Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk

## PENGARUH pH, DAN LAMA FERMENTASI TERHADAP PRODUKSI ETHANOL DARI Sargassum crassifolium
Mulyadi Taslim 1 , Meggy Mailoa 2 , Muhammad Rijal 3
1 Laboratorium MIPA, Institut Agama Islam Negeri Ambon
2 Pascasarjana Ilmu Perikanan dan Kelautan Unpatti Ambon
3 Jurusan Pendidikan Biologi, IAIN Ambon E-mal: mulyadi_taslim@gmail.com
Abstrak: Sargassum banyak mengandung polisakarida alginat yang dimanfaatkan untuk industri  makanan-minuman,  kosmetik,  dan  farmasi.  Selain  itu  mengandung  jenis polisakarida lain yaitu selulosa (bagian dari dinding sel), manithol (sebagai karbohidrat tersimpan)  dan  fucoidan.  Kandungan  selulosa  pada  Sargassum  berkisar  antara  23,97- 35,22% sehingga dapat diolah menjadi bahan dasar dalam pembuatan bioethanol. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pH medium 7 dan lama fermentasi 72 jam memberikan hasil  yang  terbaik  dalam  meningkatkan  produksi  dan  kadar  bioethanol  berbahan  dasar Sargassum crasifolium
Kata Kunci: Ph, Lama Fermentasi, Bioethanol, Sargassum Crasifolium

## THE INFLUENCE OF pH, AND LONG FERMENTATION TO ETHANOL PRODUCTION OF Sargassum crassifolium
Abstract: Sargassum  do  contain  many  a  polysaccharide  alginat  that  is  occupied  for makanan-minuman  making  is  a  sunset  industry,  cosmetics,  and  pharmacy.  In  addition there is a containing a kind of a polysaccharide he raised some of cellulose (part of a cell wall),  manithol  (as  carbohydrates  record  of  the  wicked)  and  fucoidan.  The  moisture content of cellulose on sargassum in  size ranges  from  23,97-35,22 % so that it can be processed  into  a  basic  source  of  some  in  the  manufacture  of  bioethanol.  The  research results show that carried out medium a pH of 7 and long fermentation 72 hours pay the price  of  their  the  best  in  promoting  business  production  and  the  nature  of  all  that bioethanol as a raw material outside Sargassum crasifolium
Kata Kunci: pH, Long Fermentation, Bioethanol, Sargassum Crasifolium
Secara umum kebutuhan energi di dunia sampai saat ini masih bergantung pada sumber daya fosil terutama minyak dan gas bumi serta batu bara. Sumber daya alam tersebut telah terbentuk ribuan tahun lalu. Tingkat konsumsi manusia terhadap energi fosil lebih tinggi
Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
BIOLOGI SEL (vol 6 no 1 edisi jAN-JUN 2017 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 14
dibandingkan  dengan  laju  pembentukannya.  Padahal  sumber  daya  energi  tersebut termasuk sumber daya yang tak terbarukan ( non renewables ) yang berarti bila dilakukan pengambilan  terus  menerus  maka  pada  suatu  saat  ketersediaannya  di  alam  akan  habis. Apabila  penggunaan  bahan  bakar  terus  dieksploitasi  maka  dikhawatirkan  akan  terjadi krisis bahan bakar yang berdampak keras terhadap kualitas hidup masyarakat seperti yang kita  rasakan  saat  ini  (Pusdatin,  2012).  Usaha  pengembangan  dan  pemanfaatan  sumber energi  baru  dan  terbarukan  sangat  tergantung  kepada  masalah  kelayakan  ekonomi. Permasalahan ini akan lebih tampak bila usaha penerapannya dikembangkan di negara- negara yang sedang berkembang. Namun penerapan teknologi tertentu masih belum layak secara  ekonomi  apabila  diterapkan  untuk  wilayah  pedesaan.  Oleh  karena  itu  perlu dipikirkan pengembangan teknologinya yang tepat guna agar tingkat adaptasinya dapat lebih tinggi bagi keadaan pedesaan dan pertanian di Indonesia (Mangunwidjaja, 2005).
Sudah saatnya penggunaan sumber energi terbarukan berupa bahan bakar nabati (BNN)  atau  bioenergi  ditingkatkan,  menggantikan  bahan  bakar  fosil  yang  semakin berkurang.  Salah  satu  contoh  bahan  bakar  nabati  cair  yaitu  pengganti  bensin  yang bernama bioetanol. Bioetanol adalah cairan yang dihasilkan dari proses fermentasi bahan nabati yang mengandung komponen kimia dari golongan karbohidrat yaitu berupa pati, amilum, serat, selulosa dan lainya oleh mikroorganisme seperti kapang, khamir ataupun bakteri  melalui  proses  konversi  komponen  kimia  tersebut  menjadi  glukosa  yang kemudian  didestilasi  menjadi  cairan  kimia  yang  disebut  etanol  (Khaidir  dkk,  2012). Etanol  merupakan  senyawa  organik  yang  terdiri  dari  karbon,  hidrogen  dan  oksigen sehingga  dapat  dilihat  sebagai  turunan  senyawa  hidrokarbon  yang  mempunyai  gugus hidroksil dengan rumus kimia C 2 H 5 OH. Etanol atau etil alkohol dikenal dengan alkohol adalah  zat  cair,  tak  berwarna,  berbau  spesifik,  mudah  terbakar  dan  menguap,  dapat bercampur  dalam  air  dengan  segala  perbandingan  dan  memiliki  sifat  menyerupai premium (Khairani, 2007).
