Potency of Ketapang ( Terminalia catappa L.) Leaves Methanol Extract Against Pathogenic Bacteria of Catfish ( Clarias batrachus L.)
Potensi Ekstrak Metanol Daun Ketapang ( Terminalia catappa L.) Terhadap Bakteri Patogen Ikan Lele ( Clarias batrachus L.)
Risky Hadi Wibowo(*) 1,2 , Welly Darwis 1 , Sipriyadi 1,2 , Reza Wahyuni 3, , Dhea Amelia Sari 3 , Elsi Silvia 3 , Aulia Adriansyah 3 , Aldy Trianda 3 , Redo Setiawan 1 ,2
1 Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Universitas Bengkulu,
2 Graduate School of Biology Study Program, Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Universitas Bengkulu
3 Undergraduate Student, Department of Biology, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, Universitas Bengkulu, Kandang Limun, Bengkulu 38112, Indonesia.
* Corresponding author: rhwibowo@unib.ac.id
Diterima 03 Februari 2022 dan disetujui 27 Februari 2022

## Abstrak
Ikan lele ( Clarias batrachus L.) merupakan salah satu spesies penting sebagai komoditas air tawar di  Indonesia  dengan  produksi  yang  semakin  meningkat  setiap  tahunnya.  Namun,  ikan  lele rentan  terhadap  beberapa  infeksi  bakteri,  salah  satunya  oleh  bakteri  patogen Bacillus  cereus terutama bila dipelihara dalam kondisi kepadatan tinggi,. Banyak sumber bahan baku lokal yang dapat dimanfaatkan sebagai pakan ikan untuk mengatasi penyakit yang muncul pada budidaya ikan, yakni salah satunya dengan memanfaatkan potensi tanaman ketapang ( Terminalia catappa L.) yang  memiliki banyak senayawa bioaktif salah satunya yang berpotensi sebagai antibakteri. Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  dan  menguji  potensi  antibakteri  dari  ekstrak  metanol daun ketapang ( T. catappa L.) terhadap bakteri patogen B. cereus yang diisolasi dari hati ikan lele ( Clarias batrachus L.) penyebab penyakit pada budidaya. Metode yang digunakan yaitu maserasi dengan  memakai  pelarut  metanol  98%  perbandingan  1:10  yang  dimaserasi  7  x  24  jam.  Uji efektivitas antibakteri dilakukan dengan metode cakram difusi dengan konsentrasi 45%, 52,5%, 60%, 67,5%, dan 75%. Hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak daun ketapang mampu menghambat pertumbuhan  bakteri B.  cereus pada  konsentrasi  45%  dengan  rata-rata  diameter  zona  hambat sebesar 6,38 mm (kategori sedang). Dari hasil yang diperoleh, dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun ketapang memiliki kemampuan dalam menghambat pertumbuhan bakteri patogen B. cereus penyebab  penyakit  pada  hati  ikan  lele  ( C.  batrachus L.)  sehingga  dapat  dijadikan  alternatif probiotik pada pakan ikan lele.
Kata Kunci : Clarias batrachus L., efektivitas, Bacillus cereus , Terminalia catappa L.

## Abstract
Catfish  (Clarias  batrachus L .)  is  one  of  the  important  species  as  a  freshwater  commodity  in Indonesia  with  production  increasing  every  year.  However,  catfish  are  susceptible  to  several bacterial  infections,  one  of  which  is  by  the  pathogenic  bacterium  Bacillus  cereus  especially when they kept in high density conditions,. Many sources of local raw materials can be used as fish feed to overcome the diseases that arise in fish farming, one of them by using the traditional ketapang plant (Terminalia catappa L. ) which has the potency as an antibacterial agent. The purpose of this research is to determine the antibacterial potency of methanol extract of ketapang ( T. catappa L.) leaves against the pathogenic bacteria B. cereus from catfish ( C. batrachus L.) causing disease in the farming. The extract was made by maceration method with methanol 98 % ratio of 1:10 which is macerated for 7 x 24 hours. Antibacterial activity test were conducted by using the diffusion disc
method with concentration variations about 45 %, 52.5 %, 60 %, 67.5 % and 75 %. The results of the antibacterial activity test of methanol extract of ketapang leaves showed the ability to inhibit the growth of  B. cereus at 45 % with the diameter of inhibition zone is 6,38 mm (medium category). From the results obtained, it can be seen that methanol extract of ketapang leaves has the potential to inhibit the growth of the pathogenic bacteria B. cereus that causing disease in catfish liver ( C. batrachus L.) so that it might be a good alternative of cat fish probiotic feed.
Keyword : Clarias batrachus L., effectiveness, Bacillus cereus , Terminalia catappa L.
Jurnal Pembelajaran  dan Biologi Nukleus is  Licensed  Under a  CC  BY  SA Creative  Commons  Attribution-Share  a  like  4.0 International License . https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i1.2475.

## PENDAHULUAN
Ikan  lele  ( Clarias  batrachus L.)  merupakan  salah  satu  komoditas  perikanan  budidaya yang tersebar luas di dunia. Terjadi peningkatan permintaan ikan lele yang cukup besar, sehingga terjadi peningkatan produksi kedua ikan tersebut melalui metode padat, tebar dan tinggi (Hardi et al ., 2018) . Menurut Butar-butar et al (2020) , ikan lele ( C. gariepinus
L.)  merupakan  salah  satu  spesies  penting  sebagai  komoditas  air  tawar  di  Indonesia. Produksinya meningkat setiap tahun. Namun, penyakit yang terjadi pada budidaya jenis ini  dapat  menghambat  pemenuhan  target  produksi  massal  yang  menyebabkan rendahnya harga jual dan rendahnya konsumsi ikan oleh masyarakat. Ikan lele rentan terhadap  beberapa  infeksi  bakteri,  terutama  bila  dipelihara  dalam  kondisi  kepadatan tinggi.  Wabah  penyakit  bertanggung  jawab  atas  peningkatan  angka  kematian  dan penurunan efisiensi produktivitas produksi, menyebabkan kerugian ekonomi yang tinggi bagi  pembudidaya  ikan,  salah  satunya  adalah Bacillus  cereus yang  disebut  sebagai patogen pada ikan lele (Chandra et al ., 2015) .
