THE CORRELATION BETWEEN TERPENOID OF SARANG SEMUT ( Myrmecodia pendans ) WITH mRNA FRUCTOSYLTRANFERASE  EXPRESSION  OF Streptococcus  mutans  BIOFILM ATCC 25175
Darul Rabil * , Eka Chemiawan ** , Mieke H. Satari *** , Meirina Gartika **

## ABSTRACT
Background: Terpenoid  isolate  sarang  semut  (Myrmecodia pendans) is a natural material that has antibacterial power through the  destruction  of  the  cell  membrane  of  Streptoccus  mutans  (S. mutans). Fructosiltransferase (ftf) is one of the extrapolisaccharides produced by S. mutans. The formation of Ftf is governed by the ftf gene.  The  aim  of  research  was  to  know  the  correlation  between terpenoid of Sarang semut administration with ftf mRNA expression of S. mutans biofilm ATCC 25175.
Method: The  study  used  mixed  methods,  namely  descriptive explorative method to look at the isolation of ftf gene and ftf mRNA expression. This study began with making 1 day biofilm , then given terpenoid  isolates  of  sarang  semut  and  chlorhexidine.  Next, isolation of ftf genes and ftf mRNA expression was carried out, then the differences in S. mutans ATCC 25175 mRNA ftf expression in sarang semut and chlorhexidine were given for 1 and 30 minutes using Real-Time PCR. Continued by looking at the relationship of the  duration  of  administration  of  sarang  semut  terpenoids  to  the expression of S. mutans ATCC 25175 mRNA ftf biofilm. Statistical analysis used the t test with p-value <0.05 and Pearson.
Results: The results showed that ftf gene with 130 bp length and ftf  mRNA  expression  could  be  isolated  from  S.  mutans  biofilm ATCC  25175  which  were  given  terpenoid  isolates  from  sarang semut. The expression of sarang semut mRNA ftf and chlorhexidine did  not  have  a  significant  difference  for  1  minute  (p  =  0.0761), whereas in 30 minutes the ant nest had a higher mRNA expression (p  =  0.0186).  There  is  a  relationship  between  the  duration  of administration of terpenoid isolates of sarang semut with S. mutans ATCC  25175  mRNA  ftf  expression  (r2  =  0.614),  with  a  medium correlation coefficient.
Conclusion: The conclusion of the study were that sarang semut terpenoid had the same effect as chlorhexidine for 1 minute on S. mutans biofilms, whereas at 30 minutes it was different. There is a relationship  between  terpenoids  of  sarang  semut  isolates  and  S. mutans biofilm ATCC 25175 mRNA expression.

## PENDAHULUAN
Salah  satu  bakteri  dominan  penyebab karies  adalah Streptococcus  mutans yang memiliki kemampuan membentuk biofilm gigi. 1
Survei  epidemiologi  menunjukkan  bahwa jumlah S. mutans lebih besar pada anak-anak. 2
Kondisi  ini  berhubungan  dengan  nilai  dmf-t yang lebih tinggi. 3
Salah  satu  virulensi  bakteri  penyebab karies  gigi  adalah  kemampuannya  untuk bertahan hidup dalam lingkungan rongga mulut
* Resident of Pediatric Dentistry Department, Faculty of Dentistry, Universitas Padjadjaran
** Lecturer of Pediatric Dentistry Department, Faculty of Dentistry, Universitas Padjadjaran *** Lecturer of Oral Biology, Faculty of Dentistry, Universitas Padjadjaran
Correspondence : meirina.gartika@fkg.unpad.ac.id

## Keywords:
Terpenoid dari Sarang semut, ekspresi mRNA ftf, Biofilm Streptoccus mutans
yang kompleks. S. mutans membentuk biofilm dengan  organisme  lain  dalam  rongga  mulut. 4
Penelitian  menunjukkan  bahwa  bakteri  yang tumbuh  pada  kondisi  biofilm  lebih  tahan terhadap antibiotik daripada planktonik. Biofilm merupakan  bentuk  struktural  sekumpulan mikroorganisme  yang  dilindungi  oleh  matriks ekstraseluler  yang  disebut  ekstrapolisakarida (EPS). 5
Polisakarida  yang  diproduksi  oleh S. mutans adalah  bagian  utama  matriks  biofilm dan  berfungsi  dalam  patogenitasnya. 6,7 S. mutans berikatan dengan kuat pada permukaan berlapis glukan dan tumbuh subur di  lingkungan  mulut  yang  kompleks  dan berubah  menjadi  biofilm  kariogenik.  Glukan merupakan  salah  satu  polisakarida  yang disintesis  oleh S.  mutans dengan  bantuan glukosiltransferase (Gtf) . 8,9
Selain  menghasilkan  Gtf, S.  Mutans memproduksi  fruktosiltransferase  (Ftf),  yang mengubah fruktosa menjadi fruktan.
