E-ISSN 26847205; p-ISSN 23374284 Media Teknologi Hasil Perikanan Terakreditasi Nasional (Sinta 3) April 2023, 11(1): 51–58 SK Ditjen Risbang Kemristekdikti
https://doi.org/10.35800/mthp.11.1.2023.54138
No: 225/E/KPT/2022 Available online https://ejournal.unsrat.ac.id/index.php/jmthp/index
Efek Penambahan Ekstrak Daun Tagalolo (Ficus Septica Burm. F) terhadap Kadar Histamin dan Total Bakteri Ikan Cakalang (Katsuwonus pelamis L)
(Effect of Adding Tagalolo Leaf  Extract (Ficus Septica Burm. F) on Histamine Levels and

## Total Bacteria of Skipjack Fish (Katsuwonus pelamis L) )
Marledy Kaunsui, Charles D. Masinambou, Ella Dertina Saragih, Engel Victor Pandey, Silvana Dinaintang Harikedua * , Djuhria Wonggo, Lita A.D.Y. Montolalu, Daisy Monica Makapedua
Program Studi Teknologi Hasil Perikanan, Jurusan Pengolahan Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Sam Ratulangi, Jl. Kampus UNSRAT Bahu Gedung E5, Manado, Sulawesi Utara, Indonesia 95115. Penulis Korespondensi: silvana.harikedua@unsrat.ac.id (Diterima 01-11-2023; Direvisi 27-12-2023; Dipublikasi 31-12-2023)

## ABSTRACT
Histamine is one of the important parameters in determining the quality of fish quality, especially in fishery products that will be exported. This study aims to determine the effect of adding tagalolo leaf water  extract  on  histamine  levels  and  total  plate  counts  in  fresh  skipjack  ( Katsuwonus  pelamis L). The  results  showed  that  tagalolo  leaves  have  the  potential  to  slow  down  the  rate  of  histamine  and bacterial development in fish

## Keyword: skipjack, histamine, tagalolo leaves, total plate count
Histamin  merupakan  salah  satu  parameter  penting  dalam  penentuan  kualitas  mutu  ikan terutama pada produk perikanan yang akan diekspor. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek  penambahan  ekstrak  air  daun  tagalolo  terhadap  kadar  histamin  dan  angka  lempeng  total pada  ikan  cakalang  ( Katsuwonus  pelamis L)  segar.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  daun tagalolo  memiliki  potensi  untuk  dapat  memperlambat  laju  perkembangan  histamin  dan  bakteri pada ikan.
Kata kunci: ikan, histamine, daun tagalolo, angka lempeng total

