PENGARUH PEMBERIAN BAHAN AKTIF EKSTRAK Nannochloropsis oculata TERHADAP KADAR RADIKAL BEBAS PADA IKAN KERAPU TIKUS ( Cromileptes altivelis ) YANG TERINFEKSI BAKTERI Vibrio alginolyticus
THE INFLUENCE OF SUPPLY OF BIOACTIVE EXTRACT Nannochloropsis oculata TO DOSE OF FREE RADICALS IN THE HUMPBACK GROUPER ( Cromileptes altivelis ) THAT WAS INFECTED BY Vibrio alginolyticus

## Uun Yanuhar
Management of Water Resources , Faculty of Fisheries and Marine Science Brawijaya University, Jl. Veteran 65144 Malang-East Java Indonesia
Email :uunyanuhar@yahoo.com, telp. 08179615372

## Abstract
Nanochloropsis oculata is one of kind green algae that overload in Indonesia ocean. The purpose of this research  was to know the potency antioxidant of Nannochloropsis oculata extract as in the Humback Grouper. The research was conducted by   experimently and used direct random sampling as design with 4 experiments and 3 repeats   i.e control fish, fish was   added Nannochloropsis oculata extract, Vibrio alginolyticus - infected fish, and Vibrio alginolyticus - infected fish that was added Nannochloropsis oculata extract. The result showed, fish that added by Nannchloropsis oculata extract made a different influence which was very clear to the decreasing of   free radical in the body. Free radical (malonaldehid) in the Vibrio alginolyticus - infected fish was 4, 04 µg/100 mg which fish was added by Nannochloropsis oculata extract, the free radical level was decrease into 3, 29 µg/100 mg massa.
Key words : MDA, Nannochloropsis oculata , Vibrio alginolyticus , free radicals

## Pendahuluan
Lautan  Indonesia  terdapat  bermacam- macam  mahluk  hidup  baik  berupa  tumbuhan  air maupun  hewan  air.  Salah  satu  mahluk  hidup  yang tumbuh  dan  berkembang  di  laut  adalah  alga. Alga m e n g a n d u n g   b a h a n - b a h a n   o rg a n i k   s e p e r t i polisakarida,  hormon,  vitamin,  mineral  dan  juga senyawa bioaktif (Putra, 2006).
Pemanfaatan  alga  sampai  saat  ini  masih belum optimal terutama di bidang farmasi (Hanani e t   a l . ,   2 0 0 5 )   j i k a   d i b a n d i n g k a n   d e n g a n keanekaragaman  jenis  alga  yang  ada  di  Indonesia. Pemanfaatan  alga  di  Indonesia  sebagian  besar hanya  sebatas  pakan  alami  untuk  ikan  yang  di budidayakan.  Permasalahan  yang  timbul  pada budidaya  ikan  khususnya  ikan  kerapu  adalah terjadinya penyakit.  Penyakit yang ditemukan pada ikan  kerapu  salah  satunya  adalah  penyakit  infeksi bakteri  yang  dikenal  dengan  penyakit  vibriosis. Bakteri  jenis Vibrio  alginolyticus merupakan  jenis yang  sangat  patogen  pada  ikan  kerapu.  Kematian masal  yang  disebabkan  oleh  penyakit  infeksi tersebut  mencapai  90-100%  (rata-rata  93,3%) selama 21 hari (Mahardika & Zafran, 2004).
Penelitian  penanggulangan  penyakit Vibrio alginolyticus masih terbatas pada pemakaian bahan-bahan  kimia  seperti  formalin, malachite green serta  beberapa  jenis  antibiotik  seperti chloramfenicol (Brown,  1998  dalam  Suryati et  al ,
1998).  Penggunaan  antibiotik  tersebut  belum diperoleh  hasil  yang  memuaskan  karena  pada umumnya  bahan-bahan  tersebut  tidak  selektif sehingga  dikhawatirkan  akan  menurunkan  mutu lingkungan  dan  bersifat  resisten  (Suryati  et  al, 1998).
Nannochloropsis oculata adalah salah satu alga laut yang memiliki senyawa bahan aktif yang diduga  mampu  digunakan  sebagai  antioksidan. Ekstrak Nannochloropsis  oculata mengandung senyawa aktif yang salah satunya berupa terpenoid (Irawan et al , 2009) yang dapat digunakan sebagai antioksidan.
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk mengeksplorasi  bahan  aktif Nannochloropsis oculata dan  melakukan  pengukuran  pengaruh pemberian  ekstrak Nannochloropsis  oculata sebagai  antioksidan  pada  ikan  Kerapu  Tikus  yang telah terinfeksi bakteri Vibrio alginolyticus .

