Jurnal SainHealth Vol. 2 No. 2 Edisi September 2018 © Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586

## MIKROORGANISME PENDEGRADASI TPH (TOTAL PETROLEUM HYDROCARBON) SEBAGAI AGEN BIOREMEDIASI TANAH TERCEMAR MINYAK BUMI (Review Article)

## Prasetyo Handrianto
Dosen Akademi Farmasi Surabaya Email: prasetyohandrianto@gmail.com

## Abstract
Exploitation and exploration activities will produce sewage sludge and crude oil spills that cause pollution  to  the  environment  and  upgrading  to  the  environment,  biology  and  soil  chemistry. Monitoring  of  oil  pollution  conditions  on  the  soil  can  be  done  by  detection  of  all  hydrocarbon components, or what is called the total petroleum hydrocarbon (TPH). According to its components, this  total  petroleum  hydrocarbon  (TPH)  can  be  classified  into  3  points,  aliphatic,  alicyclic,  and aromatic. One of the biological efforts that can be used to overcome petroleum pollution is by using bioremediation  technology.  There  are  several  methods  in  bioremediation,  one  of  which  is  the biostimulation  method,  where  the  growth  of  the  original  hydrocarbon  decomposers  is  stimulated  by adding  nutrients,  oxygen,  pH  optimization  and  temperature.  Hydrocarbonoclastic  microorganisms have  characteristic  not  possessed  by  other  microorganisms,  namely  their  ability  to  excrete hydroxylase  enzymes, which  are hydrocarbon oxidizing enzymes,  so that these bacteria can degrade petroleum hydrocarbons. Biodegradation can be formed if there is a structural transformation so that cahnges  in  molecular  integrity  occur.  This  process  is  a  series  of  enzymatic  or  biochemical  reaction that  require  ideal  environmental  conditions  with  the  growth  and  proliferation  of  microorganisms. Something that need to be known before remediation are pollutants (organic or inorganic), degraded/ not, dangerous/ not, how many pollutants pollute  the  soil, the  ratio of carbon (C), Nitrogen (N), and phophorus  (P),  soil  type,  soil  conditions  (wet  dry),  and  how  long  pollutants  have  been  deposited  in these locations
Keywords: TPH, Bioremediation, Soil

## PENDAHULUAN
Semakin meningkatnya kebutuhan masyarakat  akan  minyak  bumi  dan  gas mengakibatkan semakin meningkat pula upaya eksplorasi  dan  eksploitasi  terhadap  sumber- sumber  minyak  bumi  di  Indonesia.  Dalam aktifitas  eksploitasi  dan  ekplorasi  akan menghasilkan  lumpur  limbah  dan  tumpahan- tumpahan  minyak  mentah  yang  menyebabkan pencemaran terhadap lingkungan. Pencemaran tersebut akan mengakibatkan perubahan terhadap sifat fisik, biologi dan kimia tanah.
Pemantauan  terhadap  kondisi  pencemaran minyak  bumi  pada  tanah  salah  satunya  dapat dilakukan dengan deteksi terhadap keseluruhan  komponen  hidrokarbon,  biasa disebut  dengan total  petroleum  hydrocarbon
(TPH).  Menurut  Nugroho  (2006) total petroleum hydrocarbon (TPH) ialah merupakan  pengukuran  konsentrasi  pencemar hidrokarbon  minyak  bumi  dalam  tanah  atau serta  seluruh  pencemar  hidrokarbon  minyak dalam  suatu  sampel  tanah  yang  sering dinyatakan  dalam  satuan  mg  hidrokarbon/  kg
Jurnal SainHealth Vol. 2 No. 2 Edisi September 2018 © Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
tanah.
Menurut  komponennya, total  petroleum hydrocarbon (TPH)  ini  dapat  di  golongkan menjadi  3  yaitu,  alifatik,  alisiklik,  dan aromatik.  Senyawa  aromatik  dapat  berupa poliaromatik  dan  monoaromatik.  Komponen dari  monoaromatik  adalah  benzene,  toluene, ethylbenzena  dan  isomer  xylem  (Nugroho, 2006). Hidrokarbon monoaromatik merupakan komponen  hidrokarbon  dari  minyak  bumi yang  dapat  cepat  menyebar  ke  lingkungan/ tanah  karena  sifatnya  sangat  mudah  terlarut dalam  air  (Arafa,  2003).  Selain  tersusun  oleh komponen  hidrokarbon,  minyak  bumi  juga mengandung komponen non-hidrokarbon.