## PENDAHULUAN
Keracunan    karena    histamin  merupakan  suatu  intoksikasi  akibat  mengkonsumsi  ikan  laut  yang umumnya berasal dari famili scombroid, seperti tuna, mackerel, cakalang, dan sejenisnya.  Histamin (1H- imidazol-4-ethanamin) adalah salah satu senyawa dari golongan biogenik amin yang terbentuk dari asam amino  histidin  akibat  reaksi  enzim  dekarboksilase  dengan  suhu  optimum  adalah  25°C  (Dalgaard et  al . 2008,  Kim et  al. ,  2006).  Histamin  merupakan  salah  satu  parameter  penting  dalam  penentuan  kualitas mutu ikan apalagi untuk produk perikanan yang akan diekspor. Setyarini et al. (2019) menyatakan bahwa beberapa  gejala  yang  akan  timbul  ketika  mengkonsumsi  histamin  dengan  kadar  yang  tinggi  antara  lain yaitu  muntah-muntah,  kerongkongan  seperti  terbakar,  pembengkakan  bibir,  sakit  kepala,  kejang,  mual, muka  dan  leher  kemerahan,  gatal-gatal,  tingkat  kekebalan  tubuh  konsumen  juga  menjadi  faktor munculnya alergi dari histamin tersebut. The Food and Drug Administration (2011) menetapkan standar keamanan histamin yaitu 50 mg/kg (50 ppm), sedangkan (EC) Uni Eropa dan Standar Nasional Indonesia (SNI 2729 : 2013) menetapkan kandungan rata-rata histamin dalam ikan tidak lebih dari dari 100 mg/kg (100 ppm).
Sejak  dahulu  masyarakat  Indonesia  sering  memanfaatkan  tumbuh-tumbuhan  sebagai  bahan  alami untuk pengawetan ikan. Hal ini dibuktikan dengan adanya dokumentasi ilmiah tentang penggunaan bahan alami  yang  dapat  mempertahankan  mute  ikan  contohnya  penggunaan buah  mangrove Avicennia  marina
(Utari et  al .,  2018),  biji  buah  atung  (Moniharapon et  al .,  2019),  belimbing  wuluh  dan  daun  kemangi (Sumiati dan Marjanah, 2020) dan ekstrak daun sirih (Mentari et al ., 2016). Dokumentasi ilmiah lainnya juga sudah membuktikan bahwa bahan alami dari tumbuhan yang ditambahkan ke daging ikan memiliki pengaruh  terhadap  kadar  histamin  ikan  scombroid  contohnya  adalah  penggunaan  ekstrak  teh  hijau (Heruwati et al ., 2009), ekstrak daun jarak ( Jatropha curcas ) (Daviz, 2013),  ekstrak daun kelor (Moringa oleifera) (Valent et al ., 2017) dan ekstrak belimbing wuluh (Astuti dan Asniati, 2018).
Salah  satu  tumbuhan  yang  jarang  terdengar  tapi  mempunyai  banyak  manfaat  adalah  tumbuhan tagalolo  atau  awar-awar (Ficus  Septica  Burm. F).  Hasil  penelusuran  literatur  memperlihatkan  bahwa ekstrak  daun  tagalolo    mengandung  senyawa  terpenoid,  alkaloid,  flavonoid,  dan  fenol  (Sudirga,  2013). Akan  tetapi,  sampai  saat  ini  masih  sedikit  dokumentasi  ilmiah  yang  membahas  tentang  potensi  dari tanaman  tagalolo  yang  dapat  mencegah  kemunduran  ikan  segar  ataupun  mempengaruhi  kemunculan histamin  pada  ikan.  Penelitian  terdahulu  oleh  Makisake et  al. (2022)  secara in  silico menyimpulkan bahwa  senyawa  aktif  daun  tagalolo  dari  penelusuran  pustaka berupa  senyawa  genistin,  β-amyrin, pyrrolidine  dan  phenanthroindollizidine  tidak  dapat  bereaksi  dengan  enzim  L-histidin  dekarbokasilase karena  semua  ligan  uji  tidak  bereaksi  atau  terikat  dengan  reseptor. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  masih perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan  untuk  mengkaji  potensi  ekstrak  daun  tagalolo  tersebut.  Tujuan penelitian  ini  adalah  mengetahui  pengaruh  penambahan  ekstrak  daun  tagalolo  pada  ikan  cakalang ( Katsuwonus pelamis L) dilihat dari kadar histamin dan total bakterinya.

## MATERIAL DAN METODE

## Bahan dan alat
Alat-alat  yang  akan  dipakai  dalam  pembuatan  ekstrak  adalah  kompor,  wadah,  saringan  teh, timbangan, botol, wajan, kayu pengaduk. Alat-alat yang akan dipakai pada pengujian Histamin adalah LC sistem.  (Alliance  e2695), sentrifuge (Tomy/LC-200).  Alat-alat  yang  diperlukan  dalam  pengujian mikrobiologi  (ALT)  seperti;  inkubator  (N-Biotek  NB-201),  laminar  air  flow  (Hakka).  Bahan  yang dipakai pada penelitian ini adalah daun tagalolo  ( Ficus Septica Burm F) dan ikan cakalang ( Katsuwonus pelamis L)  ukuran  ±  1  kg  sebanyak  3  ekor.  Untuk  pengujian  angka  lempeng  total  (ALT)  bahan  yang dipakai yaitu Media PCA (Oxoid), Butterfield’s Phosphate Buffered (Merck). Untuk pengujian  histamin bahan  yang  digunakan  adalah  aseton  nitril,  asam  perklorid,  larutan  natrium  karbonat,  larutan  dansil klorida, larutan L-propolin, larutan stok histamin dan larutan stok 1,7-diaminoheptan.

