Pujiastuti et al. : Kajian Bacillus thuringiensis Diperbanyak pada Media Padat 651
Jurnal Agrotek  Tropika,  November  2023,  Vol  11,  No.  4,  pp.  651  -  660 DOI  :  http://dx.doi.org/10.23960/jat.v11i4.6841 ISSN:  2337-4993  (Print),  2620-3138  (Online)

## KAJIAN Bacillus thuringiensis DIPERBANYAK PADA MEDIA PADAT HASIL SAMPING AGROINDUSTRI TERHADAP MORTALITAS LARVA Oryctes rhinoceros DI RUMAH BAYANG

## STUDY  OF  Bacillus  thuringiensis  PROPAGATED IN AGROINDUSTRY SIDE SOLID PRODUCTS ON MORTALITY OF Oryctes rhinoceros LARVAE  IN  SHADOW  HOUSE
Yulia Pujiastuti 1 *, Irfan Mohandis Haraki 1 , Suparman SHK 1 , Abu Umayah 1 , Bambang Gunawan 1 , dan Weri Herlin 2 1 Program Studi  Proteksi Tanaman, Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan 2 Program Studi Agro-ekoteknologi , Fakultas Pertanian Universitas Sriwijaya, Sumatera Selatan, Indonesia *Email: ypujiastuti@unsri.ac.id
* Corresponding Author, Diterima:  9 Feb. 2023, Direvisi: 26 Mar. 2023, Disetujui: 3 Okt. 2023

## ABSTRACT
Oryctes rhinoceros (Coleoptera:Scarabaeidae) is an important pest in oil palm. Integrated and continuous control must be carried out. The use of entomopathogenic bacteria Bacillus thuringiensis is an alternative of chemical control. The aim of this study was to study the effectiveness of B. thuringiensis propagated by solid waste on mortality of O. rhinoceros. The experiment was designed in a randomized block design and was carried out in a shadow house, with 6 treatments including: P1: cassava + oil palm meal (2:1), P2: cassava + tofu dregs (2:1), P3: cassava + peanut meal (2:1). 2:1), P4 : cassava + corn husks (2:1), P5 (water), P6 (insecticide) and carried out 4 replications. The test insects were 3 rd instar of Oryctes larvae, 10 individuals per replication. Conditions in the shadow house were 25.1-40.2 o C and humidity 52.9-99%. The highest larval mortality was on day 20 (82.50%) in treatment P1, and the lowest was on P3 (47.5%). The surviving  larvae  showed  signs  of  decreasing  body  weight  and  length.  Symptoms  of  infection  included changes in body color, inactivity and symptoms of death in the form of a soft and watery body. The use of B. thuringiensis as a pest control agent is a prospective control method.
Keywords : Bacillus thuringiensis, bio-insecticide, entomopathogen, Oryctes rhinoceros

## ABSTRAK
Hama Oryctes rhinoceros (Coleoptera:Scarabaeidae) merupakan hama  penting pada kelapa sawit. Pengendalian secara  terpadu  dan  berkelanjutan  harus  senantiasa  dilakukan.  Penggunaan  bakteri  entomopatogen Bacillus thuringiensis menjadi alternatif bagi pengendalian kimiawi. Tujuan penelitian untuk mempelajari efektivitas B. thuringiensis yang diperbanyak dengan  bahan limbah padat terhadap mortalitas O. rhinoceros . Percobaan dirancang dengan Rancangan Acak Kelompok dan dilakukan di rumah bayang, dengan 6 perlakuan meliputi :  P1: onggok + bungkil kelapa sawit (2:1), P2: onggok + ampas tahu (2:1), P3 : onggok + bungkil kacang tanah (2:1), P4 : onggok + ampok jagung (2:1), P5 (kontrol air), P6 (kontrol insektisida) dan dilakukan sebanyak 4 ulangan. Serangga uji berupa larva Oryctes instar 3, sebanyak 10 ekor per ulangan. Keadaan di rumah bayang dengan suhu udara berkisar 25,1- 40,2 o C dan kelembaban udara 52,9-99%. Mortalitas larva tertinggi pada hari ke 20 (82,50 %) pada perlakuan P1 (onggok+bungkil kelapa sawit, 2:1), dan terendah pada P3 (onggok + bungkil kacang tanah, 2:1) (47.5%). Larva yang tetap hidup menunjukkan gejala penurunan berat dan panjang tubuh. Gejala infeksi berupa perubahan warna tubuh, tidak aktif dan gejala kematian berupa tubuh lunak dan berair. Penggunaan B. thuringiensis sebagai agens pengendali hama merupakan cara pengendalian  yang prospektif.
Kata kunci: Bacillus thuringiensis , bioinsektisida, entomopatogen, Oryctes rhinoceros

