## UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETANOL 70% DAUN MATOA (Pometia pinnata) TERHADAP AKTIVITAS ALT DAN AST DARAH TIKUS PUTIH YANG DIINDUKSI KARBON TETRAKLORIDA (CCl 4 )

## Try Oktavia Djabar
tryoktaia911@gmail.com, Puskesmas Gotowasi, Kec. Maba Selatan. Halmahera Timur

## Abstract
Antioxidant is a molecule that capable stabilize or deactivate free radicals in order not to make the cells demaged. Flavonoid compounds have pharmacological effects as antioxidants the one is leaf of Matoa  ( Pometia pinnata ). This study aims to look the activities of antioxodant 70% ethanol extract Matoa leaves ( Pometia pinnata ) in liver of male rats induced by CCl 4 . Experiments was conducted 16 days with 30 rats were divided into 6 group. The group  KN  and  KKN  that  are  given  distilled  water  for  5  days;  The  group  of  KKP  that  is  given  treatment  with curcuma 81 mg/kg BB for 10 days; The group of KE1, KE2 and KE3 that were given 70% ethanol extract Matoa leaves ( Pometia pinnata ) (KE1 dose I 100 mg/kg BW of rats, KE2 dose II 200 mg/kg BB of rats and KE3 dose III 400 mg/kg BW of rats) for 10 days. All of the group  except KN was induced by CCl 4 0,05 mg/kg BW for 5 days. On day 16 all rats blood were taken and than measured the the activity of alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST). The test results of the analysis using one way ANOVA. Increase level of ALT and AST has been seen in the dose 100 mg/kg BW and increased antioxidant activity at dose 400 mg/kg BW. Keyword : Antioxidant, Matoa leaves ( Pometia pinnata ), ALT,  AST.

## Abstrak
Antioksidan merupakan molekul yang mampu menstabilkan atau menonaktifkan radikal bebas agar tidak merusak sel. Senyawa kimia flavonoid mempunyai efek farmakologik sebagai antioksidan salah satunya adalah Daun matoa ( Pometia  pinnata ).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  melihat aktifitas  antioksidan  ekstrak  etanol  70%  daun  matoa pada hati tikus putih jantan yang diinduksi CCl 4 . Perlakuan dilakukan selama 16 hari dengan 30 ekor tikus dibagi 6  perlakuan,  kelompok  KN  dan  KKN  diberikan  aquadest  selama  5  hari;  kelompok  KKP  diberi  pembanding curcuma 81 mg/kg BB selama 10 hari; kelompok KE1, KE2 dan KE3 diberikan ekstrak etanol  70% daun matoa masing-masing KEI dosis I (100 mg/kg BB tikus), KE2 dosis II (200 mg/kg BB tikus) dan KE3 dosis III (400 mg/kg  BB  tikus)  selama  10  hari.  Semua  kelompok  kecuali  KN  di  induksi  dengan  CCl 4 dosis  0,05  mg/kg  BW selama 5 hari. Pada hari ke-16, dilakukan pengambilan darah dan kemudian dilakukan pemeriksaan kadar Alanin aminotransferase (ALT) dan Aspartat aminotransferase (AST). Analisis statistik menggunakan One Way Anova . Peningkatan  kadar  ALT  dan  AST  sudah  dapat  terlihat  pada  pemberian  dosis  100  mg/kg  BB  dan  aktivitas antioksidannya semakin meningkat pada dosis 400 mg/kg BB.
Kata kunci : Antioksidan, Daun matoa ( Pometia pinnata ), ALT, AST.

