## DAYA ANTIBAKTERI EKSTRAK ETANOL DAUN SENGGANI ( Melastoma af � ne D. Don )
Ika Trisharyanti Dian Kusumowati 1 , Rosita Melannisa 1 , Angga Prasetyawan 1
1 Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta Correspondence to : Ika Trisharyanti Dian Kusumowati email: Ika.Trisharyanti@ums.ac.id

## ABSTRACT
Melastoma  af � ne  D.  Don  had  some  activities  such  as  anthelmintic,  antibacteria,  antiin � ammation, antifungal, and antitumor. The aims of this research was determine antibacteria activity of ethanolic extract of Melastoma af � ne D. Don. The antimicrobial activity was tested by solid dilution method to get Minimum Inhibition Concentration (MIC). The compounds in Melastoma af � ne D. Don was analyzed by tube test method and Thin Layer Chromatography (TLC) with chloroform : methanol : formic acid (8,5:1,5:0,5) as mobile phase and silica gel GF254 as stationary phase. The result showed ethanolic extract of Melastoma af � ne D. Don contains alkaloid, polyphenol, � avonoid, saponin, and essential oil. The MIC of Senggani against Staphylococcus aureus was 2% and 3% against Escherichia coli and the extract could not inhibit Staphylococcus aureus and Escherichia coli multiresistant until concentration 7% extract ethanol.
Keywords : Melastoma af � ne D. Don, Staphylococcus aureus, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  merupakan  ancaman  bagi kelangsungan  hidup  manusia.  Beberapa  bakteri yang  dapat  menyebabkan  penyakit  diantaranya adalah Staphylococcus  aureus ( S.  aureus )  dan Escherichia  coli ( E.  coli )  (Jawetz et  al .,  2005). Hampir setiap orang pernah mengalami berbagai infeksi S. aureus selama hidupnya, dari keracunan makanan  yang  berat  atau  infeksi  lesi  kulit  yang kecil.  Infeksi S.  aureus juga  dapat  berasal  dari kontaminasi langsung dari luka dan jika infeksi ini menyebar dan terjadi bakterimia, maka bisa terjadi endokartitis, meningitis dan infeksi terhadap paru- paru  (Jawetz et  al .,  2005). E.  coli merupakan penyebab  paling  banyak  dari  infeksi  saluran kencing dan juga menyebabkan diare, sepsis, dan meningitis (Jawetz et al ., 2005).
Penanggulangan penyakit infeksi umumnya dilakukan dengan pemberian antibiotik. Penggunaan  antibiotik  yang  tidak  tepat, seperti  kurang  tepatnya  indikasi  penggunaan, penggunaan  bebas  oleh  masyarakat,  serta  dosis dan  lama  pemberian  yang  tidak  tepat,  akan
menimbulkan  masalah  baru  yaitu  meningkatnya resistensi  bakteri  terhadap  antibiotik.  Untuk mengatasi  masalah  tersebut,  diperlukan  upaya pengembangan  antibiotik  baru,  salah  satunya dengan memanfaatkan tumbuhan obat yang ada di sekitar kita.
Tanaman  berkhasiat  obat,  yang  dikenal masyarakat  adalah  Senggani  (Melastoma  af � ne D.  Don)  dari  suku  Melastomaceae.  Tanaman  ini berkhasiat  sebagai  penurun  demam  (antipiretik), pereda  nyeri  (analgesik),  peluruh  air  seni (diuretik),  mengobati  keputihan  (leukorea),  dan dapat  mengobati  berbagai  jenis  luka  tersayat (Dalimartha,  2000).  Hasil  skrining � tokimia menunjukkan  bahwa  ekstrak  metanol  daun Senggani mengandung senyawa tanin, � avonoid, steroid,  saponin,  dan  kuinon.  Fraksi  etil  asetat ekstrak  metanol  daun  Senggani  mempunyai aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  S.  aureus, E. coli, dan Bacilus cereus dengan KHM (Kadar Hambat  Minimal)  untuk  S.  aureus  0,78-1,56%, untuk  E.  coli  25-50%,  dan  Bacilus  cereus  0,39- 0,78% dengan metode difusi agar (Titi et al., 2007).
