Reduksi Udema Kaki Mencit ( Mus musculus ) Terinduksi Karagenan Setelah Pemberian Ekstrak Daruju ( Acanthus ilicifolius L.)
Edema Reduction of Mices Feet ( Mus musculus ) Induced Carrageenan After Giving Daruju Extracts ( Acanthus ilicifolius L.)
Darul Ikhwan, Octavian Rachmadi, Annisa Dyah Astari Putri, Ari Widiyantoro*
Program Studi Kimia FMIPA Universitas Tanjungpura, Pontianak, Indonesia *E-mail :ari.widiyantoro@chemistry.untan.ac.id
Received: 27 April 2020; Accepted: 24 Desember 2020; Published: 31 Desember 2020

## Abstrak
Acanthus  ilicifolius L.  merupakan  salah  satu  tanaman  mangrove  yang  banyak  mengandung  metabolit sekunder  yang  potensial  sebagai  bahan  baku  obat.  Masyarakat  Kabupaten  Sambas  Provinsi  Kalimantan Barat  menggunakan  ekstrak  daun  daruju  untuk  mengatasi  rasa  nyeri  pada  pegal-pegal  dan  bengkak. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi ekstrak daun daruju berupa reduksi udema kaki mencit ( Mus musculus) yang diinduksi karagenan setelah pemberian ekstrak daun daruju. Metode yang digunakan berupa ekstraksi secara maserasi dan partisi dilanjutkan dengan uji fitokimia dari ekstrak kasar dan fraksi-fraksi hasil partisi. Selanjutnya ekstrak kasar dan fraksi hasil partisi dilakukan uji reduksi udema terhadap  kaki  mencit  yang  diinduksi  karagenan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  fraksi  etil  asetat memiliki  aktivitas  antiinflamasi  terbaik  karena  mampu  menurunkan  udema  kaki  mencit  terinduksi karagenan sebesar 75% pada dosis 750 mg/kg BB. Fraksi etil asetat memiliki kemampuan mereduksi udema karena mengandung senyawa golongan flavonoid dan terpenoid.
Kata Kunci : Achantus ilicifolius L . , udema, karagenan, antiinflamasi

## Abstract
Acanthus ilicifolius L. is one of the mangrove plants that contain a lot of potential secondary metabolites of medicinal raw materials. People of Sambas Regency of West Kalimantan Province uses leaves extract daruju  to  overcome  the  pain  in  the  stiff  and  swollen.  The  objective  of  this  study  was  to  know  the antiinflammatory activity of leaves extract of daruju, in the form of edema reduction of mices feet induced carrageenan.  The  method  used  in  the  form  of  maceration  and  partition  extraction  followed  by phytochemical test of crude extract and the fraction of result of partition. Furthermore, the crude extract and the fraction of the result of the partition were tested for the reduction of edema mices feet induced carrageenan. The results showed that ethyl acetate fraction had the best antiinflammatory activity because it was able to decrease the edema of mices feet by 75% at 750 mg / kg BW. Ethyl acetate fraction has the ability to reduce edema because it contains group compounds of flavonoid and terpenoid.
Keywords : Achantus ilicifolius L., Edema, Carrageenan, Antiinflamation

## PENDAHULUAN
Masyarakat Kabupaten Sambas Provinsi Kalimantan  Barat  banyak  menggunakan ekstrak  daun  daruju  ( Acanthus  ilicifolius L.) untuk  mengobati  rasa  nyeri  pada  kulit  dan kaki  yang  bengkak.  Menurut  Amer et al .(2004)  genus Acanthus mengandung senyawa  golongan  flavonoid,  terpenoid  dan alkaloid.  Senyawa  golongan  flavonoid  dan terpenoid ini mempunyai kadar paling banyak pada bagian daun tanaman daruju.
