UJI ANTIMIKROBA EKSTRAK DAN FRAKSI TUNIKATA Didemnum molle TERHADAP PERTUMBUHAN Escherichia coli , Staphylococcus aureus , DAN Candida albicans YANG DIKOLEKSI DI SELAT LEMBEH BITUNG
Novia Angelica Pitoy 1) , Adithya Yudistira 1) , Defny Wewengkang 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Tunicate  Didemnum  molle  is  a  marine  biota  that  has  bioactive  components  that  can  be  used  as  raw material  for  medicines.  This  study  aims  to  determine  the  antimicrobial  activity  of  extracts  and  fractions  of Didemnum  molle  on  microbial  growth  of  Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus  and  Candida  albicans.  The sample was extracted by maceration using ethanol and fractionated using, n-hexane, chloroform and methanol. Antimicrobial  activity  was  tested  using  the  disc  diffusion  test  method  (Kirby  and  Bauer).  Ethanol  extract  of Didemnum molle inhibited the growth of microbes of Staphylococcus aureus (8.12 mm) and Candida albicans (9.00  mm).  Chloroform  fraction  inhibited  the  growth  of  Staphylococcus  aureus  (9.10  mm),  Escherichia  coli (10.00  mm)  and  Candida  albicans  (9.65  mm).  While  the  methanol  fraction  is  only  able  to  inhibit  microbial growth of Candida albicans (10.00 mm). The hexane fraction shows no activity against all test microbes.
Keywords :  Tunikata  Didemnum  molle,  antimicrobial,  Escherichia  coli,  Staphylococcus      aureus,  Candida albicans.

## ABSTRAK
Tunikata Didemnum  molle merupakan  biota  laut  yang  memiliki  komponen  bioaktif  yang  dapat dimanfaatkan sebagai bahan baku obat-obatan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antimikroba dari  ekstrak  dan  fraksi  tunikata Didemnum  molle terhadap  pertumbuhan  mikroba Escherichia  coli, Staphylococcus  aureus dan Candida    albicans .  Sampel  diekstraksi  dengan  cara  maserasi  menggunakan  etanol dan  difraksinasi  menggunakan,  n-heksan,  kloroform  dan  metanol.  Aktivitas  antimikroba  diuji  menggunakan metode disc  diffusion  test (Kirby  dan  Bauer).  Ekstrak  etanol Didemnum  molle menghambat  pertumbuhan mikroba Staphylococcus  aureus (8,12  mm)  dan Candida  albicans (9,00  mm).  Fraksi  kloroform  menghambat pertumbuhan  mikroba Staphylococcus  aureus (9,10  mm), Escherichia  coli (10,00  mm)  dan Candida  albicans (9,65  mm).  Sementara  fraksi  metanol  hanya  mampu  menghambat  pertumbuhan  mikroba Candida  albicans (10.00 mm). Fraksi heksan tidak menunjukkan aktivitas terhadap semua mikroba uji.
Kata  Kunci :  Tunikata Didemnum  molle ,  antimikroba, Escherichia  coli,  Staphylococcus  aureus,  Candida albicans.

