# Korespondensi: Prodi Ilmu Perikanan Fakultas Perikanan dan Kelautan  Universitas PGRI Ronggolawe E-mail: rahmaningsihsri@yahoo.co.id
Tersedia online di: http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jkpt

## GAMBARAN HEMA GAMBARAN HEMA GAMBARAN HEMA
GAMBARAN HEMA GAMBARAN HEMATOKRIT D TOKRIT D TOKRIT D TOKRIT D TOKRIT DARAH IK ARAH IK ARAH IK ARAH IK ARAH IKAN LELE SANGKURIANG ( AN LELE SANGKURIANG ( AN LELE SANGKURIANG ( AN LELE SANGKURIANG ( AN LELE SANGKURIANG ( Clarias Gariepinus Clarias Gariepinus Clarias Gariepinus Clarias Gariepinus Clarias Gariepinus))))) YYYYYANG DIBERI  P ANG DIBERI  P ANG DIBERI  P ANG DIBERI  P ANG DIBERI  PAK AK AK AK AKAN  SERBUK D AN  SERBUK D AN  SERBUK D AN  SERBUK D AN  SERBUK DAUN MAJAP AUN MAJAP AUN MAJAP AUN MAJAP AUN MAJAPAHIT ( AHIT ( AHIT ( AHIT ( AHIT ( Cr Cr Cr Cr Cresentia cujete esentia cujete esentia cujete esentia cujete esentia cujete L.) D L.) D L.) D L.) D L.) DAN AN AN AN AN DIINFEKSI DENGAN BAK DIINFEKSI DENGAN BAK DIINFEKSI DENGAN BAK DIINFEKSI DENGAN BAK DIINFEKSI DENGAN BAKTERI TERI TERI TERI TERI AEROMONAS HYDROPHIL AEROMONAS HYDROPHIL AEROMONAS HYDROPHIL AEROMONAS HYDROPHIL AEROMONAS HYDROPHILAAAAA
Sri Rahmaningsih
Sri Rahmaningsih Sri Rahmaningsih Sri Rahmaningsih
Sri Rahmaningsih # # # # # , Muhammad Zenuddin, dan Achmad Sudianto , Muhammad Zenuddin, dan Achmad Sudianto , Muhammad Zenuddin, dan Achmad Sudianto , Muhammad Zenuddin, dan Achmad Sudianto , Muhammad Zenuddin, dan Achmad Sudianto
Prodi Ilmu Perikanan Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas PGRI Ronggolawe
Jl Manunggal No 61 Tuban , 0356-322233 Faks, 0356-331578
E-mail : rahmaningsihsri@yahoo.co.id
(Diterima: 29 November 2018; Diterima setelah perbaikan: 14 Desember 2018; Disetujui: 18 Desember 2018)
ABSTRAK ABSTRAK ABSTRAK ABSTRAK ABSTRAK
Pengukuran hematologis darah ikan dapat dijadikan sebagai indikator kesehatan ikan. Salah satu penyakit yang sering menyerang pada budidaya ikan lele sangkuriang ( Clarias Gariepenus))))) adalah penyakit bercak merah atau penyakit MAS ( Motile Aeromonas Septicemia) yang dapat menyebakan tingkatmortalitas tinggi. Penyakit ini disebabkan oleh bakteri Aeromonas hydrophila, yang termasuk bakteri gram negatif. Salah satu alternatif yang digunakan untuk mengatasi permasalahan serangan penyakit adalah dengan menggunakan bahan alami yang aman dan ramah lingkungan. Tumbuhan   dapat dijadikan sebagai antibakteri dan imunostimulan, misalnya  tumbuhan majapahit ( Crescentia cujete L.) yang mempunyai kandungan kimia pada daun, batang dan daun.  Kandungan  bahan aktif tersebut  adalah flavonoid, tanin, polifenol dan saponin. Penggunaan imunostimulan dalam budidaya perikanan dilaporkan dapat meningkatkan ketahanan tubuh terhadap resistensi patogen selama masa periode stress seperti saat griding, reproduksi, pengangkutan dan vaksinasi. Kadar  hematokrit  adalah salah satu parameter hematologis yang  digunakan untuk  mengetahui  dampak infeksi  dari A.  Hydrophila. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh  serbuk daun majapahit (Crescentia cujete L.)  sebagai bahan imunostimulan  pada benih ikan lele sangkuriang  ( Clarias gariepenus) yang terinfeksi  oleh bakteri Aeromonas hydrophyla terhadap gambaran hematokritnya . Metode yang dipakai adalah menggunakan Rancangan Acak Lengkap dengan  4 perlakuan dan 3 x ulangan serta analisa data menggunakan ANOVA. Kesimpulan dari hasil penelitian ini menunjukkan bahwa dosis terbaik yang menunjukkan nilai hematokrit tertinggi adalah pada perlakuan A dengan dosis 7.5%.
