S CRIPTA B IOLOGICA | VOLUME 1 | NOMER 3 | SEPTEMBER 2014 | 193–196 | HTTPS :// DOI . ORG /10.20884/1. SB .2014.1.3.41

## AKTIVITAS ENZIM SUPEROKSIDA DISMUTASE TIKUS DIABETES YANG DIBERI EKSTRAK DAUN KAPULAGA Amomum cardamomum
P UTRI E KA S ARI 1 , S ORTA B ASAR I DA S IMANJUNTAK 1 , H ERY W INARSI 2
1 Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman, Jalan dr. Suparno 63 Purwokerto 53122
2 Jurusan Ilmu Gizi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan, Universitas Jenderal Soedirman

## A B S T R A C T
Diabetes is a disease characterized by abnormal insulin secretion, production, and insulin resistance. This condition cause oxidative stress which  produce  radical  anion  superoxide  and  decrease  superoxide  dismutase  (SOD)  activity.  SOD  is  an  antioxidant  enzyme  that  ca n reduces  anion  superoxide  which  caused  by  diabetes.  Many  natural  medicine  are  believed  having  the  capacity  to  improve  antioxidant status in the body. Cardamom’s leaf was reported containing flavonoids and vitamin C has been proven as in vitro antioxidant. However, there is no data that shows in vivo potency. This study was aimed to know the SOD activity of diabetic rats after treatment of cardamom’s leaf extract. This research used experimental method consist 2 treatment and 5 repetitions. First treatment was diabetic rats  given a dose of 100mg/kg body mass of cardamom’s leaf extract (CLE) and second treatment was diabetic rats without CLE as control every day for 21 days.  Blood  sampling  was  performed  4  times:  0,  7,  14,  21  after  treatment.  Parameter  measured  were  inhibition  of  ferricytokrom   C reduction. Data were analyzed using unpaired t test. The result showed the highest SOD activity was 506.60 U/mg protein (P < 0.01) in diabetic  rats  for  14  days  CLE.  The  conclusions  of  this  research  are  SOD  activity  increased  after  14  days  treatment of  cardamo m’s  leaf extract.
K EY W ORDS : cardamom’s leaf extract (CLE), superoxide dismutase, diabetic-rats
Penulis korespondensi: P UTRI E KA S ARI | email: putri.eksa@gmail.com

## P E N D A H U L U A N
Diabetes  melitus  (DM)  merupakan  penyakit  yang ditandai  dengan  kadar  gula  darah  yang  tinggi (hiperglikemia)  karena  produksi,  sekresi,  atau resistensi  insulin  terganggu  (Widowati,  2008). Penyakit  ini  bersifat  kronik  karena  dapat menyebabkan hipertensi, stroke, jantung, gagal  ginjal dan  kerusakan  sistem  saraf.  Menurut  Badan Kesehatan  Dunia  (WHO)  penderita  DM  di  Indonesia jumlahnya  meningkat  setiap  tahun.  Tahun  2003 jumlah  penderita  DM  13.797.470  jiwa,  tahun  2005 meningkat  menjadi  24  juta  orang  dan  jumlah  ini diperkirakan akan terus meningkat (Soegondo, 2005).
