## PENDAHULUAN
Krisan  atau  biasa  disebut  dengan Seruni  merupakan  tanaman  hias  perdu yang sering dibudidayakan serta memegang  peranan  penting  dalam  budaya dan kehidupan manusia. Krisan
( Chrysanthemum ) merupakan tanaman hias bunga  yang  berasal  dari  dataran  Cina, kemudian  masuk  ke  Indonesia  sejak  abad ke-17  dan  mulai  dikembangkan  secara komersial  pada  tahun  1940  (Prihatman, 2000).  Setelah  itu  krisan  menjadi  tanaman

## INDUCTION  OF  DIRECT SOMATIC EMBRIOGENESIS OF
Chrysanthemum  IN  MS  AND NAA  MEDIA  COMBINED WITH  SOME  CYTOKININ CONCENTRATIONS
Induksi  Embriogenesis  Somatik Langsung    Tanaman  Krisan (Chrysanthemum sp.) Pada Media  MS    Dan  NAA  Yang dikombinasikan Dengan Beberapa Konsentrasi Sitokinin
Hestia  K.  C.  Sualang 1 ,  Edy  F. Lengkong 2 *, Pemmy Tumewu 2
1) Program    Studi Agronomi,  Fakultas Pertanian,  Universitas  Sam  Ratulangi, Manado, 95115, Indonesia
2) Staf Pengajar Fakultas Pertanian, Universitas  Sam  Ratulangi,  Jl.  Kampus Unsrat  Manado,  95515  Telp  (0431) 846539
*Corresponding author: fredylengkong.fl@gmail.com

## Abstract
This study aims to determine the effect of using MS media and ZPT NAA combined  with  several  concentrations  of  cytokinins,  namely  BAP  and Kinetin  on  somatic  embryogenesis  as  seen  from  the  growth  of  shoots  of chrysanthemum (Chrysanthemum sp.). This research was conducted from June 2022 to  October 2022 at  the Genetics Laboratory of the Faculty of Agriculture,  University  of  Sam  Ratulangi.  This  study  used  a  completely randomized design  (CRD) with  7 treatments namely A (NAA 2.0 ppm); AB1  (NAA  2.0  ppm  +  BAP  1.0  ppm);  AB2  (NAA  2.0  ppm  +  BAP  2.0 ppm);  AB3  (NAA  2.0  ppm  +  BAP  3.0  ppm);  AK1  (NAA  2.0  ppm  + Kinetin 1.0 ppm); AK2 (NAA 2.0 ppm + Kinetin 2.0 ppm); AK3 (NAA 2.0  ppm  +  Kinetin  3.0  ppm).  Each  treatment  was  repeated  7  times resulting  in  49  experimental  units.  Observational  data  were  analyzed using  the ANOVA test  and continued with the 5% LSD test. The results showed  that  MS  medium  and  growth  regulator  NAA  combined  with cytokinins  could  induce  somatic  embryogenesis  of  chrysanthemum plants, where concentrations of NAA 2.0 ppm and BAP 2.0 ppm had the best effect on the number and height of explant shoots. The concentration of  NAA  growth  regulator  at  2.0  ppm  gave  the  highest  number  of  roots and when combined with cytokinins it reduced the number of roots.
Keywords:  Growth  Regulatory  Substances,  Somatic  Embryogenesis, Chrysanthemum.

## Abstrak
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  penggunaan  media MS  dan  ZPT  NAA  yang  dikombinasikan  dengan  beberapa  konsentrasi sitokinin  yaitu  BAP  dan  Kinetin  terhadap  embriogenesis  somatik  yang dilihat  dari  pertumbuhan  tunas  tanaman  krisan  ( Chrysanthemum  sp. ). Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Juni 2022 sampai Oktober 2022 di Laboratorium  Genetika  Fakultas  Pertanian  Universitas  Sam  Ratulangi. Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  7 perlakuan yaitu A (NAA 2,0 ppm); AB1 (NAA 2,0 ppm + BAP 1,0 ppm); AB2  (NAA  2,0  ppm  +  BAP  2,0  ppm);  AB3  (NAA  2,0  ppm  +  BAP  3,0 ppm);  AK1  (NAA  2,0  ppm  +  Kinetin  1,0  ppm);  AK2  (NAA  2,0  ppm  + Kinetin  2,0  ppm);  AK3  (NAA  2,0  ppm  +  Kinetin  3,0  ppm).  Masing- masing perlakuan yang diulang 7 kali menghasilkan 49 satuan percobaan. Data  hasil  pengamatan  dianalisis  dengan  menggunakan  uji  ANOVA  dan dilanjutkan  dengan  uji  BNT  5%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa media  MS  dan  zat  pengatur  tumbuh  NAA  yang  dikombinasikan  dengan sitokinin  dapat  menginduksi  embriogenesis  somatik  tanaman  krisan, dimana  konsentrasi  NAA  2,0  ppm  dan  BAP  2,0  ppm  memberikan pengaruh terbaik terhadap jumlah dan tinggi tunas ekplan. Konsentrasi zat pengatur  tumbuh  NAA  2,0  ppm  memberikan  jumlah  akar  terbanyak  dan apabila dikombinasikan dengan sitokinin dapat menekan jumlah akar.
Kata kunci : Zat Pengatur Tumbuh, Embriogenesis Somatik, Krisan

