PENGARUH BAP ( Benzyl Amino Purine ) DAN AIR KELAPA TERHADAP PERTUMBUHAN TUNAS PUCUK DAN KANDUNGAN SULFORAFAN BROKOLI ( Brassica oleracea L. var. italica Plenck) SECARA IN-VITRO
Alfrida Maninggolang Jeany Sh. Polii-Mandang Wenny Tilaar

## ABSTRACT
This study aims to know the effect of Benzyl Amino Purine (BAP) and Coconut Water on shoot bud  growth  and  Broccoli Sulforaphane  content  (Brassica  oleracea  L.  var italic  Plenck).  The  study  was conducted in the laboratory of Biotechnology Department of Aquaculture, Faculty of Agriculture of Sam Ratulangi University, Manado, that conducted from August-December 2017 . This study used a Complete Randomized Design (RAL), consisting of 8 treatments and each repeated as many 4 times, so we get 32 unit experiment. The variables observed were number of buds, number of leaves, plant height, wet weight, root  number  and  Sulforaphane content  analysis.  The  result  of  research  shows  that  analysis  of variance showed that in the use of Benzyl Amino Purine (BAP) concentration 3 ppm tends to increase the number of leaves aged 4 Weeks After Culture (MSK) and increase the number of shoots age 2 and 6 Weeks After Culture (MSK) . Benzyl Amino Purine (BAP) 3 ppm can increase the wet weight of age 6W eeks After Culture ( (MSK) . Coconut water 20% tends to increase the number of leaves at age 6 Weeks After Culture (MSK) and increase the number of shoots aged 6 Weeks After Culture (MSK) , while for combination of 3 ppm Benzyl Amino Purine (BAP) and coconut water 20% tends to increase the number of leaves aged 2 Weeks After Culture (MSK) and the number of shoots aged 2 Weeks After Culture (MSK) . Combination of coconut water and Benzyl Amino Purine (BAP) is not detected by the content of Sulforaphane.
Keywords:  Brassica  oleraceae  var  italic  plenck,  Benzyl  Amino  Purine (BAP), Coconut  Water, Sulforaphane

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh pemberian Benzyl Amino Purine (BAP) dan Air Kelapa terhadap pertumbuhan tunas pucuk dan kandungan Sulforafan Brokoli ( Brassica oleracea L. var.  italic Plenck).  Penelitian  dilaksanakan  di  laboratorium  Bioteknologi  Jurusan  Budidaya,  Fakultas Pertanian  Universitas  Sam  Ratulangi,  Manado,  pada  bulan  Agustus-Desember  2017.  Penelitian  ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL), yang terdiri dari 8 perlakuan dan masing-masing diulang sebanyak  4  kali,  sehingga  didapatkan  32  satuan  percobaan.  Variabel  yang  diamati  ialah  jumlah  tunas, jumlah daun, tinggi tanaman, berat basah, jumlah akar dan analisis kandungan sulforafan. Hasil penelitian menunjukkan  bahwa  analisis  sidik  ragam  memperlihatkan  bahwa  pada  penggunaan  konsentrasi  BAP  3 ppm  cenderung  meningkatkan  jumlah  daun  umur  4  Minggu  Setelah  Kultur  (MSK)  dan  meningkatkan jumlah  tunas  umur  2  dan  6  minggu  setelah  kultur  (MSK). Benzyl  Amino  Purine (BAP) 3  ppm  dapat meningkatkan  berat  basah  umur  6  minggu  setelah  kultur  (MSK).  Air  kelapa  20  %  cenderung meningkatkan  jumlah  daun  pada  umur  6  minggu  setelah  kultur  (MSK)  dan  meningkatkan  jumlah  tunas umur  6  minggu  setelah  kultur  (MSK),  sedangkan  untuk  kombinasi  3  ppm Benzyl  Amino  Purine (BAP) dan  air  kelapa  20  %  cenderung  meningkatkan  jumlah  daun    umur  2  minggu  setelah  kultur  (MSK)  dan jumlah  tunas  umur  2  minggu  setelah  kultur  (MSK). Pemberian  kombinasi  air  kelapa  dan Benzyl  Amino Purine (BAP) tidak terdeteksi kandungan sulforafan.
Kata  kunci:    Broccoli  ( Brassica  oleraceae  var  italic plenk),  Benzyl  Amino  Purine  (BAP),  air  kelapa, Sulforafan
Pengaruh BAP ( Benzyl Amino Purine ) Dan Air Kelapa.............................(Alfrida Maninggolang,, Jeany Mandang, Wenny Tilaar)

## PENDAHULUAN
Latar Belakang Sulforafan
merupakan senyawa antioksi-dan  paling  ampuh  yang  tersimpan pada  tanaman  brokli,  selain  betakaroten, indola, kuersetin, dan glutation.  Brokoli juga sangat  kaya  akan  mikromineral  kromium, yang membantu meredam melonjaknya kadar gula  darah  pada  penderita  kencing  manis (Diabetes  mellitus),  sehingga  pemanfaatan sayuran  brokoli  ini  sangat  disarankan  untuk penderita  kencing  manis  (Apriadji,  2008). Sehubungan  dengan  fungsi  tanaman  Brokoli ini  sebagai  tanaman  obat  yang  mengandung metabolit  sekunder,  terutama  sulforafan, maka  perlu  dikembangkan,  yang  ditujukan pada  peningkatan  sulforafan  dalam  kultur yang  terkait  dengan  pengaruh  perangsangan zat pengatur tumbuh (Rumondor, 2013)
Senyawa  glukorafanin  serta  sulforafan banyak terdapat pada Brassica dan Euporbiaceae. Hasil penelitian tentang pengaruh  NAA  dan  BAP  menunjukan  bahwa terdapat  interaksi  antara  NAA  dan  BAP dalam  pengaruhnya  terhadap  kandungan sulforafan  pada  brokoli  secara  in  vitro. Kandungan  sulforafan  tertinggi  terdapat  pada perlakuan kombinasi NAA 1 ppm dan BAP 5 ppm  yaitu  24.32  mg/l  (Tilaar,  2016).    Salah satu  faktor  penentu  keberhasilan  kultur jaringan  tumbuhan  adalah  pengaruh  Zat Pengatur  Tumbuh.  Selain  penggunaan  zat pengatur  tumbuh  sitokinin  sintetik  maka dalam penelitian ini juga dilakukan penambahan  air  kelapa  sebagai  alternatif pengganti zat pengatur tumbuh pada media.
Zat  Pengatur  tumbuh  golongan  sitokinin yang  sering  digunakan  dalam  kultur  jaringan adalah BAP dan Kinetin (George & Sherrington,  1984).  BAP  adalah  sitokinin  yang sering  digunakan  karena  paling  efektif  untuk merangsang  pembentukan  tunas,  lebih  stabil dan  tahan  terhadap  oksidasi  serta  paling  murah diantara  sitokinin  lainnya  (Nurjanah,  2009). Penelitian  yang  dilakukan  oleh  (Tilaar  & Rantung, 2013) menjelaskan bahwa BAP 2 ppm mampu mempercepat waktu bertunas.
Air  kelapa  merupakan  senyawa  organik yang  sering  digunakan  dalam  aplikasi  teknik kultur  jaringan.  Menurut  Bey,  Syafii,  & Sutrisna  (2006)  perlakuan  air  kelapa  secara tunggal  pada  konsentrasi  250  ml/l  mampu menghasilkan pembentukan daun dan akar lebih cepat pada kultur in vitro anggrek (Phalaenopsis amabilis  BL.).  Mandang  (1993)  mendapatkan bahwa  kandungan  klorofil  jaringan  krisan  in vitro umur 10 MSK pada media yang diberi air kelapa 20 %, BAP dan IAA terhadap berat daun segar sebesar 1.551 mg/g.
Hasil penelitian diatas menunjukan bahwa  air  kelapa  mendorong  pertumbuhan beberapa tanaman dalam kultur jaringan. Hal ini diduga  dapat  disebabkan  karena  (Mandang, 2013)  :  1)  Air  kelapa  mengandung  komponen- komponen  hampir  sama  dengan  media  MS karena  mengandung  :  gula,  unsur-unsur  hara makro  dan  mikro,  asam  amino  dan  asam organik;  2)  Air  kelapa  sebagai  bahan  subitusi media  MS  :  pada  kultur  jaringan  krisan diperoleh bahwa subtitusi media MS dengan air kelapa  sampai  40%  mengahasilkan  berat  basah tunas  yang  lebih  tinggi  dibanding  yang menggunakan MS 100%; 3) Air kelapa sebagai pelengkap media MS artinya ditambahkan pada media  yang  komposisinya  lengkap  (100%). Penambahan  air  kelapa  berkisar  dari  15% samnpai  30%;  4)  Air  kelapa  sebagai  buffer  : pada  kultur  jaringan  krisan  yang  medianya disubtitusi  sebagian  dengan  air  kelapa  maka penurunan pH dapat ditekan.
Diduga ada pengaruh pemberian BAP dan air  kelapa  terhadap  pertumbuhan  kotiledon  dan kandungan Sulforafan Brokoli.

