## Seleksi Uji Antagonis Bakteri Dan Jamur Endofit Dari Patogen Tanaman Karet
Sri Wahyuni (1), Nomi Noviani (2), Leni Handayani (3)
1 Fakultas Pertanian, Universitas Muslim Nusantara Al Washliyah 2 Fakultas Pertanian, Universitas Muslim Nusantara Al Washliyah 3 Fakultas Pertanian, Universitas Muslim Nusantara Al Washliyah
sriwahyuni@umnaw.ac.id (1), nominoviani@umnaw.ac.id (2), lenihandayani@umnaw.ac.id (3)

## ABSTRAK
Pengendalian  hayati  terhadap  patogen  merupakan  cara  pengendalian  yang  sedang  dikembangkan  saat  ini diantaranya  dengan  memanfaatkan  bakteri  dan  jamur  endofit.  Bakteri  maupun  Jamur  endofit  dapat menstimulasi  zat  pengatur  tumbuh,  memfiksasi  nitrogen,  dan  meningkatkan  induksi  ketahanan  terhadap tumbuhan  .  Bakteri  endofit  mampu  menghasilkan  senyawa  yang  dapat  digunakan  sebagai  ketahanan  kimia melawan mikroba patogenik yang menginfeksi tanaman.Hasil isolasi yang dilakukan dari akar tanaman karet rakyat, diperoleh 4 (empat) isolat bakteri dengan kode B01, B02, B03, B04 dan 2(dua)  isolat jamur dengan kode  J01, J02,  J03.  Hasil  yang  diperoleh  secara  invitro  dengan  pengujian  Bakteri  dan  Jamur  Endofit  di  uji secara  antagonis  dengan  patogen  akar  dari  tanaman  karet  di  peroleh  data  yaitu  Bakteri  Endofit  yang significant  diukur  dari  rerata  zona  hambat  yang  di  hasilkan  yaitu  B01  sebesar  17,65  mm  dan  B04  sebesar 18,75  mm  .  Sedangkan  Jamur  Endofit  yang  significant  dari  pengukuran  pertumbuhan  koloni  antara  jamur endofit dan Jamur Patogen yaitu J02 rata-rata pertumbuhan koloninya mencapai 52.19 mm sedangkan jamur J03 pertumbuhannya 52.60 mm.
Kata Kunci : Bacteri Endofit , Antagonis, Patogen

## ABSTRACT
Biological control of pathogens is a way of control that is currently being developed, including by utilizing endophytic bacteria and fungi. Bacteria and endophytic  fungi can  stimulate  growth regulators, fix  nitrogen, and increase the induction of plant resistance. Endophytic bacteria are able to produce compounds that can be used as chemical resistance against pathogenic microbes that infect plants. The results of isolation carried out from  the  roots  of  smallholder  rubber  plants,  obtained  4  (four)  bacterial  isolates  with  code  B01,  B02,  B03, B04 and 2 (two) fungal isolates with codes J01, J02, J03. Results obtained in vitro by testing for Bacteria and Endophytic  Fungi  were  tested  antagonically  with  root  pathogens  from  rubber  plants  obtained  data  that  is significant Endophytic Bacteria measured from the average inhibited zone produced ie B01 by 17.65 mm and B04 by 18.75 mm. While the significant endophytic fungi from the measurement of colony growth between endophytic fungi and pathogenic fungi, namely J02, the average colony growth reached 52.19 mm while J03 fungi grew 52.60 mm
Keywords : Endophytic Bacteria, Antagonist, Pathogenic

