UJI EFEK ANALGETIK, TOKSISITAS AKUT DAN TERTUNDA EKSTRAK ETANOL DAUN BERINGIN ( Ficus benjamina L.) PADA MENCIT PUTIH JANTAN ( Mus musculus )
Syilfia Hasti, Elka Yuslinda, Nofri Hendri Sandi, Wan Liawati Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau Pekanbaru

## ABSTRAK
Salah  satu  tumbuhan  yang  telah  digunakan  oleh  masyarakat  sebagai  obat tradisional  yaitu  daun  beringin  guna  mengatasi  rasa  nyeri  dan  dari  penelusuran  pustaka belum  ada  dilakukan  pengujian  secara  ilmiah  begitu  juga  dengan  penelitian  tentang toksisitasnya. Berdasarkan hal tersebut, telah dilakukan penelitian untuk mengetahui efek analgetik  ekstrak  etanol  daun  beringin  yang  diberikan  secara  oral  pada  hewan  coba mencit putih jantan yang diberi asam asetat 1% v/v sebanyak 0,1 ml sebagai penginduksi nyeri.
Penelitian  dilakukan  menurut  metode writhing  test ,  menggunakan  pembanding asetosal  dengan  dosis  65  mg/kgBB.  Bahan  uji  diberikan  secara  oral  dalam  bentuk suspensi dalam Na CMC 1%, diberikan tiga puluh menit sebelum pemberian asam asetat. Pengamatan  jumlah  geliat  dilakukan  setelah  penyuntikan  asam  asetat.  Jumlah  geliat dihitung  dengan  selang  waktu  10  menit  selama  90  menit  kemudian  dihitung  persen proteksinya.  Penelitian  toksisitas  akut  (LD 50 )  dihitung  sebagai  dosis  yang  memberikan kematian  hewan  sebanyak  50%  dari  jumlah  hewan  percobaan  selama  24  jam  setelah penyuntikan  dan  toksisitas  tertunda  dilakukan  pada  dosis  1000,  2000,  4000,  8000,  dan 16000  mg/kgBB  terhadap  parameter  volume  air  minum,  volume  urin,  perubahan  berat badan, konsumsi makanan, berat feses, rasio organ ginjal dan jantung.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol pada dosis 100, 200, dan 400 mg/kgBB  memberikan  efek  analgetik  p  <  0,05  terhadap  kontrol  negatif  (analisis  varian dua arah dan analisis Tukey). Berdasarkan hasil pengujian toksisitas akut, ekstrak etanol daun  beringin  digolongkan  praktis  tidak  toksik.  Hasil  penelitian  yang  menunjukkan adanya  gejala  toksisitas  akut,  ekstrak  etanol  daun  beringin  digolongkan  praktis  tidak toksik.  Hasil  penelitian  yang  menunjukkan  adanya  gejala  toksisitas  tertunda  terhadap parameter  perubahan  berat  badan,  konsumsi  makanan,  berat  feses,  organ  ginjal  dan jantung signifikan pada dosis 16000 mg/kgBB.
Kata kunci : Analgetik, Ficus benjamina , writhing test .

## PENDAHULUAN
Dewasa ini, penelitian dan pengembangan tumbuhan obat baik di dalam maupun di  luar  negeri  berkembang  pesat.  Penelitian  yang  berkembang  terutama  pada  segi farmakologi maupun fitokimia berdasarkan indikasi tumbuhan obat yang telah digunakan sebagian masyarakat dengan khasiat yang teruji secara empiris. Hasil penelitian tersebut, tentunya  lebih  memantapkan  para  pengguna  tumbuhan  obat  akan  khasiat  maupun kegunaannya (Dalimartha, 2000).
Daun  beringin  berkhasiat  sebagai  obat  influenza,  radang  saluran  nafas (bronchitis), batuk rejan (pertusis), malaria, radang usus akut, disentri, dan kejang panas pada  anak-anak  (Dalimarta,  2000).  Daun,  akar  dan  kulit  batang  beringin    mengandung beberapa senyawa kimia diantaranya saponin, flavonoid dan polifenol (Farihah, 2008).
Berdasarkan  hasil  penelitian  terdahulu  diketahui  bahwa  ekstrak  etanol  akar  gantung beringin  memberikan  efek  antiinflamasi  (Hasti, et  al., 2009)  dan  antipiretik  (Hasti, et al .,2011).  Penelitian  lainnya  tentang Ficus  benjamina L.  telah  diketahui  dari  daun beringin mengandung c innamic acid, narigenin, lactosa, quercetin, dan cafffeic acid yang juga mempunyai aktivitas sitotoksik terhadap cell line T-Limphoblastic Leucemic (CEM- SS) ,  sedangkan  pada  kulit  batangnya  mengandung  stigmasterol  (  Almahy et  al .,  2003). Farihah  (2008)  dalam  penelitiannyapun  menyatakan  adanya  sifat  toksik  daun  beringin terhadap Artemia  salina Leach.    Penelitian  lainnya  menyatakan  bahwa  ekstrak  etanol, fraksi heksan dan etil asetat akar gantung beringin memiliki efek analgetika (Hasti, et al. , 2011).
Agar  obat tradisional dengan bahan baku ekstrak etanol daun beringin ini dapat menjadi  obat  herbal  terstandar,  maka  perlu  juga  dilakukan  uji    praklinik  berupa  uji keamanan  yang  mencakup  uji  toksisitas  akut  dan  tertunda      dari  ekstrak.  Berdasarkan penelitian terhadap efek analgetika dari akar gantung beringin maka penulis tertarik untuk meneliti  efek  analgetik  dari  daun  tumbuhan  tersebut  yang  akan  dicobakan  pada  mencit putih  jantan  ( Mus  musculus. L)  dilanjutkan  dengan  uji  toksisitas  akut  dan  tertunda  dari ekstrak  etanol  daun  beringin.  Penelitian  efek  analgetik  ekstrak  etanol  daun  beringin beringin menggunakan metoda writhing test yaitu mengamati geliat mencit setiap periode 10 menit terhadap pemberian ekstrak etanol daun beringin pada mencit putih jantan .

