EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr

## Perbedaan Lama Fotoperiode Terhadap Total Lipid Kultur Mikroalga Chlorella vulgaris

## Hendrik Surya Bahar, Ali Djunaedi, Widianingsih*
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof.H.Soedarto S.H, Tembalang,Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail : widia2506@gmail.com
ABSTRAK: Chlorella  vulgaris merupakan  salah  satu  mikroalga  yang  mengandung  lipid,  oleh karena  itu  mikroalga C.  vulgaris dapat  dimanfaatkan  sebagai  sumber  pangan  fungsional  dalam meningkatkan  kesehatan.  Pertumbuhan  mikroalga  dipengaruhi  oleh  berbagai  macam  faktor lingkungan  salah  satunya  adalah  cahaya.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  fotoperiode terbaik guna meningkatkan pertumbuhan dan kandungan total lipid pada C. vulgaris. Metode yang digunakan  adalah  eksperimen  laboratoris.  Mikroalga C.  vulgaris dikultivasi  dengan  4  perlakuan siklus fotoperiode (terang:gelap) yang berbeda yaitu A (4 : 20), B (8 : 16), C (12 : 12) dan D ( 24 : 0). Penelitian ini menggunakan pupuk walne. Suhu air pada penelitian ini berkisar antara 18-21°C. Salinitas berkisar antara 29-32 ppt, kisaran pH pada penelitian ini antara 7,3-8,0. Pertumbuhan C. vulgaris diamati  selama  9  hari  kemudian  dipanen  untuk  perhitungan  biomassanya.  Biomassa basah  hasil  kultivasi  dikeringkan  dan  dilakukan  uji  kadar  air.  Total  lipid  ditentukan  secara gravimetrik. Biomassa  disoxhletasi menggunakan  n-heksan. Fraksi  lipid dan n-heksan dipisahkan dengan  distilator,  berat  ekstraknya  terhitung  sebagai  kandungan  total  lipid.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  perlakuan  fotoperiode  berpengaruh  secara  nyata  (p<0,05)  terhadap kepadatan  sel  mikroalga  dan    kandungan  total  lipidnya C.  vulgaris .  Perlakuan  D  memiliki  hasil kepadatan  tertinggi  sebesar  1.131x10 4 sel/mL.  Perlakuan  C  memiliki  hasil  kandungan  total  lipid tertinggi  dengan  total  17%.  Perlakuan  A  memperoleh  hasil  terendah  dengan  kepadatan  sebesar 638x10 4 (sel/mL)  dan kandungan total lipid 8,7%.
Kata kunci: Chlorella vulgaris; fotoperiode; pertumbuhan; kandungan total lipid

## Growth and Total Lipid Content in Microalgae Chlorella vulgaris (Beijerinck,1890) with Different Light Photoperiods
ABSTRACT: Chlorella vulgaris is one of the microalgae containing lipids, therefore the microalgae C.  vulgaris  can  be  used  as  a  source  of  functional  food  to  improve  health.  Microalgae  growth  is influenced by various environmental factors, one of which is light. This study aims to determine the best  photoperiod  to  increase  growth  and  total  lipid  content  of  C.  vulgaris.  The  method  used  is  a laboratory  experiment.  Microalgae  C.  vulgaris  was  cultivated  with  4  different  photoperiod (light:dark) cycle treatments, namely A (4 : 20), B (8 : 16), C (12 : 12) and D (24 : 0). This research uses  walne  fertilizer.  During  the  study,  water  quality  measurements  were  carried  out.  The  water temperature in this study ranged from 18-21°C. Salinity ranged from 29-32 ppt, the pH range in this study was between 7.3-8.0. The growth of C. vulgaris was observed for 9 days and then harvested for biomass calculation. The wet biomass from the cultivation was dried and the moisture content was tested. Total lipid was determined gravimetrically. Biomass was disoxhletated using n-hexane. The  lipid  fraction  and  n-hexane  were  separated  by  distillation,  the  weight  of  the  extract  was calculated  as  the  total  lipid  content.  The  results  showed  that  the  photoperiod  treatment  had  a significant  (p<0.05)  effect  on  the  cell  density  of  C.  vulgaris  microalgae  and  also  significantly (p<0.05)  on  the  total  lipid  content.  Treatment  D  had  the  highest  density  of  1,131  x  104  cells/mL. Treatment  C  had  the  highest  total  lipid  content  with  a  total  of  17%.  Treatment  A  obtained  the lowest yield with a density of 638 x 104 (cells/mL) and a total lipid content of 8.7%.