## JURNAL  AGROEKOTEKNOLOGI TERAPAN Applied Agroecotechnology Journal
Agroteknologi Universitas Sam Ratulangi
e_ISSN:2797-0647
hias  yang  populer  di  Indonesia  yang produksinya meningkat dari tahun ke tahun karena  memiliki  bunga  yang  kaya  warna. Berdasarkan  data  Badan  Pusat  Statistik (2021),  menunjukkan  produksi  krisan  di Indonesia  sebanyak  344.031.088  tangkai bunga pada tahun 2021.
Permintaan krisan yang terus meningkat harus diimbangi dengan ketersediaan  bibit  yang  jumlah  dan  jenis banyak,  serta tepat  waktu.  Teknologi  yang dapat  menjadi  solusi  dalam  hal  tersebut adalah  kultur  jaringan.  Kultur  jaringan dapat  menjadi  solusi  untuk  mendapatkan bibit dengan baik, jumlah banyak dan lebih cepat.
Salah satu teknik perbanyakan kultur jaringan adalah dengan metode
embriogenesis  somatik.  Embriogenesis somatik adalah proses pembentukan embrio dari sel atau jaringan somatik yang dapat  berkembang  menjadi  tanaman  baru. Jalur  embriogenesis  somatik  di  masa mendatang  lebih  mendapat  perhatian karena  bibit  berasal  dari  satu  sel  somatik sehingga  bibit  yang  dihasilkan  lebih banyak  dan  seragam  dan  dengan  waktu yang lebih singkat (Lestari, 2011; Sukmadjaja, 2005).
Ciri  khusus  dari  embrio  somatik adalah  memiliki  struktur  bipolar  yakni mampu  membentuk  dua  calon  meristem, yaitu  meristem  akar  dan  meristem  tunas. Di  samping  itu  juga,  strukturnya  yang bipolar  dan  kondisi  fisiologis  yang menyerupai embrio zigotik maka perbanyakan  melalui  pembentukan  embrio somatik akan lebih menguntungkan daripada  perbanyakan  tunas  adventif  yang unipolar (Lestari, 2011).
Keberhasilan  embriogenesis  somatik tidak lepas dari faktor yang mempengaruhinya,  salah  satunya  zat pengatur  tumbuh.  Zat  pengatur  tumbuh adalah senyawa organik bukan nutrisi yang dapat mendorong pertumbuhan dan perkembangan  tanaman.  Umumnya  ada dua  golongan  zat  pengatur  tumbuh  (ZPT)
yang  digunakan  dalam  kultur  in  vitro, yakni  golongan  auksin  dan  sitokinin.  Dua hormon  tanaman  ini,  diketahui  saling berinteraksi satu sama lain dengan genotipe tanaman dan sangat
mempengaruhi dalam mengarahkan pertumbuhan  dan  perkembangan  suatu eksplan.  Dalam  kultur  jaringan  auksin berperan dalam pembentukan kalus, inisiasi akar dan embriogenesis. Sedangkan sitokinin  berperan  dalam  merangsang pembelahan  sel,  merangsang  inisiasi  dan pembentukan  tunas.  Interaksi  auksin  dan sitokinin dapat menentukan eksplan terdiferensiasi membentuk kalus, membentuk  tunas  adventif,  menumbuhkan tunas  aksilar  atau  membentuk  embrio somatik.
Penelitian  Shinoyama.  H,  Nomura, Tsuchiya, Kazuma (2003) mampu membuktikan  bahwa  ZPT  auksin  dan sitokinin  dalam  hal  ini  adalah  kombinasi dari  2,4-D  dan  BAP  atau  Kinetin  mampu menginduksi  embrio  somatik  dari  eksplan daun  tanaman  krisan  Dendranthema  x grandiflorum (Ramat.) Kitamura. Lengkong  (2009)  juga  memanfaatkan kombinasi  ZPT  auksin  dan  sitokinin berhasil menginduksi embrio somatic pada tanaman  kentang  unggul  local  Superjhon asal  Minahasa  Selatan.  Setiawati,  Arofah dan  Nurzaman  (2020)  menggunakan  ZPT 2,4-D dan BAP pada beberapa konsentrasi mampu  menginduksi  tunas  dari  kalus embrionik tanaman krisan.
Berdasarkan  hal  di  atas  maka dilakukan  penelitian  untuk  mengetahui pengaruh  penggunaan  media  MS  dan  ZPT NAA yang dikombinasikan dengan beberapa  konsentrasi  sitokinin  BAP  dan Kinetin  terhadap  embriogenesis  somatik tanaman krisan (Chrysanthemum sp.).

