## ALCHEMY : JOURNAL OF CHEMISTRY

## Artikel Penelitian
Identifikasi Senyawa Kuersetin dari Fraksi Etil Asetat Ekstrak Daun Alpukat ( Persea americana Mill.)
Elly Rustanti 1 *, Qurrotu A’yunin Lathifah 2
1 Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Husada, Jombang, Indonesia, 61481
2 Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Hutama Abdi Husada, Tulungagung, Indonesia, 66224
INFO ARTIKEL ABSTRAK Riwayat Artikel Direvisi 16 September 2018
Diterima 9 Desember 2018 Tersedia online 30 Desember 2018
* Email penulis korespondensi: eilrose1211.er@gmail.com
Avocado  leaves  ( Persea  americana Mill.)  have  many  benefits  in  our  health because the leaves contain many secondary metabolites. One of the secondary metabolites in avocado leaves is quercetin. Quercetin is the largest compound of the flavonols group in which  percentage of  quercetin and its glycosides  is 60- 75%  of  total  flavonoids.  The  purpose  of  this  study  was  to  isolate  quercetin compounds from ethyl acetate fraction of ethanol extract of avocado leaves and to determine the presence of quercetin compounds in the avocado leaves. The leaves were extracted by maceration using 95% ethanol and fractionated with ethyl  acetate.  Identification  of  quercetin  compounds  using  liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). The results of this study indicated that avocado leaf extract contained quercetin compounds with a retention time of 5.83 minutes with molecular weight m/z = 300.50-301.50 [M-H] + .

## Keywords: Avocado leaves, quercetin, LC-MS
Daun  alpukat  ( Persea  americana Mill.)  banyak  memiliki  kegunaan  dalam kesehatan  karena  mengandung  banyak  metabolit  sekunder.  Salah  satu metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam  daun  alpukat  adalah  kuersetin. Kuersetin adalah senyawa kelompok flavonol terbesar yang mana kuersetin dan glikosidanya  berada  dalam  jumlah  sekitar  60-75%  dari  flavonoid.  Tujuan  dari penelitian ini adalah untuk mengisolasi senyawa kuersetin dari fraksi etil asetat dari  ekstrak  etanol  daun  alpukat  dan  untuk  mengetahui  adanya  senyawa kuersetin  dalam  daun  alpukat.  Daun  alpukat  diekstraksi  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut etanol 95% dan difraksinasi dengan etil asetat. Identifikasi  senyawa  kuersetin  dengan  menggunakan  kromatografi  cair- spektrometri  massa  (KC-SM).  Hasil  dari  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa dalam  ekstrak  daun  alpukat  mengandung  senyawa  kuersetin  dengan  waktu retensi 5,83 menit dengan berat molekul m/z= 300,50-301,50 [M-H] + .
Kata kunci : Daun alpukat, kuersetin, KC-SM

## 1. Pendahuluan
Indonesia terkenal dengan kekayaan alam yang memiliki berbagai jenis tumbuhan yang berkhasiat sebagai obat. Obat  tradisional  telah  dikenal  dan  digunakan  secara  turun-temurun  oleh  masyarakat  Indonesia.  Pemanfaatan  obat tradisional  pada  umumnya  lebih  diutamakan  untuk  menjaga  kesehatan,  meskipun  pemanfaatannya  ada  pula  yang ditujukan sebagai pengobatan suatu penyakit.
Daun alpukat (Persea americana Mill. ) merupakan daun yang memiliki banyak kegunaan dalam kesehatan karena mengandung zat fitokimia. Hasil penapisan fitokimia yang telah dilakukan Putri dkk. [1] menyatakan bahwa daun alpukat mengandung  senyawa  flavonoid,  alkaloid,  tanin,  saponin  dan  steroid.  Adapun  hasil  skrining  fitokimia  yang  dilakukan Sentat & Permatasari [2] menyatakan bahwa ekstrak daun alpukat memiliki kandungan senyawa kimia alkaloid, flavonoid, saponin dan tanin.
Kuersetin  ( quercetin )  adalah  salah  satu  zat  aktif  golongan  flavonoid  yang  memiliki  aktivitas  biologis  yang  kuat. Apabila  vitamin  C  mempunyai  aktivitas  antioksidan  1,  maka  kuersetin  memiliki  aktivitas  antioksidan  4,7  [3].  Flavonoid merupakan sekelompok  besar  antioksidan  bernama  polifenol  yang terdiri  atas  antosianidin,  biflavon,  katekin, flavanon, flavon,  dan  flavonol.  Kuersetin  termasuk  dalam  senyawaan  flavonol.  Kuersetin  adalah  senyawa  kelompok  flavonol terbesar dengan kandungan kuersetin dan glikosidanya berada dalam jumlah sekitar 60-75% dari flavonoid [4].
Kuersetin  dipercaya  dapat  melindungi  tubuh  dari  beberapa  jenis  penyakit  degeneratif  dengan  cara  mencegah terjadinya proses peroksidasi lemak. Kuersetin memperlihatkan kemampuan mencegah proses oksidasi dari Low Density Lipoproteins (LDL) dengan cara menangkap radikal bebas dan mengkelat ion logam transisi [5]. Aktivifitas farmakologi flavonoid  khususnya  senyawa  kuersetin  yang  potensial  menimbulkan keinginan  peneliti untuk  mengetahui  kandungan kuersetin yang terdapat dalam ekstrak daun alpukat dengan menggunakan metode LC-MS (liquid chromatography-mass spectrometry).

