AKTIVITAS ANTIJAMUR PELAPUK KAYU NANOPARTIKEL KITOSAN-EKSTRAK N-HEKSAN DAGING BUAH KAYU GADIS ( Cinnamomum parthenoxylon )
Munifilia Ekasari 1 , Devi  Nurhasana 2 , Andre Mudyanto 3 , Avidlyandi Avidlyandi 4 , Charles Banon 5 , Morina Adfa 6,7, * 1,2,3 Mahasiswa Program Studi S2 Kimia-Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu. Jalan W.R. Supratman Kandang Limun, Kota Bengkulu, Bengkulu 38371
4,5,6 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Bengkulu. Jalan W.R. Supratman Kandang Limun, Kota Bengkulu, Bengkulu 38371
7 Pusat Riset Produk Bahan Alam dan Material Fungsional, Lembaga Penelitian dan Pengabdian kepada Masyarakat (LPPM) Universitas Bengkulu *Corresponding author, e-mail:  morina@unib.ac.id

## A B S T R A C T
This study aims to synthesize chitosan nanoparticles - n -hexane extract of Cinnamomum parthenoxylon (CP)  fruit  using  the  ionic  gelation  method,  to  characterize  them,  and  to determine their antifungal activity against the wood-rotting fungi Trametes versicolor and Fomitopsis  palustris .  Chitosan-CP  extract  nanoparticles  were  formulated  with chitosan:Na-TPP:CP  extract  ratio  of  1:1:0.5.  Particle  size  and  polydispersity  index  were determined using a particle size analyzer (PSA), and particles morphology was observed using a scanning electron microscope (SEM), and antifungal activity was measured using agar  media.  The results  revealed  that the average  size  of  chitosan  nanoparticles  (base) was 276.9 nm, while the average size of chitosan-CP extract nanoparticles was 807.6 nm. The polydispersity index (PI) of both nanoparticles was greater than 0.7. Observations of the  nanoparticles'  morphology  revealed  that  aggregation/agglomeration  formed  in  the resulting particles. Both nanoparticles chitosan (base) and chitosan-CP extract inhibited the growth of white rot fungi ( T. versicolor ) more than brown rot fungi ( F. palustris ), as measured by the inhibitory zone.
Keywords : Anti fungal, Cinnamomum parthenoxylon, Fomitopsis palustris, Nanoparticles, Trametes versicolor

## PENDAHLUAN
Kayu gadis  ( Cinnamomum parthenoxylon ) dapat ditemukan di Cina, Pakistan, India, Thailand, Malaysia dan Indonesia (Phongpaichit et al ., 2007). Kayu gadis dapat dimanfaatkan  sebagai  kayu  pertukangan  maupun  sebagai  obat  herbal  (Wang et  al ., 2020).  Penggunaan  secara  tradisional,  kayu  gadis  dimanfaatkan  untuk  mengobati masuk angin, radang sendi, sakit perut, diare, asma, demam, sakit kepala, malaria dan gangguan haid (Jia et al ., 2009).
Tumbuhan  kayu  gadis  juga  berpotensi  menjadi  bahan  pengawet  alami  kayu. Ekstrak  batang  dan  kulit  batang  kayu  gadis  dilaporkan  dapat  menghambat pertumbuhan  jamur  pelapuk  coklat Gloeophyllum  trabeum dan  pelapuk  putih Pycnoporus  sanguineus (Kawamura et  al .,  2011).  Asap  cair  batang  kayu  gadis  ( C. parthenoxylon )  juga  dapat  menghambat  pertumbuhan  jamur  pelapuk  kayu Schizophyllum  commune dan Fomitopsis  palustris (Adfa et  al .,  2020).  Ekstrak  kasar metanol  daun  kayu  gadis  ( C.  parthenoxylon )  juga  dilaporkan  dapat  menghambat perkembangan  rayap  ( Coptotermes  curvignathus )  serta  mempunyai  aktivitas
antimakan  (Adfa et  al .,  2017).  Minyak  atsiri  dari  akar  tumbuhan  kayu  gadis mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus , Streptococcus mutans , Bacillus subtilis , dan aktivitas antijamur terhadap jamur Candida albicans dan Cryptococcus neoformans (Phongpaichit et al ., 2007). Bagian lain dari tumbuhan kayu gadis  yang  belum  banyak  dilaporkan  adalah  buahnya.  Buah  muda C.  parthenoxylon mempunyai bau wangi yang khas yang berasal dari minyak atsiri yang dikandungnya (Fuchino et al ., 2015), namun sejauh ini belum ditemukan laporan pemanfaatannya. Beberapa  minyak  atsiri  telah  dilaporkan  dapat  menghambat  pertumbuhan jamur  pelapuk  kayu  dan  diaplikasikan  sebagai  bahan  pengawet  kayu.  Voda et  al .
[2004]  melaporkan  efektivitas  antijamur  yang  sangat  kuat  dari  minyak  atsiri  adas manis, kemangi, jintan, oregano, dan timi terhadap jamur pelapuk coklat Coniophora puteana dan  jamur  pelapuk  putih T.  versicolor dengan  menggunakan  metode  dilusi agar.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  senyawa  yang  paling  efektif  dalam menghambat  pertumbuhan  kedua  jamur  tersebut  adalah thymol, carvacrol , trans- anethole , methyl  chavicol ,  and cuminaldehyde .  Penelitian  lainnya  dilaporkan  oleh Chittenden  dan  Singh  (2011)  yang  telah  mengidentifikasi  bahwa eugenol dan cinnamaldehyde dapat berpotensi sebagai pengawet kayu untuk perawatan kayu yang tidak terpapar pada kondisi basah.
