EFFCTIVVENESS TEST CIDER AND LIME PEEl ETANOL EXTRACT (Citrus aurantifolia) AGAINTS HYPERCHOLESTEROLEMIA IN MALE WHITE RATS GALUR WISTAR (Rattus norvegicus )
UJI EFEKTIFITAS SARI BUAH DAN EKSTRAK ETANOL KULIT JERUK NIPIS  ( Citrus aurantifolia ) TERHADAP HIPERKOLESTEROLEMIA PADA TIKUS PUTIH JANTAN GALUR WISTAR ( Rattus norvegicus )
Rivaldo Mende 1) , Herny Simbala 1) , Karlah L.R.Mansauda 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *andrewrivaldomende@gmail.com

## ABSTRACT
Lime is a type of orange that is often consumed by the public. The content of lime is vitamin C, flavonoids. This study aims to test the effectiveness of lime juice and ethanol extract of lime peel (Citrus  aurantifolia) against  hypercholesterolemia  in  male  white  rats  Galur  Wistar  (Rattus  norvegicus).  The  method  used  was experimental laboratory. The results were obtained from the stage of measuring blood cholesterol, namely pre  and  post.  The  treatment  was  started  by  giving  high  fat  feed  for  14  days.  Furthermore,  pretest measurements were carried out. After that, treatment was given to each of the 8 groups, namely CMC in the negative  control,  simvastatin  in  the  positive  control,  lime  juice  and  ethanol  extract  of  lime  peel.  Posttest measurements were carried out after 7 days of administration. The best results with a dose of T3 (0.3) fruit juice and lime peel ethanol extract were PS1 (7.2 mg). Then, the treatment was analyzed using Paired T-test and One Way ANOVA statistical test using SPSS with the results of the sig value. > 0.05 means that it can be concluded  that  there  is  no  significant  difference  in  the  average  cholesterol  level  of  rats  based  on  the treatment group.
Keywords : Effectiveness test, Lime (Citrus aurantifolia ), Hypercholesterolemia, Male white mouse

## ABSTRAK
Jeruk nipis merupakan  salah satu jenis  jeruk yang sering dikonsumsi masyarakat. Kandungan  dari  jeruk nipis  yaitu  vitamin  C,  flavonoid.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  efektifitas  sari  jeruk  nipis  dan ekstrak  etanol  kulit  jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia )  terhadap  Hiperkolesterolemia  pada  tikus  putih  jantan Galur  Wistar  ( Rattus  norvegicus ).  Metode  yang  digunakan  eksperimental  laboratorium.  Hasil  penelitian diperoleh  dari  tahap  pengukuran  kolesterol  darah,yaitu pre dan post .  Perlakuan  dimulai  dengan  memberi pakan  tinggi  lemak  selama  14  hari  Selanjutnya  dilakukan  pengukuran Pretest .  Selanjutnya  diberikan perlakuan pada tiap 8  kelompok, yaitu CMC pada kontrol negatif, simvastatin pada kontrol positif, Sari buah jeruk  nipis  dan  ekstrak  etanol  kulit  jeruk  nipis.  Pengukuran Posttest dilakukan  setelah  7  hari  pemberian. Hasil yang terbaik dengan dosis sari buah T3(0,3) dan Ekstrak etanol kulit jeruk nipis adalah PS1(7,2 mg)  . Lalu  selanjutnya  perlakuan  dianalisa  dengan  uji Paired  T-test dan  uji  statistik One  Way ANOVA menggunakan  SPSS  dengan  hasil  nilai  sig.  >  0,05  berati  disimpulkan  maka  tidak  ada  perbedaan  yang bermakna rata-rata hasil kadar kolesterol tikus berdasarkan kelompok perlakuan.
Kata  Kunci :  Uji  Efektifitas,  Jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia ),  Hiperkolesterolemia,  Tikus  Putih  jantan ( Rattus norvegicus )

