## SENYAWA KIMIA STEROL DARI KULTUR JARINGAN KELADI TIKUS (Typhonium divaricatum Decne)
Submitted : 29 Juli 2019 Edited : 20 Desember 2019 Accepted : 30 Desember 2019
Lilik Sulastri 1 , Partomuan Simanjuntak 2,3
1 Sekolah Tinggi Teknologi dan Farmasi (STTIF), Jalan Kumbang no 23 Bogor 16151;
2 Puslit Bioteknologi-LIPI Jalan Raya Bogor Km 46 Cibinong 16911;
3 Fakultas Farmasi, Universitas Pancasila, Jagakarsa Jakarta 12640 *Email : liliksulastri28@gmail.com

## ABSTRACT
Keladi  tikus  (Typhonium  divaricatum Decne) is  one  of Aracaceae  family  which  a plant that’ s very popular in Indonesian society because it contains anti-cancer substances. Nowadays, keladi tikus plants have been cultivated in tissue culture widely. The simplicia used in this study was keladi tikus from tissue culture which was separated into the upper part (leaves and petioles) and  the  bottom  (tubers)  dried  in  the  sun. Dry  simplicia  was  extracted  with  methanol  at  a temperature of 60-70 o C and the methanol extract was partitioned with ethylacetate then with n- BuOH solvents, and all extracts were tested for cytotoxic tests using the Brine Shrimp Lethality test  (BSLT)  method. The  active  fraction  of  ethylacetate  extract,  which  is  the  tuber parts was carried  out  by  column  chromatography  (SiO 2 ;  i). n-hexane:  ethylacetate  =  10:  1  ~  1:  1; ethylacetate;  MeOH; ii).  n-hexane-ethylacetate  =  5:  1)  give  one  pure  isolate. The  results  of identification based on Infrared (IR) spectra, and gas chromatography-mass spectra (GC-MS) are  -sitosterol which LC 50 is 76.2 ppm
Keywords : Keladi tikus; Typhonium divaricatum Decne; Aracaceae; tissue culture;  -sitosterol

## PENDAHULUAN
Keladi  tikus  (Typhonium  divaricatum Decne)  adalah  tanaman  semak  dari  suku Araceae  yang  di  Pulau  Jawa sudah sering digunakan sebagai obat untuk menyembuhkan penyakit kulit. Akhir-akhir ini, tanaman keladi tikus muncul sebagai tanaman yang dilaporkan  dapat  membantu  penyembuhan berbagai  penyakit  kanker  antara  lain  kanker rahim,  paru-paru,  lambung, ginjal,  payudara dan  biasanya  digunakan  untuk  mengurangi efek  samping  dari  kemoterapi  seperti  rambut rontok, mual-mual, tidak ada nafsu makan dan lain (1,2,3) .
Di  Malaysia,  ekstrak  keladi  tikus  ini telah  diproduksi  dalam  bentuk  pil  dan  teh bubuk.  Ekstrak  tanaman  ini  bahkan  dapat menyembuhkan kanker mulut rahim, sehingga
tanaman  ini  di  media  cetak  dan  di  majalah Indonesia  dijuluki  sebagai  “Tanaman  ajaib”. Karena  tanaman  keladi  tikus  sangat  banyak manfaatnya dan telah dikomersialkan sebagai bahan  baku  pangan  dan  bahan  baku  obat tradisional (4) . Sehingga  untuk  memproduksi atau  memperbanyak  jumlah  tanaman  keladi tikus, hampir  semua  instansi  penelitian  telah melakukan  kultur  jaringan.  Kultur jaringan didefinisikan sebagai teknik membudidayakan jaringan  agar  menjadi  organisme  yang  utuh dan  mempunyai  sifat  yang  sama  dengan induknya (1,2) . Kultur jaringan adalah salah satu cara  perbanyakan  tanaman  secara  vegetative yang  mempunyai  keuntungan  seperti lebih hemat  tempat,  hemat  waktu,  dan  tanaman yang diperbanyak, mempunyai sifat sama atau seragam dengan induknya dan mutu bibit lebih
terjamin. Ada  beberapa  senyawa  kimia  yang sudah diisolasi dari ekstrak keladi tikus antara lain  Phenyltridecanoic  acid, methyl 13 tridecanoate,  dan  beberapa  senyawa  alifatik lain (5) ,  β - sitosterol,  β -daucosterol,  1-O- β - glucopyranosyl-2-(hydroxyloctadecanoyl)- amido-4,8-octadecadiene-1,3-diol (6) . Maka tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui kandungan senyawa kimia dalam umbi keladi tikus  hasil  kultur  jaringan  yang  dipandu berdasarkan  uji sitotoksik dengan  metode BSLT.
Gambar 1. Tanaman keladi tikus (T.
divaricatum Decne)  hasil  kultur jaringan

