## PERKEMBANGAN MIKROBIA USUS AYAM BROILER YANG DIBERI PAKAN STEPDOWN PROTEIN DENGAN PENAMBAHAN ASAM SITRAT SEBAGAI ACIDIFIER

## INTESTINAL MICROBIAL GROWTH OF BROILER CHICKENS GIVEN DIETARY PROTEIN STEPDOWN WITH ADDITION OF CITRIC ACID AS ACIDIFIER
Imam, S., L. D. Mahfudz dan N. Suthama Fakultas Peternakan dan Pertanian Universitas Diponegoro Jl. Drh. R.Soejono Koesoemowardojo,Tembalang, Semarang E-mail: shokhirulimam@gmail.com
Diterima: 20 September 2018, Direvisi: 26 September 2018, Disetujui: 12 Oktober 2018

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengkaji  efektifitas  penambahan  asam  sitrat  (AS) sebagai acidifier dalam  pakan stepdown protein  periode starter dan finisher terhadap perkembangan bakteri asam laktat (BAL) dan Escherichia coli ( E. coli ). Perlakuan dimulai pada saat broiler berumur 8 hari dengan rata-rata bobot badan 186,23±0,68 g. Bahan pakan terdiri  dari  jagung,  bekatul,  tepung  ikan,  bungkil  kedelai,  minyak  nabati,  CaCO 3 ,  asam sitrat  sintetik  (ASS)  dan  asam  sitrat  jeruk  nipis  (ASJN).  Kandungan  protein  dan  energi metabolis  pada  pakan  periode starter masing-masing  21,41%  dan  2.856,91  kkal/kg  untuk pakan  kontrol  dan  masing-masing  19,25%  dan  2.884,12  kkal/kg  untuk  pakan stepdown protein. Kandungan protein dan energi metabolis pada pakan periode finisher sama dengan pakan periode starter stepdown protein, sedangkan pakan stepdown protein masing-masing mengandung  17,37%  dan  2.882,13  kkal/kg.  Penelitian  menggunakan  rancangan  acak lengkap (RAL) dengan 7 perlakuan (4 ulangan)  yaitu T 0 (kontrol tanpa stepdown dan AS), T 1 ( stepdown tanpa  AS),  T 2 ( stepdown +  0,8%  ASJN),  T 3 ( stepdown +  0,4%  ASS),  T 4 ( stepdown +  0,8%  ASS),  T 5 ( stepdown +  1,2%  ASS)  dan  T 6 ( stepdown +  1,6%  ASS). Parameter  penelitian  meliputi  potensial  hidrogen  (pH)  digesta,  BAL  dan E.  coli .  Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian pakan stepdown protein dengan penambahan AS sebagai acidifier nyata  (p<0,05)  menurunkan  pH  dan  jumlah E.  coli dan  meningkatkan jumlah  BAL.  Simpulan  penelitian  adalah  penggunaan  ASS  pada  taraf  0,8%  sebagai acidifier dengan pakan stepdown pada periode starter dan finisher efektif  menurunkan pH dan jumlah E. coli dan meningkatkan populasi BAL.
Kata kunci  : broiler, pakan stepdown protein, acidifier , bakteri asam laktat dan Escherichia coli .

## ABSTRACT
The  aim of the this  study  was to  evaluate the effectiveness of the addition  of  citric acid (CA) as acidifiers in dietary protein stepdown of starter and finisher periods of broiler on  the  development  of  lactic  acid  bacteria  (LAB)  and  Escherichia  coli  (E.  coli).  Dietary treatment was initiated when the broiler was 8-day-old with initial body weight of 186.23 ±
0.68  g.  Feed  was  composed  of  corn,  rice  bran,  fish  meal,  soybean  meal,  vegetable  oil, CaCO 3 ,  citric  acid  (CA),  both  synthetic  citric  acid  (SCA)  and  lime  citric  acid  (LCA). Protein  and  metabolizable  energy  contents  of  stater  feed  was  21.4%  and  2856.9  kcal/kg, respectively  for  normal  level,  and  19.2%  and  2884.1  kcal/kg,  recpectively  for  protein stepdown. Protein and metabolizable energy contents of finisher normal feed was similar to those  of  dietary  protein  stepdown  for  starter,  while  those  of  dietary  protein  stepdown  of finisher  feed  was  17.3%  and  2882.1  kcal/kg,  respectively.  A  total  of  168  birds  of  broiler were  allocated  into  7  treatments  and  4  replicates  (birds  each)  based  on  a  completely randomized  design  arrangement.Dietary  treatments  applied  were  T0  (normal  without stepdown and CA), T1 (stepdown  without  CA), T2 (stepdown + 0.8% LCA), T3 (stepdown + 0.4% SCA), T4 (stepdown + 0.8% SCA), T5 (stepdown + 1.2% SCA) and T6 (stepdown + 1.6% SCA). Parameters observed were potential hydrogen (pH) of digesta, and populations of LAB and E. coli. The results showed that feeding protein stepdown  with the addition of CA  as  acidifiers  significantly  (p<0.05)  decreased  pH  and  the  amount  of  E.  coli  and increased the number of LAB. In conclusion, SCA addition at the level of 0.8% as acidifiers in  dietary  protein stepdown effectively decreases pH and the amount of E. coli and,on the other hand, increases the population of LAB.
