EFEKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAUN SIRIH ( Piper betle Linn)
TERHADAP Staphylococcus aureus ATCC 25923
Bustanussalam 1* , Devi Apriasi 2 , Eka Suhardi 2 , Dadang Jaenudin 2
1) Laboratorium Kimia Bahan Alam, Pusat Penelitian Bioteknologi Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia (LIPI, Cibinong
2) Program Studi Pendidikan Biologi, Fakultas Keguruan  dan Ilmu Pendidikan, Universitas Pakuan, Bogor Email :bustanussalam@lipi.go.id

## ABSTRAK
Tanaman  sirih  ( Piper  betle L)  merupakan jenis  tanaman  yang  tumbuh  merambat  dengan ketinggian  mencapai  5-15  m.  Tanaman  ini  sebagai  tanaman  obat  yang  berkhasiat  untuk penyembuhan  terhadap  penyakit  kulit  yang  disebabkan  oleh  bakteri Staphylococcus  aureus karena  memiliki  daya  antiseptik  yang  baik.  Bagian  tanaman  yang  digunakan  yaitu  daunnya karena banyak mengandung senyawa turunan fenol. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui efek antibakteri ekstrak daun sirih ( Piper betle L) dan untuk mengetahui konsentrasi ekstrak daun sirih yang memiliki efek antibakteri paling efektif terhadap bakteri Staphylococcus aureus penyebab penyakit kulit. Metode yang digunakan adalah metode eksperimen dengan rancangan percobaan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL) dengan  menggunakan  2  metode  yaitu  metode Refluks  dan  Maserasi  dengan  masing-masing  konsentrasi  ekstrak  daun  sirih  ( Piper  betle L) yang terdiri atas satu faktor yaitu konsentrasi ekstrak daun sirih ( Piper betle L) dengan taraf faktor  0%,  5%,  10%,  15%,  20%  dan  25%.  Variabel  respon  yang  diamati  adalah  luas  zona hambat bakteri Staphylococcus aureus. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pada ekstrak daun sirih  terdapat  senyawa  antibakteri  yang  efektif  dalam  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus. Zona hambat mulai terlihat pada konsentrasi 5%. Perlakuan dengan cara maserasi, pada konsentrasi 10% dan 20% zona hambat tidak berbeda nyata, sedangkan pada konsentrasi 15% dan konsentrasi 25% zona hambat yang dihasilkan berbeda nyata dengan semua konsentrasi yang digunakan. Perlakuan dengan cara refluks, pada konsentrasi 10% dan 25% zona hambat tidak berbeda nyata, sedangkan pada konsentrasi 15% dan konsentrasi 20% zona hambat yang dihasilkan  berbeda  nyata  dengan  semua  konsentrasi  yang  digunakan.  Dengan  demikian, diperoleh  konsentrasi  ekstrak  daun  sirih  yang  memiliki  efek  antibakteri  yang  paling  efektif yaitu  pada  konsentrasi  25%  dengan  cara  maserasi,  sedangkan  cara  refluks  yaitu  pada konsentrasi 20%.
Kata  kunci :  Sirih  ( Piper  betle L), Staphylococcus  aureus ATCC  25923,  antibakteri, rancangan acak lengkap (RAL)
ANTIBACTERIAL EFFECTIVENESS OF BETEL ( Piper betle Linn) EXTRACT AGAINST Staphylococcus aureus ATCC 25923

