Research Article

## UNPAD

## Antibacterial Activity of Rosemary Oil Against Propionibacterium acnes and The Formulation into Nanoemulsion System
Sani E. Priani*, Rizza F. Nurasyfa, G.C. Eka Darma, Sri P. Fitraningsih, Livia Syafnir, Robby Prayitno
Pharmacy Department, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, UNISBA Submitted 19 September 2021; Revised 16 December 2021; Accepted 17 December 2021; Published 20 February 2023 *Corresponding author: egapriani@gmail.com

## Abstract
Acne  is  an  inflammatory  condition  of  the  pilosebaceous  unit  that  can  occur  due  to  infection  of Propionibacterium acnes . Rosemary essential oil contains various active compounds that have antibacterial activity. Nanoemulsions have been developed as a delivery system to the pilosebaceous unit. This study aimed to determine the antibacterial activity of rosemary oil against P. acnes and develop it into a nanoemulsion system. The antibacterial activity was conducted by the agar diffusion method. Rosemary oil contains 1,8-cineole as the main active compound and has antibacterial activity against P. acnes with an inhibitory zone of 11.315±0.069 mm at a concentration of 4%. Rosemary oil was successfully developed into a nanoemulsion system using Tween 80 as a surfactant and a combination of ethanol and PEG 400 as a co-surfactant. The rosemary nanoemulsion has a clear physical appearance with an average globule size of 33.50±0.01 nm and a PDI value of 0.45±0.03. The preparation has good physical stability based on centrifugation, heating cooling, and freeze-thaw tests. The study shows that rosemary oil has antibacterial activity against P. acnes and has been successfully developed into nanoemulsion preparations with good characteristics and physical stability.
Keywords: Acne vulgaris, Nanoemulsion, Propionibacterium acnes , Rosemary oil.
Aktivitas Antibakteri Minyak Rosemary Terhadap Propionibacterium acnes dan Formulasinya Menjadi Sediaan Nanoemulsi

## Abstrak
Jerawat  adalah  kondisi  inflamasi  kelenjar  pilosebasea  yang  dapat  terjadi  karena  infeksi Propionibacterium acnes . Minyak atsiri rosemary mengandung berbagai senyawa aktif yang memiliki aktivitas antibakteri. Nanoemulsi banyak dikembangkan sebagai sistem penghantaran pada kelenjar pilosebasea.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  aktivitas  antibakteri  dari  minyak  rosemary terhadap P. acnes dan  mengembangkannya  menjadi  sediaan  nanoemulsi.  Uji  aktivitas  antibakteri minyak rosemary dilakukan dengan metode difusi agar. Minyak rosemary dengan kandungan utama 1,8-cineole memiliki aktivitas antibakteri terhadap P. acnes dengan diameter hambat 11,315±0,069 mm  pada  konsentrasi  4%.  Minyak  rosemary  berhasil  dikembangkan  menjadi  sediaan  nanoemulsi menggunakan Tween 80 sebagai surfaktan serta kombinasi etanol dan PEG 400 sebagai kosurfaktan. Sediaan nanoemulsi memiliki karakteristik yang baik ditandai dengan penampilan fisik yang jernih dengan rata-rata ukuran globul 33,50±0,01 nm dan nilai PDI 0,45±0,03. Sediaan memiliki stabilitas fisik  yang  baik  berdasarkan  uji  sentrifugasi, heating cooling , dan freeze thaw. Dari  hasil  uji  dapat disimpulkan bahwa minyak rosemary memiliki aktivitas antibakteri terhadap P. acnes dan berhasil dikembangkan menjadi sediaan nanoemulsi yang memiliki karakteristik dan stabilitas fisik yang baik.
Kata Kunci: Jerawat vulgaris , Nanoemulsi, Propionibacterium acnes, Minyak rosemary .

## 1.  Pendahuluan
Jerawat adalah adalah kondisi inflamasi yang  terjadi  pada  kelenjar  pilosebasea/ minyak. Kondisi ini  banyak terjadi pada area tubuh  yang  banyak  mengandung  kelenjar minyak seperti muka, dada, dan punggung 1 . Jerawat  diketahui  terjadi  pada  sekitar  80% populasi pada usia remaja,  berkaitan dengan peningkatan hormon androgen pada pria dan wanita ketika pubertas 1,2 . Pada kondisi yang berat, masalah jerawat ini dapat mengganggu psikis ataupun kehidupan sosial seseorang 3 . Inflamasi pada jerawat diketahui dapat terjadi karena  perubahan keratinisasi folikel yang mengarah pada komedo, perubahan produksi sebum karena pengaruh hormon,  kolonisasi folikel oleh Propionibacterium acnes , dan  mekanisme  inflamasi  kompleks  yang melibatkan imunitas bawaan dan dapatan 4 . Kolonisasi atau infeksi bakteri pada kelenjar pilosebasea oleh P. acnes diketahui menjadi salah satu penyebab utama terjadinya jerawat 5 .  Biofilm  yang  dihasilkan  oleh P. acnes mengarah pada pengikatan korneosit yang menghasilkan mikrokomedo. P. acnes juga  mensekresi  lipase,  faktor  kemotaksis, metaloprotease, dan porfirin, yang seluruhnya dapat berinteraksi menyebabkan kerusakan keratinosit  dan  memicu  kondisi  inflamasi6 . Untuk  kondisi  jerawat  yang  penyebab utamanya disebabkan oleh infeksi bakteri maka terapi yang sesuai yakni menggunakan senyawa antibakteri.
