KADAR TESTOSTERON SERUM  DAN  CASPASE-3 AKTIF SEL LEYDIG  PADA TIKUS JANTAN Sprague Dawley DIABETES MELITUS  AKIBAT PEMBERIAN SUSPENSI BUBUK KACANG KEDELAI KUNING ( Glycin max )
Wiyadi 1)
1) Dosen Jurusan Keperawatan Politeknik Kesehatan Kemenkes Kaltim

## ABSTRAK
Diabetes  melitus  merupakan  salah  satu  penyebab  kematian  utama  di  dunia karena  komplikasi-komplikasi  yang  ditimbulkan.    Kompliksi  kronis  pada  system reproduksi  pria  yang  sering  adalah  penurunan  kadar  testosteron.  Hormon  ini diproduksi  di  dalam  sel  Leydig.    Kacang  kedelai  kuning  ( G.  max )  mengandung berbagai  komponen  nutrisi  yang  dapat  sebagai  antidiabetik,  antikolesterol, antiosteoporosis  dan  antikanker  prostate.  Kacang  kedelai  kuning  juga mengandung  fitoestrogen  yang  merupakan  estrogenik  eksogen  yang  dapat menurunkan  kadar  testosteron.  Penelitian  ini  bertujuan  menilai    kadar  serum testosteron  dan  caspase-3  aktif    sel  Leydig  pada  tikus  jantan SD diabates  yang diinduksi  STZ  akibat  pemberian  suspensi  bubuk  kedelai  kuning.    Penelitian  ini menggunakan rancangan penelitian eksperimen dengan design pre and post test control  group. Penelitian  ini    dilakukan  pada    tikus  jantan SD sebanyak  30  ekor terbagi  dalam  5  kelompok.    Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  sebelum  dan sesudah  pemberian  suspensi  bubuk  kacang  kedelai  kuning  ( G.  max) 400mg/kgBB/hr,  800  mg/kgBB/hr  dan  1600  mg/kgBB/hr  selama  4  minggu  tidak meningkatkan  kadar  testosteron  serum  secara  signifikan  (p>0,05)    dan  tidak menghambat  caspase-3  aktif  sel  Leydig  secara  signifikan  (p>0,05)  setelah pemberian  suspensi    bubuk G.  max .    Suspensi  bubuk G.  max tidak  memberikan efek terhadap kadar testosteron serum  dan tidak menghambat caspase-3 aktif  sel Leydig pada tikus jantan SD diabetes yang dinduksi STZ .

## ABSTRACT
Yellow soybeans (G. max) contain a variety of nutritional components which can be as antidiabetik, antikolesterol, antiosteoporosis and anticancer of  prostate. G. Max also  contain  Phytoestrogens  which  is  exogenous  oestrogenic  that  can  decrease testosterone levels. This research aims to assess the levels of serum testosterone and caspase-3 in rat Leydig cell active male SD diabates STZ induced due to the grant of suspension of G. max powder. This research uses experimental research design  with  design  pre  and  post  test  control  group.  This  research  was  conducted on the 30 male rats,  divided in 5 groups. The results showed that before and after the grant of suspension of G. max powder  400 mg capsule/kg/day, 800 mg/kg/day and  1600  mg/kg/day  for  4  weeks  do  not  increase  serum  testosterone  levels  were significantly (p> 0.05) and do not inhibit  caspase-3 Leydig cells  active significantly (p  >0.05)  after  the  grant  of  suspension  of G.  max powder. G.  max powder suspension  does  not  give  effect  to  serum  testosterone  levels  and  does  not  inhibit caspase-3 in rat Leydig cell active male SD diabetes which inducted STZ.
