ISSN: 1410-8917 Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 14 (3) (2011) : 83 – 88

## Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi

## Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Peningkatan Derajat Deasetilasi Kitosan dari Cangkang Rajungan dengan Variasi Konsentrasi NaOH dan Lama Perendaman
Mike T. L. Tobing a , Nor Basid Adibawa Prasetya a , Khabibi a*
a Analytical Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: khabibi@live.undip.ac.id Art ic le   Info Ab s t rac t Keywords: chitin, chitosan, deacetylation degree Research on chitosan deacetylation degree from shrimp shell has been done. This study aims  to  determine  the  effect  of  NaOH  concentration  and  soaking  time  to  degrees  of chitosan  deacetylation.  The  study  began  by  isolating  chitin  via  the  deproteination, demineralization,  and  depigmentation  stages  using  3M  NaOH,  1M  HCl  and  H 2 O 2 3% respectively. Furthermore, chitin obtained was analyzed by FTIR. Chitin production was performed  by  deacetylation  of  chitin  by  performing  two  variations  i.e.  variation  of immersion  time  for  2,  4,  6,  and  8  hours  and  variation  of  NaOH  concentration  with concentrations of 40, 50, 60, and 70%. Furthermore, the chitosan obtained was analyzed by  FTIR  method.  The  results  showed  that  the  greatest  deacetylation  degree  in  soaking conditions for 8 hours with DD was 77.99% and 70% NaOH  concentration with DD was 77%. The increase in deacetylation degree was influenced by  the increase of immersion time and NaOH concentration.

## Ab s t rak
Kata kunci: kitin, kitosan, derajat deasetilasi Telah  dilakukan  penelitian  tentang  derajat  deasetilasi  kitosan  dari  cangkang  rajungan. Penelitian ini bertujuan menentukan pengaruh konsentrasi NaOH dan lama perendaman terhadap derajat deasetilasi kitosan. Penelitian dimulai dengan mengisolasi kitin melalui tahap  deproteinasi, demineralisasi, dan  depigmentasi  menggunakan  NaOH  1M, HCl  1M dan H 2 O 2 3% secara berurutan. Selanjutnya kitin yang diperoleh dianalisis dengan FTIR. Produksi kitosan dilakukan dengan cara deasetilasi kitin dengan melakukan dua variasi yaitu waktu perendaman selama 2, 4, 6, dan 8 jam dan variasi konsentrasi NaOH dengan konsentrasi  40, 50, 60, dan 70%. Selanjutnya kitosan yang diperoleh dianalisis dengan metode  FTIR.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  derajat  deasetilasi  terbesar  pada kondisi perendaman selama 8 jam dengan DD sebesar 77,99% dan konsentrasi NaOH 70% dengan DD sebesar 77%. Kenaikan derajat deasetilasi dipengaruhi oleh kenaikan waktu perendaman dan konsentrasi NaOH.