Sejauh ini bagian akar, batang, dan daun digunakan  untuk  mengobati  penyakit  kulit dan  penyakit  dalam  yang  dilakukan  oleh masyarakat secara tradisional. Oleh karena itu banyak sekali penelitian yang mulai mengeksplorasi  aktivitas  biologik  ekstrak daun,  akar  dan  batang  dari  genus Acanthus untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  dan aktivitas  farmakologinya.  Hal  ini  dilakukan agar dapat dikembangkan untuk peningkatan kesehatan masyarakat.
Manfaat  lain  tanaman  daruju  secara literatur  menunjukkan  mampu  mengobati luka  terkena  benda  beracun,  cacingan,  bisul, sakit perut, asma, katarak, diabetes, rematik, wasir, radang gigi, migren, diabetes, hepatitis, HIV/AIDS dan herpes, serta dapat mengobati kanker.  Kandungan  senyawa  metabolit sekunder  selain  flavonoid  dan  terpenoid adalah alkaloid, saponin dan steroid (Amer et al .,  2004;  Simplice et  al .,  2008;  Andriani et al .,  2020;  Agoramoothy et  al .,  2008; Chakraborty et al ., 2007, Avijit et al ., 2012). Kandungan  metabolit  sekunder  tersebut mampu memberikan aktivitas biologik dalam berbagai  uji  antioksidan,  anti  HIV  dan antikanker.
Saranya et  al .,  2015  telah  mereview beberapa  aktivitas  biologis  yang  ditunjukkan oleh  semua  bagian  dari  tumbuhan  daruju. Daun  daruju  menunjukkan  aktivitas  sebagai antimikroba, hepatoprotektor dan antiinflamasi.  Bagian  akar  menunjukkan aktivitas  sebagai  antioksidan  sedangkan bagian  bunga  menunjukkan  aktivitas  sebagai antioksidan  dan  sitotoksik.  Ekstrak  metanol seluruh  gabungan  bagian  tanaman  daruju menunjukkan aktivitas antikanker leher rahim terhadap  sel  HeLa.  Namun  belum  ada informasi ilmiah tentang aktivitas antiinflamasi  ekstrak  daruju  yang  mereduksi udema  kaki  mencit  setelah  pemberian karagenan terutama untuk ekstrak daun daruju yang  tumbuh  di  kawasan  pantai  dan  sungai sekitar  tanah  gambut  di  Kalimantan  Barat. Kondisi geografis dan tanah akan mempengaruhi kadar metabolit sekunder dan aktivitas  biologiknya.  Berdasarkan  uraian  di atas  maka  penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui dosis ekstrak daruju yang mampu mereduksi udema kaki mencit yang diindukasi karagenan.

## METODE PENELITIAN Ekstraksi dan Fraksinasi
Sampel  daun  daruju  diambil  dari  kawasan pantai  sekitar  Kabupaten  Sambas  Provinsi Kalimantan  Barat,  Indonesia.  Sampel  daun daruju  sebanyak  5  kg  basah  dibersihkan  lalu
dikeringanginkan  pada  suhu  kamar  selama beberapa hari. Setelah kering dengan kadar air <10%  daun  dipotong-potong  lalu  diblender dan  diayak  dengan  ukuran  60  mesh.  Serbuk daun daruju sebanyak 2 kg dimaserasi dengan metanol  80%  (teknis  yang  telah  diredistilasi) pada  suhu  kamar  selama  24  jam.  Ekstrak disaring  dan  filtratnya  dikumpulkan.  Residu dimaserasi kembali dengan cara menambahkan  metanol  yang  baru  (diulang sampai  3x24  jam  sampai  jernih).  Seluruh filtrat  dikumpulkan  dan  dipekatkan  dengan evaporator,  selanjutnya  ditimbang  untuk mengetahui rendemennya.

## Pemisahan
Ekstrak metanol kental selanjutnya dilarutkan kembali  dengan  metanol  untuk  dilakukan pemisahan  secara  partisi  dengan n -heksana, diklorometana  dan  etil  asetat.  Partisi  dengan n -heksana  dilakukan  untuk  memisahkan lemak dan berbagai  metabolit sekunder  yang bersifat nonpolar. Fraksi n- heksana, diklorometana,  etil  asetat  dan  metanol selanjutnya  dipekatkan  dengan  evaporator. Selanjutnya  masing-masing  ekstrak  kental hasil partisi dilakukan skrining fitokimia dan uji reduksi udema kaki mencit yang diinduksi karagenan dengan alat plestimometer.

