## ANALISIS PERBEDAAN KADAR KAFEIN PADA KOPI BUBUK HITAM DAN KOPI BUBUK PUTIH INSTAN SECARA SPEKTROFOTOMETRI UV-Vis
Nur Patria Tjahjani 1* , Afra Chairunnisa 2 , Hana Handayani 3 1*,2,3 Prodi DIII Anafarma  Akademi Farmasi 17 Agustus 1945 Semarang Email : 1* nurpatriacahyani@gmail.com

## ABSTRAK
Kopi terkenal akan kandungan kafeinnya yang tinggi, dengan peranan  utama kafein di dalam tubuh adalah meningkatkan kerja psikomotor sehingga tubuh tetap terjaga dan memberikan efek fisiologis berupa peningkatan energi dengan batas konsumsi kopi tidak lebih dari 3-4 cangkir kopi sehari.  Kafein  merupakan  jenis  alkaloid  ksantin  yang  mempunyai  dua  cincin  karbon  dengan empat atom nitrogen dan memiliki rasa yang pahit. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kadar kafein pada kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan, menganalisis perbedaannya dan untuk mengetahui kadar kafein secara teoritis dalam satu cangkir kopi. Metode yang digunakan untuk analisis kafein secara kualitatif dengan reaksi warna dan untuk analisis secara kuantitatif dengan  menggunakan  Spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  273  nm,  percobaan dilakukan  sebanyak  tiga  kali  replikasi.  Hasil  penelitian  kadar  kafein  pada  sampel  kopi  bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan secara kuantitatif berturut-turut adalah : H1 4,8 mg; H2 3,65 mg; H3 4,85 mg; H4 3,95 mg; H5 3,85 mg; P1 9,85 mg; P2 8,8 mg; P3 9,6 mg; P4 7,4 mg; P5 6,45 mg. Hasil uji t menunjukkan perbedaan bermakna pada kadar kafein kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih dengan nilai p = 0,00. Menurut  Farmakope  Indonesia (1995),  Jika  ditinjau secara  teoritis dalam satu kali konsumsi/sachet kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan masih dalam batas  wajar  atau  tidak  melebihi  dosis lazimnya, yaitu 300-600 mg.
Kata kunci: Kopi, kafein, spektrofotometri UV-Vis

## ABSTRACT
Coffee is famous for its high caffeine content, with the main role of caffeine in the body is to improve psychomotor work so that the body stays awake and provides a physiological effect in the form of increased energy with a limit on coffee consumption of no more than 3-4 cups of coffee a day. Caffeine is a type of xanthine alkaloid that has two carbon rings with four nitrogen atoms and has a bitter taste. This study aims to determine the caffeine levels in black ground coffee and white ground coffee, analyze the differences and to find out the theoretical caffeine levels in one cup  of  coffee.  The  method  used  for  qualitative  analysis  using  UV-  Vis  Spectrophotometer  at wavelength of 273 nm, the experiment was carried out three times the replication. The results of the study of caffeine content in black coffee powder samples and instant white coffee powder in a row were : H1 4,8mg: H2 3,65 mg; H3 4,85 mg; H4 3,95 mg; H5 3,85 mg; P1 9,85 mg; P2 8,8 mg; P3 9,6 mg; P4 7,4 mg; P5 6,45 mg. T tests results showed significant differences in caffeine levels of black ground coffee and white ground coffee with a value of p=0,00. According to the Indonesian Pharmacopoeia (1995), if it is theoretically reviewed in one consumption / sachet of black powdered coffee and instant white powdered coffee is still within reasonable limits or does not exceed the usual dose, which is 300 -600 mg.
Keywords : Coffee, caffeine, UV-Vis Spectrophotometry

## Cendekia Journal of Pharmacy
STIKES Cendekia Utama Kudus
http://cjp.jurnal.stikescendekiautamakudus.ac.id

## LATAR BELAKANG
Kopi (Coffea sp) telah lama dikenal oleh masyarakat sejak berabad-abad silam, kopi dikenal sebagai komoditas bahan minuman yang paling akrab dengan masyarakat segala lapisan. Kopi dapat dihidangkan menjadi minuman yang lezat rasanya dalam berbagai suasana.  Aromanya  yang  spesifik  menggugah  selera  untuk  meminumnya  sebagai penyegar badan dan pikiran. Disamping rasa dan aromanya yang menarik, kopi juga dapat menurunkan  risiko  terkena  penyakit  kanker,  diabetes,  batu  empedu,  dan  berbagai penyakit kardiovaskuler (Budiman, 2012).
