Journal Syifa Sciences and Clinical Research (JSSCR)
Volume 4 Nomor 2
Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/jsscr , E-ISSN: 2656-9612 P-ISSN:2656-8187 DOI : https://doi.org/10.37311/jsscr.v4i2.15656

## Senyawa Antidiabetes Fraksi Aktif Daun Ketapang

## (Terminalia catappa L .)
Hamsidar Hasan 1* , Endah Nurrohwinta Djuwarno 2 , Hasrita Samudi 3 , Widy Susanti
Abdulkadir 4 , Faramita Hiola 5
1,2,3,4,5 Jurusan Farmasi Fakultas Olahraga dan Kesehatan, Universitas Negeri Gorontalo, Jl. Jenderal Sudirman No. 06 Kota Gorontalo 96128, Indonesia
* Penulis Korespondensi. Email: hamsidar.hasan@ung.ac.id

## ABSTRAK
Antidiabetes merupakan senyawa yang berperan untuk mengobati penyakit diabetes melitus. Diabetes melitus merupakan suatu penyakit atau gangguan metabolisme kronis yang ditandai dengan peningkatan kadar gula darah. Penggunaan obat tradisional relatif lebih murah dan aman  jika  dibandingkan  dengan  obat  sintesis.  Salah  satu  tanaman  yang  sering  digunakan sebagai  obat  tradisional  adalah  Tanaman  Ketapang (Terminalia  catappa  L.) .  Dalam  tanaman tersebut  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  sebagai  antidiabetes.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui ekstrak n-heksan, etil asetat dan metanol mempunyai efektivitas antidiabetes  terhadap  kadar  glukosa  darah  dan  golongan  senyawa  yang  berperan  sebagai antidiabetes. Metode penelitian yang digunakan yaitu maserasi bertingkat, skrining fitokimia, analisis kromatografi lapis tipis, dilakukan uji antidiabetes, ekstrak yang memiliki efektivitas antidiabetes  paling  efektif  kemudian  diteruskan  ke  tahap  fraksinasi  dengan  metode kromatografi cair vakum dan kromatografi kolom gravitasi, analisis kromatografi lapis tipis preparatif,  selanjutnya  dianalisis  menggunakan  spektrofotometri  Uv-Vis  dan  FTIR.  Hasil penelitian menunjukkan spektrum UV-Vis panjang gelombang maksimum fraksi aktif daun ketapang (Terminalia catappa L.) adalah 410.50 nm dan spketrum FTIR memiliki gugus fungsi O-H (hidroksil), C=O (karbonil), C-H alifatik, C-O (eter) dan CH3. Dari hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa senyawa antidiabetes yang berperan dalam fraksi aktif daun ketapang (Terminalia catappa L.) adalah golongan senyawa flavonoid. Kata Kunci:
Antidiabetes, Daun Ketapang (Terminalia catappa L.); Spektrofotometri UV-Vis; FTIR
Diterima:
21-06-2022 Disetujui: 27-07-2022 Online: 01-08-2022

## ABSTRACT
Antidiabetic  is  a  compound  that has  a vital  role  in  treating  diabetes  mellitus.  Diabetes  mellitus  is  a chronic metabolic disorder that is characterized by an increase in blood sugar levels. The use of traditional medicine is relatively cheaper and safer compared to synthetic drugs. One of the plants that is often used in  traditional  herbal  medicine  is  ketapang  (Terminalia  catappa  L.)  because  it  contains  a  secondary metabolite compound that acts as an antidiabetic. Thus, this present study aimed to determine the n- hexane,  ethyl  acetate,  and  methanol  extracts  that had  antidiabetic  efficacy  on  blood  sugar  levels  and compound  group  that  acts  as  antidiabetic.  The  research  employed  mehods  of  multiple  maceration, phytochemical  screening,  thin  layer  chromatography,  and  antidiabetic  test,  while  the  most  effective antidiabetic efficacy was then continued to the fractionation stage using vacuum liquid chromatography and gravity column chromatography. Furthermore, the preparative thin layer chromatography (PTLC) analysi,  UV-Vis  spectrometry  and  FTIR  were  carried  out.  The  research  findings  revealed  that  the maximum wavelength of active fraction in ketapang (Terminalia catappa L.) leaves was 410.50 nm, and

