The Potential Of Red Roses Extract ( Rosa Damascena Mill) As An Antiseptic Stomatitis In Snakes (Python Reticulatus) On The Total Number Leukocyte And Defferential Counting Of Leukocytes
Novi Setyaningrum 1 , Dian Ayu Kartika Sari 2 Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Wijaya Kusuma Surabaya 1 Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Wijaya Kusuma Surabaya 2

## ABSTRACT
This study aimed to determine the effect of red roses extracts (Rosa damascena Mill) as an antiseptic stomatitis  in  snakes  (Python  reticulatus)  on  the  total  number  leukocyte  and  defferential  counting  of leukocytes. Male snakes with an average weights 200 grams, length of ± 1 to 1.3 m, and derived from same  parent,  were  used  as  experimental  animals  in  the  study.  Statistical  analysis  method  using ANOVA  with  five  treatments  and  four  repetitions  were  continued  using  HSD  test  if  there  were significant  differences  found  in  the  study.  The  unhomogenous  data  processed  by  ANOVA  were continuously processed using Kruskal Wallis test. The  treatment groups consisted of the P0 (control +), the P1 (stomatitis control), the P2, P3, P4 (stomatitis treatment). P0 and P1 groups were given placebo  the  P2,  P3,  P4  each  got  a  red  rose  flower  extract  12,5%,  25%,  50%.  Respectively medications  were  given  topically,  once  a  day,  for  two  weeks.  Blood  sampling  was  performed  after treatment, respectively counting number and type of leukocytes. Data were analyzed by ANOVA and Kruskal  Wallis.  Result  showed  there  were  no  significant  differences  in  leukocytes  and  all  type  of leukocytes cells, namely: heterophile, eosinophils, basophils, lymphocytes, and monocytes.
Key word : leukocyte, Python reticulatus, Rosa damascena Mill, Stomatitis.

## PENDAHULUAN
Ular (Python  reticulatus) termasuk golongan  reptil  yang  saat  ini  banyak dipelihara sebagai hewan peliharaan. Kurangnya pengetahuan tentang cara memelihara hewan yang satu ini mengakibatkan  seringnya  timbul  masalah kesehatan  seperti  stomatitis  atau mouth-rot. Stomatitis  atau mouth-rot merupakan  gejala infeksi sistemik pada reptil sehingga menyebabkan  septikemia.  Jika  dibiarkan tidak diobati akan menyebabkan kerontokkan gigi  dan  kerusakan  pada  tulang  rahang (Jacobson, 2007).
Pengobatan modern ternyata mengandung bahan-bahan bersifat sitotoksik,
yang dapat merusak jaringan normal bersamaan  dengan  jaringan  yang  terluka, sehingga  diperlukan  tanaman  herbal.  Salah satu  tanaman  herbal  yang  mempunyai  sifat antiseptik  adalah  bunga  mawar  merah (Rosa damascena Mill ) (Wijayakusuma, 2008).
Penelitian  ini  mengamati  pengaruh ekstrak bunga mawar merah ( Rosa damascena Mill) sebagai antiseptik
stomatitis  pada  ular (Python  reticulatus) terhadap  gambaran  jumlah  dan  hitung  jenis leukosit.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  dilaksanakan  mulai  bulan Februari  2012  sampai  Mei  2012.  Penelitian dilaksanakan  di  Laboratorium  Patologi  dan Laboratorium Patologi Klinik Fakultas
Kedokteran Hewan Unair serta Laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi Unair Surabaya.
