e-ISSN 2540-9840 p-ISSN 1412-3770                                                        Jurnal Ilmiah Sains, April 2024, 24(1): 87-98 Accredited by Ministry of Education, Culture,                                       DOI: https://doi.org/10.35799/jis.v24i1.53599 Research and Technology No: 105/E/KPT/2022     Available online at https://ejournal.unsrat.ac.id/v3/index.php/jis

## Uji In Vitro Aktivitas Ekstrak Etanol Daun Leilem Terhadap Penghambatan Enzim β-Glukosidase
Krispela T.O. Siregar 1) , Fona D.H. Budiarso 2*) , Billy J. Kepel 3) , Fatimawali 2) , Widdhi Bodhi 4) , Aaltje E. Manampiring 5)
1) Program Studi Pendidikan Dokter, Fakultas Kedokteran, Universitas Sam Ratulangi, Manado, Indonesia
2,3,4,5) Bagian Kimia, Fakultas Kedokteran, Universitas Sam Ratulangi, Manado, Indonesia *Corresponding author: fonabudiarso@unsrat.ac.id

## ABSTRAK
Diabetes  merupakan  penyakit  metabolik  kronis  dengan  tanda  peningkatan  kadar  glukosa darah. Salah satu target obat antidiabetes yaitu menghambat enzim α-/β-glukosidase yang bekerja dalam proses absorpsi glukosa. Tanaman leilem ( Clerodendrum minahassae Teisjm. &  Binn.)  sudah  dikenal  dan  dimaanfaatkan  sebagai  masakan  serta  obat  di  Minahasa  dan memiliki  potensi  sebagai  agen  antidiabetes.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui aktivitas ekstrak etanol daun leilem  terhadap penghambatan enzim β-glukosidase. Ekstrak dibuat menggunakan etanol 96%. Sifat antidiabetes diukur melalui aktivitas inhibisi enzim β-glukosidase.  Nilai  median  inhibisi  konsentrasi  (IC 50 )  ekstrak  dibandingkan  dengan acarbose berturut-turut adalah  28,229 dan  13,716. Ekstrak etanol daun leilem menghambat enzim β-glukosidase.
Kata kunci :  β-glukosidase; ekstrak etanol; daun leilem; in vitro

## In Vitro Test of Leilem Leaf Ethanol Activity on β-Glucosidase Enzyme Inhibition

## ABSTRACT
Diabetes is a chronic metabolic disease with signs of elevated blood glucose levels. One of the targets of antidiabetic drugs is to inhibit the enzyme α-/β-glucosidase which works in the process of glucose absorption. Leilem plant (Clerodendrum minahassae Teisjm. & Binn.) is well  known  and  used  as  a  dish  and  medicine  for  several  diseases  in  Minahasa  and  has potential as an antidiabetic agent. This study aimed to determine the activity of  ethanolic extract of leilem leaves in inhibiting β-glucosidase enzyme. The extract was prepared with 96%  ethanol.  Antidiabetic  properties  were  measured  by  β-glucosidase  enzyme  inhibitory activity. The inhibitory concentration (IC 50 ) values of the extract compared tp acarbose were 28,229 and 13,716. Ethanol extract of leilem leaves inhibits β-glucosidase enzyme.
Keywords : β-glucosidase; ethanol extract; in vitro; leilem leaf
(Article History: Received 09-01-2024; Accepted 29-04-2024; Published 29-04-2024)

