## JIFI (JURNAL ILMIAH FARMASI IMELDA)
Vol.4, No.2, Maret 2021, pp. 43-50 ISSN: 2597-7164 (Online), 2655-3147 (Print) https://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALFARMASI
 43

## ISOLASI DAN ELUSIDASI STRUKTUR SENYAWA DARI EKSTRAK BAWANG DAYAK SERTA UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERINYA
Senda Kartika Rakainsa 1 , Khoirun Nisa 2
1 Universitas Negeri Semarang
2 Balai Penelitian Teknologi Bahan Alam, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia
Article Info ABSTRACT Article history: Received Jan 26, 2021 Revised Mar 17, 2021 Accepted Mar 26, 2021 Antibacterial  activity  screening  was  carried  out  on  10  species  of medicinal  plants  that  have  been  empirically  used  in  traditional medicine  in  Indonesia,  including  the  bulb  of  dayak  onion (Eleutherine  bulbosa),  ki  tolod  herb  (Isotoma  longiflora),  fruit  of ketepeng  cina  (Cassia  alata),  and  bluntas  leaves  (Pluchea  indica). Based on the results of antibacterial activity screening, the extract of dayak  onion  (Eleutherine  bulbosa)  showed  the  most  prominent antibacterial  activity  against  Bacillus  subtilis  and  Staphylococcus aureus at extract concentrations of 200 and 100 μg / ml, and against Klebsiella  pneumoniae  at  an  extract  concentration  of  200  μg/  ml. Purification  and  isolation  of  compounds  and  antibacterial  activity assay  were  carried  out  to  determine  which  compounds  were responsible  for  the  antibacterial  activity  of  dayak  onion.  From  the purification  and  isolation  of  the  bioactive  compound  using  MPLC, column chromatography, and preparative TLC, an isolate compound (4  mg)  was  isolated.  The  compound  was  analyzed  using  LR-EIMS and  1D-2D  NMR,  and  was  subsequently  identified  as  Hongconin. The  antibacterial  activity  test  of  dayak  onion  extract  and  isolated compounds  showed  that  the  extract  of  dayak  onion  exhibited moderate  antibacterial  activity  against  B.  subtilis,  S.  aureus,  and  K. pneumoniae,  indicated  by  the  MIC  value  ranging  from  100-200 μg/ml.  Meanwhile,  the  isolate  compound  (Hongconin)  exerted antibacterial  activity  which is  classified  as  weak  against all  types  of pathogenic bacteria tested, indicated by the MIC value of >200 μM.
Keywords:
Dayak Onion Antibacterial Isolation Hongconin This is an open access article under the CC BY-SA license.

## Corresponding Author:
Senda Kartika Rakainsa, Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Semarang,
Jl. Raya Sekaran, Kel. Sekaran, Kec. Gunungpati, Kota Semarang - Jawa Tengah. Email: sendakartika@mail.unnes.ac.id

## 1. INTRODUCTION
Menurut (Ayu Dwi Putri, 2017) Kehamilan dapat menyebabkan perubahan fisik, psikis dan Penyakit infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri,  jamur,  virus,  dan  parasit  merupakan  masalah  kesehatan  yang  masih menjadi  tantangan  di  seluruh  dunia,  terlepas  dari  perkembangan  dunia  medis  dan  pengobatan  yang  amat
44 pesat.  Akibat  yang  disebabkan  oleh  penyakit  infeksi  tersebut  dirasakan  sangat  besar  terutama  di  Negara berkembang  seperti  Indonesia,  dikarenakan  terbatasnya  jenis  pengobatan  yang  efektif,  terbatasnya  akses kesehatan bagi masyarakat kalangan menengah ke bawah, serta meningkatnya kasus resistensi antibiotik [1]. Di Indonesia sendiri, penyakit akibat infeksi bakteri seperti diare, pneumonia, ISPA, dan TBC masih menjadi masalah kesehatan yang mendesak untuk ditangani. Bahkan, penyakit infeksi menjadi penyumbang kematian pada  bayi  dan  anak-anak.  Tahun  2019,  pneumonia  dan  diare  masih  menjadi  masalah  utama  yang menyebabkan 979 kematian (pneumonia) dan 746 kematian (diare) [2].
