Corresponding Author: Erna Yovi Kurniawati Doctoral Program Medical and Health Sciences, Diponegoro University Jl. Prof. Dr. Soedarto, Tembalang Semarang Jawa Tengah email: yovi.raharjanto@gmail.com
This is an open-access article under the CC BY-SA license.
Journal homepage: http://jfi.setiabudi.ac.id

## In Silico Pharmacokinetic and Toxicity Analysis on Clitoria Ternatea Flower

## In Silico Pharmacokinetic and Toxicity Analysis on Clitoria Ternatea Flower
Erna Yovi Kurniawati 1* , Noor Pramono 2 , Syarief Thaufik Hidayat 2 , Endang Mahati 3 1 Doctoral Program Medical and Health Sciences, Faculty of Medicine, DIponegoro University, Indonesia
2 Departement Fertility and Endocrinology, Faculty of Medicine, Diponegoro University, Indonesia
3 Departement Pharmacology and Therapy, Faculty of Medicine, Diponegoro University, Indonesia
Article Info ABSTRAK Article history: Received  14 09, 2023
Revised     14 11, 2023 Accepted  17 11, 2023
Penelitian  ini  mengeksplorasi  aspek  farmakokinetik  dan  toksisitas  dari  Clitoria ternatea,  yang  terkenal  dalam  pengobatan  tradisional  karena  potensi farmakologisnya  yang  menjanjikan.  Dengan  menggunakan  metode  komputasi, penelitian ini berupaya mengungkap interaksi senyawa aktif dalam tubuh manusia, melibatkan  prediksi  tidak  hanya  sifat  farmakokinetik  tetapi  juga  mengeksplorasi korelasi antara struktur kimia dan parameter seperti lipofilisitas dan status substrat P-glikoprotein. Urgensi penelitian ini  berasal dari kebutuhan akan sumber  terapi yang  aman.  Melalui  penilaian  toksisitas  in  silico  yang  mendalam,  potensi  efek samping  dari  senyawa  diidentifikasi  dengan  cermat,  untuk  memastikan  evaluasi keamanan  yang  komprehensif..  Penelitian  ini  memperkenalkan  perspektif  baru dalam mengeksplorasi tanaman obat tradisional, dengan menekankan pentingnya alternatif  terapi  yang  aman.  Tujuan  utamanya  adalah  untuk  membangun  fondasi yang kuat untuk mengembangkan C. ternatea lebih lanjut sebagai sumber daya yang berharga  untuk  aplikasi  farmakologis  dan  memajukan  pengobatan  alami.  Hasil penelitian  mengungkapkan  banyak  senyawa  dengan  potensi  farmakologis  yang signifikan,  yang  menunjukkan  harapan  untuk  aplikasi  pengobatan  alami  di  masa depan. Namun, keharusan untuk penelitian tambahan dan validasi eksperimental menggarisbawahi  komitmen  kami  untuk  memahami  aspek  farmakologis  dan toksikologis dari senyawa ini.

## Kata kunci
Clitoria Ternatea
In Silico Farmakokinetik Toksisitas

## Keywords:
Clitoria Ternatea In Silico Pharmacokinetics Toxicity

## ABSTRACT
This  study  explores the pharmacokinetic and toxicity  aspects of  Clitoria ternatea, which  is  well-known  in  traditional  medicine  for  its  promising  pharmacological potential. Using computational methods, research seeks to unravel the interaction of active  compounds  in  the  human  body,  predicting  not  only  pharmacokinetic properties  but  also  exploring  the  correlation  between  chemical  structure  and parameters  such  as  lipophilicity  and  P-glycoprotein  substrate  status,  which improves  our  understanding  of  the  compound's  behaviour.  The  urgency  of  this research stems from the need for a safe source of therapeutics. Through in-depth in silico  toxicity  assessments,  potential  side  effects  of  compounds  are  carefully identified, ensuring a comprehensive safety evaluation. This important step lays the foundation for responsible pharmacological development. This research introduces a  new  perspective  on  exploring  traditional  medicinal  plants,  emphasising  the importance of safe therapeutic alternatives. The ultimate goal is to establish a solid foundation to further develop C. ternatea as a valuable resource for pharmacological applications and advance natural medicine. The results revealed many compounds with significant pharmacological potential, which show promise for future natural medicine  applications.  However,  the  imperative  for  additional  research  and experimental  validation  underscores  our  commitment  to  understanding  the pharmacological and toxicological aspects of these compounds.

