Journal of Parasite Science                                                                                           Vol.4 No.1 Maret 2020 eISSN : 2656-5331 , pISSN : 2599-0993
Effectivity of Etanol Extract in Peel a Pomegranate Fruit ( Punica granatum ) as Antelmintic Toward the Number of Deaths Ascaridia galli Worm in Vitro
Efektifitas Anthelmintika Ekstrak Etanol Kulit Buah  Delima ( Punica granatum ) terhadap Jumlah Kematian Cacing Ascaridia galli secara in Vitro
1) Nila Murodah, 2) Sri Mumpuni Sosiawati, 3) Iwan Sahrial Hamid, 2) Setiawan Koesdarto,
3) Rochmah Kurniasanti dan 2) Poedji Hastutiek
1) Student, Faculty of Veterinary Medicine, Universitas Airlangga,
2) Department of Veterinary Parasitology, Faculty of Veterinary Medicine, Universitas Airlangga,
3) Department of Basic Veterinary Medicine, Faculty of Veterinary Medicine, Universitas Airlangga.
Received: 27-06-2020, Accepted: 27-06-2020, Published Online: 29-06-2020 Co-Author email : sri-m-s@fkh.unair.ac.id

## Abstract
This  research  was  conducted  to  determine  the  anthelmintics  effect  of  peel  a pomegranate  fruit  extract  etanol  against Ascaridia  galli worm in  vitro .  In  this  research, using  240  samples  of A.  galli with  length  7-11cm  without  differentiating  sex.  The concentration of  peel a pomegranate  fruit extract etanol  for immersing the Ascaridia galli were 10 mg/ml, 20 mg/ml, 40 mg/ml, and 80 mg/ml. Negative control was used PBS. Positif control was used piperazin citrate 10 mg/ml. Observation death A. galli worm and analysis of the data at the 6 hour, 12 hour, 18 hour, 24 hour, 30 hour and 36 hour using ANOVA test and Duncan Range Test. ANOVA result showed significant differences between treatments (p<0,05).  Duncan  Range  Test  result  showed  peel  a  pomegranate  extract  etanol  40  mg/ml had anthelmintics effects the 36 hour which comparable with piperazin citrate 10 mg/ml.
Key words : peel a pomegranate, A. galli , anthelmintic

## Pendahuluan
Prevalensi  penyakit  yang  disebabkan  oleh Ascaridia galli ini masih sangat tinggi (Darmawi dkk,  2007).  Pengamatan  pada  empat  distrik  di wilayah pinggiran Amhara (Ethiopia) menunjukkan bahwa prevalensi cacing Nematoda yang menginfeksi pada ayam adalah A.  galli (35,58%), Heterakis  gallinae (17,28%), Subulura brupti (17,60%), Cheilospirura hamulosa (0,75%)  dan Dyspharynx  spiralis (2,62%) (Eshetu dkk, 2001).
Prevalensi  cacing A.  galli di  beberapa kabupaten  di  Jawa  Barat  (Sukabumi,  Ciamis, Bekasi,  Subang)  masing-masing  sebesar  10%, 18%  dan  5%  (Iskandar  dkk,  2002).  Salah  satu dari  18  jenis  cacing  gastrointestinal  yang menginfeksi  ayam  muda  di  kawasan  pembu- angan  sampah  di  Gana,  Afrika Barat,  adalah A. galli dengan  prevalensi  24%  (Polusen  dkk, 2000). Ayam yang rentan cacing A. galli adalah ayam  yang  masih  muda, A.  galli ini  banyak  di temukan  pada  usus  halus  ayam  bagian  tengah menurut (Permin dan Hansen, 1998).
Cacing A.  galli ini  dapat  menyebabkan enteritis  hemorhagi , anemia ,  nafsu  makan turun,  bulu  rontok,  kusam,  pucat,  sayap
terkulai,  dan  lemah.  Ayam  leyer  yang  sedang berproduksi  dapat  mengakibatkan  penurunan produksi telur atau sampai terhenti sama sekali. Ayam broiler pertumbuhan akan terganggu dan berat  badan  menurun  (Subekti  dkk,  2007). Infeksi  pada  umumnya  ringan  sampai  sedang tidak  menimbulkan  gejala  yang  nyata,  tetapi infeksi yang berat dapat menyebabkan kematian  (Soulsby,  1986).  Infeksi  yang  berat terjadi  berak  berlendir,  selaput  lendir  pucat, pertumbuhan  terhambat  dan  produksi  telur menurun (Fahrimal and Raflesia, 2002).
