## Uji Aktivitas Antimalaria dari Spons

## Xestospongia sp. Asal Pulau Yapen secara In Vivo
Murtihapsari 1* , Mathelda K. Roreng 2 , Apriani Parubak 1 , Alif Rahman 1
1 Jurusan Pendidikan Kimia, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Papua Jl. Gunung Salju, Amban Manokwari, Papua Barat, 98314, Indonesia
2 Jurusan Teknologi Hasil Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Papua Jl. Gunung Salju, Amban Manokwari, Papua Barat, 98314, Indonesia
Email: murtihapsari.kadarusman@gmail.com

## Abstract
In vivo antimalarial activity of marine sponge Xestospongia sp. collected from Yapen Island, Papua
It is generally admitted that marine sponge has rich of secondary metabolite as alkaloids, peptides and  terpene.  Those  various  compounds  can  be  used  for  antimalarial  drug.    This  study  aims  to evaluate the in vivo antimalarial activity and to characterize the effectiveness of dose (ED 50 ) of n- hexane extracted from Xestospongia sp . by using the Plasmodium berghei infected to mices. In the present study, we used Peter’s four day suppressive test, where the mice infected with Plasmodium berghei  intra  peritoneal  with  a  suspension  containing  infected  red  blood  cell  origin  from  donor mice with parasitemia. Results of present study exhibited that the sponge Xestospongia sp. contains secondary metabolite including  tritepenoid/steroid, alkaloid  and  saponin. Furthermore, an in vivo test revealed the affectivity dose (ED 50) was 0.24 mg/kg of body weight. This finding is categorized a signifant decreasing level of parasitemia.
Keywords : Antimalarial , mice , Plasmodium berghei , Xestospongia sp.

## Abstrak
Secara umum, spons laut mempunyai kandungan metabolit sekunder seperti alkaloid, peptide dan terpena. Berbagai senyawa tersebut dapat dimanfaatkan sebagai obat antimalaria. Penelitian ini bertujuan  untuk  mengetahui  kandungan  kimia  dan  mengevaluasi  aktivitas  antimalarial  secara  in vivo  untuk  efektivitas  dosis  (ED 50 )  ekstrak  n-heksana  dari  spons  Xestospongia sp .  dengan menggunakan Plasmodium berghei yang diinfeksi ke tikus. Penelitian ini digunakan metode the 4- day  Supresive  Test,  dimana  mencit  yang  diinfeksi  Plasmodium  berghei  secara  intra  peritoneal dengan  suspensi  yang  mengandung  sel  darah  merah  terinfeksi  yang  berasal  dari  mencit  donor. Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  adanya  kandungan  metabolit  sekunder  diantaranya tritepenoid/steroid,  alkaloid  dan  saponin.  Selanjutnya,  uji  in  vivo  diperoleh  nilai  ED 50 sebesar  0,24 mg/kg  BB  dikelompokan  san gat  baik,  yang  dapat  menurunkan  tingkat  parasitemia  secara signifikan.  Dengan  demikian,  spons  laut  asal  pulau  Yapen  dapat  dijadikan  sebagai  sumber metabolit potensial untuk obat antimalaria.
Kata Kunci : Antimalaria, mencit,  Plasmodium berghei, Xestospongia sp.

## PENDAHULUAN
Kasus  malaria  tertinggi  didominasi  oleh parasit Plasmodium falciparum yang mencapai  68%,  sedangkan  kasus  tertinggi kedua  disebabkan  oleh Plasmodium  vivax
yang  umum  menginfeksi  penduduk  Afrika. Indonesia masih tergolong ke dalam klasifikasi dengan  jumlah  >300.000  kasus  per  tahun dengan  tingkat  kematian  0,1-1  orang/1.000 kasus.  Kasus  kematian  malaria  di  Indonesia yang disebabkan oleh Plasmodium falciparum
mencapai  16%  per  tahun.  Kondisi  ini  terlihat jauh  lebih  membaik  jika  dibandingkan dengan  India  dengan  tingkat  kematian  65%. Dilaporkan  pula  bahwa,  Indonesia  dan sembilan  negara  lainnya  dapat  menurunkan kasus malaria sebesar 40%  hingga 2020 nanti (WHO, 2018). Kasus malaria dari jenis parasit P. falciparum telah  banyak  diteliti  dan  resisten terhadap  obat  antimalaria  seperti  4-amino kuinolin  (Wongsrichanalai et  al .,  2002), klorokuin  dan  primakuin  (Wellems  &  Plowe, 2001),  kina  dan  pirimetamin  (Happi et  al ., 2005).  Perkembangan  obat  terbaru  turunan artemisinin  (artesunat)  banyak  digunakan untuk  terapi  malaria.  Namun  demikian,  obat artemisinin  telah  dilaporkan  mengalami resisten  di  Kamboja  (Dondorp et  al .,  2009). Indonesia  adalah  negara  endemik  malaria khususnya P.  falciparum dan P.  vivax (Dini et al .,  2020)  dimana  kasus  malaria  yang terdokumentasi  pada  2018  sebanyak  18.000 kasus.  Di  daerah  Papua  dan  papua  Barat dengan  tingkat  prevalensi  tertinggi  di Indonesia sebesar 12%, pemerintah menerapkan pendekatan hibrid untuk mengeliminasi  malaria  yaitu  Terapi  Kombinasi Artemisinin dan Penyemprotan insektisida (Ipa et al ., 2020; Dini et al ., 2020).
