Program Studi Pendidikan Kimia Universitas Sebelas Maret https://jurnal.uns.ac.id/jkpk
Hal. 30-37 ISSN 2503-4146 ISSN 2503-4154 (online)

## ISOLASI ASAM FERULAT DARI DAUN MINDI ( Melia azedarach L. )
DAN UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN
Isolation of Ferulic Acid from Leaves of Mindi (Melia azedarach L.) and Its Antioxidant Activity Test
Departemen Kimia, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, Tembalang, Kota Semarang, Jawa Tengah, 50275, Indonesia
Untuk korespondensi: Telp: 081360526239, e-mail: andriyanibudi9@gmail.com

## ABSTRAK
Mindi  ( Melia  azedarach L)  merupakan  salah  satu  tumbuhan  yang  berasal  dari  famili Meliaceae dan  telah  diketahui  mempunyai  aktivitas  biologis  karena  adanya  senyawa  bioaktif salah  satunya asam ferulat. Pada  penelitian ini  telah  dilakukan isolasi asam  ferulat beserta uji aktivitas antioksidannya dari daun mindi. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi asam ferulat pada  ekstrak  etanol  daun  mindi,  menentukan kadar  asam  ferulat  dan  uji  aktivitas  antioksidan secara kualitatif. Metode yang digunakan pada penelitian ini adalah fraksinasi dengan hidrolisis (asam  dan  basa)  dan  tanpa  hidrolisis, penentuan kadar  asam  fenolat  dengan  instrument TLC Scanner dan uji aktivitas antioksidan secara kualitatif dengan metode peredaman radikal DPPH. Berdasarkan identifikasi menggunakan TLC dan TLC Scanner , bahwa dari fraksi hidrolisis basa (HB),  hidrolisis  asam  (HA)  dan  tanpa  hidrolisis  (HA)  ekstrak  etanol  daun  mindi  diduga mengandung senyawa asam ferulat. Hasil analisis dengan TLC Scanner diketahui kadar asam ferulat pada fraksi HB, HA dan TH masing-masing 15,57%; 12,17%; dan 9,56%. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pengaruh hidrolisis mempengaruhi kadar asam fenolat dimana pada fraksi HB menghasilkan kadar asam ferulat lebih tinggi dibanding fraksi HA dan TH. Pada uji aktivitas antioksidan  yang  dilakukan  secara  kualitatif  menunjukkan  bahwa  isolat  asam  ferulat  yang terkandung pada ketiga fraksi aktif meredam radikal DPPH.
Kata Kunci: Melia azedarach L, asam ferulat, TLC Scanner, DPPH

## ABSTRACT
Mindi ( Melia azedarach L.)  is one of a plant from Meliaceae family and has been known for  its  bioactive compound, such as  ferulic acid.  On  this  study, the  isolation of  ferulic acid and antioxidant activity test has been conducted. The aim of this study was to isolate the ferulic acid on ethanol extract of Melia azedarach L. leaves, determine the ferulic acid content and antioxidant activity test qualitatively. The method used in this research was isolation with hydrolysis (acid and base)  and  without  hydrolysis,  determining  the  phenolic  acid  content  using  TLC  scanner instrument  and  antioxidant  activity  test  qualitatively  using  DPPH  radical  reduction  method. According to the identification using TLC and TLC scanner, the base hydrolysis fraction (HB), acid hydrolysis  (HA),  and  without  hydrolysis  (HA)  of  ethanol  extract  from Melia  azedarach L.  was suspected contain the ferulic acid compound. The analysis result using TLC scanner was known to  have  ferulic  acid  content  on  HB,  HA,  and  TH  fraction  of  15.57%,12.17%,  and  9.56%, respectively. This study showed that hydrolysis affected the phenolic acid content where the HB fraction produced higher ferulic acid than HA and TH fraction. The antioxidant activity test that
Received: June  22, 2017 Accepted: May 16, 2018 Online Published: May 21 , 2018
DOI : 10.20961/jkpk.v3i1.11858
Andriyani Budi Listyo * , Dewi Kusrini, dan Enny Fachri y ah
has  been  conducted  qualitatively showed  that  ferulic  acid  isolates  contained  on  each  fraction actively reduce the DPPH radical.
Keywords: Melia azedarach L, ferulic acid, TLC Scanner, DPPH

