## Potensi  Daun Trembilungan ( Begonia hirtella Link) sebagai Antibakteri dan Antifungi
Febri Nur Ngazizah 1 , Nuraeni Ekowati 1 , Aisyah Tri Septiana 2
1 Fakultas Biologi, Universitas Jenderal Soedirman
2 Fakultas Pertanian, Universitas Jenderal Soedirman Email : nuraeniekowati@yahoo.com

## Abstract
Begonia hirtella leaf are commonly used  by people in mountainous areas to treat itchy due to insect bites and  skin infection.  This  study  aims  to  (1)  determine  proper  solvent  extract  of B.  hirtella leaf  on  antibacterial  activity  of S. aureus and E. coli and on antifungal activity of C. albicans (2) determine the lowest concentration of leaf extract of B. hirtella that indicate the formation of inhibition zone (3) know the content of bioactive compounds contained in each leaf extract of B. hirtella . The method used in this study is experimental with completely randomized design (CRD). The  treatments  were  type  of  solvents  ( n -hexane,  ethyl  acetate,  ethanol  and  water)  and  a  serie  of  the  ethyl  acetate extract concentration of 500 ppm, 450 ppm, 400 ppm, 350 ppm, 300 ppm and 250 ppm against S. aureus, E. coli and C.  albicans .  Data  were  analyzed  using  analysis  of  variance  (Anova)  and  the  significant  differences  between  the treatments  were  analyzed  by  Duncan  test  at  95%  confidence  level.  The  result  showed  that  each  solvent  extracts affect microbes growth with a highly significant difference p <0.05. Solvent extracts that have the best inhibitory zone is  ethyl  acetate  against S.  aureus with  an  average  diameter  of  inhibitory  zone  13.75  ±  1.26  mm.  Increasing concentrations of ethyl acetate extract of 250 ppm to 500 ppm increase inhibition zone against microbes. The  lowest concentration that show inhibition zone was 300 ppm. The formation inhibition of zone on microbes growth happened due  to  their  compounds  in  the  extract.  Extract  of n -hexane  contains  stigmasterol,  ethyl  acetate  contains neophytadiene, while the ethanol extract contains ethyl palmitate .
Keywords: Antibacterial, A ntifungal, Begonia hirtella , inhibition zone, bioactive compounds.

## Abstrak
Daun Begonia  hirtella biasa  digunakan  masyarakat  di  daerah  pegunungan  untuk  mengobati  gatal  karena  digigit serangga  dan  gatal  karena  infeksi  kulit.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  (1)  mengetahui  jenis  pelarut  ekstrak  daun B. hirtella terbaik  terhadap  aktivitas  antibakteri S.  aureus dan E.  coli serta  antifungi C.  albicans (2)  mengetahui konsentrasi  ekstrak  daun B.  hirtella minimal  yang  menunjukkan  terbentuknya  zona  hambat  (3)  mengetahui kandungan  senyawa  bioaktif  yang  terdapat  pada  masing-masing  ekstrak  daun B.  hirtella .  Metode  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  eksperimental  dengan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL).  Perlakuan  yang  dicobakan adalah  jenis  pelarut  ( n -heksan,  etil  asetat,  etanol  dan  air)  dan  variasi  konsentrasi  ekstrak  etil  asetat  500  ppm,  450 ppm,  400  ppm, 350 ppm,  300  ppm  dan  250  ppm terhadap S.  aureus,  E. coli dan C. albicans. Data  yang  diperoleh dianalisis menggunakan analisis ragam (Anova) dan perbedaan nyata antara perlakuan dianalisis dengan uji Duncan pada  tingkat  kepercayaan  95%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  masing-masing  pelarut  ekstrak  berpengaruh terhadap mikroba uji dengan perbedaan yang nyata p<0,05. Pelarut ekstrak yang mempunyai zona hambat terbaik adalah  etil  asetat  terhadap S.  aureus dengan  diameter  rata-rata  zona  hambat  13,75  ±1,26  mm.  Peningkatan konsentrasi  ekstrak  etil  asetat  250  ppm  sampai  500  ppm  meningkatkan  zona  hambat  terhadap  mikroba  uji. Konsentrasi minimal yang menunjukkan zona hambat adalah 300 ppm. Terbentuknya zona hambat pada mikroba uji disebabkan adanya kandungan senyawa pada ekstrak yang digunakan. Ekstrak n -heksan mengandung stigmasterol, ekstrak etil asetat mengandung neophytadiene, sedangkan pada ekstrak etanol mengandung ethyl palmitate.
Kata kunci: Antibakteri, Antifungi, Begonia hirtella , zona hambat, senyawa bioaktif.