## PENDAHULUAN
Organisasi  Kesehatan  Dunia  (WHO) melaporkan  bahwa  kadar  kolesterol  yang  tinggi dalam  darah  menyumbang  56%  dari  kasus penyakit  jantung  koroner  di  seluruh  dunia  dan menyebabkan  sekitar  4,4  juta  kematian  setiap tahunnya.  Penyakit  jantung  koroner  terutama disebabkan oleh aterosklerosis, yaitu penyempitan pembuluh  darah  koroner  yang  mengakibatkan insufisiensi  aliran  darah  ke  miokardium.  Salah satu  penyebab  aterosklerosis  adalah  tingginya kadar kolesterol darah Nisai (2013).
Kadar  kolesterol  tinggi  adalah  suatu kondisi saat nilai kolesterol total darah meningkat diatas  nilai  normal  (>240mg/dL).  Dalam  istilah medis,  kadar  kolesterol  tinggi  sering  disebut dengan  hiperkolesterolemia.  Hiperkolesterolemia merupakan  suatu  keadaan  peningkatan  kadar kolesterol  dalam  darah,  hal  ini  merupakan  faktor resiko  terkuat  menjadi  penyebab  penyakit kardiovaskular.  Batas  normal  kolesterol  pada manusia  adalah  <  200mg/dL.Tingginya  kadar kolesterol  LDL  dan  rendahnya  HDL  dapat meningkatkan  resiko  penyakit  kardiovaskular Wahyuni (2015) Agar terhindar dari penyakit yang disebabkan oleh  meningkatnya  kadar  kolesterol  total,  jeruk nipis    berpengaruh  dalam    penurunan    kadar kolesterol total dalam darah Aresta ( 2014). Jeruk  nipis  merupakan  salah  satu  jenis  jeruk yang  sering  dikonsumsi  masyarakat.  Kandungan dari  jeruk  nipis  yaitu  vitamin  C,juga  memiliki senyawa  flavonoid.  Dalam    jeruk  nipis  juga mengandung    hesperidin  yang  dapat  menurunkan kadar kolesterol total. Dalam 100 gram jeruk nipis mengandung  vitamin  C  63  mg  dan  hesperidin sebanyak 15,64 mg yang lebih tinggi dibandingkan juruk manis dan lemon Purnamasari (2014).
Sari jeruk nipis mengandung asam sitrat yang dapat  menurunkan  pH  saluran  pencernaan. Kondisi  asam  pada  saluran  pencernaan  akan merangsang  pembentukan  garam  empedu  untuk menetralkan.  Garam  empedu  merupakan  hasil akhir  dari  metabolisme  kolesterol,  sehingga semakin  asam  kondisi  saluran  pencernaan  akan semakin banyak  kolesterol  yang  dimetabolis, akibatnya  kadar  kolesterol  dalam  darah menurun (Santoso et al , 2015)

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  Mei  – Oktober  2020.  Tempat  penelitian  dilakukan  di
Laboratorium Farmasi Lanjut Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Jenis  penelitian  eksperimental  laboratorium, untuk  menguji  efektivitas  ekstrak  jeruk  nipis terhadap hiperkolesterolemia dengan subjek Tikus putih galur wistar ( Rattus norvegicus ). Rancangan penelitian  yang  digunakan  adalah pre  and  post test with randomized control group design . Alat dan Bahan Alat
Alat-alat  yang  digunakan  ialah  blender,  alat pengukur  kolesterol  ( Nesco  Multitester  Check ), Gunting  steril,  sonde  lambung,  kandang  tikus, beaker  glass,  kertas  saring,  gelas  ukur  500  ml, Oven, labu ukur, pot salep.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan,  yaitu  Jeruk nipis  ( Citrus  aurantifolia ),  aquades,  kuning  telur, simvastatin,  CMC,  Tikus  putih  jantan  galur wistar( Rattus  norvegicus ),  alkohol  70%,  Etanol 96%.

## Prosedur Penelitian Penyiapan dan Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini ialah  Kulit  dan  sari  jeruk  nipis  yang  diambil  di Kecamatan  Mapanget,  Kota  Manado,  Kelurahan Paniki  Bawah.  Sebelum  diambil  sampel  di  foto menggunakan  kamera,  kemudian  diambil  dan dimasukan  ke  dalam  kantong  plastik.  Lalu  di simpan  dalam  lemari  pendingin  lalu  di  bawa  ke Laboratorium  lanjutan  Program  Studi  Farmasi Universitas Sam Ratulangi.

## Ekstrasi Sampel
Metode  yang  digunakan  dalam  proses ekstraksi,  yaitu  metode  maserasi  dengan menggunakan  etanol  96%.  Sebanyak  500  g serbuk simplisia dimasukkan ke dalam etanol 96%  sebanyak  750  ml  hingga  terendam semua sambil diaduk-aduk, kemudian disimpan  atau  didiamkan  selama  5  x  24  jam di  tempat  yang  sejuk  tanpa  adanya  paparan sinar  matahari  sambil  sesekali  dilakukan pengadukan. Selanjutnya, diremaserasi dengan  250  g  1:2  dengan  menambahkan  500 ml  pelarut  etanol  96  %.  Filtrat  kemudian diambil  dan  disaring  dengan  kertas  saring .Lalu  filtrat  diuapkan  menggunakan  oven
pada  suhu  40 ° C  hingga  diperoleh  ekstrak
kental

