Waktu Optimum Hidrolisis Pati Limbah Hasil Olahan Ubi Kayu ( Manihot esculenta Crantz var. Lahumbu) Menjadi Gula Cair  Menggunakan Enzim α-Amilase Dan Glukoamilase
Optimum Time Waste Processed Starch Hydrolysis of Cassava ( Manihot esculenta Crantz var. Lahumbu) Into Liquid Sugar Using Enzymes α-Amylase And Glucoamylase

## Ardiansyah, Nurlansi, Rustam Musta*
Department of Chemistry Education Faculty of Teacher Training and Education University of Halu Oleo Kampus Bumi Tridarma; Anduonohu Kendari-South East Sulawesi - Indonesia
*Corresponding author, e-mail: rustam@gmail.com
Received: Dec. 2017 Published: Jan. 2018

## ABSTRACT
This  study  aims  to  determine  optimum  time  of  action  of  the  enzyme  α-amylase  and  glucoamylase  needed  in hydrolyze of starch from waste processed cassava (Manihot esculenta Crantz var. Lahumbu). This research was conducted through three  main  stages,  namely  the  gelatinization,  liquefaction  and  saccharification.  The  method was used method are liquefaction and  saccharification. The variation time of the stage liquefaction: 12; 24; 36; 48; 60; and 72 minutes and the saccharification stage are: 9; 18; 27; 36; 45; 54; and 63 hours. The results showed that the optimum time required for stage liquefaction using α-amylase enzyme is 48 minutes on the condition of a temperature of 80 o C with a value of 0.09% amylose levels were measured using UV-Vis spectrophotometer. The optimum time required for saccharification step using a glucoamylase which is 54 hours on the conditions of a temperature of 50 o C with the amount of reducing sugar concentration of 9.186 g/L as measured using a UV- Vis spectrophotometer.
Keywords : Waste cassava starch hydrolysis, α-amylase and glucoamylase, liquid sugar .

## PENDAHULUAN
Kebutuhan  paling  mendasar  bagi  sumber daya  manusia  suatu  bangsa  adalah  pangan. Ketersediaan  pangan  dalam  jumlah  dan  kualitas yang  cukup,  sangat  diperlukan  untuk  mencapai ketahanan  pangan.  Namun  sampai  saat  ini, permasalahan  pangan  masih  menjadi problem yang sangat kompleks dalam kehidupan manusia.  Penyebab  dari  permasalahan  pangan tersebut diantaranya yaitu kurangnya ketersediaan  bahan-bahan  pangan,  perbedaan kemampuan  ekonomi  masyarakat,  dan  juga sering  gagalnya  panen  akibat  iklim  yang  tidak menentu.  Berbagai  macam  cara  dilakukan  oleh pemerintah  dalam  upaya  memenuhi  kebutuhan bahan  pangan,  seperti  penggunaan  bibit  unggul hingga  perluasan  lahan  produksi.  Namun,  jika produksi  bahan  pangan  dalam  negeri  tidak mencukupi  kebutuhan  pangan  nasional,  maka impor menjadi jalan terakhir (Azis et al. , 2014). Indonesia  masih  bergantung  pada  impor untuk  5  bahan  pokok,  yaitu  beras,  jagung, kedelai,  tepung  terigu  dan  gula.  Produksi  gula dalam  negeri  masih  belum  mampu  memenuhi
kebutuhan  gula  nasional.  Kebutuhan  gula nasional  tahun  2014  mencapai  5,7  juta  ton  yang terdiri dari 2,8 juta ton untuk konsumsi langsung masyarakat,  dan  2,9  juta  ton  untuk  memenuhi kebutuhan industri. Banyak produsen gula masih mengeluhkan  biaya  produksi  yang  mahal  dan hasilnya  belum  mampu  bersaing  dengan  gula impor,  baik  dalam  kualitas  maupun  kuantitas (Azis et al. , 2014).
Menurut  Richana  (2006),  upaya  yang dilakukan  untuk  mengurangi  impor  gula  yaitu dengan  cara  terus  meningkatkan  produksi  gula dalam  negeri.  Disamping  itu,  mencari  alternatif bahan  pemanis  lain  sebagai  subtitusi  gula.  Gula alternatif yang sekarang sudah digunakan adalah gula  dari  pati,  seperti  sirup  glukosa  yang  salah satunya  dihasilkan  dari  tanaman  ubi  kayu.  Sirup glukosa  atau  gula  cair  yang  dihasilkan  dari  pati mempunyai  rasa  dan  kemanisan  yang  hampir sama  dengan  gula  sukrosa  atau  gula  tebu.  Sirup glukosa  mempunyai  prospek  paling  menjanjikan dalam  mensubtitusi  gula  pasir,  terutama  untuk kebutuhan industri minuman ringan ( Soft Drink ). Selain  itu,  sirup  glukosa  dapat  dibuat  dengan
teknologi  sederhana  yang  ada  di  pedesaan, sehingga  masyarakat  dapat  menggunakan  sirup glukosa  sebagai  pemanis  pada  jajanan  dan minuman,  dari  pada  menggunakan  pemanis buatan lain yang tidak sehat.  Jika semua industri sirup,  minuman  ringan,  permen,  biskuit,  dan  jeli menggunakan  sirup  glukosa,  maka  kebutuhan gula  pasir  tentu  akan  berkurang  dan  tidak  perlu impor gula.
Salah satu tanaman yang banyak mengandung  pati  adalah  ubi  kayu.  Bagi masyarakat  Sulawesi  Tenggara,  khususnya masyarakat  Muna,  Buton,  dan  Wakatobi,  ubi kayu  dijadikan  sebagai  sumber  karbohidrat pengganti  beras.  Selain  dapat  direbus,  ubi  kayu dapat diolah menjadi kaopi atau tepung ubi kayu segar  dan  nantinya    dibuat  menjadi  salah  satu makanan  khas  yang  di  sebut kasoami (Ma’suf, 2013).  Jenis  ubi  kayu  yang  umum  digunakan dalam  pambuatan kaopi adalah  varietas  lokal yang dikenal dengan nama “Lahumbu”. Jenis ubi kayu ini tidak dapat direbus karena rasanya yang agak pahit.
Limbah  cair  dari  proses  pembuatan kaopi ini, tidak di manfaatkan dan dibuang begitu saja. Sementara  itu,  limbah  cair  ini  masih  banyak mengandung sari pati. Jika dibiarkan begitu saja, limbah  cair  tersebut  dapat  menimbulkan  bau yang  tidak  sedap  dan  menyengat.  Jika  limbah cair  tersebut  di  tampung,  maka  dapat  diperoleh suatu  endapan  pati  yang  nantinya  dapat digunakan sebagai bahan dasar dalam pembuatan gula  cair  (sirup  glukosa).    Gula  cair  (sirup glukosa) dapat dibuat dengan cara hidrolisis  pati menggunakan enzim α-amilase dan glukoamilase (Chandra et  al. ,  2013).  Faktor-faktor  yang  dapat mempengaruhi  proses  hidrolisis  pati  secara enzimatis  yaitu  konsentrasi  substrat,  konsentrasi enzim,  suhu,  pH,  dan  lama  proses  hidrolisis. Hidrolisis  pati  menjadi  sirup  glukosa  dilakukan melalui  3  tahapan,  yaitu  gelatinisasi,  likuifikasi, dan sakarifikasi (Rahmawati, 2015).
Tahap  gelatinisasi  merupakan  tahap  awal yang  dilakukan  dengan  cara  memanaskan campuran  pati  dan  air  (suspensi  pati)  hingga terjadi  perubahan  bentuk  menjadi  kental.  Tahap selanjutnya  yaitu  likuifikasi  merupakan  proses hidrolisis  pati  menjadi  molekul-molekul  yang lebih  kecil  seperti  maltosa,  glukosa  dan  dekstrin dengan  bantuan  enzim  α-amilase.  Waktu  reaksi yang  diperlukan  untuk  mengubah  pati  menjadi dekstrin  dengan  bantuan    enzim  α-amilase  yaitu
sekitar  60-180  menit.  Tahap  Sakarifikasi merupakan  tahap  hidrolisis  lanjutan  dari  tahap likuifikasi dengan menggunakan enzim glukoamilase.  Waktu  reaksi  yang  diperlukan untuk  mengubah  dekstrin  menjadi  glukosa dengan bantuan enzim glukoamilase yaitu sekitar 48-96  jam  (Rahmawati,  2015).  Waktu  reaksi merupakan salah satu faktor yang mempengaruhi kerja  enzim  dalam  proses  hidrolisis  pati. Semakin  lama  waktu  reaksi,  maka  kerja  enzim pula  akan  semakin  optimum.  Namun  setelah mencapai titik optimum, maka  kerja enzim  akan menurun.  Oleh  karena  itu,  penentuan  waktu optimum reaksi enzimatis sangat penting, karena hasilnya  dapat  dijadikan  sebagai  parameter dalam pembuatan gula cair (Murtiaz, 2015).
Menurut Amin (2006) pengolahan  ubi kayu menjadi  beberapa  produk  olahan  merupakan upaya untuk mendukung program ketahanan dan diverifikasi  pangan  serta  menjadi  salah  satu solusi  masalah  ketergantungan  dan  kelangkaan suatu  bahan  pokok.  Pengolahan  limbah  cair  ubi kayu  menjadi  gula  cair  merupakan  langkah strategis  dan  ekonomis  bagi  pengembangan  ubi kayu  menjadi  berbagai  macam  produk  olahan. Selain    itu,    hal  ini  juga  merupakan  salah  satu bentuk pemanfaatan ubi kayu yang lebih optimal dan  sekaligus sebagai usaha  mengurangi pencemaran lingkungan.
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas  telah dilakukan  penelitian  tentang  waktu  optimum hidrolisis  pati  limbah  hasil  olahan  ubi  kayu ( Manihot  esculenta Crantz  var.  Lahumbu) menjadi gula cair menggunakan enzim α-amilase dan glukoamilase.

