## Profil Kromatogram dan Uji Aktivitas Antibakteri Beberapa Fraksi Ekstrak Daun Kemuning ( Murraya paniculata
(L.) Jack) terhadap Bakteri Penyebab Disentri dengan Metode Difusi Agar

## Masayu Azizah dan Sri Ekawati
Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Bhakti Petiwi Palembang, Sumatera Selatan, Indonesia
Intisari: Telah dilakukan penelitian tentang profil kromatogram dan uji aktivitas antibakteri dari beberapa frak- si ekstrak daun kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack) terhadap bakteri penyebab disentri.Penelitian ini ber- tujuan untuk mengetahui profil kromatogram dan uji aktivitas antibakteri beberapa fraksi ekstrak daun kemun- ing ( Murraya paniculata (L.) Jack) terhadap bakteri penyebab disentri.Ekstrak kental diperoleh dengan metode maserasi dan kemudian di fraksinasi. Profil kromatogram dilakukan dengan cara pemisahan secara kromato- grafi lapis tipis dan akvitas terhadap beberapa bakteri penyebab disentri dilakukan dengan metoda difusi agar. Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  profil  kromatogram  ekstrak  etanol  daun  kemuning  ( Murraya  paniculata (L.) Jack) didapatkan senyawa fenolik, flavonoid dan steroid.Pada fraksi air didapatkan senyawa fenolik dan flavonoid.Fraksi etil asetat didapatkan senyawa fenolik.Fraksi n -heksan didapatkan senyawa steroid dan terpe- noid.  Hasil  diameter  hambat  bakteri  tertinggi  didapat  pada  fraksi  etil  asetat  terhadap  bakteri Shigella  boydii ATCC 12985 dengan rata-rata 16,16 mm, 15,5 mm, 14,1 mm, dan 12,1 mm.
Kata kunci: kromatogram, aktivitas antibakteri, daun kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack)
Abstract: A research on the chromatogram profile and antibacterial activity of some fraction of the extract of Murraya paniculata (L.) Jack against the bacteria that cause dysentery. This study aimed to determine the pro- file of the chromatogram and antibacterial activity of some fraction of the extract of Murraya paniculata (L.) Jack  against the bacteria that cause dysentery. Viscous extract obtained by maceration method and then frac- tionation. Profile chromatogram is done by thin layer chromatography separation and activity in case against several bacteria that cause dysentery performed by the agar diffusion method. The results showed that the pro- file of the chromatogram obtained Murraya paniculata (L.) Jack  ethanol extract of phenolic compounds, fla- vonoids and steroids. In the water fraction obtained phenolic compounds and flavonoids. Ethyl acetate frac- tion obtained phenolic compounds. N - hexane fraction obtained steroid compounds and terpenoids. The re- sults of bacterial inhibition highest diameter obtained in ethyl acetate fraction against bacteria Shigella boydii ATCC 12985 with an average of 16.16 mm, 15.5 mm, 14.1 mm and 12.1 mm.
Keywords: chromatogram, antibacterial activity, Murraya paniculata (L.) Jack
Email: zizaloeng@gmail.com

## 1 PENDAHULUAN
isentri  basiler  adalah  infeksi  usus  besar  oleh kuman Shigella ,  yang  hanya  menimbulkan  ke- rusakan  di  usus  dan  tidak  menimbulkan    kerusakan jaringan  organ  tubuh  lainnya. Shigella  dysenteriae atau Shigella  shigae merupakan  penyebab    disentri paling  ganas  karena  membentuk  endotoksin  yang sering menimbulkan epidemi hebat di daerah tropis dan subtropis (Soedarto, 2009). Setiap tahun penya- kit  disentri  menjadi  penyebab  kematian  satu  juta orang  di  negara  berkembang  dan  sebagian  besar adalah anak-anak (Thompson, 2012).
Disentri  basiler  merupakan  masalah  kesehatan yang  serius  dan  harus  diberikan  penanganan  yang
tepat. Tindakan yang harus segera diberikan kepada penderita  shigellosis  adalah  mencegah  terjadinya dehidrasi,  serta  pemberian  obat  antibakteri  sebagai terapi kausatif, akan tetapi dengan semakin banyak- nya  ditemukan kasus resistensi bakteri terhadap an- tibiotik,  pemakaian  antibiotik  harus  semakin  diwas- padai (Prihantoro dkk, 2006).
Oleh  karena  itu  diperlukan  modifikasi  (struktur kimia),  evaluasi  dan  alternatif  (obat  herbal)  (Kat- zung, 2002). Beberapa tumbuhan yang memiliki efek sebagai antidisentri antara lain rimpang kunyit ( Cur- cuma domestica Val) (Saptarina, 2014), herba meni- ran  ( Phyllanthus  niruri )  (Munfaati  dkk,  2014),  dan daun binahong ( Anredera cordifolia ) (Ainurrochmah dkk, 2013).
D
Pada penelitian yang dilakukan Gunardi dan Kar- tika (2007) dengan menggunakan kromatografi lapis tipis  (KLT)  hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa, profil  kromatogram  ekstrak  etanol  daun  kemuning ( Murraya  paniculata (L.)  Jack)  diperoleh  6  bercak dibawah sinar UV panjang gelombang 254 nm den- gan warna biru gelap, biru, ungu, ungu jingga, hijau dan  coklat.  Aktivitas  ekstrak  etanol  daun  kemuning ( Murraya  paniculata (L.)  Jack)  terhadap Escherichia coli menunjukkan  daya  hambat  pada  konsentrasi 30% dan daya bunuh pada konsentrasi 40%.