## Penyiapan hewan uji
Penelitian  ini  menggunakan  Tikus  Putih  Jantan Galur  Wistar  ( Rattus  novergicus )  sebagai  hewan uji  yang  dibagi  menjadi  8    kelompok  dengan masing-masing  kelompok  terdiri  dari  2  tikus  yang dipelihara  di  dalam  kandang  dengan  diberikan makan  pelet.  Pakan  tinggi  lemak  dibuat  dengan cara  menambahkan  pakan  standar  (pelet)  dengan lemak 20%. Lemak yang digunakan adalah kuning telur  yang  berasal  dari  ayam  ras.  Setelah dicampurkan  pakan  tersebut  dijemur  hingga kering.Pemberian  pakan  untuk  menaikkan  kadar kolesterol tikus diberikkan selama 2 minggu.Sebelum dilakukan perlakuan, tikus terlebih  dahulu  diadaptasi  selama  satu  minggu  (7 hari).Sebelum  diberikan  perlakuan  mencit  diukur kadar  kolesterol  dalam  darah  menggunakan  alat pengukur kolesterol.
Pembuatan larutan CMC 1% Larutan stok CMC 1% dibuat dengan menimbang  serbuk  CMC  sebanyak  1g  kemudian dicampurkan dengan 100 mL aquades dihomogenkan dengan cara pemanasan
menggunakan hot  plate ,  kemudian  didinginkan. Perbandingan aquades dengan CMC adalah 100 : 1 artinya didalam 100 mL aquades 1g CMC.

## Pembuatan larutan uji
Ekstrak  jeruk  nipis  ditimbang  terlebih  dahulu sesuai  dosis  yang  digunakan,  Dosis  pemakaian pada  tikus  adalah  2  mL  dengan  konsentrasi  dan untuk  pemberian  satu  kali  sehari.  Setelah ditimbang,  masing-masing  ekstrak  kemudian dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  dan  ditambahkan larutan  aquadest  sampai  tanda  tera  dan  disonikasi hingga  homogen.  Setelah  homogen,  masing- masing  dosis  ekstrak  dimasukkan  ke  dalam  botol sampel  dan  diberi  label.  Label  ditulis  ekstrak sesuai kelompok perlakuan.

## Pembuatan larutan Simvastatin
Simvastatin  10  mg  dilarutkan  dengan  larutan CMC  1%  sampai  10  ml.  Dosis  Simvastatin  untuk manusia adalah 10 mg, dikonversikan dalam dosis tikus  0,018  didapat  0,18  mg. Penentuan  dosis Simvastatin adalah sebagai berikut :
Berat ditimbang 20 tablet
Rata –rata jumlah tablet
4056 𝑚𝑔
20 = 202 𝑚𝑔
202 𝑚𝑔 10 𝑚𝑔 ×0,18 = 3,636
3,636 𝑚𝑔
1 𝑚𝐿 × 10 = 36,4/tikus
Jadi  dalam  larutaan  stok  10  ml,mengandung  36,4 mg simvastatin,dan setiap 1 ml mengandung 3,636 mg simvastatin

## Pengelompokan hewan uji
Kelompok I , kontrol negatif dengan menggunakan aquades + CMC.
Kelompok II, kontrol positif dengan menggunakan simvastatin + CMC.
Kelompok III,   sari  jeruk  nipis  dengan  dosis sebesar 0,1 ml+ CMC.
Kelompok IV, sari jeruk nipis dengan dosis sebesar 0,2 ml + CMC Kelompok V, sari jeruk nipis dengan dosis sebesar 0,3 ml + CMC Kelompok VI, ekstrak kulit jeruk nipis dengan dosis sebesar 7,2 mg  + CMC Kelompok VII, ekstrak kulit jeruk nipis dengan dosis sebesar 14,4 mg  + CMC Kelompok VIII, ekstrak   kulit jeruk nipis dengan dosis sebesar 19,8 mg  + CMC

## Pemberian Ekstrak jeruk nipis
Pemberian  ekstrak  jeruk  nipis  dilakukan  pada tiap  kelompok  hewan  uji  (1  ekor)  untuk  masing- masing  konsentrasi.  Perlakuan  ini  dilakukan dengan  memberikan  ekstrak  jeruk  nipis  sesuai dosis perlakuan yaitu 1 mL pada setiap tikus untuk masing-masing konsentrasi secara oral menggunakan alat penyekok oral (sonde)  dua kali sehari selama 7 hari.

