CURRENT BIOCHEMISTRY ISSN: 2355-7877 e-ISSN: 2355-7931
Journal homepage: http://journal.ipb.ac.id/index.php/cbj Journal E-mail: current.biochemistry@gmail.com
Curr. Biochem. 2023. 10(1): 38-45
In Vitro Analysis of Gradual Water Extract of Red Betel Leaf ( Piper crocatum ) as Free Radical Scavenging and Inhibitor of α-Glucosidase (Analisis In Vitro Ekstrak Air Bertingkat Daun Sirih Merah ( Piper crocatum ) sebagai  Inhibitor α-Glukosidase dan Peredam Radikal Bebas)
Tiara Fibri Yuniasih 1 , Mega Safithri 1,2,* , Syaefudin 1
Department of Biochemistry, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Darmaga Campus, IPB

## University, Bogor, 16680, Indonesia
Received: 17 November 2023; Review: 20 November 2023; Accepted: 25 January 2024
Corresponding author, email: safithri@apps.ipb.ac.id

## ABSTRACT
Red betel (Piper crocatum) has an antihyperglycemic activity for diabetic treatment. The purpose of this study was to investigate the activity of DPPH free radical scavenging, the α-glucosidase inhibitory activity, and total phenolics of the aqueous extract of P. crocatum (1 st extract, 1 st extract residue, and 2 nd extract residue). The infundation method was used with spectrophotometric test techniques. The red betel leaves extract in all extracts and extract residues had a small α-glucosidase inhibition activity ranging from 0.76- 1.43%. Meanwhile, the antioxidant activity of DPPH and total phenolic levels showed significantly different results (p<0.05) in the 1 st extract, 1 st extract residue, and 2 nd extract residue. The highest antioxidant capacity and total phenolic content were found in the first extract, with 59.64±0.18 mg AAE/g extract and 55.50±0.14 mg GAE/g, respectively. Gradual extraction reduced DPPH free radical scavenging activity, α-glucosidase inhibition activity, and phenolic total content.
Keywords: α-glucosidase, antioxidant, piper crocatum, phenolic compounds

## ABSTRAK
Sirih merah (Piper crocatum) memiliki aktivitas antihiperglikemik untuk pengobatan penderita diabetes melitus. Riset ini bertujuan untuk menentukan aktivitas peredaman radikal bebas DPPH, aktivitas inhibisi α-glukosidase,  dan  total  fenolik  dari  ekstrak  air  P.  crocatum  menggunakan  ekstraksi  bertingkat  (ekstrak ke-1,  residu  ekstrak  ke-1,  dan  residu  ekstrak  ke-2).  Penelitian  ini  menggunakan  metode  infundasi  dengan teknik uji spektrofotmetri. Ekstrak daun sirih merah menghasilkan daya hambat yang kecil terhadap aktivitas α-glukosidase  berkisar  antara  0,76-1,43%.  Aktivitas  antioksidan  DPPH  dan  kadar  total  fenolik  teramati memiliki hasil yang berbeda nyata (p<0,05) pada ekstrak ke-1, residu ekstrak ke-1, dan residu ekstrak ke- 2. Aktivitas antioksidan dan kadar total fenolik tertinggi diperoleh dari ekstrak ke-1 berturut-turut sebesar 59,64±0,18  mg  AAE/g  ekstrak  dan  55,50±0,14  mg  GAE/g.  Ekstraksi  bertingkat  menurunkan  aktivitas peredaman radikal bebas DPPH dan kadar total fenolik.
Kata kunci: α-glukosidase, antioksidan, sirih merah, senyawa fenolik
1.  PENDAHULUAN Diabetes melitus merupakan kelainan genetik yang mewakili satu kesatuan autoimun dan metabolik yang memiliki karakteristik utama seperti hiperglikemia (Egan dan Dinneen 2019). Diabetes melitus dikaitkan dengan kerja insulin  dan  defisiensi  relatif  yang  disebabkan oleh gangguan metabolisme karbohidrat, lemak, protein dan hiperglikemia (Bilous dan Donelly 2014). Selain karena peningkatan glukosa dalam darah, diabetes melitus juga disebabkan oleh komplikasi stress oksidatif khususnya pembentukan radikal bebas superoksida karena kurangnya antioksidan (Dompeipen dan Simanjuntak 2015). Diperkirakan akan terjadi peningkatan jumlah penderitadiabetes melitus setiap tahunnya (Indonesia maupun dunia). Tahun 2019, prevalensi diabetes melitus sebanyak 463 juta orang (9.3%). Selanjutnya, jumlah penderita diabetes melitus diduga naik menjadi 578 juta orang (10.2%) di tahun 2030 dan semakin bertambah menajadi 700 juta orang (10.9%) di tahun 2040 (IDF 2019). Indonesia menduduki peringkat ke 7 dunia dalam jumlah penderita diabetes pada tahun 2015. Jumlah ini diprediksi akan meningkat dan menempati peringkat 6 di tahun 2040 (Widiastuti 2020).
