## FORMULATION AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF COCOA BEAN EXTRACT
TOOTHPASTE (Theobroma Cacao L .) AGAINST STREPTOCOCCUS MUTANS
FORMULASI DAN UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI PASTA GIGI EKSTRAK ETANOL BIJI KAKAO (Theobroma Cacao L .) TERHADAP BAKTERI STREPTOCOCCUS MUTANS
Apriliani M. M. L. Rarung 1) , Paulina Veronika Yolanda Yamlean 2) ,  Karlah Lifie Riani Mansauda 3) 1) Program Studi Farmasi, FMIPA UNSRAT, Manado 95115 lianrarung@gmail.com

## ABSTRACT
Cocoa beans ( Theobroma cacao L.) are seeds of the cocoa which have a components, is polyphenols which have  the  potential  as  antibacterial.  This  study  aimed  to  formulate  the  toothpaste  of  Cocoa  bean  ethanol extract  with  concentrations  of  5%,  7.5%,  10%,  12.5%,  15%  and  tested  for  physical  evaluation  of  the preparation and to obtain the inhibitory power against Streptococcus mutans bacteria. This research uses laboratory  experimental  method.  The  results  showed  an  organoleptic  physical  evaluation  requirements, homogeneity, pH test 7.4-7.7, spreadability test 30-33 mm, and adhesion test 2.25-3.23 seconds and has antibacterial activity with an average diameter of F1 (8.16 mm), F2 (8.5 mm), F3 (9.5 mm), F4 (10.41 mm) are  medium  category  and  F5  (11.58  mm)  is  in  the  strong  category.  Based  on  the  study  result  can  be concluded  that  all  formulations  of  toothpaste  preparations  of  Cocoa  bean  ethanol  extract  filled  the antibacterial activity requirements and physical test requirements and had the strongest antibacterial activity at a concentration of 15% at 11.58 mm.
Keywords: Cocoa Beans ( Theobroma cacao L.), Toothpaste, Antibacterial, Streptococcus mutans

## ABSTRAK
Biji Kakao ( Theobroma cacao L.) merupakan biji buah Kakao yang mempunyai komponen polifenol yang berpotensi sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk memformulasikan pasta gigi ekstrak etanol biji Kakao  konsentrasi  5%,  7,5%, 10%,  12,5%,  15% dan  diuji  evaluasi  fisik  sediaan serta  mendapatkan daya  hambat  terhadap  bakteri Streptococcus  mutans. Penelitian  ini  menggunakan  metode  eksperimental laboratorium. Hasil penelitian menunjukkan evaluasi fisik memenuhi syarat organoleptik, homogenitas, uji pH 7,4-7,7, uji daya sebar 30-33 mm, dan uji daya lekat 2,25-3,23 detik serta memiliki aktivitas antibakteri dengan diameter rata-rata F1 (8,16 mm), F2 (8,5 mm), F3 (9,5 mm), F4 (10,41 mm) dikategorikan sedang dan  F5  (11,58  mm)  dikategorikan  kuat.  Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa  semua formula sediaan pasta gigi ekstrak etanol biji Kakao memenuhi persyaratan uji fisik dan aktivitas antibakteri serta memiliki aktivitas antibakteri paling kuat yaitu pada konsentrasi 15% sebesar 11,58 mm.
Kata Kunci: Biji Kakao (Theobroma Cacao L.), Pasta Gigi, Antibakteri, Streptococcus mutans

## PENDAHULUAN
Riset  kesehatan  dasar  (2018)  menunjukkan adanya  masalah  kesehatan  gigi  dan  mulut penduduk Indonesia  dengan peningkatan yang
sangat  signifikan  mencapai  25,9%  pada  tahun 2013  dan tahun  meningkat  menjadi  57,6%  pada tahun  2018.  Provinsi  Sulawesi  Utara  memiliki
masalah gigi dan mulut sebesar 66,5%. Dari data ini  terlihat  bahwa  masyarakat  Indonesia  yang mempunyai  masalah  gigi  semakin  meningkat (Kemenkes,  2018).  Penyakit  karies  gigi  sangat banyak ditemukan pada masyarakat di Indonesia. Karies  gigi  merupakan  salah  satu  penyakit  gigi dan mulut yang berupa jaringan keras gigi, yaitu email,  dentin  dan  sementum  yang  disebabkan aktivitas  mikroorganisme  dalam  meragikan karbohidrat. Hal ini ditandai dengan demineralisasi  enamel  (Afni,  dkk,  2015).  Untuk mencegah  adanya  karies  gigi  yaitu  dengan melakukan  sikat  gigi  secara  rutin  menggunakan pasta gigi.
Salah satu bahan alam yang dapat digunakan sebagai bahan pengganti untuk mencegah karies gigi ialah biji Kakao ( Theobroma cacao L.). Biji Kakao  mempunyai  beberapa  komponen  aktif yang  salah  satunya  ialah  polifenol.  Polifenol merupakan  senyawa  yang  berpotensi  sebagai antibakteri  dan  polifenol  yang  dikandung  biji Kakao  ini  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri Streptococcus  mutans ,  yang  merupakan bakteri utama penyebab karies gigi (Purnamasari, 2010).
Bakteri Streptococcus  mutans merupakan golongan bakteri yang sama dengan Enterococcus faecalis yaitu bakteri Gram positif anaerob  fakultatif.  Hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  oleh  Sepriyani  (2016),  menunjukkan bahwa  ekstrak  etanol  biji  Kakao  dengan konsentrasi  25%  dan  12,5%  memiliki  pengaruh dalam menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus mutans dengan zona hambat kuat, yaitu  rata-rata  zona  hambat  pada  konsentrasi 12,5% sebesar 10,10 mm.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Peneliatian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Desember  2021  sampai  dengan  Juni  2022  di Laboratorium  Lanjut  Divisi  Teknologi  Farmasi, Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi Manado.

## Alat

## Ekstraksi
Simplisia biji Kakao diekstrak menggunakan metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  96%.
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini ialah alat – alat gelas ( Duran, Pyrex ), mikro pipet, oven  ( Inforce ® ),  pH  meter,  cawan  petri,  kaca arloji, batang pengaduk, aluminium foil, autoklaf ( GEA  Medical ® ),  inkubator  ( MMM  Gramoup ® ), blender  ( Kirin ® ),  hot  plate  ( Nesco  Lab ® ), sentrifuge  ( Hettich  Zentrifungen ® ),  laminar  Air Flow ( LAF ® ), ayakan dan timbangan analitik ( Ae Adam ® ).

