## STRATEGI BAKTERI PROBIOTIK UNTUK MENEKAN PERTUMBUHAN BAKTERI PATOGEN DIDALAM PENCERNAAN  KERAPU Chromileptes altivelis DENGAN MEMPRODUKSI BEBERAPA BAKTERIAL SUBSTANSI
PROBIOTIC BACTERIA STRATEGY FOR DEPRESSING PATOGENIC BACTERIA GROWTH IN DIGESTION OF GROUPER FISH ( Chromileptes altivelis ) WITH PRODUCING OF SUBSTANCY BACTERIAL
Agustono, Hari Suprapto dan Muhajir
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
The  aim  of  the  research  is  looking  for  probiotic  bacteria  strategy  for  depresing  the  growth  of patogenic bacteria in digestion of grouper fish. Some of anti bacteria can be produced by bacteria, such as protease, bacteriocia (germicidine, pyrocydia, circulin), amilase lipase, and lyzozym. In this case, Bacillus sp. is chosen because it can produce antibacteria againts Vibrio sp. and probiotic multifactor effect, that is enzyme production and competition of nutrient and space.
Keywords : probiotic bacteria, grouper, patogenic
Pendahuluan Probiotik  menurut  Parker  (1974) adalah organisme atau substansi yang mendukung  keseimbangan  jumlah  mikro- organisme  dalam  pencernaan  ikan  atau  kerapu. Pada  stadia  larva,  ikan  sudah  hidup  di lingkungan yang banyak sekali bakteri patogen, pada  waktu  tersebut  saluran  pencernaan  dan sistem  immune  belum  berkembang  sehingga sebetulnya  bakteri  probiotik  sangat  diperlukan pada waktu stadia larva (Vadstein, 1977). Gram negatif  facultatif  anaerob  banyak  terdapat  pada saluran  pencernaan  ikan  dan  kerang-kerangan, sehingga  simbiosis  anerob  kemungkinan dominan  pada  intestine  bagian  belakang  ikan tropis  herbivor  (Clement,  1997). Vibrio dan Pseudomonas adalah  bakteri  yang  umum dijumpai  pada  crustacea  (Moriarty,  1990),  ikan laut  (Sakata,  1990)  dan  kerang-kerangan (Prieur, et  al., 1990).  Sedangkan Aeromonas,
Plesiomonas dan  bakteri  Enterobacteriacea dominan  pada  ikan  air  tawar  (Sakata,  1990). Bakteri  pada  manusia  dan  hewan  umumnya bersifat  menetap  pada  saluran  pencernaan manusia  dan  mamalia,  sedangkan  hanya sementara  pada  ikan  dan  mikroorganisme  air (Moriarty,  1990).  Ikan  adalah  poikilothermic sehingga  jumlah  mikroba  akan  berhubungan dengan  suhu  air  (Lesel,  1990).  Perubahan salinitas juga mempengaruhi mikroba (Hamid et al ., 1978; Sakata et al., 1980; Ringo and Storm, 1993)  dan  ikan  laut  harus  minum  supaya  air tidak  hilang  dari  tubuh.  Aliran  air  yang  terus menerus  mempengaruhi  medium  disekeliling-
nya,  misalnya  pada  yang  terjadi  pada  filter feeder seperti bivalve, larva kerapu. Hal tersebut penting pada larva karena belum adanya grastric barrier.  Sehingga  mikroflora  yang  ada  di pencernaan kemungkinan berubah dengan cepat dengan adanya intrusi bakteri dari makanan dan air. Pada bivalve, mikroflora yang diketemukan sama  dengan  yang  terdapat  pada  air  laut  dan sediment  (Sugita et  al., 1981;  Prieur et  al., 1990).  Bakteri  yang  sama  juga  diketemukan pada Penaeus  japonicus dan  di  air  laut,  tetapi normal  mikroflora  kemungkinan  masuk  lewat pakan  (Moriarty,  1990).  Sedangkan  pada  larva dan  juvenil  ikan  pengaruh  makanan  terhadap masuknya  bakteria  ke  saluran  pencernaan  telah diketahui  (Ringo et  al .,  1995).  Bakteri  yang masuk  ke  saluran  pencernaan  lewat  pakan  luar biasa  jumlahnya  pada  waktu  pemberian  pakan pertama  kali  (Munro et  al .,  1993;  Bergh et  al., 1994).
