## Jurnal Ilmiah Farmako Bahari

## Journal Homepage : https://journal.uniga.ac.id/index.php/JFB

## ANTIHYPERURISEMIA ACTIVITY OF ETHANOL EXTRACT OF (PANDANUS AMARYLLIFOLIUS ROXB.) LEAVES ON HYPERURICEMIC MALE MICE
Novia Sinata * , Rahma Dona, Muthui’ah
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau Jl.Kamboja, Kel. Simpang Baru, Kec.Tampan, Kota Pekanbaru, Riau 28289, Indonesia
*Corresponding author: Novia Sinata ( noviasinata@stifar-riau.ac.id )

## ARTICLE HISTORY
Received: 15 June 2021                                   Revised: 14 July 2022                                  Accepted: 27 July 2022

## Abstract
Hyperuricemia  is  a  condition  where  the  uric  acid  blood  levels  in  excess  of  normal levels.  Hyperuricemia  can  result  from  increased  production  or  decreased  excretion  of uric acid, or a combination of both. Uric acid is the end product of purine degradation in the body. Gout is an acute inflammatory disorder characterized by swelling of the joints usually associated with a high serum uric acid level (hyperuricemia).One of the plants that  can  be  used  as  a  traditional  medicine  for  hyperuricemia  is  the  pandan  wangi leaves  ( Pandanus  amaryllifolius Roxb.).  The  study  was  conducted  to  evaluate  the antihyperuricemia activity of ethanol extract of pandan wangi leaves on hyperuricemic male  mice.Thirty  mice  were  divided  into  six  groups,  namely  normal  control  group, negative  control  group  (given  beef  liver  juice  0.6  ml/20gBB),  a  positive  control  group (alopurinol 13 mg/kgBW), extract dose of 200 mg/kgBW, extract dose of 400 mg/kgBW and  extract  dose  of  800  mg/kgBW.  Hyperuricemia  was  induced  by  using  high  purine diet  food  (MDPT)  fresh  beef  liver  juice. Measurement  of  blood  uric  acid  levels were measured by using the method of POCT (Point of Care Testing) using the EasyTouch® GCU digital tool. Observations, showed that ethanol extract of pandan wangi  leaves  dose  of  200mg/kgBW,  400mg/kgBW  and  800  mg/kgBW  gave antihyperuricemia  activity  significantly  reduced  blood  uric  acid  levels  in  male  mice (P<0.05).  The  potency  of  the  ethanolic  extract  of  pandan  wangi    leaves  at  a  dose  of 400 mg/kgBW and 800 mg/kgBW is equivalent to allopurinol at a dose of 13 mg/kgBW in reducing uric acid levels in hyperuricemic mice (P>0,05).
Key words: allopurinol, gout, hyperuricemic, pandan wangi

## AKTIVITAS ANTIHIPERURISEMIA EKTRAK ETANOL DAUN PANDAN WANGI (Pandanus amaryllifolius Roxb.) PADA MENCIT JANTAN HIPERURISEMIA

## Abstrak
Hiperurisemia  adalah    peningkatan    kadar    asam    urat  darah  di  atas  normal. Hiperurisemia  terjadi  akibat  meningkatnya  produksi  atau menurunnya  pembuangan asam  urat,  atau kombinasi  keduanya. Asam urat merupakan hasil akhir metabolisme purin  dalam  tubuh.  Penyakit  gout  merupakan  gangguan  inflamasi  akut  yang  ditandai dengan  pembengkakan  pada  sendi  disebabkan  kadar  asam  urat  yang  tinggi (hiperurisemia).  Salah  satu  tanaman  yang  dapat  digunakan  sebagai  obat  tradisional untuk  hiperurisemia  adalah  daun  pandan  wangi  ( Pandanus  amaryllifolius Roxb.). Tujuan  penelitian  ini  untuk  mengetahui  aktivitas  antihiperurisemia  ekstrak  etanol  dari daun pandan wangi terhadap kadar asam urat darah mencit jantan hiperurisemia.Tiga puluh  ekor  mencit  dibagi  menjadi  enam  kelompok  yaitu  kelompok  kontrol  normal, kelompok kontrol negative (diberi jus hati sapi 0,6 ml/20gBB), kelompok kontrol positif (alopurinol 13 mg/kgBB), kelompok dosis 200 mg/kgBB, kelompok dosis 400 mg/kgBB dan  kelompok  dosis  800  mg/kgBB.Penginduksian  hiperurisemia  dilakukan  dengan menggunakan  Makanan  Diet  Purin  tinggi  (MDPT)  jus  hati  sapi  segar.  Pemeriksaan kadar  asam  urat  menggunakan  metode Point  of  Care  Testing (POCT)  dengan menggunakan  alat  digital EasyTouch ® GCU .  Hasil  yang  didapat  ekstrak  etanol  dari daun pandan wangi ( Pandanus amaryllifolius Roxb.) dosis 200mg/kgBB, 400mg/kgBBdan 800 mg/kgBB dapat menurunkan kadar asam urat darah pada mencit putih  jantan  secara  signifikan  (P<0,05).  Potensi  ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi dosis  400  mg/kgbb  dan  800  mg/kgBB  setara  dengan  allopurinol  dosis  13  mg/kgBB dalam menurunkan kadar asam urat mencit hiperurisemia (P>0,05).
Kata kunci: allopurinol, gout, hiperurisemia, pandan wangi

