UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN FRAKSI n -HEKSAN EKSTRAK ETANOL DAUN KARIKA ( Carica pubescens ) DAN IDENTIFIKASI SENYAWA ALKALOID DAN FLAVONOIDNYA

## Annis Mu’awwanah dan Maria Ulfah
Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
e-mail: mariau_astra@yahoo.com

## ABSTRACT
Free  radicals  can  lead  to  various  dangerous  diseases,  such  as  cancer.  Active  compounds from  medicinal  plants  such  as  flavonoids  and  alkaloids  have  been  shown  the  antioxidant  effects and may serve to prevent the negative effects of free radicals. Two of these compounds have been identified  in  leaf  extract  (Carica  pubescens)  and  can  be  separated  from  other  compounds  with fractionation  method.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  antioxidant  activity  of  n- hexane  fraction  of  karika  leaves  ethanol  extract  (HFKLEE)  with  DPPH  method  and  identify  its alkaloids  and  flavonoids  compounds.  Antioxidant  activity  of  HFKLEE  series  concentration  (50; 100;  150;  200;  250  and  300)  ppm  was  performed  by  the  DPPH  method.  Vitamin  C  series concentration  (0.5;  1.0;  1.5;  2.0  and  2.5)  ppm  was  used  as  a  standard  solution.  Identification  of alkaloids  and  flavonoids  compound  in  HFKLEE  determined  by  the  thin  layer  chromatography (TLC)  method.  The  results  showed  that  HFKLEE  has  antioxidant  activity  with  IC 50 values  of 157.134  ppm  and  Vitamin  C  at  2.875  ppm.  TLC  results  indicate  the  presence  of  alkaloids  and flavonoids compounds in HFKLEE.
Key words :  Karika  leaves (Carica  pubescens) , n -hexane  fraction,  antioxidant,  flavonoids  and alkaloids

## PENDAHULUAN
World  Health  Organitation (2014)  menyebutkan  bahwa  polusi  udara  di  perkotaan  dapat menyebabkan  1,3  juta  kematian  di  seluruh  dunia  setiap  tahunnya.  Selain  polusi  udara, pembentukan  radikal  bebas  juga  dipicu  makanan  yang  digoreng,  dibakar,  paparan  sinar  UV  dari matahari yang berlebih dan obat-obat tertentu (Winarsi, 2007). Radikal bebas di dalam tubuh dapat merusak  struktur  maupun  fungsi  sel.  Sebagai  akibatnya  adalah  kerusakan  jaringan  yang  memicu terjadinya  penuaan  dini,  timbulnya  berbagai  penyakit  seperti  kanker,  jantung,  paru,  lambung, sistem  imun  dan  mata  (Tjay  dan  Raharja,  2010).  Radikal  bebas  dalam  tubuh  dapat  diatasi  oleh antioksidan  alami  tubuh.  Namun,  jumlah  radikal  bebas  yang  tinggi,  mengakibatkan  antioksidan alami dalam tubuh tidak mampu lagi mengatasinya, maka diperlukan asupan antioksidan dari luar tubuh, misalnya buah, sayur, suplemen, vitamin dan lain-lain.
Saat  ini,  orang  lebih  memilih  untuk  menggunakan  obat  tradisional  dibandingkan  dengan obat modern. Obat tradisional dinilai aman dan memberikan efek samping yang relatif kecil (Sari, 2006).  Obat  herbal  dapat  dibuat  dengan  memanfaatkan  tanaman,  seperti  buah,  kulit  buah,  kulit batang,  daun,  bunga,  akar  bahkan  biji  buah.  Bagian  tanaman  tersebut  diambil  sari  atau  bahan aktifnya yang berkhasiat sebagai obat.
Novalina  (2013)  menyatakan  bahwa  ekstrak  daun  karika  ( Carica  pubescens ) mengandung senyawa flavonoid, alkaloid, tanin, dan fenol. Penelitian Hanani dkk . (2005) menunjukkan bahwa ekstrak Spons callyspongia sp mengandung senyawa alkaloid yang berkhasiat sebagai antioksidan. Fraksi n -heksan  ekstrak  metanol  daging  buah  dan  kulit  biji  mahkota  dewa  yang  mengandung flavonoid  mempunyai  aktivitas  antioksidan  (Lisdawati  dan  Kardono,  2006).  Susilowati  dkk . (2012)  menyebutkan  bahwa  pelarut n -heksan  mampu  menyari  senyawa  flavonoid  dari  ekstrak etanol herba alfalfa.
Penelitian ini bertujuan untuk membuktikan efek antioksidan dari seri konsentrasi fraksi n- heksan  ekstrak  etanol  daun  karika  (FHEEDK)  dengan  menggunakan  metode  1,1  difenil-2-
Prosiding Seminar Nasional Peluang Herbal Sebagai Alternatif Medicine Tahun 2015 ISBN: 978-602-19556-2-8 Fakultas Farmasi Universitas Wahid Hasyim
pukrilhidrazil  (DPPH).  Simplisia  daun  karika  diekstraksi  dengan  etanol  96%  dan  difraksinasi dengan  pelarut  n-heksan.  Seri  konsentrasi  larutan  vitamin  C  standar  digunakan  sebagai pembanding. Potensi antioksidan ditetapkan berdasarkan nilai IC 50 . Senyawa flvonoid dan alkaloid dalam FHEEDK ditetapkan berdasarkan metode kromatografi lapis tipis (KLT).