KKKKKA AA AATTTTTA KUNCI: Hematokrit;
A KUNCI: Hematokrit; A KUNCI: Hematokrit; A KUNCI: Hematokrit; A KUNCI: Hematokrit; Aer Aer Aer Aer Aeromonas hydr omonas hydr omonas hydr omonas hydr omonas hydrophila ophila ophila ophila ophila; lele sangkuriang; ; lele sangkuriang; ; lele sangkuriang; ; lele sangkuriang; ; lele sangkuriang; Cr Cr Cr Cr Crescentia cujete escentia cujete escentia cujete escentia cujete escentia cujete ABSTRACT ABSTRACT ABSTRACT ABSTRACT ABSTRACT
Hematological measurements of fish blood can be used as indicators of fish health. One of the diseases that often attacks the sangkuriang catfish culture ( Clarias Gariepenus) is a red spot disease or called MAS (Motile Aeromonas Septicemia) that can cause a high mortality rate. This disease was caused by the bacterium Aeromonas hydrophila, which includes gram negative bacteria. One alternative that is used to overcome the problem of disease attacks is to use natural materials that are safe and environmentally friendly. Plants can be used as antibacterial and immunostimulant, for example majapahit plants ( Crescentia cujete L.) which have a chemical content in leaves, stems and leaves. These active ingredients are flavonoids, tannins, polyphenols and saponins. The use of immunostimulants in aquaculture was  reported to increase the body’s resistance to pathogenic resistance during periods of stress such as griding, reproduction, transportation and vaccination. Hematocrit levels are one of the haematological parameters used to determine the effect of infection from A. Hydrophila. This study aims to determine the effect of majapahit leaf powder ( Crescentia cujete L.) as an immunostimulant on sangkuriang catfish seeds (Clarias gariepenus)
PENDAHULUAN

## PENDAHULUAN PENDAHULUAN PENDAHULUAN PENDAHULUAN
Penyakit yang sering berkembang pada kegiatan akuakultur, salah satunya dalam budidaya ikan lele ( Clarias sp) adalah penyakit bercak merah yang disebabkan oleh bakteri Aeromonas hydrophila.Bakteri Aeromonas hydrophila merupakan bakteri gram negatif, yang bersifat pathogen pada ikan. Bakteri A. hydrophila merupakan bakteri patogen oportunistik penyebab penyakit MAS ( Motile Aeromonas Septicemia)yang banyak menyerangpada budidaya ikan air tawar di Indonesia di antaranya; ikan lele ( Clarias sp),  ikan mas (Cyprinus carpio), patin (Pangasius sp.), betutu ( Osphronemous marmorata) dan gurame ( Osphronemous. gouramy).
