## UJI AKTIVITAS PENANGKAP RADIKAL BEBAS DAN PENETAPAN KADAR FENOLIK TOTAL EKSTRAK ETANOL TIGA RIMPANG GENUS CURCUMA DAN
RIMPANG TEMU KUNCI ( Boesenbergia pandurata )
RADICAL SCAVENGING ACTIVITY ASSAY AND DETERMINATION OF TOTAL PHENOLIC CONTENT OF ETHANOL EXTRACT THREE CURCUMA GENUS RHIZOMES AND FIGERROOT RHIZOME ( Boesenbergia pandurata )
Rosita Melannisa, Muhammad Da’i * , Ratih Tiastika Rahmi Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta abulathfi@gmail.com

## ABSTRAK
Radikal  bebas  bersifat  sangat  reaktif  sehingga  sangat  mudah  menyerang  sel-  sel  sehat  di dalam  tubuh  yang  berujung  pada  timbulnya  suatu  penyakit.  Tubuh  memerlukan  antioksidan  dari luar  untuk  melindungi  tubuh  dari  serangan  radikal  bebas.  Beberapa  jenis  curcuma  dan  rimpang temu  kunci  mengandung  senyawa  fenolik  yang  mempunyai  aktivitas  antioksidan.  Penelitian  ini dilakukan  untuk  mengetahui  korelasi  antara  aktivitas  penangkap  radikal  bebas  dan  kadar  fenolik yang  terdapat  dalam  rimpang  kunyit  ( Curcuma  domestica ),  rimpang  temulawak  ( Curcuma xanthorriza ),  rimpang  temu  putih  ( Curcuma  zedoaria )  dan  rimpang  temu  kunci  ( Boesenbergia pandurata ).  Penentuan  potensi  aktivitas  penangkap  radikal  bebas  menggunakan  metode  DPPH dengan  pembanding  vitamin  E.  Kadar  fenolik  total  diukur  sebagai  GAE  menggunakan  pereaksi Folin-Ciocalteu. Besarnya korelasi dihitung menggunakan persamaan regresi linear dan dilihat nilai R 2 . Aktivitas penangkap radikal bebas (IC 50 ) ekstrak etanol rimpang kunyit (29,64 µg/mL) memiliki aktivitas  paling  tinggi,  tetapi  lebih  rendah  dari  vitamin  E  (12,55  µg/mL).  Kadar  fenolik  total  (GAE) tertinggi  adalah  ekstrak  etanol  rimpang  rimpang  kunyit  (179,71  mg/g).  Terdapat  korelasi  positif antara  aktivitas  penangkap  radikal  bebas  dan  kadar  fenolik  total  dalam  empat  ekstrak  tersebut dengan koefisien korelasi R 2 = 79,56 %.
Kata kunci : antioksidan, fenolik total, DPPH, korelasi.

## ABSTRACT
The  body  needs  external  antioxidants  to  protect  the  body  from  free  radical  attack.  Several types  of curcuma  and  temu  kunci  contain  phenolic  compounds  that  have  antioxidant  activity.  The aim of this research is to determine the correlation between the radical scavenging activity and the phenolic  content  of  the  ethanol  extract  of  turmeric  rhizome  (Curcuma  domestica),  temulawak rhizome  (Curcuma  xanthorriza),  zedoary  rhizome  (Curcuma  zedoaria)  and  temu  kunci  rhizome (Boesenbergia  pandurata). The DPPH was used to determine the radical scavenging  activity with vitamin  E  as  a  positive  control.  Determination  of  total  phenolic  content  is  used  Folin-Ciocalteu reagent and measured as GAE. The correlation was calculated using a linear regression equation and R 2 . The highest total phenolic content (GAE) ethanol extract of rhizome is the turmeric rhizome (179.71  mg/g).  It  is  also  has  the  highest  radical  scavenging  activity  (IC 50 =  29.64  µg/mL),  but  its activity is lower than vitamin E (IC 50 = 12.55 µg/mL). There is a positive correlation between radical scvenging activity and total phenolic content  in the four of extract with correlation coefficient R 2 = 79.56%.
Keywords : antioxidant, total phenolic, DPPH, correlation.

