Program Studi Pendidikan Kimia Universitas Sebelas Maret https://jurnal.uns.ac.id/jkpk

## SINTESIS NANOSILVER MENGGUNAKAN BIOREDUKTOR EKSTRAK DAUN PELAWAN (Tristaniopsis merguensis)
DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI
Synthesis of Nano Silver using Bioreductor of Tristaniopsis merguensis Leaf Extracts and Its Antibacterial Activity Test
Verry Andre Fabiani 1* , Megawati Ayu Putri 1 , Marhan Ebit Saputra 2 , dan Della Puspita Indriyani 1
1 Jurusan Kimia, Fakultas Teknik, Universitas Bangka Belitung Jl. Kampus Peradaban, Kampus Terpadu UBB Balunijuk, Bangka 33172, Indonesia
2 Jurusan Fisika, Fakultas Teknik, Universitas Bangka Belitung Jl. Kampus Peradaban, Kampus Terpadu UBB Balunijuk, Bangka 33172, Indonesia
* Untuk korespondensi: email: verry-andre@ubb.ac.id
Received: September 18, 2019
Accepted: December 04, 2019
Online Published: December 31, 2019
DOI : 10.20961/jkpk.v4i3.34617

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  sintesis nanosilver -ekstrak  daun  pelawan (Tristaniopsis  merguensis) . Variabel penelitian ini yaitu variasi konsentrasi AgNO 3 1 mM, 1,5 mM dan 2 mM. Ekstrak daun pelawan  berperan  sebagai  bioreduktor  yang  mengubah  Ag + menjadi  Ag 0 .  Sintesis  dilakukan dengan perbandingan 1:4 (Ekstrak daun pelawan : larutan AgNO 3 ) pada suhu 70 ° C selama 1,5 jam. Hasil analisis UV-Vis menunjukkan panjang gelombang maksimum pada konsentrasi AgNO 3 1;1,5; 2 mM berturut-turut sebesar 391, 392 dan 400 nm. Analisis XRD menjelaskan nanosilver yang  dihasilkan  berbentuk  kristalin  dan  menggunakan  persamaan Scherrer diperoleh  ukuran partikel  rata-rata  yaitu  22,8  nm.  Uji  aktivitas  antibakteri  nanosilver  dilakukan  dengan  metode cakram, nanosilver menunjukkan adanya aktivitas antibakteri yang kuat terhadap bakteri E. coli dan S. aureus .
Kata Kunci: antibakteri, daun pelawan, ukuran partikel, nanosilver

## ABSTRACT
Synthesis nanosilver from pelawan leaf extract (Tristaniopsis merguensis) has been carried out. The variables of this study were variations in the concentration of AgNO 3 1 mM, 1.5 mM and 2 mM. Pelawan leaf extract acted as a bioreductor that converts Ag + to Ag 0 . The synthesis was carried out in a ratio of 1: 4 (opposition leaf extract: AgNO 3 solution) at 70 °C for 1.5 hours. The results of the UV-Vis analysis showed the maximum at the 1 mM; 1.5 mM; 2 mM AgNO 3 concentration were 391 nm, 392 nm and 400 nm, respectively. XRD analysis explained that the resulting nanosilver was crystalline and according the Scherrer equation an average particle size was of 22.8 nm. The antibacterial  activity  test  of  nanosilver  was  carried  out  by  disc  method,  nanosilver  showed  the existence of strong antibacterial activity against E. coli and S. aureus bacteria.
Keywords: antibacterial, pelawan leaf, particle size, nanosilver