## Prosedur Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  secara  eksperimental  melalui  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  faktorial dengan 2 taraf perlakuan. Faktor A adalah suhu awal penyimpanan yaitu pada  suhu 4°C dan 28°C. Faktor  B  adalah  konsentrasi  ekstrak  daun  tagalolo  yaitu  0%,2,5%  dan  5%.  Parameter  yang  diukur dalam penelitian ini yaitu kadar histamin dan jumlah Angka Lempeng Total (ALT).

## Preparasi Sampel Daun Tagalolo
Daun  tagalolo  ( Ficus  Septica  Burm .  F)  sebanyak  ±  3  kg  di  ambil  disekitaran  daerah  Pandu  kota Manado.  Selanjutnya  dilakukan  pensortiran  basah  pada  daun  tagalolo,  kemudian  dilakukan pencucian  untuk  menghilangkan  kotoran  yang  terdapat  pada  daun  tagalolo .  Daun-daun  tersebut kemudian ditiriskan untuk menghilangkan sisa air pencucian, lalu dikeringkan anginkan pada suhu ±  37°C  selama  ±  1  minggu.  Sampel  yang  sudah  kering  dihan curkan  menggunakan  alat  pelumat sehingga  berbentuk  bubuk  sebanyak  ±1kg.  Bubuk  tersebut  kemudian  diisi  ke  dalam  plastik  dan disimpan sebelum digunakan.

## Ekstraksi daun tagalolo
Prosedur  ekstraksi  air  daun  tagalolo  mengikuti  prosedur  Hiariey et  al .,  (2013)  dengan  sedikit modifikasi.  Sebanyak  50  g  serbuk  daun  tagalolo  direbus  di  dalam  2000  mL  aquades  selama  10 menit untuk membuat konsentrasi  2.5%. Selanjutnya sebanyak 100 g dididihkan kedalam 2000 mL aquades  untuk  membuat  konsentrasi  5%.  Selanjutnya  larutan  didiamkan  selama  beberapa  menit
kemudian  disaring  menggunakan  saringan  dan  disimpan  dalam  botol  di  lemari  es  sebelum digunakan.

## Tata Laksana Penelitian
Ikan  dibeli  dari  TPI  Tumumpa  sebanyak  3  ekor  dengan  ukuran  ±  1  kg.  Ikan  dibawa  ke  laboratorium dengan coolbox yang telah disi es curah dengan perbandingan ikan dan es 1:1 dalam waktu tempuh  ±30 menit ke Laboratorium Pengendalian Mutu Hasil Perikanan Unsrat. Selanjutnya ikan diberikan perlakuan awal pada suhu 4°C dan 28°C selama 2 jam. Ikan kemudian dibersihkan dan difilet menjadi 2 bagian lalu dibagi menjadi 6 (3 potong per fillet) (Gambar 1).
Gambar 1 . Pembagian Ikan untuk Perlakuan ( garis hijau putus-putus adalah tempat ikan dibagi untuk analisa histamin dan ALT )
Ikan yang telah difilet lalu dibagi ke dalam kelompok percobaan seperti terlihat pada Tabel 1. Potongan ikan kemudian direndam ekstrak selama 60 menit, 30 menit  utk bagian daging  dan 30 menit selanjutnya untuk bagian yang ada kulitnya. Secara singkat alur penelitian dapat dilihat pada Gambar 2. Setelah  perlakuan  ikan  disimpan  di freezer sebelum  dibawa  ke  BKIPM  Manado  dan  Laboratorium Pengujian Produk Perikanan dan Kelautan (LP3K) UNSRAT.
Tabel 1. Pembagian Kelompok Percobaan untuk Perlakuan Awal
Ikan Fillet Perlakuan Awal (2 jam) Perlakuan  Konsentrasi 0% 2.5% (+1 jam) 5% (+1 jam) 1 A Disimpan pada Suhu 4°C Punggung* Perut Ekor 2 B Disimpan pada Suhu 4°C Perut* Ekor Punggung 3 A Disimpan pada Suhu 4°C Ekor* Punggung Perut 1 B Disimpan pada Suhu 28°C Punggung* Perut Ekor 2 A Disimpan pada Suhu 28°C Perut* Ekor Punggung 3 B Disimpan pada Suhu 28°C Ekor* Punggung Perut
* Untuk  perlakuan  konsentrasi  0%  dengan  perlakuan  awal  penyimpanan  pada  suhu  4  dan  28°C  setelah  2.5  jam langsung disimpan di freezer dan tidak mengalami tambahan waktu perlakuan 1 jam baik di suhu 4 dan 28°C.