## Pendahuluan
Tanaman  berkhasiat  obat  adalah  jenis tanaman  yang  pada  bagian  bagian  tertentu  baik akar, batang, kulit, daun, maupun hasil ekskresinya dipercaya dapat menyembuhkan atau mengurangi  rasa  sakit.  Salah  satu  tanaman berkhasiat  yang  tumbuh  subur  di  Indonesia adalah tanaman Begonia. Begonia dapat digunakan  sebagai  obat  gatal  karena  digigit serangga  dan  infeksi  kulit.  Penelitian  yang dilakukan  oleh  Hartutiningsih et  al .,  (2009)  dan Indrakumar et  al. (2014)  menunjukkan Begonia mempunyai  potensi  sebagai  antibakteri  terhadap bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia
coli. Hasil  uji  fitokimia  menunjukkan  bahwa tanaman tersebut mengandung senyawa golongan  fenol,  flavanoid,  steroid,  terpenoid  dan alkaloid.
Salah satu spesies Begonia yang dimanfaatkan  masyarakat  sebagai  obat  adalah Begonia  hirtella .  Pemanfaatan  tanaman  tersebut karena adanya kandungan senyawa bioaktif yang berperan  dalam  penyembuhan  penyakit  tertentu. Seperti  pada  tanaman  lain  pada  umumnya, senyawa-senyawa tersebut dapat diperoleh dengan cara ekstraksi atau isolasi dengan pelarut non  polar  ( n -heksan),  semi  polar  (etil  asetat)  dan polar  (etanol  dan  air).  Pelarut  umum  yang  sering
digunakan  dalam  ekstraksi  adalah  etanol,  karena pelarut  tersebut  dapat  menarik  senyawa  non polar,  semi  polar  maupun  polar  (Nagariya et  al ., 2010;  Harborne, 1987).
Ekstraksi  senyawa  bioaktif  dapat  dilakukan dengan  metode  maserasi  secara  bertingkat dimulai  dari  pelarut  non  polar  kemudian  diikuti semi polar dan polar. Maserasi tersebut dimaksudkan untuk menyaring senyawa non polar seperti  steroid  dan  terpenoid,  senyawa  semipolar seperti  senyawa  fenol  dan  flavanoid  serta senyawa polar seperti flavanoid dan alkaloid.
Jenis  senyawa  dalam  ekstrak  tanaman B. hirtella dapat diketahui malalui identifikasi menggunakan  pereaksi  warna  secara  kualitatif, gas  chromatography  mass  spectrometer (GCMS) secara  kualitatif  dan  kuantitatif,  di  samping  itu  uji total fenol secara kuantitatif dengan spektrofotometri  dilakukan  untuk  mengetahui kadarnya.  Selanjutnya  dilakukan  uji  aktivitas terhadap  bakteri  Gram  positif  ( S.  aureus ),  Gram negatif ( E. coli ), dan fungi ( Candida albicans ). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui pelarut  ekstrak  yang  memberikan  aktivitas maksimal  sebagai  antibakteri S.  aureus , E.  coli serta antifungi C. albicans , mengetahui konsentrasi  ekstrak  daun B.  hirtella minimal  yang menunjukkan  terbentuknya  zona  hambat  dan mengetahui  kandungan  senyawa  bioaktif  yang terdapat  pada  masing-masing  ekstrak  daun B. hirtella

## Metode
Penelitian  ini  menggunakan  daun B.  hirtella yang  diekstrak  dengan  pelarut n -heksan,  etil asetat, etanol dan air . Penelitian dilakukan secara eksperimental, rancangan percobaan yang digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL),    dengan  perlakuan  uji  daya  hambat menggunakan  ekstrak n -heksan,  etil  asetat, etanol  dan  air  terhadap S.  aureus, E.  coli dan C. albicans, dengan  4  kali  ulangan.  Ekstrak  yang mempunyai  zona  hambat  terbesar    selanjutnya dilakukan  uji  lanjut  dengan  perlakuan  variasi konsentrasi  (500  ppm,  450  ppm,  400  ppm,  350 ppm, 300 ppm dan 250 ppm) terhadap S. aureus, E.  coli dan C.  albicans, dengan  3  kali  ulangan. Parameter yang diukur adalah zona hambat yang terbentuk.
Ekstraksi (Hartutiningsih et al ., 2009; Widyawati et al ., 2010)
Metode  yang  digunakan  dalam  pembuatan ekstrak  daun  tanaman B.  hirtella adalah  metode maserasi.  Pelarut  yang  digunakan  adalah n - heksan,  etil  asetat,  etanol  dan  air.  Serbuk  kering daun direndam selama 24 jam dengan menggunakan pelarut n -heksan dengan perbandingan  200  gram  serbuk  daun:  674  ml pelarut, setelah 24 jam disaring dengan menggunakan  kertas  saring,  ampas  direndam
kembali  menggunakan  pelarut n -heksan  selama 24  jam,  disaring  lagi,  (ekstraksi  dilakukan  3x). Hasil  penyaringan  dikumpulkan  menjadi  satu dimasukkan ke dalam labu Erlenmeyer sedangkan  ampas  (daun B.  hirtella )  dikeringkan sampai tidak berbau n -heksan, kemudian direndam  ke  dalam  pelarut  etil  asetat  selama 3x24  jam,  setiap  24  jam  disaring  dan  hasil saringan  dimasukkan  ke  dalam  labu  Erlenmeyer. Ampas  hasil  maserasi  etil  asetat  dikeringkan selanjutnya  direndam  dengan  menggunakan pelarut  etanol  dengan  perbandingan  dan  lama perendaman sama seperti pada maserasi menggunakan  pelarut  etil  asetat,  demikian  pula pada  maserasi  ke  empat  dengan  menggunakan pelarut  air.  Ekstrak  yang  dihasilkan  dipisahkan dengan  pelarut  dengan  cara  diuapkan  dengan menggunakan  alat rotary  evaporator sampai dihasilkan ekstrak kental.

## Uji  aktivitas  antibakteri  dan  antifungi  (Efendi dan  Hertiani, 2013)
Sebanyak  10  ml  media  NA  untuk  bakteri, sedangkan  untuk  fungi  digunakan  media  PDA dimasukkan  ke  dalam  cawan  petri  kemudian dimasukkan  100  μL  mikroba,  mikroba  tersebut diratakan  dengan  drugalsky.  Ekstrak  ( n -heksan, etil asetat, etanol dan air) diteteskan sebanyak 50 µl  dengan  konsentrasi  1000  ppm  pada  masing- masing  kertas  cakram,  kemudian  kertas  cakram tersebut  diletakkan  di  atas  media  agar.  Setelah didiamkan  selama  30  menit,  cawan  diinkubasi pada  suhu  37°C  selama  16-18  jam.  Adanya daerah  bening  di  sekeliling  cakram  kertas menunjukkan  adanya  aktivitas  antibakteri    dan antifungi. Zona bening tersebut diukur diameternya menggunakan penggaris.

