Uji Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Daun Keji Beling ( Strobilanthes crispus BI.), Batang dan Bunga Jarak Tintir ( Jatropha multifida L.) terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Rini Hamsidi * , Wahyuni, Asrul Sani,
Jurusan Farmasi, Fakultas Farmasi Universitas Halu Oleo Kendari 93232

## Abstract
Research on the acute toxicity test of methanol extracts of keji beling leaves ( Strobilanthes crispus BI.), stems and flowers of jarak tintir ( Jatropha multifida L.) against Artemia salina Leach larvae using Brine Shrimp Lethality Test method (BSLT) had been carried out. The purpose of this study was to determine the potency of acute toxicity of methanol extract which were shown by LC 50 value. In this research, the sample methanol were obtained from a previous research. Acute toxicity tests was conducted to determine the LC 50 values of plant extracts according to the method of Brine Shrimp Lethality Test . Results of the research showed methanol extract of keji beling leaves were not toxic with LC 50 value 4427,95 μg/mL, meanwhile stems and flowers of jarak tintir had low toxicity with LC 50 225,09 and 253,26 μg/mL, respectively. The value of LC 50 influenced by the content of secondary metabolites in plants.
Keywords : Acute toxicity test, Brine Shrimp Lethality Test , LC 50 , J. multifida, S. crispus

## 1. Pendahuluan
Pertambahan jumlah penduduk dunia yang sangat pesat  terutama  di  negara-negara  berkembang  dapat menimbulkan masalah  kesehatan.  Oleh  karena  itu kebutuhan  akan  suatu  obat  yang  dapat  mencegah  atau mengobati  dari  penyakit  tertentu  mutlak diperlukan keberadaannya [1].
Masyarakat  Indonesia  telah  lama  mengenal  dan menggunakan  obat-obatan  alami  atau  yang  dikenal dengan  obat  tradisional.  Dari  sekitar  30.000  spesies tumbuhan di Indonesia, 940 diantaranya adalah tanaman obat [2]. Obat tradisional merupakan pilihan pengobatan utama  yang  kini  makin  diminati,  terlebih  lagi  dengan kesadaran untuk kembali ke alam. Obat tradisional lebih mudah diterima oleh masyarakat karena telah digunakan secara  turun-temurun,  murah  dan  mudah  diperoleh. Namun  hal  ini tidak  berarti  tanaman  obat  atau  obat tradisional  tidak  memiliki  efek  samping  yang merugikan, bila penggunaannya kurang tepat.
Saat ini terdapat berbagai macam obat tradisional yang  berasal  dari  tanaman  dan  telah  banyak  diteliti kandungan kimia dan khasiatnya. Namun masih banyak
* KBK Sains Farmasi, Fakultas Farmasi UHO Email : rini.hamsidi@yahoo.com
tanaman  yang  belum  diketahui  kadar  toksisitasnya sehingga perlu diteliti lebih lanjut [3].
Beberapa  tanaman  obat  yang  sering  digunakan masyarakat untuk menyembuhkan penyakit diantaranya keji  beling  ( Strobilanthes  crispus BI.)  dan  jarak  tintir ( Jatropha  multifida L.).  Tanaman-tanaman  tersebut digunakan  langsung  maupun  diolah  secara  tradisional untuk mengobati berbagai penyakit diantaranya sebagai pengobatan untuk peluruh batu ginjal, diabetes melitus, maag, laksatif,  penurun  panas,  anti  inflamasi  dan menghambat  pendarahan.  Penelitian  Jefrianto  (2014), ekstrak metanol daun tanaman keji beling ( Strobilanthes crispus )  menunjukkan  adanya  respon  hambat  terhadap pertumbuhan Salmonella typhi YCTC interpretasi sedang    dengan  nilai    hambat  sebesar  5  mm. Ekstrak metanol  batang  dan  bunga  jarak  tintir  ( Jatropha multifida L)  menunjukkan adanya aktifitas antioksidan sebesar 55.83 µg/mL dan 59.41 µg/mL [5].
