Aktivitas Analgetik dan Antiinflamasi Fraksi Daun Ashitaba ( Angelica Keiskei (Miq.) Koidz.) Pada Tikus Jantan Galur Wistar Dan Keamanannya Terhadap Lambung
The Analgesic and Anti-Inflammatory Activity of Fraction Ashitaba ( Angelica Keiskei (Miq.) Koidz.) Leaves on Male White Rat Wistar Strain and Its Safety on The Gastric
Eka Ndhari Rochma*, Titik Sunarni, Gunawan Pamudji Widodo Program Studi Pasca Sarjana Jurusan Sains Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi Email: ekandhari14@gmail.com
(tanggal diterima: 02-05-2020 , tanggal disetujui: 21-05-2021)

## INTISARI
Ashitaba ( Angelica keiskei (Miq.) Koidz.) adalah tanaman yang memiliki aktivitas analgetik dan  antiinflamasi.  Senyawa  yang  diyakini  efektif  adalah  alkaloid,  saponin,  tannin,  dan  flavonoid. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui ekstrak dan fraksi mana yang memiliki aktivitas analgetik dan antiinflamasi, serta keamanan lambung, dan fraksi mana yang memberikan aktivitas terkuat da teraman terhadap lambung tikus.
Serbuk ashitaba diekstraksi menggunakan metode remaserasi dengan pelarut etanol 70% untuk  menghasilkan  ekstrak  etanol  daun  ashitaba.  Ekstrak  difraksinasi  menggunakan  pelarut  n- heksan, etil asetat, dan air. Metode hot plate dan tail flick untuk pengujian analgetik, metode randall- selitto dan  pembentukan  udema  untuk  pengujian  antiinflamasi  kemudian  diamati  secara makroskopis dan mikroskopis untuk keamanan lambung tikus. Kelompok uji terdiri dari 6 kelompok perlakuan yaitu kontrol negatif Na CMC 1%, kontrol positif asam mefenamat 500mg/kg BB, ekstrak 300 mg/kg BB, fraksi n- heksan 120,7 mg/kg BB, fraksi etil asetat 20,6 mg/kg BB, fraksi air 158,65 mg/kg BB.
Hasil penelitian menyatakan bahwa ekstrak etanol, fraksi n- heksan, fraksi etil asetat, dan fraksi air daun ashitaba mempunyai aktivitas analgetik dan antiinflamasi. Ekstrak 300mg/kg BB dan fraksi  n-  heksan  120,7mg/kg  BB  menunjukkan  aktivitas  analgetik  dan  antiinflamasi  yang  setara dengan asam mefenamat dan menunjukkan keamanan pada lambung setara dengan kontrol negatif.
Kata kunci: Daun ashitaba; analgetik; antiinflamasi; makroskopis; mikroskopis

## ABSTRACT
Ashitaba (Angelica keiskei (Miq.) Koidz.) is a plant that has analgesic and anti-inflammatory activity. Compounds that are believed to be effective are alkaloids, saponins, tannins, and flavonoids. The purpose of this  study  was to determine  which  extracts and fractions had analgesic and anti- inflammatory activity, as well as gastric safety, and which fractions gave the strongest and safest activity against the stomach of rats.
Ashitaba powder was extracted using remaceration method with 70% ethanol as solvent to produce  ethanol  extract  of  ashitaba  leaves.  The  extract  was  fractionated  using  n-hexane,  ethyl acetate, and water as solvents. The hot plate and tail flick methods for analgesia testing, the randall- selitto  method  and  edema  formation  for  anti-inflammatory  testing  were  then  observed macroscopically and microscopically for the safety of the rat stomach. The test group consisted of 6 treatment groups, namely 1% Na CMC negative control, mefenamic acid positive control 500mg/kg BW, extract 300 mg/kg BW, n-hexane fraction 120.7 mg/kg BW, ethyl acetate fraction 20.6 mg. /kg BW, water fraction 158.65 mg/kg BW.
The results showed that the ethanol extract, n-hexane fraction, ethyl acetate fraction, and water fraction of ashitaba leaves had analgesic and anti-inflammatory activities. Extract 300mg/kg
BW  and  n-hexane  fraction  120.7mg/kg  BW  showed  analgesic  and  anti-inflammatory  activity equivalent to mefenamic acid and showed gastric safety equivalent to negative control.
Keywords: Ashitaba leaf; analgesic; anti-inflammatory; macroscopic; microscopic

## 1. PENDAHULUAN
Analgesik  dan  antiinflamasi  merupakan  senyawa  yang  mampu menghilangkan  atau  menurunkan  rasa  sakit  tanpa  kehilangan  kesadaran  dan mengatasi peradangan. Nyeri dan inflamasi adalah gejala penyakit yang disebabkan oleh jaringan yang rusak atau perubahan metabolisme jaringan yang diikuti  oleh pelepasan  dan  pembentukan  bahan  mediator,  seperti  prostaglandin,  serotonin, histamine,  dan  bradykinin  [1].    Obat  analgetik  dan  antiinflamasi  bekerja  dengan memblokir kerja enzim siklooksigenase yang bertanggung jawab terhadap produksi protaglandin dari membran mukosa, seperti asam lambung dan pepsin[2]. Ashitaba adalah  salah  satu  tanaman  yang  dapat  digunakan  sebagai  obat.  Semua  bagian tanaman ashitaba mengandung alkaloid, saponin, dan glikosida, sedangkan daunnya mengandung  banyak  flavonoid,  triterpenoid  dan  tanin[3].  Menurut  penelitian sebelumnya,  ekstrak  etanol  daun  ashitaba  memiliki  efek  antiinflamasi  dan analgesik[4]. Oleh karena itu, peneliti akan melakukan penelitian untuk mengetahui aktivitas analgesik dan antiinflamasi fraksi daun ashitaba pada tikus putih jantan dan mengetahui keamanannya terhadap lambung tikus.

## 2. METODE PENELITIAN 2.1. Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  penelitian  ini  adalah  bejana  maserasi,  kain  flanel, corong, corong pisah, rotary evaporator , spuit injeksi, jarum sonde, Analgesy-meter , plestimometer, mikroskop, tabung reaksi, dan hamber untuk KLT.
Bahan yang digunakan penelitian ini adalah daun ashitaba yang berasal dari daerah Trawas, Mojokerto, Jawa Timur.

## 2.2. Determinasi tanaman
Determinasi  tanaman  ashitaba  dalam  penelitian  ini  dilakukan  di Laboratorium Program Studi Biologi Fakultas  Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sebelas Maret.

## 2.3. Pengambilan tanaman
Daun ashitaba diambil dari daerah Trawas, Mojokerto, Jawa Timur. Ashitaba diambil  bagian  daunnya  yang  masih  segar,  berwarna  hijau  pada  daunnya,  tidak busuk,  dan bebas dari hama.

