## AKTIVITAS ANTIBAKTERI  -GUAIENE MINYAK NILAMTERHADAP BAKTERI ESCHERICIA COLI DAN PSEUDOMONAS AERUGINOSA
Antibacterial Activity of  -guaiene Patchouli Oil on Eschericia
coli and Pseudomonas aeruginosa
Sekar Widyaningrum 1)* Sarifah Nurjanah 1 Elazmanawati Lembong 2
1 Jurusan Teknik Pertanian Universitas Padjadjaran
2 Jurusan Teknologi Pangan Universitas Padjadjaran
DOI: http://dx.doi.org/10.21111/agrotech.v6i3.4951
Terima  15 September 2020                Revisi 4 Oktober 2020                    Terbit  30  Desember 2020
Abstrak: Minyak nilam merupakan komoditas yang memiliki potensi di bidang kesehatan dimana senyawa kimia α -guaiene yang terkandung berpotensi sebagai antibakteri.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  adanya  aktivitas antibakteri  pada  α -guaiene (kemurnian  37,5%)  dengan  konsentrasi  tertentu terhadap  bakteri Eschericia  coli (ATCC  25922)  dan Pseudomonas  aeruginosa (ATCC  27853)  serta  mengetahui  adanya  interaksi  antara  faktor  konsentrasi  α- guaiene dan  bakteri  uji  terhadap  diameter  daya  hambat  yang  terbentuk. Penelitian ini menggunakan metode eksperimental dengan uji difusi sumuran di Laboratorium  Mikrobiologi  Pangan  Fakultas  Teknologi  Industri  Pertanian Universitas  Padjadjaran.  Konsentrasi  α -guaiene yang  digunakan  adalah  20%, 40%, 60%, 80%, dan 100% dengan kontrol positif meropenem dan amoxicillin serta  kontrol  negatif  n-heksana.  Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  rata-rata diameter  daya  hambat  terbesar  yakni  3,22  mm  pada  bakteri Eschericia  coli dihasilkan  dari  α -guaiene konsentrasi  80%  dan  sebesar  2,83  mm  pada  bakteri Pseudomonas  aeruginosa dihasilkan  dari  α -guaiene konsentrasi  100%. Diameter  daya  hambat  yang  terbentuk  pada  berbagai  konsentrasi  α -guaiene ini tergolong ke dalam kategori resisten.
Kata kunci: antibakteri, α-guaiene, Eschericia coli , Pseudomonas aeruginosa
* Korespondensi email: sasekar259@gmail.com
Alamat : Fakultas Teknologi Industri Pertanian Universitas Padjadjaran Jl. Raya Bandung Sumedang KM. 21, Hegarmanah, Kec. Jatinangor, Kab. Sumedang, Jawa Barat
Abstract :  Patchouli  oil  is  a  commodity  that  has  potential  in  the  health  sector where  the  chemical  compound  α-guaiene  contained  has  the  potential  to  be antibacterial. This study aims to determine the presence of antibacterial activity at α-guaiene (purity 37.5%) with a certain concentration against Eschericia coli (ATCC 25922) and Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853) and to determine the  interaction  between  the  α-guaiene  concentration  factor  and  the  tested bacteria  to  the  diameter  of  the  formed  resistance.  This  study  used  an experimental method with well diffusion test in Food Microbiology Laboratory of  the  Faculty  of  Agricultural  Industrial  Technology,  Padjadjaran  University. The  concentrations  of  α-guaiene  used  were  20%,  40%,  60%,  80%,  and  100% with  meropenem  and  amoxicillin  positive  control  and  n-hexane  negative control.  The  results  of  this  study  showed  that  the  largest  average  diameter  of inhibition,  namely  3,22  mm  in  Eschericia  coli  was  produced  from  α-guaiene with  a  concentration  of  80%  and  2,83  mm  in  the  Pseudomonas  aeruginosa bacteria was produced from 100% concentration of α-guaiene. The diameter of the inhibitory power formed at various concentrations of α-guaiene is classified into the resistant category.
Key words: antibacterial, α-guaiene, Eschericia coli, Pseudomonas aeruginosa
1. Pendahuluan
Minyak  atsiri  atau essential  oil merupakan  hasil  ekstraksi  dari tumbuhan  yang  berasal  dari  daun,  bunga  kayu,  dan  biji-bijian. Minyak  atsiri  dapat  dimanfaatkan  melalui  berbagai  carayaitu  di konsumsi, obat luar, dan inhalasi. Banyak jenis minyak atsiri yang diproduksi  dan  di  ekspor  Indonesia,  seperti  minyak  sereh  wangi, akar  wangi,  kayu  putih,  pala,  dan  kenanga.  Salah  satu  komoditas minyak  atsiri  yang  memiliki  peran  cukup  besar  dalam  aktivitas ekspor di Indonesia adalah minyak nilam ( patchouli oil ) (Daswir et al. , 2010).