## METODOLOGI

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  ubi  kayu ( Manihot esculenta Crantz var. Lahumbu), enzim α-amilase,  enzim  glukoamilase,  larutan  iod  (I 2 dan KI), amilosa murni, etanol 95%, NaOH 1 M, CH 3 COOH  1  M,  Pereaksi  Nelson-Somogy, larutan  Arsenomolibdat,  larutan  Luff  Schrool, arang aktif, dan aquades.

## Alat
Peralatan  yang  digunakan  yaitu  alat-alat gelas  (tabung  reaksi,  gelas  beaker, Erlenmeyer , labu  takar,  buret,  gelas  ukur,  pipet  tetes,  pipet volume), penangas listrik, spektrofotometer UV-
Ardiansyah dkk. / Indo. J. Chem. Res. , 2018, 5(2), 86-95
Vis,  neraca  analitik, Hot  Plate ,  plat  tetes,  oven, pH  meter,  termometer,  botol  semprot,  batang pengaduk, kertas saring, spatula, dan panci.

## Prosedur Kerja
Preparasi  Sampel  Pati  dari  Ubi  kayu ( Manihot esculenta Crantz var. Lahumbu) Ubi  kayu  ( Manihot  esculenta Crantz  var. Lahumbu) sebanyak 15 Kg dikupas dari kulitnya lalu  dibersihkan  dari  kotoran  dengan  air  bersih dan  digiling  agar  didapat  hasil  yang  halus  dan ukuran yang merata. Selanjutnya disaring dengan menggunakan  saringan  modifikasi  sambil  di peras  hingga  kering.  Kemudian  filtrat  yang diperoleh didiamkan dalam wadah beberapa saat hingga  terbentuk  endapan  didasar  wadah. Selanjutnya  endapan  dipisahkan  dari  airnya  dan dijemur  hingga  kering  dan  di  angin-anginkan  di udara terbuka. Diperoleh 5,3 Kg tepung pati dari ubi  kayu  ( Manihot  esculenta Crantz  var. Lahumbu).
Pembuatan Kurva Standar Amilosa Pembuatan  Larutan  Induk  Amilosa  4000 ppm
Sebanyak 400 mg amilosa murni dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi.  Kemudian ditambahkan          1  mL  etanol  95%  dan  1  mL NaOH  1  M.  Campuran  dipanaskan  dalam  air mendidih selama 10 menit. Selanjutnya dipindahkan  dalam  labu  takar  100  mL  dan tambahkan  aquades  hingga  batas  tera.  Setelah itu, dikocok hingga homogen.