## 2.4. Pembuatan serbuk
Daun  ashitaba  segar  yang  akan  digunakan  ditimbang  terlebih  dahulu, kemudian  dicuci  bersih  dengan  air  mengalir  agar  bebas  dari  kotoran,  kemudian ditiriskan.  Setelah  itu,  daun  yang  sudah  dibersihkan  kemudian  dicacah  dan dikeringkan  dalam  oven  50 o C  hingga  kering.  Daun  yang  telah  kering  dihaluskan dengan blender dan diayak dengan ayakan nomor 40 untuk mendapatkan derajat kehalusan yang diinginkan[5].

## 2.5. Pembuatan ekstrak
Ditimbang  sebanyak  1000  gram  serbuk  daun  ashitaba  kemudian ditambahkan  etanol  70%  dengan  perbandingan  (1:10)  hingga  5  liter.  Proses remaserasi dilakukan dalam keadaan tertutup dalam wadah gelap dan terlindung dari  sinar  matahari  langsung.  Maserat  yang  dihasilkan  selanjutnya  disaring,  dan dipekatkan dengan rotary evaporator hingga dihasilkan ekstrak pekat[6].

## 2.6. Pembuatan fraksi
Ekstrak etanol daun ashitaba ditimbang sebanyak 10 g kemudian dipartisi menggunakan pelarut n- heksana 75 ml: air 75 ml. Fraksinasi n- heksan dikerjakan sebanyak tiga kali dengan corong pisah. Sari yang diperoleh kemudian dipekatkan untuk mendapatkan fraksi n-  heksana. Lapisan sisa fraksi n- heksana ditambahkan etil asetat sebagai pelarut. Fraksinasi dengan etil asetat dikerjakan sebanyak tiga kali. Hasil yang didapat dari fraksi etil asetat dipekatkan  untuk mendapatkan fraksi etil asetat. Sisa fraksinasi n- heksana dan etil asetat diuapkan diatas penangas air, hasilnya disebut fraksi air[7].
2.7. Identifikasi  kandungan  senyawa  dalam  ekstrak  dan  fraksi  daun ashitaba
Pengujian  tabung  dan  KLT  dilakukan  untuk  identifikasi  senyawa  yang terkandung di dalam ekstrak dan fraksi. Identifikasi kandungan senyawa dilakukan terhadap  ekstrak dan  fraksi  yang  dihasilkan  dengan  mengamati  munculnya  noda yang direaksikan dengan reagen antara lain: alkaloid, saponin, flavonoid dan tanin.

## 2.8. Pengujian aktivitas analgetik
Metode pengujian yang digunakan untuk aktivitas analgetik adalah metode hot plate dan tail flick. Metode hot plate
Tiap  kelompok  diberi  perlakuan  yaitu  kelompok  Na-CMC  1%,  kelompok asam mefenamat 1%, kelompok uji diberi ekstrak etanol, fraksi n- heksana, fraksi etil  asetat  dan  fraksi  air  daun  Ashitaba.  Sebelum  perlakuan,  tikus  ditempatkan dalam beaker glass yang dipanaskan dalam penangas air dengan suhu 55 o C. Respon tikus diamati dengan mengamati waktu latensi saat tikus merespon dengan menjilat kaki  belakangnya  atau  melompat.  Hambatan  nyeri  dengan  metode hot  plate dinyatakan sebagai % Maximum Possible Effect (MPE) [8]. Metode tail flick
Tiap kelompok tikus diberi perlakuan yaitu kelompok Na CMC 1%, kelompok asam mefenamat 1%, kelompok uji diberi ekstrak etanol, fraksi n- heksana, fraksi etil asetat dan fraksi air daun ashitaba. Tikus didiamkan selama 30 menit, kemudian ekor  tikus  disinari  dengan  sinar  infra  merah  sebagai  mediator  nyeri.  Kemudian dicatat berapa reaksi (dalam detik)  yang dilakukan  tikus menarik ekornya untuk setiap perlakuan dalam kelomupok selama 3 jam dengan selang waktu 30 menit. Aktivitas analgetik ditunjukkan dengan persentase hambatan nyeri (PHN) [9].

## 2.9. Pengujian aktivitas antiinflamasi
Uji aktivitas antiinflamasi dilakukan setelah uji aktivitas analgesik. Pengujian aktivitas  antiinflamasi  menggunakan  metode randal-selitto dan  pembentukan udema pada kaki hewan uji.
Metode randall-selitto
Tiap kelompok tikus diberi perlakuan yaitu kelompok Na CMC 1%, kelompok asam mefenamat 1%, kelompok uji diberi ekstrak etanol, fraksi n-heksana, fraksi etil asetat  dan  fraksi  air  daun  ashitaba.  Setelah  1  jam  diberi  perlakuan,  tikus  diberi sebanyak 0,1 ml suspensi λ-karagenan 1% secara subplantar. Tiga jam kemudian dilakukan  pengukuran  ambang  batas  nyeri  dengan  meletakkan  kaki  tikus  pada penjepit. Penjepit dikencangkan secara perlahan dan segera dihentikan saat tikus menunjukkan  tanda-tanda  kesakitan,  yaitu  berupa  gerakan  memberontak (melepaskan  diri)  atau  berteriak  kesakitan.  Aktivitas  antiinflamasi  ditunjukkan dengan persentase peningkatan ambang nyeri[10].

## Metode pembentukan udema
Tiap kelompok tikus diberi perlakuan yaitu kelompok Na CMC 1%, kelompok asam mefenamat 1%, kelompok uji diberikan ekstrak, fraksi n- heksana, fraksi etil asetat, dan fraksi air daun ashitaba. Sediaan uji diberikan secara per oral, 30 menit setelah pemberian sampel uji, tikus diberi 0,1 ml suspensi λ-karagenan 1% secara subplantar untuk menginduksi radang. Aktivitas antiinflamasi ditunjukkan dengan persentase penghambatan udem[11].

## 2.10. Uji keamanan lambung tikus
Setiap  kelompok  pada  uji  analgesik  dan  antiinflaasi  dilakukan  pengujian keamanan lambung. Sediaan uji diberikan secara oral terus menerus sampai hari ke 5  dengan  dosis  1  ml  per  hari.  Pada  hari  ke  5,  semua  tikus  dipuasakan  (air  saja) selama  18  jam,  dan  pada  hari  ke  6  semua  tikus  dikorbankan  dan  dibedah  untuk dikeluarkan lambungnya.

