ISOLASI DAN UJI DAYA HAMBAT BAKTERI ENDOFIT ALGA HIJAU ( Ulva Lactuca) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus areus DAN Salmonella thyphi
Dwi Ariyanti 1* dan Nur Arsita 1
1* Fakultas Ilmu dan Teknologi Hayati Universitas Teknologi Sumbawa *Corresponding Author email: dwi.ariyanti@uts.ac.id

## Diterima
Bulan Mei 2023

## Diterbitkan
Bulan Juli 2023 Keyword: Bakteri Endofit, Ulva lactuca,
Antibakteri, Staphylococcus aureus,
Salmonella thyphi

## Abstrak
Bakteri endofit merupakan bakteri yang hidup dan bersimbiosis dalam jaringan tanaman.  Bakteri  endofit  dapat  menghasilkan  senyawa  metabolit  sekunder  seperti alkaloid, terpenoid, steroid, flavonoid, kuinon dan fenol, sama dengan tanaman inangnya. Berbagai  metabolit  sekunder  tersebut  memiliki  potensi  untuk  dikembangkan  sebagai senyawa  antibakteri  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  berbagai  bakteri  patogen. Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi bakteri endofit dari sampel alga hijau ( Ulva lactuca ) yang yang  diduga  mampu  menghasilkan  senyawa antibakteri  terhadap bakteri patogen Staphylococcus aureus dan Salmonella thyphi . Tahapan penelitian ini meliputi pengambilan sampel, persiapan isolasi dan kultur bakteri endofit, isolasi bakteri endofit dari Ulva lactuca dan enumerasi, identifikasi dan purifikasi bakteri endofit, serta tahapan pengujian  aktivitas  antibakteri.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  sejumlah  6  isolat murni  yang  diberi  kode  UL-01,  UL-02,  UL-03,  UL-04,  UL-05  dan  UL-06  berhasil diidentifikasi  dari  sampel  alga Ulva  lactuca .  Pengujian  aktivitas  antibakteri  diperoleh isolat bakteri endofit yang memiliki zona hambat paling besar adalah isolat UL-03 dengan besar diameter zona hambat 13 mm terhadap Salmonella thyphi dan UL-05 dengan besar diameter  zona  hambat  3,67  mm  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus .  Dari  6  isolat bakteri diperoleh 3 isolat potensial yang dapat dikembangkan sebagai kandidat antibakteri terhadap patogen Staphylococcus aureus dan Salmonella thyphi.

## PENDAHULUAN
Kebutuhan  penggunaan  antibiotik  di seluruh  dunia  mencapai  kurang  lebih  40.000 ton/tahun  (Herwin,  2018),  baik  dalam  bidang industri  pangan,  pakan,  pertanian,  kesehatan, biokimia, genetika, dan biologi molekuler.
Kebutuhan ini akan terus meningkat seiring dengan dampak  peningkatan  angka  resistensi  terhadap antibiotik  tertentu,  yang  disebabkan  praktik  yang tidak  benar.  Pratiwi  (2009)  melaporkan  bahwa ketahanan  mikroorganisme  patogen  penyebab infeksi  seperti Staphylococcus,  Mycobacterium, Streptococcus dan  juga Salmonella terhadap antibiotik yang sudah ada semakin meningkat.
Kasus infeksi oleh bakteri patogen banyak disebabkan  dari  strain Staphylococcus  aureus dan Salmonella  thyphi (Ananda  Ramadhanty  et  al.,
2021).  Menurut  penelitian, Staphylococcus  aureus merupakan  golongan  bakteri  gram  positif  yang merupakan  patogen  utama  bagi  manusia.  Bakteri Staphylococcus aureus menginfeksi  jaringan tubuh manusia,  menyebabkan  terjadinya  infeksi  dengan ciri-ciri  peradangan,  nekrosis  dan  pembentukan
abses. Sumber infeksi yang disebabkan oleh bakteri ini  dapat  berasal dari  kontaminasi  luka  dan  infeksi pasca operasi (Fadia et al., 2020). Salmonella thyphi adalah  golongan  bakteri  gram  negatif  berbentuk batang  penyebab  demam  tifoid  (Azzahra  et  al., 2019).  Pengobatan  penyakit  infeksi  oleh  bakteri patogen dilakukan dengan menggunakan antibiotik. Akan tetapi, pada praktiknya penggunaan antibiotik banyak  tidak  terkontrol  sehingga  dalam  jangka panjang  berpotensi  menimbulkan  masalah  baru yaitu  peningkatan  resistensi  bakteri  patogen terhadap  antibiotik,  sehingga  usaha  pencarian kandidat  sumber  antibiotik  baru  menjadi  penting untuk dilakukan.
Bakteri  endofit  memiliki  potensi  yang besar  untuk  dikembangkan  sebagai  salah  satu sumber  material  antibiotik.  Bakteri  endofit  hidup dan berkembang pada jaringan tumbuhan dan alga, dan  menghasilkan  berbagai  senyawa  metabolit sekunder  yang  diduga  memiliki  sifat  dan  fungsi sebagai antimikroba sama seperti tanaman inangnya (Adriani, 2015). Selain itu, sifat bakteri endofit yang mudah  untuk  dikembangbiakkan  dan  siklus
hidupnya  yang  pendek  mampu  menghasilkan senyawa  bioaktif  dalam  jumlah  yang besar  dengan kurun  waktu  yang  singkat  (Adriani,  2015). Penelitian  oleh  Sirri  et  al.  (2022)  tentang  isolasi bakteri  endofit  penghasil  antibakteri  yang  berasal dari  alga Gracilaria  verrucosa ,  didapatkan  total  6 isolat  bakteri  endofit,  dan  2  isolat  diantaranya memberikan aktivitas antibakteri. Penelitian serupa terhadap alga Euchemua cattoni juga mendapatkan total  6  isolat  mikroba  endofit,  dan  5  diantaranya memiliki  aktivitas  antibakteri  (Aulia,  2019). Berbagai  paparan  di  atas  menunjukkan  potensi bakteri  endofit  untuk  pengembangan  sebagai material antibiotik.
Indonesia  memiliki  sumber  daya  alam  hayati  laut yang potensial untuk dikembangkan dan dimanfaatkan,  termasuk  alga  (Yulianti  &  Baso Manguntungi,  2018).  Persebaran  alga  terdapat hampir  di  seluruh  wilayah  perairan  di  Indonesia, termasuk  di  Kabupaten  Sumbawa.  Kawasan pengembangan  alga  sudah  berkembang  pesat  di Kabupaten Sumbawa sejak tahun 2010 sampai 2014. Terdapat  6  kawasan  pengembangan  budidaya  alga di  Kabupaten  Sumbawa  yaitu  wilayah  Timur Labuan  Aji-Tarano,  Labuan  Sangoro-Maronge, Labuan  Kuris-Lape,  Labuan  Terata-Lape,  Tanjung Bale-Moyo Hilir dan Pulau Medang  Labuan Badas (Suniada  dan  Realino,  2014).  Pemanfaatan  alga  di Kabupaten  Sumbawa  sejauh  ini  untuk  komoditas industri pangan dan sektor pendukung yang terkait. Pengembangan  riset  alga  fokus  pada  pemanfaatan mikroba  endofit  dari  alga  lokal  Sumbawa  untuk kandidat  potensial  materi  antibiotik  belum  banyak dilakukan. Di sisi lain, semakin meningkatnya kasus infeksi  bakteri,  yang  sejalan  dengan  meningkatnya angka  resistensi,  menunjukkan  perlu  dilakukannya penelitian  untuk  mendapatkan  kandidat  antibiotik baru khususnya dari bahan alami. Hal ini mendasari dilakukannya penelitian eksplorasi mengenai potensi dari bakteri endofit alga hijau ( Ulva lactuca ) dalam menghasilkan senyawa antibakteri.