## PENDAHULUAN
Tanaman  mindi  ( Melia  azedarach L.) adalah salah satu tanaman  berfamili Meliaceae,  yang  merupakan  tanaman  asli dari  Mexico  dan  Argentina.  Tanaman  ini dapat  tumbuh  di  Indonesia  yang  beriklim tropis  [1].  Dalam  kehidupan  sehari-hari, tanaman mindi digunakan secara tradisional untuk obat malaria, diabetes, batuk, penyakit kulit,  dan  lain-lain  [2].  Penelitian  lain  me- nyatakan bahwa ekstrak daun mindi memiliki aktivitas  sebagai,  antioksidan  antibakteri, analgesic  [3],  antidiabetes,  antihipertensi, antireumatik [1], insektisida, rodentisida, dan fungisida [4].
Pada daun mindi  terdapat kandungan metabolit  sekunder  antara  lain  alkaloid, tannin,  saponin,  fenolik,  glikosida,  steroid, terpenoid  dan  flavonoid  dimana  dalam ekstrak  etanol  daun  mindi  mengandung senyawa fenolik  dalam  jumlah  yang  banyak [5]. Kandungan senyawa fenolik ekstrak daun mindi  yang  berhasil  diidentifikasi  dengan HPLC  mengandung  komponen  mayoritas asam  protokatekat  serta  asam  galat,  asam siringat, asam ferulat, asam quinat dan asam sinapat  yang  merupakan  golongan  asam fenolat [6].
Asam  ferulat  merupakan  salah  satu jenis  asam  fenolat  yang  terkandung  dalam tanaman  yang  berasal  dari  metabolisme fenilalanin  dan  tirosin.  Asam  ferulat  banyak ditemukan pada biji dan daun  dalam bentuk
bebas  dan  terikat  dengan  lignin  dan biopolimer lainnya. Asam ferulat memiliki inti fenolik   dan   diperpanjang   rantai   samping konjugasi  sehingga  mudah  membentuk resonansi  stabil  fenoksi  radikal  yang  me- nyumbang  potensi  antioksidan  kuat  [7]. Sruktur  asam  ferulat  ditunjukkan  pada Gambar 1.
Gambar 1. Struktur asam ferulat
Ekstrak  etanol  daun  mindi  telah dilaporkan   memiliki   aktivitas   antioksidan yang ditunjukkan dengan harga IC50 sebesar 0.0054 μg/ml [5]. Daun dari  tanaman  mindi belum banyak diteliti tentang isolasi senyawa asam fenolat, oleh karena itu pada penelitian ini akan dilakukan isolasi asam ferulat dan uji aktivitas  antioksidan  secara  kualitatif  dari daun mindi.
Berdasarkan informasi  di  atas, pene- litian mengenai isolasi  asam  ferulat  dan  uji aktivitas  antioksidan  isolat  asam  ferulat belum banyak dilakukan. Penelitian ini akan dilakukan isolasi asam ferulat serta aktivitas antioksidannya  secara  kualitatif  dengan metode DPPH dari isolat asam ferulat. Hasil penelitian  ini  nantinya  diharapkan  dapat memperoleh  isolat  asam  ferulat  yang terkandung  dalam  daun  Mindi (Melia
azedarach L.)  dan  aktivitasnya  sebagai antioksidan.

