## Current Biochemistry

## CURRENT BIOCHEMISTRY
ISSN: 2355-7877 Homepage: http://biokimia.ipb.ac.id E-mail: current.biochemistry@gmail.com

## Volume 4 (3): 1-9, 2017

## Identification of Bioactive Compounds and α-Glucosidase Inhibition Activity of
Caesalpinia bonduc Seed Extract In vitro
(Identifikasi Senyawa Bioaktif dan Aktivitas Inhibisi α-Glukosidase dari Ekstrak Biji Kebiul ( Caesalpinia bonduc ) Secara In Vitro)
Oczhinvia Dwitasari 1* , Djarot Sasongko Hami Seno 1 , Mega Safithri 1
1 Department of Biochemistry, Bogor Agricultural University, Bogor, 16680, Indonesia
*Corresponding author: Oczhinvia Dwitasari; Departemen Biokimia, Jl. Agatis Gd. Fapet Lt. 5, Wing 5, Bogor 16680; Telp/Fax. +62251-8423267; E-mail: oczhinvia@gmail.com

## ABSTRACT
This study is aimed for finding alternative ways to treat diabetes. Many studies have been done before, but focused on identification of α-glucosidase inhibition mechanism. This study was conducted by extracting Caesalpinia bonduc  seed using two methods maceration by ethanol 96% and the others boil by water. The ethanol extract was  then fractioned into three fractions, n-hexane, ethyl acetate, and ethanol. To find the bioactive compounds, the ethanol extract was  then tested by several phytochemistry tests.  The phytochemistry test showed   positive results   for alkaloid, flavo- noid, saponin and triterpenoid. The inhibition mechanism was tested using pNPG. The inhibition test shown that the mechanism was a competitive inhibition, by the Dixon plot. The calculated  inhibition concentrations  for 50% substrate (IC 50 ) for ethyl acetate fraction are 1655.8079 µg/ml for 5 mM substrate and 803.9521 µg/ml for 10 mM substrate. From the results of this study, we concluded that the extract of Caesalpinia bonduc has inhibition activity toward α-glucosidase enzyme.
Keywords: α-glucosidase inhibition, Caesalpinia bonduc seed extract, diabetes treatment

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk menemukan penanganan alternatif dari penyakit diabetes. Tel- ah banyak penelitian dilakukan dalam bidang ini sebelumnya, namun masih belum banyak penelitian yang memfokuskan pada mekanisme penghambatan enzim α-glukosidase. Penelitian ini dilakukan dengan melakukan ekstrasi pada biji Caesalpinia bonduc dengan dua metode yaitu maserasi meng- gunakan etanol 96% dan perebusan dengan air. Ekstrak etanol kemudian difraksinasi menggunakan
Received : 2 July 2018; Accepted : 14 August 2018
Dwitasari et al. - Senyawa Bioaktif dan Inhibisi α-Glukosidase Ekstrak Biji Kebiul ( C. bonduc )

## 1. PENDAHULUAN
Diabetes  melitus  merupakan  penyakit kelainan metabolik yang biasanya ditandai den - gan  adanya  kondisi  hiperglikemia  kronis.  Ter - dapat dua jenis prevalen dari penyakit ini, yang biasa dikenal dengan diabetes melitus tipe 1 dan tipe 2. Mayoritas penderita diabetes melitus tipe 1 (DM1) merupakan anak-anak di bawah 15 ta - hun, sementara itu mayoritas penderita diabetes pada umumnya adalah penderita diabetes mel - itus tipe 2 (DM2) (Holt & Kumar 2010). Pen - derita DM2 biasanya mengalami kondisi hiper - glikemia postprandial, yang merupakan kondisi meningkatnya kadar gula darah setelah mener - ima  asupan  makanan  (Ceriello  2005).  Kondisi ini  memaksa  penderita  DM2  untuk  menjalani terapi sepanjang hidupnya baik dengan penga - turan  asupan  makanan  maupun  dengan  obat- obatan, agar kondisi kadar glukosa postprandial tidak naik secara drastis (Tahrani et al. 2010).
