# Korespondensi:  Balai  Riset  Perikanan  Budidaya  Air  Payau  dan Penyuluhan  Perikanan.  Jl.  Makmur  Dg.  Sitakka  No.  129,  Maros, Sulawesi  Selatan  90512,  Indonesia.
Tel.:  +  62  411  371544 E-mail:  bungatampangallo@yahoo.com
Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/ma

## KELAYAKAN  PENGGUNAAN  PROBIOTIK  RICA  KEMASAN  SERBUK  UNTUK  PEMELIHARAAN PASCA LARVA UDANG WINDU Penaeus monodon DALAM BAK TERKONTROL
Bunga  Rante  Tampangallo # ,  Ike  Trismawanti,  dan  Muliani
Balai Riset Perikanan Budidaya Air Payau dan Penyuluhan Perikanan Jl. Makmur Dg. Sitakka No. 129, Maros, Sulawesi Selatan 90512
(Naskah diterima: 9 Januari 2018; Revisi final: 5 September 2018; Disetujui publikasi: 5 September 2018)

## ABSTRAK
Probiotik  RICA  kemasan  cair  telah  diaplikasikan  pada  pemeliharaan  udang  windu  P.  monodon  maupun vaname Litopenaeus vannamei. Namun, probiotik kemasan cair dirasa banyak mengalami kendala dalam hal pengiriman. Alternatif bentuk kemasan yang saat ini sedang dikaji adalah bentuk kemasan serbuk. Penelitian ini bertujuan mengetahui viabilitas probiotik RICA setelah dikemas dalam bentuk serbuk, waktu penyimpanan, serta pengaruhnya terhadap sintasan dan  pertumbuhan benih udang windu yang  dipelihara dalam bak terkontrol.  Penelitian  dilakukan  dalam  dua  tahap,  yakni  penepungan  probiotik,  pengamatan  populasi probiotik,  dan  aplikasinya  pada  pemeliharaan  udang  windu.  Wadah  pemeliharaan  udang  windu menggunakan bak  fiber volume 500  liter. Udang uji  yang digunakan  adalah udang windu  PL-12 dengan kepadatan  200  ekor  per  bak.  Penelitian  menggunakan  rancangan  acak  lengkap  empat  perlakuan  tiga ulangan. Perlakuan menggunakan probiotik serbuk RICA-4 (A), (B) probiotik RICA-5, (C), probiotik RICA-1, dan (D) tanpa probiotik. Hasil penelitian menunjukkan bahwa populasi probiotik RICA setelah diserbukkan berkisar 10 7 sel/mL. Sintasan, bobot, dan panjang udang windu setelah dipelihara selama 48 hari dengan menggunakan probiotik RICA serbuk belum memberikan hasil yang signifikan (P>0,05), namun pemberian probiotik  RICA  telah  meningkatkan  total  hemolim  udang  windu  secara  signifikan  (P<0,05)  dibanding kontrol. Pada aplikasi probiotik ini terjadi pertumbuhan lumut dalam bak pemeliharaan akibat penggunaan tepung kanji sebagai filler.
KATA KUNCI: probiotik; udang windu; sintasan; pertumbuhan; hemolim
ABSTRACT: The application viability of RICA’s probiotic powder in tiger shrimp (Penaeus monodon) post-larvae culture reared in controlled tanks. By: Bunga Rante Tampangallo, Ike Trismawanti, and Muliani
RICA probiotics have been tested in multiple farms of black tiger shrimp P. monodon and whiteleg shrimp Litopenaeus vannamei with some promising results. However, the probiotics’ distribution in the form of liquid faces some limitations due to transportation regulations involving liquid-based substances. A powder form might be an easy and secure alternatively for the distribution of the probiotics via airplane. The purpose of the study was to observe the viability of RICA probiotics after powdering and storage as well as their influences on the survival and growth rates of black tiger shrimp reared in controlled tanks. The study was conducted in three stages which were the powdering of the probiotic, observation of the probiotics’ bacteria population, and its application in shrimp rearing. The research was designed in a completely randomized design where 200 shrimps aged PL-12 reared in each tank and applied with three different powder probiotics namely (A) RICA-4, (B) RICA-5, and (C) RICA-1 as the treatments, and (D) without adding probiotic as a control. The result showed that the probiotic population after powdering ranged around 10 7 cells/mL. The survival rate, body length, and weight of shrimps after 48 days of rearing showed insignificant results (P>0.05) among the treatment. However, RICA-1 had an increase in the total of hemocytes of the shrimps (P<0.05) compared to control. The emergence of moss in the containers became a constraint during the experiment.
KEYWORDS: probiotics; black tiger shrimp; survival; growth; hemocytes

