## BIOTROPIKA Journal of Tropical Biology
https://biotropika.ub.ac.id/
Vol. 8  |  No. 2  |  2020 | DOI: 10.21776/ub.biotropika.2020.008.02.03

## ANALISIS POLA PERTUMBUHAN DAN PENDEKATAN DNA BARCODING UNTUK IDENTIFIKASI Turbo stenogyrus P. Fischer, 1873 (MOLLUSCA: GASTROPODA)

## ANALISYS OF GROWTH PATTERNS AND DNA BARCODING APPROACH TO IDENTIFY
Turbo stenogyrus P. Fischer, 1873 (MOLLUSCA: GASTROPOD)
Dandi Saleky 1) , Simon P.O Leatemia 2) , Thomas F. Pattiasina 2) , Isma 2) , Rosa D. Pangaribuan 1) , Marius A. Welliken 1) , Edy H.P Melmambessy 1) , Muhammad Dailami 3)*

## ABSTRAK
Pengelolaan dan pelestarian keanekaragaman hayati berawal dari pengetahuan tentang  ketersediaan  sumberdaya,  identifikasi,  dan  sistematika  spesies. Banyaknya  spesies  Turbinidae  dengan  berbagai  bentuk  morfologi  dan transformasi  bentuk  menjadikan  identifikasi  dengan  gen  COI  sangat  penting dalam  mempercepat  pengungkapan  identitas  spesies.  Penelitian  ini  dilakukan dengan  tujuan  menganalisis  pola  pertumbuhan  dan  mengidentifikasi  gastopoda Turbinidae  dengan  pendekatan  DNA  barcode.  Hasil  identifikasi  berdasarkan karakter  morfologi  menunjukkan  bahwa  genus  Turbo  yang diamati  adalah  dari spesies Turbo stenogyrus. Analisis pola pertumbuhan menunjukkan bahwa pola pertumbuhan  T.  stenogyrus adalah allometrik  negatif.  Amplifikasi  DNA  dengan gen  COI  menghasilkan  panjang  sekuen  DNA  650  bp  dengan  hasil  identifikasi sesuai  dengan  pengamatan  morfologi  yaitu  Turbo  stenogyrus.  Berdasarkan analisis  filogenetik  dan  jarak  genetik,  sekuen  DNA  yang  dianalisis  membentuk clade yang sama dengan spesies Turbo stenogyrus dengan jarak genetik terdekat 4,2%.  Analisis  genetik  melalui  gen  COI  sangat  baik  dan  memberi  kemudahan dalam identifikasi spesies gastropoda.
Kata Kunci: Allometrik negatif, gen COI, jarak genetik , Turbo stenogyrus

## ABSTRACT
Conservation  and  management  of  biodiversity  begins  with  knowledge  of resource  availability,  species  identification  and  taxonomy.  Many  Turbinidae species  with  various  morphological  pattern  and  its  transformation  makes  the species  identification  with  COI  gene  is  important  to  disclosure  the  species identity. This research is conducted with aim to analyze the growth pattern and identification  of  gastropods  turbinidae  by  using  DNA  barcoding  approach.  The morphological identification result shows that the genus Turbo in this study were Turbo  stenogyrus.  Growth  pattern  analyze  explains  that  T.  stenogyrus  has negative allometric growth. The DNA amplification of COI gene produces a total 650  base  pairs  of  DNA  sequence  with the  identification  result  is  T.  stenogyrus, this  result  is  concordance  with  the  morphological  data.    Based  on  the phylogenetic tree and genetic distance data, DNA sekuens of this sample was in the same clade with T. stenogyrus with 4.2% genetic distance. Genetic analysis with COI gene is good and give simplicity in turban snails species identification.
