UJI  AKTIVITAS  ANTIBAKTERI Vibrio sp.  DENGAN  EKSTRAK ETANOL DAUN SIRSAK ( Annona muricata L.)
ANTIBACTERIAL  ACTIVITY  TESTING  OF  EXTRACT  SOURSOP  LEAVES  (Annona muricata L. ) AGAINST Vibrio sp .
Anggreni Sianturi 1 , Hendro Hitijahubessy 1* , Anastasia Putri Marshanda Rumangun 1 , Aprianti Samid 1
1 Program Studi Bioteknologi Perikanan, Politeknik Perikanan Negeri Tual , Tual - Indonesia * Corresponding Author e-mail : hendro@polikant.ac.id

## ABSTRACT
Keywords : Soursop leaves;
Vibrio sp .; Phytochemical Study of the antibacterial ability of soursop leaf extract (Annona muricata L.) in inhibiting the growth of Vibrio sp. The maceration method with 70% ethanol solvent was used in this research to determine the yield, then the extract was diluted in stages from a concentration of  100%  to  3.125%.  The  antibacterial  test  was  done  using  the  disc  diffusion  method  in TCBS  media  and  a  phytochemical  test  was  carried  out  on  soursop  leaves  to  analyze  the secondary metabolite content. The extract yield obtained in this study was 3.77%. The test results showed that the largest zone of inhibition was found at 100% extract concentration of  11.45mm.  The  smallest  inhibition  zone  was  found  in  the  6.25%  extract  with  an inhibition  zone  of  1.44mm,  the  diameter  of  the  positive  control  (tetracycline)  inhibition zone  was  22.75mm,  the  diameter  of  10%  DMSO  as  a  negative  control  was  0  mm. Phytochemical  tests  of  soursop  leaves  show  that  they  contain  alkaloids,  flavonoids, steroids, saponins and tannins.
Article History: Recieved: 28 Juli 2023 Revised: 26 November 2023 Accepted: 30 November 2023 © 2023 Jurusan Biologi FMIPA Universitas Pattimura
Copyright © 2023 Biofaal Journal Homepage: https://ojs3.unpatti.ac.id/index.php/biofaal/index E-mail: biofaaljournal@gmail.com
This  article  is  an  open  access  article  distributed a  Creative  Commons  Attribution-NonCommercial-ShareAlike  4.0 International License

## How to cite:
Sianturi A, Hitijahubessy H, Rumangun APM, and Samid A. 2023. Antibacterial activity testing of extract soursop leaves ( Annona muricata L.) against Vibrio sp.  Biofaal Journal. 4(2): 72-80.

## BIOFAAL Journal
Desember 2023   Volume 4 Nomor 2   Halaman 072-080 E-ISSN: 2723-4959
https://doi.org/10.30598/biofaal.v4i2pp072-080

## A. PENDAHULUAN
Vibrio adalah bakteri yang merupakan bagian dari lingkungan laut (Manchanayake et al., 2023). Bakteri ini bersifat patogen dalam dan dapat hidup dalam air laut beriklim tropis (Ina‐Salwany  et  al.,  2019). Vibrio sp . adalah  dasar  dari penyakit vibriosis  yang  menyerang berbagai biota laut (Egerton et al., 2018). Penyakit vibriosis sering terjadi pada ikan (Nor et al.,  2019).  Infeksi  bakteri Vibrio diduga  menjadi  penyebab  tingkat  kelangsungan  hidup sehingga selalu menurunkan kualitas produksi (Peterman & Posadas, 2019).
Sampai  saat  ini  pengendalian Vibrio sp.  biasanya dilakukan  dengan  menggunakan antibiotik,  tetapi  bakteri  ini  telah  mengembangkan  resistensi  terhadap  beberapa antibiotik.  Hal ini dipengaruhi oleh kondisi genetik dari bakteri yang mengalami perubahan terhadap  lingkungan  sehingga  mampu  bertahan  melawan  antibiotik  (Leonard  et  al.,  2023). Penggunaan  antibiotik  secara  terus  menerus  dapat  membuat  mikroorganisme  patogen  kebal terhadap  antibiotik (Onohuean  et  al.,  2021),  sehingga  perlu  dicari  antibakteri  lainnya  yang lebih efektif sebagai pengganti antibiotik yang beasal dari bahan alam. Oleh karena itu, dalam penelitian  ini  perlu  dicari  zat  antibakteri  dari  bahan  alam  yang  dapat  menghambat pertumbuhan Vibrio sp.
Menurut  Silalahi,  2020,  salah  satu  tanaman  yang  memiliki  sifat  antibakteri  dan antikanker  adalah  daun  sirsak  ( Annona  muricata L). Penelitian  Utami,  2022  menyatakan bahwa  Daun  sirsak  mengandung  senyawa  flavonoid  yang  memiliki  efek  antivirus  dan antibakteri. Penelitian tentang antibakteri dari bahan alami terhadap bakteri Vibrio sp. masih belum  banyak  diteliti.  Berdasarkan  bioaktivitas  daun  sirsak  sebagai  antibakteri,  maka  perlu diteliti  lebih  lanjut  efektifitas  antibakteri  dalam  ekstrak  daun  sirsak  untuk  menghambat pertumbuhan Vibrio sp.  dan  dilakukan  uji  fitokimia  agar  dapat  menganalisis  metabolit sekunder apa saja yang kemungkinan dapat berperan sebagai antibakteri.