Berdasarkan uraian tersebut maka penelitian ini  dimaksudkan  untuk  menguji  aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun Senggani terhadap bakteri S. aureus, E. coli , S. aureus multiresisten (MR) , dan E.  coli multiresisten  (MR)  sehingga dapat dijadikan sebagai acuan pengobatan herbal untuk pengobatan penyakit yang disebabkan oleh bakteri.

## METODE

## 1.  Bahan dan Alat
a.  Bahan
Ekstrak  etanol  96%  daun  Senggani dari  Fakultas  Farmasi  UMS,  bakteri S. aureus , E. coli , S. aureus MR, E. coli MR yang  diperoleh  dari  Laboratorium  Biologi Fakultas  Farmasi  UMS,  akuades  steril, media BHI ( Brain Heart Infusion ) (Oxoid), media  MH  (Mueller  Hinton)  (Oxoid), media  SDA  ( Sabouroud  Dextrose  Agar ) (Oxoid),  cat  Gram A,  B,  C,  dan  D,  CMC Na 0,5% (Merck), dan alkohol 70%, silika gel  GF 254 ,  etil  asetat  p.a  (Merck),  asam asetat  glasial  p.a  (Merck),  akuades,  asam formiat  p.a  (Merck)  dan  pereaksi  semprot anisaldehid-H 2 SO 4, Liebermann-Burchard, KOH  etanolik,  FeCl 3 ,  Dragendorff,  dan sitroborat.
b. Alat Alat  timbang  (Ohaus),  alat-alat  gelas, bunsen, autoclave (Pressure steam sterilizer electric model N0. 25X), Laminar Air Flow (LAF)  (CV.  Srikandi),  oven  (Memmert), vortek (Thermolyne Corporation), inkubator  bakteri  (Memmert),  mikroskop (Olympus).
2. Cara Kerja a.  Pembuatan ekstrak Ekstrak  etanol  daun  Senggani  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  diperoleh dari Fakultas Farmasi Universitas Muhammadiyah Surakarta. Proses pembuatan ekstrak sebagai berikut: Ekstrak dibuat  dengan  cara  maserasi  dengan menggunakan  etanol  96%.  Satu  bagian serbuk  kering  daun  Senggani  dimasukkan ke  dalam  maserator,  ditambah  10  bagian etanol 96%, direndam selama 6 jam sambil sekali-kali  diaduk,  kemudian  didiamkan sampai  24  jam.  Maserat  dipisahkan  dan
proses  diulangi  2  kali  dengan  jenis  dan jumlah pelarut yang sama. Semua maserat dikumpulkan dan diuapkan dengan penguap vakum hingga diperoleh ekstrak kental.
b. Uji Aktivitas Antibakteri
Seri  konsentrasi  ekstrak  etanol  yang telah  dibuat,  masing-masing  ditambah dengan media MH, dikocok hingga benar- benar  homogen,  kemudian  dipadatkan dalam posisi miring. Selanjutnya jika media yang  telah  dicampur  ekstrak  telah  padat, sebanyak  50 μ L  suspensi  bakteri  yang telah  dibuat  setara  dengan  1  x  10 6 CFU/ mL  diteteskan  ke  dalam  media,  kemudian diratakan  dengan  ose  steril,  selanjutnya diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  18- 24  jam.  Kemudian  diamati  pertumbuhan mikrobanya.  Kadar  terkecil  yang  dapat membunuh mikroba disebut Kadar Hambat Minimal (KHM).
c. Uji Kualitatif Ekstrak

## Uji alkaloid
Ekstrak  etanol  dimasukkan  dalam tabung  reaksi  ditambah  1  mL  HCl  2  N, dipanaskan  di  atas  tangas  air  selama  2 menit,  didinginkan  dan  disaring.  Filtrat diambil  3  tetes  dan  diletakkan  pada  kaca arloji,  kemudian  ditambah  2  tetes  larutan Bouchardat.  Jika  tidak  terbentuk  endapan, maka tidak mengandung senyawa alkaloid. Filtrat  jika  direaksikan  dengan  Mayer  LP akan terbentuk endapan yang menggumpal berwarna  putih  atau  kuning  yang  larut dalam metanol P dan jika � ltrat direaksikan dengan  Bouchardat  membentuk  endapan coklat  sampai  hitam,  ada  kemungkinan terdapat alkaloid (Anonim, 1989).