Pengendalian  kondisi  hiperglikemia postprandial menjadi sangat penting bagi terapi penderia  DM2.  Salah  satu  metode  terapi  yang dapat dilakukan adalah mengurangi penyerapan glukosa  dengan  melakukan  penghambatan  ter - hadap enzim-enzim penghidrolisis karbohidrat, seperti α-glukosidase (Kim et al. 2005). Metode terapi  ini  terbukti  dapat  menghambat  perkem - bangan DM2 sebanyak 36%, sehingga pender -
tiga pelarut yaitu, n-heksan, etil asetat, dan etanol. Ekstrak yang diperoleh kemudian diuji fitokimia. Berdasarkan pengujian diketahui bahwa ekstrak positif mengandung alkaloid, flavonoid, saponin dan triterpenoid. Mekanisme inhibisi diuji menggunakan substrat pNPG. Berdasarkan plot Dixon yang diperoleh, diketahui bahwa mekanisme inhibisi ekstrak biji Caesalpinia bonduc terhadap α-glu- kosidase adalah inhibisi kompetitif. Perhitungan terhadap konsentrasi inhibisi 50 (IC 50 ) untuk fraksi etil asetat adalah 1655.8079 µg/ml untuk substrat 5 mM dan 803.9521 µg/ml untuk substrat 10 mM. Berdasarkan hasil temuan yang diperoleh dalam penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa ekstrak Caesalpinia bonduc memiliki aktivitas inhibisi terhadap enzim α-glukosidase.
Kata kunci: inhibisi α-glukosidase, ekstrak biji Caesalpinia bonduc, penanganan diabetes
ita  DM2  dapat  memiliki  harapan  hidup  yang lebih panjang (Ceriello 2005).
Acarbose  dan  miglitol  merupakan  dua inhibitor enzim α-glukosidase yang diakui dan direkomendasikan oleh WHO dan IDF (Inzuc - chi et al. 2015). Meskipun kedua senyawa terse - but  memiliki  keefektifan  yang  tinggi  sebagai inhibitor,  namun  demikian  efek  samping  yang ditimbulkannya juga tidak kecil. Efek samping utama yang mungkin muncul akibat dari peng - gunaan terapi acarbose adalah gangguan pencer - naan dan flatulensi (Holt & Kumar 2010).
Salah satu alternatif tanaman obat yang dapat digunakan dalam penanganan hiperglike - mia  postprandial  adalah Caesalpinia bonduc yang  tumbuh  di  daerah  India  dan  lebih  dike - nal  sebagai  Nata  Karanja  sedangkan  di  Indo - nesia tanaman ini dikenal sebagai Kebiul yang dapat  ditemukan  di  daerah  Bengkulu  Selatan. Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan oleh  Chakrabarti et  al. (2005)  dan  Kannur et al. (2006)  tanaman  ini  terbukti  memiliki  ke - mampuan  antidiabetes,  yaitu    ekstrak  dari  biji tanaman  ini  mampu  menurunkan  kadar  tri - gliserida dalam darah hingga mendekati normal kembali. Selain itu berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Anas (2014) melalui pemberian ekstrak etanol dari biji C. bonduc terhadap M. musculus jantan  yang  diinduksi  aloksan  pada
Curr. Biochem. 2017. 4 (3): 1 - 9
dosis 0.00516 g/kg BB, diketahui bahwa terjadi penurunan glukosa darah yang relatif signifikan dari 135.4 mg/dL menjadi 104.2 mg/dL. Pene - litian ini bertujuan untuk mengungkap peranan senyawa aktif pada ekstrak biji C. bonduc dalam menghambat aktivitas enzim α-glukosidase.

## 2. METODOLOGI
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biokimia FMIPA IPB, Pusat Studi Biofarmaka LPPM-IPB  dan  Puslabfor  Mabes  Polri.  Pene - litian ini dilakukan dalam rentang waktu bulan Agustus 2017 hingga Januari 2018.

