Uji Aktivitas Antibakteri dan Antibiofilm Fraksi Biji Kelengkeng ( Euphoria longan Lour. Steud.) terhadap Staphylococcus aureus ATCC 6538
Oda Shantina Prasetya (a) , Lisa Soegianto (a)* , Sumi Wijaya (a) a Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya
Tanaman Kelengkeng ( Euphoria longan Lour. Steud.) berpotensi sebagai antibakteri. Biji kelengkeng adalah salah satu  bagian  tanaman  kelengkeng  yang  memiliki  daya  antibakteri.  Penelitian  ini  dilakukan  untuk  menentukan aktivitas  antibakteri  dan  antibiofilm  dari  fraksi  biji  kelengkeng  ( Euphoria  longan Lour.  Steud.)  terhadap Staphylococcus  aureus ATCC  6538.  Pada  penelitian  ini  ekstrak  diperoleh  dengan  metode  maserasi  dengan menggunakan  pelarut  etanol  96%  kemudian  difraksinasi  cair-cair  dengan  pelarut n -heksan,  etil  asetat  dan  air. Fraksi yang diperoleh dibuat konsentrasi 100000 ppm, kemudian diuji aktivitas antibakteri pada Staphylococcus aureus dengan  metode  difusi  sumuran,  uji  aktivitas  antibiofilm  dengan  menggunakan  metode  mikrodilusi,  dan dilakukan skrining fitokimia dengan menggunakan kromatografi lapis tipis untuk menentukan golongan senyawa yang mempunyai aktivitas antibakteri dan antibiofilm dari fraksi biji kelengkeng ( Euphoria longan Lour. Steud.). Hasil penelitian menunjukkan bahwa diameter hambat pertumbuhan pada fraksi etil asetat dengan konsentrasi 100000 ppm sebesar 14,59 mm ± 0,01, fraksi n -heksan sebesar 7,15 mm ± 0,63 dan fraksi air sebesar 12,52 mm ± 0,40. Hasil penelitian uji antibiofilm menunjukkan bahwa persentase penghambatan pertumbuhan biofilm terbaik  pada  fraksi  etil  asetat  dengan  konsentrasi  100000  ppm  sebesar  99,08%.  Skrining  fitokimia  dengan menggunakan kromatografi lapis tipis dilakukan pada fraksi etil asetat dan hasil yang didapatkan menunjukkan bahwa fraksi etil asetat mengandung senyawa tanin/polifenol, saponin triterpenoid dan flavonoid.
Kata Kunci: antibakteri, antibiofilm, fraksi, Euphoria longan Lour. Steud., Staphylococcus aureus .
Antibacterial and Antibiofilm Activity Test of Longan ( Euphoria longan Lour. Steud.) Seed Fraction Against Staphylococcus aureus ATCC 6538
Longan ( Euphoria longan Lour. Steud.) has an antibacterial potential. Longan seed is one part of Longan that has antibacterial  activity.  This  study  was  conducted  to  determine  the  antibacterial  and  antibiofilm  activity  of  longan seed fraction ( Euphoria longan Lour. Steud.) against Staphylococcus aureus ATCC 6538. In this study, the extract was obtained from maceration using 96% ethanol and it was fractionated by liquid-liquid solvent method using n - hexane,  ethyl  acetate,  and  water. Each  fraction  prepared  at  concentration  100000  ppm,  and  then  the antibacterial activity on Staphylococcus aureus was determined by well diffusion method, antibiofilm activity using microdilution  method,  and  phytochemical  screening  to  determine  the  metabolite  compounds  that  have antibacterial  and  antibiofilm  activity  using  thin  layer  chromatography. The  results  showed  that  the  diameter  of growth inhibition in ethyl acetate fraction with a concentration of 100000 ppm was 14.59 mm ± 0.01, n -hexane fraction  at  7.15  mm  ±  0.63  and  water  fraction  of  12.52  mm  ±  0.40.  Antibiofilm  test  results  showed  that  the percentage of growth inhibition of biofilm on the fraction of ethyl acetate with a concentration of 100000 ppm was 99.08%. Phytochemical screening using thin layer chromatography carried out on the fraction of ethyl acetate and showed that the fraction contains tannin/polyphenols, triterpenoid saponins and flavonoids.
