## 4-ETOKSI-3-METOKSIFENOL DAN METIL-3,4-DIHIDROKSIBENZOAT, DUA SENYAWA TURUNAN FENOLIK DARI EKSTRAK ETIL ASETAT KULIT UMBI GADUNG (Dioscorea hispida Dennst) DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK ETIL ASETAT
Nanik Siti Aminah 1 *, Alfinda Novi Kristanti 1 , Qonitah Labibah 2 , Ana Firdausiyah 3 , Yoshiaki Takaya 4
1 Departemen Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga
2 Mahasiswa Magister Kimia, Departemen Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga
3 Mahasiswa S-1 Kimia, Departemen Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga
4 Faculty of Pharmacy,
Meijo University
8 email: nanik-s-a@fst.unair.ac.id
Received 1 April 2018 Accepted 2 Mei 2018 Abstract
Two phenolic  compound namely 4-ethoxy-3-methoxyphenol and  methyl-3,4- dihydroxybenzoic  have  been  isolated  from Dioscorea  hispida Dennst . The  isolation  of phenolic  compounds  was  done  by  maceration  methods  using  methanol,  followed  by partition with n-hexane and ethyl acetate. The process of separation and purification used various  chromatography  techniques  including  vacuum  liquid  chromatography,  column chromatography,  and  radial  chromatography.  The  structure  of  isolated  compounds  were determined by spectroscopic methods including UV-Vis, IR, 1D and 2D NMR. The ethyl acetate extract was evaluated for DPPH free radical scavenging activity assay. The IC 50 of ethyl acetate extract was 415 ppm. The result of this assay indicated that ethyl acetate extract has a potential as an antioxidant.
Keywords: Dioscorea hispida Dennst, Dioscoreaceae, phenolic, 4-ethoxy-3- methoxyphenol, methyl-3,4-dihydroxybenzoic, and antioxidant

## Pendahuluan
Radikal  bebas  berupa  molekul  atau senyawa yang mengandung satu atau lebih elektron  tidak  berpasangan.  Hal  inilah yang  menyebabkan  radikal  bebas  bersifat tidak stabil. Agar stabil maka radikal bebas mencoba untuk menarik ataupun memberikan elektron yang dimilikinya ke molekul  lain.  Ketika  radikal  bebas menyerang  suatu  molekul  maka  molekul yang awalnya netral akan berubah menjadi radikal.  Proses  ini  dapat  menyebabkan reaksi  berantai  yang  mengakibatkan kerusakan  pada  sel  seperti  penyakit  hati dan  jantung,  penurunan  kemampuan
kognitif,  atau  bahkan  kanker  (Kothari et al ., 2010).
Radikal  bebas  yang  merusak  tubuh dapat  dinetralisir  dengan  menggunakan senyawa antioksidan. Antioksidan memiliki  kemampuan  untuk  menetralisir radikal bebas tanpa menjadi radikal bebas itu sendiri. Ketika antioksidan menetralkan radikal  bebas  dengan  menerima  atau menyumbangkan  elektron,  antioksidan akan  tetap  stabil  dan  tidak  akan berubah menjadi radikal bebas. Dengan kata  lain,  antioksidan menawarkan elektronnya untuk mencegah kerusakan sel (Middleton et  al .,  1998).  Tubuh  manusia
sebenarnya
menghasilkan senyawa antioksidan sebagai sistem pertahanan diri. Sayangnya tubuh manusia tidak mempunyai cadangan antioksidan berlebih sehingga jika terjadi paparan radikal bebas maka  tubuh  akan  membutuhkan  asupan antioksi  dan  dari  luar  (Sunarni et  al .,
2005).
Salah satu tumbuhan di Indonesia yang berpotensi  untuk  dikembangkan  sebagai sumber  antioksidan  alami  yaitu  umbi gadung (Dioscorea  hispida Dennst ). Tanaman  gadung (Dioscorea  hispida
Dennst ) dari famili Dioscoreaceae merupakan  salah  satu  dari  sekian  banyak tanaman  pangan  yang  ada  di  Indonesia. Umbi ini sudah tak asing lagi di kalangan masyarakat.  Berdasarkan  studi  literatur, terdapat sebanyak 4 senyawa fenolik yang telah  berhasil  diisolasi  diantaranya,  asam klorogenat,  metil  protokatekuat,  asam kafeat, dan p- hidroksibenzaldehid (Theerasin et al ., 2009). Senyawa-senyawa fenolik dari genus Dioscorea
menunjukkan berbagai bioaktivitas seperti antioksidan, antiinflamasi,  antitoksik,  dan antikanker  (Chiu et  al .,  2013;  Min et  al .,
2011;  Itharat etl  al .,  2014).  Namun penelitian  mengenai  aktivitas  antioksidan dari Dioscorea  hispida Dennst  masih sangat terbatas.