## Keywords: Chlorella vulgaris; photoperiod; growth; total lipid content

## PENDAHULUAN
Pertumbuhan  penduduk  menyebabkan  memburuknya  kerawanan  pangan  global.  Lebih lanjut,  pandemi  COVID-19  saat  ini  telah  memperburuk  risiko  kelaparan  dan  krisis  kelaparan. Sekitar 265 juta orang akan menderita kondisi kelaparan kritis pada akhir tahun 2020 (Laborde et al .,  2020).  Mikroalga  memiliki  prospek  yang  bagus  sebagai  sumber  pangan  alternatif  dengan kualitas  dan  nilai  gizi  yang  tinggi (Niccolai et  al .,2019).  Lipid fungsional/ PUFA  menurut  para  ahli dapat mengurangi beban yang dipicu oleh penyakit tidak menular seperti malnutrisi dan diet yang tidak seimbang (Xu et al .,2016). Lipid fungsional seperti PUFA dianggap sebagai elemen penting dari  diet  manusia  ,  tetapi  manusia  tidak  dapat  mensintesisnya  sendiri  dan  perlu  disediakan  dari luar melalui makanan fungsional (Morales et al .,2019).
Mikroalga  merupakan  salah  satu  produsen  metabolit  sekunder  yang  layak  untuk  menjadi pangan  fungsional  (Galasso et  al .,  2019).  Mikroalga  mengandung  asam  lemak  omega-3  dan  6 yang  merupakan  asam  lemak  tak  jenuh  ganda  rantai  panjang  esensial  (LC-PUFAs)  yang  harus dimasukkan  dalam  makanan  sehari-hari  karena  tidak  dapat  disintesis  oleh  manusia  dan  banyak hewan  (Khan et  al .,2018).  Biomassa  mikroalga  telah  banyak  digunakan  di  berbagai  industri: farmasi,  makanan  fungsional,  pakan  ternak,  pemurnian  air,  dan  produksi  biofuel  (Barkia et al .,2019) . Dalam kondisi yang sesuai, mikroalga mengubah energi matahari menjadi energi kimia senyawa  yang  terakumulasi  dalam  sel  mereka,  termasuk  lipid,  yang  dapat  digunakan  dalam produksi  pangan  alternatif  (Chen et  al ,  2013).  Hasil  biomassa  dan  komposisi  biokimia  mikroalga tergantung  pada  faktor  lingkungan  dan  fisiologis  seperti  suhu  kultur,  pH,  intensitas  cahaya, fotoperiode cahaya, ketersediaan nutrisi, dan karbon dioksida (Chen et al ., 2013). Chlorella  vulgaris merupakan  spesies  yang  telah  dipelajari  secara  ekstensif  untuk  berbagai tujuan,  seperti  produksi  biomassa  sebagai  sumber  bahan  kimia  atau  pangan  fungsional  yang berharga,  serta  pengolahan  air  limbah  dan  pakan  budidaya  (Nisak et  al .,2013).  Kuantitas  dan kualitas  cahaya  menentukan  jumlah  energi  yang  tersedia  bagi  organisme  fotosintetik  untuk melakukan aktivitas metabolisme mereka (Matos et al .,2014).