Keywords: antibacterial, antibiofilm, fractions, Euphoria longan Lour. Steud., Staphylococcus aureus .
*Corresponding author: Fakultas Farmasi Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya, Jl. Raya Kalisari Selatan No. 1 Surabaya, e-mail : lisa.soegianto@yahoo.com

## PENDAHULUAN
Gangren merupakan komplikasi kronik dari infeksi kaki pada penderita diabetes mellitus yang berwarna  merah  kehitaman,  berbau  busuk  dan berkembang  saat  sistem  kekebalan  tubuh  yang menurun  (Tjokroprawiro,  2007;  Waspaji,  2006). Menurut  Boulton,  Krisner,  dan  Vileykite  (2004), infeksi  kaki  atau  kaki  diabetik  merupakan destruksi jaringan ikat yang berhubungan dengan neuropati  dan  vaskuler  perifer  pada  tungkai bawah. Berbagai jenis bakteri yang menyebabkan infeksi  gangren  adalah  gabungan  bakteri  aerob (Gram  negatif,  yaitu Klebsiella  sp,  Proteus mirabilis dan  Gram  positif,  yaitu Staphylococcus aureus , Streptococcus )  dan  bakteri  anaerob (Drecoli  dkk,  2007).  Bakteri  tersebut  masuk  dan menyebar  dengan  cepat  dan  menyebabkan kerusakan berat pada jaringan (Brand, 2000).
Menurut Haris et al . (2002),
Staphylococcus  aureus dapat  menyebabkan infeksi  pada  kulit,  hidung,  uretra,  vagina,  dan saluran pencernaan, Staphylococcus aureus dapat membentuk biofilm. Biofilm merupakan komunitas bakteri yang saling berkomunikasi dan melekat pada permukaan inert. Menurut Paraje et al .  (2011),  biofilm  terdapat  dalam  matriks  yang tersusun atas polisakarida, protein dan DNA dari mikroba. Terapi antibiotik hanya membunuh sel- sel  bakteri  plantonik,  sedangkan  bakteri  dalam bentuk biofilm tetap hidup (Melchoir, Vaarkamp, and Gremmels,  2006).  Resistensi  biofilm terhadap pengobatan antibiotik sering mengakibatkan kegagalan kemoterapi dan infeksi kronis  berkelanjutan  sehingga  pertumbuhan biofilm perlu dihambat atau dicegah. Pengendalian,  pencegahan  bakteri  masuk  sel adhesi,  pengurangan  produksi  polisakarida,  dan gangguan  komunikasi  sel  ke  sel  yang  terlibat dalam  pembentukan  biofilm  adalah  strategi biofilm  yang  efektif  untuk  penghilangan  atau penghambatan  biofilm  (John,  Mark,  Roger, 2006).
Kelengkeng ( Euphoria longan Lour. Steud.)  merupakan  tanaman  yang  banyak ditemukan  di  Indonesia  dan  telah  dimanfaatkan untuk  berbagai  pengobatan.  Beberapa  bagian tanaman  kelengkeng  telah  mengalami  pengujian dan  diyakini  memiliki  daya  antibakteri  pada beberapa  spesies  bakteri  dan  jamur,  seperti bakteri Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli, Candida  albicans,  Aspergillus  niger (Santi, Muhtadi,  dan  Indrayudha,  2010).  Salah  satu bagian  tanaman  kelengkeng  yang  memiliki  daya antibakteri  adalah  biji  kelengkeng  ( Euphoria longan Lour. Steud.). Biji kelengkeng mengandung  senyawa  fenolik  seperti  corilangin, asam  galat,  asam  ellagat,  dan  senyawa  bioaktif lainnya (Soong dan Barlow, 2005).