Frutosyltransfearase berfungsi sebagai sumber energi  sehingga  dapat  digunakan  selama metabolisme. 10 Hal  ini  menyebabkan  ftf memiliki peran dalam pembentukan biofilm. 11
Proses  pembentukan  awal  biofilm memerlihatkan bahwa berbagai gen diperlukan S.  mutans untuk  beradaptasi.  Setiap  enzim diatur oleh gen nya seperti glucosyltransferase ( gtf ) dan fructosyltransferase ( ftf ). Sel yang ada dalam  biofilm  memiliki  karakteristik  fenotip berbeda  yang  disertai  dengan  perubahan signifikan  dalam  pola  ekspresi  gen.  Ekspresi gen  ini  termasuk  gen  yang  terkait  dengan sistem komunikasi interseluler, sistem penginderaan lingkungan, regulator metabolisme  karbohidrat,  dan  gen  yang mempromosikan  adhesi. 12 Ekspresi gtf pada
biofilm semakin lama akan meningkat sedangkan ftf sebaliknya. 13
Saat ini banyak penelitian bahan alam yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  salah satunya  adalah  sarang  semut  ( Myrmecodia pendans ). 14 Sarang  semut  telah  lama  dikenal sebagai bahan pengobatan, diantaranya digunakan  untuk  berbagai  jenis  kanker  dan tumor,  seperti  kanker  otak,  hidung,  payudara, lever, paru-paru, usus, rahim, kulit, prostat, dan kanker  darah. 15 Tujuan  penelitian  ini  untuk mengetahui apakah terdapat hubungan pemberian  terpenoid  isolat  sarang  semut terhadap  ekspresi  mRNA ftf dari  biofilm S. mutans ATCC 25175.

## METODE
Penelitian  ini  dilakukan  di  Institut Teknologi  Bandung  dengan  persetujuan  etik no.  336/UN6.KEP/EC/2019  yang  dikeluarkan oleh  Komisi  Etik  Penelitian  Kementrian  Riset, Teknologi,  dan  Pendidikan  Tinggi  Universitas Padjadjaran. Pertama,  dilakukan  pembuatan biofilm S. mutans ATCC 25175 berumur 1 hari dan  selanjutnya  diberi  terpenoid  isolat  sarang semut  selama  1  dan  30  menit.  Selanjutnya dilakukan  isolasi  gen ftf dan  pemeriksaan ekspresi mRNA ftf dari biofilm S. mutans ATCC
25175
menggunakan Real-Time PCR.
Penelitian ini menggunakan 16SrRNA sebagai housekeeping  gene .  Replikasi  pada  penelitian ini dilakukan sebanyak 5 kali. Analisis statistik menggunakan uji t berpasangan untuk melihat perbedaan  ekspresi  mRNA  biofilm S.  mutans ATCC  25175  antara  pemberian  terpenoid sarang  semut  selama  1  dan  30  menit  dan  uji Pearson  dengan p-value <  0.05.  Seluruh analisis  dilakukan  menggunakan  program statistik Excel Megastat .