## PENDAHULUAN
Perkembangan  riset  nanoteknologi berkembang begitu pesat. Para peneliti terus berinovasi  menciptakan  produk  nano  yang berguna  bagi  masyarakat.  Salah  satu  pe- ngembangan  material  nano  yang  menarik diteliti  yaitu  nanopartikel  perak  ( nanosilver ), beberapa penelitian sebelumnya telah melakukan  sintesis nanosilver dengan  ber- bagai  metode  dan  bahan  baku .  Nanosilver merupakan material yang memiliki sifat anti- mikroba  sehingga  dapat  digunakan  dalam berbagai  macam  aplikasi  seperti  kain  pem- balut luka [1], serat katun [2] yang berfungsi menghambat  pertumbuhan  bakteri,  sempro- tan antiseptik dan pelapis antimikroba untuk perangkat  medis  yang  mensterilkan  udara dan permukaan [3].  Sintesis nanosilver saat ini  terus  diarahkan  pada  sintesis  yang ekonomis dan ramah lingkungan, pengguna- an media tanaman merupakan inovasi dalam menghasilkan nanosilver .  Indonesia  kaya akan  tanaman  tropisnya  dan  hal  ini  menjadi peluang  bagi  para  peneliti  untuk  terus  me- ngembangkan nanosilver berbasis  tanaman lokal Indonesia.
Daun pelawan (Tristaniopsis merguensis) merupakan  tanaman  lokal  Bangka  Belitung yang  potensial.  Tanaman  ini  tumbuh  pada daerah gambut dan menyebar di hutan-hutan Kepulauan  Bangka  Belitung  [4].  Masyarakat Kepulauan Bangka Belitung  memanfaatkan daun  pelawan  sebagai  obat  tradisional  dan produk  teh.  Senyawa  antioksidan  yang  ter- kandung dalam daun pelawan sangat tinggi. Berdasarkan  penelitian  sebelumnya,  pada genus Tristaniopsis mengandung  senyawa fenolik  diantaranya  saponin,  flavonoid  dan tanin  [5].  Penelian  sebelumnya  juga  telah
melakukan sintesis nanosilver menggunakan ekstrak daun pucuk idat ( Cratoxylum glaucum [6],  hasil  penelitian  tersebut  menyatakan bahwa  senyawa  fenolik  berupa  tanin  dan flavonoid  dapat  bertindak  menjadi  bioreduk- tor dalam sintesis nanosilver .
Sejauh  ini  sintesis nanosilver meng- gunakan  reduktor  kimia  telah  berfungsi dengan  baik  contohnya  natrium  tetraboro- hidrat (NaBH 4 ) [7]. Selain itu, pada penelitian sebelumnya  menyatakan  bahwa  NaBH 4 memberikan  dampak  yang  buruk  bagi  ling- kungan  serta  cukup  reaktif  [8].    Oleh  sebab itu,  perlu  adanya  agen  pereduksi  alternatif untuk  memproduksi nanosilver yang  ramah lingkungan. Beberapa penelitian sebelumnya telah  menggunakan  beberapa  bioreduktor ekstrak  tanaman  dalam  sintesis nanosilver diantaranya ekstrak daun manggis  [9], daun gambir [10], daun sirih [11] dan daun ketapang [12].
Pada  penelitian  ini  telah  dilakukan penelitian  mengenai  sintesis nanosilver menggunakan ekstrak daun pelawan ( Trista- niopsis  merguensis) serta  uji  aktivitasnya sebagai antibakteri. Penelitian ini diharapkan menjadi  inovasi  baru  pemanfaatan  potensi alam lokal Bangka Belitung sebagai material fungsional  dan  dapat  diaplikasikan  sebagai produk kesehatan masyarakat di masa yang akan  datang.  Sintesis nanosilver dilakukan dengan mereaksikan daun pucuk dan larutan perak nitrat (AgNO 3 ) 1 mM, 1,5 mM dan 2 mM
(1:4) selama 1,5 jam pada suhu 70 o C. Nano- silver hasil  sintesis  dikarakterisasi  dengan analisis  XRD  dan  UV-Vis  kemudian  diuji aktivitasnya sebagai antibakteri.

## METODE PENELITIAN

## 1.  Ekstraksi Daun Pelawan
Sebanyak  20  gram  daun  pelawan kering  dilarutkan  dalam  akuades  sebanyak 200  mL  dengan  perbandingan  volume  1:2 kemudian  dipanaskan  dengan  suhu  70 ° C selama  2  jam.  Larutan  selanjutnya  disaring dan  diperoleh  filtratnya.  Filtrat  yang  dihasil- kan  kemudian  digunakan  sebagai  bioreduk- tor pada sintesis nanosilver
2.  Sintesis nanosilver menggunakan bioreduktor ekstrak daun pelawan
Sebanyak  20  mL  ekstrak  daun pelawan  direaksikan  dengan  80  mL  larutan AgNO 3 (variasi konsentrasi AgNO 3 1 mM, 1,5 mM dan 2 mM). Setelah penambahan ekstrak, selama  1,5  jam  larutan  di stirrer pada  suhu 70 ° C.  Kemudian  larutan  di sentrifuge untuk proses pemisahan endapan  dari filtrat. Hasil sintesis dikarakterisasi dengan analisis XRD dan UV-Vis.
3.  Uji aktivitas antibakteri nanosilver
Uji  antibakteri nanosilver mengikuti standard AATCC 100-1999 dan AATCC 147- 1998.  Uji  zona  daya  hambat nanosilver dilakukan dengan mencelupkan kertas cakram  kedalam  larutan nanosilver yang telah diencerkan, selanjutnya, media Nutrient Agar dituangkan  kedalam  cawan  petri  yang diinokulasikan  oleh  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus .  Selanjutnya zona daya hambat nanosilver yang terbentuk kemudian diukur [13].