## 1. Pendahuluan
Tumbuhan  adalah  bahan  alam  yang  memiliki  banyak  kandungan  senyawa metabolit  sekunder,  hal  ini  yang  mendasari  banyak  peneliti  untuk  mengeksplorasi senyawa-senyawa  metabolit  sekunder.  Senyawa-senyawa  metabolit  sekunder  inilah yang dimanfaatkan sebagai obat baik itu sebagai senyawa racun untuk pertahanan, zat atraktan  (zat  penarik)  terhadap  sesama  jenisnya,  sebagai  zat  pewarna  atau  bisa  juga untuk  mengobati suatu penyakit  tertentu. Dari  senyawa  metabolit  sekunder  tersebut lebih  dari  400  jenis  tanaman  yang  telah  terbukti  memiliki  aktivitas  sebagai  obat tradisional [1] dalam Jurnal  Tri Reksa dkk, 2019).
Salah satu tanaman yang sering digunakan sebagai obat tradisional adalah pohon ketapang (Terminalia catappa L.) . Pohon ketapang (Terminalia catappa L.) merupakan salah satu  tanaman  anggota  famili Combretaceae yang  banyak  ditemukan  di  daerah  Pasifik terutama  di  Indonesia  [2].  Masyarakat  umumnya  memanfaatkan  tanaman  ketapang (Terminalia  catappa  L.) ini  sebagai  obat  antidiabetes.  Penggunaan  tanaman  ketapang (Terminalia  catappa  L.) sebagai  obat  antidiabetes  sudah  terjadi  secara  turun  termurun terutama bagian daun, kulit batang, biji dan buah dari tanaman ketapang (Terminalia catappa  L.) ini.  Karena  dalam  tanaman  tersebut  mengandung  senyawa  metabolit sekunder sebagai antidiabetes seperti flavonoid, alkaloid, tanin steroid dan terpenoid [3].
Hal ini didukung penelitian yang dilakukan oleh [4] membuktikan bahwa daun ketapang dapat menurunkan kadar glukosa darah tikus diabetes dengan meningkatkan regenerasi sel β pankreas dan dapat menurunkan berat badan tikus diabetes.
Aktivitas antidiabetes dari ketapang kurang lebih berhubungan dengan adanya kandungan senyawa metabolit sekunder didalamnya. Hal ini yang menjadi ketertarikan bagi peneliti untuk mengetahui senyawa tersebut. Berdasarkan uraian di atas tentang tanaman  ketapang (Terminalia  catappa  L.) sebagai  antidiabetes,  dan  belum  adanya penelitian sebelumnya mengenai senyawa antidiabetes dari daun ketapang (Terminalia catappa  L.) ,  maka  peneliti  tertarik  untuk  melakukan  penelitian  tentang  senyawa antidiabetes fraksi aktif daun ketapang (Terminalia catappa L.) .

## 2.  Metode Desain Penelitian
Penelitian ini merupakan eksperimental laboratorium untuk mengetahui ekstrak n-heksan,  etil  asetat  dan  metanol  daun  ketapang (Terminalia  catappa  L.) mempunyai efektivitas antidiabetes terhadap kadar glukosa darah dan melihat golongan senyawa yang memiliki efektivitas antidiabetes fraksi aktif daun ketapang (Terminalia catappa L.) .
Alat dan Bahan
FTIR spectrum had functional groups of O-H (hydroxyl) C=O (carbonyl Co (aliphatic), C-O (ether) and CH3. Based on the finding, it could be concluded, that antidiabetic compound that plays a role in active fraction of ketapang (Terminalia Cappy L.) leaves was a flavonoid compound. Copyright © 2022 Jsscr. All rights reserved.
Keywords:
Antidiabetic; Ketapang; Terminalia catappa L . Leaves ;  Spectrometry UV-Vis;  FTIR
Received: 2022 -06-21 Accepted: 2022 -07-27 Online: 2022 -08-01
Alat  yang  digunakan  pada  penelitian  yaitu  Bejana  maserasi  (Pyrex),  disposible syringe  1,  3,  dan  5  ml,  evaporator,  glukometer,  spektrofotometry  Uv-Vis, spektrofotometry IR. Bahan yang digunakan pada penelitian yaitu Aloksan, aluminium foil,  asam  sulfat,  etanol  70%,  etil  asetat,  FeCl3,  glibenklamid,  handskun,  HCl  pekat, kloroform, kuersetin, mencit jantan (mus musculus), metanol, Na-CMC, NaCl, n-heksan, plat KLT, reagen mayer, sampel daun Ketapang (Terminalia catappa L.) , silika gel, silika F 254, silika G 60, tisu.
Ekstraksi Daun Ketapang (Terminalia catappa L.)
Simplisia Daun Ketapang (Terminalia catappa L.) , yang telah dihaluskan ditimbang 400  gram  kemudian  diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi  bertingkat  dengan pelarut n-heksan, etil asetat dan metanol. Sampel terlebih dahulu dimasukkan kedalam bejana  maserasi  kemudian  ditambahkan  n-heksan  sebanyak  3000  mL  hingga  semua sampel  terendam  sempurna  kemudian  diekstraksi.  Selanjutnya  sampel  didiamkan selama 3 x 24 jam. Setelah 3 x 24 jam perendaman ekstrak disaring untuk memisahkan filtrat  dan  residu,  kemudian  sampel  simplisia  daun  ketapang (Terminalia  catappa  L.) diangin-anginkan dan dilanjutkan dengan pelarut yang kedua yaitu etil asetat. Sampel terlebih  dahulu  dimasukkan  kedalam  bejana  maserasi  kemudian  ditambahkan  etil asetat  sebanyak  2000  mL  hingga  semua  sampel  terendam  sempurna  kemudian diekstraksi.  Selanjutnya  sampel  didiamkan  selama  3  x  24  jam.  Setelah  3  x  24  jam perendaman ekstrak disaring untuk memisahkan filtrat dan residu, kemudian sampel simplisia  daun  ketapang (Terminalia  catappa  L.) diangin-anginkan  dan  dilanjutkan dengan pelarut yang ketiga yaitu metanol. Sampel terlebih dahulu dimasukkan kedalam bejana  maserasi kemudian  ditambahkan  metanol  sebanyak  2000  mL  hingga  semua sampel  terendam  sempurna  kemudian  diekstraksi.  Selanjutnya  sampel  didiamkan selama 3 x 24 jam. Setelah 3 x 24 jam perendaman ekstrak disaring untuk memisahkan filtrat dan residu . Setelah itu masing-masing ekstrak n-heksan, etil asetat dan metanol dievaporasi  menggunakan  alat  Rotary  Evaporator  sampai  terbentuk  ekstrak  kental, kemudian ekstrak dihitung persen rendamennya menggunakan rumus sebagai berikut [6].
Rendamen (%) = Berat Ekstrak Berat Simplisia Awal x 100 % .......................(1)
Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Ketapang (Terminalia catappa L.) Uji Alkaloid
Sebanyak 0,5 gram ekstrak daun ketapang ditambahkan HCl sebanyak 5 tetes dan ditambahkan  pereaksi  dragendroff.  Adanya  senyawa  alkaloid  ditunjukkan  dengan berubah menjadi warna orange [16].

