EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr

## Potensi Bakteri Halofilik Ekstrim dari Tambak Garam Tradisional sebagai
Penghambat Aktivitas Bakteri Salmonella sp.
Eka Nurrahema Ning Asih*, Dewi Anugrah Fitri, Ary Giri Dwi Kartika,

## Sri Astutik, Makhfud Efendy
Program Studi Ilmu Kelautan, Fakultas Pertanian, Universitas Trunojoyo Madura Jl. Raya Telang, PO BOX 02 Kecamatan Kamal, Bangkalan Jawa Timur 69162 Indonesia Corresponding author, e-mail: eka.asih@trunojoyo.ac.id
ABSTRAK :  Infeksi  bakteri Salmonella sp.  di  perairan  dapat  merugikan  perikanan  budidaya, menurunkan kualitas hasil perikanan tangkap dan merusak kualitas produk olahan perikanan. Perlu dilakukan penelitian untuk mengatasi dan mencegah aktivitas bakteri Salmonella sp. pada beberapa sektor  perikanan  tersebut.  Salah  satu  upaya  yang  bisa  dilakukan  adalah  memanfaatkan sumberdaya bakteri halofilik yang hidup melimpah di air meja kristalisasi tambak garam tradisional sebagai  agen  penghambat  aktivitas  bakteri Salmonella sp..  Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengetahui potensi bakteri halofilik ekstrim yang dikultur dari tambak garam tradisional Pamekasan- Madura  sebagai  penghambat  aktivitas  bakteri Salmonella sp..  Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  terdiri  dari  beberapa  tahap  yaitu  isolasi,  purifikasi,  uji  pewarnaan  gram  dan  uji  zona hambat bakteri. Karakteristik morfologi dan pengelompokan gram bakteri  halofilik ekstrim diamati dibawah  mikroskop  binokuler  model  CX43RF  dengan  tipe  kamera  digital  MDCE-5C.  Uji  aktivitas isolat  bakteri  halofilik  ekstrim  terhadap Salmonella sp.  dilakukan  dengan  uji  zona  hambat menggunakan  metode  overlay  dan  difusi.  Hasil  penelitian  diperoleh  menunjukkan  bahwa  isolat bakteri halofilik esktrim mampu menghambat aktivitas Salmonella sp. dengan kisaran zona hambat berdiameter 4,28 mm dan 2,45 mm. Hasil penelitian ini diharapkan menjadi informasi awal untuk dipertimbangkan dalam pengembangan pemanfaatan bakteri halofilik ekstrim di bidang bioteknologi khususnya farmakologi laut kedepannya.
Kata Kunci : Bakteri halofilik ekstrem; Penghambat aktivitas; Salmonella sp.
Potential of Extreme Halophilic Bacteria from Traditional Salt Ponds as Inhibitors of Salmonella sp.
ABSTRACT : Salmonella sp. in the waters can be detrimental to aquaculture, reduce the quality of captured fishery products and damage the quality of processed fishery products. Research needs to be done to overcome and prevent the activity of Salmonella sp. in some of the fisheries sectors. One of the efforts that can be done is to utilize the halophilic bacteria resources that live abundantly in the  crystallization  table  water  of  traditional  salt  ponds  as  agents  that  inhibit  the  activity  of  these bacteria. This study aims to determine the potential of extremely halophilic bacteria cultured from Pamekasan-Madura  traditional  salt  ponds  as  inhibitors  of  Salmonella  sp.  bacteria  activity.  The method used in this study consisted of several stages, namely isolation, purification, gram staining test, and bacterial inhibition zone test. Morphological characteristics and gram grouping of extremely halophilic bacteria were observed under a CX43RF binocular microscope with a digital camera type MDCE-5C. Activity test of extremely halophilic bacteria isolates against Salmonella sp. was carried out by testing the zone of inhibition using overlay and diffusion methods. The results showed that the extreme halophilic bacteria isolates were able to inhibit the activity of Salmonella sp. with a range of 4.28 mm and 2.45 mm diameter inhibition zones. The results of this study are expected to be initial information to be considered in the development of the use of extremely halophilic bacteria in the field of biotechnology, especially marine pharmacology in the future.
Keyword: Extreme halophilic bacteria; Inhibitory activity; Salmonella sp.