B. cereus adalah bakteri batang Gram positif anaerob fakultatif penghasil toksin dan dapat menyebabkan penyakit pada hewan air membentuk endospora tunggal tahan panas, yang umumnya berbentuk oval atau terkadang bulat atau silindris. B. cereus ada di mana-mana karena tidak memiliki kebutuhan nutrisi yang kompleks, sehingga dapat dengan  mudah  untuk  hidup  di  alam. B.  cereus seringkali  menyebabkan  keracunan makanan, seperti muntah dan diare pada manusia dan menyebabkan infeksi pada luka, mata, meningitis, saluran kemih, dan pernapasan. Patogenisitas
B.  cereus dikaitkan  dengan  produksi  toksin  perusak  jaringan  dan  faktor  virulensinya. Toksin  yang  disekresikan  ini  adalah  enterotoksin,  yakni  enterotoksin  nonhemolitik, hemolisin,  sitotoksin,  fosfolipase,  dan  protease (Stanley,  2020) .  Hal  ini  dibuktikan dengan adanya penemuan penyakit yang disebabkan oleh B. cereus di beberapa Negara terhadap ikan lele ( C. batrachus L.).
Pada  budidaya  ikan  lele  Kulgaria,  Burdwan,  di  Benggala  Barat,  India  tingkat kematian  ikan  lele  mencapai  hingga  5%  dari  seluruh  total  ikan  lele  yang  ada  dalam penangkaran  tambak  budidaya  dengan  gejala  klinis  ikan  yang  terserang  menunjukkan adanya  ulkus  pada  kulit  yang  berangsur-angsur  membesar  dan  berkembang  menjadi dermatitis  ulser.  Tanda-tanda  klinis  ikan  lele  yang  terinfeksi  secara  eksperimental dengan isolat serupa dengan yang diamati pada ikan yang terkena dampak dari tambak
ikan,  yakni B.  cereus (Chandra  et  al.,  2015) .  Paparan B.  cereus patogen  pada  ikan  lele segar yang dibudidayakan dalam sistem akuakultur di Nigeria yang menyebabkan hasil produksi ikan lele yang tidak memuaskan (mencapai target) dan kemungkinaan bakteri patogen  lainnya  dalam  sistem  budidaya  ikan  lele  di  Nigeria (Stanley,  2020) dan budidaya  yang  dilakukan  kegubernuran  Kafr  El  Sheikh  Mesir  Utara,  dilaporkan B.  cereus menyebabkan  sebagian  besar  ikan  lele  di  budidaya  hampir  mati  ditandai dengan  ulserasi  kulit  dan  pendarahan.  Ikan  yang  terinfeksi  secara  eksperimental menunjukkan gejala klinis eksternal dan internal yang khas dari yang disebabkan oleh infeksi alami. Tanda-tanda klinis ikan yang terkena menunjukkan adanya luka di kulit.
B.  cereus ditemukan  memproduksi  toksin,  berupa  protease,  lipase,  lesitinase,  dan hemolisin (Younes et  al .,  2020) .  Sehingga,  hal  ini  yang  menyebabkan  perlunya pencegahan,  pengendalian  dan  penanganan  penyakit  yang  disebabkan  oleh B.  cereus terhadap ikan lele pada daerah budidaya.
Masalah di budidaya biasanya ditangani dengan mencegah wabah penyakit atau dengan  mengobati  penyakit  yang  sebenarnya  dengan  obat-obatan  atau  bahan  kimia. Penggunaan agen antibakteri telah meningkat secara signifikan dalam praktek budidaya, salah  satunya  adalah  tanaman  yang  diketahui  mengandung  prinsip-prinsip  fisiologis aktif  yang  telah  dieksplorasi,  dimasukkan  dan  kemudian  dimanfaatkan  dalam  obat- obatan  tradisional  untuk  pengobatan  penyakit  ikan  lele  yang  biasanya  menghuni berbagai  habitat  rendah  oksigen  dan  liang  di  dalam  lumpur,  sehingga  ikan  lele mengembangkan  aksesori  pada  organ  pernapasan  udara  untuk  menghirup  udara  dan mekanisme yang sesuai untuk bertahan hidup di lingkungan yang menantang seperti itu (Li et  al .,  2018) .  Menurut Noviyanti et  al (2020) ,  banyak  pembudidaya  ikan  yang mengeluhkan mahalnya pakan ikan (pelet) yang diduga menjadi penyebab meroketnya harga  ikan  di  pasaran.  Sementara  itu,  banyak  sumber  bahan  baku  lokal  yang  dapat dimanfaatkan  sebagai  pakan  ikan  untuk  mengatasi  masalah  tersebut  dan  mengatasi penyakit yang muncul pada budidaya ikan.