## Bahan
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini ialah  bakteri  Streptococcus  mutans,  ekstrak etanol  biji  Kakao  ( Theobroma  cacao  L .),  etanol 96%,  Na-CMC,  gliserin,  kalsium  karbonat, natrium  lauril  sulfat,  natrium  benzoat,  natrium sakarin,  menthol,  aquadest,  NaCl  0,9%,  Nutrien Agar  (NA),  Hydrochloric  Acid  (HCl)  0,1  N, H2SO4  (Sulfuric  Acid),  BaCl2.2H2O  (Barium Chloride  Dihydrate)  dan  kontrol  positif  (Pasta Gigi Antibakteri Daun Sirih).

## Prosedur  Penelitian Pengambilan Sampel
Sampel  biji  Kakao  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  biji  dari  buah  Kakao  yang didapat  dari  perkebunan  Desa  Tongkeina, Kecamatan  Bunaken,  Kota  Manado,  Sulawesi Utara.

## Preparasi Sampel
Buah Kakao  dikumpulkan  dan  dibelah  untuk mengeluarkan  isinya.  Kemudian  disortasi  basah dengan  cara  menghilangkan  kotoran  yang menempel ataupun isi Kakao yang rusak. Lalu di cuci  dengan  air  bersih  yang  mengalir  kemudian dipotong-potong agar biji Kakao berukuran lebih kecil. Tahap selanjutnya, biji Kakao dikeringkan dalam oven dengan suhu 40°C selama 3 hari. Lalu Biji  Kakao  disortasi  kering  untuk  memisahkan kotoran  yang  masih  menempel  kemudian dihaluskan menggunakan blender sampai menjadi simplisia kering dan diayak menggunakan ayakan sehingga  menjadi  serbuk  halus yang  siap  untuk diekstraksi (Anastasia dkk, 2017).
Sampel  sebanyak  500  g  yang  telah  ditimbang, dimasukkan  ke dalam toples kaca dan direndam dengan  pelarut  etanol  96%  sebanyak  2500  mL selama 3 hari sambil sesekali diaduk. Setelah itu,
ekstrak  disaring  dengan  menggunakan  kertas saring  dan  diperoleh  maserat  1  dan  residu  1. Residu  yang  terbentuk  kemudian  dimaserasi
dengan  pelarut  etanol  96%  sebanyak  1500  mL selama  2  hari  sambil  sesekali  diaduk.  Setelah  2 hari, dilakukan penyaringan sehingga menghasilkan  maserat  2  dan  residu  2.  Maserat yang dihasilkan diuapkan menggunakan oven.
Formulasi Sediaan Pasta Gigi Ekstrak Etanol Biji Kakao (Theobroma Cacao L.) Tabel 1. Formulasi Sediaan Pasta Gigi Ekstrak Etanol Biji Kakao (Theobroma Cacao L.)
Nama Bahan Fungsi Konsentrasi (%b/b) F1 F2 F3 F4 F5 Ekstrak Biji Kakao Bahan Aktif 5 7,5 10 12,5 15 Na-CMC Bahan Pengikat 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 Gliserin Humektan 20 20 20 20 20 Kalsium karbonat Abrasif 40 40 40 40 40 Natrium lauryl sulfat Surfaktan 1 1 1 1 1 Natrium benzoat Pengawet 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 Natrium sakarin Pemanis 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 Menthol Perasa 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 Aquadest Pelarut ad 100 ad 100 ad 100 ad 100 ad 100 Keterangan: F1 : Konsentrasi ekstrak biji Kakao 5% F2 : Konsentrasi ekstrak biji Kakao 7,5% F3 : Konsentrasi ekstrak biji Kakao 10% F4 : Konsentrasi ekstrak biji Kakao 12,5% F5 : Konsentrasi ekstrak biji Kakao 15% Kontrol Positif : Pasta Gigi Antibakteri Daun Sirih Kontrol Negatif : Basis Pasta Gigi

## Prosedur Pembuatan Pasta Gigi
Menimbang  bahan  aktif  ekstrak  biji  kakao dengan  variasi  konsentrasi  5%,  7,5%,  10%, 12,5%,  15%  dan  bahan  tambahan  natrium karboksimetilselulosa (Na CMC), kalsium karbonat, gliserin, natrium lauryl sulfat, natrium benzoat, natrium sakarin, menthol dan aquadest. Na-CMC  di  dispersikan  dalam  aquades  panas. Natrium  sakarin  dan natrium  benzoat  dilarutkan dengan  sebagian  aquadest.  Lalu  ditambahkan dispersi  Na  CMC,  menthol,  gliserin  kemudian ditambah sedikit demi sedikit kalsium karbonat . Kemudian  ekstrak  etanol  biji  Kakao,  lalu  Na- Lauryl  sulfat  ditambahkan  dan  diaduk  sampai terbentuk  massa  pasta.  Sediaan  pasta  gigi  yang telah jadi dimasukkan ke dalam wadah.
Evaluasi Fisik Sediaan Uji Organoleptik
Pengujian  dilakukan  secara  kualitatif  dengan melihat  warna,  aroma,  dan  bentuk  dari  sediaan pasta gigi.

## Uji Homogenitas
Pengujian  dilakukan  dengan  cara  pasta  gigi dioleskan sebanyak 3 kali diambil dari 3 bagian yang berbeda yaitu bagian atas, tengah dan bawah pada kaca objek kemudian dilakukan pengamatan visual  apakah  sediaan  sudah  homogen  atau belum.  Sediaan  dikatakan  baik  jika  memenuhi standar  kualitas  pasta  gigi  yaitu  homogen  (SNI No. 8861:2020).

## Uji Keasaman (pH)
Uji dilakukan dengan cara mengukur sediaan secara langsung dengan menggunakan pH meter sebanyak  3  kali  lalu  diambil  rata  –  ratanya.  pH sediaan  dikatakan  baik  jika  memenuhi  standar
mutu  pasta  gigi  yaitu  sebesar  6  -  10  (SNI  No. 8861:2020).

## Uji Daya Sebar
Sampel seberat 1 g diletakan di antara 2 kaca. Lalu diberi beban sebesar 50 g di atas kaca dan diukur diameternya sebelum dan sesudah 1 menit pemberian  beban.  Beban  50  g  ditambahkan  dan ditunggu  selama  1  menit  dan  diukur  kembali diameternya. Kemudian beban 100 g ditambahkan dan ditunggu selama 1 menit. Lalu diukur kembali diameternya. Pengukuran diameter dilakukan pada 3 titik yang berbeda dan diambil rata – ratanya (Doko, 2018).

