Identifikasi Keragaman Genetik Gen Growth Hormon Receptor Dengan Enzim Restriksi Mbo Ii (Ghr|Mbo Ii) pada Sapi Bali
(Polymorphism of Growth Hormone Receptor Gene with Restriction Enzyme MBO II (GHR|MBO II) in Bali Cattle )
Nurul Huda 1) , Made Sriasih 2) , Maskur 3)
1 ) Program Magister Manajemen Sumberdaya Peternakan, Universitas Mataram
2) Laboratorium Mikrobiologi dan Bioteknologi,Fakultas Peternakan, Universitas Mataram ,. 3 ) Laboratorium Genetika dan Pemuliaan Ternak, Fakultas Peternakan Universitas Mataram
Email: young_nh@yahoo.com
Diterima : 10  Maret 2015/ Disetujui:  20  Mei 2015

## ABSTRACT
Growth  Hormone  Receptor  (GHR)  gene  is  a  member  of  the  super  familycytokine/hematopoietin receptor. GHR plays a role in  mediating the biological activity of  growth hormone on target cells that lead to the affection of the nature ofgrowth in beef cattle carcasses and the nature of milk production in dairy  cows.  This  study  was  designed  to  identify  the  genetic  diversity  of  GHR  genes  exon  10  in  Bali cattle.  Genotype  variation  of  gene  candidates  was  identified  using  PCR-RFLP  technique.  The  results showed that mutation at position of 755bp exon 10 of GHR gene as determined by Maskur (2012) can be  identified  using  MBO  II  restriction  enzymes  at  position  of  125bp  or  at  position  of  282bp  base nucleotidescaused  by  transition  mutation  of    C/T  and  substitution  of  amino  acid  threonine  to isoleucine.Genotype identification of  GHR gene exon 10 resulted in three individual genotypes in Bali cattle population namely CC, TT and CT with frequency of 0.1931; 0.5455 and 0.2614respectively. The result  of  X²  test  and  heterozygosity  observationas  well  as  heterozygosity  expectation  indicate  that  the genotypedistribution  on  Bali  cattle  population  in  this  study  were  not  in  Hardy-Weinberg  equilibrium (Hardy-Weinberg  Equilibrium/  HWE).  The  value  of    GHR|MBO  II  gene  Polymorphic  Informative Content was 0.342051, might be used for genetic identifier, and was quite informative as gene identifier for linkage analysis in the population.
Keywords : growth hormone receptor, PCR-RFLP,MBO II, Bali cattle

## PENDAHULUAN
Penciri  DNA  dikembangkan  untuk  mende- teksi  sifat  unggul  seekor  ternak  dalam  waktu yang  relatif  lebih  cepat  dan  dalam  skala laboratorium  yang  lebih  akurat.  Sifat-sifat  pro- duksi pada ternak seperti performan pertumbuh- an,  kualitas  dan  kuantitas  karkas,  merupa-kan sifat yang memiliki nilai ekonomis penting pada ternak  yang  berada  dibawah  kontrol  beberapa gen.  Gen Growth  Hormone (GH), Growth Hormone  Receptor (GHR), insulin-like  growth factorI (IGF-I), Leptin ,  dan Pit-1 merupakan
kelompok  gen  yang  mengontrol  sifat  partum- buhan  pada  ternak  sapi  potong  (Ho  and Hoffman,  1993).Pertumbuhan  merupakan  suatu proses  deposisi,  pemindahansubstansi  sel-sel, serta  peningkatan  ukuran  dan  jumlah  sel  pada tingkat  dan  titik  berbeda  dalam  suatu  waktu tertentu  yang  dipengaruhi  oleh  gen-gen  per- tumbuhan (Lawrence dan Fowler, 2002).
Gen Growth  Hormone  Receptor (GHR) merupakan  anggota  dari  super  family  reseptor cytokine/haemato-poietin.  Famili  dari  reseptor ini terdiri dari prolactin, erythropoietin, interfe- rons,  dan  interleukins  3-7  (Carter-Su et  al .,
Nurul Huda, Made Sriasih, Maskur (Identifikasi Keragaman Genetik...)
1997).  Gen  GHR  pada  sapi  dipetakan  sebagai gen  tunggal  yang  terletak  pada  kromoson  20 (Moody et al., 1995), terdiri atas 10 ekson dan
9  intron,  dengan  panjang  25.688  bp  (Lucy et al., 1998; Jiang dan Lucy, 2001).