Disisi  lain  perkembangan  teknologi  mikro  dan  nanopartikel  memungkinkan suatu  ekstrak  atau  minyak  atsiri  dapat  dienkapsulasi  atau  dibuat  berukuran  nano dengan  harapan  dapat  meningkatkan  aktivitas  ekstrak  karena  mempunyai  ukuran partikel  yang  lebih  kecil  sehingga  diharapkan  semakin  mudah  mencapai  target sasaran  serta  dapat  juga  meningkatkan  masa  simpan  ekstrak.  Polimer  yang digunakan  pada  metode  ini  adalah  kitosan,  menggunakan  metode  gelasi  ionik memungkinkan  terbentuk cross-linking antara  kitosan  dengan  natrium  tripoliposfat sehingga  dapat  menghasilkan  produk  berukuran  nanometer  dan  lebih  stabil (Sivakami et al ., 2013).
Sejauh ini belum ada laporan pemanfaatan buah kayu gadis ( C. parthenoxylon ) untuk  menghambat  pertumbuhan  jamur  pelapuk  kayu,  maupun  pengaplikasiannya dalam  bentuk  nanopartikel  sebagai  bahan  pengawet  alami  pada  kayu.  Untuk mengoptimalkan pemanfaatan daging buah muda kayu gadis sebagai pengawet alami kayu,  maka  pada  penelitian  ini  dilakukan  sintesis  dan  karakterisasi  nanopartikel kitosan-ekstrak  daging  buah  muda  kayu  gadis  ( C.  parthenoxylon )  menggunakan metode  gelasi  ionik  serta  menguji  aktivitasnya  dalam  menghambat  pertumbuhan jamur pelapuk kayu T. versicolor dan F. palustris .

## METODE Bahan dan Alat
Jamur  yang  diuji  adalah  jamur  pelapuk  putih Trametes  versicolor dan  jamur pelapuk  coklat Fomitopsis  palustris .  Bahan-bahan  penelitian  adalah  PDA  ( Potato Dextrose  Agar ) Merck, Chitosan ≥ 75% (Sigma aldrich), Tween 80 (Merck), Natrium Tripolipospat  (Merck),  asam  asetat  glasial  (Merck),  akuades, n -heksan  (teknis), spritus,  diklorometan (Merck),  etanol  70%  (teknis)  dan  etanol  96%  (teknis). Instrumen: rotary  evaporator ( Heidolph ),  oven  ( Philips ),  autoklaf  (GEA),  inkubator ( Froilabo ), laminar  air  flow ( Telster AV-100), Freeze  Dryer ( Nuaire NU9483GC), Spektrofotometer  UV-Vis  ( Agilent  Technologies  Cary 60),  Sentrifuge  ( Rotina 380R Hettich  Zentrifugen D-78532 Tuttlingen ),  FTIR  ( Brunker ),  SEM  ( Phenom  Desktop ProXL ),  dan  PSA  ( Beckman  Coulter ).  Sedangkan  alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  neraca  analitik  (aeADAM), hot  plate (Salton),  lampu  spritus,
cawan petri diameter 9  cm, cork borer 5 mm, mikropipet, spuit 25 mL,  dan  spuit 1 mL.
Sampel Penelitian
Sampel  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  buah  kayu  gadis  ( C. parthenoxylon ) yang masih muda dengan kriteria berwarna hijau yang diambil dari Desa Lubuk Sini, Kecamatan Taba Penanjung, Kabupaten Bengkulu Tengah, Provinsi Bengkulu.  Setelah  dikoleksi,  sampel  disimpan  di  dalam freezer selama  satu  malam sebelum dilakukan ekstraksi.

## Proses Ekstraksi Sampel
Buah kayu gadis dipisahkan antara daging buah muda dan bijinya, selanjutnya daging buah muda ditimbang sebanyak 490 g dimasukkan ke dalam botol gelap dan dimaserasi dengan pelarut n -heksan sebanyak 700 mL selama 4 hari. Hasil maserasi disaring,  residu  yang  didapat  diremaserasi  kembali  dengan n -heksan,  proses remaserasi  dilakukan  hingga  pelarut  n-heksan  hasil  remaserasi  tidak  berwarna. Semua  filtrat  disatukan  dan  pelarutnya  diuapkan  menggunakan rotary  evaporator pada suhu 45 °C untuk mendapatkan ekstrak kasar n -heksan daging buah muda kayu gadis  sebanyak 14,65 g dengan rendemen 3% dan berwarna hijau tua  (Adfa et al ., 2015).