## METODE PENELITIAN

## 1.  Bahan dan alat.
Bahan yang  diperlukan  dalam  pe- nelitian ini yaitu daun Mindi (Melia azedarach L. ) dari  daerah  Purworejo,  Jawa  Tengah,  n- heksana,  etanol,  akuades,  amonia,  amil alkohol,  serbuk  magnesium,  anhidrida  asam asetat, pereaksi  Meyer,  pereaksi  Dragen- dorff , asam sulfat p.a, natrium hidroksida p.a, natrium  bikarbonat  p.a,  eter,  asam  klorida p.a,  metanol  p.a,  kloroform  p.a,    natrium asetat  p.a,  natrium sulfat anhidrat, plat silika gel GF254, asam asetat p.a, pereaksi FeCl3 2 %, Na2CO3  p.a, etil asetat p.a, asam galat p.a,  asam  ferulat  p.a,  asam  pirogalol  p.a, asam  salisilat p.a, asam kafeat p.a, indikator universal,  dan  1,1-  difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH).
Alat yang  digunakan  dalam  penelitian ini terdiri dari gelas beker, erlenmeyer, gelas ukur,  pipet  tetes,  cawan  porselin,  pipet gondok,  pengaduk,  corong  gelas,  tabung reaksi,  corong  pisah,  chamber  KLT,  lampu UV  254  nm  dan  365  nm, rotary  evaporator , botol vial, neraca analitis dan TLC Scanner .

## 2.  Persiapan Sampel
Sampel  penelitian  berupa  daun  mindi yang  diperoleh  di  sekitar  daerah  Purworejo. Daun  mindi  yang  diperoleh  dibersihkan dengan air dan dikeringkan dengan diangin- anginkan  tanpa  terkena  sinar  matahari  dan dihaluskan dengan  cara  diblender  sehingga menjadi serbuk.

## 3.  Pembuatan Ekstrak Etanol-Air
Serbuk daun Mindi sebanyak 1,180 kg dimaserasi  dengan  pelarut  etanol  96% hingga  jernih  dengan  pergantian  pelarut setiap 24  jam, kemudian dipisahkan ekstrak dan  ampasnya.  Ekstrak  yang  diperoleh kemudian dipekatkan dengan rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak kental etanol  dan  ditimbang.  Ekstrak  kental  etanol dilarutkan  kembali  dengan  etanol  kemudian dilakukan  penghilangan  klorofil  dengan menambahkan akuades panas (1:1), didiam- kan   hingga   klorofil   memisah   dan disaring.
Ekstrak  etanol-air  diekstraksi  dengan pelarut  n-heksana  menggunakan  corong pisah  hingga  membentuk  dua  lapisan. Lapisan  n-heksana  dan  lapisan  etanol-air dipisahkan

## 4.  Penapisan Fitokimia
Simplisia  daun  mindi  dilakukan  uji penapisan  fitokimia  untuk  mengetahui kandungan golongan senyawa kimianya. Uji penapisan  fitokimia  meliputi  uji  alkaloid,  uji flavonoid, uji tanin, uji saponin, uji steroid dan triterpenoid

## 5.  Isolasi Asam Fenolat
Isolasi asam fenolat dilakukan terhadap  ekstrak  etanol-air  melalui  tiga macam, yaitu hidrolisis asam, hidrolisis basa dan tanpa hidrolisis [8].

