CHARACTERIZATION AND ANTICANCER ACTIVITY FROM GAHARU (Aquilaria malaccensis)

## STEM BARK EXTRACT
Tarso Rudiana 1,2* , Elda Suci Yala Merru 2 , Hendrawati 2 , Dede Sukandar 2
1 Program Studi Kimia Fakultas Sains, Farmasi dan Kesehatan Universitas Mathla’ul Anwar Jalan Raya Labuan KM. 23, Pandelgang 42273-Indonesia
2 Program Studi Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi UIN Syarif Hidayatullah Jakarta. Jalan Ir. H. Juanda No. 95, Tangerng Selatan 15412-Indonesia
E-mail: *tarso.rudiana@gmail.com
Received: 06 April 2021. Accepted: 20 Desember 2021. Published: 31 Desember 2021 DOI: 10.30870/educhemia.v6i1.10983
Abstract: Aquilaria  malaccensis is  a  plant  species  from  the  Thymeleaceae  family. A. malaccensis contains  secondary  metabolites  of  phenolic  groups,  namely  benzophenone, chromone,  coumarin,  xanthone,  and  flavonoids  with  various  biological  activities  such  as antioxidants  and  anticancer.  This  study  aims  to  determine  the  potential  of A.  malaccensis stem  bark  extract  as  an  anticancer  and  to  determine  the  characteristics  of  secondary metabolite compounds contained in A. malaccensis stem bark extract. Extraction of the stem bark  of A.  malaccensis by  maceration  method  in  stages  using n -hexane,  ethyl  acetate  and methanol as solvents. The anticancer activity test used the microculture tetrazolium (MTT) assay  against  Murine  Leukemia  P-388  cells.  Compound  separation  using  thin  layer chromatograph (TLC) and gravity column chromatography (CC) methods. Determination of chemical  compounds  using  liquid  chromatography  mass  spectroscopy/mass  spectroscopy (LCMS/MS).  The  extracts  of n -hexane,  ethyl  acetate,  and  methanol  each  had  anticancer activity which was classified as active with an IC 50 value of 20.64, 26.61, and 14.49 µg/mL. Based on the results of separation and identification of compounds in methanol extract with TLC,  CC,  and  LCMS/MS,  methanol  extract  contains  acetaminophen,  aminosamptothesin, isophorone,  diethyl  phthalate,  3-hydroxy-6H-benzochromen-6-one,  isolongifolenic,  2-(2- phenethyl) chromone, 4′,7-dihydroxy-2′,5-dimethoxyisoflavone, 4-hydroxy-3-(1- phenylpropyl)-2H-chromone-2-one;  6-methylchromone-2-carboxylic  acid;  3,4-dimethyl-2- phenylmorpholine; and β-calacoren compounds.
Keywords: extraction; gaharu; cancer; chromatography; methanol
Abstrak: Aquilaria  malaccensis merupakan  salah  satu  spesies  tanaman  dari  famili thymeleaceae. A.  malaccensis memiliki  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  golongan fenolik yaitu benzofenon, kromon, kumarin, xanton, dan flavonoid dengan aktivitas biologis yang beragam seperti antioksidan dan antikanker. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi ekstrak kulit batang A. malaccensis sebagai antikanker dan mengetahui karakteristik senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung  pada  ekstrak  kulit  batang A.  malaccensis . Ekstraksi  kulit  batang A.  malaccensis dengan  metode  maserasi  secara  bertingkat
menggunakan  pelarut n- heksana,  etil  asetat  dan  metanol.  Uji  aktivitas  antikanker menggunakan metode microculture tetrazolium (MTT) assay terhadap sel Murine Leukemia P-388.  Pemisahan  senyawa  menggunakan  metode  kromatografi  lapis  tipis  (KLT)  dan kromatografi  kolom  gravitasi  (KKG).  Penentuan  senyawa  kimia  menggunakan liquid chromatography mass spectroscopy/mass spectroscopy (LCMS/MS). Ekstrak n- heksana, etil asetat,  dan  metanol  masing-masing  memiliki  aktivitas  antikanker  yang  tergolong  aktif dengan nilai IC 50 sebesar 20,64; 26,61; and 14,49 µg/mL. Berdasarkan hasil pemisahan dan identifikasi  senyawa  pada  ekstrak  metanol  dengan  KLT,  KKG,  dan  LCMS/MS,  ekstrak metanol  mengandung  senyawa  asetaminofen,  aminosamptotesin,  isophoron,  dietil  ftalat,  3- hidroksi-6H-benzochromen-6-on,  isolongifolen,  2-(2-fenetil)kromon,  4′,7-dihidroksi-2′,5- dimetoksiisoflavon,  4-hidroksi-3-(1-fenilpropil)-2Hkromon-2-on;  6-metilkromon-2-asam karboksilat; 3,4-dimetil-2- fenilmorfolin; dan senyawa β-calacoren.