Keywords: broiler, dietary protein stepdown, acidifiers, lactic acid bacteria, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Ayam broiler sampai saat ini masih menjadi andalan untuk memenuhi kebutuhan daging secara nasional. Kemampuan  ayam  broiler  tumbuh  cepat dan  menghasilkan  daging  pada  umur relatif muda menyebabkan komoditi unggas  ini  mempunyai  kontribusi  yang sangat  besar  terhadap  produksi  daging  di Indonesia. Kecepatan pertumbuhan broiler harus  diimbangi  dengan  kualitas  pakan yang  tinggi,  terutama  kandungan  protein. Pakan mengandung protein tinggi konsekuensinya  adalah  harga  menjadi mahal,  karena  protein  harganya  mahal. Berhubung  biaya  pakan  dalam  dalam usaha  peternakan  paling  tinggi  (70-80%), maka  diperlukan  cara  untuk  untuk menurunkan  harga  pakan  yaitu  dengan upaya  menurunkan  kandungan  protein yang disebut stepdown protein . Penurunan protein pakan
( stepdown protein)  tidak  berdampak  pada konsumsi  dan  konversi  pakan  (Razaei et al., 2004  dan  Waldroup et  al., 2005).
Khajali dan Moghaddam (2006)
menyatakan  bahwa  penurunan  protein sampai  16%  pada  periode finisher tidak mempengaruhi konsumsi pakan dan pertambahan bobot badan. Berbeda halnya dengan  yang dilaporkan oleh Razaei et  al.
(2004)  bahwa  protein  rendah  meng- akibatkan  penurunan  bobot  badan  fase starter dan grower, menurunkan konsumsi pakan  fase starter dan  meningkatkan persentase  lemak  abdominal.  Penurunan protein  pakan  di  bawah  22%  menyebab- kan menurunnya bobot badan dan peningkatan  konversi  pakan  (Jiang et  al., 2005).  Oleh  sebab  itu,  pemberian  pakan dengan  protein  rendah  atau stepdown protein  harus  diikuti  dengan  upaya  untuk meningkatkan  penyerapan  protein  dengan mengantisipasi  dampak  negatif  yang ditimbulkan  sebagai  akibat  dari  kemung- kinan  kekurangan  protein,  kekhawatiran tersebut dapat diatasi dengan penambahan feed additive berupa acidifier asam sitrat .
Stepdown protein    pakan  sampai 18%  yang  ditambah acidifier asam  sitrat
pada  umur  21  hari  dapat  meningkatkan pertambahan  bobot  badan  broiler.  Asam sitrat  juga  memperbaiki  konversi  pakan, karakteristik  karkas  dan  bobot  organ  (El- Hakim et  al., 2009). Stepdown protein pada  periode starter yang  diturunkan sampai  19%  ditambah  dengan acidifier asam  sitrat dapat meningkatkan tinggi  vili usus  halus  dan  memperbaiki  ketahanan tubuh dilihat dari peningkatan bobot bursa serta  penurunan  limpa  dan  rasio  H/L (Jamilah et  al., 2013  dan  Jamilah et  al.,
2014).  Sedangkan  penggunaan  protein rendah  ( stepdown protein)  pada  periode starter dan finisher yang  diturunkan sampai  19%  dan  17%  ditambah  dengan acidifier asam sitrat meningkatkan deposisi  protein  dan  kalsium  pada  daging serta  efisiensi  produksi  pada  usaha peternakan  broiler  (Saputra et  al., 2014 a dan Saputra et al., 2014 b ).
Efektivitas acidifier pada  ayam broiler  dapat  dilihat  dari  penurunan  pH saluran pencernaan. Penurunan pH berdampak  pada  peningkatan  jumlah bakteri  asam  laktat  (BAL)  sebagai  bakteri bermanfaat  dan  dapat  menekan  bakteri patogen  yaitu Escherichia  coli ( E.  coli ) (Kurniagung et  al., 2012).  Bakteri  asam laktat  mampu  hidup  pada  pH  asam, sedangkan  bakteri  patogen  hanya  hidup pada  kondisi  netral.  Bakteri  asam  laktat menghasilkan  bakteriosin  untuk  menekan pertumbuhan  bakteri  patogen E.  coli dalam  kompetisi  penempelan  di  mukosa usus  halus  ( competitive  exclusion ).  Proses
tersebut  dapat  mempertahankan  permea- bilitas  sel  usus  sebagai  awal  mula ketahanan  tubuh  alami  dan  mencegah senyawa berbahaya, seperti bakteri patogen  tidak  dapat  menembus  sel  usus halus,  sehingga  kondisi  pencernaan  lebih sehat.  Berdasarkan fenomena  diatas, dilakukan  penelitian  untuk  klarifikasi kaitan  antara  pakan stepdown  starter dan finisher dengan  penambahan acidifier asam sitrat sintetik berdasarkan perkembangan  bakteri  asam  laktat  dan Escherichia  coli .  Asam  sitrat  sebagai acidifier dalam  pakan stepdown protein pada periode starter dan finisher diharapkan mampu meningkatkan kesehatan  usus  halus  melalui  perbaikan keseimbangan  bakteri  asam  laktat  dan Escherichia coli .

## MATERI DAN METODE
Ternak yang  digunakan  pada penelitian  adalah  ayam  broiler  strain Lohmann MB  202  umur  8  hari  sebanyak 168  ekor  yang  terdiri  dari  84  ekor  jantan dan  84  ekor  betina  dengan  rata-rata  bobot badan  186,23  ±  0,68  g.  Ayam  broiler dipelihara  sistem litter yang  berjumlah  28 unit  dengan  ukuran  1  x  1  x  0,6  m,  setiap unit  kandang  berisi  3  ekor  ayam  jantan dan  3  ekor  ayam  betina.  Bahan  pakan terdiri  dari  jagung,  bekatul,  tepung  ikan, bungkil  kedelai,  minyak  nabati,  CaCO 3 dan  tepung  kulit  kerang.  Bahan acidifier terdiri  dari  asam  sitrat  sintetik  dan  jeruk nipis.
Tabel 1.

## Komposisi dan Kandungan Nutrien Pakan Perlakuan
Bahan Baku Pakan Pakan Perlakuan Starter Finisher Normal (P 0 ) Stepdown (P 1 ) Stepdown (P 2 ) ------------------------------ % ----------------------------- Jagung 48,00 53,00 53,50 Bekatul 14,00 16,00 21,50 Minyak Nabati 2,00 1,00 0,50 Bungkil Kedelai 28,00 22,00 16,50 Tepung Ikan 6,50 6,50 6,50 CaCO 3 0,50 0,50 0,50 Tepung Kulit Kerang 1,00 1,00 1,00 TOTAL 100,00 100,00 100,00 Kandungan Nutrien (%)* Energi Metabolis (kkal/kg)** 2.856,91 2.884,12 2.882,13 Protein Kasar 21,41 19,25 17,37 Serat Kasar 5,09 5,18 5,75 Lemak Kasar 6,04 6,33 6,37 Ca 1,00 0,98 0,95 P 0,41 0,43 0,45 Lisin*** 1,41 1,23 1,09 Metionin*** 0,43 0,40 0,37 Arginin*** 1,53 1,34 1,17 Komposisi dan kandungan nutrien starter step down sama dengan finisher normal
*  Dianalisis di Laboratorium Ilmu Nutrisi dan Pakan, Fakultas Peternakan dan Pertanian, Universitas Diponegoro (2013)
**  EM  (kkal/kg)  =  40,81  [0,87  (  PK  +  2,25  x  LK  +  BETN)  +  k]  (Balton,  1967)  dalam Murwani (2010)
***Berdasarkan Tabel Kandungan Nutrisi Bahan Pakan (Amrullah, 2004)
Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian adalah timbangan digital kapasitas 5 kg dengan ketelitian 1 g untuk menimbang bahan penyusun pakan, jumlah  pemberian  dan  sisa  pakan  serta bobot badan ayam. Peralatan lain meliputi nampan  untuk  mencampur  bahan  pakan, wadah  untuk  menempatkan  pakan,  tempat minum  sebagai  tempat  air  minum  ayam, brooder sebagai  penghangat  utama  DOC, thermometer untuk  mengukur  suhu  dalam dan  luar  kandang  dan hygrometer untuk mengukur kelembaban.
Saat ayam umur 1-7 hari dipelihara dalam kandang brooder dengan suhu 34°C
dan diberi pakan pabrikan. Mulai umur 8 - 35  hari  ayam  dipelihara  pada  kandang koloni  dengan  suhu  alami  lingkungan  dan dimasukkan  dalam  unit  kandang  sesuai dengan  perlakuan.  Pakan  dan  air  minum diberikan ad  libitum dan  sisa  pakan ditimbang setiap hari.  Ayam diberi  vaksin ND I pada umur 3 hari, selanjutnya vaksin gumboro diberikan pada umur 14 hari dan ND II pada umur 21 hari.