Usaha yang bisa diterapkan untuk mencegahnya terjadinya peningkatan diabetes melitus maupun komplikasinya, yaitu dengan terapi nonfarmakologi dan terapi farmakologi dengan cara penggunaan obat diabetes melitus sintetik dan obat herbal. Namun demikian, penggunaan obat antidiabetes sintetik dalam jangka panjang dapat berakibat timbulnya efek samping mual, muntah, nyeri perut, dan kembung (Dinicolantanio et al .  2015). Menurut Muin (2018), penggunaan tanaman herbal sebagai obat antidiabetes terbukti tidak menimbulkan efek samping yang berlebihan pada tubuh dan lebih aman. Tanaman herbal yang telah diteliti memiliki kemampuan untuk menangani diabetes melitus adalah sirih merah ( Piper crocatum ). Sirih merah banyak dimanfaatkan untuk obat karena mempunyai metabolit sekunder antara seperti tanin, flavonoid,  terpenoid,  alkaloid,  saponin,  dan minyak atsiri (Januarti et al .  2019;  Safithri dan Fahma 2008). Penggunaan ekstrak air sirih merah terbukti secara in vivo dapat menurunkan
kadar glukosa darah dan meningkatkan jumlah sel β pankreas pada tikus yang diinduksi diabetes (Hasibuan et al. 2016).  Pengujian farmakologi juga telah membuktikan khasiat ekstrak air sirih merah sebagai antihiperglikemik serta antioksidan  (Safithri et al .  2008;  Safithri et al .  2020).  Penggunaan  ekstrak  air  memiliki kelebihan dimana menghasilkan ekstrak yang lebih aman, murah, dan sederhana dibandingkan dengan pelarut lain (Ervina et al. 2019). Informasi terkait banyaknya senyawa fenolik pada ekstrak air sirih merah di ekstrak ke-1, residu ekstrak ke-1, dan residu ekstrak ke-2, sampai saat ini belum diketahui. Tujuan dari riset  ini  mengkuantifikasi  rendemen  ekstrak, total senyawa fenolik, aktivitas antioksidan dan aktivitas inhibisi ekstrak air daun sirih merah pada ekstrak ke-1, residu ekstrak ke-1, dan residu ekstrak ke-2.

## 2.  METODOLOGI
Alat dan Bahan Alat gelas dan instrumen yang dipakai dalam riset yakni alat laboratorium umum, inkubator, oven EYELA NDO-700, 96- well microplate BIOLOGX,  SPECTROstar  Nano BMG-LABTECH analytical balance model Kenko KK-Lab, pipet mohr, micropipet Gilson P200-P1000.
Bahan kimia yang dipakai pada riset adalah daun sirih merah ( Piper crocatum ) Bogor  yang  dipanen  di  kebun  Pusat  Studi Biofarmaka pada usia 6 bulan, akuades, metanol, reagen Folin-Ciocalteu 10%, Na 2 CO 3 10%, asam galat, larutan DPPH, asam askorbat, bufer fosfat 0.1 M pH 7.0, α-glukosidase dari Bacillus stearothermophilus (SIGMA), serbuk p NPG, akarbosa .
Preparasi Sampel Sirih merah terutama bagian daun disortasi dan dicuci bersih, kemudian dikeringkan menggunakan sinar matahari selama 3 hari. Selanjutnya, daun sirih merah digunting dengan ukuran kecil kemudian diblender, lalu disaring menggunakan ayakan simplisia dengan ukuran 80 mesh. Selanjutnya, simplisia daun sirih merah dikemas dalam plastik, dan disimpan pada  suhu  ruang  (Safithri et al. 2020 dengan modifikasi).