Penderita  DM  mempunyai  kecenderungan  untuk terjadi  stres  oksidatif,  peningkatan  stres  oksidatif berkaitan  dengan  hiperglikemia.  Kondisi  stress oksidatif  yang  disebabkan  radikal  bebas  ini memerlukan  ketersediaan  antioksidan  dalam  jumlah yang  cukup,  sehingga  dapat  mengurangi  kerusakan akibat radikal bebas (Wiyono, 2003). Oleh karena itu dibutuhkan asupan antioksidan dari luar tubuh untuk membantu  menangkal  radikal  bebas  dalam  tubuh. Penggunaan  obat  anti  diabetes  biasanya  dapat menimbulkan  efek  samping  seperti  hipoglikemia  dan disfungsi ginjal (Nathan et al. , 2008). Oleh karena itu, diperlukan suatu alternatif pengobatan  alami dengan harga  relatif  murah  dan  mempunyai  khasiat  tidak berbeda  jauh  dengan  obat  sintetik.  Salah  satu alternatif  pengobatan  adalah  menggunakan  obat tradisional  yang  berasal  dari  tanaman  misalnya penggunaan tanaman kapulaga ( Amomum cardamomum ) yang berfungsi sebagai antioksidan. Winarsi et  al. (2012)  dalam  penelitiannya melaporkan  bahwa  daun  kapulaga  mengandung flavonoid  sebesar  129.6  mg/g  ekstrak  dan  vitamin  C sebesar  19  mg.  Aktivitas  enzim  superoksida
dismutase  pada  penderita  diabetes  mengalami penurunan  yang  diakibatkan  oleh  banyaknya  radikal bebas  (Wiyono,  2003).  Devi et  al. (2012) menambahkan  bahwa  aktivitas  enzim  superoksida dismutase dalam mereduksi radikal anion superoksida  oleh  kapulaga  lebih  tinggi  dibandingkan dengan Syzigium aromaticum dan Piper nigrum.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  mengetahui aktivitas enzim superoksida dismutase tikus diabetes yang  diberi  ekstrak  daun  kapulaga.  Penelitian  ini diharapkan  dapat  bermanfaat  untuk  memberikan informasi  mengenai  aktivitas  enzim  superoksida dismutase  tikus  diabetes  setelah  diberi  ekstrak  daun kapulaga  dan  dapat  digunakan  sebagai  bahan  acuan pemanfaatan daun kapulaga untuk penderita diabetes melitus.

## M E T O D E
Materi  Penelitian terdiri dari bahan  dan  alat.  Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah tikus putih galur Sprague  dawley  jantan  yang  diperoleh  dari  Lembaga Penelitian dan Pengujian Terpadu (LPPT) UGM Yogyakarta, plasma  darah  tikus  diabetes,  daun  kapulaga  ( Amomum cardamomum )  yang  diperoleh  dari  Desa  Ciberem Kecamatan  Sumbang  Purwokerto,  xantin  oksidase,  larutan stok  superoksida  dismutase,  dan  aloksan.  Alat-  alat  yang digunakan dalam penelitian  ini  meliputi rotary  evaporator, feeding  tube/sonde  lambung,  spuit,  multicheck  glucose (Nesco), sentrifus dan tabung eppendorf.
Pemeliharaan  tikus,  induksi  diabetes,  dan  pengambilan plasma  darah  dilakukan  di  Rumah  Hewan  Percobaan Fakultas Biologi dan Laboratorium Mikrobiologi Universitas Jenderal Soedirman. Pengukuran aktivitas enzim Superoksida  Dismutase  dilakukan  di  Laboratorium Lingkungan  Fakultas  Biologi  Universitas  Jenderal Soedirman.  Penelitian  dilakukan  dari  bulan  Oktober  2012 hingga Februari 2013.
Penelitian  ini  dilakukan  secara  eksperimental,  yang terdiri atas 2 perlakuan dan 5 kali ulangan. Hewan uji terdiri
dari  10  ekor  tikus  putih  Sprague  dawley  dengan  rentang berat  250–300  gram  dibagi  menjadi  2  perlakuan  yaitu perlakuan  I,  tikus  diabetes  diberi  ekstrak  daun  kapulaga dengan  dosis  100  mg/kg  bb;  perlakuan  II,  tikus  diabetes tanpa diberi ekstrak daun kapulaga. Ekstrak daun kapulaga diberikan  sehari  sekali  pada pagi  hari  secara  oral. Masing- masing  perlakuan  terdiri  atas  5  ekor  tikus.  Perlakuan diberikan  selama 21 hari.  Sampel  darah diambil  saat  tikus diabetes  dan  setiap  7  hari  setelah  perlakuan  ekstrak  daun kapulaga  kemudian  dilanjutkan  dengan  pengukuran aktivitas  enzim  superoksida  dismutase.  Variabel  penelitian ini adalah variabel bebas dan variabel tergantung. Variabel bebas berupa pemberian ekstrak daun kapulaga 100 mg/kg bb,  sedangkan  variabel  tergantung  berupa  aktivitas  enzim Superoksida  Dismutase.  Parameter  yang  diukur  adalah penghambatan reduksi ferrisitokrom C.