## Uji Daya Lekat
Sediaan pasta gigi sebanyak 0,25 g ditimbang dan diletakan pada kaca objek kemudian ditutup dengan  kaca  objek  yang  lain  sampai  tertutup sempurna. Beban seberat 1 kg diletakkan di atas kaca  objek  yang  menutupi  sediaan  selama  5 menit. Kemudian beban sebesar 80 g digunakan untuk melepaskan objek gelas dari lekatan pasta gigi. Waktu yang digunakan untuk melepas kedua kaca  objek  kemudian  diukur  menggunakan stopwatch (Marchaban et al , 2017).
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Pasta  Gigi  Ekstrak Etanol Biji Kakao
1. Sterilisasi Alat Alat-alat yang disterilkan harus dalam keadaan bersih  dan  kering.  Tabung  reaksi,  gelas  ukur, erlenmeyer,  cawan  petri  disterilkan  dalam autoklaf pada suhu 121°C dengan tekanan 2 atm selama 30 menit. Pinset dan jarum ose disterilkan dengan cara dipijarkan pada nyala Bunsen (Afni, dkk, 2015).
2. Pembuatan Media Agar Nutrien  Agar  (NA)  sebanyak  4  gram dilarutkan dalam 200 mL aquades menggunakan erlenmeyer. Kemudian disterilkan menggunakan autoklaf  pada  suhu  121°  C  selama  30  menit dengan  tekanan  2  atm.  Selanjutnya  dibiarkan pada  suhu  ruangan  seelama  ±30  menit.  Media agar  miring  ini  digunakan  untuk  inokulasi bakteri, lapisan pertama dan lapisan kedua (Afni, dkk, 2015).
3. Pembuatan  Standar  Kekeruhan  Larutan  Mc. Farland 0,5
Larutan  H2SO4  1  %  sebanyak  9.95  mL dicampurkan  dengan  larutan  BaCl2.2H2O
1,175% sebanyak 0,05 mL dalam tabung reaksi. Selanjutnya  dikocok  sampai  terbentuk  larutan yang  keruh.  Kekeruhan  larutan  ini  dipakai sebagai  standar  kekeruhan  suspensi  bakeri  uji (Afni, dkk, 2015).
4. Pembuatan Suspensi Uji Bakteri Bakteri  uji  pada  media  agar  miring  diambil dengan  menggunakan  kawat  ose  steril  lalu disuspensikan ke dalam tabung yang berisi 10 mL larutan  NaCl  0,9  %  dalam  tabung  reaksi kemudian dikocok hingga diperoleh larutan yang keruh.  Kekeruhan  ini  dipakai  sebagai  standar kekeruhan suspensi bakteri uji (Afni, dkk, 2015). 5. Pembuatan Media Pengujian Media  Uji  dibuat  dengan  metode  difusi  agar dengan  cara  sumuran  dengan  2  lapisan  media agar  dengan  pengerjaan  sebagai  berikut:  (Afni, dkk, 2015).
1) Lapisan  agar  yang  pertama  dibuat  dengan menuangkan masing-masing 15 mL NA ke dalam 3 cawan petri, selanjutnya dibiarkan memadat. 2) Setelah  memadat,  pada  permukaan  lapisan dasar  ditanam  7  pecandang  menggunakan  alat tips diameter 7 mm dengan jarak dari tepi cawan yaitu  2  cm,  jarak  antar  sumur  3  cm,  dan  untuk kedalaman  sumurnya  4  mm  agar  daerah pengamatan tidak bertumpu pada masing-masing cawan.
3) Suspensi bakteri dicampurkan kedalam media pembenihan NA.
4) Lapisan  agar  yang  kedua  dibuat  dengan menuangkan  masing-masing  15  mL  NA  yang sudah  ditambahkan  suspensi  bakteri  ke  dalam  3 cawan petri, selanjutnya dibiarkan memadat. 5) Setelah  lapisan  kedua  memadat,  pecandang diangkat secara aseptik menggunakan pinset dari masing-masing  cawan  petri,  sehingga  terbentuk sumur-sumur  yang  akan  digunakan  dalam  uji antibakteri.
6. Uji Efektivitas Antibakteri
1) Basis  pasta  gigi  tanpa  ekstrak  digunakan sebagai  kontrol  negatif  dimasukan  pada  sumur sebanyak 0,1 g
2) Pasta  gigi  antibakteri  daun  sirih  digunakan sebagai  kontrol  positif  dimasukan  pada  sumur sebanyak 0,1 g.
3) Sediaan  pasta  gigi  ekstrak  etanol  biji  Kakao dengan konsentrasi 5%, 7,5%, 10%, 12,5%, 15% dimasukkan  pada  sumur-sumur  yang  berbeda sebanyak 0,1 g
4) Kemudian  cawan  petri  diinkubasi  dalam inkubator pada suhu 37oC selama 24 jam. 7. Pengamatan dan Pengukuran Pengamatan dilakukan setelah 1x24 jam masa inkubasi.  Daerah  bening  merupakan  petunjuk kepekaan  bakteri  terhadap  antibiotik  atau  bahan antibakteri lainnya yang digunakan sebagai bahan uji yang dinyatakan dengan lebar diameter zona hambat.  Diameter  zona  hambat  diukur  dalam satuan  millimeter  (mm)  menggunakan  mistar berskala  dengan  cara  diameter  keseluruhan dikurangi  diameter  sumuran  7  mm.  Selanjutnya diameter  zona  hambat  tersebut  dikategorikan kekuatan  daya  antibakterinya  sesuai  dengan kriteria kekuatan daya antibakteri menurut Davis dan Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstrak Etanol Biji Kakao
Ekstraksi  yang  dilakukan  menggunakan  cara dingin  yaitu  maserasi.  Ekstraksi  ini  bertujuan untuk  menarik  senyawa-senyawa  metabolit sekunder  yang  terkandung  di  dalam  simplisia dengan  menggunakan  pelarut  yang  sesuai.  Pada penelitian  ini  simplisia  biji  Kakao  yang  telah dikeringkan  dilakukan  maserasi  menggunakan pelarut etanol 96%. Pemilihan pelarut menggunakan  etanol  96%  karena  merupakan senyawa polar yang mudah menguap dan etanol dapat  menarik  flavonoid  paling  maksimal dibandingkan dengan air (Ardianto, 2021). Hasil yang didapatkan dari 500 g simplisia biji Kakao yang dimaserasi yaitu ekstrak kental sebanyak 52 g  dan  rendemen  sebesar  10,4%.  Ekstrak  kental yang  dihasilkan  dipekatkan  menggunakan  oven pada suhu 40oC. Pemekatan ini bertujuan untuk menguapkan pelarut yang terdapat pada maserat.