Komponen  non-hidrokarbon  dalam  minyak bumi  dapat  berupa  unsur-unsur  logam  berat. Dari  semua  logam  berat  yang  terdapat  dalam minyak bumi, beberapa logam berat tergolong berbahaya  (Sudarmaji,  2006)  seperti,  merkuri (Hg), kadmium (Cd), argon (Ag), timbal (Pb), arsen (As), copper (Cu), dan cromium (Cr).
Pencemaran  minyak  bumi  di  tanah  seperti ini  merupakan  ancaman  yang  serius  bagi kesehatan  manusia  (Vidali,  2001).  Minyak bumi  yang  mencemari  tanah  dapat  mencapai lokasi air tanah, sumber air yang menyediakan air  bagi  kebutuhan  domestik  maupun  industri sehingga  akan  menjadi  masalah  serius  bagi daerah  yang  mengandalkan  air  tanah  sebagai sumber  utama  kebutuhan  air  bersih  atau  air minum.  Hidrokarbon  dengan  konsentrasi sangat  rendah,  dapat  mempengaruhi  bau  dan rasa  air  tanah  (Atalas  dan  Bartha  1997 dalam Nugroho, 2006).
Fenomena  pencemaran  minyak  bumi sampai  saat  ini  masih  banyak  terjadi  di Indonesia.  Salah  satunya  adalah  kasus  yang terjadi di daerah tambang Kadewan,
Kabupaten  Bojonegoro,  Propinsi  Jawa  timur. Di  daerah  tambang  Kadewan  ini  terdapat  2 aktifitas  penambangan  yaitu  penambangan oleh  PERTAMINA  dan  pertambangan  secara tradisional. Pada pertambangan minyak  secara tradisional, teknologi operasional yang
digunakan  masih  minim,  sehingga  banyak terjadi  ceceran  atau  tumpahan  minyak,  baik dari  kegiatan  penambangan,  pengolahan, maupun  pengangkutan.  Tercecernya  maupun tertumpahnya  minyak  bumi  inilah  yang semakin  lama  akan  mengakibatkan  terjadinya pencemaran  yang  serius  dan  meluas  terhadap tanah di kawasan itu.
Salah  satu  upaya  secara  biologis  yang dapat  digunakan  untuk  mengatasi  pencemaran minyak bumi tersebut adalah dengan menggunakan teknologi bioremediasi.
Bioremediasi  ini  sering  digunakan  karena relatif  murah,  efektif,  efisien  dan  ramah lingkungan  (Alamri,  2009;  Handrianto,  2012; Mariano et  al .,  2007;  Nugroho,  2006). Meskipun bioremediasi ini merupakan teknologi yang efektif dalam upaya menangani pencemaran  minyak  bumi,  namun  untuk memastikan  hasil akhirnya  harus  tetap dilakukan  pemantauan  seperti  kadar  TPH, BTX,  dan  beberapa  logam  berat  yang tergolong berbahaya.
Terdapat beberapa metode dalam bioremediasi,  salah  satunya  adalah  metode biostimulasi,  dimana  pertumbuhan  pengurai hidrokarbon  asli  dirangsang  dengan  cara menambahkan  nutrien,  oksigen,  optimalisasi pH  dan  temperatur  (Mariano et  al .,  2007).
Beberapa  penelitian  tentang  biostimulasi dengan  penambahan  nutrien  sudah  pernah dilakukan  seperti  penggunaan  kotoran  sapi, limbah  media  jamur,  kotoran  ungas  (Ibiene et al .,  2011);  pupuk  kotoran  kuda  (Cunningham dan  Philp,  2000);  NPK  (Abdulsalam  dan Omale,  2009;  Cunningham  dan  Philp,  2000); Biokompos,  urea  (Aliyata  dkk,  2011);  dan pupuk organik (Munawar dkk, 2005).