## B. METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian bertempat pada Laboratorirum HPI (Hama dan Penyakit Ikan) UPTD Balai Budidaya  Tual  yang  dilaksanakan  dari tanggal  5  Desember  2022  sampai  dengan  10  Januari 2023.

## Alat dan Bahan
1.  Alat
Pembakar spirtus, incubator air concept, incubator bio concept , autoclave , hot plate , neraca, gloves  sterill ,  oven,  evaporator,  cawan petridish ,  saringan  40  mesh,  tabung  reaksi, gelas  ukur,  erlenmeyer,  spatula,  gelas  kimia,  pipet  tetes,  pinset,  sarbet, Bunsen ,  Neraca analitik, colloni counter , blender , nampan, mortar dan alu.

## 2.  Bahan
Air laut dari pesisir pantai Watdek Kabupaten Maluku Tenggara, daun sirsak , media Thiosulfate  citrate  bile  salts  sucrose (TCBS),  akuades,  etanol, cotton  swab  sterill ,  kertas cakram antibiotik tetrasiklin, kertas cakram kosong dan Tisue .

## Prosedur Penelitian

## Pembuatan Ekstrak

## 1. Preparasi sampel
Daun sirsak muda diambil sebanyak 3 kg dan dibersihkan dengan air mengalir untuk membersihkan pengotor  pada  daun.  Kemudian  daun  sirsak  diletakkan  di  atas  nampan  untuk ditiriskan dan dikeringkan selama 5 hari.

## 2. Pembuatan Ekstrak
Sampel  daun  yang  telah  dibersihkan  kemudian  dikeringkan  selama  5  hari.  Daun kering yang diperoleh kemudian digiling dengan blender dan diayak dengan ayakan 60 mesh hingga menjadi bubuk. Prosedur ekstraksi yang dilakukan pada penelitian ini adalah ekstraksi dengan metode perendaman pada suhu ruang atau sering dinamai aserasi. Hasil perendaman kemudian  disaring  dengan  kertas  saring  untuk  memisahkan  filtrat  dan  ampas.  cayang dihasilkan  dimasukkan  ke  dalam  labu  erlenmeyer  kemudian  pelarut  yang  terdapat  pada ekstrak dihilangkan sehingga diperoleh ekstrak pekat berupa pasta. Proses penguapan ekstrak cair menjadi pasta dilakukan dalam oven pada suhu 78 o C (Bintoro et al., 2017).

