## PERBANDINGAN HASIL HITUNG JUMLAH TROMBOSIT SECARA OTOMATIK PADA DARAH YANG DITAMBAHKAN ANTIKOAGULAN Na
2 EDTA 10 %  DENGAN
K 2 EDTA VACUTAINER

## Ardiya Garini
Dosen Jurusan Analis Kesehatan Poltekkes Palembang

## ABSTRAK
Pemeriksaan jumlah trombosit sangat dipengaruhi ketepatan perbandingan pemberian dosis EDTA dengan  volume  darah.  Ketepatan  dosis  Na 2 EDTA  10  %  sangat  tergantung  dari  ketrampilan,  ketelitian dan  pengalaman  petugas  laboratorium,  sedangkan  K 2 EDTA  vacutainer  mempunyai  perbandingan  dosis antikoagulan  dengan  volume  darah  yang  tepat.  Penelitian  ini  bersifat  deskriptif  dengan  membandingkan jumlah trombosit pada darah yang ditambahkan antikoagulan Na 2 EDTA 10 % dengan K 2 EDTA vacutainer dengan menggunakan alat otomatik Sismex XT 2000i. Metoda yang digunakan adalah Electronik impedance dengan laser optik dan fluorescence.  Tujuan penelitian untuk mengetahui perbedaan jumlah trombosit pada pemberian antikoagulan Na 2 EDTA 10 % dengan K 2 EDTA vacutainer. Analisa data menggunakan uji  t paired. Sampel pemeriksaan dalam penelitian adalah pasien yang datang melakukan  check up  kesehatan dimana penelitian  dilakukan di Laboratoriun Rumah Sakit RK Charitas Palembang dari tanggal 2 - 30 januari 2011. Setelah dilakukan penelitian dengan menggunakan kedua antikoagulan tersebut di atas didapat hasil t hit = 14.060  dan  t tab =  1.960  yang  berarti  ada  perbedaan  yang  bermakna.  Berdasarkan  hasil  penelitian  maka disarankan  pada  laboratorium  agar  menggunakan  antikoagulan  K 2 EDTA  vacutainer,  karena  ditemukan perbedaan yang bermakna pada perhitungan jumlah trombosit.
Kata kunci
: Trombosit, Na 2 EDTA 10 %, K 2 EDTA vacutainer.
Kepustakaan
: 11 (1997 – 2009)