Budidaya ikan Lele sangkuriang ( Clarias gariepenus) cukup berkembang di Kabupaten Tuban karena  lebih menguntungkan dan mudah dalam  pengelolaannya serta dalam pemeliharaannya.  Masalah yang dihadapi olehpetani ikandiantaranya  adalah tingkatmortalitas tinggi yang disebaban oleh  penyakit bakterial khususnya penyakit MAS yang disebabkan oleh bakteri A. hydrophila.Penggunaan imunostimulan dalam budidaya perikanan dilaporkan dapat meningkatkan ketahanan tubuh terhadap resistensi patogen selama masa periode stress seperti saat griding, reproduksi, pengangkutan dan vaksinasi (Bricknell dan Dalmo, 2005). Penggunaan imunostimulan sebagai pakan suplemen dapat meningkatkan pertahanan alami sehingga resisten terhadap patogen. Imunostimulan tidak memperlihatkan efek samping yang negatif sebagaimana antibiotik terhadap lingkungan (Kumari dan Sahoo 2006 dalam Jasmanindar, 2009). Penggunaan imunostimulan berbahan tumbuhan ataupun rumput laut telah banyak dilakukan penelitian terhadap respon imun udang vannamei salah satunya yang dilakukan oleh Ridho dan Pramesti, (2009) menyatakan bahwa pemberian ekstrak rumput laut Sargassum  sp., Dictyota  sp. dan Padina  sp., mampu meningkatkan aktivitas fagositosis udang Litopenaeus vannamei terutama pada hari ke-8, hal ini disebabkan dalam ketiga jenis rumput laut tersebut mengandung senyawa polisakarida alginat. Menurut Cheng et al. (2005), sodium alginat dapat   meningkatkan aktifitas fagositosis udang. Disamping itu, Subagiyo (2009) menyatakan bahwa ekstrak rumput laut jenis Halimeda sp. dapat meningkatkan aktifitas fagositosis pada hari ke-12 sebesar 76,78%.
Berdasarkan penelitian terdahulu secara in vitro maupun insilico penggunaan tanaman majapahit ( Crescentia cujete L) baik pada bagian batang, daun dan buah terbukti dapat menghambat pertumbuhan bakteri Vibrio harveyi (Rahmaningsih dan Jumiati (2016), ikan lele (Purwanti, 2016) ikan nila (Lutfi, 2017) serta berpengaruh terhadap sistem imun udang vannamei (Rahmaningsih dan Andriani, 2016). Berdasarkan uji fitokimia pada penelitian terdahulu menurut Rahmaningsih dan Jumiati, (2016) kandungan bahan aktif yang terkandung pada daun dan batang adalah tanin, saponin, triterpenoid dan steroid,sedangkan bahan aktif yang terkandung pada buah majapahit  adalah flavonoid, saponin dan triterpenoid (Rahmaningsih, 2017).Pengunaan buah dan daun maja sebagai anti bakteri pernah dilakukan penelitian pada bakteri Staphylococus aureus, Aeromonas salmonicidaI, V. harveyi dan V. alginolyticus secara in vitro. Penelitian secara in vivo juga telah dilakukan pada ikan lele yang terinfeksi bakteri Aeromonas hydropila(Purwanti, 2016) dan pada ikan nila (Lutfi, 2017), Vibrio harveyi pada udang vannamei (Rahmaningsih dan Andriani, 2016).  Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui pengaruh serbuk daun majapahit (Crescentia cujete L.)   sebagai bahan imunostimulan  pada benih ikan lele sangkuriang ( Clarias gariepenus) yang terinfeksi  oleh bakteri Aeromonas hydrophyla terhadap parameter hematokritnya.

## BAHAN DAN METODE BAHAN DAN METODE BAHAN DAN METODE BAHAN DAN METODE BAHAN DAN METODE
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Ilmu Perikanan Fakultas Perikanan dan Kelautan UNIROW pada bulan Maret sampai Mei 2018. Alat yang digunakan antara lain: Akuarium, gelas ukur, tabung reaksi, mikropipet, mikroskop, lemari pendingin, hemositometer, dan peralatan kualitas air untuk mengukur DO, suhu, pH, dan amonia.Bahan yang digunakan: ikan lele sangkuriang ( Clarias gariepenus)dengan berat rata-rata 10gram/ekor sebanyak 100 ekor, larutan Turk, heyem, kapas, tis- sue, aquadest, alkohol 70 %, darah  ikan, es, antikoagulan (Na-Sitrat 3,8%), metil alkohol, dan Gi- emsa.