Kebutuhan  masyarakat  terhadap  kopi  akan  terus  meningkat  sejalan  dengan kenaikan jumlah penduduk, sehingga peluang pasarnya tetap prospektif sepanjang masa (Cahyono, 2011). Kopi terkenal akan kandungan kafeinnya yang tinggi. Kafein sendiri merupakan  senyawa hasil  metabolisme  sekunder golongan  alkaloid  dari  tanaman  kopi dan memiliki rasa yang pahit. Berbagai efek kesehatan dari kopi pada umumnya terkait dengan aktivitas kafein  di dalam tubuh. Peranan  utama kafein di dalam tubuh adalah meningkatkan  kerja  psikomotor  sehingga  tubuh  tetap  terjaga  dan  memberikan  efek fisiologis berupa peningkatan energi. Kafein tidak hanya dapat ditemukan pada tanaman kopi, tetapi juga terdapat pada daun teh dan biji cokelat (Netherlands Nutrition Centre, 2013).
Batas aman konsumsi kafein yang masuk ke dalam tubuh  perharinya adalah 100- 150 mg. Dengan jumlah ini, tubuh sudah mengalami peningkatan aktivitas yang cukup untuk  membuatnya  tetap  terjaga  (Budiman,  2012).  Dalam  secangkir  kopi  biasanya mengandung 50 mg kafein, sehingga dianjurkan minum kopi tidak lebih dari 3 cangkir kopi sehari (Tjay dan Rahardja, 2015).
Kopi bubuk merupakan salah satu kopi yang banyak menjadi pilihan masyarakat, baik  yang  lanjut  usia  maupun yang berusia muda lebih  memilih  kopi  bubuk karena rasanya  yang  khas. Apabila ada  kopi  yang  mengandung  kadar  kafein  yang tinggi perlu  dilakukan  dekafeinisasi  untuk  menekan  aktivitas  kafein  di  dalam  tubuh (Fatoni, 2015).
Kopi bubuk putih  menggunakan  jenis  biji  kopi  yang  sama  dengan  kopi  hitam yang berasal dari biji kopi Robusta  atau  biji  kopi  Arabika,  yang  membedakan adalah proses dan teknologiny. Kopi bubuk putih yang dikenal dengan “white koffie” diproduksi dengan  mesin  berteknologi cold  drying dari  Jepang  yaitu  melalui proses  pembekuan atau    pendinginan    hingga    -40    derajat    Celcius    yang    mampu  menghilangkan  asam gastrik  penyebab  nyeri  lambung  hingga  80%  namun  kafein  masih  tetap  bisa dipertahankan 100% (Anonim, 2012).
Penetapan    kadar    kafein    dalam    beberapa    produk    minuman  telah    banyak dilakukan  oleh  peneliti  sebelumnya  dengan  berbagai  metode,  seperti Maramis,  dkk (Maramis, Citraningtyas and Wehantouw, 2013) menganalisis kafein  dalam kopi bubuk dengan menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis dengan hasil penelitian menunjukkan bahwa 6 sampel kopi bubuk yang ada di kota Manado mengandung kafein dengan jumlah maksimum kopi bubuk yang dapat dikonsumsi masyarakat per hari berdasarkan SNI yaitu 15,73 g-10,86 g. Fatoni (2015) menganalisis secara kualitatif dan kuantitatif kadar kafein pada  kopi  bubuk  lokal  yang  beredar  di  kota  Palembang  menggunakan  metode spektrofotometri UV-Vis dengan hasil penelitian kadar kafein dari 10 sampel merek kopi bubuk lokal masih dalam batas wajar atau tidak melebihi dosis lazimnya, yaitu 300-600 mg. Arwangga, Asih dan Sudiarta (2016), menganalisis kandungan kafein pada kopi di desa  Sesaot  Narmada  menggunakan  metode  spektrofotometri  UV-Vis  dengan  hasil penelitian kadar kafein dalam kopi mentah adalah sebesar 1,28±0,82 % dengan kadar air
sebesar 3 %, kopi murni sebesar 1,63±0,13 % dengan kadar air sebesar 1 %, dan kopi campuran sebesar 0,87±0,01 % dengan kadar air sebesar 1 %. Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis perbedaan kadar kafein pada kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan serta untuk mengetahui kadar kafein dalam satu sachet kopi bubuk hitam dan kopi bubuk  putih  ditinjau  dari  Farmakope  Indonesia  edisi  IV  (Departemen  Kesehatan  RI, 1995).