Pembuatan Nanopartikel Kitosan (Basis) dan Nanopartikel Kitosan-Ekstrak n - Heksan Daging Buah Muda Kayu Gadis ( Cinnamomum parthenoxylon ) Nanopartikel  kitosan-ekstrak n -heksan  daging  buah  muda  kayu  gadis  dibuat dengan menggunakan metode  gelasi ionik, dengan penggunakan formula pada Tabel 1 (Shetta et al ., 2019). Sebanyak 0,5 g kitosan ditimbang dan dimasukkan ke dalam labu ukur 50 mL kemudian ditambahkan asam asetat glasial 1% hingga tanda batas, selanjutnya larutan dipindahkan ke dalam Erlenmeyer untuk dilakukan pengadukan menggunakan magnetic  stirrer selama  12  jam  dengan  kecepatan  1.500  rpm  pada suhu  ruang  sehingga  didapatkan  larutan  kitosan  1%.  Sebanyak    0,5  mL tween 80 ditambahkan  tetes  demi  tetes  kedalam  larutan  kitosan  dengan  pengadukan  yang terus  dilanjutkan  dengan  kecepatan  1.500  rpm  selama  2  jam  pada  suhu  45°C  . Setelah  2  jam  pengadukan  selanjutnya  ditambahkan  larutan  ekstrak n -heksan daging  buah  muda  kayu  gadis  yang  telah  dibuat  dengan  melarutkan  0,5  g  ekstrak dengan  5  mL  diklorometan,  pengadukan  tetap  dilanjutkan  dengan  kecepatan  1.500 rpm selama 3 jam pada suhu ruang. Selanjutnya dilakukan penambahan NaTPP 0,4% sebanyak 50 mL, pengadukan tetap dilanjutkan dengan kecepatan 1.500 rpm selama 2 jam pada suhu ruang. Pembuatan nanopartikel kitosan (basis) digunakan prosedur yang  sama  dengan  pembuatan  nanopartikel  kitosan-ekstrak  namun  tanpa penambahan  ekstrak.  Selanjutnya  untuk  mengetahui  terbentuknya  nanopartikel kitosan  (basis)  dan  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  dianalisis  menggunakan Spektrofotometer UV-Vis  pada panjang gelombang 200-800 nm. Setelah nanopartikel terbentuk,  maka  diambil  sebanyak  5  mL  untuk  menentukan  ukuran  partikelnya menggunakan  PSA  ( Particle  Size  Analyzer ).  Sisa  nanopartikel  kitosan  (basis)  dan nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  kemudian  disentrifuse  selama  20  menit  dengan kecepatan  2500  rpm.  Setelah  didapatkan  hasil  dari  sentrifuge  kemudian  diambil pelletnya  dan  selanjutnya  dikeringkan  hingga  berbentuk  serbuk  menggunakan Freeze dryer . Hasil dari Freeze drying dilanjutkan dengan karakterisasi menggunakan SEM ( Scanning Electron Microscopy ) untuk melihat morfologi.
Tabel 1. Formulasi pembuatan nanopartikel kitosan (basis) dan nanopartikel kitosan ekstrak n -heksan daging buah muda kayu gadis ( C. parthenoxylon )
Bahan Nanopartikel kitosan (basis) Nanopartikel kitosan - ekstrak n - heksan daging buah muda Kayu Gadis (Nanopartikel kitosan-ekstrak CP) Kitosan (g) 0,5 0,5 Asam asetat glasial 1% (mL) 50 50 Tween 80 (mL) 0,5 0,5 Ekstrak daging buah muda kayu gadis (g) dilarutkan dalam 5 mL diklorometan - 0,5 Natrium tripolipospat 0,4% (mL) 50 50
Uji Aktivitas Antijamur Nanopartikel Kitosan (Basis) dan Nanopartikel Kitosan- Ekstrak n-Heksan Daging Buah Muda Kayu Gadis ( Cinnamomum parthenoxylon ) Sebanyak  9,75  mL  media  PDA  yang  telah  disterilkan  dicampur  dengan nanopartikel  kitosan  atau  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  yang  sebelumnya  telah disuspensikan  dengan  0,25  mL  akuades.  Variasi  uji  aktivitas  anti  jamur  suspensi nanopartikel  kitosan-ekstrak n -heksan  daging  buah  muda  kitosan  adalah  0% (akuades saja 0,25 mL) sebagai kontrol; 0,002%; 0,01%; 0,03 %; 0,05%; dan 0,07 % b/v  (massa  partikel/mL  PDA).  Partikel  basis  diuji  pada  konsentrasi  0,002%  untuk pembanding.  Nanopartikel  kitosan  maupun  Nanopartikel  kitosan-ekstrak  dicampur dengan  media  PDA  lalu  dihomogenkan  dan  dibiarkan  memadat.  Setelah  media memadat, miselium jamur uji ( Trametes versicolor dan Fomitopsis palustris ) diambil dan  dipotong  menggunakan cork  borer (diameter  5  mm)  kemudian  diletakkan dibagian tengah permukaan media. Cawan petri diinkubasi pada suhu 25°C sampai jamur  pada  cawan  petri  kontrol  memenuhi  permukaan  cawan  petri,  lalu  diukur diameter  pertumbuhan  jamur  pada  kontrol  dan  semua  sampel  uji  menggunakan jangka sorong (Adfa et al ., 2021). Uji aktivitas anti jamur dilakukan sebanyak 4 kali pengulangan.  Dari  hasil  pengukuran  pertumbuhan  jamur,  ditentukan  persentase daya hambat  pertumbuhan jamur dengan menggunakan  rumus daya hambat  (Teoh et al ., 2015).
Daya Hambat (%) = Da − Db Da x 100 %
Keterangan: Da  = diameter pertumbuhan miselium pada kontrol (mm) Db  = diameter pertumbuhan miselium pada sampel uji (mm)

## Analisis Data
Data persentase daya hambat pertumbuhan jamur dianalisis menggunakan uji one way ANOVA dan dilanjutkan dengan uji duncan menggunakan aplikasi SPSS 21 dengan  taraf  kepercayaan  95%.  Data-data  hasil  karakterisasi  Nanopartikel dideskripsikan dan dibandingkan  dengan literatur (Adfa et al ., 2020).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pembuatan Nanopartikel Kitosan (Basis) dan Nanopartikel Kitosan-Ekstrak n-Heksan Daging buah muda Kayu Gadis ( Cinnamomum parthenoxylon )
Pembuatan  partikel    kitosan-ekstrak  CP  dibuat  dengan  menggunakan  metode gelasi  ionik,  dengan  menggunakan  formula  pada  Tabel  1  yang  dimodifikasi  dari Shetta et  al .  (2019).  Untuk  mendeteksi  terbentuknya  nanopartikel  kitosan  dan
nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  maka  suspensi  yang  dihasilkan  dari  proses  gelasi ionik  dianalisis  menggunakan  Spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang 200-800  nm  untuk  melihat  adanya  perbedaan  spektrum  UV-Vis  yang  dihasilkan dengan  bahan-bahan  dasar  yang  digunakan  (Gambar  1)  yang  menandakan  bahwa sudah terbentuknya partikel kitosan dan partikel kitosan-ekstrak CP.
