Karakteristik Senyawa Pengkontras MRI (Magnetic Resonance Imaging) Gadolinium (III)-DTPA dalam Tubuh Hewan Percobaan Melalui Simulasi 53 Gd-DTPA Sebagai Tracer ( A.H. Gunawan )
Akreditasi LIPI Nomor : 536/D/2007
Tanggal 26 Juni 2007
KARAKTERISTIK SENYAWA PENGKONTRAS MRI ( MAGNETIC RESONANCE IMAGING) GADOLINIUM(III)- DTPA DALAM TUBUH HEWAN PERCOBAAN MELALUI
SIMULASI 153 Gd-DTPA SEBAGAI TRACER
A.H. Gunawan, A. Mutalib, S. Aguswarini dan Ratna Dini H. Pusat Radioisotop dan Radiofarmaka (PRR)-BATAN Kawasan Puspiptek, Serpong 15314, Tangerang

## ABSTRAK
KARAKTERISTIK SENYAWA PENGKONTRAS MRI (MAGNETIC RESONANCE IMAGING) GADOLINIUM(III)-DTPA DALAM TUBUH HEWAN PERCOBAAN MELALUI SIMULASI 153 Gd-DTPA SEBAGAI TRACER. Perilaku senyawa pengkontras MRI ( Magnetic Resonance Imaging ) Gd-DTPA di dalam tubuh dapat dipelajari dengan mengamati biodistribusi di dalam jaringan tubuh serta laju clearance baik dalam urin maupun feces dengan menggunakan hewan percobaan. Kestabilannya di dalam aliran darah dapat diamati melalui penguraiannya di dalam serum darah setelah diinkubasi pada suhu tubuh. Studi ini perlu dilakukan karena erat kaitannya dengan aspek khasiat ( efficacy ) dan keselamatan ( safety ) penggunaan senyawa pengkontras untuk MRI . Dalam laporan ini akan disampaikan hasil uji biodistribusi, clearance , serta kestabilan senyawa Gd-DTPA di dalam serum darah dengan mengunakan senyawa bertanda 153 Gd-DTPA . Komplek 1 53 Gd-DTPA disintesis sama seperti Gd-DTPA , yaitu dengan mensuspensikan DTPA ( diethylenetriaminepentaacetic acid ) dalam larutan 153 GdCl 3 , kemudian suspensi direfluks selama 1 jam dan diperoleh larutan jernih 153 Gd-DTPA . Kemurnian radiokimia komplek 153 Gd-DTPA ditentukan melalui pengukuran dengan elektroforesa kertas dan kemurniannya diperoleh lebih besar dari 95 %. Uji biodistribusi senyawa komplek 153 Gd-DTPA dilakukan terhadap mencit dan uji yang sama dilakukan pula terhadap 153 GdCl 3 untuk melihat biodistribusi Gd 3+ bebas. Hasil percobaan menunjukkan bahwa ion 153 Gd 3+ terakumulasi di beberapa organ seperti hati, jantung, paru dan limpa. Sedangkan akumulasi senyawa komplek 153 Gd-DTPA pada ginjal dicapai dalam waktu 2 jam setelah penyuntikan. Setelah 48 jam lebih dari 95 % komplek 153 Gd-DTPA dikeluarkan melalui urin dan feces dan aktivitas yang tersisa dalam tubuh hewan kurang dari 5 %. Hasil uji kestabilan senyawa kompleks dalam plasma darah pada suhu 37 o C sampai dengan 50 jam masih menunjukkan lebih dari 95 % sebagai 153 Gd-DTPA.
