234 Jurnal Agrotek Tropika 2(2):234-240, 2014 J.  Agrotek    Tropika.    ISSN  2337-4993 Vol.  2,    No.2  :  234  –  240,    Mei  2014

## EFISIENSI  REGENERASI  IN  VITRO  MELALUI  ORGANOGENESIS  EMPAT VARIETAS KEDELAI (Glycine max [L].Merr.) DARI EKSPLAN BIJI YANG DIKECAMBAHKAN ATAU DIIMBIBISIKAN
Ria Aprilenta,  Fitri Yelli,  Setyo  Dwi  Utomo  & Akari  Edy
J urusan Agroteknologi, Fakultas Pertanian Universitas Lampung Jl.Prof. Soemantri Brodjonegoro, No.1, Bandar Lampung 35145 E-mail: Joiceaprilenta@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan mengetahui pengaruh perlakuan eksplan biji yang dikecambahkan atau diimbibisikan (pra- kultur) terhadap efisiensi regenerasi in vitro empat varietas kedelai ( Glycine max (L).Merr.) melalui organogenesis. Penelitian dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan, Fakultas Pertanian, Universitas Lampung, dari bulan Maret 2013 sampai dengan Mei 2013.  Percobaan disusun dalam rancangan acak kelompok yang terdiri atas 5 ulangan. Perlakuan disusun secara faktorial (4x2) dengan faktor pertama adalah varietas kedelai sebagai eksplan (Grobogan, Argomulyo, Tanggamus, dan Ijen) dan faktor kedua adalah perlakuan pra-kultur (imbibisi  atau pengecambahan). Setiap satuan  percobaan terdiri atas empat eksplan yang dikulturkan dalam satu botol.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan pra-kultur berpengaruh terhadap persentase eksplan yang menghasilkan tunas adventif (PEMTA) dan  rata-rata  jumlah  tunas  adventif  per  eksplan  (RJTA).    Sedangkan  perlakuan  varietas  dan  interaksi  hanya berpengaruh pada PEMTA tetapi tidak berpengaruh pada RJTA.  Pada perlakuan imbibisi, PEMTA varietas Ijen lebih tinggi daripada Grobogan, Argomulyo, dan Tanggamus.  Pada perlakuan pengecambahan, PEMTA varietas Ijen lebih tinggi daripada Argomulyo namun tidak berbeda dengan Tanggamus dan Grobogan.  Jika menggunakan varietas Ijen dan Argomulyo, PEMTA perlakuan imbibisi lebih tinggi daripada pengecambahan.  RJTA perlakuan pra-kultur imbibisi 20 jam (19,5 tunas per eksplan) lebih tinggi daripada perlakuan kecambah 6 hari (9,63 tunas per eksplan).  Selain itu, media pengakaran ½ MS tanpa NAA lebih baik dalam membentuk akar fungsional daripada ½ MS yang mengandung NAA 0,5 mg/l.
Kata kunci:  imbibisi, kotiledon, kedelai, organogenesis, pengecambahan, pengakaran.