## Pendahuluan
Hiperurisemia adalah suatu keadaan dimana terjadi peningkatan kadar  asam  urat darah  di  atas  normal.  Hal  ini  dapat  disebabkan  oleh  peningkatan  produksi  atau penurunan  ekskresi  asam    urat,  atau  kombinasi    keduanya.  Hiperurisemia  dapat menyebabkan  asam  urat,  suatu  kondisi  peradangan  akut  yang  pembengkakan  pada persendian dan seringkali terasa sakit dan nyeri. 1 Pengobatan hiperurisemia umumnya melibatkan  penggunaan  obat-obat  sintetik.  Penggunaan  obat  sintetik  memiliki  efek samping  seperti  gangguan  gastrointestinal  (mual,  muntah  dan  diare),  leukopenia, anemia  aplastik,  kerusakan  hepar,  nefritis  interstisial,  dan  hipersensitivitas  bila digunakan dalam jangka panjang. 2 Berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Pane et al .,  2020  mengenai  gambaran  penggunaan  obat  herbal  pada  masyarakat  Indonesia dan  interaksinya  terhadap  obat  konvensional  tahun  2020  didapatkan  alasan penggunaan obat herbal paling banyak yaitu karena efek samping yang relatif kecil dan responden  yang  merasakan  efek  samping  dari  penggunaan  obat  herbal  lebih  sedikit (0,4%)  dibandingkan  dengan  yang  tidak  merasakan  efek  samping  (99,6%)  sehingga hal ini menyebabkan masyarakat lebih memilih obat dari bahan alam yang relatif lebih aman dan efek sampingnya rendah. 3
Salah  satu  pemanfaatan  sumber  dari  alam  yaitu  pemanfaatan  tanaman  untuk mengobati  penyakit  seperti  pemanfaatan  tanaman  sebagai  obat  antihiperurisemia. Daun  pandan  wangi  salah  satu  tanaman  yang  diduga  memiliki  aktivitas
antihiperurisemia.  Berbagai  manfaat  dari  tumbuhan  daun  pandan  wangi  antara  lain berkhasiat sebagai antibakteri, antioksidan, analgetik, dan antidiabetes. 4,5,6,7
Pandan  wangi  merupakan  salah  satu  tanaman  yang  memiliki  kandungan  kimia alkaloid,  flavonoid,  sapononin,  polifenol,  terpenoid,  steroid,  essensial  oil,  karetenoid, tokoferol  dan  kuersetin. 7 Flavonoid  pada  daun  pandan  wangi  diduga  berpengaruh dalam  menurunkan  kadar  asam  urat  darah.  Flavonoid  memiliki  potensi  untuk menghambat  xantin  oksidase. 8 Xantin  oksidase  adalah  enzim  yang  membantu mengkatalisis  oksidasi  hipoxantin  menjadi  xantin  dan  asam  urat. 8 Enzim  xantin oksidase sering menjadi target untuk menurunkan kadar asam urat yang menyebabkan penyakit gout. 9
Berdasarkan  latar  belakang  tersebut  maka  peneliti  melakukan  penelitian  untuk menguji  aktivitas  antihiperurisemia  ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  pada  mencit putih jantan hiperurisemia  menggunakan Makanan Diet  Purin Tinggi (MDPT) dari hati sapi  sebagai  penginduksi  dan  pengukuran  kadar  asam  urat  menggunakan  metoda Point  of  Care  Testing (POCT)  menggunakan  alat  Easy  Touch ® GCU dan untuk mengetahui dosis yang efektif menurunkan kadar asam urat sehingga hasil penelitian ini  diharapkan  dapat  memberikan  informasi  kepada  masyarakat  tentang  aktivitas antihiperurisemia    ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  ( Pandanus  amaryllifolius Roxb.) dan bisa dijadikan sebagai alternatif dalam pengobatan.

## Metode

## Alat
Alat yang digunakan adalah seperangkat alat destilasi (Duran 50) , seperangkat alat vacum  rotary  evaporator ( Rotavapor  R-210  Buchi ),  timbangan  analitik  (Shimadzu Auw-220),  botol  gelap,  timbangan  hewan  (Tanita®),  kandang  hewan,  kertas  saring, aluminium  foil,  corong,  sonde  oral  (Terumo ® ), hot  plate (SH-2  Laboratorium),  gunting bedah,  gelas ukur (Pyrex ® ), beker (Iwaki ® ), kaca arloji, pipet tetes, mortir dan stanfer, vial,  perkamen,  tabung  reaksi  (  Iwaki ® ),  plat  tetes,  alkohol  swab,  alat  pengukur  kadar asam urat (Easy Touch ® GCU) dan strip test (Easy Touch ® ).

## Bahan
Bahan yang digunakan adalah daun pandan wangi ( Pandanus amaryllifolius Roxb.) yang diambil di Desa Paritbaru derah Kampar, kloroform (Merck),  kloroform amoniak, asam sulfat 2N (Sigma- Aldrich ), reagen Mayer, asam klorida pekat (Sigma- Aldrich ), besi  (III)  klorida  (Sigma- Aldrich ),  logam  magnesium  (Sigma- Aldrich ),  norit,  asam asetat  anhidrat  (Sigma),  asam  sulfat  pekat  (Merck),  etanol  96%  (Brataco),  makanan mencit (Pellet CP 552), Na CMC 0,5 %, aquadest , Makanan Diet Purin Tinggi (MDPT) hati sapi 100 gram/25 ml aquadest dan tablet alopurinol (Hexpharm Jaya).

## Prosedur

## Determinasi Bahan
Tujuan  dari  determinasi  adalah  mengidentifikasi  tanaman  dari  bahan  yang dikumpulkan.Determinasi  dilakukan  di  Laboratorium  Botani  Fakultas  Matematika  dan Ilmu Pengetahuan Alam (FMIPA) Universitas Riau, Pekanbaru.