Tabel 1. Urutan primer dari gen ftf dan 16SrRNA
Gen Deskripsi
Ftf
16sRNA Forward 5’ AAATATGAAGGCGGCTACAACG 3’
Reverse 5’ CTTCACCAGTCTTAGCATCCTGAA 3’
Forward 5’ CTTACCAGGTCTTGACATCCCG 3’
Reverse 3’ ACCCAACATCTCACGACACGAG 3’

## HASIL
Pemeriksaan  PCR  ( non-purified )  dengan  gen  target  16SrRNA dan ftf .  dilakukan  menggunakan jasa Macrogen, Inc. Hasil PCR gen 16SrRNA ditunjukkan dalam Gambar 1.
16SrRNA 103 bp Ladder 100 bp Keterangan :   K+1 : Kontrol positif 1 menit K+30 : Kontrol positif 30 menit ZA+1 : terpenoid sarang semut 1 menit ZA+30 : terpenoid sarang semut 1 menit K-1 : Kontrol negatif 1 menit K-30 : Kontrol negatif 30 menit
Ladder :kcontrol panjang cDNA dalam bp ( base pair )
Gambar 1. Hasil PCR gen 16SrRNA
Gambar 1 menunjukkan hasil  isolasi gen 16SrRNA  yaitu adanya pita.  dalam setiap  bahan  yang diperiksa.  Gen  16SrRNA  merupakan  gen  kontrol  yang  menunjukkan  bahwa  bahan  yang  diperiksa merupakan bakteri. Dari hasil pemeriksaan PCR gen 16SrRNA memiliki panjang 103 pasang basa.

## Ladder
ftf 130bp Keterangan : K+1 : Kontrol positif 1 menit
K+30 : Kontrol positif 30 menit
ZA+1 : terpenoid sarang semut 1 menit ZA+30 : terpenoid sarang semut 1 menit K-1 : Kontrol negatif 1 menit K-30 : Kontrol negatif 30 menit Ladder : kontrol panjang cDNA dalam bp ( base pair ) Gambar 2. Hasil PCR gen ftf
Gambar 2 menunjukkan hasil isolasi gen ftf. Terlihat adanya pita pada tiap bahan yang diperiksa. Gen ftf yang terlihat memiliki panjang 130 pasang basa .
Tabel 2. Uji Perbedaan ekspresi mRNA ftf pada sarang semut dan klorheksidin pada 1 menit
Bahan uji R Mean SD Nilai P Sarang semut 5 0,187102 0,108077 0,0761 *) Klorheksidin 5 0,082800 0,037960 Keterangan : R : replikasi SD : Standar Deviasi Nilai p : Nilai Kepercayaan (P<0,05)
*) : Tidak bermakna/tidak signifikan
Tabel  2  menunjukkan  tidak  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  ekspresi  mRNA ftf antara pemberian sarang semut dan klorheksidin pada biofilm S. mutans ATCC 25175 dalam pemeriksaan 1 menit  (nilai  p  =  0,0761).  Hasil  ini  memiliki  makna  bahwa  pemberian  sarang  semut  dan  klorheksidin selama 1 menit memiliki efek yang sama terhadap ekspresi mRNA ftf.
Tabel 3. Uji perbedaan ekspresi mRNA ftf pada sarang semut dan klorheksidin pada 30 menit
Bahan uji R Mean SD Nilai P Sarang semut 5 1,238415 0,650277 0,0185**) Klorheksidin 5 0,342674 0,565886 Keterangan : R : replikasi SD : Standar Deviasi Nilai p : Nilai Kepercayaan (P<0,05)
**) : Bermakna/signifikan
Tabel  3  menunjukkan  terdapat  perbedaan  yang  signifikan  ekspresi  mRNA ftf pada  biofilm S. mutans antara pemberian sarang semut dan klorheksidin selama 30 menit (nilai p = 0,0185). Hasil ini
memiliki  makna  bahwa  sarang  semut  dan  klorheksidin  selama  30  menit  memiliki  efekyang  berbeda terhadap ekspresi mRNA ftf .