Kata kunci: ekstraksi; gaharu; kanker; kromatografi; metanol

## PENDAHULUAN
Kanker  merupakan  salah  satu penyakit yang menjadi penyebab kematian kedua di dunia setelah serangan jantung. Jenis kanker yang umum terjadi antara lain kanker paru, kanker payudara, kanker hati, kanker perut, kanker serviks, dan  kanker  darah  (leukemia).  Secara umum,  dari  beberapa  jenis  kanker,  satu diantaranya  menjadi  penyakit  kanker paling  ganas  yang  menyerang  anak-anak yakni  kanker  darah  (leukemia).  Selama tahun  2010-2013,  leukemia  menjadi kasus yang menyebabkan jumlah
kematian  terbanyak  dan  kasus  kematian akibat  leukemia  terus  meningkat  setiap tahunnya  (Kementrian  Kesehatan  RI,
2018). Riset Kesehatan Dasar (Riskesdas)  2018  menunjukkan  adanya prevalensi  penyakit  kanker  naik  dari 1,4%  (Kementrian  Kesehatan  RI,  2013)
menjadi 1,8% (Kementrian Kesehatan RI, 2018).
Upaya yang dilakukan untuk mengatasi  penyakit  kanker  salah  satunya adalah  eksplorasi  senyawa  metabolit sekunder  yang  beraktivitas  sebagai antikanker  dari  tumbuhan.  Salah  satu tumbuhan  yang  dimanfaatkan  sebagai sumber  senyawa  antikanker  yaitu  gaharu ( Aquilaria  malaccensis).  A.  malaccensis merupakan salah satu komoditi kehutanan  yang  memiliki  nilai  ekonomi tinggi  dan  digunakan  sebagai  komoditi ekspor  dari  Indonesia. A.  malaccensis telah  banyak  dimanfaatkan  dalam berbagai  aspek  kehidupan  yaitu  sebagai bahan  produk  industri,  kosmetik,  dan obat-obatan (Amalina, 2015).
Penelitian  sebelumnya  menyebutkan bahwa A.  malaccensis mengandung senyawa golongan  alkaloid, antrakuinon, flavonoid,  saponin,  steroid,  triterpenoid,
dan  tannin  (Harfinda  et  al.,  2017). Gunasekara  et  al.  (1981)  melaporkan bahwa, ekstrak kloroform kulit batang A. malaccensis memiliki aktivitas antikanker  terhadap  sel lymphocytic dengan  hasil  ED 50 sebesar  0,35  µg/mL.
Sejalan dengan itu, Ibrahim et al. (2011) menyebutkan bahwa ekstrak A. malaccensis
memiliki aktivitas antikanker  usus  besar  manusia  HCT-116 dengan  nilai  IC 50 sebesar  4  µg/mL.
Senyawa  aquilanol  B,  dapnauranol  D, camaejasmon E dan aquilacallane A serta 8 senyawa turunan kromon telah berhasil diisolasi  dari  tumbuhan A.  malaccensis
(Wang  et  al.,  2018).  Besarnya  potensi tanaman A.  malaccensis sebagai  sumber senyawa  antikanker  perlu  dieksplorasi dan  dikaji  lebih  lanjut  terutama  terhadap sel kanker Leukemia P-388.