Bahan  penelitian  yang  digunakan adalah Hewan coba ular (Python reticulatus) dengan  jenis  kelamin  jantan,  berat  badan rata-rata  200-300  gram,  dan  panjang  ±  1-1,3 m;  bunga  mawar  merah  ( Rosa  damascena Mill); Metil Cellulosa (CMC) 0,5%; aquabides;  EDTA, alcohol;  Rees  Ecker;  dan Giemsa
Alat  penelitian  yang  digunakan adalah  10  unit  kandang  ular  dilengkapi dengan  tempat  minum,  mortir,  timbangan analitis,  sendok  plastik,  gelas  ukur, cotton bud , pinset, spuit 5 ml, spuit tuberkulin 1 ml, needle ,  tabung  darah, glove, masker,  pipet leukosit  dari  thoma,  kamar  hitung improved neubauer , blood  cell  counter,  object  glass, cover glass dan mikroskop.
Pembuatan Ekstrak Bunga Mawar Merah ( Rosa damascena Mill)
Bunga  mawar  merah  ditimbang seberat  500  gram  kemudian  bunga  mawar merah  digiling  hingga  hancur,  lalu  hasil gilingan  dimasukkan  ke  dalam  toples  dan direndam  dalam  etanol  96%.  Perendaman dalam etanol 96% dilakukan selama tiga hari dan  tiap  hari  dilakukan  penyaringan  serta penggantian  etanol  96%.  Proses  berikutnya adalah ekstrak etanol 96% dipekatkan dalam penguap  putar  (Rotary  Vacuum  Evaporator) pada  suhu  30 C  -  40 C,  tujuannya  adalah untuk memisahkan etanol 96% dari senyawa yang  telah  berhasil  ditariknya  (Harborne, 1987).

## Pembuatan Stomatitis Kronis pada ular (Python reticulatus)
Mula-mula ular diadaptasikan dahulu di kandang dan diberi pakan yang disediakan selama  satu  minggu  agar  ular  tersebut  dapat beradaptasi dengan lingkungannya.
Manipulasi  stomatitis  dilakukan  dengan metode sebagai berikut :
1. Membuat luka goresan pada mukosa mulut pada  bagian pallatum  molle hingga  mukosa bibir sepanjang 0,5 cm.
2. Menutup mulut ular dengan isolasi dengan tujuan  menciptakan  suasana  anaerob  pada rongga mulut. Selanjutnya dipelihara didalam kandang  tanpa  dibersihkan  dan  diletakkan pada  tempat  yang  gelap.  Perlakuaan  ini diberikan  selama  2  minggu,  dan  dieavaluasi untuk memastikan terjadinya stomatitis.
Perlakuan Terapi pada Ular (Python reticulatus)
Terapi  dilakukan  secara  topikal dengan perlakuan masing-masing ular sebagai berikut :
P0 : Ular sehat + placebo (kontrol) P1 : Ular dengan stomatitis kronis + placebo P2  :  Ular  dengan  stomatitis  kronis  +  ekstrak bunga mawar merah 12,5 %
P3  :  Ular  dengan  stomatitis  kronis  +  ekstrak bunga mawar merah 25 %
P4  :  Ular  dengan  stomatitis  kronis  +  ekstrak bunga mawar merah 50 %
Pengobatan  diberikan  topikal,  satu  hari sekali, selama dua minggu.
Pada penelitian ini digunakan Rancangan  Acak  Lengkap  dengan  lima macam perlakuan dan empat macam ulangan. Data  yang  diperoleh  disusun  dalam  satu
tabel,  selanjutnya  dilakukan  uji  ANOVA, bila terdapat perbedaan yang nyata dilanjutkan  dengan  uji  Beda  Nyata  Jujur (BNJ) (Kusriningrum, 2008). Data yang telah diolah  dengan  ANOVA,  apabila  hasilnya tidak  homogen  perlu  diolah  sacara  Kruskal Wallis.  Seluruh  proses  analisis  tersebut dikerjakan  dengan  program  SPSS  13 for Windows.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Bunga mawar merah (Rosa
damascena Mill ) diyakini  berkhasiat  dalam penyembuhan luka karena memiliki kandungan limonene. Senyawa  ini  selain berpotensi  sebagai  antiseptik,  juga  memiliki efek  vasokonstriksi  pada  kapiler  (Rukmana, 1995) . Vasokonstriksi pembuluh darah merupakan  tahapan  awal  yang  penting  pada proses  penyembuhan  luka  dan  merupakan respon  fisiologis  yang  bertujuan  untuk menghentikan  perdarahan  (Mc  Gavin  and Zachary, 2007).