## Analisa Histamin
Analisis  histamin  menggunakan  instrumen  HPLC Watters e-Alliance 2695, dengan dektektor UV-Vis Prosedur  analisis  meliputi  preparasi  sampel,  ekstrasi  sampel,derivatisasi  dan  pemurnian  dan  injeksi  ke alat  HPLC.  Analisis  histamin  mengikuti  prosedur  ISO  ( International  Organization  of  Standardization ) 19343:2017  yang  diterapkan  di  Balai  Karantina  Ikan,  Pengendalian  Mutu  dan  Keamanan  (BKIPM) Manado

## Analisa Angka Lempeng Total
Analisis  angka  lempeng  total  mengikuti  SNI  2332.3:2015,  dengan  mensterilkan  alat-alat  yang  akan dipakai terlebih dahulu, lalu menyediakan media dan menghomegenkan media dan sampel lalu masukan
Filet kiri/kanan per ikan Bagian punggung
Bagian perut
Bagian ekor
dalam cawan selanjutnya diinkubasi selama 48 jam lalu dilakukan pembacaan koloni. Jumlah koloni yang dihitung adalah cawan petri yang mempunyai koloni bakteri antara 25-250 koloni.
Gambar  2 . Diagram alir penelitian

## Analisa Data
Data  yang  diperoleh  dari penelitian  ini  dihitung  nilai  rata-ratanya  dan kemudian disajikan  dalam  bentuk Tabel dan Histogram.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kadar Histamin
Gambar  3  menunjukkan  juga  bahwa  waktu  penyimpanan  dan  suhu  perlakuan  awal  memiliki pengaruh  terhadap  kadar  histamin  ikan  cakalang.  Kadar  histamin  ikan  cakalang  tanpa  perlakuan perendaman ekstrak tagalolo dan yang direndam pada ekstrak 2.5% yang diperlakukan dengan suhu penyimpanan  suhu  awal  28°C  memiliki  nilai  yang  lebih  tinggi  yaitu  0,  902  ppm  dibandingkan dengan  ikan  cakalang  yang  disimpan  pada    suhu  awal  4°C  yaitu  0,725  ppm.   Hal  ini mengindikasikan bahwa  sejak  ikan ditangkap dan didaratkan histamin  telah  ada tapi dalam  jumlah yang  kecil  dan  dapat  meningkat  ketika  adanya  kenaikan  suhu  penyimpanan.  Akan  tetapi,  kadar histamin  pada  ikan  cakalang  yang  disimpan  pada  suhu  28°C  tanpa  perlakuan  penambahan  ekstrak daun  tagalolo  ini  yang  jauh  lebih  rendah  (0,  902  ppm)  jika  dibandingkan  dengan  ikan  yang  sudah mengalami  perlakuan  perendaman  pada  ekstrak  daun  tagalolo  2,5%  (5,05  ppm)  dan  5%  (1,152 ppm).  Terdeteksinya  histamin  dalam  jumlah  kecil  pada  ikan  cakalang   ini  diduga  dipengaruhi  oleh perlakuan lanjutan terhadap ikan tersebut. Ikan yang langsung dibekukan setelah dibiarkan di suhu ruang 28°C  selama 2 jam dan tidak mendapat perlakuan tambahan 1 jam di suhu 28°C seperti pada ikan yang diberi perendaman ekstrak daun tagalolo.
Gambar  3  juga  memperlihatkan  bahwa  ikan  yang  diberi  ekstrak  2,5%  dan  disimpan  awal pada suhu 28°C memiliki kadar histamin yang lebih tinggi (5,050 ppm) dibandingkan dengan yang
diberi  perlakukan  awal  pada  suhu  4°C.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  suhu  merupakan  faktor terpenting dalam kenaikan dari histamin. Menurut Lehane  & Olley  (2000)  aktivitas dekarboksilasi histidin  terjadi  jika  suhu  lebih  besar  dari  4,4ºC  dengan  suhu  optimum  20 –30ºC.  Hal  ini  sejalan dengan  hasil  penelitian  ini  karena  ketika  perlakuan  suhu  awal  lebih  tinggi  maka  kerja  enzim  akan lebih cepat sehingga memicu kenaikan histamin.
