## DETERMINATION OF VITAMIN C CONTENT OF ETHANOL EXTRACT OF GREEN BEAN (Phaseolus radiatus L.) USING SPECTROPHOTOMETRY UV-VIS
PENENTUAN KADAR VITAMIN C EKSTRAK ETANOL KECAMBAH KACANG HIJAU (Phaseolus radiatus L.) MENGGUNAKAN SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS
Hayatul Rahimah 1)* , Rahmawaty Hasan 2)
1) Program Studi S1 Kebidanan, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Ibrahimy
2) Program Studi S1 Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Ibrahimy *hayatulrohimah27@gmail.com

## ABSTRACT
Iron deficiency anemia is the main cause of decreased aerobic endurance. Administration of vitamin C can have a significant effect on increasing hemoglobin and aerobic resistance. Phaseolus radiatus can meet the needs of vitamin C and have biological activity as antioxidants. The aim of the study was to determine the levels of vitamin C in the ethanol extract of mung bean sprouts with a standard solution of vitamin C as  a  positive  control.  The  method  consisted  of  extraction,  determining  the  maximum  wavelength, determining the standard curve, and measuring the levels of mung bean sprout ethanol extract and vitamin C standard solution. The results showed that the maximum wavelength in determining vitamin C content was 260 nm, and mung bean sprout ethanol extract had vitamin C content of 0.200 ppm at a dose of 20 ppm. This level is equivalent to the positive control, which is a standard 10 ppm vitamin C solution. The conclusion is that 20 µg/mL ethanol extract of mung bean sprouts contains vitamin C of 0.200 µg/mL. Keywords: Phaseolus radiatus L., Vitamin C, Spectrophotometry UV-Vis

## ABSTRAK
Anemia  defisiensi  besi  merupakan  penyebab  utama  penurunan  daya  tahan  aerob.  Pemberian  vitamin  C dapat memberi pengaruh yang signifikan terhadap peningkatan hemoglobin dan daya tahan aerob. Kacang hijau ( Phaseolus radiatus ) dapat memenuhi kebutuhan vitamin C dan memiliki aktivitas biologis sebagai sumber antioksidan. Tujuan penelitian ialah menentukan kadar vitamin C pada ekstrak etanol kecambah kacang  hijau  dengan  larutan  standar  vitamin  C  sebagai  kontrol  positif.  Metode  terdiri  dari  ekstraksi, penentuan panjang gelombang maksimum, penetapan kurva standar, serta pengukuran kadar ekstrak etanol kecambah kacang hijau dan larutan standar vitamin C. Hasil penelitian menunjukkan Panjang gelombang maksimum dalam penentuan kadar vitamin C adalah 260 nm, serta ekstrak etanol kecambah kacang hijau memiliki kandungan vitamin C sebesar 0,200 ppm pada takaran 20 ppm. Kadar ini setara dengan kontrol positif,  yaitu  standar  larutan  vitamin  C  10  ppm.  Kesimpulan  ialah  20  µg/mL  ekstrak  etanol  kecambah kacang hijau mengandung vitamin C sebesar 0,200 µg/mL.
Kata kunci: Phaseolus radiatus L., Vitamin C, Spektrofotometri UV-Vis