Minyak  nilam  mengandung  beberapa  senyawa  kimia,  yang dapat  dipisahkan  melalui  destilasi  fraksinasi.  Menurut  penelitian Nurjanah, et. al. (2019), komposisi bahan baku minyak atsiri nilam
Gontor AGROTECH Science Journal                                                405
denganmetode fraksinasi destilasi terdiri dari 17 komponen dengan 8  komponen  terbesar  yaitu patchouli  alcohol 30,59%,  α-
bulnesene / ∆-guaiene 18,40%,  α- guaiene 17,34%, seychellene 9,21%, α- patchoulene 9,43%, α- selinene 3,71%, dan carryophyllene 3,40%.  Berdasarkan  komponen  penyusun  minyak nilam  tersebut,  bahwa patchouli  alcohol merupakan  komponen utama penyusun minyak nilam .
Selain patchouli alcohol , salah satu komponen utama kedua dan ketiga minyak nilam adalah ∆-guaiene dan α -guaiene . Komponen guaiene banyak digunakan untuk membentuk aroma minyak nilam dan  menentukan  mutu  minyak  nilam  dan  termasuk  kedalam seskuiterpen  (Swamy  dan  Sinniah,  2015).  Seskuiterpen  memiliki sifat  sebagai  antibakteri,  antiinflamasi,  dan  pencegah  kuman (Maulidya, 2016).
Dari  beberapa  manfaat  minyak  nilam,  salah  satunya  adalah sebagai  bakterisida  dan  fungisida.  Banyak  sekali  obat  antibakteri (antibakteri  sintetik)  namun  obat  tersebut  terbatas  hanya  dalam beberapa kelas kimia yang dapat menyebabkan resistansi, sehingga penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri  gagal  disembuhkan. Menurut  penelitian  Fauzi  (2017),  mengenai  karakteristik  dan  uji aktivitas antimikroba minyak atsiri daun dan batang nilam, minyak atsiri memiliki aktivitas sebagai antimikroba terhadap Pseudomonas aeruginosa ( P. aeruginosa ) dan aktivitas antibakteri pada minyak nilam yang didapatkan diduga berasal dari senyawa-
senyawa  -guaiene , ∆-guaiene ,  dan patchouli  alcohol .  Hipotesis dari  penelitian  ini  adalah  senyawa  -guaiene pada  minyak  nilam hasil  destilasi  fraksinasi  dengan  konsentrasi  tertentu  dapat menghambat pertumbuhan bakteri E. coli dan P. aeruginosa.

## 2. Bahan dan Metode
Penelitian  ini  bersifat  eksperimental  dengan  subjek  penelitian adalah  α -guaiene kemurnian  37,5%  dengan  konsentrasi  yang berbeda-beda  yaitu  20%,  40%,  60%,  80%,  dan  100%.  Penelitian ini  dilaksanakan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  Pangan  Fakultas Teknologi  Industri  Pertanian  pada  bulan  Agustus  2020.  Sampel yang digunakan adalah bakteri Eschericia coli (ATCC 25922) dan Pseudomonas  aeruginosa (ATCC  27853)  merupakan  bakteri biakan  yang  diperoleh  dari  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran.
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  tabung  reaksi, jarum  ose,  gelas  ukur,  beaker  glass,  cawan  petri, cotton  swab , pipet,  mikropipet,  tip,  bunsen,  autoklaf,  inkubator,  penggaris, timbangan, laminar  air  flow, dan  spektrofotometer  UV-VIS.
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  α -guaiene kemurnian 37,5% yang diperoleh dari hasil penelitian Nurjanah, et.
al. (2019),  Nutrient  Agar  (NA),  NaCl  0,85%,  meropenem  10%
(kontrol  positif), amoxicillin 10%  (kontrol  positif),  n-heksana
(kontrol negatif), aquades, dan larutan Mc. Farland 0,5 (terdiri atas BaCl 2 1% dan H 2 SO 4 1%).
Penelitian  ini  menggunakan  α -guaiene yang  dilarutkan  dengan menggunakan n-heksana pada konsentrasi 20% (100μL α -guaiene dan  400μL  n-heksana),  40%  (200μL  α -guaiene dan  300μL  n- heksana),  60%  (300μL  α -guaiene dan  200μL  n-heksana),  80%
(400μL  α -guaiene dan  100μL  n-heksana),  dan  100%  (500μL  α -
guaiene ) ke dalam tabung reaksi.
