Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022 DOI: https://doi.org/10.51352/jim.v8i2.529
Copyright (c) 2022 Jurnal Ilmiah Manuntung
Furi M, Alfatma A, Dona R, Fernando A, Aryani F, Utami R, et al. UJI INHIBITOR ENZIM TIROSINASE EKSTRAK DAN FRAKSI DAUN KEDABU (Sonneratia ovata Backer)  SECARA IN-VITRO . Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan. 2022;8(2):201–214.
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 191-200, 2022 SEPTI MUHARNI
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA
Nyeri Menggunakan Obat Anti nyeri. Skripsi . Universitas Islam Negeri, Syarif
Hidayatullah. Jakarta. 2009.
22. Hidayati A, Dania H, & Puspitasari MD.
Tingkat Pengetahuan Penggunaan Obat Bebas dan Obat Bebas Terbatas Untuk Swamedikasi Pada Masyarakat RW 8
Morobangun Jogotirto Berbah Sleman.
Jurnal Ilmiah Manuntung. 2017.  3(2):
139-149
23. Mowen  M. Management Kepuasan
Konsumen. Jakarta: Erlangga. 2012. 24.
Rutter  P.  Community Pharmacy:
Symptoms, Diagnosis and Treatment.
Elsevier Inc. UK. 2017. 25. Fitriani  D.  Hubungan Perilaku Penggalian Informasi Petugas Apotek Terhadap Rasionalitas Obat Pada Swamedikasi Common Cold di Apotek-
Apotek Kota Pekanbaru. Skripsi . Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau Yayasan Univ Riau. Pekanbaru. 2021. 26. Muharni  S, Aryani  F, Agustini  TT,  & Fitriani  D.  Sikap Tenaga Kefarmasian
Dalam Penggalian Informasi Pada Swamedikasi Nyeri Gigi di Apotek-
Apotek Kota Pekanbaru Provinsi Riau. Jurnal Penelitian Farmasi Indonesia , 2017. 5(2): 67 – 73.
27. Santoso  HB. Kinerja Asisten Apoteker Lulusan Smk Farmasi Di Bidang
Pekerjaan Kefarmasian. Thesis . Universitas Muhammadiyah. Surakarta. 2016. 28. Hasanah  F, Puspitasari  PH  & Sukorini IA. Penggalian Informasi dan Rekomendasi Pelayanan Swamedikasi oleh Staf Apotek Terhadap Kasus Diare Anak di Apotek Wilayah Surabaya. Jurnal Farmasains , 2013. 2(1): 11 – 15. 29. Arenatha  FT.  Analisis Pelayanan
Kefarmasian Pengobatan Swamedikasi Diukur Dari Penerapan Pendekatan Diagnosis Diferensial dan 8 Kriteria Kie
Ideal. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Universitas Surabaya , 3(1): 1 – 19. 2014. 30. Blenkinsopp  A, Paxton  P,  & Blenkinsopp  J. Symptoms in the Pharmacy: A Guide to The Management of Common IIIness . Malden: Blackwell Publishing. 2005. 31. Rizqi AWM. Tingkat Kepuasan Pasien Terhadap Pelayanan Kefarmasian di Instalasi Farmasi Puskesmas Sisir Kota Batu. Skripsi . Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim. Malang. 2020. 32. Sholihah AI. Analisis Kepuasan Pasien Rawat Jalan Terhadap Pelayanan Kefarmasian di Rsu Dr. Moedjito Dwijosiswojo Jombang. Skripsi . Uin Maulana Malik Ibrahim. Malang. 2019. 33. Irnawati ND, & Piter. Analisa Kepuasan Pelanggan Terhadap Pelayanan Kefarmasian di Apotek Rawat Jalan RSUPN Dr. Cipto Mangunkusumo
Kencana Jakarta. Social Clinical
Pharmacy Indonesia Journal .
2019.4(2): 45-53 34. Soraya  E.  Analisis Kualitas Pelayanan
Provider Jasa Selular Indonesia IM3 Terhadap Kepuasan Konsumen. Skripsi . Universitas Muhammadiyah. Semarang. 2011. 35. Kotler. Teori Kepuasan dan Faktor- Faktor Yang Mempengaruhi Kepuasan .
Jakarta: Erlangga. 2005.
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022 p -ISSN. 2443-115X e -ISSN. 2477-1821

## UJI INHIBITOR ENZIM TIROSINASE EKSTRAK DAN FRAKSI DAUN KEDABU ( Sonneratia ovata
Backer) SECARA IN-VITRO
Submitted : 01 Desember 2021 Edited : 23 Desember 2022
Accepted : 30 Desember 2022 Mustika Furi * , Ainun Alfatma, Rahma Dona, Armon Fernando, Fina Aryani, Rahayu Utami, Septi Muharni, Husnawati, Wira Noviana Suhery, Melzi Octaviani
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau Yayasan Univ. Riau

## Email : mustikafuri@stifar-riau.ac.id

## ABSTRAK
Daun kedabu ( Sonneratia ovata Backer) diketahui memiliki kandungan metabolit sekunder salah satunya ialah fenolik, flavonoid serta memiliki aktivitas antioksidan. Senyawa fenolik, flavonoid dan aktivitas antioksidan diketahui dapat menghambat enzim tirosinase. Enzim tirosinase terlibat  dalam proses melanogesis yang menghasilkan melanin. Melanin dapat menyebabkan hiperpigmentasi. Untuk mencegah hiperpigmentasi dibutuhkan inhibitor enzim tirosinase. Penelitian ini bertujuan untuk menguji inhibitor enzim tirosinase pada ekstrak etanol, fraksi n- butanol fraksi etil asetat, fraksi n- heksana daun kedabu ( Sonneratia ovatta Backer) dengan menggunakan substrat L-tirosin. Metode yang digunakan untuk mendapatkan ekstrak etanol ialah metode maserasi dengan pelarut etanol, sedangkan beberapa fraksi didapat dengan menggunakan metode fraksinasi. Pengujian dilakukan dengan menggunakan substrat L-tirosin dan asam kojat sebagai kontrol positif dengan pengukuran serapan menggunakan microplate reader pada panjang gelombang 492 nm. Hasil penelitian menunjukkan bahwa aktivitas inhibisi enzim tirosinase yang paling baik dihasilkan oleh fraksi etil asetat dengan nilai IC 50 18,82 μg/mL, diikuti oleh fraksi n- butanol dengan nilai IC 50 24,42 μg/mL, dan fraksi n -heksana dengan nilai IC 50 28,77  μg/mL,  ekstrak  etanol  dengan  nilai  IC 50 99,03 dengan kategori kuat untuk semua sampel dibandingkan dengan asam kojat sebagai kontrol positif dengan nilai IC 50 30,09 μg/mL.
Kata kunci : Melanin, Sonneratia ovata Backer, Enzim Tyrosinase

## ABSTRACT
Kedabu leaves (Sonneratia ovata Backer) are known contain secondary metabolites, one of which is phenolic, flavonoid and antioxidant activity. Phenolic, flavonoids and antioxidant are known to inhibit the tyrosinase enzyme. The tyrosinase enzyme is involved in the process of melanogenesis which produces melanin. Melanin can cause hyperpigmentation. To prevent hyperpigmentation, tyrosinase inhibitors are needed. This study aimed to test the tyrosinase enzyme inhibitor in ethanol extract, n-butanol fraction, ethyl acetate fraction, n-hexane fraction of kedabu leaf (Sonneratia ovatta Backer) using L-tyrosine as a substrate. The method used to get ethanol extract using ethanol maceration, while some fractions are obtained using the fractionation method. The test was carried out using L-tyrosine and kojic acid as a positive control with absorption measurements using microplate reader at a wavelength of 492 nm. The results showed that the best tyrosinase inhibitory activity was produced by the ethyl acetate fraction with an IC 50 value of 18,82 g/mL, followed by the n-butanol fraction with an IC 50 value of 24,42 g/mL, and the n-hexane fraction with an IC 50 value. 28,77 g/mL, ethanol extract with an IC 50 value of 99,09 with a strong category for all samples compared with kojic acid as a positive control with an IC 50 value of 30,09 g/mL.
Keywords : Melanin, Sonneratia ovata Backer, Tyrosinase Enzyme
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA

## PENDAHULUAN
Paparan sinar UV dalam waktu yang lama dengan frekuensi yang tinggi dapat menyebabkan gangguan pada kulit. Sinar UV dapat meningkatkan sintesis melanin di kulit dan menyebabkan hiperpigmentasi (1) .
Hiperpigmentasi merupakan suatu gangguan pigmen pada kulit manusia. Peningkatan sintesis melanin ataupun distribusi melanin yang tidak merata dapat menyebabkan pigmentasi lokal serta menimbulkan masalah estetika kulit. Melanin merupakan pigmen yang melindungi kulit dari paparan sinar UV. Proses pembentukan melanin  terjadi dengan adanya bantuan enzim tirosinase dan sinar UV (2) .
Tirosinase adalah enzim yang berperan dalam pembentukan pigmen kulit atau dikenal dengan proses melanogenesis. Dalam proses melanogenesis, enzim tirosinase akan mengatur biosintesis melanin dengan cara menghidroksilasi L-tirosin menjadi L-DOPA kemudian mengoksidasi L-DOPA menjadi dopaquinon . Dopaquinon diubah menjadi
dopachrome melalui reaksi autooksidasi sehingga menjadi dihydroxy-indole (DHI) atau dihydroxy-indole-carboxyclic-acid (DHICA) untuk membentuk melanin( 3) . Kerja enzim tirosinase tergantung pada intensitas sinar UV yang masuk. Semakin banyak sinar UV yang menembus kulit maka semakin besar dan cepat enzim tirosinase bekerja sehingga semakin banyak pula melanin yang dapat terbentuk (4) . Pembentukan melanin dapat dihambat dengan beberapa cara salah satunya ialah menghambat aktivitas enzim tirosinase sehingga tidak dapat memproduksi melanin dan mengurangi terjadinya hiperpigmentasi (5) . Banyak bahan kimia yang digunakan sebagai inhibitor tirosinase diantaranya asam kojat, hidroquinon , aleosin, merkuri, dan solano. Namun beberapa senyawa tersebut memiliki efek samping yang berbahaya terkait karsinogenesis dan mutagenesis dengan frekuensi pemakaian yang tinggi (6) . Oleh karena itu eksplorasi senyawa inhibitor enzim
tirosinase yang daya inhibisinya kuat dan aman sangat dibutuhkan.
Senyawa alam yang memiliki kemampuan untuk menghambat enzim tirosinase, salah satunya ialah senyawa flavonoid dan fenolik. Kemampuan flavonoid dalam depigmentasi kulit dengan cara menghambat secara langsung aktivitas tirosinase pada proses melanogenesis. Senyawa flavonoid menghambat enzim tirosinase dengan mekanisme inhibitor kompetitif dengan substratnya (7) . Fenolik diketahui memiliki kemampuan sebagai pengkhelat Cu 2+ . Cu 2+ pada enzim tirosinase bersifat sebagai kofaktor yang berfungsi untuk membantu substrat terikat dengan enzim. Hilangnya kofaktor pada enzim mengurangi kemampuan enzim mengikat substratnya sehingga tidak terbentuk melanin (8) . Antioksidan sebagai penangkap radikal bebas dapat menghambat reaksi oksidasi enzim tirosinase (9) . Salah satu tumbuhan yang dilaporkan memiliki senyawa flavonoid dan fenolik ialah kedabu ( Sonneratia ovata Backer). Daun kedabu mengandung tiga fenolik baru yaitu sonnerphenolic A , sonnerphenolic B , dan sonnerfenolic C . Ditemukan juga senyawa flavonoid dan sembilan belas senyawa lainnya. Dilaporkan juga aktivitas antioksidan yang sangat kuat dari daun kedabu dengan ekstrak etanol, fraksi n -heksana, fraksi etil asetat dan fraksi n -butanol.

## METODE PENELITIAN
Uji aktivitas inhibitor enzim tirosinase merupakan hasil modifikasi dari penelitian dilakukan oleh (5) secara in-vitro menggunakan Microplate reader untuk membaca absorban dari melanin yang terbentuk setelah dilakukan penghambatan oleh sampel.

## ALAT DAN BAHAN
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat-alat gelas yang terdapat di Laboratorium serta satu set alat rotary evaporator (Buchi 461 Water Bath ),
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821
Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022 MUSTIKA FURI
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA

## PENDAHULUAN
Paparan sinar UV dalam waktu yang lama dengan frekuensi yang tinggi dapat menyebabkan gangguan pada kulit. Sinar UV dapat meningkatkan sintesis melanin di kulit dan menyebabkan hiperpigmentasi (1) .
Hiperpigmentasi merupakan suatu gangguan pigmen pada kulit manusia. Peningkatan sintesis melanin ataupun distribusi melanin yang tidak merata dapat menyebabkan pigmentasi lokal serta menimbulkan masalah estetika kulit. Melanin merupakan pigmen yang melindungi kulit dari paparan sinar UV. Proses pembentukan melanin  terjadi dengan adanya bantuan enzim tirosinase dan sinar UV (2) . Tirosinase adalah enzim yang berperan dalam pembentukan pigmen kulit atau dikenal dengan proses melanogenesis. Dalam proses melanogenesis, enzim tirosinase akan mengatur biosintesis melanin dengan cara menghidroksilasi L-tirosin menjadi L-DOPA kemudian mengoksidasi L-DOPA menjadi dopaquinon . Dopaquinon diubah menjadi dopachrome melalui reaksi autooksidasi sehingga menjadi dihydroxy-indole (DHI) atau dihydroxy-indole-carboxyclic-acid (DHICA) untuk membentuk melanin( 3) . Kerja enzim tirosinase tergantung pada intensitas sinar UV yang masuk. Semakin banyak sinar UV yang menembus kulit maka semakin besar dan cepat enzim tirosinase bekerja sehingga semakin banyak pula melanin yang dapat terbentuk (4) .
Pembentukan melanin dapat dihambat dengan beberapa cara salah satunya ialah menghambat aktivitas enzim tirosinase sehingga tidak dapat memproduksi melanin dan mengurangi terjadinya hiperpigmentasi (5) .
Banyak bahan kimia yang digunakan sebagai inhibitor tirosinase diantaranya asam kojat, hidroquinon , aleosin, merkuri, dan solano. Namun beberapa senyawa tersebut memiliki efek samping yang berbahaya terkait karsinogenesis dan mutagenesis dengan frekuensi pemakaian yang tinggi (6) . Oleh karena itu eksplorasi senyawa inhibitor enzim
tirosinase yang daya inhibisinya kuat dan aman sangat dibutuhkan.
Senyawa alam yang memiliki kemampuan untuk menghambat enzim tirosinase, salah satunya ialah senyawa flavonoid dan fenolik. Kemampuan flavonoid dalam depigmentasi kulit dengan cara menghambat secara langsung aktivitas tirosinase pada proses melanogenesis. Senyawa flavonoid menghambat enzim tirosinase dengan mekanisme inhibitor kompetitif dengan substratnya (7) . Fenolik diketahui memiliki kemampuan sebagai pengkhelat Cu 2+ . Cu 2+ pada enzim tirosinase bersifat sebagai kofaktor yang berfungsi untuk membantu substrat terikat dengan enzim. Hilangnya kofaktor pada enzim mengurangi kemampuan enzim mengikat substratnya sehingga tidak terbentuk melanin (8) . Antioksidan sebagai penangkap radikal bebas dapat menghambat reaksi oksidasi enzim tirosinase (9) . Salah satu tumbuhan yang dilaporkan memiliki senyawa flavonoid dan fenolik ialah kedabu ( Sonneratia ovata Backer). Daun kedabu mengandung tiga fenolik baru yaitu sonnerphenolic A , sonnerphenolic B , dan
sonnerfenolic C . Ditemukan juga senyawa flavonoid dan sembilan belas senyawa lainnya. Dilaporkan juga aktivitas antioksidan yang sangat kuat dari daun kedabu dengan ekstrak etanol, fraksi n -heksana, fraksi etil asetat dan fraksi n -butanol.

## METODE PENELITIAN
Uji aktivitas inhibitor enzim tirosinase merupakan hasil modifikasi dari penelitian dilakukan oleh (5) secara in-vitro menggunakan Microplate reader untuk membaca absorban dari melanin yang terbentuk setelah dilakukan penghambatan oleh sampel.

## ALAT DAN BAHAN
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah alat-alat gelas yang terdapat di Laboratorium serta satu set alat rotary
evaporator (Buchi 461 Water Bath ),
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA 203
seperangkat alat destilasi (Eyela OBS-2100), desikator, kertas saring, alumunium foil, pH meter, sonikator (Kudos SK330H), inkubator (Memmert IN55 Incubator ), microplate dan microplate reader 96 (Epoch BioTek). Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun kedabu ( Sonneratia ovata Backer), etanol, etil asetat, n -butanol, n - heksana, kloroform, kloroform amoniak, aquadest, pereaksi mayer, pereaksi Liebermann-Burchard, logam magnesium (Mg), asam klorida pekat (HCl), larutan besi (III) klorida (FeCl 3 ), Norit, asam asetat anhidrat ((CH 3 CO) 2 O), asam sulfat pekat (H 2 SO 4 ), disodium fosfat (Na 2 HPO 4 .2H 2 O), monosodium fosfat (NaH 2 PO 4 2H 2 O), asam kojat, L-tirosin dan enzim tirosinase.
Pengambilan Sampel Daun Kedabu Sampel yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun kedabu yang didapat dari Hutan Mangrove Desa Kayu Ara Permai,
Kecamatan Sungai Apit, Kabupaten Siak. Daun yang digunakan sebanyak 1 kg.

## Identifikasi Sampel Tumbuhan
Sampel tumbuhan diidentifikasi di Laboratorium Botani Jurusan Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Riau, Pekanbaru.

## Penyiapan Serbuk Simplisia
Daun kedabu sebanyak 1 kg disortasi basah dan dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang menempel pada permukaan daun. Setelah itu ditiriskan sampai semua sisa – sisa air pencucian tidak ada lagi pada daun kedabu. Daun kedabu kemudian dikering anginkan pada suhu ruang, setelah itu daun disortasi kering. Bahan yang sudah kering selanjutnya diserbuk dan diayak sehingga diperoleh serbuk simplisia daun kedabu.
Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Kedabu
Proses ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi atau perendaman dengan pelarut
etanol. Serbuk simplisia dimasukan ke dalam botol berwarna gelap kemudian dimaserasi dengan etanol 2,5 L selama 5 hari dalam 3 kali pengulangan. Wadah maserasi disimpan pada suhu kamar dan terlindungi dari cahaya matahari langsung. Sari etanol disaring menggunakan kapas dan ampasnya dimaserasi kembali dengan cara yang sama hingga tiga kali pengulangan. Hasil maserasi dikumpulkan, kemudian dipekatkan dengan rotary evaporator . Alat  diatur pada suhu 40-50°C hingga diperoleh ekstrak kental daun kedabu ( Sonneratia ovata Backer), kemudian ekstrak dikumpulkan dan ditimbang.