## PENDAHULUAN
Antioksidan  memiliki  manfaat  yang  positif  dan  berperan  penting  dalam  menjaga kesehatan tubuh. Hal ini disebabkan karena kemampuan antioksidan dalam menangkap radikal bebas (Shivaprasad, 2005). Radikal bebas yang berlebihan akan mengakibatkan terjadinya stres oksidatif  karena  kurangnya  jumlah  antioksidan  dalam  tubuh  sehingga  dapat  menumbulkan berbagai  penyakit  (Shivaprasad,  2005;  Rohdiana,  2001).  Antioksidan  dapat  mencegah  dan mengobati berbagai  penyakit yang diakibatkan oleh hantaman radikal bebas dari luar tubuh, seperti  polusi  udara,  merokok,  zat-zat  kimia  serta  paparan  sinar  ultraviolet.  Antioksidan berdasarkan  sumbernya  terdiri  dari  dua  golongan,  yaitu  antioksidan  sintetik  dan  antioksidan alami yang merupakan hasil isolasi bahan alam. Adanya kekhawatiran akan kemungkinan efek samping  dari  antioksidan  sintetik  menyebabkan  antioksidan  alami  menjadi  antioksidan  yang sangat dibutuhkan (Rohdiana, 2001).
Matoa adalah tanaman yang belum dimaksimalkan manfaatnya sebagai tanaman obat . Matoa ( Pometia pinnata ) merupakan tanaman khas dari Papua Barat. Berdasarkan penelitian sebelumnya, diketahui bahwa ekstrak kulit buah matoa ( Pometia pinnata ) memiliki aktivitas
antibakteri  dan  antioksidan  (Faustina,  2013).  Sedangkan,  kulit  batang  dari  matoa  ( Pometia pinnata )  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  seperti  tannin,  flavonoid,  terpenoid  dan saponin  serta memiliki aktivitas  antibakteri  (Mercy, 2013). Senyawa kimia seperti flavonoid diketahui  sebagai  senyawa  dengan  efek  farmakologi  yang  cukup  tinggi,  diantaranya  sebagai antibakteri, antioksidan dan antijamur (Thitilerdecha et.al ., 2008; Kawamura et.al ., 2010). Daun matoa ( Pometia pinnata ) diketahui mengandung senyawa golongan flavonoid (Jayuska dkk., 2013) yang diduga dapat berkhasiat sebagai antioksidan. Namun, sejauh ini belum ada penelitian tentang aktivitas antioksidan dari daun Matoa ( Pometia pinnata ).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek antioksidan dari ekstrak daun Pometia pinnata secara in  vivo dengan  parameter  yang  dilihat  adalah  aktivitas  ALT  dan  AST  dalam darah.  Penelitian  ini  menggunakan  CCl 4 sebagai  penginduksi  stres  oksidatif  yang  umum digunakan. Karbon tetraklorida merupakan suatu senyawa kimia yang dapat merusak jaringan. Efek  toksik  CCl 4 yang  timbul  disebabkan  karena  terbentuknya  senyawa  radikal  bebas  yang dapat  merusak  membaran  sel.  Dalam  hati  CCl 4 akan  dimetabolisme  oleh  sitokrom  P450 membentuk senyawa radikal bebas triklorometil (CCl 3 * ), kemudian senyawa ini akan dengan cepat bereaksi terhadap oksigen sehingga membentuk radikal triklorometil peroksil (CCl 3 O 2 -* ) yang bersifat sangat reaktif dan dapat mengoksidasi asam-asam lemak tak jenuh pada membran, sehingga  menimbulkan  peroksidasi  lipid  yang  menyebabkan  kerusakan  pada  struktur  dan fungsi dari membran sel (Halliwel dan Gutteridge, 2007; Noer, 1996).
Kerusakan akibat radikal bebas yang terjadi pada membran sel, khususnya sel hati dapat mempengaruhi protein intra sel, diantaranya enzim. ALT  dan AST merupakan enzim intra sel yang banyak terdapat pada sel hati dan merupakan enzim plasma non fungsional. Enzim plasma non  fungsional  adalah  enzim  yang  secara  fisiologis  tidak  melakukan  fungsi  di  jaringan  dan kadarnya  sangat  rendah  di  plasma  dibandingkan  dengan  kadar  di  jaringan.  Jika  terjadi kerusakan pada jaringan, maka enzim ini akan memasuki sirkulasi darah dengan kadar yang signifikan, sehingga hal ini dapat dijadikan dasar pemeriksaan yang mengindikasikan adanya kerusakan  sel  (Murray et  al ,  2009).    Penelitian  ini  diharapkan  dapat  menjadi  masukan  yang berguna bagi masyarakat dan dapat melengkapi fitofarmaka Indonesia.

