## PREVALENSI PENYAKIT
PADA KOMODITI UDANG VANAME ( Penaeus vaname ) DENGAN METODE Multipleks Polymerase chain reaction (PCR)

## FAISOL MAS‘UD

## Dosen Manajemen Sumber Daya Perairan

## ABSTRAK
Indonesia  dan  dalam  rangka  diversifikasi  komoditas  perikanan.  Tujuan  Udang merupakan salah satu komoditas perikanan unggulan dalam program revitalisasi perikanan, disamping rumput laut dan tuna. Pada awalnya jenis udang yang dibudidayakan di air payau adalah  udang  windu,  namun  setelah  mewabahnya  penyakit  terutama WSSV,    dan    bakteri yang  mengakibatkan  menurunnya  usaha  udang  vaname,  pemerintah  kemudian mengintroduksi  udang  vannamei  pada  tahun  2001  untuk  membangkitkan  kembali  usaha perudangan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  jenis  dan  prevalensi  virus  penyebab penyakit  kerdil  pada  pembenihan  udang  vaname  di  Kabupaten  Lamongan,  Jawa  Timur dengan  menggunakan  multipleks  PCR,  serta  kondisi  histolopatogis  benih  udang vaname.Sampling  dilakukan  di  4  lokasi  panti  pembenihan  udang  windu  di  Kabupaten Situbondo,  Jawa  Timur.Pengamatan  sampel  dengan  multipleks  PCR  dan  histopatologi dilakukan  di  Laboratorium  Parasit  dan  Penyakit  Ikan,  Universitas  Air  Langga Surabaya.Berdasarkan penelitian yang dilakukan di Laboratorium Parasit Dan Penyakit Ikan diperoleh  kesimpulan  bahwa  virus  yang  ditemukan  melalui  pengujian  menggunakan multipleks PCR yang menjadi penyebab penyakit kerdil pada benih udang  vaname di panti pembenihan Kab.Lamongan adalah virus MBV dan virus IHHNV, Prevalensi masing-masing virus  adalah  MBV  sebesar  95  %,  virus  IHHNV  sebesar  50  %,  sedangkan  virus  HPV  tidak ditemukan,Pengujian  histopatologis  menunjukkan  keberadaan  infeksi  virus  MBV,  IHHNV, dan HPV pada sampel benih udang windu dari lokasi pembenihan di Kabupaten Lamongan.

