EKSTRAK DAUN GANJA ( Cannabis sativa Linn) SEBAGAI AGEN
ANESTESI IKAN KOI ( Cyprinus carpio Koi)
(Hemp Leaf ( Cannabis sativa Linn) Extract as Anesthetic Agents on Koi ( Cyprinus carpio Koi))
1 Ilham Zulfahmi * , 2 Rindhira Humairani, 2 Yusrizal Akmal
1 Program Studi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Ar-Raniry, Kota Pelajar dan Mahasiswa, Darussalam, Banda Aceh 23111,(email: ilhamgravel@yahoo.com)
2 Program Studi Budidaya Perairan. Fakultas Pertanian, Universitas Almuslim, Jalan Almuslim, Matang Glumpang Dua, Peusangan, Kabupaten Bireuen, Aceh 24261,
(email:Humairanirindhira@gmail.com , drh.yusrizal.akmal.msi@gmail.com)

## ABSTRACT
This  study  aims  to  examine  the  effectiveness  of  hemp  leaf  ( Cannabis  sativa Linn)  as  an anesthetic  agent  of  Koi  Fish  (Cyprinus  carpio  Koi).  Process  making  of  marijuana extraction  and  exposure  to  the  test  fish  were  carried  out  at  the  Mathematics  and  Natural Sciences  Laboratory  of  the  University  of  Almuslim,  while  a  hematological  analysis  was carried  out  at  the  Pathology  Laboratory,  Faculty  of  Veterinary  Medicine,  Syiah  Kuala University.  The  study  was  conducted  based  on  a  completely  randomized  design  (CRD) consisting  of  four  treatments  with  five  replications  for  each  treatment  i.e  treatment  A  (1 mL.L -1 of hemp leaf extract), treatment B (1.5 mL.L -1 of hemp leaf extract), treatment C (2 mL.L -1 of  hemp  leaf  extract),  treatment  D  (4  mL.  L -1 hemp  leaf  extract).  The  results showed that there were significant differences in sedative time and conscious time between treatments.  The  fastest  sedative  time  was  obtained  in  treatment  C,  while  the  longest sedative  time  obtained  in  treatment  A  were  13.16  ±  2.28  minutes  and  20.08  ±  6.30 minutes,  respectively.  The  use  of  overdoses  extract  can  cause  a  decrease  in  oxygen consumption and changes in hematological profile
Keywords : Extraction, hemoglobin, induction time, oxygen consumption level, recovery time

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  mengkaji  efektivitas  ganja  ( Cannabis  sativa Linn)  sebagai  agen anestesi  Ikan Koi ( Cyprinus carpio Koi). Tahapan ekstraksi ganja dan pemaparan kepada ikan  uji  dilaksanakan  di  Laboratorium  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas  Almuslim,  sedangkan  analisis  hematologi  dilakukan  pada  Laboratorium Patologi,  Fakultas  Kedokteran  Hewan,  Universitas  Syiah  Kuala.  Penelitian  dilakukan berdasarkan  rancangan  acak  lengkap  (RAL)  terdiri  dari  empat  perlakuan  dengan  lima ulangan  untuk  masing-masing  perlakuan.  Perlakuan  A  (1  mL.L -1 ekstrak  daun  ganja), perlakuan B (1,5 mL.L -1 ekstrak daun ganja), perlakuan C (2 mL.L -1 ekstrak daun ganja), perlakuan D (4 mL.L -1 ekstrak daun ganja). Hasil penelitian menunjukkan bahwa terdapat
Ekstrak daun ganja ................                                                                     Vol. 16 No. 2 Tahun 2018
perbedaan yang signifikan terhadap waktu sedatif dan waktu sadar antar perlakuan. Waktu sedatif  tercepat  diperoleh  pada  perlakuan  C  sedangkan  waktu  sedatif  terlama  diperoleh pada perlakuan A yaitu masing masing sebesar 13,16 ± 2,28 menit dan 20,08 ± 6,30 menit. Penggunaan  dosis  ekstrak  yang  terlalu  tinggi  dapat  menyebabkan  terjadinya  penurunan tingkat konsumsi oksigen dan perubahan profil hematologi.
