## Research Articles
Uji aktivitas antibakteri kombinasi ekstrak etanol daun seledri ( Apium graviolens L.) dan madu hutan terhadap beberapa bakteri penyebab penyakit kulit
Masayu Azizah * , Lara Septy Lingga, Yopi Rikmasari
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi (STIFI) Bhakti Pertiwi Palembang, Sumatera Selatan, Indonesia

## Received 13 Juni 2019; Accepted 18 Desember 2019; Published 20 Januari 2020
Keyword: Celery; Forest honey; Skin infection ABSTRACT: Antibacterial  activity  test  of  ethanol  extract  of  celery  leaves ( Apium graviolens L.) and forest honey on skin-causing bacteria Staphylococcus aureus ATCC  25923, Streptococcus  pyogenes ATCC  19615, Propionibacterium acnes ATCC  11827, Pseudomonas  aeruginosa ATCC  27853, Streptococcus β hemolyticus ATCC 19615 Extraction was carried out by maceration using ethanol distillate solvent. Antibacterial activity testing was carried out by using the agar diffusion method with the concentration of the test substance ie 70%: 30%, 60%: 40%  and  50%:  50%  using  distillate  ethanol  as  negative  control  and chloramphenicol as a positive control. The results showed inhibitory extracts at concentrations  of  70%:  30%  in  each  test  bacterium,  namely Staphylococcus aureus ATCC 25923 by 17 mm, Streptococcus pyogenes ATCC 19615 at 18.6 mm, Propionibacterium  acnes ATCC  11827  at  17.9  mm, Pseudomonas  aeruginosa ATCC 27853 of 18.6 mm, Sreptococcus β hemolytic ATCC 19615 was 16.15 mm. The results showed that the ethanol extract of celery leaves and forest honey had antibacterial activity against bacterial skin infections in the strong category.
@2020  Published  by  UP2M,  Faculty  of  Mathematics  and  Natural  Sciences, Sriwijaya University Kata Kunci: Seledri; Madu hutan; Infeksi Kulit
ABSTRAK: Telah  dilakukan  uji  aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  etanol daun seledri  ( Apium  graviolens L.)  dan  madu  hutan  terhadap  bakteri  penyebab penyakit kulit yaitu Staphylococcus aureus ATCC 25923, Streptococcus pyogenes ATCC  19615 , Propionibacterium  acnes ATCC  11827 , Pseudomonas  aeruginosa ATCC  27853, Sreptococcus β hemoliticus ATCC  19615 . Ekstraksi  dilakukan dengan cara maserasi menggunakan pelarut etanol destilat. pengujian aktivitas antibakteri  dilakukan  dengan  menggunakan  metode  difusi  agar  dengan konsentrasi zat uji yaitu 70%:30%, 60%:40% dan 50%:50% dengan menggunakan etanol destilat sebagai kontrol negatif dan kloramfenikol sebagai kontrol positif. Hasil penelitian menunjukkan daya hambat ekstrak pada konsentrasi 70%:30% pada  masing-masing  bakteri  uji  yaitu Staphylococcus  aureus ATCC  25923 sebesar  17  mm ,  Streptococcus  pyogenes ATCC  19615  sebesar  18,6  mm , Propionibacterium  acnes ATCC  11827  sebesar  17,9  mm , Pseudomonas aeruginosa ATCC  27853  sebesar  18,6  mm, Sreptococcus β hemoliticus ATCC 19615 sebesar 16,15 mm . Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun  seledri  dan  madu  hutan  memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri infeksi  kulit dalam  kategori  kuat.  @2020  Published  by  UP2M,  Faculty  of Mathematics and Natural Sciences, Sriwijaya University

## Jurnal Penelitian Sains
Journal Home Page: http://ejurnal.mipa.unsri.ac.id/index.php/jps/index
DOI: https://doi.org/10.26554/jps.v22i1.547
ISSN:  2597-7059  Online,  1410-7058  print/  @2020  Published  by  UP2M,  Faculty  of  Mathematics  and  Natural Sciences, Sriwijaya University

## 1. PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  kulit  pada  manusia merupakan  jenis  penyakit  yang  sangat  sering terjadi.  Penyakit  infeksi  kulit  sering  disebut sebagai  penyakit  menular  karena  dapat menginfeksi dari satu individu ke individu lain, baik  melalui  kontak  langsung  maupun  tidak (Purwanto, 2014). Faktor yang berperan dalam penularan penyakit kulit adalah sosio ekonomi yang  rendah, hygiene perorangan  yang  jelek, lingkungan yang tidak bersih dan perilaku yang tidak mendukung kesehatan [2].
Menurut  Direktur  Jenderal  Pelayanan Medik  Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia  tahun  2006  penyakit  kulit  dan subkutan  berdasarkan  prevalensi  10  penyakit terbanyak pada masyarakat Indonesia, menduduki  peringkat  kedua  setelah  infeksi saluran  pernapasan  akut  dengan  jumlah 501.280 kasus [2]. Penyakit infeksi kulit biasanya disebabkan oleh bakteri seperti, Staphylococcus aureus,  Propionibacterium  acnes,  Streptococcus pyogenes,
Pseudomonas
aeruginosa,
Streptococcus β hemoliticus [27].