Khasiat  vasokonstriktor  pembuluh darah  dan  kandungan  senyawa limonene yang berperan sebagai antiseptik, merupakan kombinasi  yang  sinergik  dan  ampuh  dalam menekan  perkembangan  bakteri  (Legowo dkk,  2012).  Mekanisme  kerja  antiseptik terhadap mikroorganisme berbeda-beda, misalnya saja dengan mendehidrasi (mengeringkan)  bakteri,  mengoksidasi  sel bakteri,  mengkoagulasi  (menggumpalkan) cairan  di  sekitar  bakteri,  atau  meracuni  sel bakteri (Antika, 2011).
Tabel 1 . Rata-rata persentase dan Standar Deviasi (SD) Jumlah leukosit pasca perlakuan
Perlakuan ± SD P0 44113 ± 5151a P1 38100 ± 7548a P2 40650 ± 5479a P3 46500 ± 2469a P4 44200 ± 1937a
Keterangan : Superskrip yang berbeda pada kolom yang sama menunjukkan perbedaan nyata (p<0,05)
Berdasarkan  hasil  penelitian  pada tabel  diatas,  pengaruh  pemberian  ekstrak bunga  mawar  merah (Rosa  damascena Mill ) terhadap  dalam  jumlah  leukosit  ular (Python reticulatus) tidak didapatkan perbedaan yang nyata.  Hasil  ini  diakibatkan  karena  reaksi
radang  atau  inflamasi  yang  terjadi  pada mukosa mulut dan proses penyerapan ekstrak bunga  mawar  merah (Rosa  damascena Mill ) secara topikal memberikan pengaruh penyembuhan pada stomatitis.
Pengaruh  pemberian  terapi  ekstrak bunga  mawar  merah (Rosa  damascena Mill ) juga  berpengaruh  menyembuhkan  stomatitis apabila  diperiksa  secara  histopatologis  pada mukosa mulut ular dengan pemberian ekstrak bunga  mawar  merah  dengan  dosis  25%, karena dosis 25% ekstrak  mawar  merupakan dosis  optimal  karena  terbukti  efektif  dalam mereduksi  perkembangan  bakteri  pada  luka sehingga  merangsang  proses  penyembuhan (Legowo dkk, 2012).
Pada  P0  (kontrol  sehat  diterapi dengan  placebo)  dan  P1  (kontrol  stomatitis diterapi  dengan  placebo)  tidak  terdapat perbedaan  yang  nyata.  Hasil  ini  terjadi karena  kemungkinan  pada  hewan  coba  P1 peradangan  mulai  berhenti  karena  antibodi yang telah dibentuk pada tubuhnya sendiri.
Terapi  topikal  merupakan  metode yang  nyaman  dan  aman.  Keuntungan utamanya  adalah  dapat  memintas  jalur metabolisme obat pertama ( first-pass metabolism ) di hati. Terapi topikal juga dapat menghindari  risiko  dan  ketidaknyamanan seperti  pada  terapi  yang  diberikan  secara intravena, serta berbagai hal yang mempengaruhi  penyerapan  obat  pada  terapi peroral,  misalnya  perubahan  pH,  aktivitas enzim,  dan  pengosongan  lambung  (Asmara dkk, 2012).
Ada beberapa metode yang digunakan  untuk  menghitung  jumlah  total leukosit  (WBC)  pada  reptil,  karena  adanya eritrosit  berinti  dan  trombosit.  Metode tersebut  antara  lain:  metode Natt  and Herrick , metode Rees Eckers, metode dengan larutan  Ammonium  Oksalat,  dan  metode semidirect  menggunakan  larutan  phloxine (Waters,  2012).  Jumlah  leukosit  akan menurun  selama  hibernasi  dan  meningkat karena  adanya  peradangan,  infeksi  dan neoplasia haemopoietik (Waters, 2012).
