UJI AKTIVITAS PENANGKAP RADIKAL DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) ISOLAT ALFA MANGOSTIN KULIT BUAH MANGGIS ( Garcinia mangostana L.)
DPPH (1,1-diphenyl-2-pikrilhidrazil) RADICAL SCAVENGING ACTIVITY OF ALFA MANGOSTIN THAT ISOLATED FROM MANGOSTEEN RIND (Garcinia mangostana L.)

## Muhammad Da’i*, Fitriana Triharman
Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta abulathfi@gmail.com

## ABSTRAK
Manggis  ( Garcinia  mangostana L.)  merupakan  sumber  senyawa  ksanton  yang  memiliti potensi sebagai penangkap radikal bebas. Penelitian ini bertujuan untuk mengeksplorasi isolat aktif sebagai  antiradikal  dari  isolat  alfa  mangostin  kulit  buah  manggis.  Kulit  buah  manggis  sejumlah 850  g  dimaserasi  berulang  menggunakan  pelarut  heksan  (2,5  L  selama  dua  hari)    dan  diisolasi dengan  metode  partisi  menggunakan  metanol  hangat  dan    aquades  (20:1).  Analisis  isolat  yang didapat  menggunakan  Kromatografi  lapis  Tipis  (KLT)  dan High  Performance  Liquid Chromatography  (HPLC ).  Aktivitas  penangkap  radikal  ditentukan  dengan  menggunakan  pereaksi DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil) kemudian dihitung nilai Inhibitory Concentration (IC 50 ), Efficiency Concentration  (EC 50 ),  dan  Antiradikal  Power  (ARP).  Hasil  ekstraksi  diperoleh  rendemen  0,41%, sedangkan  hasil  isolasi  diperoleh  rendemen  0,33%.  Konfirmasi  senyawa  dengan  KLT  dan  HPLC menunjukkan  isolat  belum  murni.    Pengukuran  aktivitas  penangkapan  radikal  DPPH  diketahui bahwa  isolat  alfa  mangostin  memiliki  aktivitas  yang  tinggi  sebagai  penangkap  radikal  DPPH dengan nilai IC 50 13,68 µg/ml, namun aktivitas penangkap radikalnya lebih kecil bila dibandingkan dengan vitamin E (IC 50 12,50 µg/ml). Alfa mangostin dapat diisolasi dengan metode partisi metanol hangat : aquades (20:1).
Kata kunci: Manggis ( Garcinia mangostana L.), Penangkap Radikal, DPPH

## ABSTRACT
Mangosteen  ( Garcinia  mangostana L.)  is  a  source  of  xanthon  that  have  the  potential  as free radicals scavenger. This study was aimed to explore the antiradical activity of active isolate of alpha  mangostin  that  isolated  from  mangosteen  rind.  Mangosteen  rind  850g  was  macerated  a recurring use of solvent hexane (2.5 L for two days) and isolated by partitioning method using hot methanol  and  distilled  water  (20:1).  Analysis  of  isolates  were  obtained  using  thin  layer chromatography (TLC) and High Performance Liquid Chromatography (HPLC). Radical scavenging activity was determined using reagent DPPH (1,1-diphenyl-2-pikrilhidrazil) then was calculated the value  of  Inhibitory  Concentration  (IC50),  Efficiency  Concentration  (EC50),  and  antiradical  Power (ARP).  The  results  obtained  extract  yield  0.41%,  while  the  isolate yield  of  0.33%.  Confirmation  of compounds  by  TLC  and  HPLC  showed  that  isolate  was  pure.  Measurement  of  DPPH  radical activity  showed  that  alpha-mangostin  isolates  had  high  activity  as  DPPH  radical  scavenger  with IC50 value of 13.68 ug / ml, lower than vitamin E (IC50 12.50 µg/ml).
Keywords: Mangosteen ( Garcinia mangostana L.), DPPH radical scavenger