Parameter  penelitian  yang  diamati adalah potensial hidrogen (pH) digesta dan mikrobia  usus  halus  (bakteri  asam  laktat dan Escherichia  coli )  yang  diukur  pada akhir masa perlakuan yaitu pada saat ayam
umur  35  hari.  Potensial  hidrogen  digesta usus  halus,  meliputi  duodenum  (dari pangkal usus yang menempel pada gizzard sampai  ujung duodenal  loop ),  jejunum (dari ujung duodenal loop sampai meckel’s  diventrikulum )  dan  ileum  (dari meckel’s  diventrikulum sampai  pertemuan dengan  sekum  atau ileo-caecal  junction ) yang  diambil  dari  28  sampel  (masing- masing  unit  percobaan  terdiri  1  sampel), dipotong, kemudian diukur dengan memasukkan  jarum  alat  pengukur  pH elektrik,  sehingga  terbaca  pH  digesta. Sampel  digesta  dari  ayam  yang  sama, khususnya  bagian  duodenum,  ditampung ke  dalam  botol  kecil  dan  segera  disimpan dalam coolbox yang  telah  berisi  es  batu, kemudian untuk selanjutnya analisis bakteri asam laktat (BAL) dan Escherichia coli ( E.  coli ).  Jumlah  bakteri  dihitung dengan  cara  memasukkan  1  ml  digesta  ke dalam  tabung  reaksi  yang  berisi  5  ml NaCl,  kemudian  diencerkan  4  kali  untuk menghitung  BAL  dan  2  kali  untuk menghitung E.  coli .  Hasil  tersebut
dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  yang berisi  MRS  untuk  media  pertumbuhan BAL  (10 4 )  dan  EMBA  untuk  media pertumbuhan E.  coli (10 2 ),  kemudian diratakan  dengan threeangel, setelah  itu masing-masing  dimasukkan  ke  dalam inkubator  selama  2  hari  dengan  suhu 36°C. Selanjutnya, dikeluarkan dari inkubator  dan  dibiarkan  pada  suhu  ruang selama  satu  hari  dan  terakhir  dihitung jumlah koloni BAL dan E. coli.
Penelitian menggunakan rancangan acak  lengkap  (RAL)  dengan  7  perlakuan dan 4 ulangan. Perlakuan dalam penelitian adalah  pakan stepdown yang  diterapkan pada  fase starter dan finisher yang dikombinasikan dengan asam sitrat sintetik  dan  jeruk  nipis  sebagai acidifier (Tabel 2). Data dianalisis ragam menggunakan  uji  F  (ANOVA)  dengan α=5%  dan  jika  pengaruh  perlakuan  nyata (P<0,05),  dilanjutkan  dengan  uji  Wilayah Berganda  Duncan  (Steel  dan  Torrie, 1995).
Tabel 2. Perlakuan Pakan Starter Finisher T 0 : P 0 T 0 : P 1 T 1 : P 1 T 1 : P 2
T 2 : P 1 + 0,8% asam sitrat dari jeruk nipis T 2 : P 2 + 0,8% asam sitrat dari jeruk nipis T 3 : P 1 + 0,4% asam sitrat sintetik T 3 : P 2 + 0,4% asam sitrat sintetik T 4 : P 1 + 0,8% asam sitrat sintetik
T 4 : P 2 + 0,8% asam sitrat sintetik T 5 : P 1 + 1,2% asam sitrat sintetik T 5 : P 2 + 1,2% asam sitrat sintetik T 6 : P 1 + 1,6% asam sitrat sintetik T 6 : P 2 + 1,6% asam sitrat sintetik T 0 -T 6 : Kode Perlakuan P 0 ,  P 1 dan  P 2 masing-masing  merupakan  pakan  normal starter,  stepdown  starter dan stepdown finisher seperti pada Tabel 1.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Nilai  pH  usus  halus  bagian duodenum,  jejunum  dan  ileum  serta jumlah bakteri asam laktat dan Escherichia coli pada duodenum tercantum  pada  Tabel  3.  Hasil  analisis statistik  menunjukkan  bahwa  pemberian pakan stepdown protein dengan penambahan  asam  sitrat  sebagai acidifier tidak mempengaruhi (p>0,05) pH
duodenum dan jejunum, tetapi berpengaruh  nyata  (p<0,05)  terhadap  pH ileum.  Meskipun  pH  duodenum  dan jejunum  secara  statistik  tidak  berbeda nyata,  tetapi  secara  numerik  memper- lihatkan  sedikit  penurunan  pH  akibat perlakuan stepdown protein yang dikombinasikan dengan penambahan asam sitrat sintetik pada T4 ( stepdown protein + 0,8%  asam  sitrat  sintetik),  T5  ( stepdown protein + 1,2% asam sitrat sintetik) dan T6 ( stepdown protein  +  1,6%  asam  sitrat sintetik)  demikian  pula  asam  sitrat  alami pada  T2  ( stepdown protein  +  0,8%  asam sitrat jeruk nipis). Nilai pH duodenum dan
jejunum  yang  sedikit  menurun  didukung oleh pH ileum yang nyata rendah pada T4 ( stepdown protein  +  0,8%  asam  sitrat sintetik)  diikuti  dengan  T5  ( stepdown protein  +  1,2%  asam  sitrat  sintetik) dibandingkan  dengan  perlakuan  lain. Fenomena  tersebut  menunjukkan  bahwa asam  sitrat  sintetik  maupun  alami  yang dosisnya  tepat,  efektif  menurunkan  pH saluran  pencernaan  secara  keseluruhan. Nourmohammadi et al. (2010) melaporkan bahwa  penggunaan  asam  sitrat  menurun- kan  pH  di  dalam  saluran  pencernaan bagian crop , gizzard ,  duodenum,  jejunum dan ileum.
