## EVALUASI JARINGAN DALAM STUDI IN VIVO PEMBERIAN EKSTRAK PROPOLIS PADA MODEL LUKA INFEKSI
Winona May Hendrata 1 , Willy Sandhika 2 , Agung Dwi Wahyu Widodo 3
1 Mahasiswa Program Studi Kedokteran, Fakultas Kedokteran, Universitas Airlangga
2 Departemen Patologi Anatomi, Fakultas Kedokteran, Universitas Airlangga
3 Departemen Mikrobiologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Airlangga

## ABSTRACT
Background: Infection in wound could lead to various consequences including scarring and occurrence of sepsis. With increasing prevalence of resistant strain bacteria, option for treating infected wound need to be constantly  expanded.  Propolis,  a  product  of  honey  bee,  is  a  potential  treatment  which  has  been  studied  to have various effects including antibacterial, anti-inflammatory, and antioxidant. Objective: The study aims to  assess  the  effect  of  propolis  toward  wound  healing,  by  evaluating  wound  macroscopic  and  microscopic appearance. Material and method: Propolis extract were made using maceration technique using ethanol. Thirty Rattus norvegicus male rats were divided into six groups: three groups for treatment and three groups for  control.  Incision  wound  were  made  in  the  back  and  was  infected  with  Methicillin ResistantStaphylococcus aureus ( MRSA). Propolis was administered orally on daily basis. Wound excision for  observation  were  done  on  day3,  5,  and  7.  The  tissue  were  processed  using  haematoxylin-eosin  (HE) staining for microscopic observation. The distance of normal tissue surrounding the wound were measured using image analysis program. Result: Macroscopic observation showed fewer visible wound in the propolis extract  treated  group.  Measurement  by  microscopic  observation  on  day 3  also  demonstrated  more  narrow wound  width  in  propolis  extract  treated  group  (405.75  110.11  µm)  compared  to  the  control  group (806.20  644.41µm). Conclusion: The  result  of  this  study  suggests  that  propolis  extract  by  oral administration  promotes  the  healing  of  infected  wound  as  shown  within  microscopic  and  microscopic observation.
Keywords: Animal model, propolis, wound healing, wound infection

## ABSTRAK
Latar  belakang: Infeksi pada luka dapat menyebabkan berbagai komplikasi, seperti terbentuknya jaringan parut  hingga  terjadinya  sepsis.  Karena  peningkatan  prevalensi  galur  bakteri  yang  resisten,  pilihan  terapi untuk  mengobati  luka  infeksi  senantiasa  perlu  diperluas.  Propolis,  suatu  produk  lebah  madu,  adalah  salah satu  terapi  potensial  yang  telah  diteliti  memiliki  beberapa  efek  seperti  efek  antibakteri,  antiinflamasi,  dan antioksidan. Tujuan: Penelitian  ini  bertujuan  mengkaji  efek  propolis  terhadap  penyembuhan  luka,  dengan mengevaluasi penampakan makroskopik dan mikroskopik luka.
Metode dan materi: Ekstrak propolis dibuat dengan teknik maserasi menggunakan etanol. Tiga puluh ekor tikus Rattus  norvegicus jantan  dibagi  menjadi  enam  kelompok:  tiga  kelompok  untuk  perlakuan  dan  tiga kelompok  sebagai  kontrol.  Luka  insisi  dibuat  di  daerah  punggung  tikus  dan  diinfeksi  oleh Methicillin ResistantStaphylococcus  aureus  ( MRSA).  Propolis  diberikan  secara  per-oral  setiap  hari.  Eksisi  luka  untuk pengamatan  dilakukan  pada  hari  ke-3,  5,  dan  7.  Jaringan  diproses  dengan  menggunakan  pewarnaan hematoksilin-eosin (HE) untuk pengamatan mikroskopis. Jarak jaringan normal yang menggapit luka diukur dengan aplikasi analisis gambar. Hasil: Pengamatan makroskopis menunjukkan lebih sedikit sampel dengan luka  yang  masih  tampak  pada  kelompok  perlakuan  dengan  ekstrak  propolis.  Pengukuran  pada  pengamatan mikroskopis juga menunjukkan jarak lebar luka yang lebih sempit pada kelompok perlakuan dengan ekstrak propolis pada hari ke-3 (405,75  110,11 µm) dibandingkan dengan kelompok kontrol (806,20  644,41µm). Simpulan: Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  pemberian  ekstrak  propolis  melalui  jalur  oral  dapat meningkatkan penyembuhan luka infeksidari pengamatan makroskopis dan mikroskopis.