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan dalam pe - nelitian ini adalah biji kebiul ( Caesalpinia bon - duc ) yang diambil dari hutan di Desa Sukaraja Kecamatan Sukaraja Kabupaten Seluma Provin - si  Bengkulu.  Biji  kebiul  yang  diambil  adalah biji yang sudah tua dengan kulit biji yang keras dengan kadar air 5.95 %, etanol 96 %, n-heksa - na, etil asetat, enzim α-glukosidase yang berasal dari  rekombinan Bacillus stearothermophilus (Sigma G3651-250UN, Jerman), substrat p-ni - trofenil-α-D-glukopiranosida  (pNPG)  (Sigma Aldrich, USA) dan akarbose.
Peralatan yang digunakan dalam peneli - tian ini adalah oven, corong pisah, evaporator, spektrofotometer (Hitachi tipe U-2800), pH me - ter, vortex mixer, microplate reader (Biotek Ep - och) dan LC-MS/MS (Qmicro QAA 842).
Ekstraksi Sampel Biji C. bonduc (Anas 2014; Fitrilia 2015)
Ekstraksi dilakukan dengan dua cara yai - tu maserasi menggunakan etanol 96% dan pere - busan menggunakan air. Perebusan dengan air dilakukan karena metode ini merupakan metode
yang umum digunakan oleh masyarakat dalam memanfaatkan biji C. bonduc. Sampel C. bon- duc diperoleh dari hutan di sekitar Desa Suka - raja , Kecamatan Sukaraja , Kabupaten Seluma , Provinsi Bengkulu. Maserasi dilakukan dengan cara merendam sampel dalam etanol 96% den - gan  perbandingan  sampel:pelarut  adalah  1:10 (b:v).  Perendaman  dilakukan  selama  24  jam dengan menggunakan shaker  dengan kecepatan 150 rpm. Perebusan dilakukan dengan merebus sampel selama 2 jam. Baik hasil maserasi mau - pun  perebusan  kemudian  dipekatkan  dengan menggunakan rotary evaporator pada suhu 50°C hingga ekstrak mengental.
Fraksinasi Ekstrak Biji C. bonduc (Kim et al. 2008)
Sebanyak  2  gram  ekstrak  kasar  etanol yang  telah  diperoleh  pada  tahap  sebelumnya dilarutkan  dalam  100  mL  akuades    pada  suhu 50°C.  Larutan  kemudian  difraksinasi  menggu - nakan corong pisah dengan penambahan pelarut n-heksan, fraksi n-heksan kemudian dipisahkan. Tahap  ini  kemudian  diulang  untuk  pelarut  etil asetat dan etanol untuk memperoleh fraksi etil asetat dan etanol. Masing-masing fraksi kemu - dian  dipekatkan  dengan  menggunakan  rotary evaporator.

## Uji Fitokimia (Harbone 1987)
Pengujian terhadap fitokimia ekstrak biji C.  bonduc dilakukan  dengan  tahapan  sebagai berikut:
Uji Alkaloid. Pengujian alkaloid dilaku - kan  dengan  memasukkan    0.05  gram  ekstrak ke tabung reaksi dan kemudian ditambahkan 5 mL  kloroform  dan  5  tetes  NH 3 .  Campuran  ini kemudian divortex dan fraksi kloroform ditam - bahkan 30 tetes H 2 SO 4 2 M kemudian divorteks.
Lapisan asam kemudian dibagi menjadi tiga ba - gian. Pada bagian pertama ditambahkan 2 tetes pereaksi  Dragendorf,  bagian  kedua  ditambah - kan 2 tetes pereaksi Wagner dan bagian ketiga ditambahkan 2 tetes pereaksi Mayer. Uji positif ditunjukkan    dengan  endapat  merah  (Dragen - dorf),  endapan  cokelat  (Wagner)  dan  endapan putih (Mayer).