Keywords: G.max, Testosterone serum, Diabetes mellitus
Pendahuluan Diabetes  melitus  (DM)  atau
yang dikenal sebagai penyakit kencing  manis    merupakan  salah satu penyebab kematian yang utama di  dunia.  Badan  Kesehatan  Dunia pada  tahun    2003  memperkirakan 194  juta  jiwa  atau  5,1  %  dari  3,8 miliar penduduk berusia 20-79 tahun menderita DM dan pada tahun 2025 diperkirakan  meningkat  menjadi  333 juta  jiwa.  Sedangkan  di  Indonesia penderita DM juga mengalami kenaikan    dari  8,4  juta  jiwa  pada tahun 2000 menjadi sekitar 21,3 juta jiwa pada tahun 2030. Diabetes  melitus  pada  pria dapat menyebabkan infertil. Penderitia  DM memiliki kadar serum testoteron, luteinizing  hormone (LH) dan follicle  Stimulating  hormone (FSH)  yang  rendah,  hipoalbumenia, hiperkolesterol  dan  hiperglikemia yang  dapat  mempengaruhi  fungsi seksual,    dan  kapasitas  reproduksi pada  puncak  masa  reproduktsi. Testoteron  bebas  dan  testosterone total dibawah normal pada penderita dengan  DM  tipe  2.  Kadar  tes- tosteron  yang  rendah  berkaitan  erat dengan  resistensi  insulin,  hiper- glikemia,  hipertensi,  disli-pidemia, dan  meningkatnya  risiko  penyakit pembuluh darah 6 .  Kadar testosteron yang  rendah  juga  disebabkan  oleh tingginya  aktivitas  aromatase  pada jaringan lemak yang berperan penting  pada  perubahan  testosteron menjadi  estradiol  dan  banyaknya estradiol menekan hipotalamus hipofisis aksis. Hiperglikemia pada DM dapat meningkatkan produksi Reactive  Oxygen  Species (ROS) intraseluler melalui empat jalur yaitu: peningkatan  glikolisis,  aktivasi  jalur intraseluler  sorbitol  (polyol),  auto- oxidasi  glukosa,  dan  glikosilasi protein non-enzimatik yang berperan  penting  pada  patogenesis
komplikasi diabetes.  Sel Leydig juga merupakan  salah  satu  sel  yang terletak  dekat  dengan  makropag interstesial testiskuler sumber  ROS. Reactive  Oxygen  Species (ROS) diproduksi  terus  menerus  di  dalam sel  pada  mitokondria  dan  rantai reaksi transport elektron serta proses metabolisme. Enzim steroidogenik  sitokrom  P450arom  di dalam  sel  Leydig  juga  memproduksi
ROS  sebagai  mekanisme  reaksi katalitik 9 . Reactive  Oxygen  Species (ROS)  yang  banyak  akan  memblok tranport kolesterol dan  menghambat steroidogenesis  serta  merusak  sel Leydig  sehingga  produksi  testoteron menurun. Reactive  Oxygen  Species
(ROS) yang meningkat pada penderita  DM  menyebakan  ter- jadinya apoptosis sel Leydig. Diabetes  melitus  merupakan
penyakit yang kronis sehingga memerlukan  pengobatan  seumur hidup. Diabetes yang kronis membutuhkan pengobatan yang lama dan biaya besar. Menurut data WHO,  biaya  yang  harus  dikeluarkan sebagai implikasi ekonomis komplikasi DM kurang lebih mencapai 46.207 dolar AS pertahun.  Pengelolaan  DM  untuk mencegah timbulnya komplikasi lebih  lanjut  diperlukan  managemen pengelolaan diabetes, salah satunya adalah  penggunaan  diet  dari  bahan baku  kacang  kedelai  kuning  guna mempertahankan  kadar  gula  darah dalam  batas  normal.    Kacang kedelai  dapat  membantu  menu- runkan    kadar  gula  darah  yang melebihi  batas  normal  tersebut, sehingga  sangat  membantu  me- ngendalikan gejala diabetes 14,15 . Kacang  kedelai  juga  bermanfaat untuk  meningkatkan  pengontrolan metabolisme  lipid,    aktifitas  enzim antioksidan  yang dapat  menurunkan stres  oksidasi  pada  penderita  DM tipe  2.  Kedelai  memiliki  kaya  akan
asam  amino  arginin  dan  glisin  yang merupakan  komponen  penyususn hormon  insulin  dan  glukogen  yang disekresi  oleh  kelenjar  pankreas tubuh 14 . Kacang  kedelai  juga  me-
ngandung isoflavon yaitu fito- estrogen (genistein dan daidzein ) yang struktur kimianya  mirip dengan 17-β-estradiol yang  disebut es- trogen–like  molecules atau  estrogen non-steroid. Efek fitoestrogen  dapat mendekati efek  fisiologi dari endogenus  17-β-estradiol sehingga terjadi kompetitif untuk ikatan dengan  ER 9 .  Pada  pria  atau  wanita menopause kadar estrogen endogen  rendah  sehingga    ikatan dari  fitoestrogen dan  17-β-estradiol manifestsinya  dapat  terlihat    berupa penurunan    kadar  testosteron  dan peningkatan  kadar  estrogen    pada pria  meskipun  menimbulkan  pro- kontra.
Kadar  serum    testosteron dan Luteinizing Hormone (LH) menurun  setelah    mengkosusmsi protein bubuk kedelai dan meningkat lagi setelah dihentikan.  Fitoestrogen pada periode perinatal dapat mempengaruhi  sekresi  androgen pada sel Leydig testis  tikus dewasa, penurunan kadar testosteron dengan mengubah pengiriman kolesterol kedalam  jalur  steroidogenesis  dan mempengaruhi jalur biosintesis produksi  androgen    tanpa  ada perubahan  LH, 5α-reduktase atau steroidogenic acute regulatory (StAR)  testis,  menghambat  enzim 17-β-hydroxysteroid  dehydrogenase pada tikus jantan SD.