Kata kunci: Model hewan coba, propolis, penyembuhan luka, infeksi luka
Korespondensi: Winona May Hendrata,Jl. Prof DR. Moestopo 47 Surabaya, Jawa Timur, Indonesia +6281234000099, email:winonamayh@gmail.com

## Latar belakang
Infeksi  pada  luka  merupakan  suatu  masalah  yang dapat  menyebabkan  mortalitas  dan  morbiditas tinggi.  Selain  itu  perawatan  luka  yang  diperberat dengan  infeksi  membutuhkan  biaya  yang  lebih tinggi  hingga  dapat  memberatkan  beban  finansial pada  pasien  maupun  tenaga  kesehatan  (Järbrink, et  al .,  2016).  Studi  menunjukkan  bahwa  90.8% luka  operasi  mengalami  infeksi  (Giacometti, et al .,  2000).  Infeksi  menyebabkan  penyembuhan luka  menjadi  kronis.  Sebagai porte  de  entry bakteri  dari  lingkungan,  luka  kronis  yang  tidak lekas  sembuh  berisiko  menimbulkan  sepsis  dan sembuh  dengan  pembentukan scar (Ogawa, 2017).  Dengan  bertambahnya  penemuan  bakteri yang  resisten  terhadap  antibiotic  yang  ada, tantangan  mengobati  luka  infeksi  menjadi  makin berat.Salah  satu  spesies  bakteri  yang  sering menimbulkan infeksi pada luka adalah Staphylococcus  aureus (Giacometti, et  al ., 2000) .
Propolis adalah suatu bahan yang diproduksi oleh lebah  madu  ( Apis  mellifera )  (Wagh,  2013).  Di seluruh  dunia  propolis  dipakai  sebagai  obat tradisional  untuk  mengobati  beberapa  penyakit, salah satunya adalah luka pada kulit (Kuropatnicki, et al ., 2013). Propolis mengandung beragam  fenol  dan  flavonoid  dari  tanaman. Kandungan  inilah  yang  diperkirakan  membuat propolis memiliki efek antibakterial dan antioksidan  yang  poten  (Al-Waili, et  al. ,  2012; Valente, et  al., 2011).  Indonesia,  sebagai  salah satu  negara  penghasil  madu  terbesar  di  dunia (Toreti, et  al. ,  2013),memilki  potensi  untuk mengembangkan produk terapeutik yang berbahan dasar propolis.
Penelitian  terdahulu  telah  menunjukkan  efek propolis terhadap penyembuhan luka akut maupun kronis  (Hozzein, et  al .,  2015;  Pillai, et  al. ,  2010; Lotfy, et al ., 2006; Siqueira, et al. , 2010). Dalam mempelajari  penyembuhan  luka,  pengamatan dengan metode histopatologi sangat penting untuk mengetahui  proses-proses  yang  terjadi  pada jaringan.  Hingga  saat  ini  masih  belum  ada penelitian  yang  mengaji  tentang  pengaruh propolis  terhadap  penyembuhan  luka  yang terinfeksi.

## Tujuan
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengaji  pengaruh ekstrak  propolis  per-oral  terhadap  luka  infeksi pada  model  hewan  coba  dengan  evaluasi  secara makroskopis dan mikroskopis.

## Metode dan materi
Propolis dikeringkan dengan oven dan dihaluskan menjadi  bubuk.  Ekstraksi  dilakukan  dengan merendam  bubuk  propolis  dalam  etanol  96% selama 72 jam dan dilanjutkan dengan pengeringan  menggunakan rotary  evaporator dengan  suhu  55ºC.  Sebelum  pemberian  per-oral pada  tikus,  ekstrak  propolis  dilarutkan  terlebih dahulu  dengan  konsentrasi  180  mg/ml  (w/v) dalam akuades.
Perlakuan  hewan  coba  dalam  penelitian  ini dilakukan  di  Unit  Hewan  Coba  Departemen Biokimia Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga.  Penelitian  ini  menggunakan  30  ekor tikus putih Wistar ( Rattus novergicus) berkelamin jantan dengan berat antara 250-300 g. Aklimatisasi  tikus  dalam  kandang  dilakukan selama 7 hari. Hewan coba dibagi secara acak ke dalam  6  kelompok.  Pembuatan  luka  dilakukan dengan  membuat  insisi  sepanjang  2  cm  pada punggung  tikus  yang  telah  dicukur.  Setelah perdarahan  pada  luka  berhenti,  luka  diinokulasi dengan  1  ml  medium  yang  mengandung  10 5 cfu/ml Methicillin ResistantStaphylococcus aureus (MRSA) yang didapatkan dari Departemen Mikrobiologi  Fakultas  Kedokteran  Universitas Airlangga.  Setelah  penginfeksian  dengan  MRSA, luka tikus ditutup dengan kasa untuk menghindari infeksi yang tidak diinginkan.
