P-ISSN: 2302-8270 E-ISSN: 2808-1048
Cite  this  Indriyani,  N.,  Rahman,  A.P.  and  Humaidi,  F.  (2024)  ‘Detection  of  Aflatoxin  Content  in  Candlenut  ( Aleurites  moluccana ) Simplicia at Karang Penang Market using PDA ( Potato Dextrose Agar ) Method', Berkala Ilmiah Kimia Farmasi , 11(1), pp. 1-4. DOI: 10.20473/bikfar.v11i1.51957
Copyright: ©2024 by the authors. Submitted for possible open-access publication under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International (CC BY-SA) license

## Detection of Aflatoxin Content in Candlenut (Aleurites moluccana) Simplicia at Karang Penang Market using PDA (Potato Dextrose Agar) Method
Uji Kandungan Aflatoksin pada Simplisia Buah Kemiri ( Aleurites moluccana ) di Pasar Karang Penang dengan Metode Media PDA ( Potato Dextrose Agar )
Nova Indriyani 1) , Alief Putriana Rahman 1) *, Fauzan Humaidi 1)
1 Faculty of Health Science, Universitas Islam Madura, Madura, Indonesia
*Corresponding author E-mail: aliefputrianar@gmail.com
Article History: Received: November 27, 2023; Revised: June 25, 2024; Accepted: June 28, 2024; Online: June 30, 2024

## ABSTRACT
Candlenut ( Aleurites moluccana ) was a food ingredient widely used as a cooking spice. Candlenuts that were stored for too long rotted more easily and grew fungi, especially Aspergillus niger and Aspergillus flavus. These types of fungi could produce mycotoxin compounds which were dangerous when consumed by  humans.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  the  presence  of  aflatoxin  content  in  candlenut ( Aleurites  moluccana )  in  the  Karang  Penang  Sampang  market.  This  research  used  total  sampling. Candlenuts chosen as samples were all the candlenuts sold unwrapped by sellers in the Karang Penang market. This method used PDA media with the Pour Plate technique and an incubation time of 7 days. The results  of  the  study  showed  8  samples  of  candlenut  with  positive  packaging  containing  the  fungus Aspergillus  niger with  blackish-brown  colonies  and  1  sample  of  candlenut  without  positive  packaging containing  the  fungus Aspergillus  flavus with  round  yellowish-green  colonies.  In  this  study,  it  was concluded  that  the  candlenuts  circulating  in  the  Karang  Penang  Sampang  Market  were  positive  for Aspergillus niger and Aspergillus flavus .
Keywords:  Candlenut, PDA media, Aspergillus niger, Aspergillus flavus

## ABSTRAK
Kemiri ( Aleurites moluccana ) merupakan salah satu bahan pangan yang banyak digunakan sebagai rempah masakan. Kemiri yang di simpan terlalu lama akan lebih mudah membusuk dan di tumbuhi oleh jamur terutama  jamur Aspergillus  niger dan Aspergillus  flavus .  Jenis  jamur  ini  dapat  menghasilkan  senyawa mikotoksin  yang  berbahaya  apabila  dikonsumsi  oleh  manusia.  Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui adanya  kandungan  aflatoksin  pada  kemiri  ( Aleurites  moluccana )  yang  ada  di  pasar  Karang  Penang Sampang. Metode sampling menggunakan total sampling. Kemiri yang dipilih sebagai sampel yaitu semua kemiri  yang  dijual  oleh  pedagang  dipasar  Karang  Penang.  Metode  yang  digunakan  pada  penelitian  ini menggunakan  media  PDA  dengan  teknik Pour  Plate selama  waktu  inkubasi  7  hari.  Hasil  penelitian didapatkan 8 sampel kemiri dengan kemasan positif mengandung jamur Aspergilus niger dengan koloni berwarna  coklat  kehitaman  dan  1  sampel  kemiri  tanpa  kemasan  positif  mengandung  jamur  Aspergilus flavus dengan koloni berwarna hijau kekuningan berbentuk bulat. Penelitian ini dapat di simpulkan bahwa kemiri yang beredar di Pasar Karang Penang Sampang beberapa positif di tumbuhi jamur Aspergillus niger dan jamur Aspergillus flavus .
Kata kunci: Kemiri, media PDA, Aspergilus niger, Aspergilus flavus

