## Analisis fitokimia dan aktivitas antimikroba ekstrak diklorometan kulit batang
Melochia umbellata (Houtt) Stapf var. Degrabrata

## Phytochemical analysis and antimicrobial activity of dichloromethane extract
Melochia umbellata (Houtt) Stapf var. Degrabrata stem bark

## Usman
Program Magister Pendidikan Kimia, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Mulawarman, Samarinda, Kalimantan Timur, 75123, Indonesia sainusman@ymail.com

## Abstrak
Telah  dilakukan  uji  fitokimia  dan  penentuan  aktivitas  antimikroba  ekstrak  diklorometana Melochia umbellata (Houtt)  Stapf  var  Degrabrata  terhadap  bakteri  uji Staphillococcus  aureuasn,  Bacillus substilis,  Escerecia  coli, dan Salmonella  tiphy serta  jamur  uji Candida  albicans,  Malassezia  furfur, dan Aspergillus niger. Tujuan dari penelitian ini adalah menentukan senyawa mentabolit sekunder dan potensi mikroba ekstrak diklorometana kulit batang M. umbellata . Uji fitokimia ekstrak diklorometana kulit  batang M.  umbellata secara  kualitatif  yang  terdiri  dari  uji  alkaloid,  flavonoid,  triterpenoid, steroid, saponin, dan tanin. Metode yang untuk penentuan aktivitas antimikroba adalah metode difusi agar  menggunakan  kertas  cakram.    Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  diklorometana kulit  batang M.  umbellata mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  golongan;  alkaloid,  flavonoid, triterpenoid, dan senyawa fenolik. Pada konsentrasi 1.000 ppm, ekstrak diklorometana kulit batang M. umbellata memiliki  daya  hambat  tertinggi  terhadap  pertumbuhan jamur  uji C.  albicans dengan  zona hambatan  16,0  mm  dengan  kategori  kuat.  Kemudian  pada  konsentrasi  1.000  ppm,  ekstrak diklorometana juga dapat menghambat pertumbuhan bakteri uji S. aereus dan E. coli masing-masing dengan  zona  hambatan  13,0  mm  dan  12,0  mm  dengan  kategori  sedang.  Ekstrak  diklorometana berpotensi dikembangkan sebagai antimikroba terutama untuk jamur C. albicans , dan bakteri S. aereus dan E. coli.
Kata kunci: Antimikroba; ekstrak diklorometana; fitokimia; Melochia umbellata

## Abstract
Phytochemical tests and determination of the antimicrobial activity of the dichloromethane extract of Melochia  umbellata (Houtt)  Stapf  var  Degrabrata  have  been  carried  out  against  bacteria  i.e. Staphillococcus aureuasn, Bacillus substilis, Escerecia coli, and Salmonella  tiphy as well as the test and fungus i.e. Candida albicans, Malassezia furfur , and Aspergillus niger . The aim of this research was  to  determine  secondary  metabolite  compounds  and  the  microbial  potential  of  dichloromethane extract  of M.  umbellata stem  bark.  Qualitative  phytochemical  test  of  the  dextract  consisting  of alkaloid,  flavonoid,  triterpenoid,  steroid,  saponin  and  tannin  tests.  The  method  for  determining antimicrobial activity is agar diffusion method using disc paper. The results of this study indicate that the dichloromethane extract of M. umbellata stem bark contains secondary metabolite compounds of alkaloids, flavonoids, triterpenoids, and phenolics. At a concentration of 1,000 ppm, the extract has the highest inhibitory power against the growth of C. albicans with an inhibition zone of 16.0 mm in the strong category. Then at a concentration of 1,000 ppm, the extract can also inhibit the growth of the S. aereus and E.  coli ,  respectively,  with  an  inhibition  zone  of  13.0  mm  and  12.0  mm  in  the  medium category.  The  extract  has  the  potential  to  be  developed  as  an  antimicrobial,  especially  for  the C. albicans , S. aereus and E. coli .
Keyword: Antimicrobial; dichloromethane extract; phytochemicals; Melochia umbellata
Diajukan: 17 Januari 2022