Kemunculan  bakteri  patogen  yang  resisten  kini  semakin  meningkat,  sehingga  membuat  bakteri patogen tersebut menjadi tidak sensitif terhadap berbagai golongan antibiotik. Hal ini mendorong penemuan antibiotik baru, yang mana telah menjadi menjadi fokus baru para peneliti di bidang kedokteran dan farmasi [3]. Selain sumber mikroorganisme, metabolit sekunder dari tanaman mulai dilirik sebagai sumber senyawa antibakteri yang baru. Tanaman mengakumulasikan senyawa metabolit sekunder dengan aktivitas antibakteri, seperti  alkaloid,  kumarin,  isoflavonoid,  quinone,  tannin,  and  terpen.  Senyawa-senyawa  ini  bertanggung jawab atas mekanisme pertahanan tanaman terhadap mikroba patogen dan herbivora yang ada di sekitarnya [4].  Biodiversitas  flora  di  Indonesia,  terutama  keragaman  jenis  tanaman  obat  yang  digunakan  untuk pengobatan tradisional sangatlah tinggi. Namun demikian, penelitian tentang aktivitas biologis tanaman obat masih  terbatas.  Berdasarkan  fakta  tersebut,  maka  diperkirakan  potensi  tanaman  obat  di  Indonesia  yang menyimpan aktivitas antibakteri sangat besar dan masih perlu untuk digali.
Pada penelitian ini, dilakukan skrining aktivitas antibakteri terhadap 10 spesies tanaman obat yang secara  empiris  telah  digunakan  dalam  pengobatan  tradisional  di  Indonesia.  Khasiat  empiris  dari  tanaman- tanaman tersebut sangat beragam, beberapa di antaranya mengarah pada potensi antibakteri, seperti herba ki tolod  ( Isotoma  longiflora ),  buah  ketepeng  cina (Cassia  alata), dan  daun  bluntas (Pluchea  indica) untuk pengobatan  berbagai  penyakit  kulit  dan  infeksi  mata  [5-7].  Selain  itu,  kandungan  metabolit  sekunder  dari tanaman-tanaman  tersebut  seperti  alkaloid,  terpen,  tannin,  saponin,  flavonoid,  dan  fenolik  telah  terbukti mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri patogen [8-11]. Penelitian ini bertujuan untuk menyelidiki tanaman  obat  yang  berpotensi  sebagai  agen  antibakteri,  serta melakukan isolasi  senyawa  yang  bertanggung jawab  terhadap  efek  antibakteri  tanaman  tersebut.  Senyawa  isolat  diuji  aktivitas  antibakterinya  terhadap  4 jenis  bakteri  patogen,  yaitu Bacillus  subtilis,  Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli, dan Klebsiella pneumonia.

## 2. RESEARCH METHOD
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara  lain  alat  MPLC/ Medium  Pressure  Liquid Chromatography (Buchi Labortechnik AG C-615). Silica gel (40–50 μm, Kanto Chemical Co., Inc., Tokyo, Jepang)  digunakan  untuk  kromatografi  kolom.  KLT  untuk  analisis  dan  KLT-preparatif  dilakukan menggunakan plat silika 60F254 (Merck). KLT preparatif dilakukan dengan chamber KLT (Yazawa, Tokyo, Japan)  yang  telah  dijenuhkan  dengan  fase  gerak.  Visualisasi  KLT  dengan  lampu  UV  254  dan  366  nm (Yamazen).  Spektra  massa  dari  senyawa  isolat  diambil  dengan  LR-EIMS/ Low  Resolution-Electron  Impact Mass Spectrometer (Shimadzu). Spektra NMR diambil dengan  JEOL JNM-ECA500II Spectrometer dengan Tetrametilsilane  sebagai  standar internal  (Wako Pure  Chemical  Industries ).  Serbuk  simplisia  tanaman  obat yaitu  daun  dandang  gendis,  buah  ketepeng  cina,  herba  alang-alang,  daun  patikan  kebo,  daun  daruju,  umbi bawang dayak, daun ungu, daun dadap, daun bluntas, dan herba ki tolod diperoleh dari distributor simplisia di daerah Sleman, Yogyakarta. Strain bakteri Bacillus subtilis NBRC 13719, Staphylococcus aureus NBRC 100910, Escherichia  coli NBRC  102203,  dan Klebsiella  pneumoniae NBRC  14940,  didapat  dari National Institute of Technology and Evaluation (NITE, Tokyo, Jepang).

