## JIFI (JURNAL ILMIAH FARMASI IMELDA)
Vol.1 No.2, Maret 2018, pp. 51-56 ISSN: 2597-7164 (Online), 2655-3147 (Print) https://jurnal.uimedan.ac.id/index.php/JURNALFARMASI
 51

## PENGARUH MEDIA KULTUR PADA PLANLET KENTANG

## Solanum Tuberosum L TERHADAP TOTIPOTENSI PERTUMBUHAN TUNAS
Ewi Mellysa Barus 1 , Martina Restuati 2
Program Studi S1 Farmasi STIKes Imelda Medan
Article Info

## ABSTRACT
The need for potato crops is increasing but production is decreasing. Potato  productivity  is  highly  dependent  on  the  quality  of  pathogen- free potato seeds. The use of mannitol as an osmoregulator for potato seeds can be done in vitro which is able to obtain virus-free cultures and has great potential for germplasm conservation. This study aims to  determine  the  interaction  between  the  concentration  of  mannitol and the use of parts of the explants that inhibit the growth of potato plantlets so that they can be stored for a long time. The research was conducted  from  January  to  May  2017  at  the  Micropropagation Laboratory  of  the  Biotechnology  Center.  The  research  used  the factorial Complete Randomized Group Design (RKLT) method. The first  factor  was  MS  +  Mannitol  media  treatment at  levels  0,  20,  40, 60,  80,  100  and  120  g.L-1.  The  second  factor  was  the  use  of  shoot explants and  the  second  book.  The  treatment  with  the  concentration of mannitol 60 g.L-1 gave the optimum inhibition rate by suppressing plantlet  height  growth  of  58.77%;  number  of  leaves  60.77%;  root length 20.39%; with a storage period of 3 months.
Keywords: Book 2 Osmoregulator Minimal Growth
Shoots
This is an open access article under the CC BY-SA license.

## Corresponding Author:
Ewy Mellysa Barus, Program Studi S1 Farmasi, STIKes Imelda Medan, Jl. Bilal No. 52 Kelurahan Pulo Brayan Darat I Kecamatan Medan Timur, Medan - Sumatera Utara. Email: ewimellysa@gmail.com

## 1. INTRODUCTION
Tanaman  Kentang  (Solanum tuberosum  L.)  termasuk tanaman pangan  penting  dunia  setelah  beras dan gandum (Centro Internacional de la Papa/CIP, 2013). Kentang merupakan sumber karbohidrat alternatif sebagai  salah  satu  tanaman  untuk  diversifikasi  pangan.  Kebutuhan  umbi  kentang  terus  meningkat  setiap tahun  sejalan  dengan  meningkatnya  jumlah  penduduk  dan  berkembangnya  industri  yang  membutuhkan bahan baku kentang. Konsumsi kentang di Indonesia mengalami peningkatan, namun produksinya fluktuatif setiap tahun.  Produksi  kentang  pada  tahun  2012  sebesar  1,094,240 ton,  tahun  2013 menjadi  1,124,282 ton, tahun  2014  produksi  kentang  meningkat  1,347,818  ton  namun  pada  tahun  2015  mengalami  penurunan 1,219,270 ton (Badan Pusat Statistik, 2016).
Kendala  yang  terjadi  di  lapangan  menunjukan  sebagian  besar  petani  saat  ini  menggunakan  benih sisa  hasil  panen  sebelumnya.  Hal  ini  menyebabkan  penurunan  kualitas  benih,  untuk  itu  perlu  upaya  untuk
52 introduksi  jenis-jenis  kentang  baru  yang  spesifik  lokasi  dengan  biaya  murah.  Untuk  kegiatan  perbanyakan benih  diperlukan  tanaman  stok  steril  (gene  bank)  yang  disimpan  dalam  kondisi  steril.  Penyediaan  benih kentang  dapat  dilakukan  melalui  teknik  kultur  jaringan,  karena  teknik  ini  memiliki  keunggulan  dapat mengisolasi bagian apikal untuk mendapatkan kultur yang bebas virus. Oleh karena itu produksi stok benih yang  bebas  penyakit  dapat  diperoleh  dengan  teknik  ini,  Teknik  ini  merupakan  salah  satu  alternatif  bagi perbanyakan tanaman kentang (Molla et al., 2011).