## PENDAHULUAN
Bakteri  halofilik  merupakan  kelompok  mikroorganisme  yang  dapat  tumbuh  di  lingkungan dengan  kadar  garam  rendah  hingga  tinggi  (Sabdaningsih  dan  Lunggani  2020).  Bakteri  halofilik dibedakan  menjadi  3  kelompok  berdasarkan  kemampuan  hidupnya  yaitu  halofilik  rendah  ( slight halophiles ) tumbuh optimal kisaran 2-5% kadar NaCl, halofilik sedang ( moderate halophiles ) kisaran 5-20% kadar NaCl, dan halofilik ekstrim ( extreme halophiles ) kisaran 20-30% kadar NaCl. Bakteri ini  sering  ditemukan  pada  danau  garam  (Hassanshahian  dan  Jafar  2011)  khususnya  meja kristalisasi tambak garam (Marihati et al ., 2014). Malik et al ., (2019) menyatakan bahwa keberadaan bakteri  halofilik  ekstrim  di  meja  kristalisasi  dapat  mempercepat  proses  evaporasi  yang  dapat membantu  mengoptimalkan  penyerapan  sinar  matahari.  Bakteri  ini  juga  memiliki  kemampuan mempercepat proses kristalisasi garam (Marihati et al ., 2014) dan mempengaruhi kondisi fisik garam Malik et al ., 2019).
Pemanfaatan  bakteri  halofilik  tidak  hanya  sebatas  untuk  meningkatkan  kualitas  garam. Kelompok  bakteri  ini  memiliki  potensi  besar  untuk  dimanfaatkan  dibidang  biofarmakologi,  salah satunya  untuk  menghambat  aktivitas  bakteri  patogen  misalnya Salmonella sp.. Salmonella sp. merupakan  bakteri  patogen  yang  dapat  menginfeksi  hewan  maupun  manusia  (Ijong  2015). Beberapa  jenis  penyakit  akibat  infeksi  bakteri  ini  diantaranya  demam  tifoid,  tipes  dan  gangguan pencernaan  (Mogea  2006).  Bakteri Salmonella sp.  juga  termasuk  kategori  bakteri  mutu  yang menjadi  indikator  keamanan  pangan  pada  produk  perikanan  karena keberadaan  bakteri  ini  tidak boleh ditemukan atau negatif/25 gram pada produk ikan dan udang di Indonesia (Standart Nasional Indonesia,  2009).  Cemaran  bakteri Salmonella  sp. pada  produk  perikanan  dapat  menyebabkan salmonellosis yang mengindikasikan keracunan pada manusia (Hatmanti et al ., 2009). Kontaminasi bakteri Salmonella sp.  pada  produk  perikanan  umumnya  berasal  dari  lingkungan  laut  yang  telah tercemar limbah domestik seperti sampah, tinja, bangkai yang dihasilkan masyarakat setempat dan proses pengolahan produk yang tidak hygenis (Wahyuni et al ., 2017). Kontaminasi bakteri ini juga berasal  dari  sumber  air  tambak  dari  bahan  mentah  perikanan  misalnya  lokasi  udang  tersebut berkembang biak (Narumi et al ., 2009) dan manajemen pengelolaan kualitas air tambak yang tidak baik (Sutiknowati 2014). Infeksi Salmonella  sp pada  manusia  dan  produk  perikanan  ini  perlu  dilakukan  upaya penanganan  agar  tidak  memberikan  dampak  negatif  jangka  panjang.  Upaya  penanganan  awal dapat  dilakukan  dengan  melaksanakan  eksplorasi  pemanfaatan  bakteri  halofilik  ekstrim  yang dikultur dari meja kristalisasi tambak garam tradisional untuk menghambat aktivitas Salmonella sp.. Isolasi  bakteri  halofilik  ekstrim  dapat  diperoleh  dari  wilayah  yang  termasuk  areal  sentra  produksi garam di Indonesia salah satunya Pulau Madura. Pulau Madura merupakan wilayah yang memiliki luas  lahan  produksi  garam  terbesar  di  Jawa  Timur  sekitar  11.170,9  Ha  (Amami  dan  Ihsannudin, 2016).  Salah  satu  Kabupaten  yang  termasuk  dalam  daerah  pusat  produksi  garam  terbesar  di Madura  adalah  Pamekasan  (Efendy et  al .,  2012).  Tambak  garam  tradisional  di  Kabupaten Pamekasan  memiliki  potensi  yang  besar  untuk  menyediakan  isolat  bakteri  halofilik  ekstrim  yang melimpah.  Pentingnya  informasi  dan  penelitian  awal  terkait  potensi  bakteri  halofilik  ekstrim  yang melimpah  di  tambak  garam  tradisional  Pamekasan  untuk  menghambat  aktivitas Salmonella sp. inilah yang melatarbelakangi penelitian ini dilakukan. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui potensi  bakteri  halofilik  ekstrim  yang  dikultur  dari  tambak  garam  tradisional  Pamekasan-Madura sebagai penghambat aktivitas bakteri Salmonella sp.. Informasi ini diharapkan menjadi tahap awal untuk  mempertimbangkan  pemanfaatan  bakteri  halofilik  ekstrim  dibidang  biofarmakologi  laut Indonesia kedepannya.

