UJI AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK AIR KULIT PISANG KEPOK (Musa acuminate x Musa balbisiana (ABB cv)) DENGAN METODE ABTS (2,2 azinobis (3-etilbenzotiazolin)-6-asam sulfonat) PADA BERBAGAI TINGKAT

## KEMATANGAN
ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST OF PISANG KEPOK SKIN WATER EXTRACT (Musa acuminate x Musa balbisiana (ABB cv)) WITH ABTS METHOD (2.2 azinobis (3- ethylbenzothiazolin) -6-sulfonic acid) IN VARIOUS LEVELS OF MATURITY
Anggi Pantria Saputri 1 , Indria Augustina 2 , dan Fatmaria 3
Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran, Universitas Palangka Raya, Palangka Raya, Indonesia Email: anggi.pantria.1@gmail.com

## ABSTRAK
Latar  Belakang  :  Radikal  bebas  adalah  molekul  yang  tidak  stabil  dengan  elektron  yang  tidak  berpasangan  dan cenderung  “mencuri”  elektron  dari  atom  lain.  Oleh  karena  itu,  tubuh  memerlukan  suatu  senyawa  antioksidan. Antioksidan  alami  salah  satunya  didapat  dari  buah  pisang  Kepok  sebagai  antioksidan  alami.  Kulit  pisang  Kepok ternyata  memiliki  kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  seperti  flavonoid,  tannin,  saponin,  alkaloid,  kuinon,  dan terpenoid yang memiliki efek sebagai penangkal radikal bebas. Tujuan Penelitian : Untuk mengukur kadar antioksidan kulit  pisang  Kepok  dalam  berbagai  tingkat  kematangan  dan  mengetahui    tingkat  kematangan  yang  paling  efektik menghambat  pembentukan  radikal  bebas.  Metode  :  Metode  maserasi  dengan  konsentrasi  20%,  40%,  60%,  80%,  dan 100%.  Kemudian  dilakukan  uji    menggunakan  reagen  ABTS  dan  diukur  menggunakan  spektrofotometer  untuk mengukur panjang gelombang. Nilai absorbansi digunakan untuk mengukur aktivitas antioksidan dan menentukan nilai IC50. Hasil Penelitian : Nilai IC50 dari tingkat kematangan mentah sebear 60,50, matang sebesar 95,85, dan sangat matang sebesar 68,74.  Kesimpulan : Terdapat aktivitas antioksidan yang berbeda pada berbagai tingkat kematangan dan tingkat kematangan mentah adalah yang paling efektif karena memiliki nilai IC50 sebesar 60,50.
Kata Kunci : Pisang Kepok (Musa acuminate x Musa balbisiana (ABB cv)), radikal bebar, dan antioksidan.

## ABSTRACT
Background:  Free  radicals  are  unstable  molecules  with  unpaired  electrons  and  tend  to  "steal"  electrons  from  other atoms. Therefore, the body needs an antioxidant compound. One natural antioxidant is obtained from Kepok banana as a  natural  antioxidant.  Kepok  banana  peel  turns  out  to  have  secondary  metabolite  compounds  such  as  flavonoids, tannins,  saponins,  alkaloids,  quinones,  and  terpenoids  which  have  effects  as  antidotes  to  free  radicals.  Research Objectives:  To  measure  the antioxidant  levels  of  Kepok  banana  peels  in  various  levels of  maturity  and determine  the level  of  maturity  that  most  effectively  inhibits  the  formation  of  free  radicals.  Method:  maceration  method  with  a concentration  of  20%,  40%,  60%,  80%,  and  100%.  Then  the  test  using  ABTS  reagents  and  measured  using  a spectrophotometer to measure wavelength. Absorbance values  are used to measure antioxidant activity and determine IC50  values.  Results:  The  IC50  value  of  raw  maturity  level  was  60.50,  mature  at  95.85,  and  very  mature  at  68.74. Conclusion: There are different antioxidant activities at various levels of maturity and the level of raw maturity is the most effective because it has an IC50 value of 60.50.
Keywords : Pisang Kepok (Musa acuminate x Musa balbisiana (ABB cv)), Free Radicals, and Antiocidants.