## LANDASAN TEORI
Alga  merupakan  kelompok  organisme  yang tergolong  dalam  kingdom  Protista,  memiliki kemiripan dengan tumbuhan, struktur tubuh berupa tallus dan mengandung pigmen fotosintesis. Habitat alga sebagian besar berada di perairan laut, tumbuh dengan cara  menempel  pada  substrat  ( holdfast ) (Utami  &  Sayogo,  2021).  Alga  diklasifikasikan  ke dalam beberapa kelompok berdasarkan struktur dan pigmen  warnanya,  yaitu  alga  hijau  ( Chlorophyta ), alga  merah  ( Rhodophyta )  dan  alga  cokelat ( Pheophyta ).  Alga  memiliki  peranan  yang  penting dalam  menjaga  kestabilan  ekosistem  laut,  sebagai
tempat  hidup  dan  berlindung  berbagai  biota  laut. Indonesia menjadi salah satu negara penghasil alga dengan kualitas yang baik (Utami & Sayogo, 2021).
Komposisi  nutrien  dalam  alga  terdiri  dari polisakarida,  vitamin  A,  B 1 ,  B 2 ,  B 3 ,  B 9 ,  C  dan  E. Selain  itu,  alga  juga  mengandung  56  jenis  mineral dan trace -mineral  yang  penting  bagi  tubuh.  Kadar protein dalam alga cukup signifikan yaitu mencapai 48%, sedangkan kadar lemak hanya berkisar antar 1- 5% dari berat kering. Alga juga diketahui kaya akan senyawa  bioaktif  serta  pigmen  yang  sangat bermanfaat  bagi  kesehatan,  seperti  karotenoid  ( - dan  -kroten, fukoxantin), MAA ( mycosporine-like amino  acids )  dan  taurin,  katekin  ( epigalokatekin,
epigalokatekin
gallate ), phlorotannins
( phloroglucinol , eckol ) dan tokoferol (Merdekawati, 2011).
Bidang pengobatan
tradisional menggunakan  alga  sebagai  bahan  penyusun  obat untuk  penyakit  batuk,  asma,  bronkhitis,  TBC, cacingan,  sakit  perut,  demam,  rematik,  sampai dengan  obat  untuk  meningkatkan  daya  seksual (Ismail, 2010).  Beberapa jenis alga digunakan untuk pengobatan  penyakit  ginjal,  kandung  kemih  dan paru-paru.  Alga  coklat  digunakan  sebagai  obat antikoagulan  darah  karena  memiliki  kandungan senyawa Fucoidin dan sodium  laminarin  sulfat . Senyawa  bioaktif  yang  terdapat  dalam  alga  hijau diketahui  dapat  digunakan  sebagai  antibakteri (Regina et al., 2016).
Ulva  lactuca atau  selada  laut  ( sea  lettuce ) adalah  rumput  laut  yang  tergolong  dalam  divisi Chlorophyta ,  memiliki  sel-sel  yang  banyak mengandung  klorofil  sehingga  memberikan  warna hijau pada rumput laut ini (Dewi, 2018). Selada laut Ulva lactuca merupakan salah satu jenis makroalga hijau  yang  mempunyai  kandungan  antioksidan, antibakteri, antijamur dan antitumor.  Struktur Ulva lactuca memiliki  panjang  kurang  lebih  100  cm dengan ciri khas warna hijau apel terang, berbentuk seperti  daun  selada  berupa  lembaran  atau  helaian- helaian  tipis  dengan  tepi  bergelombang (Gambar 1). Alga Ulva lactuca bersifat eukariotik, memiliki klorofil sehingga dapat berfotosinteisis dan hidup di perairan  dangkal  terutama  di  pantai  yang  berbatu (Hasanela., dkk. 2020), dengan melekat, sessile atau mengambang  bebas.  Reproduksinya  menggunakan dua  metode,  yaitu  dengan  metode  seksual  dan fragmentasi thallus (Anggreni, 2020).
Gambar 1 Ulva Lactuca (Saad et al., 2021)
Alga Ulva  lactuca dapat  dikonsumsi  sebagai bahan pangan. Sejumlah 100 gram berat basah Ulva lactuca mengandung  air  18,7%;  protein  15-26%; lemak  0,1-0,7%;  karbohidrat  46-51%;  serat  2-5% dan  abu  16-23%.  Selain  itu, Ulva  lactuca mengandung vitamin B1, B2, B12, C, dan E. Alga Ulva  lactuca dapat tumbuh  dengan  baik  pada  pH 7,5-9; salinitas 29-31,5% dan kisaran suhu 28-31 o C (Dewi, 2018).
Mikroba  endofit  adalah  mikroorganisme baik bakteri atau jamur, yang tumbuh dan berkoloni di dalam jaringan tumbuhan tanpa memberikan  efek yang  negatif  seperti  penyakit  maupun  perubahan morfologis pada tumbuhan yang menjadi inangnya (Hidayat  et  al.,  2018).  Mekanisme  invasi mikroorganisme endofit ke dalam jaringan tumbuhan  dapat  terjadi  melalui  beberapa  metode yaitu  melalui  stomata,  lentisel,  luka  alami,  titik tumbuh akar lateral, radikula yang sedang tumbuh, dan  jaringan  akar  meristematik  yang  tidak terdiferensiasi.  Di  dalam  jaringan  tumbuhan, mikroba  kemudian  membentuk  koloni  di  area tempat  masuk  atau  menyebar  ke  seluruh  bagian tumbuhan  melalui  xilem  (Nurzakiyah.  2016). Mikroba  endofit  memproduksi  senyawa  yang berfungsi untuk melindungi jaringan tumbuhan dari berbagai  serangan  mikroorganisme  yang  bersifat patogen. Di sisi lain, jaringan tumbuhan berkontribusi  dengan  menyediakan  kabutuhan nutrisi  bagi  mikroba  endofit  agar  tetap  hidup. Hubungan  antara  mikroba  endofit  dan  jaringan tumbuhan bersifat simbiosis mutualisme (Nurzakiyah. 2016).
Bakteri endofit yang berinteraksi dan membentuk simbiosis mutualisme dengan tumbuhan juga berperan mendukung perkembangan tumbuhan  inang  (Hidayat  et  al.,  2018).  Beberapa peran  bakteri  endofit  diantaranya  adalah  memicu pertumbuhan  tanaman,  agen  pengendali  hayati (Aulia,  2019),  meningkatkan  produksi  dengan menyediakan  unsur  hara  yang  dibutuhkan  dan penghasil  fitohormon  (auksin,  sitokinin,  dan lainnya),  serta  bahan  utama  dalam  pembuatan biofertilizer (Hidayat et al., 2018). Selain itu, bakteri
endofit memiliki potensi besar untuk dikembangkan sebagai  kandidat  dalam  pencarian  sumber-sumber obat  baru.  Hal  ini  didukung  dengan  karakteristik bakteri endofit yang mudah untuk dikembangbiakkan,  memiliki  siklus  hidup  yang pendek  serta  mampu  menghasilkan  senyawa bioaktif dalam jumlah yang besar dalam waktu yang singkat  (Adriani,  2015).  Senyawa  bioaktif  yang ditemukan  pada  bakteri  endofit  memiliki  peran penting  dalam  bidang  kesehatan  yaitu  sebagai antibiotik, antifungi, antikanker, antioksidan, antivirus,  antidiabetes,  serta  bahan  imunosupresif (Pratiwi, 2019).

## MATODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Februari sampai dengan April 2023 di Laboratorium Bioteknologi Agroindustri, Sumbawa Techno Park , Kabupaten Sumbawa.

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini yaitu autoclave ,  inkubator,  laminar,  cawan  petri, gunting, cold  box , hotplate  stirrer ,  timbangan analitik,  mortal, bunsen, kertas  saring,  plastik klip , tabung  reaksi,  rak  tabung  reaksi,  mikropipet  dan pipet.
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  sampel alga Ulva  lactuca ,  sampel  air  laut,  aquades  steril, NaCl  (0,9%),  antibiotik  ( ampicillin )  konsentrasi xxx,  media Nutrient  Agar (NA),  media Nutrient Broth (NB), strain bakteri patogen Salmonella thypi, dan Staphylococcus aureus .

## Prosedur Kerja

## 1. Pengambilan Sampel
Sampel  alga Ulva  lactuca diambil  dari  lokasi sampling  Tanjung  Pengamas,  Labuan  Sumbawa. Sampel  alga  diambil  dengan  cara  digunting  pada bagian yang menyerupai akar, kemudian dibersihkan dari substratnya dan disimpan ke dalam plastik klip yang  telah  diisi  dengan  air  laut  bersih.
Sampel  alga  diletakkan  di  dalam cold  box untuk dibawa ke Laboratorium Bioteknologi Agroindustri,
Sumbawa Techno Park , Kabupaten Sumbawa.

## 2. Isolasi Bakteri
Sampel  alga Ulva  lactuca disiapkan  untuk dilakukan  pengenceran  10 -1 sampai  dengan  10 -5 . Sebanyak  0,1  gram  sampel  alga Ulva  lactuca ditimbag  dan  dimasukkan  ke  dalam  tabung  berisi
larutan  NaCl  (0,9%)  sebanyak  900  µL.  Larutan kemudian  dihomogenkan  menggunakan  vortex, sehingga pada tahap ini diperoleh pengenceran 10 -1 . Sebanyak 100 µL diambil dari pengenceran 10 -1 dan kemudian  dilarutkan  dalam  900  µL  NaCl  (0,9%), dan dihomogenkan sehingga diperoleh pengenceran 10 -2 , dan seterusnya   secara berjenjang proses yang sama  dilakukan  untuk  mempersiapkan  rangkaian pengenceran sampel sampai dengan diperoleh level pengenceran  10 -5 .  Sampel  dari  masing-masing perlakuan  pengenceran  (10 -1 sampai  dengan 10 -5 ) diambil sebanyak 100 µL untuk ditumbuhkan pada media  Nutrient  Agar  (NA)  dengan  menggunakan metode spread  plate ,  kemudian  diinkubasi  selama 1x24  jam  pada  suhu  ruang.  Koloni  isolat  bakteri endofit  yang  tumbuh  pada  media  selanjutnya diinokulasikan  ke  dalam  medium  NA  dengan menggunakan  metode  gores  kuadran,  kemudian diinkubasi selama 1x24 jam pada suhu 35 o C.