Pembuatan  ekstrak daun  kapulaga  menurut Winarsi, et al. (2012),  daun  kapulaga  dipotong-potong  dengan  ukuran 0,5–1  cm  kemudian  dikeringkan  secara  tidak  langsung dibawah sinar matahari selama 10–15 hari. Daun kapulaga kering  digiling  menggunakan  blender  untuk  dijadikan tepung, setelah itu direndam dengan etanol 96% selama 24 jam selanjutnya disaring. Penyaringan tersebut menghasilkan  filtrat  dan  endapan.  Perendaman  selama  24 jam dengan etanol 96% dilakukan sebanyak tiga kali. Filtrat yang  dihasilkan  dikumpulkan  menjadi  satu,  kemudian diuapkan  dengan  rotary  evaporator  hingga  didapatkan endapan pekat yang disebut ekstrak daun kapulaga.
Penginduksian tikus diabetes menurut Kim et al. (2006), tikus Sprague  dawley jantan  dipuasakan  selama  24  jam kemudian  diinjeksi  dengan  aloksan  monohidrat  yang dilarutkan dalam larutan NaCl fisiologis steril dengan dosis 120  mg/kg bobot badan  secara  intraperitoneal.  Pemberian ekstrak  daun  kapulaga  dimana  sebelumnya  dilarutkan dalam aquabides, kemudian diberikan secara oral (disonde) dengan  dosis  100  mg/kg  bb  tikus.  Air  dan  pelet  standar diberikan  secara  ad  libitum  selama  masa percobaan. Tikus sebanyak  10  ekor  dibagi  menjadi  2  perlakuan  yaitu perlakuan  I,  tikus  diabetes  diberi  ekstrak  daun  kapulaga dengan  dosis  100  mg/kg  bb;  perlakuan  II,  tikus  diabetes tanpa  diberi  ekstrak  daun  kapulaga.  Pemberian  ekstrak daun kapulaga dilakukan selama 21 hari.
Pengukuran  aktivitas  enzim  superoksida  dismutase dengan  cara  dibuat  larutan  standar  SOD  murni  komersial dari  larutan  stok sehingga  diperoleh  beberapa  konsentrasi larutan  sebagai  berikut:  250,  500  dan  1000  unit/ml  H2O. Dibaca serapannya pada panjang gelombang 550 nm dengan spektofotometer  kemudian  digunakan  untuk  membuat lautan kurva standard SOD dengan persamaan regresi linier Y= ax+b (Castenmiller et al. , 1999).
Adapun  tahapan  pengukuran  Aktivitas  Enzim Superoksida  Dismutase  adalah  sebagai  berikut:  medium reaksi disiapkan sebelum pengukuran dengan memasukkan 2,9 ml larutan A (campuran larutan xantin [0,76 mg xantin dilarutkan dalam 100 ml 0,001 NaOH] dan larutan sitokrom c [1,8 mg sitokrom c dalam 100 ml buffer fosfat pH 7,8 tanpa EDTA])  kedalam  tabung  reaksi  3  ml.  Ditambahkan  50  µl larutan baku (kontrol) atau sampel dan divorteks perlahan- lahan.  Ditambahkan  50  µl  larutan  B  (xantin  oksidase  2,88 mg/ml dalam buffer fosfat EDTA) divorteks perlahan-lahan. Blanko  dibuat  dengan  menggunakan  2,9  ml  larutan  A ditambah 50 µl buffer fosfat SOD, kemudian ditambah 50 µl larutan  B  dan  kemudian  divorteks  perlahan-lahan.  Semua kontrol maupun sampel diinkubasi pada suhu kamar selama 30  detik  kemudian  dihitung  absorbansinya  menggunakan spektofotometer UV (Tipe Shimidzhu UV-Visible 1601) pada panjang gelombang 550 nm.
