## POTENSI ANTAGONISTIK BAKTERI Lactobacillus plantarum TERHADAP BAKTERI PATOGEN Aeromonas salmonicida SECARA IN VITRO

## THE POTENTIAL ANTAGONISTIC BACTERIUM Lactobacillus plantarum AGAINST BACTERIAL PATHOGENS Aeromonas salmonicida BY IN VITRO
Yunifar Amad, Rahayu Kusdarwati dan Gunanti Mahasri
Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas Airlangga Kampus C Mulyorejo - Surabaya, 60115 Telp. 031-5911451

## Abstract
Problems were often experienced by fish farmers is bacterial pathogen Aeromonas salmonicida which causes  furunculosis disease in fish. The way to control the growth of this pathogenic bacteria was using antagonist bacteria of Lactobacillus plantarum . Growth of L. plantarum may inhibit contamination of pathogenic bacterial because of its ability to produce  bacteriocins, produce lactic, moreover that these bacteria  can  produce  hydrogen  peroxide  which  can  function  as  an  antibacterial.  This  research  aimed  to provide  information  on  the  use  of  bacterial  antagonists  L.  plantarum  in  inhibiting  the  growth  of pathogenic bacteria A. salmonicida on In Vitro .
This research was conducted on October 2012 until January 2013 at dry laboratory in Fisheries and  Marine  Faculty  of  Airlangga  University  Surabaya.  This  research  used  Completely  Randomized Design (CRD) with five treatments and four replications. Bacteria L. plantarum with 0 concentration for control (A), 10 6 (B), 10 7 (C), 10 8 (D), 10 9 (E) tested challenge by paper disc method with 10 6 concentrate of pathogenic bacteria A. salmonicida in vitro . The results showed that  L.  plantarum  with a concentration  of 10 9 CFU/ml (E)  was a treatment that produced average of obstacle on the distribution of A. salmonicida amounted to 12,375 mm. Then the treatment with a concentration of 10 8 CFU/ml (D) with the average of obstacle 8,95 mm. While treatment with a concentration of 10 7 CFU/ml (C) and 10 6 CFU/ml (B) was having average of obstacle 6.8 mm and 6  mm  was  not  significantly  different  from  the  control  (A)  which  had  an  average  6  mm  obstacle.  So  it could  be  concluded  that  bacteria L.  plantarum had  antagonistic  potential  against  bacterial  pathogens A.salmonicida which  indicated  by  the  obstacle  produced  by L.  plantarum on  growth  of  pathogenic bacteria A.salmonicida .
Keywords : Lactobacillus plantarum, Aeromonas salmonicida , paper disc test, obstacle

## Pendahuluan
Permasalahan  yang  sering  dialami petani  budidaya  ikan  adalah  penyakit.  Salah satunya  adalah  penyakit  yang  disebabkan  oleh bakteri patogen Aeromonas salmonicida . Bakteri A.  salmonicida merupakan  salah  satu patogen  obligat  penyebab  utama  penyakit furunculosis pada ikan. Bakteri ini  menginfeksi bagian  luar  dari  tubuh  ikan,  misalnya  kulit  dan insang.  Namun,  selain  di  permukaan  tubuh, A. salmonicida juga menyerang saluran pencernaan  ikan.  Penyakit  akibat  bakteri  ini sangat  mudah  menular  pada  ikan  lain  yang berada  disekitar  ikan  yang  terkena  penyakit. (Isoken et al., 2012)
Cara  yang  sering  dilakukan  untuk mengontrol  pertumbuhan  bakteri  patogen  ialah dengan menggunakan antibiotik, namun penggunaan antibiotik
ternyata dapat menimbulkan efek samping yaitu dapat menjadikan  bakteri  patogen  menjadi  resisten.