Pada  penelitian  ini  akan  dilakukan  uji  toksisitas akut  ekstrak  metanol  daun  keji  beling  ( Strobilanthes crispus BI.),  batang  dan  bunga  jarak  tintir  ( Jatropha multifida L.) terhadap Artemia salina L. dengan metode
13 | Hamsidi, dkk :Uji Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Daun Keji Beling (Strobilanthes crispus BI.), Batang dan Bunga Jarak Tintir (Jatropha multifida L.) terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Brine Shrimp lethality Test (BSLT). Metode ini sering digunakan sebagai skrining awal terhadap senyawa aktif yang  terkandung  dalam  ekstrak  tanaman  karena  relatif murah,  cepat  dan  hasilnya  dapat  dipercaya  dan merupakan  salah  satu  uji  praklinik  dari  serangkaian penelitian  berkesinambungan  terkait  efek  farmakologi, farmakokinetik,  zat  khasiat,  penetapan  mutu  dan keamanan  bahan  baku  ekstrak  yang  digunakan  dalam penunjang kesehatan.
Berdasarkan uraian di atas, maka perlu dilakukan penelitian lebih lanjut tentang tentang uji ketoksikan akut ekstrak metanol daun keji beling ( Strobilanthes crispus BI.), batang dan bunga jarak tintir ( Jatropha multifida L.) terhadap Artemia salina L dengan metode Brine Shrimp lethality Test (BSLT).

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1 Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan antara  lain gelas  kimia ( Pyrex @ ),  gelas  ukur  ( Pyrex @ ),  Blender  ( Phillips @ ), mikropipet  ( Rainin  pipet  lite  SL-100 ® dan  SL-1000 ® ), hot plate  (Schott  Instruments ® ), Vortex ( Maxi  Mix  II Barnstead Thermolyne Type 37600 Mixer ® ), botol vial, kertas saring ( Watmann @ ), neraca analitik (Precisa XB 4200  C ® ,  Precisa  XT  220  A ® ),  aerator,  desikator ( Pyrex @ ). Bahan-bahan yang digunakan adalah ekstrak metanol  daun  keji  beling  ( Strobilanthes  crispus BI.), bunga dan batang jarak tintir ( Jatropha multifida L.), air mineral, metanol teknis ( Merck @ ), DMSO (Fermipan ® ), telur Artemia  salina L.  ( Great  Salt  Lake @ ),  tepung jagung, dan NaCl ( Merck )

## 2.2 Uji Toksisitas dengan Metode BSLT
Dibuat  larutan  stok  (induk)  sebesar  1  %  yaitu sebanyak 500 mg  sampel  dilarutkan  dalam  50  mL metanol p.a. Dari  Larutan stok 10.000  µg/mL diambil volume tertentu untuk membuat seri konsentrasi sampel sebesar  100    µg/mL,  200  µg/mL,  500  µg/mL,  1000 µg/mL  dan  2000  µg/mL.  Vial  yang  berisi  larutan  uji dikeringkan sampai semua pelarutnya menguap selama beberapa hari pada suhu kamar dalam desikator sehingga tidak  berbau  pelarut dan  dapat  ditunjukkan  dengan proses  pengeringan  menghasilkan  penimbangan  yang konstan dengan bobot selanjutnya ditambahkan DMSO 1 % 1-3 tetes (50-150 µL) termasuk vial kontrol untuk melarutkan sampel kembali jika diperlukan [5], [6]. Vial yang telah diisi sampel ditambahkan air laut buatan 3 mL dan divortex  sekitar  30  menit [7],  kemudian  10  ekor larva udang Artemia salina Leach yang berumur 48 jam dimasukan ke dalam vial. Satu tetes tepung jagung (0,6 mg/mL)  dimasukkan  ke  dalam  setiap  vial  sebagai makanan Artemia lalu  ditambahkan  air  laut  buatan sampai tanda batas. Kontrol negatif (blanko) dilakukan dengan cara kerja yang sama tanpa memasukan sampel ekstrak  ke  dalam  vial.  Vial-vial  tersebut  diletakkan  di bawah penerangan. Jumlah Artemia salina Leach yang mati dalam tiap vial selama 24 jam dihitung dengan cara manual.  Kriteria  standar  untuk  menilai  kematian  larva udang  adalah  bila  larva  udang  tidak  menunjukkan pergerakan  selama  beberapa  detik  observasi. Pengamatan  dilakukan  dengan  mengamati  pergerakan larva  di  dalam  vial  dengan  bantuan  lup  disertai penyinaran cahaya. Jumlah nauplius yang mati dihitung dengan  mengurangkan  jumlah  total nauplius pada  tiap konsentrasi dengan jumlah nauplius yang  masih  hidup [8].
