ISSN: 1410-8917
e-ISSN: 2597-9914
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi 20 (3) (2017): 114-116
Jurnal Kimia Sains dan Aplikasi

## Journal of Scientific and Applied Chemistry
Journal homepage: http://ejournal.undip.ac.id/index.php/ksa

## Perbandingan Pembacaan Absorbansi Menggunakan Spectronic 20 D+ dan Spectrophotometer UV-Vis T 60U Dalam Penentuan Kadar Protein dengan Larutan Standar BSA
Sri Harjanto a*
a Pranata Laboratorium Pendidikan,Departemen Kimia FSM UNDIP, Jl.Prof.H.Soedarto,S.H, Tembalang, Semarang 50275
* Corresponding author: sri.harjanto69@gmail.com
A r t i c l e   I n f o

## A b s t r a c t
Keywords: Protein,  spectronic 20D +, UV-vis T60U spectrophotometer
Comparative test was performed on Absorbance reading of Protein Protein Determination using  Spectronic  20  D  +  and  spectrophotometer  uv-vis  T  60U  at  600  nm  wavelength.
Determination of protein content by lowry method was done by making standard solution with various concentration level, then from each concentration was taken 1 mL and added solution of lowry B, then left for 10 minutes and then added lowry solution A to be left for 20  minutes  ago  measured  its  absorbance  at  600  nm  wavelength.  The  result  of measurement of absorbance using spectronic 20D + shows the value of R2 = 0,9927 while for Spectrophotometer uv-vis T 60U shows value R2 = 0,9971. It can be concluded that the measurement of absorbance for both instruments did not differ significantly.

## A b s t r a k
Kata kunci: Protein, spectronic 20D +, spectrophotometer UV-vis T60U Telah  dilakukan  uji  perbandingan  pada  pembacaan  Absorbansi  dari  penentuan  kadar Protein  menggunakan  Spectronic  20  D+  dan  spectrophotometer  uv-vis  T  60U  pada panjang gelombang 600 nm. Penentuan kadar protein menurut metode lowry dilakukan dengan cara membuat larutan standar  dengan berbagai tingkat konsentrasi,  kemudian dari masing-masing konsentrasi tersebut diambil 1 mL dan ditambahkan larutan lowry B, kemudian dibiarkan selama 10 menit dan kemudian ditambahkan larutan lowry A untuk dibiarkan selama 20 menit lalu diukur absorbansinya pada panjang gelombang 600 nm. Hasil  penelitian  pengukuran  absorbansi  menggunakan  spectronic  20D+  menunjukkan nilai R2 = 0,9927 sedangkan untuk Spectrophotometer uv-vis T 60U menunjukan nilai R2 =  0,9971.  Hal  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  pengukuran  absorbansi  untuk  kedua instrumen tidak berbeda secara signifikan.

## 1. Pendahuluan
Protein merupakan senyawa organik kompleks yang mempunyai  bobot  molekul  tinggi  dan  merupakan polimer  dari  monomer-monomer  asam  amino.  Protein terdapat  hampir  disegala  macam  makanan  seperti susu,telur,  daging,  biji-bijian  .Protein  berfungsi  bagi tubuh antara lain sebagai penyedia bahan-bahan untuk pertumbuhan, pemelihara sel-sel jaringan tubuh.
Ada  berbagai  cara  untuk  melakukan  pengujian terhadap  protein  baik  secara  kwalitatif  maupun
kwantitatif.  Adapun  untuk  uji  kwantitatif  bisa menggunakan methode Lowry.
Kandungan  protein  dari  suatu  sampel  dapat dianalisis  dengan  bantuan  menggunakan  instrument spectronic  20D+  dan  spectrophotometer  uv-vis  T60U. Untuk  memperoleh  keseksamaan  hasil  dari  kedua instrumen  tersebut  maka  perlu  diadakan  uji  banding harga r dengan persamaan y=mx+c
Pada Spectro sinar tampak seperti Spectronic 20D+ ini  sumber  cahaya  biasanya  menggunakan  lampu tungsten  atau  lampu  wolfram,  jadi  panjang  gelombang yang  digunakan  biasanya  tinggi,  maka  data  yang
diperoleh  biasanya  makin  akurat  atau  kesalahan  yang muncul makin kecil. Berdasarkan hukum Lambert Beer: Absorbansi akan berbanding lurus dengan konsentrasi.