## Pengolahan Bahan
Proses  pengolahan  simplisia  dengan  cara  daun  pandan  wangi  segar  disortasi basah,  pencucian,  pengeringan,  sortasi  kering,  kemudian  digiling  menjadi  serbuk. Serbuk ditimbang kemudian disimpan ke dalam wadah bersih dan tertutup rapat.

## Pembuatan Ekstrak
Ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  dibuat  dengan  cara  maserasi  simplisia  daun pandan wangi dalam etanol 96%. 500 gram simplisia ditempatkan dalam wadah yang tertutup  rapat,  kemudian  ditambahkan  etanol  96%  sampai  semua  simplisia  terendam sempurna  dan  diaduk.  Perendaman  dilakukan  selama  lima  hari,  sampai  3  kali pengulangan.  Hasil  maserasi  dipekatkan  dengan rotary  evaporator hingga  diperoleh ekstrak kental sebanyak 26,884 gram dengan rendemen sebesar 5,38%.

## Pemeriksaan Kandungan Metabolit Sekunder Ekstrak

## Pemeriksaan Alkaloid
Skrining fitokimia  alkaloid dilakukan dengan metode Culvenor Fiztgerald . Sejumlah kecil ekstrak etanol daun pandan wangi dimasukkan dalam lumpang, ditambahkan 10 mL  kloroform  dan  10  mL  kloroform  amoniak  0,05N  digerus  homogen,  dipipet menggunakan  kapas  dan  dimasukkan  kedalam  tabung  reaksi,  ditambahkan  10  tetes asam  sulfat  2N,  dikocok  selama  1  menit.  Biarkan  campuran  memisah.  Kemudian lapisan  asam  (atas)  dipindahkan  ke  dalam  tabung  reaksi  lain  dan  ditambahkan beberapa tetes pereaksi mayer. Reaksi positif ditunjukkan dengan adanya kabut putih atau endapan putih. 10

## Pemeriksaan flavonoid, fenolik, terpenoid, steroid dan saponin
Sejumlah kecil ekstrak etanol daun pandan wangi dimasukkan dalam tabung reaksi, dicampur  dengan  5  mL  air  suling  dan  kloroform,  kemudian  dikocok  kuat.  Setelah beberapa saat, dua lapisan terbentuk. Lapisan air digunakan untuk menguji flavonoid, fenolik, dan saponin. Sedangkan lapisan kloroform digunakan untuk menguji terpenoid dan steroid.
Beberapa  tetes  lapisan  air  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  kemudian ditambahkan  sedikit  serbuk  magnesium  dan  beberapa  tetes  asam  klorida  pekat, terbentuknya  warna  oranye  sampai  merah  menunjukkan  adanya  flavonoid.  Pengujian fenolik dilakukan dengan memindahkan beberapa tetes lapisan air ke dalam plat tetes dan  menambahkan  beberapa  larutan  besi  (III)  klorida.  Reaksi  ditandai  dengan terbentuknya warna hijau tua.
Uji  terpenoid  dan  steroid  dilakukan  dengan  cara  menyaring  Lapisan  kloroform dengan  norit  yang  ditempatkan  pada  pipet  tetes  yang  diberi  kapas  pada  ujungnya. Selanjutnya ditempatkan pada 3 lobang plat tetes, setelah kering pada lobang pertama ditambahkan  beberapa  tetes  asam  sulfat  pekat  dan  asam  asetat  anhidrat,  lobang kedua  ditambahkan  beberapa  tetes  asam  asetat  anhidrat  dan  asam  sulfat  pekat  dan lobang  ketiga  ditambah  beberapa  tetes  asam  pereaksi  Lieberman  Bouchardat  sama banyak. Jika terbentuk warna merah positif untuk terpenoid dan warna hijau atau biru positif untuk steroid.
Sedangkan  untuk  uji  saponin,  beberapa  mL  lapisan  air  dimasukkan  ke  dalam tabung reaksi dan dikocok kuat. Bila berbentuk busa yang bertahan selama 5 menit, ini menunjukkan positif saponin. 10

## Penyiapan Sediaan Uji

## Suspensi Ekstrak etanol dosis 200 mg, 400 mg dan 800 mg/kgBB
Serbuk  Na  CMC  ditimbang  25  mg.  Kemudian  ditaburkan  di  atas  aquadest  panas sebanyak  20  kalinya  yang  berada  dalam  lumpang  panas  dan  dibiarkan  selama  15 menit kemudian digerus sampai homogen selanjutnya ditambahkan sedikit demi sedikit ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  yang  sudah  ditimbang  sesuai  dengan  dosis  yang
direncanakan, kemudian digerus hingga homogen dan ditambahkan aquadest sampai volume 5 mL.

## Suspensi Alopurinol
Dosis allopurinol untuk manusia 1 kali pemakaian adalah 100 mg. 1 Faktor konversi dosis  mencit  adalah  0,0026/20gBB.  Dosis  allopurinol  dalam  1  tablet  adalah  100  mg. Volume Administrasi Obat (VAO) pada mencit yaitu 1% dari berat badan (20 g). Dosis untuk mencit = 100 mg x 0,0026 = 0,26 mg/20 g = 13 mg/kgBB
0,26 mg

## 1,3 mg/mL C = 6,5 mg/5mL
Konsentrasi  suspensi  alopurinol  yang  dibuat  =  6,5  mg/5mL.  Suspensi  Na  CMC  5  % sebanyak  0,5  ml  ditambahkan  sedikit  demi  sedikit  Alopurinol  yang  sudah  ditimbang setara  6,5  mg  digerus  hingga  homogen  dan  ditambahkan  aquadest  sampai  volume  5 mL.

