# Korespondensi:  Balai  Besar  Riset  Budidaya  Laut  dan Penyuluhan  Perikanan.  Jl.  Br.  Gondol  Kec.  Gerokgak  Kab.
Buleleng,  Kotak  Pos  140,  Singaraja  81101,  Bali,  Indonesia. Tel.  +  62  362  92278 E-mail:  gunawan9505@gmail.com
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jra

## PERKEMBANGAN  SALURAN  DAN  SISTEM  PENCERNAAN  PADA  LARVA IKAN TUNA SIRIP KUNING, Thunnus albacares (Bonnaterre, 1788)
Gunawan # ,  Jhon  Harianto  Hutapea,  Ananto  Setiadi,  dan  Ketut  Mahardika
Balai Besar Riset Budidaya Laut dan Penyuluhan Perikanan Jl. Br. Gondol Kec. Gerokgak Kab. Buleleng, Kotak Pos 140, Singaraja 81101, Bali
(Naskah diterima: 4 Januari 2019; Revisi final: 14 Februari 2019; Disetujui publikasi: 14 Februari 2019)

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui perkembangan saluran dan sistem pencernaan pada larva ikan tuna sirip  kuning Thunnus  albacores  (Bonnaterre, 1788).  Sampel larva  diambil  setiap hari  dari larva  baru menetas (D-0) sampai D-13, dan selanjutnya dilakukan sampling pada  D-15 dan D-20. Semua sampel di foto dengan  program ACT-1  dan  diproses  secara histologi.  Hasil  pengamatan  menunjukkan larva  D-0  belum memiliki saluran pencernaan, mulut, dan mata belum terbuka. Pada D-1 saluran pencernaan mulai terbentuk, tetapi masih dalam bentuk tabung lurus. Mulut larva mulai terbuka pada D-2 (45 jam setelah menetas pada suhu  air  pemeliharaan  28°C).  Kuning  telur  sudah  diserap  sepenuhnya  pada  D-3,  saluran  dan  organ pencernaan seperti mulut, esofagus, lambung, ginjal, hati, pankreas, usus, rektum, dan anus sudah terbentuk. Pada D-5 mulai muncul mikro philli pada usus untuk mengabsorbsi nutrisi. Sel-sel penyusun hati, jantung, saluran  pencernaan  sudah  tumbuh  dan  berkembang  menyerupai  organ  ikan  dewasa,  ditandai  adanya pakan dalam usus. Saluran dan sistem pencernaan telah berdiferensiasi menjadi organ dalam seperti pada ikan  dewasa  pada  hari  ke-6  (D-6)  dan  akan  sempurna  pada  D-20  dengan  TL  ±  2  cm.  Berdasarkan perkembangan pencernaan, maka pakan awal berupa rotifer sebaiknya diberikan pada hari ke-2 (43 jam setelah menetas pada suhu air 28°C).
KATA KUNCI: larva; pencernaan; Thunnus albacares; tuna
ABSTRACT: Development of digestive track and system on yellowfin tuna larvae, Thunnus albacares (Bonnaterre, 1788). By: Gunawan, Jhon Harianto Hutapea, Ananto Setiadi, and Ketut Mahardika
The aim of this study was to observe the development of tract and digestive system on yellowfin tuna larvae. Tuna larvae were collected daily from rearing tank at hatching day 0 (D-0) to 13 (D-13). Samples of larvae were selected at D-15 and D-20. All samples were observed under light microscopy, documented and then histologically processed. The results showed that the digestive tract began to form on the larvae at day-1 which was still in the form of a straight tube. The mouth of the larvae starts to open on D-2 (45 hours after hatching at a water temperature of 28°C). At D-3,  the larvae’s yolk sac was fully absorbed, and its intestine contained a single type of food which was rotifer. The digestive tract and internal organs were formed such as the mouth, esophagus, stomach, kidney, liver, pancreas, intestine, rectum, and anus which indicated that the larvae can eat and digest food. At D-5,  microvilli began to develop in the intestine to absorb nutrients. The cells of the liver, heart, digestive tract had grown and evolved to resemble that of mature fish organs characterized by feed in the gut. The tract and digestive system have differentiated into internal organs such as in adult fish at D-6 and fully developed in D-20 with TL ± 2 cm. Based on the present finding, it is suggested that the initial feeding of tuna larvae using zooplankton (rotifer) could be done at day two (43 hours) post- hatching at a water temperature of 28°C.