## a.  Hidrolisis Asam
Sebanyak  80  mL  ekstrak  etanol-air dicampur  dengan  H 2 SO 4 2N  dalam  pena- ngas  air  selama  2  jam.  Hasil  hidrolisis  lalu diekstraksi  dengan  80  mL  eter  untuk memisahkan asam fenolat  dengan senyawa
lain  sebanyak  empat  kali.  Fraksi  eter selanjutnya diuapkan dengan dengan rotary evaporator hingga  volume  80  mL  dan diekstraksi  dengan  NaHCO 3 20%  untuk memisahkan  asam fenolat dengan senyawa fenol lainnya. Lapisan air diasamkan dengan H 2 SO 4 10%  lalu  diekstraksi  dengan  eter sebanyak empat kali.  Fraksi eter selanjutnya diuapkan  sampai  kering.  Residu  dilarutkan dalam 1 mL metanol dan selanjut-nya disebut fraksi HA [8].
b.  Hidrolisis Basa
Sebanyak  75  mL  ekstrak  etanol-air dicampur  dengan  NaOH  1  N  pada  suhu kamar dan ruang gelap selama 24 jam. Hasil hidrolisis  dilakukan  penambahan  H2SO4 10%  kemudian  diekstraksi  dengan  75  mL eter untuk memisahkan asam fenolat dengan senyawa  lain  sebanyak  empat  kali.   Fraksi eter  selanjutnya  diuapkan  dengan rotary evaporator hingga  volume  80  mL  dan  di ekstraksi  dengan  NaHCO3  20%  untuk memisahkan asam fenolat  dengan senyawa fenol lainnya. Lapisan air diasamkan dengan H2SO4  10%  lalu  diekstraksi  dengan  eter sebanyak empat kali.  Fraksi eter selanjutnya diuapkan  sampai  kering.  Residu  dilarutkan dalam 1 mL metanol dan selanjutnya disebut fraksi HB [8].
c.  Tanpa Hidrolisis
Sebanyak  75  mL  ekstrak  etanol-air  diasam- kan  dengan  H2SO4  10%  kemudian  dieks- traksi dengan 75 mL eter untuk memisahkan asam fenolat dengan senyawa lain sebanyak empat kali. Fraksi eter selanjutnya diuapkan dengan rotarry evaporator hingga volume 80 mL  dan  di  ekstraksi  dengan  NaHCO3  20%
untuk  memisahkan  asam  fenolat  dengan senyawa  fenol  lainnya.  Lapisan  air  diasam- kan  dengan  H2SO4  10%  lalu  diekstraksi dengan eter sebanyak empat kali.  Fraksi eter selanjutnya diuapkan sampai kering. Residu dilarutkan  dalam  1  mL  metanol  dan selanjutnya disebut fraksi TH [8].

## 6.  Pemisahan Asam Fenolat
Pemisahan  asam  fenolat  dilakukan terhadap fraksi HB,  HA,  dan TH mengguna- kan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dengan plat  silika  gel  GF254  dan  eluen campuran dengan  perbandingan  tertentu.  Noda  yang terbentuk  pada  KLT  disemprot  dengan pereaksi  FeCl3.  Noda  yang  diperoleh selanjutnya  dibandingkan  dengan  standar asam  galat,  asam  kafeat,  asam  ferulat  dan asam   pirogalol.   Noda   yang   memiliki   Rf sejajar dengan senyawa pembanding diiden- tifikasi  dengan  TLC Scanner dan  dilakukan pemisahan  dengan  KLT  Preparatif  dengan eluen  yang  telah  ditentukan  untuk  mem- peroleh  isolat  asam  fenolat.  Pada  KLT preparative  diperoleh  pita-pita  isolat.  Kemu- dian pita-pita isolat yang terjerap di plat silika dikeruk  dan  dilarutkan  kembali  dengan pelarut  fraksi  HA,  HB,  dan  TH  dan  disaring untuk  memisahkan  isolat  dari  silika  gel. Kemudian pelarut diuapkan untuk mendapat- kan isolat.
7.  Identifikasi  Asam  Fenolat  Mengguna- kan TLC Scanner
Identifikasi  dilakukan  menggunakan TLC Scanner terhadap fraksi HB, HA, TH dan asam  ferulat  standar  yang  dibuat  variasi konsentrasi  50,  100,  250,  500,  1000  ppm dalam  metanol.  Selanjutnya  masing-masing
5  µL  senyawa  standar  dengan  variasi konsentrasi, fraksi HB, HA dan TH dianalisis dan  diukur luas areanya menggunakan TLC Scanner untuk  menentukan  kadar  senyawa yang terkandung dalam setiap fraksi.
8.  Uji Aktivitas Antioksidan  Dengan