## 2. BAHAN DAN METODE
2.1 Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara  lain  adalah  seperangkat  alat  destilasi, corong  pisah  (Pyrex ® ),  corong,  erlemeyer, rotary evaporator, pot, botol gelap, cawan petri, jarum ose, timbangan analitik, gelas ukur, pipet tetes,  spatel  pinset,  beker  gelas,  kasa  steril, benang,  gunting,  tabung  reaksi,  rak  tabung reaksi,  bunsen,  jangka  sorong,  kertas  cakram, autoklaf,  inkubator,  oven, Laminar  air  flow ( LAF),  batang  pengaduk,  plat  tetes,  dan spektrofotometer UV-VIS.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain daun seledri ( Apium graviolens L ), madu hutan, Nutrien Agar (NA), kloramfenikol, etanol,  aquadest  dan  larutan  NaCl  0,9  %, S. pyogenes , S. aureus, P. acnes, P. aeruginosa, S. β hemoliticus.

## 2.2 Prosedur Penelitian
2.2.1 Pengambilan Sampel Sampel yang digunakan dalam penelitian  ini,  yaitu  daun  seledri  dan  madu hutan diambil  di  Jalan Batang Hari  Sembilan,
Kecamatan  Lubuklinggau  Selatan  II  Kota Lubuklinggau, Sumatera Selatan.

## 2.3  Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun
Seledri ( Apium graviolens L .)
Daun seledri yang telah dicuci bersih dan dikering  anginkan,  dirajang  lalu  di  timbang sebanyak  2  kg,  kemudian  dimaserasi  dengan cara di masukkan ke dalam botol gelap tambah etanol yang sudah didestilasi hingga terendam semua,  setelah  itu  tutup  rapat  dan  simpan  di tempat  yang  terlindung  dari  cahaya  matahari dan  didiamkan  selama  3-5  hari  kemudian ekstrak  tersebut  disaring,  ulangi  perendaman dengan  etanol  destilat  yang  baru.  Masing- masing  maserat  yang  diperoleh  dari  hasil penyaringan  kemudian  digabungkan,  setelah itu diuapkan dengan destilasi vacum dan rotary evaporator untuk mendapatkan ekstrak kental. Ditimbang  beratnya  dengan  neraca  analitik, lalu  dihitung  nilai  rendemennya  dengan persamaan rendemen:
Rendemen= 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑒𝑘𝑠𝑡𝑟𝑎𝑘  𝑦𝑎𝑛𝑔 𝑑𝑖 𝑑𝑎𝑝𝑎𝑡 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 x100%

## 2.3 Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat-alat  dan  media  pembenihan  yang akan  digunakan  terlebih  dahulu  harus disterilkan  menurut  cara  yang  sesuai  ini dilakukan  untuk  menghindari  terjadinya pertumbuhan dan pencemaran dari mikroorganisme lainnya yang tidak diharapkan. Sterilisasi  dapat  digunakan  dengan    tiga  cara yaitu  sterilisasi  udara  kering,  sterilisasi  uap  air panas, dan sterilisasi uap air panas bertekanan [11]. Sterilisasi dengan udara kering biasannya menggunakan  oven.  Alat  ini  digunakan  untuk mensterilkan alat-alat gelas, seperti erlenmeyer, petridish, tabung reaksi, dan alat gelas lainnya. Suhu  pada  sterilisasi  kering  umumnya  170- 180 ᵒ C  selama  paling  sebentar  2  jam.
Selanjutnya  dengan  uap  panas  untuk  bahan yang  berbentuk  cairan  yang  tidak  dapat disterilkan  dengan  oven. Alat yang  digunakan ini Arnold  steam  sterilizer dengan  suhu  100 ᵒ C selama 30 menit [32]. Sterilisasi dengan uap air panas  yang  bertekanan,  alat  yang  digunakan adalah  autoklaf  ( autoclave )  yang  dilengkapi dengan katup pengaman. Alat ini mempunyai tekanan 2 atm dan suhu 121 ᵒ C selama 15 menit
untuk bahan dan 20 menit untuk alat. Cara ini dapat mematikan bakteri yang ada [32].