Kata kunci : 153 Gd , Gd-DTPA , Biodistribusi , Clearance, Kestabilan, MRI

## ABSTRACT
CHARACTERISTIC OF MRI (MAGNETIC RESONANCE IMAGING) CONTRAST AGENT GADOLINIUM(III)-DTPA IN ANIMAL SIMULATED BY RADIOTRACER 153 Gd-DTPA. Characteristic of MRI contrast agent Gd-DTPA in the body can be studied by observing the stability in blood serum, biodistribution study in organ/tissues and clearance of the complex in urine and feces by using animal model. This study was performed in connection with efficacy and safety aspect of a Gd-DTPA complex as an MRI contrast agent. Gadolinium-153 DTPA was prepared by suspending of DTPA (diethylenetriaminepentaacetic acid) in GdCl 3 solution in 1 N HCl. The suspension was refluxed for one hour until the clear solution of 153 Gd-DTPA obtained. Radiochemical purities of both 153 GdCl 3 and 153 Gd-DTPA showed more than 95 % by mean of TLC and paper electrophoresis. The biodistribution studies of the 153 GdCl 3 and 153 Gd-DTPA were performed using normal white mice with the aim of evaluating the side effects of Gd ions and the efficacy of the complex Gd-DTPA. Stability test of 153 Gd-DTPA was done by using blood human serum and observed quite stable up to 116 hours. Biodistribution pattern of 153 Gd ion tends to accumulate in the organs such as liver, heart, lung and spleen, while 153 Gd-DTPA complex accumulates with optimum activity in the kidney 2 hours after injection Clearance of 153 Gd-DTPA in the urine and feces showed more than 95 % at 48 hours after injection and less than 5 % of the activity still remains in the body. Stability test of 153 Gd-DTPA complex indicated that the complex was stable up to 50 hours after preparation.
Key words : 153 Gd, 153 Gd-DTPA, biodistribution, clearance, MRI

## PENDAHULUAN
Senyawa kontras untuk MRI telah banyak digunakan sejak dasawarsa terakhir ini. Senyawa tersebut digunakan untuk meningkatkan gambaran atau citra ( image ) dari organ/jaringan yang sukar dibedakan melalui teknik pencitraan MRI biasa khususnya pada jaringan lunak sistem saraf pusat, hati, sistem pencernaan, lymphatic system, payudara, sistem kardiovascular dan paru. Dalam teknik MRI , jaringan dan organ dapat dibedakan dengan melihat perbedaan densitas proton air pada organ tersebut. Tumor dapat dideteksi karena jaringan tumor mempunyai densitas yang berbeda dari jaringan sehat sekitarnya [1,2].
Disain suatu senyawa kontras MRI memerlukan kesesuaian dari segi farmasi dan peralatan MRI . Meskipun ion-ion logam seperti Mn 2+ dan Gd 3+ merupakan logam bersifat paramagnetik untuk kontras yang baik tetapi harus dalam bentuk senyawa komplek yang stabil karena logam-logam tersebut sangat toksis [1].
Gadolinium (Gd) merupakan salah satu unsur paramagnetik sangat kuat dan memenuhi persyaratan penting sebagai senyawa kontras disamping mempunyai kemampuan menyerap netron yang sangat tinggi (4,9 x 10 4 barns). Gd-DTPA telah di loloskan oleh FDA USA sebagai senyawa pengkontras dan digunakan secara luas di berbagai negara di dunia [1-3]. Hal ini dikarenakan selain senyawa komplek tersebut memiliki kestabilan komplek yang tinggi , aman, juga memberikan beberapa efek samping yang ringan seperti sedikit sakit kepala, mual seperti terbakar pada tempat penyuntikan, sedangkan reaksi alergi jarang sekali terjadi. Hasil pengujian menunjukkan pula bahwa Gd-DTPA dilaporkan beberapa kali lebih aman bila dibandingkan dengan senyawa kontras golongan iodium yang digunakan dalam CT scans [2,4] .
Perilaku senyawa pengkontras MRI (Magnetic Resonance Imaging) Gd-DTPA di dalam tubuh dapat dipelajari dengan mengamati biodistribusinya di dalam jaringan tubuh serta laju clearance baik dalam urin maupun feces , serta kestabilannya di dalam plasma darah. Studi ini perlu dilakukan karena erat kaitannya dengan aspek khasiat ( efficacy ) dan keselamatan ( safety ) penggunaan senyawa pengkontras untuk MRI [5,6].
Dalam penelitian ini perilaku senyawa kontras Gd-DTPA di dalam tubuh dipelajari dengan menggunakan kompleks radioaktif 153 Gd-DTPA . Preparasi komplek 153 Gd-DTPA dilakukan dengan merefluk campuran 153 GdCl 3 dengan DTPA (Diethylenetriaminepentacetic acid) selama 1 jam. Kemurnian radiokimia dilakukan dengan menggunakan metode elektroforesa kertas dengan kertas Advantec sebagai fasa diam, elektrolit dapar fosfat pH 5, tegangan 200 volt dan waktu elektroforesis 2 jam.