Oleh  karena  itu,  untuk  mengatasi masalah resistensi P. falciparum perlu adanya usaha  dalam  menemukan  alternatif  obat malaria  baru  dan  dijadikan  sebagai  prioritas utama  penelitian  bahan  alam.  Salah  satu potensi  yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai produk  alternatif  bahan  alami  untuk  obat antimalaria adalah jenis organisme spons laut yang mudah ditemukan di perairan laut tropis di perairan Indo-Pasifik (Kuo et al ., 2019). Spons laut  telah  dijadikan  biota  target  untuk  obat- obatan  terbaru  dari  lautan  ( marine  drugs ), mengingat  jenis  biota  sesil  ini  termasuk  primitf yang  telah  hidup  sejak  580  juta  tahun  lalu, koloninya  ditemukan  melimpah  di  perairan laut tropis, termasuk Indonesia. Ratusan Kajian telah  membuktikan  bahwa  spons  laut  telah berkontribusi  pada  peningkatan  paten  obat dari  lautan  seperti  anti  tumor,  anti  virus,  anti inflamatori,  anti  malaria  dan  beragam treatmen  kesehatan  manusia  (Aguiar et  al ., 2021).
Spons  merupakan  salah  satu  biota  laut yang  memiliki  potensi  kandungan  bioaktif
dengan  tingkat  kereaktifan  yang  besar (Huang et  al .,  2016).  Spons  mempunyai kemampuan  untuk  mensintesis  berbagai komponen  senyawa  bioaktif  seperti  alkaloid, peptida  dan  terpena  (Muhtadi,  2018). Berdasarkan  pemanfaatannya  yang  lebih luas,  potensi  spons  laut  (genus Xestospongia ) dapat  dikategorikan  sebagai  objek  potensial untuk  pengembangan  obat  dari  lautan. Potensi  dan  kandungan  spons  banyak dimanfaatkan sebagai senyawa bioaktif untuk antikanker,  antimikroba,  antivirus,  antitumor dan antimalaria (Sipkema et al., 2004).
Spons  laut Xestospongia sp.,  sebagai alternatif  bahan  alami  untuk  aktivitas antimalaria  terbukti  mengandung  senyawa aktif  terhadap  malaria  yaitu  protein  kinase yang  diyakini  dapat  menghambat P. falciparum  ( Laurent et  al., 2006).  Selain  itu, Murtihapsari et  al .  (2010)  melaporkan  bahwa ekstrak  alkohol  spons Xestospongia sp.  asal pulau  Ansus  dan  Yapen  Papua  dapat menghambat  pertumbuhan P.  falciparum dengan  IC 50 galur  W2  0,009  dan  D6  0,003 µg/mL.  Murtihapsari, et  al .,  2013  bahwa  fraksi IV Xestospongia sp.  dengan  pelarut  heksana: etil  asetat  (3:1)  merupakan  fraksi  teraktif sebagai  antimalaria  dengan  nilai  IC 50 7,13 µg/mL.
Selain  itu,  jenis  Spons  yang  sama Xestospongia sp.,  asal  Kaimana  Papua  Barat dilaporkan  memiliki  aktivitas  antimalaria secara in vitro dengan nilai IC 50 berkisar antara 38,15-1,08  x  10 -6 µM  (Murtihapsari,  2016;  2017; 2018;  2019;  2020).  Tujuan  penelitian  ini  untuk mengetahui    kandungan  metabolit  sekunder dan  menentukan  nilai  ED 50 dari  uji  aktivitas antimalaria  secara in  vivo pada  spons  laut Xestospongia sp.  dalam  bidang  farmakologi khususnya sebagai kandidat obat malaria.

## MATERI DAN METODE
Materi yang digunakan terdiri atas spons Xestospongia sp. asal pulau Yapen, khususnya di pantai Ansus (GPS : 01 o 52’08’’ S - 136 o 12’31’’ E), sedangkan materi pendukung diantaranya alkohol  (teknis),  heksana  (teknis),    HCl  5%, reagen meyer, etanol, H 2 SO 4 , metanol (teknis), eter  (teknis),  perekasi  Lieberman  Bochard, aquadest,  FeCl 3 ,  mencit  ICR  berkelamin jantan,  pewarna  Geimsa,  mencit  pendonor,
larutan  alsever.  Alat  yang  digunakan  pada penelitian  ini  berupa  seperangkat  alat  gelas laboratorium, rotary  evaporator  (Vacuum Pneumatic),  waterbath ,  timbangan  analitik FSAR210, mikroskop Olympus, dan serangkaian alat  pengujian  antimalaria  secara in  vivo dilakukan  di  Laboratorium  Farmakologi  dan Fitokimia  Universitas  Airlangga. Preparasi sampel  spons Xestospongia sp.  didapatkan dengan  cara  menyelam  pada  kisaran kedalaman  10-15  meter.  Selanjutnya,  sampel spons  tersebut  direndam  dan  diawetkan dengan menggunakan etanol teknis (70%).
