## SKRINING FITOKIMIA, KANDUNGAN FLAVONOID TOTAL, DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL TUMBUHAN Selaginella doederleinii
Farida Dwi Oktavia, Suyatno Sutoyo *
Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Surabaya
* email : suyatno@unesa.ac.id
Received 24 Oktober 2021 Accepted 3 Desember 2021

## Abstrak
Selaginella doederleinii merupakan tumbuhan paku yang berasal dari China, namun telah dibudidayakan  di  Indonesia.  Tumbuhan  tersebut  dimanfaatkan  oleh  masyarakat  untuk melancarkan  aliran  darah,  menghilangkan  bengkak,  antitoksik,  antikanker,  dan menghentikan  pendarahan  (hemostatis).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan kandungan fitokimia, kandungan flavonoid total, aktivitas antioksidan dari ekstrak etanol tumbuhan S . doederleinii .  Ekstraksi  dilakukan  menggunakan  metode  maserasi  dan dihasilkan  ekstrak  etanol  berupa  padatan  berwarna  hijau  gelap.  Ekstrak  padat  dianalisis metabolit sekundernya menggunakan skrining fitokimia. Kadar flavonoid total ditentukan menggunakan  spektroskopi  dengan  pereaksi  aluminium  klorida.  Aktivitas  antioksidan ditentukan  menggunakan  metode  DPPH . Hasil  skrining  fitokimia  ekstrak  etanol S . doederleinii terdapat  kandungan  fenolik,  alkaloid,  saponin,  steroid,  flavonoid,  dan  tanin. Kandungan flavonoid total ekstrak etanol tumbuhan S . doederleinii sebesar 17,615 mg QE/g ekstrak.  Sementara  itu  nilai  IC 50 pada  uji  aktivitas  antioksidan  sebesar  128,696  ppm, sehingga  ekstrak  etanol S . doerdeleinii mempunyai  aktivitas  antioksidan  dalam  kategori sedang.
Kata kunci : Selaginella doederleinii, kandungan flavonoid total, aktivitas antioksidan

## Abstract
Selaginella doederleinii is one of the ferns originating from China, but has been cultivated in  Indonesia.  These  plants  used  by  the  community  to  improve  blood  flow,  eliminate swelling, antitoxic, anticancer, and stop bleeding (hemostasis). This research was conducted to determine the phytochemical content, total flavonoids content, and antioxidant activity of the ethanol extract of S . doederleinii . Extraction was carried out by maceration method and the resulting extract was a dark green solid. The ethanol extract was analyzed for its secondary  metabolite  content  by  phytochemical  screening.  Determination  of  the  total flavonoid content  was determined using spectroscopic with an aluminium chloride reagent. The  antioxidant  activity  was  determined  using  the  DPPH  method.  The  results  of phytochemical  screening  the  ethanolic  extract  of S.  doederleinii contained  phenolics, alkaloids, saponins, steroids, flavonoids, and tannins. The flavonoid content in the ethanol extract of S. doerdeleinii was 17,615 mg QE/gram extract. Based on the antioxidant activity test, it was obtained the IC 50 value of 128.696 ppm, so the ethanol extract of S. doederleinii had moderate antioxidant activity.
Keywords : Selaginella doederleinii, total flavonoids content, antioxidant activity

## Pendahuluan
Tumbuhan paku
Selaginella doederleinii merupakan  tumbuhan  paku yang berasal dari China dan sudah banyak dikembangkan  di  Indonesia.  Masyarakat mengenal tumbuhan paku tersebut dengan nama  rumput  Solo  dan  cemara  kipas gunung (Dalimartha, 1999). S. doederleinii secara  spontan  tumbuh  di  pesisir  sungai, permukaan  batuan  dan  bilik  tebing  yang basah  (Hutapea,  1999).  Tanaman  ini memiliki khasiat meminimalisir panas dan kelembapan,  memperlancar  peredaran darah,  bersifat  antitoksik,  antineoplasma, hemostasis,  serta  meredakan  bengkak. Tanaman  ini  memiliki  keefektifan  untuk mengobati  batuk,  diare,  kanker,  kelainan saluran  pernapasan,  pembengkakan  paru- paru,  hepatitis,  keputihan,  dan  patah tulang. (Dalimartha, 1999).
Tumbuhan paku S. doerdeleinii dilaporkan  terdapat  kandungan  alkaloid, saponin, dan fitosterol (Dalimartha, 1999). Keberadaan senyawa flavonoid dan lignan mendukung  bahwa  tumbuhan  paku S. doederleinii memiliki  potensi  sebagai aktioksidan  (Lin, et  al .,  1994).  Namun demikian, dari sejumlah penelitian terkait, belum  banyak  ditemukan  kandungan senyawa metabolit sekunder S. doerdeleinii yang  lebih  kompleks  dan bervariasi, maka dari itu untuk melengkapi senyawa metabolit sekunder perlu dilakukan uji skrining fitokimia. Selain itu, setiap  tanaman  mengandung  senyawa metabolit  sekunder  yang  berbeda-beda bergantung pada dimana letak tumbuhnya (Chikmawati, et al. , 2013). Pada penelitian ini menggunakan tumbuhan S. doederleinii yang  diambil  pada  tempat  yang  berbeda dari penelitian sebelumnya.
Antioksidan dibutuhkan untuk mencegah  timbulnya  stres  oksidatif  dan kerusakan  sel,  dimana  berperan  penting dalam  perkembangan  berbagai  macam penyakit  degeneratif  seperti  kanker, penyakit  arteri  koroner, dan  stroke. Berbagai  bukti  ilmiah  telah  ditunjukkan bahwa  risiko  penyakit  yang  disebabkan radikal  bebas  kronis  mampu  dikurangi
dengan memakai berbagai macam senyawa  antioksidan  meliputi  antosianin, karotenoid, stilben, dan flavonoid. (Paknahad, et al. , 2020). Dalam penelitian ini  akan  dilakukan  pengujian  skrining fitokimia, kandungan total flavonoid, serta aktivitas  antioksidan  terhadap  ekstrak etanol tumbuhan paku S. doederleinii .