Tanaman  obat  berfungsi  sebagai  komponen  penting  dari  sistem  perawatan kesehatan di India. Sejumlah besar tanaman obat dan konstituennya yang dimurnikan telah  menunjukkan  potensi  farmasi  yang  bermanfaat.  Pengobatan  tradisional melibatkan  penggunaan  ekstrak  tumbuhan  yang  berbeda  atau  konstituen  bioaktif fitokimia,  yang  menyediakan  aplikasi  kesehatan  dengan  biaya  yang  terjangkau. Menurut Younes et  al (2020) ,  metabolit  sekunder  bertanggung  jawab  untuk  aktivitas obat  tanaman.  Analisis  fitokimia  kualitatif  tanaman  ini  mengkonfirmasi  keberadaan berbagai fitokimia seperti saponin, terpenoid, steroid, antosianin, kumarin, asam lemak, tanin,  leukoantosianin,  dan  emodin.  Kuantitas  dan  kualitas  fitokimia  yang  terdapat pada tumbuhan berbeda satu sama lain, salah satunya adalah ketapang ( T. catappa L.) (Rajesh et  al .,  2015) .  Menurut Muhammad et  al (2016) , T.  catappa L.  adalah  pohon tropis  berukuran  sedang  yang  cabang-cabangnya  membentuk  lapisan  kanopi.  Semua bagian tanaman digunakan dalam pengobatan tradisional.
Daun  ketapang  telah  terbukti  melindungi  terhadap  cedera  hati  akut  yang dihasilkan  oleh  beberapa  hepatotoksikan.  Bahkan,  di  Taiwan  daun  ketapang  jatuh digunakan  sebagai  ramuan  untuk  mengobati  penyakit  hati.  Daun  memiliki  sifat antioksidan serta antiklastogenik. Berbagai ekstrak daun T. catappa L. telah dilaporkan sebagai  antikanker,  anti-HIV  dan  hepatoprotektif  serta  antiinflamasi,  hepatitis,
antidiabetes, dan afrodisiak. Dengan demikian, tujuan utama dari penelitian ini adalah untuk  mengetahui  dan  menguji  efektivitas  ekstrak  daun  ketapang  terhadap  bakteri patogen B. cereus pada ikan lele ( C. batrachus L.).

## METODE
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimental,  dilaksanakan  di  Laboratorium Mikrobiologi,  gedung Basic  Science ,  Jurusan  Biologi,  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan  Alam,  Universitas  Bengkulu.  Penelitian  ini  ingin  mengetahui  efektivitas dari  Ekstrak  daun  ketapang  ( Terminalia  catappa L.)  dengan  larutan  metanol  98%  yang akan  diujikan  pada  bakteri  patogen  ikan  lele  ( Clarisa  batrachus L.).  Ekstrak  Daun ketapang diperoleh dengan menggunakan metode maserasi (Kulawe et al ., 2019) .
Peremajaan Isolat Bakteri Patogen Bacillus cereus
Peremajaan  isolat  bakteri  patogen Bacillus  cereus HL  2  diisolasi  dari  ikan  lele sakit  dan  merupakan  koleksi  Laboratorium  Mikrobiologi,  Jurusan  Biologi,  FMIPA UNIB pada media NA dengan metode gores kuadran, kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37 o C (Lay, 1994) .
Sampling dan Pembuatan Ekstrak Daun Terminalia catappa L.
Sebanyak 1000 gram daun ketapang yang segar diambil dari sekitaran kawasan kampus utama Universitas Bengkulu, Kecamatan Muara Bangka Hulu, Kota Bengkulu. Kemudian  dikumpulkan  dan  dicuci  dengan  air  mengalir  untuk  menghilangkan  benda asing  dan  ditiriskan.  Setelah  bersih  daun  ketapang    diletakkan  pada  nampan  yang dilapisi  kertas  koran  dan  dikeringkan  dengan  suhu  ruang  selama  7  hari  (kadar  air ≤ sebesar 7,71%). Daun ketapang yang telah kering, dihaluskan menggunakan blender. Serbuk  daun  ketapang  kering  ditimbang  (neraca  analitik  digital)  serta  ditambahkan pelarut  methanol  98%  (ROFA)  dengan  perbandingan  bahan  (1):  pelarut  (10)  dan didiamkan  selama  7x24  jam  pada  suhu  ruang  Laboratorium  Mikrobiologi,  FMIPA, Universitas  Bengkulu.    Menggunakan  kertas  cakram  (Macherey-Nagel,  Duren, Germany) yang telah diteteskan larutan dan didiamkan selama 7x24 jam disaring dan filtrat  yang  diperoleh  diuapkan  dengan vacuum  rotary  evaporator (IKA,  Jakarta, Indonesia) pada suhu 40 0 C dengan kecepatan 100 rpm hingga diperoleh ekstrak pekat dan  ditimbang  menggunakan  neraca  analitik  digital  (Pioneer,  Hsinchu,  Taiwan)  yang dimodifikasi (Prayoga et al ., 2019) .
Uji Efektivitas Antibakteri dari Ekstrak Daun Terminalia catappa L.
Uji  efektifitas  dilakukan  menggunakan  metode  difusi  cakram  dengan  7  perlakuan  dan 3  pengulangan.  Pada  bakteri B.  cereus dari  isolat  hati  ikan  lele  ( C . batrachus L.) digunakan  konsentrasi  ekstrak  yaitu  45%,  52,5%,  60%,  67,5%,  dan  75%.  Pengukuran zona hambat  dilakukan dari  sisi vertikal dan horizontal,  kemudian dirata-ratakan dari hasil  pengukuran  tersebut  dan  dikurangi  dengan  diameter  kertas  cakram  yang digunakan.  Kemudian  dilakukan  klasifikasi  kategori  zona  hambat  menurut Davis  & Stout  (1971) dalam (Rahmawati et  al .,  2014) yang  menyatakan  bahwa  diameter  zona
bening  10  ±  20  mm  memiliki  daya  hambat  kuat,  diameter  zona  bening  5±10  mm mempunyai  daya  hambat  sedang  dan  diameter    zona  bening  <5  mm  memiliki  daya hambat lemah.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Peremajaan  bakteri  patogen Bacillus  cereus HL  2  dari  ikan  lele  sakit  ( Clarias batrachus L.)