## PENDAHULUAN

## Latar Belakang
Udang vaname ( Penaeus vaname ) merupakan salah satu unggulan sektor perikanan dan  kelautan  nasional  yang  banyak  dibudidayakan  meskipun  beberapa  jenis  udang  lain telah dikembangkan dan dibudidayakan di Indonesia, antara lain udang galah, udang putih, dan  udang  vanamei.  Sejarah  mencatat  Sulawesi  Selatan  pernah  menjadi  produsen  udang windu  terkemuka  di  era  tahun  1980-1990.  Namun  karena  serangan  penyakit  yang disebabkan  oleh  virus  di  awal  1991  menyebabkan  ribuan  hektar  tambak  udang  di  SulSel mengalami gagal panen.Selanjutnya produksi udang vaname terus merosot dan sulit untuk bangkit  kembali.  Provinsi  Jawa  Timur  merupakan  salah  satu  titik  sentral  produksi  udang vaname di Indonesia.
Produksi  nasional  udang  vaname  mulai  beberapa  dekade  ke  belakang  terus menurun seiring kemunculan penyakit dan mengakibatkan penurunan pendapatan nasional di  Indonesia.  Penyakit  merupakan  salah  satu  faktor  pembatas  utama  pada  peningkatan produksi  udang  windu  yang  berkelanjutan.  Virus  dipertimbangkan  sebagai  patogen  paling berperan memicu penyakit pada udang windu. Setiap fase hidup dari udang vaname rentan diserang  oleh  infeksi  virus  yang  mengakibatkan  mortalitas,  pertumbuhan  lambat  dan perubahan bentuk (Anonim, 2011).
Sejalan dengan program peningkatan produksi perikanan, Kementrian Kelautan dan Perikanan (KKP) menetapkan target produksi perikanan sebesar 22, 54 juta ton pada tahun 2014,  dimana  sebanyak  16,89  juta  ton  berasal  dari  perikanan  budidaya.  KKP  menetapkan
10 komoditas unggulan budidaya, salah satunya adalah udang. Komoditas ini diproyeksikan mengalami  peningkatan  produksi  tiap  tahun  sebesar  13%  untuk  udang  windu  dan  16% udang  vannamei.  Produksi  udang  pada  tahun  2014  ditargetkan  sebesar  699  ton  udang windu  dan  511  ribu  ton  udang  vannamei.    (Renstra  Kementrian  Kelautan  dan  Perikanan 20092014).  Namun  kendala  yang  dihadapi  oleh  banyak  pembudidaya  ikan  dan  udang adalah adanya serangan penyakit yang menyebabkan kematian.
Penyakit  kerdil  atau  biasa Syndrome (MSGS)  adalah  fenomena  yang  muncul  pada budidaya  udang  windu  yang  disebut Monodon  Slow-Growth tumbuh  lambat  secara  tidak normal dan dengan ukuran yang tidak rata dalam satu kolam. Sejak tahun 2001, petambak udang  vaname  di  Thailand  menemukan  pertumbuhan  lambat  yang  tidak  biasa  dari  hasil panen  mereka.  Petambak  memperoleh  ukuran  rata-rata  12,5  g  dari  yang  biasanya  dapat berukuran  24  sampai  40  g  setelah  4  bulan  pemeliharaan.  Masalah  ini  membuat  usaha budidaya  tidak  menguntungkan  dan  menyebabkan  kerugian  besar  pada  industri  udang dimana nilai produksi budidaya udang secara dramatis turun hingga 68% pada tahun 2002 sejak tahun 2000 (Withyachumnarnkul, 2005).
Perkembangan  memperlihatkan  bahwa  udang  vaname  yang  dipelihara  di  tambak menghadapi  dua  masalah  utama,  yaitu  terjadinya  kematian  massal  udang  pada  umur mencapai  1  sampai  2  bulan  akibat  infeksi  WSSV  dan  gejala  pertumbuhan  yang  sangat lambat sehingga meskipun telah mencapai usia panen (100-120 hari pemeliharaan) ukuran udang  masih  tetap  kerdil.  Penyebab  udang  kerdil  ini  diduga  akibat  multiple  infeksi  virus MBV, HPV, dan IHHNV (Chayaburakul et al., 2004).
Multipleks  Polymerase  chain  reaction  (PCR)  merupakan  variasi  metode  PCR  yang mengaplikasikan  dua  atau  lebih  lokus  secara  simultan  dalam  satu  reaksi.  Dengan mengaplikasikan lebih dari satu lokus dalam satu reaksi, multipleks PCR menjadi pengujian paling  cepat  dan  sesuai  untuk masalah klinis  dan  penelitian.  Sejak  dideskripsikan  pertama kali pada tahun 1988, metode ini telah sukses diterapkan pada banyak tes DNA, termasuk analisa  penghapusan,  mutasi,  pengujian  kuantitatif,  dan  transkripsi  terbalik  PCR  (Anonim, 2011).
Metode  pendeteksian  cepat  dan  akurat  sangat  dibutuhkan  untuk  mencegah penyebaran virus dari balai pembenihan sampai ke areal tambak. Metode pengujian dengan multipleks  PCR  saat  ini  merupakan  metode  yang  paling  banyak  digunakan  untuk mendeteksi  virus-virus  tersebut.  Saat  ini  pengujian  multipleks  PCR  di  beberapa  negara  di dunia telah menunjukkan manfaat penggunaan pengujian mulipleks PCR dalam mendeteksi multiinfeksi  virus  yang  menyerang  udang.  Khawsak et  al (2008)  telah  menggunakan multipleks  RT-PCR  untuk  mendeteksi  6  jenis  virus  pada  udang  windu  dan  menunjukkan hasil  yang  sangat  akurat  dalam  mendeteksi  virus  tersebut.  Di  Indonesia,  teknik  ini  belum umum  digunakan.  Oleh  karena  itu,  pada  penelitian  ini  dilakukan  pengujian  deteksi  virus secara simultan dengan multipleks PCR.