## PENDAHULUAN
Trombosit  atau  keping  darah  adalah  elemen terkecil  yang  terdapat  dalam  darah.  Trombosit mempunyai peran penting dalam hemostasis yaitu pembentukan  dan  stabilisasi  sumbat  trombosit. Pembentukan  sumbat  trombosit  terjadi  melalui beberapa  tahap  yaitu  adesi  trombosit,  agregasi trombosit dan reaksi pelepasan. (1) Jumlah normal trombosit  dalam  darah  adalah  140.000  –  450.000 /mm 3 .  Jika  jumlahnya  kurang  dari  normal (trombositopenia)  ,  maka  kalau  ada  luka  darah tidak lekas membeku dan timbul perdarahan yang terus  menerus.  Ketika  luka,  trombosit  pecah  dan mengeluarkan  zat  yang  disebut  trombokinase. Trombokinase bertemu dengan protrombin dengan pertolongan  Ca 2+ akan  menjadi  trombin.  Trombin akan  bertemu  dengan  fibrin yang  berupa  benang- benang  halus  akan    menahan  sel  darah,  sehingga terjadilah pembekuan. (2) Tujuan pemeriksaan hitung jumlah trombosit adalah :
-     Untuk menilai produksi trombosit. - Untuk menilai efek kemoterapi atau radiasi pada produksi trombosit. - Untuk  mendiagnosis  dan  memantau trombositosis atau trombositopenia berat. - Untuk  memastikan  perkiraan  jumlah  dan morfologi trombosit dari sediaan apus darah.
(3,4)
Hitung  trombosit  dapat  dilakukan  dengan cara  langsung  dan  tak  langsung.  Cara  langsung dapat dilakukan dengan cara manual dan otomatik. Cara  manual  mempunyai  ketelitian  dan  ketepatan yang  kurang  baik,  karena  trombosit  kecil  sekali sehingga sukar dibedakan dari kotoran kecil. Lagi pula trombosit mudah pecah dan cenderung saling melekat membentuk gumpalan serta mudah melekat pada permukaan asing. (5,6) Pada  cara  otomatik  dipakai  alat electronic particle counter sehingga ketelitian lebih baik dari pada cara manual. Pada Cara tak langsung, jumlah trombosit pada sediaan hapus dibandingkan dengan jumlah eritrosit kemudian jumlah mutlaknya dapat diperhitungkan dari jumlah mutlak eritrosit. (5,6,7) Pada  pemeriksaan  tertentu,  darah  harus diberi  antikoagulan  untuk  mencegah  bekunya darah  diluar  tubuh  pada  waktu  pemeriksaan .(8) Antikoagulan  adalah  zat  yang  dapat  mencegah penggumpalan darah dengan cara mengikat kalsium
Jurnal Kesehatan. Volume I No. 11 Juni 2013
atau    menghambat  pembentukan  trombin  yang diperlukan untuk mengkonversi fibrinogen menjadi fibrin dalam proses pembekuan. Bahan pemeriksaan dan  antikoagulan  harus  dicampur  segera setelah  pengambilan  specimen  untuk  mencegah pembentukan mikroklot. Pencampuran yang lembut sangat penting untuk mencegah hemolisis. (9) Salah  satu  antikoagulan  yang  sering digunakan  adalah Ethylene  Diamine  Tetraacetic
Acid (EDTA=C 10 H 14 N 2 Na 2 O 8 2H 2 O)  yang  tidak mempengaruhi  morfologi  sel-sel  darah,  sehingga ideal  untuk  pengujian  hematologi,  seperti pemeriksaan  hemoglobin,  hematokrit,  LED, hitung  lekosit,  hitung  trombosit,  retikulosit,  dan sebagainya. (5,9) Ada 3 macam EDTA, yaitu dinatrium EDTA (Na 2 EDTA),  dipotassium  EDTA  (K 2 EDTA)  dan tripotassium  EDTA  (K 3 EDTA).  Na 2 EDTA  dan K 2 EDTA biasanya digunakan dalam bentuk kering, sedangkan  K 3 EDTA  biasanya  digunakan  dalam bentuk  cair.  Dari  ketiga  jenis  EDTA  tersebut, K 2 EDTA adalah yang paling baik dan dianjurkan oleh ICSH ( International Council for Standardization in Hematology ). (9) dan  NCCL ( National Comitte for Clinical Laboratory Standard) karena perbandingan antara  dosis  antikoagulan  dengan  volume  darah dapat  dipertanggung  jawabkan. (10) Tabung  EDTA tersedia  dalam  bentuk  hampa  udara  ( vacutainer tube ) dengan tutup lavender (Purple ) atau pink . (9) EDTA  mempunyai  sifat  hiperosmolar yang  dapat  membuat  eritrosit  mengerut  dan  nilai hematokrit  lebih  rendah.  Na 2 EDTA  dan K 2 EDTA lebih asam daripada   K 3 EDTA, pH asam ini bisa menyebabkan eritrosit membesar. (7) Pemeriksaan  jumlah  trombosit  sangat dipengaruhi  ketepatan  perbandingan  pemberian dosis  EDTA  dengan  volume  darah,  bila perbandingan pemberian EDTA dengan darah tidak tepat  maka  akan  memberikan  hasil  tidak  sesuai dengan kenyataan .(5) Pemakaian antikoagulan EDTA  yaitu 1,5 mg/1 ml darah untuk EDTA kering  dan 15 µl/1 ml darah untuk  EDTA  cair.  Pemakaian  antikoagulan  yang kurang  dari  yang  telah  ditentukan,  menyebabkan darah  dapat  membeku  dan  bila  lebih  akan menyebabkan  eritrosit  mengkerut  sehingga  nilai hematokrit menurun, MCV, dan MCHC meningkat, sedangkan  trombosit  membesar  dan  mengalami disintegrasi. (8) Penelitian  yang  dilakukan  Nurrachmat (2005) di RS Kariadi Semarang  tentang perbedaan hasil  hitung  jumlah  trombosit    pada  darah  yang ditambahkan  Na 2 EDTA  10%  dengan  K2EDTA vacutainer  secara  otomatik  didapatkan  p  =  0,001 yang  berarti  ada  perbedaan  bermakna  hasil pemeriksaan  hitung jumlah trombosit. (10)
Berdasarkan  uraian  diatas,  peneliti  tertarik melakukan penelitian tentang  “Perbandingan Hasil Hitung  Jumlah  Trombosit  Secara  Otomatik  pada Darah  yang  ditambahkan Antikoagulan  Na 2 EDTA 10% dengan K 2 EDTA Vacutainer.”