Tabel 4. Uji korelasi terpenoid sarang semut dengan ekspresi mRNA ftf
Variabel R t-test p-value sifat r 2 Waktu & ftf ,783 1,56 0,0073 Non-Sign ,614
Tabel 4 menunjukkan bahwa terdapat hubungan yang positif lamanya pemberian terpenoid sarang semut (Myrmecodeia pendans) terhadap peningkatan ekspresi mRNA ftf pada biofilm Streptococcus mutans ATCC 25175. Hubungan yang signifikan tersebut ditunjukkan dengan nilai keterkaitan sebesar 0,614. Korelasi ini dapat diinterpretasikan dalam kriteria Guilford, hasil tersebut memiliki reliabilitas sedang.

## DISKUSI
Penelitian  ini  menunjukkan  gen ftf dan ekspresi mRNA ftf dapat diisolasi pada biofilm S.  mutans yang  diberi  isolat  terpenoid  sarang semut (Myrmecodia  pendans) .  Isolasi  gen ftf yang terlihat merupakan hasil dari proses PCR yang memperlihatkan DNA yang akan diperiksa,  sedangakn  ekspresi  mRNA ftf merupakan hasil proses Real Time PCR. Hasil ini sesuai dengan penelitian yang dilakukan Li et  al 17 bahwa  gen ftf dapat  terisolasi  dan terekspresi  pada  biofilm  yang  diberi  kurkumin. Lamanya  pemberian  curcumin  berpengaruh terhadap peningkatan ekspresi gen ftf .
Penelitian  yang  dilakukan  Gartika  et al 18 menjelaskan  bahwa  pemberian  terpenoid sarang semut selama 1 menit dapat menghancurkan  40%  biofilm  yang  terbentuk. Burne et al 19 menggunakan analisis chloramphenicol acetiltransferase (CAT), terlihat ekspresi ftf pada biofilm berumur 2 hari, kemudian  diberikan  0.025  mol/L  sukrosa sehingga  menunjukkan  peningkatan  ekspresi dari  menit  0  ke  10.  Hasil  yang  sama  terlihat pada pemeriksaan biofilm yang berumur 7 hari.
Fruktan dapat memengaruhi patogenesis  karies  gigi  dengan  fungsinya sebagai
penyimpanan karbohidrat ekstraseluler  dan  dapat  dimetabolisme  oleh bakteri  selama  periode  kekurangan  nutrisi. Fruktosa yang dilepaskan dari hidrolisis fruktan dapat memasuki siklus glikolitik dan dimetabolisme menjadi asam laktat, yang dapat menyebabkan demineralisasi permukaan email gigi  dan  berkontribusi  terhadap  pembentukan karies gigi. 20 Siklus glikolitik merupakan proses metabolisme glukan menjadi asam laktat. Saat ini,  terbukti  bahwa  fruktan  membantu  proses adhesi bakteri oral tertentu ke permukaan gigi. Ftf bebas juga  ditemukan menyerap ke dalam lapisan  glukan S.  mutans dan  membantu sintesis  glukan  oleh  Gtf  bebas. 21 Ftf  dan produknya (fruktan) berperan dalam pembentukan  biofilm  gigi  dan  berhubungan dengan proses karies gigi. 22
Penelitian  Rozen  et  al 21 menunjukkan jumlah  rendah  ftf  bebas  di  luar  sel  ketika S. mutans dibiakkan dengan penambahan sukrosa. Tingkat ftf yang rendah ini, ditemukan sebagai hasil dari adsorpsi ftf bebas di luar sel
ke S.  mutans yang  dilapisi  glukan,  yang terbentuk selama pertumbuhan dengan adanya sukrosa. Berbeda dengan temuan lain, Milward dan  Jacques 23 menunjukkan  pelepasan  cepat ftf pada permukaan sel Stretococcus salivarius setelah penambahan sukrosa. 21
Sekresi  ftf  yang  mengekspresikan pengikatan  glukan  oleh S.  mutans dapat memberikan  keuntungan  dalam  biofilm  gigi. Temuan  Rozen  et  al 20 menunjukkan  bahwa fruktan  dapat  mempromosikan  proses  adhesi bakteri  spesifik  ke  permukaan  yang  keras. 20