## METODE PERCOBAAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah senyawa Diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA) yang disiapkan dari hasil sintesis yang dilakukan di P2RR BATAN. Larutan gadolinium radioaktif sebagai 153 GdCl 3 disiapkan dengan mengiradiasi 100 mg serbuk logam gadolinium oksida (Gd 2 O 3 ) (Stream) , hasil irradiasi kemudian dilarutkan dalam 10 mL HCl 1N. Bahan kimia lainnya seperti HCl, NaOH, aseton semuanya buatan Merck . Larutan salin, air suling dan gas nitrogen masing-masing diperoleh dari IPHA dan IGI.
Hewan yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit dan tikus putih. Alat pencacah sinar gamma (Gammatec II) digunakan sebagai pencacah radioaktivitas pada penentuan kemurnian radiokimia. Kertas Advantec untuk elektroforesis, Dose calibrator (Victoreen) digunakan sebagai pencacah larutan bulk . Peralatan lain yang digunakan adalah beaker glass , syringe , vial dan metabolic cage .
Uji Biodistribusi Sediaan 153 Gd-DTPA
Sebanyak 0,1 mL sediaan 153 Gd-DTPA dengan aktivitas 100  Ci disuntikkan melalui vena ekor mencit setelah berat masing-masing mencit ditimbang. Mencit kemudian dibedah setelah selang waktu tertentu dan diambil organ-organ otot, tulang, darah, ginjal, limpa, jantung, paru, usus halus, lambung, kandung kemih dan hati. Setiap organ dicacah dengan alat pencacah sinar gamma dan dihitung persentase cacahan pada tiap gram organ atau tiap organ.
Uji Stabilitas dalam Serum Sediaan 153 Gd-DTPA
Sebanyak 0,5 mL sediaan 153 Gd-DTPA dicampurkan dengan 0,5 mL serum darah manusia, kemudian diinkubasikan pada suhu 37 o C dalam inkubator. Selang waktu tertentu, campuran tersebut diambil dan ditentukan kemurnian radiokimianya dengan metode elektroforesis kertas.

## Penentuan Lifofilisitas (Koefisien Partisi) Kompleks
Penentuan lifofilisitas komplek 153 Gd-DTPA didasarkan atas pengukuran koefisien distribusi senyawa komplek di fasa air dan fasa n-oktanol. Sebanyak 0,5 mL komplek 153 Gd-DTPA diambil dari larutan induk, diencerkan dengan larutan salin sampai volume 1 mL dan dimasukkan kedalam tabung reaksi , kemudian pada larutan tersebut ditambahkan 1 mL n-oktanol, larutan vortex selama 2 menit dan dibiarkan sampai ke 2 fasa terpisah. Dari tiap fasa (fasa air dan fasa oktanol) masing-masing diambil 0,5 mL dan dicacah aktivitasnya dengan alat pencacah sinar gamma (Gammatec II) dan
Karakteristik Senyawa Pengkontras MRI (Magnetic Resonance Imaging) Gadolinium (III)-DTPA dalam Tubuh Hewan Percobaan Melalui Simulasi 53 Gd-DTPA Sebagai Tracer ( A.H. Gunawan )
lifofilisitasnya dihitung sebagai perbandingan cacahan dalam fase oktanol terhadap cacahan dalam fasa air.
Uji Clearance Komplek 153 Gd-DTPA Lewat Urin ( Renal Clearance)
Besarnya perubahan aktivitas komplek dalam urin persatuan waktu merupakan laju renal clearance. Penentuan uji pencucian dari ginjal radiofarmaka 153 Gd-DTPA dilakukan dengan menyuntikkan 0,2 mL dengan aktivitas sekitar 200  Ci sediaan kepada tikus secara intra vena melalui vena ekor, kemudian tikus tersebut dimasukkan kedalam metabolic cage. Setelah selang waktu tertentu, urin ditampung dengan tabung reaksi yang sudah ditimbang dan aktivitas setiap tabung reaksi dicacah dengan alat pencacah gamma (Gammatec II) . Persentase aktivitas yang dikeluarkan melalui urin setelah selang waktu tertentu dihitung dibandingkan dengan standar yang telah diketahui cacahannya.