Perhitungan X = (y−b)
a × df
Keterangan: X  = Kadar enzim (Unit/ml) df  = Faktor pengenceran Y  = nilai absorbansi A550 nm B  = intercept a=slope
Aktivitas  SOD  diukur  berdasar  laju  penghambatan reduksi  ferrisitokrom  c  oleh  anion  superoksida  yang dihasilkan  oleh  xantin/xantin  oksidase.  Terjadi  oksidasi xantin menjadi asam urat, dan anion superoksida terbentuk yang  selanjutnya  mereduksi  ferrisitokrom  c.  Reduksi ferrsitokrom c  diamati  berdasar kenaikan  absorbansi  pada panjang  gelombang  550  nm.  Aktivitas  SOD  dapat  dilihat sebagai  aktivitas  SOD  per  miligram  protein,  dengan membagi  kadar  SOD  (U/ml)  dengan  konsentrasi  protein (mg/ml)  sehingga  aktivitas  SOD  dinyatakan  dalam  U/mg protein (Oxis Reasearch, 2001).
Pengukuran  kadar  protein  menggunakan  metode Bradford.  Dibuat  larutan  standar  protein  dengan menimbang  0.01  g  BSA  ( Bovine  Serum  Albumin )  yang kemudian dilarutkan dengan 10 ml H2O sehingga diperoleh larutan  stok  BSA  dengan  konsentrasi  1000  ppm.  Larutan stok  dengan  konsentrasi  1000  ppm  diencerkan  dengan melarutkan  0.5  ml  larutan  stok  ditambahkan  4.5  ml  H 2 O sehingga  diperoleh  larutan  stok  BSA  100  ppm.  Dilakukan pengukuran  standar  protein  dari  larutan  stok  tersebut dengan berbagai  macam  konsentrasi, setelah  itu dilakukan pengukuran  standar  protein  dengan  menambahkan  0.1  ml seri larutan standar dengan 5 ml reagen Bradford. Larutan kemudian  divortex,  larutan  ini  akan  menimbulkan  warna biru  dan  dibaca  pada  panjang  gelombang  595  nm. Pengukuran  sampel  dilakukan  dengan  cara  menambahkan 8µl supernatan dari sampel dengan 80 µl reagen Biorad dan 321  µl  aquabides  kemudian  divortex  dan  dibaca  pada panjang  gelombang  595  nm,  sampel  yang  akan  dibaca diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  30  detik  (Bradford, 1976).
Data  aktivitas  enzim  superoksida  dismutase  yang diperoleh  dianalisis  menggunakan  uji  statistik  parametrik uji t tidak berpasangan dengan program komputer IBM SPSS Statistics 19.