## Fraksinasi Ekstrak Etanol Daun Kedabu
Ekstrak kental etanol daun kedabu sebanyak 25 g dilarutkan dengan 50 mL akuades, kemudian diaduk homogen dan dimasukkan ke dalam corong pisah, lalu tambahkan 50 mL n -heksana ke dalam corong pisah tersebut. Campuran larutan dikocok hingga terekstraksi sempurna, didiamkan beberapa saat sampai terbentuk dua lapisan. Lapisan atas (lapisan n -heksana) dipisahkan, sedangkan lapisan airnya difraksinasi kembali dengan n -heksana di dalam corong pisah dengan prosedur yang sama (3 kali pengulangan). Lapisan n -heksana tersebut dikumpulkan dan dipekatkan dengan rotary evaporator. Kemudian berat fraksi n -heksana tersebut ditimbang. Lapisan air kemudian difraksinasi dengan etil asetat sebanyak 50 mL menggunakan corong pisah dan dilakukan prosedur yang sama seperti pada fraksinasi menggunakan n -heksana. Lapisan etil asetat dikumpulkan dan dipekatkan dengan rotary evaporator kemudian berat fraksi etil asetat yang diperoleh ditimbang. Lapisan air kemudian difraksinasi kembali dengan n -butanol sebanyak 50 mL menggunakan corong pisah dan dilakukan prosedur yang sama seperti pada fraksinasi menggunakan n -heksana. Lapisan n -butanol dikumpulkan dan dipekatkan dengan rotary
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022
evaporator kemudian berat fraksi n -butanol yang diperoleh ditimbang.
Uji Fitokimia Skrining fitokimia dilakukan pada daun segar, ekstrak etanol, fraksi n- heksana,
fraksi etil asetat dan fraksi n- butanol. 1. Uji Fenolik.
Daun segar yang sudah dipotong kecil/
ekstrak maupun fraksi dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Tambahkan etanol hingga sampel di dalam tabung reaksi terendam seluruhnya, dipanaskan kemudian disaring ke dalam tabung reaksi lain. Filtrat dipanaskan kembali untuk menguapkan etanol. Tambahkan 5 mL air suling dan 5 mL kloroform (1:1) di dalam tabung reaksi tersebut, lalu dikocok kuat dan dibiarkan beberapa saat sampai terbentuk dua lapisan yakni lapisan air dan lapisan kloroform. Kedua lapisan tersebut dipisahkan. Lapisan air digunakan untuk uji senyawa fenolik dengan mengambil 3-4 tetes lapisan air dan dimasukkan ke dalam plat tetes ditambahkan 1-2 tetes larutan besi (III) klorida (FeCl 3 ) 1%. Bila terbentuk warna biru menunjukkan adanya senyawa fenolik.
2. Uji Flavonoid
Sebanyak 1-2 tetes lapisan air diambil dan dimasukkan ke dalam plat tetes ditambahkan sedikit logam Mg dan beberapa tetes HCl pekat.
Bila terbentuk warna kuning-jingga sampai merah menandakan adanya senyawa flavonoid.
3. Uji Saponin Lapisan air dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu dikocok kuat selama beberapa saat. Apabila terbentuk busa yang bertahan selama 5 menit, berarti menunjukkan adanya saponin.
4. Uji Steroid dan Terpenoid Lapisan kloroform disaring melalui pipet yang diberi kapas dan norit, kemudian hasil saringan dipipet sebanyak 2-3 tetes ke dalam 3 lubang plat tetes dan dibiarkan mengering. Setelah kering pada lubang 1 ditambahkan
asam asetat anhidrat, lubang 2 ditambahkan asam sulfat pekat dan lubang 3 ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard (2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat).
Jika terbentuk warna merah menandakan adanya senyawa terpenoid dan jika terbentuk warna hijau atau biru pada lubang menandakan adanya senyawa steroid.
5. Uji Alkaloid Daun segar yang telah dipotong kecil- kecil/ekstrak maupun fraksi ditambahkan 5 mL kloroform, digerus dalam lumpang dan ditambahkan 5 mL kloroform amoniak, diaduk kemudian disaring. Ke dalam tabung reaksi ditambahkan 1 mL asam sulfat 2 N, kocok, biarkan hingga terbentuk 2 lapisan. Ambil lapisan asam (atas) lalu tambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi Mayer. Apabila terbentuk endapan putih dengan pereaksi Mayer, menandakan adanya senyawa alkaloid.
Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase Penyiapan Larutan Pereaksi 1.
Larutan Dapar Fosfat 0,05 M pH 6,5 Sebanyak 0,6 g NaH 2 PO 4 dilarutkan ke dalam aquadest 100 mL dan sebanyak 0,715 g Na 2 HPO 4 dilarutkan ke dalam aquadest 100 mL. Kedua larutan dicampurkan dan diukur pHnya dengan pH meter.
2. Larutan Enzim Tirosinase 333 unit/ml Enzim dalam kemasan sebanyak 50.000 unit (tirosinase sigma T3824). Serbuk enzim tirosinase 50.000 unit dilarutkan dalam 10 mL dapar fosfat pH 6,5 sehingga didapatkan konsentrasi enzim sebesar 5.000 unit/mL. Kemudian diambil 1,332 mL dari larutan enzim 5.000 unit/mL dipindahkan ke dalam vial gelap dan dicukupkan volumenya hingga 20 mL dengan dapar fosfat pH 6,5. Didapatkan konsentrasi 333 unit/mL enzim tirosinase dalam dapar fosfat pH 6,5.
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821
Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022 MUSTIKA FURI
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA
evaporator kemudian berat fraksi n -butanol yang diperoleh ditimbang.
Uji Fitokimia Skrining fitokimia dilakukan pada daun segar, ekstrak etanol, fraksi n- heksana, fraksi etil asetat dan fraksi n- butanol. 1. Uji Fenolik. Daun segar yang sudah dipotong kecil/ ekstrak maupun fraksi dimasukkan ke dalam tabung reaksi. Tambahkan etanol hingga sampel di dalam tabung reaksi terendam seluruhnya, dipanaskan kemudian disaring ke dalam tabung reaksi lain. Filtrat dipanaskan kembali untuk menguapkan etanol. Tambahkan 5 mL air suling dan 5 mL kloroform (1:1) di dalam tabung reaksi tersebut, lalu dikocok kuat dan dibiarkan beberapa saat sampai terbentuk dua lapisan yakni lapisan air dan lapisan kloroform. Kedua lapisan tersebut dipisahkan. Lapisan air digunakan untuk uji senyawa fenolik dengan mengambil 3-4 tetes lapisan air dan dimasukkan ke dalam plat tetes ditambahkan 1-2 tetes larutan besi (III) klorida (FeCl 3 ) 1%. Bila terbentuk warna biru menunjukkan adanya senyawa fenolik.
2. Uji Flavonoid Sebanyak 1-2 tetes lapisan air diambil dan dimasukkan ke dalam plat tetes ditambahkan sedikit logam Mg dan beberapa tetes HCl pekat.
Bila terbentuk warna kuning-jingga sampai merah menandakan adanya senyawa flavonoid.
3. Uji Saponin Lapisan air dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu dikocok kuat selama beberapa saat. Apabila terbentuk busa yang bertahan selama 5 menit, berarti menunjukkan adanya saponin. 4. Uji Steroid dan Terpenoid Lapisan kloroform disaring melalui pipet yang diberi kapas dan norit, kemudian hasil saringan dipipet sebanyak 2-3 tetes ke dalam 3 lubang plat tetes dan dibiarkan mengering. Setelah kering pada lubang 1 ditambahkan
asam asetat anhidrat, lubang 2 ditambahkan asam sulfat pekat dan lubang 3 ditambahkan pereaksi Liebermann-Burchard (2 tetes asam asetat anhidrat dan 1 tetes asam sulfat pekat).
Jika terbentuk warna merah menandakan adanya senyawa terpenoid dan jika terbentuk warna hijau atau biru pada lubang menandakan adanya senyawa steroid.

## 5. Uji Alkaloid
Daun segar yang telah dipotong kecil- kecil/ekstrak maupun fraksi ditambahkan 5 mL kloroform, digerus dalam lumpang dan ditambahkan 5 mL kloroform amoniak, diaduk kemudian disaring. Ke dalam tabung reaksi ditambahkan 1 mL asam sulfat 2 N, kocok, biarkan hingga terbentuk 2 lapisan. Ambil lapisan asam (atas) lalu tambahkan 1 sampai 2 tetes pereaksi Mayer. Apabila terbentuk endapan putih dengan pereaksi Mayer, menandakan adanya senyawa alkaloid.

## Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase
Penyiapan Larutan Pereaksi 1. Larutan Dapar Fosfat 0,05 M pH 6,5 Sebanyak 0,6 g NaH 2 PO 4 dilarutkan ke dalam aquadest 100 mL dan sebanyak 0,715 g Na 2 HPO 4 dilarutkan ke dalam aquadest 100 mL. Kedua larutan dicampurkan dan diukur pHnya dengan pH meter.
2. Larutan Enzim Tirosinase 333 unit/ml Enzim dalam kemasan sebanyak 50.000 unit (tirosinase sigma T3824). Serbuk enzim tirosinase 50.000 unit dilarutkan dalam 10 mL dapar fosfat pH 6,5 sehingga didapatkan konsentrasi enzim sebesar 5.000 unit/mL. Kemudian diambil 1,332 mL dari larutan enzim 5.000 unit/mL dipindahkan ke dalam vial gelap dan dicukupkan volumenya hingga 20 mL dengan dapar fosfat pH 6,5. Didapatkan konsentrasi 333 unit/mL enzim tirosinase dalam dapar fosfat pH 6,5.
MUSTIKA FURI SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA 205
3. Larutan Substrat L-tirosin Pembuatan larutan substrat L-tirosin 2 mM dengan melarutkan L-tirosin sebanyak 18,1 mg ke dalam 50 mL dapar fosfat. 4. Larutan Asam Kojat Pembuatan  larutan asam kojat dengan mengambil 10 mg asam kojat dan dilarutkan ke dalam 10 mL dapar fosfat pH 6,5 sehingga didapatkan konsentrasi 1.000 ppm. Kemudian larutan tersebut diencerkan menjadi konsentrasi 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 15,625 dan 7,8125 ppm. 5. Penyiapan Larutan sampel Masing-masing ekstrak dan fraksi ditimbang sebanyak 10 mg dan dilarutkan dengan DMSO 5 mL sehingga didapatkan konsentrasi 2.000 ppm. Fraksi n- heksana dan ekstrak etanol diencerkan menjadi konsentrasi 1.000; 500; 250; 125; 62,5 dan 31,25, sementara fraksi n- butanol dan fraksi etil asetat diencerkan menjadi konsentrasi 250; 125; 62,5;
31,25; 15,625; 7,8125 dan 3,90625 ppm.
Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase 1. Blanko (B 1 ) dan Blanko Kontrol (B 0 ) Blanko yang digunakan pada microplate 96 well yaitu 70 µL dapar fosfat pH 6,5 dan dicampurkan dengan enzim tirosinase sebanyak 30 µL, substrat L-tirosin sebanyak 110 µL. Blanko kontrol diuji dengan prosedur yang sama dengan pengujian pada blanko tetapi 110 µL substrat L-tirosin digantikan dengan 110 µL dapar fosfat pH 6,5.
2. Sampel (S 1 ) dan Sampel Kontrol (S 0 ) Sampel dibuat dalam konsentrasi 2000 ppm dan kemudian untuk fraksi n- heksana dan ekstrak etanol diencerkan menjadi berbagai konsentrasi yaitu 1.000; 500; 250; 125; 62,5 dan 31,25 ppm sementara untuk fraksi n-
butanol dan fraksi etil asetat diencerkan menjadi konsentrasi 250; 125; 62,5; 31,25;
15,625; 7,8125 dan 3,90625 ppm. Kemudian masing  -  masing konsentrasi dicampurkan dengan 30 µL enzim tirosinase dan 110 µL L- tirosin. Untuk pengujian sampel kontrol dilakukan dengan cara yang sama dengan pengujian sampel tetapi 110 µL dapar fosfat pH 6,5 yang digunakan untuk menggantikan 110 µL L-tirosin.
3. Asam Kojat (A 1 ) dan Asam Kojat Kontrol (A 0
) Asam kojat dibuat dalam konsentrasi
500 ppm kemudian diencerkan menjadi berbagai konsentrasi yaitu 250, 125, 62,5; 31,25; 15,625 dan 7,8125 ppm. Selanjutnya masing – masing konsentrasi dicampurkan dengan enzim tirosinase sebanyak 30 µL dan 110 µL L-tirosin. Pengujian asam kojat kontrol dilakukan dengan cara yang sama dengan pengujian asam kojat tetapi 110 µL dapar fosfat pH 6,5 yang digunakan untuk menggantikan 110 µL L-tirosin.
Semua sampel diinkubasi selama 30 menit pada inkubator dengan suhu 37ºC dan diukur pada panjang gelombang 492 nm dengan menggunakan microplate reader.

## Analisis Data
Data yang didapatkan adalah aktivitas enzim yang diukur berdasarkan hasil absorbansi. Apabila aktivitas tirosinase dalam memproduksi melanin terhambat maka ekstrak mengandung senyawa inhibitor tirosinase. Terbentuknya produk dopachrome ditandai dengan timbulnya warna coklat. Reaksi antara enzim tirosinase dan substrat L-tirosin terhambat karena adanya inhibitor tirosinase sehingga berkurangnya produk dopachrome yang disertai dengan berkurangnya intensitas warna coklat pada larutan (18) .
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA

## Tabel 1. Perlakuan Sampel Uji
Komposisi Perlakuan B 1 (µL) B 0 (µL) S 1 (µL) S 0 (µL) A 1 (µL) A 0 (µL) Sampel 70 70 Dapar Fosfat 70 70 Enzim Tirosinase 30 30 30 30 30 30 L-tirosin 110 110 110 Dapar Fosfat 110 110 110 Asam Kojat 70 70 Data absorbansi yang didapat digunakan  untuk mencari persen inhibisi. Persen inhibisi sampel dapat dihitung dengan rumus:
𝐼𝐼 = (𝐵𝐵 1 − 𝐵𝐵 0 ) − ( 𝑆𝑆 1 − 𝑆𝑆 0 ) (𝐵𝐵 1 − 𝐵𝐵 0 ) 𝑥𝑥 100%
Persen inhibisi asam kojat dapat dihitung dengan rumus :
𝐼𝐼 = (𝐵𝐵 1 − 𝐵𝐵 0 ) − (𝐴𝐴 1 − 𝐴𝐴 0 ) (𝐵𝐵 1 − 𝐵𝐵 0 ) 𝑥𝑥 100% Aktivitas penghambatan dari sampel uji ditentukan dengan IC
50 yaitu konsentrasi dimana sampel uji menghambat aktivitas tirosinase sebesar 50%. IC 50 dihitung dengan menggunakan persamaan regresi linear, log konsentrasi sampel sebagai sumbu x dan probit % inhibisi sebagai sumbu y, dari persamaan y = bx ± a dapat dihitung nilai IC 50 . Nilai IC 50 dapat dihitung dengan rumus berikut:
𝑦𝑦 = 𝑎𝑎𝑥𝑥 ± 𝑏𝑏 𝑥𝑥 = (50 ± 𝑏𝑏) 𝑎𝑎 Keterangan : a = slope b = intersep Nilai  IC50 di bawah 100 ppm menunjukkan potensi penghambatan aktivitas tirosinase yang paling kuat, nilai IC50 100-450 ppm menunjukkan potensi penghambatan yang sedang, dan 450-700 ppm menunjukkan potensi penghambatan aktivitas tirosinase sangat lemah. Tabel 2. Kategori Potensi Penghambatan Aktivitas Enzim Tirosinase Kategori Konsentrasi (ppm) Kuat < 100 Sedang 100 – 450 Lemah 451 – 700 Tidak Beraktivitas > 700

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji aktivitas inhibitor enzim tirosinase dilakukan menggunakan alat microplate reader . Pemilihan alat ini dikarenakan microplate reader dapat mengukur sampel lebih banyak secara bersamaan sehingga dapat menghemat waktu. Selain itu, sampel dan reagen yang digunakan untuk pengujian hanya dalam skala mikro sehingga dapat menghindari pemborosan bahan atau reagen (10) .
Sampel segar dari daun kedabu disortasi basah yang bertujuan untuk memisahkan pengotor atau bahan asing lainnya yang terdapat pada sampel dan memisahkan bagian sampel yang ingin digunakan. Kemudian daun kedabu dicuci dengan air mengalir. Proses pencucian bertujuan untuk menghilangkan pengotor- pengotor yang masih melekat pada sampel. Selanjutnya sampel dikering anginkan dengan tujuan untuk mengurangi kadar air yang terdapat dalam sampel agar sampel tidak ditumbuhi jamur. Setelah sampel daun kering, dilakukan sortasi kering agar benda asing yang tidak diinginkan dan
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821
Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022 MUSTIKA FURI
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA
Tabel 1. Perlakuan Sampel Uji Komposisi Perlakuan B 1 (µL) B 0 (µL) S 1 (µL) S 0 (µL) A 1 (µL) A 0 (µL) Sampel 70 70 Dapar Fosfat 70 70 Enzim Tirosinase 30 30 30 30 30 30 L-tirosin 110 110 110 Dapar Fosfat 110 110 110 Asam Kojat 70 70 Data absorbansi yang didapat digunakan  untuk mencari persen inhibisi. Persen inhibisi sampel dapat dihitung dengan rumus:
𝐼𝐼 = (𝐵𝐵 1 − 𝐵𝐵 0 ) − ( 𝑆𝑆 1 − 𝑆𝑆 0 ) (𝐵𝐵 1 − 𝐵𝐵 0 ) 𝑥𝑥 100%
Persen inhibisi asam kojat dapat dihitung dengan rumus :
𝐼𝐼 = (𝐵𝐵 1 − 𝐵𝐵 0 ) − (𝐴𝐴 1 − 𝐴𝐴 0 ) (𝐵𝐵 1 − 𝐵𝐵 0 ) 𝑥𝑥 100%
Aktivitas penghambatan dari sampel uji ditentukan dengan IC 50 yaitu konsentrasi dimana sampel uji menghambat aktivitas tirosinase sebesar 50%. IC 50 dihitung dengan menggunakan persamaan regresi linear, log konsentrasi sampel sebagai sumbu x dan probit % inhibisi sebagai sumbu y, dari persamaan y = bx ± a dapat dihitung nilai IC 50 . Nilai IC 50 dapat dihitung dengan rumus berikut:
𝑦𝑦 = 𝑎𝑎𝑥𝑥 ± 𝑏𝑏 𝑥𝑥 = (50 ± 𝑏𝑏) 𝑎𝑎 Keterangan : a = slope b = intersep
Nilai  IC50 di bawah 100 ppm menunjukkan potensi penghambatan aktivitas tirosinase yang paling kuat, nilai IC50 100-450 ppm menunjukkan potensi penghambatan yang sedang, dan 450-700 ppm menunjukkan potensi penghambatan aktivitas tirosinase sangat lemah.
Tabel 2. Kategori Potensi Penghambatan Aktivitas Enzim Tirosinase Kategori Konsentrasi (ppm) Kuat < 100 Sedang 100 – 450 Lemah 451 – 700 Tidak Beraktivitas > 700