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1. Bahan
Bahan utama yang digunakan adalah daun alpukat. Bahan kimia yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol 95%, kloroform, etil asetat, asam sulfat pekat, asam asetat anhidrat, kolesterol standar, asam klorida, natrium bikarbonat, akuades, kertas saring, dan aluminium foil.

## 2.2. Preparasi Sampel dan Isolasi Senyawa Kuersetin
Daun alpukat dicuci dengan air mengalir dan dikeringanginkan kemudian dihaluskan dengan blender . Sampel daun alpukat  yang  telah  dipreparasi  sebanyak  400  gram  ditambah  4  L  etanol  95%  dan  didiamkan  dalam  bejana  tertutup selama  24  jam.  Maserasi  dilakukan  tiga  kali  ulangan  agar  ekstraksi  berlangsung  sempurna.  Hasil  maserasi  berupa ekstrak  etanol  daun  alpukat,  kemudian  diuapkan  dengan  menggunakan rotary evaporator sehingga  diperoleh  ekstrak kental. Ekstrak dihidrolisis dengan asam klorida dan dinetralkan dengan natrium bikarbonat.

## 2.3. Fraksinasi Ekstra Daun Alpukat
Sampel hasil ekstrak difraksinasi dengan 200 mL etil asetat digojog selama 6 jam, lalu didiamkan selama 24 jam. Refraksinasi  dilakukan  sebanyak  dua  kali.  Fraksi  yang  diperoleh  diuapkan  dengan  menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh fraksi etil asetat kental. Fraksi etil asetat selanjutnya diidentifikasi dengan menggunakan LC-MS.

## 2.4. Identifikasi Senyawa Kuersetin Ekstrak Etanol Daun Alpukat
Sampel ekstrak etanol daun alpukat hasil fraksinasi dianalisis menggunakan LC-MS untuk memperoleh data secara kualitatif. Dari hasil analisis data LC-MS akan didapatkan kromatogram berupa alur tinggi puncak dan akan didapatkan berat  molekul  dari  senyawa  yang  terdapat  dalam  ekstrak  etanol  daun  alpukat.  Pengujian  dilakukan  dengan  cara mengatur kondisi operasi alat LC-MS.
Analisis LC-MS dilakukan dengan menggunakan Mariner Biospectrometry dilengkapi dengan pompa biner. HPLC dihubungkan  dengan  spektrometer  massa  Q-TOF  dilengkapi  dengan  sumber  electrospray  ionization  (ESI).  Mode extracted ion chromatogram (EIC) dari m/z 100-1200 dilakukan dengan suhu 140°C. Kolom HPLC yang digunakan untuk analisis  yaitu  Phenomenex  5  μm  C18,  150  ×  1  mm.  Pelarut  metanol  dengan  0,3%  asam  asetat,  laju  alir  total  0,05 mL/menit dan untuk menjalankan pelarut digunakan metode elusi isokratik.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Preparasi Sampel
Daun alpukat dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan debu dan kotoran yang melekat pada daun. Daun tersebut dikeringanginkan selama 2 jam di tempat yang terlindung dari paparan sinar matahari langsung. Pengeringan bertujuan untuk menurunkan kadar air, memudahkan pengolahan, dan memperlama penyimpanan [6]. Daun dihaluskan menggunakan blender dan diperoleh sampel halus sebanyak 400 gram untuk dilakukan ekstraksi. Penghalusan dengan blender bertujuan  untuk  memperkecil  ukuran  partikel  sampel  sehingga memperluas  kontak  permukaan  antara  cairan penyari  dan  bahan  aktif  yang  terkandung  dalam  tanaman  sehingga  proses  ekstraksi  dapat  berjalan  dengan  lebih maksimal. Sampel daun alpukat ditunjukkan pada Gambar 1 .
Gambar 1. Sampel daun alpukat (a) hasil pengeringan, dan (b) hasil penyerbukan