Kultur  jaringan  memiliki  prinsip  Totipotensi  ( Total  Genetic  Potential )  sel  yaitu  setiap  satu  sel, jaringan,  dan  organ  mempunyai  potensi  untuk  beregenerasi  menjadi  tanaman  lengkap  jika  tersedia  nutrisi yang.Lengkap  sebagai  media.  Perbanyakan  tanaman  dengan  metode  kultur  jaringan  mampu  menghasilkan tanaman yang bebas dari virus dengan teknik meristem tip culture, sehingga mempunyai potensi yang sangat besar untuk mengkoleksi tanaman agar tidak terjadinya kehilangan plasma nutfah.
Plasma nutfah organisme (tumbuhan, hewan, mikroba) saat ini sudah dipandang sebagai salah satu sumber  daya  alam  yang  sangat  penting,  terutama  dalam rangka  pemenuhan  kebutuhan  pangan,  energi,  dan kesehatan  (Sumaryono,  2016).  Konservasi  plasma  nutfah  merupakan  salah  satu  kegiatan  yang  perlu dilakukan untuk mencegah terjadinya erosi genetik (hilangnya keragaman) dan hilangnya suatu jenis tanaman misalnya  karena  cekaman  biotik  maupun  abiotik  (Muhammad  et  al.,  2003).  Sedangkan  menurut  Karjadi (2016),  Penyimpanan  plasma  nutfah  sangat  diperlukan  terutama  untuk  klon  (varietas)  unggul  harapan  atau klon (varietas) yang telah bebas dari penyakit virus.   Karjadi (2016) menyatakan bahwa metode penyimpanan  stok  tanaman  kentang  secara  in  vitro  yang  diterapkan  adalah  metode  cryopreservation (kriopreservasi) dan metode pertumbuhan lambat (pertumbuhan minimal).
Metode  Pertumbuhan  minimal  bertujuan  untuk  memperlambat  pertumbuhan  tanaman  tersebut dengan  menaikkan  osmolaritas  media  seperti  penambahan  manitol  dan  sorbitol.  Metode  kriopreservasi merupakan  penyimpanan  bahan  tanaman  dalam  tabung  berisi  nitrogen  cair  dengan  suhu  minus  196  °C (Sumaryono, 2016). Sebagian besar konservasi in vitro tanaman menggunakan metode partumbuhan lambat, karena lebih murah dan mudah dalam pengaplikasiannya dibandingkan dengan cryopreservation.
Metode  pertumbuhan  lambat  (slow  growth)  pada  prinsipnya  adalah  menyediakan  lingkungan  dan media  tumbuh  yang  paling  minimal  sehingga  laju  metabolisme  propagula  in  vitro  tanaman  berupa  kalus (Yuslina  et  al.,  2014  ),  embrio  somatic  (Sumarjan  dan  Hemon.,  2009),  tunas  atau  planlet  (Jawak,  2008  ), berlangsung  sangat  lambat.  Memperlambat  pertumbuhan  dapat  dilakukan  dengan  memodifikasi  media tumbuh  dengan  cara  menambahkan  senyawa  osmotikum  seperti manitol  dan  sorbitol,  serta  zat  penghambat tumbuh misalnya  ancymidol,  paclobutrazol  (Sumaryono,  2016).  Pemberian  osmotikum  dan retardant  sudah banyak  digunakan  dalam  konservasi  in  vitro  tanaman  umbi-umbian  (Roostika  et  al.,  2005).  Regulator osmotik  (osmoregulator)  adalah  suatu  senyawa  organik  yang  dapat  mempengaruhi  tekanan  osmotik  dalam media kultur sehingga mengurangi serapan hara mineral dan air oleh sel atau jaringan yang mengakibatkan terhambatnya pertumbuhan kultur (Dodds dan Robert, 1985).
