## PENGARUH SUHU DAN LAMA WAKTU KONTAK OZONE TERHADAP DAYA TETAS TELUR IKAN LELE DUMBO  ( Clarias gariepinus )

## Everd Hengga
Program Studi Akuakutur Stiper Santo Thomas Aquinas Jayapura Jl. Akuatan No.01Sentani 99352 everdhengga@stipersta.ac.id

## Abstract
This study is entitled Effect of Temperature and ozone Contact time on The Eggs Hatching Rate of African Catfish(Clarias gariepinus) This study aims to determine the level of temperature and ozone  contact  time  that  produces  ozone  concentration  levels  highest  percentage  of  eggs hatching. Catfish  (Clarias  gariepinus)  is  one  of  the  ten  main  aquaculture  commodities  in Indonesia, which is currently experiencing a decline in hatching eggs. The experimental design was  in  the  research  factorial  with  a  Completely  Randomized  Design(CRD),  consisting  of  two factors  temperature  (25 0 C  and  30 0 C  )  and  contact  time  ozone  (2,  4,  6  dan  8  minuts)  with  3 replications.  The  data  were  analyzed  using  anova  two  factore. The  result  showed  that combination  of  temperature  of  25 0 C  with  8  minuts  contact  time  indicatet  that  average  level  of the highest concentrations of ozone in water of 0,083 mgO 3 / l was highly significant (p<0,01) but this  treatment  it  was  significattly  (p<0,05)  lowered  hatchability  of  eggs  46,67  %.  As  for temperature of 30 0 C that combination treatment with ozone contact time of 8 minutes showed the concetrations ozone in the water level of 0,075 mgO 3 / l was highly significant ( p < 0,01 ) highest eggs hatching (85,55 % ). The use of ozone in cobination with certain temperature and ozone  contact  time  is  only  effective  for  the  hatchability  of  eggs  a  temparature  of  30 0 C  with ozone contact time of 8 minutes.
Keywords: Temperature, contact time ozone, Africant Catfish, hatchabilithy

## 1.   PENDAHULUAN
Potensi  perikanan  budidaya  secara  nasional diperkirakan seluas 15,59 juta  hektar   yang terdiri dari  potensi  budidaya  air  tawar  2,23  juta  ha,  air payau 1,22 juta ha, dan air laut 12,14 juta hektar. Pemanfaatannya  selama  ini    untuk  kegiatan budidaya air tawar baru sekitar 10,1 persen, pada budidaya air payau 40 persen dan untuk budidaya laut  0,01  persen  (Kementrian  Kelautan  dan perikanan  2012). Disektor  budidaya  air  tawar, salah  satu  komoditas  yang  mempunyai  nilai ekonomis  adalah  ikan  Lele  dumbo  yang  telah ditetapkan oleh Kementrian Kelautan dan Perikanan  (KKP)    sebagai  salah  satu  dari  10 komoditas utama perikanan budidaya. KKP dalam angka  (2012)  menunjukkan  bahwa  produksi  lele setiap  tahun  terus  mengalami  peningkatan
produksi  dimulai  dari  tahun  2008(114,371ton), tahun  2009  (144,755  ton),  tahun  2010  (242,811 ton),tahun  2011  (  337,577  ton)  tahun  2012 (441,217  ton)  dan  terakhir  tahun  2013  (280,513 ton / perkiraan sementara ) dengan meningkatnya jumah  produksi  akan  ikan  lele,  mengindikasikan bahwa permintaan terhadap lele ukuran konsumsi semakin  meningkat  maka  perlu  pula  ditunjang ketersediaan  benih  lele  dumbo  yang  berkualitas baik dalam jumlah yang cukup  [1].
Problem  pemijahan  induk  lele  dumbo  secara alami terdapat pada telur yang sudah dibuahi dan telah  ada  dalam  bak  penetasan  sering  terganggu oleh  mikroorganisme,  sehingga  daya  tetasnya rendah . Saat telur dilepaskan oleh induknya, pada saat  itu  juga  dilepaskan  lendir  dan  kotoran- kotoran.  yang  merupakan  media  yang  baik  untuk
berkembangnya  mikroorganisme  pengganggu, oleh  karena  itu  masa  inkubasi  telur  adalah  masa kritis untuk perkembangan telur.