## Skrining Antibakteri
Sepuluh  jenis  tanaman  obat  diambil  masing-masing  sebanyak  20  g  untuk  dibuat  ekstrak kloroformnya.  Pembuatan  ekstrak  dilakukan  dengan  metode  maserasi  pada  suhu  kamar  dengan  bantuan sonikasi.Masing-masing ekstrak dari tanaman kemudian dilakukan skrining aktivitas antibakterinya terhadap 2 jenis bakteri Gram positif, yaitu Bacillus subtilis NBRC 13719 dan Staphylococcus aureus NBRC 100910, serta  bakteri  Gram negatif  yaitu Klebsiella  pneumoniae NBRC  14940  dan Escherichia coli NBRC  102203, menggunakan metode mikrodilusi [12]. Bakteri diinokulasikan pada media agar YP ( yeast-polypeptone ) dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 12 jam. Bakteri kemudian dipindahkan ke media cair YP (tanpa agar) dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 12 jam dengan penggojogan pada alat shaker. Ekstrak tanaman dilarutkan menggunakan  DMSO  dengan  konsentrasi  masing-masing  10  mg/ml.  Media  YP  cair  yang  berisi  bakteri dipindahkan  ke  96- well  plate dan  larutan  ekstrak  diaplikasikan  ke  dalamnya.  Media  dan  sampel  kemudian didilusi  menjadi  dua  jenis  konsentrasi  (200  μg/mldan  100  μg/ml).  Ampicillin  dan  Kanamycin  digunakan sebagai  kontrol  positif  dan  kontrol negatifnya  adalah  DMSO. Plate diinkubasi  selama  24  jam  dan  aktivitas penghambatan  pertumbuhan  bakteri  diamati  secara  visual  dengan  penambahan  50  μL  larutan  MTT
(konsentrasi  5  mg/ml  dalam  isopropanol-HCl)  ke  dalam  masing-masing  sumuran  diikuti  dengan  inkubasi selama 1 jam. Percobaan dilakukan dengan 3 kali replikasi. Ekstrak yang dipilih untuk dilakukan isolasi dan purifikasi adalah  ekstrak  yang  menunjukkan  penghambatan pertumbuhan  koloni  bakteri  yang dapat  diamati secara visual (warna kuning jernih), baik pada konsentrasi 200 mg/ml maupun 100 mg/ml.

## Ekstraksi Bawang Dayak
Sampel Bulbus (umbi lapis) Bawang Dayak ( Eleutherine bulbosa ) yang telah dikeringkan sebanyak 1,5 kg diekstraksi menggunakan pelarut kloroform sebanyak 2 L dengan bantuan sonikasi selama 90 menit di suhu  ruang.  Kemudian  dilakukan  remaserasi  sebanyak  2  kali  untuk  memperoleh  hasil  ekstrak  yang  lebih optimal.  Ekstrak  disaring  dengan  corong  vakum  dan  diuapkan  menggunakan rotary  evaporator untuk memperoleh ekstrak kental .

## Isolasi Senyawa dan Elusidasi Struktur Senyawa Isolat
Ekstrak Bawang Dayak (23.5 g) dipisahkan dengan MPLC fase normal (silica gel; 40–50 µm, 1.85 kg;  kolom  100x460  mm; flow  rate =  25  ml/menit)  menggunakan  kombinasi  pelarut  n-heksana:  etil  asetat (100:0-0-100)  sehingga  menghasilkan  18  fraksi.  Fraksi  7  (bobot  51  mg;  persentase  n-heksana:  etil asetat=70:30)  kemudian  dipisahkan  dengan  kolom  kromatografi  fase  normal  menggunakan  pelarut  n- heksana:  etil asetat=5:1  sehingga menghasilkan  4  subfraksi.  Sub  fraksi 4  (10  mg)  dimurnikan  dengan  KLT preparatif  (n-heksana:  etil  asetat=1:1)  menghasilkan  suatu  senyawa  isolat  (4  mg),  kemudian  dianalisis strukturnya dengan 1D dan 2D NMR serta LR-EIMS.

## Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Bawang Dayak dan Senyawa Isolat
Ekstrak bawang dayak aktivitas antibakterinya terhadap 2 jenis bakteri Gram positif, yaitu Bacillus subtilis NBRC 13719 dan Staphylococcus aureus NBRC 100910, serta bakteri Gram negatif yaitu Klebsiella pneumoniae NBRC  14940,  menggunakan  metode  mikrodilusi  [12].  Larutan  stok  untuk  ekstrak  (10  mg/ml dalam DMSO) dan larutan stok senyawa isolat (5 mM dalam DMSO) didilusi menjadi beberapa konsentrasi (konsentrasi ekstrak: 200, 100, 50, 25, dan 12.5 μg/ml; konsentrasi senyawa isolat: 200, 100, 50, 25, dan 12.5 μM)  dalam  media  YP  berisi  bakteri  pada  96- well  plates untuk  mencari  nilai  KHM  (Kadar  Hambat Minimum). Ampicillin dan Kanamycin digunakan sebagai kontrol positif dan DMSO sebagai kontrol negatif. Plate diinkubasi  selama  24  jam  dan  aktivitas  penghambatan  pertumbuhan  bakteri  diamati  secara  visual dengan  penambahan  50  μL  larutan  MTT  (konsentrasi  5  mg/ml  dalam  isopropanol-HCl)  ke  dalam  masing- masing  sumuran  diikuti  dengan  inkubasi  selama  1  jam.  Percobaan  dilakukan  dengan  3  kali  replikasi. Percobaan  dilakukan  dengan  3  kali  replikasi.  Nilai  KHM  dari  sampel  didefinisikan  sebagai  konsentrasi terendah  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  secara  keseluruhan  setelah  diinkubasi  selama  37°C selama  24  jam.  Penghambatan  pertumbuhan  bakteri  diamati  secara  visual  dengan  melihat  sumuran  yang berwarna kuning jernih.