## 2. Metodologi penelitian
Alat :  Dalam  penelitian  ini  alat  yang  digunakan adalah  Spectronic  20D+    merk  Thermo  scientific, Spectrophotometer  uv-vis  T60U  merk  PG  Instrument Limited,  Neraca  analitik,  inkubator,  pH  meter,  almari pendingin  dan  seperangkat  alat  gelas. Bahan :  Adapun untuk bahannya antara lain larutan standar BSA dengan berbagai  konsentrasi,  akuades,  Larutan  Lowry  A, merupakan  campuran  larutan  asam  fosfo-tungstat- fosfo  molibdat  dengan akuades  (1:  1).  Larutan Lowry B, merupakan campuran 100 ml larutan Na 2 CO 3 2 % dalam larutan NaOH 0,1 N dengan 1 ml CuSO 4 5 H 2 O 1 % dan 1 ml K-Na Tartrat 2 %.

## Eksperimen
Metode  Lowry,  dengan  cara  membuat  larutan standar protein, Bovine Serum Albumine  (BSA) dengan berbagai  tingkat  konsentrasi  dari  30-300  µg/ml, kemudian  masing-masimg  diambil  1  ml  .Masukan kedalam  tabung reaksi  .  Tambahkan  ke  dalam masing- masing  tabung  8  ml  reagen  Lowry  B  dan  biarkan  pada suhu kamar selama 10 menit. Kemudian tambahkan 1 ml reagen  Lowry  A,  gojog  dan  biarkan  selama  20  menit. Kemudian  dibaca  Absorbansi  pada  panjang  gelombang 600  nm  dengan  menggunakan  Spectronic  20D+  dan Spectrophotometer uv-vis T60U.

## 3. Hasil dan pembahasan
Hasil yang diperoleh dalam penelitian ini persamaan y = mx+c dengan harga r = 0,9927 untuk spectronic 20D+ dan  harga  r  =  0,9971  untuk  spectrophotometer  uv-vis T60U..  Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa  pembacaan Absorbansi dengan menggunakan instrumen Spectronic 20 D+ dan Spectrophotometer uv-vis T60U mempunyai perbedaan harga r sebesar 0,0044. Harga ini sangat kecil

## Tabel 1. Data pengamatan
No Konsentrasi (µg/ml) Pembacaan Absorbansi Spectronic 20D+ Spectrophotometer UV- vis T60U 1 0 0,013 0,009 2 30 0,061 0,049 3 60 0,076 0,067 4 90 0,092 0,092 5 120 0,114 0,116 6 150 0.146 0,145 7 180 0,163 0,162 8 210 0,188 0,190 9 240 0,213 0,211 10 300 0,261 0,264 r = 0,9927 r = 0,9971 Y= 0,0008 x + 0,0242 Y= 0,0008 x + 0,0172
Gambar 1. Kurva standar dengan Spectronic 20D+
Gambar 2. Kurva standar dengan Spectrophotometer uv-vis T60U
Dalam uji protein dengan metode lowry yang perlu diperhatikan  adalah  penggunaan  reagen  lowry  A  dan lowry B harus dalam kondisi baru, karena mudah sekali rusak teroksidasi juga waktu pendiamannya harus tepat.
Demikian  juga saat  pembacaaan  Absorbansi  dipilih dua buah kuvet yang mempunyai tingkat baca absorbansi yang sama atau hampir sama (untuk sampel dan blanko).

## 4. Kesimpulan
Dalam  uji  protein  dengan  menggunakan  larutan standar  BSA  dan  metode  Lowry  diperoleh  hasil pembacaan  dengan  Spectronic  D20+  harga  r  =  0.9927 sedangkan  dengan  Spectrophotometer  uv-vis  T60U diperoleh  harga  r =  0,9971.  Terpautnya  harga  r sebesar 0,0044 sangat kecil, sehingga dapat disimpulkan bahwa dalam  penelitian  ini  untuk  pembacaan  Absorbansi  dari kedua  instrumen  tersebut  tidak  ada  perbedaan  secara siknifikan .

## DAFTAR PUSTAKA
Achmad H., (1992), Kimia Unsur dan Radiokimia . PT Citra Aditya Bakti, Bandung, halaman 122 - 123.
Scopes.K.Robert,  1982,  Protein  Purification  Principles and  Practice,  Springer-Verlag  New  York  and Heidelberg Berlin, 265.
Sudarmadji  S.  dkk,  1989,  Analisa  Bahan  Makanan  dan Pertanian, Liberty, Yogyakarta, 145
Mulyono  HAM,  (2005) Membuat  Reagen  Kimia  di
Laboratorium , PT Bumi Aksara,Jakarta, halaman 174
Fri  J.  and  Getrost  H.,  (1975), OrganicReagents  for  Trace Analysis , E. Merck,Darmstadt. p 22 - 25.
Miller J.C. and Miller J.N., (1988), Statistics for Analytical Chemistry , 2 nd edition, John Willey & Sons, New York, p 55-58.