## BAHAN DAN METODE
Bahan. Kulit  batang A.  malaccensis (Barabai,  Kalimantan  Selatan),  berbagai pelarut  organik  grade  teknis  terdestilasi seperti n- heksana,  metanol,  etil  asetat, dan  aseton,  kloroform  (Merck),  akuades, silika gel G 60 (35-70 mesh), sel Murine Leukemia P-388, 2% Fetal Bovine Serum
(FBS),  larutan Microculture  Tetrazolium
Technique ( MTT )  dan  10% Sodium Dodecyl  Sulfate (SDS),  asam  klorida,
PBS  (Larutan  Buffer  Posfat)  dan  media
Roswell  Park Memorial  Institute 1640 (RPMI  1640),  silika  gel  G  60  (35-70 mesh  ASTM,  Merck),  plat  KLT berlapiskan silika gel GF254 (Merck).
Alat . Berbagai  alat  gelas,  botol  vial, vacum  rotary  evaporator (Heidolph), lampu ultraviolet (UV) dengan λ 254 dan 366  nm,  Spektrofotometer  UV-Vis (Shimadzu) dan seperangkat alat spektrofotometer  LCMS/MS  (Acquaty UPLC®H-Class  System,  BEH  C18, Xevo G2-S QTof).

## Metode Penelitian

## Ekstraksi
Serbuk  kering  kulit  batang A. malaccensis (1,3  kg)  dimaserasi  dengan n- heksana  selama  3x24  jam.  Maserat ditampung  dan  dipekatkan  dengan menggunakan vaccum rotary  evaporator (T =  40 0 C)  hingga  diperoleh  ekstrak pekat n- heksana. Residu sampel dimaserasi kembali dengan etil asetat dan dilanjutkan  dengan  metanol  hingga diperoleh  ekstrak  pekat  etil  asetat  dan metanol.  Ekstrak  pekat  digunakan  untuk uji  aktivitas  antikanker.  Ekstrak  dengan aktivitas  terbaik  dipisahkan  lebih  lanjut dengan kromatografi.

## Uji Sitotoksik
Stok sel murine lukemia P-388 yang telah ditambahkan 1 mL 5% Fetal Bovin Serum (FBS)  dan  100  µL  DMSO  dan
disimpan  dalam freezer (-80 o C) selama  24  jam.  Sel  dengan  pertumbuhan pada  fase  logaritma  dikultur  dalam inkubator CO 2 (Alley et al., 1988).
Ekstrak sebanyak 10 mg ditambahkan  dengan  10  mL  DMSO sampai larut hingga diperoleh konsentrasi 1000  µg/mL  sebagai  larutan  stok  untuk membuat  variasi  konsentrasi  0,1;  0,3;  1; 3;  10;  30;  dan  100  µg/mL.  Proses selanjutnya dilakukan dengan penambahan reagen Microculture
Tetrazolium  Technique ( MTT )  sebanyak 20  µL  ditambahkan  pada  larutan  uji. Setelah  4  jam  kemudian  diberi  100  µL 10% SDS ( Sodium Dodecyl Sulfate ) HCl 0,01 N sebagai stop solution. Larutan uji disimpan  kembali  dalam  inkubator selama 24 jam (Alley et al., 1988).
Pengukuran  absorbansi  dilakukan dengan  mengamati  perubahan  warna kuning menjadi formazan ungu di dalam mitokondria  sel  yang  masih  hidup, dikuantifikasi pada panjang gelombang λ = 540 nm dengan spektrofotometer.

## Fraksinasi
Ekstrak metanol (11 g) di
kromatografi  kolom  dengan  fasa  diam yang  digunakan  adalah  silika  gel  G  60 (35-70  mesh)  dan  fasa  gerak  yaitu  eluen n- heksana:etil asetat:metanol yang ditingkatkan kepolarannya secara gradien
sehingga  diperoleh  5  fraksi  (F1-F5). Fraksi  F1  (400  mg)  dipisahkan  kembali dnegan  KKG  dengan  fasa  gerak n - heksana  :  etil  asetat  (8:2)  secara  gradien sehingga didapatkan 5 fraksi (F1.1-F1.5). Fraksi  F1.3  (127,5  mg)  dipisahkan Kembali dengan KKG dengan fasa gerak n -heksana:eti asetat (8:2) secara isokratik menghasilkan  4  fraksi  (F.1.3.1-F.1.3.4). Fraksi  F.1.3.3  (15,7  mg)  dan  F.1.3.4 (22,7mg) dikarakterisasi dengan menggunakan instrumen LCMS/MS.