Penelitian ini bertujuan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi struktur senyawa  fenolik  pada  ekstrak  etil  asetat kulit  umbi  gadung  ( Dioscorea  hispida Dennst). Proses penelitian diawali dengan tahap  maserasi  menggunakan  pelarut metanol  untuk  mengekstrak  senyawa metabolit  sekunder  dari  kulit  umbi Dioscorea  hispida Dennst.      Selanjutnya dilakukan  metode  ekstraksi  cair-cair terhadap  ekstrak  metanol  yang  diperoleh dengan  menggunakan n- heksana  diikuti etil asetat dan dilanjutkan dengan pemisahan  serta  pemurnian  senyawa fenolik  dengan  menggunakan  berbagai teknik  kromatografi.  Setelah  diperoleh senyawa murni maka selanjutnya dilakukan  penentuan  struktur  senyawa fenolik
menggunakan metode
spektroskopi  yang  meliputi  UV-Vis,  IR, 1D dan 2D NMR.
Pada  penelitian  ini  juga  dilakukan  uji aktivitas  antioksidan  ekstrak  etil  asetat kulit  umbi Dioscorea  hispida Dennst menggunakan  metode  spektroskopi  UV- Vis dengan pereaksi DPPH (1,1-difenil-1- pikrilhidrazil)  (Koleva et  al .,  2002). Metode ini memberikan informasi mengenai  reaktivitas  peredaman  radikal bebas  DPPH  oleh  sampel  yang  diuji. DPPH  memberikan  serapan  kuat  pada panjang gelombang 517 nm dengan warna ungu  gelap.  Peredaman  radikal  bebas DPPH menyebabkan terbentuknya perubahan  warna  dari  ungu  tua  menjadi kuning terang (Sasikumar et al ., 2009).

## Metode Penelitian
Alat dan bahan Sampel yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  kulit  umbi  gadung ( Dioscorea  hispida Dennst)  yang  berasal dari  Desa  Besuki,  Kecamatan  Besuki, Kabupaten  Tulungagung,  Provinsi  Jawa Timur. Bahan  kimia  yang  digunakan adalah MeOH, EtOAc, n -heksana, CHCl 3 , aseton, silika gel 60 GF 254 ukuran 0.25 mm (Merck),  silika  gel  G-60  ukuran  60-200 μm, silika gel 60 ukuran 0.200-0.500 mm (Merck  7733),  silika  gel  60  PF 254 (Merck 7749), pereaksi DPPH (1,1-difenil-1-pikril hidrazil),  natrium  asetat,  asam  asetat glasial, asam askorbat dan aquades.
Peralatan  yang  digunakan  meliputi bejana  maserasi,  corong  pisah, chamber , lampu  UV,  kolom  kromatografi,  pH- meter, rotary vacum evaporator, kromatotron, dan seperangkat alat destilasi.  Untuk  keperluan  analisis  dan identifikasi senyawa digunakan
spektrofotometer UV-Vis Shimadzu 1800, spektrofotometer FT-IR Shimadzu Tracer- 100, dan spektrofotometer NMR BRUKER 600 MHz.