## Pemberian Larutan Simvastatin
Digunakan 1 ekor tikus sebagai hewan uji untuk kelompok pembanding dengan memberikan larutan simvastatin  sesuai  dosis  yaitu  1  ml,  perlakuan secara  oral  menggunakan  alat  penyekok  oral (sonde) untuk satu ekor tikus selama 7 hari.
Pengukuran  Kadar  Kolesterol  Darah  Tikus putih galur wistar (Rattus norvegicus)
Pertama, Nesco  Multicheck  Tester diaktifkan dengan  menekan  tombol  alat  tersebut  dan dimasukkan  chip  ke  dalam  alat  dengan  tujuan untuk cek alat tersebut kemudian dimasukkan strip di  alat.  Darah  tikus  putih  diambil  dari  pembuluh
darah vena pada ekor tikus putih. Ekor tikus putih diusapkan  alkohol  70%  dengan  menggunakan kapas.  Ekor  tikus  putih  jantan  dipotong  sekitar  1 mm  dari  ujung  ekor  dengan  gunting  yang  steril. Kemudian  darah  ditampung  dalam  strip  kolesterol dan  kadar  kolestrol  darah  akan  terukur  secara otomatis  dimana  hasilnya  ditampilkan  pada monitor  berupa angka.  Ekor  tikus  putih  diusapkan alkohol agar darah menerus.