## H A S I L
D A N P E M B A H AS A N
Aktivitas  enzim  superoksida  dismutase  (SOD) plasma  sebelum  pemberian  ekstrak  daun  kapulaga (EDK)  sebesar  265.7  U/mg  protein,  dan  yang  tidak diberi  ekstrak  daun  kapulaga  (kontrol)  aktivitasnya 120.3 U/mg protein, tidak berbeda (P > 0.05). Artinya bahwa  antar kedua kelompok  tikus  adalah homogen, sehingga  apabila  terjadi perubahan selama percobaan  merupakan  pengaruh  dari  perlakuan yang  diberikan.  setelah  satu  minggu  adalah  105.02 U/mg protein untuk kelompok tikus yang diberi EDK, sedangkan  kelompok  tikus  yang  tidak  diberi  EDK sebesar 143.38 U/mg protein. Hasil ini menunjukkan tidak  terdapat  perbedaan  signifikan  (P  >  0.05). Kemungkinan  tikus  yang  diberi  EDK  belum  mampu merespon  dengan  optimal.  Setelah  dua  minggu perlakuan  aktivitas  SOD  plasma  untuk  tikus  yang diberi  ekstrak  daun  kapulaga  adalah  506.60  U/mg protein,  sedangkan  tikus  yang  tidak  diberi  ekstrak daun kapulaga memiliki aktivitas SOD sebesar 108.85 U/mg  protein.  Hasil  ini  menunjukkan  adanya perbedaan signifikan (P < 0.01) bahwa aktivitas enzim
S CRIPTA B IOLOGICA | VOLUME 1 | NOMER 3 | SEPTEMBER 2014 | 193–196 | HTTPS :// DOI . ORG /10.20884/1. SB .2014.1.3.41
SOD  mengalami  peningkatan  secara  nyata.  Namun demikian,  setelah  tiga  minggu  perlakuan  aktivitas SOD  plasma  untuk  kelompok  tikus  diabetes  yang diberi  ekstrak  daun  kapulaga  menurun  menjadi 166.76  U/mg  protein,  sedangkan  tikus  diabetes yang  tidak  diberi  ekstrak  daun  kapulaga  117.33 U/mg  protein  (Gambar  1),  tidak  terdapat  perbedaan (P>0.05).
Gambar 1 . Aktivitas SOD selama perlakuan Keterangan: *=p>0.05 (tidak berbeda nyata), **=p<0.05 (berbeda nyata) dan ***=p<0.01 (berbeda sangat nyata)
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  adanya peningkatan aktivitas SOD setelah pemberian ekstrak daun kapulaga yang mengandung senyawa flavonoid. Demikian  pula  pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh Chis et al. (2009) juga membuktikan bahwa flavonoid mampu  meningkatkan  status  antioksidan  pada  tikus diabetes. Morakinyo et al. (2011) meyakinkan bahwa aktivitas enzim superoksida dismutase tikus diabetes yang  diberi  ekstrak  etanol Zingiber  officinale dengan dosis  200  mg/kg  bb  sebesar  1.3  U/mg  protein  dan pemberian  dengan  dosis  500  mg/kg  bb  sebesar  1.4 U/mg protein, sedangkan pada tikus diabetes kontrol aktivitasnya  adalah  0.8  U/mg  protein.  Hal  tersebut memperlihatkan  bahwa  aktivitas  SOD  pada  tikus diabetes diberi ekstrak etanol jahe ( Z. officinale ) lebih tinggi  dibandingkan  dengan  tikus  diabetes  kontrol. Flavonoid yang terkandung dalam ekstrak etanol jahe ( Z.  officinale )  dapat  meningkatkan  aktivitas  enzim superoksida  dismutase  (Al-Katib et  al. ,  2009; Morakinyo et  al. ,  2011).  Srividya et  al. (2010) menambahkan  bahwa  terjadi  peningkatan  aktivitas SOD pada tikus diabetes yang diberi ekstrak lengkuas ( Alpinia  galanga ).  Terjadinya  peningkatan  aktivitas SOD  kemungkinan  karena  terdapat  flavonoid  dalam ekstrak  daun  kapulaga.  Kapulaga  yang  termasuk dalam  familia  Zingiberaceae  memiliki  kemampuan untuk meningkatkan aktivitas SOD karena kandungan flavonoidnya,  sama  seperti  jahe  dan  lengkuas  yang juga dapat melakukan hal tersebut.