Indonesia  adalah  negeri  yang  memiliki ribuan  jenis  tanaman  obat  yang  bisa  dimanfa- atkan,  dan  kebanyakan  belum  diteliti  dengan optimal.  Pengetahuan  mengenai  hal  ini  sudah diwariskan  oleh  nenek  moyang  kita  secara turun  temurun  (Lusia,  2006).  Banyak  tumbu- han yang digunakan untuk mengobati cacingan seperti  delima,  temu  hitam,  lidah  buaya,  dan bawang putih (Dalimartha, 2003).
Delima ( Punica granatum ) adalah tanaman yang sering ditanam di kebun sebagai tanaman  hias,  tanaman  obat  atau  karena buahnya  bisa  dimakan.  Hampir  semua  bagian tanaman  delima  dapat  digunakan  sebagai  obat
tradisional.  Bunga  delima  ( Granati  flos )  dapat digunakan  untuk  mengatasi  sariawan,  daging delima  ( Granati  fructus )  dapat  digunakan untuk menurunkan tekanan darah, kulit delima ( Granati  pericarpium ),  akar  delima  ( Granati radix ),  dan  kulit  kayu  delima  ( Granati  cortex ) dapat  digunakan  untuk  mengobati  cacingan (Dalimartha,  2003  yang  dikutip  oleh  Sandika, 2012).

## Alat dan Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  untuk penelitian ini adalah kulit buah delima ( Punica granatum )  yang diperoleh dari Madiun, etanol 96%, Tween 80 spiritus, Piperazin sitrat Contra- Worm® sebagai kontrol obat serta cacing A.galli dewasa  yang  diperoleh  dari  usus  halus  ayam kampung yang diperoleh dari  pasar tradisional Surabaya.
Alat- alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah : cawan petri, gunting bedah, scalpel, pinset,  mangkok  plastik,  timbangan  digital, sarung  tangan  bedah,  nampan  plastik,  batang pengaduk  kaca,  alat  maserasi,  saringan,  bak perendam,  pot  plastik,  inkubator,  kompor, gelas ukur, baker glass pyrex 500ml, api bunsen, spiritus, lap kain, rotary evaporator .

## Metode Penelitian Pembuatan ekstrak etanol kulit delima
Pembuatan  Ekstrak  etanol  kulit  buah delima  dilakukan  dengan  metode  maserasi yaitu  dengan  cara  mengeringkan  kulit  buah delima  kemudian  dihalus  kan  dan  diayak, setelah  didapatkan  serbuk  halus  direndam dengan etanol 96%, perendaman 2x24 jam yang ditampung  dalam  suatu  wadah  setelah  itu  di saring.  Perbandingan  banyak  etanol  dengan kulit buah delima 10:1. Kemudian hasil saringan maserasi  dari  ekstrak  etanol  dilakukan  evapo- rasi dengan alat rotary evaporator (40 0 C dengan kecepatan 50 rpm) yang bertujuan untuk meng- uapkan  pelarutnya  hingga  berupa  ekstrak kental  (Depkes  RI,  1989  yang  dikutip  dari Kurniawan 2013).

## Pembuatan larutan piperazin sitrat
Larutan piperazin yang digunakan sebagai kontrol untuk obat pembanding diperoleh dari obat  bubuk Contra-Worm yang  mengandung piperazin  sitrat  600  mg/g  (Ashab  dan  Lina, 2011).  Penelitian  membutuhkan  10  mg/ml. Bedasarkan  perhitungan  (Lampiran  I)  maka dibutuhkan  0,25  gram  obat Contra-Worm ® dalam setiap 25 ml larutan PBS.
Persiapan pengadaan cacing A. galli
Pada  penelitian  ini  menggunakan  cacing A.  galli yang  berukuran  7-11  cm,  pengambilan cacing  secara  acak  tanpa  membedakan  jenis kelamin.  Cacing A.  galli yang  di  butuhkan adalah  240  ekor  yang  dibagi  menjadi  6 kelompok perlakuan dan setiap perlakuan ada 4 ulangan,  tiap  ulangan  dimasukkan  10  ekor cacing A.  galli .  Cacing A.  galli tersebut diperoleh dari usus halus ayam yang terinfeksi, yang  diperoleh  dari  pasar-pasar  tradisional  di kota  Surabaya.  Setelah  didapatkan  usus  ayam yang  terinfeksi,  usus  ayam  dibedah  dengan menggunakan gunting bedah dan pengambilan cacing  dengan  menggunakan  pinset  kemudian diletakkan  di  mangkok  plastik  yang  berisi cairan PBS.
