## PENGEMBANGAN METODE PENENTUAN KADAR NEOTAM DALAM SEDIAAN OBAT DENGAN SPEKTROFOTOMETRI UV
Dewi Kurnia 1 , Anne Yuliantini 1 , Dian Faizal 1
Sekolah Tinggi Farmasi Bandung, Jl. Soekarno Hatta No.754 Bandung Indonesia
Email : dewi.kurnia@stfb.ac.id
Diterima: 4 September 2017. Disetujui: 13 Januari 2018. Dipublikasikan: 30 Januari 2018
Abstract: Neotame is newly emerging synthetic sweetener on the market in 2002. Neotame is  often  used  in  the  pharmaceutical  industry  as  a  drug  excipient  because  it  has  no  calorific value and proven safe for consumption by those who suffered from phenylketonuria, diabetes and  pregnant  women.  This  research  aims  to  develop  an  alternative  method  in  determining neotame  in  drugs  by  using  UV  spectrophotometry. Stages  of  this  research are  qualitative tests,  wavelength  optimization,  method  validation  and  determination  of  neotame  levels  in drug  sample.  Qualitative  analysis  was  performed  by  using  TLC  with  silica  gel  GF254  and eluent n-buthanol, glacial acetic acid, aquadest (6:1:1) showed a positive result. Quantitative analysis was performed by using UV spectrophotometry at a wavelength of 210 nm. From validation result, evoked regression equation of y = 0,0229x + 0,0335 calibration curve with correlation  coefficient  value  (r)  0,9959;  The  limits  of  detection  and  quantization  are respectively  1.2  ppm;  The  percent  value  of  recovery  at  100.7%  with  interday  and  intraday SBR  values  respectively  0,64%  and  1,4%.  The  results  of  the  drug  sample  measurement showed the levels of neotame is 0.09 mg/tablet. This result is stated still appropriate with the requirements  of  BPOM  i.e  maximum  use  per  day  <2  mg/kg  body  weight.  Based  on  this research results can be concluded that the determination of neotame levels in drug samples can be done by UV spectrophotometry method.
Keywords: sweetener, neotam, spektrophotometri  UV
Abstrak Neotam merupakan pemanis sintetis yang baru muncul di pasaran pada tahun 2002. Neotam sering digunakan pada industri farmasi sebagai eksipien obat karena tidak memiliki nilai kalori dan terbukti aman dikonsumsi oleh penderita gangguan fenilketonuria, diabetes dan wanita . hamil. Penelitian ini bertujuan sebagai metode alternatif penentuan neotam dalam sediaan  obat  secara  spektrofotometri  UV.  Tahapan  penelitian  yang  dilakukan  yaitu  uji kualitatif, optimasi panjang gelombang, validasi metode dan penetapan kadar neotam dalam sampel obat. Analisis kualitatif dilakukan menggunakan KLT dengan silika gel GF 254 60 dan eluen  n-butanol,  asam  asetat  glasial,  aquadest  (6:1:1)  menunjukkan  hasil  yang  positif. Analisis  kuantitatif  dilakukan  menggunakan  spektrofotometri  UV  pada  panjang  gelombang 210  nm.  Dari  hasil  validasi,  didapatkan  persamaan  regresi  kurva  kalibrasi  y  =  0,0229x  +
0,0335 dengan nilai koefisien korelasi (r) 0,9959; batas deteksi dan kuantisasi berturut-turut sebesar  1,2  bpj  dan  4,2  bpj;  nilai  persen  perolehan  kembali  sebesar  100,7  %  dengan  nilai SBR interday  dan  intraday berturut-turut  0,64%  dan  1,4%.  Hasil  pengukuran  terhadap sampel obat menunjukkan kadar neotam sebesar 0,09 mg/tablet. Hasil ini dinyatakan masih memenuhi persyaratan BPOM, yaitu maksimum penggunaan perhari < 2 mg/kg berat badan. Berdasarkan  hasil  peneltian,  dapat  disimpulkan  bahwa  penetapan  kadar  neotam  dalam sampel obat dapat dilakukan dengan metode spektrofotometri UV.
Kata kunci : pemanis, neotam, spektrofotometri UV