## BAHAN DAN METODE PENELITIAN
Jenis penelitian yang dipakai dalam penelitian  ini adalah deskriptif analitik. Obyek penelitian adalah Kopi bubuk hitam instan merk KA bubuk putih instan merk LW yang dijual di Pasar Gunungpati Semarang. Variabel bebas dalam penelitian ini adalah kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan. Sedangkan variabel terikatnya adalah kadar kafein.

## Bahan dan alat
Bahan yang digunakan pada penelitian adalah sampel kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan, baku standar kafein, kloroform, aquadest, natrium karbonat, KClO 3 , HCl, ammonia encer, CaCl 2 , indicator Brom Timol Blue (BTB), NaOH 0,1 N, serbuk Murexide,  air  panas.  Sedangkan  alat  yang  digunakan  adalah  seperangkat  alat  gelas, seperangkat alat spektrofotometer UV-Vis Single Beam Shimadzu , neraca analitik, labu takar 50,0 ml dan 100,0 ml, pipet volume 2,0 ml dan 5,0 ml, seperangkat alat titrasi, kertas saring, cawan penguap, penangas air.
Metode Penelitian
1. Preparasi sampel
Sampel dalam penelitian ini adalah kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan yang dijual di pasar Gunungpati Semarang, yaitu 1 merk kopi bubuk hitam instan, dan 1 merk kopi bubuk putih instan. Masing-masing merk diambil 5 sachet dengan nomor batch yang  sama  dan  dilakukan  replikasi  sebanyak  3  kali.  Penetapan  kadar  sesuai prosedur yaitu dengan spektrofotometri UV-Vis.
a. Uji Kualitatif Kafein
Analisis kimia kualitatif pada kafein pada kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan dapat dilakukan dengan reaksi warna.
Larutan sampel  +  HCl + KClO 3 NH 4 OH               terjadi warna lembayung.
Larutan Sampel + CaCl 2 + BTB + NaOH 0,1 N                 Biru terang. Larutan Sampel + Murexide Serbuk                Violet
b. Pembuatan Larutan Induk Kafein Ditimbang seksama 50  mg kafein  secara seksama,  dimasukkan  ke  dalam  labu takar  250  ml,  dilarutkan  dengan  aquades panas lalu  dicukupkan  sampai  tanda batas    dengan  aquades    dan    dikocok    homogen,    sehingga   diperoleh    larutan dengan  konsentrasi  200 ppm.
c. Penentuan Panjang Gelombang
Penentuan  panjang  gelombang  serapan  maksimum  dilakukan  dengan  cara memipet  5,0 ml  larutan  induk ke  dalam  labu  takar  100 ml, lalu  dilarutkan dengan  aquades  sampai  tanda  batas,  sehingga  diperoleh  larutan  baku  10  ppm (Fatoni,  2015).  Diukur  serapannya  pada  panjang  gelombang  maksimum  UV kafein pada 273 nm (Clarke, 1971).
d. Penentuan Kurva Kalibrasi
Kurva kalibrasi  dilakukan  dengan  membuat  serangkaian larutan standar dengan konsentrasi  yang  dihitung  dari  absorbansi  larutan  induk  kafein  dengan  range absorbansi  antara  0,2  sampai  0,8  dengan  cara    dipipet    masing-masing  larutan induk ke dalam  labu  takar 100  ml,  lalu  dilarutkan  dengan aquades  sampai tanda  batas.  Kemudian  diukur  serapannya  pada  panjang  gelombang serapan maksimum dan sebagai blangko digunakan aquades.
e. Prosedur Penetapan Kadar Kafein
Sejumlah  2  gram  sampel  kopi  dimasukkan  ke  dalam  labu takar  dan  dilarutkan dengan  aquades  mendidih  sebanyak  100  ml,  disaring,  lalu  filtrat  ditambah 2  gram Na 2 CO 3 ,  lalu  dimasukkan  ke dalam  corong  pisah,  dan  diekstraksi dengan  kloroform  berturut–turut 25  ml sebanyak  tiga  kali, filtrat  ditampung ke  dalam    erlenmeyer.  Fase  kloroform  diuapkan  dengan    penangas  air  atau waterbath  hingga  didapat    ekstrak    kafein.    Ekstrak  kafein    yang    dihasilkan selanjutnya  dimasukan  ke  dalam  labu  takar  100  ml  dan dilarutkan  dengan aquades  sampai  tanda  batas.  Kemudian  dilakukan  pengenceran dengan  cara dipipet  5,0  ml  larutan  tersebut ke  dalam  labu takar  50  ml untuk kopi bubuk hitam. Sedangkan untuk kopi putih dilakukan pengenceran dengan cara dipipet 2,0 ml larutan tersebut ke dalam labu takar 50 ml  dan  dilarutkan dengan aquades sampai  tanda  batas  (Fatoni,  2015).  Kemudian  ditentukan  kadarnya  dengan spektrofotometri UV-Vis pada panjang gelombang 273 nm.
