## Pharmacoscript Volume 7 No. 2 Agustus 2024
ISOLASI KOLAGEN DARI TULANG IKAN GURAME ( Osphronemus Goramy ) YANG

## DIFORMULASIKAN DALAM SEDIAAN MINUMAN SERBUK INSTAN
Lilis Tuslinah, Ferina Muthiara Putri Utami * , Mochamad Fathurohman
Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Bakti Tunas Husada Tasikmalaya *Email: muthiaraferina828@gmail.com
Received: 30/04/2024 , Revised: 07/06/2024 , Accepted: 10/06/2024, Published: 08/08/2024

## ABSTRAK
Kolagen adalah protein  yang  asam  amino utamanya  adalah hidroksiprolin dan prolin. Produksi kolagen  bisa  didapatkan  dari  tulang  ikan  gurame  (Oshpronemus  goramy).  Kolagen  banyak bersumber  dari  hewan  seperti  babi  yang  banyak  mengandung  kolagen  tetapi  dari  segi kehalalannya  tidak  terjamin.  Maka  dari  itu,  tujuan  dilakukan  penelitian  ini  untuk  mempeoleh kolagen dari tulang ikan gurame sebagai alternatif lain penghasil kolgen. Kolgen dibuat sediaan minuman  serbuk  instan  yang  memenuhi  syarat  SNI.  Metode  yang  dilakukan  pada  penelitian dimulai  dari  pengumpulan  sampel  gurame,  penyiapan  sampel,  produksi  kolagen  menggunakan metode  hidrolisis  kimia  dengan  asam  asetat  0,5  M  dan  0,75  M,  karakterisasi  kolagen  sesuai standar SNI 8076-2014. Tahapan akhir  yaitu pembuatan sediaan minuman serbuk instan sesuai syarat  dan  mutu  SNI  01-4320-1996  dengan  perbedaan  penambahan  asam  sitrat.  Hasil  dari penelitian  ini  diperoleh  kolagen  menggunakan  pelarut  asam  asetat  0,5  M  dan  0,75  M menghasilkan  nilai  rendemen  dengan  nilai  berturut-turut  1,178  %  dan  9,368%.  Nitrogen  total dari  kolagen  dengan  penggunaan  asam  asetat  0,75  M  sebesar  12,115%  dan  protein  75,718%. Analisis gugus fungsi menggunakan FTIR diketahui gugus fungsi  yang terdapat dalam kolagen yaitu  Amida  A,  Amida  B,  Amida  I,  Amida  II  dan  Amida  III.  Hasil  uji  syarat  mutu  minuman serbuk  instan  kolagen  semua  formula  memenuhi  standar  SNI  01-4320-1996.  Hasil  uji  hedonik menunjukan formula III menjadi formula terbanyak disukai dari segi citra rasa oleh perbandigan asam sitrat pada ketiga formula.
Kata kunci : Kolagen, Minuman serbuk instan, Tulang ikan gurame.

## ABSTRACT
Collagen  is  a  protein  whose  main  amino  acids  are  hydroxyproline  and  proline.  Collagen production can be obtained from the bones of gourami fish (Oshpronemus goramy). Collagen is often sourced from  animals  such as  pigs  which contain lots of  collagen but  its halal quality is not  guaranteed.  Therefore,  the  aim  of  this  research  was  to  obtain  collagen  from  gourami  fish bones  and  then  make  instant  powdered  drink  preparations  that  meet  SNI  requirements.  The method used in the research started from collecting carp samples, sample preparation, collagen production using the chemical  hydrolysis method  with 0.5 M and 0.75 M acetic acid,  collagen characterization  according  to  SNI  8076-2014  standards.  The  final  stage  is  making  instant powdered  drink  preparations  according  to  the  requirements  and  quality  of  SNI  01-4320-1996 with  the  difference  in  adding  citric  acid.  The  results  of  this  research  obtained  that  collagen using  0.5  M  and  0.75  M  acetic  acid  solvent  produced  yield  values  of  1.178%  and  9.368% respectively.  Total  nitrogen  from  collagen  using  0.75  M  acetic  acid  was  12.115%  and  protein
Tuslinah et al./Pharmacoscript, Volume 7, No, 2, Agustus 2024, 156 - 167
Tuslinah et al.;Isolaso Kolagen dari Tulang Ikan…..Pharmacoscript Volume 7 No. 2, Agustus 2024
75.718%. Functional  group analysis  using FTIR revealed that the functional  groups  contained in  collagen  are  Amide  A,  Amide  B,  Amide  I,  Amide  II  and  Amide  III.  The  test  results  for  the quality requirements of instant collagen powder drinks for all formulas meet SNI 01-4320-1996 standards.  The  hedonic  test  results  showed that formula  III  was  the  most  preferred  formula  in terms of taste image compared to citric acid in the three formulas.
Keywords : Collagen, instant powder drink, gourami fish bones.