## Pemeriksaan lambung secara makroskopis
Lambung  tikus  diperiksa  secara  makroskopis  dan  histologis  untuk mengetahui adanya kerusakan lambung. Kerusakan lambung diukur dan dievaluasi secara  makroskopis[12].  Gambar  lambung  tukak  dan  jumlah  tukak  serta pengukuran diameter tukak, selanjutnya dibandingkan dengan kelompok kontrol. Tingkat keparahan tukak dinyatakan dengan indeks tukak dan kemudian dianalisis secara statistik. Indeks tukak dihitung dengan:
Indeks tukak = A+B
Keterangan:
A = nilai rata- rata skor jumlah tukak B = nilai rata- rata skor diameter tukak
Pemeriksaan lambung secara histopatologi
Pemeriksaan histologi lambung dilakukan dengan cara pembuatan preparat jaringan  lambung  dengan  pewarnaan  Hematoxylin  dan  Eosin  alkohol  (HE). Lambung  yang  sudah  dipotong  direndam  ke  dalam  larutan  formalin,  kemudian difiksasi  dengan  larutan  bouin  selama  3  jam.  Setelah  fiksasi,  dilakukan  proses dehidrasi  dengan menggunakan alkohol  konsentrasi bertingkat: 70%, 80%,  90%,
95%,  dan  100%,  kemudian  dilakukan  penjernihan  dengan  xylol  sebanyak  3  kali. Sampel organ di blocking dengan embedding yang dituangi parafin cair, selanjutnya didinginkan.  Blok  parafin  yang  sudah  dingin  dipotong  tipis  setebal  5µm menggunakan microtom .  Proses  yang  terakhir  adalah  pewarnaan  menggunakan metode  Hematoxylin-Eosin.  Preparat  histopatologi  diamati  di  bawah  mikroskop dengan perbesaran 10x dan 40x[13].

## 2.11. Analisa data
Data  yang  dihasilkan  dari  uji  analgetik  dan  antiinflamasi  masing-  masing metode dianalisis menggunakan uji Kolmogorov-Smirnov untuk melihat data yang diteliti  berdistribusi  normal  dan  uji Levene untuk  melihat  homogenitas  data.  Jika data berdistribusi normal dan homogen, maka uji analisis varians (ANOVA) dapat dilanjutkan. Jika terdapat perbedaan yang signifikan, maka uji Post Hoc dilanjutkan . Data  yang  dihasilkan  dari  pengamatan  ulkus  lambung  diolah  dengan  uji nonparametrik Kruskal-Wallis untuk  melihat  perbedaan  pada  semua  kelompok perlakuan.  Apabila  terdapat  perbedaan  yang  signifikan,  dilanjutkan  dengan  uji Mann-Whitney untuk melihat perbedaan antar kelompok perlakuan.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil determinasi tanaman
Determinasi  tanaman  dari  daun  ashitaba  ( Angelica  keiskei (Miq.) Koidz) dilakukan di bagian Laboratorium Program Studi Biologi Fakultas Matematika Dan Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sebelas  Maret  Surakarta.  Berdasarkan  hasil determinsi  No.:  34/UN27.9.6.4/Lab/2019  dapat  diketahui  bahwa  tanaman  yang digunakan pada penelitian ini adalah tanaman Angelica keiskei (Miq.) Koidz.

## Hasil pengambilan dan pengeringan tanaman
Tanaman  ashitaba  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  diperoleh  secara acak pada bulan Februari 2018 dari daerah Trawas, Mojokerto, Jawa Timur. Daun diambil dalam kondisi yang segar, permukaan daun masih hijau, tidak busuk, dan bebas dari hama. Hasil pengeringan daun ashitaba diperoleh sebanyak 950  gram dengan rendemen 20%.

## Hasil pembuatan serbuk
Hasil pembuatan serbuk daun ashitaba diperoleh serbuk sebanyak 900 gram dengan rendemen 94,7%.

## Hasil rendemen ekstrak etanol daun ashitaba
Hasil dari ekstraksi daun ashitaba menggunakan metode remaserasi dengan pelarut  etanol  70%  dihasilkan  ekstrak  kental  sebanyak  139,1  gram  dengan  hasil rendemen 27,82%.

## Hasil fraksinasi ekstrak etanol daun ashitaba
Hasil pembuatan fraksi n- heksana, etil asetat, dan air ekstrak daun ashitaba dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Rendemen fraksi n- heksana, etil asetat, dan air daun ashitaba
Fraksinasi Bobot fraksi (g) Rendemen (%) n- heksana 10, 513 26,283
Etil asetat 1,794 4,485 Air 13,818 34, 545
Hasil identifikasi kandungan senyawa ektrak dan fraksi daun ashitaba Identifikasi  kandungan  senyawa  dalam  ekstrak  dan  fraksi  daun  ashitaba menggunakan  uji  tabung  dan  KLT.  Senyawa  yang  teridentifikasi  adalah  senyawa yang  mempunyai  aktivitas  analgesik  dan  antiinflamasi.  Ekstrak  dan  fraksi  daun ashitaba positif mengandung tanin, alkaloid, flavonoid, dan saponin.
Hasil aktivitas analgetik Metode hot plate Pengujian  aktivitas  analgetik  dengan  metode hot  plate yaitu  dengan memberikan  rangsangan  panas  terhadap  kaki  tikus  sehingga  tikus  merespon dengan  menjilati  kakinya  atau  melompat.  Hasil  waktu  rata  -  rata  dan  simpangan baku  respon  nyeri  dari  masing-  masing  kelompok  perlakuan  ditunjukkan  pada Tabel 2.
Tabel 2. Waktu latensi (detik) setelah diberikan larutan uji (mean±SD) Waktu (menit) Na CMC Asam mefenamat Ekstrak Fraksi n- heksan Fraksi Etil asetat Fraksi Air 30’ 5,76±0,92 9,26±1,26 10,22±1,42 9,87±0,52 12,13±2,95 8,01±1,63 60’ 6,09±0,98 12,14±2,94 12,29±1,95 12,27±1,06 14,75±2,56 10,28±1,31 90’ 5,69±1,27 11,82±3,57 10,52±1,08 11,39±2,58 10,21±3,25 11,48±3,41 120’ 6,88±0,72 11,22±3,57 9,45±1,62 9,68±1,97 10,77±2,49 10,17±1,73 150’ 6,00±0,51 8,27±1,35 8,73±1,25 9,40±1,48 10,02±1,15 9,711,75 180’ 6,05±0,78 7,83±1,84 7,53±1,92 7,51±0,29 8,79±2,08 9,14±1,78
Tabel 2 menunjukkan kelompok Na CMC mempunyai rata - rata waktu latensi terendah  dibanding  dengan  kelompok  lain,  dikarenakan  tidak  adanya  aktivitas analgetik  pada  kelompok  Na  CMC.  Kelompok  asam  mefenamat  pada  menit  30 mempunyai rata- rata waktu latensi yang lebih lama dibanding dengan kelompok Na CMC. Berdasarkan hasil uji statistik Post Hoc , dari metode hot plate ditemukan perbedaan yang nyata antara kelompok asam mefenamat dengan kelompok Na CMC (sig.<0,05).
Pada kelompok ekstrak dan fraksi daun ashitaba secara statistik dengan uji Post Hoc , menunjukkan bahwa ashitaba memiliki waktu latensi yang tidak berbeda signifikan,  artinya  ekstrak  dan  fraksi  tidak  menyebabkan  peningkatan  waktu latensi. Jika dibandingkan dengan kontrol positif, ekstrak dan fraksi daun ashitaba tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan (sig.> 0,05).
Hambatan  nyeri  pada  metode hot  plate dinyatakan  dengan  % Maximum Possible  Effect (MPE).  Data  waktu  latensi  dihitung  persentase Maximum  Possible Effect (MPE) dan hasilnya pada kelompok perlakuan dapat dilihat pada Tabel 3.