## PENDAHULUAN
Penggunaan  pemanis  meningkat seiring  berkembangnya  industri  pangan dan  obat-obatan.  Pemanis  ditambahkan untuk  tujuan  meningkatkan  cita  rasa  dan penerimaan  konsumen.  Pemanis  yang digunakan  ada  yang  alami  dan  sintetis, tetapi  penggunaan  pemanis  sintetis  lebih sering digunakan karena tidak mengandung kalori dan harga yang relatif murah  dengan  tingkat  kemanisan  yang tinggi  dibandingkan  pemanis  alami (Cahyadi, 2008).
Pada  industri  farmasi,  pemanis buatan lebih banyak digunakan dibandingkan  pemanis  alami.  Hal  ini disebabkan karena bahan pemanis buatan merupakan  bahan  tambahan  makanan yang dapat memberikan rasa manis yang jauh  lebih  tinggi  dengan  biaya  lebih murah dibandingkan dengan penggunaan pemanis  alami.  Dengan  demikian, produsen  dapat  menekan  biaya  produksi sehingga  diperoleh  produk  dengan tingkat  kemanisan  yang  sama  dengan
pemanis  alami  dengan  biaya  produksi jauh lebih murah.
Terdapat  6  jenis  pemanis  buatan  yang diizinkan  berdasarkan  aturan  Permenkes  RI No.033  tahun  2012  mengenai  Bahan Tambahan  Pangan  untuk  ditambahkan  ke dalam  produk  makanan  yaitu  asesulfam-K, aspartam,  siklamat,  sakarin,  sukralos  dan neotam.  Neotam merupakan pemanis sintetis yang  baru  muncul  di  pasaran  pada  tahun 2002 dengan tingkat kemanisan relatif antara 7000x  hingga  13.000x  glukosa  (Aguilar, 2007).  Penggunaan  neotam  sering  dijumpai pada  industri  farmasi  sebagai  eksipien  obat karena  tidak  memiliki  nilai  kalori  dan terbukti  aman  dikonsumsi  oleh  penderita gangguan  phenylketonuria,  diabetes  dan wanita hamil (Andriyani, 2014) .
Dalam rangka mempertahankan mutu dan keamanan, perlu dilakukan penetapan  kadar  neotam  dalam  sediaan obat.  Metode  penetapan  kadar  neotam yang sudah ada adalah metode kromatografi  cair  kinerja  tinggi  (KCKT) (Andriyani,
2014). Metode ini memerlukan  peralatan  dan  bahan  yang
relatif  mahal.  Oleh  karena  itu,  perlu
dilakukan penelitian
tentang pengembangan  metode  analisis  neotam menggunakan  peralatan  sederhana  dan bahan  yang  relative  lebih  murah.  Pada penelitian  ini  akan  dilakukan  analisis neotam  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis yang bertujuan untuk mengembangkan metode alternatif
penentuan  neotam  dalam  sediaan  obat dengan  harapan  mendapat  metode  yang valid dan lebih sederhana.

## METODE
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini diantaranya neraca analitik, alat-alat  seperti  gelas  ukur,  labu  ukur, kuvet,  pipet  volum, chamber ,  mikro pipet,  elenmeyer,  kertas  saring,  batang pengaduk  dan  spektrofotometer  UV-Vis. Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  diantaranya  sampel  obat yang  mengandung  neotam,  Neotam  p.a, metanol p.a, silika gel 60 GF 254nm, N- butanol,  asam  asetat  glasial,  dan aquadest.
Sampel  diperoleh  dari  salah  satu apotek  di  kota  Bandung.  Sebanyak  10 tablet  sampel  diambil  secara  acak kemudian  ditimbang    bobotnya.  Hasil penimbangan  dirata-ratakan  sehingga didapat bobot tablet rata-rata. Selanjutnya
10  sampel  tablet  obat  digerus  sampai halus.
Tahapan selanjutnya adalah pembuatan  larutan  induk  1000  bpj. Sebanyak  0,05  gram  neotam  p.a  di timbang  lalu  dimasukkan  dalam  labu ukur  50ml,  kemudian  dilarutkan  dengan metanol sampai tanda batas.