## Penentuan Kurva Standar Amilosa
Dibuat  larutan  standar  amilosa  dengan variasi  konsentrasi:  40  ppm;  80  ppm;  120  ppm; 160  ppm;  dan  200  ppm  dengan  cara  dipipet larutan  induk  amilosa  4000  ppm  masing-masing sebanyak 1; 2; 3; 4; dan 5 mL lalu dimasukan ke dalam  5  buah  labu  takar  100  mL.  Kemudian masing-masing labu takar ditambahkan CH 3 COOH 1 M sebanyak 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; dan 1  mL.  Disiapkan  pula  larutan  blangko  dalam labu  takar  100  mL.  Larutan  blangko  digunakan untuk tujuan kalibrasi sebagai larutan pembanding  dalam  analisis  fotometri.  Masing- masing labu takar ditambahkan 2 mL larutan iod 0,1  N.  Selanjutnya  ditambahkan  aquades  hingga batas tera dan dikocok hingga  homogen. Setelah didiamkan  selama 20  menit,  masing-masing
larutan di pindahkan ke tabung reaksi dan diukur serapannya  dengan  spektrofotometer  UV-Vis pada  panjang  gelombang  625  nm.  Dibuat  kurva hubungan antara kadar amilosa dengan serapannya  untuk  diperoleh  persamaan  regresi yang  digunakan  dalam  penentuan  kadar  amilosa dengan rumus:  y = ax + b.
dimana : y = absorbansi sampel a = kemiringan (slope) x = konsentrasi sampel  (mg/L) b = konstanta
Pembuatan Kurva Standar Glukosa Pembuatan  Larutan  Induk  Glukosa  500 ppm
Sebanyak 500 mg glukosa anhidrat dilarutkan  dengan  100  mL  aquades  dalam  gelas kimia 250 mL. Kemudian dipindahkan larutan ke dalam  labu  takar  1  L  dan  ditambahkan  aquades hingga  batas  tera.  Selanjutnya  dikocok  hingga homogen.

## Penentuan Kurva Standar Glukosa
Dibuat  larutan  glukosa  dengan  variasi konsentrasi  20  ppm;  40  ppm;  60  ppm;  80  ppm; dan  100  ppm  dengan  cara  dipipet  larutan  induk glukosa  500 ppm  masing-masing  sebanyak  4;  8; 12;  16;  dan  20  mL  lalu  dimasukkan  kedalam labu  takar  100  mL.  Selanjutnya  ditambahkan aquades  hingga  batas  tera  dan  dikocok  hingga homogen.  Disiapkan  6  buah  tabung  reaksi  yang bersih.  Kemudian  masing-masing  diisi  dengan  1 mL  larutan  glukosa  standar  dan  1  tabung  diisi dengan    1  mL  aquades  sebagai  blanko. Selanjutnya  masing-masing  tabung  ditambahkan 1  mL  pereaksi  Nelson-Somogy  dan  segera dipanaskan dalam air mendidih selama 30 menit. Diangkat dan didinginkan suhunya hingga 25 o C. Setelah dingin, masing-masing tabung ditambahkan  1  mL  larutan  arsenomolibdat, dikocok  hingga  semua  Cu 2 O  larut  sempurna. Ditambahkan 7 mL aquades dan dikocok hingga homogen.  Diukur  serapannya  pada  panjang gelombang 540 nm. Hasil pengukuran absorbansi  dibuat  dalam  bentuk  kurva  standar glukosa dan ditentukan persamaan regresinya.

## Analisis Kadar Pati
Dilarutkan  1  gram  sampel  pati  dalam  150 mL HCl 3% menggunakan Erlenmeyer 250 mL.
Ardiansyah dkk. / Indo. J. Chem. Res. , 2018, 5(2), 86-95
Kemudian  dihidrolisis  selama  30  menit  dalam waterbath lalu  didinginkan.  Selanjutnya  larutan sampel  dinetralkan  dengan  NaOH  20%  dan ditambahkan 1 mL CH 3 COOH 3%. Disaring dan dipindahkan  secara  kuantitatif  dalam  labu  takar 250 mL. Ditambahkan aquades hingga batas tera dan  dikocok  hingga  homogen.  Selanjutnya dipipet  10  mL  filtrat  larutan  sampel,  dimasukan ke  dalam  gelas  kimia  250  mL,  ditambahkan  25 mL  larutan Luff  Schrool dan  15  mL  aquades. Dipanaskan  selama  10  menit  pada  pendingin balik,  diangkat  dan  didinginkan.  Kemudian ditambahkan 25 mL H 2 SO 4 25%, 10 mL KI 20%. Dititrasi dengan larutan Natrium Tiosulfat 0,1 N dengan menggunakan indikator larutan  kanji  0,5 %.  Dengan  cara  yang  sama  dilakukan  pula terhadap  blangko  dengan  mengganti  larutan sampel/filtrat  dengan  aquades.  Ditentukan  kadar gula yang dinyatakan sebagai glukosa dari filtrat yang diperoleh dengan rumus :
Larutan Na 2 S 2 O 3 yang digunakan (Z)
= x N(Na 2 S 2 O 3 ) dimana : mL blangko  = volume Na 2 S 2 O 3 yang    digunakan untuk titrasi blangko mL  sampel  =  volume  Na 2 S 2 O 3 yang  digunakan untuk titrasi sampel
0,1
=  konsentrasi larutan Na 2 S 2 O 3 N  tio                =    konsentrasi  larutan  Na 2 S 2 O 3 yang telah distandarisasi Kadar pati  (%) = x 100% dimana : Fp = Faktor pengenceran 0,9 = Faktor konversi W = berat sampel (mg)

## Analisis Kadar Amilosa  dan Amilopektin
Sebanyak 100 mg sampel pati dimasukan ke dalam  tabung  reaksi.  Kemudian  ditambahkan  1 mL etanol 95% dan 1 mL NaOH 1 M. Campuran dipanaskan  dalam  air  mendidih  (100 o C)  selama 10  menit  hingga  terbentuk  gel.  Selanjutnya  gel dilarutkan  dengan  aquades  secukupnya  dan dipindahkan  dalam  labu  takar  100  mL. Ditambahkan  aquades  hingga  batas  tera  dan dikocok  hingga  homogen.  Dipipet    sebanyak  5 mL dari larutan sampel lalu dimasukan ke dalam labu  takar  100  mL.  Ditambahkan  dengan CH 3 COOH  1  M  sebanyak  1  mL  dan  2  mL larutan  iod  0,1  N  (berangsur-angsur).  Kemudian ditambahkan  aquades  hingga  batas  tera  dan dikocok hingga homogen. Selanjutnya
dipanaskan dalam penangas air  pada suhu 30 o C selama 20  menit,  lalu  di  pindahkan  kedalam tabung  reaksi  dan  diukur  serapannya  dengan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang  625  nm.  Serapan  yang  diperoleh diplotkan  pada  kurva  standar  untuk  memperoleh konsentrasi  amilosa  pada  sampel (mg/L) (Yenrina,  2015).  Kemudian  ditentukan  kadar amilosa dengan rumus :
Kadar amilosa  (%) = x 100%
dimana : C = konsentrasi sampel (mg/L) V = volume akhir sampel (mL) W = berat sampel (mg) Fp = faktor pengenceran
Kadar  Amilopektin  (%)  =  Kadar  Pati  (%)  –  Kadar Amilosa (%)