Fotoperiode terang  16  jam  terang  dan  8 jam  gelap  memberikan  pengaruh  terbaik terhadap pertumbuhan Chlorella  sp (Napitulu et  al. ,  2019).    Menurut  hasil  penelitian  Ratomski  dan  Paw (2021),  menyatakan  bahwa  pada  pencahayaan  selama  18  jam  perhari  dapat  memberikan  hasil yang  optimal  untuk  produksi  biomassa C.vulgaris dalam  sistem  fotobioreaktor  dengan  lampu natrium tekanan tinggi dan dioda pemancar cahaya.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  perlakuan  fotoperiode  yang  berbeda terhadap  pertumbuhan  sel  dan  kandungan  total  lipid  pada  mikroalga C. vulgaris,  selain  itu  untuk Mengetahui  siklus  fotoperiode  terbaik  yang  dapat  memberikan  kandungan  total  lipid  paling  tinggi pada mikroalga C. vulgaris.

## MATERI DAN METODE
Mikroalga C.vulgaris sebagai  materi  dalam  penelitian  ini  diperoleh  dari  stok  murni  Balai Besar Perikanan Budidaya Air Payau (BBPBAP) Jepara. Penelitian ini telah dilakukan sejak bulan Febuari-hingga  Maret  2021.    Kultivasi  dilakukan  dengan  menggunakan  wadah  toples  kaca  3000 mL  dengan  kepadatan  awal  375  x  10 4 sel/ml.  Jumlah  biakkan  murni  1/3  dari  total  volume. Sedangkan, media air laut 2/3 dari total volume dengan total volumenya sebanyak 2700 mL (Nisak et  al .,  2013).  Kualitas  air  yang  diamati  yaitu  salinitas,  suhu  dan  pH.  Salinitas  yang  diterapkan dalam  penelitian  ini  adalah  30-32  ppt.  Selanjutnya  suhu  diatur  agar  mikroalga  tumbuh  optimal, suhu  ruangan  kultur  berkisar  19°C-  23°C.  Ukuran  pH  yang  diterapkan  dalam  penelitian  kali  ini dengan nilai berkisar ph 7-8 (Ermavitalini et  al. , 2019). Aerator  diatur agar  aliran udara mengalir secara merata. Pupuk yang digunakan dalam penelitian adalah pupuk walne dengan takaran 1ml/L. Fotoperiode  sebagai  perlakukan  dilakukan  dengan  3  kali  ulangan  dan  untuk  pemanenan biomassa  dan  analisa  kadar  total  lipid  dilakukan  pada  fase  stasioner  (Ermavitalini et  al. ,  2019). Perlakuan fotoperiode  terdiri dari perlakuan A ( 4 jam terang -20 jam gelap), perlakuan B ( 8 jam terang –  16  jam gelap), perlakuan  C (  12  jam  terang  –  12 jam gelap)  dan perlakuan D  (  24 jam terang – 0 jam gelap) (Widianingsih et al .,2012). Kepadatan sel C. vulgaris dihitung dengan rumus perhitungan (Imron et al .,2016).
Journal of Marine Research Vol 11, No.1 Februari 2022, pp. 92-97
Pelarut non-polar  digunakan  yaitu n-Heksan dengan metode AOAC (Levasseur et al .,2018) biomassa kering mikroalga C. vulgaris ditimbang  sebanyak ± 1 g, kemudian sampel yang sudah ditimbang  dibungkus  dengan  kertas  saring  whatman.  Pengeringan  dilakukan  pada  labu  lemak dalam  oven,  kemudian  ditimbang  hingga  beratnya  konstan.  Pelarut  n-heksan  dimasukkan  ke dalam labu lemak dan sampel  dimasukkan ke dalam thimble. sampel diusahakan terendam oleh pelarut  n-heksan,  kemudian  dilakukan  ekstraksi  selama  6-8  jam  pada  suhu  60°C.  Evaporasi campuran  lipid  dan  pelarut  dilakukan  dengan  distilator  pada  suhu  60°C,  kemudian  labu  lemak yang berisi ekstrak lipid diletakkan dalam desikator dan ditimbang beratnya (Dewi dan Nuravivah, 2018). Penentuan total lipid pada sampel dilakukan berdasarkan rumus berikut:

## Total Lipid = (A − B) C X 100%
Keterangan : A = Berat labu lemak + ekstrak lemak (g); B = Berat labu lemak kosong (g); C= berat kering sampel (g)
Program  SPSS  25  digunakan  untuk  analisa  data.  Analisis  statistik  ini  bertujuan  untuk mengetahui pengaruh fotoperiode terhadap pertumbuhan dan  kandungan lemak total C. vulgaris . Analisis  statistik  menggunakan  One  Way  ANOVA.  Sebelumnya  dilakukan  uji  normalitas  dan  uji homogenitas. Jika hasil ANOVA terlihat berbeda nyata, maka dilakukan uji Tukey HSD. Pengujian ini  dirancang  untuk  mengetahui  perbedaan  pada  setiap  level  fotoperiode  masing-masing perlakuan.  mengetahui  perbedaan  antara  perlakuan  satu  dengan  perlakuan  yang  lain (Kusriningrum, 2012).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan hasil pengamatan pertumbuhan selama 9 hari kultivasi. Perlakuan  D memiliki hasil  kepadatan  sel  tertinggi    yaitu  1.131  ×  10 4 sel/ml  pada  hari  ke  -8    kultivasi.  Perlakuan  A memiliki  hasil  kepadatan  sel  terendah  yaitu  sebanyak  638  ×  10 4 sel/ml  pada  hari  ke-8  kultivasi. Hasil tersebut merupakan hasil yang diperoleh pada perhitungan sel pada hari ke-9 kultivasi.