## Materi dan Metode Penelitian
Objek penelitian
Objek  dalam  penelitian  ini  adalah  ikan Kerapu Tikus yang diinfeksi dengan bakteri Vibrio a l g i n o l y t i c u s ,   e k s t r a k   b a h a n   a k t i f   d a r i Nannochloropsis  oculata dan  kualitas  air  pada pemeliharaan ikan Kerapu Tikus yang di uji.
Pengaruh Pemberian Bahan Aktif Ekstrak ......

## Tempat dan waktu penelitian
P e n e l i t i a n   i n i   d i l a k s a n a k a n   d i L a b o r a t o r i u m   J a s a   T i r t a ,   L a b o r a t o r i u m Farmakologi  Fakultas  Kedokteran,  Laboratorium Ilmu-ilmu Perairan dan Laboratorium Bioteknologi Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Brawijaya  pada  bulan  Mei  -  Juli  2009,  sedangkan Nannochloropsis  oculata dan  Ikan  Kerapu  Tikus diambil di CV. Mutiara Biru Situbondo.
Alat dan bahan penelitian
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu  Saringan,  Refraktometer,  Ember,  Baskom, Aerator,  Batu  aerasi,  Spuit,  Spektrofotometer, Sentrifuse Dingin, Sentrifuse, Nampan seng, Labu evaporator, Evaporator, Oven, Timbangan, Selang, Mikropipet,  Mortar,  Tabung  reaksi,  Rak  tabung reaksi, dan Sectio.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian yaitu  Ikan  Kerapu  30  gram,  Ekstrak  bahan  aktif N a n n o c h l o ro p s i s   o c u l a t a ,   B a k t e r i Vi b r i o alginolyticus ,  Kertas  saring,  Plastik,  N-heksan,
Tissue,  Botol  Film,  TBA,  Pelet  atau  ikan  rucah,
PBS, HCl, NBT, Xantine, EDTA, XO, NaOH dan TCA.
Metode yang digunakan dalam penelitian ini  adalah  metode  eksperimen,  yaitu  mengukur d a y a   a n t i o k s i d a n   e k s t r a k   b a h a n   a k t i f Nannochloropsis  oculata pada  ikan  Kerapu  Tikus yang terinfeksi bakteri Vibrio alginolyticus . Rancangan  yang  digunakan  adalah Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dimana  setiap perlakuan dilakukan sebagai satuan tersendiri, tidak ada hubungan pengelompokan.
Pengambilan sampel Pengambilan  sampel Nannochloropsis oculata dan Ikan Kerapu Tikus yaitu di P.T Mutiara Biru  Situbondo.  Sampel Nannochloropsis  oculata diambil sebanyak 500 L dan ditaruh dalam plastik.
Setelah  sampai  di  laboratorium,  sampel  ditaruh dalam  ember  plastik  dan  diberi  aerasi  agar Nannochloropsis  oculata tidak  mati.  Sedangkan untuk  Ikan  Kerapu  Tikus  dimasukkan  dalam baskom-baskom  yang  telah  diberi  air  laut  kurang lebih  4  liter  dan  diberi  aerasi  untuk  mencukupi kebutuhan  oksigen.  Stok  untuk  bakteri Vibrio alginolyticus didapatkan  dari  Laboratorium Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas Brawijaya.
Preparasi  Sampel Nannochloropsis  oculata berdasarkan Kawaroe (2008) dalam Atmakusumah et al . (2008) :
Menyaring  sampel Nannochloropsis oculata dengan  menggunakan  kertas  saring  lalu m e n g e r i n g k a n N a n n o c h l o ro p s i s   o c u l a t a
0 menggunakan  oven  dengan  suhu  antara  60-70 C agar  air  yang  terkandung  didalamnya  hilang. Setelah itu menghaluskan Nannochloropsis oculata dengan  menggunakan  blender  dan  menyimpan Nannochloropsis oculata pada wadah plastik.
Ekstraksi Nannochloropsis  oculata berdasarkan Gunawan et al . (2008) : Mengambil  sampel Nannochloropsis oculata sebanyak 30 gram dan ditaruh dalam timbel.
Meletakkan  n-heksan  dalam  labu  A  dan  menekan tombol  power  pada  alat  soklet.  Setelah  itu menunggu  selama  15  menit  dan  menambahkan KOH 10%.

## Pengukuran kualitas air
Pengukuran  Suhu  berdasarkan  Bloom
(1988) :
Memasukan  termometer  ke  dalam  bak percobaan dan membiarkan beberapa saat di dalam bak percobaan. Mencatat angka yang terlihat (angka yang ditunjukkan air raksa).