Adhesi fruktan dapat dimediasi melalui pengikat  fruktan  atau  pada  enzim  Ftf. Identifikasi mengenai pengikat fruktan tersebut masih  harus  dieksplorasi.  Pengikatan  ftf dengan  glukan  juga  dapat  meningkatkan retensi S.  mutans ke  permukaan  yang  dilapisi glukan dengan menjembatani antara glukan. 21
Sukrosa juga dapat membantu peningkatan  sintesis  fruktan  pada  permukaan S.mutans .  Kemampuan S.  mutans untuk menghasilkan  fruktan  dalam  jumlah  tinggi menyebabkan  adanya  senyawa  karbohidrat jangka  pendek  yang  dapat  meningkatkan kelangsungan  hidup  bakteri  selama  periode kekurangan  nutrisi  dalam  biofilm.  Fruktosa yang  dilepaskan  dari  hidrolisis  fruktan  dapat dimanfaatkan  oleh  bakteri  dan  menghasilkan asam  laktat,  sehingga  berkontribusi  terhadap perkembangan  karies  gigi.  Selain  itu,  jumlah tinggi  fruktan  yang  diproduksi S.  mutans juga dapat  meningkatkan  virulensi  bakteri  dengan berperan  sebagai  bahan  kapsul  yang  dapat melindunginya dari sistem kekebalan tubuh. 24
Tingkat  ekspresi ftf dalam  biofilm dengan  pH  rendah  tidak  meningkat  seperti dalam  biofilm  yang  terbentuk  dengan  media yang  ditambahkan  zat  tertentu.  Populasi S. mutans tergantung  dengan  adanya  sukrosa
sebagai  penginduksi  efisien  dari  ekspresi  gen ftf .  Namun,  penambahan  glukosa  ke  biofilm hanya memiliki efek sedikit pada gen ftf . Dalam kultur  kimia  yang  stabil,  dengan  menurunkan pH  dari  7  menjadi  6,  dapat  meningkatkan transkripsi ftf ,  sehingga  faktor  ini  cenderung memiliki  efek  pada ftf setelah  penambahan karbohidrat.  Dengan  demikian,  faktor  global yang  mengatur  ekspresi  gen  dalam  kaitannya dengan  aliran  karbohidrat  atau  pH  dapat tumpang tindih dengan regulator yang mengontrol transkripsi ftf . 13,11 Penelitian Abranches et al 25 menemukan bahwa Catabolite Control  Protein A (CcpA) berperan dalam penentuan virulensi.
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  gen gtfB dan ftf memerlukan  CcpA  untuk  ekspresi  optimal. Berdasarkan studi genetik, percobaan biokimia dan  fisiologis  menunjukkan  bahwa  hilangnya CcpA berdampak pada kemampuan S. mutans untuk transportasi dan pertumbuhan. 25
Diketahui  ekstrak  kasar  sarang  semut tergolong concentration-dependent atau  dapat juga disebut memiliki antibakteri yang fungsinya  tergantung  dari  konsentrasi  bahan. Antibakteri  golongan  ini  memiliki  perbedaan antara  efek  maksimum  dan    minimum  yang relatif besar dan dengan peningkatan konsentrasi  akan  meningkatkan  kemampuan bunuh terhadap bakteri. 26 Efek antibakteri yang optimal dari
concentration-dependent bergantung  pada  luas  area  di  bawah  kurva penghambatan  yang  disederhanakan  menjadi rasio antara konsentrasi optimal. 27
Ekstrak,  fraksi,  maupun  isolat  umbi sarang semut telah terbukti selain mempunyai aktivitas  antibakteri  juga  memiliki  aktivitas antioksidan,  imun  modulator,  dan  antikanker. Penelitian  sebelumnya  ditemukan  bahwa ekstrak  etil  asetat  dari M.  pendans dapat
menghambat pertumbuhan S. mutans.
