## Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Notika (Archboldiodendron calosercium  (Kobuski))  Terhadap  Larva  Artemia  salina  Leach
dengan Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Nuralifah, *1 , Asriullah Jabbar 1 , Parawansah 2 , Ria Agus Iko 1
1 Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu Kendari 93232
2 Fakultas Kedokteran Universitas Halu Oleo, Kampus Hijau Bumi Tridharma Anduonohu Kendari 93232

## Abstrak
Daun notika merupakan tumbuhan yang berasal dari Papua, yang tumbuh di daerah perbukitan yang telah terjadi erosi.Daun notika secara empiris memiliki manfaat menyembuhkan penyakit malaria dan mempermudah proses persalinan. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  kandungan  metabolit  sekunder  dari  daun notika, karakterisasi  simplisia  daun notika dan  toksisitas  akut menggunakan  metode  BSLT  terhadap  larva  udang Artemia  salina Leach.  Ekstrak  daun notika diperoleh  dengan  menggunakan metode  maserasi  dengan  pelarut  etanol  96%.  Pengujian  skrining  fitokimia  dilakukan  dengan  metode  perubahan  warna  yang meliputi uji alkaloid, uji flavonoid, uji terpenoid, uji tannin dan uji saponin. Pengujian karakterisasi simplisia dilakukan dengan menentukan parameter  spesifik  yang  meliputi  penetapan  sari  larut  air dan  penetapan  sari larut  etanol  sedangkan  parameter  non spesifik  meliputi  penetapan  kadar  air  dan  penetapan  kadar  abu.  Pengujian  toksisitas  akut  menggunakan  metode Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT) dengan menggunakan  larva udang Artemia salina Leach. Hasil pengujian skrining fitokimia daun notika menunjukkan hasil positif pada flavonoid, terpenoid, saponin dan tanin. Hasil pengujian karakterisasi simplisia pada daun notika adalah kadar sari larut etanol adalah 50,04%, kadar sari larut air adalah 32,01%, kadar air 3,99 % dan kadar abu adalah 5,11%. Hasil pengujian toksisitas akut dari ekstrak etanol daun notika secara BSLT menunjukan bahwa daun notika tidak bersifat toksik dengan nilai  LC 50 1024,19 µg/mL sehingga dapat dimanfaatkan sebagai obat tradisional.
Kata kunci: daun notika , BSLT, toksisitas akut, Artemia salina , obat tradisional

## 1. Pendahuluan
Indonesia  yang  beriklim  tropis  memiliki  aneka ragam  tumbuhan  yang  dapat  digunakan  sebagai  bahan obat.  Penggunaan  obat  tradisional  secara  umum  dinilai lebih  aman  dari  pada  penggunaan  obat  modern  karena obat tradisional memiliki efek samping yang relatif lebih sedikit  dari  pada  obat  modern  [11].  Penggunaan tumbuhan  tradisional  sebagai  obat  alternatif  oleh masyarakat  memerlukan  penelitian  lebih  lanjut  agar penggunaannya  dapat  dipertanggung  jawabkan  khasiat, keamanan dan standar kualitas [3]
Daun notika ( Archboldiodendron  calosercium (Kobuski)) adalah salah satu tumbuhan obat tradisional yang  secara  empiris  digunakan  oleh  masyarakat  Papua untuk  pengobatan  penyakit  malaria  dan  mempermudah dalam  proses  persalinan.  Daun notika merupakan tanaman  baru  sehingga  perlu  dilakukan  skrining
* KBK Farmakologi dan Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi UHO Email: nuralifahapt11@gmail.com
fitokimia,  pengujian  karakterisasi  simplisia  dan  uji toksisitas.
Skrining  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui kandungan  metabolit  sekunder  meliputi  alkaloid, flavonoid,  tannin,  saponin,  dan  terpenoid.  karakterisasi simplisia  dilakukan  untuk  memberikan  gambaran  awal terhadap  jumlah  senyawa  pada  daun notika yang meliputi  penentuan  par  ameter  spesifik  (penetapan  sari larut air dan penetapan sari larut etanol) dan non spesifik (kadar  air  dan  kadar  abu).    Uji  toksisitas  pada  ekstrak tumbuhan dilakukan untuk mengetahui tingkat keamanan  suatu  ekstrak.  Pengujian  toksisitas  senyawa aktif  atau  bahan  yang  akan  digunakan  sebagai  obat merupakan  salah  satu  penelitian  yang  penting  sebagai syarat  uji  keamanan  suatu  obat  baru,  sehingga  dapat diketahui jumlah takaran yang tepat [10].
Majalah Farmasi, Sains, dan Kesehatan ISSN 2442-9791
2 | Nuralifah, dkk: Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Notika (Archboldiodendron calosercium (Kobuski))
Terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Salah satu metode awal yang sering dipakai untuk mengamati  toksisitas  pada  tumbuhan    adalah  metode brine  shrimp  lethality  test (BSLT).  Metode  BSLT merupakan salah satu cara yang cepat, murah dan mudah untuk toksisitas dari ekstrak tanaman dengan menggunakan hewan laut yaitu artemia salina Leach [9]. Hasil  yang  diperoleh  dihitung  sebagai  nilai  LC 50 ( letal concentration ) ekstrak uji dengan menggunakan Minitab 17 [11] . Suatu  ekstrak  dikatakan  aktif  bila  mempunyai nilai LC 50 <1000 μg/mL [2].