Keywords: COI gene, genetic distance, negative allometric, Turbo stenogyrus

## PENDAHULUAN
Pengelolaan  dan  pelestarian  keanekara- gaman  hayati  berawal  dari  pengetahuan tentang sumberdaya yang tersedia, sumberdaya
yang telah hilang, masalah yang dihadapi serta solusi  yang  paling  efektif  dalam  identifikasi dan taksonomi [1]. Laju kerusakan lingkungan dan  pemanfaatan  berlebih  dapat  berdampak pada  terjadinya  penurunan  populasi  dan
Diterima   : 19 Maret 2020
Disetujui  : 4 Agustus 2020

## Afiliasi Penulis:
1) Jurusan Manajemen
Sumberdaya Perairan, Universitas Musamus, Merauke, Indonesia
2) Jurusan Perikanan, Universitas

## Papua, Manokwari, Indonesia
3) Program Studi Budidaya
Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas
Brawijaya, Malang, Indonesia
Alamat Korespondensi:
*muhdailami@ub.ac.id
Cara Sitasi: Saleky, D., S.P.O. Leatemia, T.F. Pattiasina, Isma, R.D. Pangaribuan, M.A. Welliken,
E.H.P.  Melmambessy  &  M. Dailami.  2020.  Analisis  pola pertumbuhan dan pendekatan DBA
barcoding
untuk identifikasi Turbo  stenogyrus P. Fischer, 1873 (Mollusca: Gastropoda). Biotropika:  Journal of Tropical Biology 8 (2): 79-86.
kepunahan  yang  menyebabkan  banyak  spesies yang belum terungkap sampai saat ini [2].
Turbinidae  dikenal  dengan  nama bia mata merupakan gastropoda herbivora pemakan alga [3]  yang  telah  dimanfaatkan  secara  umum  di berbagai daerah [4]. Turbinidae sering ditemukan dan melimpah pada daerah intertidal  berbatu  di  pesisir  Manokwari  [5]. Pola  pertumbuhan  gastropoda  berbeda  tiap jenis  sebagai  akibat  dari  faktor  fisiologis  dan juga  faktor  ekologis  [6].  Analisis  pola pertumbuhan  dilakukan  dalam  manajemen pengelolaan  dan  konservasi  perikanan  seperti penilaian  stok  dan  biomasa  [7].  Banyaknya spesies  Turbinidae  dengan  berbagai  bentuk morfologi  dan  transformasi  bentuk  dalam setiap tahapan kehidupan organisme menjadikan  identifikasi  berbasis  potongan DNA  dengan  gen  COI  dapat  membantu mempercepat  pengungkapan  identitas  spesies [8], [9].
Gastropoda Turbinidae terdiri dari berbagai spesies  yang  mirip  secara  morfologi,  kondisi tersebut dapat mengakibatkan terjadinya kesalahan  identifikasi.  DNA barcode adalah metode identifikasi yang menggunakan sekuen gen  pendek  yang  diambil  dari  bagian  genom organisme  yang  digunakan  dalam  studi spesies,  ekologi,  dan  evolusi  [10].  DNA barcoding digunakan  dalam  mengidentifikasi secara  cepat,  tepat,  dan  mengurangi  kesulitan dalam  mengidentifikasi  spesies  [11],  penting dalam  menghubungkan  sejarah  kehidupan spesies  [12].  Identifikasi  dengan  pendekatan molekuler  telah  banyak  dilakukan  pada beberapa  jenis  gastropoda  seperti  Turbinidae [3], Turbo sp.  [13], Telescopium  telescopium [14]. Turbinidae memiliki keanekeragaman spesies yang sangat tinggi, yang  menyebabkan terjadinya  banyak  masalah  dalam  taksonomi, Identifikasi gastropoda pada umumnya menggunakan karakter cangkang untuk membedakan  antara  spesies  Gastropoda  tetapi identifikasi  berdasarkan  cangkang  saja  tidak cukup  mengingat  karakter  cangkang  dapat berubah  akibat  dari  beberapa  faktor  seperti perubahan  lingkungan  [15],  perubahan  bentuk dan warna [16]. Selain karakter morfologi pada cangkang,  identifikasi  spesies  biasanya  juga dapat dibedakan dengan menggunakan karakter anatomi yang lebih stabil [17]. Namun pengamatan karakter anatomi yang membutuhkan  tahapan  pembedahan  seringkali menyulitkan.
Kondisi-kondisi
tersebut,
menyebabkan identifikasi dengan DNA
barcoding menjadi salah satu alternatif metode
yang  penting  dilakukan,  karena  hasilnya memiliki tingkat akurasi yang tinggi [18].