## PENDAHULUAN
Seiring  berkembangnya  teknologi  dan  zaman, sebagian besar masyarakat telah mengalami perubahan gaya  hidup  termasuk  pola  makan  dan  polusi. Perkembangan  zaman  menuntut  makanan  semakin banyak  campuran  bahan-bahan  kimia  dan  proses- proses  pengawetan  agar  tetap  tahan  selama  disimpan. Perubahan  transportasi  juga  memberi  dampak  yang cukup  besar  dilihat  dari  perbedaan  penggunaan transportasi  zaman  dahulu  yaitu  hanya  menggunakan sepeda  maupun  moda  transportasi  tenaga  hewan, sedangkan  zaman  sekarang  semuanya  menggunakan mesin  yang  dapat  menimbulkan  polusi  udara.  Dengan perkembangan tersebut, semakin banyak pula masalah- masalah  yang  timbul  bagi  kesehatan,  salah  satunya adalah  efek  radikal  bebas.  Radikal  bebas  terbentuk  di dalam tubuh secara alamiah sebagai hasil samping dari proses  oksidasi  dan  pembakaran  sel  yang  berlangsung pada  waktu  bernapas,  proses  metabolisme,  dan  pada waktu  berolahraga.  Radikal  bebas  juga  dapat  berasal dari  luar  tubuh  manusia,  yaitu  akibat  paparan  dari polusi yang ada di udara, berupa asap kendaraan, asap rokok,  logam  berat,  bahkan  dari  makanan  dan  juga radiasi sinar matahari. 1
Radikal  bebas  adalah  molekul  yang  tidak stabil  dengan  elektron  yang  tidak  berpasangan. Elektron dalam sebagian besar atom bersifat stabil jika berpasangan,  sedangkan  radikal  bebas  memiliki  satu atom yang tidak berpasangan, mencari sebuah elektron yang  dapat  “dicurinya”  dari  atom  lain.  Hal  ini menyebabkan  reaksi  berantai  yang  memproduksi radikal  bebas  yang  dapat  mengganggu  fungsi  normal sel. Radikal bebas diduga terlibat pada proses penuaan dan  proses  terjadinya  penyakit  tertentu,  seperti  pada beberapa  kanker. 2 Oleh  karena  itu,  tubuh  memerlukan suatu  senyawa  yang  dapat  menangkal  radikal  bebas tersebut, yaitu antioksidan. 3 Mekanisme kerja antioksidan  dalam  menangkal  radikal  bebas  memiliki beberapa  cara  yaitu  bisa  sebagai  mengkatalisir pemusnahan  radikal  di  dalam  sel,  pereduksi, pendonor atom  hidrogen,  pendonor  elektron,  pengkelat  logam dan peredam terbentuknya singlet oksigen. 4
Antioksidan  secara  eksogen  bisa  didapatkan dari  makanan.  Senyawa  fitokimia  ditemukan  pada berbagai  sayuran  dan  buah-buahan.  Senyawa  ini mempunyai  manfaat  bagi  kesehatan,  yang  membuat tubuh  lebih  sehat  dan  lebih  kuat. 3 Antioksidan  dapat menyerap  elektron  ekstra  dari  superoksida,  oleh  sebab itu  menghentikan  pembentukan  rantai  radikal  bebas yang  merusak. 2 Sayuran  dan  buah-buahan  merupakan sumber  antioksidan  penting,  dan  telah  dibuktikan bahwa pada orang yang banyak mengkonsumsi sayuran dan  buah-buahan  memiliki  resiko  yang  lebih  rendah menderita  penyakit  kronis  dibandingkan  dengan  yang kurang mengkonsumsi sayuran dan buah-buahan. Salah satu  buah  yang  mengandung  antioksidan  yaitu  buah pisang. 5
Indonesia  merupakan  salah  satu  negara  yang memiliki  banyak  keanekaragaman  pisang  sehingga menjadikannya  sebagai  salah  satu  negara  pengekspor pisang. 6 Salah  satu  tanaman  pisang  yang  banyak terdapat  di  Indonesia  yaitu  pisang  Kepok  ( Musa acuminate  x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) ).  Secara empiris,  pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa balbisiana  ( ABB cv) )  sendiri  dapat  diolah  menjadi berbagai  macam  makanan  ataupun  bahan  makan.  Di Kalimantan  Tengah  sendiri,  khususnya  di  daerah- daerah,  pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa balbisiana  ( ABB cv) )  dimanfaatkan  tidak  hanya dengan  cara  dimakan  dagingnya  secara  langsung, namun juga diolah menjadi berbagai macam hidangan. Pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana ( ABB cv) )  dapat  diolah  menjadi  berbagai  hidangan yang  berbeda  tergantung  tingkat  kematangannya. Pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana ( ABB cv) )  yang  masih  muda  atau  mentah  biasanya digunakan  masyarakat  sebagai  bahan  dasar  olahan sayur.  Selain  itu,  pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x Musa balbisiana ( ABB cv) ) yang sudah tua juga sering digunakan untuk membuat kripik. Pisang Kepok ( Musa acuminate  x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  yang  sudah matang  bisa  dimakan  langsung  atau  direbus  terlebih dahulu  agar  semakin  lunak,  dan  yang  tersering  adalah dijadikan  hidangan  santai  yaitu  pisang  goreng.  Dari pemanfaatan  buah  daging  pisang  sebagai  makanan, menyisakan  limbah  kulit  pisang  Kepok  ( Musa acuminate  x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) ),  yang  belum dimanfaatkan secara optimal. 7
Telah  banyak  penelitian  mengenai  kulit pisang,  terutama  kandungan  yang  terdapat  di  dalam pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana ( ABB cv) ) yang tentunya sangat bermanfaat bagi tubuh yaitu  air,  abu,  lemak,  protein,  karbohidrat,  serat  kasar, insulin,  antioksidan,  kalsium,  fosfor,  besi,  vitamin  A, vitamin  B,  dan  vitamin  C. 8,9 Pada  sebuah  penelitian yang  dilakukan  sebelumnya,  juga  diketahui  hasil  uji fitokimia  pada  kulit  pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  menunjukkan  bahwa terdapat  senyawa  flavonoid,  tanin,  saponin,  alkaloid, kuinon dan triterpenoid. 10,11 Senyawa-senyawa tersebut merupakan senyawa metabolik sekunder yang sebagian besar memiliki efek sebagai antioksidan. 12

## METODE PENELITIAN

## Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen  laboratoris  berbentuk true  experimental untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  ekstrak  kulit Pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana ( ABB cv) )  dengan  mengunakan  metode  ABTS  dalam berbagai tingkat kematangan.