## 1. Pendahuluan
Sebagai  negara  maritim,  Indonesia  mempunyai potensi hasil perikanan laut yang sangat melimpah, salah satu potensi ini adalah rajungan yang akan menghasilkan limbah  yang  berupa  cangkang  rajungan.  Cangkang rajungan  banyak  mengandung  kitin  yang  mencapai 18,70-32,20%,  tergantung  pada  jenis  rajungan  dan tempat  hidupnya.  Kitin  dapat  diisolasi  dari  limbah rajungan.  Kitin,  merupakan  polimer  berantai  lurus
tersusun atas residu N-asetilglukosamina melalui ikatan ß-(1 ,4) Melalui deasetilasi dengan basa kuat, kitin dapat diubah  menjadi  kitosan.  Perlakuan  ini  mengakibatkan terlepasnya ikatan N-asetil, sehingga mengubah satu N- asetilglukosamin menjadi satuan glukosamin [1, 2].
Secara  umum  kitin  banyak  terdapat  pada eksoskeleton  atau  kutikula  serangga,  crustacea,  dan jamur  [3].  Lebih  dari  80.000  metrik  ton  kitin  diperoleh dari limbah laut dunia per tahun [4], di Indonesia limbah
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 14 (3) (2011) : 83 – 88
kitin  yang  belum  dimanfaatkan  sebesar  56.200  metrik ton per tahun.
Sekitar  35%  dari  cangkang  rajungan  mengandung kitin.  Dari  kitin  rajungan  dapat  dihasilkan  sekitar  80% kitosan (No dan Meyer, 1997). Harga kitosan di pasaran dunia  adalah  sekitar  US$  7.5/10g  untuk  kitosan  dengan standar  baik.  Saat  ini,  90%  pasaran  kitosan  dunia dikuasai oleh Jepang dengan produksi lebih dari 100 juta ton  setiap  tahunnya  [3].  Indonesia  dengan  potensi  laut lebih  luas  daripada  Jepang  mempunyai  peluang  untuk mengambil bagian dari pasaran kitosan dunia.
Secara  struktur  kimia,  kitosan  adalah  kitin  yang telah  mengalami  deasetilasi  (kehilangan  gugus  asetil). Isolasi kitin dari kulit udang/kepiting biasanya dilakukan dalam  tiga  tahap.  Pertama, tahap  penghilangan  protein (deproteinasi). Tahap ini bertujuan untuk menghilangkan  protein  menggunakan  NaOH.  Kedua, tahap penghilangan mineral (demineralisasi). Tahap ini dapat  dilakukan  dengan  menambahkan  larutan  asam klorida.  Tujuannya  untuk  menghilangkan  mineral- mineral  yang  ada  dalam  tepung  rajungan,  terutama kalsium.  Ketiga,  tahap  penghilangan  warna.  Tahap  ini dapat  dilakukan  atau  tidak  tergantung  keperluan. Penghilangan  warna  dapat  menggunakan  larutan oksidator, seperti asam oksalat, H 2 O 2 atau KMnO 4 . Kitin kemudian di deasetilasi menggunakan basa kuat seperti NaOH dan KOH [5].
Derajat  deasetilasi  kitosan  yang  dihasilkan  sangat dipengaruhi  konsentrasi  NaOH  [6].  Larutan  NaOH konsentrasi  tinggi  (>40%)  akan  memutuskan  ikatan gugus asetil dengan atom nitrogen dari kitin. Tingginya konsentrasi  NaOH  menyebabkan  gugus  fungsional amino  (-NH 3+ )  yang  mensubstitusi  gugus  asetil  kitin  di dalam  sistem  larutan  semakin  aktif  sehingga  proses deasetilasi semakin baik. Melihat pengaruh dari larutan NaOH  terhadap  derajat  deasetilasi  kitosan,  maka  pada penelitian  ini  menggunakan  variasi  konsentrasi  larutan NaOH mulai dari kontrasi 40%, 50%, 60%, hingga 70% sebagai  dasar  penelitian  untuk  meningkatkan  derajat deasetilasi kitosan.
Selain  konsentrasi  NaOH,  derajat  deasetilasi  juga dipengaruhi  lama  perendaman  dalam  NaOH  yang mengakibatkan  terjadinya  depolimerisasi  memutuskan ikatan  antara  gugus  karboksil  dengan  atom  nitrogen. Melihat  pengaruh  dari  perendaman  dalam  NaOH terhadap derajat deasetilasi kitosan , pada penelitian ini digunakan variasi lama perendaman dalam NaOH mulai dari  waktu  2,  4,  6,  hingga  8  jam  untuk  meningkatkan derajat deasetilasi kitosan.

## 2. Metodologi

## Isolasi Kitin
Limbah cangkang rajungan dicuci dan dikeringkan. Selanjutnya dibuat serbuk rajungan dengan cara digiling kemudian  diayak  pada  ukuran  100  mesh.  Serbuk cangkang  rajungan  kering  sebanyak  100  gram dideproteinasi  dengan  penambahan  500  mL  larutan NaOH  1M  selama  3  jam  pada  suhu  80°C  dengan pengadukan  terus  menerus.  Campuran  disaring  dan
residu  dicuci  dengan  akuades  sampai  netral,  kemudian tahap  demineralisasi  dengan  penambahan  500  mL  HCl 1M,  didiamkan  selama  12  jam  pada  temperatur  ruang. Campuran  yang  didapat  lalu  disaring  dan  residu  dicuci dengan  akuades  hingga  netral.  Tahap  pemutihan dilakukan  dengan  penambhan  100  mL  H 2 O 2 3% didiamkan selama 24 jam. Campuran disaring kemudian dicuci  dengan  akuades  dikeringkan  dalam  oven  pada suhu  80°C  selama  4  jam.  Hasil  dianalisis  dengan menggunakan spektrofotometri FTIR