## Rumusan Masalah
Berdasarkan  latar  belakang  yang  sudah diuraikan  sebelumnya,  masalah-masalah  yang dapat ditarik yaitu :
1. Berapa  besar  konsentrasi  kombinasi  BAP dan Air Kelapa yang tepat untuk pertumbuhan  tunas  pucuk  dan  kandungan sulforafan Brokoli secara in vitro.
2. Bagaimana  respon  pertumbuhan  eksplan tanaman  brokoli  terhadap  pemberian  BAP dan Air Kelapa secara in vitro.

## Tujuan Penelitian
Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui pengaruh  pemberian  BAP  dan  Air  Kelapa terhadap pertumbuhan tunas pucuk dan kandungan sulforafan Brokoli secara in vitro.

## Manfaat Penelitian
Manfaat dari penelitian ini yaitu:
1. Mendapatkan  metode  perbanyakan  tunas pucuk Brokoli secara in vitro.
2. Memperoleh konsentasi zat pengatur tumbuh BAP dan Air Kelapa yang optimum untuk  pertumbuhan  tunas  pucuk  Brokroli secara in vitro.
3. Memperoleh kombinasi zat pengatur tumbuh BAP dan Air Kelapa yang optimum untuk  pertumbuhan  tunas  pucuk  Brokroli secara in vitro.
4. Memberikan  informasi  dasar  bagi  peneliti lebih  lanjut  mengenai  kajian  kultur  in  vitro pada tanaman Brokoli.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Tempat dan Waktu Penelitian
Penelitian
ini dilaksanakan di Laboratorium  Biotegnologi  Universitas  Sam Ratulangi  Manado  Sulawesi  Utara  pada  (Bulan Agustus 2017- Selesai).

## Bahan dan Alat Penelitian
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini meliputi:  Bibit  Brokoli,  agar  sebagai  pemadat, sukrosa,  Air Kelapa  varietas  tenga  umur  7  bulan, BAP,  Klorox,  Alkohol  70 %  dan  95  %,  Betadine dan  Aquadest  steril,  dan  bahan  lain  yang mendukung  penelitian  ini.  Media  dasar  yang digunakan  adalah  media  MS  (Murashige  and Skoog) ditambah dengan beberapa rasio konsentrasi BAP dan Air Kelapa.
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  peralatan  gelas  (botol  kultur,  gelas  ukur, beaker glass, erlenmeyer, dan petridish), timbangan analitik, pH meter, autoclave, Laminar Air Flow (LAF), peralatan diseksi (pinset, gunting dan  skalpel),  stirer,  lampu  spiritus,  rak  kultur dengan  lampu  40  watt  dan  alat  lain  yang mendukung penelitian ini.

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Faktorial  dalam  Rancangan  Acak  Lengkap  yaitu kombinasi  antara  Air  Kelapa  dalam  2  taraf  dan BAP  dalam  4  taraf,  sehingga  di  dapatkan  8 kombinasi  perlakuan  dan  di  ulang  sebanyak  4 kali.  Susunan  perlakuan  penelitian  dapat  dilihat pada Tabel 1.

## Tabel 1. Susunan Perlakuan Dalam Penelitian
Perlakuan Komposisi Media Air Kelapa (%) BAP (ppm) A 0 0 B 0 1 C 0 2 D 0 3 E 20 0 F 20 1 G 20 2 H 20 3 Metode matematik Rancangan Acak
Lengkap  menurut  Gomez  and  Gomez  (1995) sebagai berikut : Y ij = µ + αi + ɛĳ Dimana :
Y ij = Hasil pengamatan pada perlakuan ke-i ulangan ke-j µ = Rataan umum αi = Perlakuan ke-i ɛĳ = Pengaruh galat dari perlakuan ke-I ulangan ke-j i = 1, 2, 3,…8 j = 1, 2, 3, 4

## Variabel Pengamatan
Variabel yang diamati pada penelitian ini:
1. Jumlah  tunas  di  hitung  saat  2,  4,  6  minggu setelah kultur.
2. Tinggi tunas di saat 6 minggu setelah kultur.
3. Jumlah  daun  di  hitung  saat  2,  4,  6  minggu setelah kultur.
4. Jumlah  akar  di  hitung  saat  6  minggu  setelah kultur.
5. Berat  basah  di  timbah  saat  umur  6  minggu setelah kultur.
6. Analisis kandungan Sulforafan

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  dari  hasil  pengamatan dianalisis dengan analisis ragam. Apabila berbeda nyata,  maka  dilanjutkan  dengan  uji  Beda  Nyata Terkecil (BNT).
Pengaruh BAP ( Benzyl Amino Purine ) Dan Air Kelapa.............................(Alfrida Maninggolang,, Jeany Mandang, Wenny Tilaar)

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Jumlah Daun
Analisis ragam jumlah daun umur 2, 4 dan 6 MSK menunjukkan bahwa perlakuan BAP tidak memberikan  pengaruh  nyata  terhadap  jumlah daun  umur  2  dan  6  MSK,  tetapi  memberikan pengaruh  nyata  terhadap  jumlah  daun  umur  4 MSK  yaitu  6.38  namun  tidak  berbeda  dengan perlakuan  B0  dan  B1  tapi  berbeda  dengan perlakuan  B2.  Pengaruh  BAP  terhadap  jumlah daun  umur  4  MSK  disajikan  pada  Tabel  2  dan Gambar 1.

