ISSN-p : 1410-590x ISSN-e : 2614-0063
Studi Ex-Vivo, Efek Ekstrak Eurycoma longifolia Terstandar Pada Aktivitas Enzim Rosiglitazone N-Demetilase
Ex-Vivo Study, The Effect of Standardized Eurycoma longifolia Extract on The Enzyme Activity of Rosiglitazone N-Demethylase
Purwantiningsih 1* , Abas Hj Hussin 2 , Kit Lam Chan 3 1 Department of Pharmacology & Clinical Pharmacy, Faculty of Pharmacy, Universitas Gadjah Mada 2 Centre for Drug Research, Universiti Sains Malaysia,  11800 Penang, Malaysia 3 School of Pharmaceutical Sciences, Universiti Sains Malaysia, 11800 Penang, Malaysia
Corresponding author: Purwantiningsih: Email: purwantiningsih@ugm.ac.id Submitted: 04-08-2019 Revised: 16-08-2019 Accepted: 02-09-2019
ABSTRAK Eurycoma  longifolia  (E.  longifolia) atau  dikenal  dengan  sebutan  Pasak  Bumi  di  Indonesia, sudah digunakan secara luas khususnya untuk meningkatkan stamina pada pria. Penggunaan obat herbal dalam jangka panjang membuka peluang adanya pengaruh obat herbal pada metabolisme substansi lain. Penelitian ini bertujuan melihat pengaruh E. longifolia ekstrak pada metabolisme rosiglitazone setelah pemberian oral selama satu dan empat belas hari, serta efeknya terhadap berat badan tikus. Tikus uji dibagi menjadi dua kelompok, kelompok perlakuan satu hari (dibagi dalam 8 subkelompok dengan n = 6: I (kontrol), II hingga VIII (diberi perlakuan esktrak dengan dengan dosis 1 hingga 1000 mg/kg BB) dan 14 hari (tikus dibagi menjadi 4 subkelompok, n = 6:  I (kontrol), II hingga IV (diberi perlakuan esktrak dengan dosis 5, 25 dan 50 mg/kg BB). Pada akhir percobaan, hewan uji dikorbankan dan aktivitas rosiglitazone N-demetilase pada hepatosit ditentukan dengan mengukur jumlah formaldehida yang terbentuk pada 415 nm. Aktivitas rosiglitazone N-demetilase pada  seluruh  kelompok  dianalisis  dengan  analisis  varian  pola  searah  (ANOVA)  dan  Uji  Tukey (P<0,05).  Persentase  perubahan  berat  badan  pada  kelompok  perlakuan  14  hari  dibandingkan dengan kelompok kontrol. Hasil Penelitian menunjukkan, ada peningkatan signifikan pada aktivitas rosiglitazone N-demetilase setelah tikus diberi perlakuan ekstrak E. longifolia dosis 5 hingga 1000 mg/kgBB, tetapi tidak berbeda secara signifikan pada dosis 1 mg/kg BB bila dibandingkan dengan kontrol. Pada perlakuan selama 14 hari, tidak ada perbedaan signifikan antara kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol, baik aktivitas enzime rosiglitazone N-demetilase maupun berat badan tikus.
Kata kunci: Eurycoma longifolia; aktivitas rosiglitazone N-demetilase; tikus jantan

## ABSTRACT
Eurycoma longifolia (E. longifolia) or is known as Pasak Bumi in Indonesia, has been used widely, especially to increase stamina in men. The use of herbal medicines in the long run opens up the opportunities for the influence of herbal medicines on the metabolic process of other substances. This study aimed to evaluate the effect of E. longifolia extract on rosiglitazone metabolism after oral administration for one and fourteen days, and its effect on rat body weight. The rats were divided into two groups, group for one day treatment (divided into 8 subgroups with n = 6: I (control), II to VIII (were given extract at doses of 1 to 1000 mg/kg BW) and 14 days (rats divided into 4 subgroups, n = 6: I (control), II to IV (treated with extracts of doses 5, 25 and 50 mg/kg BW). At the end of the experiment, test animals were sacrificed and rosiglitazone N-demethylase activity in hepatocytes was determined by measuring the amount of formaldehide formed at 415 nm. The rosiglitazone N- demethylase activity in all groups was analyzed by analysis of  variance (ANOVA) and Tukey Test (P <0.05).  The  percentage  of  the  changing  in  the  body  weight  in  the  14  days  treatment  group  was compared  to  the  control  group.  The  results  showed  there  was  a  significant  increased  in  the rosiglitazone N-demethylase activity after rats were treated with E. longifolia extract at doses of 5 to 1000 mg/kg BW, but was not significantly different at a dose of 1 mg/kg BW when compared with control group. For the 14 days treatment, there was no significant difference between the treatment
group  and  the  control  group,  for  both  the  rosiglitazone  N-demethylase  enzyme  activity  or  the changed of rat body weight.
