## POTENSI HEPATOPROTEKTOR PROPOLIS TERHADAP HEPAR TIKUS PUTIH
(Rattus norvegicus) YANG DIINDUKSI KARBON TETRAKHLORIDA
(Hepatoprotective Potential of Propolis toward Hepar Injury Rats (Rattus norvegicus) Induced by Carbon Tetrachloride)
Diah Krisnansari * , Hidayat Sulistyo * , Wahyu Dwi Kusdaryantoi * *Jurusan Kedokteran Fakultas Kedokteran dan Ilmu-Ilmu Kesehatan, Universitas Jenderal Soedirman, Jl. Dr. Gumbreg No. 1 / Jl. Medika Telp/Fax (0281) 622022, Purwokerto, Jawa Tengah,

## E-mail: krisnansari@gmail.com

## ABSTRAK
Pendahuluan: Prevalensi  penyakit  hepar  kronis  beserta  dampaknya  terus  meningkat.  Salah  satu  zat  hepatotoksik yang berpotensi menyebabkan penyakit hepar kronis adalah karbon tetraklorida (CCl4). CCl4 menyebabkan kerusakan hepar melalui reaksi stress oksidatif dan mekanisme biokimia. Proses ini dapat dicegah dengan penggunaan propolis sebagai antioksidan. Tujuan penelitian ini untuk mengidentifikasi potensi hepatoprotektor propolis terhadap hepar tikus putih (Rattus Novergicus) yang diinduksi karbon tetraklorida (CCl4). Metode: Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan rancangan pre-post test control study menggunakan 0,054 gr dan 0,108 gr propolis. Penelitian menggunakan hewan coba 25 ekor tikus putih (Rattus norvegicus ) jantan strain Wistar berumur 12–16 minggu dengan berat badan 125–200 gr yang sehat. Tikus dikelompokkan menjadi lima kelompok . Kelompok I mendapatkan pakan standar + sonde aquadest, kelompok II mendapatkan pakan standar + induksi carbon tetrachlorida 1% 1 mL + sonde aquadest, kelompok III mendapatkan pakan standar + induksi carbon tetrachlorida 1% 1 mL + sonde propolis 0,054 gr, kelompok IV mendapatkan pakan standar + induksi carbon tetrachlorida 1% 1 mL + sonde propolis 0,108 gr dan kelompok V mendapatkan pakan standar + induksi carbon tetrachlorida 1% 1 mL + sonde sylimarin 50 mg/kg. Pada awal penelitian dilakukan pengukuran berat badan. Setelah 30 hari perlakuan, masing-masing kelompok dilakukan pengukuran berat badan, kadar interleukin-6 (IL-6), superoxide dismutase (SOD) dan pemeriksaan patologi anatomi hepar. Analisis IL-6 dan NAS score +fobrosis antar kelompok menggunakan uji Kruskal-Wallis yang dilanjutkan dengan uji post hoc Mann Whitney Analisis SOD antar kelompok menggunakan uji One-Way ANOVA yang dilanjutkan dengan uji post hoc LSD. Hasil: Uji statistik menunjukkan ada perbedaan yang signifikan pada IL-6, SOD, dan skor NAS+fibrosis antar kelompok hewan coba. Diskusi: Hasil penelitian menunjukkan propolis 0,054 gr dan 0,108 gr menunjukkan aktivitas hepatoprotektif terhadap kerusakan hepar yang diinduksi CCl4. Hasil penelitian juga dapat merekomendasikan propolis sebagai alternatif pencegahan proses fibrosis hepar. Oleh karena itu perlu penelitian lebih lanjut potensi propolis sebagai antioksidan dan hepatoprotektor perlu dilakukan ke pasien dengan penyakit hati.
Kata kunci: IL-6, SOD, fibrosis, propolis

## ABSTRACT
Introduction: The prevalence of chronic liver disease continues to increase. One potentially hepatotoxic substances that cause chronic liver disease is carbon tetrachloride. The process of liver damage can be prevented by the antioxidant role of propolis. The aims of this research was to study the hepatoprotective potential of propolis toward hepar injury rats induced by carbon tetrachlorida. Method: This was an experimental study with pre-post test. Twenty five male Wistar rats aged 12–16 week old, weighing 125–200 gr were allocated into 5 groups. Group I: standard meal + aquadest-gavage; group II: standard meal + CCl4 1% 1 mL + aquadest-gavage, group III: standard meal + CCl4 1% 1 mL + 0,054 gr propolis-gavage, group IV: standard meal + CCl4 1% 1 mL + 0,108 gr propolis-gavage and group V: standard meal + CCl4 1% 1 mL + sylimarin 50 mg/kg-gavage. IL-6, SOD, NAS score+fibrotic were measured after treatment. Analysed of IL-6 and NAS score+fibrotic with Kruskal Wallis to Mann Whitney and analysed of SOD with One-Way ANOVA to LSD. Results: The study showed that there were significant differences in IL-6, SOD and NAS score + fibrotic between groups. Discussion: Provision of 0,054 gr and 0,108 gr have hepatoprotective potential toward hepar injury rats induced by carbon tetrachlorida. Further research need to identify antioxidants and hepatoprotective potential of propolis on human with liver disease.