## 1.  PENDAHULUAN
Serangga Oryctes  rhinoceros merupakan hama penting pada tanaman sawit (Priwiratama et al. , 2020). Gejala kerusakan yang terlihat terutama pada  daun  muda  yang  sedang  mekar  dengan ditandai  adanya  bentuk  seperti  huruf V.  Daerah sebar  yang  luas  dan  siklus  hidup  yang  panjang, menyebabkan  serangga  ini  mampu  menduduki posisinya  sebagai  hama  penting  pada  tanaman kelapa  sawit  (Susanto et  al. ,  2011;  Hosang  dan Salim, 2013). Pada tanaman berumur 2,5  tahun, serangan O.  rhinoceros akan  menyebabkan kerugian sebesar 69%. Tanaman akan mati bila tidak dilakukan  pengendalian  (Nuriyanti et  al. , 2016).  Sampai  saat  ini,  pengendalian  secara terpadu terus diusahakan untuk dilakukan dengan memadukan  berbagai  cara  pengendalian, diantaranya adalah pengendalian hayati. Salah satu teknik dalam pengendalian hayati adalah dengan penggunaaan  bakteri  entomopatogen Bacillus thuringiensis .  Bakteri  tersebut  menghasilkan spora dan protein yang toksik pada waktu spotulasi (Bravo et al. , 2013).
Perbanyakan entomopatogen B. thuringiensis memerlukan  media  yang  mengandung  unsur karbon  dan  nitrogen.  Bahan  media  yang mengandung kedua unsur tersebut antara lain pada limbah  padat  hasil  pertanian  (Purnawati et  al. , 2015). Menurut Sasmitaloka et al. (2017) bahan media padat yang dapat digunakan sebagai media perbanyakan B.  thuringiensis adalah  substrat sumber C (onggok, kulit kopi, fraksi pati iles-iles, dan ela sagu) dan sumber N (ampas tahu, bungkil kacang tanah, bungkil inti sawit, dan ampok jagung) dalam  memproduksi  bioinsektisida  dari  limbah agroindustry.  Media  tersebut  mengandung  unsur Karbon dan nitrogen serta dapat menghasilkan koloni B. thuringiensis sebanyak  dihasilkan  jumlah  sel hidup 11.2 log CFU/g, jumlah spora 8.9 log CFU/g. Beberapa peneliti telah menggunakan bahan limbah pertanian dan limbah industri sebagai media untuk pertumbuhan B. thuringiensis, antara lain ampas kedelai, air kelapa dan bekatul gandum (Valicente et  al. ,  2010),  sisa  makanan  (Zou et  al. ,  2016), ampas  kedelai  (Salazar-Magallon et  al. ,  2015), molase (Poopathi, et al. , 2013). Untuk itu perlu diteliti  kesesuaian  media  sebagai  media pertumbuhan B. thuringiensis Penelitian bertujuan untuk mempelajari bahan limbah padat sebagai media perbanyakan B.  thuringiensis dan  efektivitasnya dalam pengendalian hama O. rhinoceros di rumah bayang.

## 2.  BAHAN  DAN  METODE
Penelitian dilakukan di rumah bayang di PS Proteksi  Tanaman  FP  Unsri  dan  di  design menggunakan Rancangan Acak Kelompok dengan 6  perlakuan  dan  4  ulangan. Adapun  perlakuan sebagai berikut : yaitu P1: (onggok + bungkil kelapa sawit (2:1)), P2: (onggok + ampas tahu) (2:1), P3 (onggok + bungkil kacang tanah)(2:1), P4 (onggok + ampok jagung) (2:1), P5 (kontrol air), dan  P6 (kontrol  insektisida).  Serangga  uji  berupa  larva Oryctes instar 3, sebanyak 10 ekor per ulangan. Larva  diperoleh  dari  kebun  kelapa  sawit  dari berbagai  daerah  perkebunan  kelapa  sawit  di Sumatera Selatan. Isolat Bt yang digunakan adalah isloat yang  diperoleh dari hasil isolasi tanah di Sumatera  Selatan dengan kode Bt TPP (koleksi Laboratorium  Entomologi).

## 2.1 Persiapan Serangga Uji
Serangga uji yang digunakan dalam penelitian ini yaitu O. rhinoceros . Serangga ini diambil pada fase  larva  yang  dimulai  dari  instar  ke-3.  Larva serangga uji ditemukan dengan cara membongkar batang  sawit  yang  telah  lapuk  dan  kemudian serangga uji diambil serta diletakkan menggunakan kotak  plastik  dan  dipelihara  di  laboratorium. Serangga uji dipelihara dengan mengganti tanah serta pakan seminggu sekali dengan media tanah disemprot  air  tiga  hari  sekali  untuk  menjaga kelembaban  tanah.  Sebagai    pakan  larva  yaitu bunga jantan kelapa sawit. Larva dipelihara hingga pelaksanaan aplikasi penelitian. Pemeliharaan larva O.  rhinoceros dilakukan  secara  intensif  dengan mengamati larva setiap hari untuk melihat keadaan dan kondisi larva pada wadah pemeliharaan.