Keywords : Eurycoma longifolia; rosiglitazone N-demethylase activity; male rats
PENDAHULUAN Di  seluruh  dunia,  ada  banyak  jenis sediaan  obat  herbal  (Zhang et  al .,  2005). Berbagai  obat  tradisional  ada  yang  disiapkan menggunakan  bentuk  senyawa  terisolasi  atau preparat yang terdiri dari ekstrak utuh, ekstrak murni atau campuran senyawa yang diidentifikasi dari sumber alami, sebagai contoh ekstrak Eurycoma  Longifolia yang  digunakan untuk pengobatan disfungsi ereksi (DE) (Low & Tan, 2007; Drewes et al ., 2003). Eurycoma  longifolia Jack  ( E.  longifolia ) adalah salah satu tanaman obat tradisional yang banyak  digunakan  di  Asia  terutama  di Indonesia,  Vietnam  dan  Malaysia.  Saat  ini,  ada lebih  dari  200  produk E.  longifolia beredar  di pasar Malaysia dan sebagian besar dari produk ini  fokus  pada  efek  afrodisiak  (Bhat  &  Karim, 2010).  Akar E.  longifolia memiliki  banyak kandungan kimia seperti alkaloid
(Kanchanapoom et al ., 2001), quassinoid (Chan et al ., 1989), turunan squalene (Ang et al ., 2002), biphenylneolignan  (Morita et  al. ,  1992)  dan triterpen (Itokhawa et al ., 1992). Studi tentang E.  longifolia yang  telah  dilakukan  meliputi aktivitas  antiplasmodial  (Chan, et  al .,  2005) aktivitas  anti-schistosomal  dan  anti-parasit (Jiwajinda et al ., 2002), efek sitotoksik (Kardono et  al., 1991),  aktivitas  antipiretik  (Chan et  al ., 1995), efek apoptosis dalam sel HepG2 (Zakaria et al ., 2009) dan sebagai afrodisiak (Ang & Ngai, 2001; Ang & Lee, 2002; Ang et al ., 2003). Namun, masih  jarang  publikasi  yang  berkaitan  dengan interaksi obat herbal.
Berdasarkan studi sebelumnya
dilaporkan  bahwa  ekstrak  akar E.  longifolia
(EAE) dapat mempengaruhi metabolisme fase I baik aminopirin maupun rosiglitazone, percobaan dilakukan secara in-vitro menggunakan  hepatosit  tikus  galur  Sprague Dewley (SD) jantan dan
betina (Purwantiningsih et al., 2010; 2011). Penelitian lain juga telah melaporkan pengaruh EAE pada metabolisme aminopirin dan rosiglitazone pada tingkat molekuler (Purwantiningsih et al., 2012; 2015). Studi oleh Purwantiningsih et al. (2014), menunjukkan  bahwa  eurikomanone  (senyawa penanda  pada  EAE)  dapat  menghambat aktivitas enzim sitokrom P450 manusia. Hal ini yang  mendorong  penulis  untuk  melakukan
penelitian  berkaitan  efek  EAE  terhadap metabolisme fase I rosiglitazone secara ex-vivo.

## METODOLOGI
Alat
Alat  utama  terdiri  atas:  mikropipet (Eppendorf ® ), timbangan analitik (Explorer TM ), cawan  petri, Petri  dish  shaker (The  Belly Dancer ® ),  satu  s et  al at  perfusi,  timbangan hewan (Navigator TM ), beker glas, tabung reaksi, pH  meter  (Cyber  Scan ® 1100  pH), microplate reader (Powerwave X-340®, Biotek), sentrifuse (Universal 320R) dan Waterbath .
Bahan Rosiglitazone dibeli dari Wuhan Sunrise Technlogy,  China.  Dietil  eter,  magnesium klorida,  dan  magnesium  sulfat  dibeli  dari  BDH Laboratory  Supplies,  Inggris.  Asetil  aseton, streptozotocin,  kolagenase  tipe  IV  dan trypan blue diperoleh dari Sigma Chemicals (St. Louis, MO, USA). Disodium hidrogen fosfat, amonium asetat, barium hidroksida, zinc sulfat heptahidrat  dibeli  dari  R&M  Chemicals (Inggris),  sedangkan  glukosa  monohidrat  dan kalsium  klorida  dari  Riedel-deHaen,  Prancis. Larutan  formaldehida  37%  diperoleh  dari Merck (Darmstadt, Jerman). Semua bahan kimia yang digunakan memiliki kualitas pro-analisis.