## Karakterisasi Fraksi dengan LCMS/MS
Masing-masing  fraksi  F.1.3.3  dan F.1.3.4  sebanyak  5  mg  dilarutkan  dalam metanol  kemudian  dipipet  20  µL  dan disuntikkan  pada  LCMS  (Waters,  USA) sistem Electrospray  Ionisation (ESI) model  ion  positif,  kolom  C18  (RP18) superco, panjang kolom 50 mm, diameter dalam kolom 2,1 mm, ukuran partikel 1,8 µm  dengan  kecepatan  alir  diatur  0,3 mL/menit. Metanol:air (9:1) sebagai fasa gerak  dengan  kecepatan  alir  0,3 mL/menit (Rudiana et al., 2019).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Ekstraksi dan Aktivitas Antikanker
Kulit  batang A.  malaccensis yang dimaserasi  secara  bertingkat  dengan tingkat  kepolaran  pelarut  yang  berbeda sehingga  senyawa  yang  terkandung
dalam  sampel  dapat  diklasifikasikan berdasarkan  kepolarannya  (Rudiana  et al.,  2018).  Ekstrak  yang  diperoleh disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1 . Data rendemen ekstrak kulit batang A.
malaccensis No.  Ekstrak Bobot Ekstrak (g) Rendemen Ekstrak (%) 1. n- heksana 11,27 0,88 2. etil asetat 24,87 1,91 3. metanol 11,20 0,85
Berdasarkan % rendemennya ekstrak etil  asetat  menunjukkan  nilai  % rendemen  yang  paling besar  (Tabel  1).
Hal tersebut menandakan bahwa senyawa yang  terkandung  pada  ekstrak  etil  asetat mengandung  komponen  yang  lebih banyak  dibandingkan  dengan  fraksi lainnya.  Etil  asetat  bersifat  semipolar yang dapat melarutkan senyawa-senyawa dengan sifat kepolaran diantara polar dan nonpolar.  Beberapa  senyawa  yang  dapat larut  dalam  pelarut  etil  asetat  adalah flavonoid,  turunan  kumarin,  kromon, tanin  dan  beberapa  alkaloid  (Rudiana  et al., 2018). Kandungan senyawa nonpolar juga  mendominasi  pada  sampel A. malaccensis, hal  tersebut  dapat  dilihat pada  %  rendemen  ekstrak n -heksana memiliki % rendemen yang cukup tinggi (Tabel  1). A.  malaccesis mengandung banyak  senyawa  minyak  atsiri  yang bersifat  semipolar  seperti  α-panasinsen, gurjunen, α-farnesen, estragol, guaien, α-
guaien, verucurol, aromadendrin, valence, kariopilen,  α-kariopilen,  spathulenol,  (-)- spathulenol,  ß-selinen,  α-cubeben,  cis- limonen  oksida,  α-vatiren,  α-pelandren, (+)-epi-bisiklosesquiphelandren, germasren,  citronelil  propionate,  ß- cadiden,  sitronelal,  skualen,  humulen- 1,6-dien-3-ol,  c-elemen,  dan  arisolen (Radzi  dan  Kasim,  2020).  Kandungan senyawa polar seperti flavonoid glikosida, tanin, dan alkaloid lebih sedikit terkandung  pada  kulit  batang A. malaccensis .
Aktivitas  antikanker  dari  ekstrak n- heksana,  etil  asetat,  dan  metanol dianalisis  terhadap  sel  Murine  Leukimia P-388  dengan  metode  MTT assay .  Data hasil  aktivitas  antikanker  disajikan  pada Tabel 2.