## Tabel 3. Persentase MPE pada kelompok kontrol positif, ekstrak, dan fraksi daun ashitaba
Kelompok dosis
% Maximum Possible Effect (%)
Na CMC 0±0,00 b Asam mefenamat 40,73±20,70 a Ekstrak 300mg/kgBB 36,27±8,39 a Fraksi n-heksan 120,7mg/kgBB 39,79±7,69 a Fraksi etil asetat 20,06mg/kgBB 49,42±15,65 a Fraksi air 158,65mg/kgBB 36,98±10,12 a
Keterangan : a : Berbeda bermakna (p<0,05) dengan kontrol negatif, b : Berbeda bermakna (p<0,05) dengan asam mfenamat
Tabel  3  menunjukkan  data  rata-rata  persentase  MPE  setiap  kelompok perlakuan. Secara statistik dengan uji Post hoc, kelompok ekstrak dan fraksi daun ashitaba  memiliki  %  MPE  yang  tidak  berbeda  signifikan  dengan  kelompok  asam mefenamat (sig.>0,05). Persentase MPE yang besar dipengaruhi oleh senyawa yang terlarut  dalam  fraksi  etil  asetat.  Menurut  uji  identifikasi,  kandungan  senyawa  di dalam  ekstrak  dan  fraksi  daun  ashitaba  adalah  saponin,  alkaloid,  flavonoid  dan tanin.
Mekanisme  flavonoid  sebagai  analgesik  adalah  dengan  menghambat aktivitas enzim COX yang menurunkan produksi prostaglandin  untuk meredakan nyeri[14].  Peran  alkaloid  sebagai  analgesik  dengan  bekerja  pada  reseptor  opioid SSP, sehingga mengurangi persepsi nyeri dan respon emosional terhadap nyeri[15]. Saponin  dan  tanin  juga  menghambat  enzim  COX2,  yang  selanjutnya  dapat menghambat biosintesis mendiator analgesik prostaglandin[16].
Metode tail flick Pengujian  aktivitas  analgetik  dengan  metode tail  flick ialah  dengan memasukkan tikus ke dalam alat analgesy-meter sebagai mediator nyeri maka tikus akan  memberikan  respon  berupa  menarik  ekornya.  Hasil  waktu  rata-rata  dan simpangan  baku  respon  nyeri  dari  masing-  masing  kelompok  perlakuan  dapat dilihat pada tabel 4.
Tabel 4. Waktu reaksi (detik) setelah diberikan larutan uji (mean±SD)
Waktu (menit) Na CMC Asam Mefenamat Ekstrak Fraksi n- heksan Fraksi Etil asetat Fraksi Air 30’ 5,14±1,06 7,69±1,29 8,88±3,07 9,22±2,34 10,02±4,04 6,71±1,37 60’ 6,60±0,65 9,66±2,14 8,59±2,45 10,91±3,77 13,26±4,50 9,39±2,77 90’ 6,97±2,06 10,72±3,65 9,87±2,78 12,06±1,93 10,91±2,48 8,63±1,68 120’ 6,56±1,82 11,85±2,75 10,56±1,32 11,64±3,69 8,37±3,09 9,03±1,89 150’ 5,92±1,61 8,75±0,75 9,63±1,66 9,52±1,89 8,93±2,98 10,37±2,44 180’ 5,97±1,19 7,05±2,61 9,20±1,20 9,15±1,18 8,02±0,30 8,84±2,00
Tabel 4 menunjukkan hasil rata- rata waktu reaksi secara keseluruhan pada setiap  kelompok.  Kelompok  Na  CMC  memiliki  rata-rata  waktu  reaksi  terendah dengan  kelompok  lain,  dikarenakan  Na  CMC  tidak  mengandung  bahan  aktif  yang mampu  menghambat  rasa  nyeri.  Efek  analgetik  yang  diberi  asam  mefenamat mencapai  puncaknya  pada  menit  120.  Kelompok  ekstrak  daun  ashitaba menunjukkan efek analgetik pada menit 30 dan mencapai puncak pada menit 120. Kelompok fraksi n- heksana menunjukkan efek analgetik dan mencapai puncaknya
pada  menit  90.  Efek  analgetik kelompok  fraksi  etil  asetat  mencapai puncak  pada menit 60. Kelomok fraksi air pada menit 30 menunjukkan efek analgetik yang lebih rendah  dibanding  dengan  kelompok  uji  lain.  Rata  -  rata  waktu  reaksi  fraksi  air meningkat pada menit 60. Secara statistik dengan uji Post Hoc menyatakan bahwa Na CMC berbeda nyata dengan kelompok asam mefenamat, kelompok ekstrak, dan kelompok fraksi daun ashitaba.
Hambatan  nyeri  pada  metode tail  flick ditunjukkan  dengan  persentase hambatan  nyeri  (PHN).  Data  waktu  reaksi  dihitung  persentase  hambatan  nyeri (PHN) dengan hasil pada kelompok perlakuan dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5. Persentase hambatan nyeri (PHN) pada kelompok asam mefenamat, ekstrak, dan fraksi daun ashitaba Kelompok dosis Persentase Hambatan Nyeri (PHN) (%) Na CMC 0±0,00 b Asam mefenamat 47,27±17,10 a Ekstrak 300mg/kgBB 54,48±29,01 a Fraksi n- heksan 120,7mg/kgBB 67,56±34,92 a Fraksi etil asetat 20,06mg/kgBB 58,87±34,15 a Fraksi air 158,65mg/kgBB 45,00±40,25 a
Keterangan : a : Berbeda bermakna (p<0,05) dengan kontrol negatif, b : Berbeda bermakna (p<0,05) dengan asam mfenamat
Tabel  5  menunjukkan  rata-rata  persentase  hambatan  nyeri  pada  setiap kelompok  perlakuan.  Persentase  hambatan  nyeri  kelompok  ekstrak,  fraksi  n- heksana, dan fraksi etil asetat daun ashitaba mempunyai aktivitas hambatan nyeri yang  lebih  besar  dibandingkan  asam  mefenamat.  Secara  statistik  dengan  uji Post hoc, kelompok  ekstrak  dan  fraksi  daun  ashitaba  memiliki  persentase  hambatan nyeri yang tidak berbeda signifikan dengan kelompok asam mefenamat (sig.>0,05).
Ekstrak  dan  fraksi  daun  ashitaba  memiliki  aktivitas  analgetik  karena mengandung  senyawa  yang  dapat  beraktivitas  analgetik.  Senyawa  yang  diduga memiliki  sifat  sebagai  analgetik  yaitu  golongan  flavonoid,  alkaloid,  saponin  dan tanin.  Senyawa  flavonoid  menghambat  kerja  enzim  COX  dengan  mengurangi produksi prostaglandin oleh asam arakidonat, sehingga mengurangi rasa nyeri[17]. Alkaloid sebagai analgetik bekerja pada reseptor opioid SSP, sehingga mengubah persepsi nyeri dan respon emosional terhadap nyeri[18]. Tanin menghambat enzim COX  dari  prostaglandin  sehingga  dapat  memberikan  efek  analgetik  dan  anti- inflamasi [19]. Saponin juga memiliki efek analgetik dengan menghambat sintesis PGE2 [20].