Perlakuan  D  memiliki  kepadatan  tertinggi,  hal  ini  diduga  pada  perlakuan    tersebut ketersediaan  cahaya  sebagai  sumber  energi  proses  fotosintesis  selalu  ada  dan  pigmen fotosintesis  dapat  menyerap  cahaya  foton  lebih  banyak.  Penyerapan  energi  foton  yang  tersebut dapat meningkatkan laju fotosintesis dan proses fotosintesis dapat memproduksi senyawa organik lebih banyak guna pertumbuhan bagi mikroalga C. vulgaris . Hal tersebut diperkuat dari Yusof et al , (2021).  menyatakan  bahwa  perlakuan  fotoperiode  siklus  (24  terang  :  0  gelap)  memberikan  hasil pertumbuhan sel mikroalga C. vulgaris tertinggi dibandngkan dengan perlakuan lainnya. Perlakuan A memiliki hasil kepadatan terendah, hal tersebut diduga fotoperiode mempengaruhi pertumbuhan dan  biomassa  mikroalga  karena  sejajar  dengan  laju  fotosintesis  dan  metabolisme  mikroalga (Matos et al ., 2014).
Hasil rata-rata analisis kandungan total lipid yang terkandung dalam mikroalga C. vulgaris yang diekstraksi menggunakan soxhlet memiliki nilai yang bervariasi dan disajikan pada (lampiran 5).  Hasil  analisis  menunjukkan  pada  perlakuan  C  memiliki  kandungan  total  lipid  tertinggi  dengan nilai 17,0 %, sedangkan untuk Perlakuan A, B dan D masing-masing memiliki kandungan total lipid terendah  dengan  nilai  8,7  %,  11,8  %  dan  13,5  %.  Data  kandungan  total  lipid C.  vulgaris yang dikultivasi dengan fotoperiode berbeda kemudian diuji uji one way ANOVA ( Analysis of Variance ). Hasil  uji  one  way  ANOVA  (Analysis  of  Variance)    menunjukkan  hasil  dengan  nilai  signifikansi  ( p<0,05),  berarti  terdapat  perbedaan  yang  nyata  antara  taraf  perlakuan  fotoperiode  terhadap kandungan total lipid sel mikroalga C. vulgaris.
Fotoperiode  memberikan  pengaruh  lingkungan  terhadap  sel  mikroalga C.  vulgaris dan memberikan pengaruh dalam  biosintesis lipid.  Hal ini sesuai  Hu et  al (2008), menyatakan bahwa cekaman fotperiode  merupakan salah satu tindakan rekayasa untuk meningkatkan biosintesis lipid pada  mikroalga.  Menurut  Saad et  al .  (2019),  menyatakan  sel  mikroalga  akan  mengalokasikan pertumbuhan biomassa menjadi penyimpanan lipid sebagai adaptasi pertahanan terhadap kondisi lingkungan yang labil.