## PENDAHULUAN
Antimikroba  adalah  zat-zat  kimia  yang dihasilkan  oleh  jamur  dan  bakteri  yang memiliki  kemampuan  untuk  menghambat pertumbuhan mikroba dan toksisitasnya terhadap  manusia  relative  kecil.  Antibiotik merupakan obat  yang paling banyak digunakan pada  infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri  dan jamur. Timbulnya resistensi telah menyebabkan kelompok antiboitik tertentu tidak lagi digunakan  dalam  terapi  sehingga  penggunaan berbagai  sumber  daya  laut  dalam  pengobatan penyakit  infeksi  menjadi  pilihan  masyarakat Indonesia (Waluyo, 2005).
Indonesia  terkenal  dengan  kekayaan alamnya  yang  berlimpah.  Potensi    yang  sangat besar  dalam  menghasilkan  senyawa-senyawa aktif yang dapat digunakan sebagai bahan baku obat-obatan berasal dari organisme laut (Thakur dan  Muller,  2004).  Organisme  laut  yang diketahui  dapat  menghasilkan  senyawa  aktif antara lain bryozoa (Sima dan Vetvicka, 2011), moluska  (Kiran et  al .,  2014),  spons  (Ngantung et  al .,  2018),  karang  lunak  (Kawung et  al .,
2017) dan tunikata (Ali and Tamilselvi, 2016).
Tunikata  tergolong  dalam  organisme yang menempel pada terumbu karang. Tunikata banyak  menghasilkan  senyawa  bioaktif    untuk farmakologi  karena  dapat  berasosiasi  dengan mikroba  fotosintetik  dan  mempunyai  potensi molekular  yang  besar.  Kandungan  metabolit sekundernya  yaitu  substansi  bioaktif  yang sangat  berguna  bagi  pertahanan  diri  organisme simbionnya  (Aulia,  2011).  Diketahui  dari tunikata  sudah  ditemukan  berbagai  senyawa dengan bioaktivitas seperti larvasida
(Rumengan, 2010), antikanker/antitumor (Wewengkang et  al .,  2014),  antidiabetes  (Li, 2012),  antiinflamasi  (Chan et  al .,  2011), antivirus  (Donia et  al .,  2008),  dan  antimikroba (Wang et al ., 2008). Metabolit sekunder berupa
alkaloid,  flavonoid  dan steroid  ditemukan pada tunikata Didemnum molle (Aulia, 2011).
Didemnum  molle merupakan tunikata yang  umum  dijumpai  di  perairan  Indonesia karena  distribusi  dari  spesies  ini  tersebar  di perairan  Indo-Pasifik.  Jenis-jenis  dari  suku Didemnidae  merupakan  jenis  yang  paling mendominasi  di  perairan  dangkal  tropis.  Jenis tunikata  dari  suku  Didemnidae  memiliki adaptasi  yang  tinggi  terhadap  kondisi  perairan dan  mampu  bertahan  hidup  pada  tipe-tipe habitat (Abrar 2008).
Berdasarkan penelusuran pustaka, peneliti  tertarik  untuk  melakukan  penelitian aktivitas  antimikroba  dari  tunikata Didemnum molle terhadap  pertumbuhan Escherichia  coli, Staphylococcus aureus dan Candida albicans .

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan November 2018-Februari 2019 di Laboratorium Farmakognosi dan Fitokimia serta di Laboratorium  Mikrobiologi  Program  Studi Farmasi Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini yaitu masker, sarung tangan, pisau, gunting, telenan,  peralatan  diving  berupa  snorkel,  fins, tabung  udara  dan  masker,  kantong  plastik, Erlenmeyer  (Pyrex),  corong  pisah,  gelas  ukur (Pyrex),  gelas  kimia  (Pyrex),  oven,  timbangan analitik (Kem), cawan petri, autoklaf (Autoclaf KT-30s),  pinset,  pembakar  spiritus,  pipet  tetes, mikro  tub, Laminar  Air  Flow (Clean  Bench) , lemari pendingin, incubator (N-biotek), mikropipet,  jangka  sorong,  vial,  pot  salep, kamera untuk keperluan dokumentasi.
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu tunikata Didemnum molle, bakteri uji Staphylococcus aureus, Escherichia coli, jamur uji Candida  albicans, etanol  96%,  n-heksan, kloroform, metanol, ekstrak beef, pepton , NaCl, agar, Kloramfenikol,  kertas  cakram,  label, spidol  permanen,  tissue, aluminium  foil ,  kertas saring, kapas.

## Jenis Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian yang  menggunakan  metode  eksperimental laboratorium.

## Prosedur Penelitian Pengambilan Sampel dan Persiapan Sampel
Sampel  tunikata Didemnum  molle diambil dari perairan Selat Lembeh menggunakan alat bantu (masker, tabung udara, snorkel,  dan  fins).  Sampel    dibersihkan  dari kotoran  yang  menempel  disekitarnya,  difoto lalu  dimasukkan  kedalam  plastik,  kemudian dibawa  ke  Laboratorium  Farmakognosi  dan Fitokimia  Program  Studi  Farmasi  Universitas Sam  Ratulangi.  Sampel  dipotong  kecil-kecil dan  diekstraksi  dengan  cara  maserasi  dengan etanol  96%  lalu  diberi  label  serta  nomor sampel.