## 3. RESULTS AND ANALYSIS

## 3.1 Hasil Skrining Aktivitas Antibakteri
Skrining  aktivitas  antibakteri  dilakukan  terhadap  10  spesies  tanaman  obat  menggunakan  metode mikrodilusi  terhadap  bakteri-bakteri  patogen,  yaitu Bacillus  subtilis,  Staphylococcus  aureus,  Escherichia coli, dan Klebsiella pneumoniae. Berdasarkan hasil skrining aktivitas antibakteri, ekstrak umbi bawang dayak (Eleutherine  bulbosa) menunjukkan aktivitas antibakteri  paling  dominan  terhadap B.  subtilis dan S.  aureus pada  konsentrasi  ekstrak  200  dan  100  μg/ml,  serta  terhadap K.pneumoniae pada  konsentrasi  ekstrak  200 μg/ml (Tabel 1). Beberapa ekstrak tanaman lain menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap K.pneumoniae, seperti  buah  ketepeng  cina,  daun  patikan  kebo,  daun  daruju, daun  dadap,  dan herba  ki tolod.  Namun,  tidak ada  sampel  ekstrak  yang  menunjukkan  aktivitas  antibakteri  terhadap E.coli. Ditinjau  dari  aktivitas antibakterinya,  maka  dipilih  umbi  bawang  dayak (E.  bulbosa) untuk  selanjutnya  dilakukan  purifikasi  dan isolasi senyawa bioaktifnya.
Tabel 1. Hasil Skrining Antibakteri 10 Spesies Tanaman Obat Indonesia
No Nama tanaman B. subtilis S.aureus K.pneumoniae E.coli 1 Daun dandang gendis (Clinacanthus nutans) - - - - 2 Buah ketepeng cina (Cassia alata) - - + (200 μg/ml) - 3 Herba alang-alang (Imperata cylindrica) - - - -
46 4 Daun patikan kebo (Euphorbia hirta) - - + (200 μg/ml) - 5 Daun daruju (Acanthus ilicifolium) - - + (200 μg/ml) - 6 Umbi bawang dayak (Eleutherine bulbosa) + (200 &100 μg/ml) + (200 &100 μg/ml) + (200 μg/ml) - 7 Daun ungu (Graptophylum pictum) - - - - 8 Daun dadap (Erythrina lithosperma) - - + (200 μg/ml) - 9 Daun bluntas (Pluchea indica) - - - - 10 Herba ki tolod (Isotoma longiflora) - - + (200 μg/ml) -
Ekstraksi dan Isolasi Senyawadari E.bulbosa
Simplisia umbi lapis (bulbus) dari E.bulbosa yang dikeringkan diekstraksi dengan kloroform untuk menarik  senyawa  metabolit  sekunder  yang  ada  di  dalamnya.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi pada  suhu  kamar  diikuti  dengan  dua  kali  remaserasi  supaya  memperoleh  rendemen  ekstrak  yang  optimal. Dari hasil maserasi diperoleh ekstrak seberat 23.5 g yang kemudian dipisahkan dengan MPLC menggunakan kombinasi  pelarut  n-heksana:etil  asetat  (100:0-0-100).  Fraksi  7  (persentase  n-heksana:  etil  asetat=70:30) kemudian  dipisahkan  dengan  kolom  kromatografi  fase  normal  menggunakan  pelarut  n-heksana:  etil asetat=5:1 diikuti dengan KLT preparatif (n-heksana: etil asetat=1:1) menghasilkan suatu senyawa isolat (4 mg).  Senyawa  tersebut  selanjutnya  dielusidasi  strukturnya  dengan  bantuan  analisis  LR-EIMS  serta  1D  dan 2D NMR.
Gambar 1. Eleutherine bulbosa Mill.
Senyawa  isolat  berwujud  padatan  kuning  dengan  bobot  molekul  288  yang  dikonfirmasi  dari  hasil spektra  LR-EIMS  yang  menunjukkan peak ion  pada m/z 288  [M+Na] + .  Rumus  molekulnya  diperoleh C 16 H 16 O 5 dari  deduksi  data 13 C  NMR.  Data 1 H  NMR  menunjukkan  keberadaan  dua  gugus  hidroksil  pada pergeseran kimia 8.96ppm (s) dan 12.81 ppm (s), tiga proton aromatik pada 7.01 ppm (d), 7.38 ppm (t), dan 8.05 ppm (d), satu proton dari gugus metoksi pada 4.02 ppm (s), dan dua proton metin pada 4.69 ppm (q) dan 5.50 ppm (q).