Ekstraksi  sampel  pada  penelitian  ini menggunakan  metode  ekstraksi  maserasi. Ekstraksi  spons  sebanyak  700  g  dipotong- potong halus, kemudian dimaserasi selama 2 x 24  jam  ke  dalam  2000    mL n -heksana.  Proses ini dilakukan dengan 3 kali pengulangan dan diberikan  perlakuan  pengadukan  setiap  hari. Filtrat yang diperoleh disatukan lalu diuapkan menggunakan rotary  evaporator sampai diperoleh  ekstrak  pekat n -heksana.  Tahap berikutnya dilanjutkan  dengan menggunakan waterbath .  Ekstrak  pekat n -heksana  yang diperoleh  kemudian  dipindahkan  ke  dalam botol-botol  kecil  atau  vial  dan  ditutup  rapat (Hanani et  al .,  2005).  Ekstrak  yang  dihasilkan dianalisis  kandungan  metabolit  sekunder  dan kemudian  digunakan  pada  tahap  pengujian antimalaria secara in vivo dalam menghambat pertumbuhan Plasmodium berghei .

## Uji Kandungan Kimia
Identifikasi  kandungan  kimia  dalam ekstrak n -heksana Xestospongia sp.  dilakukan terhadap  kandungan  metabolit  sekunder golongan:  alkaloid,  flavanoid,  triterpenoid atau  steroid,  saponin  serta  tanin  (Harborne, 1987).
Pengujian  Ekstrak  Heksana  terhadap  Parasit Malaria Secara In Vivo (Abdulelah dan Abidin, 2007)
Penelitian  ini  menggunakan  35  mencit dengan  ICR  jantan  dengan  berat  variatif antara  28-32 g dan  berusia 8 minggu. Mencit yang  digunakan  adalah  mencit  yang  telah memenuhi  standar  dimana  mencit  diberikan makanan  khusus  (pellet)  dan  minuman  air
secara ad libitum . Penelitian ini menggunakan metode The 4-day Supresive Test yaitu dengan cara  memberikan  perlakuan  mulai  dari  hari ke-0 sampai hari ke-3. Mencit dibagi ke dalam kelompok  kontrol  negatif,  kelompok  kontrol positif,  kelompok  perlakuan  ekstrak  0,1;  1;10; 100  mg/kgBB.  Hari  penginfeksian  disebut  D0 (hari  ke  nol).  Setelah  2-4  jam  penginfeksian diperoleh  mencit  yang  positif,  kemudian dilakukan  pengobatan  sekali  dalam  sehari. Pemberian obat dimulai dari hari ke-0 sampai hari  ke-3.  Pengamatan  angka  parasitemia dilakukan dengan membuat preparat apusan darah  tebal  dan  tipis  yang  diambil  dari  vena ekor pada hari ke-4 setelah pemberian ekstrak (Peter dan Robinson, 1992).
Pembuatan  preparat  darah  dilakukan dengan  meneteskan  1  tetes  darah  ke  atas gelas  obyek,  kemudian  dibuat  sediaan apusan  tipis  dan  tebal,  darah  dibiarkan sampai  kering  pada  suhu  kamar.  Persen parasitemia dihitung menggunakan persamaan, (WHO, 2008):
𝑃𝑒𝑟𝑠𝑒𝑛 𝑃𝑎𝑟𝑎𝑠𝑖𝑡𝑒𝑚𝑖𝑎 (%)
=   ( 𝑒𝑟𝑖𝑡𝑟𝑜𝑠𝑖𝑡 𝑡𝑒𝑟𝑖𝑛𝑓𝑒𝑘𝑠𝑖 ± 1000 𝑒𝑟𝑖𝑠𝑡𝑟𝑜𝑠𝑖𝑡 )  𝑥 100%
Rumus  untuk  menentukan  penghambatan pertumbuhan parasit, (WHO, 2008):
𝑃𝑒𝑟𝑠𝑒𝑛 𝑝𝑒𝑛𝑔ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡𝑎𝑛(%)
=  100%  {( 𝑢𝑗𝑖 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑠𝑖𝑡𝑒𝑚𝑖𝑎 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑝𝑎𝑟𝑎𝑠𝑖𝑡𝑒𝑚𝑖𝑎 ) 𝑥 100%}
Data  yang  dihasilkan  dari  penelitian  ini disajikan dalam bentuk tabel yang menunjukkan presentasi penghambatan pertumbuhan parasit malaria P. berghei . Hasil pengujian  senyawa  metabolit  sekunder disajikan  dalam  bentuk  tabel,  dan    nilai  ED 50 ditentukan  dengan  menggunakan  analisis probit.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  ekstraksi  dengan  menggunakan metode maserasi dihasilkan ekstrak n -heksana kental  dengan  berat  14,85  g  dan  rendemen sebesar  0,07%    dari  spons Xestospongia sp. asal  pantai  Ansus.  Keseluruhan  sampel  yang dimaserasi sebanyak 21,35 kg dengan volume pelarut  yang  digunakan  41  L.  Hal  ini
menunjukkan  hanya  sekitar  0,07%  komponen yang terlarut dalam pelarut n -heksana.
