## Penurunan Laktat Dehidrogenase
Plasmodium falciparum strain  D10  pada  pemberian  Fraksi Tithonia  diversifolia (Hemsley)
Tithonia diversifolia (Hemsley) A.Gray Fractions lower Lactate Dehydrogenase of Plasmodium falciparum strain D10
Rul Afiyah Syarif * , Mae Sri Hartati Wahyuningsih, Mustofa, Ngatidjan Departemen  Farmakologi  dan  Terapi,  Fakultas  Kedokteran  Kesehatan  Masyarakat  dan Keperawatan, Universitas Gadjah Mada Corresponding author: Rul Afiyah Syarif: Email: rulafiyah@ugm.ac.id
Submitted: 14-07-2020 Revised: 05-10-2020 Accepted: 05-10-2020
ABSTRAK Penelitian  terdahulu  menunjukkan  bahwa  fraksi  ke-6  (F6)  merupakan  fraksi  aktif  (F-akt) daun Tithonia  diversifolia (Hemsley)  A.Gray  yang  menghambat  pertumbuhan Plasmodium . Pertumbuhan  parasit  ini  memerlukan  energi  yang  diperoleh  dari  aktivitas  laktat  dehidrogenase (LDH).  Penelitian  ini  bertujuan  mengkaji  aktivitas  antiplasmodium  fraksi  aktif T.  diversifolia terhadap kadar LDH kultur P. falciparum . Kultur Plasmodium falciparum strain D10 stadium cincin dibagi  menjadi  kelompok  eritrosit  tidak  terinfeksi  (KTI),  eritrosit  terinfeksi  (KI),  dan  eritrosit terinfeksi Plasmodium yang diberi F6 (F-akt) T. diversifolia (KI+F-akt) konsentrasi 9,38-150 µg/mL. Kultur diinkubasi 48 jam. Media kultur diukur kadar LDH-nya secara enzimatik. Adanya perbedaan LDH antar kelompok dianalisa dengan Anova. Penghambatan aktivitas LDH (IC 50 ) ditetapkan dengan analisa probit. Kadar LDH kelompok KI (362,33 ± 133,18 U/L) lebih tinggi daripada KTI (270,33 ± 65,85  U/L)  (p>0,05).  Pemberian  F-akt  pada  KI  menyebabkan  kadar  LDH  parasit  lebih  rendah daripada KI. Kadar LDH parasit yang diberi F-akt konsentrasi 9,38; 18,75; 37,50; dan 150 µg/mL secara berturut-turut adalah 365,5 ± 129,5; 210,5 ± 1,5; 195,5 ± 81,5; dan 111,5 ± 53,5 U/L. Tidak ada  perbedaan  kadar  LDH  antar  kelompok  penelitian  (p>0,05).  F-akt T.  diversifolia mampu menghambat LDH P. falciparum strain D10 dengan nilai IC 50 = 39,22 µg/mL. Kata kunci: Tithonia diversifolia ; laktat dehidrogenase; Plasmodium falciparum.
ABSTRACT The  previous  research  showed  that  6 th fraction  (F6),  an  active  fraction  (F-akt),  of Tithonia diversifolia (Hemsley)  A.Gray  leaves  inhibited  the Plasmodium growth.  The  growth  of  parasites requires  energy  obtained  from  the  lactate  dehydrogenase  (LDH)  activity.  This  study  aimed  to investigate the F6 (an active fraction) of T. diversifolia antiplasmodial activity on LDH levels of P. falciparum . The ring stage of P. falciparum D10 strain culture was divided into 3 groups, that were Plasmodium -uninfected  erythrocytes  (KTI), Plasmodium -infected  erythrocytes  (KI),  and Plasmodium - infected erythrocytes treated by F-akt of T. diversifolia (KI+F-akt) 9.38-150 µg/mL. The culture  was  incubated  48  h,  the  LDH  in  culture  medium  then  was  measured  enzymatically.  The difference  of  LDH  level  among  groups  was  analyzed  statistically  using  Anova.  The  LDH  activity inhibition (IC 50 ) was determined by probit analysis. The LDH level of KI group (362.33±133.18 U/L) was higher than KTI (270.33± 65.85 U/L) (p>0.05). LDH levels of KI+F-akt groups were lower than KI.  The  LDH  level  of P.  falciparum treated  by  F-akt  9.38;  18.75;  37.50;  and  150  µg/mL  were 365.5±129.5; 210.5±1.5; 195.5±81,5; and 111.5±53.5 U/L, respectively. There were no differences in LDH levels among study groups (p>0.05). F-akt of T. diversifolia inhibits LDH of P. falciparum strain D10 with IC 50 value = 39.22 µg/mL. Keywords : Tithonia diversifolia ; lactate dehydrogenase; Plasmodium falciparum.