## 3. Pengenceran Ekstrak,Kontrol Positif dan Kontrol Negatif.
Ekstrak  daun  yang  masih  berbentuk  pasta  dikeringkan  pada  suhu  78°C  dalam  oven. Ekstrak 100% didapatkan dari pasta hasil ekstraksi daun sirsak. Ekstrak 75% dibuat dari 3,75 gram  bubuk  ekstrak  yang  dilarutkan  dalam  0,5  ml  DMSO  dan  5  ml  air  suling,  kemudian diencerkan secara bertingkat. Untuk membuat ekstrak 50% diambil 2,5 ml dari ekstrak 75% dan  dilarutkan  dalam  campuran  10  ml  air  suling  dan  0,5  ml  DMSO.  Selanjutnya  untuk membuat esktrak 25% diambil 2,5 ml dari ekstrak 50% dilarutkan dengan dalam campuran 5 ml  air  suling  dan  0,5  ml  DMSO  dan  dilakukan  pengenceran  selanjutnya  dengan  cara  yang sama  sampai  konsentrasi  3,125%.  Kontrol  positif  menggunakan  kertas  cakram  yang  berisi antibiotik tetrasiklin dan kontrol negatif DMSO 10%.

## 4. Penentuan Rendemen Ekstrak
Rendemen  menjelaskan  bahwa  hasil  ekstrak  dibagi  dengan  berat  daun  kering  dikali 100% (Sudarmadji & Haryono, 1996).

## Uji Aktivitas Antibakteri

## 1. Sterilisasi Alat dan bahan
Sebelum  melakukan  prosedur  sterilisasi,  alat  yang  digunakan  terlebih  dahulu  dicuci dengan  detergen,  dibilas  dengan  air  bersih  dan  dikeringkan.  Untuk  instrumen  seperti  pipet, cawan  petri  dan  tabung  reaksi,  terlebih  dahulu  dibungkus  dengan  kertas  kepiting  dan disterilkan dalam oven pada suhu 170°C (Irmawati & Sudirjo, 2012).

## 2. Preparasi Sampel Air Laut
Air laut sebagai sample diambil menggunakan botol yang telah disterilkan, kemudian diisi  dengan  sampel  air  laut  yang  diambil  dari  Pantai  Watdek  Kabupaten  Maluku  Tenggara langsung digunakan untuk analisis selanjutnya.

## 3. Metode Disc Diffusion Kirby-Bauer
Air  suling  sebanyak  100  ml  disiapkan,  kemudian  dilarutkan  8,8  gram  media  TCBS dalam gelas erlenmeyer, kemudian gelas erlenmeyer disumbat memakai kapas dan dirapatkan sumbatan  dengan alumunium  foil ,  proses  selanjutnya  dipanaskan  hingga  media  mendidih berbuih. Bakteri dikultur dari sampel air laut yang digoresi ( streak plate )  dengan cotton swab sterill pada  media  TCBS  yang  sudah  didinginkan  (Difco,  1977).  Tahapan berikutnya  kertas cakram antibiotik (kontrol positif), kertas cakram yang direndam dalam DMSO10% (kontrol negatif) serta kertas cakram yang direndam dalam ekstrak konsentrasi 100% sampai 3,125%, masing-masing  ditempelkan  di  atas  media  yang  sebelumnya  telah  digoresi,  kemudian diinkubasi dalam inkubator dengan suhu 37°C selama ±24 jam. Ekstrak yang digunakan pada konsentrasi  100%,  yaitu  konsentrasi  ekstrak  yang  berbentuk  pasta.  Diameter  zona  yang diukur dengan daerah zona bening yang akan terlihat disekitar cakram (Ernawati, 2015).
4. Pengukuran zona hambat (Toy et al., 2015)

## Uji Fitokimia (Sangi et al., 2019)
Uji  fitokimia  adalah  analisis  kualitatif  dalam  ilmu bahan  alam  dan  kajian  fiktokimia dalam penelitian ini meliputi uji flavonoid, alkaloid, triterpen, steroid, saponnin dan tannin.