Gambar 2. Korelasi HMBC (ditunjukkan dengan anak panah) dan COSY (garis tebal) dari Senyawa Isolat (Hongconin)
Analisis 2D NMR menunjukkan korelasi HMBC yang teramati antara H-6 dengan C-14, H-7 dengan C-13, serta H-6 dengan C-5, yang mengindikasikan adanya struktur inti naftalena (Gambar 2). Proton singlet dari gugus metoksi  pada  4.02  ppm  merupakan  proton  pada  posisi  C-9,  berdasarkan  korelasi  HMBC  antara proton  tersebut  dengan  C-9.  Keberadaan  proton  fenolik  pada  C-5  dan  C-10  didukung  dengan  korelasi  dari proton 5-OH dengan C-5 dan proton 10-OH dengan C-10. Korelasi dari proton metil 1-Me dengan C-1 dan 3- Me dengan C-3 mengonfirmasikan bahwa terdapat dua gugus metil yang terikat masing-masing pada C-1 dan C-3.  Hal  tersebut  juga diperkuat  dengan  korelasi  COSY  antara  proton metin pada  H-1  dengan  proton metil pada C-1, serta proton metin pada H-3 dengan proton metil pada C-3. Korelasi HMBC antara H-1 dengan C- 3, serta pergeseran kimia pada C-1 dan C-3 (δc 69.5 dan 67.4 ppm) mengindikasikan keberadaan oxygenated carbon . Keberadaan karbon karbonil diketahui dari pergeseran kimia C-4 pada 202.9 ppm. Dari hasil analisis 1D dan 2D NMR, serta perbandingan data spektra NMR dengan referensi penelitian sebelumnya (Tabel 2), maka senyawa isolat tersebut diidentifikasi sebagai suatu turunan naftalena, yaitu (1 R ,3 R )5, 10-Dihydroxy-9- methoxy-1, 3-dimethyl-1 H -naphtho [2,3- c ] pyran-4(3 H )-one, atau yang dikenal dengan nama lain Hongconin [13,14].
Tabel 2. Perbandingan Spektra NMR dari Senyawa Isolat dan Referensi Posisi δ C isolat δ C ref.* δ H isolat δ H ref* 1 69.5 69.5 4.69 (q, 6.4 ) 4.69 (q, 6.4 ) 3 67.4 67.4 5.50 (q, 6.7 ) 5.48 (q, 6.7 ) 4 203.3 202.9 - - 5 154.4 153.4 - - 6 118.0 118.1 8.05 (d, 8.5 ) 8.04 (d, 8.5 ) 7 125.4 125.4 7.38 (t, 8.2 ) 7.38 (t, 8.2 ) 8 109.1 109.1 7.01 (d, 7.9 ) 7.01 (d, 7.9 ) 9 155.7 155.7 - - 10 139.4 139.4 - - 11 107.8 107.8 - - 12 119.6 119.6 - - 13 125.9 126.0 - - 14 120.9 120.9 - - 1-Me 17.4 16.3 1.54 (d, 6.4 ) 1.53 (d, 6.4 ) 3-Me 17.9 17.4 1.64 (q, 6.7 ) 1.63 (q, 6.7 ) 5-OH - - 12.81 (s) 12.82 (s) 10-OH - - 8.96 (s) 8.98 (s) 9-OMe 56.4 56.4 4.02 (s) 4.07 (s) δ C : 13 C (ppm, 100MHz, CDCl 3 ). δ H : 1 H (ppm, 500MHz, CDCl 3 ), Coupling constant J (Hz) *Referensi dari Fernandes & Chavan (2010)

## Uji Aktivitas Antibakteri
Untuk mengetahui aktivitas antibakteri ekstrak bawang dayak serta senyawa isolatnya (Hongconin) maka  dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri  dengan  tujuan  mencari  nilai  KHM  (Kadar  Hambat  Minimum) dengan hasil ditunjukkan pada Tabel 3.
48 Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Bawang Dayak dan Senyawa Isolat No Sampel Nilai KHM B. subtilis S.aureus K.pneumoniae E.coli 1 Ekstrak bawang dayak 100 μg/ml 100 μg/ml 200 μg/ml > 200 μg/ml 2 Senyawa Isolat (Hongconin) > 200 μM > 200 μM > 200 μM > 200 μM 3 Ampicillin (kontrol positif) < 0.2 μM < 0.2 μM - - 4 Kanamycin (kontrol positif) - - 5.2 μM 10.4 μM
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  bawang  dayak  menunjukkan  hasil  ekstrak  bawang  dayak mempunyai  aktivitas  antibakteri  yang  tergolong  moderat/sedang  terhadap B.  subtilis,  S.  aureus, dan K. pneumonia , ditunjukkan dengan nilai KHM antara 100-200 μg/ml (Tabel 3) [15].