## Analisa Data
Data  diproses,  ditabulasi  kemudian  dilakukan analisis  secara  statistik.  Pada  tahapan  analisis  ini dilakukan  uji  normalitas  data  untuk  melihat normalitas sebaran data, Apabila hasil sebaran data
normal  dan  uji  homogenitas.  Maka  untuk perbedaan  kadar  dari  masing-masing  kelompok perlakuan  dianalisa  dengan  uji  statistik  One  Way ANOVA menggunakan  SPSS.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Serbuk  simplisia  diekstraksi  dengan  metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96% sebanyak  500  mL  selama  5  x  24  jam  dan diremaserasi  menggunakan  etanol  96%  sebanyak 250  ml  yang  menghasilkan  ekstrak  kental  kulit jeruk  nipis  seberat 6,91  g g.  Berdasarkan perhitungan dengan rumus, diperoleh nilai rendemen sebesar 2,76 %
Tabel 1. Rata-rata kadar koletesrol tikus pada hari ke 0 dan 14.
Gambar 1 . Grafik Rerata kadar koletesrol tikus pada tiap kelompok perlakuan
Pengaruh  pakan  Hiperkolesterolemia  terhadap kadar kolesterol total tikus
Tikus putih diaklamatisasi sebelum melakukan penelitian  selama  14  hari    dengan  tujuan  ndapat beradaptasi  dengan  lingkungan  yang  baik.Selama
0 50 100 150 200 250 300 H0 H14 K adar
K ole st er ol d ar ah Hari Perlakuan K- K+ T1 T2 T3 PS1 PS2
PS3
Kelompok                                     H0 Perlakuan                                   (mg/dl) H14 (mg/dl) K- 209 285 K+ 186 227 T1 180 211 T2 162 240 T3 186 243 PS1 Lo(<100) 234 PS2 155 250 PS3 200 265
aklimatisasi semua tikus putih diberi pakan standar dan  minum.  Setelah  aklimatisasi,  tikus  putih dikelompokkan menjadi 8 kelompok yaitu kelompok kontrol negatif, kontrol positif, perlakuan  sari  jeruk  nipis  dosis  I,II,dan  III,  juga perlakuan  dosis  ekstrak  kulit  jeruk  nipis.  Sebelum pemberian perlakuan,tikus putih dipuasakan terlebih  dahulu  bertujuan  untuk  menghindari adanya pengaruh makanan terhadap hasil pengukuran  kolesterol  dan  rentan  waktu  puasa yang  digunakan  adalah  16-18  jam  karena  waktu tersebut  waktu  yang  dibutuhkantubuh  dalam mencerna  makanan  pada  sistem  pencernaan  dan menghapus  partikel  lemak  dari  darah  sehingga kolesterol yang terukur merupakan kolesterol yang benar-benar  ada  didalam  tubuh  tanpa  adanya pengaruh dari makanan Puspitasari ( 2015). Berdasarkan  tabel  diatas,adanya  peningkatan kadar  kolesterol  total  pada  ke  delapan  kelompok perlakuan  selama  14  hari  .Adapun  peningkatan tersebut,dapat disebabkan karena adanya pemberian  pakan  hiperkolesterolemia  secara  terus menerus pada tikus sehingga mampu mempengaruhi kadar awal kolesterol.
Pemberian pakan hiperkolesterol terhadap tikus putih berupa kuning telur merupakan asupan lemak jenuh  yang  menyebabkan  hiperkolesterolemia (Haryanto dan Sagoyo, 2013)
Identifikasi  ekstrak  etanol  kulit  jeruk  nipis (C itrus aurantifolia ).
Hasil  pembuatan  ekstrak  kulit  jeruk  nipis (C itrus  aurantifolia )  dilakukan  dengan  maserasi dan remaserasi. Metode maserasi dilakukan dengan cara  merendam  serbuk  simplisia  dalam  cairan penyari.  Cairan  penyari  akan  menembus  dinding sel  dan  masuk  ke  dalam  rongga  sel  yang mengandung  zat  aktif  ,zat  aktif  akan  larut  dan karena  adanya  perbedaan  konsentrasi  antara larutan  zat  aktif  didalam  sel  dengan  diluar  sel ,maka larutan yang terpekat didesak keluar.Peristiwa tersebut  berulang  sehingga  terjadi keseimbangan  konsentrasi.  Maserasi  dilakukan dengan menggunakan pelarut etanol 96% sebanyak 500 ml. Digunakan etanol 96% dikarenakan etanol bersifat  polar,sehingga  flavonoid  dapat  ditarik sempurna. Proses maserasi dilakukan selama 5 hari dengan  pengocokan  searah  jarum  jam  setiap harinya.  Rendaman  pada  saat  maserasi  disimpan
ditempat  yang  terlindung  dari  cahaya  untuk mencegah reaksi katalisis cahaya. Hal ini bertujuan agar zat aktif yang didapat ditarik oleh pelarut. lalu setelah itu rendaman disaring menggunakan kertas saring  bertujuan  untuk  menyaring  filtrat,  lalu setelah  itu  ampas  yang  diperoleh  diremaserasi menggunakan  pelarut  etanol  96%  dan  250  ml untuk  mendapatkan  zat  aktif  yang  lebih  banyak. Didapatkan  maserat  lebih  sedikit  dikarenakan pelarut  etanol  96%  tertarik  dalam  cairan  penyari dan  etanol  yang  mudah  menguap  ,sehingga didapatk  hasil  persentasi  rendeman  2,76%. Selanjutnya  dikeringkan  dalam  oven  dengan  suhu 50ᵒ  C  selama  3  hari  untuk  mengurangi  kadar  air yang  terdapat  pada  ekstrak,  Sehingga  diperoleh ekstrak kental.
Berdasarkan hasil penelitian Pada tiap kelompok, Sebelum perlakuan dapat dilihat bahwa terjadi  kenaikan    kadar  kolesterol  tikus  putih karena  pakan  kuning  telur  mengandung    protein dan  kolesterol  yang  tinggi.  Sesudah  perlakuan Berdasarkan    tabel  rerata  kadar  kolesterol  tikus, terlihat  bahwa  pada  hari  ke  21,  setiap  kelompok mengalami  penurunan  kadar  kolesterol  dengan angka  yang  berbeda.  Untuk  kontrol  negatif  yaitu CMC( Carboxymethyl Cellulose ), digunakan sebagai  pembanding  juga  sebagai  pengental, penstabil  dan  behan  pengikat  yang  sekaligus sebagai suspending  agent . walaupun diberi perlakuan  tetap  mengalami  penurunan  kolesterol, peneliti  berasumsi  bahwa    penurunan  tersebut disebabkan  oleh  pakan    hiperkolesterolemia  yang tidak  lagi    diberikan.  Kelompok  kontrol  positif berfungsi    sebagai  pembanding.  Simvastatin sebagai  pembanding  untuk  mengetahui  adanya pengaruh  terhadap  hewan  percobaan.  Simvastatin digunakan  yang  dosis  10  mg.  Berdasarkan  grafik K+  memiliki  hasil  kadar  kolesterol  yang  menurun dengan  nilai  211  mg/dl.  Hal ini    berkaitan dengan mekanisme kerja  dari simvastatin menurut Perhimpunan Dokter  Spesialis  Kardiovaskular Indonesia PERKI (2013), dimana simvastatin yang merupakan  obat  golongan  statin  yang  digunakan untuk  menurunkan  kadar  kolesterol  yang  paling efektif digunakan. Statin bekerja dengan menghambat sintesis kolesterol dalam hati, dengan menghambat  enzim  HMG-CoA  reduktase  .Enzim ini  berperan  pada  sintesis  kolesterol,  terutama dihati
Tabel 2 . Perbandingan kadar kolesterol total tikus sebelum dan sesudah perlakuan
Keterangan : K-  = Kontrol negatif T3  = Sari jeruk nipis dosis 0,3 ml
K+ = Kontrol positif                            PS1=  Ekstrak kulit jeruk nipis dosis 7,2 mg
T1  = Sari jeruk nipis dosis 0,1 ml      PS2 = Ekstrak kulit jeruk nipis dosis 14,4 mg
T2  =  Sari  jeruk  nipis  dosis  0,2  ml      PS3=  Ekstrak  kulit  jeruk  nipis  dosis  19,8  mg
Gambar 2 . Grafik perubahan rataan kadar kolesterol darah tiap kelompok perlakuan