## METODE PENELITIAN

## Bahan Penelitian
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun karikayang dipetik  dari  pohon  karika  yang  tumbuh  di perkebunan  karika  di  Desa  Sembungan,  Pegunungan  Dieng,  Wonosobo,  Jawa  Tengah. Berbagai bahan  lain  yang  digunakan  adalah    etanol  96%  (Brataco), n -heksan,  air,  kloroform,  pereaksi Dragendorff,  uap  amoniak,  asam  klorida  (HCl)  pekat,  silika  gel  60  F254,  metanol,  ammonia, butanol, asam asetat, dietil eter, kuinin (E. Merck) dan rutin (kuersetin 3-rutinosid) (E. Merck).

## Alat Penelitian
Alat  yang  digunakan  adalah  seperangkat  alat  maserasi,  pengaduk  kayu,  timbangan  eletrik (Ohaus), oven (Memmert), blender (Philips), moisture balance (Ohaus), vacuum rotary evaporator (Heidolph), corong Buchner, ayakan, wadah ekstrak, seperangkat alat gelas (Pyrex), corong pisah (Pyrex),  mikropipet  (Socorex),  stirer,  spektrofotometer  UV-Visibel  (Shimadzu),  timbangan elektrik  (Ohaus),  lempeng  KLT,  bejana  kromatografi  (Camag),  lampu  UV  254  nm  dan  366  nm (Camag) dan botol semprot.

## Pembuatan Fraksi n-Heksan Ekstrak Etanol Daun Karika
Daun  karika  disortasi  basah  dengan  membuang  bagian  tangkai  daunnya,  dicuci menggunakan  air  bersih  yang  mengalir,  kemudian  ditiriskan  dan  diangin-anginkan.  Daun selanjutnya  dikeringkan  dan  dihaluskan  menggunakan  blender.  Serbuk  yang  didapat  diayak  agar diperoleh  serbuk  dengan  derajat  halus  yang  seragam,  serta  diukur  kadar  airnya  dengan menggunakan alat moisture balance .
Serbuk  simplisia  daun  karika  sebanyak  1,0  kg  diekstraksi  dengan  metode  maserasi menggunakan  10  L  etanol  96%.  Cairan  penyari  etanol  96%  dibagi  menjadi  dua  bagian. Perbandingan pelarut pertama dan kedua adalah 70%:30%. Serbuk daun karika dibiarkan terendam selama  lima  hari,  sambil  diaduk.  Campuran  serbuk  simplisia  daun  karika  dan  etanol  96%, Selanjutnya disaring dan diperoleh maserat I dan ampas. Ampas ditambah dengan sisa etanol 96% dan  diperlakuan  sama  dengan  maserasi  sebelumnya  selama  dua  hari.  Campuran  serbuk  simplisia dan etanol 96% disaring kembali menghasilkan maserat II dan ampas. Ampas dibuang, sementara Maserat I dan maserat II dicampur, kemudian dipekatkan menggunakan rotary evaporator dengan suhu 50 °C.
Sebanyak 60,0 gram ekstrak etanol daun karika kental difraksinasi dengan jalan partisi cair- cair  menggunakan  pelarut n -heksan  dan  air.  Fraksinasi  dilakukan  dengan  melarutkan  ekstrak kental ke dalam campuran air dan etanol (9:1). Larutan tersebut dimasukkan dalam corong pisah dan  ditambah  n-heksan.  Jumlah  n-heksan  yang  digunakan  sebanding  dengan  jumlah  air-etanol yang  ditambahkan  ke  dalam  ekstrak  etanol  (1:1).  Fraksi  n-heksan  yang  terbentuk  (lapisan  atas) dipisahkan  Fraksi  air-etanol  digojog  kembali  menggunakan  n-heksan  hingga  fraksi  n-heksan jernih. Fraksi n-heksan yang diperoleh dipekatkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 45 °C.