## PENDAHULUAN
Radikal bebas adalah atom atau molekul yang  mengandung  satu  atau  lebih  elektron tidak berpasangan dan sangat reaktif (Fessenden  dan  Fessenden,  1986)  sehingga untuk  menjadi  stabil  radikal  bebas  cenderung akan mengambil elektron dari molekul lain yang menimbulkan ketidaknormalan molekul lain dan memulai  reaksi  berantai  yang  dapat  merusak jaringan.
Senyawa  radikal  akan  merusak  sel sehingga  menyebabkan  suatu  penyakit  seperti liver,  kanker,  dan  kondisi  yang  berhubungan dengan  umur  seperti alzheimer (Hernani  dan
Raharjo,  2006).  Oleh  karena  itu  diperlukan senyawa yang dapat meredam efek negatif dari radikal bebas yaitu antioksidan (Karyadi, 1997).
Antioksidan  adalah  substansi  dalam kadar  yang  rendah  mampu  menghambat proses  oksidasi.  Dalam  melindungi  tubuh  dari serangan  radikal  bebas,  substansi  antioksidan berfungsi  untuk  menstabilkan  radikal  bebas dengan  melengkapi  kekurangan  elektron  dari radikal bebas sehingga menghambat terjadinya reaksi berantai (Windono et al. , 2001).
Salah  satu  sumber  antioksidan  yang berasal  dari  alam  adalah  tanaman  manggis yang  dalam  bahasa  Latin  disebut Garcinia
mangostana L dari famili Guttiferae . Kandungan kimia kulit manggis adalah ksanton, mangostin, garsinon,  flavonoid,  tanin  (Heyne,  1987; Soedibyo,  1998).  Senyawa  ksanton  banyak ditemukan  pada  dua  famili  dari  tumbuhan tingkat  tinggi  yaitu  famili Guttiferae dan Gentinaceae .  Ditemukan  19  turunan  xanton hasil  isolasi  dari  buah  manggis  salah  satunya alfa  mangostin  yang  merupakan  metabolit primer  (Suksamrarn  dkk.,  2006).  Penelitian terhadap  aktivitas  ekstrak  metanol  kulit  buah manggis menunjukkan adanya aktivitas antiradikal terhadap DPPH (1,1-difenil-2- pikrilhidrazil),  sedangkan  alfa  dan  gamma mangostin pada kulit buah manggis menggunakan  metode ferric  thiocyanate juga menunjukkan  aktivitas  antioksidan  (Yoshikawa et al ., 1994 cit Chaverri et al. , 2008).
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas  penangkap  radikal  bebas  isolat  alfa mangostin  kulit  buah  Manggis  dengan  metode DPPH.

## METODE PENELITIAN
Bahan: Simplisia  kulit  buah  manggis,  DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil),  vitamin  E  (Sigma Co.),  kloroform pro  analysis  (p.a) (E.Merck), metanol p.a (E.Merck),  metanol absolute (for HPLC) p.a, heksan  (E.Merck),  kertas  saring, aquadest,  silika  gel  (E.Merck),  dan TLC  Plates AI Sheet Silica F 254 (E.Merck).
Alat: G lassware (Pyrex),  corong  buchner, spektrofotometer UV-Vis (UV Mini SHIMADZU), vaccum  rotary  evaporator , Ultrasonic  stirer , bejana  kromatografi,  kuvet, vortex ,  mikropipet (Socorex), stopwatch ,  neraca  anailitik  (A&D Co.Ltd.), High
Performance Liquid Chromatography (HPLC).