## Analisis Kualitatif
Analisis  kualitatif  neotam  dilakukan dengan metode KLT dengan
membandingkan  dengan  standar  baku neotam.  Fase  diam  yang  digunakan adalah  plat  silika  gel  GF 254 60  dengan ukuran  2 × 10  cm,  sedangkan  fase geraknya  dibuat  dengan  mencampurkan n-butanol,  asam  asetat  glasial,  aquadest dengan  perbandingan  volume  6:  1:  1 (Melberg,  2009).  Jika  terdapat  noda dengan Rf yang sama antara standar baku neotam  dan  sampel  obat,  maka  sampel dinyatakan  positif  mengandung  neotam. Pengamatan  hasil  pemisahan  dilihat  di bawah sinar UV 254nm.
Penetapan Panjang Gelombang Maksimum ( λ maks)
Penetapan panjang gelombang maksimal  dilakukan  dengan  pengukuran serapan maksimum menggunakan larutan baku  neotam.  Konsentrsi  larutan  baku yang  digunakan  yaitu  10,  15  dan  20  bpj
diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis pada  rentang  panjang  gelombang  190  – 400 nm.

## Validasi Metode

## Pembuatan  Kurva  Kalibrsi  dan  Uji Linieritas
Dari  larutan  induk  neotam  1000  bpj dibuat  larutan  deret  standar  dengan memipet  sebanyak  0,1  mL;  0,125  mL; 0,15 mL; 0,175 mL; 0,200 mL; 0,225 mL yang kemudian masing masing dilarutkan ke  dalam  10  mL  metanol.  Kemudian dilakukan  pengukuran  absorbansi  pada panjang  gelombang  maksimum  dengan spektrofotmeter  UV-Vis  untuk  mendapat nilai persamaan regresi linier.

## Batas Deteksi dan Batas Kuantisasi
Batas  deteksi  (BD)  dan  batas kuantitasi (BK) diperoleh dari hasil kurva kalibrasi yaitu dari analisis  regresi linier dan  diperoleh  persamaan  garis  regresi linier  y  =  bx  +  a.  Berikut  adalah prsamaan yang digunakan untuk menentukan BD dan BK.
Keterangan :
Sy/x  = Simpangan baku respon analit dari blanko b = Slope persamaan garis

## Uji Presisi
Sebanyak
332,1 mg sampel dilarutkan  ke  dalam  10  mL  metanol, kemudian  di  saring  menggunakan  kertas saring.  Filtrat  dipipet  sebanyak  1  mL kemudian  dilarutkan  kembali  dalam  10 mL metanol.
Serapan diukur
menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis pada  panjang  gelombang  maksimum. Pengulangan  dilakukan  sebanyak  enam kali.

## Uji Akurasi
Uji akurasi dilakukan dengan metode adisi  yang  di  buat  dari  6,975  gram sampel  (5  tablet)  dimasukkan  ke  dalam labu  200  ml,  kemudian  di  tambahkan larutan  standar  neotam  yang  dibuat  dari 50 mg standar di larutkan ke dalam 10 ml metanol.  Dari  larutan  standar  tersebut  di ambil sebanyak 0,945 mL (472,5 µ g) dan di  campurkan  ke  dalam  labu  yang  telah berisi  sampel,  kemudian  pada  labu ditambahkan  metanol  sampai  dengan tanda  batas,  selanjutnya  larutan  adisi disaring  menggunakan  kertas  saring, filtrat  hasil  penyaringan  di  ambil sebanyak 1 mL dan di encerkan kembali dalam  10  ml  metanol.  Larutan  hasil pengenceran  kemudian  di  ukur  dengan spektrofotometer  UV–Vis  pada  panjang gelombang maksimum.
Perolehan
BD = 𝟑𝑺𝒚/𝒙 𝒃 dan BK = 𝟏𝟎𝑺𝒚/𝒙 𝒃
kembali didapat dari perbandingan kadar terukur dengan kadar sebenarnya. Berikut adalah  persamaan  yang  digunakan  untuk mendapatkan nilai perolehan kembali

