P HYTOCHEMISTRY S CREENING A ND A NTIOXIDANT A CTIVITY A SSAY U SING D DPH O F T AYA ( N auclea o rientalis ) E THANOL L EAF E XTRACT

## S KRINING F ITOKIMIA D AN U JI A KTIVITAS A NTIOKSIDAN M ENGGUNAKAN D PPH P ADA E KSTRAK E TANOL
D AUN T AYA ( N auclea o rientalis )
Wahyu Nugroho 1 , Denada A.C 2
Program Studi Pendidikan Kimia, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Palangka Raya, Kampus Unpar Tunjung Nyaho, Jl. H. Timang, 73111A
e-mail: nugrohokimia@gmail.com

## ABSTRACT
This study aims to perform  phytochemical screening and antioxidant test on Taya ethanol leaf extract ( Nauclea  orientalis ).  The  ethanol  extract  was  obtained  by  extracting  the  leaves  of  Taya  by  10  grams using 100 mL of ethanol, macerated for 3 × 24 hours at room temperature then sealed, then filtered to obtain  the  filtrate,  then  concentrated.  The  extract  is  then  used  to  identify  secondary  metabolites  of alkaloids,  flavonoids,  terpenoids,  steroids,  saponins  and  phenolics.  The  antioxidant  activity  of  the ethanol extract was measured by DPPH. The results showed that Taya plant leaves contained a group of secondary metabolite compounds of alkaloids, terpenoids, flavonoids, saponins and phenolics, while for steroids were not identified. The results of antioxidant activity test extract showed that ethanol extract have antioxidant activity with IC50 value that is 352,251 ppm.
Keywords: Nauclea orientalis , Phytochemistry Screening, Antioxidant, DPPH