## Metode Penelitian
Alat dan bahan Peralatan yang digunakan yaitu vacuum pump (Gast DOA-P-504-BN), seperangkat alat  rotavapor  (Buchi  B-491),  neraca analitik  (Advanturer  Ohaous), magnetic stirrer,  freeze  dryer (Christ  Alpha  1-2 Ldplus), spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu UV-1800), oven (Heraeus ST-
5042),  corong  Buchner,  spatula,  cawan petri, plat tetes, mikropipet (Dragon Lab), stopwatch,  labu  ukur  (Pyrex),  gelas kimia(Iwaki), tabung reaksi (Pyrex), gelas ukur (Herma), botol vial.
Bahan-bahan  yang  digunakan  meliputi serbuk  kering  bagian aerial tumbuhan S. doederleinii, etanol  p.a.,  pita  Mg,  etanol 96%  teknis,  larutan  FeCl 3 (1%  dan  5%), kertas saring whatman No.1, aquades, HCl (1M dan 2M), metanol p.a., H 2 SO 4 pekat, reagen Mayer, reagen Dragendorff, reagen Wagner,  ammonia,  AlCl 3 10%,  asam asetat  anhidrida,  HCl  pekat,  kuersetin (Sigma),  kalium  asetat  1M,  DPPH (Sigma).

## Pengambilan dan Persiapan Sampel
Dalam penelitian ini sampel penelitian yaitu  bagian aerial tumbuhan  paku S. doederleinii didapatkan  dari  UPT  Balai Materia  Medica,  Kota  Batu,  Jawa  Timur. Pada  penelitian  ini  diawali  dengan mengidentifikasi  sampel  di  LIPI  Kebun Raya Purwodadi, Jawa Timur. Tumbuhan S.  doederleinii dicuci  dengan  air  hingga bersih dari kotoran-kotoran yang menempel,  selanjutnya  didiamkan  dalam suhu  ruang.  Lalu  sampel  digiling  hingga menjadi serbuk.
Sejumlah  1000  gram  serbuk  kering tumbuhan S.  doederleinii dimaserasi
dengan  1,5  L  etanol  96%  teknis  dalam waktu  24  jam  dengan  suhu  ruang. Selanjutnya dilakukan penyaringan menggunakan  corong  Buchner.  Ekstrak cair yang didapatkan kemudian dilakukan evaporasi  dengan  rotavapor,  dilanjutkan pengeringan dengan freeze dryer sehingga diperoleh  ekstrak  etanol  padat  tumbuhan paku S. doederleinii berwarna hijau gelap.