Kurangnya  informasi  tentang Turbo sp. khususnya dalam penentuan spesies menjadikan  pengelolaan  suatu  sumberdaya menjadi  tidak  maksimal.  Sehingga  analisis pola  pertumbuhan  dan  identifikasi  dengan DNA barcoding sangat penting dalam kegiatan pengelolaan  dan    pengungkapan  identitas spesies secara cepat, tepat, dan akurat [19].

## METODE PENELITIAN
Koleksi sampel dan pengukuran morfometrik. Pengambilan  sampel Turbo sp. dilakukan saat surut terendah, di pesisir Pantai Yekwandi,  Distrik  Momiwaren,  Kabupaten Manokwari Selatan.
Sampel  dikoleksi  pada  saat  malam  hari karena  jenis  Gastropoda  tersebut  adalah  jenis nokturnal  yang  aktif  pada  malam  hari  [20]. Sampel kemudian diidentifikasi secara morfologi dengan menggunakan buku identifikasi  Gastropoda Recent  and  Fossil Indonesian  Shells [19].  Panjang  cangkang  dan berat total gastropoda diukur dengan menggunakan  kaliper  dan  timbangan  digital. Selain  itu,  dilakukan  pula  pengambilan jaringan  kaki  perut  yang  disimpan  dalam tube berisi  ethanol  95%  untuk  keperluan  analisis molekuler.
Analisis  molekuler. Analisis  molekuler dilakukan  di  Sub  Laboratorium  Genetika, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas  Papua  Manokwari.  Isolasi  DNA dari  jaringan  kaki  perut  dengan  menggunakan extraction  kit (Geneid TM DNA  Isolation  Kit (tissue)).  Amplifikasi  gen  COI  dilakukan dengan  menggunakan  Go  taq  green  Amplitaq (Promega)  dengan  total  reaksi  adalah  50  µl yang  terdiri  dari  ddH 2 O  (18  µl),  go  taq  green (25  µl),  primer forward JgLCO1490  (2.5 µl  ) dan reverse JgHCO2198  (2.5  µl)  [21],  ekstrak DNA  (5  µl),  DMSO  (1  µl)  dan  BSA  (1  µl). Adapun  sekuens  primer  yang  digunakan  yaitu jgLCO1490  5’-TITCIACIAAYCAYAARGA YATTGG-3’ dan  juga  HCO2198  5’- TAIACYTCI  GGRTGICCRAARAAYCA-3’ [21].  Hasil  PCR  yang  teramplifikasi  positif kemudian  dikirim  untuk  disekuensing  di perusahaan  jasa  sekuensing  yaitu  1st  Base Malaysia.
Analisis data. Pola pertumbuhan
Gastropoda Turbo sp.  dilakukan  analisis regresi  linear  dengan  menggunakan  Microsoft Excel 2010 dengan formula [16]:
Gambar  1. Lokasi  pengambilan  sampel Turbo stenogyrus di  Pesisir  Pantai  Yekwandi  Distrik Momiwaren Kabupaten Manokwari Selatan (Sumber: Dokumen Penulis)
Tabel 1.   Sekuen DNA T. sparverius , T. bruneus , T. setosus , T. stenogyrus dan Lunella sp. yang digunakan  dalam  rekontruksi  filogenetik  termasuk  lokasi,  nomor  akses  dari National Center for Biotechnology Information (NCBI) Spesies Lokasi Acc. Number Sumber T. bruneus Asai MK273558.1 [3] T. bruneus Rendani MK273557.1 [3] T. bruneus Sabah, Malaysia AM403981 [24] T. bruneus Sabah, Malaysia AM403929 [24] T. bruneus St. Johnos Island, Singapura AM403929 [24] T. bruneus St. Johnos Island, Singapura AM049381 [24] T. setosus Pulau Mansinam - [13] T. sparverius Asai - [13] T. stenogyrus Japan AM403916.1 [24] Lunella sp . Manokwari selatan - - W = aL b ............................................   (1)
Keterangan:
W       : berat total (termasuk cangkang)(gram) L         : Panjang total (mm)
a dan b: Konstanta
Nilai  b  menggambarkan  pola  pertumbuhan spesies,  jika  nilai  b  =  3  menggambarkan pertumbuhan isometrik. Sedangkan jika nilai b ≠  3  menggambarkan  pertumbuhan  spesies adalah allometrik [22].