Ekstrak  daun  kemuning  mengandung  metabolit sekunder  seperti  minyak  atsiri,  alkaloid,  flavonoid, saponin, tanin dan damar yang menpunyai aktivitas biologis  sebagai  penenang  (sedatif),  pemati  rasa (anastesi),  penurun  panas  (antipiretik),  dan  anti- biotik  terhadap Sreptococcus  aureus (Dalimar-tha. 2002;  Windono.  2002;  Hendrik,  dkk.  2002;  Pudjias- tuti. 2002; Wahyudi. 2002).
Di  kalangan  masyarakat  telah  banyak  menggu- nakan  tanaman  herbal  untuk  mengobati  penyakit disentri,  salah  satunya  tanaman  kemuning  namun belum  dilakukan  penelitian  secara  ilmiah  terhadap beberapa  bakteri  penyebab  disentri,  maka  dari  itu perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui secara ilmiah  aktivitas  antibakteri  penyebab  disentri  serta senyawa  apa  saja  yang  terkandung  didalam  daun kemuning  ( Murraya  paniculata (L.)  Jack)  dengan analisa kromatografi lapis tipis

## 2 METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilakukan dari bulan April 2016 sampai dengan Agustus 2016 di Laboratorium  Mikrobiologi Farmasi dan Laboratorium Penelitian  Sekolah Ting- gi Ilmu Farmasi Bhakti Pertiwi Palembang.

## Alat dan Bahan
a. Alat
Alat  yang  digunakan  antara  lain  seperangkat  alat maserasi,  seperangkat  alat  destilasi  vakum,  sepe- rangkat alat rotari evaporator, corong pisah, corong kaca,  vial,  bunsen,  cawan  petri,  timbangan  analitik, gelas  ukur,  pipet  tetes,  tabung  reaksi,  beaker  glass, pinset,  erlenmeyer,  jarum  ose,  kapas,  kassa  steril, alumunium  foil,  benang,  gunting,  spatel,  jangka  so- rong,  autoklaf,  elektro  thermal  inkubator,  kertas saring, kertas cakram, Laminer air flow, pipet kapiler dan spektrofotometer UV-Vis.
b. Bahan
Bahan  yang  digunakan  adalah  daun  Kemuning (Murraya paniculata (L.) Jack), media Nutrient Agar (NA), tetrasiklin, etanol destilat, NaCl fisiologis 0,9%, n-heksan, etil asetat,   etanol,  aquadest, plat Kroma- tografi  Lapis  Tipis  (KLT),  reagen  sitroborat,  reagen FeCl 3 1%, reagen vanilin asam sulfat, methanol, Shi- gella dysenteriae ATCC 13313, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella boydii ATCC 12985.

## Prosedur Penelitian
a. Pengambilan Sampel dan Identifikasi Tumbuhan Sampel berupa daun dari tanaman Murraya panicu- lata (L.) Jack, yang diperoleh dari sektaran kawasan jl.  Ariodillah  II,  Palembang  Sumatera  Selatan  dan identifikasi  tumbuhan  uji  dilakukan  di  Herbarium Universitas  Andalas  (ANDA)  Padang,  Sumatera  Ba- rat.
b. Ekstraksi dan Fraksinasi
1 kg daun kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack) kemudian  daun  tersebut  dirajang  kecil-kecil  masuk- kan  kedalam  botol  maserasi  berwarna  coklat  lalu tambahkan  pelarut  etanol  hasil  destilasi  sampai sampel terendam semuanya dan disimpan ditempat gelap  sambil  sesekali  diaduk.  Setelah  5  hari,  pisah- kan  ekstrak  etanol  dengan  cara  penyaringan  dan ulangi  proses  perendaman.  Penyaringan  dilakukan sebanyak 3 kali.Maserat yang dihasilkan kemudian di kumpulkan.Maserat  yang  didapat  dikentalkan dengan  destilasi  vakum  dan  rotari  evaporator sehingga  didapat  ekstrak  kental.  Kemudian  difraksi- nasi  dengan n -heksan  tambahkan  aquadest  80  ml, akan didapat fraksi n-heksan dan fraksi air, fraksi  n- heksan  dipekatkan  dengan  destilasi  vakumuntuk menguapkan pelarutnya, sedangkan fraksi air difrak- sinasikan  dengan  etil  asetat,  akan  didapat  fraksi  etil asetat  dan  fraksi  air,  fraksi  etil  asetat  dan  fraksi  air dipekatkan  dengan  destilasi  vakum , hingga  terben- tuk ekstrak kental.
c. Kromatografi Lapis Tipis
Plat KLT dipotong berukuran 1 × 6 cm, sebanyak 5 mg  ekstrak  kental  dilarutkan  dalam  etanol  destilasi kemudian  ditotolkan  pada  lempeng  KLT  Silika  gel. Plat dimasukkan ke dalam bejana pengembang yang berisi cairan pengembang yaitu eluen etil asetat dan n-heksan  perbandingan  4:1.  Kemudian  dieluasi sampai  batas  10  cm  dari  titik  pusat  awal  penoto- lan.Setelah sampai batas, lempeng KLT diangkat dan dibiarkan mengering.Kemudian noda diamati secara visual di bawah sinar UV. Bercak yang nampak dihi- tung  jumlah  dan  dilihat  warna  fluoresensi  yang nampak.  Setelah  itu  diukur  harga  Rf-nya,  jumlah bercak  menggambarkan  banyaknya  komponen  se-
nyawa  yang  ada  di  dalamnya,  harga  Rf  dan  warna bercak dicocokkan dengan pustaka untuk mengeta- hui golongan senyawanya.