## Yuniasih et al. – In Vitro Analysis of Gradual Water Extract of Red Betel Leaf
Penentuan Kadar Air Simplisia Kadar air diukur dengan metode gravimetri (metode pengeringan hingga bobot simplisia konstan pada suhu 105 o C). Sebanyak 2 g sampel diletakkan di cawan bersih, lalu dikeringkan dalam waktu 3 jam pada suhu 105 o C, kemudian diletakkan dalam desikator untuk didinginkan selama 30 menit. Setelah itu sampel ditimbang. Pengeringan dilanjutkan kembali pada suhu 105 o C sampai diperoleh bobot konstan. Untuk bobot kosong cawan ditentukan dengan memasukkan cawan bersih ke oven lanjut dikeringkan pada suhu 105 o C selama 30 menit, lalu didinginkan dalam desikator,  kemudian  ditimbang.  Pengeringan dilanjutkan kembali pada suhu 105 o C sampai diperoleh bobot konstan (AOAC 2007).
Ekstraksi Simplisia Teknik infundasi dilakukan untuk mengekstrak daun sirih merah. Sebanyak 5 g simplisia sirih merah ditambahkan pelarut akuades sebanyak 100 mL (1:20). Selanjutnya, sampel dididihkan selama 15 menit dengan kondisi tertutup. Kemudian ekstrak disaring memakai kertas saring, sehingga didapatkan filtrat  pertama  (F1)  dan  residu  pertama  (R1). R1 ditambahkan akuades sebanyak 100 mL, lalu dididihkan selama 15 menit dengan kondisi tertutup. Selanjutnya ekstrak R1 disaring kembali  sehingga  didapatkan  filtrat  kedua (F2) dan residu kedua (R2). R2 ditambahkan akuades sebanyak 100 mL, lalu dididihkan selama 15 menit dengan kondisi tertutup. Selanjutnya ekstrak R2 disaring kembali sehingga  didapatkan  filtrat  ketiga  (F3)  dan residu ketiga (R3). Selanjutnya, F1, F2, dan F3 dievaporasi menggunakan rotary evaporator dengan suhu 50 o C dan diperoleh secara berturut- turut ekstrak 1, ekstrak residu ke-1, dan ekstrak residu ke-2. Ekstrak disimpan pada suhu ruang sampai digunakan (Safithri et al. 2020 dengan modifikasi).
Pemeriksaan Kandungan Total Fenolik Larutan ekstrak sirih merah 10.000 ppm dan asam galat (sebagai standar fenolik) diambil masing-masing sebanyak 10 µL,
ditambahkan 10 µL reagen Folin-Ciocalteu 10% dan dimasukkan ke dalam 96-well microplate . Setelah itu, Na 2 CO 3 7.5% sebanyak 25 µL ditambahkan, kemudian diinkubasi selama 30 menit dalam tempat gelap. Setelah proses inkubasi, absorbansi diukur pada λ = 750 nm. Pengukuran  dikerjakan  sebanyak  3  ulangan ( triplo )  (Rafi et al. 2018,  Safithri et al. 2020 dengan modifikasi).
Analisis Aktivitas Antioksidan Sebanyak 40 µL larutan ekstrak konsentrasi 10.000 ppm ditambahkan ke dalam 96- well microplate , kemudian ditambahkan 250 µL  larutan  DPPH  125  µM  (dilarutkan  dalam etanol), lalu ekstrak diinkubasi di tempat gelap dan tertutup selama 30 menit. Absorbansi larutan diukur  pada  λ  =  515  nm  dengan microplate reader . Akuades digunakan sebagai blanko, sedangkan asam askorbat digunakan sebagai standar.  Pengukuran  dilakukan  sebanyak  tiga ulangan (triplo) (Rafi et al. 2018, Safithri et al. 2020 dengan modifikasi).
Penentuan Kemampuan Ekstrak Menginhi - bisi α-Glukosidase Kemampuan ekstrak menginhibisi α -glukosidase diuji dengan cara 10 μL larutan sampel 10.000 ppm ditambahkan buffer fosfat pH 7.0 konsentrasi 100 mM sebanyak 50 μL,  lalu  substrat p -NPG  konsentrasi  10  mM sebanyak  25  μL,  kemudian  larutan  enzim sebnayak 25 μL yang dimasukkan dalam 96- well microplate . Lalu dilanjutkan inkubasi selama 30  menit  pada  suhu  37  ᵒC.  Ditambahkan  100 μL Na 2 CO 3 200 mM untuk menghentikan reaksi yang berlangsung. Penentuan aktivitas inhibisi α-Glukosidase melalui pengukuran absorbansi p -nitrofenol pada λ= 410 nm. Akarbosa 10 ppm dipakai sebagai kontrol positif (Sancheti et al. 2009 dengan modifikasi).