## Uji aktivitas antibakteri dan antifungi berbagai variasi konsentrasi pelarut terbaik
Sama  halnya  dengan  uji  aktivitas  antibakteri dan  antifungi  pada  berbagai  pelarut,  hanya  saja ekstrak  yang  diteteskan  ke  dalam  kertas  cakram adalah  ekstrak  yang  berupa  variasi  konsentrasi pelarut dengan zona hambat paling besar. Variasi konsentrasi  yang  digunakan  yaitu  500  ppm,  450 ppm, 400 ppm, 350 ppm, 300 ppm dan 250 ppm.
Uji kandungan senyawa menggunakan pereaksi warna

## Meliputi uji Saponin,tannin dan terpenoid.
Analisis  total  fenol  (Andarwulan  dan  Shetty,

## 1999)
Dibuat  seri  larutan  standar  asam  tanat  dalam etanol  yang  digunakan  sebagai  kurva  standar. Pembuatan  standar  asam  tanat  yaitu  melarutkan asam  tanat  dalam  etanol  95%,  kemudian  dibuat seri  pengenceran  0  ppm,  25  ppm,  50  ppm,  75 ppm,  100  ppm,  dan  125  ppm.  Untuk  analisis sampel,  diambil 1 ml sampel dari masing-masing
pengenceran  dan  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi bersih.  Ditambah 1 ml etanol 95%, 5 ml air bebas ion dan 0,5 ml reagen folin ciocalteau 50% pada  masing-masing  tabung  reaksi.  Divortex  dan didiamkan  selama  5  menit.  Setelah  5  menit ditambah  1  ml  larutan  Na 2 CO 3 5%,  kemudian divortex  dan  disimpan  pada  tempat  gelap  selama 60  menit.  Setelah  diinkubasi  pada  tempat  gelap, sampel divortex kembali dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang 725 nm. Kadar  fenolik  dalam  masing-masing  ekstrak dihitung dengan memasukkan absorbansi sebagai Y  dalam  kurva  baku,  sehingga  diketahui  kadar fenol total dalam ekstrak uji (X)

## Analisis  dengan GC-MS
Alat ini digunakan untuk mengetahui jenis dan kadar  senyawa  bioaktif  dari  ekstrak  daun B. hirtella .

## Analisis data
Kandungan  senyawa  dan  total  fenol  dianalisis secara  deskriptif,  sedangkan  data  aktivitas antibakteri  dan  antifungi  dianalisis  menggunakan analisis  ragam  (Anova),    dilanjutkan  dengan  uji Duncan pada tingkat kepercayaan 95%.

## Hasil dan Pembahasan

## Uji Kandungan  Senyawa bioaktif ekstrak daun

## B. hirtella
Uji  kandungan  senyawa  bioaktif  dilakukan secara  kualitatif  dengan  pereaksi  warna,  dan GCMS. Di samping itu juga ditentukan kadar total fenol.  Hasil  uji    golongan  senyawa  pada  ekstrak dengan  pelarut  yang  berbeda  memberikan  hasil senyawa  yang  berbeda  pula.  Hal  ini  karena senyawa  bioaktif  pada  tanaman  akan  terlarut pada  pelarut  yang  mempunyai  tingkat  kepolaran yang  sama  dengan  senyawa  tersebut.  Menurut Himawan et  al .  (2012)  didasarkan  pada  prinsip like  dissolves  like bahwa  senyawa  yang  bersifat polar  akan  mudah  larut  dalam  pelarut  polar, sedangkan  senyawa  nonpolar  akan  mudah  larut dalam pelarut nonpolar.
Hasil pengamatan kandungan senyawa dengan  pereaksi  warna  diketahui  bahwa  ekstrak etil  asetat,  ekstrak  etanol  dan  ekstrak  air  positif mengandung  senyawa  saponin.  Hal  ini  sesuai dengan  pernyataan  Darsana et  al .  (2012)  bahwa saponin  merupakan  glukosida  yang  larut  dalam pelarut  polar.  Reaksi  Saponin  positif  ditandai dengan  terbentuknya  busa.  Menurut  Marliana et al .  (2005),  apabila  terbentuk  busa  yang  mantap (tidak hilang selama 30 detik) maka menunjukkan adanya saponin.
Ekstrak n -heksan,  etanol  dan  air,  positif mengandung  alkaloid ,  yang  ditandai  adanya endapan  merah  setelah  penambahan  pereaksi Dragendorff. Nagariya et  al .  (2010) menyatakan pada  reaksi  menggunakan  reagen Dragendorf,
dinyatakan  bahwa  ion logam  K + membentuk ikatan kovalen dengan alkaloid sehingga membentuk kompleks kalium-alkaloid yang mengendap.
Senyawa  tanin  bersifat  polar  sehingga  dari hasil  uji  tanin  yang  positif  hanya  pada  ekstrak etanol  dan  ekstrak  air  yang  ditandai  dengan terbentuknya  warna  hijau  kehitaman  setelah ekstrak  diberi  larutan  FeCI 3 .  Sangi et  al .  (2008) menyatakan  tanin  dibagi  menjadi  dua  golongan dan  masing-masing  golongan  memberikan  reaksi warna  yang  berbeda  terhadap  FeCI 3 1  %. Golongan  tanin  hidrolisis  akan  menghasilkan warna  biru  kehitaman  dan  tanin  kondensasi  akan menghasilkan  warna  hijau  kehitaman.  Reaksi antara  FeC1 3 bereaksi  dengan  salah  satu  gugus hidroksil  yang  ada  pada  senyawa  tanin  akan menimbulkan warna. Ekstrak yang positif mengandung  terpenoid  adalah  ekstrak n -heksan dan  ekstrak  etil  asetat,  kedua  ekstrak  tersebut berwarna merah setelah diberi pereaksi Lieberman Buchard .
Selain  dengan  uji  fitokimia,  untuk  mengetahui kandungan senyawa dilakukan dengan menghitung  kadar  total  fenol.  Hasil  uji  kadar  total fenol  tersebut  menunjukkan  golongan  senyawa fenol  lebih  banyak  terekstrak  pada  pelarut  polar dibandingkan  pelarut  semipolar  dan  non  polar. Menurut  Rafsanjani  dan  Putri  (2015)  hasil tersebut  disebabkan  komponen  fenolik  yang bersifat  semipolar  mudah  terekstrak  oleh  etil asetat  yang  mempunyai  konstanta  dielektrik  6,02 sedangkan komponen yang polar mudah terekstrak  oleh  etanol  konstanta  dielektrik  24,30. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  golongan  senyawa fenol  pada  daun B.  hirtella lebih  banyak  yang bersifat polar.
Jenis  senyawa  dalam  ekstrak  telah  diketahui dengan uji GCMS. Ekstrak n -heksan mengandung stigmasterol , campesterol , squalene , gamma sitosterol dan alpha  ergosterol .  Pada  ekstrak  etil asetat  teridentifikasi neophytadiene , stigmasterol , squalene , palmitinic  acid dan gamma  sitosterol . Sedangkan  pada  ekstrak  etanol  mengandung senyawa antara lain ethyl palmitate , palmitic acid , ethyl linolenat dan acetol .