## Uji saponin
Ekstrak  etanol  dimasukkan  dalam tabung  reaksi,  ditambah  10  mL  air  panas dan  dikocok  kuat  selama  10  detik  akan terbentuk buih mantap selama tidak kurang dari  10  menit  setinggi  1-10  cm.  Pada penambahan  1  tetes  HCl  2  N,  buih  tidak hilang  menunjukkan  adanya  senyawa saponin (Anonim, 1989).

## Uji polifenol
Ekstrak  etanol  dimasukkan  dalam tabung  reaksi  ditambah  10  mL  air  dan
dipanaskan  selama  10  menit.  Larutan didinginkan,  kemudian  disaring.  Filtrat yang  diperoleh  ditetesi  dengan  FeCl 3 sebanyak  3  tetes,  kemudian  diamati perubahan  warna  larutan.  Hasil  positif menunjukan  adanya  senyawa  polifenol adalah terbentuknya larutan berwarna ungu sampai biru (Anonim, 1989).

## Uji tanin
Ekstrak  etanol  dimasukkan  dalam tabung  reaksi  ditambah  10  mL  air  dan dipanaskan  selama  30  menit.  Larutan disaring dan ditambah 1 mL NaCl 2% maka akan  terbentuk  suspensi  atau  endapan  lalu disaring.  Filtrat  ditambah  dengan  5  mL larutan gelatin 1%. Jika terbentuk endapan maka dapat diindikasikan terdapat senyawa tanin (Anonim, 1989).
Uji  avonoid Ekstrak  etanol  disari  dengan  10 mL  metanol  dengan  pendingin  balik selama  10  menit,  disaring  selagi  panas. Filtrat  diencerkan  dengan  10  mL  air  lalu didinginkan,  setelah  dingin  ditambah  5 mL  eter,  dikocok  dengan  hati-hati  lalu didiamkan.  Lapisan  metanol  (lapisan bawah)  diambil  dan  diuapkan  pada  suhu 40°C.  Residu  dilarutkan  dalam  5  mL  etil asetat,  disaring.  Filtrat  diuapkan  hingga kering kemudian direaksikan dengan  aseton P,  sedikit  asam  borat  dan  asam  oksalat, dipanaskan  hati-hati  dalam  penangas  air. Sisa  yang  diperoleh  ditambah  10  mL  eter dan  diamati  dibawah  sinar  UV  366  nm, jika  larutan  ber � ouresensi  kuning  intensif, menunjukkan  adanya � avonoid  (Anonim, 1989).
Uji Kromatogra  Lapis Tipis
Fase diam yang digunakan adalah silika gel  GF  254,  fase  gerak  yang  digunakan adalah  kloroform:methanol:asam  format (8,5:1,5:0,5).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  aktivitas  antibakteri  bertujuan  untuk mengetahui aktivitas ekstrak etanol daun Senggani terhadap  bakteri S.  aureus,  E.  coli , S.  aureus MR , dan E.  coli MR . Uji  ini  dilakukan  dengan menggunakan metode dilusi padat dan hasil yang diperoleh  adalah  nilai  Kadar  Hambat  Minimal (KHM),  yaitu  kadar  terkecil  ekstrak  etanol  daun
Senggani  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri.
Uji  antibakteri  menggunakan  3  macam kontrol. Uji terhadap kontrol media menunjukkan bahwa  media  yang  digunakan  benar-benar steril,  hal  ini  ditunjukkan  dengan  tidak  adanya pertumbuhan  mikroba  pada  kontrol  media. Kontrol  pertumbuhan  dan  kontrol suspending agent menunjukkan bahwa bakteri dapat tumbuh baik,  sehingga  dapat  diketahui  bahwa  CMC  Na 0,5%  tidak  memiliki  aktivitas  antibakteri  dan masing-masing media yang digunakan merupakan media yang cocok untuk pertumbuhan S. aureus dan E. coli.
