## Determinasi Bakteri Simbion Luminesensi Cumi Loligo edulis Serta Analisis Potensinya Sebagai Anti Bakteri
Delianis Pringgenies*, Dinny Anjang Sari, Ria Azizah T.N., Ervia Yudiati, Endang Sri Susilo dan Alfi Satriadi
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH. Kampus UNDIP Tembalang, Semarang 50275 Email: pringgenies@yahoo.com

## Abstract
The aim of this research is to determine luminous bacteria that symbiont with the light organ of the squid Loligo  edulis and also to find out the potency of simbiont bacteria in light organ  of  the  squid  L.  edulis.  The  squid  L.  edulis  were  collected  from  Teluk  Awur  Waters, Jepara.  Stages of this research began with the isolation of bacteria, bacteria screening for anti  bacteria,  antibacterial  activity  test  and  and  determination  of  bacterial  species  of  the isolate.  The  result  of  determination  showed  that  luminous  bacteria  which  symbiont  with  the light organ of the squid L. edulis is come from species of  Photobacterium phosphoreum.  The result showed that luminous bacteria which symbiont with the light organ of the squid L. edulis have potency as antibacterial compound. Bacteria P. phosphoreum which symbiont in light organ of the squid L. edulis could inhibit the growth of Vibrio harveyi (diameter of resistance zone had range from 8,30-8,87 mm), Escherichia coli (diameter of resistance zone had range from  7,84-8,45  mm),  Staphylococcus  aureus  (diameter  of  resistance  zone  had  range  from 8,39-9,09 mm) and Bacillus sp (diameter of resistance zone had range from 8,27-9,01).
Keyword : symbiosis,  L. edulis, P. phosphoreum, antibacterial

## Abstrak
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mendeterminasi  bakteri  simbion  yang bercahaya  yang  pada  organ  ringan  dan  mengetahui  potensi  bakteri  simbion  pada  organ ringan dari cumi cumi Loligo edulis. Cumi L. edulis dikoleksi dari perairan Teluk Awur, Jepara. Tahapan penelitian meliputi:  isolasi bakteri, skrining bakteri, uji aktivitas antibakteri dan dan identifikasi  spesies bakteri isolat. Hasil penelitian memperlihatkan bahwa bakteri luminensensi yang bersimbiosis dengan organ cahaya cumi L. edulis adalah bakteri jenis Photobacterium phosphoreum.  Bakteri  luminesensi  yang  menempel  pada  organ  cahaya  cumi  L.  edulis memiliki potensi sebagai senyawa antibakteri. Bakteri P. phosphoreum yang tergabung edulis dapat menghambat pertumbuhan bakteri pathogen Vibrio harveyi (diameter zona resistansi berkisar antara 8,30-8,87 mm), Escherichia coli (diameter zona resistansi berkisar antara 7,84- 8,45 mm), Staphylococcus aureus (diameter zona resistansi berkisar antara 8,39-9,09 mm) dan Bacillus sp (diameter zona resistansi berkisar antara 8,27-9,01).
Keyword : simbiosis,  Loligo edulis, Photobacterium phosphoreum, antibacteria

## PENDAHULUAN
Cepaholoda adalah biota laut yang memiliki  tangan  dibagian  kepalanya  dan masyarakat mengenal hewan ini  dengan: cumi,  sotong  dan  gurita.  Biota  laut  cumi ada  yang  memiliki  organ  cahaya sedangkan  Sotong  dan  gurita  tidak
(Pringgenies et  al., 2001).  Organ  cahaya pada  cumi Loligo  duvaucelii berasal  dari bakteri luminesensi yang bersimbiosis pada organ  cahayanya  (Pringgenies  dan Jǿrgensen,  1994). Organ  cahaya  cumi terdapat  menempel  pada  kantong tintanya  (Rudiana  dan  Pringgenies,  2004). Hasil  penelitian  Pringgenies  dan  Sejati
(2004)  memberikan  informasi  bahwa bakteri  yang  bersimbiosis  pada  organ cahaya  cumi-cumi L.  duvauceli adalah bakteri luminesensi
dari
jenis Photobacterium  phosphoreum .  Bakteri luminesensi  ini  pada  organ  cahaya  cumi- cumi  tidak  diturunkan  langsung  dari induknya  tetapi  melalui  lingkungan.  Pada masa juvenile ,  cumi-cumi  mengeluarkan senyawa  mukoid  yang  mempermudah bakteri  mengenali  pori-pori  tubuh  inang. Bakteri  memasuki  pori-pori  inang  dan masuk ke bagian dalam dengan bantuan flagella (Pringgenies. 2012).  Ketika bakteri mulai  menempel,  inang  mengeluarkan senyawa  racun  peroksida  (H 2 O 2 ),  tetapi bakteri  dengan  enzim  katalase  mampu mengkatalisis  senyawa  peroksida  menjadi senyawa  lain  yang  tidak  berbahaya  dan melepaskannya  ke  lingkungan.    Akibat masuknya  bakteri,  beberapa  sel  inang mengalami kematian sehingga mikroorganisme  dan  inang  akan  menyatu (Utomo, 2005).