## ABSTRACT
Betel plant ( Piper betle L) is a type of plant that grows vines reaching between 5-15 m. This plant as a medicinal plant that is efficacious for the healing of skin disease caused by the bacterium Staphylococcus aureus because it has a good antiseptic. Plant part used is the leaves because many contain phenol derivatives. This study aims to determine the antibacterial effects of extracts of betel leaf ( Piper betle L) and to determine the concentration of betel leaf extract which has the most effective antibacterial effects against Staphylococcus aureus causes skin disease.  The  method  used  is  the  experimental  method  of  experimental  design  completely
randomized  design  (CRD)  using  two  methods,  namely  methods  reflux  and  maceration  with each concentration of extracts of betel leaf ( Piper betle L) consisting of a single factor, namely the concentration of extracts of betel leaf ( Piper betle L) to the level of a factor of 0%, 5%, 10%,  15%,  20%  and  25%.  The  observed  response  variable  is  broad  zone  of  inhibition  of Staphylococcus  aureus.Hasil  showed  that  the  betel  leaf  extract  contained  antibacterial compounds  are  effective  in  inhibiting  the  bacteria  Staphylococcus  aureus.  Inhibition  zone began to look at a concentration of 5%. Treatment by maceration, at a concentration of 10% and 20% inhibition zone was not significantly different, while at concentrations of 15% and a concentration of 25% inhibition zone produced significantly different with all concentrations used. Treatment by way of reflux, at a concentration of 10% and 25% inhibition zone was not significantly different, while at concentrations of 15% and a concentration of 20% inhibition zone  produced  significantly  different  with  all  concentrations  used.  Thus,  the  concentration obtained betel leaf extract has antibacterial effect is most effective at a concentration of 25% by maceration, while reflux means that at a concentration of 20%.
Keywords :  Betel  (Piper  betle  L),  Staphylococcus  aureus  ATCC  25923,  antibacterial, completely randomized design (CRD)

## PENDAHULUAN
Sejak zaman dahulu masyarakat Indonesia  mengenal  dan  memakai  tanaman sebagai obat alternatif dalam upaya penanggulangan  masalah  kesehatan  sebelum adanya  pelayanan  kesehatan  secara  formal atau rumah sakit yang menggunakan berbagai jenis  obat  modern.  Pengetahuan  tentang tanaman obat tradisional ini telah diwariskan dari  nenek  moyang  sampai  ke  generasi  saat ini.Pengobatan  dan  pendayagunaan  obat tradisional ini merupakan salah satu program pelayanan  kesehatan  dasar  dan  sebagai pengobatan alternatif di bidang kesehatan.Salah  satu  jenis  tanaman  yang dapat dimanfaatkan sebagai tanaman obatadalah  daun  Sirih (Piper  betle). Daun sirih ( Piper betle) banyak digunakan sebagai bahan  obat  alternatif  untuk  mengobati berbagai jenis penyakit seperti obat pembersih  mata,  menghilangkan  bau  badan, mimisan,  sariawan,  pendarahan  gusi,  batuk, bronchitis ,  keputihan  dan  obat  kulit  sebagai perawatan  untuk  kecantikan  atau  kehalusan kulit.Rebusan  daun  sirih  berkhasiat  dapat menghilangkan bau mulut dengan caradikumur-kumur karena mengandung antiseptik  (antibakteri).Pemanfaatan  rebusan dan  ekstrak  daun  sirih  sebagai  bahan antibakteri  alami  mempunyai  keuntungan. Hal  ini  dikarenakan  tanaman  tersebut memiliki  senyawa  alami  yang  lebih  aman
dibandingkan  dengan  penggunaan  obat  yang mengandung bahan sintetik.
Minyak atsiri banyak terkandung dalam daun  sirih  yang  tersusun  atas  beberapa komponen  kimia  yang  digolongkan  sebagai senyawa  fenol  dan  senyawa  selain  fenol. Senyawa-senyawa  fenol  penyusun  minyak atsiri  daun  sirih  terdiri  dari  dua  komponen fenol yaitu isomer betel fenol dari kavikol dan eugenol  dengan  berbagai  kombinasi  fenol seperti  alil  pirokatekol,  kavibetol,  karvakrol, metal  eugenol,  sineol  dan estragol.  Senyawa kimia  selain  fenol  terdiri  dari  kadinen, kariofilen,  terpen,  terpinen,  metal  eter, menthon  dan  seskuiterpen  (Dharma,1985). Sejak tahun 600 SM daun sirih sudah dikenal mengandung  zat  antiseptik  yang  dapat membunuh bakteri sehingga banyak digunakan sebagai antibakteri dan antijamur.
Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  perlu dilakukan  penelitian  tentang  efektivitas antibakteri  ekstrak  daun  sirih  terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus .

## METODE PENELITIAN Bahan
Daun Sirih hijau, Bakteri
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Alat
Autoklaf  (YK280B),  Botol  Semprot, Cawan  Petri,  Erlenmeyer,  Gelas  Ukur (Pyrex),  Inkubator  (Model  100-800),  Jangka
Sorong,  Jarum  Ose,  Lampu  Spiritus,  Pipet Mikro  (Pipetman  Gilson),  Tabung  Reaksi (Pyrex), dan Neraca Analitik (Sartorius)

## Cara Kerja Preparasi sampel
Sebanyak  3  kg  daun  sirih  dicuci  dan dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan kemudian dihaluskan sampai menjadi serbuk menggunakan penggiling daun (motor penggiling).  Setelah  didapatkan  serbuk  daun sirih,  digunakan  untuk  dua  metode  ekstraksi yaitu dengan cara Maserasi dan Refluks.

## Cara Maserasi
Serbuk  daun  sirih  ditimbang  sebanyak 200 g, kemudian direndam dalam erlenmeyer menggunakan pelarut metanol 96% sebanyak 1000  ml  pada  suhu  kamar  selama  24 jam.Hasil  rendaman  disaring  dan  filtrat diambil serta sisanya dilakukan ekstraksi lagi dengan  volume  yang  sama,  ekstraksi dilakukan  sampai  pelarut  jernih.  Hasil  yang diperoleh dipekatkan dengan rotary evaporator.

## Cara Refluks
Serbuk  daun  sirih  ditimbang  sebanyak 200  gr,  kemudian  direndam  menggunakan pelarut metanol 96% sebanyak 1000 ml pada suhu  60  –  70 o C  selama  ±  3  jam.Hasil rendaman  disaring  dan  filtrat  diambil  serta sisanya  dilakukan  ekstraksi  lagi  dengan volume  yang  sama,  ekstraksi  dilakukan
sampai  pelarut  jernih.  Filtrat  yang  diperoleh disaring  dan  diuapkan  pelarutnya  dengan rotary evaporator.

## Uji  Antibakteri
Ekstrak  metanol  maserasi  dan  refluks dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri  dengan metode  difusi  cakram.  Bakteri  uji  yang digunakan  adalah Staphylococcus  aureus ATCC 25923 .
Larutan  uji  dibuat  dalam  6  (enam) konsentrasi  yang  berbeda  yaitu  0,  5,  10,  15, 20,  25  %.  Kertas  cakram  yang  telah disterilkan  dicelupkan  ke  dalam  larutan  uji yang  terdiri  dari  6  (enam)  konsentrasi diletakkan di atas media inokulum. Dilakukan pengamatan selama tiga hari dengan menghitung  luas  Diameter  Daerah  Hambat (mm). Data  yang diperoleh kemudian diolah secara  statistik  meliputi  uji  homogenitas,  uji normalitas, analisis variansi ANOVA dan uji jarak berganda Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Cara Maserasi E kstrak  daun  sirih  dengan  berbagai konsentrasi yang digunakan menyebabkan zona hambat terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Data zona hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1. Tingkat Zona Hambat Hasil Maserasi
0 1.07 1,29 1.31 1.52 1.66 0 0.5 1 1.5 2 0 5 10 15 20 25 Rat a -r ata zon a h am b at (m m ) Konsentrasi ekstrak daun sirih (%)
Ekstrak  daun  sirih  memiliki  zona  hambat terhadap pertumbuhan
bakteri
Staphylococcus aureus yaitu zona hambat yang  paling  tinggi  ditunjukkan  pada konsentrasi  25%  sebesar  1,66  mm  dan zona hambat yang terendah pada konsentrasi  ekstrak  daun  sirih  5%  yaitu sebesar  1,07  mm,  sedangkan  yang  tidak menunjukkan  zona  hambat  yaitu  pada konsentrasi 0% (Gambar 1).
Tabel 1.  Pengaruh  ekstrak  daun  sirih terhadapdaya
hambat
Staphylococcus aureus pada berbagai  konsentrasi  hasil maserasi Konsentrasi Zona Hambat (mm) 0% 0 e 5% 1,07 d 10% 1,29 c 15% 1,31 c 20% 1,52 b 25% 1,66 a
Keterangan  :  superkrip  huruf  yang  sama tidak memperlihat perbedaan yang nyata
Berdasarkan  hasil  uji  homogenitas  ragam zona  hambat  menunjukkan  bahwa  data dinyatakan  homogen,  karena  data  pada
zona hambat diperoleh nilai χ 2 hitung < χ 2 tabel pada taraf 5% dengan db = 5 yaitu - 30,24  <  11,07,  sedangkan  hasil  uji normalitas  diperoleh  bahwa  data  zona hambat  >68,26  maka  data  memiliki distribusi normal yaitu sebesar 83,33%.
Berdasarkan  Tabel  1  terlihat  bahwa terdapat  perbedaan  zona  hambat  diantara konsentrasi  yang  diuji  Konsentrasi  0% berbeda nyata dengan perlakuan lainnya.Adanya zona hambat mulai terlihat dengan perlakuan  ekstrak daun sirih  pada konsentrasi  5%.  Konsentrasi  10%  dengan konsentrasi  20%  menunjukkan  tidak berbeda  nyata  karena  berdasarkan  uji Duncan  kedua  perlakuan  tersebut  berada dalam  satu  grup,  tetapi  kedua  konsentrasi tersebut  berbeda  nyata  dengan  perlakuan yang  lain.  Konsentrasi  15%  dengan konsentrasi  25%  berbeda  nyata  dengan seluruh perlakuan lainnya, karena konsentrasi  tersebut  berbeda  grup  dengan perlakuan lainnya.

