## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i1.4955

## Uji Cemaran Coliform Menggunakan Uji MPN pada Air Sumur Gali, Sumur Bor dan PDAM
Cut Fatimah, Safriana, Sindy Andriani *
Farmasi, S-1 Farmasi, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Indah, Medan, Indonesia Email: 1 cutmah57@gmail.com, 2 safrianaaabdullah@gmail.com, 3,* sindyandriani115@gmail.com. Email Penulis Korespondensi: sindyandriani115@gmail.com (*: coressponding author)
Abstrak −Abstrak  Parameter  fisik,  biologi,  dan  kimiawi  membentuk  standar  kualitas  kesehatan  lingkungan  untuk  media  air  yang digunakan  untuk  kebutuhan  higiene  sanitasi.  Parameter-parameter  tersebut  wajib  diperiksa  secara  berkala  sesuai  dengan  peraturan perundang-undangan yang terdapat dalam Peraturan Menteri Kesehatan Nomor 32 Tahun 2017. Salah satu persyaratan tersebut adalah batas  MPN,  yaitu  jumlah  total  Coliform  maksimal  50  koloni  per  100  mililiter  dan  mensyaratkan  tidak  adanya  Escherichia  coli. Penelitian ini untuk memastikan apakah air PDAM, sumur bor, dan air sumur gali di wilayah Desa Cinta Rakyat Percut Sei Tuan Deli Serdang terkontaminasi oleh Escherichia coli dan indeks MPN Coliform. Seri tabung 3:3:3 yang terdiri dari uji prediksi menggunakan media Lactose  Broth (LB),  uji  konfirmasi  menggunakan  media  Brilliant  Green Lactose  Broth (BGLB),  dan  uji  komplementer menggunakan media Eosin digunakan untuk melakukan uji kontaminasi mikrobiologis menggunakan metode Most Probable Number (MPN) Coliform. Pewarnaan Gram dengan methylene blue agar (EMBA). Enam sampel air dari sumur gali, enam sampel dari sumur bor, dan satu sampel air PDAM dari tempat tinggal pemilik rumah digunakan untuk pengujian. Sampel-sampel tersebut dipilih secara acak. Temuan penelitian menunjukkan bahwa dua sampel air sumur  - ASGD 1 dengan 75 koloni/100 mL dan ASGD 6 dengan 75 koloni/100 mL - melebihi batas total Coliform. Enam sampel yang diambil dari sumur gali positif mengandung koliform tinja. Jumlah koloni untuk ASGD 1 adalah 15/100 mL, ASGD 2 adalah 7/100 mL, ASGD 3 adalah 7/100 mL, ASGD 4 adalah 15/100 mL, ASGD 5  adalah  4/100  mL,  dan  ASGD  6  adalah  20/100  mL.  Dua  sampel  dari  sumur  bor  positif  mengandung  koliform  tinja.  Terdapat  4 koloni/100 mL untuk ASBD 2 dan 7 koloni/100 mL untuk ASBD 4. Sampel air PDAM tidak mengandung koliform non-tinja dan koliform tinja.
Kata Kunci: Air Sumur Gali; Air Sumur Bor; Air PDAM; Most Probable; Bakteri
Abstract− Physical, biological, and chemical parameters form the environmental health quality standards for water  media used for sanitary hygiene needs. These parameters must be checked periodically by the laws and regulations contained in the Minister of Health Regulation Number 32 of 2017. One of these requirements is the MPN limit, which is a maximum total Coliform count of 50 colonies per 100 milliliters and requires the absence of Escherichia coli. This study was to ascertain whether PDAM water, borehole, and dug well water in the Cinta Rakyat Village area of Percut Sei Tuan Deli Serdang were contaminated by Escherichia coli and the MPN Coliform index. A 3:3:3 tube series consisting of a prediction test using Lactose Broth (LB) media, a confirmation test using Brilliant Green Lactose Broth (BGLB) media, and a complementary test using Eosin media was used to conduct a microbiological contamination test using the Most Probable Number (MPN) Coliform method. Gram stain with methylene blue agar (EMBA). Six water samples from dug wells, six from boreholes, and one PDAM water sample from the homeowner's residence were used for testing. The samples were randomly  selected.  The  findings  showed  that  two  well  water  samples  -  ASGD  1  with  75  colonies/100  mL  and  ASGD  6  with  75 colonies/100 mL - exceeded the total Coliform limit. Six samples taken from dug wells were positive for fecal coliform. The colony count for ASGD 1 was 15/100 mL, ASGD 2 was 7/100 mL, ASGD 3 was 7/100 mL, ASGD 4 was 15/100 mL, ASGD 5 was 4/100 mL, and ASGD 6 was 20/100 mL. Two samples from boreholes were positive for fecal coliform. There were 4 colonies/100 mL for ASBD 2 and 7 colonies/100 mL for ASBD 4. PDAM water samples did not contain non-fecal coliforms and fecal coliforms.
Keywords : Dug Well Water; Bore Well Water; PDAM Water; Most Probable; Bacteria