## Pendahuluan
Indonesia  memiliki  sumberdaya  alam  yang sangat melimpah dan beranekaragam. Potensi sumberdaya  alam  yang  ada  di  Indonesia  memiliki sumbangsih  yang  cukup  besar  terhadap  kekayaan sumber daya alam dunia. S alah satu jenis tanaman obat yang terdapat pada hutan tropis Idonesia yaitu Melochia umbellata (famili  Malvaceae).  Jenis  tumbuhan  ini dikenal oleh masyarakat Sulawesi Selatan dengan nama Paliasa dan sejak  lama  digunakan  oleh  masyarakat sebagai  obat  tradisional,  untuk  mengobati  penyakit liver,  hipertensi,  kolesterol  dan  hepatitis  (Raflizar, 2006).  Kemudian  genus  lain  seperti Melochia chamaedris digunakan  oleh  masyarakat  di  Rio  Grande do  Sul  Brasil  sebagai  agen  antihipertensi  dan  kanker (Dias,  dkk.,  2007). Melochia  tomentosa digunakan sebagai  obat  tradisional  oleh  penduduk  Curacao  untuk mengobati  kanker  dan  bagian  akar  digunakan  untuk mengurangi  pembengkakan  (Kapadia,  1977).  Daun Sterculia  africana  yang  digunakan  sebagai  obat  kejang- kejang (Hamza, 2006).
Senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung pada  ekstrak M.  umbellata yaitu;  adalah  minyak  atsiri, triterpenoid,  alkaloid  lavonoid,steroid,  fenolik,  dan saponin  (Heyne,  1987;  Usman,  2015).  Ridhay,  dkk. (2012)  telah  mengisolasi  senyawa  bioaktif  yaiyu Stigmasterol  terglikosida  (5,22-stigmastadien-3 β -ol) dari  ekstrak  kayu  akar M.  umbellata dan  memiliki aktivitas  antijamur  dan  antibakteri.  Senyawa  tersebut mampu  menghambat  pertumbuhan  jamur Aspergillus niger dan menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli serta Staphylococcus aureus . Senyawa golongan  alkaloid  kuinolinon  (Walherione  C  dan cleomiscosin A) dari ekstrak kayu batang M. umbellata bersifat toksik terhadap A. salina dengan nilai LC 50 0,29 μg/mL (Erwin, dkk., 2014). Ekstrak etil asetat dari kulit batang M.  umbellata  var.  Visena bersifat  toksik terhadap A.  salina dan  bersifat  sangat  toksik  terhadap virus  dengue  dengan  nilai  IC 50 1,67  μg/mL  (Nunuk., dkk., 2018).
Berdasarkan uraian di atas maka kajian mengenai khasiat  senyawa  kimia  aktif  dari  tumbuhan M. umbellata sebagai  antimikroba  masih  perlu  dilakukan. Agar  potensi  bioaktivitas  dan  kandungan  senyawa bioaktif dapat dieksplor dari tanaman M. umbellata .

## Metode Penelitian

## Peralatan dan bahan
Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  alat-alat  gelas  yang  lazim  digunakan  di laboratorium,  rotary  evaporator,  plat  tetes,  seperangkat alat  kromatografi  lapis  tipis,  neraca  analitik,  penyaring Buchner,  kertas  saring  Whatman  No.  42,  autoklaf,  ose, spoit,  keranjang,  spatula,  botol  selai,  botol  vial,  pinset, laminar air flow (LAF) , mikrometer sekrup, pipet tetes, labu  erlenmeyer,  labu  ukur,  batang  pengaduk,  lampu
spiritus,  penangas  air,  cawan  petri,  inkubator,  corong pisah, dan rak tabung.
Bahan  tumbuhan  yang  digunakan  adalah  kulit batang M.  umbellata yang  telah  diidentifikasi  di
Herbarium Bogoriense, Pusat Penelitian dan Pengembangan  Biologi,  LIPI  Bogor,    dengan  nomor spesimen: BO-1912171. Bakteri yang digunakan adalah B. subtilis /ATCC 6633 ,                    S. aureus/ ATCC 25923 (bakteri gram positip), E. coli/ ATCC 25922, dan S.  thypi/ ATCC  6633  (bakteri  gram  negatip),  Jamur  uji yang  digunakan  adalah C.  albicans/ ATCC10231 ,  M. furfur /ATCC  14521  dan A.  niger /ATCC  16404. Medium pengujian adalah media padat SDA (dekstrosa, pepton  casein,  agar  bakteriologis)  dan  PDB  (kentang, glukosa). Medium pengujian adalah media padat Muller Hinton  Agar  (MHA).  Sedang  bahan  kimia  yang digunakan  diklorometana,  nutrient  agar  (NA),  nutrient broth  (NB),  Muller  Hinton  Agar,  Pereaksi  Meyer, Wagner,  Dragendorff,  Perekasi  Liberman-Burchard, HCl, H 2 SO 4 , FeCl 3 , SeSO 4 dan DMSO.

