## PENDAHULUAN
Indonesia merupakan negara dengan sumber daya alam yang melimpah. Salah satu subsektor basis sumber daya alam  terbesar  di  Indonesia  adalah  sektor  pertanian. Salah satunya kopi robusta (Coffea canephora) dan vanili (Vanila planifolia). Kopi merupakan tanaman yang banyak ditemukan pada beberapa negara di belahan dunia dan telah  dikonsumsi  sebagai  minuman.  Negara  maju  dan negara  berkembang,  tidak  ingin  ketinggalan  untuk
mengkonsumsi  kopi.  Kopi  yang  paling  sering  beredar dipasaran  berasal  dari  biji  kopi  robusta  ( Coffea canephora ) dan biji kopi arabika ( Coffea arabica ).  (Wang, Kan, 2012).
Kopi  robusta  memiliki  ketahanan  yang  lebih  tinggi dibanding  kopi  arabika.  Kopi  robusta  lebih  tahan terhadap hama dan penyakit dibandingkan kopi arabika. Selain itu kopi robusta dapat tumbuh di iklim apapun, tidak seperti kopi arabika yang sangat tergantung iklim dan  cuaca.  (Farah,  et  al.,  2012).  Tanaman  kopi  dapat
Uji Aktivitas Antioksidan dan Profil Fitokimia Biji Kopi Robusta (Coffea canephora), Biji Vanili (Vanila planifolia), dan Kombinasi Keduanya dengan Bermacam Pelarut
Tests of Antioxidant Activity and Phytochemical Profile of Robusta Coffe Seeds (Coffe canephora), Vanilla Seeds (Vanila planifolia), and the Combination of the Both With Various Solvents
Muhammad Andre Niljon 1*
Himmi Marsiarti 2
Universitas YARSI, Jakarta Pusat, Daerah Khusus Ibukota Jakarta 10510, Indonesia
*email: himmi.marsiati@yarsi.ac.id

## Abstrak
Kopi robusta (Coffea canephora) dan buah vanili (Vanila planifolia) merupakan tanaman yang  mengandung  antioksidan.  Tujuan  Penelitian  untuk  menentukan  aktivitas antioksidan  tanaman  tersebut  dan  kombinasi  keduanya  dengan  bermacam  pelarut (etanol, etil asetat dan air). Aktivitas antioksidan  diukur menggunakan metode DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil). Hasil penelitian buah vanili memliki nilai IC 50 153,09 ppm pada ektrak etanol, IC 50 176,69  ppm pada ekstrak etil asetat, dan IC 50 245,28  ppm pada ekstrak air.  Biji kopi robusta memliki nilai IC 50 18,96 ppm pada ekstrak etanol, IC 50 27,03  ppm  pada  ekstrak  etil  asetat,  dan  IC 50 20,13  ppm  pada  ekstrak  air. Kombinasi vanili dan kopi  memliki nilai IC 50 39,40 ppm pada ekstrak etanol, IC 50 41,25 ppm pada ekstrak etil asetat, dan IC 50 38,60 ppm pada ekstrak air. Vitamin C sebagai standar pembanding memiliki nilai IC 50 2,99 ppm. Hasil uji ANOVA menunjukan nilai p<  0.05  yang  menandakan  terdapat  perbedaan  signifikan  antara  sampel  dengan berbagai pelarut. Uji fitokimia menunjukkan buah vanili memiliki kandungan flavonoid dan fenolik. Kata Kunci: Antioksidan DPPH Fitokimia Kopi Robusta Vanili Kombinasi Keywords : Antioxidant DPPH Phytochemicals Robusta coffee vanilla Combination