Peremajaan  bakteri  patogen Bacillus  cereus HL  2  dari  ikan  lele    sakit  ( C.  batrachus L.) dilakukan  dengan  metode  gores  kuadran  pada  media  NA  dilanjutkan  dengan pewarnaan Gram seperti gambar 1,
Gambar 1. Morfologi koloni bakteri patogen Bacillus cereus HL 2 dari ikan lele  sakit ( Clarias batrachus L.): a. Isolat murni; b. Hasil pewarnaan Gram
Tahap preparasi sampel penelitian disajikan pada gambar 2.
Gambar  2. Preparasi  uji  MIC  dan  efektivitas  ekstrak  daun  ketapang  ( T.  catappa L.)  terhadap bakteri patogen B. cereus pada ikan lele ( C. batrachus L.) : a. daun utuh ketapang ( T. catappa L.); b. simplisia  daun  ketapang  ( T.  catappa L.);  c.  maserasi  daun  ketapang  ( T.  catappa L.)  dengan metanol 98%; dan d. ekstrak methanol daun ketapang ( T. catappa L.).
a b a b c d
Hasil uji efektivitas ekstrak metanol dari daun ketapang terhadap bakteri patogen B. cereus pada ikan lele setelah diinkubasi selama 72 jam disajikan pada tabel 1.
Tabel 1. Tabel hasil pengukuran uji efektivitas ekstrak metanol daun Ketapang terhadap bakteri patogen B. cereus inkubasi 72 jam Perlakuan Rata-rata Diameter Zona Hambat ± SD (mm) Kategori Zona Hambat - 0,00 ± 0,00 a Sedang + 6,07 ± 0,16 b Lemah 45,00 % 6,38 ± 0,54 b Sedang 52,50 % 6,45 ± 0,60 b Sedang 60,00 % 7,03 ± 0,13 bc Sedang 67,50 % 7,72 ± 1,01 cd Sedang 75,00 % 8,00 ± 0,95 e Sedang
Keterangan: (+) = Kloramfenikol; (-) = Akuades; SD = Standar Deviasi.
Gambar  3.  Z ona  hambat  yang  terbentuk  dari  ekstrak  metanol  daun  ketapang  ( T.  catappa L.) terhadap  bakteri  patogen B.  cereus pada  ikan  lele  ( C.  batrachus L.)  menggunakan  uji  efektivitas dengan metode cakram setelah diinkubasi selama 72 jam
Tabel  2. Tabel  hasil  pengukuran  uji  efektivitas  ekstrak  metanol  daun  Ketapang  terhadap bakteri patogen B. cereus inkubasi 72 jam JK dB KT F hitung F tabel 5% Perlakuan 177,581 6 29,597 77,899 3,295 Galat 7,979 21 0,380 Total 185,560 27
Keterangan: JK = Jumlah Kuadrat; DB = Derajat Bebas dan KT = Kuadrat Tengah

## Pembahasan
Salah  satu  cara  untuk  menanggulangi  atau  mencegah  pertumbuhan  bakteri patogen adalah dengan memanfaatkan bahan aktif dari tanaman yang dapat digunakan sebagai  antibakteri.  Antibakteri  merupakan  senyawa  yang  mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri  sehingga  dapat  digunakan  untuk  kepentingan  pengobatan terhadap gangguan kesehatan yang disebabkan oleh bakteri (Rita et al ., 2016) . Penyakit bakterial adalah salah satu penyebab kerugian besar di bidang akuakultur, salah satunya disebabkan  oleh  bakteri  patogen B.  cereus .  Faktor  virulensi  bakteri  penyakit  umumnya
diekspresikan  oleh  gen-gen  virulen  yang  diregulasi  dengan  sistem Quorum  Sensing sebagai Anti  Quorum  Sensing (AQS)  yang  dapat  menghambat  faktor  virulensi  bakteri patogen  penyebab  penyakit  pada  ikan  lele  dumbo  ( C.  gariepinus ) (Novita et  al .,  2015) . Salah  satu  pengobatan  menggunakan  bahan  aktif  dari  tanaman,  contohnya  adalah penggunaan  daun  ketapang  ( T.  catappa L.)  diketahui  mengandung  senyawa  kimia seperti  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  triterpenoid,  steroid,  resin,  saponin,  kuinon,  dan fenolik. Senyawa tanin dan flavonoid daun ketapang diduga bersifat sebagai antibakteri (Tampemawa et al ., 2016) . Menurut penelitian Munira et al (2018) melaporkan bahwa ekstrak  metanol  daun  ketapang  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  Gram positif maupun Gram negatif.
Daun  ketapang  biasanya  dikenal  berkhasiat  untuk  menjaga  kualitas  air  pada kegiatan  budidaya  perikanan.  Kulit  kayu,  buah,  dan  daun  ketapang  sudah  digunakan sebagai  obat    tradisional  untuk  mengobati  berbagai  penyakit,  termasuk  penyakit  kulit, disentri,  sakit  kepala,  dan  sakit  perut  pada  anak-anak.  Zat  kimia  dalam  ekstrak  daun ketapang  yang  diduga  bersifat  antibakteri  adalah  tanin  dan  flavonoid  sehingga diharapkan mampu menjadi bahan alami alternatif dalam pencegahan dan pengobatan penyakit,  salah  satunya  adalah Motile  Aerommonad  Septicaemia (MAS)  pada  ikan  yang hidup pada habitat tawar, seperti ikan lele yang merupakan ikan air tawar yang diminati oleh masyarakat (Wahjuningrum et al ., 2008) . Ikan lele mengandung nutrisi tinggi dan merupakan ikan yang berlendir, dan lendir merupakan salah satu media pertumbuhan yang baik untuk bakteri (Araujo, 2017) .