Mikroorganisme yang
bersifat sementara  pada  ikan  dapat  digunakan  untuk memperbaiki  kondisi  kolam,  bahkan  Moriaty (1998)  menyebutkan  probiotik  sebagai  “water additives”,  tetapi  definisi  yang  sebenarnya adalah  bakteri  yang  dimasukkan  dengan berbagai  macam  cara  kedalam  saluran pencernaan dan tetap hidup untuk memperbaiki kesehatan. Pada tahun 1991 Porubcan mencoba dua  cara  untuk  memperbaiki  kualitas  air  dan produksi kerapu P.monodon . Cara yang pertama adalah  biofilter  yang  mengambang  diinokulasi dengan  nitrifying  bacteria  untuk  mengurangi jumlah  ammonia  dan  nitrit  pada  air,  tretment
seperti  ini  menambah  kelangsungan  hidup kerapu  (Porubcan  ,1991a).  Kedua  adalah menambahkan  bakteri Bacillus spp  kedalam kolam  dekat  dengan  aerator  untuk  mengurangi penggunaan  oksigen  dan  menambah  produksi kerapu (Porubcan, 1991b). Pada umumnya yang disebut probiotik komersial adalah mengandung bakteri  nitrifikasi  dan Bacillus spp.  Kedua bakteri  tersebut  sangat  berbeda,  nitrifikasi bakteri membutuhkan lingkungan yang sebenarnya  dan  belum  pernah  diketemukan  di saluran  pencernaan  dari  hewan. Bacillus spp dipakai  probiotik  untuk  mammalia  hidup  pada tanah  dan  mereka  tidak  menetap  pada  saluran pencernaan,  hanya  aktif  pada  selama  transit  di saluran  pencernaan  (Ghounier-Chateau,  1994). Selanjutnya mereka melaporkan banyak mengisolasi Bacillus spp  dari  ikan  (Hamid et al., 1978),  crustacea  (Sharmila et  al .,  1996), bivalve (Sugita et al ., 1981). Queiroz dan Boyd (1998)  melaporkan  bahwa Bacillus spp  dapat meningkatkan  survival  dan  produksi  channel catfish,  tetapi  pengarang  tersebut  menitik beratkan  pada  kualitas  air  yang  dikondisikan sangat  buruk  dengan  perlakuan.  Kennedy (1998)  mengisolasi  strain Bacillus  subtilis dari ikan snook Centromopus undecimalis . Inokulasi  dari  strain  tersebut  kedalam  air pemeliharaan  menghilangkan Vibrio sp  dari semua lava snook sesudah menurunkan salinitas 30-3  ‰.  Moriarty  (1998)  juga  melaporkan bahwa pemberian Bacillus sp bisa meningkatkan  survival  pada  kolam  kerapu. Dengan  treatment  tersebut  dapat  menurunkan jumlah  luminous Vibrio sp  pada  sediment  dan air,  walaupun  efek  terhadap  mikroflora  pada itestine  tidak  dipelajari. Bacillus sp  tersebut dipilih  karena  memproduksi  antibiotik  untuk melawan Vibrio sp,  tetapi  mereka  menitik beratkan  pada  efek  multifaktor  probiotik misalnya  produksi  enzim,  kompetisi  untuk nutrien  dan  ruang.  Beberapa  mekanisme tersebut  kemungkinan  mencegah  berbiaknya strain  yang  resisten  terhadap  antibiotik.  Data yang sesungguhnya Moriarty (1998)
menunjukkan  bahwa Bacillus spp  mempunyai aksi  penghambatan    terhadap  luminous Vibrio sp  pada  kolam  sedimen,  tetapi  survival  kerapu kemungkinan  bisa  disebabkan  oleh  efek probiotik  atau  efek  yang  tidak  langsung  pada kesehatan kerapu.

## Metodologi
Isolasi bakteri Bakteri  diisolasi  dari  kerapu,  larva  dan  air pemeliharaan  dengan  prosedur  sebagai  berikut. Sepuluh sampel yang masing-masing diambil dari kerapu  (hepatopancreas/HP,  intestine),  larva  dan
air  pemeliharaan.  Larva  yang  berjumlah  10 sampel  dengan  berat  masing-masing  0.1  g,  HP dan  intestine  dengan  berat  yang  sama  kemudian digerus  tersendiri  pada  mortar  0.9  ml  air  laut steril.  Kemudian  diambil  sebanyak  0.1  ml  dan diencerkan  berseri  10  kali  dan  ditanam  pada Marine Agar 2216 (MA, Difco Laboratories). Air laut yang tidak diencerkan dan diencerkan 10 kali ditanam  pada  medium  yang  sama.  Sesudah inkubasi  pada  suhu  30°C  selama  48  jam,  bakteri yang  bersifat swarming (tumbuh  menyebar) akan tumbuh  pada  plate,  dan  koloni  yang  membentuk zona  terang  (clear  zone)  yang  mempunyai  daya inhibisi  (penghambat) terhadap  bakteri  swarming diambil  untuk  ditanam  lagi  agar  dapat  koloni murni.  Bakteri  yang  didapatkan  diinokulasi  pada media  MA  semisolid  dan  disimpan  pada  suhu 20°C untuk penelitian lebih lanjut.