## 3. Enumerasi Mikroba
Pada penelitian ini digunakan metode perhitungan  mikroba  dengan Total  Plate  Count (TPC).  Langkah  pertama  yang  dilakukan  adalah membuat  suspensi  bakteri  dengan  mengambil sebanyak  1-4  ose  bakteri  kemudian  diinokulasikan ke  dalam  larutan  NaCl  0,9%  lalu  dihomogenkan. Setelah  itu  dilakukan  pengenceran  berseri  sampai dengan  pengenceran  10 -5 .  Hasil  pengenceran  10 -3 sampai  10 -5 masing-masing  diambil  sebanyak  100 µL  dan  diinokulasikan  pada  media  NA  dengan teknik spread plate (Alfiyanti dan Putri, 2020).
Kemudian diiinkubasi pada suhu 35 o C selama 1x24  jam.  Jumlah  sel  bakteri  yang  diperoleh  dari proses enumerasi dinyatakan dengan satuan Colony Forming  Units per  mL  (CFU/mL)  yang  dihitung dengan rumus:

## CFU/mL : jumlah koloni x faktor pengencer x 10

## 4. Identifikasi Bakteri Endofit
Identifikasi  morfologi  koloni  bakteri  endofit dilakukan  setelah  masa  inkubasi  menggunakan media  NA  pada  suhu  35 o C  selama  1x24  jam. Pengamatan  morfologi  yang  dilakukan  meliputi tepian  koloni,  bentuk  koloni,  elevasi,  permukaan koloni serta warna koloni
Identifikasi  morfologi  sel  bakteri  endofit dilakukan dengan menggunakan metode pewarnaan gram.  Hal  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  bentuk sel  bakteri  dan  membedakan  bakteri  endofit  yang
diperoleh  dari  jenis  gram  positif  dengan  bakteri gram negatif, menggunakan metode pewarnaan sel. Prosedur  pewarnaan  gram  dilakukan  dengan mengambil 1 ose bakteri lalu diratakan di atas object glass dan difiksasi hingga kering. Setelah itu strain bakteri ditetesi dengan zat warna kristal violet yang berfungsi  sebagai  pewarna  primer  lalu  didiamkan selama  30  detik,  dibilas  menggunakan  akuades. Selanjutnya strain bakteri pada object glass ditetesi iodin,  didiamkan  selama  30  detik,  dan  dibilas dengan  menggunakan  akuades.  Aseton  alkohol kemudian  diteteskan,  didiamkan  selama  15  detik lalu  dibilas  dengan  akuades.  Langkah  terakhir adalah  ditetesi  dengan  zat  warna  safranin  lalu diamkan  selama  15  detik  dan  dibilas  dengan menggunakan  akuades.  Bakteri  gram  negatif  akan melunturkan  zat  warna  kristal  violet  dan  mengikat zat  warna  safranin  pada  saat  strain  bakteri  ditetesi menggunakan aseton alkohol. Selanjutnya dilakukan  pengamatan  bentuk  sel  menggunakan mikroskop  pembesaran  1000x  (Awaludin  Prihanto et al., 2018).

## 5. Purifikasi Bakteri Endofit
Proses  purifikasi  bakteri  endofit  dilakukan dengan  menggunakan  metode  gores  ( streak method ).  Koloni  bakteri  dipisahkan  berdasarkan perbedaan warna dan bentuknya, selanjutnya isolat murni  yang  diperoleh  diinokulasikan  pada  media NA,  kemudian  diinkubasi  selama  1x24  jam  pada suhu 35 o C.

## 6. Uji Aktivitas Antibakteri
Bakteri  patogen  yang  digunakan  pada  uji aktivitas  antibakteri  adalah Staphylococcus  aureus ATCC  25923  (koleksi  dari  UGM)  dan Salmonella thyphi ATCC  14028  (koleksi  dari  Pusat  Penelitian Kimia LIPI). Masing-masing isolat bakteri diremajakan  dengan  cara  dikultur  pada  media Nutrient  Broth (NB)  dan  diinkubasi  selama  1x24 jam pada suhu 35 o C.
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dilakukan dengan menggunakan metode difusi agar. Sebanyak 1  mL  kultur  bakteri  patogen  yang  sudah ditumbuhkan pada media NB dimasukkan ke dalam falcon yang berisi 9 mL akuades steril. Sebanyak 4,5 mL  bakteri  patogen  diambil  dan  dimasukkan  ke dalam  50  mL falcon  tube dan  ditambahkan  media NA sebanyak 25,5 mL. Setelah media memadat, lalu dibuat  sumuran  dan  kemudian  dimasukkan  isolat bakteri  endofit  masing-masing  sebanyak  50  uL. Proses  inkubasi  dilakukan  pada  suhu  35 o C  selama 1x24 jam. Pada penelitian ini, larutan antibiotik jenis ampicillin konsentrasi  100  µg/  mL  digunakan sebagai pembanding (kontrol +).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Isolasi dan Enumerasi Bakteri Endofit
Berdasarkan  hasil  isolasi  bakteri  endofit  dari sampel alga hijau ( Ulva lactuca ), setelah dilakukan inkubasi  selama  1x24  jam  pada  cawan  petri  yang berisi  hasil  pengenceran  sampel  terlihat  telah ditumbuhi koloni-koloni bakteri sebagaimana dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar  2 Hasil  isolasi  bakteri  endofit  dari  sampel alga  hijau  ( Ulva  lactuca )  pada  berbagai  macam pengenceran. (A) Pengenceran 10 -3 ; (B) Pengenceran 10 -4 ; dan (C) Pengenceran 10 -5 .
Hasil  isolasi  bakteri  menunjukkan  adanya koloni yang tumbuh pada medium isolasi baik yang tunggal maupun berkelompok. Koloni tunggal lebih banyak  dijumpai  dari  sampel  dengan  tingkat pengenceran lebih besar.
Koloni sampel yang diperoleh dari hasil isolasi dengan  berbagai  tingkat  pengenceran  selanjutnya dilakukan  enumerasi  bakteri  atau  perhitungan jumlah  koloni  bakteri.  Pada  penelitian  ini,  hasil enumerasi  koloni  bakteri  endofit  pada  setiap pengenceran  10 -3 ,  10 -4 dan  10 -5 dapat  dilihat  pada Tabel 1 berikut.
Tabel 1 Hasil enumerasi bakteri endofit dari sampel alga  hijau  ( Ulva  lactuca )  pada  berbagai  tingkat pengenceran.
Tingkat Pengenceran Jumlah koloni bakteri (CFU/mL) 10 -3 6,3 x 10 -3 10 -4 11,3 x 10 -4 10 -5 21,3 x 10 -5
Hasil  yang  tertera  pada Tabel  1 merupakan penghitungan  dari  nilai  rata-rata  jumlah  bakteri sampel  alga  hijau  ( Ulva  lactuca )  pada  masing- masing  pengenceran,  yaitu  pada  pengenceran  10 -3 didapatkan  sejumlah  6,3  x  10 -3 CFU/mL bakteri, pengenceran 10 -4 sejumlah 11,3 x 10 -4 CFU/mL, dan pengenceran  10 -5 sejumlah  21,3  x  10 -5 CFU/mL.
Enumerasi  adalah  metode  perhitungan  jumlah koloni  mikroba  dalam  suatu  media  tanpa  adanya identifikasi  secara  spesifik  jenis  mikrobanya,  yang dilakukan dengan metode Total Plate Count (TPC) dengan serangkaian pengenceran (Alfiyanti & Putri, 2020).