Pada  pengujian  ekstrak  daun  ketapang  yang  telah  di  evaporasi  dengan rotary evaporator terhadap  bakteri  patogen B.  cereus pada  ikan  lele,  lima  konsentrasi  ekstrak yang digunakan yaitu 45%, 52,5%, 60%, 67,5%, dan 75% memiliki kemampuan untuk menghambat  pertumbuhan B.  cereus dengan  kategori  sedang  (5-10  mm).  Ekstrak  daun ketapang  pada  konsentrasi  75%  memiliki  rata-rata  diameter  zona  hambat  lebih  besar sebesar  8  mm  dibandingkan  dengan  empat  konsentrasi  lainnya.  Menurut Basri et  al.,
(2010) menyatakan  bahwa  aktivitas  antibakteri  dikatakan  kuat  jika  diameter  daya hambat yang muncul di sekitar cakram berukuran lebih dari 8 mm, sedang bila diameter daya  hambat  7-8  mm  dan  bila  daerah  hambatan  kurang  dari  7  mm  dianggap  lemah. Menurut Alfiah et  al (2015) menyatakan  metode  uji  efektivitas  mempunyai  tujuh perlakuan  yang  terdiri  dari  dua  kontrol,  yakni  negatif  (akuades)  dan  positif (kloramfenikol)  dan  lima  konsentrasi  berbeda,  yakni  45%,  52,5%,  60%,  67,5%,  dan 75%.  Pada  konsentrasi  paling  besar  zona  hambatnya  adalah  salah  satu  konsentrasi efektif yang akan berdampak pada penyembuhan terhadap penyakit infeksi pada ikan.
Menurut Tampemawa et  al (2016) , zona  bening  menunjukkan  area  dimana pertumbuhan  bakteri  terhambat  oleh  adanya  suatu  senyawa  aktif.  Semakin  tinggi diameter  zona  bening  menunjukkan  semakin  tinggi  pula  kemampuan  suatu  senyawa aktif  menghambat  pertumbuhan  bakteri,  yang  tentu  saja  bergantung  pada  konsentrasi senyawa  tersebut.  Respon  hambatan  yang  terbentuk  yaitu  pada  konsentrasi  <  20  % dengan kategori hambatan sedang (9 mm); konsentrasi
20-40%  dengan  kategori  sedang  (9,75  mm);  konsentrasi  50-60%  dengan  kategori  kuat (14 mm); konsentrasi 70-80% dengan kategori kuat (15 mm); dan konsentrasi 90-100% dengan kategori sangat kuat (21 mm) (Dewi et al., 2019) .
Hasil yang diperoleh pada kontrol negatif menunjukkan tidak terbentuknya zona hambat di sekitar kertas cakram dengan diameter 0 mm. Hal ini disebabkan karena pada kontrol  negatif  (akuades)  tidak  mengandung  zat  antibakteri.  Antibiotik  kloramfenikol (kontrol  positif)  mampu  menghambat  pertumbuhan B.  cereus dengan  diameter  zona hambat  sebesar  6,07  mm  pada  uji  efektivitas.  Menurut Karina et  al .,  (2015) , terbentuknya zona hambat menunjukkan bahwa di dalam ekstrak memiliki kandungan antibiotik yang memiliki potensi yang sangat kuat dalam menghambat pertumbuhan B. cereus dengan adanya pengendalian terhadap serangan bakteri hila pada ikan lele dapat dilakukan  dengan  pemberian  berbagai  macam  antibiotik  seperti ampicilin , chloramphenicol dan tetracycline .  Berdasarkan  Keputusan  Menteri  Kelautan  dan Perikanan, antibiotik ampicilin , chloramphenicol dan tetracycline termasuk dalam kategori obat  keras.  Menurut Prayoga et  al .,  (2019) ,  kloramfenikol  merupakan  antibiotik berspektrum  luas  yang  aktif  terhadap  banyak  bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif. Cara  kerja  kloramfenikol  bergabung  dengan  subunit-subunit  ribosom  sehingga menggangu  sintesis  protein,  sehingga  menghasilkan  zona  hambat  kategori  sedang sampai sangat kuat.
Diameter zona hambat yang dihasilkan akibat pemberian ekstrak daun ketapang karena  adanya  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terdapat  pada  ekstrak tumbuhan  ketapang  tersebut.  Zat  kimia  dalam  ekstrak  daun  ketapang  yang  diduga bersifat antibakteri adalah flavonoid, tanin, alkaloid, saponin, fenol, dan minyak atsiri (Sine  dan  Fallo,  2016) dan  proses  ekstraksi  menggunakan  pelarut  air  dapat  menarik senyawa-senyawa yang bersifat polar, seperti flavonoid dan tanin.