## Uji Kualitatif Hasil Ekstraksi
1) Alkaloid
Ditimbang 4 mg sampel padat dilarutkan  menggunakan  3  mL  metanol dan  5  mL  amonia  pada  pH  sekitar  8–9, kemudian  hasil  pencampuran  tersebut disaring.  Selanjutnya  2  mL  larutan  HCl 2M ditambahkan pada filtrat dan dikocok. Hasil yang didapatkan dimasukkan dalam 4  tabung  reaksi  masing-masing  5  tetes. Tabung 1 berisi larutan blanko, sedangkan tabung 2, 3, dan 4 akan dicampur dengan 1 tetes pereaksi
Mayer,
Wagner, Dragendorff  pada  setiap  tabung.  Hasil positif  pada  pengujian  ini  ditunjukkan dengan  masing-masing  larutan  terdapat endapan putih, coklat atau jingga (Suyani, 1991).
2) Flavonoid Sejumlah  1  mg  ekstrak  etanol  padat ditempatkan pada plat tetes, lalu dimasukkan  10  tetes  metanol,  diaduk menggunakan spatula sampai larut. Selanjutnya  ditambahkan  6  potongan  pita Mg  dan  HCl  pekat  4  tetes  ke  dalam campuran. Timbulnya warna kuning, biru, jingga  maupun  merah  menunjukkan  hasil positif (Octaviani, et al. , 2019).
3) Fenolik Sejumlah 1 mg sampel padat diletakkan dalam plat tetes, kemudian menambahkan 10 tetes metanol, lalu diaduk menggunakan spatula sampai larut. Selanjutnya  ditambahkan  6  tetes  larutan FeCl 3 5%.  Warna  biru,  hijau,  ungu,  atau kemerahan  kemerahan  menandakan  hasil positif pada pengujian (Suyani, 1991).
4) Saponin
Sebanyak  1  mg  ekstrak  etanol  padat diletakkan  pada  tabung  reaksi,  lalu menambahkan 5 mL aquades dan digoyang  selama  1  menit.  Jika  terbentuk buih, ditambahkan 4 tetes larutan HCl 1M. Jika tidak ada buih, dilanjutkan pemanasan ±3 menit. Kemudian dibiarkan dingin lalu dikocok  kuat-kuat.  Terbentuknya  buih stabil dalam waktu ±10 menit menandakan terdapat  senyawa  saponin  dalam  sampel. (Triwahyuono & Hidajati, 2020).
5) Tanin Sebanyak 1 mg sampel padat dilarutkan dalam etanol, kemudian ekstrak dididihkan dengan air dalam penangas air, selanjutnya dilakukan  penyaringan.  Menambahkan  3 tetes  FeCl 3 1%  ke  dalam  filtrat  yang diperoleh.  Hasil  positif  dapat  dilihat berdasarkan  terbentuknya  warna  pada sampel yaitu biru tua dan hitam kehijauan. FeCl 3 digunakan  untuk  mengidentifikasi gugus fenol,  jika dalam  senyawa terdapat gugus  fenol,  maka  terdapat  juga  tanin, karena  tanin  adalah  senyawa  polifenol (Jati, et al., 2019).
6) Steroid dan Triterpenoid (Uji
Liebermann-Burchard)
Sejumlah  1  mg  sampel  padat  etanol diletakkan pada plat tetes,  ditambahkan 6 tetes  asam  asetat  anhidrat,  kemudian diaduk menggunakan spatula sampai larut. Selanjutnya ditambahkan satu tetes H 2 SO 4 pekat.  Jika  terbentuk  warna  ungu  hingga jingga dalam larutan menunjukkan terdapat  senyawa  triterpenoid,  sedangkan jika berwarna biru atau hijau menunjukkan terdapat senyawa steroid (Suyani, 1991).

## Uji Flavonoid Total
Ditimbang  25  mg  serbuk  kuersetin dilarutkan menggunakan etanol p.a hingga menghasilkan  larutan  standar  kuersetin 1000  ppm.  Larutan  standar  kuersetin dibuat  bervariasi  konsentrasi  sebesar  20, 30,  40,  50,  dan  60  ppm.  Larutan  standar kuersetin  diambil  sebanyak  0,5  mL kemudian ditambahkan 1,5 mL etanol p.a., 0,1 mL AlCl 3 10%, 0,1 mL CH 3 COOK 1M lalu  2,8mL  aquades.  Dilakukan  inkubasi
dalam  waktu  30  menit.  Selanjutnya ditentukan
panjang
gelombang maksimum,  mengambil  larutan  40  ppm, diukur panjang gelombang dengan rentang 400-800  nm  (Haeria  &  Andi,  2016). Larutan standar yang digunakan merupakan  larutan  dengan  konsentrasi yang  berada  di  tengah-tengah  larutan standar kuersetin (Trinovita, et al. , 2019). Panjang  gelombang  ditentukan  bertujuan untuk mengetahui nilai absorbansi maksimal  pada  sampel  (Gandjar  & Rohman, 2007).
Menimbang  50  mg  sampel  ekstrak etanol  tumbuhan  paku S.  doederleinii kemudian  dicukupkan  dengan  etanol  p.a. hingga  mencapai  konsentrasi  5000  ppm. Selanjutnya menambahkan 0,5 mL sampel uji  dengan  1,5  mL  etanol  p.a.,  0,1  mL AlCl 3 10%,  0,1  mL  CH 3 COOK  1M,  2,8 mL aquades. Kemudian dilakukan inkubasi selama 30 menit. Untuk mengukur
absorbansi digunakan spektrofotometer UV-Vis,
panjang gelombang  maksimum  yang  digunakan yaitu  435  nm,  diperoleh  dari  percobaan sebelumnya.  Kandungan  flavonoid  total pada sampel tumbuhan paku S. doederleinii dapat dicari dengan persamaan  pada  kurva  kalibrasi  larutan kuersetin  yang  diperoleh.  Pengukuran dilakukan  secara  triplo  (Haeria  &  Andi, 2016).