## Uji Antibakteri dan Antifungi
Uji  Antibakteri  dan  antifungi  dilakukan  untuk mengetahui  pengaruh  daun B.  hirtella yang diekstrak  dengan  pelarut n -heksan,  etil  asetat, etanol  dan  air  terhadap  zona  hambat E.  coli , S. aureus dan C.  albicans menggunakan  metode difusi  agar Kirby  Bauer .  Pengujian  menggunakan kertas  cakram  berdiameter  6  mm  yang  telah disterilkan  terlebih  dahulu.  Pada  kertas  cakram tersebut diteteskan ekstrak sebanyak 50 μL. Zona hambat  yang  terbentuk  ditandai  adanya  daerah bening  di  sekeliling  cakram,  besarnya  zona hambat  diketahui  dengan  pengukuran  diameter daerah  bening  tersebut.  Zona  hambat  pada S.
aureus dari  yang  terbesar  hingga  terkecil  yaitu ekstrak  etil  asetat,  ekstrak air,  ekstrak  etanol  dan ekstrak n -heksan.  Sedangkan  pada E.  coli yaitu ekstrak  etil  asetat,  ekstrak  air,  ekstrak n -heksan dan  ekstrak  etanol.  Berbeda  dengan S.  aureus
dan E.  Coli ,  zona  hambat  pada C.  albican terbesar pada ekstrak etil asetat kemudian disusul dengan  ekstrak n -heksan,  ekstrak  etanol  dan ekstrak air (Gambar 1).
Gambar 1. Zona hambat pada uji antimikroba A. S. aureus , B. E. coli ,  C. C. albicans , 1. kontrol positif, 2. kontrol negatif, 3. ekstrak n -heksan, 4. ekstrak etil asetat, 5. ekstrak etanol dan 6. ekstrak air
Kontrol  positif  yang  digunakan  untuk  bakteri adalah  kloramfenikol.  Kloramfenikol  berfungsi sebagai  pembanding  karena  merupakan  jenis antibiotik  yang  memiliki  spektrum  luas terhadap bakteri Gram positif dan Gram negatif.
Kloramfenikol menunjukkan zona hambat terhadap mikroba uji.
Nilai rata-rata  zona hambat pada mikroba uji disajikan  pada  Gambar  2.  Gambar  2.  Menunjuk- kan  bahwa  kloramfenikol  dan  perlakuan  ekstrak
membentuk  zona  hambat.  Zona  hambat  pada kloramfenikol tergolong zona hambat yang sangat kuat.  Menurut  Davis  dan  Stout  (1971),  ketentuan daya  antibiotik  yaitu  daerah  hambatan  20  mm atau  lebih  termasuk  kategori  sangat  kuat,  daerah hambatan  10-20  mm  kategori  kuat,  daerah hambatan  5-10  mm  kategori  sedang  dan  daerah
hamba tan  ≤  5  mm  kategori  lemah.  Perlakuan ekstrak  daun B.  hirtella juga  membentuk  zona hambat dengan spektrum luas sebagai antibakteri yang  ditandai  dengan  terbentuknya  zona  hambat pada bakteri uji.  Zona hambat pada kontrol positif dan  perlakuan  ekstrak  bakteri  uji  tersaji  pada gambar di bawah ini :
Gambar 2. Rata-rata zona hambat pada mikroba S. aureus dan E. coli dengan  perlakuan kloramfenikol, ekstrak n -heksan, ekstrak etil asetat, ekstrak etanol dan ekstrak air.
Besarnya  zona  hambat  pada  uji  aktivitas antimikroba  menunjukkan  bahwa  masing-masing ekstrak dari daun B. hirtella mempunyai kemampuan  penghambatan  yang  berbeda-beda. Hal ini disebabkan oleh kandungan senyawa pada masing-masing  ekstrak  berbeda  sesuai  dengan tingkat  kepolaran  pelarut.  Zona  hambat  pada S. aureus dari  yang  terbesar  hingga  terkecil  yaitu ekstrak  etil  asetat,  ekstrak air,  ekstrak  etanol  dan ekstrak n -heksan.  Sedangkan  pada E.  coli yaitu ekstrak  etil  asetat,  ekstrak  air,  ekstrak n -heksan dan  ekstrak  etanol.  Berbeda  dengan S.  aureus dan E.  coli zona  hambat  pada C.  albicans terbesar pada ekstrak etil asetat kemudian disusul dengan  ekstrak n -heksan,  ekstrak  etanol  dan ekstrak air yang disajikan pada Gambar 3.
Gambar 3.  Rata-rata zona hambat pada mikroba C. albicans dengan perlakuan ketokonazol,  ekstrak n -heksan,  etil asetat, etanol dan air
Diameter  zona  hambat  yang  terbentuk selanjutnya  dianalisis  menggunakan  analisis
ragam.  Hasilnya  menunjukkan  bahwa  masing- masing ekstrak berpengaruh terhadap mikroba uji dengan perbedaan yang nyata (P<0,05).
Selanjutnya dilakukan analisis lanjut menggunakan uji Duncan pada tingkat kepercayaan  95%.  Analisis lanjut dilakukan untuk mengetahui  perbedaan  pada  masing-masing perlakuan.  Hasil  uji  Duncan  disajikan  pada  Tabel 1.
Tabel  1. Nilai  rataan  diameter  zona  hambat  pada perlakuan variasi ekstrak
No  Perlakuan Diameter zona hambat (mm) 1. E1m 1 10,00 ± 0,82 ab 2. E2m 1 13,75 ± 1,26 e 3. E3m 1 11,00 ± 0,00 abc 4. E4m 1 11,75 ± 1,26 bcd 5. E1m 2 10,50 ± 0,58 ab 6. E2m 2 11,75 ± 0,50 bcd 7. E3m 2 10,25 ± 0,50 ab 8. E4m 2 10,75 ± 2,36 abc 9. E1m 3 12,50 ± 1,29 cde 10.  E2m 3 13,00 ± 0,82 de 11.  E3m 3 11,00 ± 1,82 abc 12 E4m 3 9,75 ± 0,96 a