## METODOLOGI Alat dan Bahan
Bahan yang digunakan adalah daun matoa ( Pometia pinnata) yang diambil dari Balai Penelitian  Tanaman  Rempah  dan  Obat  (BALITRO).  Sampel  daun  tanaman  Matoa  ( Pometia pinnata ) diindentifikasikan di Herbarium Bogoriense Bidang Botani Pusat Penelitian Biologi, Lembaga  Ilmu  Pengetahuan  Indonesia  (LIPI)  Bogor,  untuk  memastikan  keaslian  jenis tumbuhan. Pembuatan ekstrak menggunakan metode Ekstraksi Maserasi dengan pelarut etanol 70%. Curcuma (SOHO) sebagai standar pembanding dan Karbon Tetraklorida (CCl 4 ) sebagai penginduksi.  Pelarut  yang  digunakan  adalah  Aquadestilata,  Etanol,  Minyak  Kelapa. Pemeriksaan aktivitas ALT dan AST menggunakan Kit ALT/AST (DyaSis®). Hewan uji yang digunakan adalah tikus putih jantan galur Spraygue Dawley dengan berat 150 sampai 250 gram yang  diperoleh  dari  Blitar  yang  sudah  diperiksa  kesehatannya  oleh  Dinas  Peternakan Pemerintah Provinsi Jawa Timur.
Cara kerja Pembuatan ekstrak Simplisia  daun  Matoa  ( Pometia  pinnata )  diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi dengan pelarut  etanol 70%. Daun yang telah  kering, dihaluskan dan ditimbang kurang lebih sebanyak 500 g kemudian dimaserasi dengan etanol 70%, volume pelarut etanol harus melebihi batas simplisia (±2 cm) dari permukaan simplisia). Tutup wadah maserasi dengan alumunium foil dan diaduk dengan stirer selama 3 jam, lakukan maserasi selama 24 jam, kemudian saring
dengan kertas saring untuk memisahkan filtrate (1) dengan residu. Proses maserasi dilakukan berulang dengan 2 kali penggantian pelarut pada residu hasil penyaringan. Selanjutnya filtrat (1 & 2) hasil maserasi digabungkan dan diuapkan pelarutnya (evaporasi) menggunakan Rotary Evaporator, sehingga diperoleh ekstrak kental daun Matoa ( Pometia pinnata ).

## Pemeriksaan karakteristik ekstrak
Ekstrak etanol 70% daun Matoa ( Pometia pinnata) yang diperoleh dihitung randemen ekstrak, pemeriksaan organoleptik dan dilakukan uji sisa pelarut, tujannya adalah memberikan jaminan bahwa selama proses tidak meninggalkan sisa pelarut yang memang seharusnya tidak boleh ada, kemudian pemeriksaan kandungan kimia pada ekstrak meliputi alkaloid, flavonoid, tannin dan saponin.

## Perlakuan Kelompok Hewan Uji
Penelitian  ini  menggunakan  rancangan  acak  lengkap  masing-masing  30  ekor  tikus dibagi menjadi 6 perlakuan dalam 5 kali ulangan. Kelompok normal (KN) diberikan aquadest selama  5  hari  (hari  1-5);  sedangkan  kelompok  kontrol  negatif  (KKN)  dibuat  stres  oksidatif dengan Karbon Tetraklorida (CCl 4 ) dosis 0,05 mg/kg BB dalam 1 mL minyak kelapa selama 5 hari (hari 1-5); kelompok kontrol positif (KKP) diberikan CCl 4 dosis 0,05 mg/kg BB dalam 1 mL  minyak  kelapa  selama  5  hari  (hari  1-5)  dan  diberikan  larutan  pembanding  curcuma  81 mg/kg BB selama 10 hari  (hari 6-15); kelompok ekstrak dosis I (KE1) diberikan CCl 4 dosis 0,05  mg/kg  BB  dalam  1  mL  minyak  kelapa  selama  5  hari  (hari  1-5)  dan  diberikan  sediaan ekstrak etanol 70% daun matoa ( Pometia pinnata ) dosis I (100 mg/kg BB tikus) selama 10 hari (hari 6-16); kelompok ekstrak dosis II (KE2) diberikan CCl 4 dosis 0,05 mg/kg bb dalam 1 mL minyak kelapa selama 5 hari (hari 1-5) dan diberikan sediaan ekstrak etanol 70% daun matoa ( Pometia  pinnata )  dosis  II  (200  mg/kg  BB  tikus)  selama  10  hari  (hari  6-15);  dan  kelompok ekstrak dosis III (KE3) diberikan CCl 4 dosis 0,05 mg/kg BB dalam 1 mL minyak kelapa selama 5 hari (hari 1-5) dan diberikan sediaan ekstrak etanol 70% daun matoa ( Pometia pinnata ) dosis III (400 mg/kg BB tikus) selama 10 hari (hari 6-15). Pada hari ke-16, dilakukan pengambilan darah dan  pemeriksaan kadar  Alanin  aminotransferase (ALT) dan Aspartat  aminotransferase (AST).

