## ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF EXTRACT AND FRACTION Mycale vansoesti SPONGE COLLECTED FROM MANADO TUA ISLAND
UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAN FRAKSI DARI SPONS (Mycale vansoesti) YANG DIPEROLEH DARI PULAU MANADO TUA
Ira H. Puspita Prins 1)* , Adithya Yudistira 1) ,  Erladys M. Rumondor 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115
* ira.prins@gmail.com

## ABSTRACT
Antioxidant  are  compounds  that  can  scavenge  free  radicals.  The  free  radicals  are  one  of  the cause  of  various  diseases.  Mycale  vansoesti  Sponge  is  one  of  the  marine  biota  that  have  a potential as a source of bioactive compounds for the antioxidant. This research aimed to test the antioxidant  activity  of  extract  and  fraction  Mycale  vansoesti  Sponge  Collected  From  Manado Tua  Island.  Antioxidant  test  used  a  Uv-vis  spectrophotometer  at  517  nm  wavelength  with  the method  inhibiting  free  radical  DPPH  (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil)  at  concentration  100  ppm. The results of this research showed that ethanol extract, n-hexane fraction, chloroform fraction, and methanol fraction has an antioxidant activity  with percent  inhibition  of  62.31 %, 62.40 %, 49.42  %,  and  56.51  %.  The  conclusion  of  this  research  was  extract  and  fraction  Mycale vansoesti sponge has vital potential as an antioxidant with the highest antioxidant activity was in n-hexane fraction with percents inhibition value of 62.40 %.
Keywords: Antioxidant, Mycale vansoesti, DPPH, Manado Tua Island .

## ABSTRAK
Antioksidan  merupakan senyawa yang  berperan dalam mencegah dampak negatif radikal bebas yang  dapat  menyebabkan  berbagai  penyakit.  Salah  satu  biota  laut  yang  berpotensi  memiliki senyawa  bioaktif  seperti  antioksidan  adalah  Spons Mycale  vansoesti .  Tujuan  penelitian  ini adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  ekstrak  dan  fraksi  dari  spons Mycale  vansoesti yang  diperoleh  dari  Pulau  Manado  Tua.  Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan menggunakan  spektrofotometri  Uv-Vis  pada  panjang  gelombang  517  nm  dengan  metode penghambatan radikal bebas DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) terhadap ekstrak dan fraksi pada konsentrasi  100  ppm.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol,  fraksi  n-heksana, fraksi kloroform, dan fraksi metanol memiliki aktivitas antioksidan dengan persen inhibisi yang masing-masing  diperoleh  adalah  62.31  %,  62.40  %,  49.42  %,  dan  56.51  %.  Kesimpulan  yang didapat  yaitu ekstrak dan  fraksi spons Mycale vansoesti terbukti  memiliki aktivitas antioksidan dengan  persen  inhibisi  tertinggi  terdapat  pada  fraksi  n-heksana  sebesar  62.40  %  dengan konsentrasi 100 ppm.
Kata Kunci: Antioksidan, Mycale vansoesti , DPPH, Pulau Manado Tua