Keywords: IL-6, SOD, fibrotic, propolis

## PENDAHULUAN
Prevalensi penyakit hepar kronis beserta dampaknya terus meningkat. Penyakit hepar
merupakan masalah kesehatan dunia bahkan lebih  dari  350  juta  jiwa  penduduk  dunia menderita hepatitis kronik (Park et al ., 2010).
Potensi Hepatoprotektor Propolis terhadap Hepar Tikus Putih (Diah Krisnansari, dkk.)
Kejadian  penyakit  hepar  sering  dikaitkan dengan  angka  morbiditas  dan  kerugian ekonomi yang besar (Jules, 2008). Penyakit hepar kronis merupakan penyebab kematian terbesar ketiga setelah penyakit kardiovaskuler dan  kanker  pada  pasien  yang  berusia 45–46 tahun di negara maju. Di seluruh dunia penyakit hepar kronis menempati urutan ke tujuh  penyebab  kematian.  Sekitar  25.000 orang meninggal setiap tahun akibat penyakit hepar  kronis  (Chung  &  Podolsky,  2004). Mortalitas penyakit hepar (hepatitis B dan C, sirosis hepar, kanker hepar) di Indonesia tahun 2003–2004 adalah 46.300 jiwa, lebih tinggi dari Malaysia yaitu 4.500 jiwa (WHO, 2009). Indonesia  merupakan  negara  dengan penderita  hepatitis  terbanyak  urutan  ketiga setelah  India  dan  Cina.  Sekitar  5–7,5  juta penduduk  Indonesia  terkena  infeksi  kronik HCV  (Depkes,  2007).  Data  Kementerian Kesehatan  Republik  Indonesia  (2010) menyebutkan  bahwa  sekitar  130  juta  orang menderita  hepatitis  B  dan  7  juta  orang menderita  hepatitis  C,  50%  berpotensi menderita hepatitis kronik dan 10% berpotensi menderita sirosis hepar dan kanker hepar.
Hepar  adalah  organ  sentral  dalam metabolisme  tubuh  dan  penting  untuk pertahanan hidup, baik berupa perlindungan, detoksifikasi  maupun  metabolisme.  (Price, 2005).  Hepar  adalah  organ  pertama  setelah saluran pencernaan yang terpapar oleh bahan- bahan yang bersifat toksik, sehingga sangat potensial  mengalami  kerusakan  sehingga dapat mengakibatkan peradangan sel-sel hepar (hepatitis)  ataupun  kematian  sel  (nekrosis) (Robins  &  Kumar,  1995).  Kerusakan  pada hepar juga akan menyebabkan terganggunya metabolisme  di  dalam  tubuh,  sehingga terjadilah  gangguan  homeostasis  (Price, 2005).
Etiologi  penyakit  hepar  kronis  yang banyak  terjadi  di  Asia  antara  lain  virus hepatotropik dan nonhepatotropik, reaktivasi hepatitis  B  atau  C,  agen  infeksius  yang berkembang  di  hepar,  alkohol,  penggunaan obat hepatotoksik, hepatitis autoimun (Wilson’s disease)  dan  intervensi  bedah  serta  etiologi hepatotoksik  yang  belum  diketahui  (Sarin, et al., 2009). Salah satu zat hepatotoksik yang
berpotensi menyebabkan penyakit hepar kronis adalah karbon tetraklorida (CCl4).
Karbon tetraklorida (CCl4) merupakan salah  satu  zat  hepatotoksik  yang  dapat menghasilkan  radikal  bebas  yang  dapat tertimbun  dalam  lemak  tubuh,  hepar  dan sumsum tulang belakang. CCl4 menyebabkan kerusakan hepar melalui reaksi stres oksidatif dan  mekanisme  biokimia  (Monika,  2012). Proses kerusakan hepar akibat induksi karbon tetraklorida  dapat  dicegah  dengan  peran antioksidan (Tjok & Wibawa, 2012).