Manitol  (C6H14O6)  merupakan  gula  alkohol  polihidrik  atau  asiklik  poliol,  yang  diturunkan  dari manosa.  Manitol  berperan  penting  dalam  translokasi  asimilat  dalam  floem  (Deguchi  et  al.,  2004).  Manitol mampu  menembus  semipermeabel  pada  pembuluh  floem  sehingga  akan  terjadi  osmosis  pada  pembuluh xylem  dan  mengakibatkan  terjadinya  aliran  tekanan.  Osmosis  yang  terjadi  pada  pembuluh  xylem mempengaruhi  unsur  hara  makro  salah  satunya  yaitu  aliran  kalium  menjadi  terhambat.  Kalium  merupakan zat  terlarut  utama  yang  berfungsi  dalam  keseimbangan  air,  serta  memiliki  peranan  penting  dalam pertumbuhan.  Tanaman  yang  mengalami  defisiensi  kalium  menyebabkan  pertumbuhan  pada  tanaman tersebut  terhambat.  Manitol  merupakan  serbuk  putih,  tidak  berbau,  bubuk  kristal,  atau  granul  mudah mengalir  bebas.  Manitol  mempunyai  rasa  yang  manis,  seperti  glukosa  dan  setengah  kali  manisnya  sukrosa serta  memberi  sensasi  dingin  di  mulut  (Setyarini, 2009).  Penambahan manitol  ke  dalam media  kultur  akan menghambat  pertumbuhan  dan  perkembangan  tanaman  yang  dikulturkan  tanpa  mempengaruhi  sifat genetiknya sehingga manitol dapat digunakan untuk konservasi in vitro.
Menurut  Dewi  (2002)  penggunaan  media  MS  +  manitol  40  g.L-1  merupakan  media  yang  paling sesuai  untuk  konservasi  talas.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  interaksi  konsentrasi  manitol dan jenis bagian eksplan yang dapat menghambat pertumbuhan planlet kentang.

## 2. RESEARCH METHOD
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Januari  sampai  Mei  2017  di  Laboratorium  Mikropropagasi Tanaman,  Balai  Bioteknologi  Badan  Pengkajian  dan  Penerapan  Teknologi,  PUSPIPTEK.  Penelitian dilakukan menggunakan metode Rancangan Kelompok Lengkap Teracak (RKLT) dengan pola faktorial yang terdiri dari dua faktor.
Faktor pertama adalah konsentrasi manitol yaitu 0, 20, 40, 60, 80, 100, dan 120 g.L-1. Faktor kedua adalah jenis bagian eksplan yaitu pucuk dan buku ke-2. Kombinasi kedua faktor menghasilkan 14 kombinasi perlakuan.  Masingmasing  perlakuan  pada  setiap  percobaan  diulang  sebanyak  4  kali,  sehingga  setiap
percobaan  terdiri  atas  168  satuanpercobaan.  Setiap  satuan  percobaan  terdiri  atas  3  eksplan.  Media  yang digunakan  adalah  komposisi media  MS  yang diberi  myoinositol  100  mg.L-1;  vitamin  thiamine  0.1 ml.L-1; vitamin pyridoxine 0.5 ml.L-1; nicotinic acid 0.5 ml.L-1; vitamin glysine 2 ml.L-1, dan sukrosa 30 g.L-1.
