Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 21 September 2020 :: Accepted: 15 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020

## EFEK EKSTRAK DAUN GAMBIR ( UncariaGambirRoxb) TERHADAP TINGKAT STRESS OKSIDATIF DAN EKSPRESI Brain Derived Neurothropic Factor(BDNF)

## PADA HIPOKAMPUS MENCIT BETINA MODEL PENUAANYANG DIINDUKSI D-GALAKTOSA
JulendaIrianti Sebayang, 1 Mutiara Indah Sari, 2 Muhammad Ichwan 3

## MAGISTER PROGRAM BIOMEDIK, FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA Jl. DOKTER MANSYUR  NO. 5, PADANG BULAN, MEDAN SUMATERA UTARA
e-mail :julendasby_kampus@yahoo.com
DOI : https://doi.org/10.35451/jfm.v3i1.475

## Abstract
Prevalence of premature aging that causes in decreased memory throughout the world of individuals aged 60 years and over is estimated at 5-7%. According to WHO this is caused by progressive dysfunction and neuronal cell death and is related to free radical formation. This study was design to evaluate the effect of gambir leaf extract ( uncariaGambirRocb ) on MDA and expression BDNF in the hippocampus of aging female mice that are induced in D-Galactose. In this study that method is used a post test only control group, the researcher design with 4 groups being treated ( group1 : inject D-Galactose 150 mg/kgbb/ip and sondeaquabidest  0,1%,  group  2  :  sondecathechins  100  mg  and  inject  D- Galactose  150mg/kgbb,  group  3  ;  sondecathechins  200  mg  and  inject  D- Galactose 150  mg/kgbb,  group  4  :  sondecathechine  400  mg  and  inject D- Galactose150  mg/kgbb)  with  the  inclusion  criteria  :  all  female  mice (MusMusculus L) were 10-12 weeks old and had not been studied. MDA is examined through blood serum with spektrofotometer. Isolation  RNA  with  Kit  Tiangen  Kat  DP419  and  BDNF  expression  from  the hippocampus by RT PCR Increased level of MDA showed increased stress oksidatif.In the mean weight gain at the beginning and end of the study, there were significant differences between the control group and the treatment group ( p=0,0111). P value were not significant (p=0,8948) at Malondialdehide (MDA) level for the control and treatment groups, and found p value is significant in Brain Derived Neurothropic Factor (BDNF) expression (p=0,0490).
The dose of 200 mg/kgbb is determine as the most effective dose of gambier beverage to improve the memory of female mice.
Keywords : Cathechins, Stress oksidatif, BDNF, D-Galactose
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 21 September 2020 :: Accepted: 15 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020