## Prosedur Isolasi senyawa fenolik
Isolasi senyawa fenolik dari kulit umbi Dioscorea  hispida Dennst  (2,5  kg)
dilakukan dengan metode ekstraksi padat- cair  dengan  cara  maserasi  pada  suhu kamar.  Ekstraksi  ini  dilakukan  sebanyak tiga  kali  menggunakan  pelarut  MeOH. Filtrat kemudian dipisahkan dari pelarutnya dan dipekatkan dengan menggunakan rotary  vacum  evaporator hingga  diperoleh  ekstrak  kental  MeOH sebesar  243  g  (9,72%)  .  Ekstrak  kental MeOH  yang  telah  diperoleh  diekstraksi cair-cair  menggunakan  pelarut n -heksana untuk  menghilangkan  kandungan  lemak dan  senyawa-senyawa  non  polar  lainnya yang dapat mengganggu proses pemisahan senyawa  fenolik.  Hasil  dari  partisi  yaitu terbentuknya  dua  lapisan,  yakni  lapisan atas berupa fraksi n -heksana dan lapisan  bawah  berupa  fraksi  MeOH. Ekstrak n -heksana  yang didapat diuapkan dengan  menggunakan rotary  vacum evaporator hingga diperoleh ekstrak kental n -heksana yang berwarna cokelat sebanyak  16  g  (0,64%).  Ekstrak  metanol yang didapatkan ditambah dengan  EtOAc dan  air.  Partisi  ini  menghasilkan  dua lapisan,  yakni  lapisan  atas  berupa  ekstrak EtOAc  dan  lapisan  bawah  berupa  ekstrak MeOH.  Ekstrak  EtOAc  yang  didapat diuapkan  dengan  menggunakan rotary vacum  evaporator hingga  diperoleh ekstrak  kental  EtOAc  yang  berwarna cokelat kehitaman sebanyak 17 g (0,68%).
Pemisahan  senyawa  fenolik  yang terdapat  dalam  ekstrak  EtOAc  (17  g) diawali  dengan  kromatografi  cair  vakum menggunakan  eluen n -heksana :  EtOAc yang  kepolarannya  ditingkatkan  secara gradien  menghasilkan  enam  fraksi  utama yaitu A-F.
Pemisahan fraksi D (560 mg) dilakukan dengan  kromatografi  kolom  gravitasi menggunakan  eluen n -heksana : EtOAc  = (9:1), (8:2), (7:3), (3:2), (1:1) menghasilkan subfraksi D 1 -D 5 .
Pemurnian  pada  sub-fraksi  D 5 (274 mg) dilakukan dengan kromatografi radial menggunakan  eluen n -heksana : EtOAc  = (1:1), (4:6), (3:7), (2:8), (1:9)
menghasilkan  tiga  sub-fraksi  yaitu  D 5.1 - D 5.5 .  Sub-fraksi  D 5.3 menghasilkan  spot
dengan noda tunggal sehingga didapatkan senyawa  fenolik  ( 1 )  sebanyak  2  mg  yang berwujud  padatan  berwarna  kuning.  Uji kemurnian senyawa fenolik ( 1 ) dilakukan dengan  analisis  KLT  menggunakan  tiga sistem  eluen  yang  berbeda.  Eluen  yang digunakan  yaitu  CHCl 3 : aseton  (9:1)
(Rf=0,47),  CHCl 3 : EtOAc  (1:1)  (Rf=0,5),
serta n -heksana : aseton (8:2) (Rf=0,4). Sub-fraksi  D 5.5 (56,4  mg)  dimurnikan dengan  kromatografi  radial  menggunakan eluen CHCl 3 : EtOAc  menghasilkan  enam sub-fraksi yaitu      D 5.51 -D 5.56 . Sub-fraksi
D 5.55 dan D 5.56 digabung karena menghasilkan  spot  sama.  Sub-fraksi  ini menghasilkan  spot  dengan  noda  tunggal sehingga  didapatkan  senyawa  fenolik  ( 2 ) sebanyak 34,1 mg yang berwujud padatan berwarna  kuning  cerah.  Uji  kemurnian senyawa  fenolik  ( 2 )  dilakukan  dengan analisis  KLT  menggunakan  tiga  sistem eluen yang berbeda. Eluen yang digunakan yaitu  CHCl 3 100%  (Rf=0,57),  CHCl 3 : EtOAc  (9:1)  (Rf=0,85),  serta n -heksana : EtOAc (8:2) (Rf=0,23).

## Uji aktivitas antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  ekstrak  etil asetat  kulit  umbi Dioscorea  hispida Dennst  dilakukan  menggunakan  metode spektroskopi  UV-Vis  dengan  pereaksi DPPH (1,1-difenil-1-pikrilhidrazil).