Osmoregulator manitol diberikan sesuai dengan perlakuan. Sebelum penambahan agar 8 g.L-1, pH medium  ditetapkan  5.8.  Media  diotoklaf  pada  18  –  20  Psi  dengan  suhu  120 ⁰ C  selama  20  menit.  Medium diisikan  sebanyak  10  ml  kedalam  tabung  kultur.  Kultur  diinkubasi  dibawah  pencahayaan  11  jam  dengan sumber cahaya lampu TL. Suhu ruang kultur 26 – 22 0 C dengan RH 70 – 80%. Kultur diamati mulai minggu kedua setelah tanam (MST) dan selanjutnya setiap dua minggu selama tiga bulan. Peubah yang diamati ialah: (a) tinggi tanaman yang diukur dari permukaan media sampai ke titik tumbuh eksplan, (b) jumlah daun baru, (c)  panjang akar.  Data  dianalisis  dengan  uji  F.  Jika  perlakuan  menunjukkan  pengaruh  yang nyata terhadap hasil pengamatan maka dilakukan analisis uji lanjut Duncan Multiple Range Test (DMRT) pada taraf nyata 1%  atau  5%.  Untuk  hasil  analisis  ragam,  jumlah  daun  dan  panjang  akar  data  ditransformasi  dengan (x+0.5)1/2 untuk memperkecil koefisien keragaman sehingga data lebih normal.

## 3. RESULTS AND ANALYSIS
Pengaruh  manitol  yang  digunakan  dengan  konsentrasi  tinggi  mampu  mengubah  eksplan  menjadi browning  saat  umur  3  hari  setelah  tanam  (HST),  hal  tersebut  dikarenakan  ketidakmampuan  eksplan menerima  tekanan  osmotikum  mekanisme  dari  zat  pelarut  manitol.  Menurut  Santoso  dan  Nursadi  (2003), peristiwa  browning  sesungguhnya  merupakan  peristiwa  alamiah  biasa  yang  sering  terjadi  pada  sistem biologi, yaitu suatu proses adaptif pada bagian tanaman akibat adanya pengaruh fisik atau biokimia (memar, pengupasan, pemotongan, serangan penyakit, atau kondisi yang tidak normal).
Tinggi Planlet Pengaruh tunggal manitol pada berbagai taraf terhadap tinggi planlet kentang sangat nyata.  Selain  itu,  pengaruh  tunggal  terhadap  berbagai  jenis  eksplan  yang  digunakan  memberikan  pengaruh sangat nyata terhadap tinggi planlet. Pada perlakuan tunggal manitol perlakuan konsentrasi manitol 100 g.L-1 dan  120  g.L-1  tidak  terjadi  peningkatan  terhadap  tinggi  planlet  karena  manitol  merupakan  zat  osmotikum yang akan meningkatkan secara perlahan tekanan osmotik sehingga ketersedian air akan berkurang, tentu saja semakin tinggi manitol akan terhambat pasokan air serta nutrisi sehingga viabilitas eksplan yang sedang masa pertumbuhan akan menurun. Dewi et al., (2014) menyatakan bahwa pada dasarnya akumulasi osmoregulator yang berlebihan akan menurunkan aktivitas enzim.
Manitol  merupakan  senyawa  stabilisator  osmotik  yang  dapat  meningkatkan  osmolaritas  media, sehingga  penyerapan  nutrisi  ke  dalam  jaringan  terhambat  (Tambunan,  2003).  Media  MS0  yang  diberikan pada  perlakuan  kontrol  tanpa  manitol  memiliki  unsur  hara  makro  dan  mikro  yang  terpenuhi  tanpa  adanya hambatan  dari  tekanan  osmotik  sehingga  pertumbuhan  planlet  terus  meningkat.  Selain  itu  dengan  adanya sukrosa 3% pada media MS0 sebagai sumber energi menjadikan planlet selalu tersedia pasokan makanannya. Menurut Laisina (2009), gula bukan saja sebagai penghasil energi tetapi juga untuk pembentukan metabolit sekunder yang penting dalam pertumbuhan dan perkembangan tanaman.