## Uji Fitokimia
Ekstrak metanol dan fraksi-fraksi hasil partisi dilakukan  skrining  metabolit  sekunder.  Uji dilakukan  secara  kromatografi  lapis  tipis dengan  penampak  noda  untuk  golongan fenolik,  flavonoid,  alkaloid,  terpenoid  dan steroid.  Uji  fitokimia  dengan  metode  KLT dilakukan  dengan  cara  mencari  eluen  yang terbaik  yang  dapat  memisahkan  senyawa- senyawa  dalam  ekstrak  uji.  Pemisahan  yang terbaik jika eluen tersebut mampu memunculkan  jumlah  spot  yang  banyak  dan terpisah  dengan  baik  antar  spotnya.  Eluen terbaik ini digunakan untuk uji fitokimia pada ekstrak  pada  semua  golongan  metabolit sekunder.  Setelah  itu  setiap  KLT  disemprot dengan reagen uji fitokimia.
Uji  Reduksi  Udema  Kaki  Mencit  ( Mus musculus ) Setelah Induksi Karagenan
Uji  aktivitas  antiinflamasi  dilakukan berdasarkan pada kemampuan ekstrak mengurangi  atau  menekan  derajat  udema yang  diinduksi  pada  hewan  percobaan. Induksi  udema  dilakukan  pada  kaki  mencit dengan cara penyuntikan suspensi karagenan intraplantar.  Ekstrak/fraksi  diberikan  secara oral  1  jam  sebelum  penyuntikan  karagenan. Ukuran udema kaki diukur dengan alat yang bekerja  berdasarkan  hukum  Archimedes (pletismometer). Aktivitas antiinflamasi larutan  uji  ditunjukkan  oleh  kemampuannya mengurangi udema yang diinduksi pada kaki mencit..
Sebelum  perlakuan  mencit  jantan  yang  akan dijadikan  hewan  coba  dilakukan  aklimatisasi terlebih dahulu selama 2 minggu dengan cara ditempatkan pada  sebuah  kandang  kelompok berupa  bak  plastik.  Selama  diaklimatisasi mencit diberi makan berupa pellet dan minum ad libitum . Mencit jantan strain balbc umur 2- 3  bulan  dengan  bobot  badan  berkisar  antara 20-25  g,  dikelompokkan  dalam  kelompok- kelompok  tertentu,  masing-masing  5  ekor. Pada  kelompok  A  merupakan  kontrol  positif (indometasin)  dengan  dosis  50  mg/kg  BB, kelompok B, C dan D merupakan kelompok- kelompok  perlakuan  dengan  pemberian ekstrak hasil maserasi dan hasil partisi dengan dosis  masing-masing  250  mg/kg  BB,  500 mg/kg  BB  dan  750  mg/kg  BB.  Diusahakan berat  badan  antar  tikus  tidak  jauh  berbeda. Volume  telapak  kaki  kelompok  kontrol  dan kelompok  uji  dibandingkan  secara  statistik dengan uji t (taraf kepercayaan 95%) sehingga dapat  disimpulkan  apakah  perbedaan  yang diperoleh  bermakna.  Jika  bermakna  dihitung rata-rata  %  reduksi  radang  yang  terjadi  pada kelompok uji dengan rumus % reduksi radang = { (a-b)/a} x 100%. Dimana a dan b, berturut- turut  adalah  volume  rata-rata  telapak  kaki kelompok kontrol dan kelompok uji. Nilai % reduksi radang ini menunjukkan kemampuan obat uji menekan radang (aktivitas antiinflamasi)  dimana  peradangan  pada kelompok kontrol adalah 100%. Dosis efektif dari  obat  uji  adalah  dosis  obat  uji  yang memberikan reduksi radang sebesar 25% dari
radang pada kelompok kontrol (Audina et al ., 2018; Apridamayanti et al., 2018).