PENDAHULUAN
Resistensi terhadap antimalaria konvensional  yang  semakin  luas  berakibat pengendalian dan pengobatan malaria semakin
rumit.  Untuk  mengatasi  resistensi  ini  maka penemuan  antimalaria  baru  sangat  diperlukan baik  berupa  senyawa  sintetis  maupun  dari bahan  alam.  Antimalaria  sintetis  kinin  dan
artemisinin  merupakan  contoh  antimalaria yang  awalnya  bersumber  dari  tanamam. Penemuan  senyawa  baru  dari  tanaman  yang secara empirik bermanfaat untuk menanggulangi  malaria  diharapkan  dapat memberikan  kontribusi  dalam  mengatasi resistensi terhadap obat konvensional klorokuin.
Tithonia  diversifolia (Hemsley)  A.  Gray secara empirik digunakan untuk mencegah dan mengobati  malaria.  Penelitian  sebelumnya didapatkan  bahwa  ekstrak  metanol  dan  fraksi daun T.  diversifolia mempunyai  aktivitas antiplasmodium,  dan  aktivitas  terbaik  dimiliki oleh fraksi 6 (F6) (Syarif dkk., 2008; Syarif dkk., 2018).  Informasi  terkait  target  kerja  fraksi T. diversifolia sebagai  antiplasmodium  sangatlah bermanfaat  bila  tanaman  ini  dikembangkan lebih lanjut sebagai obat dari bahan alam.
Target  untuk  antiplasmodium  dapat berlangsung  intrasel  (di  dalam Plasmodium ) maupun  ekstrasel.  Target  intrasel  terjadi  di sitosol, membran, vakuola digesti, mitokondria, dan apikoplas sedangkan ekstrasel dengan cara obat  invasi  ke  eritrosit  (Kalra  dkk ., 2006). Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Syarif  dkk . , (2018)  mendapatkan  bahwa  secara in  vitro fraksi  5,  fraksi  6,  dan  fraksi  7 T.  diversifolia menghambat polimerisasi heme dalam vakuola digesti.  Heme  yang  tidak  dipolimerisasi berakibat matinya parasit tersebut . Agar  bertahan  hidup, Plasmodium memerlukan  energi  yang  diperoleh  dari metabolisme  glukosa  melalui  proses  glikolisis. Laktat dehidrogenase (LDH) merupakan enzim yang  terlibat  dalam  tahap  akhir  glikolisis (Pradhan  dkk.,  2009).  Dengan  demikian keberadaan  dan  penghambatan  aktivitas  LDH berpengaruh  terhadap  kelangsungan  hidup Plasmodium dan LDH menjadi target potensial dalam  pengembangan  obat  baru  antimalaria (Kalra dkk . , 2006). LDH  mengkatalisis  secara  reversibel perubahan  piruvat  menjadi  laktat.    Reduksi piruvat  menjadi  laktat  ini  disertai  dengan oksidasi    NADH  menjadi  NAD + ,  koenzim  yang diperlukan  untuk  memproduksi  ATP  (Valvona dkk . ,  2016).  Penghambatan  LDH  memblok regenerasi  NAD + dan  mencegah  pembentukan ATP  (Premlata  dkk.,  2012)  sebagai  sumber energi Plasmodium .  Untuk  itu  penelitian  ini bertujuan   mengkaji    aktivitas  antiplasmodium
F6 T.  diversifolia terhadap  kadar  LDH  pada kultur P. falciparum .

## METODOLOGI
Penelitian  dilakukan  setelah  mendapat persetujuan  dari  Komisi  Etik  Penelitian Kesehatan FK UGM No KE/FK/18/EC. Penelitian eksperimental  laboratorium dilakukan pada P. falciparum secara in  vitro sebagai  subyek penelitian  dengan  rancangan post-test  control group only design . Daun T.  diversifolia diperoleh  dari Pakem,  Sleman,  Yogyakarta  dan  dideterminasi di  Laboratorium  Biologi  Farmasi,  Fakultas Farmasi,  Universitas  Gadjah  Mada.  Pembuatan fraksi T. diversifolia dilakukan di Laboratorium Farmakologi  dan  Terapi,  kultur P.  falciparum strain  D10  dan  uji  penghambatan  LDH dilakukan  di  Laboratorium  Parasitologi,    serta pengukuran  LDH  di  Laboratorium  Patologi Klinik, Fakultas Kedokteran Universitas Gadjah Mada.