Pada  uji  ini  digunakan  asam  askorbat sebagai  kontrol  positif  dan  ekstrak  etil asetat  kulit  umbi Dioscorea  hispida Dennst sebagai sampel. Sebanyak 500 µ L larutan uji variasi konsentrasi (10, 25, 50, 125,  250,  dan  500  ppm)  ditambahkan dengan 500 µ L larutan buffer  asetat 0,2 M (pH  5,5),  1000 µ L  metanol,  dan  500 µ L larutan  DPPH  5  x  10 -4 M.  Larutan  uji diinkubasi  dalam  ruang  gelap  selama  30 menit.  Selanjutnya  larutan  uji  diukur absorbansinya  pada  λ maks 517  nm.  Data absorbansi yang diperoleh dianalisis untuk menentukan daya hambat sesuai persamaan  1  dengan A 0 merupakan absorbansi  blanko  dan A 1 merupakan absorbansi sampel ataupun kontrol positif.
Pengukuran  absorbansi  dilakukan  secara duplo dan hasilnya dirata-ratakan.
    0 1 0 100 % A A DPPH A    (1)
Analisis  data  mengenai  daya  hambat inhibitory concentration (IC 50 ) ditentukan berdasarkan  analisis  regresi  linier  % peredaman  DPPH  terhadap  konsentrasi senyawa. Nilai IC 50 menyatakan besarnya konsentrasi sampel yang dibutuhkan untuk mengurangi  sebesar  50%  radikal  DPPH [10,11] .

## Hasil dan Pembahasan
Senyawa fenolik ( 1 ) berwujud padatan berwarna  kuning.  UV  (MeOH)  λ maks (log ε):  260  (4,05).  IR  (KBr) ν maks 3385, 2924,2850,1516,1271 cm -1 . Spektrum 13 C- NMR  yang  dilengkapi  dengan  DEPT  90 dan  DEPT  135  memperlihatkan adanya  9 sinyal  karbon  yang  terdiri  dari  dua  sinyal karbon metil (δ C 29,6 dan 55,9 ppm), tiga sinyal  karbon  metin  (δ C 118,5;  108,5  dan 114,2 ppm), satu sinyal karbon metilen (δ C 56,3),  serta  tiga  sinyal  karbon  kuarterner (δ C 145,2; 146,7 dan 135,0 ppm).
Spektrum 1 H-NMR  (600  MHz, CDCl 3 ) memperlihatkan adanya tiga sinyal proton  aromatik,  yaitu  sinyal double doublet pada δ H 6,84 ppm dengan kopling orto ( J =  7,8  Hz)  dan meta ( J  = 1,8  Hz) terhadap  proton  aromatik  lainnya.  Kedua proton aromatik lainnya merupakan sinyal doublet pada δ H 6,92 dan 6,91 ppm. Sinyal tersebut  menandakan  adanya  tiga  proton aromatik dan terikat pada cincin benzena. Sinyal  proton  lainnya  memperlihatkan adanya sinyal quartet (δ H 4,14 ppm) serta sinyal triplet (δ H 1,28  ppm)  yang menandakan  adanya  subtituen  etil.  Selain itu, spektrum 1 H-NMR juga memperlihatkan  sinyal singlet gugus metoksi  (δ H 3,93  ppm)  dan  sinyal singlet gugus hidroksi (δ H 5,59 ppm).
Spektrum
HSQC
merupakan korelasi antara sinyal proton dari 1 H- NMR  dengan  sinyal  karbon  dari 13 C- NMR dalam satu ikatan. Analisis spektrum
HSQC  memperlihatkan  enam  korelasi sinyal proton dengan sinyal karbon dalam satu  ikatan,  diantaranya  :  proton  pada  δ H 6,84  ppm  berkorelasi  dengan  karbon  δ C 118,5  ppm,  proton  pada  δ H 6,92  ppm berkorelasi  dengan  karbon  δ C 108,5  ppm, proton  pada  δ H 6,91  ppm  berkorelasi dengan karbon δ C 114,2 ppm, proton pada δ H 1,28 ppm berkorelasi dengan karbon δ C 29,6  ppm,  proton  pada  δ H 4,14  ppm berkorelasi  dengan  karbon  δ C 56,3  ppm, dan  proton  pada  δ H 3,93  ppm  berkorelasi dengan karbon δ C 55,9 ppm. Spektrum HMBC merupakan korelasi antara sinyal proton dari 1 H- NMR  dengan  sinyal  karbon  dari 13 C- NMR  dalam  dua  atau  tiga  ikatan.  Dalam hal  ini  hasil  analisisnya  dapat  digunakan untuk  menempatkan  posisi  subtituen. Korelasi HMBC digambarkan seperti pada Gambar  1 .  Berdasarkan  data  spektrum 13 C-NMR, 1 H-NMR,  HSQC,  dan  HMBC maka  struktur  senyawa  fenolik  ( 1 ) diprediksi  sebagai  senyawa  fenol  yang dikenal dengan nama 4-etoksi-3- metoksifenol  .  Analisis  1D  dan  2D  NMR untuk  senyawa  4-etoksi-3-metoksifenol terdapat pada Tabel 1.