f. Perhitungan Kadar Kafein Larutan    sampel    akan    diukur    serapannya  pada    panjang  gelombang  serapan maksimum,  kemudian  serapan  dicatat.  Konsentrasi  kafein  akan  ditentukan berdasarkan persamaan regresi dari kurva kalibrasi standar.
Kadar kafein dalam sampel dapat dihitung dengan cara sebagai berikut :
Kadar kafein (mg/g)
= Konsentrasi (mg/L) x Volume Pengenceran (L)xFP Berat Sampel (g) Keterangan :
Konsentrasi (mg/L)  : dari hasil regresi linier (y = bx+a)
FP : Faktor Pengenceran
Untuk  mengetahui  adanya perbedaan  kadar  kafein  pada  kopi  bubuk  hitam  dan kopi bubuk putih instan, dilakukan analisis menggunakan statistik terhadap hasil penetapan kadar tersebut.
2. Analisis Data
Setelah data kadar kafein dari kopi bubuk hitam instan dan kopi bubuk putih instan terkumpul, data hasil penelitian diolah dan disajikan dalam bentuk grafik dan tabel. Untuk mengetahui normalitas data dilakukan uji normalitas menggunakan Saphiro Wilk,  kemudian  dilanjutkan  dengan  uji  beda  Paired  T. Nilai  signifikasi  pada penelitian  ini  adalah  jika  variabel  yang  dianalisis  memiliki  nilai  p<0,05,  semua analisis statistik dilakukan dengan program komputer SPSS 16.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Analisis Data
Data kadar kafein pada kopi bubuk hitam menunjukkan hasil uji normalitas dengan nilai  signifikansi  0,291>0,05  maka  dapat  disimpulkan  bahwa  data  terdistribusi normal. Kadar kafein pada kopi bubuk putih instan menunjukkan hasil uji normalitas
dengan nilai signifikansi 0,177>0,05 maka dapat disimpulkan bahwa data terdistribusi normal, selanjutnya dilakukan uji beda T dengan nilai sig (2-tailed) 0,000<0,05 maka dapat disimpulkan adanya perbedaan bermakna pada kadar kafein dalam kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan yang dijual di pasar Gunungpati Semarang.
2. Hasil Penelitian
a. Deskripsi Sampel
Pada penelitian ini menggunakan sampel kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih  instan  yang  dijual  di  pasar  Gunungpati  Semarang.  Organoleptis  kedua sampel dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Organoleptis Sampel Kopi Bubuk Hitam Instan Kopi Bubuk Putih Instan Kode H P Bentuk Serbuk Serbuk Warna Hitam Coklat Rasa Manis Manis Aroma Khas kopi Khas kopi Berat/Sachet 31 g 20
b. Uji Kualitatif Kafein dengan reaksi Warna
Uji  kualitatif  terhadap  kafein  dilakukan  untuk  mengetahui  kebenaran sampel dengan menggunakan reaksi  warna. Hasil  pengamatan terhadap sampel dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel 2. Hasil Uji Kualitatif Kafein
No Reaksi Kopi Bubuk Hitam Instan Kopi Bubuk Putih Instan 1 Larutan  sampel    +    HCl  +
KClO 3
NH 4 OH  Terjadi warna lembayung.