## Uji Flavonoid
Sebanyak 0,5 gram ekstrak daun ketapang ditambahkan HCl sebanyak 5 tetes dan ditambahkan  serbuk  magnesium.  Adanya  senyawa  flavonoid  ditunjukkan  dengan berubahn menjadi warna hijau, merah, kuning dan ungu [16].

## Uji Saponin
Sebanyak  0,5  gram  ekstrak  daun  ketapang  ditambahkan  aquades  kemudian dipanaskan dan dikocok. Adanya senyawa saponin ditunjukkan dengan adanya busa [16].

## Uji Steroid dan Terpenoid
Sebanyak 0,5 gram ekstrak daun ketapang ditambahkan etil asetat sebanyak 2 mL dan ditambahkan pereaksi liberman. Adanya senyawa steroid ditunjukkan warna hijau dan senyawa terpenoid ditunjukkan warna merah [16].

## Uji Tanin
Sebanyak  0,5  gram  ekstak  ditambahkan  aquades  kemudian  dipanaskan  dan ditambahkan FeCl3. Adanya senyawa tanin ditunjukkan dengan warna hijau, biru [16].

## Analisis Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Ekstrak  kental  masing-maasing  daun  ketapang (Terminalia  catappa  L.) dianalisis menggunakan  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  dengan  fase  diam  silika  gel  dan  fase gerak eluen n-heksan dan etil asetat pada berbagai perbandingan. Masing-masing KLT divisualisasi  di bawah  lampu  UV  366 nm.  Setelah  didapatkan noda  yang  diinginkan dilanjutkan dengan menghitung nilai R f -nya menggunakan rumus [18].
R f =                                                                             …………………(2)

## Uji Efektivitas Antidiabetes
Pembuatan Suspensi Na-CMC 0,5%
Ditimbang  sebanyak  0,5  gram  Na-CMC,  kemudian  dimasukan  perlahan-lahan pada gelas kimia yang berisi 100 mL aquades panas sambil terus diaduk menggunakan batang pengaduk hingga larutan tersebut berbentuk koloidal.

## Pembuatan Suspensi Aloksan
Ditimbang aloksan dengan BB mencit 20 g sebanyak 0,08, BB mencit 21 g sebanyak 0,09 g, BB mencit 22 g sebanyak 0,09 g, BB mencit 23 g sebanyak 0,1, BB mencit 24 g sebannyak 0,1 g, BB mencit 25 g sebanyak 0.1 g, BB mencit 26 g sebanyak 0,11 g, BB mencit 27 g sebanyak 0,11 g, BB mencit 28 g sebanyak 0,12 g, BB mencit 30 g sebanyak 0,11 g dan BB mencit 31 g sebanyak 0,13 g kemudian dimasukkan ke dalam NaCl 25 mL sedikit demi sedikit sambil dilakukan pengadukan.

## Pembuatan Suspensi Glibenklamid
Serbuk Glibenklamid ditimbang sebanyak 6,38 mg/28 mg BB mencit dengan dosis yang  digunakan  diperoleh  dari  konversi  dosis  manusia  ke  mencit,  kemudian disuspensikan  kedalam  Na-CMC  0,5%  sedikit  demi  sedikit  sambil  diaduk  perlahan, kemudian dicukupkan volumenya hingga 100 ml.

## Jarak Yang Ditempuh Oleh Komponen
Jarak Yang Ditempuh Oleh Pelarut
Pembuatan Suspensi Ekstrak Aktif Daun Ketapang (Terminalia catappa L.)
Dibuat suspensi ekstrak aktif daun Ketapang 1% b/v, 3% b/v dan 5% b/v dengan cara  ditimbang  masing-masing  1  gram,  3  gram  dan  5  gram  ekstrak  aktif  kemudian dimasukan kedalam lumpang lalu ditambahkan larutan koloidal Na-CMC 0,5% digerus hingga tercampur secara homogen kemudian dicukupkan volumenya sampai 100 mL.
Fraksinasi Ekstrak Daun Ketapang (Terminalia catappa L.)

## Pemisahan Senyawa Menggunakan Kromatografi Cair Vakum
Ekstrak kental metanol sampel daun Ketapang (Terminalia catappa L.) yang terdiri dari beberapa komponen tersebut difraksinasi dengan metode kromatografi kolom cair vakum (KCV) menggunakan silika gel sebagai fase diam sedangkan fase geraknya eluen dari hasil KLT. Hasilnya kemudian di evaporasi dan ditimbang.

## Pemisahan Senyawa Menggunakan Kromatografi Kolom Gravitasi
Hasil dari fraksinasi KCV yang telah ditimbang kemudian di lihat noda pada KLT dan digabung hasil fraksinya jika terdapat noda yang sama. Fraksi tersebut dibawa ke KKG untuk di fraksinasi kembali dengan fase diam silika gel dan fase geraknya eluen yang sama dari hasil KCV.

## Pemisahan Senyawa Menggunakan Kromatografi Lapis Tipis Preparatif
Fraksi  yang  memiliki  aktivitas  sebagai  antidiabtetes  selanjutnya  dipisahkan dengan metode Kromatografi Lapis Tipis Preparatif (KLT-P) menggunakan eluen hasil orientasi dari KLT. Plat yang telah dielusi kemudian dikeluarkan dari dalam chamber lalu dikeringkan. Plat KLT selanjutnya diamati noda-noda menggunakan lampu UV 366 nm.  Noda  yang  dihasilkan  kemudian  dikerok  dan  dimasukkan  kedalam  vial  dan ditambahkan pelarut metanol untuk kemudian digunakan pada Spektrofotometri Uv- Vis dan IR.

