Volume 8, Nomor 2 Halaman 1-4
Perubahan Histologis Uterus Tikus Putih ( Rattus norvegicus ) Galur Wistar: Aktifitas Antifertilitas Ekstrak Kulit Biji Mete ( Anacardium occidentale L.)

## HARLITA, RIEZKY MAYA PROBOSARI, JOKO ARIYANTO
P. Biologi PMIPA FKIP UNS *email: lita_uns@yahoo.co.id
Manuscript received: 11 Mei 2015 Revision accepted: 28 Juli 2015

## ABSTRACT
On  the  issue  of  distribution  of  teachers,  for  example,  we  have  not  been  able  to  spread  evenly  elementary  teachers  in remote homeland. In fact, the number of primary school teachers as a whole are not including less. As a result, there was a  shortage  of  teachers  locally  everywhere,  especially  in  the  small,  difficult  and  remote.  On  the  issue  of  disparity  in quality,  basil  learn  the  average  elementary  school  student  in  the  big  cities  are  generally  much  higher  than  their counterparts in remote areas. Perhaps a more appropriate blamed is because we have not found the proper techniques to perform Duplicate Classroom Management (PKR). Understanding the nature or essence of PKR, PKR is expected to no longer  regard  as  a  difficult  problem  to  overcome.  In  contrast,  the  self  will  grow  understanding  that  PKR  is  a  definite challenge  to  overcome.  The  purpose  of  this  study  was  to  determine  how  the  management  class  for  Elementary  School Teachers Experiencing Shortage of the Frontier or Remote province of East Kalimantan that occurred during this time, to find  out  what  happened  to  the  problem  of  learning  patterns  that  have  been  implemented  in  elementary  schools Experiencing Shortage Teachers  in the Frontier or Remote East Kalimantan Province and develop a model to solve the problems that occurred in the study that had been conducted at the Primary School Teachers Experiencing Shortage of the Frontier  or  Remote  Kalimantan  Timur.Model development  modeled  after  Dick  &  Carey  with  steps  to  identify  learning objectives,  learning  analysis,  analysis  of  student  characteristics,  formulate  learning  indicators,  developing  test  items, develop  learning  strategies,  developing  and  selecting  materials,  designing  formative  evaluation  and  revise  teaching materials. Classroom management model appropriate to deal with problems in elementary Sebatik Island due to shortage of  teachers  is  classroom  management  model  in  the  sense  that  221  teachers  teach  two  classes,  two  subjects  in  the  same room. This model is considered to be appropriate to the circumstances on the island of Sebatik who have never applied for duplicate classroom management model management model 221 is a model of the simplest of the three models in the management of dual class.
Keywords: kulit biji mete, histologis uterus, tikus putih