Ikan lele dipelihara dalam aquarium berkapasitas 20 liter air selama 28 hari dan diberi pakan  pelet komersil yang dicampur dengan serbuk daun majapahit
which is infected by the bacterium Aeromonas hydrophyla against the hematocrit picture. The method used is using a completely randomized design with 4 treatments and 3 x replications and data analysis using ANOVA. Conclusions from the results of this study indicate that the best dose that shows the highest hematocrit value is in treatment A with a dose of 7.5%
KEYWORDS: Hematokrit; KEYWORDS: Hematokrit; KEYWORDS: Hematokrit; KEYWORDS: Hematokrit; KEYWORDS: Hematokrit; Aeromonas hydrophila Aeromonas hydrophila Aeromonas hydrophila Aeromonas hydrophila Aeromonas hydrophila; sangkuriang catfish
; sangkuriang catfish ; sangkuriang catfish ; sangkuriang catfish ; sangkuriang catfish Crescentia cujete Crescentia cujete Crescentia cujete Crescentia cujete Crescentia cujete
dengan menggunakan perekat progol.  Pakan diberikan sebanyak 5% dari berat badan ikan dan diberikan dua kali sehari yaitu pagi pukul   08.00 pagi dan sore pukul 16.00 selama satu bulan.Perlakuan dalam penelitian ini sebanyak  4 perlakuan dengan masing-masing 3 kali ulangan, yaitu ; Perlakuan A: pakan komersil + 7.5%  serbuk daun majapahit, perlakuan B: pakan komersil + 10% serbuk daun majapahit dan Perlakuan C :pakan komersil + 12,5%  serbuk daun majapahit dan perlakuan D: kontrol (pakan pelet komersial).
Penghitungan  kadar  hematokrit  dilakukan  untuk melihat  perubahan hematokrit  yang  terjadi  setelah ikan diberi pakan dengan campuran serbuk daun majapahit  dan setelah diinfeksi dengan  bakteri A. hydrophila. Penginfeksian dilakukan dengan perendaman, setelah muncul gejala klinis penyakit MAS yaitu setelah hari ke-3 kemudian dilakukan pengukuran nilai hematokrit.Pengukuran menggunakan tabung mikrohematokrit berupa pipa kapiler yang berlapis
heparin. Sampel darah dihisap dengan menggunakan pipa kapiler, sampai  pada ¾ bagian kapiler, kemudian ditutup dengan bahan penutup (lilin). Pipa kapiler yang berisi darah kemudian disentrifuse dengan kecepatan 1500 rpm selama 5 menit. Pembacaan dilakukan dengan membandingkan bagian darah yang mengendap dengan seluruh bagian darah yang ada di dalam tabung mikrohematokrit, menggunakan mikrohematokrit skala dan hasilnya dinyatakan dalam persen (%) (Angka et al. 1985) dalamDopongtonung (2008).

## HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL DAN PEMBAHASAN HASIL DAN PEMBAHASAN
Hematokrit digunakan untuk mengukur perbandingan antara eritrosit dengan plasma, sehingga hematokrit memberikan rasio total eritrosit dengan total volume darah dalam tubuh Hasil pengukuran hematokrit selama penelitian di tampilkan pada tabel 1 dibawah ini :
Tabel 1.     Kadar hematokrit pada ikan lele sangkuriang selama penelitian
Perlakuan Kadar hematokrit (%) Awal penelitian Setelah pemeliharaan selama 30 hari Setelah infeksi hari ke-3 A 35,17 ± 0,69 15,12 ± 0,25 25,42 ±0,41 B 17,99 ± 0,13 25,94 ± 0,17 25,13 ± 0,14 C 22,40 ± 0,44 22,47 ± 0,50 24,09 ± 0,03 K 18,41 ± 0,36 39,04 ± 0,12 32,04 ± 018
sumber ragam DB jumlah kuadrat kuadrat tengah f hitung f tabel 1% f tabel 5% perlakuan 2 203,20 101,60  752,60 18,00 5,14 Galat 6 0,81  0,14 Total 8  204,01 101,74
Dari Tabel 1 diatas menunjukkan bahwa semua perlakuan memberikan pengaruh yang hampir sama yaitu terjadi peningkatan prosentase hematokrit pasca ikan diinfeksi dengan bakteri A. hydrophila, kecuali perlakuan B yang justru menurun meskipun tidak banyak.  Dari data yang diperoleh selanjutnya dilakukan analisa ANOVA, hasil analisa menunjukkan bahwa perlakuan memberikan pengaruh sangat nyata.