## Spektrofotometri UV-Vis
Fraksi  hasil  kromatografi  lapis  tipis  preparatif  yang  sudah  dipisahkan  dengan silika kemudian dimasukkan ke dalam kuvet lalu diukur Panjang gelombang maupun absorbansinya pada spektrofotometri UV- Vis.

## Spektrofotometri FTIR
Fraksi hasil kromatografi lapis tipis preparatif yang sudah dipisahkan dengan silika kemudian diukur pada spektrofotometri FTIR. Isolat diteteskan pada pellet KBr, dikeringkan  kemudian  dianalisis  dengan  spektrofotometri  inframerah  pada  rentang gelombang 4000 - 400 cm -1 .
3.  Hasil dan Pembahasan Ekstraksi Daun Ketapang (Terminalia catappa L.)
Daun ketapang (Terminalia catappa L.) diperoleh dari Desa Tolomato, Kecamatam Suwawa Tengah, Kabupaten Bone Bolango, Provinsi Gorontalo. Daun ketapang yang
telah  diambil  dicuci  bersih,  dirajang,  dikeringkan  dan  dihaluskan  agar  memperoleh serbuk simplisia.
Tabel 1. Hasil Penelitian Berat Ekstrak dan Rendamen Ekstrak Berat Sampel (g) Volume Pelarut (mL) Berat Ekstrak (g) Rendemen (%) N-Heksan 400 3000 59,7 14,92 Etil Asetat 320,5 2000 48,7 15,19 Metanol 289 2000 39,5 13,66
Tabel 1 menunjukkan bahwa hasil dari proses ekstraksi daun Ketapang (Terminalia catappa L.) sebanyak 400 g dengan menggunakan pelarut n-heksan sebanyak 3000 mL diperoleh hasil ekstrak kental sebanyak 59,7 g dengan persentase rendamen sebanyak 14,92 %, sebanyak 320,5 g dengan menggunakan pelarut etil asetat sebanyak 2000 mL diperoleh hasil esktrak kental 48,7 g dengan persentase sebanyak 15,19 % dan sebanyak 289 g dengan menggunakan pelarut metanol sebanyak 2000 mL diperoleh hasil ekstrak 39,5 g dengan persentase rendamen 13,66%. Persen rendamen yang didapatkan masuk dalam  range  persen  rendamen  yaitu  10-15%,  hal  ini  menunjukkan  bahwa  proses ekstraksi daun Ketapang (Terminalia catappa L.) berlangsung secara optimal [5].
Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Ketapang (Terminalia catappa L.)
Skrining fitokimia sebagai tahap awal untuk memberikan gambaran ada atau tidaknya golongan senyawa yang berpotensi sebagai antidiabetes yang terkandung dalam tanaman yang diteliti.
Tabel 2. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Ketapang
Ekstrak Hasil Senyawa Alkaloid (HCl+ dragendrfof) Flavonoid (HCl+Mg) Tannin (FeCl 3 ) Soponin (air panas +HCl) Steroid/terpenoid (H2SO4 + as. asetat anhidrat) N-Heksan - - - - + Etil asetat - + + - + Metanol - + + - +
Tabel 2 menunjukkan menunjukkan data hasil uji skrining fitokimia dari hasil ekstrak Daun Ketapang (Terminalia catappa L.) memperoleh hasil bahwa Daun Ketapang (Terminalia  catappa  L.) mengandung  senyawa  flavonoid,  steroid,  tanin  dan  terpenoid. Hal ini diperkuat oleh [6] yang menyatakan bahwa ekstrak daun ketapang mengandung senyawa flavonoid, steroid, tanin dan triterpenoid.

## Hasil Analisis Kromatografi Lapis Tipis
Pengujian  kualitatif  senyawa  antidiabetes  ekstrak  daun  ketapang (Terminalia catappa  L.) dilakukan  dengan  menggunakan  metode  kromatografi  lapis  tipis  (KLT),
dimana pengujian ini bertujuan untuk mengetahui ada atau tidaknya senyawa metabolit sekunder dari ekstrak daun ketapang (Terminalia catappa L.) . Masing-masing ditotolkan pada  plat  KLT  dan  dielusi  menggunakan  eluen n -heksan  :  etil  asetat  dengan perbandingan  9:1  8:2,  7:3,  dan  6:4.  Setelah  dilakukan  proses  elusi  kemudian  dilihat bercak noda pada lampu UV 366 nm.
Gambar 1. Hasil Analisis Kromatografi Lapis Tipis : eluen n -heksan : etil asetat dengan perbandingan 9:1 8:2, 7:3, dan 6:4