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  kepulauan dengan  luas  lautan  mencapai  70%  dengan keanekaragaman  hayati  laut  yang  melimpah, terdapat lebih  dari 300 spesies terumbu karang, lebih  dari  200  spesies  ikan,  puluhan  moluska, krustasea,  spons,  alga,  rumput  laut,  dan berbagai  jenis  biota  lainnya  (Abdillah,  2013). Namun  pengembangan  potensi  bahari  dalam kaitannya  dengan  dunia  kefarmasiaan  masih belum optimal. Padahal keanekaragaman tersebut  memiliki  senyawa  bioaktif    yang berpotensi  untuk  diteliti  dan  dikembangkan sebagai  obat  atau  bahan  baku  obat  (Moelyono, 2016).
Salah  satu  biota  laut  yang  memiliki senyawa bioaktif adalah spons. Spons merupakan  hewan  laut  dengan  struktur  tubuh sederhana yang terbentuk  dari serat spons yang memiliki spikula yaitu sel penyusun tubuh yang berbentuk  seperti  jarum  dan  memiliki  pori-pori yang  menyerap  air  ke  dalam  tubuhnya.  Spons menghasilkan senyawa bioaktif dengan berbagai  khasiat  seperti  antioksidan,  antijamur, antibakteri,  antikanker,  antiinflamasi,  dan antimalaria (Trianto et al ., 2016).
Antioksidan  merupakan  senyawa  yang dapat  memperlambat  dan  mencegah  terjadinya reaksi  oksidasi  lipid  dalam  radikal  bebas (Yuslianti,  2017).  Antioksidan  berperan  dalam
mencegah  dampak  negatif  radikal  bebas  yang dapat  menyebabkan  berbagai  penyakit  seperti karsinogenik  dan  penuaan  (Anggraeni et  al , 2014).
Penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan oleh  Lampogajo et  al ,  (2021)  menunjukkan hasil  kadar  antioksidan  dari  ekstrak  spons Mycale  vansoesti yang  diambil  dari  perairan Pulau Mantehage memiliki aktivitas antioksidan  tertinggi  dengan  persen  inhbisi sebesar  60,7%  pada  konsentrasi  0,35  ppm. Menurut Mangurana (2019) perbedaan kandungan  senyawa  pada  spesies  yang  sama dapat terjadi karena adanya perbedaan karakteristik
lingkungan sehingga menyebabkan senyawa bioaktif yang dihasilkan juga  bervariasi,  hal  ini  dipengaruhi  oleh lingkungannya  seperti,  kedalaman,  intesitas cahaya, dan pertahanan kimia.
Metode  yang  digunakan  pada  pengujian aktivitas antioksidan adalah metode DPPH ( 1,1- difenil-2-pikrilhidrazil ).  Metode  ini  sering digunakan  karena  sederhana,  mudah,  cepat  dan memberikan hasil yang akurat (Abdillah, 2013).
Dilatar  belakangi  hal  tersebut,  peneliti tertarik  untuk  menguji  aktivitas  antioksidan ekstrak dan fraksi spons Mycale vansoesti yang diperoleh  dari  Pulau  Manado  Tua  dengan menggunakan metode DPPH.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini akan dilaksanakan pada bulan Oktober  2021  –  Maret  2022  di  Laboratorium Farmasi  Lanjut,  Program  Studi  Farmasi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Bahan dan Alat Bahan
Bahan yang  digunakan dalam penelitian ini adalah  etanol  95%,  DPPH (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil) ,  aquades,  kloroform,  n-heksan, methanol, dan spons Mycale vansoesti.

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  erlenmeyer,  sarung  tangan,  spidol permanen,  pisau,  talenan,  spatula,  corong  pisah, wadah  botol,  timbangan  digital,  spatula,  zipper lock  bag,  tabung  reaksi,  alumunium  foil,  kertas saring,  dan rotary  evaporator , Spektrofotometri UV-Vis.
Jenis Penelitian
Penelitian ini adalah penelitian eksperimental  laboratorium  untuk  menguji aktivitas  antioksidan  dengan  menggunakan metode  DPPH  dari  ekstrak  dan  fraksi  spons Mycale  vansoesti yang  diperoleh  dari  Pulau Manado Tua.

## Pengambilan Sampel
Sampel  diambil  dari  pulau  Manado  Tua dengan  menggunakan  (alat  bantu  masker  dan snorkel).  Sebelum  diambil  sampel  di  foto menggunakan kamera bawah laut dan dimasukkan ke dalam kantong plastik jepit yang telah  disiapkan.  Sampel  di  simpan  dalam  kotak pendingin  kemudian  dibawa  ke  Laboratorium penelitian lanjut Program Studi Farmasi Universitas  Sam  Ratulangi  Manado  untuk dideterminasi.
Gambar 1. Peta Lokasi Pengambilan Sampel

## Preparasi Sampel
Sampel  dari  spons Mycale  vansoesti disiapkan  dan  dibersihkan  dari  pengotor, sebanyak 500 mL pelarut etanol 95% dimasukkan  kedalam  wadah  botol  plastik  yang selanjutnya akan diekstraksi.