Perlakuan terhadap cacing A. galli
Perlakuan  yang  digunakan  adalah  enam perlakuan,  sedangkan  ulangan  pada  penelitian ini  bedasarkan  rumus  Federer  (1963)  dalam Kusriningrum  (2010)  adalah  sebagai  berikut: t ( n - 1) ≥ 15, 6 ( n – 1) ≥ 15, 6n – 6 ≥ 15, 6n  ≥  21, n  ≥  3,4  =  4.  t  sebagai  jumlah  perlakuan  dan  n sebagai jumlah ulangan.
dari  hasil  perhitungan  di  atas,  maka dibutuhkan  minimal  4  ulangan  pada  setiap perlakuan,  jadi  dibutuhkan  24  cawan  petri. Adapun perlakuan pada cacing tersebut adalah sebagai  berikut  :  (I)  Perlakuan  dengan merendam cacing A. galli dalam PBS, perlakuan (II)  yaitu  perlakuan  dengan  merendam  cacing A. galli pada piperazin 10 mg/ml, perlakuan (III) yaitu  perlakuan  dengan  merendam  cacing A. galli dalam ekstrak kulit buah delima 10 mg/ml, perlakuan  (IV)  yaitu  dengan  merendam  cacing A.  galli dalam  ekstrak  kulit  buah  delima  20 mg/ml,  perlakuan  (V)  yaitu  dengan  merendam cacing A. galli dalam ekstrak kulit buah delima 40  mg/ml,  dan perlakuan ke (VI)  yaitu  dengan merendam  cacing A.  galli dalam  ekstrak  80 mg/ml.  Semua  cawan  petri  diisi  larutan perlakuan  dengan  volume  25  ml  dan  10  cacing A.  galli yang  masih  bergerak  aktif  (Ali  dkk, 2012),  kemudian masing-masing  cawan petri di masukkan  ke  dalam  inkubator  dengan  suhu 37 0 C. Pengamatan dilakukan pada jam ke-6, ke- 12, ke-18, ke-24, ke-30 dan ke-36.

## Analisis Data
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  ekperi- mental yang dilakukan di laboratorium dengan rancangan  yang  digunakan  adalah  Rancangan Acak  Lengkap  (Kusriningrum,  2010).  Untuk mengetahui  daya  anthelmintik  ekstrak  etanol
Journal of Parasite Science                                                                                           Vol.4 No.1 Maret 2020 eISSN : 2656-5331 , pISSN : 2599-0993
Kulit  delima  ( P.  granatum )  dengan  melihat mortilitas cacing  A.  galli .  Data  yang  diperoleh di  analisis  dengan  ANAVA  dan  untuk membandingkan  antar  perlakuan  dilanjutkan dengan uji jarak berganda Duncan
Hasil dan Pembahasan Hasil Pengamatan Terhadap Jumlah Kematian Cacing A. galli
Pemberian  ekstrak  kulit  buah  delima ( Punica  granatum )  pada  kelompok  perlakuan menyebabkan  kematian  cacing A.  galli .  Keber- hasilan  penggunaan  kulit  buah  delima  ( P. granatum )  sebagai  anthelmintik  ini  ditandai dengan  adanya  kematian  pada  tiap  perlakuan dan  pada  pengamatan  yang  dilakukan  tiap  6 jam sekali.
Hasil  yang  diperoleh  setelah  melakukan penelitian  dapat  diketahui  bahwa  pemberian dari berbagai perlakuan menujukkan hasil yang berbeda antara yang satu dengan yang lainnya, penelitian ini menunjukkan hasil yang berbeda nyata.  Berdasarkan  hasil  tersebut  didapatkan rerata  jumlah  kematian  cacing A.  galli pada semua perlakuan dalam waktu pengamatan jam ke-6,  ke-12,  ke-18,  ke-24,  ke-30,  dan  ke-36, disajikan dalam Tabel 1.