## Ekstraksi dan uji fitokimia
Sebanyak  250  g  serbuk  halus  kulit  batang M. umbellata dimaserasi dengan diklorometana selama 1 x 24  jam  (sebanyak  3  kali).  Ekstrak  diklorometana disaring  dan  disatukan  pada  Erlenmeyer  kemudian dipekatkan  pada  tekanan  rendah  menggunakan  rotary evaporator  suhu  30-40  C  hingga  diperoleh  ekstrak diklorometana  kental.  Ekstrak  diklorometana  tersebut diambil  sebanyak  5  gram  dan  dimasukkan  ke  dalam botol vial untuk dilakukan uji fitokimia, uji antimikroba (antibakteri  dan  antijamur).  Uji  fitokimia  yang dilakukan  secara  kualitatif  diantaranya,  uji  alkaloid dengan  pereaksi  Meyer,  Wagner  dan  Dragendorf;  uji flavonoid  dengan  pereaksi  (serbuk  Mg  dalam  0,2  ml HCl  pekat),  uji  fenolik  dengan  pereaksi  FeCl 3 ,  uji triterpenoid  dan  steroid  dengan  pereaksi  Liberman- Burchard  serta  Uji  saponin  dengan  pereaksi  busa  (Patil dan Khan, 2017; Nain, dkk., 2013).

## Uji antimikroba
Mikroba uji yang digunakan dalam penelitian ini terdiri  dari  bakteri  uji; B.  subtilis,  S.  aureus (bakteri gram positif), E. coli dan S. thypi (bakteri gram negatif) dengan  menggunakan  kontrol  positif  kloramfenikol serta  jamur  uji C.  albicans,  M.  furfur  dan  A.  niger, dengan  kontrol  positif  ketokonazol.  Uji  antimikroba terhadap  ekstrak  diklorometana  kulit  batang M. umbellata dengan  variasi  konsentrasi;  200,  400,  600, 800,  dan  1.000  ppm,  dengan  metode  difusi  agar menggunakan  kertas  cakram.  Kertas  cakram  yang digunakan memiliki diameter lingkaran 6 mm. Inkubasi dilakukan  selama  24  jam  (bakteri)  dan  48  jam  (jamur), diameter  zona  hambat  atau  daerah  zona  bening  yang terbentuk di sekeliling kertas cakram diukur menggunakan  mikrometer  sekrup  Hasil  uji  aktivitas antimikroba  (antibakteri  dan  antijamur)  dapat  dilihat pada Tabel 2 dan 3, serta Gambar 1 dan 2.