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi  daun  pelawan  dilakukan dengan  metode  maserasi  menggunakan
pelarut  air.  Stabilitas  yang  cukup  tinggi, ramah lingkungan dan ekonomis merupakan keunggulan pelarut air.
Gambar 1. Ekstrak daun pelawan
Gambar 1 menunjukkan bahwa ekstrak yang dihasilkan berwarna  merah kecoklatan dan  berdasarkan  penelitian  sebelumnya, genus Tristaniopsis diketahui  mengandung senyawa  fenolik  seperti  saponin,  tanin  dan flavonoid [5]. Kandungan tersebut berpotensi digunakan sebagai bioreduktor dalam sintesis nanosilver .

## 1.  Sintesis Nanosilver
Sintesis nanosilver dilakukan  dengan metode  yang  ramah  lingkungan (green synthesis). Metode  ini  dapat  meminimalisir penggunaan  bahan  kimia  yang  cenderung toksik dan tidak ramah lingkungan [14]. Pada penelitian ini, ekstrak daun pelawan menjadi pilihan  alternatif  sebagai  bioreduktor  pada sintesis nanosilver .  Kandungan  kimia  pada ekstrak daun pelawan dapat mereduksi par- tikel Ag + menjadi Ag 0 [15].
Sumber    perak  yang  digunakan  pada penelitian ini berasal dari larutan perak nitrat (AgNO 3 ),  kelarutan  AgNO 3 yang  tinggi  ter- hadap pelarut seperti air dan alkohol menye- babkan AgNO 3 digunakan sebagai prekursor pada  sintesis  nanopartikel  perak  [16].  Cam-
puran  hasil  reaksi  antara  ekstrak  tanaman dengan larutan AgNO 3 menghasilkan padatan berwarna abu kehitaman seperti terlihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Padatan Nanosilver
Adanya  senyawa  fenolik  pada  ekstrak daun pelawan menyebabkan terjadinya reaksi reduksi  ion  Ag + menjadi  Ag 0 seperti  terlihat pada mekanisme reaksi berikut (Gambar 3).
Gambar 3. Mekanisme reduksi ion perak [17]
2.  Karakteristik Nanosilver
a.  Analisis Spektrofotometer UV-Vis
Karakteristik nanosilve r dapat teramati dari serapan panjang gelombang maksimum berdasarkan  analisis  spektrofotometer  UV- Vis.  Daerah  serapan  panjang  gelombang pada  rentang  395-405  nm  menunjukkan terbentuknya partikel berukuran nano dengan ukuran  10-14 nm [18], kurva panjang  gelom- bang maksimum dari nanopartikel perak dapat diamati pada Gambar 4.
Gambar 4. Kurva panjang gelombang maksi- mum nanopartikel perak [18]
Gambar 5. Hasil analisis UV-Vis
Gambar  5  menjelaskan  bahwa  hasil analisis UV-Vis menunjukkan adanya serapan panjang gelombang maksimum pada 400 nm dan  hal  ini  mengindikasikan  terbentuknya nanosilver dengan  ukuran  10-14  nm.    Selain itu, gambar 5 juga menjelaskan bahwa sema- kin  tinggi  konsentrasi  AgNO 3 maka  distribusi partikel  Ag  semakin  banyak  dan  berbanding lurus  dengan  serapan  panjang  gelombang yang dihasilkan sesuai dengan Hukum Lambert- Beer [9].