Senyawa  terpenoid  termasuk  diterpenoid, monoterpenoid, dan sesquiterpenoid dilaporkan memiliki banyak aktivitas antibakteri dan antimikroba. 28
Terpenoid  dari  sarang  semut  adalah hasil maserasi sarang semut dari bagian umbi dan  memiliki  daya  antibakteri.  Penelitian sebelumnya  menunjukkan  bahwa  terpenoid sarang  semut  memiliki  nilai  MBIC  ( Minimum Biofilm Inhibitory Concentration ) terpenoid dari sarang  semut  terhadap  biofilm S.  mutans adalah  50  ppm,  dan  nilai  MIC  ( Minimum Inhibitory  Concentration )  adalah  40  ppm. 18
Penelitian Attamimi et al 15 menunjukkan bahwa ekstrak kasar umbi sarang semut memiliki nilai MIC antara 9,77 ppm dan 19,53 ppm. 15
Penelitian  ini  menunjukkan  adanya hubungan  yang  positif  lamanya  pemberian terpenoid isolate sarang semut dengan gen ftf pada  biofilm S.  mutans ATCC  25175.
Disamping  itu  penelitian  ini  dilakukan  pada kondisi biofilm yang menyulitkan senyawa aktif untuk menembus EPS dari biofilm.

## KESIMPULAN
Terpenoid sarang semut memiliki efek yang sama dengan klorheksidin selama 1 menit pada  biofilm S.  mutans ,  sedangkan  pada  30 menit  berbeda.  Terdapat  hubungan  terpenoid isolat sarang semut dengan ekspresi mRNA ftf biofilm S. mutans ATCC 25175.

## DAFTAR PUSAKA
1. Alazmah  A.  Early  Childhood  Caries:  A Review.  Early  Child  Caries  A  Rev  J Contemp  Dent  Pract  J  Contemp  Dent Pr. 2017;1818(88):1 –61.
2. Widayati  N.  Faktor  yang  berhubungan dengan  karies  gigi  pada  anak.  J  Berk Epidemiol. 2014;2(2):196 –205.
3. Khotimah K, Suhadi Ns P. Faktor-faktor
yang  berhubungan  dengan  kejadian karies gigi pada anak usia 6-12 tahun di
SD  Negeri  Karangayu  03  Semarang. STIKES Telogorejo Semarang. 2013;014:1 –10. 4. Negrini  TDC,  Spolidorio  LC.  Genetic polymorphism of Streptococcus mutans in Brazilian family members. Brazilian J Microbiol. 2003;34:213 –7.
5. Warna  D,  Fatmawati  A,  Gigi  BK,  Gigi FK,  Jember  U.  Hubungan  biofilm Streptococcus  mutans  terhadap  resiko terjadinya karies gigi. J Kedokt Gigi Univ Jember. 2011;8(3):127 –30.
6. Jiang  S,  Huang  X,  Zhang  C,  Cai  Z. Morphological  and  proteomic  analyses of the biofilms generated by Streptococcus  mutans  isolated  from caries-active  and  caries-free  adults.  J Dent Sci. 2015;10(2):206 –15.
7. Krzysciak W, Jurczak A, Koscielniak D, Bystrowska B. The virulence of Streptococcus mutans and the ability to form biofilms. Eur J Clin Microbiol Infect Dis. 2014;33:499 –515.
8. Jeon J, Rosalen PL, Falsetta ML, Koo H. Natural  products  in  caries  r esearch : current  (Limited)  knowledge.  Caries
Res. 2011;45:243 –63. 9. Seneviratne CJ, Zhang CF, Smaranayake LP. Dental plaque biofilm in  oral  health  and  disease.  Chinese  J
Dent Res. 2011;14(2):87 –94.
10. Lei L, Yang Y, Mao M, Li H, Li M, Yang Y, et al. Modulation of biofilm exopolysaccharides by the Streptococcus mutans vicX Gene. Front Microbilogy. December 2015;6:1 –14. 11. Sato  S,  Kuramitsu  HK.  Isolation  and characterization of a fructosyltransferase gene from
Streptococcus  mutans  GS-5.  Infect Immun. 1986;52(1):166 –70.
12. Shemesh  M,  Tam  A,  Steinberg  D. Expression  of biofilm-associated genes of Streptococcus mutans in response to glucose  and  sucrose.  J  Med  Microbiol.
2007;56:1528 –35.
