## Nurihardiyanti et al./Galenika Journal of Pharmacy
AKTIVITAS DIURETIK KOMBINASI EKSTRAK BIJI PEPAYA ( Carica papaya L) DAN BIJI SALAK (Salacca zalacca varietas zalacca (Gaert.)Voss ) PADA TIKUS JANTAN GALUR WISTAR ( Rattus norvegicus L)
DIURETIC AKTIVITY OF SEED EXTRACT COMBINATION OF PAPAYA ( Carica papaya L.) AND SNAKE FRUID ( Salacca zalacca varietas zalacca (GAERT.)VOSS) IN WISTAR STRAIN MALE RATS ( Rattus norvegicus L.)
Nurihardiyanti 1* , Yuliet 1 , Ihwan 1
1 Jurusan Farmasi Fakultas MIPA Universitas Tadulako, Palu
Received 28 Agustus 2015, Accepted 28 September 2015

## ABSTRAK
Telah dilakukan penelitian  uji aktivitas diuretik kombinasi ekstrak biji pepaya ( Carica papaya L) dan biji  salak  ( Salacca  zalacca (Gaert.)  Voss)  pada  tikus  jantan  galur  wistar  ( Rattus  norvegicus L .) .  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengetahui  efek  diuretik  dan  kombinasi  dosis  efektif  sebagai  diuretik.  Ekstrak  dibuat  dengan metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Uji  aktivitas  diuretik  yang  dilakukan  dibagi  dalam  5 kelompok  perlakuan.  Setiap  kelompok  terdiri  dari  5  ekor  tikus  putih.  Kelompok  1  (K1)  (kontrol  negatif) diberikan suspensi Na-CMC 0,5%; K2 (kontrol positif) diberikan furosemid 3,6 mg/kgBB; serta K3, K4 dan K5 berturut-turut  diberikan  kombinasi  dosis  ekstrak  biji  salak  dan  biji  pepaya  secara  berturut-turut  sebesar  “37,5 mg/kgBB + 7,5 mg/kgBB”; “70 mg/kgBB +15 mg/kgBB”; dan “140 mg/kgBB + 30 mg/kgBB”. Masing-masing tikus  kemudian  diberi  aquadest  hangat  (suhu  70 o C)  10ml/100  gBB  sebagai loading  dose secara  oral.  Diukur volume  urin  yang  dieksresikan  dicatat  tiap  30  menit  selama  6  jam  setelah  itu  dilanjutkan  pengukuran  volume urin  kumulatif.  Kemudian  dari  volume  urin  kumulatif  diambil  sampel  untuk  pengukuran  kadar  natrium  (Na), kalium (K), serta pH urin. Data dianalisis secara statistik  menggunakan  ANOVA ( analysis of variance ). Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  kombinasi  dosis  ekstrak  yang  efektif  adalah  dosis  K5  (ekstrak  biji  salak  140 mg/kgBB  dan  biji  pepaya  dosis  30  mg/kgBB)  dengan  indeks  aktivitas  diuretik  sebesar  1,48;  pH  urin  7,52; indeks saluretik natrium sebesar 1,62 dan indeks saluretik kalium 1,56.
Kata kunci : biji pepaya, biji salak, diuretik, pH Urin, Natrium, Kalium.

## ABSTRACT
Research on diuretic activity of seed extract combination of papaya ( Carica papaya L) and snake fruit ( Salacca zalacca (Gaert.) Voss) to male wistar strain rats ( Rattus norvegicus L.) has been conducted. This study aimed  to  determine  the  diuretic  effect  of  the  seed  extract  combination  and  its  effective  dose  combination  as diuretics. The extract was prepared by maceration method using ethanol 96%. Diuretic activity test was divided into 5 treatment groups. Each group consisted of 5 rats. Group 1 (negative control) was given suspension of Na- CMC 0.5%; Group 2 (positive control) was given furosemide 3.6 mg/kgBW; Group 3, 4, and 5 were given dose combination  of  snake  fruit  seed  extract  and  papaya  seed  extract  successively  at  “37.5  mg/kgBW  +  7.5 mg/kgBW”;  “70  mg/kgBW  +  15mg/kgBW”;  and  “140  mg/kgBW  +  30  mg/kgBW”.  Each  rat  was  then  orally given warm distilled water (70°C) 10ml/100gBW as loading dose. The excreted urine volume was measured and recorded  every  30  minutes  for  6  hours  which  was  continued  to  cumulative  urine  volume  calculation. Furthermore, sample was taken from the cumulative urine to measure levels of sodium (Na), potassium (K), and the pH of the urine. Data were statistically analyzed using ANOVA (Analysis of Variance). The results showed that  the  effective  extract  dose  combination  was  found  in  Group  5’s  dose  (140  mg/kgBW  of  snake  fruit  seed extract  and  30  mg/kgBW  papaya  seed  extract)  with  diuretic  activity  index  of  1.48;  urine  pH  of  7.52;  sodium saluretic index of 1.62; and potassium saluretik index of 1.56.
Keywords: snake fruit seed, papaya seed, diuretics, urine pH, sodium, potassium.
*Corresponding author : Nuriardiyanti, hjadawiah@gmail.com