Uji Clearance Komplek 153 Gd-DTPA Lewat Feces
Besarnya perubahan aktivitas komplek dalam feces per satuan waktu merupakan laju clearance. Penentuan uji clearance yang melalui feces dari radiofarmaka 153 Gd-DTPA dilakukan dengan menyuntikkan 0,2 mL komplek dengan aktivitas 200  Ci kepada tikus secara intra vena melalui vena ekor, kemudian tikus tersebut dimasukkan ke dalam metabolic cage . Setelah selang waktu tertentu, feces ditampung dengan tabung reaksi yang sudah ditimbang dan aktivitas setiap tabung dicacah, kemudian dihitung persentase aktivitasnya dibandingkan dengan standar yang telah diketahui cacahannya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pemakaian senyawa Gd-DTPA sebagai kontras dalam teknik MRI sangat umum digunakan, karena senyawa ini terkenal aman dan menghasilkan efek samping yang minimal dibanding dengan senyawa kontras lain. Gadolinium dalam sistem berkala termasuk dalam golongan unsur tanah jarang dengan nomor atom 64, mempunyai 30 isotop tetapi hanya 7 yang stabil ditemukan di alam dan unsur ini mempunyai 2 elektron pada kulit terluarnya. Gadolinium merupakan unsur paramagnetik yang memiliki 7 elektron yang tidak berpasangan di kulit f sehingga dapat digunakan sebagai senyawa kontras yang baik. Radioisotop Gadolinium dalam bentuk ion Gd 3+ merupakan unsur yang toksis [6,7] sehingga dalam penelitian ini selain melihat karakteristik komplek Gd-DTPA dalam hewan percobaan terutama mengenai biodistribusi dan ekskresinya, juga dilihat karakteristik radionuklida Gd 3+ dalam tubuh hewan percobaan.
Pengujian lipofilisitas Gd 3+ dan kompleks Gd-DTPA dilakukan dengan menentukan koefisien distribusi sediaan dalam campuran oktanol/air. Hasil penentuan menunjukkan bahwa koefisien distribusi atau log P o/w Gd 3+ dan Gd-DTPA masing-masing adalah -1,1135 dan -1,1245. Rendahnya lipofilisitas Gd 3+ dan komplek Gd-DTPA menunjukkan bahwa senyawa sulit larut dalam lemak atau pelarut non polar, tetapi mudah sekali larut dalam air ( hidrofil ), karena itu clearance cenderung ke sistem renal.
Hasil pengujian biodistribusi radionuklida Gd 3+ dan komplek Gd-DTPA ditunjukkan pada Tabel 1 dan Gambar 1 serta Gambar 2. Pengujian biodistribusi radionuklida 153 Gd dan komplek 153 Gd-DTPA dilakukan menggunakan hewan mencit putih dengan berat 25 g hingga 35 g. Organ dan jaringan yang diambil adalah darah, ginjal, paru, limpa, usus, lambung, hati, tulang, jantung dan otot.
Gadolinium (III) alam hewan mencit terakumulasi pada organ organ jantung, hati, paru dan limpa. Bila dilihat dari tempat terjadinya penimbunan radioaktivitas tersebut, menunjukkan adanya bentuk partikel dari 153 Gd meskipun sediaan yang disuntikkan berbentuk larutan jernih yang terlebih dahulu telah disaring dengan penyaring 0,22  m. Dari hasil percobaan secara in vitro dengan melihat perubahan pH larutan GdCl 3 pada pH diatas 5 akan terjadi endapan putih yang akan larut kembali bila pH diturunkan lebih kecil dari 5. Dari hasil percobaan tersebut setelah penyuntikan (pH 4) dalam darah pH larutan akan naik karena pengaruh pH tubuh
% aktivitas/organ 1 Jam p.i. 2 Jam p.i. 48 Jam p.i. Nama Organ Gd Gd-DTPA Gd Gd-DTPA Gd Gd-DTPA Darah 8,19 0,11 4,36 0,01 0,01 0,00 Ginjal 3,04 0,74 1,35 0,78 0,36 0,13 Usus 0,31 0,05 0,24 0,05 0,19 0,01 Lambung 1,03 0,07 0,24 0,10 0,09 0,08 Hati 19,9 0,07 10,8 0,08 2,78 0,02 Jantung 2,55 0,05 1,14 0,02 0,12 0,01 Paru 22,1 0,09 8,26 0,04 0,80 0,01 Limpa 25,8 0,06 22,5 0,02 0,67 0,03 Tulang 1,41 0,07 1,62 0,04 0,07 0,03 Otot 0,27 0,04 0,35 0,09 0,07 0,02
Tabel 1 . Hasil uji biodistribusi Gd 3+ dan komplek Gd-DTPA pada mencit 1 jam, 2 jam dan 48 jam setelah penyuntikan (p.i. = post injection) .