Tujuan penelitian adalah menilai  penurunan    kadar  tes- tosteron  darah  setelah  pemberian suspensi  bubuk  kedelai  kuning  ( G. max )  pada  tikus  jantan  SD  diabetes yang  diinduksi  steptozotocin  dan penghambatan  apoptosis  sel  Leydig setelah  pemberian  suspensi  bubuk
kedelai kuning pada  tikus  jantan SD diabates yang diinduksi step- tozotocin.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan jenis  penelitian  eksperimen  dengan design  penelitian pre  and  post  test control  group  design .  Penelitian dilakukan dengan memberikan manipulasi  pada  subyek  penelitian yaitu hewan coba dan mem- bandingkan dengan kelompok kontrol. Variabel-variabel pada penelitian  ini  adalah  Variabel  bebas suspensi  bubuk  kedelai  kuning  (G. max ).  Variabel  tergantung    kadar testosteron    dan  apoptosis    sel Leydig.  Variabel  terkendali  subyek diambil  dari  jenis  kelamin  jantan, umur dan berat badan relatif sama.Variabel  bahan  coba  kedelai kuning diperoleh dari
pasar
tradisional.  Variabel  pemeliharaan semua  subyek  dipelihara  dalam kandang  dengan  jenis  pakan  dan minum  yang  sama  serta  pemberian secara ad libitum .
Alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah;kandang tikus,kanul spuit,alat pembuat
bubuk,  spuit  injeksi,  sentrifuge, spectrofotometer,  timbangan  digital merk  sartotius.tabung  kapiler  dan tempat sampel darah, ELISA Kit dan caspase-3 aktif
Hewan  coba  yang  digunakan adalah  tikus  putih  spesis Sprague Dawley jantan  usia  11-12  minggu, berat  badan  200–250  gr  sebanyak 30 ekor yang di dapat dari Laboratorium Pusat Penelitian Terpadu  Universitas  Gadjah  Mada Yogyakarta,pakan tikus, kedelai
kuning  yang  diperoleh  dari  pasar tradisional Yogyakarta dan aquades, Streptozotocin  merk  MP  Biomedis Inc.
Tempat  Penelitian  dilakukan  di Laboratorium Ilmu Faal UGM sebagai tempat pemeliharaan hewan coba dan pemeriksaan kadar glukosa  darah.  Laboratorium  Fisio- logi  dan  Patologi  Klinik  FKH  UGM untuk  pemeriksaan  kadar  serum testosteron.  Laboratorium  Patologi Analomi  untuk  pemeriksaan  Cas- pase-3 aktif.
Terminasi  dilakukan  meng- gunakan  inhalasi  ether  kemudian dilakukan  dekapitasi.  Setelah  tikus diterminasi, testis kiri  diambil secara hati-hati  melalui  insisi  transversal  di bagian  bawah  abdomen.  Testis difiksasi  dengan  PBS  formalin  10%. Selanjutnya  dilakukan  pembuatan embedding paraffin dan diiris dengan ketebalan 3 μM. Kadar testosteron diukur dengan  metode  ELISA.  Apoptosis sel Leydig diperiksa dengan menggunakan  metode  caspase  3 aktif  immunohistokimia.  Prosedur pemeriksaan sesuai 23 dilakuan deparafinasi  dengan  larutan  xylol  2 kali masing masing 5 menit terhadap preparat  testis,  dilanjutkan  rehidrasi menggunakan etanol. Peraparat testis secara berturut-turut dimasukkan  dalam  etanol  absolut  2 kali  3  menit,  etanol  95%  2  kali masing  -masing  3  menit  dan  etanol 70%  3 menit,  terakhir dicuci  dengan aquabides.  Peraparat  testis  dicuci dengan    PBS  ( phosphate  buffered saline solution ), diberi tetesan proteinase  K  selama  20  menit. Selanjutnya dilakukan inkubasi dalam  PBS  ( phosphate  buffered saline  solution )  yang  mengandung H 2 O 2 3% untuk menghambat aktifitas peroksidase endogen.
Setelah preparat testis diinkubasi dengan  larutan    H 2 O 2 3%  selama  5 menit, kemudian dibilas dengan PBS selama  15  menit.  Preparat  testis kemudian diblok dengan serum goat normal  1,5%  dalam  PBS  dan
diinkubasi dengan caspase-3 antihuman  poliklonal  rabbit  (0,5 μg/ml)  dalam  serum  goat  normal 1,5%  dalam  PBS  selama  45  menit pada  suhu  ruangan.  Preparat  testis kemudian  diinkubasi  pada  biotin konjugat  goat  antirabbit  IgG,  Avidin- biotin-peroksida  kompleks  selama  1 jam  dan  larutan  diaminobenzidane (DAB),  kemudian  dilakukan counter- staining dengan  hematosilin.  Untuk kontrol  negatif  tambahkan  antibodi primer rabbit IgG 1 μg/ml. Pengamatan dan penghitungan caspase-3 aktif sel Leydig  terhadap potongan    jaringan  melintang  testis.
Caspase-3  aktif  sel  Leydig    ditandai dengan inti berwarna coklat, sedangkan sel Leydig normal berwarna kebiruan.
Perhitungan  sel  Leydig  yang mengalami  caspase-3  aktif  dengan merandom  dari  ruang  intertesiel  (20 perpreparat testis) diantara tiga atau empat  sirkuler  tubulus,  kemudian dirata-rata.