## Tujuan dan Kegunaan
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  jenis  dan  prevalensi  virus  penyebab penyakit  kerdil  pada  pembenihan  udang  vaname  di  Kabupaten  Lamongan,  Jawa  Timur dengan menggunakan multipleks PCR, serta kondisi histolopatogis benih udang windu.
Manfaat  dan  kegunaan  penelitian  ini  adalah  sebagai  informasi  jenis  dan  prevalensi virus  yang  berasosiasi  dengan  penyakit  kerdil  pada  benih  udang  windu  untuk  digunakan sebagai  langkah  pengendalian  virus  tersebut  misalnya  rekomendasi  kebijakan  sertifikasi benih dan penggunaan probiotik.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Sampling  dilakukan  di  empat  lokasi  panti  pembenihan  udang  windu  di  Kabupaten Lamongan,  Jawa  Timur.  Pengamatan  sampel  dengan  multipleks  PCR  dan  histopatologi dilakukan di Laboratorium Parasit dan Penyakit Ikan Universitas Airlangga Surabaya.

## Alat dan Bahan
Peralatan dan bahan yang digunakan dalam penelitian ini dapat dilihat pada tabel 1 dan 2 sebagai berikut:
Tabel 1. Peralatan yang Digunakan

## dalam Penelitian
No. Alat Fungsi 1 Micropipet Untuk memindahkan secara akurat suatu larutan/cairan dalam volume kecil. 2 Sentrifugator Untuk memutar sampel dalam kecepatan tinggi 3 Alat elektroforesis Untuk memisahkan segmen DNA berdasarkan aliran listrik 4 Vortex mixer Untuk mencampur larutan dalam proses ekstraksi DNA 5 Waterbath with shaker Untuk inkubasi sesuai temperature yang diinginkan
6 Tabung eppendorf Untuk mengekstrak DNA 7 Tabung koleksi Untuk mengumpulkan hasil ekstak DNA 8 Thermalcycler Untuk mengaplifikasi segmen DNA
9 UV iluminator Untuk memvisualisasi  virus yang terdeteksi 10 Deck glass Untuk mengalas jaringan 11 Mikrotom Untuk memotong jaringan 12 Mikroskop Untuk mengamati jaringan 13 Tabung PCR Untuk Prosedur PCR Tabel 2. Bahan-bahan yang Digunakan dalam Penelitian No. alat Fungsi 1 Ethanol Untuk menghilangkan air dalam jaringan 3 Larutan Davidson Untuk memfiksasi jaringan 4 Proteinase K Untuk melarutkan Protein 5 Qia Amp Kit (Qiagen) Untuk ekstraksi DNA
6 Hematoxylin/eosin Untuk mewarnai jaringan 7 Paraffin Untuk menginfiltrasi jaringan agar dapat dipotong menjadi ketebalan tertentu 8 Master mix Komposisi PCR yang terdiri atas dNTP, buffer, dan enzim 9 Coral load Membantu menstabilkan tamplate DNA saat  running elektroforesis 10 Primer Untuk mencocokkan DNA virus dengan template DNA sampel

## Pengumpulan Sampel
Udang  sampel  adalah  benih  udang  vaname  yang  siap  ditebar  atau  dijual  ke  petani tambak dari 4 panti pembenihan di Kabupaten Lamongan yang terbagi atas 3 Hatchery (A, B, C) dan 1 Backyard (D). Jumlah sampel yang diambil sebanyak 300 ekor dari setiap kolam pembenihan udang stadia PL 12-14. Selanjutnya sampel dibawa ke laboratorium kemudian dilakukan  pengacakan  secara  bertingkat  yaitu  300  ekor  dibagi  ke  dalam  3  sub  sampel masing-masing 100 ekor dan dari 100 ekor kemudian diambil 5 ekor secara acak setiap sub sampel  untuk  dilakukan ekstraksi.  Setiap  5  ekor  dari  sub  sampel  digabung  untuk  dijadikan sebagai 1 sampel ekstrak. Jumlah sampel ekstrak setiap pembenihan adalah 5 tabung.