Gambar 1. Spektrum  UV-Vis  suspensi  hasil  gelasi  ionik.  (A)  suspensi  partikel  kitosan- NaTPP-tween  80  (basis),  (B)    larutan  tween  80,  (C)  suspensi  kitosan-NaTPP- tween  80-ekstrak  n-heksan  daging  buah  muda  kayu  gadis  (partikel  kitosan- ekstrak CP), (D) larutan ekstrak n-heksan daging buah muda kayu gadis, dan (E) larutan NaTPP
Hasil  analisis  menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  menunjukan  adanya perbedaan  serapan  yang  terjadi  antara  suspensi  partikel  kitosan  (basis)  (A)  dan suspensi partikel kitosan-ekstrak CP (C). Hal ini dapat disebabkan adanya pengaruh penambahan  ekstrak n -heksan  daging  buah  muda  kayu  gadis.  Serapan  ekstrak n - heksan  daging  buah  muda  kayu  gadis  berada  pada  panjang  gelombang  238  nm dengan  nilai  absorbasi  0,317  (D),  sedangkan  suspensi  partikel-ekstrak  CP  pada panjang  gelombang  239  nm  dengan  absorbasi  0,602  (C).  Suspensi  partikel  kitosan (basis)  memiliki  serapan  pada  panjang  gelombang  203  nm  dengan nilai  absorbansi 3,104 (A). Bahan lain seperti tween 80 (B) memiliki serapan pada panjang gelombang 233  nm  dengan  nilai  absorbansi  1,306,  sedangkan  larutan  NaTPP  tidak  memiliki serapan  (E).  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  Kain  dan  Kumar  (2020)  yang melaporkan  bahwa  terjadinya  pergeseran  nilai  panjang  gelombang  serapan  dan absorbansi  menandakan  adanya  pengaruh  dari  penambahan  ekstrak,  dan  bahan lainnya. Sehingga dapat diketahui bahwa partikel kitosan (basis) dan partikel kitosan- ekstrak CP sudah terbentuk.

## Karakterisasi  Nanopartikel  Kitosan  (Basis)  dan  Nanopartikel  Kitosan-Ekstrak n-Heksan Daging Buah Muda Kayu Gadis (Nanopartikel Kitosan-Ekstrak CP) Ukuran Partikel dan Distribusi
Suspensi  partikel  kitosan  (basis)  dan  partikel  kitosan-ekstrak  CP  yang  telah dibuat,  dilakukan  karakterisasi  menggunakan  PSA  ( Particle  Size  Analyzer )  untuk mengetahui ukuran partikel dan juga distribusi partikelnya. Rata-rata ukuran partikel yang  dihasilkan  untuk  partikel  kitosan  (basis)  yaitu  276,9  nm  dan  807,6  nm  untuk partikel  kitosan-ekstrak  CP  (Gambar  2),  keduanya  dapat  digolongkan  sebagai nanopartikel  karena  ukuran  partikel  berada  pada  rentang  10-1.000  nm (Anandharamakrishnan, 2014; Mohanraj dan Chen, 2007).
Distribusi  ukuran  partikel  atau polydispersity  index (P.I)  adalah  nilai  yang menyatakan tingkat keragaman ukuran partikel. Menurut Danaei et al . (2018) tingkat keseragaman  ukuran  partikel  atau  kehomogenan  dari  partikel  ditunjukan  dari  nilai P.I.  Jika  nilai  P.I  kurang  dari  0,05  menunjukkan  homogenitas  yang  baik,  sebaliknya jika  nilai  P.I  lebih  besar  dari  0,7  menunjukkan heterogenitas yang  tinggi  karena memiliki  distribusi  ukuran  partikel  yang  sangat  luas.  Nilai  P.I.  dari  penelitian  ini adalah 1,27 untuk nanopartikel kitosan (basis) dan 1,40 untuk nanopartikel kitosan- ekstrak  CP.  Sehingga  dapat  dikatakan  bahwa  nanopartikel  kitosan  (basis)  dan nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  memiliki  distribusi  ukuran  partikel  yang  tidak homogen karena nilai P.I yang dihasilkan lebih besar dari 0,7.
Dilihat  dari  ukuran  partikel  yang  dihasilkan,  ukuran  nanopartikel  kitosan (basis)  lebih  kecil  daripada  ukuran  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP,  begitu  juga dengan polydispersity  index nanopartikel kitosan  (basis)  lebih  kecil  dari  pada nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP.  Data  ini  memperlihatkan  bahwa  penambahan ekstrak n -heksan daging buah muda kayu gadis dapat mempengaruhi ukuran partikel dan polydispersity index nanopartikel kitosan-ekstrak CP yang terbentuk.
(a) (b)
Gambar 2. Hasil karakterisasi PSA ( Particle Size Analyzer ). (A) nanopartikel kitosan (basis), (B) nanopartikel kitosan-ekstrak CP.