## Waktu Optimum Hidrolisis
Optimasi  Hidrolisis  Pati  menggunakan Enzim α-Amilase (Likuifikasi)
Sebanyak  300  gram  pati,  dimasukkan  ke dalam  panci  dan  ditambahkan  aquades  dengan perbandingan  1:  3  (300  gram  pati/900  mL aquades).  Dipanaskan  pada  suhu  100 o C  selama 30  menit  sambil  diaduk.  Pada  saat  terbentuk gel  (tahap  gelatinisasi),  diatur  suhunya  menjadi 80 o C  dan  ditambahkan  enzim  α-amilase  ke dalam wadah sebanyak 0,15 mL.  Pada 12 menit pertama, diukur sisa kadar patinya secara:

## Uji kualitatif
Uji kualitatif dilakukan dengan cara diambil 1  mL  sampel  dan  ditetesi  dengan  larutan  iod 0,1  N.  Jika  masih  terdapat  warna  biru,  berarti masih terdapat pati yang belum terhidrolisis oleh enzim α-amilase.

## Uji kuantitatif
Uji  kuantitatif  dilakukan  dengan  cara diambil 1 mL sampel di masukkan ke dalam labu takar 100 mL dan ditambahkan 2 mL larutan iod 0,1  N.  Kemudian  ditambahkan  aquades  hingga batas  tera  dan  dikocok  hingga  homogen. Selanjutnya  diukur  absorbansinya  pada  panjang gelombang  625  nm.  Hal  yang  sama  dilakukan setiap 12 menit dan pemanasan dihentikan ketika uji iod sudah tidak memberikan warna biru.
Optimasi  Hidrolisis  Pati  menggunakan Enzim Glukoamilase (Sakarifikasi)
Dekstrin yang dihasilkan selanjutnya didinginkan  hingga  suhunya  mencapai  50 o C. Kemudian  ditambahkan  enzim  glukoamilase sebanyak  0,6  mL  dan  diatur  pada  pH  5  sambil diaduk.  Proses  sakarifikasi  membutuhkan  waktu maksimal 63 jam (variasi waktu : 9 jam, 18 jam, 27 jam, 36 jam, dan 45 jam, 54 jam dan 63 jam) sambil diaduk. Pada 9 jam pertama, diukur kadar gula  reduksinya  menggunakan  metode  Nelson- Somogy,  dengan  cara    dipipet  1  mL  larutan sampel dan diencerkan dalam labu takar 100 mL. Selanjutnya  dipipet  lagi  1  mL  larutan  sampel yang  telah  diencerkan,  ditambahkan  1  mL pereaksi  Nelson-Somogy  dan  segera  dipanaskan dalam  air  mendidih  selama  30  menit.  Diangkat dan  didinginkan  suhunya  hingga  25 o C.  Setelah dingin, ditambahkan 1 mL larutan arsenomolibdat,  dikocok  hingga  semua  Cu 2 O larut  sempurna.  Ditambahkan  7  mL  aquades kemudian  dikocok  hingga  homogen.  Diukur serapannya  pada  panjang  gelombang  540  nm. Dilakukan  pula  cara  yang  sama  setiap  9  jam berikutnya  hingga  63  jam.  Waktu  optimum reaksi dapat diketahui dengan dihasilkannya gula reduksi yang paling besar.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Preparasi  Sampel  Pati  dari  Ubi  kayu ( Manihot esculenta Crantz var. Lahumbu) Sampel  pati  dalam  penelitian  ini  diekstrak dari  umbi  ubi  kayu  ( Manihot  esculenta Crantz var. Lahumbu). Preparasi sampel diawali dengan pengupasan  kulit  umbi  dan  dilanjutkan  dengan pencucian  menggunakan  air  bersih.  Tujuannya untuk  membersihkan  kotoran  (berupa  tanah) yang  masih  menempel  pada  umbi.  Kemudian umbi dihaluskan dengan  cara diparut. Bubur  ubi yang telah halus diencerkan sedikit menggunakan air dengan tujuan untuk mendapatkan pati yang lebih banyak. Disamping itu, penggunaan metode ini juga dapat menurunkan  kandungan  asam  sianida  (HCN) yang  terdapat  dalam  sampel  (Purawisastra, 2004).  Menurut  Baskin  dalam  Purwati et  al. (2016),  asam  sianida  (HCN)  mudah  larut  dalam air  karena  sama-sama  bersifat  polar.  Tahap selanjutnya  diperas  dengan  menggunakan  kain saring.  Filtrat  hasil  perasan  ditampung  dan didiamkan hingga patinya mengendap. Pati yang
telah  mengendap  dipisahkan  dengan  airnya  dan diangin-anginkan diudara terbuka hingga kering.
Sebanyak  15  Kg  ubi  kayu  ( Manihot esculenta Crantz  var.  Lahumbu)  yang  diekstrak sebagai sampel dalam penelitian ini, menghasilkan  rendemen  pati  sebesar  35,33% atau  beratnya  sekitar  ±  5,3  Kg.  Ciri  fisik  dari tepung  pati  yang  dihasilkan  yaitu  teksturnya halus dan berwarna putih.