## 1. Analisis senyawa alkaloid
Timbang  4  g  bubuk  daun,  ditambahkan  beberapa  ml  kloroform  dan  dihaluskan kembali.  Amonia  dan  kloroform  kemudian  ditambahkan  dengan  perbandingan  1:1.  Larutan disaring  melalui  tabung  reaksi  dan  ditambahkan  10  tetes  asam  sulfat  2N  ke  dalam  filtrat. Filtrat vortex kemudian didiamkan beberapa saat hingga terbentuk dua lapisan. Lapisan atas dihilangkan  dan  ditempatkan  dalam  tiga  tabung  reaksi  hingga  2,5  ml.  Ketiga  larutan  ini direaksikan  dengan  pereaksi  Mayer,  Dragendorff  dan  Wagner.  Adanya  endapan menunjukkan  bahwa  sampel  mengandung  alkaloid.  Reaksi  dengan  pereaksi  Mayer menghasilkan endapan putih, dengan pereaksi Dragendorff endapan jingga-merah dan dengan pereaksi Wagner endapan coklat.

## DV
DH
Keterangan : DV :Diameter zona bening vertical DH :Diameter zona bening horizontal DKC :Diameter cakram

## 2. Analisis senyawa triterpenoid dan steroid
±50-100mg  sampel  bubuk  daun  dimasukan  dalam  tabung  reaksi  dan  tambahkan CH 3 COOH asetat anhidrat hingga semua sampel terendam seluruhnya, diamkan selama ±15 menit,  tambahkan  6  tetes  larutan  asam  sulfat  pekat  ke  dalam  tabung.  Terbentuknya triterpenoid  2-3  tetes  ditandai  dengan  jika  muncul  warna  merah  jingga  atau  ungu. Pembentukan steroid ditandai dengan munculnya larutan biru.

## 3. Analisis senyawa flavanoid
Bubuk daun sebanyak 200 mg diekstraksi dengan 5 ml etanol dalam tabung reaksi dan selama  ±5  menit  ditaruh  diatas  Bunsen.  Selain  itu,  beberapa  tetes  HCl  pekat  dimasukan dalam  tabung.  Kemudian  tambahkan  0,2  g  bubuk  Mg  dalam  tabung.  Adanya  flavonoid ditunjukkan dengan munculnya warna merah tua (magenta) dalam waktu ±3 menit.

## 4. Analisis senyawa saponin
Tabung  reaksi  disiapkan  dan  dimasukkan  2  g  sampel  bubuk  daun,  ditambahkan  air suling  hingga  sampel  tenggelam,  didihkan  2-3  menit  dengan  bunsen,  dinginkan,  dikocok dengan vortex. Adanya busa yang stabil menunjukan positif saponin.

## 5. Analisis senyawa tannin
Dalam  tabung  reaksi  20mg bubuk  daun  direndam  dengan  etanol  96%.  Diambil  1  ml larutan dituang dalam tabung dan ditambahkan larutan FeCl3 1% sebanyak 2-3 tetes. Adanya tanin ditunjukkan dengan warna laurtan menjadi biru tua atau hijau.

## Analisis Data
Hasil  kajian  aktivitas  antibakteri  dengan  metode disc  diffusion berupa  zona  bening, selanjutnya  dilakukan  analisis  data  yang  didasarkan pada  analisa  diameter  zona  hambat  dan daya hambat bakteri oleh Greenwood et al., 1995 pada tabel 1.
Tabel 1. Diameter zona dan daya hambat
Diameter zona hambat Daya hambat bakteri D >20 Golongan Kuat 15 < D < 20 Golongan Sedang 10 < D <15 Golongan Lemah D <10 Tidak ada daya hambat
Keterangan: D = diameter

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN
Rendemen Ekstrak Daun Sirsak ( Annona muricata L . )
Rendemen  ekstrak  dalam  penelitian  inididapatkan  dari  berat  ekstrak  kering  (pasta) sebesar  13,2119  gram  dibagi  berat  bubuk  daun  sirsak  sebesar  350  gram  dikalikan 100%. Maka  persen  rendemen  ekstrak  dalam  penelitian  ini  dapat  diperoleh  sebesar  3,77  %. Dalam  penelitian  ini  dilakukan  Analisis  Kuantitatif  pertama  dengan  menentukan  nilai rendemen  ekstrak  daun  sirsak  ( Annona  muricata L.).  Perhitungan  rendemen  ekstraksi bertujuan  untuk  menentukan  jumlah  potensi  ekstrak  yang  larut  etanol  70%.  Pelarut  yang digunakan untuk perendaman atau maserasi adalah etanol yang sifatnya polar hingga mampu
mengekstraksi senyawa bioaktif lebih banyak karena sebagian besar senyawa bioaktif bersifat polar. Pemilihan  pelarut  sangat  mempengaruhi  senyawa  bioaktif  yang  akan  larut  dalam pelarut  tersebut.  Pelarut  polar  akan  melarutkan  senyawa-senyawa  senyawa  bioaktif  yang bersifat  polar,  sedangkan  pelarut  nonpolar  akan  melarutkan  senyawa  bioaktif  yang  bersifat nonpolar. Etanol adalah pelarut umum yang digunakan sebagai pelarut untuk proses maserasi karena  hampir  semua  senyawa  bioaktif  dapat  terikut  dalam  pelarut  etanol.  Sehingga  pelarut ini sering disebut magic solvent .