Pernyatan  tersebut  mendukung  bahwa  tekanan  fotoperiode  mempengaruhi  reaksi  terang
Journal of Marine Research Vol 11, No.1 Februari 2022, pp. 92-97
dan gelap yang terjadi pada sel mikroalga C. vulgaris , sehingga menyebabkan adanya variasi nilai kandungan total lipid dan laju fotosintesis. Perlakuan fotoperiode dengan fase terang yang singkat waktunya  akan  menurunkan  laju  pertumbuhan  dan  mempengaruhi  penyerapan  tidak  optimal energi foton oleh pigmen fotosintesis dan mempengaruhi laju fotosintesis (Novianti dan Sri, 2015). Menurut Atikij et al . (2019), proses biosintesis lipid terjadi saat kloroplas melakukan fiksasi karbon dioksida.  Menurut  Masojídek et  al (2013),  menyatakan  fiksasi  karbondioksida  terjadi  pada  fase gelap dalam proses fotosintesis sel mikroalga. Hasil penelitian menunjukkan perlakuan C memiliki hasil kandungan total lipid tertinggi.
Gambar 1. Pertumbuhan C.vulgaris pada kultivasi selama 9 hari dengan fotoperiode berbeda. (A = 4 jam terang 20 jam gelap), (B= 8 jam terang 16 jam gelap), (C = 12 jam terang 12 jam gelap), (D = 24 jam terang 0 jam gelap).
Gambar 2. Nilai  Rata-Rata  kandungan  total  lipid  Mikroalga C.vulgaris pada  kultivasi  dengan fotoperiode yang berbeda. (A = 4 jam terang 20 jam gelap), (B=  8 jam terang 16 jam gelap), (C = 12 jam terang 12 jam gelap), (D = 24 jam terang 0 jam gelap).
0 200 400 600 800 1000 1200 1 2 3 4
5 6 7 8 9 K epadat an S el ( x 10 4 sel /m l) Waktu (hari ke-) A B C
D
0,087 0,118 0,169 0,135 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2 A B C D K an du ng an T otal Li pi d ( % -dw )
Fotoperiode (Terang : Gelap)
Journal of Marine Research Vol 11, No.1 Februari 2022, pp. 92-97
Menurut  Widianingsih et  al .  (2012),  menyatakan  bahwa  fotoperiode  akan  memberikan pengaruh  terhadap  peningkatan  kandungan  total  lipid  total  mikroalga  pada  fase  stasioner  dan mampu  mengurangi  pembentukan  atau  sintesi  n-3 polyunsaturated  fatty  acids (PUFA).  Menurut Krzemin´ska et  al .  (2014),  menyatakan  bahwa  dalam  tekanan  lingkungan  yang  tidak menguntungkan , mikroalga  dapat  mengakumulasi  lipid  netral  dalam  bentuk triasilgliserida  (TAG) yang  dapat  digunakan  oleh  mikroalga  untuk  bertahan  dalam  tekanan  lingkungan  yang  periode cahayanya  dikurangi.  Hal  itu  diperkuat  dari  hasil  dari  penelitian  Gammanpila et  al .  (2015), menunjukkan  siklus  fotoperiode  (12:12)  menghasilkan  lipid  tertinggi  dibandingkan  dengan  siklus fotoperiode yang lain.

## KESIMPULAN
Fotoperiode memberikan pengaruh yang  berbeda nyata terhadap kandungan total lipid dan pertumbuhan,  tetapi  tidak  berpengaruh  nyata  terhadap  produksi  biomassa  kering  mikroalga Chlorella  vulgaris .  Fotoperiode  (12:12)  memberikan  pengaruh  kandungan  total  lipid  dengan  hasil paling tinggi pada mikroalga Chlorella vulgaris .

## DAFTAR PUSTAKA
Atikij, T., Syaputri, Y., Iwahashi, H., Praneenararat, T., Sirisattha, S., Kageyama, H., & Sirisattha, R.W.  2019.  Enhanced  Lipid  Production  and  Molecular  Dynamics  under  Salinity  Stress  in Green  Microalga Chlamydomonas  reinhardtii (137C). Marine  Drugs ,  17(4):1-15.  DOI: 10.3390/md17080484
Barkia  I,  Saari  N.,  &  Manning,  S.R.  2019.  Microalgae  for  high-value  products  towards  human health and nutrition. Marine Drugs , 17(5):304. DOI: 10.3390/md17050304.