Penelitian lain dilaporkan
oleh Murtihapsari, et  al .,  (2013),  bahwa  ekstrak n - heksana  spons Xestospongia sp.  yang terdapat di kawasan pantai Barawaikap Serui memiliki  rendemen  sebesar  0,26  %.    Nilai  ini menunjukkan  rendemen  pada  hasil  ekstraksi spons Xestospongia sp. asal pantai Barawaikap  lebih  besar  dibandingkan  ekstrak spons Xestospongia sp. asal pantai Ansus dan Yapen  Murtihapsari et  al .,  (2010).  Perbedaan yang  terjadi  dapat  dikarenakan  oleh  faktor lingkungan, dimana diasumsikan bahwa pada kondisi  lingkungan  yang  berbeda,  spesies yang  sama  belum  tentu  memiliki  kandungan metabolit  sekunder  yang  sama  (Marzuki, 2018).
Hasil  ekstraksi  metode  maserasi  pada penelitian  ini  juga  dipengaruhi  oleh  jenis pelarut.  Berdasarkan  laporan  penelitian  yang dilakukan  oleh  Murtihapsari et  al .,  (2010), ekstrak  metanol  spons Xestospongia sp.  yang terdapat di kawasan Yapen memiliki rendemen  sebesar  3,16%,  ini  menunjukkan rendemen pada hasil ekstrak n -heksana spons Xestospongia sp.  lebih  kecil  dibandingkan hasil  ekstrak  metanol  pada  kawasan  yang sama. Daya melarutkan yang tinggi berhubungan  dengan  kepolaran  pelarut  dan kepolaran  bahan  yang  diekstraksi.  Jenis pelarut  polar  menghasilkan  rendemen  yang lebih  besar  dibandingkan  pelarut  non  polar yang menghasilkan rendemen lebih kecil atau lebih sedikit (Harborne,1987).
Hasil  Uji  kandungan  metabolit  sekunder atau uji fitokimia merupakan uji kualitatif yang dilakukan  untuk  mengetahui  kandungan senyawa  aktif  dalam  suatu  bahan.  Uji metabolit  sekunder  spons Xestospongia sp, dilakukan dengan mereaksikan ekstrak
dengan  suatu  reagen  tertentu  (Harborne, 987).  Hasil  pengujian  kandungan  metabolit sekunder dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1,  menunjukkan  bahwa  ekstrak n - heksana spons Xestospongia sp. mengandung alkaloid yang positif sedang. Hasil positif pada uji  ditandai  dengan  terbentuknya  endapan yang  tidak  begitu  kuat.    Menurut  Harbone (1987),  jika  uji  alkaloid  hasilnya  positif  terjadi karena  perubahan  warna  atau  terbentuk endapan. Hasil penelitian ini, ekstrak yang diuji alkaloidnya  membentuk  endapan  karena adanya  pembentukan  kompleks  antara  ion logam dari pereaksi  yang digunakan dengan senyawa alkaloid. Uji  triterpenoid atau steroid hasilnya  positif  sedang  ditandai  dengan terjadinya perubahan  warna hijau yang tidak begitu  pekat,  perubahan  warna  yang  tejadi yaitu  warna  kekuningan  menjadi  kehijauan. Menurut  Robinson  (1995),  uji  ini  menandakan positif  steroid  bila  terjadi  perubahan  warna merah  kehijauan  saat  ekstrak  ditambahkan pereaksi Liebarmen-Burchard.
Hasil  uji  saponin  pada  ekstrak n -heksana spons Xestospongia sp.  hasilnya  positif  lemah ditandai  dengan  terbentuknya  busa  dengan jumlah yang sedikit dan stabil hingga 15 menit Menurut  Robinson  (1995),  saponin  adalah senyawa  aktif  permukaan  yang  dapat menimbulkan  busa  jika  dikocok  dalam  air. Senyawa  ini  memiliki  gugus  polar  dan nonpolar  bersifat    aktif    permukaan  sehingga saat    dikocok    dengan  air,    saponin    dapat membentuk  misel. Struktur misel terletak pada gugus  polar menghadap ke  luar  sedangkan gugus  nonpolarnya menghadap  ke  dalam, keadaan    inilah    yang    tampak  seperti  busa (Robinson,1995).  Hasil  uji  tanin  dan  flavonoid diperoleh  hasil  negatif  ditandai  dengan  tidak terjadi perubahan warna dan tidak terbentuk endapan  untuk  menandakan  adanya  tanin, sedangkan  hasil  negatif  flavonoid  ditandai
Tabel 1. Hasil pengujian kandungan metabolit sekunder Ekstrak n -heksana
No Komponen metabolit sekunder Hasil Perubahan 1 Alkaloid positif sedang Terbentuk endapan 2 Flavanoid negatif - 3 Tritertenoid /Steroid positif sedang Kekuningan-kehijauan 4 Tanin negatif - 5 Saponin positif lemah Terbentuk busa
dengan  tidak  terjadinya  perubahan  warna menjadi  merah  untuk  menandakan  adanya senyawa metabolit sekunder flavonoid (Harborne, 1987).