## LATAR BELAKANG
Konsep  pengaturan  fertilitas  bukan  merupakan  hal  yang baru. Sejumlah tumbuhan maupun ekstrak tumbuhan telah digunakan  sebagai  agen  antifertilitas  secara  turun temurun. Banyak tumbuhan digunakan sebagai kontrasepsi (mencegah ovulasi atau fetilisasi), abortifasien (mencegah implantasi) dan oksitosi (merangsang kontraksi uterus). Tumbuhan  atau ekstrak tumbuhan yang berpotensi  sebagai  aborsi,  kontrasepsi,  abortifasien  dan sterilitas dikenal sebagai agen antifertilitas (Kumar et al ., 2012).  Mete  ( Anacardium  occidentale L.)  merupakan salah  satu  tanaman  tropis  yang  berasal  dari  Brazilia, Amerika  Selatan.  Tanaman  ini  disebarkan  oleh  pedagang Portugis  ke  daerah  lain,  pada  awal  abad  ke  16  misalnya India,  Afrika  dan  Asia  Tenggara,  termasuk  Indonesia (Lilia, et  al .,  1991).  Pembudidayaan  tanaman  mete  yang mempunyai nilai ekonomi yang tinggi akan mengeluarkan limbah  kulit  biji  mete.  Kulit  biji  mete  yang  dianggap sebagai  limbah  ternyata  mengandung  30% Cashew  Nut Shell Liquid (CNSL) atau minyak laka (Lilia et al .,1991). Minyak laka (CNSL) merupakan senyawa fenolik (Konan et.  al .,  2007).  Hasil  ekstraksi  CNSL  mengandung    80% asam  anakardat,  15%  kardol  dan  sejumlah  kecil  derivat kardol  yakni  metil  kardol  dan  kardanol  (Sulivan et  al .,
1982; Simpen, 2008).  Berbagai efek asam anakardat telah dilaporkan,  antara  lain  sebagai  bakterisidal,  fungisidal mematikan cacing dan protozoa (Kubo et al. 1993). Asam anakardat  juga  mempunyai  aktifitas  antifertilitas  dan  anti implantasi.  Prasad et  al. (2007)  meneliti  pada  tikus menunjukkan  bahwa  pemberian anacardic  acid  methyl ester  in  presence  of  oil (AAMEO) mempunyai  aktifitas antiimplantasi  81,3%  dan  antifertilitas  60%.  A nacardic acid  methyl  ester  in  presence  of  ethanol (AAMEE) mempunyai aktifitas antiimplantasi   37% dan antifertilitas 20%.
Harlita,  dkk.  (2013)  meneliti  ekstrak  kulit  biji  mete mempengaruhi  ketebalan  lapisan  endometrium  tikus albino.  Penelitian  Harlita  dkk  (2015)  bahwa  ekstrak  kulit biji  mete  mempengaruhi  kadar  hormon  progesteron  tikus putih. Progesteron merupakan hormone yang mempengaruhi
Siklus  estrus  merupakan  perubahan  hormonal  yang terjadi pada ovarium. Pada tikus terdiri dari 4 fase utama, yaitu  proestrus,  estrus,  metestrus  dan  diestrus  (Taylor, 1994).  Siklus  ini  dapat  dengan  mudah  diamati  dengan melihat  perubahan  sel-sel  penyusun  lapisan  epitel  vagina yang  dapat  dideteksi  dengan  metode  apus  vagina pewarnaan Giemsa (Brancroft and Steven,1996).
Uterus  merupakan  salah  satu  organ  reproduksi  betina yang berfungsi sebagai penerima dan tempat perkembangan  ovum  yang  telah  dibuahi.  Uterus  pada tikus  berupa  tabung  ganda,  disebut  tipe  dupleks (Partodihardjo,  1988).  Dinding  uterus  secara  histologis terdiri dari tiga lapisan utama, yaitu lapisan endometrium, miometrium  dan  perimetrium  (Burkitt et  al .,  1993; Ozdemir  &  Atalar,  2009).  Endometrium  tikus  terdiri  dari epitel kolumnar bersilia dan lapisan basal lamina propria. Lamina  propria  disusun  oleh  jaringan  pengikat  longgar, serabut  kolagen,  fibroblas  dan  dan  limposit  ditemukan diantara jaringan (Gartner & Hiatt, 1997). Kelenjer uterus ditemukan pada lamina propria (Saruhan et al ., 2006).
Miometrium  terdiri  dari    otot  polos  yang  tersusun sirkular  di  bagian  dalam  dan  longitudinal  di  bagian  luar. Perimetrium disusun oleh jaringan pengikat dan sejumlah pembuluh darah (Dellmann & Carithers, 1996).
Uterus memperlihatkan perubahan siklik baik struktural maupun fungsional sebagai respons atas hormon estrogen  dan  progesteron  ovarium.  Perubahan  ini menyiapkan  uterus  untuk  implantasi  serta  tempat  makan embrio  dan  fetus.  Apabila  implantasi  tidak  terjadi, pembuluh  darah  di  dalam  endometrium  akan  melemah (Dellmann dan Brown, 1992). Gangguan pada uterus akan mempengaruhi implantasi
embrio
sehingga mempengaruhi fertilitas.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh ekstrak kulit biji mete terhadap struktur uterus tikus putih.