Kata penting : ekstraksi , hemoglobin , tingkat konsumsi oksigen, waktu sedatif , waktu sadar

## PENDAHULUAN
Tahapan budidaya ikan selalu berkaitan dengan proses penyortiran, penimbangan  berat,  pemeriksaaan  tingkat kematangan  gonad  dan  pengangkutan (tranportasi)  yang  dapat  berdampak  pada meningkatkannya  tingkat  stres  pada  ikan (Roubach et al ., 2005; Weber et al ., 2009). Menurut  Husen  &  Sharma  (2014)  faktor stres ini menyebabkan terjadinya perubahan plasma kortisol & jumlah limfosit, menurunnya nafsu makan serta meningkatkan kerentanan terhadap penyakit dan kematian. Salah satu upaya meminimalisir  tingkat  stres  dalam  berbagai tahapan tersebut adalah dengan menggunakan agen anestesi.
Sebagian  besar  agen  anestesi  yang digunakan  dalam  budidaya  saat  ini  berasal dari  bahan  sintetik  (Barbaz et  al. ,  2017). Salah satunya adalah tricaine methanesulphonate atau  yang  lebih  dikenal dengan  MS-222.  MS-222  merupakan  agen anestesi  yang  paling  banyak  digunakan dalam  usaha  budidaya  di  dunia.  Walupun demikian,  MS-222  memiliki  harga  sangat mahal  dan  jarang  tersedia  di  negara berkembang  (Popovic et  al. ,  2012).  Selain itu, penggunaan bahan ini juga menimbulkan  efek  samping  terhadap  ikan berupa perubahan tingkah laku dan terjadinya  iritasi  pada  jaringan  organ (Williams et al. , 2009)
Menanggapi  hal  tersebut,  beberapa peneliti  mulai  mengembangkan  berbagai bahan alternatif lainnya yang dapat digunakan  sebagai  agen  anestesi  ikan.
Beragam penelitian sebelumnya menunjukkan  bahwa  ekstrak  dari  beberapa tumbuhan  telah  diujicobakan  sebagai  agen anestesi  ikan.  Inoue et  al. ,  (2003) mengungkapkan  bahwa  minyak  cengkeh efektif  digunakan  sebagai  agen  anestesi ikan Brycon  cephalus. Ektraksi  dari tumbuhan Lippia  alba,  Spilanthes  acmella , & Nicotiana  tabacum juga  dilaporkan memiliki  potensi  sebagai  agen  anestesi terhadap  beberapa  jenis  ikan  (Cunha et  al., 2011;    Barbas et  al., 2016;  Agokei  & Adebisi, 2010).
Ganja ( Cannabis sativa Linn) merupakan tumbuhan yang memiliki sebaran  tinggi  di  daerah  Asia  Tengah, Tenggara  dan  Selatan  (Ayenigbara,  2010). Provinsi Aceh sering dikonotasikan sebagai lumbung  ganja  Indonesia.  Ganja  sangat potensial  dijadikan  agen  anestesi  karena mengandung Tetra  Hydro  Cannabinol (THC)  (Kumar et  al. ,  2001;  Hirst et  al. , 1998).  THC  digunakan  dapat    mengikat reseptor  spesifik  yang  ada  di  dalam  otak yang disebut reseptor cannabinoid (Hampson et  al .,  1998;  D'Souza et  al ., 2004).  Dalam  dosis  rendah,  senyawa tersebut  dapat  mengurangi  rasa  sakit, mengurangi  agresi,  merangsang  nafsu makan  dan  membantu  mengurangi  rasa
mual  (Pertwee  &  Thomas,  2007).  Pada dosis  yang  lebih  tinggi  THC  dapat melindungi saraf dari stress oksidatif melalui antioksidan neuroprotektif (Hampson et al ., 1998). Pemanfaatan ganja sebagai  agen  anestesi  telah  berhasil dilakukan sebelumnya terhadap tikus (Napimoga et al. , 2009).