## Ekstraksi
Sebanyak  145  g  spons Mycale  vansoesti diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi. Sampel  dipotong kecil-kecil lalu dimasukkan ke dalam botol 600 ml, kemudian sampel direndam dengan  pelarut  etanol  95%  dan  didiamkan selama  24  jam  proses  ini  dilakukan  dengan  3 kali  pengulangan.  Hasil  maserasi  disaring dengan  menggunakan  kertas  saring  untuk mendapatkan  filtrat  yang  kemudian  diuapkan menggunakan rotary evaporator sehingga menghasilkan  ekstrak  kasar  dari  spons Mycale vansoesti. Ekstrak  yang  diperoleh  kemudian ditimbang.

## Fraksinasi
Sebanyak  3  g  ekstrak  etanol  Spons Mycale vansoesti difraksinasi  dengan  memasukkan ekstrak kedalam Erlenmeyer,
kemudian dilarutkan dengan menambahkan pelarut metanol 80% sebanyak 100 mL dan dimasukkan kedalam  corong  pisah  kemudian  ditambahkan 100 mL n-heksan lalu dikocok hingga homogen. Didiamkan  hingga  memisah  menjadi  dua  fraksi yaitu  Lapisan  metanol  dan  Lapisan  n-heksan. Lapisan  n-heksan  dikeluarkan  dari  corong  pisah untuk  dievaporasi  hingga  diperoleh  ekstrak kental fraksi n  heksan  dan  kemudian  ditimbang. Selanjutnya  ditambahkan  100  mL  aquades
kedalam  fraksi  metanol  untuk  dipartisi  kembali menggunakan  kloroform  dengan  perbandingan 1:1  (v/v),  dikocok  hingga  tercampur  kemudian didiamkan  hingga memisah  menjadi dua lapisan yaitu  lapisan  metanol  dan  lapisan  kloroform. Masing-masing  fraksi  dikeluarkan  dari  corong dan dievaporasi menggunakan rotary
evaporator hingga  diperoleh  ekstrak  kental  dan kemudian  ditimbang.  Masing-masing  ekstrak kental dari fraksi n-heksan, fraksi kloroform dan fraksi metanol diuji aktivitas antioksidan dengan menggunakan metode DPPH.
Pembuatan  Larutan  Ekstrak  dan  Fraksi Spons Mycale vansoesti 𝑉 1 × 𝑀 1 =   𝑉 2 × 𝑀 2 Untuk  membuat  larutan  ekstrak  dengan konsentrasi  100  ppm  dilakukan  dengan  cara melarutkan  10  mg  ekstrak  etanol  spons Mycale vansoesti kedalam  100  mL  etanol  95%  dalam labu terukur kemudian divortex. Perlakuan yang sama  dilakukan  pada  fraksi  n-heksan,  fraksi kloroform dan fraksi metanol.

## Pembuatan Larutan DPPH 50 ppm
Untuk  pembuatan  larutan  DPPH  ditimbang sebanyak  5  mg  serbuk  DPPH  dan  dilarutkan dalam  100  mL  etanol  95%,  dalam  labu  ukur kemudian  divortex  sehingga  diperoleh  larutan dengan  konsentrasi  50  ppm.  Larutan  didiamkan selama  30  menit  dan  disimpan  dalam  wadah tertutup  rapat  serta  ditutupi  dengan  alumunium foil agar terlindung dari sinar matahari.

## Pembuatan Larutan Kontrol DPPH
Larutan  kontrol  dibuat  dengan  mencampur 2 ml etanol 95% dan 2 ml larutan DPPH 50 ppm dikocok  hingga  homogen  dan  diinkubasi  dalam ruangan gelap selama 30 menit kemudian diukur panjang gelombang 517 nm.
Pengujian  Aktivitas  Antioksidan  dengan Metode DPPH

