ISSN: 1410-8917
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 15 (2) (2012) : 47 – 52
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa
Isolasi Senyawa Triterpenoid dari Daun Ketapang Kencana ( Terminalia Muelleri Benth) dan Uji Aktivitas Sitotoksik dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test
(BSLT)
Veronika Adelina Hartini a , Khairul Anam a* , Bambang Cahyono a
a Organic Chemistry Laboratory, Chemistry Department, Faculty of Sciences and Mathematics, Diponegoro University, Jalan Prof. Soedarto, Tembalang, Semarang
* Corresponding author: k.anam@live.undip.ac.id
A r t i c l e   I n f o A b s t r a c t
Keywords:
Terminalia muelleri Benth., Triterpenoid, cytotoxic
Ketapang  kencana  ( Terminalia  muelleri Benth.)  is  one  of  the  flowering  plants  of  the Combretaceae  family.  This  family  has  been  widely  used  as  a  traditional  medicine  for antibacterial, antifungal, and antiviral. However, the use of T. muelleri as a traditional medicine  has  not  been  widely  known.  This  study  aim  was  to  determine  the  content  of triterpenoid compounds and cytotoxic activity in T. muelleri. The study consisted of three stages which were isolation of triterpenoid compounds by extraction, followed by liquid- liquid  extraction  fractionation,  separation of  compound  components  by  vacuum  liquid chromatography  (KCV)  and  purification  using  TLC.  Characterization  of  pure  isolated compounds with FTIR, UV-Vis, and GC-MS spectrometers. The cytotoxic activity test was performed on ethanol extract, n-hexane fraction, ethyl acetate fraction, and methanol- water fraction by BSLT method. The isolates obtained were white solids with a yield of 0.28%  (w/w).  Characterization  of  isolates  with  UV-Vis  spectrophotometer  showed  an absorption at 204 nm which was a cut off solvent. Based on the FTIR spectrogram showing the presence of -OH, C=C, C=O, -CH 3 and -CH 2 . While the MS spectroscopy showed that the isolates had molecular weights of 577 g/mol and had similar fragmentation patterns of  lupeol  compounds  (SI  =  88%).  The  results  of  cytotoxic  activity  test  showed  ethanol extract and n-hexane fraction were not toxic while ethyl acetate fraction and methanol- water fraction had slightly toxic properties with LC 50 price of 100 ppm and 78,735 ppm respectively.

## A b s t r a k
Kata kunci: Terminalia muelleri Benth., triterpenoid, sitotoksik
Ketapang kencana ( Terminalia muelleri Benth.) merupakan salah satu tumbuhan berbunga dari  suku  Combretaceae.  Suku  ini  telah  banyak  dimanfaatkan  sebagai  obat  tradisional untuk antibakteri, antifungi, dan antivirus. Akan tetapi, penggunaan T. muelleri sebagai obat  tradisional  belum  banyak  diketahui.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui kandungan  senyawa  triterpenoid  dan  aktivitas  sitotoksik  pada T.  muelleri. Penelitian dibagi menjadi tiga tahap yaitu isolasi senyawa triterpenoid dengan cara ekstraksi, diikuti fraksinasi  secara  ekstraksi  cair-cair,  pemisahan  komponen  senyawa  dengan kromatografi  cair  vakum  (KCV)  dan  pemurnian  menggunakan  KLT.  Karakterisasi senyawa murni hasil isolasi dengan spektrometer FTIR, UV-Vis, dan GCMS. Uji aktivitas sitotoksik  dilakukan  terhadap  ekstrak  etanol,  fraksi n- heksana,  fraksi  etil  asetat,  dan fraksi metanol-air dengan metode BSLT. Isolat yang diperoleh berupa padatan berwarna putih dengan rendemen 0,28% (b/b). Karakterisasi isolat dengan spektrofotometer UV- Vis  menunjukkan  adanya  serapan  pada  204  nm  yang  merupakan  cut  off  pelarut. Berdasarkan spektrogram FTIR menunjukkan adanya gugus – OH, C=C, C=O, -CH3 dan – CH2. Sedangkan spektrogram MS menunjukkan bahwa isolat memiliki bobot molekul 577
g/mol dan memiliki pola fragmentasi mirip senyawa lupeol (SI=88%). Hasil uji aktivitas sitotoksik  menunjukkan  ekstrak  etanol  dan  fraksi  n-heksana  bersifat  tidak  toksik sedangkan fraksi etil asetat dan fraksi metanol-air memiliki sifat sedikit toksik dengan harga LC 50 berturut-turut 100 ppm dan 78,735 ppm.