## 2.2 Persiapan Media Limbah Padat
Limbah yang digunakan pada penelitian ini ialah terdiri dari onggok, bungkil kelapa sawit, bungkil kacang  tanah,  ampas  tahu,  dan  ampok  jagung. Onggok  didapatkan  di  daerah  Soponyono, Kecamatan Negeri Agung, Kabupaten Way Kanan, Lampung.  Bungkil  kelapa  sawit  didapatkan  di daerah  Kabupaten  Bogor,  melalui e-commerce . Bungkil  kacang  tanah  didapatkan  di  daerah Kecamatan  Bandung  Wetan,  Kota  Bandung melalui e-commerce . Ampas tahu didapatkan dari pabrik  tahu  yang  berada  di  daerah  Muhajirin, Kabupaten Indralaya Utara, dan ampok jagung di Pasar 16 Ilir, Kota Palembang (Gambar 1). Bahan-
bahan tersebut dikeringkan dan dihancurkan dengan mortar selanjutnya disaring dengan menggunakan saringan diameter  20 mesh.
2.3 Perbanyakan B. thuringiensis pada Media Limbah Padat
Sebagai persiapan dilakukan pembuatan seed culture ,  dengan  cara  satu  jarum  ose  isolat B. thuringiensis dari  agar  miring  dimasukkan  ke dalam  20  ml  Nutrient  Broth  (NB).  Selanjutnya selama  12  jam  dikocok  pada  shaker  dengan kecepatan  200  rpm.  Hasilnya  sebanyak  10  ml ditambahkan pada 20 ml NB yang baru dan kembali dikocok pada kondisi yang sama (200 rpm, 12 jam). Seed culture siap  digunakan untuk perbanyakan B. thuringiensis pada media padat.
Campuran media dimasukkan kedalam wadah plastik  kotak  berukuran  440  ml  selanjutnya ditambahkan konsentrasi elemen mikro yaitu 1 g/L CaCO 3 , 0.3 g/L MgSO 4 , 0.02 g/L MnSO 4 , 0.02 g/L FeSO 4 , dan 0.02 g/L ZnSO 4 (Valicente et al. , 2010). Media disterilisasi secara terpisah menggunakan autoclave pada  suhu  121 0 C  selama  20  menit dengan  tekanan  1  atm,  setelah  dingin  baru diinokulasi dengan seed culture 10% (V/W) dan diatur  dengan  ketebalan  media  3  cm.  Media selanjutnya  diinkubasi  selama  72  jam  didalam inkubator pada suhu 30 0 C
2.4 Aplikasi Bio-insektisida Bacillus thuringiensis
Aplikasi  bioinsektisida  di  rumah  bayang dilakukan dengan menambahkan media tanah yang sudah  disterilkan  sebanyak  2,5  kg  tanah,  dan ditambahkan 30 g bunga jantan sawit pada kotak.
Aplikasi bioinsektisida ini hanya dilakukan sekali pada  saat  awal  perlakuan.  Bio-insektisida diaplikasikan  dengan  dosis  20  g  dengan  cara dilarutkan dalam air sebanyak 200 ml air dimasukkan ke  dalam  kotak  wadah  penelitian  untuk  setiap ulangan. Penambahan pakan dilakukan setiap 7 hari sekali. Hal ini dilakukan untuk 6 perlakuan dengan masing-masing  4  ulangan.  Pada  masing-masing perlakuan  diletakkan  10  serangga  uji pada  kotak wadah pada saat aplikasi berlangsung. Aplikasi bio- insektisida fermentasi padat dilakukan hanya satu kali, diikuti dengan pengamatan setiap hari terhadap mortalitas larva (Gambar 2).
Gambar 1.  Bahan Hasil Samping Agroindustri, a) Onggok, b) Bungkil Kelapa Sawit, c) Ampas Tahu, d) Bungkil Kacang Tanah, e) Ampok Jagung
Gambar  2.  Tahapan  aplikasi  bioinsektisida fermentasi padat, a) tanah ditimbang sebanyak 2 kg, b.) penambahan pakan berupa  bunga  jantan  kelapa  sawit sebanyak  30  g,  c)  penambahan bioinsektisida yang sudah dilarutkan dalam  air,  d)  Larva O. rhinoceros diletakan  pada  wadah  kotak pengamatan (masing-masing perlakuan terdapat 10 ekor), e) kondisi rumah bayang setelah aplikasi dengan papan kode perlakuan.

## 2.5  Penghitungan  Koloni  Bakteri
Koloni  bakteri dihitung  dengan metode total plate  count (TPC),  yaitu  dengan  cara menumbuhkan bakteri pada media agar dan dihitung jumlah koloninya setelah 24 jam. Pada pengujian ini, sampel bakteri diambil pada saat proses fermentasi berjalan selama 24 jam, 48 jam dan 72 jam.

## 2.6  Mortalitas  Larva
Pengamatan mortalitas larva dilakukan setiap hari  setelah  diaplikasikan  bio-insektisida B. thuringiensis . Gejala  larva  yang  mati  berupa adanya perubahan warna menjadi coklat kehitaman dan tekstur tubuh menjadi lembut berair  serta tidak ada  respon  bila  disentuh.  Larva  yang  mati dipisahkan  dari  kotak  dan  dimasukkan kedalam plastik  zip  dan  ditandai  label. Adapun  rumus perhitungan mortalitas larva adalah sebagai berikut:
Keterangan: P = persentase mortalitas larva, a = jumlah larva mati, b = Total larva diamati.
2.7 Panjang  dan berat Tubuh Larva Oryctes rhinoceros
Panjang  tubuh  larva O.  rhinoceros diukur menggunakan  meteran  dari  ujung  caput  sampai dengan  ujung  abdomen  dengan  posisi  larva melingkar.  Diukur  setiap  7  hari  sekali  setelah aplikasi pada saat penggantian tanah dan pakan. Panjang  larva  di  rata-ratakan  untuk  mengetahui panjang larva per-ekor untuk setiap perlakuan pada masing-masing ulangan.
Berat  tubuh  larva O.  rhinoceros dihitung menggunakan timbangan digital. Ditimbang setiap 7 hari sekali. Seluruh berat kemudian dirata-ratakan untuk mengetahui berat larva per-ekor untuk setiap perlakuan pada masing-masing ulangan.
2.8  Gejala  Infeksi  dan  Kematian Oryctes rhinoceros
Gejala infeksi serangga uji diamati setiap hari selama pengamatan berlangsung. Hal ini dilakukan untuk mengetahui pengaruh dari bio-insektisida B. thuringiensis tersebut. Gejala infeksi yang diamati seperti  perilaku  larva  yang  sulit  bergerak,  tidak nafsu makan, kulit larva mulai lunak dan warna larva  yang  berubah  menjadi  kehitaman  hingga kemudian  serangga  uji  tidak  bergerak  dan
menimbulkan  bau  busuk  serta  berlendir  yang menandakan serangga uji telah mati.

## 2.9  Suhu dan  Kelembaban  Udara dan Tanah Rumah Bayang
Suhu  dan  kelembaban  diamati  setiap  hari setelah aplikasi menggunakan thermohygrometer yang  dipasangkan  pada  rumah  bayang. Pengamatan suhu dan kelembaban dilakukan untuk mengetahui faktor lingkungan yang mempengaruhi kemampuan hidup O. rhinoceros sebagai serangga uji.Suhu tanah pada wadah kotak penelitian setiap hari setelah aplikasi diamati menggunakan digital soil meter yang ditancapkan ke tanah pada masing- masing  kotak  perlakuan  dan  ulangannya. Pengamatan suhu tanah dilakukan untuk mengetahui faktor lingkungan yang mempengaruhi kemampuan hidup O. rhinoceros sebagai serangga uji

## 2.10 Analisis  data
Data mortalitas larva, panjang dan berat larva dianalisis  dengan  menggunakan  analisis  varians (ANOVA). Pengujian lebih lanjut menggunakan Tukey’s  Honest  Significant  Difference (HSD) Test untuk menguji perbedaan yang signifikan antara perlakuan  pada P  = 0,05.  Semua data  dianalisis dengan  menggunakan  perangkat  lunak  SAS University Edition 2.79.4M5.