GHR  memiliki  fungsi  memediasi  aktivitas biologi  hormon  pertumbuhan  pada  sel  target (Rotwein et  al .,  1994;  Argetsinger  dan  Carter- Su,  1996),  yang  mempengaruhi  sifat  partum- buhan  karkas  pada  sapi  pedaging  dan  sifat produksi susu pada sapi perah. Mutasi pada gen GHR  dapat  menyebabkan  keterlambatan  per- tumbuhan  pada  manusia  yang  dikenal  sebagai GH resistence atau GH insensitif (Rosenbloom et  al .,  1997).  Oleh  karena  fungsinya  yang penting, gen GH dan GHR merupakan kandidat gen  untuk  program Marker  Asissted  Selection atau  penanda  genetik  untuk  pertumbuhan, karkas  dan  produksi  susu  pada  ternak  khu- susnya pada sapi (Beauchemin et al ., 2006).
Keragaman  gen  GHR  diharapkan  dapat dijadikan  sebagai  informasi  dasarsebagai  gen mayor  yang  mem-pengaruhi  tingkat  produksi ternak.  Keragaman  genetik  mengacu  pada variasi dalam level gen individu (polimorfisme) dalam  sebuah  spesies  dan  adanya  sebuah mekanisme  dalam  populasi  untuk  menyesuai- kan  diri  dengan  perubahan  lingkungan  (Soy- sal,  2004).  Disamping  itu  polimor-fisme  gen dapat  digunakan  sebagai  alat  untuk  menge- lompokkan  dan mempelajari  kekerabatan  antar bangsa (Liefers et al. , 2005).
Keragaman  genetik  fragmen  gen  GHR| Alu I pada exon 10 telah diiden-tifikasi pada beberapa sapi  pedaging/  potong.  Ge et  al .  (2000) mengidentifikasi single  nucleotide  polymor- phism (SNP)  fragmen  gen  GHR| Alu I  sapi Angus, yang berlokasi pada posisi 76 (T/C), 200 (G/A), 229 (T/C) dan 257 (A/G) bp. Sementara Maskur et al. (2012), melaporkan dua SNP baru pada  exon  10  gen  GHR  pada  sapi  Bali  yang disebabkan oleh mutasi substitusi Timin dengan Sitosin  (T/C)  pada  posisi  basa  702  bp  dan transisi  Sitosin  dengan  Timin  (C/T)  pada  posisi 755 bp.
Keragaman  genetik  sapi  Bali  akibat  adanya mutasi pada exon 10 gen GHR tersebut menarik untuk  dikaji  meng-ingat  informasi  ini  menjadi penting karena besar manfaatnya untuk program pemuliaan.

## MATERI DAN METODE
Penelitian  ini  menggunakan  sampel  darah sapi  Bali  yang  diambil  dari  kelompok  peternak sapi  bantuan  JICA  dan  ACIAR  di  Kabupaten Lombok Barat, Kabupaten Lombok Tengah dan Kabupaten  Lombok  Timur  yang  dipelihara secara  intensif.  Sampel  darah  sapi  Bali  yang digunakan  me-rupakan  koleksi  Laboratorium Imuno-biologi  Fakultas  MIPA  Universitas Mataram. Sampel darah yang di-gunakan dalam penelitian ini  adalah  sebanyak  88  sampel  darah sapi Bali terdiri dari 49 sampel darah jantan dan 39 sampel darah betina.

## Ekstraksi DNA genom
Ekstraksi DNA genome dilakukan mengikuti petunjuk  Sambrook et  al .  (1989)  yang dimodifikasi  oleh  Maskur et  al. (2014)  dengan menggunakan buffer lisis sel untuk mendegradasi  dinding  sel  dan  fenol-khloroform untuk mendegradasi protein dan lemak kemudian  dipresifitasi  menggunakan  etanol absolut.  Proses  berikutnya  ada-lah  pemurnian menggu-nakan RNAse.