Ikan  Koi  ( Cyprinus  carpio Koi) adalah  salah  jatu  jenis  ikan  hias  air  tawar yang  diminati  di  Indonesia.  Ikan  ini memiliki  bentuk  badan  dan  warna  yang indah serta dipercaya membawa keuntungan  (Kusrini et  al .,  2015).  Berbeda dengan ikan konsumsi yang dapat ditranportasikan dalam keadaan mati, sebagai ikan  hias, ikan  Koi  harus ditranportasikan  dalam  keadaan  hidup. Upaya  meminimalisisr  stres  terhadap  ikan Koi selama masa tranportasi dapat dilakukan  melalui  pemberian  anestesi. Penelitian ini bertujuan mengkaji efektivitas  ganja  ( Cannabis  sativa Linn) sebagai  agen  anestesi  Ikan  Koi  ( Cyprinus carpio Koi)

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  dilaksanakan  mulai bulai  Juli  sampai  dengan  September  tahun 2018. Tahapan ekstraksi ganja dan pemaparan kepada ikan  uji dilaksanakan di Laboratorium Matematika dan Ilmu Pengetahuan  Alam  Universitas  Almuslim, sedangkan  analisis  hematologi  dilakukan pada  Laboratorium  Patologi,  Fakultas Kedokteran  Hewan,  Universitas  Syiah Kuala.
Ganja  ( Cannabis  sativa Linn)  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  berbentuk kering berasal dari barang sitaan Kepolisian Resort Kabupaten Bireuen setelah sebelumnya  adanya  ikatan  kerjasama  dan pemberitahuan  tentang  adanya  penelitian ini.  Sebanyak  dua  kilogram  daun  ganja
dipisahkan  dari  batangnya  dan  diangkut  ke Laboratorium untuk kemudian dikeringkan. Metode  ektrasi  yang  digunakan  mengacu pada standar Departemen Kesehatan Republik  Indonesia  (2000).  Daun  ganja kering dibersihkan dengan air dan dikeringkan kembali untuk kemudian dihaluskan  dengan  menggunakan  blender kering.  Simplisia  yang  telah  diperoleh kemudian diayak sehingga diperoleh bubuk daun ganja  ( Cannabis sativa Linn). Ekstraksi  dilakukan  dengan  merendam bubuk  dengan  mengunakan  etanol  96  % selama  tiga  hari  dalam  maserator.  Maserat dipisahkan  dengan  cara  filtrasi.  Proses maserasi diulang sebanyak dua kali dengan tetap  menggunakan  pelarut  yang  sama. Estrak  ganja  yang  diperoleh  disimpan sampai dengan waktu pemaparan.
Ikan  Koi  ( Cyprinus  carpio Koi) yang  digunakan  dalam  penelitian  memiliki kisaran  bobot  rata  rata  10  gram  dengan kisaran panjang 11 – 13 cm. Ikan diperoleh dari  Balai  Benih  Ikan  (BBI)  Batee  Iliek kabupaten  Bireuen  dan  diangkut  ke laboratorium  menggunakan  transpontasi darat untuk kemudian diaklimatisasi selama sepuluh  hari.  Selama  masa  aklimatisasi, ikan  diberi  pakan  buatan  dua  kali  sehari. Kotoran  ikan  dan  limbah  pakan  disipon setiap  hari  untuk  menjaga  kondisi  kualitas air media. Setelah masa aklimatisasi selesai, ikan  sehat  dipilih  untuk  digunakan  pada percobaan.

## Perlakuan dan parameter penelitian
Penelitian dilakukan berdasarkan rancangan  acak  lengkap  (RAL)  terdiri  dari empat  perlakuan  dengan  lima  ulangan untuk  masing-masing  perlakuan.  Perlakuan A (1 mL.L -1 ekstrak daun ganja), perlakuan B  (1,5  mL.L -1 ekstrak  daun  ganja), perlakuan C (2 mL.L -1 ekstrak daun ganja), perlakuan D (4 mL.L -1 ekstrak daun ganja).
Wadah pemaparan anastesi yang digunakan adalah  gelas  kimia  bervolume  dua  liter. Ikan uji ditempatkan sebanyak satu ekor per wadah  dengan  tidak  diberi  makan  selama masa perlakuan.