## Penyiapan Induktor Hiperurisemia
Induktor  hiperurisemia  yang  digunakan  adalah  Makanan  Diet  Tinggi  Purin  (MDPT) yaitu  hati  sapi  segar  100  g  dicuci  bersih,  kemudian  diblender  dengan  menambahkan aquadest 25 mL hingga halus, kemudian saring dan masukkan dalam wadah.

## Penyiapan hewan uji
Mencit  yang  digunakan  dalam  percobaan  adalah  mencit  putih  ( Mus  musculus L.) jantan sebanyak 30 ekor  yang berumur 2-3 bulan  dengan berat 20-30 gram. Sebelum menggunakan  hewan,  hewan  tersebut  diaklimatisasi  selama  7  hari  dengan lingkungannya  dan  diberi  makanan  dan  minuman  yang  cukup.  Jika  hewan  tidak mengalami  perubahan  berat  badan  lebih  dari  10%  dan  menunjukan  perilaku  normal, hewan  dinyatakan  sehat.  Semua  hewan  dikelompokan  secara  acak  agar  distribusi berat  badan  merata  untuk  semua  kelompok  dengan  variasi  tidak  lebih  dari  20%  dari rata-rata berat badan.

## Pengujian Aktivitas Antihiperurisemia
Hewan  percobaan  5  kelompok  yaitu  kelompok  normal,  kontrol  negatif,  control positif  dan  3  kelompok  perlakuan  dosis  yaitu  kelompok  dosis  200  mg/kgbb,  400 mg/kgbb  dan  800  mg/kgbb.  Setiap  kelompok  terdiri  dari  5  ekor  mencit  putih  ( Mus musculus L.) jantan. Adapun cara perlakuannya sebagai berikut : Kelompok  kontrol  normal:  mencit  diberi  suspensi  Na  CMC  0,5%  diberikan  1  kali sehari secara per oral sebanyak 1% dari berat badan mencit selama 28 hari.
Kelompok kontrol negatif: mencit diberi MDPT 0,6 mL/20gBB selama 14 hari 1 kali sehari,  hari  ke  15  hingga  ke  28  diberi  MDPT  0,6  mL/20gBB  dan  suspensi    Na  CMC 0,5% 1 kali sehari per oral sebanyak 1% dari berat badan mencit.
Kelompok  kontrol  positif:  mencit  diberi  MDPT  0,6  mL/20gBB  selama  14  hari  1  kali sehari,  hari  ke  15  hingga  ke  28  diberi  MDPT  0,6  mL/20gBB  dan  allopurinol  dosis  13 mg/kgBB 1 kali sehari per oral sebanyak 1% dari berat badan mencit.
Kelompok dosis 1, mencit diberi MDPT 0,6 mL/20gBB selama 14 hari 1 kali sehari, hari ke 15 hingga ke 28  diberi MDPT 0,6 mL/20gBB dan ekstrak etanol daun pandan wangi dosis 200 mg/kgBB 1 kali sehari per oral sebanyak 1% dari berat badan mencit.
Kelompok dosis 2, mencit diberi MDPT 0,6 mL/20gBB selama 14 hari 1 kali sehari, hari ke 15 hingga ke 28 diberi MDPT 0,6 mL/20gBB dan ekstrak etanol daun pandan wangi dosis 400 mg/kgBB 1 kali sehari per oral sebanyak 1% dari berat badan mencit.
Kelompok  dosis  3,  mencit  diberi  MDPT  0,6  mL/20gBB  selama  14  hari  sebanyak  1 kali  sehari,  hari  ke  15  hingga  ke  28  diberi  MDPT  0,6  mL/20gBB  dan  ekstrak  etanol daun pandan wangi dosis 800 mg/kgBB 1 kali sehari per oral sebanyak 1% dari berat badan mencit.
Pengukuran  kadar  asam  urat  dilakukan  dengan  metode Point  of  Care  Testing (POCT)  menggunakan  alat  digital  Easy  Touch ® GCU.  Alat  dikalibrasi  terlebih  dahulu dengan nomor kode yang disesuaikan dengan strip tes yang akan digunakan. Strip tes diselipkan pada tempat khusus pada alat tersebut, kemudian pada layar akan muncul gambar  tetesan  darah  yang  menandakan  alat  siap  digunakan.  Setelah  ekor  mencit didesinfeksi  dengan  etanol  70%  ujung  ekor  digunting  dengan  gunting  bedah,  tetesan darah pertama dibuang, tetesan berikutnya diserapkan pada strip tes sampai terdengar bunyi. Dalam  waktu 20 detik pada layar akan tertera kadar asam urat dengan mg/dL. Pengukuran  kadar  asam  urat  dilakukan  pada  hari  ke-0,  15,  22  dan  29.  Hewan percobaan  di  puasakan  selama  16  jam  sebelum  dilakukan  pengukuran  kadar  asam urat.
Data dari hasil penelitian ini dianalisa secara statistik dengan ANOVA dua arah. Jika hasil  analisa  bermakna  kemudian  dilanjutkan  dengan  Uji  Tukey  dan  kebermaknaan diambil pada tingkat kepercayaan 95%.