## Tujuan Penelitian
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah untuk  mengetahui  pengaruh  penggunaan media MS dan ZPT NAA yang dikombinasikan dengan beberapa
konsentrasi  sitokinin  BAP  dan  Kinetin
terhadap  embriogenesis  somatik  yang dilihat  dari  pertumbuhan  tunas  tanaman krisan ( Chrysanthemum sp.).

## METODOLOGI PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium  Genetika  Fakultas  Pertanian Universitas Sam Ratulangi Manado. Penelitian  ini  dilaksanakan  selama  4 (empat) bulan, mulai dari Juni 2022 sampai Oktober 2022.

## Alat dan Bahan Penelitian
Alat  yang  akan  digunakan  dalam penelitian ini antara lain; autoclave, drying oven/incubator, magnetic stirrer, timbangan analitik, beaker glass, pengaduk kaca, pipet tetes, pH meter, kompor, panci, botol  kultur  ukuran  230  ml  sebanyak  49 botol,  laminar  air  flow,  pinset,  scalpel, lampu  bunsen,  sprayer,  petridish,  tatakan kaca,  plastik  bening,  karet  gelang,  spidol, label, kertas milimeter block, alat tulis dan kamera.
Bahan  yang  akan  digunakan  dalam penelitian  ini  berupa  eksplan  daun  paling atas  tanaman  krisan  var.  Jayanti,  6-Benzyl Amino  Purin  (BAP),  Naphthaleneacetic Acid  (NAA),  Kinetin,  media  Murashige and  Skoog  (MS)  instan,  gula,  NaOH  atau HCl,  agar-agar,  aquades,  alkohol  70%  & 96%.

## Metode Penelitian
Metode  penelitian  yang  dilakukan yaitu  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap (RAL) dengan 7 perlakuan dan 7 ulangan sehingga terdapat 49 unit percobaan. Perlakuan zat pengatur tumbuh yang digunakan adalah auksin yaitu NAA, yang  dikombinasikan  dengan  beberapa konsentrasi  sitokinin  BAP  dan  Kinetin. Kombinasi perlakuan  adalah sebagai berikut:
1.  A (NAA 2,0 ppm)
2.  AB1 (NAA 2,0 ppm + BAP 1,0 ppm)
3.  AB2 (NAA 2,0 ppm + BAP 2,0 ppm)
4.  AB3 (NAA 2,0 ppm + BAP 3,0 ppm)
5.  AK1 (NAA 2,0 ppm + Kin 1,0 ppm)
6.  AK2 (NAA 2,0 ppm + Kin 2,0 ppm) 7.  AK3 (NAA 2,0 ppm + Kin 3,0 ppm)

## Prosedur Penelitian
1. Pembuatan Larutan Stok NAA
Pembuatan larutan stok NAA dilakukan  dengan  cara  bubuk  ZPT  NAA ditimbang  sebanyak  0,1  g  lalu  ditambah dengan  NaOH  1  N  beberapa  tetes  untuk melarutkan serbuk NAA. Kemudian ditambahkan  aquades  sebanyak  100  ml, menghasilkan  larutan  stok  Kinetin  100 ppm.
2. Pembuatan Larutan Stok BAP
Pembuatan larutan stok BAP dilakukan  dengan  cara  BAP  ditimbang sebanyak  0,05  g  lalu  ditambah  dengan NaOH 1 N beberapa tetes untuk melarutkan serbuk BAP. Kemudian ditambahkan  aquades  sebanyak  50  ml, menghasilkan larutan stok BAP 100 ppm.