## Hasil uji aktivitas antiinflamasi
Metode randall-selitto Pengujian aktivitas antiinflamasi dengan metode randall-selitto yaitu dengan pengukuran ambang batas nyeri yang dilakukan dengan cara meletakkan kaki tikus pada penjepit, maka tikus akan memberikan respon berupa gerakan memberontak
(melepaskan diri) atau berteriak kesakitan. Hasil rata-rata bobot tekanan diplotkan dalam bentuk grafik selengkapnya disajikan pada Gambar 1.

## Gambar 1. Rata-rata bobot tekanan (gram) setelah pemberian sediaan uji
Gambar  1  menunjukkan  bahwa  kelompok  Na  CMC  pada  menit  30  sudah menunjukkan rata - rata bobot tekanan yang lebih kecil dibanding dengan kelompok lainnya. Hal ini dapat dinyatakan bahwa kelompok Na CMC tidak memiliki aktivitas sebagai antiinflamasi. Secara statistik dengan uji Post Hoc diketahui bahwa terdapat perbedaan  nyata  antara  kelompok  asam  mefenamat  dengan  kelompok  Na CMC(sig.<0,05).  Kelompok  ekstrak,  fraksi  n-  heksan  dan  fraksi  air  daun  ashitaba pada menit 30 memiliki rata - rata bobot tekanan yang lebih besar dibanding dengan kelompok  Na  CMC  dan  memuncak  pada  menit  90.  Pada  fraksi  etil  asetat  daun ashitaba rata- rata bobot tekanan meningkat dari menit 30 dan mencapai puncak pada menit 60. Ini disebabkan karena adanya respon alami tubuh saat megalami nyeri, sehingga tidak semua pemberian ekstrak maupun fraksi menghasilkan rata- rata  puncak  bobot  tekanan  yang  sama  [21].  Secara  statistik  dengan  uji Post  hoc , dihasilkan  bahwa  ekstrak dan  fraksi  daun  ashitaba  memiliki  bobot  tekanan  yang tidak  berbeda  signifikan.  Jika  dibandingkan  dengan  kelompok  asam  mefenamat, ekstrak dan fraksi daun ashitaba tidak menunjukkan perbedaan yang nyata (sig. > 0,05). Data persentase peningkatan ambang nyeri dapat dilihat pada Tabel 6.
Tabel 6. Persentase peningkatan ambang nyeri Kelompok dosis Persentase peningkatan ambang nyeri  (%) Na CMC 0±0,00 b Asam mefenamat 32,41±27,40 a Ekstrak 300mg/kgBB 39,21±13,82 a Fraksi n-heksan 120,7mg/kgBB 32,91±17,61 a Fraksi etil asetat 20,06mg/kgBB 30,29±6,57 a Fraksi air 158,65mg/kgBB 27,18±11,48 a Keterangan : a : Berbeda bermakna (p<0,05) dengan kontrol negatif, b : Berbeda bermakna (p<0,05) dengan asam mfenamat
Tabel  6  menunjukkan  rata-  rata  persentase  peningkatan  ambang  nyeri setiap kelompok. Secara statistik dengan uji Post hoc, kelompok ekstrak dan fraksi daun ashitaba memiliki persentase peningkatan ambang nyeri yang tidak berbeda signifikan  dengan  kelompok  asam  mefenamat  (sig.>0,05).  Rata-rata  persentase peningkatan  ambang  nyeri  yang  besar  dipengaruhi  oleh  kandungan  senyawa  di dalam ekstrak maupun fraksi. Senyawa yang terkandung di dalam ekstrak maupun fraksi daun ashitaba yang diduga sebagai antiinflamasi adalah flavonoid, alkaloid, saponin, dan tanin.
Mekanisme  antiinflamasi  flavonoid  dengan  cara  penghambatan  langsung aktivitas  enzim  COX  dan  lipooksigenase,  yang  mengakibatkan  penghambatan biosintesis prostaglandin dan leukotrien sebagai produk akhir dari jalur COX dan lipooksigenase  [22].  Saponin  sebagai  antiinflamasi  dengan  cara  menghambat pembentukan  eksudat  dan  meningkatkan  permeabilitas  vaskular  pembuluh darah[23].  Tanin  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  bertindak  sebagai antiinflamasi dalam beberapa cara, termasuk menghambat produksi oksidan (O2) oleh neutrofil, monosit dan makrofag. Kedua, dengan menghambat secara langsung oksidan reaktif seperti radikal hidroksi (OH) dan asam hipoklorit[24].