## Ekstraksi
Tunikata Didemnum  molle sebanyak 1195  gram  diekstraksi  dengan  cara  maserasi. Sampel  di  bersihkan,  dipotong  kecil-kecil  lalu dimasukkan  ke  dalam  botol  dan  direndam dengan  larutan  etanol  96%  sampai  sampel terendam  secara  keseluruhan  dan  dibiarkan selama 24 jam. Sampel yang direndam disaring dengan menggunakan kertas saring menghasilkan  filtrat  1  dan  debris  1.  Debris  1 direndam  dengan  larutan  etanol  96%  sampai sampel  terendam  secara  keseluruhan  kemudian
dibiarkan  selama  24  jam.  Sampel  tersebut disaring menggunakan kertas saring menghasilkan  filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2 kemudian  direndam  dalam  larutan  etanol  96% sampai  sampel  terendam  secara  keseluruhan dan  dibiarkan  selama  24  jam,  sampel  tersebut disaring menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 3 dan debris 3. Filtrat 1, 2 dan  3  dicampur  menjadi  satu  kemudian disaring, lalu dimasukkan dalam oven sehingga didapat ekstrak kasar tunikata Didemnum molle kemudian  ditimbang  menggunakan  timbangan analitik  dan  diperoleh  ekstrak  kasar  sebanyak 2,5 gram.

## Fraksinasi
Sebanyak  1,5  gram  ekstrak  kasar Didemnum molle dimasukkan kedalam erlenmeyer, kemudian dilarutkan dengan metanol  80%  sebanyak  100  mL.  Setelah  larut, dimasukan kedalam corong pisah dan ditambahkan  pelarut  n-heksan  sebanyak  100 mL.  Setelah  itu  dikocok  sampai  homogen. Dibiarkan hingga terbentuk lapisan metanol dan lapisan n-heksan. Masing-masing lapisan ditampung dalam wadah yang berbeda. Lapisan n-heksan  selanjutnya  dimasukkan  dalam  oven lalu  ditimbang  dan  diperoleh  ekstrak  fraksi  n- heksan sebanyak 0,095 gram.
Lapisan  metanol  ditambahkan  akuades 100  mL,  dipartisi  dengan  pelarut  kloroform dengan  perbandingan  1:1  v/v  dalam  corong pisah  dikocok  sampai  homogen.  Dibiarkan hingga  terbentuk  dua  lapisan  yaitu  lapisan metanol dan lapisan kloroform. Masing-masing lapisan  ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan  kloroform  selanjutnya  dimasukkan dalam  oven  hingga  kering  lalu  ditimbang  dan diperoleh  fraksi  kloroform  sebanyak  0,105 gram.    Lapisan  metanol  dimasukkan  kedalam oven  lalu  ditimbang  dan  diperoleh  fraksi
methanol  sebanyak  1,3  gram.  Ketiga  fraksi yang  diperoleh  digunakan  dalam  pengujian antimikroba  dan  dihitung  nilai  rendemen  dari masing-masing fraksi dengan persamaan:

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  gelas  yang  digunakan  dalam penelitian  aktivitas  antimikroba  ini  disterilkan terlebih  dahulu  dengan  menggunakan  autoklaf pada  suhu  121  ºC  selama  15  menit,  pinset dibakar  dengan  pembakaran  di  atas  api langsung dan media disterilkan di autoklaf pada suhu 121 ºC selama 15 menit (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Cair B1
Ditimbang Pepton 0,5 g, ekstrak daging 0,3  g  ( meat  extract )  ,  Natrium  klorida  0,3  g dilarutkan  dalam  metanol  sebanyak  100  mL menggunakan  Erlenmeyer,  dikocok  sampai homogen. Media yang telah homogen kemudian  disterilkan  dengan  menggunakan autoklaf  pada  suhu  121˚C  selama  15  menit.
Dipipet  1  mL  media  cair  B1,  kemudian masukkan  dalam  tabung  reaksi  dan  tutup dengan aluminium  foil .    Media  cair  B1  siap digunakan  sebagai  media  kultur  mikroba (Ortez, 2005).