Rosemary ( Rosmarinus  officinalis L. ) adalah tanaman herba aromatik yang berasal famili Lamiaceae 7 . Selain digunakan sebagai bahan masakan, rosemary juga dapat dimanfaatkan untuk tujuan pengobatan karena berbagai kandungan senyawa bioaktif yang dimilikinya. Minyak atsiri dari rosemary diketahui mengandung berbagai komponen seperti 1,8-cineole,  α-pinene,  camphore, camphene,  β-pinene, dan verbenone . Kandungan senyawa bioaktif tersebut memunculkan berbagai aktivitas farmakologi dari minyak rosemary salah satunya aktivitas antibakteri. Minyak rosemary diketahui memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Proteus vulgaris,
Pseudomonas aeruginosa, dan Escherichia coli dan  juga  aktivitas  antijamur  terhadap Candida albicans, dan Aspergillus niger 8 . Penelitian  lainnya  menunjukkan  bahwa minyak rosemary memiliki aktivitas terhadap Propionibacterium acnes akibat berbagai kandungan senyawa yang dimilikinya 9 . Pengobatan  jerawat  dapat  dilakukan dengan berbagai metode seperti dengan terapi topikal, terapi sistemik, ataupun dengan terapi lainnya seperti resurfacing , dermabrasion, chemical peels, dan xenografts. Terapi topikal yang paling banyak digunakan dan umumnya dilakukan dengan pemberian senyawa antibakteri, retinoid, ataupun kombinasinya. Berbagai pendekatan formulasi banyak dikembangkan untuk penghantaran topikal senyawa aktif pada pengobatan jerawat, salah satunya dengan pengembangan nanoemulsi 10 . Nanoemulsi adalah suatu sistem isotropik berupa sistem dispersi minyak dan air dengan  ukuran globul 10-100 nm yang distabilkan dengan penambahan surfaktan dan kosurfaktan 11 . Nanoemulsi diketahui sesuai untuk digunakan sebagai penghantaran senyawa lipofilik ke dalam kulit pada terapi jerawat  karena  mampu  meningkatkan penetrasi komponen aktif pada unit pilosebasea yang bersifat lipofilik. Pengaruh dari ukuran globul dan keberadaan surfaktan/kosurfaktan sebagai peningkat penetrasi yang mendukung terjadinya  hal  tersebut.  Penelitian  lain  juga telah mengembangkan sediaan nanoemulsi untuk penghantaran minyak atsiri pada terapi jerawat dan hasilnya menunjukkan hasil yang baik secara in vitro dan in vivo 12 . Penelitian ini bertujuan untuk menguji aktivitas antibakteri dari minyak rosemary terhadap P.acnes dan mengembangkannya menjadi  sediaan  nanoemulsi.  Evaluasi karakteristik  dan  stabilitas  fisik  dilakukan terhadap sediaan nanoemulsi yang dihasilkan.

## 2.  Metode
2.1.  Alat Instrumen yang digunakan pada penelitian ini meliputi inkubator (Memmert), autoclave (Tomy SX-500), magnetic stirrer (Thermolyne S131120-33Q), sonicator bath (Bransonic CPX2800H-E), spektrofotometri
UV/Vis (Shimadzu UV-1800), pH meter (Mettler Toledo, Seven CompactTM S220), sentrifuga (centrifuge Medical Practice 800), viskometer Brookfield , particle size analyzer (Horiba sz 100).
2.2.  Bahan Bahan utama yang digunakan pada penelitian ini adalah minyak rosemary (Lansida internasional), tryptone soya broth (Merck), Cremophor RH40 (BASF), Tween 80  (bratachem),  Polietilenglikol/PEG  400 (bratachem), propilenglikol (bratachem), gliserin (bratachem), etanol (Merck).
2.3.  Prosedur
2.3.1. Karakterisasi dan penentuan kandungan senyawa minyak rosemary Dalam penelitian ini bahan yang digunakan merupakan minyak atsiri dari tanaman rosemary yang diperoleh dari Lansida Group. Karakterisasi minyak atsiri rosemary dilakukan  dengan  melakukan  uji organoleptis,  penentuan  bobot  jenis,  indeks bias, dan analisis komponen senyawa yang terkandung dalam minyak atsiri dengan menggunakan gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS) 13 .