Hasil  sekuensing  yang  didapat  kemudian diedit  dan  diurutkan  dengan    menggunakan model  ClustalW  (1.6)  [23]  pada  program MEGA  7  ( Moleculer  Evolutionary  Genetic Analysis ).  Data  hasil  sekuen  nukleotida  yang telah  diedit  kemudian  dicocokkan  dengan  data yang  tersedia  pada  GenBank  di  NCBI ( National Center for Biotechnology Information )  (https://www.ncbi.  nlm.nih.gov/) dengan  menggunakan  BLAST  ( Basic  Local Alignment  Search  Tool )  dan  Boldsystem (http://www.boldsystems.org).
Analisis  filogenetik  menggunakan  metode Neighbor-Joining (NJ)  dengan  model  Kimura 2-parameter, bootstrap 1000x  yang  dibentuk dari  beberapa  sekuen  DNA  yang  diambil  dari NCBI  dan  juga  sekuen  hasil  penelitian sebelumnya sebagai sekuen pembanding dalam penelitian ini (Tabel 1).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Identitas  spesies Turbo berdasarkan pengamatan  morfologi .  Keong Turbo yang berhasil  dikoleksi  memiliki  ciri-ciri  yaitu memiliki cangkang yang keras, kasar bergerigi dan  memanjang  dengan operculum berwarna putih ataupun putih kehitaman. Warna cangkang  hijau  dan  hitam  keclokatan  dengan kisaran ukuran 14,55–58,53 mm.  Berdasarkan ciri-ciri tersebut diyakini bahwa seluruh keong yang dikoleksi adalah spesies Turbo stenogyrus . Pola  pertumbuhan Turbo  stenogyrus . Total  57  individu T.  stenogyrus dikoleksi  dari pesisir  Pantai  Yekwandi,  Distrik  Momiwaren, Kabupaten  Manokwari  Selatan.  Pengukuran morfometrik  meliputi  panjang  cangkang  dan berat total.  Ukuran panjang cangkang berkisar antara  14,55–58,53  mm  dengan  berat  total berkisar 3,7 – 41,5 g.
Gambar 1. Regresi  linear  panjang  total dan berat total dari 57 individu T. stengyrus
Gastropoda Turbinidae seperti T.
stenogyrus adalah  jenis  gastropoda  pemakan alga  yang  umumnya  ditemukan  pada  daerah rataan  terumbu  karang  maupun  intertidal berbatu.  Spesies T.  stenogyrus memiliki kemiripan  morfologi  dengan  spesies T. bruneus , yang telah dikoleksi sebelumnya pada beberapa  lokasi  di  daerah  Kepala  Burung Papua  [3],  [13]. T.stenogyrus memiliki  bentuk morfologi  yang  mirip  dengan T.  bruneus karakter  morfologi  yang  mirip  dari  bentuk,
ukuran  dan  warna  cangkang  dan  juga keduanya  memiliki  habitat  yang  sama  yaitu pada intertidal berbatu.
Pola  pertumbuhan T.  stenogyrus dengan persamaan  W  =  1.2003L 0.5916 dengan  nilai  R 2 = R 2 =  0,634.  Analisis  panjang  dan  berat menunjukkan hubungan linier dengan persamaan  garis  Y  =  0,5916x  –  8,9207.
Berdasarkan  nilai  korelasi  yang  diperoleh, kontribusi  panjang  cangkang  terhadap  berat adalah 0,796147. Hasil analisis pola pertumbuhan  didapat  nilai  sebesar  0,5916 (b>3). Hasil tersebut menunjukkan bahwa pola pertumbuhan T . stenogyrus adalah  allometrik negatif,  yang  berarti  pertambahan  berat  badan lebih lambat daripada panjangnya [3].
T.stenogyrus memiliki  bantuk  cangkang  yang relatif  kurus.  Nilai  allometrik  negatif  pada suatu  spesies  diidentikan  dengan  bentuk  tubuh yang kurus [25].
Gambar  2. Morfologi Turbo  stenogyrus asal Manokwari selatan
Hasil  tersebut  banyak  dijumpai  pada berbagai  jenis  gastropoda  seperti T. spaverius (nilai  b=  2.467), T.  bruneus (nilai  b=  2.295) [3], Telescopium  telescopium (nilai  b=  1.14)
[6],  dan  berbagai  jenis  gastropoda  air  tawar [26].