## Tabel 1
Hasil uji fitokimia ekstrak diklorometana kulit batang M. umbellata Uji fitokimia Hasil uji Ket. Alkaloid - Pereaksi Meyer
- Pereaksi Wagner
- Pereaksi Dragendorff
kuning – merah kuning – kuning kehijauan jingga – cokelat kemerahan (+) (+) (+) Flavonoid bening – coklat merah (+) Steroid bening –  ungu (-) Triterpenoid bening – merah kecoklatan (+) Senyawa Fenolik jingga – hijau kuning (+) Saponin bening – berbuih (-) Tanin jingga – jingga (-) (+)  =  teridentifikasi, (-)   =  tidak teridentifikasi Tabel 2 Aktivitas antibakteri ekstrak diklorometana kulit batang M. umbellata
Kons. (ppm) Diameter Zona Hambatan Bakteri (mm) S. aureus B. subtilis E. coli S. thypi 200 6,4 6,0 7,5 6,3 400 6,2 6,2 9,0 6,3 600 7,5 7,3 9,0 7,4 800 8,0 8,2 11,5 8,11 1000 12,0 10,0 13,0 9,12 KN 6,0 6,0 6,0 6,0 KP 19,5 18,5 18,5 17,5 KN= Kontrol negatif (DMSO), KP= Kontrol Positif (Kloramfenicol) Tabel 3 Aktivitas antijamur ekstrak diklorometana kulit batang M. umbellata
Kons. (ppm) Diameter Zona Hambatan Jamur (mm) C. albicans M. furfur A. niger 200 9,6 6,0 6,0 400 10,3 6,2 6,3 600 12,7 8,0 6,2 800 14,3 8,15 6,2 1000 16,0 9,0 6,5 KN 6,4 6,3 6,3 KP 23,7 14.6 16,3
KN= Kontrol negatif (DMSO), KP= Kontrol Positif (Ketokonazol)