2.3.2. Uji  aktivitas  antibakteri  minyak rosemary terhadap Propionibacterium acnes Uji  aktivitas  antibakteri  ini  dilakukan secara kuantitatif dengan menggunakan metode difusi agar. Minyak atsiri rosemary diencerkan  menggunakan  gliserin  menjadi beberapa konsentrasi,yaitu  0,25; 1; 2; 4; 5 % dengan menggunakan antibiotik klindamisin sebagai pembanding dan gliserin sebagai kontrol negatif. Sebanyak 20 mL media padat ( tryptone soya agar ) yang telah dicairkan (suhu 35-45°C) dituangkan ke dalam cawan petri yang telah berisi 50 µL suspensi bakteri P. acnes . Campuran dihomogenkan dengan cara diputar perlahan lalu didiamkan hingga memadat. Setelah memadat dibuat sumur dengan menggunakan perforator diameter 6 mm. Minyak atsiri rosemary pada berbagai konsentrasi dan pembanding dimasukkan ke dalam sumur lalu didiamkan dalam suhu
ruangan selama 30-60 menit (pra-inkubasi). Cawan petri kemudian diinkubasi pada suhu 37°C  selama  18-24  jam.  Setelah  inkubasi dilakukan pengukuran diameter hambat berupa zona bening pada sekeliling sumur 14 .
2.3.3. Optimasi formula nanoemulsi rosemary Sebelum dilakukan optimasi formula nanoemulsi,  dilakukan  uji  ketercampuran minyak dengan surfaktan dan kosurfaktan. Surfaktan yang digunakan adalah Tween 20, Tween 80, dan Cremophor RH 40. Sedangkan kosurfaktan yang digunakan adalah PEG 400, propilenglikol, gliserin, dan etanol. Uji ketercampuran dilakukan dengan mencampurkan  minyak  dengan  surfaktan/ kosurfatkan pada berbagai perbandingan dalam tabung reaksi (1:1; 1:2; 1:3; 1:4; 1:5). Selanjutnya dilakukan pengembangan sediaan nanoemulsi menggunakan perbandingan minyak dan Smix (surfaktan+kosurfaktan) 1:8; 1:9; 1;10; 1;11; 1:12 pada perbandingan surfaktan dan kosurfaktan 1:1. Sediaan nanoemulsi dibuat dengan mencampurkan minyak, surfaktan dan kosurfaktan dan dipanaskan pada suhu 40°C sambil diaduk. Selanjutnya tambahkan aquadest yang sudah dipanaskan pada suhu yang sama, ke dalam campuran kemudian diaduk menggunakan magnetic stirrer kecepatan 1000 rpm selama 20 menit. Sediaan selanjutnya diultrasonikasi menggunakan sonicator bath selama 10 menit. Sebagai skrining awal keberhasilan pembentukan nanoemulsi dilakukan dengan uji  organoleptis  dan  uji  %  transmitan  pada panjang  gelombang  650  nm.  Formula optimum  berdasarkan  hasil  uji  organoleptis dan % transmitan  dipilih sebagai formula akhir dengan penambahan pengawet dan antioksidan 15 .
2.3.4. Karakterisasi sediaan nanoemulsi rosemary Sediaan akhir nanoemulsi rosemary dilakukan  karakterisasi  lebih  lanjut  meliputi pengujian  organoleptis,  %  transmittan,  pH, viskositas, dan ukuran globul.
Organoleptis: Sediaan dilakukan pengujian  warna,  bau,  dan  kejernihan  dari sediaan nanoemulsi rosemary 16 .
%Transmitan: Pengujian  dilakukan dengan melakukan pengukuran % transmitan menggunakan spektrofotometer UV/Vis pada panjang  gelombang  650  nm  menggunakan aquadest sebagai blanko 17 . pH: Pengukuran pH dilakukan secara langsung dengan pH meter yang sudah dikalibrasi.
Viskositas: Pengukuran viskositas dilakukan menggunakan viscometer Brookfield pada kecepatan rotasi 100 rpm 16 . Ukuran globul dan poly dispersity index: Penentuan ukuran globul dan Poly Dispersity Index (PDI) dilakukan dengan menggunakan Particle Size Analyzer (PSA) 18 .