## Analisis Kadar Pati
Kadar  pati  merupakan  salah  satu  kriteria mutu  untuk  tepung,  baik  sebagai  bahan  pangan maupun  non-pangan. Analisis kadar pati dilakukan  terhadap  sampel  pati  yang  diperoleh dari  hasil  ekstraksi  ubi  kayu  ( Manihot  esculenta Crantz var. Lahumbu). Tujuannya untuk mengetahui  kemurnian  pati  yang  terdapat  dalam sampel. Metode yang digunakan untuk penetapan  kadar  pati  adalah  metode  Luff Schrool. Berdasarkan ketetapan SNI 3451: 2011, metode  Luff  Schrool  merupakan  metode  yang dapat  digunakan  dalam  analisis  suatu  sampel karbohidrat (BSN, 2011). Prinsip dari metode ini yaitu  reduksi  dari  ion  Cu 2+ menjadi  Cu + oleh gula pereduksi. Gula pereduksi adalah gula yang mempunyai kemampuan untuk mereduksi. Senyawa-senyawa  yang  mengoksidasi  atau bersifat  reduktor  adalah  logam-logam  oksidator seperti Cu(II).
Seluruh  senyawa  karbohidrat  yang  ada dipecah  menjadi  gula  sederhana  (monosakarida) dengan  bantuan  katalis  asam  (HCl  3%)  sambil dipanaskan.  Hal  ini  bertujuan  agar  reaksinya dapat  berjalan  dengan  cepat.    Setelah  proses hidrolisis  selesai,  larutan  sampel  dinetralkan dengan larutan NaOH 20%. Larutan sampel diuji secara  kualitatif  dengan  menggunakan  kertas lakmus untuk memastikan larutan sudah mencapai  netral.  Pada  pengujian  karbohidrat dengan  metode  Luff  Schrool,  pH  larutan  harus diperhatikan dengan baik. Jika pH larutan terlalu rendah  (terlalu  asam),  maka  akan  menyebabkan hasil  titrasi  akan  menjadi  lebih  tinggi  dari sebenarnya.  Sebaliknya,  jika  pH  larutan  terlalu tinggi  (terlalu  basa),  maka  hasil  titrasi  akan menjadi lebih rendah dari sebenarnya.
Monosakarida  bebas  yang  terbentuk  akan bereaksi  dengan  larutan  uji  Luff  Schrool  yang mengakibatkan  ion  Cu 2+ yang  terdapat  dalam reagen  tereduksi  menjadi  Cu + yang  ditandai dengan  perubahan  warna  dari  biru  menjadi  biru
kehitaman.  Kelebihan  Cu 2+ yang  tidak  tereduksi dikuantifikasi  dengan  titrasi  iodometri  dengan menggunakan  larutan  standar  Na 2 S 2 O 3 0,1  N. Hasil  analisis  menunjukan  bahwa  bobot  glukosa (gula pereduksi) dalam sampel pati yaitu sebesar 39,06 mg. Berdasarkan data tersebut, maka kadar pati  yang  diperoleh  dengan  menggunakan metode Luff Schrool adalah sebesar 87,89%.
Menurut Richana et al. (2016), standar baku untuk tepung ubi kayu sebagai bahan baku dalam pembuatan  gula  cair  yaitu  memiliki  kadar  pati sebesar  ±  80%.  Sementara  itu,  kadar  pati  yang diperoleh  dalam  penelitian  ini  lebih  besar dibandingkan  dengan  standar  bakunya.  Hal  ini dikarenakan  pada  metode  preparasi  sampel dilakukan  pencucian  ulang  terhadap  rendemen pati, sehingga senyawa  terlarut dan  zat pengotor lainnya  ikut  larut  dalam  air.  Selain  itu,  terdapat korelasi  antara  kadar  pati  dengan  karakteristik fisik suatu sampel tepung pati. Kenampakan fisik dari sampel pati yang diperoleh dari penilitian ini yaitu  teksturnya  halus  dan  warnanya  putih. Penelitian lain yang dilakukan oleh Richana  dan Sunarti  (2004),  menyimpulkan  bahwa  tingginya kadar pati suatu tepung ubi kayu (tapioka), dapat dicirikan  dengan  kenampakan  fisiknya  yang berwarna putih.

## Analisis Kadar Amilosa dan Amilopektin
Polisakarida  utama  yang  menyusun  pati adalah  amilosa  dan  amilopektin.  Perbandingan amilosa  dan  amilopektin  pada  pati  ubi  kayu bervariasi.  Analisis  kadar  amilosa  pada  sampel dilakukan  berdasarkan  prinsip Iodin-Binding (pengikatan  iodin),  dimana  amilosa akan berikatan  dengan  iodin  dan  menghasilkan kompleks  yang  berwarna  biru.  Intensitas  warna biru  ini  kemudian  diukur  dengan  menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Semakin tinggi intensitas  warna  yang  terukur,  maka  semakin tinggi  pula  kadar  amilosanya  (Bemiller  dan Whistler, 1996).
Pengukuran  kadar  amilosa  diawali  dengan penentuan  kurva  standar  amilosa.  Tujuannya yaitu untuk menentukan suatu persamaan regresi linear  yang  selanjutnya  digunakan  dalam penentuan  kadar  amilosa  pada  sampel.  Kurva standar  amilosa  diperoleh  dengan  mengukur absorbansi  sederetan  larutan  standar  amilosa dengan  variasi  konsentrasi  0  ppm  (blangko);  40 ppm; 80 ppm; 120 ppm; 160 ppm; dan 200 ppm dengan  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis
pada  panjang  gelombang  maksimum  (λ  max) yaitu  625  nm.  Kurva  standar  amilosa  dibuat dengan memplot data konsentrasi larutan standar terhadap  absorbansinya.  Grafik  kurva  standar amilosa dapat dilihat pada Gambar 1.