Berdasarkan  gambaran  keadaan tersebut,  maka  perlu  kiranya  dilakukan penelitian  mengenai  determinasi  bakteri luminesensi  yang  bersimbiosis  pada  organ cahaya  cumi-cumi L.  duvauceli dan L. edulis serta aktivitas antibakterinya terhadap  bakteri  patogen  penyebab penyakit  pada  hewan  dan  manusia. Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  tujuan penelitian adalah  untuk mengetahui jenis bakteri  Determinasi  bakteri  luminesensi yang  bersimbiosis  pada  organ  cahaya cumi-cumi L.  edulis .  Disamping  itu,  untuk mengetahui  potensi  bakteri  luminesensi yang  bersimbiosis  pada  organ  cahaya cumi-cumi L. edulis .

## MATERI DAN METODE
Materi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah    bakteri  luminesensi yang  diisolasi  dari  organ  cahaya  cumi- cumi L.  edulis sedangkan  bakteri  uji  yang digunakan dalam uji sensitivitas antibakteri adalah Vibrio  harveyi , V.  alginolyticus, Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus dan Bacillus sp.
Pelaksanaan  Penelitian  meliputi: sterilisasi  alat  dan  bahan  yang  akan digunakan  dalam  penelitian,  pembuatan
media  isolasi  bakteri  luminesensi  yang terdiri  dari  media  Nutrient  Agar  (NA)  dan Nutrient  Broth  (NB),  koleksi  sampel  cumi- cumi L.  duvauceli dan L.  edulis , pengambilan sampel organ cahaya cumi- cumi yang menempel pada kantong tinta, isolasi  bakteri  luminesensi,  determinasi bakteri  luminesensi  dan  uji  sensitivitas antibakteri.
Determinasi bakteri luminesensi meliputi pewarnaan Gram dan uji dengan media  TCBS.  Langkah  untuk  uji  ini  adalah dengan  menginokulasi  bakteri  luminesensi yang  diisolasi  dari  organ  cahaya  cumi- cumi L.  edulis pada  media  TCBS  dengan cara gores kemudian diinkubasi selama 24 jam  dan  diamati  ada  atau  tidaknya pertumbuhan bakteri.  Uji dikatakan positif (+)  jika  bakteri  tumbuh  pada  media  TCBS sedangkan  hasil  uji  dikatakan  negatif  (-) jika  tidak  terdapat  pertumbuhan  bakteri pada  media  TCBS.  Selanjutnya  adalah  uji oksidase, uji Indol, uji Hugh-Leifson (OF), uji motilitas,  uji  H 2 S,  uji  Voges-Proskauer.
Selanjutya  dilakukan  uji sensitivitas  isolat bakteri luminesensi
terhadap pertumbuhan bakteri pathogen.
Isolat  bakteri  simbion  cumi L.  edulsi yang  memberikan  hasil  positif  terhadap bakteri  uji  kualitatif  selanjutnya  dilakukan uji  kuantitatif.    Metode  yang  digunakan untuk uji kuantitatif sama dengan metode uji kualitatif.  Pembentukan diameter zona hambatan  (daerah  yang  tidak  ditumbuhi bakteri  di  sekeliling  kertas  cakram)  diukur tiap waktu inkubasi 24 jam, 48 jam, 72 jam dan 96 jam dengan menggunakan jangka sorong.    Semua  kegiatan  tersebut  di  atas dilakukan dalam keadaan aseptis.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  isolasi  yang  dikerjakan dengan  metode  Lay  (1994)  diperoleh  8 isolat,  namum  hanya  1  isolat  murni  yang berpendar.  Penentuan  isolat  bakteri luminesensi  yang  bersimbiosis  pada  organ cahaya  cumi-cumi L.  edulis didasarkan pada  morfologi  koloni  bakteri  luminesensi yang  ditumbuhkan  pada  media  Nutrient Agar  (NA)  di  dalam  cawan  petri  serta pengamatan  pemancaran  cahaya  oleh bakteri  pada  ruang  gelap.  Selanjutnya dilakukan  pemurnian  terhadap  isolat
bakteri  sehingga  didapatkan  isolat  murni bakteri luminesensi.