## Metode pembentukan udema
Pengujian aktivitas antiinflamasi dengan metode pembentukan udema yaitu dengan  menginjeksikan  λ-karagenan  pada  telapak  kaki  tikus,  kemudian  volume udema  diukur  menggunakan  alat  plestimometer.  Hasil  rata-rata  bobot  tekanan diplotkan dalam bentuk grafik selengkapnya disajikan pada Gambar 2.
Gambar 2. Rata-rata volume udema setelah pemberian sediaan uji
Gambar 2 menunjukkan rata - rata volume udem kaki tikus pada keseluruhan kelompok. Kelompok Na CMC memiliki rata- rata volume udem tertinggi dibanding dengan  kelompok  lainnya.  Kelompok  asam  mefenamat  mempunyai  rata  -  rata volume  udem  yang  lebih  rendah  dibanding  dengan  kelompok  lain.  Hal  ini memperlihatkan bahwa asam mefenamat dapat memberikan efek terapi yang baik dengan mekanisme kerja menghambat sintesis prostaglandin pada tubuh dengan
cara  menghambat  enzim  COX  1  dan  2  [25].  Secara  statistik  dengan  uji Post  hoc , bahwa kelompok Na CMC dan kelompok asam mefenamat berbeda bermakna (sig. > 0,05). Pada kelompok ekstrak dan fraksi n- heksan daun ashitaba rata- rata volume udem meningkat pada menit 60. Pada kelompok fraksi etil asetat dan fraksi air daun ashitaba rata- rata volume udem meningkat dan mencapai puncak pada menit 120. Secara  statistik  uji Post  hoc ,  dihasilkan  bahwa  ekstrak  dan  fraksi  daun  ashitaba memiliki  volume  udema  yang  tidak  berbeda  nyata.  Jika  dibandingkan  dengan kelompok asam mefenamat, ekstrak dan fraksi daun ashitaba tidak menunjukkan perbedaan nyata (sig. > 0,05). Data persentase penghambatan udema dapat dilihat pada Tabel 7.
Tabel 7. Persentase penghambatan udema Kelompok dosis Persentase penghambatan udema  ( %) Na CMC 0±0,00 b Asam mefenamat 28,25±9,38 a Ekstrak 300mg/kgBB 22,05±14,79 a Fraksi n-heksan 120,7mg/kgBB 25,79±15.48 a Fraksi etil asetat 20,06mg/kgBB 20,53±12,58 a Fraksi air 158,65mg/kgBB 19,79±11,37 a
Keterangan : a : Berbeda bermakna (p<0,05) dengan kontrol negatif, b : Berbeda bermakna (p<0,05) dengan asam mefenamat
Tabel  7  menunjukkan  rata  -  rata  persentase  penghambatan  udema  pada masing - masing kelompok. Secara statistik dengan uji Post hoc, kelompok ekstrak dan fraksi daun ashitaba memiliki persentase hambatan udema yang tidak berbeda signifikan  dengan  kelompok  asam  mefenamat  (sig.>0,05).  Aktivitas  antiinflamasi ekstrak  dan  fraksi  daun  ashitaba  diyakini  karena  adanya  senyawa  saponin, flavonoid,  alkaloid  dan  tanin.  Mekanisme  flavonoid  dalam  antiinflamasi  dengan menghambat  permeabilitas  kapiler,  menghambat  metabolisme  asam  arakidonat serta sekresi enzim lisosom oleh sel neutrofil dan sel endotel[26]. Penghambatan pelepasan  histamin  oleh  sel  mast,  penurunan  sekresi  IL-1  oleh  monosit  dan  PAF pada  trombosit  adalah  cara  kerja  alkaloid  sebagai  antiinflamasi[27].  Senyawa saponin bekerja dengan cara menghambat pembentukan eksudat dan menghambat peningkatan  permeabilitas  vaskular  [28].  Tanin  juga  memiliki  aktivitas antiinflamasi, tetapi mekanisme kerjanya belum dijelaskan secara pasti [29].

## Uji keamanan lambung tikus Pemeriksaan makroskopis lambung
Pemeriksaan  makroskopis  lambung  dilakukan  dengan  cara  mengambil bagian lambung tikus, selanjutnya dipotong secara membujur. Hasil rata  - rata total skor ulkus pada masing -masing  kelompok perlakuan ditunjukkan  pada Tabel 8.

## Tabel 8. Indeks ulkus
Perlakuan Rataan  jumlah tukak  Rataan diameter ulkus  Indeks ulkus Na CMC 1,33± 0,58 b 1,33± 0,58 b 2,67± 1,15 b
Asam mefenamat 4,33 ± 0,58 a 3,33 ± 0,58 a 7,67 ± 1,15 a Ekstrak 2 ± 0 b 2 ± 0 b 4 ± 0 b Fraksi n-heksan 2,33± 0,58 b 2,33± 0,58 b 4,67± 1,15 b Fraksi etil asetat 2,67± 0,58 b 2,67± 0,58 b 5,33± 1,15 b Fraksi air 2,67± 0,58 b 2,67± 0,58 b 5,33± 1,15 b
Keterangan : a : Berbeda bermakna (p<0,05) dengan kontrol negatif, b : Berbeda bermakna (p<0,05) dengan asam mfenamat
a b c d e f
Gambar 3. Uji makroskopik kontrol positif dan kontrol negatif Keterangan: kontrol positif (a), kontrol negatif (b), ekstrak (c), fraksi n-heksan (d), fraksi etil asetat (e), fraksi air (f)
Nilai  indeks  ulkus  kelompok  kontrol  positif  yang  diberi  asam  mefenamat mempunyai  nilai  indeks  ulkus  tertinggi  dibanding  dengan  kelompok  perlakuan lainnya. Hal ini dikarenakan asam mefenamat dapat mengiritasi mukosa lambung. Mekanisme  iritasi  lambung  oleh  NSAID  bersifat  sistemik  dan  lokal.  Iritasi  lokal menimbulkan  difusi  kembali  asam  lambung  ke  mukosa  sehingga  menyebabkan kerusakan  jaringan.  Iritasi  sistemik  melalui  penghambatan  biosintesis  PGE2  dan PGE1  dapat  mengakibatkan  perdarahan  lambung[30].  Hasil  pemeriksaan makroskopis  pada  kelompok  Na  CMC  memperlihatkan  tidak  ada  kerusakan  atau iritasi pada mukosa lambung tikus. Hal ini dikarenakan tidak ada induksi atau zat berbahaya secara eksogen (alkohol dan obat-obatan) dan endogen (pepsin, garam empedu, dan asam klorida)[31].
Hasil pemeriksaan makroskopis kelompok ekstrak dan fraksi daun ashitaba menunjukkan adanya bercak darah atau iritasi pada lambung, namun setelah diuji dengan  uji  statistik Kruskal-Wallis dan Mann-Whitney ekstrak  daun  ashitaba  dan kelompok fraksi memiliki nilai indeks ulkus yang tidak berbeda signifikan dengan kelompok Na CMC (p>0,05).