## Kultur Mikroba
Masing  –  masing  mikroba  yang  sudah dikultur  ( Escherichia  coli , Staphylococcus aureus dan Candida  albicans )  ditambahkan media  cair  B1  yang  disiapkan  sebelumnya sebanyak  100  µL  kedalam  tabung  reaksi  yang berbeda-beda.  Masing-masing  tabung  reaksi ditutup dengan aluminium foil dan dimasukkan kedalam  inkubator  selama  1x24  jam  dengan suhu 37 o C.
Pembuatan  Kontrol  Positif  dan  Kontrol Negatif
Kontrol positif dalam pengujian aktivitas antimikroba ini menggunakan kloramfenikol paper disc. Kontrol  negatif  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  menggunakan metanol untuk menguji apakah pelarut metanol memberikan  pengaruh  terhadap  aktivitas  daya hambat,  dengan  cara  membuat  larutan  stok metanol  dengan  mengambil  sebanyak  200  μL metanol  kemudian  ditotolkan  pada  kertas cakram.  Kontrol  negatif  digunakan  sebagai pembanding.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan uji dibuat dengan cara melarutkan  ekstrak  etanol Didemnum  molle sebanyak  1  mg  ke  dalam  200  μL  metanol sehingga  menghasilkan  konsentrasi  larutan  uji sebesar  250  μg/50  μL.  Perlakuan  yang  sama dilakukan untuk fraksi n-heksan, fraksi kloroform dan fraksi metanol (Ortez , 2005).

## Pembuatan Media Agar B1
Pepton  0,5  g,  ekstrak  daging  ( meat extract )  0,3  g,  natrium  klorida  0,3  g, nutrient agar 1,5  g  dan  dilarutkan  dalam  akuades sebanyak  100  mL  menggunakan  Erlenmeyer, dikocok  sampai  homogen.    Media  yang  telah homogeny kemudian disterilkan dengan menggunakan autoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit. Media agar B1 siap digunakan untuk uji aktivitas antimikroba.

## Pengujian Aktivitas Antimikroba
Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini yaitu  metode  difusi  agar  (disc  diffusion  Kirby and Bauer). Pada pengujian aktivitas antimikroba  digunakan  kertas  cakram  yang berukuran 6 mm dengan daya serap 50 μL tiap cakram. Suspensi mikroba kemudian
diinokulasikan ke dalam media dan dihomogenkan.  Kemudian  media  yang  telah diinokulasi  mikroba  dituangkan  ke  dalam cawan  petri  sebanyak  100  mL  dan  ditunggu hingga  media  mengeras.  Sampel  yang  telah ditentukan  konsentrasinya  (250  μg/50  μL) ditotolkan  pada  masing-masing  cakram  dengan menggunakan mikropipet. Masing-masing cawan petri diberi label dan nomor sampel yang sesuai.  Kertas  cakram  yang  telah  ditotolkan sampel uji tunikata Didemnum molle diletakkan ke  dalam  cawan  petri  dengan  pinset  lalu diinkubasi selama 1 x 24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan dan Pengukuran Zona Bening
Pengamatan  dilakukan  setelah  24  jam masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran  cakram menunjukkan  kepekaan  mikroba  terhadap antibiotik atau  bahan  antimikroba yang digunakan  sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan dengan  diameter  zona  bening.  Diameter  zona bening  diukur  dalam  satuan  millimeter  (mm) menggunakkan  jangka  sorong  dengan  cara diukur  diameter  zona  bening  horizontal ditambahkan  dengan  diameter  zona  bening vertikal lalu dibagi dua. Kemudian zona bening yang  telah  diukur,  dibandingkan  berdasarkan pedoman Davis dan Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan Fraksinasi
Sampel  tunikata Didemnum  molle yang diambil  dari  perairan  Selat  Lembeh,  dipotong kecil-kecil. Sampel dipotong kecil-kecil bertujuan  untuk  memperbesar  ukuran  sampel karena  semakin  luas  permukaan  sampel  maka interaksi  antara  sampel  dan  pelarut  semakin besar  sehingga  proses  ekstraksi  berjalan optimal  (Ncube et  al ,  2008).  Setelah  di  potong kecil-kecil sampel di masukkan kedalam wadah dan diekstraksi menggunakan metode maserasi.
maserasi.  Tujuan  pemilihan  metode  maserasi karena  cara  pengerjaan  dan  peralatannya  yang sederhana, tidak dilakukan pemanasan sehingga dapat  mencegah  terjadinya  kerusakan  zat  aktif terhadap  panas  yang  berlebihan.  Metode maserasi sangat menguntungkan karena dengan perendaman sampel, terjadi pemecahan dinding sel  karena  adanya  perbedaan  tekanan  didalam dan  diluar  sel  sehingga  metabolit  sekunder dalam  sitoplasma  larut  dalam  pelarut  organik (Lenny, 2006).
Maserasi
dilakukan dengan menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Etanol dipilih  karena  selektif,  tidak  toksik,  ekonomis dan  kemampuan  penyariannya  yang  tinggi sehingga  dapat  menyari  senyawa  yang  bersifat non  polar  sampai  senyawa  yang  bersifat  polar. Proses  maserasi  dilakukan  3x24  jam  dengan dua  kali  remaserasi  atau  pergantian  pelarut yang baru. Remaserasi dilakukan dengan tujuan untuk  mendapatkan  penyarian  yang  maksimal (Khopkar,  2008).  Filtrat  yang  diperoleh diuapkan  menggunakan  oven  dengan  suhu 40°C sehingga didapat ekstrak etanol 2,5 gram.
Ekstrak  yang  diperoleh  dari  proses maserasi  selanjutnya  dilakukan  fraksinasi dengan menggunakan tiga pelarut yang berbeda berdasarkan  tingkat  kepolaran.  Pelarut  yang digunakan  yaitu  n-heksan,  kloroform  dan metanol.  Penggunaan  pelarut  n-heksan  untuk melarutkan  senyawa  yang  bersifat  non  polar, pelarut  kloroform  untuk  melarutkan  senyawa yang  bersifat  semi  polar  dan  pelarut  metanol untuk melarutkan senyawa yang bersifat polar. Tabel 2. Rendemen fraksi tunikata