Pengobatan  penyakit  hepar  masih terbatas efikasi dan sulit dijalankan (Lee et al .,  2007).  Penderita  penyakit  hepar  sering kali melakukan pengobatan ketika kondisinya kronis. Tidak ada pengobatan standar untuk fibrosis hepar. Oleh sebab itu, perlu adanya pengobatan alternatif sebagai upaya preventif dan atau kuratif penyakit hepar (Seeff et al ., 2001; Lee et al. , 2007). Penelitian  tentang  nutrisi  yang digunakan  untuk  obat  penyakit  hepar  telah banyak dilakukan baik yang dapat mencegah, memproteksi  dan  memperbaiki  penyakit hepar. Nutrisi yang dapat digunakan sebagai obat  penyakit  hepar  adalah  yang  memiliki efek  antioksidan.  Antioksidan  menghambat aktivasi hepatic  stellate  cells (HSC), mencegah apoptosis hepatosit dan mengurangi fibrosis  hepar  eksperimental  (Oeij.  2012; Tjok dan Wibawa, 2012). Obat herbal sudah dipertimbangkan sebagai salah satu alternatif pengobatan terhadap berbagai penyakit ( Tasduq et  al., 2005).  Antioksidan  yang  terkandung dalam  obat  herbal  dapat  digunakan  sebagai terapi pada penyakit hepar melalui mekanisme pertahanan dari radikal bebas, ROS dan proses inflamasi  (Vitaglione,  Morisco,  Caporaso, dan Fogliano, 2004). Propolis telah digunakan secara  luas  di  dunia.  Propolis  mengandung antioksidan  dan  mempunyai  efek  anti inflamasi,  immunoregulator,  bakteriostatik dan  bakterisid  (Ansorge,  Reinhold,  dan Lendeckel, 2003; Tsai et al. , 2009). Sampai saat  ini  belum  ada  penelitian  mengenai potensi  hepatoprotektor  propolis  sebagai antioksidan yang diharapkan dapat mengobati penyakit hepar. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi hepatoprotektor propolis
Jurnal Ners Vol. 9 No. 2 Oktober 2014: 270–278
terhadap hepar tikus putih (Rattus Novergicus) yang diinduksi karbon tetraklorida (CCl4).

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilaksanakan di 3 laboratorium Fakultas Kedokteran dan Ilmu-ilmu Kesehatan (FKIK)  Universitas  Diponegoro  Semarang. Laboratorium Farmakologi digunakan untuk pemeliharaan  dan  perlakuan  hewan  coba, Laboratorium  Biokimia  digunakan  untuk pemeriksaan laboratorium Interleukin-6 (IL- 6)  dan  Superoxide  Dismutase  (SOD),  dan Laboratorium  Patologi  Anatomi  digunakan untuk  pemeriksaan  mikroskopik  patologi anatomi  hepar.  Penelitian  ini  merupakan penelitian  eksperimental  dengan  rancangan pre-post test control study menggunakan 0,054 gr dan 0,108 gr propolis yang dapat mencegah terjadinya  perlemakan  hati  (Krisnansari, Sulistyo, dan Ati, 2012).
Penelitian  ini  menggunakan  hewan coba 25 ekor tikus putih (Rattus norvegicus ) jantan strain Wistar berumur 12-16 minggu yang sehat. Hewan coba ditimbang kemudian dipilih tikus dengan berat antara 200-250 gram kemudian diadaptasikan/diaklimatisasi selama 10  hari  sebelum  penelitian.  Semua  hewan coba ditempatkan dalam kandang yang terbuat dari bahan yang sama yaitu kandang terbuat dari kaca diberi alas jerami, dipelihara dalam lingkungan  dengan  suhu  dan  kelembaban yang  sama,  mendapat  pencahayaan  alami, kelembapan dan minuman hewan coba juga sama.  Selama  masa  aklimatisasi,  hewan coba diberi asupan makanan standar dan air yang cukup. Seluruh hewan coba kemudian dikelompokkan secara random menjadi lima kelompok di mana setiap kelompok terdiri dari lima ekor hewan coba. Hewan coba dengan berat  badan  lima  terendah  dibagi  menjadi lima  kelompok  secara  acak  dengan  diberi nomor I.a, II.a, III.a, IV.a, V.a. Hewan coba dengan  berat  badan  sedang  dibagi  menjadi lima kelompok secara acak dan diberi nomor I.b, I.c, I.d, II.b, II.c,II.d, III.b, III.c,III.d, IV.b, IV.c,IV.d, V.b, V.c, V.d. Hewan coba dengan berat badan lima tertinggi dibagi menjadi lima kelompok secara acak dan diberi nomor I.e, II.e, III.e, IV.e, V.e.
Masing-masing  kelompok  mendapat perlakuan  sesuai  jadwal  selama  30  hari. Kelompok  I  mendapatkan  pakan  standar  + sonde  aquadest.  Kelompok  II  mendapatkan pakan standar + induksi carbon tetrachlorida 1%  1  mL  +  sonde  aquadest.  Kelompok  III mendapatkan pakan standar + induksi carbon tetrachlorida 1% 1 mL + sonde propolis 0,054 gr. Kelompok IV mendapatkan pakan standar + induksi carbon tetrachlorida 1% 1 mL + sonde propolis 0,108 gr. Kelompok V mendapatkan pakan standar + induksi carbon tetrachlorida 1% 1 mL + sonde sylimarin 50 mg/kg. Pada  awal  penelitian  dilakukan pengukuran  berat  badan.  Setelah  30  hari perlakuan, masing-masing kelompok dilakukan pengukuran berat badan, kadar interleukin- 6  (IL-6),  superoxide  dismutase  (SOD)  dan pemeriksaan patologi anatomi hepar.