## Tabel  2.  Pengaruh BAP Terhadap Jumlah Daun Umur
4 MSK (minggu setelah kultur) Perlakuan Rata-rata Jumlah Daun BAP (mg/l) B0 (0 ppm) B1 (1 ppm) B2 (2 ppm) B3 (3 ppm)
5.13 ab 6.25 b 3.25 a
6.38 b BNT 5% 2.90
Keterangan:  Angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama,
tidak berbeda nyata berdasarkan uji BNT 5%.
B0 = 0 ppm BAP
B1 = 1 ppm BAP A0= 0 % Air Kelapa
A0 = 0 % Air Kelapa B2 = 2 ppm BAP B3 = 3 ppm BAP A0= 0 % Air Kelapa A0 = 0 % Air Kelapa
Gambar 1.  Jumlah Daun Umur 4 MSK (minggu setelah kultur)
Rata-rata  jumlah  daun  umur  4  MSK menunjukkan  perlakuan  BAP  3  ppm  memiliki rerata  tertinggi  yaitu  6.38  helai,  ini  menunjukkan BAP  dapat  memberikan  pengaruh  pada  jumlah daun  meski  perlakuan  BAP  3  ppm  tidak  berbeda dengan  perlakuan  BAP  0  ppm  dan  BAP  1  ppm namun  berbeda  dengan  perlakuan  BAP  2  ppm
yaitu  3.25  helai  (Tabel  2  dan  Gambar  1). Fithriyandini,  Maghfoer  &  Wardiyati,  (2015) mendapatkan bahwa penggunaan BAP 2,5 ppm + ½  MS  pada  tanaman  angrek  dapat  menghasilkan daun  sebanyak  6  helai  pada  12  MSK.  Pada penelitian  lainnya  oleh  Talukder et al,  (2003) melaporkan  bahwa  pemberian  BAP  2,5  mg/l  air menghasilkan  jumlah  daun  tertinggi  yaitu  2,55 helai  pada  anggrek.  Penggunaan  ZPT  dalam kultur in  vitro pada  batas-batas  tertentu  mampu merangsang  pertumbuhan,  namun  dapat  bersifat penghambat apabila digunakan melebihi konsentrasi  optimum  (George  &  Sherrington, 1984).
Pengaruh  air  kelapa  terhadap  jumlah  daun umur  6  minggu  setelah  kultur  menunjukan  tidak berpengaruh nyata (Tabel 3 dan Gambar 2).
Tabel  3.   Pengaruh Air Kelapa Terhadap Jumlah Daun
Umur 6 MSK (minggu setelah kultur) Perlakuan Rata-rata Jumlah Daun Air Kelapa (%) A0 (0) A20 (20) 13.13 a 21.31 a BNT 5% 10.77
Keterangan:    Angka yang diikuti dengan huruf yang sama,
tidak  berbeda  nyata  berdasarkan  uji  BNT 5%.
Tabel  3  dan  Gambar  2,  rata-rata  jumlah daun terbanyak pada perlakuan air kelapa dengan konsentrasi  20  %  yaitu  21.31  ini  menunjukan bahwa  air  kelapa  cenderung  memperbanyak jumlah  daun.  Hal  ini  di  buktikan  oleh  Astutik (2008)  mendapatkan  dengan  penambahan  air kelapa sebesar 7.5 % mampu mendapatkan jumlah daun  pisang  ambon  terbanyak  yaitu  6.90. Sulistiyorini,  Maynarti  &  Syafaruddin  (2012) menyatakan  penambahan  20  %  air  kelapa  pada tanaman  lada  mampu  mendapatkan  rerata  jumlah
daun  tertinggi  yaitu  7.20.  Hal  ini  disebabkan karena  penambahan  air  kepala  sampai  40  % mampu meningkatkan tinggi tanaman dan jumlah tunas tanaman  krisan  (Mandang,  1993).  Selanjut- nya  Wattimena  (1988)  menyatakan  bahwa  air kelapa mengandung zat aktif untuk perkembangan embrio  seperti  sitokinin,  sitokinin  mempengaruhi metabolisme  asam  nukleat  dan  sintesa  protein yang  berpengaruh  terhadap  pembelahan  sel  dan diferensiasi tanaman.
Rata  –rata  jumlah  daun  dari  perlakuan kombinasi  BAP  dan  Air  Kelapa  umur  2  minggu setelah  tanam  disajikan  pada  Tabel  4  dan  bisa  di lihat pada Gambar 3 .
Tabel 4.     Pengaruh Kombinasi BAP dengan Air Kelapa
Terhadap Jumlah Daun Umur 2 MSK AK (%) BAP (mg/l) Rata-rata 0 1 2 3 0 2.50 ab 1.75 ab 2.50 ab 1.25 a 2.00 20 2.75 b 1.25 a 1.50 a 2.50 ab 2.00 Rata-rata  2.63 1.50 2.00 1.88 BNT 5%  1.15
Keterangan:    Angka yang diikuti dengan huruf yang sama, tidak berbeda nyata berdasarkan uji BNT 5%.
B0   = 0 ppm BAP B1   = 1 ppm BAP A20 = 20 % Air Kelapa A20 = 20 % Air Kelapa B2    = 2 ppm BAP B3   = 3 ppm BAP
A20 = 20 % Air Kelapa
A20 = 20 % Air Kelapa
Gambar 3. Jumlah Daun in vitro umur 2 MSK.
Tabel 4 dan Gambar 3 menunjukkan bahwa rerata  jumlah  daun  terbanyak  pada  perlakuan kombinasi  0  ppm  BAP  dan  20%  air  kelapa  yaitu 2.75,  meskipun  perlakuan  ini  tidak  berbeda dengan perlakuan 0 % air kelapa + 0 ppm BAP, 0 %  air  kelapa +  1  ppm  BAP,  0  %  Air Kelapa  + 2 ppm  BAP  dan  20  %  Air  Kelapa  +  3  ppm  BAP, namun  air  kelapa  cenderung  dapat  meningkatkan jumlah  daun.  Menurut  Bulago,  Akannde  & Ogunbodede  (2007)  bahwa  penggunaan  BAP dengan  konsentrasi  1.5  mg/l  dilaporkan  mampu
menghasilkan jumlah daun tertinggi pada tanaman Telfairia  occidentalis Hook.  Penggunaan  BAP  3 ppm/l  menghasilkan  jumlah  daun  terbanyak tanaman  Anggrek  ( Dendrobium  sp) dengan  rata- rata  9.81  jumlah  daun  per  tunas  (Meklin  &  dkk, 2015).
Amutha et  al (2003)  menyatakan  bahwa penggunaan  Air  Kelapa  pada  konsentrasi  10  % dapat merangsang pembentukan tunas pada 4 var. tanaman  kacang  hijau,  sehingga  secara  tidak langsung  perlakuan  yang  digunakan  dapat meningkatkan  jumlah  daun  yang  terbentuk dikarenakan  Air  Kelapa  memiliki  unsur  K  tinggi diikuti  Na,  Mg  dan  unsur-unsur  lainnya.  Proses pembentukan  daun  dalam  kultur in  vitro dengan penggunaan Air Kelapa berkaitan dengan keberadaan  unsur  K  dan  Mg  yang  relatif  tinggi pada  media  yang  digunakan.  Berdasarkan komposisi  mineral  dan  hormon  yang  terkandung pada  Air  Kelapa  maka  diduga  pemberian  Air Kelapa  dapat  memberikan  pengaruh  yang  baik terhadap rata-rata jumlah daun per eksplan.