Uji aktivitas antibakteri ekstrak etanol daun Senggani  terhadap S.  aureus menunjukkan  nilai KHM adalah 2% sedangkan KHM terhadap E. coli adalah  3%.  Uji  daun  Senggani  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli multiresisten,  masih  menunjukkan  pertumbuhan sampai  kadar  ekstrak  7%.  Nilai  KHM  untuk E. coli adalah  3%,  jauh  berbeda  dengan  penelitian sebelumnya  yang  mendapatkan  nilai  KHM  25- 50%  (Titi et  al .,  2007).  Perbedaan  ini  dapat disebabkan asal tanaman, perbedaan metode yang digunakan, dan perbedaan pelarut yang digunakan. Titi et  al. (2007)  menggunakan  pelarut  metanol dan fraksi etil asetat. Pelarut metanol bersifat lebih polar  daripada  etanol,  sehingga  dapat  menyari senyawa-senyawa  polar  seperti  senyawa  fenol yang memiliki banyak gugus hidroksi.
Hasil uji aktivitas antibakteri daun Senggani menunjukkan bahwa aktivitas antibakteri ekstrak etanol  daun  Senggani  lebih  tinggi  terhadap S. aureus daripada E.  coli. Hal  tersebut  dapat diakibatkan  perbedaan  dinding  sel  mikroba yang  merupakan  penentu  penetrasi,  ikatan,  dan aktivitas obat (Jawetz et  al ., 2005). Dinding sel bakteri S.  aureus berlapis  tunggal  dan    tersusun atas  peptidoglikan  (protein  dan  gula)  serta  lipid dengan  kadar  rendah  (1-4  %),  sehingga  ekstrak etanol  yang  mengandung  senyawa-senyawa polar  seperti � avonoid  lebih  mudah  menembus dinding sel. Dinding sel bakteri E. coli lebih sulit ditembus  senyawa  yang  bersifat  polar  karena struktur dinding sel bakteri ini berlapis tiga yang tersusun  atas  peptidoglikan  dan  lipid  dengan kadar  yang  tinggi  (11-22  %).  Hasil  uji  terhadap bakteri multiresisten, sampai kadar ekstrak etanol daun Senggani 7% belum menunjukkan kematian bakteri.
Hasil  skrining � tokimia  ekstrak  etanol daun  Senggani  menunjukkan  adanya  kandungan polifenol,  tannin,  saponin,  dan � avonoid.  Hasil skrining menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Senggani  positif  mengandung  polifenol  dengan terbentuknya  larutan  berwarna  hijau  sampai  biru setelah  ditetesi  reagen  FeCl 3 yang  disebabkan adanya  reaksi  komplek  antara  polifenol  dengan FeCl 3 .  Adanya  tanin  ditunjukkan  dengan terbentuknya endapan setelah ditambahkan gelatin 1%.  Saponin  ditunjukkan  dengan  terbentuknya buih  yang  stabil.  Flavonoid  juga  ditunjukkan dengan � uoresensi kuning intensif di bawah sinar UV 366 nm (Wagner dan Bladt, 1996).
Analisis KLT daun Senggani menunjukkan adanya  polifenol  pada  Rf  0,4.  Bercak  tersebut setelah  disemprot  dengan  FeCl 3 dan  diamati secara  visual,  memberikan  warna  kelabu.  Positif � avonoid ditunjukkan pada Rf 0,7. Hasil KLT menunjukkan  di  bawah  sinar  UV 254nm terjadi pemadaman becak, pada UV 366 didapatkan bercak � uoresensi  kuning  kemerahan.
Berdasarkan  analisis  KLT,  daun  Senggani tidak  mengandung  alkaloid,  minyak  atsiri, dan saponin.