Morfologi  Nanopartikel  Kitosan  (Basis)  dan  Nanopartikel  Kitosan-Ekstrak n - Heksan Daging Buah Muda Kayu Gadis (Nanopartikel Kitosan-Ekstrak CP) Suspensi partikel yang telah dibuat kemudian dikeringkan dengan Freeze dryer untuk mendapatkan  nanopartikel dalam bentuk serbuk, yang selanjutnya dilakukan pengambilan  data  SEM  ( Scanning  Electron  Microscopy )  untuk  mengetahui morfologinya  (Gambar  3).  Hasil  karakterisasi  SEM  memperlihatkan  morfologi  dari nanopartikel kitosan (basis) pada perbesaran 250x (Gambar 3A) dan 2.500x (Gambar 3B). Morfologi nanopartikel kitosan-ekstrak CP pada  perbesaran 500x  (Gambar  3C) dan  perbesaran  3.000x  (Gambar  3D).  Hasil  pengamatan  morfologi  nanopartikel kitosan  dan  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  sama-sama  membentuk  agregat.  Hasil foto  SEM  sejalan  dengan  nilai polydispersity  index nanopartikel  kitosan  (basis)  dan nanopartikel kitosan-ekstrak CP yang lebih besar dari 0,7. Ukuran partikel yang tidak seragam  dapat  disebabkan  karena  kecenderungan  partikel  untuk  aglomerasi membentuk agregat partikel yang lebih besar. Sejalan dengan laporan Ningsih et al . (2017),  faktor  yang  dapat  menyebabkan  hal  tersebut  terjadi  adalah  perbandingan kitosan  dan  NaTPP  yang  digunakan,  pH  larutan,  massa  ekstrak  yang  ditambahkan, kecepatan pengadukan, serta volume larutan saat pengadukan dengan stirrer. Bentuk partikel  yang  terbentuk  tidak  sama  dapat  juga  menyebabkan  kontak  antar  partikel sehingga terjadi agregasi (Zare, 2016).
(a)
(b) (c) (d)
Gambar 3. Foto  SEM  ( Scanning  Electron  Microscopy )  nanopartikel  kitosan  (basis)  dan nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP.  (A)  nanopartikel  kitosan  (basis)  dengan perbesaran  250x,  (B)  nanopartikel  kitosan  (basis)    dengan  perbesaran  2.500x, (C)  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  dengan  perbesaran  500x,  (D)  nanopartikel kitosan-ekstrak CP dengan perbesaran 3.000x.

## AKTIVITAS ANTI JAMUR
Daya  hambat  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  dan  nanopartikel  kitosan (basis)  terhadap  pertumbuhan  jamur  pelapuk  kayu Trametes  versicolor dan Fomitopsis palustris disajikan pada Tabel 2 dan 3.
Tabel  2. Daya  hambat  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  dan  nanopartikel  kitosan  (basis) terhadap pertumbuhan jamur Trametes versicolor Bahan Uji Daya Hambat ± SD dan Notasi Trametes versicolor 0% (Akuades/Kontrol) 0,00 ± 0,00 a Nanopartikel kitosan Basis 0,002% 19,44 ± 1,96 b Nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,002 % 17,50 ± 1,96 b Nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,01 % 21,94 ± 1,96 b Nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,03 % 30,00 ± 2,75 c Nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,05 % 34,03 ± 0,94 c Nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,07 % 43,03 ± 2,36 d
Tabel  3. Daya  hambat  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  dan  nanopartikel  kitosan  (basis) terhadap pertumbuhan jamur Fomitopsis palustris Bahan Uji Daya Hambat ± SD dan Notasi Fomitopsis palustris 0% (Akuades/Kontrol) Nanopartikel kitosan Basis 0,002% 0,00 ± 0,00 a 14,58 ± 4,87 b Nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,002 % 15,97 ± 6,84 bc Nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,01 % 17,78 ± 2,36 bc Nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,03 % 20,00 ± 3,39 bc Nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,05 % 26,94 ± 1,18 cd Nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,07 % 34,31 ± 6,52 d
Persentase  daya  hambat  nanopartikel  kitosan  ekstrak n -heksan  daging  buah muda  kayu  gadis  terhadap  pertumbuhan  2  jenis  jamur  pelapuk  kayu  mengalami kenaikan  seiring  dengan  penambahan  konsentrasi  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP. Akan tetapi persentase daya hambat partikel basis terhadap jamur T. versicolor lebih besar (9,44%) daripada nanopartikel ekstrak CP pada konsentrasi terkecil (0,002%) yaitu  17,50%.  Dari  uji  Duncan  dilihat  pemberian  nanopartikel  kitosan  basis  tidak berbeda nyata dengan nanopartikel kitosan-ekstrak CP pada konsentrasi 0,002% dan 0,01%  dalam  penghambatan T.  versicolor dengan  notasi  b.  Sedangkan  dalam penghambatan pertumbuhan F. palustris, pemberian nanopartikel kitosan-ekstrak CP pada konsentrasi 0,002%, 0,01% dan 0,03% tidak berbeda nyata antar perlakuan dan dengan  pemberian  nanopartikel  kitosan  basis  pada  konsentrasi  0,002%  dengan notasi b dan bc.
Tabel 2 dan 3, terlihat bahwa pemberian nanopartikel kitosan-ekstrak n -heksan daging  buah  muda  kayu  gadis  berbeda  nyata  dalam  penghambatan  pertumbuhan  2 jenis jamur uji dimulai pada konsentrasi 0,03 dan 0,05 %.  Hal ini dapat dipengaruhi oleh  berbagai  faktor  diantaranya  ukuran  partikel,  dan  pengaruh  distribusi  ukuran partikel  yang  tidak  merata  serta  terjadinya  aglomerasi  atau  agregat  sehingga penghambatan terhadap pertumbuhan jamur kurang signifikan (Martien et al ., 2012). Dari data PSA diketahui ukuran partikel nanopartikel kitosan (basis) lebih kecil dari pada  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP,  dan  dari  data  SEM  juga  terlihat  bahwa nanopartikel yg dihasil membentuk agregat. Selain itu jika terjadi enkapsulasi ekstrak oleh  matriks  kitosan  juga  akan  memperlambat  pelepasan  ekstrak  keluar  dari cakangnya  karena  kitosan  cenderung  hidrofobik  sehingga  mempengaruhi  penetrasi ekstrak terhadap jamur uji (Shetta et al ., 2019).