Karakteristik  molekuler. Panjang  hasil amplifikasi  PCR  gen  COI  dari T.  stenogyrus dengan  menggunakan  primer  JgLCO1490  dan JgHCO2198  adalah  650  bp  ( base pair). Panjang hasil amplifikasi DNA yang didapatkan  sama  dengan  hasil  yang  diperoleh pada analisis Gastropoda Turbinidae [3], [13].
Identifikasi  spesies  menggunakan  analisis BLAST pada NCBI memperoleh hasil kemiripan  sekuen  sebesar  96,13  %  dan  95,97 % hasil identifikasi menggunakan Bold System ( http://www.boldsystems.org ) menunjukkan bahwa  adalah  benar  bahwa  keong  Turbinidae yang diteliti adalah spesies Turbo stenogyrus.
Gambar 3. Hasil ampilifikasi gen COI Turbo stenogyrus
Gambar  4. Pohon  filogenetik Turbo sp.  menggunakan  metode Neighbor-Joining (NJ)  dengan model  Kimura  2-parameter, bootstrap 1000  replikasi.  Angka  di  setiap  cabang menunjukkan nilai bootstrap yang diperoleh.
Spesies  yang  mirip  secara  morfologi ( cryptic ) sering terjadi pada spesies invertebrata,  sehingga  identifikasi  molekuler dan  konvensional  dilakukan  secara  bersama sehingga  dapat  mengungkap  keanekeragaman spesies  secara  cepat  dan  akurat  [27].  Hasil analisis  molekuler  diperoleh  panjang  sekuen DNA  adalah  650  bp,  panjang  sekuen  tersebut umum  diperoleh  pada  sekuen  COI    pada Turbinidae [3], [13].
Pohon filogenetik Turbo sp. asal Manokwari Selatan (Gambar 4) memperlihatkan Turbo sp.  asal  Manokwari Selatan  berada  dalam  satu clade dengan T. stenogyrus dengan nilai bootstrap 99. Sedangkan T. bruneus yang memiliki
kemiripan  morfologi  dengan T.  stenogyrus berada  pada clade yang  berbeda  bersama T. setosus .  Pada  organisme  laut,  keragaman,  dan diferensiasi  genetik  sangat  dipengaruhi  oleh respon  adaptasi  organisme  terhadap  kondisi lingkungan  [28],  interaksi  kompleks  antar dinamika oseanografi dan sifat ekologis [29].
Tingginya  nilai bootstrap yang  terbentuk mengindikasikan  percabangan  pada  pohon filogenetik  yang  terbentuk  memiliki  tingkat validitas  dari  percabangan  tersebut.  Dengan didukung  oleh  nilai bootstrap yang  tinggi  dan sangat  stabil,  dengan  demikian  semakin  tinggi nilai bootstrap maka kestabilannya makin baik [30].
Tabel 2.   Jarak  genetik  antara Turbo stenogyrus asal  Manokwari  Selatan  dengan  beberapa  sekuen yang diambil dari GenBank
No  Spesies 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 Turbo bruneus (Asai) - 2 Turbo bruneus (Rendani) 0,000  - 3 Turbo bruneus (AM049381)- St.Johnos Island (Singapura) 0,006  0,006 - 4 Turbo bruneus (AM403931) - Sabah (Malaysia) 0,016  0,016  0,016 - 5 Turbo bruneus (AM403930) - Sabah (Malaysia) 0,017  0,017  0,017  0,002 - 6 Turbo bruneus (AM403929) - St Johnos Island (Singapura) 0,006  0,006  0,000  0,016  0,017 - 7 Turbo sparverius (Asai) 0,108  0,108  0,112  0,104  0,106  0,112 - 8 Turbo setosus (Mansinam) 0,110  0,110  0,110  0,106  0,108  0,110 0,122* - 9 Turbo stenogyrus (AM403916) 0,104  0,104  0,104  0,093  0,095  0,104 0,090 0,107 - 10 Turbo sp. (Manokwari Selatan) 0,108  0,108  0,108  0,101  0,102  0,108 0,088 0,101  0,042
*Jarak genetik terbesar
Pohon filogenetik (Gambar 2) T. stenogyrus asal  Manokwari  Selatan  dengan  sekuen tambahan  dari  Genbank  dan  sekuen  dari penelitian sebelumnya. T. stenogyrus membentuk clade tersendiri  berbeda  dengan clade T. bruneus . Secara morfologi T. bruneus memiliki  kemiripan  dengan T.  stenogyrus tetapi  berdasarkan  analisis  pohon  filogenetik kedua  spesies  tersebut  terpisah  dan  masing  - masing  membentuk clade tersendiri.  Pohon filogenetik menunjukkan pengelompokan antar sekuen individu. Pohon filogenetik berdasarkan  data  sekuen  adalah  hal  yang terpenting  dan  menarik  dalam  studi  evolusi [31]. Pohon filogenetik  membentuk  grafik  dua dimensi yang menunjukkan hubungan di antara organisme atau lebih.