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji aktivitas inhibitor enzim tirosinase dilakukan menggunakan alat microplate reader . Pemilihan alat ini
dikarenakan microplate reader dapat mengukur sampel lebih banyak secara bersamaan sehingga dapat menghemat waktu. Selain itu, sampel dan reagen yang digunakan untuk pengujian hanya dalam skala mikro sehingga dapat menghindari pemborosan bahan atau reagen (10) .
Sampel segar dari daun kedabu disortasi basah yang bertujuan untuk memisahkan pengotor atau bahan asing lainnya yang terdapat pada sampel dan memisahkan bagian sampel yang ingin digunakan. Kemudian daun kedabu dicuci dengan air mengalir. Proses pencucian bertujuan untuk menghilangkan pengotor- pengotor yang masih melekat pada sampel. Selanjutnya sampel dikering anginkan dengan tujuan untuk mengurangi kadar air yang terdapat dalam sampel agar sampel tidak ditumbuhi jamur. Setelah sampel daun kering, dilakukan sortasi kering agar benda asing yang tidak diinginkan dan
MUSTIKA FURI SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA 207
pengotor yang masih tertinggal selama pengeringan dapat dipisahkan. Sampel daun kering yang diperoleh sebanyak 300 g dirajang untuk memperluas permukaan sampel agar kontak antara sampel dengan pelarut menjadi lebih luas sehingga senyawa yang berada dalam sampel lebih mudah tersari oleh pelarut yang digunakan (11) . Dari proses pembuatan simplisia didapat sebanyak 300 g serbuk simplisia. Selanjutnya simplisia diekstraksi dengan menggunakan metode maserasi menggunakan pelarut etanol. Pemilihan proses maserasi dikarenakan metode ini merupakan penyarian yang sederhana dan dapat menarik zat yang terdapat di dalam simplisia baik simplisia yang tahan pemanasan maupun yang tidak tahan pemanasan serta tidak membutuhkan perlakuan khusus dalam pengerjaannya. Pemilihan pelarut etanol dikarenakan pelarut etanol merupakan pelarut yang bersifat universal yaitu pelarut yang dapat menarik senyawa yang bersifat polar hingga nonpolar (11) . Selanjutnya dilakukan penyaringan untuk memisahkan maserat dari residu. Maserat yang diperoleh dipekatkan menggunakan rotary evaporator . Proses pemekatan tersebut menghasilkan ekstrak kental etanol berwarna coklat kehitaman sebanyak 48,095 g dengan persen rendemen sebesar 16,03%. Ekstrak difraksinasi untuk menyederhanakan komponen-komponen metabolit yang terdapat pada ekstrak. Fraksinasi dilakukan menggunakan tiga jenis pelarut yang berbeda berdasarkan derajat kepolaran pelarutnya. Fraksinasi dimulai dari pelarut n -heksana untuk menarik senyawa-senyawa non polar yang terdapat pada ekstrak. Kemudian fraksinasi dilanjutkan dengan etil asetat yang bersifat semi polar untuk menarik senyawa- senyawa semi polar yang terkandung dalam
ekstrak dan n -butanol yang bersifat polar untuk menarik senyawa-senyawa yang lebih polar yang terkandung dalam ekstrak (19) . Hasil fraksinasi ekstrak etanol daun kedabu diperoleh fraksi n- heksana,
etil asetat, dan n- butanol berturut-turut sebesar 1,6301 g; 1,1792 g dan 1,2905 g.
Persen rendemen berturut-turut sebesar 6,25% ; 4,716 % dan 5,162 %. Hasil % rendemen fraksi n- heksana lebih besar dibanding pelarut lainnya diduga disebabkan oleh banyaknya zat klorofil yang tertarik oleh pelarut tersebut.
Tabel 3. Hasil Ekstraksi dan Fraksinasi Daun Kedabu ( Sonneratia ovata Backer). Jenis Sampel Berat (gram) % Rendemen Ekstraksi Etanol 48,095 16,03% Fraksi n - Heksana 1,63 6, 25 % Fraksi Etil Asetat 1,17 4, 71 % Fraksi n - butanol 1,29 5, 16 % Skrining fitokimia dilakukan terhadap daun segar, ekstrak dan fraksi agar diketahui gambaran secara kualitatif tentang golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung di dalam masing – masing sampel tersebut. Hasil skrining fitokimia pada sampel segar dan ekstrak etanol daun kedabu menunjukkan adanya senyawa fenolik, flavonoid, alkaloid,
saponin, terpenoid dan steroid. Pada fraksi n -heksana menunjukkan adanya senyawa fenolik, flavonoid dan terpenoid. Fraksi etil asetat dan fraksi n- butanol positif mengandung senyawa fenolik, flavonoid, alkaloid, terpenoid, steroid dan saponin.
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA
Tabel 4. Hasil Skrining Fitokimia Sampel
No.  Kandungan Kimia Sampel Segar Ekstrak Etanol Fraksi n- Heksana Fraksi Etil Asetat Fraksi n- Butanol 1. Fenolik + + + + + 2. Flavonoid + + + + + 3. Terpenoid + + + + + 4. Steroid + + - + + 5. Alkaloid + + - + + 6. Saponin + + - + + Pengujian aktivitas inhibitor enzim tirosinase terhadap ekstrak dan fraksi daun kedabu menggunakan enzim tirosinase dan L- tirosin sebagai substratnya. Enzim tirosinase dan substrat L-tirosin akan menghasilkan dopaquinon , dopaquinon diubah menjadi dopachrome melalui autooksidasi sehingga menjadi dihydroxy-indole (DHI) atau dihydroxy-indole-carboxyclic-acid (DHICA)
untuk membentuk melanin (pigmen berwarna coklat). Melanin yang terbentuk dapat terukur intensitasnya pada panjang gelombang 492 nm (12) . Melanin di  dalam tubuh dapat menyebabkan hiperpigmentasi. Hiperpigmentasi merupakan suatu gangguan pigmen pada kulit manusia yang disebabkan adanya peningkatan melanin ataupun distribusi melanin yang tidak merata. Pembentukan melanin dapat dicegah dengan menghambat enzim tirosinase. Penghambatan enzim ini memerlukan suatu senyawa yang bersifat sebagai inhibitor enzim tirosinase. Apabila ekstrak maupun fraksi mengandung senyawa inhibitor enzim tirosinase maka akan dapat menghambat pembentukan melanin. Pembentukan melanin ditandai dengan munculnya warna coklat, apabila sampel bersifat sebagai inhibitor enzim tirosinase maka pembentukan melanin akan terhambat sehingga akan menurunkan intensitas warna coklat. Serapan yang diperoleh (absorbansi) dari hasil pengujian digunakan untuk mengetahui seberapa besar aktivitas sampel dalam menginhibisi reaksi substrat L-tirosin dan enzim tirosinase. Nilai absorbansi yang
didapat pada pengujian dapat digunakan sebagai data untuk menghitung persen inhibisi sampel. Nilai persen inhibisi dapat menggambarkan seberapa besar daya hambat aktivitas enzim tirosinase yang dimiliki sampel pada tiap – tiap konsentrasi. Semakin besar persen inhibisi sampel maka akan semakin tinggi daya hambat sampel terhadap enzim tirosinase sehingga sampel memiliki kemampuan yang tinggi dalam menghambat pembentukannya melanin. Hal ini juga dapat ditandai dengan semakin berkurangnya intensitas warna coklat yang terjadi.
Penghambatan aktivitas enzim tirosinase juga digambarkan dengan nilai IC 50 . IC 50 merupakan nilai konsentrasi inhibitor yang dapat menghambat 50% aktivitas enzim tirosinase. Semakin kecil nilai IC 50 maka semakin baik aktivitas penghambatannya, karena hanya dengan konsentrasi kecil sudah bisa menghambat 50% aktivitas enzim tirosinase. Pengujian dilakukan pada blanko (B1), blanko kontrol (B0), sampel (S1), sampel kontrol (S0) dan sebagai pembanding asam kojat (A1) dan asam kojat kontrol (A0). Asam kojat dipilih sebagai kontrol positif dikarenakan asam kojat memiliki kestabilan yang tinggi (Chang, 2009). Mekanisme asam kojat dalam menghambat enzim tirosinase adalah dengan membentuk khelat tembaga (Cu 2+ ) pada sisi aktif enzim sehingga sisi aktif enzim tidak dapat berikatan dengan substratnya dan tidak menghasilkan melanin (7) . Pengujian asam kojat sebagai kontrol positif dilakukan untuk
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821
Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022 MUSTIKA FURI
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA
Tabel 4. Hasil Skrining Fitokimia Sampel No.  Kandungan Kimia Sampel Segar Ekstrak Etanol Fraksi n- Heksana Fraksi Etil Asetat Fraksi n- Butanol 1. Fenolik + + + + + 2. Flavonoid + + + + + 3. Terpenoid + + + + + 4. Steroid + + - + + 5. Alkaloid + + - + + 6. Saponin + + - + + Pengujian aktivitas inhibitor enzim tirosinase terhadap ekstrak dan fraksi daun kedabu menggunakan enzim tirosinase dan L- tirosin sebagai substratnya. Enzim tirosinase dan substrat L-tirosin akan menghasilkan dopaquinon , dopaquinon diubah menjadi dopachrome melalui autooksidasi sehingga menjadi dihydroxy-indole (DHI) atau dihydroxy-indole-carboxyclic-acid (DHICA) untuk membentuk melanin (pigmen berwarna coklat). Melanin yang terbentuk dapat terukur intensitasnya pada panjang gelombang 492 nm (12) . Melanin di  dalam tubuh dapat menyebabkan hiperpigmentasi. Hiperpigmentasi merupakan suatu gangguan pigmen pada kulit manusia yang disebabkan adanya peningkatan melanin ataupun distribusi melanin yang tidak merata. Pembentukan melanin dapat dicegah dengan menghambat enzim tirosinase. Penghambatan enzim ini memerlukan suatu senyawa yang bersifat sebagai inhibitor enzim tirosinase. Apabila ekstrak maupun fraksi mengandung senyawa inhibitor enzim tirosinase maka akan dapat menghambat pembentukan melanin. Pembentukan melanin ditandai dengan munculnya warna coklat, apabila sampel bersifat sebagai inhibitor enzim tirosinase maka pembentukan melanin akan terhambat sehingga akan menurunkan intensitas warna coklat.
Serapan yang diperoleh (absorbansi)
dari hasil pengujian digunakan untuk mengetahui seberapa besar aktivitas sampel dalam menginhibisi reaksi substrat L-tirosin dan enzim tirosinase. Nilai absorbansi yang
didapat pada pengujian dapat digunakan sebagai data untuk menghitung persen inhibisi sampel. Nilai persen inhibisi dapat menggambarkan seberapa besar daya hambat aktivitas enzim tirosinase yang dimiliki sampel pada tiap – tiap konsentrasi. Semakin besar persen inhibisi sampel maka akan semakin tinggi daya hambat sampel terhadap enzim tirosinase sehingga sampel memiliki kemampuan yang tinggi dalam menghambat pembentukannya melanin. Hal ini juga dapat ditandai dengan semakin berkurangnya intensitas warna coklat yang terjadi. Penghambatan aktivitas enzim tirosinase juga digambarkan dengan nilai IC 50 . IC 50 merupakan nilai konsentrasi inhibitor yang dapat menghambat 50% aktivitas enzim tirosinase. Semakin kecil nilai IC 50 maka semakin baik aktivitas penghambatannya, karena hanya dengan konsentrasi kecil sudah bisa menghambat 50% aktivitas enzim tirosinase.
Pengujian dilakukan pada blanko (B1), blanko kontrol (B0), sampel (S1), sampel kontrol (S0) dan sebagai pembanding asam kojat (A1) dan asam kojat kontrol (A0). Asam kojat dipilih sebagai kontrol positif dikarenakan asam kojat memiliki kestabilan yang tinggi (Chang, 2009). Mekanisme asam kojat dalam menghambat enzim tirosinase adalah dengan membentuk khelat tembaga (Cu 2+ ) pada sisi aktif enzim sehingga sisi aktif enzim tidak dapat berikatan dengan substratnya dan tidak menghasilkan melanin (7) . Pengujian asam kojat sebagai kontrol positif dilakukan untuk
MUSTIKA FURI SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA 209
memastikan bahwa metode yang dipakai sudah benar dengan cara membandingkan nilai IC 50 sampel yang didapat dengan nilai IC 50
dari pembandingnya yaitu asam kojat. Pengujian larutan blanko (B1) dilakukan untuk mengetahui aktivitas enzim tanpa adanya sampel sementara pengujian blanko kontrol (B0) digunakan sebagai faktor koreksi terhadap blanko (B1). Pengujian larutan sampel (S1) dilakukan untuk mengetahui kemampuan penghambatan aktivitas enzim tirosinase oleh ekstrak, sedangkan pengujian larutan sampel kontrol (S0) dilakukan sebagai faktor koreksi terhadap larutan sampel.
Pengujian ekstrak etanol, fraksi n- heksana, fraksi etil asetat dan fraksi n- butanol daun kedabu dilakukan pada konsentrasi 2000; 1000; 500; 250; 125; 62,5 dan 31,25 µg/mL dikarenakan pada konsentrasi yang lebih besar larutan sampel masih berwarna pekat pada beberapa konsentrasi, sehingga apabila dilakukan pembacaan pada alat dikhawatirkan warna sampel akan mengganggu pembacaan intensitas dopachrome pada panjang gelombang 492 ppm. Pengujian fraksi etil asetat dan fraksi n -butanol daun kedabu dilakukan kembali pada konsentrasi yang lebih kecil yaitu pada konsentrasi 250; 125; 62,5; 31,25; 15,625; 7,8125 dan 3,90625 µg/mL dikarenakan nilai persen inhibisi yang diperoleh melalui pengujian pada konsentrasi sebelumnya berada di atas 50%. Sehingga nilai
IC 50 tidak dapat ditentukan berdasarkan pengujian tersebut. Pengujian ekstrak etanol dan fraksi n- heksana daun kedabu tetap dilakukan pada konsentrasi 2000; 1000; 500;
250; 125; 62,5 dan 31,25 µg/mL dikarenakan nilai persen inhibisi yang diperoleh berada di rentang 100% hingga 36% sehingga nilai IC 50 dapat ditentukan berdasarkan pengujian tersebut. Pengujian asam kojat dilakukan pada konsentrasi 500; 250; 125; 62,5; 31,25; 15,625 dan 7,1825 µg/mL dikarenakan asam kojat merupakan senyawa murni yang sudah diketahui bersifat sebagai inhibitor enzim tirosinase. Pengujian dilakukan dengan 2 perlakuan. Perlakuan pertama ialah mereaksikan sampel, enzim tirosinase dan substrat L-tirosin (S1). Perlakuan kedua atau perlakuan sampel kontrol (S0) adalah mereaksikan sampel dan enzim tirosinase tanpa substrat. Enzim tirosinase yang digunakan pada pengujian merupakan enzim yang disimpan pada suhu rendah. Penyimpanan enzim tirosinase yang optimal dilakukan pada suhu - 20℃ agar reaksi katalis enzim terhenti. Enzim tirosinase kembali aktif pada kisaran suhu 35- 37℃ (13) . Sampel kemudian diinkubasi pada suhu 37℃ selama 30 menit. Suhu 37℃ dipilih sebagai perlakuan sampel dikarenakan suhu tersebut sesuai dengan suhu tubuh dan suhu optimal enzim bekerja, sementara waktu 30 menit adalah waktu yang cukup agar enzim tirosinase, subtrat dan ekstrak saling bereaksi (14) . Hasil pengujian aktivitas inhibitor enzim tirosinase diperoleh nilai IC 50 asam kojat sebesar 30,09 µg/mL dengan nilai y=32,261x – 59,819 dan R 2 =0,9968. Nilai IC 50 ekstrak etanol daun kedabu adalah sebesar 99,03 µg/mL dengan nilai y=12,355x – 6,7769 dan R 2 =0,9904. Nilai IC 50 fraksi n -heksana sebesar 28,77 µg/mL dengan nilai y=11,812x + 10,32 dan R 2 = 0,9986. Fraksi etil asetat dengan nilai IC 50 sebesar 18,82 µg/mL dengan nilai y=8,9021x + 23,872 dan R 2 =0,9904. Fraksi n - butanol dengan nilai IC 50 sebesar 24,42 µg/mL dengan nilai y=16,393x -  2,3861 dan R 2 =0,9936. Nilai absorbansi dari asam kojat, ekstrak etanol dan fraksi kedabu mendapatkan nilai yang semakin kecil pada konsentrasi yang semakin besar. Semakin besar konsentrasi larutan sampel maka semakin kecil absorbansi yang didapatkan dan semakin berkurang intensitas warna coklat. Hal ini dapat diartikan bahwa pada konsentrasi yang lebih besar, sampel uji memiliki kemampuan yang lebih baik dalam menghambat enzim tirosinase membentuk melanin sehingga melanin yang terbentuk sedikit dan terjadi pengurangan
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA
intensitas warna coklat yang menyebabkan nilai absorbansi yang kecil. Semakin kecil nilai absorbansi yang didapatkan maka semakin besar pula persen inhibisi atau daya hambat yang dimiliki larutan uji, semakin besar konsentrasi sampel maka semakin besar pula persen inhibisi atau daya hambat yang dimiliki larutan uji.
Berdasarkan kategori potensi kekuatan inhibitor enzim tirosinase maka didapatkan hasil bahwa ekstrak etanol, fraksi n -heksana,
fraksi etil asetat dan fraksi n -butanol daun kedabu memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang kuat. Fraksi etil asetat memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase terbaik dengan nilai IC 50 18,82 µg/mL diikuti oleh fraksi n- butanol dengan nilai IC 50 24,42 µg/mL, fraksi n -heksana dengan nilai IC 50 28,77 µg/mL dan ekstrak etanol dengan nilai IC 50 99,03 µg/mL. Fraksi etil asetat, fraksi butanol dan fraksi n- heksana daun kedabu memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang lebih kuat dibandingkan asam kojat dengan nilai IC 50
30,09 µg/mL. Sedangkan ekstrak etanol daun kedabu memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang lebih lemah dibandingkan dengan asam kojat sebagai pembanding. Aktivitas inhibitor enzim tirosinase fraksi etil asetat, fraksi n- butanol, fraksi n -
heksana dan ekstrak etanol daun kedabu yang kuat diduga karena banyaknya kandungan senyawa fenolik. Hasil skrining fitokimia yang diujikan pada keempat sampel positif mengandung fenolik. Sesuai dengan pernyataan (15) , daun kedabu mengandung banyak senyawa fenolik yang telah berhasil diisolasi seperti sonnerphenolic A, sonnerphenolic B, sonnerfenolic C, tiga turunan asam galat serta dua turunan fenolik lainnya. Fenolik diketahui memiliki kemampuan untuk menghambat enzim tirosinase dengan cara sebagai pengkhelat Cu 2+ . Cu 2+ pada enzim tirosinase bersifat sebagai kofaktor yang berfungsi untuk membantu substrat terikat dengan enzim. Hilangnya kofaktor pada enzim mengurangi kemampuan enzim mengikat substratnya sehingga mengurangi aktivitasnya dalam membentuk melanin (18) . Aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang kuat diduga juga disebabkan oleh adanya kandungan flavonoid. Berdasarkan hasil skrining fitokimia, keseluruhan sampel positif memiliki senyawa golongan flavonoid. Senyawa flavonoid memiliki kemampuan untuk menghambat enzim tirosinase.