Dalam  Penelitian  Santi,  Muhtadi,  dan Indrayudha  (2010),  ekstrak  etanol  biji  dan  kulit kelengkeng  diuji  aktivitas  antibakteri  dengan metode  dilusi  dengan  hasil  uji  aktivitas antibakteri  untuk  ekstrak  etanol  95%  kulit
kelengkeng  pada  konsentrasi  0,25%  sampai  4% belum menunjukkan aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus ,  sedangkan ekstrak  etanol  95%  biji  kelengkeng  pada konsentrasi  2%  sampai  8%  memiliki  aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus . Berdasarkan  penelitian  di  atas,  maka dilakukan  proses  fraksinasi  terhadap  ekstrak etanol  biji  kelengkeng  yang  memiliki  potensi sebagai  antibakteri  dan  antibiofilm  terhadap bakteri Staphylococcus aureus . Fraksinasi dilakukan  untuk  menentukan  fraksi  yang memiliki  aktivitas  antibakteri  dan  antibiofilm yang  paling  baik.  Fraksi  aktif  yang  diperoleh kemudian  diskrining  kromatografi  lapis  tipis untuk  menentukan  golongan  senyawa  yang memiliki aktivitas antibakteri dan antibiofilm.

## METODE PENELITIAN

## Bahan
Biji  Kelengkeng  ( Euphoria  longan Lour. Steud.)  didapat  dari  Materia  Medika,  Batu-Malang, Jawa  Timur  yang  diambil  pada  bulan  Maret  2016. Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah Staphylococcus aureus ATCC 6538 yang diperoleh dari Laboratorium Mikrobiologi  Farmasi  Unika  Widya  Mandala Surabaya.  Bahan-bahan  penelitian  yang  digunakan seperti etanol 96% teknis (Brataco, Indonesia), kertas saring,  kertas  saring  bebas  abu,  spiritus,  ½  Mc Farland  I,  akuades,  larutan  kristal  violet  1%, penampak  noda  (FeCl 3 , Liebermann-Burchard , Dragendorff ,  AlCl 3 ). n -heksana  dan  etil  asetat (Brataco,  Indonesia),  metanol,  Tetrasiklin  HCl, Tween  2%,  DMSO,  Trypticase  Soy  Agar  ( E.Merck , Jerman),  Trypticase  Soy  Broth  ( E.Merck ,  Jerman), Mueller  Hinton  Agar  ( E.Merck ,  Jerman),  Mueller Hinton Broth ( E.Merck , Jerman).
Alat
Oven ( Memmert , 854,
Schwabach, Jerman), Laminar  Air  Flow (Type  V-130), inkubator  ( Memmert ,  Jerman),  autoklaf  ( All American , Amerika), timbangan analitis ( Sartorius ,  Jerman),  tabung  reaksi,  cawan  petri, gelas  beker,  erlenmeyer, vortex ( Labinco  BV , Belanda), microplate  96  well  (Iwaki ,  Jepang) , microplate  reader ( Thermofisher  Scientific  Oy , Finlandia), micropipet ( Scilogex ,  Amerika),  pipa kapiler,  corong  pisah,  cawan  porselen,  lemari pendingin  ( Hitachi ,  Jepang), hot  plate dan magnetic  stirer ( Faithful  SH-3 ,  China),  jangka sorong ( Mitutoyo , Jepang), perforator.

## Tahapan Penelitian
Proses Fraksinasi Ekstrak Biji kelengkeng Serbuk  simplisia  biji  kelengkeng  ( Euphoria longan Lour.  Steud.)  diekstraksi  dengan  metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%  dan diremaserasi  sebanyak  3  kali.  Ekstrak  yang diperoleh  dilakukan  fraksinasi  dengan  metode fraksinasi  cair-cair  menggunakan  pelarut n -heksan, etil asetat dan metanol-air.