## METODOLOGI

## Bahan Penelitian
Bahan  penelitian:  daun  beringin  segar  sebanyak  4  kg  yang  diperoleh  dari lingkungan  kampus  Bina  Widya  Universitas  Riau,  Pekanbaru,  asetosal,  aquadest,  asam asetat glacial, etanol, dan Na CMC.
Hewan  uji:  mencit  putih  jantan  berumur  7-9  minggu  sebanyak  55  ekor  dengan  berat badan 20-35 gram.

## Alat Penelitian
Alat  yang  digunakan  adalah,  rotary  evaporator,  stopwatch,  jarum  suntik, timbangan mencit, mortir dan stamfer, sudip, gelas ukur, pipet tetes, timbangan analitik, alat bedah dan erlemeyer.

## Jalannya Penelitian
1. Penyiapan Ekstrak
Akar  gantung  beringin  yang  akan  dijadikan    sampel  dibersihkan,  dirajang  dan diblender,  kemudian  ditimbang  sebanyak  1  kg  lalu  diekstraksi  secara  maserasi  yang dilakukan hingga sempurna dengan menggunakan etanol 96% dalam botol gelap ukuran 2,5  liter.  Perendaman  dilakukan  selama  5  hari  pada  tempat  yang  terlindung  dari  cahaya sambil  berulang-ulang  diaduk,  sehingga  terjaga  perbedaan  konsentrasi  yang  sekecil- kecilnya  antara  larutan  di  dalam  dengan  larutan  di  luar  sel.  Kemudian  disaring  dan ampasnya  kembali  dimaserasi  lagi  dengan  cara  yang  sama  sampai  maserat  yang dihasilkan  berwarna  bening.  Selanjutnya  filtrat  dikentalkan  dengan rotary  evaporator sampai memperoleh ekstrak kental serta bobot yang konstan (Depkes RI, 1986).
2. Persiapan Hewan Percobaan
Hewan  percobaan  yang  digunakan  adalah  mencit  putih  jantan  berumur  7-9 minggu  dengan  berat  badan  antara  20-35  gram.  Masing-masing  dipisahkan  tersendiri selama 1 minggu sebelum perlakuan. Mencit dinyatakan sehat bila selama pemeliharaan
bobot badan tidak mengalami penurunan lebih dari 10% serta secara visual menunjukkan perilaku normal.

## 3. Pengujian Efek Analgetik
Hewan percobaan sebanyak 25 ekor dipuasakan selama lebih kurang 18 jam tapi tetap  diberi  minum.  Hewan  ditimbang  dan  dikelompokkan  menjadi  5  kelompok  dan masing-masing  terdiri  dari  5  ekor.  Ekstrak  daun  beringin  dan  asetosal  disuspensikan terlebih dahulu dengan NaCMC 1% sebelum diberikan kepada hewan uji. Pada masing- masing  kelompok  hewan  uji  diberikan  secara  oral  yaitu  Kelompok  I  untuk    Kontrol positif diberi asetosal dengan dosis 65 mg/kg BB,  Kelompok II  untuk  Kontrol negatif diberi  NaCMC  1%  dari  berat  badan,  Kelompok  III  diberi  ekstrak  daun  beringin  pada dosis 100mg/kg BB, Kelompok IV diberi ekstrak daun beringin pada dosis 200mg/kg BB, Kelompok  V  diberi  ekstrak  daun  beringin  pada  dosis  400  mg/kg  BB.  Setelah  30  menit kepada  setiap  kelompok  diberikan  asam    asetat  0,1  mL  dengan  konsentrasi  1%  dengan cara  intraperitoneal  (ip).  diamati  dan  dicatat  jumlah  geliaant  yang  ditunjukkan  mencit setiap 10 menit selama 90 menit, kemudian dihitung dengan rumus % proteksinya dengan rumus sebagai berikut:
% Proteksi = (1 – P/K) x 100% Keterangan: P = Jumlah geliat  kelompok perlakuan K = Jumlah  geliat  kelompok kontrol negatif