## METODE DALAM TEKNOLOGI BIOREMEDIASI
Terdapat  tiga  pendekatan  yang  dapat digunakan  dalam  bioremediasi  tumpahan minyak yaitu (Handrianto, 2013):
1. Bioaugmentasi, dimana  mikroorganisme
Jurnal SainHealth Vol. 2 No. 2 Edisi September 2018 © Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
pengurai  ditambahkan  untuk  melengkapi populasi mikroba yang telah ada
2. Biostimulasi,
dimana pertumbuhan
pengurai hidrokarbon indigenous dirangsang  dengan  cara  menambahkan nutrien dan/ atau mengubah habitat
3. Bioavailability yaitu  dilakukan  dengan cara meningkatkan akses mikroba terhadap substrat hidrokarbon.
Beberapa  penelitian  tentang  biostimulasi dengan  penambahan  nutrient  sudah  pernah dilakukan  seperti  penggunaan  kotoran  sapi, limbah media jamur, kotoran unggas (Ibiene et al .,  2011);  pupuk  kotoran  kuda  (Cunningham dan  Philp,  2000);  NPK  (Abdulsalam  dan Omale,  2009;  Cunningham  dan  Philp,  2000); Biokompos,  urea  (Aliyata  dkk,  2011);  dan pupuk nutrien (Munawar dkk, 2005).
Metode  biostimulasi  dengan  penambahan nutrien  pada  bioremediasi  tumpahan  minyak mentah  mampu  menstimulasi  pertumbuhan mikroba  tanah.  Bioremediasi  dengan  nutrien ini  dalam  waktu  tertentu  mampu  menurunkan konsentrasi  minyak  (Munawar  dkk,  2005) sebab  pertumbuhan  mikroba  alami  pada  tanah tercemar  tersebut  akan  mendegradasi  TPH tanah tercemar minyak bumi. Mikroorganisme membutuhkan  unsur  seperti  nitrogen  dan fosfor  untuk  menunjang  kehidupan  dan metabolismenya,  namun  jumlah  nutrien dalam tanah  tercemar  minyak  bumi  umumnya terbatas sehingga menghambat proses degradasi  minyak  dalam  tanah  tersebut (Nugroho,  2006),  oleh  karena  itu  diperlukan penambahan nutrien.

## MIKROBA PENDEGRADASI HIDROKARBON
Mikroorganisme  yang  banyak  hidup  dan berperan  di  lingkungan  yang  mengandung hidrokarbon adalah bakteri, sedangkan kehadiran jenis yang lain tidak terlalu dominan tetapi  cukup  berperan  yaitu  fungi,  ragi,  alga dan  aktinomisetes.  Bakteri  dalam  aktifitas hidupnya memerlukan molekul karbon sebagai salah  satu  sumber  nutrisi  dan  energi  untuk melakukan metabolisme
dan perkembangbiakanya.
Secara khusus, kelompok  mikroorganisme  yang  mampu menggunakan  sumber  karbon  yang  berasal dari senyawa hidrokarbon disebut mikroorganisme hidrokarbonoklastik. Krakteristik mikroorganisme
hidrokarbonoklastik  yang  tidak  dimiliki  oleh mikroorganisme  lain  adalah  kemampuanya mengekskresikan  enzim  hidroksilase,  yaitu enzim  pengoksidasi  hidrokarbon,  sehingga bakteri  ini  mampu  mendegradasi  senyawa hidrokarbon  minyak  bumi  dengan  memotong rantai  hidrokarbon  tersebut  menjadi  lebih pendek (Nugroho, 2006).
Mikroba yang dapat memanfaatkan hidrokarbon  tersebar  luas  di  lingkungan  dan mulai memperbanyak diri ketika berada dalam kondisi yang sesuai (Nugroho, 2006).
Organisme  alam,  baik  indigen  atau  eksogen (ditambahkan),  adalah  agen  utama  yang digunakan  untuk  bioremediasi  (Prescott et  al .,
2002  dalam  Chatterjee et  al ,  2008).  Jenis mikroba yang digunakan pun dapat bervariasi, tergantung  dari  sifat  kimia  polutan,  dan  harus dipilih  dengan  hati-hati  karena  mikroba  hanya bertahan  dalam  kisaran  kontaminan  yang terbatas  (Prescott et  al ,  2002;.  Dubey,  2004;
dalam Chatterjee et al , 2008).