## Hasil Uji Efektivitas Antidiabetes
Berdasarkan  hasil  data  pengukuran  kadar  glukosa  darah  pada  gambar  2 menunjukkan  adanya  perbedaan  pada  hasil  pengukuran  darah  pada  masing-masing kelompok.  Perbedaan  ini  didasarkan  pada  penurunan  kadar  glukosa  darah  yang berbeda-beda pada setiap kelompok uji.
Kelompok  kontrol  negatif  yaitu  kelompok  yang  diberikan  Na-CMC  0,5%  b/v mencit  sebagai  kelompok  kontrol  negatif  tidak  memberikan  efek  penurunan  kadar glukosa  darah  pada  mencit  jika  dibandingkan  dengan  kelompok  lainnya.  Hal  ini dikarenakan  menurut  [7]  pemberian  Na-CMC  hanya  sebagai  kontrol  negatif  pada penelitian ini dan Na-CMC tidak memiliki efek antidiabetes atau tidak memberikan efek apapun pada mencit sehingga tidak mampu untuk menurunkan kadar glukosa darah.
Kelompok kontrol positif yaitu kelompok yang diberikan suspensi glibenklamid. Pada kelompok kontrol positif ini terjadi penurunan kadar glukosa darah mencit yaitu sebesar  30%.  Glibenklamid  merupakan  obat  antidiabetes  yang  termasuk  dalam golongan sulfonilurea yang memiliki efek terapetik dapat menurunkan kadar glukosa darah,  sehingga  glibenklamid  sering  dijadikan  sebagai  obat  pembanding  dalam penelitian  [8].  Glibenklamid  bekerja  menurunkan  kadar  gula  darah  dengan  cara meningkatkan pelepasan insulin dari pankreas. Mekanisme ini bergantung pada sel beta pankreas. Sulfonilurea menempel pada reseptor yang spesifik di sel beta pankreas dan menyekat pemasukan kalium melalui kanal ATP-dependent [9]. Kelompok kontrol positif glibenklamid mengalami penurunan kadar glukosa darah hingga 64 mg/dl.
Kelompok perlakuan (ekstrak metanol) dengan pemberian ekstrak metanol daun Ketapang dengan dosis 1% b/v, 3% b/v dan 5% b/v. Pada dosis 1% b/v mengalami penurunan glukosa darah sebesar 24%, dosis 3% mengalami penurunan glukosa darah sebesar 36% dan kelompok dosis 5% mengalami penurunan glukosa darah sebesar 52%. Hal  ini  diduga  karena  adanya  senyawa  metabolit  sekunder  yang  bertindak  sebagai antidiabetes  atau  penurun  kadar  glukosa  darah  pada  tanaman  Ketapang  adalah
flavonoid  dan  tanin  [3].  Mekanisme  flavonoid  sebagai  antidiabetes  yaitu  dapat menghambat  fosfodiesterase  sehingga  meningkatkan  cAMP  pada  sel  beta  pankreas. Peningkatan  cAMP  akan  menstimulasi  pengeluaran  protein  kinase  A  (PKA)  yang merangsang  sekresi  insulin  semakin  meningkat  [10].  Mekanisme  kerja  tanin  sebagai antidiabetes  yaitu  dengan  cara  menghambat  proses  glikolisis  dan  absorbsi  glukosa sehingga kadar glukosa darah menurun [11].
Tabel 3. Hasil Uji Antidiabetes Ekstrak Daun Ketapang (Terminalia catappa L.)
Kelompok Hewan Uji (mg/dl) KGD Sebelum Induksi (mg/dl) KGD Sesudah Induksi (mg/dl) KGD Setelah Perlakuan 30 (menit) 60 (menit) 90 (menit) 120 (menit) Kelompok Kontrol Negatif 1 78 91 72 100 118 118 2 105 110 121 127 121 113 3 91 94 110 157 151 124 Kelompok Kontrol Positif 1 116 116 116 121 78 74 2 82 85 118 87 67 60 3 89 72 100 72 68 58 Ekstrak Metanol 1% 1 76 96 91 85 78 71 2 113 116 105 105 87 76 3 118 127 118 118 115 110 Ekstrak Metanol 3% 1 96 127 124 124 100 103 2 87 140 121 100 78 70 3 70 110 89 80 76 70 Ekstrak Metanol 5% 1 124 124 113 78 70 70 2 82 105 62 70 53 47 3 97 118 103 74 53 47 Ekstrak Etil Asetat 1% 1 87 105 87 60 78 89 2 62 97 91 138 110 94 3 76 134 161 232 151 124 Ekstrak Etil Asetat 3% 1 45 91 68 89 105 116 2 38 127 91 103 130 183 3 33 127 127 154 178 261 Ekstrak Etil Asetat 5% 1 36 154 211 202 179 130 2 30 103 96 154 110 187 3 29 118 110 103 68 43 Ekstrak N- heksan 1% 1 70 85 85 82 94 96 2 71 78 76 71 87 78 3 91 102 100 103 110 94 Esktrak N- heksan 3% 1 76 85 94 110 105 113 2 82 100 87 151 154 138 3 89 113 121 154 178 116 Ekstrak N- heksan 5% 1 96 105 195 113 120 131 2 76 132 118 110 161 178 3 91 118 85 53 60 74
Gambar 2. Hasil Uji Efektivitas Antidiabetes Ekstrak Daun Ketapang
Kelompok  perlakuan  (ekstrak  etil  asetat)  dengan  pemberian  ekstrak  etil  asetat daun  Ketapang  dengan  dosis  1%,  3%  dan  5%.  Pada  kelompok  dosis  1%  mengalami penurunan kadar glukosa darah sebesar 9%, dosis 3% tidak terjadi penurunan kadar glukosa darah dan kelompok dosis 5%v mengalami penurunan sebesar 4%. Tetapi pada kelompok  ini  tidak  terjadi  penurunan  kadar  glukosa  darah  secara  signifikan,  hal  ini dikarenakan  etil  asetat  merupakan  senyawa  semipolar  yang  dimana  dapat  menarik senyawa  polar  dan  senyawa  nonpolar  pada  ekstrak  etil  asetat  daun  Ketapang (Terminalia catappa L.) senyawa yang didapatkan dalam jumlah yang kecil. Penurunan kadar  glukosa  darah  ini  diduga  karena  adanya  senyawa  flavonoid,  tanin  dan triterpenoid.  Mekanisme  flavonoid  dalam  menurunkan  kadar  glukosa  darah  yaitu dengan merangsang pelepasan insulin pada sel beta pankreas untuk disekresikan ke dalam  darah  [12].  Tanin  memiliki  aktivitas  penurunan  gula  darah  dengan  cara penghambatan  kerja  α-glukosidase  sehingga  penyerapan  gula  dan  laju  peningkatan gula pada sistem pencernaan masih tidak terlalu tinggi [13]. Sedangkan terpenoid bekrja dalam menurunkan kadar glukosa darah yaitu dengan merangsang pengeluaran insulin dan membantu penyerapan glukosa dengan cara merangsang GLUT-4 di dalam sel [14].
Kelompok  perlakuan  (ekstrak  n-heksan)  dengan  pemberian  ekstrak  n-heksan daun Ketapang dengan dosis 1%, 3% dan 5%. Pada kelompok perlakuan ini tidak terjadi penurunan  kadar  glukosa  darah,  hal  ini  dikarenakan  n-heksan  bersifat  nonpolar sehingga  kandungan  senyawa  pada  ekstrak  n-heksan  adalah  senyawa-senyawa nonpolar  yang  dimana  secara  signifikan  yang  paling  banyak  bersifat  sebagai antidiabetes  adalah  senyawa  polar.  Dapat  dilihat  pada  hasil  skrining  fitokimia  dan monitoring  KLT  ekstrak  n-heksan  daun  Ketapang (Terminalia  catappa  L.) positif mengandung  steroid,  steroid  merupakan  senyawa  nonpolar.  Steroid  bisa  sebagai antidiabetes  bekerja  dengan  cara  menstimulasi  keluarnya  insulin  dari  pankreas sehingga akan menurunkan glukosa darah [15]. Ekstrak n-heksan kandungan senyawa steroid  dalam  jumlah  yang  kecil  sehingga  tidak  dapat  menurunkan  kadar  glukosa darah.  Jenis  pelarut  yang  berbeda  akan  mempengaruhi  kandungan  senyawa  dan memberikan  efektivitas  yang  berbeda  dengan  memperhatikan  kelarutan  senyawa bahan alam dalam pelarut tersebut [16].
Dari  hasil  pengukuran  penurunan  kadar  glukosa  darah  terhadap  ekstrak  daun ketapang dan dilakukan analisis secara One Way Anova menggunakan SPSS 16 untuk mengetahui  perbedaan  signifikan  antara  ketiga  ekstrak  dengan  kontrol  positif  yang digunakan  yaitu  glibenklamid  terhadap  penurunan  kadar  glukosa  tersebut.  Hasil  uji analisis One  Way  Anova pada  dengan  tingkat  kepercayaan  95%  diperoleh  ekstrak metanol tidak terjadi perbedaan signifikan dengan kontrol positif glibenklamid yang artinya esktrak metanol efektif dalam menurunkan kadar glukosa darah.