Analisis Data Analisis data riset memakai aplikasi SPSS 25.0 dengan menggunakan analisis varian (ANOVA) one way .

## 3.  HASIL
Rendemen Ekstrak dan Kadar Air Daun Sirih merah Rendemen ekstrak air sirih merah berkisar antara 1.56% hingga 8.85% (Tabel 1). Rendemen ekstrak tertinggi terdapat pada ekstrak ke-1, yaitu sebesar 8.85%. Kadar air yang dihasilkan simplisia daun merah sebesar 5.86%.

## Kadar Total Senyawa Fenolik Ekstrak Air
Daun Sirih Merah Kadar total fenolik terbesar terdapat pada residu ekstrak air sirih merah ke-1 yaitu sebesar 55.50 ± 0.14 mg GAE/g, sedangkan kadar total fenolik terkecil terdapat pada ekstrak residu sirih merah ke-2 yaitu sebesar 5.37 ± 0.20 mg GAE/g.  Analisis  ANOVA  menghasilkan  nilai total fenolik pada ekstrak ke-1, residu ekstrak ke-1, dan residu ekstrak ke-2 berbeda nyata untuk semua konsentrasi pada taraf kepercayaan 95%.
Kemampuan Ekstrak Air Daun Sirih Mer - ah Meredam Radikal Bebas DPPH Hasil pengujian aktivitas antioksidan dari ekstrak ke-1, ekstrak residu ke-1, dan ekstrak residu ke-2 daun sirih merah ditunjukkan pada Gambar 2. Semua sampel ekstrak menunjukkan hasil aktivitas antioksidan berbeda nyata (p<0.05)  (Gambar  2).  Aktivitas  antioksidan terbesar terdapat pada ekstrak ke-1 sebesar 59.64 ± 0.18 mg AAE/g ekstrak (57.27%), sedangkan aktivitas antioksidan terkecil terdapat pada residu ekstrak ke-2 sebesar 26.80 ± 0.36 mg AAE/g ekstrak (22.49%). Uji statistik aktivitas antioksidan semua sampel menunjukkan hasil berbeda nyata untuk semua konsentrasi pada taraf kepercayaan 95%.
Kemampuan Ekstrak Air Daun Sirih Mer - ah Menginhibisi α-Glukosidase Hasil pengujian aktivitas inhibisi α-glukosidase  ekstrak  ke-1,  residu  ekstrak ke-1, dan residu ekstrak ke-2 daun sirih merah  ditunjukkan  pada  Gambar  4.  Hasil  uji statistik menunjukkan persen inhibisi berbeda nyata  (p<0.05)  pada  semua  sampel.  Persen
penghambatan α-glukosidase terbesar terdapat pada residu ekstrak ke-1 sebesar 1.43%. dan nilai terkecil terdapat pada residu ekstrak ke-3 sebesar 0.76%. sementara itu, aktivitas inhibisi α-glukosidase pada akarbosa sebesar 95.15%.
Tabel 1 Rendemen ekstrak air daun sirih merah Pengujian Hasil Rerata (%) Rendemen ekstrak ke-1 8.85 ± 1.57 a Rendemen ekstrak residu ke-1 4.29 ± 0.77 b Rendemen ekstrak residu ke-2 1.56 ± 0.15 c
Keterangan : Huruf yang berbeda pada kolom menunjukkan hasil yang  berbeda nyata pada taraf kepercayaan 95%
55,50±0,14 a 19,75±0,20 b 5,37±0,20 c -20 0 20 40 60 80 100 Ekstrak ke-1 Residu ekstrak ke-1 Residu ekstrak ke-2 To ta l F en oi kl (m g G AE /g Eks tra k)

## Sampel
Gambar 1  Kadar  total  senyawa  fenolik  ekstrak  air daun sirih merah. Huruf yang berbeda pada diagram menyatakan hasil yang berbeda nyata pada tingkat kepercayaan 95%
Gambar 2  Kemampuan  ekstrak  air  daun  sirih  merah meredam  radikal  bebas  DPPH.  Perbedaan huruf pada diagram menyatakan hasil berbeda nyata pada tingkat kepercayaan 95%.