## Sampel dan Teknik Pengambilan Sampel
Penelitian  ini  terdiri  atas  empat  kelompok tingkat  kematangan  berdasarkan  umur  tanaman  buah
pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana ( ABB cv) )  yaitu  mentah,  masak,  sangat  masak.  Buah pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana ( ABB cv) ) didapat dari kebun pisang di kota Palangka Raya,  Kalimantan  Tengah.  Buah  pisang  Kepok  ( Musa acuminate  x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  yang  telah dipilih  dan  dikelompokkan  kemudian  dipisahkan  dari kulitnya.
Kriteria Inklusi Kulit Pisang Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana ( ABB cv) ) yang masuk kriteria inklusi ialah yang  memiliki  warna  hijau  tua  dengan  tekstur  daging keras  (umur  ±100  hari),  kuning  dengan  tekstur  daging lunak  (umur  ±110  hari),  kuning  kecoklatan  dengan tekstur  daging  lembek  (umur  ±115  hari)  dan  kondisi yang  baik  (tidak  busuk).  Pisang  langsung  dipanen sesuai  pada  usia  98  hari.  Kemudian  pengerjaan penelitian  di  mulai  saat  usi  pisang  100  hari.  Pada tingkat  kematangan  matang  dan  sangat  matang  pisang ditunggu  agar  mencapat  tingkat  kematangan  yang diinginkan.  Penghitungan  umur  pisang  dimulai  saat bunga dari jantung pisang terbuka semua.
Kriteria Eksklusi
Kulit Pisang Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana  ( ABB cv) )  yang  masuk  kriteria  eksklusi ialah yang memiliki warna kehitaman dan kondisi yang tidak baik (busuk).

## Variabel Penelitian
Variabel  bebas  dalam  penelitian  ini  meliputi ekstrak  air  kulit  pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  konsentrasi  20%,  40%, 60%, 80%, dan 100%.
Variabel  terikat  dalam  penelitian  ini  adalah kandungan  antioksidan  dalam  menghambat  radikal bebas.
Definisi Operasional
Ekstrak  kulit  buah  pisang  kepok  ( Musa acuminate x Musa balbisiana ( ABB cv) ) dibuat dengan metode maserasi menggunakan pelarut air dengan cara diblender  dan  direndam  di  dalam  aquades,  kemudian disaring dengan corong Buchner, kemudian dipekatkan menggunakan rotary vacuum evaporator , lalu diencerkan  dan  dijadikan  sebagai  konsentrasi  100%. Untuk  membuat  konsentrasi  80%  dibuat  dengan mengencerkan  konsentrasi  100%  ditambah  aquades sebanyak  20%  dari  berat  ekstrak,  untuk  membuat konsentrasi 60% dibuat dengan mengencerkan konsentrasi  100%  ditambah  aquades  sebanyak  40% dari  berat  ekstrak,  untuk  membuat  konsentrasi  40% dibuat  dengan  mengencerkan  konsentrasi  100% ditambah  aquades  sebanyak  60%  dari  berat  ekstrak, dan  untuk  membuat  konsentrasi  20%  dibuat  dengan mengencerkan  konsentrasi  100%  ditambah  aquades sebanyak 80% dari berat ekstrak .

## Alat dan Bahan Penelitian
Alat  yang  digunakan  yaitu  timbangan,  gelas beaker,  corong  Buchner,  kertas  saring,  blender, maserator,  labu  ukur,  pipet  dan micropipet , Rotary
vacuum  evaporator ,  kuvet  dan  spektrofotometer  UV- Vis.  Bahan  yang  digunakan  yaitu  kulit  pisang  Kepok ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) ), alkohol  97%,  ABTS,  Kalium  Persulfat,  air  aquades, aqua deionisasi, dan Vitamin C.

## Pengambilan Umbi Bawang Suna
Sampel yang diambil yaitu kulit pisang Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana ( ABB cv) ) dengan berbagai  tingkat  kematangan  yaitu  mentah,  matang, dan  sangat  matang,  kemudian  dipisahkan  dari dagingnya sesuai dengan tingkat kematangan, lalu kulit pisang  tersebut  akan  ditimbang  masing-masing kelompok yaitu 100g.