## Fraksinasi Ekstrak Dengan Kromatografi Cair Vakum (KCV)
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak metanol daun ketapang (Terminalia catappa  L.) memiliki  efektivitas  antidiabetes  paling  efektif.  Ekstrak  metanol  ini
selanjutnya  akan  di  fraksinasi  untuk  memudahkan  dalam  mengidentifikasi  senyawa spesifik yang bersifat sebagai antidiabetes pada daun ketapang (Terminalia catappa L.) dengan menggunakan metode KCV (Kromatografi Cair Vakum). KCV adalah metode fraksinasi dengan cara memisahkan ekstrak kental menjadi beberapa fraksi yang lebih sederhana dengan cara pemisahan tersebut memanfaatkan kolom yang berisi fase diam dan  fase  geraknya  dan  dibantu  dengan  sebuah  pompa  vakum  [17].  Fase  diam  yang digunakan adalah silika gel 60 GF254 dan fase gerak adalah 11 perbandingan eluen n- heksan : etil asetat (n-heksan 50, 45:5, 40:10, 35:15, 30:20, 25:25, 20:30, 15:35, 10:40, 5:45, etil asetat 50) dalam 50 mL.
Gambar 3. Hasil Fraksinasi KCV Ekstrak Metanol Daun Ketapang (UV 354)
Gambar  3  menunjukkan  bahwa  hasil  yang  diperoleh  adalah  11  fraksi  yang kemudian  hasil  fraksi  tersebut  ditotolkan  pada  plat  KLT  untuk  diamati  visualisasi bercak nodanya pada lampu UV 366 nm. Visualisasi bercak noda dan warna yang sama digabung menjadi 1 fraksi, kemudian dievaporasi dan ditimbang.

