## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada Volume 13 No 2, Hal 234-242, Juli 2022
Universitas Kusuma Husada Surakarta ISSN : 2087 – 5002 | E-ISSN : 2549 – 371X

## PENGARUH PERBEDAAN SUHU DAN LAMA PENYIMPANAN SPUTUM TERHADAP JUMLAH BAKTERI TAHAN ASAM
Dwi Handayani 1 , Yusianti Silviani 2
1,2 Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Nasional e-mail : yusianti.silviani@stikesnas.ac.id

## ABSTRAK
Tuberkulosis  merupakan  suatu  penyakit  menular  langsung  yang disebabkan  oleh bakteri TB yaitu Myobacterium Tuberculosis . Sampai saat ini, Tuberkulosis (TBC) masih menjadi tantangan  besar  untuk  pemerintah  Indonesia.  Untuk  kepentingan  diagnosis  dengan  cara pemeriksaan sputum mikroskopis langsung, terduga pasien TB diperiksa contoh uji sputum dengan  pewarnaan  Ziehl  Neelsen.  Namun,  di  beberapa  daerah  di  Indonesia,  jauhnya fasilitas  kesehatan  terkadang  mengharuskan  sampel  BTA  mengalami  penundaan pemeriksaan  karena  melalui  proses  pengiriman  terlebih  dahulu.  Tujuan  penelitian  ini adalah untuk mengetahui adanya pengaruh perbedaan suhu dan lama penyimpanan sputum terhadap  jumlah  Bakteri  Tahan  Asam.  Desain  penelitian  ini  adalah  desain  penelitian eksperimental laboratorium dengan rancangan acak lengkap (RAL). Penelitian dilakukan dengan 5 perlakuan yaitu penyimpanan selama 0 jam, 24 jam pada suhu 2-8 o C, 24 jam pada suhu 25 o C, 48 jam pada suhu 2-8 o C dan 48 jam pada suhu 25 o C. Berdasarkan pengamatan mikroskopis dan pengolahan data, diperoleh hasil p value > 0,05 maka Ho diterima dan Ha ditolak.  Dari  hasil  tersebut  dapat  disimpulkan  bahwa  tidak  terdapat  pengaruh  dari perbedaan suhu dan lama penyimpanan terhadap jumlah BTA +. Kata kunci: Tuberkulosis, Perbedaan Suhu, Lama Penyimpanan

## ABSTRACT
Tuberculosis is a direct infectious disease caused by the TB bacteria, named Myobacterium tuberculosis.  Until  now,  Tuberculosis  (TBC)  is  still  a  big  challenge  for  the  Indonesian government. For the purpose of diagnosis by direct microscopic examination of  sputum, suspected  TB  patients  are  examined  for  sputum  samples  with  Ziehl  Neelsen  staining. However, in some areas in Indonesia, the distance from health facilities sometimes requires that Acid-Fast Bacilli samples undergo a delay in examination because they go through the delivery process first. Therefore, the purpose of this study was to determine the effect of differences in temperature and storage time on the amount of Acid-Fast Bacilli +. The design  of  this  study  is  a  laboratory  experimental  research  design  with  a  completely randomized design. The study was conducted with 5 treatments, that stored for 0 hours, 24 hours  at  a  temperature  of  2-8 o C,  24  hours  at  a  temperature  of  25 o C,  48  hours  at  a temperature of 2-8 o C and 48 hours at a temperature of 25 o C. After microscopic observation and data processing, the results obtained p value > 0.05, then Ho is accepted and Ha is rejected.  From  these  results  it  can  be  concluded  that  there  is  no  effect  of  differences  in temperature and storage time on the amount of acid-fast bacilli +.
Keywords: Tuberculosis, Temperature Differences, Storage Time