Parameter  utama  yang  diamati  pada penelitian  ini  meliputi  rata-rata  lamanya waktu sedatif dan waktu sadar untuk setiap perlakuan, tingkat konsumsi oksigen,  profil hematologi dan histopatologi insang. Waktu sedatif diukur sesaat setelah ikan dipaparkan  dengan  cairan  anestesi  sampai ikan  tidak  lagi  menunjukkan  gerakan. Waktu  sedatif ikan diatur selama  15 menit. Selama waktu pemingsanan ikan diletakkan dalam media steril tanpa campuran anestesi. Apabila waktu sedatif telah berakhir, media diberikan  aerasi  kuat  dan  mulai  diukur lamanya  waktu  sadar  ikan.  Ikan  dianggap sadar apabila telah mampu menyeimbangkan  tubuhnya  dan  berenang secara  normal  (Tort et  al .,  2002).  Tingkat konsumsi  oksigen  diukur  15  menit  setelah waktu  sadar  ikan.  Pengukuran  tingkat konsumsi oksigen mengacu pada persamaan Liao dan Huang (1975)  yaitu:
Dimana  TKO:  Tingkat  Konsumsi Oksigen (mgO 2 .Gram tubuh -1 .Jam -1 ) DO awal : Oksigen terlarut pada awal pengamatan  (mg.L -1 ),  DO akhir :  Oksigen terlarut  pada  akhir  pengamatan  (mg.L -1 ), W: Berat ikan uji (g), V: Volume air (L), T: Periode  pengamatan  (jam).  Pengambilan contoh  darah  dan  insang  ikan  dilakukan bersamaan  15  menit  setelah  waktu  sadar ikan.  Pengambilan  darah  melalui  vena caudalis dengan spuit 1 ml sebanyak 0,5 ml untuk  kemudian  dimasukkan  kedalam tabung  mikrotube  yang  telah  ditambahkan antikoagulan ethylene  diamine  tetraacetic
acid (EDTA).  Profil  hematologi  dianalisis dengan  menggunakan  alat Mindray  BC- 2800 Auto Hematology Analyzer .

## Analisa Data
Analisis  stastistik  yang  digunakan untuk membandingkan parameter
pengukuran  (waktu  sedatif,  waktu  sadar, tingkat konsumsi oksigen, profil hematologi)  adalah  dengan  menggunakan ANOVA  satu  arah.  Kriteria  berbeda  nyata yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah pada  tingkat  kepercayaan    95%  (p<0,05). Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan bantuan sofware SPSS 22.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penggunaan  anestesi  dalam  bidang akuatultur  salah  satunya  bertujuan  untuk mengurangi  stres  dan  kematian  pada  saat pengangkutan dan pengukuran ikan (Sneddon,  2012).  Disamping  itu,  anestesi terhadap  ikan  terutama  untuk  keperluan penelitian dan kedokteran hewan dimaksudkan dalam rangka menjaga perspektif  etis  kehewanan  (Ashley  et  al., 2007;  Roques  et  al.,  2010).  Saat  ini sebagian besar agen anestesi yang digunakan  dalam  budidaya  saat  ini  berasal dari  bahan  sintetik  (Barbaz et  al. ,  2017). Williams et al. (2009) menyebutkan bahwa penggunaan bahan sintetik dapat menimbulkan  efek  samping  terhadap  ikan berupa  perubahan  tingkah  laku  dan  iritasi pada jaringan organ.
Beragam  penelitian  telah  dilakukan dalam  rangka  menemukan  agen  anestesi ikan yang berasal dari bahan alam. Inoue et al. ,  (2003)  mengungkapkan  bahwa  minyak cengkeh  efektif  digunakan  sebagai  agen anestesi  ikan Brycon  cephalus. Ektraksi dari  tumbuhan Lippia  alba,  Spilanthes acmella ,  & Nicotiana  tabacum juga dilaporkan  memiliki  potensi  sebagai  agen anestesi  terhadap  beberapa  jenis  ikan
(Cunha et  al., 2011;  Barbas et  al., 2016; Agokei  &  Adebisi,  2010).  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  ekstraksi  daun  ganja terbukti  mampu  memberikan  efek  sedatif kepada  ikan  Koi.  Walaupun  demikian  efek sedatif  baru dapat terjadi dalam waktu rata- rata lebih dari sepuluh menit
Terdapat  perbedaan  yang  signifikan terhadap  waktu  sedatif  dan  waktu  sadar antar  perlakuan.  Waktu  sedatif  tercepat diperoleh  pada  perlakuan  C  sedangkan
waktu  sedatif  terlama  diperoleh  pada perlakuan  A  yaitu  masing  masing  sebesar 13,16 ± 2,28 menit dan 20,08 ± 6,30 menit. Walaupun  tidak  ditemukan  perbedaaan yang  signifikan  antara  waktu  sedatif  pada perlakuan  C  dan  perlakuan  D,  akan  tetapi perlakuan  D  memiliki  waktu  sadar  yang lebih lama dibandingkan dengan pertemuan C yaitu masing masing sebesar 12,85 ± 2,56 dan 6,39 ± 1,88 (Gambar 1).