Untuk  itu  desinfeksi  telur  harus  segera dilakukan  untuk  menghambat  perkembangan mikroorganisme pengganggu.  Bermacam-macam bahan  kimia  dan  fisika  telah  digunakan  sebagai desinfektan  pada  media  air  penetasan  telur seperti  ozon (O ₃ ), klorin (Cl ₃ ), penyinaran  dengan ultra  violet,  penggunaan  suhu  (pemanasan)  dan lain-lain.  Dari  bermacam-  macam  zat  kimia  dan fisika  tersebut  dan  sehubungan  issue  global penggunaan  bahan  desinfektan  yang  ramah lingkungan,  ozon  menjadi  salah  satu  pilihan  saat ini,  dan  ozon  termasuk  desinfektan  yang  ramah lingkungan [2].
Saat ini ozon dapat  diproduksi ditempat sesuai kebutuhan  dengan  menggunakan  mesin  ozon komersial  TR-YCA  Tiens  Fruit  and  vegetable cleaner,  volume  ozon  150  mg/jam  dengan memakai  tenaga  listrik  15  watt  .  Proses  yang relatif baru adalah mencampur gas ozon ke dalam air,  dikenal  dengan  nama  ozonisasi  [3].  Dalam pemanfaatan ozonisasi di hatchery telah dilakukan serangkaian  penelitian  antara  lain  terhadap  telur ikan  kod,  turbot  dan  halibut  atlantik  [4]. Dan dilaporkan bahwa konsentrasi ozon yang tinggi ( 4 mg  O ₃ /  l  selama  1  menit  atau  lebih  tinggi), ditemukan  hasil  persentase  penetasan  lebih rendah  dibandingkan  dengan  konsentrasi  ozon  2 mgO ₃ /l selama  2 menit  atau  kurang menunjukkan penetasan  normal  [4].  Sementara  itu  hasil penelitian Diko [5] memperlihatkan pengaruh suhu terhadap penetasan telur ikan lele dumbo dimana pada perlakuan suhu (30°C) dihasilkan daya tetas sebesar 76,75% .
Penelitian lainnya yang dilakukan Jiang dkk [6] menunjukan  efek  ozonisasi  terhadap  persentase tetasan embrio udang Kuruma, Penaues ( Marsupenaues) japonicus , berbeda-beda tergantung  pada  lama  waktu  kontak    ozon  pada telur.  Dari  semua  hasil  penelitian  yang  dilaporkan belum  ada  penelitian  yang  mengkombinasikan antara suhu dan lama waktu kontak ozon sebagai desinfektan terhadap daya tetas telur.
Tolak  ukur  keberhasilan  usaha  pembenihan ikan  adalah  tercapainya  daya  tetas  telur  dan kelansungan  hidup  larva  yang  tinggi.  Untuk mencapai  hal  tersebut  terdapat  beberapa  faktor yang  perlu  mendapat  perhatian  antara  lain desinfeksi  telur  ikan  pasca  pemijahan.  Dalam penanganan  desinfeksi  telur  ikan  lele  dumbo menggunakan ozonisasi dihadapkan pada
masalah  tingkat  konsentrasi  (CT=  Konsentrasi  & Lama  waktu  kontak),  pada  media  air  ozonisasi telur  akibat    adanya  perbedaan  suhu  dan  lama waktu  kontak  ozonisasi.  Dalam  kondisi  ini  suhu mempengaruhi metabolisme embrio dalam penggunaan  energi  untuk  beradaptasi  pada kualitas  air  media  ozonisasi  yang  pada  akhirnya akan berpengaruh terhadap persentase penetasan telur.
Lama waktu kontak ozon menurut Corman dkk [7]  bahwa  ozonisasi  dengan  nilai  konsentrasi  (C) yang lebih rendah dan nilai waktu kontak ozon (T) yang  lebih  lama  tidak  bersifat  toksik  pada  embrio P.japanicas .  Dalam  tingkat  konsentrasi  (CT)  ini, diharapkan dapat berpenetrasi ke dalam
membrane sel mikroorganisme pathogen sehingga
menurunkan kemampuan mikroorganisme  (inaktif)  pada  telur  ikan  yang pada  akhirnya  akan  berpengaruh  pula  terhadap persentase daya tetas telur ikan lele dumbo.
Dari  uraian  diatas,  diketahui  bahwa  ozonisasi pada  suhu  dan  lama  waktu  kontak  berpengaruh terhadap persentase daya tetas telur  lele dumbo. Namun demikian informasi tentang tingkat konsentrasi  ozon  sebagai  desinfektan  yang menunjang  daya tetas telur belum ditentukan.