Lu et  al. (2010)  dalam  penelitiannya  melaporkan aktivitas SOD tikus diabetes yang diberi ekstrak daun Litsea  coreana  sebesar  101.90  U/mg  protein  lebih tinggi  dibandingkan  dengan  tikus  diabetes  tanpa perlakuan  sebesar  62.96  U/mg  protein.  El-Beshbshy (2005) menambahkan bahwa aktivitas SOD pada tikus stres  oksidatif  lebih  rendah  dibandingkan  dengan
tikus stres oksidatif yang diberi ekstrak teh hijau. Hal serupa  juga  disampaikan  oleh  Pattabiraman  dan Muthukumaran  (2011)  bahwa  pemberian  ekstrak mengkudu  ( Morinda  tinctoria )  dengan  dosis  300 mg/kg  bb  dapat  meningkatkan  aktivitas  SOD  tikus diabetes  sebesar  18.34  U/mg  protein  lebih  tinggi dibandingan  tikus  diabetes  tanpa  pemberian  ekstrak mengkudu ( M. tinctoria ) sebesar 15.63 U/mg protein. Baik  Litsea  coreana,  Morinda  tinctoria  dan  teh  hijau mengandung flavonoid, sehingga dapat meningkatkan aktivitas  enzim  superoksida  dismutase  pada  tikus diabetes  (Lu et  al. ,  2010;  El-Beshbshy,  2005; Pattabiraman dan Muthukumaran, 2011).
Flavonoid bekerja sebagai antioksidan dengan cara mendonorkan  ion  hidrogen  (Sugihara et  al. ,  2001; Amic et  al. ,  2003),  dan  sebagai  scavenger  radikal bebas yang terbentuk selama terjadi peroksidasi lipid (Nijveldt et  al. ,  2001;  Devisov  dan  Afanas’ev,  2005).
Mekanisme  kerja  antioksidan  flavonoid  menurut Aylindania (2007) dengan cara menekan pembentukan radikal bebas, yaitu melalui penghambatan  enzim,  pengkelatan  ion  logam  (metal ion  chelating)  yang  terlibat  dalam  produksi  radikal bebas  serta  meredam  radikal  bebas  yang  telah terbentuk.  Firuzi et  al. (2005)  menambahkan  bahwa flavonoid dapat menghambat kerja  enzim pembentuk radikal bebas.
Selain flavonoid, daun kapulaga juga mengandung vitamin  C  sebesar  19  mg/g  ekstrak  (Winarsi et  al. , 2012)  yang  dapat  membantu  meningkatkan  status antioksidan  di  dalam  tubuh  dengan  menetralkan radikal  bebas.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan adanya  perbedaan  aktivitas  enzim  superoksida dismutase  tikus  diabetes.  Sesuai  dengan  penelitian Day  &  Lal  (2012)  pemberian  vitamin  C  mampu meningkatkan  aktivitas  SOD  sebesar  6.46  U/mg protein  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  tikus diabetes  tanpa  perlakuan.  Peran  vitamin  C  dapat melindungi  molekul-molekul  yang  sangat  diperlukan oleh  tubuh,  seperti  protein,  lipid,  karbohidrat  dan asam  nukleat  dari  kerusakan  radikal  bebas  dan  ROS yang  disebabkan  oleh  stres  oksidatif  (Arifin et  al. , 2007).  Sadi et  al. (2007)  dalam  percobaannya membuktikan  bahwa  vitamin  C  dapat  meningkatkan status antioksidan tikus diabetes.
Efek negatif radikal bebas dijelaskan oleh Janson et al. (2011)  disebabkan  oleh  kejadian  stres  oksidatif pada  tubuh  tikus,  tetapi  efeknya  dapat  dicegah  oleh antioksidan  vitamin  C.  Antioksidan  tersebut  bereaksi dengan  berbagai  macam  ROS  yang  ada  dalam  darah atau  sel  yaitu  dengan  mendonorkan  elektronnya untuk  radikal  bebas  tersebut.  Vitamin  C  dapat menghalangi pelekatan glukosa pada protein sehingga proses  glikasi  terhambat  dan  pembentukan  radikal anion  superoksida  menurun  (Padayatty et  al. ,  2003). Hal  ini  juga  menjelaskan  bahwa  adanya  vitamin  C  di dalam daun kapulaga dapat bekerja sebagai peredam radikal superoksida yang akhirnya dapat memperkuat kerja  enzim  SOD  di  dalam  tubuh  tikus  diabetes. Dengan demikian  terjadi sinergisme antara flavonoid
dengan vitamin C, yang mengakibatkan berkurangnya jumlah  radikal  bebas  dan  sebaliknya  dapat meningkatkan aktivitas enzim superoksida dismutase.