## 1. PENDAHULUAN

## LATAR BELAKANG
Kemajuan dalam bidang pengobatan dan pelayanan Kesehatan berkontribus iuntuk meningkatkan kualitas hidup pada populasi penduduk.Jumlah penduduk lanjut usia juga meningkat termasuk di Indonesia. Persentasependuduklanjutusia di Indonesia (> 60 tahun) padatahun2018adalah  9,27%.  Jumlah ini diperkirakan  20%  dari populasi penduduk pada tahun 2025 (Silvi liyana M,  et  al.  2018).Meningkatnya jumlah lanjut usia menyebabkan timbulnya penyakit  yang  berkaitan dengan penuaan seperti masalah gangguan jantung dan gangguan kognitif (Leritz E. C, et al. 2011), Prevalensi penuaan dini yang  mengakibatkan penurunan daya ingat di seluruh dunia terhadap individu yang  berumur  60  tahun ke atas diperkirakan 5-7%. Menurut WHO hal ini disebabkan
oleh disfungsi yang progresif dan kematian sel sel  neuron dan berhubungan
pembentukan radikalbebas( Alves J et al,.2013).
Menurut teori penuaan radikal bebas ,akumulasi radikal bebas  di  dalam sel menyebabkan penuaan dan kerusakan sel (HekimiS,et  al,  2014).  Flavonoid adalah bahan alami  yang  memiliki aktivitas antioksidan yang kuat (N P, D DA,  R  C.S,2016).  Konsumsi makanan kaya  flavonoid seperti  herbal,  buah buahan,  dan sayu rsayuran sangat disarankan untuk menghambat  proses penuaan (Spencer JPE, 2016).
Asupanmakanan  yang  mengandung flavonoid  berkolerasi dengan kinerja kognitivlanju usia yang lebih baik (Kent K,et  al.  2016). Bukan hanya sebagai antioksi dan dalam menghambat radikal bebas tetapi juga mengganggu jalur sel
dan moleculer dalam perlindungan saraf.
Flavonoid dapatmeningkatkanplastisitassarafdan proses lain dalam fungsi kognitif melalu imodulasi ekspresi  gen  ataufosforilasi protein (Ayaz  M,  et  al,2019).  Modulasi ini disebabkan oleh disfungsi progresif dan kematian selsarafdanselterkait yang berhubungan dengan
pembentukan radikalbebas (Alves  J,  et al, 2013 ).
Penuaan fisiologis atau bahkan akibat  stress  oksidatif mengakibatkan gangguan respon seluler di hipokampus, yang  ditandai dengan penurunan viabilitas,  peningkatan mortalitas dan pemendekanakson neuron (Rosenzweig ES, et al, 2003).
MDA  sebaga ipenanda  stress oksidatif
merupakan
senyawa dehaldehyde dan produk akhir dari lipid peroksi dadalam tubuh yang dihasilkan dari radikal bebas dan merupakan produk sampingan dari biosintesis prostaglandin  dan produk akhir dari membrane lipid oksidase (Rahman T, et al,2012). Sehingga MDA dapat digunakan sebagai indeks pengukuran aktivitas stress oksidatif (Ayala A, et al, 2014). Dalam proses penuaan, ekspresi BDNF berubah, sehingga terjadi penurunan regulasi BDNF, yang mengindikasikan penurunan tingkat ekspersi  BDNF  di  otakdandarah.
Rendahnyakadar BDNF dapat menyebabkan penurunan konduktivitas saraf (Lima GiacobboB,et al,2018). Penelitian tentang penggunaan sumberan tioksidan alami,  dapat
menghambat efek penuaan dan penyakit degenerative ( rahmawati N, et al,  2011).  Salah  satunya ekstrak daun gambir  yang  mengandung katekin sebaga ikomponenutama dan beberapa komponen lainnya (Farmasi J, 2006).
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 21 September 2020 :: Accepted: 15 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020

## 1. METODE

## Penelitian ini menggunakan metode
post test only control group. Dibagi menjadi 4 kelompok ( mencit betina  : kelompok  kontrol :  injeksi D-Galaktosa  150  mg/kgbb/ip  dan sonde  aquabidest  0,1%, kelompok 1 (K1) : sonde katekin 100 mg dan injeksi  D-Galaktosa  150 mg/kgbb, kelompok 2 (K2) sonde katekin 200 mg  dan  injeksi  D-Galaktosa  150 mg/kgbb, kelompok 3 (K4) : sonde katekin  400  mg  dan  injeksi  D- Galaktosa 150 mg/kgbb).
Sampel dalam penelitian ini menggunakan kriteria inklusi semua mencit  betina  ( mus  musculus  L ), usia  10-12  minggu  dan  belum pernah dipelajari.
Penelitian  ini  disetujui  oleh  Komite Etik  MIPA    Universitas  Sumatera Utara.
- Pengukuran MDA Pengukuran  MDA  diambil  dari sampel  darah  mencit  betina dengan menggunakan SPEKTOFOTOMETRI dan Malondialdehyde  (MDA) Assay
Kit (TBA metthod).
- Isolasi RNA
Menggunakan  Kit  Tiangen  Cat DP419
- Pengukuran Ekspresi BDNF Ekspresi BDNF pada hipokampus
penuaan  mencit  betina  diukur menggunakan  RT  PCR  dengan
Kit RT PCR one step (QIAGEN)
- Statistik Analisis
Mean,  Standard  Deviasi  (SD), presentasi ditabulasikan. Ditabulasikan dengan
parametrik  test  dan  data  di  tes untuk  normaliti  dan  homogen menggunakan  ANOVA  Test  (  p- value ≥  0,05  )  sedangkan hipotesis  menggunakan Post-
Hoc Testuntuk uji statistik 5% (
p-value  =  0,05  )  jika  p ≤  0,05 berarti  signifikan.  Data  tidak terdistribusi normal menggunakan test non parametrik multivariate tes Krusskall Walls.