## Ekstraksi DNA
Deteksi keberadaan virus MBV, IHHNV, dan HPV dilakukan dengan terlebih dahulu melakukan  ekstraksi  DNA  dari  udang  dan  selanjutnya  dilakukan  amplifikasi  DNA  dengan menggunakan  teknik  M-PCR.  Ekstraksi  DNA  dilakukan  dengan  terlebih  dahulu  menggerus seluruh  bagian  tubuh  udang  sampai  halus.Selanjutnya  ekstraksi  DNA  dilakukan  dengan menggunakan  kit  qiagen  DNA  mini  kit  menggunakan  protokol  untuk  tissues.  Secara berurutan ekstraksi DNA dilakukan dengan prosedur sebagai berikut :
1.   Membersihkan  sampel  udang  yang  telah  difiksasi  dengan  alkohol  70  %  beberapa  kali kemudian menggerus sampel sampai hancur
2.   Mengambil  3  buah  tabung  mikro  ( microtube )  1,5  mL  dan  menambahkan  larutan  ATL sebanyak 180 µL.
3.   Meletakkan sampel dalam 1 buah tabung mikro ( microtube ) 1,5 mL tersebut.
4.   Selanjutnya  menambahkan  larutan  proteinase  K  sebanyak  200  µL  kedalam  tabung, kemudian divorteks lalu melakukan sentrifus cepat.
5.   Kemudian  menginkubasi  tabung  pada  suhu  56 o C  selama  semalam  atau  3  jam tergantung  jenis  jaringan.  Dalam  kasus  inkubasi  selama  3  jam  sebaiknya  melakukan vorteks setiap selang 1 jam untuk menjamin bahwa jaringan terlisis dengan sempurna.
6.   Setelah  inkubasi  selanjutnya  melakukan  sentrifus  cepat  sehingga  seluruh  cairan  yang melengket  pada  dinding  tabung  akan  menuju  ke  dasar  tabung,  kemudian  supernatant dibuang.
7.   Menambahkan  larutan  200  µL  buffer  Al,  memvortex  larutan  selama  15  detik,  lalu menginkubasi larutan pada suhu 70 o C selama 10 menit. Kemudian melakukan sentrifus cepat dan membuang supernatant
8.   Selanjutnya menambahkan 200   µL ethanol 99,5 % (ethanol absolut) 9.   Memindahkan  larutan  dari  tabung  mikro  ( microtube )  pada  QIAamp  mini  spin  kolom (dalam  2  mL  tabung  koleksi),  pada  saat  memindahkan  larutan  agar  tidak  menyentuh dinding  tabung.  Menutup  penutup  tabung  dan  melakukan  sentrifus  pada  8000  rpm selama  1  menit,  meletakkan  QIAamp  kolom  pada  tabung  koleksi  yang  baru  dan membuang tabung koleksi yang sudah mengandung filtrate.
10. Menambahkan 500 µL buffer AW1 tanpa menyentuh dinding tabung, menutup penutup, lalu melakukan sentrifus 8000 rpm selama 1 menit, kemudian meletakkan kembali kolom pada  tabung  koleksi  yang  baru  dan  tabung  koleksi  yang  mengandung  filtrate  lalu dibuang.
11. Menambahkan  500  µL  buffer  AW  2  pada  column  tanpa  menyentuh  pinggir  tabung, metutup tabung lalu melakukan sentrifus pada 1400 rpm selama 3 menit
12. Membuang  filtrate  lalu  menempatkan  kembali  kolom  pada  tabung  koleksi  yang  sama, lalu melakukan sentifuskembali pada 1400 rpm selama 1 menit.
13. Selanjutnya  meletakkan  QIAamp  kolom  pada  tabung  mikro  ( microtube )  1,5  mL  dan menambahkan  buffer  AE  sebanyak  100  µL,  menginkubasi  pada  suhu  kamar  selama  1 menit, lalu melakukan sentrifus pada 8000 rpm selama 1 menit
14. Mengulangi langkah 13 dengan menambahkan lagi larutan buffer  AE sebanyak 100 µL pada tabung yang sama, lalu diinkubasi selama 1 menit dan selanjutnya disentrifus pada 8000 rpm selama 1 menit. Total larutan DNA yang diperoleh adalah 200 µL.
15. Menyimpan hasil ekstrak DNA pada suhu -20 o C sebelum digunakan.