## I. PENDAHULUAN

## 1. Latar Belakang
Karet  ( Hevea  brasiliensis Muell.  Arg)  merupakan  salah  satu  komoditas  perkebunan  yang  penting baik  untuk  lingkup  Indonesia  maupun  bagi  internasional.  Indonesia  pernah  menguasai  produksi karet dunia dengan mengungguli produksi negara-negara lain. Tanaman karet merupakan salah satu komoditi perkebunan yang menduduki posisi cukup penting sebagai sumber devisa non migas bagi Indonesia.  Salah  satu  masalah  utama  dari  budidaya  tanaman  pertanian  di  Indonesia  ialah  adanya serangan  fungi  Patogen  terhadap  berbagai  tanaman  antara  lain  tanaman  cabai,  kacang-kacangan, coklat,  karet  dan  kelapa  sawit.  Serangan  fungi  patogen  tersebut  mengakibatkan  kerugian  yang sangat besar bagi para petani. Untuk itu diperlukannya suatu penanggulangan yang efektif. Selama ini telah  banyak dilakukan pengendalian fungi patogen pada tanaman secara kimiawi, akan tetapi menimbulkan  efek  negatif  terhadap  lingkungan.  Usaha  penanggulangan  penyakit  tanman  secara biologis  mempunyai  peluang  yang  cukup  besar  karena  organismenya  telah  tersedia  di  alam  dan aktivitasnya  dapat  distimulasi  dengan  memodifikasi  lingkungan  maupun  tanaman  inang. Keuntungan dalam menggunakan mikroorganisme antagonis sebagai pengendalian biologis antara lain  :  aman  terhadap  lingkungan,  tidak  ada  efek  residu,  aplikasinya  bersifat  berkelanjutan  karena yang  digunakan  organisme  hidup  yang  dapat  memperbanyak  diri  sehingga  dapat  mengurangi aplikasi  yang  berulang-ulang.  Penelitian  bakteri  endofit  telah  dilakukan  lebih  dari  20  tahun  yang lalu. Hampir setiap bagian tanaman ditemukan adanya jamur endofit, baik pada daun,akar maupun batang.  Dalam  beberapa  tahun  terakhir,  pengaplikasian  mikrobe  endofit  sebagai  pengendali biologis  telah  menjadi  alternatif  untuk  menggantikan  peran  pengendali  kimia  seperti  pestisida. Penggunaan  agen  biologis  ini  secara  alami  mampu  mengendalikan  populasi  hama,  meningkatkan produksi  tanaman  dan  merupakan  pilihan  yang  baik  bagi  resistensi  penyakit  dan  juga  ramah lingkungan.Tanaman  tingkat  tinggi  mengandung  beberapa  mikroba  endofit  yang  menghasilkan metabolit  sekunder  sebagai  bentuk  pertahanan  terhadap  mikroba  patogen.  Potensi  cendawan endofit  cukup  besar  untuk  dikembangkan  sebagai  agens  pengendali  hayati,  karena  cendawan  ini hidup  dalam  jaringan  tanaman  sehingga  berperan  langsung  dalam  menghambat  perkembangan pathogen dalam tanaman , dan meningkatkan pertumbuhan tanaman. Cendawan endofit melindungi tanamandari  serangan  patogen  melalui  mekanismekompetisi,  induksi  resistensi,  antagonisme,dan mikoparasit  .  Cendawan  inijuga  dapat  menginduksi  respon  metabolism  inang,  sehingga  menjadi resisten  terhadappatogen  tanaman  sehingga  produksimeningkat.  Pengendalian  hayati  terhadap patogen  merupakan  cara  pengendalian  yang  sedang  dikembangakan  saat  ini  diantaranya  dengan memanfaatkan  bakteri  endofit.  Bakteri  endofit  dapat  menstimulasi  zat  pengatur  tumbuh, memfiksasi  nitrogen,  dan  meningkatkan  induksi  ketahanan  terhadap  patogen  tumbuhan  .  Bakteri endofit  mampu  menghasilkan  senyawa  yang  dapat  digunakan  sebagai  ketahanan  kimia  melawan mikrob  patogenik  yang  menginfeksi  tanaman  .  Bakteri  endofit  asal  tomat  memiliki  senyawa siderofor,  hidrogen  sianida,  asam  salisilat  dan indoleacetic  acid .  Bakteri Pseudomonas , Bacillus, Klebsiella dan Citrobacter memilikisifat  antagonistik  terhadap Fusarium sp  .Dari  uraian  diatas penulis  tertarik  untuk  melakukan  Isolasi  dan  uji  antifungal  bakteri  dan  jamur  endofit  dari  akar tanaman karet.
2. Perumusan Masalah
Rumusan masalah dari penelitian ini adalah  :
1. Apakah tanaman karet  memiliki keragaman mikroba endofit (bakteri dan jamur) pada Tanaman Karet ?
2.  Apakah  Keragaman  mikroba  endofit  (bakteri  dan  jamur)  mampu  menghambat  serta mengendalikan penyebab patogen ?
3. Tujuan Penelitian
Tujuan  penelitian  adalah  : Untuk  mendapatkan  mikroba  endofit  (bakteri  dan  jamur)  pada tanaman karet yang potensial sebagai agens hayati terhadap patogen tanaman karet.
4. Manfaat Penelitian
Manfaat penelitian ini adalah :
1.  Isolat  bakteri  dan  Jamur  endofit  yang  diisolasi  dari  tanaman  karet  sangat  potensial  untuk dikembengkan secara invivo dalam mengendalikan Patogen.
2. Isolat endofit yang potensial merupakan kultur yang alami yang dapat dijadikan bakterisida dan fungisida untuk mengendalikan patogen tanaman karet.