## 1. PENDAHULUAN
C. ternatea merupakan tanaman yang memiliki sejarah panjang  sebagai sumber bahan  alami  yang  digunakan  untuk  berbagai  tujuan  kesehatan.  Ekstrak  C.  ternatea memiliki manfaat farmakologis yang potensial, yang telah menarik minat para akademisi dan praktisi pengobatan tradisional. Ekstrak Clitoria ternatea telah menunjukkan potensi dalam  memodulasi  mikrobiota  usus  dan  meningkatkan  keseimbangan  hormon  secara keseluruhan [1]. Clitoria ternatea, juga dikenal sebagai bunga telang, telah diteliti untuk mengetahui  efek  terapeutiknya  yang  potensial  pada  PCOS.  Bunga  telang  mengandung senyawa  seperti  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  dan  tanin  [2],  yang  memiliki  sifat antioksidan dan anti-inflamasi [3]. Penelitian telah menunjukkan bahwa ekstrak Clitoria ternatea dapat menghambat produksi sitokin pro-inflamasi, mengurangi stres oksidatif, dan melindungi dari kerusakan hati dan ginjal. Hal ini juga dapat membantu mengatur metabolisme lipid, menurunkan kadar kolesterol, dan meningkatkan sensitivitas insulin [4].  Kandungan  ini  menjadikan  C.  ternatea  sebagai  bahan  alami  yang  menjanjikan  di bidang  obat-obatan  dan  suplemen  kesehatan.  Namun,  studi  penggunaan  C.  ternatea sebagai  obat  potensial  membutuhkan  pemahaman  terkait  profil  farmakokinetik  dan toksisitas dengan menggunakan metode in silico seperti Swiss ADME dan Protox II, serta validasi lebih lanjut melalui uji laboratorium.
Analisis  farmakokinetik berkorelasi  dengan bioavailabilitas  yang  dapat  mempengaruhi efek  farmakologi  dan  efek  toksik  dari  ekstrak  C.  ternatea  [5].  Analisis  farmakokinetik berkorelasi dengan bioavailabilitas yang dapat mempengaruhi efek farmakologi dan efek toksik  dari  ekstrak  C.  ternatea  [5].  Uji  coba  laboratorium  konvensional  membutuhkan biaya yang mahal dan memakan waktu yang lama untuk melakukan studi farmakokinetik dan  toksisitas.  Metode  in  silico,  menggunakan  software  Swiss  ADME  dan  Protox  II, memberikan  wawasan  yang  berharga  tentang  profil  farmakokinetik  dan  toksisitas  C. ternatea.  Keuntungan  pertama  adalah  kecepatan  analisis  yang  lebih  tinggi,  yang memungkinkan penelitian ini memberikan hasil dengan cepat. Selain itu, pendekatan in silico  dapat  mengidentifikasi  tren  terperinci  dalam  interaksi  senyawa  aktif  C.  ternatea dengan tubuh manusia, memberikan pemahaman yang mendalam tanpa membutuhkan waktu  yang  lama.  Farmakokinetik  suatu  zat,  termasuk  proses  absorpsi,  distribusi, metabolisme,  dan  ekskresi,  dapat  diperkirakan  dengan  bantuan  perangkat  lunak  yang disebut  Swiss  ADME.  Protox  II  merupakan  prediktor  toksisitas  untuk  menilai  potensi keracunan bahan kimia.  Metode in silico ini juga memiliki keterbatasan, prediksi yang dihasilkan masih memerlukan validasi eksperimental lebih lanjut di laboratorium untuk memastikan  keakuratannya.  Meskipun  demikian,  dengan  adanya  keterbatasan  ini, penggunaan  metode  in  silico  tetap  menjadi  pilihan  yang  baik  karena  memberikan perspektif  yang  lebih  cepat  dan  lebih  hemat  biaya  mengenai  sifat  farmakologis  dan toksisitas senyawa alami.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  memprediksi  potensi  efek  farmakologis dari ekstrak C. ternatea sehingga dapat mempelajari rincian informasi penting tentang bagaimana  ekstrak  C.  ternatea  berinteraksi  dengan  tubuh  manusia,  bagaimana  bahan aktif didistribusikan di dalam tubuh, dan efek toksik potensial yang dapat ditimbulkan dengan menggunakan metode in silico. Hasil dari penelitian ini akan menjelaskan lebih lanjut mengenai potensi aplikasi ekstrak C. ternatea sebagai obat. Pendekatan in silico yang digunakan dalam penelitian ini juga dapat menawarkan alternatif yang lebih cepat dan  lebih  hemat  biaya  untuk  memahami  sifat  farmakokinetik  dan  toksisitas  senyawa alami. Temuan dari analisis ini dapat menjadi titik awal untuk penelitian lebih lanjut dan potensi  kemajuan  dalam  industri  farmasi  dan  penggunaan  kearifan  lokal  sebagai  obat herbal.  Melalui  pendekatan  in  silico,  penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengoptimalkan
pemahaman  potensi  farmakologis  C.  ternatea  dengan  tetap  mempertimbangkan kelebihan dan keterbatasan metodologi ini.

## 2. METODE
Struktur  3D  dan  Canonical  SMILES  diidentifikasi  melalui  Database  PubChem (National  Library  of  Medicine).  Menganalisis  deskriptor  fisiokimia  serta  memprediksi parameter  ADME  dan  sifat  kemiripan  obat  (  druglikeness)  menggunakan  SwissADME (Swiss  Institute  of  Bioinformatics).  Akses  website  http://www.swissadme.ch,  unggah senyawa SMILES, SwissADME akan memberikan hasil dan parameter ADME. Toksisitas senyawa diuji menggunakan ProTox II ( Prediction of Toxicity of Chemicals).  Akses situs web  https://tox-new.charite.de/protox_II/,  unggah  senyawa  SMILES,  pilih  model tambahan yang akan diprediksi dan mulai Prediksi Toksisitas. Dosis toksisitas didasarkan pada LD50 dalam mg/kg berat badan. LD50 adalah dosis letal rata-rata, yang berarti dosis yang menyebabkan 50% subjek uji meninggal setelah terpapar senyawa.
Kelas  toksisitas  ditentukan  oleh  sistem  klasifikasi  pelabelan  kimia  yang diselaraskan secara global (GHS). Nilai LD50 diberikan dalam mg/kg. Kelas I: fatal jika tertelan (LD50 ≤ 5). Kelas II: mematikan jika tertelan (5 < LD50 ≥ 50). Kelas III: beracun jik a tertelan (50 < LD 50 ≤ 300). Kelas IV: berbahaya jika membengkak (300 < LD50) ≤ 2000). Kelas V: mungkin berbahaya jika tertelan (2000 < LD50, ≤ 5000). Kelas VI: tidak beracun  (LD50  >  5000).  Model  toksisitas  juga  menganalisis  hepatotoksisitas, karsinogenisitas, mutagenisitas, dan sitotoksisitas target [5], [6].