2.3.5. Uji stabilitas nanoemulsi rosemary Pengujian  stabilitas  dilakukan  dengan 3 tahapan yakni sentrifugasi, heating cooling , dan freeze thaw .  Uji  sentrifugasi  dilakukan terhadap sediaan pada kecepatan 3500 rpm  selama  30  menit.  Uji heating cooling dilakukan dengan menyimpan sediaan pada dua suhu berbeda yaitu 4 ± 1˚C dan 40 ± 1˚C masing-masing selama 48 jam dan dilakukan sebanyak tiga siklus. Uji freeze thaw dilakukan dengan menyimpan sediaan pada suhu -21˚C dan 25˚C masing-masing selama tidak kurang dari  48  jam  dan  dilakukan  sebanyak  tiga siklus.  Selanjutnya  dilakukan  pengamatan terhadap  kejernihan,  pemisahan  fase,  dan pengendapan dari sediaan nanoemulsi 19 .
3.  Hasil Minyak rosemary pada penelitian ini digunakan sebagai bahan aktif yang diketahui memiliki aktivitas antibakteri. Untuk memastikan kualitasnya dilakukan karakterisasi meliputi organoleptis, bobot jenis,  indeks  bias,  dan  kandungan  senyawa utama  dengan  GC-MS.  Hasil  pengujian ditampilkan pada tabel 1. Terlihat bahwa minyak rosemary mengandung banyak senyawa yang berkhasiat sebagai antibakteri seperti 1,8-cineole, camphore, alpha- pinene, camphene, dan p-cymene . Minyak rosemary selanjutnya  diuji  aktivitas antibakterinya dengan metode difusi agar terhadap bakteri Propionibacterium acnes . Hasilnya ditampilkan pada tabel 2. Dari tabel terlihat bahwa mulai konsentrasi 4% minyak rosemary memberikan aktivitas antibakteri yang kuat, karena memberikan diameter hambat >10 mm. Minyak rosemary selanjutnya  dikembangkan  menjadi  sediaan nanoemulsi pada konsentrasi 4%.
Pada pembuatan sediaan nanoemulsi diperlukan surfaktan dan kosurfaktan. Hasil uji  ketercampuran  antara  minyak rosemary dengan  beberapa  surfaktan  menunjukkan bahwa minyak memiliki ketercampuran yang paling baik dengan Tween 80 dan Tween 20 (mampu bercampur pada perbandingan 1:1). Pada uji ketercampuran antara minyak dengan  kosurfaktan  menunjukkan  bahwa

## Tabel 1. Hasil karakterisasi minyak
Parameter Hasil Organoleptis Cairan tidak berwarna, bau khas Bobot jenis 0,912 g/mL Indeks bias 1,469 Kandungan Senyawa Utama : 1,8-cineole camphore alpha-pinene camphene p-cymene 23,79 % 18,97 %
17,45 % 9,33 % 5,84 %
Konsentrasi (%) Diameter hambat (mm) 0,25 7,235 ± 0,009 1 9,050 ± 0,044 2 9,985 ± 0,105 4 11,315 ± 0,069 5 12,685 ± 0,097
Tabel 2. Aktivitas antibakteri minyak rosemary
etanol dan PEG 400 memiliki tingkat ketercampuran paling baik dengan minyak rosemary . Formulasi sediaan nanoemulsi minyak rosemary ditampilkan pada tabel 3.  Terhadap seluruh sediaan hasil optimasi formula nanoemulsi dilakukan penapisan awal keberhasilan pembentukan nanoemulsi dengan pengujian organoleptis dan %Transmitan.
Skrining awal untuk evaluasi keberhasilan nanoemulsi menggunakan parameter %Transmitan. Diketahui bahwa nilai %Transmitan>98% dapat mengindikasikan keberhasilan pembentukan nanoglobul. Berdasarkan hasil pada tabel 4, formula F3 telah memiliki nilai %Transmitan>98%, sehingga dipilih sebagai formula dasar nanoemulsi rosemary. Sediaan nanoemulsi F3 kemudian dikembangkan menjadi sediaan akhir nanoemulsi rosemary dengan penambahan fenoksietanol 0,5% sebagai pengawet dan alfa-tokoferol 0,05% sebagai antioksidan. Hasil evaluasi terhadap sediaan akhir nanoemulsi rosemary (F3) ditampilkan  pada  tabel  4  sedanglan  grafik distribusi ukuran globul hasil pengukuran PSA ditampikan pada gambar 1. Hasil menunjukkan bahwa sediaan nanoemulsi F3
memiliki karakteristik yang baik berdasarkan hasil  uji  organoleptis,  %Transmitan,  pH, dan viskositas dan memiliki rata-rata ukuran globul 33,50±0,01 nm dengan nilai PDI  0,45 ± 0,03. Terhadap sediaan selanjutnya dilakukan uji stabilitas dengan tiga tahapan uji yakni uji sentrifugasi, heating cooling , dan freeze thaw . Hasilnya bisa dilihat pada tabel 4 dan gambar 2. Sediaan nanoemulsi (F3) memiliki stabilitas yang baik, yang ditandai dengan tidak adanya perubahan fisik nanoemulsi selama uji dalam bentuk  terjadinya  pengendapan, creaming , ataupun pemisahan fase.