## PENDAHULUAN
Diuretik  adalah  obat  yang  dapat menambah  kecepatan  pembentukan  urin. Istilah  diuresis  mempunyai  dua  pengertian, pertama  menunjukkan  adanya  penambahan volume  urin  yang  diproduksi  dan  yang  kedua menunjukkan jumlah pengeluaran (kehilangan)  zat-zat  terlarut  dan  air.  Fungsi utama  diuretik  adalah  untuk  memobilisasi cairan edema, yang berarti mengubah keseimbangan cairan sedemikian rupa sehingga  volume  cairan  ekstrasel  kembali menjadi normal (Tanu, 2009).
Diuretik  berperan  dalam  penurunan tekanan darah yang terjadi setelah penggunaan senyawa  ini  berlangsung  2  fase.  Penurunan tekanan  darah  mula-mula  terjadi  akibat peningkatan  eksresi  natrium.  Konsentrasi  ion natrium  terjadi  penurunan  akibatnya  volume plasma  dan  volume  menit  jantung  akan  turun, sebaliknya tekanan  perifer (secara reflektoris) agak  naik.  Pada  fase  kedua,  volume  plasma akan dinormalkan kembali dan eksresi natrium akan  hampir  sama  dengan  harga  awal  terapi. Penurunan  tekanan  darah  pada  fase  ini kemungkinan terutama disebabkan oleh kurangnya  kandungan  natrium  dalam  dinding pembuluh  (Ernst  Mutschler,  1991).  Tetapi pada  umumnya  yang  digunakan  dalam menangani hipertensi adalah dengan menggunakan  obat-obatan  sintetis  seperti furosemid (Tanu, 2009).
Selain  menggunakan  obat  sintetis, beberapa  obat  herbal  digunakan  sebagai alternatif  pengobatan.  Pengobatan  tersebut kebanyakan diperoleh berdasarkan pengetahuan masyarakat secara turun- temurun,  namun  sebagian  besar  tanaman  obat yang  ada  belum  terbukti  khasiatnya  secara ilmiah.  Buah  salak  ( Salacca  zalacca (Gaert.) Voss.)  dan  pepaya  ( Carica  papaya L.) merupakan  buah  khas  dari  Indonesia  yang dapat  ditemukan    hampir  disetiap  daerah. Daging  buah  salak  telah  diproses  menjadi berbagai  macam  produk  olahan  pangan  dan banyak  menghasilkan  limbah  biji  salak. Pemanfaatan  biji  salak  masih  kurang  karena bijinya  yang  keras  dan  tidak  mudah  hancur sehinggga  untuk  mengolah  biji  salak  cukup
sulit.  Bijinya  dibuang  karena  dianggap  tidak bermanfaat  namun  seiring  perkembangan teknologi  pengetahuan  maka  biji  salak  telah diolah menjadi kopi oleh masyarakat di daerah Sumatera  dan  Jawa.  Manfaat  yang  dirasakan setelah  mengonsumsi  biji  salak  yaitu  adanya penurunan  tekanan  darah.  Penurunan  tekanan darah  dapat  berhubungan  dengan  terjadinya diuresis. Diuresis dapat menyebabkan penurunan volume plasma yang akan menurunkan  curah  jantung  dan  menurunkan tekanan darah.
Penelitian  sebelumnya  membuktikan bahwa ekstrak etanol biji salak pada dosis 0,14 g/kg  BB  sebanding  dengan  furosemid  dapat meningkatkan  volume  urin  selama  6  jam  dan memberikan efek diuretik terhadap tikus putih jantan galur Wistar (Novita,dkk.,2014). Hal ini disebabkan karena adanya kandungan flavonoid  yang  berperan  dalam  meningkatkan volume  urin  (diuresis).  Mekanisme  kerja flavonoid  sebagai  diuretik  dengan  cara menghambat  ko-transpor  dan  menurunkan reabsorbsi  ion  Na + ,  K + ,  dan  Cl - terjadi peningkatan  elektrolit  di  tubulus  sehingga terjadilah  diuresis  (Geurin  dan  Reveillere, 1989).
Pemanfaatan  biji  pepaya  juga  sangat kurang  karena  memiliki  biji  yang  kecil  dan berbau  tidak  enak  sehingga  masyarakat  hanya menjadikannya  sebagai  limbah  padahal  biji pepaya mempunyai manfaat. Menurut Villegas (1992)  biji  buah  pepaya  dapat  digunakan sebagai  obat  peluruh  kencing  (diuretik). Penelitian oleh Isnania,dkk (2014) menyatakan bahwa pada ekstrak biji pepaya memiliki efek diuretik  terhadap  tikus  putih  jantan  galur Wistar  dengan  efek  terbaik  ditunjukkan  pada dosis 0,03 g/kgBB sebanding dengan furosemid. Hasil skrining fitokimia menunjukkan ekstrak biji pepaya mengandung senyawa  alkaloid.  Alkaloid  bekerja  langsung pada  tubulus  dengan  cara  meningkatkan ekskresi  Na + dan  Cl - .  Dengan  meningkatnya ekskresi Na+ juga akan meningkatkan ekskresi air  dan  menyebabkan  volume  urin  bertambah (Nessa, 2013).
Berdasarkan  uraian  diatas,  oleh  karena belum adanya penelitian yang
mengkombinasikan  antara  ekstrak  biji  salak dan  ekstrak  biji pepaya,  maka  peneliti tertarik ingin mengetahui efektivitas diuretik kombinasi  ekstrak  biji  pepaya  dan  biji  salak pada tikus putih jantan dan mengetahui adanya efek  potensiasi  serta  menentukan  kombinasi dosis ekstrak biji pepaya dan ekstrak biji salak yang  mempunyai  efek  diuretik  pada  tikus putih jantan.