Dari Tabel 2 diatas dapat diketahui  bahwa F hitung lebih besar dari F tabel 1%dan 5%,sehingga  perlakuan memberikan pengaruh yang sangat nyata pada penelitian. Fujaya  (2004) menyatakan  bahwa  terdapat korelasi yang  kuat  antara  hematokrit  dan jumlah hemoglobin  darah,  dimana semakin  rendah  jumlah
Tabel 2. Hasil analisa sidik ragam perlakuan
sel-sel  darah merah  maka  semakin  rendah  pula kandungan hemoglobin dalam darah.  Kadar hematokrit  ini  dapat digunakan untuk  mengetahui dampak infeksi  dari A.  hydrophila, sehingga dapat digunakan  sebagai  petunjuk kondisi  kesehatan  ikan setelah penginfeksian.  Gambar 1 menunjukkan terjadi peningkatan setelah 3 hari dilakukan penginfeksian.
Dari Gambar 1 dapat diketahui  bahwa kontrol tanpa pemberian serbuk daun majapahit dalam pakannya memiliki prosentase jumlah hematokrit yang lebih tinggi baik setelah perlakuan pemberian pakan selama 28 hari maupun setelah 3 hari ikan diinfeksi. Peningkatan prosentase hematokrit berkisar antara 24,09 ± 0,03 sampai 25,42 ±0,41. Hal ini sesuai
dengan penelitian yang dilakukan oleh Sa’diyah (2006) yang menyatakan  bahwa  kadar  hematokrit ikan  patin ( Pangasius hypophthalmus) yang  dipelihara  dengan pemberian pakan  mengandung  larutan  mahkota dewa ( Phaleria  macrocarpa) mengalami  peningkatan  setelah diinfeksi  dengan A.  hydrophila berkisar  antara  24,14- 26,18%. Sementara hasil berbeda dengan penelitian yang dilakukan oleh  Lukistyowati (2012),  kadar hematokrit  ikan  patin setelah  perendaman  dengan berbagai dosis  larutan  sambiloto  ( Andrographis paniculata  Ness)  mengalami penurunan  berkisar antara  10,70-24,30%  setelah  diinfeksi  dengan Edwardsiella  tarda. Hasil penelitian (Chen et  al., 2004) pada ikan nila menunjukkan bahwa  hematokrit, dan glukosa  dapat  menjadi  indikator  untuk menunjukkan kondisi kesehatan ikan. Menurut  Bond (1979) dalamSaragih et al, 2015)  kadar  hematokrit normal  pada ikan  teleostei  berkisar  antara  20-30% dan pada ikan laut bernilai sekitar 42% ,  ikan  yang mengalami  anemia mempunyai  persentase hematokrit minimum  10%.
Hematokrit adalah persentase eritrosit di dalam darah (Guyton 1997) dalam. Dopongtonung (2008). Hematokrit digunakan untuk mengukur perbandingan antara eritrosit dengan plasma, sehingga hematokrit memberikan rasio total eritrosit dengan total volume darah dalam tubuh. Nilai hematokrit adalah parameter yang berpengaruh terhadap pengukuran volume eritrosit, presentase nilai hematokrit ikan lele ( Clarias spp) normal berkisar antara 30,8 - 45,5% (Angka et al., 1985) dalam. Dopongtonung A. (2008).  Nilai hematokrit secara langsung berhubungan dengan jumlah eritrosit dan konsentrasi hemoglobin.  Maryani ( 2003) menyebutkan , nilai hematokrit yang lebih kecil dari 22% menunjukkan bahwa ikan mengalami anemia dan kemungkinan terinfeksi penyakit. Abdullah (2008) melaporkan bahwa nilai hematokrit akan mengalami
penurunan pada ikan lele ( Clarias spp) yang terinfeksi Aeromonas hydrophila. Menurut Irianto (2005), ane- mia pada  ikan juga dapat disebabkan oleh defisiensi Fe dan vitamin E di dalam pakan.