## Uji aktivitas antioksidan FHEEDK dan Vitamin C dengan metode DPPH
Sampel larutan uji FHEEDK dibuat dalam seri konsentrasi (50; 100; 150; 200; 250 and 300) ppm dan larutan vitamin C standar dalam seri konsentasi (0,5; 1,0; 1,5; 2,0 and 2,5) ppm. Larutan DPPH 0,1 mM sebanyak 2,0 mL ditambahkan masing-masing 2,0 mL sampel, kemudian distirer selama  satu  menit.  Campuran  larutan  tersebut  didiamkan  dalam  tempat  gelap  selama  30  menit, selanjutnya  dibaca  absorbansi  DPPH  dengan  alat  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang 516,6 nm. Persen penghambatan sampel dihitung menggunakan rumus:
%𝑨𝒌𝒕𝒊𝒗𝒊𝒕𝒂𝒔 𝒂𝒏𝒕𝒊𝒐𝒌𝒔𝒊𝒅𝒂𝒏 = 𝑨𝒃𝒔 𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 − 𝑨𝒃𝒔 𝒑𝒆𝒓𝒍𝒂𝒌𝒖𝒂𝒏 𝑨𝒃𝒔 𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 𝒙 𝟏𝟎𝟎 % Keterangan: Abs kontrol : Absorbansi larutan DPPH 0,1 mM. Abs perlakuan : Absorbansi larutan DPPH 0,1 mM dalam sampel seri konsentrasi FHEEDK atau vitamin C

## Identifikasi Senyawa Golongan Alkaloid dengan Metode KLT
Sampel FHEEDK seberat 100 mg ditambahkan dengan 2,0 mL amoniak 10% dan divortex selama  dua  menit.  Selanjutnya,  5,0  mL  kloroform  ditambahkan  dan  divortex  selama  dua  menit. Campuran  larutan  tersebut  disentrifugasi  selama  tiga  menit,  fase  kloroform  dipisahkan  dan diuapkan dengan gas nitrogen. Fase kloroform dilarutkan dalam 200,0 μL kloroform. Sampel dan senyawa  kuinin  standar  (pembanding)  ditotolkan  sebanyak  20,0  μL  pada  fase  diam  silika  gel  60 F254.  Fase  diam  dimasukkan  ke  dalam  bejana  kromatografi  yang  telah  dijenuhi  oleh  fase  gerak metanol : ammonia (100 :1,5). Fase diam dielusi hingga batas (8 cm), diangkat dan dikeringkan. Bercak disemprot dengan pereaksi Dragendorff. Sampel FHEEDK terbukti mengandung senyawa ktif golongan alkaloid apabila terbentuk bercak berwarna kuning orange.