## 3.2. Isolasi Senyawa Kuersetin dari Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Daun Alpukat
Ekstraksi  daun  alpukat  dilakukan  dengan  metode  maserasi  atau  perendaman  menggunakan  pelarut  etanol  95% ( Gambar 2 ). Etanol dapat merusak dinding sel pada sampel sehingga senyawa yang bersifat polar dapat terlarut dalam etanol.  Selama  proses  maserasi  terjadi  proses  difusi.  Metode  maserasi  dipilih  karena  cara  pengerjaan  dan  peralatan yang  digunakan  sederhana  dan  metode  ini  memaksimalkan  kontak  antara  pelarut  dan  bahan  serta  dapat  digunakan untuk zat yang tahan maupun tidak tahan pemanasan [7]. Daun alpukat sebanyak 400 gram diekstraksi menggunakan 4 L etanol 95% dengan cara direndam selama 24 jam sambil sesekali diaduk. Proses ini  dilakukan tiga kali pengulangan untuk mendapatkan hasil ekstraksi yang maksimal.
Gambar 2. Ekstraksi dengan etanol 95% dan fraksinasi dengan etil asetat
Hasil  maserasi  disaring  dan  dipekatkan  dengan  menggunakan vaccum  rotary  evaporator pada  suhu  45°C  untuk menghindari  kerusakan  zat  aktif  akibat  pengaruh suhu  tinggi.  Pada proses  ini  dihasilkan  ekstrak kental.  Ekstrak  pekat selanjutnya dihidrolisis dengan asam klorida pada suhu ruang selama 2 jam dan dinetralkan dengan natrium bikarbonat bertujuan  untuk  memisahkan  senyawa  polar  seperti  kuersetin  dari  ekstrak  pekat.  Proses  fraksinasi  dilakukan  dengan mengojog  sampel  menggunakan  200  mL  etil  asetat  selama  6  jam,  lalu  didiamkan  selama  24  jam.  Refraksinasi berlangsung  sebanyak  dua  kali.  Fraksinasi  dilakukan  hingga  fraksi  etil  asetat  berwarna  bening  yang  mengindikasikan bahwa  semua senyawa semipolar yang terkandung di  dalam sudah tertarik ke fraksi  etil  asetat.  Fraksi  yang  diperoleh diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh fraksi etil asetat kental.
Fase etil asetat Fase air a b

## 3.3. Identifikasi Senyawa Kuersetin
Fraksi  etil  asetat  diidentifikasi  dengan  menggunakan  LC-MS  untuk  mengetahui  senyawa  kuersetin  berdasarkan berat  molekulnya.  Berdasarkan  hasil  identifikasi  menggunakan  LC-MS  didapat  bahwa  dalam  ekstrak  daun  alpukat mengandung  senyawa  kuersetin  dengan  waktu  retensi  5,83  menit  dengan  m/z=  300,50-301,50  [M-H] + .  Hal  ini  sesuai dengan  penelitian  Harizon  dkk.  [8]  yang  menunjukkan  bahwa  senyawa  kuersetin  dari  kulit  batang Sonneratia  alba ( Lythraceae )  berdasarkan  spektrum  UP-LC-MS/MS  memiliki  berat  m/z  301,03  [M-H] + .  Berdasarkan  literatur,  rumus molekul senyawa kuersetin adalah C 15 H 10 O 7 dengan berat molekul 302,236 mol/g . Pada sampel fraksi etil asetat kuersetin didapatkan puncak spektrum [M-H] + dengan nilai m/z 301 seperti pada standar kuersetin, tetapi dengan intensitas yang rendah ( Gambar 3 ).