## PENDAHULUAN
Radikal bebas dapat didefinisikan sebagai molekul atau senyawa yang mempunyai satu atau lebih elektron bebas yang tidak  berpasangan  (Hernani  dan  Raharjo, 2006). Radikal bebas dapat dihasilkan dari hasil metabolisme  tubuh  dan  juga  dari  luar  tubuh seperti  asap  rokok,  polusi  lingkungan,  radiasi, obat-obatan,  pestisida,  serta  sinar  ultraviolet (Langseth, 1995).
Tubuh  memerlukan  substansi  penting, yaitu  antioksidan  yang  dapat  membantu melindungi  tubuh  dari  serangan  radikal  bebas dengan  meredam  dampak  negatif  senyawa radikal  bebas  tersebut.  Antioksidan  adalah substansi  yang  dapat  menghambat  atau menangkal  proses  oksidasi  pada  konsentrasi rendah (Vaya dan Aviram, 2001).
Beberapa  antioksidan  dapat  dihasilkan dari  produk  alami  seperti  rempah,  herba,
sayuran,  dan  buah.  Tanaman  obat  mempunyai daya  aktivitas  antioksidan  lebih  tinggi  bila dibandingkan  dengan    buah    dan  sayuran (Hernani dan Raharjo, 2006).
Genus Curcuma dan Boesenbergia yang termasuk  famili  Zingiberaceae  telah  lama dimanfaatkan  dalam  pengobatan  tradisional dan  dapat  dikembangkan  sebagai  antioksidan. Kurang  lebih  20  jenis  Curcuma,  seperti C. xanthorriza , C.  domestica , C.  zedoaria dan lainnya tumbuh di Indonesia (Afifah dkk., 2003). Beberapa jenis kurkuma telah diteliti mengandung  senyawa  kimia  yang  disebut sebagai kurkuminoid
(kurkumin 75%, demetoksikurkumin 15-20%
dan bisdemetoksikurkumin kurang lebih 3%). Kurkuminoid  merupakan  kelompok  senyawa fenolik  yang  mempunyai  sifat  antioksidan  dan antiradang  (Anonim,  2007).  Selain  kurkuminoid ditemukan  pula  kandungan  senyawa  fenolik lain,  seperti  flavonol  kuersetin,  kaempferol, mirisetin  dan  luteolin  dalam  genus  Curcuma (Hartati dkk., 2003; Andarwulan dkk., 2010). Panduratin  A  dalam  rimpang  Boesenbergia pandurata  merupakan  derivat  kalkon  yang mempunyai  efek  biologis,  seperti  antiinflamasi, analgetik,  antikanker  dan  antioksidan  (Yun et al. ,  2006 cit .  Geonadi,  2009).  Aktivitas antiradikal suatu ekstrak dapat dipengaruhi oleh kadar fenolik totalnya (Utami dkk., 2005).
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui korelasi antara aktivitas penangkap radikal dan kadar  fenolik  yang  terdapat  dalam  rimpang dengan  genus    Curcuma  ( C.  xanthorriza,  C. domestica,  C.  zedoaria )  dan    rimpang  temu kunci ( B. pandurata ).

## METODE PENELITIAN
Bahan :  ekstrak  etanol  rimpang C.  xanthorriza, C.  domestica,  C.  zedoaria ,  dan B.  pandurata yang diperoleh dari Fakultas Farmasi Universitas  Muhammadiyah  Surakarta,  DPPH (2,2-  diphenyl-1-picrylhydrazyl),  etanol p.a , etanol  teknis,  akuabidestilata,  vitamin  E,  asam galat, reagen Folin-Ciocalteau, Na 2 CO 3 , alumunium foil, lempeng KLT.

## Jalannya Penelitian
Penentuan kadar fenolik total Berdasarkan  Chun et  al .  (2003)  yang  telah dimodifikasi,  penentuan  kadar  total  senyawa fenolik ekstrak dengan metode Folin- Ciocalteau.  Dengan  menggunakan  asam  galat sebagai  sebagai  baku.  Nilai  yang  diperoleh merupakan  ekuivalensi  miligram  asam  galat tiap  gram  ekstrak  ( Gallic  Acid  Equivalent / GAE).