Sehubungan dengan hal tersebut perlu dilakukan  penelitian  tentang  pengaruh  suhu  dan lama  waktu  kontak  ozon  terhadap  persentase daya tetas telur ikan lele dumbo.

## 2. METODE PENELITIAN
Metode  yang  digunakan  adalah  metode penelitian  eksperimen  dengan  desain  penelitian menggunakan  pola  faktorial  dengan  Rancangan Acak Lengkap. yang terdiri atas 2 faktor perlakuan yaitu  factor  A    adalah  suhu  dan  factor  B  lama waktu  kontak  ozon  dan  setiap  perlakuan mempunyai 3 ulangan.(gambar 3)
Y 3 B 3 W 2 B 2 X 1 B 1 Y 1 B 1 Z 1 A 1 Z 2 A 2
W 1 B 1 X 2 A 2 X 3 A 3 W 3 B 3 Z 3 A 3 Y 2 A 2 Y 1 A 1 X 3 B 3 W 2 A 2 X 1 A 1 Y 3 A 3 X 2 B 2
W 3 B 3 Z 1 B 1 Z 2 B 2 Y 2 B 2 Z 3 B 3 W 1 A 1 Keterangan : A,B
: Perlakuan Suhu
W,X,Y dan Z  : Perlakuan Lama Kontak
1, 2 dan 3      : Ulangan
Gambar  3.  Tata  letak  media  inkubasi  telur  hasil perlakuan  suhu  dari  lama  kontak ozon yang Berbeda .
Adapun  faktor  suhu  mengikuti  suhu  perairan ikan-ikan  tropis  yang  dapat  tumbuh  dengan  baik pada suhu antara 25-32 ⁰ C [8],  sedangkan factor waktu kontak ozon berdasarkan penelitian Corman dkk [7]   yang menyatakan protokol untuk ozonisasi  dalam  akuakultur  harus  mengikuti  nilai- nilai  Konsentrasi  (C)  dan  waktu  kontak  ozon  (T) yang  efektif  untuk  desinfeksi  organisme  budidaya sehingga perlakuan dalam penelitian ini terdiri dari dua  factor    yakni  2  fakor  suhu  dan  4  faktor  lama waktu kontak (T) ozon dan  3 ulangan.
Media air yang digunakan untuk penelitian ini adalah  media  air  tawar    .  Sebelum  digunakan  air ditampung  dalam  bak  penampungan    selama  24 jam. Untuk mendapatkan media air ozonisasi telur diperoleh  dari  ozon  prosesor  TR-YCA  Tiens  Fruit and Vegetable Cleaner (gambar 4) .

## Gambar 4. Ozon prosesor TR-YCA
Alat  Ozon  prosesor  ini  dapat  menghasilkan volume  gas  ozon  150  mg/jam  ±  20%  atau  30 mg/jam  atau    untuk  waktu  2,4,6  dan  8  menit dihasilkan volume gas ozon 1 ,2, 3 dan 4 mgO ₃ . Wadah  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  Bak Fiber glas 1  buah ukuran 1 x 2 meter untuk  pemijahan  dan  papan  diberi  ijuk  tempat penempelan  telur  sebanyak  2  buah  ukuran  0,5 meter. (gambar 5)

## Gambar 5. Bak Fiber berisi induk siap memija
Bak fiber  glas volme 50 L berjumlah 1 buah, Untuk  penyimpanan  air  tawar  selama  24  jam  dan
baskom  plasik  volume  5  liter  sebanyak  26  buah untuk  penampungan  sementara  telur  uji.Stoples kaca  volume  5  L  berjumlah  6  buah  untuk perlakuan  ozonisasi  telur.Akuarium  kecil  ukuran 0,15 m²  berjumlah 26 buah dimana 24 buah untuk inkubasi  telur  setelah  diozonisasi  dan  2  buah untuk  pembanding/kontrol  yang  masing-masing dilengkapi dengan selang aerasi (gambar 6).