## Uji Aktivitas Antioksidan
Ditimbang  5  mg  ekstrak  etanol tumbuhan paku S. deoderleinii , selanjutnya  dilarutkan  dengan  etanol  p.a. hingga  diperoleh  konsentrasi  larutan induk 500 ppm (Taba, et al ., 2019). Untuk menghasilkan  DPPH  konsentrasi  4  mM, ditimbang  DPPH  sejumlah  0,0157  gram, kemudian dicukupkan menggunakan etanol  p.a.  dalam  labu  ukur  100  mL. Larutan  yang  dihasilkan  selanjutnya disimpan  pada  botol  gelap  serta  dalam ruangan gelap (Taba, et al. , 2019).
Larutan ekstrak dibuat dengan 5 variasi konsentrasi yaitu 10, 20, 40, 80, 160 ppm.
Diambil  sebanyak  0,1;  0,2;  0,4;  0,8;  1,6 mL dari larutan induk 500 ppm. Kemudian ditambahkan  1  mL      larutan  DPPH  pada labu ukur 5 mL dicukupkan menggunakan etanol  p.a.,  kemudian  campuran  dikocok sampai  homogen.  Selanjutnya  campuran diinkubasi  30  menit  pada  ruangan  yang gelap  serta  pada  suhu  ruang.  Absorbansi setiap  sampel  ditentukan  dengan  panjang gelombang  514  nm  (didapatkan  dari larutan  induk  500  ppm)  (Farah, et  al. , 2019).  Persentase  inhibisi  radikal  bebas DPPH dapat  ditentukan dalam  persamaan
1.
% Inhibisi = A blanko-A ekstrak A blanko x 100% ….. (1)
Setelah  didapatkan  nilai  %inhibisi radikal  DPPH,  akan  diketahui  nilai  IC 50 melalui  analisis  grafik  hubungan  antara persentase  inhibisi  yang  didapatkan  pada tiap konsentrasi larutan sampel. Nilai IC 50 menunjukkan  konsentrasi  larutan  sampel dapat  meredam  50%  absorbansi  larutan DPPH (Taba, et al. , 2019).

## Hasil dan Pembahasan
Pada  penelitian  ini  digunakan  metode maserasi  karena  mudah  untuk  dilakukan dan  menggunakan  alat-alat  yang  cukup sederhana. Prosesnya sangat efektif dalam mengekstraksi  senyawa  dari  bahan  alam, hal ini membuat tanaman sampel mengalami penguraian pada dinding serta membran sel yang mengakibatkan perbedaan tekanan diantara dalam sel dan luar  sel,  oleh  karena  itu  metabolit sekunder  akan  larut  dengan  pelarut organic.  Tanpa  pemanasan  juga  menjadi salah satu kelebihan metode maserasi agar senyawa  metabolit  yang  akan  dianalisis tidak  rusak  (Pasaribu,  2009).  Didapatkan hasil  maserasi  berupa  ekstrak  padat berwarna hijau gelap dengan berat 99,028 gram. Hasil  dari  pengujian  fitokimia ditunjukkan dalam Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol S. doederleinii Uji Fitokimia Hasil Pengamatan
Gambar
Fenolik + Terbentuk warna ungu
Flavonoid
+ Terbentuk warna jingga
Alkaloid - Mayer - Wagner - Dragendorff + + + Endapan putih Endapan coklat Endapan jingga Saponin +
Terbentuk buih
Steroid + Terbentuk warna hijau kebiruan
Tanin
+ Terbentuk warna hijau kehitaman
Dari  data  yang  dihasilkan  dalam pengujian fitokimia tersebut mengindikasikan  bahwa  ada  senyawa metabolit sekunder yaitu flavonoid, alkaloid,  fenolik,  steroid,  saponin,  dan tanin  pada  sampel  etanol  tumbuhan  paku Selaginella doederleinii.
Hasil  penelitian  sebelumnya  tentang tumbuhan  paku  genus Selaginella yang banyak  diteliti  yaitu S.  willdenowii . Tumbuhan S. willdenowii memiliki kandungan  fenolik,  flavonoid,  alkaloid, saponin, dan tanin (Rindita, et al. , 2020).

## Hasil Uji Alkaloid
Pada pengujian ini menunjukkan bahwa ekstrak  etanol  tumbuhan S.  doederleinii mengandung senyawa alkaloid dibuktikan terdapat  endapan  berwarna  putih  dalam Mayer, endapan coklat dalam Wagner, dan endapan jingga dalam Dragendorff. Endapan dihasilkan karena terjadi pembentukan  kompleks  kalium–alkaloid. Alkaloid  memiliki  pasangan  elektron bebas  pada  atom  nitrogen  yang  akan berikatan  dengan  ion  K + dalam  pereaksi alkaloid (McMurry & Fay, 2004).
Persamaan reaksi percobaan ini terlihat pada Gambar 1 sampai 3.
Gambar 1. Persamaan reaksi Mayer
Gambar 2. Persamaan reaksi Wagner
Gambar 3. Persamaan reaksi Dragendorff (Setiabudi & Tukiran, 2017)

## Hasil Uji Flavonoid
Pengujian  kadar  flavonoid  total  dengan menggunakan pereaksi Shinoda. Dihasilkan  perubahan  warna  larutan menjadi  berwarna  jingga  dikarenakan senyawa  kompleks  dari  ion  magnesium dengan  ion  fenoksi  pada  senyawa flavonoid.  Reduksi  senyawa  flavonoid yang  terkandung  dalam  ekstrak  dengan Mg 2+ dan  HCl  pekat  akan  membentuk kompleks  [Mg(OAr) 6 ] 4- yang  berwarna jingga (Marliana, 2005). Persamaan reaksi yang  terlibat  dalam  pengujian  ini  terlihat pada Gambar 4.
Gambar  4. Reaksi  flavonoid  dengan Magnesium  (Setiabudi  & Tukiran, 2017)