## KESIMP KESIMP KESIMP KESIMP KESIMPUL UL UL UL ULAN AN AN AN AN
Hasil penelitianmenunjukkan bahwa  berdasarkan analisa ANOVA perlakuan memberikan pengaruh yang sangat nyata pada penelitian dan  dosis terbaik yang menunjukkan nilai hematokrit tertinggi adalah pada perlakuan A dengan dosis 7.5%  dengan nilai peningkatan prosentase hematokrit berkisar antara 15,12 ± 0,25 sampai 25,42 ±0,41.
UC UC UC UC UCAP AP AP AP APAN TERIMA K AN TERIMA K AN TERIMA K AN TERIMA K AN TERIMA KASIH ASIH ASIH ASIH ASIH
Terima kasih penulis ucapkan kepada Universitas PGRI Ronggolawe Tuban yang telah mendanai penelitian ini melalui program Hibah DIPA UNIROW pendanaan tahun 2018 melalui Surat   kontrak  No. 07/SP2H/LEMLIT UNIROW/V/2018.
D D D D DAF AF AF AF AF TTTTTAR P AR P AR P AR P AR P UST UST UST UST USTAK AK AK AK AKAAAAA
Abdullah, Y. (2008).  Efektivitas Ekstrak Daun Paci – Paci Leucas Lavandulaefolia Untuk Pencegahan  dan Pengobatan Infeksi Penyakit Mas Motile Aeromonad Septicaemia Ditunjau Dari Patologi makro Dan Hematologi Ikan Lele Dumbo Clarias Sp. Skripsi Fakultas Perikanan Dan Ilmu Kelautan. IPB : Bogor.
Angka, S.L., Priosoeryanto, B.P., Lay, B.W.,  &  Harris, E.  (2004). Penyakit  Motile Aeromonad Septicae- mia  pada  Ikan  Lele Dumbo  Clarias  sp.  Forum Pascasarjana. 27 : 339-350.
Bricknell, I., & Dalmo, R.A. (2005). The use of immunostimulants in fish larval aquaculture. Fish & Shellfish Immunology.
Gambar 1.     Hasil pengukuran hematokrit pada ikan lele  sangkuriang selama penelitian.
Keterangan :  A,B,C adalah perlakuan K = kontrol , I,= pengambilan hematokrit hari ke 1, II = pengambilan  hari ke 28 dan III = pengambilan hari ke- 3 setelah infeksi
Cheng, W., Liu, CH., Yeh, S.T., & Chen, J.C. (2005).
The immune stimulatory effect of sodium algi- nate on the white shrimp Litopenaeus vannamei and its resistance against Vibrio alginolyticus. Fish and Shellfish Immunology.
Chen,  C.Y.,  Wooster, G.A.,  &  Bowser, P.R.  (2004).
Comparative  blood  chemistry  and  histopathol- ogy  of  tilapia infection with Vibrio vulnificus or Streptococcus iniae or exposed to carbon tetrachlorida, gentamicin, or cooper sulfate. Aquaculture 239: 421%443.
Dopongtonung, A. (2008). Gambaran darah Ikan  Lele (Clarias spp)  Yang Berasal Dari Daerah Laladon Bogor. Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan Institut Pertanian Bogor.
Fujaya,  Y.  (2004).  Fisiologi  Ikan  Dasar Pengembangan Teknologi  Perikanan.  Jakarta  : Rineka Cipta. 179 hlm.
Irianto, A. (2005). Patologi Ikan Teleostei. Gadjah Mada University Press,    Yogyakarta.