Gambar 6. Akarium mini Ukuran 0,15 m 2
Gelas ukur volume 250 ml sebanyak 8 buah untuk pengamatan habisnya kuning telur. Pelaksanaan Ozonisasi Telur :Memasukan selang bandul  ozon  kedalam  stoples  yang  telah  berisi telur dan ujung selang berikutnya dihubungkan ke mesin  ozon  prosesor.mengaktifkan  mesin  ozon prosesor.    Menekan  tombol  waktu  kontak  (T) ozone  disesuaikan  dengan  tahapan  perlakuan waktu kontak ozon 2,,4,6 dan 8 menit dengan tiga kali  ulangan  ozonisasi.Memindahkan  telur  hasil ozonisasi kedalam akuarium inkubasi telur.
Melakukan observsasi telur inkubasi, pengukuran  sisa  konsentrasi  ozon  (CT),  pH  dan DO  air  ozonisasi,  pengambilan  sampel  telur  dan air untuk pengukuran total bakteri. Melakukan monitoring lama waktu penetasan.  monitoring  kualitas  air,  prosentase penetasan  dan  kelangsungan  hidup  larva  serta lamanya  waktu  habis  kuning  telur.  Data  hasil penelitian dianalisis dengan menggunakan analisis  ragam  ( anova  two  factor )  untuk  melihat apakah  perlakuan  menunjukan  pengaruh  nyata (P<0,05)  atau  pengaruh  sangat  nyata  (P<0,01).
Apabila  terdapat  pengaruh  maka  dilanjutkan dengan  uji  W-Tukey.  Sedangkan  untuk  melihat hubungan  diantara  perlakuan  dilakukan  Uji regresi.  Adapun  alat  bantu  untuk  menganalisis data  dimaksud    digunakan  paket  program  SPSS versi 17.0.

## 3.  HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Tingkat Konsentrasi Ozon pada media air
Hasil  dari  Tingkat  Kosentrasi  Ozon  pada  air ozonisasi  telur  ikan  lele  dumbo  untuk  perlakuan suhu  25 0 C  dan  30 0 C  dengan  lama  kontak  ozon yang berbeda ditunjukan pada tabel 1.
Tabel  1.  Tingkat  Kosentrasi  Ozon  pada  air ozonisasi  telur  ikan  lele  dumbo  untuk perlakuan suhu 25 0 C dan 30 0 C dengan lama kontak ozon yang berbeda.
Pengaruh  suhu  25 ⁰ C    dengan  lama  waktu kontak  ozon  2  menit  menghasilkan  tingkat konsentrasi  ozon  berkisar  0,016  ±  0,002  mgO ₃ /l  . selanjutnya  setelah  penaikan  lama  waktu  kontak ozon  4,  6,  dan  8  menit  berkisar  0,036  ±  0,04 sampai  0,083  ±  0,012  mgO ₃ /l,  sementara pengaruh  suhu  30 ⁰ C  tingkat  konsentrasi  ozon dengan  lama  waktu  kontak  ozon  2  menit menghasilkan  tingkat  konsentrasi  ozon  berkisar 0,012 ± 0,002 mgO ₃ /l selanjunya setelah penaikan lama waktu kontak ozon 4, 6, dan 8 menit berkisar 0,031±0,004  sampai  0,075  ±  0,009  mgO ₃ /l  . Waktu  paruh  ozon  di  dalam  air  akan  berkurang seiring  dengan  meningkatnya  suhu  air . Hasil analisis ragam (tabel  2).
Tabel  2.  Analisa  Ragam  Tingkat  Kosentrasi ozonisasi  Telur  Lele  Kombo  (Clarians
Gariepinus)
Menunjukkan  bahwa  perlakuan  suhu  dan lama waktu kontak ozon yang berbeda memberikan pengaruh yang sangat nyata (P<0,01) terhadap tingkat konsentrasi ozon dalam air.  disamping  itu  interaksi  antara  perlakuan  suhu dan  lama  waktu  kontak  ozon  memberikan pengaruh  yang  sangat  nyata  (p<0,01)  terhadap tingkat  konsentrasi  ozon  dalam  air  ozonisasi  telur lele  dumbo.  Selanjutnya  hasil  uji  lanjut    W-Tukey (Tabel 3.)