## Hasil Uji Fenolik
Pada  percobaan  ini  didapatkan  ekstrak etanol  tumbuhan S.  Doederleinii berubah warna menjadi ungu, menunjukkan bahwa dalam sampel terkandung senyawa  fenol. Warna  ungu  timbul  akibat  terbentuknya senyawa kompleks antara ion ferri dan ion fenoksida yaitu [Fe(OAr) 6 ] 3. Reaksi terlihat pada Gambar 5.
Gambar 5. Reaksi dengan ferri klorida (Jati, et al. , 2019)
Hasil Uji Saponin
Pada pengujian senyawa saponin menggunakan metode “Forth”. Hasil yang didapatkan  dalam  pengujian  ini  timbul buih yang stabil dengan tinggi 2 cm dalam waktu ±10 menit. Timbul buih yang stabil disebabkan  karena  glikosida  memiliki kemampuan  memperoleh  buih  pada  air lalu mengalami hidrolisis menjadi glukosa serta senyawa lainnya. Persamaan reaksi  pembentukkan  buih  pada  saponin disajikan dalam Gambar 6.
+
1-arabinopiriosil-3β-Aglikon   Asetil oleanolat    Glukosa Gambar  6. Persamaan  reaksi  pengujian senyawa  saponin  (Setiabudi & Tukiran, 2017)

## Hasil Uji Tanin
Pengujian  senyawa  tanin  dalam  ekstrak etanol S.  doederleinii setelah  ditetesi larutan  FeCl 3 terbentuk  larutan  berwarna hijau kehitaman yang menandakan terbentuk  senyawa  kompleks  (tanin  dan ion Fe 3+ ). Reaksi terlihat pada Gambar 7.
Gambar 7. Reaksi Tanin dengan Polifenol dan Ferri Klorida (Sulasmi, et al. , 2019)

## Hasil Uji Steroid
Pada  pengujian  steroid  ekstrak  etanol S. doederleinii dihasilkan  larutan  berwarna menjadi  hijau  kebiruan.  Penyebabnya karena golongan  steroid mengalami oksidasi  yang  akan  membentuk  ikatan rangkap  terkonjugasi  (Sriwahyuni,  2010). Persamaan reaksi ditunjukkan pada Gambar 8.
OH OH OH CH 2 OH O CO 2 H CO O OH OH OH CH 2 OH O H 2 O
Gambar 8. Senyawa steroid dengan asam asetat  anhidrida  dan  H 2 SO 4 (Simaremare, 2014)

## Kandungan Flavonoid Total
Analisis flavonoid diuji dengan metode spektrofotometri  UV-visible.  Kuersetin digunakan  sebagai  larutan  standar  karena termasuk kedalam jenis flavonoid sebagai standar  pembanding  dalam  menentukan kandungan flavonoid total, serta memiliki aktivitas antioksidan yang tinggi (Lindawati & Ma'ruf, 2020).
Pada  penelitian  ini  dihasilkan  panjang gelombang  maksimum  sebesar  435  nm. Selanjutnya  larutan  kurva  baku  kuersetin dibuat  untuk  menghitung  konsentrasi sampel  melalui  persamaan  regresi  linier yang  dihasilkan  (Gandjar  &  Rohman,
2007).  Pada  percobaan  ini  digunakan metode kolorimetri yaitu dengan mereaksikan aluminum klorida, metode ini juga  relatif  sederhana  untuk  pengujian flavonoid  golongan  flavon  esensial  dan flavonol  dapat  bereaksi  dengan  Al  (III) (Octaviani, et al ., 2019). Senyawa flavonoid tumbuhan S.
doerdeleinii yang  telah  diidentifikasi menghasilkan  warna  jingga  pada  reaksi Shinoda.  Warna  jingga  menandakan bahwa  terdapat  kandungan  flavonoid golongan  flavon,  auron  atau  khalkon (Winarti, et  al. ,  2007).  Sedangkan  pada golongan  flavonoid  lain  terbentuk  warna merah muda (flavonol), warna merah (2,3 dihidroflavonol), dan warna ungu (xanthone) (Depkes, 1989).
Dilakukan pengukuran absorbansi variasi konsentrasi pada panjang gelombang  maksimum  435  nm.  Dalam pengukuran  dilakukan  secara  triplo. Pengulangan  pengukuran  bertujuan  untuk meningkatkan  ketepatan  percobaan.  Hasil pengukuran  pada  absorbansi  larutan standar  kuersetin  terlihat  dalam  Tabel  2. Berdasarkan  data  Tabel  2  dapat  dibuat kurva  baku  konsentrasi  larutan  kuersetin. Diperoleh kurva pada Gambar 9.
Tabel 2. Hasil larutan standar kuersetin Konsentrasi larutan kuersetin (ppm) Absorbansi 1 2 3 A rata-rata 20 0,168 0,170 0,172 0,17 30 0,262 0,264 0,266 0,264 40 0,331 0,335 0,333 0,333 50 0,417 0,423 0,420 0,420 60 0,509 0,507 0,508 0,508
Gambar 9. Kurva baku larutan kuersetin
Pengukuran kandungan flavonoid total didasarkan  hasil  persamaan  regresi  linier pada Gambar 9 yakni y = 0,0083x + 0,0062 dimana R 2 yang didapatkan sebesar 0,9982 dan  r  sebesar  0,999.  Hal  tersebut menunjukkan  bahwa  kurva  baku  yang didapatkan  linear  dan  konsentrasi  larutan kuersetin  dengan  nilai  serapan  saling berhubungan (Widyasari, et al. , 2019). Selanjutnya dilakukan pengukuran kandungan  flavonoid  total  ekstrak  etanol S.  doederleinii berdasarkan  persamaan regresi  linier  dari  kurva  baku  yang diperoleh  (Gambar  9).  Hasil  pengukuran absorbansi  ekstrak  etanol  tumbuhan  paku S.  doederleinii berturut-turut  sebesar 0,7370;  0,7374;  dan  0,7372.  Dan  didapat rata-rata absorbansi sebesar  0,7372.
Berdasarkan kurva baku larutan flavonoid kuersetin  dihasilkan  nilai  konsentrasi sebesar 88,072 µg/mL. Selanjutnya
dengan mempertimbangkan faktor
pengenceran diperoleh kandungan flavonoid  total  dalam  ekstrak  etanol S. doederleinii sebesar  sebesar  17,615  mg QE/g  ekstrak.  Kandungan  flavonoid  total dari  ekstrak  etanol S.  doederleinii didukung  oleh  hasil  skrining  fitokimia yang  menunjukkan  keberadaan  senyawa fenolik  dan  senyawa  flavonoid  dalam ekstrak tersebut.