## PENDAHULUAN
Kedelai  ( Glycine  max (L.)  Merr.)  merupakan komoditas  pangan  sumber  utama  protein  nabati  dan minyak nabati yang sangat penting di dunia.  Di Indonesia, kebutuhan akan kedelai terus meningkat setiap tahunnya. Berdasarkan  data  tahun  2011,  produksi  dalam  negeri sebesar  ±  851,29  ribu  ton  biji  kering  atau  hanya mencukupi  ±  37,01%  dari  kebutuhan,  sisanya  ±  64% diimpor dari negara lain (Badan Pusat Statistik, 2012). Oleh  karena  itu,  perlu  upaya  peningkatan  produksi kedelai  dalam  negeri.    Salah  satu  upaya  yang  perlu dilakukan  melalui  penggunaan  varietas  unggul. Beberapa  cara  dapat  dilakukan  untuk  memperoleh varietas unggul.  Salah satunya ialah melalui rekayasa genetika.    Keberhasilan  transformasi  genetik  untuk memperoleh tanaman transgenik sangat ditentukan oleh teknik  regenerasi in  vitro (Pardal,  2002).    Regenerasi in  vi tro kedelai  da pat  ditempuh  melalui  jalur
embriogenesis somatik dan organogenesis.  Regenerasi in  vitro berfungsi  untuk  meregenerasikan  tanaman transgenik dari sel atau jaringan transgenik (Utomo et al. ,  2010).Protokol  regenerasi in  vitro kedelai  yang efisien digunakan dalam transformasi genetik sehingga diharapkan memperbesar efisiensi transformasi genetik kedelai.    Utomo et  al. (2010)  melaporkan  prosedur regenerasi in  vitro dari  eksplan  buku  kotiledon  enam varietas  kedelai  (Wilis,  Sinabung, Anjasmoro,  Kaba, Seluwah, dan Sibayak) melalui organogenesis.  Eksplan buku kotiledon diperoleh dari benih yang dikecambahkan selama 5-6 hari.  Proporsi eksplan yang menghasilkan tunas  berkisar  43-100%.    Rata-rata  jumlah  tunas  per ekplan berkisar antara 7-36 tunas per eksplan.  Prosedur transformasi  genetik  kedelai  dimodifikasi  oleh  Paz et al. (2006) dengan menggunakan eksplan buku kotiledon ( cotyledonary nodes ) dari benih masak.  Benih masak tersebut diperoleh melalui perlakuan pra-kultur berupa pengecambahan 6 hari, sedangkan benih masak lainnya
diperoleh dengan perlakuan imbibisi semalam.  Prosedur ini  juga  yang  dilakukan  oleh  Safitri  (2013)  yang menerapkan  lima  varietas  kedelai  (Anjasmoro,  Kaba, Willis, Sinabung, dan Seulawah) pada  masing-masing perlakuan  pra-kultur  (imbibisi  dan  pengecambahan). Rata-rata jumlah tunas adventif per eksplan perlakuan imbibisi yaitu 15,4 tunas per eksplan lebih tinggi daripada perlakuan pengecambahan 6  hari yaitu 12,9 tunas per eksplan.
Prosedur  regenerasi in  vitro kedelai  dengan perlakuan pra-kultur imbibisi belum banyak digunakan. Namun,  perlakuan  imbibisi  memiliki  kelebihan  dalam efisiensi waktu karna membutuhkan waktu yang lebih singkat  dibandingkan  perlakuan  pengecambahan. Penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui  pengaruh perlakuan  pra-kultur  (imbibisi  atau  pengecambahan) terhadap  efisiensi  regenerasi in  vitro empat  varietas kedelai.

## BAHAN  DAN  METODE
Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan / Ilmu Tanaman Fakultas Pertanian Universitas Lampung  dari  Maret  2013  sampai  dengan  Mei  2013. Percobaan menggunakan menggunakan rancangan acak kelompok  yang disusun  dalam faktorial  4  x 2.  Faktor pertama adalah varietas kedelai sebagai sumber eksplan (Grobogan, Argomulyo, Tanggamus, dan Ijen).  Faktor kedua adalah perlakuan pra-kultur (imbibisi 20 jam dan pengecambahan 6 hari).  Setiap satuan percobaan terdiri atas empat eksplan yang dikulturkan dalam satu botol dan setiap perlakuan diulang 5 kali.
Benih  kedelai  disterilkan  dengan  menggunakan gas  klorin  yaitu  dengan  menaruh  benih  kedelai  pada cawan  petri  terbuka  yang  ditempatkan  berjejer  dalam desikator.    Gas  klorin  diproduksi  di  dalam  desikator dengan cara menambahkan tetes demi tetes 3,3 ml HCl 12 N  ke permukaan  dinding bagian  dalam  gelas  piala yang  telah  berisi  100  ml  Bayclin  yang  berbahan  aktif NaClO 5,25%.  Desikator kemudian ditutup rapat dengan menambahkan vaselin disekitar pinggiran tutup kemudian dibalut  dengan plastik wrap dan dibiarkan selama 2 x 24  jam.    Setelah  itu,  desikator  dibuka  dengan  cara menggeser tutup desikator ke arah samping dan segera diikuti dengan penutupan cawan petri berisi benih kedelai yang sudah steril.  Untuk menurunkan konsentrasi gas klorin,  cawan  petri  kemudian  dikeluarkan  dari desikatordan  segera  ditempatkan  dalam laminar  air flow  hood selama  30  menit.