## Gambar 1. Grafik  kurva standar amilosa
Berdasarkan Gambar 1, grafik kurva standar amilosa,  diperoleh  suatu  persamaan  regresi y=0,002x  +  0,008  dengan  nilai  kooefisien korelasi  (r)  =  0,996.  Nilai  koefisien  korelasi menunjukkan  kekuatan  hubungan  antara  dua variabel.  Kuat  dan  lemahnya  hubungan  antara dua  variabel  tersebut,  diukur  pada  skala  interval 0-1.    Jika  nilai  kooefisien  korelasi  mendekati angka  1,  maka  kedua  variabel  memiliki hubungan  yang  sangat  kuat.  Hasil  pengukuran kadar  amilosa  dan  amilopektin  pada  sampel  pati disajikan dalam Tabel 1 berikut ini.
Tabel 1 Hasil Pengukuran Kadar Amilosa dan
Amilopektin Sampel pati (mg) Absorbansi Kadar amilosa (%) Kadar amilopektin (%) 100 0,0244 16,40 71,49
Data  pada  Tabel  1  menunjukan  kadar amilosa  dan  amilopektin  yang  terdapat  pada sampel.  Kandungan  amilosa  pada  ubi  kayu umumnya  lebih  rendah  dari  pada  kandungan amilopektinnya.  Ubi  kayu  dapat  dibedakan menjadi  3  golongan  berdasarkan  kandungan amilosanya,  yaitu:  (1)  ubi  kayu  dengan  kadar amilosa  tinggi  (>  25%);  (2)  ubi  kayu  dengan kadar  amilosa  menengah  (20-25%);  dan  (3)  ubi kayu  dengan  kadar  amilosa  rendah  (<  20%) (Winarno dalam Kusnandar, 2010). Berdasarkan Tabel  4.1,  ubi  kayu  yang  dipakai  dalam penelitian  ini  termasuk  dalam  kategori  ubi  kayu dengan  kadar  amilosa  rendah.  Pati  dengan kandungan  amilosa  tinggi  lebih  mudah  larut dalam  air  karena  banyak  memiliki  gugus
y = 0.0027x + 0.008 R² = 0.9962 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0 50 100 150 200 250 A b so rb an si Konsentrasi    (ppm)
hidroksil, sehingga sulit membentuk gel dan sulit mengental.  Pati  dengan  kandungan  amilosa rendah  atau  memiliki  kandungan  amilopektin tinggi  memiliki  sifat  mengembang  yang  lebih baik  (Kusnandar,  2010).    Selain  itu,  pati  yang memiliki  kandungan  amilosa  tinggi  bersifat kurang  rekat  dan  kering.  Sebaliknya,  pati  yang memiliki kandungan amilopektin tinggi memiliki  sifat  rekat  dan  basah  (Hidayat et  al. , 2007).
Optimasi Hidrolisis Pati menggunakan Enzim α-Amilase (Likuifikasi)
Hidrolisis pati merupakan proses pemecahan  molekul  amilum  (pati)  menjadi komponen yang lebih sederhana, seperti dekstrin, maltosa,  dan  glukosa  (Purba,  2009).  Hidrolisis pati  menggunakan  enzim  α-amilase  diawali dengan  proses  pembengkakan  granula  pati dengan  cara  pamanasan  atau  disebut  tahap gelatinisasi.  Pemanasan  dilakukan  terhadap campuran  300  gram  pati  dan  900  mL  air (perbandingan  1  :  3)  sambil  diaduk.  Tujuan dilakukan  pengadukan  yaitu  untuk  mencegah proses  gelatinisasi  pati  yang  tidak  sempurna. Gelatinisasi  pati  terjadi  pada  suhu  63  °C. Pemanasan dilakukan pada suhu yang jauh lebih tinggi  dari  suhu  gelatinisasi  yaitu  antara  100  – 120  °C.  Hal  ini  dimaksudkan  agar  gelatinisasi pati  dapat  terjadi  dengan  cepat  (±30  menit). Penelitian  yang  dilakukan  oleh  Agusmanto  dan Kusnandar  (1995),  mengatakan  bahwa  laju hidrolisis  enzimatik  jauh  lebih  cepat  terhadap pati  tergelatinisasi  ( gelatined  starch )  dari  pada suspensi pati yang belum tergelatinisasi. Menurut Susilawati et al. (2008), jika likuifikasi dilakukan  dibawah  suhu  gelatinisasi,  maka  pati tidak  akan  terurai  atau  terhidrolisis  sempurna secara enzimatik.
Pati  yang  telah  membentuk  gel  kemudian diturunkan  suhunya  menjadi  80  °C  dan ditambahkan  0,15  mL  enzim  α-amilase. Penggunaan  suhu  tersebut  disesuaikan  dengan jenis  enzim  yang  digunakan.  Suhu  80°C  untuk enzim  α-amilase  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  merupakan  suhu  optimal  yang diperoleh  berdasarkan  hasil  optimasi  enzim terhadap  substrat  pati  yang  diuji  menggunakan larutan  iod.  Jika  suhu  yang  diberikan  di  atas 80  °C,  maka  enzim  mengalami  denaturasi  dan tidak  dapat  bekerja  untuk  menghidrolisis  pati. Sebaliknya, jika suhu yang diberikan dibawah 80
°C,  maka  kerja  enzim  sangat  lambat  dan membutuhkan  waktu  yang  cukup  lama  dalam menghidrolisis pati. Pati akan mulai terhidrolisis oleh enzim yang ditandai dengan perubahan dari bentuk  gel  menjadi  cair  (encer)  atau  disebut tahap  likuifikasi.  Enzim  α-amilase  akan menghidrolisis  ikatan  α-(1,4)-glikosida  dari bagian  dalam  secara  acak  baik  pada  amilosa maupun amilopektin (Rahmawati, 2015). Menurut  Ratna  dan  Yulistiani  (2015),  pada proses  likuifikasi,  pati  akan  dipecah  menjadi dekstrin, maltosa, dan glukosa. Dektrin merupakan  hasil  hidrolisis  pati  yang  tidak sempurna.  pengurangan  panjang  rantai  tersebut akan  menyebabkan  perubahan  sifat  dimana  pati yang  tidak  mudah  larut  dalam  air,  diubah menjadi dekstrin yang larut dalam air.
Senyawa  amilosa  yang  terkandung  dalam pati  akan  lebih  cepat  terhidrolisis  oleh  enzim  α- amilase dari pada amilopektin karena merupakan polimer  dari  glukosa  yang  hanya  tersusun  dari ikatan  α-(1,4)-glikosida.  Menurut  Purba  (2009), enzim α-amilase akan memotong ikatan α-(1,4)- glikosida  pada  amilosa  dengan  cepat  pada  pati kental  yang  telah  mengalami  gelatinisasi.  Hasil penurunan  kadar  amilosa  pada  sampel  terhadap variasi satuan waktu disajikan pada Gambar 2.

## Gambar 2. Grafik  penurunan kadar amilosa
Berdasarkan Gambar 2, dapat dilihat bahwa grafik  penurunan  kadar  amilosa  sebagai  akibat dari  hidrolisis  pati  oleh  enzim  α-amilase  terjadi secara  signifikan.  Pada  saat  12  menit  pertama setelah  penambahan  0,15  mL  enzim  α-amilase, kadar amilosa mengalami penurunan yang cukup besar  jika  dibandingkan  dengan  12  menit berikutnya.  Hal  ini  dikarenakan  aktivitas  enzim α-amilase  bekerja  secara  cepat.  Menurut Rahmawati  (2015),  aktifitas  enzim  α-amilase mengalami  peningkatan  pada  substrat  yang berbentuk  gel.    Rentang  antara    0  –  12  menit
0% 2% 4% 6% 8% 10% 12% 14% 16% 18% 0 20 40 60 80 K ad ar am il o sa ( % ) Waktu  (menit)
merupakan  fase  peralihan  dari  bentuk  gel berubah  menjadi  cair  (likuifikasi).  Setelah  12 menit berikutnya, aktivitas enzim mulai menurun sering  dengan  perubahan  waktu.  Menurunnya aktivitas  enzim  diakibatkan  karena  jumlah substrat  yang  mulai  berkurang.  Selain  itu, penurunan kadar amilosa dapat dilihat melaui uji iodium  (kualitatif).  Amilosa  dapat  bereaksi dengan  iodium  membentuk  kompleks  yang berwarna  biru.  Intensitas  warna  biru  mengalami penurunan seiring bertambahnya waktu jika diuji dengan larutan iod.
Waktu  reaksi  merupakan  salah  satu  faktor yang  mempengaruhi  kerja  enzim  dalam  proses hidrolisis pati. Semakin lama waktu reaksi, maka kerja  enzim  pula  akan  semakin  optimum (Murtiaz,  2015).  Waktu  optimum  hidrolisis  pati menggunakan  enzim  α-amilase  terjadi  pada kondisi  waktu  48  menit.  Hidrolisis  pati menggunakan  enzim  α-amilase  terjadi  sangat cepat. Hal ini terjadi karena jumlah amilosa yang terdapat  pada  sampel  sangat  rendah,  sehingga tidak membutuhkan waktu yang lama. Berdasarkan  grafik  di  atas,  pada  kondisi  waktu 48  menit,  kadar  amilosa  sangat  rendah  yaitu 0,09%.  Setelah  12  menit  berikutnya,  kadar amilosa  sudah  tidak  lagi  mengalami  perubahan yang  signifikan.  Semakin  rendah  kadar  amilosa, maka semakin rendah pula kadar patinya, karena produk hidrolisis yang dihasilkan sudah banyak..