Pembuatan  suspensi  bakteri  pada  penelitian  ini  dilakukan dengan  cara  menambahkan  NaCl  0,85%  ke  dalam  biakan  bakteri di  agar  miring  dan  dipindahkan  ke  tabung  reaksi  yang  telah disiapkan  NaCl  0,85%.  Kemudian  mengukur  kekeruhannya menggunakan  spektrofotemer  dengan  panjang  gelombang  (λ)  625 nm  sampai  mendapat  kekeruhan  yang  sesuai  dengan  Mc.  Farland 0,5 yaitu 1,5 x 10 8 CFU/mL (Dalynn, 2014). Jika absorbansi lebih dari 0,1 maka suspensi  ditambahkan NaCl  0,85%, sedangkan jika absorbansi kurang dari 0,08 ditambahkan koloni bakteri.
Metode  pengujian  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah difusi sumuran dengan setiap konsentrasi dilakukan 3 kali ulangan. Suspensi  bakteri  yang  telah  setara  dengan  Mc.  Farland  0,5 dimasukkan  sebanyak  100μL  ke  dalam  cawan  petri  berisikan media  NA.  Kemudian  suspensi  diratakan  dengan  menggunakan cotton swab secara melingkar. Kontrol positif, kontrol negatif, dan
α -guaiene dimasukkan ke dalam lubang sumuran sebanyak 60μL.
Cawan petri diinkubasi pada suhu 37 ℃ selama 20 jam.
Pengamatan dilakukan setelah masa inkubasi dengan mengukur zona  bening  di  sekitar  sumuran  yang  merupakan  petunjuk kepekaan bakteri terhadap bahan antibakteri yang digunakan. Zona bening  diukur  dengan  menggunakan  penggaris  dengan  satuan milimeter  (mm).  Setiap  sumuran  dilakukan  pengukuran  sebanyak tiga  kali.  Data  perhitungan  hasil  diameter  daya  hambat  diukur melalui rata-rata dan disajikan melalui tabel.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Hasil  pengukuran  diameter  zona  hambat  α -guaiene, kontrol negatif  dan  kontrol  positif  terhadap E.  coli dan P.  aeruginosa dapat dilihat pada Tabel 1 dan Tabel 2.
Berdasarkan  Tabel  1,  aktivitas  antibakteri  minyak  α -guaiene ditandai  dengan  adanya  zona  bening  di  sekeliling  sumuran  pada berbagai  perlakuan  yang  diteliti.  Menurut  Pan et  al. di  dalam Prawira  (2014)  pengelompokan  aktivitas  antibakteri  digolongkan dalam  tiga  kategori  yaitu  kategori  lemah  (diameter  hambat  <3 mm),  sedang  (diameter  hambat  3-6  mm),  dan  kuat  (diameter hambat  >  6  mm).  Pada  bakeri E.  coli diameter  paling  luas dihasilkan  oleh  minyak  α -guaiene dengan  konsentrasi  80%  yaitu 3,22  mm  dan  masuk  ke  dalam  kategori  sedang.  Sedangkan  pada bakteri P. aeruginosa diameter paling luas dihasilkan oleh minyak α -guaiene dengan  konsentrasi  100%  yaitu  2,83  mm  dan  masuk kedalam kategori rendah.
Aktivitas  antibakteri  α -guaiene dibandingkan  dengan  zona bening  yang dihasilkan oleh amoxicillin dan meropenem terhadap bakteri E.  coli dan P.  aeruginosa .  Hasil  pengujian  menunjukkan zona bening amoxicillin sebesar 21,33 mm pada bakteri E. coli dan 5,33  mm P.  aeruginosa .  Sedangkan  zona  bening  meropenem sebesar  42,67  mm  pada  bakteri E.  coli dan  46  mm P.  aeruginosa (Tabel  2).  Jika  dibandingkan  dengan  zona  hambat  menurut  CLSI (2016),  bakteri  E .  coli dikatakan  sensitif  terhadap  antibiotik amoxicillin dan  meropenem  karena  diameter  yang  dihasilkan ≥ 17 mm.  Sedangkan  pada  bakteri P.  aeruginosa dikatakan  resisten terhadap  antibiotik amoxicillin dan  sensitif  terhadap  antibiotik meropenem.