Ukuran radang pada masing-masing kaki mencit  dapat  pula  dihitung  terhadap  bagian kaki lainnya dari mencit yang sama sebelum penyuntikan karagenan. Perbandingan persentase  reduksi  radang  dilakukan  antara kelompok  kontrol  dengan  kelompok  uji. Pembengkakan  kaki  tikus  kontrol  positip harus  >  30  %  agar  hasil  dapat  digunakan dengan baik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil penelitian diperoleh sampel daun daruju basah mempunyai kadar air 53% tetapi  setelah  dikeringkan  menjadi  10% sehingga sampel mudah diserbukkan. Ekstraksi  dengan  maserasi  menghasilkan rendemen  ekstrak  kasar  metanol  15,11%. Partisi  ekstrak  kental  metanol  menghasilkan fraksi  metanol  20,15%,  fraksi  etil  asetat 45,67%,  fraksi  diklorometana  20,10%  dan fraksi n -heksana 13,07% serta sebagian kecil hilang  dalam  proses  pemisahan.  Ekstrak kental  metanol  dan  fraksi  hasil  partisi selanjutnya  dilakukan  skrining  fitokimia untuk  mengetahui  kandungan  metabolit sekundernya secara kualitatif (Tabel 1).
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Metanol dan Fraksi-Fraksi Hasil Partisi Daun Daruju
Sampel Fen Alk  Ter Fla Ste Ekstrak Metanol + + + + +
Fraksi Metanol + + _ + _ Fraksi Etil Asetat + + _ + _ Fraksi Diklorometana + + + + _
Fraksi n - Heksana _ _ + _ +
Keterangan  :  Fen  (Fenolik),  Alk  (Alkaloid), Ter  (Terpenoid),  Fla  (Flavonoid)  dan  Ste (Steroid).
Skrining  fitokimia  dilakukan  dengan metode  KLT.  Hal  ini  untuk  mengetahui distribusi golongan-golongan metabolit sekundernya melalui spot-spot KLT. Berdasarkan Tabel 1 terlihat bahwa golongan metabolit  sekunder  fenolik,  flavonoid  dan alkaloid  terdistribusi  pada  fraksi  semipolar dan  polar  sedangkan  golongan  metabolit sekunder  terpenoid  dan  steroid  terdistribusi pada fraksi semipolar dan nonpolar.
Untuk mengetahui aktivitas antiinflamasi ekstrak/fraksi daun daruju maka dilakukan uji reduksi  udema  terhadap  kaki  mencit  yang diinduksi  karagenan.  Pengujian  dilakukan pada  jam  ke-1,  ke-4  dan  ke-10  setelah pemberian ekstrak/fraksi. Pengujian dilakukan  pada  ekstrak  metanol  dan  seluruh fraksi  hasil  partisi.  Berdasarkan  hasil penelitian terlihat bahwa ekstrak metanol dan fraksi  etil  asetat  menunjukkan  aktivitas reduksi udema yang bagus. Hasil uji reduksi
udema kaki mencit setelah pemberian ekstrak metanol  dan  fraksi  etil  asetat  ditampilkan pada Gambar 1 dan 2.
Berdasarkan  Gambar  1  terlihat  bahwa ekstrak  metanol  daun  daruju  dalam  berbagai dosis  yaitu  variasi  dosis  (B)  250  mg/kg  BB, (C)  500  mg/kg  BB  dan  (D)  750  mg/kg  BB dengan  senyawa  pembanding  indometasin dengan  dosis  (A)  50  mg/kg  BB  mampu mereduksi udema kaki mencit yang diinduksi karagenan. Ekstrak metanol daun daruju  yang mengandung  metabolit  sekunder  golongan fenolik,  alkaloid,  flavonoid,  terpenoid  dan steroid (sesuai Tabel 1) menunjukkan aktivitas reduksi  udema  yang  baik  tetapi  masih  lebih rendah dari persentase kontrol positif.