KEYWORDS: larvae; digestive track; Thunnus; tuna

## PENDAHULUAN
Pembenihan  ikan  tuna  sirip  kuning  (Thunnus albacares) di hatchery masih dihadapkan oleh beberapa
kendala yang sering menimbulkan kematian massal. Ada  tiga faktor  utama yang  menjadi kendala  dalam pembenihan ikan tuna sirip kuning yaitu: 1) tingginya mortalitas pada sepuluh hari pertama yang disebabkan oleh kualitas telur, nutrisi pakan, dan faktor lingkungan seperti  cahaya,  arus,  kandungan  oksigen,  amoniak, dan nitrit dalam air, serta tekanan osmosis media air pemeliharaan (Kaji, 2003; Patridge, 2009); 2) kematian
cukup tinggi terjadi pada umur sekitar 20 hari yang disebabkan tingginya tingkat kanibalisme sesama larva (Reglero et al., 2014); 3) pada saat mencapai ukuran juvenil  (TL  ±  2  cm)  sering  terjadi  kematian  akibat menabrak  dinding  atau  lompat  keluar  dari  bak pemeliharaan (Kaji, 2003).
Oleh karena itu, penelitian dasar sangat diperlukan mengenai  perkembangan  organ  dalam  larva  ikan seperti  organ  yang  berhubungan  pencernaaan  dan pergerakan  seperti  morfologi  larva  untuk  berenang mencari makan agar bisa  hidup dan tumbuh dengan sempurna. Menurut Kato et al. (2004), pengetahuan tentang perubahan perkembangan sistem pencernaan yang terkait dengan asimilasi makanan sangat penting untuk memahami nutrisi yang dibutuhkan oleh larva ikan.  Pemahaman  tentang  sistem  pencernaan  dan aktivitas enzim pencernaan larva ikan dapat membantu pemilihan pakan yang tepat sesuai dengan kebutuhan larva (Galaviz et al., 2011).
Pengamatan perkembangan awal sistem pencernaan ikan tuna sirip biru, Thunnus thynnus telah dilaporkan oleh Kaji et al. (1996), dan aktivitas enzim pencernaan, serta  komposisi  asam  amino  dari  juvenil  ikan  tuna sirip  kuning  oleh  Buentello  et  al.  (2011).  Namun, perkembangan sistem pencernaan larva ikan tuna sirip kuning belum ada yang melaporkan. Oleh karena itu, diperlukan  penelitian  pengamatan  perkembangan saluran dan sistem pencernaan larva ikan tuna sirip kuning  untuk  mendukung  keberhasilan  perbenihan ikan tuna sirip kuning di Indonesia.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui perkembangan saluran dan sistem pencernaan larva ikan  tuna  sirip  kuning  (Thunnus  albacares)  hasil budidaya  yang  dipelihara  di  hatchery.  Dari  hasil penelitian  ini  diharapkan  dapat  ditentukan  waktu, jenis, dan ukuran pakan awal untuk larva ikan tuna sirip  kuning  agar  pertumbuhan  dan  kelangsungan hidup meningkat.

## BAHAN DAN METODE

## Pemeliharaan  Larva
Penelitian  ini  dilakukan  pada  bulan  Juli-Agustus 2017  di  hatchery  ikan  tuna  sirip  kuning  dan laboratorium  Balai  Besar  Riset  Budidaya  Laut  dan Penyuluhan  Perikanan  (BBRBLPP)  Gondol,  Bali.  Telur ikan tuna sirip kuning yang dibuahi (fertile) biasanya mengambang di permukaan air dikumpulkan dari KJA tempat  pemeliharaan  induk.  Telur  tersebut  lalu dipelihara  dalam  bak  terbuat  dari  fiberglass  dengan volume 6 m 3 . Bak dilengkapi dengan aerasi dan sistem pergantian air dan diletakan di lokasi yang diberi atap transparan.  Kepadatan  tebar  telur  20  butir/L.
Pemeliharaan larva diakhiri setelah berumur 20 hari dan umumnya sudah berukuran juvenil (TL ± 2 cm).