## Didemnum molle
No.  Sampel  Berat (g) Rendemen (%) Warna 1. FH 0,095 6,33 Orange 2. FK 0,105 7,00 Hitam 3. FM 1,30 86,67 Putih
Keterangan: FH : Fraksi n-heksan FM : Fraksi metanol
FK : Fraksi kloroform
Pelarut  yang  berbeda  akan  melarutkan senyawa-senyawa yang berbeda karena masing- masing pelarut dapat secara selektif memisahkan  kelompok  kandungan  kimia  yang terkandung dalam sampel, sehingga didapatkan fraksi yang berbeda-beda. Hasil fraksinasi yang diperoleh,  fraksi  metanol  memiliki  rendemen yang  lebih  besar  dibandingkan  fraksi  n-heksan dan fraksi kloroform. Rendemen fraksi metanol yaitu  86,67%.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa terdapat  banyak  komponen  bioaktif  yang bersifat polar dalam tunikata Didemnum molle .
Uji
Aktivitas Antimikroba Tunikata Didemnum molle Pengujian aktivitas
antimikroba menggunakan metode difusi agar disc diffusion test. Metode  ini  dipilih  karena  mudah,  murah dan  tidak  memerlukan  alat  khusus.  Metode difusi  agar  adalah  metode  yang  dilakukan dengan  pengukuran  dan  pengamatan    diameter
zona  bening  yang  terbentuk  disekitar  cakram yang  berisi  antimikroba  yang  telah  diinokulasi mikroba.
Penggunaan  mikroba  bertujuan  untuk mengetahui  apakah  ekstrak  dan  fraksi  tunikata Didemnum molle memiliki aktivitas antimikroba,  dan  untuk  mengetahui  spektrum dari  aktivitas  antimikroba Didemnum  molle apakah  memiliki  spektrum  luas  yang  dapat menghambat  banyak  jenis  mikroba  yaitu bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif,  atau spektrum sempit yang hanya menghambat salah satu dari Gram positif atau negatif.
Dalam pengujian ini, hasil yang didapat yaitu  adanya  zona  hambat  disekeliling  cakram berukuran  6  mm  yang  ditandai  dengan  zona bening,  hal  ini  menunjukkan  adanya  kepekaan mikroba  terhadap  ekstrak  atau  fraksi  dari tunikata Didemnum molle . Pengamatan dilakukan  setelah  inkubasi  pada  suhu  37°C selama 1x24 jam dengan pengulangan sebanyak tiga  kali.  Dilakukan  pengulangan  untuk  lebih mengakuratkan hasil yang diperoleh.
Tabel  3.  Hasil  pengujian  ekstrak  dan  fraksi  tunikata Didemnum  molle terhadap  mikroba  uji Escherichia coli, Staphylococcus aureus dan Candida albicans. Diameter Zona Hambat (mm) Mikroba Ulangan EE FH FK FM K+ K- Escherichia coli 1 0 0 9,1 0 21 0 2 0 0 9,1 0 3 0 0 9,1 0 Rata-rata 0 0 9,1 0 Staphylococcus aureus 1 8,12 0 10 0 21,1 0 2 8,12 0 10 0 3 8,12 0 10 0 Rata-rata 8,12 0 10 0 Candida albicans 1 9 0 9,65 10 22,1 0 2 9 0 9,65 10 3 9 0 9,65 10 Rata-rata 9 0 9,65 10
Keterangan : EE : Ekstrak etanol FH : Fraksi n-heksan FK : Fraksi kloroform FM : Fraksi metanol K+ : Kontrol Positif K-
: Kontrol negatif
Dalam  pengujian  ini  digunakan  kontrol positif  dan  kontrol  negatif.  Kontrol  positif berfungsi  sebagai  kontrol  dari  zat  uji,  dengan membandingkan  diameter  daerah  hambat  yang terbentuk  (Dwijendra,  2014).  Kontrol  positif yang  digunakan  adalah  kloramfenikol  paper disc. Kloramfenikol memiliki aktivitas antimikroba yang lebih besar terhadap mikroba uji  dibandingkan  ekstrak  etanol,  fraksi  n- heksan,  fraksi  kloroform  dan  fraksi  metanol. Diameter zona hambat yang dihasilkan
kloramfenikol pada Escherichia coli,
Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans yaitu 21,10 mm, 21,00 mm dan 22,10 mm. Hal ini menunjukkan bahwa kloramfenikol
memiliki aktivitas antimikroba dengan spektrum luas yaitu  dapat menghambat pertumbuhan bakteri gram negatif, gram positif dan jamur (Pelczar dan Chan, 1988).
Kontrol negatif berfungsi untuk mengetahui  ada  tidaknya  pengaruh  pelarut terhadap  pertumbuhan  mikroba  uji Escherichia coli,  Staphylococcus  aureus, dan Candida albicans . Kontrol negatif yang digunakan yaitu metanol  karena  pelarut  yang  digunakan  untuk melarutkan larutan uji yaitu metanol. Dari hasil yang  diperoleh,  kontrol  negatif  tidak  memiliki daya  hambat  antimikroba  terhadap  ketiga mikroba  uji.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa aktivitas  yang  ditunjukkan  oleh  ekstrak  dan fraksi  tunkata Didemnum  molle ,  murni  dari senyawa yang ada dalam sampel dan bukan dari pelarut.
Dari hasil yang diperoleh, ekstrak etanol menunjukkan  adanya  zona  bening  pada Staphylococcus  aureus dikategorikan  sedang dengan  diameter  zona  hambat  8,12  mm  dan Candida albicans dikategorikan sedang dengan diameter  zona  hambat  9,00  mm,  sedangkan pada Escherichia  coli tidak  menunjukkan adanya  zona  bening.  Hal  ini  menunjukkan adanya  senyawa  aktif  yang  memiliki  aktivitas antimikroba  berspektrum  sempit  karena  hanya dapat  menghambat  pertumbuhan  salah  satu bakteri yaitu bakteri gram positif Staphylococcus  aureus dan  jamur Candida albicans ,  tidak  menghambat  pertumbuhan bakteri gram negatif Escherichia coli.
Pada  fraksi  kloroform,  menunjukkan adanya  zona  bening  pada Escherichia  coli, Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans. Masing-masing  dikategorikan  sedang  dengan diameter  zona  hambat  berturut-turut  9,10  mm, 10,00 mm, dan 9,65 mm. Hal ini menunjukkan adanya  senyawa  aktif  yang  memiliki  aktivitas antimikroba  berspektrum  luas  karena  dapat menghambat pertumbuhan bakteri gram negatif Escherichia coli , bakteri gram positif Staphylococcus  aureus dan  jamur Candida albicans.
Pada  fraksi  metanol,  menunjukkan adanya  zona  bening  pada Candida  albicans dikategorikan  sedang  dengan  diameter  zona hambat 10,00 mm, sedangkan pada Escherichia coli dan Staphylococcus aureus tidak menunjukkan  adanya  zona  bening.  Hal  ini menunjukkan  adanya  senyawa  aktif  yang memiliki  aktivitas  antimikroba  berspektrum sempit  karena  hanya  dapat  menghambat pertumbuhan jamur Candida albicans dan tidak menghambat  pertumbuhan  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus aureus.
Pada fraksi n-heksan tidak menunjukkan adanya  zona  bening  pada Escherichia  coli,
Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans .
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  senyawa  dari sampel  tunikata Didemnum  molle hanya bersifat  semi  polar  dan  polar  bukan  bersifat non-polar.
Dari  hasil  yang  diperoleh  pada  ekstrak etanol  dan  fraksi  kloroform  menunjukkan bahwa  bakteri Staphylococccus  aureus lebih sensitif  dibandingkan  bakteri Escherichia  coli .
Hal  ini disebabkan oleh perbedaan dinding sel, yaitu  bakteri  gram  positif  memiliki  dinding  sel yang  lebih  sederhana  sehingga  senyawa antimikroba  lebih  mudah  masuk  dalam  sel (Entjang, 2003).