## Pengamatan sebelum dan sesudah perlakuan
Selanjutnya  pengamatan  sebelum  perlakuan kadar  kolesterol  tikus  putih  naik  disebabkan pemberian  pakan  hiperkolesterolemia,    dengan hasil  tertingggi  oleh  kelompok  kontrol  negatif yaitu  285  mg/dl.  Setelah  sesudah  perlakuan  dapat
dilihat  pada  kelompok  pemberian  Sari jeruk  nipis, kelompok  T1  dengan  dosis  0,1  ml  ,  T2  dengan dosis 0,2 ml, dan T3 dengan dosis 0,3 ml, masing- masing  kelompok  menunjukan  adanya  efek penurunan kadar kolesterol pada tikus putih. Akan tetapi  nilai  kadar  kolesterol  total  yang  paling
Kelompok Perlakuan H0 (mg/dl) H14 (mg/dl H21 (mg/dl) K- 209 285 161 K+ 186 227 211 T1 180 211 160 T2 162 240 227 T3 186 243 189 PS1 Lo(<100) 234 151 PS2 155 250 215 PS3 200 265
196 0 50 100 150 200 250 300 H0 H14 H21 K ada r K ol es te rol Dar ah Waktu Perlakuan K- K+ T1 T2 T3 PS1 PS2
signifikan  menurun  adalah  kelompok  T3  dengan dosis  0,3  ml    menurunkan  kadar  kolesterol  dari 243  mg/dl  menjadi  189  mg/dl.  lalu  hasil  dari perlakuan  kelompok  ekstrak  kulit  jeruk  nipis  PS1 dengan  dosis  7,2  mg,PS2  dengan  dosis  14,4 mg,dan  PS3  dengan  dosis  19,8  mg  juga menunjukan adanya efek penurunan kadar kolesterol  pada  tikus  putih.  Dengan  nilai  kadar kolesterol  total  yang  paling  signifikan  Kelompok PS1dengan  dosis  7,2  mg    menurunkan  kadar kolesterol dari 234 mg/dl menjadi 151 mg/dl. Sari  jeruk  nipis  dan  Ekstrak  kulit  jeruk  nipis efektif  terhadap  penurunan  kadar  kolesterol  darah tikus putih. Tetapi Kelompok pemberian Sari jeruk nipis dan Kelompok perlakuan Ekstrak etanol kulit jeruk  nipis  memiliki  perbedaan  hasil  rata-rata kadar kolesterol total setelah perlakuan kemungkinan  disebabkan  adanya  perbedaan  kadar zat  yang  berperan  dalam  menurunkan  kadar kolesterol  darah  diantara  kedua  kelompok  seperti flavonoid  ,  saponin,  minyak  atsiri(siral,  limonene, feladren, glikosida, hesperidin).
Jeruk  nipis juga  mengandung  Vitamin  C  tinggi dan unsur-unsur senyawa seperti asam sitrat, asam amino,  glikosida,  kalsium,  lemak,  asam  situn, damar,  kalsium,  besi,  fosfor  dan  vitamin B1.Penurunan  Kadar  kolesterol  pada  tikus  putih oleh  karena  pemberian  Jeruk  nipis  karena  adanya kandungan flavonoid utama dalam jeruk nipis yaitu hesperidin (Kurnia,2014).
Hesperidin  merupakan  flavonoid  spesifik  pada buah jeruk nipis yang memiliki sifat hipokolesterolemik.  Hesperidine  memiliki  efek signifikan  dalam  menurunkan  kadar  kolestererol, kadar  LDL  dan  meningkatkan  kadar  HDL (Haryanto dan Sayogo, 2013).
Hesperidin  dapat  menghambat  kerja  enzim 3- hydroxy-3methylglutaryl coenzim A-reductase sehingga  dapat  menekan  sintesis  kolesterol  oleh hati  dan  dapat  meningkatkan  konsentrasi  reseptor LDL Kurnia (2014). Sesuai dengan penelitian Bok et  al .  Pada  tahun  1999  yang  memberikan hesperidin  pada  30  tikus  jantan  (Haryanto    dan Sayogo 2013).
Flavonoid  dapat  menghambat  aktivitas enzim  Acyl-CoA  Cholesterol  Acyl  Transferase (ACAT)  pada  sel  HepG2  yang  berperan  dalam penurunan  esterifikasi  kolesterol  pada  hepar sehingga  jumlah  kolesterol  ester  pun  berkurang. Kolesterol  ester  berperan  dalam  pembentukan lipoprotein,  salah  satunya  VLDL  sehingga  VLDL yang  disintesis  juga  menurun.  Tidak  hanya  itu, penghambatan  sekresi  Apo-B100  pada  sel  CaCO2 yang  juga  menyusun  komponen  VLDL  dan
penurunan  aktivitas  MTP  yang  berfungsi  untuk memediasi  pembentukan  VLDL  oleh  flavonoid juga mempengaruhi penurunan sintesis dari VLDL yang akan dikonversi menjadi LDL, sehingga LDL mengalami  penurunan.  Oleh  karena  itu,  pada penelitian  ini,  ekstrak  rumput  laut  merah (Kappaphycus alvarezii) yang mengandung flavonoid yaitu berupa quercetin dapat menurunkan  kadar  LDL  (Ekananda  &  Siregar 2015).
Pengujian Paired Sample T-Test
Hasil  analisis  data  menggunakan  SPSS    25 untuk pengujian Paired Sample T-Test pada output ini  ringkasan  hasil  statistik  deskriptif  dari  kedua sampel  yang  diteliti  yakni  nila Pre  Test dan Post Test .Untuk  nilai Pre  Test diperoleh  rata-rata  hasil kadar kolesterol atau mean sebesar 244,37,sedangkan  untuk  nilai  diperoleh  nilai  rata- rata  hasil  188,75.Untuk  nilaim  Std. Deviation (standar deviasi) pada Pre Test sebesar 22,840 dan Post  Test sebesar  28,589.Nilai Std.Error Mean untuk Pre  Test sebesar  8,075  dan  untuk Post  Test sebesar  10,107.Lalu  untuk  Interprestasi  tabel output  Paired  Sample  Correlations  diketahui  nilai koefisien  korelasi  sebesar  0,007  dengan  nilai signifikansi sebesar 0,986. Karena nilai Sig. 0,986 >  probabilitas  0,05  maka  dapat  dikatakan  bahwa tidak  ada  hubungan  antara  variabel Pre  Test dengan  Variabel Post  Test .  Output  ketiga  ini adalah  yang  terpenting,karena  pada  bagian  ketiga inilah  kita  akan  menemukan  ada  atau  tidaknya pengaruh  Kelompok  perlakuan  terhadap  hasil kadar  kolesterol  tikus  putih  ( Rattus  norvegicus ). Berdasarkan  tabel  output Paired  Samples  Test , diketahui nilai Sig. (2- tailed) adalah sebesar 0,004 <  0,05,  maka  HO  ditolak  dan  Ha  diterima. Sehingga dapat disimpulkan bahwa ada perbedaan rata-rata  antara  hasil  kadar  kolesterol  tikus Pre Test dan Post  Test yang  artinya  ada  pengaruh Kelompok  perlakuan  untuk  menurunkan  kadar kolesterol tikus putih ( Rattus norvegicus ).

