## KARAKTERISASI EKSTRAK DAUN SIRIH MERAH
(PIPER CROCATUM, RUIZ&PAV) SEBAGAI OBAT ANTIDIABETES MENUJU OBAT HERBAL TERSTANDAR
Eka Wisnu Kusuma 1) , Disa Andriani 2)
1, 2 Prodi S-I Farmasi STIKes Nasional
kusuma.3ka@gmail.com

## ABSTRAK
Daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) merupakan salah satu tanaman obat potensial yang digunakan masyarakat untuk pengobatan diabetes. Penelitian ini bertujuan untuk meningkatkan kualitas daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) menjadi raw material yang memenuhi standar ekstrak tumbuhan obat dalam pemenuhan mutu ekstrak menjadi obat herbal terstandar (OHT) antidiabetes. Pembuatan ekstrak dengan metode maserasi dengan pelarut etanol 96% selama 3 hari. Karakterisasi mengacu pada standarisasi dan analisa data berdasarkan Parameter Ekstrak Tumbuhan Obat (Kepmenkes RI No: 55/Menkes/SK/I/2000) dan Peraturan Kepala BPOM RI Nomor 12 tahun 2014 tentang Persyaratan Mutu Obat Tradisional. Ekstrak daun sirih merah (Piper crocatum Ruiz & Pav) memenuhi standar raw material sediaan OHT dengan organoleptis berbentuk serbuk kering, warna coklat tua, bau aromatis, dan memiliki rasa asam sepat pahit. Kadar air(%) 6,795±0,0017( ≤ 10%). Uji angka lempeng total 0,9 x 10 2 koloni/g. Uji kapang khamir 1 x 10 2 koloni/g. dan pada pengujian cemaran mikroba didalam ekstrak hasilnya negatif. a fl atoksin B1<0,23( ≤ 5 μ g/kg), B2 <0,19 μ g/kg, G1<0,23 μ g/kg, G2<0,84 μ g/kg dan a fl atoksin total <0,84 ( ≤ 20 μ g/kg). Pada pengujian logam berat didapatkan logam Pb <0,165ppm, Cd <0,159 ppm, As <0,0217ppm dan Hg <0,018ppm
Kata kunci : daun sirih merah, standardisasi, diabetes melitus

## ABSTRACT
Piper crocatum Ruiz & Pav known as “Daun sirih merah” is one of the potential medicinal plants that used for the treatment of diabetes mellitus. This study aims to improve the quality of red betel leaves (Piper crocatum Ruiz & Pav) into raw materials that meet the standards of medicinal plant extracts in ful fi lling the quality of the extract into antidiabetic standardized herbal medicine (OHT). Making extract with maceration method with 96% ethanol as much as 10 L for 3 days. Characterization refers to the standardization and analysis of data based on Parameter of Medicinal Plant Extracts (Kepmenkes RI No: 55 / Menkes / SK / I / 2000) and the Regulation of the Head of BPOM RI Number 12 of 2014 concerning Quality Requirements for Traditional Medicines. Red betel leaf extract (Piper crocatum Ruiz & Pav) meets the standard raw material for OHT preparations with organoleptis in the form of dry powder, dark brown color, aromatic odor, and has a bitter acid taste. Moisture content (%) 6,795 ± 0,0017 ( ≤ 10%). Test the total plate number 0.9 x 10 2 colonies / g. Test of yeasts contamination 1 x 10 2 colonies / g.The total bacteria test in the extract was negative. The a fl atoxin content B1<0,23( ≤ 5 μ g/ kg), B2 <0,19 μ g/kg, G1<0,23 μ g/kg, G2<0,84 μ g/kg and total a fl atoxin content <0,84 ( ≤ 20 μ g/kg). The heavy metal tests resulted Pb metal of <0,165ppm,Cd <0,159 ppm, As <0,0217ppm and Hg <0,018ppm
Keywords : piper crocatum Ruiz & Pav, Standardization, diabetes mellitus