Bioetanol dapat dihasilkan dari bahan-bahan nabati dan pemanfataan bahan-bahan hayati  tersebut  telah  banyak  diteliti  dan  dikembangkan  dalam  memproduksi  bioetanol seperti:  singkong,  jagung,  sagu,  aren,  tebu  dan  biji-bijian  yang  pada  dasarnya mengandung molekul karbohidrat yang dapat dikonversi menjadi bioetanol. Hal lain yang paling  unik  dan  menarik  dari  pembuatan  bioetanol  pun  kini  marak  diteliti  dan  dibuat dengan memanfaatkan limbah organik yang tidak terpakai lagi seperti kulit pisang, ampas tebu, ampas sagu, kulit ubi dan juga tongkol jagung serta limbah organik lainnya. Bukan hanya  itu  saja,  bahkan  sekarang  ini  organisme  laut  pun  mendapat  sorotan  tajam  oleh peneliti  dengan  memanfaatkan  rumput  laut  (Alga)  sebagai  bahan  baku  pembuatan bioetanol salah satunya yaitu alga cokelat dari spesies Sargassum .
Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
BIOLOGI SEL (vol 6 no 1 edisi jAN-JUN 2017 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 15

## METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian  kuantitatif  eksperimen  laboratorium ( laboratorium eksperiment ), yang bertujuan untuk mengetahui pengaruh pH media dan lama  fermentasi  terhadap  produksi  dan  kadar  bioethanol  dari S.  crasifolium .  Variabel terikat  yang  diukur  adalah  produksi  bioethanol  dalam  satuan  (ml).  Perlakuan  dalam penelitian ini adalah: pH Medium (B 1 = PH 5; B 2 = PH 6; B 3 = PH 9) dan Lama Fermentasi (C 1 =  Lama  Fermentasi=  24  jam;  C 2 =  Lama  Fermentasi=  48  jam;  dan  C 3 =  Lama Fermentasi 72 jam).
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Mei – Agustus 2017. Tempat pengambilan sampel S.  crassifolium yaitu  di  Desa  Liang,  Kecamatan  Salahutu,  Kabupaten  Maluku Tengah; tempat  melakukan preparasi  sampel dilakukan di  Laboratorium  MIPA  Institut Agama Islam Negeri Ambon untuk reparasi sampel; tempat melakukan proses destilasi hasil  fermentasi  dilakukan  di  Laboratorium  Kimia  Fakultas  Keguruan  dan  Ilmu Pendidikan  Unpatti;  dan  analisis  kadar  etanol  bertempat  di  Laboratorium  Kimia Universitas Muhammadiyah Malang. Adapun prosedur penelitian ini meliputi:
1. Persiapan Subtrat Fermentasi
a. Persiapan sampel Sargassum crassifolium
Sargassum  crassifolium yang  digunakan  berasal  dari  perairan  laut  desa  Liang. Persiapan  sampel S.  crassifolium dilakukan  dengan  cara  mengambil S.  crassifolium sebanyak  yang  dibutuhkan  dengan  menggunakan  gunting,  kemudian  sampel  dicuci dengan air tawar, setelah itu keringkan dengan bantuan sinar matahari selama 12 jam. S. crassifolium yang  sudah  kering  dipotong-potong  dengan  ukuran  1  cm  kemudian diblender.  Tahapan  selanjutnya  yaitu  mengoven  sampel S.  crassifolium yang  telah digiling pada suhu 50 o C selama 4 jam (Aryani, dkk. 2013).
b. Delignifikasi
Delignifikasi  dilakukan  dengan  menimbang  sebanyak  100  gram  serbuk S. crassifolium ditambah  dengan  500  ml  NaOH  2%  ke  dalam  Erlenmeyer  kemudian dipanaskan dan diaduk dengan stirrer selama 3 jam pada suhu 80 o C. Selanjutnya larutan dipisahkan  dengan  cara  disaring.  Serbuk S.  crassifolium yang  telah  terpisah  dibilas dengan air (Richana, 2011).
c. Hidrolisis
Proses  hidrolisis  dilakukan  dengan  cara,  filtrat  hasil  delignifikasi  yang  telah dimasukkan kedalam Erlenmeyer dengan menambahkan larutan HCl 21% sebanyak 500 ml, kemudian  larutan hidrolisis dimasukkan kedalam oven dengan suhu 80 o C selama 3 jam (Richana, 2011).
d. Persiapan starter
Starter  yang  digunakan  adalah  ragi  roti  yang  ditumbuhkan  dalam  subtrat pertumbuhan. Ragi yang digunakan dalam penelitian ini, yaitu ragi komersil yang dijual dipasaran  dengan  merek  pakmaya.  Substrat  pertumbuhan  terdiri  dari  1000  ml  aquades
Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
BIOLOGI SEL (vol 6 no 1 edisi jAN-JUN 2017 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 16
yang ditambahkan dengan 100g  gula pasir (konsentrasi  10%)  yang disiapkan di  dalam gelas beaker. Setelah semua bahan-bahan dimasukkan, kemudian dihomogenkan terlebih dengan magnetic stirrer kemudian disterilkan dengan menggunakan autoclave pada suhu 121 0 C selama 15 menit. Substrat ditunggu hingga dingin. Setelah dingin, sampai kira- kira mencapai  suhu  30-33 0 C, ragi  dimasukan ke  dalam subtrat,  selanjutnya diinkubasi kedalam incubator pada suhu 30 0 C selama 8 jam (Azizah. dkk, 2012). Banyak ragi pada pembuatan starter adalah 3%.
e. Inokulasi starter
Setelah  starter  diinkubasi  selama  8  jam,  maka  starter  tersebut  siap  untuk diinokulasikan di dalam subtrat fermentasi. Starter dimasukan dalam medium fermentasi pada  kondisi  yang  aseptis.  Jumlah  starter  yang  dimasukkan  adalah  sebanyak  10% (Richana, 2011).