Identifikasi bakteri Bakteri  yang  sudah  didapatkan  kemudian diidentifikasi  untuk  mengetahui  strain  bakteri tersebut.  Sebagai  pembanding  didapatkan  adalah Bergey’s  Manual  of  Systematic  Bacteriology. Strain  bakteri  yang  didapatkan  atau  yang  telah teridentifikasi kemudian disimpan dengan gycerol pada suhu -20°C dan diberi label untuk penelitian berikutnya.
Strain Vibrio untuk penelitian Lima strain bakteri Vibrio sp telah diisolasi dan  diidentifikasi  dan  dibandingkan  dengan Bergey’s  Manual  of  Systematic  Bacteriology. Bakteri  tersebut  diisolasi  dari  air  pemeliharaan ikan  dan  dari  HP  kerapu.  Kemudian  bakteri tersebut  disimpan  dengan  glycerol  dan  disimpan pada -20°C sampai untuk digunakan. Pada waktu akan digunakan bakteri dithawing dulu pada suhu kamar  selama  1  jam  kemudian  diinokulasikan pada MA.
Tes penghambatan Bakteri  antiswarming  yang  didapatkan dilakukan testing untuk  mengetahui kemampuan- nya  dalam  menghambat  strain Vibrio sp  dengan metode  double-layer  plate  (Imada et  al .,  1985; Dopazo et  al .,  1988).  Plate  MA  diinokulasi dengan cara stabbing (ditusukkan) dengan bakteri antiswarming, setiap plate bisa diinokulasi sampai 7 strain. Sesudah inkubasi pada suhu 30°C selama 4 hari, bakteri dibunuh dengan menggunakan uap chloroform  selama  10  menit  dan  ditumpangi (overlay)  MA  yang  mengandung  sedikit  dari Vibrio sp.  Plate  kemudian  diinkubasi  pada  suhu 30°C selama 2 hari. Zona terang akan didapatkan sekitar  koloni  dari  bakteri  yang  memproduksi antibiotik.
Identifikasi  dan  tes  terhadap  bakteri  yang memproduksi antibiotik
Strain  yang  telah  diketahui  mempunyai daya hambat terhadap bakteri Vibrio sp kemudian dilakukan identifikasi untuk mengetahui karakteristiknya.  Semua  dilakukan  pada  suhu 30°C,  semua  karakter  bakteri  termasuk  koloni, morfologi,  pengecatan  gram,  produksi  pigmen, motilitas, flagella, produksi oxidase dan katalase, tes OF, produksi nitrat, pertumbuhan pada suhu 4 dan  30°C,  penggunaan  sitrat  dan  pertumbuhan pada air laut. Produksi lipase, amylase, gelatinase, deoksiribonuclease  juga  diuji.  Kemampuan menggunakan  berbagai  bahan  organik  sebagai sumber  karbon  diuji  dengan  menggunakan  basal medium  agar  yang  mengandung  0.2  %  gula (Krieg and Holt, 1984).

## Hasil dan Pembahasan
Studi  pendahuluan  tentang  bakteri probioitik telah dilakukan pada untuk mendapatkan bakteri yang mempunyai kemampuan  menghambat  pertumbuhan Vibrio sp,  dan  bakteri  pathogen  lainnya  mengurangi jumlah  bahan  organik  di  kolam  budidaya  ikan dan  kerapu  kerapu.  Kerugian  dari  industri perikanan  tahun  1989-1992  9(  dalam  kurun  4 tahun)  sebesar 248 juta USD atau 62 juta USD per tahun dan enam tahun kemudian pada tahun 1998  dengan  total  kerugian  senilai  318  juta USD  per  tahun.  Penelitian  ini  dilakukan berdasarkan  kegagalan  budidaya  kerapu C. altivellis dan  bberapa  komoditas  lainnya  akibat bakteri Vibrio sp  dan  mendesak  dilakukan karena  untuk  mencega,  kegagalan  budidaya kerapu  dan  menjaga  kelangsungan  ekspor kerapu  Indonesia,  meningkatkan  pendapatan petani ikan dan mengurangi pengangguran yang terus meningkat setiap tahunnya.
Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan bakteri  yang  diisolasi  adalah Bacillus sp  dan Alteromonas sp dan  beberapa  bakteri  lain  yang merupakan  bakteri  asli  yang  mempunyai  daya penghambat pertumbuhan bakteri Vibrio sp dan mampu  mengurangi  polutan  di  kolam  serta
mengurangi  jumlah  bakteri patogen di  intestine kerapu.  Jika  bacterial  load  pada  kolam  tinggi selain  menimbulkan  Bacterial  White  Spot Syndrome (BWSS) walaupun tidak merugikan/mematikan kerapu/ikan tetapi
membuat organnoleptik ikan menjadi buruk dan juga menurunkan ketersediaan oksigen yang ada dan  menjadikan  ikan  rentan  terhadap  penyakit dan perubahan alam lainnya.
Probiotik  mempunyai  peran  sangat penting  didalam  ekosistem  tambak,  karena mempunyai  beberapa  fungsi  yang  tidak  bisa digantikan  bakteri  lain.  Bakteri  yang  bisa memproduksi  substansi  mirip  antibiotik  sangat diperlukan  didalam  ekosistem  tambak  karena pertumbuhan  bakteri  ini  bisa  menekan  bakteri patogen  dengan  cara  berkompetisi  untuk mendapatkan  makanan  dan  ruang  untuk  ikan dan  kerapu  dengan  cara  memproduksi  suatu substansi  yang  dapat  menghambat  atau membunuh  patogen  lain.  Bakteri  in  bisa digunakan  untuk  mengurangi  penggunaan antibiotik  didalam  budidaya  ikan  yang  tidak meninggalkan  residu  yang  berbahaya  dan  bias digunakan  untuk  menjaga  keseimbangan  flora atau  jenis  dan  jumlah  bakteri  yang  berada didalam air sehingga ikan atau kerapu terhindar dari infeksi yang mematikan.
Salah  satu  cara  untuk  mendapatkan panen kerapu yang banyak dalam jangka waktu yang  singkat  adalah  memakai  teknik  budidaya intensif  walaupun  banyak  kendalanya.  Karena semakin tinggi padat penebaran yang digunakan menyebabkan  stress  pada  ikan  yang  akhirnya menyulut  terjadinya  penyakit.  Dewasa  ini karena  permintaan  yang  banyak  penggunaan budidaya  intensif  merupakan  keharusan,  tanpa ini  pemenuhan  permintaan  sulit  dipenuhi. Misalnya  untuk  budidaya  ikan  kerapu  Ikan kerapu Chromileptes  altivelis yang  merupakan warmwater fish dengan suhu  optimal 20 - 30˚C bisa  hidup  pada  air  dan  laut.  Indonesia merupakan  negara  produsen  kerapu  terbanyak didunia dengan produksi 41.000 MT pada tahun 1995.  Atau  90  persen  hasil  tersebut  dari
Tabel 1. Substansi Antibakteri Yang Dihasilkan Dan Spesies Bakterinya
Nama Bakteri Subtansi antibakteri yang diproduksi Bacillus brevis Protease, bacteriocin (germicidine dan pyrocydin) Bacillus circulans Protease, bacteriocin (circulin) Bacillus coagulanss Protease, dan bacteriocins Pseudomonas spp. Protease, amilase lipase Pseudomona putida Protease, amilase lipase Pseudomonas mallei Protease, amylase, lipase Pseudomonas spp. Protease, amylase, lipase Pseudomonas maltophillia Protease, amylase, lipase Corynebacterium Bacteriocyn, lyzozym Corynebacterium boffmani Bacteriocyn, lyzozym
tangkapan di alam dan ini harus disertai dengan produksi  buatan.  Bobot  ikan  konsumsi  adalah 0.5 – 2 kg/ekor dan berharga sangat mahal. Jika Vibrio sp.  menimbulkan  penyakit  pada  kerapu, kemungkinan  disebabkan  defense  mechanism menurun, karena dalam keadaan stress produksi antibody dan aktifitas phagocytosis terganggu.