## 3.  Pembuatan Larutan Stok Kinetin
Pembuatan  larutan  stok  Kinetin dilakukan dengan cara bubuk ZPT Kinetin ditimbang  sebanyak  0,05  g  lalu  ditambah dengan  HCl  1  N  beberapa  tetes  untuk melarutkan  serbuk  Kinetin.  Kemudian ditambahkan  aquades  sebanyak  50  ml, menghasilkan  larutan  stok  Kinetin  100 ppm.
4. Pembuatan  Media  MS  +  ZPT (lihat table 1)
5. Sub-kultur Tanaman Krisan
Eksplan  yang  akan  digunakan  untuk subkultur  adalah  buku  atau  nodus  krisan var. Jayanti diambil dari koleksi laboratorium  kultur  jaringan.  Subkultur dilakukan  di  dalam laminar  air  flow cabinet yang sudah disinari UV sebelumnya. Eksplan pada media regenerasi  sebelumnya  dipotong  yang terdiri  dari  nodus  dengan  satu  daun  dan setelah  itu  disubkultur  pada  media  MS  0 untuk  regenerasi  baru.  Setiap  botol subkultur  berisi  5  eksplan  nodus  krisan. Penanaman  untuk  bahan  penelitian  akan dilakukan setelah subkultur tersebut
mencapai kurang lebih 5 nodus atau sekitar 1-1,5 bulan.
6. Sterilisasi Alat
Sterilisasi  alat  yang  akan  digunakan dengan  cara  dicuci  menggunakan  sabun dan bayclin , kemudian dikeringkan terlebih dahulu.  Selanjutnya  alat-alat  yang  sudah kering tersebut dibungkus dengan menggunakan  kertas  HVS  dan  disterilisasi di dalam autoclave .
7. Penanaman Eksplan
Penanaman  eksplan  dilakukan  di dalam laminar  air  flow  cabinet .  Botol berisi media yang sudah disterilkan dibuka tutupnya.  Proses  ini  dilakukan  dengan menggunakan lampu bunsen sambil memutar  mulut  botol  dengan  titik  tengah poros untuk meminimalisir adanya bakteri, virus  atau  jamur.  Kemudian  eksplan  yang akan  digunakan  diambil  dari  botol  kultur hasil subkultur dan dipotong menggunakan scalpel pada  bagian  daun  paling  pucuk dengan  ukuran  ±  0,5  cm  di  atas  tatakan kaca.  Eksplan  daun  krisan  yang  telah
dipotong diambil dari tatakan dan diletakkan  secara  mendatar  pada  media yang  sudah  disiapkan  sesuai  perlakuan dengan  menggunakan  pinset,  dimana  satu botol  berisi  satu  eksplan.  Kemudian,  tutup botol  kultur  dengan  penutup  plastik  dan diikat dengan karet gelang.
8. Pemeliharaan Pemeliharaan eksplan dilakukan dengan menjaga kondisi ruang kultur pada suhu  20-24°C  dan  sumber  cahaya  dari lampu  Fluorescent/Neon.  Pemeliharaan juga  dilakukan  dengan  penyemprotan alkohol. Penyemprotan alkohol 70% dilakukan  secara  reguler  dengan  tujuan untuk meminimalisir adanya kontaminasi.
9. Pengamatan
Pengamatan  dilakukan  secara  rutin selama  10  minggu  dengan  mengamati perkembangan dari penelitian
menggunakan alat-alat yang sudah disiapkan  yaitu  kertas millimeter  block , penggaris, alat tulis, buku dan kamera.
Tabel 1. Kombinasi perlakuan ZPT NAA yang dikombinasikan dengan sitokinin, BAP, dan Kinetin
Perlakuan  MS (gr/500 ml) Gula (g) Agar (g) ZPT (ml) A 2,215 15 4 NAA 10 ml AB1 2,215 15 4 NAA 10 ml + BAP 5 ml AB2 2,215 15 4 NAA 10 ml + BAP 10 ml AB3 2,215 15 4 NAA 10 ml + BAP 15 ml AK1 2,215 15 4 NAA 10 ml + Kinetin 5 ml AK2 2,215 15 4 NAA 10 ml + Kinetin 10 ml AK3 2,215 15 4 NAA 10 ml + Kinetin 15 ml