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada Volume 13 No 2, Hal 234-242, Juli 2022
Universitas Kusuma Husada Surakarta ISSN : 2087 – 5002 | E-ISSN : 2549 – 371X
1. PENDAHULUAN
Tuberkulosis  merupakan  suatu penyakit  menular  langsung  yang disebabkan  oleh  bakteri  TB  yaitu Myobacterium Tuberculosis . Bakteri  ini  ditemukan  pada  tanggal 24  Maret  1882  oleh  Robert  Koch (Danusantoso, 2018). Bakteri Mycobacterium Tuberculosis adalah bakteri  dengan  bentuk  batang  lurus ataupun  bengkok  yang  ramping dengan  panjang  2-4  μm  dan  lebar 0,2  –0,5  μm  dan  bergabung membentuk  rantai.  Bakteri  ini memiliki  sifat  tahan  asam,  oleh karena  itu  sering  disebut  Bakteri Tahan Asam/ BTA (Zanita, 2019) . Beberapa  penegakan  diagnosa TB paru yaitu dengan melihat gejala klinis dan pemeriksaan bakteriologis yang meliputi pemeriksaan mikrobiologis langsung,  biakan  dan  tes  cepat. Namun pemeriksaan biakan memerlukan  waktu  lebih  lama  dan memerlukan peralatan khusus. Pemeriksaan  mikroskopis  dinilai lebih  mudah,  spesifik,  sensitif  serta efisien waktu dan biaya. Faktor yang mempengaruhi  hasil  mikroskopis antara  lain  kualitas  sampel,  jumlah bakteri,  kualitas  sediaan,  kualitas pewarna  dan  kualitas  sediaan. Sensitivitas  pemeriksaan  dengan metode  ini  akan  sangat  terganggu ketika  jumlah  bakteri  kurang  dari 10.000  kuman/ml  sampel  dahak. Pemeriksaan  BTA  menggunakan metode Tes Cepat Molekuler (TCM)  dapat  mendeteksi  hingga jumlah  minimal  kuman  BTA  131 kuman/ml  sampel  dahak  (Das, Ganguly  dan  Mandal,  2019).  Pada pemeriksaan  mikroskopis,  sputum pasien akan diperiksa dengan pewarnaan Ziehl Nelseen. Suhu  optimum  pertumbuhan Mycobacterium  tuberculosis adalah 37°C, pH pembenihan antara 6,0-8,0 dengan  pH  optimum  antara  6,5-6,8 (Nurlaily,  2015).  Bakteri  ini  tahan terhadap  suhu  rendah  antara  4 o C sampai  minus  70 o C,  namun  sangat
peka  terhadap  sinar  matahari  dan sinar  ultraviolet  sehingga  sebagian besar bakteri akan mati dalam waktu beberapa  menit.  Sedangkan  dalam dahak  pada  suhu  antara  30-37 o C akan    mati    dalam    waktu    lebih kurang    1  minggu  (Kesehatan, 2017).
Sampai  saat  ini,  Tuberkulosis (TBC)  masih  menjadi  tantangan besar  untuk  pemerintah  Indonesia. Pada tahun 2021 Indonesia menjadi penyumbang  dua  pertiga  kasus
Tuberculosis  di  seluruh  dunia, dengan perkiraan kasus 845.000 dan jumlah kematian 98.000 (Wulandari, 2021). Bakteri  ini  tidak  bergerak  dan tidak membentuk spora atau kapsul (Irianto and Koes, 2013). Selain itu,
Mycobacterium tuberculosis dindingnya  banyak  mengandung lipid  sehingga  sulit  terwarnai  oleh pengecatan  Gram.  Pewarnaan  ZN dilakukan  untuk  mengidentifikasi adanya Mycobacterium tuberculosis atau  BTA  di  dalam  sediaan (Juliantina and Agustiningtyas, 2020). Mycobacterium  tuberculosis akan  terlihat  berbentuk  panjang, berwarna merah dengan latar belakang biru. Sementara itu, untuk menginterpretasi  hasil  pemeriksaan mikroskopis  BTA  digunakan  skala IUATLD (Kesehatan, 2017). Untuk waktu terbaik pengumpulan sputum adalah  setelah  bangun  tidur, karena sekresi abnormal bronkus cenderung  untuk  berkumpul  pada waktu tidur (Somantri, 2012). Namun,  di  beberapa  daerah  di Indonesia,
jauhnya fasilitas kesehatan  terkadang  mengharuskan sampel BTA mengalami penundaan pemeriksaan  karena  melalui  proses pengiriman terlebih
dahulu.
Terkadang  terdapat  juga  situasi dimana jumlah tenaga laboratorium sangat  minim  sedangkan  terdapat kegiatan  rutin  laboratorium  lain yang  harus  dilakukan.  Hal  ini  juga mengakibatkan  sampel  BTA  tidak dapat langsung dikerjakan.