Gambar 1. Waktu Sedatif dan Waktu Sadar Ikan Koi pada Setiap Perlakuan *Superskrip yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (p < 0,05).
Mengacu  pada  pendapat  Ross  & Ross  (2008),  waktu  sedatif  yang  didapat dalam  penelitian  ini  masih  tidak  sesuai dengan waktu standar sedatif dan pemulihan  yang  direkomendasikan,  yaitu berlangsung  dibawah  lima  menit.  Hal  ini diduga  dipengaruhi  oleh  metode  ekstrasi yang  dilakukan.  Dalam  penelitian  ini metode  ekstraksi  yang  dilakukan  masih tergolong sederhana sehingga zat aktif yang diharapkan  dapat  memberikan  efek  sedatif
bagi  ikan  tidak  terekstrak  dengan  baik. Penelitian lanjutan mengenai metode ekstrasi  yang  sesuai  untuk  mendapatkan hasil yang lebih baik masih perlu dilakukan.
Tingkat  konsumsi  oksigen  ikan  Koi setelah waktu sadar menunjukkan penurunan  dibandingkan  tingkat  komsumsi oksigen  sebelum  ikan  diberikan  perlakuan. Walaupun  demikian,  secara  statistik  tidak terdapat  perbedaan  yang  signifikan  antara tingkat  konsumsi  oksigen  sebelum  dan
sesudah  masa  pemaparan  ekstrak  daun ganja  pada  perlakuan  A,  B  dan  C  (Gambar 2).  Tingkat  konsumsi  oksigen  mengalami penurunan  yang  signifikan  pada  perlakuan
D  dibandingkan  dengan  perlakuan  kontrol dengan nilai sebesar 0,19 ± 0,10 (mgO 2 /gram tubuh.jam).
Gambar  2.  Tingkat  Konsumsi  Oksigen  Ikan  Koi  Setelah  Waktu  Sadar  pada  Setiap Perlakuan. *Superskrip yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (p < 0,05)
Seiring  dengan  meningkatnya  dosis ekstrak  daun  ganja,  efek  sedatif  tercepat diperoleh  pada  perlakuan  C  dan  D. Walaupun demikian,  perlakuan D memiliki waktu  sadar  yang  lebih  lama  dibandingkan perlakuan  A  dan  B.  Hal  ini  diduga  terjadi akibat  terganggunya  sistem  pernapasan ikan.  Benli et  al. (2008)  menyebutkan bahwa  organ  pernapasan  sangat  berperan penting  dalam  proses  anestesi.  Jalur  masuk dan  ekskresi  anestesi  pada  ikan  terjadi terutama  melalui  insang,  sedangkan  organ lainnya  memiliki  peran  yang  lebih  kecil (Ross  &  Ross,  2008).  Hasil  penelitian sebelumnya oleh Zulfahmi (2018), menyatakan  bahwa  terdapat  perubahan histopatologi  berupa hyperlasia , epithelial lifting dan lamellar  fusion dalam  intensitas berat  pada  ikan  koi  yang  dipapar  ekstrak daun  ganja  dengan  konsentrasi  tinggi. Tergangunya  sistem  pernapasan  ikan  pada
perlakuan D juga dikaitkan dengan menurunnya tingkat konsumsi oksigen ikan. Perlakuan  D  didapati  memiliki  tingkat konsumsi  oksigen  yang  lebih  rendah dibandingkan perlakuan lainnya.