Gambar 1 . Biodistribusi radionuklida 153 Gd dalam hewan mencit pada 1 jam, 2 jam, 24 jam dan 48 jam setelah penyuntikan (p.i.= post injection ).
D ar ah K .K em ih G in ja l U su s La m bu ng H at i Ja nt un g P ar u Li m pa T ul an g 1 jam p.I 2 jam p.I 48 jam p.I 0 2 4 6 8 10 12 % a k ti v it a s /o rg a n Nama Organ 1 jam p.I 2 jam p.I 48 jam p.I Nama Organ % A d it iv it as O rg an
(~ 7,4) dan dengan naiknya pH larutan kemungkinan terbentuknya endapan besar sekali, sehingga akan terjadi penimbunan pada organ hati, jantung, paru dan limpa.
Pada komplek 153 Gd-DTPA 1 jam setelah penyuntikan, akumulasi komplek masih agak tinggi pada darah dan ginjal, menunjukkan sediaan tersebut sebagian masih terdapat dalam darah dan sebagian lagi sudah mengalami ekskresi lewat ginjal. Konsentrasi 153 Gd-DTPA pada 2 jam dan 48 jam setelah penyuntikan dalam organ lain termasuk darah sudah sangat kecil sekali (< 0,1 %), konsentrasi yang terlihat agak tinggi pada ginjal menunjukkan bahwa masih terjadi ekskresi dari komplek 153 Gd-DTPA . Pada 48 jam setelah penyuntikan dari data eksresi lewat ginjal masih sekitar 1 % yang dikeluarkan lewat urin dan 0,2 % lewat feces .
Ion-ion logam paramagnetik termasuk juga ion Gd 3+ bersifat toksis bila diberikan secara langsung sehingga untuk meminimalisai toksisitasnya dibuat dalam bentuk komplek dengan ligan (EDTA, DTPA, DOTA, TETA) atau disalut dengan polimer seperti misalnya dengan dextran dan arabino-galactan . Untuk melihat stabilitas komplek 153 Gd-DTPA dalam tubuh manusia terutama dalam aliran darah, perlu dilakukan uji stabilitas komplek tersebut secara in vitro dengan menggunakan serum darah manusia dan hasilnya dapat dilihat pada Gambar 3.
Parameter yang digunakan dalam pengujian stabilitas ini adalah kemurnian radiokimia sampai dengan 50 jam setelah pencampuran dengan serum darah, kemurnian komplek masih di atas 95 % sebagai
153 Gd-DTPA . Hal ini menunjukkan bahwa komplek tersebut stabil dalam dalam darah dalam tubuh manusia dan ini menunjukkan bahwa sediaan tersebut sangat aman karena tidak terurai menjadia ion 153 Gd 3+ yang bersifat toksis.
Jalur ekskresi komplek 153 Gd-DTPAdiamati dalam hewan tikus putih menggunakan alat metabolic cage . Hasil laju ekskresi komplek 153 Gd-DTPA dalam urin dan feces bisa dilihat pada Gambar 4 dan Gambar 5.
Pengamatan laju ekskresi sediaan 153 Gd-DTPA dilakukan selama 116 jam dengan cara menampung urin dan feces yang keluar setelah waktu tertentu. Pada 2 jam setelah penyuntikan sekitar 60,5 % komplek sudah diekskresikan lewat urin dan feces (urin = 60,2 % dan feces = 0,3 %). Ekskresi pada 48 jam setelah penyuntikan menunjukkan bahwa sekitar 94,5 % komplek 153 Gd-DTPA sudah diekskresikan baik lewat ginjal/urin (79, 4 %) maupun lewat feces (15,1 %) dan dari data hasil biodistribusi pada Tabel 1 ditunjukkan bahwa sampai dengan 48 jam setelah penyuntikan akumulasi pada ginjal dan lambung masih lebih tinggi dibanding organ lainnya. Hal ini menunjukkan bahwa ekskresi pada ke 2 organ tersebut masih terjadi. Gambar 5 laju ekskresi komplek 153 Gd-DTPA pada feces tikus putih menggunakan alat metabolic cage.