Tabel  3.  Uji  lanjut  W-Tukey  lama  kontak  Ozon
saat  ozonisasi  telur  Lele  Dumbo  (C. Gariepinus) Menunjukkan perbedaan nyata antar perlakuan  lama  waktu  kontak  ozon  2  menit dengan 4, 6, dan 8 menit. begitu pula lama waktu kontak  ozon  4  menit  dengan  2,  6,  8  menit. selanjutnya  waktu kontak ozon 6 menit dengan 2, 4, 8 menit dan lama waktu kontak 8 menit dengan 2,  4,  6  menit. Pada  Perlakuan  kombinasi  suhu 25 ⁰ C  dan  30 ⁰ C  dengan  Lama  waktu  kontak  ozon 2,  4,  6,  dan  8  menit  terlihat  bahwa  rata  –rata tingkat  konsentrasi  ozon  dalam  air  tertinggi dihasilkan  lama  waktu  kontak  ozon  8  menit  yakni 0,083  mgO ₃ /l    dan  0,075  mgO ₃ /L.  Terendah terdapat  pada  lama  waktu  kontak  ozon  2  menit yakni  0,016  mgO ₃ /l    dan  0,012  mgO ₃ /.  Hasil
penelitian  ini  menunjukan  bahwa  makin  lama waktu  kontak  ozon  dengan  air  dan  makin  rendah suhu  air  maka  konsentrasi  ozon  dalam  air  dapat meningkat  secara  sangat  nyata  dan  optimum pada  lama  waktu  kontak  8  menit  dalam  air  saat ozonisasi  telur  lele  dumbo.  Rendahnya  tingkat konsentrasi ozon pada suhu 25 ⁰ C dan 30 ⁰ C pada lama waktu kontak ozon 2 menit menggambarkan bahwa  konsentrasi  ozon  yang  berdifusi  kedalam air  penetasan  telur  masih  berada  pada  tekanan parsial gas ozon yang rendah dengan medium air penetasan  telur  sehingga  konsentrasi  ozon  yang didapatkan  juga  minimal.  selanjutnya  pada penaikan  lama  waktu  kontak  ozon  4,  6,  dan  8 menit  konsentrasi  ozon  berada  pada  tekanan parsial  yang  meningkat  dalam  medium  air penetasan  telur  sehingga  konsentrasi  ozon  yang didapatkan optimum.

## 3.2. Daya Tetas Telur.
Tingkat  kosentrasi  ozon  pada  air  ozonisasi telur  ikan  lele  dumbo  untuk  perlakuan  suhu  25 0 C dan 30 0 C dengan lama kontak ozon yang berbeda ditunjukan pada tabel 4.
Tabel  4.  Tingkat  kosentrasi  ozon  pada  air ozonisasi  telur  ikan  lele  dumbo  untuk perlakuan suhu 25 0 C dan 30 0 C dengan lama kontak ozon yang berbeda.
Pengaruh  suhu  25 ⁰ C    dengan  lama  waktu kontak  ozon  2  menit  menghasilkan  daya  tetas telur berkisar 56,67 ± 6,67 % . selanjutnya setelah penaikan  lama  waktu  kontak  ozon  4,  6,  dan  8 menit berkisar 43,33 ± 12,02 sampai 51,11 ± 5,09 %,  sementara  pengaruh  suhu  30 ⁰ C  persentase daya tetas telur dengan lama waktu kontak ozon 2 menit  menghasilkan  daya  tetas  telur  berkisar 81,11  ±  13,47  %  selanjutnya  setelah  penaikan lama waktu kontak ozon 4, 6, dan 8 menit berkisar 83,33  ±  10,28  sampai  85,55  ±  10,71  %  . Selanjutnya dengan menggunakan  regeresi linear untuk menganalisis pola hubungan antara pengaruh  suhu  dan  lama  waktu  kontak  ozon terhadap tingkat konsentrasi ozon dalam air.
Tabel  5.  Hasil  Analisa  Regresi  Suhu  dan  Lama Kontak Ozon Terhadap Kosentrasi Ozon Dalam air Ozonisasi Telu Lele Dumbo.