Pengamatan morfologi  koloni  bakteri  luminesensi  ini meliputi  warna,  bentuk,  permukaan  dan bagian  tepi  koloni.  Hasil  isolasi  bakteri luminesensi  yang  bersimbiosis  pada  organ cahaya  cumi-cumi L.  edulis menunjukkan bahwa  koloni  bakteri  yang  ditumbuhkan pada  media  NA  dapat  memancarkan cahaya  yang  berwarna  kebiruan  jika ditempatkan  pada  ruangan  gelap.  Isolat bakteri luminesensi yang bersimbiosis pada organ cahaya cumi-cumi L. edulis . Hasil uji biokimia  menunjukkan  bahwa  isolat  L2 bersifat Gram negatif, dapat memancarkan  cahaya  di  ruang  gelap, tidak  tumbuh  pada  media  uji  TCBS, menghasilkan enzim oksidase, tidak dapat membentuk  indol,  oksidatif  terhadap karbohidrat  (sukrosa  dan  laktosa),  motil, tidak menghasilkan H 2 S pada pertumbuhan  dengan  SIM  medium  dan dapat  melaksanakan  fermentasi  2,3- butanadiol.
Berdasarkan  pengamatan  morfologi dan  uji  biokimia    bakteri  luminesensi  yang bersimbiosis  pada  organ  cahaya  cumi- cumi L.  edulis maka  bakteri  tersebut termasuk ke dalam jenis bakteri Photobacterium phosphoreum . Uji
sensitivitas isolat bakteri luminesensi terhadap  pertumbuhan  bakteri  patogen menunjukkan  bahwa  isolat  bakteri  yang diisolasi  dari  organ  cahaya  cumi-cumi L. edulis bersifat  bioaktif  atau  mempunyai kemampuan untuk menghambat pertumbuhan bakteri uji. Hasil uji kuantitatif sensitivitas  antibakteri    isolat L. edulis terhadap  bakteri  uji  ( V.  harveyi , E.  coli,  S. aureus dan Bacillus sp) (Tabel. 1)
Pembentukan diameter zona hambatan yang terbesar diperoleh dari uji sensitivitas  antibakteri  terhadap V.  harveyi adalah  pada  waktu  inkubasi  24  jam  yaitu sebesar  (8,87  ±  0,100)  mm  untuk  isolat L. edulis. Diameter  zona  hambatan  yang terbesar yang diperoleh dari uji sensitivitas antibakteri terhadap E. coli adalah pada waktu inkubasi 24 jam yaitu sebesar (8,31 ± 0,101)  mm  untuk  isolat L. edulis . Pembentukan  diameter  zona  hambatan isolat L. edulis selama masa inkubasi 4 x 24 jam mengalami penurunan. Hasil diameter zona  hambatan  yang  terbesar  yang diperoleh  dari  uji  sensitivitas  antibakteri terhadap S.  aureus adalah  pada  waktu inkubasi 48 jam yaitu sebesar (9,00 ± 0,153) mm  untuk  isolat L. edulis sebesar  (9,09  ± 0,182)  mm  pada  waktu  inkubasi  72  jam. Diameter  zona  hambatan  yang  terbesar
Tabel 1. Diameter zona hambatan hasil uji kuantitatif dari  isolat L2  terhadap V.  harveyi , E. coli , S. aureus dan Bacillus sp.