## Jalan Penelitian
Ekstrak kulit buah manggis yang diperoleh melaui maserasi menggunakan pelarut  heksan  dilarutkan  dengan  metanol hangat dan ditambahkan aquades DM (perbandingan  metanol:aquades  DM  20:1). Didinginkan  dalam  refrigerator  pada  suhu  4ºC selama  24  jam.  Dipisahkan  antara  kristal dengan  cairan  menggunakan  kertas  saring. Setelah diperoleh isolat, dianalisis menggunakan  Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT) dan High  Performence  Liquid  Chromaogrphy (HPLC).
Aktivitas  penagkap  radikal  ditentukan dengan metode DPPH. Isolat dengan konsentrasi tertentu ditambah 100 μl DPPH 0,4 mM  dan metanol p.a hingga  1,0  ml.  Campuran divortex selama 30 detik dan diukur absorbansinya  pada λ  517  nm  terhadap blangko  setelah operating  time .  Pengukuran absorbansi  kontrol  dilakukan  terhadap 100  μl
DPPH  dan  900  μl  metanol p.a .  besarnya aktivitas  penangkap  radikal  dihitung  dengan rumus:
Persen (%) penangkap radikal:
( absorbansi kontrol-absorbansi sampel ) absorbansi kontrol
Penentuan  aktivitas  penangkap  radikal dilakukan melalui perhitungan inhibitory concentration  (IC 50 ),  efficiency  concentration (EC 50 ), dan antiradical  power  (ARP) .  Hasil aktivitas penangkap radikal isolat alfa mangostin  kulit  buah  manggis  dibandingkan dengan vitamin E.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pengujian kemurnian isolat alfa mangostin dilakukan dengan
metode Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  dan High Performance  Liquid  Chromatography (HPLC). Hasil  analisis  KLT  menunjukkan  kesamaan profil  kromatogram  sampel  uji  isolat  dengan profil  kromatogram  standar  senyawa  alfa mangostin.  Sehingga  dapat  dikatakan  bahwa sampel  uji  isolat  mengandung  senyawa  alfa mangostin.
Pada  analisis  kualitatif  menggunakan metode  HPLC,  menunjukkan Retention  Time (RT)  isolat  maupun  standar  secara  berturut- turut yaitu 9,603 menit dan 10,528 menit. Hal ini dapat  dikatakan  bahwa  dalam  isolat  tersebut mengandung alfa mangostin.
Namun ditemukan dua puncak pada profil kromatogram isolat. Hasil
uji secara keseluruhan menunjukkan  bahwa  isolat  belum  murni,  dilihat dari  profil  kromatogram  hasil  KLT  dan  HPLC terdapat beberapa spot ataupun puncak. Hal ini dapat mempengaruhi potensi aktivitas penangkap  radikalnya,  dimana  dari  isolat  yang didapatkan  masih  belum  bisa  ditentukan senyawa  mana  yang  lebih  poten  bertanggung jawab terhadap aktivitas penangkap radikal.
Uji  aktivitas  penangkap radikal dilakukan dengan  menggunakan  metode  DPPH  (1,1- difenil-2-pikrilhidrazil).  Pengamatan  dilakukan dengan  melihat  penurunan  intensitas  warna DPPH akibat direduksi oleh sampel uji.
Hasil  pengukuran  aktivitas  penangkap radikal  DPPH  pada  ekstrak  heksan,  isolat  alfa mangostin  dan  vitamin  E  secara  berturut-turut adalah  21,22  μg/ml,  13,68  μg/ml,  dan  12,50 μg/ml.  Bila  dibandingkan  dengan  aktivitas penangkap      radikal  oleh  vitamin  E  diperoleh bahwa  aktivitas  penangkap  radikal  dari  isolat alfa  mangostin  dan  ekstrak  heksan  lebih  kecil dari  vitamin  E  (Tabel  1).  Ekstrak  heksan memiliki  potensi  aktivitas  penangkap  radikal paling rendah karena masih terdapat campuran berbagai  macam  senyawa  yang  relatif  masih kompleks, sedangkan isolat mempunyai komposisi senyawa yang relatif lebih sederhana,  dengan  kandungan  utama  adalah alfa mangostin.
X 100
Tabel  1 -Hasil  penentuan  aktivitas  penangkap  radikal ekstrak  heksan,  isolat  alfa  mangostin  kulit  buah  manggis dibandingkan dengan vitamin E.
Aktivitas  penangkap  radikal  dari  isolat alfa mangostin kemungkinan berasal dari gugus –OH yang terikat pada cincin aromatik. Adanya inti  aromatis  pada  senyawa  fenol  (gugus hidroksi fenolik) dapat mereduksi radikal bebas DPPH  (hidrazil)  menjadi  bentuk  netralnya (hidrazin) yang berwarna kuning.
Dilaporkan  oleh  Turkoglu et  al., (2006) bahwa  senyawa  fenol  dapat  mengeliminasi radikal  karena  gugus  hidroksinya.  Senyawa fenolik  bereaksi  sebagai  agen  pereduksi, pemberi  hidrogen,  peredam  oksigen  singlet, dan  juga  sebagai  pengkelat  logam  yang potensial  (Kahkonen et  al .,  1999).  Mekanisme antiradikal  diawali  dengan  donor  proton –OH fenolik  kepada  DPPH  dan  menghasilkan  suatu radikal  fenoksil  (Gambar    1).  Radikal  fenoksil selanjutnya  mengalami  stabilitas  resonansi terhadap ikatan rangkap terkonjugasi, sehingga menjadi radikal yang stabil dan tidak reaktif.
Gambar  1 -Reaksi  Radikal  DPPH  dengan  Alfa  Mangostin. Mekanisme  antiradikal  diawali  dengan  donor  proton –OH fenolik  kepada  DPPH    dan  menghasilkan  suatu  radikal fenoksil  yang  mengalami  stabilisasi  resonansi  terhadap ikatan rangkap terkonjugasi, sehingga menjadi radikal yang stabil dan tidak reaktif.