## Identifikasi Morfologi Bakteri Endofit
Selanjutnya,  berdasarkan  hasil  isolasi  bakteri yang  telah  dilakukan,  dengan  menggunakan  dasar pengamatan  morfologi,  dipilih  koloni  bakteri  yang memiliki karakteristik berbeda dari hasil pengenceran 10 -3 , 10 -4 dan 10 -5 .  Pada penelitian ini, sejumlah  6  kandidat  isolat  bakteri  endofit  yang berbeda  berhasil  diseleksi  dari  sampel  alga Ulva lactuca .  Setiap  isolat  yang  diperoleh  kemudian diberikan  kode  isolat  UL  untuk  memudahkan pendataan.  Hasil  pengamatan  morfologi  mikroba endofit dapat dilihat pada Tabel 2 berikut.
Tabel  2 Hasil  pengamatan  karakteristik  morfologi koloni kandidat isolat bakteri endofit dari alga Ulva lactuca.
Isolat Bentuk Tepian Elevasi Warna UL-01 Bulat Rata Cembung Orange UL-02 Bulat Rata Cembung Kuning UL-03 Bulat Rata Cembung Putih kekuningan UL-04 Bulat Rata Cembung Orange UL-05 Bulat Bergerigi Datar Putih kekuningan UL-06 Bulat Rata Datar Putih
Berdasarkan Tabel  2 ,  isolat  mikroba endofit UL-01, UL-02, UL-03, UL-04, UL-05, dan UL-06  memiliki  karakteristik  morfologi  yang beragam baik itu tepian, elevasi dan juga warnanya, namun  memiliki  bentuk  yang  sama  yaitu  bulat. Tepian  pada  isolat  UL-01,  UL-02,  UL-03,  UL-04 dan UL-06 sama yaitu rata, sementara isolat UL 05
A
B

## C
memiliki  tepian  yang  bergerigi.  Isolat  UL-01,  UL- 02,  UL-03  dan  UL-04  memiliki  elevasi  cembung sementara pada isolat UL-05 dan UL-06 elevasinya datar. Warna dari 6 isolat mikroba endofit beragam, yaitu  warna  oranye  pada  isolat  UL-01  dan  UL-04, warna  kuning  pada  isolat  UL-02,  warna  putih kekuningan  pada  isolat  UL-03  dan  UL-05,  serta warna  putih  pada  isolat  UL-06.  Perbedaan karakteristik  morfologi  mikroba  endofit  dari  setiap isolat  menunjukkan  adanya  perbedaan  jenis  pada setiap isolat bakteri tersebut (Sirri et al., 2022). Hasil yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  sesuai  dengan penjelasan Pratiwy et al., (2022), yang menyatakan bahwa  dalam  satu  tanaman  bisa  diisolasi  beberapa genus maupun spesies mikroba endofit.
Tabel  3 Hasil  pengamatan  morfologi  sel  bakteri endofit yang diisolasi dari alga hijau ( Ulva lactuca ).
Kode isolat Morfologi sel Bentuk Gram UL-03 Basil Positif UL-04 Basil Positif UL-05 Basil Positif
Pada penelitian ini, pengamatan morfologi sel dari  bakteri  endofit  yang  diisolasi  dari  alga  hijau ( Ulva  lactuca )  dilakukan  dengan  menggunakan metode pewarnaan gram. Pada tahap ini, dari total 6 isolat kandidat bakteri endofit yang diperoleh, hanya 3  isolat  yang  berhasil  diremajakan  untuk  tahapan pengecatan  gram  ( Tabel  3 ).  Sejumlah  3  isolat dijumpai kontaminasi yang terlalu banyak dan juga tidak  tumbuh  ketika  dilakukan  proses  peremajan pada medium dan kondisi yang sama.
Hasil  pengamatan  menggunakan  mikroskop dengan  dengan  perbesaran  1000x  dapat  dilihat bahwa  ketiga  isolat  bakteri  berwarna  ungu  dengan bentuk  basil  ( Gambar  3 ).  Penelitian  serupa  yang dilakukan  oleh  Sabdaningsih  et  al.,  (2013), mendapatkan  tujuh  isolat  bakteri  endofit,  gram positif berbentuk basil.
Gambar 3 Hasil pengamatan morfologi sel bakteri endofit  yang  diisolasi  dari  alga  hijau Ulfa  lactuca menggunakan metode pengecatan gram.
Pada Gambar 3 , terlihat hasil akhir pewarnaan gram  ketiga  isolat  bakteri  endofit  menghasilkan warna  ungu,  hal  ini  menandakan  bahwa  isolat merupakan  bakteri  dengan  gram  positif.  Bakteri
gram positif dapat mempertahankan zat warna ungu kristal  violet  pada  proses  pewarnaan  gram, sebaliknya  bakteri  gram  negatif  tidak  dapat mempertahankan  zat  warna  ungu.    Bakteri  gram negatif, pada proses pengecatan gram apabila dicuci menggunakan  alkohol  dan  selanjutnya  diberi pewarnaan  merah  safranin  mempertahankan  warna merah  safranin  (Putri,  2018).  Lebih  lanjut dijelaskan, bakteri gram positif merupakan kelompok  bakteri  yang  memiliki  kandungan  lipid rendah yaitu sebesar 1-4% dan hanya memiliki satu lapis  membran  peptidoglikan  yang  tebal  apabila dibandingkan  dengan  kelompok  bakteri  gram negatif yang memiliki kandungan  lipid sebesar 11- 22% (Awaludin Prihanto et al., 2018).