Oleh  karena  itu  perlu  dilakukan  pencarian metode  lain  yang  aman  bagi  biota  dan lingkungannya.  Salah  satunya  adalah  dengan memanfaatkan  sifat  antagonisme  antar  bakteri atau antar komunitas bakteri. (Shickney, 2000)
Bakteri
antagonis merupakan
mikroorganisme non patogen yang jika dikonsumsi  akan  memberikan  pengaruh  yang positif terhadap fisiologi dan kesehatan inangnya.  Suatu bakteri dapat dikatakan  bakteri probiotik apabila bersifat non patogen, menghasilkan  asam  dengan  cepat,  tahan terhadap  garam  empedu,  mampu  menempel pada  epitel  dinding  saluran  pencernaan,  serta mampu  memproduksi  substansi  antimikroba termasuk asam organik, hidrogen  peroksida dan bakteriosin.  Bakteri  asam  laktat  dari  jenis Lactobacillus banyak  yang  termasuk  sebagai bakteri  yang  memiliki  sifat  antagonisme terhadap  bakteri  patogen  sehingga  menarik untuk  diteliti  lebih  lanjut  sebagai  agen
pengendali  bakteri  patogen.  (McNaught  dan MacFie, 2000)
Lactobacillus plantarum mampu merombak senyawa kompleks menjadi senyawa yang  lebih  sederhana  dengan  hasil  akhirnya yaitu asam laktat. Asam laktat dapat menghasilkan  pH  yang  rendah  pada  substrat sehingga menimbulkan suasana asam. Pertumbuhan L.  plantarum dapat  menghambat kontaminasi dari bakteri pathogen dan penghasil racun karena kemampuannya untuk menghasilkan  asam  laktat  dan  menurunkan  pH substrat,  selain  itu  bakteri  asam  laktat  dapat menghasilkan  hidrogen  peroksida  yang  dapat berfungsi sebagai antibakteri (Suriawiria, 1983)
Pemanfaatan  bakteri  antagonis  sebagai agen  pengendali  bakteri  patogen  akan  semakin penting  dari  segi  ekosisterm  akuakultur, mengurangi dan bahkan menghilangkan
penggunaan  antibiotik  sehingga  tercipta  sistem budidaya  yang ramah lingkungan. Manfaat dari penilitian  adalah  untuk  memberikan  informasi tentang pemanfaatan bakteri antagonis
Lactobacillus plantarum
sebagai agen pengendali hayati dalam menghambat
pertumbuhan bakteri patogen Aeromonas salmonicida secara In Vitro

## Metodologi
Penelitian  ini  telah  dilakukan  di Laboratorium  kering  Fakultas  Perikanan  dan Kelautan  Universitas  Airlangga  Surabaya  pada bulan Oktober 2012 hingga Januari 2013.
Alat  –  alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini antara lain oven, centifuge, cawan petri,  tabung  reaksi,  jarum ose ,  bunsen,  pinset, autoclave , laminar  air  flow ,  pipet,  spatle, refrigerator.
Bahan  –  bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  bahan  yang  digunakan untuk  penelitian  berupa  isolat  murni  bakteri Aeromonas salmonicida dengan  konsentrasi 10 6 CFU/ml  dan Lactobacillus  plantarum dengan konsentrasi  10 1 CFU/ml,  berurutan  hingga  10 9 CFU/ml . Media tumbuh  yang digunakan adalah de Man Rogosa Sharpe Agar dan Broth (MRSA dan MRSB) sesuai dengan petunjuk Ogunbanwo et  al. (2003). Tryptic  Soy  Agar (TSA), akuades steril, kertas cakram.
Rancangan  penilitian  yang  digunakan adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yaitu rancangan  yang  digunakan  untuk  percobaan yang  mempunyai  media  percobaan  yang seragam,  sehingga  banyak  digunakan  untuk percobaan  di  laboratorium.  Penelitian  ini menggunakan  RAL  dengan  lima  perlakuan  dan empat  ulangan  dengan  acuan  dari  hasil penelitian penadahuluan, yaitu :
Perlakuan A  :  Kertas  cakram  diletakkan  pada isolat A.  salmonicida dengan konsentrasi 10 6 CFU/ml (kontrol). Perlakuan B  : L. plantarum dengan konsentrasi  10 6 CFU/ml  diuji tantang  dengan A.  salmonicida dengan konsentrasi 10 6 CFU/ml. Perlakuan C  : L. plantarum dengan konsentrasi  10 7 CFU/ml  diuji tantang  dengan A.  salmonicida dengan konsentrasi 10 6 CFU/ml. Perlakuan D  : L. plantarum dengan konsentrasi  10 8 CFU/ml  diuji tantang  dengan A.  salmonicida dengan konsentrasi 10 6 CFU/ml.
Perlakuan E  : L. plantarum dengan konsentrasi  10 9 CFU/ml  diuji tantang  dengan A.  salmonicida dengan konsentrasi 10 6 CFU/ml.