Data  hasil  penelitian  diuji dengan  menggunakan    program SPSS.  Perbedaan  antara    kadar testosteron  serumantar  kelompok perlakuan  dan  kontrol  diuji  dengan uji  KrusKal-Willis,  kemudian  jika menunnjukkan  adanya  perbedaan yang  bermakna  antar  kelompok dilanjutkan  dengan    uji Wilcoxon signed  ranks  test .  Untuk  menilai caspase-3  aktif  sel  Leydig  antar kelompok  perlakuan  dan  kontrol dianalisa dengan menggunakan
Kruskall-Wallis , kemudian jika menunjukkan  adanya  perbedaan yang  bermakna  antar  kelompok dilanjutkan dengan uji Mann-Whitney test untuk mengetahui derajat perbedaan antar kelompok.

## Hasil Penelitian dan Pembahasan
Subyek  pada  penelitian  ini adalah 30 ekor tikus putih jantan SD dengan  umur  11-12  minggu  berat
badan 200-250 gram yang dikelompokan  menjadi  lima  kelom- pok  masing-masing  terdiri  6  ekor tikus. Adapun lima kelompok tersebut  terdiri  dari;  kelompok  kon- trol  (K1),  kelompok  diabetes  (K2), kelompok  tikus  dengan  perlakuan suspensi  bubuk  kacang  kedelai kuning 400 mg/kgBB/hr (K3), kelompok  tikus  dengan  perlakuan suspensi  bubuk  kacang  kedelai kuning  800  mg/kgBB/hr  (K4)  dan kelompok  tikus  dengan  perlakukan suspensi  bubuk  kacang  kedelai kuning  1600 mg/kgBB/hr  (K5).  Pada saat proses adaptasi terjadi kematian  satu  ekor  tikus  pada kelompok  dua  (K2),  kemudian  pada saat  perlakuan  terjadi  kematian  lagi 2  ekor  tikus  pada  kelompok  kontrol negatif (K1), 2 ekor pada  kelompok kontrol  positif  (K2),  satu  ekor  tikus pada kelompok dosis 400 mg/kgBB/hr  (K3)  dan  kelompok dosis  800  mg/kgBB/hr  (K4)  dan paska perlakukan mati lagi satu ekor tikus  pada  kelompok  dosis  1600 mg/kgBB/hr  (K5)  sehingga    pada akhir  penelitian  jumlah  tikus  tersisa 22 ekor.
Kadar testosteron serum
pada  kelompok  kontrol  (K1)  adalah 3,33  ±  1,379  ng/ml  dan  setelah  4 minggu  2,99  ±  1,418  ng/ml.Kadar tesosteron  pada  kelompok  diabetes (K2)  adalah  0,28  ±  0,056  ng/ml  dan setelah  4  minggu  kadar  testosteron serum  adalah    0,25  ±  0,011  ng/ml mengalami  penurunan   0,034  ng/ml.
Kadar testosteron
serumpada kelompok  dosis  400  mg/kgBB/hr (K3)  sebelum  pemberian  suspensi bubuk  kacang    kedelai  kuning adalah    0,26  ±  0,026  ng/ml  dan
setelah  perlakuan  0,29  ±  0,044 ng/ml  mengalami  kenaikan  0,032 ng/ml.  Kadar  testosteron  serum pada kelompok dosis 800 mg/kgBB/hr  (K4)  sebelum  pem- berian suspensi bubuk kacang kedelai kuning adalah  0,27 ± 0,0436 ng/ml dan setelah perlakauan 0,31 ± 0,253  ng/ml  mengalami  kenaikan 0,037  ng/ml.  Kadar  testosteron serum  pada  kelompok  dosis  1600 mg/kgBB/hr  (K5)  sebelum  pem- berian suspensi bubuk kacang kedelai  kuning  adalah  0,29  ±  0,120 ng/ml  dan  setelah  perlakuan  0,33  ±
0,059  ng/ml  mengalami  kenaikan
0,038 ng/ml.
Kadar testosteron serum sebelum  pemberian  suspensi  bubuk kacang  kedelai kuning menunjukkan adanya perbedaan
bermakna p<0,05  antar  kelompok  pada  uji Kruskal-Willis .  Perbedaan  bermakna p<0,05 antara kelompok kontrol (K1) dengan  kelompok  diabetes  (K2), kelompok pemberian suspensi bubuk  kacang  kedelai  kuning  dosis 400  mg/kgBB/hr  (K3),  kelompok pemberian  suspensi  bubuk  kacang kedelai kuning dosis 800 mg/kgBB/hr  (K4),  dan  kelompok pemberian  suspensi  bubuk  kacang kedelai kuning dosis 1600 mg/kgBB/hr (K5) tetapi tidak
bermakna  p>0,05  untuk  kelompok diabetes  (K2)  dengan  kelompok  K3, K4  dan  K5  dari  hasil  uji Mann- Whitney .
