Karakterisasi  dan  Uji  Aktivitas  Antioksidan  serta Penetapan  Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak  Etanol  Kulit Batang Kapuk Randu ( Ceiba petandra
L. Gaertn)
Yamin * , Rini Hamsidi, Nasria, Sabarudin
Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma, Jl. H. E. A. Mokodompit Kendari 93232
E-mail: yamin_taeri1975@yahoo.com

## Abstrak
Antioksidan merupakan senyawa penting dalam menjaga kesehatan tubuh karena berfungsi sebagai penangkap radikal bebas dalam tubuh. Radikal    bebas    dapat    menginduksi    penyakit kanker, aterosklerosis, dan penuaan dini. Penelitian ini bertujuan untuk mengkarakterisasi ekstrak, serta menguji potensi antioksidan dan menentukan kadar fenolik total ekstrak etanol kulit batang kapuk randu  ( Ceiba  petandra L  Graetn).  Aktivitas  antioksida  ditentukan  dengan  uji  penangkal  radikal  bebas  DPPH  (2,2-diphenyl-1- pikrilhidrazil).  Kandungan  fenolik  total  ditentukan  dengan  metode  Folin-Ciocalteau  menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis. Hasilnya menunjukkan bahwa ekstrak etanol kulit batang C. petandra L Graetn mengandung metabolit sekunder yang terdiri dari alkaloid, flavonoid, fenol tannin dan saponin, memiliki potensi antioksidan yang kuat dengan nilai IC 50 sebesar 26,06 µg/mL, serta memiliki kadar fenolik total sebesar 43,063 µg/mL
Kata kunci: Antioksidan, kulit batang Kapuk Randu, DPPH

## 1. Pendahuluan
Indonesia  yang  merupakan  negara  berkembang mempunyai  keterbatasan  dalam  penanggulangan  masalah kesehatan,  yaitu  prevalensi  penyakit  degeneratif  makin meningkat [1]. Selain akibat penyakit degeneratif, penuaan pun  juga  menjadi  masalah  kesehatan  di  Indonesia. Indonesia  seperti  negara-negara  lainnya  dikawasan  Asia Pasifik akan mengalami penuaan penduduk dengan cepat. Penuaan  ditandai  dengan  hilangnyaintegritas  fisiologis yang  progresif,  yangmemicu  gangguan  fungsi  dan meningkatkanrisiko kematian. Kemunduran fungsi inimenjadi  faktor  risiko  utama  patologipada  manusia meliputi  kanker,  diabetes,kelainan  kardiovaskuler,  dan penyakitneurodegeneratif [2].
Semua  penyakit  tersebut  ialah  akibat  dari  radikal bebas yang terpapar pada tubuh manusia, sehingga radikal bebas  masih  menjadi  penyebab  kematian  di  Indonesia. Radikal  bebas  tersebut  bersifat  reaktif  dalam  mencari pasangan  elektronnya,  jika  sudah  terbentuk  dalam  tubuh maka  akan  terjadi  reaksi  berantai  menghasilkan  radikal bebas  yang  baru  yang  akhirnya  jumlah  radikal  bebas  ini akan  terus  bertambah.  Keadaan  dimana  tubuh  terpapar radikal bebas dalam jumlah yang melebihi kapasitas tubuh disebut  stress  oksidatif.  Oleh  karena  itu  tubuh  kita memerlukan substansi penting yaitu antioksidan yang dapat membantu  melindungi  tubuh  dari  serangan  radikal  bebas dengan  meredam  efek  negatif  yang  disebabkan  oleh senyawa ini.
Antioksidan  merupakan  senyawa  penting  dalam menjaga  kesehatan  tubuh  karena  berfungsi  sebagai
penangkap  radikal  bebas  dalam  tubuh.  Radikal        bebas dapat    menginduksi    penyakit kanker, aterosklerosis, dan penuaan  dini  [3].  Pada  umumnya,  antioksidan  dibagi menjadi dua    jenis    yaitu    antioksidan    sintetik    dan antioksidan  alami.  Antioksidan  sintetis  yang  banyak digunakan      berbahaya      bagi      kesehatan  karena  bersifat racun  jika  dikonsumsi  dengan  konsentrasi  yang  berlebih. Oleh  karena  itu,  diperlukan      antioksidan      alami      yang cenderung  tidak  memiliki  efek  samping  dan  bermanfaat bagi kesehatan [4].
Senyawa  antioksidan  alami  tumbuhan  adalah senyawa fenolik   atau   polifenolik   yang   dapat   berupa golongan flavonoid, tokoferol dan asam-asam polifungsional. Salah satu tanaman yang memiliki potensi antioksidan  adalah  kapuk  randu  ( Ceiba  petandra L. Gaertn),  dimana  fraksi  metanol  kulit  batang  kapuk  randu sedniri  memiliki  kadar  fenolik  total  yang  lebih  besar dibandingkan dengan fraksi n-heksana dan etil asetat yakni sebesar  90,87  µgGAE/mL,  sehingga  penelitian  ini  akan dilakukan  karakterisasi  ekstrak  etanol  dari  kulit  batang kapuk  randu  serta  uji  aktivitas  antioksidan  dengan menggunakan metode DPPH dan kadar total fenoliknya.