## Penetapan Kadar Neotam
Penetapan  kadar  neotam  dilakukan dengan  menimbang  332,1  mg  sampel kemudian  dilarutkan  ke  dalam  10  mL metanol. Larutan sampel disaring menggunakan  kertas  saring,  filtrat kemudian  dipipet  1  mL  kemudian dilarutkan  kembali  dalam  10  mL metanol.  Serapan  diukur  menggunakan spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang gelombang maksimum dengan pengulangan sebanyak enam kali.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Analisis kualitatif
Analisis  kualitatif  neotam  dilakukan dengan  metode  kromatografi  lapis  tipis (KLT).  Kromatografi  lapis  tipis  adalah metode  pemisahan  suatu  senyawa berdasarkan kepolarannya dan digunakan untuk  pemisahan  senyawa  dalam  jumlah kecil.    Parameter  uji  kualitatif  neotam dilakukan  berdasarkan  metode  uji kualitatif  aspartam  dan  turunannya  yaitu dengan  silika  gel  GF 254 60  sebagai  fasa
diam  dan  campuran  n-butanol,  asam asetat glasial dan aquades (6:1:1) sebagai eluen (Melberg A, dkk, 2009). Parameter ini  digunakan  pada  neotam  dengan pertimbangan  adanya  kemiripan  struktur kimia  antara  struktur  aspartame,  turunan aspartam dan neotam.
Neotam  (N-(3,3-dimethylbuthyl)L- α - aspartyl-l-phenylalanine  1-methyl  ester), memiliki  rumus  kimia  C 20 H 30 N 2 O 5 .H 2 O dan  memiliki  berat  molekul  396,2 gram/mol.  Titik  lelehnya  rendah,  yaitu  - 83,4 o C  dan  kandungan  air  sebesar  4,5%. Neotam dalam bentuk bubuk dapat tahan sampai  lima  tahun  dengan  kondisi penyimpanan  yang  baik.  Kestabilan produk  dipengaruhi  oleh  pH,  kadar  air, dan  suhu.  Neotam  merupakan  senyawa yang  disintesis  dari  aspartam  dan  3,3- dimetilbutiraldehida  (Aguilar,  2007). Neotam  merupakan  senyawa  yang  tidak berwarna,  oleh  karena  itu  noda pemisahan  untuk  senyawa  yang  tidak berwarna dapat dilihat di bawah sinar UV pada panjang gelombang 254 nm maupun dengan  di  semprotkan  pereaksi  warna yang spesifik. (Ibrahim, 2013).
Kemiripan  struktur  antara  neotam dan aspartam dapat dilihat pada gambar 1 dan  2.  Kedua  struktur  neotam  dan aspartam memiliki kesamaan pada residu asam  amino  fenilalanin.  Adanya  residu asam  amino  fenilalanin  dapat  digunakan
%Perolehan Kembali= 𝒌𝒂𝒅𝒂𝒓 𝒕𝒆𝒓𝒖𝒌𝒖𝒓 𝒌𝒂𝒅𝒂𝒓 𝒔𝒆𝒃𝒆𝒏𝒂𝒓𝒏𝒚𝒂 x 100%
sebagai  penanda  pada  hasil  pemisahan menggunakan
KLT yaitu dengan
disemprot  menggunakan  pereaksi  warna ninhidrin (Melberg A, dkk, 2009).
Gambar 1. Struktur Kimia Neotam
Gambar 2 .  Struktur Kimia Aspartam
Parameter  uji  kualitatif  neotam  dengan KLT dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Kondisi Uji Kualitatif Neotam dalam Sampel Parameter Keterangan Jenis plat Ukuran Fase gerak Penampak bercak Silica gel gf 254 10 cm x 2 cm N-butanol:Asam asetat glasial:aquadest (6:1:1)
Lampu UV 254 nm
Gambar 3. Hasil uji kualitatif sampel (A: Standar Neotam, B: Sampel)
Gambar  3  adalah  gambar  profil hasil pemisahan neotam dengan KLT di bawah sinar UV 254 nm. Bagian A adalah  posisi  pemisahan  untuk penotolan  larutan  standar  baku neotam  sedangkan  bagian  B  adalah posisi  penotolan  larutan  sampel. Sampel  obat  yang  digunakan  adalah suplemen  ibu  hamil  dalam  bentuk sediaan tablet. Dari hasil pemindaian di  bawah  sinar  UV  254  nm  terlihat ada  bercak  sampel  yang  sejajar dengan  bercak  standar  neotam. Bercak  tersebut  diperoleh  pada  jarak dari  titik  penotolan  5,8  cm  dengan nilai  RF  dari  kedua  bercak  adalah 0,725. Berdasarkan hasil pengamatan tersebut  maka  dapat  disimpulkan bahwa  di  dalam  sampel  tablet tersebut positif mengandung pemanis neotam  dan  parameter  uji  nilai memenuhi  rentang  RF  0,2–0,8 (Kealey, dkk., 2002).