Sterilisasi  alat  dan  bahan  dalam penelitian ini menggunakan Autoclave
(autoklaf) . Autoclave adalah alat untuk mensterilkan  berbagai  macam  alat  dan  bahan yang digunakan dalam
mikrobiologi menggunakan  uap  air  panas  bertekanan.
Tekanan  yang digunakan  pada umumnya 2  atm dan  dengan  suhu  121 o C  (250 o F).  Lama sterilisasi  yang  dilakukan  15  menit  untuk 121 o C.  Cara  penggunaannya  adalah  pertama, sebelum  melakukan  sterilisasi,  banyaknya  air dalam  autoklaf  di  periksa  terlebih  dahulu.  Jika air  kurang  dari  batas  yang  ditentukan,  maka dapat  ditambah  air  sampai  batas  tersebut.  Lalu alat dan bahan dimasukkan. Kemudian autoklaf ditutup  dengan  rapat  agar  tidak  ada  uap  yang keluar  dari  bibir  autoklaf.  Klep  pengaman jangan dikencangkan terlebih dahulu. Kemudian autoklaf  dinyalakan  dan  diatur timer dengan waktu  minimal  15  menit  pada  suhu  121 o C. Kemudian  ditunggu  sampai  air  mendidih sehingga  uapnya  memenuhi  kompartemen autoklaf  dan  terdesak keluar  dari  klep pengaman.  Kemudian  klep  pengaman  ditutup (dikencangkan). Penghitungan waktu 15’ dimulai  sejak  tekanan  mencapai  2  atm.  Jika alarm  tanda  selesai  berbunyi,  maka  ditunggu sampai  tekanan  dalam  kompartemen  turun hingga  sama  dengan  tekanan  udara  di lingkungan (nol). Kemudian klep-klep pengaman  dibuka  dan  isi  autoklaf  dikeluarkan secara hati-hati. (Universitas Jendral Soedirman,
2008)
Penelitian pendahuluan dilakukan dengan  tujuan  untuk  mengetahui  konsentrasi minimal  dari  bakteri Lactobacillus  plantarum yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri
Aeromonas salmonicida dengan  konsentrasi 10 6 CFU/ml.  Penelitian  pendahuluan  ini  dilakukan dengan  metode  kertas  cakram.  Konsentrasi bakteri L. plantarum yang digunakan adalah 10 1
CFU/ml,  10 2 CFU/ml,  10 3 CFU/ml,  10 4
CFU/ml,  10 5 CFU/ml,  10 6 CFU/ml,  10 7 CFU/ml, 10 8 CFU/ml yang dikultur pada media de  Man  Rogosa  Sharpe  Broth (MRSB). Kemudian  disentrifuge dengan  kecepatan 3.500 rpm  selama  20  menit  pada  suhu  4 o C. Dipisahkan antara supernatan dan pelet. (Joly et al , 1990).
Bakteri Aeromonas salmonicida
dengan  konsentrasi  10 6 CFU/ml  disebar  pada media Tryptic  Soy  Agar (TSA)  secara  merata. Kemudian paperdisc atau  kertas  cakram dimasukkan  ke  dalam  pelet  dari  bakateri Lactobacillus plantarum dan  diamkan selama 5 menit  agar  dapat  meresap  sempurna. Paperdisc selanjutnya  diletakkan  di  atas  sebaran  bakteri patogen A.  salmonicida pada  media  TSA dengan  kepadatan  10 6 sel/ml  merujuk  kepada prosedur Buntin et al ., (2008).
Penelitian  utama  ini  dilakukan  dengan metode  kertas  cakram.  Konsentrasi  bakteri L. plantarum yang digunakan  adalah 10 5 CFU/ml, 10 6 CFU/ml,  10 7 CFU/ml,  10 8 CFU/ml  yang dikultur  pada  media de  Man  Rogosa  Sharpe Broth (MRSB).  Kemudian  disentrifuge  dengan kecepatan 3.500 rpm selama 20 menit pada suhu 4 o C.  Dipisahkan  antara  supernatan  dan  pelet.
(Joly et al , 1990).
Bakteri A. salmonicida dengan konsentrasi  10 6 CFU/ml  disebar  pada  media Tryptic  Soy  Agar (TSA)  secara  merata. Kemudian paperdisc atau  kertas  cakram dimasukkan  ke  dalam  pelet  dari  bakateri L. plantarum dan  didiamkan  selama  5  menit  agar dapat meresap sempurna. Paperdisc selanjutnya diletakkan  di  atas  sebaran  bakteri  patogen A. salmonicida pada  media  TSA dengan kepadatan  10 6 CFU/ml merujuk kepada prosedur  Buntin et  al .,  (2008).  Masing-masing perlakuan  dilakukan  pengulangan  4  kali. Kemudian diinkubasi pada suhu 30 o C selama 24 jam  untuk  melihat  hasil  daya  hambat  dari L. plantarum tersebut.