## Evaluasi  Fisik  Sediaan  Pasta  Gigi  Ekstrak Etanol  Biji Kakao
1. Uji Organoleptik
Uji organoleptik diamati secara visual meliputi warna,  aroma  dan  bentuk  untuk  mengetahui tampilan  luar  dari  sediaan  pasta  gigi  yang dihasilkan  memenuhi  syarat  estetika  atau  tidak. Hasil uji dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2.  Hasil Uji Organoleptik
Formula Hasil Pengamatan Warna Aroma Bentuk F1 Coklat Mint, khas ekstrak biji coklat Agak kental F2 Coklat Mint, khas ekstrak biji coklat Agak kental F3 Coklat Mint, khas ekstrak biji coklat Kental F4 Coklat Tua Mint, khas ekstrak biji coklat Kental F5 Coklat Tua Mint, khas ekstrak biji coklat Sangat kental
Hasil  pengujian  organoleptik  menunjukkan warna yang berbeda-beda pada tiap formula. Hal ini  dipengaruhi  oleh  konsentrasi  ekstrak  etanol biji  Kakao,  karena  semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak  etanol  biji  Kakao  yang  digunakan  maka warna pasta gigi yang dihasilkan semakin coklat (pekat). Perbedaan konsentrasi ekstrak biji etanol Kakao  juga  mempengaruhi  bentuk  atau  tekstur pasta  gigi,  dimana  semakin  meningkatnya konsentrasi ekstrak maka pasta gigi akan semakin kental.  Pada  semua  formula  pasta  gigi  (F1,  F2, F3,  F4,  dan  F5),  menghasilkan  aroma  khas ekstrak  etanol  biji  Kakao,  dengan  aroma  mint. Aroma khas ekstrak terkuat pada formula F5. Hal ini  dikarenakan  F5  mengandung  lebih  banyak ekstrak  etanol  biji  Kakao  dibandingkan  dengan formula lainnya.

## 2. Uji Homogenitas
Pengujian  homogenitas  bertujuan  untuk melihat apakah pasta yang dibuat homogen atau tercampur  merata  antara  zat  aktif  dengan  basis, dapat  terdistribusi  merata  dan  tidak  mengiritasi mukosa  mulut  dan  gigi  ketika  pasta  gigi digunakan.

## PHARMACON– PROGRAM STUDI FARMASI, FMIPA, UNIVERSITAS SAM RATULANGI, Volume 11 Nomor 4, November 2022
Tabel 3. Hasil Uji Homogenitas Formula Hasil Pengamatan F1 Homogen F2 Homogen F3 Homogen F4 Homogen F5 Homogen
Hasil pengamatan terhadap homogenitas pada sediaan  pasta  gigi  ekstrak  etanol  biji  Kakao dilakukan  dengan  cara  mengoleskan  sediaan pasta gigi sebanyak 3 kali diambil dari 3 bagian yang berbeda yaitu bagian atas, tengah dan bawah pada kaca objek kemudian dilakukan pengamatan visual  apakah  sediaan  sudah  homogen  atau belum.  Berdasarkan  uji  homogenitas  yang  telah dilakukan bahwa semua formula pasta gigi yang telah dibuat menunjukkan susunan yang homogen.  Hal  ini  ditunjukkan  dengan  tidak adanya butiran kasar ataupun gumpalan dari hasil pengamatan  pasta  pada  kaca  objek.  Hal  ini dikarenakan  pada  proses  pembuatan  pasta  gigi ekstrak  etanol  biji  Kakao,  seluruh  bahan  untuk pembuatan  pasta  gigi  telah  dihaluskan  terlebih dahulu sehingga mudah tercampur dan menghasilkan  sediaan  yang  homogen.  Faktor yang mempengaruhi homogenitas adalah distribusi  ukuran  partikel  (Paul,  Obeng  dan Krests,  2004).  Jika  ukuran  partikelnya  seragam maka  akan  didapat  sediaan  yang  homogenya. Menurut  Badan  SNI  (1995)  sediaan  pasta  gigi yang  homogen  yaitu  tidak  terlihat  adanya gelembung  udara,  gumpalan,  dan  partikel  yang terpisah.  Maka  dari  hasil  yang  diperoleh  semua sediaan pasta gigi yang dibuat dapat disimpulkan homogen  dan  memenuhi  syarat  yang  ditetapkan oleh SNI.

## 3. Uji Keasaman (pH)
Uji  pH  dilakukan  untuk  melihat  tingkat keasaman sediaan yang bertujuan untuk menjamin  pasta  yang  dihasilkan  sesuai  untuk pemakaian  pada  mukosa  mulut,  menjamin sediaan tidak mengiritasi mulut dan memberikan
rasa nyaman. Pengujian pH ( Power of Hydrogen ) dilakukan  dengan  menggunakan  pH  meter. Berdasarkan hasil pengamatan pH pada pengulangan 1, 2, dan 3 dapat dilihat rata-rata pH pada  (Tabel  4).  Uji  pH  menunjukkan  bahwa semua  pH  sediaan  formula  pasta  gigi  ekstrak etanol  biji  Kakao  (F1,  F2,  F3,  F4,  dan  F5) berkisar  antara  7,4  –  7,8,  hal  tersebut menunjukkan kadar pH yang terdapat pada pasta gigi  memiliki  pH  yang  basa  namun  masih memenuhi syarat pH menurut SNI 8861:2020 dari pasta gigi yaitu 6 - 10 yang artinya kelima sediaan formula pasta gigi ekstrak etanol biji Kakao dapat digunakan dengan aman pada mukosa mulut.

## Tabel 4. Hasil Uji Keasaman (pH)
Pasta  gigi  dengan  pH  yang  terlalu  rendah menyebabkan iritasi dan mempermudah pertumbuhan bakteri asidogenik yang hidup pada lingkungan  asam  seperti  Streptococcus  mutans dan Lactobacillus pada pH 4,5-5,5. Selain itu, pH di bawah 5,5 berpotensi menyebabkan terjadinya demineralisasi  gigi  dan  kerusakan  email  gigi sehingga menyebabkan karies gigi (Widodo et al, 2015; Shetty et al 2013 dan Tanabe et al, 2013). Suhu memiliki pengaruh terhadap hasil pengukuran  pH  (Barron,  Ashton,  dan  Geary, 2006). Standar pengukuran pH pasta gigi menurut SNI  (2020)  adalah  pada  suhu  25 0 C.  Jika  dilihat dari  penelitian  putri  (2013),  pasta  gigi  dengan bahan pengikat Natrium-CMC selama penyimpanan memiliki pH yang relatif stabil. Hal ini  sesuai  dengan  penelitian  pasta  gigi  ekstrak etanol biji Kakao selama penyimpanan pH yang diperoleh cenderung tetap.