## b.  Analisis XRD
Analisis X-Ray  Diffraction digunakan untuk  mengetahui  informasi  derajat  kristali- nitas  dan  orientasi  (hkl)  dari nanosilver . Secara  kuantitatif,  analisis  XRD  juga  dapat menentukan  ukuran  partikel  menggunakan
persamaan Debye-Scherrer melalui  pola difraksi dan intensitas puncak yang terbentuk [19].  Difraktogram nanosilver dapat  diamati pada Gambar 6.
Gambar 6. Difraktogram XRD Nanosilver
Difraktogram XRD nanosilver menun- jukkan adanya puncak pada  pola difraksi 2 θ yaitu  38,13 ° ;  44,29 ° ;  64,50 ° dan  77,37 ° dan nilai  FWHM  ( Full  Width  at  Half  Maximum ) yaitu 0,0062, 0,0107, 0,0071, 0,0062, 0,0071. Hasil  ini  bersesuaian  dengan  data  ICDD ( International Centre For Diffaction Data) No.
01-071-4613 mengenai pola difraksi perak 2 θ 38,09 ° ; 44,27 ° ; 64,41 ° dan 77,35 ° dan indeks Miller  (111),  (200),  (220),  dan  (311).  Selain itu, untuk mengetahui ukuran partikel rata-rata nanosilver dapat  menggunakan  persamaan debye scherrer.

## 𝐷 = 𝐾𝜆 𝛽 cos 𝜃 (1)
Keterangan  : D = ukuran rata-rata partikel λ = panjang gelombang Cu-K 𝛼 (1,5406 Å ) 𝜃 = sudut bragg (rad)
K = shape factor (0,9)
𝛽 = FWHM (rad)
Tabel 1. Hasil Analisis Data Nanosilver 2θ (deg) θ (rad) FWHM (rad) D (nm) 38,13 0,3228 0,0062 23,45 44,29 0,3865 0,0107 13,96 64,50 0,5628 0,0071 22,94 77,37 0,6752 0,0062 28,04 Ukuran Partikel (D) Rata-rata 22,87
Berdasarkan  Tabel  1,  ukuran  partikel rata-rata yang dihasilkan yaitu 22,87 nm dan termasuk  dalam  ukuran  partikel  pada  skala nano  (1-100  nm).  Pada  penelitian  sebelum- nya menyatakan bahwa ukuran nanopartikel perak  dengan  rentang  ukuran  7,36 –  36,68 nm  dapat  diaplikasikan  sebagai  antibakteri penyebab  luka  infeksi  [1],  sehingga  hasil penelitian  ini  berpotensi  diaplikasikan  lebih lanjut  sebagai  antibakteri  dalam  sediaan produk kesehatan.
c. Uji Antibakteri Nanosilver
Uji  aktivitas  antibakteri nanosilver dilakukan pada sampel dengan konsentrasi 2 mM, hal ini disebabkan karena pada konsen- trasi  tersebut  serapan  panjang  gelombang yang dihasilkan berada pada range serapan panjang  gelombang  maksimum  nanosilver berdasarkan  hasil  analisis  UV-Vis.  Uji  anti- bakteri dilakukan pada bakteri S. aureus dan E.  coli menggunakan  metode  difusi  cakram seperti terlihat zona hambatnya pada Gambar 7.
(a)                                  (b) Gambar 7. Aktivitas Antibakteri Nanosilver (a) S. aureus dan (b) E. coli
Aktivitas  antibakteri nanosilver pada gambar 6 menunjukkan adanya zona bening pada  media  dari sampel nanosilver dengan variasi  konsentrasi  pengenceran  25%,  50% dan  100%.  Adapun  diameter  zona  hambat disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Diameter zona hambat nanosilver Konsentrasi Diameter zona hambat (mm) E. coli S. aureus 25% 7,75 8,35 50% 9,55 8,60 100% 12,95 12,10
Berdasarkan  Tabel  2  dapat  diamati bahwa diameter zona hambat pada bakteri E. coli dan S.aureus menunjukkan peningkatan luas diameter seiring meningkatnya konsen- trasi nanosilver. Berdasarkan kategori keku- atan  daya  hambat, nanosilver yang  dihasil- kan  memiliki  daya  hambat  yang  sedang hingga kuat, kategori kekuatan daya hambat bakteri tergolong dalam 4 kategori yaitu daya hambat lemah (<5 mm), daya hambat sedang (5-10  mm),  daya  hambat  kuat  (10-20  mm), dan daya hambat sangat kuat (>20 mm) [20]. Penelitian  sebelumnya  menyatakan  bahwa daya  tahan  bakteri  Gram  negatif  seperti E. coli berhubungan dengan struktur dinding sel bakteri tersebut, bakteri gram negatif memiliki penghalang  permeabilitas  berupa  lapisan tipis lipopolisakarida  yang  efektif membatasi penetrasi nanosilver ke dalam struktur sel E. coli namun pada  bakteri gram positif seperti
S. aureus hanya memiliki lapisan peptidogli- kan  untuk  proses  permeasi  sehingga nano- silver mudah  melakukan  penetrasi  dan  me- rusak dinding sel bakteri tersebut [21].