Pengukuran  Salinitas  berdasarkan  Kordi dan Tancung (2008) :
Menyiapkan  refraktometer  dan  membuka penutup  kaca  prisma  lalu  meneteskan  1-2  tetes  air yang akan diukur dan menutup kembali dengan hati- h a t i   a g a r   t i d a k   t e r j a d i   g e l e m b u n g   u d a r a dipermukaan kaca prisma. Mengarahkan ke sumber cahaya  lalu  melihat  nilai  salinitasnya  melalui  kaca pengintai dan mencatat hasil pengukuran.
Pengukuran  pH  berdasarkan  Walters (1989): Mengkalibrasi pH meter dengan aqudes lalu memasukkan pH meter ke dalam bak percobaan dan mencatat hasil yang tertera di pH meter.
Uji  Tantang  Pada  Ikan  Kerapu  Tikus  berdasarkan Yanuhar (2008) :
Meneteskan  4  ml  Vibrio  alginolyticus dengan populasi 108 CFU/mL pada bak percobaan dan menunggu selama 24 jam. Memberikan ekstrak Nannochloropsis  oculata  melalui  oral  sebanyak  + 0 , 3   m l   p a d a   i k a n   k e r a p u   d a n   m e n g a m a t i perubahannya  selama 7 hari.
(Fujaya, 2004).
Setelah otak mengalami infeksi, mikroglia pada  bagian  otak  akan  berperan  aktif  sebagai  sel fagosit. Sel fagosit adalah sel pemakan bakteri asing untuk  membunuh  bakteri  dan  virus  yang  masuk dalam tubuh. Namun apabila bakteri melebihi batas kemampuan,  maka  dia  akan  menyerang  sel  itu sendiri (Krism, 2009).
Infeksi  bakteri  merupakan  bentuk  radikal bebas yang berasal dari luar tubuh (eksogen). Ciri- ciri  ikan  yang  telah  terinfeksi  bakteri Vibrio spp. seperti  warna  tubuh  kegelapan,  nafsu  makan berkurang,  nekrosis,  perut  menggelembung  dan mata  menonjol  ( exopthalmia ),  terjadi  perubahan perilaku, gerakan lamban, keseimbangan terganggu, dan  berputar-putar  ( whirling ).  Perubahan  perilaku t e r j a d i   p a d a   i k a n   y a n g   t e r i n f e k s i Vi b r i o alginolyticus pada  3  –  12  jam  setelah  terinfeksi.
Perubahan  ini  diikuti  perubahan  morfologi  ikan seperti  warna  tubuh  menjadi  kegelapan  dan erithema  disekitar  sirip  ikan,  perut  dan  mulut. Selanjutnya terjadi peradangan pada bekas infeksi, timbul  bercak  merah  pada  pangkal  sirip,  timbul perdarahan  pada  insang  dan  mulut,  terjadi penggelembungan  pada  perut  ikan  karena  berisi cairan, terjadi luka nekrotik pada otot perut, saluran intestinal  dan  rectum  terbelah  berisi  cairan  hingga terjadi kematian (Murdjani, 2002).
Penggunaan  ekstrak Nannochloropsis oculata diharapkan  mampu  menurunkan  kadar radikal  bebas  yang  ada.  Ekstrak Nannochloropsis oculata diberikan  secara  oral  melalui  mulut  ikan dengan  dosis  0,3  ml  dalam  konsentrasi  0,1  % (Nitimulyo,  2005).  Ekstrak Nannochloropsis oculata mengandung bahan aktif yang salah satunya b e r u p a   t e r p e n o i d   d a n   m e r u p a k a n   s u m b e r antioksidan.  Antioksidan  adalah  senyawa  yang m e m p u n y a i   s t r u k t u r   m o l e k u l   y a n g   d a p a t memberikan  elektronnya  kepada  molekul  radikal bebas  dan  dapat  memutus  reaksi  berantai  dari radikal  bebas  (Noor,  2009).  Terpenoid  merupakan salah  satu  antioksidan  kuat  dalam  tubuh  untuk proses sintesa organik dan pemulihan sel-sel tubuh (Deherba, 2009).