## 1. Pendahuluan
Masyarakat  Indonesia  telah  lama  memanfaatkan tumbuhan obat sebagai obat tradisional. Obat tradisional adalah  bahan  atau  ramuan  bahan  yang  berasal  dari tumbuh-tumbuhan, hewan, dan mineral, sediaan sarian (galenik) atau campuran dari bahan tersebut yang secara turun-temurun  telah  digunakan  untuk  pengobatan. Wilayah  nusantara  Indonesia  memiliki  40.000  spesies tanaman dan 940 diantaranya berkhasiat obat. Indonesia merupakan salah satu penghasil tanaman obat terbesar di  dunia.  Mengingat  semakin  meningkatnya  kebutuhan akan  obat – obatan  maka  perlu  dilakukan  penelitian mengenai komponen aktif yang ada pada tumbuhan obat tersebut serta toksisitasnya sebagai obat.
Salah  satu  tumbuhan  yang  dapat  dimanfaatkan sebagai  obat  adalah  ketapang  kencana  ( Terminalia muelleri Benth.). T.  mulleri merupakan  salah  satu tumbuhan berbunga dari genus Terminalia dan keluarga Combretaceae.  Tumbuhan  ini  dikenal  di  Indonesia sebagai ketapang kencana. T. mulleri tersebar secara luas di  negara  tropis  seperti  India,  Indonesia  dan  Amerika Utara [1]. Tumbuhan ini belum banyak dikembangkan di Indonesia.  Namun,  ekstrak  Genus  Terminalia  telah diketahui  aktivitasnya  sebagai  antikanker,  antioksidan, antifungi, dan sebagai inhibitor enzim α -glukosidase [2, 3].  Genus  Terminalia  mengandung  metabolit  sekunder triterpenoid siklik dan turunannya, flavonoid, tanin dan senyawa aromatik lainnya [4].
Triterpenoid  yang  merupakan  salah  satu  golongan senyawa metabolit sekunder, telah banyak dipergunakan dalam  kehidupan  sehari-hari  sebagai  obat  seperti diabetes, gangguan menstruasi, patukan ular, gangguan kulit, kerusakan hati dan malaria. Senyawa  triterpenoid mempunyai nilai ekologi bagi tumbuhan karena senyawa ini bekerja sebagai antifungi, insektisida, antipemangsa, antibakteri  dan  antivirus.  Bigham dkk. [5]  menyatakan bahwa  triterpenoid  yang  mempunyai  aktifitas  sebagai antibakteri adalah triterpenoid saponin dan triterpenoid glikosida.
Jenis  terpenoid  yang  berhasil  diisolasi  dari  Genus Terminalia  antara  lain  asam  3-asetilmaslinat  dari Terminalia  alata dan  terminalin  A  dari Terminalia glaucescens [6].  Mengingat  jenis  senyawa  triterpenoid yang  terkandung  di  dalam T.  mulleri belum  pernah dilaporkan maka perlu dilakukan isolasi dan identifikasi senyawa triterpenoid dari T. mulleri.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengisolasi  dan mengidentifikasi  senyawa  triterpenoid  dari  daun T. mulleri Benth.  serta  menguji  aktivitas  sitotoksiknya dengan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).