## PENDAHULUAN
Aflatoksin merupakan cemaran alami yang dihasilkan  oleh  beberapa  spesies  dari  fungi aspergilus yang  banyak  ditemukan  di  daerah  yang  beriklim  panas dan  lembab,  terutama  pada  suhu  27  -  40℃  dan kelembaban  yang  tinggi  dapat  memicu  perkembangan Aspergilus flavus untuk memproduksi aflatoksin sebagai mitotoksin  (Aini,  2012).  Cemaran Aspergillus  flavus dapat terlihat dari pertumbuhan fungi yang berbentuk
seperti  serbuk  berwarna  hijau  keabuan  atau  hijau kekuningan (Aini, 2012).
Berdasarkan  klasifikasi International  Agency  for Research on Cancer (IARC) pada tahun 2002, aflatoksin termasuk  dalam  senyawa  kelompok  1  yakni  senyawa yang bersifat karsinogenik pada manusia. Selain bersifat karsinogenik, aflatoksin ini juga bersifat genotoksik dan hepatoksik.  Jenis-jenis  bahan  pangan  yang  rentan terhadap  kontaminasi  aflatoksin  antara  lain  jagung, kacang-kacangan, beras dan susu.
Aflatoksin  merupakan  mitotoksin  yang  dihasilkan oleh 20 spesies kapang yang termasuk kedalam kelompok genus Aspergillus .  Kapang Aspergillus mudah  tumbuh dan  menghasilkan  toksin  pada  kisaran  suhu  12-48℃ dengan pertumbuhan optimal  pada  suhu  37℃ kelembapan  yang  tinggi  dapat  memicu  terhadap perkembangan aspergilus  flavus untuk  memperodusi aflatoksin. Sebaliknya pada kondisi anaerob menghambat pertumbuhan aspergilus flavus sehingga akan menurunkan resiko produksi aflatoksin (Broto, 2018).
Uji  kandungan  aflatoksin  dilakukan  pada  bahan pangan berupa kemiri ( Aleurites moluccana ) yang beredar di Pasar Tradisional Karang Penang Sampang dikarenakan  suhu  dan  kelembaban  di  lingkungan  pasar dan  tempat  penyimpanan  kemiri  yang  kurang  higienis serta  dalam  jangka  waktu  yang  lama  sehingga menyebabkan mudah terkontaminasi oleh jamur terutama jamur Aspergilus niger dan jamur Aspergilus flavus .
Kemiri yang mengandung aflatoksin dan terakumulasi  didalam  tubuh  akan  menyebabkan  efek paling  parah  yaitu  penyakit  kanker.  Hal  tersebut disebabkan  karena  Aflatoksin  bersifat  karsinogenik, hepatotoksik  sehingga  dapat  menurunkan immune (kekebalan  tubuh  manusia).  Aflatoksin  memiliki  titik lebur  antara  246-299℃,  sehingga  tidak  rusak  selama proses  pemasakan.  Aflatoksin  juga  tidak  terurai  dalam sistem  pencernaan  manusia  dan  hewan,  sehingga akumulasi paparan aflatoksin pada jangka panjang dapat menyebabkan penyakit kronis.
Menurut  Kuswiyanto  (2015),  pengujian  kandungan aflatoksin  pada  kemiri  dilakukan  menggunakan  media PDA dengan metode Pour Plate (Agar tuang). Metode ini menyebabkan  sel-sel  bakteri  pertumbuhan  jamur  tidak hanya terdapat pada permukaan media agar tetapi juga di dalam  atau  bahkan  di  dasar  media  agar  sehingga pertumbuhan jamur dapat diamati secara makroskopik. Media PDA merupakan media yang pada umumnya di gunakan untuk pertumbuhan jamur di karenakan media PDA memiliki pH yang rendah yaitu 4,5 - 5,6 sehingga mendukung  terhadap  pertumbuhan  jamur.  Karena  pada dasarnya media PDA yang ini memiliki tingkat keasaman yang rendah dan dapat menghambat terhadap pertumbuhan  bakteri  yang  membutuhkan  lingkungan yang netral dengan pada pH 7,0 dan suhu optimum untuk pertumbuhan  jamur  berkisar  antara  25-30℃  (Rafika, 2022).
Berdasarkan  dengan  komposisinya  media  PDA merupakan  media  yang  termasuk  dalam  media semisintetik  yang  karena  tersusun  atas  bahan  alami berupa  kentang  dan  bahan  sintetis  berupa  dekstrosa dexstrose  dan  agar.  Kentang  mengandung  karbohidrat, vitamin, dan mikronutrien lain yang dapat di manfaatkan untuk pertumbuhan jamur, sedangkan dexstrose dekstrosa merupakan  karbohidrat sederhana  yang  menjadi  sumber energi untuk jamur tumbuh yang dapat sesegera mungkin untuk  digunakan  sedangkan  untuk  media  agarnya berfungsi  sebagai  bahan  pemadat.  Sehingga  masing- masing dari ketiga komponen tersebut sangat di perlukan bagi pertumbuhan dan perkembangbiakan mikrorganisme terutama pada jamur (Jamilatun et al ., 2020).
Menurut  Novianti  (2022),  menyatakan  bahwa pertumbuhan Trichoderma  sp sangat  bergantung  pada ketersediaan karbohidrat yang digunakan sebagai sumber energi untuk pertumbuhannya. Bahan yang mengandung karbohidrat  dengan  konsentrasi  yang  tinggi  akan
mendorong pertumbuhan jamur. Pertumbuhan jamur yang tinggi  akan  menghasilkan  jumlah  spora  yang  lebih banyak,  sedangkan  proses  pertumbuhan  jamur  yang rendah  akan  menghasilkan  jumlah  spora  yang  lebih sedikit.
Jagung  dan  kacang  tanah  merupakan  media  yang sangat  baik  untuk  pertumbuhan  jamur  penghasil aflatoksin  dan  jenis  mikotoksin  lainnya  sehingga  di golongkan  sebagai  komoditas  sangat  rentan  beresiko tinggi  terhadap  kontaminasi  mikotoksin  (Nurmayani, 2022). Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui adanya kandungan  aflatoksin  pada  kemiri  yang  ada  di  Pasar Tradisonal Karang Penang Sampang.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Lokasi dan Lama Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kimia DIII Farmasi Universitas Islam Madura Pamekasan. Penelitian ini  merupakan  penelitian  eksperimental  dengan  jenis penelitian  deskriptif  kualitatif,  dan  sampel  yang digunakan pada penelitian ini sebanyak 9 sampel  dengan teknik  pengambilan  sampel  total  sampling.  Hal  tersebut digunakan  karena  hanya  ada  9  penjual  kemiri  dipasar tersebut.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  adalah  alat-alat  gelas  dari pyrex, alat pembakar spirtus, cawan petri, neraca analitik (O’hauss),  autoklaf,  ayakan  20  mesh,  kertas  saring, aluminium  foil,  hotplate  ( Thermo  Cimarec ),  rotary evaporator,  water  batch,  batang  pengaduk  dan  pinset. Bahan yang digunakan  adalah sampel buah kemiri yang dijual  di  Pasar  Karang  Penang  Kabupaten  Sampang- Madura,  jagung  yang  berjamur  dengan  warna  jamur berwarna hijau, media PDA, metanol 99%, aquadest.