## Penetapan Panjang Gelombang
Setiap  senyawa  kimia  memiliki panjang  gelombang  yang  berbeda-beda (spesifik).  Oleh  karena  itu  perlu dilakukan  pengujian  panjang  gelombang terlebih dahulu untuk mengetahui daerah kerja senyawa yang akan diuji kemudian dibandingkan  dengan  data  pada  literatur sebagai  parameter.  Uji  ini  dilakukan sebagai parameter kespesifikan dari analit yang  akan  diuji.  Suatu  unsur  atau senyawa  akan  menyerap  cahaya  lebih kuat  pada  panjang  gelombang  tertentu, dan  absorbansi  akan  maksimum  apabila diukur pada panjang gelombang maksimum.  Uji  penetapan  panjang gelombang  dilakukan  dengan  larutan standar  dalam  pelarut  metanol  pada daerah  UV  dengan  panjang  gelombang 190–400  nm.  Tabel  2  menunjukan  data serapan  pada  setiap  konsentrasi  larutan uji.
Tabel 2. Uji Kespesifikan
Konsentrasi (ppm) λ max Absorbansi 10 210,40 0,333 15 210,40 0,461 20 209,20 0,606
Pada  konsentrasi  10,  15  dan  20  bpj serapan  maksimum  terjadi  pada  panjang gelombang  maksimum  neotam  rata  rata adalah 210 nm (Gambar 4).
Gambar 4. Spektrum neotam pada konsentrasi
10, 15, dan 20 bpj
Pada  konsentrasi  10,  15  dan  20  bpj serapan  maksimum  terjadi  pada  panjang gelombang  maksimum  neotam  rata  rata adalah 210 nm (Gambar 4). Berdasarkan data  ini,  maka  pada  tahapan  penelitian selanjutnya  digunakan  210  nm  sebagai panjang  gelombang  maksimum  pada setiap pengukuran dengan spektrofotometri UV.

## Uji Linieritas, BD dan BK
Kelinieran  suatu  metode  analisis adalah  kemampuan  untuk  menunjukkan bahwa  nilai  hasil  uji  langsung  atau setelah diolah secara matematika, proporsional  dengan  konsentrasi  analit dalam  sampel  dalam  batas  rentang konsentrasi  tertentu.  Rentang  suatu metode  analisis  adalah  interval  antara batas  konsentrasi  tertinggi  dan  terendah analit  (termasuk  tingkat  yang  disebut) yang tebukti dapat ditentukan menggunakan  prosedur  analisis,  dengan presisi,  akurasi,  dan  kelinieran  yang
memadai
(Satiadarma, 2004). Uji linieritas  dilakukan  dengan  membuat kurva kalibrasi yang dapat menghasilkan persamaan  garis  regresi  serta  nilai koefisien  larutan  baku  dengan  nilai serapan  yang  dihasilkan.  Koefisien korelasi  (r)  dihitung  dari  regresi  linear Y= bx+a pada kurva kalibrasi.
Telah dilakukan uji linieritas  sebagai salah  satu  bagian  dari  validasi  metode penetapan  kadar  neotam.  Pada  tahapan ini dilakukan pengukuran serapan larutan standar  Neotam  dengan  konsentrasi  10; 12,5; 15; 17,5; 20; 22,5 ppm pada λ 210 nm.  Data  hasil  pengukurannya  dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Uji linieritas baku neotam
Konsentrasi (bpj) Absorbansi 10 0,256 12,5 0,329 15 0,379 17,5 0,439 20 0,476 22,5 0,557
Dari  pengukuran  di  atas  diperoleh persamaan  garis  linier    y  =  0,0229x  + 0,0335 dengan nilai R 2 = 0,992 dan nilai r = 0,9959 . Suatu persamaan regresi linier dinyatakan  linier  bila  r  <0,99.  Maka dalam  kurva  kalibrasi  di  atas  dapat dinyatakan memenuhi persyaratan.
Gambar 5. Kurva kalibrasi neotam
Batas deteksi (BD) dari suatu metode analisis  adalah  nilai  parameter  uji  batas, yaitu  konsentrasi  analit  terendah  yang dapat  dideteksi,  tetapi  tidak  dikuantitasi pada  kondisi  percobaan  yang  dilakukan. Batas  kuantitasi  (BK)  dari  suatu  metode analisis adalah nilai parameter penentuan kuantitatif  senyawa  yang  tedapat  dalam konsentrasi rendah dalam matriks, seperti pencemar  dalam  bahan  obat  baku,  hasil degradasi  senyawa  aktif  dalam  sediaan obat dan lain-lain (Satiadarma, 2004).
BD  ditentukan  melalui  garis  regresi linear  kurva  kalibrasi  (Harmita,  2004). Nilai  terkecil  yang  dapat  dideteksi  dan masih  dapat  memberikan  respon  yang signifikan  pada  metode  pengukuran neotam  dengan  spektrofotometer  UV yaitu  1,26  bpj.  BK  menunjukkan kuantitasi  konsentrasi  terendah  analit yang  pasti  terdeteksi  secara  kuantitatif. Nilai  BK  sesuai  persamaan  kurva kalibrasi standar neotam adalah 4.20 bpj.
y = 0,0229x + 0,0335 r = 0,995 0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0 10 20 30 Ab so rb an si Konsentrasi (bpj)