3. Hasil dan Pembahasan
Tabel 1. Hasil perhitungan nilai LC 50 masing-masing tanaman No Nama Tanaman Bagian Tanaman Konsentrasi (µg/mL) % Mortalitas LC 50 (µg/mL) 1 Keji Beling ( Strobilanthes crispus BI.) Daun
0 500 1000 2000 5000 10000 0 % 3 % 13 % 33 % 63 % 93 % 4427,95 2 Jarak tintir ( Jatropha multifida L.) Batang 0 100 200 500 1000 2000
0 %
6,7 % 26,7 % 56,7 % 76,7 % 96,7 % 253,29 Bunga 0 100 200 500
1000 2000 0 % 10 % 30 % 53 % 76,7 % 96,7 % 225,09
14 | Hamsidi, dkk :Uji Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Daun Keji Beling (Strobilanthes crispus BI.), Batang dan Bunga Jarak Tintir (Jatropha multifida L.) terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Toksisitas  ditentukan  dengan  melihat  harga  LC 50 yang dihitung  berdasarkan  analisis  probit.    Ekstrak dikatakan toksisk jika memiliki nilai LC 50 < 1000 μg/ml (ppm).  LC 50 ( Lethal  Concentration 50)  merupakan konsentrasi zat yang menyebabkan terjadinya kematian pada 50% hewan uji. Parameter yang ditunjukkan untuk mengetahui adanya aktivitas biologi pada suatu senyawa terhadap  hewan  uji  ialah  dengan  menghitung  jumlah larva  yang  mati  karena  pengaruh  pemberian  senyawa dengan dosis atau konsentrasi yang telah ditentukan.
Ekstrak  metanol  daun  keji  beling menunjukkan adanya  respon  hambat  terhadap  pertumbuhan Salmonella  typhi YCTC dengan  nilai    hambat  sedang sebesar  5  mm [9].  Ekstrak  metanol  batang  jarak  tintir ( Jatropha  multifida L. menunjukkan  adanya  aktivitas antioksidan  sebesar  55.83  µg/mL sedangkan  pada ekstrak  metanol  bunga  jarak  tintir  ( Jatropha  multifida L.) menunjukkan  adanya  aktivitas  antioksidan  sebesar 59.41 µg/mL [4].
Pengujian  toksisitas  dimulai  dengan  mencari  satu konsentrasi terkecil yang sudah dapat membunuh hampir semua hewan uji. Untuk menentukan nilai tersebut maka dilakukan  trial  atau  uji  orientasi  dari  3  sampel  yang digunakan.  Pengujiannya  yaitu  dengan  menggunakan konsentrasi 5000 µg/mL, 2000 µg/mL, dan 1000 µg/mL yang  diambil  dari  larutan  induk  10.000  µg/mL  dibuat masing-masing  dalam  10  mL.  Dari  hasil  uji  orientasi selanjutnya diambil satu konsentrasi terkecil yang sudah dapat  membunuh  hampir  semua  larva Artemia  salina . Konsentrasi tersebut dibuat dalam 5 variasi konsentrasi serta kontrol masing-masing dengan 3 kali replikasi yang digunakan untuk menentukan nilai LC 50 . Rata-rata  kematian  larva  untuk  masing-masing kelompok perlakuan diperoleh dengan menghitung total jumlah kematian setiap kelompok perlakuan sebanyak 3 replikasi  dan  kemudian  membaginya  dengan  jumlah replikasi.  Kemudian  dihitung  persen  kematian  pada masing-masing konsentrasi perlakuan dan kontrol.