Jurnal SainHealth Vol. 2 No. 2 Edisi September 2018 © Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
Tabel 1. Beberapa mikroorganisme potensial pendegradasi bahan pencemar hidrokarbon
Mikroorganisme Bahan pencemar pada penelitian Referensi Bacillus subtilis TPH ( total petroleum hydrocarbon ) Abdussalam dan Omale, 2009 Micrococcus varians, Bacillus substillis, Pseudomonas aeruginosa Minyak mentah Ekpo dan Udofia, 2008 Ochrobactrum anthropic, Stretophomonas, Bacillus cereus TPH ( total petroleum hydrocarbon ) Mariano et al., 2007 Pseudomonas fluorescens,
Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis, Bacillus sp .
Alcaligenes sp.
Acinetobacter lwoffi, Flavobacterium sp.
Micococus roseous Corinebacterium sp. Petroleum hydrocarbon Adebusoye et al ., 2007 dalam Das dan Chandran, 2010

## Acinetobacter faecalis-type II
Pseudomonas cepacea Actinobacillus sp. Pseudomonas stutzeri Pseudomonas pseudomallei
Pseudomonas fluorescens-25 Pseudomonas aeruginosa Rhodotorulla mucilaginosa Candida parapsilosis Minyak mentah (Sampel dari Bojonegoro) Ni’matuzahroh dkk., 2009 Aeromonas hydrophila, Pseudomonas putida, Pseudomonas aeromonas, Flavobacterium meningosepticum Minyak mentah (Kilang minyak Pertamina)
Pada  tabel  1  di  atas  spesies-spesies  yang diisolasi  oleh  Ni’matuzahroh  dkk.  (2009) adalah  berasal  dari  tanah  tercemar  minyak bumi di daerah tambang tradisional Bojonegoro.  Dari  9  spesies  yang  berhasil diisolasi tersebut dapat menggambarkan bahwa  tanah  tercemar  minyak  bumi  di  daerah tambang  tradisional  Bojonegoro  memiliki keanekarangaman  yang  cukup  tinggi.  Hal  ini merupakan salah satu faktor yang memungkinkan  untuk  dilakukan  biostimulasi
untuk  memaksimalkan  pertumbuhan  bakteri indigen tersebut.

## MEKANISME BIODEGRADASI HIDROKARBON
Secara umum biodegradasi atau penguraian  bahan  (senyawa)  organik  oleh mikroorganisme  dapat  terjadi  bila  terjadi transformasi struktur sehingga terjadi perubahan  integritas  molekuler.  Proses  ini berupa  rangkaian  reaksi  kimia  enzimatik  atau
Jurnal SainHealth Vol. 2 No. 2 Edisi September 2018 © Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
biokimia  yang  mutlak  memerlukan  kondisi lingkungan  yang  sesuai  dengan  pertumbuhan dan perkembangbiakan mikroorganisme
(Shechan  dalam  Nugroho,  2006).  Senyawa hidrokarbon  dalam  minyak  bumi  merupakan sumber karbon bagi pertumbuhan
mikroorganisme,  sehingga  senyawa  tersebut dapat  didegradasi  dengan  baik  (Nugroho, 2006).  Ilustrasi  dari  mekanisme  degradasi hidrokarbon  secara  aerob  adalah  sebagai berikut.