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada Volume 13 No 2, Hal 234-242, Juli 2022
Universitas Kusuma Husada Surakarta ISSN : 2087 – 5002 | E-ISSN : 2549 – 371X
Pada penelitian sebelumnya Pengaruh Lama Penyimpanan Dahak  Pagi  pada  Suhu  Kamar Terhadap  Jumlah  Bakteri  Tahan Asam  diperoleh  hasil  tidak  ada pengaruh  lamanya  penyimpanan dahak pagi yang langsung dikerjakan, ditunda 3 jam dan 6 jam pada  suhu  kamar  terhadap  jumlah BTA (Muin et al. , 2020)
Tujuan  penelitian  adalah  untuk mengetahui  pengaruh  perbedaan suhu dan lama penyimpanan sputum terhadap  jumlah  BTA  +  dengan waktu  tunda  yang  lebih  panjang yaitu 24 jam dan 48 jam, lalu dengan suhu ruang dan suhu dingin (2-8 O C)
dilakukan.

## 2. METODOLOGI PENELITIAN
Menurut  jenisnya  penelitian  ini termasuk penelitian analitik eksperimental yang menguji pengaruh antara perbedaan suhu dan lama penyimpanan terhadap jumlah BTA +. Desain penelitian ini adalah desain penelitian eksperimental laboratorium dengan rancangan acak  lengkap  (RAL).  Penelitian dilakukan dengan 5 perlakuan yaitu penyimpanan selama 0 jam, 24 jam pada suhu 2-8 o C, 24 jam pada suhu 25 o C,  48  jam  pada  suhu  2-8 o C  dan 48 jam pada suhu 25 o C.
Perhitungan  pengulangan  pada penelitian  ini  menggunakan  rumus Federer : (t-1) (r-1)  15
Keterangan: t = treatment (perlakuan)
r = replikasi (pengulangan)
15 = derajat kebebasan umum (t-1) (r-1)  15
(5-1) (r-1)  15
4r  15 + 4 4r  19. r  4.75 (ulangan  yang  digunakan  adalah  5 kali) Berdasarkan perhitungan di atas, ditetapkan jumlah pengulangan sebanyak  lima  kali  untuk  setiap perlakuan,  sehingga  keseluruhan jumlah  sampel  yang  digunakan dalam penelitian ini harus lebih dari 15.  Peneliti  menggunakan  jumlah sampel sebanyak 25 (Wahyuningrum  dan Probosari, 2012) Populasi penelitian adalah sputum  dengan  BTA  positif  dari pasien yang menjalani pemeriksaan sputum  di  Balai  Kesehatan  Paru Masyarakat  (BKPM)  Purwokerto. Sampel dipilih berdasarkan penggunaan kriteria tertentu.
Kriteria  inklusi  adalah  sputum sewaktu  dengan  konsistensi  kental dan  purulen,  sedangkan  kriteria eksklusi  adalah  sputum  bercampur darah (Setiyoningsih dan Sukundarno,  2020).  Jumlah  sampel yang  diambil  adalah  lima  sputum sewaktu dengan pengulangan sebanyak  lima  kali,  sehingga  total sampel  yang  digunakan  adalah sebanyak  25  sampel.  Sputum  ini kemudian  diperiksa  jumlah  BTA segera setelah pengumpulan, setelah dilakukan  penyimpanan  24  jam pada suhu 2-8 o C, 24 jam pada suhu 25 o C,  48  jam  pada  suhu  2-8 o C  dan 48 jam pada suhu 25 o C.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil penelitian yang  dilakukan,  didapatkan  data- data sebagai berikut:

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada Volume 13 No 2, Hal 234-242, Juli 2022
Universitas Kusuma Husada Surakarta ISSN : 2087 – 5002 | E-ISSN : 2549 – 371X