## 3.2 Pembahasan
Skrining  aktivitas  antibakteri  dari  10  spesies  tanaman  menunjukkan  bahwa  tidak  ada  sampel tanaman yang mempunyai aktivitas antibakteri terhadap E.coli. Bakteri E.coli termasuk bakteri Gram negatif yang  dikenal  sulit  untuk  dipenetrasi  oleh  senyawa  obat  dan  antibiotik.  Hal  ini  disebabkan  oleh  dinding  sel bakteri  Gram  negatif  yang  terdiri  dari  beberapa  lapisan,  sehingga  bakteri  jenis  ini  dikenal  lebih  resisten terhadap antibiotik daripada bakteri Gram positif [16].
Dari hasil penelitian ini, diketahui bahwa tanaman bawang dayak mempunyai aktivitas antibakteri. Tanaman bawang dayak telah diketahui mengandung tiga golongan besar senyawa metabolit sekunder yang telah  diisolasi  sebelumnya,  seperti  naftalena,  antrakuinon,  dan  naftokuinon,  serta  senyawa  lain  seperti stigmasterol-3-Oβ-D-glucopyranoside, kadsuric  acid dan  stigmasterol.  Tanaman  ini  dilaporkan  mempunyai aktivitas  biologi  sebagai  antimikroba,  antiinflamasi,  antivirus,  antihipertensi,  dan  sitotoksik,  sehingga  hasil penelitian  ini  sejalan  dengan  penelitian  yang  telah  dilakukan  sebelumnya  [17].  Selanjutnya,  purifikasi  dan isolasi ekstrak bawang dayak dilakukan untuk menyelidiki kandungan senyawa yang bertanggung jawab atas efek antibakterinya, mengingat penelitian tentang aktivitas antibakteri dari senyawa bioaktif tanaman bawang dayak  masih  sangat  terbatas.  Dari  proses  purifikasi  dan  isolasi  ekstrak  bawang  dayak,  diperoleh  suatu senyawa bernama Hongconin.
Senyawa  ini  selanjutnya  diuji  aktivitas  antibakterinya  menggunakan  metode  dilusi  cair dikombinasikan  dengan  MTT  untuk  mengetahui  nilai  KHM.  Nilai  KHM  didefinisikan  sebagai  konsentrasi ekstrak/senyawa  yang menunjukkan  penghambatan total terhadap  pertumbuhan  koloni  bakteri  [18]. Teknik dilusi yang dikombinasikan dengan metode MTT merupakan salah satu teknik yang sesuai untuk menentukan nilai KHM [19]. Prinsip reaksi MTT adalah reduksi enzimatis dari garam tetrazolium menjadi formazan pada sel  bakteri  yang  masih  hidup  yang  berwarna  ungu  kebiruan  [20].  Sementara  itu,  pada  sel  bakteri  yang pertumbuhannya  terhambat/mati  reaksi  tersebut  tidak  terjadi  sehingga  teramati  secara  visual  menunjukkan warna kuning jernih.
Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  bawang  dayak  menunjukkan  hasil  ekstrak  bawang  dayak mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap B.  subtilis,  S.  aureus, dan K.  pneumonia .  Hal  ini  sesuai  dengan hasil  yang  ditunjukkan  oleh  penelitian  sebelumnya  bahwa  ekstrak  bawang  dayak  mempunyai  aktivitas antibakteri terhadap S. aureus ATCC 23235 dan 27664, Streptococcous mutans dan S. pyogenes dengan nilai KHM bervariasi antara 120-125 μg/mL [21]. Fraksi yang dipisahkan dari ekstrak bawang dayak juga terbukti menghambat  pertumbuhan  bakteri  MRSA  ( Methycillin  Resistant  Staphylococcus  aureus )  dengan  KHM bervariasi antara 62.5-1000 μg/mL [22]. Ekstrak bawang dayak dinyatakan dapat mendenaturasi sitoplasma dan mengganggu kestabilan membran serta menyebabkan kebocoran membran sel bakteri S. aureus [23]. Sementara itu,  senyawa  isolat  (Hongconin) mempunyai  aktivitas  antibakteri  yang tergolong  lemah terhadap  semua  jenis  bakteri  pathogen  yang  diujikan,  ditunjukkan  dengan  nilai  KHM  >200μM  [24]. Penelitian  sebelumnya  menyatakan  bahwa  senyawa  tersebut  mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap S. aureus ATCC  27664  dengan  KHM  31.25  μM  dan terhadap S.  aureus ATCC  25923  dengan  KHM  125  μM [17].  Perbedaan  nilai  KHM  antara  penelitian  ini  dan  penelitian  yang  telah  dipublikasi  sebelumnya  dapat disebabkan  oleh  perbedaan  dalam  jumlah  inoculum  bakteri,  tipe  media  pertumbuhan,  waktu  inkubasi,  dan metode  preparasi  inoculum  [25].  Namun  demikian,  secara  umum  senyawa  Hongconin  dapat  dikategorikan mempunyai  aktivitas  antibakteri  sedang-lemah  terhadap  berbagai  jenis  bakteri  patogen.  Dimungkinkan senyawa  lain  yang  terkandung  dalam  ekstrak  bawang  dayak  bertanggung  jawab  atas  aktivitas  antibakteri pada ekstrak. Oleh karena itu, penelitian tentang isolasi senyawa bioaktif dari ekstrak bawang dayak dan uji aktivitas antibakterinya perlu dikembangkan lebih jauh.