Kadar  testosteron  serums etelah  pemberian  suspensi  bubuk kacang    kedelai  kuning    menun- jukkan  adanya  perbedaan  yang bermakna p<0,05 antar
Tabel  2 Hasil uji Wilcoxon signed ranks test kadar testosteron serum sebelum dan sesudah pemberian
kelompok  pada  uji Kruskal-Willis . Kadar  testosteron  serum  terjadi perbedaan  bermakna  p<0,05  antara kelompok kontrol (K1) dengan kelompok  diabetes  (K2),  kelompok pemberian  suspensi  bubuk  kacang kedelai kuning dosis 400 mg/kgBB/hr  (K3),  kelompok  pem- berian suspensi bubuk kacang kedelai kuning dosis 800 mg/kgBB/hr  (K4)  dan  kelompok pemberian  suspensi  bubuk  kacang kedelai kuning dosis 1600 mg/kgBB/hr  (K5).  Kadar  testosteron serum  setelah  pemberian  suspensi bubuk kacang kedelai ada perbedaan  bermakna p<0,05 antara kelompok  diabetes  (K2)  dengan kelompok  dosis  800  mg/kgBB/hr (K4)  dan  kelompok  dosis  1600 mg/kgBB/hr  (K5)  pada  uji Mann- Whitney .
Kadar  serum    testosteron sebelum  dan  sesudah  pemberian suspensi  bubuk  kacang    kedelai kuning  ( G.  max )  berdasarkan  hasil uji Wilcoxon  signed  ranks  test tidak meningkatkan    secara  bermakna (p>0,05)  untuk  semua  kelompok perlakuan  (Tabel.2).
suspensai  bubuk  kacang    kedelai kuning ( G. max)
Caspase-3  aktif  sel  Leydig ditentukan    dengan  metode  immu- nohistokimia setelah 4 minggu pemberian  suspsnei  bubuk  kacang kedelai kuning ( G.max ). Pada
kelompok  kontrol  (K1)  jumlah  rerata caspase-3  aktif  adalah    0,6  ±  0,23, kelompok  diabetes  (K2)  adalah  2,6 ± 0,95, kelompok pemberian suspensi  bubuk  kacang    kedelai kuning dengan dosis 400 mg/kgBB/hr  (K3)  adalah  2,1  ±  0,72, kelompok pemberian suspensi
bubuk  kacang    kedelai  kuning dengan  dosis  800  mg/kgBB/hr  (K4) adalah  2,0  ±  0,89,  dan  kelompok pemberian  suspensi  bubuk  kacang kedelai  kuning  dengan  dosis  1600 mg/kgBB/hr adalah 1,8 ± 0,93.
Hasil  uji Kruskal-Wallis  test antar  kelompok  terhadap  jumlah rerata  caspase-3  aktif  menunjukkan perbedaan  bermakna  p<0,05.  Pada uji Mann-Whitney  test menunjukkan perbedaan  bermakna  p<0,05  antara kelompok kontrol (K1) dengan kelompok diabetes (K2), kelompok Kelompok n Kadar testoseron serum (mean ± SD ) ng/ml P- value Sebelum perlakuan Setelah perlakuan Kelompok kontrol (K1) 4 3,33 ± 1,379 2,99 ± 1,418 0,068 Kelompok diabetes (K2) 3 0,28 ± 0,565 0,24 ± 0,02 0,285 Diabetes + dosis 400 mg/kgBB/hr (K3) 5 0,26 ± 0,262 0,29 ± 0,044 0,080 Diabetes + dosis 800 mg/kgBB/hr (K4) 5 0,27 ± 0,043 0,31 ± 0,025 0,138 Diabetes + dosis 1600 mg/kgBB/hr (K5) 6 0,29 ± 0,12 0,33 ± 0,059 0,463
Tabel  3 Uji Mann-Whitney test jumlah rerata caspase-3 aktif pada sel Leydig
Kelompok n * Caspase-3 aktif (Mean ± SD ) Kelompok kontrol  (K1) 4 0,6 a ± 0,23 Kelompok diabetes (K2) 3 2,6 b ± 0,95 Diabetes + dosis 400 mg/kgBB/hr(K3) 5 2,1 b ± 0,72 Diabetes + dosis 800 mg/kgBB/hr(K4) 5 2,0 b ± 0,89 Diabetes + dosis 1600 mg/kgBB/hr(K5) 3 1,8 b ± 0,93
Keterangan a,b : huruf yang berbeda menunjukkan signifikasi (p<0,05).