Hasil kadar malonaldehida (MDA)
Hasil  kadar  malonaldehida  ikan  Kerapu Tikus dapat diketahui dengan menggunakan analisa regresi.  Analisa  regresi  yang  didapat  antara konsentrasi  larutan  standar  dengan  panjang gelombang  yang  terserap  merupakan  regresi  linier dengan persamaan y = 0,041x + 0,002 dengan nilai koefesien  korelasi  R2  sebesar  0,998  dengan  r  =

## Pengukuran MDA berdasarkan Prangdimurti (2009)
Menimbang  150  mg  otak  dan  digerus dengan  menggunakan  mortar.  Mensentrifuse  3000 rpm,  selama  15  menit  lalu  mengambil  supernatan sebanyak  200µl  serta  menambahkan  larutan  TCA 15%  dan  0,05  ml  TBA  0,37%  dalam  HCl  0,25  N. Memanaskan pada suhu 80 oC selama 15 menit lalu mendinginkan  pada  suhu  ruang.  Setelah  itu mensentrifus dengan kecepatan 3000 rpm selama 15 menit dan membaca dengan spektrofotometer pada panjang gelombang 532 nm.

## Hasil dan Pembahasan
Perlakuan ikan kerapu tikus
Penelitian  ini  menggunakan  ikan  Kerapu Tikus  yang  direndam  dengan  bakteri Vibrio alginolyticus pada  kepadatan  108  CFU/  ml  media. Hal  ini  bertujuan  melemahkan  daya  tahan  tubuh ikan  sehingga  kadar  radikal  bebas  di  tubuh  ikan meningkat.  Krism  (2009)  mengatakan,  infeksi bakteri  adalah  salah  satu  penyebab  terjadinya radikal  bebas.  Pada  saat  ikan  terinfeksi  bakteri, jumlah  sel  darah  putih  yaitu  neutrofil  dan  monosit meningkat. Leukosit merupakan salah satu jenis sel darah  yang  mempunyai  peranan  sangat  penting dalam  sistem  kekebalan  ikan,  dan  akan  meningkat secara  pesat  apabila  terjadi  suatu  infeksi  (Tizard,
1988  dalam  Endarti,  2009).  Neutrofil  dan  monosit ini  merupakan  sel  fagosit,  menurut  Irianto  (2005) sel-sel  fagosit  akan  mengenali  dan  menelan partikel-partikel  antigenik,  termasuk  bakteri  dan sel-sel inang yang rusak melalui tiga tahapan proses yaitu  pelekatan,  fagositosis  dan  pencernaan. Monosit  dan  neutrofil  yang  teraktivasi  memiliki kemampuan  untuk  menghasilkan  suatu  jenis oksigen dan nitrogen reaktif. Terbentuknya oksigen dan  nitrogen  reaktif  tersebut  sangat  berbahaya karena berpotensi menyerang sel tubuh. Jadi infeksi bakteri  secara  tidak  langsung  akan  meningkatkan produksi radikal bebas oleh sel fagosit.
Penginfeksian  bakteri  masuk  kedalam tubuh  melalui  sejumlah  jalur  alami  (saluran respirasi,  saluran  gastrointens  inal  dan  saluran genitourinary)  atau  melalui  jalur  non  alami  seperti dalam  membran  mucus  atau  kulit.  Bakteri    yang masuk  lewat  mulut  diperkirakan  karena  ikan melakukan  proses  osmoregulasi  dan  respirasi dengan  jalan  meminum  air.  Bakteri  akan  terbawa kedalam  peredaran  darah  saat  penyerapan  O   oleh 2 darah di insang kemudian keseluruh tubuh yaitu dari insang  darah  dialirkan  ke  dorsal  aorta  kemudian darah  dialirkan  ke  kepala,  otot  badan,  ginjal  dan semua organ pencernaan melalui pembuluh kapiler
0,998.  Kadar  malonaldehida  yang  didapat  dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1.  Kadar  Malonaldehida    (MDA)  pada  Ikan Kerapu Tikus
Keterangan : A. Ikan Sehat B. Ikan yang ditambahkan ekstrak Nannochloropsis oculata
C . I k a n   y a n g   d i i n f e k s i k a n   b a k t e r i Vi b r i o alginolyticus
D . I k a n   y a n g   d i i n f e k s i k a n   b a k t e r i Vi b r i o a l g i n o l y t i c u s d a n   d i t a m b a h k a n   e k s t r a k

## Nannochloropsis oculata
Malonaldehida (MDA) merupakan produk akhir  dari  oksidasi  lipid.  Tingginya  kadar malonaldehida  dipengaruhi  oleh  kadar  peroksidasi lipid, yang secara tidak langsung juga menunjukkan tingginya  jumlah  radikal  bebas  (Wresdiati,  2009). Menurut Arief (2008), bentuk-bentuk radikal bebas dalam  tubuh  antara  lain,  triplet  (3O ),  tunggal
2
1
(singlet/ O ),  anion  superoksida  (O .-),  radikal
2
2
hidroksil  (OH-),  nitrit  oksida  (NO-),  peroksinitrit (ONOO-),  asam  hipoklorus  (HOCl),  hidrogen peroksida  (H O ),  radikal  alkoxyl  (LO-),  dan
2 2 2
radikal  peroksil  (LO ).    Analisis  malonaldehida pada penelitian ini dibagi dalam 4 perlakuan. Pada perlakuan A yaitu ikan sehat atau normal, memiliki kadar  malonaldehida  sebesar  2,69  µg/100  mg massa.  Nilai  tersebut  menggambarkan  walaupun ikan tidak terinfeksi, tubuh ikan tetap mengandung s e n y a w a   r a d i k a l   b e b a s .   Wi n a r s i   ( 2 0 0 7 ) , menjelaskan  bahwa  senyawa  oksigen  reaktif  juga dapat  diproduksi  melalui  kondisi  tidak  stress  atau normal,  dan  terdapat  keseimbangan  antara  proses pembentukan  dan  pemusnahan  senyawa  oksigen reaktif. Hal ini biasanya merupakan respon normal proses biokimia secara intrasel maupun ekstrasel.