(a) (b) (c) (d) (e) (f) (g)
Gambar  4. Pertumbuhan  miselium  jamur Trametes  versicolor setelah  penambahan nanopartikel  kitosan  (basis) dan nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP:  (a)  kontrol (akuades)  (b)  nanopartikel  kitosan  (basis)  0,002%  (c)  nanopartikel  kitosan- ekstrak  CP  0,002%    (d)  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  0,01%    (e) nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  0,03%  (f)  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP 0,05% (g) nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,07%.
Nilai  daya  hambat  terbesar  nanopartikel  kitosan  ekstrak n -heksan  daging  buah muda  kayu  gadis  terhadap  jamur  pelapuk  putih T.  versicolor sebesar  43,03%  dan jamur pelapuk coklat F. palustris yaitu sebesar 34,31% pada konsentrasi uji tertinggi (0,07%),  sedangkan  daya  hambat  terkecil  yaitu  sebesar  19,44%  untuk  jamur T. versicolor dan  14,58%  untuk  jamur F.  palustris pada  konsentrasi  uji  terkecil (0,002%).  Pertumbuhan  miselium  jamur  uji  dapat  dilihat  pada  Gambar  4  dan  5. Sejalan  dengan  laporan  Adfa et  al .  (2020)  bahwa  asap  cair  kayu  batang C. parthenoxylon lebih beracun bagi jamur pelapuk putih ( S. commune ) daripada jamur pelapuk coklat ( F. palustris ). Kawamura et al . (2004) juga melaporkan bahwa fraksi etil asetat batang Gmelina arboa dapat menghambat pertumbuhan T. versicolor lebih besar  dari  pada F.  palustris. Celimene et  al. (1999)  menyatakan  bahwa  stilbenes (pinosylvin,  pinosilvin  monometil  eter,  dan  pinosilvin  dimetil  eter)  lebih  toksik terhadap jamur  pelapuk putih daripada jamur  pelapuk coklat.  Menurut  Oramahi et al .  (2018),  asap  air  dari  batang  kelapa  sawit  dengan  kandungan  kimia  terbesarnya asam  asetat  dan  beberapa  senyawa  fenolik  dapat  menghambat  pertumbuhan T. versicolor pada  konsentrasi  1,0  dan  1,5%,  namun  konsentrasi  yang  lebih  tinggi diperlukan untuk menghambat pertumbuhan F. palustris .
(a) (b) (c) (d) (e) (f) (g)
Gambar 5. Pertumbuhan  miselium  jamur Fomitopsis  palustris setelah  penambahan nanopartikel  kitosan  (basis) dan  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP:  (a)  kontrol (akuades)  (b)  nanopartikel  kitosan  (basis)    0,002%  (c)  nanopartikel  kitosan- ekstrak  CP  0,002%    (d)  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  0,01%    (e) nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP  0,03%  (f)  nanopartikel  kitosan-ekstrak  CP 0,05% (g) nanopartikel kitosan-ekstrak CP 0,07%.
Daya hambat pertumbuhan jamur oleh nanopartikel ekstrak n-heksan daging buah muda kayu gadis diduga dipengaruhi oleh kemampuan kitosan dan juga ekstrak n -heksan  daging  buah  kayu  gadis  ( C.  parthenoxylon ),  dan  ukuran  partikel.  Diduga kandungan kimia buah kayu gadis mempunyai aktivitas antijamur, dimana buah kayu gadis kaya akan minyak atsiri dan asam lemak. Lima monoterpen 5-(2,3-dihydroxy-3- methylbutyl)-4-hydroxy-4-methyldihydrofuran  2  (3H)-one , 5-(2,3-dihydroxy-3-methyl butyl)-4-methylfuran-2(5H)-one , 8-hydroxy-4,7,7-trimethyl-1,6dioxaspiro[4.4]  non-3-en- 2-one, 8-hydroxy-4,7,7-trimethyl-1,6 dioxaspiro[4.4]non-3-en-2-one (4), dan 3-hydroxy-
4,4-dimethyl-4-butyrolactone telah diisolasi dari ekstrak metanol buah Cinnamomum inunctum yang merupakan sinonim dari ( C. parthenoxylon ) (Fuchino et al ., 2015). Kitosan  juga  telah  dilaporkan  mempunyai  aktivitas  anti  bakteri  dan  anti  jamur (Broda, 2020; Qi et al ., 2004). Mekanisme antijamur kitosan dilaporkan bahwa gugus amino  yang  bermuatan  positif  dari  kitosan  dapat  berikatan  dengan  gugus  yang bermuatan  negatif  seperti  fosfolipid  pada  dinding  sel  jamur  melalui  interaksi elektrostatik,  membentuk  lapisan  membran  polimer  pada  permukaan  sel  jamur, mengubah  permeabilitas  selektif  sel,  sehingga  menghalangi  nutrisi  memasuki  sel, atau  mengganggu  sel  membran  memasuki  sel,  dan  akhirnya  mengganggu  sintesis DNA dan RNA pada jamur (Qin et al., 2020). Qi et al. (2004) juga melaporkan bahwa nanopartikel  kitosan  menunjukkan  aktivitas  antimikroba  yang  lebih  tinggi dibandingkan  dengan  bentuk  bebas  polimer  kitosan,  polikationik  nanopartikel kitosan dengan muatan permukaan yang tinggi akan berinteraksi lebih efektif dengan jamur  dibandingkan  dengan  bentuk  bebas  polimer  kitosan.  Selain  itu,  nanopartikel kitosan  memiliki  afinitas  yang  lebih  tinggi  untuk  mengikat  sel  jamur.  Kitosan berukuran  nano  berkontribusi  pada  luas  permukaan  yang  lebih  besar  dan menyebabkan nanopartikel untuk dapat menyerap lebih erat ke permukaan sel jamur dan mengganggu integritas  membran. Selain hal tersebut, beberapa faktor lain juga mempengaruhi  aktivitas  antijamur  nanopartikel  kitosan,  antara  lain  sumber  asli kitosan, berat molekul,  metode sintesis, tempat substituennya dan jenis jamur yang akan diuji aktivitasnya (Ing et al ., 2012; Xu et al ., 2010).