4.  Pembahasan Minyak rosemary yang digunakan pada penelitian ini memiliki karakteristik yang baik, berdasarkan  hasil  pengujian  organoleptis, berat  jenis,  indeks  bias,  dan    juga  analisis komponen senyawa. Nilai berat jenis berada pada rentang standar yang dipersyaratkan yakni diantara  0,895–0,920 20 . Hasil yang sama diperlihatkan pada  nilai indeks bias yang berada pada rentang yang dipersyaratkan 1,467-1,474. 13 Hasil analisis komponen dengan metode GC-MS menunjukkan bahwa komponen utama dari minyak rosemary adalah 1,8-cineole, camphore, alpha-pinene,
Parameter Hasil Organoleptis Bening,kekuningan, bau khas %Transmittan 98,15 ± 0,04 % pH 5,96 ± 0,08 Viskositas 64,00 ± 0,00 cps Rata-rata ukuran globul 33,50 ± 0,01 nm Polydispersity index (PDI) 0,45 ± 0,03 Uji sentrifugasi Stabil Uji Heating cooling Stabil Uji Freeze thaw
Stabil
Tabel 4. Hasil evaluasi fisikokimia sediaan nanoemulsi F3

## Tabel 3. Hasil optimasi formula nanoemulsi minyak rosemary
Bahan F1 F2 F3 F4 F5 F6 F7 F8 F9 F10 M. Rosemary 4 4 4 4 4 4
4 4 4 4 Tween 80 16 18 20 22 24 - - - - - Tween 20 - - - - - 16 18 20 22 24 Etanol 8 9 10 11 12 8
9 10 11 12 PEG 400 8 9 10 11 12 8 9 10 11 12 Aquadest ad 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 %Transmitan 13,65± 0,14 97,22± 0,02 98,95 ± 0,78 98,04 ± 0,01 99,21 ± 0,03 53,77 ± 0,12 84,14 ± 1,09 93,46 ± 0,11 93,46 ± 0,11 96,87 ± 0,03
camphene, dan p-cymene . Komponen dengan presentasi tertinggi adalah 1,8-cineole yang mencapai 23,7%. Hasil yang sama ditunjukkan oleh beberapa penelitian lainnya, yang  menunjukkan  bahwa  komponen senyawa utama dari minyak rosemary adalah 1,8-cineole 19 . Senyawa 1,8-cineole merupakan senyawa turunan terpenoid, yang diketahui memiliki aktivitas antibakteri yang kuat dengan mekanisme mengganggu metabolime karbohidrat dan membran sel bakteri 20,21 . Selain 1,8-cineole senyawa  lainnya  juga diketahui memiliki aktivitas antibakteri yakni camphore 22 , alpha-pinene 23 , camphene 24 , dan p-cymene 25 . Kandungan senyawa aktif tersebut yang mendukung aktivitas antibakteri dari minyak rosemary .  Hasil  uji aktivitas  antibakteri  menunjukkan  bahwa terjadi  peningkatan  aktivitas  antibakteri selaras dengan peningkatan konsentrasi, yang ditandai dengan peningkatan nilai diameter hambat. Pada konsentrasi minyak >4%, minyak rosemary menunjukkan  aktivitas antibakteri kuat pada P. acnes karena memiliki nilai diameter hambat>10 mm 26 . Penelitian tentang aktivitas minyak rosemary terhadap P.acnes juga pernah dilakukan oleh peneliti sebelumnya, yang menunjukkan bahwa nilai KHM minyak adalah 0,056% 9 . Hasil tersebut sesuai dengan penelitian ini, dimana pada konsentrasi  uji  0,25%  sudah  memberikan nilai diameter hambat, karena persentasenya di atas nilai KHMnya.
Minyak rosemary selanjutnya dikembangkan  menjadi  sediaan  nanoemulsi. Dipilih surfaktan dan kosurfaktan yang memiliki ketercampuran yang baik dengan minyak rosemary untuk meningkatkan efektifitas  pembentukan  sistem  nanoemulsi.