## Pengujian Zona Hambat
Data pengukuran zona hambat dari pengenceran bertingkat ekstrak daun sirsak dengan konsentrasi  100%,  sampai  3,125%  dengan  perlakuan  sebanyak  dua  kali  (duplo),  kontrol positif  adalah  30  mg  tetrasiklin  dalam  bentuk  cakram  antibiotik,  kontrol  negatif  adalah cakram dalam larutan dimetil sulfooksida 10% (DMSO), datanya ditampilkan dalam tabel 2.
Tabel 2. Data Zona Hambat dan Daya Hambat
No Sampel Zona hambat (mm) Daya Hambat (Greenwood, 1995) 1 Ekstrak DS 100% 11.45 Sedang 2 Ekstrak DS 75% 3.52 Lemah 3 Ekstrak DS 50% 2.95 Lemah 4 Ekstrak DS 25% 2.8 Lemah 5 Ekstrak DS 12,5% 2.25 Lemah 6 Ekstrak DS 6,25% 1.44 Lemah 7 Ekstrak DS 3,125% 0 - 8 Kontrol (+) 22.75 Sangat kuat 9 Kontrol(-) 0 -
Keterangan: DS: Daun Sirsak; Kontrol (+): Tetrasiklin 30 mg; Kontrol (-): DMSO 10%
Dalam  penelitian  ini  zona  hambat  terbesar  didapatkan  dalam  ekstrak  konsentrasi 100% sebesar 11,45mm. Zona hambat yang paling kecil didapatkan dalam konsentrasi 6.25% sebesar  1,44mm,  kontrol  positif  (tetrasiklin)  sebesar  22,75  mm  dan  kontrol  negatif  yaitu DMSO  10%  sama  sekali  tidak  membentuk  zona  hambat.  maka  dapat  dilihat  dari  hasil  rata- rata  pengujian  zona  hambat  menunjukan  adanya  aktivitas  antibakteri  yang  sedang  dari ekstrak  daun  sirsak  pada  konsentrasi  100%,  aktivitas  antibakteri  bersifat  lemah  pada konsentrasi  75%  sampai  3,125%.  Jika  aktivitas  antibakteri  dibandingkan  dengan  kontrol positif  yang  merupakan  antibiotik  tetrasiklin  dalam  30  mg,  maka  hasil  antibitotik  masih tergolong  sangat  kuat  sebagai  antibakteri  dibandingkan  ekstrak  daun  sirsak  100%  yang bersifat sedang.
Penggunaan  DMSO  10%  digunakan  sebagai  kontrol  negatif  dimaksudkan  untuk menjadi  perbandingan  yang  mana  tidak  akan  membentuk  zona  hambat  karena  bersifat sebagai pelarut ekstrak. DMSO yaitu pelarut yang dapat melarutkan zat polar yang sukar larut dalam  air  suling.  Penggunaan  tetrasiklin  30  mg  sebagai  kontrol  positif  sebagai  pembanding antibiotik  atau  antibakteri  yang  sudah  merupakan  senyawa  murni  yang  sudah  dapat dipastikan dapat membentuk zona hambat. Metode pengujian antibakteri dalam penelitian ini menggunakan  kertas  cakram  untuk  membantu  proses  inhibisi  bakteri  dengan  ekstrak  atau sering disebut sebagai metode difusi cakram. Metode ini didasarkan pada besar atau diameter
Sianturi, dkk                                                                      Biofaal Journal, vol 4(2), pp. 072-080, Desember 2023
zona hambat yang dibentuk dan hasilnya dalam satuan milimeter. Kelemahan dari metode ini adalah  keberadaan  zona  bening  yang  sangat  sulit  ditentukan  apabila  media  memberikan warna  tertentu,  sehingga  zona  hambat  sulit  diukur  dengan  teliti  (Saraswati,  2018;  Wayne, 2006).