## Abstract
Robusta  coffee  (Coffea  canephora)  and  vanilla  fruit  (Vanila  planifolia)  are  plants  that contain antioxidants. The aim of the study was to determine the antioxidant activity of these plants  and  their  combination.  Activity  was  measured  using  the  DPPH  (1,1-diphenyl-2- picrylhydrazyl)  method  on  ethanol,  ethyl  acetate,  and  water  extracts.  The  results  of  the research on vanilla fruit had an IC 50 value of 153.09 ppm in ethanol extract, IC 50 176.69 ppm  in  ethyl  acetate  extract,  and  IC 50 245.28  ppm  in  aqueous  extract.  Robusta  coffee beans have an IC 50 value of 18.96 ppm in the ethanol extract, an IC 50 of 27.03 ppm in the ethyl acetate extract, and an IC 50 of 20.13 ppm in the aqueous extract. The combination of vanilla and coffee had an IC 50 value of 39.40 ppm for the ethanol extract, an IC 50 of 41.25 ppm for the ethyl acetate extract, and an IC 50 of 38.60 ppm for the aqueous extract. Vitamin C as a standard for comparison has an IC 50 value of 2.99 ppm. The ANOVA test results showed a value of p <0.05 which indicated that there were significant differences between  samples  with  various  solvents.  Phytochemical  tests  showed  that  vanilla  contain flavonoids and phenolics.
© 2023 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v9i2.4612
tumbuh optimal pada 0 - 10 °C LS dan 0 - 5°C LU.
Untuk  iklim  yang  dapat  mempengaruhi  pertumbuhan kopi  rubusta  pada  elevasi  0  –  1500  mdpl  dengan temperature rata-rata 21-24 °C. Di mana dengan curah hujan  2000-3000  mm/th  dan  keasaman  tanah  atau  pH tanah  5.5  -  6.5  artinya  tanah  yang  dalam  banyak mengandung  humus  tanah  yang  lebih  asam,  dengan catatan  fisik  tanaman  kopinya  baik  sesuai  dengan fisiologi tumbuhan tanaman kopi. (Rahmat 2014). Penelitian  epidemiologis  sebelumnya  menyebutkan bahwa kopi memiliki beberapa manfaat untuk kesehatan yaitu  dapat  mencegah  penyakit  kronik.  Salah  satu  zat dari  kopi  yang  bermanfaat  bagi  kesehatan  yaitu kandungan antioksidan kopi yang cukup tinggi. (Claudia Anesini, et al., 2010).
Vanili ( Vanilla planifolia ) adalah tanaman penghasil bubuk vanili  yang  mengandung  vanilin  dan  bisa  dijadikan pengharum  makanan  dan  minuman.  Untuk  konsumsi langsung  dari  rumah  tangga  umumnya  dalam  bentuk bubuk. Penggunaannya langsung dicampurkan ke dalam bahan makanan atau minuman (Tim Karya Tani Mandiri, 2010). Vanili mengandung antioksidan tingkat tinggi. Ini memiliki  properti  obat  penenang  dan  karenanya mengurangi  kecemasan.  Vanili  juga  digunakan  sebagai obat aromaterapi yang dianggap sebagai aroma populer untuk memberikan efek afrodisiak. (Srinivasan, K, 2016). Antioksidan merupakan pertahanan pertama tubuh kita terhadap  kerusakan  sel  yang  disebabkan  oleh  radikal bebas  dan  sangat  penting  untuk  menjaga  kesehatan tubuh agar optimum. Antioksidan mampu menginaktivasi  atau  menstabilisasi  radikal  bebas sebelum  radikal  bebas  menyerang  sel.  Antioksidan sangat  penting  dalam  menjaga  sel  dan  kesehatan sistemik.  Secara  keseluruhan  radikal  bebas  terlibat dalam  patogenesis  kebanyakan  penyakit,  namun pembentukan  radikal  bebas  (dalam  tubuh  kita)  dapat dikontrol  oleh  antioksidan  dalam  tubuh  kita.  Ketika kadar  antioksidan  dalam  tubuh  kita  tidak  terlalu banyak  kerusakan  yang ditimbulkan oleh radikal bebas dapat  berakumulasi  dan  menimbulkan  dampak  yang
cukup  serius  terhadap  kesehatan.  Antioksidan  dapat ditemukan dalam berbagai zat seperti vitamin C, vitamin E  atau  beberapa  sumber  makanan  contohnya  kopi (Percival, Marks, 2016)
Skrining  fitokimia  merupakan  metode  yang  digunakan untuk  mempelajari  komponen  senyawa  aktif  yang terdapat pada sampel. Letak geografis, suhu, iklim dan kesuburan  tanah  suatu  wilayah  sangat  menentukan kandungan senyawa kimia dalam suatu tanaman. Sampel tanaman  yang  digunakan  dalam  uji  fitokimia  dapat berupa  daun,  batang,  buah,  bunga  dan  akarnya  yang memiliki  khasiat  sebagai  obat  -obatan  tradisional (Agustina, et al. 2016).
Berdasarkan  uraian  di  atas,  maka  perlu  dilakukan penelitian untuk mengetahui kandungan antioksidan dari kopi  robusta  dan  biji  vanili  .  Untuk  uji  aktivitas penangkap  radikal  dapat  dilakukan  dengan  berbagai metode. Metode yang digunakan adalah metode DPPH (2,2-difenil-1-  pikrilhidrazil).  Metode  ini  sering digunakan  karena  memberikan  hasil  yang  akurat, reliabel, relatif cepat dan praktis. (bath, et al, 2014).

## METODOLOGI
Penelitian  ini  adalah  penelitian  eksperimental  yang  di lakukan  di  Laboratorium  Herbal Lantai  11  Universitas YARSI, Jakarta.

## Alat
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu : blender, Vacum  Rotary  Evaporator ,  Cawan  penguap,  Neraca analitik,  Inkubator,  Labu  erlemeyer,  Pipet  tetes, Spektrofotometer UV-Vis, Kertas saring Whatman no. 41, Vial, dan alat-alat gelas lainnya.

## Bahan
Adapun  bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah : Ekstrak Biji Kopi Robusta, Ekstrak Buah Vanilli, Etanol  teknis  (96%),  Etil  asetat,  Pereaksi  Dragendorff, Pereaksi  Mayer,  Kloroform,  Ammonia, H 2 SO 4 , FeCl 3 , HCl  ,  Etanol,  1,1diphenyl-2-picrylhydrazil  (DPPH), Vitamin C.

## Cara kerja

## Pembuatan Ekstrak
Biji  kopi  robusta  (Coffea  canephora)  200  gram dimasukkan  ke  dalam  erlemeyer  dan  kemudian dicampur dengan pelarut etanol 96% sebanyak 2000 mL sedangkan  buah  vanili  ( Vanila  planifolia) yang  sudah kering 100 gram dimasukkan ke dalam erlemeyer dan kemudian  dicampur  dengan  pelarut  etanol  96% sebanyak  1000  mL  sebanyak  lalu  diaduk  dalam  shaker selama 6 jam sampai homogen. Selanjutnya dimaserasi selama  36  jam.  Filtrat  yang  diperoleh  disaring menggunakan  kertas  Whatman  no  41,  dipekatkan dengan vacuum rotary evaporator pada suhu 40°C dalam kondisi vakum sampai pelarut yang terkondensasi tidak menetes.