## KESIMPULAN
Sintesis nanosilver berhasil  dilakukan menggunakan  bioreduktor  ekstrak  daun pelawan (Tristaniopsis merguensis), konsen- trasi optimum pembentukan nanosilver yaitu pada  konsentrasi  larutan  AgNO 3 2  mM dengan  serapan  panjang  gelombang  mak- simum 400 nm dan ukuran partikel rata-rata yaitu  22,87  nm.  Uji  aktivitas  antibakteri  me- nunjukkan  bahwa nanosilver memiliki  aktivi- tas antibakteri yang kuat terhadap bakteri E. coli dan S. aureus .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih diucapkan kepada RISTEKDIKTI  yang  telah  memberikan  ban- tuan dana penelitian melalui skim hibah Pro- gram  Kreativitas  Mahasiswa  Bidang  Pene- litian Eksakta Tahun 2019.

## DAFTAR RUJUKAN
[1] H. A. Ariyanta & S. Wahyuni, “Preparasi Nanopartikel  Perak  dengan  Metode Reduksi  dan  Aplikasinya  Sebagai Antibakteri Penyebab Infeksi,” Indones.
J.  Chem.  Sci. ,  vol.  3,  no.  1,  pp.  1 –6, 2014.
[2] A. Haryono & S. B. Harmami, “Aplikasi Nanopartikel  Perak  pada  Serat  Katun sebagai Produk Jadi Tekstil Antimikroba,”
J. Kim. Indones. ,  vol. 5, no. 1, pp. 1 –6, 2010.
[3] Z. Xiu, Q. Zhang, H. L. Puppala, V. L. Colvin,  & P.  J.  J.  Alvarez,  “Negligible
Particle-Specific  Antibacterial  Activity of  Silver  Nanoparticles,” Nano  Lett. , vol. 12, pp. 4271 –4275, 2012.
[4] N.  Yarli,  “Ekologi  pohon  pelawan (Tristaniopis merguensis Griff.) sebagai inang  jamur  pelawan  di  Kabupaten Bangka Tengah,” IPB, 2011.
[5] L.  Verotta,  M.  D.  Agli,  A.  Giolito,  M. Guerrini, P. Cabalion, & E. Bosisio, “In Vitro Antiplasmodial Activity of Extracts  of  Tristaniopsis  Species  and
Identification  of  the  Active  Consti- tuents :  Ellagic  Acid  and  3  ,  4  ,  5- Trimethoxyphenyl- (6′-O-galloyl )- O-B- D-glucopyranoside ,” J. Nat. Prod. , vol. 64, no. 5, pp. 603 –607, 2001.
[6] V. A. Fabiani, F. Sutanti, D. Silvia, & M. A.  Putri,  “Green  Synthesis  Nano-
partikel  Perak  Menggunakan  Ekstrak
Daun Pucuk (Idat (Cratoxlyum
glaucum)  sebagai  Bioreduktor,” Indo. J.  Pure  App.  Chem ,  vol.  1,  no.  2,  pp. 68 –76, 2018.
[7] M.  Julkarnain,  A.  K.  Mondal,  M. Rahman, & S. Rana, “Preparation and Properties of Chemically Reduced  Cu and  Ag  Nanoparticles,”  in Inter- national  Conference  on  Mechanical,
Industrial  and  Materials  Engineering , 2013, vol. 2013, pp. 636 –640.
[8] S. K. Ghosh, S. Kundu, M. Mandal, & T.  Pal,  “Silver  and  Gold  Nanocluster Catalyzed  Reduction  of  Methylene Blue by Arsine in a Micellar Medium,” Langmuir ,  vol.  18,  no.  23,  pp.  8756 – 8760, 2002.
[9] Y.  Masakke,  Sulfikar,  &  M.  Rasyid,