## Aktivitas Antioksidan
Prinsip  metode  DPPH  adalah  terjadinya transfer elektron dari senyawa antioksidan ke radikal bebas DPPH, sehingga diperoleh  molekul  radikal  bebas  yang stabil.  Terjadinya  reaksi  tersebut  ditandai dengan  berubahnya  warna  larutan  DPPH dari  warna  ungu  hingga  warna  kuning muda (George, et al., 2015). Hasil aktivitas antioksidan ekstrak etanol tumbuhan paku S. doederleinii disajikan pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil aktivitas antioksidan tumbuhan S. doederleinii
Konsentrasi larutan kuersetin (ppm) Absorbansi %Inhibisi 1 2 3 rata-rata kontrol 0,7316 0,7316 0,7316 0,7316 0 10 0,6841 0,6838 0,6841 0,6840 6,506 20 0,6541 0,6543 0,6545 0,6543 10,566 40 0,5745 0,5745 0,5748 0,5746 21,459 80 0,4781 0,4783 0,4782 0,4782 34,636 160 0,2943 0,2948 0,2944 0,2945 59,746
y = 0.0083x + 0.0062 R² = 0.9982 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0 20 40 60 80 A b so rb an si Konsentrasi
Dalam penelitian ini kekuatan aktivitas antioksidan  dinyatakan  dengan  IC 50 yaitu konsentrasi zat dimana mampu menginhibisi  atau  meredam  absorbansi DPPH  sebanyak  50%  (Julizan, et  al. , 2019).  Nilai  IC 50 didapatkan  berdasarkan analisis  regresi  linier  konsentrasi  larutan
ekstrak  etanol S.  doederleinii dengan persentase  inhibisi  absorbansi  DPPH. Berdasarkan  data  Tabel  3  dapat  dibuat grafik  antara  konsentrasi  larutan  ekstrak dengan  persentase  peredaman  absorbansi atau  inhibisi  DPPH,  yang  disajikan  pada Gambar 10.
Gambar 10. Hubungan konsentrasi larutan ekstrak dan persentase inhibisi DPPH
Berdasarkan  Gambar  10  didapatkan persamaan  regresi  y  =  0,3511x  +  4,8148. Kemudian  memasukkan  nilai  y  dengan 50%  diperoleh  nilai  x  atau  IC 50 sebesar 128,696  ppm.  Karena  harga  IC 50 terdapat direntang  100-250  ppm  maka  aktivitas antioksidan  dari  ekstrak  etanol  tumbuhan paku S.  doederleinii termasuk  kategori sedang (Rahman, et al., 2014).
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol tumbuhan paku S. doederleinii disebabkan oleh kandungan senyawa metabolit sekunder jenis fenolik khususnya flavonoid  (Heim, et  al., 2002).  Senyawa fenolik  yang  berupa  flavonoid  berpotensi sebagai antioksidan. Aktivitas antioksidan flavonoid disebabkan karena adanya gugus hidroksil fenolik yang mampu menetralkan  radikal  bebas  melalui  donor atom  hidrogen.  Al-Farsi, et  al .  (2007) menyatakan  bahwa  kandungan  flavonoid total  dan  aktivitas  antioksidan  saling berhubungan.  Semakin  besar  kandungan flavonoid  total  suatu  zat  maka  semakin besar pula kemampuan antioksidannya.
Peran flavonoid dalam aktivitas antioksidan  yaitu  dengan  mendonorkan atom hidrogen atau dengan kemampuannya  mengikat  logam,  dalam bentuk glukosida (terdapat rantai glukosa) sedangkan  dalam  bentuk  bebas  disebut aglikon.  Jika  semakin  sedikit  ikatan  gula maka  sifat  antioksidannya  semakin  tinggi (Arifin & Ibrahim, 2018).
Kemampuan senyawa flavonoid dalam aktivitas antioksidan juga tergantung pada penyusunan  gugus  fungsi  dalam  struktur intinya.  Jumlah  gugus  hidroksil  secara signifikan  akan  berpengaruh  terhadap aktivitas  antioksidan.  Gugus  hidroksil tambahan  di  cincin  B (gugus  pyrogallol) dapat meningkatkan kapasitas antioksidan. Di sisi lain, kehadiran hanya satu hidroksil di  cincin  B  dapat  mengurangi  aktivitas antioksidan.  Sedangkan  substitusi  pada cincin  A  dan  C  memiliki  dampak  yang kecil  pada  aktivitas  antioksidan  (Pieta, 2000).
y = 0.3511x + 4.8148 R² = 0.9912 0 10 20 30 40 50 60 70 0 50 100 150 200 % in h ib is i Konsentrasi