## METODE

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  :  tikus  putih galur Wistar betina umur 2,5 bulan, dengan berat 150-200 gram,  yang  berasal  dari  LPPT  UGM  Unit  IV.  Bahan pembuatan  ekstrak:  kulit  biji  mete,  etanol  destilat  96%, kertas  saring,  akuades,  larutan  Natrium  Karboksil  Metil Sellulosa  (CMCNa)  0,5%.  Bahan  pembuatan  preparat apusan  vagina:  larutan  NaCl  fisiologis,  metanol,  pewarna Giemsa.
Bahan  pembuatan  preparat  histologis  uterus:  uterus, larutan  buffer  formalin    (formalin  40%  100  ml,  Sodium phospate monobasic 4 gr, Sodium phospate dibasic 6,5 gr, akuades)  ,  metanol  absolut,  parafin  59-60 0 C,  albumin, pereaksi  perekat  Albumin-Meyer  (albumin  telur,  gliserin, timol), xylene, larutan alkohol dengan berbagai konsentrasi (70%, 80%, 96% dan alkohol absolut), kanada balsam, pewarna Hematoksilin Erlich, larutan eosin 0,5% dalam etanol 70%.

## Alat
Alat perlakuan hewan uji: Kandang hewan uji, timbangan hewan,    sonde  lambung.  Alat  untuk  pengamatan  estrus: cutton  bud,  objek  glass, mikroskop  cahaya.  Alat  yang digunakan  pembuatan  preparat  histologis  uterus:  alat gelas,  peralatan  bedah,  oven,  mikrotom,  staining  jar,  hot plate,  lampu  spiritus,  spatula,  kuas,  pipet  tetes,  kertas saring,  kapas,  tisue,  kaca  benda  dan  kaca  penutup.
Mikrosokop  binokuler  merk  Nikon  tipe  Eclipse  50i, dilengkapi dengan USB kamera digital tipe sight DS-U2.

## Tempat Penelitian
Pembuatan  ekstrak  uji  di  Laboratorim  Penelitian  dan Pengujian  Terpadu  (LPPT)  Unit  III  UGM.  Perlakuan hewan  uji,  pembuatan  dan  analisis  preparat  histologis dilakukan di Laboraorium P. Biologi FKIP UNS.

## Metode
Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  dengan  3  perlakuan yaitu  P1. kontrol, P2. placebo (larutan CMCNa 0,5%) dan P3.  pemberian  ekstrak  kulit  biji  mete    dosis  300  mg/  kg berat badan (BB).  Hewan uji digunakan sebanyak 18 ekor tikus  putih  betina.    Pemberian  ekstrak  dilakukan  secara oral selama 25 hari (5-6 kali siklus estrus). Sampel uterus untuk  pembuatan  preparat  histologis  diambil  saat  estrus pada  akhir  perlakuan.    Uterus  dibuat  sediaan  histotologis dengan pewarnaan HE dengan ketebalan 4-5 μ.

## Analisis Data
Preparat  histologis  dibuat  seri,  lalu  diamati  di  bawah mikroskop  dan  dianalisis  secara  kualitatif  dengan membandingkan struktur histologis antar perlakuan.