## 1. Uji Fitokimia Daun Sirsak
Uji fitokimia dari daun sirsak adalah hal yang perlu dilakukan dalam penelitian ini. Hal  ini  dilakukan  bertujuan  untuk  mencari  tahu  kandungan  senyawa  bioaktif  yang  dapat berfungsi sebagai antibakteri. Hasil uji fitokimia daun sirsak bisa dilihat dalam tabel 3.
Tabel 3. Hasil Uji fitokimia Daun Sirsak
No Uji fitokimia Hasil uji Keterangan 1 Alkaloid Mayer + + Adanya endapan putih Wagner + Terbentuknya endapan coklat Dragendorff - Tidak adanya endapan merah jingga 2 Triterpen - Tidak adanya warna ungu atau merah jingga 3 Steroid + Adanya warna biru yang Nampak 4 Flavonoid + Timbulnya warna magenta 5 Saponin + Munculnya buih yang stabil pada saat dikocok 6 Tanin + Terbentuknya biru tua atau hitam
Keterangan: (+): hasil uji menunjukan adanya metabolit; (-): hasil uji tidak menunjukan adanya metabolit.
Uji  fitokimia  adalah  analisis  kualitatif  yang  didasarkan  pada  munculnya  warna dalam  suatu  reaksi  kimia.  Senyawa  bioaktif  yang  dihasilkan  dari  uji  fitokimia  daun  sirsak adalah  alkaloid,  flavonoid,  steroid,  saponin  dan  tannin.  Terbentuknya  Zona  Bening  dari  uji antibakteri    ekstrak  daun  sirsak  terhadap  bakteri Vibrio sp.  menunjukan  adanya  senyawa bioaktif yang berfungsi sebagai antibakteri.
Senyawa  bioaktif  yang  diperoleh  dalam  daun  sirsak  ( Annona  muricata L.) sangat berguna  dalam  menghambat Vibrio sp.,  adalah  senyawa  flavanoid  yang  pada  umumnya bersifat  polar  karena  memiliki  gugus  fenolik.  Senyawa  flavanoid  sebagai  antibakteri menghasilkan  protein  ekstraseluler  dari  gugus  senyawa  kompleks  dan  mudah  larut  akan merusak  dinding  sel  bakteri  dan  diikuti  rusaknya  senyawa  intraseluler.  Senyawa  flavanoid memperlambat  pembentukan  energi  dan  merusak  sistem  respirasi  bakteri,  karena  bakteri membutuhkan  energi  untuk  menyerap  berbagai  senyawa  bioaktif  dan  biosintesis  senyawa makromolekuler (Astuti, 2018). Senyawa lain yang dapat berfungsi sebaga antibakeri adalah alkaloid.  Alkaloid  dapat  menghambat  perkembangan  bakteri  dengan  merusak  membran  sel dan  merusak  strukur  protein  sel  bakteri  yang  menyebabkan  bakteri  tidak  dapat  bertumbuh (Utami,  2022).  Tannin  adalah  salah  satu  senyawa  bioaktif  yang  didapati  juga  dalam  daun sirsak ( Annona muricata L.) yang berguna menginaktivasi kerapatan sel dan enzim dari suatu bakteri.  Tannin  juga  dapat  merusak  distribusi  protein  di  lapisan  dalam  sel.  Fungsi  lain senyawa  tannin  adalah    merusak  dinding  sel  bakteri,  karena  tannin  dapat  melarutkan  dan merusak  ikatan  polipeptida  yang  berada  pada  dinding  sel  bakteri  (Herwandi  et  al.,  2019). Menurut  Bontjura,  2015  menduga  fungsi  senyawa  bioaktif  steroid  sebagai  antibakteri  yaitu merusak  membran  sel  sehingga  menjadi  rapuh  dan  lisis.  (Rijayanti,  2014)  mengemukakan
tentang  saponin    mampu  merusak  ikatan  peptidoglikan  dari  dinding  sel  bakteri  dan  melisis DNA bakteri dengan busa yang dibentuk oleh tumbuhan tersebut.