## 1. PENDAHULUAN
Setiap makhluk hidup membutuhkan air, dan akses terhadap air bersih merupakan faktor utama untuk menjaga kesehatan. Air dapat diklasifikasikan sebagai air permukaan atau air tanah, tergantung di mana ia berada. Air permukaan ditemukan di permukaan tanah, sedangkan air tanah ditemukan di bawahnya. Tergantung pada kondisi tanah, sebagian dari curah hujan  yang  jatuh  ke  tanah  akan  meresap  ke  dalam  tanah  dan  sebagian  lagi  akan  menggenang  di  permukaan. Mikroorganisme secara konstan ada di udara, terutama di udara dekat tanah berdebu, dan terbawa oleh air hujan. Begitu sampai di daratan, sisa-sisa makanan (sampah), kotoran hewan, dan kotoran manusia semakin mencemari air (I P. et al., 2020) .
Salah satu sumber daya alam yang sangat penting bagi kelangsungan hidup manusia adalah air. Fungsi air bagi kehidupan manusia tidak dapat digantikan oleh senyawa lain. Populasi yang terus bertambah menyebabkan kebutuhan air yang  semakin  besar.  Akibatnya,  kebutuhan  air  meningkat  seiring  dengan  meningkatnya  taraf  hidup.  Pengeboran  atau penggalian sumur untuk menyediakan air sumur merupakan salah satu cara untuk memenuhi kebutuhan air  (Boimau et al., 2023).
Warga kerap memanfaatkan air sumur bor, air PDAM, dan sumur gali untuk  minum, memasak, mandi, bersih- bersih, buang air besar, dan buang air kecil. Salah satu  media tumbuhnya kuman penyakit menular adalah air. khusus sebagai sarana penularan mikroba penyebab penyakit menular (Rahmawati et al., 2024). Air yang terkontaminasi dapat membawa mikroorganisme patogen dari kotoran ke dalam persediaan makanan dan minuman. Oleh karena itu, penting

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i1.4955
untuk  melakukan  pengolahan  air  bersih  yang  digunakan  untuk  minum  dan  keperluan rumah  tangga  yang  berasal  dari sumber  di  jaringan  distribusi  agar  tidak  bersentuhan  dengan  berbagai  jenis  kotoran  dan  kotoran  yang  mungkin mengandung kuman berbahaya. Salah satu sumber air permukaan murni yang paling populer di masyarakat adalah sumur gali, meskipun ada kemungkinan air (Utami & Miranti, 2020).
Dari perspektif mikrobiologi, bakteri Escherichia coli, yang biasanya ada di usus besar manusia, sering terdeteksi di  sumber  air  minum.  Mayoritas  bakteri Escherichia  coli tidak  berbahaya,  bahkan  mungkin  ada  manfaatnya  jika  ada. Peran  mereka  dalam  usus  besar  manusia  adalah  untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri  berbahaya.  Bakteri  ini  juga membantu pemecahan sisa makanan di usus besar dan membantu proses pencernaan (Amalia et al., 2022).
Kuman Escherichia coli tidak boleh ada di dalam air minum. karena Escherichia coli merupakan bakteri berbahaya yang  dapat  menyebabkan  gangguan  pencernaan  pada  manusia  dan  dapat  mencemari  air  minum.  jika  lebih  tinggi  dari biasanya. Pada anak-anak, muntah atau diare dapat menyebabkan wabah. Penyakit yang dikenal sebagai demam tifoid ini juga dapat disebabkan oleh spesies coliform lainnya, seperti Salmonella typhi (Rinaldi et al., 2022).
Organisasi  Kesehatan  Dunia  (WHO)  menyatakan  bahwa  sumber  air  bersih  dan  layak  minum  untuk  digunakan manusia  harus  memenuhi  standar  fisik,  kimia,  mikrobiologi,  dan  radioaktif  yang  ketat.  Untuk  memastikan  bahwa kesehatan  konsumen  air  tidak  terganggu,  sangat  penting  untuk  memeriksa  kualitas  air.  Secara  mikrobiologis,  bakteri Escherichia coli dan Coliform adalah penanda kualitas air yang terkontaminasi (Anggraeni & Ekawati, 2020). Karena Escherichia coli sering ditemukan di usus manusia dan hewan dan dikeluarkan melalui tinja, bakteri ini digunakan  sebagai  indikasi  kontaminasi  bakteri.  dapat  menyebarkan  sejumlah  penyakit  jika  masuk  ke  dalam  tubuh seseorang.  Satu  miliar  partikel  virus,  yang  dapat  hidup  selama  berminggu-minggu  pada  suhu  di  bawah  10°C,  dapat ditemukan dalam satu gram kotoran. Tinja mengandung empat jenis mikroorganisme berbahaya: bakteri, yang biasanya berupa bakteri Escherichia coli , virus, protozoa, dan cacing (Rinaldi et al., 2022). Pendekatan  MPN  (M ost  Probable  Number )  sering  digunakan  untuk  mengidentifikasi  bakteri Escherichia  coli dalam air. Dalam pengujian kualitas mikrobiologis, kelompok Escherichia coli digunakan sebagai indikasi dalam teknik MPN. Kelompok coliform terdiri dari bakteri Coliform tinja dan non-tinja yang memfermentasi laktosa pada suhu 44°C selama 24 jam, menghasilkan gas dan asam sebagai produk sampingan. Nilai konsentrasi bakteri yang paling mungkin secara statistik ditampilkan oleh teknik MPN (Aminah & Wahyuni, 2018).

## 2. METODE PENELITIAN

## 2.1 Prosedur dan rancangan Penelitian
Penelitian ini dilakukan dengan metode deskriptif dengan cara mendeskripsikan tingkat kontaminasi Coliform di Desa Cinta  Rakyat  Percut  Sei  Tuan,  Deli  Serdang,  Sumatera  Utara,  dengan  menggunakan  teknik  MPN  ( Most  Probable Number ) pada air sumur bor, air sumur gali, dan air PDAM. Sampel air dari sumur bor, sumur gali, dan air PDAM di Desa Cinta Rakyat Percut Sei Tuan, Deli Serdang, menjadi variabel bebas penelitian. Uji Coliform dengan metode MPN digunakan untuk mengukur variabel dependen penelitian (Afrianti Rahayu & Muhammad Hidayat Gumilar, 2017).