## PENDAHULUAN
Ikan  gurame  (Osphronemus  goramy) Termasuk  kategori    komoditas  ikan  untuk sumber penghasil gizi masyarakat Indonesia.  Menurut  data  Badan  Pusat Statistik,  Jawa  Barat  menjadi  produsen terbesar ikan gurame. Di tahun 2014 terdata sebanyak  30,14%  dari  hasil  panen  ikan gurame  berasal  dari  Jabar  (12.970  ton)  dan pada tahun 2016 semakin meningkat sekitar 53.220 ton (BPS, 2022).
Ikan  gurame  sebagai  salah  satu sumber  penghasil  kolagen  yang  tinggi. Kolagen  dari  tulang  ikan  gurame  dapat diekstraksi  menggunakan  pelarut  asam asetat 0,5 M (Simanjuntak, 2013).
Kolagen  merupakan  suatu  protein yang terkandung dalam tubuh hewan sekitar 30%  terutama  pada  hewan  babi,  hanya  saja kehalalannya  tidak  terjamin  maka  dari  itu, dipilih  alternative  lain  sebagai  sumber penghasil kolagen  yaitu  tulang ikan  gurame (Sugihartono & Wahyuni, 2019). Berdasarkan  penelitian  (Norman,  2016) ekstraksi kolagen dari sisik beserta tulangnya  dilakukan  menggunakan  enzim protease diperoleh rendemen sebesar 3,94%,
sedangkan  dengan  metode  menggunakan asam  asetat  0,5  M  menghasilkan  rendemen sebesar  4,27  %  (Norman,  2016).  Penelitian (Willy  et  al.,  2021)  mengekstraksi  tulang dan sisik ikan gurame menggunakan pelarut asam  asetat  0,75  M  didapat  rendemen sebesar  2,34%.  Struktur  tripel  heliks kolagen kuat dan menjadi pluntiran jaringan ikat sehingga sifatnya elastis, bisa mengerut dan  mengendur  (Sugihartono  &  Wahyuni, 2019).
Kolagen  menjadi  bahan  makanan modern  yang  banyak  dimanfaatkan  di industri  pangan  (Takemori  et  al.,  2007). Selain  itu,  untuk  meningkatkan  kualitas, nilai  gizi  dan  kesehatan  suatu  produk  serta telah  diterapkan  sebagai  penambah  protein, dan bahan tambahan makanan (Hasim et al., 2017).
Di  dalam  aspek  kosmetika  kolagen digunakan  untuk  zat/bahan  aktif  dalam membantu mencegah penuaan dini, menjaga elastisitas kulit dan melembabkan kulit (Ata et  al.,  2016).  Beberapa  bentuk  sediaan kosmetika  yang  menggunakan  kolagen seperti  lotion,  gel,  dan  shampo.  Kolagen mulai  dikembangkan  juga  sebagai  produk
suplemen  makanan  dalam  bentuk  minuman serbuk karena lebih praktis dalam penyajian dan  lebih  stabil  dalam  penyimpanan  dalam jangka waktu panjang (Hasim et al., 2017).
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut, maka  pada  penelitian  ini  dilakukan  proses ekstraksi  kolagen  dari  tulang  ikan  gurame dengan  hidrolisis  kimia  menggunakan pelarut  asam  asetat.  Kualitas  kolagen  yang dihasilkan  dikarakterisasi  sesuai  dengan standar  SNI  8076-2014.  Kemudian  dibuat sediaan  minuman  serbuk  instan  karena praktis  dalam  penyajian  serta  tahan  untuk penyimpanan  lama  dan  minuman  serbuk instan  diuji  sesuai  persyaratan  mutu  sesuai standar SNI 01-4320-1996.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat yang dipakai diantaranya blender, oven,  Freeze  Dryer,  Nercara  analitik,  Mesh nomor  30,  Fourier  Transform  Infrared Spectrophotometer (FTIR), Differential Scanning  Calorimetry  (DSC),  rtanur,  alat destilasi,  labu  Kjeldahl,  desikator,  cawan porselen.
Bahan  yang  digunakan  diantaranya tulang ikan gurame, NaOH, CH3COOH p.a, H 2 SO 4 pekat,  H 2 O 2 ,  H 3 BO 3 ,  Indikator, aquadest, K 2 SO 4 , CuSO 4 , natrium hidroksida-thiosulfat,  HCl,  NaCl,  asam sitrat, sukrosa, perisa, tartrazine,
maltodextrin.
Jalannya Penelitian