## Purifikasi Bakteri Endofit
Setelah  dilakukan  isolasi  dan  pengamatan morfologi  bakteri  endofit  dari  sampel  alga  hijau Ulva  lactuca ,  selanjutnya  dilakukan  pemurnian isolat  bakteri  terpilih  (UL-03;  UL-04;  dan  UL-05) dengan  menginokulasi  isolat  pada  media  NA, kemudian  dilanjutkan  dengan  inkubasi  pada  suhu 35 o C selama 1x24 jam. Tahapan ini dilakukan untuk memisahkan koloni-koloni bakteri endofit sehingga diperoleh isolat murni tunggal berdasarkan bentuk, tepian,  elevasi  dan  warna.  Hasil  purifikasi  pada penelitian ini dapat dilihat pada Gambar 4 berikut.
Gambar  4 Hasil  purifikasi  bakteri  endofit  yang diisolasi dari alga hijau Ulfa lactuca.

## Uji  Daya  Hambat  Bakteri  Endofit  terhadap Staphylococcus aureus dan Salmonella thyphi
Hasil  uji  daya  hambat  mikroba  endofit  dari sampel  alga  hijau  ( Ulva  lactuca )  terhadap  bakteri patogen Staphylococcus  aureus dan Salmonella thyphi menunjukkan hasil yang bervariasi dari setiap isolat (Tabel  4). Pada  penelitian  ini,  pengujian aktivitas  antibakteri  dilakukan  untuk  mengetahui kemampuan isolat bakteri endofit yang diisolasi dari alga  hijau Ulva  lactuca dalam  menghambat pertumbuhan  bakteri  patogen  penyebab  infeksi utama yaitu Staphylococcus aureus dan Salmonella thyphi ,  yang  secara  berturut-turut  merupakan  jenis patogen  yang  dapat  menginfeksi  manusia  melalui luka, serta penyebab demam tifus.
UL-03 UL-04
UL-05
UL-01 UL-03 UL-02 UL-04 UL-05 UL-06 A B
Science and Technology
Tabel  4 Rata-rata  diameter  zona  hambat  isolat bakteri endofit dari sampel alga hijau ( Ulva lactuca ) terhadap bakteri patogen Staphylococcus aureus dan Salmonella thyphi.
Kode isolat Diameter zona hambat (mm) Staphylococcus aureus Salmonella typhi UL-03 0 a 13,00 c ± 1,73 UL-04 2,33 b ± 1, 15 0 a UL-05 3,67 c ±0,57 0 a Kontrol positif ( Ampicilin ) 11 d 9 b Kontrol negatif (akuades)
0 a 0 a
Keterangan:  Kategori  antibakteri  (Tangapo  et  al.,
2022)
- Kategori sangat kuat (20-35 mm)
- Kategori kuat (10-20 mm)
- Kategori sedang (6-10 mm)
- Kategori lemah (<5 mm)
Berdasarkan hasil analisis data rata-rata diameter zona hambat isolat mikroba endofit dari sampel alga hijau  ( Ulva  lactuca )  terhadap  bakteri  patogen Staphylococcus  aureus dan Salmonella  thyphi , diperoleh  hasil  aktivitas  antibakteri  dari  isolat endofit  yang  telah  diisolas,  yang  dikonfirmasi dengan  diameter  zona  hambat  terhadap  bakteri patotogen. Hasil penelitian menunjukkan penghambatan pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus dengan  kategori  lemah  oleh  isolat  UL-04 yang  dikonfirmasi  dengan  diameter  zona  hambat rata-rata sebesar 2,33 b ± 1,15 (mm) dan pada isolat UL-05  dengan  rata-rata  diameter  zona  hambat sebesar  3,67 c ±  0,57  (mm).  Sedangkan  pada  isolat UL-03  tidak  menunjukkan  adanya  diameter  zona hambat atau isolat UL-03 tidak dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.
Pada  pengujian  besar  zona  hambat  terhadap bakteri  patogen Salmonella  thyphi diperoleh  hasil rata-rata  besar  zona  hambat  pada  isolat  UL-03 sebesar  13,00 c ±  1,73  (mm)  dengan  kategori antibakteri  kuat  sedangkan  pada  isolat  UL-04  dan UL-05  tidak  menunjukkan  adanya  aktivitas antibakteri,  atau  kedua  isolat  ini  tidak  dapat menghambat pertumbuhan Salmonella thyphi.
Bakteri endofit dapat dikelompokkan menjadi beberapa kategori berdasarkan perbedaan kemampuan  dari  setiap  isolat  dalam  menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder  maupun  antibiotik (Tangapo  et  al.,  2022).  Aktivitas  antibakteri  dapat dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor,  diantaranya
adalah  konsentrasi  ekstrak,  kandungan  senyawa antibakteri,  daya  difusi  ekstrak  dan  jenis  bakteri (Sari et al., 2015). Pada penelitian ini, isolat bakteri endofit  dengan  kode  UL-03  menunjukkan  besar diameter  kategori  antibakteri  kuat  terhadap  bakteri Salmonella  thyphi apabila  dibandingkan  dengan kontrol  positif  dengan  besar  diameter  9 mm .
Salmonella  thyphi merupakan  bakteri gram  negatif dengan dinding sel yang tersusun dari satu atau lebih lapisan  peptidoglikan  yang  tipis  serta  memiliki membran  di  bagian  luar  lapisan  peptidoglikan, sehingga  dinding  sel  bakteri Salmonella  thyphi sangat rentan terhadap pemberian antibiotik ataupun bahan  yang  mengandung  senyawa  antibakteri lainnya (Rostinawati et al., 2017).
Pada  pengujian  antibakteri  terhadap  bakteri patogen Staphylococcus  aureus diperoleh  kandidat bakteri endofit potensial yaitu isolat UL-04 dan UL- 05 dengan besar diameter zona hambat pada kontrol positif  sebesar  11 mm. Staphylococcus  aureus merupakan bakteri patogen yang dapat menyebabkan  penyakit  pada  hewan  dan  manusia. Bakteri  ini  termasuk  dalam  golongan  bakteri  gram positif yang memiliki dinding sel yang tersusun atas lapisan peptidoglikan yang tebal, asam teikoat, serta sedikit lipid (Karlina et al., 2013) .
Terdapat beberapa faktor yang mempengaruhi besar  kecilnya  diameter  zona  hambat,  yaitu kepekaan  pertumbuhan,  reaksi  antara  bahan  aktif dengan  medium,  waktu  inkubasi,  kerapatan  koloni dan  aktivitas  metabolit  dari  mikroorganisme  serta jumlah  kandungan  zat  aktifnya  (Surjowardojo Puguh, 2016).
Pada  penelitian  ini  digunakan  antibiotik ampicillin sebagai  kontrol  positif  dan  akuades sebagai  kontrol  negatif. Ampicillin merupakan antibiotik  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  gram  positif  seperti Staphylococcus  aureus dan Streptococcus  sp., serta  bakteri  gram  negatif seperti Salmonella  sp.,  Listeria  minginitis dan Haemophilus  influenzae (Sumampouw,  2018). Ampicillin  merupakan  jenis  antibiotik  golongan Beta Laktam ( β-Lactam ) yang bekerja dengan cara mengikat  penisilin  protein  ( Protein  Binding Penicillin ) sehingga menghambat proses transpeptidase sintesis  peptidoglikan  pada  dinding sel  bakteri  yang  mengakibatkan  terhambatnya biosistesis  dinding  sel  bakteri  dan  menyebabkan lisis,  sehingga  bakteri  tidak  dapat  mengetahui perbedaan tekanan osmosa dari luar dan dari dalam sel  yang  menyebabkan  bakteri  mati  (Suheri  et  al., 2015).
Kemampuan  isolat  bakteri  endofit  dalam menghambat bakteri patogen Staphylococcus aureus dan Salmonella thyphi direpresentasi dengan terbentuknya  zona bening  pada  pengujian aktivitas antibakteri  bakteri  endofit  yang  telah  diisolasi  dari sampel alga hijau ( Ulva lactuca ). Kemampuan dari isolat  bakteri  endofit  disebabkan  karena  adanya kemampuan  isolat  dalam  menghasilkan  senyawa metabolit  sekunder  sebagai  antibakteri  yang  sama seperti  tumbuhan  inangnya.  Bakteri  endofit  dapat menghasilkan  senyawa  metabolit  sekunder  seperti alkaloid,  terpenoid,  steroid,  flavonoid,  kuinon  dan fenol  yang  memiliki  potensi  sebagai  senyawa bioaktif  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri patogen (Rau et al., 2018).