Kandungan  metabolit  sekunder  yang dimiliki  oleh  suatu  mikroorganisme  seperti spons  yang  terdapat  pada  lingkungan  yang berbeda,  sangat  dipengaruhi  kemampuan adaptasi, ketersediaan dan jejaring makanan serta  interaksi  intra  sel  spons  itu  sendiri (Marzuki,  2018).  Kandungan  senyawa  spons laut juga dipengaruhi oleh kondisi subtrat dan mikroba asosiatifnya. Pertumbuhan spons laut banyak  dipengaruhi  oleh  kondisi  optimal  dari proses up  welling yang  kaya  nutrien  selama musim selatan dan utara dan memanfaatkan arus  bolak  balik  nutrien  yang  mengalir  di bagian  selatan  samudera  Hindia  mulai  dari perairan  Asia  timur  laut  hingga  Melanesia (Hartoko 2007).
Hasil Pengujian ekstrak terhadap  parasit malaria secara in vivo dengan menggunakan mencit ICR jantan berjumlah empat puluh dua ekor yang telah diinfeksi Plasmodium berghei. Plasmodium berghei merupakan parasit yang menyebabkan  malaria  pada  golongan rodensia. Plasmodium jenis  ini  banyak digunakan dalam penelitian  penyakit malaria (Isa et  al .,  2012).    Data  hasil  pembacaan mikroskopik  pengujian  antimalaria  dilihat pada Tabel 2.
Pemberian dosis 100, 10, 1, 0,1 mg/kgBB memiliki pertumbuhan rata-rata persen parasitemia  berturut-turut  yaitu  6,09%,    4,16%, 3,13%  dan  3,68%.  Hasil  perhitungan  tingkat parasitemia tertinggi pada dosis 100 mg/kgBB yaitu 6,09%. Selanjutnya, persen penghambatan  berturut-turut  yaitu  7,87%, 37,06%, 52,64% dan 44,33%, dari data tersebut terlihat  nilai  persen  penghambatan  tertinggi pada  1  mg/kgBB  yaitu  sebesar  52,64%,
sedangkan  nilai  penghambatan  terendah pada  100  mg/kgBB  yaitu  sebesar  7,87%. Menurut  Andrade-note et  al., (2003)  suatu ekstrak  dikatakan  aktif  untuk  menurunkan parasitemia  apabila  ekstrak  tersebut  dapat menurunkan  parasitemia  lebih  dari  30%.  Jadi, dapat dikatakan pada pemberian dosis 10, 1, 0,1  mg/kgBB  yang  aktif  untuk  menurunkan tingkat parasitemia karena ketiganya memiliki persen penghambatan lebih dari 30%.
Jika  dibandingkan  persen  penghambatan spons Xestospongia sp. dengan penelitian dari beberapa  filum  invetebrata  laut  dari  spesies Phallusia  nigra dan Ascidia  sydneiensis pada dosis 500 mg/kg dengan persen penghambatan  masing-masing  61,00%  dan 45,23%.  Spesies Holothuria sp.  pada  dosis  50 mg/kg  dengan  persen  penghambatan 25,97%.  Spesies Microscosmus  goanus dan Echinaster  echinophorus pada  dosis  250 mg/kg  dengan  persen  penghambatan masing-masing  62,90  dan  17,31%,  sedangkan jika  dilihat  persen  penghambatan  spons Xestospongia sp.  sangat  tinggi  untuk  dosis  1 mg/kg sebesar 52,64% (Mendiola et al ., 2006)
Penelitian  ini    digunakan  kontrol  positif data  sekunder  adalah  klorokuin.  Klorokuin merupakan  turunan  dari  4-aminokuinolin. Klorokuin  memiliki  efektivitas  yang  sangat tinggi  terhadap P.  vivax dan P.  falciparum . Meski hanya efektif pada fase eritrosit, namun memiliki  efek  supresi  yang  lebih  kuat dibanding  dengan  obat  kina  dan  kuinakrin (Laksono,  2011).  Hasil  persen  penghambatan yang  telah  diketahui  kemudian  dianalisis menggunakan analisis probit yang menyatakan  nilai  ED 50 (efektivitas  dosis  50%) dengan  membaca    tabel  probit.  Harga  ED 50 menunjukkan  besarnya  dosis  bahan  uji  yang dapat  menghambat  50%  pertumbuhan Plasmodium berghei . Jika semakin kecil harga ED 50 maka semakin besar efektivitas
Tabel 2 . Hasil Pengujian antimalaria ekstrak n -heksana spons Xestospongia sp.