## 2. Metode Penelitian

## Bahan
Daun T.  muelleri Benth. , aquades,  asam  asetat anhidrid, asam sulfat pekat, metanol, etanol, n -heksana, etil  asetat,  diklorometan,  silika  gel  60H  (Merck  EM 7734),  plat  KLT,  KLT  preparatif,  kertas  saring,  Tween ® 20, telur Artemia salina Leach. dan garam dapur.

## Alat
Gelas beaker 1 L, erlenmeyer 2 L, labu takar 50 mL, gelas  ukur  250  mL,  termometer,  pipet  tetes,  cawan penguapan,  chamber  KLT,  botol  vial  10  mL,  kolom kromatografi,  pompa  vakum,  rotaryvaporator,  bejana penetesan telur Artemia salina , neraca analitis, lampu UV, spektrometer FTIR, UV-Vis, dan GCMS.

## Preparasi Sampel
Daun T.  muelleri diperoleh  dan  dideterminasi  di Pusat  Konservasi  Tumbuhan  Kebun  Raya  Bogor.  Daun dibersihkan  dari  debu,  pasir  dan  pengotor  lainnya, kemudian  diangin-anginkan  hingga  kering  dan dijadikan serbuk menggunakan blender.

## Ekstraksi Triterpenoid
Sebanyak  1  kg  serbuk  kering T.  muelleri diekstraksi dengan cara maserasi menggunakan 3 L pelarut etanol. Filtrat  yang  didapat  dipekatkan  dengan rotary vacuum evaporator sehingga  diperoleh  ekstrak  etanol  dengan berat 42 gram.

## Fraksinasi Ekstrak Etanol
Sebanyak  24  gram  ekstrak  etanol  difraksinasi dengan metode ekstraksi cair-cair menggunakan pelarut berturut-turut n -heksana, etil asetat, dan metanol. Tiga fraksi yang diperoleh yaitu fraksi n -heksana, fraksi etil asetat,  dan  fraksi  metanol  ditentukan  fraksi  yang  kaya triterpenoid  menggunakan  pereaksi  Liebermann- Burchard  (LB).  Uji  positif  keberadaan  triterpenoid ditunjukkan dengan timbulnya warna merah.

## Pemisahan Triterpenoid
Fraksi  yang  positif  terhadap  pereaksi  LB  diisolasi kandungan  triterpenoidnya.  Pemisahan  dilakukan dengan metode kromatografi cair vakum. Silica gel 60H digunakan  sebagai  fase  diam  dan n -heksana, diklorometana,  etil  asetat,  dan  metanol  sebagai  fase gerak  yang  dialirkan  secara  gradient  berdasarkan peningkatan kepolaran.

## Uji Kemurnian Triterpenoid
Isolat  diuji  kemurniannya  menggunakan  KLT dengan  pelarut n -heksana,  kloroform,  diklorometana, etil  asetat,  metanol,  dan  campuran  pelarut  dengan perbandingan  tertentu.  Uji  kemurnian  juga  dilakukan
dengan  KLT  dua  dimensi.  Kemurnian  ditunjukkan dengan terbentuknya noda tunggal.

## Karakterisasi Triterpenoid
Karakterisasi  senyawa  triterpenoid  dilakukan terhadap  kristal  hasil  pemurnian  menggunakan spektrometer FTIR, UV-Vis, dan GCMS.