## PENDAHULUAN
Brevibacillus laterosporus (BT951) telah diisolasi oleh Muliani  et  al.  (2006)  dari  tambak  udang  windu  (P. monodon) dan telah dijadikan sebagai isolat probiotik RICA-1, demikian halnya isolat probiotik RICA-4 dan RICA-5 yang diisolasi oleh Tampangallo & Nurhidayah (2010) dari makroalga dan teridentifikasi sebagai Ba- cillus subtilis (BM12) dan Bacillus licheniformis (BM58). B.  laterosporus  BT951  adalah  bakteri  gram  positif, berbentuk batang, katalase, dan oksidase positif, indol negatif,  dan  bersifat  motil  (Muliani  et  al.,  2011). Selanjutnya dilaporkan sifat menguntungkan dari isolat ini adalah tidak bersifat patogen terhadap larva udang windu  dan  mampu  menghambat  pertumbuhan  V. harveyi.
Penggunaan kombinasi isolat probiotik RICA yang diisolasi  dari  laut  pada  pemeliharaan  benur  di  bak terkontrol dapat meningkatkan sintasan benur secara signifikan  dibanding  kontrol  tanpa  probiotik (Atmomarsono et al., 2009). Beberapa spesies bacil- lus telah dimanfaatkan sebagai probiotik pada budidaya udang  terintegrasi  (Haseeb,  2011),  budidaya  udang vaname  (Zokaei  et  al.,  2009)  dan  dicampur  dengan pakan udang (Widanarni et al., 2014).
Isolat-isolat probiotik RICA juga telah diaplikasikan pada budidaya udang windu maupun vaname di tambak dan  terbukti  dapat  meningkatkan  sintasan  dan produksi  udang  (Tahe  et  al.,  2015;  Sulestiani  et  al., 2016).  Probiotik  RICA  kemasan  cair  dirasa  kurang praktis dalam hal pengiriman, terutama ke pulau lain melalui  transportasi  udara.  Probiotik  kemasan  cair membutuhkan  perlakuan  khusus  dalam  pengiriman sehingga menyebabkan biaya transportasi lebih mahal dibandingkan dengan produk dalam bentuk non-cair. Produk kemasan dari probiotik juga bertujuan untuk meningkatkan efektivitas probiotik dan mempermudah aplikasi di lapangan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa untuk mengurai bahan organik pada  titik  tertentu  di  dasar  petakan  tambak,  maka dapat dipilih probiotik dalam bentuk tablet agar tetap berada pada titik/dasar tambak yang hendak diperbaiki/ treatment, sedangkan apabila sasarannya adalah media air budidaya maka yang efisien adalah kemasan serbuk atau cair karena mudah tersebar atau larut dalam air (Newman, 2011).
Probiotik RICA ini pun telah diuji coba untuk dibuat dalam bentuk serbuk dengan menambahkan tepung kanji. Aktivitas menguntungkan dari isolat probiotik RICA yang telah diserbukkan diharapkan masih tetap aktif  seperti  halnya  dengan  probiotik  cair.  Tujuan penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  viabilitas probiotik RICA setelah dikemas dalam bentuk serbuk dan waktu penyimpanan serta pengaruhnya terhadap
sintasan dan pertumbuhan benih udang windu yang dipelihara dalam bak terkontrol.

