## PENGUKURAN KADAR OX-LDL (Low Density Liporotein Oxidation) PADA PENDERITA ATEROSKLEROSIS DENGAN UJI ELISA
Raudatul Jannah 1 , Widodo 1 , Jayarani Fatimah Putri 1 , Saifur Rahman 2 , Miefetika Lukitasari 2
1 JurusanBiologi, FakultasMatematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Brawijaya
2 Fakultas kedokteran, Universitas Brawijaya
Raudatul jannah: anna.inges@gmail.com

## ABSTRACT
Atherosclerosis is caused by multifactors, for example free radical. Free radical could oxidize LDL to Ox-LDL. The oxidation process is considered as an important role in the early stages of atherosclerosis progression. This study aimed to know the differences levels of LDL oxidation among patients with atherosclerosis smokers, non- smokers  and  smokers  with  dyslipidemia. We  have  measured  Ox-LDL  concentration  from nine  samples aterosclerosis patients by using ELISA test. The data were analyzed using ANOVA (Analysis of Variance). This study suggested that Ox-LDL level of  the  nine  patiens are  not  significantly  difference. Further  research  by increasing the number of samples is needed to concieve the effect of smoking and dyslipidemia with Ox-LDL levels.

## Keywords: Atherosclerosis, ELISA ,LDL,  Ox-LDL

## ABSTRAK
Aterosklerosis disebabkan oleh multifaktor, salah satunya yaitu paparan radikal bebas yang dapat mengoksidasi LDL  menjadi  Ox-LDL.Proses  oksidasi  dianggap  sebagai  komponen penting  pada  tahap  awal  perkembangan aterosklerosis. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  perbedaan  kadar  oksidasi  LDL  pada  penderita aterosklerosis  perokok,  bukan  perokok  dan  perokok  disertai dislipidemia. Pada  penelitian  ini  telah  diuji  kadar Ox-LDL dari sembilan sampel pasien  yang menderita aterosklerosis dengan menggunakan uji ELISA dan data yang  diperoleh  dianalisis  menggunakan ANOVA (Analysis  of Variance). Hasil dari  penelitian ini menunjukan bahwa dari 9 pasien  yang diamati menunjukkan tidak ada perbedaan kadar oksidasi LDL yang signifikan pada penderita aterosklerosis  yang  memiliki  kebiasan  merokok,  tidak  memiliki  kebiasaan  merokok  dan  penderita aterosklerosis yang memiliki kebiasaan merokok disertai dislipidemia. Penelitian lebih lanjut dengan menambah jumlah  sampel  sangat  diperlukan  untuk  dapat membuat  kesimpulan  mengenai  pengaruh  merokok  dan dislipidemia dengan level Ox-LDL.
Kata kunci: Aterosklerosis, ELISA , LDL, Ox-LDL

## PENDAHULUAN
Aterosklerosis merupakan suatu penyakit akibat respon peradangan pada pembuluh darah yang bersifat progresif[1]. Aterosklerosis tersebut  disebabkan  oleh  multifaktor [2] salah satunya yaitu kebiasaan  merokok  dan  kenaikan kadar  LDL  dalam  darah [3]. Asap  rokok  yang dihirup  akan  menghasilkan  radikal  bebas  yang dapat  mengoksidasi  LDL  menjadi  Ox-LDL[4]. Pembentukan  Ox-LDL  akan  memicu  respon inflamasi  dan  menghasilkan  sitokin  proinflamsi yang menyebabkan ekspresi molekul adhesi pada permukaan  sel  endotel,  yaitu inter  cellular adhesion  molecule-I (ICAM-I), vascular  cell adhesion molecule-I (VCAM-I) dan selection [5] Sehingga menyebabkan monosit melekat pada permukaan  sel  endotel, monosit  tersebut  akan berpenetrasi ke intima  menjadi  makrofag
kemudian mengekspresikan macrophage  colony stimulating  factor (M-CSP).  Molekul  M-CSP berfungsi  merangsang  terjadinya radang  dan mengekspresikan  reseptor  skavenger  yang dapat mengenali LDL termodifikasi sehingga membentuk  sel  busa  [3] [5]. Pembentukan  sel busa  menyebabkan  penyempitan  lumen  arteri koroner dan tidak terjadi penurunan aliran darah serta gangguan  suplai  oksigen  ke  miokardium sehingga  menyebabkan terjadinya  penyakit jantung  koroner. Proses  oksidasi  di  anggap sebagai  komponen penting  pada  tahap  awal perkembangan  aterosklerosis[1]dengan demikian sangat  penting  untuk  diketahui  kadar  oksidasi LDL,  salah  satu  cara  untuk  mengetahui  kadar Ox-LDL  pada  penderita  aterosklerosis  yaitu dengan menggunakan  metode  ELISA  (Enzyme- linked  immunosorbent  assay) [6]. Oleh  karena, itu  penelitian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui
kadar  Ox-LDL pada  pasien  aterosklerosis  yang tidak  memiliki  kebiasaan  merokok,  memiliki kebiasaaan  merokok  dan  memiliki  kebiasaan merokok disertai dislipidemia.