Gambar 3 Kemampuan ekstrak air daun sirih merah menginhibisi  α-glukosidase.  Kesaamaan huruf pada diagram menyatakan hasil yang tidak berbeda nyata pada tingkat kepercayaan 95%.
Yuniasih et al. – In Vitro Analysis of Gradual Water Extract of Red Betel Leaf

## 4.  PEMBAHASAN
Rendemen Ekstrak dan Kadar Air Simplisia Daun Sirih merah Nilai rendemen ekstrak air pada penelitian ini 8.85% dan lebih rendah dibandingkan penelitian dengan pelarut yang sama yang dilakukan Suhermanto (2013) yaitu sebesar 11.94% dan Kartika (2013) sebesar 14.85%. Terjadi penurunan nilai rendemen ekstrak pada ekstrak yang diperoleh dari residu ke-1 dan  ke-2.  Penelitian  oleh  Suhermanto  (2013) menggunakan daun sirih merah berumur 2 tahun, sedangkan penelitian ini menggunakan daun sirih merah berumur 6 bulan. Hal tersebut diduga menjadi salah satu penyebab perbedaan rendemen yang dihasilkan, dimana akumulasi sel serta biosisintesis meningkat seiring bertambahnya usia selama pertumbuhan tanaman, sehingga semakin tua usia tumbuhan maka kandungan metabolit sekundernya semakin tinggi dan komponen senyawanya pun semakin bervariasi (Kamaruzaman et al . 2020). Selain faktor tersebut, menurut Wahyuni dan Widjanarko (2015), faktor- faktor lain yang mempengaruhi rendemen ekstrak adalah ekstraksi, jenis pelarut, suhu, cahaya, pH dan jenis pelarut yang digunakan. Jumlah kandungan metabolit sekunder yang terekstrak dari pelarut dinyatakan dalam nilai rendemen (Ukieyanna 2012). Teknik ekstraksi bertingkat menunjukkan hasil rendemen ekstrak yang diperoleh berbeda nyata (p<0.05), dan nilainya semakin menurun (Tabel 1).  Hasil ini sejalan dengan ekstraksi kayu manis bertingkat menggunakan pelarut air.
Kadar air simplisia sirih merah pada riset ini yaitu 5.86%, sehingga simplisia tergolong kualitas yang baik, karena lebih rendah dari 10%  (BPOM  2014).  Hal  ini  dapat  diartikan pertumbuhan mikroba dan reaksi enzimatis yang dapat mendegradasi kandungan senyawa kimia dalam simplisia dapat dihambat dengan baik. Kadar air simplisia hasil penelitian ini memiliki nilai yang lebih rendah dibandingkan penelitian yang  dilakukan  Safithri et al. (2022) dengan metode yang sama  sebesar 6.50%. Beberapa faktor yang menyebabkan perbedaan kadar air adalah umur sampel, ukuran sampel, suhu, dan waktu (Sulistiawati et al. 2015).
Kadar Total Senyawa Fenolik Ekstrak Air Daun Sirih Merah Kadar total senyawa fenolik ekstrak air daun sirih yang dihasilkan melalui teknik ekstraksi bertingkat menunjukkan nilai yang semakin menurun dan berbeda nyata (p<0.05) (Gambar 1). Hasil ini sejalan dengan kadar total fenolik ekstrak kayu manis yang diekstraksi bertingkat menggunakan pelarut air (Maulana et al. 2022).  Perbedaan  kadar  total  senyawa fenolik dipengaruhi oleh jumlah rendemen yang dihasilkan. Tingginya rendemen ekstrak yang didapat menunjukkan ekstrak tersebut mengandung senyawa aktif yang tinggi (Hasnaeni dan Usman 2019).  Senyawa fenolik yang dapat ditemukan pada sirih merah adalah schisandrin C, Tetrahydrocurcumin, hernanol, dan garcinone C (Purnama et al. 2023). Kadar total senyawa fenolik pada penelitian ini, terutama pada ekstrak pertama (55.50  ±  0.14  mg  GAE/g)  lebih  tinggi  dari penelitian yang dilakukan oleh Suhermanto (2013) dengan menggunakan pelarut air memiliki total fenol sebesar 32.93 ± 1.22 mg/g GAE.  Hal  ini  bisa  disebabkan  umur  tanaman tersebut.  Biosintesis senyawa fenolik akan meningkat seiring dengan bertambahnya usia selama pertumbuhan tanaman.