Perlakuan B yaitu ikan yang ditambahkan ekstrak Nannochloropsis  oculata memiliki  kadar malonaldehida sebesar 2,07 µg/100 mg massa. Jika
dibandingkan  dengan  ikan  normal  maka  terjadi penurunan  kadar  malonaldehida,  yang  berarti terjadi  penurunan  senyawa  radikal  bebas  dalam tubuh.  Menurut  Prangdimurti  (2009),  pada  tikus percobaan yang diberikan tambahan ransum protein mampu  menurunkan  kadar  malonaldehida  pada tikus.  Hal  ini  dikarenakan  adanya  antioksidan kedelai  yaitu  isoflavon.  Begitu  pula  dengan penelitian ini. Pada ikan yang ditambahkan ekstrak Nannochloropsis  oculata mampu  menurunkan kadar  malonaldehida  karena  adanya  antioksidan dari ekstrak Nannochloropsis oculata .
Pada  perlakuan  C  yaitu  ikan  yang diinfeksi Vibrio  alginolyticus memiliki  kadar malonaldehida  sebesar  4,04  µg/100  mg  massa. Radikal  bebas  yang  timbul  akibat  infeksi  bakteri diasumsikan  terbentuk  dari  hasil  sampingan metabolisme  sel  yang  bekerja    melawan  serangan bakteri.    Hargono  (1996)  menjelaskan,  serangan bakteri  pada  jaringan  akan  menimbulkan  respon terhadap  sel  untuk  melakukan  proses  fagositosis, yang  merupakan  proses  penyerapan  dan  eliminasi mikroba  atau  partikel  lain  oleh  sel.  Neutrofil  dan monosit  ini  merupakan  sel  fagosit,  Monosit  dan neutrofil  yang  teraktivasi  memiliki  kemampuan untuk  menghasilkan  suatu  jenis  oksigen  dan nitrogen  reaktif.  Menurut  Arief  (2008),  suatu k e a d a a n   d i m a n a   t i n g k a t   o k s i g e n   r e a k t i f i n t e r m e d i a t e   ( R O I )   y a n g   t o k s i k   m e l e b i h i pertahanan  anti-oksidan  endogen  dikenal  dengan istilah tekanan oksidatif ( oxidative stress ). Keadaan ini  mengakibatkan  kelebihan  radikal  bebas,  yang akan bereaksi dengan lemak, protein, asam nukleat seluler,  sehingga  terjadi  kerusakan  lokal  dan disfungsi  organ  tertentu.  Sehingga  pada  perlakuan C memiliki kadar malonaldehida tertinggi.
Perlakuan  D  yaitu  ikan  yang  diinfeksi Vibrio  alginolyticus dan  ditambahkan  ekstrak N a n n o c h l o ro p s i s   o c u l a t a m e m i l i k i   k a d a r m a l o n a l d e h i d a   s e b e s a r   3 , 2 9   µ g / 1 0 0   m g . Pembentukan radikal bebas dalam keadaan normal akan  diikuti  oleh  pembentukan  antioksidan  dalam tubuh sehingga terjadi keseimbangan antara radikal bebas dan antioksidan (Lefrina, 2009). Namun bila dihasilkan  melebihi  batas  kemampuan  proteksi antioksidan  seluler,  maka  dia  akan  menyerang  sel itu  sendiri.  Lemak  merupakan  biomolekul  yang rentan  terhadap  serangan  radikal  bebas  (Arief, 2008). Nilai kadar malonaldehida dengan perlakuan yang diberikan dapat dilihat pada Gambar 1.