Chen,  C.Y.,  Zhao  ,X.Q.,  Yen,  H.W.,  Ho,  S.H.,  Cheng,  C.L.,  Lee,  D.J.,  Bai,  F.W.,  &  Chang,J.S. 2013.  Microalgae-based  carbohydrates  for  biofuel  production. Biochemical  Engineering Journal , 78:1 –10. DOI: 10.1016/j.bej.2013.03.006 Dewi,  E.R.S.  &  Nuravivah,  R.  2018.  Potential  of  Microalgae Chlorella  vulgaris As  Bioremediation Agents of Heavy Metal Pb (Lead) On Culture Media . E3S Web of Conferences , 31(05010) : 1- 4. DOI:10.1051/e3sconf/20183105010.
Ermavitalini, D., Dwirejeki, S., Nurhartika, S. & Saputro, T.B. 2019. Pengaruh Kombinasi Cekaman Nitrogen  dan  Fotoperiode  Terhadap  Biomassa,  Kandungan  Kualitatif Triasilgliserol  dan  Profil Asam  Lemak  Mikroalga Nannochloropsis  sp . Akta  Kimia  Indonesia, 4(1):32-49.  DOI: 10.12962/j25493736.v4i1.5089 Gammanpila,  A.M.,  Rupasinghe,  C.P.,  &  Subasinghe,  S.  2015.  Light  Intensity  and  Photoperiod Effect  on  Growth  and  Lipid  Accumulation  of  Microalgae Chlorella  vulgaris and Nannochloropsis  sp for Biodiesel  Production.  Proceedings  of  12  th  ISERD  International Conference ISBN: 978-93-85832-00-0.
Galasso, C., Gentile, A., Orefice, I., Ianora, A., Bruno, A., Noonan, D.M., Sansone, C., Albini, A., & Brunet,  C.  2019.  Microalgal  derivatives  as  potential  nutraceutical  and  food  supplements  for human  health:  a  focus  on  cancer  prevention  and  interception. Nutrients, 11(6):1226. DOI: 10.3390/nu11061226.
Levasseur,  W.,  Taidi,  B.,  Lacombe,  R.,  Perre,  P.,  &  Pozzobon,  V.  2018.Impact  of  seconds  to minutes photoperiods on Chlorella vulgaris growth rate and chlorophyll a and b content. Algal Research, 36:10 –6.
Hu,  Q.,  Sommerfeld,  M.,  Jarvis,  E.,  Ghirardi,  M.,  Posewitz,  M.,  &  Seibert,  M.,  2008.  Microalgal triacylglycerols  as  feedstocks  for  biofuel  production:  perspectives  and  advances .  The  Plant Journal, 54:21 –39.
Imron,  M.A.,  Sudarno  &  Masithah,  E.D.  2016.  Pengaruh  Salinitas  Terhadap  Kandungan  Lutein pada Mikroalga Botryococcus braunii . Journal of Marine and Coastal Science , 5(1):36 – 48. Masojídek,  J.,  Torzillo,  G.,  &  Koblížek,  M.  2013.  Photosynthesis  in  Microalgae.  Handbook  of Microalgal Culture, 21 –36p. DOI: 10.1002/9781118567166.ch2
Journal of Marine Research Vol 11, No.1 Februari 2022, pp. 92-97
Krzemin´ska,  I.,  Skowron´ska,  B.  P.,  Trzcin´ska  ,M.  &  Tys, J.  2014. Influence  of  photoperiods  on the  growth  rate  and  biomass  productivity  of  green  microalgae. Bioprocess  and  Biosystems Engineering , 37: 735-741. DOI: 10.1007/s00449-013-1044-x.