* n : besar sampel
dosis 400
mg/kgBB/hr (K3), kelompok  dosis  800  mg/kgBB/hr (K4)  dan  kelompok  dosis  1600 mg/kgBB/hr  (K5)    tetapi  tidak bermakna  antara  kelompok  K2 dengan K3,K4 dan K5 atau sebaliknya  (Tabel  3).  Kadar  tes- tosteron  serum  pada  penelitian  ini, setelah  pemberian  suspensi  bubuk kacang    kedelai  kuning  pada  tikus jantan SD selama  4  minggu  secara peroral  tidak  menunjukkan  adanya perbedaan dengan semua kelompok pemberian suspensi bubuk  kacang    kedelai  kuning  dosis 400 mg/kgBB/hr (K3), 800 mg/kgBB/hr (K4) dan 1600 mg/kgBB/hr  (K5).  Penelitian  tentang fragmentasi DNA spermatozoa pada tikus  jantan  Wistar  diabetes  yang diinduksi streptozotocin dapat dicegah dengan pemberian suspensi bubuk kacang kedelai kuning dengan  dosis  200  mg/kgBB/hr,  400 mg/kgBB/hr  dan  800  mg/kgBB/hr. Penelitian yang dilakukan oleh
Weber et  al .,  (2001)  membuktikan bahwa    kadar  testosteron  menurun secara  bermakna  (p<0,05)  pada tikus jantan Sprague-Dawley berumur  50  hari  dengan  mem- berikan makanan kaya akan fitoestrogen  (Fito-600)  selama  20
hari,    dibandingkan  dengan  kelom- pok  kontrol.  Gardner-Thorp et  al ., (2002)  meneliti  pada  relawan  pria sehat  dan  tidak  merokok  diberikan isoflavon  120  mg/hari  ( daidzein 75 mg/hari  dan genistein 45  mg/hari)
selama  6  minggu,  hasilnya  kadar testosteron menurun secara
signifikan  (p<0,05)  meskipun  tidak menurunkan  serum  steroid  seks yang lain, albumin dan sex hormone binding globulin (SHGB),
memperbaiki  stres  oksidasi,  dan menurunkan  hidroperoksida  secara signifikan.
Penelitian  ini  menunjukkan bahwa  kadar  testosteron  serum pada  tikus  jantan Sprague  Dawley kelompok  kontrol    (K1)  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  kelompok  lain ( K2,K3,K4 dan K5) secara signifikan (p<0,05),    Kelompok  K2,K3,K4  dan K5 kadar testosteron serum menjadi rendah  akibat    diabetes  kronis dengan induksi STZ. Pada penderita DM tipe 2 kadar testosteron total dan bebes lebih rendah secara signifikan dibandingkan  dengan  DM  tipe  1. Pada  pria  penderita  diabetes  kadar testosteron  lebih  rendah  diban- dingkan  pada  pria  tanpa  riwayat diabetes.  Kadar  insulin  yang  rendah menyebabkan gangguan pada
metabolisme  karbohidrat  akibatnya terjadi  peningkatan  glukosa  darah (hiperglikemia).  Hiperglikemia  kronis mengakibatkan terjadinya peningkatan  radikal  bebas  melalui berbagai  jalur  yang  menyebabkan stres oksidasi dan penurunan aktifitas  17,20 lyase yang  berakibat pada penurunan dehydroepian- drosterone (DHEA) sebagai prekrusor hormon tes-toteron. Dehydroepiandrossterone yang  ren- dah mengakibatkan rendahnya kadar testosteron. Kadar testosteron serum  pada  penelitian  ini  diukur pada minggu kedua setalah diinduksi STZ . Kadar testosteron serum
pada  kelompok  kontrol  (K1)  setelah 4  minggu    terjadi  sedikit  menurun tetapi  masih  dalam  batas  normal. Kadar testosteron normal pada tikus dewasa  antara  0,66  -5,4  ng/ml. Pada kelompok diabetes (K2) terjadi penurunan  kadar  testosteron  serum meskipun  tidak  bermakna,  hal  ini disebabkan semakin kronisnya kondisi DM. Kadar testosteron serum pada kelompok diabetes (K2) lebih  rendah  dibandingkan  dengan kelompok pemberian suspensi bubuk  kacang  kedelai    dosis  400 mg/kgBB/hr  (K3)  tetapi  tidak  ber- makna (p>0,05), sedangkan terhadap kelompok pemberian suspensi  bubuk  kacang    kedelai kuning  dosis  800  mg/kgBB/hr  (K4) dan kelompok dosis 1600 mg/kgBB/hr  (K5)  kadar  testosteron serum  meningkat  secara  bermakna (p<0,05).  Kadar  testosteron  serum pada kelompok ini meningkat meskipun  belum  mencapai  batas normal. Hal ini kemungkinan disebabkan  karena  DM  pada  tikus sudah dalam kondisi kronis. Kacang kedelai kuning mengandung  isoflavon  yang  dapat mempengaruhi pembelahan sel
Leydig.  Sel  Leydig  yang  meningkat jumlahnya    menyababkan  sekresi testosteron juga meningkat 25 .
Pemeriksaan  caspase-3  aktif untuk  menilai  apoptosis  sel  Leydig dilakukan  setelah  4  minggu  pada kelompok  kontrol  (K1),  kelompok diabetes (K2) dan kelompok dengan pemberian  suspensi  bubuk  kacang kedelai kuning  ternyata mengalamai apoptosis sel Leydig secara bermakna (p<0,05)  antara kelompok kontrol (K1) dengan semua kelompok (K2,K3,K4 dan K5). Caspase-3  aktif  pada  kelompok diabetes  (K2)    lebih  tinggi  diban- dingkan  dengan  kelompok  pem- berian suspensi bubuk kacang kedelai  kuning  pada  semua  dosis (K3,K4 dan K5) tetapi tidak signifikan (p>0,05). Penelitian lain pada berbagai  subyek  dan  variasi  hasil, diantaranya    penelitian  pada  tikus jantan  Wistar    berumur  90  hari sebanyak  14  ekor  terdiri  dari  dua kelompok,  8  ekor  kelompok  kontrol (fitoestrogen  rendah  3  mg/kgBB/hr) dan 6 kelompok perlakuan
(fitoestrogen  tinggi  14  mg/kgBB/hr) diberikan  selama  24  hari,  terjadi peningkatan  apoptosis    sel  germinal pada  kelompok  perlakuan  (fito- estrogen  tinggi)  secara  signifikan (p<0,001). Hypothalamo-pituatary- testiculer  axis dan  kerja  estrogen terganggu  sehingga  mengakibatkan peningkatan  apoptosis  sel  germinal (26).