## KESIMPULAN
Isolat alfa mangostin memiliki aktivitasyang  tinggi  sebagai  penangkap  radikal DPPH  dengan  nilai  IC 50 13,68  µg/ml,  namun aktivitas  penangkap  radikalnya  lebih  kecil  bila dibandingkan  dengan  vitamin  E  (IC 50 12,50 µg/ml).  Alfa  mangostin  dapat  diisolasi  dengan metode partisi metanol hangat:aquades (20:1). SARAN
Perlu dilakukan penentuan senyawa- senyawa  lain  dalam  kulit  buah  manggis  yang berpotensi  sebagai  antiradikal  selain  senyawa alfa  mangostin.  Serta  perlu  diteliti  lebih  lanjut tentang  potensi  senyawa  alfa  mangostin  selain sebagai antioksidan.

## DAFTAR ACUAN
Chaverri,  J.  P.,  Rodriguez,  N.  C.,  Ibarra,  M.  O.,  and  Rojas,  J.  M.  R.,2008, Medical  properties  of mangosteen  (Garcinia  mangostana), Facultad  de  Quimica,  Departemen  Biologi,  Universidad Nacional Autonoma de Mexico (Unam), Ciudad Univercitaria, Mexica.
Fessenden, R. J., and Fessenden, J. S., 1986, Kimia Organik , diterjemahkan oleh Pudjaatmakan, A. H., Edisi Ketiga, 223-224, Penerbit Erlangga, Jakarta.
Hernani dan Raharjo, M., 2006, Tanaman Berkhasiat Antioksidan , Penebar Swadaya, Jakarta.
Heyne,  K.,  1987, Tumbuhan  Berguna  Indonesia  III, Penerjemah:  Badan  Penelitian  dan Pengembangan Kehutanan, Yayasan Sarana Wahajaya, Jakarta, pp 1385 –1386.
Kähkönen  M.P., Hopia  A.I, Vuorela  H.J., Rauha  J.P., Pihlaja  K., Kujala  T.S., Heinonen  M.,  1999, Antioxidant  activity  of  plant  extracts  containing  phenolic  compounds, J  Agric  Food  Chem ., 47(10):3954-62.
Karyadi, E.,
1997,
Antioksidan, Resep Sehat dan Umur Panjang , ( http://www.indomedia.com/intisari/1997/juni/juni97.htm), Diakses 20 April 2009 .
Soedibyo, M., 1998, Alam Sumber Kesehatan , Balai Pustaka, Jakarta, pp 257 –258.
Sudarsono,    Gunawan,  D.,  Wahyuono,  S.,  Purnomo,  I.  A.  G.,  2002, Tumbuhan  Obat  II(Hasil Penelitian,  Sifat-sifat,  dan  Penggunaan) ,  Pusat  Studi  Obat  Tradisional  UGM,  91-92,  Sekip-Utara, Yogyakarta.
Suksamrarn,  S.,  Orapin,  K.,  Piniti,  R.,  Nititat,  C.,  Nattapat,  L.,  Apichart,  S.,  2006,  Cytotoxic Prenylated  Xanthones  from  the  Young  Fruit  of Garcinia  Mangostana , Chem.  Pharm.  Bull. 54(3) 301-305.
Turkoglu  A.,  Kivrak  I.,  Mercan  N., Duru  M.E.,  Gezer  K. And  Turkoglu  H.,  2006,  Antioxidant  and antimicrobial  activities  of Morchella  conica Pers. African  Journal  of  Biotechnology .  5  (11),  1146- 1150
Windono,  T.,  Hendrajaya,  K.,  Nurfatmawati,  H.,  Soraya  F.,  2001,  Uji  Perendaman  Radikal  Bebas terhadap DPPH Dari Ekstrak Kulit Buah dan Biji  Anggur (Vitis  liniferol)  Probolinggo  Biru dan  Bali, Artikel hasil penelitian Artocarpus , Vol. 1 Fakultas Farmasi UNAIR, Surabaya 34-43.