Pada fraksi etil asetat dilakukan uji pada variasi  dosis  (B)  250  mg/kg  BB,  (C)  500 mg/kg  BB  dan  (D)  750  mg/kg  BB  dengan senyawa  pembanding  indometasin  dengan dosis (A) 50 mg/kg BB. Berdasarkan gambar
Gambar 1. Persentase reduksi radang kaki mencit setelah pemberian ekstrak metanol daruju
Gambar 2. Persentasi reduksi radang kaki mencit setelah pemberian fraksi etil asetat daruju
diketahui bahwa fraksi etil asetat mempunyai aktivitas  antiinflamasi  (mereduksi  udema kaki mencit yang diinduksi karagenan) paling bagus  diantara  ekstrak  kental  metanol  dan fraksi  hasil  partisi  lainnya..  Berdasarkan Gambar 2 terlihat bahwa dosis (D) 750 mg/kg BB  fraksi  etil  asetat  mempunyai  persentase reduksi lebih tinggi dari kontrol positif. Efek antiinflamasi  ini  masih  tergantung  dosis (Dewi et  al .,  2015).  Hal  ini  terkait  dengan kandungan senyawa metabolit sekunder yang terkandung  didalamnya  yaitu  flavonoid  dan terpenoid (Khotimah & Muhtadi, 2016). Efek antiinflamasi flavonoid didukung oleh aksinya  sebagai  antihistamin.  Flavonoid dapat  menghambat  pelepasan  histamin  dari sel mast. Flavonoid dapat menghambat  enzim c-AMP  fosfodiesterase  sehingga    kadar  c- AMP  dalam  sel  mast  meningkat,    dengan demikian  kalsium  dicegah  masuk    ke  dalam sel  yang  berarti  juga  mencegah    pelepasan histamine (Khotimah & Muhtadi, 2016; Santi, 2015). Selain itu, mekanisme flavonoid dalam menghambat  terjadinya  radang  melalui  dua cara  yaitu menghambat  asam arakidonat  dan sekresi  enzim  lisosom  dan  endothelial. Terhambatnya  pelepasan  asam  arakidonat dari sel inflamasi akan menyebabkan kurang tersedianya  subtrat  arakidonat  bagi  jalur siklooksigenase  dan  jalur  lipooksigenase (Audina et  al., 2018;  Andayani et  al .,  2018; Anggraeny et al ., 2016)
Mekanisme  kerja  golongan  senyawa flavonoid dan terpenoid mengikuti mekanisme  obat  antiinflamasi  nonsteroid. Fraksi  etil  asetat  memberikan  kemampuan reduksi  75%  pada  dosis  750  mg/kg  BB. Aktivitas  antiinflamasi  pada  ekstrak  metanol lebih rendah dibandingkan aktivitas antiinflamasi fraksi-fraksi hasil partisi, hal ini karena  efek  antagonis.  Mekanisme  kerja antiinflamasi  golongan  steroid  tidak  bisa bekerja  secara  bersama  dengan  golongan nonsteroid.
Kandungan  metabolit  sekunder  pada masing-masing  fraksi  dan  ekstrak    akan mempengaruhi  aktivitas  biologik  dari  fraksi atau  ekstrak  tersebut.  Kadar  metabolit sekunder  dari  setiap  tanaman  akan  berbeda tergantung  berbagai  faktor  seperti  faktor geografis, kondisi tanah, perlakuan saat tanam dan proses pascapanen.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  fraksi  etil  asetat  daun daruju dosis 750 mg/kg BB mampu mereduksi udema  kaki  mencit  ( Mus  musculus )  yang diinduksi  karagenan  secara  lebih  baik dibandingkan  ekstrak  kasar  dan  fraksi  hasil partisi  lainnya.  Kandungan  senyawa  yang diduga  memberikan  aktivitas  antiinflamasi adalah golongan flavonoid dan terpenoid.