Hal  kontradiktif  terjadi  pada  perlakuan  perendaman  ikan  cakalang  dengan  konsentrasi ekstrak  daun  tagalolo  5%.  Kadar  histamin  ikan  cakalang  yang  diperlakukan  dengan  suhu penyimpanan  suhu  awal  4°C  memiliki  nilai  yang  lebih  tinggi  yaitu  5,113  ppm  dibandingkan dengan ikan cakalang yang disimpan pada  suhu awal 28°C yaitu 1,152 ppm.  Hal ini diduga terjadi karena  pada  proses  perendaman  di  suhu  4°C  ekstrak  air  daun  tagalolo  tidak  dapat  bekerja  dengan baik.  Hal  ini  sejalan  dengan  hasil  penelitian  Kusuma et  al. (2017)  yang  menyatakan  bahwa  pada penyimpanan  di  suhu refrigerasi terdapat  penurunan  daya  hambat  ekstrak  daun  sirih  karena kerusakan dan berkurangnya senyawa  aktif pada ekstrak. Rahayu (2014) juga menambahkan bahwa pendinginan  bisa  memperlambat  kecepatan  reaksi-reaksi  metabolisme  sehingga  setiap  penurunan suhu akan mengurangi kecepatan reaksi ekstrak.
Melalui  Gambar  3  dapat  dilihat  bahwa  meningkatnya  pemberian  konsentrasi  ekstrak  daun tagalolo  menunjukkan  hubungan  linier  dengan  penurunan  kadar  histamin   terutama  pada  ikan  yang diberi  perlakuan  awal  28°C.  Ikan  cakalang  yang  diberi  ekstrak  daun  tagalolo  5%  memiliki  kadar histamin  yang  lebih  rendah  dibandingkan  dengan  ikan  cakalang  yang  diberi  ekstrak  daun  tagalolo 2.5%.  Hal  ini  mungkin  terjadi  karena  pengaruh  ekstrak  terhadap  bakteri-bakteri  pembentuk histamin sudah mulai bekerja. Sudirga (2013) menyatakan bahwa  ekstrak daun tagalolo  mengandung senyawa terpenoid, alkaloid, flavonoid, dan fenol. Selanjutnya Kusmarwati (2008) menyatakan bahwa senyawa  aktif  seperti  flavonoid,  polifenol  dan  alkaloid   mempunyai  kemampuan  menghambat bakteri pembentuk histamin seperti Morganella morgani.
Gambar 3 . Kadar histamin ikan cakalang dengan ekstrak daun tagalolo
Hal  menarik  lainnya dari penelitian ini adalah  tidak  sinkronnya  trend yang  terjadi pada  ikan cakalang  yang  diberi  perlakuan  awal  4°C.  Kadar  histamin  ikan  cakalang  yang  diberikan konsentrasi 2.5% lebih rendah dibandingkan dengan ikan cakalang yang diberikan ekstrak 5%. Hal ini kemungkinan  terjadi karena daging ikan dari 3 bagian  ikan yang berbeda (punggung, perut dan ekor)  tidak  tercampur  merata  sehingga  saat  sampling  pengujian  histamin  kadar  histamin  yang didapat  juga  tidak  merata  (Tabel  1).  Hal  ini  didukung  dengan  penelitian  dari  Wodi et  al .  (2018), yang  menyatakan  bahwa  kadar  histamin  daging  ikan  tuna  pada  bagian  perut,  punggung,  dan  ekor berbeda yaitu 3,05 ppm, punggung 4,05 ppm, dan ekor 3,46 ppm secara berurutan.  Secara  umum  hasil pengujian  histamin  pada  penelitian  ini  semuanya  tidak  melewati  batas  kadar  histamin   yang  telah
0.725 0.862 5.113 0.902
5.050
1.152 0 10 20 30 40 50 60 0% 2,5% 5% K ad ar H ist am in ( p p m ) Konsentrasi Ekstrak Daun Tagalolo (%) 4°C 28°C Batas penerimaan histamin ikan segar 50 mg/kg (FDA)
ditetapkan  oleh  BSN  dalam  SNI  2729:2013  yaitu  10  mg/kg  (100  ppm)  sehingga  aman  jika  akan dikonsumsi.