## Polymerase chain reaction (PCR)
Komposisi  reaksi  PCR  dikondisikan  pada volume reaksi 15 μL terdiri atas 100 ng DNA, 2 x Taq  Master  Mix  (Taq  DNA  Polymerase  0,05 μ/mL,  2x  vibuffer  A,  0,4  mM  dNTP  dan  3  mM MgCl 2 ),  10  pmol/  μL  primer  F,  10  pmol/  μL primer  R,  50  mM  MgCl 2, ddH 2 O  pH  7  dengan menggunakan sekuen nukleotida pengapit forward dan reverse primer masing-masing  F :5’- GCTAACTTCATCGTGGACAAC ‘3R:5’- TATGGCATGATTTTGTTC  AG’3 .  Amplifi- kasi  dilakukan  selama  35  siklus  dengan denaturasi awal pada suhu 94 o C selama 5 menit, diikuti  35  siklus  berikutnya  masing  94 o C  x  15
Nurul Huda, Made Sriasih, Maskur (Identifikasi Keragaman Genetik...)
detik, suhu annealing 56 o C x 45 detik. Satu siklus ekstensi  awal    pada  suhu  72 o C  x  1  menit, kemudian  diakhiri  satu  siklus  berikutnya  pada 70 o C  selama  10  menit  dengan  menggunakan mesin PCR (SensoQuest, Germany). Produk PCR di  elektroforesis  pada  gel  agarose  1.5%, Kemudian divisualisasi pada UV tran- siluminator.
Polymerase
chain reaction-restriction fragment fength polymorphism (PCR–RLFP).
Produk  PCR  yang  diperoleh  dari  masing- masing  gen  target  dianalisis  menggunakan RFLPmelalui pemo-tongan menggunakan enzim restriksi  MBOII.  Adapun  komponen  reaksi dalam pemotongan fragmen gen hasil amplifikasi PCR terdiri dari 10 µl DNA produk PCRditambahkan 0,5 µL enzim restriksi MBOII (0,25  U);  1,5  µL  buffer  enzim  (10x)  dan  3  µL ddH 2 O,sampai volume produk PCR  – RLFP 15 µL. Selanjutnya n inkubasi selama 16  jam pada suhu 37 o C.

## Genotypingkandidat gen
Elektroforesis  dilakukan  dengan  gel  agarose pada    konsentrasi    2%    dan  dijalankan  pada tegangan  100  volt  selama  30  -  45  menit.  Hasil elektroforesis  diamati  dan  difoto  dengan bantuan  UV  trans  iluminator  (Alpha  Imager). Penentuan  posisi  pita  DNA  pada  gel  agarose dilakukan secara manual.
Ukuran  dan  jumlah  dari  alel  yang  muncul pada  gel  ditentukan  berdasarkan  asumsi  bahwa semua pita DNA dengan laju migrasi yang sama adalah  homolog.  Alel  T  adalah  SNP  dengan nukleotida  T  (terpotong  enzim  MBO  II), sedangkan  alel  C  adalah    SNP  dengan nukleotida C (tidak terpotong enzim MBO II.

## Analisis data
Frekuensi genotipe dan alel dihi-tung dengan menggunakan  rumus  Nei  dan  Kumar  (2000). Freku-ensi Alel dapat dihitung dengan cara :
Keterangan : Xi = frekuensi alel ke-i, n ii =jumlah sampeldengan genotipe ii, n ĳ = jumlah sampel dengan genotipe ij,
N = Jumlah individu sampel.
Frekunsi genotype dapat dihitung dengan cara :
Keterangan :
Xi = Frekunsi genotif ke i n i = Jumlah individu bergenotipe i N = jumlah individu sampel
Keseimbangan  Hardy  Weinberg  diuji  dengan  uji Khi-Kuadrat (Hartl & Clark 1997)
Keterangan: χ 2 = uji Chi- Kuadrat Obs = jumlah pengamatan genotip ke-i Exp  = jumlah harapan genotip ke-i
Heterozigositas  pengamatan  (Ho),  hetero- zigositas  harapan  (He)  dan  standar  eror heterozigositas harapan (Weirs 1996)
Frekuensi  Heterozigositas Pengamatan:
Keterangan: H o =frekuensi heterozigositas pengamatan N 1ij = jumlah individu heterozigositas pada lokus ke-1 N   = jumlah individu yang dianalisis
Heterozigositas Harapan:
Keterangan: H e = heterozigasitas harapan P 1i = frekuensi alel ke I pada lokus 1
Nurul Huda, Made Sriasih, Maskur (Identifikasi Keragaman Genetik...)