Keterangan: E1= ekstrak n -heksan E2= ekstrak etil asetat E3= ekstrak etanol E4= ekstrak air m 1 = S. aureus m 2 = E. coli m 3 = C. Albicans
Hasil  uji  tersebut  menunjukkan  bahwa  zona hambat  terbesar  adalah  pada S.  aureus yang diberi  ekstrak  etil  asetat,  dengan  diameter  rata- rata zona hambat 13,75 ± 1,26 mm. Zona hambat terkecil  ditunjukkan  pada  mikroba C.  albicans pada  ekstrak  air  dengan  diameter  rata-rata  zona hambat 9,67 ± 0,82 mm. Perbedaan zona hambat dapat  disebabkan  oleh  struktur  dinding  sel  pada mikroba  uji  berbeda-beda.  Struktur  dinding  sel bakteri Gram positif lebih sederhana dibandingkan struktur dinding sel bakteri Gram negatif sehingga memudahkan  senyawa  antibakteri  masuk  ke dalam  sel  dan  menemukan  sasaran  untuk bekerja.  Irianto  (2006)  menyatakan  bakteri  Gram positif  dinding  selnya  terdiri  atas  peptidoglikan, terdapat  asam  teikhoat.  Bakteri  Gram  negatif terdiri  atas  tiga  lapis  yaitu  lapisan  dalam  adalah peptidoglikan  dan  lapisan  luar  terdiri  atas  dua lapisan  yaitu  lipopolisakarida  dan  lipoprotein. C. albicans mempunyai zona hambat terkecil, karena termasuk  organisme  eukariotik  yang  susunan dinding  selnya  lebih  kompleks  dibandingkan dengan bakteri. Hasil tersebut juga didukung oleh pendapat Allison dan Gilbert (2004) dalam Efendi dan  Hertiani  (2013)  perbedaan  aktivitas  terhadap beberapa mikroba disebabkan perbedaan struktur penyusun dinding sel mikroba. Dinding sel bakteri Gram  negatif  memiliki  lapisan  peptidoglikan  yang lebih  tipis  dibandingkan  bakteri  Gram  positif, tetapi  memiliki  lapisan  membran  luar  tambahan yang  lebih  kompleks.  Akibatnya,  secara  umum akan  lebih  sulit  menembus  dinding  sel  bakteri Gram  negatif  daripada  Gram  positif.  Sedangkan struktur  penyusun  dinding  sel C. albicans tersusun dari polisakarida (mannan, glukan, kitin), protein  dan  lipid  dengan  membran  sel  di bawahnya yang mengandung sterol.
Ekstrak  etil  asetat  membentuk  zona  hambat terbesar  karena  etil  asetat  bersifat  semipolar, sehingga senyawa non polar dan polar dapat larut dalam  etil  asetat.  Etil  asetat  mengandung senyawa  antimikroba  yang  mampu  menghambat atau membunuh mikroba lebih tinggi dibandingkan  ekstak  yang  lainnya.  Fitrial et    al . (2008) menyatakan senyawa semi polar mempunyai  afinitas  lebih  tinggi  untuk  berinteraksi dengan  diding  sel,  sehingga  ekstrak  semi  polar lebih  efektif  menghambat  pertumbuhan  bakteri daripada ekstrak etanol, air (polar) dan ekstrak n- heksan (non polar).
Berdasarkan  uji  fitokimia  ekstrak  etil  asetat mengandung  senyawa  saponin.  Saponin  sebagai antibakteri dan antifungi menyebabkan kerusakan protein  dan  enzim  di  dalam  sel.  Saponin  dapat berdifusi  melalui  membran  luar  dan  dinding  sel bakteri yang rentan kemudian mengikat membran sitoplasma sehingga mengganggu dan mengurangi  kestabilan  sel.  Hal  ini  menyebabkan sitoplasma bocor keluar dari sel yang mengakibatkan  kematian  sel  bakteri  (Cavalieri,
2005  dalam  Taufiq et  al .,  2015).  Saponin  bersifat sebagai  surfaktan  yang  berbentuk  polar  akan menurunkan  tegangan  permukaan  membran sterol  dari  dinding  sel C.  albicans, sehingga menyebabkan  gangguan  permeabilitas  membran yang  berakibat  pemasukan  bahan  atau  zat-zat yang  diperlukan  dapat  terganggu  akhirnya  sel membengkak  dan  pecah  (Luning et  al .,  2008 dalam Fitriani et al. , 2013).
Selain  mengandung  saponin  pada  uji  total fenolik,  ekstrak  etil  asetat  juga  mengandung  total senyawa  fenolik  sebanyak  23,530  ml/g.    Fenol berinteraksi dengan protein membentuk kompleks protein  fenol.  Ikatan  antara  protein  dan  fenol adalah ikatan  yang lemah dan segera mengalami peruraian.  Fenol  yang  bebas,  akan  berpenetrasi ke  dalam  sel  bakteri,  menyebabkan  presipitasi dan denaturasi protein.
Fenol dapat