## 2.2.2  Pembuatan  Medium  Pembenihan Medium Nutrien Agar
Sebanyak 28 gram serbuk nutrient agar (siap  pakai)  dilarutkan  dalam  1  liter  air  suling dan  dipanaskan  sampai  mendidih  sambil sesekali  diaduk  hingga  homogen,  lalu disterilkan  dalam  autoklaf  pada  suhu  121 0 C selama  15  menit.  Media  nutrien  agar dituangkan  sebanyak  10  ml  ke  dalam  cawan petri  dan  5  ml  ke  dalam  tabung  reaksi kemudian  dimiringkan,  biarkan  memadat  dan disimpan dalam lemari pendingin [9].

## 2.2.3 Peremajaan Bakteri Uji
Bakteri  uji  dari  stok  kultur  diremajakan dengan  cara  menggoreskan  1-2  jarum  ose, biakan  bakteri  secara  zig-zag  pada  media Nutrien  Agar,  kemudian  inkubasi  pada  suhu 37 ° C selama 24 jam [28]

## 2.2.4 Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri uji yang telah diinokulasi diambil dengan  jarum  ose  steril  lalu  disuspensikan kedalam pelarut NaCl 0,9 % (b/v) sebanyak 5 ml dan  kocok  homogen.  Kekeruhan  suspensi bakteri uji diukur dengan alat spektrofotometer UV-Vis  dengan  panjang  gelombang  530  nm dan transmitan 25 % [5].

## 2.2.5 Pembuatan Larutan Uji
Pembuatan larutan uji dari ekstrak etanol daun  seledri  dengan  konsentrasi  70%,  60%, 50%.  Ekstrak  etanol  daun  seledri  dengan konsentrasi tersebut dilarutkan dengan etanol, kemudian  masing-masing  larutan  uji  dengan konsentrasi  tersebut  lalu  di  teteskan  madu hutan dan diuji aktivitas anti bakterinya.

## 2.2.6 Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Larutan  kloramfenikol  0,1%  dibuat dengan cara melarutkan 50 mg kloramfenikol. .dalam 50 ml etanol destilat, larutan antibakteri kloramfenikol  0,01%  kemudian  diencerkan
dengan  cara  dipipet  1  ml  larutan  induk kloramfenikol 0,1% dalam etanol hingga 10 ml.

## 2.2.7 Larutan Kontrol Negatif
Larutan  kontrol  negatif  (-)  yang digunakan adalah etanol destilat.

## 2.2.8  Uji  Penghambatan  Pertumbuhan Bakteri
Uji  aktivitas  antibakteri  dengan  difusi agar,  menggunakan  kertas  cakram,  dengan bakteri uji yaitu S. aureus, S. pyogenes, P. acnes, P.  aeruginosa,  S. β hemoliticus. Media  agar sebanyak  10 ml  dituangkan  ke  dalam masing- masing  cawan  petri  steril  dan  didiamkan sampai media menjadi padat selama 10 menit. Setelah itu diteteskan suspensi bakteri sebanyak 2 tetes ke tabung reaksi yang berisi 10 ml media agar cair pada suhu 40-45 0 C, lalu homogenkan serta tuangkan di atas cawan petri yang berisi 10  ml  media  agar  yang  telah  memadat  dan ratakan.  Cawan  petri  tersebut  dihomogenkan secara  horizontal  agar  suspensi  bakteri  ini merata  pada  seluruh  permukaan  agar, kemudian biarkan pada suhu kamar selama 15 menit.  Kemudian  kertas  cakram  yang  telah disterilkan dicelupkan ke dalam masing-masing konsentrasi  ekstrak:  madu  dengan  masing masing perbandingan 70:30%, 60:40%, 50;50% yang  telah  dikombinasi  keduanya,  kontrol positif dan Kontrol negatif lalu diletakkan pada permukaan  media  agar  yang  telah  diinokulasi dengan  bakteri.  Kemudian  cawan  petri  yang berisi  nutrien  agar  tersebut  diinkubasi  pada suhu 37 ᵒ C selama 48 jam, lalu diukur diameter zona bening ( clear zone ) yang terbentuk dengan menggunakan jangka sorong [4].