Hasil pengukuran parameter hematologi  menunjukkan  bahwa  terjadi peningkatan  jumlah  sel  darah  merah  pada perlakuan  A  dibanding  perlakuan  kontrol yaitu  masing  masing  1,56  ±  0,02  x10 6 sel/mL  dan  1,31  ±  0,10  x10 6 sel/mL. Penurunan  jumlah  sel  darah  merah  secara signifikan terlihat pada perlakuan D dengan nilai  1,16  ±  0,14  x10 6 sel/mL.  Selain parameter  jumlah  sel  darah  merah,  ikan pada perlakuan D juga memiliki jumlah sel darah  putih  dan  Hb  yang  lebih  rendah  jika dibandingkan  dengan  perlakuan  kontrol yaitu  masing  masing  sebesar  153,55  ± 20,86  x10 3 sel/mL  untuk  sel  darah  putih
Ekstrak daun ganja ................                                                                     Vol. 16 No. 2 Tahun 2018
dan  7,05  ±  0,91  g/dL  untuk  parameter  Hb (Tabel 1).
Menurut  Tytler  &  Hawkins  (1981), menurunnya tingkat konsumsi oksigen ikan disebabkan  ikan  mengalami  hipoksia. Hipoksia  yang  terjadi  pada  ikan  dapat mempengaruhi  profil  hematologi  darah seperti  menurunkan  Hb  dan  hormon kortisol.  Terjadinya  perubahan  terhadap profil hematologi darah ikan akibat berbgai ragam agen anestesi juga pernah dilaporkan oleh  beberapa  peneliti  sebelumnya  (Gomes et al ., 2001; Sladky et al. , 2001; Sandodden et al. , 2001; Ribas et al ., 2007).

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  ganja  ( Cannabis sativa Linn) sebagai agen anestesi ikan Koi ( Cyprinus carpio Koi) memiliki kandungan bioaktif  yang  berpotensi  dijadikan  agen anestesi  ikan.  Walaupun  demikian,  waktu sedatif  dan  waktu  sadar  ikan  Koi  yang diberi  anestesi  berupa  ekstrak  daun  ganja masih  belum  sesuai  dengan  waktu  standar sedatif  dan  sadar  yang  direkomendasikan. Penggunaan  dosis  ekstrak  yang  terlalu tinggi dapat menyebabkan terjadinya penurunan  tingkat  konsumsi  oksigen  dan perubahan profil hematologi pada ikan Koi.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan kepada  Pusat  Penelitian  dan  Penerbitan, Lembaga Penelitian dan Pengabdian Kepada  Masyarakat,  Universitas  Islam Negeri  Ar-Raniry  yang  telah  mendanai penelitian  ini  melalui  skema  Penelitian Peningkatan  Kapasitas  2018  (SK  No. B- 035/Un.08/LP2M-I/Ks.01.2/03/2018). Disamping  itu,  ucapan  terima  kasih  juga dihaturkan kepada Kepolisian Resort
Kabupaten Bireuen
yang telah memfasilitasi tersedianya bahan baku untuk keperluan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Agokei  OE  &  Adebisi  AA.  2010.  Tobacco as  an  anesthetic  for  fish  handling procedures. Journal  of  Medicinal Plants Research , 4: 1396-1399.
Ashley  PJ,  Sneddon  LU,  McCrohan  CR.
2007.  Nociception  in  fish:  stimulus– response  properties  of  receptors  on the  head  of  trout  Oncorhynchus mykiss. Brain  Research. 1166:  47– 54.
Ayenigbara  GO.  2012.  Medical  Utility  of Cannabis  Sativa. IOSR  Journal  of Pharmacy , 2(3): 460-463.
Barbas LAL, Hamoy M, Mello VJ, Barbosa RPM,  Lima  HST,  Torres  MF, Nascimento LAS, Silva JKR,
Andrade  EHA,  Gomes  MRF.  2017. Essential  oil  of  citronella  modulates electrophysiological responses in tambaqui Colossoma  macropomum : A  new  anaesthetic  for  use  in  fish. Aquaculture , 479: 60-68.