## Uji aktivitas antioksidan (metode DPPH)
Sejumlah  larutan  stok  sampel  ekstrak etanol rimpang C. xanthorriza, C. domestica, C. zedoaria,  B.  pandurata serta  vitamin  E  dengan lima  seri  konsentrasi,  ditempatkan  dalam  labu takar  5,0  mL.  Sampel  selanjutnya  ditambah dengan  0,7  mL  DPPH  0,4  mM  dan  ditambah etanol  hingga  tanda.  Campuran  tersebut divorteks  selama  30  detik  dan  diinkubasi selama 30 menit.
Absorbansi  sampel  diukur  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  (Simadzu)  terhadap blangko  yang  terdiri  dari  sejumlah  larutan  stok dalam etanol pada  maks 517,6 nm. Selain itu, dibandingkan  dengan  kontrol  yang  terdiri  dari 0,7 mL DPPH 0,4 mM dalam etanol. Dihitung % aktivitas  antiradikal.  Dibuat  kurva  regresi  linier antara konsentrasi melawan % aktivitas antiradikal. Didapatkan rumus regresi linier dan ditentukan  konsentrasi  sampel  pada  aktivitas 50%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak  yang  digunakan  sebagai  sample adalah  ekstrak  yang  diperoleh  dari  fakultas farmasi  Universitas  Muhammadiyah  Surakarta, berupa  ekstrak  kental  yang  diperoleh  dengan cara maserasi.
Gambar 1- Hasil Penetapan Kadar Fenolik Total

## Kadar fenolik total
Penetapan  kadar  fenolik  total  dapat menggunakan pereaksi Folin-Ciocalteu. Mekanisme  dari  metode  ini  berdasarkan kekuatan mereduksi dari gugus hidroksi fenolik. Semua senyawa fenolik termasuk fenol sederhana dapat bereaksi dengan reagen Folin Ciocalteu  (Huang et  al. ,  2005).  Adanya  inti aromatis  pada  senyawa  fenol  (gugus  hidroksi fenolik) dapat mereduksi fosfomolibdat fosfotungstat menjadi molybdenum yang berwarna  biru  (Sudjadi  dan  Rohman,  2004). Kadar  fenolik  total  empat  ekstrak  etanol  dari yang  tertinggi  adalah  temulawak  (95,76  mg/g), rimpang temu putih (35,39 mg/g) (Gambar 1).
Aktivitas penangkap radikal bebas
Aktivitas  antiradical  ditentukan  dari kemampuan  senyawa  yang  terdapat  dalam ekstrak  untuk  menurunkan  intensitas  warna ungu  radikal  DPPH  pada  panjang  gelombang maksimum  (Rohman  dan  Riyanto,  2006). Penurunan  intensitas  warna  ungu  DPPH  ini disebabkan  oleh  berkurangnya  kromofor  atau ikatan  rangkap  terkonjuggasi  pada  senyawa DPPH,  yang  disebabkan  oleh  adanya  ekstrak sebagai  penangkap  radikal  akan  mendonorkan atom H pada DPPH menjadi DPPH-H tereduksi yang  menjadi  warna  kuning  (Huang et  al. , 2005).
Diperoleh  aktivitas  penangkap  radikal bebas  berturut-turut  dari  IC50  yang  terkecil yaitu  Vitamin  E  (12,55  ±  2,53  µg/mL),  ekstrak kunyit (29,64 ± 0,83 µg/mL), ekstrak temulawak (58,45  ±  5,06  µg/mL),  ekstrak  temu  kunci (140,21  ±  8,35  µg/mL),  ekstrak  temu  putih (170, ± 78 3,03 µg/mL) (Gambar 2). Dari empat ekstrak  yang  diuji,  tidak  ada  ekstrak  yang mempunyai  potensi  aktivitas  antioksidan  yang lebih  kuat  disbanding  vitamin  E  karena  dari keempat  ekstrak  yang  diuji  tidak  ada  yang memiliki IC 50 lebih kecil dari vitamin E.
Gambar  2- Kunyit,  Temulawak,  Temu  Kunci,  dan  Temu Putih dibandingkan dengan vitamin E.