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol  tunikata Didemnum  molle memiliki aktivitas  antimikroba  terhadap  pertumbuhan Staphylococcus  aureus dan Candida  albicans , sedangkan  fraksi  kloroform  memiliki  aktivitas antimikroba terhadap pertumbuhan Escherichia coli,  Staphylococcus  aureus dan Candida albicans , serta fraksi metanol memiliki aktivitas antimikroba  terhadap  pertumbuhan Candida albicans. Fraksi  n-heksan  tidak  memiliki aktivitas  antimikroba.  Ekstrak  etanol,  fraksi kloroform dan fraksi metanol memiliki aktivitas antimikroba dengan ketegori sedang.

## Saran
Dari hasil penelitian ini perlu dilakukan penelitian  lebih  lanjut  mengenai  senyawa  aktif yang  terkandung  dalam  tunikata Didemnum molle terlebih khusus pada fraksi kloroform.

## DAFTAR PUSTAKA
Abrar, M., Manuputty, A.E.W. 2008 .
Inventarisasi dan Sebaran Biota
Ascidian  di  Terumbu  Karang  Perairan Berau,  Kalimantan  Timur:  Oseanologi dan  Lirnnologi  di  Indonesia .  Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia, Jakarta.
Ali,  H.A.J.,  Tamiselvi,  M.  2016. Ascidians  in
Coastel Water: A Comprehensif
Inventory  of  Ascidian  Fauna  from  the Indian  Cost .  Springer  International Publishing, Switzerland.
Allen,  G.  1996. Marine  Life  of  Southeast  Asia and Pasific . Mary Chia, Singapore.
Aulia,  U.M.  2011.  Eksplorasi  dan  Fungsi Senyawa  Bioaktif  Ascidian  Didemnum molle  sebagai  Antifouling.  [ Skripsi ]. Institut Pertanian Bogor.
Chan,  S.T.S.,  Pearce,  A.N.,  Januario,  A.H.,
Page,  M.J.,  Kaiser,  M.,  McLaughlin, R.J.,  Harper,  J.L.,  Webb,  V.L.,  Barker, D., Copp,  B.R. 2011. Antiinflammatory and  Antimalarial  Meroterpenoids  from the New Zealand. J. Org. Chem . 76(21):
9151-6.
Davis,  W.  W.,  Stout,  T.R.  1971.  Disc  Plate Methods  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Journal  Microbiology. 22(4) : 659-665.
Donia,  M.S.,  Wang,  B.,  Dunbar,  D.C.,  Densai, P.V.,  Patny,  A.,  Avery,  M.,  Hamann, M.T. 2008. Mollamides B and C, Cyclic Hexapeptides  from  the  Indonesian Tunicate  Didemnum  molle .  Jurnal Natural Product . 71(6) : 941-945.
Dwijendra,  I.,  Wewengkang,  D.S.,  Frenly,  W. 2014. Aktivitas Antimikroba dan Karakterisasi Senyawa Fraksi Lamellodysidea herbacea yang
Diperoleh  dari  Teluk  Manado. Jurnal Ilmiah Farmasi. 3(4) : 1-2.
Entjang, I. 2003. Mikrobiologi dan Parasitologi untuk  Akademi  Keperawatan .  PT  Citra
Aditya Bhakti, Bandung.
Kawung,  N.J.,  Mangindaan,  R.E.P.,  Rompas,