## Pengujian ANOVA
Selanjutnya  dilakukan  pengujian  Normalitas ( Shapiro  Wilk )  dan  Homogenitas  ( Levene  Test) sebelum  pengujian one  way  anova untuk mengetahui  normal  tidaknya  satu  distribusi  data dan  untuk  mengasumsikan  kalau  nilai  tiap-tiap variabel  mempunyai  varians  yang  homogen.  Hasil uji  Normalitas  didapatkan  nilai  probabilitas  yang mencakup  semua  kelompok  perlakuan  p  >  0,05 sehingga dapat disimpulkan bahwa data berdistribusi normal (lampiran 7).Hasil uji
Homogenitas didapatkan nilai p > 0,05 berarti data tersebut  terdistribusi  homogen  (lampiran  9). Selanjutnya  dilakukan  analisis  parametrik  dengan metode  Anova.  Hasil  statistik  dengan  metode Anova  dimana  uji  F  menunjukan  nilai  F  hitung sebesar 0,573 dan p = 0,768.
Data penelitian yang telah didapatkan dilakukan  uji  statistik  dengan  menggunakan aplikasi  SPSS  versi  25  untuk  menarik  kesimpulan dari  penelitian  yang  telah  dilakukan  dengan menggunakan  metode  analisis  varian  satu  faktor ( One  Way  Anova ) , dilakukan  untuk  menguji perbedaan  tiga  kelompok  atau  lebih  berdasarkan satu  variabel  independen.  Analisis  ini  digunakan untuk  penelitian  eksperimental,  karena  peneliti ingin  menguji,  apakah  ada  perbedaan  bermakna antar  perlakuan  tersebut. dimana  dilakukan  uji normalitas  terlebih  dahulu  dan  uji  homogenitas sebagai syarat kedua yang harus dipenuhi sebelum melakukan pengujian One Way Anova . Berdasarkan  uji  statistik  yang  dilakukan  data terdistribusi  normal  dan  homogen.  Pengujian anova  atau  uji  F  bisa  dilakukan  dengan membandingkan  F  hitung  dengan  F  tabel. Berdasarkan  tabel  Anova  didapatkan  nilai  sig.  > 0,05  berarti  bisa  disimpulkan  bahwa  H0  diterima maka tidak ada perbedaan yang bermakna rata-rata hasil  kadar  kolesterol  tikus  berdasarkan  kelompok perlakuan. Hasil menunjukan H0 diterima maka uji lanjut ( Post Hoc Test ) tidak dilakukan