## Variasi Konsentrasi NaOH
Kitin  yang  telah  dihasilkan  pada  proses  diatas dimasukkan dalam larutan NaOH dengan konsentrasi 40, 50, 60,  dan  70%  (berat)  pada  suhu  80°C  sambil  diaduk kecepatan  konstan  selama  4  jam.  Campuaran  disaring kemudian  dicuci  dengan  aquades,  dikeringkan  dalam oven  pada  suhu  80°C  selama  4  jam.  Maka  terbentuklah kitosan.  Selanjutnya  kitosan  yang  diperoleh  dianalisis dengan menggunakan metode FTIR.

## Variasi Waktu Perendaman
Kitin  yang  telah  dihasilkan  pada  proses  diatas dimasukkan  dalam  larutan  NaOH.  Transformasi  kitin menjadi  kitosan  dilakukan  melalui  deasetilasi  dengan NaOH 60% sebanyak 500 mL sambil terus diaduk dengan variasi waktu perendaman 2, 4, 6, dan 8 jam pada suhu 80°C.  Campuran  disaring  kemudian  dicuci  dengan akuades, dikeringkan dalam oven pada suhu 80°C selama 4  jam.  Maka  terbentuklah  kitosan.  Selanjutnya  kitosan yang diperoleh dianalisis dengan menggunakan  metode FTIR.  Penentuan  derajat  deasetilasi  dilakukan  dengan menggunakan persamaan Domszy dan Robrts.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Isolasi Kitin
Proses  isolasi  kitin  dari  cangkang  rajungan dilakukan melalui beberapa tahap. Tahap yang pertama adalah  tahap  deproteinasi  yaitu  tahap  penghilangan protein  dari  cangkang  rajungan  dengan  menggunakan reagen NaOH 1M. Pada saat deproteinasi larutan menjadi agak mengental dan berwarna kemerahan. Larutan yang agak  mengental  tersebut  karena  adanya  kandungan protein dari dalam crude kitin yang terlepas dan berikatan dengan  ion  Na + ,  membentuk  natrium  proteinat. Crude kitin  hasil  tahap  deproteinisasi  dicuci  dengan  aquades untuk menghilangkan sisa NaOH yang masih menempel pada crude kitin.
Gambar 1. Reaksi deproteinasi
Tahap  selanjutnya  yaitu  demineralisasi,  bertujuan untuk menghilangkan mineral atau senyawa anorganik yang  terdapat  pada crude kitin.  Kandungan mineral utama didalam kulit udang adalah CaCO 3 . Proses
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 14 (3) (2011) : 83 – 88
demineralisasi  dilakukan  dengan  menggunakan  larutan HCl 1M. Pada proses ini, senyawa kalsium akan bereaksi dengan asam klorida menghasilkan kalsium klorida yang larut dalam air, gas CO 2 dan air HCl. Reaksi yang terjadi adalah sebagai berikut
CaCO 3(s) + 2HCl → CaCl 2(aq) + H 2 O + CO 2(g)
Crude kitin hasil tahap demineralisasi dicuci dengan aquades  untuk  menghilangkan  sisa  HCl  yang  masih menempel pada crude kitin. Setelah demineralisasi, maka crude kitin  melalui  tahap  depigmentasi  bertujuan  untuk penghilangan  warna  (pigmen)  yang  terkandung  dalam crude kitin,  yaitu red-orange  astaxanthin, suatu  jenis karotenoid. Hasil yang diperoleh kemudian dicuci dengan akuades hingga pH netral. Produk yang dihasilkan adalah kitin kemudian dilakukan uji dengan menggunakan FTIR untuk  mengidentifikasi  gugus  fungsi  dan  menentukan derajat  deasetilasi.  Derajat  desetilasi  diartikan  sebagai persentase  banyaknya  gugus  asetil  yang  hilang  dan digantikan  dengan – H  saat  proses  deasetilasi, Berdasarkan  perhitungan Base  line ,  diperoleh  derajat deasetilasi  kitin  sebesar  55,74%.  Derajat  deasetilasi tersebut  menunjukkan  adanya  gugus  NH 2 sebesar 55,74% dan gugus asetil yang tersisa pada kitin sebesar 44.26%. Spektra FTIR kitin ditunjukkan pada gambar 2
Gambar 2. Spektra FTIR Kitin
Tabel 1. Bilangan gelombang dan gugus yang terdapat pada kitin sesuai
Bilangan gelombang (cm -1 ) Prediksi gugus 3448,72 Uluran O-H dan uluran N-H
2931,80
Regangan C-H alifatik 1627,92 Uluran C=O amida sekunder 1427,32 C-H alkil 1072,42 Uluran C-O
Berdasarkan spektra yang dihasilkan pada gambar 2, terlihat  ada  beberapa  puncak  khas  yang  menunjukkan ciri  spesifik  struktur  kitosan.  Misalnya  pada  puncak 1072,42  cm -1 yang  menunjukkan  adanya  gugus  eter, – CH 3 pada  bilangan  gelombang  1427,32  cm -1 ,  puncak 1627,92  cm -1 menunjukkan  adanya  gugus  C=O  yang menunjukkan  keberadaan  amida,  puncak  2931,80  cm -1 menunjukkan  adanya  uluran  C-H, puncak  3448,72  cm -1 yang  menunjukkan  adanya  gugus  alkohol  yang berimpitan  dengan  uluran  NH  dan  beberapa  puncak
serapan lain yang memperkuat adanya struktur khitosan pada sampel yang diuji.