## 2. Fermentasi
Proses  fermentasi  dilakukan  dengan  menyaring  filtrat  dari  proses  hidrolisis, kemudian hasil saringan berupa cairan dimasukkan kedalam erlenmeyer dan ditambahkan NaOH atau HCl sampai pH menjadi 5, 6 dan 7 untuk variasi pH (Ariyani. dkk, 2012), lalu menambahkan  starter  sebanyak  300ml  sesuai  konsentrasi  starter.  Proses  fermentasi dilakukan sesuai dengan waktu perlakuan, yaitu mulai dari 48 jam, 72 jam, dan 96 jam (Azizah. dkk, 2012).

## 3. Destilasi
Pengujian  kadar  alkohol  diawali  dengan  proses  destilasi.  Hasil  fermentasi didestilasi  untuk  memisahkan  etanol  dengan  larutan  lainnya.  Destilasi  dilakukan  pada suhu 80 o C (Ariyani. dkk, 2012).
4. Pengujian Kadar Etanol
Pengujian  kadar  etanol  dilakukan  dengan  metode Chromatography  Gas (GC). Hasil dari metode Chromatography Gas (GC) ini yaitu berupa kromatogram, dimana dari kromatogram  tersebut  dapat  diketahui:  Waktu  retensi,  %  luas  area,  dan  %  tinggi  atau kadar. Analisis dengan GC dilakukan dengan menginjeksi 1µL sampel. Kemudian profil kromatograf  sampel  dibandingkan  dengan references  standard pada  program  GC-MS dengan menekan similary search (Fitriana, 2009) .

## HASIL PENELITIAN
Pemanfataan bahan-bahan hayati telah banyak diteliti dan dikembangkan dalam memproduksi  bioetanol  seperti  singkong,  jagung,  sagu,  aren,  tebu  dan  biji-bijian  yang pada  dasarnya  mengandung  molekul  karbohidrat  yang  dapat  dikonversi  menjadi bioetanol.  Hal  lain  yang  paling  unik  dan  menarik  dari  pembuatan  bioetanol  pun  kini marak diteliti dan dibuat dengan memanfaatkan limbah organik yang tidak terpakai lagi seperti  kulit  pisang,  ampas  tebu,  ampas  sagu,  kulit  ubi  dan  juga  tongkol  jagung  serta limbah organik lainnya. Bukan hanya itu saja, bahkan sekarang ini organisme laut pun
Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
BIOLOGI SEL (vol 6 no 1 edisi jAN-JUN 2017 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 17
mendapat sorotan tajam oleh peneliti dengan memanfaatkan rumput laut sebagai bahan baku  pembuatan  bioetanol  salah  satunya  yaitu  alga  cokelat  dari  spesies Sargassum crassifolium
Sargassum crassifolium merupakan salah satu jenis alga cokelat yang kaya akan manfaat serta memiliki nilai ekonomis tinggi, memiliki umur panen yang relatif singkat, tersebar luas di perairan laut Indonesia dengan potensi produksinya cukup tinggi namun produksinya masih banyak berasal dari hasil panen persediaan dari alami. S. crassifolium banyak  mengandung  polisakarida  alginat  yang  dimanfaatkan  untuk  industri  makanan- minuman,  kosmetik,  dan  farmasi.  Polisakarida  lainnya  adalah  selulosa  (bagian  dari dinding  sel),  manithol  (sebagai  karbohidrat  tersimpan)  dan  fucoidan.  Selulosa  pada Sargassum  berkisar  antara  23,97-35,22%.  Selulosa  yang  dimanfaatkan  adalah  produk turunannya  yaitu carboxymethyl  cellulose (cmc)  yang  banyak  dimanfaatkan  sebagai bahan  penstabil,  pengental,  dan  pengemulsi.  Kandungan  selulosa  yang  tinggi  pada sargassum  merupakan  salah  satu  potensi  untuk  dijadikan  sebagai  bahan  dalam memproduksi bioethanol (Kadi & Atmadja, 1996). Penggunaa variasi pH media dengan penggunaan konsentrasi ragi 1% dan lama fermentasi 24 jam dengan hasil sebagai berikut Tabel 1. Pengaruh pH Media Terhadap Produksi (ml) dan Kadar Bioethanol (%)
pH Media Produksi Bioetanol (ml) Kadar Bioetanol (%) 5 46 8.643 6 53 9.168 7 70 9.943
Berdasarkan Tabel 1 tersebut diketahui bahwa produksi dan kadar bioetanol untuk 100 g berat kering S. crassifolium yang dihasilkan dari masing-masing perlakuan dengan penggunaan  konsentrasi  ragi  dan  lama  fermentasi  yang  tetap  adalah  berbeda,  dengan volume dan kadar terendah diperoleh pada perlakuan pH 5, sedangkan volume dan kadar bioethanol tertinggi diperoleh pada perlakuan pH 7. Data tentang perbandingan volume dan kadar bioethanol dari masing-masing perlakuan dapat dilihat pada Gambar 1 berikut
Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