Rekonstruksi pohon  filogenetik  didukung oleh  analisis  jarak  genetik  (Tabel  2),  jarak genetik  terendah  0,00%  antara T.  bruneus (Asai)  dan T.  bruneus (Rendani)  dan  tertinggi 12,2%  antara T.  setosus (Mansinam)  dan T. sparverius (Asai).  Sedangkan  jarak  genetik antar T. bruneus dan Turbo sp. asal Manokwari Selatan  memiliki  jarak  genetik  10,8%  hal tersebut mengindikasikan spesies yang dikoleksi  dari  dari  pesisir  Manokwari  Selatan bukanlah  jenis T.  bruneus meskipun  memiliki kemiripan  morfologi . Jarak  genetik  terdekat Turbo sp.  asal  Manokwari  Selatan  adalah dengan  jenis T.  stenogyrus dengan  jarak genetik 4,2%.

## KESIMPULAN
Pola  pertumbuhan Turbo  stenogyrus adalah  allometrik  negatif,  yang  berarti pertambahan  berat  lebih  lambat  daripada panjang.  Berdasarkan  analisis  filogenetik dan  jarak  genetik,  sekuen  DNA  yang dianalisis  membentuk clade yang  sama dengan spesies T. stenogyrus dengan  jarak genetik terdekat 4,2 %. Analisis molekuler memperlihatkan  jenis tersebut adalah  jenis T. stenogyrus . Analisis genetik melalui gen CO1 sangat baik dan  memberi kemudahan dalam identifikasi spesies gastropoda.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terimakasih  disampaikan  kepada Laboratorium  Genetika  Molekuler,  FPIK, Universitas  Papua  yang  telah  memfasilitasi pelaksanaan  penelitian  ini  sehingga  dapat berjalan dengan baik.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Ji Y, Ashton L, Pedley SM, Edwards DP, Tang  Y,  Nakamura,  A,  Kitching,  R, Dolman  PM,  Woodcock  P,  Edwards  FA, Larsen TH, Hsu WW, Benedick S, Hamer KC, Wilcove DS, Bruce C, Wang X, Levi T,  Lott  M,  Emerson  BC,  Yu  DW  (2013)
Reliable, verifiable and efficient monitoring of biodiversity via
metabarcoding. Ecol. Lett. 16 (10): 1245– 1257. doi: 10.1111/ele.12162.
[2] Jala  S,  Haumahu  S,  Uneputty  P  (2014) Variasi morfometrik dan hubungan panjang  berat  siput  jala.  Jurnal  TRITON 10: 122–130.
[3] Saleky  D,  Setyobudiandi  I,  Toha  AHA, Takdir  M,  Madduppa  HH  (2016)  Length- weight relationship and population genetic  of  two  marine  gastropods  species (Turbinidae: Turbo  sparverius and Turbo bruneus )  in  the  bird  seascape  Papua,
Indonesia.  Biodiversitas  J.  Biol.  Divers.
17 (1): 208–217. doi:
10.13057/biodiv/d170 130.
[4] Watson G, Davies J, Wood H, & Cocks A (2018)  A  comparison  of  survivorship  and function  (grazing  and  behaviour)  of  three gastropod  species  used  as  clean-up  crew for  the  marine  aquarium  trade.  PLoS  One
13 (6): 1–16. doi: 10.1371/journal.pone.0199 516. [5] Saleky  D,  Leatemia  SP,  Yuanike  Y, Rumengan  I,  Putra  ING  (2019) Temporal distribution of G astropods in rocky intertidal area in North Manokwari, West Papua. Jurnal Sumberdaya Akuatik Indopasifik 3 (1): 1– 10. doi: 10.46252/jsai-fpik- unipa.2019.Vol.3. No.1.58.