## Preparasi Kontrol Positif
Jagung  pipilan  ditimbang  sebanyak  500  gram  dan dihaluskan.  Kemudian  diayak  menggunakan  ayakan ukuran 20 mesh. Hasil ayakan diencerkan dengan metanol 60% dengan perbandingan 6:4 (Agrotek & Yusuf, 2022).
Serbuk  jagung  sebanyak  450  gram  diekstraksi dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  metanol 60% sebanyak 100 ml selama 24 jam. Kemudian maserat disaring  menggunakan  kertas  saring  dan  dievaporasi menggunakan rotary evaporator hingga terbentuk ekstrak kental (Agrotek & Yusuf, 2022).

## Preparasi Ekstrak Sampel Kemiri
Buah  kemiri  ditimbang  sebanyak  5  gram  dan dihaluskan,  lalu  dimaserasi  menggunakan  metanol  60% sebanyak  125  ml.  Larutan disaring  menggunakan  kertas saring  dan  filtrat  I  pipet  sebanyak  15  ml  kocok  hingga homogen, dan ekstrak siap digunakan untuk uji (Fitriana & Sulistyaningsih, 2019).

## Pembuatan Media PDA
Media PDA ditimbang sebanyak 7,8 gram, kemudian serbuk  PDA  dilarutkan  dengan  150  ml  aquadest  hingga homogen lalu dipanaskan di atas hotplate . Larutan PDA yang  sudah  homogen  dituangkan  ke  dalam  erlenmeyer. Larutan  PDA  dalam  erlenmeyer  disterilisasi  dalam autoklaf pada suhu 121℃ selama 15 menit. Media PDA
sebanyak 15 ml ditambahkan pada masing-masing cawan petri hingga padat (Agrotek & Yusuf, 2022).