## Tabel 1. Karakteristik Sampel Sputum
Gambar 1 Jumlah Bakteri Tahan Asam
Tabel 2. Jumlah Bakteri Tahan Asam Berdasar Gradasi Kode sputum A B C D E 0 Gradasi 3+ 3+ 3+ 1+ 3+ 24 jam (2-8ºC) Gradasi 3+ 3+ 3+ 1+ 3+ 24 jam (25ºC) Gradasi 3+ 3+ 3+ Scanty 3+ 48 jam (2-8ºC) Gradasi 3+ 3+ 3+ Scanty 3+ 48 jam (25ºC) Gradasi 3+ 3+ 3+ Scanty 3+ Sputum  A,  B, C,  D  maupun  E yang disimpan pada suhu 25oC cenderung menjadi  lebih  encer  dibandingkan sputum yang disimpan pada suhu 2-
0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 A B C
D E 0 jam 24 jam (2-8ºC) 24 jam (25ºC) 48 jam (2-8ºC) 48 jam 25ºC No 1 2 3 4 5 Kode sputum A B C D E Volume < 3 ml Dahak Purulen Volume < 3 ml Dahak Purulen Volume < 3 ml Dahak Purulen Volume < 3 ml Dahak+nanah Purulen Volume < 3 ml Dahak Purulen Konsistensi purulen Konsistensi purulen Konsistensi purulen Nanah lendir Konsistensi purulen Konsistensi lebih encer Konsistensi lebih encer Konsistensi lebih encer Konsistensi lebih encer Konsistensi lebih encer Konsistensi purulen Konsistensi purulen Konsistensi purulen Seperti air Konsistensi purulen Konsistensi lebih encer Konsistensi lebih encer Konsistensi lebih encer Konsistensi lebih encer Konsistensi lebih encer

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada Volume 13 No 2, Hal 234-242, Juli 2022
Universitas Kusuma Husada Surakarta ISSN : 2087 – 5002 | E-ISSN : 2549 – 371X
8oC.  Sementara  itu,  jumlah  BTA semua  sputum  pada  penyimpanan 25ºC mengalami penurunan dibandingkan sputum yang disimpan pada suhu 2-8oC. Berdasarkan Gambar 1 dan Tabel 2 diketahui bahwa terjadi penurunan jumlah BTA baik sputum A, B, C, D maupun  E  seiring  semakin  lama penyimpanannya. Berdasarkan gradasi maka tidak terdapat perubahan gradasi pada sputum A, B, C  dan  E  dari  yang  dikerjakan langsung, disimpan 24 jam pada suhu 2-8ºC,  24  jam  pada  suhu  25ºC,  48 jam pada suhu 2-8ºC maupun 48 jam pada  suhu  25ºC.  Tetapi  terdapat pengecualian pada sputum D dengan lama penyimpanan 24 jam pada suhu
2-8ºC  ke  lama  penyimpanan  24  jam
pada  suhu  25ºC  karena  terjadi penurunan  gradasi  dari  1+  menjadi scanty. Namun perubahan gradasi ini dapat  disebabkan  karena  gradasi  1+ pada  sputum  D  dengan  lama penyimpanan  24  jam  pada  suhu  2- 8ºC  hanya  memiliki  jumah  BTA sebanyak  10,  dimana  angka  ini merupakan  angka  minimal  untuk gradasi  1+.  Sehingga  bila  jumlah BTA  berkurang  bahkan  hanya  satu, hal  ini  sudah  dapat  mengubah  hasil gradasinya.  Selain  dari  pada  data jumlah  bakteri,  melalui  tabel  3  di bawah  ini  dapat  dilihat  jika  data penelitian yang diperoleh berdistribusi normal sehingga dilanjutkan  dengan  uji  Repeated ANOVA. Tabel 3. Uji Normalitas 0 24 jam (2-8ºC) 24 jam (25ºC) 48 jam (2-8ºC) 48 jam (25ºC) Number of values Minimum Maximum Range Mean Std. Deviation Std. Error of Mean 5 10.00 7790 7780 2998 3001 1342 5 10.00 7750 7740 2832 2967 1327 5 9.000 7440 7431 2755 2842 1271 5 5.000 6710 6705 2593 2549 1140 5 3.000 5830 5827 2369 2221 993.4 Tabel 4. Hasil Uji Repeated ANOVA 0 24 jam (2-8ºC) 24 jam (25ºC) 48 jam (2-8ºC) 48 jam (25ºC) Test for normal distribution Shapiro-Wilk test W P value Passed normality test (alpha=0.05)? P value summary Number of values 0.9231 0.5500 Yes ns 5 0.8807 0.3125 Yes ns 5 0.8882 0.3480 Yes ns 5 0.9139 0.4912 Yes ns 5 0.9430 0.6871 Yes ns 5
Dilihat dari tabel 4 di atas, nilai p yang dimiliki oleh sampel BTA 0 jam yaitu sebesar 0.5500, sampel BTA 24 jam (2-8ºC) dengan nilai p = 0.3125, sampel  BTA  24  jam  (25ºC)  sebesar 0.3480, sampel BTA 48 jam (2-8ºC) jam  dengan  nilai  p  =  0.4912  dan sampel BTA 48 jam (25ºC) dengan p