## Metode DPPH
Pengujian aktivitas antioksidan dilaku- kan  terhadap  isolat  asam  ferulat  dari  fraksi HB,  HA  dan  TH  dengan  metode  DPPH menggunakan  KLT.  Isolat  asam  ferulat ditotolkan  pada  plat  KLT  kemudian  dielusi menggunakan eluen yang cocok. Setelah itu lempeng dikeringkan dan  disemprot dengan larutan  DPPH  0,5  mM.  Isolat  yang  aktif sebagai  antioksidan  akan  menghasilkan perubahan  warna  dari  ungu  menjadi  kuning dalam jangka waktu tertentu.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1.  Preparasi Sampel dan Uji Skrining
Sampel  daun  mindi  3  kg  didapatkan serbuk daun mindi sebanyak 1,180 kg. Pada uji  skrining  didapatkan  bahwa  serbuk  daun mindi  mengandung  senyawa  alkaloid  flavo- noid, steroid, tannin, saponin dan fenolik

## 2.  Pembuatan Ekstrak Etanol Air
Ekstrak    etanol-air    dibuat    dengan mengektraksi   daun   mindi   terlebih   dahulu melalui metode maserasi. Serbuk daun mindi dimaserasi    dengan    pelarut    etanol    96 %terlebih  dahulu  untuk  melarutkan  seluruh senyawa yang terkandung dalam daun mindi. Pemilihan  pelarut  etanol  karena  etanol merupakan    pelarut    universal    sehingga semua  senyawa  organik  dalam  daun  akan
terambil  [9].  Filtrat  maserasi  diuapkan dengan rotary evaporator.
Ekstrak  etanol  dihilangkan  klorofilnya dengan  penambahan  akuades  (1:1).  Tahap ini perlu dilakukan dengan harapan agar tidak mengganggu  tahapan  proses  isolasi  lanjut- an.  Filtrat  hasil  penyaringan  dari  proses  ini merupakan ekstrak etanol air yang diperoleh sebesar  132,85  gram  atau  sekitar 225 mL. Ekstrak etanol air kemudian dipartisi dengan n-heksana  untuk  menghilangkan  senyawa- senyawa yang bersifat non polar.

## 3.  Penapisan Fitokimia
Uji  pendahuluan menggunakan pena- pisan  fitokimia  dilakukan  sebagai  langkah awal  untuk  memperoleh  gambaran  me- ngenai  golongan  yang  terkandung  dalam sampel. Penapisan fitokimia dilakukan terhadap serbuk daun mindi. Hasil penapisan fitokimia dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji penapisan fitokimia serbuk daun mindi ( Melia azedarach L.)
Uji Hasil Alkaloid + Flavanoid + Triterpenoid - Steroid + Saponin + Tanin + Fenolik +

## 4.  Isolasi Senyawa Asam Fenolat
Ekstrak  etanol-air  diisolasi  dalam  tiga macam  isolasi,  yaitu  hidrolisis  basa  (HB), hidrolisis  asam  (HA),  dan  tanpa  hidrolisis (TH).  Untuk  mengambil  asam  fenolat  dari bentuk  ester  dilakukan  dengan  hidrolisis basa.  Pada  tahap  ini  digunakan NaOH 1N untuk  mengambil  asam  fenolat  dari  bentuk
ester  Karena  gugus  ester  akan  mengalami hidrolisis dengan NaOH dan air.
Untuk  membebaskan  asam  fenolat dari  bentuk  glikosida  dilakukan  hidrolisis asam. Pada tahap ini  digunakan H2SO4 2N untuk  mengambil  asam  fenolat  dari  bentuk glikosida. Isolasi asam fenolat dalam bentuk tanpa  hidrolisis  bertujuan  untuk  mengambil asam fenolat bebas. Fraksi HB, HA, dan TH hasil  hidrolisis  masing-masing sebesar  1,05 gram, 1,26 gram dan 1,38 gram. Dari ketiga fraksi  tersebut  (HB,  HA  dan  TH)  dilarutkan dalam metanol. Selanjutnya dari ketiga fraksi tersebut,  dilakukan  pemisahan  isolat  meng- gunakan KLT.