## Uji Sitotoksik dengan Metode BSLT
Uji  sitotoksik  dilakukan  dengan  membuat  larutan sampel  dalam  air  laut  buatan  dengan  konsentrasi  25 ppm; 250 ppm; 2500 ppm. Sebanyak 0,125 gram ekstrak ditambah  dengan  50  µL  Tween ® 20,  dilarutkan  pada media dalam labu takar hingga mencapai 50 mL sehingga diperoleh  larutan  induk  dengan  konsentrasi  2500  ppm. Kemudian  dibuat  larutan  dengan  konsentrasi  250  ppm dan 25 ppm dari pengenceran larutan induk. Sebanyak + 10 ekor larva Artemia salina Leach. dimasukkan ke dalam vial yang telah berisi 2 mL pada masing-masing larutan sampel  konsentrasi  2500  ppm;  250  ppm;  25  ppm  dan ditambahkan air laut buatan sampai 5 mL. Hal tersebut dilakukan dengan tujuan untuk membuat larutan dengan konsentrasi tepat 1000 ppm; 100 ppm; 10 ppm.
Vial dijaga agar tetap mendapat penerangan. Jumlah Artemia  salina Leach.  yang  mati  dalam  tiap  botol  gelas dihitung  setelah  24  jam  perlakuan.  Dihitung  dan ditentukan  prosentase  kematian  [7].  Uji  toksisitas dilakukan 3 kali replikasi untuk setiap ekstrak dan fraksi.
Untuk  menentukan  nilai  LC 50 digunakan  Analisis Probit  melalui  hubungan  konsentrasi  dengan  persen kematian.

