## BIOSPECIES
Vol. 16 (2) : 1 – 5, Juli 2023
DOI :http://doi.org/10.22437/biospecies.v1512
Candida was a fungus that can cause candidiasis infection. Candidiasis could occur of the skin, nails, mucous membranes and the gastrointestinal. The study aims to examine whether Auricularia nigricans methanol extract has the ability to inhibit the growth of Candida albicans, C. glabrata, and C. parapsilosis. Soxhletation was used as the extraction method, and the inhibitory  test  method  involved  diffusion  paper  disk  and  wells  methods.  The  concentration variations used were 0.2 g/ml, 0.25 g/ml and 0.3 g/ml with 10% DMSO as a negative control. The research results obtained were that no inhibition zones were formed at concentrations of 0.2 g/ml, 0.25 g/ml and 0.3 g/ml so that they were included in the inactive category.
Keywords : Auricularia nigricans, Candida, soxhlet method, methanol extract, paper disc and wells method.
Candida  merupakan  jamur golongan  khamir yang  dapat  menyebabkan infeksi  kandidiasis. Kandidiasis  tersebut  dapat  terjadi  pada  kulit,  kuku,  membran  mukosa  dan  saluran  cerna. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan ekstrak metanol Auricularia nigricans dalam  menghambat  pertumbuhan  C.  albicans,  C.  glabrata  dan  C.  parapsilosis.  Metode ekstraksi  yang  digunakan  adalah  sokletasi  selama  10  jam  dan  metode  uji  daya  hambat antifunginya secara difusi cakram dan sumuran. Variasi konsentrasi yang digunakan adalah 0,2 g/ml, 0,25 g/ml dan 0,3 g/ml dengan DMSO 10% sebagai kontrol negatif. Hasil penelitian yang diperoleh adalah tidak terbentuknya zona hambat pada konsentrasi 0,2 g/ml, 0,25 g/ml dan 0,3 g/ml sehingga termasuk dalam kategori tidak aktif.
Kata kunci : Auricularia nigricans, Candida, metode sokletasi, ekstrak metanol, metode difusi cakram dan sumuran.
Abstract Abstrak
* Email: floreta.fiska@gmail.com 1 Akademi Farmasi Surabaya Kinanti Ayu Puji Lestari 1 , Floreta Fiska Yuliarni 1*
Widianingtyas Subroto 1 , Mufidhatul Nur Azizah 1 , Tutik Handayani 1 , Surahmaida 1 , Afina Indrawati 1 , Amelya Dyah Pertiwi 1 , Audry Ridho Ayuningtyias 1 , Hillda
Candida spp
Inhibitory Test of Methanol Extract of Auricularia nigricans Against Candida spp. UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK METANOL Auricularia nigricans TERHADAP

## PENDAHULUAN
Candida adalah jamur golongan khamir yang dapat  membentuk  sel  ragi  dan  hifa  yang  semu. Candida merupakan  flora  normal  pada  tubuh manusia, namun dapat berubah menjadi patogen dan menyebabkan penyakit kandidiasis (Rodrigues et al.,  2014).  Kandidiasis merupakan infeksi  yang  disebabkan  oleh  berbagai  spesies Candida yang  bersifat  akut  dan  pada  umumnya dapat menginfeksi kulit, kuku, membran mukosa, saluran  cerna  dan  menyebabkan  penyakit sistemik (Widasmara et al., 2011).
Terapi  yang  sering  digunakan  untuk mengobati kandidiasis adalah obat-obat antijamur golongan azol seperti ketokonazol, mikonazol dan klotrimazol  yang  memiliki  mekanisme  kerja menghambat  sintesis  ergosterol  pada  jamur sehingga dapat menyebabkan kerusakan membran  sel  jamur.  Obat-obat  antijamur  yang berbentuk  salep  atau  krim  sangat  mudah digunakan, namun tidak jarang menimbulkan efek yang  merugikan  seperti  rasa  gatal  serta  panas pada  daerah  yang  terinfeksi  (Arifin  et  al.,  2018). Adanya efek samping tersebut menjadi penyebab perlunya  mencari  alternatif  pengobatan  dari bahan alam, salah satunya jamur kuping hitam ( A. nigricans ).
Jamur  kuping  hitam  merupakan  jamur golongan  Basidiomycota  yang  mengandung berbagai metabolit sekunder diantaranya alkaloid, flavonoid dan  monoterpen  yang berfungsi  dalam menghambat pertumbuhan mikroorganisme (Afiukwa  et  al.,  2013).  Berdasarkan  hasil penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh  Triani  et  al. (2017),  ekstrak  metanol  jamur  kuping  hitam dengan konsentrasi 0,40 g/ml berpotensi sebagai antifungi karena rata-rata  diameter zona hambat yang terbentuk sebesar 33,36 mm.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui kemampuan  ekstrak  jamur  kuping  hitam  dengan pelarut metanol dalam menghambat pertumbuhan Candida albicans, Candida glabrata dan Candida parapsilosis .