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Larutan uji sampel dibuat dengan cara sebanyak 2  mL  larutan  DPPH  ditambahkan  kedalam  2 mL  larutan  sampel  ekstrak  etanol,  fraksi  n- heksan,  fraksi  kloroform  dan  fraksi  metanol kemudian  dikocok  hingga  homogen  dan diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu  ruangan yaitu 37 0 C hingga terjadi perubahan warna dari aktivitas  DPPH.  Perubahan  warna  ungu menjadi kuning menandakan efisiensi penangkal radikal bebas, Masing-masing
sampel  dilakukan  3  kali  pengulangan.  Semua sampel  yaitu  sampel  ekstrak  dan  fraksi  yang telah  di  inkubasi  diuji  nilai  absorbansinya menggunakan  spektrofotometer  Uv-vis  pada panjang gelombang 517 nm. Aktivitas penangkapan  radikal  bebas  (persen  inhibisi) dihitung  sebagai  persentase  DPPH  yang tereduksi  dengan  menggunakan  rumus  sebagai berikut :
% 𝒊𝒏𝒉𝒊𝒃𝒊𝒔𝒊 = 𝒂𝒃𝒔. 𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 − 𝒂𝒃𝒔. 𝒔𝒂𝒎𝒑𝒆𝒍 𝒂𝒃𝒔, 𝒌𝒐𝒏𝒕𝒓𝒐𝒍 × 𝟏𝟎𝟎 %

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil
Sebanyak  145  g  sampel  spons Mycale vansoesti yang  telah  di  ambil  dari  Pulau Manado  tua  dideterminasi  dan  diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut
etanol  95%.  Filtrate  hasil  maserasi  diuapkan sehingga diperoleh ekstrak etanol dan dihitung nilai  randemennya.  Hasil  randemen  ekstrak ditunjukkan pada Tabel 1 berikut ini :
Tabel 1. Randemen Ekstrak Spons Mycale vansoesti No. Jenis Ekstrak Berat Bahan Awal (g) Berat Ekstrak (g) Randemen Ekstrak Karakteristik Ekstrak Warna Bentuk 1. Etanol 145 6 4.13 % Coklat Pekat Kasar Pada  proses  fraksinasi  diambil  sebanyak  3 gram  ekstrak  etanol  untuk  difraksinasi  dengan teknik  ekstraksi  cair-cair  atau  fraksinasi  cair- cair.  Hasil  fraksinasi  kemudian  diuapkan
sehingga didapatkan fraksi kental dan dihitung nilai  randemennya  seperti  yang  ditunjukkan pada Tabel 2 berikut ini : Tabel 2. Randemen Fraksi Spons Mycale vansoesti No. Jenis Fraksi Berat Bahan Awal (g) Berat Fraksi (g) Randemen Karakteristik Fraksi Warna Bentuk 1. Metanol 3 1.63 54.33 % Coklat Kental 2. n-heksana 3 0.12 4.00 % Coklat Kental 3. Kloroform 3 0.07 2.33 % Hijau gelap Kental Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan dengan metode DPPH (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil )  menggunakan  spektrofotometri
Uv-vis pada panjang gelombang 517 nm. Hasil absorbansi ekstrak dan fraksi ditunjukkan pada Tabel 3. Tabel 3.  Data Absorbansi Ekstrak dan Fraksi Spons Mycale vansoesti No. Jenis Sampel Konsentrasi (ppm) Absorbansi Pengulangan I II III 1. Ekstrak Etanol 100 0.243 0.259 0.311 2. Fraksi n-heksan 100 0.179 0.302 0.330 3. Fraksi Kloroform 100 0.371 0.358 0.362 4. Fraksi Metanol 100 0.365 0.344 0.229 5. Kontrol DPPH 0.719

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Dari  nilai  absorbansi  yang  diperoleh  maka dapat  dihitung  nilai  presentasi  penghambatan radikal  DPPH  (%  inhibisi)  seperti  yang ditunjukkan pada Tabel 4.
Tabel. 4 Hasil Persen Inhibisi Ekstrak dan Fraksi Spons Mycale vansoesti No. Jenis Sampel Konsentrasi (ppm) Pengulangan Rata- rata I II III 1. Ekstrak Etanol 100 66.20 % 63.98 % 56.75 % 62.31 % 2. Fraksi n- heksan 100 75.10 % 58.00 % 54.10 % 62.40 % 3. Fraksi Kloroform 100 48.40 % 50.21 % 49.65 % 49.42 % 4. Fraksi Metanol 100 49.24 % 52.16 % 68.15 % 56.51 %