## Uji Presisi
Presisi  atau  keseksamaan  diukur
sebagai  simpangan  baku  atau  simpangan baku relatif (koefisien variasi). Keseksamaan  dapat  dinyatakan  sebagai keterulangan ( repeatability ) atau ketertiruan ( reproducibility ). Keterulangan adalah keseksamaan metode jika dilakukan berulang kali oleh analis yang sama pada kondisi sama dan dalam  interval  waktu  yang  pendek. Ketertiruan  adalah  keseksamaan  metode jika  dikerjakan  pada  kondisi  yang berbeda.
Uji presisi dilakukan dengan melarutkan  sebanyak  332,1  mg  sampel ke  dalam  metanol  dengan  faktor pengenceran  100 × .  Pengujian  dilakukan 2 × yaitu pada hari 1 dan hari ke 2. Hasil yang  diperoleh  dapat  dilihat  pada  Tabel 4.

## Tabel 4. Data hasil uji presisi
Parameter Intraday Interday Kons. Rata-rata (bpj) 22.5546 22.4672 Ʃ (Xi-X)^2 0.122 0.5072 SD 0.1562 0.3185 SBR (%) 0.6972 1.4177 Dapat  dilihat  dari  data  bahwa  nilai
RSD yang diperoleh, menunjukan bahwa hasil  presisi  yang  dilakukan  sebanyak dua  kali  pada  hari  yang  berbeda
mendapat  nilai  0,6972%  dan  1,4177%. Dengan  demikian,  dapat  disimpulkan bahwa  uji  presisi  yang  dilakukan  valid, karena masih di bawah 2%.

## Uji Akurasi
Akurasi  atau  kecermatan  dari  suatu metode  analisis  adalah  kedekatan  nilai hasil uji yang diperoleh dengan prosedur tersebut  dari  nilai  yang  sebenarnya, seringkali  dinyatakan  dalam  persen perolehan kembali analit pada penentuan kadar  sampel  yang  mengandung  analit dalam jumlah diketahui. Akurasi merupakan  ukuran  ketepatan  prosedur analisis yang ditentukan dengan menerapkan  prosedur  tersebut  pada sampel atau campuran komponen matriks yang  telah  dibubuhi  analit  dalam  jumlah diketahui,  baik  dengan  kadar  lebih  besar maupun kadar lebih kecil dari kandungan normalnya  yang  dinyatakan  dalam sampel (Satiadarma, 2004).
Cara  penentuan  akurasi  ditentukan dengan  metode  simulasi  ( spiked-placebo recovery )  dan  adisi  (penambahan  bahan baku).  Pada  penelitian  ini,  akurasi ditentukan  dengan  metode  standar  adisi dengan  menambahkan  sejumlah  neotam ke dalam sampel obat (80% - 120% dari kadar  sampel  yang  diperkirakan).  Data akurasi  diperoleh  dengan  cara  dari  5 tablet  sampel  yang  telah  dihaluskan
ditambahkan 472,5 µ g standar, kemudian dilarutkan  dalam  200  mL  metanol, kemudian  di  pipet  1  mL  dan  dilarutkan dalam  10  mL  metanol.  Data  hasil pengukuran  akurasi  datap  dilihat  pada Tabel 5.