## 5.  Pemisahan Asam Fenolat
Pemisahan  asam  fenolat  dilakukan dengan  menggunakan  KLT  dengan  fase diam  silika  gel  GF254  3×8  cm  dan  eluen campuran  kloroform:etil  asetat:asam  asetat (50:50:3) sebagai fase gerak. Pada tahap ini fraksi  HB  menghasilkan  4  noda,  fraksi  HA menghasilkan  6  noda,  dan  fraksi  TH meng- hasilkan  4  noda.  Pada  ketiga  fraksi mem- punyai  satu  noda  yang  sejajar  dan  memiliki kemiripan  Rf,  sehingga  dapat  disimpulkan bahwa  dalam  ketiga  fraksi  tersebut  diduga mengandung senyawa yang sama.
Identifikasi  selanjutnya  dengan  mem- bandingkan  sampel  dan  asam  fenolat standar (asam  ferulat, asam  pirogalol, asam galat, asam kafeat dan asam salisilat). Hasil yang diperoleh dari ketiga  fraksi tersaji pada Gambar 2. menunjukkan bahwa noda dengan Rf  yang  sejajar  sebelumnya,  memiliki kemiripan  Rf  dengan  asam  fenolat  strandar yaitu asam ferulat dengan Rf = 0,62.
Gambar  2 . Hasil  KLT  pada  fraksi  HB, HA,TH,  dan  senyawa  standar  dengan eluen campuran
Keterangan : G : asam galat pembanding K : asam kafeat pembanding F : asam ferulat pembanding P : asam pirogalol pembanding S : asam salisilat pembanding HB : fraksi hidrolisis basa TH : fraksi tanpa hidrolisis HA : fraksi hidrolisis asam
Fraksi  HB,  TH,  dan  HA  selanjutnya dilakukan  pemisahan  menggunakan  KLT preparatif  sehingga  diperoleh  isolat  asam ferulat.

## 6. Identifikasi    Asam    fenolat    dengan TLC Scanner
Identifikasi  asam  fenolat  dilakukan menggunakan TLC Scanner pada  panjang gelombang 254  nm.  Dari data TLC Scanner menghasilkan  harga  Rf   dan  luas  area  dari sampel dan asam ferulat standar  yang telah di KLT campuran eluen kloroform: etil asetat: asam  asetat  (50:50:3). Peak hasil  analisis TLC Scanner antara harga Rf  dan luas area dari  sampel  dan  asam  ferulat  standar ditunjukkan pada Gambar 3.
Gambar 3. Peak hasil analisis TLC Scanner
Harga Rf sampel dibandingkan dengan  Rf  asam  ferulat  standar  yang ditunjukkan dalam tabel 2.
Tabel 2. Hasil Analisis TLC Scanner
No Nama Senyawa Rt 1 F50 0,53 2 F100 0,53 3 F250 0,54 4 F500 0,55 5 F1000 0,56 6 HB 0,57 7 HA 0,56 8 TH 0,53
Pada hasil tersebut dapat disimpul-kan bahwa  Rf    asam  ferulat  standar  memiliki kemiripan dengan salah satu Rf dari masing- masing  fraksi  tersebut  yaitu  0,56  sehingga dapat    disimpulkan  bahwa    ketiga  fraksi tersebut  diduga  mengandung  asam  ferulat. TLC Scanner juga  dapat  digunakan  untuk analisis  kuantitatif  dengan  bantuan  per- samaan  linier  kurva  kalibrasi  standar  yang diperoleh  dari  korelasi  berat  senyawa dan area  senyawa  standar  (asam  ferulat)  yang dapat dilihat pada Gambar 4. Dari
persamaan  y  =  6.2531x  +  21467  dapat digunakan untuk menentukan kadar
senyawa asam ferulat pada ketiga fraksi  dan didapatkan masing-masing fraksi HB
15,57%;  fraksi  HA  12,17  %;  dan  fraksi  TH 9,56  %.  Dapat  disimpulkan  bahwa  asam ferulat fraksi HB memiliki kadar asam ferulat terbesar.
Gambar  4.  Grafik  Kurva  Kalibrasi  Asam
Ferulat
7.  Uji Aktivitas Antioksidan  Dengan Metode DPPH
Hasil  aktivitas  antioksidan isolat asam ferulat  dari  fraksi  HB,  HA  dan  TH  yang dilakukan  menggunakan  KLT  dengan  eluen campuran kloroform : etil asetat : asam asetat (50:50:3)    menunjukkan    perubahan    warna dari  violet menjadi kuning pada  noda.   Hasil dari  uji  aktivitas  antioksidan  dengan  metode DPPH  menunjukkan  bahwa  isolat  asam ferulat  yang  terkandung  pada  tiga  fraksi tersebut  aktif meredam radikal DPPH.