Pada penelitian ini konsentrasi manitol 20 g.L-1; 40 g.L-1; 60 g.L-1; 80 g.L-1; 100 g.L-1; dan 120 g.L-1; berturut-turut mampu menghambat laju pertambahan tinggi planlet kentang secara in vitro pada umur 10 MST sebesar 32.27%; 48.25%; 58.72%; 63.66%; 64.53%; dan 64.53% (Tabel 1). Namun pada penelitian Jawak  (2008),  perlakuan manitol  20 g.L-1;  40  g.L-1;  dan 60  g.L-1  berturut-turut  mampu menghambat laju pertambahan  tinggi  tanaman  jeruk  besar  (Citrus  grandis  L.  Osbeck)  sebesar  56.37%;  63.76%;  dan  39.60% pada umur 24 MST. Sedangkan pada penelitian Dewi et al. (2014), pengurangan tinggi tunas jeruk besar cv. Nambangan dengan konsentrasi manitol yang sama berkisar antara 39.6 – 63.8% pada umur 24 MST.
Tabel 1. Pengaruh Interaksi Konsentrasi Manitol dan Berbagai Jenis Eksplan Terhadap Rata-rata Tinggi Planlet (cm) Kentang cv. AP-4 Secara In Vitro pada Umur 10 MST
Jenis Bagian Eksplan Konsentrasi Manitol (g.L- 1 ) 0 20 40 60 80 100 120 140 160 Pucuk 3.42a 2.17c 1.58d 1.41de  1.29e 1.22e 1.22e 1.22e 1.22e Buku ke-2 3.46a 2.48b 1.98c 1.44de  1.22e 1.22e 1.22e 1.22e 1.22e Koefisien Keragaman 7,06%
Keterangan: Angka-angka yang diikuti huruf yang sama tidak berbeda nyata pada uji DMRT taraf 5%; data tinggi planlet ditransformasi dengan (x + 0.5).
Pengaruh  interaksi  antara  konsentrasi  manitol  dengan  berbagai  jenis  eksplan  yang  digunakan berdasarkan  analisis  ragam  pada  umur  2  dan  4  MST  tinggi  planlet  tidak  berpengaruh  nyata  pada  setiap perlakuan namun, umur 6, 8, dan 10 MST tinggi planlet menunjukan  pengaruh sangat nyata terhadap setiap perlakuan.
54
Semakin  rendah  konsentrasi  manitol  untuk  berbagai  jenis  eksplan  yang  digunakan  maka  tinggi planlet akan semakin tinggi, sedangkan perlakuan berbagai jenis eksplan yang digunakan bagian buku ke-2 memberikan respon pertumbuhan yang cepat pada konsentrasi manitol rendah
Gambar 1. Kondisi Planlet Dengan Konsentrasi Manitol 60 g.L-1 Pada Berbagai Ulangan, Umur 10 MST. Jenis Eksplan Bagian Pucuk (a) Dan Bagian Buku Ke 2 (b)
Jumlah  daun  Percobaan  perlakuan  konsentrasi  manitol  pada  berbagai taraf  menunjukkan  pengaruh yang sangat nyata terhadap pertambahan jumlah daun, sedangkan perlakuan berbagai jenis eksplan pucuk dan buku  ke-2  menunjukan  hasil  yang  tidak  nyata  serta  interaksi  antar  perlakuan  memberikan  pengaruh  tidak nyata. Hasil penelitian ini menunjukan penekanan jumlah daun optimum terjadi pada perlakuan konsentrasi manitol  80  g.L-1  dengan  jenis  eksplan  bagian  buku  ke-2  rata-rata  jumlah  daun  adalah  0.78  helai  dengan menekan  laju  pertumbuhan  jumlahdaun  sebesar  63.21%;  ini  tidak  berbeda  nyata  dengan  perlakuan konsentrasi manitol 60 g.L-1 manitol pada jenis eksplan bagian pucuk dengan persentase penekanan sebesar 60.77% dan pada jenis eksplan buku ke-2 tingkat menekan laju pertumbuhan jumlah daun 53.77%.