## PENDAHULUAN
Diabetes merupakan penyakit metabolik kronis dengan tanda meningkatnya kadar glukosa darah (WHO, 2023). Hiperglikemia, peningkatan glukosa darah atau peningkatan gula darah, adalah dampak diabetes yang tidak terkendali (WHO, 2023). Kasus diabetes di Indonesia  menempati  peringkat  kelima  tertinggi  di  dunia.  Provinsi  Sulawesi  Utara
menempati  peringkat  keempat  tertinggi  di  Indonesia,  setelah  Provinsi  DKI  Jakarta, Kalimantan Timur, dan DIY, berdasarkan data Riskesdas tahun 2018 (Tim Riskesdas, 2018).
Diabetes  tipe  II  merupakan  bentuk  yang  umum  sering  terjadi,  dicirikan  oleh hiperglikemia,  kekurangan  insulin  relatif,  dan  resistensi  insulin  (Baynest  HW,  2015). Manajemen  diabetes  melitus  diawali  dengan  menerapkan  gaya  hidup  yang  sehat,  terapi nutrisi sesuai anjuran medis, dan kegiatan fisik seiring dengan intervensi farmakologis. Salah satu mekanisme dari obat antihiperglikemik oral adalah menghambat penyerapan glukosa di usus  kecil  untuk  mengatur  glukosa  postprandial  (Perkumpulan  Endokrinologi  Indonesia, 2021).
Keadaan saat  kadar glukosa postprandial meningkat dengan cepat   disebut glucose spike . Kondisi ini memicu peningkatan peroksidase lipid, koagulasi trombosit, dan sintesis reactive oxygen species yang berpotensi untuk menyebabkan kerusakan pembuluh darah dan menyebabkan timbulnya serta berkembangnya tahapan aterosklerosis. Komplikasi vaskular yang  terjadi  akibat  hiperglikemia  postprandial  meliputi  kelainan  mikrovaskuler  seperti retinopati  diabetik  dan  nefropati  diabetik  serta  kelainan  makrovaskuler  antara  lain  infark miokard, infark serebral, dan ateriosklerosis ekstremitas bawah (Hiyoshi et al ,. 2019).  Oleh karena  itu,  kontrol  hiperglikemia  postprandial  sangat  penting  dalam  pengobatan  diabetes serta pencegahan komplikasi kardiovaskular. (Li et al ., 2005)
Glukosidase merupakan enzim yang terlibat dalam disosiasi karbohidrat kompleks di usus halus yang berperan memutus ikatan glikosidik (Gondokesumo et al ., 2017). Enzim β- glukosidase merupakan bagian penting dari tahap akhir sistem selulosa. Selama hidrolisis selulosa,  selulase  bersama  dengan  eksoglukanase  dan  endoglukanase  bekerja  pada  serat selulosa serta menghidrolisisnya menjadi oligosakarida berukuran lebih kecil. Oligosakarida berukuran  kecil  dimanfaatkan  oleh  β-glukosidase  sebagai  substrat  untuk  melepaskan glukosa  sebagai  produk  akhir  hidrolisis  lengkap  selulosa  (G.  Singh et  al .,  2016).  β- glukosidase merupakan salah satu enzim yang ditemukan lebih awal dan banyak dipelajari karena distribusnya yang universal dan berbagai substrat yang terdefinisi dengan baik serta sifat enzim yang sederhana dalam pengujian (Singhania et al ., 2013).
Acarbose adalah obat antidiabetes oral yang dapat menekan gula darah postprandial. Namun, penggunaan obat ini bisa menyebabkan efek samping berupa gejala gastrointestinal seperti diare, rasa kembung pada perut, dan sakit perut (Dinicolantonio et al ., 2015). Dalam beberapa dekade terakhir, ketertarikan dalam penggunaan produk alami sebagai terapeutik untuk  pencegahan  dan  pengobatan  diabetes  tipe  2  terus  meningkat  karena toksisitas  serta efek samping produk alami lebih rendah (Dirir et al ., 2022).
Tanaman leilem ( Clerodendrum minahassae Teisjm. & Binn.), tanaman yang sering dijumpai di daerah Minahasa. Umumnya penduduk Minahasa menggunakan bagian tanaman leilem, yaitu daunnya untuk bahan tambahan pada masakan dan sebagai pengobatan untuk kondisi  seperti  sakit  perut,  cacingan,  dan  penyakit  paru-paru  (Utami et  al .,  2017).  Daun leilem berperan juga sebagai antioksidan dengan adanya senyawa metabolit sekunder yang terkandung didalamnya (Kairupan et al ., 2019). Senyawa yang ada di daun leilem memiliki potensi besar sebagai agen antidiabetes yang didasarkan atas sifat farmakologinya, energi ikatan, dan interaksinya terhadap beberapa enzim (Kepel et al. , 2022) . Pada penelitian ini, dilakukan uji in vitro aktivitas ekstrak etanol daun leilem terhadap penghambatan enzim β-
glukosidase.  Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas ekstrak etanol daun leilem terhadap penghambatan enzim β-glukosidase.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan dari bulan Agustus 2023 sampai dengan November 2023 di  Laboratorium  Kimia,  Program  Studi  Pendidikan  Dokter,  Fakultas  Kedokteran, Universitas  Sam  Ratulangi  dan  di  Laboratorium  Mikrobiologi,  Program  Studi  Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi, Manado.

## Bahan
Sampel penelitian adalah daun tumbuhan leilem ( Clerodendrum minahassae Teisjm. &  Binn.)  yang  dipetik  di  Desa  Kayuuwi,  Kecamatan  Kawangkoan  Barat,  Kabupaten Minahasa,  Provinsi  Sulawesi  Utara  dan  di  Desa  Rumoong  Atas,  Kecamatan  Tareran, Kabupeten  Minahasa  Selatan,  Provinsi  Sulawesi  Utara.  Bahan  yang  digunakan acarbose (A8980, Sigma-Aldrich), buffer fosfat pH 7.0, beta glucosidase activity assay kit (MAK129, Sigma-Aldrich), beta-glucosidase  almonds  lyphilized (49290,  Sigma-Aldrich),  Na 2 CO 3 , reagen  viz.  Mayer,  reagen  Dragendorff,  reagen  Wagner,  Na 2 CO 3 ,  amonia,  H 2 SO 4 , magnesium, HCl, etanol 96%, FeCl 1%, asam asetat, kloroform, asam sulfat, etanol 96%, bovine serum albumine, aqua demineralisata .

## Persiapan Simplisia Daun Leilem
Daun  leilem  yang  segar,  masih  muda,  tidak  keras  dan  tidak  kasar,  serta  tidak berlubang, dipetik 5-7 lembar dari pucuk saat pagi hari. Kemudian, daun dicuci bersih dan dikeringkan  dengan  cara  dianginkan.  Daun  kering  diblender  sehingga  didapatkan  serbuk daun, lalu diayak dengan ukuran 60 mesh lalu disimpan dalam wadah tertutup.

## Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Leilem.
Simplisia  kering  diukur  beratnya  dan  diekstraksi  menggunakan  metode  maserasi. Serbuk  daun  leilem  ( Clerodendrum  minahassae Teisjm.  &  Binn)  sejumlah  400  gram diekstraksi  dengan  etanol  96%  sebanyak  2  liter  selama  3  x  24  jam.  Selanjutnya,  ekstrak diremaserasi  menggunakan  500  mL  etanol  96%  selama  2  x  24  jam.  Selanjutnya,  ekstrak tersebut dipekatkan dengan oven bersuhu 42 º C selama 3 x 24 jam.