## 2. HASIL DAN PEMBAHASAN Karateristik sampel
Penelitian  ini  menggunakan  24 mencit  betina  dengan  umur 10=12  minggu,  dan  di  bagi dalam 4 kelompok :
● Control (C)  : mencit betina di injeksi D-Galaktosa dengan dosis 150 mg/kgbb, sonde aquabidest 0,1%, makanan
● Kelompok 1 ( K1) :
Mencit betina diinjeksi D-Galaktosa dengan dosis 150 mg/kgbb, sonde ekstrak daun gambir 100 mg/kgbb, makanan
● Kelompok 2 (K2) : Mencit betina diinjeksi D-Galaktosa dengan dosis 150 mg/kgbb, sonde ekstrak daun gambir 200 mg/kgbb, makanan ● Kelompok 3(K4) : Mencit betina diinjeksi D- galaktosadengan dosis 150 mg/kgbb, sonde ekstrak daun gambir 400 mg/kgbb, makanan.
Pengukuran sampel menggunakan rumus Federer (t-1) (n-1) > 15 Uji Normalitas untuk BB mencit Betina (g) Awalpenel itian Akhirpeneli tian Perbe daan Δ penam bahan BB
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 21 September 2020 :: Accepted: 15 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020
1.Kontrol C●Nilai median (min- max) 27  (26-30) ●Nilai Mean (±SD) 27,20±1,64 ● nilaiP* 0,0468 2.K100 (K1) ●Nilai median (min-max) 27(25-28) ●Nilai Mean(±SD) 26,20±1,30 ● nilai p* >0,10 3.K200 (K2) ●Nilai median (min-max) 27(25-28) ●Nilai mean (±SD) 26,60±1,51 ● nilai p* >0,10 4.K400 (K4) ●Nilai median (min-max) 28(25-28) ●Nilai mean (±SD) 26,60±1,14
● nilai p*
>0,10 33(31-35) 33,20±1,924 >0,10 28 (25-31) 27,60±2,302 >0,10 29(25-30) 28,00±2,345 >0.10 28(28-29) 28,20±0,44 0,0005 6 (5-7) 6±1 >0,10 1 (0-3) 1,40± 1,14 >0,10 2(0-2) 1,40± 0,89 0,046 1(0-4) 1,6± 1,51 >0,10 Uji normalitas menggunakan Kolmogorov-Smirnov untuk berat
badan,  dari  semua kelompok sebelum diberikan  perlakuan,  ditemukan  1 kelompok terdistribusi  tidak  normal dengan  p  value=  0,0468.  dan  diakhir penelitian ditemukan  data terdistribusi tidak normal pada kelompok K4 dengan p-value = 0,0005.
Perbedaan  berat  badan  sebelum  dan sesudah  perlakuan,  dengan  data terdistribusi
tidak normal pada
kelompok K2 dengan p-value = 0,046.
Pada penambahan berat badan menggunakan chart, dengan menggunakan non parametric multivariate  Kruskal  Walls  diikuti dengan tes Dunn, ditemukan perbedaan berat  badan  yang  signifikan  dari kelompok kontrol (p<0,05) dibandingkan  dengan kelompok yang diberikan perlakuan.

## Penanambahan berat badan mencit betina sesudah perlakuan

## Tabel 1.Penambahan berat badan
mencit betina sesudah perlakuan Kelompok Penambahan BB rata rata P* Kontrol K 100 (K1) K 200 (K2) K 400 (K4) 6±1 1,4±1,14 1,4±0,8944 1,6±1,517 0,0111
*Non-parametric Kruskall Wallis Test
Mean penambahan berat badan  mencit betina dari awal penelitian sampai akhir penelitian,  peningkatan  penambahan berat  badan  pada kelompok kontrol lebih tinggi dari pada semua kelompok yang diberi perlakuan dengan
pemberian sonde ekstrak daun gambir. Tampak  perbedaan  yang  signifikan antara kelompok kontrol dan kelompok yang diberikan perlakuan (p = 0,0111 ).
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 21 September 2020 :: Accepted: 15 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020

## Hasil  peningkatan  MDA  setelah perlakuan
Tabel 2.Peningkatan MDA setelahperlakuan Kelompok Kadar MDA (nmol/ml) *P Kontrol K 100 (K1) K 200 (K2) K 400 (K4) 13,68±5,581 15,45±8,082 13,15±4,420 15,15±2,738 0,8948 *one way Annova Hasil  MDA  dari  semua  perlakuan menggunakan  Shapiro-Wilk  normality test, ditemukan data teristribusi normal. Dilanjutkan dengan multivariate analysis  dari  tes  Anova  untuk  melihat perbedaan diantara kelompok. Hasil  Δ  CT  dari  mencit  betina sesudah perlakuan Kelompok perlakuan ΔCT BDNF Mean±SD *P Kontrol K 100 (K1) K 200 (K2) K 400 (K4) 4,45±1,42 8,55±4,26 5,51±0,94 6,61±1,03 0,0490
Analisa  ekspresi  BDNF  dari  hasil  ΔCT untuk  semua kelompok yang  diberikan perlakuan,  menggunakan  Shapiro-Wilk normality  tes.  Hasil  menunjukkan  data terdistribusi  normal.  Untuk  melihat perbedaan
antara kelompok ,
menggunakan  Anova  multivariate  test, ditemukan p value yang tidak signifikan (p = 0,0490)
Hasil dari ekspresi BDNF, menggunakan rumus Livak.
Ekspresi  BDNF  secara  grafik,  dengan dosis  200  mg/kgbb  merupakan  dosis ekstrak daun gambir yang paling efektif untuk meningkatkan daya ingat mencit.