## Variabel Pengamatan
Variabel yang diamati pada
penelitian ini:
1. Waktu Keluar Tunas (MST) Pengamatan  menurut  parameter  waktu keluar  tunas  (MST)  dilakukan  setiap seminggu  sekali  dengan  mengamati minggu  ke  berapa  tunas  krisan  keluar untuk pertama kalinya setelah tanaman dikulturkan.
2. Jumlah Tunas (buah) Perameter  jumlah  tunas  akan  diamati pada  akhir  penelitian,  dengan  cara menghitung secara manual berdasarkan
jumlah  tunas  yang  tumbuh  dari  setiap sampel.
3. Tinggi Tunas (mm) Parameter  tinggi  tunas  akan  dihitung pada  minggu  terakhir  pengamatan, dengan  cara  mengukur  dari  pangkal tunas  sampai  ujung  daun  tertinggi setiap  sampel  menggunakan  kertas millimeter block atau penggaris.
4. Jumlah Akar (buah) Parameter  jumlah  akar  dihitung  pada minggu  terakhir  pengamatan,  dengan cara  menghitung  setiap  akar  yang muncul dari eksplan.
Analisis Data Analisis data dilakukan dalam penelitian  ini  yaitu  menggunakan  analisis sidik  ragam  atau Uji  F  untuk  mengetahui perbedaan pengaruh tiap perlakuan terhadap  parameter  pengamatan.  Bila hasil sidik  ragam  berbeda  nyata  (F  hitung  >  F tabel  5%)  maka  akan  dilanjutkan  dengan Uji Beda Nyata Terkecil (BNT).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Waktu Keluar Tunas
Hasil analisis sidik ragam menunjukkan bahwa perlakuan NAA yang dikombinasikan dengan beberapa konsentrasi  sitokinin,  yaitu  BAP  dan kinetin  tidak  berpengaruh  nyata  terhadap waktu keluar tunas.
Penambahan ZPT diduga telah mendukung perkembangan eksplan melalui proses  pembelahan  sel  menjadi  embrio somatik.  Menurut  Lestari  (2011),  Zat pengatur tumbuh auksin dalam konsentrasi yang  relatif  tinggi  diperlukan  untuk memacu  pembentukan  kalus  embriogenik dan struktur embrio somatik.
Pengamatan minggu pertama eksplan sebagai  awal  pertumbuhan  kalus  ditandai dengan  pembengkakkan  eksplan  kurang lebih  3-4  kali  lipat  dari  ukuran  awal eksplan, kemudian diikuti dengan munculnya  kalus  yang  terlihat  berwarna hijau  bening  dengan  struktur  remah (friabel)  di  bagian  tepi  kemudian  disusul ke  permukaan  dan  tengah  eksplan.  Hasil penelitian  dari  Sinaulan,  Lengkong  dan Tulung  (2019)  bahwa  pertumbuhan  kalus embrionik  pada  tanaman  krisan  setelah  7 hari  dikulturkan.  Hasil  penelitian  dari Anggraeni,  Sulistyowati  dan  Purwati (2012) menunjukkan bahwa kalus embrionik  berwarna  putih  muncul  di minggu  ke-4  setelah  kultur  pada  media MS+BAP+2,4-D tanaman jarak pagar.
Eksplan berkembang dan membentuk embrio somatik sekunder yang siap  masuk  pada  tahap  pendewasaan
embrio yang selanjutnya dapat berkembang  menjadi  tunas  dan/atau  akar. Waktu  munculnya  tunas  ditandai  dengan adanya  pembengkakan  atau  penebalan berupa  tonjolan  (calon  tunas)  pada permukaan  eksplan.  Pada  penelitian  ini ZPT sitokinin dan auksin mampu menginduksi  tunas  dari  kalus  embrionik krisan mulai dari minggu ke empat sampai minggu terakhir.
Berdasarkan  penelitian  Setiawati et al. (2020),  tunas  dari  kalus  embrionik muncul pada konsentrasi ZPT 2 ppm 2,4-D +  0,5  ppm  BAP;  2  ppm  2,4-D  +  1  ppm BAP; serta 4 ppm 2,4-D + 1 ppm BAP, hal itu karena peranan ZPT BAP yang mampu menginduksi  tunas  dari  kalus  tanaman krisan.