## Penapisan Fitokimia Serbuk Daun Leilem.
Senyawa matabolit sekunder ekstrak etanol daun leilem ( Clerodendrum minahassae Teisjm.  &  Binn)  dianalisis  secara  kualitatif  untuk  mengidentifikasi  keberadaan  alkaloid, flavonoid, tanin, terpenoid dan steroid, serta saponin. (Utami et al ., 2017)

## Uji Alkaloid
Campuran ekstrak dengan 5 mL kloroform dan 5 mL amonia dipanaskan, dikocok, dan disaring. Selanjutnya, pada setiap filtrat ditambahkan asam sulfat 2 N sebanyak 5 tetes, kemudian dikocok dan dibiarkan bereaksi. Fraksi bagian atas dari setiap filtrat diambil dan diujikan  dengan  menggunakan  reagen  Mayer,  Wagner,  dan  Dragendorf.  Alkaloid  positif apabila terbentuk endapan putih, coklat, dan jingga.

## Uji Flavonoid
Campuran ekstrak dengan 3 mL etanol 70% diaduk, dipanaskan, diaduk kembali, dan kemudian  disaring.  Filtrat  yang  dihasilkan  ditambahkan  denan    serbuk  Mg  sebanyak  0,1 gram dan 2 tetes HCl pekat. Apabila terjadi perubahan warna menjadi merah pada lapisan etanol, maka menunjukkan adanya flavonoid.

## Uji Tanin
Ekstrak disari dengan 10 mL air lalu disaring dan produk hasil saringan diencerkan dengan  air  sampai  warnanya  hilang.  Sebanyak  2  mL  larutan  dikeluarkan  dan  dicampur dengan  2  tetes  FeCl  1%.  Keberadaan  tanin  dapat  dikenali  dari  warnanya  yang  hijau kecokelatan atau hitam kebiruan.

## Uji Terpenoid dan Steroid
Ekstrak dicampur dengan 3 mL kloroform atau 3 mL etanol 70% dan ditambahkan 2 mL  H2SO4  pekat  dan  2 mL  asam  asetet anhidrat.  Senyawa  steroid  positif apabila terjadi perubahan warna dari ungu ke biru atau hijau, sedangkan senyawa terpenoid positif apabila terbentuk warna kecokelatan antar permukaan.

## Uji Saponin.
Ekstrak  ditempatkan  dalam  tabung  reaksi,  diberi  tambahan  air  panas  sebanyak  10 mL,  didinginkan  dan  kemudian  dikocok  intensif  selama  10  detik.  Keberadaan  senyawa saponin dapat dikonfirmasi jika terbentuk buih dengan tinggi 1-10 cm selama setidaknya 10 menit ketika ditambahkan 1 tetes HCl 2 N, buih tidak hilang.

## Uji aktivitas penghambatan β-glukosidase
Pembuatan  larutan  Larutan  Na 2 CO 3 dibuat  dengan  melarutkan  4239  mg  serbuk Na 2 CO 3 anhidrat ke dalam 200 mL aqua demineralisata. Konsentrasi substrat p-nitrophenyl- β-D-glucopyranoside (β-NPG) dibuat dengan mencampurkan 200 µL buffer dan 40 µL β- NPG.  Larutan  stok  enzim  β-glukosidase  dengan  konsentrasi  4,5  U/  mL  dibuat  dengan menimbang sebanyak 10,1 mg serbuk enzim β-glukosidase lalu dilarutkan ke buffer hingga mencapai volume 100 mL. Selanjutnya, pipet sebanyak 1 mL dari larutan stok lalu larutkan dengan buffer hingga mencapai 100 mL agar mendapatkan konsentrasi larutan 0,45 U/mL. Kemudian pipet sebanyak 1 mL dari larutan 0,45 U/mL dan dilarutkan dengan 2 mL buffer yang  mengandung  0,2%  BSA.  Larutan  0,2%  Bovine  Serum  Albumin  (BSA)  berasal  dari proses melarutkan 100 mg BSA dalam 50 mL buffer. Sebanyak ± 10 mg ekstrak dilarutkan dengan buffer dalam labu ukur 10 mL sehingga diperoleh larutan induk dengan konsentrasi ±1000 µg/mL. Dari larutan induk, dipipet 5 mL kemudian dilarutkan dengan buffer hingga 10  mL  sehingga  dihasilkan  konsentrasi  ±  500  µg/mL.  Untuk  mendapatkan  konsentrasi ekstrak sebesar 10 ppm, 20 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm maka dari larutan konsentrasi ±  500  µg/mL  dipipet  berturut-turut  sebanyak  0,2  mL,  0,4  mL,  1  mL,  2  mL,  3  mL  dan dilarutkan  dengan  buffer  hingga  10  mL.  Uji  aktivitas  inhibisi  β-glukosidase  dilakukan dengan  cara  setiap  larutan  pereaksi  yang  terdiri  atas  36  µL  larutan  buffer,  30  µL  larutan sampel dengan beberapa konsentrasi (10 ppm, 20 ppm, 50 ppm, 100 ppm, 150 ppm) dan 17 µL  substrat  β-NPG  dengan  konsentrasi  5  mM  dimasukkan  ke  dalam  96 microplate lalu diinkubasi selama 5 menit pada suhu 37ºC. Setelah inkubasi, tambahkan 17 µL larutan β- glukosidase 0,15 U /mL di tiap sumur sehingga volume total 100 µL. Menginkubasi kembali
selama 15 menit agar terjadi reaksi hidrolisis sempurna, lalu tambahkan  natrium karbonat (Na 2 CO 3 ) 200 mM sebanyak 100 µL, kemudian ukur absorbansi dengan panjang gelombang 450 nm menggunakan microplate reader .
Data  diolah  dengan  menentukan  rata-rata  absorbansi  dari  tiap  jenis  larutan, menghitung persen inhibisi, dan menggunakan regresi linear untuk menentukan nilai IC 50 , serta nilai potensi relatif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil Ekstraksi Daun Leilem (Clerodendrum minahassae Teisjm. & Binn.)
Sebanyak 400 gram serbuk leilem ( Clerodendrum minahassae Teisjm. & Binn) yang telah diekstraksi menghasilkan 28,84 gram ekstrak kental. Hasil perbandingan antara ekstrak dibagi dengan simplisia awal didapatkan persen rendeman sebesar 7,21%.