## 4. Uji Daya Sebar
Uji daya sebar sediaan pasta gigi dimaksudkan untuk  mengetahui  kemampuan  menyebar  saat diaplikasikan  pada  sikat  gigi.  Kemampuan menyebar  adalah  karakteristik  penting  dalam formulasi, karena mempengaruhi transfer konfirmasi bahan aktif pada daerah target dengan dosis  yang  tepat,  kemudahan  penggunaan, tekanan  yang  diperlukan  agar  dapat  keluar  dari kemasan,  dan  penerimaan  oleh  konsumen (Warnida et  al ,  2016).  Hasil  pengukuran  daya sebar  pasta  gigi  ekstrak  etanol  biji  Kakao  dapat dilihat di Tabel 5.
Tabel 5. Hasil Uji Daya Sebar Pengula ngan Hasil Pengamatan (mm) F1 F2 F3 F4 F5 Pengula ngan 1 32 33 32 31 31 Pengula ngan 2 33 34 33 32 27 Pengula ngan 3 35 34 33 33 33 Rata- rata±SD 33±0 ,15 33±0 ,05 32±0 ,05 32±0 ,10 30±0 ,30
Dari hasil uji daya sebar menunjukkan bahwa formulasi  F1  dan  F2  memiliki  daya  sebar  yang lebih besar dibandingkan dengan ketiga formula lainnya. Sedangkan, F5 memiliki daya sebar yang lebih  kecil  dari  semua  formula.  Hal  ini disebabkan  karena  semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak  yang  digunakan,  semakin  padat  suatu sediaan  maka  viskositas  sediaan  tersebut  lebih tinggi  sehingga  diameter  penyebarannya  lebih kecil sehingga sediaan sedikit susah mengalir atau menyebar. Pasta gigi yang baik memiliki rentang daya sebar yang sesuai dengan sediaan pasta gigi pasaran yaitu sebesar 20,6 – 50,3 mm. Daya sebar yang  terlalu  tinggi  menunjukkan  konsistensi pasta  terlalu  encer  serta  mudah  hancur  atau meluruh  seperti  lotion  dan  sulit  diaplikasikan pada saat pemakaiannya (Doko, 2018). Sehingga semua sediaan formulasi pasta gigi ekstrak etanol biji Kakao memenuhi syarat.
Dari data penelitian diketahui bahwa semakin lama  waktu  penyimpanan  daya  sebar  semakin besar,  hal ini disebabkan  karena  semakin  sering sediaan  pasta  gigi  berinteraksi  dengan  udara. Sedangkan semakin tinggi formula maka semakin rendah  daya  sebar.  Hal  ini  disebabkan  karena
daya  sebar  berhubungan  dengan  kandungan  air, semakin  banyak  kandungan  air  maka  semakin luas daya sebar.

## 5. Uji Daya Lekat
Uji  daya  lekat  bertujuan  untuk  mengetahui kemampuan melekat suatu sediaan pasta gigi saat diaplikasikan  pada  sikat  gigi  dan  pada  saat pengaplikasikan  saat  gosok  gigi.  Tidak  terdapat parameter  yang  pasti  untuk  nilai  daya  lekat namun berdasarkan penelitian Doko (2018), pasta gigi  idealnya  memiliki  daya  lekat  1  –  6  detik. Daya lekat yang tinggi menunjukkan konsistensi sediaan  lebih  padat,  elastis  dan  mudah  melekat pada sikat gigi akan tetapi memiliki penyebaran yang  kurang  baik.  Sebaliknya,  daya  lekat  yang rendah biasanya dimiliki pasta dengan konsistensi  yang  lebih  encer  dan  tidak  begitu melekat pada sikat gigi tetapi mampu menyebarkan  bahan  aktif  dengan  baik.  Hasil pengukuran daya sebar pasta gigi ekstrak etanol biji Kakao dapat dilihat di Tabel 6.
Tabel 6. Hasil Uji Daya Lekat Pengul angan Hasil Pengamatan (detik) F1 F2 F3 F4 F5 Pengul angan 1 2,24 2,28 2,43 2,50 2,83 Pengul angan 2 2,21 2,60 2,62 2,45 3,23 Pengul angan 3 2,32 2,81 2,97 3,15 3,65 Rata- rata±S D 2,25 ±0,0 5 2,56 ±0,2 6 2,67 ±0,2 7 2,7± 0,39 3,23 ±0,4 1
Hasil pengujian menunjukkan bahwa masing- masing  formula  memiliki  rata-rata  daya  lekat yang berbeda yaitu pada F1 sebesar 2,25, pada F2 sebesar  2,56,  pada  F3  sebesar  2,67,  pada  F4 sebesar  2,  dan  pada  F5  sebesar  3,23.  Hal  ini dipengaruhi  oleh  perbedaan  konsentrasi  ekstrak etanol  biji  Kakao.  Perbedaan  jumlah  ekstrak etanol  biji  Kakao  berpengaruh  terhadap  daya lekat  sediaan  pasta  gigi,  semakin  besar konsentrasi ekstrak maka mengakibatkan konsistensi  pasta  gigi  semakin  kental  sehingga
daya adhesive naik dan menyebabkan daya lekat semakin lama.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Pengujian  aktivitas  antibakteri  pasta  gigi ekstrak  etanol  biji  Kakao  dilakukan  untuk mengetahui  daya  hambat  ekstrak  etanol  biji Kakao yang diformulasikan dalam sediaan pasta gigi.  Pengujian  dilakukan  dengan  menggunakan metode  difusi  agar  dengan  cara  sumuran  dan bakteri  yang  digunakan  adalah Streptococcus mutans . Pengujian aktivitas antibakteri
Streptococcus  mutans dilakukan  dengan  5
formula  pasta  gigi  yang  berbeda  dan  2  kontrol. Lima  formula  tersebut  yaitu  formula  1  dengan konsentrasi  ekstrak  etanol  biji  Kakao  5%, formula  2  dengan  konsentrasi  ekstrak  7,5%, formula  3  dengan  konsentrasi  ekstrak  10%, formula 4 dengan konsentrasi ekstrak 12,5%, dan formula 5 dengan konsentrasi ekstrak 15%. Dua kontrol  yang  digunakan  ialah  kontrol  negatif (basis  tanpa  ekstrak)  dan  kontrol  positif  yang menggunakan  pasta  gigi  antibakteri  daun  sirih. Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  pasta  gigi  ekstrak etanol biji Kakao dapat dilihat pada Tabel 10.