Parameter uji utama pada penelitian ini adalah  daerah  hambatan  bakteri Lactobacillus plantarum terhadap pertumbuhan bakteri Aeromonas  salmonicida .  Pengukuran  zona hambat  dilakukan  dengan  mengukur  diameter daerah  yang  jernih  atau  tidak  ada  pertumbuhan (Pradhika, 2008).
Analisis data hambatan yang dihasilkan L.  plantarum terhadap  pertumbuhan A.  salmonicida menggunakan  Analisis  Varian (Anava)  dan  dilanjutkan  dengan  Uji  Jarak
Berganda  Duncan  dengan  tingkat  kesalahan (error  rate)  α  =  0,01  dan  akan  diketahui perlakuan yang menghasilkan hambatan terbaik.

## Hasil dan Pembahasan
Hasil  pengamatan  penelitian  berupa hambatan  yang  dihasilkan  oleh  bakteri L. plantarum pada  sebaran  bakteri A.  salmonicida dalam  media  TSA.  Hambatan  tersebut  ditandai dengan  adanya  zona  bening  disekitar  kertas cakram  yang  sebelumnya  diberi  suspensi L. plantarum. Hasil  analisis  varian  (ANAVA) yang  dilakukan  menunjukkan  bahwa  perlakuan bakteri Lactobacillus  plantarum memberikan pengaruh  yang  berbeda  sangat  nyata  dalam menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen Aeromonas salmonicida (P < 0,01). Rata – rata diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan L. plantarum pada  sebaran A.  salmonicida dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1. Rata – rata diameter zona hambat yang dihasilkan Lactobacillus  plantarum pada  sebaran Aeromonas  salmonicida dalam milimeter (mm).
Perlakuan (CFU/ml) Rata – rata diameter zona hambat ± SD (mm) E (10 9 ) 12,375 a ± 1,567 D (10 8 ) 8,95 b ± 0,443 C (10 7 ) 6,8 c ± 0,938 B (10 6 ) 6 c ± 0 A (Kontrol) 6 c ± 0 Keterangan : Notasi yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan yang sangat nyata (P < 0,01).
Hasil  uji  jarak  berganda  Duncan α = 0,01 yang dilakukan menunjukkan bahwa setiap perlakuan memiliki hasil yang berbeda. Dimana semakin  tinggi  konsentrasi L.  plantarum yang diberikan maka  semakin  besar  diameter hambatan  yang  dihasilkan.  Urutan  perlakuan terbaik  adalah  perlakuan L.  plantarum dengan konsentrasi  10 9 (E),  kemudian L.  plantarum dengan konsentrasi 10 8 (D), sedangkan perlakuan L.  plantarum dengan  konsentrasi  10 7
(C)  dan  10 6 (B)  tidak  berbeda  nyata  dengan kontrol atau tanpa L. plantarum (A).
Berdasarkan  hasil  uji  jarak  berganda Duncan α =  0,01  dapat  diketahui  bahwa  setiap perlakuan memiliki hasil yang berbeda. Dimana semakin  tinggi  konsentrasi L.  plantarum yang diberikan  maka  diameter  hambatan  yang dihasilkan  pada  sebaran  bakteri  patogen A. salmonicida juga  akan  semakin  besar.  Pelczar dan  Chan  (1988)  menyatakan  bahwa  semakin tinggi  konsentrasi  suatu  antibakteri  maka aktivitas  antibakterinya  semakin  kuat  pula.  Hal
ini  dikarenakan  bahwa  dengan  konsentrasi bakteri  antagonis  yang  semakin  tinggi  maka kandungan  zat  antibakteri  yang  dihasilkan  juga akan semakin banyak sehingga daya hambatnya terhadap bakteri uji akan semakin besar.
Hasil  dari  penelitian  yang  telah dilaksanakan  menunjukkan  bahwa  bakteri L. plantarum dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri A. salmonicida . Hasil tersebut menunjukkan  bahwa  bakteri L.  plantarum memiliki  potensi  antagonistik  terhadap  bakteri patogen A.  salmonicida .  Hal  ini  sesuai  dengan pernyataan  Gildberg et  al. (1995),  bahwa bakteri L.  plantarum dapat  menghambat  atau menekan  pertumbuhan  dari  bakteri  patogen A. salmonicida.