## Tabel 5. Hasil uji perolehan kembali
Kons.  yang ditambahkan (%) Kons. perolehan kembali (%) 80 81 100 100,7 120 120,2
Dari  hasil  perhitungan  diperoleh  persen perolehan  kembali  ( recovery )  adalah sebesar    81%,  100,7%  dan  120,2%. Dapat  disimpulkan    bahwa  hasil  validasi metode  akurasi  yang  dilakukan  adalah valid.

## Penetapan Kadar Sampel
Neotam  merupakan salah satu bahan tambahan  pangan  yang  bertujuan  untuk memberikan  rasa  manis  pada  produk. Pemanis  ini  diproduksi  oleh NutraSweet Company yang  telah  dilegalkan  oleh FDA  (Food  Drug  Administration)  untuk digunakan  sebagai  bahan  tambahan pangan  sejak  2002.  Jumlah  penambahan pemanis sintetis telah diatur oleh BPOM.
Menurut Peraturan Kepala Badan Pengawas  Obat  dan  Makanan  Republik Indonesia  Nomor  4  tahun  2014  tentang batas  maksimum  Penggunaan  Bahan
Tambahan  Pemanis,  batas  maksimum yang diperbolehkan dikonsumsi adalah < 2 mg/kg berat badan perharinya.
Penetapan  kadar  neotam  dalam sampel  obat  telah  dilakukan  dengan metode  spektrofotometri  UV  dengan pelarut  metanol  yang  sebelumnya  sudah divalidasi  terlebih  dulu.  Data  penentuan kadar  dilihat  dari  data  presisi  yaitu dengan  perolehan  bobot  neotam  dalam 332,1  mg  sampel  adalah  22,5  bpj, sehingga  dalam  satu  tablet  diperoleh bobot  neotam  setara  dengan  22,5  ppm  x 4,2 = 0,0945 mg/tab. Hasil ini dinyatakan masih  memenuhi  persyaratan  BPOM, yaitu maksimum penggunaan perhari < 2 mg/kg berat badan.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian,  diperoleh hasil  bahwa  penetapan  kadar  neotam dengan  metode  spektrofotometri  UV dengan  pelarut  metanol  dapat  digunakan untuk  penetapan  kadar  neotam  dalam sampel  obat.  Hal  ini  dapat  dibuktikan dengan  data–data  yang  memenuhi persyaratan  parameter  validasi  metode. Penentuan  kadar  neotam  dalam  sampel obat  X  diperoleh  hasil  sebesar  0,0945 mg/tab. Hasil ini masih berada di bawah ambang  batas    maksimal  penggunaan neotam  yang  di  tetapkan  oleh  BPOM dengan nilai ADI < 2 mg/kg bb.

## Ucapan Terima Kasih
Penelitian  ini  dibiayai  oleh  P3M STFB  melalui  anggaran  dana  Riset
Internal  P3M  STFB  tahun  anggaran
2017.

## DAFTAR PUSTAKA
Aguilar,  dkk.  2007. Neotame  as  a sweetener  and  flavour  enhancer  1 Scientific  Opinion  of  the  Panel  on Food Additives, Flavourings, Processing  Aids  and  Materials  in
Contact  with  Food .  The  EFSA Journal . Vol. 581, hh. 1-43 .
Andriyani  D.  2014, Penentuan  Kadar Neotam  dan  Aspartam  Dalam
Produk Pangan . BPOM RI
Cahyadi  W.  2008, Analisis  dan  Aspek Kesehatan Bahan Tambahan
Pangan .  Edisi  Kedua.  Bumi Aksara: Jakarta. Harmita,  2004, Petunjuk  Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara Perhitungannya , Departemen
Farmasi FMIPA-UI.
Ibrahim  M.S  dan  Sitorus  M.  2013,
Teknik Laboratorium Kimia Klinik.
Edisi pertama. Graha ilmu:
Yogyakarta.
Melberg  A,  dkk.  200,  Acid  Hydrolysis of  Aspartame  and  Identification  of Its  Product  by  Thin  Layer Chromatography. Chem  Educator , hh. 1-4.
Satiadarma, dkk. 2004. Asas Pengembangan  Prosedur  Analisis, Edisi Pertama. Airlangga University Press. Surabaya. SK  kepala  BPOM  Republik  Indonesia No.4 Tahun 2014. Persyaratan Penggunaan Bahan Tambahan Pangan
Pemanis  Buatan  dalam  Produk Pangan.