## 3. HASIL
Kelarutan  dan  potensi  ketersediaan  hayati  suatu  senyawa  kimia  dalam  tubuh manusia  didasarkan  pada  Lipinski's  Rule.  Lipinski's  Rule  terdiri  dari  empat  kriteria sederhana yang harus dipenuhi oleh suatu bahan kimia untuk dapat dikatakan memiliki potensi sebagai obat dengan bioavailabilitas yang baik, antara lain: berat molekul kurang dari 500 g/mol, Log P ( Koefisien Partisi Oktanol-Air ) kurang dari 5, jumlah donor atom hidrogen reseptor dari suatu ikatan hidrogen terikat kurang dari atau sama dengan 5, dan jumlah reseptor dari suatu donor atom hidrogen dari suatu hidrogen terikat kurang dari atau  setara  dengan  10.  Suatu  senyawa  memenuhi  setidaknya  empat  kriteria  di  atas, sehingga  diasumsikan  berpotensi  memiliki  kelarutan  yang  baik  dalam  air  dan  dapat dengan  mudah  melewati  membran  sel.  Senyawa  yang  memenuhi  Lipinski's  Rule cenderung memiliki bioavailabilitas yang lebih tinggi, yang berarti mereka lebih mungkin diserap oleh tubuh dan menghasilkan efek farmakologis yang diinginkan [6], [7].
Tabel 1. Druglikeness Clitoria Ternatea Compounds
Compound Lipinski’s Rule Parameter Druglikeness (Lipinski) Molecular Weight <500 MLOGP <4.15 Num H-bond acceptors <10 Num H-bond donors <5 Kaempferol 286.24 g/mol -0.03 6 4 Yes Quercetin 302.24 g/mol -0.56 7 5 Yes Myricetin 318.24 g/mol -1.08 8 6 Yes Ternatin 374.34 g/mol -0.12 8 2 Yes Petunidin 317.27 g/mol 0.03 7 5 Yes Peonidin 301.27 g/mol 0.57 6 4 Yes Delphinidin 338.70 g/mol 0.03 7 6 Yes Malvidin 331.30 g/mol 0.28 7 4 Yes Cyanidin 287.24 g/mol 0.32 6 5 Yes Epicatechin 290.27 g/mol 0.24 6 5 Yes Scutellarin 462.36 g/mol -2.12 12 7 No Baicalein 270.24 g/mol 0.52 5 3 Yes Luteolin 286.24 g/mol -0.03 6 4 Yes Apigenin 270.24 g/mol 0.52 5 3 Yes
Compound Lipinski’s Rule Parameter Druglikeness (Lipinski) Molecular Weight <500 MLOGP <4.15 Num H-bond acceptors <10 Num H-bond donors <5 Chlorogenic 354.31 g/mol -1.05 9 6 Yes Protocatechuic 154.12 g/mol 0.40 4 3 Yes Gallic 170.12 g/mol -0.16 5 4 Yes Anthraquinone 208.21 g/mol 1.86 2 0 Yes Taraxerol 426.72 g/mol 6.92 1 1 Yes Alpha Tocopherol 430.71 g/mol 6.14 2 1 Yes Gamma-Tocopherol 416.68 g/mol 5.94 2 1 Yes Campesterol 400.68 g/mol 6.54 1 1 Yes Stigmasterol 412.69 g/mol 6.62 1 1 Yes Beta-Sitosterol 414.71 g/mol 6.73 1 1 Yes Sitostanol 416.72 g/mol 6.88 1 1 Yes Palmitic Acid 256.42 g/mol 4.19 2 1 Yes Stearic Acid 284.48 g/mol 4.67 2 1 Yes Petroselinic Acid 282.46 g/mol 4.57 2 1 Yes Linoleic Acid 280.45 g/mol 4.47 2 1 Yes Arachidic Acid 312.53 g/mol 5.13 2 1 Yes Behenic Acid 340.58 g/mol 5.58 2 1 Yes Phytanic Acid 312.53 g/mol 5.13 2 1 Yes 3-deoxy-3, 11-epoxy cephalotaxine 313.35 g/mol 1.56 5 0 Yes
Prediksi penyerapan, distribusi, metabolisme, dan ekskresi selanjutnya dilakukan dengan  memasukkan  kode  SMILES  dari  senyawa  tersebut  melalui  ADME  Tools  (Swiss ADME), hasil prediksi disajikan sebagai berikut:.
Table 2. ADME Prediction Analysis (Absorption, Distribution, Metabolism, Excretion)
Compounds ADME Prediction Absorption Distribution (Lipophilicity- Log P o/w ) Metabolism (Cytochrome metabolism) Excretion (P-gp substrate) GI Absorption Skin permeation (Log Kp) Kaempferol High -6.7 1.58 CYP1A2 CYP2D6 CYP3A4 No Quercetin High -7.05 1.23 CYP1A2 CYP2D6 CYP3A4 No Myricetin Low -7.4 0.79 CYP1A2 CYP3A4 No Ternatin High -6.37 2.50 CYP1A2 CYP2C9 CYP3A4 No Petunidin High -6.88 0.63 CYP1A2 Yes Peonidin High -6.53 0.97 CYP1A2 Yes Delphinidin High -7.5 -0.98 No Yes Malvidin High -6.73 0.92 CYP1A2 Yes Cyanidin High -7.51 0.32 CYP1A2 Yes Epicatechin High -7.82 0.85 No Yes Scutellarin Low -8.59 -0.20 No Yes Baicalein High -5.7 2.24 CYP1A2 CYP2D6 CYP3A4 No Luteolin High -6.25 1.73 CYP1A2 CYP2D6 CYP3A4 No Apigenin High -5.8 2.11 CYP1A2 No
Compounds ADME Prediction Absorption Distribution (Lipophilicity- Log P o/w ) Metabolism (Cytochrome metabolism) Excretion (P-gp substrate) GI Absorption Skin permeation (Log Kp) CYP2D6 CYP3A4 Chlorogenic Low -8.76 -0.38 No No Protocatechuic High -6.42 0.65 CYP3A4 No Gallic High -6.84 0.21 CYP3A4 No Anthraquinone High -5.16 2.64 CYP1A2 CYP2C19 No Taraxerol Low -2.3 7.22 No No Alpha Tocopherol Low -1.33 8.27 No Yes Gamma- Tocopherol Low -1.51 7.95 No Yes Campesterol Low -2.5 6.90 No No Stigmasterol Low -2.74 6.97 CYP2C9 No Beta-Sitosterol Low -2.2 7.19 No No Sitostanol Low -2.93 7.07 No No Palmitic Acid High -2.77 5.20 CYP1A2 CYP2C9 No Stearic Acid High -2.19 5.93 CYP1A2 No Petroselinic Acid High -2.6 5.70 CYP1A2 CYP2C9 No Linoleic Acid High -3.05 5.45 CYP1A2 CYP2C9 No Arachidic Acid Low -1.61 6.62 CYP1A2 No Behenic Acid Low -1.01 7.40 CYP1A2 No Phytanic Acid High -2.31 6.15 CYP2C9 Yes 3-deoxy-3, 11- epoxy cephalotaxine High -7.25 1.95 CYP2D6 No
Kemampuan suatu senyawa atau zat untuk membahayakan makhluk hidup dikenal sebagai  toksisitas.  Tingkat  toksisitas  suatu  zat  ditentukan  oleh  toksisitas  umum,  yang meliputi  zat  alami  yang  ditemukan  pada  tumbuhan,  hewan,  dan  sumber  daya  alam lainnya.  Toksisitas  senyawa  alami,  termasuk  hepatotoksisitas,  karsinogenisitas, mutagenisitas, dan sitotoksisitas, sangat penting untuk banyak aplikasi farmasi, medis, dan  lingkungan.  Pengujian  toksisitas  senyawa dari  bahan  alami  sangat  penting karena dapat  membantu  mengidentifikasi  zat  yang  berpotensi  berbahaya  atau  beracun  dan memberikan panduan untuk desain obat yang aman dan efektif [10], [11] Table 3. Toxicity Test Results of Clitoria Ternatea Compound
Compounds Toxicity LD50 (mg/kg) Toxicity Class Hepatotoxicity Carcinog enicity Immunot oxicity Mutagenicity   Cytotoxicity Kaempferol 3919 5 Inactive Active Inactive Active Inactive Quercetin 159 3 Inactive Active    Inactive Active Inactive Myricetin 159 3 Inactive Active    Inactive Active Inactive Ternatin 5000 5 Inactive Inactive Active Inactive Inactive Petunidin 5000 5 Inactive Active Active Inactive Inactive Peonidin 5000 5 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Delphinidin 5000 5 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Malvidin 5000 5 Inactive Inactive Active Inactive Inactive Cyanidin 5000 5 Inactive Active Inactive Inactive Inactive Epicatechin 10000 6 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive
Compounds Toxicity LD50 (mg/kg) Toxicity Class Hepatotoxicity   Carcinog enicity Immunot oxicity Mutagenicity   Cytotoxicity Scutellarin 5000 5 Inactive Active Inactive Inactive Inactive Baicalein 3919 5 Inactive Active    Inactive Active Inactive Luteolin 3919 5 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Apigenin 2500 5 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Chlorogenic 5000 5 Inactive Inactive Active Inactive Inactive Protocatechuic 2000 4 Inactive Active Inactive Inactive Inactive Gallic 2000 4 Inactive Active Inactive Inactive Inactive Anthraquinone 5000 5 Inactive Inactive   Inactive Active Inactive Taraxerol 70000 6 Inactive Inactive Active Inactive Inactive Alpha Tocopherol 5000 5 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Gamma- Tocopherol 5000 5 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Campesterol 890 4 Inactive Inactive Active Inactive Inactive Stigmasterol 890 4 Inactive Inactive Active Inactive Inactive Beta-Sitosterol 890 4 Inactive Inactive Active Inactive Inactive Sitostanol 500 4 Inactive Inactive Active Inactive Inactive Palmitic Acid 900 4 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Stearic Acid 900 4 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Petroselinic Acid 48 2 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Linoleic Acid 100000 6 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Arachidic Acid 900 4 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Behenic Acid 900 4 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive Phytanic Acid 900 4 Inactive Inactive   Inactive Inactive Inactive 3-deoxy-3, 11- epoxy cephalotaxine 28 2 Inactive Active Active Inactive Active