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada - Januari 2019

## 1. PENDAHULUAN
Indonesia mempunyai kekayaan alam yang luas terutama keanekaragaman hayatinya. Potensi kekayaan ini belum dimanfaatkan secara luas untuk mengembangkan bahan baku obat. Peningkatan mutu obat tradisional memerlukan proses standarisasi. Proses standarisasi adalah proses penting dalam memperoleh senyawa aktif.
Bahan baku obat diperoleh dengan cara dikembangkan melalui fi tofarmaka  sehingga keamanan dan khasiatnya secara medik dapat dipertanggungjawabkan. Persyaratan mutu obat tradisional merupakan hal yang wajib dipenuhi setiap bahan baku dengan dibuktikan melalui pengujian laboratorium (BPOM RI, 2014).
Tanaman daun sirih merah ( Piper crocatum Ruiz & Pav) merupakan keanekaragaman hayati tanaman yang sering dimanfaatkan masyarakat secara turun temurun untuk berbagai pengobatan seperti diabetes, hepatitis, hipertensi, ambeien, obat sakit gigi dll (Prapti & Puspaningtyas, 2013). Sirih merah melalui mekanisme enzimatik dapat menurunkan glukosa darah (Agustanti, L. 2008). Ekstrak daun sirih merah menunjukkan penurunan kadar glukosa pada tikus putih yang diinduksi aloksan (Dewi, Y, F., Anthara, S, M, Dharmayudha, A, G, O. 2014).
Penelitian ini bertujuan untuk memberikan informasi ilmiah yang berkaitan dengan stan- darisasi obat herbal khususnya untuk pengobatan diabetes serta memberikan e fi kasi yang terukur secara farmakologis dan menjamin keamanan konsumen.

## 2.   METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan yaitu alat-alat gelas, corong Buchner, vortex, mikropipet, rotary evaporator , alat Spektrofotometer Serapan Atom (SSA) merk Shimadzu 6650 F, timbangan analitik merk Acis, furnace, oven, inkubator, autoklaf, HPLC Shimadzu LC-10AD No. C20293309457 J2
Daun sirih merah dari Desa Samirono Yogyakarta, air, media Lactose Broth Single Strength (LBS), media Lactose Broth Double Strength (LBD), media Brilliant Green Lactosa
Bile Broth (BGLB), media BPW ( Buffer Pepton Water ), media MC ( Mac Conkey ) dan media BAP ( Blood Agar Plate ), media Manitol Salt Agar (MSA), media Brain Heart Infussion (BHI) dan Kaldu Pepton Darah (KPD), media Klinger Iron Agar (KIA), PAD, SIM, UREA, CITRAT, MR/ VP, media gula-gula, Media Uji IMVIC, KOH, Barlic, Kovac, FeCl3, Metil red, Media NA miring , Cat Gram A, B, C dan D. larutan standar Cd 2 + 1000 ppm, larutan standar Pb 2 + 1000 ppm, larutan standar As 2 + 1000 ppm, larutan standar Hg 2 + 1000 ppm larutan HNO3 pekat, larutan HClO4, aquabidest, larutan HCl, 2N, larutan Na2S, larutan HNO3 2N, larutan KI, larutan ditizon 0,005% b/v, larutan NH4OH 1N, kristal KCN, larutan HNO3 0,5M
Cara Kerja
a. Preparasi Sampel Bahan baku utama yang akan digunakan dalam penelitian adalah daun sirih merah berasal dari Samirono, Yogyakarta. Pada tahap persiapan sampel, daun sirih merah ( Piper crocatum Ruiz & Pav) dicuci kemudian dikeringkan. Setelah tahap sortasi kering simplisia digiling dengan mesin penggiling dan diayak dengan ayakan mesh 40, kemudian disimpan dalam tempat kering dan tertutup rapat. Ekstraksi daun sirih merah ( Piper crocatum Ruiz & Pav) sebanyak 2000 gram dilakukan maserasi dengan pelarut etanol 96% sebanyak 10 L selama 3 hari. Ekstrak yang diperoleh di uapkan pelarutnya dengan rotary evaporator sehingga didapatkan ekstrak kental dan kemudian dipanaskan diatas waterbath untuk mendapatkan ekstrak kering.