Adanya
daya
hambat pada Lactobacillus  plantarum terhadap  pertumbuhan bakteri patogen Aeromonas salmonicida dikarenakan
L. plantarum tersebut
memproduksi  asam  laktat.  Rahayu  dkk.  (1992) menyatakan  bahwa  asam  –  asam  organik misalnya  asam  laktat  dan  asam  asetat menyebabkan  penurunan  pH  sehingga  suasana menjadi asam yang dapat menghambat pertumbuhan  bakteri  patogen.  Menurut  Isoken et  al.  (2012)  bakteri  patogen A.  salmonicida dapat  tumbuh  pada  kisaran  pH  5  hingga  9. Sedangkan  Fardiaz  (1992)  mengemukakan bahwa  bakteri  asam  laktat  (BAL)  misalnya L. plantarum akan  menghasilkan asam laktat  yang dapat  menurunkan  nilai  pH  hingga  3  sampai 4,5.  Hal  ini  diperkuat  dengan  pernyataan  dari Weinberg  dan  Muck  (1996)  serta  Merry et  al.
(1997)  bahwa  BAL  dapat  menurunkan  Ph hingga  3,8  yang  dikarenakan  adanya  produksi asam  laktat  dan  asam  -  asam  lainnya.  Dengan keadaan  pH  yang  demikian  rendah,  maka pertumbuhan  bakteri  patogen A.  salmonicida akan terhambat.
Di  samping  itu,  bakteriosin  juga berperan  dalam  menghambat  bakteri  uji. Kusmiati dan Malik (2002) menyatakan bahwa, bakteriosin  merupakan  senyawa  protein  yang diekskresikan  oleh  bakteri  yang  yang  memiliki sifat  menghambat  pertumbuhan  bakteri  lain terutama yang  memiliki kekerabatan erat secara filogenik.  Menurut  Eckner  (1992)  mekanisme kerja bakteriosin dalam menghambat pertumbuhan  bakteri  uji  diawali  dengan menempelnya  molekul  protein  pada  reseptor yang  terdapat  pada  permukaan  sel  bakteri kemudian masuk melalui dinding sel dan kontak dengan  membran.  Hal  ini  akan  menyebabkan membran  sitoplasma  menjadi  tidak  stabil, akibatnya viabilitas sel rendah dan menyebabkan  keluarnya  material  dalam  inti  sel bakteri sehingga sel menjadi mati.
Selain  itu,  hidrogen  peroksida  juga memiliki  peran  dalam  menghambat  bakteri patogen.  Jenie  dan  Rini  (1995)  melaporkan L. plantarum mampu  memproduksi  H 2 O 2 dalam jumlah  yang  tinggi  sehingga  cukup  potensial dalam menghambat pertumbuhan bakteri patogen.  Lindgren  dan  Dobrogosz  (1990) menyatakan hidrogen peroksida juga mempunyai
efek bakterisidal
yang menyebabkan  oksidasi  yang  kuat  pada  sel bakteri  dan  perusakan  struktur  molekul  dasar dari protein sel.  Hal ini diperkuat oleh Zalan et al .,  (2005)  yang  menyatakn  bahwa  Hidrogen peroksida  memiliki  efek  bakterisidal  karena produksi  superoksida  oksigen  dan  radikal hidroksil  yang  menyebabkan  oksidasi  sel bakteri dan merusak struktur dasar molekul dari protein sel.

## Kesimpulan
Dari penelitian yang telah dilaksanakan dapat  diambil  kesimpulan  bahwa  bakteri Lactobacillus  plantarum memiliki  potensi antagonistik terhadap bakteri patogen Aeromonas  salmonicida yang  ditandai  dengan adanya  hambatan  yang  dihasilkan  bakteri L. plantarum pada pertumbuhan bakteri patogen A. salmonicida . Berdasarkan  hasil  penelitian  yang dilakukan, penulis menyarankan adanya penelitian  lanjutan  menggunakan  bakteri L. plantarum dengan konsentrasi yang lebih tinggi. Hal ini bertujuan untuk mengetahui konsentrasi maksimal  bakteri L.  plantarum yang  dapat mengahasilkan hambatan terbesar pada pertumbuhan bakteri patogen A. salmonicida .