## Ekstraksi Tumbuhan
Pelarut  yang  digunakan  pada  ekstraksi  isi adalah  air,  karena  air  memiliki  sifat  kelarutan  yaitu polar . Metode  ekstraksi  dengan  cara  maserasi  dipilih karena  metode  ini  tidak  akan    merusak  senyawa metabolit sekunder yang ada. 6
1. Kulit  pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa balbisiana  ( ABB cv) )  dipisahkan  dari  dagingnya kemudian  bersihkan  dengan  air  dan  disterilkan menggunakan alkohol 97%.
2. Kulit  pisang  Kepok ( Musa  acuminate  x  Musa balbisiana ( ABB cv) ) dipotong menjadi beberapa bagian kecil.
3. Masing-masing  kelompok  yang  telah  dihaluskan dengan  blender  tadi  kemudian  direndam  dengan aquades.
4. Ekstrak  yang  didiamkan  selama  1x24  jam kemudian  disaring  dengan  corong  Buchner,  hasil filtratnya  kemudian  dipekatkan  dengan rotary vacuum evaporator dan diulang sebanyak 2x.
5. Hasil  dari  2  maserasi  kemudian  digabungkan, diencerkan  dengan  aquades  untuk  mendapatkan konsentrasi 20%, 40%, 60%, 80% dan 100%.
Metode  ABTS  (2,2  azinobis  (3-etilbenzotiazolin)-6- asam sulfonat)
1. Pembuatan  Larutan  Kalium  persulfat  :  Kalium persulfat  ditimbang  3,5  mg  dilarutkan  dengan  air 5 mL.
2. Pembuatan  Larutan  ABTS  :  ABTS  ditimbang sebanyak  18  mg,  kemudian  dilarutkan  dalam  5 mL aqua deionisasi.
3. Pembuatan Larutan Stok ABTS : Sebanyak 5 mL ABTS  ditambahkan  dengan  5  mL  larutan  kalium persulfat  dan  cukupkan  volume  sampai  25  mL dengan  air,  kemudian  diinkubasi  dalam  ruang gelap suhu 22-24 o C selama 12-16 jam.
4. Pembuatan  Larutan  Kontrol  Vitamin  C  :  10  mg vitamin  C  murni  dilarutkan  dalam  10  mL kemudian ditambahkan air hingga batas.
5. Uji Aktivitas Antioksidan Metode ABTS :
a. Penentuan Panjang Gelombang Maksimal Larutan  ABTS  dipipet  sebanyak  1  mL kemudian  dimasukkan  ke  dalam  labu
tentukur  5  mL    dan  dicukupkan  dengan aquades  sampai  garis  batas.  Serapan  diukur dengan spektrofotomoter UV-Vis yang telah diatur  panjang  gelombangnya  dari  400-800 nm  hingga  diperoleh  panjang  gelombang maksimum.
b. Pengukuran Serapan Larutan Blanko ABTS Stok  ABTS  dipipet  sebanyak  1  mL kemudian  dimasukan  kedalam  lalu  tentukur 5mL  lalu  dicukupkan  dengan  air  sampai garis  batas.  Selanjutnya  larutan  diinkubasi selama 15 menit dan diukur serapan dengan spektrofotometri pada  panjang  gelombang 734nm.
c. Pengujian Larutan Ekstrak Masing-masing ekstrak dipipet sebanyak 0,1
mL,  kemudian  ditambahkan  2  mL  larutan stok ABTS. Selanjutnya diinkubasi selama 6 menit dan diukur serapan dengan spektrofotometri  pada  panjang  gelombang 734 nm.
d. Pengujian Larutan Vitamin C Larutan  vitamin  C  dipipet  30  μl  kemudian ditambahkan  1  mL  larutan  ABTS  dan dicukupkan volumenya sampai 5 mL dengan air. Kemudian ukur serapan dengan spektrofotometer  pada  panjang  gelombang 734nm.
Persentasi  perhitungan  ABTS  menggunakan rumus :
𝐴𝑘𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 𝐴𝑛𝑡𝑖𝑜𝑘𝑠𝑖𝑑𝑎𝑛 = (Abs blanko − Abs sampel) x 100% Abs blanko Perhitungan Nilai IC 50 Kemampuan  antioksidan  umumnya  diukur berdasarkan nilai IC 50 , dimana IC 50 ini menggambarkan besarnya  konsentrasi  suatu  senyawa  yang  mampu menghambat  radikal  bebas  sebanyak  50%.  Nilai  IC 50 diperoleh melalui persamaan regresi garis linier y=ax + b, dengan variable y bernilai 50 dan nilai x adalah IC 50 .

## Cara Pengolahan Data dan Analisis Data
Analisis  data  yang  digunakan  yaitu  metode deskriptif.  Data  yang  diperoleh  akan  selanjutnya  diuji normalitas  dengan  menggunakan  SPPS,  kemudian dilanjutkan dengan menggunakan one way anova untuk menguji perbedaan seri larutan konsentrasi dan tingkat kematangan terhadap nilai IC 50 antioksidan .

## HASIL
Hasil Rendemen
Berdasarkan hasil penelitian diperoleh rendemen  ekstrak  air  kulit  pisang  Kepok  ( Musa acuminate x Musa balbisiana ( ABB cv) ) sebesar 25%. Hasil Fitokimia Berdasarkan  hasil  uji  fitokimia  kuantitatif terlihat  bahwa  ekstrak  air  kulit  pisang  Kepok  ( Musa acuminata  x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  mengandung saponin,  alkaloid,  flavonoid,  steroid,  tanin  dan
terpenoid.  Kandungan  terbanyak  yang  ada  pada  kulit pisang  Kepok  adalah  terpenoid,  diikuti  oleh  steroid, alkaloid, saponin, flavonoid, dan tanin.