## Tujuan penelitian
Diketahuinya  perbedaan  hasil  hitung  jumlah trombosit  secara  otomatik  pada  darah  yang ditambahkan antikoagulan Na 2 EDTA 10% dengan K 2 EDTA vacutainer.

## Metode Penelitian
Jenis  penelitian  yang  digunakan  adalah deskriptif  analitik.  Populasi  dalam  penelitian  ini adalah  semua  pasien  yang    melakukan check-  up kesehatan di laboratorium Rumah Sakit RK Charitas dari bulan Januari sampai Agustus 2010.
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini yaitu 25% dari populasi yang berjumlah 76 pasien.
(11) Subjek diambil sesuai dengan kriteria yang telah ditetapkan  oleh  peneliti  yaitu    usia  15-50  tahun, hasil hitung jumlah trombosit normal, darah tidak beku,  darah  harus  tepat  2  ml  Na 2 EDTA  10%  dan darah mengalir  dan berhenti secara otomatis bila mencapai 2 ml pada K 2 EDTA vacutainer. Metoda  yang  digunakan  pada  pemeriksaan hitung jumlah  trombosit adalah   E l e k t r o n i k impedance dengan laser optik dan fluorescence.

## Hasil dan Pembahasan
1.    Hasil
Diketahui :
n =   Sampel =  76 x =  Rata-  rata  hitung  jumlah  trombosit menggunakan  antikoagulan  K 2 EDTA vacutainer . =  270.526.320 y =  Rata-rata  hitung  jumlah  trombosit menggunakan  antikoagulan  Na 2 EDTA 10%. =  254.657.890 =    Rata-rata penyimpangan sampel =   15,87 SD  =   Simpangan baku pada sampel yang berpasangan
=   9,8
Tingkat kepercayaan 95% α = 0,05
Ardiya Garini, Perbandingan Hasil Hitung Jumlah Trombosit Secara Otomatik Pada Darah Yang Ditambahkan  Antikoagulan Na 2 EDTA 10 %  Dengan K 2 EDTA Vacutainer
Hipotesa : H0 = µ1 = µ2 Kriteria Keputusan :
Terima H0 jika – t - tab ≤ t H ≤ t tab Tolak H0 jika  t hit < - t - tab atau t H > t tab
Hasil =  t hit >  t tab =  14.060  >  1.960
Hasil  analisa  H0  ditolak    yang  berarti  ada perbedaan  hasil  hitung  jumlah  trombosit  secara otomatik pada darah yang ditambahkan antikoagulan Na 2 EDTA 10% dengan K 2 EDTA vacutainer.

## Pembahasan
Setelah dilakukan pemeriksaan hitung jumlah trombosit  menggunakan  Na 2 EDTA  10  %    dengan K 2 EDTA vacutainer  didapatkan hasil, ada perbedaan yang bermakna antara kedua antikoagulan tersebut. Hasil  hitung  jumlah  trombosit  menggunakan antikoagulan  Na 2 EDTA  10  %  lebih  rendah  dari K 2 EDTA  vacutainer.    Hasil    ini  sejalan  dengan Nurrachmat (2005) di RS Kariadi Semarang yang menyatakan ada perbedaan yang bermakna antara hasil  pemeriksaan  hitung  jumlah  trombosit  pada darah yang ditambahkan antikoagulan Na 2 EDTA 10 % dengan K 2 EDTA vacutainer. Perbedaan ini mungkin disebabkan pH  antikoagulan  Na 2 EDTA  10  %  lebih  asam dibandingkan  pH  K 2 EDTA  vacutainer  yang mendekati pH darah ( 7.37 – 7.45 ), perbandingan volume antikoagulan Na 2 EDTA 10%  dengan darah
yang tidak tepat. Apabila antikoagulan yang dipakai kurang dari dosis yang ditentukan (1,50 ± 0,25 mg/ ml  darah),  dapat  menyebabkan  darah  membeku dan  bila  lebih  dari  dosis  menyebabkan  trombosit membesar  dan  mengalami  disintegrasi.  ICSH  dan NCCLS  menganjurkan  menggunakan  K 2 EDTA vacutainer  karena mempunyai perbandingan antara dosis antikoagulan dengan volume darah yang dapat dipertanggung jawabkan. Kemungkinan human  error dapat  terjadi baik  pada  penggunaan  antikoagulan    Na 2 EDTA 10  %  maupun  K 2 EDTA  vacutainer. Ada  beberapa hal  yang  perlu  diperhatikan  seperti  pada  tahap pra  analitik,  contoh  pada  penggunaan  K 2 EDTA vacutainer,  sebelum  tabung  berhenti  menghisap sudah  dilakukan  pencabutan  jarum  sehingga perbandingan antara dosis antikoagulan dan volume darah  tidak  tepat  lagi  menyebabkan  peningkatan jumlah  trombosit  palsu.  Setelah  darah  bercampur dengan  antikoagulan  sebaiknya  dihomogenkan dengan cara menggoyang-goyangkan tabung pada Na 2 EDTA  10%  dan    membolak-balikkan  tabung pada  K 2 EDTA vacutainer.