## Uji  Aktivitas  Antibakteri  Fraksi  dengan  Metode Difusi
Uji  aktivitas  antibakteri  fraksi  dari  ekstrak etanol biji kelengkeng dilakukan dengan menggunakan  metode  difusi  sumuran.  Suspensi bakteri uji yang sudah disetarakan dengan  ½ Mc Farland  I  (~1,5  x  10 8 CFU/ml)  diinokulasikan sebanyak  200  μl  ke  dalam  25  ml  media  MHA 50°C  dan  dihomogenkan  menggunakan vortex . Media MHA yang telah diinokulsikan dipindahkan  ke  dalam  cawan  petri  steril  dan dirotasi.  Pra-pengeraman  dilakukan  selama  1,5-2 jam pada suhu 37°C. Sumuran dibuat menggunakan perforator dengan diameter 6 mm. Masing-masing  larutan  uji  fraksi  biji  kelengkeng (konsentrasi 100000 ppm) dimasukkan sebanyak 20  μl  ke  dalam  sumuran,  Tetrasiklin  HCl  30  μg sebanyak  20μl  yang  dimasukkan  ke  dalam sumuran  digunakan  sebagai  kontrol  positif, DMSO 2,5% sebanyak 20µl dimasukkan ke dalam sumuran sebagai kontrol negatif. Media diinkubasi  selama  24  jam  dengan  suhu  37°C. Diameter  hambat  pertumbuhan  diukur  dengan jangka sorong

## Uji Aktivitas Penghambatan Pembentukan Biofilm Fraksi dengan Metode Mikrodilusi
Pengujian  aktivitas  antibiofilm  dilakukan dengan metode mikrodilusi. Microplate U-bottom
96  well masing-masing  diisi  dengan  larutan  uji fraksi  biji  kelengkeng  (berbagai  konsentrasi dengan  konsentrasi  awal  100000  ppm)  sebanyak 100  μl,  suspensi  bakteri  yang  sudah  disetarakan dengan  ½  Mc  Farland  I  sebanyak  20  μl  pada masing-masing  sumuran,  dan  TSB  ( Trypticase Soy  Broth )  yang  mengandung  glukosa  2,5% sebanyak  100  μl.  Sebagai  kontrol  positif pembanding  digunakan  tetrasiklin  HCl  30  μg/20 μl  sebanyak  100  μl. Microplate ditutup  dengan parafilm dan diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37°C (dalam kondisi lembab). Setelah inkubasi, isi sumuran  dibuang  dan  dibilas  3  kali  dengan  air mengalir  dan  dikeringkan  dalam  inkubator  37°C selama  15  menit.  Masing-masing  sumuran  diberi kristal  violet  1%  sebanyak  200  μl  dan  didiamkan selama  15  menit  pada  suhu  ruang  yang  berguna untuk  mewarnai  biofilm  yang  terbentuk. Microplate dicuci  atau  dibilas  dengan  air mengalir  sebanyak  2  kali.  Masing-masing sumuran  diberi  Tween  2%  sebanyak  200  μl  dan didiamkan selama 15 menit yang digunakan untuk melarutkan  cincin  biofilm  yang  terbentuk. Microplate  reader dimasukkan  dan  di shake selama 30 detik, serta dibaca densitas optik pada λ  595  nm.  Hitung  persen  penghambatan pembentukan biofilmnya.
x 100%
Keterangan: DO = Densitas Optik DO sampel = DO rata-rata abs. sampel – DO rata-rata abs. Blanko negatif fraksi DO blanko positif                      = DO rata-rata abs. Blanko positif – DO rata-rata abs. blanko negatif media Blanko negatif fraksi = media pertumbuhan dengan fraksi biji kelengkeng Blanko positif = media pertumbuhan dengan suspensi bakteri
Blanko negatif media              = media pertumbuhan
Skrining  Fitokimia  dengan  Kromatografi  Lapis Tipis (KLT)