## 2.2 Bahan dan Alat yang digunakan Saat Penelitian
Bahan-bahan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain akuades, alkohol 96%, kristal violet, Lugol, media (BGLB), media Lactose Broth (LB), media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA), safranin, dan Brilliant Green Lactose Bile Broth alumunium foil. Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain autoklaf, cawan petri, hotplate, inkubator, jarum ose,  labu  erlenmeyer,  pengaduk  magnetik,  mikroskop,  neraca  analitik,  kaca  objek,  pipet  tetes,  pipet  volume,  tabung Durham, dan tabung reaksi (Alifia & Aji, 2020).

## 2.3 Lokasi Penelitian
Penelitian ini dilakukan pada laboratorium Mikrobiologi Program Studi S1 Farmasi Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Indah Medan

## 2.4 Sterilisasi Alat
Alat yang berasal dari kaca, gelas disterilkan menggunakan oven pada suhu 150ºC selama 1 jam, media Lactose Crort , Briliant Green Lactose Bile Broth dan Eosin Metilen Blue menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.
2.5 Pembuatan Bahan Dan Media
2.5.1 Lactose Broth (LB)
Komposisi  :
Bacto Beef Extrack  3 g Bacto pepton
5 g
Bacto lactose
5 g

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i1.4955
Cara pembuatan : Media Lactose Broth (LB) ditimbang sebanyak 13 gram dan dilarutkan dalam 1 liter akuades kemudian dihomogenisasi dengan magnetic stirrer dan dipanaskan dengan menggunakan hot plate. Sebanyak 10 mL media dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang telah berisi tabung Durham dan disterilisasi menggunakan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit.

## 2.5.2 Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLB)
Komposisi : Bacton pepton 10 g Bacto Lactose 10 g Bacto Oxgall 10 g Bacto Brillian green    0,1433 g
Cara pembuatan : Media Brilliant  Green  Lactose  Broth (BGLB)  ditimbang  sebanyak  40  gram  dimasukkan  ke  dalam  labu  Erlenmeyer, kemudian dilarutkan dengan akuades 1 L, aduk hingga homogen. Kemudian dituangkan ke dalam tabung reaksi  yang telah dimasukkan tabung Durham sebanyak 6 mL, ditutup dengan kapas steril. Disterilisasi dengan autoklaf pada suhu 121°C selama 15 menit, lalu didinginkan.

## 2.5.3 Eosin Metilen Blue Agar (EMBA)
Komposisi : Pepton 10 g Laktosa 10 g Dikalium fosfat  3,5 g Natrium sulfit 2,5 g Basic Fuchsin 0,4 g Agar 15 g Air destilata 1000 mL
Cara pembuatan : Media Eosin Metilen Blue Agar (EMBA) dibuat dengan menimbang sebanyak 37,5 gram EMBA dan dilarutkan dalam 1 liter  akuades  kemudian  dipanaskan  dengan  hotplate.  Medium  disterilisasi  menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121°C selama15 menit.

## 2.5.4 Larutan Kristal Violet 1%
Komposisi : Kristal violet   100 mg Air suling        100 mL
Cara pembuatan :
Bahan kristal violet ditimbang sebanyak 100 mg dilarutkan dalam 100 mL air suling sambil diaduk sehingga semua bahan larut sempurna.

## 2.5.5 Larutan Lugol
Komposisi : Iodium
1 g Kalium Iodida 2 g Air Suling ad 100 mL
Cara pembuatan:
Iodium ditimbang sebanyak 1g lalu ditambahkan 2g kalium iodida dan ditambahkan sedikit demi sedikit air suling sambil diaduk sehingga semua bahan larut sempurna sampai 100 mL.

## 2.5.6 Larutan Safranin
Komposisi : Safranin
100 mg Air Suling 100 Ml
Cara pembuatan  :
Bahan safranin ditimbang sebanyak 100 mg lalu dilarutkan dalam 100 mL air suling sambil diaduk sehingga semua bahan larut sempurna.

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i1.4955

## 2.6 Teknik Pengambilan Sampel
Di  Desa  Cinta  Rakyat  Percut  Sei  Tuan  Deli  Serdang,  enam  sampel  air  dari  sumur  gali,  enam  sampel  dari  sumur bor/pompa,  dan  satu  sampel  dari  air  PDAM  dikumpulkan  dengan  menggunakan  wadah  (botol)  dan  penutup.  Teknik pengambilan sampel ini dikenal  dengan istilah simple random  sampling. Pertama, botol yang akan digunakan sebagai sampel gelas disterilkan selama satu jam pada suhu 150°C di dalam oven. Selanjutnya, setiap sampel air dikumpulkan di tempat di Desa Cinta Rakyat Percut Sei Tuan Deli Serdang (Pangesti’ et al., 2021).

## 2.7 Pengujian Terhadap MPN Coliform
Tiga pendekatan seri tabung reaksi tersedia untuk uji MPN Coliform: metode seri tabung 5:1:1, seri 3:3:3, dan seri tabung 5:5:5. Tiga tabung ganda (varian 3:3:3) digunakan untuk melakukan penelitian ini (Hidayah et al., 2022). Proses uji MPN diselesaikan dalam tahap-tahap berikut ini:

## 2.7.1 Uji Praduga (Presumtive test)
Media Lactose Broth (LB) digunakan dalam uji dugaan untuk mengidentifikasi total bakteri Coliform dalam bahan uji. Prosedur berikut ini digunakan untuk melakukan tes ini:
Rakit tabung reaksi dengan tabung Durham, tiga tabung reaksi dengan sepuluh mililiter media LB  dengan konsentrasi ganda, dan enam tabung reaksi dengan sepuluh mililiter media LB dengan konsentrasi tunggal. Setelah mengocok sampel air  ±  25  kali,  10  mL  masing-masing  sampel  ditambahkan  ke  dalam  tabung  LB  dengan  dua  konsentrasi. Satu  mililiter sampel  ditambahkan  ke  masing-masing  dari  tiga  tabung  LB  konsentrasi  tunggal,  dan  satu  mililiter  sampel  tambahan ditambahkan ke tiga tabung LB konsentrasi tunggal yang tersisa. Selama 24 hingga 48 jam, semua tabung LB diinkubasi pada suhu 35 hingga 37°C. Selain itu, hasil yang baik dicatat dalam tabung Durham dalam medium jika dihasilkan gas (Fahimatul Ula et al., 2021).