## 4. PEMBAHASAN Druglikeness Senyawa Clitoria Ternatea
Kaempferol,  Quercetin,  Myricetin,  Ternatin,  Petunidin,  Peonidin,  Delphinidin, Malvidin, Sianidin, Epicatechin, Baicalein, Luteolin, Apigenin, Klorogenik, Protocatechuic, Galic,  Antrakuinon,  Taraxerol,  Alfa  Tokoferol,  Tokoferol  Gamma,  Campesterol, Stigmasterol, Beta-Sitosterol, Sitostanol, Asam Palmitat, Asam Stearat, Asam Petroselinat, Asam  Linoleat,  Asam  Arakidat,  Asam  Behenat,  Asam  Fitanat,  dan  3-deoksi-3,11-epoksi sefalotinon  memenuhi  kriteria  kemiripan  obat  menurut  Lipinski's  Rule.  Scutellarin memiliki jumlah akseptor dan donor ikatan H yang melebihi batas yang ditetapkan oleh Lipinski's  Rule,  sehingga  tidak  memenuhi  kriteria  kemiripan  obat.  Kondisi  ini  dapat menjadi  indikasi  bahwa  senyawa  ini  mungkin  memiliki  potensi  keterbatasan  dalam penyerapan dan distribusi dalam tubuh.
Terdapat satu senyawa Clitoria ternatea yang tidak memenuhi kriteria kemiripan obat berdasarkan Lipinski's Rule karena jumlah akseptor dan donor ikatan hidrogen yang melebihi  batas  yang  ditetapkan.  Namun,  hal  ini  tidak  secara  langsung  menutup kemungkinan  untuk  mengembangkan  Clitoria  ternatea  sebagai  obat  alami.  Meskipun Lipinski's Rule memberikan pedoman awal untuk evaluasi obat, banyak obat yang sukses di pasaran tidak mematuhi semua kriteria ini. Keputusan untuk melanjutkan penelitian pengembangan  obat  bahan  alami  Clitoria  ternatea  bergantung  pada  beberapa  faktor tambahan, seperti hasil uji praklinis dan informasi tambahan tentang sifat farmakologis dan toksikologis senyawa tersebut. Beberapa senyawa yang tidak memenuhi Lipinski's Rule  tetapi  memiliki  aktivitas  farmakologis  yang  signifikan  dapat  menjadi  objek
pengembangan  lebih  lanjut,  terutama  jika  senyawa  tersebut  menunjukkan  potensi terapeutik  yang  tinggi  dan  dapat  diatasi  dengan  perbaikan  formulasi  atau  modifikasi struktural.
Pengembangan  obat  bahan  alami  lebih  lanjut  dimungkinkan  melalui  langkah- langkah validasi lebih lanjut yang diperlukan untuk lebih memahami sifat-sifat senyawa; termasuk  pengujian  toksisitas,  penentuan  mekanisme  kerja,  dan  penelitian  tambahan untuk  memahami  bagaimana  senyawa  berinteraksi  dengan  sistem  biologis.  Pada pengembangan obat dari bahan alami seperti Clitoria ternatea, penting untuk melakukan pendekatan holistik dan mempertimbangkan keragaman senyawa yang ada serta potensi sinergi di antara mereka. Karenanya, meskipun satu senyawa dapat saja tidak memenuhi kriteria tertentu, penelitian lebih lanjut pada tingkat sel dan hewan dapat memberikan wawasan  yang  lebih  lengkap  tentang  potensi  obat  dari  ekstrak  tanaman  secara keseluruhan.