## Pengamatan  Saluran  Pencernaan
Pengamatan  perkembangan  saluran  dan  sistem pencernaan  larva  ikan  tuna  sirip  kuning  dilakukan dengan  mengambil  larva  ikan  tuna  setiap  hari  dari umur 0 sampai 13 hari setelah menetas (D-0—D-13) dengan  jumlah  sampel  masing-masing  sebanyak  10 ekor, selanjutnya dilakukan sampling larva pada D-15 dan  D-20.  Sampel  larva  diamati  di  bawah  sterio- mikroskop  (Nikon  tipe  SMZ  1000)  yang  terhubung dengan kamera dan monitor  komputer. Pengambilan gambar dilakukan dengan program ACT-1.

## Pengamatan  Preparat  Histologi
Pengamatan saluran pencernaan dilakukan dengan histologi.  Sebanyak  5-20  ekor  larva  ikan  tuna  sirip kuning  diamati  di  bawah  mikroskop,  setelah  itu sampel ikan yang sama difiksasi dalam larutan bouin selama  4-6  jam.  Preparat  histologi  berdasarkan Mahardika et al. (2012). Pembuatan preparat dilakukan dengan dehidrasi bertingkat (70%, 80%, 90%, 95%, 100%), dibersihkan dengan xylol, dan ditanam dalam parafin. Proses embedding dilakukan dalam alat otomatis (au- tomatic tissue processor, Sakura FineTecnhical. C.O. LTD,  Tokyo,  Japan).  Preparat  histologi  dipotong dengan alat microtome dengan ketebalan 4-5 µm dan diwarnai  dengan  Hematoxylin  dan  Eosin  (H  &  E). Pengamatan  histologis  dilakukan  di  bawah  sterio- mikroskop (Nikon Eclipse tipe E600) pada pembesaran 10-40x.

## HASIL DAN BAHASAN

## Perkembangan  Saluran  Pencernaan
Larva yang baru menetas (D-0) mempunyai bentuk tubuh yang transparan, mata dan mulut belum terbuka. Mata dan mulut mulai terbuka pada larva D-2. Pada larva  D-0  dan  D-1  bagian  perut  masih  terdapat cadangan makanan berupa kuning telur (yolk sac) yang masih cukup besar (Gambar 1), cadangan makanan ini habis pada larva D-2 (Gambar 1).
Pengamatan  saluran  pencernaan  lar va  D -2 menunjukkan bahwa mulut larva sudah terbuka (45 jam setelah menetas pada suhu air pemeliharaan 28°C). Larva di dalam bak pemeliharaan mulai diberikan pakan alami berupa zooplankton jenis rotifer (B. rotindiformis) dua  jam  sebelum  larva  buka  mulut  (43  jam  setelah menetas pada suhu air 28°C). Rotifer diberikan pada larva D-2 dengan pertimbangan bahwa larva dengan kondisi  mulut mulai  terbuka  dengan sempurna  dan kuning telur yang telah habis mampu menggunakan rotifer sebagai sumber pakan exogenous.
Gambar 1. Perkembangan morfologi larva ikan tuna sirip kuning.
Figure 1. Morphological development of yellowfin tuna larvae.
Larva  D-3  terlihat  sudah  bergerak  aktif  dalam mencari  makanan  dari  sumber  eksogen,  hal  ini ditandai dengan berkembangnya sirip dada dari hasil pengamatan  melalui  foto.  Pada  stadia  ini perkembangan organ mata sudah lengkap, mulut sudah terbuka  sempurna,  kuning  telur  dan  butir  minyak sudah habis, dan di dalam perut larva sudah terlihat adanya  makanan  berupa  rotifer.  Pada  larva  baru menetas sampai umur lima hari merupakan masa kritis di  mana  sering  ditemukan  kematian  lar va  di permukaan air akibat terjebak tegangan permukaan air.  Menurut  Kaji  et  al.  (1996),  kualitas  pakan  awal menjadi  faktor  penentu  terjadinya  mortalitas  pada umur awal larva ikan tuna. Hal tersebut ditunjukkan dari tingkat pertumbuhan yang lambat dari larva ikan tuna pada stadia awal.