## Simpulan
Ada  perbedaan  bermakna  antara  hasil pemeriksaan hitung jumlah trombosit menggunakan antikoagulan  Na 2 EDTA  10%  dengan  K 2 EDTA vacutainer.

## Saran
Antikoagulan yang dipakai untuk pemeriksaan trombosit sebaiknya menggunakan tabung K 2 EDTA vacutainer yang direkomendasikan oleh ICSH dan NCCLS, pencampuran antikoagulan dengan darah harus homogen (dibolak balik ± 6-8 kali) serta batas waktu pemeriksaan tidak lebih dari 1 jam.

## DAFTAR PUSTAKA
Sudiono,  H.  dkk.  2005. 1. Penuntun  Patologi Klinik hematologi, Edisi:1. Penerbit   Buku Bagian Patologi Klinik Fakultas Kedokteran. UKRIDA.Jakarta   Hal:32
Setiabudy,  DR.  2007.
2. Hemostasis  dan Trombosis ,  Penerbit  Buku  FKUI,  Jakarta. Hal: 2, 26-27. Widmann,  FK.  1995. 3. Tinjauan Klinis Atas Hasil  Pemeriksaan  Laboratorium Edisi: 9.  Penerjemah:  Siti  Boedina  Krisno,  dkk. Penerbit Buku Kedokteran EGC: Jakarta, Hal: 35,156-158
Jurnal Kesehatan. Volume I No. 11 Juni 2013
Setiabudy, DR. 2003. 4.
Strategi  Pemeriksaan
Laboratorium pada Perdarahan. Penerbit
Bagian  Patologi  Klinik.  FKUI.  Jakarta.  Hal 177-178.
Gandasoebrata, R. 2001.
5. Penuntun Laboratorium  Klinik .  PT.  Dian  Rakyat. Jakarta. Hal 8,9,15
Muliaty, D. 2004. 6. PerkembanganTeknologi Laboratorium  Kesehatan .  Departemen Pengembangan Laboratorium  klinik Prodia. RAKERNAS VI PATELKI Padang. Hal 20
Wirawan, R & E, Silman. 1996.
7. Pemeriksaan Laboratorium  Hematologi Sederhana . FKUI. Jakarta. Hal 1, 3
Handayani.T.2009.
8.
Antikoagulan  EDTA, Jumlah  leukosit http://digilib.unimus.ac.id. diakses : 5 November 2010.
9.  Riswanto,2009.  A 9. ntikoagulan ,  http:// labkesehatan.blog spot.com//11/htlm. Diakses
5 Oktober 2010 Nurrachmat. H.2005. 10. Perbedaan jumlah eritrosit , leukosit dan trombosit pada pemberian antikoagulan  EDTA  konvensional dengan
EDTA    vacutainer. http://eprints.Undip. ac.id / 21394/1/pdf. Diakses 6 september
2010.
11.  Arikunto,S.  2007. Manajemen  Penelitian . Edisi : 9.  Penerbit PT  Rineka Cipta. Jakarta.
Hal 95-96