Kromatografi  Lapis  Tipis  (KLT)  dilakukan menggunakan  plat  silika  gel  F 254 .  Larutan  dari fraksi  yang  digunakan  adalah  fraksi  yang  paling aktif sebagai antibakteri dan antibiofilm ditotolkan  sebanyak  4  µl  pada  plat  KLT  dan dieluasi  dengan  menggunakan  fase  gerak metanol:etil  asetat  (8:2)  ditambah  asam  formiat sebanyak  1  tetes  (0,05  ml/50  µl).  Diamati  pada sinar UV 254nm dan UV 366nm, serta disemprot dengan  berbagai  penampak  noda  seperti  FeCl 3 (Tanin), Dragendroff (Alkaloid), Liebermann Burchard (Saponin  Steroid/Triterpenoid),  dan AlCl 3 (Flavonoid)  untuk  mengetahui  golongan senyawa  yang  mempunyai  aktivitas  antibakteri dan antibiofilm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  yang  didapatkan  dari  uji  aktivitas antibakteri (Tabel 1 dan Gambar 1) menunjukkan bahwa  fraksi  etil  asetat  memiliki  daerah  hambat pertumbuhan yang paling besar, yaitu 14,59 mm ± 0,01  dibandingkan  dengan  fraksi n -heksan  (7,15
mm  ±  0,63)  dan  fraksi  air  (12,52  mm  ±  0,40). Tetrasiklin sebagai blanko positif memiliki daerah hambat  pertumbuhan  sebesar  18,4  mm  ±  0,14. Hasil  DHP  fraksi  etil  asetat  yang  besar  dapat diduga  bahwa  senyawa  metabolit  sekunder  yang aktif  sebagai  antibakteri  pada  biji  kelengkeng seperti tanin,  saponin  lebih  banyak  tersari  dalam pelarut etil asetat. Dari hasil yang didapat terbukti bahwa fraksi etil asetat sebagai fraksi yang paling aktif  dalam  aktivitas  antibakteri.  DMSO  yang digunakan  sebagai  blanko  negatif  tidak  meng- hasilkan  daerah  hambat  pertumbuhan.  Hasil  ini menunjukkan  bahwa  DMSO  tidah  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC  6538  sehingga  dapat  digunakan  sebagai pelarut.
Pada  uji  aktivitas  antibiofilm  kontrol negatif  berisi  media  TSB  yang  mengandung glukosa  2,5%  dimana  glukosa  digunakan  untuk membantu  pertumbuhan  dari  biofilm  (Archer et al .,  2011)  sedangkan  kontrol  positif  berisi  media TSB yang mengandung glukosa 2,5% dan suspensi bakteri.  Hasil  dari  persentase  penghambatan biofilm yang terbaik dimiliki oleh fraksi etil asetat
pada  konsentrasi  100000  ppm  adalah  99,08% (Tabel 2 dan Grafik 2). Hal ini dapat dilihat pada konsentrasi  100000  ppm  fraksi n -heksan memiliki  persentase  penghambatan  biofilm  yang melebihi 100% dan fraksi air memiliki persentase penghambatan  biofilm  97,31%.  Pada  konsentrasi 100000  ppm  hasil  data  fraksi n -heksan persentasenya  melebihi  100%  disebabkan  karena absorbansi  sampel  lebih  kecil  dibandingkan dengan  absorbansi  blanko  fraksi n -heksan sehingga data tidak dapat digunakan. Absorbansi sampel  yang  lebih  kecil  dari  absorbansi  blanko fraksi  dikarenakan  konsentrasi  fraksi n -heksan yang  tinggi  sehingga  menyebabkan  pembentukan lapisan pada dinding sumuran microplate sehing-
ga  saat  dicuci  lapisan  tersebut  masih  menempel. Pada  grafik  hasil  persentase  penghambatan biofilm, pola grafik fraksi etil asetat menunjukkan garis  yang  turun  naik  namun  masih  mendekati 100%  dibandingkan  garis  fraksi n -heksan  yang semakin  menjauhi    persentase  100%  dan  garis fraksi  air  yang  berada  dibawah  fraksi  etil  asetat. Pola  grafik  Tetrasiklin  HCl  juga  menunjukkan hasil  yang  turun  naik  mendekati  100%  (Tabel  3 dan  Grafik  3).  Hasil  ini  menunjukkan  bahwa fraksi etil asetat memiliki aktivitas penghambatan biofilm yang paling mendekati dengan Tetrasiklin HCl.  Fraksi  etil  asetat  digunakan  sebagai  fraksi aktif  untuk  skrining  fitokimia  dengan  metode kromatografi lapis tipis.