d. Pembuatan Larutan Uji Dan Larutan Kontrol
Pembuatan larutan uji ekstrak total,  fraksi n -heksan, fraksi etil asetat dan fraksi air di buat masing-masing konsentrasi 40% b/v, 30% b/v, 20% b/v  dan 10% b/v, kemudian  larutan  uji  diatas  diuji  aktivitas  antibakte- rinya.  Sebagai  parameter  aktivitas  antibakteri  digu- nakan  kontrol  (+)  dan  kontrol  (-).Larutan  kontrol positif  digunakan  tetrasiklin,  sedangkan  untuk  kon- trol negatif menggunakan etanol destilat yang meru- pakan pelarut yang digunakan sebagai pelarut untuk larutan  uji  dan  larutan  kontrol.Penggunaan  pelarut etanol  destilat  ini  dikarenakan  etanol  destilat  meru- pakan  pelarut  universal  yang  dapat  melarutkan  un- tuk setiap tingkat kepolaran dan cocok untuk kontrol yang  digunakan  dan  etanol  ini  tidak  bersifat  desin- fektan.
e. Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  disterilkan  terlebih  dahulu  dicuci bersih  dan  dikeringkan.    Untuk  alat-alat  gelas  (ta- bung  reaksi,  gelas  ukur,  erlenmeyer,  pipet)  ditutup mulutnya  dengan  sumbat  kapas  yang  dibaluti  de- ngan  kain  kasa  steril  dan  dibungkus  dengan  kertas perkamen, begitu juga dengan cawan petri dan co- rong.Kemudian semuanya disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121° C dengan tekanan 15 lbs selama 15 menit. Pinset,  jarum ose,  dan kaca objek  disterilkan dengan  cara  pemijaran  dengan  jalan  melewatkan pada  nyala  api  selama  20  detik  (Dwidjoseputro, 1998).
f. Pembuatan Larutan Tetrasiklin
Tetrasiklin  dibuat  dengan  konsentrasi  0,01%  dalam etanol  destilat  sebanyak  50  ml  digunakan  sebagai pembanding  antibakteri.  Larutan  ini  dibuat  meng- gunakan labu takar 50 ml.
g. Pembuatan Medium Pembenihan Nutrient Agar
Sebanyak 23 gram serbuk nutrient agar (siap pakai) dilarutkan  dalam  1  liter  air  suling  dan  dipanaskan sampai  mendidih  sambil  sesekali  diaduk  hingga  ho- mogen,  lalu  disterilkan  dalam  autoklaf  pada  suhu 121ºC dengan tekanan 15 lbs selama 15 menit. Me- dia  nutrien  agar  dituangkan  sebanyak  10  ml  keda- lam  cawan  petri  dan  5  ml  ke  dalam  tabung  reaksi untuk  agar  miring,  biarkan  memadat  dan  simpan dalam lemari pendingin (Cappuccino , 2009) .
h. Peremajaan Bakteri Uji
Bakteri    yang  telah  dimurnikan  diinokulasi  dengan bantuan jarum ose ke media agar miring, kemudian
diinkubasi pada suhu 36˚C selama 24-48 jamhingga diperoleh  pertumbuhan  yang  normal  (Brooks  dkk, 2013).
i. Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Koloni diambil dari  agar miring nutrien agar meng- gunakan  jarum  ose,  lalu  disuspensikan  ke  dalam pelarut NaCI 0.9 % sebanyak 5 𝑚𝑙 dan kocok homo- gen  dalam  tabung  reaksi.  Kekeruhan  suspensi mikroba  uji  diukur  dengan  alat  spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 580 nm dengan transmitan 25% (Cappuccino , 2009).
j. Uji Aktivitas Antibakteri
Teteskan suspensi bakteri sebanyak 2 tetes ke tabung reaksi yang berisi 10 ml media agar, lalu homogen- kan,  kemudian  tuangkan  di  atas  cawan  petri  yang berisi  10  ml  media  agar  yang  telah  memadat,  lalu ratakan.  Cawan  petri  tersebut  digoyangkan  bebera- pa  kali  secara  horizontal  agar  suspensi  bakteri  ini merata  pada  seluruh  permukaan  agar.Kemudian dibiarkan  pada  suhu  kamar  selama  15  menit  (Cap- puccino , 2009). Setiap bakteri uji ditempatkan pada 3  cawan  petri  untuk  tiap  larutan  uji  dan  pengujian dilakukan  sebanyak  tiga  kali  (triplo).  Cakram  kertas yang telah disterilkan dicelupkan ke dalam masing - masing  konsentrasi  zat  uji  yang  telah  disiapkan  ke- mudian  diletakkan  pada  permukaan  media  agar yang  telah  diinokulasi  dengan  bakteri.  Cawan  petri nutrien  agar  diinkubasi  kedalam    inkubator  pada suhu 37º C selama 48 jam. Kemudian diukur diame- ter zona bening ( clear zone ) yang terbentuk dengan menggunakan jangka sorong.
k. Analisis Data
Data yang diperoleh berupa zona hambat terhadap bakteri uji, selanjutnya disajikan dalam bentuk tabel dan dianalisa. Data hasil kromatografi lapis tipis dis- ajikan dalam bentuk gambar.