## Jumlah Tunas
Dari hasil analisis ragam didapatkan bahwa BAP  3  ppm  dapat  memberikan  pengaruh  nyata pada umur 2 dan 6 MSK (minggu setelah kultur). Rata-rata  jumlah  tunas  dari  perlakuan  BAP  umur 2 dan 6 MSK disajikan pada Tabel 5 dan Gambar 4 dan 5.
Tabel 5.   Pengaruh BAP Terhadap Jumlah Tunas Umur 2 dan 6 MSK Perlakuan Rata-rata Jumlah Tunas (MSK) BAP (mg/l) 2 6 B0 (0 ppm) B1 (1 ppm) B2 (2 ppm) B3 (3 ppm) 1.00 a 1.38 a 1.25 a
2.75 b
6.13 a
7.88 a
8.38 ab 12.13 b BNT 5% 1.16 4.16
Keterangan:      Angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama,
tidak berbeda nyata berdasarkan uji BNT 5%.
Pengaruh BAP ( Benzyl Amino Purine ) Dan Air Kelapa.............................(Alfrida Maninggolang,, Jeany Mandang, Wenny Tilaar)
Tabel  5  dan  Gambar  4  serta  Gambar  5, menunjukkan  bahwa  perlakuan  BAP  3  ppm memberikan pengaruh nyata pada umur 2 dengan rerata  jumlah  tunas  tertinggi  yaitu  2.75.  Pada umur  6  MSK  perlakuan  BAP  3  ppm  berbeda nyata  dengan  perlakuan  B0  (0  ppm),  B1  (1  ppm) namun  tidak  berbeda  dengan  perlakuan  B2  (2 ppm).
Sebagaimana Tilaar, (2012) mendapatkan rata-rata  jumlah  tunas  terbanyak  pada  tanaman brokoli dengan konsentrasi 2.5 ppm BAP yaitu 17 tunas. Penelitian lainnya yang dilakukan oleh Al- saif,  Hossain  &  Taha  (2011)  mendapatkan konsentrasi  BAP  2  mg/l  merupakan  konsentrasi efektif  untuk  pertumbuhan  dan  perkembangan tunas  nenas.  Pada  tanaman  tembakau,  Nisak, Nurhidayati  &  Purwanin  (2012)  mendapatkan konsentrasi  BAP  4  ppm  +  0.1  ppm  NAA memiliki  rerata  tertinggi  yaitu  52.5  tunas,  hal  ini menunjukan bahwa BAP sebagai sitokinin sangat efektif  untuk  menginisiasi  tunas  secara  langsung maupun tidak langsung. Kombinasi IAA 0.1 ppm +  BAP  3  ppm  menghasilkan  rerata  jumlah  tunas terbanyak  yaitu  8  tunas  pada  tanaman  kentang secara in-vitro (Septiana,  Slameto  &  Restanto, 2014).
Dari  hasil-hasil  penelitian  tersebut  diatas dapat  dikatakan  bahwa  BAP  dapat  meningkatkan jumlah  tunas.  Hal  ini  dikarenakan  berkaitan dengan fungsi fisiologis sitokinin dapat merangsang  pembelahan  sel  dan  peran  sitokinin dalam  morfogenesis  adalah  dalam  pembentukan tunas (Hess dalam Tilaar, 2016).
Rata-rata  jumlah  tunas  dari  perlakuan  air kelapa  umur  6  MSK  disajikan  pada  Tabel  6  dan Gambar 6 .
Tabel  6.    Pengaruh  Air  Kelapa  Terhadap  Jumlah  Tunas Umur 6 MSK Perlakuan Rata-rata Jumlah Tunas Air Kelapa (%) A0 (0) A20 (20) 6.44 a 10.81 b BNT 5% 4.16
Keterangan:    Angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama, tidak berbeda nyata berdasarkan uji BNT 5%.
Tabel  6  dan  Gambar  6,  menunjukkan bahwa perlakuan air kelapa memberikan pengaruh nyata  pada  jumlah  tunas  umur  6  MSK  dengan rerata  jumlah  tunas  10.81  dan  berbeda  nyata dengan  perlakuan  tanpa  air  kelapa.  Mandang, 1997  mendapatkan  pada  penambahan  air  kelapa hingga  45  %  mampu  meningkatkan  jumlah  tunas tanaman  krisan  sebesar  10.2  tunas  /eksplan.  Hal ini  menunjukkan  bahwa  penambahan  air  kelapa dapat  meningkatkan  jumlah  tunas.  Rata-rata jumlah  tunas  dari  perlakuan    kombinasi  BAP dengan  air  kelapa  disajikan  pada  Tabel  7  dan Gambar 7.