Pigmentasi pada bagian atas kepala mulai muncul saat larva D-7, pigmentasi ini semakin terlihat jelas dengan bertambahnya umur larva. Pada D-7 ini juga, organ  gigi  sudah  mulai  tumbuh  pada  rahang  atas. Tumbuhnya gigi ini menandakan bahwa larva sudah bisa mengonsumsi pakan dengan ukuran yang lebih besar dari rotifer seperti copepod, naupli Artemia, atau larva  ikan  yang  baru  menetas.  Di  samping  itu,  gigi tuna sirip kuning yang tajam ini menandakan sifat ikan tuna sirip kuning sebagai karnivora dan sangat rakus makan. Pemberian pakan dengan jumlah yang cukup dan ukuran yang sesuai dengan bukaan mulut akan mengurangi  sifat  kanibalisme  larva  ikan  tuna  sirip kuning. Sifat kanibalisme ini mulai terjadi saat larva umur D-10. Saat larva ikan tumbuh, ada peningkatan dalam keberhasilan menangkap pakan karena ikan yang lebih besar memiliki ukuran bukaan mulut yang lebih besar,  dan  ukuran  pakan  terus  meningkat  sesuai dengan  ukuran  bukaan  mulut  larva  (DeVries  et  al., 1998).
Memasuki umur D-12 sudah mulai muncul dorsal fin (sirip punggung) pertama dan pelvic fin (sirip perut) (Gambar  1). Pada  sirip  ekor  mulai terlihat  jelas  siri- sirip tulangnya dan tulang bagian ekor telah mengalami pembelokan. Pada D-12 perkembangan mulut dan gigi larva  ikan  tuna  sudah  berkembang  sempurna.  Sirip ekor sudah berkembang sempurna pada D-15 dengan bentuk sirip ekor yang sudah membelah seperti ikan dewasa,  pada  stadia  ini  larva  sudah  bisa  berenang bebas mengelilingi bak pemeliharaan untuk mencari makanan dan untuk mendapatkan suplai oksigen.
Pada  D-20  larva  ikan  tuna  sirip  kuning  sudah metamorphosa  menjadi  juvenil  (secara  fisik  sudah menyerupai ikan dewasa dengan TL ± 2 cm) di mana dorsal  fin  (sirip  punggung)  pertama  maupun  sirip punggung kedua sudah tumbuh sempurna dan mulai tumbuh memanjang. Demikian juga dengan pectoral
fin (sirip dada) dan pelvic fin (sirip perut) juga sudah tumbuh sempurna, ekor sudah berkembang sempurna dengan pangkal ekor kecil dan kuat sebagai ciri ikan perenang cepat (Gambar 1).

## Perkembangan  Sistem  Pencernaan
Pada saat larva ikan tuna sirip kuning baru menetas (D-0), saluran pencernaan belum terbentuk. Mulut dan mata belum terbuka, kerongkongan, lambung, usus, rectum, dan anus juga belum terbentuk. Sedangkan organ-organ  yang  membantu  proses  pencernaan seperti hati, pankreas, dan ginjal juga belum terlihat (Gambar 2). Hal yang sama juga terjadi pada ikan kakap putih  (Atractoscion  nobilis)  (Galaviz  et  al.,  2011)  dan kakap  merah  (Lutjanus  argentimaculatus)  (Mahardika et  al.,  2012).  Pada  stadia  ini  kuning  telur  dan gelembung  minyak  sebagai sumber  makanan  masih ada  dalam  ukuran  yang  cukup  besar.  Belum terbentuknya  saluran  pencernaan  pada  stadia  ini membuat  yolk  sac  berperan  besar  sebagai  sumber nutrisi bagi kelangsungan hidup larva.