## BAHAN DAN METODE

## Persiapan  Serbuk  Probiotik  RICA
Persiapan  pembuatan  serbuk  probiotik  RICA meliputi  sterilisasi  tepung  kanji  (400  g)  yang  akan digunakan  sebagai  filler/pengisi  probiotik  RICA  cair dengan  menggunakan  autoclove  pada  suhu  121°C, tekanan  1  atm  selama  15  menit;  peremajaan  dan perbanyakan  isolat  probiotik  RICA-1,  4,  dan  5; pengamatan kepadatan probiotik sebelum dan sesudah dalam kemasan serbuk.
Probiotik  RICA-1, 4, dan 5 masing-masing dikultur di media nutrien broth (Difco) sebanyak 200 mL (1,6 g nutrien broth ditambahkan NaCl 3 g dan dilarutkan dalam  aquades  200  mL).  Probiotik  ini  diinkubasi  di atas inkubator bergoyang selama 24 jam. Kepadatan probiotik cair pada kondisi awal kemudian di-sampling dengan menggunakan metode split/sebar pada media Triptic soya agar (TSA) plate (4 g TSA ditambah 1,5 g NaCl dan dilarutkan dalam 100 mL akuades). Probiotik RICA cair ini dipindahkan ke dalam wadah gelas piala steril.
Tepung  kanji  steril  (400  g)  dimasukkan  sedikit demi  sedikit  ke  dalam  probiotik  cair  tadi.  Setelah adonan probiotik menjadi kalis, adonan ini kemudian disimpan dalam inkubator 40°C steril selama 1-2 jam. Tepung  yang  masih  tersisa  kemudian  dimasukkan semua ke dalam adonan probiotik tadi lalu diaduk lagi agar  merata  lalu  dibagi  ke  dalam  nampan  steril kemudian  dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu  40°C selama  24-48  jam.  Campuran  tepung  kanji  dan probiotik  RICA  yang  telah  kering  kemudian  di-sam- pling  kepadatannya  dengan  menggunakan  metode sebar pada media TSA plate. Setelah diinkubasi selama 48 jam populasi bakteri yang tumbuh pada media TSA plate dihitung secara manual.
Probiotik  serbuk  ini  kemudian  disimpan  dalam wadah stoples pada suhu ruang. Sampling kepadatan bakteri probiotik serbuk setelah penyimpanan (selama 10  bulan)  dilakukan  setiap  bulan  dengan  cara mengambil  1  g  probiotik  dalam  kemasan  serbuk, diencerkan kemudian disebar pada media TSA plate.

## Persiapan  Wadah,  Media  Pemeliharaan,  dan Hewan  Uji
Wadah yang digunakan pada penelitian ini adalah bak fiber berbentuk persegi empat berukuran 50 cm x  50  cm  x  50  cm  sebanyak  12  buah.  Bak  tersebut dipasangi selang dan batu aerasi sebanyak empat titik per bak, lalu diisi dengan air laut salinitas 30 ppt yang
telah melalui membran filter 0,2 µm hingga ketinggian 45 cm.
Hewan uji yang digunakan pada penelitian ini adalah benur udang windu PL-12 yang diperoleh dari Instalasi Perbenihan Udang Windu (IPUW), Balai Penelitian dan Pengembangan Budidaya Air Payau di Kabupaten Barru, Sulawesi  Selatan.  Bobot  rata-rata  benur  PL-12  yang digunakan adalah 0,002 g/ekor.

## Pemeliharaan  Benur  Udang
Benur PL-12 ditebar sebanyak 200 ekor per bak. Sebelum  benur  ditebar,  semua  bak  pemeliharaan ditambahkan  dengan  plankton  Cheotoceros  amami. Plankton ini dapat berfungsi sebagai pakan alami untuk benur sekaligus sebagai peneduh bagi benur agar lebih mudah beradaptasi dengan lingkungannya yang baru. Benur  diberi  pakan  sebanyak  3%  dari  bobot  benur dengan  frekuensi  pemberian  tiga  kali  sehari,  yaitu pukul  07.00,  12.00  dan  17.00.  Penggantian  air sebanyak 30% dilakukan seminggu sekali dan probiotik diberikan setiap hari sesuai dengan perlakuan masing- masing sebanyak 0,5 g. Pemeliharaan udang dilakukan selama 48 hari.

## Rancangan  Penelitian
Penelitian dilakukan menggunakan Rancangan Acak Lengkap  (RAL)  dengan  empat  perlakuan  dan  tiga ulangan, yakni: A= pemberian probiotik serbuk RICA- 4,  B=  pemberian  probiotik  serbuk  RICA-5,  C= pemberian  probiotik  serbuk  RICA-1,  dan  D=  tanpa pemberian probiotik  (kontrol).
Bobot benur diukur sebelum ditebar, setelah tiga minggu pemeliharaan dan di akhir penelitian. Sintasan dan total sel hemosit udang yang dipelihara dihitung
pada  saat  panen.  Total  sel  hemosit  diamati  dengan mengambil sampel benur sebanyak satu ekor per bak dimasukkan  dalam  mikrotube  yang  telah  berisi  0,3 mL antikoagulan (trisodium sitrat 3,8%) lalu digerus kasar.  Cairan  gerusan  ini  kemudian  diambil  dengan menggunakan  pipet  tetes  lalu  diteteskan  di  atas hemositometer.  Sel  hemosit  dihitung  di  bawah mikroskop dengan pembesaran 4.000x menggunakan bilik  25.  Total  sel  hemosit  dihitung  menggunakan rumus:
di mana:
N
= jumlah sel hemosit (sel/mL) n1, n2, n3, n4, n5 = jumlah sel hemosit dalam kotak kecil hemositometer (sel)
Data  sintasan,  panjang,  bobot,  dan  total  sel hemosit dianalisis dengan menggunakan Anova.