## BAHAN DAN METODE

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu alat  soklet,  blender,  nampan,  batang  pengaduk, sendok  tanduk,  gelas  ukur,  gelas  beker,  kertas saring, rotary  evaporator ,  pipet  tetes,  tabung reaksi,  kaca  arloji,  timbangan  analitik,  kertas perkamen, tali, erlenmeyer, bunsen, pemantik, hot plate, pipet  volume,  kawat  ose,  inkubator, autoklaf,  oven,  cawan  petri,  cawan  porselen,
plastik wrap ,  pinset,  botol  vial,  kertas  cakram, cotton swab , mikropipet, yellow tip, blue tip, labu ukur 10 ml dan jangka sorong.
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  jamur  kuping  hitam  ( Auricularia  nigricans ), Potato  Dextrose  Broth (PDB), Potato  Dextrose Agar (PDA), C.  albicans,  C.  glabrata ,  dan C. parapsilosis ,  DMSO  10%,  metanol,  alkohol  70% dan akuades.

## Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat-alat  gelas  yang  memiliki  akurasi  rendah seperti erlenmeyer, cawan petri dan gelas beker disterilisasi  menggunakan  oven  dengan  suhu 180°C selama 2 jam. Alat-alat gelas yang memiliki akurasi  tinggi  seperti  gelas  ukur,  pipet  ukur  dan juga media pertumbuhan disterilisasi menggunakan  autoklaf  dengan  suhu  121°C selama 15 hingga 20 menit. Pinset dan kawat ose disterilisasi menggunakan api bunsen.

## Pembuatan Serbuk Jamur Kuping Hitam
Jamur  kuping  hitam  berasal  dari  tempat budidaya  jamur  di  Malang,  Jawa  Timur.  Jamur tersebut  dideterminasi  terlebih  dahulu  di  Badan Riset  dan  Inovasi  Nasional  (BRIN)  di  Cibinong, Jawa Barat. Jamur yang didapatkan berupa jamur kuping  hitam  kering.  Jamur  tersebut  disortasi kemudian  dipotong  kecil-kecil  lalu  dihaluskan menggunakan  blender.  Setelah  menjadi  serbuk kemudian diayak menggunakan ayakan 40 mesh untuk mendapatkan serbuk yang lebih halus.

## Pembuatan Ekstrak Jamur Kuping Hitam
Serbuk  jamur  kuping  hitam  halus  ditimbang sebanyak  50  gram  kemudian  dibungkus menggunakan  kertas  saring  dan  dimasukkan  ke dalam  timbal  alat  soklet.  Pelarut  metanol sebanyak  250  ml  dimasukkan  dalam  labu  alas bulat.  Air  es  digunakan  untuk  mendinginkan kondensor.  Ekstraksi  dilakukan  selama  10  jam dengan suhu 50°C dan dilakukan sebanyak empat kali. Hasil ekstraksi diuapkan menggunakan rotary evaporator dengan  suhu  yang  sama  untuk memisahkan  pelarut  dengan  ekstrak.  Ekstrak  di oven selama 7x24 jam hingga didapatkan ekstrak kental jamur kuping hitam.

## Persiapan Jamur Uji
Jamur uji Candida albicans, Candida glabrata dan Candida  parapsilosis diperoleh  dari  Balai Besar  Laboratorium  Surabaya,  Jawa  Timur. Candida di  subkultur  pada  media  PDA  miring dalam tabung reaksi kemudian diinkubasi selama 24  jam  menggunakan  inkubator  dengan  suhu 28°C. Jamur yang telah tumbuh di media PDA
miring diambil sebanyak 1 ose lalu diinokulasi ke dalam media cair PDB dan diinkubasi selama 24 jam menggunakan inkubator dengan suhu 28°C.