## b. Uji Organoleptis
Uji organoleptis dilakukan dengan pengamatan terhadap bentuk, rasa, bau dan warna ekstrak etanol daun sirih merah
c. Uji Kadar Air
Penetapan kadar air dilakukan dengan metode gravimetri, sampel ditimbang sebanyak 2 gram ekstrak kering daun sirih merah kemudian dilakukan moisture balance.
Jurnal Kesehatan Kusuma Husada - Januari 2019
d.  Uji Cemaran mikroba
1) Uji Angka Lempeng Total
Sebanyak 1 ml dipipet dari tiap penge- nceran ke dalam cawan petri.Tiap cawan petri dituangkan 15 mL media NA cair. Setelah dituangi media NA segera cawan petri digoyang dan diputar membentuk angka delapan atau sedemikian hingga suspensi tersebut merata. Setelah media memadat, cawan petri diinkubasi pada suhu 35-37° C selama 24-48 jam den- gan posisi terbalik. Jumlah koloni yang tumbuh diamati dan dihitung.
2)  Uji Kapang Khamir Dipipet masing-masing pengenceran dipipet 1,0 ml, dituangkan pada media PDA segera digoyangkan sambil diputar agar suspensi tersebar merata, setelah memadat seluruh cawan petri diinkubasi pada suhu 20-25°C selama 5-7 hari dan dicatat jumlah koloni jamur yang tumbuh.
3) Identi fi kasi Mikroba Patogen Sedikit ekstrak ditambah NaCl 0,9% steril kemudian dihomogenkan. Ambil masing-masing 1 ohse dari biakan ma- sukkan dalam media penyubur BHI, KPD dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Kemudian digoreskan pada media selektif(MC untuk Esch- erichia coli , Salmonella sp , Shigella sp. ,
Pseudomonas aeruginosa dan BAP un- tuk Staphylococcus aureus). Diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam, lihat pertumbuhan koloni bakteri bandingkan dengan kontrol.
e. Uji Afl atoksin
Analisis kuantitatif dilakukan dengan HPLC Kolom C18 Inertsil, (150 mm x 4,5 mm), 5 μ m, panjang gelombang eksitasi 365 nm, panjang gelombang emisi 450 nm, fase gerak: Aquabidest:Asetonitril: Metanol 600:100:300. Nilai Rf ( Rate of fl ow ) dari fl uoresensi bercak sampel dan standar dibandingkan.
f. Uji cemaran logam Pb, Cd, As dan Hg Penetapan kadar Timbal (Pb), Kadmium (Cd), Arsen (As) dan Merkuri(Hg) dengan
menggunakan alat Atomic Absorption Spech- trophotometer . Penetapan kadar keempat lo- gam berat dilakukan dengan cara digesti ba- sah berdasarkan cara kerja penetapan batas angka logam cemaran yang tercantum dalam aturan BPOM tentang persyaratan mutu obat tradisional.

## 4.  HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada penelitian ini, di gunakan sampel daun sirih merah yang telah dibuktikan kebenaran identitasnya. Determinasi dilakukan di Materia Medika Batu Malang. Kebenaran identitas sampel dibuktikan dengan hasil determinasi yang menyatakan bahwa sampel yang digunakan merupakan daun sirih merah
Gambar 1. Daun sirih merah
Gambar 2 . Hasil ekstraksi daun sirih merah

## Penetapan Organoleptik
Penetapan organoleptik dilakukan dengan mengamati bentuk fi sik dari ekstrak daun sirih merah yang bertujuan sebagai pengenalan awal menggunakan panca indra dengan mendeskrip- sikan bentuk, warna, bau, dan rasa (Depkes RI, 2000). Daun sirih merah tumbuhnya merambat dengan batang bulat hijau keunguan, tidak me- miliki bunga, daunnya bertangkai membentuk jantung hati dan bagian atasnya meruncing ser- ta permukaan daunnya keperakan dan meng- kilap (sudewo, 2005). Ekstrak etanol daun sirih merah secara organoleptik adalah ekstrak kental,
Jurnal Kesehatan Kusuma Husada - Januari 2019
berwarna hijau tua, bau khas daun, dengan rasa pahit pedas.