## Pemeriksaan lambung secara mikroskopis
Uji  mikroskopis  dilakukan  setelah  tikus  diamati  secara  makroskopik  pada hari  pembedahan.  Hasil  pengamatan  secara  mikroskopis  pada  setiap  kelompok perlakuan dengan perbesaran 40x adalah sebagai berikut:
Kontrol negatif
Kontrol positif
Ekstrak daun ashitaba
Gambar 4. Hasil uji mikroskopik pada setiap kelompok perlakuan Keterangan : adanya perdarahan ( )
Hasil  pemeriksaan  secara  mikroskopis  pada  kelompok  asam  mefenamat memperlihatkan  adanya  kerusakan  lambung.  Asam  mefenamat  dapat mengakibatkan hilangnya sel-sel epitel pada permukaan lambung dan mengurangi sekresi lendir, yang membentuk penghalang pelindung terhadap asam. Kerusakan mukosa disebabkan oleh efek lokal asam mefenamat (NSAID)[32]. Pada kelompok Na CMC memperlihatkan tidak adanya kerusakan lambung, karena Na CMC sebagai kontrol normal tidak mendapatkan faktor defensif dan agresif di lambung, sehingga kondisi  fisik  lambung  tidak  rusak  (lambung  normal)[33].  Hasil  pemeriksaan mikroskopis  ekstrak  dan  fraksi  daun  ashitaba  menunjukkan  adanya  perdarahan pada mukosa lambung yang disebabkan karena adanya efek samping ekstrak dan fraksi daun ashitaba. Secara statistik dengan uji Mann-Whitney pada pemeriksaan makroskopis,  ekstrak  dan  fraksi  daun  ashitaba  tidak  menunjukkan  adanya perbedaan nyata dengan kelompok Na CMC(p<0,05).
Mekanisme  flavonoid  sebagai  gastroprotektif  seperti  antihistamin  untuk mengurangi  produksi  histamin,  dimana  banyak  prostaglandin  yang  terbentuk sebagai faktor pertahanan mukosa lambung [34]. Tanin bekerja sebagai anti tukak dengan  menurunkan  sekresi  asam lambung. Tanin  mempengaruhi  integritas  dari membran  mukosa  dan  membentuk  lapisan  film  pelindung  untuk  mencegah menyerapnya zat beracun[35]. Mekanisme alkaloid sebagai gastroprotektif dengan mempercepat  penyembuhan  luka  dan  peningkatan  produksi  mukus  lambung setelah  cedera  dengan  agen  penginduksi[36].  Mekanisme  kerja  saponin  sebagai gastroprotektif adalah dengan mengaktifkan faktor protektif dari membran mukosa [37].
Berdasarkan keseluruhan hasil penelitian ini dapat diketahui bahwa ekstrak 300mg/kgBB dan fraksi n-heksan 120,7mg/kgBB menunjukkan aktivitas analgetik dan  antiinflamasi  yang  setara  dengan  asam  mefenamat  dan  menunjukkan keamanan pada lambung setara dengan kontrol negatif.

## 4. KESIMPULAN
Ekstrak dan fraksi daun ashitaba memiliki aktivitas analgetik dengan metode hot  plate dan tail  flick ,  memiliki  aktivitas  antiinflamasi  dengan  metode randall- selitto dan  pembentukan  udema.  Hasil  uji  makroskopis  dan  mikroskopis menunjukkan bahwa ekstrak dan fraksi daun  ashitaba aman digunakan terhadap lambung tikus. Fraksi n-heksan dari ekstrak daun ashitaba menunjukkan aktivitas analgetik dan antiinflamasi paling kuat dan aman terhadap lambung tikus.
Fraksi n- heksan
Fraksi Etil asetat
Fraksi Air