## 3 HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Hasil kromatografi lapis tipis dan aktivitas antibakteri ekstrak etanol dan beberapa fraksi  daun kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack) terhadap Shigella dy- sentriae ATCC  13313 ,  Shigella  flexneri ATCC  12022 dan Shigella  boydii ATCC  12985  diperoleh  hasil  se- bagai berikut:
1. Pemeriksaan  kandungan  kimia  daun  kemuning ( Murraya  paniculata (L.)  Jack)  dengan  penam- pang bercak pada KLT  dapat dilihat  ekstrak eta- nol  mengandung  fenolik,  flavonoid  dan  steroid, fraksi  air  mengandung  fenolik  dan  flavonoid,
fraksi  etil  asetat  mengandung  fenolik,  dan  fraksi n-heksan mengandung  steroid dan terpenoid. 2. Sampel segar daun kemuning ( Murraya panicula- ta (L.)  Jack)  1  kilogram  yang  diekstraksi  dengan pelarut  etanol  menggunakan  metode  ekstraksi secara  maserasi  diperoleh  ekstrak  kental  etanol sebanyak  92,58 gram  dengan rendemen  sebesar 9,258%.
3. Hasil  fraksinasi  ekstrak  kental  etanol  74,41  gram daun  kemuning  ( Murraya  paniculata (L.)  Jack) diperoleh fraksi kental n-heksan 13,75 gram, frak- si  kental  etil  asetat  26,42  gram  dan  fraksi  kental air 34,24 gram.
4. Hasil  pengukuran  diameter  hambat  ekstrak  eta- nol daun terhadap kemuning ( Murraya panicula- ta (L.) Jack) Shigella dysentriae ATCC 13313, Shi- gella  flexneri ATCC  12022  dan Shigella  boydii ATCC  12985  pada  konsentrasi  40%,  30%,  20% dan 10% dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel 1.  Diameter hambat rata-rata dan standar deviasi dari ekstrak etanol daun kemuning ( Murraya paniculata (L.)Jack)terhadap Shigella dysentriae ATCC 13313, Shigel- la flexneri ATCC 12022 dan Shigella boydii ATCC 12985 Bakteri Uji Zat Uji Diameter Rata-rata (mm)±SD Shigella dysen- triae ATCC 13313 K (+) 20,8 ± 0,89 K (-) 0 ± 0 40% 12,46 ± 0,30 30% 11,8 ± 0,40 20% 10,76 ± 0,35 10% 8,66 ± 0,70 Shigella flexneri ATCC 12022 K (+) 20,8 ± 0,50 K (-) 0 ± 0 40% 11,3 ± 0,70 30% 13,06 ± 0,25 20% 10,2 ± 0,34 10% 8,9 ± 0,76 Shigella boydii ATCC 12985 K (+) 23,13 ± 0,30 K (-) 0 ± 0 40% 13,5 ± 0,34 30% 12,1 ± 0,35 20% 11,56 ± 0,32 10% 10,4 ± 0,52 Keterangan: (+): Tetrasiklin,  (  ): Etanol Destilat
5. Hasil  pengukuran  diameter  hambat  fraksi  air, fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan daun kemun- ing  ( Murraya  paniculata (L.)  Jack)  terhadap Shi- gella  dysentriae ATCC  13313, Shigella  flexneri ATCC 12022 dan Shigella boydii ATCC 12985 pa- da konsentrasi 40%, 30%, 20% dan 10% dapat di- lihat pada tabel 2.
Tabel 2. Diameter hambat rata-rata dan standar deviasi dari beberapa fraksi daun kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack) terhadap Shigella dysentriae ATCC 13313, Shi- gella flexneri ATCC 12022 dan Shigella boydii ATCC 12985 Zat Uji Kon- sentrasi (%) Rata-rata (mm) ± SD Fraksi Air Fraksi Etil Asetat Fraksi n -Heksan Shigella dysen- triae ATCC 13313 K (+)  21,16 ± 0,40 22,2 ± 0,41 20,5 ± 0,36 K (-) 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 40% 12,23 ± 0,66 13,73 ± 0,20 11,7 ± 0,17 30% 11,53 ± 0,25 12,5 ± 0,25 10,56 ± 0,35 20% 10,16 ± 0,32 11,8 ± 0,30 9,43 ± 0,47 10% 9,16 ± 0,45 11,1 ± 0,26 8,2 ± 0,36 Shigella flexneri ATCC 12022 K (+) 21,8 ± 0,45 22,9 ± 0,23 22,0 ± 0,49 K (-) 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 40% 13,4 ± 0,20 14,7 ± 0,17 12,4 ± 0,52 30% 12,2 ± 0,50 12,8 ± 0,40 11,1 ± 0,47 20% 10,1 ± 0,45 11,9 ± 0,40 9,93 ± 0,23 10% 8,5 ± 0,88 11,1 ± 0,26 8,5 ± 0.30 Shigella boydii ATCC 12985 K (+) 23,2 ± 0,36 23,86 ± 0,37 23,0 ± 0,26 K (-) 0 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 40% 14,26 ± 0,11 16,156 ± 0,25 13,7 ± 0,17 30% 13,63 ± 0,37 15,5 ± 0,30 12,13 ± 0,37 20% 11,5 ± 0,70 14,1 ± 0,36 11,23 ± 0,40 10% 9,66 ± 0,37 12,1 ± 0,25 9,96 ± 0,28 Keterangan:  (+) : Tetrasiklin, (  ): Etanol Destilat

## Pembahasan
a. Ekstraksi Daun Kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack)
Pada  penelitian  ini  digunakan  sampel  segar  daun kemuning  ( Murraya  paniculata (L.)  Jack).  Sampel segar  digunakan  untuk  mencegah  terjadinya  peru- bahan  kimia  yang  tidak  diinginkan  dari  zat  aktif  se- lama proses pengeringan. Sebelum proses maserasi, daun  kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack) dira- jang  untuk  membuka  sel-sel  daun  kemuning  ( Mur- raya  paniculata (L.)  Jack)  sehingga  zat  aktif  yang terdapat di dalam sel-sel daun dapat tersari dengan lebih  sempurna  kedalam  pelarut.  Proses  ekstraksi dilakukan dengan cara maserasi. Cara maserasi dipi-
lih  karena  pengerjaannya  mudah  dan  sederhana, dapat  digunakan  untuk  sampel  yang  banyak,  tidak memerlukan  peralatan  khusus  serta  tidak  menggu- nakan  panas  sehingga  baik  untuk  simplisia  dengan zat  aktif  yang  tidak  tahan  terhadap  pemanasan (Harbone, 1987).