## 2. Metode

## 2.1 Preparasi
Daun  kapuk  randu  diperoleh  dari  Kelurahan Bonggoeya  Kecamatan  Wua-Wua  Kota  Kendari  Provinsi Sulawesi  Tenggara.  Sebanyak  950  gram  serbuk  simplisia
Kulit  batang  kapuk  randu  ( C.  petandra (L.)  Gaertn) diekstrkasi dengan etanol 96% selama 3 x 24 jam, dimana setiap 1 x 24 jam dilakukan penyaringan, yang selanjutnya dilakukan  pemekatan    dengan  menggunakan  Rotary evaporator. Selanjutnya ekstrak yang diperoleh digabungkan  dan  ditimbang  beratnya  untuk  ditentukan besar rendemennya.

## 2.2 Penapisan Fitokimia
Penapisan  fitokimia  secara  kualitatif  dilakukan dengan  dua  metode,  yaitu  metode  reaksi  warna/ pengendapan  dan  metode  kromatografi  lapis  tipis  (KLT) [5].

## 2.3 Karakteristik Ekstrak
Karakteristik  yang  diperiksa  meliputi  parameter spesifik  yaitu organoleptik  yang  mendeskripsikan bentuk, warna, bau dan rasa, serta parameter non spesifik (kadar air dan kadar abu) [6].

## 2.4 Pengujian Aktivitas Antioksidan
Ekstrak  etanol  kulit  batang  kapuk  randu  dilakukan dengan  menggunakan  metode  DPPH  (2,2-difenil-1- pikrilhidrazil) secara spektrofotometri UV-Visibel [7]

## Pembuatan Larutan DPPH
Pereaksi  DPPH  konsentrasi  50  ppm  dibuat  dengan cara DPPH ditimbang sebanyak 5 mg kemudian dilarutkan dengan pelarut etanol 96% hingga semua larut, kemudian dimasukkan  ke  dalam  labu  takar  100  mL  dan  diencerkan hingga tanda tera kemudian dihomogenkan [8].

## Penentuan Panjang Gelombang Maksimum DPPH
Penentuan  panjang  gelombang  maksimum  larutan DPPH dilakukan dengan memipet 3,5 ml larutan DPPH 50 ppm ditambahkan dengan 0,5 ml etanol 96% dan dikocok hingga  homogen,  diinkubasi  selama  30  menit  pada  suhu ruang  yang  gelap  kemudian  diamati  serapannya  pada rentang  panjang  gelombang  400-800  nm  menggunakan spektrofotometer UV-Vis [8].
Pengukuran  serapan  sampel  dengan  menggunakan spektrofotometer UV-Vis
Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan dengan uji DPPH terhadap ekstrak etanol kulit batang kapuk randu C. petandra dilakukan  dengan  mengambil  0,5  mL  larutan sampel  dari  berbagai  konsentrasi,  kemudian  ditambahkan 3,5  mL  DPPH  lalu    diinkubasi  pada  ruangan  gelap,  dan diukur serapannya pada panjang gelombang maksimum.