## II. METODE

## Tempat dan Waktu
Penelitian  ini  akan  dilaksanakan  di  Laboratorium  FMIPA-  Farmasi  Universitas  Muslim Nusantara Al Washliyah Medan.

## Rancangan Penelitian atau Model
Model  Penelitian  ini  menggunakan  Metode  Oposisi  secara  Langsung  dengan  menguji mikroba endofit  yang diperoleh dari  tanaman karet dan di uji secara antagonis dengan jamur  patogen.  Selanjutnya  Uji  antagonis  dianalisis  dengan  menggunakan  uji  T  pada taraf  kesalahan  5%  (0,05).  Penggunaan  uji  T  bertujuan  untuk  membandingkan kemampuan  tumbuh  dari  Mikroba  Endofit  dan  Patogen  pada  media  uji  antagonis  dan pada  media  kontrol  sehingga  dapat  diketahui  apakah  setiap  mikroba  endofit  yang didapat mampu menghambat pertumbuhan  patogen .

## Bahan dan Peralatan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  Organ  Tanaman  Karet  Sehat  (Akar, Batang,  dan  Daun),  Media  Biokimia  (NA,  PDA,  TSIA,SCA,  Pewarnaan  Gram),  Alkohol 70%,  dan  Alat  yang  digunakan  adalah  Cakram,  Cawan  Petri,  Jarum  Ose,  Bunsen, Inkubator, Autoklaf

## Tahapan Penelitian
1. Isolasi Bakteri dan Jamur Endofit Dari Tanaman Karet
Isolasi  bakteri  endofit  dari  akar,  batang  dan  daun  dilakukan  dengan  metode  sterilisasi permukaan  menurut  metode  Radu  &  Kqueen  (2002).  Sampel  yang  diambil  dari  lokasi dimasukkan  ke  dalam  plastik  diletakkan  di  dalam  termos  yang  berisi  es  batu,  kemudian sampel  dibawa ke laboratorium untuk isolasi bakteri dan Jamur endofit. Tahap awal yang dilakukan  adalah  mencuci  akar  dengan  air  mengalir  selama  20  menit.  Sterilisasi  bagian permukaan  akar,  batang  dan  daun  dilakukan  dengan  cara  merendamnya  di  dalam  larutan secara berturut-turut: etanol 75% selama 2 menit, larutan sodium hipoklorit 5,3% selama 5 menit  dan  etanol  75%  selam  30  detik.  Selanjutnya  akar  dibilas  dengan  akuades  steril, setelah kering bagian ujung kiri dan kanan akar dipotong 1 cm, kemudian masing-masing akar, batang dan daun dipotong membujur dan diletakkan di permukaan media NA (untuk bakteri) dan PDA (untuk Jamur) yang telah dicampur dengan antibiotik ketokonazole (0,3 g/100  ml)  dengan  posisi  bekas  potongan  ke  arah  media,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu ruang  selama  5  hari.  Koloni  yang  muncul  disubkultur  ke  media  NA  dan  PDA  yang  baru untuk dimurnikan.
2. Karakterisasi Jamur  Endofit  Tanaman Karet
Isolat bakteri yang diperoleh dari akar, batang dan daun dikarakterisasi secara morfologi meliputi bentuk morfologi, warna spora, bentuk hifa
3. Uji Antibakteri dan Antifungal Bakteri dan Jamur Endofit Tanaman Karet
Uji  antagonis  dilakukan  untuk  melihat  kemampuan  Bakteri  dan  Jamur  endofit  dalam menghambat  pertumbuhan    patogen.  Biakan  bakteri  dan  jamur  endofit  yang  diperoleh, selanjutnya  di  lakukan  pengujian  antibakteri  dan  antifungi.  Untuk  pengujian  antibakteri, mikroba  endofit  yang  diperoleh  diinokulasikan  ke  media  NA  (bakteri)  dan  PDA  (Jamur) untuk  dilakukan  uji  tantang  dengan  patogen  .  Patogen  kultur  jamur  patogen  yang  sudah diremajakan  diambil  dengan cork  borer ,  lalu  diinokulasikan  pada  bagian  tengah  media modifikasi PDA + YE 1% dengan jarak 3,5 cm dari cakram tempat inokulum isolat bakteri lalu  biakan  tersebut  diinkubasi  selama  72  jam  pada  suhu  ruang.  Pengujian  daya  hambat isolat  bakteri  dan  jamur  endofit  terhadap  jamur  patogen,  menggunakan  metode  difusi
cakram kertas sesuai dengan metode Kirby-Baur (Mishra et al ., 2006; Kulsuntiwong et al ., 2008).