Cara Penelitian Fraksinasi T. diversifolia T.  diversifolia dikeringkan  dalam  oven bersuhu  50  C  kemudian  diblender  untuk mendapatkan  serbuk.  Pembuatan  fraksi dilakukan  seperti  pada  penelitian  sebelumnya (Syarif  dkk.,  2018).  Fraksi  6  yang  diketahui mempunyai  aktivitas  antiplasmodium  terbaik pada penelitian sebelumnya selanjutnya disebut fraksi  aktif  (F-akt)  (Syarif  dkk.,  2018), dilakukan  uji  penghambatan  LDH  dalam penelitian ini.
Kultur Plasmodium falciparum Aktivitas senyawa uji T. diversifolia pada P.  falciparum untuk  mengukur  pembentukan enzim  LDH  dilakukan  pada  mikroplate  96- sumuran.  Suspensi P.  falciparum (100  µL) stadium  cincin  dengan  parasitemia  1%  dan hematokrit  1,5%  didistribusikan  pada  tiap sumuran 96- microplate . Sinkronisasi Plasmodium stadium cincin dilakukan menggunakan  sorbitol  5%  (Contreras  dkk . , 2004). Ada 3 kelompok kultur dalam penelitian ini  yaitu  kelompok  eritrosit  tidak  terinfeksi Plasmodium
(KTI), kelompok terinfeksi
Plasmodium (KI),  dan  kelompok  terinfeksi Plasmodium yang  diberi  F-akt T.  diversifolia (KI+F-akt)   konsentrasi  9,38;  37,5;  18,75   dan
150  µg/mL.  Tiap  uji  dilakukan  duplikat.
Mikroplate kultur diinkubasi selama 48 jam, CO 2 5 %, suhu 37  C. Supernatan dikumpulkan untuk pengukuran LDH.

## Pengukuran laktat dehidrogenase
Masing-masing  sampel  uji  sebanyak  10  L  diukur  kadar  LDH-nya  secara  enzimatik menggunakan  metode  dari  Synchron  CX® Systems  (Anonim,  2008).  Aktivitas  laktat dehydrogenase  diukur  menggunakan  reagen laktat dehydrogenase (LD-P) yang mengkatalisis reduksi secara reversibel piruvat menjadi laktat deisertai oksidasi NADH menjadi NAD+. Synchron CX® Systems secara otomatis menyesuaikan  volume  sampel  dengan  reagen yang dimasukkan ke dalam kuvet dengan rasio sampel:reagen  adalah  1:50.  Sistem  memonitor perubahan absorbansi pada panjang gelombang 340  nm.  Absorbansi  yang  terukur  berbanding lurus  dengan  aktivitas  LD-P  dan  hal  ini digunakan  System  untuk  menghitung  dan mengekspresikan aktivitas LDH.
Analisa Hasil Data  LDH  ditampilkan  secara  deskriptif. Perbedaan  rata-rata  kadar  LDH  akibat pemberian  F-akt T.  diversifolia berbagai konsentrasi  dianalisa  dengan  ANOVA  program SPSS versi 13.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Kadar LDH kelompok KI (362,33 ± 133,18 U/L)  lebih  tinggi  daripada  KTI  (270,33  ±  65,85 U/L)  (p>0,05).  Pemberian  F-akt  pada  KI menyebabkan  kadar  LDH  parasit  lebih  rendah, dan  semakin  tinggi  konsentrasi  F-akt  yang diberikan  maka  kadar  LDH  semakin  rendah. Kelompok  KI+F-akt  konsentrasi  terendah menunjukkan  kadar  LDH  yang  hampir  sama dengan KI.  Kadar LDH parasit yang diberi F-akt konsentrasi  9,38;  18,75;  37,50;  dan  150  µg/mL secara berturut-turut adalah 365,5 ± 129,5; 210,5 ± 1,5; 195,5 ± 81,5; dan 111,5 ± 53,5 U/L (Gambar 1).  Tidak  ada  perbedaan  kadar  LDH  antar kelompok penelitian (p>0,05)
Semakin  tinggi  konsentrasi  F-akt  yang diberikan pada KTI menunjukkan penghambatan  pembentukan  LDH  yang semakin besar (Tabel I).  Konsentrasi F-akt yang mampu menghambat sintesis LDH sebesar 50% (IC 50 ) adalah 39,22 µg/mL.