## Tabel 10. Hasil Uji Antibakteri Pasta Gigi Ekstrak Biji Kakao
Diameter daerah hambatan (mm) Formula Pengulangan I Pengulangan II Pengulangan III Rata- rata±SD Keterangan K (-) 0 0 0 0 - K (+) 23,75 24,75 24,25 24,25±0,50 Sangat Kuat F1 7,5 6 11 8,16±2,56 Sedang F2 8,25 6 11,25 8,5±2,63 Sedang F3 9 8 11,5 9,5±1,80 Sedang F4 9,5 9,5 12,25 10,41±1,58 Sedang F5 11,25 10,25 13,25 11,58±1,52 Kuat
Hasil  pengujian  antibakteri  sediaan  pasta  gigi ekstrak  etanol  biji  Kakao  terhadap  bakteri Streptococcus  mutans ,  menghasilkan  diameter daya hambat yang ditandai dengan terbentuknya daerah bening disekitar sumur  yang dibuat pada media.  Diameter  daya  hambat  diperoleh  dengan mengukur  daerah  bening  dengan  menggunakan mistar berskala dengan cara diameter keseluruhan dikurangi  diameter  sumuran  7  mm  dan  diukur dalam  satuan  millimeter  (mm).  Sehingga diperoleh  diameter  rata-rata  zona  hambat  yang paling  tinggi  yaitu  formulasi  F5  dengan konsentrasi ekstrak etanol biji Kakao 15% yaitu sebesar  11,58  mm  dan  diameter  rata-rata  zona hambat  yang  paling  rendah  yaitu  F1  dengan konsentrasi  ekstrak  etanol  biji  Kakao  5%  yaitu sebesar 8,16 mm. Hasil ini menunjukkan bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  biji  Kakao  dalam pasta gigi maka diameter daya hambat antibakteri akan  semakin  besar.  Hal  ini  disebabkan  karena semakin tinggi konsentrasi bahan uji, yang berarti semakin besar jumlah zat aktif yang terkandung dalam  ekstrak,  maka  semakin  besar  pula kemampuan  bahan  uji  dalam  menghambat
pertumbuhan  suatu  bakteri.  Sedangkan  untuk formula K– (blanko/ kontrol negatif) atau formulasi basis sediaan pasta gigi ekstrak etanol biji Kakao (tanpa ekstrak  etanol biji Kakao) adalah  sebesar  0  mm,  dan  K+  (kontrol  positif) sebagai pembanding yaitu pasta gigi antibakteri daun sirih Mustika Ratu yaitu sebesar 24,25 mm.
Hasil diameter daya hambat pasta gigi ekstrak etanol biji Kakao pada semua formula pasta gigi ekstrak etanol biji Kakao masih belum sebanding dengan pasta gigi herbal yang beredar di pasaran (kontrol  positif) dalam menghambat  bakteri Streptococcus  mutans, tetapi  semua  formula pasta gigi ekstrak etanol biji Kakao telah menunjukkan aktivitas sebagai antibakteri karena suatu  bahan  baru  dapat  dikatakan  memiliki aktivitas antibakteri bila diameter hambatan yang terbentuk  adalah  lebih  dari  atau  sama  dengan  6 mm (Depkes RI, 1989).
Menurut  kriteria  zona  hambat  menurut  Davis (1971),  jika  diameter  zona  hambat  5  mm  atau kurang, maka aktivitas penghambatan dikategorikan  lemah.  Diameter  zona  hambat sebesar 5  – 10 mm maka  dikategorikan  sedang.
Diameter zona hambat sebesar 11 – 20 mm maka dikategorikan  kuat,  dan  jika  diameter  zona hambat  20  mm  atau  lebih,  maka  aktivitas penghambatan dikategorikan sangat kuat. Berdasarkan kriteria tersebut, maka kemampuan antibakteri  pasta  gigi  ekstrak  etanol  biji  Kakao terhadap  Streptococcus  mutans  dengan  F1 konsentrasi  ekstrak  5%  (8,16  mm),  F2 konsentrasi  ekstrak  7,5%  (8,5  mm)  F3  dengan konsentrasi ekstrak 10% (9,5 mm) memiliki daya antibakteri sedang, F4 konsentrasi ekstrak 12,5% (10,41  mm)  memiliki  daya  antibakteri  sedang, sedangkan  F5  konsentrasi  ekstrak  15%  (11,58 mm) memiliki daya antibakteri kuat.
Pasta  gigi  ekstrak  etanol  biji  Kakao memberikan  aktivitas  antibakteri  pada  semua konsentrasi  (F1,  F2,  F3,  F4,  dan  F5)  dan terbentuknya  zona  bening  disekitar  sumuran pasta gigi ekstrak etanol biji Kakao menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji Kakao mengandung zat- zat  kimia  yang  berguna  sebagai  antibakteri. Faktor yang  mempengaruhi kemampuan ekstrak etanol  biji  Kakao  berperan  aktif  sebagai antibakteri  adalah  alkaloid,  flavonoid,  steroid, terpenoid,  fenolik,  kumarin  dan  polifenol. Mekanisme  alkaloid  memiliki  kemampuan sebagai  antibakteri  dengan  cara  mengganggu komponen  penyusun  peptidoglikan  pada  sel bakteri,  sehingga  lapisan  dinding  sel  tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel  (Darsana,  2012).  Flavonoid  menyebabkan terjadinya  kerusakan  permeabilitas  dinding  sel bakteri,  mikrosom,  dan  lisosom  sebagai  hasil interaksi  antara  flavonoid  dengan  DNA  bakteri. Polifenol  berpotensi  sebagai  antibakteri  dengan meracuni  protoplasma,  merusak  dan  menembus dinding sel serta mengendapkan protein sel bakteri (Agustina A, 2016).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  biji  Kakao ( Theobroma  cacao L.)  dapat  diformulasikan menjadi  sediaan  pasta  gigi  dengan  konsentrasi 5%, 7,5%, 10%, 12,5% dan 15% serta memenuhi persyaratan mutu fisik sediaan pasta gigi.
Hasil uji antibakteri terhadap bakteri Streptococcus  mutans  menunjukkan konsentrasi
15% memiliki nilai daya hambat yang kuat yaitu sebesar 11,58 mm.