## Jumlah Tunas
Hasil  sidik  ragam  menunjukkan bahwa  perlakuan  konsentrasi  zat  pengatur NAA yang dikombinasikan dengan beberapa konsentrasi sitokinin berpengaruh nyata terhadap jumlah tunas. Hasil uji BNT 5% disajikan pada Tabel 2.
Pada  penelitian  ini  jumlah  tunas terbanyak  terdapat  pada  perlakuan  AB2 (NAA  2,0  ppm  +  BAP  2,0  ppm).  Hal tersebut  sesuai  dalam  buku  Wattimena (1992),  bahwa  peranan  ZPT  sitokinin, khususnya BAP dalam media perbanyakan in  vitro dapat  memacu  dan  merangsang multiplikasi tunas.
Berdasarkan  hasil  penelitian  dari Sutriana,  Jumin  dan  Mardaleni  (2014), perlakuan  dengan  hanya  NAA  1,0  ppm tanpa  BAP  menghasilkan  jumlah  tunas terbanyak  pada  tanaman  anggrek.  Sama halnya  dengan  penelitian  ini,  penggunaan ZPT  NAA  tanpa  BAP  sudah  mampu menginduksi  tunas  dari  eksplan.  Hal tersebut  diduga  karena  eksplan  krisan mengandung  sitokinin endogen  dan  unsur- unsur  yang  dibutuhkan  media  yang menunjang  kebutuhan  nutrisi  tanaman sehingga mampu merangsang pembentukan tunas.
Gambar  1. Pengaruh  ZPT  NAA  yang  dikombinasikan  dengan  beberapa  konsentrasi sitokinin terhadap waktu terbentuk tunas (MST)
Tabel 2. Pengaruh ZPT NAA yang dikombinasikan dengan beberapa konsentrasi sitokinin terhadap jumlah tunas (tunas)
Perlakuan Rata-rata Jumlah Tunas (tunas) A (NAA 2,0 ppm) AB1 (NAA 2,0 ppm + BAP 1,0 ppm) AB2 (NAA 2,0 ppm + BAP 2,0 ppm) AB3 (NAA 2,0 ppm + BAP 3,0 ppm)
AK1 (NAA 2,0 ppm + Kinetin 1,0 ppm)
AK2 (NAA 2,0 ppm + Kinetin 2,0 ppm) AK3 (NAA 2,0 ppm + Kinetin 3,0 ppm) 3,57 bc 0,29 a 5,14 c 2,14 ab 1,00 ab 1,86 ab 1,00 ab BNT 5% = 2,74
Pada perlakuan menggunakan kinetin dalam  Tabel  2,  pemberian  kinetin  dengan beberapa  konsentrasi  tidak  berbeda  nyata satu  sama  lain.  Apabila  dibandingkan dengan  penggunaan  BAP,  rata-rata  jumlah tunas  dengan  kinetin  cenderung  lebih rendah  dibandingkan  BAP.  Hal  ini kemungkinan  karena efek  yang  BAP  lebih baik  daripada  Kinetin,  karena  BAP memiliki  gugus  benzyl  yang  tidak  mudah dirombak  oleh  enzim  dalam  jaringan tanaman  (Moore,  1979 dalam Supriati et al .,  2002).  Menurut  penelitian  Sintha
(2017),  beberapa  konsentrasi  kinetin  yang dikombinasikan dengan BAP maupun yang tidak  menunjukkan  bahwa  kinetin  kurang berpengaruh  terhadap  pembentukan  tunas. Oleh karena itu, dalam penelitian mendatang  konsentrasi  kinetin  mungkin bisa  dinaikkan  yang  akhirnya  dapat memicu proses induksi tunas.
Tinggi Tunas
Hasil  sidik  ragam  menunjukkan bahwa perlakuan NAA yang dikombinasikan  dengan  BAP  dan  kinetin berpengaruh  nyata  terhadap  tinggi  tunas. Hasil uji BNT 5% pada Tabel 3.
Berdasarkan  analisis,  rata-rata  tinggi tunas  yang  paling  tinggi  adalah  pada perlakuan AB2 (NAA 2,0 ppm + BAP 2,0 ppm).  Menurut  Wareing  dan  Phillips (1981) dalam Yelnititis  (2018),  sitokinin merupakan  ZPT  yang  jika  dikombinasikan dengan auksin dapat merangsang pembelahan dan menentukan arah diferensiasi sel.
Pada  perlakuan  AB3  (NAA  2,0  ppm +  BAP  3,0  ppm)  menunjukkan  penurunan jumlah  tunas  saat  konsentrasi  BAP bertambah.  Hasil  tersebut  membuktikan bahwa penambahan sitokinin memperlambat  pertumbuhan  tinggi  tunas.
Hal  ini  disebabkan  karena  setiap  tanaman memiliki  toleransi  unsur  hara  yang
berbeda.  Sitokinin  endogen  pada  eksplan mampu  mendorong  pembentukan  tunas sehingga  memerlukan  sitokinin  yang  tidak terlalu  tinggi.  Menurut  penelitian  Tilaar, Rantung dan Tulung (2015), BAP berpengaruh  nyata  terhadap  tinggi  tunas dengan  rata-rata  tunas  tertinggi  terdapat pada  perlakuan  1  ppm  BAP.  Pada penelitian tersebut diketahui bahwa penambahan konsentrasi BAP
menyebabkan  terhambatnya  pertambahan tinggi tunas tanaman krisan kulo.
Hasil  analisis  ragam  menunjukan bahwa  beberapa  konsentrasi  kinetin  tidak berbeda nyata pengaruhnya terhadap tinggi tunas dibandingkan dengan BAP. Menurut penelitian  dari  Prayugo  (2017),  interaksi antara  ZPT  kinetin  dan  NAA  berpengaruh
tidak nyata terhadap parameter tinggi tunas tanaman  krisan.  Selain  itu,  hasil  penelitian lain  dari  Tilaar et  al . (2015),  hasil  analisis ragam  menunjukan  bahwa  ZPT  kinetin tidak berbeda pengaruhnya terhadap tinggi tunas  tanaman  krisan.  Pada  dasarnya sitokinin  dapat  merangsang  morfogenesis, pembelahan  sel  dan  pertumbuhan  pucuk lateral.  Akan  tetapi,  pada  penelitian  ini peran  ZPT  kinetin  tidak  terlalu  efektif dalam pertumbuhan tinggi tunas.