## Fraksinisasi Ekstrak
Ekstrak  etanol  yang  diperoleh  kemudian  difraksinasi dengan metode ekstraksi cair-cair. Ekstrak etanol kental yang  berwujud  pasta  sebanyak  10  g  dicampur  dengan pelarut  air  panas  70  °C  100  mL  sambil  diaduk  hingga terlarut semua. Larutan yang diperoleh dimasukkan ke dalam corong pemisah dan ditambah dengan heksan 150 mL  dan  dikocok  kembali  hingga  tercampur  secara merata, kemudian didiamkan hingga terbentuk 2 lapisan, dan dipisahkan. Fraksi air dicampur lagi dengan heksan 150  mL,  diaduk  dan  kemudian  dipisahkan.  Perlakuan tersebut  diulang  sebanyak  3  kali.  Fraksi  heksan  dari  3 ulangan  fraksinasi  digabungkan  dan  kemudian dievaporasi  dengan vacuum rotary  evaporator dalam kondisi  vakum  pada  suhu  40  °C  hingga  pelarut  yang terkondensasi  tidak  menetes  dan  diperoleh  fraksi heksan  (H).  Fraksinasi  dengan  etil  asetat  dilakukan dengan  cara  yang  sama  dan  akan  diperoleh  fraksi  etil asetat  (EA).  Ekstrak  dan  fraksi  dikemas  dalam  botol berwarna gelap dan disimpan suhu 10 °C

## Menentukan nilai % Rendeman
Sebelum  dilakukan  penilaian  %  rendeman,  masing- masing filtrat dari etanol, n-heksana, air dan etil asetat diuapkan menggunakan vacum rotary evaporator dengan suhu  40ºC-50ºC  kecepatan  30  rpm  hingga  diperoleh
ekstrak  dengan  tekstur  kental.  Kemudian  dituang  di cawan  penguap  dengan  suhu  50ºC  yang  menghasilkan tekstur kental dari filtrat etanol, n-heksana, air dan etil asetat.  Semua  filtrat  ditimbang  dan  hitung  nilai rendeman.
Nilai rendeman % dihitung dengan rumus:
% rendemen = Bobot ekstrak kental Bobot simplisia yang diekstraksi x
100%

## Pembuatan Larutan DPPH
DPPH  dengan  konsentrasi  160  mg/L  dibuat  dengan menimbang  zat  tersebut  sebanyak  4,0  mg  dan dilarutkan dalam 25 mL metanol di dalam labu ukur. Larutan  yang  dihasilkan  disimpan  di  ruang  gelap  dan dilindungi dengan aluminium foil.

## Persiapan Larutan Uji
Sampel  ditimbang  sebanyak  10  mg,  kemudian dilarutkan  dengan  10  ml  etanol  96%  sehingga didapatkan  konsentrasi  500  ppm.  Kemudian  larutan induk  dipipet  sebanyak  10,  50,  100,  200  L  kedalam tabung  reaksi  yang  telah  ditera,  untuk  mendapatkan konsentrasi  sampel  10,  50,  100,  200  ppm.  Masing- masing tabung  selanjutnya  ditambahkan 1 mL larutan DPPH 1 mM dan ditambahkan dengan    sampai 5 mL. Setelah homogen, tabung yang berisi larutan tersebut diinkubasi  pada  ruangan  gelap  selama  30  menit. Selanjutnya serapan diukur dengan spektrofotometer UV-visible pada panjang gelombang 515 nm.

## Pembuatan Larutan Pembanding
Larutan  pembanding  Vitamin  C  dibuat  dengan ditimbang  sebanyak  10  mg  Vitamin  C,  dimasukkan kedalam labu ukur 50 ml, kemudian ditambah etanol 20 ml, lalu dikocok sampai homogen, sehingga  didapat konsentrasi  larutan  Vitamin  C  500  ppm.  Kemudian dibuat  larutan  uji  pembanding  dengan  konsentrasi sebesar 1 ppm, 2 ppm, 3 ppm, 4 ppm dan 5 ppm
Perhitungan 𝑰𝑪 𝟓𝟎 Absorbansi  diukur  dengan  spektrofotometer  UV-VIS pada  panjang  gelombang  serapan  maksimum  DPPH pada  panjang  gelombang  515nm.  Pengujian  aktivitas antioksidan  dilakukan  sebanyak  tiga  kali  pengulangan untuk  masing-masing  konsentrasi  larutan  uji  dan larutan  pembanding  secara  berurutan.  Aktivitas antioksidan  sampel  ditentukan  oleh  besarnya hambatan  serapan  radikal  DPPH  melalui  perhitungan persentase inhibisi serapan DPPH dengan menggunakan rumus:
% 𝑃𝑒𝑛𝑔ℎ𝑎𝑚𝑏𝑎𝑡𝑎𝑛 = 𝑎𝑤𝑎𝑙 𝑟𝑒𝑎𝑘𝑠𝑖  −  𝑠𝑒𝑡𝑒𝑙𝑎ℎ 𝑟𝑒𝑎𝑘𝑠𝑖 𝑠𝑒𝑡𝑒𝑙𝑎ℎ 𝑟𝑒𝑎𝑘𝑠𝑖 ×  100%
Keterangan: Awal  reaksi  =  Absorbansi  DPPH  kontrol  pada λ maksimum  sebelum direaksikan dengan larutan uji. Setelah  reaksi  =  Absorbansi  DPPH  pada λ maksimum setelah  direaksikan  dengan  larutan  sampel  uji  dan pembanding.
Nilai 𝐼𝐶 50 diperoleh  dengan  terlebih  dahulu  membuat persamaan garis yang menghubungkan antara % Inhibisi terhadap konsentrasi larutan uji masing-masing sampel (20, 40, 60, 80 dan 100 ppm) dan pembanding vitamin C  (1,  2,  3,  4  dan  5    ppm). 𝐼𝐶 50 diperoleh  dengan menghitung  konsentrasi  larutan  uji  yang  bisa menghasilkan  hambatan  radikal  bebas  (%  inhibisi) sebesar 50 berdasarkan persamaan garis regresi linear korelasi I dengan K menggunakan rumus :
y = Persen inhibisi (50) x = Konsentrasi sampel (ppm) a = Intercept (perpotongan garis di sumbu Y) b = Slope (kemiringan)
Data yang diperoleh dari alat Spektrofotometri UV-Vis berupa  absorbansi  DPPH  kontrol  dan  DPPH  setelah direaksikan dengan larutan uji sampel dan pembanding pada berbagai konsentrasi, digunakan untuk menghitung
% Inhibisi. % Inhibisi digunakan untuk memperoleh 𝐼𝐶 50 . Penyajian  data  dalam  bentuk  tabulasi,  hasil  dianalisis dengan membandingkan nilai 𝐼𝐶 50 yang didapatkan dari pengujian antioksidan terhadap ekstrak kental, fraksi etil asetat, dan fraksi air.