## Gastrointestinal Absorbtion
Berdasarkan  tabel  prediksi  ADME,  prediksi  penyerapan  gastrointestinal menghasilkan  senyawa-senyawa  yang  masuk  dalam  kategori  "tinggi"  (kaempferol, quercetin,  ternatin,  petunidin,  peonidin,  delphinidin,  malvidin,  sianidin,  epikatekin, isorhamnetin,  bainicale,  luteolin,  apigenin,  protocatechuic,  gallic,  antrakuinon,  asam palmitat, asam stearat, asam petroselinat, asam linoleat, asam fitat, 3-deoksi-3, 11-epoksi sefalotaksin). Ada senyawa dalam kategori "rendah" (myricetin, scutellarin, chlorogenic, taraxerol, alpha-tocopherol, gamma-tocopherol, campesterol, stigesterol, beta-sitosterol, sitstigostanol / mastanol, asam arakidonat, dan asam behenat).
Penyerapan  gastrointestinal  yang  rendah  dari  suatu  senyawa  dapat  memiliki dampak yang signifikan terhadap efektivitas dan ketersediaan senyawa tersebut dalam tubuh manusia. Jika suatu senyawa memiliki penyerapan gastrointestinal yang rendah, berarti jumlah senyawa yang diserap oleh saluran pencernaan mungkin terbatas, yang dapat menghambat efek terapeutik yang diharapkan karena senyawa tersebut mungkin tidak  mencapai  tingkat  konsentrasi  yang  diperlukan  dalam  darah  atau  organ  target. Penyerapan yang rendah dapat mengurangi kemanjuran suatu senyawa, karena jumlah senyawa  yang  cukup  mungkin  tidak  mencapai  target  biologisnya.  Kondisi  ini  dapat mengurangi potensi terapeutik dan membuat senyawa tersebut menjadi kurang efektif sebagai  obat.  Penyerapan  gastrointestinal  yang  rendah  mungkin  memerlukan penyesuaian dosis atau frekuensi pemberian untuk mencapai tingkat ketersediaan yang memadai; ini dapat menjadi faktor penting dalam pengembangan obat, terutama untuk mencapai  efek  terapeutik  yang  diinginkan.  Clitoria  ternatea  mengandung  senyawa dengan  penyerapan  gastrointestinal  yang  rendah;  hal  ini  dapat  menjadi  pertimbangan penting dalam  pengembangannya  sebagai  obat  alami.  Akan  tetapi,  banyak  faktor  yang mempengaruhi  penyerapan,  termasuk  formulasi,  dosis,  dan  sifat-sifat  senyawa. Modifikasi  formulasi  atau  teknik  pemrosesan  tertentu  akan  diperlukan  untuk meningkatkan  bioavailabilitas  dan  penyerapan  senyawa-senyawa  ini.  Senyawa  dengan daya  serap  gastrointestinal  yang  tinggi  cenderung  memiliki  bioavailabilitas  yang  lebih baik, yang berarti lebih efisien dalam mencapai jaringan target dan menghasilkan efek terapeutik yang diinginkan [6], [7].

## Skin Permeation
Tingkat permeabilitas kulit yang dianggap baik untuk patch transdermal biasanya berkisar  antara  -3  hingga  -1  cm/detik.  Tingkat  permeabilitas  yang  lebih  tinggi  dalam kisaran  ini  menunjukkan  bahwa  senyawa  tersebut  lebih  mudah  menembus  kulit  dan berpotensi  memberikan  dosis  terapi  yang  efektif.  Senyawa  dengan  nilai  log  Kp  yang rendah  cenderung  tetap  berada  di  permukaan  kulit  tanpa  menembus  lebih  dalam.
Senyawa dengan nilai log Kp positif (nilai di atas nol) cenderung memiliki potensi untuk menembus atau menyerap melalui kulit lebih baik daripada senyawa dengan nilai log Kp negatif  (nilai  di  bawah  nol).  Nilai  Log  K  p  yang  positif  menunjukkan  bahwa  senyawa tersebut lebih mudah bertransisi dari fase air (kulit) ke fase non-polar (seperti lapisan kulit)[6], [8]. Terdapat 13 senyawa yang diprediksi dapat dikembangkan menjadi patch transdermal  pada  Clitoria  ternatea,  yaitu  taraxerol,  alfa-tokoferol,  gamma-tokoferol, campesterol, stigmasterol, beta-sitosterol, sitostanol/stigmastanol, asam palmitat, asam stearat, asam petroselinat, asam arakidonat, asam behenat, dan asam fitat.
Apabila senyawa tertentu pada Clitoria ternatea memiliki nilai permeasi kulit yang tinggi,  maka  dapat  dipertimbangkan  untuk  mengoptimalkan  formulasi  patch  dengan berfokus pada senyawa tersebut. Pemilihan senyawa dengan karakteristik permeabilitas kulit  yang  baik  dapat  meningkatkan  efisiensi  penghantaran  obat  melalui  patch transdermal.  Perlu dilakukan  penyesuaian  formulasi  patch,  termasuk  pemilihan  bahan pembawa  (vehicle)  yang  mendukung  penetrasi  kulit.  Pemilihan  bahan  pembawa  yang sesuai  dapat  meningkatkan  ketersediaan  dan  penetrasi  senyawa  dari  Clitoria  ternatea melalui  lapisan  kulit.  Uji  praklinis  dan  uji  klinis  perlu  dilakukan  untuk  mengevaluasi efektivitas  dan  keamanan  penggunaan  patch  transdermal  Clitoria  ternatea.  Hasil penelitian ini akan memberikan pemahaman yang lebih baik tentang potensi penggunaan patch  ini  dalam  aplikasi  klinis.  Pengembangan  obat  patch  transdermal  juga  harus mempertimbangkan potensi toksisitas dan keamanan senyawa dalam Clitoria ternatea. Penggunaan  patch  memungkinkan  penyerapan  senyawa  secara  terus menerus melalui kulit, sehingga evaluasi yang cermat terhadap efek samping dan toksisitas menjadi hal yang penting.[8], [9].

## Lipophilicity
Semua  senyawa  bersifat  lipofobik,  kecuali  tiga  senyawa  hidrofilik  (delphinidin, scutellarin, klorogenik). Salah satu elemen penting dalam farmakokinetik dan efek obat pada tubuh adalah lipofilisitas. Penetrasi membran dan jaringan biologis yang lebih baik merupakan  karakteristik  senyawa  dengan  lipofilisitas  tinggi,  yang  memungkinkan distribusi yang lebih efektif ke berbagai organ dan jaringan tubuh. Namun, lipofilisitas yang  berlebihan  juga  dapat  menyebabkan  penumpukan  zat  dalam  jaringan  lemak  dan organ tertentu, yang dapat memengaruhi cara tubuh mendistribusikan dan membuang zat-zat tersebut. Oleh karena itu, menentukan lipofilisitas merupakan komponen penting dalam penelitian farmasi dan desain obat [9].
Meskipun terdapat tiga senyawa dalam Clitoria ternatea yang bersifat hidrofilik (delphinidin, scutellarin, dan chlorogenic), pengembangan Clitoria ternatea sebagai obat alami  oral  masih  memungkinkan.  Pengembangan  formulasi  yang  tepat  dan  strategi penghantaran  yang  inovatif  dapat  membantu  meningkatkan  ketersediaan  dan kemanjuran  senyawa-senyawa  tersebut  di  dalam  tubuh.  Penelitian  diperlukan  untuk merancang  formulasi  oral  yang  optimal  atau  patch  transdermal.  Pilihan  pengikat,  alat bantu  penyerapan,  dan  penggantian  dapat  memengaruhi  kelarutan,  stabilitas,  dan penyerapan  senyawa  hidrofilik  ini.  Penerapan  teknologi  penghantaran  khusus,  seperti nanopartikel  atau  liposom,  dapat  meningkatkan  kelarutan  dan  penyerapan  senyawa hidrofilik. Teknologi ini dapat membantu memasukkan senyawa ini ke dalam formulasi dan  meningkatkan  efisiensi  penyerapan  di  saluran  pencernaan.  Kombinasi  senyawa hidrofilik  dengan  senyawa  lipofilik  dalam  formulasi  dapat  memperluas  opsi pengembangan. Senyawa lipofilik dapat memfasilitasi penyerapan dan distribusi di dalam tubuh,  sementara  senyawa  hidrofilik  tetap  memberikan  manfaat  kesehatan  yang diinginkan. Penyesuaian dosis dan frekuensi pemberian dapat menjadi strategi penting
untuk memastikan ketersediaan dan kemanjuran yang optimal dalam penggunaan oral [6] – [8].