13. Li Y, Burne RA. Regulation of the gtfBC and  ftf  genes  of  Streptococcus  mutans in  biofilms  in  response  to  pH  and carbohydrate.  Soc  Gen  Microbiol  J. 2001;147:2841 –8.
14. Gartika M, Mariam MS, Kurnia D, Satari MH.  Antibacterial  of  terpenoid  A  from Sarang  Semut  (Myrmecodia  pendans) against  Streptococcus  mutans.  Int  J Chemtech Res. 2018;11(01):228 –33.
15. Attamimi FA, Ruslami R, Maskoen AM.
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kasar umbi sarang semut (Myrmecodia pendens) Streptococcus sanguinis dibandingkan Chlorhexidine. Maj Kedokt Bandung. 2017;49(2):94 –101.
16. Cowan MM. Plant products as antimicrobial agents. Clin Microbiol Rev. 1999;12(4):564 –82.
17. Li B, Li X, Lin H, Zhou Y. Curcumin as a promising  antibacterial  a gent :  effects on  metabolism  and  biofilm formation  in S. mutans. Biomed Res Int. 2018;1 –11. 18. Gartika  M,  Pramesti  HT,  Kurnia  D, Satari  MH.  A  terpenoid  isolated  from sarang  semut  (Myrmecodia  pendans) bulb  and  its  potential  for  the  inhibition and eradication of Streptococcus mutans  biofilm.  BMC  Complement Altern Med. 2018;18(151):1 –8.
19. Burne  RA,  Chen  YM,  Penders  JEC. Analysis of gene expression in Streptococcus  mutans  in  biofilms  in vitro. Adv Dent Res. 1997;11(1):100 –9. 20. Rozen  R,  Bachrach  G,  Bronshteyn  M, Gedalia  I,  Steinberg  D.  The  role  of fructans  on  dental  biofilm  formation  by Streptococcus sobrinus , Streptococcus mutans  ,  Streptococcus  gordonii  and Actinomyces viscosus. FEMS Microbiol Lett. 2001;195:205 –10.
21. Rozen  R,  Steinberg  D,  Bachrach  G.
Streptococcus mutans fructosyltransferase  interactions  with glucans. FEMS Microbiol Lett.
2004;232(1):39 –43.
22. Lee  SF,  Delaney  GD,  Elkhateeb  M.  A Two-component covRS regulatory System regulates expression of fructosyltransferase and a novel extracellular carbohydrate in Streptococcus mutans A two-
component  covRS  regulatory  system regulates expression of fructosyltransferase and a novel extracellular. Am Soc Microbiol.
2004;72(August 2004):3968 –73.
23. Milward  P,  Jacques  A.  Secretion  of fructosyltransferase  by  Streptococcus salivarius involves the sucrose- dependent  release  of  the  cell-bound form. J Gen Microbiol. 1990;136(May):165 –9. 24. Pabst  J,  Cisar  OTL.  The  cell  wall- associated levansucrase of actinomyces viscosus. Biochim Biophys
Acta. 1979;566:274 –82.
25. Abranches J, Nascimento MM, Zeng L, Browngardt CM, Wen ZT, Rivera MF, et al.  CcpA  regulates  central  metabolism and  virulence  gene  expression  in Streptococcus  mutans.  J  Bacteriol.
2008;190(7):2340 –9.
26. Abdul-aziz  MH,  Roberts  JA,  Lipman  J, Mouton  JW,  Hope  WW.  Applying pharmacokinetic/Pharmacodynamic principles  in  critically  Ill  p atients : optimizing efficacy and reducing resistance  development.  Thieme  Med Publ. 2015;36:136 –53.
27. Richards GA, Bch MB, Sa FCP, Joubert IA, Bch MB, Sa DA, et al. Optimising the administration of antibiotics in critically ill patients. South African Med J.
2015;105(5):1 –5.
28. Ariningtyas  E,  Hemiawati  SM, Laksono B. Perbedaan potensi antibakteri ekstrak  metanol  umbi  sarang  semut (Myrmecodia  pendens  Merr  &  Perry) dan  NaOCl  terhadap  Streptococcus mutans  (ATCC  25175).  J  Kedokt  Gigi. 2016;28(2):1 –7.