Tiga  kelompok  diberi  propolis  dengan  dosis  720 mg/kg  berat  badan  yang  selanjutnya  disebut sebagai  kelompok  perlakuan,  sedangkan  tiga kelompok  lainnya  diberi  air  yang  selanjutnya disebut  sebagai  kelompok  kontrol.  Pemberian pada  seluruh  hewan  coba  dilakukan  setiap  hari selama  perlakuan  dan  diberikan  dengan  sonde melalui lubang hidung.
Pada hari ke 3, 5, dan 7 satu kelompok perlakuan dan  satu  kelompok  kontrol  dikorbankan  untuk dilakukan pengamatan. Setelah euthanasia dengan menggunakan  teknik cervical  dislocation, kulit tikus yang mengandung luka dilakukan eksisi dan difiksasi  dengan neutral  buffer  formalin selama 24 jam.Selanjutnya, jaringan eksisi dibuat menjadi blok  paraffin.  Bagian  tengah  dari  panjang  luka diiris  dan  dilakukan  pewarnaan  HE  untuk dilakukan pengukuran lebar luka.
Foto mikroskopis diambil dengan perbesaran 40x menggunakan  kamera  dan  mikroskop  cahaya (Olympus CX33) yang telah dikalibrasi. Pengukuran  penutupan  luka  dilakukan  dengan menggunakan  aplikasi  Fiji  (Schindelin, et  al. ,
2012)  dengan  menarik  garis  setingkat  epidermis dari tepi salah satu jaringan sehat, melewati luka, dan  berakhir  pada  tepi  jaringan  sehat  yang  lain. Pengukuran  pada  aplikasi  telah  disesuaikan dengan  kalibrasi  kamera.  Spesimen  yang  lukanya telah  tertutup  oleh  jaringan  epidermis  panjang luka diberi nilai 0 µm.

## Hasil Penampakan luka secara makroskopis
Dari  penampakan  makroskopis  luka  pada  hari observasi,  luka  diklasifikasikan  menjadi  tampak (+)  dan  tidak  tampak  (-)  (Tabel  1).  Klasifikasi luka  yang  tampak  meliputi  luka  yang  masih terbuka, luka yang dilapisi oleh lapisan epitel, dan luka yang masih tampak kontraksinya. Sedangkan luka yang tidak tampak meliputi bagian kulit yang sudah  tampak  mulus  dan  bagian  kulit  yang  telah ditumbuhi oleh rambut (Gambar1).
a b c d
e
Gambar 1. Macam penampakan luka pada hewan coba; a. Luka terbuka, b. Luka dilapisi oleh lapisan epitel, c. Tampak kontraksi luka, d. Tidak ada sisa luka, e. Area luka telah ditumbuhi rambut.
Tabel 1. Penampakan luka pada setiap kelompok Kelompok Hari pengamatan n Luka (+) Luka(-) Perlakuan 3 5 4 1 Kontrol 3 5 5 0 Perlakuan 5 5 4 1 Kontrol 5 5 5 0 Perlakuan 7 5 2 3 Kontrol 7 5 3 2
Pada seluruh hari pengamatan, di kelompok perlakuan  dengan  propolis  terdapat  lebih  banyak jumlah  luka  yang  tidak  tampak  dibandingkan dengan  kelompok  kontrol.Jumlah  luka  tampak dan tidak tampak pada pengamatan hari ke-3 dan hari  ke-5  sama,  namun  tampak  peningkatan
jumlah dengan luka tidak tampak pada pengamatan hari ke-7 (Tabel 1).

## Lebar luka secara mikroskopis
Lebar  luka  dalam  penelitian  ini  adalah  jarak antara  jaringan  normal  yang  diukur  pada  tingkat epidermis yang berisi jaringan luka maupun ruang kosong  pada  pengamatan  mikroskopis  (Gambar 2a dan b). Penutupan luka pada model luka insisi hewan  coba,  khususnya  tikus,  terjadi  dengan bertemunya kedua sisi panjang luka (Gross, et al ., 1995).  Beberapa  spesimen  pada  hampir  setiap kelompok  mengalamipenutupan  (Gambar  2c  dan d), sehingga ukuran lebar luka dianggap 0 µm dan tidak  dimasukkan  dalam  penghitungan  rerata dengan  tujuan  meningkatkan  objektifitas.  Pada pengamatan  hari  ke-3,  seluruh  kelompok  kontrol belum  mengalami  penutupan  sedangkan  satu spesimen dari kelompok perlakuan telah mengalami penutupan luka. Uji Mann-Whitney U test pada  kelompok  perlakuan  (405,75  110,11) dan  kontrol  (806,20  644,41)  pengamatan  hari ke-3  menunjukkan  perbedaan  tidak  signifikan  ( p = 0,413).  Meski  demikian  terdapat  perbedaan rerata  lebar  luka  yang  cukup  besar,  di  mana kelompok  perlakuan  memiliki  rerata  lebar  luka yang lebih kecil.