Pembahasan Selama  siklus  intraeritrosit Plasmodium mendapatkan  energi  melalui  metabolisme glukosa  (glikolisis).  Laktat  dehidrogenase merupakan enzim teminal dalam glikolisis yang mengubah  piruvat  menjadi  laktat  dengan kofaktor   NADH.     LDH     mengkatalisis   secara
Gambar 1. Kadar LDH ± SEM P. falciparum strain D10 setelah pemberian F-akt T.diversifolia 0 100 200 300 400 500 600 Kontrol eritrosit tidak
terinfeksi Kontrol eritrosit terinfeksi 9,38 18,75 37,50 150,00
F-akt T.diversifolia (µg/mL) LDH (µg/mL)
reversibel  perubahan  piruvat  menjadi  laktat.
Reduksi  piruvat  menjadi  laktat  dalam  tubuh manusia  disertai  dengan  oksidasi    NADH menjadi  NAD + yang  selanjutnya  digunakan untuk memproduksi ATP (Garba & Ubom, 2005; Valvona  dkk . , 2017). 3-acetyl pyridine adenine dinucleotide  (APAD + )  dalam Plasmodium merupakan  analog  koenzim  NAD + manusia. Seperti  halnya  dalam  tubuh  manusia,  LDH Plasmodium ( p LDH)  mengkatalisis  secara reversibel  perubahan  piruvat  menjadi  laktat dan  mengubah  APADH  menjadi  APAD + (Kalra dkk . , 2006).
Sebelum  diberi  perlakuan,  kultur P. falciparum disinkronisasi  menjadi  stadium cincin.  Setelah  48  jam  inkubasi  dengan  F-akt, medium kultur
dikumpulkan untuk
pemeriksaan  LDH.  Inkubasi  48  jam  dipilih karena  aktivitas  maksimal  LDH  terjadi  ketika kultur Plasmodium diinkubasi 36 – 48 jam, yaitu saat stadium trofozoit dan skizon lebih dominan karena  stadium  cincin  telah  berkembang menjadi  stadium  tersebut.    Selain  dipengaruhi oleh  lama  inkubasi,  aktivitas    pLDH  juga berhubungan  dengan  jumlah  parasit  dalam plasma  darah  (parasitemia)  dan  kadar hematokrit.  Aktivitas  LDH  dapat  dideteksi  bila parasitemia 1-2% dan hematokrit 1,5% (Basco dkk. , 1995; Verma dkk., 2013). Penelitian yang dilakukan oleh Vivas dkk ., (2005) mendapatkan bahwa aktivitas pLDH dan ekspresi  RNA  pLDH P.  falciparum stadium trofozoit  lebih  besar  daripada  stadium  cincin, dan pada stadium trofozoit lebih peka terhadap antimalaria  OXD1.  Hal  ini  dimungkinkan berkaitan  dengan  kenaikan  kebutuhan  energi stadium  trofozoit  yang  konsisten  dengan kenaikan  glikolisis  sebagai  jalur  metabolisme esensial untuk kelangsungan hidup Plasmodium stadium ini.