## 1. Penyiapan Sampel
Ikan  gurame  diperoleh  dari  pasar induk  Cikurubuk  Tasikmalaya.  Bagian tulang  dipisahkan  dan  dibersihkan  dari dagingnya  (degradasi)  dengan  cara  dikukus kemudian dibersihkan daging yang menempel pada tulang. Kemudian dilakukan demineralisasi  menggunakan  NaOH  0,1  M yang  bersifat  korosif  sehingga  dapat menghilangkan  mineral  dan  protein  non kolagen.

## 2. Proses Ekstraksi
Ekstraksi  tulang  ikan  gurme  yang telah digiling kemudian dilakukan perendaman menggunakan pelarut
CH 3 COOH 0,5M dan 0,75M tiga hari tanpa penggantian  pelarut.  Perbandingan  tulang dengan  asam  asetat  berturut-turut  1:10. Pemisaan  filtrat  dan  residu  menggunakan kain. Kemudian filtrat dipresipitasi menggunakan  NaCl  0,9  M  dan  didapatkan kolagen  basah.  Kolagen  basah  kemudian  di freeze  drying untuk  menghasilkan  kolagen kering (Willy et al., 2021).
3. Pengujian Kualitas Kolgen
Pengujian diantaranya yakni
penetapan  rendemen,  kadar  air,  kadar  abu, penetapan  nitrogen  total,  penetapan  gugus fungsi kolagen dan titik leleh kolagen.
4. Karakterisasi Kolagen
4.1 Penentuan rendemen Rendemen dilakukan dengan menimbang  hasil  ekstrak  yang  sudah  di freeze drying dibagi 100 gram tulang ikan.
4.2 Kadar Air
Cawan/botol timbang ditimbang dalam  keadaan  kosong,  kemudian  dioven pada suhu 105˚C dan dibiarkan dingin pada desikator,  bobot  cawan  ditimbang  hingga konstan.  Kemudian  cawan  diisi  sampel  lalu dikeringkan  di  oven  pada  suhu  105˚C sampai  konstan.  Hasil  kadar  air  memenuhi syarat jika tidak melebihi 12% (SNI, 2014). Kadar air dihitung dengan rumus :
Kadar air (%) = x 100%
Keterangan : w 1 = Bobot sampel setelah oven (g) w 2 = Bobot sampel (g)

## 4.3 Kadar Abu
Uji  kadar  abu  dilakukan  dengan menimbang  cawan  krus  berisi  sampel kemudian dimasukan tanur pada suhu 550˚C sampai menjadi  abu,  dibiarkan  dingin  pada desikator  dan  timbang  sampai  bobot konstan.  Kadar  abu  memenuhi  syarat  jika tidak  melebihi  1%  (SNI,  2014).  Kadar  abu dihitung menggunakan rumus :
Kadar Abu (%) = x 100%
Keterangan : w 1 = Bobot sampel sebelum diabukan (g) w 2 = Bobot sampel + cawan sesudah diabukan (g) w = Bobot sampel + cawan sebelum diabukan (g)
4.4 Penetapan Kadar Nitrogen Total
Penetapan kadar nitrogen total kolagen  tulang  ikan  gurame  menggunakan metode Kjeldahl. Dilakukan dengan 3 tahap yakni,  pertama  destruksi  menggunakan H 2 SO 4 dan  H 2 O 2 dengan  penambahan CuSO 4 dan  K 2 SO 4 sebagai  katalis,  destilasi untuk melepaskan ammonia dari ammonium sulfat  dan  titrasi  menggunakan  HCl  untuk mengetahui  kadar  nitrogen  total  (SNI, 2014).

## 4.5 Analisis Gugus Fungsi Kolagen
Gugus fungsi di analisis menggunakan metode Fourier  Transform  Infra  red (FTIR).  Kolagen  dimasukan  ke  dalam  set holder  kemudian  dianalisis  serapan  untuk menentukan gugus fungsi kolagen (Suptijah et al., 2018).