Pada  perlakuan  pra-kultur  imbibisi,  benih  4 varietas  yang  telah  melalui  proses  sterilisasi  masing- masing  sebanyak  25-30  benih  dimasukkan  ke  dalam
erlenmeyer  yang  berisi  air  steril  sehingga  benih-benih tersebut  terendam  sepenuhnya.    Perendaman  benih- benih tersebut dilakukan selama 20 jam pada suhu 24 ± 2°C dengan 16 jam terang dan 8 jam gelap.  Sedangkan pada  perlakuan  prakultur  pengecambahan,  masing- masing keempat varietas kedelai yang telah disterilisasi kemudian ditanam ke dalam medium MS (MS tanpa zat pengatur  tumbuh)yang  mengandung  2%  sukrosa  dan dipadatkan  dengan  0,8%  agar.    Masing-masing  benih kedelai  yang  ditanam  adalah  4-5  benih  per  botol kemudian  dikecambahkan  selama  5-6  hari  pada  suhu 24 ± 2°C dengan 16 jam terang dan 8 jam gelap.
Setelah  proses  perlakuan  pra-kultur  selesai, pengkulturan pada media inisiasi tunas dapat dilakukan dari sumber eksplan yang telah melalui proses tersebut. Pada  perlakuan  pra-kultur  imbibisi,  air  yang  terdapat didalam erlenmeyer yang berisi benih dibuang kemudian dilanjutkan  dengan  membelah  benih  secara  vertikal menjadi dua bagian kotiledon.  Pucuk poros embrio di atas buku kotiledon dibuang dan selanjutnya dibuat 5-7 goresan sepanjang 2-3 mm sejajar dengan poros embrio pada buku kotiledon menggunakan pisau skapel no. 15. Eksplan  buku kotiledon  dari  kecambah yang  berumur 20 jam tersebut dikulturkan  pada media inisiasi tunas (MS) yang mengandung benzilamino purin (BAP) 0,75 mg  l -1 .    Penyiapan  eksplan  dari  perlakuan  pra-kultur pengecambahan  6  hari  yakni  dengan  memisahkan kotiledon dari akarnya dengan cara memotong hipokotil 3-5  mm  di  bawah  buku  kotiledon.    Dua  kotiledon dipisahkan  dengan  cara  membelah  vertikal  sepanjang hipokotil  kemudian  pucuk  poros  embrio  di  atas  buku kotiledon  dibuang.    Selanjutnya  dibuat  5-7  goresan sepanjang  2-3  mm  sejajar  dengan  poros  embrio  pada buku kotiledon.
Setelah berumur 40 hari setelah tanam (hst), tunas adventif  yang  tumbuh pada  setiap  eksplan  dipisahkan satu per satu.  Tunas-tunas yang memiliki lebih dari 3 daun dikulturkan ke dalam medium pengakaran masing- masing 1 tunas per botol.  Hal ini bertujuan agar akar yang  muncul  dari  tunas  dapat  tumbuh  dengan  baik. Medium  pengakaran  yang  digunakan  adalah  media  ½ MS dan media ½ MS yang mengandung NAA 0,5 mg l -1 .    Masing-masing  perlakuan  ditanam  ke  dalam  dua media  pengakaran  tersebut.    Pengamatan  tunas  yang membentuk  akar  fungsional  dilakukan  pada  umur  3 minggu  setelah  tanam  (mst)  selama  di  medium pengakaran.
Untuk  mengetahui  efisiensi  regenerasi in  vitro kedelai  secara  organogenesis  melalui  perlakuan  pra- kultur,  maka  dilakukan  pengamatan  pada  variabel berikut:

## HASIL  DAN  PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil penelitian, terlihat respon awal yang  relatif  berbeda  dari  kedua  eksplan  melalui perlakuan  pra-kultur  imbibisi  atau  pengecambahan. Secara visual, terdapat perbedaan warna buku kotiledon yang telah melalui perlakuan pra-kultur (Gambar 1a dan 1b).    Pada  perlakuan  imbibisi  selama  20  jam,  benih mengalami perbesaran dua kali lipat dari ukuran benih
(1)    Persentase  eksplan yang  membentuk  tunas adventif  (PEMTA).