Penyiapan ekstrak E. longifolia Ekstrak E.  longifolia dibuat  dari  akar E.  longifolia dengan  metode  esktraksi  sesuai dengan  metode  yang  dijelaskan  sebelumnya oleh  Chan et  al. (2004).  Akar E.  longifolia dikumpulkan  dari  Distrik  Teluk  Bahang  di Penang,  Malaysia.  Serbuk  akar  ditimbang sebanyak  2  kg  dan  diekstraksi  berulang  kali pada  suhu  kamar  (enam  kali  selama  dua minggu) dengan etanol-air (1:1). Semua ekstrak etanol encer dikumpulkan dan diuapkan untuk mendapatkan  ekstrak  kering  serta  diperoleh rendemen sebanyak 2,8%. Standarisasi dilakukan  di  Laboratorium  Pharmaceutical Chemistry,  School  of  Pharmaceutical  Sciences , Universiti Sains Malaysia. Dari ekstrak tersebut telah  berhasil  diisolasi  eurycomanone  murni, dan  esktrak  dinyatakan  mengandung  19,6% eurycomanone  (Low et  al., 2005).  Ekstrak terstandar E.  longifolia digunakan  dalam
penelitian  ini  dan  disiapkan  dengan  cara melarutkan  ekstrak  dalam  air  suling.  Voucher specimen  sampel  tanaman  disimpan  di  Kebun Raya  Penang  dengan  Referensi  No.  785-117 (Chan et al. , 2004).

## Hewan uji
Tikus  untuk  percobaan  ini  berasal  dari rumah  hewan  di  Universiti  Sains  Malaysia, Penang,  Malaysia.  Tikus  Sprague-Dawley  (SD) jantan  yang  digunakan  memiliki  berat  badan 350 ± 40g dan umur 20-24 minggu. Semua tikus diberi  pakan  pelet  standard  (Gold  Coin®, Penang,  Malaysia)  dan  air  minum ad  libitum . Protokol penelitian telah disetujui oleh Komite Etika untuk Hewan, Universitas Sains Malaysia, Penang,  Malaysia  dengan  no  referensi: USM/PPSF/50 (066) Jld.2.

## Jalannya Penelitian
Penyiapan kurva standar formaldehida Larutan standar dibuat pada konsentrasi 0,5;  1;  1.5;  2;  2,5  μg/mL  (dibuat  dengan pengenceran larutan stok formaldehida konsentrasi  2,5  μg/mL),  masing -masing konsentrasi  diambil  1  mL  dan  dimasukkan dalam  tabung  reaksi.  Dalam  tabung  kontrol, larutan stok 1 mL diganti dengan 1 mL air suling. Sebanyak  2  mL  Reagen  Nash  ditambahkan  ke setiap tabung reaksi dan ditutup. Semua tabung diinkubasi  pada  60  ºC  selama  30  menit  dalam shaking waterbath .  Kemudian  0,20  mL  larutan dimbil  dari  masing-masing  tabung  dan dipindahkan  ke  plate  96  sumuran.  Absorbansi dibaca  pada  415  nm  dengan  menggunakan microplate reader (Powerwave X-340®, Biotek). Persamaan  kurva  standar  diperoleh  dengan memplotkan nilai absorbansi versus konsentrasi formaldehida, μg/mL.
Studi ex-vivo efek ekstrak E. longifolia pada aktivitas enzim rosiglitazone N-demetilase Tikus  dibagi  menjadi  dua  kelompok yaitu  untuk  perlakuan  satu  hari  dan  14  hari. Pada  kelompok  perlakuan  satu  hari,  tikus dibagi  dalam  delapan  subkelompok  (n  =  6); kelompok  I  (kontrol),  dan  kelompok  II  -  VIII (diberi perlakuan E.  longifolia ekstrak dosis 1 hingga  1000  mg/kgBB).  Untuk  kelompok perlakuan  14  hari,  hewan  uji  dibagi  menjadi empat  subkelompok  (n  =  6);  kelompok  I (kontrol)  dan  kelompok  II  hingga  IV  (diberi perlakuan E. longifolia ekstrak dosis 5, 25 dan 50 mg/kgBB). Pada akhir perlakuan hepatosit
dari  masing-masing  tikus  diisolasi  dengan teknik  perfusi  (Hussin  &  Skett,  1998),  dan dilakukan
uji aktivitas rosiglitazone N-demetilase.