## 3.  HASIL  DAN  PEMBAHASAN
Penelitian ini dilaksanakan di rumah bayang Jurusan Hama dan Penyakit Tumbuhan Fakultas Pertanian Universitas Sriwijaya, dengan suhu udara rumah  bayang  berkisar  25,1-40,2 o C  dan kelembaban udara 52,9-99%
3.1 Perhitungan Koloni Bacillus thuringiensis
Perhitungan koloni B. thuringiensis dilakukan dengan  mengamati  koloni  sebanyak  3  kali pengamatan dengan interval waktu 24, 48, dan 72 jam  proses  fermentasi.  Pengmatan  dilakukan dengan  menumbuhkan  bakteri  tersebut    pada media nutrient  agar (NA).  Perhitungan  koloni dilakukan dengan menggunakan colony counter . Hasil analisis sidik ragam yang dilakukan pada tiga waktu pengamatan didapatkan hasil berbeda nyata  pada  masing-masing  perlakuan.  Jumlah kerapatan  spora  berbeda-beda  pada  setiap perlakuan (Tabel 1).
P = a b x 100% (1)
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilaksanakan, perhitungan kerapatan koloni bakteri B.  thuringiensis dilakukan  dengan  tujuan  untuk mengetahui  potensi  beberapa  campuran  hasil samping agroindustri sebagai media perbanyakan bakteri. Pada pengamatan kerapatan koloni 72 jam setelah inkubasi, didapatkan perhitungan kerapatan koloni  berbeda  nyata  pada  masing-masing perlakuan. Kerapatan koloni bakteri tertinggi terjadi pada  perlakuan  onggok  +  bungkil  kelapa  sawit dengan nilai (3.86 × 10 6 cfu/g) dan terendah terjadi pada perlakuan onggok + ampok jagung dengan nilai (1.53 × 10 6 cfu/g). Studi penelitian Zhuang et al. (2011) mengungkapkan bahwa fermentasi 72 jam campuran substrat sludge (limbah pabrik) + dedak  gandum  memberikan  hasil  sel  hidup B. thuringiensis tertinggi (5.98 × 10 10 cfu/g) sebagai media  kultivasi  padat B.  thuringiensis yang dibandingkan dengan media komersial dengan nilai jumlah sel hidup tertinggi (6.18 × 10 10 ).
Perbedaan  jumlah  koloni  bakteri  didasarkan pada kandungan C (karbon) dan N (nitrogen) yang berbeda  pada  setiap  campuran  substrat  hasil
samping agroindustri. Kadar karbohidrat dan kadar serat  yang  tinggi  pada  substrat  onggok  dapat digunakan  sebagai  sumber  karbon  bagi B. thuringiensis sedangkan substrat bungkil kelapa sawit dengan dapat menjadi sumber nitrogen yang digunakan untuk pertumbuhan spora dan produksi δ-endotoksin.    Menurut  Purnawati et  al. (2015) kombinasi  onggok  dan  bungkil  sawit  dapat memberikan  kandungan  serat  dan  mineral tambahan yang baik bagi pertumbuhan jumlah spora dan sel vegetatif. Serat merupakan komponen yang cukup  penting  untuk  dipertimbangkan  dalam komposisi media fermentasi padat. Hal ini karena berkaitan  dengan  porositas.  Keberadaan  serat dalam  campuran  bahan  dapat  memberikan  pori pada  media  sehingga  isolat  bakteri  tetap  dapat mendapatkan suplai  oksigen dan  air saat  proses fermentasi berlangsung.