## 3. Hasil Dan Pembahasan
Hasil uji fitokimia terhadap serbuk daun dan ekstrak etanol  daun T.  muelleri sesuai  dengan  metode  yang dilakukan  oleh  Farnsworth  [8]  menunjukkan  bahwa serbuk daun dan ekstrak etanol positif terhadap alkaloid, flavonoid, saponin, tanin galat, kuinon, dan triterpenoid.
Hasil  uji  fitokimia  terhadap  fraksi  etil  asetat menunjukkan bahwa fraksi tersebut memiliki kandungan  triterpenoid.  Pemisahan  fraksi  etil  asetat dilakukan  dengan  kromatografi  cair  vakum  (KCV) menggunakan  silika  gel  60H  sebagai  fasa  diam  dan n - heksana,  diklorometana,  etil  asetat,  metanol  sebagai fasa  gerak  yang  diberikan  secara  gradien  berdasarkan peningkatan  kepolaran.  Eluat  dengan  pola  noda  yang sama  digabung  menjadi  kelompok  fraksi  besar, diuapkan  pelarutnya  dan  diuji  kualitatif  terhadap triterpenoid menggunakan KLT dengan reagen semprot spesifik  untuk  triterpenoid  yaitu  Lieberman-Burchard (LB). Berdasarkan uji KLT terdapat satu kelompok fraksi yang  memberikan  respon  positif  terhadap  reagen semprot LB yaitu fraksi A1-A11b dengan yang selanjutnya diberi nama EA.  Kelompok  fraksi  EA  ini  kemudian  diuji kualitatif dengan KLT menggunakan reagen semprot LB untuk mengetahui keberadaan triterpenoid. Pada Rf 0,45 dan  0,68  secara visible terdapat  noda  yang  berwarna merah  keunguan  dan  di  bawah  lampu  UV  365  nm befluoresensi biru kehijauan yang merupakan warna dari triterpenoid [9] ditunjukkan pada Gambar 1.
Berdasarkan hasil analisis KLT tersebut, selanjutnya dilakukan pemisahan dengan KLT preparatif menggunakan  eluen  campuran  2  pelarut n -heksana- diklorometana  (0,5  :  9,5)  dan  menghasilkan  8  noda seperti ditunjukkan pada Gambar 2. Sebagian kecil dari plat  KLT  tersebut  dipotong  dan  disemprot  LB  untuk mengetahui keberadaan triterpenoid. Hasil uji kualitatif menunjukkan bahwa noda dengan nomor urut 3 dan 4 positif triterpenoid. Untuk lebih memastikan keberadaan  triterpenoid  maka  noda  nomor  3  dan  4 dikerok dan diuji  kualitatif dengan  KLT menggunakan reagen semprot LB.
Gambar 1. KLT kelompok fraksi EA hasil KCV; (A) secara visible setelah disemprot Lieberman-Burchard , (B) di bawah lampu UV 365 nm dengan asam sulfat 10% dan (C) di bawah lampu UV 365 nm LB
Gambar 2. Hasil KLT preparatif kelompok fraksi EA di bawah lampu UV 365 nm
Uji  kemurnian  dilakukan  dengan  KLT  dua  dimensi menggunakan  pelarut n -heksana-diklorometana  (0,5  : 9,5)  dan n -heksana-kloroform  (3  :  7).  Hasil  KLT preparatif  noda  nomor  3  menunjukkan  noda  tunggal dengan  fluoresensi  berwarna  merah  muda  di  bawah
lampu UV 365 nm dengan intensitas warna yang lemah. Hasil  KLT  preparatif noda  nomor  4  menunjukkan noda tunggal  dengan  fluoresensi  berwarna  merah  muda dengan intensitas warna kuat.
Isolat  nomor  3  dan  4  yang  telah  relatif  murni selanjutnya  dikarakterisasi  dengan  spektroskopi  UV- Vis, FTIR, dan GCMS. Namun, isolat nomor 3 tidak dapat dikarakterisasi  karena  jumlahnya  yang  sangat  sedikit dan semakin berkurang selama proses penyimpanan.
Hasil  serapan  UV-Vis  dalam  pelarut  metanol menunjukkan  adanya  serapan  panjang  gelombang  204 nm,  ditunjukkan  pada  Gambar  3.  Munculnya  serapan pada panjang gelombang 204 nm merupakan salah satu ciri khas dari senyawa triterpenoid di mana serapan yang muncul  merupakan  serapan cut  off pelarut  yang digunakan. Metanol menyerap pada panjang gelombang lebih pendek dari 185 nm dan karenanya biasa digunakan untuk  pelarut  di  dalam  daerah  UV.  Bila  metanol digunakan sebagai pelarut, serapan yang kuat terentang ke dalam daerah dekat UV, menghasilkan cut off di dalam daerah 200-220 nm [10].
Hasil  analisis  dengan  spektrofotometer  FTIR  pada Gambar 4 menunjukkan gugus fungsi yang terdapat pada isolat.
Gambar 3. Spektrogram UV-Vis isolat triterpenoid