Sebanyak  1,0  mL  rosiglitazone  (0,75 mM) dalam larutan pembawa ditambahkan ke cawan petri yang mengandung media inkubasi dan  hepatosit  hasil  isolasi  (75.000  sel/petri). Untuk  petri  kontrol,  rosiglitazone  digantikan dengan  larutan  pembawa  (1%  larutan  PEG- 400). Cawan petri diinkubasi pada suhu kamar selama 10 menit di atas meja bergoyang. ZnSO4 [0,5  mL;  25%  (b/v)]  ditambahkan  untuk menghentikan  reaksi  dan  diikuti  oleh penambahan Ba (OH)2 jenuh (0,5 mL). Sampel kemudian disentrifugasi selama 10 menit pada 3000 rpm. Sebanyak 1 mL supernatant diambil dan ditambahkan ke tabung reaksi berisi 2 mL reagen Nash dan diinkubasi pada 60ºC selama 30  menit  dalam waterbath  shaker. Aktivitas rosiglitazone N-demetilase ditentukan menurut metode kolorimetri dari Nash (1953) yaitu  dengan  mengukur  jumlah  formaldehida yang  terbentuk  pada  415  nm  menggunakan microplate reader .

## Pengukuran bobot badan hewan uji
Bobot badan hewan uji ditimbang tiap 2 hari  sekali,  selama  14  hari  untuk  selanjutnya dihitung  perubahan  bobot  badan  perhari  dan dilakukan Analisis Varian pola searah (ANOVA) untuk mengetahui perbedaan antar kelompok.

## Analisis Data
Rata-rata dan standar deviasi
formaldehida  yang  terbentuk  (μg/mL)  karena aktivitas N-demetilase pada kelompok perlakuan  dihitung  dan  dibandingkan  dengan kelompok  kontrol.  Aktivitas  rosiglitazone N-demetilase  pada  masing-masing  kelompok dibandingkan  dengan  menggunakan  analisis varians satu arah (ANOVA) dan dilanjutkan Uji Tukey,  tingkat  signifikansi  ditetapkan  pada  P <0,05.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pembuatan Kurva Standar Formaldehida Kurva  standar  formaldehida  dibuat dengan  cara  memplotkan  hasil  pembacaan absorbansi  dengan  konsentrasi  formaldehida yang digunakan (Gambar 1). Persamaan kurva baku yang diperoleh yaitu  Y = 0.0624X-0,0009 dan  nilai  R 2 =  0.9996.  Berdasarkan  harga  R 2 terlihat bahwa nilainya mendekati 1, itu berarti
bahwa  terdapat  hubungan  linier  antara konsentrasi  formaldehida  yang  digunakan dengan absorbansi yang dihasilkan.
Studi  ex-vivo  efek  ekstrak E.  longifolia pada aktivitas  enzim  rosiglitazone  N-demetilase setelah pemberian oral dosis tunggal dan 14 hari Pengaruh pemberian ekstrak E. longifolia terhadap  aktivitas  enzim  pemetabolisme rosiglitazone  pada  fase  I  yaitu  enzim rosiglitazone  N-demetilase,  setelah  pemberian oral  dosis  tunggal  disajikan  pada  Gambar  2. Pada  gambar  tersebut  menunjukkan  bahwa peningkatan  formaldehida  secara  signifikan
terjadi  pada  semua  kelompok  perlakuan dibandingkan  dengan  kelompok  kontrol (P <0,05) pada dosis 5 sampai 1000 mg/kgBB, dan  peningkatan  terjadi  seiring  peningakatan dosis  yang  digunakan.  Namun  peningkatannya tidak berbeda secara signifikan pada kelompok perlakuan dosis 1 mg/kgBB (P>0,05).
Hasil percobaan untuk perlakuan selama 14  hari  ditunjukkan  dalam  Gambar  3.  Pada kelompok  perlakuan  yang  diberikan  ekstrak E. longifolia selama 14 hari dengan dosis 5, 25 dan 50 mg/kgBB, formaldehida yang terbentuk mengalami  peningkatan  dibandingkan  dengan kelompok kontrol (P<0,05) walaupun peningkatannya  tidak  proporsional  dengan
Gambar I. Kurva standard Formaldehida
Gambar 2. Pengaruh pemberian ekstrak E. longifolia pada aktivitas enzim pemetabolisme rosiglitazone  pada  hepatosit  tikus  jantan  perlakuan  secara  oral  dosis  tunggal  (1-1000 mg/kgBB (*P<0,05 dibandingkan dengan kelompok kontrol, nilai = rata-rata ± SD, n = 6).
peningkatan  dosis  ekstrak  yang  digunakan. Peningkatan  formaldehida  paling  tinggi  terjadi pada kelompok dosis 5 mg/kgBB diikuti dengan dosis 25 dan 50 mg/kgBB.