## Analisis  Fitokimia  Biji  Kopi  Robusta  dan  Buah Vanilli
Penelitian  ini  menggunakan  metode  maserasi  untuk mendapatkan ekstrak etanol biji kopi robusta dan buah vanilli.  Ekstrak  cair  yang  didapatkan  diuapkan menggunakan vacuum rotatory evaporator. Metode yang digunakan  untuk  mengidentifikasi  kandungan  kimia dalam ekstrak etanol biji kopi robusta dan buah vanilli adalah uji kualitatif dengan reaksi warna dan busa.

## Uji Flavonoid
Sejumlah  sampel  di  dalam  tabung  reaksi  ditambahkan dengan:
a. serbuk magnesium 0,1 mg dan 5 tetes asam klorida 37% dikocok kuat. Reaksi positif adanya flavonoid ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna  kuning, merah atau jingga.
b. pereaksi  asam  sulfat  2N  sebanyak  4  tetes.  Reaksi positif  adanya  flavonoid  ditunjukkan  dengan terbentuknya warna kuning, merah atau jingga.
c. pereaksi larutan natrium hidroksida 10% sebanyak 4 tetes. Reaksi positif adanya flavonoid ditunjukkan dengan  terbentuknya  warna  kuning,  merah  atau jingga.

## Uji Fenolik
Sampel  yang  telah  dipanaskan  dengan  air  ditambahkan dengan  4  tetes  pereaksi  besi  (III)  klorida  5%. Terbentuknya  warna  hijau  hingga  biru  kehitaman menunjukkan adanya senyawa fenol.

## Steroid dan Triterpenoid
Sampel  ditambahkan  eter,  kemudian  dipipet  dan disaring.  Eter  pada  filtrat  diuapkan  lalu  ditambahkan pereaksi  Lieberman-Buchard.  Terbentuknya  warna biru-hijau  menunjukkan  adanya  senyawa  steroid, sedangkan  terbentuknya  warna  ungu  menunjukkan adanya senyawa triterpenoid.
Y= bx + a

## Saponin
Sampel ditambahkan dengan air lalu dipanaskan selama 15  menit.  Kemudian  dikocok  kuat  selama  30  detik. Senyawa saponin positif jika terbentuk busa yang stabil dengan  tinggi  1  cm  selama  5  menit  dan  tidak  hilang dengan penambahan 1 tetes HCl 2N.

## Tanin
Sampel  yang  telah  dipanaskan  dengan  air  ditambahkan dengan  4  tetes  besi  (III)  klorida  1%.  Terbentuknya larutan berwarna biru kehitaman menunjukkan adanya senyawa tannin

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  cara  membuat  ekstrak biji  kopi  robusta (Coffea  canephora) dan  buah  vanilli ( Vanila  planifolia) di  maserasi,    yang  bertujuan  untuk menguji  aktivitas  antioksidan  biji  kopi  robusta,  buah vanili serta kombinasi keduanya dengan metode DPPH dan  profil  fitokimia.  Selanjutnya  untuk  mengetahui aktivitas  antioksidan  maka  diberikan  6  perlakuan (konsentrasi)  pada  masing-masing  sampel  dari  ekstrak biji kopi robusta, buah vanili, dan kombinasi keduanya. Larutan Vitamin C sebagai standar  akan dibandingkan dengan hasil ekstrak biji kopi robusta, buah vanili, dan kombinasi keduanya. Berikutnya akan dibandingkan nilai aktivitas  antioksidan  yang  di  tentukan.  Pengujian aktivitas  antioksidan  diulang  sampai  tiga  kali  (triplo) untuk masing-masing konsentrasi larutan uji dan larutan pembanding secara berurutan.

## Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  Biji  Kopi Ropbusta, Buah vanili dan Kombinasi Keduanya
Penelitian  tentang  pengujian  aktivitas  antioksidan  biji kopi  robusta,buah  vanili  dan  kombinasi  keduanya dilakukan. Antioksidan merupakan suatu senyawa yang dapat menyerap atau menetralisir radikal bebas sehingga mampu mencegah penyakit-penyakit degeneratif seperti kardiovaskuler,  karsinogenesis,  dan  penyakit  lainnya, Senyawa  antioksidan  adalah  substansi  yang  diperlukan tubuh  untuk  menetralisir  radikal  bebas  dan  mencegah kerusakan yang ditimbulkan oleh radikal bebas terhadap
sel  normal,  protein,  dan  lemak.  Senyawa  ini  memiliki struktur molekul  yang  dapat  memberikan  elektronnya kepada  molekul  radikal  bebas  tanpa  terganggu  sama sekali fungsinya dan dapat memutus reaksi berantai dari radikal  bebas  (Murray,  2019).  DPPH  yang  bereaksi dengan  antioksidan  yang  terdapat  pada  sampel  akan menghasilkan  bentuk  tereduksi  difenil  pikrilhidrazil. Reduksi  DPPH  yang  berubah  menjadi  DPPH-H disebabkan  adanya  donor  hidrogen  dari  senyawa hidroksil yang membuat radikal DPPH berubah  warna menjadi  kuning  saat  elektron  berpasangan  dengan antioksidan. Pengurangan intensitas warna yang terjadi berhubungan dengan jumlah elektron DPPH.
Metode  DPPH  menggunakan  parameter  IC50  yaitu menunjukkan  konsentrasi  uji  yang  mampu  menangkap radikal  bebas  sebanyak  50%  yang  diperoleh  melalui persamaan  regresi.  Nilai  IC50  berbanding  terbalik dengan  kemampuan  antioksidan  suatu  senyawa  yang terkandung  dalam  bahan  uji.  Semakin  kecil  nilai  IC50 suatu senyawa uji maka senyawa tersebut semakin aktif sebagai  penangkal  radikal  bebas.  Aktivitas  antioksidan dapat  diukur  melalui  metode  DPPH.  Efektivitas  suatu sampel  untuk  menangkal  radikal  bebas  dari  metode DPPH dinamai dengan IC 50 . Pengertian dari IC 50 adalah konsentrasi  yang  dapat  meredam  50%  radikal  bebas DPPH.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka  semakin  besar aktivitas  antioksidannya.  Suatu  senyawa  dikatakan memiliki aktivitas antioksidan kelompok sangat kuat jika nilai IC 50 kurang dari 50 ppm, kelompok kuat IC 50 antara 50-100  ppm,  kelompok  sedang  jika  nilai  IC 50 101-150 ppm, dan kelompok lemah jika nilai IC 50 antara 150-200 ppm. (Widyasanti, 2022) (Molynoux, 2004)
Setelah  itu  dilakukan  dilakukan  perhitungan  nilai  IC 50 dari  ekstrak  biji  kopi  robusta  dan  buah  vanili berdasarkan  nilai  inhibisi  yang  didapatkan.  Nilai 𝐼𝐶 50 diperoleh dengan terlebih dahulu membuat persamaan garis  yang  menghubungkan  antara  %  Inhibisi  terhadap konsentrasi  larutan  uji  masing-masing  sampel  dan pembanding  vitamin  C.  Nilai 𝐼𝐶 50 diperoleh  dengan menghitung  konsentrasi  larutan  uji  yang  bisa
menghasilkan  hambatan  radikal  bebas  (%  inhibisi) sebesar 50 berdasarkan persamaan garis regresi linear. Hasil  pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak  biji  kopi robusta,  buah  vanili  dan  kombinasi  keduanya  dapat dilihat pada Tabel 1-3
Tabel 1. Hasil Uji Penghambatan Aktivitas Antioksidan  Rata-Rata  dan  Standar Devisiasi  Biji  Kopi  Robusta  dan  Standar Vitamin C Tabel II. Hasil Uji Penghambatan Aktivitas Antioksidan  Rata-Rata  dan  Standar Devisiasi Buah Vanili Sampel  Pengujian Nilai IC 50 (ppm) Rata- rata Standar Deviasi Ekstrak etanol Vanili 1 156,58 153,09 3,31 2 150,00 3 152,68 Ekstrak etil asetat Vanili 1 171,77 176,69 14,49
3 196,41 Fraksi air Vanili 1 244,18 245,28 7,21 2 252,98 3 238,68 Tabel III. Hasil  Uji  Penghambatan  Aktivitas Antioksidan  Rata-Rata  dan  Standar Devisiasi Kombinasi Keduanya Sampel Pengujian Nilai IC 50 (ppm) Rata- rata Standar Deviasi Ekstrak etanol kombinasi 1 39,54 39,40 0,77 2 40,09 3 38,57 Ekstrak etil asetat kombinasi 1 43,39 41,25 2,12
2 41,21 3 39,16 Fraksi air kombinasi 1 38,47 38,60  0,12 2 38,60 3 38,72 Hasil pengujian aktivitas antioksidan bahan sampel menunjukkan vitamin C sebagai standar memiliki antioksidan  terbaik.  Aktivitas  antioksidan  yang  sangat kuat  ditunjukkan  dengan  nilai 𝐼𝐶 50 dibawah  50  ppm. Sampel ekstrak biji kopi robusta berupa ekstrak etanol biji kopi robusta dengan nilai 𝐼𝐶 50 sebesar 18,96 ppm, ekstrak  air  biji  kopi  robusta  dengan  nilai 𝐼𝐶 50 sebesar  20,13  ppm,  dan  ekstrak  etil  asetat  nilai 𝐼𝐶 50 sebesar 27,03 ppm.
Data tersebut menunjukkan bahwa antioksidan terkuat terdapat pada sampel ekstrak etanol dengan nilai 𝐼𝐶 50 sebesar  18,96  ppm.  Terdapat  perbedaan  dari penelitian  yang  dilakukan  oleh  Niputu  (2020) yang memperoleh nilai 𝐼𝐶 50 sebesar 40,24 ppm.