Analisis IL-6 dan NAS score +fibrosis antar  kelompok  menggunakan  uji Kruskal- Wallis yang dilanjutkan dengan uji post hoc
Mann Whitney. Analisis SOD antar kelompok menggunakan  uji  One-Way  ANOVA  yang dilanjutkan dengan Post Hoc Least Significant Difference (LSD).  Uji  statistik  dilakukan dengan  taraf  kepercayaan  95%  (α=0,05). (Sopiyudin,  2008).  Pemeriksaan  patologi anatomi  hepar  untuk  mengetahui  steatosis, balloning, inflamasi dan fibrosis hepar antar kelompok.

## HASIL
Uji Kruskal-Wallis menunjukkan adanya perbedaan signifikan IL-6 antar kelompok (p = 0,000). Uji post hoc IL-6 dengan menggunakan uji Mann-Whitney didapatkan perbedaan IL-6 antar semua kelompok (Tabel 1).
Uji  ANOVA  menunjukkan  terdapat perbedaan  signifikan  SOD  antar  kelompok (p = 0,000). Uji post hoc LSD menunjukkan perbedaan signifikan SOD pada kelompok I dan II, I dan III, II dan IV, II dan V, III dan IV, III dan V (Tabel 2).
Berdasarkan rerata NAS score +fibrosis tiap kelompok hewan coba didapatkan seperti pada Tabel. 3. Uji Kruskal-Wallis untuk  NAS score +fibrosis menunjukkan adanya perbedaan
Potensi Hepatoprotektor Propolis terhadap Hepar Tikus Putih (Diah Krisnansari, dkk.)
Tabel 1.  Karakteristik  rerata  IL-6  tiap kelompok Kelompok IL-6 Min Maks Mean SD I 0,62 0,75 0,68 0,05 II 2,70 3,11 2,94 0,16 III 0,86 1,01 0,95 0,07 IV 0,70 0,88 0,78 0,07 V 0,98 1,15 1,07 0,06 Tabel 2.  Karakteristik  rerata  SOD  tiap kelompok Kelompok SOD Min Maks Mean SD I 88.20 111.40 98.74 8.74 II 58 71 64,98 5,89 III 64.50 83.00 74.12 7,63 IV 74,50 112,00 94,24 14,16 V 84,50 126,70 100,96 18,50
Tabel 4.  Hasil uji post hoc steatosis, balloning, inflamasi dan fibrosis Kelompok Kelompok p steatosis p balloning p inflamasi p fibrosis I II 0,005 0,005 0,005 0,005 III 0,003 0,005 0,003 0,005 IV 0,005 0,005 0,005 0,005 V 0,004 0,004 0,004 0,004 II III 0,134 0,118 0,134 0,549 IV 0,212 0,118 0,339 0,549 V 0,014 0,042 0,014 0,513 III IV 0,519 1,000 1,000 1,000 V 0,014 0,905 0,014 0,221 IV V 0,189 0,905 0,065 0,221 Tabel 3.  Rerata NAS score dan fibrosis No Klpk Steatosis Balloning Inflamasi Fibrosis 1 I 0 0 0 0 2 II 1,6 1,4 1,6 2,6 3 III 2 2,2 2 2,4 4 IV 2,2 2,2 2 2,4 5 V 2,8 2,2 2,8 2,8 Keterangan:
0-2 : Not diagnostic of NASH (negatif)
3-4 : borderline 5 - 8 : NASH (positif)

## Fibrosis Staging
Stage I: Zone 3 perivenular perisinusoidal �� pericellular fibrosis, focal or e�tensive �� pericellular fibrosis, focal or e�tensive pericellular fibrosis, focal or e�tensive Stage II: As above with focal or e�tensive periportal fibrosis Stage III: Bridging fibrosis, focal or e�tensive e�tensive e�tensive Stage IV: Cirrhosis
yang  bermakna  pada  steatosis  (p=0,001), balloning  (p=0,004),  inflamasi  (p=0,001) dan  fibrosis  (p=0,006)  antar  kelompok.  Uji post hoc Mann-Whitney didapatkan steatosis, balloning, inflamasi dan fibrosis (Tabel 4).
Pemeriksaan  patologi  anatomi  hepar diamati  berdasarkan  pengamatan  lapang pandang secara acak. Pengamatan mikrokopis hanya mampu melihat kerusakan hepar berupa degenerasi  dan  nekrosis  (Romzah  2005).

## Jurnal Ners Vol. 9 No. 2 Oktober 2014: 270–278
Gambar 3.  Gambaran  hepar  hewan  coba kelompok III.
Gambar 4.  Gambaran  hepar  hewan  coba kelompok IV.
Gambar 5.  Gambaran  hepar  hewan  coba kelompok V. Gambar 1.  Gambaran  hepar  hewan  coba kelompok I.
Gambar 2.   Gambaran  hepar  hewan  coba kelompok II.
Gambar berikut merupakan hasil perbandingan gambaran  hepatosit  tiap  kelompok  setelah perlakuan.
Gambar 1 menunjukkan struktur hepar normal dan tidak tampak adanya kerusakan hepar pada hewan coba kelompok I.