100% percobaan) satuan per n dikulturka yang (eksplan adventif) tunas 1 membentuk yang (eksplan PEMTA     
(2)  Rata-rata jumlah tunas adventif per eksplan (RJTA).
   percobaan) satuan per an tunas menghasilk yang (eksplan tumbuh) yang adventif (tunas RJTA
(3)  Proporsi tunas yang membentuk akar fungsional (PTMAF).  Tunas  yang mengalami perkembangan akar secara terus menerus (akar fungsional) diamati selama 3 mst untuk selanjutnya diaklimatisasi.
semula  dan  muncul  hipokotil  yang  keluar  dari  poros embrio.    Sedangkan  pada  benih  yang  diperlakukan kecambah 6 hari mengalami pertumbuhan hipokotil yang terus-menerus  dan  adanya  perubahan  warna  menjadi hijau pada bagian buku kotiledon. Eksplan buku kotiledon selanjutnya  disayat  dan  ditanam  dalam  media  inisiasi tunas (Gambar 1c).
Pada  penelitian  ini,  pengamatan  efisiensi regenerasi  didasarkan  pada  persentase  eksplan  yang
Gambar 1.  Pembentukan tunas adventif kedelai secara organogenesis melalui perlakuan pra-kultur imbibisi dan pengecambahan.(A)  eksplan  dari  benih  varietas  Ijen  perlakuan  imbibisi  20  jam,  (B)    eksplan  dari benih varietas Grobogan perlakuan kecambah 5-6 hari, (C) eksplan perlakuan imbibisi dalam media inisiasi tunas, (D) tunas adventif varietas Tanggamus umur 40 hari setelah dikulturkan dalam media inisiasi  tunas,  (E)  tunas  adventif  yang  muncul  pada  eksplan  varietas  Ijen  perlakuan  imbibisi,  (F) penampilan akar varietas Ijen pada media ½ MS.
A B C
D                                                     E
F
menghasilkan tunas adventif (PEMTA) serta rata-rata jumlah tunas adventif per eksplan (RJTA).  Pengamatan efisiensi  regenerasi  didasarkan  pada  pembentukkan tunas  adventif  karena  pada  umumnya  tanaman transgenik  kedelai  yang  diregenerasikan  melalui organogenesis berasal dari tunas adventif, bukan tunas aksilar (Utomo, 2005).  Pada umur 8 hst mulai terbentuk kalus pada beberapa eksplan dan tunas aksilar juga mulai mucul.  Tunas aksilar adalah tunas yang terbentuk secara langsung dari meristem aksilar tanpa melalui fase kalus sehingga  tunas  tersebut  terbentuk  jauh  lebih  cepat daripada  tunas  adventif  (Utomo et  al. ,  2010).   Tunas aksilar yang terbentuk dipotong dan dibuang.  Berbeda dengan tunas aksilar, tunas adventif baru terlihat muncul setelah umur 18 hst.  Tunas adventif adalah tunas yang telah membentuk   1 daun trifoliate.
Pada  umur  40  hst  (Gambar  1d),  dilakukan pengamatan  terhadap  persentase  eksplan  membentuk tunas adventif dan rata-rata jumlah tunas  adventif per eksplan.  Tunas adventif yang memiliki lebih dari 3 daun pada  setiap  eksplan  dipisahkan  satu  per  satu  untuk selanjutnya dikulturkan ke dalam medium pengakaran masing-masing 1 tunas per botol agar akar yang muncul dari  tunas  dapat  tumbuh  dengan  baik.   Ada  beberapa eksplan varietas Ijen dengan perlakuan pra-kultur imbibisi yang menghasilkan tunas adventif dalam jumlah banyak pada umur 40 hst (Gambar 1e).