## 4.6 Titik Leleh Kolagen
Titik  leleh  kolagen  ditentukan  dengan menggunakan metode Differential  Scanning Calorimetry (DSC) dengan melihat peak dan titik  awal  pelelehan  serta  titik  akhir pelelehan (Dewi et al., 2017).
5. Pembuatan Minuman serbuk instan Kolgen tulang ikan gurame,
Maltodextrin,  asam  sitrat  dan  perisa  dioven pada  suhu  50˚C  untuk  kemudian  menjadi granul  dan  mencampurkan  bahan  lainnya. kemudian digrinder dan diayak menggunakan  mesh  no  30.  Sediaan  dibuat dalam 10 gram/sachet.

## 6. Uji Hedonik
Sediaan diuji hedonik untuk menentukan  kesukaan  responden  terhadap ketiga sediaan.
Tabel I. Formula Minuman Serbuk Instan
Bahan Fungsi Formula FI F2 F3 Kolagen tulang ikan (%) Zat aktif 10 10 10 Asam Sitrat(%) Pemberi citra rasa 2,5 3,75 5 Sukrosa(%) Pemanis 20 20 20 Tartazin(%) Pewarna 0,2 0,2 0,2 Perisa(%) Perisa 15 15 15 Maltodextrin(%) Pengental Add 100 Add 100 Add 100 7. Uji Syarat dan Mutu Minuman
7.1 Organoleptik
Uji  organoleptik  dilakukan  dengan menilai dari rasa, warna dan aroma.
7.2 Kadar air
Kadar air diuji untuk melihat kandungan air pada sediaan. Syarat kadar air sesuai  SNI01-4372-1996  yaitu  maks  3% (SNI, 1996).

## 7.3 Kadar abu
Kadar  abu  diuji  untuk  melihat kandungan  suatu  mineral  sediaan.  Syarat menurut SNI maksimal 1,5% (SNI, 1996).

## 7.4 Bagian tak larut air
Dilakukan  dengan  menimbang  20g sampel  kemudian  dimasukan  ke  beaker glass  400mL  lalu  tambahkan  air  panas  200 mL  di  aduk  sampai  terlarut.  Saat  panas tuangkan  ke  dalam  gelas  kimia  lain  sambil disaring menggunakan kertas saring sebelumnya  telah  di  timbang.  Bilas  beaker glass  menggunakan  air  panas  dan  disaring.
Kertas  saringnya  dilakukan  pengeringan dalam  oven  suhu  105˚C,  timbang  kertas sampai  bobot  tetap.  Perhitungan  dilakukan dengan menghitung bobot sampel hasil oven dibagi bobot sampel (SNI, 1996)