Gambar 1. Metabolisme hidrokarbon dalam kondisi aerob oleh bakteri (Das dan Chandran, 2010)
Di  dalam  minyak  bumi  terdapat  dua macam  komponen  yang  dibagi  berdasarkan kemampuan mikroorganisme menguraikannya, yaitu  komponen  minyak  bumi  yang  mudah diuraikan oleh mikroorganisme dan komponen yang  sulit  didegradasi  oleh  mikroorganisme. Komponen minyak bumi yang mudah didegradasi oleh bakteri merupakan komponen terbesar dalam minyak bumi atau mendominasi,  yaitu  alkana  yang  bersifat  lebih mudah  larut  dalam  air  dan  terdifusi  ke  dalam membran  sel  bakteri.  Jumlah  bakteri  yang mendegradasi  komponen  ini  relatif  banyak
karena  substratnya  yang  melimpah  di  dalam minyak  bumi.  Isolat  bakteri  pendegradasi komponen minyak bumi ini biasanya merupakan pengoksidasi alkana normal. Komponen minyak bumi yang sulit didegradasi merupakan komponen yang jumlahnya  lebih  kecil  dibanding  komponen yang mudah didegradasi. Hal ini menyebabkan bekteri  pendegradasi  komponen  ini  berjumlah lebih  sedikit  dan  tumbuh  lebih  lambat  karena kalah  bersaing  dengan  pendegradasi  alkana yang  memiliki  substrat  lebih  banyak.  Isolasi bakteri  ini  biasanya  memanfaatkan  komponen
Initial attack by oxygenases
Degradation by peripheral pathways
C 2
C 4 C 6 Intermediates of TCA cycle
C 5 CO 2 O 2 H 2 O Respiration Biosynthesis Cell biomassa NH 4 + PO 4 3- SO 4 2- Fe 3+ Hydrocarbon GROWTH
Jurnal SainHealth Vol. 2 No. 2 Edisi September 2018 © Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
minyak  bumi  yang  masih  ada  setelah pertumbuhan  lengkap  bakteri  pendegradasi komponen minyak bumi yang mudah didegradasi.

## FAKTOR  YANG    MEMPENGARUHI BIOREMEDIASI
Sebelum  melakukan  remediasi,  hal  yang perlu diketahui:
1. Jenis  pencemar  (organik  atau  anorganik), terdegradasi/tidak,berbahaya/tidak
2. Berapa  banyak  zat  pencemar  yang  telah mencemari tanah tersebut
3. Perbandingan  karbon  (C),  nitrogen  (N), dan fosfor (P)
4. Jenis tanah .
5. Kondisi tanah (basah, kering)
6. Telah berapa lama zat pencemar terendapkan  di  lokasi  tersebut,kondisi pencemaran (sangat penting untuk dibersihkan segera/ bisa ditunda). Terdapat
beberapa faktor yang
mempengaruhi efektifitas bioremediasi diantaranya  adalah  keanekaragaman  jenis mikroorganisme yang ada, ketersediaan kontaminan  untuk  didegradasi  oleh  mikroba, kondisi  lingkungan, konsentrasi dan toksisitas bahan  pencemar.  Bioremediasi  membantu mikroorganisme  tumbuh  dan  meningkatkan populasi mikroba dengan menciptakan kondisi lingkungan  yang  optimum  sehingga  dapat mendetoksifikasi dengan jumlah dan kecepatan  maksimum.  Proses  ini  disebut dengan biostimulasi. Biostimulasi salah satunya  adalah  dengan  cara  penambahan nutrien untuk membantu meningkatkan metabolisme  mikroba  indigenous.  Selain aspek  nutrien,  beberapa  faktor  lingkungan lainnya  juga  berperan  dalam  mengoptimalkan degradasi  terhadap  kontaminan.  Kondisi lingkungan  optimum  yang  yang  dibutuhkan untuk mendegradasi kontaminan adalah sebagai berikut.
Tabel 2.Kondisi lingkungan yang mempengaruhi degradasi (Vidali, 2001)
Parameter Kondisi yang disyaratkan untuk aktifitas mikroorganisme Titik optimum untuk degradasi minyak bumi Kelembaban tanah 25-28% 30-90% pH tanah 5,5-8,8 6,5-8,0 Kadungan oksigen Aerobik 10-40% Kandungan nutrien N dan P untuk pertumbuhan mikroorganisme C:N:P=100:10:1 Temperatur ( o C) 15-45 20-30 Kontaminan Tidak terlalu toksik Hidrokarbon 5-10% dari berat kering tanah Logamberat 2000 ppm 700 ppm Komposisi tanah Rendah tanah liat atau kandungan lumpur -

## DAFTAR PUSTAKA
Alami,  Nur  Hidayah.  2010.  Efektivitas biosurfaktan Pseudomonas putida T1(8) dalam bioremediasi tanah tercemar minyak mentah. Tesis ,
Universitas Airlangga, Surabaya
Jurnal SainHealth Vol. 2 No. 2 Edisi September 2018 © Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
Abdusssalam  dan  Omale.  2009.Comparation of biostimulation and
bio augmentation  techniques  for  the remediation  of  used  motor  oil contaminated  soil. Braz.  Arch.  Biol. Technol . Vol.52 no.3
Aliyata,  Barokah,  La  Ode  Sumarlin,  Ahmad Saepul  Mujab.  2011.  Penggunaan biokompos dalam bioremediasi lahan tercemar limbah minyak bumi.