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk melakukan skrining fitokimia dan uji antioksidan pada ekstrak etanol  daun  Taya  ( Nauclea  orientalis ).  Ekstrak  etanol  diperoleh  dengan  cara  mengekstrasi daun Taya sebanyak 10 gram menggunakan 100 mL etanol, dimaserasi selama 3×24 jam pada suhu kamar kemudian ditutup rapat, setelah itu disaring sehingga diperoleh filtrat, kemudian dipekatkan. Ekstrak kemudian digunakan untuk mengidentifikasi metabolit sekunder alkaloid, flavonoid,  terpenoid,  steroid,  saponin  dan  fenolat.  Aktivitas  antioksidan  dari  ektrak  etanol diukur dengan DPPH. Hasil penelitian menunjukkan bahwa daun tumbuhan Taya mengandung golongan  senyawa  metabolit  sekunder  alkaloid,  terpenoid,  flavonoid,  saponin  dan  fenolat, sedangkan  untuk  steroid  tidak  teridentifikasi.  Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  memiliki  aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 yakni 352,251 ppm. Kata Kunci : Nauclea orientalis , Uji Fitokimia, Antioksidan, DPPH
PENDAHULUAN Indonesia sangat
terkenal dengan keanekaragaman  jenis  tumbuhan  dari  berbagai  jenis, bahkan  Indonesia  diakui  sebagai  negara  dengan keanekaragaman  jenis  tumbuh-tumbuhan  terbesar kedua di dunia. Negara Indonesia menyimpan kekayaan yang sangat ternilai harganya, terletak di daerah tropik sehingga  memiliki  keanekaragaman  hayati  yang  tinggi dibandingkan dengan daerah subtropik dan kutub.
Di  Pulau  Kalimantan,  salah  satu  tumbuhan yang  biasa  digunakan  sebagai  obat  tradisional  adalah daun  dari  tumbuhan  Taya  ( Nauclea  orientalis ).  Daun tanaman Taya di Kalimantan Tengah atau dalam bahasa Dayak  Ngaju  disebut  “dawen  taya”  adalah  tanaman berkayu keras. Di daerah  lain,  tanaman bernama  Latin Nauclea orientalis ini juga banyak terdapat di Pulau Bali (disebut  bengkel),  di  Boven  Digul  Papua  dan  juga  di Pulau Timor.
Daun  Taya  merupakan  tumbuhan  berkayu keras yang tumbuh liar di pedalaman hutan Kalimantan Tengah.  Tanaman  ini  diambil  daunnya  sebagai penambah nikmat sensasi masakan. Walaupun pahit di lidah, enak sensasi rasa pahitnya. Menanamnya seperti singkong,  batangnya  ditanam  ke  tanah  dengan  posisi arah calon daun ke atas.
Daun  Taya  memiliki  permukaan  yang  licin, hampir  mirip  daun  salam,  namun  lebih  lembut. Batangnya  seperti  daun  salam  dan  memiliki  bunga- bunga  kecil  berwarna  kuning  gading  yang  tertempel pada batok buah. Namun buah dan bunganya tidak bisa dimakan,  hanya  daunnya  yang  dimanfaatkan  untuk sayur.
Klasifikasi Tumbuhan Taya adalah sebagai berikut:
Kingdom : Plantae Divisi : Spermatophyta Sub Divisi : Angiospermae Kelas : Dicotyledoneae Sub Kelas :Sympetalae Bangsa : Rubiales Famili : Rubiaceae Genus : Nauclea Spesies : Nauclea orientalis L
Gambar 1. Tanaman Taya ( Nauclea orientalis )
Kandungan metabolit sekunder dari daun Taya yang  tumbuh  di  Kalimantan  Tengah  belum  diketahui. Masyarakat  lokal  biasa  memanfaatkan  daun  Taya dalam  kehidupan  sehari-hari  sebagai  sayur,  masker wajah, obat sakit perut.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilakukan  di  laboratorium Pendidikan Kimia FKIP Universitas Palangka Raya.
Alat dan Bahan
Peralatan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini antara  lain  yaitu  pisau,  sendok,  neraca  analitik,  kaca arloji,  gelas  kimia  50  mL,  labu  takar  100  mL,  kertas saring,  labu  erlenmeyer  250  mL,  gelas  ukur  100  mL, spatula,  rak  tabung  reaksi,  pipet  tetes,  corong  kaca, pipet  ukur  +  karet,  keranjang,  plat  tetes,  gunting,
aluminium foil, tisu, rotary evavorator, dan spektrofotometer UV-Vis.
Bahan-bahan  yang  digunakan  pada  penelitian ini  antara  lain  yaitu  daun  taya,  aquades  (H 2 O),  Etanol (EtOH),  asam  klorida  (HCl),  besi  (III)  klorida  (FeCl 3 ), serbuk magnesium (Mg), asam sulfat (H 2 SO 4 ), dan asam asetat anhidrida ((CH 3 CO) 2 O).

## Preparasi Sampel
Sampel  dari  penelitian  ini  adalah  daun  Taya ( Nauclea  orientalis )  asal  kota  Palangka  Raya.  Daun dikeringkan, dibersihkan dan dibuat serbuk.

## Ekstraksi
Ekstrak  etanol  diperoleh  dengan  cara mengekstrasi daun Taya sebanyak 10 gram menggunakan  100  mL  etanol,  dimaserasi  selama  3×24 jam pada suhu kamar kemudian ditutup rapat, setelah itu  disaring  sehingga  diperoleh  filtrat,  kemudian dipekatkan.

## Skrining Fitokimia
1. Identifikasi Alkaloid
Lapisan  ekstrak  etanol  dipipet  1  mL
dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  kemudian ditambahkan beberapa tetes pereaksi Meyer
Dragendorff.  Jika  terdapat  alkaloid  akan  terbentuk endapan  putih  berwarna  jingga  atau  coklat,  hasil  ini menunjukkan uji positif untuk uji alkaloid.
2. Identifikasi Terpenoid dan Steroid.
Diambil  estrak  etanol  dimasukkan  kedalam  2 lubang  plat  tetes  masing-masing  sebanyak  5  tetes  ke lubang  plat  tetes  dibiarkan  sampai  kering,  dan ditambahkan  3  tetes  asam  sulfat  pekat  (H 2 SO 4 )  ke dalam  satu  lubang    sedangkan  lubang  yang  lain ditambahkan satu tetes asam asetat anhidrida dan satu tetes asam sulfat pekat. Terbentuknya warna biru atau hijau  menandakan  adanya  steroid  (pada  saat penambahan  asam  asetat  anhidrida  dan  asam  sulfat) dan  jika  terbentuk  warna  merah  atau  merah  ungu menandakan adanya terpenoid (pada saat penambahan asam sulfat pekat).