Tabel 2 . Aktivitas antikanker Leukimia P-388 dari ekstrak A. malaccensis No.  Ekstrak Nilai IC 50 (µg/mL) 1. n- heksana 20,64 2. etil asetat 26,61 3. metanol 14,49
Ekstrak n -heksana dan etil asetat A. malaccensis memiliki  nilai  aktivitas antikanker  yang  tergolong  sedang (moderat  aktif)  dengan  nilai  aktivitas antara  20-200  µg/mL  (Ito  et  al.,  2003). Aktivitas  antikanker  ekstrak  metanol A. malaccensis tergolong  aktif  karena  nilai IC 50 yang  dihasilkan  yakni  <20  µg/mL
(Ito  et  al.,  2003).  Ekstrak  metanol
memiliki  aktivitas  antikanker  tinggi terhadap  sel  Murine  Leukemia  P-388 .
Hal  ini  dikarenakan  senyawa  polar  yang terkandung dalam ekstrak diduga merupakan  senyawa  golongan  metabolit sekunder  seperti  fenolik,  saponin,  dan flavonoid  yang  berpotensi  sebagai antikanker.  Menurut  Abdillah  (2006) senyawa  fenolik,  saponin,  dan  flavonoid memiliki  peran  dalam  menghambat poliferasi sel kanker.

## Fraksinasi Ekstrak Teraktif
Ekstrak  metanol  memiliki  nilai aktivitas antikanker paling baik (Tabel 1) dipisahkan  dengan  metode  kromatogafi. Setiap  proses  pemisahan  dilakukan berdasarkan massa sampel yang dominan dengan  pola  pemisahan  yang  lebih sederhana.  Berikut  adalah  profil  KLT fraksi F.1.1.3.1 - F.1.1.3.4
Gambar 1. Hasil uji KLT 4 fraksi gabungan (F.1.1.3.1 – F.1.1.3.4)
Fraksi  F.1.1.3.3  dan  F.1.1.3.4  dipilih
untuk diidentifikasi senyawanya menggunakan LCMS/MS, hal ini dikarenakan  kedua  fraksi  tersebut memiliki pola pemisahan terbaik (Gambar  1)  dengan  bobot  fraksi  yang mencukupi  dan  diduga  kedua  fraksi tersebut mengandung senyawa polar yang mampu menghambat senyawa antikanker.

## Karakterisasi fraksi dengan LCMS/MS
Identifikasi komponen senyawa kimia menggunakan LCMS/MS menghasilkan beberapa puncak kromatogram  yang  memiliki  waktu retensi  berbeda-beda.  Banyaknya  puncak kromatogram yang
dihasilkan menunjukkan  jumlah  senyawa  yang teridentifikasi  dalam  fraksi  F.1.1.3.3 (Gambar  2a)  dan  F.1.1.3.4  (Gambar  2b). Kromatogram  kedua  fraksi  tersebut disajikan pada Gambar 2.
Kromatogram LC dianalisis menggunakan  software  Mass  Lynx  versi 4.1  kemudian  dibandingkan  dengan data base  online  Mass  Bank ,  HMDB, Mass
Bank  of  North  America (MoNA) (Fathoni, 2021) . Hasil puncak kromatogram dari senyawa pada F.1.1.3.3  (Gambar  2a)  terlihat  bahwa terdapat  8  puncak  area  senyawa  yang berhasil diidentifikasi.