Mekanisme  senyawa  flavonoid  dalam  mengganggu  aktivitas  bakteri  adalah dengan  mendenaturasi  protein  sel  bakteri  dan  merusak  membran  sitoplasma,  karena flavonoid  efektif  bekerja  sebagai  bakteriostatik  karena  diduga  dapat  menghambat  dan merusak  dinding  sel  yang  terdiri  dari  lapisan  protein,  mekanisme  kerja  senyawa- senyawa  fenol  termasuk  flavonoid  sebagai  antibakteri  adalah  dengan  mendenaturasi protein  sel  bakteri  bakteri  dan  merusak  membran  sel.  Penghambatan  dan  perusakan dinding  dan  membrane  sel  ini  dapat  dilakukan  dengan  terbentuknya  ikatan-ikatan hydrogen  dan  kovalen  antara  bahan  aktifnya  yang  bersifat  hidrofobik  sehingga menganggu  integrasi  dinding  dan  membran  sel  bakteri.  Menurut Chem  (2017) menyatakan bahwa flavonoid berperan aktif dalam menghambat pertumbuhan bakteri. Flavonoid  menghambat  pertumbuhan  bakteri  dengan  cara  merusak  dinding  sel, menonaktifkan  kerja  enzim,  berikatan  dengan  adhesin,  dan  merusak  membran  sel. Cincin beta dan gugus –OH pada flavonoid diduga sebagai struktur yang bertanggung jawab sebagai aktivitas antibakteri.
Menurut Munira et  al (2018) ,  senyawa  flavonoid  dapat  merusak  membran sitoplasma  yang  dapat  menyebabkan  hilangnya  metabolit  penting  dan  menginaftifkan sistem  enzim  bakteri.  Kerusakan  ini  memungkinkan  nukleutida  dan  asam  amino meresap  keluar  dan  mencegah  masuknya  bahan-bahan  aktif  ke  dalam  sel.  Pada perusakan membran sitoplasma, ion H+ dari senyawa fenol dan turunannya (flavonoid) akan  menyerang  gugus  polar  (gugus  posfat)  sehingga  molekul  fosfolipid  akan  terurai menjadi  gliserol,  asam  karboksilat  dan  asam  fosfat.  Hal  ini  mengakibatkan  fosfolipid tidak  mampu  mempertahankan  bentuk  membran  sitoplasma  akibatnya  membran sitoplasma  akan  bocor  dan  bakteri  akan  mengalami  hambatan  pertumbuhan  dan

## bahkan kematian.
Menurut Gibbs  (2013) ,  tanin  merupakan  polifenol  yang  diperoleh  dari  berbagai bagian tanaman yang berbeda. Selain digunakan dalam industri pengolahan kulit, tanin telah menunjukkan potensi antivirus, antibakteri dan efek antiparasit. Dalam beberapa tahun  terakhir  tanin  juga  telah  dipelajari  untuk  efeknya  terhadap  kanker  melalui mekanisme yang berbeda. Tanin yang terkandung dalam tumbuhan akan mengganggu sel bakteri dalam penyerapan protein oleh cairan sel. Hal ini dapat terjadi karena tanin dapat  menghambat  enzim  proteolitik  yang  berperan  dalam  menguraikan  protein menjadi  asam  amino.  Tanin  dapat  mengerutkan  membran  sel  bakteri  yang menyebabkan  membran  sitoplasma  mengerut  sehingga  terjadinya  perubahan permeabilitas,  sel  tidak  dapat  melakukan  aktivitas  hidup  sehigga  pertumbuhan  bakteri terhambat  atau  bahkan  mati.  Tanin  dapat  bersifat  sebagai  antibakteri  dan  antivirus, dapat merusak membran sel bakteri serta dapat mengerutkan dinding atau membran sel bakteri,  sehingga  dapat  mengganggu  permeabilitas  sel  bakteri.  Hal  ini  akan menghambat pertumbuhan bakteri dan akhirnya bakteri mati (Munira et al. , 2018) . Penghambatan  pertumbuhan  bakteri  patogen B.  cereus yang  merupakan  bakteri Gram positif terdiri atas beberapa lapisan peptidoglikan yang membentuk struktur yang tebal dan kaku serta mengandung substansi dinding sel yang disebut asam teikoat tahan terhadap pemberian antibiotik atau bahan antibakteri lainnya karena mengandung lebih banyak  lapisan  peptidoglikan  dan  mengandung  asam  teikoat  dibandingkan  bakteri Gram negatif (Chem, 2017) sangat terpengaruh oleh konsentrasi zat aktif yang terlarut dalam ekstrak daun ketapang. Dengan demikian dapat dibuktikan bahwa ekstrak daun ketapang  mempunyai  daya  hambat  terhadap  bakteri B.  cereus ,  sehingga  dapat dikembangkan untuk fungsi bioaktivitas dalam pencegahan dan pengobatan infeksi dari bakteri patogen B. cereus pada ikan lele di penangkaran atau budidaya ikan.
Dari hasil pengukuran zona hambat pada tabel 1 kemudian dianalisis dengan uji ANOVA  yang  tertera  pada  tabel  2  diperoleh  F hitung 77,899  lebih  besar  dari  pada  F tabel yaitu  3,295.  Hasil  uji  ANOVA  mendapat  nilai  signifikasi  yang  menunjukkan  bahwa ekstrak  daun  ketapang  berpengaruh  berbeda  nyata  terhadap  pertumbuhan  bakteri C. batrachus L . Pada Uji Duncan didapatkan bahwa kontrol dan konsentrasi ekstrak 75% menunjukkan  perlakuan  yang  diberikan  berbeda  nyata,  sedangkan  perlakuan  lainnya tidak berbeda nyata.