## Korelasi  antara  aktivitas  penangkap  radikal bebas dan kadar fenolik total
Dari  hasil  penelitian  menunjukkan aktivitas  penangkap  radikal  bebas  (IC 50 )  dan kadar  fenolik  total  (GAE)  dalam  ekstrak  kunyit (29,64 µg/mL; 179,71 mg/g), rimpang temulawak (58,45 µg/mL; 95,76 mg/g), rimpang temu  kunci  (140,21  µg/mL;  89,45  mg/g)  dan rimpang temu putih (170,78 µg/mL; 35,39  mg/g).  Semakin  tinggi  kadar  fenolik  total yang  terdapat  di  dalam  ekstrak  maka  semakin besar  pula  potensi  aktivitas  antioksidannya. Korelasi  kandungan  fenolik  dan  aktivitas antioksidan  yang  terdapat  dalam  rimpang diketahui  dari  koefisien  korelasi  (R 2 )  dari persamaan  regresi  linear  antara  aktivitas antioksidan dan kadar fenolik total.
Gambar 3- Grafik hubungan IC 50 dengan kadar Fenolik total
Aktivitas antioksidan tiap ekstrak berkolerasi  positif  dengan  kadar  fenolik  total dalam ekstrak (R 2 = 0,7956) (Gambar 3). Hal ini berarti  79,56  %  aktivitas  antioksidan  ekstrak etanol  empat  ekstrak  disumbangkan  oleh senyawa  fenolik.  Senyawa-senyawa  fenolik yang telah terbukti memiliki aktivitas penangkap radikal  dari  empat  ekstrak  etanol  yang  diteliti adalah senyawa kurkuminoid (kurkumin, demetoksikurkumin dan bisdemetoksi- kurkumin), xanthorizol dan panduratin A (Song, 2001 cit .  Achmad  dkk.  2007;  Yun et  al. ,  2006 cit . Geonadi dkk., 2009; Irawati, 2008). Aktivitas
antioksidan ekstrak yang diteliti 79,56% disumbangkan  oleh  senyawa  fenolik  yang dikandungnya. Sedangkan
selebihnya kemungkinan  dari  senyawa  lain  seperti  vitamin C  atau  betakaroten  (Vaya  dan  Aviram,  2001) dimana
senyawa tersebut dapat menyumbangkan proton
sehingga menstabilkan  radikal  bebas  dan  mempunyai aktivitas  penangkap  radikal  bebas.  Senyawa marker  yang  terdapat  pada  ekstrak  yang  diuji adalah  kurkuminoid,  tetapi  tidak  ditemukan pada ekstrak rimpang temu kunci ( B. pandurata ).  Kadar  fenolik  tertinggi  terdapat
pada  ekstrak  kunyit  ( C.  domestica )    dapat diindikasikan  pula  dengan  tingginya  kadar fenolik  maka  tinggi  pula  kadar  kurkuminoidnya sehingga  aktivitas  penangkap  radikal  bebas makin kuat.
Dari  hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa ekstrak etanol rimpang kunyit, temulawak,  temu  kunci  dan  temu  putih  terbukti mengandung senyawa yang mempunyai aktivitas  sebagai  penangkap  radikal  bebas. Semakin  tinggi  kadar  fenolik  total  maka aktivitas penangkap radikal bebas juga meningkat.

## KESIMPULAN
Empat  ekstrak  etanol  rimpang  yang  diuji memiliki aktivitas penangkap radikal (IC 50 ) yaitu
kunyit (29,64  µg/mL), temulawak (58,45 µg/mL), temu kunci (140,21  µg/mL), temu putih (170,78  µg/mL).  Dari    empat  ekstrak  yang  diuji aktivitas  antioksidannya  tidak  ada  yang  lebih kuat  dibandingkan  dengan  vitamin  E  (12,55 µg/mL).
Kadar  fenolik  total  (GAE) ekstrak etanol rimpang yang diteliti yaitu kunyit (179,71 mg/g), temulawak  (95,76  mg/g),  temu  kunci  (89,45 mg/g) dan temu putih (35,39 mg/g).
Terdapat  korelasi  positif  antara  aktivitas antioksidan  dan  kadar  fenolik  total  dalam ekstrak.  79,56  %  aktivitas  antioksidan  ekstrak etanol  empat  ekstrak  disumbangkan  oleh senyawa fenolik.