## Fraksinasi Fraksi Aktif dengan Metode Kromatografi Kolom Gravitasi (KKG)
Hasil fraksinasi KCV ditimbang jika hasilnya dibawah dari 0,2 g maka dilakukan fraksinasi  kedua  yaitu  dengan  metode  KKG  (Kromatografi  Kolom  Gravitasi).  KKG (Kromatografi  Kolom  Gravitasi)  merupakan  suatu  metode  pemisahan  fisik,  dimana komponennya  dipisahkan  dan  didistribusikan  diantara  dua  fase  dan  menggunakan kolom sebagai alatnya [18]. Fase gerak yang digunakan dalam metode ini adalah eluen n-heksan : etil (8:2) dalam 200 mL dan fase diam yang digunakan adalah silika gel 60 G.
Gambar 4. Hasil Fraksinasi KKG Fraksi Aktif Daun Ketapang (UV 354)
Gambar  3  menunjukkan  bahwa  hasil  yang  diperoleh  adalah  18  fraksi  yang kemudian  hasil  fraksi  tersebut  ditotolkan  pada  plat  KLT  untuk  diamati  visualisasi bercak nodanya pada lampu UV 366 nm. Visualisasi bercak noda dan warna yang sama digabung menjadi menjadi 5 fraksi. Kemudian di evaporasi dan ditimbang.
Analisis  Kromatografi  Lapis  Tipis  Preparatif  (KLT-P)  Fraksi  Aktif  Daun  Ketapang (Terminalia catappa L.)
Fraksi aktif yang didapatkan dari metode KKG adalah fraksi aktif yang bersifat sebagai  antidiabetes  paling  efektif  kemudian  dilakukan  pengujian  kualitatif menggunakan  KLTP  (Kromatografi  Lapis  Tipis  Preparatif).  KLTP  merupakan  suatu proses isolasi yang prosesnya terjadi karena adanya perbedaan daya serap dan  daya partisi, selain itu dilihat dari kelarutan komponen-komponen kimia yang dimana akan bergerak  mengikuti  tingkat  kepolaran  dari  eluen  yang  didasarkan  pada  daya  serap adsorben terhadap komponen kimia yang tidak sama, sehingga komponen ini bergerak dengan  kecepatan  yang  berbeda  pula.  Hal  inilah  yang  menyebabkan  terjadinya pemisahan [19].
Gambar 5. Hasil Analisis KLTP Fraksi Aktif Daun Ketapang (UV 354)
Gambar  5  menunjukkan  bahwa  hasil  yang  diperoleh  yaitu  noda  tunggal,  hal tersebut  menunjukkan  bahwa  isolat  dari  fraksi  relatif  murni.  Hal  tersebut  diperkuat kemurniannya  dengan  dilakukan  analisis  KLT  dari  Isolat  fraksi  aktif  tersebut  dan diperoleh  hasil  visualisasi  noda  tunggal  yang  dilihat  pada  lampu  UV  366  nm.  Noda tersebut  kemudian  dikerok  dan  dimasukkan  kedalam  vial  dan  ditambahkan  pelarut metanol untuk kemudian digunakan pada Spektrofotometri Uv-Vis dan FTIR.

## Elusidasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri UV-Vis
Elusidasi menggunakan sprektrofotometri UV-Vis digunakan untuk  menentukan panjang  gelombang  dari  senyawa  antidiabetes  daun  ketapang (Terminalia  catappa  L.) . Pengukuran serapan panjang gelombang dilakukan running pada panjang gelombang 300-800 nm.
Gambar 6. Hasil Elusidasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri UV-Vis
Gambar 6. menunjukkan panjang gelombang maksimum berada pada panjang gelombang 410.50 nm. Dari hasil tersebut diduga senyawa antidiabetes fraksi aktif daun ketapang (Terminalia catappa L.) adalah senyawa golongan flavonoid, karena menurut [20]  panjang  gelombang  maksimum  dari  kuersetin  yaitu  370-450  nm.  Kuersetin merupakan  senyawa  flavonoid  yang  banyak  terdapat  pada  tanaman.  Senyawa  ini
memiliki aktivitas farmakologi yang sangat beragam, seperti antioksidan, menurunkan kadar gula darah, antiinflamasi, antiplatelet dan antikanker [21].

## Elusidasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri FTIR
Elusidasi  menggunakan  sprektrofotometri  Inframerah  digunakan  untuk menentukan  gugus  fungsi  dari  senyawa  antidiabetes  fraksi  aktif  daun  ketapang (Terminalia catappa L.)
Gambar 7. Hasil Elusidasi Senyawa Menggunakan Spektrofotometri FTIR
Gambar  7  menunjukkan  hasil  pengukuran  spektrum  FTIR  diperoleh  serapan pada bilangan gelombang 3448.72 𝑐𝑚 −1 menunjukkan adanya gugus O-H (hidroksil) terikat. Menurut [22] gugus O-H (hidroksil) terikat berada pada serapan 3600-3000 𝑐𝑚 −1 yang  membentuk  pita  lebar,  hal  ini  didukung  oleh  adanya  serapan  pada  bilangan gelombang  1026.13 𝑐𝑚 −1 yang  menunjukkan  adanya  C-O.  Serapan  pada  bilangan gelombang  1635.64 𝑐𝑚 −1 menunjukkan  adanya  gugus  C=O  (karbonil)  terkonjugasi. Serapan bilangan gelombang pada 1408.04 𝑐𝑚 −1 menunjukkan adanya CH3 dan serapan bilangan  gelombang  pada  2826.01 𝑐𝑚 −1 menunjukkan  adanya  gugus  C-H  alifatik. sehingga besar kemungkinan senyawa yang berada dalam fraksi aktif daun ketapang (Terminalia catappa L.) adalah golongan senyawa flavonoid.