## KESIMPULAN
Ekstrak  metanol  daun  ketapang  ( Terminalia  catappa L.)  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri patogen Bacillus cereus yang diisolasi dari ikan lele ( C. batrachus L.) dengan konsentrasi ekstrak terbaik pada konsentrasi 75% dengan diameter zona hambat sekitar  8  mm  menggunakan  pelarut  methanol  98%.  Berdasarkan  hasil  penelitian tersebut,  ekstrak  daun T.  catappa L.  diharapkan  dapat  menjadi  salah  satu  alternatif probiotik pakan dalam budidaya ikan lele yang dapat mencegah atau mengobati infeksi yang  disebabkan  oleh  berbagai  bakteri  patogen.  Untuk  penelitian  selanjutnya  dapat dilakukan uji analisis fitokimia untuk mengetahui senyawa-senyawa yang berperan dan Gas Chromatography-Mass Spectroscopy (GC-MS) untuk dapat mengetahui senyawa utama
yang  sangat  berperan  sebagai  antibakteri  serta  perlu  diketahui  juga  efek  samping  dari penggunaan ekstrak daun T. catappa L. secara in vivo .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kepada  tim  penelitian  bidang  kajian  mikrobiologi,  Jurusan  Biologi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Bengkulu  dan  juga seluruh  pihak  yang  terlibat  dalam  memberikan  motivasi,  bimbingan  dan  dalam penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Alfiah, R., Rieska, K., & Siti,  M. (2015).  Efektivitas Ekstrak  Metanol  Daun Sembung  Rambat ( Mikania  micrantha Kunth.)  Terhadap  Pertumbuhan  Jamur Candida  albicans . Journal Protobiont , 4 (2), 52–57. Araujo,  2010.  (2017). Pendekatan  Inovatif  untuk  Penjaminan  Mutu  dalam  Perawatan KesehatanNo Judul , Buletin , 6 (1), 5–9.
Basri, F., Amira, N., Shamsuddin, M., Ishak, S. F., Sciences, A. H., Kebangsaan, U., Raja, J., & Abdul,  M.  (2010). International  Journal  of  Current  Medical  and  Pharmaceutical  Time-Kill Assay And Post-Antibiotic Effect Of Acetone Extract Of Canarium Odontophylum Leaves Against Methicillin-Resistant  of  Diagnostic  &  Applied  Health  Sciences  ,  Faculty  of  Health  Sciences  , . October .
Butar-butar, O. D., Suryanto, D., & Ilyas, S. (2020). Detection of Edwardsiella tarda Infection of Catfish  ( Clarias  gariepinus )  in  Central  Tapanuli  Regency,  North  Sumatra  ,  Indonesia. IOSR Journal of Agriculture and Veterinary Science , 13 (1), 6–13.
https://doi.org/10.9790/2380-1301020613
Chandra,  G.,  Bhattacharjee,  I.,  &  Chatterjee,  S.  (2015).  Bacillus  cereus  infection  in  stinging catfish,  Heteropneustes  fossilis  (Siluriformes:  Heteropneustidae)  and  their  recovery  by Argemone mexicana seed extract. Iranian Journal of Fisheries Sciences , 14 (3), 741–753.
Chem, J. (2017). Isolasi, Identifikasi, Uji Aktivitas Senyawa Flavonoid Sebagai Antibakteri Dari Daun Mangga. Indonesian Journal of Chemical Science , 6 (2), 91–96.
Gibbs,  D.  (2013).  Senyawa  Flavonoid  Yang  Bersifat  Antibakteri  Dari  Akway  ( Drimys becariana .Gibbs). Chemistry Progress , 6 (1), 34–37. https://doi.org/10.35799/cp.6.1.2013.2069
Hardi, E. H., Nugroho, R. A., Saptiani, G., Sarinah, R., Agriandini, M., & Mawardi, M. (2018). Identification of Potentially Pathogenic Bacteria From Tilapia ( Oreochromis niloticus ) and Channel  Catfish  ( Clarias  batrachus )  Culture  in  Samarinda,  East  Kalimantan,  Indonesia. Biodiversitas , 19 (2), 480–488. https://doi.org/10.13057/biodiv/d190215 Karina, S., Saputri, M., & Naufal, M. (2015). Pemanfaatan ekstrak daun inai ( Lawsonia inermis l.) sebagai  bakterisida  terhadap Aeromonas  hydrophila yang  menginfeksi  ikan  lele sangkuriang ( Clarias gariepinus ). Depik , 4 (3), 168–174.
https://doi.org/10.13170/depik.4.3.3056
Kulawe, D., Abubakar, A. I., & Abubakar, Z. A. (2019). The Activities of the Aqueous Crude Extracts  of  the  Leaf,  Root  and  Bark  of  Combretum  Molle  Against  Selected  Test Organisms. International  Journal  of  Scientific  and  Research  Publications  (IJSRP) , 9 (10),
p9428. https://doi.org/10.29322/ijsrp.9.10.2019.p9428 Li,  N.,  Bao,  L.,  Zhou,  T.,  Yuan,  Z.,  Liu,  S.,  Dunham,  R.,  Li,  Y.,  Wang,  K.,  Xu,  X.,  Jin,  Y., Zeng,  Q.,  Gao,  S.,  Fu,  Q.,  Liu,  Y.,  Yang,  Y.,  Li,  Q.,  Meyer,  A.,  Gao,  D.,  &  Liu,  Z.
(2018).  Genome  sequence  of  walking  catfish  ( Clarias  batrachus )  provides  insights  into terrestrial adaptation. BMC Genomics , 19 (1), 1–16. https://doi.org/10.1186/s12864-018- 5355-9
M.  Younes,  A.,  Y.  Gaafar,  A.,  Eldeen  Z.,  A.,  Abou  Zaid,  A.  A.,  &  A.  Askora,  A.  (2020). Isolation  and  Pathogenicity  Determination  of  Bacillus  cereus  Associated  with  Ulcer
Formation in African Catfish Clarias gariepinus . Asian Journal of Animal Sciences , 15 (1), 10– 18. https://doi.org/10.3923/ajas.2021.10.18
Muhammad, A., Mudi, S. Y., Muhammad, A., & Mudi, S. Y. (2016). Phytochemical screening and antimicrobial activities of leaf extracts of Swietenia macrophylla . ChemSearch Journal , 7 (2), 64-69–69.