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada Volume 13 No 2, Hal 234-242, Juli 2022
Universitas Kusuma Husada Surakarta ISSN : 2087 – 5002 | E-ISSN : 2549 – 371X
= 0.6871. Berdasarkan tabel 3 dapat disimpulkan  bahwa  seluruh  data berdistribusi normal. Hal ini dikarenakan  seluruh  nilai  p  sampel BTA  >  0.05.  Berdasarkan  hasil pengolahan data melalui uji repeated Anova  diperoleh  nilai  p  sebesar
0.2101.    Nilai  p  >  0.05  maka  Ho diterima dan Ha ditolak, artinya tidak ada pengaruh yang signifikan perbedaan suhu dan lama penyimpanan  terhadap  jumlah  BTA +. Berdasarkan hasil penelitian pada tabel  2,  semakin  lama  disimpan jumlah  BTA  mengalami  penurunan. Penurunan  ini  juga  terjadi  pada sputum  yang  disimpan  pada  suhu 25°C  dibandingkan  dengan  sputum yang disimpan pada suhu 2-8°C. Hal ini  dapat  dilihat  dari  tabel  yang menunjukkan  jumlah  BTA  pada sputum  yang  langsung  dikerjakan, disimpan 24 jam pada suhu 2-8ºC, 24 jam  pada  suhu  25ºC,  48  jam  pada suhu  2-8ºC  maupun  48  jam  pada suhu  25ºC.  Penurunan  jumlah  BTA ini  dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa faktor yaitu nutrisi, proses enzimatis pada sputum dan perubahan konsistensi sputum. Sama  seperti  bakteri  lainnya, bakteri tahan asam juga membutuhkan  nutrisi  untuk  dapat bertahan  hidup.  Pada  sputum,  BTA hanya  dapat  menggunakan  nutrisi yang  ada  di  dalamnya.  Berbeda ketika  berada  di  dalam  tubuh,  BTA bisa mendapatkan nutrisi yang cukup dari inangnya. Nutrisi dalam sputum ini  terbatas  jumlahnya,  sehingga ketika nutrisi dalam sputum akhirnya habis  akibat  digunakan  secara  terus menerus,  BTA  akan  kehilangan sumber  energinya  dan  mati.  Hal  ini sesuai dengan teori kurva pertumbuhan yang menyatakan bahwa  sebagian    besar  populasi bakteri  akan  mulai  mengalami kematian    karena    nutrisi    di   dalam medium    sudah    habis,    adanya    zat
racun  dan habisnya  energi  cadangan di  dalam  sel (Wuryanti, 2012) Penurunan  jumlah  BTA  adalah proses  enzimatis  yang  terjadi  dalam sputum.  Sel  lekosit  dalam  sputum mengandung enzim- neutrophil elastase dan alpha-naphtyl  acetate esterase yang  masih  dapat  bekerja sampai  72  jam  meski  aktivitasnya akan terus menurun. Neutrofil elastase  disekresikan  oleh  neutrofil selama peradangan, dan menghancurkan bakteri dan jaringan inang. Jugniot., et al. 2019). Sementara itu, alpha-naphtyl acetate esterase adalah esterase non spesifik yang  digunakan  sebagai  penanda adanya  sel  limfosit  T  matang  dalam jumlah banyak (Bayraktaroğlu et al., 2015).  Kondisi  lingkungan  seperti pH  dan  suhu  memegang  peranan penting  pada  aktivitas  enzim  ini. Aktivitas  enzim-enzim  inilah  yang akan  mengakibatkan  terjadinya  lisis pada bakteri maupun pada sel lekosit itu  sendiri  (Zanchet  et  al.,  2007). Proses  enzimatis  ini  menyebabkan rusaknya  struktur  dinding  BTA sehingga  menghilangkan  sifat  tahan asam  yang  dimiliki  BTA.  Bakteri tahan asam yang seharusnya menyerap  warna  merah  dari  karbol fuchsin tidak dapat lagi mempertahankan warnanya saat ditambahkan  dengan  alkohol  asam dan ikut terwarnai oleh metilen blue sehingga  berwarna  biru.  Akibatnya sel tidak terbaca sebagai BTA. Proses enzimatis  ini  juga  dapat  melisiskan sel BTA. Sel BTA yang lisis/hancur sudah  tidak  dapat  lagi  terwarnai sehingga berpengaruh pada penurunan jumlah BTA. Besarnya  aktivitas  enzim  ini dipengaruhi oleh suhu penyimpanan. Enzim-enzim lekosit optimal bekerja pada  suhu  tubuh  (±  37°C).  Suhu penyimpanan  pada  penelitian  ini adalah  2-8°C  dan  25°C.  Suhu  yang jauh  di  bawah  suhu  optimal  enzim lekosit  ini  menyebabkan  aktivitas enzim  dalam  sputum  tidak  seaktif