## 2.3 Analisa Data
Cara pengolahan dan analisis data yaitu data  diameter  hambatan  yang  diperoleh  rata- ratakan  lalu  ditabulasi  berdasarkan  jenis mikroba  uji  yang  digunakan  pada  berbagai konsentrasi  zat  uji  dan  dianalisa  secara deskriptif.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1 Hasil
Sampel daun segar seledri ( A. graviolens )
1  kg,  diperoleh  ekstrak  kental  sebanyak  30,78
gram.  Hasil  rendemen  yang  diperoleh  yaitu 3,07% b/b. Rata-rata diameter hambat sediaan uji  terhadap  bakteri  uji  pada  Tabel  1  dan Gambar 1.
Tabel 1 Rata-rata diameter hambat sediaan uji terhadap bakteri uji
Zat uji Konsentrasi (%) Rata-Rata Diameter Hambat ± SD Sa Sp Pa P.ae Sh Ekstrak Etanol Seledri ( Apium graviolens L.) + Madu 70:30 17± 0,45 18,6±0,45 17,9±0,75 18,6±0,45  16,15±0,65 60:40 15,8±0,43  17,83±0,65 16,8±0,95 17,8± 0,3 15,26±0,15 50:50 13,3±0,2 17,03±0,64  15,73±0,68  15,76±0,61 13,3±0,1 Kontrol + 22,2±0,9 22,2±0,65 22,96±0,40  23,5±0,52  24,26±0,15 Kontrol - - - - - -
Ket. : K (+): Kloramfenikol, K (-): Etanol destilat, Sa: S. aureus, Sp: S. pyogenes, Pa: P. acnes, P.ae: P. aeruginosa, Sh: S. β hemoliticus
Gambar 1. Diagram rata-rata diameter hambat sediaan uji terhadap bakteri uji