## Hasil dan Pembahasan
Sebanyak  22,15  gram  ekstrak  diklorometana kulit  batang M.  umbellata yang berwarna  cokelat kehijauan  diperoleh  dari  250  gram  sampel  yang diekstraksi  dengan  cara  maserasi.  Hasil  uji  fitokimia ekstrak dapat dilihat pada Tabel 1. Berdasarkan Tabel 1, diketahui  bahwa  ekstrak  diklorometana  kulit  batang M. umbellata mengandung alkaloid, flavonoid, triterpenoid,  dan  senyawa  fenolik.  Hasil  penelitian
sebelumnya  melaporkan  bahwa  ekstrak  tumbuhan M. umbellata mengandung senyawa alkaloid, flavonoid, steroid,  dan  saponin  (Selfi,  dkk.,  2015).    Usman,  dkk., (2018) melaporkan bahwa ekstrak n-heksan kulit batang M. umbellata mengandung senyawa steroid, triterpenoid, steroid, dan saponin.
Aktivitas antimikroba (antibakteri dan antijamur) merupakan  kemampuan  ekstrak  atau  senyawa  dalam menghambat  atau  membunuh  pertumbuhan  bakteri  uji dan  jamur  uji.  Aktivitas  antimikroba  ekstrak  kulit batang M.  umbellata ditunjukkan  dengan  adanya  zona bening  di  sekitar  kertas  cakram,  dimana  pada  daerah tersebut tidak ditumbuhi oleh bakteri uji atau jamur uji. Aktivitas antimikroba ekstrak diklorometna kulit batang M.  umbellata (200  -  1.000  ppm)  merupakan  hasil pengukuran  rata-rata  diameter  zona  hambat  ekstrak dengan  metode  difusi  agar  (difusi  Kirby-Bauer) menggunakan  kertas  cakram  berdiamter  6  mm.  Hasil pengukuran  rata-rata  diameter  zona  hambat  terhadap mikroba  uji  (bakteri  uji  dan  jamur  uji), dapat  dilihat pada Tabel 2 dan 3 serta Gambar 1 dan 2.
Berdasarkan  Tabel  2  dan  Gambar  1,  pada konsentrasi  1000  ppm  ekstrak  diklorometana  kulit batang M.  umbellata memiliki aktivitas  daya  hambat tertinggi terhadap bakteri E. coli, dan S. Aureus dengan diameter zona hambat 13,0 mm dan 12,0 mm (termasuk dalam  kategori  sedang).  Kemudian  pada  konstrasi  200 ppm  ekstrak  diklorometana  hanya  memiliki  aktivitas terhadap  bakteri E.  coli dengan  diameter  zona  hambat 7,5  mm  dengan  kategori  aktivitas  lemah.  Berdasarkan Tabel  3  dan  Gambar  2,  pada    konsentrasi    1000  ppm, aktivitas    daya    hambat  tertinggi  ekstrak  diklorometana kulit  batang M.  umbellata ditunjukkan  pada  jamur  uji C. albicans dengan diameter zona hambat 16,0 mm dan termasuk  dalam  kategori  kuat , kemudian  diikuti  jamur M. furfur dan A. niger masing-masing dengan diameter zona  hambat  9,0  mm  dan  6,5  mm,  dan  keduanya termasuk dalam kategori lemah.
Senyawa  metabolit  sekunder  seperti  alkaloid, flavonoid,  tanin,  fenol,  saponin,  dan  beberapa  senyawa aromatik  lainnya  berperan  penting  dalam  mekanisme pertahanan mikroorganisme terhadap gangguan serangga  dan  herbivora  lainnya  (Bonjar,  dkk.  2004). Senyawa  fenol,  tanin,  saponin,  dan  steroid  dalam ekstrak  dapat  bertindak  sebagai  agen  antimikroba. Menurut  Shimada  (2006),  senyawa  fenolik  dapat mendegradasi dinding sel, berinteraksi dengan komposisi  dan  mengganggu  membran  sitoplasma, merusak  protein  membran,  merusak  mekanisme enzimatik untuk produksi energi dan metabolisme, serta mengubah  serapan  hara  dan  transpor  elektron.  Sedang senyawa  steroid  dilaporkan  memiliki  sifat  antibakteri yang  menyebabkan  terjadinya  kebocoran  pada  liposom (Raquel and Epand, 2007). Senyawa aktif dalam ekstrak diklorometana  secara  kualitatif  maupun  kuantitatif berperan  penting  atas  membran  sel  dari  bakteri  jenis gram negatif dan gram positif (Hanaa, dkk., 2011).
Gambar 1. Diameter zona hambat bakteri uji ( S. Aureus, B. Subtilis, E. coli, dan S. typhi )
Gambar 2. Diameter zona hambat jamur uji ( C. albicans, M. furfur, A. niger )
Aktivitas  antimikroba  yang  ditimbulkan  oleh ekstrak  diklorometana  bagian  jaringan  kulit  batang M. umbellata kemungkinan  disebabkan  adanya  kandungan metabolit  sekunder  seperti  flavonoid,  fenolik,  dan terpenoid. Senyawa golongan flavonoid dapat menghambat pertumbuhan bakteri melalui penghambatan  DNA  gyrase  dan  fungsi  membran sitoplasma  (Chusnie  &  Lamb,  2005).  Senyawa  fenolik dapat  menyebabkan  lisis  pada  komponen  seluler  dan merusak  mekanisme  enzimatik  sel  bakteri  (Pelczar  & Chan, 1988). Sedangkan senyawa terpenoid mengakibatkan  pemecahan  membran  oleh  komponen- komponen  lipofilik  (Cowan,  1999;  Bobbarala,  2012). Sifat  hidrofobik  atau  lipofilik  pada  triterpenoid  sebagai antijamur kemungkinan senyawa tersebut menyebabkan terjadinya kerusakan membran sitoplasma, koagulasi sel dan terjadinya gangguan proton pada sel jamur (Natta et al. 2008).  Sifat  antijamur  dari  steroid  karena  adanya sifat  lipofilik  yang  dimiliki  senyawa  steroid  sehingga dapat menghambat perkecambahan spora dan perbanyakan  miselium  pada  jamur  (Subhisha,  2005). Sifat  antimikroba  dari  senyawa  golongan  saponin karena  kemampuan  senyawa  tersebut  menyebabkan terjadinya  kebocoran  protein  dan  mengganggu  enzim tertentu dari sel. (Zablotowicz, dkk., 1996).