Berdasakan  hasil  pengamatan,  dapat  dilihat  bahwa  aktivitas antibakteri dari minyak  -guaiene memiliki diameter daya hambat yang  kecil  atau  masih  belum  kuat  untuk  dijadikan  sebagai antibakteri  terhadap E.  coli dan P.  aeruginosa. Hal  ini  dapat disebabkan  karena  beberapa  faktor  seperti  temperatur  inkubasi, lamanya  waktu  inkubasi,  ketebalan  media,  serta  kekeruhan suspensi  bakteri.  Kandungan  α -guaiene pada  minyak  nilam  yang digunakan  37,50%,  sehingga  kemungkinan  masih  mengandung senyawa  lainnya,  hal  tersebut  menyebabkan  kinerja  komponen  α - guaiene sebagai  zat  antibakteri  kemungkinan  belum  optimal.
Selain  itu,  pengenceran  juga  dapat  menjadi  faktor  yang menyebabkan  kurangnya  daya  difusi  minyak  α -guaiene ke  dalam media (Zeniusa, 2019). Pada minyak α -guaiene dengan konsentrasi 20%  tidak  terbentuk  zona  bening  pada  bakteri  kedua  bakteri.  Hal tersebut  dapat  disebabkan  karena  jumlah  minyak  α -guaiene yang dilarutkan  lebih  sedikit  dibandingkan  n-heksana.  Minyak  α - guaiene kemurnian 37,50% pada konsentrasi 20% memiliki sedikit kandungan  senyawa  α -guaiene dibandingkan  dengan  konsentrasi 100%.
Kedua  bakteri  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  merupakan bakteri  Gram  negatif  dimana  bakteri  Gram  negatif  memiliki ketahanan yang lebih baik dibandingkan bakteri Gram positif. Hal ini  dapat  disebabkan  karena  struktur  dinding  sel  bakteri  Gram negatif  lebih  kompleks  dibandingkan  bakteri  Gram  positif.
Struktur  dinding  sel  bakteri  Gram  negatif  berlapis  tiga  yaitu lipoprotein,  lipoposakarida,  dan  peptidoglikan  sehingga  senyawa antibakteri sulit untuk masuk ke dalam sel (Maulidya, 2016).

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  aktivitas  antibakteri  α -guaiene, didapatkan  bahwa  minyak  α -guaiene dengan  konsentrasi  80% dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri E.  coli dengan  diameter daya  hambat  3,22  mm  (sedang)  dan  minyak  α -guaiene dengan konsentrasi  100%  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri P.
aeruginosa 2,83 mm (rendah).

## 5. Referensi
Dalynn. 2014. McFarland Standard . Dalynn Biological Catalogue
No. TM50 – TM60: Canada.
Daswir,  Kusuma,  I.,  dan  Irwandi.  2010. Usaha  Menghasilkan Minyak Nilam yang Bermutu . pp 36–45.
Fauzi,  M.  dan  Lely,  N.  2017. Karakterisasi  dan  Uji  Aktivitas Antimikroba  Minyak  Atsiri  Daun  dan  Batang  Nilam
(Pogostemo cablin Benth) . Jurnal Ilmiah Bakti Farasi 2(1): 41-
48
Maulidya,  R.,  Aisyah,  Y.  dan  Haryani,  S.  2016. Pengaruh  Jenis Bunga  dan  Waktu  pemetikan  Terhadap  Sifat  Fisiokimia  dan Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri bunga Kenanga (Cananga
odorata). Jurnal  Teknologi  dan  Industri  Pertanian  Indonesia 8(2): 53-60
Nurjanah, S., Rialita, T., dan Lembong, E. 2019. Laporan Tahun I Riset  Kompetensi  Dosen  Unpad  (RKDU):  Isolasi  dan Karaktterisasi  Guaiene  dari  Minyak  Nilam  (pogostemon calbin  BENTH)  serta  Pemanfaatannya  Sebagai  Bahan Antimikroba . Universitas Padjadjaran. Jatinangor
Prawira,  M.Y.,  Sarwiyono.,  dan  P.  Surjowardojo.  2014. Daya Hambat  Dekok  Daun  Kersen  (Muntingia  calabura  L.) Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri  Staphylococcus  aureus Penyebab  Penyakit  Mastitis  Pada  Sapi  Perah .  Skripsi.
Universitas Brawijaya. Malang
Swamy,  M.K.  dan  Sinniah,  U.R.  2015. A  Comprehensive  Review on  the  Phytochemical  Constituents  and  Pharmacological Activities  of  Pogostemon  cablin  Benth.:  An  Aromatic Medicinal  Plant  of  Industrial  Importance .  US  National Library of Medicine National Institutes of Health 20(5): 8521-
8547.
Zeniusa,  P.,  Ramadhian,  M.  R.,  Nasution  S.  H.  dan  Karima,  N.
2019. Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  Etanol  Teh  Hijau  terhadap
Eschericia coli Secara In Vitro. Majority 8(2): 136-143