## Pembuatan Variasi Konsentrasi
Penelitian  ini  menggunakan  kontrol  negatif berupa Dimethyl  sulfoxide (DMSO)  10%. Konsentrasi  ekstrak  jamur  kuping  hitam  yang digunakan adalah 0,2 g/ml, 0,25 g/ml dan 0,3 g/ml. Penentuan  konsentrasi  tersebut  berdasarkan Triani, et. al. (2017).
Konsentrasi  pertama  yang  dibuat  adalah konsentrasi 0,3 g/ml yang merupakan konsentrasi paling  tinggi  kemudian  dilanjutkan  dengan pembuatan  konsentrasi  0,25  g/ml  dan  0,2  g/ml. Konsentrasi 0,25 g/ml dan 0,2 g/ml dibuat dengan cara mengambil dari konsentrasi 0,3 g/ml.
Konsentrasi  0,3  g/ml  dibuat  dengan  cara menimbang  3  gram  ekstrak  kental  jamur  kuping kemudian arloji kaca menggunakan hitam dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  10  ml  dan ditambahkan DMSO 10% hingga tanda batas lalu dikocok  hingga  homogen.  Konsentrasi  0,25  g/ml dibuat dengan cara mengambil 2,5 ml ekstrak dari konsentrasi  0,3  g/ml  dan  ditambahkan  0,5  ml DMSO 10% lalu dimasukkan ke dalam botol vial. Konsentrasi  0,2  g/ml  dibuat  dengan  cara mengambil 2 ml ekstrak dari konsentrasi 0.3 g/ml dan  ditambahkan  1  ml  DMSO  10%  lalu dimasukkan ke dalam botol vial.

## Uji Daya Hambat
Pengujian  daya  hambat  dilakukan  dengan  2 metode  difusi  yaitu  cakram  dan  sumuran. Pengujian ini dilakukan 5 kali ulangan.
Metode difusi cakram dilakukan dengan cara media PDA sebanyak 20 ml dituangkan ke dalam masing-masing cawan petri sebanyak 5 buah lalu ditunggu  hingga  menjadi  padat. Candida yang telah  dibiakkan  dalam  media  PDB  diambil menggunakan cotton swab kemudian diratakan di atas  media  PDA  di  cawan  petri.  Masing-masing konsentrasi  ekstrak  dipipet  sebanyak  25  μl kemudian  diteteskan  di  atas  kertas  cakram  lalu diletakkan  di  atas  media  PDA  di  cawan  petri. Media yang telah diberi kertas cakram diinkubasi pada suhu 28°C selama 24 jam di inkubator.
Metode  difusi  sumuran  dilakukan  dengan mengambil  biakan Candida pada  media  PDB
sebanyak 1 ml lalu dimasukkan ke dalam cawan petri. Media PDA sebanyak 20 ml dimasukkan ke dalam  cawan  petri  tersebut  lalu  digoyang membentuk angka 8 sehingga Candida dan media tercampur.  Media  dibiarkan  hingga  memadat. Pada  media  dibuat  4  lubang  sumuran.  Masing- masing konsentrasi ekstrak diambil sebanyak 75 μl  dan  dimasukkan  ke  lubang  sumuran.  Biakan tersebut diinkubasi pada suhu 28°C selama 2 x 24 jam.
Diameter  zona  hambat  yang  terbentuk  dari aktivitas  antifungi  ekstrak Auricularia  nigricans terhadap mikroba uji C . albicans , C. glabrata , dan C.  parapsilosis diukur  menggunakan  jangka sorong  dan  hasil  pengukuran  dibandingkan dengan  kategori  zona  hambat  berdasarkan penelitian Mirfat et al. (2014).
Tabel 1. Kategori Zona Hambat
Zona Hambat Kategori - (Tidak ada) Tidak aktif <9 mm Lemah 9-12 mm Sedang 13-18 mm Kuat >18 mm Sangat kuat

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  determinasi  menunjukkan  bahwa sampel  yang  dikirim  adalah  jamur  kuping  hitam ( Auricularia nigricans ). Ekstrak jamur kuping hitam yang didapatkan sebanyak 5,45 gram,  berwarna ungu pekat, bau khas jamur dan berbentuk kental dengan  persentase  rendemen  sebesar  2,725%. Berdasarkan  hasil  tersebut,  nilai  rendemen termasuk dalam kategori kecil (Sulistyanto, 2016).