2 Larutan  Sampel  +  CaCl 2 +
BTB + NaOH 0,1 N Biru terang
3 Larutan Sampel + Murexide Serbuk                Violet
3.   Penetapan  Kadar  Kafein  pada  sampel  kopi  bubuk  hitam  dan  kopi  bubuk  putih instan.
a. Perhitungan Penimbangan Standar Kafein 200 ppm
Mg = Volume pembuatan  x ppm 1000 =    250      x 200 1000
= 50,0 mg
b. Data Penimbangan Standar Kafein
Tabel 3. Data Penimbangan Standar Kafein W+Z (mg) W+S (mg) Berat Zat (mg) 371,3 321,4 49,9 c. Koreksi Kadar ppm  =           1000 x mg penimbangan Volume pembuatan =            1000 x 49,9 250 = 199,6 ppm Deret Baku A  =     0,2        x 199,6  = 18,95 ppm
2,106
B  =     0,8        x 199,6  = 75,82 ppm 2,106
Tabel 4. Deret Standart 5 ppm, 8 ppm, 11 ppm, 14 ppm, 17 ppm
No. Konsentrasi Perhitungan Koreksi Kadar 1. 5 ppm ad 100 ml V1 x C1 = V2 x C2 100 x 5 = V2 x 199,6 V2  = 2,50 ml V1 x C1 = V2 x C2 100xC1 = 2,50 x 199,6 C1 =  4,990 ppm 2. 8 ppm ad 100 ml V1 x C1 = V2 x C2 100 x 8 = V2 x 199,6 V2  = 4,00 ml V1 x C1 = V2 x C2 100xC1 = 4,00 x 199,6 C1 =  7,984 ppm 3. 11 ppm ad 100 ml V1 x C1 = V2 x C2 100 x 11 = V2 x 199,6 V2 = 5,51 ml~5,50 ml V1 x C1 = V2 x C2 100xC1 = 5,50 x 199,6 C1 = 10,978 ppm 4. 14 ppm ad 100 ml V1 x C1 = V2 x C2 100 x 14 = V2 x 199,6 V2 = 7,01 ml~7,00 ml V1 x C1 = V2 x C2 100 x C1 = 7,00x199,6 C1 = 13,972 ppm 5. 17 ppm ad 100 ml V1 x C1 = V2 x C2 100 x 17 = V2 x 199,6 V2 = 8,51 ml~8,50 ml V1 x C1 = V2 x C2 100 x C1 = 8,50x199,6 C1 = 16,966 ppm

## a. Data Penimbangan Sampel

## Tabel 5. Data Penimbangan Sampel
No.  Sampel Replikasi 3x W+Z (gram) W+S (gram) Berat Zat (gram) 1 H1 X1 2.3229 0.3211 2.0018 X2 2.3185 0.3162 2.0023 X3 2.3393 0.3383 2.0010 2 H2 X1 2.3293 0.3305 1.9988 X2 2.3289 0.3327 1.9962 X3 2.3477 0.3473 2.0004 3 H3 X1 2.3179 0.3184 1.9995 X2 2.3279 0.3272 2.0007 X3 2.3416 0.3387 2.0029 4 H4 X1 2.3358 0.3402 1.9956 X2 2.3515 0.3504 2.0011 X3 2.3342 0.3340 2.0002 5 H5 X1 2.3418 0.3417 2.0001 X2 2.3251 0.3235 2.0016 X3 2.3240 0.3286 1.9954 6 P1 X1 2.3164 0.3172 1.9992 X2 2.3279 0.3320 1.9959 X3 2.3315 0.3314 2.0001 7 P2 X1 2.3283 0.3312 1.9971 X2 2.3319 0.3355 1.9964 X3 2.3385 0.3405 1.9980 8 P3 X1 2.3379 0.3369 2.0010 X2 2.3276 0.3322 1.9954 X3 2.3263 0.3256 2.0007 9 P4 X1 2.3275 0.3280 1.9995 X2 2.3353 0.3370 1.9983 X3 2.3250 0.3293 1.9957 10 P5 X1 2.3347 0.3350 1.9997 X2 2.3297 0.3304 1.9993 X3 2.3241 0.3275 1.9966 Tabel 6. Standar Kafein No.  Standar Konsentrasi Sesungguhnya (X) Absorban (Y) 1 Standar 1 4.9900 ppm 0,242 2 Standar 2 7,9840 ppm 0,389 3 Standar 3 10,9780 ppm 0,526 4 Standar 4 13,9720 ppm 0,661 5 Standar 5 16,9660 ppm 0,798
b. Kurva Linieritas Kafein
A = 0,0157 B = 0,0462 R = 0,9998
Rumus Y = b x + a,  Y = absorbansi sampel X = Y – a b c. Perhitungan  Kopi Hitam dan Kopi Putih
H1 X1   = Y1 – a b = 0,450 – 0,0157 0,0462 = 9,4004 ppm Kadar (b/b) = konsentrasi yang didapat (mg/ℓ) x volume total sampel (ℓ) x Fp Berat Sampel (g)
= 9,4004 (mg/ℓ) x 0,1 ℓ x 50/5 2,0018 g = 4,7 mg/g
Masing – masing sampel dilakukan replikasi 3 (tiga) kali kemudian hasilnya dirata- rata. Penetapan kadar kafein pada sampel kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan dapat dilihat pada Tabel 7.