## PENDAHULUAN
Kacang  hijau  ( Phaseolus  radiatus L.) merupakan  salah  satu  tanaman  kacang-kacangan penting  di  Asia  Tenggara  dan  Asia  Selatan.  Di Indonesia,  tanaman  ini  menempati  urutan  ketiga setelah  kedelai  dan  kacang  tanah,  baik  mengenai luas  area  penanaman  dan  produksinya  maupun peranannya sebagai bahan makanan. Kacang hijau juga merupakan salah satu jenis kacang-kacangan yang memberikan banyak manfaat bagi kesehatan khususnya  bagi  ibu  hamil.  Hal  ini  dikarenakan kacang hijau memiliki banyak kandungan gizi yang baik  untuk  kesehatan  ibu  selama  kehamilannya (Aidah, 2020).
Kacang  hijau  memiliki  kandungan  vitamin dan  mineral  seperti  kalsium,  fosfor,  besi,  natrium dan  kalium.  Kacang  hijau  mengandung  protein lengkap yang  membantu dalam  pembentukan  sel- sel  tubuh.  Selain  itu  kacang  hijau  dapat  berperan dalam pembentukan sel darah merah dan mencegah anemia karena kandungan fitokimia dalam kacang hijau  sangat  lengkap  sehingga  dapat  membantu proses  hematopoiesis  (Aidah  2020;  Apriadji, 2018).
Anemia defisiensi besi merupakan penyebab utama  penurunan  daya  tahan  aerob.  Pemberian suplemen  besi  dan  Vitamin  C  yang  diberikan bersamaan  memberi  pengaruh  yang  signifikan terhadap  peningkatan  hemoglobin dan daya  tahan aerob.  Peningkatan  hemoglobin  mempunyai hubungan  yang  signifikan  terhadap  peningkatan daya  tahan  tubuh  aerob.  Anemia  memerlukan perhatian  serius  dari  semua  pihak  yang  terkait dalam  pelayanan  kesehatan.  Anemia  memiliki konsekuensi  kesehatan  yang  merugikan  secara signifikan, serta dampak buruk pada pembangunan sosial dan ekonomi (Alamsyah, 2020).
Penggunaan  kacang  hijau  efektif  dalam mengatasi  anemia  pada  pasien  kanker  dengan kemoterapi. Konsumsi dua cangkir rebusan kacang hijau dapat memenuhi 50% kebutuhan besi harian dan  80%  memenuhi  kebutuhan  harian  vitamin  C dan  vitamin  lain  seperti  tiamin,  riboflavin,  dan niacin. Kacang hijau memiliki kandungan vitamin C  yang  cukup  baik,  yaitu  sebesar  6,70  mg  dalam 100 g takaran kacang hijau (Chavez et al., 2018). Beberapa metode yang telah dikembangkan untuk  menentukan  kadar  vitamin  C  pada  suatu sampel  diantaranya  adalah  Spektrofotometri  UV- Vis.  Penetapan  kadar  dengan  menggunakan spektrofotometri  UV-Vis  dapat  memberikan informasi terkait analisis kualitatif maupun analisis kuantitaif (Wulaisfan et al. , 2016).
Berdasarkan  uraian  tersebut  maka  perlu dilakukan  penelitian  guna  mengidentifikasi  atau menentukan  kadar  vitamin  C  dalam  kecambah kacang  hijau  ( Phaseolus  radiatus L.)  sehingga dapat mengetahui takaran vitamin C sebagai upaya alternatif  konsumsi  pangan  untuk  mengatasi anemia.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Peneliatian
Waktu dan tempat penelitian ini berlangsung selama  bulan  Maret  sampai  April  2023  di Laboratorium  Biologi  Farmasi,  Adapun  jenis penelitian  yang  dilakukan  adalah  eksperimental dengan tujuan menetapkan kadar vitamin C dalam ekstrak kecambah kacang hijau.

## Ekstraksi
Kecambah biji kacang hijau sebanyak 1000 gram dicuci bersih dan dikeringkan menggunakan oven suhu 50ºC. Selanjutnya dilakukan penyerbukan  kecambah  biji  kacang  hijau  dan pembuatan  ekstrak  kacang  hijau  menggunakan pelarut  etanol  96%  dengan  metode  maserasi. 1000gram  serbuk  biji  kacang  hijau  dilarutkan dalam  7500  mL  etanol  96%.  Maserasi  dilakukan selama  3x24  jam  pada  suhu  kamar  dengan dilakukan  sesekali  pengadukan.  Selanjutnya dilakukan  penguapan  pelarut  pada  ekstrak  cair menggunakan rotary  evaporator pada  suhu  40 0 C (Atchibiri, et al., 2010).

## Pembuatan Larutan Baku Vitamin C
Asam  askorbat  standar  ditimbang  100  mg kemudian  dilarutkan  dalam  100  mL  aquades. Dipipet  larutan  standar  asam  askorbat  tadi sebanyak 2,5 mL, dimasukkan kedalam labu ukur 25  mL. Diencerkan  dengan  aquades  hingga  tanda batas dan dihomogenkan (Wulaisfan et al. , 2016).

## Penentuan Panjang Gelombang
Penentuan  serapan  atau  absorbansi  larutan standar  vitamin  C  (asam  askorbat)  pada  rentang panjang gelombang 200-300 nm dengan menggunakan instrumen spektrofotometer UV-Vis (Wulaisfan et al. , 2016).

## Pembuatan Kurva Standar
Pembuatan  larutan  standar  dibuat  dengan mengambil  blanko  0,2  mL;  0,4  mL;  0,6  mL;  0,8 mL;  dan  0,10  mL  dari  larutan  standar  asam askorbat  2,5  mL/25  mL.  Konsentrasi  larutan standar yang diperoleh berturut-turut adalah 2, 4, 6, 8, dan 10 mg/L (Wulaisfan et al. , 2016).