R.M.,  Chasanah,  E.,  Kapoyos,  M., Abdjul,  B.,  Januar,  H.I.,  Fajarningsih, D.,  Sumagando,  A.  2017.  Cytotoxic Anticancer from New Compound Unsrat-sinularine of Soft Coral Sinularia sp.  from  Bunaken  Island,  Manado, Indonesia. Int.  J.  Drug.  Dev  &  Res . 9(3): 1-4.
Khopkar,  S.M.  2008. Konsep  Dasar  Kimia Analitik . UI Press, Jakarta.
Kiran,  N.,  Siddiqui,  G.,  Khan,  A.N.,  Ibrar,  K., Tushar, P. 2014. Extraction and Screening of Bioactive Compounds with Antimicrobial  Properties  from  Selected Species  of  Mollusk  and  Crustacean. J. Clin. Cell. Immunol. 5(1) : 1-5.
Lenny, S. 2006. Senyawa Flavonoida, Fenilpropanoida dan Alkaloida . FMIPA Universitas Sumatera Utara, Medan.
Li, J.L., Xiao, B., Park, M., Yoo, E.S., Shin, S., Hong, J., Chung, H.Y., Kim, H.S., Jung, J.H. 2012. PPAR-γ agonistic metabolites from the ascidian Herdmania  momus. Jurnal  Natural
Product . 75(12) : 2082-2087.
Ncube,  N.S.,  Afolayan,  A.J.,  Okoh,  A.I.  2008.
Assesement Techniques of Antimicrobial  Properties  of  Natural Compounds  of  Plant  Origin:  Current
Methods  and  Future  Trends. Africa Journal of Biotechnology. 7(12) : 30-32.
Ngantung,  A.E.C.,  Bara,  R.A.,  Sumilat,  D.A.
2016.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  dari
Spons Dictyonella funicularis dan Phyllospongia  lamellosa  yang  diambil pada  Perairan  Bunaken .  Jurnal  Pesisir dan Laut Tropis . 2(1) : 10-16.
Oretz,  J.  H.  2005.  Disk  Diffusion  testing  in manual  of  antimicrobial  susceptibility testing.  Marie  B.  coyle.  American society for microbiology, Amerika.
Pelczar,  M.,  Chan,  E.C.S.  1988. Dasar-Dasar Mikrobiologi  2 .  Universitas  Indonesia,
Jakarta. Rumengan,  A.P.  2010.  Uji  Larvasida  Nyamuk (Aedes aegypti) dari
Ascidian
( Didemnum  molle ). Jurnal  Perikanan dan Kelautan . 6(2) :8386.
Sima,  P.  dan  Vetvicka,  V.  2011.  Bioactive substances  with  anti-neoplastic  efficacy from  marine  invertebrates:  Bryozoa,
Mollusca, Echinodermata and Urochordata. World.  J.  Clin.  Oncol . 2(11) :362-366.
Thakur,  N.  L.,  and  Muller,  W.  E.  G.  2004.
Biotechnological  Potential  of  Marine Sponges. Jurnal Current Science .
86 :1506-1512.
Waluyo,  L.  2005. Mikrobiologi  Umum . Penerbit  Universitas  Muhammadiyah Press, Malang.
Wang,  W.,  Nam,  S.J.,  Lee,  B.C.,  Kang,  H. 2008.  Beta-carboline  alkaloids  from  a Korean  tunicate  Eudistoma  sp.. Jurnal Natural Product . 71(2) :163-6.
Wewengkang,  D.S.,  Sumilat,  D.A.,  Rotinsulu, H.  2014.  Sitotoksitas  Ekstrak  Kasar Ascidian  dari  Pulau  Bunaken. Jurnal LPPM  Bidang  Sains  dan  Teknologi .
1(1) :86-89.