## Hasil
Tabel 1. Hasil Penapisan Metabolit Sekunder Esktrak Etanol Daun Pandan Wangi
Keterangan : (+) = terdeteksi (-) = tidak terdeteksi
Tabel 2. Kadar Asam Urat Mencit Sebelum dan Sesudah Pemberian Ekstrak  etanol Daun Pandan Wangi  ( Pandanus amaryllifolius Roxb)
Kelompok Kadar Asam Urat rata-rata (mg/dL) ±SD t 0 t 15 t 22 t 29 Normal 3,18±0,08 3,16±0,11 3,16±0,11 3,16±0,11 Negatif 3,14±0,11 6,36±0,57 8,04±0,39 9,54±0,63 Positif 3,12±0,13 6,54±0,65 4,64±0,46 3,36±0,21 Metabolit Sekunder Hasil Pengamatan Alkaloid + Flavonoid + Terpenoid - Steroid + Fenolik + Saponin -
Tabel 2. (Lanjutan) Kelompok Kadar Asam Urat rata-rata (mg/dL) ±SD t 0 t 15 t 22 t 29 Dosis 200 mg/kgBB 3,16±0,11 6,44±0,66 5,50±0,64 4,30±0,73 Dosis 400 mg/kgBB 3,12±0,13 6,42±0,56 5,20±0,43 3,54±0,32 Dosis 800 mg/kgBB 3,14±0,11 6,70±0,67 5,22±0,85 3,50±0,33
Keterangan : t0   = Kadar asam urat  awal pada sebelum diinduksi MDPT t15 = Kadar asam urat setelah 14 hari diinduksi MDPT t22 = Kadar asam urat setelah  7  hari setelah pemberian sediaan uji t29 = Kadar asam urat setelah 14 hari setelah pemberian sediaan uji
Tabel 3. Persentase Peningkatan Kadar Asam Urat Setelah Diinduksi MDPT Hati Sapi
Kelompok Kadar Rata-rata Asam Urat (mg/dL)±SD % Peningkatan Kadar Asam Urat t 0 t 15 Negatif 3,14±0,11 6,36±0,57 ↑102,54 Positif 3,12±0,13 6,54±0,65 ↑109,61 Dosis 200 mg/kgBB 3,16±0,11 6,44±0,66 ↑103,79 Dosis 400 mg/kgBB 3,12±0,13 6,42±0,56 ↑105,76 Dosis 800 mg/kgBB 3,14±0,11 6,70±0,67 ↑113,37
* Keterangan
Rumus perhitungan: kadar rata-rata asam urat t 15 – kadar rata-rata asam urat t 0 x100% kadar rata-rata asam urat t 0
Tabel 4. Persentase Penurunan Kadar Asam Urat Setelah diinduksi MDPT dan diberi sediaan uji
Kelompok Kadar Rata-rata Asam Urat ( mg/dL) ±SD % Penurunan Kadar Asam Urat t 15 t 22 t 29 t 22 t 29 Normal 3,16±0,11 3,16±0,11 3,16±0,11 ↓0,00 ↓0,00 Negatif 6,36±0,57 8,04±0,39 9,54±0,63 ↑26,42 ↑50,00 Positif 6,54±0,65 4,64±0,46 3,36±0,21 ↓29,05 ↓48,62 Dosis 200 mg/kgBB 6,44±0,66 5,50±0,64 4,30±0,73 ↓14,59 ↓33,22 Dosis 400 mg/kgBB 6,42±0,56 5,20±0,43 3,54±0,32 ↓19,00 ↓44,85

## Tabel 4. (Lanjutan)
Kelompok Kadar Rata-rata Asam Urat ( mg/dL) ±SD % Penurunan Kadar Asam Urat t 15 t 22 t 29 t 22 t 29 *Keterangan : ↓ = Penurunan
↑ = Kenaikan
Rumus perhitungan:
kadar rata-rata asam urat t 22 / t 29 – kadar rata-rata asam urat t 15 x 100% kadar rata-rata asam urat t 15