Hasil pengamatan yang didapat selanjutnya  ditabulasi  dan  diolah  dengan program  SPSS  18 for  windows .  Uji  normalitas data  dilakukan  terlebih  dahulu  dengan  meng- gunakan Kolmogorov-Smirnov untuk  menge- tahui data terdistribusi normal atau tidak. Hasil yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  nilai signifikan uji 0,147 lebih besar dari 0,05 (p>0,05, jadi  data  berdistribusi  normal.  Selanjutnya  uji statistik  parametrik  bisa  dilakukan  dengan analisis  varian  (ANAVA).  Hasil  ANAVA menunjukkan  terjadi  perbedaan  yang  nyata (p<0,05)  kenaikan  jumlah  kematian  cacing A. galli dengan  pemberian  berbagai  dosis  ekstrak kulit buah delima ( P. granatum ).
Setelah diketahui dari hasil ANAVA menu- njukkan  perbedaan  yang  nyata,  maka  dapat
dilakukan  uji  lanjutan  menggunakan  uji  jarak berganda Duncan .  Pada  uji  jarak  berganda Duncan diperoleh perbedaan angka pada setiap kelompok,  digunakan  untuk  membandingkan semua perlakuan yang ada.
Berdasarkan  hasil  perbandingan  rerata jumlah  kematian  cacing A.  galli pada  setiap kelompok  dengan  perhitungan  statistik  secara keseluruhan  menunjukkan  perbedaan  yang nyata.  Kelompok  kontrol  positif  sebagai pembandingnya  menunjukkan  angka  (7,75 bc ± 1,70),  hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa  obat telah  diabsorpsi  oleh  cacing A.  galli sampai menimbulkan efek kematian. Kelompok perlakuan  VI  (ekstrak  80  mg/ml)  memberikan hasil  yang  terbaik  dalam  menimbulkan kematian  pada  cacing A.  galli ,  dengan menunjukkan  presentase  kematian    tertinggi yaitu 87,5%, kelompok perlakuan V (ekstrak 40 mg/ml)  dengan  presentase  kematian  82,5%, sedangkan  kelompok  perlakuan  IV  (ekstrak  20 mg/ml) dan III (ekstrak 10 mg/ml) menunjukkan  presentase  kematian  72,5%  dan 62,5%.  Kontrol  negatif  menunjukkan  angka kematian  7,50%,  hal  ini  dapat  dijelaskan  jika pemberian  pelarut  PBS  saja  tidak  memberikan pengaruh  kematian.  Kematian  yang  terjadi dapat  diakibatkan  karena  terlalu  lamanya cacing di dalam pelarut atau dapat diakibatkan karena in  vitro tidak  selalu  mutlak  seperti kondisi  di  dalam  tubuh,  selain  itu  dapat  juga diakibatkan karena suhu.  Selisih  angka kontrol positif  dan  perlakuan  IV  menunjukkan  angka yang  berbeda  nyata,  hal  ini  menunjukkan bahwa  efek  dari  ekstrak  kulit  buah  delima  ( P. granatum )  dapat  menyebabkan  kematian  pada cacing A. galli . Pada perlakuan V menunjukkan bahwa jumlah rata-rata kematian cacing A. galli setara dengan Piperazin sitrat, sehingga ekstrak kulit  buah  delima  40  mg/ml  dapat  menggan- tikan penggunaan piperazin sitrat pada penang- ganan pengobatan ascaridiasis.
Tabel 1. Rerata Presentase Jumlah Kematian Cacing A. galli pada jam ke-6, ke-12, ke-18, ke-24, ke-30 dan ke-36.
Perlakuan Jumlah kematian (%) Jam ke-6 Jam ke-12 Jam ke-18 Jam ke-24 Jam ke-30 Jam ke-36 PBS 0 0 0 0 0 7,5 Piperazin 10 mg/ml 0 0 0 7,5 42,5 77,5 Ekstrak 10 mg/ml 0 0 2,5 10 52,5 62,5 Ekstrak20 mg/ml 0 0 5 15 50 72,5 Ekstrak40 mg/ml 0 2,5 12,5 25 65 82,5 Ekstrak80 mg/ml 0 7,5 20 32,5 70 87,5
Tabel2. Rerata Jumlah Kematian Cacing A. galli Setiap Kelompoknya.
a,b,c Superskip  yang  berbeda  pada  kolom  yang  sama  menunjukkan  perbedaan  yang  nyata  (p<0,05) antar kelompok perlakuan

## Kesimpulan
Ekstrak  kulit  buah  delima  ( P.  granatum ) mempunyai  daya  anthelmintika  terhadap cacing Ascaridia  galli secara in  vitro .  Terdapat perbedaan  yang  nyata  di  antara  pemberian ekstrak kulit buah delima ( P. granatum ) dalam berbagai  konsentrasi  terhadp  cacing A.  galli secara in  vitro .Ekstrak  kulit  buah  delima  40 mg/ml  setara  dengan  piperazin  sitrat  setelah perendaman 36 jam terhadap mortalitas cacing A. galli secara in vitro .