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa ekstrak etanol tumbuhan paku S. doederleinii mempunyai kandungan senyawa  metabolit  sekunder  golongan fenol, flavonoid, alkaloid, steroid, saponin, tanin.  Kandungan  flavonoid  total  sebesar 17,615  mg  QE/g  ekstrak  serta  aktivitas antioksidan  berkategori  sedang  dengan nilai IC 50 sebesar 128,696 ppm.

## Daftar Pustaka
Al-Farsi,  M.,  Alasalvar,  C.,  Al-Abid,  Al- Shoaily,  M.,  Al-Amry,  M.,  Al- Rawahy,  F . ,  2007.  Compositional and  Functional  Characteristics  of Dates,  Syrups,  and  Their  by- Products. Food Chemistry, Volume 104, 943-947.
Arifin,  B.  &  Ibrahim,  S.,  2018.  Struktur,
Bioaktivitas dan Antioksidan
Flavonoid. Zarah, 6(1), 21-29.
Chikmawati,  T.,  Sopyati,  P.  D.  &  M., 2013.  Pertumbuhan  dan  analisis kualitatif tanin, saponin dan flavonoid dari Selaginella plana, S. willdenovii and S. mayeri pada tiga naungan  berbeda. Bioslogos, 3(1), 1-9.
Dalimartha,  S.,  1999. Atlas  Tumbuhan Obat  Indonesia,  Jilid  I. Jakarta: Trubus Agriwidya.
Depkes,  RI.,  1989. Materia  Medika Indonesia. Jilid  V  ed.  Jakarta: Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia.
Farah,  J.,  Y.  &  Marpaung,  M.  P.,  2019. Ekstrak  Etil  Asetat  Daun  Jambu Biji  Merah  (Psidium  guajava  L.) sebagai  Antioksidan  secara  In vitro. JFL  :  Jurnal  Farmasi Lampung, 8(2), 78-86. Gandjar,  G.  &  Rohman,  A.,  2007. Kimia Farmasi  Analisis. Yogyakarta: Pustaka Pelajar.
George,  V.,  Kumar,  D.,  Suresh,  P.  & Kumar,  R.,  2015.  Antioxidant, DNA  Protective  Effecacy  and
HPLC Analysis of Annona
muricata (soursop) extracts. Journal  of  Food  Science  and Technology, 52(4), 2238-2335. Haeria,  H.  &  Andi,  T.,  2016.  Penentuan
Kadar Flavonoid Total dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Etanol  Daun  Bidara  (Ziziphus spina-christi L.). Journal of Pharmaceutical  and  Medicinal Science, 1(2), 57-61. Heim,  K.,  Tagliaferro,  A.  &  Bobilya,  D., 2002.  Flavonoid  Antioxidants  : Chemistry, Metabolisme and Stucture-Activity. Journal of
Nutritional  Biochemistry, Volume 13, 572-584.
Hutapea,  J.,  1999. Investaris  Tanaman Obat  Indonesia,  Jilid  V. Jakarta: Departemen  Kesehatan  RI  dan Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan.
Jati,  N.,  Prasetya,  A.  T.  &  Mursiti,  S., 2019.  Isolasi,  Identifikasi,  dan Uji Aktivitas  Antibakteri  Senyawa Alkaloid  Pada  Daun  Pepaya. Jurnal MIPA, 42(1), 1-6.
Julizan, N., Maemunah, S., Dwiyanti, D. &
Anshori, J., 2019. Validasi
Penentuan  Aktifitas  Antioksidan Dengan Metode  DPPH. Kandaga- Media  Publikasi  Ilmiah  Jabatan Fungsional Tenaga Kependidikan, 1(1), 41-45.
Lindawati,  N.  &  Ma'ruf,  S.,  2020. Penetapan  Kadar  Total  Flavonoid Ekstrak  Etanol  Kacang  Merah (Phaseolus  vulgaris  L.)  secara Spektrofotometri  Visibel. Jurnal Ilmiah Manuntung, 6(1), 83-91. Lin,  R.,  Skaltsounis,  A.L.,  Seguin,  E.,
Tillequin,  F.,  Koch,  M . ,  1994.
Phenolic Constituents
of Selaginella  doederleinii. Planta Medica, 60(2), 168-170.
Marliana, E., 2005. Aktivitas Antioksidan
Ekstrak  Etanol  Daun  Andong (Cordyline fruticosa [L] A.
Cheval). Jurnal Mulawarman Scientifie . 11(1), 71-82.
McMurry,  J.  &  Fay,  R.,  2004. McMurry Fay Chemistry. 4th edition ed. CA:
Pearson Education International.
Octaviani, M., Fadhli, H. & Yuneistya, E.,