Dosis (mg/kgBB) % pertumbuhan %Penghambatan 100 6,09 7,87 10 4,16 37,06 1 3,13 52,64 0,1 3,68 44,33 K 6,61 -
Tabel 3. Nilai ED 50 dari beberapa jenis spons dan kontrol positif
Sampel Pelarut/ senyawa Nilai ED 50 (mg/kgBB) Sumber Xestospongia sp. n -heksana 0,24 Hasil Penelitian ini Xestospongia sp. Etanol 331,95 Syamsudin et al ., 2013 Plakortis Quinolin 6,10 Campiani et al ., 2007 Acanthostrongylophora Manzamin A 55 Hamann et al ., 2007 Kontrol Positif Klorokuin 0,67 Data sekunder (Mustofa & Sholikhah, 2007) penghambatan ekstrak terhadap pertumbuhan Plasmodium
berghei (Kusumawardhani et al., 2005).
Berdasarkan  tabel  probit  terlihat  harga ED 50 pada  penelitian  ini terletak  pada  dosis 0,24 mg/kgBB. Nilai ini dapat diartikan bahwa pemberian ekstrak n -heksana spons xestospongia sp.  pada  dosis  0,24  mg/kgBB dapat  menurunkan  tingkat  parasitemia  50%. Jika  dibandingkan  dengan  dengan  nilai  ED 50 klorokuin,  terlihat  bahwa  dosis  ekstrak n - heksana lebih kecil sehingga dapat dikatakan hasil penelitian ini sangat berpotensi. Menurut Isa et al ., (2012), aktivitas antimalaria secara in vivo dikelompokkan  menjadi  sangat  baik  bila nilai Ed 50 <100 mg/kgBB/hari, kategori baik  bila nilai  ED 50 =  101-250  mg/kgBB/hari.  Kategori sedang  bila  nilai  ED 50 =  251-500mg/kgBB/hari dan  tidak  aktif  jika  >500mg/kgBB/hari. Menurut  Syamsudin et  al., (2013),  ekstrak etanol  dari  spons Xestospongia sp.  dapat menghambat pertumbuhan parasit P. berghei dengan  dosis  331,95  mg/kgBB.  Quinolin  yang diisolasi  dari  dari  spons Genus Plakortis dapat menghambat pertumbuhan parasitemia dengan dosis 6,100 mg/kgBB (Campiani et al ., 2007). Pada penelitian ini diperoleh nilai ED 50 = 0,24  mg/kgBB,  dimana  dapat  dikelompokkan sangat baik untuk aktivitas antimalaria secara in  vivo .  Beberapa  hasil  ekstrak  dan  senyawa telah  berhasil  diperoleh  dari  spons  yang berfungsi  sebagai  antimalaria.  Perbandingan Nilai ED 50 dari hasil penelitian ini dan beberapa penelitian lainnya dapat dilihat pada Tabel 3.

## KESIMPULAN
Spons Xestospongia sp.  asal  pulau Yapen  mengandung  metabolit  sekunder diantaranya  tritepenoid/steroid,  alkaloid  dan saponin.  Selain  itu,  ekstrak n -heksana  spons Xestospongia sp.  pada  dosis  0,24  mg/kgBB
dapat  menurunkan  tingkat  parasitemia secara signifikan.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdulelah,  H.A.A  &  Abidin,  B.A.H.  Z.  2007.  In- vivo  Anti-Malarial  Test  of  Nigella  Sativa ( Black  Seed )  Different  Extracts. American Journal of Pharmacology and Toxicology , 2:46-50.
Aguiar,  A.C.C.,  Parisi,  J.R.,  Granito,  R.N.,  de Sousa,  L.R.F.,  Renno,  A.C.M.  &  Gazarini, M.L.,  2021.  Metabolites  from  Marine Sponges  and  Their  Potential  to  Treat Malarial  Protozoan  Parasites  Infection:  A Systematic  Review. Marine    drugs ,  19(3):
p.134
Dini,  S.,  Douglas,  N.M.,  Poespoprodjo,  J.R., Kenangalem,  E.,  Sugiarto,  P.,  Plumb,  I.D., Price, R.N. & Simpson, J.A., 2020. The risk of morbidity and mortality following recurrent  malaria  in  Papua,  Indonesia:  a retrospective
cohort
study.
BMC medicine , 18(1):1-12. Dondorp, A.M., Nosten, F., Poravuth, Debashish, D., Phyo,  A.P, Tarning, J., Khin, M.L,  Ariey,  F.,  Hanpithakpong,  W.,  Lee, S.J., Ringwald, P., Silamut, K., Imwong, M., Chotivanich, K., Lim, P., Herdman, T., Sam An  S.,  Shunmay,  Y.,  Singhasivanon,  P., Day,  N.P.J.,  Lindegardh,  N.,  Socheat,  D., Nicholas,  J.  &  White,  F.R.S.  2009. Artemisinin  Resistance  in Plasmodium falciparum Malaria. The  New  England Journal of Medicine, (361); 455-67. Ebada,  S.S.  &  Proksch,  P.  2012.  The  Chemistry of  Marine  Sponges.  In  Handbook  of Marine Natural Products (ed. E. Fattorusso). Springer, London. 191.