## 2. Metode

## 2.1 Umum
Sampel  daun notika diperoleh  dari  Kelurahan Madi,  Kecamatan  Paniai  Timur,  Kabupaten  Paniai, Provinsi Papua. Penelitian ini dilakukan di laboratorium Farmasi  Fakultas  Farmasi  Universitas  Halu  Oleo,  dan Laboratorium  Biologi  FMIPA  Universitas  Halu  Oleo. Determinasi dilakukan di Pusat Penelitian Biologi, LIPI, Cibinong. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan mengukur jumlah  larva A. salina yang mati 50 % dari total larva uji. Kemudian dihitung nilai  LC 50 dengan  memasukkan  angka  probit  (50% kematian larva uji).

## 2.2 Preparasi Sampel
Sampel  dicuci  di  bawah  air  mengalir  untuk menghilangkan  kotoran  yang  melekat  pada  sampel, kemudian  dilakukan  perajangan  dengan  tujuan  untuk mempermudah proses pengeringan. Sampel daun notika kemudian  disortasi  kering  untuk  menghilangkan pengotor  yang  masih  tertinggal  dan  sampel  yang mengalami kerusakan saat proses sortasi basah sehingga diperoleh  simplisia  kering.  Setelah  itu  dilakukan penghalusan  dengan  tujuan  untuk  memperkecil  ukuran partikel

## 2.3 Karakterisasi Simplisia
Karakterisasi
simplisia bertujuan untuk menetapkan  spesifikasi  simplisia  sehingga  dapat menjamin  mutu,  keamanan,  manfaat  dan  bahan  baku simplisia.  Syarat  baku  simplisia  adalah  dilakukan pengujian  pada  karakterisasi  simplisia  pada  tanaman yang meliputi kadar sari larut etanol, kadar sari larut air, kadar air dan kadar abu [5].

## 2.4 Skrining Fitokimia
Skrining  fitokimia  bertujuan  untuk  memberikan gambaran  tentang  golongan  senyawa  yang  terkandung dalam  tanaman  yang  diteliti,  antara  lain  alkaloid,
flavonoid,  saponin,  terpenoid,  dan  tannin.  Prosedur pengujian berdasarkan Harborne, 1987 [17].