Penghitungan  jumlah  sel  leukosit menurut  metode Natt  and  Herrick berbeda dengan  metode  Rees  Eckers.  Salah  satunya yang  membedakan  adalah  pengenceran  dan rumus penghitungan jumlah total leukositnya.  Pada  metode  Rees  Eckers perbandingan  pengencerannya  1:20  dengan rumus  jumlah  total  leukositnya  (N)  x  50  =
Jumlah  leukosit  per  μl  darah  (Bijanti  dkk, 2010).  Menurut  Bijanti  (2013)  pada  metode
Natt and Herrick perbandingan pengencerannya 1:200 dengan rumus jumlah total leukosit per μl darah adalah:
Total leukosit di 9 bidang besar + (10% jumlah total leukosit) X 200
Lima jenis sel leukosit yang diidentifikasi  dalam  darah  perifer  ular (Python reticulatus) adalah heterofil, eosinofil, basofil, limfosit dan monosit.
Jumlah  heterofil  dan  eosinofil  tidak menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  antara kelompok perlakuan dengan kelompok kontrol. Menurut Waters (2012) peningkatan yang  signifikan  dalam  jumlah  heterofil  akan terjadi  apabila  adanya  inflamasi  karena infeksi  parasit  dan  mikroba.  Peningkatan jumlah  heterofil  juga  dapat  terjadi  dengan adanya reaksi non-inflamasi seperti stres.
Menurut  Jacobson  (2007),  Ular mengalami kesulitan dalam menjaga keseimbangan  tubuhnya  apabila  terkena stres.  Stres  pada  ular  biasanya  diakibatkan oleh perlakuan dan faktor lingkungan seperti: adanya  getaran,  temperatur  yang  berubah- ubah,  perpindahan  kandang,  dan  birahi. Kegagalan  dalam  menjaga  stabilitas  kondisi tubuh  inilah  yang  mengakibatkan  penurunan sistem kekebalan tubuh ular.
Selama terjadinya stres, hormon yang berasal  dari  hipothalamus  ikut  berperan. Hipothalamus  mensekresikan Corticotropin Realising  Faktor (CRF)  ke  hipofisa anterior. Selanjutnya  hipofisa  anterior  mensintesa Adrenocorticotropin  Hormon (ACTH)  dan kemudian  disekresikan  ke  seluruh  pembuluh darah.  Adaptasi  fisiologi  tubuh  ular  selama stres  dicirikan  oleh  meningkatnya  hormon ACTH.  Kortex  adrenal  akan  terangsang mensekresikan  corticosteroid  yang  akan mempengaruhi membran sel-sel hati. Selama stres,  jumlah  ACTH  yang  disekresikan  oleh hipofisa  anterior  melebihi  jumlah  ACTH yang diperlukan untuk menimbulkan pengeluaran  glukokortikoid  (Davis, et  all. , 2008).
Jumlah  basofil  tidak  menunjukkan perbedaan  yang  nyata  antara  kelompok perlakuan  dengan  kelompok  kontrol.  Hal  ini dapat dijelaskan berdasarkan pendapat Bijanti  dkk  (2010),  bahwa  basofil  jarang sekali  ditemukan  dalam  darah  kebanyakan
hewan  secara normal. Waters (2012) melaporkan  bahwa  jumlah  basofil  tidak dipengaruhi oleh faktor musiman dan basofil akan  terlihat  meningkat  apabila  adanya infeksi parasit.