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Kegiatan  penelitian  dilakukan  pada  bulan Agustus 2012-Februari  2013  di  Laboratorium biologi  molekuler  dan  seluler,  Jurusan  Biologi, Fakultas  Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Brwaijaya, Malang.

## Subjek Penelitian
Kriteria  inklusi  yaitu  laki-laki berusia 50- 80 tahun  yang  menderita  Aterosklerosis  dengan ciri-ciri klinis sebagai berikut: ECG, Peningkatan Troponin I, menderita Dislipidemia, Perokok dan bukan perokok. dengan  jumlah  keselurahan ada sembilan sampel.

## Preparasi sampel darah
Sampel  darah  diperoleh dari  Rumah  Sakit Saiful Anwar Malang sebanyak 600 µl kemudian disentrifugasi  20 menit  4000  rpm  4ºC,  sehingga didapatkan plasma.

## Uji kadar Ox-LDL dengan ELISA
Ox-LDL  diukur  dengan  menggunakan enzyme-linked  immunosorbent  assay (Mercodia Oxidized  LDL  ELISA  kit). Mikroplat  dicoating dengan  mouse  monoclonal  anti-oxidized  LDL, Mikroplate  diisi  dengan  kalibrator  dan  plasma. sebanyak  25  µl kemudian  ditambahkan  asaay buffer sebanyak 100 µl, inkubasi 2 jam sambil di shaker pada suhu ruang (18-25º C). Dicuci 6 kali dengan  wash  buffer  sebanyak 350  µl  dan ditambahkan  enzim  konjugat  (Monoclonal  anti- apoB) 100 µl masing masing strip, setelah itu di inkubasi  selama  1  jam  pada  suhu  ruang  (18-25º C)  selanjutnya  dilakukan  pencucian  yang  kedua sebanyak 6 kali dengan wash buffer.
Ditambahkan  substrat  TM  200  µl,  Inkubasi  15 menit  pada  suhu  ruang  tanpa  dishaker  dan ditambahkan  stop  solution  50  µl,  dinkubasi 30 menit  dan Hasilnya  dibaca pada panjang
gelombang 450.
Analisa Statistik Analisis data dilakukan dengan menggunakan  metode  ANOVA (Analysis  of Variance) pada  program SPSS  16 dilakukan  uji lanjut Tukey.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  penelitian  tersebut  di  gunakan sembilan pasien yang memenuhi kriteria inklusi. Berdasarkan  uji  ELISA  yang  telah  dilakukan dapat diketahui bahwa pasien penderita aterosklerosis dengan kebiasaan seperti merokok, tidak merokok dan pasien merokok yang disertai dengan  dislipidemia  tidak  memiliki perbedaan kadar Ox-LDL yang signifikan (Gambar 1).
Gambar 1. Kadar Ox LDL pada subyek penelitian.
Pada  Gambar 1 dapat dilihat bahwa kadar Ox-LDL  pada  pasien  penderita  aterosklerosis bukan  perokok  memiliki  kadar Ox-LDL  yang paling  rendah  dibandingkan  dengan  pasien perokok dan pasien perokok disertai dislipidemia.Namun Perbedaan  kadar  oksidasi LDL  pada  tiga  kelompok  pasien  tersebut  tidak berbeda  nyata  hal  ini  dapat  dilihat  dari  hasil analisis menggunakan statistik uji  tukey. Menurut penelitian Das menyatakan bahwa tidak ada perbedaan kadar LDL  teroksidasi antara pasien perokok dengan bukan perokok hal ini diakibatkan oleh polusi lingkungan yang juga bias mempengaruhi kerentanan  LDL  untuk teroksidasi [7].  