BIOLOGI SEL (vol 6 no 1 edisi jAN-JUN 2017 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 18
Gambar 1. Hubungan pH Media dengan Produksi (ml) dan Kadar Bioethanol (%)
Berdasarkan Gambar 1 tersebut, terlihat bahwa volume dan kadar bioethanol pada tiap-tiap perlakuan berbeda. Volume dan konsentrasi bioethanol pada perlakuan pH = 5 adalah  46  ml  dan  8.643%;  volume  dan  konsentrasi  bioethanol  pada  perlakuan  pH  =  4 adalah 53 ml dan 9.168%; dan volume serta konsentrasi bioethanol pada perlakuan pH = 7  adalah  70  ml  dan  9.943%.  Selain  perlakuan  pH  media,  dalam  penelitian  ini  juga digunakan  variasi  lama  fermentasi  dengan  penggunaan  konsentrasi  ragi  dan  pH  media tetap dengan hasil sebagai berikut
Tabel 2. Pengaruh Lama Fermentasi Terhadap Produksi (ml) dan Kadar Bioethanol (%)
Lama Fermentasi (Jam) Produksi Bioetanol (ml) Kadar Bioetanol (%) 24 46 8.643 48 56 11.081 72 67 14.043
Berdasarkan Tabel 2 tersebut diketahui bahwa produksi dan kadar bioetanol untuk 100 g berat kering S. crassifolium yang dihasilkan dari masing-masing perlakuan dengan penggunaan konsentrasi ragi dan pH media yang tetap adalah berbeda, dengan volume dan kadar terendah diperoleh pada perlakuan lama fermentasi 24 jam, sedangkan volume dan kadar bioethanol  tertinggi  diperoleh pada perlakuan lama fermentasi  72 jam. Data tentang perbandingan volume dan kadar bioethanol dari masing-masing perlakuan dapat dilihat pada Gambar 2 berikut
0 10 20 30 40 50 60 70 pH Media Produksi Bioetanol (ml) Kadar Bioetanol (%) 5 46 8.643 6 53 9.168 7 70 9.943

## Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
Gambar 2. Hubungan Lama Fermentasi (Jam) dengan Produksi (ml) dan Kadar Bioethanol (%)
Berdasarkan Gambar 2 tersebut, terlihat bahwa volume dan kadar bioethanol pada tiap-tiap  perlakuan  berbeda.  Volume  dan  konsentrasi  bioethanol  pada  perlakuan  lama fermentasi  = 24 jama adalah 46 ml dan 8.643%; volume dan konsentrasi bioethanol pada perlakuan  lama  fermentasi  48  jam  adalah  56  ml  dan  11.081%;  dan  volume  serta konsentrasi  bioethanol  pada  perlakuan  lama  fermentasi  72  jam  adalah  67  ml  dan 14.043%.
Ethanol merupakan senyawa Hidrokarbon dengan gugus Hydroxyl (-OH) dengan 2  atom  karbon  (C)  dengan  rumus  kimia  C 2 H 5 OH.  Secara  umum  Ethanol  lebih  dikenal sebagai Etil Alkohol berupa bahan kimia yang diproduksi dari bahan baku tanaman yang mengandung  karbohidrat  (pati).  Bahan  baku  tersebut  merupakan  tanaman  yang  biasa ditanama  oleh  masyarakat  ataupun  tumbuh  secara  alami  pada  habitat  tertentu. S. crassifolium merupakan  jenis  tumbuhan  air  yang  tumbuh  di  laut  dengan  membentuk koloni yang besar serta mengapung pada permukaan air asin. Sargassum sendiri masuk ke dalam tumbuhan jenis  alga coklat  yang selain mengandung iodium  yang tiggi,  juga mengandung selulosa serta pati yang tinggi. Kandungan karbohidrat total S. crassifolium adalah  33,3%  yang  merupakan  komponen  terbesar  diantara  yang  lainnya.  Tingginya kandungan  karbohidrat  pada  sargassum,  sehingga  dapat  dijadikan  sebagai  bahan  baku dalam  pembuatan  bahan  bakar  yang  ramah  lingkungan,  yang  diistilahkan  dengan bioethanol. Secara umum ethanol biasa digunakan sebagai bahan baku industri turunan alkohol, campuran untuk miras, bahan dasar industri farmasi, kosmetika dan kini sebagai campuran bahan bakar untuk kendaraan bermotor. Pembuatan bioethanol melalui proses fermentasi yang dibantu oleh mikroorganisme seperti S. cereviceae pada interval waktu tertentu  dan  derajat  keasaman  medium.  Olehnya  itu,  penelitian  ini  menggunakan  3
0 10 20 30 40 50 60 70 80 Lama Fermentasi (Jam) Produksi Bioetanol (ml) Kadar Bioetanol (%) 24 46 8.643 48 56 11.081 72 67 14.043
Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
BIOLOGI SEL (vol 6 no 1 edisi jAN-JUN 2017 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 20
perlakuan (konsentrasi ragi, pH, dan lama fermentasi) untuk melihat dampaknya terhadap produksi dan kadar bioethanol yang dihasilkan dari S. crassifolium.