## Cytochrome metabolism
Beberapa senyawa, seperti kaempferol, quercetin, ternatin, petunidin, peonidin, malvidin,  dan  sianidin,  memiliki  prediksi  metabolisme  oleh  enzim  CYP1A2,  yang merupakan salah satu enzim sitokrom P450 yang paling aktif dalam tubuh manusia, yang menunjukkan  bahwa  senyawa-senyawa  tersebut  dapat  mengalami  pemecahan  dan modifikasi  yang  signifikan  dalam  tubuh.  Senyawa  baicalein,  luteolin,  dan  apigenin memiliki  prediksi  metabolisme  oleh  CYP2D6  dan  cYP3A4,  yang  merupakan  enzim sitokrom P450 lainnya yang penting dalam pemecahan senyawa yang berbeda.
Senyawa  yang  terlibat  dalam  metabolisme  enzim  CYP  umumnya  mengalami transformasi  kimiawi,  seperti  oksidasi,  yang  dapat  menghasilkan  metabolit  aktif  atau tidak aktif. Metabolit tersebut dapat memiliki aktivitas farmakologis atau efek toksik yang berbeda  dari  senyawa  aslinya.  Keterlibatan  enzim  CYP  dapat  menyebabkan  potensi interaksi  obat.  Senyawa  yang  menggunakan  jalur  metabolisme  yang  sama  dengan senyawa  lain  yang  dimetabolisme  oleh  enzim  CYP  yang  sama  dapat  bersaing  dengan enzim tersebut, sehingga mempengaruhi tingkat eliminasi dan ketersediaan keduanya. Polimorfisme  genetik  pada  enzim  CYP  dapat  menyebabkan  variasi  respons  individu terhadap senyawa yang dimetabolisme oleh enzim tersebut. Beberapa individu mungkin memiliki aktivitas enzim CYP yang lebih tinggi atau lebih rendah, yang mempengaruhi laju metabolisme senyawa obat. Dalam pengembangan klinis, penyesuaian dosis mungkin diperlukan  untuk  mengakomodasi  variabilitas  metabolisme  oleh  enzim  CYP.  Hal  ini penting untuk mencapai konsentrasi terapeutik yang diinginkan dan menghindari efek toksik.  Penting  untuk  mempertimbangkan  dampak  keterlibatan  enzim  CYP  dalam pengembangan  obat,  terutama  jika  senyawa  tersebut  berpotensi  sebagai  obat  alami. Beberapa senyawa yang dimetabolisme oleh enzim CYP masih dapat digunakan sebagai obat alami apabila melalui formulasi atau penyesuaian dosis, respons individual dapat diprediksi  atau  dipantau  dengan  baik,  dan  interaksi  obat  dapat  diatasi  dengan penyesuaian dosis atau pemilihan senyawa yang sesuai.[8].
Berdasarkan  tabel  yang  disediakan,  jika  "Metabolisme  sitokrom"  untuk  suatu senyawa terdaftar sebagai "Tidak", berarti senyawa tersebut tidak dimetabolisme secara signifikan oleh enzim CYP yang terdaftar (CYP1A2, CYP2C9, CYP2C19, CYP2D6, CYP3A4). Namun,  beberapa  senyawa,  seperti  delphinidine,  epicatechin,  scutellarin,  chlorogenic, alpha-tocopherol,  gamma-tocopherol,  taraxerol,  dan  sejumlah  senyawa  lainnya,  tidak memiliki prediksi metabolisme oleh enzim sitokrom P450 tertentu. Senyawa yang tidak mengalami metabolisme yang signifikan oleh enzim CYP mungkin lebih stabil di dalam tubuh,  karena  tidak  akan  mengalami  perubahan  kimiawi  yang  dapat  mempercepat eliminasi. Keterlibatan enzim CYP dalam metabolisme obat dapat menyebabkan interaksi obat jika senyawa bersaing untuk enzim yang sama. Apabila suatu senyawa tidak diubah oleh enzim CYP yang umumnya terlibat dalam metabolisme obat, potensi interaksi obat dapat berkurang. Senyawa yang tidak mengalami metabolisme yang signifikan mungkin memiliki  ketersediaan  hayati  yang  lebih  tinggi  karena  tidak  mengalami  perubahan kimiawi yang dapat mempengaruhi penyerapan dan distribusi dalam tubuh [8].

## P-gp (P-glycoprotein)
Terdapat  10  senyawa  (peonidin,  delphinidin,  malvidin,  petunidin,  sianidin, epikatekin, scutellarin, alfa-tokoferol,  gamma-tokoferol, dan asam fitat) yang berstatus sebagai  substrat  Pgp  dengan  status  "ya",  serta  24  senyawa  yang  berstatus  "tidak". Senyawa  yang  merupakan  substrat  P-gp  cenderung  mengalami  penurunan bioavailabilitas  karena  dapat  dipompa  keluar  (  efflux)  dari  sel  yang  melibatkan  P-gp.
Kondisi ini dapat mempengaruhi tingkat penyerapan dan ketersediaan senyawa tersebut di  dalam  tubuh.  Pada  senyawa  dengan  status  P-gp  "ya",  optimasi  formulasi  dan penyesuaian  dosis  diperlukan.  Teknik  formulasi  khusus  atau  kombinasi  dengan modulator  P-gp  dapat  membantu  meningkatkan  bioavailabilitas.  Senyawa  yang merupakan substrat P-gp dapat berinteraksi dengan obat lain yang juga menggunakan jalur transpor yang sama. Perlu pertimbangan khusus dalam pengembangan formulasi kombinasi  atau  penyesuaian  dosis.  Senyawa  dengan  status  P-gp  "tidak"  memiliki bioavailabilitas yang lebih tinggi karena tidak mengalami efek pengurangan penyerapan oleh  P-gp.  Kehadiran  senyawa  dengan  status  P-gp  "  tidak  "  dapat  mengurangi  risiko interaksi obat yang melibatkan jalur P-gp, memfasilitasi pengembangan formulasi yang melibatkan senyawa ini. Senyawa dengan status P-gp "tidak" mungkin lebih cocok untuk formulasi  oral,  karena  kurang  terpengaruh  oleh  pengaruh  P-gp  pada  penyerapan  [8] – [10]. .
Pada kedua senyawa dengan status P-gp "ya" dan "tidak", uji klinis dan evaluasi keamanan merupakan tahapan penting dalam pengembangan obat dari bahan herbal. Uji klinis  dan  evaluasi  keamanan  akan  memberikan  pemahaman  lebih  lanjut  mengenai respons pasien dan potensi efek samping. Optimalisasi formulasi dan penggunaan metode formulasi inovatif dapat membantu mengatasi tantangan yang mungkin terkait dengan status P-GP. Pilihan kombinasi senyawa dalam formulasi dapat membantu memanfaatkan potensi sinergis dan meminimalkan dampak negatif dari status P-gp tertentu.