Uji  Flavonoid,  Saponin  dan  Tanin. Sebanyak 0.1 gram sampel dimasukkan  ke da - lam tabung reaksi. Ditambahkan 10 mL akuades kemudian  dipanaskan  selama  5  menit  lalu disaring.  Filtrat  kemudian  dibagi  menjadi  tiga bagian, bagian pertama digunakan untuk uji fla - vonoid ditambahkan serbuk Mg, 5 tetes HCl pe - kat, 5 tetes etanol dan 7 tetes amil alkohol, lalu divorteks. Uji positif ditunjukkan  dengan warna jingga pada lapisan amil alkohol. Bagian kedua digunakan untuk uji saponin dengan melakukan pengocokan hingga terbentuk buih yang stabil selama 10 menit. Bagian ketiga digunakan un - tuk uji tanin dengan penambahan FeCl 3 1%. Uji positif ditunjukkan  oleh warna hijau kehitaman.
Uji Triterpenoid . Pengujian triterpenoid dilakukan dengan melarutkan 10 mg sampel da - lam 5 mL larutan eter, kemudian diuapkan da - lam  cawan  penguap.  Kemudian  ditambahkan asam asetat anhidrat dan asam sulfat (2:1). Uji positif  ditandai  dengan  munculnya  warna  me- rah-hijau.
Uji Aktivitas Inhibisi α-glukosidase (Sancheti et al. 2009; Sugiwati et al. 2009)
Dalam  pengujian  aktivitas  inhibisi  dari ekstrak biji C. bonduc terhadap enzim α-gluko - sidase  dilakukan  dengan  menggunakan  sistem reaksi yang ditunjukkan  pada Tabel 1.
Dwitasari et al. - Senyawa Bioaktif dan Inhibisi α-Glukosidase Ekstrak Biji Kebiul ( C. bonduc )
Reagen Volume (µL) Blanko Kontrol Blanko Sampel Kontrol Sampel Pelarut 10 10 - - Sampel - - 10 10 Bufer 50 50 50 50 Substrat (pNPG) 25 25 25 25 Enzim 25 - 25 - Buffer - 25 - 25 Inkubasi 37ºC 30 menit Na 2 CO 3 100 100 100 100

## Tabel 1. Sistem reaksi inhibisi α-glukosidase
Inisiasi  reaksi  dilakukan  dengan  penambahan 25 μL enzim α-glukosidase dengan konsentrasi 0.04 U/mL dalam bufer fosfat (pH 7.0) kemudi - an diinkubasi pada suhu 37 °C selama 30 menit. Penghentian    reaksi  dilakukan  dengan  penam - bahan  100  μL  Na 2 CO 3 200  mM.  Hasil  reaksi diukur dengan microplate reader pada panjang gelombang  410  nm.  Percobaan  dilakukan  se - banyak 3 kali pengulangan. Selanjutnya dilaku - kan perhitungan % inhibisi untuk menentukan nilai IC 50 . Pengujian kinetika inhibisi dilakukan dengan menggunakan sistem reaksi yang sama namun  menggunakan  variasi  konsentrasi  sub - strat (5 mM dan 10 mM).

## Teknik Analisis Data
Analisis  Mekanisme  Inhibisi .  Anali - sis mekanisme inhibisi dari ekstrak C. bonduc terhadap  enzim  α-glukosa  dilakukan  dengan menggunakan  teknik  plot  Dixon.  Data  untuk plot  Dixon  diperoleh  dari  sistem  reaksi  yang dijelaskan  pada  bagian  sebelumnya  pada  dua konsentrasi substrat (5 mM dan 10 mM). Plot Dixon diperoleh dari kurva linear 1/v vs [I]. Me - kanisme inhibisi diperoleh dari bentuk dua kur - va linear yang terbentuk.
Curr. Biochem. 2017. 4 (3): 1 - 9
Analisis  ANOVA. Analisis  ANOVA dilakukan  untuk  melihat  pengaruh  jenis  frak - si  ekstrak C.  bonduc dan  pengaruh  konsentra - si  terhadap  kemampuan  inhibisinya  terhadap α-glukosidase.  Uji  ANOVA  dilakukan  dengan menggunakan software SPSS 23.0 pada sistem operasi Windows 10.