## Hasil Uji Daya Hambat
Hasil  pengamatan  uji  daya  hambat  ekstrak metanol jamur kuping hitam (Auricularia nigricans) terhadap  mikroba  uji Candida spp.  dengan metode  cakram  dan  sumuran  setelah  diinkubasi selama 2x24 jam dapat dilihat pada Tabel 2 dan Tabel 3. Uji daya jamur kuping hitam (Auricularia nigricans) terhadap  mikroba  uji C.  parapsilosis dengan  metode  cakram  dan  metode  sumuran dapat dilihat pada Gambar 1.
Tabel  2. Rata-rata  Diameter  Zona  Hambat  Jamur  Kuping  Hitam (Auricularia  nigricans) Terhadap Candida spp. dengan Metode Cakram.
Jenis jamur Diameter zona hambat (mm) pada konsentrasi Kontrol negatif 0,2 g/ml 0,25 g/ml 0,3 g/ml C. albicans - - - - C. glabrata - - - - C. parapsilosis - - - -
Tabel 3. Diameter Zona Hambat Jamur Kuping Hitam (Auricularia nigricans) Terhadap Candida spp. Dengan Metode Sumuran.
Jenis jamur Diameter zona hambat (mm) pada konsentrasi: Kontrol negatif 0,2 g/ml 0,25 g/ml 0,3 g/ml C. albicans - - - - C. glabrata - - - - C. parapsilosis - - - -
Ket: (-) Zona Hambat Tidak Aktif
Gambar 1 . Uji daya hambat Jamur Kuping ( A. nigricans ) terhadap Candida parapsilosis dengan metode cakram (A); dan metode sumuran (B).
Berdasarkan hasil uji daya hambat menunjukkan bahwa ekstrak metanol Auricularia nigricans tidak  dapat  menghambat  pertumbuhan Candida spp. karena tidak terbentuk zona hambat pada  semua  konsentrasi  dan  kontrol  negatif sehingga dapat dikategorikan tidak aktif.
Faktor-faktor  yang  diduga  mempengaruhi zona  hambat  tidak  terbentuk  antara  lain  lama waktu  yang  diperlukan  untuk  ekstraksi,  habitat jamur kuping hitam, dan sifat jamur uji.

## Lama waktu yang diperlukan untuk ekstraksi
Lama  ekstraksi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  selama  10  jam,  sedangkan waktu  ekstraksi  yang  digunakan  oleh  penelitian sebelumnya  adalah  12  jam  dengan  hasil  zona hambat  yang  terbentuk  sebesar  15,6  ±  1,5  mm terhadap Candida  albicans (Avci  et  al.,  2016). Waktu  ekstraksi  yang  lebih  pendek  dapat memberikan  hasil  nilai  rendemen  yang  lebih rendah  karena  tidak  semua  komponen  senyawa
dapat  terekstrak.  Semakin  lama  waktu  ekstraksi maka  waktu  sampel  untuk  dapat  berkontak langsung  dengan  pelarut  juga  semakin  lama (Achmad & Sugiarto, 2019).

## Habitat jamur kuping hitam
Sampel  jamur  kuping  hitam  ( Auricularia nigricans )  yang  digunakan  berasal  dari  tempat budidaya  jamur  Desa  Wonorejo  Kabupaten Malang,  Jawa  Timur  sedangkan  penelitian sebelumnya menggunakan sampel jamur kuping hitam yang berasal dari hutan Desa Simpang Alur Kabupaten Landak dan hasil penelitian menunjukkan  terbentuknya  zona  hambat  pada mikroba uji Aspergillus flavus (Triani et al., 2017) . Jamur  yang  tumbuh  liar  memiliki  serat  dan senyawa  metabolit  yang  lebih  tinggi  karena mengalami banyak tekanan atau stress lingkungan  selama  proses  pertumbuhannya. Tekanan atau stress lingkungan yang dialami oleh jamur  liar  dapat  meningkatkan  kandungan
A B
senyawa  metabolit  sekunder  yang  dimilikinya. Jamur liar menjadi lebih kuat dan tahan terhadap lingkungan  sekitar  apabila  dibandingkan  dengan jamur  budidaya  yang  tumbuh  pada  lingkungan yang  dilindungi  dan  dijaga  dengan  baik.  Hal tersebut  menyebabkan  senyawa  metabolit  yang dihasilkan  jamur  budidaya  menjadi  lebih  sedikit (Srikram & Supapvanichb, 2017).

## Sifat jamur uji
Candida spp. mudah membentuk biofilm saat ditanam di media yang mengandung konsentrasi lipid  atau  glukosa  tinggi  (Munawaroh,  2018). Mikroba  yang  dapat  membentuk  biofilm  memiliki ketahanan  yang  lebih  besar  terhadap  agen antimikroba (Purbowati, 2018).