## HASIL DAN BAHASAN

## Populasi  Bakteri Probiotik  Serbuk
Populasi  bakteri  probiotik  RICA  cair  sebelum dikemas dalam bentuk serbuk adalah 1 x 10 10 cfu/mL untuk RICA-1; 3,9 x 10 9 cfu/mL RICA-4; dan 1,69 x 10 9 cfu/mL  RICA-5.  Setelah  ditambahkan  tepung  kanji dengan perbandingan 1:2 (v:w) dan dikeringkan dalam oven pada suhu 40°C, maka populasi bakteri probiotik serbuk RICA-1 menjadi 7,23 x 10 8 cfu/mL sedangkan untuk RICA-4 dan RICA-5 masing-masing menjadi 1,47 x  10 9 cfu/mL  dan  8,35  x  10 8 cfu/mL  (Gambar  2). Probiotik  serbuk  inilah  yang  selanjutnya  digunakan pada tahap pemeliharaan udang windu.
Gambar 1. Proses  pembuatan probiotik  RICA serbuk;  probiotik RICA  cair (a),  probiotik yang telah ditambahkan tepung kanji dan diinkubasi dalam oven (b), dan contoh probiotik RICA setelah diserbukkan (c).
Figure 1. Processes of powdering RICA probiotics; liquid form of probiotics RICA (a), probiotics after addition with starch and incubation in oven (b), and powder form of probiotics RICA  (c).

## A                                        B                                         C
4 10 x 25 x 5 n5 n4 n3 n2 n1 N           
Pada  umumnya  bacillus  memiliki  endospora (Newman, 2011), adanya sifat ini menyebabkan bacil- lus  sangat  mungkin  untuk  dikemas  dalam  berbagai bentuk,  termasuk  diserbukkan.  Bentuk  kemasan probiotik  dapat  berupa  bentuk  cair  (liquid),  serbuk, pelet, kapsul atau pun tablet. Pada prinsipnya pemilihan bentuk kemasan ini sangat berkaitan dengan upaya untuk  mengurangi  adanya  kontaminasi  terhadap produk, serta mempermudah dalam transportasi dan penyimpanan.
Tingginya  populasi  bakteri  probiotik  RICA  yang ditepungkan dengan cara yang sangat sederhana ini dapat memberi harapan untuk pengembangannya. Pada pembuatan  probiotik  RICA  dengan  menggunakan maltosa 20% (v/w) sebagai filler kemudian diserbukkan dengan  memakai  freeze  drying  juga  mengalami penurunan  sekitar  10  cfu/mL  (Ambarwati,  2015). Penyebab turunnya populasi probiotik pada metode spray drying antara lain adalah karena tipisnya penyalut dari probiotik sehingga tidak dapat melindungi bakteri dari panasnya alat spray drying. Namun penyalut yang terlalu  banyak  juga  dapat  menyebabkan  populasi bakteri  per  gram  menjadi  lebih  rendah  (Yulinery  & Nurhidayat, 2012).
Performa  bakteri  probiotik  serbuk  RICA  pada percobaan penyimpanan probiotik serbuk ini di suhu ruang dapat dilihat pada Gambar 3.
Populasi  bakteri  probiotik  serbuk  cenderung mengalami  penurunan,  setelah  disimpan  selama  10 bulan,  probiotik  RICA-1  turun  satu  desimal,  RICA-4 dan  5  turun  dua  hingga  tiga  desimal,  walaupun
demikian hasil pengamatan ini masih belum konsisten. Hal ini menunjukkan bahwa bakteri probiotik belum homogen melekat pada tepung kanji yang digunakan sehingga metode sederhana ini perlu diperbaiki lagi supaya  probiotik  serbuk  yang  dihasilkan  lebih homogen. Nampaknya penelitian ini memberikan hasil yang lebih baik dibanding yang diperoleh Yulinery & Nurhidayat (2012), hanya mampu menyimpan bakteri yang sudah dienkapsulasi selama dua minggu.