1. Pengaruh  pH  Medium  Fermentasi  dan  Lama  Fermentasi  Terhadap  Produksi Bioethanol (ml)
Bioetanol (C 2 H 5 OH) merupakan salah satu biofuel yang hadir sebagai bahan bakar alternatif yang lebih ramah lingkungan dan sifatnya yang terbarukan. Merupakan bahan bakar  alternatif  yang  diolah  dari  tumbuhan  yang  memiliki  keunggulan  karena  mampu menurunkan emisi CO 2 hingga 18%, dibandingkan dengan emisi bahan bakar fosil seperti minyak  tanah  (Anonim,  2007a).  Bioetanol  dapat  diproduksi  dari  berbagai  bahan  baku yang  banyak  terdapat  di  Indonesia,  sehingga  sangat  potensial  untuk  diolah  dan dikembangkan  karena  bahan  bakunya  sangat  dikenal  masyarakat.  Tumbuhan  yang potensial  untuk  menghasilkan  bioetanol  antara  lain  tanaman  yang  memiliki  kadar karbohidrat tinggi, seperti tebu, nira, aren, sorgum, ubi kayu, jambu mete (limbah jambu mete), garut, batang pisang, ubi jalar, jagung, bonggol jagung, jerami, dan bagas (ampas tebu).  Penggunaan S.  crassifolium sebagai  bahan  baku  dalam  pembuatan  bioethanol belum  dilakukan,  pada  hal  kandungan  karbohidratnya  paling  tinggi  bila  dibandngkan dengan  komposisi  kimia  lainnya.  Menurut  Tri  Handayani,  Sutarno,  Ahmad  Dwi Setyawan (2004) menyatakan bahwa kandungan karbohidrat dari S. crasifolium adalah 36,93%  lebih  besar  bila  dibandingkan  dengan  protein  dan  lemak  yang  masing-masing 5,19% dan 1,63%. Hal yang sama dikemukakan oleh Fahri, M (2010) yang menyatakan bahwa secara umum S. crassifolium mempunyai kandungan nutrisi cukup lengkap. Secara kimia  rumput  laut  terdiri  dari  air  (27,8%),  protein  (5,4%),  karbohidrat  (33,3%),  lemak (8,6%) serat kasar (3%) dan abu (22,25%). Selain karbohidrat, protein, lemak dan serat, rumput laut juga mengandung enzim, asam nukleat, asam amino, vitamin (A, B, C, D, E dan K) dan makro mineral seperti nitrogen, oksigen, kalsium dan selenium serta mikro mineral seperti zat besi, magnesium dan natrium. Kandungan asam amino, vitamin dan mineral rumput laut mencapai 10-20 kali lipat dibandingkan dengan tanaman darat. Bila dibandingkan  antara  kandungan  protein,  lemak,  dan  karbohidrat  maka  komponen karbohidrat lebih besar bila dibandingkan dengan keduanya, sehingga atas dasar tersebut maka S. crasifolium dapat dijadikan sebagai bahan baku pembuatan bioethanol Dengan  menggunakan  perlakuan  konsentrasi  ragi,  pH  medium  fermentasi,  dan lama  fermentasi  diperoleh  hasil  bahwa  ada  pengaruh  perlakuan  terhadap  produksi bioethanol  dengan  perlakuan  yang  terbaik  adalah  (konsetrasi  ragi  3%,  pH  7,  dan  lama fermentasi 72 jam). Penggunaan ragi dalam penelitian berfungsi sebagai mikroorganisme yang  melakukan  fermentasi  glukosa  menjadi  ethanol.  Di  dalam  ragi  terkandung S. cereviceae yang  memiliki  kemapuan  besar  dalam  merombak  gula  menjadi  ethanol. Menurut  Oura  (2009),  menyatakan  bahwa S.  cereviceae dikenal  sebagai  baker’s  yeast yang  memiliki  kemampuan  paling  tinggi  dalam  memfermentasi  gula  menjadi  ethanol pada kondisi anaerob fakultatif. Hal yang sama dikemukakan oleh Trianik Widyanigrum
Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
BIOLOGI SEL (vol 6 no 1 edisi jAN-JUN 2017 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 21
et  al  (2016)  yang  menyatakan  bahwa  penggunaan S.  cereviceae dapat  mempercepat periombakan glukosa menjadi ethanol, dan semakin tinggi konsetrasi S. cereviceae yang digunakan, maka produksi bioethanol semakin besar karena dipengaruhi oleh banyaknya sel yang melakukan proses perombakan glukosa menjadi ethanol. Selama nutrisi dalam medium  tersedia,  maka  mikroorganisme  yang  bersangkutan  akan  terus  melakukan perombakan dan akan berakhir seiring dengan menurunnya nutrisi di dalam medium.