## KESIMPULAN
Ekstrak  jamur  kuping  hitam (Auricularia nigricans) tidak dapat menghambat pertumbuhan C.  albicans,  C.  glabrata,  C.  parapsilosis baik dengan metode cakram ataupun sumuran . Perlu dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  mengenai aktivitas antifungi jamur kuping hitam (Auricularia nigricans) dengan  mempertimbangkan  faktor penyebab tidak terbentuknya zona hambat.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terimakasih  kepada Akademi  Farmasi  Surabaya  yang  menyediakan fasilitas Laboratorium Farmakognosi dan Laboratorium Mikrobiologi sehingga penulis dapat menyelesaikan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Achmad,  Z.,  &  Sugiarto,  B.  (2019).  Pengaruh Waktu Ekstraksi Antosianin Dari Biji Alpukat ( Persea  americana )  Sebagai  Pewarna Alami. Simposium Nasional RAPI  XVIII FT UMS , 16 – 20.
Afiukwa, C. A., Ugwu, Okechukwu, P. C., Ebenyi, L.  N.,  Oketa,  H.  A.,  Idenyi,  J.  N.,  &  Ossai Emmanuel,  C.  (2013).  Phytochemical analysis  of  two  wild  edible  mushrooms, Auricularia polytricha and Pleurotus ostreatus ,  common  in  ohaukwu  area  of ebonyi  state,  nigeria. Research  Journal  of Pharmaceutical,  Biological  and  Chemical Sciences , 4 (2), 1065 – 1070.
Arifin, Z., Khotimah, S., & Rahmayanti, S. (2018). Aktivitas Antijamur Ekstrak Etil Asetat Daun Mangga  Bacang  ( Mangifera  foetida L.)
Terhadap Candida albicans Secara In Vitro. Jurnal Cerebellum , 4 (3), 1114.
Avci, E., Cagatay, G., Alp Avci, G., Suicmez, M.,
&  Coskun  Cevher,  S.  (2016).  An  Edible Mushroom  with  Medicinal  Significance; Auricularia  polytricha. Hittite  Journal  of Science  and  Engineering , 3 (2),  111 – 116. https://doi.org/10.17350/hjse19030000040 Mirfat,  A.  H.  S.,  Vikineswary,  S.,  Ahmad,  M., Salahuddin, H., Abdullah, N., & Sabaratnam,  V.  (2014).  Antimicrobial Activities of Split Gill
Mushroom Schizophyllum  commune Fr. American Journal  of  Research  Communication , 2 (7),
113. www.usa-journals.com
Munawaroh,  U.  (2018).  Identifikasi  Keberadaan Jamur Candida Pada  Feses  Anak  Autiism Spectrum  Disorder  (ASD)  yang  Menjalani Diet Karbohidrat. In Skripsi .
Purbowati,  R.  (2018).  Hubungan  Biofilm  dengan
Infeksi: Implikasi pada Kesehatan Masyarakat  dan  Strategi  Mengontrolnya. Jurnal  Ilmiah  Kedokteran  Wijaya  Kusuma ,
5 (1), 1. https://doi.org/10.30742/jikw.v5i1.1 Rodrigues,  C.  F.,  Silva,  S.,  &  Henriques,  M. (2014). Candida  glabrata :  A  Review  of  Its Features  and  Resistance. European Journal  of  Clinical  Microbiology  and Infectious  Diseases , 33 (5),  673 – 688. https://doi.org/10.1007/s10096-013-2009-3 Srikram, A., & Supapvanichb, S. (2017). Pertanian dan  Sumber  Daya  Alam  Artikel  Asli Komposisi Proksimat dan Senyawa Bioaktif Dari Jamur Liar dan Budidaya Yang Dapat Dimakan  Dari  Thailand  Timur  Laut. 50(2016), 432 – 436.
Sulistyanto, S. R. & wibowo. (2016). Uji Aktivitas Antijamur  Ekstrak  Etanol  Daun  Som  Jawa Terhadap  Pertumbuhan Candida  albicans. Media Farmasi Indonesia Vol 11 No 2 UJI ,
11 (2), 1067 – 1074.
Triani, Rahmawati, & Turnip, M. (2017). Aktivitas Antifungi  Ekstrak  Metanol  Jamur  Kuping Hitam ( Auricularia polytricha (Mont.) Sacc.) terhadap Aspergillus flavus (UH 26). Jurnal Labora Medika , 1 (2), 14 – 20.
Widasmara,  D.,  Suyoso,  S.,  &  Murtiastutik,  D.
(2011).  Profil  Spesies Candida dari Kandidiasis  Vulvovaginalis  pada  Pasien HIV  /  AIDS  yang  Mendapat  Antibiotik Sistemik  ( Candida Species  Profile  of Vulvovaginal  Candidiasis  in  HIV  /  AIDS Patients  Treated  with  Systemic  Antibiotic).
Vulvo , 202 – 205.