## Hasil Skrining Fitokimia
Tabel 1. Hasil Skrining Fitokimia Ekstrak Daun Leilem
No Golongan Senyawa Pereaksi Hasil Keterangan 1 Alkaloid Mayer Positif Terbentuk endapan putih Wagner Positif Terbentuk endapan coklat Dragedrof Positif Terbentuk endapan jingga 2 Flavonoid HCl + Mg Positif Terbentuk endapan merah bata 3 Tanin FeCl 3 Positif Terbentuk warna biru kehitaman 4 Terpenoid dan Steroid H 2 SO 4 + CH 3 COOH Positif Terbentuk warna ungu dan coklat 5 Saponin H 2 O + HCl Positif Terbentuk buih
Hasil  skrining  fitokimia  ekstrak  daun  leilem  dapat  dilihat  pada  Tabel  1.  Dalam analisis  fitokimia  golongan  senyawa  alkaloid  menggunakan  pereaksi  Mayer,  ditemukan endapan putih yang diperkirakan sebagai kompleks kalium-alkaloid. Prinsip dasar metode ini adalah reaksi pengendapan yang terjadi melalui penggantian ligan, dimana atom nitrogen dengan pasangan elektron bebas pada molekul alkaloid dapat menggantikan ion iodo dalam berbagai reagen. Reagen Dragendorff, yang mengandung bismut nitrat dan kalium iodida dalam  larutan  asam  asetat  glasial  (kalium  tetraiodobismutat  (III)),  menghasilkan  endapan berwarna  coklat  muda  sampai  kuning  (jingga)  sebagai  indikator  positif  adanya  alkaloid. Endapan ini menunjukkan adanya kalium alkaloid. Hasil positif untuk alkaloid juga diamati pada  uji  Wagner  dengan  terbentuknya  endapan  coklat  muda  hingga  kuning  yang diperkirakan sebagai kompleks kallium-alkaloid. Dalam pembuatan pereaksi Wagner, iodin bereaksi dengan ion I - dari kalium iodida, membentuk ion dengan warna coklat (Ergina et al ., 2014; Marliana et al ., 2005).
Dalam  analisis  flavonoid,  penambahan  logam  Mg  dan  HCl  dilakukan  untuk mereduksi  inti  benzopyrone  pada  struktur  flavonoid  sehingga  menyebabkan  terbentuknya
garam  flavonoid  berwarna  merah.  Warna  biru  kehitaman  pada  uji  tanan  menunjukkan terbentuknya kompleks antara tanin dan Fe 3+ . Terbentuknya kompleks ini dapat disebabkan oleh adanya senyawa fenolik terutama  tanin yang merupakan senyawa polifenol. Pengujian terpenoid  dan  steroid  mengubah  warna  menjadi  ungu  dan  coklat.  Hal  ini  disebabkan kemampuan senyawa triterpenoid dan steroid dalam membentuk warna ketika berinteraksi dengan H 2 SO 4 dalam pelarut asetat anhidrida. Uji saponin menunjukkan hasil positif karena terbentuknya gelembung. Saponin mempunyai gugus glikosil sebagai komponen polar dan gugus steroid atau triterpenoid sebagai komponen polar dan gugus steroid atau triterpenoid sebagai  komponen  non  polar,  sehingga  mempunyai  aktivitas  permukaan  dan  membentuk misel bila dikocok dengan air. Dalam struktur misel, gugus polar menghadap ke luar dan gugus  nonpolar  menghadap  ke  dalam,  sehingga  menciptakan  keadaan  seperti  gelembung (Habibi et al ., 2018).