## 2.7.2 Uji Penegasan (Confirmative test)
Untuk membedakan antara koliform tinja dan non-tinja, dilakukan uji konfirmasi. Coliform yang ditemukan dalam tinja dikultur pada suhu 44°C, sedangkan coliform yang ditemukan dalam non-tinja dikultur pada suhu 37°C. Untuk melakukan tes  ini,  siapkan  beberapa  tabung  dengan  masing-masing  10  mL  media  BGLB.  Untuk  mendeteksi  koliform  non-tinja, sampel yang menunjukkan temuan positif pada media LB (produksi gas dalam tabung Durham) diinokulasikan ke dalam dua seri media BGLB dan diinkubasi selama 24 hingga 48 jam. Seri lainnya diinkubasi pada suhu 44°C untuk mendeteksi koliform tinja. Jumlah tabung BGLB yang positif untuk pembentukan gas kemudian dicatat. Selanjutnya, periksa temuan positif jika terbentuk gas dalam tabung Durham di media BGLB (Handayani et al., 2022).

## 2.7.3 Uji Lengkap (Complete Test)
Hasil yang positif gas pada hasil dari tabung BGLB pada suhu 44,5°C dilanjutkan ke uji lengkap dengan cara: Setelah  mengambil  satu  loop  dari  setiap  sel  dalam  tabung  BGLB  dan  menginokulasikannya  dalam  pola  zig-zag  pada media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA), kultur dipertahankan pada suhu 44°C selama 24 jam. Hasil positif terlihat, dibuktikan dengan adanya koloni yang berwarna hijau metalik mengkilap. Escherichia coli dapat  ditumbuhkan dalam media  selektif  ini.  Karena  EMBA  mengandung  laktosa,  setiap  bakteri Escherichia  coli yang  ada  dalam  kultur  akan menunjukkan warna koloni tertentu-hijau dengan kilau logam-karena asam yang dihasilkan selama fermentasi laktosa. Sebaliknya, koliform non-tinja lainnya yang mampu tumbuh memiliki koloni berwarna cokelat, yang merupakan indikasi Enterobacter aerogenes, atau koloni yang tidak berwarna (Iqbal et al., 2021). Melakukan pewarnaan Gram: sediaan apusan dibuat dengan menggunakan satu siklus koloni positif dengan Eosin Methylene Blue Agar, didistribusikan sekitar 1 cm di atas kaca objek, difiksasi pada nyala api Bunsen, dan diberi 2 tetes kristal violet. Warna ungu terbentuk setelah 1 menit inkubasi, setelah itu sampel dibilas dengan air. mengalir. Setelah menambahkan larutan Lugol dan menunggu tiga menit, cuci dengan alkohol untuk menghilangkan warna yang tersisa. Setelah itu, setetes larutan safranin berkembang, menjadi merah  tua,  dan  dibiarkan  mengering  selama  15  detik.  Setelah  menambahkan  minyak  emersi,  diperiksa  di  bawah mikroskop dengan perbesaran 10x dan 100x. Adanya koloni berbentuk batang menandakan adanya bakteri Escherichia coli yang positif (N.W & Sumarya, 2021).

## 2.7.4 Uji Indol
Diinokulasikan 1 sengkelit biakan ke dalam media Trypton Broth (TB), kemudian diinkubasi pada suhu 37ºC selama 18- 24  jam.  Sebanyak  0,2-0,3  ml  pereaksi  indol  ditambahkan  ke  dalam  tabung.  Warna  merah  tua  pada  permukaan  media menunjukkan reaksi indol positif Escherichia coli (Wenas et al., 2020).

## 2.7.5 Uji Metil Merah
Diinokulasikan 1 sengkelit biakan ke dalam media Methyl Red-Voges Proskauer (MR-VP), kemudian diinkubasi pada suhu 37ºC selama 48 jam. Dengan menggunakan pipet, 5 ml biakan dipindahkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 5 tetes metil merah, dan dikocok sampai homogen. Warna kuning menunjukkan reaksi negatif contoh bakteri : Klebsiella

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i1.4955
dan Enterobacter dan  jika  warna  merah  menunjukkan  reaksi  positif,  contoh  bakteri  yaitu: Salmonell a, Shigella , Escherichia (Nurafifah et al., 2021).

## 2.7.6 Uji Voges Proskauer
Diinokulasikan 1 sengkelit biakan ke dalam media Methyl Red-Voges Proskauer (MR-VP), kemudian diinkubasi pada suhu 37ºC selama 48 jam. ditambahkan 0,5 ml larutan α-Naftol dan 0,2 ml larutan kalium hidroksida, kemudian dikocok sampai homogeny dan didiamkan selama 2-4 jam. warna merah  tua menunjukkan reaksi positif, contoh bakteri  Klebsiella sp, Enterobacter sp dan Serratia sp (R et al., 2021).