## Pengambilan sampel darah
Darah diambil melalui vena jugularis, darah yang diperoleh ditampung di dalam tabung EDTA dan disentrifugasi dengan kecepatan 3000 rpm selama 10 menit. plasma yang diperoleh dari hasil sentrifugasi diambil atau dipisahkan menggunakan pipet.

## Penetapan aktivitas ALT dan AST (Dyasis®)
Penetapan aktivitas ALT dan AST berdasarkan reaksi enzimatik menggunakan reagen kit Dyasis® ALT. Larutan sampel berisi campuran reagen 1 (R1) dan reagen 2 (R2) dengan perbandingan 4 : 1, kemudian sebanyak 1000 μl reagen kit AST tersebut  direaksikan dengan 100 μl sampel, di vortex dan diinkubasi pada suhu 37 ºC selama 1 menit, selanjutnya sampel dibaca  absorbansinya  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  365 nm.

## Analisa Data
Data dianalisa menggunakan anova satu arah program SPSS. Jika data tidak terdistribusi normal atau tidak bervarians homogen maka digunakan metode Kruskal wallis.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  rendemen  ekstrak  yang  diperoleh  dari  proses  ekstraksi  sebesar  53,28%. Pemeriksaan  organoleptik  ekstrak  etanol  70%  daun  Matoa  ( Pometia pinnata)  secara organoleptik menunjukkan bahwa ekstrak memiliki konsistensi yang kental, berwarna coklat kehitaman,  berbau  khas  dan  berasa  pahit  kelat  dan  sedikit  berbusa.  Pemeriksaan  kadar  sisa pelarut  pada  ekstrak  etanol  70%  daun  Matoa  ( Pometia  pinnata )  adalah  0,01%.  Hal  ini
menunjukkan bahwa kadar pelarut etanol 70% yang tersisa dalam ekstrak hanya sebesar 0,01% sehingga  masih  memenuhi  persyaratan  batas  sisa  pelarut  etanol  yang  diperbolehkan  yakni menurut  FDA  ( Food  and  Drug  Administration )  adalah  0,5%.  Berdasarkan  hasil  skrining senyawa  fitokimia,  ekstrak  etanol  70%  daun  Matoa  ( Pometia  pinnata )  positif  mengandung beberapa  kelompok  senyawa  kimia,  seperti  senyawa  alkaloid,  saponin,  tanin,  terpenoid  dan khususnya  senyawa  flavonoid  yang  diduga  dapat  berkhasiat  sebagai  antioksidan.  Hasil pemeriksaan rata-rata aktivitas AST dan ALT Hati tikus pada gambar 1 dan gambar 2.
Gambar 1. Grafik perbandingan aktivitas ALT plasma darah
Berdasarkan  hasil  pemeriksaan  aktivitas  ALT  plasma  darah  Pada  gambar  1  terlihat aktivitas ALT plasma yang diperoleh dari kelompok KN adalah 46,69 U/L, aktivitas ALT pada KN lebih rendah dibanding aktivitas ALT pada KKN yang diinduksi CCl 4 , yaitu 70,69 U/L. Pada KKP yang diberikan Curcuma (SOHO) setelah pemberian CCl 4 dengan dosis 81 mg/Kg BB, aktivitas ALT plasma lebih rendah dibanding kelompok KKN, yaitu  48.6113 U/L. Pada KE1  yang  diberikan  ekstrak  etanol  70%  daun  Matoa  dengan  dosis  100  mg/Kg  BB  setelah pemberian CCl 4 , aktivitas ALT plasma darah yang diperoleh lebih rendah dibanding KKN yaitu 49,3877  U/L,  tetapi  lebih  tinggi  dibanding  KN.  Pada  KE2  dan  KE3  yang  diberikan  ekstrak etanol 70% daun Matoa dengan dosis 200 mg/Kg BB dan dosis 400 mg/Kg, memperlihatkan aktivitas  ALT  dalam  plasma  yang  lebih  rendah  dibanding  KKN  dan  hampir  sama  dengan aktivitas ALT pada KN, yaitu berturut-turut 46,0233 U/L dan  41.559 U/L.