Pada  larva  D-1  saluran  pencernaan  larva  mulai terbentuk, tetapi masih dalam bentuk tabung lurus. Menurut  Yufera  et  al.  (2014),  lapisan  epitel  tunggal dibentuk oleh sel-sel kuboid dan columnar pada saluran pencernaan pada stadia ini. Kondisi yang sama juga terjadi pada  larva ikan  tuna sirip  biru Atlantik  yang baru menetas. Saluran pencernaan pada larva ikan tuna saat menetas berbentuk lurus sampai ke yolk sac dan berdiferensiasi  di  daerah  usus  (Yufera  et  al.,  2014). Mata dan mulut larva ikan tuna sirip kuning D-1 belum terbuka, demikian juga dengan lubang anus juga belum terbuka  meskipun  rektum  sudah  mulai  terbentuk (Gambar 2). Perkembangan saluran pencernaan larva ikan  tuna  sirip  kuning  pada  D-1  sama  dengan  yang terjadi pada beberapa jenis spesies ikan laut yang lain pada  umur  yang  sama,  seperti  ikan  kerapu  macan Ephinephelus fuscoguttatus (Muzaki et al., 2012), kerapu bebek Cromileptes altivelis (Andriyanto, 2011), kakap putih Atractoscion nobilis (Galaviz et al., 2011), yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco (Yang et al., 2010), dan kakap merah Lutjanus argentimaculatus (Mahardika et al., 2012).
Menurut  Kolkovski  (2001),  saat  baru  menetas saluran  pencernaan  berbentuk tabung  lurus  sampai mulut. Saluran pencernaan ini tidak berubah sampai mulut  terbuka  dan  kuning  telur  terserap  habis. Selanjutnya, saluran pencernaan akan berdiferensiasi menjadi buccopharynx, foregut, midgut, dan hindgut.
Mulut dan mata sudah terbuka saat larva memasuki umur  dua  hari  (D-2),  saluran  pencernaan  masih berbentuk tabung lurus dari esophagus (kerongkongan) sampai  anus.  Esophagus  (kerongkongan)  mulai
berkembang  dan  lapisan  sederhana  ephitelium
Keterangan (Note): og: butiran minyak (oil globule), mt: mata (eye), i: usus (intestine), r: rectum, es: kerongkongan (esofagus), an: anus, l: hati (liver), p: pankreas, hg: hindgut, ov: oral valve, st: lambung (stomach), ys: kuning telur (yolk sac), n: tulang (notochord), bc: rongga mulut (buccal cavity), sb: gelembung renang (swim bladder), h: jantung (heart), k: ginjal (kidney), mg: midgut, mv: micro villi, ub: kandung kemih (urine bladder), g: insang (gill)
Gambar 2. Perkembangan saluran pencernaan larva ikan tuna sirip kuning. Figure 2. Digestive track development of yellowfin tuna larvae.
skuamosa mulai terbentuk. Usus primordial dari larva D-2 ini dibatasi oleh satu lapisan sel kolumnar. Swim bladder (gelembung renang) sudah terbentuk pada larva D-2 yang memungkinkan larva dapat turun naik dalam air pemeliharaan, demikian juga organ ginjal, pancreas, dan  hati  juga  sudah  terbentuk.  Terbentuknya gelembung renang pada ikan tuna sirip kuning sedikit lebih  cepat  dibandingkan  dengan  terbentuknya gelembung renang pada ikan kakap putih Atractoscion
nobilis yaitu pada saat larva umur D-3 (Galaviz et al., 2011).
Menurut Yufera et al. (2014), perkembangan sistem pencernaan larva ikan tuna sirip biru atlantik pertama terjadi dengan pembukaan dari kedua mulut dan anus pada D-2. Mulut dibedakan ke dalam rahang bagian atas  dan  bawah,  selanjutnya  rongga  buccal, kerongkongan,  dan  usus  juga  terdeteksi  pada  larva D-2. Pada fase ini, rongga bukal pada larva ikan tuna
Gambar 2. Lanjutan. Figure 2. Continued.
Saluran dan sistem pencernaan larva ikan tuna sirip kuning pada D-6 semua sudah tersedia dan selanjutnya adalah proses penyempurnaan. Pada D-20 saluran dan sistem pencernaan sudah sempurna dan larva sudah metamorphosa  menjadi  juvenil  (secara  fisik  sudah menyerupai ikan dewasa dengan TL ± 2 cm).