## 3.2 Mortalitas Larva Oryctes  rhinoceros
Pelaksanaan  uji  mortalitas  larva Oryctes rhinoceros dilakukan  pada  masing-masing
Tabel 1. Perhitungan Koloni Bacillus thuringiensis
Keterangan: * berbeda nyata, tn berbeda tidak nyata, angka-angka yang dihuruf yang sama berbeda tidak nyata. Berbeda nyata pada taraf uji P < 0,05 (Data transformasi log).
Tabel 2. Mortalitas Larva Oryctes rhinoceros terhadap Bioinsektisida Padat
Bioinsektisida
Koloni Bakteri B. thuringiensis ( × 10 6 (cfu/g) 24 jam 48 jam 72 jam P1 (onggok + bungkil kelapa sawit) 1,95±0,07b 2,97±0,03c 3,86±0,04c P2 (onggok + ampas tahu) 1,06±0,09ab 1,90±0,05b 2,17±0,07b P3 (onggok + bungkil kacang tanah) 1,62±0,04ab 1,83±0,04b 2,09±0,01b P4 (onggok + ampok jagung) 0,87±0,07a 1,36±0,11a 1,53±0,11a Fhitung 30,94 * 61,09 * 102,23 * Ftabel 3,49 3,49 3,49 BNJ 5% 0,06 0,04 0,04 Perlakuan Pengamatan mortalitas larva O. rhinoceros (ekor) hari ke- 4 8 12 16 20 P1 (onggok+ bungkil kelapa sawit) 12,50±4,80c 25,00±2,90b 47,50±8,54b 60,00±12,2b 82,50±8,54c P2 (onggok + ampas tahu) 0,00±0,00a 10,00±4,08ab  25,00±5,00ab  30,00±5,77a 50,00±7,07b P3 (onggok + bungkil kacang tanah) 2,50±2,50ab 12,50±7,50a 22,50±14,3ab  40,00±15,8ab  47,50±14,4a P4 (onggok + ampok jagung) 7,50±4,80bc 17,50±8,54a 27,50±8,54b 42,50±8,54ab  62,50±8,54b P5 (kontrol air) 5,00±2,90abc  7,50±4,80a 10,00±7,07a 22,50±8,54a 25,00±8,66a P6 (kontrol insektisida) 100±0,00d 100±0,00c 100±0,00c 100±0,00c 100±0,00d Fhitung 44,69 * 20,43 * 12,96 * 9,50 * 8,83 * Ftabel 2,90 2,90 2,90 2,90 2,90 BNJ 5% 10,84 14,19 16,38 16,14 16,13
Keterangan: * berbeda nyata, tn berbeda tidak nyata, angka-angka yang dihuruf yang sama berbeda tidak nyata. Berbeda nyata pada taraf uji P < 0,05 (Data transformasi arcsin).
perlakuan  dengan  jumlah  40  ekor.  Mortalitas serangga uji diamati pada hari ke 4, 8, 12, 16 dan 20 hsa (hari setelah aplikasi). Mortalitas larva O. rhinoceros mengalami peningkatan pada setiap kali pengamatan. Berdasarkan hasil analisa sidik ragam, pengamatan mortalitas menunjukkan hasil berbeda nyata antar setiap perlakuan (Tabel 2)
Pengaplikasian bioinsektisida B. thuringiensis terhadap mortalitas larva O. rhinoceros didapati hasil bahwa penggunaan bioinsektisida berpengaruh nyata terhadap mortalitas larva dengan mortalitas tertinggi dalam 20 hsa pada perlakuan P1 (onggok + bungkil kelapa sawit) dengan tingkat kematian 82.5% dan tingkat kematian terendah terjadi pada perlakuan  P3  (onggok  +  bungkil  kacang  tanah) dengan kisaran 47.5%. Pada produksi bioinsektisida dengan  campuran  substrat  karbon  dan  nitrogen yang terpilih, dihasilkan jumlah sel dan jumlah spora yang berbeda. Apabila jumlah spora yang dihasilkan sedikit maka kristal protein yang dihasilkan juga sedikit sehingga akan berpengaruh terhadap tingkat toksisitasnya.  Selain itu,  tingkat  mortalitas  juga dipengaruhi  oleh  dosis  atau  konsentrasi bioinsektisida. Dengan kata lain, semakin tinggi konsentrasi yang digunakan maka akan semakin tinggi mortalitas larva O. rhinoceros . Hal ini sesuai dengan Elsharkawy et al . (2022) yang menyatakan bahwa peningkatan konsentrasi berbanding lurus dengan peningkatan efek toksik atau racun yang menyebabkan daya bunuh semakin tinggi.
3.3  Lethal  Time 50  (LT 50 )  larva Oryctes rhinoceros
Penentuan  waktu  letal  didasarkan  pada pengamatan mortalitas larva yang dilakukan. Lethal time dihitung mulai dari saat aplikasi bioinsektisida hingga larva O. rhinoceros mengalami mortalitas mencapai 50%. Hasil pengamatan pada masing- masing perlakuan yang diaplikasikan bioinsektisida B.  thuringiensis menunjukkan  hasil  bahwa pemberian  bioinsektisida  P1  (onggok  +  bungkil
kelapa sawit) telah mempercepat waktu LT 50 dari larva O.  rhinoceros rata-rata  13  hari  dengan kisaran 12×14 hari dibandingkan dengan perlakuan bio-insektisida lainnya.  LT 50 pada kontrol insektisida mencapai 2,11 hari (Tabel 3).
Pemberian  beberapa  bioinsektisida  dari campuran hasil samping agroindustri menunjukkan bahwa pemberikan onggok + bungkil kelapa sawit merupakan perlakuan yang paling cepat mematikan 50%  larva O.  rhinoceros yaitu  13  hari  setelah aplikasi  dibandingkan  dengan  perlakuan bioinsektisida  lainnya.  Hal  ini  berbeda  dengan kontrol insektisida yang paling cepat mematikan 50% larva yaitu 2 hari. Hal ini diduga karena belum dapat  dipastikan  berapa  kristal  protein  yang diperoleh dari setiap spora yang dihasilkan. Selain itu faktor-faktor seperti distribusi spora dan kristal protein dalam penyemprotan bioinsektisida juga menjadi salah satu faktor keberhasilan (Bravo et al. ,  2011).  mengemukakan  bahwa  salah  satu kelemahan pestisida nabati adalah daya racunnya yang  rendah,  sehingga  memerlukan  waktu  yang lebih lama dalam mematikan serangga uji .