Pada pengamatan hari ke-5, seluruh sampel dalam kelompok  kontrol  belum  mengalami  penutupan, sedangkan  pada  kelompok  perlakuan  hanya terdapat  satu  sampel  yang  lebar  lukanya  dapat diukur.  Uji  statistik  tidak  dapat  dilakukan  pada kelompok  pengamatan  hari  ke-5  dan  ke-7  karena terdapat  banyak  jumlah  sampel  luka  yang  telah mengalami penutupan.
Tabel 2. Rerata lebar luka pada tiap kelompok Kelompok Hari penga matan n Rata- rata lebar luka (µm) p Perlakuan 3 4 405,75  110,11 0,41 Kontrol 3 5 806,20  644,41 Perlakuan 5 1 400 n/a Kontrol 5 5 334,40  233,92 Perlakuan 7 0 - n/a Kontrol 7 1 16
Keterangan:  n  =  jumlah  luka  yang  secara mikroskopis  belum  mengalami  penutupan; n/a (not  applicable) =  uji  statistik  tidak dapat  dilakukan  sehingga p tidak  bisa didapatkan.
a
b
c d
Gambar 2. Pengukuran lebar luka secara mikroskopis. Garis kuning pada gambar (a) dan (b) menunjukkan jarak yang diukur. Keterangan: (a) jarak yang diukur menyebrangi ruang kosong pada daerah luka, (b) jarak yang diukur melewati jaringan pembekuan darah dan jaringan nekrotik, (c) didapati bentukan depresi pada daerah  luka namun sudah tertutup dengan lapisan epidermis, (d) luka yang telah tertutup dan permukaan cenderung rata.

## Diskusi
Pada setiap hari pengamatan, kelompok perlakuan dengan  ekstrak  propolis  memiliki  paling  tidak satu  sampel  luka  yang  sudah  tidak  tampak. Sedangkan  pada  hari  ke-3  dan  ke-5,  seluruh  luka dalam kelompok
kontrol masih tampak.Penyembuhan luka
yang sempurnadidapatkan  pada  jangka  waktu  yang pendek,  yaitu  selama  3  hari  hingga  5  hari khususnya  pada  kelompok  perlakuan  dengan ekstrak  propolis.  Penyembuhan  luka  normal
manusia  hinggga  pada  titik  lukanya  sudah  tidak tampak lagi membutuhkan waktu di atas 3 minggu untuk  menyelesaikan  seluruh  fase  penyembuhan luka (Gonzalez, et al. , 2016). Luka dapat sembuh pada  hewan  coba  tikus  dalam  jangka  waktu  yang pendek  kemungkinan  dapat  dijelaskan  oleh metabolism  tikus  yang  lebih  cepat  daripada manusia  (Schiaffino  &  Reggiani,  2011).  Adanya satu  sampel  yang  mengalami  penyembuhan sempurna pada kelompok perlakuan, dibandingkan dengan kelompok kontrol,
Hendrata, et al
menandakan  adanya  peningkatan  kesembuhan luka  dengan  pemberian  ekstrak  propolis.  Ada kemungkinan setiap individu hewan coba memiliki  respon  yang  bervariasi  terhadap  ekstrak propolis, meskipun homogenitas hewan coba telah dikendalikan,  sehingga  sangat  mungkin  luka  tiap individiu  hewan  coba  sembuh  dalam  jangka waktu  yang  bervariasi.  Keterbatasan  dalam  studi ini  adalah  penampakan  luka  tidak  diamati  setiap hari,  karena  membuka  penutup  luka  akan memaparkan  luka  pada  berbagai  gangguan  dari lingkungan  serta  menimbulkan  stres  pada  hewan coba.
Penyembuhan  luka  terdiri  dari  tiga  fase,  yakni fase  inflamasi,  fase  proliferasi,  dan  fase remodeling (Diegelmann & Evans, 2004; Gonzalez, et al. , 2016). Fase inflamasi adalah fase yang  bertujuan  untuk  membersihkan  luka  dari jaringan nekrotik, benda asing, dan kuman. Secara umum pada  manusia fase ini mulai dari saat luka terbentuk hingga hari ke-3. Fase proliferasi terdiri dari  pembentukan  matriks  ekstraselular  dan pembuluh darah. Fase ini berlangsung dari hari ke 3  hingga  minggu  ke-3  setelah  pembentukan  luka. Fase  remodeling  adalah  fase  terakhir  yang bertujuan  menata  matriks  ekstraselular  pada  area luka dan dapat berlangsung hingga lebih dari satu tahun.  Tiga  fase  tersebut  tidak  berjalan  secara terpisah,  namun  merupakan  proses  yang  saling tumpang  tindih  (Gonzalez, et  al. ,  2016).  Luka kronis  adalah  luka  yang  fase  penyembuhannya melebihi waktu yang diperkirakan hingga membutuhkan  intervensi  agar  dapat  sembuh dengan  semestinya  (Frykberg  &  Banks,  2015; Velnar, et  al. ,  2009).  Pada  penelitian  ini  kronis atau tidaknya luka belum dapat ditentukan karena belum  diteliti  secara  jelas  jangka  waktu  fase-fase penyembuhan luka pada tikus.