Ulangan (µg/100 mg massa) 2,67 2,01 3,92 3,28 1 2 3 A B C D 2,56 2,13 4,03 3,14 2,85 2,09 4,17 3,47 2,69 2,07 4,04
3,29 Perlakuan Rerata
Pengaruh Pemberian Bahan Aktif Ekstrak ......
Keterangan : A. Ikan Sehat B. Ikan yang ditambahkan ekstrak Nannochloropsis oculata
C . I k a n   y a n g   d i i n f e k s i k a n b a k t e r i   Vi b r i o alginolyticus
D . I k a n   y a n g   d i i n f e k s i k a n   b a k t e r i Vi b r i o a l g i n o l y t i c u s d a n   d i t a m b a h k a n   e k s t r a k

## Nannochloropsis oculata
Gambar  1  tersebut  menjelaskan  bahwa penginfeksian  bakteri  pada  perlakuan  C  dan  D meningkatkan kadar malonaldehida lebih besar jika dibandingkan  dengan  kontrol  (perlakuan A).  Pada perlakuan C yaitu ikan yang diinfeksi bakteri Vibrio a l g i n o l y t i c u s m e n i n g k a t k a n   a k t i v i t a s malonaldehida sebesar 1, 35 µg/100 mg massa dari ikan normal. Pembentukan radikal bebas dalam sel secara  umum  melalui  reaksi  pemindahan  elektron, menggunakan  mediator  enzimatik  atau  non-
enzimatik.  Produksi  radikal  bebas  dalam  sel  dapat terjadi secara rutin maupun sebagai reaksi terhadap rangsangan,  secara  rutin  adalah  superoksida  yang dihasilkan  melalui  aktifasi  fagosit  dan  reaksi katalisa seperti ribonukleotida reduktase sedangkan pembentukan melalui rangsangan adalah kebocoran superoksida,  hidrogen  peroksida  dan  kelompok oksigen reaktif (ROS) lainnya pada saat bertemunya b a k t e r i   d e n g a n   f a g o s i t   t e r a k t i f a s i .   R e a k s i pembentukan  radikal  bebas  dapat  dilihat  pada Gambar 2.
O   y a n g   a d a   d i k o n v e r s i   m e n j a d i 2 superoksida  (O -)  oleh  enzim  oksidatif  yang 2 terdapat  pada  retikulum  endoplasma,  mitokondria, membran  plasma,  peroksisom  dan  sitosol.  O - 2 dikonversi  menjadi  H O   melalui  reaksi  lismutasi 2 2 dan  dikonversi  menjadi  OH-.  H O   juga  dapat 2 2 secara langsung diproduksi melalui reaksi oksidasi di  peroksisom.  Kerusakan  yang  diakibatkan  oleh
Gambar 1. Perbandingan Kadar MDA dengan Perlakuan
Perlakuan Kadar MDA (   g/I 00 mg massa)
serangan  radikal  bebas  pada  lipid  (peroksidasi), protein,  dan Asam  Deoksiribonukleat  (ADN)  akan mengakibatkan  berbagai  macam  bentuk  kerusakan sel.  Pada  keadaan  normal  sumber  utama  radikal bebas  adalah  kebocoran  elektron  yang  terjadi  dari rantai transport elektron, misalnya yang ada dalam mitokondria dan endoplasma retikulum dan molekul oksigen  yang  menghasilkan  superoksida.  Dalam kondisi  yang  tidak  lazim  seperti  radiasi  ion,  sinar ultraviolet,  dan  paparan  energi  tinggi  lainnya, dihasilkan  radikal  bebas  yang  sangat  berlebihan (Arief, 2008).
Hasil sidik ragam kadar  Malonaldehida (MDA) Pengaruh  penginfeksian  bakteri  dan penambahan  ekstrak  Nannochloropsis  oculata terhadap  kadar  malonaldehida  pada  ikan  Kerapu dapat  diketahui  dengan  melakukan  analisa keragaman atau sidik ragam.
Berdasarkan  hasil  sidik  ragam  diketahui penginfeksian  bakteri  memberikan  pengaruh berbeda  sangat  nyata  dalam  meningkatkan  kadar radikal bebas pada tubuh ikan Kerapu Tikus. Hal ini dikarenakan tidak seimbangnya kadar radikal bebas dalam tubuh dengan antioksidan yang ada. Menurut Lefrina  (2009),  pembentukan  radikal  bebas  dalam keadaan  normal  akan  diikuti  oleh  pembentukan a n t i o k s i d a n   d a l a m   t u b u h   s e h i n g g a   t e r j a d i keseimbangan antara radikal bebas dan antioksidan. Namun  bila  dihasilkan  melebihi  batas  kemampuan proteksi  antioksidan  seluler,  maka  dia  akan menyerang  sel  itu  sendiri.  Adanya  infeksi  bakteri menyebabkan radikal bebas dalam tubuh meningkat tetapi  antioksidan  yang  ada  belum  mencukupi sehingga kadar malonaldehide menjadi tinggi.