## Pembahasan
Sampel  spons Mycale  vansoesti yang diperoleh dari Pulau
Manado Tua dideterminasi  untuk  memastikan  kebenaran identitas  dari  sampel  yang  diteliti  agar terhindar  dari  kesalahan  dalam  pengumpulan bahan.  Sampel  dibersihkan  dari  pengotor  agar tidak terbawa pada saat proses ekstraksi dan di simpan  kedalam  cool  box.  Tujuan  sampel disimpan  kedalam  coolbox  agar  sampel  tidak terkena  cahaya  matahari  langsung  yang dikhawatirkan  dapat  merusak  senyawa  aktif yang terkandung dalam sampel.
Metode maserasi dipilih untuk mengekstraksi  spons Mycale  vansoesti karena metode  ini  dapat  mencegah  kemungkinan rusaknya  zat aktif  akibat  pemanasan  selain  itu proses  pengerjaannya  mudah  dan  peralatan yang digunakan cukup sederhana. Pelarut yang digunakan  dalam  ekstraksi  yaitu  etanol  95  %. Etanol  95%  dipilih  karena  memiliki  tingkat kepolaran  yang  tinggi  sehingga  lebih  banyak menarik  senyawa  metabolit  sekunder  yang terkandung  dalam  sampel.  Sampel  yang  telah dibersihkan  dari pengotor kemudian  di potong kecil-kecil tujuannya untuk memperluas permukaan  sehingga  pelarut  lebih  mudah berpenetrasi  kedalam  sel  sehingga  penarikan senyawa kimia yang terkandung dalam sampel lebih maksimal (Dwijendra et al , 2014). Proses maserasi  ini  dilakukan  dengan  tiga  kali pengulangan  hal  ini  dilakukan  untuk  menarik senyawa kimia yang terkandung dalam sampel secara  maksimal.  Filtrate  hasil  maserasi disaring  dan  diuapkan  hinga  diperoleh  ekstrak sebanyak 6 gram yang berwarna coklat dengan
randemen  sebesar  4,13  %  (Tabel  1).  Proses fraksinasi dilakukan dengan menggunakan tiga pelarut  yang  berbeda  kepolarannya.  Tujannya agar  komponen  kimia  yang  terkandung  dalam ekstrak  spons Mycale  vansoesti akan  larut kedalam  pelarut  yang  sesuai  dengan  tingkat kepolarannya.  Pelarut  yang  digunakan  yaitu metanol  sebagai  pelarut  polar,  n-heksan sebagai  pelarut  non-polar,  dan  kloroform sebagai pelarut semi polar. Dengan menggunakan  pelarut  yang  berbeda  tingkat kepolarannya  maka  akan  terbentuk  2  lapisan, pelarut  dengan  massa  jenis  besar  akan  berada di  bagian  bawah,  sedangkan  pelarut  dengan massa  jenis  kecil  akan  berada  dilapisan  atas. Berdasarkan  hasil  randemen  yang  diperoleh pada  Tabel  1  dan  2  menunjukkan  nilai randemen  terbesar  terdapat  pada  pelarut metanol,  hal  ini  menunjukkan  bahwa  senyawa bioaktif  yang  terkandung  dalam  sampel  lebih banyak terekstrak pada pelarut polar.
Sedangkan  nilai  randemen  terkecil  terdapat pada  fraksi  kloroform  hal  ini  menunjukkan bahwa  jumlah  komponen  bioaktif  hanya sedikit  teridentifikasi  pada  pelarut  yang bersifat  semi  polar.  Tinggi  dan  rendahnya randemen  yang  dihasilkan  dapat  dipengaruhi oleh penggunaan jenis pelarut dengan perbedaan polaritasnya, dimana suatu senyawa akan  lebih  mudah  larut  pada  pelarut  yang memiliki tingkat kepolaran yang sama.