## Simpulan
Kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  ekstrak diklorometana kulit batang M. umbellata yaitu; senyawa
golongan alkaloid, flavonoid, triterpenoid,  dan senyawa fenolik. Pada konsentasi 1.000 ppm ekstrak diklorometana M.  umbellata mampu  menghambat pertumbuhan  bakteri E.  coli, dan S.  Aureus dengan diameter  zona  hambat  13,0  mm  dan  12,0  mm,  dengan kategori  aktivitas  sedang.  sedangkan  daya  hambat terhadap bakteri B. subtilis dan S. typhi termasuk dalam kategori lemah dengan diameter zona hambat < 11mm. selain  itu,  ekstrak  diklorometana  kulit  batang M. umbellata berpotensi  sebagai  antijamur,  terutama terhadap C.  albicans dengan  diameter  zona  hambat  16 mm (> 14 mm).

## Daftar Pustaka
Raflizar,  Adimunca,  dan  Tuminah,  S. 2006. Dekok Daun  Paliasa  ( Kleinhovia  hospita Linn)  Sebagai Obat Radang Hati Akut. Cermin Dunia Kedokteran . 50, p. 10-14.
Dias G.C.D., Gressler V., Hoenzel S.C.S.M., Silva U.F., Dalcol  I.I.,  Morel  A.F.  2007.  Constituents  of  the roots of
Melochia chamaedrys . Journal Phytochemistry .  68,  p. 668–672
Kapadia, G.J., Shukla, Y.N., Morton, J.F., and Lloyd A., 1977,  New  Cyclopetide  Alkaloids  from  Melochia tomentosa, Phytochemistry. 16(9), p. 1431-1433.
Hamza,  O.J.M.,  Beukel,  C.J.P.V.D.B.,  Matee,  M.I.N., Moshi,  M.J.,  Mikx,  F.H.M.,  Selemani,  H.O., Mawambo,  Z.H.,  Ven,  A.J.A.M.V.D.,  and  Verweji,
6.4 6.2 7.5 8 12 6.2 19.5 6 6.2 7.3 8.2 10 6 18.5 7.5 9 9 11.5 13 6.3 18.5 6.3 6.3 7.4 8.11 9.12 6.3 17.5 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 200 400 600 800 1000 KN KP Diam et er Z on a Ham b at ( m m ) Konsentrasi Sampel (μg/mL) S. Aureus B. Subtilis E. coli S. thypi 9.6 10.3 12.7 14.3 16 6.4 23.7 6 6.2 8 8.15 9 6.3
14.6
6 6.3 6.2 6.2 6.5 6.3 16.3 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 200 400 600 800 1000 KN KP Diam et er Z on a Ham b at ( m m ) Konsentrasi Sampel (μg/mL) C. albicans M. furfur A. niger
P.E.  2006.  Antifungal  Activity  of  Same  Tazmanian Plants  Used  Traditionally  for  The  Treatment  of Fugal Infection, Ethnopharmacology. 108(1), p. 124- 132.
Heyne, K., 1987, Tumbuhan Berguna Indonesia , Jilid II, Yayasan sarana Warna Jaya, Jakarta.
Usman.  2015.  Potensi  Senyawa  Metabolit  Sekunder Dari Kulit Batang Melochia umbellata (Houtt) Stapf var. Degrabrata (Paliasa) sebagai Anti-Tuberkulosis. Jurnal Sains dan Kesehatan. 1(4), p. 2407-6082.
Ridhay,  A.,  Noor,  A.,  Soekamto,  N.H.  2012.  A Stigmasterol  Glycoside  from  the  Root  Wood  of Melochia umbellata (Houtt) stapf var . degrabrata K., Indonesian Journal of Chemistry . 12(1), p. 100-103.
Erwin,  Noor,  A.,  Soekamto,  N.H.,  Altena,  I.v.,  and Syah,  Y.M.  2014.  Waltherione  C  and  cleomiscosin from  Melochia  umbellata  var.  Degrabrata  K. Malvaceae),  biosynthetic  and  chemotaxonomic signiﬁcance. Biochemical  Systematics  and  Ecology . 55, p: 358-361.
Soekamto,  N.H.,  Liong,  S.,  Fauziah,  S.,  Wahid,  I.,