## Sintasan  Juvenil  Udang  Windu
Sintasan  udang  windu  yang  dipelihara  dengan menggunakan probiotik serbuk RICA dapat dilihat pada Gambar  4.  Sintasan  tertinggi  diperoleh  pada  udang yang dipelihara dengan menggunakan probiotik RICA- 4  yakni  81  ±  12,3%  disusul  penggunaan  probiotik RICA-1 69,5±3,5%; kontrol 69,3 ± 12%; dan RICA-5 63 ± 4,6%.
Pemberian  probiotik  RICA  serbuk  belum memberikan  pengaruh  yang  signifikan  (P>0,05) terhadap sintasan udang windu yang dipelihara (Gambar 4). Gunarto & Hendrajat (2008) juga melaporkan efek pemberian probiotik pada pemeliharaan juvenil udang vaname tidak signifikan meningkatkan sintasan dan produksi, akan tetapi cenderung memperbaiki kualitas air. Hal yang sama diperoleh Silva et al. (2011) pada pemeliharaan larva hingga post larva udang vaname dengan menggunakan probiotik komersil dan Pham et al. (2014) pada pemeliharaan post larva udang vaname selama  sembilan  hari  dengan  pemberian  probiotik Pseudoalteromonas.  Namun  demikian  beberapa penelitian penggunaan probiotik pada pemeliharaan
Gambar 2. Populasi  probiotik  RICA  dalam  bentuk  cair  dan  setelah dikemas dalam bentuk serbuk.
Figure 2. Population  of  RICA  probiotics  in  liquid  form    and  after powdering. 8.2 8.4 8.6 8.8 9 9.2 9.4 9.6 9.8 10 10.2 RICA-1 RICA-4 RICA-5 Po p u las i p ro b io ti k Pr ob iot ic p op ul at ion (l o g c fu /m L) Probiotik (Probiotic) Cair (Liquid) Serbuk (Powder) Cair (Liquid) Serbuk (Power)
udang  memberikan  hasil  yang  signifikan  berbeda dibanding  tanpa  probiotik,  seperti  yang  dilaporkan oleh Newman (2011) bahwa pemberian probiotik ba- cillus dapat meningkatkan sintasan dan produksi udang windu.

## Bobot dan  Panjang Juvenil  Udang Windu
Bobot dan panjang udang pada penelitian ini setelah dipelihara selama ± 1,5 bulan adalah 0,4112 ± 0,0683 g : 3,9 ± 0,3 cm pada kontrol; 0,4107 ± 0,1603 g : 3,8 ± 0,8 cm pada perlakuan C (RICA-1); 0,3221 ±
0,1941 g : 3,5 ± 0,4 cm pada perlakuan A (RICA-4); dan 0,3191 ± 0,336 g : 3,6 ± 0,3 cm pada perlakuan B (RICA-5) (Gambar 5).