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada Volume 13 No 2, Hal 234-242, Juli 2022
Universitas Kusuma Husada Surakarta ISSN : 2087 – 5002 | E-ISSN : 2549 – 371X
ketika  dalam  tubuh  sehingga  meski ada penurunan jumlah BTA, penurunan ini tidak signifikan. Penyebab lain yang mengakibatkan  penurunan  jumlah BTA adalah karena adanya perubahan  konsistensi  sputum  yang menjadi  lebih  encer.  Penyebab encernya  sputum  dapat  disebabkan karena    suhu    hangat    yang menyebabkan  pecahnya  granula- granula pada senyawa sputum sehingga    cairan  akan    keluar  dari granula  dan  sputum  tampak  lebih encer  (Budiharjo  and  Purjanto, 2016).  Perubahan  kosistensi  ini menyebabkan  sulitnya  pembuatan preparat.  Konsistensi  sputum  yang cair  menyebabkan  sputum  sulit terambil pada saat pembuatan preparat  sehingga  banyak  sel  BTA yang  tidak  ikut  terbawa.  Apusan sputum juga akan lebih sulit melekat pada kaca objek sehingga menyebabkan  preparat  menjadi  sulit untuk diwarnai dan dibaca. Akibatnya  jumlah  sel  BTA  yang dihitung  menjadi  lebih  sedikit  dari yang seharusnya.
Berdasarkan  data  jumlah  BTA hasil  pemeriksaan,  ada  penurunan jumlah  BTA  dari  sputum  dengan suhu  penyimpanan  2-8°C  ke  suhu 25°C  baik  pada  lama  penyimpanan 24  jam  maupun  48  jam.  Selain  itu terjadi  pula  penurunan  jumah  BTA dari sputum yang dikerjakan langsung,  ke  sputum  yang  disimpan 24  jam  lalu  ke  sputum  dengan penyimpanan 48 jam. Namun, apabila dilihat dari gradasinya, tidak terjadi  perubahan  gradasi  pada sputum  A  baik  yang  langsung dikerjakan,  disimpan  24  jam  pada suhu  2-8ºC,  24  jam  suhu  25ºC,  48 jam pada suhu 2-8ºC maupun 48 jam pada  suhu  25ºC.  Hasil  ini  juga didapatkan pada sputum B, C dan E. Tetapi  pada  sputum  D,  memang terjadi  perubahan  gradasi  dari  1+ menjadi  scanty,  namun  perubahan gradasi  ini  dapat  disebabkan  karena gradasi  1+  sputum  D  dengan  lama penyimpanan  24  jam  pada  suhu  2-
8ºC  hanya  memiiki  jumah  BTA sebanyak  10,  dimana  angka  ini merupakan  angka  minimal  untuk gradasi  1+.  Sehingga  saat  terjadi penurunan  jumlah  BTA  sebanyak satu BTA pada sputum dengan lama penyimpanan 24 jam pada suhu 25ºC hal  ini  sudah  dapat  mengubah  hasil gradasinya.
Oleh  karena  itu  secara  umum, berdasarkan  analisis  uji  repeated Anova  diperoleh  hasil  tidak  ada pengaruh yang  signifikan  perbedaan suhu dan lama penyimpanan terhadap  jumlah  BTA  +. Hasil  yang diperoleh  pada  penelitian  ini  sejalan dengan  penelitian  sebelumnya  yang dilakukan oleh Muin, dkk pada tahun 2020.  Hasil  tersebut  menunjukkan tidak ada pengaruh lamanya penyimpanan  dahak  pagi  terhadap jumlah  BTA  dari  sembilan  sampel dengan masing-masing sampel dilakukan  tiga perlakuan  yaitu diperiksa  segera,  ditunda  selama  3 jam dan 6 jam.