## SARAN
Pada  penelitian  selanjtnya  perlu  lebih dikembangkan  dengan  melakukan  evaluasi  sifat sediaan yang belum dilakukan pada penelitian ini seperti  uji  stabilitas  sediaan  serta  perlu melakukan pengujian antibakteri terhadap bakteri lain yang dapat menyebabkan kerusakan gigi.

## DAFTAR PUSTAKA
Afni,  N.,  Said,  N.,  &  Yuliet,  Y.  (2015).  Uji Aktivitas Antibakteri Pasta Gigi Ekstrak Biji Pinang (Areca Catechu L.) Terhadap
Streptococcus Mutans dan
Staphylococcus  Aureus.  Jurnal  Farmasi Galenika (Galenika Journal of Pharmacy) (e-Journal), 1(1), 48-58. Agustina, A. 2016. Isolasi dan Identifikasi Flavonoid Rimpang Lengkuas Merah (Alpinia Galanga, Linn) Secara Kromatografi Lapis Tipis. Cerata Jurnal Ilmu Farmasi, 4(1). Almujadi dan Taadi. 2017. Hubungan Pengetahuan  Kesehatan  Gigi  dan  Mulut terhadap Jumlah Karies  Anak  Kelas  III- V  di  SD  Muhammadiyah  Sangonan Godean  Yogyakarta.  Jurnal  Kedokteran Gigi, 4(1): 1-7.
Anastasia, A., Yuliet., dan Tandah, M. R. 2017.
Formulasi Sediaan Mouthwash Pencegah Plak Gigi Ekstrak Biji Kakao (Theobroma Cacao L) Dan Uji Efektivitas Pada  Bakteri  Streptococcus  Mutans.
GALENIKA Journal of Pharmacy, 3(1): 84 – 92.
Ardianto, R. A. Cikra, S. 2021. Formulasi dan Uji Mutu  Fisik  Sediaan  Pasta  Gigi  Herbal Ekstrak  Temu  Kunci  (Boesenbergia pandurata Roxb). Journal Farmasi
Universitas Mulawarman.
Aseng,  Khotimah,  S.,  Armyanti,  I.  2015.  Uji
Aktivitas  Antibakteri  Kombinasi  Infusa Daun Mangga Bacang (Mangifera foetida L.) dan Infusa Lidah Buaya (Aloe
Vera  L.)  Terhadap  Staphylococcus aureus.  [Skripsi].  Fakultas  Kedokteran, Pontianak.
Badan  Standarisasi  Nasional.  2020.  Standar Nasional  Indonesia  Pasta  Gigi.  SNI 8861:2020. Jakarta: Badan Standardisasi Nasional.
Badan  Standarisasi  Nasional.  2020.  Standar Nasional  Indonesia  Pasta  Gigi.  SNI  12-
3524-1995. Jakarta: Badan Standardisasi Nasional.
Baroon,  J.  J.,  C.  Ashton,  L.  Geary.  2006.  The
Effect of Temperature on pH Measurement. Technical Papers. Technical Services Department, Reagecon Diagnostic Ltd., Shanron Free
Zone, Clare, Ireland.
Davis,  W.W.,  &  Stout,  T.  R.  1971.  Disc  Plate Methods  of  Microbiological  Antibiotic Assay. Microbiology. 22(4):659-665. Dirjen  POM.  1979.  Farmakope  Indonesia  Edisi III. Jakarta: Depkes RI.
Dirjen  POM.  1995.  Farmakope  Indonesia  Edisi IV. Jakarta: Depkes RI.
Dirjen  POM.  2014.  Farmakope  Indonesia  Edisi
V. Jakarta: Depkes RI.
Doko,  Kamelia  Intany.  2018.  Uji  Aktivitas Antibiofilm terhadap Streptococcus mutans  dan  Optimasi  CMC  Na  dan Sorbitol  pada  Formula  Pasta  Gigi  Gel Ekstrak  Daun  Kelor  (Moringa  oleifera Lmk.). [Skripsi]. Fakultas Farmasi USD, Yogyakarta.
Ermawati, N. 2019. Formulasi Sediaan Pasta Gigi Ekstrak  Etanol  Daun  Alpukat  (Persea Americana  Mill)  Sebagai  Antibakteri Streptococcus Mutans. [Skripsi]. Jurusan Farmasi  Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam Universitas AlGhifari,
Bandung. Fatmawati,  D,.  W.  2011.  Hubungan  Biofilm Streptococcus  Mutans  Terhadap  Resiko Terjadinya Karies Gigi. Jurnal Kedokteran  Gigi  Universitas  Jember, 8(3): 127-130. Holt, J. G., Krieg, N. R.,
Sneath,  P.  H.  A.,  Staley  and  J.  T.,
Williams,  S.  T.  2000.  Bergey  Manualof Determinative Bacteorology, 9thEd.
Kasinus Yogyakarta.
Ilmi,  M.  A.  M.  2017.  Formulasi  Pasta  Gigi
Kombinasi  Ekstrak  Daun  Sirih  Merah (Piper  crocatum  Ruitz  &  Pav)  Dan
Propolis  Dan  Uji  Aktivitas  Antibakteri Terhadap Streptococcus Mutans. [Skripsi]. Fakultas Kedokteran, Pontianak. Karmawati, E. Mahmud, Z. dkk. 2010. Budidaya dan  Pasca  Panen  Kakao.  Bogor:  Pusat Penelitian dan Pengembangan Perkebunan.
Kemenkes RI. 2018. Situasi Kesehatan gigi dan Mulut Pusat Data dan Informasi. Jakarta:
Indonesia
Khamisli,  Y.,  Dewi,  E.,  Intan,  B.E.M.  2019.
Hubungan  Indeks  Severitas  Karies dengan  pH  Saliva  pada  Penyandang Tunagiahita di Panti Sosial Bina Grahita (SB)  Harapan  Ibu  Kalumbuak  Kota
Padang  pada  Tahun  2018.  Jurnal Kedokteran Gigi Universitas Baiturrahmah. 6(1): 71-75. Konam, J., Y. Namaliu, R. Daniel dan D. Guest. 2009.  Pengelolaan  Hama  dan  Penyakit Terpadu untuk Produksi Kakao
Berkelanjutan.  Panduan  pelatihan  untuk petani dan penyuluh.
Kowalska, J. and A. Sidorczuk. 2007. Analysis of the effect of technoligical processing on changes  antioxidant  properties  of  cocoa processed  Products.  Polish  Journal  of Food and Nutrition Sciences. 57(2): 95- 99.