## SIMPULAN
Nanopartikel kitosan-ekstrak n -heksan daging buah muda kayu gadis (ekstrak CP)  telah  berhasil  dibuat  menggunakan  metode  gelasi  ionik  dan  berhasil menghambat  pertumbuhan  jamur  pelapuk  putih T.  versicolor dan  jamur  pelapuk coklat F. palustris pada berbagai konsentrasi uji, diharapkan dapat menjadi kandidat bahan  pengawet  kayu  secara  alami.  Penelitian  lanjutan  diperlukan  untuk  mencari perbandingan yang tepat antara kitosan: NaTPP: ekstrak untuk mendapatkan partikel dengan  ukuran  yang  lebih  kecil  dengan  morfologi  yang  lebih  baik  sehingga  dapat meningkatkan  kemampuannya  dalam  menghambat  pertumbuhan  jamur  pelapuk kayu dan juga dapat disimpan lebih lama.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada S2 Kimia FMIPA Universitas Bengkulu atas pendanaan penelitian ini dengan nomor kontrak 1911/UN30.12/HK/2021.

## REFERENSI
Adfa, M., Gusatyana, N. M. C., Mudyanto, A., Avidlyandi, A., Oktiarni, D., & Yudha S., S.
(2021).  Combined  Effect  of  Methanol  Extract  of Persea  americana Seeds  and Cassia  alata Leaves  against Staphylococcus  epidermidis .  Proceedings  of  the International Seminar on Promoting Local Resources for Sustainable Agriculture and  Development  (ISPLRSAD  2020), 13 (Isplrsad  2020),  36 – 40. https://doi.org/10.2991/absr.k.210609.006
Adfa, M., Livandri, F., Meita, N. P., Manaf, S., Ninomiya, M., Gustian, I., Putranto, A. M. H., Supriati, R., Koketsu, M. (2015). Termiticidal Activity of Acorus calamus Linn. Rhizomes and Its Main Constituents against Coptotermes curvignathus Holmgren.
Journal of Asia-Pacific Entomology , 18 (1), 47 – 50. https://doi.org/10.1016/j.aspen.2014.10.012
Adfa,  M.,  Romayasa,  A.,  Kusnanda,  A.  J.,  Avidlyandi,  A.,  Yudha  S.,  S.,  Banon,  C.,  & Gustian, I. (2020). Chemical Components, Antitermite and Antifungal Activities of Cinnamomum parthenoxylon Wood Vinegar. Journal of the Korean Wood Science and Technology , 48 (1), 107 – 116. https://doi.org/10.5658/WOOD.2020.48.1.107 Adfa, M., Sanusi, A., Manaf, S., Gustian, I., & Banon, C. (2017). Antitermitic Activity of Cinnamomum  parthenoxylon Leaves  against Coptotermes  curvignathus . Oriental Journal of Chemistry , 33 (6), 3063 – 3068. https://doi.org/10.13005/ojc/330646 Anandharamakrishnan,  C.  (2014).  Techniques  for  Nanoencapsulation  of  Food Ingredients. In Techniques for Nanoencapsulation of Food Ingredients . Retrieved from http://link.springer.com/10.1007/978-1-4614-9387-7_3
Broda,  M.  (2020).  Natural  Compounds  for  Wood  Protection  against  Fungi — A Review. Molecules , 25 (15), 1-24.
Chittenden, C., & Singh, T. (2011). Antifungal Activity of Essential Oils against Wood Degrading  Fungi  and  Their  Applications  as  Wood  Preservatives. International Wood Products
Journal , 2 (1), 44 – 48. https://doi.org/10.1179/2042645311Y.0000000004
Celimene, C. C., Micales, J. A., Ferge, L., & Young, R. A. (1999). Efficacy of Pinosylvins against  White-rot  and  Brown-rot  Fungi. Holzforschung , 53 (5),  491 – 497. https://doi.org/10.1515/HF.1999.081
Danaei,  M.,  Dehghankhold,  M.,  Ataei,  S.,  Hasanzadeh  Davarani,  F.,  Javanmard,  R., Dokhani,  A.,  Khorasani,  S.,  Mozafari,  M.  R.  (2018).  Impact  of  Particle  Size  and Polydispersity Index on the Clinical Applications of Lipidic Nanocarrier Systems. Pharmaceutics , 10 (2), 1 – 17. https://doi.org/10.3390/pharmaceutics10020057 Fuchino, H., Yazawa, A., Kiuchi, F., Kawahara, N., Takahashi,  Y., & Satake, M. (2015). Novel  Monoterpene  Lactones  from Cinnamomum  inunctum . Chemical  and Pharmaceutical  Bulletin , 63 (10),  833 – 836.  https://doi.org/10.1248/cpb.c15- 00368
Ing,  L.  Y.,  Zin,  N.  M.,  Sarwar,  A.,  &  Katas,  H.  (2012).  Antifungal  Activity  of  Chitosan Nanoparticles  and  Correlation  with  Their  Physical  Properties. International Journal of Biomaterials , 2012 , 1 – 9. https://doi.org/10.1155/2012/632698
Jia, Q., Liu, X., Wu, X., Wang, R., Hu, X., Li, Y., & Huang, C. (2009). Hypoglycemic Activity of a  Polyphenolic  Oligomer-Rich Extract of Cinnamomum parthenoxylon Bark in Normal  and  Streptozotocin-Induced  Diabetic  Rats. Phytomedicine , 16 (8),  744 – 750. https://doi.org/10.1016/j.phymed.2008.12.012
Kain,  D.,  &  Kumar,  S.  (2020).  Synthesis  and  Characterization  of  Chitosan Nanoparticles  of Achillea  millefolium L.  and  Their  Activities. F1000Research , 9 , 1297. https://doi.org/10.12688/f1000research.26446.1