## Amplifikasi DNA
Amplifikasi  DNA  dengan  teknik  M-PCR  dilakukan  dengan  komposisi,  primer,  dan kondisi PCR sebagai berikut:

## Komposisi M-PCR
 Master mix 12,5  Primer 0,8 X (3 psg)  Template DNA 2,0  MiliQ 3,2  Coral Land 2,5 Jumlah 25 µL

## Kondisi PCR
Proses Suhu Lama  Predenaturasi 94 C 10 ’  Denaturasi 94 C 30 ’  Annealing 56 C 30 ’’  Extension 72 C 1 ’  Final Extension 72 C
5 ’
 Siklus PCR 35 Siklus

## Elektroforesis

## Persiapan gel agarose.
Agarose  ditimbang  sesuai  dengan  keperluan,  kemudian  dilarutkan  dalam  larutan TAE  1  x.  Dalam  penelitian  ini  konsentrasi  agarose  yang  digunakan  adalah  1,5%.  Dengan menggunakan  pemanas  (hotplate)  agarose  dilarutkan  sampai  mendidih  dan  setelah mendidih  dibiarkan  selama kurang  lebih  25  menit  sampai  suhunya  sekitar  50 o C,  kemudian dicetak  dalam  tray  agarose  yang  telah  dilengkapi  dengan  sisir  untuk  membentuk  sumur- sumur gel. Setelah agarose dingin, dengan sangat hati-hati sisir tray diangkat kemudian gel dimasukkan  kedalam  elektroforesis  apparatus  yang  telah  diisi  dengan  TAE  1  x  sebagai buffer elektroforesis.
Running elektroforesis .
Untuk  mengetahui  apakah  suatu  sampel  terinfeksi  dengan  virus  (MBV,  IHHNV, HPV),  maka  hasil  PCR  sebanyak  10  µL  di- running dalam  gel  elektroforesis  mini  bersama- sama  dengan  DNA  marker  100bp.  Setelah  semua  hasil  PCR  diinjeksikan  kedalam  sumur- sumur  gel  elektroforesis,  selanjutnya  elektroforesis  dijalankan  dengan  kondisi  100  volt, selama 45 menit.

## Visualisasi DNA
Gel  hasil  elektroforesis  direndam  dalam  larutan ethidium  bromida (konsentrasi  1 mg/mL) selama 10 – 15 menit. Selanjutnya gel dicuci dengan akuadest selama 5 – 10 menit. Untuk  mengetahui  ada  tidaknya  infeksi  HPV,  IHHNV  dan  MBV  terhadap  sampel-sampel yang dideteksi maka gel hasil elektroforesis diamati menggunakan uv transilluminator yang sekaligus dilakukan pengambilan foto.

## Parameter Penelitian

## Prevalensi Virus
Tingkat  infeksi  virus  dinyatakan  dalam  prevalensi,  dihitung  dengan  petunjuk Fernando et.al (1972) sebagai berikut:
Dimana :
Prev  : Persentase udang yang terserang virus (%) N : Jumlah sampel yang terinfeksi virus (ekor) N : Jumlah sampel yang diamati (ekor)