Menurut beberapa  penelitian radikal bebas merupakan pemicu utama terjadinya penyakit Aterosklerosis [8]. Komponen  asap  rokok  seperti  nikotin,  tar,  dan hidrokarbon mampu memicu terbentuknya radikal  bebas  pada  berbagai  sel  tubuh  dan menyebabkan  terjadinya  reaksi berantai  yang dapat  menyebar  ke  seluruh  tubuh  [9].  Radikal bebas yang terdapat dalam asap rokok jumlahnya sangat  banyak,  dalam  satu  kali hisapan diperkirakan  masuk  10 14 molekul  radikal  bebas.
Kandungan  H 2 O 2 yang  tinggi  pada  asap  rokok akan  mempermudah  terjadinya  kerusakan  sel serta mempermudah propagasi  radikal bebas [7]. Radikal  bebas  dalam  jumlah  berlebihan [10] dapat  merusak  membran  sel  melalui  peroksidasi lipid  sehingga  merusak  fungsi  sel,  merusak protein  melalui  kerusakan  asam  amino  yang mengandung  sulfur,  merusak  DNA  melalui kerusakan  basa  maupun  gugus  gula  sehingga terjadi mutasi [11][12]. Asap rokok sebagai salah satu  sumber  radikal  bebas dikaitkan  dengan ketidakseimbangan antara oksidan dengan antioksidan. Oksidasi LDL terjadi karena adanya radikal  bebas, Proses  oksidasi  dimulai  oleh serangan  radikal  bebas  dengan  menarik  atom hidrogen dari salah satu PUFA yang terikat pada LDL.Pembentukan radikal hidroksil dari hidrogen  peroksida,  yang  diperantarai  oleh  Fe 2+ , dapat  mencetuskan  reaksi  berantai.  Akhirnya terjadi  degradasi  lemak,  dan  terbentuk  berbagai produk  seperti  MDA,  etana,  dan  pentana  dan selanjutnya  mengawali  proses  inflamasi [10] [12]. Asap  rokok  yang  dihirup  menghasilkan stres  oksidatif  yang  mengakibatkan  kerentanan LDL untuk teroksidasi, terutama pada pembuluh darah.  LDL  yang  berada  didalam  pembuluh darah  akan  masuk  ke  dalam  intima,  Selanjutnya LDL  akan  mengalami  modifikasi  oleh  radikal bebas menjadi Ox-LDL [13] [14].Selain paparan radikal  bebas  yang  berasal  dari  rokok  kejadian penyakit  aterosklerosis  juga  disebabkan  oleh genetik,  stress,  kebiasaan  dan  prilaku  hidup, RAS, dan lingkungan. Riwayat keluarga merupakan  salah  satu  faktor  resiko  yang  kuat untuk terjadinya penyakit aterosklerosis. Riwayat keluarga yang positif terhadap penyakit aterosklerosis  akan  meningkatkan  timbulnya aterosklerosis  prematur [15]  [4]. Kecendrungan pola  makan yang  tidak  sehat akan  semakin memicu  meningkatnya  radikal  bebas  dalam tubuh.  Jika  radikal  bebas  tersebut  bereaksi dengan  LDL  maka akan  terjadi  oksidasi  LDL sehingga  akan  terjadi  penumpukan  lemak  pada dinding  pembuluh  arteri  dan  akan  membentuk plak  yang  bisa  memicu  terjadinya  penyakit aterosklerosis [16].