## KESIMPULAN
Larva  ikan  tuna  sudah  mulai  makan  pakan  luar (eksogen) pada D-3. Saluran dan sistem pencernaan telah berdiferensiasi menjadi organ dalam seperti pada ikan dewasa pada hari ke-6 (D-6) dan akan sempurna pada D-20 dengan TL ± 2 cm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan terima kasih kepada Pusat Riset Perikanan, Badan Riset dan Sumberdaya Manusia Kelautan dan Perikanan, Kementerian Kelautan dan Perikanan (KKP) yang  telah  membiayai  penelitian  ini  melalui  DIPA BBRBLPP Gondol Tahun Anggaran 2017. Ucapan terima kasih kepada rekan teknisi yang telah membantu dalam pelaksanaan penelitian ini, Mujimin, Slamet Hariyadi, Nengah Mupu, M. Arif, Syahrodi, dan Jafar Shadiq.

## DAFTAR  ACUAN
Andriyanto, W. (2011). Studies on the ontogeny of the digestive system and selected enzyme activity during early  life  stages  of  humpback  grouper  (Cromileptes altivelis) (Valenciennes, 1828). Thesis submitted in fulfillment of the requirement for the Degree of Master  of  Science  in  the  Institute  of  Tropical Aquaculture. University Malaysia Terengganu.
Buentello,  J.A.,  Pohlenz,  C.,  Margulies,  D.,  Scholey, V.P., Wexler, J.B., Ramírez, D.T., Neill, W.H., Baltazar, P.H.,  &  Gatlin,  D.M.  (2011).  A  preliminary  study of  digestive  enzyme  activities  and  amino  acid composition  of  early  juvenile  yellowfin  tuna (Thunnus albacares). Journal Aquaculture, 312, 205- 211.
DeVries,  D.R.,  Bermigan,  M.T.,  &  Stein,  R.A.  (1998). Prey  selection  by  larval  fishes  as  influenced  by available zooplankton and gape limitation. Trans- actions of the American Fisheries Society, 127, 1040- 1050.
Galaviz,  M.A.,  García-Gasca,  A.,  Drawbridge,  M., Álvarez-González, C.A., & López, L.M. (2011). On- togeny of the digestive tract and enzymatic activ- ity  in  white  seabass,  Atractoscion  nobilis,  larvae. Journal Aquaculture, 318, 162-168.
Kaji, T., Tanaka, M., Takahashi, Y., Oka, M., & Ishibashi, N. (1996).  Preliminary observations  on develop- ment  of  Pacific  bluefin  tuna  Thunnus  thynnus (Scombridae) larvae reared in the laboratory, with
sirip biru atlantik ditutupi oleh lapisan tunggal dari sel epitel. Pada fase ini hati muncul sebagai jaringan basophilic  yang  melekat  pada  yolk  sac.  Sistem pencernaan dan organ pencernaan juga sudah mulai terbentuk  pada  lar va  D -2  ikan  kerapu  macan Ephinephelus fuscogutatus (Muzaki et al., 2012), kerapu bebek Cromileptis altivelis (Andriyanto, 2011), yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco (Yang et al., 2010), dan ikan kakap merah Lutjanus argentimaculatus (Mahardika et al., 2012).
Pada larva ikan tuna sirip kuning D-3 yolk sac sudah diserap sepenuhnya oleh larva, dan di dalam usus sudah terdapat makanan berupa rotifer. Pada stadia ini saluran dan organ  pencernaan sudah  berfungsi sepenuhnya seperti  mulut,  esofagus,  lambung,  ginjal,  hati, pankreas, usus, rektum, dan anus; sehingga larva pada stadia  ini  sudah  bisa  menelan,  menyerap,  dan mengasimilasi pakan yang pertama kali di dapat dari sumber eksogen saat yolk sac sudah benar-benar habis diserap. Jantung sudah terlihat jelas, gelembung renang juga sudah semakin membesar. Sel-sel epitel skuamosa berlapis terbentuk di esofagus pada larva ikan tuna sirip  kuning  umur  tiga hari  ini.  Usus  sudah  melipat dan  juga  sudah  terpisah  dari  rektum,  urine  bladder (kandung kemih), yang berada di belakang rektum juga terbentuk. Urine bladder ini juga bisa dipakai sebagai indikator kualitas air dalam media pemeliharaan larva, bila di  dalam urine  bladder  terdapat kotoran  seperti berbentuk kristal biasanya kondisi kualitas air dalam media pemeliharaan larva kurang baik. Lambung pada larva ikan kakap merah Lutjanus argentimaculatus baru muncul  saat  larva  umur  lima  hari  (Mahardika  et  al., 2012), larva ikan kerapu bebek Cromileptis altivelis pada hari kedua (Andriyanto, 2011) dan larva kerapu macan Epinephelus  fuscogutatus  pada  hari  ketiga  (Muzaki  et al., 2012).