## Total  Sel  Hemosit
Sel  hemosit  dapat  menjadi  indikasi  kondisi fisiologis  atau  pun  tingkat  kesehatan  udang.  Sel hemosit udang terdiri atas sel granular, semi-granular dan hialin (Braak, 2002). Gambaran total sel hemosit udang  windu  pada  penelitian  ini  dapat  dilihat  pada Gambar 6.
Gambar 3. Populasi probiotik RICA bentuk serbuk setelah disimpan selama sepuluh bulan.
Figure 3. Population of RICA probiotic in powder form after ten months storage. 0.0000 1.0000 2.0000 3.0000 4.0000 5.0000 6.0000 7.0000 8.0000 9.0000 10.0000 Awal (Initial) 24 jam (hours)
1 2 3 4 6 7 8 10 Po p u las i p ro b io ti k Pop ul at ion p rob iot ic (c fu /g ) Lama penyimpanan (bulan) Storge time (months) RICA-4 RICA-5 RICA-1
Gambar 4. Sintasan juvenil udang windu P. monodon yang dipelihara dengan menggunakan probiotik RICA serbuk.
Figure 4. Survival rate of shrimp juvenile P. monodon reared with the application of RICA powder probiotics.
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 RICA-4 RICA-5 RICA-1 Kontrol (Control) Si n tas an (S ur vi va l r at e) ( % ) Perlakuan (Treatments) Awal   24 jam       1           2           3           4           6          7           8          10 Initial  24 hour
RICA-4             RICA-5              RICA-1     Kontrol (Control)
Total  sel  hemosit  udang  yang  dipelihara  adalah 2,462 x 10 7 ± 4,56 x 10 6 sel/mL (B); 2,065 x 10 7 ± 3,32 x 10 6 sel/mL (A); 1,847 x 10 7 ± 1,23 x 10 6 sel/mL (C);  dan  1,092  x  10 7 ±  2,08  x  10 6 sel/mL  (kontrol) (Gambar 6). Sel hemosit yang tinggi dapat disebabkan oleh  adanya  peptidoglukan  yang  terdapat  dalam probiotik yang diberikan. Pemberian probiotik secara signifikan dapat meningkatkan total sel hemosit dan ditunjukkan dengan jumlah sel tertinggi diperoleh pada aplikasi  probiotik  RICA-5  (Gambar  6).  Hal  ini  tidak
Gambar 5. Panjang (kiri) dan bobot (kanan) juvenil udang windu yang dipelihara dengan menggunakan probiotik  RICA  serbuk.
Figure 5. Body length (left) and body weight (right) of shrimp juvenile P. monodon reared with the application of RICA powder probiotics.
Gambar 6. Total sel hemosit udang windu yang dipelihara dengan menggunakan probiotik RICA serbuk.
Figure 6. Total  hemocytes  cells of  shrimp  P.  monodon  reared  with the application of RICA powder probiotics.
sejalan dengan data sintasan yang diperoleh (Gambar 5).  Penyebab  rendahnya  sintasan  pada  perlakuan probiotik RICA-5 dibanding kontrol (walaupun tidak signifikan)  pada  penelitian  ini  kemungkinan disebabkan  oleh  keterlambatan  probiotik  ini menempel pada udang ataupun karena jumlahnya yang masih sedikit sehingga tidak dapat melawan bakteri patogen  yang  mungkin  sudah  terdapat  pada  tubuh udang yang  dipelihara (Bermudezbrito  et al.,  2012). Hal ini juga sejalan dengan hasil penelitian Silva et al.
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 RICA-4 RICA-5 RICA - Kontrol (Control) B o b o t (g /e ko r) / W ei gh t (g /fi sh ) Perlakuan (Treatments) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 5 RICA-4 RICA-5 RICA-1 Kontrol (Control) Pan jan g (c m /e ko r) / Le ng th (c m /fi sh ) Perlakuan (Treatments) b b b a 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 RICA-4 RICA-5 RICA-1 Kontrol (Control) T o tal s el h em o si t (x 1 0 4 se l/m L) T ot al h ae m oy te c el l ( x10 4 ce ll/ m L) Perlakuan (Treatments)
RICA-4       RICA-5       RICA-1   Kontrol (Control)
RICA-4       RICA-5         RICA-1   Kontrol (Control)
RICA-4             RICA-5           RICA-1     Kontrol (Control)
(2011) yang mendapatkan sintasan pasca-larva udang vaname yang lebih rendah setelah sembilan hari masa pemeliharaan.  Data  total  sel  hemosit  dapat memberikan  bukti  bahwa  probiotik  RICA  dalam kemasan serbuk dengan metode yang sederhana masih dapat melakukan fungsinya, karena salah satu fungsi probiotik untuk meningkatkan imunitas (Vrieze et al., 2010 dalam Sanchezortiz et al., 2015). Bermudezbrito et  al.  (2012)  menyarankan  untuk  memperhatikan metode  kultur  probiotik  karena  kondisi  kultur kemungkinan dapat memengaruhi ekspresi karakter molekuler  probiotik.  Pemilihan  metode  yang  tidak tepat  dapat  menyebabkan  penurunan  fungsi  dari probiotik yang dikultur.
Probiotik  serbuk  RICA-5  dan  RICA-4  adalah  iso- late  Bacillus  licheniformis  dan  Bacillus  subtilis  yang diisolasi dari makroalga/rumput laut (Tampangallo & Nurhidayah,  2010).  Sanchesortiz  et  al.  (2015) melaporkan  bahwa  pemberian  isolat  Bacillus  subtilis pada pemeliharaan udang vaname dapat meningkatkan total  sel  hemosit  udang  secara  signifikan.  Hasil penelitian  Chandran  et  al.  (2014)  menunjukkan pemberian probiotik bacillus pada pakan udang windu dapat juga meningkatkan total sel hemosit, aktivitas phenoloksidase,  respiratory  burst,  konsentrasi  pro- tein  plasma,  dan  aktivitas  antibakteri.  Pemberian probiotik juga dapat meningkatkan ekspresi gen Litsty PEN3 (Pham et al., 2014). Hal ini disebabkan adanya peptidoglukan dalam probiotik yang dapat bersinergi positif dengan sistem pertahanan tubuh udang yang dominan  yang  dilakukan  oleh  hemosit.  Kehadiran bakteri  patogen  dapat  merangsang  udang  untuk memproduksi  hemosit,  mengaktifkan  fagositosis, prophenoloksidase,  antimicrobial  peptides  (AMPs) seperti  penaidins,  crustin,  dan  anti-lipopolysaccharide factors  (ALFs)  (Tassanakajon  et  al.,  2011).  Hal  inilah yang menyebabkan mortalitas juvenil udang vaname yang dipelihara dengan menambahkan B. subtilis dalam pakan lebih rendah setelah dipapar Vibrio harveyi 10 5 cfu/mL selama 24 jam (Balcazar & Rojas-Luna, 2007). Probiotik  bacillus  dapat  hidup  dalam  jumlah  yang mencukupi  dan  menstimulasi  enzim  dalam  saluran pencernaan  untuk  bekerja  lebih  baik  (Soccol  et  al., 2010).