n   = jumlah alel pada lokus ke-1 Tingkat  informasi  suatu  alel  dihitung  dengan pendekatan nilai polymorphic informative content (PIC) :
Keterangan P i = frekuensi alelke i n = jumlah alel per perinci (marker)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Produk  PCR  berukuran  sekitar  342  bp (Gambar  1),  berada  pada  posisi  exon  10  gen GHR .  Berdasarkan  Hasil  penjajaran  sekuen yang  dilakukan  oleh  Maskur et  al. (2012) menggunakan  program  BioEdit  dan  Mega4 terindikasi  adanya  mutasi  baru  pada  exon  10 gen  GH  (Gambar  2).  Hasil  identifikasi  sekuen DNA  menunjukkan  ruas  gen  GHR  yang diamplifikasi  terdapat  dua  situs  pemotongan MBO  II  yaitu  pada  posisi  38  bp  dan  125  bp exon  10  bovine Growth  Hormone  Receptor (Gen  Bank  Kode  Akses  AF140284)  seperti terlihat  pada  Gambar  3  dan  menghasilkan  dua alel, yaitu alel C ( uncu t) dan alel T ( cut) . Alel C tidak  terpotong  dengan  dengan  MBO  II, menghasilkan satu fragmen DNA berukuran 342 bp  sedangkan  alel  T  terpotong  pada  situs pemotongan    MBO  II,  menghasilkan  tiga fragmen    DNAberukuran  panjang  217  bp,  125 bp dan 87 bp.
Fragmen  gen  GHR|MBO  II  menghasilkan tiga  macam  genotipe,  yaitu  fragmen  yang  tidak terpotong dikenal dengan genotipe CC, fragmen yang terpotong menjadi tiga pita dikenal dengan genotipe  TT,  dan  fragmen  gabungan  (empat pita) dikenal dengan genotipe CT (Gambar 4.).
Mutasi  transisi  pada  basa  755  bp  yang dilaporkan  oleh  Maskur  (2012)  berhasil diidentifikasi  dengan  meng-gunakan  enzim restriksi  MBO  II  dimana  basa  C  (Cytosin) diubah  menjadi  T  (Timin)  pada  posisi  125  bp gen  GHR  exon  10  atau  pada  posisi  basa nukleotida  282  bpsesuai  sekuen  GHR  di Gen
Bank (Kode  Akses  AF140284).  Posisi  mutasi transisi  C/T  dan  substitusi  asam  amino  pada ekson 10 gen GHR dapat dilihat pada Gambar 5.
Mutasi  transisi  C/T  yang  dilaporkan  oleh Maskur  (2012)  pada  posisi  282  bp  merupakan mutasi  titik  ( point  mutation )  mengubah  sekuen nukle-otida  pada  kodon  44  exon  10  yaitu  ACC yang  menyandikan  asam  amino threonin menjadi  AUC  yang  menyandikan  asam  amino Isoleucine . Menurut Windelspecht (2007) mutasi  transisi  ini  terjadi  karena  adanya substitusi  antara  satu  basa  purin  (Adenin) dengan basa  Purin lainnya (Guanin) atau antara satu  basa  Pirimidin  (Timin)  dengan  basa Pirimidin lainnya (Sitosin).

## Frekuensi  alel  dan  genotipe  gen  GHR-  MBO II
Mutasi  transisi  C/T  pada  pada  exon  10 menghasilkan  dua  alel  yaitu  C  dan  T  dengan distribusi frekuensi alel T lebih besar dibandingkan  alel  C  yaitu  masing-masing 0,6761 dan 0,3239 (Tabel 1).
Alel  C  merupakan  alel  minor  dengan frekuensi  yang  lebih  rendah  dari  alel  T. Identifikasi genotipe menggunakan teknik PCR- RFLP  gen  GHR  exon  10  menghasilkan  tiga genotipe individu dalam populasi sapi Bali yaitu CC,  TT  dan  CT  dengan  frekuensi  masing- masing 0,1931; 0,5455 dan 0,2614.