## DAFTAR PUSTAKA
Achmad,  S.  A.,  Hakim,  E.  H.,  Makmur,  L.,  Syah,  Y.M.,  Juliwaty,  L.  D.,  dan  Mujahidin,  D.,  2007, Tumbuh-tumbuhan Obat Indonesia , Jilid 2, Penerbit ITB, Bandung.
Afifah,  E.,  Tim  Lentera,  2003, Khasiat  dan  Manfaat  Temulawak  Rimpang  Penyembuh  Aneka Penyakit , Agromedia Pustaka, Tangerang.
Andarwulan, N., Batari, R., Sandrasari,  D.A., Bolling,  B.,  dan Wijaya, H., 2010,  Flavonoid content and antioxidant activity of vegetables from Indonesia, Food Chemistry , 121 , 1231 –1235.
Anonim, 2007, Temu Putih , Departemen Kesehatan RI, Jakarta.
Chun, O. K., Kim, D-O. And Lee, C. Y., 2003, Superoxide Radical Scavenging Activity of the Major Polyphenols in Fresh Plums, Journal of Agricultural and Food Chemistry , 51 , 8067-8072.
Geonadi,  F.  A.,  Fitria,  M.,  Ayu,  D.  P.,  dan  Sulistyorini  ,  E.,  2009, Temu  Kunci  (Boesenbergia pandurata) , (online), (http://ccrcfarmasiugm.wordpress.com/ensiklopedia-tanaman-anti- kanker/t/temu- kunci/), diakses pada 25 Agustus 2010.
Hartati,  M.S.,  Mubarika,  S.,  Bolhuis,  R.L.H.,  Nooter,  K.,  Oostrum,  R.G.,  Boersma,  A.M.H.,  dan Wahyuono,  S.,  2003,  Sitotoksisitas  rimpang  temu  mangga  (Curcuma Mangga Val. & V. Zijp.) dan  kunir  putih  (Curcuma  Zedoaria  I.)  terhadap  beberapa  sel  kanker  manusia  (in  vitro)  dengan metoda SRB, Berkala Ilmu Kedokteran , 35 , 4, 197-201.
Hernani dan Raharjo, M., 2006, Tanaman Berkhasiat Antioksidan , Penebar Swadaya, Jakarta.
Huang,  D.,  Ou,  B.,  and  Prior,  R.L.,  2005,  The  Chemistry  behind  Antioxidant  Capacity  Assays, Journal of Agricultural and Food Chemistry , 53 , 1841-1856.
Langseth,  L.,  1995, Oxidants,  Antioxidans,  and  Disease  Prevention ,  International  Life  Sciences Institutes (ILSI) Europe, Belgium.
Rohman, A. dan Riyanto, S., 2006, Aktivitas Antiradikal Bebas Ekstrak Kloroform Buah Mengkudu (Morinda citrifolia, L.) dan Fraksi-fraksinya, Artocarpus , 6 , 1, 39.
Utami, W., Dai, M., dan Sofiana Y. R.,2005,   Aktivitas Penangkap Radikal Dengan Metode DPPH Serta  penetapan  Kandungan  Fenol  dan  Flavonoid  Dalam  Ekstrak  Kloroform,  Ekstrak  Etil  Asetat, Ekstrak Etanol Daun Dewandaru (Eugenia uniflora L.), Pharmacon , 6 , 5-9.
Vaya,  J.,  and  Aviram,  M.,  2001,  Nutritional  Antioxidants:  Mechanisms  of  Action,  Analyses  of Activities and Medical Applications, Curr. Med. Chem.-Imm, Endoc. & Metab. Agents , 1, 1.