Berdasarkan  hasil  analisis  ragam,  efisiensi regenerasi pada variabel pengamatan persentase eksplan yang  menghasilkan  tunas  adventif  (PEMTA) dipengaruhi  oleh  perlakuan  pra-kultur,  varietas,  serta interaksi  kedua  faktor  (Tabel  1).    Pada  perlakuan
Tabel 1.  Hasil analisis ragam variabel PEMTA, dan RJTA.
Variabel Pengamatan Perlakuan Imbibisi atau pengecambahan (P) Varietas (V) PxV PEMTA * * * RJTA * tn tn
Keterangan:  * = berbeda nyata pada taraf 5%, tn = tidak berbeda nyata pada taraf 5%.
Gambar 2.   Pengaruh varietas terhadap setiap perlakuan pra-kultur (imbibisi dan pengecambahan).  Angka yang diikuti huruf yang sama pada setiap perlakuan varietas tidak berbeda nyata berdasarkan uji BNT5% (16,81). = Varietas Grobogan, = Varietas Agromulyo, = Varietas Tanggamus, = Varietas Ijen.
imbibisi,  PEMTA  varietas  Ijen  (65%)  lebih  tinggi daripada ketiga varietas lainnya (Gambar 2), sedangkan PEMTA  varietas  Tanggamus  (30%)  tidak  berbeda dengan  Argomulyo  (35%)  dan  Grobogan  (15%). PEMTA  varietas  Argomulyo  lebih  tinggi  daripada Grobogan.   Pada perlakuan  pengecambahan, PEMTA varietas  Ijen  (35%)  tidak  berbeda  dengan Tanggamus (25%) dan Grobogan (20%).  PEMTA varietas Ijen lebih tinggi daripada Argomulyo (15%).  Persentase eksplan yang menghasilkan tunas adventif (PEMTA) perlakuan imbibisi dan pengecambahan berbeda pada varietas Ijen dan Argomulyo (Gambar 3).  Jika menggunakan varietas Ijen,  perlakuan  imbibisi  (65%)  lebih  tinggi  daripada pengecambahan (35%).  Demikian juga dengan varietas Argomulyo,  perlakuan  imbibisi  (35%)  lebih  tinggi daripada pengecambahan (15%).  Sebaliknya, PEMTA perlakuan  imbibisi  dan pengecambahan  tidak  berbeda pada perlakuan varietas Tanggamus dan Grobogan.
Hasil  penelitian  ini  sesuai  dengan  hasil  yang dilaporkan  oleh  Marveldani et  al. (2007)  bahwa persentase  eksplan  yang  membentuk  tunas  tertinggi ditunjukkan  oleh  varietas  Ijen  yaitu  sebesar  77,5%. PEMTA tertinggi dalam penelitian ini juga ditunjukkan oleh varietas Ijen, tetapi PEMTA  yang diperoleh  pada varietas Ijen dengan perlakuan imbibisi dalam penelitian ini  hanya  sebesar  65%.    Hasil  penelitian  ini  juga menunjukkan PEMTA yang relatif lebih rendah daripada Utomo et al. (2010).  Eksplan yang berasal dari benih
masak  yang  dikecambahkan  selama  5-6  hari  pada varietas Wilis, Sinabung, Anjasmoro, Kaba, Seulawah, dan  Sibayak  dilaporkan  berturut-turut  sebesar  94%, 100%, 86%, 96%, 90%, dan 81%.
Berdasarkan  hasil  analisis  ragam,  pengaruh varietas dan interaksi tidak nyata, sedangkan perlakuan pra-kultur  nyata  terhadap  rata-rata  jumlah  tunas  per eksplan  (RJTA).    Perlakuan  pra-kultur  imbibisi  lebih tinggi dibandingkan dengan perlakuan pengecambahan. Perlakuan imbibisi memiliki nilai rata-rata jumlah tunas per  eksplan  sebesar  19,5  tunas  sedangkan  perlakuan pengecambahan sebesar 9,63 tunas dari semua varietas yang dicobakan.  Hasil penelitian ini sesuai dengan hasil yang  dilaporkan  oleh  Safitri  (2013)  bahwa  RJTA dipengaruhi  oleh  perlakuan  pra-kultur  namun  tidak dipengaruhi  oleh  perlakuan  varietas  maupun  interaksi kedua faktor.  RJTA perlakuan imbibisi yaitu 15,4 tunas lebih  tinggi  daripada  perlakuan  pengecambahan  yaitu 12,9 tunas (Tabel 2).