## Tabel 7.  Pengaruh Kombinasi BAP dengan Air Kelapa
Terhadap Jumlah tunas Umur 2 MSK AK (%) BAP (mg/l) Rata-rata 0 1 2 3
0 1.00 a 1.75 ab 1.25 a 2.50 bc 1.63 20 1.00 a 1.00 a 1.25 a 3.00 c 1.56 Rata-rata  1.00 1.38 1.25 2.75 BNT 5%  1.16
Keterangan:   Angka yang diikuti dengan huruf yang sama, tidak  berbeda    nyata  berdasarkan  uji  BNT 5%.
Tabel  7  dan  Gambar  7,  menunjukkan bahwa  nilai  rerata  tertinggi  jumlah  tunas  pada pengamatan  umur  2  MSK  terdapat  pada perlakuan  kombinasi  3  ppm  BAP  dan  20%  Air Kelapa yaitu 3.00 berbeda nyata dengan 0 ppm BAP    +  Air  Kelapa  20  %,  1  ppm  BAP  +  Air Kelapa 20 % dan 2 ppm BAP + Air Kelapa 20
%, 0 ppm BAP + 0 % Air Kelapa, 1 ppm BAP +  0  %  Air  Kelapa  dan  2 ppm    BAP  +  0  %  Air Kelapa  namun  tidak  berbeda  dengan  3  ppm BAP  +  0  %  Air  Kelapa.  Ini  menunjukkan bahwa  air  kelapa  cenderung  meningkatkan jumlah  tunas  meski  tidak  berbeda  dengan perlakuan  3  ppm  BAP  tanpa  penambahan  air kelapa.
Menurut  Suminar  dkk  (2017)  konsentrasi BAP  1.5  mg/l  merupakan  perlakuan  terbaik pada  multiplikasi  eksplan  embrionik  axis kedelai  var.  Mutiara  I  secara in  vitro. Wattimena  dkk  (1988)  meyebutkan  bahwa difenilurea  yang  terkandung  dalam  Air  Kelapa memiliki  aktivitas  sama  seperti  sitokinin, sehingga  dalam  penggunaannya  Air  Kelapa mampu merangsang pembentukan tunas dengan nilai  tertinggi  namun  tidak  berbeda  nyata dengan  perlakuan  yang  menggunakan  sitokinin sintetik. Air kelapa yang disubtitusi pada media kultur  akan  meningkatkan  pertumbuhan  tunas tanaman  krisan  dan  anggrek  (Mandang  et  al (1997)  dan  Matatula  (2003).  Air  kelapa  pada media kultur jaringan memperbaiki pertumbuhan  tunas,  medorong  pertumbuhan kalus  dan  morfogenisis  (Wattimena,  Polii- Mandang & Purwito, 1990).

## Tinggi Tunas
Data  dan  analisis  ragam  tinggi  tunas dapat  dilihat  pada  Lampiran  3.  Berdasarkan analisis ragam tinggi tunas menunjukkan bahwa perlakuan  BAP  memberikan  pengaruh  nyata terhadap  tinggi  tunas  sedangkan  perlakuan  air kelapa  dan  perlakuan  kombinasi  BAP  dengan air  kelapa  tidak  memberikan  pengaruh  nyata terhadap tinggi tunas. Rata-rata tinggi tunas dari perlakuan  BAP  disajikan  pada  Tabel  8  dan Gambar 8.
Tabel  8.    Pengaruh  BAP  Terhadap  Tinggi  Tunas  dan
Berat Basah Perlakuan Rata-rata Tinggi Tunas (cm) Rata-rata Berat Basah (g) BAP (mg/l) B0 (0 ppm) B1 (1 ppm) B2 (2 ppm) B3 (3 ppm) 9.88 b 4.04 a 3.75 a
4.90 a
0.736 a 1.024 a 1.175 a 2.479 b BNT 5% 2.90 1.19
Keterangan:   Angka yang diikuti dengan huruf yang sama, tidak    berbeda  nyata  berdasarkan  uji  BNT 5%.
Tabel  8  dan  Gambar  8,  menunjukkan bahwa  tinggi  tunas  tertinggi  pada  perlakuan  0 ppm BAP berbeda nyata dengan perlakuan B1 (1 ppm  BAP),  B2  (2  ppm  BAP),  dan  B3  (3  ppm BAP).  Namun  tanaman  pada  perlakuan  0  ppm BAP menunjukan pertumbuhan yang kurang vigor karena tanaman nampak seperti etiolasi. Pengaruh BAP yang terjadi setelah di analisis Tilaar, (2012) juga  mendapatkan  konsentrasi  0  ppm  NAA  +  0 ppm  BAP  menghasilkan  rerata  tinggi  tunas  yang terbaik yaitu 6.50 pada tanaman Brokoli. Menurut Hess  dalam  Tilaar  (2012)  menyatakan  bahwa fungsi  sitokinin  seperti  BAP  hanya  untuk pembelahan  sel,  sehingga  BAP  menekan  tinggi tunas  dan  secara  morfogenesis  BAP  berperan pada  pembentukan  tunas  karena  adanya  fungsi tersebut  menunjukan  bahwa  penambahan  BAP tidak berpengaruh pada tinggi tanaman.
Hal ini menunjukan bahwa salah satu faktor tanaman tidak dapat mengendalikan lagi pertumbuhan  tingginya  ialah  dengan  pemberian ZPT,  menurut  Heti,  dkk  (2015)  bahwah  hasil  uji BNT dengan kombinasi NAA dan BAP pada taraf NAA  5 m  dan  BAP  0 m  menunjukan  tinggi tunas  yang  baik  yaitu  sebesar  1.20  cm  dan  ini tidak  berbeda  dengan  pemberian  NAA  0 m  dan BAP  18 m  yaitu  1.13  cm  pada  tanaman Nepenthe  ampullaria Jack,  ini  membuktikan bahwa  untuk  menghasilkan  tanaman  yang  cukup tingi  hanya  diperlukan  NAA  yang  rendah  tanpa perlu menggunakan BAP. Tabel 8  dan Gambar 8 menunjukkan  bahwa  tinggi  tunas  tertinggi  pada perlakuan  0  ppm  BAP  berbeda  nyata  dengan perlakuan B1 (1 ppm BAP), B2 (2 ppm BAP), dan B3 (3 ppm BAP). Namun tanaman pada perlakuan 0  ppm  BAP  menunjukan  pertumbuhan  yang kurang  vigor  karena  tanaman  nampak  seperti etiolasi.  Pengaruh  BAP  yang  terjadi  setelah  di analisis Tilaar, (2012) juga mendapatkan konsentrasi  0  ppm  NAA  +  0  ppm  BAP menghasilkan  rerata  tinggi  tunas  yang  terbaik
Pengaruh BAP ( Benzyl Amino Purine ) Dan Air Kelapa.............................(Alfrida Maninggolang,, Jeany Mandang, Wenny Tilaar)
yaitu 6.50 pada tanaman Brokoli. Menurut Hess dalam  Tilaar  (2012)  menyatakan  bahwa  fungsi sitokinin  seperti  BAP  hanya  untuk  pembelahan sel,  sehingga  BAP  menekan  tinggi  tunas  dan secara  morfogenesis  BAP  berperan  pada pembentukan  tunas  karena  adanya  fungsi tersebut  menunjukan  bahwa  penambahan  BAP tidak berpengaruh pada tinggi tanaman.
Hal  ini  menunjukan  bahwa  salah  satu faktor  tanaman  tidak  dapat  mengendalikan  lagi pertumbuhan tingginya ialah dengan pemberian ZPT, menurut Heti, dkk (2015) bahwah hasil uji BNT  dengan  kombinasi  NAA  dan  BAP  pada taraf  NAA  5 m  dan  BAP  0 m  menunjukan tinggi  tunas  yang  baik  yaitu  sebesar  1.20  cm dan ini tidak berbeda dengan pemberian NAA 0 m  dan  BAP  18 m  yaitu  1.13  cm  pada tanaman Nepenthe ampullaria Jack, ini membuktikan  bahwa  untuk  menghasilkan tanaman  yang  cukup  tingi  hanya  diperlukan NAA  yang  rendah  tanpa  perlu  menggunakan BAP.