Bakteri pathogen Waktu Inkubasi (jam) Diameter Zona Hambatan (mm) Rerata (mm) ISD I II III V.  harveyi 24 48 72 96 8,87 8,83 8,40 8,50 8,77 8,60 8,13 8,13 8,97 8,93 8,37 8,77 8,87 8,79 8,30 8,47 0,100 0,169 0,148 0,321 E. coli 24 48 72 96 8,20 8,63 8,03 8,03 8,33 8,17 8,03 8,00 8,40 7,83 7,50 7,50 8,31 8,21 7,85 7,84 0,101 0,401 0,306 0,298 S. aureus 24 48 72 96 9,20 9,27 9,30 9,17 8,83 8,90 8,97 8,90 9,03 9,03 9,00 8,97 9,02 9,07 9,09 9,01 0,185 0,188 0,182 0,140 Bacillus sp 24 48 72 96 9,30 9,03 8,63 8,10 9,03 8,90 8,87 8,60 8,70 8,57 8,23 8,10 9,01 8,83 8,58 8,27 0,300 0,237 0,323 0,288
Keterangan : ISD = Indeks Standar Deviasi
yang  diperoleh  dari  uji  sensitivitas antibakteri  terhadap Bacillus sp adalah pada waktu  inkubasi 24  jam yaitu sebesar (8,92  ±  0,068)  mm  untuk  isolat L. edulis . Pembentukan  diameter  zona  hambatan isolat L. edulis terhadap Bacillus sp selama masa  inkubasi  4  x  24  jam  mengalami penurunan.

## Pembahasan
Hasil penelitian memperlihatkan bahwa  pancaran  cahaya  isolat L. duvauceli terlihat  lebih  terang  jika dibandingkan  dengan  pancaran  cahaya isolat L.  edulis .    Pancaran  cahaya  ini dipengaruhi  oleh  diameter  koloni  dan jumlah total bakteri luminesensi (Pringgenies dan Sejati, 2004). Isolat bakteri luminesensi  yang  berhasil  didapatkan  dari organ  cahaya  cumi-cumi L.  edulis kemudian diidentifikasi berdasarkan karakteristik  bakteri  luminesensi  dari  genus Vibrio  dan  Photobacterium.    Hasil identifikasi  isolat  bakteri  luminesensi  yang bersimbiosis  pada  organ  cahaya  cumi- cumi L.  edulis kemudian  dibandingkan dengan karakteristik bakteri genus Photobacterium  dan  karakteristik  spesies bakteri  luminesensi  berdasarkan  acuan Baumann et  al .,  (1984).  Berdasarkan  sifat Gram,  bakteri P.  phosphoreum yang diisolasi dari organ cahaya cumi-cumi dan L.  edulis tergolong  bakteri  Gram  negatif. Menurut  Pelczar  dan  Chan  (1986)  bakteri Gram  negatif  mempunyai  struktur  dinding sel  yang  tipis  dan  berlapis  tiga  dengan kandungan  lipid  yang  tinggi  sekitar  11-22 %,  peptidoglikan,  protein,  fosfolipida  dan liposakarida  (LPS).    Menurut  Pringgenies dan
Sejati (2004)
meskipun P. phosphoreum termasuk  golongan  bakteri Gram  negatif  tetapi  sejauh  ini  belum  ada laporan mengenai patogenitas bakteri ini. Kemungkinan  selama  proses  koevolusinya inang  telah  mengantisipasi  keberadaan LPS bakteri dengan mensekresikan senyawa  penetralisir  melalui  mikrovili- mikrovili dalam lumen.
P.  phosphoreum termasuk  ke  dalam famili  Vibrionaceae.  Bakteri  ini  berbentuk batang  dengan  ukuran  1,8-2,4  µm  dan dengan  diameter  0,8-1,3  µm  dan  dapat
tumbuh  pada  temperatur  4-30 0 C.  Genus Photobacterium  mempunyai  butiran  poly- β-hydroxybutyrate  (PHB)  yang  merupakan salah  satu  karakteristik  khas  dari  bakteri luminesensi  ini  (Baumann et  al .,  1984)  dan membedakannya  dari  2  genus  bakteri luminesensi lain yaitu Vibrio dan Xenorhabdus (Holt et al ., 1993 dalam Sejati et al ., 2003).  Menurut Brock (1991) bahwa butiran poly-β-hydroxybutyrate (PHB)
merupakan sumber energi bagi sel bakteri.