Hasil uji beda nyata terkecil Kkadar  Malonaldehida (MDA)
Perbedaan  tiap  perlakuan  diketahui dengan melakukan Uji Beda Nyata Terkecil (BNT) dengan taraf nyata 0,05% (selang kepercayaan 95%) maupun  taraf  nyata  0,01%  (selang  kepercayaan 99%).
Berdasarkan  hasil  uji  BNT  diketahui bahwa  setiap  perlakuan  memiliki  hasil  yang berbeda.   Perlakuan yang terbaik adalah perlakuan i k a n   s e h a t   y a n g   d i t a m b a h k a n   e k s t r a k Nannochloropsis  oculata (perlakuan  B),  diikuti perlakuan A yaitu Ikan sehat, lalu perlakuan D yaitu ikan  yang  diinfeksi  dengan  bakteri Vibrio a l g i n o l y t i c u s l a l u   d i t a m b a h k a n   e k s t r a k Nannochloropsis  oculata  dan  terakhir  perlakuan  C y a i t u   i k a n   y a n g   d i i n f e k s i   b a k t e r i Vi b r i o
a l g i n o l y t i c u s t a n p a   d i t a m b a h k a n   e k s t r a k Nannochloropsis  oculata .  Pada  perlakuan  C memiliki  kadar  malonaldehida  yang  paling  tinggi, d i k a r e n a k a n   a d a n y a   i n f e k s i   b a k t e r i   y a n g menyebabkan  ikan  menjadi  stress.  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Wresdyati (2009),  pada  tikus  yang  diberi  perlakuan  stres m e n i n g k a t k a n   k a d a r   r a d i k a l   b e b a s   a t a u malonaldehida  dalam  tubuh.  Pada  Tikus  normal kadar  malonaldehida  sebesar  3,  34  µg/100  mg massa  sedangkan  tikus  yang  stres  meningkat menjadi 25, 51 µg/100 mg massa.
Data kualitas air
Faktor yang mempengaruhi aktivitas ikan Kerapu  saat  pemeliharaan  salah  satunya  adalah kualitas  air.  Semakin  sesuai  kondisi  air  maka semakin bagus pertumbuhan ikan Kerapu.
Data  kualitas  air  yang  meliputi  suhu, salinitas  dan  pH  selama  penelitian  menunjukkan nilai rata-rata yang tidak terlalu berbeda pada setiap perlakuan  dari  hari  ke  hari.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  perlakuan  yang  berbeda  tidak  memberikan pengaruh yang berbeda terhadap kualitas air media. Nilai  kualitas  air  yang  ada  merupakan  media optimum untuk pertumbuhan ikan Kerapu Tikus.

## Kesimpulan
Penggunaan  ekstrak Nannochloropsis oculata memberikan pengaruh terhadap penurunan radikal  bebas  (malonaldehide)  pada  ikan  Kerapu Tikus.  Pada  malonaldehide,  selisih  antara  Ikan Kerapu  Tikus  yang  diinfeksi  bakteri Vibrio alginolyticus dengan  ikan  Kerapu  Tikus  yang diinfeksi  bakeri  dan  ditambahkan  ekstrak Nannochloropsis oculata yaitu sebesar 0,75 µg/100 m g   m a s s a .   Te r b u k t i   b a h w a   p e n g g u n a a n Nannochloropsis  oculata mampu  menurunkan kadar radikal bebas (malonaldehide) yang ada.
Perlu  dilakukan  penelitian  selanjutnya untuk  mengetahui  dosis  yang  optimum  dalam m e l a w a n   r a d i k a l   b e b a s   d a l a m   t u b u h   d a n pengembangan  cara  yang  lebih  efisien  dalam mendapatkan bahan aktif Nannochloropsis oculata sebagai  antioksidan  untuk  kepentingan  budidaya khususnya ikan Kerapu Tikus.