## MATERI DAN METODE
Pengambilan  sampel  air  meja  kristalisasi  tambak  garam  dilakukan  di  Tambak  Garam Tradisional  di  Desa  Tanjung Kecamatan  Pademawu Kabupaten  Pamekasan  (Gambar  1)  dengan titik koordinat 7°13’49.64”S,113°32’12.33”E. Sampel air meja kristalisasi di ambil sebanyak 10 ml menggunakan tabung reaksi ulir yang telah distrerilisasi. Pengambilan sampel air meja kristalisasi
dilakukan dengan memasukkan tabung reaksi ulir dengan keadaan tertutup kedalam air, kemudian membuka tutup tabung di dalam air dan ditutup kembali dengan posisi tabung masih di dalam air. Sampel air yang telah didapatkan dimasukan kedalam cool box yang telah di isi es batu. Sampel selanjutnya dibawa ke Laboratorium Biologi Laut Prodi Ilmu Kelautan Universitas Trunojoyo Madura untuk dilakukan isolasi bakteri.

## Isolasi dan Purifikasi Koloni Bakteri Halofilik
Isolasi bakteri halofilik dilakukan dengan memipet sampel air meja kristalisasi sebanyak 50 µL per  cawan  petri  dengan sistem  duplo.  Sampel  yang telah  diisolasi  di  simpan ke dalam  inkubator dengan suhu 28-30°C selama 21x24jam. Koloni bakteri yang tumbuh selanjutnya dipurifikasi atau dimurnikan.  Purifikasi  atau  yang  dikenal  metode  pemurnian  koloni  bakteri  dengan  menggunakan metode penggoresan (Waluyo 2007). Teknik purifikasi yang digunakan dalam penelitian ini adalah goresan  kuadran  (4  goresan  dalam  lempengan  agar).  Purifikasi  koloni  bakteri  dilakukan  dengan mengambil  1  lup  koloni  bakteri,  kemudian  dilakukan  penggoresan  pada  media  padat,  kemudian sampel disimpan ke dalam inkubator dengan suhu 28-30°C selama 21x24 jam. Koloni bakteri yang telah tumbuh saat purifikasi, kemudian dipindahkan ke dalam media agar miring.

## Identifikasi Morfologi Bakteri Halofilik Ekstrim
Identifikasi  morfologi  bakteri  yang  dilakukan  meliputi  morfologi  koloni  dan  sel  bakteri. Pengamatan morfologi koloni bakteri dilakukan secara langsung dengan melakukan pengamatan warna, opacity, from, elevasi, margin dan permukaan koloni bakteri. Karakteristik morfologi koloni bakteri yang tumbuh di media padat tersebut   ditentukan   berdasarkan bentuk koloni bakteri merujuk pada  Leboffe  (2012).  Pengamatan  morfologi  sel  dilakukan  secara  mikroskopik  dengan menggunakan metode pewarnaan gram.

## Pewarnaan Gram Bakteri Halofilik Ekstrim
Pewarnaan  gram  bakteri  merupakan metode  karakterisasi  bakteri  secara  mikroskopik  yang digunakan untuk mengetahui morfologi sel bakteri dan sifat gramnya (Wulandari dan Purwaningsih 2019).  Uji  gram  bakteri  yang  pertama  dilakukan  preparasi  preparat.  Preparat  dibersihkan menggunakan  alcohol,  kemudian  panaskan  jarum  ose  hingga  memerah.  Jarum  ose  yang  telah panas  ditetesi  aquades,  kemudian  digoreskan  pada  preparat.  Panaskan  jarum  ose  lagi  hingga memerah  kemudian  ambil  1  lup  isolat  murni  dan  digoreskan  secara  membulat  pada  preparat, kemudian dikeringkan dengan cara dilewatkan diatas api bunsen. Preparat yang telah kering dan membentuk  lingkaran  isolat,  kemudian  di  tetesi  kristal  violet  sebanyak  1-2  tetes  selama  1  menit selanjutnya  dibilas  dengan  aquades.  Isolat  kemudian  ditetesi  dengan  lugol  sebanyak  1-2  tetes selama  1  menit  kemudian  dibilas  dengan  aquades  dan  guyur  aceton  alkohol  untuk  meluruhkan warna ungu selanjutnya ditetesi safranin sebanyak 1-2 tetes dan dibiarkan selama 1 menit kemudian dibilas  dengan  aquades.  Isolat  yang  telah  selesai  pewarnaan  gram  diamati  dibawah  mikroskop binokuler CX43RF dengan digital kamera tipe MDCE-5C .