Pada  penelitian  ini  apoptosis sel  Leydig  pada  tikus  jantan  SD diabetes  dapat  dihambat  dengan pemberian  suspensi  bubuk  kacang kedelai  kuning  pada  semua  dosis, ada  kecendurngan  jumlah  apoptosis sel  Leydig  mengalami  penurunan miskipun  tidak  bermakna  (p>0,05). Hal  ini  sesuai  dengan  hasil  pene- litian  yang  telah  dilakukan  bahwa,
isoflavon    meningkatkan  jumlah  sel Leydig 25 . Kacang    kedelai  kuning diketahui  memiliki  berbagai  kan- dungan  nutrisi  sebagai  antidiabetik, antikarsinogenik, antiosteoporosis, antiproliferasi, antikolesterol dan perubahan  hormon 27 .  Kacang  kede- lai juga mengandung berbagai vitamin  diantaranya  vitamin  C  yang berfungsi sebagai antioksidan.
Berdasarkan  hasil  penelitian yang  dilakukan  oleh  Chang et  al ., (2008)  kacang  kedelai  bermanfaat untuk  mengontrol  kadar  gula  darah, metabolisme lipid dan aktifitas enzim antioksidan  pada  penderita  DM.tipe 2.  Kacang  kedelai  juga  potensial untuk managemen diet pada penderita  DM.  Pada  penelitian  ini suspensi  bubuk  kacang  kedelai  dari semua dosis tidak signifikan menurunkan kadar testosteron tikus, sehingga  berdasarkan  penelitian  ini kacang    kedelai  kuning  masih  relatif aman untuk kesehatan sistem reproduksi pada tikus jantan Sprague Dawley dewasa.

## Kesimpulan dan Saran
Dari  hasil  penelitian  tentang akibat  pemberian  suspensi  bubuk kacang  kedelai  (G. max )  pada  tikus diabetes yang diinduksi strep-
tozotocin dapat  diambil  kesimpulan bahwa  pemberian  suspensi  bubuk kacang    kedelai  kuning  (G. max) tidak    memberikan  efek  terhadap kadar    testosteron  serum    dan  tidak menghambat  caspase-3  aktif  sel Leydig pada tikus jantan SD diabetes yang diinduksi strep- tozotocin. Adapun saran untuk penelitian  berikutnya  adalah  perlu dilakukan penelitian lebih lajut tentang  profil  kadar  testosteron serum  secara  series  dan  hambatan caspase-3 aktif sel Leydig pada tikus jantan SD diabetes
selama
pemberian  suspensi  bubuk  kacang kedelai kuning dengan jumlah hewan coba yang lebih banyak.

## Daftar Pustaka
Adlercreutz  H,  Mazur  W. Phyto- oestrogens and Western diseases. Ann Med  1997 Apr;29(2):95-120. Ahmed  RG .  The  Physiological  and Biochemical Effects of Diabetes on the Balance Between  Oxidative  Stress  and Antioxidant  Defencse  System. Med J Islam Aca Sci 2005;15(1):31-42. Akingbemi BT, Braden TD, Kemppainen BW, Hancock KD, Sherrll JD, Cook SJ, et al. Exposure to Phytoestrogens in the  Perinatal  Period  Affects Androgen Secreation by Testicular  Leydig  Cells  in  the Adult Rat. J Endocrinol 2007;149(9):4475-88. Andayani  TM. Analisis  biaya  terapi Diabates  mellitus  di  Rumah Sakit  Dr.  Sardjito  Yogyakarta. Majalah  Farmasi  Indonesia 2006;17(3):130-5. Anonim. Manfaat  Susu  Kedelai Untuk Penderita Diabetes.
http://mdl525
info/2008/01/23/manfaat-susu- kedelai-untuk-penderita- diabetes/comment-page-2/ 2008 Jan 12;1(23):2. Assinder  S,  Davis  R,  Fenwick  M, Glover  A. Adult-only  exposure of  male  rats  to  a  diet  of  high phytoestrogen
content
increases  apoptosis  of  meiotic and  post-meiotic  germ  cells. Reproduction 2007 Jan;133(1):11-9.
Chandel  A,  Dhindsa  S,  Topiwala  S,
Chaudhuri  A,  Dandona  P.
Testosterone  concentration  in
young  patients  with  diabetes.