## D. KESIMPULAN
Hasil  ekstraksi  etanol  daun  sirsak  yang  diperoleh  dalam  penelitian  ini  berupa rendemen  sebesar  3,77%.  Hasil  uji  zona  hambat  maksimum  diperoleh  pada  konsentrasi ekstrak daun sirsak pada konsentrasi 100% sebesar 11,45 mm. Zona hambat terkecil terdapat pada ekstrak 6,25% sebesar 1,44 mm, diameter zona hambat kontrol positif (tetrasiklin) 22,75 mm dan zona hambat kontrol negatif dalam hal ini adalah DMSO 10%, tidak terbentuk zona sama  sekali.  Uji  fitokimia  yang  dilakukan  pada  penelitian  ini  mengungkapkan  kandungan senyawa  bioaktif  pada  daun  sirsak  yaitu  adanya  alkaloid,  flavonoid,  steroid,  saponin  dan tanin.

## E. UCAPAN TERIMA KASIH
Riset ini bisa dilakukan dengan baik karena adanya bantuan Dana Hibah dari Program Riset Mahasiswa dalam Pekan Ilmiah Mahasiswa di Politeknik Perikanan Negeri Tual Tahun 2022. Kami mengucapkan terima kasih untuk Wakil Direktur  III Bidang  Kemahasiswaan di Politeknik  Perikanan  Negeri  Tual  dan  Tim  dalam  Program  Kreativitas  Mahasiswa  (PKM) Corner Politeknik  Perikanan  Negeri  Tual  yang  telah  mendorong  kami  untuk  melaksanakan penelitian ini dari awal sampai selesai dengan sangat baik.