## Hasil Uji Aktivitas Antioksidan
Ekstrak  kulit  pisang  Kepok  ( Musa  acuminate x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  kemudian  diuji menggunakan ABTS dan diukur dengan spektrofotometer.  Hasil  pengukuran  dapat  dilihat  pada Tabel 5.1.
Tabel  5.1  Hasil  Rata-rata  Absorbansi  Sampel Ekstrak Kulit Pisang Kepok
No. Kel. Sampel X Absorbansi ± SD 100 80 60 40 20 1. Kulit Pisang Mentah 0,040± 0,024 0,051± 0,002 0,060± 0,002 0,087± 0,000 0,122± 0,007 2. Kulit Pisang Matang 0,074± 0,024 0,062± 0,005 0,046± 0,001 0,030± 0,001 0,020± 0,000 3. Kulit Pisang Sangat Matang 0,104± 0,005 0,083± 0,004 0,041± 0,005 0,041± 0,001 0,021± 0,002 4. Blanko 0,143±0,000 5. Kontrol (+) 0,003±0,000 Selanjutnya  dilakukan  penghitungan  persen inhibisi untuk menentukan parameter aktivitas antioksidannya.  Aktivitas  antioksidan  menunjukkan kemampuan  suatu  antioksidan  dalam  menghambat radikal  bebas  yang  dinyatakan  dalam  bentuk  persen (%). Pada penelitian ini didapatkan persentase aktivitas antioksidan seperti pada Tabel 5.2.
Tabel 5.2 Hasil Rata-rata Uji Aktivitas Antioksidan
No Kel. Sampel X Aktivitas Antioksidan (%) ± SD 100 80 60 40 20 1. Kulit Pisang Mentah 72,02 ± 2,962 64,33 ± 1,979 58,04 ± 1,979 39,16 ± 0,000 14,68 ± 4,956 2. Kulit Pisang Matang 48,25 ± 2,983 56,64 ± 3,959 67,83 ± 0,989 79,02 ± 0,494 86,01 ± 0,000 3. Kulit  Pisang Sangat Matang 27,27 ± 3,952 41,95 ± 2,962 55,94 ± 3,959 71,32 ± 0,494 85,31 ± 1,400 4. Kontrol (+) 97,90 ± 0,000
Data  yang  tersedia  dilakukan  uji  normalitas dan uji homogenitas. Pada uji normalitas Shapiro-Wilk didapatkan hasil p > 0,05 yaitu data terdistribusi secara normal  sehingga  dapat  menggunakan  uji  parametrik. Kemudian  pada  uji  homogenitas  didapatkan  hasil  p  < 0,05 yaitu data tidak sama atau homogen. Uji hipotesis dilakukan dan didapatkan hasil p (p value) < 0,05. Nilai tersebut  menandakan  bahwa  hipotesis  diterima  karena nilai p bermakna.
Gambar  5.1  Kurva  Regresi  Linier  Ekstrak  Air Kulit Pisang Kepok Mentah
Dari  gambaran  kurva  di  atas  diperoleh persamaan regresi  pada  ekstrak  air  kulit pisang  Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana ( ABB cv) ) mentah adalah  y  =  0,0993x  +  7,691,  kemudian  dilakukan perhitungan untuk menentukan IC 50 . Adapun hasil nilai IC 50 yang  diperoleh  dari  persamaan  regresi  linier ekstrak  air  kulit  pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  mentah  adalah  sebagai berikut : y = ax + b y = 0,0993x + 7,691 50 = 0,0993x + 7,691 x = 60,5019305 = 60,50
Berdasarkan  perhitungan  di  atas,  nilai  IC 50 pada  ekstrak  air  kulit  pisang  Kepok  mentah  adalah sebesar 60,50.

## Gambar  5.2  Kurva  Regresi  Linier  Ekstrak  Air Kulit Pisang Kepok Matang
Dari  gambaran  kurva  di  atas  diperoleh persamaan regresi  pada  ekstrak  air  kulit pisang  Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana ( ABB cv) ) matang adalah y = -0,4895x + 96,92. Dari hasil persamaan ini regresi  ini  kemudian  dilakukan  perhitungan  untuk menentukan  IC 50 .  Adapaun  hasil  nilai  IC 50 yang diperoleh dari persamaan regresi linier ekstrak air kulit pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana ( ABB cv) ) matang adalah sebagai berikut : y = ax + b y = -0,4895x + 96,92 50 = -0,4895x + 96,92
x = 95,85291113 = 95,85
Berdasarkan  perhitungan  di  atas,  nilai  IC 50 pada ekstrak air kulit pisang Kepok ( Musa acuminate x Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  matang  adalah  sebesar 95,85.
Gambar  5.3  Kurva  Regresi  Linier  Ekstrak  Air Kulit Pisang Kepok Sangat Matang
Dari  gambaran  kurva  di  atas  diperoleh persamaan regresi  pada  ekstrak  air  kulit pisang  Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana ( ABB cv) ) sangat matang  adalah  y  =  -0,7272x  +  99,993.  Dari  hasil persamaan  ini  regresi  ini  kemudian  dilakukan perhitungan  untuk  menentukan  IC 50 .  Adapaun  hasil nilai  IC 50 yang  diperoleh  dari  persamaan  regresi  linier ekstrak  air  kulit  pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  sangat  matang  adalah sebagai berikut : y = ax + b y = -0,7272x + 99,993 50 = -0,7272x + 99,993 x = 68,74724972 = 68,74
Berdasarkan  perhitungan  di  atas,  nilai  IC 50 pada  ekstrak  air  kulit  pisang  Kepok  sangat  matang adalah sebesar 68,74.