## PENUTUP

## Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian, didapatkan kesimpulan  yaitu:  sejumlah  6  isolat  murni  bakteri endofit  berhasil  diisolasi  dari  sampel  alga  hijau ( Ulva  lactuca )  yang  selanjutnya  diberi  kode  isolat UL-01,  UL-02,  UL-03,  UL-04,  UL-05  dan  UL-06. Dari total 6 isolat murni bakteri endofit, sejumlah 3 isolat dapat dikonfirmasi menunjukkan zona hambat terhadap bakteri patogen Staphylococcus aureus dan Salmonella  thyphi. Adapun  zona  hambat  paling besar  dihasilkan  oleh  isolat  UL-03  dengan  besar rata-rata  diameter  zona  hambat  13  mm  terhadap Salmonella typhi dan UL-05 dengan besar arata-rata diameter  zona  hambat  3,67  mm  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus. Dengan mempertimbangkan hasil penelitian yang diperoleh, penting  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  yang difokuskan  pada  optimasi  produksi  senyawa metabolit  sekunder  spesifik  dari  3  isolat  bakteri endofit  sampel alga  hijau  ( Ulva  lactuca ),  yang dilanjutkan dengan identifikasi kandungan senyawa metabolit  sekunder,  serta  melakukan  karakteristik bakteri  lebih  lanjut  agar  mengetahui  spesies potensial dari bakteri endofit.