Gambar 2. Grafik Pada Jumlah Daun Planlet Kentang Umur 8 MST Data Jumlah Daun Ditransformasi Dengan (x + 0.5)1/2
Menurut Dewi et al. (2010), respon tanaman akibat penambahan manitol dalam media terlihat pada ukuran  daun  yang  semakin  mengecil  pada  konsentrasi  manitol  yang  tinggi.  Peningkatan  potensial  osmotik pada  media  tersebut  menyebabkan  kekurangan  air  yang  tersedia  bagi  pertumbuhan dan  perkembangbiakan. Tanaman  yang  merespon  kekurangan  air  akan  mengurangi  laju  transpirasi  untuk  penghematan  air, kekurangan air juga akan merangsang peningkatan sintesis dan pembebasan asam absisat dari sel-sel mesofil daun  Asam  absisat  merupakan  hormon  yang  diproduksi  dalam  bagian  daun,  batang,  akar  dan  buah  yang berfungsi sebagai menghambat pertumbuhan.
Panjang  Akar  Pengamatan  panjang  akar  dilakukan  pada  umur  12  MST,  berdasarkan  hasil  analisis ragam  Pengaruh  tunggal  manitol  memberikan  pengaruh  sangat  nyata,  sedangkan  pengaruh  tunggal  bagian jenis eksplan tidak berpengaruh nyata terhadap panjang akar serta interaksi terhadap perlakuan memberikan pengaruh  sangat  nyata.  Bagian  jenis  eksplan  pucuk  pada  faktor  manitol  (Gambar  3)  memiliki  respon pertumbuhan panjang akar yang cepat. Penelitian Jawak (2008) melaporkan perlakuan manitol 20 g.L-1; 40 g.L-1; dan 60 g.L-1 pada planlet jeruk besar tidak adanya pertumbuhan akar sama sekali.
Gambar 3. Grafik Pada Panjang Akar Planlet Kentang Umur 12 MST Pada Pengaruh Konsentrasi Manitol Pada Berbagai Jenis Eksplan
Gambar 4. Kondisi Akar Planlet Kentang Pada Berbagai Konsentrasi Manitol Pada Umur 12 MST. (a) 0 g.L- 1; (b) 20 g.L-1; (c) 40 g.L-1; (d) 60 g.L-1; (e) 80 g.L-1; (f) 100 g.L-1; (g) 120 g.L-1. (A) Eksplan Bagian Pucuk Dan (B) Eksplan Bagian Buku Ke-2

## 4. CONCLUSION
Konsentrasi  manitol  80  g.L-1  mampu  memberikan  pertumbuhan  optimum  pada  laju  pertumbuhan terhambat  pada  beberapa  parameter, namun  dari  segi  ekonomis  konsentrasi  manitol  60  g.L-1 tidak  berbeda nyata  sehingga  mampu  memberikan  pertumbuhan  yang  optimum  untuk  konservasi  plasma  nutfah  kentang kultivar  AP-4.  Jenis  eksplan  bagian  pucuk  yang  paling  baik  untuk  konservasi  planlet  kentang  memiliki viabilitas yang baik normal.

## REFERENCES
Badan  Pusat  Statistik.  (2016). Luas  Panen,  Produksi  dan  Produktivitas  Kentang .  2012  –  2015. http://bps.go.id. (diakses pada 27 Januari 2017).
Centro Internacional de la Papa (CIP). (2013). Facts and Figures .http://cipotato.org/potato/facts(diakses pada 27 Januari 2017).
Deguchi, M., Y. Koshita, M. Gao, R. Tao, T. Tetsumura, S. Yamaki dan Y. Kanayama.  (2004). Engineered Sorbitol Accumulation Induces Dwarfism in Japanese persimmon. J. Plant Physiol, Vol. 161 (1): 1177 – 1184.
Dewi,  I.S.,  G.  Jawak,  I.  Roostika,  M.  Sabda,  B.  S.  Purwoko,  dan  W.H.  Adil.  (2010). Konservasi  In  Vitro Tanaman  Jeruk  Besar  (Citrus  maxima  (Burm.)  Merr.) Kultivar  Srinyonya  Menggunakan  Osmotikum dan Retar. Jurnal AgroBiogen edisi 6 hal 84-90. Dewi,  I.S.,  G.S.  Jawak,  B.S.  Purwoko,  dan  M.  Sabda.  (2014). Respon  Pertumbuhan  Kultur  In  Vitro  Jeruk Besar  (Citrus  maxima  (Burm.) Merr.)  cv.  Nambangan  terhadap  Osmotikum  dan  Retardan.  Jurnal Hortikultura. Indonesia, Vol. 5 (1): 21 – 28.