Benli  ACK,  Koksal  G,  Ozkul  A.  2008. Sublethal  ammonia  exposure  of  Nile tilapia  ( Oreochromis  niloticus L.): Effects  on  gill,  liver  and  kidney histology. Chemosphere , 72(9): 1355- 1358.
Cunha  MA,  Silva  BF,  Delunardo  FAC,
Benovit  SC,  Gomes  LC,  Heinzmann BM, Baldisserotto B. 2011.
Anesthetic  induction  and  recovery  of
Hippocampus  reidi exposed  to  the essential oil of Lippia alba . Neotropical  Ichthyology ,  9(3):  683– 688.
D'Souza  DC,  Perry  E,  MacDougall  L,
Ammerman  Y,  Cooper  T,  Braley  G, Krystal JH. 2004. The psychotomimetic effects of intravenous delta-9- tetrahydrocannabinol in healthy
individuals: implications for psychosis. Neuropsychopharmacolog y , 29(8): 1558–1572.
Departemen Kesehatan RI. 2000. Parameter  Standar  Umum  Ekstrak Tumbuhan  Obat .  (Edisi  I).  Direktorat Jendral Pengawasan Obat Dan
Makanan, Direktorat Pengawasan
Obat Tradisional. Jakarta: Gomes  LC,  Chippari-Gomes  AR,  Lopes NP, Roubach R, Araujo-Lima CARM. 2001. Efficacy of Benzocaine as an Anesthetic in Juvenile Tambaqui  Colossoma  macropomum. Journal  of  the  World  Aquaculture Society , 32(4): 426-431.
Hampson AJ, Grimaldi M, Axelrod J, Wink
D.  1998.  Cannabidiol  and  (−)Δ 9 -
tetrahydrocannabinol are neuroprotective antioxidants. Proceedings of the National Academy of Sciences , 95(14): 8268-8273. Hirst RA, Lambert DG, Notcutt WG. 1998. Pharmacology and potential therapeutic  uses  of  cannabis. British
Journal Of Anasthesia, 81(1):77-84.
Husen  A  &  Sharma  AH.  2004.  Efficacy  of anesthetics  for  reducing  stress  in  fish during  aquaculture  practices  -  a review. Kathmandu University
Journal  of  Science,  Engineering  and
Technology, 10(1): 104-123.
Inoue  LAKA,  Neto  CS,  Moraes  G.  2003. Clove  oil  as  anesthesic  for  juveniles of matrinxã Brycon cephalus (Gunther,  1969). Ciência  Rural , 33(5): 943–947.
Kumar  RN,  Chambers  WA,  Pertwee  RG. 2001.  Pharmacological  actions  and therapeutic  uses  of  cannabis  and cannabinoids. Anaesthesia ,  56(11): 1059-1068.
Kusrini E, Cindelaras S, Prasetio AB. 2015. Pengembangan  Budidaya  Ikan  Hias Koi (Cyprinus  Carpio) Lokal  Di Balai  Penelitian  Dan  Pengembangan
Budidaya  Ikan  Hias  Depok. Media Akuakultur , 10(2): 71-78.
Napimoga  MH,  Benatti  BB,  Lima  FO, Alves  PM,  Campos  AC,  Pena-dos- Santos  DR,  Guimarães  FS.  2009.
Cannabidiol decreases bone resorption by inhibiting RANK/RANKL  expression  and  pro- inflammatory cytokines during experimental periodontitis in rats. International immunopharmacology , 9(2): 216-222.
Pertwee RG, Thomas A. 2007. Therapeutic applications for agents that act at CB1 and  CB2  receptors.  In:  Reggio  PH (ed). The Cannabinoid Receptors. The Humana  Press:  Totowa,  NJ:  361  – 392.
Popovic  NT,  Strunjak-Perovic  I,  Coz- Rakovac  R,  Barisic  J,  Jadan  M, Beracovic  AP,  Klobucar  RS.  2012. Tricaine  methane-sulfonate  (MS-222) application in fish anaesthesia. Journal  of  Applied  Ichthyology ,
28(4): 553–564.