## 3. Identifikasi Saponin
Diambil  1  mL  estrak  etanol  dimasukkan  ke dalam  tabung  reaksi  kemudian  dikocok  kuat-kuat,  bila terbentuknya  busa  yang  permanen  selama  ±15  menit menandakan positif adanya saponin.
4. Identifikasi Flavonoid
Diambil 1 mL estrak etanol, lalu dimasukkan ke dalam  tabung  reaksi  ditambahkan  2  potong  serbuk logam  Mg dan  3 tetes HCl pekat.  Terbentuknya warna orange sampai merah menunjukkan uji positif untuk uji flavonoid.

## 5. Identifikasi Fenolat
Diambil  1  mL  estrak  etanol  dimasukkan kedalam  tabung  reaksi  kemudian  ditambahkan  (besi (III)  klorida)  FeCl 3 .  Jika  terbentuk  warna  biru,  hijau, merah,  ungu  dan  hitam yang  kuat  menandakan  positif adanya senyawa fenolat.
Uji Antioksidan
Uji  Aktivitas  Penangkapan  Radikal  Bebas  dengan Metode DPPH (1,1 difenil-2 pikrilhidrazil)
Sejumlah 10 mg masing-masing ekstrak etanol dari daun Taya dilarutkan dalam etanol sebagai larutan induk kemudian dibuat dalam berbagai konsentrasi (10; 25;  50;  100;  200  ppm)  untuk  masing-masing  ekstrak yang  diperoleh,  selanjutnya  dimasukkan  kedalam tabung  reaksi,  dalam  tiap  tabung  reaksi  ditambahkan 1,0 mL DPPH kemudian ditambahkan lagi 2,0 mL etanol kemudian diinklubasi pada suhu 37 0 C selama 30 menit selanjutnya  serapan  diukur  pada  panjang  gelombang 517  nm.  Sebagai  pembanding  digunakan  vitamin  C (konsentrasi  10;  25;  50;  100;  200  ppm).  Nilai  IC 50 dihitung  masing-masing  dengan  menggunakan  rumus persamaan regresi (Erawati, 2012).

## Penentuan Panjang Gelombang DPPH
Larutan  DPPH  yang  digunakan  dibuat  dengan cara menimbang seksama lebih kurang 0,05 mg serbuk DPPH  kemudian  dilarutkan  dengan  etanol  dalam  labu ukur  50  mL  dan  dicukupkan  dengan  etanol  hingga tanda  batas  sehingga  didapat  larutan  DPPH  100  ppm. Larutan ini ditentukan spektrum serapannya menggunakan  spektrofotometer  UV  pada  panjang gelombang  400  nm  hingga  800  nm  kemudian ditentukan  panjang  gelombang  optimumnya  (Bendra, Atika, 2012).
Pembuatan Larutan Blanko
Pembuatan  larutan  blanko  dilakukan  dengan cara  etanol  dipipet  sebanyak  3  mL  kemudian dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi  dan  ditambahkan 1,0  mL  larutan  DPPH  lalu  dikocok  sampai  homogen, diinklubasi pada suhu 37 0 C selama 30 menit (Dewi, dkk. 2016).
Pembuatan larutan vitamin C 1000 ppm
Sebanyak  10  mg  vitamin  C  ditimbang  dan  dilarutkan dalam  10  mL  etanol  kemudian  dikocok  hingga homogen.
Pembuatan  larutan  vitamin  C  konsentrasi  (10;  25;  50; 100; 200 ppm)
Dipipet  0,1;  0,  25;  0,5;  1  ;  2  mL  larutan  induk vitamin  C  masing-masing  ke  dalam  labu  ukur  10  mL, ditambahkan  etanol    hingga  tanda  batas.  Selanjutnya dipipet  1,0  mL  masing-masing  ke  dalam  6  tabung reaksi.  Pada  masing-masing  tabung  ditambah  dengan 1,0  mL  DPPH  kemudian  ditambahkan  lagi  2,0  mL etanol.  Dikocok  hingga homogen kemudian diinklubasi pada suhu kamar selama 30 menit (Ery, 2013)