## Histopatologi
Histopatologi  udang  yang  terinfeksi  virus  diketahui  dari  kondisi  histologi  seperti hypertropeid nukleat, respon eosinofilik atau basofilik jaringan (Lightner, 1996).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Amplifikasi DNA
Berdasarkan  hasil  pengujian  menggunakan  teknik  multipleks  PCR  ( Polymerase chain  reaction )  di  Laboratorium  Parasit  Dan  Penyakit  Ikan  Jurusan  Perikanan  terhadap sampel benih udang windu dari 4 lokasi pembenihan di Kabupaten Takalar, diperoleh hasil bahwa  benih  udang  terinfeksi  oleh  dua  jenis  virus  MSGS  yaitu  virus  MBV  dan  IHHNV. Berikut contoh gambar visualisasi DNA sampel yang terinfeksi virus tersebut:
M     1      2      3      4     5     6    7
Gambar 5. Visualisasi DNA hasil M-
PCR dari sampel B dan C
Keterangan: M (Marker); Lane 1-7 = + MBV; Lane 3, 5, 6, 7 = + IHHNV
Gambar di atas menunjukkan visualisasi DNA dari 7 buah sampel pengamatan yang terdiri  atas  3  buah  sampel  lokasi  B  dan  4  buah  sampel  lokasi  C.  Pada  visualisasi  DNA  di atas, pita DNA tampak menunjukkan keberadaan virus MBV dan virus IHHNV yang berada pada  ukuran  305  bp  dan  302  bp,  sedangkan  pita  DNA  virus  HPV  dengan  ukuran  659  bp tidak  tampak  pada  visualisasi  DNA  di  atas  maupun  visualisasi  DNA  sampel  lainnya  dari empat lokasi pembenihan udang vaname di Kabupaten Lamongan.
Meskipun  pita  DNA  virus  HPV  tidak  tampak,  tapi  kemungkinan  keberadaan  virus tersebut masih besar.  Pita DNA virus HPV yang tidak tampak bisa disebabkan kondisi dan komposisi  PCR  yang  belum  optimal  misalnya  suhu  atau  waktu  annealing  yang  belum optimal  atau  kombinasi  ketiga  pasangan  primer  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  tidak cocok.
Teknik  multipleks  PCR  yang  digunakan  dalam  pendeteksian  keberadaan  virus sangat berperan dalam melakukan pendeteksian dini dan cepat terhadap keberadaan lebih dari  satu  virus  yang  menyerang  benih  udang  yang  diteliti.Deteksi  dini  dan  cepat  pada sampel membantu dalam penanganan dan pengendalian virus yang tepat.
Saat ini, pengujian tercepat dan sensitif dalam mendeteksi asosiasi virus penyebab penyakit kerdil pada benih udang windu adalah dengan menggunakan teknologi polymerase chain  reaction  (PCR)  yang  memerlukan  waktu  kurang  lebih  3  jam  hingga  selesai.  Namun, pengujian kromatografik juga telah dikenalkan saat ini. Meskipun tidak sepeka metode PCR, metode tersebut sangat spesifik dan mudah digunakan (Flegel, 2006).
1000bp 500 bp 100 bp 305 bp 302 bp

## Prevalensi Virus
Berdasarkan hasil visualisasi DNA virus yang ditemukan pada semua sampel dari 4 lokasi  pembenihan  udang  windu  di  Kabupaten  Lamongan,  dilakukan  penghitungan  tingkat prevalensi virus dengan hasil seperti pada tabel 3.
Tabel 3.  Prevalensi Virus dari 4 Lokasi Pembenihan di Kabupaten Situbondo Lokasi Pem benihan Jumlah sampel Positif MBV Prev. MBV (%) Positif IHVHN Prev. IHHNV (%) Positif HPV Prev. HPV (%) A 5 4 80 0 0 0 0
B 5 5 100 4 80 0 0
C 5 5 100 3 60 0 0 D 5 5 100 3 60 0 0
Rata- rata
95 % 50 % 0 %
Dari  tabel  di  atas,  diketahui  bahwa  tingkat  prevalensi  virus  MBV  di  Kabupaten Situbondo adalah yang tertinggi yaitu 95 % sedangkan tingkat prevalensi virus HPV adalah yang  terendah  yaitu  0%  karena  tidak  ditemukannya  virus  tersebut  pada  benih  yang  diteliti berdasarkan  hasil  visualisasi  DNA  virus.  Tabel  di  atas  menunjukkan  secara  keseluruhan bahwa panti benih (Hatchery dan Backyard) di Kabupaten  Lamongan hanya terjangkit oleh virus MBV dan IHHNV, sedangkan keberadaan virus HPV tidak ditemukan pada benih yang diteliti.
Prevalensi  virus  MBV  sebesar  95%  adalah  yang  tertinggi  disebabkan  karena  virus MBV  merupakan  Baculovirus  tipe  A  yang  mengandung  DNA  stranded  ganda  sebagai  tipe asam  nukleatnya  sehingga  multiplikasi  DNA-nya  lebih  banyak  (Lightner,  1996).  Selain  itu, tingginya tingkat prevalensi virus sangat dipengaruhi oleh tingkat kepadatan benih di kolam pembenihan.  Dari  informasi  yang  diperoleh  di  lapangan,  terdapat  3  Panti  benih  di Kabupaten Lamongan yang hanya memiliki satu kolam pembenihan untuk setiap stadia post larva  yang  dipelihara,  sehingga  mengakibatkan  penumpukan  benih  udang  dan meningkatkan  terjadinya  penyebaran  virus  yang  cepat.  Oleh  karena  itu,  berdasarkan penghitungan prevalensi, juga ditemukan keberadaan virus IHHNV yang cukup besar yaitu 45 %.
Walaupun  tidak  mematikan  inangnya,  MBV  menghambat  pertumbuhan  udang (Flegel  and  Pasharawipas,  1998).  Dari  aspek  patologis,  gangguan  pertumbuhan  udang terkait  dengan  gangguan  pada  sistem  pencernaan  dan  metabolisme.  Sistem  pencernaan memiliki  organ-organ  bagian  terkait.  Organ-organ  pencernaan  udang  yang  penting  adalah Hepatopankreas  (HP)  dan  perut  bagian  tengah  (mid  gut  atau  MG)  sebab  pada  bagian- bagian  ini  berlangsung  pencernaan  makanan  dan  penyerapan  nutrisi  oleh  udang  (Vogt, 1992).  Oleh  sebab  itu,  benih  memiliki  kerentanan  yang  sama  untuk  terjangkit  virus  MBV karena pada stadia post larva udang memerlukan penyerapan nutrisi dan pencernaan yang optimal.
Prevalensi  virus  HPV  sebesar  0%  (tidak  ditemukan)  disebabkan  kondisi  dan komposisi  PCR  yang  belum  optimal  misalnya  suhu  atau  waktu  annealing  yang  belum optimal  atau  kombinasi  ketiga  pasangan  primer  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  tidak cocok.