## Berat Basah
Analisis  ragam  berat  basah  menunjukkan bahwa  perlakuan  BAP  memberikan  pengaruh nyata terhadap berat basah, sedangkan perlakuan  air  kelapa  dan  perlakuan  kombinasi BAP  dengan  air  kelapa  tidak  memberikan pengaruh  nyata  terhadap  berat  basah.  Rata-rata berat  basah  dari  perlakuan  BAP  disajikan  pada Tabel  8.  Tabel  8  menunjukkan  bahwa  berat basah tertinggi pada perlakuan 3 ppm BAP dan berbeda  nyata  dengan  perlakuan  B0  (0  ppm BAP), B1 (1 ppm BAP)  dan B2 (2 ppm BAP). Hasil yang didapatkan berat basah tidak selaras dengan  tinggi  tanaman  (Tab.8),  tanpa  BAP tanaman  tinggi  namun  perlakuan  BAP  dan  Air Kelapa  tanaman  pendek  dan  memiliki  berat basah paling rendah. Hal ini disebabkan karena tanaman tersebut tinggi namun tidak vigor.
Auksin  dalam  konsentrasi  rendah  dan dikombinasikan dengan sitokinin dalam konsentrasi  tertentu  mampu  mempercepat perpanjangan  tunas  (Klerk,  2006).  Auksin menstimulasi  pembesaran  dan  perpanjangn  sel setelah  terjadi  pembelahan  sel  yang  distimulir oleh  sitokinin.  Septiana,  Slameto  &  Restanto, (2014) kombinasi IAA 0,1 ppm dan BAP 3 ppm menghasilkan  rerata  tinggi  tunas  yaitu  10,9  cm
pada  nodus  tangkai  bunga  anggrek  bulan ( Phalaenoosis amabilis ). Pemberian konsentrasi BAP  yang  tinggi  tidak  dapat  meningkatkan tinggi  planlet,  ini  disebabkan  karena  BAP adalah  sitokinin  yang  dapat  mendorong pembelahan  sel,  membantu  perkembangan embrio  seara  teratur  pada  perkecambahan  biji, menghambat degradasi klorofil dan menghambat penuaan (Noggle & Fritz, 1977).

## Jumlah Akar
Analisis ragam jumlah akar menunjukkan bahwa  perlakuan  BAP  memberikan  pengaruh nyata terhadap jumlah akar, sedangkan perlakuan  air  kelapa  dan  perlakuan  kombinasi BAP  dengan  air  kelapa  tidak  memberikan pengaruh nyata terhadap jumlah akar. Rata-rata jumlah akar dari perlakuan BAP disajikan pada Tabel 9 dan Gambar 9.
Tabel 9. Pengaruh BAP Terhadap Jumlah Akar Perlakuan Rata-rata Jumlah Akar BAP (mg/l) B0 (0 ppm) B1 (1 ppm) B2 (2 ppm) B3 (3 ppm) 7.75 b 0.00 a 0.13 a 0.00 a BNT 5% 1.27
Keterangan:  Angka  yang  diikuti  dengan  huruf  yang  sama, tidak berbeda  nyata berdasarkan uji BNT 5%
Tabel  9  dan  Gambar  9,  menunjukkan bahwa jumlah akar terbanyak pada perlakuan 0 ppm  BAP  dan  berbeda  nyata  dengan  perlakuan B1  (1  ppm  BAP),  B2  (2  ppm  BAP)  dan  B3  (3 ppm  BAP).  Penggunaan  BAP  sebagai  sitokinin pada dasarnya berfungsi untuk memicu pecahnya  seludang  tunas  dan  tumbuhan  mata tunas, selain itu BAP akan mencegah dominansi
apikal  sehingga  pertumbuhan  tunas  samping tidak  terhambat  (Salisbury  dan  Roos,  1992). BAP  memiliki  sifat  yang  sangat  aktif  yang berperan  dalam  diferensiasi  sel,  memicu pertumbuhan  tunas,  proliferasi  tunas  ketiak dan  justru  menghabat  pembentukan  akar (Wattimena, 1988).
Pertumbuhan akar terjadi pada saat tanaman  telah  berkembang  lengkap  sehingga auksin endogen yang berperan dalam pembentukan akar telah tersintesis pada pembentukan pucuk dan terakumulasi pada daerah pangkal  tunas.  Auksin  endogen  dibentuk  pada pucuk  yaitu  IAA  dan  turun  ke  dasar  tanaman sehingga  akan  merangsang  perakaran,  selain  itu auksin  berfungsi  untuk  merangsan  pembesaran dan pemanjangan sel dan merangsan pembentukan akar (Hess dalam Tilaar, 2012). Isda &  Fatonah,  (2014)  mendapatkan  rerata  jumlah akar  terbanyak  pada  eksplan  anggrek  sebanyak  5 buah dengan konsentrasi kombinasi BAP 0,5 ppm dan  NAA  0,5  ppm.  Mukhtar et al  (2005) menyatakan bahwa pemberian 2 mg/l NAA dapat memberikan  hasil  terbaik  terhadap  panjang  akar Citrus  reticulate, hal  ini  menunjukan  bahwa konsentrasi  NAA  yang  optimum  dalam  induksi dan pemanjangan akar setiap taman berbeda-beda dan  dipengaruhi  keseimbangan  antara  hormon endogen (IAA) dan hormon eksogen. Tabel 9 dan Gambar  9,  menunjukkan  bahwa  jumlah  akar terbanyak  pada  perlakuan  0  ppm  BAP  dan berbeda nyata dengan perlakuan B1 (1 ppm BAP), B2  (2  ppm  BAP)  dan  B3  (3  ppm  BAP). Penggunaan BAP sebagai sitokinin pada dasarnya berfungsi untuk memicu pecahnya seludang tunas dan  tumbuhan  mata  tunas,  selain  itu  BAP  akan mencegah dominansi apikal sehingga pertumbuhan  tunas  samping  tidak  terhambat (Salisbury  dan  Roos,  1992).  BAP  memiliki  sifat yang sangat aktif yang berperan dalam diferensiasi  sel,  memicu  pertumbuhan  tunas, proliferasi  tunas  ketiak      dan  justru  menghabat pembentukan akar (Wattimena, 1988).
Pertumbuhan akar terjadi pada saat tanaman  telah  berkembang  lengkap  sehingga auksin endogen yang berperan dalam pembentukan akar telah tersintesis pada pembentukan pucuk dan terakumulasi pada daerah pangkal  tunas.  Auksin  endogen  dibentuk  pada pucuk  yaitu  IAA  dan  turun  ke  dasar  tanaman sehingga  akan  merangsang  perakaran,  selain  itu auksin  berfungsi  untuk  merangsan  pembesaran
dan pemanjangan sel dan merangsan pembentukan akar (Hess dalam Tilaar, 2012). Isda &  Fatonah,  (2014)  mendapatkan  rerata  jumlah akar  terbanyak  pada  eksplan  anggrek  sebanyak  5 buah dengan konsentrasi kombinasi BAP 0,5 ppm dan  NAA  0,5  ppm.  Mukhtar et al  (2005) menyatakan bahwa pemberian 2 mg/l NAA dapat memberikan  hasil  terbaik  terhadap  panjang  akar Citrus  reticulate, hal  ini  menunjukan  bahwa konsentrasi  NAA  yang  optimum  dalam  induksi dan pemanjangan akar setiap taman berbeda-beda dan  dipengaruhi  keseimbangan  antara  hormon endogen (IAA) dan hormon eksogen.