Legi,  A.P.,  Edy,  H.J.,  Abdullah ,  S.  S.,  (2021), Formulasi Dan Uji Aktivitas Antibakteri Sediaan Sabun Cair Ekstrak Etanol Daun Sirsak ( Annona Muricata Linn) Terhadap Bakteri Staphylococcus ,
Pharmacon, 10(3) , 1058–1065.
Maharani, E., T, dan Hersoelistyorini, W. 2009.
Analisis  Kadar  Detergent  Anionik  Pada Sediaan  Pasta  Gigi  Anak-Anak.  Jurnal
Kesehatan, 2(2).
Marchaban,  Fudholi,  A.,  Saifullah,  T.N., Martien,  R., Kuswahyuning, R.,
Bestari, A. N.
2017. Teknologi Formulasi Sediaan Cair Semi  Padat  3rd  Edition.  UGM  Press, Yogyakarta.
Mopangga, E., Yamlean, P. V. Y., & Abdullah, S. S. (2021). Formulasi Sediaan Sabun Mandi Padat Ekstrak Etanol Daun Gedi ( Abelmoschus manihot L.) Terhadap
Bakteri Staphylococcus epidermidis . Pharmacon, 10(3) , 1017–1024.
Nurhayati, S. L., Yahdiyani, N., dan Hidayatulloh,
A, 2020. Perbandingan Pengujian
Aktivitas  Antibakteri  Starter  Yogurt Dengan  Metode  Difusi  Sumuran  Dan Metode Difusi Cakram. Jurnal Teknologi
Hasil Peternakan, 1(2): 41-46.
Nursal, K.F., Indriani, O. dan Dewanthi, L. 2010.
Penggunaan Na-CMC sebagai
Gelling  Agent  dalam  Formulasi  Pasta Gigi  Ekstrak  Etanol  70  %  Daun  Jambu Biji (Psidium guajava). Jakarta. Fakultas Farmasi, UHAMKA.
Pangaila,  A.  B.,  Pangemanan,  D.  H.  C.,  dan Parengkuan,  W.  2016.  Uji  Efektivitas
Antibakteri  Ekstrak  Bunga  Pacar  Air (Impatiens  Balsamina  L)  Terhadap Pertumbuhan Streptococcus Mutans Secara In Vitro. Jurnal Ilmiah Farmasi – UNSRAT, 5(1)
Paul  Edward  L,  Atiemo-Obeng  Victor  A,  Kresta Suzanne  M.  2004.  “Handbook  of Industrial  Mixing”,  New  York,  John Wiley  &  Sons,  Inc.,  Hoboken,  New Jersey.  Pelczar  MJ,  Chan  ESC.  2008. Dasar-dasar  mikrobiologi  2,  Ratna  SH dkk,  penerjemah:  Jakarta:  UI  Pr.
Terjemahan dari: Elements of
Mikrobiology.
Pratiwi,  S.T.,    2008.    Mikrobiologi    Farmasi.
Jakarta: Erlangga.
Purnamasari,  D.  2010,  Konsentrasi  Ekstrak  Biji
Kakao  Sebagai  Material  Alam  dalam Menghambat Pertumbuhan
Streptococcus mutans.  Jurnal PDGI, Surabaya.
Ranganathan, V. 2019. Streptococcus mutans: has it  become  prime  perpetrator  for  oral manifestations.  J  Microbiol.  7(4):  207- 213.
Retnaningtyas,  D.  A.,  Widya,  D.  R.  P.  2014. Karakterisasi  sifat  fisikokimia  pati  ubi jalar  oranye  hasil  modifikasi  perlakuan STPP.  Jurnal  Pangan  dan  Agroindustri. 2(4):68-69.
Rowe, R.C., dkk. 2009. Handbook of Pharmaceutical  Excipients  6th.  London: Pharmaceutical Press.
Sahuleka,  A.S.G.,  Edy,  H.J.,  Abdullah,  S.  S.,
(2021), Formulasi Sediaan Krim Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Eceng Gondok ( Eichhornia crassipes ) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus , Pharmacon, 10(4) , 1162–1168.
Sinrang,  V.N.S.,  Edy,  H.J.,  Abdullah,  S.S.,,
(2022),  Formulasi  Sediaan  Obat  Kumur Ekstrak  Etanol  Biji  Pinang  ( Areca catechu  L. ),  Pharmacon, 11(1) ,  1342– 1349.
Sepriyani,  R.  2020.  Efektivitas  Ekstrak  Biji Kakao  (Theobroma  Cacao  L.)  Sebagai Antimikroba  Terhadap  Streptococcus Mutans.  [Skripsi].  Fakultas  Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara, Medan. Shetty, Hegde and Devadiga D. 2013. Correlation between  Dental  Caries  with  Salivary Flow,  pH,  and  Buffering  Capacity  in Adult  South  Indian  Population:  An  In- Vivo Study. International Journal Research  Ayurveda  Pharma.  4(2):  219- 223.
Sultana, S. S., Swapna, G., Lak. Silaban,  L.  T. 2019.  Gambaran  Pengetahuan Tentang Makanan  Manis  dan  Mudah  Melekat Terhadap  Terjadinya  Karies Gigi  Pada Siswa-Siswi Kelas III SD Negeri 067097 Kecamatan  Medan  Barat.  Politeknik Kesehatan  Medan,  Jurusan Keperawatan Gigi, Medan.
Sukanto. 2012. Takaran Dan Kriteria Pasta Gigi Yang Tepat Untuk Digunakan Pada Anak
Usia  Dini.  Jurnal  Kedokteran  Gigi Universitas Jember, 9(2): 104-109. Tanabe, T., M., Takakhasi, K., Shimoyama, Y., Toyoshima and Ueno, T. 2013. Effects of Rehydration and Food Consumption on  Salivary  Flow,  pH  and  Buffering Capacity  in  Young  Adult  Volunteers during Ergometer Exercise. Journal of the  International  Society  of  Sports Nutrition. 10(49): 1-6.
Ulfa,  S.,  W.  2019.  Efektivitas  Bioherbisida Dari Limbah  Cair  Pulp  Kakao  Dalam
Pengendalian  Berbagai  Jenis  Gulma
Di Kebun  Masyarakat  Kecamatan  Deli Tua Kabupaten  Deli  Serdang.  Jurnal Biologi.