## 4.  Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  disimpulkan  bahwa.  Ekstrak  metanol  3% daun  ketapang (Terminalia  catappa  L.) mempunyai  efektivitas  antidiabetes  terhadap kadar  glukosa  darah.  Golongan  senyawa  berperan  sebagai  antidiabetes  yang terkandung dalam fraksi  aktif daun ketapang (Terminalia catappa L.) adalah golongan senyawa flavonoid.
Referensi
[1]  Dewick,  P.M.  2009. Medicinal  Natural  Products:  A  Biosynthetic  Approach .  Second edition. London: John Wiley and sons.
[2]  Afiukwa,  C.  A.,  Ugwu,  P.  C.  O.,  Ebenyi  L.  N.,  Oketa,  H.  A.,  Idenyi,  J.  N. danEmmanuel,  C.  O.  2015. Phyochemical  analysis  of  two  wild  edible  mushrooms, Auricularia  Polytricha  and  Pleurotus  Ostreatus,  common  in  Ohaukwu  area  of  Ebonyi state .  Nigeria:  Research  Journal  of  Pharmaceutical,  Biological  and  Chemical Sciences 4(2): 1065-1070. Amin, M.N., M.M. Rahman, K. W Rahman, R. Ahmed, M. S Hossain and M. B.
[3]  Kim JS, Ju JB, Choi CW, dan Kim SC. 2006. Hypoglycemic and Antihyperlipidemic Effect  of  Four  Korean  Medicinal  Plants  in  Alloxan  Induced  Diabetic  Rats. Am  J  of Biochemistry and Biotechnology, Vol 2(4), 154-160.
[4]  Ahmed.  2005. Large  Scale  Plant  In  Vitro  From  Leaft  Derived  Callus  of  Pineapple (Ananascomosus (L) Merr.cv. Galant Kew), Internasional Journal of Botany I(2) : 128- 132.
[6]  Herli MA, Isna Wardaniati. 2019. Skrining Fitokimia Ekstrak Etanol Dan Fraksi  Daun Ketapang Yang Tumbuh di Sekitar Univ. Abdurrab,Pekanbaru.Journal Of Pharmacy & Science 2(2):1-8
[7]  Latuconsina,  N.H.,  Fatmawati  Citraningtyas,  G.  2014. Uji  Efektivitas  Diuretik Ekstrak  Etanol  Biji  Salak  (Salacca  zallaca)  Pada  Tikus  Putih  Galur    Wistar  (Rattus novergicus). Jurnal Ilmiah Farmasi Unsrat.
[8]  Basit, A., Riaz, M. and Fawwad, R., 2012, Glimepiride: evidence-based facts,  trends, and observations , Dovepress, 463-470.
[9]  Sola D, Rossi L, Schianca GPC, Maffioli P, Bigliocca M, Mella R, 2015. Sulfonylureas and their use in clinical practice. Arch Med Sci. (4): 840-848.
[10]  Setianingsih,  et  al.  2018. 2018191Dampak  Penggunaan  Gadget  Pada  Anak  Usia Prasekolah  Dapat  Meningkatan    Resiko  Gangguan  Pemusatan  Perhatian  dan Hiperaktivitas. Klaten: STIKes Muhammadiyah Klaten
[11]  Fadhilah, M . (2016). Gambaran Tingkat Risiko dan Faktor-faktor yang  Berhubungan dengan Risiko Diabetes Melitus Tipe 2 di Buaran Serpong. Journal Kedokteran Yarsi. Tangerang: Universitas Syarif Hdayatullah.
[12]  Atiqoh,  H.,  Wardani,  R.  &  Meikawati,  W.,  2011 ,  Uji  Antidiabetik  Infusa  Kelopak Bunga Rosella (Hibiscus sabdariffa Linn.) pada Tikus Putih Jantan Galur Wistar yang Diinduksi Glukosa , J Kesehat Masy Indones, 7(1), 43-50
[13]  Yuda, A.A.G.P., Rolan Rusli, Arsyik Ibrahim. 2015. Kandungan Metabolit Sekunder Dan Efek Penurunan Glukosa Darah Ekstrak Biji Rambutan(Nephelium lappaceum L.) Pada Mencit (Mus musculus), Jurnal Sains dan Kesehatan, 1(3).
[14]  Tjay, Tan Hoan dan Kirana Rahardja .2007. Obat-Obat Penting Khasiat, Penggunaan dan  Efek-Efek  Sampingnya,  Edisi  Keenam,  262,  269-271 .  Jakarta:  PT.  Elex  Media Komputindo,  Bourne,  H.R.  dan  Zastrow,  Mark  Von,  2007,  Drug  Receptors  & Pharmacodynamic,  Dakam  :  Katzung,  Bertram  G.  (2007),  Basic  &  Clinical Pharmocology, Tent Edition, United States : Lange Medical Publications.
[15]  Agustin, D. D., & et al. (2015). Kualitas Hidup Pasien Kanker Payudara dengan Terapi Kombinasi Fluorouracil , Doxor
[16]  Prayoga, dkk. 2019. Dentifikasi Senyawa Fitokimia dan Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar  Daun  Pepe    (Gymnema  reticulatum  br.)  Pada  Berbagai  Jenis  Pelarut .  Bali  : Program Studi Imu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Unud [17]  Ghisalberti,  E.L.  2008. Detection  and  Isolation  of  Bioactive  Natural  Products  dalam Bioactive  Natural  Product:  Detection,  Isolation  and  Structural  Determination  2nd Edition . New York: CRC Press.
[18]  Sastrohamidjojo, Hardjono. 2002. Kromatografi. Yogyakarta: Penerbit Liberty.
[19]  Nasution.  2010 .  Berbagai  Pendekatan  dalam  Proses  Belajar  dan  Mengajar. Jakarta: Bumi Aksara.
[20]  Gandjar,  I.  G.  dan  Rohman,  A.,  2007. Kimia  Farmasi  Analisis,  Pustaka  Pelajar . Yogyakarta.
[21]  Gomes,  Faustino  Cardoso.  2014. Manajemen  Sumber  Daya  Manusia .  Andi. Yogyakarta.
[22]  Pavia  Donald  dkk.  2009. Introdution  To  Spectroscopy. Broks/Cole  CENGANGE Learning : Washington.