Tabel 7. Kadar Kafein pada Kopi Bubuk Hitam dan Kopi Bubuk Putih Instan
No. Sampel Kadar kafein (mg/g) 1. H1 4,8 2. H2 3,65 3. H3 4,85 4. H4 3,95 5. H5 3,85 6. P1 9,85 7. P2 8,8 8. P3 9,6 9. P4 7,4 10. P5
6,45
y = 0,0462x + 0,0157 R² = 0,9997 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 0 5 10 15 20 AB SO RB AN KONSENTRASI
Kadar  kafein  dalam  satu  kali  konsumsi/sachet  kopi  bubuk  hitam  (31,gram)  dan  kopi bubuk putih instan (20 gram) dapat dilihat pada Tabel 8.

## Tabel 8. Kadar Kafein Kopi Bubuk Hitam dan Kopi Bubuk
Putih Instan Persachet No. Sampel Kadar percobaan dalam (1 gram) Kadar persachet (31 dan 20 gram) 1. H1 4,8 mg/g 148,8 mg/g 2. H2 3,65 mg/g 113,15 mg/g 3. H3 4,85 mg/g 150,35 mg/g 4. H4 3,95 mg/g 122,45 mg/g 5. H5 3,85 mg/g 119,35 mg/g 6. P1 9,85 mg/g 197 mg/g 7. P2 8,8 mg/g 176 mg/g 8. P3 9,6 mg/g 192 mg/g 9. P4 7,4 mg/g 148 mg/g 10. P5 6,45 mg/g 129 mg/g
Kafein yang terdapat di dalam kopi bubuk instan dipisahkan dengan cara ekstraksi. Menurut  Wilson  dan  Gisvold  (2011)  penyeduhan  dilakukan  dengan  air  mendidih sebanyak 100 ml, karena kafein larut dalam 1,5 bagian air mendidih. Hasilnya kemudian dilakukan  penyaringan dan filtrat yang diperoleh ditambahkan  Na 2 CO 3 ,  penggunaan Na 2 CO 3 untuk  mengikat  tanin yang  terlarut, air dan menambah kebasaan alkaloid. Ekstraksi dilanjutkan dengan menggunakan  pelarut kloroform sebanyak tiga kali dalam  corong  pisah.  Kafein  merupakan  alkaloid  yang  bersifat  non  polar  sehingga diperlukan  pelarut  yang  non  polar,  menurut  Ansel  (2013)  prinsip  ekstraksi  cair  –  cair dengan corong pisah adalah berdasarkan kepolarannya “like dissolve like” yang berarti suatu senyawa akan larut pada pelarut yang sama derajat kepolarannya, pelarut polar akan melarutkan senyawa yang bersifat polar dan pelarut non polar akan melarutkan senyawa yang  bersifat  non  polar.  Ekstraksi  dilakukan  dengan  corong  pisah  karena  cara  ini tergolong sederhana dan cepat.
Penetapan  kadar  kafein  pada  kopi  bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan dilakukan  dengan menggunakan  metode  spektrofotometri  UV-Vis.  Pemilihan  metode spektofotometri UV-Vis  karena  metode  ini  merupakan  metode  yang  relatif  cepat, murah,  dan  mudah pengerjaannya (Guuzin, Karabina and Sungur, 2002).
Penentuan  panjang  gelombang    maksimum  dari  kafein  ditentukan  untuk mendapatkan  serapan  terbesar  yang  selanjutnya    digunakan    untuk    penentuan  kadar kafein  pada    sampel.  Pengukuran  panjang    gelombang    maksimum  pada  kafein  yang memberikan serapan panjang gelombang  273 nm dengan nilai absorbansi 0,471, grafik penentuan  panjang  gelombang  dapat  dilihat  pada  lampiran.  Kurva  linieritas  antara absorbansi dengan konsentrasi standar yang dilakukan dalam berbagai konsentrasi, yaitu 5, 8, 11, 14 dan 17 ppm,  sehingga didapat persamaan regresi linier Y = 0,046X + 0,015 dengan nilai r = 0,999, kriteria penerimaan koefisien korelasi  adalah r ≥ 0,95. Metode spektrofotometri    uv  –  vis  ini  merupakan  metode  penetapan  kadar  kafein  memiliki ketepatan dan ketelitian yang dapat diterima (Fajriana and Fajriati, 2018).