## HASIL
Struktur  histologis  uterus  ketiga  kelompok  perlakuan dapat dilihat pada Gambar 1 dan 2.
Gambar  1.  Struktur  uterus  P1,  P2  dan  P3.  Pewarnaan  HE, Perbesaran  100x P1.  Kontrol,  P2.  Larutan  CMCNa  0,5% dan P3. Ekstrak kulit biji mete 300 mg/kg bb.
Gambar  1  terlihat  struktur  uterus  semua  perlakuan. Struktur  uterus  kelompok  P1  dan  P2  terlihat  lumen  yang bersih,  lebar  dan  epitelnya  tersusun  teratur.  Daerah endometrium terlihat berukuran lebih tebal. Kelompok P3 terlihat  lumen  yang  relatif  sempit,  daerah  endometium yang  relatif  tipis  dan  sel-sel  penyusunnya  tersusun longgar,  serta  tebal  epitel  yang  lebih  tipis  dari  pada kelompok P1 dan P2.
Gambar 2. Struktur endometrium perlakuan P3. Pewarnaan HE, Perbesaran 400x
Gambar  2  terlihat  adanya  sel  epitel  lain  yang  terdapat di  bagian  lumen  yang  merupakan  pelepasan  dari  bagian mukosa epitel, sehingga epitel menjadi lebih tipis.  Sel-sel epitel    di  daerah  endometrium  terlihat  mengalami  lisis, terlihat  adanya  vaskularisasi  jaringan,  dimana  epitel menempel  di  kelenjer  sehingga  lamina  propria  menjadi tipis.  Hal ini disebabkan oleh pemberian ekstrak kulit biji mete,  dimana  ekstrak  kulit  biji  mete  menyebabkan
perubahan  pada  struktur  sel  penyusun  endometrium. Perubahan  struktur  endometrium  akan  mempengaruhi kemampuan endometrium untuk implantasi embrio.
Gambar 3. Struktur sel epitel P1, P2 dan P3. Pewarnaan HE, perbesaran 400x P1. Kontrol, P2. Larutan CMCNa 0,5% dan P3. Ekstrak kulit biji mete 300 mg/kg bb
Gambar  3  untuk    P1  dan  P2  terlihat  struktur  epitel endometrium nya adalah epitel kolumnar tinggi. Beberapa sel  mempunyai  silia,  siasanya  memiliki  mikrovili permukaan. Struktur epitel seperti ini berhubungan dengan fungsinya  sebagai  tempat  implantasi  bagi  embrio.  P3 terlihat struktur epitel endometrium yang berubah menjadi epitel selapis kubus dan tidak terlihat adanya silia. Hal ini terjadi  karena  adanya  pengelupasan  dari  lapisan  mukosa epitel  sehingga  epitel  silindris  yang  terdapat  pada  bagian atas terkikis, sehingga  yang tertinggal adalah  sel epitel di bagian  basal  yang  berbentuk  kubus.  Adanya  perubahan struktur  epitel  ini  bisa  menyebabkan  implantasi  embrio tidak melekat erat, sehingga bisa menyebabkan aborsi. Hal ini sesuai dengan pendapat Anderson and Conning (1988) bahwa senyawa-senyawa yang mempunyai sifat
estrogenik  atau  anti  estrogenik  akan  mempengaruhi fertilisasi.  Pemberian  zat  senobiotik  tertentu  pada  tikus betina  dapat  menyebabkan  uterotropik  (meningkatnya berat  uterus).  Darios et  al .  (2012)  juga  menyatakan kehamilan  dapat  terjadi  bila  struktur  epitel  endometrium dan  otot-otot  penyusun  endometrium  tidak  mengalami perubahan.
Endometrium P3 juga terlihat adanya perlemakan. Hal ini disebabkan karena ekstrak kulit biji mete bersifat  lipid sehingga dengan  mudah  masuk ke bagian dalam/ nukleus dari sel. Dengan cara difusi   ekstrak  kulit biji  mete dapat melewati  membran    sel  yang  bersifat  lipid  bilayer, sehingga  terjadi  penumpukan  lemak  di  dalam  sel.  Akibat adanya kelebihan lemak di dalam sel, organel sel (tertama Aparatus Golgi) akan bekerja lebih keras untuk mengubah lemak  ini  menjadi  metabolit  sehingga  dapat  mengganggu kerja sel. Hal ini juga dapat diamati pada kelompok hewan yang  diberi  perlakuan,  vaginanya  selalu  basah  dan lengket.  Ekstrak  kulit  biji  mete  mengandung  senyawa yang  bersifat  fenolik,  dimana  senyawa  fenolik  ini  akan memasuki reseptor- reseptor hormon yang dapat berikatan dengan  fenolik  seperti  hormon  testosteron,  estrogen, progesteron dan prostaglandin.

## KESIMPULAN
Hasil  penelitian  tentang    Perubahan  Histologis  Uterus Tikus Putih ( Rattus norvegicus ) Galur Wistar   : Aktifitas Antifertilitas  Ekstrak  Kulit  Biji  Mete    ( Anacardium occidentale L.) dapat disimpulkan bahwa ekstrak kulit biji mete  menyebakan  perubahan  struktur  uterus  tikus  albino. Terjadi perubahan susunan epitel endometrium dari epitel berlapis kubus bersilia menjadi epitel selapis kubus.