Tabel 3. Rerata Nilai pH Usus Halus dan Jumlah Bakteri pada Duodenum Perlakuan Parameter pH Usus Halus Jumlah Bakteri Duodenum Duodenum Jejunum Ileum BAL (10 4 ) E.coli (10 2 ) T0 6,35±0,16 6,08±0.22 6,40±0,30 ab 5,75±1,04 abc 5,25±0,85 ab T1 6,13±0,14 6,48±0,22 6,80±0,30 a 3,00±1,04 c 7,00±0,85 a T2 5,95±0,14 5,98±0,22 6,80±0,30 a 7,25±1,04 a 3,00±0,85 bcd T3 6,03±0,14 5,75±0,25 6,10±0,30 ab 6,50±1,04 ab 2,25±0,85 cd T4 5,80±0,14 5,73±0,22 5,48±0,30 b 7,75±1,04 a 1,75±0,85 d T5 5,75±0,14 5,75±0,22 5.60±0.30 ab 5,25±1,04 abc 4,50±0,85 abc T6 5,58±0,14 5,65±0,22 6,05±0,30 ab 3,75±1,04 bc 6,50±0,85 a
ad Superskrip  pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05).
Penurunan  pH  di  dalam  saluran pencernaan  akibat  pemberian acidifier terjadi  ketika  asam  terurai  dalam  saluran pencernaan dan membebaskan ion hidrogen (H + ) (Lückstädt, 2009). Semakin banyak ion hidrogen (H + ) yang dilepaskan oleh acidifier dari  asam  organik,  pH  di dalam  saluran  pencernaan  semakin  asam. Efisiensi  asam  ditentukan  oleh  nilai  pKa asam tersebut (Rudback, 2013). Nilai pKa asam  sitrat  adalah  3,13  sampai  dengan 6,40;  lebih  tinggi  dibandingkan  asam organik  lainnya  (Gauthier,  2007).  Nilai pKa  adalah  ukuran  kuantitatif  yang menunjukkan banyaknya asam yang terurai dalam  suatu larutan. Asam organik
dengan  nilai  pKa  tinggi  mempunyai  sifat antimikroba  lebih  efisien  dari  pada  asam dengan  pKa  rendah  (Huyghebaert,  2005 dan  Rudback,  2013).  Abdel-Fattah et  al . (2008)  menunjukkan  bahwa  asam  sitrat lebih  baik dalam   menurunkan pH saluran pencernaan  dibandingkan  asam  asetat, asam  laktat  maupun  tanpa  ketiga  asam tersebut.