## Identifikasi  Senyawa  Antidiabetes  Menggu- nakan LC-MS/MS.
Larutan  sampel  sebanyak  5µL  dengan konsentrasi 1,000 μg/mL dimasukkan ke dalam instrumen  LC-MS/MS.  Fase  gerak  yang  digu - nakan  adalah  campuran  asetonitril  dan  air,  se - dangkan fase diam yang digunakan adalah ko - lom C18. Dengan laju alir diatur pada 0.2 mL/ menit analisis dilakukan selama 23 menit pada temperatur pemisahan 50°C.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  pengujian  terhadap  fi - tokimia  ekstrak  biji C.  bonduc yang  telah dilakukan dalam penelitian ini, diperoleh hasil sebagaimana ditunjukan pada Tabel 2. Berdasar - kan data pada Tabel 2, pada sampel ekstrak biji C. bonduc yang diperoleh menunjukkan  hasil positif pada hampir semua uji yang dilakukan.
Tabel 2. Senyawa fitokimia ekstrak biji kebiul ( C.bonduc )
Hanya tanin yang menunjukkan  uji negatif pada semua sampel. Selain itu hasil negatif juga mun - cul pada pengujian flavonoid pada fraksi n-hek - san  namun  positif  pada  fraksi  etanol  dan  etil asetat.  Hal  ini  disebabkan  oleh  adanya  gugus hidroksil pada strukturnya, yang meningkatkan afinitas  senyawa  ini  pada  pelarut  polar  seperti etanol dan air (Crozier et al. 2006).
Hasil  fitokimia  dari  ekstrak C.  bonduc yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  juga  sesuai dengan penelitian yang dilakukan Shukla et al.
(2009).  Di  mana  penelitian  tersebut  menun - jukkan  bahwa ekstrak biji C. bonduc memili- ki kandungan flavonoid, alkaloid, saponin dan fenolik.
Aktivitas inhibisi dari ekstrak C. bonduc disajikan pada Tabel 3 dalam bentuk nilai IC 50 . Nilai  IC 50 menunjukkan    konsentrasi  sampel yang  dapat  menginhibisi  50%  aktivitas  enzim α-glukosidase.  Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka kemampuan inhibisi dari sampel semakin baik. Dalam pengujian yang dilakukan terlihat bahwa sampel fraksi etil asetat memiliki nilai IC 50 yang paling  kecil  pada  dua  variasi  konsentrasi  sub - strat dibandingkan sampel lainnya. Oleh karena itu dapat disimpulkan bahwa sampel fraksi etil asetat memiliki kemampuan inhibisi yang lebih
Kandungan kimia Ekstrak air Ekstrak etanol Fraksi n-heksan Fraksi etil asetat Fraksi etanol Alkaloid Mayer + + + + + Dragendrorf + + + + + Bouchardat + + + + + Tanin - - - - - Flavonoid + + - + + Saponin + + + + + Triterpenoid + + + + + Keterangan : (+) = mengandung senyawa (-) = tidak terdeteksi adanya senyawa
Dwitasari et al. - Senyawa Bioaktif dan Inhibisi α-Glukosidase Ekstrak Biji Kebiul ( C. bonduc )
Sampel IC 50 (µg/ml) untuk Sub- strat 5 mM IC 50 (µg/ml) untuk Sub- strat 10 mM Akarbose 0.1538 0.0978 Ekstrak Kasar Air 5570.1639 1812.5890 Ekstrak Kasar Etanol 14848.77143 8814.3773 Fraksi n-heksan 80121.5508 18599.3672 Fraksi Etil Asetat 1655.8079 803.9521 Fraksi Etanol 10907.3787 8052.5019
Tabel 3. Rata-rata IC 50 pada jenis sampel inhibitor pada dua variasi konsentrasi substrat
baik.