Diabetes Care  2008  Oct;
31(10):2013-7. Chang  JH,  Kim  MS,  Kim  TW,  Lee SS. Effects of soybean supplementation on blood glucose,  plasma  lipid  levels, and  erythrocyte  antioxidant enzyme  activity  in  type  2 diabetes mellitus patients. Nutr
Res Pract 2008;2(3):152-7. Colon  E.  Autocrine  and  Paracrine Regulator of Leydig Cell Survival in the Postnatal Testis Karolinska Institute. Anno 1810 . Stockholm.; 2007. Desai  N,  Sabanegh  Jr  E,  Kim  T, Agarwal A. Free Radical Theory of Aging : Implication in Male Infertility. Urology 2010;75[1], 14-19. Diemer  T,  Allen  J,  Hales  KH,  Hales DB. Reactive Oxygen  Disrupts Mitochondria  in  MA-10  Tumor Leydig cell and Inhibits Steroidogenesis Acute Regulatory  (StAR)  Protein  and Steroidogenesis. Endocrinology
2003;10(1210):1-42. Dinulovic  D,  Radonjic  G .  Diabetes mellitus/male  infertility .  Arch Androl 1990;25(3):277-93. Evans  JL,  Goldfine  ID, Maddux  BA,
Grodsky  GM.  Oxidative  stress and  stress-activated  signaling pathways: a unifying hypothesis  of  type  2  diabetes. Endocr Rev 2002 Oct; 23(5):599-622. Goodin S, Shen F, Shih WJ, Dave N, Kane  MP,  Medina  P,  et  al.
Clinical  and  biological  activity of soy protein powder supplementation in healthy male volunteers. Cancer Epidemiol  Biomarkers  Prev 2007 Apr;16(4):829-33.
Khushk  I,  Dohot  MU,  Baloach  SA,
Bhutto  MA.  The  Evaluation  of
Soybean Extraccts in Alloxan - Induced Diabeteic  Rabbits. World Appplied Sci J 2010;8:22-5. Kim JM, Luo L, Zirkin BR. Caspase- 3  activation  is  required  for Leydig  cell  apoptosis  induced by ethane dimethanesulfonate. Endocrinology 2000 May;141(5):1846-53. Maneesh  M,  Jayalaksmi  H,  Singh TA,  Chakrabati  A. Impaired Hypothalamic - Pituitary- Gonadal  Axis  Function  In  Men With  Diabetes  Mellitus. Indian J Clin Biochem 2006;21 (1):165-8. Mitchell  JH,  Cawood  E,  Kinniburgh D, Provan A, Collins AR, Irvine
DS. Effect  of  a  phytoestrogen food supplement on reproductive  health  in  normal males .  Clin  Sci  (Lond)  2001 Jun;100(6):613-8.
Nagata  C,  Takatsuka  N,  Shimizu  H,
Hayashi H, Akamatsu T, Murase  K .  Effect  of  soymilk consumption on serum estrogen and androgen concentrations  in  Japanese men. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2001 Mar;10(3):179-84. Pilsakova  L,  Riecansky  I,  Jagla  F. The  physiological  actions  of isoflavone phytoestrogens .
Physiol Res 2010;76(3):1-32.
Purwaningsih W, Rizal DM, Kadarsih S. Peningkatan  Fragmentasi
DNA  Spermatozoa  pada  Tikus Jantan  (Rattus novergicus) Diabetes Mellitus yang Diinduksi  Streptozotocin  dapat Dicegah  dengan  Pemberian Suspensi Bubuk Kedelai Kuning.  FK .UGM. Yogyakarta; 2010.
Rhoden  EL,  Ribeiro  EP,  Teloken  C,
Souto  CA. Diabetes  mellitus  is associated with subnormal
serum levels of free testosterone  in  men .  BJU  Int 2005 Oct;96(6):867-70. Saad  F,  Gooren  LJ. The  role  of testosterone  in  the  etiology and  treatment  of  obesity,  the metabolic syndrome, and diabetes  mellitus  type  2 .  J
Obes 2011;2011.
Sherrill  JD,  Sparks  M,  Dennis  J, Mansour  M,  Kemppainen  BW, Bartol FF, et al. Developmental exposures  of  male  rats  to  soy isoflavones  impact  Leydig  cell differentiation. Biol Reprod 2010 Sep;83(3):488-501. Traish  AM,  Saad  F,  Guay  A .  The dark side of testosterone deficiency:  II.  Type  2  diabetes
and insulin resistance . J Androl
2009 Jan;30(1):23-32.
Weber KS, Setchell KD, Stocco DM,
Lephart ED . Dietary soy- phytoestrogens decrease testosterone levels and prostate weight without altering LH,  prostate  5alpha-reductase or testicular steroidogenic acute regulatory peptide levels in  adult  male  Sprague-Dawley rats. J Endocrinol 2001 Sep;170(3):591-9.
Wild S, Roglic G, Green A, Sicree R,
King  H .  Global  Prevalence  of Diabetes;  Estimates  for  the year  2000  and  projection  for 2030. Diabates Care 2006;27(5):1047-53