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  dapat  diambil kesimpulan, yaitu tidak terdapat perbedaan kadar Ox-LDL  yang  signifikan terhadap sembilan pasien yang disampling.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian lebih  lanjut dengan jumlah sampel yang lebih banyak.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Bapak  Muhaimin Rifa’i.,PhD.Med.Sc dan Drs.  Aris  Soewondo,  M.Si  yang  mengkritisi artikel ini. PERKI (perhimpunan dokter spesialis kardiovaskuler  indonesia),  DPP  dan  SPP  yang telah mendanai penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
[1]  Imanual,  S  dan  tjiptaningrum,  A.  2012. Lipoprotein-Associated phospholipase
A2 (Lp-PLA2) sebagai petanda penyakit jantung  koroner.  Departemeb  patologi klinik,  Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia. [2] Aviram, Michael. 2008. Macrophage Foam Cell Formation During Early Atherogenesis  Is  Determined  by  the Balance  Between  Pro-Oxidants  and  Anti-
Oxidants  in  Arterial  Cells  and  Blood Lipoproteins. Institute  for  Research  in the Medical Sciences, Haifa, Israel. [3] Djohari,M. Dan Syamsu. 2009. Modified low desnsity lipoprotein (LDL) in Atherogenesis  process. The  Indonesian journal of medical science.502-510.
[4] Rahman, A, 2012. Faktor-faktor risiko mayor aterosklerosis  pada  berbagai  penyakit aterosklerosis. universitas diponegoro. semarang. [5] Hansson GK. 2005. Inflamation,
atherosclerosis  and  coronary  atery  disease. Atheroscler  Thromb  Vasc  Biol.  352:1685- 1695.
[6] Wisnasari, shila. 2012. ELISA.Magister Biomedik.Universitas Brawijaya.
[7]  Das,  Dedaditya,  D.Bhattacharjee,  I.Ghosh,D. Mandal,T.Bera,  T.Sanyal,C.Sarkar.  2012. LDL  Susceptibility  to  Oxidative  Stress  in Smokers. Indian Medicial Gazette.
[8]  Sumarno,  T.Puspita,  R.Wahyuningsih.  2012. Peran  antioksidan  pada  ekstrak  tepung daun  kelor  (Moringa  Oliofera)  terhadap kadar  MDA  (Hepar)  pada  tikus Rattus novergicus  strain  wistar yang  dipapari asap  rokok.  Laboratorium  Biomedik, FKUB.Malang
[9]  Malia,  A,  2006.  The  differences  of  serum lipid and the progression of atherosclerotic lession  in  abdominal  aortic  between  the
momordica  charantina  juice  and  control group.
Magister Ilmu Biomedik.
Universitas Diponegoro. [10]Ismawati,  E. Asni  and  M.Y.Hamidy.  2012. pengaruh  air  perasan  umbi  bawang  merah
(allium ascalanicum L) terhadap
melanoldehida  (MDA)  plasma  mencit yang  diinduksi  hiperkolestrolemia.  Jurnal Natur  Indonesia  14(2),  Februari  2012: 150-154
[11]  Indrapraja,  O.    2009.  Efek  minyak  atsiri bawang  putih  (Allium  sativum)  dan  cabe jawa  (Piper  retrofractum  Vahl.)  terhadap jumlah eritrosit pada tikus yang diberi diet kuning  telur.  Tesis.Fakultas  Kedokteran
Universitar Diponegoro Semarang.
[12]Juwita,  D.  2009.  Efek minyak  atsiri  bawang putih  allium  sativum  terhadap  jumlah erittrosist  (studi  eksperimental  pada  tikus wistar  yang  diberi  diet  kunging  telur). Skripsi.  Fakultas  Kedokteran  Universitas Diponegoro Semarang.
[13] Powell, J. T.,  1998. Vascular damige from smoking:  disease  mechanism at  the arterial wall.vsc med 1998 3:21
[14] Yang, H.,  A. S. S. Mohamed and S. Zhou. 2012. Oxidized  low  density  lipoprotein, stem cells, and atherosclerosis. Lipids in Health and Disease 2012, 11:85.
[15]  Anwar,  T.B.2004.Dislipidemia  sebagai faktor  resiko penyakit  jantung  koroner. Fakultas Kedokteran Universitas sumatra.
[16]  Paramawati,  R.  2012.    Potensi  berbagai dedaunan sebagai minuman sumber flavonoid-antioksidan. Balai Besar Pengembangan Mekanisasi Pertanian.
Seminar  nasional  fungsional  diakses  pada tanggal 1 februari 2013.