## Gambar 3. Hasil Identifikasi Senyawa Kuersetin dengan LC-MS
Pada penelitian Harizon dkk. [8] juga mengidentifikasi senyawa kuersetin dengan menggunakan UV, IR, dan NMR menunjukkan  bahwa  senyawa  kuersetin  diperoleh  berupa  padatan  berwarna  kuning;  UV  (MeOH):  maks  254  nm (  6,200), 380 (  7,200); IR (KBr)  maks 3409, 1665, 1611, 1015 cm -1 . 1H- dan 13C-NMR (aseton-d6, 500 MHz untuk 1H- NMR  dan  125  MHz  untuk  13C-NMR).  Penelitian  Fitrya  [3]  menunjukkan  bahwa  hasil  isolasi  flavonoid  kuersetin  dari tanaman  benalu  teh  berupa  serbuk  amorf  berwarna  kuning  dengan  titik  leleh  177-179 o C.  Analisis  spektrum  UV menunjukkan  maks pita I (348 nm) dan pita II (255 nm). Pereaksi geser NaOH, NaOAc, NaOAc/asam borat, AlCl 3 dan AlCl 3 /HCl menunjukkan bahwa senyawa flavonoid tersubstitusi pada 3,3',4',5,7 pentahidroksi flavon. Analisis spektrum IR menunjukkan  adanya  regang  OH  (3369  cm -1 ),  regang  C-H  alifatik  (2956  cm -1 ),  regang  C=O  (1658  cm -1 ),  regang  C=C (1606 cm -1 ) dan ulur C-O (1271-1143 cm -1 ). Berdasarkan analisis data spektrum UV dan IR menunjukkan senyawa hasil isolasi adalah flavonoid 3,3,4,5,7-pentahidroksi flavon atau kuersetin.

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  alpukat  hasil fraksinasi dengan etil asetat mengandung senyawa kuersetin pada waktu retensi 5,83 menit dengan berat molekul m/z sebesar  300,50-301,50 [M-H] + tetapi  belum  diketahui  secara  kuantitatif  kandungan  senyawa  kuersetin  yang  terdapat dalam ekstrak etanol daun alpukat.

## Daftar Pustaka
[1] E.  P.  K.  Putri,  B.  Hamzah,  &  N.  Rahman,  “Analisis  Kualitatif  Zat  Bioaktif  pada  Ekstrak  Daun  Alpukat  ( Persea Americana Mill.) dan Uji Praklinis dalam Menurunkan Kadar Glukosa Darah pada Mencit ( Mus musculus ),” Jurnal Akademika Kimia, vol. 2, no. 3, pp. 119-127 , 2013.
[2] T.  Sentat,  &  R.  Permatasari,  “Uji  Aktivitas  Ekstrak  Etanol  Daun  Alpukat  ( Persea  Americana Mill.)  terhadap  Penyembuhan  Luka  Bakar  pada  Punggung  Mencit  Putih  Jantan  ( Mus  Musculus ),” Jurnal  Ilmiah Manuntung Sains Farmasi dan Kesehatan, vol. 1, no. 2, pp. 100-106, 2015.
[3] Fitrya, “Flavonoid Kuersetin dari Tumbuhan Benalu Teh ( Scurulla atropurpureea BL. Dans),” Jurnal Penelitian Sains, vol. 14, no. 4(C) 14408, pp. 33-37, 2011.
[4] D. A. Anggorowati, G. Priandini, & Thufail, “Potensi Daun Alpukat ( Persea Americana Mill.) Sebagai Minuman Teh Herbal yang Kaya Antioksidan,” INDUSTRI Inovatif, vol. 6, no. 1, pp. 1-7, 2016.
[5] G. S. Kelly, “Quercetin. Monograph,” Alternative Medicine Review , vol. 16, no. 2, pp. 172-194, 2011.
[6] H.  Karyati,  A.  B.  Utomo,  &  E.  V.  Mutiara,  “Pengaruh  Pemberian  Ekstrak  Etanol  dan  Isolat  Flavonoid Daun  Murbei  ( Morus  alba L.)  terhadap  Penurunan  Kadar  Kolesterol secara in  vitro, ”  Skripsi,  Sekolah  Tinggi  Ilmu Farmasi, Semarang, 2013.
[7] A. Z. Imani, “Uji Aktivitas Antijamur Ekstrak Etanol Daun Mangga Bacang (Mangifera foetida L. ) terhadap Candida albicans secara in vitro, ” Jurnal Mahasiswa PSPD FK Universitas Tanjungpura , vol. 3, no. 1, 2015.
[8] Harizon, B. Pujiastuti, D. Kurnia, D. Sumiarsa, U. Supratman, & Y. Shiono, “Kuersetin dan Kuersetin-3- O -Glukosida dari Kulit Batang Sonneratia alba (Lythraceae),” Jurnal Kimia VALENSI: Jurnal Penelitian dan Pengembangan Ilmu Kimia , vol. 1, no. 1, pp. 33-38, 2015.