Pengamatan  pada  hari  ke-3,  5,  dan  7  bertujuan untuk  mewakili  ketiga  fase  penyembuhan  luka, namun masih dibutuhkan pengamatan lebih lanjut untuk mengevaluasi kualitas dalam mewakili fase- fase  tersebut.  Fase-fase  penyembuhan  luka diperkirakan lebih pendek pada hewan coba tikus. Infeksi  mengganggu  penyembuhan  luka  terutama dengan  memperpanjang  inflamasi  (Hampton, 2007).  Inflamasi  yang  memanjang  adalah  akibat dari  pengaktifan  persinyalan  inflamasi  dan kerusakan  jaringan,  dimana  keduanya  disebabkan oleh pathogen (Zhao, et al., 2013).
Penutupan  luka  dipengaruhi  beberapa  faktor seperti kontraksi luka dan epitelisasi (Gonzalez, et al. , 2016). Kontraksi luka adalah proses penarikan
jaringan  ke  arah  tengah  luka  dengan  tujuan memperkecil  area  luka  (Sharpe  &  Martin,  2013). Posisi  anatomi  luka  menentukan  kecenderungan luka  menutup  dengan  mekanisme  kontraksi  luka atau  dengan  epitelialisasi,  meskipun  kedua mekanisme tersebut selalu terjadi pada penyembuhan luka. Luka yang dibuat pada bagian punggung dalam penelitian ini lebih mengandalkan kontraksi luka dibandingkan dengan  epitelialisasi  (Levinson,  2013),  meskipun beberapa luka  tampak  tertutup  oleh  lapisan  epitel (Gambar  1).  Sel  myofibroblas  yang  merupakan hasil  diferensiasi  dari  sel  fibroblast  merupakan efektor utama dalam proses kontraksi luka (Bin & Wang, 2011). Penelitian sebelumnya  menemukan bahwa  efek  anti  inflamasi  oleh  ekstrak  propolis diprakarsai oleh peningkatan transforming growth factor  beta (TGF-  )  (Hozzein, et  al. ,  2015)  yang dapat  meningkatkan  proliferasi  sel  fibroblast (Chitturi, et  al. ,  2015)  yang  kemungkinan  dapat meningkatkan  penutupan  luka  dengan  kontraksi pada penelitian ini.
Lebar  luka  dalam  penelitian  ini  menggambarkan penutupan  luka  yang  dapat  diamati  secara mikroskopis.  Dalam  penelitian  ini,  penutupan adalah saat jaringan epidermis telah menutup area luka  (Gambar  2c  dan  d).  Lebar  luka  dianggap sebagai  jarak  yang  akan  diperkecil  oleh mekanisme  epitelialisasi  atau  dengan  kontraksi luka, karena pada model luka insisi arah kontraksi luka  dan  epitelialisasi  bergerak  ke  arah  tengah secara  transversal  pada  luka  (Gross, et  al., 1995; Pastar, et  al., 2014).  Kontraksi  luka  pada  model luka  eksisi  ditunjukkan  oleh  beberapa  penelitian (Gross, et al. , 1995; Sharpe & Martin, 2013; Yeh, et al ., 2017) namun belum banyak penelitian yang menggunakan  model  luka  insisi  (Gross, et  al ., 1995).  Penelitian  lebih  lanjut  dibutuhkan  untuk membandingkan  luka  insisi  dengan  eksisi  untuk menentukan  kelebihan  dan  kekurangan  masing- masing sebagai model luka pada hewan coba. Pemberian  ekstrak  propolis  menunjukkan  jarak lebar  luka  yang  lebih  kecil  pada  hari  ke-3.  Dapat diartikan, melalui efeknya yang beragam, propolis meningkatkan  penyembuhan  luka  yang  pada penelitian  ini  ditunjukkan  oleh  penutupan  luka yang  lebih  cepat  pada  pengamatan  mikroskopis. Pada hari ke-5 pengamatan makroskopis menunjukkan  terdapat  4  sampel  pada  kelompok perlakuan yang masih memiliki luka yang tampak (Tabel  1),  namun  terlihat  pada  pengamatan mikroskopis  bahwa  sebagian  luka  yang  masih tampak  tersebut  telah  mengalami  penutupan
(Tabel  2).  Kontraksi  luka  dan  epitelialisasi terutama  terjadi  pada  fase  proliferasi  dan berlangsungnya fase proliferasi sangat dipengaruhi  oleh  fase  inflamasi  (Velnar, et  al. , 2009).  Oleh  karena  itu  penutupan  luka  dapat diartikan  sebagai  berjalannya  fase  proliferasi. Fase  inflamasi  yang  memanjang  karena  infeksi, selain menyebabkan keterlambatan fase proliferasi,  dapat  menyebabkan  timbulnya  bekas luka  atau scar pada  akhir  penyembuhan  luka karena  ekspresi  sitokin  pro-inflamasi  yang berlebihan  (Landen, et  al., 2016).  Peningkatan sitokin pro-inflamasi yang juga meliputi interferon  gamma  (IFN-  ),  interleukin  1  (IL-1), interleukin  6  (IL-6)  dan tumor  necrosis  factor alpha (TNF-  )  menyebabkan  lingkungan  area luka  yang  bersifat  proteolitik  sehingga  dapat menghambat mulainya fase proliferasi (Landen, et al .,  2016).  Propolis  diteliti  dapat  menurunkan konsentrasi  IL-6  dan  TNF-  yang  merupakan sitokin pro-inflamasi, dan di sisi lain meningkatkan  TGF-  dan IL-10  yang  merupakan sitokin  anti-inflamasi  (Machado, et  al .,  2012). Efek  anti-inflamasi  propolis  berperan  penting dalam  transisi  fase  inflamasi  menuju  ke  fase proliferasi.