Penggunaan  sediaan  herbal  sudah meluas di masyarakat (Zhang et al ., 2005) baik di negara berkembang maupun di negara maju. Peningkatan  penjualan  sediaan  herbal  di Amerika diperkirakan mencapai 25% pertahun, data  yang  ada  menunjukkan  peningkatan  dari US$ 1 miliar di tahun 1994 ke angka US$ 4 miliar di tahun 1998 (Bent & Ko, 2004). Estimasi pasar obat tradisional dan makanan kesehatan lainnya di Malaysia adalah  antara US$ 526 hingga US$ 790 juta (Noordin et al, 2008). Ada  banyak  laporan  tentang  interaksi yang terjadi antara obat dengan sediaan herbal, efek  samping  sediaan  herbal  dan  potensi mereka  dalam  mempengaruhi  efek  terapeutik pada  penggunaaan  obat-obatan  secara  klinis dimana  interaksi  tersebut  kadang-kadang menyebabkan  beberapa  konsekuensi  klinis yang serius (Mills et al ., 2005; Low & Tan, 2007). Saxena et  al .  (2008)  melaporkan  bahwa penggunaan Piper  nigrum yang  diketahui mengandung piperin, ternyata mampu meningkatkan  ketersediaan  hayati  fenitoin, propranolol,  dan  teofilin  berdasarkan  hasil  uji klinis pada manusia. Studi lain oleh Salman et al. (2010) tentang efek ekstrak air E. longifolia pada ketersediaan  hayati  propranolol  menunjukkan bahwa  ekstrak  tersebut  menurunkan  AUC (29%),  mengurangi  Cmax  (42%)  dan
memperpanjang Tmax (86%) dari propranolol. Perubahan  yang  cukup  besar  bukan  tidak mungkin  dapat  mempengaruhi  efek  terapeutik propranolol,  tetapi  perlu  pembuktian  lebih lanjut.
E.  longifolia adalah  sediaan  herbal  yang telah  banyak  digunakan  oleh  masyarakat  baik dengan  cara  menyeduh  maupun  yang  sudah dalam bentuk sediaan jadi berupa esktrak dalam kapsul.  Karena  adanya  permintaan  produk E. longifolia yang tinggi, saat ini ada lebih dari 200 produk E. longifolia yang beredar dan terdaftar di Biro Kontrol Malaysia (Bhat & Karim, 2010), dijual  sebagai  Obat  Herbal  Tradisional  di Indonesia  dan  Malaysia.  Untuk  memenuhi permintaan  tersebut  sekitar  21.000  kg E. longifolia dipanen oleh pengumpul pertahun, dari  data  permintaan  kebutuhan  sekitar  > 54.000  kg  pertahun.  Sediaan  ini  diklaim mempunyai  efek  sebagai  afrodisiak  dan memiliki efek meningkatkan kadar testosteron.
E.  longifolia ekstrak  tidak  dapat  berefek serta merta sebagaimana penggunaan afrodisiak  sintetik  yang  bisa  berefek  secara cepat.  Sediaan  ini  harus  dikonsumsi  secara teratur dalam jangka waktu tertentu. Efektivitas baru  optimal  dirasakan  setelah  waktu penggunaan  minimal  satu  minggu  atau  lebih secara terus menerus. Banyak penyakit kronis, seperti
penyakit kardiovaskular,
hipogonadisme  dan  diabetes  melitus,  dapat memengaruhi  fungsi  seksual  (Wespes,  2002). Menurut  penelitian  sebelumnya,  kekurangan
Gambar 3. Pengaruh pemberian ekstrak E. longifolia pada aktivitas enzim pemetabolisme rosiglitazone  pada  hepatosit  tikus  jantan  setelah  perlakuan  oral  selama  14  hari  dengan dosis 5, 25 dan 50 mg/kgBB (*P<0,05 dibandingkan dengan kelompok kontrol, nilai = rata- rata ± SD, n = 6).