## METODE PENELITIAN Alat
Kandang  hewan  uji,  sarung  tangan, tempat  makanan  dan  minum  hewan  uji,  alat- alat  gelas  (Pyrex ® ), rotary  evaporator (Eyela OSB  2100),  oven,  pipet,  pisau,  ayakan, disposable  syringe 1,  5  dan  10  mL,  blender ( Laboratory  blender ),  gelas  kimia(Pyrex ® ), modifikasi  kandang  metabolit,  kertas  saring, masker, timbangan analitik, waterbath , wadah penampung  urin,  pH  meter,  sonde  oral  dan
Flame Fotometer ( BWB- XP Flame Photometer ).

## Bahan
Biji salak dan biji pepaya. Bahan-bahan kimia  yang  digunakan  etanol  96%,  akuades, Na CMC, Reagen Dragedorff, Wagner, Mayer,
Lieberman
Buchard,
Furosemid (PT INDOFARMA  No  Batch  1505005),  serbuk
Mg,  asam  klorida  pekat,  asam  nitrat,  asam perklorat, larutan FeCl 3 , LaCl 3 dan HCl 2N.
Hewan  uji  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  hewan  tikus  putih  jantan galur  Wistar  dengan  berat  badan  180-220  g sebanyak  15  ekor.    Sebelum  dilakukan pengujian,  hewan  uji  dikondisikan  terlebih dahulu  selama  1  minggu  dengan  kondisi lingkungan,  makanan  dan  diberi  minuman yang sama.

## Pembuatan  Ekstrak  Biji  Pepaya  dan  Biji Salak Dengan Metode Maserasi
Biji  pepaya  diekstraksi  menggunakan pelarut  etanol  96%,  pembuatan  ekstrak dilakukan  dengan  metode  maserasi,  yaitu sebanyak  250  g  serbuk  biji  pepaya  yang diperoleh dimasukkan kedalam bejana maserasi kemudian ditambahkan pelarut etanol 96%, ditutup dan dibiarkan terendam selama 3 hari  terlindung  dari  cahaya  (setiap  hari digojok).  Ekstrak  kemudian  disaring  dengan menggunakan  kertas  saring  sehingga  didapat maserat  (filtrat  1)  dan  residunya  diremaserasi dengan  etanol  96%  menggunakan  prosedur
yang  sama,  maserasi  dilakukan  selama  2  hari sampai  diperoleh  maserat  yang  jernih  (filtrat 2). Selanjutnya semua maserat etanol digabungkan  (filtrat  1+filtrat  2)  dan  diuapkan dengan menggunakan Rotary evaporator pada temperatur 40 o C sampai volumenya menjadi ¼ dari  volume  awal  dan  dilanjutkan  dengan pemekatan menggunakan waterbath pada suhu 40 o C sehingga menghasilkan ekstrak kental. Biji  salak  diekstraksi  menggunakan pelarut  etanol  96%,  pembuatan  ekstrak dilakukan  dengan  metode  maserasi,  yaitu sebanyak  300  g  serbuk  biji  salak  yang diperoleh dimasukkan kedalam bejana maserasi kemudian ditambahkan pelarut etanol 96%, ditutup dan dibiarkan terendam selama 3 hari  terlindung  dari  cahaya  (setiap  hari digojok).  Ekstrak  kemudian  disaring  dengan menggunakan  kertas  saring  sehingga  didapat maserat  (filtrat  1)  dan  residunya  diremaserasi dengan  etanol  96%  menggunakan  prosedur yang  sama,  maserasi  dilakukan  selama  2  hari sampai  diperoleh  maserat  yang  jernih  (filtrat 2). Selanjutnya semua maserat etanol digabungkan  (filtrat  1+filtrat  2)  dan  diuapkan dengan menggunakan Rotary evaporator pada temperatur 40 o C sampai volumenya menjadi ¼ dari  volume  awal  dan  dilanjutkan  dengan pemekatan menggunakan waterbath pada suhu 40 o C sehingga menghasilkan ekstrak kental.