## Histopatologi
Berdasarkan  pengamatan  histopatologi  yang  dilakukan  terhadap  sampel  benih udang  windu  di  panti-panti  benih  Kabupaten  Takalar,  didapatkan  sebuah  gambar mikroskopis  yang  sesuai  dengan  ciri  bentuk  infeksi  virus  MBV,  IHHNV,  dan  HPV  yang ditemukan pada sampel D (Gambar 6) sebagai berikut:
Gambar 6.  Gambar histopalogis infeksi virus MBV,
IHHNV, dan   HPV yang ditemukan
Pembesaran1000 X, H & E)
Gambar  di  atas  menunjukkan  suatu  bentuk  occlusion  body  dari  virus  MBV  pada jaringan benih udang yang diambil dari sampel D. Sesuai tingginya tingkat prevalensi virus MBV  pada  sampel  D,  virus  telah  tampak  menyebar  pada  hampir  keseluruhan  jaringan atas.hepatopankreas benih udang di
Virus  MBV  membentuk  badan  oklusi  (Occlusion  body)  yang  berbentuk  elips  dan berwarna merah jambu (eosinofilik) karena pewarnaan Hematoxylin-Eosin (H&E). kepekatan warna  dan  diameter  badan  oklusi  tersebut  bervariasi  tergantung  tahap  perkembangan infeksi.  Semakin  tinggi  tahap  infeksi  MBV,  semakin  pekat  warna  dan    semakin  besar diameter  badan  oklusinya  (Lightner, et  al 1983  dan  Dubrovsky et  al ,  1988).  Pada pengambilan gambar secara photomicrograph yang pernah dilakukan pada sampel udang vaname di Thailand dapat dilihat tingkatan infeksi virus MBV seperti gambar di bawah ini:
Gambar 7. Photomicrograph tingkat infeksi virus MBV (Flegel,
2006)
Pada gambar di atas, bisa dilihat nucleus yang terinfeksi MBV pada tingkat awal dan nucleus  yang  terinfeksi  pada  tingkat  akhir.Jika  dibandingkan  dengan  melihat  hasil  gambar mikroskopis  yang  diperoleh  maka  dapat  disimpulkan  bahwa  benih  udang  telah  tersinfeksi virus MBV pada tahap yang tinggi.
Selain virus MBV, keberadaan Virus IHHNV juga  tampak pada gambar histologis di atas. Virus IHHNV dapat dikenali dengan melihat ciri occlusion body yang berwarna merah jambu.  Di  dalam  occlusion  body  virus  IHHNV,  jugaterdapat  inclusion  body  yang  berwarna merah jambu sehingga terdapat 2 buah badan oklusi pada nucleus sel yang terserang virus IHHNV tersebut
Gambar 8. Infeksi IHHNV pada   nukleus antennal gland   udang windu (Flegel,2006).
Gambar  di  atas  menunjukkan  nucleus  dari  sel  yang  terinfeksi  virus  IHHNV  pada organ  antennal  gland  udang  vaname.Gambar  diambil  dari  udang  vaname  yang  memiliki bentuk  organ  antenna  yang  mengalami  perubahan  bentuk  tidak  normal.  Oleh  karena  itu ditemukannya virus IHHNV pada benih udang vanameakan sangat merugikan apabila tidak dideteksi dan ditangani lebih awal.
Pada gambar histopalogis juga bisa dilihat keberadaan infeksi virus HPV yang tidak ditemukan melalui pengujian menggunakan teknik multipleks PCR. Bentuk infeksi virus HPV ditunjukkan  oleh  nucleus  yang  berwarna  ungu  (bersifat  basofilik)  seperti  gambar  di  bawah ini:
Gambar 9. Histopatologi virus HPV pada hepatopankreas udang di Thailand (Flegel,  2006)
Virus HPV di atas ditemukan pada sel organ hepatopankreas sampel udang vaname di  Thailand.  Pada  tahap  awal  infeksi  virus  HPV,  nuclei  terlihat  masih  berukuran  normal namun  seiring  meningkatnya  tahap  infeksi  virus,  nuclei  terlihat  menjadi  lebih  besar.Virus HPV  pada  organ  hepatopankreas  berdampak  pertumbuhan  lambat  pada  udang  sehingga menyebabkan benih udang tidak tumbuh secara normal.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan  di  Laboratorium  Parasit  Dan  Penyakit  Ikan diperoleh kesimpulan sebagai berikut:
1.  Virus yang ditemukan melalui pengujian menggunakan multipleks PCR yang menjadi penyebab penyakit kerdil pada benih udang windu di panti pembenihan Kab. Takalar adalah virus MBV dan virus IHHNV.
2.  Prevalensi masing-masing virus adalah MBV sebesar 95 %, virus IHHNV sebesar 50 %, sedangkan virus HPV tidak ditemukan.
3.  Pengujian  histopatologis  menunjukkan  keberadaan  infeksi  virus  MBV,  IHHNV,  dan HPV pada sampel benih udang windu dari lokasi pembenihan di Kabupaten Takalar.