## Pembahasan
Sampel  yang  digunakan  adalah  1,7  kg  daun  pandan  wangi  segar  yang  telah dikeringkan.  Tujuan  pengeringan  sampel  adalah  untuk  mengurangi  kadar  air  dan menghentikan  reaksi  enzimatik  untuk  menjaga  mutu  simplisia.  Setelah  kering, dilakukan  perajangan  sampel  yang  bertujuan  untuk  memperluas  permukaan  sampel agar  kontak  antara  pelarut  dengan  sampel  semakin  luas  sehingga  mempermudah penetrasi  pelarut  kedalam  membran  sel  dan  proses  penarikan  senyawa-senyawa yang  terkandung  didalam  sampel  semakin  baik.  Hal  ini  didasari  oleh  semakin  kecil ukuran sampel maka proses interaksi pelarut dengan sampel semakin efektif. 11 Sampel  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan  etanol  96%  yang telah  didestilasi.    Etanol  adalah  pelarut  universal  yang  dapat    melarutkan    hampir semua senyawa baik yang bersifat polar, semi polar dan non polar.  Selain  itu, etanol dapat    menjaga  stabilitas  zat  dengan  cara  menghambat  kerja  enzim  dan  bersifat antiseptik  sehingga dapat  menghambat   pertumbuhan    kapang    dan  jamur  dan  kadar toksisitasnya relatif rendah terhadap makhluk hidup. 10
Sampel  kering  daun  pandan  wangi  dimaserasi  selama  5  hari  sambil  sesekali diaduk  dan  dilakukan    tiga    kali    pengulangan.Maserat  yang  diperoleh  dipekatkan dengan rotary evaporator . Prinsip vacum rotary evaporator adalah menguapkan pelarut dibawah  titik  didih  dibantu  dengan  dengan  penurunan  tekanan  menggunakan  vakum sehingga  zat  yang  terkandung  didalam  pelarut  tidak  rusak  oleh  suhu  tinggi. 10 Ekstrak kental  etanol  daun  pandan  wangi  yang    diperoleh  adalah  sebanyak  26,8841  gram. Rendemen  sebesar  5,38%.  Besarnya  rendemen  dipengaruhi  oleh  banyaknya  jenis komponen senyawa yang dapat terlarut dalam pelarut yang digunakan.
Setelah  didapatkan  ekstrak  kental,  dilakukan  uji  kandungan  metabolit  sekunder ekstrak etanol daun pandan wangi yang meliputi alkaloid, flavonoid, terpenoid, steroid, fenolik  dan  saponin.  Pada  tabel  1  hasil  pemeriksaan  metabolit  sekunder,  diperoleh hasil  ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  mengandung  senyawa  metabolit  sekunder yaitu flavonoid, alkaloid, fenolik dan steroid.
Pengujian ekstrak etanol daun pandan wangi untuk aktivitas antihiperurisemia ini dilakukan  pada  hewan  percobaan  berupa  mencit.  Mencit    yang    akan  digunakan adalah    mencit    yang  sehat  dan  tidak  mengalami  perubahan  berat  badan  lebih  dari 10%  selama  aklimatisasi.Selanjutnya  diukur  kadar  asam  urat  awal  mencit  untuk memastikan  bahwa  mencit  yang  digunakan  adalah  mencit  yang  kadar  asam  uratnya berada pada range normal. Kadar normal asam urat mencit adalah  1,5-3,3 mg/dL. 12 Penginduksian  mencit  dilakukan  dengan  pemberian  makanan  diet  purin  tinggi (MDPT)  yaitu  hati  sapi  segar  sebanyak  0,6  mL/20gBB  secara  oral  setiap  hari.
Dosis 800 mg/kgBB 6,70±0,67 5,22±0,85 3,50±0,33 ↓22,08 ↓47,76
Pemberian hati sapi digunakan sebagai penginduksi karena hati sapi termasuk bahan pangan dengan kadar purin tinggi kategori 1 dan mempunyai  kandungan  purin nomor dua  tertinggi    setelah    otak.  Kandungan  purin  hati  sapi  adalah  554  mg/100g.  Seluruh purin yang  berasal  dari  tubuh  sendiri (sintesa asam nukleat) ataupun yang berasal dari  makanan  akan  dimetabolisme  menjadi  asam  urat.  Purin  yang  berasal  dari makanan  akan  dipecah  melalui  pencernaan  sehingga  menghasilkan  hipoxantin  dan xantin.  Selanjutnya  dengan  bantuan  enzim  xantin    oksidase,  hipoxantin    dan    xantin akan diubah menjadi asam urat. Selain itu, penelitian yang dilakukan Rahmawati, dkk menunjukan  penggunaan  hati  sapi  dapat  meningkatkan  kadar  asam  urat  darah  pada tikus putih jantan. Mencit yang dikatakan hiperurisemia jika kadar asam urat darahnya lebih dari 3,3 mg/dL. 13
Penelitian ini menggunakan alopurinol dosis 13 mg/kgBB sebagai kontrol positif. Pemilihan  alopurinol    sebagai    kontrol  positif  karena  alopurinol    adalah  obat    modern yang    umum    digunakan  dalam  menurunkan  kadar  asam  urat.  Alopurinol    bekerja menghambat  enzim    xantin    oksidase    sehingga  pembentukan  hipoxantin  menjadi xantin dan xantin menjadi asam  urat  dapat  terhambat. 2 Oleh  karena  itu,  pemilihan alopurinol sebagai kontrol positif bertujuan untuk mengetahui sekaligus membandingkan  efek  antara  ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  dengan  alopurinol dalam menurunkan kadar asam urat darah.
Pada penelitian yang telah dilakukan terlihat hasil yang menunjukkan  kelompok mencit  normal  kadar  asam  uratnya  stabil  pada  rentang  kadar  normal  yaitu  0,5-3,3 mg/dL, sebab mencit normal ini tidak diinduksi dengan MDPT hati sapi sehingga kadar asam  urat  darah  mencit  ini  tetap  normal  selama  masa  perlakuan. 12 Sedangkan kelompok kontrol negatif terlihat bahwa  kadar asam urat darah mencit kontrol negatif ini  jauh  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  mencit  normal  yaitu  lebih  dari  3,3  mg/dL. Tingginya  kadar  asam  urat  darah  mencit  kontrol  negatif  ini  disebabkan  karena kelompok ini telah diinduksi dengan MDPT hati sapi tanpa diberikan sedian uji.
Pada  penelitian  ini  terlihat  adanya  aktivitas  antihiperurisemia  yang  ditandai penurunan  kadar  asam  urat  darah  mencit  pada  kelompok  positif  (alopurinol)  dosis 13mg/kgBB dan kelompok sediaan ekstrak uji pada pengamatan hari ke-22 dan ke-29. Sedangkan  untuk  kelompok  negatif  yang  tidak  diberi  alopurinol  maupun  sediaan ekstrak uji menunjukan terjadi kenaikan kadar asam urat darah mencit  hari ke-22 dan ke-29.Hasil  analisis  ANOVA  dua  arah  menunjukan  kelompok  dosis  (perlakuan)  dan lama perlakuan mempengaruhi kadar asam urat darah secara bermakna (p<0,05).Hal ini  berarti  faktor  perbedaan  dosis  tiap  kelompok  dan  lama  pemberian  sediaan  uji memberikan  pengaruh  terhadap  perubahan  kadar  asam  urat  secara  bermakna (p<0,05).