Kandungan senyawa � avonoid, polifenol,  tannin,  dan  saponin  pada  daun Senggani,
kemungkinan berkontribusi terhadap  aktivitas  antibakteri.  Aktivitas antibakteri  dari  saponin  diduga  melalui sifatnya  yang  memiliki  gugus  polar  dan non  polar  seperti  sabun  yang  merupakan senyawa aktif permukaan yang kuat sehingga dapat  menurunkan  tegangan  permukaan dinding  sel  bakteri  (Hertiani et  al .,  2003 cit Robinson, 1995). Diabsorbsinya saponin pada permukaan  sel  akan  menyebabkan  naiknya permeabilitas sehingga membran sel menjadi bocor  atau  rusak  yang  dapat  menimbulkan kebocoran  konstituen  sel  yang  esensial (Jawetz et al ., 2005). Senyawa � avonoid dapat mendenaturasi  protein  sel  bakteri  sehingga mengubah struktur dan menghilangkan sifat- sifat  khasnya  (Tjay  dan  Raharja,  2002). Senyawa � avonoid  memiliki  aktivitas antibakteri karena dapat membentuk senyawa kompleks dengan protein yang terdapat pada dinding  sel  maupun  protoplas  sel  (Hertiani et  al. ,  2003)  dan  senyawa  polifenol  bekerja dengan  cara  mempresipitasikan  protein  sel bakteri (Robbers, 1996).

## SIMPULAN
1.  Ekstrak  etanol  daun  Senggani  mempunyai
KHM  terhadap S.  aureus pada  konsentrasi 2%, sedangkan KHM terhadap E. coli sebesar 3%, dan belum mampu membunuh bakteri S. aureus MR dan E. coli MR sampai kadar 7%.
2.  Ekstrak  etanol  daun  Senggani  mengandung senyawa  polifenol, � avonoid,  tannin,  dan saponin.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  1989. Materia  Medika  Indonesia .  Jilid  V. Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta. 549-553
Dalimartha, S. 2000. Atlas Tumbuhan Obat Indonesia .
Jilid I. Trubus Argo Widya. Jakarta. 68-69. Hertiani T., Palupi, I.S., Sanliferianti, &
Nurwindasari,  H.D.  2003. Uji  Potensi
Antimikroba    terhadap S.  aureus,  E.  coli, Shigella  dysentriae ,  dan Candida  albicans dari  Beberapa  Tanaman  Obat  Tradisional untuk  Penyakit  Infeksi. Pharmacon . Vol.  4 No. 2 . UMS. Surakarta.
Jawetz,  E.,  Melnick,  J.L.,  &  Adelberg,  E.A.  2005. Mikrobiologi  Kedokteran . diterjemahkan oleh  Mudihardi,  E.,  Kuntaman,  Wasito, E.B.,  Mertaniasih,  N.M.,  Harsono,  S., Alimsardjono,  L.  Edisi  XXII.  Penerbit Salemba  Medika.  Jakarta.  327-335.  362- 363.
Robbers,  S.E.,  Speedie,  M.K.,  Tyler,  V.E. 1996. Pharmacognosy and Pharmacobiotechnology . A. Waverly
Company. USA. 139-140.
Robinson,  T.  1995. Kandungan  Organik  Tumbuhan Tinggi . Edisi  VI.  diterjemahkan  oleh Padmawinata, K. Institut Pertanian Bandung. Bandung.
Titi,  N.W.,  Rusmiati,  D.,    Farida,  Y.  2007.  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Dan  Fraksi  Ekstrak Daun Senggani ( Melastoma malabathricum Linn.)  Terhadap Staphylococcus  aureus, Escherichia  coli, Dan Bacillus  cereus Dengan  Metode  Difusi  Agar. Farmaka . 5 (3).
Tjay  dan  Raharja.  2002. Obat-obat  Penting:  Khasiat, penggunaan  dan  Efek-efek  Samping . Departemen Kesehatan Republik Indonesia. Jakarta.
Wagner,  H.  &  Bladt,  S.  1996.  Plant  Drug Analysis A Thin  Layer  Chromatography Atlas.  Second Edition. Springer German.