Jasmanindar, Y. (2009). Penggunaan Ekstrak Gracilaria verrucosa Untuk Meningkatkan Sistem Ketahanan Udang Litopenaeus vannamei. Tesis. IPB : Bogor Luthfi M. (2017). Pengaruh Ekstrak Daun Majapahit ( Crescentia cujete) Dengan Dosis yang Berbeda Untuk Mengurangi Aktivitas Bakteri Aeromonas hydrophila Pada Budidaya Ikan Nila (Oreochromis niloticus). Skripsi. Fakultas Perikanan dan Kelautan UNIROW.
Lukistyowati,  I.  (2012).  Studi Efektivitas  Sambiloto (Andrographis  paniculata Ness.)  untuk Mencegah Penyakit Edwardsiellosis pada Ikan  Patin (Pangasius hypophthalmus). Laporan Hasil Penelitian  Dana  DIPA Universitas  Riau.  Lembaga Penelitian  Universitas  Riau. Pekanbaru. 15 hlm. Maryani, M. (2003). Interaksi Antara Logam Berat
Kadmium(Cd) dan Infeksi Bakteri Aeromonas Hydrophila Pada Ikan Mas Cyprinus Carpi.  Skripsi Fakultas Perikanan Dan Ilmu Kelautan, IPB.
Purwanti, D. (2016). Analisa Pemberian Ekstrak Buah Majapahit (Crescentia cujete L.) Dengan Dosis Yang Berbeda Untuk Mengurangi Aktivitas Bakteri Aeromonas hydrophila Pada Benih Ikan Lele Sangkuriang (Clarias gariepinus). Skripsi. Tidak dipublikasikan. Program Studi Ilmu Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas PGRI Ronggolawe Tuban.
Rahmaningsih, S., & Andriani, R. (2016). Pengaruh Bahan Aktif Daun Majapahit ( Crescentia cujete) Terhadap Respon Imun Udang Vannamei ( Litopenaeus vannamei). Prosiding Seminar Nasional Pengembangan Sumber Daya Pedesaan dan Kearifan Lokal, Berkelanjutan VI Universitas Jendral Sudirman Purwokerto,  ISBN:978-602-1643- 15-0, Hal 156.
Rahmaningsih, S., & Jumiati. (2016). Study Tentng Pemanfaatan Tanaman Majapahit ( Crescentia cujete) Untuk Penanggulangan Bakteri Vibrio harveyi Secara In vitro,  Prosiding Seminar Nasional Perikanan dan Kelautan VI,Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Brawijaya Malang, Hal 52-58.
Rantam, F. A. (2003). Metode Imunologi. Airlangga University Press. Surabaya.
Ridlo, A., & Pramesti, R. (2009). Aplikasi Ekstrak Rumput Laut Sebagai Agen Imunostimulan Sistem Pertahanan Non Spesifik Pada Udang ( Litopenaeus vannamei). FPIK UNDIP. Ilmu Kelautan. Vol. 14.
Saragih S.P., Syawal H., & Rauwaty M. (2015). Total Of Erythrocytes, Haematocrit, And Haemoglobin Changes Of Pangasius hypophthalmus That Were Immersed in Curcumin Extract And That Were in Infected by Aeromonas hydrophila. Skripsi. Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Riau.
Sa’diyah.  (2006).  Pemanfaatan  Buah Mahkota  Dewa (Phaleria macrocarpa)  untuk Pencegahan Infeksi Penyakit  MAS  (Motile Aeromonad  Septicaemia) ditinjau  dari  Gambaran  Darah Ikan  Patin (Pangasionodon hypophthalmus).  Skripsi. Fakultas Perikanan dan  Ilmu Kelautan Universitas Riau.
Subagiyo. (2009). Uji Pemanfaatan Rumput Laut Halimeda sp. Sebagai Sumber Makanan Fungsional Untuk Memodulasi Sistem pertahanan Non Spesifik Pada Udang Putih ( Litopenaeus vannamei). Ilmu Kelautan.