## 2.5 Ekstraksi
Ekstraksi  maserasi  dilakukan  dengan  cara  serbuk simplisia ditimbang 500 mg dan direndam menggunakan pelarut  etanol  96%.  Perbandingan  jumlah  sampel  dan etanol  yang  digunakan  adalah  (1:10),  setiap  1  gram sampel  diekstraksi  dengan  10  ml  etanol  96%.  Jadi  500 gram sampel dilarutkan dengan 5000 mL atau 5 L etanol 96%.  Maserasi  dilakukan  selama  3x24  jam,  dimana setiap 1x24 jam residu dan filtrat harus dipisahkan dan dilakukan  pergantian  pelarut  yang  sama.  Filtrat  yang diperoleh kemudian diuapkan pelarutnya menggunakan Rotary  Vacuum  Evaporator pada  suhu  50 o C.  Ekstrak cair  yang  diperoleh  kemudian  disimpan  dalam  cawan porselen yang kemudian dipekatkan menggunakan water bath pada suhu 60°C
2.6 Uji  Toksisitas  dengan  metode  Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT)
Larutan  induk  dari  ekstrak  etanol  daun notika dibuat  sebanyak  20  mL  dengan  konsentrasi  4000  ppm. Pembuatan larutan induk yaitu dilarutkan terlebih dahulu ekstrak  daun notika sebanyak  0,08  g  dan  ditambahkan DMSO sebanyak 2 mL dan dicukupkan sampai 20 mL. Larva yang telah berumur 48 jam dimasukkan ke dalam gelas  ukur  menggunakan pipet tetes bersamaan air laut kemudian  dicukupkan  sampai  5  mL.  Setelah  itu, dipindahkan ke dalam botol vial yang telah terisi 5 mL larutan ekstrak. Dengan cara yang sama dilakukan pada semua  konsentrasi.  Setelah  24  jam  pasca  penambahan ekstrak,  maka  dilakukan  pengamatan  kematian  larva. Kriteria  standar  untuk  menilai  kematian  larva  udang adalah bila udang tidak menunjukan pergerakan selama beberapa  detik  observasi  [12].  Total  larva  yang digunakan  pada  seluruh  percobaan  dengan  3  kali percobaan/replikasi  adalah  210  ekor.  Total  kematian larva  diperoleh  dengan  menjumlahkan  kematian  larva, dibagi  dengan  total  larva  yang  digunakan  setiap konsentrasi dan dikalikan dengan 100%.

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1 Preparasi Sampel
Proses  pengeringan  simplisia  dilakukan  dengan cara dijemur dibawah sinar matahari dan ditutup dengan kain  hitam  agar  sampel  tidak  terkena  sinar  matahari secara  langsung  sehingga  kandungan  aktif  dalam simplisia tidak rusak dan juga  memiliki sirkulasi udara yang baik sehingga mengoptimalkan proses pengeringan [14]. Sampel selanjutnya dihaluskan sehingga
Nuralifah, dkk: Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Notika (Archboldiodendron calosercium (Kobuski)) Terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
memperluas  bidang  kontak  antara  daun notika dengan pelarut dan mempercepat penetrasi pelarut ke dalam sel daun sehingga zat kimia yang diperoleh semakin banyak.

## 3.2 Karakterisasi Simplisia
Simplisia  pada  tanaman  atau  tumbuhan  dikatakan baik  jika  memenuhi  syarat  baku  simplisia  yang  tertera pada  Depkes  RI  2000  [5].  Karakteristik  simplisia disajikan dalam tabel berikut.
Tabel 1 . Karakteristik simplisia Jenis karakterisasi Hasil Standar [5] Kadar sari larut etanol Kadar sari larut air Kadar air Kadar abu 50,04 % 32,01 % 3,99 % 5,11% >9,7 % >  18% < 10 % <7%
Penentuan kadar sari larut air dan etanol bertujuan untuk  menunjukkan  jumlah  bahan-bahan  yang  dapat disari  oleh  air  maupun  etanol,  sehingga  dapat memberikan gambaran mengenai besarnya bahan-bahan yang  terlarut  dan  bagian  yang  dimanfaatkan  sebagai bahan obat [16]. Kadar sari larut etanol pada daun notika adalah 50,04%  dan kadar sari larut dalam air pada daun notika adalah  32,01%,  dimana  keduanya  memenuhi standar mutu yang disyaratkan [5,8].
Penetapan  kadar  air  bertujuan  untuk  mengetahui besarnya  kandungan  air,  terkait  dengan  kemurnian  dan kontaminasi  yang  mungkin  terjadi  sehingga  dapat digunakan  pada  jangka  waktu  yang  lama.  Kadar  air simplisia  berperan  dalam  pertumbuhan  mikroba sehingga  sangat  menentukan  kualitas  dan  masa penyimpanan  simplisia  [16].  Berdasarkaan  pengujian yang  dilakukan  maka  diperoleh  hasil  kadar  air  ekstrak etanol daun notika sebanyak 3,99%. Hasil ini telah sesuai dengan  persyaratan  kadar  air,  dimana  kadar  air  tidak lebih dari 10% [5]. Semakin tinggi kadar air maka akan lebih  mudah  ditumbuhi  jamur  dan  kapang  sehingga dapat  menurunkan  aktivitas  biologis  simplisia  dalam masa penyimpanan [13].
Penetapan kadar abu dilakukan untuk memberikan gambaran  kandungan  mineral  internal  dan  eksternal yang  berasal  dari  proses  awal  sampai  akhir.  Selain  itu juga  dapat  menggambarkan  jumlah  kandungan  logam dalam  ekstrak  [16].  Kadar  abu  yang  diperoleh  dalam pengujian ini sebesar 5,11% dan memenuhi standar mutu dibawah 7% [5].