Hasil  uji  X 2 menunjukkan  bahwa  distribusi genotipe  tidak  berada  dalam  keseimbangan Hardy–Weinberg (Hardy-Weinberg Equilibrium /HWE).  Frekuensi  genotipe  pada  lokus  gen GHR exon 10 menunjukkan ketidak- seimbangan  (X²  hitung  >  X²  tabel),  Tabel  2. menunjukkan  hasil  pengukuran  indeks  genetik dari populasi sapi Bali yang meliputi heterozigositas  pengamatan  (H o ),  heterozigosi- tas harapan (H e ), Standart Eror dan Polymorphic Infor-mation  Contents (PIC).  Nilai  hetero- zigositas  pengamatan  (H o )  se-besar0,261lebih rendah dibandingkan nilai heterozigositas harapan (H e ). Perbedaan antara nilai Ho dan He bahwa  telah  terjadi  ketidak-seimbangan  Hardy- Weinberg yaitu perubahan frekuensi gen yang
Nurul Huda, Made Sriasih, Maskur (Identifikasi Keragaman Genetik...)
Gambar 1. Visualisasi Hasil Amplifikasi Ruas Gen GHR|MBO II pada Gel Agarose 1,5%
Gambar 2. Penjajaran sekuen DNA exon 10 gen GHR .
Gambar  3.  Fragmen  Gen  GHR|MBO  II  di  dasarkan  pada  Sekuens  Gen  GHR  di  Gen  Bank    (Kode  Akses AF140284)
Ket :Posisi Primer (forword dan Reverse) bergaris bawah dan berwarna hijau Situs pemotongan enzim MBO II (cetak tebal dan diblok abu)
Tabel 1. Frekuensi alel dan genotipe gen GHR - MBO II pada sapi Bali
Gen N Frekuensi alel Frekuensi Genotipe X² (HWE) X² C T CC TT CT (0,05) GHR 88 0,3239 0,6761 0,1931 0,5455 0,2614 14,307* 5,991
Keterangan : * = X² hitung > X² tabel (0,05)

## 342 bp
1 acagctcagc aatccaagtt cattggcaaa cattgatttt tatgcccagg taagcgacat 61 tacaccagca ggaaatgtgg tcctttcccc aggccaaaag aataagactg ggaaccccca 121 gtgtgacacg cacccagaag tggtcacacc ctgccaa gct aacttcatcg tggacaac gc 181 tta cttct gc gaggtagacg ccaaaaagta cattgccctg gcccctcatg tcgaggctga 241 atcacacgta gagccaagct ttaaccag gaaga catttac atcaccacag aaagccttac 301 cactacagct gggaggtcgg ggacagcaga acatgttcca agttctgaga tacctgtccc 361 agattatacc ttcattcata tagtacagtc ttcacagggc ctcgtactca atgcgactgc 421 cctgcccttg cctgacaaag agtttctctc atcatgtggc tatgtgagca cagaccaa ct 481 gaacaaaatc atgccatag c ttttctttga tttcctatga gctacccnnt tgatgggnca 541 g
TGC CAA GCT AAC TTC ATC GTG GAC AAC GCT TA C TTC T GC GAG
GT A GAC GCC AAA AAG TAC ATT GCC CTG GCC CCT CAT GTC GAG GCT GAA TCA CAC GTA GAG CCA AGC TTT AAC CAG GAA GA C ATT
TAC A C/TC ACC ACA GAA AGC CTT ACC ACT ACA GCT GGG AGG TCG GGG ACA GCA GAA CAT GTT CCA AGT TCT GAG ATA CCT GTC CCA GAT TAT ACC TTC ATT CAT ATA GTA CAG TCT TCA CAG GGC CTC GTA CTC AAT GCG ACT GCC CTG CCC TTG CCT GAC AAA GAG TTT CTC TCA TCA TGT GGC TAT GTG AGC ACA GAC CAA CTG AAC AAA ATC ATG CCA TAG CTT TTC TTT GAT TTC CTA TGA GCT ACC CNN
Gambar 5. Posisi mutasi transisi C/T dan substitusi asam amino pada exon 10 gen GHR
Ket: Pada posisi basa nukleotida 282 bp terjadi perubahan basa C (Cytosin) menjadi T (timin) yang merubah asam amino Threonin menjadi Isoleusine
Tabel  2. Pendugaan nilai heterosigositas dan PIC Gen GHR - MBO II
Gen H o H e Se PIC GHR 0,261 0,4380 0,0006 0,342051
cukup  besar  dari  generasi  ke  generasi  lainnya yang  mungkin  disebabkan  oleh  adanya  seleksi, migrasi,  mutasi  dan genetic  drift (Noor,  2008). Pernyataan  ini  didukung  oleh  Tambasco et al. (2003),  yang  menyatakan  bahwa  perbedaan yang  kontras  antara  nilai  heterozigositas  hasil pengamatan  dengan  heterozigositas  harapan merupakan indikator ketidak-seimbangan genotip  dalam  populasi.  Sementara  Machado et al. (2003)  menyatakan  bahwa  jika  nilai heterozigositas  pengamatan  (H o =  0,080)  lebih rendah dibandingkan nilai heterozigositas harapan  (H e =0.290)  dapat  menjadi  indikasi adanya  seleksi  yang  intensif  dan  kemungkinan terjadinya perkawinan dalam kelompok/ endogami.