MRSA  adalah  salah  satu  bakteri  yang  paling sering  menyebabkan  infeksi  pada  luka  operasi (Giacometti, et al ., 2000). MRSA merupakan tipe bakteri Staphylococcus  aureus yang  memiliki resistensi terhadap antibiotik methicillin dan dapat ditemukan  sebagai  flora  normal  pada  tubuh manusia  (Nathwani, et  al ,  2010)sehingga  risiko paparan  terhadap  pathogen  ini  meningkat.  Selain memiliki pola resisten yang berbeda, MRSA juga memiliki virulensi yang berbeda dengan Staphylococcus aureus (Sina, et al. , 2013) . Penelitian lain menunjukkan MRSA memiliki  kemampuan  membentuk  biofilm  yang dapat meningkatkan persistensi MRSA dalam area luka  (Dakheel, et  al .,  2016).  Sifat  antibakterial yang  dimiliki  propolis  juga  dapat  meningkatkan efek  penyembuhan  luka,  karena  eradikasi  bakteri yang  lebih  cepat  akan  mencegah  memanjangnya fase inflamasi. Penelitian ini belum mengkaji efek antibakterial  propolis  terhadap  MRSA  yang digunakan,  namun  penelitian-penelitian  terdahulu telah  membuktikan  secara  konfiden  tentang  sifat antibakterial  ekstrak  propolis  (Hamouza, et  al., 2018; Wojtyczka, et al., 2013).
Sebagian studi yang mengaji tentang efek ekstrak propolis  sebagai  terapi  luka  di  hewan  coba
mengaplikasikannya  secara  topikal  (Almeida, et al. ,  2013;  Hozzein, et  al. ,  2015).  Pemberian ekstrak  propolis  secara  oral  pada  penelitian  ini menunjukkan  kemungkinan  bahwa  seluruh  atau sebagian  zat  yang  terkandung  dalam  propolis dapat  terdistribusi  ke  dalam  area  luka.  Hal  ini ditunjukkan oleh adanya peningkatan penyembuhan  luka  pada  kelompok  perlakuan. Farmakodinamik  dan  farmakokinetik  ekstrak propolis,  serta  zat-zat  yang  dikandungnya,  perlu dipelajari lebih lanjut.

## Simpulan
Dari pengamatan makroskopis maupun mikroskopis,  pemberian  ekstrak  propolis  per-oral pada  model  hewan  coba  dapat  meningkatkan kecepatan penyembuhan luka. Penelitian selanjutnya  hendaknya  mangkaji  lebih  dalam mekanisme-mekanisme  spesifik  propolis  dalam membantu penyembuhan luka.

## Daftar pustaka
Al-Waili,  N.  Al-Ghamdi,  A.  Ansari,  M.  J.  Al- Attal,  Y.  &  Salom,  K.,  2012.  Synergistic effects  of  honey  and  propolis  toward  drug multi-resistant Staphylococcus Aureus,
Escherichia  coli  and  Candida  Albicans isolates in single and polymicrobial cultures. International  Journal  of  Medical  Sciences , 9(9): 793–800.
Almeida,  E.B.  Cordeiro,  J.  Karla,  A.  Lima,  D.
Oliveira,  L.  De,  Oliveira,  S.,  2013.  The incorporation  of  Brazilian  propolis  into collagen-based  dressing  films  improves dermal burn healing. Journal of Ethnopharmacology , 147(2): 419–25.