## 4. CONCLUSION
1. Sepuluh spesies tanaman obat yang diskrining aktivitas antibakterinya menunjukkan aktivitas antibakteri, di antaranya umbi bawang dayak, buah ketepeng cina, daun patikan kebo, daun daruju, daun dadap, dan
49 herba ki tolod.
2. Isolasi  dan  elusidasi  struktur  senyawa  bioaktifdari  ekstrak  bawang  dayak  menghasilkan  senyawa  isolat yang diidentifikasi sebagai Hongconin, berdasarkan analisis dengan LR-EIMS dan 1D-2D NMR.
3. Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  bawang  dayak  dan  senyawa  isolat  menunjukkan  hasil  ekstrak  bawang dayak mempunyai aktivitas antibakteri yang tergolong moderat/sedang terhadap B. subtilis, S. aureus , dan K.  pneumoniae ,  ditunjukkan  dengan  nilai  KHM  antara  100-200  μg/ml.  Sementara  senyawa  isolat (Hongconin) mempunyai aktivitas antibakteri yang tergolong lemah terhadap semua jenis bakteri patogen yang diujikan, ditunjukkan dengan nilai KHM >200 μM.
4. Penelitian  tentang  isolasi  senyawa  bioaktif  dari  ekstrak  bawang  dayak  perlu  dilakukan  untuk  mencari senyawa  yang  bertanggung  jawab  atas  efek  antibakterinya.  Selanjutnya,  senyawa  tersebut  perlu dikembangkan menjadi kandidat antibiotik baru untuk mengatasi berbagai penyakit infeksi.

## REFERENCES
1. Okeke, I.N., Laxminarayan, R., Bhutta, Z.A., Duse, A.G., Jenkins, P., O’Brien, T.F., Pablos-Mendez, A., Klugman, K.P. 2005. Antimicrobial resistance in developing countries. Part I: Recent trends and current status. The Lancet Infectous Disease . 5, 481–493.
2. Kemenkes RI. 2020. Profil Kesehatan Indonesia Tahun 2019 . https://www.kemkes.go.id/folder/view/01/structure-publikasi-pusdatin-profil-kesehatan.html, diakses tanggal 24 Januari 2021.
3. Uche-Okereafor,  Nkemdinma,  Sebola,  M.,  Tapfuma,  K.,  Mekuto,  L.,  Green,  E.,  Mavungmengwana,  V. 2019.  Antibacterial  Activities  of  Crude  Secondary  Metabolite  Extracts  from  Pantoea  Species  Obtained from  the  Stem  of  Solanum  mauritianum  and  Their  Effects  on  Two  Cancer  Cell  Lines. International Jurnal of Environmental Research and Public Health . 16, 602.
4. Reichling, J. 2010. Plant-microbe interactions and secondary metabolites with antibacterial, antifungal, and  antiviral  properties,  in  Annual  Plant  Reviews  volume  39:  functions  and  biotechnology  of  plant secondary metabolites: Wiley-Blackwell Publishing, Iowa, USA, 2nd edition, pp 214−317.
5. Hussain H, Al-Harrasi A, Abbas G, Rehman NU, Mabood F, Ahmed I, Saleem M, Van Ree T, Green IR, Anwar  S,  Badshah  A,  Shah  A,  Ali  I.,  2013,  The  Genus  Pluchea  :Phytochemistry,Traditional  Uses,  and Biological Activities. Chemistry and Biodiversity , 10, 1944-1971.
6. Dalimartha S., 2000, Atlas Tumbuhan Obat Indonesia. Trubus Agriwidya, Jakarta.
7. Siregar R.M., 2015, Antibacterial Activity of Kitolod (Laurentia longiflora (L). Peterm) Leaf  and Flower Extact Against Several Conjunctivity Causing Bacteria , Institut Pertanian Bogor, 1 (L), 8.