Gambar  2  menunjukkan  adanya kerusakan  hepar  berupa  steatosis,  lobular inflamasi, ballooning hepatosit, fibrosis dan bridging fibrosis pada hewan coba kelompok II.
Gambar 3 menunjukkan masih adanya beberapa kerusakan hepar, berupa steatosis, lobular inflamasi, ballooning hepatosit, fibrosis tidak  terlihat  bridging  fibrosis  pada  hewan coba kelompok III.
Gambar  4  menunjukkan  kerusakan hepar masih terlihat, berupa steatosis, lobular inflamasi,  ballooning  hepatosit,  fibrosis tidak terlihat bridging fibrosis dan bridging fibrosis.
Gambar  5  menunjukkan  adanya kerusakan hepar yang lebih jelek pada hewan coba  kelompok  V  dibandingkan  kelompok lainnya, berupa steatosis, lobular inflamasi, ballooning  hepatosit,  fibrosis  dan  bridging
Potensi Hepatoprotektor Propolis terhadap Hepar Tikus Putih (Diah Krisnansari, dkk.) fibrosis,  terlihat  peningkatan  jaringan  ikat fibrous, dan gambaran bridging fibrosis lebih terlihat jelas.

## PEMBAHASAN
Berdasarkan  Tabel  1  didapatkan hasil  pemeriksaan  rerata  IL-6  tertinggi pada  kelompok  II  dan  rerata  IL-6  terendah pada  kelompok  I,  sedangkan  untuk  rerata SOD tertinggi pada kelompok V dan rerata SOD  terendah  pada  kelompok  II.  Adanya kerusakan  hepar  akan  meningkatkan  IL-6 dan  menurunkan  SOD.  Pada  kelompok  II mendapatkan  paparan  CCl4  tanpa  adanya perlindungan  antioksidan  propolis  maupun sylimarin,  didapatkan  bahwa  hepar  hewan coba  mengalami  kerusakan  yang  lebih berat  dibandingkan  dengan  kelompok  yang tidak  terpapar  CCl4  dan  kelompok  yang terpapar  CCl4  yang  mendapatkan  propolis atau  sylimarin.  Propolis  0,054  gr  dan 0,108 gr dapat melindungi kerusakan hepar dari paparan bahan toksik. Analisis statistik juga menunjukkan perbedaan signifikan IL-6 dan SOD antar kelompok.
Kerusakan hepar karena reaksi oksidasi dikatalisis oleh sitokrom P450 (CYP) 2E1, 4A10 dan 4A14 (Alvina, 2010). Sitokrom CYP2E1 mengkatalisis metabolisme CCl4 di retikulum endoplasma  menjadi  radikal  bebas  yaitu, trichloromethyl (CCl 3 ) (Tsai et al ., 2009; Siwi, 2012). CCl 3 bereaksi dengan senyawa sulfidril, seperti glutation dan protein, serta asam lemak tidak jenuh sehingga menyebabkan abnormal fungsi  protein,  peroksidasi  lipid,  kerusakan mitokondria dan nukleus (Siwi, 2012). Reaksi dengan glutation mampu memperburuk stess oksidatif (Ferreira et al ., 2010). Hal ini pada akhirnya  menyebabkan  gangguan  fungsi hepatosit dan nekrosis sel. CCl4 menyebabkan hepatosit rusak dan dapat mengaktivasi sistem imun. Hepatosit yang rusak melepaskan ROS dan  mediator  fibrogenik  serta  menginduksi perekrutan sel darah putih oleh sel inflamasi (Tjok  &  Wibawa,  2012).  Sel  kupffer  yang teraktivasi  dapat  menghasilkan  ROS  dan sitokin yang memperparah keadaan inflamasi (Kim et al ., 2011).
Penelitian  ini  menunjukkan  paparan CCl4 pada hewan coba dapat menyebabkan fibrosis  hepar.  Respon  hepar  hewan  coba terhadap paparan kronik CCl4 hampir sama dengan  hepar  penderita  cirosis  hepatis  (Fu, et  al. ,  2008).  Metabolisme  CCl4 di  hepar menstimulasi  dihasilkannya  peroksidasi lipid  dan  menghasilkan  radikal  bebas  yang menyebabkan  nekrosis  sel  hepatosit  dan menyebabkan inflamasi (Basu, 2003). Inflamasi berhubungan  dengan  fibrosis  hepar  dan proinflamasi IL-6 akan meningkat. Konsentrasi IL-6 juga meningkat pada penderita cirrhosis hepatis  karena  alkohol.  IL-6  menginduksi inflamasi hepar dan sintesis kolagen in vivo. IL-6  diproduksi  oleh  sel  stelata  hepatosit yang teraktivasi yang memfasilitasi produksi matriks ekstraseluler termasuk kolagen tipe I,  yang  menyebabkan  fibrosis  hepar  (Fu, et al. , 2008). Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  propolis  secara  sig nif ikan menurunkan  konsentrasi  serum  IL-6  pada hewan  coba  yang  mendapat  paparan  CCl4. Penelitian Linawati dan Bagiada (2008) juga menunjukkan  pemberian  propolis  10  mg/ ml  dapat  meningkatkan  aktivitas  makrofag dengan  meningkatkan  sekresi  interleukin 12  (IL-12)  pada  kultur  makrofag  dari penderita  tuberkulosis  paru  yang  diinfeksi Mycobacterium tuberculosis.