Uji Aktivitas Isolat Halofilik EkstrimTerhadap Salmonella sp.
Uji  aktivitas  isolat  bakteri  halofilik  ekstrim  terhadap  bakteri Salmonella sp . dilakukan menggunakan metode difusi disk mengacu pada Trianto et al ., (2019). Tahap ini dimulai dengan mengkultur  isolat  bakteri  murni  dengan  cara  menshaker  isolat  bakteri  menggunkaan  media  cair selama 2x24 jam. Hasil pengkulturan bakteri diisolasi pada media padat yang selanjutnya diletakkan kertas cakram steril. Kertas cakram steril dibasahi dengan isolat bakteri halofilik ekstrim sebanyak 3µL,  kemudian  diinkubasi  selama  2x24  jam.  Zona  hambat  yang  terbentuk  diukur  menggunakan jangka  sorong.  Pengukuran  zona  hambat  bakteri  dilakukan  berdasarkan  bentuk  bulatan  yang dihasilkan oleh agen zona hambat (Gambar 2). Pengukuran diameter zona hambat terbentuk yang bulat  sempurna menggunakan  pengukuran  berdasarkan  Oroh et  al., (2015).  Metode  pengukuran zona hambat yang tidak terbentuk bulat penuh dilakukan dengan cara merata-rata diameter yang terbentuk (Widiana et al., 2011).  Berikut cara pengukuran zona hambat menurut Oroh et al., (2015) dan Widiana et al., (2011).

## Analisa Data
Analisa data pada penelitian ini yaitu dengan mengukur besaran diameter zona hambat pada setiap  sampel.  Menurut  Oroh et  al., (2015)  mengkategorikan  besaran  zona  hambat  menjadi  4 kategori yang disajikan dalam Tabel 1.
a b
Gambar 2. Metode pengukuran zona hambat bakteri: a) Zona hambat terbentuk bulat penuh (Oroh et al., 2015) dan b) Zona hambat tidak terbentuk bulat (Widiana et al., 2011)
Tabel 1 Kategori besaran zona hambat antibakteri
Ukuran diameter (mm) Kategori >20 Sangat Kuat 10-20 Kuat 5-10 Sedang <5 Lemah Sumber: Oroh et al., 2015
Data  yang  diperoleh  dianalisis  secara  deskriptif  yang  disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan gambar.  Data  tersebut  dinarasikan  berdasarkan  hasil  yang  dilengkapi  dengan  literatur  yang berkaitan dan mendukung.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Produksi garam secara tradisional yang dilakukan oleh masyarakat pesisir di Desa Tanjung Kecamatan  Pademawu  Kabupaten  Pamekasan-Madura  umumnya  dilakukan  mulai  dari pengambilan air baku di laut yang dialirkan di kolam penampungan atau yang dikenal dengan istilah bouzem/ reservoir . Air baku yang telah terkumpul di bouzem, kemudian dialirkan menuju ke kolam peminihan dan berakhir di meja kristalisasi. Salah satu mikroorganisme yang mampu hidup pada lingkungan air produksi garam tradisional ini adalah bakteri halofilik. Bakteri halofilik terbagi atas 3 kelompok yaitu halofilik rendah ( slight halophiles ) hidup pada kadar NaCl 0,2-0,5 M, halofilik sedang ( moderate halophiles ) hidup pada kadar NaCl 0,5-2,5 M dan halofilik ekstrim ( extreme halophiles ) hidup pada kadar NaCl 2,5-5,2 M (Oren 2008).
Karakteristik isolat bakteri halofilik dapat diidentifikasi dengan mengetahui morfologi (warna, form, elevasi, margin dan permukaan) dan gram bakteri. Karakteristik isolat bakteri halofilik ekstrim yang dikultur dari sampel diidentifikasi secara morfologi koloni disajikan dalam Tabel 2 dan Gambar 3.
Identifikasi  koloni  bakteri  halofilik  ekstrim  ( extreme halophiles )  banyak  ditemukan  berwarna merah  muda,  merah  dan  orange  kemerahan  dengan  transparasi  tidak  transparan  (Gambar  1.3). Koloni tersebut kebanyakan berbentuk circular dengan elevasi raised hingga convex . Koloni halofilik ekstrim ( extreme halophiles ) bermargin entire dan permukaan koloni halus dan mengkilap. Seluruh koloni  bakteri  memilik  perbedaan  yang  paling  dominan  yaitu  warna  merah.  Warna  merah menandakan bakteri tersebut bakteri halofilik ekstrim ( extreme halophiles ). Bakteri halofilik ekstrim ( extreme halophiles ) merupakan bakteri yang dapat tumbuh pada media garam dengan konsentrasi 2,5-5,2 M (Oren 2008). Bakteri halofilik memiliki karakteristik yaitu berpigmen merah (Oren 2002). Warna  merah  yang  dimiliki  bakteri  halofilik  bermanfaat  sebagai  sumber  karotenoid  yang mempercepat laju penguapan air (Castro et al., 2018). Karakteristik tersebut merupakan karakter unik bakteri halofilik.