## Identifikasi Senyawa Golongan Flavonoid dengan Metode KLT
Sampel  FHEEDK  seberat  50,0  mg  dimasukkan  ke  dalam  labu  alas  bulat  dan  dilarutkan dengan 10,0 mL asam klorida 4 N. Selanjutnya, larutan dihidrolisis/refluk dengan pendingin balik selama  30  menit,  didinginkan  dan  diekstraksi  dengan  5,0  mL  pelarut  dietileter.  Fase  dietileter diambil  dan  diuapkan  dengan  gas  nitrogen.  Larutan  sampel  sebanyak  10,0  μL  dan  pembanding rutin  ditotolkan  pada  fase  diam  silica  gel  60  F254.  Fase  diam  dimasukkan  ke  dalam  bejana kromatografi  yang  telah  dijenuhi  dengan  berisi  fase  gerak  butanol-asam  asetat-air  (3:1:1)  dan dielusi hingga batas (8 cm). Fase diam dikeringkan dan bercak diamati di bawah sinar UV 254 nm dan 366 nm. Uap amoniak digunakan sebagai pereaksi semprot penampang bercak. Terbentuknya spot berwarna kuning menunjukkan adanya senyawa flavonoid dalam sampel FHEEDK.

## Analisa data
Potensi  antioksidan  dinyatakan  dalam  bentuk  nilai  IC 50 .  Nilai  IC 50 FHEEDK  dan  vitamin  C ditetapkan dengan menggunakan analisis probit pada taraf kepercayaan 95 %.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi dan Fraksinasi Daun Karika
Ekstrak  kental  daun  karika  yang  diperoleh  dari  1000,0  gram  serbuk  kering  daun  karika adalah  145,0  gram,  sehingga  diperoleh  rendemen  ekstrak  sebesar14,5%.  Ekstrak  etanol  daun karika yang diperoleh berwarna hijau kehitaman, bertekstur sangat kental dan berbau khas. Ekstrak etanol daun karika disimpan dalam tempat yang terlindung dari sinar matahari langsung. Cahaya matahari  dapat  menimbulkan  terjadinya  reaksi  dikatalisis  yang  dapat  merusak  senyawa  aktif (Voight,  1994).  Setelah  dilakukan  fraksinasi,  FHEEDK  yang  diperoleh  dari  60,0  gram  ekstrak etanol  daun  karika  adalah  sebanyak  15,0  gram.  FHEEDK  yang  diperoleh  berwarna  hijau  pekat, memiliki tekstur yang kental dan berbau khas dengan rendemen sebesar 25%.