[6] Ariyanto  D,  Bengen  DG,  Prartono  T (2018)  Length-Weight  relationships  and condition factors of Telescopium telescopium (Gastropoda :  Potamididae) in  Banggi  coast  of  Central  Java,  Java Island , Indonesia. International Journal of Fisheries and  Aquatic Studies 6 (2): 548– 550.
[7] Ayoade  AA,  Ikulala  AOO  (2007)  Length weight  relationship,  condition  factor  and stomach contents of Hemichromis bimaculatus , Sarotherodon  melanotheron and Chromidotilapia
guentheri
(Perciformes: Cichlidae) in Eleiyele Lake,
Southwestern Nigeria. Rev. Biol. Trop. 55 (3–4): 969–977. doi: 10.1551 7/rbt.v55i3- 4.5970.
[8] Hebert  PDN,  Ratnasingham  S,  deWaard JR,  Hebert  PDN,  Ratnasingham  S,  & Jeremy  R  (2003)  Barcoding  animal  life: cytochrome c oxidase subunit 1 divergences among closely related species.  Proc  Biol  Sci.  270  (Suppl  1): S96-S99. doi: 10.1098/rsbl.2003.0025
[9] Hebert  PDN,  Cywinska  A,  Ball  SL, deWaard JR (2003)
Biological identifications  through  DNA  barcodes.
Proc  Biol  Sci.  270  (1512):  313–321.  doi: 10.1098/rspb.2002.2218
[10] Kress  WJ,  García-Robledo  C,  Uriarte  M, Erickson  DL  (2015)  DNA  barcodes  for ecology,  evolution,  and  conservation, Trends  Ecol.  Evol.  30  (1):  25–35.  doi: 10.1016/j.tree.2014.10.008.
[11] Madduppa  H, Taurusman  AA,  Subhan  B, Anggraini  NP,  Fadillah  R,  Tarman  K (2017) Short communication: DNA barcoding  reveals  vulnerable  and  not evaluated  species  of  sea  cucumbers (Holothuroidea  and  Stichopodidae)  from Kepulauan Seribu reefs, Indonesia. Biodiversitas  18  (3):  893–898.  doi: 10.13057/biodiv/d180305.
[12] Puillandre  N,  Strong  EE,  Bouchet  P, Boisselier  MC,  Couloux  A,  Samadi  S (2009)  Identifying  gastropod  spawn  from DNA  barcodes:  possible  but  not  yet practicable.  Mol.  Ecol.  Resour.  (9)  5:
1311–1321. doi: 10.1111/j.1755-
0998.2009.02576.x
[13] Leatemia SPO, Manumpil AW, Saleky D, Dailami  M  (2018)  DNA  Barcode  dan Molekuler  Filogeni Turbo sp.  di  Perairan
Manokwari Papua Barat. Prosiding Seminar  Nasional  MIPA  Unipa  3:  103–
114.
[14] Palanisamy SK, Kumar  CP, Paramasivam P,  Sundaresan  U  (2018)  Molecular Approach  to  the  identification  and phylogenetic biogeography of snail Telescopium  telescopium using  mt-COI gene  sequences.  Regional  Studies  in
Marine Science 35: 1–17. doi: 10.1016/j.rsma.2020.101109 [15] Razkin O, Gómez-Moliner BJ, Vardinoyannis K, Martínez-Ortí A, Madeira  MJ  (2017)  Species  delimitation for  cryptic  species  complexes:  case  study of  Pyramidula  (Gastropoda,  Pulmonata),” Zool.
Scr. 46(1): 55–72. doi: 10.1111/zsc.12192
[16] Tindi  M,  Mamangkey  NGF,  Wullur  S,
(2017) DNA barcode dan analisis filogenetik  molekuler  beberapa  jenis bivalvia  asal  perairan  Sulawesi  Utara berdasarkan  gen  COI.  Jurnal  Pesisir  dan Laut Tropis. 1(2): 32–38.