## Penetapan kadar air
Prinsip dari penentuan kadar air yaitu menguapkan air dengan pembawa cairan kimia yang mempunyai titik didih lebih tinggi daripada air dan tidak dapat bercampur dengan air. Kadar air dalam sediaan obat tradisional termasuk ekstrak tidak boleh melebihi batas 10 % (Depkes RI, 1994). Lihat tabel 1
Tabel 1. Hasil Pengujian Kadar Air
Replikasi Persentase Referensi MMI I 6,793 II 6,796 III 6,796 Rata-rata 6,795 Tidak lebih dari 10%

## Penetapan Cemaran mikroba
Pengujian cemaran bakteri ini termasuk pada salah satu pengujian kemurnian ekstrak. Uji ini mencangkup penentuan jumlah mikroorgan- isme yang diperbolehkan dan untuk menunjukan tidak adanya bakteri tertentu didalam ekstrak. Pada ekstrak cemaran bakteri tidak ditemukan, dimana didalam ekstrak mengandung senyawa kimia fl avonoid, alkaloid senyawa polifenolat, tanin dan minyak atsiri yang berfungsi sebagai antibakteri(Juliantina et al, 2009). Pengujian angka lempeng total didapatkan hasil 0,9 x 10 2 koloni/g (< 10 4 koloni/g) dan Uji kapang khamir 1 x 10 2 koloni/g (< 10 3 koloni/g) menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun sirih merah yang di- hasilkan memenuhi persyaratan angka lempeng total dan angka khamir yang ditetapkan oleh Kepmenkes RI No: 55/Menkes/SK/I/2000 dan Peraturan Kepala BPOM RI Nomor 12 tahun 2014 tentang Persyaratan Mutu Obat Tradisional.
Tabel 2. Hasil rata-rata ALT dan kapang
Khamir Pengujian x ± SD Angka Lempeng total 0,9x10 2 ± 5 x10 -3 koloni/gram Angka kapang khamir 1,0x10 1 ± 1 x 10 -2 koloni/gram
Replika I Replika II Replika III Gambar 3. Angka lempeng total Replika I Replika II Replika III
Gambar 4. Angka kapang khamir
Penetapan kadar afl atoksin
A fl atoksin adalah mikotoksin yang dihasil- kan oleh kapang Aspergillus fl avus dan A. pa- rasiticus (IARC 2002). Kapang tersebut dapat mengontaminasi ekstrak dan akan menghasilkan toksin berupa a fl atoksin B1, B2, G1, dan G2 (Syarief et al . 2003). Jenis yang paling berbahaya dari keempat jenis a fl atoksin tersebut ialah a fl a- toksin B1. Kandungan a fl atoksin yang lebih ren- dah bersifat kronis dan dapat menyebabkan kank- er hati sedangkan kandungan yang tinggi bersifat akut dan berpengaruh terhadap kerusakan berb- agai jaringan tubuh manusia dan hewan (Kuni- holm, M. H., Lesi, O. A., Mendy, M., Akano, A.
O., Sam, O., Hall, A. J., ... & Kirk, G. D., 2008). Makanan yang terkontaminasi a fl atoksin  akan mengakibatkan kerusakan hati dan kanker hati apabila dikonsumsi secara teru menerus (Syarief, R., Ega, L., & Nurwitri, C. C. , 2003).
Uji a fl atoxin dilakukan untuk menjamin ekstrak tidak mengandung cemaran a fl atoxin yang dapat menyebabkan ketoksikan. Cemaran a fl atoxin dapat menyebabkan mutagenik (mutasi gen), teratogenik (menghambat pertumbuhan janin) dan karsinogenik (menimbulkan kanker pada jaringan). Adanya cemaran a fl atoxin pada ekstrak dapat membahayakan kesehatan (Khoirani, 2013). Hasil uji A fl atoksin  total (a fl atoksin B1, B2, G1 dan G2) menunjukkan < 0,84 μ g/kg dan a fl atoksin B1 menunjukkan hasil < 0,23 μ g/kg, hasil uji tersebut memenuhi kadar a fl atoksin total (a fl atoksin B1, B2, G1 dan G2) ≤ 20 μ g/kg dan a fl atoksin B1 ≤ 5 μ g/kg sehingga ekstrak etanol daun sirih memenuhi persyaratan yang telah ditetapkan. Hasil Uji dapat dilihat pada tabel III.
Tabel 3. Hasil Uji A fl atoksin
No Parameter Uji Hasil Persyaratan 1 A fl atoksin B1 < 0,23 μ g/kg ≤ 5 μ g/kg Memenuhi 2 A fl atoksin B2 < 0,19 μ g/kg - 3 A fl atoksin G1 < 0,23 μ g/kg - 4 A fl atoksin G2 < 0,19 μ g/kg - 5 A fl atoksin total < 0,84 μ g/kg ≤ 20 μ g/kg
Memenuhi