Seleksi yang dilakukan secara tidak langsung telah  mendorong  terjadinya  akumulasi  genotip homozigote  TT  pada  gen  dalam  populasi  sapi Bali.  Hal  ini  dapat  dijelaskan  dimana  sampel penelitian ini diambil pada kelompok-kelompok peternakan semi komersial yang intensif.
Berdasarkan  klasifikasi  PIC,  analisis  nilai PIC  terhadap  penciri  PCR-RFLP  fragmen  gen
GHR|MBO  II  pada  sapi  Bali  yang  disajikan pada  Tabel  3.  menunjukkan    polimorfisme  gen GHR-pada populasi sapi Bali berada pada level sedang  dengan  nilai  PIC0,342051.  Berdasarkan nilai  PIC  tersebut,  gen  GHR  memiliki keragaman  genetik  sedang  sebagai  penciri genetik pada sapi Bali, fragmen gen GHR| MBO II  bersifat  cukup  informatif  sebagai  gen  penciri untuk analisis keterpautan dalam populasi.

## SIMPULAN DAN SARAN Simpulan
Berdasarkan  penelitian  yang  di-lakukan, dapat disimpulkan bahwa fragmen gen GHR|MBO II pada sapi Bali bersifat polimorfik dan  telah  terjadi  ketidakseimbangan  Hardy- Weinberg.  Terjadi  mutasi  pada  popu-lasi  sapi Bali  dalam  penelitian  ini  yaitu  pada  posisi  755 bp dan berhasil diidentifikasi pada situs MBO II dimana basa C (Cytosin) menjadi T (Timin) dan mengubah  asam  amino  threonine  (ACC) menjadi  asam  amino  Isoleucine  (AUC).  Nilai
Polymorphic Informative Content
gen GHR|MBO  II  pada  sapi  Bali  termasuk  kategori sedang  sehingga  memiliki  keragaman  genetik sedang  dan  dapat  digunakan  sebagai  sebagai penciri  genetik  serta  bersifat  cukup  informatif sebagai  gen  penciri  untuk  analisis  keterpautan dalam populasi.

## Saran
Masih  perlu  dilakukan  penelitian  mengenai gen-gen  kandidat  pengontrol  sifat  pertumbuhan pada sapi Bali untuk mendapatkan kandidat gen yang  dapat  dijadikan  sebagai  penciri  sifat tersebut  sehingga  nantinya  dapat  digunakan dalam  proses  seleksi  dengan  mela-kukan sequensing  terkait  gen-gen  pengontrol  pertum- buhan.

## DAFTAR PUSTAKA
Argetsinger,  L.  S.,  and  C.  Carter-Su.  1996.
Mechanism  of  signaling  by  growth  hormone receptor . Physiology Review. 76:1089–1107. Beauchemin, V. R., M. G. Thomas, D. E.
Franke and  G. A. Silver. 2006. Valuationof DNA polymorphisms involving growth hormone relative to growth andcarcass characteristics in Brahman steers. Genetic Molecular Research. 5: 438-447.
Carter-Su, C., Anthony P. J. King, Lisa S. Smit, Joyce  A.  Vander  Kuur,  Lawrence  S. Argetsinger,  George  S.  Campbell,  and  Wei- hua  Huo.  1997.  Molecular  Mechanisms  of Growth  Hormone  Action.  Journal  Animal Science 75:1-10.
Ge,  W.,  M.  E.  Davis,  H.  C.  Hines  and  K.  M.
Irvin.  2000.  Rapid  Communication:  Single nucleotide  polymorphisms  detected  in  exon 10  of  the  bovine  growth  hormone  receptor gene.  Journal  Animal  Science . 78:2229–
2230.
Hartl, D.  L. and  A.  G Clark. 1997. Principle of Population  Genetic.  Sinauer  Associates, Sunderland, MA.