Apabila dihubungkan dengan perubahan  keseimbangan  bakteri  dalam usus  halus,  ternyata  pakan stepdown disertai  dengan  pemberian  asam  sitrat sebagai acidifier berpengaruh nyata (p<0,05)  terhadap  bakteri  asam  laktat (BAL)  dan Escherichia  coli ( E.  coli )
terutama di duodenum. Sebagaimana telah dibahas  sebelumnya  pada  paramenter  pH usus  halus,  bahwa  asam  sitrat  sintetik maupun alami yang dosisnya tepat (T4 dan T2)  dapat  menurunkan  pH,  sehingga berdampak  pada  perubahan  populasi bakteri  dalam  usus  halus.  Penggunaan asam  sitrat  sintetik  (T4)  dan  asam  sitrat jeruk  nipis  (T2)  ternyata  efektif  dalam meningkatkan jumlah bakteri yang bermanfaat  bagi  inang  (BAL)  dibanding- kan  dengan  pakan  normal  (T0)  maupun stepdown (T1).  Keadaan  asam  yang diakibatkan  oleh  asam  sitrat  sintetik maupun  alami  mampu  meningkatkan jumlah  BAL  yang  ada  di  dalam  saluran pencernaan  broiler,  terutama  pada  usus halus,  dan  sebaliknya  menurunkan  jumlah E.  coli.  International  Commission  on Microbiological  Specifications  for  Foods (1980)  menyatakan  bahwa  bakteri  asam laktat  tumbuh  optimum  pada  pH  5,5  atau di  bawahnya.  Asam  sitrat yang ada dalam pakan  membuat  kondisi  pH  usus  halus menjadi  lebih  asam  yang  mendukung aktivitas  bakteri  asam  laktat  menjadi berkembang  lebih  baik  dan  menekan pertumbuhan E.  coli (Kurniagung et  al.,
2012) . Efektifitas  asam  organik  sebagai acidifier tergantung pada perbedaan sensi- tivitas  bakteri  terhadap  pH. Bifido- bacterium  sp. dan Lactobacillus  sp. Misalnya  adalah  jenis  bakteri  asam  laktat yang  tidak  sensitif  terhadap  pH . Bahkan jenis  ini  mempunyai  toleransi  lebih  besar, perbedaan  antara  pH  di  dalam  dan  di  luar tubuhnya. Asam organik yang
menyebabkan  pH  rendah  di  dalam  tubuh bakteri  dikeluarkan  dalam  bentuk  tidak terurai  oleh  bakteri  itu  sendiri.  Kondisi tersebut  bertujuan  untuk  menciptakan keseimbangan  di  dalam  dan  di  luar  tubuh bakteri,  sehingga  proses  metabolisme bakteri  tidak  terganggu  (Gauthier,  2002). Al-Kassi  dan  Mohssen  (2009)  dan Hashemi et  al. (2012)  menunjukkan
bahwa  pemberian acidifier meningkatkan populasi Lactobacillus pada  usus  halus ayam  broiler  umur  21  hari  maupun  42 hari.
Bakteri  asam  laktat  (BAL)  yang berkembang  baik  di  dalam  saluran pencernaan  akibat  dari  pemberian  asam sitrat sintetik dan alami juga menunjukkan adanya  aktivitas  antimikroba.  Bakteri asam laktat (BAL) memproduksi metabolit antimikroba, yaitu asam organik, hydrogen peroksida  dan  bakteriosin.  Asam  organik yang  diproduksi  BAL  adalah  asam  laktat, asam  asetat,  asam  propionat  dan  asam butirat.  Fungsi  dari  asam  organik  tersebut sama  dengan  asam  sitrat  sintetik  maupun alami  (Lahtinen et  al., 2012).  Adanya asam  organik  menyebabkan  produksi intraseluler hidrogen peroksida dan digunakan  untuk  melindungi  sel  terhadap keracunan  oksigen.  Hidrogen  peroksida bereaksi  dengan  senyawa  lain  yang hasilnya menghambat pertumbuhan bakteri  patogen  (Theron  dan  Lues,  2011 dan  Taylor,  2008).  Selain  asam  organik, BAL juga menghasilkan bakteriosin seperti yang disebutkan diatas. Bakteriosin mempunyai  fungsi  menghambat  pertum- buhan bakteri patogen. Cara kerja bakteriosin dengan menghancurkan integritas  membran  sitoplasma  sel  target melalui  pembentukan  pori.  Bakteriosin menyebabkan kebocoran metabolit berberat  molekul  rendah  atau  pengusiran tekanan proton ( proton motif force , PMF). Proton  motif  force (PMF)  adalah  gradien elektrokimia  di  atas  membran  sitoplasma yang  terdiri  atas  potensial  membran  dan gradien  pH,  yang  memandu  sintesis  ATP dan  mengakumulasikan  ion  dan  metabolit lainnya.  Penurunan  PMF  sel  target,  yang diinduksi oleh aktivitas bakteriosin membuat kematian sel melalui penghentian  reaksi  pembentukan  energi.
Kekurangan ATP intraselular membuat sel tidak mampu mengangkut nutrisi dan tidak dapat mempertahankan konsentrasi
molekul  kofaktor  seperti  K + dan  Mg 2+ , sehingga  terjadi  kematian  sel  (Lahtinen et al., 2012).