## Penetapan cemaran logam berat
Penetapan kadar logam berat ini dilakukan menggunakan Atomic Absorbtion Spectroscopy (AAS). Standardisasi parameter non spesi fi k ekstrak etanol daun sirih merah dilakukan untuk menetapkan batas maksimal material berbahaya dan bersifat toksik bagi kesehatan seperti logam berat Pb, Cd, As, dan Hg yang diperbolehkan dalam ekstrak. Oleh karena itu pengujian logam berat sangat penting dilakukan dalam
standardisasi ekstrak tanaman obat (Menteri Kesehatan, R. I. 2009).
Timbal adalah logam yang bersifat toksik terhadap manusia. Logam ini berasal dari makanan dan minuman yang terkontaminasi Pb, debu yang tercemar Pb, kontak dengan kulit, mata, melalui parenteral atau melalui inhalasi dari udara (Widowati, W., Sastiono, A., & Jusuf, R. 2008). Kadmium adalah logam yang sangat toksik dengan waktu paruh yang cukup lama. Pada orang dewasa, kadmium dapat menyebabkan kanker payudara, kegagalan reproduksi, penyakit kardiovaskuler atau paru-paru, bahkan dapat menyebabkan kemandulan.(Istarani, F. F., & Pandebesie, E. S. 2014). Arsen adalah salah satu logam toksik yang sering diklasi fi kasikan sebagai logam, tetapi lebih bersifat nonlogam. Gejala keracunan arsenik ringan dimulai dengan sakit kepala, jika tidak diobati akan mengakibatkan kematian(Darmono, 2009). Merkuri adalah logam berat yang mempunyai efek toksik dimana dapat menyerang sistem saraf pusat dan dapat menyerang ginjal (Al fi an, Z. 2006).
Berdasarkan paparan tentang bahaya logam- logam berat tersebut ekstrak harus memenuhi batas persyaratan cemaran yang telah ditetapkan. Hasil uji cemaran logam berat (Pb, Cd, As, dan Hg) ekstrak etanol daun sirih menggunakan metode Atomic Absorbtion Spectroscopy (AAS) dapat dilihat pada tabel IV.
Tabel 4. Hasil Uji Cemaran Logam Berat
No Parameter Uji Hasil Persyaratan 1 Timbal (Pb) < 0,165 mg/kg ≤ 10 mg/kg Memenuhi 2 Kadmium (Cd) < 0,159 mg/kg ≤ 0,3 mg/kg Memenuhi 3 Arsen (As) < 0,0217 mg/kg ≤ 5 mg/kg Memenuhi 4 Air raksa (Hg) < 0,018 mg/kg ≤ 0,5 mg/kg Memenuhi
Hasil uji cemaran logam berat, ekstrak etanol daun sirih merah masih dibawah batas maksimal yang diperbolehkan oleh pemerintah yaitu untuk timbal ≤ 10 mg/kg, kadmium ≤ 0,3 mg/kg, arsen ≤ 5 mg/kg, air raksa ≤ 0,5 mg/kg.