## 2. Cara Refluks
Ekstrak  daun  sirih  dengan  berbagai konsentrasi yang digunakan menyebabkan zona hambat terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Data zona hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 2. Tingkat Zona Hambat Hasil Refluks
0 1.12 1.4 1.3 1.64 1.48 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8 0 5 10 15 20 25 Rat a -r ata zon a h am b at (m m ) Konsentrasi ekstrak daun sirih (%)
Ekstrak daun sirih memiliki zona hambat terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus yaitu  zona hambat  yang  paling  tinggi  ditunjukkan pada konsentrasi 20% sebesar 1,64 mm
dan  zona  hambat  yang  terkecil  pada konsentrasi ekstrak daun sirih 5% yaitu sebesar 1,12 mm, sedangkan yang tidak menunjukkan  zona  hambat  yaitu  pada konsentrasi 0% (Gambar 2).
Tabel 2.  Pengaruh  ekstrak  daun  sirih  terhadap  daya  hambat Staphylococcus aureus pada berbagai konsentrasi hasil refluks Konsentrasi Zona Hambat (mm) 0% 0 e 5% 1,12 d 10% 1,40 b 15% 1,30 c 20% 1,64 a 25% 1,48 b
Keterangan : superkrip huruf yang sama tidak memperlihat perbedaan yang nyata
Berdasarkan  hasil  uji  homogenitas ragam  zona  hambat  menunjukkan bahwa  data  hasil  penelitian  tersebut dinyatakan  homogen,  karena  data  pada zona hambat diperoleh nilai χ 2 hitung < χ 2 tabel  pada  taraf  5%  dengan  db  =  5 yaitu  -8,02<  11,07.  Kemudian  data tersebut di uji dengan menggunakan uji normalitas  diperoleh  bahwa  data  zona hambat  >68,26  maka  data  memiliki distribusi normal yaitu sebesar 83,33%.
Berdasarkan  Tabel  2  menunjukkan bahwa terdapat  perbedaan zona hambat diantara konsentrasi yang diuji.Konsentrasi  0%  berbeda  nyata dengan  perlakuan  lainnya.Adanya  zona hambat mulai terlihat dengan perlakuan ekstrak daun sirih pada konsentrasi 5%. Konsentrasi  10%  dengankonsentrasi 25%  menunjukkan  tidak  berbeda  nyata karena  berdasarkan  uji  Duncan  kedua perlakuan  tersebut  berada  dalam  satu grup,  tetapi  kedua  konsentrasi  tersebut berbeda  nyata  dengan  perlakuan  yang lain. Konsentrasi
15% dengan konsentrasi  20%  berbeda  nyata  dengan seluruh  perlakuan  lainnya,  karena konsentrasi  tersebut  berbeda  grup dengan perlakuan lainnya.
Ekstrak  metanol  daun  sirih  hasil ekstraksi  secara  maserasi  maupun refluks  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus ATCC 25923. Hal ini disebabkan oleh turunan fenol yaitu kavikol dalam sifat antiseptiknya  lima  kali  lebih  efektif dibandingkan  fenol  biasa.  Dengan  sifat antiseptik tersebut sirih sering digunakan untuk menyembuhkan penyakit  kulit  yang  disebabkan  oleh bakteri