Campiani,  G.,  Gemma,  S.,  Fattorusso,  C., Kukreja,  G.,  Joshi,  B.P.,  Butini,  S.,  Persico, M., Coccone, S.S. & Bernetti, M., Giuseppe CAMPIANI,  2010.  Novel  4-amino-quinoline
derivatives  useful  as  anti-malaria  drugs. U.S. Patent Application 12/527,454. Harborne. 1987. Metode Fitokimia Edisi Kedua. Patmawanata  K,  Soediro  I,  Penerjemah.
Terjemahan dari : Phytochemical Methods. Bandung.ITB.
Hartoko,  A.  2007.  Vertical  Temperature,  The Fate of Up Welling and Spatial Distribution of  Fish  Biomass  of  North  Papua  Waters. Journal
of Coastal
Development . 10(3):181-187
Happi,  C.T.,  Gbotosho,  G.O.,  Folarin,  O.A.,
Akinboye, D.O., Yusuf, B.O., Ebong, O.O. & Oduola,  A.  M.  J.  2005.  Polymorphisms  in Plasmodium  falciparum genes  and  age related in vivo sulfadoxine – pyrimethamine resistance  in  malaria-infected  patients from Nigeria. Acta tropica . 95(3);183-193. Hanani,  E., Mun’im,  A., &  Sekarini,  R.,  2005 . Identifikasi  Senyawa  Antioksidan dalam Spons  dari  Kepulauan  Seribu, Majalah Ilmu  Kefarmasian .  2(3):127-133.  doi: 10.7454/psr.v2i3.3389.
Hamann,  M.T.,  Hill,  R.,  &  Roggod,  S.,  2007. Marine Natural Products. Key Advances to the Practical  Application of this Resource in Drug Development. Natural products in drug  discovery .  61:313 – 321.  doi:  10.2533/ chimia.2007.313.
Huang,  R.Y.,  Chen,  W.T.,  Kurtan,  T.,  Mandi,  A.,
Ding, J., Li, J.  & Guo, Y.W. 2016. Bioactive isoquinolinequinone  alkaloids  from  the South  China  Sea  nudibranch  Jorunna funebris and its sponge-prey Xestospongia sp. Future medicinal chemistry . 8(1):17-27. Ipa, M., Widawati, M.,  Laksono,  A.D., Kusrini, I. &  Dhewantara,  P.W.,  2020.  Variation  of preventive  practices  and  its  association with malaria infection in eastern Indonesia:  Findings  from  community- based survey. PloS one , 15(5):p.e0232909. Isa,  Rinadar  &  Sugito.  2012.  Aktivitas Antiplasmodium  Daun  Sernai  ( Wedelia Biflora) Berdasarkan Evaluasi  Fungsi Ginjal dan  Hati  pada  Mencit  yang  Diinfeksi dengan Plasmodium  berghei . Jurnal veteriner . 13(2):167-175.
Kusumawardhani,  D.,  Widyawaruyanti,  A.,  & Kusumawati.  I.,  2005.  Efek  Antimalaria Ekstrak  Sambiloto  Terstandar  (Parameter Kadar    Aandrografolida)  Pada    Mencit Terinfeksi Plasmodium  Berghei . Majalah Farmasi  Airlangga  (Airlangga  Journal  of Pharmacy ). 5(1): .25-29
Kuo,  J.,  Yang,  Y.T.,  Lu,  M.C.,  Wong,  T.Y.,  Sung, P.J.,  &  Huang,  Y.  S.  2019.  Antimicrobial activity and diversity of bacteria associated with
Taiwanese marine sponge  Theonella  swinhoei. Annals  of Microbiology. 69(3):253-265.
Laksono,  R.D.  2011.  Profilaksis  Malaria  di Perbatasan  Indonesia-Timor  Leste. Jurnal Dokter  Satgas  YONIF  131  TNI  AD. 38(7):503-507.
Laurent,  D.,  Valerie  J.,  Arnaud,  P.,  Martine,  K.,
Dominique,  D.,  Sophie,  S.,  Oliver,  L., Nicolas,  L.,  Maryvonne,  F.,  Frederic,  A., Severine,  M.,  Christian,  D.,  Laurent,  M.  & Michel,  S.  2006.  Antimalarial  Potential  of Xestoquinone,  a  Protein  Kinase  Inhibitor from A Vanuatu Marine Sponge
Xestospongia sp.  Elsevier. Bioorganic  & Medicinal  Chemistry . 4477 – 4482.  doi  : 10.1016/j.bmc.2006.02.026.
Marzuki,  I.  2018.  Eksplorasi  Spons  Indonesia: Seputar  Kepulauan  Spermonde.  Penerbit Nas  Media  Pustaka.  Cetakan  pertama. Makassar. 158-159
Mendiola,  J.,  Hernandez  H.,  Idalia  Sariego,  I., Rojas,  L.,    Otero  A.,  Angel  Ramirez,  A., Chavez, Marıa de los Angeles, Pa yrol, J,A.,
& Aida, H. 2006. Antimalarial activity from three ascidians: an exploration of different marine  invertebrate  phyla. Tropical Medicine and Hygiene . 100:909-916.