menyebabkan koagulasi protein sehingga membrane  sel  mengalami  lisis  (Juliantina et  al., 2008). Senyawa  fenol  mengganggu  dinding  sel dan  membran,  mengendapkan  protein  dan menonaktifkan  enzim- enzim  (Katzung,  2001). Senyawa  fenol  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri  dengan  cara  koagulasi  protein  dan  lisis membran  sel  bakteri.  Terjadinya  lisis  pada membran  sel  mengakibatkan  kebocoran  pada  sel sehingga metabolit esensial yang dibutuhkan oleh mikroba  keluar  dari  sel  dan  kemudian  fenol  di dalam  sel  akan  merusak  sistem  kerja  sel, merusak membran sitoplasma yang mengakibatkan  terhambatnya  pertumbuhan  sel atau  matinya  sel,  mendenaturasikan  protein, asam-asam  nukleat,  menghambat  sintesis  asam nukleat  dan  protein  (Novianti,  2015). Fenol mempunyai  aktivitas  antibakteri  berspektrum  luas terhadap  bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif (Oliver et  al .,  2001). Mekanisme  senyawa  fenol sebagai  antifungi  yaitu  berinteraksi  dengan dinding sel fungi, dimana pada kadar yang rendah akan mendenaturasi protein dan pada kadar yang tinggi  akan  menyebabkan  koagulasi  protein sehingga  sel  akan  mati  (Siswandono  dan Sukardjo,1995 dalam Lidyawita et al , 2013).
Total  senyawa  fenol  pada  ekstrak  etil  asetat lebih  kecil  bila  dibandingkan  ekstrak  etanol, karena  golongan  senyawa  fenolik  pada  daun B. hirtella lebih banyak yang bersifat polar. Meskipun kandungan  total  fenol  ekstrak  etil  asetat  lebih sedikit  dibandingkan  ekstrak  etanol,  akan  tetapi ekstrak etil asetat ini mempunyai zona penghambatan  terhadap  mikroba  uji  lebih  besar. Hal  ini  menunjukkan  total  senyawa  fenol  ini  tidak sebanding  dengan  aktivitas  antimikroba,  karena ada senyawa-senyawa yang lain yang mempunyai  aktivitas  sebagai  antimikroba  pada ekstrak  etil  asetat  salah  satunya  senyawa neophytadiene.
Neophytadiene merupakan golongan senyawa terpenoid. Terpenoid dapat menghambat pertumbuhan atau mematikan
bakteri dengan mengganggu proses terbentuknya membran  atau  dinding  sel,  sehingga  tidak terbentuk  atau  terbentuk  tidak  sempurna  (Ajizah, 2004).  Selain  itu  Cowan  (1999)  dalam  Amalia et al .  (2014)  menyatakan  bahwa  terpenoid  memiliki aktivitas  antibakteri  dengan  mekanisme  yaitu bereaksi  dengan  porin  (protein  transmembran) pada membran luar dinding sel bakteri membentuk  ikatan  polimer  yang  kuat  sehingga mengakibatkan  rusaknya  porin.  Rusaknya  porin yang merupakan pintu keluar masuknya senyawa akan  mengurangi  permeabilitas  dinding  sel bakteri.  Permeabilitas  dinding  sel  ini  akan mengganggu masuk keluarnya nutrisi dan senyawa  lainnya,  sehingga  pertumbuhan  bakteri terhambat  atau  mati.  Sedangkan  mekanisme kerja  terpenoid  sebagai  antifungi  menurut  Ahmad dan  Gholib  (2013)  yaitu  karena  senyawa terpenoid  ini  larut  dalam  lemak  sehingga  dapat menembus membran sel fungi dan mempengaruhi permeabilitasnya
serta menimbulkan  gangguan  pada  struktur  dan  fungsi membran sel.
Ekstrak  etil  asetat  mempunyai  zona  hambat terbesar sehingga digunakan untuk uji selanjutnya yaitu  uji  variasi  konsentrasi  etil  asetat,  untuk mengetahui pengaruh variasi konsentrasi terhadap  zona  hambat  yang  terbentuk.  Menurut Yunus et  al (2014),  variasi  konsentrasi  ini bertujuan  untuk  melihat  perbedaan  diameter hambat  dari  masing-masing  konsentrasi  yang digunakan. Uji awal variasi konsentrasi menggunakan  variasi  konsentrasi  1000  ppm,  500 ppm,  250  ppm  dan  125  ppm.  Hasil  uji  tersebut diketahui  zona  hambat  masih  terbentuk  pada konsentrasi 500 ppm, sedangkan pada
konsentrasi 250 ppm dan 125 ppm tidak terbentuk zona  hambat.  Berdasarkan  uji  tersebut  maka ditetapkan  variasi  konsentrasi  ekstrak  yang diujikan yaitu antara 500 ppm dan 250 ppm, untuk diketahui konsentrasi ekstrak minimal yang masih bisa menghambat mikroba uji. Variasi konsentrasi yang  digunakan  yaitu  500  ppm,  450  ppm,  400 ppm, 350 ppm, 300 ppm dan 250 ppm.
Hasil uji menunjukkan semakin  besar konsentrasi  ekstrak,  semakin  besar  pula  zona hambat  yang  terbentuk.  Pada  konsentrasi  300 ppm  masih  terbentuk  zona  hambat  sedangkan pada  konsentrasi  250    ppm  tidak  ada  zona hambat  yang  terbentuk,  sehingga  konsentrasi terendah  yang  mampu  menghambat  mikroba  uji adalah 300 ppm. Menurut Nurmahani et al. (2012) dalam  Rakasiwi  dan  Soegiharjo  (2014),  KHM didefinisikan sebagai konsentrasi terendah ekstrak  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan bakteri dalam waktu 24 jam inkubasi.