## Aktivitas Antioksidan FHEEDK dan Vitamin C
Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode  DPPH  menunjukkan  bahwa  FHEEDK  dan vitamin C mampu  menangkap radikal bebas  DPPH yang ditandai dengan perubahan warna ungu yang memudar menjadi kuning pucat. Hal tersebut terjadi karena adanya reduksi elektron tunggal pada radikal DPPH oleh atom hidrogen dari senyawa antioksidan. Pemberian atom hidrogen dari antioksidan akan membentuk senyawa difenilpikrilhidrazin tereduksi (DPPH-H) yang bersifat non radikal. Akibat reaksi tersebut, terjadi peningkatan senyawa kompleks non radikal dan penurunan radikal  bebas  DPPH.  Jumlah  DPPH  yang  tersisa  diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis
Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi n-Heksan Ekstrak Etanol Daun Karika
dengan  panjang  gelombang  516,6  nm  (Molyneux,  2004).  Mekanisme  reaksi  pemadaman  radikal bebas DPPH dapat dilihat pada gambar 1. Hasil uji aktivitas antioksidan FHEEDK dan vitamin C dapat dilihat pada tabel I.
OH FI OH O FI OH R RH FI-OH FI-O B B O FI OH O FI O R RH FI-quinone FI-O B B
Gambar 1. Penangkapan spesies oksigen reaktif (R•) oleh flavonoid (Pietta, 2000) Tabel I. Aktivitas Antioksidan FHEEDK dan vitamin C dengan metode DPPH
Sampel Konsentrasi (ppm) Aktivitas Antioksidan (%)* Persamaan Probit IC50 (ppm) Fraksi n-Heksan Ekstrak Etanol Daun Karika 50 26,979 y = 0,490 x + 0,574 r = 0,999 157,134 100 42,434 150 46,419 200 51,427 250 55,627 300 71,782 Vitamin C 0,5 22,025
y = 0,405 x + 0,306 r = 0,987 2,875 1,0 24,610 1,5 36,564 2,0 42,488 2,5 50,458
*hasil tersebut merupakan hasil dari 3 kali pengukuran
FHEEDK  dan  vitamin  C  dinyatakan  memiliki  aktivitas  antioksidan  apabila  mampu mengurangi kadar radikal bebas larutan DPPH 0,1 mM yang ditandai dengan semakin rendahnya nilai absorbansi yang terbaca pada alat spektrofotometer UV-Vis.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa  aktivitas  antioksidan  FHEEDK  memiliki  korelasi  yang  positif  dengan  konsentrasi. Peningkatan konsentrasi sampel FHEEDK dan vitamin C mengakibatkan penurunan kadar radikal bebas larutan DPPH 0,1 mM.
Potensi antioksidan suatu senyawa dinyatakan dalam ukuran nilai inhibition concentration ( IC 50 )  yang  dapat  diperkirakan  menggunakan  analisis  probit . Nilai  ini  menggambarkan kemampuan  suatu  senyawa  dalam  mengurangi  senyawa  radikal  bebas  larutan  DPPH  0,1  mM sebesar 50%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa nilai IC 50 FHEEDK sebagai antioksidan adalah sebesar  151,134  ppm  dan  nilai  IC 50 vitamin  C  adalah  2,875  ppm.  Nilai  IC 50 berbanding  terbalik dengan potensi antioksidannya. Semakin kecil nilai IC 50 suatu senyawa, maka semakin kuat daya antioksidannya,  begitupun  sebaliknya.  Menurut  Blois  (1958),  senyawa  antioksidan  dengan  nilai IC 50 kurang  dari  50  ppm  memiliki  daya  antioksidan  yang  kuat,  dan  senyawa  antioksidan  dengan nilai  IC 50 antara  150-200  ppm  memiliki  daya  antioksidan  lemah.  Berdasarkan  nilai  IC 50 ,  potensi antioksidan  FHEEDK  termasuk  dalam  kategori  lemah,  sedangkan  daya  antioksidan  vitamin  C sangat kuat. Hal ini mungkin disebabkan karena masih ada senyawa lain yang terkandung dalam FHEEDK yang menganggu aktivitas antioksidannya, seperti lapisan lilin daun dan mengakibatkan

## Annis Mu’awwanah
kadar  senyawa  yang  berkhasiat  sebagai  antioksidan  yang  adalah  dalam  fraksi  lebih  sedikit. Vitamin C merupakan senyawa tunggal bersifat reduktor dan sangat poten sebagai antioksidan.

