 36.52 ± 0.511 a 150 37.18 ± 0.443 b 35.88 ± 0.164 a 36.86 ± 0.207 b 36.14 ± 0.545 a 180 37.06 ± 0.364 b 35.30 ± 0.254 a 36.62 ± 0.238 b 35.80 ± 0.583 a Keterangan :
K (-) = Kontrol negatif ; K (-) = Kontrol positif F1 (-E) = Formula 1 tanpa Enhancer ; F2 (E) =Formula 2 dengan Enhancer Data dengan supercript huruf yang berbeda menandakan sinifikan bermakna
Gambar  1. Temperatur  tubuh  tikus  (rata-rata)  ±  SD  setelah  pemberian  vaksin  DPT-Hb  0,1  ml  tiap kelompok perlakuan selama 180 menit (°C)
Keterangan : K (-) = Kontrol negatif ; K (-) = Kontrol positif F1 (-E) = Formula 1 tanpa Enhancer ; F2 (E) =Formula 2 dengan Enhancer
Tabel 3. Hasil Perubahan Suhu Tikus tiap Menit ke Menit Pengamatan
Waktu (menit ke- hingga ke-) Perubahan Temperatur tubuh tikus (rata-rata) ± SD dari menit ke menit tiap pengamatan K (-) K (+) F1 (-E) F2 (E) 0-15 -0.30 ± 0.16 b -1.28 ± 0.60 a -0.48 ± 0.26 b -0.48 ± 0.16 b 15-30 -0.48 ± 0.30 a -0.52 ± 0.55 a -0.62 ± 0.24 a -0.64 ± 0.15 a 30-45 -0.50 ± 0.23 a -0.22 ± 0.30 a -0.54 ± 0.33 a -0.54 ± 0.29 a 45-60 -0.50 ± 0.25 a -0.26 ± 0.46 a -0.50 ± 0.16 a -0.26 ± 0.13 a 60-75 0.08 ± 0.29 a 0.76 ± 0.70 b 0.38 ± 0.08 * 0.42 ± 0.08 * 75-90 0.20 ± 0.07 a 0.60 ± 0.25 b 0.42 ± 0.13 * 0.52 ± 0.15 b 90-105 0.22 ± 0.08 a 0.34 ± 0.30 a 0.32 ± 0.24 a 0.34 ± 0.11 a 105-120 0.30 ± 0.14 a 0.68 ± 0.51 a 0.40 ± 0.29 a 0.48 ± 0.16 a 120-150 0.22 ± 0.08 a 0.42 ± 0.18 a 0.26 ± 0.18 a 0.38 ± 0.13 a 150-180 0.12 ± 0.08 a 0.58 ± 0.28 b 0.24 ± 0.18 a 0.34 ± 0.13 *
Keterangan: K (-) = Kontrol negatif ; F1 (-E) = Formula 1 tanpa Enhancer ; F2 (E) =Formula 2 dengan Enhancer Data dengan supercript huruf yang berbeda menandakan sinifikan bermakna
Gambar 2. Perubahan Temperatur tubuh tikus (rata-rata) ± SD dari menit ke menit tiap pengamatan (-) = Kontrol negatif ; K (-) = Kontrol positif F1 (-E) = Formula 1 tanpa Enhancer ; F2 (E) =Formula 2 dengan Enhancer
Hasil  pengamatan  makrofag  dapat  dilihat pada  tabel  4  dan  gambar  3-4.  Hasil  yang  di dapatkan  yaitu  pada  preparat  1,2  dan  3  hasil kontrol  positif,  Formula  2  (dengan  enhancer), Formula  1  (tanpa  enhancer)  dan  kontrol  negatif berbeda  bermakna.  Hasil  makrofag  pada  kontrol negatif  yaitu  472.2  –  491,  pada  kontrol  positif 182.6-195.2,  pada  Formula  1  (tanpa  enhancer) 386.6 – 400, pada Formula 2 (dengan enhancer) 229,6 – 242.6. Hasil pengamatan makrofag dapat dilihat bahwa dari rentang terendah yaitu kontrol positif,  kemudian  Formula  2  (dengan  enhancer), Formula  1  (tanpa  enhancer),  dan  makrofag terbanyak  pada  kontrol  negatif.  Hal  tersebut menunjukkan bahwa kontrol positif yaitu dengan
menggunakan  paracetamol  dapat  menurunkan jumlah  makrofag  paling  baik.  Pada  Formula  2 (dengan  enhancer)  juga  dapat  menurunkan jumlah  makrofag  tetapi  tidak  sebaik  kontrol positif  dengan  paracetamol,  hal  ini  menunjukkan bahwa  enhancer  Span-80  mampu  meningkatkan penetrasi  ekstrak  etanol  bawang  merah  ( Allium ascalonicum L.)  kedalam  kulit.  Pada  Formula  1 (tanpa  enhancer)  dapat  menurunkan  jumlah makrofag tetapi kemampuan penurunan dibawah Formula  2  yang  diberi  penambahan  enhancer Span-80.  Pada  kontrol  negatif  jumlah  makrofag yang  didapat  sangat  banyak,  hal  tersebut menunjukkan  kemampuan  alami  sistem  imun dari tubuh.