Bin,  L.  &  Wang,  J.H.C.,  2011.  Fibroblasts  and Myofibroblasts  in  Wound  Healing:  Force Generation  and  Measurement. J  Tissue
Viability , 20(4): 108–20. Chitturi, R.T.Balasubramaniam, A.M. Parameswar,  R.A.  Kesavan,  G.  Haris, K.T.M.  Mohideen,  K.,  2015.  The  Role  of Myofibroblasts in Wound Healing,
Contraction  and  its  Clinical  Implications  in Cleft Palate Repair. Journal of International Oral Health , 7: 75–80.
Dakheel,  K.H.  Rahim,  R.A.  Neela,  V.K.  Al- Obaidi,  J.R.  Hun,  T.G.  Yusoff,  K.,  2016. Methicillin-Resistant  Staphylococcus  aureus Biofilms  and  Their  Influence  on  Bacterial Adhesion  and  Cohesion. BioMed  Research International , 2016.
Diegelmann,  R.F.  &  Evans,  M.C.,  2004.  Wound healing:  an  overview  of  acute,  fibrotic  and delayed  healing. Frontiers  in  Bioscience , January (1): 283–9.
Frykberg,  R.G.  &  Banks,  J.,  2015.  Challenges  in the Treatment of Chronic Wounds. Advances in Wound Care , 4(9), 560–82.
Giacometti, A. Cirioni, O. Schimizzi,  A.M. Prete, M.S.D.D’Errico,  M.M.  Petrelli,  E.  Scalise, G.,  2000.  Epidemiology  and  Microbiology of Surgical Wound Infections Epidemiology and  Microbiology  of  Surgical  Wound Infections. Journal of Clinical Microbiology , 38(2): 918–22.
Gonzalez, A.C.D.O.  Costa, T.F. Andrade, Z.D.A. Medrado,  A.R.A.P.,  2016.  Wound  healing  - A  literature  review. Anais  Brasileiros  de Dermatologia , 91(5): 614–20.
Gross,  J.Farinelli,  W.  Sadow,  P.  Anderson,  R.
Bruns,  R.,  1995.  On  the  mechanism  of  skin wound " contraction ": A granulation tissue " knockout  "  with  a  normal  phenotype. Proc. Natl. Acad. Sci. USA , 92(June): 5982–6.
Hamouza, M.S. Rahman, M.F.A.E. Hafeez, M.A.
Gerges, A., 2018. Egyptian fennel honey and
/  or  propolis  against  MRSA  harboring  both mecA  &  icaA  genes. International  Journal of Complementary and Alternative Medicine , 11(3), 180–5.
Hampton,  S.,  2007.  Bacteria  and  wound  healing. Journal of Community Nursing , 21(10), 32– 40.
Hozzein,  W.N.  Badr,  G.  Ghamdi,  A.A.A.  Sayed, A.  Al-Waili,  N.S.  Garraud,  O.,  2015.
Topical  application  of  propolis  enhances cutaneous  wound  healing  by  promoting TGF-beta/smad-mediated
collagen
production in a streptozotocin-induced type I diabetic  mouse  model. Cellular  Physiology and Biochemistry , 37(3): 940–54.
Järbrink,  K.  Ni,  G.  Sönnergren,  H.  Schmidtchen, A.  Pang,  C.  Bajpai,  R.Car,  J.,  2016. Prevalence and incidence of chronic wounds and  related  complications :  a  protocol  for  a systematic  review. Systematic  Reviews ,  5:
152.
Kuropatnicki,  A.K.Szliszka,  E.Krol,  W.,  2013.
Historical  aspects  of  propolis  research  in modern times. Evidence-Based
Complementary  and  Alternative  Medicine , 2013.
Landen,  N.X.Li,  D.  Stable,  M.,2016.  Transition from inflammation to proliferation : a critical
step  during  wound  healing. Cell.  Mol.  LIfe Sci , 73: 3861–85.
Levinson,  H.,  2013.  A  Paradigm  of  Fibroblast Activation  and  Dermal  Wound  Contraction to  Guide  the  Development  of  Therapies  for Chronic  Wounds  and  Pathologic  Scars. Adv Wound Care (New Rochelle) , 2(4): 149–59. Lotfy,  M.Badra,  G.  Burham,  W.  Alenzi,  F.Q., 2006.  Combined  use  of  honey,  bee  propolis and myrrh in healing a deep, infected wound in  a  patient  with  diabetes  mellitus. British Journal  of  Biomedical  Science ,  63(4):  171– 3.
Machado,  J.L.  Assuncao,  A.K.M.Silva,  M.C.P.D. Assunc,  M.  Silva,  A.  Conceic,  G.Berretta, A.A., 2012. Brazilian Green Propolis : Anti-
Inflammatory Property
by an Immunomodulatory Activity. Evidence- Based  Complementary  and  Alternative Medicine , 2012: 1–10.