Gambar 4. Spektrogram FTIR isolat
Hasil  analisis  pola  serapan  FTIR  terhadap  isolat menunjukkan adanya serapan pada bilangan gelombang 3317,56 cm -1 yang merupakan serapan vibrasi ikatan O- H. Vibrasi ikatan ini diduga merupakan vibrasi dari gugus alkohol yang didukung dengan munculnya serapan pada
kuat pada bilangan gelombang 1093,64 cm -1 dan serapan lemah  pada  1047,35  cm -1 dari  vibrasi  ulur  C-O  alkohol. Adanya serapan pada bilangan gelombang 3070,68 cm -1 merupakan serapan vibrasi ulur ikatan =C-H. Vibrasi ini diduga  merupakan  vibrasi  dari  =C-H  alifatik  yang diperkuat  dengan  adanya  bilangan  gelombang  1575,84 cm-1 dan 1541,12 cm -1 yang merupakan vibrasi ulur C=C alifatik. Selain itu juga pita serapan pada daerah panjang gelombang 883,40 cm -1 dan 794,67 cm -1 yang merupakan vibrasi  tekuk  C-H  alifatik.  Serapan  kuat  pada  daerah bilangan gelombang 1739,79 cm -1 diduga karena adanya gugus  fungsi  C=O.  Keberadaan  serapan  rentangan  C-H alifatik  ditunjukkan  dengan  adanya  pita  serapan  yang tajam dengan intensitas kuat pada bilangan gelombang 2920,23  cm -1 dan  2850,79  cm-1,  hal  ini  memberi petunjuk  kemungkinan  adanya  gugus  metil  (CH 3 )  dan metilena  (CH 2 ).  Dugaan  ini  diperkuat  oleh  adanya serapan  pada  daerah  bilangan  gelombang  1463,97  cm -1 dan  1379,10  cm -1 yang  merupakan  serapan  dari bengkokan – CH 2 dan – CH 3 yang  mengindikasikan adanya  gugus  gem  dimetil  sebagai  ciri  khas  senyawa triterpenoid  [11].  Adanya  serapan  kuat  pada  bilangan gelombang  466,37  cm -1 merupakan  serapan  dari  gugus sikloheksana.
Gambar 5. Kromatogram GC isolat
Gambar 6. Spektrogram massa isolat
Hasil analisis dengan GC menunjukkan bahwa isolat belum  murni  dengan  adanya  20  puncak  dan  waktu retensi  yang  berbeda.  Senyawa  pada  puncak  nomor  20 dengan waktu retensi 41,376 menit merupakan senyawa komponen  terbesar  pada  isolat.  Spektrogram  massa senyawa puncak nomor 20 dengan waktu retensi 41,376 menit, base peak m/e 95 dan berat molekul sebesar 577 g/mol  menunjukkan  pola  fragmentasi  sebagai  berikut: m/e  577[M + ];  426;  218;  203;  189;  175;  161;  147;  135; 121;109;  95;  81;  69;  55;  41.  Pola  ini  sesuai  dengan  pola fregmentasi  lupeol  sebagai  berikut:  m/e  426[M + ];  218; 207; 189; 175; 161; 147; 135; 121; 109; 95; 81; 69; 55 [12]. Untuk  klarifikasi  perkiraan  struktur  senyawa  puncak nomor  20,  maka  dilakukan  analisis  mengenasi  pola fragmentasi  strukturnya,  disajikan  pada  gambar  7. Berdasarkan analisis tersebut, maka diperkirakan bahwa
puncak  nomor  20  merupakan  puncak  dari  senyawa triterpenoid  yang  memiliki  kerangka  mirip  dengan kerangka  senyawa  lupeol.  Namun,  perlu  dilakukan analisis lebih lanjut menggunakan instrumen NMR untuk mengetahui kepastian kerangkan struktur dari senyawa pada puncak nomor 20.
Gambar 7. Perkiraan fragmentasi senyawa puncak nomor 20
Uji  sitotoksik  dilakukan  terhadap  ekstrak  etanol, fraksi n- heksana,  fraksi  etil  asetat,  dan  fraksi  metanol. Penelusuran  aktivitas  toksik  pada  isolat  tidak  dapat dilakukan  karena  jumlah  isolat  yang  diperoleh  sangat sedikit.  Pengujian  dilakukan  dengan  metode  BSLT menggunakan larva Artemia salina Leach. yang berumur 2 hari. Berdasarkan Moshi dkk. [13] harga 30 ppm < LC 50 ≤ 100  ppm  bersifat  sedikit  toksik,  harga  LC 50 >100  ppm bersifat tidak toksik. Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa ekstrak etanol dan fraksi n -heksana bersifat tidak toksik  sedangkan  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  metanol bersifat sedikit toksik dengan harga LC 50 berturut-turut 100 ppm dan 78,735 ppm ditunjukkan pada tabel 1.
Tabel 1: Hasil pengamatan kematian larva Artemia salina Leach. pada ekstrak etanol, fraksi n -heksana, fraksi etil asetat, dan fraksi metanol