## METODE PENELITIAN
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  tanaman  keladi  tikus (Typhonium  divaricatum Decne)  hasil  kultur jaringan.
Pereaksi yang digunakan Pereaksi Lieberman- Burchard, air laut, larva udang Artemia salina Leach,  metanol, n-heksan,  Bismut  nitrat, larutan  penyemprot  Dragendorff, n-butanol, etilasetat dan Silika gel GF60 (70-230 mesh).
Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  alat  refluks,  evaporator vakum,  neraca  analitik,  botol  kultur,  lampu neon,  corong pisah,  spektrofotometer infra merah, spektrometer GC-MS  dan  perangkat gelas.

## Ekstraksi dan partisi
Masing-masing tanaman kering (bagian bawah  dan  atas)  sebanyak  100  gr direfluks dengan pelarut metanol sebanyak 6 kali pada suhu  60-70 o C,  dipekatkan  dengan Rotary vakum evaporator  sampai  diperoleh  ekstrak kental.  Ekstrak  yang  diperoleh ditambahkan air  dan dipartisi dengan  etilasetat  dengan perbandingan 1 : 1, dipisahkan dan kemudian dilanjutkan dengan pelarut n-butanol.
Sehingga diperoleh ekstrak etilasetat, n-BuOH
dan air.

## Penapisan fitokimia
Penapisan  fitokimia  meliputi  senyawa alkaloid, flavonoid, saponin, steroid, dilakukan berdasarkan metode Farnsword dan dimodifikasi oleh Gireesh, 2013 (7) .

## Pengujian  toksisitas  berdasarkan  metode
Brine Shrimp LthalityTest (BSLT)
Pengujian sitotoksik terhadap  ekstrak,
fraksi dan senyawa murni dilakukan berdasarkan metode Meyer yang dimodifikasi (8) . Isolasi dan pemurnian dengan kromatografi kolom Ekstrak  etilasetat 5  gr dilakukan kromatografi kolom (SiO 2 : kloroform- metanol = 20 : 1 ~ 1 : 1) memberikan 4 fraksi.
Kemudian fraksi EA-2 dilakukan
kromatografi  kolom  kedua  dengan  sistem (SiO 2 , n-heksan-etilasetat  =  5  :  1) sehingga diperoleh senyawa murni yang memiliki daya sitotoksik yang baik.

## Identifikasi isolat murni
Isolat murni adalah  isolate  yang memiliki daya sitotoksik terbaik. Indentifikasi struktur  kimia  berdasarkan data spektrum Infra  merah  (FT-IR)  dan  GC-MS. Skema isolasi  dan  identifikasi  dapat  dilihat  pada Gambar 2.
Sampel (Typhonium divaricatum)*)
direfluks dengan MeOH (6x)

## Ekstrak MaOH
dipartisi dengan air-etilasetat
1 : 1
Lap. etilasetat Lap. air diuapkan Ekstrak EA dipartisi dengan n-BuOH dan diuapkan Ekstrak n-BuOH Ekstrak air
Uji toksisitas (BSLT)
*) : Masing-masing bagian tanaman yang atas dan di bawah tanah diref luks secara terpisah