Tabel 1. Hasil uji aktivitas antibakteri fraksi etanol biji kelengkeng ( Euphoria longan Lour. Steud.) terhadap
Staphylococcus aureus ATCC 6538 dengan metode difusi Sampel Diameter Hambat Pertumbuhan (mm)* Rata-rata DHP (mm) 1 2 3 Fraksi n -Heksan 7,95 7,1 6,4 7,15 ± 0,63 Fraksi Etil asetat 15,1** 14,575 14,6 14,59 ± 0,01 Fraksi Air 12,125 12,5 12,925 12,52 ± 0,40 Tetrasiklin HCl (blanko positif 18,3 19,575** 18,5 18,4 ± 0,14 DMSO 2,5% (blanko negatif) - - - - *Diameter sumuran 6 mm **Data tidak dipakai
Gambar  1. Hasil  uji  antibakteri  fraksi  ekstrak etanol  biji  kelengkeng  ( Euphoria  longan Lour. Steud.)  terhadap  Staphylococcus  aureus  ATCC 6538
Keterangan: A= Fraksi n-heksan 100.000 ppm; B= Fraksi etil asetat  100000  ppm;  C=  Fraksi  air  100000  ppm;  D= TetrasiklinHCl  konsentrasi  400  ppm  (blanko  positif);  E= DMSO 2,5% (blanko negatif).
Pada  skrining  fitokimia  dengan  metode kromatografi  lapis  tipis,  fraksi  etil  asetat  dieluasi dengan  eluen  metanol:etil  asetat  (8:2)  dan ditambahkan asam formiat 1 tetes (0,05 ml/50 µl) Hasil KLT fraksi etil asetat dari ekstrak etanol biji kelengkeng  ( Euphoria  longan (Lour.)  Steud.) menunjukkan adanya golongan senyawa tanin/polifenol,  flavonoid  dan  saponin  triter- penoid  (Tabel  4  dan  Gambar  4).  Hasil  tersebut ditemukan  pada  fraksi  etil  asetat  karena  sifatnya
yang  mengarah  ke  polar.  Tanin/polifenol  ditun- jukkan  dengan  adanya  warna  biru  kehitaman setelah  disemprot  dengan  pereaksi  FeCl 3 dan dilihat secara visual. Flavonoid ditunjukan dengan adanya  warna  kuning  setelah  disemprot  dengan pereaksi  AlCl 3 dan  ber flouresence saat  dilihat pada  UV  366  nm. Saponin  triterpenoid ditunjuk- kan  dengan  warna  oranye  setelah  disemprot dengan  pereaksi Liebermann-Burchard dan dilihat secara visual.
Tanin  berfungsi  sebagai  antibakteri  yang akan mengganggu sintesa peptidoglikan sehingga pembentukan dinding sel menjadi tidak sempurna.  Mekanisme  kerja  tanin  sebagai antibakteri  adalah  menginaktivasi  adhesin  sel bakteri yang terdapat pada permukaan sel (Naim, 2014).  Tanin  juga  dapat  mengakibatkan  keru- sakan pada dinding sel dan merupakan salah satu senyawa  fenol.  Polifenol  dapat  merusak  struktur protein karena berikatan dengan protein. Protein sebagian besar berada di struktur dinding sel dan membran  sitoplasma.  Sel  bakteri  menjadi kehilangan  bentuk  dan  terjadi  lisis  diakibatkan karena  ketidakstabilan  pada  dinding  sel  dan membran  sitoplasma.  Ketidakstabilan  ini  menye- babkan fungsi permeabilitas selektif, pengangkutan  aktif  dan  pengendalian  susunan protein terganggu.
Mekanisme kerja flavonoid sebagai antibakteri, yaitu menghambat enzim DNA girase, merusak  membran  lipid  bilayer  dan  merusak fungsi  barier  dari  membran,  menghambat  proses respirasi  dan  menghambat  enzim  NADH- sitokrom  reduktase  (Cushnie  dan  Lamb,  2005). Flavonoid  memiliki  mekanisme  kerja  yang  sama seperti  senyawa  fenolik.  Mekanisme  kerja  dari
saponin  triterpenoid  sebagai  antibakteri,  yaitu merusak  membran  sel  yang  dapat  menyebabkan
kematian sel (Monalisa dkk, 2011).