## 7.5 Uji Hedonik
Uji  kesukaan/hedonik  dilakukan  agar menilai  tingkat  kesukaan  responden  pada sediaan.  Data  hasil  dianalisis  menggunakan SPSS  menggunakan  uji  univariate  dan  uji post hoc menggunakan test Duncan (Bambang et  al .,  2011). Kemudian  data diolah  menggunakan  SPSS  28.0.0.0  untuk menentukan  formula  yang  paling  banyak disukai oleh sebanyak 30 orang panelis.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## 1. Isolasi Kolagen
Preparasi  sampel  dilakukan  untuk memisahkan  bagian  tulang  dengan  daging yang  masih  menempel  pada  tulang  yang terlebih  dahulu  dilakukan  degradasi  dengan
Tuslinah et al.;Isolaso Kolagen dari Tulang Ikan…..Pharmacoscript Volume 7 No. 2, Agustus 2024
mengukus tulang agar lebih mudah memisahkan  tulang  dengan  dagingnya. Tulang  dikeringkan  untuk  menghilangkan kandungan  air  dan  memudahkan  dalam proses  penggilingan  tulang.  Dilakukan demineralisasi sampel untuk menghilangkan protein  nonkolagen,  mineral  dengan  pelarut Natrium hidroksida 0,1 M dengan perbandingan tulang dan NaOH adalah 1:10. NaOH  memiliki  sifat  panas  dan  korosif sehingga dapat membersihkan dan mengikis sisa-sisa  daging,  kotoran,  mineral  yang terdapat pada tulang (Noorman, 2016).
Tulang  ikan  direndam  menggunakan pelarut  asam  asetat.  Filtrat  hasil  ekstraksi dipresipitasi  dengan  menambahkan  NaCl 0,9  M  yang  berfungsi  untuk  mengendapkan kolagen. Hasil menunjukan bahwa ekstraksi kolagen  menggunakan  pelarut  asam  asetat
0,75  M  menghasilkan  %  rendeman  yang lebih  besar  yaitu  9,386%,  dibandingkan dengan pelarut asam asetat 0,5 M rendemen sebesar  1,178%.  Perbedaan  konsentrasi asam  asetat  berpengaruh  terhadap  hasil kolagen  karena  semakin  tinggi  konsentrasi kolgen  maka  semakn  mudah  kolagen terekstrasi pada tulang. Tetapi, jika konsntrasi terlalu tinggi maka akan menyebabkan  gelatinisasi.  Hasil  esktraksi mnggunakan plarut  asam asetat 0,75 M  dan 0,5  M  memiliki  perbedaan  hasil  rendemen. Ini  dipengaruhi struktur  tulang ikan  gurame yang  cukup  keras  serta  cukup  sulit  untuk diekstraksi  maka  peningkatan  konsentrasi pelarut  asam  asetat  dapat  memaksimalkan proses ekstraksi kolagen (Willy et al., 2021).
Pelarut asam asetat 0,5 M Pelarut asam asetat 0,75 M
Gambar 1. Kolagen  hasil  ekstraksi  menggunakan pelarut asam asetat 2. Uji Karakteristik Kolagen
Pengujian kadar air dilakukan kandungan air kolagen. Kadar air berpengaruh  untuk  ketahanan  kolagen,
banyaknya kandungan air memicu pertumbuhan mikroorganisme yang menyebabkan  kolagen  akan  cepat  rusak (Deny  et  al.,  2015).  Kadar  air  yang  didapat
pada  kolagen  adalah  sebesar  5,357  ± 0,0429%  maka  kolagen  memenuhi  standar SNI 8076-2014 yaitu  maksimal 12%. Kadar abu  diuji  untuk  melihat  kandungan  mineral di  dalam  kolagen.  Kadar  abu  diperoleh sebesar  1,009  ±  0,060%  dan  masih memenuhi syarat SNI yaitu maksimal 1 %.
Analisis nitrogen total kolagen sampel menggunakan  metode  kjeldahl.  Prinsip metode  kjeldahl  diantaranya  destruksi, destilasi  dan  titrasi.  Pada  proses  destruksi sampel  dipanaskan  pada  H 2 SO 4 pekat menyebabkan  terjadinya  penguraian  unsur- unsurnya.  Pada  proses  ini  sampel  yang didestruksi  berubah  menjadi  bening,  reaksi yang terjadi :
Protein + H 2 SO 4 → (NH 4 ) 2 SO 4 + H 2 O +
CO 2 + H 2 SO 4 + matriks produk Destilasi dilakukan dengan penambahan  larutan  NaOH  yang  berfungsi untuk  membebaskan  NH 3 dari  ikatannya. (Chromý et al., 2015). Berikut reaksinya : (NH 4 ) 2 SO 4 +  NaOH  →  2NH 3 +  Na 2 SO 4 + 2H 2 O + NaOH
Asam borat
(H 3 BO 3 ) sebagai penampung  hasil  destilasi  dimana  asam borat  menjadi  penerima  ammonia  sebagai destilat  dalam  bentuk  uap  bersifat  basa (Chromý et al., 2015).  Berikut reaksinya:
NH 3 + H 3 BO 3 →NH 4 H 2 BO 3 + H 3 BO 3
Titrasi  dilakukan  untuk  menghitung jumlah  nitrogen  yang  dihasilkan  dari  ion ammonia  dalam  larutan  penampung.  Titik
akhir  titrasi  ditandai  dengan  perubahan  dari warna  hijau  tosca  menjadi  abu-abu  netral. setelah  penambahan  indikator Bromocresol green-Metilred . Berikut reaksinya :
2NH 4 H 2 BO 3(aq) +  2HCl (aq) →  2NH 4 Cl (aq) + H 3 BO 3(aq)
Berdasarkan  hasil  pengamatan  total nitrogen  (%N)  yang  dilakukan  dua  kali pengerjaan  (duplo)  total  nitrogen  berhasil dianalisis  12,12%.  Maka  sesuai  dengan standar  yang  ditetapkan  SNI  8076-2014, yaitu persyaratan untuk  kadar nitrogen total ada  pada  rentang  12-14%.  Adapun  untuk mengetahui  hasil  kadar  protein  yang dihasilkan adalah dengan mengkalikan hasil %N  dengan  faktor  konversi  dari  protein yakni  6,25  sehingga  pada  penelitian  ini didapat kadar protein sebesar 75,718%.
Identifikasi  gugus  amida  kolagen dengan  spektrofotometer  FTIR.  Analisis gugus  amida  kolagen  hasil  ekstraksi  tulang ikan  gurame  yang  telah  di freeze  dry teridentifikasi  gugus  Amida  A,  B,  I,  II  dan III.