## EA ext.

## (5 g)
Kr. kolom (SiO 2 , n-hexane-EA = 20 : 1 ~ 1 : 1 ; etilacetate; MeOH EA-1 EA-2 EA-3 EA-4
Kr. kolom (SiO 2 , n -hex.-EA= 5 : 1 EA-2-1 EA-2-2
EA-2-3
EA-2-4
 -sitosterol identifikasi (IR, GC-MS)
Gambar 2. Skema Isolasi dan identifikasi senyawa kimia keladi tikus
HASIL DAN PEMBAHASAN Penapisan  fitokimia  untuk  ekstrak MeOH keladi tikus Dalam pengujian penapisan fitokimia,  alkaloid tidak  teridentifikasi
(negatif)  di  dalam  ekstrak  MeOH  dengan tidak  terbentuknya  warna  merah  setelah disemprot  dengan  pereaksi  Dragendorff. Pada  pengujian  flavonoid  terbentuk  warna merah pada lapisan amil alkohol, sehingga
flavonoid  positif  di  dalam  ekstrak  MeOH. Keberadaan steroid dan triterpenoid ditandai  dengan  terbentuknya  warna  hijau kebiruan  pada  pengujian  dengan  larutan Liebermann-Buchard warna  biru  untuk steroid, hijau untuk triterpenoid. Pengujian saponin  memberikan busa  dengan  air  dan dikocok  yang  mengindikasikan  adanya saponin  dalam  ekstrak  MeOH.  Hasil penapisan  fitokimia  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil  penapisan  fitokimia  untuk
ekstrak MeOH No. Jenis pengujian Eksistensi 1 Alkaloid Negatif 2 Flavonoid Positif 3 Saponin Positif 4 Steroid Positif 5 Triterpenoid Positif

## Hasil uji sitotoksik dengan metode BSLT
Hasil pengujian BSLT untuk ekstrak keladi  tikus  bagian  atas  (Tabel  2) menunjukkan  bahwa  persentase  kematian larva udang dalam seluruh ekstrak tidak ada yang  mencapai  50%,  sehingga  tidak dilakukan perhitungan probit analysis guna memperoleh  nilai  LC 50 .  Ini membuktikan bahwa  ekstrak  methanol,  etilasetat, n- butanol  dan  air  dari bagian  atas  simplisia tidak memiliki daya toksi
Pada  hasil  pengujian  untuk  keladi tikus  bagian  bawah  terdapat  rata-rata persentase  kematian  mencapai  lebih  dari 50%  yaitu  ekstrak  etilasetat.  Data  tersebut dilakukan analisis probit yang memberikan LC 50 sebesar 73,93 ppm yang mengindikasikan konsentrasi ekstrak etilasetat keladi tikus yang dapat mematikan 50% larva udang yang terdapat di  dalamnya.  Hasil  Uji  toksisitas  ekstrak keladi  tikus  bagian  bawah  dapat  dilihat pada Tabel 3. . Tabel 2. Hasil uji toksisitas untuk ekstrak keladi tikus bagian atas No. Jenis ekstrak Konsentrasi (ppm) Ulangan Jumlah Persen Kematian I II III Rata-rata (%) 1 Metanol 10 0 1 0 0,33 2,22 100 0 0 1 0,33 2,22 1000 1 3 1 1,67 11,11 2 Etilasetat 10 2 1 1 1,33 8,89 100 2 1 1 1,33 8,89 1000 2 2 4 2,67 17,78 3 n-butanol 10 2 0 0 0,67 4,44 100 2 3 1 2,00 13,33 1000 2 4 3 3,00 20,00 4 Air 10 0 0 1 0,33 2,22 100 1 0 0 0,33 2,22 1000 0 2 2 1,33 8,89
Tabel 3. Hasil uji toksisitas untuk ekstrak keladi tikus bagian bawah No. Jenis ekstrak Konsen trasi (ppm) Ulangan Jumlah Persen Kematian I II III Rata-rata (%) 1 Metanol (Me) 10 0 1 2 1,00 6,67 100 3 4 6 4,33 28,89 1000 5 5 7 5,67 37,78 2 Etilasetat (EA) 10 2 3 2 2,33 15,56 100 8 9 8 8,33 55,56 1000 12 15 14 13,66 91,11 (LC 50 73,93 ppm) 3 n-butanol (Bu) 10 0 4 1 1,66 11,11 100 1 6 5 4,00 26,67 1000 4 6 7 5,67 37,78 4 Air 10 5 5 3 4,33 28,89 (Wa) 100 6 5 3 4,66 31,11 1000 8 5 4 5,66 37,78 5 EA-1 10 0 1 0 0,33 2,00 100 1 0 0 0,66 4,40 1000 2 2 1 1,67 11,13 EA-2 10 6 5 6 5,66 37,77 100 8 8 8 8 53,33 1000 13 12 12 12,33 82,22 (LC 50 71.1 ppm) EA-3 10 3 4 6 4,33 28,89 100 4 6 7 5,67 37,77 1000 5 7 7 6,33 42,22 EA-4 10 1 0 0 0,33 2,22 100 2 3 4 2,66 17,77 1000 7 8 8 7,66 51,11 6 EA-2-1 10 8 9 9 8,66 57,77 100 10 9 9 9,33 62,22 1000 12 11 11 11,33 75,55 EA-2-2 10 2 1 2 1,66 11,11 100 4 4 3 3,67 24,46 1000 5 7 6 6 40 EA-2-3 10 6 7 8 7 46,66 100 10 11 11 10,66 71,11 1000 11 11 12 11,32 75,55 (LC 50 67,2 ppm) EA-2-4 10 2 1 2 1,66 11,06 100 4 3 2 3 20,00 1000 7 6 7 6,66 44,44
Kromatografi kolom untuk ekstrak
Etilasetat
Hasil pemurnian dengan kromatografi kolom  untuk  ekstrak  etilasetat  (SiO 2 ;  (i). n- heksan-etilasetat  =  10  :  1  ~  1  :  1;  Eilasetat; MeOH (ii). n-heksan-etilasetat  =  5  :  1) memberikan satu isolat murni yang memberikan  daya  toksik  sebesar  75,55  % (LC 50 = 67,2 ppm)