Tabel 2. Hasil persentase rata-rata penghambatan biofilm Staphylococcus aureus ATCC 6538 oleh fraksi ekstrak biji kelengkeng ( Euphoria longan Lour. Steud.) Sampel % Penghambatan Biofilm 100000 ppm 50000 ppm 25000 ppm 12500 ppm 6250 ppm 3125 ppm 1562,50 ppm 781,25 ppm Fraksi n -Heksan >100 97,62 93,70 84,27 87,60 42,39 60,21 19,32 Fraksi Etil asetat 99,08 99,03 98,32 87,90 82,70 92,03 93,12 94,48 Fraksi Air 97,31 96,76 67,10 76,59 87,91 90,67 88,45 85,15
Tabel 3. Hasil persentase rata-rata penghambatan biofilm Staphylococcus aureus ATCC 6538 oleh pembanding (Tetrasiklin HCl) Sampel % Absorbansi Tetrasiklin HCl 400 ppm 200 ppm 100 ppm 50 ppm 25 ppm 12,5 ppm 6,25 ppm 3,125 ppm Tetrasiklin HCl 99,89 99,11 99,77 99,65 99,67 99,75 99,88 >100
Gambar 2. Grafik persentase penghambatan biofilm Staphylococcus aureus ATCC 6538 terhadap fraksi ekstrak etanol biji kelengkeng ( Euphoria longan Lour. Steud.)
Gambar 3. Grafik persentase penghambatan biofilm Staphylococcus aureus ATCC 6538 terhadap tetrasiklin HCl pada berbagai konsentrasi
Gambar 4. Profil KLT fraksi etil asetat dari ekstrak etanol biji kelengkeng ( Euphoria longan (Lour.) Steud.) dengan fase diam silika gel F 254 dan fase gerak metanol:etil asetat (8:2) ditambah asam formiat 1 tetes (a)UV 254 nm (b) UV 366 nm (c) AlCl 3 (d) Dragendorff (e) Liebermann-Burchard (f) FeCl 3
Tabel 4. Hasil perhitungan nilai Rf kromatografi lapis tipis fraksi etil asetat dari ekstrak etanol biji kelengkeng ( Euphoria longan (Lour.) Steud.) Rf UV 254 nm UV 366 nm AlCl 3 Dragendorff  Liebermann- Burchard FeCl 3 0,00- 0,10 - - - - - - 0,11- 0,20 - - - - - - 0,21- 0,30 - - - - - - 0,31- 0,40 - - - - - - 0,41- 0,50 - - - - 0,48 - 0,51- 0,60 0,55 0,55 - - - 0,55 (biru kehitaman) 0,61- 0,70 - - 0.62 - - 0,64 (biru kehitaman) 0,71- 0,80 - - - - 0,79 - 0,81- 0,90 - - - - - 0,82 0,91- 1,00 - - - - - -

## KESIMPULAN
Fraksi n -heksan,  fraksi  etil  asetat,  dan fraksi  air  dari  ekstrak  etanol  biji  kelengkeng ( Euphoria longan Lour. Steud.) memiliki aktivitas sebagai  antibakteri  dan  antibiofilm  terhadap Staphylococcus aureus  ATCC  6538.  Fraksi  etil asetat  dari  ekstrak  etanol  biji  kelengkeng ( Euphoria  longan Lour.  Steud.)  konsentrasi 100000  ppm  mempunyai  aktivitas  antibakteri terbesar  terhadap Staphylococcus  aureus ATCC 6538  dengan  DHP  sebesar  14,59  ±  0,01  mm.
Fraksi  etil  asetat  dari  ekstrak  etanol  biji kelengkeng  ( Euphoria  longan Lour.  Steud.) konsentrasi  100000  ppm  memiliki  aktivitas antibiofilm tertinggi pada bakteri Staphylococcus aureus ATCC 6538 dengan persen penghambatan pembentukan  biofilm  99,08  %.  Fraksi  etil  asetat merupakan  fraksi  yang  paling  besar  aktivitas antibakteri dan antibiofilm mengandung golongan senyawa  flavonoid,  tanin/polifenol  dan  saponin triterpenoid.