## F. DAFTAR PUSTAKA
Astuti,  N.  D.  (2018). Efektivitas  Obat  Sirup  Jahe  Merah  (Zingiber  officinale  var.  rubrum)  Terhadap  Potensi Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli . FKIP UNPAS.
Bintoro, A., Ibrahim, A. M., Situmeang, B., Kimia, J., & Cilegon, B. (2017). Analisis dan identifikasi senyawa saponin dari daun bidara (Zhizipus mauritania L.). Jurnal Itekima , 2 (1), 84–94.
Bontjura,  S.  (2015).  Uji  efek  antibakteri  ekstrak  daun  leilem  (Clerodendrum  minahassae  l.)  terhadap  bakteri streptococcus mutans. Pharmacon , 4 (4).
Difco,  L.  (1977).  Difco  manual  of  dehydrated  culture  media  and  reagents  for  Microbiology  and  Clinical laboratory procedures. Difco Laboratories . Egerton,  S.,  Culloty,  S.,  Whooley,  J.,  Stanton,  C.,  &  Ross,  R.  P.  (2018).  The  gut  microbiota  of  marine  fish. Frontiers in Microbiology , 9 , 873.
Ernawati,  K.  (2015).  Kandungan  senyawa  kimia  dan  aktivitas  antibakteri  ekstrak  kulit  buah  alpukat  terhadap bakteri Vibrio auginoliticus. Jurnal Kajian Veteriner , 16 , 203–211.
Greenwood,  D.,  Finch,  R.,  Davey,  P.,  &  Wilcox,  M.  (1995).  Antibiotics,  susceptibility  (Sensitivity)  test antimicrobial and chemoterapy. United State of America: Mc Graw Hill Company . Herwandi,  H.,  Mahyarudin, M.,  & Effiana,  E.  (2019).  Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol  annona  muricata linn. terhadap vibrio cholerae secara in vitro. Majalah Kedokteran Andalas , 42 (1), 11–21. Ina‐Salwany, M. Y., Al‐saari, N., Mohamad, A., Mursidi, F., Mohd‐Aris, A., Amal, M. N. A., Kasai, H., Mino, S.,  Sawabe,  T.,  &  Zamri‐Saad,  M.  (2019).  Vibriosis  in  fish:  a  review  on  disease  development  and prevention. Journal of Aquatic Animal Health , 31 (1), 3–22. Irmawati,  Y.,  &  Sudirjo,  F.  (2012).  Isolasi  Bakteri  Pada  Rumput  Laut  Kappaphychus  alvarezii  yang  Terpapar Ice-Ice. Neritik. Langgur .
Leonard,  R.,  Dewi,  U.  U.,  &  Triastuti,  R.  R.  J.  (2023).  Identifikasi  Bakteri  Dan  Studi  Resistensi  Antibiotik Enrofloksasin  Serta  Histopatologi  Pada  Ikan  Lele  (Clarias  Gariepinus)  Di  Kabupaten  Pasuruan  Jawa Timur. Grouper: Fisheries Scientific Journal , 14 (2), 86–100.
Manchanayake,  T.,  Salleh,  A.,  Amal,  M.  N.  A.,  Yasin,  I.  S.  M.,  &  Zamri-Saad,  M.  (2023).  Pathology  and pathogenesis of Vibrio infection in fish: A review. Aquaculture Reports , 28 , 101459.
Nor,  N.  M.,  Yazid,  S.  H.  M.,  Daud,  H.  M.,  Azmai,  M.  N.  A.,  &  Mohamad,  N.  (2019).  Costs  of  management practices of Asian seabass (Lates calcarifer Bloch, 1790) cage culture in Malaysia using stochastic model that includes uncertainty in mortality. Aquaculture , 510 , 347–352. Onohuean,  H.,  Okoh,  A.  I.,  &  Nwodo,  U.  U.  (2021).  Epidemiologic  potentials  and  correlational  analysis  of Vibrio  species  and  virulence  toxins  from  water  sources  in  greater  Bushenyi  districts,  Uganda. Scientific Reports , 11 (1), 22429.
Peterman,  M.  A.,  &  Posadas,  B.  C.  (2019).  Direct  economic  impact  of  fish  diseases  on  the  East  Mississippi catfish industry. North American Journal of Aquaculture , 81 (3), 222–229.
Rijayanti,  R.  P.  (2014).  Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  etanol  daun  mangga  bacang  (Mangifera  Foetida  L.) terhadap  Staphylococcus  aureus  secara  in  vitro. Jurnal  Mahasiswa  PSPD  FK  Universitas  Tanjungpura , 1 (1).
Sangi,  M., Runtuwene, M. R.  J.,  Simbala, H.  E.  I., & Makang, V.  M. A.  (2019). Analisis fitokimia tumbuhan obat di Kabupaten Minahasa Utara. Chemistry Progress , 1 (1), 47–53. Saraswati, D. K. (2018). Uji MIC (Minimum Inhibitory Concentration) Ekstrak Methanol Jamur Tiram Merah Muda  (Pleurotus  flabellatus)  Terhadap  Bakteri  Multidrug  Resistance  Staphylococcus  aureus  Secara  In Vitro . Universitas Muhammadiyah Semarang.
Silalahi,  M.  (2020).  Annona  muricata  (Kajian  Pemanfaatan  Dan  Bioaktivitasnya  Dalam  Kesehatan). Husada Mahakam: Jurnal Kesehatan , 10 (1), 52–62.
Sudarmadji,  S.  S.,  &  Haryono,  B.  (1996).  Analisis  Bahan  Makanan  dan  Pertanian,  Edisikedua. Jogjakarta,: PenerbitLiberty , 114–117.
Toy, T. S. S., Lampus, B. S., & Hutagalung, B. S. P. (2015). Uji daya hambat ekstrak rumput laut Gracilaria sp terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. E-GiGi , 3 (1).
Utami,  S.  M.  (2022).  Studi  Literatur  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun  Sirsak  (Annona  muricata  L.)
Terhadap Berbagai Sampel Bakteri. Pharmaceutical Science Journal , 2 (1), 107–115. Wayne, P. A. (2006). Methods for dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically.
Approved Standard M7-A7. Clinical and Laboratory Standards Institute .