Ribas  L,  Flos  R,  Reig  L,  MacKenzie  S, Barton BA, Tort L. 2007. Comparison of methods for anaesthetizing Senegal sole  (Solea  senegalensis)  before slaughter:  Stress  responses  and  final product  quality. Aquaculture ,  269: 250–258
Roques  JAC,  Abbink  W,  Geurds  F.  2010.
Tailfin  clipping,  a  painful  procedure: studies  on  Nile  tilapia  and  common carp. Physiology  &  Behavior, 101:
533–540.
Ross  LG  & Ross  B. 2008. Anaesthetic and sedative techniques for aquatic animals ,  3rd  ed.  Blackwell  Science Ltd. Oxford. 240 pp.
Roubach R, Gomes  LC, Fonseca FAL, Val AL.  2005.  Eugenol  as  an  efficacious anaesthetic  for  tambaqui, Colossoma macropomum (Cuvier). Aquaculture Research , 36(11): 1056– 1061.
Sandodden  R,  Finstad  B.  and  Iversen  M. 2001.  Transport  stress  in  Atlantic salmon  (Salmo  salar  L.):  anaesthesia
and  recovery. Aquaculture  Research . 32(2):87-90.
Sladky  KK,  Swanson  CR,  Stoskopf  MK, Loomis  MR,  Lewbart  GA.  2001. Comparative  efficacy  of  tricane methanesulfonate  and  clove  oil  for use  as  anesthetics  in  red  pacu (Piaractus  brachypomus). American Journal  of  Veterinary  Research ,  62: 337-342.
Sneddon LU. 2012. Clinical anesthesia and analgesia  in  fish. Journal  of  Exotic Pet Medicine , 21: 32–43.
Tytler  R.  and  Hawkins  AD.  1981. Vivisection,  anaesthetics  and  minor surgery.  In:  A.D.  Hawkins,  (Ed.),
Aquarium  Systems.  Academic  Press,
London: 247-278
Weber  ES.  2011.  Fish  analgesia:  pain, stress,  fear  aversion,  or  nociception?. Veterinary  Clinics  of  North  America: Exotic  Animal  Practice ,  14(1):  21-
32.
Williams  T,  Readman  G,  Owen  S.  2009. Key  issues  concerning  environmental enrichment  for  laboratory–held  fish species. Laboratory  Animals ,  43(2): 107–120.
Zulfahmi  I.  2018.  Dampak  Ekstrak  Daun Ganja ( Cannabis sativa Linn) Sebagai Agen Anestesi Terhadap Histopatologi Insang Ikan Koi
( Cyprinus  carpio Koi). Prosiding Seminar  Nasional  Multidisiplin  Ilmu Universitas Asahan : 317–323.
Tabel 1. Profil Hematologi Ikan Koi Setelah Waktu Sadar Pada Setiap Perlakuan
* Superskrip yang berbeda menunjukkan perbedaan yang nyata (p < 0,05).
Parameters Kontrol Perlakuan A Perlakuan B Perlakuan C Perlakuan D RBC (x10 6 cells/mL) 1,32 ± 0,10 a 1,56 ± 0,02 b 1,48 ± 0,07 a 1,36 ± 0,02 a 1,16 ± 0,14 a WBC (x10 3 cells/mL) 186,50 ± 7,07 a 194,55 ± 1,20 a 197,70 ± 10,18 a 175,60 ± 2,68 a 153,55 ± 20,86 b Hb (g/dL) 8,45 ± 0,35 a 9,40 ± 0,84 a 9,60 ± 1,27 a 7,70 ± 0,28 a 7,05 ± 0,91 b Hct (%) 29,60 ± 0,10 a 34,10 ± 2,40 a 22,15 ± 9,26 a 19,50 ± 1,41 a 24,65 ± 3,46 a MCV (fL) 223,85 ± 1,20 a 218,95 ± 19,58 a 187,25 ± 1,06 a 161,7 ± 37,47 a 212,50 ± 2,12 a MCH (pg) 68,85 ± 2,47 a 60,15 ± 4,31 a 62,85 ± 8,13 a 57,70 ± 0,70 a 60,45 ± 0,21 a MCHC (g/dL) 29,50 ± 0,99 a 27,65 ± 4,45 a 33,60 ± 4,10 a 34,10 ± 1,98 a 28,60 ± 0,28 a