## 4. KESIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan bahwa tidak ada pengaruh perbedaan suhu dan lama penyimpanan terhadap jumlah BTA +.

## 5. SARAN
1. Bagi tenaga laboratorium Penyimpanan  sputum  pada  suhu tinggi akan mempercepat perubahan  konsistensi  sputum, sehingga sputum sebaiknya disimpan pada refrigerator untuk menjaga konsistensinya. 2. Bagi peneliti selanjutnya Perlu dilakukan penelitian lanjutan  dengan  variabel  lain seperti  kualitas  sampel  dan kondisi lingkungan (pH). 6. UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih penulis ucapkan kepada:
1. Sekolah  Tinggi  Ilmu  Kesehatan Nasional  yang  telah  membantu selama proses penelitian.

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada Volume 13 No 2, Hal 234-242, Juli 2022
Universitas Kusuma Husada Surakarta ISSN : 2087 – 5002 | E-ISSN : 2549 – 371X
2. Seluruh  Bapak  dan  Ibu  dosen Sekolah  Tinggi  Ilmu  Kesehatan Nasional yang telah membimbing selama proses penelitian.

## REFERENSI
Bayraktaroğlu, A.G., Kurum, A., Simsek, O., Arikan, S (2015) ‘Determination of  alpha-naphthyl  acetate  esterase (anae)  activity  in  peripheral  blood leukocytes  of  pregnant,  adult,  and kitten  angora  cats’, Turkish  Journal of  Veterinary  and  Animal  Sciences,
39(1),  pp.  57–61.  doi:10.3906/vet- 1407-44. Budiharjo,  T.  and  Purjanto,  K.A.  (2016) ‘Pengaruh Penanganan Sputum Terhadap Kualitas Sputum Penderita TBC  Secara  Mikroskopis  Bakteri Tahan Asam’, Jurnal Riset Kesehatan, 1, pp. 42–44. doi:https://doi.org/10.31983/jrk.v5i1 .622. Danusantoso,  H.  (2018) Ilmu  Penyakit
Paru.  3rd  edn.  Edited  by  J.  Suyono . Jakarta:  Penerbit  Buku  Kedokteran EGC. Available at: https://opac.perpusnas.go.id/DetailO pac.aspx?id=1077003. Das,  P.,  Ganguly,  S.  and  Mandal,  B.
(2019) ‘Sputum smear microscopy in tuberculosis: It is still relevant in the era of molecular diagnosis when seen from  the  public  health  perspective’,
Biomedical and Biotechnology
Research  Journal  (BBRJ) ,  3(2),  p. 77. doi:10.4103/bbrj.bbrj_54_19. Irianto  and  Koes  (2013) Mikrobiologi:
Menguak  Dunia  Mikroorganisme .
2nd  edn.  Bandung:  Bandung  Yrama Widya. Jugniot,  N.,  Voisin,  P.,  Bentaher,  A., Mellet, P. (2019) Neutrophil Estalase Activity Imaging: Recent Approaches in Design and Application of Activity Based Probes and Substrats Based Probes. Contrast Media & Molekuler Imaging Volume 2019. p. 1-12. doi: 10.1155/2019/7417192 Juliantina,  F.  and  Agustiningtyas,  I. (2020) Pengecatan  Ziehl  Neelsen (ZN) . Available at: https://fk.uii.ac.id/mikrobiologi/mate ri/pengecatan-ziehl-neelsen-zn/. Kesehatan, K. (2017) ‘Pelatihan laboratorium tuberkulosis bagi petugas  di  fasyankes’,  ( MODUL PELATIHAN LABORATORIUM