Selain  penggunaan  ragi,  perlakuan  pH  medium  fermentasi  akan  memberikan pengaruh terhadap produksi bioethanol. pH merupakan kondisi asam-basa medium suatu mikroorganisme yang dapat mempengaruhi pertumbuhan (aktivitas pembelahan sel) dari mikroorganisme tertentu. Menurut Endro Saputro dan Tri Sumiyati (2016), menyatakan bahwa pH sangat berperan penting dalam pertumbuhan mikroorganisme fermentasi. pH berkenaan  dengan  derajat  keasaman  medium  yang  akan  menentukan  aktivitas mikroorganisme  selain  ketersediaan  nutrisi.  pH  yang  paling  baik  dalam  kombinasi perlakuan adalah 8, hal ini bertentangan dengan pendapat Oura (2009) yang menyatakan bahwa pH yang paling baik untuk pertumbuhan S. cereviceae berkisar antara 4,0 – 4,5. Perbedaan pH yang ditemukan oleh peneliti dengan penelitian sebelumnya diduga karena penelitian sebelumnya tidak menggunakan variasi perlakuan dengan factor lain, peneliti sebelumnya hanya menggunakan satu factor variabel bebas yaitu pH, sedangkan peneliti menggunakan 3 faktor yang dikombinasikan yaitu konsetrasi ragi, pH medium, dan lama fermentasi.  Adanya  perbedaan  perlakuan  ini,  diduga  memberikan  dampak  terhadap kebutuhan nilai pH yang dibutuhkna oleh S. cereviceae yang terdapat di dalam ragi.
Selain  faktor  konsetrasi  ragi  dan  pH  medium  fermentasi,  lama  fermentasi merupakan  salah  satu  bagian  dari  kombinasi  perlakuan  yang  memberikan  pengaruh terhadap  produksi  bioethanol  yang  dihasilkan  dengan  menggunakan S.  crasifolium sebagai bahan baku. Lama fermentasi yang memberikan hasil yang paling baik adalah 72 jam,  artinya  bahwa  fase  logaritmik  berlangsung  pada  waktu  tersebut.  Fase  logaritmik adalah fase pertumbuhan tercepat yang dialami oleh mikroorganisme karena ketersediaan nutrisi  yang  lebih  banyak  dibandingkan  dengan  keberadaan  sel  mikroba.  Banyaknya nutrisi  mengakibatkan  ketersediaan  energi  mikroba  dalam  jumlah  yang  besar  untuk merombak glukosa menjadi ethanol. Pendapat ini sejalan dengan hasil temuan dari Endro Saputro dan Tri Sumiyati (2016) yang menyatakan bahwa produksi ethanol dipengaruhi oleh lama fermentasi, dimana lama fermentasi berkenaan dengan waktu logaritmik yang dimiliki oleh mikroba untuk berada dalam jumlah yang banyak dalam merombak glukosa menjadi  ethanol.  Jika  terlalu  lama  waktu  fermentasi,  maka  produksi  ethanol  dapat berkurang  karena  terjadinya  kematian  sel  mikroba  yang  disebabkan  oleh  kekurangan nutrisi  atau  karena  keracunan  CO 2 yang  merupakan  produk  samping  dari  proses fermentasi anaerobik.
Salah satu cara untuk mendapatkan bioethanol adalah melalui proses fermentasi secara anaeribik pada bahan yang mengandung amilum (Sugili Putra, 2006). Sargassum
Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
BIOLOGI SEL (vol 6 no 1 edisi jAN-JUN 2017 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 22
crasifolium  terbukti  mengandung  amilum  dengan  kadar  yang  tinggi  bila  dibandingkan dengan kandungan protein dan lemak. Selama proses fermentasi, amilum akan dipecah menjadi glukosa, untuk selanjutnya difermentasi oleh S. cereviceae sampai menghasilkan ethanol. Dalam proses fermentasi terjadi reaksi sebagai berikut:
(CH 2 O) n C 6 H 12 O 6 CH 3 CH 2 OH  + CO 2 (Amilum) (Glukosa) (Ethanol) (Karbondioksida) Enzim/Asam Ragi
Amilum  yang  merupakan  molekul  kompleks  yang  tersusun  oleh  monomer-monomer glukosa dan dihubungkan oleh ikatan glikosidik dapat dipecah menjad glukosa dengan perlakuan pemberian senyawa asam atau penambahan enzim (Fifi Nurfiana dkk, 2009). Penambahan  senyawa  asam  atau  penggunaan  enzim  berfungsi  untuk  memecah  ikatan glikosidik yang menghubungkan unit-unit glukosa. Glokosa yang terbentuk dari proses perombakan amilum, selanjutnya akan diubah menjadi alcohol oleh mikroba pada kondisi anaerobik. Selama proses fermentasi, selain alkohol juga dihasilkan gas karbondioksida (Rijal, 2015).
Setiap  bahan  baku  yang  digunakan  dalam  pembuatan  bioethanol  akan mendapatkan  hasil  yang  berbeda,  baik  dari  volume  maupun  kadar  ethanol.  Hal  ini disebabkan oleh tingginya kadar amilum ataupun glukosa yang terurai dari amilum oleh aktivitas  enzim  atau  hidrolisi  dengan  menggunakan  senyawa  asam.  Volume mencerminkan  banyaknya  jumlah  ethanol  yang  dihasilkan  dalam  satu  ml  yang  dapat diukur setelah proses destilasi, sedangkan kadar mencerminkan kandungan ethanol dalam bentuk  persentase  yang  menunjukkan  jumlahnya  per  100  ml  contoh.  Pembentukan bioethanol dari bahan baku yang mengandung amilum, seperti S. crasifolium dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu: suhu, pH, konsentrasi ragi, lama fermentasi, kadar gula, nutrisi ragi, konsetrasi senyawa asam, dan konsetrasi enzim (Diah Restu dan Anastasia Rafika, 2013).