## 4. Kesimpulan
Isolat  yang  diperoleh  berupa  padatan  berwarna putih dengan rendemen 0,28% (b/b). Karakterisasi isolat dengan  spektrofotometer  UV-Vis  tidak  menunjukkan adanya serapan. Spektrogram FTIR menunjukkan adanya gugus – OH,  C=C,  C=O,  -CH3  dan – CH2.  Sedangkan spektrogram  MS  menunjukkan  bahwa  isolat  memiliki bobot molekul 577 g/mol dan memiliki pola fragmentasi mirip  senyawa  lupeol  (SI=88%).  Hasil  uji  aktivitas sitotoksik  menunjukkan  ekstrak  etanol  dan  fraksi  n- heksana bersifat tidak toksik sedangkan fraksi etil asetat dan  fraksi  metanol-air  memiliki  sifat  sedikit  toksik dengan  harga  LC 50 berturut-turut  100  ppm  dan  78,735 ppm.

## 5. Daftar Pustaka
[1]  RHMJ  Lemmens,  N  Wulijarni-Soetjipto,  Prosea: Plant  Resources  of  South-East  Asia, Pudoc, Wageningen, The Netherlands , 23, (1992)
[2]  P Masoko, J Picard, JN Eloff, Antifungal activities of six south African Terminalia species
(Combretaceae), Journal of Ethnopharmacology , 99, 2,
(2005) 301-308
[3]  K  Anam,  RM  Widharna,  D  Kusrini, α -Glucosidase inhibitor  activity  of  Terminalia  species, IJP- International  Journal  of  Pharmacology ,  5,  4,  (2009) 277-280
[4]  K  Anam,  AG  Suganda,  EY  Sukandar,  L  Broto  S Kardono,  Antibacterial  effect  of  component  of Terminalia  muelleri  Benth.  Against  Staphylococcus aureus, International  Journal  of  Pharmacology ,  6,  4,
(2010) 407-412
[5]  Andrea  K  Bigham,  Thomas  A  Munro,  Mark  A Rizzacasa, Roy M Robins- Browne, Divinatorins A− C, New Neoclerodane Diterpenoids from the Controlled Sage  Salvia  d  ivinorum, Journal  of  natural  products , 66, 9, (2003) 1242-1244
[6]  ASR  Anjaneyulu,  AV  Raghava  Reddy,  Gopal  R Mallavarapu,  RS  Chandrasekhara,  3-acetylmaslinic
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 15 (2) (2012) : 47 – 52
acid  from  the  root  bark  of  Terminalia  alata, Phytochemistry , 25, 11, (1986) 2670-2671
[7]  B.  N.  Meyer,  N.  R.  Ferrigni,  J.  E.  Putnam,  L.  B. Jacobsen,  D.  E.  Nichols,  J.  L.  McLaughlin,  Brine Shrimp:  A  Convenient  General  Bioassay  for  Active Plant Constituents, Planta Med , 45, 05, (1982) 31-34 http://dx.doi.org/10.1055/s-2007-971236
[8]  Norman R. Farnsworth, Biological
and
phytochemical  screening  of  plants, Journal  of Pharmaceutical  Sciences ,  55,  3,  (1966)  225-276 http://dx.doi.org/10.1002/jps.2600550302
[9]  Hildebert Wagner, Sabine Bladt, Plant drug analysis: a  thin  layer  chromatography  atlas,  2 th Edition  ed., Springer Science & Business Media, Germany, 1996.
[10] Robert  M  Silverstein,  Francis  X  Webster,  David  J Kiemle, David L Bryce, Spectrometric Identification of Organic Compounds, John wiley & sons, 1981.
[11]  Leda  Mathias,  Ivo  JC  Vieira,  Raimundo  Braz-Filho, Edson Rodrigues Filho, A new pentacyclic triterpene isolated from Myroxylon balsamum (syn. Myroxylon peruiferum), Journal of the Brazilian Chemical Society , 11, 2, (2000) 195-198 http://dx.doi.org/10.1590/S0103-
50532000000200017
[12] Tatiane  C  de  Carvalho,  Aline  M  Polizeli,  Izabel  CC Turatti, Marcela E Severiano, Carlos E de Carvalho, Sérgio  R  Ambrósio,  Antônio  EM  Crotti,  Uir  S  de Figueiredo,  Paulo  C  Vieira,  Niege  AJC  Furtado, Screening  of  filamentous  fungi  to  identify biocatalysts for lupeol biotransformation, Molecules , 15, 9, (2010) 6140-6151 http://dx.doi.org/10.3390/molecules15096140
[13] MJ  Moshi,  E  Innocent,  JJ  Magadula,  DF  Otieno,  A Weisheit,  PK  Mbabazi,  RSO  Nondo,  Brine  shrimp toxicity of some plants used as traditional medicines in Kagera region, north western Tanzania, Tanzania journal  of  health  research ,  12,  1,  (2010)  63-67 http://dx.doi.org/10.4314/thrb.v12i1.56287