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada - Januari 2019
Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun sirih merah aman digunakan karena cemaran logam beratnya termasuk kategori aman

## 5. KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun sirih merah ( Piper crocatum Ruiz & Pav) memenuhi persyaratan berdasarkan Parameter Ekstrak Tumbuhan Obat (Kepmenkes RI No: 55/Menkes/SK/I/2000) dan Peraturan Kepala BPOM RI Nomor 12 tahun 2014 tentang Persyaratan Mutu Obat Tradisional.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustanti, L. 2008 . Potensi Daun Sirih Merah (Piper crocatum) sebagai Aktivator Enzim Glukosa Oksidase . Skripsi. IPB. Bogor, 33 Al fi an, Z. 2006. Merkuri: Antara manfaat dan efek penggunaannya bagi kesehatan manusia dan lingkungan. Avaliable: http:// library. usu. ac. id/download/e-book/zul% 20al fi an. pdf.10Agustus2018 .
Bambang Sudewo. 2005 . Jenis-jenis Sirih Berkhasiat Obat. Trubus No. 278 Th. XXIV
BPOM RI. 2014. Persyaratan Mutu Obat Tradisional, Peraturan Kepala Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Indonesia, p. 1–25 Darmono, 2009 . Farmasi Forensik Dan Toksikologi. Jakarta : UI Press Depkes RI. 2000. Parameter standar umum ekstrak tumbuhan obat. Cetakan Pertama. Jakarta. Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan
Depkes RI. 1999. Keputusan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor: 661/MENKES/ SK/VII/1994 tentang Persyaratan Obat Tradisional. Jakarta: Departemen Kesehatan Republik Indonesia
Dewi, Y, F., Anthara, S, M, Dharmayudha, A, G, O. 2014 . Efekti fi tas ekstrak daun sirih merah ( Piper crocatum ) terhadap penurunan kadar glukosa darah tikus putih jantan ( Rattus novergicus ) yang diinduksi alloksan . Bulettin vetereiner udayana ISSN : 2085-2495: Vol. 6 No. 1
IARC Working Group on the Evaluation of Carcinogenic Risks to Humans, World Health Organization, & International Agency for Research on Cancer . 2002. Some traditional herbal medicines, some mycotoxins, naphthalene and styrene (No. 82). World Health Organization
Istarani, F. F., & Pandebesie, E. S. 2014. Studi dampak arsen (As) dan kadmium (Cd) terhadap penurunan kualitas lingkungan . Jurnal Teknik ITS, 3(1), D53-D58. Januari 1993. Bandung
Juliantina, F., Citra, D. A., Nirwani, B., Nurmasitoh, T., & Bowo, E. T. 2009. Manfaat sirih merah (Piper crocatum) sebagai agen antibakterial terhadap bakteri gram positif dan gram negatif. Jurnal Kedokteran dan Kesehatan Indonesia, 1(1), 12-20.
Khoirani N. 2013 . Karakterisasi Simplisia dan Standarisasi Ektrak Etanol Herba Kemangi (Ocimum americanumL. Skripsi. Program Studi Farmasi, Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Syarif Hidayahtullah,
Jakarta, 45.
Kuniholm, M. H., Lesi, O. A., Mendy, M., Akano, A. O., Sam, O., Hall, A. J., & Kirk, G. D. 2008. A fl atoxin exposure and viral hepatitis in the etiology of liver cirrhosis in the Gambia, West Africa . Environmental health perspectives, 116(11), 1553.
Menteri Kesehatan, R. I. 2009 . Kepmenkes RI No.
261 Tahun 2009 tentang Farmakope Herbal Indonesia. ed I. Jakarta: Menteri Kesehatan Republik Indonesia. hal, 170-171.
Prapti, U. dan Puspaningtyas, D.E. 2013. The Miracles of Herbs. Jakarta: Agromedia Pustaka
Syarief, R., Ega, L., & Nurwitri, C. C. 2003.
Mikotoksin bahan pangan. Bogor: Institut Pertanian Bogor Press
Widowati, W., Sastiono, A., & Jusuf, R. 2008. Efek Toksik Logam: Pencegahan dan Penanggulangan Pencemaran . Yogyakarta: Penerbit Andi. hlm 2-206