## Pengaruh Variasi Konsentrasi NaOH dalam Proses Transformasi Kitin
Kitin  hasil  isolasi  dilakukan  proses  deasetilasi menggunakan  variasi  konsentrasi  NaOH.  Untuk menentukan  konsentrasi  NaOH  maksimal, maka  proses deasetilasi  ini  dilakukan  dengan  konsentrasi  NaOH bervariasi  yaitu  40,  50,  60  dan  70%.  Hasilnya  di  FTIR sebagaimana  pada  Gambar  3,  4,  5  dan  6.  Penggunaan konsentrasi  NaOH  yang  tinggi  pada  proses  deasetilasi diharapkan  akan  menghasilkan  rendemen  kitosan  yang memiliki  derajat  deasetilasi  tinggi.  Hal  ini  disebabkan gugus  fungsional  amino  (-NH 3+ )  yang  mensubtitusi gugus asetil kitin di dalam sistem larutan semakin aktif, maka semakin sempurnalah proses deasetilasi.
Penggunaan  NaOH  konsentrasi  tinggi  digunakan karena  struktur  kitin  yang  tebal  dan  ikatan  hidrogen mempunyai karboksil pada rantai berikutnya serta untuk memutuskan ikatan antara gugus karboksil dengan atom nitrogen. Hal ini sesuai pula dengan pendapat  Martinou dkk. [7]  yang  menyatakan  bahwa  larutan  NaOH  mampu merubah  konformasi  kitin  yang  sangat  rapat  menjadi renggang  sehingga  lebih  mudah  terekspos  untuk mendeasetilasi polimer kitin.
Hasil percobaan dapat dilihat pada grafik pengaruh penambahan  konsentrasi  NaOH,  menunjukkan  bahwa derajat  deasetilasi  terbesar  terjadi  pada  konsentrasi NaOH  70%  yaitu  sebesar  77%.  Konsentrasi  NaOH semakin  meningkat  mengakibatkan  derajat  deasetilasi meningkat. Konsentrasi NaOH yang semakin besar yaitu dari 40% menjadi 50% meningkatkan derajat deasetilasi sebesar  1.12%  (dari  72.80%  menjadi  74.%).  Pada konsentrasi  NaOH  yang  ketiga  dari  50%  menjadi  60% hanya  meningkatkan  derajat  deasetilasi  sebesar  0.85% (dari 74.% menjadi 74.85%). Kemudian pada konsentrasi NaOH  yang  terakhir  meningkatkan  derajat  deasetilasi sebesar 2.15% ( dari 74.85.% menjadi 77%).
Gambar 3. Spektra FTIR Kitosan dengan variasi konsentrasi NaOH 40%
Gambar 4. Spektra FTIR Kitosan dengan variasi konsentrasi NaOH 50%
Gambar 5. Spektra FTIR Kitosan dengan variasi konsentrasi NaOH 60%
Gambar 6. Spektra FTIR Kitosan dengan variasi konsentrasi NaOH 70%
Tabel 2. Hasil perhitungan derajat deasetilasi kitosan pada variasi konsentrasi NaOH selama 4 jam pada suhu
80°C Konsentrasi NaOH (%) Berat kitosan (gram) 40 6,75 50 6,44 60 6,59 70 5,12
Hasil  serupa  juga  diperoleh  oleh  penelitian Azhar,dkk (2010) terhadap kulit udang yang menyatakan derajat deasetilasi produk  yang direndam dengan NaOH 40%  dan  50%  pada  suhu  100°C  dengan  waktu perendaman  kitin  300  menit  menghasilkan  derajat deasetilasi  59.31%,  dan  66.67%  yang  juga  meningkat.
Perbedaan  nilai  derajat  deasetilasi  ini  mungkin  karena sampel kulit udang yang digunakan masih dalam bentuk kasar  (belum  diayak)  sehingga  reaksi  penghilangan gugus asetil berjalan dengan lambat.
Gambar 7. Pengaruh Penambahan Konsentrasi NaOH terhadap Nilai DD
Pengaruh  Variasi  Lama  Perendaman  dalam  Proses Transformasi Kitin