## Pengujian Aflatoksin pada Media PDA
Larutan  media  PDA  dituangkan  pada  cawan  petri hingga  memadat,  lalu  ekstrak  kemiri  ditambahkan  pada cawan petri yang berisi media PDA tersebut. Cawan petri digoyangkan secara memutar agar larutan ekstrak kemiri tercampur merata pada media PDA dan diinkubasi selama 7 hari (Agrotek & Yusuf, 2022).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Identifikasi  kandungan  aflatoksin  pada  kemiri  dari Pasar  Tradisonal  Karang  Penang,  Sampang  dilakukan melalui uji kualitatif dengan menggunakan metode media PDA. Hasil menunjukkan bahwa 8 sampel kemiri dengan kemasan  positif  mengandung  jamur Aspergilus  niger ( Gambar 1C ) dan 1 sampel kemiri tanpa kemasan positif mengandung jamur Aspergilus flavus ( Gambar 1D ).
A B C D
Gambar  1. Pertumbuhan  Jamur  pada  Inkubasi  Hari  ke-7.  A (Kontrol  +),  B  (Kontrol  -),  C  (+  jamur aspergilus niger ) dan D (+ jamur aspergilus flavus )
Hasil  pertumbuhan  jamur Aspergilus  niger dan Aspergilus  flavus dapat  diamati  pada Gambar  1 .  Jamur Aspergilus  niger positif  ditandai  dengan  adanya  koloni berwarna  coklat  kehitaman  di  atas  permukaan  media PDA,  sedangkan  pertumbuhan  jamur Aspergilus  flavus positif  ditandai  dengan  adanya  koloni  berwarna  hijau kekuningan/hijau tua.  Kontrol positif dalam penelitian ini menggunakan  jagung  sebagai  standart  aflatoksin  karena aflatoksin paling banyak tumbuh pada jagung. Ciri jagung yang  ditumbuhi  jamur Aspergilus yaitu  jagung  dengan jamur berwarna hijau. Selain itu, jagung juga merupakan substrat  yang  sangat  cocok  dalam  pertumbuhan  dan perkembangan  jamur  terutama  jamur  yang  dihasilkan merupakan  jamur Aspergilus  flavus (Sukmawati et  al ., 2018). Proses  preparasi  jagung  sebagai  kontrol  positif menggunakan  pelarut  metanol  60%  karena  pelarut tersebut  memiliki  toleransi  yang  rendah  terhadap  ikatan antibodi  dalam  sistem,  sehingga  memperkecil  rekoveri aflatoksin.  Metanol  dalam  aflatoksin  jagung  memiliki sifat  toleransi  yang  sangat  baik  dari  pada  plarut-pelarut
polar  lainnya  seperti  aseton,  klorofom,  etanol  dan asetonitril (Wijayanti, 2010). Kontrol negatif menggunakan  media  PDA  yang  dilarutkan  dengan aquadest  sehingga  tidak  diketahui  adanya  pertumbuhan jamur Aspergilus flavus dan Aspergilus niger ( Gambar 2 ).
Gambar 2 . Pertumbuhan Jamur
Kemiri  dari  pasar  Tradisional  Karang  Penang Sampang  tercemar  oleh  jamur Apergilus  flavus dan Aspergilus  niger karena  tempat  penyimpanan  yang digunakan adalah wadah kontainer terbuka dan dibungkus plastik  sehingga  kemiri  mudah  lembab  maka  jamur mudah berkembang biak dengan baik (Zahara, 2021).
Faktor  lain  yang  menyebabkan  pertumbuhan jamur pada  kemiri  dari  Pasar  Tradisonal  Karang  Penang
Sampang  adalah  suhu  penyimpanan,  lamanya  masa penyimpanan,  dan  tempat  penyimpanan  yang  kurang bersih.  Selain  itu  faktor  pendukung dalam  pertumbuhan jamur,  karena  kandungan  kemiri  yang  berupa  lemak, karbohidrat,  dan  juga  protein  yang  merupakan  substrat yang  sangat  baik  dalam  pertumbuhan  jamur  terutama Aspergilus niger .
Sampel  kemiri  yang  berjumlah  9  diinkubasi  pada media  PDA  selama  7  hari  karena  pada  hari  ke-7  jamur telah  berada  pada  fase  logaritmik  atau  eksponensial sehingga  jamur  dapat  membelah  dengan  cepat  menjadi dua kali lipat. Jika waktu inkubasi yang dilakukan ≥ 7 hari bahkan  sampai  beberapa  bulan,  jamurakan  mati disebabkan oleh racun yang menumpuk, sehingga jamur hanya  dapat  dipertahankan  pada  fase  logaritmik  atau eksponensial.