testosterone  yang  sebelumnya  hanya  dijumpai pada pria dengan diabetes tipe 2, ternyata juga umum pada pria dengan diabetes tipe 1 (Tomar et  al., 2006;  Chandel et  al., 2008).  Kadar testosteron  yang  rendah  dapat  menyebabkan masalah  kesehatan  yang  dapat  mengakibatkan terjadinya  disfungsi  ereksi  (Marbeger et  al ., 2006). Penderita  diabetes  seringkali  juga mengalami gangguan seksual, yang mana pada penderita  tersebut  harus  menggunakan  obat antidiabetes  secara  rutin  dalam  jangka  waktu lama  atau  bahkan  seumur  hidup.  Untuk mengatasi  gangguan  seksual  bukan  tidak mungkin  penderita  menggunakan  sediaan herbal untuk pengatasan gangguan seksualnya, sebagai contoh sediaan herbal yang digunakan adalah ekstrak E. longifolia . Dalam penelitian ini ingin  diketahui  bagaimana  efek  penggunaan secara bersamaan ekstrak tersebut dengan agen antidiabetes  yang  dalam  hal  ini  rosiglitazone digunakan  sebagai  obat  model.  Penggunaan ekstrak E.  longifolia dan  rosiglitazone  secara bersamaan  untuk  jangka  waktu  yang  lama, diduga  dapat  mempengaruhi  metabolisme rosiglitazone  karena  adanya  pengaruh  ekstrak E.  longifolia terhadap  aktivitas  enzim  N- demetilase  yang  berfungsi  untuk  melakukan proses metabolisme fase I.
Penelitian  sebelumnya  menunjukkan bahwa esktrak E. longifolia dapat meningkatkan konsentrasi  formaldehida  pada  hepatosit kelompok  tikus  jantan  normal  dan  diabetes. Peningkatan  yang  signifikan  terjadi  (p<0,05), menunjukkan bahwa ekstrak tersebut meningkatkan metabolisme rosiglitazone fase I
pada tikus jantan secara in-vitro (Purwantiningsih et  al., 2011).  Kedua  hasil  ini sejalan yaitu esktrak E. longifolia meningkatkan aktivitas enzim N-demetilase sehingga meningkatkan metabolisme rosiglitazone. Hasil tersebut  didukung  oleh  penelitian  lain  yang mana
ekstrak
E.
longifolia diduga mempengaruhi fase I metabolisme rosiglitazone pada tikus jantan pada tingkat molekular yaitu diduga  melalui  jalur  aktivasi  fosfatase  dan penghambatan tirosin kinase (Purwantiningsih et al., 2015).

## Pengukuran bobot badan hewan uji
Pengukuran  bobot  badan dilakukan tiap 2  hari  sekali  selama  14  hari,  dan  dihitung persentase perubahannya, data antar kelompok dibandingkan menggunakan analisis varian pola searah  (Anova)  untuk  melihat  perbedaannya. Hasil perhitungan perubahan persentase bobot badan  disajikan  dalam  Gambar  4,  sedangkan berdasarkan hasil uji statistik perubahan antar kelompok  uji  tidak  berbeda  secara  signifikan (P>0,05) dikarenakan besarnya standar deviasi. Ini berarti bahwa perlakuan esktrak E. longifolia dosis  5-50  mg/kgBB  secara  oral  selama 14  hari  tidak  mempengaruhi  bobot  badan hewan uji.
KESIMPULAN
Pemberian
ekstrak
E. longifolia meningkatkan  secara  signifikan  (P<0,05) aktivitas enzim N-demetilase
dalam memetabolisme rosiglitazone pada tikus jantan setelah  mendapat  perlakuan  ekstrak  tersebut secara oral untuk pemberian selama satu hari
Gambar 4. Persentase perubahan berat badan tikus setelah mendapat perlakuan ekstrak E. longifolia secara oral selama 14 hari dengan dosis 5, 25 dan 50 mg/kgBB; dimana C
dosis 5-1000 mg/kgBB dibandingkan kelompok kontrol,  tetapi  tidak  berbeda  signifikan  pada dosis 1 mg/kgBB . Perlakuan esktrak E. longifolia dosis 5, 25 dan 50 mg/kgBB secara oral selama 14  hari  meningkatkan  secara  signifikan (P<0,05) aktivitas enzim tersebut dibandingkan kontrol,  tetapi  tidak  mempengaruhi  bobot badan hewan uji.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  School  of  Pharmaceutical  Sciences, Universiti Sains Malaysia, yang telah membiayai penelitian ini dengan Grant Number 1001/PFARMASI/821127.

## DAFTAR PUSTAKA
Ang,  H.  H.,  Hitotsuyanagi,  Y.,  Fukaya,  H.,  &
Takeya,  K.,  2002,  Quassinoids  from Eurycoma  longifolia , Phytochemistry,
59 (8), 833-837. Ang,  H.,  &  Ngai,  T.  H.,  2001,  Aphrodisiac evaluation  in  non-copulator  male  rats after  chronic  administration  of E. longifolia Jack, Fundamental  &  Clinical Pharmacology, 15 , 265-268.