## 2.7.7 Uji Triple Sugar Iron Agar (TSIA)
Menurut  (Hardiana  et  al.,  2023),  Koloni  dugaan  salmonella  dipindahkan  ke  perbenihan  miring  TSIA  dengan  cara menggores pada bagian miring dan menusuk pada bagian tegak perbenihan, kemudian diinkubasi pada suhu 37ºC selama 24-48 jam. Perubahan yang terjadi diamati.
Pada bagian tegak Salmonella akan:
1. Memfermentasi glukosa, warna media berubah dari ungu menjadi kuning.
2. Tidak memfermentasi sakarosa, warna media tetap ungu.
3. Membentuk H2S, warna media berubah dari ungu menjadi hitam.
4. Pada bagian miring, Salmonella akan :
5. Memfermentasi laktosa atau sakarosa, warna media menjadi kuning.
6. Tidak memfermentasi laktosa dan sakarosa, warna media tetap merah atau tidak berubah.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada penelitian ini Untuk mengetahui kualitas air sebagai kebutuhan minum dan rumah tangga, dilakukan pemeriksaan bakteri Coliform secara mikrobiologi pada enam sampel air dari sumur gali, enam sampel dari sumur bor, dan satu sampel dari air PDAM yang terdapat di rumah-rumah penduduk di wilayah Desa Cinta Rakyat Percut Sei Tuan Deli Serdang. Air  yang  layak  minum  dan  berkualitas  harus  memenuhi  standar  yang  ditetapkan  dalam  Peraturan  Menteri  Kesehatan Republik Indonesia Nomor 32 Tahun 2017. Analisis bakteri Coliform menggunakan uji MPN Coliform merupakan salah satu faktor yang digunakan untuk menilai kualitas air minum.

## 3.1 Pengujian Jumlah Bakteri
Teknik MPN ( Most Probable quantity ) digunakan untuk menghitung jumlah bakteri Coliform pada sampel air dari sumur bor,  sumur  gali,  dan  satu  sampel  air PDAM  yang  ditemukan  di  pemukiman  penduduk  di  wilayah Desa  Cinta  Rakyat Percut Sei Tuan Deli Serdang. Teknik MPN adalah pendekatan kuantitatif yang menghitung mikroorganisme Escherichia coli dan Coliform . Dengan mengencerkan sampel, pendekatan ini berusaha untuk menurunkan konsentrasi mikroba dari sampel yang diperiksa, sehingga memudahkan pengamatan bakteri tertentu dan memungkinkan perhitungan yang tepat. Adapun sampel air minum yang diteliti dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel  1. Sampel air minum yang diteliti No. Sampel Kode Sampel 1 Air sumur gali dari dusun 5 ASGD 1 2 Air sumur gali dari dusun 7 ASGD 2 3 Air sumur gali dari dusun 8 ASGD 3 4 Air sumur gali dari dusun 9 ASGD 4 5 Air sumur gali dari dusun 10 ASGD 5 6 Air sumur gali dari dusun 11 ASGD 6 7 Air sumur bor dari dusun 5 ASBD 1 8 Air sumur bor dari dusun 7 ASBD 2 9 Air sumur bor dari dusun 8 ASBD 3 10 Air sumur bor dari dusun 9 ASBD 4 11 Air sumur bor dari dusun 10 ASBD 5 12 Air sumur bor dari dusun 11 ASBD 6 13 Air PDAM Air PDAM

## 3.2 Uji Pendugaan (Presumitive Test)
Dengan  menggunakan media  Lactose  Broth (LB)  dalam  tabung  Durham,  uji  penduga  berupaya  memastikan  apakah sampel  terkontaminasi  bakteri  Coliform,  yang  dapat  memfermentasi  laktosa  dan  menghasilkan  gas.  Seri  tabung  3:3:3

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i1.4955
digunakan dalam penyelidikan ini untuk melakukan uji MPN Coliform (3 tabung berisi 10 mL sampel, 3 tabung berisi 1 mL sampel, dan 3 tabung berisi 0,1 mL sampel) serta berdasarkan sampel air yang diuji ASGD 1, ASGD 2, ASGD 3, ASGD 4. ASGD 5. ASGD 6, ASBD 1, ASBD 2. ASBD 3, ASBD 4, ASBD 5, ASBD 6, menunjukkan bahwa seluruh sampel tersebut terdapat bakteri dan Air PDAM tidak terdapat Coliform . Adapun hasil uji pendugaan ( Presumitive test ) dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil perhitungan bakteri Coliform pada uji pendugaan.
Kode sampel air Tabung yang positif Tabung positif Indeks MPN per 100 mL 10 mL 1 mL 0,1 mL
Tb.
1 Tb. 2 Tb. 3 Tb. 1 Tb. 2 Tb. 3 Tb. 1 Tb. 2 Tb. 3 ASGD 1 + + + -
+ - + - - 3-1-1 75 ASGD 2 + + - + + - - - - 2-2-0 21 ASGD 3 + + + - - - + - - 3-0-1 39 ASGD 4 + + + - + - - - - 3-1-0 43 ASGD 5 + + - - + - - - - 2-1-0 15 ASGD 6 + + +
- + - + - - 3-1-1 75 ASBD 1 + + - + - - - - - 2-1-0 15 ASBD 2 + + - + - - + - - 2-1-1 20 ASBD 3 + + - + - - - - - 2-1-0 15 ASBD 4 + + - + + - - - - 2-2-0 21 ASBD 5 + + - + - - - - - 2-1-0 15 ASBD 6 + + - - - - - - - 2-0-0 9 Air PDAM - - - - - - - - - 0-0-0 <3 Keterangan : Tb =   Tabung:
+  =  Terbentuk gas gas pada tabung Durham/ kekeruhan;
─  =  Tidak terbentuk gas pada tabung gas/kekeruhan
<  =  Kurang dari
Informasi tersebut mengindikasikan bahwa kualitas air di rumah-rumah warga di Desa Cinta Rakyat Percut Sei Tuan  Deli  Serdang  belum  memenuhi  standar  yang  ditetapkan  oleh  Peraturan  Menteri  Kesehatan  Republik  Indonesia Nomor 32 Tahun 2017. Peraturan tersebut menetapkan bahwa harus ada 50 koloni Coliform dan 0 koloni Escherichia coli per 100 mililiter. Air yang berasal dari sumur bor dan sumur gali di rumah-rumah warga di Desa Cinta Rakyat Percut Sei Tuan, Deli Serdang, perlu diwaspadai dan tidak aman untuk dikonsumsi secara langsung tanpa pengolahan terlebih dahulu,  seperti  dengan  penyaringan  yang  diikuti  dengan  pemanasan.  Sebaliknya,  air  PDAM  yang  diuji  memenuhi persyaratan mikrobiologis untuk air minum.