## Identifikasi struktur  kimia  isolat murni berdasarkan analisa spektra IR
Hasil analisa  infra  merah untuk  isolat murni  menunjukkan  bahwa  terdapat  gugus hidroksil  (OH)  pada  bilangan  gelombang 3400  cm -1 ;  dan  adanya  gugus  C-H (stretching)  dari  isopropil  CH(CH 3 ) 2 yang juga  ditunjukkan  adanya  gugus  CH 3 pada bilangan gelombang 1450 cm -1 . Pada daerah bilangan  gelombang  1600-1800  cm -1 tidak
terdapat gugus C=O, dikarenakan intensitasnya sedang lemah, yang cenderung menunjukkan  adanya  C=C  dari  siklik, sedangkan  untuk  gugus  C=O  adalah tajam (9,10) .  Sehingga  gugus  yang terdapat dalam struktur  kimia  dapat  dibandingkan
dengan spektrum β -sitosterol yang mempunyai spektra yang sama (11) .
Penetapan  bobot  molekul  isolat  dengan kromatografi gas-spektra massa (GC-MS) dan analisis fragmentasi
Hasil analisis kromatografi gas dengan GC-MS  menghasilkan  puncak  kelimpahan (abundance)  yang  sangat  tinggi  pada  menit ke  12,43  dibandingkan  puncak  pada  menit lainnya, hal ini  menunjukkan  kemurnian yang  tinggi dari  senyawa  tersebut. Data spektrum  GCMS  menyatakan  bahwa  peak paling kanan  merupakan  bobot  molekul senyawa  yaitu  m/z  414,  setelah  ditelusuri berdasarkan library, senyawa yang memiliki m/z  414 (Gambar 2). Analisa spektrum spektrometri  massa  secara  menyeluruh menunjukkan  hasil  positif  dengan  rumus molekul  C 29 H 50 O  pada m/z 414.  Analisa fragmentasi  dapat  diprediksikan  terjadinya fragmentasi  dengan m/z 43;  145;  255;  288; dan  18  (M - 396) dan  dapat  dilihat  pada Gambar 3. Sehingga  berdasarkan  hasil analisa spektra infra merah dan GC-MS dapat ditetapkan  senyawa  isolat  dari  tanaman keladi  tikus  bagian  atas  adalah  senyawa β - sitosterol (Gambar 5).
Gambar 2 . Spektrum massa untuk isolat murni
HO m/z 396 m/z 288 m/z 253 m/z 141 m/z 43 m/z 414 (M-1)
Gambar 4. Hasil analisa fragmentasi untuk senyawa kimia isolat murni
Gambar 5. Struktur kimia β -sitosterol (stigma-5-en-3 -ol)