## Toxicity
Sejumlah besar penelitian dan pengujian toksisitas harus dilakukan pada bahan alami  apa  pun  yang  dimaksudkan  untuk  digunakan  dalam  produk  farmasi,  suplemen makanan, atau obat-obatan. Studi toksisitas membantu menentukan dosis yang aman dan membantu  pengembangan  produk  yang  aman  bagi  kesehatan  manusia.  Senyawa  yang ditemukan  dalam  produk  alami  dapat  memiliki  tingkat  toksisitas  yang  berbeda-beda, tergantung pada sifat kimia dan biologisnya. Tanaman yang secara tradisional digunakan sebagai  obat  mengandung  senyawa  dengan  toksisitas  rendah  atau  bahkan  efek  yang menguntungkan bagi kesehatan, tetapi bahan-bahan tertentu dari produk alami juga bisa sangat beracun dan berbahaya bagi manusia [10].
Hasil analisis menunjukkan variasi yang besar dalam LD50 dari berbagai senyawa, dengan nilai tertinggi adalah 100.000 mg/kg (asam linoleat) dan terendah 28 mg/kg. (3- deoksi-3,  11-epoksi  sefalotaksin).  Hasil  uji  LD50  senyawa  asam  petroselinat  dan  3- deoksi-3, 11-epoksi sefalotaksin masuk dalam golongan senyawa kelas 2 dengan LD50 kelas 2 yang dianggap toksik dengan potensi tinggi untuk menimbulkan efek negatif pada organisme uji dalam dosis sedang Senyawa ini memiliki kemampuan untuk menimbulkan kerusakan  atau  gangguan  pada  fungsi  tubuh  apabila  dikonsumsi  atau  terpapar  dalam dosis yang cukup tinggi. Hasil uji LD50 senyawa yang berada di kelas 3 adalah quercetin dan myricetin. Senyawa dengan LD50 kelas  3 dianggap sebagai senyawa yang bersifat toksik dengan tingkat toksisitas sedang. Meskipun toksisitasnya lebih rendah daripada senyawa dengan LD50 kelas 1 dan 2, senyawa tersebut masih berpotensi menimbulkan efek negatif pada organisme uji pada dosis yang lebih tinggi. Dosis yang lebih tinggi lagi diperlukan untuk menyebabkan kematian pada 50% hewan uji, tetapi masih berpotensi menimbulkan efek toksik jika tertelan dalam dosis yang signifikan [11].
Hasil  uji  LD50  dari  senyawa  di  kelas  4  adalah:  protocatechuic,  campesterol, stigmasterol, beta-sitosterol, sitostanol/stigmastanol, asam palmitat, asam stearat, asam arakidat, asam behenat, asam fitat, dan asam galat. Klasifikasi ini menunjukkan bahwa dosis yang jauh lebih tinggi diperlukan untuk menyebabkan kematian atau efek toksik, tetapi  kita  masih  perlu  berhati-hati  karena  dapat  berbahaya  jika  tertelan  dalam  dosis
yang signifikan. Hasil uji LD50 dari senyawa-senyawa yang masuk dalam kelas 5 adalah: kaempferol,  ternatin,  sinensetin,  peonidin,  petunidin,  delphinidin,  malvidin,  sianidin, isorhamnetin,  scutellarin,  baicalein,  luteolin,  apigenin,  klorogenik,  antrakuinon,  alfa- tokoferol,  dan  gamma-tokoferol.  Kategori  ini  menunjukkan  bahwa  senyawa  tersebut memiliki  potensi  toksisitas  rendah  hingga  sedang  jika  tertelan.  Dosis  yang  diperlukan untuk  menyebabkan  efek  toksisitas  pada  50%  hewan  uji  berada  dalam  kisaran  yang cukup  tinggi,  sehingga  senyawa  cenderung  kurang  berbahaya  pada  dosis  yang  biasa digunakan  dalam  aplikasi  atau  paparan  pada  manusia.  Hasil  uji  LD50  dari  senyawa epicatechin,  taraxerol,  dan  asam  linoleat  termasuk  dalam  kategori  kelas  6.  Dosis  yang sangat  tinggi  diperlukan  untuk  menimbulkan  efek  toksisitas,  dan  klasifikasi  ini menunjukkan bahwa senyawa tersebut dianggap tidak beracun pada dosis yang umum digunakan. Mayoritas senyawa dalam C. ternatea diklasifikasikan dalam kelas 4 dan 5, yang menunjukkan tingkat toksisitas sedang hingga rendah [10], [11].
Analisis  menunjukkan  bahwa  senyawa  C.  ternatea  diprediksi  tidak  memiliki aktivitas hepatotoksik, yang dapat merusak hati. Beberapa senyawa diprediksi memiliki potensi  karsinogenik,  yang  berarti  dapat  menyebabkan  kanker.  Senyawa  seperti kaempferol,  quercetin,  myricetin,  petunidin,  sianidin,  scutellarin,  baicalein, protocatechuic,  gallic,  dan  3-deoxy-3,  11-epoxy  cephalotaxine  diklasifikasikan  sebagai aktif dalam hal karsinogenisitas, sehingga penggunaan atau paparan terhadap senyawa- senyawa  ini  harus  berhati-hati.  Beberapa  senyawa  diprediksi  memiliki  potensi imunotoksik, yang dapat memengaruhi sistem kekebalan tubuh. Senyawa-senyawa ini, seperti  ternatin,  petunidin,  klorogenik,  taraxerol,  campesterol,  stigmasterol,  beta- sitosterol, sitostanol, dan 3-deoksi-3, 11-epoksi sefalotaksin, dapat memengaruhi respons kekebalan  tubuh  terhadap  infeksi  atau  penyakit.  Mutagenisitas  mengacu  pada kemampuan suatu senyawa untuk menyebabkan mutasi pada materi genetik. Beberapa senyawa  dalam  penelitian  ini  diklasifikasikan  sebagai  aktif  dalam  hal  mutagenisitas, seperti  kaempferol  dan  quercetin,  myricetin,  baicalein,  dan  antrakuinon,  yang menunjukkan bahwa senyawa-senyawa tersebut dapat menyebabkan perubahan genetik yang  berpotensi  berbahaya.  Senyawa  3-deoksi-3,  11-epoksi  sefalotaksin  diperkirakan memiliki  potensi  sitotoksik,  yang  dapat  memengaruhi  kesehatan  sel-sel  dalam  tubuh. Penelitian  lebih  lanjut  mungkin  diperlukan  untuk  mengkonfirmasi  prediksi  ini  dan mengidentifikasi mekanisme toksik yang lebih rinci [10], [12].