Pada  pengujian  dengan  KLT  daun  kemuning  ( Mur- raya  paniculata (L.)  Jack)  menunjukkan  bahwa  ek- strak kental etanol daun kemuning ( Murraya panicu- lata (L.) Jack) mengandung senyawa fenolik, steroid dan  flavonoid.Dilanjutkan  pengujian  fraksi  air  den- gan  menggunakan  KLT  daun  kemuning  ( Murraya paniculata (L.)  Jack)  mengandung  senyawa  fenolik dan  flavonoid,  pada  fraksi  etil  asetat  mengandung senyawa  fenolik  dan  pada  fraksi n -heksan  mengan- dung senyawa terpenoid dan steroid.
Maserasi sampel dilakukan didalam botol gelap dan tertutup  untuk  menghindari  pengaruh  oksida- si.Sampel dimaserasi sebanyak 3 kali, masing-masing selama  5  hari  dan  terlindung  dari  cahaya.  Pelarut yang  digunakan  adalah  etanol  hasil  destilasi,  etanol digunakan  karena  etanol  adalah  pelarut universal yang dapat menarik  hampir semua komponen kimia yang terkandung dalam tumbuhan, baik yang bersi- fat  polar,  semipolar,  atau  non  polar  dengan  harga yang  relatif  murah,  dan  tidak  begitu  toksik  bagi  pe- neliti  bila  dibandingkan  dengan  metanol.  Maserat daun kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack) yang diperoleh disaring dan dikumpulkan kemudian pela- rutnya diuapkan dengan destilasi vakum, dilanjutkan dengan rotary evaporator untuk menguapkan pelarut yang  masih  bersisa  hingga  terbentuk  ekstrak  yang kental.
Hasil ekstraksi sampel daun kemuning  ( Murraya pa- niculata (L.)  Jack)  segar  sebanyak  1  kilogram  dida- pat ekstrak etanol kental sebanyak 92,58 gram den- gan persen rendemen sebesar 9,258% .
b. Fraksinasi Daun Kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack)
Fraksinasi  dilakukan  dengan  menggunakan  alat  co- rong  pisah  dengan  pelarut  berdasarkan  tingkat  ke- polarannya yaitu air, etil asetat dan n-heksan.Tujuan dari  fraksinasi  yaitu  untuk  memisahkan  senyawa  ki- mia  berdasarkan  kepolarannya  (Djamal,  2010).  Air akan menarik senyawa yang bersifat polar, etil asetat akan menarik senyawa semipolar dan n-heksan akan menarik  senyawa  nonpolar.  Ekstrak  kental  etanol sebanyak 74,41 gram difraksinasikan dan hasil fraksi kental air sebanyak 34,24 gram, fraksi kental etil ase- tat  26,42  gram  dan  fraksi  kental n -heksan  13,75 gram.
c. Kontrol Positif  dan Kontrol Negatif
Kontrol  positif  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah tetrasiklin. Tetrasiklin dibuat dengan konsen- trasi 0,1%. Tetrasiklin dipilih karena termasuk golon- gan  antibiotik  yang  bersifat  bakteriostatik,  berspek- trum  luas  yang  meliputi  bakteri  gram  positif  dan negative,  aerobik  dan  anaerobik.Golongan  tetrasik- lin  menghambat  sintesis  protein  bakteri  pada  ribo- somnya. Paling sedikit terjadi dua proses dalam ma- suknya  antibiotik  kedalam  ribosom  bakteri  gram negative,  pertama  secara  difusi  pasif  melalui  kanal hidrofilik, kedua melalui system transpor  aktif.  Sete- lah  masuk  antibiotik  berikatan  secara  reversible dengan  ribosom  30  S  dan  mencegah  ikatan  tRNA- amino asil pada kompleks mRNA- ribosom. Hal ter- sebut  mencegah  perpanjangan  rantai  peptide  yang sedang  tumbuh  dan  berakibat  terhentinya  sintesis protein (Gan, 1987). Selain itu juga tetrasiklin meru- pakan  ajuvan  yang  efektif,  untuk  disentri    yang  dis- ebabkan oleh strain Shigella yang peka (Gan, 1987).
Sedangkan  kontrol  negatif  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  etanol  destilat  bertujuan  untuk melihat  ada  tidaknya  pengaruh  pelarut  dalam  uji aktivitas.Selain  itu  juga  sebagai  pelarut  zat  uji  dari ekstrak  dan fraksi daun  kemuning  ( Murraya panicu- lata (L.) Jack).
d. Bakteri Uji
Bakteri  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu bakteri  penyebab dysentri  basiller yaitu  bakteri Shi- gella dysentriae ATCC 13313 , Shigella flexneri ATCC 12022dan Shigella  boydii ATCC  12985.  Bakteri  ini didapat  dari  Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran  Universitas  Indonesia,  Jakarta.  Bakteri Shigella dysentriae ATCC 13313 memiliki 10 serotipe, Shigella flexneri ATCC 12022 memiliki 6 serotipedan Shigella  boydii ATCC  12985  memiliki  15  serotipe. Bakteri  ini  memiliki  sifat  khas  yaitu  dalam  pemben- tukan eksotoksin yang kuat (neurotoksin) yang dapat dibuat toksoid.Disamping itu juga terdapat pula sua- tu  enterotoksin  sehingga  terjadilah  disentri  (Gupte, 1990).