## 3.2 Pembahasan
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian ini,  yaitu  daun  seledri  ( Apium  graviolens L.)  dan madu  hutan  diambil  di  Jalan  Batang  Hari Sembilan,  Kecamatan  Lubuklinggau,  Sumatera Selatan.  Sampel  segar  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  bertujuan  untuk  menghindari kemungkinan terjadinya kerusakan senyawa kimia dalam  tanaman  uji  selama  proses  pengeringan. Sebelum  proses  ekstraksi  berlangsung,  daun seledri  ( A.  graviolens )  dirajang  terlebih  dahulu dengan tujuan untuk memperbesar kontak antara bahan dan pelarut, sehingga pelarut yang didapat sesuai  dan  mudah  masuk  ke  dalam  sampel  zat aktif  sehingga memenuhi syarat baku yang telah ditetapkan [8].
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah maserasi.  Maserasi  merupakan  metode  ekstraksi yang  cocok  digunakan  untuk  mengekstraksi sampel  yang  tahan  panas  maupun  yang  tidak tahan  panas,  dengan  cara  ini  kemungkinan hilangnya  kandungan  kimia  didalam  tanaman yang  rusak  akibat  pemanasan  dapat  dihindari. Kekurangan  metode  maserasi  ini  adalah prosesnya  membutuhkan  waktu  yang  agak  lama dan pelarut yang digunakan banyak [8].
Untuk  mengekstraksi  daun  seledri  ( A. graviolens )  digunakan  pelarut  etanol,  karena etanol  mampu  menarik  senyawa  polar  maupun non  polar  (bersifat universal )  serta  tidak membahayakan  peneliti  maupun  bakteri  uji. Etanol  yang  digunakan  adalah  etanol  hasil destilasi.  Etanol  hasil  destilasi  ini  dapat
0 5 10 15 20 25 30 K(-) 50%:50% 60%:40% 70%:30% K(+) Di ameter h ambat konsentrasi staphylococcus aureus stretococcus pyogenes propionibacterium acnes pseudomonas aeruginosa
stretococcus β hemoliticus
berpenetrasi ke dalam sel-sel dari daun seledri ( A. graviolens )  sehingga  kemampuan  mengekstraksi zat aktif lebih baik dan proses penguapan pelarut relatif lebih cepat waktunya dibandingkan dengan etanol yang konsentrasinya lebih rendah [8].
Setelah  proses  maserasi  didapatkan maserat  dan  dilanjutkan  dengan  destilasi  vakum dengan  tujuan  untuk  menguapkan  pelarut  dan mengurangi tekanan udara pada permukaan labu sehingga akan menurunkan tekanan uap pelarut dan  titik  didih  pelarut.  Dengan  penurunan  titik didih ini dapat mengurangi terurai atau rusaknya komponen  kimia    terdapat  dalam  ekstrak  daun seledri,  selanjutnya  ekstrak  daun  seledri  ( A. graviolens )  yang  agak  kental  diuapkan  dengan rotary  evaporator sehingga  diperoleh  ekstrak kental etanol daun seledri ( A. graviolens ). Pada  ekstraksi  sampel  daun  seledri  (( A. graviolens )  sebanyak  satu  kilogram  didapat ekstrak kental sebanyak 30,78 gram, maka didapat persen  rendemen  daun  seledri  ( A.  graviolens ) sebesar 3,07% b/b.
Daun  seledri  memiliki  aktivitas  sebagai antibakteri  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus ATCC  25923 ,  Streptococcus  pyogenes ATCC  19615 ,  Propionibacterium  acnes ATCC 11827 ,  Pseudomonas  aeruginosa ATCC  27853, Sreptococcus β hemoliticus ATCC 19615 . Pengaruh antibakteri yang  terhadap bakteri S. aureus ATCC 25923 , S. pyogenes ATCC 19615 , P. acnes ATCC 11827 , P. aeruginosa ATCC 27853, S. β hemoliticus ATCC  19615    yaitu  pada  ekstrak  etanol  dengan rata-rata  diameter  hambat  dari  yang  terbesar berturut-turut  adalah  17  mm  dan  18,6  mm  dan 18,6 mm dan 17,96 mm dan 16,15 mm Berdasarkan penelitian sebelumnya mengatakan  bahwa  tanaman  seledri  ( A. graviolens )  memiliki  kandungan  kimia  berupa flavonoid,  saponin,  tanin,  alkaloid,  dan  minyak atsiri  [8].  Ekstrak  etanol  daun  seledri  ( A. graviolens )  dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri dengan metode difusi agar. Metode ini digunakan karena memiliki beberapa keunggulan dibanding metode lainnya seperti peralatan yang digunakan relatif  sederhana  serta  pengamatan  diameter hambat  ( clear  zone )  yang  mudah.  Media  yang digunakan  adalah  media  Nutrien  Agar  karena Nutrien  Agar  merupakan  media  selektif  dan komposisi  yang  terdapat  di  dalamnya  sesuai dengan kebutuhan pertumbuhan bakteri uji yang