TUBERKULOSIS  BAGI  PETUGAS
DI FASYANKES ), p. 43.
Muin,  W.O.N.,  Kalma,  K.,  Artati,  A., Rafika.  (2020)  ‘Pengaruh  Lama Penyimpanan Dahak Pagi Pada Suhu Kamar  Terhadap  Jumlah  Bakteri Tahan  Asam  (Bta)’,  J urnal  Media Analis  Kesehatan, 11(2),  p.  104. doi:10.32382/mak.v11i2.1785. Nurlaily, D. (2015) Resistensi Mycobacterium tuberculosis Terhadap Antibiotik Rifampisin Pada Pasien Domisili Cilacap Dengan  Kriteria  MDRTB  Drop  Out Tuberculosis Paru di RSUD Cilacap. UNIVERSITAS MUHAMMADIYAH
PURWOKERTO. Skripsi Available at:
http://repository.ump.ac.id/id/eprint/ 1841. Setiyonongsih,  N.E.,  Sakundarno,  M. (2020). Gambaran Tata Cara Pengeluaran  Sputum  dan  Kualitas Sputum  Pasien  Curiga  Tuberculosis di Puskesmas Gajahan II Kabupaten
Demak. Visikes 19 (1) p. 58-71. Somantri, I. (2012) Asuhan Keperawatan Pada  Klien  Dengan  Gangguan Sistem Pernafasan . 2nd edn. Jakarta: Salemba  Meedika.  Available  at: https://onesearch.id/Record/IOS284 6.slims-4694. Wahyuningrum,  M.R.,  Probosari,  E (2012)  Pengaruh  Pemberian  Buah
Pepaya  (Carica papaya L) Terhadap Kadar Trigliserida Pada Tikus SPRAGUE  DAWLEY  DENGAN HIPERKOLESTEROLEMIA. Jurnal  of  Nutrition  College 1  (1) p192-198. Wulandari, F. (2021) Kemenkes: Indonesia  Sumbang  Dua  Pertiga

## Jurnal Kesehatan Kusuma Husada Volume 13 No 2, Hal 234-242, Juli 2022
Universitas Kusuma Husada Surakarta ISSN : 2087 – 5002 | E-ISSN : 2549 – 371X
Kasus  TBC  di  Dunia,  Tribun Kesehatan . Available at: www.tribunnews.com/kesehatan/20 21/03/01/kemenkes-indonesia- sumbang-dua-pertiga-kasus-tbc-di- dunia (Accessed: 17 October 2021). Wuryanti, W. (2012) ‘Pengaruh
Penambahan  Biotin  Pada  Media Pertumbuhan Terhadap Produksi Sel Aspergillus  niger’, Bioma :  Berkala
Ilmiah  Biologi ,  10(2),  p.  46. doi:10.14710/bioma.10.2.46-50. Zanchet,  R.C.,  Feijo,  G.,  Gastaldi,  A.C., Jardim,  RB.  (2007)  ‘O  muco traqueobrônquico  humano  mantido em  temperatura  ambiente  e  suas propriedades físico-químicas’, Jornal  Brasileiro  de  Pneumologia, 33(1), pp. 57–61. doi:10.1590/S1806- 37132007000100012. Zanita (2019) ‘Penatalaksanaan TB Paru’,
Jurnal  Kesehatan, 53(9),  pp.  1689– 1699. Available at: http://eprints.poltekkesjogja.ac.id/13 62/4/BAB II.pdf.