## 3.3 Ekstraksi
Ekstraksi  adalah  proses  pemisahan  kandungan senyawa  kimia  dari  jaringan  tumbuhan  maupun  hewan dengan  menggunakan  penyari  yang  sesuai  [5].  Proses ekstraksi  yang  digunakan  adalah  metode  maserasi.
Metode maserasi merupakan cara ekstraksi yang paling sederhana  dan  dalam  tahapanya  tidak  dilakukan  proses pemanasan  sehingga  menghindari  kerusakan  dari senyawa  yang  dikandung  oleh  simplisisa  [1].  Pelarut yang digunakan dalam penelitian ini adalah etanol 96%. Etanol 96% adalah pelarut semi polar dan pelarut yang baik untuk ekstraksi karena dapat mengekstrak senyawa yang polar dan senyawa yang non-polar. Pelarut etanol 96% relatif kurang toksik dibandingkan metanol, murah, mudah didapat dan ekstrak yang diperoleh tidak mudah ditumbuhi  jamur  dan  bakteri  serta  umum  digunakan dalam pembuatan ekstrak. Selain itu, etanol merupakan pelarut  yang  tidak  karsinogen,  dan  mudah  menguap dengan  titik  didih  78 o C  sehingga  tidak  meninggalkan residu yang tinggi. Pelarut etanol juga merupakan pelarut dengan daya ekstraktif terbesar untuk semua bahan alam berbobot  molekul  rendah  seperti  alkaloid,  saponin  dan flavonoid [6].
Tabel 2. Data rendemen daun notika
Rendemen  merupakan  kadar  kandungan  senyawa metabolit  sekunder  dalam  tumbuhan  daun notika yang dinyatakan dalam persen.Penetapan rendemen bertujuan untuk  mengetahui  jumlah  kira-kira  simplisia  yang dibutuhkan  untuk  pembuatan  sejumlah  tertentu  ekstrak kental.