Uji sensitivitas isolat
bakteri luminesensi terhadap pertumbuhan bakteri  pathogen  menunjukkan  adanya aktivitas penghambatan terhadap bakteri uji  dengan  terbentuknya  zona  jernih  di sekeliling  kertas  cakram.  Perbedaan kemampuan  penghambatan  dari  isolat bakteri terhadap bakteri pathogen diduga  karena  adanya  perbedaan kemampuan  bakteri  uji  dalam  menetralisir metabolit  sekunder  yang  dihasilkan  oleh isolat bakteri L. edulis .  Tidak adanya zona hambatan  pertumbuhan V.  alginolyticus diduga  karena  isolat L.  edulis yang digunakan  tidak  menghasilkan  antibiotik atau  zat  penghambat  lainnya  dalam mengendalikan
pertumbuhan V.
alginolyticus serta kemampuan V. alginolyticus sendiri  dalam  menetralisir  zat penghambat tersebut. Luas diameter zona hambatan  yang  terbentuk  pada  uji sensitivitas isolat bakteri luminesensi terhadap bakteri  patogen  berbeda-beda untuk tiap bakteri uji.  Menurut  Brock dan Madigan  (1991)  luas  diameter  zona hambatan  di  sekeliling  kertas  cakram dipengaruhi  oleh  sensitivitas  bakteri  uji terhadap  agen  antibakteri,  kesesuaian media pertumbuhan mikroorganisme, kondisi  pada  saat  inkubasi,  laju  difusi  dari agen  antibiotik  di  dalam  media  dan konsentrasi molekul agen antibiotik.
Berdasarkan hasil pengamatan dapat  diketahui  bahwa  waktu  inkubasi memberikan pengaruh pada pembentukan  diameter  zona  hambatan pertumbuhan  bakteri  uji.    Adanya  zona hambatan  yang  terbentuk  menandakan bahwa bakteri P. phosphoreum menghasilkan  metabolit  sekunder  yang berfungsi  sebagai  senyawa  antibakteri yang  dapat  menghambat  pertumbuhan
bakteri uji.  Metabolit sekunder merupakan senyawa  kimia  hasil  metabolisme  yang terkandung di dalam organisme. Metabolit sekunder tidak langsung mempengaruhi  kehidupan  organisme, tetapi  bahan  ini  tetap  sangat  berguna untuk  mempertahankan  kelangsungan hidup organisme dari pengaruh lingkungan  alam  sekitarnya  (Manitto,
1980). Bakteri Gram
positif hanya mempunyai  satu  lapis  dinding  sel  yang tebal  sedangkan  bakteri  Gram  negatif mempunyai  struktur  dinding  sel  yang berlapis. Bakteri Gram negatif mempunyai membran luar di  luar dinding  sel  selain  itu juga  mempunyai  membran  sitoplasma. Diduga  hal  inilah  yang  menyebabkan perbedaan  besarnya  zona  hambatan yang terbentuk antara bakteri Gram positif dan bakteri Gram negatif.   Zat antibakteri akan  lebih  mudah  masuk  melewati  satu lapis dinding sel pada bakteri Gram positif dibandingkan  dengan  melewati  tiga  lapis dinding  sel  bakteri  Gram  negatif  (Bibiana dan  Hastowo,  1992 dalam Susanto et  al ., 1996).
Sebagian  besar  dinding  sel  bakteri Gram  positif  terdiri  dari  peptidoglikan sedangkan  dinding  sel  bakteri  Gram negatif  mempunyai  kandungan  lipida yang  tinggi  dibandingkan  dinding  sel bakteri  Gram  positif  (Lay,  1994).    Dinding sel  berfungsi  memberi  bentuk  tertentu pada  sel,  untuk  memberi  perlindungan, memegang  peranan  dalam  pembelahan sel  dan  untuk  mengatur  keluar  masuknya zat  kimia  (Dwidjoseputro,  1987).    Menurut Wattimena et  al .,  (1994) dalam Susanto (1996)  tekanan  internal  bakteri  Gram positif 3-5 kali lebih besar jika dibandingkan  dengan  bakteri  Gram negatif.   Setelah pelekatan zat antibakteri oleh  reseptor,  reaksi  transpeptidase  akan dihambat  dan  disintesa  peptidoglikan tertahan  kemudian  dilanjutkan  dengan penghentian  aktivitas  suatu  penghambat enzim otolitik dalam dinding sel.  Hal inilah yang  akan  mengaktifkan  enzim  litik  dan mengakibatkan  lisis  sel.    Dikarenakan bakteri  Gram  positif  mempunyai  tekanan internal  yang  lebih  besar  dibandingkan bakteri  Gram  negatif  maka  lisis  yang ditimbulkan akan lebih besar. Menurut Lay (1994) berbagai faktor yang
mempengaruhi penghambatan mikroorganisme  mencakup  kepadatan populasi mikroorganisme, kepekaan terhadap  bahan  antimikrobial,  volume bahan  yang  disterilkan,  lamanya  bahan antimikrobial
diaplikasikan
pada mikroorganisme, konsentrasi bahan antimikrobial, suhu dan kandungan bahan organik.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan,  hasil  determinasi  bakteri luminesensi  yang  bersimbiosis  pada  organ cahaya L.  edulis adalah  jenis  bakteri Photobacterium  phosphoreum .  Bakteri luminesensi  dari  cumi-cumi L.  edulis berpotensi  sebagai  antibakteri.  Senyawa antibakteri  yang  dihasilkan  oleh  bakteri P. phosphoreum mampu menghambat pertumbuhan  bakteri  Gram  negatif    ( V. harveyi dan E.  coli )  dan  bakteri  Gram positif ( S. aureus dan Bacillus sp).