merupakan bakteri gram posif dan gram negatif. Sebagai  bakteri  uji  digunakan  bakteri S.  aureus ATCC 25923 , S. pyogenes ATCC 19615 , P. acnes ATCC  11827 ,  P.  aeruginosa ATCC  27853, S. β hemoliticus ATCC  19615  yang  merupakan  jenis bakteri gram positif dan gram negatif. Bakteri ini didapat dari Laboratorium Mikrobiologi Fakultas Kedokteran  Universitas  Indonesia,  Jakarta. Bakteri  uji  yang  digunakan  merupakan  bakteri yang patogen dan dapat mewakili bakteri patogen lainnya yang menyebabkan infeksi pada manusia.
Uji  aktivitas  antibakteri  kombinasi  ekstrak etanol  daun  seledri  dan  madu  hutan,  diawali dengan  proses  sterilisasi.  Proses  sterilisasi bertujuan  untuk  membunuh  bentuk  hidup  dari mikroorganisme  dan  menghindari  kontaminasi mikroba. Untuk sterilisasi alat-alat gelas digunakan autoklaf  karena  memiliki  beberapa  keunggulan seperti  waktu  sterilisasi  yang  singkat  serta  efektif untuk  alat-alat  gelas  yang  memiliki  rongga. Setelah  itu  dilakukan  peremajaan  bakteri  uji. Peremajaan bakteri bertujuan untuk mendapatkan  bakteri  yang  aktif  dan  mencegah kerusakan bakteri.
Selanjutnya suspensi bakteri dibuat dengan melarutan NaCl 0,9% dengan  bakteri uji. Hal ini bertujuan  untuk  mengencerkan  bakteri  uji  yang pekat sehingga bakteri dapat menyebar ke dalam media  agar  dengan  sempurna  dan  homogen. Penggunaan  NaCl  0,9%  bertujuan  agar  pada proses  pengenceran  tekanan  osmosa    sel-sel bakteri  sama  dengan  tekanan  osmosa  cairan tubuh, sehingga tidak terjadi kematian sel (lisis).
Kekeruhan suspensi bakteri diukur dengan menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada panjang  gelombang  ( λ )  580  nm  dengan transmitan  25%  untuk  bakteri.  Pengukuran  ini bertujuan untuk menghomogenkan jumlah koloni bakteri yang digunakan dalam setiap cawan petri pada  tiap-tiap  pengujian.  Dengan  kekeruhan tersebut  maka  pertumbuhan  mikroba  uji  pada media relatif baik, yang jumlah populasi menurut penelitian  sebelumnya  lebih  kurang  1  juta koloni/ml  [6].  Suspensi  bakteri  digunakan sebanyak  2  tetes  ke  dalam  10  ml  media  nutrien agar.
Pada penelitian ini dilakukan pengenceran pada  konsentrasi  70:30%,  60:40%,  50:50%  dari ekstrak  daun  seledri  ( A.  graviolens ).  Pembuatan larutan induk yaitu pada konsentrasi 70:30% b/v,
dimana  ekstrak  ditimbang  sebanyak  7  gram  dan dilarutkan dalam  10 ml etanol destilat dan 3 gram madu  di  larutkan  dengan  10  ml  aquadest. Kemudian diambil 7 ml ekstrak dan 3ml madu dari larutan  induk  ekstrak  dan  madu.  Pembuatan larutan  induk  konsentrasi  60;40%  b/v,  dimana ekstrak ditimbang sebanyak 6 gram dan dilarutkan dalam  10  ml  etanl  destilat  dan  4  gram  madu dilarutkan dengan 10 ml aquadest. Lalu diambil 6 ml ekstrak dan 4 ml madu dari ekstrak dari larutan induk  ekstrak  dan  madu.  pembuatan  larutan induk  konsentrasi  50:50%  b/v,  dimana  ekstrak ditimbang  5  gram  dan  dilarutkan  dalam  10  ml etanol  destilat  dan  5  gram  madu  dilarutkan dengan 10 ml aquadest. Kemudian diambil 5 ml ekstrak dan 5 ml madu dari larutan induk ektrak dan madu.Tujuan dikombinasikan untuk meningkatkan efek antibakteri dari daun seledri.