## K E S I M P U L A N
Berdasarkan  hasil  penelitian  dan  hasil  analisis terhadap  data  yang  diperoleh,  maka  dapat disimpulkan  bahwa  aktivitas  enzim  superoksida dismutase  tikus  diabetes  mengalami  peningkatan setelah 14 hari pemberian ekstrak daun kapulaga.

## D A F T AR R E F E R E N S I
Al-Katib  SM,  Al-Khasab  EM,  Kalo  MS,  Hamdoon  AA.  2009.  The Antioxidant  Effects  of  Flavonoids  and  Non-Flavonoid  Part Extract from Ginger ( Zingiber officinale ) Roots. Journal Raf Sci. 20(3):18-31.
Amic  D,  Beslo  D,  Trinasjstic  N.  2003.  Structure-radical  scavenging activity  relationship  of  flavonoids.  Croatica  Chemical  Acta. 76(1):56-61.
Arifin  H,  Vivi  D,  Almahdy  A.  2007.  Pengaruh  Pemberian  Vitamin  C terhadap  Fetus  pada  Mencit  Diabetes.  Jurnal  Sains  dan Teknologi Farmasi. 12(1):32-40.
Aylindania  N.  2007.  Pengaruh  Pemberian  Teh  Hijau  ( Camellia sinensis L.) terhadap Aktivitas Radikal Bebas pada Hepar Mencit ( Mus  musculus )  Diabetes  [Skripsi].  Universitas  Islam  Negeri (UIN) Malang, Malang.
Bradford  MM.  1976.  A  Rapid  and  Sensitivity  Method  for Quantitation  of  Microgram  Quantities  of  Protein  Utilizing  The Principles of Protein Dye-Binding. Anal. Biochem. 11:870-884.
Castenmiller JM, Soren T, Lauridsen, Dragsted LO, Karin H, Jozef PH, Clive  E.  1999.  B-Carotene  does  not  change  markers  of enzymatic  antioxidant  activity  in  human  blood.  J  Nutr. 129:2162-2169.
Chis IC, Ungureanu MU, Marton A, Simedrea R, Muresan A, Potescu I,
Decea  N.  2009.  Departement  of  Physiology.  University  of Medicine and Pharmacy. Romania.
Day  R,  Lal  SS.  2012.  Supplementation  effects  of  vitamin  C  and vitamin  E  on  oxidative  stress  in  post  menopausal  diabetic women. BioChemistry: An Indian Journal. 2012;6(4).
Devi SA, Umasankar ME, Babu S. 2012. A Comparative Study of Anti Oxidant  Properties  in  Common  Indian  Spices.  IRJP.  3(5):465- 468.
El-Beshbishy  HA.  2005.  Hepatoprotective  Effect  of  Green  Tea ( Camellia  sinensis )  Extract  against  Tamoxifen-induced  Liver Injury  in  Rats.  Journal  of  Biochemistry  and  Molecular  Biology. 38(5):563-570.
Firuzi O, Lacanna A, Petrucci R, Marrosu G, Saso L. 2005. Evaluation of  The  Antioxidant  Activity  of  Flavonoid  by  “Ferric  Reducing Antioxidant  Power”  Assay  and  Cyclic  Voltammetry.  Biochim Biophys Acta. 1721:174-184.
Janson  S,  Erawan  W,  M.  Akbar  K.  2011.  Pemberian  Vitamin  C Dikontraindikasikan  pada  Pengobatan  Tuberkulosis  dengan
Isoniazid.  Journal  of  the  Indonesian  Medical  Students Association. 1(1):10-15.
Kim  SJ,  BJ,  Choi  WC,  Kin  CS.  2006.  Hypoglycemic  and Antihyperlipidemic  Effect  of  Four  Korean  Medicinal  Plants  in Alloxan  Induced  Diabetic  Rats.  American  Journal  Biochemical Biotechnology. 2(4):154-160.