## Pembuatan Larutan Sampel
Pembuatan  larutan  seri  bahan  uji  konsentrasi  0,1;  0, 25; 0,5; 1 ; 2 mL
Dipipet  0,1;  0,  25;  0,5;  1  ;  2  mL  larutan  induk bahan  uji  masing-masing  kedalam  labu  ukur  10,0  mL, ditambahkan  etanol  hingga  tanda  batas.  Selanjutnya dipipet  1,0  mL  masing-masing  6  tabung  reaksi.  Pada masing-masing  tabung  ditambahkan  dengan  1,0  mL DPPH  kemudian  ditambahkan  lagi  2,0  mL  etanol dikocok  hingga  homogen  kemudian  diinkubasi  pada suhu kamar selama 30 menit.
Serapan  dari  larutan  tersebut  diukur  pada  panjang gelombang 517 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kandungan  metabolit  sekunder  dari  Tanaman Daun Taya (Nauclea orientalis) diidentifikasi melalui uji fitokimia.  Uji  fitokimia  yang  dilakukan  meliputi  uji alkaloid,  flavonoid,  steroid,  fenolik,  saponin  dan terpenoid.  Analisis  fitokimia  menurut  Harborne  (1987) dilakukan  untuk  menentukan  ciri  senyawa  aktif penyebab  efek  racun  atau  efek  bermanfaat,  yang ditunjukkan oleh ekstrak kasar bila diuji dengan sistem biologi.  Namun  tujuan  utamanya  adalah  menganalisis tumbuhan  untuk  mengetahui  kandungan  bioaktif  yang berguna  untuk  pengobatan  (Alfinda,  dkk.  2008).  Data hasil  uji  fitokimia  yang  diperoleh  dari  hasil  identifikasi metabolit  sekunder  ekstrak  etanol  daun  taya  ( Nauclea orientalis ) dapat dilihat pada Tabel 1.
Antioksidan  adalah  zat  penghambat  reaksi oksidasi akibat radikal bebas yang dapat menyebabkan kerusakan asam lemak tak jenuh,membran dinding sel, pembuluh darah, basa DNA, dan jaringan lipid sehingga menimbulkan penyakit. Suatu tanaman dapat memiliki aktivitas  antioksidan  apabila  mengandung  senyawaan
yang  mampu  menangkal  radikal  bebas  seperti  fenol dan  flavonoid.  Aktifitas  antioksidan  tidak  dapat  diukur secara  langsung,  melainkan  melalui  efek  antioksidan dalam  mengontrol  proses  oksidasi.  Banyak  metode yang  bisa  digunakan  untuk  mengukur  aktivitas antioksidan.  Pada  pengukuran  aktifitas  antioksidan perlu  diperhatikan  sumber  radikal  bebas  dan  substrat. Hal  ini  dikarenakan  antioksidan  mungkin  dapat melindungi  lipid  dari  kerusakan  oleh  radikal  bebas, namun  di  waktu  yang  sama  dapat  mempercepat kerusakan  molekul  sel  lainnya.  Untuk  mengatasi masalah  ini  dapat  digunakan  beberapa  metode pengukuran  aktifitas  antioksidan  untuk  mengevaluasi efek dari antioksidan.
Tabel 1. Hasil Penelitian Identifikasi Golongan Senyawa Metabolit  Sekunder    Pada  Ekstrak  Etanol  Daun  Taya ( Nauclea orientalis )
Metabolit Hasil Pengamatan Ket. Alkaloid Larutan  berwarna  kuning  dan  terdapat endapan berwarna coklat. +++ Terpenoid   terbentuk warna merah pada larutan ++ Steroid tidak terbentuk warna biru - Saponin terbentuk busa pada larutan ++ Flavonoid   terbentuk warna merah pada larutan +++ Fenolik terbentuk warna biru, hijau kehitaman +++
Pengujian aktivitas antioksidan ekstrak dilakukan  dengan  menggunakan  metode  DPPH. Berdasarkan  pada  penelitiaan  terdahulu  metode  ini paling  umum  digunakan.  Pengukuran  dilakukan  secara spektrofotometer UV-VIS. Penentuan panjang gelombang  DPPH  dilakukan  pada  panjang  gelombang 517  nm  dan  selanjutnya  pengukuran  dengan  metode peredaman  radikal  DPPH  dilakukan  pada  panjang gelombang tersebut.
DPPH  atau  1,1-difenil-2-pikrilhidrazil  (α,α- difenil-βpikrilhidrazil)  merupakan  suatu  radikal  bebas yang  stabil  dan  tidak  membentuk  dimer  akibat delokalisasi  dari  elektron  bebas  pada  seluruh  molekul. Delokalisasi  elektron  bebas  ini  juga  mengakibatkan terbentuknya warna ungu pada larutan DPPH sehingga bisa  diukur  absorbansinya  pada  panjang  gelombang sekitar 517 nm.  Ketika  larutan  DPPH  dicampur dengan senyawa  yang  dapat  mendonorkan  atom  hidrogen, maka  warna  ungu  dari  larutan  akan  hilang  seiring dengan  tereduksinya  DPPH.  Uji  aktivitas  antioksidan dengan  menggunakan  metode  ini  berdasarkan  dari