Sebagai kontrol positif digunakan Kloramfenikol,  kontrol  positif  digunakan  untuk membandingkan potensi ekstrak daun seledri ( A. graviolens )  dengan  kloramfenikol,  zona  hambat yang  dihasilkan  oleh  ekstrak  etanol  daun  seledri ( A.  graviolens )  mempunyai  daya  hambat  yang besar.
Kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  etanol  destilat.  Etanol  hasil destilasi ini digunakan sebagai pelarut zat uji dari ekstrak  daun  seledri  ( A.  graviolens ).  Hasil pengukuran daya hambat aktivitas antibakteri dari ekstrak  etanol  daun  seledri  ( A.  graviolens ) terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC 25923 ,  Streptococcus  pyogenes ATCC  19615 ,
Propionibacterium acnes
ATCC 11827 , Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853,
Sreptococcus β hemoliticus ATCC  19615dengan konsentrasi  70%:30%,  60%:40%  dan  50%:50% diameter zona hambat berturut-turut sebesar  17 mm dan 18,6 mm dan18,6 mm dan 17,96 mm dan 16,15  mm.  Pada  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  25923 , diameter  zona  hambat  berturut turut 17 mm, 15,8mm, 13,3 mm. Sedangkan pada bakteri S.  pyogenes ATCC  19615 , diameter  zona hambat berturut turut 18,6 mm, 17,8 mm, 17,03 mm. P. acnes ATCC 11827 diameter zona hambat berturut  turut17,9  mm,  16,8  mm,  15,73  mm. P. aeruginosa ATCC  27853  diameter  zona  hambat berturut turut 18,6 mm, 17,8 mm, 15,76 mm. S. β hemoliticus ATCC  19615  diameter  zona  hambat
berturut-turut sebesar 16,15 mm, 15,26 mm, 13,3 mm.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak etanol  daun  seledri  ( A.  graviolens )  terhadap bakteri S. aureus ATCC 25923 , S. pyogenes ATCC 19615 , P. acnes ATCC 11827 , P. aeruginosa ATCC 27853, S. β hemoliticus ATCC 19615 menunjukkan diameter  hambat  paling  besar  pada  konsentrasi 70%:30%,  60%:40%,  dan  50%:50%  terhadap bakteri S.  aureus,  S.  pyogenes,  P.  acnes,  P. aeruginosa , S. β hemoliticus (Tabel  1).  Hal  ini dikarenakan  mekanisme  kerja  dari  flavonoid. Flavonoid  merupakan  senyawa  fenol  dapat bersifat koagulator protein [9], senyawa flavonoid dalam  merusak  membran  sel  bakteri  yaitu membentuk  senyawa  kompleks  dengan  protein ekstraseluler sehingga membran sel bakteri rusak dan  diikuti  dengan  masuknya  air  yang  tidak terkontrol  kedalam  sel  bakteri,  hal  ini menyebabkan  pembengkakan  dan  akhirnya membran  sel  bakteri  pecah  (Black  dan  Jacobs, 1993).
Selain  itu,  senyawa  flavonoid  memiliki kemampuan  mendenaturasi  protein  sel  bakteri dengan  cara  membentuk  ikatan  hidrogen kompleks  dengan  protein  sel  bakteri.  Sehingga, struktur  dinding  sel  dan  membran  sitoplasma bakteri yang mengandung protein menjadi tidak stabil  dan  kehilangan  aktivitas  biologinya, akibatnya  fungsi  permeabilitas  sel  bakteri terganggu  dan  sel  bakteri  akan  mengalami  lisis yang  berakibat  pada  kematian  sel  bakteri (Harborne,  1987).  Selain  itu  adanya  aktivitas antibakteri  dari  larutan  uji  disebabkan  karena ekstrak daun seledri ( A. graviolens ) mengandung senyawa  metabolit  sekunder  berupa  flavonoid, saponin dan tanin, apiin, apigenin, minyak atsiri. kandungan  yang  dimiliki  seledri,  flavonoid, saponin  dan  tanin  merupakan  senyawa  yang bersifat antibakteri [22].
Madu hutan dapat digunakan sebagai anti bakteri,  dikarenakan  kadar  gula  pereduksi  yang tinggi  yaitu  glukosa  dan  fruktosa,  terdapat  juga sukrosa, madu memiliki viskositas kental, pH yang rendah  dan  terdapat  juga  senyawa  inhibine peroksida  (H 2 O 2 )  yang  terbentuk  dalam  madu oleh  aktivitas  enzim glucose  oxidase yang memproduksi  asam  glukonat  dan  hidrogen peroksida dari glukosa [25].