## Tabel 2. Hasil identifikasi gugus amida kolagen sampel dan standar
Gambar 2. Spektrum FTIR kolagen sampel (merah) dan standar (hitam)
Spektrum  kolagen sampel  dan standar menunjukan  terdeteksinya  gugus  amida  A, amida B, amida I, amida II dan amida III.
Gugus NH-Stretching (Amida A) yang terdeteksi sebagai indeks terdapatnya ikatan hidrogen pada gugus amida. Amida B  yang terdeteksi menunjukan adanya vibrasi regangan  simetris  dari  gugus  CH 2 .  Amida  I yang  terbentuk  pada  kolagen  standar  dan sampel menunjukan adanya vibrasi regangan  C=O  dimana  amida  ini  berperan
sebagai  indikato  adanya  serin  dari  protein kolagen. Amida II pada kolagen standar dan sampel,  menunjukkan  adanya  NH  bending, CN stretching, diamana  panjang gelombang ini  menunjukkan  kolagen  yang  dihasilkan memiliki struktur beta-sheet yang menjelaskan bahwa kolagen belum terdegradasi  menjadi  gelatin,  Amida  III pada kolagen standar dan sampel menunjukan  bahwa  kolagen  yang  terdeteksi belum  terdenaturasi  karena  masih  terdapat struktur tripel helix (Suptijah et al., 2018).
Differential Scanning Calorimetry (DSC)  merupakan  salah  satu  cara  untuk mengetahui  titik  leleh  kolagen  (Sultra, 2007).  DSC  untuk  melihat  ketahanan kolagen apabila diberikan perlakuan terhadap  suhu  tertentu.  Suhu  dari  kolagen sampel menunjukkan titik transisi 142,36˚C (T max )  dengan  suhu  awal  pelelehan  (T onset ) 12.
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 1236 1558 1652 2934 3484 1287 1558 1683 3459 Wave numbers (cm -1 ) Kolagen Sampel Kolagen Standar 2926
Amida Wilayah serapan (cm-1) Puncak serapan (cm-1) Keterangan Standar Sampel Amida A 3400-3500 3484 3459 Gugus NH streching Amida B 2935-2915 2934 2926 Gugus CH2 streching Amida I 1690-1600 1652 1683 Gugus C=O streching Amida II 1575-1480 1558 1558 NH bending,CN streching Amida III 1300-1200 1236 1287 NH bending,CN streching

## Pharmacoscript Volume 7 No. 2 Agustus 2024
Gambar 3. Thermogram DSC kolagen sampel dan standar
Kolagen  standar  menunjukan  suhu maksimal  transisi  (T max )  225-241˚C  dengan titik awal pelelehan (T onset ) 223,47-239,92˚C dan  titik  akhir  pelelehan  (T endset )  229,08- 243,87˚C. kolagen sampel menunjukan suhu maksimal  transisi  (T max )    142,36˚C  dengan titik awal pelehan (T onset ) 120,41˚C dan titik akhir pelelehan (T endset ) 155,65˚C. Hasil dari perbandingan  antara  kolagen  sampel  dan standar  memiliki  perbedaan  yakni  kolagen sampel  memiliki  titik  pelelehan  yang  lebih rendah,  perbedaan  titik  pelelehan  ini dipengaruhi  oleh  komposisi  asam  amino terutama  hidroksiprolin  dan  prolin.  Hal  ini disebabkan oleh karena  adanya asam  amino hidroksiprolin  dan  prolin  mempunyai  suatu cincin  pirolidin  dan  ikatan  hidrogen  yang menjaga  kestabilan  polipeptida  (Rini  et  al., 2023).  Perbedaan  suhu  pelelehan/stabilitas termal  dari  suatu  kolagen  karena  setiap asam  amino memiliki  karakteristik  termal yang  berbeda-beda  dalam  mempertahankan
denaturasi  apabila  diberikan  perlakuan panas  (Dewi  et  al.,  2017).  Semakin  tinggi nilai  T max menunjukan  nilai  stabilitas termal paling tinggi (Rini et al., 2023) .
3. Pembuatan Minuman Serbuk