## Daftar Pustaka
A r i e f ,   S .   2 0 0 8 .   R a d i k a l   B e b a s . h t t p : //www.ruteplanen.dk/query?wrel&search_wo rdantin-kurniawan.com %2Fkesehatan- populer%2Fmengenal-radikal-bebas.html
Jurnal Perikanan dan Kelautan Vol. 1, No. 2, 2009 Ilmiah November
Atmakusumah.  2008.  Bahan  Bakar  Bernama M i k r o a l g a . h t t p : / / m a j a l a h . Te m p o i n t e r a k t i f . c o m   / i d / a r s i p / 2 0 0 8 / 1 0 /06/ILT/mbm .20081006.ILT128378.id.html Bloom,  J.H.  1988.  Analisa  Mutu  Air  Secara
Kimiawi  dan  Fisis.  Sebuah  Laporan  tentang Pelatihan  dan  Praktek  pada  Fakultas Perikanan. NUFFIC-UNIBRAW. Malang
Deherba.  2009.  Kandungan  yang  Terdapat  pada
M e n g k u d u . h t t p : / / s e h a t b e r s a m a deherba.blogspot.com/2009/03/kandungan- yang-terdapat-pada-mengkudu.html
F u j a y a ,   Y.   2 0 0 4 .   F i s i o l o g i   I k a n .   D a s a r pengembangan  teknologi  perikanan.  Rineka Cipta. Jakarta.
Gunawan,  I.W.G.,  I.G.A.  Gede  Bawa  dan
Sutrisnayanti.  2008.  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Terpenoid  yang  Aktif  Antibakteri pada  Herba  Meniran  (Pillanthus  Niruri). http://ejournal.unud.ac.id/abstrak/j-kimoll2- nol-gunawan-pdf
Hanani,  E.,  Abdul,  M  dan  Ryani  S.  2005.
Identifikasi  Senyawa  Antioksidan  dalam Spons Callyspongia sp  dari  Kepulauan S e r i b u . h t t p : / / j u r n a l . f a r m a s i .   u i . a c . i d /pdf/2005/v02
I r a w a n ,   B . ,   M a r i s s a ,   M   d a n   A t i e k .   2 0 0 9 .
Pemanfaatan  Alga  Laut Nannochlorpsis oculata Sebagai  Sumber  Antioksidan  untuk
Pengendali  Vibriosis  pada  Ikan  Kerapu.
Program  Kreatifitas  Mahasiswa.  Universitas Brawijaya. Malang
Kordi, K., dan Tanchung. 2008. Budidaya Perairan.
PT Citra Aditya Bakti. Bandung Krism. 2009. Tangkal Radikal Bebas dengan Buah dan  Sayur. http://www.pulau-madura.com/ index.php/2009/01/tangkal-radikal-bebas- dengan-buah-dan-sayur
Lefrina, Yeni. 2009. Tangkal Radikal Bebes Dengan A n t i o k s i d a n . h t t p : / / w w w . pikiranrakyat.com/prprint.php?mib=beritadet ail&id=30087
Murjani.  2002.  Identifikasi  dan  Patologi  Bakteri Vibrio  alginolitycus Pada  Ikan  Kerapu  Tikus. Disertasi. Program Pasca Sarjana. Universitas Brawijaya
Noor,  Nuning.  M.  2009.  Radikal  Bebas  dan
Antioksidan. http://nakedfisher.blogspot.com/
2009 /06/radikal-bebas-dan-antioksidan.html
Prangdimurti. 2009. Pengaruh Protein Ransum dan P e m b e r i a n   Te h   H i j a u   t e r h a d a p   K a d a r Malondialdehida  (MDA)  Organ  Hati  Tikus Percobaan. http://www.scribd.com/doc/ 11495362/Laporan-Penentuan-Kadar-MDA
Putra,  Sinly.  E.  2006.  Alga  Laut  Sebagai  biotaget industri. http://www.chem-is-try.org .  Diakses tanggal 2 Mei 2008
Suryati, E., Muliani dan Parenrengi. 1998. Analisis serta  Pemanfaatan  Bioaktif  Bunga  Karang Halichondria sp.  Yang  Aktif  Menghambat Pertumbuhan  Bakteri Vibrio sp.  Pada  Udang.
Prosiding Simposium Perikanan Indonesia II. Hal 192-194.
Walters,  G.L.  1989.  Water  Analysis  Handbook. Hach Company. Colorado USA
Wresdiati,  T.,  M.  Astawan  dan  Fithriani  D.  2009. Pengaruh  á-Tokoferol  terhadap  Profil Superoksida  Dismutase  dan  Malondialdehida pada  Jaringan  Hati  Tikus  di  Bawah  Kondisi Stres. http://ejournal.unud.ac.id/?module =detailpenelitian&idf=6&id
Mahardika,  K  .Zafran,  2004.    Infeksi  Iridovirus Pada  JuvenilKerapu  Bebek  (Cromileptes altivelis)  Di  Karamba  Jaring  Apung.    Balai Besar Riset Perikanan Budidaya Laut Gondol.
Bali.  Prosiding. Penegndalian Penyakit  Pada Ikan  Dan  Udang  berbasis  Imunisasi  Dan Biosecurity.