LDH merupakan enzim esensial di semua organ  tubuh,  yang  terletak  dalam  sitosol (intrasel).  Adanya  LDH  dalam  medium  atau ekstrasel  menunjukan  bahwa  telah  terjadi kerusakan  atau  kematian  sel,  dalam  hal  ini eritrosit  dan  atau Plasmodium (Cobben  dkk . , 1997). LDH yang terukur dalam sampel dengan menggunakan  metode  dari  Synchron  CX® Systems dimungkinkan adalah p LDH dan human LDH  ( h LDH)  karena  metode  ini  tidak  spesifik mengukur hanya p LDH. Kadar  LDH  pada  KI  lebih  tinggi dibandingkan dengan KTI maupun KI+F-akt. Hal ini dapat terjadi karena  ambilan glukosa pada eritrosit terinfeksi Plasmodium 30-50 kali lebih besar  daripada  yang  tidak  terinfeksi,  dan hampir  semua  glukosa  ini  diubah  menjadai laktat (Jensen dkk., 1983 cit ., Vivas dkk., 2005). Aktivitas metabolisme yang tinggi ini tercermin dalam  bentuk  tingginya  kadar  LDH  pada eritrosit  terinfeksi  (Roth,  1990 cit .,  Vivas  dkk.,
2005). Kelompok KI+F-akt konsentrasi terendah menunjukkan  kadar  LDH  yang  hampir  sama dengan  KI.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa konsentrasi  terendah  F-akt  tidak  mampu membunuh Plasmodium. Lain  halnya  dengan konsentrasi  F-akt  yang  lebih  tinggi.  Kelompok KI+F-akt  menunjukkan  kadar  LDH  yang semakin  bertambah  rendah  dengan  semakin tingginya konsentrasi F-akt. Hal ini menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi  F-akt  maka  semakin  tinggi Plasmodium yang  mati di waktu  awal inkubasi sehingga  tidak  menginfeksi  eritrosit  lainnya. Akibatnya  di  akhir  inkubasi  lebih  banyak eritrosit  yang  utuh  dan  tidak  lisis.  Selain  tidak menginfeksi eritrosit lain, kadar LDH yang lebih rendah pada KI+F-akt daripada KTI kemungkinan  karena  F-akt  mempunyai  efek
Tabel I . Kadar LDH dan persentase penghambatan pembentukannya pada P. falciparum strain D 10 setelah pemberian F-akt T.diversifolia F-akt T.diversifolia (µg/mL) Rata-rata LDH ± SEM (U/L) Nilai p LDH % penghambatan LDH ± SEM Nilai IC 50 (µg/mL) 9,38 365,5 ± 265,84 - 18,75 210,5 ± 97,59 p>0,05 41,92 ± 79,37 37,50 195,5 ± 128,44 46,07± 66,96 39,22 150 111,5 ± 55,81 69,25± 26,67 KI 362,33± 133,18 KTI 270,33 ± 65,85
proteksi sehingga eritrosit dapat bertahan lama (tidak lisis). Namun untuk membuktikan hal ini perlu sediaan apus darah yang sayangnya tidak dilakukan dalam penelitian ini.
Penelitian ini mendapatkan bahwa IC 50 F- akt dalam menghambat kadar LDH P. falciparum strain  D10  (sensitif  klorokuin)  sebesar  39,22 µg/mL. Nilai ini lebih tinggi daripada IC 50 F-akt (13,63±1,43  µg/mL)  dalam  menghambat pertumbuhan P. falciparum strain FCR3 (strain resisten klorokuin) yang diperoleh dengan cara menghitung parasitemia sediaan apusan darah menggunakan  mikroskop  cahaya.  Meskipun pengukuran  LDH  juga  dapat  dipakai  untuk mengetahui  aktivitas  antiplasmodium  suatu senyawa, namun IC 50 yang diperoleh tidak sama. Hal  ini  dapat  disebabkan  strain Plasmodium yang  berbeda  atau  F-akt T.  diversifolia lebih spesifik  bekerja/berefek  pada P.  falciparum resisten  klorokuin.  Jumlah  pengulangan percobaan  yang  terbatas  (hanya  2)  dalam penelitian ini sehingga menyebabkan SEM yang besar juga merupakan salah satu penyebab IC 50 LDH  lebih  besar  daripada  IC 50 aktivitas antiplasmodium  secara  mikroskopik.  Untuk membuktikan hal tersebut sebaiknya dilakukan penelitian  mengukur  aktivitas  penghambatan produksi LDH di P. falciparum strain FCR3 dan menambah jumlah pengulangan uji penghambatan LDH.

## KESIMPULAN
F-akt  menghambat  aktivitas  laktat dehidrogenase P. falciparum strain D10 (strain sensitif  klorokuin)  dengan  IC 50 sebesar  39,22 µg/mL.  Penelitian serupa sebaiknya dilakukan pada P. falciparum resisten klorokuin.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih diucapkan kepada Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia yang telah memberikan dana penelitian melalui
Riset  Pembinaan  Ilmu  Pengetahuan  dan Teknologi Kedokteran (Risbin Iptekdok ).