## 3.4 Skrining Fitokimia
Tumbuhan  umumnya  mengandung  senyawa  aktif dalam  bentuk  metabolit  sekunder  seperti  alkaloid, flavonoid,  tanin,  terpenoid,  dan  saponin.  Metode skrining  fitokimia  dilakukan  dengan  melihat  reaksi warna dengan menggunakan suatu pereaksi
Tabel 3. Hasil pengamatan uji skrining fitokimia ekstrak daun notika ( Archboldiodendron calosercium Kobuski).
Golongan Senyawa Penanda Hasil Ket Alkaloid Endapan coklat atau merah jingga Hitam - Flavonoid Merah jingga atau jingga Endapan coklat muda jingga + Terpenoid Perubahan warna Hijau kehitaman + Saponin Terbentuk busa Terbentuk busa + Tanin Hijau unggu atau kehitaman Hijau kehitaman +
Keterangan:
(-)   : Tidak mengandung golongan senyawa  metabolit sekunder (+)  : Mengandung golongan senyawa metabolit sekunder
Bobot simplisia Bobot ekstrak Rendemen Basah        Kering      Serbuk 6,1 kg         5,7 kg      5,7 kg 158,36 g 2,77 %
4 |
Nuralifah, dkk: Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Notika (Archboldiodendron calosercium (Kobuski)) Terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
3.5 Uji  Toksisitas  dengan  metode  Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT)
Uji BSLT ( Brine Shrimp Lethality Test) digunakan sebagai  uji  permulaan  untuk  mengetahui  aktivitas  dari suatu  zat  atau  senyawa  yang  terkandung  dalam  suatu ekstrak  atau  isolat  murni.  Larva Artemia  salina yang digunakan dalam pengujian adalah Artemia salina yang berumur 48 jam disebabkan karena pada larva umur 48 jam  mulut  dan  saluran  pencernaannya  telah  terbentuk sempurna  dan  larva  juga  memiliki  peningkatan ketahanan  tubuh  [7].  DMSO  merupakan  cairan  tak berwarna  yang  memiliki  rumus  molekul  (CH 3 ) 2 SO merupakan pelarut yang dapat melarutkan senyawa polar maupun non polar.
Gambar 1 .   Grafik mortalitas Artemia salina Leach terhadap konsentrasi ekstrak etanol daun notika
Grafik  di  atas  menunjukan  bahwa  peningkatan mortalitas  dari  larva  udang  berbanding  lurus  dengan kenaikan  konsentrasi.  Tingkat  mortalitas  yang  paling tinggi terjadi pada konsentrasi 1000 μg/mL. Mekanisme kematian  larva A.  salina berhubungan  dengan  fungsi senyawa flavonoid dan saponin pada ekstrak daun notika karena  senyawa  flavonoid  dan  saponin  menghambat daya  makan  larva  (antifedant).  Saponin  mengandung glikosida  dalam  tanaman  yang  sifatnya  menyerupai sabun  dan  dapat  larut  dalam  air,  flavonoid  dapat menurunkan aktivitas enzim pencernaan dan penyerapan makanan  [15].  Cara  kerja  senyawa  flavonoid  adalah dengan bertindak sebagai stomach poisoning atau racun perut. Oleh karena itu, bila senyawa- senyawa ini masuk ke  dalam  tubuh  larva,  alat  pencernaannya  akan terganggu.  Senyawa  ini  akan  menghambat  reseptor perasa pada daerah mulut larva. Hal ini mengakibatkan larva  gagal  mendapatkan  stimulus  rasa  sehingga  tidak mampu mengenali makanannya dan akibatnya larva mati kelaparan  sedangkan  senyawa  golongan  saponin  dapat mengikat  oksigen  yang  terdapat  didalam  air  sehingga kadar  oksigen  didalam  air  menurun  dan  larva Artemia
salina Leach  dapat  mengalami  kematian  karena kekurangan oksigen.
Tabel 4. Hasil Pengukuran Nilai LC 50 Sampel Konsentrasi (μg/mL) % mortalitas LC 50 (μg/mL / ppm) Daun Tumbuhan Notika 0 10 100 250 500 750 1000 0 1024,19
Berdasarkan  Tabel 4, ekstrak  daun notika bersifat tidak  toksik terhadap larva udang Artemia salina Leach karena  memiliki  nilai  LC 50 =  1024,19  ppm.  Ekstrak dikatakan bersifat toksik jika LC 50 < 1000 ppm [2]. LC 50 ( Lethal  Concentration 50)  merupakan  konsentrasi  zat yang  menyebabkan  terjadinya  kematian  pada  50% hewan percobaan yaitu larva Artemia salina Leach. Nilai LC 50 menunjukan  daun notika bersifat  tidak  toksik sehingga dapat dimanfaatkan sebagai obat tradisional.

## 4. Kesimpulan
Hasil  uji  karakterisasi  simplisia  pada  daun notika adalah kadar sari larut etanol adalah 50,04%, kadar sari larut  air  adalah  32,01%,  kadar  air  3,99%,  kadar  abu adalah  5,11%.  Senyawa  metabolit  sekunder  yang terdapat dalam daun notika adalah flavonoid, terpenoid, saponin, dan tannin. Uji toksisitas akut terhadap hewan uji Artemia  salina Leach  memiliki  nilai LC 50 sebesar 1024,19 ppm dengan interprestasi tidak toksik