Bakteri  halofilik  yang  telah  diidentifikasi  kemudian  dipurifikasi  dengan  tujuan  untuk menghasilkan isolat bakteri halofilik murni. Tujuan dari purifikasi yaitu memisahkan koloni bakteri menjadi satu isolat yang benar-benar murni (Ayuningrum et al., 2020). Hasil purifikasi bakteri halofilik ekstrim sebanyak 2 isolat yaitu P.MK.4 dan P.MK.6 (Gambar 4). Budiharjo et al., (2017) menjelaskan bahwa bakteri halofilik ekstrim tumbuh optimal pada kadar NaCl 20-30%
Isolat murni bakteri halofilik ekstrim kemudian di uji pewarnaan gram. Pewarnaan gram bakteri merupakan  metode  karakterisasi  bakteri  secara  mikroskopik  yang  digunakan  untuk  mengetahui morfologi sel bakteri dan sifat gramnya (Wulandari dan Purwaningsih 2019) Isolat bakteri halofilik yang telah murni selanjutnya diuji gram. Uji gram dilakukan untuk mengetahui gram bakteri dengan ketentuan  warna  ungu  untuk  bakteri  gram  positif  dan  warna  merah  untuk  bakteri  gram  negatif. Bakteri bergram positif karena bakteri tersebut mengikat warna kristal violet dengan kuat sedangkan bakteri gram negatif mengikat warna safranin dengan kuat (Wantania et al., 2016). Berikut hasil uji gram bakteri disajikan pada (Gambar 5).
Hasil  uji  gram  bakteri  halofilik  ekstrim  yaitu  bakteri  gram  negatif  dengan  bentuk  sel  basil pendek.  Kelompok  bakteri  gram  negatif  memiliki  persentase  lipid  dan  lemak  yang  lebih  tinggi
dibandingkan  kelompok  bakteri  gram  positif  (Sudarsono,  2008),  karena  kelompok  bakteri  gram negatif  ini  umumnya  memiliki  peptidoglikan  yang  lebih  tipis  dibandingkan  kelompok  bakteri  gram positif (Sunatmo, 2007). Fitri et al., (2022) menyatakan bahwa bakteri halofilik memiliki gram yang bervariasi yaitu gram negatif dan positif, selain itu bakteri halofilik juga memiliki karakter 75-85% terdapat flagel dan berbentuk batang.

## Tabel 2 Identifikasi morfologi koloni bakteri halofilik ekstrem
Kode Isolat Morfologi Koloni Bakteri Warna dan opacity From dan Elevasi Margin dan Permukaan P.MK.1 Putih Kemerahan, tidak transparan Circular, Convex Entire , Halus P.MK.2 Merah muda, transparan Irregular, Raised Entire, Halus dan Berkilau P.MK.3 Putih tulang, tidak transparan Circular, Convex Entire, Halus P.MK.4 Merah, tidak transparan Circular, convex Entire, Halus dan Berkilau P.MK.5 Putih Kemerahan, tidak transparan Circular, Raised Entire, Halus dan Berkilau P.MK.6 Orange kemerahan, tidak transparan Circular, Raised Entire , Halus dan Berkilau P.MK.7 Kuning Kemerahan, tidak transparan Irregular, Raised Entire , Halus dan Berkilau
Keterangan:  P.MK  =  Pamekasan  Meja  Kristalisasi  Isolat  halofilik  ekstrim  adalah  isolat  bakteri halofilik ekstrim dari air meja kristalisasi.