## Daftar Pustaka
Agoramoorthy, G., Chen F.A., Venkatesalu, V., 2008, Evaluation of antioxidant polyphenols from selected mangrove plants of India, Asian J. Chem 2, 1311-1322
Amer, M.E., Shoer, M.I.A., Kader, M.S., 2004., Alkaloids and flavone acyl glycosides from Acanthus arboreus, J. Braz. Chem. Soc. 15, 262-266
Andayani,  D.,  Suprihartini,  E.,  Astuti,  M.  2018.  Efek  Antiinflmasi  Ekstrak  Etanol  Krokot (Portulaca oleracea L.) pada Udema Tikus yang Diinduksi Karagenin, J.Pharm. Sci. Clin. Res., 1, 43-49
Andriani, D., Revianti, S., Prananingrum, W. 2020. Identification of Compounds Isolated from Methanol Extract of Acanthus ilicifolius Leaves and Evaluation of Their Antifungal and Antioxidant Activity, Biodiversitas, 21(6), 2521-2525
Anggraeny, E.N.,Pramitaningastuti, A.S., 2016. Studi Uji Daya Antiinflamasi dan Antipiretik Ekstrak  Etanol  Daun  Lengkeng  (Dimocarpus  longan  Lour)  pada  Tikus  Jantan  (Rattus norvegicus) Galur Wistar, Jurnal Ilmiah Farmasi, 2 (2), 44-51
Apridamayanti,  P.,  Sanera,  F.,  Robiyanto,  R.2018.  Aktivitas  Antiinflamasi  Ekstrak  Etanol Daun Karas (Aquilaria malaccensis Lamk), Pharm.Sci.Res. 5(3), 152-158
Audina,  M.,  Yuliet,  Kaherati,  K.,  2018.  Efektivitas  Antiinflamasi  Ekstrak  Etanol  Daun Sumambu  (Hyptis  capitata  Jacq.)  pada  Tikus  Jantan  (Rattus  norvegicus  L.)  yang Diinduksi Karagenan, Biocelebes, 12 (2), 17-23
Avijit,  D., Sarkar, R., Howlader, S.I., Hamiduzzaman, Hossain,  M.A., 2012, Phytochemical screening  and  evaluation  of  antioxidant,  cytotoxic  and  antimicrobial  properties  of Acanthus ilicifolius (Acantaceae), Inter. Res. J. Pharm., 3 (8), 153-156
Chakraborty,  T.,  Bhuniya,  D.,  Chatterjee,  M.,  Rahaman,  M.,  Singha,  D.,  2007,  Acanthus ilicifolius  plant  extract  prevents  DNA  alterartions  in  a  transplantable  Ehrlich  ascites carcinoma-bearing murine model,  World J. Gastroenterology, 48, 6538-6548
Dewi,  A.A.A.T.S.,  Puspawati,  N.M.  Suarya,  P.  2015.  Aktivitas  Antiinflamasi  Ekstrak  Eter Kulit Batang Tenggulun (Protium javanicum Burm) Terhadap Edema pada Tikus Wistar yang Diinduksi dengan Karagenan, Jurnal Kimia, 9 (1), 13-19
Khotimah, S.N., Muhatdi, A., 2016. Review Artikel , Beberapa Tumbuhan yang Mengandung Senyawa Aktif Antiinflamasi, Farmaka, 14 (2), 28-40
Santi, T.D., 2015. Uji Toksisitas Akut dan Efek Antiinflamasi Ekstrak Metanol dan Ekstrak n- Heksana Daun Pepaya (Carica papaya L.), Pharm. Sci. Res., 2 (2), 101-114
Saranya,  A.,  Ramanathan  T.,  Selvarajan,  K.,  Kasavanarayanan,  Adam  A.,  2015,  Traditional Medicinal  uses,  chemical  constituents,  and  Biological  activties  of  Mangrove  Plant, Acanthus ilicifolius , a brief review, American-Eurasian, J. Agric. Environment., Sci., 15 (2), 243-250
Simplice, F.H., Paulin, N., Elvis, C., Acha, A.E. 2008., Protective effect of Acanthus montanus in carrageenan-induced models of local inflammation , inhibitory effect on nitric oxide (NO) production, Pharmacologyonline 2, 161-169.