Gambar  1. Struktur  senyawa  4-etoksi-5 metoksifenol hasil isolasi
Senyawa fenolik ( 2 ) berwujud padatan berwarna kuning cerah. UV (MeOH) λ maks (log  ε)  :  256  (4,05)  dan  292,2  (4,05). Spektrum 13 C-NMR  yang  dileng-kapi dengan  DEPT  90  dan  DEPT  135 memperlihatkan  adanya  8  sinyal  karbon yang  terdiri  dari  satu  sinyal  karbon  metil (δ C 47,8 ppm), tiga sinyal karbon metin (δ C 114,4; 116,4 dan 122,3 ppm), serta empat
sinyal karbon kuarterner (δ C 122,9; 144,4; 149,7; dan 169,6 ppm.
Spektrum 1 H-NMR (600 MHz, MeOH) memperlihatkan adanya tiga sinyal proton di  daerah  aromatik,  yaitu  sinyal double doublet pada δ H 7,45 ppm dengan kopling orto ( J = 8,22 Hz) dan meta ( J = 2,04 Hz) terhadap  proton  aromatik  lainnya.  Kedua
proton aromatik lainnya merupakan sinyal doublet pada δ H 6,80 dan 7,43 ppm. Sinyal tersebut  menandakan  adanya  tiga  proton aromatik dan terikat pada cincin benzena. Sinyal  proton  lainnya  memperlihatkan adanya  sinyal singlet gugus  metoksi  (δ H 3,33 ppm).
Tabel 1 Data NMR senyawa 4-etoksi-3-metoksifenol hasil isolasi dari kulit umbi Dioscorea hispida Dennst (600 MHz, CDCl 3 ) C δ H (ppm) (mult, J dalam Hz), I δ C (ppm) HMBC 1 - 145,2 - 2 6,84 ( dd, J = 1,8 dan 7,8 Hz), 2H 118,5 C-1, C-3 3 6,92 ( d, J = 8,4 Hz), 2H 108,5 C-2 4 - 135,0 - 5 - 146,7 - 6 6,91 ( s ), 1H 114,2 C-4,C-5 7 4,14 ( q ), 2H 56,3 C-8 8 1,28 ( t ), 3H 29,6 C-7 5-OCH 3 3,93 ( s ), 3H 55,9 C-5 1-OH 8,57 ( s ), 1H - C-2, C-6
Spektrum  HMBC  merupakan  korelasi antara  sinyal  proton  dari 1 H-NMR dengan  sinyal  karbon  dari 13 C-NMR dalam dua atau tiga ikatan. Dalam hal ini hasil  analisisnya  dapat  digunakan  untuk menempatkan  posisi  subtituen.  Korelasi sinyal proton pada pada δ H 7,45 ppm (H-2) dengan  empat  sinyal  karbon  kuarterner yaitu  δ C 122,9;  144,4;  149,7;  dan  169,6 ppm.  Korelasi  sinyal  proton  δ H 6,80  ppm (H-5) dengan tiga sinyal karbon kuarterner yaitu  δ C 122,9;  144,4  dan  149,7  ppm. Korelasi sinyal  proton  δ H 7,43  ppm  (H-6) dengan dua sinyal karbon kuarterner yaitu δ C 144,4  dan  169,6  ppm  serta  satu  sinyal karbon metin pada δ C 116,4 ppm. Korelasi HMBC digambarkan seperti pada Gambar 2.
Berdasarkan  data  spektrum 13 C-NMR, 1 H-NMR  dan  HMBC  maka  struktur senyawa  fenolik  ( 1 )  diprediksi  sebagai senyawa fenol yang dikenal dengan nama 3,4-dihidroksibenzoat Analisis 1D dan 2D
NMR untuk senyawa 3,4-
dihidroksibenzoat terdapat pada Tabel 2.