## Pengujian  efek  diuretik  kombinasi  biji pepaya dan biji salak
Tikus  dipuasakan  tidak  diberi  makan  ± 18 jam dengan tetap diberi minum ad libitum , kemudian bobot badan tikus ditimbang. Dibagi menjadi  5  kelompok,  masing-masing  diberi aquadest  hangat    (suhu  70 o C)  10  ml/100  g sebagai loading dose secara oral.
Setelah  30  menit  masing-masing  tikus diberi  perlakuan  sesuai  kelompoknya.  Tikus kemudian  ditempatkan  di  kandang  metabolik individual dan volume urin yang diekskresikan dicatat  setiap  30  menit  selama  6  jam  setelah itu  dilanjutkan  pengukuran  volume  urin kumulatif.  Kemudian  dari  volume  urin kumulatif  diambil  sampel  untuk  pengukuran kadar natrium (Na), kalium (K), serta pH urin.
Tabel  1.  Pembagian  kelompok  uji  aktivitas diuretik kombinasi ekstrak biji pepaya dan biji salak No Kelompok Jumlah Tikus (ekor) Perlakuan 1 Kontrol Negatif (-) 5 Diberi suspensi Na CMC 0,5% 2 Kontrol Positif (+) 5 Diberi suspensi furosemid 3,6 mg/kg BB 3 Kombinasi Dosis 1 5 Diberi suspensi kombinasi ekstrak biji salak 37,5 mg/kg BB dan biji pepaya 7,5 mg/kg BB 4 Kombinasi Dosis 2 5 Diberi suspensi kombinasi ekstrak biji salak 70 mg/kg BB dan biji pepaya 15 mg/kg BB 5 Kombinasi Dosis 3 5 Diberi suspensi kombinasi ekstrak biji salak 140 mg/kg BB dan biji pepaya 30 mg/kg BB

## Pengukuran pH (Derajat Keasaman)
Penetapan  pH  urin  menggunakan  pH meter.  Untuk  penetapan  pH  ini,  urin  harus benar-benar  segar  atau  diawetkan  supaya jangan  terjadi  amonia  oleh  perombakan ureum.

## Penentuan  Kadar  Natrium  dan  Kalium dengan Flame Fotometer
Sebanyak  1  ml  volume  urin  diekstraksi dengan  menambahkan  asam  nitrat  5  ml ditambahkan  asam  perkolat  2  ml  selama  24 jam,  kemudian  dimasukkan  dalam  erlenmeyer 25  ml,  selanjutnya  didestruksi  basah  hingga volumenya  1-2  ml  dan  didinginkan  hingga suhu ruang. dimasukkan kedalam labu terukur 25  ml  kemudian  dicukupkan  dengan  aquades sampai  25  ml  ditambahkan  larutan  baku campuran  LACl 3 4,5  ml,  selanjutnya  diukur menggunakan alat Flame Fotometer.

## Analisis Data
Volume  urin  yang  diperoleh  digunakan untuk  menghitung  indeks  aktivitas  diuretik (IAD)  berdasarkan  persamaan.  Persamaan tersebut diuraikan sebagai berikut.

## IAD= 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑈𝑟𝑖𝑛 𝐾𝑒𝑙.𝐵𝑎ℎ𝑎𝑛 𝑈𝑗𝑖 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒 𝑈𝑟𝑖𝑛 𝐾𝑒𝑙.𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑁𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓
Data kadar natrium dan kalium digunakan untuk menghitung indeks saluretik.
Persamaan  indeks  saluretik  disajikan sebagai berikut.
IS=

## 𝐾𝑎𝑑𝑎𝑟 𝐸𝑙𝑒𝑘𝑡𝑟𝑜𝑙𝑖𝑡 𝐵𝑎ℎ𝑎𝑛 𝑈𝐽𝑖 𝑘𝑎𝑑𝑎𝑟 𝐸𝑙𝑒𝑘𝑡𝑟𝑜𝑙𝑖𝑡 𝐾𝑒𝑙𝑜𝑚𝑝𝑜𝑘 𝐾𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 𝑁𝑒𝑔𝑎𝑡𝑖𝑓
Selain  itu  volume  urin  kumulatif  ,  kadar natrium  dan  kalium  yang  diperoleh  dianalisis dengan menggunakan metode ANOVA ( Analysis  Of    Variance )  pada  tingkat kepercayaan  95%.  Dilanjutkan  dengan  uji Duncan untuk mengetahui kelompok perlakuan yang berbeda signifikan dibandingkan  dengan  yang  lainnya.  Data diolah dengan menggunakan SPSS Ver. 20.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Hasil Penapisan Fitokimia
Ekstrak  etanol  biji  salak  positif mengandung  senyawa  bioaktif  yang  berperan dalam  memberikan  khasiat  atau  efek  biologi, antara  lain  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  dan tanin. Hasil penapisan fitokimia dapat dilihat pada Tabel 2.

## Tabel  2.  Hasil  Penapisan  Fitokimia  Ekstrak Biji Pepaya
No. Golongan Senyawa Hasil Identifikasi 1. Flavonoid + 2. Saponin + 3. Steroid/Triterpenoid - 4. Alkaloid + 5. Tanin + Keterangan : (+) Ekstrak mengandung golongan senyawa yang diuji (-) Ekstrak    tidak  mengandung  golongan senyawa yang     diuji
Ekstrak  etanol  biji  pepaya  positif mengandung  senyawa  bioaktif  yang  berperan dalam  memberikan  khasiat  atau  efek  biologi, antara  lain  flavonoid,  alkaloid,  saponin,  dan tanin.    Hasil  penapisan  fitokimia  dapat  dilihat pada Tabel 3.
Tabel  3  Hasil  Penapisan  Fitokimia  Ekstrak Biji Salak
No. Golongan Senyawa Hasil Identifikasi 1. Flavonoid + 2. Saponin + 3. Steroid/Triterpenoid - 4. Alkaloid + 5. Tanin +
Keterangan :
(+) Ekstrak mengandung golongan senyawa yang diuji (-) Ekstrak    tidak  mengandung  golongan senyawa yang     diuji Hasil Pengukuran Volume Urin dan Indeks Aktivitas Diuretik
Hasil pengukuran volume urin kumulatif  dan  indeks  aktivitas  diuretik  dapat dilihat pada Tabel 4.
Tabel 4. Volume total urin dan indeks aktivitas diuretik