## 3.4 Panjang dan berat Larva Oryctes rhinoceros
Pengamatan  panjang  dan  berat  larva O.rhinoceros dilakukan  setiap  minggu  dengan perhitungan panjang larva dimulai pada hari aplikasi bioinsektisida berlangsung hingga minggu ketiga. Berdasarkan hasil analisis sidik ragam panjang larva O. rhinoceros pada minggu pertama, berbeda tidak nyata  pada  masing-masing  perlakuan,  pada perlakuan  minggu  kedua  dan  minggu  ketiga menunjukkan  hasil  berbeda  nyata  pada  masing- masing  perlakuan  (Tabel  4).  Berdasarkan  hasil analisis sidik ragam, berat larva O. rhinoceros pada minggu  pertama  yaitu  P1  berbeda  tidak  nyata dengan P3, tetapi berbeda nyata dengan P2, P4, P5 dan P6. Pada pengamatan minggu kedua dan ketiga masing-masing perlakuan menunjukkan hasil yang berbeda nyata (Tabel 5).
Perlakuan LT 50 (hari) Selang Kepercayaan Batas bawah Batas atas P1 (onggok + bungkil kelapa sawit) 13,13 12,01 14,30 P2 (onggok + ampas tahu) 19,54 18,13 21,08 P3 (onggok + bungkil kacang tanah) 18,32 16,99 19,76 P4 (onggok + ampok jagung) 16,79 15,54 18,13 P5 (kontrol air) - - - P6 (kontrol insektisida) 2,11 1,91 2,32 Tabel 3 . Lethal time (LT 50 ) larva Oryctes rhinoceros bioinsektisida padat
Pengamatan  panjang  dan  berat  larva O. rhinoceros ,  didapati  hasil  penelitian  berupa penurunan  panjang  tubuh  pada  masing-masing perlakuan di setiap minggunya. Penurunan panjang dan berat tubuh larva diakibatkan oleh infeksi B. thuringiensis pada larva yang bergejala dan belum mati  yang  mengalami  perubahan  yang  ditandai dengan ukuran tubuh menyusut. Panjang larva pada minggu pertama berdasarkan hasil analisis sidik ragam  menunjukkan  tidak  berbeda  nyata  antar perlakuan  sedangkan  berat  larva  pada  minggu pertama menunjukkan hasil berbeda nyata antar perlakuan.  Pada  minggu  kedua  dan  ketiga pengamatan, menunjukkan panjang dan berat yang berbeda nyata pada setiap perlakuan. Perbedaan panjang  dan  berat  tubuh  larva  dipengaruhi  oleh jumlah kematian dan jumlah pakan yang dimakan sehingga  menyebabkan  peningkatan  ataupun penurunan pada larva. Faktor eksternal seperti suhu, kelembaban  dan  kualitas  pakan  pada  tempat
berlangsungnya hidup larva mempengaruhi panjang dan berat tubuh larva (Fauzana & Ustadi, 2020).