P.MK.1
P.MK.2 P.MK.3
P.MK.4
P.MK.5 P.MK.6 P.MK.7
Gambar 3. Koloni bakteri halofilik ekstrem Keterangan:  P.MK.1:  Pamekasan  Meja  Kristalisasi  Isolat  halofilik  ekstrim  1;  P.MK.2:  Pamekasan Meja  Kristalisasi  Isolat  halofilik  ekstrim  2;  P.MK.3:  Pamekasan  Meja  Kristalisasi  Isolat  halofilik ekstrim 3; P.MK.4: Pamekasan Meja Kristalisasi Isolat halofilik ekstrim 4; P.MK.5: Pamekasan Meja Kristalisasi Isolat halofilik ekstrim 5; P.MK.6: Pamekasan Meja Kristalisasi Isolat halofilik ekstrim 6 P.MK.7: Pamekasan Meja Kristalisasi Isolat halofilik ekstrim 7
Journal of Marine Research Vol 12, No. 3 Agustus 2023, pp. 382-390
Gambar 4. Hasil purifikasi isolat bakteri ekstrim ( extreme halophiles )
P.MK.4 (-) Basil pendek P.MK.6 (-) Basil pendek
Gambar 5. Hasil pewarnaan gram isolat bakteri halofilik ekstrim ( extreme halophiles )
Aktivitas  isolat  bakteri  halofilik  terhadap  bakteri Salmonella sp . dimulai  dengan  mengkultur bakteri halofilik ekstrim dan Salmonella sp. dalam media cair dan di shaker selama 3x24 jam. Waktu yang  sedikit  lama  pada  saat  pengkulturan  dikarenakan  adanya  adaptasi  lingkungan  oleh  bakteri halofilik ekstrim. Oren et al., (2006) menyatakan bahwa bakteri halofilik tumbuh dengan berbagai kondisi salinitas dan juga kepekatan air laut. Isolat yang telah dikultur diisolasi pada media padat yang disebar yaitu bakteri Salmonella sp . sebanyak 100 µL dan diisi 5 kertas cakram yang terdiri atas 3 kali pengulangan isolat bakteri halofilik sebanyak 3 µL, 1 kontrol negatif dan 1 kontrol positif. Isolat yang telah diisolasi selanjutnya diinkubasi selama 2x 24 jam dengan suhu 37°C. Zona hambat merupakan  zona  terbentuknya  antibakteri  yang  dapat  diartikan  sebagai  zat  penghambat  atau mematikan pertumbuhan bakteri tertentu. Hasil pengukuran zona hambat ditampilkan pada Tabel 3.
Hasil uji zona hambat diketahui bahwasannya isolat bakteri halofilik ekstrim termasuk kategori lemah sesuai dengan pengkategorian zona hambat menurut Oroh et al., (2015) yang menunjukkan jika <5  mm  termasuk  kategori  lemah.  Daya  hambat  pada  isolat  ekstrim  halofilik  tergolong  lemah dikarenakan  bakteri  halofilik  ekstrim  tumbuh  optimal  pada  kadar  NaCl  yang  tinggi,  sehingga memerlukan waktu sedikit lama untuk beradaptasi dengan media yang telah disediakan. Menurut Yuliana et  al., (2019)  bahwa  pertumbuhan  bakteri  terdapat  4  fase  yaitu fase  lag,  fase  log,  fase stasioner dan fase kematian. Hasil pengujian yang diperoleh didapatkan fenomena bahwa bakteri halofilik ekstrim yang kultur pada media tidak menunjukkan indikasi pertumbuhan maksimal pada hari ke-2 pasca kegiatan kultur dilakukan. Indikasi pertumbuhan maksimum atau dikenal istilah fase stasioner pada bakteri ekstrim halofilik pada hari ke-3. Fase stasioner atau percepatan pertumbuhan ini merupakan kondisi dimana bakteri dalam kondisi mengalami pertumbuhan yang stabil (Yuliana et al., 2019) ditandai dengan kekeruhan pada media (Sumarno 2000).
Journal of Marine Research Vol 12, No. 3 Agustus 2023, pp. 382-390
Tabel 3. Aktivitas zona hambat bakteri halofilik terhadap salmonella sp.
Kode isolat Diameter (mm) Kategori P.MK.4 4,28 Lemah C+ 31 Sangat kuat C- 0 - P.MK.6 2,45 Lemah C+ 28 Sangat kuat C- 0 -
Keterangan:  P.MK  =  Pamekasan  Meja  Kristalisasi  Isolat  halofilik  ekstrim  adalah  isolat  bakteri halofilik ekstrim dari air meja kristalisasi; C+ = Kontrol positif; C- = Kontrol negatif
Hasil  yang  diperoleh  dari  penelitian  juga  dialami  dari  penelitian  Yulianti  (2016)  yang menyatakan  bahwa  Bakteri Salmonella sp . masuk  pada fase stasioner pada  hari  kedua  dengan ditandai  keruhnya  media  pengkulturan.  Hasil  penelitian  Yulianti  (2016)  menunujukkan  bahwa pertumbuhan  bakteri Salmonella sp.  dipengaruhi  juga  oleh  suhu.  Bakteri Salmonella sp . tumbuh optimal  dengan  suhu  35-37°C.  Fenomena  lain  yang  didapatkan  dari  hasil  penelitian  ini  juga didapatkan bahwa ada perbedaan waktu pertumbuhan bakteri halofilik ekstrim membutuhkan waktu yang sedikit lama dengan pertumbuhan bakteri Salmonella sp . Perlambatan pertumbuhan bakteri halofilik ekstrim menghasilkan zona hambat lemah dikarenakan pada saat bakteri Salmonella sp. masuk pada fase stasioner sedangkan bakteri halofilik ekstrim memasuki fase log atau pertumbuhan yang signifikan namun belum terdapat metabolit sekunder (Yulianti 2016), sehingga belum terdapat senyawa antibiotik untuk melawan bakteri Salmonella sp.