Gambar 2. Grafik perbandingan aktivitas AST plasma darah Pada gambar 2 terlihat bahwa aktivitas AST plasma yang diperoleh dari KN, yaitu 64,31 U/L lebih rendah dari aktivitas AST pada KKN yang diinduksi CCl 4 , yaitu 99,35 U/L. Pada KKP yang diberikan Curcuma (SOHO) setelah pemberian CCl 4 dengan dosis 81 mg/Kg BB, aktivitas  AST  plasma  lebih  rendah  dibanding  KKN,  yaitu  70,45  U/L,  tetapi  lebih  tinggi dibanding  KN.  Pada  KE1  yang  diberikan  ekstrak  etanol  70%  daun  Matoa  dengan  dosis  100 mg/Kg  BB,  aktivitas  AST  plasma  darah  yang  diperoleh  lebih  rendah  dibanding  KKN  yaitu 66,23 U/L, sama halnya dengan KE2 dan KE3 yang diberikan ekstrak etanol 70% daun Matoa dengan dosis 200 mg/Kg BB dan dosis 400 mg/Kg dengan rata-rata aktivitas AST plasma darah
46,6918 70,6955 48,6113 49,3877 46,0233 41,559 0 20 40 60 80 KN KKN KKP KE 1 KE 2 KE 3 AK T IVIT AS AL T P L ASM A U/L KELOMPOK PERLAKUAN 64,31 99,35 70,45 66,23 64,31 58,07 0 50 100 150 KN KKN KKP KE 1 KE 2 KE 3 AK T IVIT AS AST P L ASM A U/L KELOMPOK PERLAKUAN
64,31 U/L dan 58,07 U/L yang memperlihatkan aktivitas AST lebih rendah dari aktivitas AST pada KKN.
Hasil  analisis  statistik  aktivitas  ALT  dan  aktivitas  AST  pada  plasma  darah menggunakan  ANOVA  menunjukkan  tingginya  aktivitas  ALT  dan  AST  plasma  darah  tikus pada  kelompok  tikus  yang  diinduksi  CCl 4 (KKN)  berbeda  bermakna  (p<0,05)  bila dibandingkan  dengan  KN.  Pada  KKP  yang  diberikan  curcuma  sebagai  pembanding  terdapat perbedaan bermakna aktivitas ALT dan aktivitas AST dengan KKN (p<0,05), sedangkan pada kelompok yang diberikan ekstrak etanol 70% daun Matoa ( Pometia pinnata) KE1, KE2, KE3 dengan  dosis  berturut-turut  100  mg/Kg  BB,  200  mg/Kg  BB  dan  400  mg/Kg  BB,  terlihat perbedaan  bermakna  (p<0,05)  tehadap  kelompok  KKN.  Tetapi  tidak  terdapat  perbedaan bermakna (p>0,05) dengan KN dan KKP.
Tingginya aktivitas ALT dan AST dipengaruhi karena banyaknya radikal bebas yang terbentuk dari hasil metabolisme CCl 4 yang menyebabkan kerusakan membran sel hati akibat peroksidasi  lipid,  sehingga  menyebabkan  kerusakan  struktur  membran  dan  permeabilitas membran sel hati terganggu.  Walaupun sel hati memiliki mekanisme pertahanan antioksidan endogen, tetapi karena tingginya stres oksidatif di dalam sel maka antioksidan endogen tidak dapat menahan kerusakan pada organ hati. Kerusakan pada sel-sel hati menyebabkan ALT dan AST  yang  banyak  terkandung  di  dalam  sel-sel  hati  akan  keluar,  sehingga  aktivitasnya  akan meningkat pada plasma. Dalam hati CCl 4 akan dimetabolisme oleh sitokrom P450 membentuk senyawa radikal bebas triklorometil (CCl 3 * ), kemudian senyawa ini akan dengan cepat bereaksi terhadap oksigen sehingga membentuk radikal triklorometil peroksil (CCl 3 O 2 -* ) yang bersifat sangat  reaktif dan dapat  mengoksidasi  asam-asam  lemak tak jenuh pada membran, sehingga menimbulkan  peroksidasi  lipid  yang  menyebabkan  kerusakan  pada  struktur  dan  fungsi  dari membran sel (Halliwel dan Gutteridge, 2007; Noer, 1996).
Kenaikan  aktivitas  ALT  dan  AST  dalam  plasma  dapat  disebabkan  oleh  sel-sel  yang kaya akan transaminase mengalami nekrosis atau hancur, sehingga enzim tersebut masuk ke dalam peredaran darah. Oleh karena itu, tingginya aktivitas ALT dan AST dalam plasma dapat dijadikan indikator adanya kerusakan sel, seperti sel hati (Halliwell dan Gutteridge, 2007; Noer, 1996).
Pemberian ekstrak etanol 70% daun Matoa menggunakan tiga dosis berbeda, yaitu 100, 200 dan 400 mg/Kg BB. Dari ketiga dosis tersebut semuanya menunjukkan penurunan aktivitas ALT  dan  AST  pada  plasma  hingga  mencapai  aktivitas  normal.  Sehingga  dapat  disimpulkan bahwa  ekstrak  etanol  70%  daun  Matoa  ( Pometia  pinnata )  memiliki  aktivitas  antioksidan sehingga dapat menekan stres oksidatif.