Ozonisasi telur berpola linear dengan persamaan  (1)  Y  =  0,011x  –  0,007  (  R²  =  0,997) dan  Persamaan  (2)  Y  =  0,010x  –  0,001  (R²  = 0,995  ).  Berdasarkan  Kedua  persamaan  tersebut terdapat  korelasi  yang  kuat  dimana  konsentrasi ozon  dalam  air  sebesar  99,5  dan  99,7  % dipengaruh  oleh  suhu  dan  lama  waktu  kontak ozon    sedangkan  sisanya  0,3  dan  0,5  % dipengaruhi  oleh  faktor  lain.  hubungan  antara suhu  dan  lama  waktu  kontak  ozon  terhadap konsentrasi  ozon  dalam  air  memperlihatkan semakin  rendah  suhu  air  dan  semakin  dinaikan waktu  kontak  ozon  maka  konsentrasi  ozon  dalam air  akan  meningkat  secara  optimum  dalam  air ozonisasi.  Proses  difusi  gas  kedalam  air  pada umumnya akan meningkat kelarutannya saat suhu rendah dan akan menurun kelarutannya saat suhu tinggi.Hal  ini  menggambarkan  tingkat  kelarutan ozon  dalam  air  ditentukan  pula  oleh  kondisi  suhu lingkungan  air  itu  sendiri  dimana  kondisi  suhu lingkungan  air  akan  merespon  dengan  menaikan atau  menurunkan  kosentrasi  ozon.  Menurut pendapat Widodo [9]  efektivitas ozon dipengaruhi oleh  beberapa  faktor  antara  lain  suhu,  makin rendah  suhu  makin  tinggi  kelarutan  ozon  dalam bahan  tersebut.  Selain  itu  dalam  komersial aplikasi  budidaya  adalah  sangat  sulit  untuk mempertahankan  konsentrasi  sisa  ozon  diatas  1 mgO ₃ /L.  Perlakuan  Lama  waktu  kontak  ozon      8 menit  pada  tingkat  suhu  25 ⁰ C  dan  30 ⁰ C berpengaruh  sangat  nyata  terhadap  tingkat konsentrasi  ozon  dalam  air.  Hasil  ini  menunjukan kombinasi  suhu  dan  lama  waktu  kontak  ozon dapat  meningkatkan  konsentrasi  ozon  secara sangat  nyata  dan  optimum  dalam  air  saat ozonisasi telur lele dumbo ( C. gariepinus ).

## 4.  KESIMPULAN
Perlakuan  Lama  waktu  kontak  ozon      8  menit pada  tingkat  suhu  25 ⁰ C  dan  30 ⁰ C  berpengaruh sangat  nyata  terhadap  tingkat    konsentrasi  ozon dalam  air.  Hasil  ini  menunjukan  kombinasi  suhu dan  lama waktu kontak ozon dapat meningkatkan konsentrasi  ozon  secara  sangat  nyata  dan
optimum dalam air saat ozonisasi telur lele dumbo (C. gariepinus).
5.  DAFTAR PUSTAKA.
[1] Kementrian  Kelautan  dan  Perikanan  R.I.  2014 Statistik-Kelautan-dan-Perikanan-2012 Jakarta.
[2] Ernawati  dan  Setiawan,2008,  Penggunaan Spektrofotometer HP 8452 A untuk menentukan  kadar  ozon  produksi  ozonizer sedang dan kecil,PTAPB –Batan, Jogjakarta
[3] Khadre  MA,  Yousef  AE,  Kim  JG.  2001. Microbiological  aspects  of  ozone  applications in food: a review. Journal of Food Science . Vol. 66 (9) :1242 – 1252.
[4] Grotmol, Paulsenb, Totlanda (2003), Hatchability  of  eggs  from  Atlantic  cod,turbot and  Atlantic  halibut  after  disinfection  with ozonated seawater in Elsevier Aquaculture 245 -254
[5] Diko  A,  2011.  Pengaruh  suhu  terhadap penetasan  telur  ikan  lele  dumbo(  Clarias gariepinus ) IKIP PGRI Semarang
[6] Jiang,  G.  Yun,  L.,  Yang,  D.,  Lu,  Y.,  2001.  The toxicity  of  ozonated  seawater  to  the  Penaeus chinensis  and  Paralichthys  olivaceus.Mar.  Sci. 25 (3), 11– 13
[7] Corman, Sellars, Morehead, (2004), Toxicity of ozone generated from different combinations of ozone concentration (C) and exposure time (T): a  comparison  of  the  relative  effect  of  C  and  T on  hatch  rates  of  Penaeus  (Marsupenaeus) japonicus  embryos  -  CSIRO  Marine  Researc, Australia
[8] Boyd, C.E. 1982. Water quality management in pond fish culture.  Elsevier  Scientific Published. Amsterdam. 318p 1987.
[9]  Widodo  T,H.R  (  1986).  Penggunaan  Ozon Dalam  Air  Minum  .  PT.Golden  Missisipi, Jakarta 107 hal.