## DAFTAR PUSTAKA
Archer,  N.K.,  Powers,  M.E.,  Leid,  J.G.,  Costerton,  J.W., Mazaitis, M.J., and Shirtliff, M.E. 2011. Staphylococcus aureus Biofilm:  Properties,  Regulation  and  Roles  in  Human  Disease, Landes Bioscience , 2(5): 445-459.
Boulton  A.  J,  Krisner  S.,  Vileykite  L.,2004,  Neurophatic diabetic foot ulcers, N Engl J Med , 351(1): 48 – 55.
Brand PW. The foot in diabetes.in Rifkin H,Raskin P ; Diabetes mellitus ,  vol  v,  American  Diabetes  Association,  Prentice-Hall International, Maryland 2000, 291-5.
Cushnie, T. P. T. and Lamb, A. J. 2005. Antimicrobial Activity of Flavonoids, International Journal of Antimicrobial Agents , 26(5): 343-356.
Drecoli, E., Karimi, J., Manaf, A., Syahbuddin, S. 2007. Artikel Penelitian : Profil Ulkus Diabetik pada Penderita Rawat Inap di Bagian Penyakit Dalam RSUP. Dr. M. Djamil Padang. (Akses: 11 Februari 2016, 23:40).
Haris et  al .  2002.  An  Introduction  to  Staphylococcus  aureus, and  Techniques  for  Identifying  and  Quantifying  S.  aureus Adhesins  in  Relation  to  Adhesion  to  Biomaterials  Review. European Cells and Materials Vol. 4.
John  L.,  Mark  E.,  Roger  G.  2006. Biofilms,  Infection,  and Antimicrobial  Therapy .  CRC  Press  Taylor  &  Francis  Group, New York.
Kementrian  Negara  Riset  dan  Teknologi.  2006. Euphoria longana Lamk., WARINTEK .  Diakses  pada  21  Juni  2016, http://warintek.ristekdikti.go.id/pangan_kesehatan/tanaman obat/depkes/4-037.pdf .
Melchoir, MB, H Vaarkamp and J Fink-Gremmels, 2006. Bio
fillm: Arole in recurrent mastitis infection ? The Vet. Journal . 171: 398–407.
Monalisa,  D., Handayani,  T.,  Sukmawati,  D., 2011, Uji  Daya Antibakteri  Ekstrak    daun    Tapak    Liman    ( Elephantopus scaber L.)  Terhadap Staphylococcus  aureus dan Salmonella typhi , Jurnal  BIOMA .  9(2): 13 –20.
Naim,  R.  2014, Senyawa  Antimikroba  Dari  Tumbuhan , Fakultas  Kedokteran  Hewan  Dan  Sekolah  Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Paraje, M. G. et al . 2011. Antimicrobial resistance in biofilms . Argentina: Formatex.
Santi,  R.  N.,  Muhtadi,  Indrayudha,  P.  2010.    Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Biji dan Kulit Lengkeng ( Euphoria longan Lour.  Steud.)  terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus serta  Toksisitasnya  terhadap Artemia salina Leach. Jurnal  Farmasi  Indonesia  Pharmacon (Pharmaceutical  Journal  of  Indonesia) .  Surakarta:  Fakultas Farmasi Muhammadiyah Surakarta.
Soong,  Y.  Y.  dan  Barlow,  P.  J.  2005.  Isolation and  Structure Elucidation of Phenolic Compounds from longan ( Dimocarpus longan Lour.)  seed  by  High  Performance  Liquid Chromatography-Electrospray  Ionization  Mass  Spectrometry, Journal of  Chromatography      A ,1085(2):        270-277. PMid:16106708.http://dx.doi.org/10.1016/j. chroma.2005.06.042
Tjokroprawiro,  A.  2007. Buku  ajar  ilmu  penyakit  dalam . Airlangga University Press, Surabaya.
Waspaji,  S.  2006. Buku  Ajar  Ilmu  Penyakit  Dalam  Edisi  IV . Jakarta: Pusat Penerbitan IPD FKUI.