Moriarty (1998) juga melaporkan bahwa pemberian Bacillus sp  bisa  meningkatkan survival  pada  kolam  kerapu.  Dengan  treatment tersebut  dapat  menurunkan  jumlah  luminous Vibrio sp pada sediment dan air, walaupun efek terhadap  mikroflora  pada  itestine  tidak dipelajari. Bacillus sp  tersebut  dipilih  karena memproduksi  antibiotik  untuk  melawan Vibrio sp,  tetapi  mereka  menitik  beratkan  pada  efek multifaktor  probiotik  misalnya  produksi  enzim, kompetisi  untuk  nutrien  dan  ruang.  Beberapa mekanisme  tersebut  kemungkinan  mencegah berbiaknya  strain  yang  resisten  terhadap antibiotik.  Data  yang  sesungguhnya  Moriarty (1998)  menunjukkan  bahwa Bacillus spp mempunyai  aksi  penghambatan    terhadap luminous Vibrio sp pada kolam  sedimen, tetapi survival  kerapu  kemungkinan  bisa  disebabkan oleh  efek  probiotik  atau  efek  yang  tidak langsung pada kesehatan kerapu
Probiotik  menurut  Parker  (1974) adalah organisme atau substansi yang mendukung  keseimbangan  jumlah  mikro- organisme  dalam  pencernaan  ikan  atau  kerapu. Pada  stadia  larva,  ikan  sudah  hidup  di lingkungan yang banyak sekali bakteri patogen, pada  waktu  tersebut  saluran  pencernaan  dan sistem  immune  belum  berkembang  sehingga sebetulnya  bakteri  probiotik  sangat  diperlukan pada waktu stadia larva (Vadstein, 1977). Gram negatif  facultatif  anaerob  banyak  terdapat  pada saluran  pencernaan  ikan  dan  kerang-kerangan, sehingga  simbiosis  anerob  kemungkinan dominan  pada  intestine  bagian  belakang  ikan tropis  herbivor  (Clement,  1997). Vibrio dan Pseudomonas adalah  bakteri  yang  umum dijumpai  pada  crustacea  (Moriarty,  1990),  ikan laut  (Sakata,  1990)  dan  kerang-kerangan (Prieur, et  al., 1990).  Sedangkan Aeromonas, Plesiomonas dan  bakteri  Enterobacteriacea dominan pada ikan air tawar (Sakata, 1990).
Bakteri  pada  manusia  dan  hewan umumnya  bersifat  menetap  pada  saluran pencernaan  manusia  dan  mamalia,  sedangkan hanya sementara pada ikan dan mikroorganisme air (Moriarty, 1990). Ikan adalah poikilothermic sehingga  jumlah  mikroba  akan  berhubungan dengan  suhu  air  (Lesel,  1990).  Perubahan salinitas juga mempengaruhi mikroba (Hamid et al ., 1978; Sakata et al., 1980; Ringo and Storm,
1993)  dan  ikan  laut  harus  minum  supaya  air
tidak  hilang  dari  tubuh.  Aliran  air  yang  terus menerus  mempengaruhi  medium  disekeliling- nya,  misalnya  pada  yang  terjadi  pada  filter feeder seperti bivalve, larva kerapu. Hal tersebut penting pada larva karena belum adanya grastric barrier.  Sehingga  mikroflora  yang  ada  di pencernaan kemungkinan berubah dengan cepat dengan adanya intrusi bakteri dari makanan dan air. Pada bivalve, mikroflora yang diketemukan sama  dengan  yang  terdapat  pada  air  laut  dan sediment  (Sugita et  al., 1981;  Prieur et  al., 1990).  Bakteri  yang  sama  juga  diketemukan pada Penaeus  japonicus dan  di  air  laut,  tetapi normal  mikroflora  kemungkinan  masuk  lewat pakan  (Moriarty,  1990).  Sedangkan  pada  larva dan  juvenil  ikan  pengaruh  makanan  terhadap masuknya  bakteria  ke  saluran  pencernaan  telah diketahui  (Ringo et  al .,  1995).  Bakteri  yang masuk  ke  saluran  pencernaan  lewat  pakan  luar biasa  jumlahnya  pada  waktu  pemberian  pakan pertama  kali  (Munro et  al .,  1993;  Bergh et  al., 1994) Mikroorganisme  yang  bersifat sementara pada  ikan  dapat  digunakan  untuk  memperbaiki kondisi  kolam,  bahkan  Moriaty  (1998) menyebutkan probiotik sebagai “water additives”,  tetapi  definisi  yang  sebenarnya adalah  bakteri  yang  dimasukkan  dengan berbagai  macam  cara  kedalam  saluran pencernaan dan tetap hidup untuk memperbaiki kesehatan. Pada tahun 1991 Porubcan mencoba dua  cara  untuk  memperbaiki  kualitas  air  dan produksi kerapu P.monodon . Cara yang pertama adalah  biofilter  yang  mengambang  diinokulasi dengan  nitrifying  bacteria  untuk  mengurangi jumlah  ammonia  dan  nitrit  pada  air,  tretment seperti  ini  menambah  kelangsungan  hidup kerapu  (Porubcan  ,1991a).  