Analisis  dari  ANOVA  dua  arah  dilanjutkaan  dengan  uji  Tukey.  Hasil  uji  Tukey pada  faktor  kelompok  perlakuan  terhadap  kadar  asam  urat  menunjukkan  bahwa penurunan  kadar  asam  urat  kelompok  kontrol  normal  dan  negatif  berbeda  nyata dengan  kelompok  uji  yang  lain.  Kelompok  kontrol  positif  berbeda  nyata  (p<0,05) dengan kelompok uji dosis 200 mg/kgBB, tetapi tidak berbeda nyata (p>0,05) dengan kelompok  uji  dosis  400  dan  800  mg/kgBB.  Dari  data  yang  diperoleh  didapatkan kesimpulan bahwa kelompok dosis 400 dan 800 mg/kgBB mempunyai efek yang sama dengan kelompok kontrol positif dalam menurunkan kadar asam urat darah.
Pada  diagram  rata-rata  kadar  asam  urat  terhadap  dosis  pada  gambar  1 menunjukkan  pemberian  ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  dosis  200,  400  dan  800 mg/kgBB dapat menurunkan kadar asam urat mencit putih jantan hiperurisemia. Dari 3 variasi  dosis  yang  digunakan,  dosis  400  dan  800  mg/kgBB  menunjukkan  penurunan kadar asam urat yang paling baik mendekati kadar kontrol positif yang diberi alopurinol dosis 13 mg/kgBB.
Persentase  penurunan  antara  dosis  dan  kontrol  positif  (Alopurinol)  terhadap kontrol normal dapat dilihat pada tabel 4.  Persentase  penurunan  kadar  asam  urat
pada  kelompok  perlakuan  yaitu,  kelompok  yang  diberi  alopurinol  13  mg/kgB  dan kelompok dosis 200, 400 dan 800 mg/kgBB setelah 7 dan 14 hari pemberian sediaan uji  yang  diukur  pada  hari  hari  ke-22  dan  29  berturut-turut  adalah  pada  alopurinol 29,05%  dan  48,62%;  dosis  200  mg/kgBB  14,59%  dan  33,22%;  dosis  400    mg/kgBB 19,00% dan 44,85%; dan dosis  800 mg/kgBB 22,08% dan 47,76%.
Berdasarkan tabel persentase penurunan kadar asam urat yang ditunjukan oleh Alopurinol dosis 13 mg/kgBB, ekstrak etanol daun pandan wangi dosis 400 mg/kgBB dan    ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  dosis  800  mg/kgBB    pada  setiap  hari  tidak jauh berbeda. Peningkatan dosis ekstrak etanol daun pandan wangi dua kali lipat yaitu dosis  800  mg/kg  BB    meningkatkan  efek  penurunan  kadar  asam  urat  sedikit  lebih tinggi dari dosis 400 mg/kgBB.
Hasil  uji  lanjut  Tukey  menunjukkan  adanya  perbedaan  nyata  (p<0,05)  antara lama  perlakuan  pada  hari  ke-15,  22  dan  29.  Berdasarkan  data  tabel  4  persentase penurunan  kadar  asam  urat  selama  perlakuan  menunjukkan  bahwa  semakin  lama pemberian zat uji maka semakin besar pula persen penurunan kadar asam urat darah mencit.  Semakin  lama  waktu  pemberian  ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  maka mekanisme  kerja  senyawa  yang  berkhasiat  di  dalam  ekstrak  akan  semakin  baik sehingga menunjukkan aktivitas penurunan yang signifikan.
Mekanisme  ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  dalam  menurunkan  kadar  asam urat  darah  pada  mencit  hiperurisemia  diduga  karena  kandungan  senyawa  metabolit sekunder  yang  terdapat  dalam  ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi.  Adapun  dugaan senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada daun pandan wangi ini yang memiliki aktivitas  menurunkan  kadar  asam  urat  adalah  senyawa  flavonoid.  Hasil  uji  fitokimia dari  penelitian  yang  dilakukan  diperoleh  bahwa  ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi mengandung  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  fenolik  dan  steroid.  Senyawa  golongan flavonoid  lain  yang  juga  terkandung  dalam  pandan  wangi  adalah  kuersetin,  rutin, epikatekin, katekin, kaemferol, myrisetin, luteolin dan naringin. 14
Flavonoid  memiliki    banyak    manfaat  seperti    sebagai    antioksidan    dan sebagai  inhibitor  aktivitas  enzim.  Salah  satu  enzim  yang  dapat  dihambat aktivitasnya    adalah    xanthin  oxidase.  Mekanisme  kerja  flavonoid  dalam menurunkan  kadar  asam  urat  dengan  cara  menghambat  kerja  enzim  xantin oksidase sehingga pengubahan hipoxantin menjadi xantin dan xantin menjadi asam urat  dapat  terhambat.  Hal  ini  disebabkan  oleh  adanya  dua  cincin    aromatik    yang memiliki gugus  hidroksil  sebagai  akseptor  elektron xantin  oksidase.  Hubungan antara    struktur    flavonoid  dengan    aktivitasnya    sebagai    in hibitor  xanthin  oxidase disebabkan  oleh  adanya  ikatan  rangkap  pada atom C 2 =C 3 serta adanya gugus hidroksil pada atom  C 3 , C 5 dan  C 7 .
Aktivitas  antihiperurisemia    senyawa    flavonoid    akan  menurun    dan    bahkan kehilangan    aktivitasnya  apabila    terjadi    glikosilasi    pada    atom    C 7 .  Namun    jika glikosilasi    terjadi    pada    atom    C 8 akan  meningkatkan  aktivitas  antihiperurisemia dan  inhibitor  xanthin  oxidase.  Hal  ini  mungkin  disebabkan  oleh    pengaruh    posisi glikosilasi    terhadap    sisi  pengikatan  komponen  tersebut  terhadap  enzim.Struktur planar  dan  adanya gugus  hidroksil  pada  senyawa  flavonoid mungkin  memiliki peranan    yang    penting  dalam    interaksinya    dengan    molekul    target  pada komponen  tersebut.  Senyawa  golongan  flavonoid  lain  yang  juga  berperan  dalam menurunkan  asam  urat  adalah  kuersetin  dan  rutin.  Kuersetin  dan  rutin  memiliki aktivitas xantin oksidase yang dapat menurunkan kadar asam urat dalam darah. 15