contohnya bakteri Staphylococcus  aureus .  Daun  sirih memiliki  efek  antibakteri  terhadap Staphylococcus aureus (Mahendra, 2005) dan sebagai obat pembersih mata, menghilangkan  bau  badan,  mimisan, sariawan,  pendarahan  gusi,  batuk, bronchitis,  dan  keputihan.  Air  rebusan daun  sirih  dapat  menghilangkan  bau mulut  dengan  cara  dikumur-kumur  dan memperhalus  kulit  muka  (Muhlisah, 2010).Selain  itu  interaksi  ekstrak  daun lidah buaya ( Aloe vera L.) dan daun sirih ( Piper  betle L.)  memberikan  daya hambat terhadap Staphylococcus aureus dimana semakin tinggi konsentrasi yang diberikan  semakin  besar  daya  hambat yang  terbentuk  (Rahmawati,  2014). Fraksi-fraksi  ekstrak  sirih  hijau  ( Piper
betle
L.) mempunyai aktivitas penghambatan  yang  kuat  terhadap bakteri  patogen  pangan  ( Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Pseudomonas
aeruginosa,
Staphylococcus  aureus,  Bacillus  cerius
dan Listeria  monocytogenes) dimana hasil  analasis  GC-MS  menunjukkan bahwa  mengandung  senyawa  kavikol, asam dosekanoat, miristat, palmitat dan oleat (Suliantari dkk, 2012). Sedangkan hasil  penelitian  Poeloengan  dkk,  2005 memberikan  hasil  bahwa  ekstrak  daun sirih secara in vivo mampu menurunkan jumlah kuman dalam susu sapi penderita mastitis subklinis. Penelitian Jayalakshmi et al , 2015 menginformasikan bahwa ekstrak metanol  dan  kloroform  selain  memiliki aktivitas antibakteri yang signifikan juga memiliki  aktivitas  antioksidan.  Hasil analisa  fitokimia  mengandung  senyawa fenol,  tanin,  flavonoid,  glikosidan  dan protein. Streptococcus  mutans dan Staphylococcus  aureus merupaka  flora normal  dalam  rongga  mulut.  Namun, keduanya dapat berubah menjadi patogen bila rongga mulut tidak terjaga. Karies  gigi  merupaka  salah  satu penyakit  yang timbul akibat kebersihan rongga mulut yang buruk. Ekstrak etanol daun sirih  ( Piper  betle L.) memberikan zona
hambat terbesar untuk Streptococcus  mutans yaitu  24,5  mm pada  konsentrasi  100  %  sedangkan untuk Staphylococcus  aureus zona hambatnya  27,5  mm  pada  konsentrasi 100 % (Saanin dan Lidya, 2014). Daun sirih  ( Piper  betle L.)  juga  mengandung minyak  atsiri  yang  memiliki  aktivitas antimikroba. Minyak esensial/atsiri dari daun sirih ( Piper betle L.) kultivar Sagar Bangla  secara in  vitro diketahui memiliki  aktivitas  daya  hambat  sangat tinggi  terhadap  4  jamur  keratinofilik yaitu
Arthoderma
benhamie,
Microsporum  gypseum,  Trichophytn mentagrophytes,  Ctenomyces  serratus dan lima Aspergillus patogen. Diketahui pula minyak esensial/atsiri lebih efektif
terhadap cacing pita ( Taenia solium ) dan cacing tambang ( Bunostonum trigonocephalum )  (Garg  &  Jain,  1992). Pemberian minyak atsiri dari daun sirih ( Piper betle L.) dengan konsentrasi yang berbeda  berpengaruh  terhadap  zona hambat  bakteri Staphylococcus  aureus Rosebanch paling tinggi pada konsentrasi  3  %  dengan  diameter  2,1 mm (Simanjuntak & Risita, 2014).