Munira,  M.  M.,  Rasidah,  R.  R.,  Melani,  E.  M.,  Zakiah,  N.  Z.,  &  Nasir,  M.  N.  (2018).  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun  Ketapang  ( Terminalia  catappa L.)  Warna Hijau dan Warna Merah serta Kombinasinya. Indonesian Journal of Pharmacy and Natural Product , 1 (2), 8–13. https://doi.org/10.35473/ijpnp.v1i2.92
Novita,  H.,  Rusmana,  I.,  Yuhana,  M.,  &  Pasaribu,  F.  H.  (2015).  Karakterisasi  Bakteri  Anti Quorum Sensing (AQS) Sebagai Penghambat Virulensi Penyakit Pada Ikan Lele Dumbo
( Clarias gariepinus ). Jurnal Riset Akuakultur , 10 (1), 89. https://doi.org/10.15578/jra.10.1.2015.89-98 Noviyanti,  A.,  Husna,  F.,  Ridhwan,  M.,  &  Surya,  E.  (2020). The  Effectiveness  of  Feeding  Azolla Microphylla on Catfish ( Clarias Batrachus ) Growth . 03 (1).
Pater  Suteja,  I.  K.,  Susanah  Rita,  W.,  &  Gunawan,  I.  W.  G.  (2016).  Identifikasi  Dan  Uji Aktivitas Senyawa Flavonoid Dari Ekstrak Daun Trembesi ( Albizia saman (Jacq.) Merr) Sebagai Antibakteri Escherichia coli . Jurnal Kimia , 1–8. https://doi.org/10.24843/jchem.2016.v10.i01.p19
Prayoga, D., G., E., Nocianitri, K., A., & Puspawati, N., N. (2019). Antioksidan Ekstrak Kasar Daun  Pepe  ( Gymnema  reticulatum Br.)  Pada  Berbagai  Jenis  Pelarut. Jurnal  Ilmu  Dan Teknologi Pangan , 8 (2), 111–121.
Prihandani,  S.  S.  (2015).  Uji  Daya  Antibakteri  Bawang  Putih  ( Allium  sativum L.)  Terhadap Bakteri Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli , Salmonella  typhimurium dan Pseudomonas aeruginosa Dalam  Meningkatkan  Keamanan  Pangan. Informatika  Pertanian , 24 (1),  53. https://doi.org/10.21082/ip.v24n1.2015.p53-58
Rahmawati,  N.,  Sudjarwo,  E.,  &  Widodo,  E.  (2014).  Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  herbal terhadap  bakteri Escherichia coli . Jurnal Ilmu-Ilmu Peternakan (Indonesian Journal of Animal Science) , 24 (3), 24–31. https://jiip.ub.ac.id/index.php/jiip/article/view/184
Rajesh,  B.  .,  Potty,  V.  .,  C,  P.  K.,  Miranda,  M.  T.  .,  &  S.G,  S.  (2015).  Antioxidant  and Antimicrobial  Activity  of  Leaves  of Terminalia  catappa and Anacardium  occidentale :  A Comparative Study. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry , 4 (1), 79–82. Shintya Dewi, Syarifah NYRS Asseggaf, Diana Natalia, M. (2019). Efek Ekstrak Etanol Daun Kesum ( Polygonum minus Huds.) sebagai Antifungi terhadap Trichophyton rubrum . Jurnal Kesehatan Andalas , 8 (2), 198. https://doi.org/10.25077/jka.v8i2.992
Sine,  Y.,  &  Fallo,  G.  (2016).  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Ketapang  ( Terminalia catappa L.)  dan  Daun  Jambu  Biji  ( Psidium  guajava L.)  terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Aeromonas hydrophila . Jurnal Pendidikan Biologi , 1 (1), 9–11.
Stanley,  I.  (2020). Extent  of  contamination  of  fresh  catfish  (Clarias  gariepinus)  with  Bacillus  cereus pathogen in the Nigerian catfish aquaculture systems Extent Of Contamination Of Fresh Catfish ( Clarias gariepinus) With Bacillus Cereus Pathogen In The Nigerian . June 2019 . Tampemawa,  P.  V,  Pelealu,  J.  J.,  &  Kandou,  F.  E.  F.  (2016).  Uji  Efektivitas  Ekstrak  Daun Ketapang ( Terminalia catappa L.) Terhadap Bakteri Bacillus Amyloliquefaciens . Pharmacon , 5 (1), 308–320. https://doi.org/10.35799/pha.5.2016.11324 Wahjuningrum,  D.,  Ashry,  N.,  &  Nuryati,  S.  (2008).  Pemanfaatan  Ekstrak  Daun  Ketapang Terminalia  cattapa Untuk  Pencegahan  Dan  Pengobatan  Ikan  Patin Pangasionodon hypophthalmus Yang  Terinfeksi Aeromonas  hydrophila . Jurnal  Akuakultur  Indonesia , 7 (1),
79–94.
Sitasi APA style : Wibowo, R H., Darwis W., Sipriyadi S., Wahyuni R., Sari D A., Silvia E., Adriansyah A.,  Trianda  A.,  Setiawan  R.  (2022).  Potency  of  Ketapang  ( Terminalia catappa L)  Leaves  Methanol  Extract  Against  Pathogenic  Bacteria  of Catfish  ( Clarias  batrachus L), Jurnal  Pembelajaran  dan  Biologi  Nukleus , 8(1), 82-92. https://doi.org/10.36987/jpbn.v8i1.2475.