Selain menguji  pengaruh masing-mas - ing fraksi terhadap aktivitas inhibisi α-glukosi - dase  melalui  perhitungan  IC 50 ,  dilakukan  pula pengujian  terhadap  pengaruh  konsentrasi  dari sampel  terhadap  aktivitas  inhibisi.  Untuk  me - nentukan apakah variasi konsentrasi sampel ber - pengaruh  nyata  terhadap  aktivitas  inhibisinya maka dilakukan uji ANOVA. Hasil uji ANOVA menunjukkan  taraf signifikansi 0.0000 dengan nilai p 0.05 maka disimpulkan bahwa terdapat perbedaan  nyata  dari  variasi  konsentrasi  dari sampel ektrak biji C. bonduc.
Pengujian  terhadap  pengaruh  positif dari  peningkatan  konsentrasi  sampel  terhadap kemampuan  inhibisi  dilakukan  dengan  uji  re - gresi  linear  menggunakan  kurva  1/v  vs  kon - sentrasi sampel. Hasil pengujian menunjukkan slope kurva bernilai positif (6.454) yang berarti penambahan  konsentrasi  sampel  memperbesar nilai  1/v  dengan  kata  lain  mengurangi  nilai  v (laju reaksi). Sehingga dapat disimpulkan bah - wa  penambahan  konsentrasi  sampel  mening - katkan kemampuan inhibisi ekstrak C. bonduc terhadap enzim α-glukosidase.
Meskipun  dalam  penelitian  ini  terung - kap  bahwa  terdapat  kemampuan  inhibisi  terh -
adap α-glukosidase baik ekstrak kasar maupun fraksi dari biji C. bonduc , namun kemampuan ini masih relatif rendah jika dibandingkan den - gan  penelitian  sejenis  dengan  menggunakan ekstrak  benalu  cengkeh.  Fitrilia  (2015)  mene - mukan bahwa IC 50 dari ekstrak benalu cengkeh adalah 129.7 µg/ml yang menunjukkan  kemam - puan inhibisi yang lebih baik dibandingkan ha - sil penelitian ini. Namun demikian, hal ini tidak menunjukkan  bahwa aktivitas antidiabetes dari sampel juga masuk dalam kategori rendah. Pe - nelitian Chakrabarti et al. (2005) dan Kannur et al. (2006) menunjukkan  bahwa biji C. bonduc memiliki  kemampuan  antidiabetes  yang  baik. Berdasarkan data dalam penelitian ini, kemun - gkinan besar ekstrak biji C. bonduc memiliki ti - dak hanya satu mekanisme antidiabetes. Hal ini perlu  ditelusuri  lebih  lanjut  melalui  penelitian lainnya.
Hasil  pengujian  menggunakan  ploting Dixon  menunjukkan    bahwa  sampel  memiliki karakteristik  inhibisi  kompetitif  (Gambar  1). Selain  itu  berdasarkan Tabel  3,  diketahui bah - wa sampel dengan nilai IC 50 paling kecil adalah sampel fraksi etil asetat . Nilai IC 50 ini menun- jukkan  bahwa sampel tersebut hanya membu - tuhkan  konsentrasi  sebesar  1655.8079  µg/ml untuk substrat 5 mM dan 803.9521  µg/ml untuk substrat 10 mM untuk menghambat 50% enzim yang jauh lebih kecil dibandingkan sampel lain yang diperoleh dari ekstrak biji kebiul.
Nilai Ki dari fraksi etil asetat diperoleh sebesar 183.125 × 10-3 M. Nilai Ki menunjuk - kan seberapa mudah kompleks enzim-inhibitor dapat terurai. Nilai Ki yang lebih kecil menun - jukkan  lebih  banyak  terbentuk  kompleks  en - zim-inhibitor,  yang  dapat  diartikan  bahwa  ke - mampuan inhibisi lebih baik. Nilai Ki dari fraksi etil asetat ini masih relatif besar jika dibanding - kan dengan hasil penelitian Neves et al. (2009)
Curr. Biochem. 2017. 4 (3): 1 - 9
Gambar 1. Ploting Dixon pada fraksi etil asetat dengan konsentrasi substrat 5 mM dan 10 mM
pada inhibitor kayu manis terhadap enzim poly - phenoloxidase yaitu 0.078 × 10 -3 M.