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
Pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak spons Mycale  vansoesti dilakukan  dengan menggunakan metode DPPH. Pemilihan penggunaan  metode  ini  karena  merupakan metode  yang  sederhana,  peka  dan  akurat  serta hanya  memerlukan  sedikit  sampel  untuk evaluasi  aktivitas  antioksidan  dari  senyawa bahan alam (Molyneux, 2004). Prinsip pengukuran aktivitas antioksidan dengan metode  DPPH  yaitu  adanya  perubahan  warna DPPH  dari  ungu  menjadi  kekuningan.  Radikal bebas  DPPH  yang  memiliki  elektron  tidak berpasangan  akan  memberikan  warna  ungu, warna  akan  berubah  kuning  saat  elektron tersebut  berpasangan.  Pengukuran  absorbansi ekstrak dan fraksi  dengan DPPH menggunakan spektrofotometer uv-vis pada panjang gelombang  517  nm.  Panjang  gelombang maksimum  ini  memberikan  serapan  paling maksimal  dari  larutan  DPPH.  Sebelum  diuji dispektrofotometer larutan uji diinkubasi selama  30  menit  agar  terjadi  reaksi  antara larutan  sampel  dengan  larutan  DPPH  (Martiani et  al ,  2017).  Kemampuan  suatu  senyawa  untuk mereduksi  DPPH  radikal  ditunjukkan  dengan penurunan  absorbansi  larutan  uji,  dimana semakin  kecil  nilai  absorbansinya  maka senyawa  tersebut  semakin  banyak  mereduksi radikal  DPPH  sehingga  presentase  inhibisinya semakin tinggi.
Berdasarkan  data  absorbansi  ekstrak  dan fraksi  pada  Tabel  3  terjadi  penurunan  nilai absorbansi  pada  spectrum  fraksi  n-heksana yang menunjukkan adanya aktivitas antioksidan.  Adanya  aktivitas  antioksidan  dari sampel  mengakibatkan  terjadinya  perubahan warna  pada  larutan  DPPH  dalam  larutan  uji sampel  yang  semula  berwarna  ungu  menjadi kuning.  Warna  kuning  menandakan  semakin banyak  DPPH  yang  dihambat  oleh  fraksi tersebut  dan  semakin  sedikit  DPPH  yang tersisa, sehingga nilai absorbansi semakin kecil. Perubahan  intensitas  warna  ungu  DPPH disebabkan karena adanya senyawa antioksidan yang tereduksi/memberikan ion hidrogen kepada DPPH ( 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil ) sehingga  terbentuk  senyawa  DPPH-H (1,1- difenil-2-pikrilhidrazin) yang ditunjukkan dengan  memudarnya  warna  ungu  menjadi kuning (Navitri, 2012).
Berdasarkan
hasil perhitungan penghambatan  radikal  DPPH  (%  inhibisi)  yang diperoleh  pada  Tabel  4  menunjukkan  persen inhibisi  dari  ekstrak  kasar  etanol,  fraksi  n-
heksana,  fraksi  kloroform,  dan  fraksi  metanol yaitu  berturut-turut  adalah  62.31%,  62.40  %, 49.42  %,  56.51  %  pada  konsentrasi  100  ppm. Berdasarkan  persen  inhibisi  diketahui  bahwa fraksi  n-heksana  memiliki  aktivitas antioksidan yang  lebih  baik  dalam  meredam  radikal  bebas DPPH yakni sebesar 62.40 %. Tingginya persen inhibisi  dikarenakan  fraksi  n-heksana  banyak mengandung  senyawa  antioksidan  sehingga kemampuan untuk menangkap atau menetralisir radikal  bebas  DPPH  semakin  besar.  Penelitian yang  dilakukan  oleh  Abraham et  al (2017), spons Chynachyrella australiensis dan Chynachyrella  sp spesies  serupa  dari  kelas demospongiae  berdasarkan  hasil  uji  fitokimia menunjukkan  kandungan  senyawa  pada  fraksi n-heksana Chynachyrella  australiensis dan Chynachyrella sp . mengandung senyawa steroid.
Ekstrak  etanol  spons Mycale  vansoesti memiliki  persen  inhibisi  yang  lebih  rendah dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol  spons Mycale  vansoesti pada  penelitian  sebelumnya. Pada  penelitian  sebelumnya  yang  dilakukan oleh  Lampogajo et  al (2021)  pengujian antioksidan  ekstrak  etanol  spons Mycale vansoesti yang  diambil  dari  pulau  Mantehage memiliki  persen  inhibsi  sebesar  60.7  %  pada konsentrasi 0,35 ppm. Sedangkan pada penelitian ini, persen inhibisi dari ekstrak etanol spons Mycale  vansoesti yakni  sebesar  62.31  % pada  konsentrasi  100  ppm.  Perbedaan  hasil persen  inhibisi  yang  diperoleh  disebabkan karena  perbedaan  lokasi  pengambilan  sampel. Perbedaan tempat dapat mempengaruhi kandungan  senyawa  pada  spesies  yang  sama, hal  ini  dipengaruhi  karena  adanya  perbedaan karakteristik  lingkungan  laut  yang  dapat mempengaruhi  kehidupan  spons.  Faktor  yang mempengaruhi pertumbuhan dan perkembangan  spons  diantaranya  suhu,  arus laut, salinitas, intensitas cahaya, kedalaman dan gelombang.  Pertumbuhan  dan  perkembangan yang  baik  bagi  spons  yaitu  kondisi  lingkungan laut yang  memiliki arus laut yang  lebih tenang, serta  kondisi  perairan  tersebut  tidak  dalam keadaan tercemar (Marzuki, 2018).
Berdasarkan  data  pada  Tabel  4,  persen inhibisi dari fraksi metanol cukup tinggi sebesar 56.51 %. Sedangkan persen inhibisi