## Pengujian Larutan Vitamin C sebagai pembanding
Asam askorbat ditimbang 10 mg kemudian dilarutkan dalam  etanol    96  %  hingga  larut  selanjutnya  dimasukkan
kedalam  labu  takar  100  ml    dan  diencerkan  hingga  tanda tera  sehingga  diperoleh  konsentrasi  100  ppm.  Dilakukan pengenceran  untuk  membuat  seri  konsentrasi  1  ppm,  2 ppm, 3 ppm, 4 ppm dan 5 ppm. Setelah itu 0,5 ml larutan masing-masing  konsentrasi  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi  dan  ditambahkan  3,5  ml  larutan  DPPH  50  ppm dikocok hingga homogen dan diinkubasi pada suhu  ruang selama 30 menit. Serapan diukur menggunakan spektrofotometri  Uv-Vis  pada  panjang  gelombang maksimum DPPH.

## 3. Hasil dan Pembahasan
Sampel  Kulit  batang  kapuk  randu  diperoleh  dari Kelurahan Bonggoeya Kecamatan Wua-Wua kota Kendari, dimana sampel kulit batang kapuk randu tersebut di panen pada  sore  hari.  Pengambilan  ini  dilakukan  agar  metabolit sekunder  yang  diperoleh  maksimal.  Sampel  kulit  batang kapuk  tersebut  selanjutnya  dikeringkan  di  bawah  sinar matahari  yang  ditutupikain  hitam.  Hal  ini  dilakukan  agar tidak terjadi paparan langsung sinar matahari. Dimana jika terjadi paparan langsug dengan sinar matahari akan terjadi degradasi dari metabolit yang ada dalam simplisia tersebut.
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah  metode maserasi.  Pemilihan  metode  ini  dikarenakan  metodenya sederhana dan tidak menjenuhkan. Disamping itu metabolit yang  tidak  tahan  panas  tidak  mengalami  kerusakan  atau hilang  selama  proses  ekstraksi.  Maserat  ditarik  dengan menggunakn  pompa  vakum  pada  suhu  40 0 C  sehingga diperoleh  ekstrak  etanol  sebesar  39,80  gram  dan  nilai rendamennya sebesar 4,18%.
Pengujian  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui kondungan  metobolit  sekunder  yang  ada  dalam  sampel. Hasil  uji fitokimi didapatkan  bahwa dalam ekstrak etanol daun  kapuk  randu  terdapat  alkaloid,  flavonoid,  fenol, tannin, dan saponin (Tabel 1).
Tabel 1. Hasil uji fitokimia ekstrak Kulit batang kapuk randu ( C. petandra L. Gaertn)
No. Metabolit Sekunder Pereaksi Hasil Standar (warna) 1. Alkaloid Dragendorff + endapan coklat mudah 2. Flavonoid Serbuk  Mg  + HCl pekat + Merah jingga 3 Fenolik Besi  klorida 0,1% + Hijau kecoklatan 4. Saponin Akuades + Terbentuk busa stabil 5. Tanin FeCl3 1% + Hijau kehitaman
Kualitas  ekstrak  etanol  kulit  batang  dan  daun  kapuk randu dapat terjamin dengan memenuhi suatu standar mutu ekstrak.  Selain  itu,  karakteristik  ekstrak  perlu  dilakukan agar  dapat  diperoleh  bahan  baku  yang  seragam  sehingga dapat  menjamin  efek  farmakologi  tanaman  tersebut. Karakterisasi  ekstrak  kulit  batang  dan  daun  kapuk  randu meliputi  parameter  spesifik  yaitu  identitas,  organoleptik, kadar sari larut air, dan kadar sari larut etanol.
Tabel 2. Penetapan parameter spesifik ekstrak etanol kulit batang kapuk randu Karakteristik Hasil Parameter Spesifik a. Identitas
- Nama latin tumbuhan
- Nama Indonesia tumbuhan
b. Organoleptis
- Bentuk
- Bau
- Warna
c. Kadar sari laut air
d. Kadar sari larut etanol
Ceiba  petandran (L.) Gaertn Tumbuhan kapuk randu Kental Khas Coklat kemerahan
12% 3,22%
Pengujian  aktivitas  antioksidan  masing-masing ekstrak dilakukan dengan metode peredaman radikal bebas DPPH  dan  memberikan  hasil  sebagaimana  ditampilkan pada Tabel 3 dan Tabel 4 serta Gambar 1 dan Gambar 2.
Tabel 3. Hasil uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol kulit batang kapuk randu  ( C. petandra ) Ekstrak Absorbansi blanko Kosentrasi (ppm) % inhibisi Absorbansi Ekstrak Kulit batang 0,573 10 43,80 0,322 20 48,34 0,296 30 53,05 0,269 40 52,88 0,27 50 58,81 0,236