Tabel 4. Hasil uji pengaruh patch ekstrak etanol bawang merah pada jumlah makrofag Preparat K- K+ F1 (-E) F2 (E) 1 491 ± 6.96 d 182.6 ± 11.72 a 400 ± 11.42 c 240.8 ± 9.01 b 2 482.8 ± 22.79 d 183.2 ± 11.05 a 386.6 ± 16.20 c 242.6 ± 5.17 b 3 487.2 ± 9.15 d 195.2 ± 5.63 a 397.8 ± 9.88 c 229.6 ± 14.22 b
K (-) = Kontrol negatif ; K (-) = Kontrol positif F1 (-E) = Formula 1 tanpa Enhancer ; F2 (E) =Formula 2 dengan Enhancer Data dengan supercript huruf yang berbeda menandakan sinifikan bermakna
Gambar 3. Hasil uji pengaruh patch ekstrak etanol bawang merah pada jumlah makrofag
(-) = Kontrol negatif ; K (-) = Kontrol positif F1 (-E) = Formula 1 tanpa Enhancer ; F2 (E) =Formula 2 dengan Enhancer
Gambar  5. Sel  makrofag  pada  hapusan  cairan intraperitoneal  tikus  Wistar  jantan  (mikroskop pembesaran100x)

## KESIMPULAN
Sediaan patch ekstrak  etanol  bawang merah  ( Allium  ascalonicum L.)  telah  terbukti memiliki  efek  antipiretik  berdasarkan  hasil analisis  statistik patch dengan  enhancer  tidak berbeda  bermakna  dengan  kelompok  kontrol positif  yang  menggunakan  parasetamol  sebagai antipiretik.  Sehingga  ekstrak  etanol  bawang merah ( Allium ascalonicum L.) mampu menurunkan  demam  dan  dapat  menurunkan jumlah  makrofag  mebikuti  penurunan  suhu  dari tikus putih. Telah terbukti penambahan enhancer Span-80 dapat membantu meningkatkan penetrasi obat kedalam kulit.

## DAFTAR PUSTAKA
Amila,  G.,  Rusnadi,  R.  dan  Lukmayani,  Y.  2008,  Uji  efek antipiretik  jus  jeruk  nipis  pada  tikus  putih  galur  sprague dawley sel kelamin, Mimbar , 24(1): 27-35.
Bailey,  J.E.  and  David,  F.O.  1987, Biochemical  Engineering Fundamentals , McGraw-Hill Book Company, New York.
Guyton,  A.C.  and  Hall,  J.E.  2007, Buku  Ajar  Fisiologi Kedokteran , ECG, Jakarta, pp. 453-456.
Rowe, R.C., Sheskey, P.J., and Quinn, M.E., 2009, Handbook of  Pharmaceutical  Excipient ,  Pharmaceutical  Press  and American  Pharmacist  Association,  Washington  D.C,  6:  580- 584.
Saifuddin, A., Rahayu, V. dan Teruna H.Y. 2011, Standarisasi
Bahan Obat Alam , Graha Ilmu, Yogyakarta.
Soedibyo,  S.  dan  Souvriyanti,  E.  2006,  Gambaran  Presepsi Orang  Tua  tentang  Penggunaan  Antipiretik  sebagai  Obat Demam, Sari Pediatri , 8: 142-146.
Suwertayasa,  I.P.,  Bodhy,  W.  dan  Edy,  H.J.  2013,  Uji  efek antipiretik ekstrak etanol daun tembelekan ( Lantana camara L.)  pada  tikus  putih  jantan  galur  wistar, Jurnal  Ilmiah Farmasi Universitas Sam Ratulangi , 2(3): 45-49.
Tjay,  T.H.  dan  Rahardja,  K.  2007, Obat-obat  Penting ,  Elex Media Komputindo, Jakarta, pp. 570-572.