Surfaktan yang digunakan adalah Tween 80 dan Tween 20. Tween 80/20 adalah jenis surfaktan nonionik yang banyak digunakan pada pengembangan sediaan nanoemulsi karena tingkat iritasinya yang rendah, tidak mudah terpengaruh oleh pH, dan  bersifat biokompatibel 27,28 . Tween sebagai surfaktan berfungsi untuk membentuk lapisan antarmuka di sekeliling globul sehingga mencegah koalesensi atau penggabungan kembali  globul  menjadi  globul  yang  lebih besar 29 . Sebagai kosurfaktan digunakan kombinasi etanol dan PEG 400 yang memiliki ketercampuran lebih baik dengan minyak rosemary dibandingkan dengan gliserin dan propilenglikol. Kosurfaktan umumnya berupa senyawa alkohol rantai pendek dan ditambahkan ke dalam sediaan nanoemulsi untuk mambantu membentuk lapisan  antar  muka  yang  rapat  dan  fleksible pada permukaan globul dan juga menurunkan nilai tegangan permukaan 30 . Hasil  optimasi  menunjukkan  formula optimum nanoemulsi adalah  F3 yang menggunakan Tween 80 sebagai surfaktan dengan perbandingan minyak dan Smix 1:10. Formula F3 mampu menghasilkan sediaan  nanoemulsi  yang  jernih  dengan transmitan >98% pada kombinasi minyak dan Smix terendah. Nilai %Transmitan >98%  menunjukkan  kejernihan  sistem  yang sangat baik sehingga bisa mengindikasikan keberhasilan pembentukan nanoglobul 31 . Dari hasil pada tabel 3, secara umum dapat dikatakan bahwa Tween 80 mampu membentuk sistem nanoemulsi minyak rosemary yang lebih baik dibandingkan dengan Tween 20. Tween 20 bersifat lebih hidrofil dengan nilai HLB 16,3 dibandingkan
Gambar 1. Grafik  Distribusi  Ukuran  Globul Nanoemulsi
Gambar 2. Sediaan nanoemulsi rosemary (F3)
dengan Tween 80 yang memiliki nilai HLB 15. Nilai HLB dari Tween 80 lebih sesuai untuk minyak rosemary yang juga memiliki nilai HLB butuh 15 32 . Kesesuaian nilai HLB surfaktan dengan HLB butuh minyak dapat  membantu  meningkatkan  efektifitas pembentukan sistem dispersi.
Formula  F3  selanjutnya  dijadikan sebagai formula akhir sediaan nanoemulsi rosemary dengan penambahan pengawet dan antioksidan untuk meningkatkan stabilitas selama penyimpanan. Hasil evaluasi lebih lanjut  terhadap  F3  ditampilkan  pada  tabel 4. Dapat dilihat bahwa sediaan memiliki karakteristik fisik yang baik dengan nilai pH yang sesuai dengan nilai pH kulit yakni pada rentang 4-6 33 .  Nilai  viskositas  menunjukkan bahwa sediaan memiliki konsistensi cair yang merupakan karakteristik khas dari sediaan nanoemulsi 34 . Hasil karakterisasi menggunakan particle size analizer , menunjukkan bahwa sediaan memiliki ukuran globul yang baik. Sediaan nanoemulsi minyak rosemary F3 memiliki rata rata ukuran globul 33,50±0,01 nm yang sesuai dengan batas ukuran globul nanoemulsi, yani pada rentang 10-100 nm 35 . Nilai PDI dari sistem nanoemulsi <0,5  yang  menunjukkan  homogenitas  dari distribusi ukuran globul 36 . Hasil uji stabilitas menunjukkan    sediaan  nanoemulsi  minyak rosemary (F3) memiliki stabilitas yang baik secara kinetis ditandai dengan tidak adanya perubahan  sistem  pada  uji  sentrifugasi,  dan juga  memiliki  stabilitas  yang  baik  secara termodinamis ditandai dengan tidak adanya perubahan  sistem  setelah  pengujian heating cooling dan freeze thaw .  Pada  uji  stabilitas parameter  yang  diamati  adalah  terjadinya pemisahan fase, pengendapan, dan creaming .
5.  Kesimpulan Minyak rosemary dengan kandungan utama 1,8-cineole sebesar 23,79%, memiliki aktivitas antibakteri terhadap P. acnes yang memberikan diameter hambat 11,315±0,069 mm pada konsentrasi 4%. Minyak rosemary berhasil  dikembangkan  menjadi  sediaan nanoemulsi menggunakan Tween 80 sebagai surfaktan serta kombinasi etanol dan PEG 400 sebagai kosurfaktan. Sediaan nanoemulsi
memiliki karakteristik yang baik ditandai dengan penampilan fisik yang jernih dengan rata-rata ukuran globul 33,50±0,01 nm dan nilai PDI 0,45±0,03. Sediaan nanoemulsi memiliki stabilitas fisik yang baik berdasarkan uji  sentrifugasi, heating cooling , dan freeze thaw.

## Daftar Pustaka
1.  Suva MA, Patel AM, Sharma N. A Brief Review on Acne Vulgaris : Pathogenesis , Diagnosis and Treatment. Res Rev J Pharmacol. 2016;4(3).
2.  Sevimli Dikicier B. Topical treatment of  acne  vulgaris:  efficiency,  side effects,  and  adherence  rate.  J  Int Med  Res.  2019;47(7).  https://doi. org/10.1177/0300060519847367
3.  Heng AHS, Chew FT. Systematic review of the epidemiology of acne vulgaris. Sci Rep. 2020;10(1). https://doi.org/10.1038/ s41598-020-62715-3
4.  Tan AU, Schlosser BJ, Paller AS. A review of diagnosis and treatment of acne in adult female patients. Vol. 4, International Journal of Women’s Dermatology.