Persamaan garis yang diperoleh antara % penghambatan  dengan  konsentrasi  ekstrak  etanol  kulit batang  dan  ekstrak  etanol  daun  kapuk  randu  digunakan untuk  menentukan  nilai  IC 50. Hasil  analisis  menunjukkan bahwa  nilai  IC 50 dari  ekstrak  etanol  kulit  batang  kapuk randu  yaitu  sebesar 26,06  µg/mL.  Hal  ini  menunjukkan pada konsentrasi 26,06 µg/mL ekstrak etanol kulit batang kapuk  randu  dapat  menghambat  50%  dari  radikal  bebas DPPH.
Gambar 1. Persentase penghambatan radikal bebas
Hasil  perhitungan  memperlihatkan  ekstrak  kulit batang  kapuk  randu  memiliki  potensi  antioksidan  yang kuat.  Hal  ini  sebagaimana  sesuai  dengan  parameter kekuatan antioksidan yaitu kuat (IC 50 <50 ppm), aktif (IC 50 50-100 ppm), sedang (IC 50 101-250 ppm), lemah (IC 50 250- 500 ppm), dan tidak aktif (IC 50 >500 ppm.
Berdasarkan identifikasi fitokimia ekstrak etanol kulit batang  kapuk  randu  ( Ceiba  petandra (L.)  Gaertn)  positif mengandung alkaloid maupun senyawa fenolik (flavonoid
dan  tanin).  Golongan  alkaloid  dan  senyawa  fenolik (flavonoid dan tanin) merupakan salah satu indikator suatu tanaman  memiliki  aktivitas  antioksidan.  Hal  ini  karena alkaloid  dan  senyawa  fenolik  memiliki  gugus  hidroksi  (- OH) yang terikat pada cincin aromatik. senyawa fenol akan mendonorkan atom hidrogennya yang terdapat pada gugus hidroksi  pada  radikal  DPPH  sehingga    membuat  radikal DPPH menjadi stabil.
Gambar 2. Mekansime reaksi penentuan gugus fenolik [9].
Penentuan  senyawa  kandungan  total  fenolik  pada daun  samama  dilakukan  dengan  metode Folin-Ciocalteu . Prinsip metode ini adalah oksidasi gugus fenolik hidroksil. Pereaksi  ini  mengoksidasi  fenolat  (garam  alkali), mereduksi  asam  heteropoli  menjadi  suatu  kompleks molibdenum-tungsten  (Mo-W).  Fenolat  hanya  terdapat pada larutan basa, tetapi pereaksi ini dan produknya tidak stabil pada kondisi basa. Selama reaksi  belangsung,  gugus fenolik-hidroksil bereaksi dengan pereaksi Folin- Ciocalteu , membentuk kompleks fosfotungstat- fosfomolibdat  berwarna  biru  dengan  struktur  yang  belum diketahui  dan  dapat  dideteksi  dengan  spektrofotometer. Warna  biru  yang  terbentuk  akan  semakin      pekat      setara dengan   konsentrasi   ion fenolat  yang terbentuk, artinya semakin  besar  konsentrasi      senyawa      fenolik      maka semakin  banyak  ion  fenolat  yang  akan  mereduksi  asam heteropoli  sehingga  warna  biru  yang  dihasilkan  semakin pekat [9].
Gambar 3. Grafik hubungan konsentrasi dan absorbansi asam galat
Penentuan kandungan total fenolik ekstrak dilakukan berdasarkan kurva  standar asam galat. Penggunaan  asam galat    sebagai    standar,  disebabkan  karena  asam  galat adalah  turunan  dari  hidrobenzoat  yang  merupakan  suatu asam  fenol  sederhana    yang    bersifat    murni    dan    stabil [10]. Pembuatan kurva baku asam galat ditentukan dengan mengulang  pengukurannya  sebanyak  3 kali pengulangan, sampai  memperoleh  nilai  koefisien  korelasi  yang
y = 0.3455x + 41.012 R² = 0.9408 0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 0 10 20 30 40 50 60 % p en g h a m b a ta n Konsentrasi y = 0.0112x + 0.1127 R² = 0.9952 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0 20 40 60 A b so rb an si Konsentrasi (ppm)
mendekati  1  (R2    =  1  atau  mendekati  1).  Berdasarkan persamaan  regresi  linier  tersebut,  serta  hasil  pengukuran absorbansi ekstrak etanol kulit batang kapuk randu sebesar 0,595, maka kadar total fenolik yang yang terdapat dalam ekstrak  etanol  kulit  batang  kapuk  randu  sebesar  43,063 µg/mL.