Faktor lain yang mempengaruhi kandungan total fenolik menurut Kamaruzaman et al. (2020) adalah faktor pra dan pasca panen seperti spesies (perbedaan intraspesies dan interspesies), karakteristik lingkungan (kondisi iklim, kelembaban dan kecerahan), fitur agronomi (tanah, pasokan air, penggunaan pupuk atau pupuk kandang), kematangan, cara pemanenan dan pengangkutan, penyimpanan, proses pengeringan, dan cara ekstraksi (Kamaruzaman et al. 2020).
Kemampuan Ekstrak Air Daun Sirih Mer - ah Meredam Radikal Bebas DPPH Teknik ekstraksi bertingkat menghasilkan ekstrak air daun sirih merah yang memiliki kemampuan  meredam  radikal  bebas  DPPH yang diperoleh berbeda nyata (p<0.05) dengan hasil yang semakin menurun (Gambar 2).  Hasil ini sejalan dengan kemampuan ekstrak air kayu manis yang diekstraksi bertingkat, dalam
meredam  radikal  bebas  DPPH  (Maulana et al. 2022). Penurunan kemampuan ekstrak air daun sirih merah dalam meredam radikal bebas DPPH (Gambar  2)  sejalan  dengan  penurunan  kadar total senyawa fenoliknya (Gambar 1). Tingginya kandungan total fenolik dalam suatu sampel berbanding lurus dengan tingginya aktivitas antioksidan yang dihasilkan (Toripah et al. 2014). Ekstrak air daun sirih merah memiliki kemampuan untuk meredam radikal bebas DPPH  dalam  penelitian  ini,  terutama  ekstrak pertama sebesar 59.64 ± 0.18 mg AAE/g ekstrak lebih tinggi jika dibandingkan dengan ekstrak air kulit kayu manis (9.012 ± 0.039 mg AAE/g) dari Maulana et al. (2022). Senyawa metabolit sekunder yang berpotensi memiliki antioksidan alami pada ekstrak air daun sirih merah adalah tanin, flavonoid,  dan  alkaloid  (Safithri et al. 2016). Senyawa  flavonoid  memiliki  konfigurasi cincin B hidroksil yang dapat menjerat ROS dengan mendonorkan atom hidrogen menjadi radikal hidroksil, peroksil serta peroksinit yang menghasilkan kestabilan radikal serta diperoleh jumlah radikal flavonoid stabil yang meningkat (Januarti et al . 2019).

## Aktivitas Inhibisi α-Glukosidase Ekstrak
Daun Sirih Merah Teknik ekstraksi bertingkat menghasilkan ekstrak air daun sirih merah dengan kemampuan menghambat  enzim  α-glukosidase  yang diperoleh berbeda nyata (p<0.05), dan nilainya semakin  menurun  (Gambar  3).  Persen  inhibisi ekstrak daun sirih sangat kecil terhadap aktivitas  α-glukosidase  yaitu  sebesar  1.43% dibandingkan akarbosa yang memiliki daya hambat sebesar 95.15%. Hasil ini sejalan dengan penelitian  Safithri  (2012),  dimana  ekstrak  air daun sirih merah mempunyai aktivitas inhibisi α-glukosidase sebesar -0.40 ± 2.26%. Penelitian  Kamaruzaman et al. (2020) tentang  perbedaan  aktivitas  inhibisi  enzim α-glukosidase berdasarkan waktu panen dengan pelarut yang sama menunjukkan waktu panen 8 bulan memiliki aktivitas inhibisi sebesar 83.81 ± 0,53% serta waktu panen 2 bulan memiliki aktivitas inhibisi yang lebih rendah, yaitu hanya
sebesar 53.16 ± 1.85%. Perbedaan yang signifikan terlihat  antara  aktivitas  inhibisi  α-glukosidase penelitian  ini  dan  hasil  Kamaruzaman et al. (2020) yang diduga karena perbedaan konsentrasi substrat.  Pengunaan  konsentrasi  substrat p NPG pada  penelitian  Kamaruzaman et al. (2020) 5 kali lebih kecil dibandingkan dengan penelitian ini. Hasil penelitian Alfarabi et al. (2010) menggunakan pelarut etanol 70% menunjukkan daya inhibisi sebesar 39.62%. Hal tersebut diduga karena perbedaan kepolaran pelarut yang digunakan.