Lu  Y,  Zhang  Q,  Li  J,  Sun  Y,  Wang  L,  Cheng  W,  Yang  H.  2010. Antidiabetic  Effects  of  Total  Flavonoids  from  Litsea  Coreana leve on Fat-Fed, Streptozotocin- Induced Type 2 Diabetic Rats. The American Journal of Chinese Medicine. 38(4):713-725.
Morakinyo  AO,  Akindele  AJ,  Ahmed  Z.  2011.  Modulation  of Antioxidant  Enzymes  and  Inflammatory  Cytokines:  Possible Mechanism  of  Anti-diabetic  Effect  of  Ginger  Extracts.  Afr.  J. Biomed. Res. 14:195-202.
Nathan MN, Buse JB, Mayer BD, Ferrannini E, Holman RR, Sherwin R,  Zinman  B.  2008.  Management  of  Hyperglicemia  in  Type  2 Diabetes:  A  Consensus  Alogarithm  for  Initiation  and Adjustment of Therapy. Diabetes Care. 31(1):173-175.
Nijveldt  RJ.  2001.  Flavonoids:  a  Review  of  Probable  Mechanism of Action  and  Potential  Applications.  The  American  Journal  of Clinical Nutrition. 74:418-425.
Oxis  Research.  2001.  Spectrophotometric  Assay  for  Superoxida Dismutase  For  Research  Use  Only  Not  For  Use  In  Diagnostic Procedures. Oxis Health Product. USA.
Padayatty SJ, Are K, Yahoi W, Peter E, Oran K, Je-Hyuk L, Shenglin C, Crishtoper C, Anand D, Mark L. 2003. Vitamin C as Antoxidant: Evaluation  of  Its  Role  in  Disease  Prevention.  Journal  of  the American College of Nutrition. 22(1):18-35.
Pattabiraman  K,  Muthukumaran  P.  2011.  Antidiabetic  and Antioxidant Activity of Morinda tinctoria roxb Fruits Extract in Streptozotocin-Induced  Diabetic  Rats.  Asian  Journal  Pharmacy Technology. 1(2):34-39.
Sadi G, Yilmaz O, Guray T. 2007. Effect of Vitamin C and Lipoic acid on  Streptozotocin-  induced  Diabetes  Gene  Expression:  mRNA and  Protein  Expressions  of  Cu-Zn  SOD  and  Catalase.  Mol  Cell Biochem. 309:109-116.
Soegondo  S.  2005.  Penatalaksanaan  Diabetes  Melitus  Terpadu. FKUI. Jakarta.
Srividya  AR,  Dhanabal  SP,  Satish  KMN,  Parth  KHB.  2010. Antioxidant  and  Diabetic  Activity  of  Alpinia  Galanga. International  Journal  of  Pharmacognosy  and  Phytochemical Research. 3(1): 6-12.
Sugihara  N,  Ohnishi  M,  Imamua  K,  Fuono  K.  2001.  Differences  in Antioxidative Efficiency  of  Cathecins in  Various  Metal-induced Lipid  Peroxidation  in  Cultured  Hepatocytes.  Journal  of  Health Science. 47(2): 99-106.
Widowati.  2008.  Potensi  Antioksidan  sebagai  Antidiabetes.  JKM. 7(2): 1-2.
Winarsi  H,  Sasongko  ND,  Purwanto  A,  Nuraeni  I.  2012.  Minuman Berbasis  Ekstrak  Kapulaga  sebagai  Antioksidan  yang Berpotensi  Antidiabetes.  Laporan  Penelitian  MP3EI  (tidak dipublikasikan). LPPM, Universitas Jenderal Soedirman.
Wiyono  P.  2003.  Peranan  Hiperglikemia  Terhadap  Terjadinya Komplikasi Kronik Diabetes Melitus. B.I. Ked. 35(1):55-60.