## Optimasi  Hidrolisis  Pati  menggunakan Enzim Glukoamilase (Sakarifikasi)
Penentuan  waktu  optimasi  hidrolisis  pati oleh  enzim  glukoamilase  dilakukan  dengan menggunakan  metode  Nelson-Somogy.  Metode ini  merupakan  metode  penetapan  kadar  gula pereduksi.  Pengukuran  kadar  gula  pereduksi diawali dengan penentuan kurva standar glukosa. Kurva standar glukosa diperoleh dengan mengukur  absorbansi  sederetan  larutan  standar glukosa  dengan  variasi  konsentrasi  0  ppm (blangko);  20  ppm;  40  ppm;  60  ppm;  80  ppm; dan 100 ppm dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang  maksimum  (λ  max)  yaitu  540  nm. Kurva  standar  glukosa  dibuat  dengan  memplot data  konsentrasi  larutan  standar  terhadap absorbansinya.  Grafik  kurva  standar  glukosa dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Grafik kurva standar glukosa
Berdasarkan Gambar 3, diperoleh persamaan regresi untuk kurva standar glukosa y =  0,007x  +  0,012  dengan  nilai  kooefisien korelasi  (r)  =  0,995.  Nilai  kooefisien  korelasi pada  kurva  standar  glukosa  ini  tidak  jauh berbeda  dengan  nilai  kooefisisen  korelasi  pada penentuan kurva standar amilosa sebelumnya.

## Gambar 4.  Grafik peningkatan konsentrasi gula pereduksi
Selama proses hidrolisis berlangsung, enzim glukoamilase  akan  memecah  dekstrin  menjadi glukosa.  Semakin  lama  proses  hidrolisis  maka gula  pereduksi  dalam  larutan  terus  mengalami peningkatan.  Setiap  9  jam,  konsentrasi  gula pereduksi  dalam  larutan  sampel  dianalisis dengan  mengambil  1  mL  larutan  sampel kemudian  diencerkan  dalam  labu  takar  100  mL. Metode yang digunakan untuk analisis konsentrasi  gula  pereduksi  adalah  metode Nelson-Somogy.  Menurut  jurnal  hasil  penelitian yang dilakukan oleh Kiyan et al. (2016), metode Nelson-Somogy  lebih  spesifik  jika  digunakan dalam  penetapan  gula  pereduksi  pada  sampel. Hasil  pengukuran  gula  pereduksi  pada  larutan sampel dapat dilihat pada Gambar 4.
y = 0.0075x + 0.0126 R² = 0.9955 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 50 100 150 A b so rb an si Konsentrasi (ppm) 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 20 40 60 80 K o n se n tr as i (g/ L ) Waktu  (jam)
Pada  Gambar  4,  terlihat  bahwa  semakin lama  waktu  reaksi  maka  semakin  tinggi konsentrasi gula pereduksinya. Tingginya produk (gula pereduksi) yang dihasilkan dapat menghambat  kerja  enzim.  Pada  titik  54  jam, terjadi  sedikit  penurunan  konsentrasi  gula pereduksi.  Hal  ini  terjadi  akibat  adanya  reaksi antara  enzim  dan  produk  yang  terbentuk. Tingginya  konsentrasi  gula  pereduksi  dalam larutan  menandakan  bahwa  substrat  yang semakin  berkurang,  sehingga  sebagian  gula pereduksi membentuk kompleks kembali dengan enzim atau dikenal dengan istilah penghambatan unkompetitif. Menurut Suhartono (2001), penghambatan  unkompetitif  merupakan  salah satu  penghambatan  dari  reaksi  enzimatis  yang terjadi  akibat  dari  akumulasi  produk  oleh  reaksi enzim  itu  sendiri  dan  terjadi  secara reversible (dapat balik).
Menurut  Melliawati dalam Bandjar et  al. (2015), enzim glukoamilase dapat menghidrolisis ikatan  α-(1,4)  glikosidik  pada  amilosa  maupun amilopektin.  Enzim  ini  juga  dapat  memutus ikatan  α-(1,6)  glikosidik  pada  titik  percabangan yang terdapat pada amilopektin dengan laju yang lebih  rendah.  Hasil  analisis  awal  sampel menunjukkan  bahwa,  kadar  amilopektin  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  kadar  amilosa, sehingga  jumlah  titik  percabangan  α-(1,6) glikosidik  sangat  banyak.  Oleh  karena  itu, hidrolisis pati menggunakan enzim glukoamilase membutuhkan waktu yang lebih lama dibandingkan  dengan  enzim  α-amilase.  Waktu optimum  hidrolisis  pati  dengan  menggunakan enzim  glukoamilase  yaitu  54  jam  dengan konsentrasi gula pereduksi sebesar 9,186 g/L.

## KESIMPULAN
Kesimpulan  dari  penelitian  ini  yaitu  waktu optimum kerja enzim α-amilase yang dibutuhkan dalam  menghidrolisis  pati  dari  limbah  hasil olahan  ubi  kayu  ( Manihot  esculenta crantz  var. lahumbu)  menjadi  gula  cair  yaitu  48  menit  pada tahap  likuifikasi  dengan  nilai  kadar  amilosa terendah 0,09% sedangkan untuk enzim glukoamilase yaitu 54 jam pada tahap sakarifikasi dengan diperoleh jumlah konsentrasi gula pereduksi tertinggi sebesar  9,186 g/L.