## 3.KESIMPULAN
Ditemukan  peningkatan penambahan berat badan mencit betina pada masing masing kelompok
perlakuan ke kelompok kontrol tetapi tidak signifikan. Hasil MDA menurun pada kelompok K2 dibanding kelompok kontrol tetapi tidak signifikan.
Peningkatan  ekspresi  BDNF    pada kelompok K2  dibandingkan dengan kelompok lain dalam kontrol.
Pemberian ekstrak daun gambir dengan dosis  200mg/kgbb,  merupakan  dosis yang paling efektif untuk meningkatkan daya ingat mencit betina.

## DAFTARPUSTAKA
Silviliyana M, Ika M, Rida A, Ramadani KD, Sulistiyowati R, Annisa L, et al.
StatistikPendudukLanjutUsia 2018. Susilo D, Harahap IE, SinangR,editors. Jakarta :BadanPusatStatistik; 2018.4-15p. Leritz.E.C, R.E. G, I K, Rudolph.J.L.,Milberg.W.P. Cardiovaskular Disease Risk FaktorAnd Cognition in the elderly. 2011;5(5):407-12. Alves, J. et al (2013) ‘World Journal of Clinical  Cases  ©  2013’,1(8),  pp. 233-242. doi: 10.12998/wjcc.vl.i8.233. Hekimi S, Lapointe J, Wen Y. Taking a ”good” look  at free  radicals in the aging  process.  2014;21(10):569- 76.
N  P.,.  D  DA,R  C.  S.  Flavonoids  :  an overview. 2016; Spencer  JPE.  The  impact  of  fruit flavonoids on memory and cognition  The  impact  of  fruit flavonoidson memory and cognition. 2016;(October 2010). Kent  K,  Roodenrys  S,  Charlton  KE, Richards  R,  Morgan  O,  GilbertH. Dietary  Flavonoid
Intake  And Cognitive  Perfomance  In  Older Adults  With  Alzheimer’  S  Type Dementia.
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 3 No.1 Edisi Mei-Oktober 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 21 September 2020 :: Accepted: 15 OKtober 2020 :: Published: 31 Oktober 2020
Ayaz  M,  Sadiq  A,  Junaid  M,  Ullah  F,
Ovais M, Ullah I, et al. Flavonoids as  Prospective  Neuroprotectans and Their Therapeutic Propensity in Aging  Associated  Neurological
Disorders. 2019;11(June). Alves  J,Magalhấes  R,  Marchado  Á, Gonçalves ÓF, Sampaio A, Petrosyan A, et al. World Journal of Clinical Cases © 2013. 2013;1(8):233-42. Rosenzweig  ES,  BarnesCA.  Impact  of aging  on  hippocampal  function: plasticity,  network  dynamics,  and cognition.  Vol.  69.  2003.  143-179 p. Rahman T, Hosen I, Islam MMT, Shekar HU.  Oxidative  stress  and  human health.2012;2012(November):997
-1019. Ayala  A,  Muñoz  MF,  Argüelles  S.  Lipid Peroxidation : Production, Metabolism, and Signaling Mechanisms  of  Malondialdehyde and 4-Hydroxy-2-Nonenal. 2014;(November). Lima Giacobbo B, Doordurin J, Klein HC, Dierckx  RAJO,  Bromberg  E,  de Vries EFJ. Brain-Derived Neurothropic  Factor  in  Brain Disorders: Focus on Neuroinflammation. Mol Neurobiol. 2018; Rahmawati  N,  Bakhtiar  A,  Putra  DP. Optimasi  metoda  isolasi  katekin dari gambir untuk sediaan farmasi dan senyawa marker. 2011;16(2):171-80. Farmasi J, Matematika F, Ilmu D, Alam
P,  Udayana  U,  Unud-jimbaran  JK. Pengaruh  Dosis  Minuman  gambir Terhadap  Peningkatan  Daya  Ingat Mencit Galur. 2006;