## Identifikasi Senyawa Golongan Alkaloid dan Flavonoid dengan Metode KLT
Identifikasi  senyawa  golongan  alkaloid  dengan  KLT  dilakukan  menggunakan  fase  diam silika  gel  60  F254  karena  baik  untuk  memisahkan  senyawa  alkaloid  (Sastrohamidjojo,  2002). Pembanding  yang  digunakan  adalah  senyawa  kuinin.  Pengamatan  juga  dilakukan  di  bawah  sinar UV  254  nm,  sinar  UV  365  nm  dan  secara  visibel.  Penampak  bercak  untuk  identifikasi  alkaloid adalah pereaksi semprot Dragendorf.
Hasil identifikasi di bawah sinar UV 254 nm menunjukkan bahwa bercak sampel FHEEDK mampu  meredamkan  fluorosensi  silica  gel  60  F  254,  namun  tidak  terjadi  pada  kuinin.  Senyawa kuinin  berfluorosensi  biru  di  bawah  sinar  UV  254  nm.  Sementara  itu,  bercak  sampel  FHEEDK tidak  terlihat  setelah  disinari  dengan  sinar  UV  366  nm,  sedangkan  bercak  pembanding  kuinin berfluorosensi  biru.  Hasil  pengamatan  secara  visibel  setelah  bercak  sampel  FHEEDK  dan pembanding kuinin disemprot dengan pereaksi semprot Dragendorf menunjukkan bercak berwarna kuning  orange.  Oleh  karena  itu,  sampel  FHEEDK  dinyatakan  positif  mengandung  senyawa golongan alkaloid (Robinson, 1995). Hasil identifikasi senyawa golongan alkaloid FHEEDK dapat dilihat pada gambar 2.
Keterangan :
Fase diam : Silika gel 60 F254 Fase gerak : Metanol : Amonia (100:1,5) Penampak bercak : Dragendorff A : Pengamatan pada sinar UV 254 nm B : Pengamatan pada sinar UV 365 nm C : Pengamatan secara visibel P : Pembanding kuinin S : fraksi n-heksan ekstrak etanol daun karika
Gambar  2.  Hasil  identifikasi  senyawa  alkaloid  dari  fraksi n -heksan  ekstrak  etanol  daun karika
Perbedaan sifat dan tingkat kepolaran senyawa  alkaloid dalam FHEEDK dan kuinin dapat dilihat dari perbedaan nilai Rf bercak. Nilai Rf bercak sampel FHEEDK adalah sebesar 0,65 dan Rf  kuinin  adalah  0,51.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini  menyimpulkan  bahwa  senyawa  alkaloid dalam FHEEDK memiliki sifat dan tingkat kepolaran yang berbeda dengan kuinin.
Analisis  bercak  senyawa  golonganflavonoid  pada  plat  KLT  dilakukan  dengan menggunakan  penampak  bercak  uap  amoniak  untuk  memberikan  suasana  basa.  flavonoid  dalam larutan netral atau asam merupakan senyawa tidak berwarna. Akan tetapi, senyawa flavonoid akan berwarna  terang  atau  jingga  dalam  suasana  basa  dan  bercak  akan  dapat  terdeteksi  secara  visibel maupun  di  bawah  sinar  ultraviolet.  Pembanding  yang  digunakan  dalam  identifikasi  senyawa golongan  flavonoid  adalah  senyawa  rutin  yang  merupakan  glikosida  flavonol.  Senyawa  ini
Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi n-Heksan Ekstrak Etanol Daun Karika
digunakan  sebagai  pembanding  karena  merupakan  jenis  flavonoid  yang  paling  sering  dijumpai pada  pemeriksaan  flavonoid,  banyak  terdapat  dalam  tumbuhan  dan  tersebar  luas  dalam  pigmen tanaman (Harborne, 1987).
Pengamatan bercak dilakukan di bawah sinar UV 254 nm, 366 nm dan secara visibel. Hasil pengamatan  menunjukkan  bahwa  bercak  sampel  FHEEDK  dan  rutin  berwarna  coklat  di  bawah sinar UV 254 nm dan secara visibel berwarna kuning. Bercak sampel FHEEDK dan pembanding rutin berwarna biru setelah dilihat di bawah sinar UV 366 nm. Hal ini menunjukkan bahwa sampel FHEEDK  memiliki  senyawa  aktif  golongan  flavonoid.  Wagner  and  Bladt  (2001)  menyebutkan bahwa  flavonoid  dapat  berfluoresensi  dan  memberikan  warna  kuning,  hijau,  maupun  biru  serta berwarna kuning lebih intens setelah diuapi amoniak. Hasil identifikasi senyawa flavonoid dalam FHEEDK dapat dilihat pada Gambar 3.
Keterangan :
Fase diam : Silika gel 60 F254 Fase gerak : Butanol : Asam Asetat : Air (3:1:1) Penampak bercak : Uap amoniak A : Pengamatan pada sinar UV 254 nm B : Pengamatan pada sinar UV 365 nm C : Pengamatan secara visible P : Pembanding rutin S : fraksi n -heksan ekstrak etanol daun karika
Gambar 3.   Hasil  identifikasi  senyawa  flavonoid  dari  fraksi n -heksan  ekstrak  etanol  daun karika
Nilai Rf bercak sampel FHEEDK sebesar 0,82, sedangkan nilai Rf pembanding rutin adalah 0,56.  Nilai  Rf  sampel  yang  lebih  besar  dibanding  rutin  menunjukkan  bahwa  senyawa  aktif  yang terdeteksi  mimiliki  polaritas  lebih  rendah  dibanding  rutin  dan  jenis  flavonoid  yang  terkandung dalam fraksi uji berbeda dengan rutin.