## Kandungan Sulforafan
Analisis  kandungan  sulforafan  menun- jukkan ke delapan perlakuan yang di berikan pada tanaman  brokoli  tidak  terdeteksi  kandungan sulforafan.  Ada  berbagai  macam  kendala  yang terjadi  pada  keadaan  ini,  adanya  hal-hal menyangkut  faktor    eksternal  maupun  faktor internalnya.  Faktor  eksternal  meliputi  :  cahaya dan suhu, dan faktor internalnya meliputi : faktor pemberian ZPT, sumber karbon, derajat keasaman,  prasat  (precursor),  imobilisasi  sel  dan elisitasi.  Faktor  eksternal  dan  faktor  internal adalah sebagai berikut:
1. Faktor eksternal
Cahaya  merupakan  faktor  penentu dalam  peningkatan  kandungan  metabolik sekunder  dikarenakan  adanya  fotoperioditas. Masing-masing  tanaman  memiliki  respon yang  berbeda  terhadap  cahaya,  contoh  nyata pada kultur kalus Haplopappus gracillis lebih tinggi jika kultur berada dalam gelap selama 3 hari  sebelum  didedahkan  pada  cahaya dibandingkan  jika  kultur  berada  dalam  gelap selama  1  hari  sebelum  didedahkan  pada cahaya  (Mantell  &  Smith,  1983).  Pada penelitian  Kurata,  dkk  (1999)  dan  Sartor  & Mazzafera  (2000)  mendapatkan  pada  kultur sel  kopi  arabika  dengan  melakukan  stress intensitas  cahaya  yang  tinggi  maka  terjadi peningkatan  kandungan  kafein  pada  sel-sel kopi.
Kandungan metabolik sekunder dipengaruhi  juga  oleh  suhu.  Kumar et al (2012)  mendapatkan  perlakuan  suhu  pada kultur  kalus Heliotropium  indicum L  pada
Pengaruh BAP ( Benzyl Amino Purine ) Dan Air Kelapa.............................(Alfrida Maninggolang,, Jeany Mandang, Wenny Tilaar)
media  MS  dengan    perlakuan  suhu  25 0 C memiliki kandungan flavonoid tertinggi (1,67 ±  0.04  mg/g).  Zhong  &  Yoshida  (2003) menyatakan  bahwa  produksi  anthocyanin dapat  berkurang  pada  temperatur  lebih  tinggi dari 28 0 C dan optimal pada 25 0 C. Kandungan nikotin pada kultur kalus tembakau pada suhu 27 0 C  meningkat  100-200  %  (Mantell  & Smith,  1983).  Hal  ini  menunjukan  bahwa suhu  juga  berpengaruh  pada  metabolik sekunder  namun  respons  suhu  pada  setiap tanaman berbeda-beda.
2. Faktor internal
Zat  pengatur  tumbuh  pada  macam  dan konsentrasi  yang  tepat  dapat  memacun sintesis metabolik sekunder. Mantell & Smith, 1983 mendapatkan bahwa penambahan konsentrasi  kinetin  yang  tinggi  pada  medium akan  menghambat  sintesis  alkaloid  pada tanaman Datura  tatula ,  sedangkan  pada tanaman Scopolia maxima konsentrasi kinetin yang  tinggi  justru  dapat  memacu  sintesis alkaloid.  Konsentrasi  kinetin  mg/l  dan  2,4-D mg/l semakin tinggi maka semakin tinggi pula kandungan  saponin  pada  tanaman Talinum peniculatum Gaert.
Nutrisi  dalam  medium  kultur  jaringan tumbuhan mempengaruhi metabolisme primer dan  sekunder  sel  (Misawa,  1994),  lanjutnya konsetrasi fosfat dapat meningkatkan kandungan indol alkaloid pada kultu C.roseus, dalam kultur sel Rosa sp kandungan senyawa  fenolik  menurun  jika  konsentrasi nitrogen organik dalam medium ditingkatkan. Pada  tanaman  tembakau  penambahan  50  g/l sukrosa  meningkatkan  kandungan  nikotin dalam  sel  tembakau  dibandingkan  dengan  20 g/l sukrosa. Derajat keasaman dapat mempengaruhi  metabolit  sekunder  pada kultur  jaringan,  pada  kultur  sel Ipomea  sp pada penambahan triptofan dalam medium pH 6,3  dapat  menghasilkan  triptofan  dua  kali lipat  leibh  tinggi  dibandingkan  dengan triptofan  yang  dihasilkan  pada  medium  pH 4,8 (Mantell & Smith, 1983).
Penambahan  prazat  (precursor)  dalam kultur  jaringan  dapat  meningkatkan  metabolik sekunder,  dalam  kultur  kalus Dioscorea deltoidea ditambahkan  100  ppm  kolesterol dapat  meningkatkan  produksi  diosgenin  hingga 100  %  (Chowdhury  &  Chaturvedi,  1980). Pemberian prazat metionin 10  ppm dan ekstrak benih  brokoli  3  g/l  pada  tanaman  brokoli mampuh  mening-katkan  kandungan  sulforafan (Rumondor, Polii-Mandang & Rotinsulu, 2013). Tanaman  tapak  darah  dengan  penambahan triptofan  50  sampai  250 mg/l  dapat meningkat- kan  kandungan  katarantin  dalam  kultur  tapak darah (Pandiangan dkk, 2011).

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian,  didapatkan penggunaan konsentrasi BAP 3 ppm cenderung meningkatkan  jumlah  daun  umur  4  (MSK) minggu setelah kultur dan meningkatkan jumlah tunas  umur  2  dan  6  (MSK)  minggu  setelah kultur.  BAP  3  ppm  dapat  meningkatkan  berat basah  umur  6  (MSK).  Air  kelapa  20  % cenderung  meningkat-kan  jumlah  daun  pada umur  6  (MSK)  minggu  setelah  kultur  dan meningkatkan  jumlah  tunas  umur  6  MSK, sedangkan untuk kombinasi 3 ppm BAP dan air kelapa  20  %  cenderung  meningkat-kan  jumlah daun    umur  2  MSK  dan  jumlah  tunas  umur  2 MSK.  Pemberian  kombinasi  air  kelapa  dan BAP  tidak  terdeteksi  kandungan  suforafan Berdasarkan  hasil  penelitian,  didapatkan  peng- gunaan  konsentrasi  BAP  3  ppm  cenderung meningkatkan  jumlah  daun  umur  4  (MSK) minggu setelah kultur dan meningkatkan jumlah tunas  umur  2  dan  6  (MSK)  minggu  setelah kultur.  BAP  3  ppm  dapat  meningkatkan  berat basah  umur  6  (MSK).  Air  kelapa  20  % cenderung  meningkat-kan  jumlah  daun  pada umur  6  (MSK)  minggu  setelah  kultur  dan meningkatkan  jumlah  tunas  umur  6  MSK, sedangkan untuk kombinasi 3 ppm BAP dan air kelapa  20  %  cenderung  meningkat-kan  jumlah daun    umur  2  MSK  dan  jumlah  tunas  umur  2 MSK.  Pemberian  kombinasi  air  kelapa  dan BAP tidak terdeteksi kandungan suforafan.