## KESIMPULAN
Isolat  bakteri  halofilik  esktrim  dari  meja  kristalisasi  garam  tradisional  Pamekasan  memiliki potensi  untuk  menghambat  aktivitas  bakteri Salmonella sp . dengan  kisaran  zona  hambat berdiameter 4,28 mm dan 2,45 mm. Kisaran daya hambat bakteri haofilik termasuk kategori lemah diduga karena bakteri halofilik ekstrim membutuhkan waktu lebih lama untuk dapat tumbuh optimal pada media dengan kadar NaCl yang tinggi yang telah disediakan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada Lembaga Penelitian dan Pengabdian Masyarakat Universitas Trunojoyo Madura  melalui  Program  Hibah  Penelitian  Mandiri  UTM  2021  dengan  nomor  kontrak  penelitian: 3217/UN46.4.1/PT.01.03/2021.

## DAFTAR PUSTAKA
Ayuningrum,  D.,  Rhesi,  K.,  &  Meezan,  A.A.,  2020.  Potensi  Bakteri  Asosiasi  Tunikata  sebagai Penghasil  Senyawa  Antibakteri  Guna  Menghambat  Pertumbuhan  Bakteri Multidrug  Resistant . Jurnal Pasir Laut , 4(2):102 – 107. DOI: 10.14710/pasir laut.2020.32807. Budiharjo, R., Sarjono, R., & Asy’ari, D.M. , 2017. Pengaruh Konsentrasi NaCl Terhadap Aktivitas Spesifik Protease Ekstraseluler dan Pertumbuhan Bakteri Halofilik Isolat Bittern Tambak Garam Madura. Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi , 20(3):142-145. DOI: 10.14710/jksa.20.3.142-145 Castro,  G.S.,  Moyo,  A.C.,  Khumalo,  L.,  Petrik,  L.F.,  &  Trindade,  M.,  2018.  Factors  Influencing Pigment Production by Halophilic Bacteria and Its Effect on Brine Evaporation Rates. Microbial Biotechnology , 12(2):334-345. DOI: 10.1111/1751-7915.13319
Fitri, D.A., Asih, E.N.N., Kartika, A.G.D., Agustina, N., Fadloli, B., Dewi, K., & Makhfud, E., 2022. Morphological  Characteristics  of  Halophilic  Bacteria  in  Tradisional  Salt  Production. Journal  of Marine Resources and Coastal Management, 3(1):1-7. DOI: 10.29080/mrcm.v3i01.1360
Hassanshahian, M., & Jafar, M., 2011. Isolation and Characterization of Halobacterium salinarum from Saline Lakes in Iran. Jundishapur Journal of Microbiology, 4(12):59-65.
Hatmanti,  A.N.R.,  &  Dewi,  J.,  2009.  Screening  Bakteri  Penghambat  untuk  Bakteri  Penyebab Penyakit  pada  Budi  Daya  Ikan  Kerapu  dari  Perairan  Banten  dan  Lampung. Makara  Sains . DOI:10.7454/mss.v13i1.395.
Ijong, F.G., 2015. Mikrobiologi dan Kelautan. Jakarta: Rineka Cipta.
Leboffe, M.J., & Pierce, B.E., 2012.  Brief Microbiology.Laboratory Theory & Application 2nd Edition.
Englewood: Morton Publishing.
Malik, R.A., Nilawati, N., Handayani, N.I., Rame, R., Djayanti, S., Pratiwi, N.I., & Setianingsih, N.I.
2019. Aplikasi Bakteri Halofilik Berwarna Merah Terimmobilisasi dalam Meningkatkan Kualitas Garam dalam Proses Produksi Garam. Prosiding SNPBS (Seminar Nasional Pendidikan Biologi dan Saintek) Ke-4.
Marihati.,  Harihastuti,  N.,  Muryati.,  Nilawati.,  Eddy,  S.,  &  Danny,  H.,  2014. Penggunaan  Bakteri Halofilik sebagai Biokatalisator Untuk Meningkatkan Kualitas dan Produktifitas Garam NaCl di Meja Kristalisasi. Jurnal Riset Industri , 8(3):191-196.