Ang, H. H., & Lee, K. L., 2002, Effect of Eurycoma longifolia Jack on orientation activities in middle-aged  male  rats, Fundamental  & Clinical Pharmacology, 16 , 479-483. Ang,  H.  H.,  Lee,  K.  L.,  &  Kiyoshi,  M,  2003,
Eurycoma longifolia Jack enhances sexual motivation  in  middle-aged  male  mice, Journal  of  Basic  Clinical  Physiology  and Pharmacology, 14 , 301-308.
Bent, S., & Ko, R., 2004, Commonly Used Herbal
Medicines in the United States: A Review,
American  Journal  of  Medicine,  116 ,  478- 485.
Bhat,  R.,  &  Karim,  A.,  2010,  Tongkat  Ali ( Eurycoma  longifolia Jack):  A  review  on its  Ethnobotany  and  pharmacological importance, Fitoterapia, 81, 669 – 679. Chan, K. L., Choo, C. Y., & Abdullah, N. R., 2005, Semisynthetic 15-O-Acyl- and 1,15-Di-O- acyleurycomanones  from Eurycoma longifolia as  Potential  Antimalarials, Planta Medica, 71 , 967-969.
Chan, K. L., Choo, C. Y., Abdullah, N. R., & Ismail, Z.,  2004,  Antiplasmodial  studies  of Eurycoma longifolia Jack using the lactate dehydrogenase  assay  of
Plasmodium
falciparum , Journal of Ethnopharmacology, 92 , 223 -227. Chan,  K.  L.,  Lee,  S.  P.,  Sam,  T.  W.,  &  Han,  B.  H., 1989,  A  quassinoid  glycoside  from  the roots of Eurycoma longifolia, Phytochemistry, 28 , 2857-2859. Chan,  K.  L.,  Lee,  S.  P.,  &  Yuen,  K.  H.,  1995,
Antipyretic  Activity  of  Quassinoids  from Eurycoma  longifolia  Jack.  In  Ghazally  I,
Murtedza  M  &  Laily  D  (Eds.),  Chemical prospecting  in  Malayan  forest ,  Selangor: Pelanduk Publications, 219-224.
Chandel, A., Dhindsa, S., Topiwala, S., Chaudhuri,
A.,  &  Dandona,  P.,  2008,  Testosterone Concentrations  in  Young  Patients  With Diabetes, Diabetes Care, 31 , 2013-2017. Drewes, S. E., George, J., & Khan, F., 2003, Recent findings  on  natural  products  with erectile-dysfunction activity, Phytochemistry, 62 , 1019-1025. Hussin, A. H., & Skett, P., 1988, Lack of effect of insulin  in  hepatocytes  isolated  from streptozotocin-diabetic male rats,
Biochemical  Pharmacology,  37 (9),  1683-
1686. Itokawa,  H.,  Kishi,  E.,  Morita,  H.,  &  Takeya,  K., 1992, Cytotoxic quassinoids and tirucallane-type  triterpene  from  the woods  of Eurycoma longifolia, Chemical
Pharmacology Bulletin, 40 , 1053-1055.
Jiwajinda,  S.,  Santisopasri,  V.,  Murakami,  A., Kawanaka, M., Kawanaka, H., Gasquet, M.,
Eilas,  R.,  Balansard,  G.,  &  Ohigashi,  H., 2002, In vitro anti-tumor promoting and anti-parasitic activities of the quassinoids from Eurycoma  longifolia ,  a  medicinal plant  in  Southeast  Asia, Journal  of Ethnopharmacology, 82 , 55-58. Kanchanapoom, T., Kasai, R., Chumsri, P., Hiraga, Y.,  &  Yamasaki,  K.,  2001,  Canthin-6-one and β -carboline alkaloids from Eurycoma harmandiana , Phytochemistry,  56 ,  383- 386.
Kardono,  L.  B.  S.,  Angerhofer,  C.  K.,  Tsauri,  S.,
Padmawinata,  K.,  Pezzuto,  J.  M.,  & Kinghorn,  A.  D.,  1991,    Cytotoxic  and antimalarial  constituents  of  the  roots  of Eurycoma  longifolia , Journal  of  Natural Products, 54 (5), 1360-1367. Low, B. S., Ng, B. H., Choy, W. P., Yuen, K. H., & Chan,  K.  L.,  2005,  Bioavailability  and pharmacokinetic studies of
eurycomanone from Eurycoma longifolia ,
Planta Medica, 71 , 803-807.
Low, W. Y., & Tan, H. M., 2007,  Asian traditional medicine for erectile dysfunction, Journal of  Men's  Health  and  Gender,  4 (3),  245- 250.