Proses  transformasi  kitin  dengan  variasi  lama perendaman  digunakan  untuk  mengetahui  lama perendaman optimum reagen untuk proses pembentukan  kitosan  dengan  derajat  deasetilasi terbesar.  Lama  perendaman  kitin  dalam  NaOH berpengaruh  terhadap  pemecahan  rantai  molekul  kitin [7]. Perendaman dalam NaOH dilakukan terhadap sampel kitin  dalam  bentuk  tepung  dengan  ukuran  100  mesh. Penepungan  dilakukan  agar  proses  deasetilasi  dapat berlangsung lebih cepat dan sempurna, karena semakin luasnya  permukaan  yang  dapat  diakses  oleh  larutan alkali.
Derajat  deasetilasi  adalah  suatu  parameter  mutu yang menunjukkan gugus asetil yang dapat dihilangkan dari  kitin.  Semakin  tinggi  derajat  deasetilasi  kitosan, maka gugus asetil yang terdapat dalam kitosan tersebut semakin  sedikit  [5].  Pengaruh  lama  perendaman terhadap  derajat  deasetilasi  dapat  dilihat  pada  grafik pengaruh  waktu  perendaman  NaOH  terhadap  derajat deasetilasi  sebagaimana  pada  Gambar  7,  8,  9  dan  10. Derajat deasetilasi terbesar didapatkan pada perendaman NaOH 60% pada 80 o C selama 8 jam sebesar
77.99%. Lama perendaman NaOH meningkat mengakibatkan derajat deasetilasi meningkat, sedangkan  perendaman  yang  semakin  tinggi  dari  2  jam sampai  4  jam  meningkatkan  derajat  deasetilasi  sebesar 3.31% (dari 71.54% menjadi 74.85%). Pada perendaman yang  ketiga  dari  4  jam  menjadi  6  jam  hanya meningkatkan  derajat  deasetilasi  sebesar  1.35%  (dari 74.85%  menjadi  76.2%).  Kemudian  pada  perendaman yang  terakhir  meningkatkan  derajat  deasetilasi  sebesar 1.79%  (dari  76.20%  menjadi  77.99%).  Besaran peningkatan  derajat  deasetilasi  menunjukkan  bahwa lama  perendaman  berpengaruh  terhadap  kenaikan derajat deasetilasi.
Gambar 8. Spektra FTIR Kitosan dengan variasi
Perendaman selama 2 jam
Gambar 9. Spektra FTIR Kitosan dengan variasi Perendaman selama 4 jam
Gambar 10. Spektra FTIR Kitosan dengan variasi Perendaman selama 6 jam
Gambar 11. Spektra FTIR Kitosan dengan variasi Perendaman selama 8 jam
Tabel 3. Hasil perhitungan derajat deasetilasi kitosan pada variasi lama waktu perendaman dengan konsentrasi 60% dan suhu 80°C Waktu Perendaman (jam) Berat kitosan (gram) 40 6,47 50 6,59
60
6,19
70
5,04
Gambar 12. Pengaruh Perpanjangan Waktu Perendaman Naoh terhadap Nilai DD
Hasil  serupa  juga  diperoleh  oleh  penelitian  A Emmawati,  dkk (2000)  yang  menyatakan  derajat deasetilasi  produk  yang  direndam  dengan  NaOH  60% pada suhu 60°C dengan waktu perendaman kitin 60, 90, 120  dan  180  menit  menghasilkan  derajat  deasetilasi 50,88%,  53,26%,  54,65%,  dan  64,31%  yang  juga meningkat. Perbedaan nilai derajat deasetilasi ini karena suhu  perendaman  NaOH  yang  digunakan  lebih  rendah (60°C).  Kondisi  awal  kitin,  seperti  derajat  deasetilasi awal,  juga  berpengaruh  terhadap  perbedaan  derajat deasetilasi  akhir.  Dalam  hal  ini,  penelitian  Emmawati dkk. [8]  kondisi  awal  kitin  yang  dihasilkan  sebesar 42,22%. Sementara dalam penelitian ini, digunakan kitin dengan derajat deasetilasi awal sudah cukup besar, yaitu 55,74%.
Dengan  demikian  kenaikan  derajat  deasetilasi dipengaruhi  oleh  kenaikan  perpanjangan  waktu perendaman,  sedangkan  lama  perendaman  dan konsentrasi NaOH juga berpengaruh terhadap pemecahan rantai molekul.