Mogea,  R.N.,  2006.  Kualitas  Perairan  Pesisir  Selatan  Pulau  Bunaken  Ditinjau  dari  Kondisi Bakteriologis. Jurnal Natural , 5(1):23-27. DOI:10.30862/jn.v5i1.703
Narumi, E.H., Zuhriansyah., & Mustofa, I., 2009. Pollution Detection of Salmonella sp . to Fresh White Shrimp  ( Panaeus  merguiensis )  at  Traditional  Market  of  Surabaya  Residence. Jurnal  Ilmiah Perikanan dan Kelautan , 1(1):87-91. DOI: 10.20473/jipk.v1i1.11703.
Oren, A., 2008. Microbial Life at High Salt Concentrations: Phylogenetic and Metabolic Diversity. Saline System (Biomed Central), 4(2):1-13. DOI: 10.1186/1746-1448-4-2. Oroh, S.B., Kandou, F.E.F., Pelealu, J., & Pandiangan, D., 2015. Uji Daya Hambat Ekstrak Methanol Selaginella delicatula dan Diplazium  dilatatum Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherecia coli . Jurnal Ilmiah Sains , 15(1):53-57. DOI: 10.35799/jis.15.1.2015.8238. Sabdaningsih,  A.,  &  Arina,  L.T.,  2020.  Isolasi  dan  Karakterisasi  Morfologi  Bakteri  Halofilik  dari Bledug Kuwu, Kabupaten Grobogan. Bioma , 22(1):46-52. DOI:10.14710/bioma.22.1.46-52.
Standar  Nasional  Indonesia.  2009.  SNI  7388  Batas  Maksimum  Cemaran  Mikroba  pada  Pangan. Jakarta: Badan Standarisasi Nasional Indonesia.
Sudarsono, A., 2008 . Isolasi dan Karakterisasi Bakteri pada Ikan Laut dalam Spesies Ikan Gindara (Lepidocibium flavobronneum). Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Sunatmo, T.I., 2007. Eksperimen Mikrobiologi dalam Laboratorium. Bogor: Penerbit Ardy Agency. Sutiknowati, I.L., 2014. Kualitas Perairan Tambak Udang Berdasar Parameter Mikrobiologi. Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis , 6(1):157-170. 10.28930/jitkt.v6i1.8638 Trianto, A., Nirwani., Susanti, O., Maesaroh, D., & Radjasa, O.K., 2019. The Bioactivity of Bacterium and  Fungi  Living  Associate  with  The  Sponge Reniera sp.  Against  Multidrug-Resistant Staphylococcus  aureus and Escherichia  coli.  Biodiversitas ,  20(8):2302-2307.  DOI: 10.13057/biodiv/d200827.
Wantania, L.L., Ginting, E.L., & Wullur, S., 2016. Isolasi Bakteri Simbion dengan Spons dari Perairan Tongkeina, Sulawesi Utara. Jurnal LPPM Bidang Sains dan Teknologi , 3(1):57-65. Waluyo, L., 2007. Mikrobiologi Umum. Malang: UMM Press.
Wahyuni, Y., Jamilah, I., & Suryanto, D., 2017. Isolation of Opportunistic Pathogen Bacteria from North Sumatera Shrimp Aquaculture. Jurnal Agrohita , 1(2):71-75.
Widiana,  R.,  Indriati,  G.,  &  Harsinta,  N.,  2011.  Daya  Hambat  Ekstrak  Daun  Mengkudu  ( Morinda citrifolia L .) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Penyebab Diare. Jurnal Saintek , 3 (1): 60-64. Wulandari, D., & Purwaningsih, D., 2019. Identifikasi dan Karakterisasi Bakteri amilolitik pada Umbi Colocasia  esculenta L.  Secara  Morfologi,  Biokimia  dan  Molekuler. Jurnal  Bioteknologi  & Biosains Indonesia , 4(2):247-258.
Yuliana, C., Hertadi, R., & Wahyuningrum, D., 2019. Produksi dan Optimasi Biosurfaktan dari Bakteri Halofilik Chromohalobacter  japonicus BK-AB18. CHEESA  (Cemical  Engeneering  Research Articels) , 2(2):56-65. DOI: 10.25273/cheesa.v2i2.5410. Yulianti.,  2016.  Pertumbuhan  Bakteri Salmonella  Sp. dengan Variasi  Konsentrasi  Jahe (Zingiber Officinate) pada Telur Asin. Universitas Islam Negeri Alauddin Makasar.