## KESIMPULAN
Fraksi n -heksan  ekstrak  etanol  daun  karika  (FHEEDK)  mempunyai  aktivitas  antioksidan dengan metode DPPH. Nilai IC 50 FHEEDK adalah sebesar 157,1 ppm dan vitamin C sebesar 2,9 ppm. Senyawa golongan alkaloid dan flavonoid berhasil teridentifikasi dalam FHEEDK.

## DAFTAR PUSTAKA
Blois  M.S.,  1958,  Antioxidant  Determinations  by  the  Use  of  a  Stable  Free  Radical, Nature , 18 , 1199-1200

## Annis Mu’awwanah
Gunawan  D.  dan  Mulyani  S.,  2004, Ilmu  Obat  Alam  (Farmakognosi) ,  Jilid  I,  Cetakan  I,  12-13, Penebar Swadaya, Jakarta
Hanani  E,.  Mun’im  A.  dan  Sekarini  R.,  2005,  Identifikasi  Senyawa  Antioksidan  dalam Spons callyspongia sp. dari Kepulauan Seribu, Majalah Ilmu Kefarmasian , 2 (3), 127-133
Harborne  J.B.,  1987. Metode  Fitokimia:  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan , diterjemahkan oleh Kosasih Padmawinta dan Iwang Soediro, Institut Teknologi Bandung, Bandung
Lisdawati  V.  dan  Kardono  L.B.S.,  2006,  Aktivitas  Antioksidan  dari  Beberapa  Fraksi  Ekstrak Daging  Buah  dan  Kulit  Biji  Mahkota  Dewa  ( Phaleria  Macrocarpa) ,  Media  Litbang Kesehatan 16 (4), 1-7
Molyneux,  P.,  2004.  The  Use  of  The  Stable  Free  Radical  Diphenylpicryl-hydrazil  (DPPH)  for Estimating Antioxidant Activity , Songklanakarin J. Science Technology , 26 (2), 211-219
Novalina  D.,  2013,  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak Carica  pubescens dari  Dataran  Tinggi  Dieng Terhadap Penyebab Diare, Tesis , Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Pietta P.G., 2000, Flavonoids as Antioxidants, J. Nat. Prod. , 63 ( 7 ), 1035–1042
Robinson T., 1995, Kandungan Senyawa Organik Tumbuhan Tinggi , Diterjemahkan oleh Prof. Dr. Kosasih Padmawinata., Institut Teknologi Bandung, Bandung
Sari  L.S.O.T.,  2006,  Pemanfaatan  Obat  Tradisional  Dengan  Pertimbangan  Manfaat  dan Keamanannya, Majalah Ilmu Kefarmasian , 3(1), 1-7
Sastrohamidjojo H., 2002, Kromatografi, Universitas Gadjah Mada Press, Yogyakarta.
Susilowati  S.,  Claresa  A.  dan  Arifin  I.,  Uji  Sitotoksik  Fraksi  n-Heksan  Ekstrak  Etanol  Herba Alfalfa (Medicago sativa L.) pada Sel T47D dan Sel Hela Serta Identifikasi Kandungan Senyawa Kimia, Jurnal Ilmu Farmasi & Farmasi Klinik , 9 (2), 1-9
Tjay  T.H.  dan  Raharja,  K.,  2010, Obat-obat  Penting,  Khasiat,  Penggunaan  dan  Efek-efek sampingnya, Edisi VI, 643, PT. Elex Media Komputindo Kelompok Gramedia, Jakarta
Voight R., 1994, Buku Pelajaran Teknologi Farmasi , diterjemahkan oleh Soendari, N.S., Gadjah Mada University Press, Yogyakarta
Wagner H. and Bladt S., 2001, Plant Drugs Analysis: a Thin Layer Chromatography Atlas, second edition, Springer Verlag Berlin Heidenberg, New York
WHO., 2014, Air Pollution, http://www.who.int/ceh/risks/cehair/en/ , diakses tanggal 1 November 2014
Winarsi H., 2007, Antioksidan Alami dan Radikal Bebas, 19 , Kansius, Yogyakarta
Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi n-Heksan Ekstrak Etanol Daun Karika