## III. HASIL

## Isolasi dan Karakterisasi Bakteri dan Jamur Endofit  Tanaman Karet
Hasil isolasi yang dilakukan dari  tanaman karet rakyat, diperoleh 4 (empat) isolat bakteri dengan  kode  B01,  B02,  B03,  B04  dan  2(dua)    isolat  jamur  dengan  kode  J01,  J02,  J03. Karakterisasi  yang  dilakukan  pada  isolat  bakteri  meliputi  bentuk  morfologi  sel,  bentuk koloni  dan  penataan  serta  uji  biokimia.  Hasil  pengamatan  morfologi  dan  uji  biokimia terhadap isolat yang diisolasi dapat dilihat pada Tabel di bawah ini :
Tabel 1. Karakterisasi Morfologi Koloni dan Sel Isolat Bakteri Endofit
Gambar 1 Isolat Bakteri Endofit Hasil Isolasi Dari  Tanaman Karet.

## Kemampuan Antagonis Bakteri Endofit terhadap Fungi patogen Tanaman
Isolat  bakteri  yang  berpotensi  menghambat  jamur  pada  tahapan  isolasi,  selanjutnya digunakan  pada  pengujian  antagonis,  untuk  melihat  kemampuannya  dalam    menghambat pertumbuhan  jamur  patogen.  Jamur  patogen  yang  digunakan  yaitu: R.  Microporus .  Dari Hasil pengujian antifungal Bakteri Endofit Akar Tanaman Karet,
Dari  hasil  pengujian  antagonis  dari  hari  ketiga  sampai  hari  ketujuh  diperoleh  data  isolat B01 dan isolat B04 menunjukkan rerata zona hambat yang significant sampai hari ketujuh. B01  zona  hambat  pada  hari  ketujuh  sebesar  17,65  mm  dan  B04  sebesar  18,75  mm.  Dari data  diatas  diperoleh  bahwa  B01  dan  B04  memiliki  kemampuan  daya  hambat  dalam mengendalikan  jamur  patogen  pada  akar  tanaman  karet.  MenurutMuthukumar  et  al. (2010),Senyawa  yang  berhasil  diketahui  berperan  dalam  mengendalikan  patogen  adalah asam  salisilat,  siderofor,  dan  hidrogen  sianida.Bakteri  yang  memiliki  kemampuan antibiosis  biasanya  memiliki  senyawa  yang  dapat  mengganggu  pertumbuhan  morfologis maupun  fisologis  cendawan.  Menurut  Purwantisari  et  al.  (2005),  ada  bebarapa  cara penghambatan  serangan  cendawan  patogen  oleh  bakteri.  Pertama,  bakteri  menghasilkan senyawa  bioaktif  yang  dapat  mendegradasi  komponen  struktural  cendawan.  Senyawa tersebut mendegradasi dinding sel cendawan. Menurut Kaaria et al. (2012), metabolit yang
Isolat  MorfologiKoloni MorfologiSel Gram Warna Bentuk Tepi Elevasi Bentuk  Penataa n B01 Putih Tidak beraturan Bergelo mbang Datar Kokus Mono - B02 Krem Tidak Beraturan Rata Datar Batang  Mono + B03 Krem Tidak Beraturan Bergelo mbang Datar Kokus Mono + B04 Kuning  Tidak Beraturan Berbelah  Cembung  Kokus Mono - A B C
D
Wahyuni  S,  Noviani  N,  Handayani  L  :  Seleksi  dan  Uji  Antagonis  Bakteri  dan  Jamur Endofit Dari Patogen Tanaman Karet
dihasilkan  bakteri  endofit  tanaman  mampu  menghambat  patogen.  Hasil  analisis menggunakan  kromatografi  menunjukkan  bahwa  senyawa  metabolit  yang  terkandung berasal  dari  kelompok  amida,  asam,  quinin,  derivate  indol,  steroid,  azole,  alkohol  dan hidrokarbon.
hasil pengujian antagonis dapat terlihat pada tabel berikut :
Gambar 2 Isolat Jamur  Endofit Hasil Isolasi  Tanaman Karet.