Murtihapsari,  Chasanah,  E,  &  Purwantiningsih.
2010. A New Candidate active compound  from  Papuan  marine  sponge. Poster Presentation.
International
Conference  of  Bioactive  Compound.
Bandung Murtihapsari,  Parubak,  A.S.,  Mangallo,  B., Ekasari, W., Asih, P.B.,  & Lestari, A.Y. 2013. Isolation  and  Presence  of  Antimalarial Activities  of  Marine  Sponge Xestospongia sp. Indonesian  Journal  of  Chemistry,
13(3):199 – 204.
Murtihapsari,  Kurnia,  D,  Herlina,  T,  & Supratman, U, 2016.  Senyawa steroid dari spons ( Xestospongia sp.) dan aktivitasnya terhadap  Plasmodium  falciparum  secara in vitro, Seminar Nasional Kimia UNJANI HKI 2016 3-4 Agustus 2016, Hotel Grand Tjokro, Bandung.
Murtihapsari,  Jonathan,  J.M,  Kurnia  D,  Herlina T,  &  Supratman  U,  2017.  Antimalarial Compound  from  Papuan  Marine  Sponge Xestospongia sp. 2nd Internasional
Seminar  and  Expo  on  Jamu,  Ghra  Sanusi Hardjadinata – UNPAD.  26-27  September 2017, Bandung Murtihapsari,  Suruwaky,  A.M.,  Kadarusman, Kurnia,  D.,  Herlina,  T.,  &  Supratman,  U. 2018.    A  New  Antiplasmodial  Compound from  the  Papuan  Marine  Sponge Xestospongia sp. Jurnal  Kimia  Valensi , 4(1):1-6.
Murtihapsari,  Salam,  S.,  Kurnia,  D.,  Herlina,  T., Darwati,  Kadarusman,  Abdullah,  F.F., Husna,  M.H.,  Awang,  K.,  Yoshihito  Shiono, Y.,  &  Supratman,  U.  2019.  Antiplasmodial Sterols  from  Indonesian  Marine  Sponge,
Xestospongia
sp.
Natural Product Research . 1478-6427. doi:
10.1080/14786419.2019.1611815.
Murtihapsari, Kurnia, D., Herlina, T., Katja, D.G., Kadarusman,  Awang,  K.,  Shiono,  Y.,  & Supratman,  U.,  2020.  Antiplasmodial Compounds  from  Indonesian  Marine Sponge,
Xestospongia
sp,
Against
Plasmodium  falciparum 3D7. CMU  J.  Nat.
Sc i. 19(3):487-497. doi :
10.12982/CMUJNS.2020.0032
Mustofa  &  Sholikhah,  E.N.  2007.  Aktivitas antiplasmodium  in  vitro  dan  in  vivo  fraksi yang  diperoleh  dari  ekstrak  methanol pasak  bumi  ( Eurycoma  longifolia Jack) yang secara tradisional digunakan mengobati
malaria di Kalimantan
Selatan. Majalah  Obat  Tradisional., 11:25- 30.
Peter,  W.  &  Robinson,  B.L.  1992.  The Chemotheraphy  of  Rodent  Malaria  XLVII: Studies  Pyronaridine  and  Other  Mannich
Base  Antimalarias  Ann. Trop . Med . Parasitol .  86:455-465. doi: 10.1080/000349 83.1992.11812694.
Robinson,  T.  1995.    Kandungan  Senyawa Organik    Tumbuhan    Tinggi.  Diterjemahkan oleh  Prof.  Dr.  Kosasih    Padmawinata. Bandung : ITB.
Sipkema,  D.,  Snijders,  A.P.L,  Schroen,  C.G.P.H, Osinga, R,  & Wijffels, R. 2004. The life and death of sponge cells . Biotechnology and Bioengineering . 85 ( 3):239 – 247.
Syamsudin, A., Rahmatul, W.A., Yatnita, P.C., &
Noriah, M.N. 2013. Evaluation of
Antimalaria Activitiy and Acute Toxicity of Xestospongia sp . American  Journal  of Pharmacology  and  Toxicology. 799-803. doi : 10.1016/j.jopr.2013.08.001.
Wellems, T.E. & Plowe, C.V. 2001. Chloroquine- resistant  malaria. Journal  of  Infectious Diseases . 184(6): 770-776.
Wongsrichanalai,
C., Pickard,
A. L., Wernsdorfer, W. H., & Meshnick, S. R. 2002. Epidemiology  of  drug-resistant  malaria. The  Lancet  infectious  diseases .  2(4):  209- 218.
WHO  (World  Health  Organization).  2008. In Vitro Micro-test  (Mark  III)  For  The Assessment
of
The Response of
Plasmodium  falciparum to  Chloroquin, Mefloquine, Quinine, Amodiaquine, Sulfadoxine/Pyrimethamine and Artemisinin.  Division  of  Control  of  Tropical Diseases. 1-30.
WHO (World Health Organization). 2018. World Malaria report 2018. 1-8