Jumlah rendemen, kandungan total fenolik, serta aktivitas antioksidan pada ekstrak air daun sirih merah ( Piper crocatum ) yang bertingkat (ekstrak ke-1, residu ekstrak ke-1, dan residu ekstrak ke-2) menunjukkan hasil yang berbeda nyata (p<0.05). Jumlah rendemen, kandungan fenolik serta aktivitas antioksidan mempunyai hasil tertinggi pada residu ekstrak ke-1. Sementara itu, ekstrak daun sirih merah pada semua ekstrak dan residu ekstrak memiliki daya hambat yang kecil terhadap aktivitas α-glukosidase berkisar antara 0.75- 1.46%.

## 5.  UCAPAN TERIMA KASIH
Kami mengucapkan terima kasih kepada Program Inovasi Prospektif dan Pengembangan Minuman Fungsional LKST IPB 2021 an. Dr. Mega Safithri, S.Si., M.Si.

## DAFTAR PUSTAKA
[AOAC] The Association of Official Analytical Chemistry. 2012. Official  Methods of  Analysis.  Association  of  Official Analytical  Chemistry  19th  Edition.
Gaitherburg (US): AOAC.
[BPOM  RI].  Badan  Pengawas  Obat  dan Makanan Republik Indonesia. 2014. Peraturan  Kepala  Badan  Pengawas Obat dan Makanan Nomor 12 Tahun 2014  tentang  Persyaratan  Mutu  Obat Tradisional. Jakarta (ID) : BPOM RI.
Alfarabi  M,  Bintang  M,  Suryani,  Safithri M. 2010. The comparative ability of antioxidant  activity  of  Piper  crocatum in inhibiting fatty acid oxidation and free radical scavenging. Hayati J Biosci . 17(4): 201-204.
Yuniasih et al. – In Vitro Analysis of Gradual Water Extract of Red Betel Leaf
Bilous R, Richard D. 2014. Buku Pegangan Diabetes  Edisi  Ke  4. In Handbook of Diabetes 4th ed.
Dinicolantanio JJ, Bhutani J, O’Keefe JH. 2015.  Acarbose:  safe  and  effective  for lowering postprandial hyperglycemia and improving cardiovascular outcomes. Open Heart . 2(1):1-13.
Dompeipen EJ,  Simanjuntak P. 2015. Aktivitas antidiabetes dan antioksidan kapang endofit  dari  tanaman  mahoni  ( Swietenia macrophylla  King ). Biopropal Industry . 6(1): 7-17.
Egan AM, Dinneen SF. 2019. What is diabetes? Medicine (United Kingdom). 47(1). doi:10.1016/j.mpmed.2018.10.002.
Ervina M, Nawu YE, Esar SY. 2016. Comparison of in vitro antioxidant activity of infusion, extract and fractions of Indonesian cinnamon ( Cinnamomum burmannii ) bark. International Food Research Journal 23:1346-1350.
Hasnaeni, Wisdawati, Usman S. 2019. Pengaruh Metode Ekstraksi Terhadap Rendemen Dan Kadar Fenolik Ekstrak Tanaman Kayu Beta-Beta ( Lunasia amara Blanco ).
Galenika Journal of Pharmacy. 5(2): 175 – 182.
Januarti IB, Wijayanti R, Wahyuningsih S, Misa Z.  2019.  Potensi  ekstrak  terpurifikasi daun sirih merah ( Piper crocatum Ruiz &
Pav ) sebagai antioksidan dan antibakteri. Journal of Pharmaceutical Science and Clinical Research. 2(1): 60-68.
Kamaruzaman  SKS,  Kasim  KH,  Jaafar  MN. 2020.  The  effect  of  harvesting  time  on the antioxidant and antidiabetic activity of Piper crocatum (sirih merah) extract. IOP Conf. Series: Materials Science and Engineering . 864:1-9.
Kartika Y. 2013. Aktivitas antioksidan campuran ekstrak daun sirih merah dan kulit kayu manis [skripsi]. Bogor (ID):IPB University.