Kedua  adalah menambahkan  bakteri Bacillus spp  kedalam kolam  dekat  dengan  aerator  untuk  mengurangi penggunaan  oksigen  dan  menambah  produksi kerapu (Porubcan, 1991b). Pada umumnya yang disebut probiotik komersial adalah mengandung bakteri  nitrifikasi  dan Bacillus spp.  Kedua bakteri  tersebut  sangat  berbeda,  nitrifikasi bakteri membutuhkan lingkungan yang sebenarnya  dan  belum  pernah  diketemukan  di saluran  pencernaan  dari  hewan. Bacillus spp dipakai  probiotik  untuk  mammalia  hidup  pada tanah  dan  mereka  tidak  menetap  pada  saluran pencernaan,  hanya  aktif  pada  selama  transit  di saluran  pencernaan  (Ghounier-Chateau,  1994). Selanjutnya mereka melaporkan banyak mengisolasi Bacillus spp  dari  ikan  (Hamid et al., 1978),  crustacea  (Sharmila et  al .,  1996), bivalve (Sugita et al ., 1981). Queiroz dan Boyd (1998)  melaporkan  bahwa Bacillus spp  dapat meningkatkan  survival  dan  produksi  channel catfish,  tetapi  pengarang  tersebut  menitik
beratkan  pada  kualitas  air  yang  dikondisikan sangat  buruk  dengan  perlakuan.  Kennedy (1998)  mengisolasi  strain Bacillus  subtilis dari
ikan snook
Centromopus undecimalis . Inokulasi  dari  strain  tersebut  kedalam  air pemeliharaan  menghilangkan Vibrio sp  dari semua lava snook sesudah menurunkan salinitas 30-3  ‰.  Moriarty  (1998)  juga  melaporkan bahwa  pemberian Bacillus sp  bisa  me- ningkatkan survival pada kolam kerapu. Dengan treatment  tersebut  dapat  menurunkan  jumlah luminous Vibrio sp  pada  sediment  dan  air, walaupun efek terhadap mikroflora pada itestine tidak dipelajari.

## Kesimpulan
Bacillus sp  tersebut  dipilih  karena memproduksi  antibiotik  untuk  melawan Vibrio sp,  tetapi  mereka  menitik  beratkan  pada  efek multifaktor  probiotik  misalnya  produksi  enzim, kompetisi  untuk  nutrien  dan  ruang.  Beberapa mekanisme  tersebut  kemungkinan  mencegah berbiaknya  strain  yang  resisten  terhadap antibiotik.  Data  yang  sesungguhnya  Moriarty (1998)  menunjukkan  bahwa Bacillus spp mempunyai  aksi  penghambatan  terhadap luminous Vibrio sp pada kolam  sedimen, tetapi survival.

## Daftar Pustaka
Ahne,  W.,  W.  Popp  and  R.  Hoffman  (1982)  : Pseudomonas  fluorescens as  a  pathogen of  tench Tinca  tinca .  Bull.  Europe.  Ass.
Fish Path. 4 : 56 - 57. Allen, D. A., B. Austin and R. R. Colwell (1983) : Numerical taxonomy of bacterial isolates associated  with  a  freshwater  fishery.  J. Gen. Microbiol, 129 : 2043 - 2062. Aoki, T., Kitao,T., Itabashi,T., Wada,Y., Sakai,M.
(1981) : Proteins and lipopolysaccharides in  the  membrane  of Vibrio  anguillarum .
Develop. Biol. Standard., 49, 225 - 232.
Austin,  B.  and  D.  Austin  (1987)  :  Bacterial  Fish
Pathogen.  Ellis  Hoorwood.  London.  Pp 250 - 262.
Bergh, O., K.E.Naas and T.Harboe (1994) : Shift in  the  intestinal  microflora  of  Atlantic halibut Hippoglossus hippoglossus larvae during  first  feeding.  Can.  J.  Fish. Aquat.Sci., 51:1899-1903.
Chart,H. and Trust, T.J. (1984) : Characterization of the surface antigen of the marine fish pathogens, Vibrio  anguillarrum and Vibrio ordalli .Can.J.Microbiol., 30, 703 - 710.
Clement,  K.D.  (1997)  :  Fermentation  and gastrointestinal  microorganism  in  fishes.