## 5. KESIMPULAN
Senyawa-senyawa dalam C. ternatea memiliki berat molekul yang sesuai dengan Lipinski's Rule, yang mengindikasikan potensi penyerapan yang baik. Sifat hidrofobik dari beberapa  senyawa  mempengaruhi  distribusi  dan  permeabilitasnya.  Prediksi metabolisme  dan  status  P-gp  memberikan  wawasan  tentang  efek  farmakokinetik. Validasi eksperimental diperlukan untuk konfirmasi.

## 6. UCAPAN TERIMAKASIH (12 PT)
Artikel  jurnal  ini  ditulis  sebagai  penelitian  pendahuluan  yang  didanai  oleh Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Riset, dan Teknologi melalui Program Beasiswa Pendidikan Indonesia Program Doktor. Isi dari artikel ini sepenuhnya menjadi tanggung jawab penulis. Penulis ingin menyatakan bahwa tidak ada konflik kepentingan yang dapat mempengaruhi hasil atau interpretasi dalam artikel ini.

## 7. REFERENCES (10 PT)
[1] Y. Liang, Q. Ming, J. Liang, Y. Zhang, H. Zhang, and T. Shen, “Gut microbiota dysbiosis in polycystic ovary syndrome: Association with obesity — A preliminary report,”
Can  J  Physiol  Pharmacol ,  vol.  98,  no.  11,  pp.  803 – 809,  2020,  doi:  10.1139/cjpp- 2019-0413.
[2] Gejalakshmi.S  and  N.  Harikrishnan,  “Exploring  the  Pharmacological  Potential  of Clitoria  Ternatea:  In  vivo  Assessment  of  its  CNS  Activity  as  a  Medicinal  Herb,” Journal  of  Population  Therapeutics  and  Clinical  Pharmacology ,  vol.  30,  no.  4,  pp. 523 – 532, Apr. 2023, doi: 10.47750/JPTCP.2023.30.04.052.
[3] Y.  Wang et  al. ,  “Clitoria  ternatea  blue  petal  extract  protects  against  obesity, oxidative  stress,  and  inflammation  induced  by  a  high-fat,  high-fructose  diet  in C57BL/ 6 mice,” Food Research International , vol. 162, pp. 963 – 9969, 2022, doi: 10.1016/j.foodres.2022.112008.
[4] W. Hakam Maulidy, A. Mustika, and I. Safitri Mukono, “The Effect of Butterfly Pea (Clitoria  Ternatea)  Extract  on  Reducing  Total  Cholesterol  Levels  in  Rattus norvegicus  with  the  Hypercholesterolemia  Model,” International  Journal  of Research Publications , vol. 115, no. 1, Dec. 2022, doi: 10.47119/IJRP10011511220224349.
[5] K. Linggam, S. Ramanathan, S. Sasidharan, and S. M. Mansor, “Toxicity evaluation of methanol extract of clitoria ternatea L. Leaf,” Malaysian Journal of Medicine and Health Sciences , vol. 8, no. 2, pp. 33 – 39, 2012, Accessed: Jun. 25, 2023. [Online]. Available: https://www.researchgate.net/publication/288117872
[6] P. Rani, B. K. Rajak, and D. V. Singh, “Physicochemical parameters for design and development of lead herbicide molecules: Is ‘Lipinski’s rule of 5′ appropriate for herbicide discovery?,” Pest Manag Sci , vol. 79, no. 5, pp. 1931 – 1943, May 2023, doi: 10.1002/PS.7367.
[7] R.  Roskoski,  “Rule  of  five  violations  among  the  FDA -approved  small  molecule protein  kinase  inhibitors,” Pharmacol  Res ,  vol.  191,  p.  106774,  May  2023,  doi: 10.1016/J.PHRS.2023.106774.
[8] B. Bakchi et al. , “An overview on applications of SwissADME web tool in the design and  development  of  anticancer,  antitubercular  and  antimicrobial  agents:  A medicinal chemist’s perspective,” J Mol Struct , vol. 1259, p. 132712, Jul. 2022, doi: 10.1016/J.MOLSTRUC.2022.132712.
[9] K.  M.  Al  Azzam,  “SwissADME  and  pkCSM  Webservers  Predictors:  an  integrated Online Platform for Accurate and Comprehensive Predictions for In Silico ADME/T Properties  of  Artemisinin  and  its  Derivatives,” Kompleksnoe  Ispolzovanie Mineralnogo Syra = Complex use of mineral resources , vol. 325, no. 2, pp. 14 – 21, Jun. 2023, doi: 10.31643/2023/6445.13.
[10] H.  K.  Shin,  R.  Huang,  and  M.  Chen,  “In  silico  modeling -based  new  alternative methods  to  predict  drug  and  herb- induced  liver  injury:  A  review,” Food  and Chemical Toxicology , vol.
179,
p. 113948, Sep. 2023, doi: 10.1016/J.FCT.2023.113948.
[11] E. Benfenati, Q. Chaudhry, G. Gini, and J. Lou Dorne, “Integrating in silico models and  read-across  methods  for  predicting  toxicity  of  chemicals:  A  step-wise strategy,” Environ Int , vol. 131, p. 105060, Oct. 2019, doi: 10.1016/J.ENVINT.2019.105060.
[12]  P.  K.  P.  Krishnamoorthy et  al. ,  “In -silico  study  reveals  immunological  signaling pathways, their genes, and potential herbal drug targets in ovarian cancer,” Inform Med Unlocked , vol. 20, p. 100422, Jan. 2020, doi: 10.1016/J.IMU.2020.100422.