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI,
terendah terdapat pada fraksi kloroform sebesar 49.42 %. Hal ini  menunjukkan bahwa senyawa yang terekstrak pada pelarut polar lebih banyak dibandingkan dengan pelarut yang bersifat semi polar.  Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan oleh  Kurniawan et  al (2021),  Spons Haliclona sp spesies  serupa  dari  kelas  Demospongiae, berdasarkan  hasil  uji  fitokimia  menunjukkan bahwa  ekstrak  metanol  spons Haliclona  sp . mengandung  kelompok  senyawa  alkaloid  dan steroid.  Hal  ini  juga  didukung  oleh  penelitian yang  dilakukan  oleh  Mayefis, et  al (2021), mengenai pengujian aktivitas  antioksidan ekstrak  metanol  spons  natuna  (filum  porifera) dengan metode DPPH menunjukkan berdasarkan uji fitokimia ekstrak metanol spons natuna  memiliki  senyawa  yang  berpotensi sebagai antioksidan diantaranya alkaloid, flavonoid,  dan  saponin.  Dimana  alkaloid, terutama  indol,  dapat  menghentikan  reaksi senyawa  rantai  radikal  bebas  secara  efisien.
Senyawa alkaloid lainnya yang bersifat antioksidan  adalah  kuinolon  yang  dapat bertindak  sebagai  radikal,  hidroksi,  dan peredam  melatonin  yang  berperan  penting dalam  melindungi  sel  dari  efek  radiasi. Senyawa  selanjutnya  yang  berpotensi  sebagai antioksidan  adalah  flavonoid  yang  merupakan senyawa  polifenol  yang  dapat  mendonorkan atom hidrogen sehingga dapat meredam radikal bebas.
Rendahnya  presentase  inhibisi  pada  fraksi kloroform dipengaruhi oleh kemampuan senyawa antioksidan dalam memberikan elektron  kepada  DPPH.  Pada  fraksi  kloroform senyawa aktif yang terkandung dalam fraksi ini lebih  sedikit  sehingga  kemampuan  untuk memberikan  elektron  kepada  DPPH  semakin kecil.  Selain  itu,  zat  pengotor  yang  terkandung dalam fraksi  kloroform  masih tinggi  dan  masih mengandung  senyawa  campuran  sehingga masih perlu dipisahkan dan dimurnikan.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh  pada penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa ekstrak dan  fraksi  spons Mycale  vanosoesti memiliki aktivitas  antioksidan  dengan  persen  inhibisi tertinggi terdapat pada fraksi n-heksana sebesar 62.40 % dengan konsentrasi 100 ppm.