## Simpulan
Berdasarkan
hasil penelitian dapat disimpulkan bahwa (1). Jenis pelarut ekstrak daun B.  hirtella yang  mempunyai  zona  hambat  terbaik adalah  etil  asetat  pada  bakteri S.  aureus; (2). Konsentrasi  minimal  ekstrak  etil  asetat  yang menunjukkan    terbentuknya  zona  hambat  adalah pada  konsentrasi  300  ppm;  dan  (3).  Kandungan senyawa tertinggi pada ekstrak n -heksan daun B. hirtella adalah  stigmasterol,  ekstrak  etil  asetat adalah  neophytadiene,  dan  ekstrak  etanol  adalah ethyl palmitate.

## Daftar Referensi
Ahmad,  R.  Z  Dan  Gholib  D.  2013.  Pengujian Ekstrak Etanol, Etil asetat dan Minyak Atsiri Daun  Beluntas  ( Pluchea  indica (L)  Lees.) terhadap Trichophyton mentagrophytes dan Cryptococcus  neoformans Secara In  Vitro. Balai Besar Penelitian Veteriner,Bogor.
Ajizah, A. 2004. Sensitivitas
Salmonella typhimurium terhadap Ekstrak Daun Psidium  Guajava  L.  Bioscientie.    1  (1):  31- 38.
Amalia,  S.,  S.  Wahdaningsih  dan  N.  K.  Untari. 2014.    Antibacterial Activity  Testing  of N -
Hexane Fraction of Red Dragon ( Hylocereus polyrhizus Britton & Rose) Fruit Peel  on Staphylococcus  aureus ATCC 25923. Trad. Med.J . 19 (2): 89-94. Andarwulan, N.  dan  K.  Shetty.  1999.  Phenolic Content  in  Differential  Tissue  Culture  of Trasf (Ormed and Agrobacterium-
Transformed  Roots  af  Anise  Pimpinella
anisum  L.).  Journal  of  Agriculture  Food Chemists. 47: 1776-1780.
Darsana,  I  Gede  O.,  I  N.  K.  Besung  dan  H.
Mahatmi.  2012.  Potensi  Daun  Binahong (Anredera  cordifolia  (Tenore)  Steenis) dalam  Menghambat  Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  coli  secara  In  Vitro.  Indonesia Medicus Veterinus. 1 (3): 337 – 351.
Davis,  W.W.  and  Stout,  T.R.  1971.  Disc  plate method  of  microbiological  antibiotic  assay. American  Society  for  Microbiology,  22(4): 659-665
Efendi,  Y.  N.  dan  T.  Hetiani.  2013.  Potensi Antimikroba  Ekstrak  Etanol  Sarang  Semut (Myrmecodia  tuberosa  Jack)  terhadap Candida  albicans,  Escherichia  coli  dan Staphylococcus aureus. Trad.Med.J. 18 (1): 53-58.
Fitrial,  Y.,  M.  Astawan,  S.  S.  Soekarto,  K.  G. Wiryawan,  T.  Wresdiyati  dan  R.  Khairina. 2008.  Antibakteri  Ekstrak  Biji  Teratai (Nymphaea  pubescens  Wild)  terhadap Bakteri  Patogen  Penyebab  Diare.  Jurnal
Teknologi dan Industri Pangan. 19 (2): 158- 164.
Fitriani,  E.,  M.  Alwi.  dan  Umrah.  2013.  Studi Efektivitas Ekstrak  Daun  Sereh  Wangi ( Cymbopogon  nardus L.)  Sebagai  Anti Fungi Candida  albicans. Biocelebes.7  (2): 15-20.
Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia: Penuntun cara modern  menganalisis tumbuhan. Penerbit ITB, Bandung.
Hartutiningsih,  M.  Siregar,  R.  S.  Purwantoro, Sudarmono dan A. Agusta. 2009. Pengungkapan  Potensi  Obat  pada  Tiga Jenis  Begonia  Terpilih  (B.  muricata  Blume, B.  multangula  Blume,  B.  "Bacem  Kebo") melalui  Uji  Antibakteri  Escherichia  coli  dan Staphylococcus  aureus  secara  In  Vitro. Prosiding  Seminar  Nasional  Sains  II,13-15 November, Bogor.
Himawan, H. C., V. Surjana dan L. Prawira. 2012. Karakterisasi  dan  Identifikasi  Komponen Kimia Rimpang Kunyit (Curcuma domestica Val.)  Sebagai  Inhibitor  Bakteri  Patogen. Fitofarmaka. 2 (2): 30-39.