## Uji Angka Lempeng Total (ALT)
Gambar 4 memperlihatkan bahwa jumlah bakteri terendah 4,27 cfu/g didapatkan pada ikan cakalang tanpa perlakuan ekstrak dan disimpan pada suhu 4 ° C. Hal ini terjadi karena pada saat penelitian  ikan  yang  dibeli  langsung  difillet  dan  disimpan  pada  suhu  dingin  4 ° C  selama  2  jam dan  kemudian  langsung  dibekukan  (Tabel  1). Gambar  4  juga  menunjukkan  juga  bahwa  waktu penyimpanan  dan  suhu  perlakuan  awal  memiliki  pengaruh  terhadap  jumlah  total  bakteri  ikan cakalang.  Ikan  yang  diperlakukan  dengan  suhu  penyimpanan  awal  28°C  cenderung  memiliki  nilai total  bakteri  yang  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  ikan  yang  disimpan  awal  pada  suhu  4°C.  Hal ini  mengindikasikan  bahwa  suhu  dingin  dapat  memperlambat  kecepatan  perkembangan  bakteri. Secara umum nilai total bakteri pada penelitian ini khususnya pada ikan yang disimpan awal pada suhu  4 ° C  lebih  rendah  jika  dibandingkan  dengan  hasil  penelitian  Affiano  (2011)  yang memperlihatkan bahwa pada penyimpanan 4 ° C jumlah bakteri dari ikan yang diambil di bagian perut, bagian ekor, dan bagian bawah kepala adalah  4.64, 4.57 dan 4.59 cfu/g secara berurutan. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  prinsip  rantai  dingin  sangat  penting  diterapkan  pada  ikan  pasca ditangkap.

## Gambar 4 . Jumlah Total Bakteri dengan Ekstrak Daun Tagalolo
Melalui  Gambar  4  juga  dapat  diketahui  bahwa  meningkatnya  pemberian  konsentrasi  ekstrak daun tagalolo menunjukkan hubungan linier dengan penurunan jumlah total bakteri baik pada ikan yang diberi perlakuan awal 28°C maupun pada ikan yang diberi perlakuan awal 4°C.  Secara umum ikan  cakalang yang diberi konsentrasi  ekstrak 5% memiliki jumlah total bakteri yang  lebih  rendah dibandingkan  dengan  ikan  cakalang  yang  diberi  konsentrasi  ekstrak  2.5%. Hal  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  tagalolo  dapat  menghambat  perkembangan  jumlah  bakteri.  Tuna et  al. (2016) menyatakan bahwa ekstrak daun awar-awar memiliki daya hambat pada bakteri S. aureus dan  E.  coli .  Ekstrak  awar-awar  memiliki  beberapa  senyawa  seperti  alkaloid,  saponin  dan flavonoid  yang  mampu  menjaga  perombakan  protein  dan  lemak  oleh  bakteri,  sehingga  dapat mengatasi pembusukan pada ikan.
4.27 4.3 4.28 4.44 4.9 4.36 0 1 2 3 4 5 6 7 0% 2.5% 5% Ju m la h t o tal m ik ro b a (lo g c fu /g ) Konsentrasi Ekstrak Daun Tagalolo 4° C 28° C Batas cemaran bakteri ikan segar 5.7 (log cfu/g) (PerBPOM No.13 tahun 2019)

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  tagalolo  memiliki  potensi  untuk memperlambat laju perkembangan histamin dan bakteri. Perlakuan penambahan ekstrak air daun  tagalolo  5%  yang  mengalami  perlakuan  awal  pada  suhu  28 ° C  cukup  karena  mampu menekan jumlah histamin maupun total bakteri pada ikan cakalang.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Lembaga Penelitian dan Pengabdian Masyarakat (LPPM)  Universitas  Sam  Ratulangi  yang  sudah  memberikan  dana  melalui  skema  PKM-Penelitian UNSRAT tahun 2021.