## Instan dan Uji Syarat Mutu
Pembuatan  minuman  serbuk  instan dibuat  dengan  perbedaan  konsentrasi  asam sitrat.  Asam  sitrat  yang  digunakan  tidak lebih  dari  8%  (Allen,  2009).  Digunakan perbedaan  konsentrasi  asam  sitrat  karena asam  sitrat  mempengaruhi  citra  rasa  dari minuman  serbuk    dengan  memodifikasi manisnya gula dan asam sitrat juga berperan sebagai antioksidan yang berpengruh terhadap  oksidasi  suatu  produk  (Emy Oktaviani, 2018). Sediaan dibuat dalam tiga formula.  Formula  I  sediaan  dengan  asam sitrat  2,5%,  Formula  II  asam  sitrat  3.75% dan  Formula  III  asam  sitrat  5%  terlampir pada Gambar 4.
Gambar 4. Sediaan Formula I, Formula II dan Formula III
Tabel  3. Hasil  Kadar  Air  Minuman  Serbuk Instan No. Formula Kadar air (%) 1. F1 2,743 ± 0,043 2. F2 2,827 ± 0,013 3. F3 2,923 ± 0,027
Kadar  air  pada  sediaan  berpengaruh pada  lama  penyimpanan.  Karena  kadar  air yang  kecil  dapat  menghambat  perusakan pada sediaan. Hasil menunjukan Formula I , Formula  II  dan  Formula  III  memenuhi syarat  SNI01-4320-1996.  Dimana  kadar  air minuman serbuk maks 3%.
Tabel 4. Hasil Kadar Abu Minuman Serbuk Instan
No. Formula Kadar abu (%) 1. F1 0,965  ± 0,003 2. F2 0,943 ± 0,004 3. F3 0,928 ± 0,007
Dari  uji  kadar  abu  minuman  serbuk dikatakan bahwa sesuai SNI yaitu maksimal
1,5% dengan kadar abu terbaik diperoleh F3 karena memiliki hasil lebih kecil dibandingkan dengan ketiga formula.
Pada  uji  bagian  tak  larut  air  formula harus  memiliki  kelarutan  dalam  air,  jika terdapat  bagian  yang  tak  larut  air  artinya terdapat pengotor pada sediaan.
Tabel  5. Hasil  Bagian  Tak  Larut  Air
Minuman Serbuk Instan No. Formula Bagian Tak Larut Air (%) 1. F1 0,967 2. F2 1,334 3. F3 1,555
Dari hasil tersebut didapatkan formula I  menghasilkan  bagian  tak  larut  air  paling kecil,  artinya  bagian  tak  larut  air  FI  lebih baik dari pada ketiga formula.
Sediaan  diuji  kesukaan  atau  uji hedonk dilakukan untuk  mengetahui tingkat penerimaan  panelis  dilihat  dari  rasa,  warna serta  aroma  dari  minuman  serbuk  instan pada  30  responden.  Dari  hasil  yang diperoleh  untuk  warna  terbanyak  disukai adalah  Formula  II  .  Aroma  terbanyak disukai  Formula  III,  Rasa  yang  paling banyak  disukai  adalah  Formula  III  dan parameter  kelarutan  yang  terbanyak  disukai responden  yakni  Formula  III  dari  hasil  data uji hedonik ini dianalisis data secara statistik menggunakan  aplikasi  SPSS  versi  28.0.0.0 analisis  data  pada  peneltian  ini  diantaranya, Uji  univariate  ( test  of  between  subject effect ), uji ini digunakan untuk melihat nilai
signifikansi kemudian dilakukan Uji lanjutan  atau  Uji  post  hoc  dengan Test Duncan (Bambang  et  al.,  2011) . Dari  hasil yang  didapatkan  dengan  melihat  hasil Test Duncan diperoleh  hasil  dimana  Formula  III menjadi  formula  terbaik.  Ketiga  formula memiliki syarat dan mutu sesuai SNI hanya saja dari segi kesukaan Formula III menjadi formula  terbaik  karena  dari  30  responden memilh  Formula  III  sebagai  paling  banyak disukai.

## KESIMPULAN
Pada  penelitian  ini  dapat  ditarik kesimpulan  yakni  dapat  diperoleh  kolagen dari  tulang  ikan  gurame  yang  memenuhi standar SNI No 8076:2014, sediaan Formula I  memeuhi  SNI  bagian  tak  larut  air  tetapi dari  segi  citra  rasa  Formula  III  menjadi sediaan yang paling banyak disukai responden  dan  memenuhi  syarat  mutu minuman  serbuk  sesuai  SNI  No.  01- 4320:1996.