Perbedaan  ini  mungkin  karena  daerah  pengambilan sampel  diperoleh  dari  daerah  Kerinci  yang  memiliki Rata-rata curah hujan tahunan adalah 2.991 mm, Rata-
Sampel Pengujian  Nilai IC 50 (ppm) Rata- rata Standar Deviasi Ekstrak etanol kombinasi 1 39,54 39,40  0,77 2 40,09 3 38,57 Ekstrak etil asetat kombinasi 1 43,39 41,25  2,12 2 41,21 3 39,16 Fraksi air kombinasi 1 38,47 38,60  0,12 2 38,60 3 38,72
rata  temperatur  antara  16°C  hingga  28°C  dengan ketinggian 3.805 m dpl dan merupakan gunung merapi aktif  sehingga  kondisi  tanah  menjadi  tanah  vulkanik. (Taman Nasional Kerinci Seblat, 2018) sedangkan survei sebelumnya diperoleh dari daerah Tambanan, Bali yang memiliki  rata  curah  hujan  263 mm,  Rata-rata temperatur  berkisar  4  ketinggian  2.276  m  dpl. (Pemerintah Kabupaten Tambanan, 2020 ) Waktu panen juga mempengaruhi aktivitas antioksidan biji  kopi  hijau  robusta.  Dalam  penelitian  ini,  biji  kopi hijau robusta dipanen pada pagi hari. Pemanenan pada pagi  hari  dapat  memperoleh  kandungan  metabolit sekunder  yang  maksimal.  Sebab,  jika  dilakukan  pada siang  hari  metabolit  sekunder  yang  berperan  sebagai antioksidan akan berkurang ketika sudah terpapar sinar UV dari matahari (Nganggu, 2016).  Waktu panen sangat erat hubungannya dengan pembentukan senyawa aktif di dalam bagian tanaman yang akan dipanen. Waktu panen  yang  tepat  pada  saat  bagian  tanaman  tersebut mengandung senyawa aktif dalam jumlah yang terbesar (Afandi  &  Hertiani,  2015).  Asam  klorogenat  yang terkandung  dalam  biji  kopi  hijau  juga  rentan  terhadap panas, oksigen, cahaya, dan kelembapan, karena adanya ikatan tak jenuh dalam molekulnya (Rosliuk et al., 2020) Sampel ekstrak buah vanili memiliki potensi antioksidan yang lemah. Ekstrak etanol buah vanili memiliki aktivitas antioksidan  dengan  nilai  153,09  ppm,  ekstrak  etil asetat  vanili  dengan  nilai 𝐼𝐶 50 176,69  ppm  dan ekstrak air buah vanili dengan nilai 𝐼𝐶 50 245,28 ppm.
Dari  data  tersebut  disimpulkan  bahwa  aktivitas antioksidan terkuat terdapat pada sampel ekstrak etanol buah  vanili,  dengan  nilai 𝐼𝐶 50 sebesar  153,09  ppm.
Belum ada penelitian yang membahas tentang aktivitas antioksidan  dari  buah  vanili,  sehingga  diambil pembanding  dari  tumbuhan  yang  satu  famili.  Terdapat perbedaan  dari  penelitian  yang  dilakukan  Prasetyo (2020).  Pada  penelitian  tersebut  bahan  yang  diteliti adalah  denborium  yang  berfamili  sama  dengan  vanili yaitu orhidaceae yang memperoleh nilai IC 50 sebesar 353.94 ppm. Perbedaan ini terjadi karena
berbeda  genus  dan  spesies  serta  memiliki  perbedaan pada uji fitokimia yaitu vanili ditemukan adanya senyawa falvonoid sedangkan pada denborium tidak ditemukan. Sampel  ekstrak  kombinasi  biji  kopi  robusta  dan buah vanili memiliki antioksidan yang sangat kuat, kedua ekstrak kombinasi fraksi air tersebut memiliki aktivitas antioksidan  dengan  nilai 𝐼𝐶 50 sebesar  38,60  ppm  dan kedua  ekstrak  kombinasi  etanol  tersebut  memiliki aktivitas antioksidan sebesar 39,40 ppm, sedangkan kedua ekstrak etil asetat ekstrak kombinasi memiliki antioksidan kuat dengan nilai 𝐼𝐶 50 sebesar  41,25  ppm.  Data  tersebut  menunjukkan bahwa  aktivitas  antioksidan  terkuat  terdapat  pada sampel  air  dengan  nilai 𝐼𝐶 50 sebesar  38,60  ppm, sehingga dapat disimpulkan bahwa antioksidan dalam biji kopi Robusta secara langsung membantu meningkatkan sebanyak  73%  (3x  lipatnya)  antioksidan  dalam  buah vanili.  Pada  kombinasi  meningkatkan  aktivitas antioksidan  buah  vanili  dan  menurunkan  aktivitas  biii kopi robusta.
Ekstrak  biji  kopi  robusta,  buah  vanili,  dan  kombinasi keduanya  memiliki  nilai 𝐼𝐶 50 lebih  tinggi  dibandingkan vitamin C, hal ini menunjukkan potensi antioksidan  vitamin  C  lebih  tinggi,  karena  ekstrak  biji kopi robusta, vanili dan kombinasi keduanya  mengandung  senyawa  kompleks  yang  belum dimurnikan, berbeda dengan vitamin C yang merupakan senyawa  tunggal  memiliki  kemurnian  yang  tinggi  dan berpotensi antioksidan.
Antioksidan  dalam  biji  kopi  Robusta  tergolong antioksidan  sangat  kuat,  sedangkan  vanili  tergolong lemah.    Hal  ini  mungkin  disebabkan  oleh adanya  perbedaan  kandungan  antioksidan  pada  kedua sampel,  seperti  fenol.  Untuk  mengetahui  adanya pengaruh  perbedaan  pelarut  biji  kopi  robusta,  buah vanili  dan  kombinasi  keduanya  terhadap  nilai  aktivitas antioksidan  maka  dilakukan  uji  statistik one-way ANOVA.  Pada  uji  ANOVA  terdapat  perbedaan pengaruh yang signifikan antara sampel dengan berbagai pelarut.
Kandungan  fitokimia  buah  vanili  ( Vanila  planifolia ) terdapat kandungan flavonoid dan fenolik pada ekstrak etanol, etil asetat, dan air.