Larva  mulai  umur  empat  hari  (D-4)  bentuk  usus sudah melingkar dan dibagi menjadi dua bagian, usus yang dekat dengan lambung disebut midgut sedangkan yang dibelakang yang langsung berhubungan dengan rektum  disebut  hindgut.  Pada  tahap  ini, kerongkongan,  lambung,  usus,  rektum,  hati,  dan pankreas sudah terlihat lebih jelas. Pada larva D-5 mulai muncul mikro philli pada usus untuk mengabsorbsi nutrisi.  Ukuran  hati  dan  jantung  sudah  lebih  besar, usus  juga  lebih  besar  dengan  jumlah  pakan  yang terdapat di dalamnya lebih banyak.
Pada  larva  ikan  tuna  sirip  kuning  D-6  saluran pencernaan mulai dari kerongkongan, lambung, usus, rektum, dan anus sudah terlihat dengan jelas. Ukuran jantung  dan  hati  lebih  membesar,  demikian  juga dengan organ yang lain seperti ginjal, swim bladder, pankreas, dan urine bladder juga semakin berkembang.
special reference to the digestive system. Marine and Freshwater Research, 47(2), 261-269.
Kaji, T. (2003). Bluefin tuna larval rearing and devel- opment:  State  of  the  art.  p.  84-89.  In  Bridges, C.R.,  García,  A.,  &  Gordin,  H.  (Eds.).  Domestica- tion  of  the  bluefin  tuna  Thunnus  thynnus. Zaragoza: Ciheam, p. 85-89.
Kato,  K,  Ishimaru,  K.,  Sawada,  Y.,  Mutsuro,  J.,
Miyashita, S., Murata, O., & Kumai, H. (2004). On- togeny  of  digestive  and  immune  system  organs of  larval  and  juvenile  kelp  grouper  Epinephelus bruneus reared in the laboratory. Fisheries Science, 70, 1061-1069.
Kolkovski,  S.  (2001).  Digestive  enzymes  in  fish  lar- vae and juveniles—Implications and applications to formulated diets. Journal Aquaculture, 200, 181- 201.
Mahardika, K., Mastuti, I., Melianawati, R., & Zafran. (2012). Histological study on internal organs de- velopment  of  mangrove  snapper,  Lutjanus argentimaculatus larvae. Indonesian Aquaculture Jour- nal, 7(2), 133-138.
Muzaki,  A.,  Mahardika,  K.,  Mastuti,  I.,  Andriyanto, W., Asih, Y.N., & Wardana, I.K. (2012). The diges-
tive  track  development  of  the  tiger  grouper Ephinephelus fuscogutatus larvae treated with thy- roxine  hormone.  Indonesian  Aquaculture  Journal, 7(2), 115-122.
Patridge, G. (2009). The international experience. In Patridge, G (Ed.). Hatchery production of yellow- fin  tuna.  Melbourne,  Australia:  International Specialised Skills Institute Inc., p. 11-25.
Reglero, P., Ortega, A., Blanco, E., Fiksen, Ø., Viguri, F.J., De  la Gándara, F.,  Seoka, M., &  Folkvord, A. (2014). Size-related differences in growth and sur- vival in piscivorous fish larvae fed different prey types. Journal Aquaculture, 433, 94-101.
Yang, R., Xie, C., Fan, Q., Gao, C., & Fang, L. (2010). Ontogeny of the digestive tract in yellow catfish Pelteobagrus fulvidraco larvae. Journal Aquaculture, 302, 112-123.
Yufera, M., Ortiz-Delgado, J.B., Hoffman, T., Siguero, I., Urup, B., & Sarasquete, C. (2014). Organogen- esis of digestive system, visual system and other structures  in  Atlantic  bluefintuna  (Thunnus thynnus)  lar vae  reared  with  copepods  in mesocosm system. Journal Aquaculture, 426-427, 126-137.