In: Mackei, R.I., B.A.Withe,
R.E.Isaccson (Ed), Gatrointestinal Microbiology,  Vol  1,  Gastrointestinal Ecosystem  and  Fermentation,  Chapman and Hall Microbiology Series, International  Thomson  Publishing,  New York, pp 156-198. Dopazo, C.P., M.L.Lemos, C.Lodeiros,
J.Bolinches,  J.L.  Barja  and  A.L.Toranzo (1988) : Inhibitory activity of antibiotics- producing  marine  bacteria  against  fish pathogens. J.Appl.Bact., 65: 97-101.
Egidius,E.  and  Anderson,K.  (1979)  :  Bath immunization-a  practical  and  non stressing  method  of  vaccinating  farmed sea  rainbow  trout Salmo  gairdneri Richardson against Vibriosis,  J.Fish.Dis.
2, 405 - 410.
Ellis,  A.E.  (1988)  :  Fish  Vaccination.  Academic Press.
Fryer,J.L.,  Rohovec,J.S.  and  Garrison,  R.L. (1978)  :  Immunization  of  salmonid  for control  of  Vibriosis.  Mar.  Fish  Review, 40, 20 - 23.
Figueras,  A.,  M.  M.  Santarem  and  B.  Novoa (1997)  : In  vitro immunostimulan  of turbot Scophthalmus maximus leucocytes with  beta  glucan  and/or Photobacterium damsela bacterin.  Fish  Pathology,  32  : 153 - 157.
Gould,R.W.,  O`Leary,P.J.,  Garrison,  R.L., Rohovec,J.S.  and  Fryer,  J.L.  (1978)  : Spray  vaccination:  a  method  for immunization of fish. Fish.Pathol.,13, 63 - 68.
Gournier-Chateau,  N.,  J.P.Larpent,  I.Catellanos, J.L.Larpent (1994) : Les Probiotiques en Alimentation  Animale  et  Humaine. Tehchnique et Documentation Lavoisier, Paris. 192 pp.
Hamid,  A.,  T.Sakata  and  D.Kakimoto  (1978)  : Microflora in the alimentary tract of grey mullet.  A  comparison  of  the  mullet intestinal  microflora  in  fresh  and seawater.Bull.Japan.Soc.Sci.Fish.,  44  : 53-57.
Imada,  C.,  U.Simidu  and  T.Naga  (1985)  : Isolation  and  characterization  of  marine bacteria  producing  alkaline  protease inhibitor. Bull.Japan.Soc.Sci.Fish.,
51:799-803. Johnson,K.A.,  Flynn,J.K  and  Ammend,  D.F.
(1982)  :  Duration  of  immunity  in salmonids vaccinated by direct immersion with Yersinia ruckeri and Vibrio anguillarum bacterins.
J.Fish.Dis.,5, 207 - 213. Kawai,K.,  Kusuda,R.  and  Itami.T.  (1981)  : Mechanisms  for protection  in ayu orally
vaccinated for vibriosis. Fish.Pathol., 15, 257 - 262. Krieg,  N.R.  and  J.G.Holt  (1984)  :  Bergey’s Manual  of  Systematic  Bacteriology, Vo.1.Wllilam and  Wilkin, Baltimore, pp 964.
Kusuda,  R  and  K.  Kawai  (1992)  :  Bacterial infections  of  fish  in  Japan.  In  Salmonid diseases,  editor  T.  Kimura.  Hokkaido University Press,Sapporo, Japan. Leong,  J.C  dan  J.L.Fryer  (1993)  :  Viral  vaccine for  aquaculture.  Annual.  Rev.  of  Fish Disease, pp 225 - 240.
Lesel,  R.  (1990)  :  Thermal  effects  on  bacterial flora  in  the  gut  of  rainbow  trout  and african  catfish.  In:  Lesel,  R  (Ed)  : Microbiology  in  Poecilotherms.Elsevier, Amsterdam, pp 33-38. Lowry,  O.H.,  N.J.  Rosebrough,  A.L.Farr  and R.J.Randall  (1951)  :  Protein  me- asurement  with  the  folin  fenol  reagent. J.Biol. Chemistry 193 : 265- 275. Munro, P.D., T.H.Birbeck and A. Barbour (1993) :  Influence  of  rate  of  bacterial colonization  of  the  gut  of  turbot  larvae on  larval  survival.    In:  Resinersten,  H., L.A.Dahle,  L.Jorgensen,  K.Tvinnereim (Eds),  Fish  farming  Technology,  A.A. Balkema Rotterdam, pp 85-92. Moriarty,  D.J.W  (1997)  :  The  role  of microorganism  in  aquaculture  ponds. Aquaculture 151: 333-349.