Uji  aktivitas  antioksidan  pada  ekstrak etil  asetat  dari  kulit  umbi Dioscorea hispida Dennst  dilakukan  dengan  metode pengukuran  peredaman  radikal  bebas
DPPH  menggunakan  spektrofotometer UV-Vis.  Metode  ini  dipilih  karena sederhana,  cepat,  mudah  dan  hanya memerlukan sedikit              sampel (Koleva et al ., 2002). Uji aktivitas tidak dilakukan terhadap isolat murni karena jumlah yang diperoleh sangat terbatas.
Gambar  2. Struktur  senyawa  metil-3-4- dihidroksibenzoat hasil isolas
Hasil  optimasi  panjang  gelombang yang  dilakukan  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  menunjukkan bahwa  serapan  maksimum  DPPH  berada pada panjang gelombang 520,5 nm dengan absorbansi sebesar 1,010. Nilai absorbansi ini ditetapkan sebagai absorbansi blanko.
Tabel  2 Data  NMR  senyawa  metil  3,4-dihidroksibenzoat  hasil  isolasi  dari  kulit  umbi Dioscorea hispida Dennst (600 MHz, MeOH)
C δ H (ppm) (mult, I, J dalam Hz) δ C (ppm) HMBC 1 - 122,9 - 2 7,45 ( d, 1H, J = 2,04 Hz) 116,4 C-1, C-3, C-4, C=O 3 - 144,4 - 4 - 149,7 - 5 6,80 ( d , 1H, J = 8,22 Hz) 114,3 C-1, C-3, C-4 6 7,43 ( dd, 1H, J = 8,22 dan 2,04 Hz) 122,3 C-2,C-4, C=O C=O - 169,6 - -OCH 3 3,33 ( s , 3H) 47,8 C=O
Uji  ini  menggunakan  asam  askorbat sebagai  kontrol  positif.  Asam  askorbat memiliki  gugus  hidroksi  bebas  yang bertindak  sebagai  penangkap  radikal bebas dan gugus polihidroksi  yang dapat meningkatkan aktivitas antioksidan (Kim et  al .,  2005).  Pembuatan  kontrol  positif dilakukan  sama  seperti  halnya  larutan sampel.  Larutan  sampel  dibuat  dengan cara melarutkan 10 mg ekstrak etil asetat dalam 10 mL metanol. Kemudian larutan induk  1000  ppm  ini  diencerkan  menjadi 500,  250,  125,  50,  25,  dan  10  ppm. Masing-masing dimasukkan kedalam vial sebanyak 500 µ L kemudian ditambahkan 500 µ L  larutan buffer asetat  0,2  M  (pH 5,5), 1000 µ L metanol, dan 500 μL larutan
DPPH 5 x 10 -4 M. Campuran dihomogenkan dan diinkubasi pada ruang gelap selama 30 menit untuk selanjutnya diukur absorbansinya. Selanjutnya dihitung  nilai  IC 50 .  Dari  perhitungan diperoleh bahwa asam askorbat memiliki nilai  IC 50 sebesar          33  ppm  sedangkan ekstrak  etil  asetat  memiliki  nilai  IC 50 sebesar  415  ppm  .  Aktivitas  antioksidan yang  dimiliki  oleh  asam  askorbat tergolong  dalam  kategori  sangat  aktif sebagai  antioksidan.  Sedangkan  aktivitas antioksidan yang dimiliki oleh ekstrak etil asetat  dari  kulit  umbi Dioscorea  hispida Dennst  kurang  aktif,  namun  ia  masih berpotensi sebagai zat antioksidan. Hal ini sesuai  dengan  Molyneux  (2004)  yang
menyatakan  bahwa  suatu  ekstrak  masih berpotensi  sebagai  antioksidan  apabila nilai  IC 50 yang  diperoleh  ≤  1000  ppm (Molyneux,  2004).  Grafik  perbandingan aktivitas  antioksidan  dari  asam  askorbat dan  ekstrak  etil  asetat  dapat  dilihat  pada Gambar 3 .