RJTA  dalam  penelitian  ini  setara  dengan  yang dilaporkan oleh Utomo et al. (2010) yang menggunakan eksplan dari benih masak yang dikecambahkan secara in  vitro selama  5-6  hari.    Namun,  varietas  yang dievaluasi adalah varietas Wilis, Sinabung, Anjasmoro, Kaba,  Seulawah,  dan  Sibayak.    RJTA  yang  diperoleh berkisar antara 9,3-19,7 tunas.  Hasil ini hampir sama dengan RJTA yang dihasilkan pada penelitian ini berkisar antara  9,63–19,5 tunas.    Menurut  Pierik  (1987)  yang
Gambar 3. Pengaruh pra-kultur terhadap setiap perlakuan varietas.Angka yang diikuti huruf yang sama padasetiap perlakuan pra-kultur tidak berbeda nyata berdasarkan uji BNT 5% (16,81). = imbibisi, = kecambah
Tabel 2. Pengaruh perlakuan pra-kultur (imbibisi atau pengecambahan) terhadap rata-rata jumlah tunas  adventif per  eksplan  (RJTA).
Perlakuan pra-kultur Rata-rata jumlah tunas adventif per eskplan (RJTA) Imbibisi 19,50 a Pengecambahan 9,63 b
Keterangan: Angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata menurut uji  BNT pada taraf nyata 5%.
dikutip oleh Pardal (2002), adanya perbedaan efisiensi regenerasi in  vitro tersebut  disebabkan  adanya perbedaan  genotipe  dari  masing-masing  varietas sehingga  menyebabkan  perbedaan  respon  regenerasi pada setiap varietas.
Pada  variabel  pengamatan  proporsi  tunas  yang membentuk akar fungsional (PTMAF), perlakuan media ½  MS  tanpa  NAA  cenderung  membentuk  akar  yang lebih baik dengan waktu paling cepat daripada perlakuan media  ½  MS  +  NAA  0,5  mg  l -1 .    Pada  umur  3  mst, tunas-tunas adventif yang diakarkan dalam media ½ MS denga n  NAA  0,5  mg  l -1 tida k  secar a  langsung membentuk  akar,  akan  tetapi  terlebih  dahulu  melalui pembentukan kalus sehingga akar yang terbentuk lebih lambat dibandingkan pada media ½ MS.  Hasil penelitian ini  menunjukkan  adanya  pengaruh  hormon  yang dita mbahkan  ke  da lam  media  terhadap  model pertumbuhan akar.  Karakter planlet yang ditumbuhkan dalam media  ½ MS membentuk  akar  yang jumlahnya banyak,  berukuran  relatif  kecil  dan  panjang  (Gambar 3f).   Akar-akar  tersebut  lebih  baik  dalam  melakukan penyerapan  unsur  hara  dan  mineral  (Lestari,  2011). Berbeda dengan media ½ MS, pada media ½ MS yang ditambahkan dengan NAA 0,5 mg/l terbentuk kalus yang menyebabkan akar yang tidak banyak, berbentuk pendek dan  besar.    Hal  ini  juga  mengganggu  dalam  proses aklimatisasi dan penyerapan hara pada tanaman.
Berdasarkan Tabel 3, PTMAF dengan perlakuan imbibisi pada media ½ MS (81%) lebih tinggi daripada
media ½ MS+NAA 0,5 mg l -1 (67%).  Namun, PTMAF perlakuan kecambah pada media ½ MS (81,75%) tidak berbeda dengan media ½ MS+NAA 0,5 mg l -1 (77%). Hal ini menunjukkan bahwa media perlakuan ½ MS lebih responsif terhadap PTMAF baik pada tunas yang berasal dari perlakuan imbibisi maupun pengecambahan.