## Tabel 4. Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase oleh Asam Kojat
Konsentrasi (µg/mL) Abs. Sampel (S 1 ) Abs. Sampel (S 0 ) % Inhibisi Persamaan Linear IC 50 500 0,003 0,002 99,84
y = 32,261x – 59,819
R 2 = 0,9968 30,19 250 0,009 0,002 98,89 125 0,059 0,003 91,16 *62,5 0,162 0,004 74,96 *31,25 0,323 0,006 49,92 *15,625 0,468 0,007 27,35 *7,8125 0,598 0,015 7,94
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821
Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022 MUSTIKA FURI
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA
intensitas warna coklat yang menyebabkan nilai absorbansi yang kecil. Semakin kecil nilai absorbansi yang didapatkan maka semakin besar pula persen inhibisi atau daya hambat yang dimiliki larutan uji, semakin besar konsentrasi sampel maka semakin besar pula persen inhibisi atau daya hambat yang dimiliki larutan uji.
Berdasarkan kategori potensi kekuatan inhibitor enzim tirosinase maka didapatkan hasil bahwa ekstrak etanol, fraksi n -heksana, fraksi etil asetat dan fraksi n -butanol daun kedabu memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang kuat. Fraksi etil asetat memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase terbaik dengan nilai IC 50 18,82 µg/mL diikuti oleh fraksi n- butanol dengan nilai IC 50 24,42 µg/mL, fraksi n -heksana dengan nilai IC 50 28,77 µg/mL dan ekstrak etanol dengan nilai IC 50 99,03 µg/mL. Fraksi etil asetat, fraksi butanol dan fraksi n- heksana daun kedabu memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang lebih kuat dibandingkan asam kojat dengan nilai IC 50 30,09 µg/mL. Sedangkan ekstrak etanol daun kedabu memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang lebih lemah dibandingkan dengan asam kojat sebagai pembanding. Aktivitas inhibitor enzim tirosinase fraksi etil asetat, fraksi n- butanol, fraksi n -
heksana dan ekstrak etanol daun kedabu yang kuat diduga karena banyaknya kandungan senyawa fenolik. Hasil skrining fitokimia yang diujikan pada keempat sampel positif mengandung fenolik. Sesuai dengan pernyataan (15) , daun kedabu mengandung banyak senyawa fenolik yang telah berhasil diisolasi seperti sonnerphenolic A, sonnerphenolic B, sonnerfenolic C, tiga turunan asam galat serta dua turunan fenolik lainnya. Fenolik diketahui memiliki kemampuan untuk menghambat enzim tirosinase dengan cara sebagai pengkhelat Cu 2+ . Cu 2+ pada enzim tirosinase bersifat sebagai kofaktor yang berfungsi untuk membantu substrat terikat dengan enzim. Hilangnya kofaktor pada enzim mengurangi kemampuan enzim mengikat substratnya sehingga mengurangi aktivitasnya dalam membentuk melanin (18) . Aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang kuat diduga juga disebabkan oleh adanya kandungan flavonoid. Berdasarkan hasil skrining fitokimia, keseluruhan sampel positif memiliki senyawa golongan flavonoid. Senyawa flavonoid memiliki kemampuan untuk menghambat enzim tirosinase.