Tabel  1  menunjukkan  semain  tinggi  konsentrasi ekstrak maka semakin tinggi pula persen mortalitas larva Artemia  salina L. Suatu  ekstrak  dikatakan  toksik berdasarkan metode BSLT jika harga LC 50 < 1000 µg/ mL.  Sampel  tanaman  yang  bersifat  toksik  menurut metode BSLT adalah bagian batang dan bunga tanaman jarak  tintir,  sementara  daun  keji  beling  bersifat  tidak toksik  menurut  metode  BSLT.  Sampel  yang menunjukkan nilai LC 50 terkecil pada tabel diatas adalah bunga  dan  batang  jarak  tintir  ( Jatropha multifida L.) dengan  nilai  LC 50 sebesar  225,09  dan  253,29  µg/mL, artinya bunga dan batang jarak tintir ( Jatropha multifida
L.) memiliki potensi toksik terhadap Artemia salina L., sedangkan sampel yang menunjukkan nilai LC 50 terbesar adalah  daun  keji  beling (Strobilanthes  crispus BI .)
dengan nilai LC 50 sebesar  4427,95 µg/mL, artinya daun keji  beling (Strobilanthes  crispus BI .) tidak  memiliki potensi toksik bagi Artemia salina L. Pada  penelitian  ini  didapatkan  bahwa  ekstrak metanol  bunga  dan  batang  jarak tintir  mempunyai potensi  toksisitas  akut.  Hal  tersebut  berkaitan  dengan senyawa metabolit sekunder yang terdapat dalam bunga jarak tintir yaitu flavonoid. Flavonoid bertindak sebagai antioksidan yang mencegah terjadinya fragmentasi DNA oksigen  reaktif  seperti  radikal  hidroksil  yang  memicu kerusakan  sel  yang  mengawali  timbulnya  sel  kanker. Senyawa  golongan  flavonoid  juga  dapat  mempercepat proses apoptosis sel  yang  mengakibatkan  kematian sel [10, 11, 12].
Selain flavonoid, senyawa metabolit sekunder yang terkandung dalam jarak tintir antara lain adalah alkaloid. Alkaloid  dapat  bertindak  sebagai stomach  poisoning atau racun perut. Oleh karena itu, bila senyawa-senyawa ini masuk ke dalam tubuh larva maka alat pencernaannya akan  terganggu.  Selain  itu,  senyawa  ini menghambat reseptor  perasa  pada  daerah  mulut  larva.  Hal  ini mengakibatkan  larva  gagal  mendapatkan  stimulus  rasa sehingga tidak mampu mengenali makanannya [13].
Beberapa  tanaman  yang  memiliki  kandungan bioaktif akan bersifat toksik pada dosis tinggi sehingga dapat  dikatakan  bahwa  tanaman  yang  memiliki kandungan  bioaktif  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  untuk  mengetahui  potensinya.  Suatu  ekstrak tanaman bersifat toksik menurut harga LC 50 dengan LC 50 <1000  μg/ml,  maka  tanaman  tersebut  dapat dikembangkan  sebagai  kandidat  obat  antikanker. Namun, bila tidak bersifat toksik maka tanaman tersebut dapat  diteliti  kembali  untuk  mengetahui  khasiatnya dengan menggunakan hewan coba yang lebih besar dari larva Artemia salina L. seperti mencit dan tikus secara in vivo untuk pengembangan obat herbal terstandar (OHT) maupun fitofarmaka.