Stres  oksidatif  sangat  erat  kaitannya dengan fibrosis hepar. Peroksidasi lipid dan nekrosis  secara  signifikan  ditekan  dengan suplementasi  antioksidan  seperti  flavonoid, silymarin, atau vitamin E. Hasil penelitian ini menunjukkan suplementasi propolis 0,054 gr dan 0,108 gr dapat menekan aktivitas enzim antioksidan SOD. SOD melindungi sel stelata hepatosit dari cedera yang disebabkan paparan CCl4  dan  fibrosis  dengan  menurunkan stress  oksidatif.  Penelitian  ini  juga  sejalan dengan hasil penelitian Monika (2012) yang menunjukkan  bahwa  suplementasi  propolis 200  mg/kg  selama  14  hari  dapat  menekan aktifitas  glutation  oksidase  dan  katalase hepar  tikus  yang  mendapat  induksi  CCl4 0,15 mL/kg selama 12 minggu. Selain itu, hasil penelitian menunjukkan efek hepatoprotektor propolis memiliki derajat hampir sama dengan
Jurnal Ners Vol. 9 No. 2 Oktober 2014: 270–278
silymarin. Penelitian Ismail, Aksu dan Seven (2010)  juga  menunjukkan  suplementasi propolis  1  g/kg  selama  42  hari  pada  ayam pedaging yang mendapat paparan 220 ppm Pb dapat menurunkan aktivitas SOD.
Uji Kruskal  Wallis menunjukkan adanya  perbedaan  yang  bermakna  pada steatosis, balloning, inflamasi  dan  fibrosis antar kelompok. Uji ini dilanjutkan dengan uji post hoc yang menunjukkan adanya perbedaan steatosis pada kelompok I dan II, I dan III, I dan IV, I dan V, II dan V, dan kelompok III dan V. Selain itu, diperoleh perbedaan yang bermakna  pada balloning antara  kelompok I  dan  II,  I  dan  III,  I  dan  IV,  I  dan  V,  dan kelompok II dan V. Perbedaan inflamasi terjadi pada kelompok I dan II, I dan III, I dan IV, I dan V, II dan V, III dan V. Perbedaan fibrosis terjadi pada kelompok I dan II, I dan III, I dan IV, I dan V.
Nekrosis  sentrilobular  terjadi  tiga sampai dua belas jam setelah paparan CCl4. Kerusakan  awal  terjadi  pada  membran sel.  Namun  bukan  akibat  metabolit  CCl4. CCl4 melarutkan  membran  lipid  sel  yang menyebabkan  membran  lebih  permeabel. Peningkatan  permeabillitas  membran  sel menyebabkan  peningkatan  kehilangan  ion kalium dan enzim aspartat aminotransferase (AST)  serta  akumulasi  ion  kalsium  dan air  intrasel  sehingga  mengakibatkan  sel membengkak  dan  nekrosis.  Toksisitas lanjutan disebabkan oleh metabolit CCl4 yang bergantung pada sitokrom CYP2E1. Aktivasi sitokrom ini lebih lanjut menyebabkan kaskade fibrosis  hepar  (Luo et  al .,  2004).  Nekrosis sel  hepatosit  tersebut  berlangsung  terus menerus  mengakibatkan  fisbrosis.  Fibrosis ini irreversibel sehingga proteksi terjadinya fibrosis sangat penting. Salah satu yang dapat mengurangi kejadian fibrosis adalah dengan peran antioksidan.
Antioksidan  propolis  menghambat aktivasi hepatic stellate cells (HSC), mencegah apoptosis hepatosit dan mengurangi fibrosis hepar  eksperimental.  Propolis  juga  sebagai immunoregulator yang dapat meningkatkan status  imunitas  sehingga  dapat  melindungi sel  hepar  dari  kerusakan  dengan  menekan aktivitas  sel  kupffer  dalam  menghasilkan
ROS dan sitokin yang memperparah keadaan inflamasi (Ansorge, Reinhold, dan Lendeckel, 2003). Hal ini tampak pada gambaran hepar kelompok III dan IV di mana proses inflamasi dan fibrosis berkurang dibandingkan dengan kelompok II dan V.
Sylimarin  merupakan  komponen  ß avonoid alami dari tumbuhan berduri Silybum marianum telah  dikenal  sebagai  terapi  anti fibrotik potensial. Senyawa tersebut berfungsi sebagai  antioksidan  dan  dapat  mengurangi kerusakan  hepar  dengan  sitoproteksi  dan inhibisi  fungsi  sel  Kupffer.  Uji  coba  pada pasien  sirosis  menunjukkan  adanya  sedikit kelebihan  dalam  hal survival pada  pasien sirosis alkoholik dengan penyakit Child-Pugh A.  Namun  penelitian  dengan  melibatkan responden  lebih  besar  dan  kontrol  sedang dijalankan  untuk  menilai  efikasi  sylimarin secara definitif (Myers, 2008).