(a) (b)
Gambar 2 . Kromatograf fraksi (a) F.1.1.3.3 dan (b) F.1.1.3.4
Gambar 3. Struktur senyawa fraksi metanol
Kimia S1FMIPA UIN Time 2.00 4.00 6.00
8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 % 0 100 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 % 0 100 Elda Suci YM Kode F3 1: TOF MS ES+ BPI 1.55e7 11.60 11.17 9.82 9.63 1.01 8.94 6.03 10.13 13.36 12.38 12.75 16.28 13.82 15.82 14.11 15.27 14.88 17.87 16.95 Elda Suci YM Kode F3 1: TOF MS ES+ TIC 6.18e7 16.28 15.82 13.36 11.60 11.17 9.84 1.01 10.77 12.90 12.75 15.62 15.17 13.82 14.92 14.29 17.18 16.87 17.32 17.98 Kimia S1FMIPA UIN Time 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 % 0 100 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00
14.00
16.00 18.00 20.00 22.00 % 0 100 Elda Suci YM Kode F7 1: TOF MS ES+ BPI 1.94e7 11.89 9.98 9.84 9.72 8.97 1.03 11.83 11.71 11.17 11.93 17.91 12.30 14.31 12.51 13.49 12.86 15.85 15.47 15.21 17.18 16.95 18.33 Elda Suci YM Kode F7 1: TOF MS ES+ TIC 8.62e7 17.91 15.80 15.47 11.89 9.98 9.84 9.72 9.08 1.03 11.43 11.17 12.30 14.31 12.35 12.51 14.06 13.82 12.88 15.21 15.87 16.75 16.97 18.28
Tabel 3 . Senyawa hasil analisis LCMS/MS fraksi
metanol Fraks i RT (men it) Massa Rumus Molekul Nama Senyawa F.1.1. 3.3 1,01 251,10 63 C 17 H 14 O 2 2-(2- feniletil) kromon ( 1 ) 6,03 151,03 88 C 8 H 9 NO 2 asetamino fen ( 2 ) 8,94 364,12 58 C 20 H 17 N 3 O 4 9-amino kamtotesi n ( 3 ) 9,63 139,11 25 C 9 H 14 O isoforon
( 4 ) 10,13  223,09 34 C 12 H 14 O 4 dietil ftalat ( 5 ) 11,17  213,05 72 C 13 H 8 O 3 3 - hidroksi -
6H-benzo kromon- 6-on ( 6 ) 11,69  201,16 37 C 15 H 20 isolongifo len ( 7 ) 13,36  317,10 17 C 17 H 16 O 6 4’,7- dihidroksi
-2’,5- dimetoksi isoflavon ( 8 ) F.1.1. 3.4 9,72 281,11 78 C 18 H 16 O 3 4- hidroksi- 3-(1- fenilpropi l)-2H- kromon- 2-on ( 9 ) 9,98 205,08 65 C 11 H 8 O 4 6- metilkrom on -2- asam karboksila t (1 0 ) 11,17  192.13 88 C 18 H 16 O 3 3,4- dimetil-2- fenilmorp olin ( 11 ) 11,89  201.16 43 C 15 H 20 β- calacoren ( 12 )
Beberapa  senyawa  yang  telah berhasil  diisolasi  dari  tanaman A. malaccensis diantaranya  Huo  et  al.
(2015) telah berhasil mengisolasi senyawa 1 dari  kulit  batang A. malaccensis. Senyawa  asetofenon  ( 2 ) berhasil  diisolasi  dari  ekstrak  metanol kulit  batang A.  malaccensis (Afiffudden et  al.,  2015).  Senyawa  β-calacoren  ( 12 ) berhasil  diisolasi  pada A.  malaccensis (Ismail et al., 2013).
Senyawa 1 diduga  merupakan senyawa yang bertindak sebagai antikanker.  Hal  ini  sesuai  dengan penelitian  dari  Yang  et  al.  (2012)  yang berhasil  mengisolasi  senyawa 1 dari batang A. sinensis dan memiliki aktivitas antitumor  pada  sel  tumor  SMMC-7721 dengan  nilai  IC 50 sebesar  37,95  µg/mL.
Wang  et  al.  (2018)  juga  menemukan senyawa 1 pada  daun A.  malaccensis yang  memiliki  aktivitas  antikanker payudara  pada  sel  MCF-7  dengan  IC 50 sebesar 19 µg/mL.