## DAFTAR PUSTAKA
Anderson,  D.  &  Conning,  D.M.  (Eds),  (1988). Experimental Toxicology, The basic Issues: Assessing Chemical Injury to the Reproductive System. The Universities Press ( Belfast) Ltd, London.
Burkit,  H.G.B.,  Young,  B.  &  Heat,  J.W.  (1999). Wheathers Functional  Histology .  A  text  and  Color  Atlas.  Third  ed. Churchill Livingstone. Edinburg.
Darios,  E.S.,  Seitz,  B.  &  Watts,  S.W.  (2012).  Smooth  Muslce Pharmacology  in  the  Isolated  Virgin  and  Pregnant  Rat Uterus  and  Cervix. J  of  Pharmacol  and  Therapeu ,  341, 587-596.
Gartner, L.P. & Hiatt, J.L. (1997). Color Textbook of Histology . W.B. Saunders Co. USA.
Harlita,    Probosari,  R.M.  &  Fatmawati,  U.  (2013).  Pengaruh Ekstrak    Kulit  Biji  Mete  ( Anacardium  occidentale L) terhadap Struktur Uterus Tikus Albino. Prosiding Seminar Nasional Biodiversitas , 1, 186-191.
Harlita,  Marjono,  Probasari,  R.M.  (2015).  Potensi  Rodentisida Ekstrak  Kulit  Biji  Mete  ( Anacardium  occidentale L.): Kadar Hormon Progesteron Tikus Putih ( Rattus novergicus )  Betina. Prosiding  Seminar  Nasional  APTA , 1, 120-126.
Konan,  N.A.,  Bacchi,  E.M.,  Lincopan,  N.,  Varela,  S.D.  & Varanda,  E.A.  (2007).  Acute,  Subacute  Toxicity  and Genotoxic  Effect  of  the  Hydroethanolic  Extract  of  the Cashew ( Anacardium occidentale L). J of Etnhopharmacology , 110, 30-38.
Kubo I, Murai H, & Himejima M. (1993). StructureAutibacterial Activity  Relationship  of  Anacardic  Acids. J  Agric  Food Chern , 41.
Kumar,  D.,  Kumar,  A  &  Prakash,  O.  (2012).  Potential Antifertility  Agents  from  Plants:  A  Comprehensive Review. J of Ethnopharmacology , 140: 1-32.
Lilia,S.P.M.,  Quimaldi,  R.O.,  Flavier,  M.E.  &  Villau,  M.S.. (1991).  Studies  on  Cashew  ( Anacardium  occidentale L.) Nut Oil. The Philippine Agriculturist , 74 (4), 511.
Ozdemir,  D.  &  Atalar,  O.  (2009).  Observations  on  the Morphology  of  the  Uterus  of  the  Porcupine  ( Hystrix cristata ). Veterinary Archiv , 79 (4), 379-384.
Prasad,  F.E.,  Shirish,  P.S.,  Raghunath  ,P.D.  &  Samir,  S.S. (2007). In  Vivo Anti-Fertility  and  Anti-Implantation Activity  of  Anacardic  Acid  Methyl  Ester  in  Rats. Pharmacologyonline 3.
Saruhan,  B.D.,  Ozbag,  G.,  Ozdemir,  N.  &  Gumusalan,  Y. (2006).  Comparative  Effect  Ovariectomy  and  Flutamin  on Body Uterus Ovariectomized Rat Model. J. Inonu Med. 13, 221-226.
Simpen, I N. (2008). Isolasi Cashew Nut Shell Liqiud dari Kulit Biji  Mete  ( Anacardium  occidentale L)  dan  Kajian Beberapa Sifat Fisiko Kimianya. Jurnal Kimia , 2 (2).
Sullivan,  J.T.,  Richards,  C.S.,  Lloyd,  H.A.,  &  Khrishn,  G.
(1982).  Ancardic  Acid:  Moluscicide  in  Cashew  Nut  Shell Liquid. Planta Medica , 44, 175-177.
Taylor,  P.  (1994). Practical  Teratology .  WB  Saunders  Co. London.