## SARAN
Disarankan  agar  penelitian  ini  dapat dilanjutkan untuk mengisolasi senyawa metabolit  sekunder  dari  ekstrak  dan  fraksi sehingga  dapat  dimanfaatkan  sebagai  sumber antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdillah,  S, et  al .  2013.  Cytotoxic  and Antioxidant  Activities  of  Marinesponge Diversity  at  Pecaron  Bay  Pasir  Putih Situbondo  East  Java,  Indonesia .  Journal of Pharmacy Research . 685-689.
Anggraini et al . 2014. Uji Aktivitas
Antioksidan Fraksi Etil asetat, Kloroform,  Petroleum  eter,  dan  n- heksana Hasil Hidrolisis Ekstrak Metanol Mikroalga Chlorella sp. Journal
Alchemy . 3(2): 173-188.
Abraham, et  al. Anticancer  Pre-screening  of
Marine  Sponge Chynachyrella Extract from  Spermonde  Archipelago,  South Sulawesi, Indonesia. Research Journal of
Pharmaceutical, Biological and
Chemical Sciences . 8(4): 833-837.
Dwijendra,  I.  Defny,  W.  Frenly,  W.  2014.
Aktivitas  Antibakteri  dan  Karakterisasi
Senyawa  Fraksi  Spons lamellodysidea herbacea yang  diperoleh  dari  Teluk
Manado. Pharmacon  Jurnal  Ilmiah Farmasi . 3(4): 2302-2493.
Lampogajo,  S.  Adithya,  Y.  Erladys,  R.  2021. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Spons  ( Mycale  vansoesti  Sensu )  yang dikoleksi  dari  Kepulauan  Mantehage. Pharmacon  Jurnal  Ilmiah  Farmasi . 10(2): 812-817.
Moelyono,  2016. Farmasi  Bahari .  Yogyakarta:
Deepublish.
Mangurana,  I,  Yusnaini,  Sahidin.  2019.
Analisis LC-MS/MS (Liquid Crhomatogaph  Mass  Spectrometry)  dan Metabolit Sekunder serta Potensi Antibakteri  Ekstrak  n-Heksana  Spons Callyspongia aerizusa yang diambil pada kondisi  tutupan  Terumbu  Karang  yang berbeda di Perairan Teluk Staring. Jurnal Biologi Tropis. 19(2): 131-141.
Martiani,  I.  Ida,  A. Farid,  P.  2017.  Antioxidant Activities  of  N-Hexan,  Ethyl  Acetate, and  Methanol  Extracts  of  Dewandaru
Leaves  ( Eugenia  uniflora  L.). Jurnal
Ilmiah Farmako Bahari. 8(2): 31-39.
Molyneux, P. 2004. The Use  of  the stable Free Radikal  DPPH .  J.Sci.Technol. 26(2): 211-219.
Mayefis,  D.,  Sri,  H.  Siska,  W.  2021. Antioxidant Activity of Methanol Extract Natuna  Marine  Sponge  (Porifera)  with DPPH  Methode. Asian  Journalo  Of Pharmaceutical  And  Clinical  Research. 14 (04): 109-112.
Marzuki,  I.  2018. Eksplorasi  Spons  Indonesia: Seputar
Kepulauan
Spermonde.
Makassar: Nas Media Pustaka.
Membri,  D.K.,  Yudistira,  A.,  Sumantri,  S.
(2021). Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak  Etanol  Spons  Liosina  paradoxa
Yang  Dikoleksi  Dari  Pulau  Mantehage. Pharmacon, 10(2), 775– 777.
Navitri,  D.  2012.  Uji  Aktivitas  Antiradikal Bebas  Ekstrak  Buah  Jeruk  Bali (Citrus maxima  burmfz) dengan  Metode  DPPH ( 1,1-diphenyl-2-pikrylhidrazyl ). UNESA Journal of Chemistry 1(2).
Yuslianti,  R.  2017. Pengantar  Radikal  Bebas dan Antioksidan. Yogyakarta:
Deepublish.