Penghambatan  sel  kanker  Murine Leukemia P-388 senyawa 1 dapat melalui dua mekanisme yaitu adanya penghambatan  melalui  apoptosis    dan growth  factor .  Apoptosis  merupakan mekanisme  dalam  sel  yang  berfungsi menjaga  keseimbangan  jumlah  sel  hidup dan  sel  mati  dengan  menghancurkan  sel yang  rusak  atau  abnormal,  sedangkan growth  factor merupakan  suatu  protein yang dapat mengaktifkan sistem proliferasi sel  atau  diferensiasi  sel  yang  berikatan
dengan  suatu  reseptor  pada  permukaan  sel (Alison, 2001). Menurut Jiang et al. (2004)
senyawa  kromon  merupakan  senyawa golongan flavonoid yang dapat mengembalikan  keseimbangan  apoptosis pada sel karena dapat menurunkan ekspresi penekan  apoptosis  seperti  Bcl-2  dan  Bcl- XL.  Selain  itu,  kematian  sel  kanker  dapat diakibatkan  oleh  adanya  reseptor growth factor yang  diblokir  oleh  senyawa flavonoid  sehingga  tidak  dapat  berikatan dengan  protein  di  dalam  sel  kanker  dan menyebabkan  tidak  terjadinya  proliferasi sel kanker (Alison, 2001).

## KESIMPULAN
Ekstrak n -heksana,  etil  asetat,  dan metanol  kulit  batang A.  malaccensis memiliki  aktivitas  antikanker  Leukimia P-388  dengan  nilai  IC 50 sebesar  20,64;
26,61;  dan  14,49  µg/mL.  Senyawa  yang terkandung  pada  ekstrak  metanol  kulit batang A.  malaccensis adalah  2-(2-
feniletil) kromon; asetaminofen; 9-amino kamptotesin;  isoforon;  dietil  ftalat;  3- hidroksi-6Hbenzo kromon-6-on; isolongifolen; 4’,7-dihidroksi-2’,5- dimetoksi  isoflavon  dari  fraksi  FA.3.3 dan senyawa 4-hidroksi-3-(1-fenilpropil)- 2Hkromon-2-on;  6-metilkromon-2-asam karboksilat;  3,4-dimetil-2-  fenilmorfolin; dan  senyawa  β-calacoren.  Perlu  dikaji lebih  lanjut  senyawa  yang  terdeteksi melalui  pemurnian  dan  penentuan struktur kimia serta menentukan aktivitas antikanker dari senyawa murninya.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih kepada  analis  di  Laboratorium  Kimia Bahan  Alam  ITB  dan  Azhar,  S.Si  di Pusat  Laboratorium  Forensik  MABES POLRI  yang  telah  membantu  dalam analisis antikanker dan LCMS/MS.

## DAFTAR RUJUKAN
Abdillah,
A. (2006). Aktivitas
antiproliferasi  ekstrak  air  daun  sisik naga (Pyrrosia nummularifolia (Sw.)
Ching)  terhadap  sel  lestari  tumor hela  secara  in  vitro .  [Skripsi].  IPB,
Bogor.
Afiffudden, S. K., Alwi, H., & Hamid, K.
H.  (2015). Dtermination  of  4’-
hydroxyacetanilide  in  leaves  extract of  Aquilaria  malaccensis  by  high pressure  liquid  chromatography . Malaysia:  Universitas  Teknologi Mara.
Alison,  M.  (2001).  Encyclopedia  of  Life Sciences.  In Cancer  Journal  Nature Publishing Group (4th ed.).
Alley,  M.  C.,  Scudiero,  D.  A.,  Monks,
A., & Hursey, M. (1988). Feasibility of  Drug  Screening  with  Panels  of Human  Tumor  Cell  Lines  Using  a Feasibility  of  Drug  Screening  with Panels  of  Human  Tumor  Cell  Lines Using  a  Microculture  Tetrazolium Assay. Cancer  Research  Journal ,
48 (5), 589–601.
Amalina,  Y.  (2015). Penetapan  kadar flavonoid  total  dan  uji  aktivitas antioksidan  secara  in  vitro  ekstrak etanol  daun  gaharu  (Aquilaria microcarpa Baill) . [Skripsi].
Universitas  Lambung  Mangkurat, Banjarbaru.
Fathoni,  A.  (2021).  Characterization  of Phytochemicals and Chemical Compounds of Patat Leaves
( Phrynium  capitatum )  As  Wrapping Materials for Pesor Doclang.
EduChemia  (Jurnal  Kimia  Dan Pendidikan) , 6 (1), 13–25.