## SIMPULAN
Hasil  optimal  zona  hambat  ekstrak metanol  daun  sirih  hasil  maserasi  pada konsentrasi 25% yaitu dengan zona hambat 1,66  mm,  sedangkan  hasil  optimal  zona hambat  ekstrak  metanol  daun  sirih  hasil refluks pada konsentrasi 20% yaitu dengan zona  hambat  1,64  mm.  Hasil  analisis statistik  variansi  zona  hambat  terlihat sangat beda nyata variasi konsentrasi untuk ekstrak  metanol  daun  sirih  hasil  maserasi maupun refluks.

## DAFTAR PUSTAKA
Dharma, A.P. 1985. Tanaman Obat Tradisional Indonesia. Balai Pustaka. Jakarta.
Garg,  S.  C  and  Jaain,  R.  1992.  Biological Activity  of  Essential  Oil  of Piper betle L.  Journal  of  Essential  Oil Research. Volume 4, Issue 6. Pages 601-606
Hanafiah,  Kemas  Ali.  2001. Rancangan Percobaan : Teori dan Aplikasi. PT.
Raja Grafindo Persada. Jakarta.
Jayalaksmi, B., Raveesha, K.A., Murali, M.
and
Amruthesh, K. N. 2015.Phytochemical,  antibacterial and  antioxidants  studies  on  leaf extracts of Piper betle L.
International  Journal  of  Pharmacy and Pharmaceutical Sciences,
Volume 7, Issue 10. Pges 23-29
Mahendra,  B.  2005. 13  Jenis  Tanaman Obat  Ampuh .  Penebar  Swadaya. Jakarta.
Muhlisah,  F.  2010. Tanaman  Obat
Keluarga . Penebar Swadaya.
Jakarta.
Poeloengan,  Masniari.,  Susan  M.  M.  dan Andriani. 2005. Efektivitas Ekstrak
Daun  Sirih  ( Piper  betle Linn) terhadap Mastitis Subklinis.Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner. Hlm. 1015-1019 Reveny,  Julia.  2011.  Daya  Antimokroba
Ekstrak  dan  Fraksi  Daun  Sirih Merah  ( Piper  betle Linn).  Jurnal
Ilmu Dasar, Vol. 12, No. 1. Hlm. 6- 12.
Rahmawati.2014.  Interaksi  Ekstrak  Daun Lidah  Buaya  ( Aloe  vera L.)  dan
Daun Sirih ( Piper betle L.) terhadap Daya Hambat Staphylococcus aureus secara In Vitro .Jurnal
EduBio Tropika, Volume 2, Nomor 1, hlm.121-127.
Suliantari, Betty S. L. Jenie dan Maggy T.
Suhartono.2012. Aktivitas Antibakteri  Fraksi-fraksi  Ekstrak Sirih  Hijau  ( Piper  betle Linn)
Terhadap Patogen Pangan. J.
Teknol.  Dan  Industri  Pangan,  Vol. XXIII, No. 2, hlm. 217-220.
Suherman,  Lidya  Fransiska.  2014.  Efek Antimikroba  Ekstrak  Etanol  Daun Sirih  ( Piper  betle L.)  Terhadap
Streptococcus mutans dan Staphylococcus aureus [Tesis]. Fakultas  Kedokteran,  Universitas Kristen Maranatha.
Simanjuntak,  Flentina  Meri  Kristin  dan
Rosita Tarigan.2014. Pengaruh Pemberian Minyak Atsiri dari Daun
Sirih Sirih ( Piper betle L.) Terhadap Staphylococcus aureus Rosebanch.Prosiding Seminar Nasional Biologi dan Pembelajarannya. Hlm. 339-349
Suryana  I.  2009. Pengujian  Aktivitas Ekstrak  Daun  Sirih  (Piper  betle Linn)  Terhadap  Rhizoctonia  Sp . 20:92-98
.