Hasil pengamatan biodistribusi maupun clearance dari komplek 153 Gd-DTPA menunjukkan bahwa ekskresi komplek tersebut melalui ginjal dan feces , penimbunan aktivitas pada organ lainnya sangat kecil dan ekskresi pada 116 jam setelah penyuntikan tidak terlalu berbeda dengan ekskresi pada 48 jam setelah penyuntikan.
Gambar 2 . Biodistribusi 153 Gd-DTPA dalam hewan mencit pada 1 jam, 2 jam, 24 jam dan 48 jam setelah Penyuntikan (p.i. = post injection) .
D ar ah G in ja l La m bu ng H at i Ja nt un g P ar u Li m pa O to t 1 jam 2 jam 24 jam 48 jam 0 0.2 0.4 0.6 0.8 % a k t. /o rg a n Nama organ 1 jam 2 jam 24 jam 48 jam Nama Organ % A d it iv it a s O rg an Gambar 5 . Laju ekskresi komplek 153 Gd-DTPA pada feces
tikus putih menggunakan alat metabolic cage. 0 4 8 12 16 20 0 30 60 90 120 Waktu, jam % a k ti v it a s Waktu, jam % A d it iv it a s 0 30 60 90 0 30 60 90 120 Waktu, jam % a k ti v it a s Waktu, jam % A d it iv it a s Gambar 4 . Laju ekskresi komplek 153 Gd-DTPA pada urin tikus putih menggunakan alat metabolic cage.
0 30 60 90 120 0 20 40 60 Waktu, jam % a k ti v it a s Waktu, jam % A d it iv it a s
Gambar 3 . Hasil uji stabilitas komplek 153 Gd-DTPA dalam serum darah manusia.
Karakteristik Senyawa Pengkontras MRI (Magnetic Resonance Imaging) Gadolinium (III)-DTPA dalam Tubuh Hewan Percobaan Melalui Simulasi 53 Gd-DTPA Sebagai Tracer ( A.H. Gunawan )

## KESIMPULAN
Telah dilakukan pengujian pra klinik dari sediaan 153 Gd-DTPA yang meliputi uji biodistribusi, lipofilisitas, stabilitas dalam serum darah dan clearance dengan menggunakan hewan percobaan. Hasil biodistribusi menunjukkan bahwa sediaan 153 Gd-DTPA yang masih terdapat dalam tubuh hewan tikus putih sangat kecil sekali yaitu sekitar 4 % dan sisanya (96 %) diekskresikan melalui urin dan feces . Data hasil uji clearance menunjukkan bahwa sampai dengan 48 jam setelah penyuntikan sekitar 94,5 % 153 Gd-DTPA dikeluarkan dari tubuh tikus. SejumLah kecil yang masih tersisa (~ 4 %) diduga bukan merupakan bentuk komplek 153 Gd-DTPA dan untuk mengetahui lebih jauh perlu dilakukan penelitian tersendiri.

## DAFTAR ACUAN
[1]. VOLKOV A., Contrast Agent in MRI , http:// www.cc.utah.edu/~avba51/mrl.html
[2]. LOWE M., Contrast Agent for MRI , http:// www.le.ac.uk/chemistry/research/ chrimpl10.html
[3]. MRI Contrast
Agent , http://www.
macrocyclics.com/dar/MRI-Contrast.Agent/html
[4]. GRIES, HEINZ; ROSENBERG, DOUWE; WEINMANN, HANNS-JOACHIM, Diagnostic Media, United States Patent 4647447, http:// www.freepatentsonline.com/4647447.html
[6]. MEADE; THOMAS J., Magnetic Resonance
Imaging Agents for the Delivery of Therapeutic Agents , United States Patent 6713046 , http:// www.freepatentsonline.com/6713046.html
[7]. CACHERIS, WILLIAM P.; QUAY, STEPHEN C., Heterocyclic Derivatives of DTPA Used for Magnetic Resonance Imaging, United States Patent 5087440, http://www.freepatentsonline.com/ 5087440.html
[8]. RANNEY; DAVID F., Physically and Chemically Stabilized Polyatomic Clusters for Magnetic Resonance Image and Spectral Enhancement,
United States Patent 5, 213, 788, http:// www.freepatentsonline.com/5,213,788.html