## Saran
1. Gunakanlah  Air  Kelapa  sebagai  bahan subtitusi  media  dan  sebagai  bahan alternatif  yang  mudah  di  dapatkan  dan harganya murah
2. Bisa  menggunakan  konsentrasi  air  kelapa lebih  dari  20%  sehingga  menghemat pemakaian zat pengatur tumbuh sintetik.
3. Diharapkan  melalui  penelitian  ini  bisa menjadi referensi untuk penelitian selanjutnya.

## DAFTAR PUSTAKA
,  (1993).  Peran  Air  Kelapa dalam  Kultur  Jaringan  Tanaman Krisan.  Disertasi.  Istitut  Pertanian Bogor.
,  (1995).  Air  Kelapa  Sebagai
Bahan  Subtitusi  Media  MS  pada Kultur Jaringan Krisan. Eugenia 1(1) :
1-11
Apriadji, W. H. (2008). Menimbang Keunggulan Sayuran Daun . Retrieved Maret  7,  2017,  from  multiply: http://kulinerkita.muliply.
com/reviews/items/506
Bey,  Y.,  Syafii,  W.,  &  Sutrisna.  (2006).
Pengaruh  Pemberian  Giberalin  (GA3) dan air kelapa terhadap perkecambahan  biji  anggrek  bulan (Phalaenopsis  amabilis  BL)  secara  in vitro. j. Biogenesis 2 (2) , 41-46.
Chowdhury,  A.  R.,  &  Chaturvedi,  H.  C.
(1980). Cholesterol and Bioshynthesis of  diosgenin  by  tuber  callus  of Dioscore  deltoidea. Curren  Science , (49) : 237-8.
Fithriyandini,  A.,  Maghfoer,  D.  M.,  & Wardiyati, T. (2015). Pengaruh Media Dasar dan 6-Benzylaminopurine (BAP)  terhadap  Pertumbuhan  dan Perkembangan  Nodus  Tangkai  Bunga Anggerk Bulan ( Phalaenopsis amabilis) dalam  perbanyakan  secara in vitro.
George,  E.  F.,  &  Sherrington,  P.  D.  (1984). Plant  Propagation  by  Tissue  Culture. England: Exegetics Limited.
Isda, N. M., Fatonah. S. (2014). Induksi Akar
Pada Eksplan Tunas Anggrek Gramatophylum scriptum var. Citrinum Secara in  vitro pada  Media MS  dengan  Penambahan  NAA  dan BAP.
Klerk,  G.  J.  (2006). Plant  Hormones  In  Tissue
Culture, In Duchefa Biochemie . Biochemicals  Plant  Cell  And  Tissue Culture Phytopathogy, Duchefa Biochemie BV, Haarlem. Netherlands.
Kumar,  M.  S  Balachandran,  S.,  Chaudhury,  S.
(2012). Influence of incubation temperatures on total phenolic, flavonoids  content  an  free  radical scavenging  activity  of  callus  from Heloitropium indicum L. Asia J. Pharm. Res, 2 (4): 148-152
Mandang,  J.  S.  (2013). Media  Kultur  Jaringan Tanaman. Manado: Bayumedia Publishing Anggota IKAPI.
Mantell,  S.  H.,  Matthews,  J.  A  and  R.  A.  MC.
Kee.  (1983).  Principles  of  Plant Biotechnology.  An  Introduction  to Genetic Engineering in Plant. Blackwell Scientific  Publ.  London.  Melbourne.  P. 197-204.
Matatula, A. J. (3003). Subtitusi Media MS dengan Air Kelapa dan Gandasil-D Pada Kultur Jaringan Krisan. Eugenia 9 (4) : 203-211
Pengaruh BAP ( Benzyl Amino Purine ) Dan Air Kelapa.............................(Alfrida Maninggolang,, Jeany Mandang, Wenny Tilaar)
Murashige, T. (1974). Plant Propagation through Tissue Culture . Ann. rev. Plant physiol , 135-166.
Nurjanah,  E.  (2009).  Pengaruh  Kombinasi NaCl  dan  ZPT  IBA  pada  Media  MS
Terhadap  Pertumbuhan  Galur  Mutan Padi  Secara  In  Vitro.  Prodi  Biologi, Fakultas Islam Negeri Syarif Hidayatullah. Pandiangan,  D.,  Tilaar,  W.,  Karyono.,  R.  R. Esyanti,  dan  A.  Subarnas.  (2011). Respons  Pertumbuhan,  Kadar  Protein dan Aktivitas Triptofan Dekarboksilase Agregat sel ( Chatarantus roseus .L). G. Don yang diberi Prekursor Triptofan. J. Bionatura Vol. 13 (1): 6-15
Rumondor, M. J., Polii-Mandang, J., Rotinsulu,  W.  (2013).  Peningkatan Sulforafan Brokoli (Brassica Oleraceae  L.  Var.  Italica)  dengan Mondifikasi Media pada Kultur
Jaringan. Mipa UNSRAT Online 2 , 60- 65.
Septiana,  A.  A.,  Slameto.,  Restanto,  D.  P.
(2014).  Pengaruh  Hormon  IAA  dan
BAP Terhadap Perbanyakan Tanaman Kentang  ( Solanum  tuberosum L.) Secara in vitor.
Tilaar,  W.  (2016). Mikropropagasi  Brokoli (Brassica  oleracea L. var.  Italica Plenck) dan  Peningkatan Sulforafan Selama Pembentukan Plantlet. Disertasi.  Pascasarjana  Universitas Brawijaya. Malang
Tilaar,  W.,  &  Rantung,  J.  L.  (2013).  Induksi Kalus  dan  Tunas  dar  Eksplan  Pucuk Brokoli  dalam  Media  MS  yang diberikan  NAA  dan  BAP.  Manado: Eugenia.
Tilaar,  W.,  Sumeru,  A.,  Bagyo,  Y.,  &  Polii- Mandang,  J.  (2012). Synthesis  of Sulforaphan  during  the  Formation  of Plantlets from Broccoli (Brassica oleracea  L  var  italica)  In  Vitro.
Manado: International Journal of Engineering & Technology IJET-IJENS Vol: 12 No; 03.