“Biosintesis Partikel-nano Perak Menggunakan  Ekstrak  Metanol  Daun Manggis ( Garcinia mangostana L . ),” J. Sainsmat , vol. IV, no. 1, pp. 28 –41, 2015.
[10]  S.  Arief,  W.  Rahma,  D.  V.  Wellia,  & Zulhadjri,  “Green  Synthesis  Nano- partikel  Ag  dengan  Menggunakan Ekstrak Gambir sebagai  Bioreduktor,” in SEMIRATA  2015  Bidang  MIPA
BKS-PTN Barat , 2015, pp. 233 –238.
[11] M.  D.  Purnamasari,  “Sintesis  Anti- bakteri Nanopartikel Perak Mengguna- kan  Bioreduktor  Ekstrak  Daun  Sirih (Piper  betle  Linn)  dengan  Iradiasi Microwave, ” 2015.
[12]  E. Y. Lembang & M. M. Zakir, “Sintesis Nanopartikel  Perak  dengan  Metode Reduksi  Menggunakan  Bio-reduktor Ekstrak  Daun  Ketapang  (Terminalia catappa),”  Universitas  Hasanuddin, 2013.
[13]  T. Wahyudi, D. Sugiyana, & Q. Hemly,
“Sintesis  Nanopartikel  Perak  dan  Uji Aktivitasnya  Terhadap  Bakteri  E.  coli dan S. aureus,” Arena Tekst. , vol. 26, no. 1, pp. 55 –60, 2011.
[14]  K.  N.  Thakkar,  S.  S.  Mhatre,  &  R.  Y. Parikh, “Biological synthesis of metallic nanoparticles,” Nanomedicine  Nano- technology,  Biol.  Med. ,  vol.  6,  no.  2, pp. 257 –262, 2010.
[15]  V.  Kumar  & S.  K.  Yadav,  “Plant- mediated  synthesis  of  silver  and  gold nanoparticles and their applications,” J Chem Technol Biotechnol , vol. 84, no.
June 2008, pp. 151
–157, 2009.
[16]  W.  R.  O.  Yanti  & Astuti,  “Sintesis
Nanokristal Perak Menggunakan Ekstrak  Kulit  Buah  Manggis  (Garcinia mangostana L.),” J. Fis. Unand , vol. 7, no. 3, pp. 286 –291, 2018.
[17]  S.  Jain  & M.  S.  Mehata,  “Medicinal Plant Leaf Extract and Pure Flavonoid Mediated  Green  Synthesis  of  Silver Nanoparticles  and  their  Enhanced Antibacterial Property,” Sci.  Rep. ,  vol.
7, no. November, pp. 1 –13, 2017.
[18]  S.  D.  Solomon,  M.  Bahadory,  A.  V Jeyarajasingam, S. A. Rutkowsky, & C. Boritz, “Synthesis and  Study  of Silver Nanoparticles,” J.  Chem.  Educ. ,  vol. 84, no. 2, pp. 322 –325, 2007.
[19]  S. Nikmatin, A. Maddu, S. Purwanto, T. Mandang,  & A.  Purwanto,  “Analisa Struktur  Mikro  Pemanfaatan  Limbah Kulit  Rotan  Menjadi  Nanopartikel Selulosa  Sebagai  Pengganti  Serat Sintesis,” J. Biofisika , vol. 6, no. 1, pp.
41 –49, 2013.
[20]  W.  Davis  &  T. Stout,  “Disc  Plate Method  of  Microbiological  Antibiotic Assay,” Appl. Microbiol. , vol. 22, no. 4, pp. 659 –665, 1971.
[21]  B.  Biswas,  K.  Rogers,  F.  Mclaughlin, D. Daniels, & A. Yadav, “Anti-microbial Activities  of  Leaf  Extracts  of  Guava
(Psidium  guajava  L  .)  on  Two  Gram- Negative and Gram- Positive Bacteria,” Int.  J.  Microbiol. ,  vol.  2013,  pp.  1 –7,
2013.