## DAFTAR PUSTAKA
Astuti I., & Asniati, N. 2018. Pengaruh ekstrak daun belimbing wuluh terhadap  histamin pada ikan cakalang ( Katsuwonus pelamis ) Asap. Gorontalo Fisheries Journal . (1):1-9.
Badan  Standarisasi  Nasional.  [BSN]  2013.  Ikan  Segar.  SNI  2729:2013.  Badan  Standardisasi  Nasional: Jakarta.
European  Commission.  [EC],  2005.  Regulation  (EC)  No.  2073/2005  of  15  November  2005  on microbiological criteria for foods stuffs. Official Journal of the European Union. L 338/1.
Dalgaard P, Emborg J, Kjolby A, Sorensen ND, Ballin NZ. 2008. Histamin and biogenicamines : formation and  importance  in  seafood.  T  Borresen,  edited,  Improving  Seafood  Product  for  the  Customer.  North America : Woodhead PublishCRC Press LLC.
Daviz,  L  S.  P.  (2013).  Pengaruh  Perlakuan  Ekstrak  Daun  Jarak  Pagar  ( Jatropha  curcas L)  dan  Suhu Penyimpanan  Terhadap  Perubahan  Kadar  Histamin,  TMA-N  Dan  TVB-N  Ikan  Tuna  ( Thunnus sp). Universitas Gadjah Mada.
Food and Drug Administration. 2011. [FDA], Fish and fishery product hazards and control    guidance-Fourth Edition. US Department Health and Human Services. Food and Drug Administration. Center for Food Safety and Applied Nutrition. Florida.
Heruwati,  E.  S.,  Sukarto,  S.  T.,  &  Syah,  S.  U.  (2004).  Perkembangan  Histamin  selama  proses   fermentasi peda dari ikan kembung ( Rasfrelliger negtecfus ). Jumal Penelitian Perikanan Indonesia. 10(3). 47 -55. Hiariey,  S.  Pujantoro,  L.  &  Sugiyono.  2013.  Ekstrasi  air  biji  atung  ( Parinarium  glaberium  Hassk )  untuk mendapatkan bahan pengawet alami. Jurnal Keteknikan Pertanian . 27(1) 49-51
Kim, S. H., An, H. & Price, R. J. 2006. Histamin Formation and Bacterial Spoilage of Albacore Harvested off the U.S Northwest Coast. Journal of Food Science . 64(2):340–343. Kusmarwati,  A.  &  N,  Indriati.  2008.    Daya  hambat  ekstrak  bahan  aktif  biji  picung  ( Pangium  edule )  terhadap pertumbuhan  bakteri  penghasil  histamine. Jurnal  Pasca  Panen  dan  Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan . 3(1):29-35.
Kusuma,  S.  M,  Susilorini,  E.T,  Surjowardojo,  P.  2017.  Pengaruh  lama  dan  suhu  penyimpanan  ekstrak  daun  sirih hijau  ( piper  betle  linn )    dengan  aquades  terhadap  daya  hambat  bakteri Streptococus  agalactiae penyebab mastitis pada sapi perah. Jurnal Ternak Tropika . 18(2). 14-21
Lan NT, Dallsgarad A, Camp PD, Mara D. 2007. Microbiological  quality of fish grown in wastewater-fed and non wastewater-fed fishpond in  Hanoi, Vietnam : Influence of hyegine practices in  local retail  markets. Journal Water and Health 5:209-218
Lehane, L. and Olley, J. (2000) Histamine Fish Poisoning  Revisited. International  Journal  of  Food Microbiology , 58, 1-37.