## Tabel 3. Zona Hambat Uji Antagonis Isolat Bakteri Endofit dengan Jamur Patogen
Isolat Jamur Persentase daya hambat hari ke- 2 3 4 5 6 7 J01 Rigidoporus microsporus 0.92a 15.82c 15.90c 15.92c 15.93c 15.93c J02 Rigidoporus microsporus 0.80a 8.57b 28.40d 35.20d 47.06e 52.19e J03 Rigidoporus microsporus 0.75a 15.83c 15.90c 35.46d 38.48d 52.60e
Berdasarkan  Tabel  3  diketahui  bahwa  perlakuan  J02  dan  J03  memiliki  aktifitas pertumbuhan  jamur  yang  significant  untuk  mengendalikan  jamur  patogen.  Hal  tersebut terlihat  dari    pertumbuhan  mulai  hari  ke  dua  sampai  hari  ketujuh  aktifitas  pertumbuhan jamur  endofit  yaitu  J02  sampai  hari  ketujuh  rara-rata  pertumbuhan  koloninya  mencapai 52.19 sedangkan jamur J03 pertumbuhannya 52.60. Untuk J01 pertumbuhan jamur sampai hari ketujuh tidak menunjukkan pertumbuhan yang sangat sigificant. Hal ini kemungkinan disebabkan  karena  jamur  patogen  menghambat  ruang  gerak  dan  kalah  saing  untuk berinteraksi dengan jamur patogen.

## Gambar 3. Isolat Jamur Endofit Hasil Isolasi Dari Akar Tanaman Karet.
Hal  ini  sesuai  dengan  Soesanto  (2008)  yang  menyatakan  bahwa  persaingan  akan  nutrisi memegang  peranan  utama  pada  hampir  semua  agenssi  pengendali  hayati.  Disamping persaingan  akan  nutrisi  juga  persaingan  ruang  hidup.  Dari  data  tersebut  dapat  terlihat bahwa  pertumbuhan  agens  antagonis  yang  berasal  dari  rhizosfer  dan  jaringan  tanaman
A B
C
A B C
memiliki  pertumbuhan  cepat  dan  dapat  digunakan  sebagai  agens  hayati.  Hal  ini  sesuai dengan  Carrol  (1998)  yang  menyatakan  bahwa  pada  umumnya  jenis  agens  hayati  yang dikembangkan  adalah  mikroba  alami,  baik  mikroba  yang  hidup  di  tanah,  air,  bahan organik, dan jaringan tanaman

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian ini adalah :
1. Diperoleh  4  isolat  bakteri  dengan  kode  (B01,B02,B03  dan  B04)  dan  3  isolat  Jamur dengan kode (J01,J02 dan J03).
2. Bakteri Endofit yang significant diukur dari rerata zona hambat yang di hasilkan yaitu B01 zona hambat pada hari ketujuh sebesar 17,65 mm dan B04 sebesar 18,75 mm.
3. Jamur  Endofit  yang  significant  dari  pengukuran  pertumbuhan  koloni  antara  jamur endofit  dan  Jamur  Patogen  yaitu  J02  sampai  hari  ketujuh  rara-rata  pertumbuhan koloninya mencapai 52.19 mm sedangkan jamur J03 pertumbuhannya 52.60 mm.
4. Bakteri  dan  Jamur  Endofit  yang  significant  mengendalikan  jamur  patogen  akar  putih dapat dilakukan pengujian lanjutan secara teknik invivo

## DAFTAR PUSTAKA
Away, Y. 1985. Evaluasi Pengaruh Beberapa Marga Mikroorganisme pada Fermentasi Biji Kakao Terhadap Mutu Cita rasa Indeks Fermentasi. Tesis. ITB. Bandung.
Carrol  G.  C.  1988.  Fungal  Endophytes  in  Stems  and  Leaves.  FromLatent  Pathogens  to Mutualistic Symbiont. Ecology. 69: 2-9
Girsang. W. 2009. Dampak Negatif Penggunaan Pestisida. Diakses dari https://usitani.wordpress.com/2009/02/26/dampak-negatif-penggunaanpestisida/.
Kurnia, et al. 2014. Penggunaan jamur endofit untuk mengendalikan Fusarium oxysporum f.sp. capsici dan Alternaria solani secara in Vitro Liani E. (Pathology Group). 2015. Fungi Endofit. Dikutip dari http://tgc.lk.ipb.ac.id/2015/05/18/fungi-endofit/#.
Yulianti  T.  2012.  Menggali  Potensi  Endofit  untuk  Meningkatkan  Kesehatan  Tanaman Tebu  Mendukung  Peningkatan  Produksi  Gula  Revealing  the  Potency  of  Endophyte to  Improve  Sugarcane  Health  Supporting  Acceleration  of  Sugar  Production. Perspektif  Vol.  11  No.  2  /Des  2012.  Hlm  111  –  122  ISSN:  1412-8004.  Balai Penelitian Tanaman Pemanis dan Serat.
Accepted Date Revised Date Decided Date Accepted to Publish 10 Desember 2022 13 Desember 2022 20 Desember 2022 Ya