Moriarty,  D.J.W  (1998)  :  Control  of  luminous Vibrio  species  in  penaeid  aquaculture ponds. Aquaculture 164: 351-358.
Mushiake,  K.,  T.  Nakai  and  K.  Muroga  (1985)  : Effects  of  Zinc  on  the  activity  of  Eel Anguilla japonica leucocyte. Fish Pathol 6 : 125 - 130.
Plumb,  J.A  (1994)  :  Health  maintenance  of cultured  fishes  :  Principal  microbial diseases. CRC Press. Boca Raton.
Porubcan,  R.S.  (1991a)  :  Reduction  of  ammonia nitrogen  and  nitrite  in  tank  of Penaeus monodon using floating biofilter containing  processed  diatomaceus  erath- media  pre-inoculated  with  nitrifying bacteria.  Program  and  abstract  of  the 22nd Annual Conference and Exposition, 16-20 June 1991, San Juan Puerto Rico, World Asquaculture Society.
Porubcan,  R.S.  (1991b)  :  Reduction  in  chemical oxygen  demand  and  improvement  in Penaeus  monodon yield  in  pond inoculated  with Bacillus bacteria. Program and abstract of the 22nd Annual Conference  and  Exposition,  16-20  June
1991,  San  Juan  Puerto  Rico,  World Asquaculture Society.
Prieur,  D.,  G.Mevel,  J.L.Nicolas,  A.Plusquellec and  M.Vigneulle  (1990)  :  Interaction between bivalve molluscs and bacteria in the marine environment. Oceanogr.Mar.Biol.Annu.Rev., 28 : 277-
352.
Reed, M and R. Mueench (1958) : The calculation of LD50. J. Bio. Chemistry. 5 : 25 - 27.
Ringo,  E.,  E.Strom  and  J.A.Tabachek  (1995)  : Intestinal  microflora  of  salmonids  :  a review. Aquacul.Res., 26: 773-789.
Robert,  R.J.  and  M.T.  Horne  (1978)  :  Bacterial meningitis  in  farmed  rainbow  trout Salmo  gairdneri Richardson,  affected with  chronic  pancreatic  necrosis.  J.  Fish Diseases. 1 : 157 - 164.
Robert (1988) :  Fish Pathology. Bailliere Tindal. London. Pp 189 - 190. Sakata, T. (1990) : Microfora in the digestive tract of  fish and shellfish. In :Lesel, R. (Ed), Microbiology in Poecilotherms, Elsevier, Amsterdam, pp 171-176.
Sakata, T., J.Okabayashi and D.Kakimoto (1990)
: Variation in the intestinal microflora of Tilapia  reared  in  fresh  and  sea  water. Bull.Japan.Soc.Sci.Fish., 46: 313-317.
Salati,  F.,  K.  Watanabe,  K.Kawai  and  R.Kusuda (1989) : Immune response of ayu against Vibrio  anguillarum Lipopolysaccharide. Nippon Suisan Gakkaishi, 19 : 45 - 49.
Sharmila, R., T.J.Abraham, J. Sundararaj (1996) : Bacterial  flora  of  semi-intensive  pond reared Penaeus  indicus and  the environment.  J.Aquaculture  Trop.,  11: 193-203.
Sugita,  H.,  H.Tanaami,  T.  Kobashi  and Y.Deguchi  (1981)  :  Bacterial  flora  of coastal bivalve. Bull.Japan.Soc.Sci. Fish., 47:655-661.
Suprapto,  H.,  T.  Hara,  T.  Nakai  and  K.  Muroga (1996)  :  Purification  of  a  lethal  toxin  of Edwardsiella  tarda .  Fish  Pathology  31  : 203 - 207.
Suprapto,  H.  (1997)  :  Studies  on  the  toxin  of
Edwardsiella tarda . Doctoral dissertation. Hiroshima University,
Japan.
Storm,  E.  and  E.  Ringo  (1993)  :  Changes  in bacterial  flora  in  developing  cod,  Gadus morhua  L  larvae  after  inoculation  of Lactobacillus plantarum in the water. In: Walter,  B.,  H.J.Fyhn  (Eds),  Physio- logical and Biochemical Aspects of Fish larval  Development.  University  of Bergen Norway, pp 226-228.
Tanasomwang,  V.,  T.Nakai,  Y.Nishimura  and K.Muroga  (1998)  : Vibrio -inhibiting marine bacteria isolated from Black tiger shrimp  hatchery.  Fish  Pathol.,  33  :  459- 466. Vadstein, O (1977) : The use of immunostimulation in marine larviculture: possibilities and challenges. Aquaculture 155: 401-407.