[17] Puillandre N, Cruaud C, Kantor YI (2010) Cryptic  species  in  Gemmuloborsonia (Gastropoda: Conoidea). Journal Molluscan  Study  76(1):  11–23.  doi: 10.1111/j.1755-0998.2009.02576.x.
[18] Layton  KKS,  Martel  AL,  Hebert  PD (2014) Patterns of DNA barcode variation
in Canadian marine molluscs. PLoS One 9 (4): e95003.
doi: 10.1371/journal.pone.00950 03.
[19] Purnamasari  L,  Farajallah  A,  Wowor  D (2016)  Application  of  DNA  barcode  in determination  of  shrimp  species  of  fresh water  from  the  Province  of  Jambi. BioCENCETTA II (1): 50–59.
[20] Alf  A,  Kreipl  K  (2015)  A  new  species  of the  family  Turbinidae  Rafinesque,  1815 from  Saint  Brandon,  Western  Indian Ocean (Mollusca, Gastropoda, Vetigastropoda,  Turbinidae).  Spixiana
38(1): 3–10.
[21] Geller  J,  Meyer  C,  Parker  M,  Hawk  H (2013)  Redesign  of  PCR  primers  for mitochondrial  cytochrome  c  oxidase subunit  I  for  marine  invertebrates  and application  in  all-taxa  biotic  surveys. Molecular  Ecolology  Resources  13(5): 851–861. doi: 10.1111/1755-0998.12138.
[22] Effendie  MI  (1979)  Method  on  fish biology. IPB, Bogor, Yayasan Agromedia.
[23] Kumar  S,  Stecher  G,  Tamura  K  (2016) MEGA7: Molecular evolutionary genetics analysis  version  7.0  for  bigger  datasets.
Molecular Biology Evolution 33(7) 1870– 1874. doi: 10.1093/molbev/msw054.
[24] Williams ST (2007) Origins and diversification of Indo-West Pacific marine  fauna:  evolutionary  history  and biogeography
of turban shells (Gastropoda,  Turbinidae).  Biol.  J.  Linn. Soc. 92(3): 573–592. doi: 10.1111/j.1095- 8312.2007.0085 4.x.
[25] Zabarun  A  (2016)  Hubungan  panjang berat,  faktor  kondisi  dan  rasio  berat daging Kerang Pasir ( Modiolus modulaides ) di perairan Bungkutoko Kota Kendari.  Jurnal  Manajemen  Sumberdaya
Perairan 2(1): 21–32.
[26] Krupanidhi  S  (2020)  Regression  analysis of  shell  morphology  of  a  few  of  endemic aquatic  and  terrestrial  gastropods  as  a prelude  to  their  conservation  strategy. Acta Scientific Biotechnology 1(1): 2–7.
[27] Vrijenhoek  RC  (2009)  Cryptic  species, phenotypic  plasticity,  and  complex  life histories: Assessing  deep-sea  faunal diversity  with  molecular  markers.  Deep Sea  Res.  Part  II  Top.  Stud.  Oceanogr.  56
(19–20):  1713–1723.  doi:  10.1016/J. DSR2.2009.05.016.
[28] Solas  M,  Sepúlveda  R,  Brante  A  (2013) Genetic  variation of the shell  morphology in Acanthina  monodon (Gastropoda)  in
habitats  with  different  wave  exposure conditions.  Aquat.  Biol.  18(3):  253–260. doi: 10.3354/ab00508
[29] Silva SE, Silva IC, Madeira C, Sallema R, Paulo  OS,  Paula  J  (2013)  Genetic  and morphological  variation  in  two  littorinid gastropods: evidence for recent population  expansions  along  the  East African  coast.  Biol.  J.  Linn.  Soc.  108(3): 494–508 doi: 10.1111/j.1095-8312.20 12.02041.x.
[30] Wirdateti  W,  Indriana  E,  Handayani  H, (2016) Analisis sekuen DNA  mitokondria cytochrome oxidase I (COI) mtDNA pada
Kukang Indonesia ( Nycticebus spp) sebagai  penanda  guna  pengembangan identifikasi spesies Jurnal Biologi Indonesia 12(1): 119–128. doi: 10.14203/jbi.v12i1 .2322. [31] Indi DNLP (2011) Filogenetika molekuler:  Metode  taksonomi  organisme berdasarkan  sejarah  evolusi.  Wartazoa 30(16114): 1–10.