## Daftar Pustaka
1. Agoes G. Teknologi Bahan Alam , Bandung: Penerbit ITB, 2007.
2. Alam  G. Bhrine  Shrimp  Lethality  Test (BST)  sebagai Bioassay  dalam  isolasi  senyawa  bioaktif  dari  Bahan Alam. Majalah Farmasi dan Farmakologi, 2002, 6(2) .
3. Berna  E,  Juheini  A,  Emiyanah.  Toksisitas  Akut  Daun Justicia gendarussa Burm. Makara Sains , 2010, 14(2).
4. Brass LJ. British Papua New Guines: Central Division, Mt Tafa,  Landslip  Regrowths  2400  m,  Also  In  Herbarium, Journal of The Arnlod Arboresum , 1933, 21(2) .
5. Departemen  Kesehatan  RI. Parameter  Standar  Umum Ekstrak  Tumbuhan  Obat ,  Jakarta:  Direktorat  Jendral POM, 2000.
6. Djamal  R. Kimia  Bahan  Alam: Prinsip-Prinsip  Dasar Isolasi dan Identifikasi , Padang: Baiturrahman, 2010.
7. Fatimawali, Adithya Y, Frenly W. Acute Toxicity Test of Etanol  Extract  from  Mangosteen  Pericarp  ( Garcinia mangostana  L .)  Against Artemia  Salina Leach  Larvae
y = 0.0251x + 20.204 R² = 0.94 0 10 20 30 40 50 0 500 1000 1500 % M o rt a li ta s Konsentrasi ( ppm ) Grafik Mortalitas
5 | Nuralifah, dkk: Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Daun Notika (Archboldiodendron calosercium (Kobuski))
Terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Menggunakan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Using Brine Shrimp Lethality Test (BST), PHARMACON, 2013, 2(1).
8. Manoi  F.  Pengaruh  Cara  Pengeringan  Terhadap  Mutu Simplisia Sambiloto, Bul Littro , 2006, 17(1) . 9. Meyer BN, Ferrigni
NR, Putnam JE, Jacobsen
LB, Nichols  DE, McLaughlin  JL.  Brine  shrimp:  a convenient general bioassay for active plant constituents. Planta Med ., 1982, 45(5) ;31-4.
10. Meytij JR, Joke LT. Pengujian Fitokimia dan Toksisitas Ekstrak Etanol Jantung Pisang Kepok ( Musa paradisiaca LINN.)  dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Jurnal Sainsmat , 2015, 4(2) .
11. Risa S, Sapri, Pranamala VA. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Akar KB ( Coptosapelta tomentosa Valeton ex K.
Heyne)  dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT), Jurnal Ilmiah Manuntung , 2016, 2(2) . 12. Sari  LORK.  Pemanfaatan  Obat  Tradisional  Dengan Pertimbangan Manfaat dan Keamanannya . Majalah Ilmu Kefarmasian , 2006, 3(1).
13. Salim  M,  Sulistyaningrum  N,  Isnawati  A,  Sitorus  H, Yahya,  Ni’mah  T.  Karakterisasi  Simplisia  dan  Ekstrak Kulit  Buah  Duku  ( Lansium  domesticum Corr)  Dari
Provinsi Sumatera Selatan dan Jambi, Jurnal Kefarmasian Indonesia , 2016, 6(2) .
14. Utomo AD, Rahayu WS, Dhiani BA. Pengaruh Beberapa Metode  Pengeringan  Terhadap  Kadar  Flavonoid  Total Herba Sambiloto ( Andrographis paniculata ), Pharmacy,
2009, 6(1) .
15. Yunita EA. Pengaruh Ekstrak Daun Teklan ( Eupatorium rioarium ) Terhadap Mortilitas dan Perkembangan Larva Aedes aegypti, Bioma, 2009, 11(1) .
16. Zulharmitta,  Kasypiah  U,  Rivai  H.  Pembuatan  dan Karakterisasi Ekstrak Kering Daun Jambu Biji ( Psidium guajava L.). Jurnal Farmasi Higea , 2012, 4(2) .
17. Harborne JB. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan.  Terjemahan  Padmawinata  K dan Soediro I. Bandung: Penerbit ITB, 1987.