## 5. DAFTAR PUSTAKA
[1]. Inayati  A.  2010.  Uji  efek  analgetik  dan  antiinflamasi  ekstrak  etanol  70% daun  sirih (Piper  betle,  Linn) secara  in  vivo.[Skripsi].  Jakarta:  Universitas Islam Negeri (UIN) Syarif Hidayatullah.
[2]. Setyari  W,  Sudjarwo  SA.  2008.  Potensi  analgesik  dan  antiinflamasi  dari ekstrak tapak liman ( Elehantophus scraber ). J. Penelit. Med. Eksakta 7 (1): 16-22.
[3]. Rahmatika A. 2017. Formulasi dan uji aktivitas antioksidan sediaan krim ekstrak  etanol  70%  daun  ashitaba  ( Angelica  keiskei Koidz)  dengan  setil alkohol sebagai stiffening agent [Skripsi]. Jakarta: Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, UIN Syarif Hidayatullah.
[4]. Burhanudin NW. 2016. Uji aktivitas analgetik ekstrak etanol daun ashitaba ( Angelica  keiskei (Miq.)  Koidz)  pada  mencit  putih  jantan  ( Mus  musculus ) dengan tail flick analgesy-meter [Skripsi]. Surakarta: Universitas Setia Budi.
[5]. Prasetyo,  Inoriyah  E.  2013.  Pengelolaan  Budidaya  Tanaman  Obat-obatan (Bahan  Simplisia).  Cetakan  ke-1.  Bengkulu:  Badan  Penerbitan  Fakultas Pertanian UNIB.
[6]. Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia.  2013. Farmakope  Herbal Indonesia .  Edisi  1  Suplemen  3.  Jakarta:  Kementerian  Kesehatan  Republik Indonesia.
[7]. Akhsanita M. 2012. Uji sitotoksik ekstrak, fraksi, dan sub-fraksi daun jati ( Tectona  grandis Linn.  f.)  dengan  metoda Brine  shrimp  lethality  bioassay [Skripsi]. Padang: Fakultas Farmasi, Universitas Andalas.
[8]. Widiandani T, Siswandono, Hardjono S, Istifada, Zahra R. 2013. Uji aktivitas analgesik senyawa baru turunan parasetamol pada mencit ( Mus musculus ) dengan metode hot plate . Berkala Ilmiah Kimia Farmasi 2(2): 1-4.
[9]. Budiati T, Suzana, Surdijati S. 2010. Sintesis, uji aktivitas analgesik dan anti- inflamasi senyawa benzoiltiourea tersubstitusi. Majalah Farmasi Indonesia 2(1): 68-76.
[10]. Ching  FP et  al .  2009.  Evaluation  of  analgesic  and  anti-inflamatory compounds from Stereospermum kunthianum (Bignoniaceae). International Journal of PharmTech Research 4(1) : 1065-1068.
[11]. Rinayanti A, Dewanti E, Adelina M. 2014. Uji efek antiinflamasi fraksi air daun  mahkota  dewa  ( Phaleria  macrocarpa (Shecff.)Boerl.)terhadap  tikus putih ( Rattus norvegicus L.). Pharm Sci Ress 1(2): hlm 78-85.
[12]. Putra  CR.  2017.  Uji  anti-tukak  lambung  ekstrak  etanol  daun  jambu  biji ( Psidium  guajava Linn.)  pada  tikus  wistar  yang  terinduksi  asetosal. [Skripsi]. Yogyakarta: Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma.
[13]. Zahro  F.  2016.  Pengaruh  sari  buah  pepino  ( Solanum  muricatum Aiton) terhaap penyembuhan ulser dan gambaran histopatologi lambung mencit Swiss-webster serta  pemanfaatannya  sebagai leaflet .[Skripsi].  Jember: Fakultas Keguruan Dan Ilmu Pendidikan, Universitas Jember.
[14]. Gunawan  D,  Mulyani  S.  2004.  Ilmu  Obat  Alam:  Farmakognosi  jilid  ke-1. Jakarta: Penebar Swadaya. Hlm 9&106.
[15]. Safitri. 2013. Uji efek analgesik infusa daun cocor bebek ( Kalanchoe pinnata (Lam.)  Pers.)  terhadap  mencit  jantan  galur  swiss  yang  diinduksi  dengan asam  asetat  [Naskah  Publikasi].  Universitas  Tanjungpura:  Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura.
[16]. Sentat  T,  Soemarie  YB,  Hakim  LN.  2018.  Uji  aktivitas  analgetik  ekstrak etanol  daun  sereh  wangi  ( Cymbopogon  nardus (L)  Rendle)  pada  mencit putih  ( Mus  musculus )  jantan  dengan  metode  induksi  nyeri  cara  kimia. Al Ulum Sains dan Teknologi 4(1): 28-33.
[17]. Sasongko  H et  al .  2016.  Aktivitas  analgesik  ekstrak  etanol  daun  karika ( Carica  pubescens )  secara  in  vivo. Journal  of  Pharmaceutical  Science  and Clinical Research 01: hlm 83-89.
[18]. Puspitaningrum I, Kusmita L. 2018. Efek analgetik tepung umbi bidara upas ( Merremia  mammosa (Lour)  Hall.  F.)  pada  mencit  jantan. Media  Farmasi Indonesia 9(2): hlm 723-731.
[19]. Hasan  MM et  al .  2014  analgesic  and  anti-inflammatory  activities  of  leaf extract  of Mallotus  repandus (Willd.)  Muell.Arg. BioMed  Research International hlm 1-7.
[20]. Keswara  YD,  Handayani  SR.  2019.  Uji  aktivitas  analgetik  ekstrak  etanol daun inggu ( Ruta angustifolia [L]Pers) pada tikus putih jantan. Jounal Syifa Sciences and Clinical Research 1(2): hlm 57-69.
[21]. Sukini. 2018. Uji aktivitas ekstrak etanol, fraksi n-heksana, etil asetat, dan air dari ekstrak etanol kulit buah manggis ( Garcini mangostana L.) dengan metode tail flick . [Skripsi]. Surakarta: Universitas Setia Budi.
[22]. Pramitaningastuti  AS,  Anggraeny  EN.  2017.  Uji  efektivitas  antiinflamasi ekstrak  etanol  daun  srikaya  ( Annona  squamosa .  L)  terhadap  edema  kaki tikus putih jantan galur wistar. Jurnal Ilmiah Farmasi 13(1): 8-14.
[23]. Safrina  N,  Susanti  R,  Sari  R.  2018.  Uji  efek  antiinflamasi  ekstrak  etanol rimpang  jeringau  merah  ( Acorus  Sp. )  terhadap  radang  kaki  tikus  jantan galur wistar yang diinduksi karagenan. CDK-265 45(6):409-413.
[24]. Sukmawati,  Yuliet,  Hardani  R.  2015.  Uji  aktivitas  antiinflamasi  ekstrak etanol  daun  pisang  ambon  ( Musa  paradisiacal L.)  terhadap  tikus  putih ( Rattus  norvegcus L.)  yang  diinduksi  karagenan. GALENIKA  Journal  of Pharmacy 1(2):126-132.
[25]. Khaerati K, Rivani, Ihwan. 2017. Aktivitas antiinflamasi ekstrak etanol uwi banggai ungu ( Dioscorea alata L.) terhadap tikus putih galur wistar yang diinduksi putih telur. Jurnal Farmasi Indonesia 9(1): 40-46.
[26]. Novadyanti. 2015. Uji aktivitas antiinflamasi dan anyipiretik ekstrak etanol daun  petai  ( Parkia  speciosa Hassl)  pada  tikus  putih  jantan  galur  wistar. [Skripsi]. Pontianak: Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura.
[27]. Luliana S, Susanti R, Agustina E. 2017. Uji aktivitas antiinflamasi ekstrak air herba  ciplukan  ( Physalis  angulata L.)  terhadap  tikus  putih  ( Rattus norvegicus L.)  jantan  galur  wistar  yang  diinduksi  karagenan. Traditional Medicine Journal 22(3): hlm 199-205.
[28]. Audina M, Yuliet, Khaerati K. 2018. Efektifitas antiinflamasi ekstrak etanol daun  sumambu  ( Hyptis  capitata Jacq.)  pada  tikus  putih  jantan  ( Rattus norvegicus L.) yang diinduksi dengan karagenan. Biocelebes 12(2) : hlm 17- 23.
[29]. Fitriyani  A,  Winarti  L,  Muslichah  S,  Nuri.  2011.  Uji  antiinflamasi  ekstrak metanol daun sirih ( Piper crocatum Ruiz & Pav) pada tikus putih. Majalah bat Tradisional 16(1): hlm 34-42.
[30]. Shafira  AN,  Kairupan  CF,  Durry  MF.  2016.  Gambaran  histopatologik lambung tikus wistar ( Rattus norvegicus ) yang diinduksi asam mefenamat dan diberi susu kental manis. Jurnal e-Biomedik (eBM) 4(2):1-8.
[31]. Septiana  L.  2018.  Aktivitas  antiinflamasi  ekstrak  etanol  daun  sukun ( Artocarpus  altilis (Park.)Fosberg)  dan  keamanan  terhadap  tukak lambung.[Skripsi]. Surakarta: Universitas Setia Budi.
[32]. Sakura  YW,  Jayawardhita  AAG,  Kardena  IM,  Sudimartini  LM.  2017. Perbandingan  gambaran  histopatologi  lambung  tikus  putih  ( Rattus norvegicus )  jantan  yang  diberi  amoxicillin  dikombinasikan  dengan  asam mefenamat dan deksametason. Indonesia Medicus Veterinus 6(3): 246-253.
[33]. Susilawati  NM,  Yuliet,  Khaerati  K.  2016.Aktivitas  gastroprotektif  ekstrak etanol  daun  gedi  hijau  ( abelmoschus  manihot (L.)  terhadap  tikus  putih jantan ( Rattus norvegicus L.) yang diinduksi dengan aspirin. Online Journal of Natural Science 5(3): 296-306.
[34]. Biswani NKAT. 2017. Uji aktivitas anti-tukak lambung ekstrak etanol daun lidah  buaya  ( Aloe  vera Linn.)  pada  lambung  tikus  wistar  yang  terinduksi asetosal. [Skripsi]. Yogyakarta: Universitas Sanata Dharma.
[35]. Islamiah MR, Sukohar A. 2017. Efektivitas kandungan zat aktif daun cincau hijau ( Cyclea barbata Miers) dalam melindungi mukosa lambung terhadap ketidakseimbangan  faktor  agresif  dan  faktor  defensif  lambung. Majority 7(1): 41-48.
[36]. Saptarini NM, Suryasaputra D, Saepulhak AM. 2011. Analisis rasio proteksi antiulser  sari  buah  pepino  ( Solanum  muricatum  Aiton )  menggunakan mencit sebagai model hewan coba. Majalah Obat Tradisional 16(2): 75-80.
[37]. Rahmaniyah  NS.  2015.  Uji  efek  penyembuhan  ulkus  dari  perasan  daging buah mangga podang urang ( Mangifera indica L.) pada lambung tikus yang diinduksi aspirin. Jurnal Wiyata 2(2): 181-187.