Hasil penelitian  yang telah dilakukan dengan  perlakuan pH medium  fermentasi dan  lama  fermentasi  menunjukkan  adanya  pengaruh  terhadap  kadar  ethanol  yang dihasilkan. Kadar ethanol tertinggi diperoleh pada perlakuan (pH = 7 dan lama fermentasi =  72  jam).  pH  medium  mempengaruhi  kadar  ethanol  yang  dihasilkan  dalam memfermentasi  glukosa  yang  berasal  dari  perombakan  amilum S.  crasifolium .  pH merupakan  kondisi  asam  basa  medium  fermentasi  yang  berhubungan  dengan  aktivitas pertumbuhan mikroorganisme. pH yang terlalu rendah (asam) atau terlalu tinggi (basa) dapat  memicu  tingkat  kematian  sel  mikroba.  Tingkat  kematian  mikroorganisme  yang tinggi  akan  berpengaruh  terhadap  kecepatan  fermentasi,  karena  jumlah  mikroba  akan berkurang dalm mengurai glukosa menjadi ethanol. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pH  yang  paling  baik  terhadap  kadar  ethanol  adalah  7.  Bila  dibandingkan  dengan  hasil penelitian  yang  relevan,  menunjukkan  bahwa  kadar  ethanol  yang  paling  baik  adalah dengan  menggunakan  pH  medium  pada  kondisi  asam  (pH  =  3  -  4)  untuk  bahan  baku
Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
BIOLOGI SEL (vol 6 no 1 edisi jAN-JUN 2017 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 23
berupa  kulit  pisang,  biji  durian,  dan  singkong.  Hasil  penelitian  yang  ditemukan bertentangan dengan penelitian sebelumnya karena pH yang menunjukkan hasil terbaik dalam  penelitian  ini  adalah  pH  dalam  kondisi  netral.  Hal  ini  diduga  karena  perbedaan bahan  baku  yang  digunakan  yang  memerlukan  nilai  pH  yang  lebih  tinggi  bila dbandingkan dengan bahan organik lainnya.
Perombakan  glukosa  menjadi  ethanol  juga  dipengaruhi  oleh  lama  fermentasi, karena  terkait  dengan  interval  waktu  yang  dibutruhkan  oleh  mikroba  untuk  merombak substrat  menjadi  produk.  Mikroba  memiliki  fase  pertumbuhan  yang  berkenaan  dengan waktu  pertumbuhan.  Mikroba  akan  bertambah  dalam  jumlah  yang  tinggi  pada  fase logaritmik, sehingga kemampuannya dalam menggunakan nutrisi akan semakin besar dan hal ini akan berdampak terhadap produk yang dihasilkan. Hasil penelitian yang dilakukan oleh Fifi Nurfiana, dkk (2009) dan Diah Rsetu dan Anastasia rafika (2013) menunjukkan bahwa  interval  waktu  24  jam-72  jam  memberikan  hasil  tertinggi  terkait  kadar  ethanol berbahan baku biji durian dan kulit pisang kepo. Hasil penelitian tersebut sejalan dengan temua  peneliti  yang  menemukan  bahwa  waktu  72  jam  memberikan  hasil  baik  terkait kadar ethanol berbahan dasar S. crasifolium .

## KESIMPULAN
1. Ada  pengaruh  variasi  pH  terhadap  peningkatan  volume  (ml)  bioethanol  dari S. crasifolium dengan pH yang terbaik adalah 7
2. Ada pengaruh lama fermentasi terhadap peningkatan volume (ml) bioethanol dari S. crasifolium dengan lama fermentasi terbaik adalah 72 jam

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan  dengan  melakukan  kombinasi  perlakuan antara konsetrasi ragi dengan pH medium, konsentrasi ragi dengan lama fermentasi, dan konsentrasi ragi dengan pH serta lama fermentasi. Selain itu, perlu adanya penambahan variabel  lain  yaitu  pengukuran  kadar  gula  tereduksi  setelah  proses  deliginasi  secara kimiawi atau penggunaan enzim yang berasal dari mikroba tertentu.

## DAFTAR PUSTAKA
Ariyani  Endang,  dkk.  2013.  Produksi  Bioetanol  Dari  Jerami  Padi (Oryza  sativa L ) . Journal of Chemical Science , 2 (2).
Atmadja,  W.S.,  A.  Kadi,  Sulistidjo,  dan  Rachmaniar.  1996 .  Pengenalan  Jenis-jenis Rumput Laut . Jakarta: Puslitbang Oseanologi LIPI.
Azizah  N,  dkk.  2012.  Pengaruh  Lama  Fermentasi  Terhadap  Kadar  Alkohol,  pH,  dan Produksi  Gas  pada  Proses  Fermentasi  Bioetanol  Dari  Whey  dengan  Substitusi Kulit Nanas, Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan , Vol. 1, No. 2.
Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
BIOLOGI SEL (vol 6 no 1 edisi jAN-JUN 2017 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 24
Bold, H.C., Wayne, M.J. 1985. Introduction to the Algae. Second Edition . New Jersey:
Prentice Hal, Inc Englewood Cliffs,
Castro,  R,  dkk.  2004.  Water-soluble  Seaweed  Extract  Modulate  the  Pantoeaa Agglomerans Lipopolysaccharide (LPS) Fish Shelfish Immunol. 10: 555-558.