Limfosit,  terlibat  dalam  berbagai fungsi imunologi seperti produksi imunoglobulin  dan  kekebalan  tubuh  (Davis.,
et all , 2008). Jumlah limfosit sangat variabel dan  dipengaruhi  oleh  faktor  fisiologis, termasuk spesies, usia (reptil muda cenderung  memiliki  angka  sedikit  lebih tinggi),  jenis  kelamin  (reptil  betina  dari beberapa  spesies  memiliki  jumlah  limfosit lebih  tinggi  dari  reptil  jantan),  musim (umumnya jumlah terendah di musim dingin dan tertinggi di musim panas) dan peningkatan ecdysis .  Penurunan  jumlah limfosit dapat terjadi dengan adanya malnutrisi  dan  beberapa  infeksi  virus  akut (Waters,  2012).  Monosit  umumnya  terjadi dalam  jumlah  yang  rendah  dalam  darah perifer  reptil  paling  dan  umumnya  berkisar antara  0%  dan  3%  .  Fungsi  utama  monosit memfagosit  partikel  besar  dan  umumnya terdapat  dalam  jumlah  yang  rendah  dalam darah perifer reptil (Waters, 2012).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  telah  diteliti, maka dapat disimpulkan :
Pemberian  ekstrak  bunga  mawar merah (Rosa  damascena Mill ) terhadap jumlah  dan  hitung  jenis  leukosit  mampu memyembuhkan stomatitis pada ular (Python reticulatus).

## DAFTAR PUSTAKA
Antika, L.T. 2011. Uji daya antimikroba dari antiseptik. http://linda-
haffandi.blogspot.com/2011/ 11/uji-daya-antimikroba- dari-aseptik.html. [23 Februari 2013] Asmara, A., S.F Daili., T. Noegrohowati., Ida Zubaedah.  2012.  Vehikulum dalam Dermatoterapi Topikal. FK Universitas
Indonesia  dan  RS.  dr.  Cipto
Mangunkusumo Jakarta Vol.39, No.1. Bijanti R, M.G.A Yuliani, R.S Wahjuni, R.B Utomo.  2010.  Buku  Ajar
Patologi  Klinik  Veteriner, Edisi  Pertama.  Surabaya: Airlangga University Press.
Bijanti  R.  2013.  Hematologi  Reptil  (Teknik Pengambilan Darah dan Pemeriksaan Hematologi Reptil). Laboratorium Patologi  Klinik  Veteriner, Departemen Kedokteran Dasar  Fakultas  Kedokteran Hewan Universitas Airlangga.
Davis,  A.K.,  D.  L.  Maney.,  J.  C.  Maerz.
2008. The  use  of  leukocyte profiles  to  measure  stress  in vertebrates:  a  review  for ecologists . Journal compilation  ©  2008  British Ecological Society, Functional Ecology, 22, 760– 772. Harborne,  J.B.  1987.  Metode  Fitokimia. Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan. Penerbit ITB. Bandung. Jacobson,  E.  R.  2007. Infectious  Diseases and  Pathology  of  Reptiles .
United  State  of  America: CRC Press Taylor & Francis Group. Kusriningrum. 2008. Perancangan Percobaan. Airlangga University Press. Surabaya. Legowo, D., N. Setyaningrum., F.D
Prabayuda.,  R.M  Safitrianti., W.S Safitri. 2012. Efektifitas Ekstrak Bunga Mawar Merah ( Rosa damascena Mill) sebagai  Antiseptik  terhadap Pengobatan Stomatitis Kronis  pada  Ular  Python ( Python reticulatus ). Veterinaria  Medika  Fakultas Kedokteran Hewan Universitas  Airlangga  Vol  5, No.2. Mc  Gavin  and  Zachary.  2007. Pathologic Basis  Veterinary  Disease .
Missouri: Mosby Elseiver.
Rukmana,  R.  1995.  Mawar.  Yogyakarta: Kanisius.
Waters,  M.  2012. Reptile  Hematology . Department of Pathology and Infectious  Diseases.  Royal Veterinary College, University of London. Wijayakusuma,  H.  M.  H.  2008.  Ramuan Lengkap  Herbal  Taklukkan
Penyakit.  Jakarta:  Pustaka Bunda.