## DAFTAR PUSTAKA
Allen,L.V.(2009). Handbook of Pharmaceutical Excipients, Sixth
Edition (R. R. C., P. J. Sheskey, & M. E.  Queen  (eds.)).  Pharmaceutical Press  and  American  Pharmacists
Assosiation
Ata,  S.  T.  W.,  Yulianty,  R.,  Sami,  F.  J.,  & Ramli,  N.  (2016).  Isolasi  Kolagen
Dari Tulang Ikan
Cakalang (Kotsumonus  pelamis).  Journal  of Pharmaceutical and Medicinal Science 1(1), 27-30.
Bambang,  A.,  Wayan,  I.,  &  Gusti,  A.
(2011).  Rancangan  Percobaan  Teori,
Aplikasi
SpssExcel.LintasKataPublishing:Mala nghttps://www.itis.gov/servlet/Single Rpt/SingleRpt?search_topic=TSN&se arch_value=369#
BPS,2022https://binjaikota.bps.go.id/indicat or/56/129/1/produksi-ikan-tawar.html diakses  pada  tanggal  20  November 2023
Chromý,  V.,  Vinklárková,  B.,  Šprongl,  L.,
&  Bittová,  M.  (2015).  The  Kjeldahl Method  as  a  Primary  Reference Procedure  for  Total  Protein  in Certified Reference Materials  Used in Clinical  Chemistry.  I.  A  Review  of
Kjeldahl Methods Adopted by Laboratory Medicine. Critical ReviewsinAnalyticalChemistry,45(2),
106–111.
Dewi,  S.  G.,  Trilaksani,  W.,  &  Tati,  N. (2017). Histologi, Ekstraksi dan Karakterisasi  Kolagen  Gelembung Renang  Ikan  Cunang  (Muarenesox talabon).  Jurnal  Ilmu  Dan  Teknologi Kelautan Tropis, 9(2), 665–683 Emy  Oktaviani.(2018).  Penentuan  Kadar Flavonoid  danAktivitas  Antioksidan
Formula  Serbuk  Minuman  Instan Ekstrak  Belimbing  Manis  (Averrhoa carambola  L.).  Fitofarmaka :  Jurnal Ilmiah Farmasi, 8(1).
Hashim  P,  Ridzwan  M,  B.  J.  dan  H.  M.
(2017). Collagen in food and beverage industries. International Food Research Journal, 22(1), 1–8 Nasional,  B.  S.  (1996).  Standar  National Indonesia01-4320-1996 :Serbuk
Minuman Tradisional. 1–6
Nasional,  S.B.  (2014).  Standar  National
Iindonesia 8076:2014 Kolagen
Kolagenn  kasar  dari  sisik  sisik  ikan Syarat  mutu dan pengolahan Noorman.  (2016).  Perbandingan  Produksi Kolagen  Dari  Sisik  Dan  Tulang  Ikan Gurami  (  Osphronemus  Gouramy  ) Secara  Kimia  Dan  Enzimatis  Oleh :
Perbandingan  Produksi  Kolagen  Dari Sisik  Dan  Tulang  Ikan  Gurami  ( Osphronemus  Gouramy  ).  Artikel Teknologi Pangan UNPAS, 15.
Rini,  A.,  Dewi,  R.,  &  Rahmi,  N.  (2023).
Pengecilan Ukuran Partikel dan Karakterisasi Kolagen Dari Kulit Ikan Gabus  (Chana  striata)  dengan  Metode Ball  Milling.  Jurnal  Sains  Farmasi Dan Klinis, 10(1), 44–53.
Simanjuntak, B. (2013). Pengolahan
Kolagen Kulit Ikan Nila Merah.  Balai
Besar Penelitian Pengembangan
Pengolahan  Produk  dan  Bioteknologi Kelautan dan Perikanan : Jakarta.
Sugiharto, Erwanto, Y., W. (2019). Kolagen dan gelatin untuk Industri Pangan dan Kesehatan. Lily Publisher.
Suptijah, P., Indriani, D., & & Wardoyo, S.
E.  (2018).  Isolasi  Dan  Karakterisasi Kolagen  Dari  Kulit  Ikan  Patin (Pangasius  Sp.).  Jurnal  Sains  Natural, 8(1), 8.
Sultra,  Yudi  Kurniadi.(2007).  Pembuatan Dan  Pencirian  Poli(Asam  Glikolat) Metode  Solid  State  Polymerization. Bogor:Institut  Pertanian  Bogor.hlm  4- 5
Takemori,  T.,  Yasuda,H.,  Mitsui,M.,  &
Shimizu,H.(2007).Collagen containing food  and  drink.  Pub.No:  US  2007/ 0009638 A1.
Willy,  P.  W.,  Thomas,  G.,  &  Septiadji,  M. R. (2021). Penambahan Kolagen Sisik
Dan Tulang Ikan Gurami (Osphronemus Goramy) Pada
Minuman  Jus  Jambu  Biji  (Psidium Guajava)TechnologyJournal(PFTJ).