## 4. KESIMPULAN
Ekstrak daun seledri ( Apium graviolens L.,) dan madu hutan mempunyai aktivitas terhadap S. aureus ATCC 25923, S. pyogenes ATCC 19615 , P. acnes ATCC 11827 , P. aeruginosa ATCC 27853, S. β hemoliticus ATCC 19615 .
Ekstrak  etanol  daun  seledri  ( A. graviolens ) dan  madu  hutan  memiliki  aktivitas  antibakteri yang  optimal  sebesar  17  mm±0,45 ,  S.  pyogenes ATCC  19615  sebesar  18,6mm±0,45 ,  P.  acnes ATCC 11827 sebesar 17,9mm±0,75 , P. aeruginosa ATCC 27853 sebesar 18,6±0,45, S. β hemoliticus ATCC  19615  sebesar  16,15mm±0,65 . dengan kategori kuat.

## REFERENSI
[1]Assani, Susiana. (1994). Mikrobiologi Kedokteran . Jakarta.
[2]Astriyanti, Tuti., Mariana D.C.L., Mustakim S., (2010) Perilaku  Hygiene  Perorangan  Pada Narapidana  Penderita  Penyakit  Kulit  dan Bukan  Penderita  Penyakit  Kulit  di  Lembaga Permasyarakatan Klas II Kupang Tahun 2010. Jurnal  MKM  5(1)  :  1. Kupang:    Universitas Nusa Cendana.
[3]Brooks,  G.F.,  Carroll,  K.C.,  Butel,  J.S.,  Morse, S.A.,  Mietzner,  T.A.  (2013). Medical Microbiology. Jakarta: EGC.
[4]Cappuccino,  J.  (2009). Manual  Laboratorium Mikrobiologi . Jakarta: EGC Medical Publisher.
[5]Culvenor,  C.C.J  &  J.S.Fitzgerald.  (1993).  A field method for alkaloid screening of plant. J.Pharm Sci . 52, 303-304.
[6]Depkes RI. (1995). Farmakope Indonesia (Edisi IV). Jakarta: Departemen Kesehatan RI.
[7]Djamal, R. (1995). Prinsip-prinsip Dasar Bekerja dalam  bidang  Kimia  Bahan  Alam. Padang: Universitas Baiturrahman.
[8] Djamal, R. (2010). Kimia Bahan Alam. Prinsip- prinsip Dasar isolasi dan identifikasi. Padang: Universitas Baiturrahman.
[9] Dwidjo, S.D. (1998). Dasar-dasar Mikrobiologi . Jakarta: UI Press.
[10]Erywiyatno, L SBBU, D., Krihariyati, D. (2012). Pengaruh  Madu  Terhadap  Pertumbuhan Bakteri S.  pyogenes  dan  S.  aureus. Jurnal Jurusan Analis Kesehatan Sains. Vol. 01 No. 01: ISSN 2302-3635
[11]Harahap,  dkk.  (2000). Ilmu  penyakit  kulit . Hipokrates : Jakarta
[12]Harmita.  (2009). Analisis  Fisiko  Kimia Kromatografi . Jakarta: EGC.
[13]Harryana,  Eren,  dkk.  (2013). Daun  Ampuh Basmi  Berbagai  Penyakit .  Jogjakarta:  Nusa Kreativa.
[14]Jawetz, E. (2011). Mikrobiology kedokteran jilid 2 . Jakarta: Salemba Baru.
[15]Kardinan,  A.  dan  Ruhnayat,  A.  (2007). Budi Daya  Tanaman  Obat  Secara  Organik. Tangerang:Penerbit Agromedia Pustaka.
[16]Kamilah,  N.  S.  (2013). Uji  Efektivitas Penambahan Madu Lebah pada Ekstrak Kulit Buah  Manggis  (Garsinia  mangostana  L.) Sebagai  Antibakteri (Skripsi).  Bengkulu: Universitas Bengkulu.
[17]Khoiriyah,  dkk.  (2012). Aplikasi  Pendukung Keputusan  Epidemilogi  Resistensi  Bakteri Menggunakan  Metode  Dilusi di  RSUD  dr. Soetomo .  Surabaya:  Institut  Teknologi Sepuluh Nopember.
[18]Kusimaningtiyas,  Eni.  (2008). Sensitifitas Metode Bioautografi Kontak dan Agar Overlay dalam  Penentuan  Senyawa  Antikapang . Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, (Vol.6).
[19]Majidah, Dewi, dkk. (2014). Daya Antibakteri Ekstrak  Daun  Seledri  (Apium  graveolens  L.) terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans
sebagai  Alternatif  Obat  Kumur  (Antibacterial Activity  of  Celery  Leaves  Extract  [Apium graveolens  L.]  against  Streptococcus  mutans as an Alternative Mouthwash) . Artikel Ilmiah. Fakultas Kedokteran Universitas Jember.
[20]Molan PC. (2006). Theevidence supporting the use  of  honey  as  a  wound  dressing .  The international  journal  of  lower  extremity wounds,5(1), 40-54.
[21]Mujetahid  MA.  (2010). Teknik  pemanenan madu lebah hutan , 4(1),36-40.
[22]Nadinah.  (2008). Kinetika  Inhibisi  Ekstrak Etanol  Seledri  (Apium  graveolens  L.)  dan Fraksinya  Terhadap  Enzim  Xantin  Oksidase Serta  Penentuan  Senyawa  Aktifnya (Tesis). Bogor: Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
[23]Roatinawati. (2010). Jurnal Aktivitas Antimikroba Ekstrak Herba Tespong (Oenanthe Javanica D.C ). Jatinagor.
[24]Safitri, Ratu dan Sinta Sastika Novel. (2010). Medium Analisis Mikroorganisme (Isolasi dan Kultur). Jakarta: CV. Trans Info Media. Hlm: 78.
[25]Sakri,  F.M.  (2012). Madu  dan  Khasiat: Suplemen  Sehat  Tanpa  Efek  Samping . Yogyakarta : Diandra Pustaka Indonesia. Hlm 1, 11.
[26]Seputro, Dd. (1998). Dasar-dasar Mikrobiologi Umum. Bandung: Angkasa.
[27]Setiabudy,  Rianto.  (2011). Farmakologi  & Terapi (Edisi V). Jakarta: Penerbit FKUI.
[28]Siregar,  S.F.  (2009) .  Uji  aktivitas  anti  bakteri ekstrak  etanol  dan  air  rebusan  kulit  batang ingul  (Toona  sinesis  M.  Roem)  terhadap beberapa bakteri. (Skripsi). Medan: Universitas Sumatera Utara.
[29]Simes, JJH., JG., Tracey, LJ dkk. (1959). An Australian  phytochemical  Survey  Saponins and  Eastern  Australian  Flowering  Plant. Australia:  Common  Wealth  Scientific  and Industrial Research Organization.
[30]Suharto  dan  Fiet,  Aidil.  (1994). Mikrobiologi Kedokteran . Jakarta.
[31]Trisaputra, D. (2007). Uji aktivitas mikrobiologi madu  lebah  terhadap  miokroba  penyebab infeksi pada kulit . (Skripsi) Palembang: STIFI Bhakti Pertiwi
[32]Tjahjadi, C. Dan Herlina, M. (2011). Pengantar Teknologi  Pangan. Bandung:  Universitas Padjajaran.
[33]Yuliana,  N  (2017). Perbandingan  efektivitas antibakteri  dari  beberapa  jenis  madu  merk dagang  dan  madu  hutan  sumatera  selatan terhadap  bakteri  Escherichia  coli  dan  vibrio cholerae. Palembang: STIFI Bhakti Pertiwi.