Ekstrak propolis berair (APE) dilaporkan dapat  melindungi  hepar  tikus  terhadap cedera  karbon  tetraklorida  (CCl4)  melalui penurunan  kebocoran  sitosol  enzim  laktat dehidrogenase (LDH), penurunan peroksida lipid dan pemeliharaan seluler konten glutation tereduksi (GSH) (Aiman et al., 2002). Senyawa utama  propolis  –tectochrysin--  mempunyai potensi antioksidan yang poten. Tectochrysin secara signifikan dapat menurunkan aktivitas transaminase serum yang meningkat akibat kerusakan hepar yang diinduksi oleh CCl4 pada tikus.  Tectochrysin  meningkatkan  aktivitas enzim  antioksidan  seperti  hepar  dismutase superoksida  sitosol,  katalase,  dan  glutation peroksidase pada tikus yang diinduksi CCl4 serta  penurunan  yang  signifikan  produksi MDA (Lee et al., 2007).

## SIMPULAN DAN SARAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa propolis 0,054 gr dan 0,108 gr menunjukkan aktivitas hepatoprotektif terhadap kerusakan hepar yang diinduksi CCl4 yang ditunjukkan dengan  menurunnya  IL-6  dan  SOD  dan persentase  kerusakan  sel  hepar  yang lebih  rendah.  Hasil  penelitian  juga  dapat merekomendasikan propolis sebagai alternatif pencegahan proses fibrosis hepar. Oleh karena
Potensi Hepatoprotektor Propolis terhadap Hepar Tikus Putih (Diah Krisnansari, dkk.) itu perlu penelitian lebih lanjut potensi propolis sebagai antioksidan dan hepatoprotektor perlu dilakukan ke pasien dengan penyakit hepar.

## KEPUSTAKAAN
Alvina, 2010. Type IV Collagen As Marker Of Fibrosis In Nonalcoholic Liver Disease. Universa  Medicina ,  May-August, 29(2). Ansorge,  S.,  Reinhold,  D.,  and  Lendeckel,
U.,  2003.  Propolis  And  Some  Of  Its Constituents  Down-Regulate  DNA Synthesis And Inflammatory Cytokine Production  But  Induce  TGF- Β 1 Production  of  Human  Immune  Cells.
Zeitschrift f¨ur Naturforschung. Section C , 58 (7–8), 580–589.
Basu, S., 2003. Carbon tetrachloride-induced lipid peroxidation: eicosanoid formation and  their  regulation  by  antioxidant nutrients. Toxicology, 189, 113–127 Chung,  R.T.,  and  Podolsky,  D.K.  2004.
Cirrhosis  and  Its  Complications . In  Harrison’s  Principles  of  Internal Medicine.  16 th Edition.  New  York: McGraw-Hill. Depkes, RI., 2007. Profil Kesehatan Indonesia .
Jakarta: Depkes RI.
El-Khatib,  A.S.,  Agha,  A.M.,  Mahran, L.G.,  dan  Khayyal,  M.T.,  2002.
Prophylactic Effect of Aqueous Propolis
Extract  against  Acute  Experimental Hepatotoxicity in vivo. Z. Naturforsch , 57c, 379–385.
Ferreira, E. A., Gris, E. F., Felipe, K. B., Correia,
J.  F.,  Cargnin-Ferreira,  E.,  Filho,  D. W., et al. 2010. Potent Hepatoprotective
Effect in CCl4-Induced Hepatic Injury in Mice of Phyloroacetophenone from
Myrcia  mutiflora. Libyan  Journal Medical. 4891 (5), 1–10.
Fu, Y., Zheng, S., Lin, J., Ryerse, J., and Chen, A.,  2008.  Curcumin  Protects  the  Rat
Liver  from  CCl4-Caused  Injury  and Fibrogenesis by Attenuating Oxidative Stress and Suppressing Inflammation. The American society for pharmacology and  experimental  therapeutics  mol pharmacol, 73(2), 399–409. Ismail,  S.,  Aksu,  T  and  Seven,  P.T.,  2010.
The effects of propolis on biochemical parameters and activity of antioxidant
enzymes  in  broilers  exposed  to  lead- induced oxidative stress. Asian-Aust. J. Anim. Sci., 23 (11), 1482–1489. Jules,  D.,  2008. Chronic  hepatitis.  In: harrison’s  principles  of  internal medicine  seventeenth  edition. New York: McGraw Hill.
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.
2010.  Hepatitis  masalah  kesehatan dunia. Jakarta: Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.
Kim, H.-Y., Park, J., Lee, K.-H., Lee, D.-U.,
Kwak,  J.-H.,  Kim,  Y.  S., et  al. 2011. Ferulic acid protects against ccl4-liver injury in mice. Toxicology, 104–111
Krisnansari,  D.,  Sulistyo,  H.,  Ati,  V.R.B., 2012.  Efek  propolis  terhadap  fungsi dan perlemakan hati tikus putih (rattus norvegicus) model hiperkolesterolemia.