## 3.3    Uji Penegasan (Confirmative Test)
Menemukan sampel yang positif mengandung bakteri Coliform tinja ( Escherichia coli ) dan non-tinja pada uji pendugaan adalah tujuan dari uji konfirmasi. Uji konfirmasi, yang melibatkan pengambilan satu atau dua tabung dari tabung reaksi positif, menginokulasikannya ke dalam tabung dengan 10 mL media BGLB, dan kemudian menginkubasi dalam dua seri, dilakukan sebagai respons terhadap temuan positif uji prediksi pada media LB. Untuk memeriksa keberadaan Coliform non-tinja, seri  pertama diinkubasi pada suhu 37ºC,  sedangkan seri kedua diinkubasi pada suhu 44ºC untuk memeriksa keberadaan Coliform tinja. Adapun hasil uji penegasan( Confirmative test ) dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel  3. Hasil perhitungan uji penegasan Coliform fekal
Kode sampel air Tabung yang positif Tabung positif Indeks MPN g/mL 10 mL 1 mL 0,1 mL Tb. 1 Tb.2 Tb. 3 Tb. 1 Tb. 2 Tb. 3 Tb. 1 Tb. 2 Tb. 3 ASGD 1 + + - + - - - - - 2-1-0 15 ASGD 2 + - - + - - - - - 1-1-0 7 ASGD 3 + - - - - - + - - 1-0-1 7 ASGD 4 + + - + - - - - - 2-1-0 15 ASGD 5 + - - - - - - - - 1-0-0 4 ASGD 6 + + - + - - + - - 2-1-1 20

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i1.4955
ASBD 1 - - - - - - - - - 0-0-0 <3 ASBD 2 + - - + - - + - - 1-0-0 4 ASBD 3 - - - - - - - - - 0-0-0 <3 ASBD 4 + - - + - - - - - 1-1-0 7 ASBD 5 - - - - - - - - - 0-0-0 <3 ASBD 6 - - - - - - - - - 0-0-0 <3 Keterangan: Tb = Tabung:
+  = Terbentuk gas gas pada tabung Durham/ kekeruhan;
─  = Tidak terbentuk gas pada tabung gas/kekeruhan
<   =  Kurang dari
Enam  sampel  air  sumur  gali  dan  dua  sampel  air  sumur  bor  yang  diuji  untuk  konfirmasi  fecal coliform tidak memenuhi persyaratan yang ditetapkan dalam Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor 32 Tahun 2017 untuk total coliform , yaitu 50 koloni per 100 mL, dan Escherichia coli , yaitu 0 koloni per 100 mL, dalam uji konfirmasi fecal coliform . Hal ini terjadi akibat jarak septic tank dan sumber air yang terlalu dekat.

## 3.4 Uji Pemastian (Completed test)
Uji  ini  dilakukan  untuk  mempertegas  adanyan coliform fekal  yang  dilakukan  dengan  cara  iinkubasi  pada  suhu  44°C dengan bakteri  tinja manusia atau hewan berdarah panas yaitu bakteri Escherichia coli. Uji ini dilakukan dengan cara menanamkan sampel dari uji penegasan yang positif terhadap coliform fekal dilakukan penggoresan pada media Eosin Methylen Blue Agar (EMBA). kemudian diinkubasi pada suhu 37ºC selama 24 jam. Sampel yang positif pada media ini adalah Escherichia  coli terlihat  adanya  ciri  koloni  yang  tumbuh  pada  media  berwarna  hijau  metalik.  Koloni  bakteri Escherichia coli tumbuh berwarna merah kehijauan dengan kilab metalik atau koloni berwarna merah muda dengan lendir untuk  kelompok  Coliform  lainnya.  Hal  ini  dikarenakan Escherichia  coli merupakan  bakteri  yang  dapat  melakukan fermentasi. Bakteri yang menfermentasikan dengan lambat akan menghasilkan koloni berwarna merah muda dalam media agar  EMB.  Media  EMB  adalah  selektif  diferensial  untuk  mendeteksi  keberadaan  bakteri Escherichia  coli dan mikroorganisme lainnya.

## 3.5 Uji Biokimia

## 3.5.1 Uji Indol
Inkubasi satu kultur yang dinyatakan positif mengandung koliform tinja dalam media Trypton Broth (TB) selama delapan belas hingga dua puluh empat jam pada suhu 37ºC. Setelah menambahkan antara 0,2 dan 0,3 mililiter reagen indol ke dalam tabung reaksi, permukaannya menjadi  merah tua, yang menandakan bahwa dua dari  setiap enam  sampel sumur yang dibor dan enam sampel sumur yang digali positif mengandung Escherichia coli .

## 3.5.2 Uji Metil Merah
Media Methyl Red-Voges Proskauer (MR-VP) diinfeksikan dengan satu siklus kultur, kemudian diinkubasi selama 48 jam  pada  suhu  37ºC.  Lima  mililiter  kultur  dipipet  ke  dalam  tabung  reaksi,  lima  tetes  metil  merah  ditambahkan,  dan campuran tersebut diaduk untuk memastikan homogenitas. Enam sampel ASGD negatif, sedangkan lima sampel sumur gali memiliki hasil positif, seperti yang terlihat dari perkembangan warna merah pada tabung. Selain itu, dua sampel dari sumur bor memberikan hasil yang positif.