## Hasil Uji Aktivitas Penghambatan Enzim β-glukosidase
Tabel 2 . Hasil Pengukuran Nilai Absorbansi dan Persen Inhibisi Enzim β-Glukosidase oleh Kontrol Positif.
Konsentasi (ppm) Absorbansi Rata-rata absorbansi %Inhibisi I II III 10 1,103 1,103 1,148 1,118 40,150 20 0,413 0,796 1,00 0,736 60,582 50 0,324 0,326 0,885 0,512 72,609 100 0,39 0,397 0,512 0,433 76,820 150 0,339 0,348 0,348 0,345 81,531
Tabel 3. Hasil Pengukuran Nilai Absorbansi Enzim β-Glukosidase oleh Sampel
Konsentrasi (ppm) Absorbansi Rata-rata absorbansi %Inhibisi I II III 10 0,246 1,982 1,168 1,132 39,400 20 0,246 1,993 1,099 1,113 40,435 50 0,273 0,691 1,189 0,718 61,581 100 0,267 0,793 0,859 0,640 65,757 150 0,249 0,747 0,755 0,584 68,754
Hasil Analisis Nilai IC 50 Kontrol Positif
Hasil uji aktivitas acarbose didapatkan dari persamaan garis regresi dengan memplot ln konsentrasi larutan uji dengan nilai persen inhibisi yang terdapat pada Tabel 2.
Gambar 1 . Grafik Aktivitas Inhibisi Enzim β-Glukosidase oleh Kontrol Positif
Berdasarkan Gambar 1 didapatkan persamaan y = 14,249x + 12,688 dengan nilai R 2 sebesar 0,926.  Adapun dari persamaan regresi linear oleh kontrol positif  didapatkan nilai IC 50 = 13,716

## Hasil Analisis IC 50 Sampel Uji
Hasil  uji  aktivitas  ekstrak  daun  leilem  didapatkan  dari  persamaan  garis  regresi dengan memplot ln konsentrasi larutan uji dengan persen inhibisi yang terdapat pada Tabel 3.
Gambar 2. Grafik Aktivitas Inhibisi Enzim β-Glukosidase oleh Sampel
Berdasarkan gambar 2 didapatkan persamaan y = 12,208x + 9,221 dengan nilai R 2 sebesar  0,929.  Adapun  dari  persamaan  regresi  linear  oleh  kontrol  positif  didapatkan  nilai IC 50 = 28,229
Aktivitas potensi relatif  = (IC 50 kontrol positif / IC 50 sampel) x 100%
= (13,716/28,229) x 100%
= 0,486
0 20 40 60 80 100 0 1 2 3 4 5 6 % I nhibi si Ln Konsentrasi (ppm) Kontrol Positif 0 20 40 60 80 0 1 2 3 4 5 6 % I nhi bi si Ln Konsentrasi (ppm) Sampel
Prinsip  dasar  pengujian  ini  adalah  mengukur  aktivitas  enzim  dengan  memantau penyerapan  p-nitrofenol  yang  merupakan  hasil  hidrolisis  substrat  β-NPG.  Semakin  besar kemampuan  ekstrak  dalam  menghambat  aktivitas  enzim  β-glukosidase  maka  semakin rendah jumlah p-nitrofenol yang dihasilkan. Hal ini terlihat dari nilai serapan yang semakin rendah (Gumilang, 2015). Hasil uji penghambatan dapat dilihat pada Tabel 2 dan Tabel 3. Untuk  menghitung  nilai  IC 50 yaitu  konsentrasi  yang  dibutuhkan  untuk  menghambat  50% aktivitas enzim maka diperlukan persen inhibisi. Nilai IC 50 yang rendah berarti kemampuan penghambatan terhadap  aktivitas  β-glukosidase  semakin  tinggi. Hasil  IC 50 sebesar 13,716 didapatkan  pada  kontrol  positif  yaitu acarbose .  Sedangkan,  IC 50 28,229  diperoleh  dari sampel  yaitu  ekstrak  daun  leilem.  Potensi  relatif  ekstrak  daun  leilem  dalam  menghambat enzim β-glukosidase yaitu sebesar 0,4 kalinya dibandingkan dengan kontrol positif.
Kemampuan  penghambatan  oleh  kontrol  positif  masih  lebih  tinggi  apabila dibandingkan  dengan  sampel.  Adanya  aktivitas  penghambatan  oleh  ekstrak  dapat disebabkan  oleh  karena  pada  skrining  fitokimia  terdapat  senyawa  pada  daun  leilem  yang memiliki efek menghambat enzim ini, antara lain senyawa alkaloid, flavonoid, terpenoid dan steroid, tanin, dan saponin.
Pada  beberapa  studi  yang  telah  dilakukan  menunjukkan  bahwa  senyawa-senyawa tersebut  berperan  sebagai  antidiabetes  dengan  menghambat  enzim  glukosidase. Salah satunya pada  studi  in  vitro,  terdapat  senyawa  alkaloid  yang  diisolasi  dari  daun Murraya koenigii yang terbukti menghambat aktivitas enzim glukosidase (Muhammad et al ., 2021) . Glukosidase merupakan enzim yang bertugas untuk mendegradasi gula kompleks menjadi sederhana. Dengan adanya penghambatan glukosidase maka akan menunda penyerapan gula di  usus,  sehingga  ini  merupakan  strategi  untuk  menjaga  kadar  gula  darah  pada  pasien diabetes melitus tipe  II.  