Hasil penelitian penentuan kadar kafein menunjukkan bahwa sampel kopi bubuk hitam memiliki kadar kafein lebih rendah dari kopi bubuk putih instan yaitu, H1 4,8 mg/g;
H2 3,65 mg/g; H3 4,85 mg/g; H4 3,95 mg/g; H5 3,85 mg/g; P1 9,85 mg/g; P2 8,8 mg/g; P3 9,6 mg/g; P4 7,4 mg/g; P5 6,45 mg/g dan hasil uji statistik juga menunjukkan adanya perbedaan yang bermakna antara kadar kafein pada kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan. Perbedaan kadar kafein pada kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan dipengaruhi oleh proses selama pembuatan kopi seperti, banyaknya kafein yang hilang karena  rusak  atau  larut  dalam  air  perebusan  dan  suhu  yang  tinggi  pada  proses penyangraian biji kopi. Kafein sendiri merupakan alkaloid golongan pseudo alkaloid dan termasuk dalam jenis alkaloid purin (ksantin) yang mempunyai dua cincin karbon dengan empat atom nitrogen serta memiliki sifat kimia yang mudah terdekomposisi oleh panas dan sinar dengan adanya oksigen (Robinson, 2011).
Penelitian ini sejalan dengan penelitian yang dilakukan oleh Nugraha, yaitu kadar kafein pada kopi bubuk hitam kurang dari 5 mg/g (Nugraha, Yusuf and Lismayani, 2014). Penelitian  ini  juga  didukung  oleh  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Suwarsa  (Suwarsa, Nuryanti  and  Hamzah,  2018)  serta  penelitian  yang  dilakukan    Fajriana  (Fajriana  and Fajriati, 2018), yang membuktikan bahwa kadar kafein akan mengalami penurunan pada proses penyangraian kopi menggunakan suhu tinggi.
Kadar kafein dalam satu kali konsumsi/sachet kopi  bubuk hitam (31 g/sachet) dan kopi bubuk putih instan (20 g/sachet) berturut-turut adalah H1 148,8 mg/g; H2 113,15 mg/g; H3 150,35 mg/g; H4 122,45 mg/g; H5 119,35 mg/g; P1 197 mg/g; P2 176 mg/g; P3 192 mg/g; P4 148 mg/g; P5 129 mg/g. Kopi  bubuk  hitam dan kopi bubuk putih instan yang  telah  diteliti mempunyai kadar  kafein yang masih dalam  batas  wajar  atau  tidak melebihi dosis  lazim,  yaitu  300-600  mg jika dikonsumsi tidak lebih dari 3 sachet sehari.
Ditinjau  dari  Farmakope  Indonesia Edisi IV (Departemen Kesehatan RI, 1995) jika  mengkonsumsi  kopi dapat berkhasiat menciutkan pembuluh yang secara akut dapat meningkatkan  tekanan  darah  dengan  terjadinya  gangguan  ritme  (sementara)  dan  jika minum >5 cangkir sehari dapat meningkatkan risiko infark jantung sampai 70%, terutama pada wanita dengan angina pectoris. Minum kopi terlalu sering dalam jangka waktu yang lama mengakibatkan meningkatnya lemak jahat atau LDL (low density lipoprotein ) yang dapat menyebabkan tekanan darah tinggi (Tjay dan Rahardja, 2015).

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Dari  hasil  penelitian  diperoleh kadar  kafein pada  sampel kopi bubuk hitam dan kopi bubuk putih instan, yaitu : H1 4,8 mg/g; H2 3,65 mg/g; H3 4,85 mg/g; H4 3,95 mg/g; H5 3,85 mg/g; P1 9,85 mg/g; P2 8,8 mg/g; P3 9,6 mg/g; P4 7,4 mg/g; P5 6,45 mg/g.
Hasil  uji  beda  T  menyatakan  bahwa  terdapat  perbedaan  bermakna  pada  kadar kafein  dalam  kopi  bubuk  hitam  dan  kopi  bubuk  putih  instan  yang  dijual  di  pasar Gunungpati Semarang.
Kadar kafein dalam satu kali konsumsi/sachet kopi  bubuk hitam (31 g/sachet) dan kopi bubuk putih instan (20 g/sachet) berturut-turut adalah H1 148,8 mg/g; H2 113,15 mg/g; H3 150,35 mg/g; H4 122,45 mg/g; H5 119,35 mg/g; P1 197 mg/g; P2 176 mg/g; P3 192 mg/g; P4 148 mg/g; P5 129 mg/g.