## Keterangan:
Kombinasi Dosis 1 =  Kombinasi ekstrak biji salak 37,5 mg/kg BB dan biji pepaya 7,5 mg/kg BB Kombinasi Dosis 2 =  Kombinasi ekstrak biji salak 70 mg/kg BB dan biji pepaya 15 mg/kg BB Kombinasi Dosis 3 =  Kombinasi ekstrak biji salak 140 mg/kg BB dan biji pepaya 30 mg/kg BB

## Hasil Pengukuran pH Urin
Hasil  pengukuran  pH  urin  dilakukan dengan  menggunakan  alat  pH  meter.  Hasil pengukuran pH urin dapat dilihat pada Tabel 5
Tabel 5. Hasil Pengukuran pH Urin
Kelompok pH Kontrol Negatif (Na CMC) 7,17 Kontrol Positif (Furosemid) 7,29 Kombinasi Dosis 1 7,24 Kombinasi Dosis 2 7,48 Kombinasi Dosis 3 7,52

## Keterangan:
Kombinasi Dosis 1 =  Kombinasi ekstrak biji salak 37,5 mg/kg BB dan biji pepaya 7,5 mg/kg BB Kombinasi Dosis 2 =  Kombinasi ekstrak biji salak 70 mg/kg BB dan biji pepaya 15 mg/kg BB Kombinasi Dosis 3 =  Kombinasi ekstrak biji salak 140 mg/kg BB dan biji pepaya 30 mg/kg BB