## PEMBAHASAN
Proses maserasi pada penelitian ini menggunakan  pelarut  air.  Pelarut  air  akan  menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang akan mengandung  zat  aktif.  Zat  aktif  akan  larut  dengan adanya  perbedaan  konsentrasi  antara  larutan  aktif  di dalam  sel  dengan  yang  di  luar  sel,  maka  larutan  yang pekat  akan  didesak  keluar. 13 Pemilihan  pelarut  air sebagai  pelarut  pada  tahap  ini  didasarkan  karena pelarut  air  karena  titik  didihnya  lebih  rendah  dari  titik didih  zat  aktif,  tidak  bersifat  toksik,  dan  bersifat  polar maka  pelarut  air  dapat  memudahkan  dalam  menarik senyawa-senyawa  yang  terkandung  dalam  kulit  pisang yang  nantinya  dibutuhkan  dalam  uji  aktivitas antioksidan. 14 Hasil yang didapatkan berupa filtrat cair langsung  diuapkan  menggunakan rotary  evaporator dengan suhu terjaga sekitar 70 o C selama 18 jam. Hasil
y = 0.6993x + 7.691 r² = 0.9229 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60
80 100 120
A k ti v it a s A n ti o k si d a n ( % ) Konsentrasi (%) Hubungan  Antara Persen (%) Aktivitas Antioksidan  Pisang Kepok Mentah dengan Konsentrasi Ekstrak Air Kulit Pisang Mentah y = -0.4895x + 96.92 r² = 0.9943 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 120 A k ti v it a s A n ti o k si d a n ( % ) Konsentrasi (%) Hubungan  Antara Persen (%) Aktivitas Antioksidan  Pisang Kepok Matang dengan Konsentrasi Ekstrak Air Kulit Pisang Matang y = -0.7272x + 99.993 r² = 0.9998 0 20 40 60 80 100 0 20 40 60 80 100 120
A k ti v it a s A n ti o k si d a n ( % ) Konsentrasi (%)
Hubungan  Antara Persen (%) Aktivitas Antioksidan  Pisang Kepok Sangat Matang dengan Konsentrasi Ekstrak Air Kulit Pisang Sangat
Matang
dari  proses  penguapan  menyisakan  ekstrak  cair sebanyak 250ml.
Ekstrak  air  kulit  pisang  Kepok  ( Musa acuminate  x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  kemudian diuji  menggunakan  larutan  ABTS.  ABTS  merupakan suatu  radikal  yang  dapat  diproduksi  dengan  cara oksidasi kalium persulfat (K 2 S 2 O 8 ) sebelum penambahan  antioksidan.  ABTS    merupakan  radikal dengan pusat nitrogen dengan karakteristik warna biru- hijau, ketika tereduksi oleh antioksidan menjadi bentuk nonradikal yang tidak berwarna. 15 Aktivitas antioksidan  bahan  alam  pada  metode  ABTS  seperti karotenoid  dan  senyawa  fenolik  dapat  diukur berdasarkan  penghilangan  warna  ( decolorization )  dari ABTS,  yaitu  mengukur  serapan  pengurangan  radikal kation dengan spektrofotometer pada panjang gelombang
734 nm
sebagai persentase penghambatan. 16 Hasil pengujian ekstrak air kulit pisang Kepok ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  untuk melihat aktivitas antioksidan secara kuantitatif dilakukan  dengan  cara  mencari  nilai  absorbansi  dari setiap  sampel  larutan  uji.  Nilai  absorbansi  didasarkan pada pengurangan radikal kation setelah proses reduksi oleh antioksidan dari ekstrak kulit pisang Kepok ( Musa acuminate  x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) ). 16 Radikal bebas yang terbentuk oleh proses oksidasi oleh Kalium persulfat akan bergabung dan terikat dengan antioksidan  dengan  pendonoran  atom  hidrogen  dari antioksidan.  Senyawa  yang  diduga  berpean  besar dalam  proses  pendonoran  atom  hidrogen  adalah senyawa  terpenoid,  dimana  golongan  terpenoid memdonasikan  atom  hidrogen  dan  berikatan  dengan senyawa  radikal  bebas  untuk  membuatnya  menjadi lebih  stabil  dan  tidak  reaktif. 17 Nilai  absorbansi  yang didapat  dari  setiap  konsentrasi  kemudian  digunakan untuk  mencari  persen  inhibisi  untuk  menentukan  nilai IC 50 .
Berdasarkan  hasil  penelitian  diketahui  bahwa pada  tingkat  kematangan  mentah  didapatkan  hasil semakin  besar  konsentrasi  maka  semakin  besar  pula persen  inhibisi  terhadap  radikal  bebas.  Sedangkan untuk  tingkat  kematangan  matang  dan  sangat  matang berbanding  terbalik,  dimana  semakin  kecil  konsentrasi maka  semakin  besar  persen  inhibisi  terhadap  radikal bebasnya.  Secara  spesifik  suatu  senyawa  dikatakan memiliki  aktivitas  antioksidan  yang  sangat  kuat  jika nilai  IC 50 -nya  <  50,  kuat  jika  IC 50 -nya  50-100,  sedang jika  nilai  IC 50 -nya  101-150,  lemah  jika  nilai  IC 50 -nya 151-200, dan sangat lemah jika nilai IC 50 -nya >200. Selanjutnya  parameter  IC 50 digunakan  untuk menentukan  kekuatan  antioksidan  dari  kulit  pisang Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana ( ABB cv) ). Nilai IC 50 ini diperoleh melalui persamaan regresi garis linier  y=  ax  +  b,  dengan  variabel  y  merupakan  suatu tetapan  bernilai  50  dan  x  adalah  nilai  IC 50 .  Pada penelitian  ini  didapatkan  hasil  nilai  IC 50 ekstrak  air