## Hasil Uji Fitokimia Buah Vanili
Berikutnya  dilakukan  uji  fitokimia  ekstrak  etanol,  etil asetat, dan air buah vanilli (Vanila planifolia) . Hal ini untuk mengetahui  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder yang terdapat pada buah vanili (Vanila planifolia). Dalam penelitian  ini  dilakukan  pengujian  fitokimia  yaitu flavonoid, fenolik, steroid dan triterpenoid, saponin, dan tanin.
Pada  penelintian  ini  menunjukkan  fitokimia  pada  buah vanili  dengan  hasil  positif  pada  senyawa  flavonoid  dan fenolik,  lalu  diperoleh  hasil  negatif  pada  steroid  dan triterpenoid, saponin, dan tannin. Hasil analisis fitokimia Buah vanili tersebut dapat dilihat pada tabel 4:
Tabel IV. Hasil Uji Fitokimia Buah Vanili.
No Metabolit Sekunder Hasil Etanol Etil Asetat Air 1. Flavonoid + + + 2. Fenolik + + + 3 Steroid - - - 4 Triterpenoid  - - - 5 Saponin - - - 6 Tanin - - -

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  maka  dapat  disimpulkan Aktivitas  antioksidan  pada  biji  kopi  robusta (Coffea canephora) memiliki  nilai  terbaik  pada  fraksi  etanol dengan nilai IC 50 18,96 ppm, diikuti oleh fraksi air 20,13 ppm  lalu  fraksi  etil  asetat  27,03  ppm.  Aktivitas antioksidan  buah  buah  vanili (Vanila  planifolia )memiliki nilai terbaik pada fraksi etanol dengan nilai IC 50 153,09 ppm,  diikuti  oleh  fraksi  etil  asetat  176,69  ppm.  Lalu fraksi air 245,28 ppm. Aktivitas antioksidan kombinasi keduanya  memiliki  nilai  terbaik  pada  fraksi  air  dengan nilai IC 50 38,60 ppm, diikuti oleh fraksi etanol 39,40 ppm
lalu  fraksi  etil  asetat  41,25  ppm.  Pada  uji  ANOVA terdapat  perbedaan  pengaruh  yang  signifikan  antara sampel dengan berbagai pelarut.   Kandungan fitokimia buah  vanili  ( Vanila  planifolia ) terdapat  kandungan flavonoid  dan  fenolik  pada  ekstrak  etanol,  etil  asetat, dan air.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  kepada  Rektor,  Yayasan Universitas YARSI serta dosen pembimbing yang telah membantu  sebagian  dana  penelitian  dan    semua  pihak yang    bekerjasama  dalam  membantu  kelancaran penelitian ini.