## Hasil  Pengukuran  Kadar  Natrium  dan Kalium
Hasil  pengukuran  kadar  natrium  dan kalium  yang  diperoleh  dengan  menggunakan alat  flame  fotometer,  dapat  dilihat  pada  Tabel 6.
Tabel 6. Nilai kadar natrium, kalium urin, dan indeks saluretik tikus
Keterangan: Kombinasi Dosis 1 =  Kombinasi ekstrak biji salak 37,5 mg/kg BB dan biji pepaya 7,5 mg/kg BB
Kombinasi Dosis 2 =  Kombinasi ekstrak biji salak 70 mg/kg BB dan biji pepaya 15 mg/kg BB
Kombinasi Dosis 3 =  Kombinasi ekstrak biji salak 140 mg/kg BB dan biji pepaya 30 mg/kg BB Kelompok Volume Total Urin (ml/6 jam) Indeks Aktivitas Diuretik Kontrol Negatif (Na CMC) 12,62 ± 0,99 a - Kontrol Positif (Furosemid) 17,82 ± 0,61 c 1,41 Kombinasi Dosis 1 13,44 ± 0,67 a 1,06 Kombinasi Dosis 2 16,12 ± 1,84 b 1,28 Kombinasi Dosis 3 18,68 ± 0,31 c 1,48 Kelompok Konsentrasi ion Na + (mEq/L) Konsentrasi ion K + (mEq/L) Indeks Saluretik Na     K Kontrol Negatif (Na CMC) 1,00 ± 0,02 a 0,51 ± 0,07 a
-                 - Kontrol Positif (Furosemid) 4,26 ± 0,05 c 1,91 ± 0,04 c 4,25      3,74 Kombinasi Dosis 1 1,51 ± 0,10 b 0,74 ± 0,04 b 1,5       1,43 Kombinasi Dosis 2 1,55 ± 0,06 b 0,73 ± 0,01 b 1,55      1,43 Kombinasi Dosis 3 1,62 ± 0,07 b 0,81 ± 0,03 b 1,62     1,56
Kandungan  bioaktif  yang  terdapat dalam  ektrak  biji  salak  yang  beraktivitas sebagai diuretik
adalah flavonoid (Novita,dkk.,2014). Berdasarkan
hasil penapisan fitokimia yang diperoleh menunjukkan  bahwa  pada  ekstrak  biji  salak memberikan  hasil  positif  terhadap  golongan senyawa flavonoid, saponin, alkaloid dan tanin (Tabel  3).  Sedangkan  untuk  kandungan bioaktif  yang  terdapat  dalam  ektrak  biji pepaya  yang  beraktivitas  sebagai  diuretik adalah  senyawa  alkaloid  (Nessa,  2013). Berdasarkan  hasil  penapisan  fitokimia  yang diperoleh  menunjukkan  bahwa  pada  ekstrak biji  pepaya  memberikan  hasil  positif  terhadap golongan senyawa flavonoid, saponin, alkaloid dan  tanin  (Tabel  2).  Penapisan  fitokimia  ini bertujuan untuk mengetahui golongan senyawa  yang  terkandung  didalam  ekstrak bahan uji yang digunakan.
Pada  penelitian  ini  selang  waktu pemberian  semua  perlakuan  adalah  30  menit selama  6  jam.  Sebelum  diberi  perlakuan terhadap  masing-masing  kelompok  terlebih dahulu  tikus  putih  jantan  dicekok  aquades hangat  sebanyak  10  ml/100  g  BB  sebagai loading  dose yang  bertujuan  merangsang pengeluaran  urin  serta  untuk  menyamakan kadar  air  dan  garam  elektrolit.  Setelah  30 menit tikus putih jantan diberikan suspensi Na CMC 0,5%, Furosemid, dan kombinasi ekstrak biji pepaya dan biji salak dengan selang waktu 30  menit  dapat  menimbulkan  efek  untuk meningkatkan volume urin. Pengukuran volume  urin  dilakukan  selama  6  jam  untuk melihat efek yang maksimal pada suatu bahan uji  yang  diberikan.  Diuretik  meningkatkan volume  urin  dan  sering  mengubah  pH-nya serta  komposisi  ion  di  dalam  urin  dan  darah. Penggunaan  klinis  utamanya  ialah  dalam menangani  kelainan  yang  melibatkan  retensi cairan (edema) atau dalam mengobati hipertensi dengan efek diuretiknya menyebabkan penurunan volume darah, sehingga  terjadi  penurunan  tekanan  darah (Mycek, M. J., 2001).
Berdasarkan hasil pengukuran volume total  urin  tikus  pada  Tabel  4  menunjukkan bahwa  pada  kontrol  negatif  (Na  CMC) memiliki volume urin yang rendah dibandingkan  kontrol  positif  (Furosemid)  dan kombinasi dosis 1, 2 dan 3. Hal ini disebabkan karena  kontrol  negatif  tidak  terkandung  zat aktif  yang  dapat  meningkatkan  volume  urin sehingga  menyebabkan  ekskresi  urin  yang
keluar  sedikit.  Aktivitas  diuretic  tertinggi  ke terendah  secara  berurutan  adalah  kombinasi dosis  3  (1,48),  furosemid  1,41),  kombinasi dosis  2  (1,28)  dan  kombinasi  dosis  1  (1,06). Peningkatan  pemberian  dosis  ekstrak  biji papaya dan ekstrak biji salak dapat meningkatkan pengeluaran volume urin terhadap  tikus  putih  jantan.  Hasil  uji  statistic Anova  terhadap  volume  total  urin  diperoleh nilai  signifikansi  0,000  (p<0,05).  Artinya masing  -  masing  perlakuan  memberikan perbedaan yang bermakna, untuk hal ini maka perlu dilanjutkan dengan pengujian beda rata - rata dari masing - masing perlakuan dengan uji Duncan. Hasil uji lanjut Duncan menunjukkan dari ketiga kombinasi dosis, kombinasi dosis 3 (ekstrak  biji  salak  140  mg/kg  BB+ekstrak  biji pepaya  30  mg/kg  BB)  dan  furosemid mempunyai  efek  yang  sama  dengan  nilai signifikansinya adalah 0,203 yang masih lebih besar  dari  (p>0,05).  Sedangkan  efek  diuretik kombinasi dosis 1 lebih kecil bila dibandingkan  dengan  kombinasi  dosis  2 dengan  nilai  signifikansi  0,01  (p  <  0,05)  dan berbeda  tidak  signifikan  dengan  kontrol negative (p=0,224, p>0,05), meskipun volume total urin kelompok kombinasi dosis 1 terlihat lebih  banyak  dibandingkan  dengan  control negative. Hal ini diduga karena konsentrasi zat aktif yang masih sedikit sehingga efek diuretik rendah.
Berdasarkan hasil pengukuran pH masing-masing kelompok menunjukkan adanya  peningkatan  derajat  keasaman  (pH) urin.  Nilai  pH  urin  tikus  normal  berkisar  7,3 sampai  8.  Nilai  pH  urin  ditentukan  oleh pengaturan  asam  basa  di  ginjal.  Apabila sejumlah HCO 3 - difiltrasi secara terus menerus ke  dalam  tubulus  ginjal  dan  dieksresikan  ke dalam  urin,  maka  akan  menyebabkan  urin bersifat basa. Sebaliknya, apabila sejumlah ion H + difiltrasi  secara  terus-menerus  kedalam tubulus  ginjal  dan  dieksresikan  ke  dalam  urin maka  akan  menyebabkan  urin  bersifat  asam (Brater DC, 1998). Dalam pengaturan konsentasi  ion  H + ,  ginjal  memiliki  beberapa mekanisme  yaitu  mensekresikan  ion  H + ke tubulus,  melakukan  reabsorbsi  ion  HCO 3 - dan memproduksi  ion  HCO 3 - yang  baru.  Hal  ini dilakukan  untuk  mengurangi  dan  menetralisir kelebihan ion H + di dalam tubuh (Nalwaya N, dkk. 2009).