## Daftar Pustaka
Ashab  I  and  Lina  SMM.  2011.  In  vitro phytochemical and anthelmintic activity of cocculus  hirsutus  Linn,  and  Rumex dentatus Linn. S. J. Pharm. Sci 4 (2) : 63-65
Dalimartha  S.  2003. Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia.  Jilid  Ketiga.  Jakarta:  Puspa Swara.
Darmawi  R,  Tiuria  RD,  Soejoedono  FH, Pasaribu  dan  Balqis  U.  2007.Populasi  L3 pada  ayam  petelur  yang  diinfeksi  dengan dosis  6000  L2 Ascaridia  galli .  Jurnal Kedokteran Hewan. 1(2) :71-76.
Eshetu  Y,  Mulualem  E,  Ibrahim  H,  Berhanu  A, and  Aberra  K.  2001.  Study  of  gastro- intestinal helminths of scavenging chickens  in  four  rural  districts  of  Amhara region,  Ethiopia.  Rev.  Sci.  tech.  off.  Int. Epiz. 20(3):791–796.
Kurniawan  S.  2007.  Pengaruh  Ekstrak  Kulit Akar  Delima  ( Punica  granatum )  terhadap Cacing Ascaridia  galli secara In-Vitro . Malang: Universitas Muhammadiyah Malang.
KurniawanA.2013.  Uji  Efek  Imunostimulan Estrak  Etanol  Daun  Tekelan (chromolaen odorata (L.)  terhadap  Aktivitas  Sel Makrofag  Mencit  Yang  diinduksi  Bakteri Staphylococcus Aureus .
Kusriningrum RS. 2010. Perancangan
Percobaan,  Airlangga  University  press Surabaya.
Lusia.  2006.  Pemanfaatan  Obat  Tradisional dengan Pertimbangan Manfaat dan Keamanannya.  Majalah  Ilmu  Kefarmasian. Halaman 1-7.
Permin A and Hansen JW. 1998. Epidemiology, Diagnosis and Control of Poultry Parasites. Food  and  Agriculture  Organization  of  the United Nations, Rome.
Sandika  B.  2012,  Pengaruh  pemberian  air rebusan  akar  delima  ( Punica  granatum ) terhadap  mortalitas Ascaris  suum  G oesze secara in vitro.
Soulsby  EJL.  1986.  Helminth,  Arthropods  and Protozoa or Domesticated Animals. 7 rd Ed. Lea and Febiger. Philadelphia.
Soulsby  EJL.  1990.  Anthelmintic  activity  of ivermectin  against  experimental Ascaridia galli infection in chickens.
Subekti  S,  Koesdarto  S,  Kusnoto,  Sosiawati  SM dan  Puspitawati  H.  2007.  Penuntun Praktikum  Helmintologi  Veteriner  Edisi  1 Revisi ke 3.
Subekti  S,  Koesdarto  S,  Sosiawati  SM  dan Kusnoto  2013,  Buku  Teks  Helminthiasis Veteriner. Global Persasa press. Surabaya.
Wiryowidagdo S. 2007. Kimia dan Farmakologi Bahan Alam. Edisi Kedua. Jakarta: Penerbit Buku Kedokeran EGC.
No Kelompok perlakuan Jumlah kematian cacing A.galli 1. Kontrol Negatif (PBS) 0,75 a ± 0,95 2. Kontrol Positif piperazin 10 mg/ml 7,75 bc ± 1,70 3. Ekstrak 10 mg/ml 6,25 b ± 1,50 4. Ekstrak 20 mg/ml 7,25 bc ± 0,95 5. Ekstrak 40 mg/ml 8,25 bc ± 0,95 6. Ekstrak 80 mg/ml 8,75 c ± 1,50