## DAFTAR PUSTAKA
Ambre,  P.K.,  Pissurlenkar,  R.R.S.,  Jagyasi,  A.S., ule, R.A., Khedkar, V., Barhatel, C.R., Vivas, L., Tripathi, A.K., Sullivan, D., Birkinshaw, R.,  Brady,  L.,  Iyer,  K.,  and  Coutinho,  E.C. 2012.  Molecular  Modeling  Studies, Synthesis  and  Biological  Evaluation  of Novel Plasmodium    falciparum Lactate
Dehydrogenase ( pf LDH) Inhibitors. Anti- Infective Agents 10 : 55-71. https://www.researchgate.net/publicati on/259674306 Anonim.  2008. SYNCHRON  CX®  System(s)
Chemistry  Information  Sheet:  LD-P Lactate Dehydrogenase . Beckman Coulter, Inc. Basco , L . K . , Marquet , F, Makler , M . M, Le Bras , J. 1995.  Plasmodium  falciparum and Plasmodium vivax: lactate dehydrogenase activity and its application for in vitro drug susceptibility assay. Exp  Parasitol 80 (2):260-71. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/78958 36/
Cobben  N.  A.  M.,  Drent,  M.,  Schols,  A.  M.  W.  J., Lamers R. J. S., Wouters E. F. M., and Van Dieijen-Visser,  M.  P.1997.  Serum  lactate dehydrogenase  and  its  isoenzyme pattern  in  ex-coalminers. Respiratory Medicine 91 : 616-623. https://www.mendeley.com/catalogue/
d7eb36da-5dff-37be-bf66-
1bfe2eb8ab19/ Contreras,  C.E.,  Rivas,  M.A.,  Dominguez,  J., Charris,  J., Palacios,  M., Bianco, N.E., and Blanca, I. 2004. Stage-specifics Activity of Potential Antimalarial Compounds Measured in vitro by Flow Cytometry in Comparison  to  Optical  Microscopy  and
Hypoxanthine  Uptake. Mem  Inst  Cruz.
99 (2):179-84. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15250 472/
Garba,  I.H.  dan  Ubom,  G.A.2005.  Total  serum lactate  dehydrogenase  activity  in  acute Plasmodium falciparum malaria infection. Singapore Med J 46 (11):632-634
Grace, N.N., Rainer, B.W., Barbara, G, Erie, N.L., and Victoris, N. 2004. Utilization of Weed Species  as  Sources  of  Traditional Medicines in Central Kenya. Lyonia., 7(2)
: 71-87.
Kalra  B.S.,  Chawla  S.,  Gupta  P.,  and  Valecha  N. 2006. Screening of antimalarial drugs: An overview. Indian J Pharmacol 38 (1): 5-12 Pradhan,  A,  Tripathi,  A.K.,    Desai,  P.V., Mukherjee, P.K., Avery, M.A., Walker, L.A., Tekwani,  B.L.  2009.  Structure  and function  of Plasmodium  falciparum malate  dehydrogenase:  Role  of  critical amino    acids     in    co-substrate    binding
pocket. Biochimie 91:  1509 – 1517. http://dx.doi.org/10.1016/j.biochi.2009. 09.005 Syarif  RA,  Wahyuningsih  MSH,  Mustofa, Ngatidjan,  Kurniawan  H,  Al  Hilal  SR. 2008.  Aktivitas  antiplasmodium  in  vitro ekstrak  kembang  bulan  ( Tithonia diversifolia (Hemsley)  A.Gray)  terhadap Plasmodium  falciparum . Majalah  Obat Tradisional 13 (43): 3- 9.
Syarif,  R.A.,  Wahyuningsih,  M.S.H,  Mustofa, Ngatidjan.  2018.  Antiplasmodial  activity and  onset speed of growth inhibition of Tithonia  diversifolia (Hemsley)  A.Gray leave fractions on Plasmodium falciparum. Trop. J. Pharm 17 (11): 2213-
2218.
https://www.tjpr.org/admin/12389900 798187/2018_17_11_15.pdf Valvona,  C.J.,  Fillmore,  H.L.,  Nunn,  P.B.,
Pilkington,    G.J.    2016.     REVIEW     The
Regulation  and  Function  of  Lactate Dehydrogenase A: Therapeutic Potential in Brain Tumor. Brain Pathology 26 : 3-17 Verma,  P.,  Biswas,  S.,  Mohan,  T.,  Ali,  S.,  &  Rao, D.N.  2013.  Detection  of  histidine  rich protein  &  lactate  dehydrogenase  of Plasmodium  falciparum in  malaria patients  by  sandwich  ELISA  using  in- house  reagents. Indian  J  Med  Res 138 : 977-987.
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24521
645/
Vivas,  L.,  Easton,  A.,  Kendrick,  H.,  Cameron,  A., Lavandera,  J.L.,  Barros,  D.,  de  las  Heras, F.G.,  Brady,  R.L.,  and  Croft,  S,L.  2005.
Plasmodium  falciparum :  stage  specific effects  of  a  selective  inhibitor  of  lactate dehydrogenase. Exp Parasitol 111 (2):105-14. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16098
967/