e. Uji Aktivitas Antibakteri
Pengujian  diawali  dengan  proses  sterilisasi  alat-alat yang  akan  digunakan,  sterilisasi  bertujuan  untuk membunuh  bentuk  hidup  dari  mikroorganisme  dan menghindari  kontaminasi  mikroba.  Sterilisasi  alat- alat  yang  terbuat  dari  gelas  digunakan  autoklaf  ka- rena  memiliki  beberapa  keunggulan  seperti  waktu sterilisasi  yang  singkat  serta  efektif  untuk  alat-alat gelas  yang  memiliki  rongga.  Setelah  itu  dilakukan peremajaan  bakteri  uji.  Peremajaan  bakteri  bertu- juan  untuk  mendapatkan  bakteri  yang  aktif  dan mencegah kerusakan bakteri.
Selanjutnya  pembuatan  bakteri  uji  dengan  cara melarutkan NaCl 0,9% dengan bakteri uji.Hal ini ber- tujuan  untuk  mengencerkan  bakteri  uji  yang  pekat sehingga  bakteri  dapat  menyebar  ke  dalam  media agar  dengan  sempurna  dan  homogen.  Penggunaan NaCl 0,9% bertujuan agar pada proses peng-enceran tekanan  osmosa    sel-sel  bakteri  sama  de-ngan  teka- nan osmosa cairan tubuh, sehingga tidak terjadi ke- matian sel (lisis).
Kekeruhan  suspensi  bakteri  diukur  dengan menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  pan- jang gelombang ( λ ) 580 nm dengan transmitan 25 % untuk  bakteri.  Pengukuran  ini  bertujuan  untuk menghomogenkan    jumlah  koloni  bakteri  yang  di- gunakan  dalam  setiap  cawan  petri  pada  tiap-tiap pengujian.  Suspensi  bakteri  digunakan  sebanyak  2 tetes  ke  dalam  10  ml  media  yang  telah  cairKekeru- han  suspensi  bakteri  diukur  dengan  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang ( λ )  580  nm  dengan  transmitan  25  %  untuk  bakteri. Pengukuran  ini  bertujuan  untuk  menghomogenkan jumlah  koloni  bakteri  yang  digunakan  dalam  setiap cawan petri pada tiap-tiap pengujian. Suspensi bak- teri digunakan sebanyak 2 tetes ke dalam 10 ml me- dia nutrien agar.
Pengujian aktivitas antibakteri menggunakan me- tode  difusi  agar.Metode  ini  dipilih  karena  memiliki beberapa  keunggulan  dibanding  metode  lainnya seperti  peralatan  yang  digunakan  relatif  sederhana serta  pengamatan  diameter  hambat  ( clear zone) yang  mudah.Media  yang  digunakan  adalah  media nutrien agar karena merupakan media selektif kare- na komposisi yang terdapat didalamnya sesuai den- gan kebutuhan pertumbuhan bakteri uji yang meru- pakan bakteri gram negatif.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etanol dan  beberapa  fraksi  (fraksi  air,  etil  asetat  dan  n- heksan)  terhadap  ketiga  bakteri  uji  dengan  kon- sentrasi  40%,  30%,  20%,  dan  10%  secara  deskriptif menunjukkan  adanya  perbedaan  diameter  zona hambat ( clear zone ). Hasil pengukuran daya hambat aktivitas antibakteri dari ekstrak etanol daun kemun- ing  ( Murraya  paniculata (L.)  Jack)  terhadap  bakteri Shigella  dysentriae ATCC  13313dengan  konsentrasi 40%, 30%, 20% dan 10% berturut-turut sebesar 12,46 mm, 11,8 mm, 10,76 mm, dan 8,66 mm. Pada bakte- ri Shigella  flexneri ATCC  12022  berturut-turut  13,2 mm,  11,3  mm,  10,2  mm,  dan  8,9  mm.  Sedangkan pada  bakteri Shigella  boydii ATCC  12985  berturut- turut 13,5 mm, 12,1 mm, 11,56 mm, dan 10,4 mm.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etanol daun  kemuning  ( Murraya  paniculata (L.)  Jack)  ter- hadap  bakteri Shigella  dysentriae ATCC  13313 ,  Shi-
gella flexneri ATCC 12022 dan Shigella boydii ATCC 12985  menunjukkan  diameter  hambat  paling  besar pada konsentrasi 40%, 30%, 20%, dan  10% terhadap bakteri Shigella  boydii ATCC  12985  berturut-turut 13,5 mm, 12,1 mm, 11,56 mm, dan 10,4 mm. Hal ini disebabkan  adanya  beberapa  golongan  senyawa yang mempunyai aktivitas antimikroba. Berdasarkan penampak  bercak  pada  KLT  ekstrak  etanol  daun kemuning  ( Murraya  paniculata (L.)  Jack)  mengan- dung senyawa fenolik, steroid dan flavonoid.