2018. https://doi.org/10.1016/j. ijwd.2017.10.006
5.  Dréno B, Pécastaings S, Corvec S, Veraldi S, Khammari A, Roques C. Cutibacterium acnes (Propionibacterium acnes) and acne vulgaris: a brief look at the latest updates. Vol. 32, Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. 2018. https://doi.org/10.1111/jdv.15043
6. Beylot  C,  Auffret  N,  Poli  F,  Claudel JP, Leccia MT, Del Giudice P, et al. Propionibacterium acnes: An update on its role in the pathogenesis of acne. Journal of the European Academy of Dermatology and Venereology. 2014. https://doi.org/10.1111/jdv.12224
7.  Sánchez-Camargo A del P, Herrero M. Rosemary  (Rosmarinus  officinalis)  as  a functional  ingredient:  recent  scientific evidence. Vol. 14, Current Opinion in  Food  Science.  2017.  https://doi. org/10.1016/j.cofs.2016.12.003
8.  Jiang Y, Wu N, Fu YJ, Wang W, Luo M, Zhao CJ, et al. Chemical composition and
antimicrobial activity of the essential oil of Rosemary. Environ Toxicol Pharmacol. 2011;32(1). https://doi.org/10.1016/j. etap.2011.03.011
9. Fu Y, Zu Y, Chen L, Efferth T, Liang H, Liu Z, et al. Investigation of antibacterial activity of Rosemary essential oil against Propionibacterium acnes with atomic force microscopy. Planta Med. 2007;73(12). https://doi.org/10.1055/s-2007-981614 10. Vyas A, Kumar Sonker A, Gidwani B. Carrier-based drug delivery system for  treatment  of  acne.  The  Scientific World  Journal.  2014.  https://doi. org/10.1155/2014/276260
11. Pandey P, Gulati N, Makhija M, Purohit D, Dureja H. Nanoemulsion: A Novel Drug Delivery Approach for Enhancement of Bioavailability. Recent Pat Nanotechnol. 2020;14(4).  https://doi.org/10.2174/1872 210514666200604145755
12. Taleb MH, Abdeltawab NF, Shamma RN, Abdelgayed SS, Mohamed SS, Farag MA, et al. Origanum vulgare L. Essential oil as a potential anti-acne topical nanoemulsion—in vitro and in vivo study. Molecules. 2018;23(9). https://doi. org/10.3390/molecules23092164
13. Belkhodja  H,  Meddah  B,  Touil  AT, Şekeroğlu  N,  Sonnet  P.  Chemical Composition and Properties of Essential Oil  of  Rosmarinus  Officinalis  and Populus Alba. World J Pharm Pharm Sci. 2016;5041(9).
14. Genatrika E, Nurkhikmah I, Hapsari I. Formulasi Sediaan Krim Minyak Jintan Hitam (Nigella Sativa L.) Sebagai  Antijerawat  Terhadap  Bakteri Propionibacterium Acnes. PHARMACY. 2016;13(02).
15. Annisa R, Mutiah R, Hakim A, Rahmaniyah DNK. Formulation design and evaluation of hydrocortisone-loaded nanoemulsion and nanoemulsion gel for topical delivery. In: AIP Conference Proceedings. 2019.
https://doi. org/10.1063/1.5115677
16. Sabale V, Vora S. Formulation and evaluation of microemulsion-based hydrogel for topical delivery. Int J
Pharm  Investig.  2012;  https://doi. org/10.4103/2230-973x.104397
17. Christy GP, Arimurni DA, Wahyudi MDP, Martien  R,  Tunjung  WAS.  Formulation and  Characterization  of  Kaffir  Lime  Oil Nanoemulsion. Biosci Biotechnol Res Asia.  2017;  https://doi.org/10.13005/ bbra/2525
18. Shinde U, Pokharkar S, Modani S. Design and evaluation of microemulsion gel system  of  nadifloxacin.  Indian  J  Pharm Sci.  2012;  https://doi.org/10.4103/0250- 474X.106066
19. Yang C, Powell CA, Duan Y, Shatters R, Zhang M. Antimicrobial nanoemulsion formulation with improved penetration of foliar spray through citrus leaf cuticles to control citrus huanglongbing. PLoS One.
2015; https://doi.org/10.1371/journal. pone.0133826 20. Islam M, Khalid S, Ahmad I, Zuberi SA, Fatima K. ESSENTIAL OILS: PHARMACOPEIAL IDENTIFICATION TESTS  AND  USES.  Baqai  J  Heal  Sci. 2018;21(1).