Daftar Pustaka Buntin, N., S. Chanthachum, and T. Hongpattarakere.  2008.  Screening  of lactic acid
bacteria from gastrointestinal tracts of marine fish for their  potential  use  as  probiotics. Songklanakarin  J.  Sci.  Technol .  30 (Suppl.1): 141-148. Eckner  KF,  1992 .  Bacteriocins  and  food applications.  Dairy  Food  and  Env Sanitation. 12: 204–9.
Fardiaz,  S.,  1992.  Mikrobiologi  Pangan  I. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta. Gildberg,  A.,  A.  Johansen  and  J.  Bogwald. 1995.  Growth  and  survival  of  Atlantic Salmon  ( Salmo  salar )  fry  given  diets supplemented with fish protein hydrolysate  and  lactic  acid  bacteria during a challange trial with Aeromonas salmmonicida . Aquaculture.138: 23-24.
Isoken  H.  I.,  U.  I.  Ehimario,  A.  Farhad,  T. Mvuyo,  and  I.  O.  Anthony.  2012. Emerging Aeromonas Species Infections  and  Their  Significance  in Public  Health.  The  Scientific  World
Journal.  Volume  2012  (2012),  Article ID 625023, 13 pages. Jenie  B.S.L.  dan  S.E.  Rini,  1995.  Aktivitas
Antimikroba  dari  Beberapa  Spesies Lactobacillus terhadap Mikroba
Patogen dan Perusak Makanan. Buletin
Teknologi dan Industri Makanan. Joly, P., R. Cailleux, and M.T. Cerceau. (1990). La stérilité male  pathologique, élément de  la  co-adaptation  entre  populations de  champignons  et  de  plantes-hotes: modèle des Pleurotes des Ombellifères. Bulletin  de  la  Socciete  Botanique  de France 137, 71-85. Kusmiati,  &  A.  Malik.  2002. Aktivitas bakteriosin  dari  bakteri Leuconostoc mesenteroides Pbac1  pada  berbagai media  Jurnal  Makara  Seri  Kesehatan. Sistem  Informasi  Jurnal  Ilmiah  UI (Sijuri).
Kusriningrum,  R.  S.  2008.  Perancangan Percobaan. Universitas Airlangga. Surabaya. hal. 43-63.
Lindgren  S.E.  dan  W.  J.  Dobrogosz,  1990. Antagonistic  activity  oflactic  acid bacteria
in food and feed fermentations. FEMS  Microb.  Rev . 87: 149–64. McNaught,  C.E.,  and  J.  Macfie.  2000. Probiotics  in  Clinical  Practice:  a criticalreview of the evidence. Nutrition Research 21 (2001) 343-353.
Merry,  R.J.,  K.F.  Lowes,  ad  A.  Winters.  1997. Current  and  future  approaches  to biocontrol in silage. 17-27.
Pelczar,  M.J  and  E.C.S.  Chan.  1986.  Dasar- dasar  Mikrobiologi  1.  Penerjemah:
R.S.Hadioetomo, T. Imas, S.S. Tjitrosomo  dan  S.L.  Angka.  UI-Press, Jakarta.
Pradhika, E.I. 2008. Mikrobiologi Dasar : Kunci Awal Identifikasi Bakteri. Jakarta. Rahayu  W.  P.,  S.  Ma’oen,  S.  Fardiaz  dan Suliantari,  1992. TeknologiFermentasi Produk Perikanan . PAU. IPB. Bogor.Shickney, R.R. 2000. Encyclopedia of Aquaculture. JohnWiley and Sons, Inc., New York. Suriawiria, U. 1983. Mikrobiologi Masa Depan Penuh Kecerahan di Dalam Pembangunan. Biologi. ITB. Bandung. Universitas  Jendral  Sudirman.  2008.  Petunjuk Praktikum Mikrobiologi Dasar. Universitas Jendral Sudirman. Purokerto. hal. 9. Weinberg,  Z.G.,  and  R.E.  Muck.  1996.  New trends and opportunities in the development  and  use  of  inoculants  for silage.  FEMS  Microbiol.  Rev.  19,  53- 68.
Zalan, Z., E. Nemeth, A. Barath and A. Halasz, 2005.  Influence  of  growth  medium  on hydrogen  peroxide  and  bacteriocin production  of Lactobacillusv strains. Food  Technol.  Biotechnol.,  43:  219- 225.