Tiga siklopeptida alkaloid yaitu nummularine-R, nummularin-C, dan  hemsine-A diisolasi  dari  tumbuhan Ziziphus  oxyphylla  edgw memberikan  hasil  yaitu dapat  mengontrol  hiperglikemia  postprandial  dengan  proses  inhibisi  enzim  glukosidase  ( Choudhary et  al .,  2011).  Senyawa  carbazole  alkaloid  yang  diperoleh  dari  daun Murraya koenigii menunjukkan efek penghambatannya terhadap enzim glukosidase. (Dineshkumar et al. , 2010). Penelitian lain membandingkan efek antidiabetik dari total alkaloid dari Feculae bombycis (TAFB) dan flavonoid, studi ini dilakukan secara in vitro dan in vivo (eksperimen tikus induksi diabetes), didapatkan bahwa baik alkaloid dan flavonoid dapat menghambat aktivitas enzim glukosidase untuk menurunkan level glukosa darah (Geng et al ., 2010) Studi  lain  meneliti  senyawa  flavonoid  dari  tumbuhan Ampelopsis  grossedentata memberikan  aksi  penghambatan  enzim  glukosidse  dengan  inhibisi  kompetitif  sehingga membantu  kontrol  kadar  glukosa  postprandial  (Singh et  al .,  2022).  Senyawa  Naringenin bagian dari Flavanones (subklas flavonoid) terbukti menghambat aktivitas intestinal  enzim glukosidase  dengan  menunda  absorpsi  karbohidrat.  Senyawa  sianidin  dan  senyawa  rutin yang  merupakan  bagian  dari  golongan  alkaloid  terbukti  juga  dalam  prosesnya  untuk menghambat enzim glukosidase dengan mengurangi absorpsi glukosa di intestinal (Al-Ishaq et al. , 2019).
Terpenoid  menunjukkan  aktivitas  inhibisi  enzim  glukosidase,  terbukti  dengan penelitian  yang  dilakukan  Singh  dan  kawan-kawan  yang  mengisolasi  terpenoid  dari tumbuhan Cucurbitaceae dan Salvia urmiensis Bunge (Singh et al ., 2022) . Penelitian oleh Deutschlander,  meneliti  senyawa  betulin,  termasuk  golongan  terpenoid,  senyawa  betulin
diisolasi dari akar tumbuhan Euclea undulata dan terbukti menghambat enzim glukosidase (Deutschländer et  al .,  2011).  Penelitian  lain  meneliti  jenis  triterpenoid  yaitu  asam hyptadienic  diisolasi  dari Potentilla  fulgens telah  menunjukkan  melawan  aktivitas  enzim glukosidase  dan  terbukti  berpotensi  dalam  penanganan  diabetes  (Kumar et  al .,  2013). Penelitian lain telah meneliti pentacyclic triterpene asetate diisolasi dari Fagara tessmanni juga  menunjukkan  efek  inhibisinya  (Mbaze et  al .,  2007).  Tiga  senyawa  baru  golongan triterpenoid  diisolasi  dari Salacia  hainanensis dibandingkan  dengan acarbose ,  senyawa tersebut  menunjukkan  inhibisi  kuat  melawan  enzim  glukosidase    dan  potensial  untuk pengobatan diabetes (Huang et al ., 2012).
Senyawa  golongan  tanin  terbukti  juga  dalam  penghambatannya  terhadap  enzim glukosidase, hal ini berkaitan dengan adanya proanthocyanidin (Sieniawska, 2015) . Tanin yang dikondensasi dari fraksi daun R.mucronata memberikan IC 50 yang lebih rendah dari obat acarbose , hal ini berarti bahwa fraksi tersebut memiliki potensi sebagai bahan alami untuk antidiabetes, terbukti dengan aktivitas penghambatannya terhadap enzim glukosidase yang  menunda  absorpsi  glukosa  di  usus.  Mekanisme  inhibisi  glukosidase  tersebut diperkirakan karena ikatan hidoksilasi dan substitusi  cincin B (Budi & Puspitasari, 2015). Senyawa  lain  yaitu  Procyanidin  A2  yang  diperoleh  dari  tanin  yang  dikondensasi  dari tumbuhan Wendlandia glabrata berpotensi sebagai agen antidiabetes dengan menginhibisi enzim glukosidase (Sheikh et al ., 2019)
Aktivitas  penghambatan  glukosidase  ditunjukkan  juga  oleh  senyawa  golongan saponin, sebagai contoh Arjunolic acid yang didapat dari Terminalia arjuna . Penelitian ini dilakukan  dengan  model  tikus  diabetes  dengan  induksi  streptotozin  (Elekofehinti,  2015) . Dengan  model  penelitian  yang  sama,  saponin  dari  buah Terminalia  arjuna terbukti  juga menghambat aktivtas enzim glukosidase. Senyawa lain dari golongan Saponin yaitu 28-O- monoglucosides  diisolasi  dari  tumbuhan Gypsophila  oldhamiana menginhibisi  aktivitas enzim glukosidase (Choudhary et al ., 2020) .