21. Teneva DG, Goranov BG, Denkova- Kostova RS, Hristova-Ivanova YM, Klisurova DI, Slavchev AK, et al. Chemical composition, antioxidant and antimicrobial activity of essential oils from  leaves  and  flowers  of  Rosmarinus officinalis  L.  Bulg  Chem  Commun. 2020;52.
22. Simsek M, Duman R. Investigation of effect  of  1,8-cineole  on  antimicrobial activity of chlorhexidine gluconate. Pharmacognosy  Res.  2017;9(3).  https:// doi.org/10.4103/0974-8490.210329
23. Sun Y, Cai X, Cao J, Wu Z, Pan D.
Effects  of  1,8-cineole  on  carbohydrate metabolism related cell structure changes of Salmonella. Front Microbiol. 2018;9(MAY).  https://doi.org/10.3389/ fmicb.2018.01078
24. Rahman FA, Priya V, Gayathri R, Geetha R V. In vitro antibacterial activity of camphor oil against oral microbes. Int J Pharm Sci Rev Res. 2016;39(1).
25. Salehi B, Upadhyay S, Orhan IE, Jugran AK, Jayaweera SLD, Dias DA,
et  al.  Therapeutic  potential  of  α-and β-pinene: A  miracle  gift  of  nature.  Vol. 9,  Biomolecules.  2019.  https://doi. org/10.3390/biom9110738
26. De Freitas BC, Queiroz PA, Baldin VP, Do Amaral PHR, Rodrigues LLF, Vandresen F, et al. (-)-Camphene-based derivatives as potential antibacterial agents against Staphylococcus aureus and Enterococcus spp. Future Microbiol. 2020;15(16). https://doi.org/10.2217/fmb-2020-0131
27. Marchese A, Arciola CR, Barbieri R, Silva AS, Nabavi SF, Sokeng AJT, et al. Update on monoterpenes as antimicrobial agents: A particular focus on p-cymene. Vol. 10, Materials.  2017.  https://doi.org/10.3390/ ma10080947
28. Nasri, Harahap U, Silalahi J, Satria D. Antibacterial activity of lactic acid bacteria isolated from dengke naniura of carp (Cyprinus carpio) against diarrhea-causing pathogenic bacteria.
Biodiversitas.  2021;22(8).  https://doi. org/10.13057/biodiv/d220802
29. Indrati O, Martien R, Rohman A, Nugroho AK. Development of nanoemulsion-based hydrogel containing andrographolide: Physical properties and stability evaluation. J Pharm Bioallied Sci.  2020;12(6).  https://doi.org/10.4103/ jpbs.JPBS_174_20
30. Koroleva M, Nagovitsina T, Yurtov E. Nanoemulsions stabilized by non-ionic surfactants: Stability and degradation mechanisms. Phys Chem Chem Phys.
2018;20(15). https://doi.org/10.1039/
c7cp07626f
31. Safaya M, Rotliwala YC. Nanoemulsions: A review on low energy formulation methods, characterization, applications and optimization technique. In: Materials Today:  Proceedings.  2020.  https://doi. org/10.1016/j.matpr.2019.11.267 32. Zeng L, Xin X, Zhang Y. Development and characterization of promising Cremophor EL-stabilized o/w nanoemulsions containing short-chain alcohols as a cosurfactant. RSC Adv. 2017;7(32). https://doi.org/10.1039/C6RA27096D
33. Mahtab A, Anwar M, Mallick N, Naz
Z, Jain GK, Ahmad FJ. Transungual Delivery of Ketoconazole Nanoemulgel for  the  Effective  Management  of Onychomycosis. AAPS PharmSciTech.
2016;17(6). https://doi.org/10.1208/
s12249-016-0488-0
34. Rodríguez-Rojo  S, Varona  S,  Núñez  M, Cocero MJ. Characterization of rosemary essential oil for biodegradable emulsions. Ind  Crops  Prod.  2012;37(1).  https://doi. org/10.1016/j.indcrop.2011.11.026
35. Ali SM, Yosipovitch G. Skin pH: From basic science to basic skin care. Vol. 93, Acta Dermato-Venereologica. 2013. https://doi.org/10.2340/00015555-1531
36. Patel RP, Joshi JR. An overview on nanoemulsion: a novel approach. Int J Pharm Sci Res. 2012;3(12).
37. Azeem A,  Rizwan  M, Ahmad  FJ,  Iqbal Z, Khar RK, Aqil M, et al. Nanoemulsion components screening and selection: A technical note. AAPS PharmSciTech. 2009;10(1). https://doi.org/10.1208/ s12249-008-9178-x
38. Pratiwi G, Martien R, Murwanti R. Chitosan nanoparticle as a delivery system for polyphenols from meniran extract (Phyllanthus niruri l.): Formulation, optimization, and immunomodulatory activity. Int J Appl Pharm.
2019;11(2). https://doi.org/10.22159/
ijap.2019v11i2.29999