Marbeger,  M.,  Roehrborn,  C.  G.,  Marks,  L.  S., Wilson,  T.,  &  Rittmaster,  R.  S.,  2006, Relationship among Serum Testosterone, Sexual  Function,  and  Response  to Treatment in Men Receiving Dutasteride for  Benign  Prostatic  Hyperplasia, The Journal  of  Clinical  Endocrinology  & Metabolism, 91 (4), 1323-1328.
Mills, E., Cooper, C., Seely, D., & Kanfer, I., 2005, African  Herbal  Medicines  in  the Treatment  of  HIV:  Hypoxis  and Sutherlandia.  An  overview  of  evidence and  pharmacology, Nutrition  Journal,  4 , 19. Morita,  H.,  Kishi,  E.,  Takeya,  K.,  &  Itokawa,  H., 1992,  Biphenylneolignans from wood of Eurycoma  longifolia, Phytochemistry,  31 , 3993-3995.
Nash,  T.,  1953,  The  colorimetric  estimation  of formaldehyde by means of the Hantzsch Reaction, Biochemical  Journal,  55 ,  416  - 421. Noordin, N., Othman, S. N., & Che Mat, R., 2008, Technology  implementation  barriers  in the  Malaysian  herbal  industry:  A  case study [Online]. [Accessed 10 th September
2012]. Available from World Wide Web: http://www.repo.uum.edu.my/2911/1/R uzinoor.pdf
Purwantiningsih,  Hussin,  A.  H.,  &  Chan,  K.  L.,
2010,  Phase I  drug metabolism  study  of the  standardised  extract  of Eurycoma longifolia (TAF-273)  in  rat  hepatocytes. International    Journal  of  Pharmacy  and Pharmaceutical Sciences , 2:147-152. Purwantiningsih,  Hussin,  A.  H.,  &  Chan,  K.  L.,
2011,  Herb-Drug  Interaction  Study  of Eurycoma longifolia Extract (TAF-273) on Antidiabetic Drug (Rosiglitazone) Metabolism. Asian Journal of Pharmaceutical  and  Clinical  Research ; 4(2):88-92. Purwantiningsih,  Hussin,  A. H.,   &  Chan,  K.   L., 2012, Sex-Related Alterations of Aminopyrine metabolism by Standardised  Extract  of Eurycoma longifolia (TAF-273), Acta  Alimentaria Hungaria, 41(3):316-326.
Purwantiningsih,  Hussin,  A.  H.,  Chan,  K.  L.,  & Ismail  S.,  2014,  Inhibitory  Effect  of Eurycoma longifolia Extract and Eurycomanone  on  Human  Cytochrome P450  Isoforms.
International    Journal  of Pharmacy  and  Pharmaceutical  Sciences , 6(6):441-444.
Purwantiningsih,  Hussin,  A.  H.,  &  Chan,  K.  L.,
2015,  Effect  of  Standardized Eurycoma longifolia Extract  on  Rosiglitazone Metabolism in The Old Normal Male Rat Hepatocytes:  A  Mechanism  Study. International    Journal  of  Pharmacy  and Pharmaceutical Sciences , 7(2):80-83
Salman, S. A. B., Amrah, S., Wahab, M. S. A., Ismail, Z.,  Ismail,  R.,  Yuen,  K.  H.,    &  Gan,  S.  H., 2010, Modification  of  propranolol’s bioavailability  by Eurycoma  longifolia water-based  extract, Journal  of  Clinical Pharmacy  and  Therapeutics,  35 (6),  691- 696.
Saxena,  A.,  Tripathi,  K.  P.,  Roy,  S.,  Khan,  F.,  & Sharma,  A.,  2008,  Pharmacovigilance: Effects  of  herbal  components  on  human drugs interactions involving Cytochrome P450, Bioinformation, 3 (5), 198-204. Tomar, R., Dhindsa, S., Chaudhuri, A., Mohanty, P.,  Garg,  R.,  &  Dandona,  P.,  2006, Contrasting Testosterone Concentrations in Type 1 and Type 2 Diabetes, Diabetes Care, 29 (5), 1120-1122. Wespes,  E.,  2002,    The  ageing  penis, World Journal of Urology, 20 , 36-39.
Zakaria, Y., Rahmat, A., Pihie, A. H. L., Abdullah,
N.  R.,  &  Houghton,  P.  J.,  2009,
Eurycomanone  induce  apoptosis  in HepG2  cells  via  up-regulation  of  p53,
Cancer Cell International Journal, 9 (16).
Zhang, L., Wang, Y., Zou, P., Pan, X., Zhang, H., &
Chen,  W.,  2005,  Advances  in  Clinical Pharmacokinetics  of  Herbal  Medicines, US-China Medical Sciences, 2 , 59-72.