## DAFTAR PUSTAKA
Baumann,  P.,  Furnis,  A.L.  &  Lee,  J.V.  1984. Facultatively  An  Aerobic  Negative Rods, in N.R Krieg. Bergey’s Manual of Systematic  Bacteriology.  Volume  1. Williams & Wilkins, USA. 964 pp.
Brock, T.D & Madigan, M.T. 1991. Biology of Microorganism. Prentice Hall, Englewood Cliff, New Jersey. 909 pp.
Dwidjoseputro,  D.  1987.  Dasar-Dasar Mikrobiologi.  Djambatan,  Jakarta,  214 hlm.
Gupte,  S.  1990.  Mikrobiologi  Dasar.
Binarupa Aksara. Jakarta. (diterjemahkan oleh Julius E. Suryawidjaja) Lay,  B.W.  1994.  Analisis  Mikroba  di Laboratorium. PT Rajagrafindo Persada, Jakarta, 168 hlm.
Pringgenies,  D.,  Sastrodihardjo,  S.,  Nganro, N.R.  &  Aryantha,  I.N.  2001.  Bacterial Symbionts  in  the  Luminous  Organ  of the  Squid, Loligo  duvauceli ,  and Cuttlefish, Sepia sp.  Phuket  Marine Biological  Center  Special  Publication. 25(1):145-148.
Pringgenies,  D  &  J.M  Jǿrgensen.1994. Morphology of the Luminous Organ of
the  Squid Loligo  duvauceli d’Orbigny,
1839. Acta Zoologica. 75(4):305-309. Pringgenies, D & Sedjati, S. 2004. Isolasi dan Determinasi  Bakteri  Luminesensi  yang Bersimbiosis  pada  Cumi-cumi Loligo duvauceli . J.  Ilmiah  Pengembangan Ilmu-ilmu Kelautan. 9 (1):26-30. Pringgenies, D. 2012. Fenomena Bioluminensensi  Cumi-Cumi  ( Loligo duvauceli) Berasal dari Bakteri Simbion. Jurnal  Harpodon  Borneo. 5(1):63-73
Rudiana,  E.  &  Pringgenies,  D.  2004.
Morfologi  dan  Anatomi  Cumi-cumi Loligo  duvauceli yang  Memancarkan Cahaya. J.  Ilmiah  Pengembangan Ilmu-ilmu Kelautan . 9(2):96-100. Sedjati,  S.,  Pujiastuti,  J.  &  Pringgenies  D. 2003.  Determinasi  Bakteri  Luminesensi yang  Bersimbiosis  pada  Inang  Sotong
Sepia  esculenta (Bakteri  sebagai sumber cahaya). Universitas
Diponegoro,  Semarang.  (Laporan Penelitian).  (tidak  dipublikasikan).  21 hlm.
Utomo,  Y.W.  2005. Vibrio  fischery ,  Si Pemantau  Laut.  (http://pasti.itgo.com /tabloid/edisi23/iptek.htm) (Tanggal pengambilan 10 Juli 2017).
Susanto, A.B., O.K. Radjasa dan T. Bachtiar. 1996.  Studi  Pendahuluan  Potensi Ekstrak Kasar Calcareous Algae Genus Halimeda dari Perairan Jepara Sebagai Senyawa Antibakteri. Universitas  Diponegoro,  Semarang.
(Laporan  Hasil  Penelitian).  (tidak dipublikasikan). 27 hlm.