Ho, K. K. Y., and D. M. Hoffman. 1993. Aging and  growth  hormone.  Hormonal    Research, 40:80–86.
Jiang, H. and M. C. Lucy. 2001. Variants of the 5’-untranslated  region  of  the  bovine  growth hormone receptor mRNA: isolation, expression and effect on translation efficiency. Gene. 265: 45-53.
Lawrence,  T.L.J.,  and  V.R.  Fowler.  2002.
Growth  of  Farm  Animals.  Walling  Ford: CABI International. New York. USA.
Liefers S.C., R.F. Veerkamp, M.F.W. Te Pas, C. Delavaud, Y. Chilliard, M. Platje, and T. Van der Lende. 2005.  Leptin promoter mutations affect  leptin  levels  and  performance  traits  in dairy cows. Animal Genetics. 36 : 111 - 118.
Lucy,  M.  C.,  G.  S.  Johnson,  H.  Shibuya,  C.  K.
Boyd,  and  W.O.Herring.  1998.  Rapid communication: Polymorphic (GT)
microsatellite  in  the  bovine  somatotropin receptor  gene  promoter.  Journal  Animal Science 76: 2209-2210.
Machado  M.B.B,  M.M.Alencar,  A.P.Pereira and H.N.Oliveira. 2003. QTL affecting body weight  in  a  candidate  region  of  cattle chromosome  5.  Genetic  Molecular  Biology . 26: 259-265.
Maskur,  Cece  Sumantri,  Eddie  Gurnadi  dan Muladno,  2012. Asosiasi  Polimorfisma Nukleotida  Tunggal  Gen  Growth  Hormone Receptor  (GHR)  dengan  Sifat  Produksi  pada Sapi  Bali.  Jurnal  Penelitian  Universitas Mataram . 2 (15).
Maskur,  Rodiah,  and  C.  Arman . 2014. Association  of  a  novel  single  nucleotide polymorphism  in  growth  hormone  receptor gene  with  production  traits  in  Bali  cattle. Italian  Journal  of  Animal  Science  2014; 13:3461
Moody,  D.E.,  D.  Pomp,  W.  Barendse,  and J.E.Womack.  1995.  Assignment  of  the growth  hormone  receptor  gene  to  bovine chromosome  20  using  linkage  analysis  and somatic  cell  mapping.  Animal  Genetics.  26: 341-343.
Nurul Huda, Made Sriasih, Maskur (Identifikasi Keragaman Genetik...)
Nei,  M.  and  S.  Kumar.  2000.  Molecular Evolution  and  Physologenetics.  Oxford University Press, New York.
Noor, R. R. 2008.  Genetika Ternak. Edisi ke-4. Penebar Swadaya, Jakarta. 34 Rosenbloom,  A.  L.,  R.  G.  Rosenfeld  and  J.
Guevara-Aguirre.  1997.  Growth  hormone insensitivity.  Pediatric  Clinic.  North  Am. 44:423–442.
Rotwein,  P.,  A.  M.  Gronowski,  and  M.  J.
Thomas.  1994.  Rapid  nuclear  actions  of growth hormone. Hormonal Research. 42:170–175.
Sambrook  J.,  E.  F.  Fritsch  and  T.  Maniatis. 1989.  Molecular  Cloning  a  Laboratory Manual. CSH Laboratory Press. USA.
Soysal M. 2004. Understanding genetic variation  regional  capacity  building  training.
Workshop on the Corversation and Management  of  Animal  Genetic  Resources.
Deparment  of  Animal  Sciences  Faculty  of Agriculture,
Trakya
University,
TekirdaTurkiye.
Tambasco DD, Paz CCP, Tambasco-Studart M, Pereira  AP,  Alencar  MM,  Freitas  AR, Coutinho  LL,  Packer  IU  and  Regitano  LCA .2003.  Candidate  genes  for  growth  traits  in beef cattle crosses Bos taurus X Bos indicus. Journal  Animal  Breeding  Genetic.  120:51- 56.
Weir,  B.  S.  1996.  Genetic  Data  Analysis  II  :
Method for Discrete Population GeneticData. 2nd  edition.  Sinauer  Associates.  Sunderland, MA. USA.35
Windelspecht,  M.  2007.  Genetics  101.  1st  Ed.
Greenwood Press, London.