8. Banso A., 2009, Phytochemical and antibacterial investigation of bark extracts of Acacia nilotica , Journal of Medicinal Plants Research , 3, 82-85
9. Naumann  H.D.,  Tedeschi  L.O.,  Zeller  W.E.,  Huntley  N.F.,  2017,  The  role  of  condensed  tannins  in ruminant  animal  production:  advances,  limitations  and  future  directions, Brazilian  Journal  of  Animal Science 46(12): 929-949.
10. Kumar,  S.,  and  Pandey  A.K.,  2013,  Chemistry  and  Biological  Activities  of  Flavonoids:  An  Overview, The Scientific World Journal , 1, 1-16.
11. Nitiema, L.W., Savadogo, A., Simpore, J., Dianou, D., Traore, A.S., 2012, In vitro Antimicrobial Activity of  Some  Phenolic  Compounds  (Coumarin  and  Quercetin)  Against  Gastroenteritis  Bacterial  Strains, International Journal of Microbiological Research 3(3): 183-187.
12. Malekinejad, H.; Gilani, B. B.; Tukmechi, A.; Ebrahimi, H. A cytotoxicity and comparative antibacterial study on the effect of Zataria multiflora Boiss, Trachyspermum copticum essential oils, and Enrofloxacin on Aeromonas hydrophila . Avicenna J. Phytomed . 2012, 2, 188−195. 13. Fernandes,  R.A.,  Chavan,  V.P.,  2010,  A  Concise  Asymmetric  Synthesis  of  (–) ‐ Hongconin  and  (–)
‐ 1 ‐ epi ‐ Hongconin, European Journal of Organic Chemistry , 22, 4306-4311.
14. Zhengxiong, C., Huizhu, H., Chengrui, W., Yuhui, L., Jianmi,D.,  Sankawa U., Noguchi H. and Itaka Y., 1986, Hongconin, a New Naphthalene Derivative from Hong-Cong, the Rhizome of Eleutherine ameicana MERR. et HEYNE (Iridaceae), Chem. Pharm. Bull ., 34(7): 2743–2746.
15. Kuete,  V.,  2010,  Potential  of  Cameroonian  plants  and  derived  products  against  microbial  infections:  a review, Planta Medica , 76(14): 1479-1491.
16. Salton,  M.R.J.;  Kim,  K.S.  Structure. In  Medical  Microbiology,  4th  ed.;  Baron,  S.,  Ed.;  University  of Texas Medical Branch at Galveston : Galveston TX, USA, 1996; Chapter 2; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/ books/NBK8477/, diakses tanggal 22 Januari 2021.
17. Insanu, M., Kusmardiyani, S., Hartati, R., 2014, Recent Studies on Phytochemicals and Pharmacological Effects of Eleutherine americana Merr., Procedia Chemistry 13, 221-228.
18. Ifesan,  B.O.,  Hamtasin,  C.,  Mahabusarakam,  W.,  Voravuthikunchai  S.P.,  2009,  Assessment  of antistaphylococcal  activity  of  partially  purified  fractions  and  pure  compounds  from  Eleutherine
50
Americana, Journal of Food Protection , 72(2): 354-359. 19. Balouiri, M.; Sadiki, M.; Ibnsouda, S, K., 2016, Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: a review, Journal of Pharmaceutical Analysis, 6, 71−79.
20. Grela,  E.,  Kozłowska,  J.,  Grabowlecka,  A.,  2018,  Current  methodology  of  MTT  assay  in  bacteria  -  A review, Acta Histochemica , 120(4):303-311.
21. Ieyama  T,  Gunawan-Puteri  MDPT,  Kawabata  J,  2011,  a-Glucosidase  inhibitors  from  the  bulb  of Eleutherine Americana, Food Chemistry, 128, 308-311
22. Sirirak  T,  SP.  Voravuthikunchai,  2011,  Eleutherine  americana:  A  candidate  for  the  control  of Campylobacter species. Poultry Science , 90, 791-796.
23. Ifesan  B.O.,  Joycharat  N.,  Voravuthikunchai,  S.P.,  2009,  The  mode  of  antistaphylococcal  action  of Eleutherine americana. FEMS Immunology and Medical Microbiology , 57, 193-201.
24. Caamal-Fuentes,  E.E.,  Peraza-Sanchez,  S.R.,  Torres-Tapia,  L.W.,  Moo-Puc,  R.E.,  2015,  Isolation  and Identification  of  Cytotoxic  Compounds  from  Aeschynomene  fascicularis,  a  Mayan  Medicinal  Plant, Molecules , 20 (8), 13563-13574.
25. Meletiadis,  J.,  Meis,  J.F.G.M.,  Mouton,  J.W.,  2001,  Analysis  of  growth  characteristics  of  filamentous fungi in different nutrient media, Journal of Clinical Microbiology , vol 39, pp. 478-484.