hilangnya  warna  ungu  akibat  tereduksinya  DPPH  oleh antioksidan.  Intensitas  warna  dari  larutan  uji  diukur melalui  spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang gelombang  sekitar  517  nm.  Hasil  dari  uji  ini diinterpretasikan sebagai IC 50 , yaitu jumlah antioksidan yang  diperlukan  untuk  menurunkan  konsentrasi  awal DPPH  sebesar  50%.  Pada  metode  ini  tidak  diperlukan substrat  sehingga  memiliki  keuntungan,  yaitu  lebih sederhana dan waktu analisis yang lebih cepat. Metode DPPH  digunakan  pada  pengujian  aktivitas  antioksidan. Metode  ini  berdasarkan  pada  kemampuan  suatu senyawa  antioksidan  untuk  mengurangi  radikal  DPPH melalui  mekanisme  donasi  atom  hidrogen.  Sebagai pembanding yang berfungsi sebagai kontrol positif dari zat  uji  yang  mengandung  senyawa  antioksidan digunakan vitamin C.
Gambar  2.  Grafik  Hubungan  Konsentrasi dengan % inkubasi
Analisis data daya hambat IC 50 ditentukan berdasarkan analisis  regresi  linier  %  peredaman  DPPH  terhadap konsentrasi  senyawa.  Jika  IC 50 <  1000  ppm,  maka senyawa  tersebut  mempunyai  aktivitas  sebagai antioksidan.  Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  memiliki  aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 yakni 352,251 ppm.
Dengan  Hasil  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  memiliki  aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 yakni 352,251 ppm bahwa ekstrak  etanol  pada  daun  Taya  memiliki  aktivitas antioksidan  yang  lemah.  Kemampuan  peredaman radikal  DPPH  pada  daun  taya  terkait  dengan  senyawa yang  terkandung  pada  daun  Taya    yaitu  flavonoid, polifenol.  Senyawa  polifenol  mempunyai  kemampuan untuk menyumbangkan hidrogen, aktivitas antioksidan senyawa  fenolik  dapat  dihasilkan  pada  reduksi netralisasi  radikal  bebas  yang  mengawali  proses oksidasi atau  pada penghentian reaksi radikal  berantai yang  terjadi.  Sifat  antioksidan  dari  flavonoid  dan  tanin berasal  dari  kemampuan  untuk  mentransfer  sebuah elektron ke senyawa radikal bebas, dengan mekanisme tersebut  flavonoid  dan  tanin  memiliki  efek  yaitu
menghambat peroksidasi lipid dan menekan kerusakan jaringan oleh radikal bebas
Kontrol positif yang digunakan pada penelitian ini adalah vitamin C. Vitamin C merupakan antioksidan yang larut dalam air 2. Penggunaan kontrol positif pada pengujian  aktivitas  antioksidan  ini  adalah  untuk mengetahui  seberapa  kuat  potensi  antioksidan  yang ada  pada  ekstrak  etanol  jika  dibandingkan  dengan viatmin  C.  Apabila  nilai  IC 50 sampel  sama  atau mendekati  nilai  IC 50 kontrol  positif  maka  dapat dikatakan bahwa sampel berpotensi sebagai salah satu alternatif antioksidan yang sangat kuat.
Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak menunjukkan  bahwa  vitamin  C  memiliki  aktivitas antioksidan  dengan  nilai  IC 50 yakni  5,49  ppm, sedangkan  hasil  uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  memiliki  aktivitas antioksidan  dengan  nilai  IC 50 yakni  352,251  ppm,  yang menunjukan bahwa ekstrak etanol daun Taya memiliki aktivitas  antioksidan  yang  lemah.  Vitamin  C  dikatakan memiliki  aktivitas  antioksidan  sangat  aktif  karena  nilai IC 50 kurang  dari  50  µg/mL  (10).  Selain  itu,  vitamin  C yang  digunakan  berupa  senyawa  murni  sehingga aktivitas  antioksidannya  sangat  aktif.  Dari  penelitian aktivitas  antioksidan  dengan  DPPH  didapatkan  hasil, semakin  besar  konsentrasi  sampel,  maka  semakin besar pula nilai persen inkubasi.

## Kesimpulan
Berdasarkan  penelitiaan  yang  telah dilakukan, dapat disimpulkan sebagai berikut:
a. Ekstrak  etanol  pada  daun  Taya  teridentifikasi mengandung  senyawa  golongan  alkaloid, terpenoid, flavonoid, saponin dan fenolik.
b. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  memiliki aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 yakni
352,251 ppm
c. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak menunjukkan  bahwa  vitamin  C  memiliki aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC
50 yakni 5,49 ppm
d. Daun  taya  mempunyai  nilai  IC 50 352,251 µg/mL  yang  menunjukan  bahwa  daun  taya memiliki aktivitas antioksidan yang lemah.

## DAFTAR PUSTAKA
Alfinda,  dkk.  2008  . Buku  Ajar  Fitokimia .  Surabaya: Airlangga university press.
Bendra,  Atika.  2012. Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Daun Premna  Oblongata  Miq.  Dengan  Metode Dpph  Dan  Identifikasi  Golongan  Senyawa  Kimia Dari Fraksi Teraktif. Skripsi. Depok: FMIPA UI.
Dewi,  dkk.  2016. Pengujian  Aktivitas  Antioksidan Menggunakan  Metode  DPPH  pada  Daun Tanjung (Mimusops elengi L). Jurnal Yogyakarta: Prosiding  Seminar  Nasional  Teknik  Kimia “Kejuangan”  Pengembangan  Teknologi  Kimia untuk Pengolahan Sumber Daya Alam Indonesia.
Ery. 2013. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Buah Lakum  (Cayratia  Trifolia)  Dengan  Metode  DPPH (2,2-Difenil1-Pikrilhidrazil). Jurnal.  Pontianak: Program  Studi  Farmasi  Fakultas  Kedokteran Universitas Tanjungpura.
Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia (Penuntun Cara Modern  Menganalisis  Tumbuhan).  Bandung  : Institut Teknologi Bandung (ITB)