Adanya  asam  sitrat  sintetik  dan alami  di  dalam  pakan  dan  ditambah  lagi dengan asam organik hasil metabolit BAL membuat  kondisi  saluran  pencernaan broiler  semakin  asam,  terutama  pada  T4 ( stepdown protein  +  0,8%  asam  sitrat sintetik) dan T2 ( stepdown protein + 0,8% asam sitrat jeruk nipis). Kondisi seperti ini membuat  bakteri  yang  sensitif  terhadap pH  seperti  bakteri E.  coli tidak  mampu berkembang  dengan  baik.  Kim et  al. (2005)  menjelaskan  bahwa  pertumbuhan Lactobacilli yang  didukung  oleh  kondisi asam  saluran  pencernaan  disertai  dengan produksi asam laktat dan metabolit lainnya yang menurunkan pH, menghambat proliferasi,  kolonisasi  danpertumbuhan Escherichia  coli. Mekanisme  ini  terjadi karena  asam  organik  yang  tidak  terurai (tidak terionisasi, lebih lipofilik)
menembus  membran  semi  permeabel  dari dinding  sel  bakteri  dan  masuk  ke  dalam sitoplasma. Asam organik terurai melepaskan H +
dan anion (A - ), menjadikan pH di dalam bakteri menurun,
bakteri  yang  sensitif  terhadap  pH  tidak mampu mentolerir perubahan pH yang ada di dalam tubuhnya. Keadaan ini menyebabkan  bakteri  melakukan  tindakan H + -ATP ase pump untuk  menormalkan pH di  dalam  tubuh  bakteri.  Proses  ini membutuhkan banyak energi, apabila terus berlanjut akhirnya menghentikan pertumbuhan  bakteri  atau  bahkan  mati. Bagian  anion  (A - )  dari  asam  yang terperangkap  di  dalam  tubuh  bakteri  dan menyebar  secara  bebas  melalui  dinding sel.  Akumulasi  dari  anion  (A - )  menjadi beracun  untuk  bakteri  karena  meng- akibatkan ketidakseimbangan anionik yang  menyebabkan permasalahan osmotik di  dalam  tubuh  bakteri  (Gauthier,  2002 dan Reddy, 2004).

## SIMPULAN
Penggunaan  asam  sitrat  sintetik pada  taraf  0,8%  sebagai acidifier pada pakan stepdown periode starter dan finisher efektif  dalam  menurunkan  pH usus halus dan jumlah bakteri Escherichia coli serta  meningkatkan  populasi  bakteri asam laktat.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdel-Fattah,  S.A.,  M.H.  El-Sanhoury, N.M.  El-Mednay  and  F.  Abdel- Azeem.  2008.  Thyroid  activity, some  blood  constituents,  organs morphology  and  performance  of broiler  chicks  fed  supplemental organic  acids.  Int.  J.  Poultry  Sci. 7 (3): 215-222.
Al-Kassi,  A.G.  and  M.A.  Mohssen.  2009.
Comparative  study  between  single organic  acid  effect  and  synergistic organic  acid  effect  on  broiler performance. Pak. J. Nut. 8 (6): 896- 899.
Amrullah,  I.K.  2004.  Nutrisi  Ayam
Broiler.  Lembaga  Satu  Gunung Budi, Bogor. Direktorat Jenderal Peternakan dan Kesehatan  Hewan.  2013.  Statistik Peternakan  dan  Kesehatan  Hewan.
Kementerian  Pertanian  Republik Indonesia, Jakarta. El-Hakim,  A.S.A.,  G.  Cherian  and  M.N. Ali. 2009. Use of organic acid, herbs and their combination to improve the utilization of commercial low protein  broiler  diets.  Int.  J.  Poultry Sci. 8 (1):14-20.
Gauthier,  R.  2002.  Intestinal  Health,  The
Key  to  Productivity  (The  Case  of Organic  Acid).  XXVII  Convention ANECA-WPDC, Puerto Vallarta. Gauthier,  R.  2007.  Organic  acids  and essential  oils,  let’s  not  be  chicken with antibiotic growth promoter free poultry.  Poultry  Service  Industry Workshop October 2 nd - 4 th , Alberta. Pp. 11-26. Hashemi, S.R., I. Zulkifli, H. Davoodi, Z. Zunita  and  M.  Ebrahimi.  2012.
Growth performance, intestinal microflora,  plasma  fatty  acid  profile in  broiler  chickens  fed  herbal  plant ( Euphorbia  hirta )  and  mix  of acidifiers.  Anim.  Feed  Sci.  Technol. 178 : 167-174.
Huyghebaert,  G.  2005.  Alternatives  for antibiotics in poultry. Proceedings of the 3 rd Mid-Atlantic Nutrition Conference. March 23-24, Timonium, Maryland. Pp. 38-57. International Commission on
Microbiological  Specifications  for Foods.  1980.  Microbial  Ecology  of Foods,  Volume  1:  Factor  Affecting Life  and  Death  of  Microorganisms. Academic Press Inc., New York. Jamilah,  N.  Suthama  dan  L.  D.  Mahfudz. 2013. Performa produksi dan ketahanan  tubuh  broiler  yang  diberi pakan stepdown dengan penambahan asam sitrat sebagai acidifier . JITV. 18 (4): 251-257.