Valensi. vol.2 no.3
Arafa,  A.M.,  2003.  Biodegradation  of  some aromatic  hydrocarbons  (BTEX)  by  a bacterial  consortium  isolated  from polluted  sait  in  Saudi  Arabia.
Pakistan Journal of Biological
s cience 17: 1482–1486.
Chatterjee, Sandipan et al . 2008.Bioremediation:  a  tool  for cleaning polluted environments
(Review  Paper). Journal  of  Applied Biosciences . Vol. 11: 594 - 601.
Cunningham dan Philp. 2000. Comparation of
bioaugmentation  and  biostimulation in  ex  situ  treatment  of  diesel contaminated soil. Land Contamination  and  Reclamation .  8
(4)
Das,  Nilanjama  dan  Preethy  Chandran.  2011.
Microbial  degradation  of  petroleum hydrokarbon contaminant: An Overview. Biotechnology  Research International . V.2011 (Article id.941810).
Ekpo,  M.A.  dan  U.S.  Udofia.  Rate  of biodegradation  of  crude  oil  by micoorganims  isolated  from  oil sludge  environment. African  Journal Of  Biotechnology .  Vol.7  (24),  pp
4495-4499.
Ibiene  et  al.,  2011.  Bioremediation  of hydrocarbon  contaminated soil in the Niger  delta  using  spent  mushroom compost  and  other  organic  waste. Nigerian  Journal  Of  Agriculture, Food And Environment . 7(3)
Mariano  A.P.,  Ana  Paula,  Dejanira  de
Franceschi, and Daniel Marcos Bonotto,  2007.  Laboratory  study  on the  bioremediation  of  diesek  oil contaminated  soil  from  petrol  station. Brazillian  Jaournal  Of  Microbiology . 38: 346-353.
Munawar  dan  Tini Surtiningsih.  2005. Bioremediasi Tumpahan Minyak Mentah  Dengan  Metode  Biostimulasi Di  Lingkungan  Pantai  Surabaya
Timur. JurnalHayati .105-132.
Ni’matuzahroh,  fatimah,  Rini  Purbowati,
Ahmad  thontowi,  Agus  supriyanto, dan  M.  Afandi.  2009.  Exploration  of polyaromatic hydrocarbonoclastic microbes  from  oil  polluted  soil.
Proceeding : Congress and international conference of indonesian society for microbiology.
Nugroho,  A.  2003. Bioremidiasi  Hidrokarbon Minyak Bumi . Jakarta: Bumi Aksara
Handrianto, P. (2012). Teknologi bioremediasi dalam  mengatasi  tanah  tercemar hidrokarbon.  In Prosiding  Seminar Nasional  Kimia  Unesa  2012 (pp.  22- 30).
Handrianto,  P.  (2013). Bioremediasi  tanah tercemar  minyak  bumi  di  lokasi pertambangan  tradisional  Bojonegoro dengan
metode stimulasi
Jurnal SainHealth Vol. 2 No. 2 Edisi September 2018 © Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Maarif Hasyim Latif Sidoarjo p-ISSN : 2548-8333 e-ISSN : 2549-2586
menggunakan  kotoran  sapi (Doctoral Dissertation, Universitas Airlangga).
Sudarmaji,  J.  Mukono,  dan  Corie  I.P.  2006.
Toksikologi  logam  berat  B3  dan dampaknya terhadap kesehatan. FKM. Universitas Airlangga.
Vidali,  M.,  2001.  Bioremediation.  An  over view. Pure  Appl.Chem .  73(7):  1163- 1172.