## 3.5 Suhu Tanah dan Kelembaban Udara Rumah Bayang
Pengamatan suhu tanah pada media inkubasi dilakukan setiap hari ke 4, 8, 12, 16, dan 20 hsa (hari setelah aplikasi). Suhu tanah diamati pada masing-masing  perlakuan  dengan  menggunakan digital  soil  meter .  Pengamatan  suhu  tanah dilakukan pagi (07.30 WIB), siang (12.30 WIB) dan sore (16.30 WIB). Berdasarkan hasil analisis sidik ragam, pengamatan suhu tanah (Tabel 6,).
Suhu dan kelembaban udara dirumah bayang diukur dengan menggunakan thermohygrometer . Pengamatan suhu dan kelembaban udara dilakukan setiap hari ke 4, 8, 12, 16, dan 20 hsa (hari setelah aplikasi) pada pagi hari (07.30 WIB), siang hari (12.30  WIB),  dan  sore  hari  (16.30)  WIB.  Rata-
Perlakuan Pengamatan panjang larva O. rhinoceros (cm) minggu ke- 1 2 3 P1 (onggok + bungkil kelapa sawit) 10,30±0,03 7,70±0,33b 4,40±1,26b P2 (onggok + ampas tahu) 10,40±0,10 8,90±0,25bc 6,40±0,48bc P3 (onggok + bungkil kacang tanah) 10,40±0,10 8,30±0,54bc 6,10±1,57bc P4 (onggok + ampok jagung) 10,80±0,07 8,70±0,63bc 6,00±0,64bc P5 (kontrol air) 10,80±0,18 9,30±0,87c 7,00±0,69c P6 (kontrol insektisida) 10,20±0,25 0,00±0,00a 0,00±0,00a F hitung 2,81 tn 97,85 * 12,48 * Ftabel 2,90 2,90 2,90 BNJ 5% 0,34 0,21 0,47 Perlakuan Pengamatan berat larva O. rhinoceros (g) minggu ke- 1 2 3 P1 (onggok + bungkil kelapa sawit) 11,00±0,15a 10,10±0,46b 5,40±1,76b P2 (onggok + ampas tahu) 11,40±0,23b 10,90±0,31bc 7,30±0,68bc P3 (onggok + bungkil kacang tanah) 11,00±0,22a 9,80±0,31b 6,60±1,59bc P4 (onggok + ampok jagung) 11,90±0,28bc 9,90±0,63b 7,00±0,90bc P5 (kontrol air) 13,50±0,28d 12,00±0,92c 8,90±1,34c P6 (kontrol insektisida) 12,00±0,12c 0,00±0,00a 0,00±0,00a Fhitung 14,98 * 157,2 * 10,76 * Ftabel 2,90 2,90 2,90 BNJ 5% 0,53 0,19 0,56
Tabel 4. Panjang Larva Oryctes rhinoceros terhadap Bio-Insektisida Padat
Keterangan: * berbeda nyata, tn berbeda tidak nyata, angka-angka yang dihuruf yang sama berbeda tidak nyata. Berbeda nyata pada taraf uji P < 0,05 (Data transformasi akar kuadrat).
Keterangan: * berbeda nyata, tn berbeda tidak nyata, angka-angka yang dihuruf yang sama berbeda tidak nyata. Berbeda nyata pada taraf uji P < 0,05 (Data transformasi akar kuadrat).
Tabel 5. Berat Larva Oryctes rhinoceros terhadap Bioinsektisida Fermentasi Padat
Perlakuan Suhu tanah O. rhinoceros ( o C) hari ke- 4 8 12 16 20 P1 (onggok + bungkil kelapa sawit) 31.6 31.9 32.5 33.4 30.0 P2 (onggok + ampas tahu) 32.3 32.4 32.6 33.1 30.6 P3 (onggok + bungkil kacang tanah) 32.2 32.1 32.9 33.1 30.1 P4 (onggok + ampok jagung) 32.5 32. 33.3 33.4 30.1 P5 (kontrol air) 31.6 33. 33.3 32.3 29.9 P6 (kontrol insektisida) 32.1 32.8 32.8 33.9 29.7 Fhitung 2.05 tn 1.56 tn 0.65 tn 0.96 tn 0.51 tn Ftabel 2.90 2.90 2.90 2.90 2.90 BNJ 5% 0.57 0.73 0.89 0.83 0.90
rata  suhu  dirumah  bayang  didapatkan  berkisar antara 29.7-32.8 O C dengan rata-rata kelembaban udara berkisar antara 83.6-90% (Tabel 7).
Suhu tanah pada wadah serangga uji di setiap hari pengamatan didapati bahwa suhu tanah relatif fluktuatif dengan kisaran 30-33%. Tanah sebagai habitat  utama  memainkan  peranan  penting  bagi kemampuan bertahan hidup larva O. rhinoceros. Jika  kisaran  suhu  pada  tanah  sesuai, mikroorganisme dan serangga dapat hidup secara optimal. Menurut Pujiastuti et al. (2022), larva O. rhinoceros dapat  hidup  dengan  suhu  optimal dengan kisaran 27-29 o C. Pada temperatur tersebut, bioinsektisida B.  thuringiensis dapat  tumbuh dengan  optimal  dan  berkembang  di  tubuh  larva dengan baik. Suhu dan kelembaban udara di rumah bayang juga mempengaruhi terhadap daya hidup
larva.  Pada  suhu  ruang,  suhu  relatif  fluktuatif dengan kisaran 29.7-32.8 o C dengan kelembaban berkisar 80.7-90.0%. Suhu dan kelembaban udara berpengaruh  terhadap  perkembangan  dan pertumbuhan  larva O.  rhinoceros .  Suhu  dan kelembaban  yang  optimal  secara  langsung  akan mempengaruhi laju dekomposisi pakan sehingga mempermudah  larva  dalam  mengonsumsi pakannya.  Nuriyanti et  al. (2017)  melaporkan bahwa  kelembaban  habitat  yang  optimum  bagi stadia larva O. rhinoceros adalah 85×95%.
3.6 Gejala Larva Oryctes rhinoceros Terinfeksi Bacillus  thuringiensis
Larva Oryctes rhinoceros yang terinfeksi oleh bakteri Bacillus thuringiensis menunjukkan gejala
Tabel 7. Suhu dan Kelembaban Udara Rumah Bayang
Tabel 6. Suhu Tanah Inkubasi Larva Oryctes rhinoceros
Parameter Pengamatan Suhu dan kelembaban udara rumah bayang hari ke- 4 8 12 16 20 Suhu ( o C) 30.9 31.8 31.6 32.8 29.7 Kelembaban (%) 88.3 83.6 90.0 80.7 89.9
Gambar  3.  Gejala  Infeksi  Bakteri B.  thuringiensis pada  Larva Oryctes  rhinoceros a)  Larva O. rhinoceros Sehat  Hari  Pertama,  b)  Gejala  Infeksi  pada  Larva  Hari  Keempat,  c)  Gejala Infeksi Larva pada Hari Keenam, d) Gejala Infeksi Larva pada Hari ke-10.
motorik yang ditandai dengan tingkat keaktifan dan sensitifitas  larva menurun. Larva bergejala juga mengalami perubahan warna tubuh yang awalnya bewarna  putih,  kemudian  berangsur-angsur kecokelatan dan bewarna hitam yang menandakan larva sudah mati. Selain perubahan warna, gejala yang  timbul  akibat  infeksi B.  thuringiensis juga ditandai  dengan  bentuk  fisik  tubuh  larva  yang cendrung melunak hingga terbentuknya pori atau lubang yang mengeluarkan cairan akibat pecahnya organ pencernaan larva, serta larva yang bergejala cendrung berbau busuk dan menyengat. Larva O. rhinoceros yang sehat ditandai dengan ciri-ciri tubuh larva yang bewarna putih dengan ujung abdomen bewarna coklat/merah menghitam (Gambar 3 ).
Gejala serangan yang terjadi akibat serangan B.  thuringiensis terhadap  larva O.  rhinoceros dapat menyebabkan perubahan warna pada tubuh larva dari yang bewarna putih menjadi kecoklatan hingga menjadi kehitaman, secara motorik larva menjadi tidak aktif bergerak dan kehilangan nafsu makan. Akibatnya, larva akan mati dengan kondisi tubuh berubah menjadi melunak. Selanjutnya, akan terjadi kerusakan pada bagian organ tubuh yang ditandai adanya cairan yang keluar melalui bagian tubuh larva. Tubuh larva juga akan membusuk dan mengeluarkan aroma menyengat. (Sihombing et al. 2014)  mengungkapkan  bahwa B.  thuringiensis merupakan bakteri yang memiliki kristal protein dan bersifat sebagai racun perut didalam saluran tubuh serangga  dan  menyebabkan  hidrolisis  dan menghasilkan  fraksi  yang  bersifat  toksik  dan merusak  dinding  tubuh  bagian  dalam  serangga sehingga menyebabkan gangguan pencernaan dan menyebabkan kematian

## 4.  KESIMPULAN
Mortalitas larva O. rhioceros tertinggi terjadi pada perlakuan P1 (onggok + bungkil kelapa sawit) dengan  tingkat  kematian  mencapai  82.5% dibandingkan dengan perlakuan P2, P3 dan P4 yang masing-masing  memiliki  tingkat  kematian  50%, 47.5%, dan 62.5% di Rumah Bayang. Jumlah koloni sel  bakteri B.  thuringiensis pada  P1  (onggok  + bungkil kelapa sawit) yang lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan  lainnya berpengaruh terhadap banyaknya  jumlah  kerapatan  spora  dan  kristal protein  yang  dihasilkan  dalam  menyebabkan mortalitas pada larva O. rhinoceros . Gejala infeksi dan kematian telah terjadi setelah 24 jam aplikasi dan  terjadi  pada  beberapa  perlakuan  dengan menunjukkan gejala infeksi Bacillus thuringiensis
pada larva serangga  uji O. rhinoceros di  rumah bayang.