## Penetapan Kadar Vitamin C
Ekstrak kacang hijau ditimbang sebanyak 5 gram  kemudian  dilarutkan  dengan  aquades  bebas CO 2 hingga  100  mL  menggunakan  labu  ukur.
Larutan  diencerkan  dengan  memipet  sebanyak  10 mL, 20 mL, dan 30 mL, masing-masing dilarutkan dalam  aquades  bebas  CO 2 hingga  100  mL  dalam labu  ukur.  Masing-masing  larutan  ekstrak  diukur absorbansinya  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis  dengan  panjang  gelombang  maksimal (Wulaisfan et al. , 2016).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kacang hijau memiliki kandungan vitamin C dengan berbagai aktivitas biologis, seperti sumber antioksidan  yang  baik  dan  dapat  memenuhi kebutuhan vitamin selama kehamilan. Pemenuhan zat gizi ini dapat mencegah faktor risiko kejadian anemia  selama  kehamilan.  (Purwono  &  Hartono, 2020).
Pembuatan ekstrak kacang hijau menggunakan  metode  maserasi.  Tahap  awal ialah penyerbukan  kecambah  kacang  hijau  yang dikeringkan  di  bawah  panas  matahari  dengan ditutupi  kain  hitam  agar  cepat  kering  dan melindungi  senyawa  yang  terkandung  dalam kacang  merah  yang  tidak  tahan  terhadap  panas yang tinggi. Pengeringan dilakukan selama 3 hari. Sampel kemudian diserbukkan dan diayak. Tujuan penghalusan  ini  adalah  untuk  meningkatkan  luas permukaan sehingga sampel kontak dengan pelarut semakin  luas  dan  proses  ekstraksi  menjadi  lebih maksimal.  Hasil  serbuk  simplisia  yang  diperoleh adalah  528  gram.  Rendemen  serbuk  simplisia terhadap berat awal kacang hijau sebesar 10,88%. Hasil  serbuk  simplisia  ini  diambil  masing-masing 200  gram  sebanyak  tiga  kali  untuk  pembuatan ekstrak  etanol  kacang  hijau  dengan  metode maserasi.
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah maserasi  (ekstraksi  dingin).  Metode  ini  dipilih karena  prosesnya  yang  sederhana  dan  tidak melibatkan  pemanasan  sehingga  dapat  mencegah kerusakan  senyawa  kimia  yang  tidak  tahan terhadap  pemanasan.  Pelarut  yang  digunakan dalam ekstraksi adalah etanol 96% karena bersifat polar  sehingga  dapat  menyari  atau  mengekstraksi senyawa-senyawa organik polar seperti flavonoid. Hasil  dari  maserasi  disaring  setelah  3  hari  dan residu  yang  didapat  dimaserasi  kembali  dengan tujuan  untuk  melarutkan  senyawa-senyawa  yang tertinggal pada ampas sekaligus menghilangkan zat pengotor pada saat perendaman ((Dwiarso, 2017).
Filtrat  yang  diperoleh  dari  dua  proses perendaman  dipekatkan  dengan  rotary  evaporator pada  suhu  maksimum  50°C  dan  kecepatan  200 rpm. Suhu yang digunakan kurang dari 50°C untuk
menghindari kerusakan zat aktif akibat penguapan pada  suhu  yang  tinggi.  Tujuan  dari  pemekatan adalah  untuk  memisahkan  antara  pelarut  dan ekstrak  yang  diperoleh.  Proses  ekstraksi  kacang hijau  menghasilkan  ekstrak  kental  dengan  hasil rendemen  sebesar  12,45%.  Adapun  karakteristik yang  dihasilkan  dari  ekstrak  etanol  kecambah kacang hijau yaitu ekstrak kental, berbau khas dan berwarna hijau kehitaman.
Gambar 1. Ekstrak etanol kecambah kacang hijau
Vitamin  C  atau  asam  askorbat  merupakan bahan  farmasi  yang  banyak  dikonsumsi  sebagai antioksidan. Asam askorbat dalam sediaan farmasi dapat  ditentukan  dengan  metode  titrasi  iodometri atau  spektrofotometri  ultraviolet  pada  panjang gelombang  265  nm.  Penyerapan  pada  panjang gelombang  260  nm  mampu  menyerap  absorbansi maksimal  pada  asam  askorbat.  Absorbansi sebanding  dengan  jumlah  partikel,  sehingga berdasarkan  data  tersebut  partikel  yang  paling banyak  terserap  berada  pada  panjang  gelombang 260  nm.  Berdasarkan  pengukuran  panjang gelombang  maksimum,  nampak  serapan  terbesar pada  panjang  gelombang  260  nm  untuk  beberapa sampel.  Kadar  vitamin  C  pada  cabai  merah  besar keriting  diperoleh  dengan  cara  mengonversi  data absorbansi (Atchibiri et al., 2010).
Tabel 1. Hasil pengukuran panjang gelombang maksimum larutan standar Panjang gelombang (nm) Absorbansi (ppm) 200 220 240 260 280 300 0,061 0,039 0,029 0,081 0,027 0,003
Tabel di atas menunjukkan nilai absorbansi atau serapan maksimum larutan standar Vitamin C nampak pada panjang gelombang 260 nm dengan nilai  absorbansi  sebesar  0,081.  Oleh  karena  itu, pengukuran  kadar  vitamin  C  pada  ekstrak  etanol kecambah kacang hijau dengan variasi konsentrasi berbeda  dilakukan  pada  panjang  gelombang  260 nm.
Tabel  2  menguraikan  hasil  pengukuran kadar  vitamin  C  pada  ekstrak  etanol  kecambah kacang  hijau  dengan  konsentrasi  20  ppm menghasilkan  absorbansi  terbesar,  yaitu  0,200 ppm.  Hal  tersebut  menunjukkan  bahwa  terdapat kandungan  vitamin  C  sebanyak  0,200  ppm  pada ekstrak etanol kecambah kacang hijau 20 ppm.