Makisake, R. G., Montolalu, R. I., Mewengkang, H. W,. Sanger, G., Harikedua, S. D., Makapedua, D. M., Salindeho, N., Zagoto, E. B. S., & Gumolung, I. J. P. A. (2022).  Studi  In  Silico  Senyawa  Daun  Tagalolo (Ficus  septica  Burm F)  sebagai  Ligan  Uji  pada  Enzim  L-Histidin  Dekarboxilase. Media  Teknologi  Hasil Perikanan 10(3):122–126.
Mentari  L.M, Safrida, Khairil, 2016. Potensi  pemberian ekstrak daun sirih ( piper betle L) sebagai  pengawet  alami ikan selar ( Selaroides leptolepis ). Jurnal ilmiah Mahasiswa Pendidikan Biologi . (1) 1-9.
Moniharapon,  T.,  Pattipeilohy,  F.,  Mailoa,  M.  N.,  &  Souhotta,  L.  M.  (2019).  Aplikasi  pengawet  alami  atung ( Parinarium glaberimum hassk ) pada industri tuna loin di  Dusun Parigi Desa Wahai. Majalah Biam , 15(2): 70–76
Pianusa, F. A, Sanger, G. & Wonggo, D. 2015. Kajian perubahan mutu kesegaran ikan Tongkol ( Euthynnus Affinis ) yang direndam  dalam ekstrak rumput laut ( Eucheuma spinosum )  dan ekstrak buah bakau ( Sonneratia alba). Media Teknologi Hasil Perikanan 3(2):66-74 Rahayu,  S.  2015.  Deteksi Streptococus  agalactiae penyebab  mastitis  subklinis  pada  sapi  perah  di  kecamatan Cendana kabupaten Enkareng. Program Studi Kedokteran Hewan. Universitas Hasanuddin,  Makasar. Setyarini,  V.D.,  Indah,  L.  &  Christ,  K.  2019.  Kadar  histamin  pada  udang  vannamei  ( Litopenaeus  vannamei )  dan identifikasi bakteri pembentuk histamin. Analis Kesehatan Sains . 8(1):666-671. Sudirga,  S.  K.  (2018).  Efektivitas  Ekstrak  Daun  Awar-Awar  ( Ficus  septica) Sebagai  Fungisida  Nabati  Terhadap Penekanan Penyakit Antraknosa Pada Tanaman Cabai Besar. Prosiding Semnas Pendidikan Biologi.
Sumiati,  S.,  &  Marjanah,  M.  (2020).  Perbandingan  buah  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )  dan  daun  kemangi ( Ocimum  Sanctum )  sebagai  bahan  pengawet  alami  ikan  kembung  ( Rastrellinger sp.). Jurnal  Jeumpa ,  7(2): 422–432
Tuna,  I.  A,  Wowor  M.  P,  &  Awaloei  H.  2016.  Uji  daya  hambat  ekstrak  daun  awar-awar  ( Ficus  septica  Burm, F) terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli . Journal Biomedik . (4). 1-4 Utari,  F.,  Herliany,  N. E.,  Negara,  B.,  Kusuma, A.  B.,  &  Utami,  M.  A. F. (2018).  Aplikasi  variasi  lama  maserasi buah  mangrove  Avicennia  marina  sebagai  bahan  pengawet  alami  ikan  nila  ( Oreochromis sp.). Jurnal Enggano 3(2):164-177. Valent, F. A., Parwata, I. M. O. A., & Rita, W. S. (2017). Potensi Ekstrak Etanol Daun Kelor ( Moringa  oleifera ) Terhadap Penurunan Kadar Histamin Pada Ikan Lemuru ( Sardinella longiceps ). Jurnal Media Sains 1(2):57– 62.
Winarno, F. (2014). Kimia Pangan dan Gizi. Gramedia.
Wodi, S. I., Trilaksani, W. & Nurilmala, M. 2018. Histamin dan identifikasi bakteri pembentuk histamin pada tuna mata besar ( Thunnus obesus ). Jurnal Teknologi Perikanan dan Kelautan. (9). 185-195