## 4. Kesimpulan
Kitosan  dapat  dihasilkan  dari  cangkang  rajungan . Pada  penelitian  ini  dilakukan  variasi  lama  perendaman selama  2,  4,  6  dan  8  jam  dalam  transformasi  kitin  dan memberikan  derajat  deasetilasi  yang  maksimal  pada perendama selama 8 jam sebesar 77,99% Pada penelitian ini  dilakukan  variasi  konsentrasi  NaOH  40,  50,  60  dan 70% dan memberikan derajat deasetilasi yang maksimal pada konsentrasi NaOH 70% sebesar 77%

## 5. Daftar Pustaka
[1]  M  Enick  Robert,  J  Beckman  Eric,  The  Chitin Chemistry, (1992)
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 14 (3) (2011) : 83 – 88
[2]  George AF Roberts, Structure of chitin and chitosan, in: Chitin Chemistry , Springer, 1992, pp. 1-53.
[3]  Iason Tsigos, Aggeliki Martinou, Dimitris Kafetzopoulos, Vassilis Bouriotis, Chitin
deacetylases:  new, versatile  tools  in  biotechnology, Trends  in  Biotechnology ,  18,  7,  (2000)  305-312 http://dx.doi.org/10.1016/S0167-7799(00)01462-1
[4]  Reetarani  S.  Patil,  Vandana  Ghormade,  Mukund  V. Deshpande,  Chitinolytic  enzymes:  an  exploration, Enzyme and Microbial Technology , 26, 7, (2000) 473-
483
http://dx.doi.org/10.1016/S0141-
0229(00)00134-4
[5]  Dietrich  Knorr,  Functional  Properties  of  Chitin  and Chitosan, Journal of Food Science , 47, 2, (1982) 593- 595 http://dx.doi.org/10.1111/j.1365-
2621.1982.tb10131.x
[6]  Soottawat  Benjakul,  Pairat  Sophandora,  Chitosan production  from  carapace  and  shell  of  black  tiger shrimp  (Panaeus  monodon), Asean  Food  Journal (Malaysia) , (1993)
[7]  A.  Martinou,  D.  Kafetzopoulos,  V.  Bouriotis,  Chitin deacetylation  by  enzymatic  means:  monitoring  of deacetylation processes, Carbohydrate Research , 273,
2,  (1995)  235-242 http://dx.doi.org/10.1016/0008- 6215(95)00111-6
[8]  Aswita Emmawati, Betty Sri Laksmi Jenie, Yusro Nuri Fawzya,  Produksi  Kitosan  Dengan  Kombinasi Perlakuan Kimia Dan Enzimatis Menggunakan NaOH dan Kitin Deasetilase, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor, Bogor