Maulana F. 2022. Aktivitas antioksidan dan antidiabetes in vitro ekstrak air kulit batang kayu manis ( Cinnamomum burmannii ) asal kota Jambi [skripsi].
Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor. Muin R. 2018. Potret penggunaan obat herbal khususnya di Kelurahan Lajonga Kecamatan  Panca  Lautang  Kabupaten Sidrap sebagai anti diabetes. Jurnal Ilmiah Kesehatan Diagnosis . 12(6): 617- 620.
Purnama  EW,  Safithri  M, Andrianto  D.  2023. Clusterization  of  red  betel  leaves  (Piper crocatum) from various regions in Indonesia based on secondary metabolite fingerprint  analysis  and  cytotoxicity values. Indonesian  Journal  of  Applied Research. 4(2): 170-182.
Rafi M, Febriany S, Wulandari P, Suparto IH, Ridwan T, Rahayu S, Siswoyo DM. 2018.  Total  phenolics,  flavonoids,  and anthocyanin contents of six vireya rhododendrom from Indonesia and evaluation of their antioxidant activities. Journal  of  Applied  Pharmaceutical Science . 8(9): 49-54.
Safithri  M,  Fahma  F.  2008.  Potency  of Piper crocatumdecoction as an antihiperglycemia in rat strain Sprague dawley. HAYATI Journal of Biosciences . 15(1): 45-48.
Safithri M, Faridah DN, Ramadani F, Pratama R. 2022. Antioxidant activity of ethanol extract and fractions of Piper crocatum with rancimat and cuprac methods. Turk J Biochem . Doi: https://doi.org/10.1515/ tjb-2021-0300
Safithri  M,  Indariani  S,  Septiya  D.  2020. Aktivitas antioksidan dan total fenolik minuman fungsional nanoenkapsulasi berbasis ekstrak sirih merah. Indonesian Journal of Human Nutrition. 7(1): 69-83. Safithri  M.  2012.  Kajian  mekanisme antihiperglikemik campuran ekstrak daun sirih merah dan kulit kayu manis yang berpotensi sebagai minuman fungsional. [disertasi].  Bogor:  Institut  Pertanian Bogor.
Safithri,  M.  and  Fahma,  F.  2016.  Potency of  Piper  crocatum  decoction  as  an antihyperglycemia in rat strain Sprague dawley . Hayati Journal of Biosciences. 15(1): 45-48.
Hasibuan MS, Yasni S, Bintang M, Rsnti AS. 2016. Antihyperglycemic Activity of Piper crocatum Leaves and Cinnamomum burmannii Bark Mixture Extract in  Streptozotocin-induced  Diabetic Rats. Journal of Mathematical and Fundamental Science. 48(2): 178-191. Sancheti S, Sandesh S, Sung YS. 2009.
Chaenomeles  sinensis:  A  potent  α-and β-glucosidase inhibitor. Am J Pharm and Toxicol . 4(1): 8-11. Suhermanto. 2013. Profil flavonoid, tanin dan alkaloid dari ekstrak daun sirih merah ( Piper crocatum ) [skripsi]. Bogor (ID) :
Institut Pertanian Bogor.
Sulistiawati  E,  Santosa  I,  Rizka  Y,  Saka AA.  2015.  Pengaruh  suhu  pada pengeringan tepung kimpul (Xanthasoma sagittifolium). J Chemica . 2 (2) : 57-60.
Toripah S, Jemmy SA, Frenly W. 2014. Aktivitas antioksidan dan kadungan total fenolik ekstrak daun kelor ( Moringa oleiferaLam). JIF . 3(4):37-43. Ukieyanna E. 2012. Aktivitas antioksidan, kadar fenolik,  dan  flavonoid  total  tumbuhan suruhan ( Peperomia pellucida L. Kunth ) [skripsi].  Bogor  (ID):  Institut  Pertanian Bogor.
Wahyuni DT, Widjanarko SB. 2015. Pengaruh jenis pelarut dan lama ekstraksi terhadap ekstrak karotenoid labu kuning dengan metode gelombang ultrasonik. JPA. 3 (2) : 309-401.
Widiastuti L. 2020. Acupressure dan senam kaki terhadap tingkat peripheral arterial disease pada klien DM tipe 2. Jurnal Keperawatan Silampari . 3(2): 649-706.