Berdasarkan  hasil  pengukuran  kadar natrium  dan  kadar  kalium  pada  Tabel  6. menunjukkan  kadar  natrium  urin  tikus  yang
diberikan  kombinasi  dosis  ekstrak  biji  papaya dan  ekstrak  biji  salak  dengan  tiga  peringkat dosis  yang  digunakan  cenderung  meningkat seiring dengan bertambahnya dosis. Demikian juga  halnya  dengan  kadar  kalium  urin  yang diekskresikan. Berdasarkan hasil yang diperoleh,  kombinasi  dosis  1,  2  dan  3 menunjukkan  efek  diuretik  terhadap  kadar natrium  dalam  urin  yang  berbeda  tidak signifikan. Pemberian kombinasi dosis 1,2 dan 3 mempunyai efek diuretik terhadap pengeluaran natrium lebih besar dibandingkan dengan  tikus  kontrol  negatif  tetapi  tidak  lebih banyak  daripada  kontrol  positif  dengan  nilai signifikansi  0,00  (p  <  0,05).  Hal  ini menunjukkan  bahwa  furosemid  lebih  kuat untuk  pengeluaran  natrium  dan  kalium  dalam urin  tikus  sedangkan  CMC-Na  0,5%  adalah sebagai  kontrol  negatif  dalam  penelitian  ini memiliki  urin  dengan  kandungan  ion  natrium dan  kalium  yang  lebih  rendah.  Hal  ini mengindikasikan  bahwa  peningkatan  volume urin  yang  terlihat  selama    penelitian  bukan merupakan  efek  osmotik  atau  aquaretik melainkan  disebabkan  oleh  adanya  aktivitas diuretik  (Mary  JM,  dkk.  1995).  Penelitian  ini menunjukkan  bahwa  semakin  banyak  dosis ekstrak  yang  diberikan  maka  semakin  banyak mempengaruhi  pengeluaran  volume  urin  dan ekskresi  natrium.  Peningkatan  pengeluaran natrium  dalam  urin  mengindikasikan  adanya efek  diuretik  yang  dihasilkan  dari  ekstrak  biji papaya dan ekstrak biji salak. Hasil yang sama juga  diperoleh  pada  pengukuran  kadar  kalium urin tikus.
Penelitian  ini  juga  memberikan  hasil bahwa  kadar  natrium  dan  kalium  pada  urin tikus lebih besar dari kadar kalium sesuai dari fungsi diuretik yang merupakan senyawa yang dapat  meningkatkan  pengeluaran  ekskresi  air dan  garam-garam.  Peningkatan  kadar  ion natrium dan kalium dalam urin pada kelompok tikus yang dicekok ekstrak biji pepaya dan biji salak  ini  merupakan  efek  natriuretik  diuretik, hampir semua sediaan diuretik yang digunakan untuk  menurunkan  tekanan  darah,  gagal jantung dan memobilisasi ekskresi ion natrium dan  kalium.  Peningkatan  kadar  ion  natrium dan  kalium  urin  dimungkinkan  diakibatkan oleh  penghambatan  karbonik  anhidrase  pada tubulus  proksimal  ginjal  sehingga  reabsorbsi ion  natrium  akan  berkurang.  Untuk  menutupi kekurangan  ion  natrium  dalam  tubuh,  ginjal memaksimalkan  kerja  ko-transport  Na-K  di tubulus  proksimal.  Hasil  kompensasi  yang
dilakukan oleh ginjal menyebabkan peningkatan kadar kalium di dalam urin (Lork S,  2006).  Kemungkinan  penyebab  kenaikan kadar  ion  natrium  dan  kalium  pada  segmen asenden  ansa  henle  sebagaimana  mekanisme kerja  furosemid  (obat  diuretik  yang  sering digunakan  sebagai  standar  pembanding  dalam pengujian diuretik) dan penghambatan reabsorbsi  ion  natrium  pada  tubulus  distal (Mary  JM,  dkk.  1995).  Ekskresi  ion  natrium dan  kalium  melalui  urin  secara  terus  menerus dapat  mengakibatkan  gangguan  homeostasis ion  di  dalam  tubuh,  dehidrasi  ion,  dan  pada kondisis  kronis  mengganggu  kerja  jantung. Oleh karena itu penggunaan kombinasi ekstrak biji  pepaya  dan  biji  salak  sebagai  diuretik alami  disarankan  untuk  digunakan  sesuai dengan dosis efektif yang direkomendasikan.
Analisis  fitokimia  ekstrak  etanol  biji pepaya  dan  biji  salak  menunjukkan  bahwa ekstrak tersebut mengandung alkaloid, flavonoid, saponin, dan tanin (Tabel 2 dan 3). Alkaloid merupakan senyawa organik terbanyak  ditemukan  di  alam.  Alkaloid golongan  kafein,  teobromin,  dan  teofilin memiliki  khasiat  diuretika  (Lork  S,  2006). Sementara  itu  flavonoid  merupakan  golongan fenol alam terbesar yang diketahui mempunyai berbagai  khasiat,  seperti  antiradang,  diuretik, antihipertensi, dan meningkatkan kerja pembuluh  darah  kapiler  (Depkes,  2007). Alkaloid  dapat  memberikan  efek  diuretik dengan  cara  berikatan  dengan  reseptor adenosin A1. Alkaloid juga dapat menyebabkan peningkatan volume urin. Alkaloid  bekerja  langsung  pada  tubulus dengan  cara  meningkatkan  ekskresi  Na + dan Cl - .  Dengan  meningkatnya  ekskresi  Na + juga akan meningkatkan ekskresi air dan menyebabkan volume urin bertambah.
Flavonoid  dapat  meningkatkan  volume  urin dengan  cara  meningkatkan  laju  kecepatan glomerulus (Jouad, 2001). Selain itu flavonoid dapat  menghambat  reabsorbsi  Na + dan  Cl - sehingga  menyebabkan  peningkatan  Na + dan air  dalam  tubulus.  Dengan  demikian,  terjadi peningkatan  volume  air  dalam  tubulus  dan terjadi peningkatan volume urin.
Saponin  merupakan  senyawa  hasil metabolisme sekunder pada beberapa tanaman bersifat  menurunkan  tegangan  permukaan, merangsang  ginjal  untuk  bekerja  lebih  aktif, dan  meningkatkan  absorbsi  diuretik  (terutama bentuk  garam  dalam  urin)  (Nalwaya  N,  dkk. 2009). Dengan demikian, kandungan alkaloid,
flavonoid, dan saponin yang terkandung dalam ekstrak etanol biji pepaya dan biji salak diduga bekerja sinergis menimbulkan efek diuretik.
Penggunaan  kombinasi  ekstrak  biji pepaya  dan  biji  salak  sebagai  diuretik  alami telah  terbukti  mampu  meningkatkan  volume urin,  eksresi  ion  natrium  dan  kalium  melalui urin  sehingga  ekstrak  ini  memiliki  potensi yang  hampir  sama  dengan  diuretik  sintetik yang  banyak  digunakan  saat  ini.  Pengeluaran ion  natrium  dan  kalium  dalam  jumlah  yang berlebih  mengakibatkan  dehidrasi,  gangguan keseimbangan  ion  tubuh,  dan  pada  kondisi yang  parah  dapat  mengganggu  fisiologis jantung. Dengan demikian, penggunaan kombinasi  ekstrak  biji  pepaya  dan  biji  salak sebagai  diuretikum  juga  harus  berhati-hati, tidak  boleh  diberikan  secara  terus  menerus, dan sesuai dosis efektif sehingga meminimalisir efek negatif yang ditimbulkan.