## KESIMPULAN
Ekstrak etanol daun leilem ( Clerodendrum minahassae Teisjm. & Binn) mengandung senyawa  bioaktif  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  terpenoid    dan  steroid,  dan  saponin.  Ekstrak etanol daun leilem  ( Clerodendrum minahassae Teisjm. & Binn) memiliki aktivitas dalam penghambatan enzim β-glukosidase dengan potensi relatif sebesa 0,4 kalinya dibandingkan dengan Acarbose sebagai kontrol positif.

## DAFTAR PUSTAKA
Al-Ishaq, R.K., Abotaleb, M., Kubatka, P., Kajo, K., & Büsselberg, D. (2019). Flavonoids and  their  anti-diabetic  effects:  Cellular  mechanisms  and  effects  to  improve  blood sugar levels. Biomolecules , 9 (9), 430. https://doi.org/10.3390/biom9090430.
Baynest,  H.W.  (2015).  Classification,  Pathophysiology,  Diagnosis  and  Management  of Diabetes Mellitus. Journal of Diabetes & Metabolism , 06 (05). https://doi.org/10.4172/2155-6156.1000541.
Budi  Sasmito,  B.,  &  Puspitasari,  Y.E.  (2016).  Antidiabetic  and  antioxidant  activities  of tannin  extract  of  Rhizophora  mucronata  leaves. Available  Online  Www.Jocpr.Com Journal of Chemical and Pharmaceutical Research , 8 (3), 143–148.
Choudhary, M.I., Adhikari, A., Rasheed, S., Marasini, B.P., Hussain, N., Kaleem, W.A., & Atta-Ur-Rahman.  (2011).  Cyclopeptide  alkaloids  of  Ziziphus  oxyphylla  Edgw  as novel  inhibitors  of  α-glucosidase  enzyme  and  protein  glycation. Phytochemistry Letters , 4 (4), 404-406. https://doi.org/10.1016/j.phytol.2011.08.006.
Choudhary, N., Khatik, G.L., & Suttee, A. (2020). The Possible Role of Saponin in Type-II Diabetes- A Review. Current Diabetes Reviews , 17 (2), 107–121. https://doi.org/10.2174/1573399816666200516173829.
Deutschländer, M.S., Lall, N., Van De Venter, M., & Hussein, A.A. (2011). Hypoglycemic evaluation of a new triterpene and other compounds isolated from Euclea undulata Thunb. var. myrtina (Ebenaceae) root bark. Journal of Ethnopharmacology , 133 (3), 1091–1095. https://doi.org/10.1016/j.jep.2010.11.038.
Dineshkumar, B., Mitra, A., & Mahadevappa, M. (2010). Antidiabetic and hypolipidemic effects of mahanimbine (carbazole alkaloid) from Murraya koenigii (rutaceae) leaves. International  Journal  of  Phytomedicine , 2 (1),  22–30. https://doi.org/10.5138/ ijpm.2010.0975.0185.02004.
Dinicolantonio, J.J., Bhutani, J., & O’keefe, J.H. (2015). Acarbose: safe and effective for lowering postprandial hyperglycaemia and improving cardiovascular outcomes. Open Heart , 2 , 327. https://doi.org/10.1136/openhrt-2015.
Dirir, A.M., Daou, M., Yousef, A.F., & Yousef, L.F. (2022). A review of alpha-glucosidase inhibitors  from  plants  as  potential  candidates  for  the  treatment  of  type-2  diabetes. Phytochemistry  Reviews , 21 (4),  1049–1079.  https://doi.org/10.1007/s11101-021- 09773-1.
Elekofehinti,  O.O.  (2015).  Saponins:  Anti-diabetic  principles  from  medicinal  plants  -  A review. Pathophysiology , 22 (2),
95–103. https://doi.org/10.1016/ j.pathophys.2015.02.001.
Geng, P., Yang, Y., Gao, Z., Yu, Y., Shi, Q., & Bai, G. (2010). Combined effect of total alkaloids  from  Feculae  Bombycis  and  natural  flavonoids  on  diabetes  . Journal  of Pharmacy  and  Pharmacology , 59 (8),  1145–1150. https://doi.org/10.1211/ jpp.59.8.0013.
Gondokesumo, M.E., Kusuma, H.S.W., & Widowati, W. (2017). α-/β-Glucosidase and α- Amylase  Inhibitory  Activities  of  Roselle  (Hibiscus  sabdariffa  L.)  Ethanol  Extract. Molecular  and  Cellular  Biomedical  Sciences , 1 (1),  34. https://doi.org/10.21705/ mcbs.v1i1.3.
Gumilang,  J.,  &  Ui,  F.F.  (2015).  Uji  Penghambatan  Aktivitas  Alfa-Amilase  dan  Alfa- Glukosidase Secara In Vitro Pada Ekstrak Daun Garcinia rigida Miq., Serta Skrining Fitokimia Pada Ekstrak Teraktif [Skripsi]. Universitas Indonesia, Depok, Jakarta.
Hiyoshi, T., Fujiwara, M., & Yao, Z. (2019). Postprandial hyperglycemia and postprandial hypertriglyceridemia in type 2 diabetes. Journal of Biomedical Research , 33 (1), 1– 16. https://doi.org/10.7555/JBR.31.20160164 .
Habibi, A.I., Firmansyah, R.A., & Setyawati, S.M. (2018). Skrining Fitokimia Ekstrak n- Heksan  Korteks  Batang  Salam  ( Syzygium  polyanthum ). Indonesian  Journal  of Chemical Science , 7(1), 1-4. DOI: 10.15294/ijcs.v7i1.23370.
Huang, J., Guo, Z.H., Cheng, P., Sun, B.H., & Gao, H.Y. (2012). Three new triterpenoids from Salacia hainanensis Chun et How showed effective anti-α-glucosidase activity. Phytochemistry Letters , 5 (3), 432–437. https://doi.org/10.1016/j.phytol.2012.03.016 Kairupan, C.F., Mantiri, F. R., & Rumende, H.R.R. (2019). Phytochemical Screening and Antioxidant Activity of Ethanol Extract of Leilem (Clerodendrum minahassae Teijsm. &  Binn)  as  an  Antihyperlipidemic  and  Antiatherosclerotic  Agent. IOP  Conference Series:  Earth  and  Environmental  Science , 217 (1).  https://doi.org/10.1088/1755- 1315/217/1/012016.