Hasil pengujian uji aktivitas antibakteri dari fraksi air  daun  kemuning  ( Murraya  paniculata (L.)  Jack)) terhadap  bakteri Shigella  dysentriae ATCC  13313 , dengan  konsentrasi  40%,  30%,  20%  dan  10%  bertu- rut-turut  sebesar  12,23  mm,  11,53  mm,  10,16  mm, dan  9,16  mm.  Pada  bakteri Shigella  flexneri ATCC 12022  berturut-turut  13,4  mm,  12,2  mm,10,1  mm, dan 8,5 mm. Sedangkan pada bakteri Shigella boydii ATCC  12985  berturut-turut  14,26  mm,  13,63  mm, 11,5  mm,  dan  9,66  mm.  Berdasarkan  penampang bercak  pada  KLT  fraksi  air  mengandung  senyawa fenolik dan flavonoid .
Hasil pengujian uji aktivitas antibakteri dari fraksi etil  asetat  daun  keminung  ( Murraya  paniculata (L.) Jack)  terhadap  bakteri Shigella  dysentriae ATCC 13313 , dengan konsentrasi 40%, 30%, 20% dan 10% berturut-turut sebesar 13,7 mm, 12,5 mm, 11,8 mm, dan  11,1  mm.  Pada  bakteri Shigella  flexneri ATCC 12022  berturut-turut  14,7  mm,  12,8  mm,  11,9  mm, dan 11,1 mm. Sedangkan pada bakteri Shigella boy- dii ATCC 12985 berturut-turut 16,16 mm, 15,5 mm, 14,1  mm,  dan  12,1  mm.  Berdasarkan  penampang bercak  pada  uji  KLT  fraksi  etil  asetat  mengandung senyawa fenolik.
Hasil pengujian uji aktivitas antibakteri dari fraksi n-heksan  daun  kemuning  ( Murraya  paniculata (L.) Jack)  terhadap  bakteri Shigella  dysentriae ATCC 13313 , dengan  konsentrasi  40%,  30%,  20%  dan10% berturut-turut sebesar 11,7 mm, 10,56 mm, 9,43 mm dan  8,2  mm.  Pada  bakteri Shigella  flexneri ATCC 12022  berturut-turut  12,4  mm,  11,1  mm,  9,93  mm dan 8,5 mm. Sedangkan pada bakteri Shigella boydii ATCC  12985  berturut-turut    13,7  mm,  12,13  mm, 11,23  mm  dan  9,96  mm.  Berdasarkan  penampang bercak  pada  KLT  fraksi n -heksan  mengandung  se- nyawa steroid dan terpenoid.
Hasil uji aktivitas antibakteri dari beberapa fraksi (fraksi air, etil  asetat dan  n-heksan)  daun kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack) terhadap bakteri Shi- gella  dysentriae ATCC  13313 ,  Shigella  flexneri ATCC 12022 dan Shigella boydii ATCC 12985 menunjukkan diameter hambat yang paling besar dengan konsen- trasi 40%, 30%, 20% dan 10% pada fraksi etil asetat.
Pada fraksi etil asetat daun kemuning ( Murraya pani- culata (L.) Jack)  memberikan efek paling besar ter- hadap Shigella  boydii ATCC  12985.  Hal  ini  terjadi karena Shigella boydii merupakan penyebab dysentri basiller yang  paling  ringan  dan  terdiri  atas  15  sero- tipe yang sudah ditemukan (Gupte, 1990).
Uji  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  etanol  dan fraksi etil asetat  daun kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack)  terhadap Shigella dysentriae ATCC 13313, Shigella  fexneri ATCC  12022  dan Shigella  boydii ATCC 12985 menunjukkan fraksi etil asetat membe- rikan diameter hambat ( clear zone ) yang lebih besar dibandingkan  ekstrak  etanol.  Berdasarkan  uji  fitoki- mia fraksi etil asetat mengandung senyawa fenolik.
Pada penelitian yang dilakukan Gunardi dan Kar- tika  (2007)  diketahui  bahwa  ekstrak  etanol  daun kemuning  ( Murraya  paniculata (L.)  Jack)  memiliki aktivitas antimikroba terhadap bakteri Eschericia coli dengan KBM 40% b/v.
Selanjutnya  penelitian  ini  dilanjutkan  fraksinasi, hasil  pengukuran  diameter  hambat  uji  aktivitas  dari beberapa  fraksi  (fraksi  air,  etil  asetat  dan  n-heksan) menunjukkan adanya aktivitas fraksi etil asetat yang bersifat  semi  polar  yang  lebih  besar  dari  pada ekstrak  etanol  dengan  konsentrasi  40%,  30%,  20% dan  10%  terhadap Shigella  boydii ATCC  12985 berturut-turut  16,16  mm,  15,5  mm,  14,1  mm,  dan 12,1 mm.
f. Senyawa Kimia Antibakteri
Hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan  menunjukkan bahwa  yang  memberikan  aktivitas  antibakteri  yang paling  besar  adalah  fraksi  etil  asetat.Senyawa  yang diduga  sebagai  antibakteri  adalah  senyawa  fenolik (berdasarkan penampak bercak pada KLT).
Fenolik  merupakan  senyawa  yang  mengandung fenol  (senyawa  turunan  fenol)  yang  secara  kimiawi telah  diubah  untuk  mengurangi  kemampuannya dalam  mengiritasi  kulit  dan  meningkatkan  aktivitas antibakterinya  (Pratiwi,  2008).  Golongan  fenol mampu  merusak  membran  sel,  menginaktifkan  en- zim dan mendenaturasi protein sehingga dinding sel mengalami kerusakan karena penurunan permaebi- litas.Perubahan  permeabilitas  membran  sitoplasma memungkinkan  terganggunya  transportasi  ion-ion organik yang penting ke  dalam sel sehingga beraki- bat terhabatnya pertumbuhan bahkan hingga kema- tian  sel  (Damayanti  dan  Suparjana,  2007).  Dalam konsentrasi tinggi, kandungan fenol menembus  dan mengganggu dinding sel bakteri dan mempresipitasi protein  dalam  sel  bakteri.  Dalam  konsentrasi  yang lebih  rendah,  fenol  menginaktifkan  sistem  anzim penting dalam sel bakteri (Oliver dkk., 2001). Flavo-
noid  merupakan  salah  satu  golongan  fenol  alam yang  terbesar,  terdapat  dalam  berbagai  bentuk struktur.  Semuanya  mengandung  15  atom  atom karbon  dalam  inti  dasarnya,  yang  tersusun  dalam konfigurasi  C 6- C 3- C 6 ,  yaitu  2  cincin  aromatik  yang dihubungkan  oleh  satuan  tiga  karbon  (Zaidan  dan Djamil, 2014).