Penelitian  tidak  dipublikasikan. Purwokerto: FKIK Universitas Jenderal Soedirman.
Lee, C.H., Park, S.W., Kim, Y. S., Kang, S.
S., Kim, J. A., Lee, S. H., et al. 2007. Protective mechanism of glycyrrhizin on  acute  liver  injury  induced  by carbon  tetrachloride  in  mice. Biology Pharmacology Bulletin, 30 (10), 1898–
1904. Linawati, M., dan Bagiada, M. 2008. Pengaruh propolis terhadap sekresi interleukin- 12  pada  supernatan  kultur  makrofag dari penderita tuberkulosis paru yang diinfeksi mycobacterium tuberculosis. Penelitian tidak dipublikasikan. Luo, Y.-J., Yu, J.-P., Shi, Z.-H., dan Wang, L. 2004.  Ginkgo  biloba  extract  reverses CCl4-Induced  liver  fibrosis  in  rats. World Journal of Gastroenterology, 10
(7), 1037–1042. Monika, B., 2012. Propolis prevents hepatorenal injury  induced  by  chronic  exposure to  carbon  tetrachloride.  hindawi publishing  corporation. Evidence- Based Complementary and Alternative Medicine. Volume  2012,  Article  ID 235358,  12  pages.  doi:10.1155/2012/
235358.
Myers,  RP.  2008.  Non-invasive  markers  of liver fibrosis: playing the probabilities. Liver International, 56,1328-31. Oeij, A.A., 2012. Fibrosis Hati. JKM, 8 (2),
198–210.
Jurnal Ners Vol. 9 No. 2 Oktober 2014: 270–278
Park, C. M., Cha, Y. S., Youn, H. J., Cho, C. W., dan Song, Y.S., 2010. Amelioration of Oxidative Stress by Dandelion Extract through CYP2E1 Suppression against
Acute Liver Injury Induced by Carbon
Tetrachloride in Sprague-dawley Rats. Phytotherapy Research, 24 (9), 1347– 1353
Price, S. A., 2005. Patofisiologi konsep klinis proses-proses  penyakit. Volume  1.
Jakarta: EGC.
Robins and Kumar. 1995. Buku ajar patologi II . Jakarta: EGC.
Sarin, S.K., Ashish, K., John, A.A., Yogesh, K.C.,  Sheung,  TF.,  Hitendra,  GH.,
Janaka,  DS.,  Saeed,  SH.,  Rajiv,  J.,
Piyawat,  K.,  George,  KL.,  Qing,  L., Kaushal,  M.,  Rosmawati,  M.,  Qin,
N.,  Salimur,  R.,  Archana,  Rastogi, Stephen,  M.R.,  Puja,  S.,  Didier,  S.,
Samir,  S.,  Barjesh,  CS.  2009.  Acute- on-chronic  liver  failure:  consensus recommendations of the Asian Pacific Association for The Study of The Liver (APASL). Hepatology International, 3,
269–82
Seeff,  L.  B.,  Lindsay,  K.  L.,  Bacon,  B.  R.,
Kresina,  T.  F.,  dan  Hoofnagle,  J.  H.
2001.  Complementary  and  alternative medicine  in  chronic  liver  disease. Hepatology, 34 (3), 595–603. Siwi, A.C., 2012. Pengaruh pemberian kafein terhadap skor aktivitas histologi hati tikus yang diinduksi karbon tetraklorida (ccl4). Penelitian tidak dipublikasikan. Tasduq,  S.  A.,  Kaiser,  P.,  Gupta,  D.K.  et al.  2005.  Protective  Effect  of  A  50% Hydroalcoholic  Fruit  Extract  Of Emblica  Officinalis  Against  Anti- Tuberculosis  Drugs  Induced  Liver Toxicity. Phytotherapy  Research, 19
(3), 193–197. Tjok,  I.A.S.,  and  Wibawa,  I.D.N.,  2012.
Pendekatan  diagnosis  dan  terapi fibrosis hati. Denpasar: Bagian/SMF Ilmu  Penyakit  Dalam  FK  Universitas Udayana/RS Sanglah,
Tsai, C.-F., Hsu, Y.-W., Chen, W.-K., Chang,
W.-H., Yen, c.-C., Ho, Y.-C., et al . 2009. Hepatoprotective Effect of Electrolyzed
Reduced  Water  Against  Carbon Tetrachloride-Induced Liver Damage in Mice. Food and Chemical Toxicology, 47, 2031–2036. Vitaglione, P., Morisco, F., Caporaso, N., and Fogliano, V., 2004. Dietary antioxidant compounds  and  liver  health. Critical Reviews in Food Science and Nutrition,
44 (7–8), 575–586.
World  Health  Organization.  2009. Table  2
Estimated Total Death (‘000), by Cause and WHO Member State, 2004 (a,m). Department of Measurement and Health Information, Ganeva.