## KESIMPULAN
Dari  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat disimpulkan bahwa terdapat 8 sampel kemiri yang dijual di  Pasar  Tradisional  Karang  Penang  Sampang  dengan kemasan positif mengandung jamur Aspergilus niger dan 1  sampel  kemiri  tanpa  kemasan  positif  mengandung jamur Aspergilus flavus .

## DAFTAR PUSTAKA
Agrotek, J. & Yusuf, H.O., (2022) ‘Tingkat Pertumbuhan Aspergillus Flavus sp dan Pembentukan
Aflatoksin  pada  berbagai  Metode  Penyimpanan dengan  Kadar  Air  Biji  Jagung  Pakan’, Jurnal
Agrotek , 6(2), p.55.
Aini,  N.,  (2012)  ‘Aflatoksin:  Cemaran  dan  Metode Analisisnya dalam Makanan’,
Jurnal Kefarmasian Indonesia , 2(2), pp.54-61.
Broto,  W.  (2018)  ‘Status  Cemaran  dan  Upaya Pengendalian Aflatoksin pada Komiditas Serelia dan Aneka Kacang’  pp.81-90.
Fitriana,  R.  &  Sulistyaningsih,  E.,  (2019)  ‘Identifikasi Kontaminasi  Aflatoksin  pada  Rempah-Rempah yang  Dijual  di  Sentra  Pasar  di  Kabupaten Jember’, Multidisciplinary Journal , 2, pp.24-29.
International  Agency  for  Research  on  Cancer,  (2002)
‘Aflatoxin’, IARC Monographs , 82, p.171.
Jamilatun,  M.,  Azzahra,  N.  &  Aminah,  A.,  (2020)
‘Perbandingan Pertumbuhan Aspergillus fumigatus pada  Media  Instan  Modifikasi Carrot Sucrose Agar dan Potato Dextrose Agar’ , Jurnal Mikologi Indonesia, 4(1), pp.168-174. https://doi.org/10.46638/jmi.v4i1.69.
Kuswiyanto,  K.  (2015)  ‘Isolasi,  reproduksi  dan pertumbuhan bakteri’, Bab 8, pp.191-217.
Novianti,  D.,  (2022)  ‘Uji  Tiga  Jenis  Media  Tumbuh Trichoderma sp. dan Efektivitas’, pp.294-298.
Nurmayani,  W.,  (2022)  ‘Potensi  putri  malu  ( Mimosa Pudica )  sebagai  penghambat  aflatoksin  pada jagung pipilan’, pp.87-94.
Rafika,  M.P.,  (2022)  ‘Perbandingan  Pertumbuhan Candida  albicans pada  Media  Potato’, Jurnal Medika Karya Ilmiah Kesehatan , 7(2).
Sukmawati, D., Wahyudi, P., Rahayu, S., Moersilah, M., Handayani, T., Rustam, K.Y. & Puspitasari, S.I., (2018)  ‘Skrining  Kapang Aspergillus spp. Penghasil  Aflatoksin  pada  Jagung  Pipilan  di Daerah Bekasi, Jawa Barat’, Al-Kauniyah: Jurnal Biologi,
11(2), pp.151-162. https://doi.org/10.15408/kauniyah.v11i2.6961.
Wijayanti,  A.,  (2010)  ‘Penentuan  Kadar  Aflatoksin  B1 dalam  Pakan  Broiler  Secara  Kromatografi  Cair Kinerja  Tinggi  Dengan  Pemurnian  Secara Imunoafinitas’, Journal Saint Vet, 28(2).
Zahara,  (2021)  ‘Gambaran  Jamur Aspergilus sp.  pada kemiri  ( Aleurites  moluccana )  yang  dijual  secara terbuka  di  pasar  pasir  gintung  dan  pasar  koga Bandar
Lampung’, Available at: http://repository.poltekkes-tjk.ac.id/ [Accessed
June 23, 2024].