Menurut  Hernani  (2011),  efek  antibakteri  dis- ebabkan adanya flavonoid dengan mekanisme kerja dapat  dibagi  menjadi  3  yaitu,menghambat  sintesis asam nukleat, menghambat fungsi membran sel dan menghabat  metabolisme  energi.  Flavonoid  meng- hambat  fungsi  membran  sel  dengan  membentuk senyawa kompleks dengan protein ekstraseluler dan terlarut sehingga dapat merusak membran sel bakte- ri  dan  diikuti  dengan  keluarnya  senyawa  (Cushnie, 2005).
Mekanisme  steroid  sebagai  antibakteri  berhu- bungan  dengan  membran  lipid  dan  sensitivitas  ter- hadap komponen steroid yang menyebabkan  kebo- coran  pada  lipospom  (Madduluri,  2013).  Steroid dapat  berinteraksi  dengan  membran  fosfolipid  sel yang bersifat permaebal terhadap senyawa-senyawa lipofilik sehingga  menyebabkan integritas membran menurun  serta  morfologi  membran  sel  berubah yang  menyebabkan  sel  rapuh  dan  lisis  (Ahmed, 2007).
Mekanisme  terpenoid  sebagai  antibakteri  adalah bereaksi dengan porin (protein transmembran) pada membran  luar  dinding  sel  bakteri,  membentuk  ika- tan  polimer  yang  kuat  sehingga  mengakibatkanru- saknya porin. Rusaknya porin yang merupakan pintu keluar  masuknya  senyawa  akan  mengurangi  per- meabilitas  dinding  sel  bakteri  yang  akan  mengaki- batkan sel bakteri akan kekurangan nutrisi, sehingga pertumbuhan  bakteri  terhambat  atau  mati  (Cowan, 1999).

## 4 SIMPULAN
Penelitian  ini  membuktikan  bahwa  ekstrak  etanol dan  beberapa  fraksi  (fraksi  air,  fraksi  etil  asetat  dan fraksi n -heksan) daun kemuning ( Murraya paniculata (L.) Jack) pada konsentrasi 40%, 30%, 20% dan 10% dapat  menghambat  bakteri  penyebab  penyakit dy- sentri  basiller yaitu  bakteri dysentriae ATCC  13313 , Shigella  flexneri ATCC  12022  dan Shigella  boydii ATCC  12985  dengan  kandungan  kimia  fenolik,  fla- vonoid.

## REFERENSI _____________________________
[1] Ainurrochmah, dkk. 2013. Efektivitas Ekstrak Daun Binahong (Anreder cordifolia ) terhadap Penghambatan
Pertumbuhan Bakteri Shigella flexneri dengan Metode Sumuran. Surabaya: Universitas Negeri Surabaya.
[2] Brooks, dkk. 2013. Jawetz, Melnick, & Adelberg’s Med- ical Microbiology. Jakata. EGC.
[3] Cappuccino, James G. 2009. Manual Laboratorium Mikrobiologi . Jakarta : EGC Medical Publisher.
[4] Dalimartha. 2002. Obat tradisional kemuning (online) . (cited 2006 Dec 27; Available from : URL : http//www.pdpersi.co.id.
[5] Djamal, Rusdi. 2010. kimia bahan alam: Prinsip-Prinsip Dasar Isolasi Dan Identifikasi. Padang : Universuitas Baiturahman.
[6] Dwidjoseputro, D. 1998 . Dasar- Dasar Mikrobiologi . Jakarta : Universitas Indonesia.
[7] Gan, S. 1987. Farmakologi dan Terapi , Edisi III, Bagian Farmakologi Fakultas Kedokteran. Jakarta : Universitas Indonesia.
[8] Gunardi, Kartika, D. 2007. Profil Kromatogram dan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Kemuning ( Murraya paniculata (L) Jack) Terhadap Escherichia coli secara In Vitro. Fakultas kedokteran Universitas Diponegoro.
[9] Gupte, Satis. 1990. Mikrobiologi dasar (Edisi III). Jakar- ta: Bina Aksara.
[10] Hendrik SB, dkk. 2002. Efek Analgesik dari Infusum ( Murraya paniculata (L) Jack) Terhadap Respon Nyeri yang Diinduksi Asam Asetat. Surabaya : Farmakologi Universitas Airlangga.
[11] Prihantoro, dkk. 2006. Efek antibakteri Ekstrak kulit Buah Delima ( Punica Granatum) Terhadap Shigella dy- sentriae Secara In Vitro.  Jurnal Kedokteran Brawijaya.
[12] Soedato DTM, Park. 2009. Penyakit Menular Di Indone- sia. Jakarta : CV Sagung Seto.
[13] Thompson, N. 2012. Wabah Disentri Gaya Baru Ancam Dunia . Diakses 1 November 2012 dari http://www.jpnn.com. ____________________________