## PENUTUP
Pemberian ekstrak etanol 70% daun matoa dosis 100 mg/kg BB, 200 mg/kg BB dan 400 mg/kg  BB  dapat  menurunkan  aktivitas  ALT  dan  AST  pada  darah  tikus  putih  jantan  yang diinduksi  CCl 4 .  Penurunan  aktivitas  ALT  dan  AST  telah  terlihat  pada  pemberian  dosis  100 mg/kg BB dan aktivitas antioksidannya semakin meningkat hingga dosis 400 mg/kg BB.

## DAFTAR PUSTAKA
Faustina,  F.C..  (2013).  Major  Components  in  Matoa  Fruit  Peel  and  The  Antioxidant  and Antimicrobial Activity of Its Extract, Swiss German University.
Jayuska, A., Sayekti, E., Rahimah. (2013). Karakterisasi Senyawa Flavonoid Hasil Isolat dari Fraksi Etil Asetat Daun Matoa (Pometia pinnata)[skripsi]. Universitas Tanjung Pura.
Halliwell,  B.  dan  Gutteridge,  J.M.C.  (2007).  Free  Radicals  in  Biology  and  Medicine,  4 th ed. London, University Press, Oxford.
Kawamura, F., Shaharuddin, N.A., Sulaiman, O. Hashim, R., and Ohara, S. (2010). Evaluation on  Antioxidant  Activity,  Antifungal  Activity  and  Total  Phenol  of  11  Selected Commercial Malaysian Timber Species, JARQ 44 (3), 319-324.
Murray,  R.K.,  Granner,  D.K.  dan  Rodwell,  V.W.  (2006).  Biokimia  Harper  ed.  27,  Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Noer, H.M.S., dkk. (1996) Buku Ajar Ilmu Penyakit Dalam, Jilid I, edisi ketiga. Balai Penerbit FKUI, Jakarta. 224-332.
Rohdiana,  D.  (2001).  Aktivitas  Daya  Tangkap  Radikal  Polifenol  Dalam  Daun  Teh,  Majalah Jurnal Indonesia12, (1),53-58.
Roykhan, A. (2012). Efek Ekstrak Etanol Kulit Rambutan (Nephelium lappaceum L.) Terhadap Pencegahan  peningkatan  Kadar  Enzim  Transaminase  Pada  Tikus  Putih  (Ratus norvegicus)  Jantan  yang  Diinduksi  Karbon  Tetraklorida  (CCl 4 )  [Skripsi].Universitas Islam Indonesia, Yogyakarta.
Shivprasad,  H.N.  (2005).  In-vitro  models  for  antioxidant  activity  evaluation:  a  review. Pharmaceutical Rev,(3).
Thitilertdecha, N., Teerawutgulrag, A., Rakariyatham, N. (2008). Antioxidant and antibacterial activities of Nephelium lappaceum L. Extracts., LWT Food Sci. Tecnol, 41, 2028-2035.