## Jumlah Akar
Hasil  sidik  ragam  menunjukkan bahwa perlakuan
NAA yang dikombinasikan  dengan  BAP  dan  kinetin berpengaruh  nyata  terhadap  jumlah  akar. Hasil uji BNT 5% pada Tabel 4. Tabel 3.  Pengaruh  ZPT  NAA  yang  dikombinasikan  dengan  beberapa  konsentrasi sitokinin terhadap tinggi tunas (mm) Perlakuan Rata-rata Tinggi Tunas (mm) A (NAA 2,0 ppm) AB1 (NAA 2,0 ppm + BAP 1,0 ppm)
AB2 (NAA 2,0 ppm + BAP 2,0 ppm) AB3 (NAA 2,0 ppm + BAP 3,0 ppm) AK1 (NAA 2,0 ppm + Kinetin 1,0 ppm)
AK2 (NAA 2,0 ppm + Kinetin 2,0 ppm) AK3 (NAA 2,0 ppm + Kinetin 3,0 ppm) 5,71 bc 0,43 a 6,86 c 4,57 abc 1,14 ab 2,29 ab 0,86 ab

## BNT 5% = 4,36
Keterangan: angka yang diikuti dengan huruf yang sama, tidak berbeda nyata berdasarkan uji BNT 5%.
Tabel 4.  Pengaruh  ZPT  NAA  yang  dikombinasikan  dengan  beberapa  konsentrasi sitokinin terhadap jumlah akar (akar) Perlakuan Rata-rata Jumlah Akar (akar) A (NAA 2,0 ppm) AB1 (NAA 2,0 ppm + BAP 1,0 ppm) AB2 (NAA 2,0 ppm + BAP 2,0 ppm) AB3 (NAA 2,0 ppm + BAP 3,0 ppm)
AK1 (NAA 2,0 ppm + Kinetin 1,0 ppm)
AK2 (NAA 2,0 ppm + Kinetin 2,0 ppm) AK3 (NAA 2,0 ppm + Kinetin 3,0 ppm) 14,57 b 2,57 a 2,57 a 2,57 a 1,29 a 1,43 a 4,57 a

## BNT 5% = 6,27
Keterangan: angka yang diikuti dengan huruf yang sama, tidak berbeda nyata berdasarkan uji BNT 5%.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  pemberian  NAA  dengan  BAP, maupun  NAA  dengan  kinetin  juga  bisa memacu  pembentukan  perakaran  eksplan walaupun  jumlah  akar  yang  muncu  jauh
lebih  rendah  dengan  yang  hanya  diberi auksin.  Sedangkan  penambahan  ZPT sitokinin dapat mencegah atau menurunkan potensi  pertumbuhan  akar  pada  eksplan. Berdasarkan  hasil  penelitian,  perlakuan  A
(NAA 2,0 ppm) menunjukkan jumlah akar terbanyak dengan rata-rata 14,57 akar. Hal tersebut sesuai dengan pendapat Wattimena (1992) bahwa penggunaan ZPT auksin  dalam  kultur  jaringan  berperan dalam  pembentukan  akar.  Pada  penelitian Setiawati et  al .  (2020),  kemunculan  akar pada  kalus  terlihat  pada  ZPT  dengan konsentrasi  2  ppm  2,4-D  +  1  ppm  BAP; 4 ppm  2,4-D  +  0,5  ppm  BAP;  dan  2  ppm 2,4-D  +  0,5  ppm  BAP.  Dengan  demikian, dapat  disimpulkan  bahwa  konsentrasi auksin eksogen yang ditambahkan ditambah  dengan  auksin  endogen  dalam eksplan  dapat  merangsang  pembentukan akar pada kalus.