## REFERENSI
Farah,  A.  and  Donangelo,  C.M.  (2006)  Phenolic Compounds in Coffee. Brazilian Journal of Plant Physiology, 18, 23-36.
Kadji,  M.  H.,  Runtuwene,  M.  R.  &  Citraningtyas,  G.
(2013).  Uji  Fitokimia  Dan  Aktivitas Antioksidan  Dari  Ekstrak  Etanol  Daun Soyogik (Saurauia Bracteosa Dc).
Pharmacon, 2.
Molyneux, P. (2004). The use of the stable free radikal diphenyl  picrylhydrazyl  (DPPH)  for estimating  antioxidant  activity. Journal Science of Technology. 2 :211-219.
Nganggu, Y . P . H. (2016). Uji aktivitas antioksidan dan menggunakan  metode  radikal  DPPH  (1,1 Difenil  2-Pikrilhidrazil)  dan  penetapan  kadar fenolik  total  fraksi  etil  asetat  ekstrak  etanol daun benalu scurrula ferruginea (Jack) danser pada tanaman tabebuia aurea (Manso) Benth. and Hook. f. Ex S. Moore .
Niputu, U . A. (2020). Uji Aktivitas Antioksidan Maserat Air  Biji  Kopi  (coffea  canephora)  Hijau Pupuan Dengan Metode DPPH (2,2-difenil-
1-pikrilhidarazil)
Prasetyo,  Y.,  Njudang,  K.,  Wibowo,  H.M.P.  and Krisnawan, A.H. (2020). Evaluasi Pertumbuhan  Suspensi  Sel  Dendrobium anosmum  var.  gigantea  dan  Aktivitasnya sebagai Antioksidan. MPI (Media Pharmaceutica Indonesiana) . 3, 2
Ramanavicience, A., V. Mostovojus., I. Bachmatova., dan
A.  Ramanavicius.  (2003). Anti-  bacterial Effect  on  Caffeine  on  Eschericia  and Pseudomonas florescens . Journal Acta Medica Lituanua , 10(4):185-188.
Reddy,  L.  J.,  R.  D.  Jalli,  B.  Jose,  dan  S.  Gopu.  (2012). Evaluation  of  Antibacterial  and  Atioxidant Activities of The Leaf Essential Oil and Leaf extract  of  Citrus  Aurantifolia  L.  Asian Journal of Biochemical and Pharmaceutical Research 2:346-53
Rismunandar, dan Sukma, E., S. (2002). Bertanam Panili. Penerbit Penebar Swadaya. Jakarta
Rosliuk,  D.,  Rutkaite,  R., Ivanauskas,  L.,  &  Jakstas,  V  .
(2020).  Interaction  between  cross-  linked cationic starch microgranules and chlorogenic acid isomers in artichoke and green coffee bean aqueous extracts. Journal of Chromatography B: Analytical Technologies in  the  Biomedical  and  Life  Sciences ,
1160 (September),
122385. https://doi.org/10.1016/j.jchromb.2020.122 3 85
Kesuma  Sayuti  dan  Rina  Yenrina.  (2015).  Antioksidan Alami  dan  Sintetik.  Andalas  University Press, Padang.
Solikha, R.M. (2016). Identifikasi Senyawa Triterpenoid dari  Fraksi  N-Heksana  Ekstrak  Rumput Bambu  (Lophatherum  gracile  Brongn.) dengan  Metode  UPLC-MS.  Skripsi.  UIN Maulana Malik Ibrahim Malang.
Sagar,  B.  K.,  &  Singh,  R.  P.  (2011).  Genesis  And Development  of  DPPH  Method  of Antioxidant  Assay.  J  Food  Sci  Technol, 48(4), 412–422
Sulistyarini,  I.,  Sari  Arum,  D.  and  Wicaksono,  T. (Sekolah  T.  I.  F.  “Yayasan  P.  S.  (2019) „Skrining  Fitokimia  Senyawa  Metabolit Sekunder Batang Buah Naga... (Sulistyarini, dkk) ‟ , Jurnal Ilmiah Cendikia Ekstata, 5(9), pp. 56–62.
Sunarni, T., Pramono, S. & Asmah, R., (2007), Flavonoid antioksidan  penangkap  radikal  dari  daun kepel (Stelechocarpus burahol (Bl.) Hook f.
&  Th.),  Majalah  Farmasi  Indonesia,  18(3), 111 - 116.
Surwato  dan  Yuke  Octavianty.  (2012).  Budidaya  12 Tanaman  Perkebunan  Utama.  Penebar Swadaya: Jakarta.
Susidarti,  R.A.,  (2017).  Ribuan  Tanaman  Herbal  di Indonesia  Belum  Dimanfaatkan  Secara Optimal.  http:  ugm.  ac.  id/  id/  berita. (Online) Diakses 15 Desember 2020.
Tim  Karya  Tani  Mandiri.  (2010).  Pedoman  Bertanam
Vanili. Penerbit CV. Nuansa Aulia. Bandung Wachidah, L. N. (2013). Uji Aktivitas Antioksidan serta Penentuan  Kandungan  Fenolat  Dan Flavonoid Total Dari Buah Parijoto.Jakarta:UIN Syarif Hidayatullah. Wang,  Kan.,  (2006).  Agrobacterium  protocols.Edisi 2.Totowa New Jersey. Humana press inc.
Widyasanti,  A  (2016).  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Teh  Putih  (Camellia  Sinesis)  Dengan Metode DPPH (2,2 Difenil-1-Pikrilhidrazil)
Wilapangga,  A.  &  Sari,  L.  P.  (2018).  Analisis  Fitokimia dan  Antioksidan  Metode  DPPH  Ekstrak Metanol  Daun  Salam  (Eugenia  polyantha). IJOBB 2, 19–24 .
Winarsi H, (2007). Antioksidan alami dan radikal bebas potensi  dan  aplikasinya  dalam  kesehatan. Yogyakarta. Kanisius.
Yuhernita, Juniarti. (2014). Analisis Senyawa Metabolit Sekunder  Dari  Ekstrak  Metanol  Daun Surian Yang Berpotensi Sebagai Antioksidan. Makara Sains, 15 (1) : 1 Yun Zhong et al. (2002). Free radicals, antioxidants, and nutrition. Elsevier Science Inc ;18:872–8
Zheng W. and Wang S.Y., (2009). Antioxidant Activity and  Phenolic  Compounds  in  Selected Herbs. J.Agric.Food Chem., 49 (11) : 5165- 70, ACS Publications, Washington D.C.