## 3.5.3 Uji Voges Proskauer
Media Methyl Red-Voges Proskauer (MR-VP) diinokulasikan dengan satu siklus kultur, kemudian diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37ºC. Campurkan 0,5 mililiter larutan α-Naftol dan 0,2 mililiter larutan kalium hidroksida, aduk rata, dan diamkan selama dua hingga empat jam. Tidak ada sampel yang diperiksa yang berubah warna, yang menunjukkan bahwa sampel tersebut positif mengandung Escherichia coli .

## 3.5.4 Uji Voges Proskauer
Benih  miring  TSIA diinokulasi  dengan kultur dosis tunggal dengan cara menusuk bagian tegak benih  dan menggores bagian  miringnya,  lalu  diinkubasi  pada  suhu  37ºC  selama  24  hingga  48  jam.  Keberadaan  bakteri Escherichia  coli ditunjukkan dengan adanya perubahan warna pada bagian tegak dan miring pada sampel ASGD 1 dan ASBD 2, serta pada sampel ASGD 2 dan ASBD 3, ASGD 4, ASGD 5, ASGD 6, dan ASGD 1 dan ASBD 2.

## 4. KESIMPULAN
Hasil  Pengujian  pada  Desa  Deli  membuktikan  bahwa  pada  airnya  terdapa  mengadung  senyawa coliform . . ASGD  1 mengandung  09  koloni/100  mililiter  koliform  non-tinja,  ASGD  2  mengandung  15  koloni/100  mililiter,  ASGD  3 mengandung 14 koloni/100 mililiter, ASGD 4 mengandung 15 koloni/100 mililiter, ASGD 5 mengandung 09 koloni/100

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i1.4955
mililiter, ASBD 1 mengandung 09 koloni/100 mililiter, dan ASBD 6 mengandung 23 koloni per 100 mililiter koliform non-tinja. Sembilan koloni coliform non-fecal terdapat pada ASBD 1, empat koloni terdapat pada ASBD 2, lima belas koloni terdapat pada ASBD 3, tujuh koloni terdapat pada ASBD 4, dan tujuh koloni terdapat pada ASBD 5 mengandung 9 koloni/100 ml coliform non-fecal, sedangkan ASBD 6 mengandung 4 koloni/100 ml jenis yang sama. Namun demikian, air PDAM bebas dari koliform tinja dan non-tinja serta Air sumur gali dan sumur bor yang berada di Desa Cinta Rakyat Percut Sei Tuan Deli Serdang yang diuji seluruhnya.  Sampel ASGD 1 mengandung coliform fekal 15 koloni/100 mL, ASGD 2 mengandung Coliform fekal 7 koloni/100 mL, ASGD 3 mengandung coliform fekal 7 koloni/100 mL, ASGD 4 mengandung coliform fekal  15  koloni/100  mL,  ASGD  5  mengandung coliform fekal  4  koloni/100  mL,  ASGD  6 mengandung coliform fekal 20 koloni/100 mL. Sampel ASBD 1 mengandung coliform  fekal <3 koloni/100 mL, ASBD 2  mengandung coliform fekal  4  koloni/100  mL,  ASBD  3  mengandung  coliform    fekal  <3  koloni/100  mL,  ASBD  4 mengandung coliform fekal  7  koloni/100  mL,  ASBD  5  mengandung  coliform    fekal  <3  koloni/100  mL,  ASBD  6 mengandung coliform fekal <3 koloni/100 mL. Air sumur gali dan sumur bor yang berada di Desa Percut seui tuan Deli Serdang seluruhnya tidak memenuhi persyaratan air untuk kebutuhan rumah tangga dan air minum menurut Permenkes RI Nomor 32 tahun 2017 yaitu total Coliform maksimum 50 koloni/100 mL dan Escherichia coli 0 koloni/100 mL.

