© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi

## Resistensi Ikan Gurami ( Osphorenemus gouramy )
Terhadap Infeksi Aeromonas hydrophila Setelah Perendaman  Ekstrak Air Panas Spirulina plantesis
Lina Wafia Asmi* 1 , Woro Hastuti Satyantani , Sri Subekti Prodi S2 Bioteknologi Perikanan dan Kelautan, Sekolah Pascasarjana, Universitas Airlangga, Surabaya e-mail: lina.wafia13@gmail.com*1

## Abstrak
Gurami  telah  umum  dibudidayakan  dan  menjadi  andalan  sebagai  salah  satu  sumber protein  hewani,  namun  masih  menghadapi  kendala  dalam  hal  budidaya  yaitu  pertumbuhan  yang lambat dan ketahanan hidup yang rendah. Salah satu penyebabnya adalah serangan penyakit oleh bakteri Aeromonas  hydrophila . Spirulina  platensis merupakan  mikroalga  yang  dapat  digunakan sebagai immunostimulan. Lipopolisacarida (LPS) yang terkandung pada Spirulina platensis dapat memperbaiki  system  imunitas  pada  ikan  gurami.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui resistensi  ikan  gurami  ( Osphorenemus  gouramy )  terhadap  infeksi Aeromonas  hydrophila setelah perendaman  ekstrak  air  panas Spirulina  platensis .  Rancangan  penelitian  yang  digunakan  adalah Analisis  Varian  dilanjutkan  dengan  Duncan,  dengan  menggunakan  5  perlakuan  yaitu  K - (tanpa perendaman ekstrak S. platensis dan tanpa diinfeksi A. hydrophila ), K + (tanpa perendaman ekstrak S. platensis dan  diinfeksi  dengan  A. hydrophila ),  A  (perendaman  ekstrak  S. platensis 15  ppm  dan diinfeksi dengan A. hydrophila ), B (perendaman ekstrak S. platensis 30 ppm dan diinfeksi dengan A. hydrophila ),   dan   C   (perendaman   ekstrak   S. platensis 60   ppm   dan   diinfeksi   dengan A. hydrophila ).  Kepadatan A. hydrophila yang  diinfeksi  terhadap  ikan  gurami  adalah  10 5 cfu/mL yang  disuntikkan  secara  intra  peritoneal  0.1  mL/ekor. Perendaman  ekstrak  S. platensis dilakukan pada  hari  ke-1  dan  ke-7,  sedangkan  infeksi  A. hydrophila dilakukan  pada  hari  ke-15.  Parameter yang  diamati  adalah  kelulus  hidupan,  total  leukosit,  aktivitas  lisozim,  dan  histopatologi  hati. Pengamatan  dilakukan  pada  hari  ke  -7,  -14,  -25,  sedangkan  untuk  histopatologi  hati  hanya dilakukan  pada  hari  ke-25.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  perendaman  ekstrak  air  panas Spirulina  platensis dapat meningkatkan  resistensi ikan  gurami  terhadap  A. hydrophila dibanding dengan  control  (p<0.05).  Resistensi  terbaik  ikan  gurami  terhadap  A. hydrophila diperoleh  dari ikan gurami dengan perendaman 30 ppm dengan kelulus hidupan 77%, total leukosit 60,32 x 10 4 sel/mm 3 , aktivitas lisozim 1,33 .  Pengukuran kualitas air selama penelitian menunjukkan suhu air berkisar  antara  28-28,5°C,  pH    berkisar  antara  7,3-7,5,  Amonia  berkisar  antara  0,5  –  0,52  mg/l, sedangkan oksigen terlarut berkisar antara 5,04 – 5,41 mg/L.

## Kata kunci : Osphorenemus gouramy, Spirulina platensis, Aeromonas hydrophila

## Abstract
Gouramy  has  been  generally  cultivated  and  being  one  of  mainstay  animal  protein source, but still faced some obstacles in cultivated that is low growth and low survival rate. One of  the  reason  is  diseases  by  Aeromonas  hydrophila  bacteria.  Spirulina  platensis  is  microalgae which  is  used  as  immunostimulant.  Lipopolisacarida  (LPS)  which  is  in  Spirulina  platensis  can improve  immunity  system  in  gouramy.  The  purpose  of  this  research  is  to  understand    gouramy (Osphorenemus gouramy) resistance   towards  Aeromonas  hydrophila infection after  submersion of  Spirulina  plantesis  hot  water  extract.  Research  design  which  is  used  is  Variance  Analysis
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi
continued with Duncan, by used 5 treatment that is K - (without submersion of S.platensis exctract and  without  A.hydrophila  infected),  K + (without  submersion  of  S.platensis  exctract  and  with A.hydrophila infected), A (with submersion of S.platensis 15 ppm exctract and with A.hydrophila infected), B (with submersion of S.platensis 30 ppm exctract and with A.hydrophila infected) and C (with submersion of S.platensis 60 ppm exctract and with A.hydrophila infected).  A.hydrophila density which is infected towards gouramy is 10 5 cfu/mL injected by intra peritoneal 0.1 mL/fish. The  submersion  done  at  1 st day  and  7 th day,  while  A.hydrophila  infection  done at  15 th day.  The observed parameter is survival rate, total of leucocyte, lisozyme activity, and liver histopatology. Observation done at 7 th day, 14 th day and 25 th day, while the liver hitopatology only done at 25 th day.  The  result  show  that  submersion  of  Spirulina  plantesis  hot  water  extract  can  improved gouramy  resistance  towards  A.hydrophila  if  compared  by  control  (p<0.05).  The  best  resistance result  of  gouramy  towards  A.hydrophila  is  from  gouramy  treatment  with  submersion  30  ppm which  show  result  survival  rate  77%,    total  of  leucocyte  show  result  60,32  x  10 4 sel/mm 3 , lisozyme  activity  show  result  1,33.  Water  quality  measurement  during  research  shows  water temperature about 7,3-7,5, ammonia about 0,5 – 0,52 mg/l, while dissolved oxygen about 5,04 – 5,41 mg/L.
Keyword : Osphorenemus gouramy, Spirulina platensis, Aeromonas hydrophila
1.    PENDAHULUAN
Ikan   gurami   ( Osphronemus   gouramy ) telah  umum  dibudidayakan  dan  menjadi andalan   sebagai   salah   satu   sumber   protein hewani.   Kawasan   pengembangan   budidaya ikan  gurami  juga  sudah  terbentuk di  beberapa daerah,  seperti  di  Jawa  Barat  (Bogor, Tasikmalaya,   Ciamis,   Garut),   Jawa   Tengah (Cilacap,           Banyumas,           Banjarnegara, Purbalingga),    Yogyakarta    (Kulonprogo, Bantul,  Sleman),  Jawa  Timur  (Tulungagung, Blitar,  Lumajang),  Sumatra  Barat  dan  Riau. (KKP,  2015).  Kementerian  Perikanan  dan Kelautan  (2015)  menjabarkan jumlah  produksi ikan   gurami   pada   tahun   2010      mencapai 55.331  ton  dan  terus  meningkat  sampai  tahun 2012  dengan  jumlah  produksi  82.794  ton, sedangkan  jika  dilihat  dari  nilai  produksi menunjukkan    ikan    gurami    merupakan produksi  perikanan  budidaya  kolam  dengan nilai tertinggi  dibanding dengan ikan budidaya kolam   lainnya,    yakni     pada    tahun   2011 mencapai  Rp.  137.292.865.980,-  .  Walaupun ikan  gurami  sudah  lama  dibudidayakan  secara komersial  namun  masih  menghadapi  kendala dalam  hal  budidaya  yaitu  pertumbuhan  yang lambat    dan    ketahanan    hidup    yang    rendah. Salah  satu  penyebabnya  adalah  serangan penyakit  oleh  bakteri Aeromonas  hydrophila (Tanjung dkk.,2011) .
Dalam  kondisi   normal, A.  hydrophila biasa   ditemukan   pada   lingkungan   perairan
tawar  dan  merupakan  penghuni  saluran gastrointestinal.   Penyakit   yang   disebabkan oleh  bakteri  ini  terutama  menyerang  ikan  air tawar seperti ikan Gurami, Lele, ikan Mas dan spesies  ikan tropis lainnya  termasuk  ikan  hias. Bakteri A.  hydrophila merupakan  penyebab utama aeromonas ( Motile Aeromonas Septichaemia, MAS) atau Hemorrhagic Septichaemia pada    berbagai    hewan    air, terutama  ikan  air  tawar  (Austin  dan  Adams, 2007). Penyakit MAS yang disebabkan oleh A. hydrophila merupakan  penyakit  utama  yang menjadi  kendala  dalam  bisnis  aquakultur  di seluruh  dunia  (Yu et  al., 2004).  Ikan  yang terinfeksi biasanya memiliki luka pada tubuhnya,  bola  mata  menonjol  ( exophthamia ), terjadi pendarahan pada beberapa bagian tubuh dan  perut  membuncit.  Ikan  yang  terinfeksi dengan  luka  terbuka  dapat  menyebarkan penyakit ini ke ikan lain, dan ikan yang terlihat sehat   tetapi   membawa   penyakit   ini   ( sub clinical  carriers )  kemungkinan  ada  dan  akan melepaskan  bakteri  yang  terdapat  dalam kotoran  ke  lingkungan  perairan  (Strohmeyer, 2009).
Spirulina sp.  mengandung  protein  60% yang  terdiri  dari  12  asam  amino  esensial,  10 vitamin,  dan  juga  sifat  terapi  seperti  pigmen fikosianin  yang  bersifat  antioksidan  dan antiinflamatori,   polisakarida   yang   memiliki efek  antitumor  dan  antiviral,  dan  γ-asam linoleat  (GLA)  yang  berfungsi  dalam  penurun
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
kolesterol  (Desmorieux and Decaen,  2005). Lipopolisakarida (LPS) adalah sebuah molekul besar berupa               kompleks               antara senyawa lipid dan polisakarida dengan ikatan kovalen.   Menurut   Boajiang   (1994),   dalam penelitiannya     terhadap    tikus     mengatakan bahwa   polisakarida   yang   terkandung   pada Spirulina plantensis dapat memperbaiki fungsi imunitas    seluler    nonspesifik    dan    fungsi humoral  spesifik.  LPS  merangsang  makrofag dan       sel       monositik       yang       dianggap menyebabkan     pelepasan     mediator     secara cepat,  terutama  sitokin,  interleukin  IL-1,  IL-6 dan  tumor  necrosis  factor  TNF,  yang  pada akhirnyanya   mengaktifkan   sel-sel   lain   yang terlibat   dalam   mekanisme   pertahanan   inang (Gallay et  al .,  1993).   Dalam  penelitian  yang dilakukan  oleh  Tayag  (2010)  yaitu  pemberian ekstraksi air panas dari Spirulina platesis yang diberikan  pada  udang  dan  ditantang  dengan Vibrio    alginolyticus menunjukkan    bahwa Spirulina      platensis memiliki      pengaruh terhadap   beberapa   parameter   sistem   imun udang.      Selvaraj et      al .      (2008)     juga membuktikan             bahwa             pemberian lipopolisakarida    memberikan  pengaruh  yang baik   terhadap   kelulushidupan   serta   sistem imun   spesifik   dan   non-spesifik   pada   ikan Cyprinus    carpio yang    ditantang    dengan Aeromonas hydrophila.
Pemberian  imunostimulan  untuk  ikan dapat dilakukan dengan  cara pemberian secara oral,  perendaman  langsung,  dan  penyuntikan intraperitonial  (Tindal,  1989).  Satyantini  dkk. (2016)  telah  melakukan  penelitian  pemberian ekstrak  air  panas Spirulina  platensis melalui suntik  pada    ikan  gurami,  dan  hasil  penelitian itu  menunjukkan  bahwa  ekstrak  air  panas Spirulina  platensis dapat  meningkatkan  sistem imun  non  spesifik    yaitu  peningkatan  leukosit dan aktifitas fagositosis pada ikan gurami.
Dari  penjabaran  di  atas,  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  mengenai  pengaruh pemberian  ekstraksi  air  panas Spirulina platensis dengan  cara  perendaman  terhadap kululushidupan,  sistem  imun  (parameter  total leukosit dan aktivitas lisozim) serta histopatologi  organ  hati  ikan  Gurami  yang diinfeksi dengan Aeromonas hydrophila.

## 2.    METODE PENELITIAN
Penelitian    dilaksanakan  di  Institute  of Tropical  Disease  dan  Laboratorium  Fakultas Perikanan  dan  Kelautan  Universitas  Airlangga pada bulan Januari-Juni 2016.
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  (a)  alat ekstraksi; thermometer ,  gelas  ukur, hot  plate , timbangan    digital,    kertas    saring, vacum bucner ,  sentrifus,  pipet  tetes,  micro  pipet  (b) alat  pemeliharaan;  akuarium,  tandon  air, aerator,   selang   aerasi,   batu   aerasi,   selang sipon,  kertas  pH    (c)  alat  kultur  bakteri;  petri disk,    tabung    reaksi,    pipet,    autoclave, inkubator,  kulkas,  kapas,  alumunium  foil  (d) alat  untuk  uji  total  leukosit;  haemisitometer, mikroskop,  objek  glass,  pipet  tetes  (e)  alat untuk  pembuatan  preparat  histopatologi;  baker glass,  objek  glass,  cover  glass,  pipet  (f)  alat untuk  uji  aktifitas  lisozim;  micro  titer  plate ELISA Reader.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian adalah  (a)  bahan  ekstraksi; Spirulina  platensis dan  aquades  (b)  bahan  pemeliharaan;  ikan Osphronemus gouramy, air, pakan ikan, garam ikan,  KMnSO 4 ,  formalin  (c)  bahan  kultur bakteri:  bakteri Aeromonas  hydrophila, media TSA,  media  TSB  (d)  bahan  untuk  uji  total leukosit  ;  anti  coagulan,    larutan  Turk’s,  es batu  (e)  bahan  untuk  pembuatan  preparat  dan pewarnaan  histopatologi;  Paraffin,  Formalin PA,  Etahnol  PA,  Xylene  PA,  Haematoxylin Crystal,  Mercury  Oxide,  Hydrochloric  Acid, Amonium  atau  Potassium  Ammonium  Sulfat, Sodium  Phosfat  Dibasic,  Natrium  Chlorida, Entelan,  Methanol,  Asam  Asetat  Glacial, Sodium Phosphat Monobasic, Xylene, Alkohol absolute,  Alkohol  95%,  HE,  Aquadest  Acid Alkohol  (f)  bahan  untuk  uji  aktifitas  lisozim; bakteri Micrococcus lysodeikticus , PBS.
Penelitian  ini  menggunakan  metode eksperimental  untuk  mengetahui  pengaruh pemberian  ektrak Spirulina terhadap  system kekebalan  tubuh  ikan Osphronemus  gouramy yang  dinfeksi Aeromonas  hydrophila dengan dosis        ektrak Spirulina  platensis yang berbeda.    Perhitungan    dosis    didapatkan    dari
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi
hasil  penelitian  pendahuluan  yang  dilakukan sebelumnya.   Hasil   terbaik   pada   penelitian
sebelumnya  dengan  cara  menginjeksi  ekstrak Spirulina  platensis dengan  dosis  20  ppm (Satyantini  dkk.,  2016).  Dari  dosis  tersebut, dapat  ditentukan  dosis  perendaman  ekstrak Spirulina  platensis dengan  dikalikan  1.5  dari dosis  terbaik  pemberian  secara  penyuntikan berdasarkan Selvaraj (2009), sehingga didapatkan dosis perlakuan perendaman adalah 15  ppm,  30  ppm  dan  60  ppm.    Eksperimental merupakan    suatu    tindakan    yang    dibatasi dengan   nyata   dan   dapat   dianalisis   hasilnya (Kusriningrum,    2008).    Perlakuan    dari penelitian ini adalah sebagai berikut :
K (-)    :     Ikan     tanpa     direndam     ekstrak
Spirulina  platensis tanpa  uji  tantang (direndam dengan air steril).
K (+)   :    Ikan        tanpa    direndam    ekstrak Spirulina platensis lalu diinfeksi Aeromonas hydrophila.
A         :    Ikan    direndam    dengan    ekstrak
Spirulina platensis dengan konsentrasi 15   ppm , lalu   diinfeksi   dengan A. hydrophila .
B         :    Ikan    direndam    dengan    ekstrak Spirulina platensis dengan konsentrasi 30   ppm,   lalu   diinfeksi   dengan A. hydrophila .
C         :    Ikan    direndam    dengan    ekstrak
Spirulina platensis dengan konsentrasi 60   ppm,   lalu   diinfeksi   dengan A. hydrophila .
Perendaman  dengan  ekstrak air  panas  S. platensis dilakukan  dua  kali,  yaitu  pada  hari ke-1  dan  hari  ke   -7.   Infeksi A.  hydrophila dilakukan pada hari ke-15.
Prosedur dari pemeliharan ikan Osphronemus  gouramy dalam  penelitian  ini adalah  dengan  menyiapkan  alat  dan  bahan seperti  akuarium  dan  aerasi  dengan  cara dibersihkan  terlebih  dahulu,  setelah  itu akuarium  diisi  dengan  air  sebanyak  20  liter dan  diberi  aerasi  untuk  media  pemeliharaan ikan  gurami.  Ikan  gurami  dengan  ukuran  7-8 cm  dimasukan  ke  dalam  akuarium  sebanyak 15    ekor    setiap    akuarium,    dilakukan perendaman      dengan      ekstrak Spirulina platensis dengan  konsentrasi  sesuai  perlakuan, setiap   perlakuan   terdapat    3    kali    ulangan dengan     penempatan     akuarium     perlakuan
secara  acak.  Pemberian  pakan  dilakukan  pada pagi    dan    sore    hari.          Perendaman    dengan ekstrak  air  panas  S. platensis dilakukan  dua kali, yaitu pada hari ke-1 dan hari ke -7.
Uji  tantang  dilakukan  pada  hari  ke  -15 dengan Aeromonas  hydrophila 10 5 cfu/mL dengan cara disuntik secara intra peritoneal 0.1 mL/ekor  (Setyowati,  2003).        Pengamatan kelangsungan  hidup  ikan  gurame  dilakukan seriap  hari  selama  penelitian  setelah  infeksi, sedangkan  pengamatan  total  leukosit,  dan aktivitas  lisozim  pada  hari  ke-7,  14,   dan  25. Pengamatan histopatologi organ hati dilakukan pada akhir penelitian.
Metode  ekstraksi  air  panas Spirulina platensis adalah  disusun  berdasarkan  metode yang  dijelaskan  Tayag et  al .,  (2010)  yaitu  20 gram  tepung Spirulina  platensis ditambahkan ke  100  ml  air  deionisasi,  lalu  dipanaskan  di atas  hot  plate  yang  diatasnya  terdapat  air mendidih  (dipanaskan  di  dalam  air  mendidih tersebut)  dan  diaduk  selama  1  jam  dengan suhu  90 o C.    Selanjutnya  disentrifuse  dengan kecepatan  3500  rpm pada  suhu  4 o C selama  15 menit untuk memisahkan endapan dan supernatant. Endapan dan supernatant dipisahkan,  jika  supernatan  belum  mencapau 100  ml,  maka  endapan  di  ekstak  kembali dengan   menambahan   air   deionisasi   hingga didapatkan  supernatan  sejumlah  100  ml. Supernatan  dikeringkan  dengan  proses freeze drying .

## 2.1  Penghitungan Total Leukosit
Penghitungan total leukosit (Svobodova dan Vyukusova, 1991) dengan cara mengambil darah  dengan  pipet  yang berisi  bulir  pengaduk warna putih sampai skala 0,5. Lalu tambahkan larutan    Turk’s    (berfungsi    untuk    mematikan sel-sel  darah  merah)  sampai  skala  11, pengadukan  darah  di  dalam  pipet  dilakukan dengan  mengayunkan  tangan  yang  memegang pipet    seperti    membentuk  angka    delapan selama  3  –  5  menit  sehingga  darah  tercampur rata.  Setelah  itu  tetesan  pertama  larutan  darah dalam pipet dibuang, selanjutnya teteskan pada haemacytometer  tipe  Neubauer  kemudian ditutup    dengan    gelas    penutup.    Jumlah    sel darah putih dengan bantuan mikroskop dengan perbesaran   400   x.  Jumlah   leukosit   dihitung
dengan  cara  mengkonversikan  dengan  jumlah sel   total   kotak   besar   dan   volume   kotak sehingga  didapat  jumlah  sel  darah  putih  per mm 3

## 2.2 Aktivitas Lisozim
Darah   diambil   dari   ikan   tanpa   anti koagulan,  darah  disimpan  pada  suhu  ruang selama  dua  jam,   kemudian  pada  lemari  es (4°C)   selama   24   jam.   Serum   kemudian dipanen  dengan  cara  disentrifugasi  pada  5000 rpm  (rotation  per  minute)  selama  tiga  menit. Uji  aktivitas  lisozim dilakukan  dengan  metode Lygren et  al. (1999) dalam Satyantini  (2013) 10 µl serum sampel diletakkan ke dalam micro titer  plate  lalu  ditambahkan  dengan  190  µl suspensi Micrococcus  lysodeikticus (Sigma- Aldrich  Chemical)  (0,2  mg Micrococcus lysodeikticus /  mL  PBS  (pH  7.4))  digoyang perlahan   pada   suhu   ruang   yang   konstan. Setelah  1  dan  30  menit  inkubasi,  selanjutnya dilakukan  pembacaan  dengan  menggunakan micro   titer   plate   ELISA   Reader   dengan panjang  gelombang  nm.  (Aktifitas  lisozim relative  (unit)  dihitung  sbb  :  1  Unit  =  0,001 penurunan  absorrban/menit.  Jika  penghitungan aktivitas   lisozim   mutlak   diperlukan,   maka dapat  menggunakan  larutan  standar  dari  putih telur  ayam  dengan  beberapa  konsentrasi  untuk membuat  kurva  standar  prosedur  pengukuran sama).

## 2.3  Histopatologi Organ Hati
Preparat  histologis  yang  dibuat  adalah hati    ikan.    Untuk    mempresentasikan keseluruhan   organ   hati,   maka   tiap   sampel organ   hati  dibedah   menjadi  3   yaitu  bagian frontal,  median  dan  distal.  Ikan  dibedah  dan diambil  bagian  hatinya,  diawetkan  dengan formalin  4  %  selama  24  jam.  Setelah  itu dilakukan  fiksasi,  memindahkan  hati  ke  dalam larutan  FAA  selama  24  jam.      Dilanjutkan dengan  proses  dehidrasi,  dilakukan  secara bertingkat dengan alkohol 70%, 80%, 90%, 95 %,    serta    alkohol    masing-masing    1    jam.
Clearing ,  dilakukan  selama  1  jam  yaitu dimasukkan ke dalam larutan alkoholxilol, lalu memasukkannya ke dalam xilol murni I, II, III
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi
masing-masing   selama   20   menit.   Setelah proses cleaning dilakukan infiltrasi menggunakan paraffin. Hati dimasukkan kedalam  xylol  :  parafin  (1:1)  cair  selama  20 menit,  kemudian  memasukkan  parafin  cair  I, II,  III  masing-masing selam 20  menit di dalam oven dengan suhu 60˚C.   Setelah itu dilakukan embedding ,  tahapan  menanam  jaringan  atau sampel yang digunakan. Paraffin cair dituangkan  ke  dalam  cetakan  sampai  penuh kemudian  membenamkan  potongan  organ  ke dalam    parafin    tersebut.    Jaringan    diletakkan pada  posisi  dasar  tengah  dengan  posisi melintang.  Setelah  itu  sampel  dipotong menggunakan  microtome  dengan  ketebalan  6- 10  mikron,  proses  ini  disebut  dengan sectioning.     Dilanjutkan     dengan affixing , perekatan  dengan  menggunakan  albumin  dan gliserin  dengan  perbandingan  1:1,  disimpan dalam   kotak   sediaan   selama   1   hari,   untuk menghilangkan   parafin,   sediaan   dimasukkan ke      dalam      xylol      selama      10      menit ( deparafinisasi ).
Langkah   selanjutnya   adalah staining atau  pewarnaan,  proses  pewarnaan  dengan menggunakan  hematoxylin  dan  eosin  dengan langkah  sediaan  histologis  dihisap  xylolnya dengan  menggunakan  kertas  saring.  Kemudian berturut-turut   dimasukkan   ke   alkohol   96%, 90%,  80%,  70%,  60%,  50%,  40  %  dan  30  % masing masing selama 5 menit lalu ke aquades selama  5  menit.  Dicuci  dengan  air  mengalir kurang  lebih  2  menit,  dimasukkan  ke  dalam haemotoxylin  selama  4  menit,  lalu  dicuci dengan  air  mengalir  selama  10  menit, dimasukkan   ke   dalam  aquades   dan   alkohol 50%,  60%,  70%,  80%,  90%,  96%  masing- masing  beberapa  celupan,  lalu  dimasukkan  ke dalam  eosin  selama  1,5  menit,  dimasukkan  ke dalam  alkohol  70  %,  80%,  90%,  95%,  lalu preparat dikering-anginkan dan dimasukkan  ke xylol   selama   15   menit,   sediaan   histologi ditetesi  dengan  canada  balsam  lalu  ditutup dengan  cover  glass.  Terakhir  adalah mounting (penutupan)  dan labelling (pemberian  label) yaitu    Penutupan    preparat    dengan menggunakan  kaca  penutup  dan  memberi identitas pada preparat. Pengamatan di Laboratorium  Pengamatan  preparat  dilakukan mengguankan  mikroskop  compound  dengan perbesaran  40-1000x.  Penilaian  kerusakan  hati
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi
Rang nekr kaian     Peradangan dan        Fib osis        pembengkakan skor       Ciri       skor     ciri 0 Tidak ada 0 kelainan
1 Peradanga 1 Perlu
n dan                        asan pembengk                   fibros akan                           is sedikit                       pada tersebar                      bagia pada 1/3                        n bagian                      portal daerah portal 3 Cukup 3 Terbe banyak                       ntuk peradanga                    rangk n dan                         aian pembengk                     dari akan 1/3 –                    bagia 2/3 pada                        n bagian                       yang portal                      meng alami fibros is 4 Peradanga 4 Chirr
n dan                        hosis pembengk                    terlih akan > 2/3                      at pada                         jelas bagian portal rosis Ciri skor Tidak ada kelai nan
Sedik it bagia n meng alami nekro sis Cuku p banya k bagia n yang meng alami nekro sis hingg a 50% Perta nda nekro sis lebih dari 50% 0 1 3 4
ikan  gurami  dinilai  berdasarkan  Histological Activity Index (HAI) Knodell et al ., (1981).
Tabel 1 . Penilaian kerusakan hati ikan
berdasarkan Histological Activity Index (HAI) (Knodell et al ., 1981)

## 2.4 Survival Rate (SR)
Kelulus  hidupan  (Survival  Rate)  ikan
Gurami dihitung dengan cara:
SR = Nt / No x 100% Keterangan : SR  =    Sintasan / Survival Rate (%)
Nt  =     jumlah   total   ikan   yang   hidup   pada akhir penelitian (ekor)
No  =    jumlah total ikan pada awal penelitian (ekor)

## 3.    HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1  Hasil
Total  leukosit  ikan  Gurami  yang direndam  ekstrak  air  panas Spirulina  platensis dengan dosis yang berbeda menunjukkan hasil yang  berbeda  nyata  antar  perlakuan  (P<0.05). Kisaran  nilai  total  leukosit  pada  penelitian  ini adalah  18  x  10 4 –  68  x  10 4 sel/mm 3 .  Pada Gambar  1  menunjukkan  total  leukosit  ikan gurami  dengan  perendaman  ekstrak  air  panas Spirulina platensis dengan konsentrasi 30 ppm menunjukkan  hasil  tertinggi,  yaitu  62  x  10 4 sel/mm 3 pada hari ke 7, 68 x 10 4 sel/mm 3 pada hari  ke  14,  dan  10  hari  setelah  diinfeksi  A. hydrophila (hari  ke-25)  42  x  10 4 sel/mm 3 . Total  leukosit  hari  ke-  7,  14,  25  perlakuan K(+)  menunjukkan  nilai  terendah  yaitu  18  x 10 4 sel/mm 3 ,  18  x  10 4 sel/mm 3 ,  dan  8,6  x  10 4 sel/mm 3 .
Pada  gambar  2  menunjukkan  aktivitas lisozim  ikan  gurami  pada  hari  ke-7  dan  ke-14 perendaman    ekstrak Spirulina    platensis dengan  dosis  30  ppm merupakan  hasil terbaik, akan  tetapi  tidak  berbeda  nyata  dengan perendaman  dengan  konsentrasi  15  ppm maupun  60  ppm,        sedangkan  ikan  tanpa perendaman  ekstrak Spirulina  platensis (K+ dan   K-)   memiliki   aktivitas   lisozim   yang berbeda  lebih  rendah  (P<0.05).  Setelah dilakukan  uji  tantang  pada  ikan  gurami, aktivitas  lisozim  pada  hari  ke-25  perlakuan  B (perendaman ekstrak 30 ppm)  merupakan hasil terbaik,  sedangkan  hasil  terendah  didapatkan dari perlakuan K(+).
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi
Gambar  1 .  Total  leukosit  ikan  gurami  yang direndam ekstrak air panas Spirulina platensis dengan konsentrasi yang berbeda
Gambar  2. Aktivitas  lisozim  ikan   gurami yang  direndam  ekstrak  air  panas
Spirulina platensis dengan konsentrasi yang berbeda
Gambar  3. Histopatologi hati pada perlakuan K(-),  K(+),  A,  B  dan  C.  (He  =
Hemorage  ;  Ne  =Necrosis  ;  Fi  = Fibrosis)
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi
Perla- kuan Nek-          Dege-    Fib- rosis           nerasi    rosis 0            1          0 1            1          1 1            1          1 4            4          4 4            4          4 4            4          3 3            3          3 3            4          4 4            3          3 1            3          3 3            1          1 3            1          3 3            3          3 3            3          3 3            1          3 rata-rata K-1 K-2 K-3 Rata- rata K+1 K+2
K+3
Rata- rata
A1
A2 A3 Rata- rata B1 B2 B3 Rata- rata C1 C2 C3 Rata- rata 0,333333 1 1 0,777778 4 4 3,666667 3,888889 3 3,666667 3,333333 3,333333 2,333333 1,666667 2,333333 2,111111 3 3 2,333333 2,777778
Tabel  3. Skoring  kerusakan  hati  ikan  gurami yang  direndam  ekstrak  air  panas Spirulina          platensis dengan konsentrasi yang berbeda
Keterangan  :  K(-)  =  tanpa  perendaman  ekstrak S. platensis dan  tanpa  diuji  tantang  ,  K(+)  =  tanpa perendaman  ekstrak  S. platensis lalu  diinfeksi  A. hydrophila pada  hari  ke-15,  A  =  perendaman ekstrak  S. platensis konsentrasi  15  ppm  pada  hari ke-1 dan hari ke-7 dan diinfeksi pada hari ke-15, B =  perendaman  ekstrak  S. platensis konsentrasi  30 ppm  pada  hari  ke-1  dan  hari  ke-7  dan  diinfeksi pada    hari    ke-15,    C    =    perendaman   ekstrak S. platensis konsentrasi  60  ppm  pada  hari  ke-1  dan hari ke-7 dan diinfeksi pada hari ke-15.
Pengamatan kerusakan pada organ hati dilakukan  pada  hari  terakhir  penelitian  (hari ke-25).  Perlakuan  K(-)  hati  ikan  hampir  tidak mengalami kerusakan pada sel, pada perlakuan
K(+)  hati  ikan  mengalami  kerusakan  yang paling     besar     dengan     terjadi     hemoragi,
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi
nekrosis,  dan  fibrosis.  Pada  perlakuan  A,  B, dan  C juga  mengalami  kerusakan  sel  nekrosis, hemoragi,  dan  fibrosis  akan  tetapi  tidak sebanyak   kerusakan   pada   perlakuan   K(+). Skor  kerusakan  hati  tertinggi  didapatkan  dari perlakuan K(+), sedangkan skor kerusakan hati terendah (terbaik) diperoleh dari perlakuan K(- ),    lalu    disusul    dengan    perlakuan    B (perendaman ekstrak Spirulina platensis konsentrasi 30 ppm).
Gambar   4. Skoring   kerusakan   hati   ikan gurami  yang  direndam  ekstrak  air panas Spirulina  platensis dengan konsentrasi yang berbeda
Gambar  5. Kelulus  hidupan  ikan  gurami terhadap  A. hydrophila setelah pemberian ekstrak air panas Spirulina platensis dengan konsentrasi yang berbeda
Kelulushidupan ikan gurami pada penelitian  ini  didapatkan  hasil  yang  berbeda nyata  tiap perlakuan  (P<0.05).  Kelulushidupan tertinggi  diperoleh  dari  perlakuan  K(-),  lalu disusul    dengan    perlakuan    B    (SR    77%),
kemudian perlakuan A (SR 73%), perlakuan C (SR 71%), sedangkan perlakuan K(+) merupakan  nilai  kelulushidupan  terendah dengan nilai SR 44%.
Kualitas    air    pada    penelitian    ini dipantau    selama    penelitian    berlangsung, karena kualitas air pada bak pemeliharaan ikan gurami  merupakan  factor  penting  dalam keberhasilan   pemeliharaan   ikan.   Rata-rata hasil    pemeriksaan    kualitas    air    selama penelitian terdapat pada Tabel 3.
Tabel 3. Hasil rata-rata pemerikasaan kualitas air selama pemeliharaan ikan gurami Parameter Kualitas Air Rata p -rata kualitas air sela emeliharaan 25 hari K(+)       A        B 28,5       28       28 7,5        7,3      7,3 0,5        0,5     0,52 5,28      5,41    5,39 ma K(-) C Suhu (°C) 28 pH 7,4 Amoniak 0,52 (mg/l)
DO 5,33 (mg/l) 28 7.4 0,52 5,04
Keterangan  :  K(-)  =  tanpa  perendaman  ekstrak S. platensis dan  tanpa  diuji  tantang  ,  K(+)  =  tanpa perendaman  ekstrak  S. platensis lalu  diinfeksi  A. hydrophila pada  hari  ke-15,  A  =  perendaman ekstrak  S. platensis konsentrasi  15  ppm  pada  hari ke-1 dan hari ke-7 dan diinfeksi pada hari ke-15, B =  perendaman  ekstrak  S. platensis konsentrasi  30 ppm  pada  hari  ke-1  dan  hari  ke-7  dan  diinfeksi pada    hari    ke-15,    C    =    perendaman   ekstrak S. platensis konsentrasi  60  ppm  pada  hari  ke-1  dan hari ke-7 dan diinfeksi pada hari ke-15.

## 4.2  Pembahasan
Spirulina      platensis mengandung lipopolisakarida  yang  memiliki  efek  antitumor dan  antiviral  (Desmorieux and Decaen,  2005). Lipopolisakarida    (LPS)    adalah    sebuah molekul        besar    berupa  kompleks  antara senyawa  lipid  dan polisakarida dengan ikatan kovalen.  Ekstraksi Spirulina  platensis dengan menggunakan  air  panas  dapat  menghasilkan LPS sebesar 7% (Chaiklahan et al., 2013).
Perendaman    ekstrak    air    panas Spirulina  platensis pada  hari  ke-1  dan  ke-7 dengan  konsentrasi  15  ppm,  30  ppm,  60  ppm memberikan pengaruh peningkatan total leukosit lebih baik pada ikan gurami dibanding
tanpa  perendaman  ekstrak Spirulina  platensis sampai      hari      ke-14.      Setelah      diinfeksi
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi
Aeromonas  hydrophila pada  hari  ke-15,  total leukosit  gurami  pada  hari  ke-25  dengan perendaman  ekstrak  S. platensis mengalami penurunan,        tetapi  ikan  gurami  dengan perendaman ekstrak S. platensis tetap menunjukkan nilai yang lebih tinggi dibanding kontrol  (p<0.5).  Nilai  terendah  terletak  pada perlakuan K(+) dengan nilai total leukosit 8,62 x  10 4 sel/mm 3 .  Minaka  (2012)  dalam penelitiannya  mengungkapkan  bahwa  leukosit ikan  gurami  yang  terserang Aeromonas hydrophila akan  mengalami  penurunan jumlah total leukosit. Ikan gurami dengan perendaman ekstrak Spirulina  platensis memiliki  nilai leukosit  yang  lebih  tinggi  setelah  diuji  tantang karena    memiliki    total    leukosit    yang    lebih tinggi  sebelumnya  sebagai  bentuk  sistem pertahanan  awal  ikan.  Hal  ini  sejalan  dengan hasil penelitian Satyantini (2013) yang mengungkapkan  nilai  leukosit  ikan  kerapu bebek  setelah  diuji  tantang  dengan  dengan Vibrio  alginolyticus yang  sebelumnya  diberi pakan  dengan  penambahan  fikosianin  sebagai imunostimulan  memiliki  nilai  total  leukosit lebih tinggi dibanding dengan ikan yang hanya diuji  tantang  dengan  V. alginolyticus tanpa pemberian fikosianin terlebih dahulu.
Nilai  total  leukosit  ikan  gurami  yang meningkat      setelah      perendaman      ekstrak Spirulina    platensis dikarenakan    LPS S. platensis yang  masuk  ke  dalam  tubuh  ikan akan berikatan dengan LBP
( Lypopolysccharide  Binding  Protein )  dan  akan mengaktifasi  molekul  CD14  pada  permukaan sel. Ikatan antara LBP dan CD14 menginduksi TLR-4  yang  terdapat  pada  permukaan  sel leukosit     (yaitu     neutrofil,     monosit,     dan makrofag)    dan    akan    membentuk    ikatan kompleks  dengan  protein  kecil  yang  disebut MD-2   (Myeloid   Differentiation   factor   2) (Wang and    Quinn, 2010).    LPS    yang terkandung dalam Spirulina
platensis
merangsang  makrofag  dan  sel  monosit  yang menyebabkan  pelepasan  mediator  secara  cepat sehingga    dapat    mempercepat    poliferasi    sel imun (Gallay et al ., 1993).
Nilai  total  leukosit  ikan  gurami  yang meningkat setelah perendaman ekstrak Spirulina platensis menunjukkan bahwa sistem imunitas  ikan  tersebut  meningkat,  sehingga disaat ikan diinfeksi dengan A. hydrophila ikan
tersebut mampu memberikan pertahanan tubuh dibanding  ikan  gurami  tanpa  perendaman ekstrak  S. platensis .  Leukosit  ikan  merupakan bagian  dari  sistem  pertahanan  tubuh  yang bersifat non-spesifik (Moyle and Cech, 1988). Perendaman        ekstrak Spirulina platensis pada ikan gurami juga meningkatkan aktivitas  lisozim.  Aktifitas  lisozim  pada penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ikan  yang diberi imunostimulan Spirulina platensis memiliki  aktivitas  lisozim  yang  lebih  baik dibanding     aktivitas     lisozim     ikan     tanpa perendaman     ekstrak Spirulina     platensis. Konsentrasi   perendaman   ekstrak   S. platensis (15,  30,  dan  60  ppm)  sama-sama  memberikan pengaruh    terbaik    dalam    meningkatkan aktivitas  lisozim  dan  memberikan  pengaruh dengan  perbedaan  yang  nyata  dibanding aktivitas  lisozim  pada  ikan  kontrol.  Hal  ini terjadi baik sebelum ataupun setelah dilakukan infeksi  dengan Aeromonas  hydrophila .  Pada penelitian  sebelumnya,  pemberian  ekstrak  air panas Spirulina platensis dengan cara penyuntikan  maupun  perendaman  pada  udang vanammei    dapat    meningkatkan    aktivitas lisozim    baik    sebelum    maupun    setelah dilakukan uji tantang dengan Vibrio alginolyticus (Tayag,   2010) . Misra et   al . (2006) juga menjabarkan dari hasil penelitiannya  bahwa  ikan Labeo  rohita yang diberi immunostimulan β-glucan lalu ditantang dengan  bakteri Aeromonas  hydrophila dan Edwardsiella  tarda memiliki  aktivitas  lysozim yang  lebih  tinggi  dibanding  ikan  tanpa pemberian immunostimulan.
Aktivitas   lisozim   pada   ikan   gurami diukur  menggunakan  microtitter  plate  ELISA reader  dengan  OD  λ  450  nm dengan  inkubasi menggunakan        bakteri        Gram        positif Micrococcus  lysodeikticus. Lisozim  adalah enzim  yang  mempunyai  daya  bakterisid  yang banyak  terdapat  pada  monosit  dan  neutrofil. LPS  yang  terkandung  dalam  ekstrak  air  panas Spirulina    platensis yang    masuk    ke    dalam tubuh ikan melalui perendaman dapat merangsang TLR4 yang terdapat pada permukaan  sel  yaitu  monosit,  makrofag  dan neutrofil  sehingga  mempercepat  poliferasi  sel imun  tersebut,  disaat  hal  itu  terjadi,  organella- organella  intraseluler  pada  monosit  dan neutrofil  juga  akan  bertambah  yang  dimana
salah satunya adalah enzim lisozim (Wang and Quinn,  2010,  Bellanti et  al .,  1985).  Masuknya immunostimulan  akan  merangsang  sel  fagosit untuk   memproduksi   lebih   banyak   lisozim (Yin, et  al .,  2009).  Peningkatan  aktivitas lisozim  juga  berkorelasi  dengan  aktivitas fagositosis,  semakin  tinggi  nilai  aktivitas lisozim  maka  semakin  tinggi  pula  kemampua sel   dalam   melakukan   aktivitas   fagositosis (Yin, et al ., 2009 ).
Kerusakan  hati  pada  ikan  gurami memiliki  perbedaan  kerusakan  tiap  perlakuan, pada  perlakuan  K(-)  hati  ikan  gurami  hampir tidak  ditemui  kerusakan  pada  sel,  sedangkan kerusakan   terbesar   terjadi   pada   perlakuan K(+).  Hal  ini  disebabkan  karena  pada  ikan K(+)  tidak  diberikan  immunostimulan  terlebih dahulu sebelum diinfeksi A. hydrophila , sehingga  saat  tubuh  ikan  terinfeksi  patogen ikan  belum  memiliki  sistem  pertahanan  tubuh yang  lebih  baik.  Patogen  yang  masuk  seperti Aeromonas  hydrophila memproduksi  toksin, terdapatnya  zat  toksik  dalam  tubuh  ikan  dapat mempengaruhi  struktur  histopatologi  hati  ikan sehingga dapat mengakibatkan kelainan histopatologi  hati  yaitu  pembengkakan  sel, nekrosis atau kematian sel, fibrosis dan serosis (Nabib dan Pasaribu, 1989).
Pada ikan gurami yang diberi immunostimulan Spirulina  platensis sebelum diuji       tantang Aeromonas       hydrophila mengalami  kerusakan  hati  yang  lebih  sedikit dibanding    perlakuan    K(+).              Hal    ini dikarenakan  pemberian  imunostimulan  LPS Spirulina  platensis dapat  meningkatkan  sel fagosit (Gallay et al ., 1993), sel kupffer adalah jenis  makrofag  sinusoid  hati  yang  memiliki fungsi  untuk  memfagosit  patogen  yang  masuk ke  dalam  hati  (Thomson and Knolle,  2010), sehingga disaat ikan gurami terinfeksi A. hydrophila sel  kupffer  bisa  menfagosit patogen lebih baik agar tidak terjadi kerusakan sel pada hati.
Pada  penelitian  Astiatih  (2013)  juga menunjukkan  hati  ikan  lele  yang  diinfeksi Aeromonas  hydrophila dengan  injeksi  10 7 cfu/ml  mengalami  kerusakan  hati  berupa nekrosis,  hemoragi  dan  edema  pada  hari  ke-5 setelah  infeksi.      Pada  penelitian  Tanjung dkk (2010)  menunjukkan  hati  ikan  gurami  yang terserang     bakteri Aeromonas     hydrophila
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi
mengalami  kerusakan  sel  seperti  nekrosis  dan hemoragi.
Kematian  yang  terjadi  selama  10  hari pemeliharaan   setelah   dilakukan   uji   tantang Aeromonas  hydrophila pada  penelitian  ini adalah  42%  pada  perlakuan  K(+),   pada  ikan dengan   pemberian   immunostimulan   terlebih dahulu sebelum diinfeksi bakteri (perlakuan A, B,  dan  C)  terjadi  kematian  sebanyak  26,  23, dan 29% masing-masing. Sementara perlakuan K(-) yaitu tanpa pemberian imunostimulan dan infeksi    bakteri    mengalami    kelulushidupan 100%. Ikan gurami dengan pemberian imunostimulan     LPS Spirulina     platensis memiliki  kelulushidupan  yang  lebih  baik dibanding         ikan         tanpa         pemberian imunostimulan, hal ini terjadi karena imunostimulan  dapat  meningkatkan  sistem imun  pada  ikan  gurami  sehingga  ikan  gurami lebih  resisten  terhadap Aeromonas  hydrophila . Pada     penelitian     Misra et     al (2006) menunjukkan  bahwa  pada  ikan Labeo  rohita yang  diberi  immunostimulan  lalu  ditantang Aeromonas   hydrophila mengalami   mortality sebesar  20-35%,  yakni  lebih  rendah  dari K(+) yang  mengalami  mortality  sebesar  60%. Penelitian  Tayag  dkk  (2010)  menyimpulkan bahwa dengan konsentrasi Aeromonas hydrophila 10 8 cfu/ml  mampu  mengakibatkan kematian ikan gurami minimal tiga hari setelah terinfeksi.
Kualitas  air  pada  penelitian  dengan ketinggian  air  40  cm  di  masing-masing akuarium, terukur suhu air berkisar antara 28- 28,5°C,  pH      berkisar  antara  7,3-7,5,  Amonia berkisar  antara  0,5  –  0,52  mg/l,  sedangkan oksigen  terlarut  berkisar  antara  5,04  –  5,41 mg/L.   Hal ini sesuai dengan SNI ikan  gurami (2000)  bahwa  untuk  pemeliharan  ikan  gurami dengan ukuran ± 8 cm ketinggian air yang baik adalah 40-60 cm, suhu  25-30 °C, pH 6.5-8.5.

## 4.    KESIMPULAN DAN SARAN 5.1 Kesimpulan
1)   Perendaman  ekstrak  air  panas Spirulina platensis pada ikan gurami ( Osphronemus gouramy )     dapat     meningkatkan     total leukosit setelah diinfeksi A .hydrophila . 2)   Perendaman  ekstrak  air  panas Spirulina platensis pada ikan gurami ( Osphronemus
gouramy )  dapat  meningkatkan  aktivitas lisozim setelah diinfeksi A .hydrophila .
3)    Perendaman  ekstrak  air  panas Spirulina platensis pada ikan gurami ( Osphronemus gouramy )  dapat  menurunkan  kerusakan organ hati setelah diinfeksi A .hydrophila.
4)   Perendaman  ekstrak  air  panas Spirulina platensis pada ikan gurami ( Osphronemus gouramy )  dapat  meningkatkan  kelulus hidupan setelah diinfeksi A .hydrophila.

## 5.2 Saran
Dari penelitian ini, disarankan untuk dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai pemberian  ekstrak  air  panas Spirulina platensis dalam  bentuk  pemberian  melalui pakan  agar  mudah  diterapkan  dalam budidaya  untuk  meningkatkan  resistensi ikan  gurami  ( Osphronemus  gouramy ) terhadap Aeromonas hydrophila.

## UCAPAN TERIMA KASIH
1.  Sekolah          Pascasarjana          Universitas Airlangga  yang  telah  memberi  penulis kesempatan      untuk      menempuh pendidikan    S2    Bioteknologi    Perikanan dan Kelautan.
2.  Dr.Woro    Hastuti    Satyantini    Ir.,M.Si sebagai   pembimbing  ketua  danProf.  Dr. Sri       Subekti,       drh.,       DEA.sebagai pembimbing  kedua  yang  denganpenuh perhatian             telah             memberikan bimbingan,          dorongan,dan          saran dalampenyusunan    usulan    penelitian hingga selesainya penyusunan  Tesis ini.
3.    Prof.  Dr.  Hari  Suprapto,  Ir.,  M.Agr.,  Dr. Gunanti  Mahasri,  Ir.,  M.Si.,  danRahayu Kusdarwati, Ir., M.Kesselaku dosen penguji  yang  telah  memberikan  masukan dan saran dengan penuh kesabaran.
4.    Terima     kasih     tak     terhingga     juga penulis      sampaikan      kepada      suami Muhammad   Khoirul   Afif,   orang     tua, keluarga   besar   yang     telahmemberikan doa restu, kasih saying, motivasi, semangat, dan perhatian selama penyusunan tesis ini.
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi
5. Fakultas      Perikanan      dan      Kelautan Universitas      Airlangga      yang menyediakan  tempat  untukpenelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
AOAC.  1998. Official  Methods  of  Analysis  of AOAC  Internasional ,  16 th edition. Association  Of  Official  Analytical Chemists. Rockville. USA
Austin,  B.  And  D.  A.  Austin.  2007. Bacterial
Fish  Pathogens  Diseases  in  Farmed and  Wild  Fish .  Books  In  Aquatic  and Marine Sciences, Chichester UK
Germany.
Asniatih,  M.  Idris  dan  S.  Kadir.  2013. Studi Histopatologi  pada  Ikan  Lele  Dumbo (Clarias  gariepinus)  yang  Terinfeksi Bakteri  Aeromonas  hydrophila .  Jurnal Mina Laut Indonesia. 03 : 13 – 21.
Boajiang,  G.  1994. Study  on  Effect  and
Mechanism of Polyccharida of Spirulina  platensis  on  Body  Immune Function Improvement . Book of Abstract. Second Asia Pacific Conference  on  Algal  Biotechnology. p.24. Brenden,   R.A.   and   H.W.   Huizinga.   1986.
Susceptibility  of  Normal  and  X-ray Irradiated Animal to Aeromonas hydrophila Infections . Current Microbiol. 13 : 129-132.
Desmorieux,    H.    and    Decaen,    N.    2005.
Convective   Drying   of   Spirulina   in Thin Layer . Jurnal of Food Engineering, 66: 497-503. Gallay, P., Heumann, D., Roy, D.L., Barras, C. and Glauser,         M.P.         1993. Lippopolysaccharide-binding      protein as a major plasma protein responsible for  endotoxemie shock . Proceedings  of the  National  Academy  of  Sciences (USA) 90: 9935-9938.
Janda,  J.M.  1991. Recent   Advances  in  the Study  of the  Taxonomy,  Pathogenicity, and  Infectious  Syndrome  Associated with  the  Genus  Aeromonas. Clin Microb. Rev., 4: 397.
Kementerian  Kelautan  dan  Perikanan.  2015. Statistik  Jumlah  Produksi  Perikanan Budidaya  Kolam  Menurut  Jenis  Ikan dan            Provinsi , 2010-2015. http://statistik.kkp.go.id/index.php/stat istik/c/12/0/0/0/0/Statistik- PerikananBudidayaKolam/?pulau_id= &subentitas_id=61&view_data=1&tah un_start=2010&tahun_to=2015&tahu n=2015&filter=Lihat+Data+%C2%B
B. 15 november 2015.
Kementerian  Kelautan  dan  Perikanan.  2015. Statistik    Nilai    Produksi    Perikanan Budidaya  Kolam  Menurut  Jenis  Ikan dan            Provinsi,            2010-2015 . http://statistik.kkp.go.id/index.php/stat istik/c/12/0/0/0/0/Statistik- PerikananBudidayaKolam/?pulau_id= &subentitas_id=62&view_data=1&tah un_start=2010&tahun_to=2015&tahu n=2015&filter=Lihat+Data+%C2%B B. 15 november 2015.
Kusriningrum.  2008. Rancangan  Percobaan . Surabaya:     Pusat     Penerbitan     dan Percetakan Unair (AUP), hlm 6-37.
Misra,  C.K.,  Das,  B.K.,  Mukherjee,  S.C., Pattnaik,  P.  2006. Effect  of  multiple injections  of  β-glucan  on  non-specific immune response and disease resistance  in  Labeo  rohita  fingerlings . Fish  and  Shellfish  Immunol.  20:  305- 319.
Moyle,  P.  B.  and J. J.  Cech.  1988. Fishes.  An Introduction  to  Ichthyology .  Second Edition. New Jersey: Prentice Hall. pp 62.
Nabib,  R.  dan  Pasaribu,  F.  H.  1989. Patologi dan  penyakit    ikan. Pusat    Antar Universitas.  Bogor:  Institut  Pertanian Bogor.
© (2017) Sekolah Pascasarjana Universitas Airlangga, Indonesia
JBP Vol. 19, No. 2, Agustus 2017 – Lina Wafia Asmi
Rahmaningsih,  S.  2012. Pengaruh  Ekstrak Sidawayah  dengan  Konsentrasi  yang Berbeda  untuk  Mengatasi  Infeksi Bakteri  Aeromonas  hydrophyla  pada
Ikan  Nila  (Oreochromis  niloticus) . Jurnal    Ilmu    Perikanan    dan Sumberdaya Perairan.
Satyantini,  W.  H.  2013. Peningkatan  Respon Pertumbuhan,  Imun  Non  Spesifik  dan Resistensi  Juvenil  Ikan  Kerapu  Bebek (Cromileptes altivelis) dengan Pemberian Fikosianin Spirulina . Disertasi,  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor.
Satyantini,  W.H.,  Agustono,  Arinbi.,  E.K Sabdoningrum., M. Budi., L.W. Asmi.
2016. Peningkatan Respons Imun Non Spesifik    Ikan    Gurame    Pasca Pemberian Ekstrak Air Panas Mikroalga  Spirulina  platensis. Jurnal Kedokteran Hewan Indonesia. 17 (3) :
347-354.
Selvaraj V., Sampath. K., Sekar Vaithilingam.
2008. Administration of lipopolysaccharide  increases  specific and  non-specific  immune  parameters and survival in carp (Cyprinus carpio) infected  with  Aeromonas  hydrophila . Aquaculture 286 : 176-183.
Setyowati,  E.  A.,  2003. Potensi  Spirulina platensis    Sebagai    Imunostimulan Pada  Ikan  Gurami  (Osphorenemus gouramy Lac.) .      Tesis.      Institut
Pertanian Bogor, Bogor.
Standart Nasional Indonesia. SNI : 01-6485.3-
2000. Produksi   benih   ikan   gurame
(Osphronemus  goramy  Lac.)  kelas benih sebar.
Svobodova,     Z.,     Vyukusova,     B.     1991. Diagnostik,  Prevention  and  Therapy of   Fish   Disease   and   Intoxication. Research  Institute  of  fish  Culture  and Hydrobiology                          Vodnany
Czechoslovakia .
http//www.fao.org/fi/website/firetrivea ction.do?dom=topic&fid=16064&la ng=en. 22 juni 2015.
Tanjung, L. R., dll . 2011. Uji KetahananBeberapa Strain Ikan Gurami Terhadap Penyakit Aeromonas .  Limnotek  (2011)  18  (1)  : 58-71.
Tayag, C.M., Lin, Y.C., Li, C. C., Liou, C. H., Chen,  J.  C.  2010. Administration  of the  hot-water  extract  of  Spirulina platensis enhanced the immune response  of  white  shrimp  Litopenaeus vannamei  and  its  resistance  against Vibrio    alginolyticus .    Fish    and Shellfish  Immunology 28  (2010)  764- 773.
Thomson,  A.W,  Knolle,  P.A.  2010. Antigen- presenting cell function in the tolerogenic   liver   environment. Nat Rev Immunol. 10:753–766.
Tindall,  B.  1989. Fish  Pathology .  Edited  : Ronald  J.  Robert.The  techniques  of immunization. Hal.151.
Wang,  X.  and  Quinn,  P.J.  2010. Endotoxins  : Lipopolysaccharides  og  Gram-negatif Bacteria . Subcell Biochem 53: 2-36.
Yin,   Guojun.,   L.Ardo,  K.D.   Thompson,   A. Adams,  Z.  Jeney,  G.  Jeney.  2009. Chinese  herbs  (Astragalus  radix  and Ganoderma lucidum) enhance immune response    of    carp,    Cyprinus    carpio, and  protection  against  Aeromonas hydrophila .    Fish    and    Shellﬁsh Immunol 26 : 140–145.
Yu,  H.  B.,  Srinivasa  Rao,  P.  S.,  Lee,  H.  C., Vilches,  S.,  Merino,  S.,  Tomas,  J.  M., and  Leung,  K.  Y.  2004. A  Type  III secretion  System  Is  Required  for
Aeromonas hydrophila         AH-1
Pathogenesis. Infect.  Immun.  72  (3)  : 1248-1256.