## 4. Evaluasi Efek Toksisitas Akut dan Tertunda
Uji  toksisitas  akut,  dilakukan  pada  dosis  1000  mg/kgBB,  2000  mg/kgBB,  4000 mg/kgBB,  8000  mg/kgBB,  16000  mg/kgBB  kemudian  dihitung  nilai  LD 50 nya  dengan mengamati jumlah hewan yang mati dalam 24 jam. Pada mencit yang masih hidup mulai dari  24 jam  sampai  dengan  14  hari setelah  penyuntikan  dilanjutkan  dengan  pengamatan toksisitas tertunda.  Parameter  yang  diamati  setiap  hari  untuk  toksisitas  tertunda adalah : penimbangan  berat  badan,  kemudian  ditentukan  persentase  perubahan  berat  badan, pengukuran  konsumsi  makanan,  pengukuran  berat  feces,  pengukuran  konsumsi  air minum,    pengukuran  volume  urin  dan  pada  hari  ke  14  hewan  dikorbankan  untuk penentuan rasio berat organ hati, ginjal dan jantung. Data-data yang diperoleh dari hasil pengamatan diolah menggunakan  metoda statistika Analysis of Variance (ANOVA) dua arah kecuali untuk rasio berat organ hati,ginjal dan jantung diolah  menggunakan metoda statistika Analysis of Variance (ANOVA) satu arah.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN
Dari  4  kg  sampel  segar  daun  beringin  yang  dimaserasi  dengan  etanol  96% diperoleh  ekstrak  kental  etanol  sebanyak  435,602  g  (43,56%)  dengan  rendemen  sebesar 10,89%.  Data  hasil  pengamatan    persen  proteksi  kontrol  negatif  ,  kontrol  positif  dan ekstrak etanol daun beringin, dapat dilihat pada Gambar 1.

## Gambar 1.   Hasil  Pengamatan  Persen  Proteksi  Ekstrak  Etanol  Daun  Beringin  terhadap Hewan Percobaan
Hasil  penelitian  pada  dosis  100,  200  dan  400  mg/kg  BB  ekstrak  etanol  daun beringin mempunyai efek analgetik. Pada dosis 400 mg/kgBB mempunyai efek analgetik, hal ini juga terlihat secara statistik terhadap perbedaan yang signifikan dengan uji Lanjut Tukey  terhadap  kontrol  negatif  (p<0,05).  Berdasarkan  data statistik,  terlihat  bahwa  efek analgetik  ekstrak  etanol  daun  beringin  pada  dosis  100,  200,  400  mg/kgBB  berbeda signifikan  dengan  asetosal  sebagai  kontrol  positif  (p>0,05),  ini  berarti  bahwa  efek analgetik  ekstrak  etanol  daun  beringin  masih  lemah  dibandingkan  dengan  asetosal . Dari pengamatan  uji  analgetik  pada  menit  ke  90  persen  proteksi  jadi  100%,  ini  diakibatkan karena pada menit ke 90 kerja asam asetat sebagai penginduksi nyeri sudah mulai habis karena  dari  penghitungan  %  proteksi  pada  menit  ke  90  nilai  geliat  kumulatif  pada kelompok kontrol negatif nilainya menjadi 0 yang artinya geliatan tidak ada lagi .
Hasil pengamatan pada hewan percobaan dengan variasi dosis 1000, 2000, 4000, 8000,dan 16000 mg/kgBB tidak menyebabkan kematian hewan percobaan sehingga dari hasil pengujian didapat nilai LD 50 24 jam ekstrak etanol daun beringin adalah  > 16000 mg/kg BB dan diklasifikasikan praktis tidak toksik.
Berdasarkan  grafik  hubungan  waktu  dengan  parameter    perubahan  berat  badan, konsumsi makanan, berat feses, konsumsi air minum dan volume urin  dapat dilihat efek dari masing-masing zat uji. Dari hasil pengamatan parameter toksisitas tertunda, adanya perhitungan  yang  bernilai  negatif  pada  parameter  persentase  perubahan  berat  badan menunjukkan adanya penurunan berat badan hewan percobaan (Gambar 2).
Gambar 2. Grafik  Hasil  Pengamatan  Hubungan  Waktu  Terhadap  Persentase  Perubahan Berat Badan
Pada parameter rasio berat organ terjadi kenaikan berat organ hati, ginjal   secara signifikan  (p<0,05)  pada  dosis  16000  mg/kg  BB,  ini  dapat  disebabkan  oleh  edem  yang
-60 -40 -20 0 20 40 60 80 100 120 10 20 30 40 50 60 70 80 90 Waktu (menit) % P ro te ks i Kontrol Negatif Kontrol Positif Dosis 100 mg/kg BB Dosis 200 mg/kg BB Dosis 400 mg/kg BB
-10 -5 0 5 10 15 20 25 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Waktu (hari) % P er ub aha n B er at B ada n Kontrol Negatif Dosis 1000 mg/kg BB Dosis 2000 mg/kg BB Dosis 4000 mg/kg BB Dosis 8000 mg/kg BB Dosis 16000 mg/kg BB
terjadi pada organ-organ tersebut, berat organ petunjuk yang sangat peka dari efek pada organ (Lu, 1995). Seperti tampak pada Gambar 3.