## KESIMPULAN
Perlakuan  pra-kultur  berpengaruh  terhadap persentase  eksplan  yang  menghasilkan  tunas  adventif (PEMTA)  dan  rata-rata  jumlah  tunas  adventif  per eksplan  (RJTA).    Sedangkan  perlakuan  varietas  dan interaksi hanya berpengaruh pada PEMTA tetapi tidak berpengaruh  pada  RJTA.Pada  perlakuan  imbibisi, PEMTA varietas Ijen lebih  tinggi  daripada Grobogan, Argomulyo,  dan  Tanggamus.      Pada  perlakuan pengecambahan,  PEMTA  varietas  Ijen  lebih  tinggi daripada  Argomulyo  namun  tidak  berbeda  dengan Tanggamus dan Grobogan.  Jika menggunakan varietas Ijen dan Argomulyo, PEMTA perlakuan imbibisi lebih tinggi daripada pengecambahan.  RJTA perlakuan pra- kultur imbibisi 20 jam (19,5 tunas per eksplan) lebih tinggi daripada  perlakuan  kecambah  6  hari(9,63  tunas  per eksplan). Selain itu, media pengakaran ½ MS tanpa NAA lebih baik dalam membentuk akar fungsional daripada ½ MS yang mengandung NAA 0,5 mg l -1 .
Tabel 3. Uji t-student taraf nyata 5% pada persentase tunas adventif kedelai yang membentuk akar  fungsional pada dua macam media pengakaran pada 3 mst.
Media Pengakaran Pra-kultur Rata-rata (%) ½ MS Imbibisi 81,75 a ½ MS Kecambah 81,00 a ½ MS + NAA 0,5 mg l -1 Imbibisi 77,00 ab ½ MS + NAA 0,5 mg l -1 Kecambah 67,00 b
Keterangan: Angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata menurut uji t-student pada taraf nyata 5%

## DAFTAR  PUSTAKA
Badan  Pusat  Statistik.  2012. Produksi  kedelai indonesia .  http://www.bps.go.id.  Badan  Pusat Statistik. Jakarta.
Lestari, Endang G. 2011.  Peranan zat pengatur tumbuh dalam  perbanyakan  tanaman  melalui  kultur jaringan.  AgroBiogen. 7(1):63-68.
Marveldani,  M.  Barmawi,  dan  S.D.Utomo.    2007.
Regenerasi  i n  vitro  kedelai  melalui organogenesis  pada  tiga  konsent rasi benziladenin.    Jurnal  Agrin. 10  (1):  49-55.
Pardal,  S.  J.    2002. Perkembangan  penelitian regenerasi  dan  transformasi  pada  tanaman kedelai. Buletin  Agrobio 5:37-44.
Paz,  M.M.,  J.C.  Martinez, A.B.  Kavlig,  T.M.  Fonger and  K.Wang.    2006. Improved  cotyledonary node  method  using  an  alternative  explant deri ved  from  mature  seed  f or  efficient Agrobacteri um-mediated soybean transformation. Plant  Cell Rep. 25:206-213.
Safitri,  Yesi.    2013.  Pengaruh  Perlakuan  Pra-kultur Terhadap  Efisiensi  Regenerasi  In  Vitro  Lima Varietas  Kedelai  ( Glycine  max (L.)  Merr.).
(Skripsi).     Universitas  Lampung.  Bandar Lampung.
Salisbury, F. B., C, W. Ross.  1992. Plant Physiology 4th edition .  Diterjemahkan oleh Lukman, D.R., dan Sumaryono.  1995.  Fisiologi Tumbuhan Jilid 3.    Institut Teknologi  Bandung.  Bandung.  202- 209 hlm.
Utomo,  S.D.    2004. Transformasi  genetik  lima varietas  kedelai  menggunakan  Agrobacterium.
Jurnal  Agrotropika 9(2):95-101.
Utomo,  S.  D.    2005. Efisiensi  Regenerasi  In  Vitro Enam Varietas Kedelai melalui Organogenesis. Jurnal Agrista. 9 (1): 83-92.
Utomo, S.D., F. Yelli, dan A. Edy.  2010. Regenerasi in  vitro  dari  eksplan  buku  kotiledon  enam varietas  kedelai  melalui  organogenesis  pada medium  MS .    Prosiding  bagian  II.  Seminar Nasonal  Sains  dan  Teknologi  III.    Universitas Lampung. Bandar Lampung. 2:433-440.