## 4. Kesimpulan
Ekstrak metanol daun  keji  beling (Strobilanthes crispus BI .) tidak tidak  menunjukkan  adanya  potensi toksisitas akut terhadap Artemia salina L. dengan nilai LC 50 sebesar 4427,95 µg/mL.  Sedangkan  ekstrak metanol  bunga  dan  batang  jarak  tintir  ( Jatropha multifida L.)  memiliki  potensi  toksisitas  akut  terhadap Artemia salina
L. dengan nilai LC 50 sebesar 225,086 dan 253,29µg/mL (interpretasi low toxic )

## Daftar Pustaka
1. Ruslin  dan  Sahidin I. Identifikasi  dan  Determinasi Tanaman  Obat  Tradisional  Masyarakat  Sulawesi Tenggara  pada  Arboretum  Prof.  Mahmud  Hamundu
15 | Hamsidi, dkk :Uji Toksisitas Akut Ekstrak Metanol Daun Keji Beling (Strobilanthes crispus BI.), Batang dan Bunga Jarak Tintir (Jatropha multifida L.) terhadap Larva Artemia salina Leach dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Universitas Haluoleo. Majalah Farmasi Indonesia. 2008,
19(2).
2. Supriadi. Penyakit Layu Bakteri (R. solanacearum) pada Tumbuhan Obat dan Strategi Penanggulangannya . Balai Penelitian  Tanaman  Rempah  dan  Obat  Bogor: Bogor, 2000.
3. Ramdhani RN. Uji  Toksisitas terhadap Artemia  salina Leach dan Toksisitas Akut Komponen Bioaktif Pandanus conoideusvar Lam. sebagai Kandidat Antikanker, Skripsi, Universitas Sebelas Maret Surakarta. 2009.
4. Abda F. Skrining Fitokimia dan Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Metanol Beberapa Tanaman Obat Tradisional di Sulawesi  Tenggara . S kripsi. Universitas Halu  Oleo: Kendari. 2014.
5. Adfa  M. Survey  Etnobotani,  Studi  Senyawa  Flavonoid dan  Uji Brine  Shrimp Beberapa  Tumbuhan  Obat Tradisional Suku Serawai di Propinsi Bengkulu. Gradien 1(1) , 2005; hal. 45-46.
6. Atmoko  T,  dan Ma’ruf A. Uji  Toksisitas  dan  Skrining Fitokimia  Ekstrak  Tumbuhan  Sumber Pakan  Orangutan Terhadap  Larva Artemia  salina L. Jurnal  Penelitian Hutan dan Konservasi Alam . 6(1) , 2009; hal. 39.
7. Indiastuti DN, Skrining Pendahuluan Toksisitas Beberapa Tumbuhan Benalu terhadap Larva Udang Artemia salina Leach, Jurnal Ilmu  Kefarmasian Indonesia . 6(2) , 2008; hal. 82.
8. Cahyadi R. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Etanol Buah Pare ( Momordica charantia L.) terhadap Larva Artemia salina Leach  dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT) , Skripsi . Universitas Diponegoro: Semarang. 2009 9. Jefrianto M. Profil  Fitokimia  dan  Aktivitas  Antibakteri Tanaman  Obat  di  Sulawesi  Tenggara  Terhadap  Bakteri Salmonella typhi YCTC . Skripsi. Universitas Halu Oleo; Kendari, 2014.
10. Ogata S, Miyake Y, Yamamoto K, Okumura K, Taguchi H. Apoptosis  Induced by The  Flavonoid from Lemon Fruit ( Citrus limone ) and Its Metabolites in HL-60 Cells. Biosci.Biotechnol . 64(5) ; 2000.
11. Vizcaino  F. The  Flavonoid  Quercetininduced  Apotosis And Inhibits JNK Activation In Intimal Vascular Smooth Muscle Cells. Biochem. and Biophy. Res. Comm. 346(3) , 2006.
12. Ren W, Buckwheat T, Flavonoid Activates Caspase 3 And Induces  Hl-60  Cell  Apoptosis. Clin. Pharmacol . 23(8) , 2009.
13. Rita WS, Suirta IW, Sabikin A. Isolasi dan Identifikasi Senyawa yang  Berpotensi Sebagai  Antitumor  Pada Daging  Buah  Pare ( Momordica  charantia L.), Jurnal Kimia 2 , 2008 .