## Gambar 3.   Grafik  Hasil  Pengamatan  Rasio  Berat  Organ  Hati,  Ginjal  dan  Jantung Terhadap setiap Perlakuan

## KESIMPULAN
Pemberian  sedian  uji  berupa  ekstrak  etanol  daun  beringin  pada  mencit  putih jantan  dengan  dosis  100,  200,  dan  400  mg/kg  BB  dapat  disimpulkan  mempunyai  efek analgetik  (p<0,05) . Berdasarkan  nilai  LD 50 24  jam  ekstrak  etanol  daun  beringin diklasifikasikan  praktis  tidak  toksik. Hasil  penelitian  juga  menunjukkan  terlihat  adanya gejala toksisitas tertunda terhadap parameter perubahan berat badan, konsumsi makanan, berat  feses,  organ  ginjal  dan  jantung  secara  signifikan  (p<0.05)  pada  dosis  16000 mg/kgBB.

## DAFTAR PUSTAKA
Almahy,H.A.,  Mawardi,M.,  Mohd,A.S.,  &  Abdul,  M.A.,  2003.  The  Chemical  Constituents  of Ficus benjamina Linn. and Their Biological Activities. Pertanika J.Sci & Technol . 11(1): 73-81 Anonim,  1979, Farmakope  Indonesia ,  Edisi  III,  Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia Jakarta.
Dalimartha, S., 2000, Atlas Tumbuhan Indonesia, jilid II, Trubus  Agriwidya, Jakarta. Depkes RI, 1986, Sediaan Galenik , Departemen Kesehatan Republik Indonesia , Jakarta Farihah, 2008. Uji Toksisitas Ekstrak Daun Ficus benjamina L terhadap Artemia salina Leach dan Profil Kromatografi Lapis Tipis. Skripsi . Fakultas Farmasi Universitas Muhammmadiyah Surakarta.
Hasti, S., Sandi, N.H. dan Firdaus,M., 2009,  Uji Efek Antiinflamasi Ekstrak Etanol Akar Gantung Beringin (Ficus  benjamina L. ) Pada  Tikus  Putih  Betina (Rattus  norvegicus),  Laporan Penelitian , Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Riau, Pekanbaru. Hasti, S., Sandi, N.H., Sari,E.N. dan Sinaga,S., 2011, Uji Efek Analgetika  Ekstrak Etanol, Fraksi Etil Asetat Dan Fraksi Heksan Akar Gantung Beringin (Ficus benjamina L. ) Pada Mencit Putih Jantan (Mus Musculus), Prociding Seminar Farmasi Up Date ke 3,  Medan.
Hasti,  S., Sandi ,  N.H.,  dan  Srianti,  T.,  2011, Uji  Efek  Antipiretika  Ekstrak  Etanol,  Fraksi  Etil Asetat Dan Fraksi Heksan Akar Gantung Beringin (Ficus benjamina L. ) Pada Tikus Putih Betina (Rattus norvegicus), Prociding Seminar Nasional Farmasi ,  Padang.
0 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 Kontrol negatif Dosis 1000 mg/kg BB Dosis 2000 mg/kg BB Dosis 4000 mg/kg BB Dosis 8000 mg /kg BB Dosis 16000 mg/kg BB Perlakuan R a s io B e ra t O rga n (gr a m ) Hati Ginjal Jantung