Saran
Bagi  masyarakat  hendaknya  dalam  mengkonsumsi  kopi  bubuk  hitam  dan  kopi bubuk  putih  instan  tidak  lebih  dari  3  cangkir  perhari,  untuk  penderita  hipertensi  tidak boleh mengkonsumsi kopi meskipun dengan kadar kafein yang rendah.Untuk penelitian selanjutnya  diharapkan  untuk  dapat  meneliti  kadar  kafein  dengan  penambahan  zat pembasa dan metode yang lain.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim  .(2012). Apa  Sebenarnya  White  Coffee  Itu ? , detikFood  2012 .  Available  at: https://food.detik.com/info-kuliner/d-2015814/apa-sebenarnya-white-coffee-itu (Accessed: 3 September 2020).
Ansel, H. C. (2013) Pengantar Bentuk Sediaan Farmasi . 9th edn. Edited by L. V Allen, N. Propovic, and L. Hendriati. Jakarta: EGC.
Arwangga, A. F., Asih, I. A. R. & Sudiarta, I. W. (2016) ‘ Analisis Kandungan Kafein Pada   Kopi di desa Sesaot Narmada Menggunakan Spektrofotometri UV-VIS ’, Jurnal Kimia   FMIPA  Univ  Udayana  Denpasar ,  10(1),  pp.  110–114.  doi:  : https://doi.org/10.24843/JCHEM.2016.v10.i01.p15. Budiman, H. (2012). Prospek Tinggi Bertanam Kopi . Yogyakarta: Pustaka Baru Press. Cahyono, B. (2011). Sukses Berkebun Kopi . Jakarta: Pustaka Mina. Departemen Kesehatan RI. (1995). Farmakope Indonesia Edisi IV . Indonesia. Fajriana,  N.  H.  and  Fajriati,  I.  (2018).  ‘ Analisis  Kadar  Kafein  Kopi  Arabika  (Coffea arabica L) pada Variasi Temperatur Sangrai Secara Spektrofotometri UV-
Vis’, Analit:   Analytical and Environmental Chemistry, 3(02), pp. 148–162. Fatoni.  (2015).  ‘ Analisa  Secara  Kualitatif  dan  Kuantitatif  Kadar  Kafein  Dalam  Kopi Bubuk  Lokal Yang Beredar di Kota Palembang Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis ’, Laporan Penelitian Mandiri Fakultas Farmasi STIFI Bhakti Pertiwi Palembang.
Guuzin,  A.,  Karabina,  K.  and  Sungur,  S.  (2002).  ‘ Derivative  Spectrophotometric
Determination of Caffeine in Some Beverages’ , Turkish Journal of Chemistry, 26,
pp. 295–302.
Maramis, R. K., Citraningtyas, G. and Wehantouw, F. (2013). ‘ Analis Kafein Dalam Kopi Bubuk Di Kota Manado Menggunakan Spektrofotometri UV-Vis ’, PHARMACON Jurnal  Ilmiah  Farmasi  –  UNSRAT ,  2(04),  pp.  122–128.  doi: https://doi.org/10.35799/pha.2.2013.3100.
Netherlands Nutrition Centre. (2013). ‘Caffein Fact sheet’, www.voedingscentrum.nl . Nugraha, D., Yusuf, A. L. and Lismayani (2014) ‘ Penetapan Kadar Kafein Kopi Bubuk Hitam  Merek  "K"  dengan  Metode  Spektrofotometri  UV-Vis ',  Prodi  Farmasi STIKES Muhammadiyah Ciamis, 1(2), pp. 10–18.
Robinson, T. (2011). Kandungan Organik Timbuhan Tinggi . Bandung: ITB. Suwarsa, I. N., Nuryanti, S. and Hamzah, B. (2018) ‘ Analysis of Caffeine Level in Local Coffee Powder that Circulates in Palu City ’, J. Akademika Kim . ,Vol 7, pp. 189– 192.
Tjay, T. H. & Rahardja, K. (2015). Obat-obat Penting . 7th edn. Jakarta: PT. Elex Media Komputindo.
Wilson,  C.  O.  (2011). Wilson  and  Gisvold’s  Textbook  of  Organic  Medicinal  and Pharmaceutical  Chemistry .  12th  edn.  Edited  by  J.  M.  Beale  and  J.  H.  Block. Lippincott Williams and Wilkins.