## REFERENCES
Afrianti  Rahayu,  S.,  &  Muhammad  Hidayat  Gumilar,  M.  (2017).  Uji  Cemaran  Air  Minum  Masyarakat  Sekitar  Margahayu  Raya Bandung Dengan Identifikasi Bakteri Escherichia coli. Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology , 4 (2), 50. https://doi.org/10.15416/ijpst.v4i2.13112
Alifia, E. S., & Aji, O. R. (2020). Analisis Keberadaan Coliform dan Escherichia coli pada Es Batu dari Jajanan Minuman di Pasar Tengah Bandar Lampung. Quagga: Jurnal Pendidikan Dan Biologi , 13 (1), 74. https://doi.org/10.25134/quagga.v13i1.3698
Amalia, H., Ramadhan, P., Siti, T., Karimuna, R., & Pratiwi, H. A. (2022). Identifikasi Bakteri Escherichia Coli dan Gambaran Kondisi Fisik Sumur Gali di Sekitar Bekas Tempat Pembuangan Akhir ( TPA ) Sampah Punggolaka Kota Kendari. Kesehatan Masyarakat Celebes , 3 (2), 56–69.
Aminah, S., & Wahyuni, S. (2018). Hubungan Konstruksi Sumur Dan Jarak Sumber Pencemaran Terhadap Total Coliform Air Suur Gali Di Dusun 3A Desa Karang Anyar Kecamatan Jati Agung Kabupaten Lampung Selatan Relationship Construction Well And Distance  Source  Pollution  Against  Total  Coliform  W. Jurnal  Analisis  Kesehatan , 7 (1),  1–6.  ejurnal.poltekkes- tjk.ac.id/index.php/JANALISKES/article/view/921
Anggraeni,  P.,  &  Ekawati,  E.  R.  (2020).  DETEKSI  Escherichia  coli  DAN  Angka  Paling  Mungkin  PADA  AIR  SUMUR  DEKAT JAMBAN DIDAERAH WONOAYU, SIDOARJO. Jurnal SainHealth , 4 (1), 16. https://doi.org/10.51804/jsh.v4i1.710.16-19
Boimau, Y., Maubana, W. M., & Cintya Adelia, K. A. (2023). Pemodelan Anomali Aliran Sungai Bawah Tanah Menggunakan Data Self-Potential. Jurnal Teori Dan Aplikasi Fisika , 11 (01), 39–46. https://doi.org/10.23960/jtaf.v11i1.3080 Fahimatul Ula, Misbakhul Munir, & Hanik Faizah. (2021). Uji Cemaran Mikroba Pada Air Yang Digunakan Untuk Mencuci Peralatan Makan Oleh Pedagang Kaki Lima di Sekitar UIN Sunan Ampel Surabaya. Biotropic : The Journal of Tropical Biology , 5 (2), 101–115. https://doi.org/10.29080/biotropic.2021.5.2.101-115
Handayani, K., Pertiwi, T., & Zahara, A. (2022). G-07 Uji Kontaminasi Cemaran Bakteri Escherichia coli dan Salmonella sp . pada Produk Pasteurized Crab Meat . 46–50.
Hardiana, H., Dewi Safrida, Y., & Zarwinda, I. (2023). Uji Cemaran Bakteri Coliform Pada Air Minum Isi Ulang Dari Depot Air Di Kelurahan Lamgarot Aceh Besar. Jurnal Sains Dan Kesehatan Darussalam , 3 (1), 44–52. https://doi.org/10.56690/jskd.v3i1.77 Hidayah,  H.,  Mursal,  I.  L.  P.,  Susaningsih,  H.  A.,  &  Amal,  S.  (2022).  ANALISIS  CEMARAN  BAKTERI  Coliform  DAN IDENTIFIKASI Escherichia coli PADA ES BATU BALOK DI KOTA KARAWANG. Pharma Xplore Jurnal Ilmiah Farmasi , 7 (1), 54–68. https://doi.org/10.36805/farmasi.v7i1.2335 I P., S., I P., A. B., & N. K., J. (2020). UJI CEMARAN COLIFORM DAN Escherichia coli PADA AIR SUMUR GALI DISEKITAR TEMPAT  PEMOTONGAN  TERNAK  BANJAR  KEDEN  DESA  KETEWEL  KECAMATAN  SUKAWATI  KABUPATEN GIANYAR. Jurnal Widya Biologi , 11 (01), 20–29. https://doi.org/10.32795/widyabiologi.v11i01.567 Iqbal, M., Kadaria, U., Asbanu, G. C., Teknik, J., Fakultas, L., & Universitas, T. (2021). Pengolahan Air Sumur Gali Menggunakan Kombinasi Sistem . 1–10.
N.W, K., & Sumarya, I. M. (2021). Total Coliform Dan Escheria Coli Air Sumur Bor Dan Sumur Gali Di Kabupaten Gianyar. Jurnal Widya Biologi , 12 (02), 90–97. https://doi.org/10.32795/widyabiologi.v12i02.2142
Nurafifah, D. A., Widyastuti, D. A., & Minarti, I. B. (2021). Identifikasi Escherichia Coli dari Air Sumur Gali Daerah Tlogosari Wetan Kota Semarang. Prosiding Seminar Nasional Sains Dan Entrepreneurshiip VII Tahun 2021 , 91.
http://conference.upgris.ac.id/index.php/snse/article/view/2082
Pangesti’, I., Nugroho, Y. E., & Nurwahidah, A. T. (2021). Identifikasi Cemaran Bakteri Escherichia coli pada air sumur. Jurnal Pharmaqueous , 3 (2), 6–11.
R, L. R., Adlina, S., & Yuliana, A. (2021). Isolasi Dan Identifikasi Bakteri Penghasil Protease Ekstraseluler Dari Limbah Cai r Tahu Putih. Jurnal  Kesehatan  Bakti  Tunas  Husada:  Jurnal  Ilmu-Ilmu  Keperawatan,  Analis  Kesehatan  Dan  Farmasi , 21 (2),  187. https://doi.org/10.36465/jkbth.v21i2.748
Rahmawati,  A.  N.,  Utami,  D.  W.,  Saryanti,  D.,  &  Kurniaaji,  B.  (2024). Analisis  Most  Probable  Number  (  MPN  )  Coliform  dan Escherichia coli Pada Air Sumur Bor di Pemukiman Warga Kelurahan Pucangsawit Surakarta . 23 (2), 147–153.
Rinaldi, Hardiana, & Zakaria, N. (2022). Uji Cemaran Coliform Pada Air Minum Isi Ulang (Amiu) Yang Dijual Di Desa Peuniti Kota Banda Aceh. Jurnal Sains Dan Kesehatan Darussalam , 2 (2), 36–42. https://doi.org/10.56690/jskd.v2i2.66

## Journal of Pharmaceutical and Health Research

## ISSN 2721-0715 (media online)
DOI 10.47065/jharma.v5i1.4955
Utami, F. T., & Miranti, M. (2020). Metode Most Probable Number ( MPN ) Sebagai Dasar Uji Kualitas Air Sungai Rengganis dan Pantai timur Pangandaran Dari Cemaran Coliform dan Escherichia coli. Jurnal Kesehatan Bakti Tunas Husada : Jurnal Ilmu
Ilmu Keperawatan, Analis Kesehatan Dan Farmasi , 20 (1), 21–30. https://ejurnal.stikes-
bth.ac.id/index.php/P3M_JKBTH/article/download/550/482
Wenas, D. M., Suardi, J., & Wahidin, W. (2020). Uji Cemaran Mikroba pada Sediaan Lipstik Cair. JUSTE (Journal of Science and Technology) , 1 (1), 49–60. https://doi.org/10.51135/justevol1issue1page49-60