kulit  pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa balbisiana  ( ABB cv) )  mentah  sebesar  60,50,  matang sebesar  95,85,  dan  sangat  matang  sebesar  68,74,  yang diartikan  sebagai  ketiga  tingkat  kematangan  dari  kulit pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana ( ABB cv) )  tersebut  menunjukan  golongan  antioksidan kuat.
Kemampuan  senyawa  metabolik  sekunder sebagai antioksidan bergantung pada susunan konfigurasi,  substansi,  dan  jumlah  kelompok  hidroksil yang  dapat  mempengaruhi  mekanisme  aktivitas antioksidan.  Konfigurasi  hidroksil  cincin  menentukan kemampuan  meredam  ROS  dan  RNS.  Senyawa metabolit  sekunder  dapat  memberi  hidrogen  dan elektron  pada  hidroksil,  peroksil,  dan  radikal hidroperoksil yang akan menstabilkan radikal bebas. 18 Perbedaan  nilai  IC 50 dari  tiap  tingkat kematangan  dapat  dipengaruhi  oleh  berbagai  faktor, antara  lain  suhu,  lingkungan,  sinar  matahari,  proses fisiologis  dan  biologi  dari  pisang.  Peran  fisiologis  dan biologi  mengambil  peran  paling  besar  dalam terbentuknya  kandungan  di  dalam  pisang.  Proses fisiologi  pisang  dapat  dilihat  dari  proses  pematangan melalui  tiga  tahap  yaitu  pra-klimakterik,  klimakterik, dan penuaan ( senescence ). 19
Pada  penelitian  sebelumnya  dijelaskan  bahwa pada proses awal proses pematangan pisang (tahap pra- klimakterik) terjadi peningkatan respirasi, pemebentukan  pati  yang  telah  mencapai  maksumum, dan  sebagian  besar  tannin  telah  terurai  menjadi senyawa eter aromatic dan fenol. 20 Agen aktif termasuk senyawa  metabolit  sekunder  seperti  terpenoid,  dan steroid  banyak  terdapat  di  kulit  pisang  pada  kulit pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana ( ABB cv) ) mentah 21 yang lebih larut dalam air, namun menjadi  tidak  aktif  pada  kulit  pisang  Kepok  ( Musa acuminate  x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  matang, 22 sedangkan berbanding terbalik pada pelarut etanol yang menunjukkan  hasil  bahwa  tingkat  kulit  pisang  Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana ( ABB cv) ) mentah memiliki  kandungan  senyawa  fenolik  lebih  sedikit dibandingkan  kulit  pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  matang  karena  sifat kelarutan  senyawanya, 23 inilah  yang berpengaruh pada tingginya kadar senyawa fenolik, karena senyawa fenol yang bersifat asam dan melepaskan ion H + . 19
Pada tingkat kematangan matang, kulit pisang Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana ( ABB cv) ) secara  fisiologis  dan  biologis  sedikit  berbeda  dengan mentah,  karena  dalam  keadaan  matang  proses klimakterik  berlangsung  terjadi  peningkatan  produksi gas  etilen,  keadaan  ini  yang  menyebabkan  perbedaan kadar  senyawa  metabolit  yang  terdapat  dalam  kulit pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa  balbisiana ( ABB cv) ). 20 Pada kulit pisang Kepok ( Musa acuminate x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  dengan  tingkat kematangan  sangat  matang,  sebenarnya  sudah  mulai terjadi penurunan metabolisme, sehingga hasil
akhirnya  menyebabkan  kualitas  dan  kandungan senyawa didalamnya pun juga berkurang. Namun pada puncak  proses  klimakterik  sampai  awal senescence, senyawa  fenolik  masih  banyak  terdapat  dalam  sel-sel, sebelum  akhirnya  akan  teroksidasi  oleh  enzim fenoloksidase  sehingga  menghasilkan  pigmen  melanin pada  kulit  pisang  Kepok  (kuning  dengan  bercak kecoklatan). 19 Faktor-faktor  tersebut  mempengaruhi  dari keadaan biologi dan kimiawi dari kulit pisang tersebut, sehingga  terjadi  perubahan-perubahan  dari  kandungan senyawa  metabolit  sekunder.  Berdasarkan  hasil penelitian,  tingkat  kematangan  yang  paling  efektif dalam  menghambat  radikal  bebas  adalah  kulit  pisang Kepok ( Musa acuminate x Musa balbisiana ( ABB cv) ) dengan tingkat kematangan mentah yang memiliki nilai IC 50 sebesar 60,50 dan tergolong antioksidan kuat.