Berdasarkan  identifikasi  menggunakan instrumen  LC-MS/MS  diperoleh  tiga  senyawa dengan kelimpahan yang paling tinggi. Dari tiga kelompok senyawa tersebut terdapat satu senya - wa kelompok amida yaitu (3aR, 5S, 5aR, 8aS, 8bR)-N-(4-Butoksfenil)-2,2,7,7-tetrametiltet - rahidro-3aH-bis[1,3]dioksolo[4,5-b:4’,5’-d] piran-5-karbakamida yang selanjutnya  disebut piranokarbaksamida. Senyawa ini muncul pada waktu  retensi  8.452  menit  dengan  kelimpah - an 10.05% dari sampel. Hasil MS ditunjukkan pada Gambar 2.

## Gambar 2. Hasil MS dari piranokarbaksamida
Senyawa  piranokarbaksamida  yang  di - peroleh dengan massa molekul sebesar 422.2183 m/z ini merupakan senyawa turunan amida yang juga memiliki gugus hidroksil pada cincin aro - matiknya. Khan et al. (2014) menyatakan bah - wa, senyawa polifenol (senyawa dengan cincin cincin  aromatik  tersubstitusi  gugus  hidroksil) yang  terikat  pada  gugus  basa  nitrogen  (amina dan  amida)  memiliki  potensi  sebagai  inhibitor dari enzim α-glukosidase.
Proses inhibisi dari enzim α-glukosidase menggunakan  acarbose  ataupun  miglitol  terja - di  dengan  cara  protonasi  gugus  N  pada  struk - tur inhibitor. Hal ini terjadi karena sisi aktif dari
enzim  α-glukosidase  merupakan  gugus  yang memiliki  sifat  nukleofil.  Reaksi  hidrolisis  glu - kosa dengan enzim α-glukosidase terjadi ketika ion karbanium yang terbentuk dari polisakarida berikatan dengan sisi aktif enzim yang bersifat nukleofil (Chiba 1997). Senyawa polifenol yang terikat  dengan  basa  nitrogen  memiliki  potensi membentuk sisi N terprotonisasi yang akan ber - kompetisi dengan substrat (ion karbanium dari polisakarida) untuk berikatan dengan sisi aktif enzim α-glukosidase (Rahim et al. 2015). Me - kanisme  protonasi  N  dari  senyawa  piranokar - baksamida yang diperoleh dalam penelitian ini masih  perlu  ditelusuri  lebih  lanjut.  Penelusu - ran lebih lanjut terhadap aktivitas inhibisi dari senyawa  piranokarbaksamida  terhadap  enzim α-glukosidase juga perlu dilakukan.
Fitrilia T. 2015. Ekstrak daun benalu cengkeh (Den - drophthoe Pentandra (L.) Miq) sebagai agen antioksidan dan antidiabetes secara in vitro [Tesis]. Bogor: Institut Pertanian Bogor.
Harbone  JB.  1987.  Metode  Fitokimia.  Ed  ke-2. Bandung: ITB.
Holt T, Kumar S. 2010. ABC of Diabetes. Sixth Edi - tion. Oxford: Blackwell Publishing.
Inzucchi  SE,  Bergenstal  RM,  Buse  JB,  Diamant M, Ferrannini E, Nauck M, Matthews DR. 2015. Management of hyperglycemia in type 2 diabetes : a patient-centered approach: up - date to a position statement of the American Diabetes Association and the European As - sociation for the study of diabetes. Diabetes Care. 38(1): 140-149.
Kannur DM, Hukkeri VI, Akki KS. 2006. Antidia - betic activity of Caesalpinia bonducella seed extracts in rats. Fitoterapia. 77(7): 546-549.