Kawamura, F., Ohara, S., & Nishida, A. (2004). Antifungal Activity of Constituents from The  Heartwood  of Gmelina  arborea :  Part  1.  Sensitive  Antifungal  Assay  against Basidiomycetes. Holzforschung , 58 (2),  189 – 192.  https://doi.org/10.1515/ HF.2004.028
Kawamura, F., Ramle, S. F. M., Sulaiman, O., Hashim, R., & Ohara, S. (2011). Antioxidant and  Antifungal  Activities  of  Extracts  from  15  Selected  Hardwood  Species  of Malaysian timber. European Journal of Wood and Wood Products , 69 (2), 207 – 212. https://doi.org/10.1007/s00107-010-0413-2
Martien, R., Adhyatmika, Irianto, I. D. K., Farida, V., & Sari, D. P. (2012). Perkembangan Teknologi Nanopartikel dalam Sistem Penghantaran Obat. Majalah Farmaseutik ,
8 (1),  133 – 144.  Retrieved  from  https://www.academia.edu/download/ 41739804/Perkembangan_Teknologi_Nanopartikel_dala20160129-20505-

## 1jxjfbc.pdf
Mohanraj,  V.  J.,  &  Chen,  Y.  (2007).  Nanoparticles  -  A  review. Tropical  Journal  of Pharmaceutical Research , 5 (1), 561 – 573. https://doi.org/10.4314/tjpr.v5i1.14634
Ningsih, N., Yasni, S., & Yuliani, S. (2017). Sintesis Nanopartikel Ekstrak Kulit Manggis Merah dan Kajian Sifat Fungsional Produk Enkapsulasinya. Jurnal Teknologi Dan Industri Pangan , 28 (1), 27 – 35. https://doi.org/10.6066/jtip.2017.28.1.27
Oramahi, H. A., Yoshimura, T., Diba, F., Setyawati, D., & Nurhaida. (2018). Antifungal and  Antitermitic  Activities  of  Wood  Vinegar  from  Oil  Palm  Trunk. Journal  of Wood Science , 64 (3), 311 – 317. https://doi.org/10.1007/s10086-018-1703-2
Phongpaichit, S., Kummee, S., Nilrat, L., & Itarat, A. (2007). Antimicrobial  Activity of Oil from The Root of Cinnamomum porrectum . Songklanakarin Journal of Science and Technology , 29 , 11 – 16.
Qi, L., Xu, Z., Jiang, X., Hu, C., & Zou, X. (2004). Preparation and Antibacterial Activity of Chitosan Nanoparticles. Carbohydrate Research , 339 (16), 2693 – 2700. https://doi.org/10.1016/j.carres.2004.09.007
Qin, Y., Li, P., & Guo, Z. (2020). Cationic Chitosan Derivatives as Potential Antifungals: A  Review  of  Structural  Optimization  and  Applications. Carbohydrate Polymers , 236 , 116002. https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2020.116002 Shetta,  A.,  Kegere,  J.,  &  Mamdouh,  W.  (2019).  Comparative  Study  of  Encapsulated Peppermint  and  Green  Tea  Essential  Oils  in  Chitosan  Nanoparticles: Encapsulation, Thermal Stability, In-vitro Release, Antioxidant and Antibacterial Activities. International  Journal  of  Biological  Macromolecules , 126 ,  731 – 742. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2018.12.161
Sivakami, M. S., Gomathi, T., Venkatesan, J., Jeong, H., Kim, S., & Sudha, P. N. (2013). Preparation and Characterization of Nano Chitosan for Treatment Wastewaters. International Journal of Biological Macromolecules , 57 , 204 – 212. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2013.03.005
Teoh,  Y.  P.,  Mashitah,  M.  D.,  &  Salmiah,  U.  (2015).  Antifungal  Activities  of  Selected Wood-Degrading Fungi of Rubberwood. Journal of Tropical Forest Science , 27 (3), 325 – 333. https://www.jstor.org/stable/43490290
Voda, K., Boh, B., & Vrtačnik, M. (2004). A Quantitative Structure – Antifungal Activity Relationship Study of Oxygenated Aromatic Essential oil Compounds Using Data Structuring and PLS Regression Analysis. Journal of Molecular Modeling , 10 , 76 – 84. https://doi.org/10.1007/s00894-003-0174-5
Wang, J., Su, B., Jiang, H., Cui, N., Yu, Z., Yang,  Y., & Sun, Y. (2020). Traditional  Uses, Phytochemistry  and  Pharmacological  Activities  of  The  Genus Cinnamomum (Lauraceae): a Review.
Fitoterapia ,
146 , 104675. https://doi.org/10.1016/j.fitote.2020.104675
Xu,  T.,  Xin,  M.,  Li,  M.,  Huang,  H.,  &  Zhou,  S.  (2010).  Synthesis,  Characteristic  and Antibacterial  Activity  of  N,N,N-trimethyl  Chitosan  and  Its  Carboxymethyl Derivatives. Carbohydrate
Polymers , 81 (4), 931 – 936. https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2010.04.008
Zare,  Y.  (2016).  Study  of  Nanoparticles  Aggregation/Agglomeration  in  Polymer Particulate  Nanocomposites  by  Mechanical  Properties. Composites:  Part  A , 84 ,
158 – 164. https://doi.org/10.1016/j.compositesa.2016.01.020