## KESIMPULAN
Populasi probiotik RICA kemasan serbuk setelah disimpan selama 10 bulan masih memenuhi standar (minimal 10 6 cfu/mL). Probiotik RICA kemasan serbuk belum  signifikan  meningkatkan  sintasan  dan pertumbuhan  akan  tetapi  viabilitasnya  masih  tetap aktif,  yang  ditandai  dengan  signifikannya  total  sel hemosit.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini terlaksana atas dukungan tim peneliti dan teknisi Kesehatan Ikan dan Lingkungan, serta tim Instalasi  Perbenihan  Udang  Windu  Balai  Riset Perikanan Budidaya Air Payau dan Penyuluh Perikanan di Kabupaten Barru.

## DAFTAR  ACUAN
Ambarwati, D. (2015). Populasi probiotik RICA-1 pow- der dengan penambahan maltosa 20%. Komunikasi pribadi.
Atmomarsono,  M.,  Muliani,  &  Nurbaya.  (2009).
Penggunaan bakteri probiotik dengan komposisi berbeda untuk perbaikan kualitas air dan sintasan pascalarva udang windu. J. Ris. Akuakultur, 4(1), 73- 83.
Balcazar, J.L.,  & Rojas-Luna,  T. (2007).  Inhibitory ac- tivity of probiotic Bacillus subtilis UTM 126 against vibrio species  confers protection  against vibrio- sis in juvenile shrimp (Litopenaeus vannamei). Curr. Microbiol., 55, 409-412. DOI: 10.1007/s00284-007- 9000-0.
Bermudezbrito, M., Plaza-Diaz, J., Munoz-Quezada, S., Gomez-Llorente,  C.,  &  Gil,  A.  (2012).  Probiotic mechanisms of action. Ann. Nutr. Metab., 61, 160- 174. DOI: 10.1159/000342079.
Braak, V.D.K. (2002). Haemocytic defence in black tiger shrimp  (Penaeus  monodon).  Thesis.  Wageningen University. Netherlands, 168 pp.
Chandran,  M.N.,  Iyapparaj,  P.,  Moovendhan,  S., Ramasubburayan,  R.,  Prakash,  S.,  Immanuel,  G., &  Palavesam,  A.    2014.    Influence  of  probiotic bacterium Bacillus cereus isolated from the gut of wild shrimp Penaeus monodon in turn as a potent growth  promoter  and  immune  enhancer  in  P. monodon. Fish & Shellfish Immunology (36):38-45.
Gunarto,  &  Hendrajat,  E.A.  (2008).  Budidaya  udang vaname,  Litopenaeus  vannamei  pola  semiintensif dengan beberapa jenis probiotik komersil. J. Ris. Akuakultur, 3(3), 339-349.
Haseeb, M. (2011). Development of zero water exchange shrimp culture system integrated with bioremediation of  detritus  and  ammonia-nitrogen.  Thesis.  Cochin University of Science and Technology, 293 pp. Muliani,  Nurbaya,  &  Atmomarsono,  M.  (2006). Penapisan  bakteri  yang  diisolasi  dari  tambak udang sebagai kandidat probiotik pada budidaya udang windu, Penaeus monodon. J. Ris. Akuakultur, 1(1), 73-85.
Muliani,  Nurbaya,  &  Susianingsih,  E.  (2011).
Karakterisasi  dan  identifikasi  molekuler  isolat BT951 serta evaluasi potensinya sebagai bakteri
probiotik  pada  budidaya  udang  windu  (Penaeus monodon). J. Ris. Akuakultur, 6(3), 457-468.