Gunasekara,  S.,  Kinghorn,  A.,  Cordell, G.,  &  Farnsworth,  S.  (1981).  Plan anti  cancer  agent  xix. Constituent  of
Aquilaria  malaccensis,  Journal  Nat. Prod , 44 (5), 569–572.
Harfinda,  E.  M.,  Normagiat,  S.,  &
Hardiansyah,  G.  (2017).  Potensi senyawa  metabolit  sekunder  daun Aquilaria  Sp  asal  kalimantan  barat untuk  pembuatan  teh  herbal. Ilmu
Pengetahuan dan Teknologi .
Huo,  H.,  Zhu,  Z.,  Pang,  D.,  Li,  Y.,  & Huang,  Z.  (2015).  Seskuiterpen  anti neuroinflamasi  dari  kayu  gaharu cina. Fitoterapia , 10 (6), 115–121.
Ibrahim,  A.  H.,  Al-Rawi,  S.,  Majid,  A.
M.  S.,  Rahman,  N.  N.  A.,  Salah,  K. M.  A.,  &  Kadir,  M.  O.  A.  (2011). Separation  and  fractionation  of Aquilaria  malaccensis oil  using supercritical fluid extraction and tthe cytotoxic  properties  of  the  extracted oil. Procedia  Food  Science , 1 (11),
1953–1959.
Ismail,  N.,  Ali,  N.  A.  Z.,  Jamil,  M.,
Rahiman,  M.  H.  F.,  Tajuddin,  S.,  & Taib,  M.  (2013). Differentiating agarwood aol quality using artificial neural network . Malaysia:
Universitas Teknologi Mara.
Ito,  C.,  Itoigawa,  M.,  Takakura,  T.,
Ruangrungsi,  N.,  Enjo,  F.,  Tokuda, H.,  Nishino,  H.,  &  Furukawa,  H.
(2003).  Chemical  Constituens  of
Garcinia fusca: Structure Elucidation of  Eight  New  Xanthones  and  Their Cancer  Chemopreventive  Activity. The Journal of Natural Products , 66 , 200–205.
Jiang,  Z.,  Reddy,  D.,  Ackerman,  S.  K.,
Salvesen, J., Li, C., Li, Y., & Sun, X. (2004). Novel Lapachone Compounds  and  Methods  of  Use
Thereof (Patent No. WO 2004/045557  A2).  In United  States Patent Aplication (WO 2004/045557
A2).
Kementrian  Kesehatan  RI.  (2013). Riset Kesehatan  Dasar  (RISKESDAS):
Perkembangan  Kanker  Indonesia .
Jakarta:  Badan  Litbang  Kemenkes
RI.
Kementrian  Kesehatan  RI.  (2018). Riset Kesehatan Dasar (RISKEDAS): Kanker  Leukimia .  Jakarta:  Badan
Litbang Kemenkes RI. Radzi,  N.  C.,  &  Kasim,  F.  A.  (2020). Effect of microwave pretreatment oh gaharu essential oil using hydrodistillation  method. Indones.  J.
Chem , 20 (4), 960–966.
Rudiana,  T.,  Fitriyanti,  F.,  &  Adawiah,
A. (2018). Aktivitas Antioksidan dari Batang Gandaria ( Bouea macrophylla Griff). EduChemia (Jurnal  Kimia  Dan  Pendidikan) ,
3 (2), 195.
Rudiana, T., Suryani, N., Indriatmoko, D.
D., Yusransyah, Amelia, A.,
Noviany,  &  Hadi,  S.  (2019).
Characterization  of  antioxidative fraction  of  plant  stem Bouea macrophylla Griff. Journal  of Physics: Conference Series , 1341 .
Wang,  S.,  Yu,  Z.,  Wang,  C.,  Wu,  C.,
Guo, P., & Wei, J. (2018). Chemical
Constituents  and  Pharmacological Activity  of  Agarwood  and  Aquilaria Plants. Molecules (Basel,
Switzerland) , 23 (2).
Yang,  L.,  Qiao,  L.,  Xie,  D.,  Yuan,  Y.,
Chen, N., Dai, J., & Guo, S. (2012). 2-(2-Phenylethyl)chromones from
Chinese  eaglewood. Phytochemistry ,
76 , 92–97.