## Saran
Analisa  keberadaan  virus  penyebab  penyakit  kerdil  menggunakan  teknik  multipleks PCR  sangat  bermanfaat  untuk  mendeteksi  keberadaan  virus  tersebut.  Oleh  karena  itu, pengaplikasian  metode  ini  akan  sangat  baik  apabila  dilakukan  di    semua  usaha  budidaya udang vaname di Kabupaten Lamongan.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2011. Pengelolaan Kesehatan Ikan Budidaya Laut . Balai Budidaya Laut Lampung, Direktorat  Jenderal  Perikanan  Budidaya,  Departemen  Kelautan  dan  Perikanan. Jakarta.
Chayaburakul,  K.,  Nash,  G.,  Pratanpipat,  P.,  Sriurairatana,  S.,  Withyachumnarnkul,  B., 2004. Multiple  pathogens  founding  rowth - retarded  black  tiger  shrimp Penaeus monodon cultivated in Thailand . Dis. Aquat. Org. 60: 89 –96.
Flegel  T.W,  and  Pasharawipas,  T.  1988. Active  viral  accommodation:  a  new  concept  for crustacean  response  to  viralpathogen  in  advances  in  shrimpbiotechnology (editor: T.W.  Flegel)  national  center  for  genetic  engineering  and  biotechnology,  Bangkok: 245-250
Flegel,  T.W.,  2006. Detection  of  major  penaeid  shrimp  viruses  in  Asia,  a  historical perspective with emphasisonThailand . Aquaculture 258: 1-33.
Khawsak,  P.,  Deesukon,  W.,  Chaivisutangkura,  P.,  and  Sukhumsirichart,  W.  2008. Multipleks  RT-PCR  Assay  to  Simultaneous  detection  of  six  viruses  of  penaeid shrimp. Molecular and celluler probes . 22:177-183