## KESIMPULAN
Media  MS  dan  zat  pengatur  tumbuh NAA yang dikombinasikan dengan sitokinin dapat menginduksi embrio somatik tanaman krisan, dimana konsentrasi  NAA  2,0  ppm  dan  BAP  2,0 ppm  memberikan  jumlah  dan  tinggi  tunas terbaik.
Zat  pengatur  tumbuh  NAA  2,0  ppm memberikan  jumlah  akar  terbanyak  dan apabila  dikombinasikan  dengan  sitokinin dapat menekan jumlah akar.

## DAFTAR PUSTAKA
Badan Litbang Pertanian. 2021. Balitbangtan  Tingkatkan  Kualitas Krisan  Sesuai  Standar  Ekspor  di Tomohon . URL : https://www.litbang.pertanian.go.id/i nfo-aktual/4230/ , 9 Mei 2022.
Lengkong, E.F. 2009.
Regenerasi
Tanaman  Melalui  Embryogenesis Somatik pada Kentang Unggul Lokal Superjhon  Asal  Minahasa  Selatan. Jurnal Formas 2(4):244-249.
Lestari,  E.  2011.  Peranan  Zat  Pengatur
Tumbuh
dalam Perbanyakan
Tanaman  melalui  Kultur  Jaringan.
Jurnal AgroBiogen , 7(1) : 63-68.
Prayugo, S. H. 2017. Pengaruh Pemberian
Kinetin Dan NAA
Terhadap Pertumbuhan  Planlet  Stek  Buku
Tanaman  Krisan  ( Chrysanthemum indicum L). Skripsi . Fakultas Pertanian Universitas Muhammadiyah  Sumatera  Utara. Medan.
Prihatman, K. 2000. Krisan ( C. morifolium Ramat,  C.  indicum,  C.  daisy ). Budidaya Pertanian , 1-13.
Setiawati,  T.,  Arofah,  A.,  Nurzaman,  M.
2020. Induksi Kalus Krisan
( Chrysanthemum  morifolium Ramat var.  Tomohon  Kuning)  Dengan  2,4- Dichlorophenoxyacetic  Acid (2,4-D) Dan  6- Benzylaminopurine (BAP) Pada  Kondisi  Pencahayaan  Berbeda. Jurnal Pro-Life, 7(1) : 13-26.
Shinoyama, H., Nomura, Y., Tsuchiya, T., Kazuma,  T.  2004.  A  Simple  and Efficient Method for Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration from Leaves of Chrysanthemum  [ Dendranthema  × grandiflorum (Ramat.)  Kitamura].
Plant Biotechnology, 21(1) : 25-33.
Sinaulan,  J.,  Lengkong,  E.,  Tulung,  S. 2019.  Respon  Pembentukkan  Kalus Embrionik  Tanaman  Krisan  Kulo ( Chrysanthemum morifolium )
Terhadap  Pemberian  Zat  Pengatur Tumbuh Sitokinin. Cocos , 1(1) :1-9.
Sukmadjaja,  D.  2005.  Embriogenesis somatik  langsung  pada  tanaman cendana. Jurnal Bioteknologi Pertanian , 10(1) : 1-6.
Supriati,  Y.,  Adil,  W.,  Sukmadjaja,  D., Mariska, I. 2002. Peningkatan Multiplikasi Tunas dan Induksi Akar Tanaman  Iles-iles  melalui  Kultur In Vitro . Prosiding  Seminar  Hasil Penelitian Rintisan dan Bioteknologi Tanaman : 222-229.
Sutriana,  S.,  Jumin,  H.  B.,  Mardaleni. 2014.  Interaksi  BAP  dan  NAA
Terhadap Pertumbuhan Eksplan Anggrek  Vanda  Secara In-Vitro . Jurnal  Dinamika  Pertanian,  29(1) : 1-8.
Tilaar,  W.,  Rantung,  J.,  Tulung,  S.  2015.
Induksi  Tunas  Dari  Nodul  Krisan Kulo  Dalam  Media  Murashige  Dan
Skoog Yang Diberi Sitokinin.
Eugenia, 21(2) : 94-104.
Wattimena,  G.  A.  1992. Bioteknologi
Tanaman .  Departemen  Pendidikan dan  Kebudayaan  Direktoran  Jendral Pendidikan  Tinggi  Pusat  Antar Universitas  Bioteknologi.  Institut Pertanian Bogor.
Yelnititis.  2018.  Embriogenesis  Somatik Rotan  Tohiti  ( Calamus  inops Becc.
ex Heyne). Jurnal Pemuliaan
Tanaman Hutan, 12(1) : 41-50.