Jamilah,  N.  Suthama  dan  L.  D.  Mahfudz. 2014.  Pengaruh  penambahan  jeruk nipis  sebagai acidifier pada  pakan stepdown terhadap  kondisi  usus halus ayam pedaging. JITP. 3 (2): 90-
95.
Jiang, Q., P.W. Waldroup and C.A. Fritts. 2005.  Improving  the  utilization  of diet  low  in  crude  protein  for  broiler chicken,  1.  Evaluation  of  special amino  acid  supplementation  to  diets low  in  crude  protein.  Int.  J.  Poultry Sci. 4 (3): 115-122.
Khajali,  F.  and  H.N.  Moghaddam.  2006. Metionine  supplementation  of  low- protein  broiler  diets:  influence  upon growth  performance  and  efficiency of  protein  utilization.  Int.  J.  Poultry Sci. 5 (6): 569-573.
Kim,  Y.Y.,  D.Y.  Kil,  H.K.  Oh  and  I.K. Han. 2005. Acidifier as an alternative  material  to  antibiotics  in animal  feed.  Asian-Aust.  J.  Anim. Sci. 18 (7): 1048-1060.
Kurniagung,  F.,  V.D.Y.B.  Ismadi  dan  I.
Estiningdriati. 2012. Pengaruh
penambahan  jeruk  nipis  ( Citrus aurantifolia ) dalam ransum terhadap total  bakteri  asam  laktat  dan  bakteri coliform  pada  saluran  pencernaan
itik magelang jantan. Anim. Agric. J. 1 ( 1): 405-413.
Lahtinen, S., A.C. Ouwehand, S. Salminen and  A.V. Wright. 2012. Lactic  Acid
Bacteria, Microbiological
and Functional  Aspects.  4 th Ed.  CRC Press, Boca Raton.
Lückstädt,  C.  2009.  Acidifiers  in  Animal Nutrition, A Guide for Feed Preservation  and  Acidification  to Promote Animal Performance. Nottingham University Press,
Nottingham.
Murwani,  R.  2010.  Broiler  Modern.  Edisi Pertama. Widya Karya, Semarang.
Nourmohammadi,  R.,  S.M.  Hosseini  and H.  Farhangfar.  2010.  Effect  of dietary  acidification  on  some  blood parameters  and  weekly  performance of  broiler  chickens.  J.  Anim.  Vet. Adv. 9 (24): 3092-3097.
Razaei,  M.,  H.N.  Moghaddam,  J.P.  Reza and  H.  Kermanshahi.  2004.  The effects  of  dietary  protein  and  lysine level on broiler performance, carcass characteristics  and  N  excretion.  Int.
J. Poultry Sci. 3 (2): 148-152.
Reddy, V.R. 2004. The role of acidifers in poultry  nutrition.  Avitech  Technical Bulletin.  Avitech  Animal  Health PVT. LTD., Haryana.
Rudbäck,  L.  2013.  Organic  Acids  in Liquid Feed for Pigs-Palatability and
Feed  Intake.  Swedish  University  of Agricultural  Sciences,  Department of Animal Nutrition and
Management,  Uppsala.  (Thesis  of Master).
Saputra,  W.Y.,  N.  Suthama  dan  L.D. Mahfudz.  2014 a .Deposisi  protein dan  kalsium  daging  pada  broiler yang diberi kombinasi pakan stepdown  protein  dan  asam  sitrat. Prosiding Seminar Nasional Teknologi dan Agribisnis Peternakan untuk Akselerasi Pemenuhan  Pangan  Hewani  (Seri II),  Purwokerto,  14  Juni  2014.  Hal. 132-138. Saputra,  W.Y.,  N.  Suthama  dan  L.D. Mahfudz. 2014 b . Pemberian kombinasi  pakan double  step  down dan  asam  sitrat  sebagai  upaya peningkatan efisiensi usaha
peternakan  broiler.  Buletin  Nutrisi dan Makanan Ternak 10 (1): 34-40.
Steel,  R.G.D  dan  J.H.  Torrie.  1995. Prinsip  dan  Prosedur  Statistika. Gramedia Pustaka, Jakarta. (Diterjemahkan oleh Bambang Sumantri). Taylor,  S.  2008.  Advances  in  Food  and Nutrition Research. Vol. 54. Academic Press, London. Theron,  M.M.  and  J.F.R.  Lues.  2011. Organic Acids and Food Preservation.  CRC  Press.  Boca Raton.
Waldroup, P.W., Q. Jiang and C.A. Fritts. 2005.  Effects  of  supplementing broiler  diets  low  in  crude  protein with  essential  and  nonessential amino  acids.  Int.  J.  Poultry  Sci. 4 (6): 425-431.