Kepel, B.J., Fatimawali, F., Tallei, T.E., & Kalalo, M.J. (2022). Unraveling Anti-Diabetic and  Pharmacological  Properties  of  Green  Gedi,  Leilem,  and  Sesewanua  Using  A Pharmacoinformatics  Approach. Jurnal  Penelitian  Tanaman  Industri , 28 (1),  21. https://doi.org/10.21082/jlittri.v28n1.2022.21-34
Ergina, Nuryanti, S., & Pursitasari I.D. (2014). Uji Kualitatif Senyawa Metabolit Sekunder Pada  Daun  Palado  (Agave  angustifolia)  Yang  Diekstraksi  Degnan  Pelarut  Air  dan Etanol. J. Akad. Kim , 3 (3), 165–172.
Kumar,  D.,  Ghosh,  R.,  &  Pal,  B.C.  (2013).  α-Glucosidase  inhibitory  terpenoids  from Potentilla  fulgens  and  their  quantitative  estimation  by  validated  HPLC  method. Journal  of  Functional  Foods , 5 (3),  1135–1141. https://doi.org/10.1016/ j.jff.2013.03.010
Li, Y., Wen, S., Kota, B.P., Peng, G., Li, G.Q., Yamahara, J., & Roufogalis, B.D. (2005). Punica  granatum  flower  extract,  a  potent  α-glucosidase  inhibitor,  improves postprandial  hyperglycemia  in  Zucker  diabetic  fatty  rats. Journal  of Ethnopharmacology , 99 (2), 239–244. https://doi.org/10.1016/j.jep.2005.02.030. Marliana, S.D., Suryati, V., & Suyono, S. (2005). The phytochemical screenings and thin layer chromatography analysis of chemical compounds in ethanol extract of labu siam fruit  (Sechium  edule  Jacq.  Swartz.). Biofarmasi  Journal  of  Natural  Product Biochemistry , 3 (1), 26–31. https://doi.org/10.13057/biofar/f030106.
Mbaze, L.M., Poumale, H.M.P., Wansi, J.D., Lado, J.A., Khan, S.N., Iqbal, M.C., Ngadjui, B.T., & Laatsch, H. (2007). α-Glucosidase inhibitory pentacyclic triterpenes from the stem  bark  of  Fagara  tessmannii  (Rutaceae). Phytochemistry , 68 (5),  591–595. https://doi.org/10.1016/j.phytochem.2006.12.015.
Muhammad,  I.,  Rahman,  N.,  Gul-E-nayab,  Nishan,  U.,  &  Shah,  M.  (2021).  Antidiabetic activities  of  alkaloids  isolated  from  medicinal  plants. Brazilian  Journal  of Pharmaceutical Sciences , 57 . https://doi.org/10.1590/s2175-97902020000419130
Perkumpulan  Endokrinologi  Indonesia.  (2021).  Pedoman  Pengelolaan  dan  Pencegahan
Diabetes Melitus Tipe 2 Di Indonesia. https://pbperkeni.or.id/wp- content/uploads/2021/11/22-10-21-Website-Pedoman-Pengelolaan-dan-Pencegahan- DMT2-Ebook.pdf
Sheikh, Y., Chanu, M. B., Mondal, G., Manna, P., Chattoraj, A., Chandra Deka, D., Chandra Talukdar,  N.,  &  Chandra  Borah,  J.  (2019).  Procyanidin  A2,  an  anti-diabetic condensed  tannin  extracted  from:  Wendlandia  glabrata,  reduces  elevated  G-6-Pase and mRNA levels in diabetic mice and increases glucose uptake in CC1 hepatocytes and C1C12 myoblast cells. RSC Advances , 9 (30), 17211–17219. https://doi.org/10.1039/c9ra02397f.
Sieniawska,  E.  (2015).  Activities  of  Tannins-From  In  Vitro  Studies  to  Clinical  Trials. Natural Product Communications , 10 (11), 1877–1884.
Singh, G., Verma, A. K., & Kumar, V. (2016). Catalytic properties, functional attributes and industrial applications of β-glucosidases.
3 Biotech , 6 (1), 1–14. https://doi.org/10.1007/s13205-015-0328-z.
Singh, S., Bansal, A., Singh, V., Chopra, T., & Poddar, J. (2022). Flavonoids, alkaloids and terpenoids: a new hope for the treatment of diabetes mellitus. Journal of Diabetes and Metabolic Disorders , 21 (1), 941–950. https://doi.org/10.1007/s40200-021-00943-8. Singhania, R. R., Patel, A. K., Sukumaran, R. K., Larroche, C., & Pandey, A. (2013). Role and  significance  of  beta-glucosidases  in  the  hydrolysis  of  cellulose  for  bioethanol production. Bioresource  Technology , 127 ,  500–507. https://doi.org/10.1016/ j.biortech.2012.09.012
Tim  Riskesdas  2018.  Hasil  Utama  RISKESDAS  2018.  Retrieved  August  22,  2023,  from https://kesmas.kemkes.go.id/assets/upload/dir_519d41d8cd98f00/files/Hasil- riskesdas-2018_1274.pdf
Utami,  Y.  Umar,  A.H.,  Syahruni,  R.,  &  Kadullah,  I.  (2017).  Standardisasi  Simplisia  dan Ekstrak Etanol Daun Leilem ( Clerodendrum minahassae Teisjm. & Binn.). Journal of Pharmaceutical and Medicinal Sciences, 2(1), 32-39.
World  Health  Organization.  (2023a,  April  5). Diabetes .  https://www.who.int/health- topics/diabetes#tab=tab_1
World Health Organization. (2023b, April 5). Diabetes . Diabetes. https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/diabetes#:~:text=Overview , hormone%20that%20regulates%20blood%20glucose.