## Tabel 4. Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase oleh Asam Kojat
Konsentrasi (µg/mL) Abs. Sampel (S 1 ) Abs. Sampel (S 0 ) % Inhibisi Persamaan Linear IC 50 500 0,003 0,002 99,84 y = 32,261x – 59,819
R 2 = 0,9968
30,19 250 0,009 0,002 98,89 125 0,059 0,003 91,16 *62,5 0,162 0,004 74,96 *31,25 0,323 0,006 49,92 *15,625 0,468 0,007 27,35
*7,8125
0,598 0,015 7,94
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022 MUSTIKA FURI
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA 211
Tabel 5. Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase oleh Ekstrak Etanol Daun Kedabu Konsentrasi (µg/mL) Abs. Sampel (S 1 ) Abs. Sampel (S 0 ) % Inhibisi Persamaan Linear IC 50 2000 0,316 0,313 99,53 y = 12,355x – 6,7769
R 2 = 0,9904 99,03 1000 0,325 0,269 91,27 *500 0,332 0,153 71,75 *250 0,358 0,090 57,65 *125 0,370 0,063 51,60 *62,5 0,382 0,025 43,71 *31,25 0,416 0,022 37,82 Tabel 6. Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase oleh Fraksi n- Heksana Daun Kedabu Konsentrasi (µg/mL) Abs. Sampel (S 1 ) Abs. Sampel (S 0 ) % Inhibisi Persamaan Linear IC 50 *2000 0,392 0,391 99,74 y = 11,812x + 10,32 R 2 = 0,9986 28,77 *1000 0,409 0,357 91,90 500 0,412 0,292 81,11 *250 0,422 0,273 76,49 125 0,442 0,258 71,01 *62,5 0,510 0,248 58,60 *2000 0,392 0,391 99,74 Tabel 7. Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase oleh Fraksi Etil Asetat Daun Kedabu Konsentrasi (µg/mL) Abs. Sampel (S 1 ) Abs. Sampel (S 0 ) % Inhibisi Persamaan Linear IC 50 250 0,133 0,047 86,48 y = 8,9021x + 23,872 R 2 = 0,9921 18,82 125 0,257 0,034 64,75 *62,5 0,314 0,020 59,65 *31,25 0,330 0,012 55,86 15,625 0,400 0,012 44,87 *7,8125 0,417 0,012 42,24 *3,90625 0,464 0,017 35,61
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA
Tabel 8. Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase oleh Fraksi n- Butanol Daun Kedabu Konsentrasi (µg/mL) Abs. Sampel (S 1 ) Abs. Sampel (S 0 ) % Inhibisi  Persamaan Linear IC 50 *250 0,069 0,001 89,16 y = 16,393x - 2,3861 R 2 = 0,9936 24,42 125 0,206 0,006 68,33 62,5 0,285 0,003 55,60 *31,25 0,307 0,003 52,13 *15,625 0,374 0,002 41,29 *7,8125 0,421 0,000 33,56 3,90625 0,434 -0,004 30,88 Kemampuan flavonoid dalam menghambat terjadinya pigmentasi kulit adalah dengan cara menghambat langsung aktivitas enzim tirosinase pada proses melanogenesis. Senyawa flavonoid menghambat enzim tirosinase dengan mekanisme inhibitor kompetitif dengan substratnya (7) . Posisi gugus hidroksil dan jumlah gugusnya pada senyawa flavonoid memiliki peranan penting dalam menghambat aktivitas enzim tirosinase.
Semakin banyak jumlah gugus OH pada cincin benzena, maka semakin berfungsi dalam menghambat aktivitas enzim tirosinase, sedangkan adanya konjugat gula pada cincin benzena dapat menurunkan aktivitas penghambatan (16) . Kemampuan sampel dalam menginhibisi enzim tirosinase juga dipengaruhi oleh tingginya kemampuan antioksidan yang dimiliki oleh sampel. Antioksidan dapat menghambat reaksi oksidasi enzim sehingga enzim tidak dapat mengoksidasi reaksi L-tirosin menjadi L-
DOPA  dan reaksi L-DOPA menjadi dopaquinon sehingga proses melanogenesis terhambat dan tidak terbentuk melanin (9) . Penentuan aktivitas antioksidan yang telah dilakukan oleh (17) terhadap sampel ekstrak etanol, fraksi n- heksana, fraksi etil asetat dan fraksi n -butanol daun kedabu ( Sonneratia ovata Backer) memiliki kemampuan antioksidan yang sangat kuat. Perbandingan
antara nilai IC 50 aktivitas antioksidan sampel dan nilai IC 50 pengujian enzim tirosinase didapatkan suatu hubungan yang linear, dimana semakin kecil nilai IC 50 aktivitas antioksidan sampel maka semakin kecil pula nilai IC 50 aktivitas inhibitor enzim tirosinase dari sampel tersebut. Dapat diartikan bahwa semakin besar potensi antioksidan suatu sampel maka semakin besar pula potensi inhibisi enzim tirosinase.
Jumlah kandungan flavonoid, fenolik, steroid dan terpenoid serta kekuatan aktivitas antioksidan menjadi alasan mengapa fraksi etil asetat, fraksi n- butanol, fraksi n -heksana dan ekstrak etanol memiliki kemampuan aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang kuat.

## SIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa inhibitor aktivitas enzim tirosinase yang paling baik dihasilkan oleh fraksi etil asetat dengan nilai IC 50 sebesar 18,82 μg/mL diikuti oleh fraksi n -butanol dengan nilai IC 50 24,42  μg/mL, fraksi n -heksan dengan nilai IC 50 sebesar 28,77 μg/mL dan ekstrak etanol dengan nilai IC 50 99,03  μg/mL.  Baik  ekstrak  maupun fraksi-fraksi daun kedabu memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase dengan kategori kuat yang dibandingkan dengan asam kojat dengan nilai IC 50 30,09 μg/mL.
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821
Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022 MUSTIKA FURI
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA
Tabel 8. Uji Aktivitas Inhibitor Enzim Tirosinase oleh Fraksi n- Butanol Daun Kedabu Konsentrasi (µg/mL) Abs. Sampel (S 1 ) Abs. Sampel (S 0 ) % Inhibisi  Persamaan Linear IC 50 *250 0,069 0,001 89,16 y = 16,393x - 2,3861 R 2 = 0,9936 24,42 125 0,206 0,006 68,33 62,5 0,285 0,003 55,60 *31,25 0,307 0,003 52,13 *15,625 0,374 0,002 41,29 *7,8125 0,421 0,000 33,56 3,90625 0,434 -0,004 30,88 Kemampuan flavonoid dalam menghambat terjadinya pigmentasi kulit adalah dengan cara menghambat langsung aktivitas enzim tirosinase pada proses melanogenesis. Senyawa flavonoid menghambat enzim tirosinase dengan mekanisme inhibitor kompetitif dengan substratnya (7) . Posisi gugus hidroksil dan jumlah gugusnya pada senyawa flavonoid memiliki peranan penting dalam menghambat aktivitas enzim tirosinase. Semakin banyak jumlah gugus OH pada cincin benzena, maka semakin berfungsi dalam menghambat aktivitas enzim tirosinase, sedangkan adanya konjugat gula pada cincin benzena dapat menurunkan aktivitas penghambatan (16) . Kemampuan sampel dalam menginhibisi enzim tirosinase juga dipengaruhi oleh tingginya kemampuan antioksidan yang dimiliki oleh sampel.
Antioksidan dapat menghambat reaksi oksidasi enzim sehingga enzim tidak dapat mengoksidasi reaksi L-tirosin menjadi L- DOPA  dan reaksi L-DOPA menjadi dopaquinon sehingga proses melanogenesis terhambat dan tidak terbentuk melanin (9) . Penentuan aktivitas antioksidan yang telah dilakukan oleh (17) terhadap sampel ekstrak etanol, fraksi n- heksana, fraksi etil asetat dan fraksi n -butanol daun kedabu ( Sonneratia ovata Backer) memiliki kemampuan antioksidan yang sangat kuat. Perbandingan
antara nilai IC 50 aktivitas antioksidan sampel dan nilai IC 50 pengujian enzim tirosinase didapatkan suatu hubungan yang linear, dimana semakin kecil nilai IC 50 aktivitas antioksidan sampel maka semakin kecil pula nilai IC 50 aktivitas inhibitor enzim tirosinase dari sampel tersebut. Dapat diartikan bahwa semakin besar potensi antioksidan suatu sampel maka semakin besar pula potensi inhibisi enzim tirosinase.
Jumlah kandungan flavonoid, fenolik, steroid dan terpenoid serta kekuatan aktivitas antioksidan menjadi alasan mengapa fraksi etil asetat, fraksi n- butanol, fraksi n -heksana dan ekstrak etanol memiliki kemampuan aktivitas inhibitor enzim tirosinase yang kuat.

## SIMPULAN
Berdasarkan penelitian yang telah dilakukan dapat disimpulkan bahwa inhibitor aktivitas enzim tirosinase yang paling baik dihasilkan oleh fraksi etil asetat dengan nilai IC 50 sebesar 18,82 μg/mL diikuti oleh fraksi n -butanol dengan nilai IC 50 24,42  μg/mL, fraksi n -heksan dengan nilai IC 50 sebesar 28,77 μg/mL dan ekstrak etanol dengan nilai IC 50 99,03  μg/mL.  Baik  ekstrak  maupun fraksi-fraksi daun kedabu memiliki aktivitas inhibitor enzim tirosinase dengan kategori kuat yang dibandingkan dengan asam kojat dengan nilai IC 50 30,09 μg/mL.
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022 MUSTIKA FURI SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA 213

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis mengucapkan terimakasih kepada  Lembaga P3M STIFAR Riau atas pendanaan penelitian ini pada skema Hibah
Dosen Pemula.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Isfardiyana  SI,  dan Safitri  SR. Pentingnya Melindungi Kulit dari Sinar Ultraviolet dan Cara Melindungi Kulit dengan Sunblock Buatan, Jurnal Inovasi dan Kewirausahaan. 2014,3(2): 126- 133. 2. Erdmann VA, and Barciszewski J. RNA Technologies and Their Applications , Springer-Verlag. Heidelberg. 2010. 3. Halaban R, Hebert DN and Fisher ED. Tyrosinase Maturation and Oligomerization in the Endoplasmic Reticulum Require a Melanocyte Specific Factor, Journal of Biological Chemistry. 2003,  278(28): 25607- 25617. 4. Fais  A, Corda  M, Era  B, Fadda  MB, Quezada  E, Santana  L, Picciau  C. Tyrosinase Inhibitor Activity of Coumarin-Resveratrol Hybrid Molecules, Journal molecules. 2009, 1(1): 2514-2520. 5. Himawan  R.  Uji Aktivitas Ekstrak Etanol 70% dan Etil Asetat Daun Sukun ( Artocarpus altilis Park.) Fosberg) sebagai Inhibitor Tirosinase, Jurnal Farmamedika. 2016, 1(2): 63-69. 6. Lin JW, Chiang HM, Lin YC, Wen KC. Natural Products with Skin-Whitening Effects, Journal Food and Drugs analysis. 2008, 16(2): 1-10. 7. Chang TS.  An Updated Review of Tyrosinase Inhibitors, International Journal of Molecular Sciences. 2009, 1(1): 2440- 2475. 8. Karadeniz F, Burdurlu HS, Koca N, & Soyer  Y.  Antioxidant Activity of Selected Fruits and Vegetables Grown in Turkey, Turk J Agric. 2005, 29(25): 297-303. 9. Maack A and Pegard A. Populus nigra (Salicaceae) Absolute Rich in Phenolic Acids, Phenylpropanoïds and Flavonoids as a New Potent Tyrosinase Inhibitor, Journal Fitoterapia. 2016, 111(3): 95 – 101. 10. Dhianawaty  D dan Ruslin  H. Kandungan Total Polifenol dan Aktivitas Antioksidan dari Ekstrak Metanol Akar Imperata cylindrica (L) Beauv (Alang-alang), Jurnal Fakultas Kedokteran Universitas Padjajaran. 2015, 47(1): 2338-6223. 11. Harbone  JB. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, Penerjemah: Kosasih P, Soediro Iwang, Penerbit ITB Bandung. 2006. 12. Baumann L, & Saghari S. Basic Science of The Dermis; Cosmetic Dermatology. Second Edition, Mc Graw Hill. New York. 2009. 13. Zaidi K, Alia A, Ali S. Purification and Characterization of Melanogenic Enzyme Tyrosinase From Button Mushroom. Hindawi Publishing Corporation Enzyme Research. 2016, 2014(6): 1-6 14. Sari  AP.  Aktivitas Antioksidan dan Inhibisi Enzim Tirosinase dari Ekstrak Daun Petai Belalang ( Archidendron Clypearia (Jack) Nielson), Skripsi. Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru. 2016.
15. Nguyen T, Pham H, Pham N, Quach N, Pudhom K, Hansen PE, et al. Chemical Constituents from Sonneratia ovata Backer and Their In Vitro Cytotoxicity and Acetylcholinesterase Inhibitory
Activities, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters. 2015, 25(11): 2366- 2371. 16. Sanjeewa KKA, Kim EA, Son KT, Jeon YJ. Bioactive Properties and Potentials Cosmeceutical Applications of Phlorotannins Isolated from Brown
Jurnal Ilmiah Manuntung: Sains Farmasi Dan Kesehatan p-ISSN. 2442-115X; e-ISSN. 2477-1821 Vol.8 No.2, Hal. 201-214, 2022
JURNAL ILMIAH MANUNTUNG, 8(2), 201-214, 2022
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN SAMARINDA
Seaweeds: A Review. Journal of Photochemistry and Photobiology. 2016, 16(5): 100 – 105. 17. Basit  AN.  Penentuan Total Fenolik, Flavonoid, dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak dan Fraksi Daun Kedabu ( Sonneratia ovata Backer), Jurnal Farmasi Indonesia, 2020,Vol 12 (1), 1-12. 18. Zolghadri S, Bahrami A, Hassan Khan MT, Munoz-Munoz J, Garcia-Molina F, Garcia-Canovas F, et al .  A comprehensive review on tyrosinase inhibitors. Journal of enzyme inhibition and medicinal chemistry , 2019. 34 (1),
279 – 309. 19. Hanani E. Analisis Fitokimia , Penerbit: EGC, Jakarta. 2016.