## DAFTAR PUSTAKA
Agusmanto,  Kusnandar,  1995, Amilosa  Pati Segar ,  BPPT  Sulusuban  Lampung  Tengah.
Buletin Teknologi dan Industri Pangan 6 (2) : 72-91.
Amin,  H.,  2006, Peningkatan  Mutu  Dan  Masa Simpan Kasoami Makanan Khas Tradisional Sulawesi Tenggara Dari Bahan
Baku Ubi Kayu , IPB, Bogor.
Azis,  A.,  Suryadi,  Nurnayah  L.,  Paramita  K.  L., Nurhayati N, 2014, GUCAKUSI : Gula Cair dari  Kulit  Singkong  Sebagai  Alternatif Sumber  Glukosa. Laporan  Akhir  Program Kreativitas Mahasiswa. IPB, Bogor. Bandjar, A., Tanasale, M., & Luhukay, M., 2015.
Kinetic Parameters Determination Of Glucoamylase  On  Hydrolysis  Reaction  Of Sagoo  Starch  (Metroxylon  sp). Indonesian Journal  Of  Chemical  Research,  2 (2),  176- 181.
Bemiller,  J.  N.,  Whistler,  R.  L.,  1996,
Carbohydrates. Dalam: Fennema, O. R. ed., Food  Chemistry. Marcel  Dekker,  Inc.,  New York, 157-223.
Bungati,  Dian  D.,  Abidin  Z.,  2012, Peningkatan Nilai  Tambah  Ubi  Kayu  Menjadi  Kasoami Sebagai  Makanan  Pokok  Di  Kelurahan Laompo  Kecamatan  Batauga  Kota  Bau-
Bau.
Prosiding Seminar Nasional Meningkatkan  Daya  Saing  dan  Nilai Tambah  Produk  Pertanian  Berbasis  Sumber Daya Lokal. Kerjasama Universitas Padjajaran  Bandung,  Badan  Riset  Daerah Provinsi  Jawa  Barat,  dengan  BPTP  Jawa Barat, Bandung.
Chandra,  A.,  Inggrid  H.  M.,  Verawati,  2013,
Pengaruh  pH  dan  Jenis  Pelarut  pada Perolehan  dan  Karakterisasi  Pati  dari  Biji Alpukat . Universitas Katolik Parahyangan. Dian  D.,  Ratule  M.  T.,  Bungati,  Lutiana  W.  O., 2012,  Kasoami  Sebagai  Pangan  Lokal Masyarakat Buton dalam Mendukung Kemandirian  Pangan  Nasional. Prosiding seminar  Nasional  Kemandirian  Pangan 2012. UNPAD-BPTP  Jawa  Barat-DPRD Provinsi Jawa Barat.
Hidayat,  B.,  Ahza,  A.  B.,  Sugiyono,  2007, Karakterisasi  Tepung  Ubi  Jalar  ( Ipomea batatas L ) varietas Shiroyukata serta Kajian Potensi  Penggunaannya  Sebagai  Sumber
Pangan  Karbohidrat  Alternatif. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan, Bogor. Kiyan,  H.,  Alkayyis,  Susanti,  H.,  2016, Perbandingan  metode  Somogy-Nelson  dan Anthrone-Sulfat  pada  Penetapan  Kadar Gula  Pereduksi  dalam  Umbi  Cilembu ( Ipomea  batatas L.). Jurnal  Farmasi  Sains dan Komunitas. Universitas Ahmad Dahlan, Yogyakarta.
Kusnandar,  F.,  2010, Kimia  Pangan  :Komponen Makro . Dian Rakyat, jakarta. Ma’suf,  A.,  2013, Teknologi  Pengolahan  Ubi Kayu  Menjadi  Makanan  Lokal  Buton “Kasoami” .  Balai  Pengkajian  Teknologi Pertanian, Sulawesi Tenggara. Murtiaz,  K.  D.,  2015, Optimasi  Produksi  Gula Cair Dari Pati Sagu (Metroxylon spp.) Asal Sulawesi  Tenggara .  Balai  Besar  Penelitian dan  Pengembangan  Pasca  Panen  Pertanian, Bogor.
Purawisastra  S.,  Yuniati  H.,  2004, Penurunan Kadar Sianida Singkong Pahit pada Proses Fermentasi  Cair  Bakteri  Brevibacterium lactofermentemum BL-1M76 . Balai Penelitian Bioteknologi, Bogor.
Purba,  E.,  2009, Hidrolisis  Pati  Ubi  Kayu (Manihot  usclenta)  Dan  Pati  Ubi  Jalar
(Impomonea  Batatas)  Menjadi  Glukosa Secara  Cold  Process  Dengan  Acid  Fungal Amilase  Dan  Glukoamilase. Universitas
Lampung, Bandar Lampung.
Purwati, Y., Thuraidah, A., Rakhmina, D., 2016,
Kadar Sianida Singkong Rebus dan Singkong Goreng. Jurnal Analisis Kesehatan . Medical Laboratory Technology Journal (MLTJ), Banjarmasin.
Rahmawati,  A.,  2010, Pemanfaatan  Limbah Kulit  Ubi  Kayu ( Manihot  utilissima Pohl) dan Kulit Buah Nanas ( Ananas comosus L.) pada  Produksi  Bioetanol  Menggunakan Aspergillus niger. UNS, Surakarta.
Rahmawati,  A.  Y.,  Aji  S.,  2015,  Hidrolisis Tepung Ubi Jalar Ungu ( Ipomea batatas L. )
secara  Enzimatis  menjadi  Sirup  Glukosa Fungsional. Jurnal Pangan dan Agroindustri. 3(3)1152-1195.
Richana,  N. , 2006, Gula  Singkong  dapat Diproduksi  di  Pedesaan .Vol .  28,  No.  3 . Warta Penelitian dan Pengembangan Pertanian, Bogor
Richana,  N.,  Budiyanto,  A.,  Arief,  R.  W.,  2016,
Teknologi  Produksi  Sirup  Glukosa .  Balai Penelitian  dan  Pengembangan  Pertanian, Bogor
Susilawati,  Nurjana,  S.,  Putri,  S.,  2008,
Karakteristik  Sifat  Fisik  dan  Kimia  Ubi Kayu  ( Manihot  esculenta )  Berdasarkan Lokasi  Penanaman  dan  Umur  Panen Berbeda. Jurnal  Teknologi  Industri  dan Hasil Pertanian . Fakultas Pertanian, Lampung.
Yenrina,  R.,  2015, Metode  Analisis  Bahan Pangan  Dan  Komponen  Bioaktif ,  Andalas University Press, Padang.