Khan  KM,  Rahim  F,  Wadood  A,  Kosar  N,  Taha M, Lalani S, Khan M. 2014. Synthesis and molecular  docking  studies  of  potent  α-glu - cosidase  inhibitors  based  on  biscoumarin skeleton. European  journal  of  medicinal chemistry. 81: 245-252.
Kim KY, Nam KA, Kurihara H, Kim SM. 2008. Po - tent  α-glukosidase  inhibitors  purified  from the  red  alga  Grateloupia  elliptica. Phyto- chemistry. 69: 2820-2825.
Kim YM, Jeong YK, Wang MH, Lee WY, Rhee HI.
2005.  Inhibitory  effect  of  pine  extract  on α-glucosidase activity and postprandial hy - perglycemia. Nutrition. 21(6): 756-761.
Neves VA, Picchi DG, Silva MAD. 2009. Some bio - chemical  properties  of  polyphenoloxidase from spearmint (Mentha arvensis). Brazilian Archives of Biology and Technology. 52(4): 1001-1010.
Rahim  F,  Malik  F,  Ullah  H,  Wadood  A,  Khan  F, Javid  MT,  Khan  KM.  2015.  Isatin  based Schiff bases as inhibitors of α-glucosidase: Synthesis, characterization, in vitro evalua - tion  and  molecular  docking  studies. Bioor - ganic chemistry. 60:42-48.
Sancheti S, Sandesh S, Seo SY. 2009. Chaenomelos sinensis : a potent α- and β- glucosidase in - hibitor. American Journal of Pharmacology

## 4. DAFTAR PUSTAKA
Anas A. 2014. Isolasi dan uji aktivitas ekstrak biji ke - biul (Caesalpinia Sp) terhadap kadar glukosa mencit (Mus Musculus) sebagai sumber be - lajar  (modul)  berbasis  konstruktivesme  un - tuk meningkatkan hasil belajar kimia SMK [Tesis]. Bengkulu : Universitas Bengkulu.
Ceriello A.  2005.  Postprandial  hyperglycemia  and diabetes  complications:  is  it  time  to  treat?. Diabetes . 54(1): 1-7.
Chakrabarti S, Biswas TK, Seal T, Rokeya B, Ali L,
Khan AA,  Mukherjee  B.  2005. Antidiabet - ic  activity  of  Caesalpinia  bonducella  F.  in chronic type 2 diabetic model in long-evans rats  and  evaluation  of  insulin  secretagogue property  of  its  fractions  on  isolated  islets. Journal of Ethnopharmacology. 97(1): 117- 122.
Chiba S. 1997. Molecular mechanism in α-glucosi - dase and glucoamylase. Bioscience, biotech - nology, and biochemistry. 61(8): 1233-1239.
Crozier A,  Clifford  MN, Ashihara  H.  2006.  Plant Secondary  Metabolites.  Oxford:  Blackwell Publishing.
Dwitasari et al. - Senyawa Bioaktif dan Inhibisi α-Glukosidase Ekstrak Biji Kebiul ( C. bonduc )
Curr. Biochem. 2017. 4 (3): 1 - 9
and Toxicology. 4(1): 8-11.
Shukla  S,  Mehta A,  John  J,  Mehta  P,  Vyas  SP,  & Shukla  S.  2009.  Immunomodulatory  activ - ities of the ethanolic extract of Caesalpinia bonducella seeds. J ournal of Ethnopharma- cology. 125(2): 252-256.
Sugiwati S, Setiasih S, Afifah E. 2009. Antihypergly - cemic activity of the mahkota dewa [Phale - ria macrocarpa (scheff.) Boerl.] leaf extracts as  an  alpha  glucosidase  inhibitor. Makara Kesehatan. 13: 74-78.
Tahrani  AA,  Piya  MK,  Kennedy  A,  Barnett  AH.
2010. Glycaemic control in type 2 diabetes: targets and new therapies. Pharmacology & Therapeutics. 125(2): 328-361.