Dewi, N. (2002 ). Perbanyakan dan Pelestarian Plasma Nutfah Talas (Colocasia esculenta (L.) Schot) Secara In Vitro. Tesis. Program Pascasarjana IPB. Bogor.
Dewi, N., I.S. Dewi, dan I. Roostika. (2014). Pemanfaatan Teknik Kultur In Vitro untuk Konservasi Plasma Nutfah Ubi-Ubian . Jurnal AgroBiogen, Vol. 10 (1): 34 – 44. Dodds,  J.H.  dan  L.W.  Roberts.  (1985). Experiments  in  Plant  Tissue  Culture.  2nd  Edition .  Cambridge University Press. Cambridge. UK.
56
Jawak,  G.  (2008). Konservasi  Plasma  Nutfah  Jeruk  Besar  secara  In  Vitro. Skripsi.  Fakultas  Pertanian. Institut Pertanian Bogor.
Karjadi, A.K. (2016). Kultur Jaringan dan Mikropropagasi Tanaman Kentang (Solanum tuberosum L) . Iptek Tanaman Sayuran, No. 008, Maret 2016. Balai Penelitian Tanaman Sayuran. Bandung.
Laisina, J.K.J.  (2009). Pelestarian secara In Vitro Melalui Pertumbuhan Minimal pada Beberapa Genotipe Ubi Jalar(Ipomea batatas (L) Lam). Tesis. Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor. Bogor. Molla,  M.M.H.,  K.M.  Nasiruddin.,  M.  AlAmin,  D.  Khanam  dan  M.A.  Salam.  (2011). Effect  of  Growth Regulators on Direct Regeneration of Potato. International Conference on Environment and Industrial Innovation, Vol. 12: 205 – 210. Muhammad,  H.,  Armiati  dan  W.  Dewayani.  (2003). Jeruk  Keprok  Selayar  dan  Upaya  Pelestariannya . http://www.pustakadeptan.go.id/public ation/p3223031. pdf. (diakses pada 4 Febuari 2017).
Roostika,  I.,  N.  Sunarlim,  dan  V.N.  Arief.  (2005). Teknik  Penyimpanan  Kentang  Hitam  secara  In  vitro. Buletin Penelitian Pertanian Tanaman Pangan 24 (1): 46 – 52.
Santoso,  U.  dan  F.  Nursadi.  (2003). Kultur  Jaringan  Tanaman .  Publikasi  Terbitan  Univeritas Muhammadiyah Malang. Malang.
Setyarini, D. (2009). Pengaruh Variasi Konsentrasi Polivinilpirolidon sebagai Bahan Pengikat dan Manitol sebagai  Bahan  Pengisi  terhadap  Sifat  Fisik  dan  Respon  Rasa  Tablet  effervescent  Ekstrak  Tanaman Ceplukan (physalis angulata l.). Skripsi. Fakultas Farmasi. Universitas Muhammadiyah Surakarta. Sumarjan dan A.F. Hemon. (2009). Efektivitas Polietilena Glikol dan Manitol sebagai Agens Penyeleksi In Vitro untuk Cekaman Kekeringan terhadap Pertumbuhan Embrio Somatik Kacang Tanah . Crop Agro, Vol. 2(1): 30 – 36.
Sumaryono.  (2016). Konservasi  In  Vitro  Plasma  Nutfah  Tumbuhan .  Indonesian  Research  Institute  for Biotechnology and Bioindustry.
Tambunan,  I.R.  (2003). Studi  Penyimpanan  Kultur  In  Vitro  Ubi  Jalar  (Ipomea  batatas  (L)  Lam)  secara Kriopreservasi . Tesis. Program Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor.