## UJI FITOKIMIA DAN UJI TOKSISITAS EKSTRAK ETANOL TANAMAN KESEMBUKAN (Paederia foetida Linn.) DENGAN METODE BRINE SHRIMP LETHALITY TEST
Datin An Nisa Sukmawati 1 , Elok Kamilah Hayati 1 , Roihatul Muti’ah 2
1 Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Maulana Malik Ibrahim Malang
2 Jurusan Farmasi, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Maulana Malik Ibrahim Malang

## ABSTRACT
Kesembukan plant (Paederia foetida  L.) is one of the plants  from  the Rubiaceae tribe  which  has been used by the people to cure thrush, fever, blown, high blood pressure,  arthritis and herpes. The purposes of this research are to determine the level of toxicity of each Kesembukan plant extracts against the Artemia salina L. and to find the content of the compounds contained in each Kesembukan plant extract.
The  research  was  conducted  by  extracting  the  sample  using  ethanol,  chloroform  and  n-hexane.  The concentrated  extract  was  used  to  test  the toxicity  of  Artemia  salina  L.    using Brine  Shrimp  Lethality  Test method  (Meyer,  et  al.,  1982)  and  phytochemicals  with  reagents.  Compounds  from  phytochemical  test  results were identified using thin layer chromatography with the eluents to find out the best eluent. The mortality data of Artemia salina L. were analyzed by probit analysis to find LC 50 values of each extract.
The  results  of  this  research  show  that  each  extract  of  Kesembukan  plant  (Paederia  foetida  L.)  has  the level of toxicity against Artemia salina L. with LC 50 values indicated less than 1000 ppm.  LC 50 values of each extract ethanol, chloroform and n-hexane was 226,787; 482,014, and 146,181 ppm. Content of compounds from phytochemical test result using the reagent for each Kesembukan plant extract are the class of steroid compound. The best eluent for the separation of steroid compound in ethanol extract is n-hexane: ethyl acetate (8:2) with the values of Rf = 0.22 and 0.48 and for chloroform extract is n-hexane: ethyl acetate (7:3) with the values of Rf = 0.32; 0.45; 0.59; 0.63; 0.82; 0.85; 0.87 and 0.94 and for n-hexane extract is n-hexane: ethyl acetate (8:2) with the values of Rf = 0.12; 0.38 and 0.41.
Keywords : Kesembukan plant (Paederia foetida Linn, Artemia salina Leach, toxicity test, phytochemical test

## ABSTRAK
Tanaman Kesembukan (Paederia foetida L.) merupakan salah satu tanaman dari suku Rubiaceae (kopi- kopian)  yang  telah  digunakan  oleh  masyarakat  sebagai  obat  sariawan,  obat  demam,  sesak  nafas,  obat  tekanan darah tinggi, rematik dan herpes. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui tingkat toksisitas masing- masing ekstrak tanaman Kesembukan terhadap larva udang Artemia salina L. dan untuk mengetahui kandungan senyawa yang terkandung dalam masing-masing ekstrak tanaman kesembukan.
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  mengekstraksi  sampel  menggunakan  pelarut  etanol,  kloroform  dan  n- heksana.  Ekstrak  pekat  yang  diperoleh  digunakan  untuk  uji  toksisitas  terhadap  larva  udang  Artemia  salina  L. dengan  metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (Meyer,  et  al.,  1982)  dan  untuk  uji  fitokimia  dengan  reagen. Senyawa  dari  hasil  uji  fitokimia  diidentifikasi  menggunakan  kromatografi  lapis  tipis  dengan  beberapa  eluen untuk  mengetahui  eluen  yang  terbaik.  Data  kematian  larva  udang  Artemia  salina  L.  dianalisis  dengan  analisis probit untuk mengetahui nilai LC 50 pada masing-masing ekstrak.
Hasil  dari  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  masing-masing  ekstrak  tanaman  Kesembukan  (Paederia foetida L.) memiliki tingkat toksisitas terhadap larva udang Artemia salina L.yang ditunjukkan dengan nilai LC 50 kurang  dari  1000  ppm.  Nilai  LC 50 masing-masing  ekstrak  etanol,  kloroform  dan  n-heksana  adalah  226,787; 482,014; dan 146,181 ppm. Kandungan senyawa hasil uji fitokimia menggunakan reagen untuk masing-masing ekstrak  tanaman  Kesembukan  adalah  golongan  senyawa  steroid.  Eluen  terbaik  untuk  pemisahan  senyawa  pada ekstrak etanol adalah n-heksana : etil asetat (8:2) dengan nilai Rf= 0,22 dan 0,48. Pada ekstrak kloroform adalah n-heksana : etil asetat (7:3) dengan nilai Rf= 0,32; 0,45; 0,59; 0,63; 0,82; 0,85; 0,87 dan 0,94. Pada ekstrak n- heksana adalah n-heksana : etil asetat (8:2) dengan nilai Rf= 0,12; 0,38 dan 0,41.
Kata Kunci: Tanaman Kesembukan (Paederia foetida Linn), Artemia salina Leach, uji toksisitas, uji fitokimia

## I. PENDAHULUAN
Tanaman  kesembukan  ( Paederia foetida L.)  merupakansalah  satu  tanaman dari  suku Rubiaceae (kopi-kopian)  yang dapat hidup di daerah tropis dan merupakan tanaman perdu. Keberadaan tanaman kesembukan  ini  sudah  melimpah  dan banyak  dimanfaatkan  oleh  masyarakat sebagai makanan, minuman, dan bahan obat (Rukmana,  2002).  Selain  itu,  masyarakat percaya bahwa tanaman kesembukan dapat menyembuhkan  beberapa  penyakit  seperti diare,  sariawan,  demam,  sesak  nafas, tekanan  darah  tinggi,  rematik,  herpes  dan disentri (Wijayakusuma, 2002).
BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test ) digunakan  untuk  menentukan  toksisitas suatu  ekstrak  atau  senyawa.Uji  toksisitas terhadap larva udang Artemia salina L. atau BSLT dapat digunakan sebagai uji pendahuluan pada penelitian yang mengarah  pada  uji  sitotoksik.Parameter yang  ditunjukkan  untuk  menunjukkan adanya aktivitas biologi pada suatu senyawa  pada  Artemia  salina  L.  adalah kematiannya.  Penggolongan  toksisitas  atas dasar  jumlah  besarnya  zat  kimia  yang diperlukan  untuk  menimbulkan  bahaya untuk  harga  LC50  dibedakan  menjadi (Meyer, etal., 1982) :
a. Toksik (LC50 < 1000 ppm).
b. Tidak toksik (LC50> 1000 ppm).
Penelitian  yang  dilakukan  oleh Morshed, et al., (2012) menyebutkan bahwa ekstrak  metanol  tanaman  kesembukan memiliki  bioaktivitas  yang  tinggi  dengan nilai  LC50  sebesar  1,5625  ppm.  Tetapi pada  penelitian  tersebut  belum  dilakukan identifikasi  golongan  senyawa  apa  yang berperan  dalam  tingginya  bioaktivitas tersebut.  Berdasarkan  penelitian  tersebut maka  dilakukan  penelitian  tentang  uji toksisitas  tanaman  kesembukan  dengan menggunakan pelarut etanol.
II. METODE PENELITIAN
Pelaksanaan Penelitian Penelitian dilaksanakan di Laboratorium Kimia Organik dan Laboratorium Riset Kimia Analitik
Universitas  Islam  Negeri  Maulana  Malik
Ibrahim  Malang  pada  bulan  Januari  2013 sampai bulan Mei 2013.
Alat dan Bahan Penelitian Alat-alat  yang  digunakan  adalah seperangkat  alat  gelas, rotary  evaporator , neraca  analitik,  kertas  saring,  gelas  vial, penyaring Buchner vaccum, shaker , mikropipet,  lampu, aerator dan  tabung reaksi.
Bahan  yang  digunakan  meliputi tanaman  kesembukan,  etanol,  aquades, larva udang Artemia salina L., DMSO, ragi roti,  air  laut,  reagen  Meyer,  reagen Lieberman-Burcard.
CARA KERJA Preparasi Sampel
Sampel tanaman kesembukan diambil  bagian  daun  dan  batangnya kemudian  dicuci  dan  dikeringanginkan. Selanjutnya,  dipotong  kecil-kecil,  dan dikeringkan  dengan  oven  pada  suhu  30- 37 O C selama 2 jam dan dihaluskan sampai berbentuk serbuk. Kemudian diayak dengan ukuran  60  mesh.  Hasil  yang  diperoleh digunakan sebagai sampel penelitian.
Ekstraksi Senyawa Aktif dengan Maserasi Serbuk tanaman kesembukan
( Paederia  foetida L.)  ditimbang  sebanyak 60  g  dan  diekstraksi  dengan  perendaman menggunakan  300  mL  pelarut  etanol selama 24 jam. Pengadukan dibantu dengan shaker ,  kemudian  disaring  dan  ampasnya dimaserasi  kembali  dengan  pelarut  yang sama  sampai  diperoleh  ampas  yang  pucat. Masing-masing filtrate diuapkan pelarutnya menggunakan rotary  evaporator untuk mendapatkan ekstrak pekat etanol.
Uji  Toksisitas  dengan  Larva  Udang Artemia salina L.
Telur larva udang Artemia salina L. ditimbang  2,5  mg  dan dimasukkan  ke dalam bejana penetasan yang berisi  air laut 250  mL. Diaerasi  menggunakan aerator dan diberi lampu. Penetasan dilakukan
selama 48 jam.
Ekstrak etanol tanaman kesembukan ditimbang  sebanyak  10  mg,  dilarutkan dengan  menggunakan  100  μL  dimetil sulfoksida  (DMSO)  dan  ditambahkan
sedikit  air  laut.  Dipindahkan  pada  labu takar  10  mL  dan  ditanda  bataskan  sampai volume 10 mL untuk membuat larutan stok 1000  ppm  (Febriany,  2004).  Kemudian, dipipet sebanyak 8 mL; 4 mL; 2 mL; 1 mL; 0,5  mL;  0,25  mL;  0,125  mL;  0,0625  mL; 0,03125 mL; 0,015625 mL; dan 0,0078 mL, dimasukkan ke dalam labu takar 10 mL.
Selanjutnya,  ditambahkan  setetes larutan  ragi  roti,  ditambahkan  dengan  air laut sampai tanda batas 10 mL dan dikocok sampai  homogen,  sehingga  konsentrasinya 800;  400;  200;  100;  50;  25;  12,5;  6,25; 3,125;  1,5625;  dan  0,78  ppm  (Morshed,  et al.,  2012).Kontrol  dibuat  dengan  cara  yang sama tanpa adanya penambahan ekstrak.
Selanjutnya,  larutan  dipindahkan  ke dalam  gelas  vial  dan  dimasukkan  10  ekor larva udang Artemia salina L.. Pengamatan dilakukan selama 24 jam terhadap kematian larva  udang.  Analisis  data  yang  dilakukan untuk  mencari  nilai  LC50  adalah  dengan analisis  probit  menggunakan  Minitab  16 (Halimah, 2010).
Uji Fitokimia dengan Reagen Uji Flavonoid
Ekstrak etanol tanaman kesembukan masing-masing  diambil  1  mg.  Kemudian dilarutkan dalam 1-2 mL metanol panas 50 %. Setelah itu ditambah logam Mg dan 4-5 tetes HCl pekat. Larutan berwarna merah atau  jingga  yang  terbentuk  menunjukkan adanya flavonoid (Halimah, 2010).
Uji Alkaloid
Ekstrak etanol tanaman kesembukan diambil  1  mg,  ditambah  0,5  mL  HCl  2  % dan  larutan  dibagi  dalam  dua  tabung. Tabung  I  ditambahkan  2-3  tetes  reagen Dragendroff,  tabung  II  ditambahkan  2-3 tetes reagen Mayer. Jika tabung I terbentuk endapan  jingga  dan  pada  tabung  II terbentuk endapan kekuning-kuningan, menunjukkan  adanya  alkaloid  (Halimah, 2010).
Uji Tanin Uji dengan FeCl 3 Ekstrak etanol tanaman kesembukan diambil  1  mg,  ditambahkan  dengan  2-3
tetes  larutan  FeCl 3 1  %.  Jika  larutan menghasilkan  warna  hijau  kehitaman  atau biru tua, maka ekstrak tersebut mengandung tanin (Halimah, 2010).

## Uji dengan Larutan Gelatin
Ekstrak etanol tanaman kesembukan diambil  1  mg,  ditambah  dengan  larutan gelatin. Jika terbentuk endapan putih, maka ekstrak tersebut mengandung tanin (Halimah, 2010).

## Uji Tanin Katekol dan Tanin Galat
Ekstrak etanol tanaman kesembukan diambil 1 mg, ditambahkan dengan larutan formaldehid 3 % : asam klorida pekat (2:1) dan  dipanaskan  dalam  air  panas  dengan suhu  90 o C.  Jika  terbentuk  endapan  merah, maka ekstrak tersebut menunjukkan adanya tanin  katekol.  Filtrat  dijenuhkan  dengan Na-asetat  dan  ditambahkan  larutan  FeCl 3 1 %.  Jika  terbentuk  warna  biru  tinta  atau hitam,  maka  ekstrak  tersebut  menunjukkan adanya tanin galat (Halimah, 2010).

## Uji Saponin
Ekstrak etanol tanaman kesembukan diambil 1 mg, ditambah air (1:1) dan sambil dikocok selama 1 menit, apabila menimbulkan  busa  ditambahkan  HCl  1  N, busa  yang  terbentuk  dapat  bertahan  selama 10  menit  dengan  ketinggian  1-3  cm,  maka ekstrak positif mengandung saponin (Halimah, 2010).

## Uji Triterpenoid dan Steroid
Ekstrak etanol tanaman kesembukan diambil  1  mg,  dilarutkan  dalam  0,5  mL kloroform  dan  ditambah  dengan  0,5  mL asam asetat anhidrat. Campuran ini selanjutnya  ditambah  dengan  1-2  mL H 2 SO 4 pekat  melalui  dinding  tabung tersebut.  Jika  hasil  yang  diperoleh  berupa cincin kecoklatan atau violet pada perbatasan  dua  pelarut  maka  ekstrak tersebut  menunjukkan  adanya  triterpenoid, sedangkan  jika  hasil  yang  diperoleh terbentuk  warna  hijau  kebiruan  maka ekstrak  tersebut  menunjukkan  adanya steroid (Halimah, 2010).
III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Uji  Toksisitas  dengan  Larva  Udang Artemia salina L.
Parameter  yang  digunakan  pada  uji toksisitas adalah bioaktivitas suatu senyawa terhadap  larva  udang Artemia  salina L. dengan menghitung kematiannya yang nilai LC50<  1000  ppm  (Meyer,  et  al.,  1982). Pada  penelitian  ini  hasil  uji  toksisitas ekstrak  etanol  dianalisis  probit  dengan program Minitab 16. Kurva mortalitas yang didapat adalah :
Gambar 1. Kurva  mortalitas  Larva  Udang
Artemia  salina L.  terhadap ekstrak etanol tanaman kesembukan  dengan  LC50= 226,787 ppm
Berdasarkan  kurva  mortalitas  diatas ekstrak etanol tanaman kesembukan memiliki  nilai  LC50  <  1000  ppm,  maka ekstrak  tersebut  memiliki  bioaktivitas terhadap  larva  udang Artemia  salina L. pada nilai LC50 = 226,787 ppm.
Uji Fitokimia dengan Reagen Uji  fitokimia  dalam  penelitian  ini dilakukan pada golongan senyawa flavonoid, alkaloid, tanin, steroid, triterpenoid, dan saponin dengan menggunakan reagen masing-masing. Hasil uji  fitokimia  dengan  reagen  ditunjukkan pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil  identifikasi  uji  fitokimia ekstrak etanol tanaman
kesembukan dengan Reagen.
Keterangan: Tanda - : tidak terkandung senyawa Tanda + : terkandung senyawa

## IV. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Ekstrak etanol tanaman kesembukan (Paederia  foetida  L.)  memiliki  toksisitas terhadap  larva  udang Artemia  salina L., ditunjukkan dengan nilai LC50< 1000 ppm. Nilai LC50 dari ekstrak etanol226,787 ppm.
Golongan  senyawa  dalam  ekstrak etanol  tanaman  kesembukan  ( Paederia foetida L.) berdasarkan uji fitokimia dengan reagen adalah golongan senyawa steroid Saran
Perlu  dilakukan  identifikasi  dan pemisahan  senyawa  dengan  menggunakan kromatografi lapis tipis (KLT).

## V. DAFTAR PUSTAKA
Febriany,  S.  2004.  Pengaruh  Beberapa Ekstrak
Tunggal Banle dan Gabungannya yang Berpotensi Meningkatkan Aktivitas Enzim Lipase  Secara In  Vitro.  Skripsi . Bogor  :  Jurusan  Kimia  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam Institut Pertanian Bogor.
Halimah,  N.  2010.  Uji  Fitokimia  dan  Uji Toksisitas Ekstrak Tanaman Anting- Anting  ( Acalypha  indica  Linn .)
terhadap  Larva  Udang Artemia salina  Leach.  Skripsi Diterbitkan.
Malang: Fakultas Sains dan Teknologi  Universitas  Islam Negeri
Maulana Malik Ibrahim Malang. Meyer, B.N. Ferrigni, P. J.E, Jacobsen. L.B, Nichols and McLaughlin.1982.
Brine Shrimp: A Convenient General  Bioassay  for  Active Plant
Constituents. Planta  Medica 45:  31- 34.
Morshed, H. Islam, Md.S. Parvin, S. Uddin, M.A.  Mostofa, A.G.M  dan  Sayyed,
S.B.2012. Antimicrobial and Cytotoxuc  Activity  of  the Methanol Extract  of Peaderia  foetida  Linn.
Journal  of  Applied  Pharmaceitical
Science . 02 (01); 2012: 77-80.
Rukmana.  2002. Mengkudu  Budaya  Dan Prospek  Agribisnis . Yokyakarta:
Kanisius. Wijayakusuma,  H.  2002. Atasi  Asam  Urat dan Rematik Ala Hembing . Jakarta:Niaga Swadaya.