Indrakumar,  I.,  R.  Gomathi  dan  S.  Karpagam. 2014.  Antimicrobial  and  In  vitro  Antioxidant Potential  of  Begonia  dipetala  Graham.  Int. J. Pharm. Sci. Rev. Res. 27 (2): 382-386. Irianto,  K.  2006.  Mikrobiologi  Menguak  Dunia Mikroorganisme  Jilid  1.  Yrama  Widya, Bandung.
Juliantina,  F.,  D.  A.  Citra,  B.  Nirwani,  T. Nurmasitoh dan  E. T. Bowo. 2008. Manfaat Sirih merah (Piper crocatum) sebagai Agen Antibakterial  terhadap  Bakteri  Gram  positif dan  Gram  Negatif.  Jurnal  Kedokteran  dan Kesehatan  Indonesia.  Universitas Islam Indonesia, Yogyakarta
Katzung,  B.  G.  2001 .  Farmakologi:  Dasar  dan Klinik . Diterjemahkan oleh Bagian Farmokologi UNAIR.2004, Salemba
Medika, Jakarta.
Lidyawita,  R.,  Sudarsono  dan  Harsini.  2013. Antifungal Activities of Boiled Cashew  Bark (Anacardium occidentale  L.) on C.  albicans In Acrylic Resin. Trad. Med. J. 18(1):46-52.
Marliana,  S.  D.,  V.  Suryanti  dan  Suyono.  2005.
Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi  Lapis  Tipis  Komponen  Kimia
Buah  Labu  Siam  (Sechium  edule  Jacq. Swartz.)  dalam  Ekstrak  Etanol.  Biofarmasi. 3 (1): 26-31.
Nagariya,  A.  K.,  A.  K.  Meena,  D.  Jain,  B.  P. Gupta,  A.  K  Yadav,  M.  R.  Gupta,  A.  K
Pathak dan Neelam. 2010. Medicinal Plants Used  in  the  Healing  of  Skin  Diseases  in Different  Regions  of  India:  A  Review. International  Journal  of  Chemical  and Analytical Science. 1 (5): 110-113.
Novianti,  D.  2015.  Kemampuan  Daya  Hambat Ekstrak  Buah  Mengkudu  (Morinda  citrifolia) terhadap  Bakteri  Shigella  Dysenteriae. Sainmatika. 12 (1): 1-7.
Oliver,  S.  P.,  B.  E.  Gillespie,  M.  J.  Lewis,  S.  J. Ivey,  R.  A.  Almeida,  D.  A.  Luther,  D.  L. Johnson,  K.  C.  Lamar,  H.  D.  Moorehead dan H. H. Dowlen. 2001. Efficacy of a New Premilking  Teat  Disinfectant  Containing  a Phenolic  Combination  for  the  Prevention  of Mastitis. J. Dairy Sci. 84: 1545-1549.
Rafsanjani,  M.  K.  dan  W.  D.  R.  Putri.  2015.
Karakterisasi  Ekstrak  Kulit  Jeruk  Bali Menggunakan  Metode  Ultrasonic  Bath (Kajian  Perbedaan  Pelarut  dan  Lama Ekstraksi.  Jurnal  Pangan  dan  Argoindustri. 3 (4): 1473-1480.
Rakasiwi,  B.  L.  dan  C.  J.  Soegihardjo.  2014.  Uji
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanolik Daging  Buah  Buni  (Antidesma  bunius  (L.)
Spreng)  terhadap  Staphylococcus  aureus ATCC  25922  dan  Escherichia  coli  ATCC 25923. Jurnal Farmasi Sains dan Komunikasi. 11 (1): 23-31.
Sangi,  M.,  Max  R.  J.  Runtuwene1,  H.  E.  I. Simbala  dan  V.  M.  A.  Makang.  2008. Analisis  Fitokimia  Tumbuhan  Obat  di Kabupaten Minahasa Utara. Chem. Prog. 1 (1): 47-53.
Taufiq,  S.,  U.  Yuniarni  dan  S.  Hazar.  2015.  Uji Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Biji Buah Pepaya ( Carica papaya L.) terhadap Escherichia  coli  dan  Salmonella  thypi. Prosiding Penelitian SPeSIA, Unisba.
Widyawati,  P.  S.,  C.  H.  Wijaya,  P.  S.  Harjosworo dan  D.  Sajuthi.  2010.  Pengaruh  Ekstraksi dan Fraksinasi terhadap Kemampuan Menangkap  Radikal  Bebas  DPPH  (1,1- Difenil-2-  Pikrilhidrazil)  Ekstrak  dan  Fraksi Daun  Beluntas  (Pluchea  indica  Less). Seminar Rekayasa Kimia dan Proses 2010. Universitas Diponegoro, Semarang.
Yunus,  R.  A.  H.  Alimuddin  dan  P.  Ardiningsih. 2014.  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Kulit Buah  Tampoi  (Baccaurea macrocarpa ) terhadap  Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus . JKK. 3 (3): 19- 24.