2019.  Uji  Aktivitas  Antimikroba Ekstrak  Etanol  dari  Kulit  Bawang Merah  (Allium  cepa  L.)  dengan Metode Difusi Cakram. Pharmaceutical Sciences and
Research, 6(1), 62-68.
Paknahad,  Z.  Parisa,  S.,  Teimouri,  Z., Hasanzadeh,  A.,  Hashemi,  M. l. ,
2020.  Dietary  total  antioxidant capacity and severity of stenosis in patients  with  coronary  artery disease. International  Journal  for Vitamin  and  Nutrition  Research, 91(3-4), 235-241.
Pasaribu,  S.,  2009.  Uji  Bioaktivitas Metabolit  Sekunder  Dari  Daun Tumbuhan  Bandotan  (Ageratum conyzoides  L.). Jurnal  Kimia Mulawarman . 6(2), 23-29.
Pieta,  P.-G.,  2000.  Review  Flavonoids  as Antioxidants. Journal  of  Natural Products, 63(7), 1035-1042.
Rahman, N., Bahriul, P. & Diah, A., 2014. Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Daun Salam (Syzygium Polyanthum) dengan Menggunakan 1,1-Difenil-2- Pikrilhidrazil. Jurnal  Akademika
Kimia, 3(3), 143-149.
Rindita,  Anggia,  VIvi,  Rahmaesa,  Eka, Devi,  Retna  K.,  Alawiyah,  Lidia
Fatmah., 2020. Exploration,
phenolic  content  determination, and antioxidant activity of dominant pteridophytes in Gunung Malang  Village,  Mount  Halimun SalakNational  Park,  Indonesia. Biodiversitas, 21(8), 3676-3682. Setiabudi,  D.  &  Tukiran,  2017.  Uji
Skrining Fitokimia Ekstrak Metanol  Kulit  Batang  Tumbuhan Klampok Watu (Syzygium litorale). Unesa Journal of Chemistry, 6(3), 155-160.
Shahwar,  D.,  Rehman,  S.,  Ahmad,  N.  & Raza,  M.,  2010.  Antioxidant
Activities of The Family Euphorbiaceae, Lauraceae,
Malvaceae,  and  Balsaminaceae. African  Journal  of  Biotechnology, Volume 9, 1086-1096.
Simaremare, E., 2014. Skrining Fitokimia
Ekstrak Etanol Daun Gatal (Laportea decumana (Roxb.) Wedd). Pharmacy, 11(1), 98-107. Sriwahyuni,  I.,  2010. Uji  Fitokimia Ekstrak  Tanaman  Anting-Anting (Acalypha  Indica  Linn)  dengan Variasi Pelarut dan Uji Toksisitas menggunakan brine shrimp (artemia  salina  leach), Malang: Fakultas  Sains  dan  Teknologi Universitas  Islam  Negeri Maulana
Malik Ibrahim.
Sulasmi,  S.,  M.  &  Z.,  2019.  Tanin
Identification of 4 Species
Pterydophyta from Baluran National Park. Journal of Physics:
Conf. Series, 1(2).
Suyani, H., 1991. Kimia dan Sumber Daya Alam, Padang:  Pusat  Penelitian Universitas Andalas.
Taba, P., Paramitha, N. & Kasim, S., 2019.
Sintesis nanopartikel Perak menggunakan Ekstrak Daun Salam (Syzygium  polyanthum)  sebagai Bioreduktor  dan  Uji  Aktivitasnya sebagai  Antioksidan. Indo.  J. Chem. Res, 7(1), 51-60.
Trinovita, Y., Mundriyastutik, Y., Fanani, Z.  &  Fitriyani,  A.  N.,  2019. Evaluasi  Kadar  Flavonoid  Total
Pada Ekstrak Etanol Daun Sangketan  (Achyranthes  Aspera) Dengan Spektrofotometri. Indonesia  Jurnal  Farmasi, 4(1),
12-18.
Triwahyuono, D. & Hidajati, N., 2020. Uji
Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Kulit Batang Mahoni (Swietenia mahagoni Jacq). Unesa Journal of Chemistry, 9(1), 54-57.
Widyasari, E. Sriyani, M.E., Daruwati, I., Halimah,  I.,  Nuraeni,  W.,  2019. Karakteristik Fisika-Kimia Senyawa bertanda 99mTc-
Kuersetin. Jurnal Sains dan Teknologi Nuklir Indonesia, 20(1),
9-18. Winarti,  W.,  Djamil,  R.  &  Yuniasari,  I.,
2007. Identifikasi Senyawa Flavonoid dalam Fraksi  n-Butanol Taraxacum officinale, Asteraceaea. Ikatan Apoteker Indonesia, 5(2), 59-66.