Newman, S.G. (2011). Pro 4000X. Advanced biotech- nology for pond water quality (Environment) man- agement.  www.bioremediationaquaculture.com atau www.aqua-in-tech.com.
Pham,  D.,  Ansquer,  D.,  Chevalier,  A.,  Dauga,  C., Peyramale, A., Wabete, N., & Labreuche, Y. (2014). Selection  and  characterization  of  potential probiotic bacteria for Litopenaeus stylirostris shrimp hatcheries in New Caledonia. J. Aquaculture. DOI: 10.1016/j.aquaculture.2014.04.031.
Soccol,  C.R.,  Vandenberghe,  L.P.,  Spier,  M.R.,
Medeiros, A.B.P., Yamaguishi, Lindner, J.D., Pandey, A., & Thomaz-Soccol, V. (2010). The potential of probiotic, Food Technol. Biotechnol., 48(4), 413-434.
Tahe, S., Suwoyo, H.S., & Fahrur, M. (2015). Aplikasi probiotik RICA dan komersial pada budidaya udang vaname  (Litopenaeus  vannamei)  pola  intensif. Prosiding Forum Inovasi Teknologi Akuakultur, hlm. 435-445.
Tampangallo, B.R., & Nurhidayah. (2010). Pemantauan populasi bakteri pada beberapa jenis rumput laut. Prosiding  Seminar  Perikanan  Nasional.  Universitas Hang Tuah. Surabaya, hlm. 4.
Tassanakajon,  A.,  Amparyup,  P.,  Somboonwiwat,  K.,
& Supungul, P. (2011). Cationic antimicrobiol pep- tides in penaeid shrimp. Marine Biotechnology Jour- nal, 13, 639-657.
Sanchezortiz, A.C., Luna-Gonzales, A., Campa-Cordova, A.I.,  Escamilla-Montes,  R.,  Flores-Miranda,  M.C., &  Mazon-Suastegui,  J.M.  (2015).  Isolation  and
characterization  of  potential  probiotic  bacteria from pustulose ark (Anadara tuberculosa) suitable for shrimp farming. Lat. Am. J. Aquat. Res., 43(1), 123-136.
Silva, E.F., Soares, M.A.,  Calazans, N.F., Vogeley, J.L., Valle,  B.C.,  Soares,  R.,  &  Peixoto,  S.  (2011).  Ef- fect  of  probiotik  (Bacillus  spp.)  addition  during larvae and postlarvae culture of the white shrimp Litopenaeus vannamei. Aquaculture Research, p. 1-9. DOI: 10.1111/j.1365-2109.2011.03001x.
Sulestiani, A.,  Pasaribu, A.M., Subianto, A.,  & Huda, M.Kh.  (2016).  Pemanfaatan  probiotik  di  tambak udang  windu  (Penaeus  monodon,  F.)  untuk mengatasi penyakit udang “White Spot Syndrome Virus”  (WSSV)  di  Desa  Srowo  Kecamatan  Sidayu Kabupaten  Gresik,  Jawa  Timur.  Majalah  Aplikasi Ipteks NGAYAH, 7(1), 100-109.
Widanarni,  Noermala,  J.I.,  &  Sukenda.  (2014). Prebiotik,  probiotik,  dan  sinbiotik  untuk mengendalikan koinfeksi Vibrio harveyi dan IMNV pada udang vaname. J. Akuakultur Indonesia, 13(1), 11-20.
Yulinery, T., & Nurhidayat, N. (2012). Analisis viabilitas probiotik  Lactobacillus  terenkapsulasi  dalam penyalut dekstrin dan jus markisa (Passiflora edulis). J. Tek. Ling., 13(1), 109-121.
Zokaei,  H.F.,  Saad,  C.R.B.,  Daud,  H.M.,  Sharr  Azni Harmin, S.A., & Shakibazadeh, S. (2009). Effect of Bacillus subtilis on the growth and survival rate of shrimp  (Litopenaeus  vannamei).  African  Journal  of Biotecnoogy, 8(14), 3369-3376.