## KESIMPULAN
Kesimpulan dari hasil penelitian ini yaitu :
1. Ekstrak air kulit pisang Kepok ( Musa acuminate x Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  dalam  berbagai tingkat kematangan memiliki aktivitas antioksidan  dalam  menghambat  radikal  bebas melalui  metode  ABTS (2,2  azinobis  (3- etilbenzotiazolin)-6-asam sulfonat).
2. Tingkat  kematangan  yang  paling  efektif  dalam menghambat radikal bebas melalui metode ABTS (2,2 azinobis (3-etilbenzotiazolin)-6-asam sulfonat) adalah  kulit  pisang  Kepok  ( Musa acuminate  x  Musa  balbisiana  ( ABB cv) )  dengan tingkat  kematangan  mentah  yang  memiliki  nilai IC 50 sebesar 60,50.

## SARAN
Pada penelitian selanjutnya diharapkan :
1. Peneliti  dapat  mengembangkan  penelitian  ini dengan  menerapkan  pada  hewan  coba  seperti tikus atau mencit.
2. Melanjutkan penelitian menggunakan kulit pisang Kepok sebagai produk sunscreen atau sunblock . 3. Melakukan penelitian terhadap kandungan senyawa  metabolit  sekunder  secara  spesifik  yang dapat digunakan sebagai antiaging.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Parwata  IMOA.  Bahan  Ajar  Uji  Bioaktivitas [Internet].  Bali:  Kimia  Terapan  Universitas Udayana;  2015.  1-51  p.  Available  from: https://simdos.unud.ac.id/uploads/file_pendidikan _dir/463d30c83d76f1ea8231c896adeb39e0.pdf
2. Silverthorn  DU.  Fisiologi  Manusia :  Sebuah Pendekatan  Terintegrasi.  6th  ed.  Octavius  H, editor. Jakarta: EGC; 2013. 779 p.
3. Halliwell  B. Oxidative  stress,  nutrition  and health.
Experimental
strategies
for optimization of nutritional antioxidant intake in humans. Free Radic Res . 1996;25 (1):57–74.
4. Puspitasari  ML,  Wulansari  TV,  Widyaningsih TD,  Maligan  JM,  Nugrahini  NIP.  Aktivitas Antioksidan  Suplemen  Herbal  Daun  Sirsak  ( Annona  muricata  L .)  dan  Kulit  Manggis  ( Garcinia  mangostana  L .):  Kajian  Pustaka.  J Pangan Dan Agroindustri. 2016;4(1):283–90.
5. Supriyanti  FMT,  Suanda  H,  Rosdiana  R. Pemanfaatan  Ekstrak  Kulit  Pisang  Kepok ( Musa  bluggoe )  Sebagai  Sumber  Antioksidan Pada  Produksi  Tahu.  Dep  Pendidik  Kim FPMIPA Bandung. 2015;393–400.
6. Adhayanti  I,  Abdullah  T,  Romantika  R.  Uji Kandungan  Total  Polifenol  Dan  Flavonoid Ekstrak  Etil  Asetat  Kulit  Pisang  Raja  ( Musa paradisiaca  var.  sapientum ).  Media  Farm. 2018;14(1):146–52.
7. Atun  S,  Arianingrum  R,  Handayani  S, Rudyansah,  Garson  M.  Identifikasi  dan  Uji Aktivitas  Antioksidan  Senyawa  Kimia  dari Ekstrak  Metanol  Kulit  Buah  Pisang  Kepok ( Musa  paradisiaca  Linn. ).  Indones  Jorrnal Chem. 2007;7(1):83–7.
8. Puspitasari  S,  Syauqy  A.  Pengaruh  pembeian Pisang  Kepok  ( Musa  paradisiaca  forma typical )  Terhadap  Kadar  Malondialdehyde (MDA)  Tikus  Sprague  Dawley  Pra-Sindrom Metabolik. J Nutr Coll. 2015;4(2):314–22.
9. Munadjim.  Teknologi  Pengolahan  Pisang.  3rd ed. Jakarta: PT Gramedia; 1988.
10. Sihotang  YM.  Karakterisasi  dan  Skrining Fitokimia  Serta  Uji  Efek  Antidiare  Ekstrak Kulit Pisang Kepok ( Musa v paradisiaca ABB ) pada  Tikus  Putih  Jantan  ( Rattus  norvegicus ). Universitas Sumatera Utara; 2014.
11. Saraswati  FN.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  96%  Limbah  Kulit  Pisang Kepok  Kuning  ( Musa  Balbisiani )  Terhadap Jerawat  Penyebab  Jerawat  ( Stapylococcus epidermidis, Stapylococcus aureus dan Propionibacterium acne ). UIN Syarif Hidayatullah Jakarta; 2015.
12. Zhang YJ, Gan RY, Li S, Zhou Y, Li AN, Xu DP,  et  al. Antioxidant  Phytochemicals  for  the
Prevention and Treatment of Chronic Diseases. Molecules . 2015;20(12):21138–56.
13. Miller  NJ,  Sampson  J,  Candeias  LP,  Bramley PM,  Rice-Evans  CA. Antioxidant  Activities  of Carotenes  and  Xanthophylls. FEBS  Lett. 1996;384(3):240–2.
14. Fiedor  J,  Burda  K. Potential  role  of carotenoids  as  antioxidants  in  human  health and disease. Nutrients. 2014;6(2):466–88. 15. Emad  AS. Antioxidant  Compound,  Assays  of Determination  and  Mode  of  Action. Egypt:
African Journal of Pharmacy
and Pharmacology. 2013; 7 (10). 528-539 p.
16. Mastuti  W.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Metanol  Buah  Naga  Merah  ( Hylocereus polyrhius  ( F.A.C Weber)Britton  &  Rose )  Hasil Maserasi  dan  Dipekatkan  Dengan  Kering
Angin. Kediri: Jurnal Wiyata. 2016; 3 (2).
17. Gordon  MH. The  Mechanism  of  Antioxidant Action  In  Vitro. UK:  Departemen  of  Food
Science and Technology, Whiteknights. 1990.
18. Amic  D,  Amic  DD,  Beslo  D,  Trinajstic  N.
Structure-Radical Scavenging Activity
Relationships  of  Flavonoids. Croat  Chem  Acta. 2003;76(1):55–61.
19. Nurmin,  Sri  MS,  Irwan  S.  Penentuan  Kadar Natrium  (Na)  dan  Kalium  (K)  dalam  Buah Pisang  Kepok  ( Musa  acuminate  x  Musa balbisiana  ( ABB cv) )  Berdasarkan  Tingkat Kematangan.  Palu  :  J.  Akademia  Kim.  2018;  7 (3).
20. Ratnawati  LD,  Hanafi.  Aktivitas  Antioksidan Selama  Pematangan  Buah  Biji  ( Psidium guajava L., ). Bogor : Warta Akab. 2009; 22.
21. Swaraswati  FN.  Uji  Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak  Etanol  90%  Limbah  Kulit  Pisang Kepok  Kuning  ( Musa  balbisiani )  Terhadap Bakteri  Penyebab  Jerawat  ( Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, dan Propionibacterium acne ). Jakarta : Skripsi UIN Syarrif Hidayatullah. 2015.
22. Pereira  A,  Maraschin  M. Banana  (Musa  spp) from  peel  to  pulp  :  ethnooharmacology,  source of  bioactive  compounds  and  its  relevance  for human  health .  Inggris  :  J  Ethnopharmacol. 2015; 160.
23. Allikha  BM,  Siti  NK,  Tauafik  NH,  Umar  HA.
Pembuata  Kopi  dari  Kulit  Pisang  Kepok  ( Musa paradisiaca Linn ) dan Aktivitas
Antioksidannya. Semarang : Jurnal Ilmu Pangan dan Hasil Pertanian. 2019; 3.