Zenta,  F.,  Taba,  P.,  and  Ahmad,  F.  2018. Dengua e antiviral  activity  of  polar  extract  from Melochia umbellata (Houtt)  Stapf  var.  Visenia.  Journal  of Physics:  Conference  Series,  979.  doi:10.1088/1742- 6596/979/1/012017
Patil,  M.B.,  Khan,  P.A.  2017.  Primary  phytochemical studies  of  catunaregam  spinosa  (Thunb)  triven  for secondary metabolites. Int J Pharm Bio Sci. 8(2), p. 320-323. DOI: 10.22376/ijpbs.2017.8.2.p320-323
Nain,  J.,  Bhatt,  S.,  Dhyani,  D.R.S.,  Joshi,  N.  2013. Phytochemical  screening  of  secondary  metabolites of  Dhatura  Stramonium  L.  International  Journal  of Current Pharmaceutical Research. 5(2), p. 151-153.
Wulur,  S.,  Zenta,  F.,  Natsir,  H.,  Soekamto,  N.H.  2015.
Study  of  Compounds  from  Extract  of Melochia umbellata (Houtt.) Stapf var. Degrabrata K. (Paliasa) Leaves  That  Has  Potential  as  Antibacterial. Indonesia Chimica Acta. 8(1).
Usman,  Usman.,  AMIR,  M.M.,  Soekamto,  N.H., Ahmad,  A.,  Maulidiyah,  M.  2018.  Isolation  of Secondary Metabolite Compounds and Antibacterial Activities Tests from Hexane Ekxtract of Stem Bark Melochia umbellata (Houtt) Stapf var. Degrabrata K. Asian J Pharm Clin Res. 11(8), p. 457-462.
Bonjar,  G.H.S.,  Nik,  A.K.,  Aghighi,  S.  2004. Antibacterial and antifungal survey in plants used in indigenous  herbal-medicine of south east regions of Iran. J Biol Sci . 4, p. 405-412.
Shimada, T. 2006. Salivary proteins as a defense against dietary tannins. J. Chem. Ecol . 32, p. 1149-1163.
Raquel,  F.,  and  Epand.  2007.  Bacterial  lipid composition  and  the  antimicrobial  efficacy  of
cationic steroid compounds. Biochimica et Biophysica Acta . P. 2500–2509.
Hanaa, F.M,. Ali, Hossam, S., El-beltagi, and Nasr, N.F.
2011.Evaluation  of  antioxidant  and  antimicrobial activity  of Aloysia  triphylla . Electronic  Journal  of Environmental,
Agricultural and food
Chemistry.10(8), p. 2689-2699.
Chusnie,  T.T.P.,  &  Lamb,  A.J.  (2005).  Antimicrobial activity  of  flavonoid.  International  Journal  of Antimicrobial Agents. 26(5), p. 343-356.
Pelczar,  M.J.,  &  Chan,  E.C.S.  (1988).  Dasar-Dasar Mikrobiologi 2. Jakarta: UI Press.
Cowan,  M.M.  (1999).  Plant  products  as  antimicrobial agents.  Clinical  Microbiology  Reviews.  12(4),  p. 564-582.
Bobbarala,  V.  (2012).  Antimicrobial  Agents.  Croatia: Intech.
Natta,  L.,  Orapin,  Krittika,  and  Pantip.  2008.  Essensial Oil  from  Zingiberaceae  for  Anti  Food-Borne Bacteria. J.International  Food  Research .  15(3),  p. 337-346.
Subhisha,  S.,  dan  Subramoniam,  A.  2005.  Antifungal Activities  of  a  Steroid  From Pallavicinia  lyellii ,  a Liverwort. Tropical  Botanic  Garden  and  Research
Institute , India. 37(5 ), p. 304-308.
DOI: 10.4103/0253-7613.16854.
Zablotowicz  RM,  Hoagland  RE,  Wagner  SC.  Effect  of saponins  on  the  growth  and  activity  of  rhizosphere bacteria. Adv Exp Med Biol. 1996;405:83-95.