Kusriningrum. 2012. Perancangan Percobaan. Airlangga University Press. Surabaya. Hal 43-69 Laborde,  D.,  Martin,  W.,  Swinnen,  J.  &  Vos,  R.,  2020.  COVID-19  risks  to  global  food  security.
Science, 369:500-502. DOI: 10.1126/science.abc4765.
Matos,  Â.P.,  Cavanholi,  M.G.,  Moecke,  E.H.S.  &  Sant'Anna,  E.S.  2014.  Effects  of  different photoperiod and trophic conditions on biomass, protein and lipid production by the marine alga Nannochloropsis  gaditana at  optimal  concentration  of  desalination  concentrate. Bioresource Technology, 224:490 –7. DOI: 10.1016/j.biortech.2016.11.004.
Niccolai, A., Zittelli, G.C., Rodolfi, L., Biondi, N., Tredici, M.R., 2019. Microalgae of interest as food source:  biochemical  composition  and  digestibility. Algal  Research, 42:  101617.  DOI: 10.1016/j.algal.2019.101617.
Nisak,  K.,  Rahardjo,  B.S.  &  Masithah,  E.D.  2013.  Studi  Perbandingan  Kemampuan Nannochloropsis  sp .  dan Chlorella  sp .  Sebagai  Agen  Bioremediasi  Terhadap  Logam  Berat Timbal  (Pb). Jurnal  Ilmiah  Perikanan  dan  Kelautan .,  5(2):175-180.  DOI:  10.20473/jipk.v5i2. 11405.
Novianti  &  Sri,  S.  2015.  Effect  of  Photoperiod  During  Nitzschia  sp.  Culture.  Against  Total  Fat Content  and  Ratio  of  N  P.  Thesis.  Lampung.  Aquaculture  Study  Program,  Faculty  of Agriculture. University of Lampung.
Ratomski,  P.  &  Paw,  M.H.  2021.  Production  of Chlorella  vulgaris biomass  in  tubular Photobioreactors  during  Different  Culture  Conditions. Applied  Sciences ,  11:1-13.  DOI: 10.3390/app11073106
Saad, M.G., Dosoky, N.S., Zoromba, M.S. & Shafik, H.M. 2019. Algal Biofuels : Current Status and Key Cahllenges. Energies ., 12(10):1920. DOI:10.3390/en12101920.
Morales,  M.,  Hélias,  A.  &  Bernard,  O.  2019.  Optimal  integration  of  microalgae  production  with photovoltaic  panels:  environmental  impacts  and  energy  balance. Biotechnology  for  Biofuels and Bioproducts , 12(1):239. DOI: 10.1186/s13068-019-1579-4 Khan,  M.I,  Shin,  J.H.,  &  Kim,  J.D.  2018.  The  promising  future  of  microalgae:  current  status, challenges,  and  optimization  of  a  sustainable  and  renewable  industry  for  biofuels,  feed,  and other products. Microbial Cell Factories , 17(1):36-57. DOI: 10.1186/s12934-018-0879-x. Widianingsih,  Hartati,  R.,  Endrawati,  H.  &  Iriani,  V.R.  2012.  Kandungan  Lipid  Total Nannochloropsis oculata Pada Kultur dengan Berbagai Fotoperiod. Ilmu Kelautan , 17(3):119- 124. DOI:10.14710/ik.ijms.17.3.119-124
Xu,  Y., Ibrahim,  I.M.  & Harvey,  P.J.  2016. The  influence  of photoperiod and  light  intensity  on the growth  and  photosynthesis  of Dunaliella  salina (chlorophyta)  CCAP  19/30. Plant  Physiology and Biochemistry, 106:305 –15. DOI: 10.1016/j.plaphy.2016.05.021.
Yusof,  N.S.,  Yeong,  Y.S.,  Zakeri  ,H.A.,  Wahid  ,M.E.A.,  Ghafar,  S.N.A.  &  Yusuf,  N.  2021. Photoperiod  influenced  the  growth  and  antioxidative  responses  of Chlorella  vulgaris , Isochrysis  galbana ,  and Tetraselmis  chuii . Journal  of  Applied  Pharmacetical  Science .,  11 (4):125-134. DOI: 10.7324/JAPS.2021.110415.