Gambar  3 .  Grafik  aktivitas  antioksidan dari asam askorbat dan ekstrak etil asetat Dioscorea hispida Dennst

## Kesimpulan
Dua  buah  senyawa  turunan  fenolik berupa 4-etoksi-3-metoksifenol dan metil-3,4-dihidroksienzoat berhasil diisolasi dari kulit umbi gadung ( Dioscorea hispida Dennst).
Uji  aktivitas  antioksidan  terhadap radikal  bebas  DPPH  dari  ekstrak  etil asetat  kulit  umbi Dioscorea  hispida Dennst memperlihatkan IC 50 sebesar 415 ppm. Hal ini menunjukkan bahwa ekstrak tersebut berpotensi sebagai antioksidan.
0 20 40 60 80 100 120 0 200 400 600 In h ibi si (%) Konsentrasi (ppm) Grafik Asam Askorbat Ekstrak Etil Asetat

## Daftar Pustaka
Chiu,  C.  S.,  Deng,  J.  S.,  Chang,  H.  Y., Chen, Y. C., Lee, M. M., Hou, W. C., et  al.  (2013).  Antioxidant  and  anti- inflammatory properties of Taiwanese yam (Dioscorea japonica Thunb. var. pseudojaponica (Hayata) Yamam.) and its reference compounds. Food  Chemistry,  141 , 1087-1096.
Itharat, A., Thongdeeying, P., & Ruangnoo,  S.  (2014).  Isolation  and characterization  of  a  new  cytotoxic dihydrophenanthrene from Dioscorea  membranacea  rhizomes and  its  activity  against  five  human cancer  cell  lines. Journal  of
Ethnopharmacology, 156 , 130-134.
Kim,  J.  S.  (2005).  Radical  scavenging capacity  and  antioxidant  activity  of the  E  vitamer  fraction  in  rice  bran. Journal  of  Food  Science,  70 ,  208- 213.
Koleva,  I.  I.,  Beek,  T.  A.,  Linssen,  J.  P.,
Groot,  A.  d.,  &  Evstatieva,  L.  N. (2002). Screening of plant extract for antioxidant  activity:  a  comparative study  on  three  testing  methods. Phytochemical Analysis, 13 , 8-17.
Kothari, S., Thompson, A., Agarwal, A., & Plessis,  S.  S.  (2010).  Free  radicals: their  beneficial  and  detrimental effect  on  sperm  function. Indian Journal of Experimental Biology, 48 , 425-435.
Middleton,  E.,  C.  Kandaswami,  &  T.C. Theoharides.  (1998).  The  effect  of plant  flavonoids  on  mammalian cells: implications for inflammation, heart
disease,
and cancer. Pharmacological  Reviews,  52 ,  673- 751.
Min,  M.  A.,  Jiang,  Z.  Z.,  Ruan,  J.  L.,  & Zhang,  L.  Y.  (2011).  Toxicity  of  a diterpene  lactone  isolated  from Dioscorea bulbifera on hepatocytes. Chinese Journal of Natural Medicines, 9(4) , 280-285.
Molyneux, P. (2004). The use of the stable free  radical  diphenylpicrylhydrazyl (DPPH)  for  estimating  antioxidant activity. Songklanakarin  J.  Sci.
Technol., 26(2) , 211-219.
Noorhajati, H. (2014). Aktivitas antioksidan  ekstrak  kulit  batang trengguli (Cassia fistula) dengan uji DPPH. Prosiding Seminar Nasional Sains dan Pendidikan  Sains IX, 5(1) ,
467-471.
Sasikumar,  J.  M.,  Maheshu,  V.,  Jayadev,
R.  (2009).  In  vitro  antioxidant activity  of  methanolic  extract  of Berberis tinctoria Lesh. root and root bark. Journal  of  Herbal  Medicine Toxicology, 32(3) , 53-58.
Sharma,  O.  P.,  &  Bhat,  T.  K.  (2009). DPPH  antioxidant  assay  revisited.
Food Chemistry, 113 , 1202-1205.
Sunarni, T. (2005). Aktivitas  Antioksidan Penangkap Radikal Bebas Beberapa Kecambah  Dari  Biji  Tanaman
Familia Papilionaceae. Jurnal
Farmasi Indonesia, 2(2) , 53-61.
Theerasin,  S.,  &  Baker,  A.  (2009). Analysis and identification of phenolic  compounds  in  Dioscorea hispida  Dennst. Asian  Journal  of Food And Agro-Industry, 2(4) , 547- 560.