## SIMPULAN
Isolat  murni  dari  fraksi  EA-2-3 tanaman keladi tikus (Typhonium divaricatum Decne) memiliki nilai
toksisitas dengan  LC 50 sebesar  67,2  ppm.
Hasil  identifikasi  berdasarkan  spektrum
FTIR dan GCMS, fraksi EA2-3
diperkirakan  merupakan  senyawa β - sitosterol.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Musir A, Farida Y, Martati T, Edward
B,  (2009),  Penapisan  Fitokimia  dan Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak  n- Heksana  dan  Metanol  Daun  Keladi Tikus (Typhonium divaricatum Decne)
2. Farida Y, Martati T, Musir A, Edward B,  (2010),  Uji  Aktivitas  Sitotoksik dan Antioksidan  dari  Ekstrak  Daun Keladi Tikus (Typhonium divaricatum Decne),  Jurnal  Ilmu Kefarmasian  Indonesia  (JifI).  8  (2) 118-124. 3. Djamil R, Anelia T, (2009) Penapisan Fitokimia, Uji BSLT dan Uji Antioksidan Ekstrak Metanol Beberapa Spesies Papilonaceae. 7(2), 65-71.
4. Adrianta AK, Udayani WN, Meriyani H,  (2017),  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Etanol  Daun  Keladi  Tikus (Typhonium divaricatum Decne) dengan Metode DPPH (1,1- Diphenyl-2-Picrylhidrazyl), Medicamento 3 (1), 29-33.
5. Choo,  CY,  Chan,  KL,  Sam,  TW, Hitotsuyanagi,  Y.,  Takeya,  K.,  2001.
The  cytotoxicicity  and  Chemical Constituent  of  hexane  fraction  of Typhoniumfalgelliforme (Araceae),J.of Ethnopharmacology, vol. 77, p. 129-131.
6. Huang  P.,  Karaganis  G.,  Waterman PG.,  2004.  Chemical  Constituent from Typhonium  flagelliforme,.  J.of
Chinese  medicinal  materials,  March 27(3):173-5
7. Gireesh,  A.,  Harsha,  H.,  Pramod,  H., Kholkute, S.D. (2013). Pharmacognostic  and  Premilinary Phytochemical Analiysis of Sauropus androgynus (L.) Merr.Leaf. International Jurnal of Drug
Development  &  Research.  5(1):  321-
125.
8. Menthor RH, Blagica J, Tatjana KP.( 2014).  Toxicological  evaluation  of the plant products using brine shrimp (Artemia  salina)  model.  Macedonian Pharm. Bull. 60 (1), 9-18
9. Mistry  BD.  (2009).  A  Handbook  of spectroscopic  data, chemistry  (UV, IR, PNMR, CNMR and Mass Spektoscopy) B.K.M. Science College. Jaipur: Oxford Book Company India, hal.: 8, 15 & 21 10. Stuart,  B.H.  (2004). Infra  Red Spectroscopy Fundamentals and Applications. Sydney: John Willey & Sons Ltd
11. Bulama  JS, Dangogo SM,  Mathias SN.  2015.  Isolaion  and  identification
of β -sitosterol  from  ethylacetate extract of root Terminalia glaucescens,  Int.  J.  of  Sciences  and Research Publication vol. 5 (3), p. 1- 3