## KESIMPULAN
Sari  buah  dan  Ekstrak  etanol  kulit  jeruk  nipis ( Citrus aurantifolia ) memiliki aktivitas antihiperkolesterolemia,  juga  efektif  terhadap penurunan kadar kolesterol total tikus putih jantan galur  wistar  ( Rattus  norvegicus ).Juga  Terdapat perbedaan antara Sari buah dan ekstrak etanol kulit jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia ).  Perbedaannya adalah Sari buah jeruk nipis dengan dosis  terbaik adalah konsentrasi 0,3 ml sedangkan untuk ekstrak etanol kulit jeruk nipis ( Citrus aurantifolia ) dengan dosis 7,2 mg.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk parameter  lain,  seperti  kadar  LDL,  HDL  dan Trigliserida,  serta  penelitian  untuk  mengetahui kandungan  buah  jeruk  nipis  untuk  mengetahui komponen  zat  aktif    yang  paling  berperan  untuk menurunkan kadar kolesterol total

## DAFTAR PUSTAKA
Ekananda,    N.  2015.  Bay  Leaf  in  Dyslipidemia Therapy . 4 :. 64–69.
Haryanto, A dan Sagoyo. 2013. Hiperkolesterolemia  :  Bagaimana  Peran Hesperidine. Vol 40, No 1.
http://www.kalbemed.com/Events.aspx.
Kurnia,  A.  2014.  Khasiat  Ajaib  Jeruk  Nipis  –Dari A-Z  untuk  Kesehatan  dan  Kecantikan. Ed.1. Rapha Publishing, Yogyakarta..
Nisai, Af. 2013. Pengaruh konsumsi tahu terhadap penurunan  low  density  lipoprotein  (LDL) pada tikus putih jantan (strain wistar) yang diberi diet tinggi kolesterol.
Perki.    2013.  Pedoman  Tatalaksana  Dislipidemia.
Centra Communications. Jakarta
Purnamasari,  I.  2014. Pengaruh  Pemberian  Jus Pare  (Momordica  charantia  L)  dan  Jus Jeruk Nipis (Citrus aurantifolia) Terhadap Kadar  Kolesterol  Total  Tikus  Sprague Dawley Hiperkolesterolemia . 3 : 4.’
Puspitasari et  al .,  2015.  Pengaruh  Pemberian Ekstrak  Jamur  Kuping  Hitam  terhadap Penurunan Kadar Kolesterol Mencit Swiss
Webster Jantan. 192-198. Prosiding Penelitian SPeSIA Unisba
Sagay et al ,. 2019. Uji aktivitas antihiperlipidemia ekstrak    etanol  buah  pinang  yaki  (Areca vestiara)  pada  tikus  putih  jantan  galur wistar (Rattus norvegicus) yang diinduksi hiperlipidemia. Universitas Sam
Ratulangi, Manado.
Santoso et  al ,.  2015.  Perbedaan  penggunaan konsentrasi  larutan  asam  sitrat  dalam pembuatan gelatin tulang rawan ikan pari mondol. Jurnal Pengolahan dan Bioteknologi  Hasil  Perikanan , 4 :  106- 114.
Wulan,  A.  2014.  Pengaruh  Pemberian  Jus  Pare (Momordica charantia L) dan Jeruk Nipis ( Citrus  aurantifolia )  terhadap  kadar kolesterol  total  tikus  Sprague  Dawley Hiperkolesterolemia. Universitas
Diponegoro Semarang.