## 4. Kesimpulan
Ekstrak kulit batang kapuk randu memiliki metabolit sekunder  yang  terdiri  dari  flavonoid,  alkaloid,  fenolik, saponin  dan  tannin,  dengan  kadar  fenolik  total  sebesar 43,063  µg/mL,  serta  menunjukkan  aktivitas  antioksidan yang tergolong kuat dengan nilai IC 50 sebesar 26.06 µg/mL.

## Ucapan Terima Kasih
Ucapan  terima  kasih  diberikan  kepada  LPPM  UHO dan Fakultas Farmasi yang telah memfasilitasi terlaksananya penelitian ini.

## Daftar Pustaka
1. Werdhasari  A.  Peran  Antioksidan  Bagi  Kesehatan. Jurnal Biomedik Medisiana Indonesia , 2014, 3(2) ;59–68
2. Lopez-Otin C, Blasco MA, Partridge L, Manuel S, Guido K. The  Hallmarks  of  Aging. Cell ,  2013, 153(6) ;194-217 . doi:10.1016/j.cell.2013.05.039
3. Hernarni  dan  Rahardjo.  Tanaman  Berkhasiat  Antioksidan. Jakarta: Penebar Swadaya, 2005.
4. Sarastani  D,  Soekarto  ST,  Muchtadi  TR,  Fardiaz  D, Apriyantono  A.  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  danFraksi Ekstrak Biji Atung, Jurnal Teknologi dan Industri Pangan, 2002, 13 (2) .
5. Farnsworth NR. Biological and phytochemical Screening of Plants. J Pharm Sci, 1966, 55(3) ;225-76.
6. Depkes RI, 2000, Inventaris Tanaman Obat Indonesia Jilid I .  Jakarta:  Departemen  Kesehatan  dan  Kesejahteraan Republik Indonesia, 2000.
7. Zou Y, Lu Y, Wei D. antioxidant activity of flavonoid rich extract of Hypericum perforatum L. In Vitro . Journal Agric Food Chem, 2004, 52 ;5032-9.
8. Brand-Williams  W,  Cuvelier  ME.  Use  of  a  free  radical method to evaluate antioxidant activity. Food Sci Tech , 1995,
28(1) ;25–30. doi.org/10.1016/S0023-6438(95)80008-5.
9. Khadijah,  2017,  Penentuan  Total  Fenolik  dan  Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Etanolik Daunsamama
(Anthocephalus  macrophylus) Asal  Ternate,  Maluku Utara.