## DAFTAR PUSTAKA
Brater,  D.C.  (1998). Diuretic  Theraphy .  The New England Journal of medicine.
Depkes.  (2007). Kebijakan  Obat  Tradisional Nasional ,  Departemen  Kesehatan  RI, Jakarta.
Geurin,  J.C.,  and  Reveillere  H.P.  (1989).
Orthosiphone  stamineus  as  a  potent source  of  methylripario  chromene  A,  J.
Nat. Prod .
Isnania.,  dkk.  (2014). Aktivitas Diuretik  dan Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Etanol  Biji Pepaya  (Carica  papaya  L.)  Pada  Tikus
Putih  Jantan  Galur  Wistar  (Rattus norvegicus) Jurnal  Ilmiah  Farmasi FMIPA Universitas Samratulangi Manado.
Jouad,  H.,  Lacaille-Dubois  MA.,  Lyoussi  B, Eddouks  M.  (2001). Effects  of  The Flavonoids  Extracted  from  Spergularia purpurea  Pers. on  Arterial  Blood Pressure and  Renal  Function  in  Normal
and  Hypertensive  Rats.  Journal  of Ethnopharmacology
Lork, S. (2006). Pemanfaatan Obat Tradisional dengan Pertimbangan Manfaat  dan  Keamanannya ,  Majalah Kefarmasian.
Marry,  JM,  dkk.  (1995). Farmakologi  Ulasan Bergambar .  Penerbit  Widya  Medika, Jakarta.
Mycek,  M.  J.,  Harvey,  R.  A.,  dan  Champe C.C.  (2001). Farmakologi  Ulasan Bergambar,  Edisi  2 .  Penerbit  Widya Medika. Jakarta.
Mutschler Ernst. (1991). Dinamika Obat . Edisi 5 .  Penerjemah  Mathilda  B  Widianto,
Anna Setiadi Ranti. ITB. Bandung.
Nalwaya N, dkk. (2009). Diuretic activity of a herbal  product  UNEX.  International Journal of Green Pharmacy.
Nessa.  (2013). Efek  Diuretik  dan  Daya  Larut Batu Ginjal dari Ekstrak Etanol Rambut Jagung ( Zea mays L.). Fakultas Farmasi, Universitas Andalas. Padang.
Novita.,  dkk.  (2014). Uji  Efektivitas  Diuretik Ekstrak  Etanol  Biji  Salak  (Salacca zalacca  varietas  zalacca  (gaert)  Voss  ) Pada  Tikus  Putih  Jantan  Galur  Wistar (Rattus norvegicus) Jurnal Ilmiah Farmasi FMIPA Universitas Samratulangi Manado.
Tanu, I. (2009). Farmakologi dan Terapi Edisi 5  (Cetak  Ulang  dengan  Perbaikan), Balai Penerbit FKUI, Jakarta
Villegas,  V.N.  (1992). Carica  papaya L. Didalam  Verheij  EWM  dan  CoroneRE, editor  Plant  Resources  of  South-East Asia:  Edible  Fruits  and  Nuts  No.2.
PROSEA
Foundation. Bogor.