Nathwani,  D.  Davey,  P.G.  Marwick,  C.A.,  2010.
MRSA:  treating  people  with  infection. Clinical Evidence , November: 1–18.
Ogawa,  R.,  2017.  Keloid  and  hypertrophic  scars are the result of chronic inflammation in the reticular  dermis. International  Journal  of Molecular Sciences , 18(3).
Pastar,  I.Stojadinovic,  O.Yin,  N.C.  Ramirez,  H.
Nusbaum, A.G. Sawaya, A. Patel,
S.B.Khalid,  L.  Isseroff,  R.R.Tomic-Canic, M.,  2014.  Epithelialization  in  Wound Healing: A Comprehensive Review.
Advances in Wound Care , 3(7), 445–64.
Pillai,  S.I.  Palsamy, P.  Subramanian,  S.
Kandaswamy,  M.,  2010.  Wound  healing properties  of  Indian  propolis  studied  on excision wound-induced rats. Pharmaceutical Biology , 48(11): 1198–206.
Schiaffino,  S.  &  Reggiani,  C.,  2011.  Fiber  types in mammalian skeletal muscles. Physiol Rev , 91: 1447–1531.
Schindelin, J. Arganda-Carreras, I. Frise, E.Kaynig,  V.  Longair,  M.  Pietzsch,  T. Preibisch,  S.Rueden,  C.  Saalfeld,  S.Schmid, B.  Tinevez,  J.  White,  D.J.Hartenstein, V.Eliceiri,  K.  Tomancak,  P.  Cardona,  A. 2012.  Fiji:  an  open-source  platform  for biological-image  analysis. Nature  Methods , 9(7): 676–682.
Sharpe,  J.R.  &  Martin,  Y.,  2013.  Strategies Demonstrating Efficacy in Reducing Wound Contraction  In  Vivo. Advances  in  Wound Care , 2(4): 167–175.
Sina,  H.  Ahoyo,  T.A.  Moussaoui,  W.Keller,  D. Bankolé,  H.S.  Barogui,  Y.  Stienstra, Y.Kotchoni,  S.O.  Baba-Moussa,  L.,  2013. Variability  of  antibiotic  susceptibility  and toxin  production  of  Staphylococcus  aureus strains  isolated  from  skin,  soft  tissue,  and bone  related  infections. BMC  Microbiology , 13 (1).
Siqueira,  M.F.  Li,  J.  Cheha,  L.  Desta,  T.  Chino,
T.,  2010.  Impaired  wound healing  in  mouse models  of  diabetes  is  mediated  by  TNF-α dysregulation  and  associated  with  enhanced activation  of  Forkhead  boxO1  (FOXO1),. Diabetologia , 53: 378–388.
Toreti,  V.C.Sato,  H.H.  Pastore,  G.M.  Park,  Y.K., 2013.  Recent  progress  of  propolis  for  its biological and chemical compositions and its botanical origin. Evidence-Based
Complementary  and  Alternative  Medicine ,
2013.
Valente,  M.J.  Baltazar,  A.F.  Henrique,  R.
Estevinho, L.Carvalho, M., 2011. Biological activities  of  Portuguese  propolis:  Protection against  free  radical-induced  erythrocyte damage  and  inhibition  of  human  renal cancer  cell  growth  in  vitro. Food  and
Chemical Toxicology , 49(1): 86–92.
Velnar,  T.  Bailey,  T.  Smrkolj,  V.,  2009.  The Wound Healing Process : an Overview of the Cellular  and  Molecular  Mechanisms. The Journal  of  International  Medical  Research , 37(5): 1528–42.
Wagh,  V.D.,  2013.  Propolis:  A  wonder  bees product  and  its  pharmacological  potentials. Advances  in  Pharmacological  Sciences , 2013.
Wojt czka,   .D.  K pa,  M.  Idzik,  D.Ku ina,   . Ka a a-Dzik,  A.Dziedzic,  A.Wa sik,   .J., 2013.  In  vitro  antimicrobial  activity  of ethanolic  extract  of  polish  propolis  against biofilm  forming  staphylococcus  epidermidis strains. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine , 2013.
Yeh, C. Chen, C. Leu, Y. Lin, M. Chiu, M. Wang,
H., 2017. The effects of artocarpin on wound healing :  in  vitro  and  in  vivo  studies. Scientific Reports , 7(15599): 1–13. Zhao,  G.  Usui,  M.L.  Lippman,  S.I.  James,  G.A. Stewart,  P.S.  Fleckman,  P.  Olerud,  J.E., 2013. Biofilms and Inflammation in Chronic Wounds. Advances  in  Wound  Care ,  2(7):
389–399.
Hendrata, et al