## 5.  UCAPAN TERIMA  KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  kepada Rektor  Unsri yang  telah  memberikan  dukungan dana  melalui  skim  penelitian  Hibah  kompetitif dengan  nomor  Kontrak  Nomor  :  0164.25/UN9/ SB3.LP2M.PT/2022 tanggal 27 Juni 2022

## 6.  DAFTAR  PUSTAKA
Bravo, A., S. Likitvivatanavong, S. S. Gillb, & M. Soberóna. 2011. Bacillus thuringiensis : A Story of A Successful Bioinsecticide. Insect Biochem  Mol Biol. 41(7): 423–431. Bravo,  A. I.  Gómez, H.  Porta, B.  I.  García- Gómez, C. Rodriguez-Almazan, L. Pardo, & M. Soberón. . 2013. Evolution of Bacillus thuringiensis Cry  Toxins  Insecticidal Activity. Microb  Biotechnol .  2013  Jan; 6(1): 17–26.
Elsharkawy,  M.  M.,  M.  Almasoud,  Y.  M. Alsulaiman, R. S. Baeshen, H. Elshazly, R. H. Kadi, M. M. Hassan, & R. Shawer. 2022. Efficiency  of Bacillus  thuringiensis and Bacillus  cereus Against Rhynchophorus ferrugineus. Insects .  13(905):  1-13.
Fauzana,  H.  &  U.  Ustadi.  2020.  Pertumbuhan Larva  Kumbang  Tanduk  ( Oryctes rhinoceros L.)  pada  Berbagai  Media Tumbuh Tanaman Famili Arecaceae. Jurnal Entomologi Indonesia .  17(2):  89-96.
Hosang, M. L. A., & Salim. 2013. Penekanan Populasi Oryctes  rhinoceros dan Rhynchophorus ferrugineus dengan Perangkap dan Feromon. Prosiding  Konferensi  Nasional  Kelapa (KNK) VIII,  67-72.
Nuriyanti, D. D., I. Widhiono, & A. Suyanto. 2016. Faktor-faktor  Ekologis  yang  Berpengaruh terhadap Struktur Populasi Kumbang Badak ( Oryctes  rhinoceros L.  ) Jurnal  Biosfera .
33 (1): 13-21
Poopathi,  S.,  C.  Mani  &  G.  Rajeswari.  2013. Potential  of  Sugarcane  Bagasse  (agro- industrial  waste)  for  the  Production  of Bacillus thuringiensis Israelensis. Tropical Biomedicine 30(3): 504–515
Priwiratama,  H.,    A.  E.  Prasetyo,  T.  A.  P. Rozziansha,  & A.  Susanto.  2020. Hama Kumbang  Badak  Oryctes  rhinoceros Bioekologi, Kerusakan  dan  Pengendalian .
Medan:  Pusat  Penelitian  Kelapa  sawit Medan.
Pujiastuti, Y., M. Ridwan, H. Saputra, M. Agusrafil, A. Nurnabila, H. Hendarjanti. 2022. Study of  Effectivity Bacillus thuringiensis Based Bio-insecticide Against Oryctes  rhinoceros
Larvae  at  Shade  House. Biovalentia: Biological Research Journal . 8 (2): 145–150. Purnawati,  R.,  T.  Sunarti,  K.Syamsu,  &  M. Rahayuningsih. 2015. Produksi Bioinsektisida oleh Bacillus  thuringiensis Menggunakan Formulasi  Media Padat. Jurnal Teknologi Industri Pertanian . 25 (3):205-214
Sasmitaloka, K. S., S. T. Candra, & R. Mulyorini.
2017. Bioinsecticides Production by Bacillus thuringiensis subsp.  aizawai  using Agroindustrial  by-Product  in  Solid Fermentation.  http://repository.pertanian. go.id/handle/123456789/1549
Sihombing, R., S. Oemry, & L. Lubis. 2014. Uji efektifitas  beberapa  entomopatogen  pada larva Oryctes  rhinoceros L.  (Coleoptera: Scarabaeidae)  di  Laboratorium’, Jurnal Agroekoteknologi  Universitas  Sumatera Utara . 2(4): 100698.
Susanto, A., Sudharto, & A. E. Prasetyo. 2011. Informasi Organisme Pengganggu Tanaman  Kumbang Tanduk Oryctes  rhinoceros Linn.Artikel. Pusat Penelitian Kelapa Sawit: Medan.
Valicente F. H., S. T. Edmar De, I. S. L. Maria, L. F.  Fernanda,  &  M.  V.Corina.  2010. Production  of Bacillus  thuringiensis Biopesticide Using Commercial Lab Medium and Agricultural  by-Products  as  Nutrient Sources. Revista  Brasileira  De  Milho  E Sorgo. 9 (1): 1-11
Velazquez , A. A. Alvear-Garcia, I. Arenas-Sosa,
&  G.  Peña-Chora.  2015.  Evaluation  of Industrial by-Products for The Production of Bacillus thuringiensis Strain GP139 and The Pathogenicity When Applied to Bemisia tabaci nymphs. Bulletin  of  Insectology. 68 (1): 103-109
Zhuang, L., S. Zhou, Y. Wang, Z. Liu, & R. Xu . 2011 ‘Cost-effective Production of Bacillus thuringiensis Biopesticides  by  Solid-state Fermentation  Using  Wastewater  Sludge: Effects  of  Heavy  Metals’, Bioresource Technology . 102(7) : 4820–4826 Zou  H., S. Ding,W. Zhanga, J. Yaoa, L. Jiang, & J. Liang. 2016.  Study on Influence Factors in Bacillus  thuringiensis Production  by Semi-Solid State Fermentation  Using  food waste. The Tenth International Conference on  Waste  Management  and  Technology (ICWMT)  Procedia  Environmental Sciences . 31:  127 – 135.