## Kesimpulan
Dari  hasil  penelitian  pemberian  ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  memberikan pengaruh  terhadap  penurunan  kadar  asam  urat  mencit  hiperurisemia.  Pemberian ekstrak etanol dosis 200, 400 dan 800 mg/kgBB dapat menurunkan kadar  asam urat darah  mencit  sehingga  memiliki  aktivitas  antihiperurisemia.  Berdasarkan  analisa statistik  uji  ANOVA  Dua  Arah  menunjukan  Pemberian  ekstrak  etanol  daun  pandan wangi  dosis  400  dan  800  mg/kgBB  tetapi  tidak  berbeda  nyata  (p>0,05)  dengan kelompok kontrol positif alopurinol dosis 13 mg/kgBB dalam menurunkan kadar asam urat darah.

## Saran
Perlu penelitian lebih lanjut pada aktivitas antihiperurisemia mengunakan fraksi dari  ekstrak  etanol  daun  pandan  wangi  untuk  mengetahui  senyawa  yang  terkandung yang  dapat  menurunkan  kadar  asam  urat  serta  uji  toksisitas  untuk  mengetahui keamanan penggunaanya.

## Daftar Pustaka
1. Wells B, Dipiro J, Et.al. Pharmacotherapy handbook. 9th ed. United States: Mc Graw Hill; 2015. 1 –8 p.
2. Katzung  B,  Master  S,  et.al.  Basic  &  clinical  pharmacology.  12th  ed.  United States: Mc Graw Hill; 2012. 651 –56 p.
3. Pane M, Rahma A, Et.al. Gambaran penggunaan obat herbal pada masyarakat indonesia dan interaksinya terhadap obat konvensional tahun 2020. J Med Stud. 2021;1(1):40 –62.
4. Faras A, Wadkar S, Et.al. Effect of leaf extract of pandanus amaryllifolius (roxb.) on growth of escherichia coli and micrococcus (staphylococcus aureus). Int Food Res J [Internet]. 2014;21(1):421 –3. Available from: http://www.ifrj.upm.edu.my
5. Suryani  C,  Tamaroh  S,  Et.al.  Aktivitas  antioksidan  ekstrak  etanol  daun  pandan (pandanus amaryllifolius) dan fraksi-fraksinya. agritech [Internet]. 2020;37(3):271 –9. Available from: http://doi.org/10.22146/agritech.11312
6. Azizah  M,  Yunita  N.  Uji  efek  analgetik  ekstrak  daun  pandan  wangi  (pandanus amaryllifolius  roxb.)  terhadap  mencit  putih  jantan  (mus  musculus)  galur  swiss webster.  Sci  J  Farm  dan  Kesehat  [Internet].  2017;7(2):168 –72.  Available  from: https://doi.org/10.36434/scientia.v7i2.133
7. Prameswari O, Widjanarko S. Uji efek ekstrak air daun pandan wangi terhadap penurunan  kadar  glukosa  darah  dan  histopatologi  tikus  diabetes  mellitus.  J Pangan dan Agroindustri. 2014;2(2):16 –27.
8. Mohos  V,  Nyú  E.  Inhibition  of  xanthine  oxidase-catalyzed  Xanthine  and  6- Mmercaptopurine  oxidation  by  flavonoid  aglycones  and  some  of  their conjugates.  Int  Mol  Sci  [Internet].  2020;21(3256):1 –10.  Available  from: https://doi.org/10.3390/ijms21093256
9. Azmi  S,  Jamal  P.  Xantine  oxidase  inhibitory  activity  from  potental  malaysian medicinal plant as remedie for gout. Int Food Res J. 2012;19(1):56 –9.
10. N asyanka  L,  Na’imah  J.  Pengantar  fitokimia.  Jawa  Timur:  CV  Penerbit  Qiara Media; 2020. 9 –17 p.
11. Prasetyo,  Inoriah  E.  Pengelolaan  budidaya  tanaman  obat-obatan  (bahan simplisia). Bengkulu: Badan Penerbitan Fakultas Pertanian UNIB; 2013. 16 p.
12. Sonia R, Yusneliti, et.al. Efektivitas ekstrak etanol daun durian (durio zibethinus (linn.) sebagai antihiperurisemia. J Kefarmasian Indones [Internet].
P-ISSN: 2087-0337
2020;10(2):130 –9. Available from: https://doi.org/10.22435/jki.v10i2.2148
13. Rahmawati F, Nugraheni P, Et.al. Optimization of elevating blood uric acid levels with  high  purine  diet.  J  Pure  Appl  Chem  Res  [Internet].  2018;7(1):19 –24. Available from: https://doi.org/10.21776/ub.jpacr.2018.007.01.357
14. Ghasemzadeh  A,  Jaafar  H.  Optimization  of  reflux  conditions  for  total  flavonoid and  total  phenolic  extraction  and  enhanced  antioxidant  capacity  in  pandan (pandanus amaryllifolius Roxb.) using response surface methodology. Sci World J [Internet]. 2014;13(342):1 –10. Available from: https://doi.org/10.1155/2014/523120 15. Liu  L,  Zhang  L.  Advances  in  structures  required  of  polyphenols  for  xanthine oxidase  inhibition.  Rev  Artic  Food  Front  [Internet].  2020;1:152 –67.  Available from: https://doi.org/10.1002/fft2.27