## REFERENSI
Adriani.  (2015).  Aktivitas  Antibakterial  Fungi Endofit Caulerpa racemosa Terhadap Bakteri
Escherichia  coli  dan  Staphylococcus  aureus. Prosiding  Seminar  Nasional  Mikrobiologi Kesehatan Dan Lingkungan , 2014 , 11–15.
Alfianti,  E  dan  Putri,  D.H.  (2020).  Precision  of enumeration  technique  for  count  of  the number of bacterial cells with the spread plate method. Serambi Biologi, 4 (1), 7-10.
Ananda  Ramadhanty,  M.,  Tri  Lunggani,  A.,  &
Nurhayati,  dan. (2021). Isolasi bakteri endofit asal  tumbuhan  mangrove  Avicennia  marina
dankemampuannya sebagai antimikroba patogenStaphylococcus aureus dan Salmonella  typhi  secara  in  vitro. NICHE Journal  of  Tropical  Biology , 4 (1),  16–22. https://ejournal2.undip.ac.id/index.php/niche
Aulia,  J.  (2019).  Identifikasi  Bakteri  Endofit  Pada Tumbuhan  Kawista  (Limonia  acidissima  L.). Skripsi , Universitas Negeri Semarang , 1–70.
Awaludin  Prihanto,  A.,  Dwi  Laksono  Timur,  H., Abdul Jaziri, A., Nurdiani, R., & Pradarameswari,  K.  A.  (2018).  ISOLASI DAN  IDENTIFIKASI  BAKTERI  ENDOFIT MANGROVE  Sonneratia  alba  PENGHASIL ENZIM  GELATINASE  DARI  PANTAI SENDANG BIRU, MALANG, JAWA TIMUR. Indonesia Journal of Halal , 1 (1), 31. https://doi.org/10.14710/halal.v1i1.3114
Azzahra, F., Arefadil Almalik, E., & Atkha Sari, A.
(2019).  UJI  AKTIVITAS  ANTIBAKTERI DARI EKSTRAK ETANOL DAUN
ALPUKAT (Persea americana Mill.) TERHADAP  BAKTERI  Salmonella  typhi
DAN Staphylococcus aureus. Jurnal Kefarmasian Akfarindo , 1–10.
https://doi.org/10.37089/jofar.v0i0.63
Fadia,  Nurlailah,  Herlina,  T.  E.,  &  Lutpiatina,  L.
(2020).  Efektivitas  Ekstrak  Etanol  Daun Kirinyuh ( Chromolaena Odorata L ) Sebagai Antibakteri  Effectiveness  of  Kirinyuh  Leaf  ( Chromolaena Odorata L ) Ethanol Extract As an  Antibacterial  of  Salmonella  Typhi  and Staphylococcus Aureus.
Jurnal Riset
Kefarmasian Indonesia , 2 (3), 158–168.
Herwin,  H.  (2018).  ISOLASI  FUNGI  ENDOFIT PENGHASIL ANTIBIOTIKA PADA ALGA MERAH JENIS Gracilaria verrucosa
SECARA  KLT-BIOAUTOGRAFI. Jurnal Ilmiah As-Syifaa , 10 (1), 83–91.
https://doi.org/10.33096/jifa.v10i1.334
Hidayat, F., Rahutomo, S., Farrasati, R., Pradiko, I.,
Syarovy, M., Sutarta, E. S., & Widayati, W. E. (2018).
PEMANFAATAN BAKTERI ENDOFIT UNTUK MENINGKATKAN KERAGAAN  BIBIT  KELAPA  SAWIT (Elaeis  guineensis  Jacq.)  UTILIZATION  OF ENDOPHYTIC  BACTERIA  TO  IMPROVE THE  OIL  PALM  (Elaeis  guineensis  Jacq.) SEEDLINGS  GROWTH. Jurnal  Penelitian Kelapa Sawit , 26 (2), 71–78.
Pratiwi,  R.  H.  (2019).  Peranan  Mikroorganisme Endofit  Dalam  Dunia  Kesehatan:  Kajian Pustaka. Sainmatika: Jurnal Ilmiah
Matematika  Dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam ,
16 (1), 21. https://doi.org/10.31851/sainmatika.v16i1.26
95
Pratiwy, F. M., Arifah, F. N., Herawati, T., Widya, S.  N.,  &  Husna,  W.  (2022). ISOLASI BAKTERI ENDOFIT PADA ALGA MERAH ( Gracilarilari  sp  .)  DAN  AKTIVITAS  ANTI BAKTERI  TERHADAP  PERTUMBUHAN Vibrio  sp  .  DAN  Staphylococcus  aureus .
18 (2), 59–69. https://doi.org/10.21009/Bioma18(2).3
Putri, M. F. (2018). Diversitas Bakteri Endofit Pada Daun  Muda  Dan  Tua  Tumbuhan  Muda. Eksakta , 19 (1).
Saad, E. M., Elshaarawy, R. F., Mahmoud, S. A., & El-Moselhy, K. M. (2021). New Ulva lactuca Algae  Based  Chitosan  Bio-composites  for Bioremediation  of  Cd(II)  Ions. Journal  of Bioresources and Bioproducts , 6 (3), 223–242. https://doi.org/10.1016/j.jobab.2021.04.002
Sirri, Y., Warouw, V., Rumengan, I. F., Paransa, D. S.,  Undap,  S.  L.,  &  Ginting,  E.  L.  (2022). Isolation  and  Antibacterial  Activity  assay  of Endophytic  Symbiont  Bacteria  on  Seaweed Gracilaria  verrucosa  originated  from  Batu Meja  Tongkaina  Beach,  North  Sulawesi.
Jurnal Ilmiah PLATAX , 10 (2), 424. https://doi.org/10.35800/jip.v10i2.42226
Suniada, K. I., & Realino, D. B. (2014). STUDY OF LOCATION DETERMINATION
FOR SEAWEED  CULTURE  DEVELOPMENT  IN SALEH BAY, SUMBAWA, NTB .
Tangapo,  A.  M.,  Mambu,  S.  M.,  Kolondam,  B.,
Pasappa, N., & Pelealu, J. (2022). Eksplorasi Fungi Endofit Tumbuhan Mangrove Avicennia marina sebagai Penghasil Senyawa Antibakteri. Jurnal Ilmu Alam Dan Lingkungan , 13 (2), 25–31. http://journal.unhas.ac.id/index.php/jai2/articl
e/view/22341
Utami,  T.  P.,  &  Sayogo,  B.  H.  (2021).  Studi Literatur Potensi Pemanfaatan
dan Pengolahan  Alga  Genus  Sargassum  yang Terdapat di Kepulauan Seribu Sebagai Bahan Obat. Archieves Pharmacia , 3 (1), 41–48.
Yulianti,  Y.,  &  Baso  Manguntungi,  A.  Y.  (2018).
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Alga Merah dari Pantai  Luk,  Sumbawa  terhadap  Salmonella thypi  dan  Staphylococcus  aureus. Biota : Jurnal  Ilmiah  Ilmu-Ilmu  Hayati , 3 (1),  1–11. https://doi.org/10.24002/biota.v3i1.1888