## Tabel 2. Hasil pengukuran kadar vitamin C
Jenis bahan uji Konsentrasi (ppm) Absorbansi (ppm) Ekstrak etanol kecambah kacang hijau Vitamin C 10 20 30 2 4 6 8 10 0,190 0,200 0,195 0,500 0,680 0,553 0,255 0,200
Berdasarkan  pengukuran  absorbansi  pada ekstrak  etanol  kecambah  kacang  hijau  dengan pembanding larutan standar vitamin C menunjukkan  bahwa  metode  spektrofotometer UV-Vis  mampu  memberikan  hasil  pengukuran serapan  atau  absorbansi  vitamin  C  pada  Panjang gelombang 260 nm. Ekstrak etanol kecambah biji kacang  hijau  ( Phaseolus  radiatus L.)  memiliki kandungan  vitamin  C  yang  bervariasi  mulai  dari konsentrasi  atau  takaran  10,  20  dan  30  µg/mL. Oleh  karena  itu  konsumsi  pangan  kacang  hijau dapat  menjadi  alternatif  pemenuhan  vitamin  C sebagai  upaya  pencegahan  faktor  risiko  anemia selama kehamilan.

## KESIMPULAN
Ekstrak  etanol  kecambah  kacang  hijau memiliki kandungan vitamin C sebesar 0,200 ppm
pada  takaran  20  ppm.  Kadar  ini  setara  dengan kontrol positif, yaitu standar larutan vitamin C 10 ppm.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  20  µg/mL ekstrak etanol kecambah kacang hijau mengandung vitamin C sebesar 0,200 µg/mL.

## SARAN
Perlu dilakukan pengolahan pangan terhadap kacang hijau atau penerapan nutraseutikal kacang hijau bagi ibu hamil guna mencegah faktor risiko anemia selama kehamilan.

## DAFTAR PUSTAKA
Aidah,  Sitinur.  2020.  Eksiklopedi  Kacang  hijau deskripsi,  filosofi,  manfaat,  budidaya  dan peluang  bisnisnya.  Yogyakarta:  Penerbit KBM Indonesia.
Alamsyah,  W.  2020.  Anemia  pada  Ibu  Hamil.
Jakarta: EGC.
Apriadji,  W.  H.  2018. Makan  Enak  Untuk  Hidup Sehat,  Bahagia,  Dan  Awet  Muda .  Jakarta: Gramedia Pustaka.
Atchibiri,  Ocho-Anin  AL,  Brou  KD,  Koua-  kou TH,  Kouadio  YJ,  Gnakri  D  (2010). Screening  for  Antidiabetic  and  Antioxidant Activity and Phytochemical Constituents of common  bean  ( Phaseolus  vulgaris L.) Seeds. J Medicinal Plants Study. 4(17): 1757 ± 61.
Chávez,  J.L.;  Carrillo-Rodríguez,  J.C.;  Guzmán, A.M.V.; Aquino-Bolaños, E.N.; Hernández- Delgado,  S.;  Perez,  N.M.;  Lobato-Ortiz,  R. Traditional family production and nutritional-nutraceutical  value  of  common beans  ( Phaseolus  vulgaris L.)  in  Southeast Mexico.  In Phaseolus  vulgaris:  Cultivars, Production and Uses , 1st ed.; Nova Science
Publishers,  Inc.:  New  York,  NY,  USA, 2018; pp. 167–198. Dwiarso. 2017. Metode Kromatografi. Yogyakarta. Deepublish. Purwono  &  Hartono.  2020.  Kacang  hijau  tehnik budidaya  di  berbagai  kondisi  lahan  dan musim. Jakarta: Niaga Swadaya.
Wulaisfan  R,  Adi  N,  Nurhidayat.  2016  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Kacang  Hijau Menggunakan  Pereaksi  DPPH.  Warta Farmasi 5(1): 66-71.