## KESIMPULAN
Dari   hasil   analisis   KLT   dan   TLC Scanner terhadap  fraksi  HB,  fraksi  HA dan fraksi  TH  diduga  mengandung  senyawa asam ferulat. Kadar asam ferulat didapatkan dari  ketiga  fraksi  tersebut  yaitu  fraksi    HB 15,57  %,  fraksi  HA  12,17  %,  dan  fraksi  TH 9,56  %.  Hasil  dari  uji  aktivitas  antioksidan
secara  kualitatif  menunjukkan  bahwa  isolat asam  ferulat  yang  terkandung  pada  tiga fraksi tersebut  aktif meredam radikal DPPH.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Atas  selesainya  penelitian  ini  ucapan terima  kasih  disampaikan  kepada  Dosen- dosen  Departemen  Kimia  FSM  Universitas Diponegoro    khususnya    Bidang    Kimia Organik atas  bimbingan dan arahan selama penelitian  ini  berlangsung,  serta  teman- teman  riset  Laboratorium  Organik  atas semangat dan dukungan sehingga penelitian ini dapat terlaksana dengan lancar.

## DAFTAR RUJUKAN
[1]  Sharma,  D.  a.  Y.  P.,  "Preliminary  and Pharmacological Profile of Melia azedarach  L.: An Overview", Journal of Applied Pharmaceutical Science, Vol. 3, No. 12, pp. 133-138, 2013.
[2]  Azam,  M.  M.,  et  al.,  "Pharmacological Potentials  of  Melia  azedarach  L.  A review", American Journal of BioScience, Vol. 1, pp. 44-49, 2013.
[3]  Asadujjaman,  et  al.,  "Assessment  of Bioactivities of Ethanolic Extract of Melia azedarach (Meliaceae) Leaves", Journal of Coastal Life Medicine, Vo. 1, pp. 118- 122, 2013.
[4]  Mishra,  G.  et  al.,  "Melia  azedarach:  A Review", Medicinal Chemistry & Analysis, Vol. 3, No. 2, pp. 53-56, 2013.
[5]  Ahmed,  M.  F.,  et  al.,  2012,  "Phyto- chemical Studies and Antioxidant Activity of  Melia  azedarach  Linn  Leaves  By DPPH  Scavenging  Assay",  Journal  of Pharmaceutical Applications, Vol. 3, No. 1, pp. 271-276, 2012.
[6]  Akacha    M.,    et  al.,  "Phytochemically Evaluation  and  Net  Anti-oxidant  Activity of  Tunisian  Melia  azedarach  Leaves Extract from their ProAntidex Parameter", Bangladesh  J  Pharmacol,  Vol.  11,  pp. 301-307, 2016.
[7]  Graft  Ernst,  "Antioxidant  Potential  of Ferulic  Acid.  Free  Radical  Biology  and Medicine",  Vol.  13,  No.  4,  pp.  435-448, 1992.
[8]  Zadernowski, R.,  et al.,  "Phenolic  Acids of  Borage  (Borago  officinalis  L.)  and Evening  Primrose  (Oenothera  biennis L.)", Paper No. J10057 in Journal AOCS 79, Vol. 7, No. 4, pp. 335-338, 2002.
[9]  Harborne, J.B., "Phytochemical Methods, A  Guide  to  Modern  Technique  of  Plant Analysis 3th", Chapman & Hall, pp. 13-14, 1987.