Fitriana Lili. 2009. Analisis Bioetanol Hasil Fermentasi Dari Pati Sagu ( Metroylon sago )
Asal Papua. Skripsi Jurusan Kimia FMIPA Universitas Negeri Papua.
Jasminandar, Y. 2009. Penggunaan Ekstrak ( Gracilaria verrucosa ) Untuk Meningkatkan Sistem Ketahanan Udang vaname ( Litopenaeus vannamei ). Tesis Pasca Sarjana Institut Pertanian Bogor..
Khairani, Rini. 2007. Tanaman Jagung Sebagai Bahan Bio-fuel http://www.Macklintmip unpad. net/ Biofuel/ Jagung/ Pati.pdf. diakses tanggal 14 Agustus 2016
Khaidir,  Setyaningsih,  Haerudin.  2012.  Dehidrasi  bioetanol  menggunakan  zeolit  alam termodifikasi. Jurnal Teknologi Industri Pertanian . Institut Pertanian Bogor.
Mangunwidjaja, D dan Sailah, I. 2005. Pengantar Teknologi Pertanian . Depok: Penebar Swadaya.
Nurfiana F. dkk. 2009. Pembuatan Bioetanol Dari Biji Durian Sebagai Sumber Energi Alternatif.  Teknokimia  Nuklir .  Yogyakarta:  Sekolah  Tinggi  Teknologi  Nuklir Badan Tenaga Nuklir Nasional (STTN-BATAN).
Handayani, W. 1999. Ekstraksi dan Karakterisasi Alginat dari Rumput Laut Sargassum spp. (Laporan Penelitian). Yogyakarta: Fakultas Teknologi Pertanian UGM.
Hidayat, A. 1994. Budidaya Rumput Laut. Usaha Nasional, Surabaya Rahmawati Ani, “Pemanfaatan  Limbah Kulit Ubi Kayu (Manihot  uttilisima Pohl ) dan Kulit  Nanas (Anana  Comosus L ) Pada  Produksi  Bioetanol  Menggunakan Aspergilus wenti ”, Jurnal Pembuatan Bioetanol (online), diakses pada 16 Agustus 2016.
Richana Nur. 2011. Bioetanol; Bahan Baku Teknologi Produksi Dan Pengendalian Mutu . Bandung: Nuansa Cendikia.
Pujiani  dkk.  2014.  Biokeonversi  Selulosa  Dari  Tongkol  Jagung  Menjadi  Bioetanol. Jurnal Alkohol (online) . diakses pada 1 September 2016
Pujianingsih,  I.  r.  2005. Teknologi  Fermentasi  Dan  Peningkatan  Kualitas  Pakan . Fakultas Peternakan. Semarang: Universitas Diponegoro.
Pusdatin.  2010.  Buku  Pegangan  Statistik  Ekonomi  Energi  Indonesia  DESDM  2010.
http://www.esdm.go.id/publikasi/indone sia-energy-outlook/ringkasan- eksekutif/doc_download/1255-  ringkasan-eksekutif-indonesia-energy-  outlook- 2010.html. diakeses tanggal 1 September 2016
Santi  S.  Sinta.  2008.  Pembuatan  alkohol  dengan  Proses  Fermentasi  Buah  Jambu  Mete
Oleh Khamir Sacharomyces cereviceae . Jurnal Penelitian Ilmu Teknik, Vol 8, No 2, (Desember 2008).
Jurnal Biology Science & Education 2017  Mulyadi. t, dkk
BIOLOGI SEL (vol 6 no 1 edisi jAN-JUN 2017 issn 2252-858x/e-ISSN 2541-1225)  Page 25
Saputra R D, dkk. 2012. Kajian Rumput Laut Sargassum duplicatum J. G. Agardh sebagai Penghasil Bioetanol dengan Proses Hidrolisis Asam dan Fermentas. Journal Of Marine Research . Volume 1, Nomor 2, Tahun 2012, Halaman 145-151
Sari  N  R,  dkk.  2014.  Kondisi  Optimum  Produksi  Bioetanol  Dari  Rumput  Laut  Coklat
( Sargassum  duplicatum )  Menggunakan Trichoderma  viride Dan Pichia angophorae . Balai Besar Penelitian Dan Pengembangan Pengolahan Produk Dan Bioteknologi Kelautan Dan Perikanan. Institut Pertanian Bogor. JPB Perikanan Vol.9 Desember
Sugiono. 2013. Statistik untuk Penelitian . Bandung: Alfabeta.
Suprihatin. 2010. Teknik Fermentasi. Surabaya: UNESA University Press. Rahmawati Ani. 2013. Pemanfaatan Limbah Kulit Ubi Kayu ( Manihot uttilisima Pohl) dan Kulit Nanas (Anana Comosus L ) Pada Produksi Bioetanol Riadi Lieke. 2013. Teknologi Fermentasi Edisi 2. Yogyakarta: Graham Ilmu. Yowono Triwibowo. 2005. Biologi Molekuler. Jakarta: Erlangga Zen.  1988.  Energi,  Sumberdaya,  Lingkungan  Hidup  dalam  Pembangunan Berkesinambungan. Jakarta: Penerbit Dian Rakyat.