## Pengaruh Perbedaan Salinitas Terhadap Viabilitas Bakteri
Pseudomonas spp.
1 Apri Arisandi, 2 Maulinna Kusumo Wardhani, 3 Kaswan Badami, 4 Anisa Sopiyanti 1,2,4 Program Studi Ilmu Kelautan, Universitas Trunojoyo Madura
3 Program Studi Agroteknologi, Universitas Trunojoyo Madura
1 apri_unijoyo@yahoo.com

## ABSTRAK
Kondisi perairan laut yang fluktuatif dan cenderung ekstrim menyebabkan rumput laut mudah terserang penyakit ice-ice. Munculnya bercak putih pada thallus rumput laut  Eucheuma  cottonii  yang  terinfeksi  penyakit  ice-ice  diduga  disebabkan  oleh bakteri  patogen  yaitu  Pseudomonas  spp.    Tujuan  yang  ingin  dicapai  dalam pelaksanaan penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh perbedaan salinitas terhadap viabilitas bakteri Pseudomonas spp dan untuk mengetahui pada salinitas berapakah  bakteri  Pseudomonas  spp  tidak  dapat  tumbuh.  Bakteri  diidentifikasi melalui  uji  biokimia,  dan  viabilitas  diamati  dengan menanam  bakteri  pada media TSA  plate  dengan  salinitas  30,  32,  dan  34  ppt  dengan  3  kali  pengulangan,  dan untuk uji konfirmasi bakteri di tanam pada media TSA miring dengan kadar salinitas 0, 20, 40, 60, 80, dan 100 ppt. Hasil yang diperoleh menunjukan bakteri tumbuh dengan normal pada hampir semua media uji kecuali pada media 100 ppt, hal ini menunjukan  bahwa  bakteri  Pseudomonas  spp  merupakan  bakteri  yang  bersifat halofilik atau dapat tumbuh baik pada kadar salinitas yang tinggi.
Kata Kunci: Eucheuma cottonii, ice-ice, Pseudomonosa spp,Viabilitas.
The Influence of Salinity Difference to Viability of Pseudomonas spp. Bacteria

## ABSTRACT
The  conditions  of  marine  waters  that  fluctuate  and  tend  to  extremes  can  cause seaweed  susceptible  to  ice-ice  disease.  The  appearance  of  white  patches  on infected Eucheuma cottonii seaweed thallus is estimated as ice-ice disease which is  caused  by  pathogenic  bacteria  of  Pseudomonas  spp    The  objectives  of  this research  is  to  determine  the  effect  of  salinity  difference  to  viability  of  bacteria Pseudomonas spp and to know on what salinity is the bacterium  Pseudomonas spp  that  can’t  grow.  Bacteria  were  identified  by  biochemical  tests.  Viability  was observed by planting bacteria on TSA plate medium with salinity 30 ppt, 32 ppt, and 34 ppt with 3 repetitions, and for bacterial confirmation test in planting on TSA tilting with salinity 0 ppt, 20 ppt, 40 ppt, 60 ppt, 80 ppt, And 100 ppt. The results showed  that  bacteria  grew  normally  in  almost  all  test  media  except  in  100  ppt media,  this  showed  that  Pseudomonas  spp  bacteria  were  halophilic  bacteria  or could grow well at high salinity levels.
Keywords: Eucheuma cottonii, ice-ice, Pseudomonosa spp, Viability.
PENDAHULUAN Rumput laut Eucheuma cottonii  dapat  tumbuh  dengan  baik pada  musim  kemarau,  sebaliknya pada musim hujan pertumbuhannya dapat  melambat  (Arisandi  2013). Pertumbuhan  Eucheuma  cottonii yang lambat di musim hujan disebabkan  oleh  kisaran  salinitas dan suhu yang fluktuatif (Msuya dan Salum 2007). Kebanyakan makroalga atau rumput laut mempunyai  toleransi  yang  rendah terhadap perubahan salinitas
(Khasanah    2013).  Begitu  pula dengan  spesies  Eucheuma  cottonii merupakan  jenis  rumput  laut  yang bersifat  stenohaline atau organisme yang  hanya  dapat  beradaptasi dengan  sedikit  perubahan  salinitas.
Salinitas dapat berpengaruh terhadap proses osmoregulasi pada tumbuhan rumput laut (Aslan 1991). Salinitas yang tinggi dapat menghambat  pertumbuhan  rumput laut. Pada  rumput  laut  yang terserang penyakit ice-ice ditemukan
pula  adanya  bakteri.  Darmayanti  et al.  (2001)  menyebutkan  bahwa hampir  seluruh  contoh  rumput  laut yang diambil dari budidaya di pantai Takalar Sulawesi Selatan ditemukan bakteri  jenis  Vibrio  spp.  Aeromonas sp. dan Pseudomonas spp. Perubahan  salinitas  atau  kadar garam  dapat  mempengaruhi  kadar air dalam tumbuh mikroba (Agustono et  al.  2012).  Salinitas  berhubungan erat  dengan  tekanan  osmotik  yang berpengaruh terhadap pertumbuhan bakteri.

## METODE PENELITIAN
Pengambilan sampel dilaksanakan  pada  tanggal  06  Mei 2017  pada  saat  musim  hujan  di Kecamatan Bluto Kabupaten Sumenep. Isolasi bakteri dan pengamatan  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas  spp  dari  sampel dilakukan  pada  tanggal  8-14  Mei 2017  dilaksanakan  di  Laboratorium Uji Balai Karantina Ikan Pengendalian  Mutu  Dan  Keamanan
Gambar 1. Peta Lokasi Penelitian
Hasil Perikanan Kelas I Surabaya II. (Gambar 1).
Sampel rumput laut
eucheuma  cottoni  yang  digunakan merupakan rumput laut yang memiliki gejala  klinis  terserang  penyakit  ice- ice  yaitu  munculnya  bercak  putih pada  rumput  laut  (sebanyak  25gr) yang  diambil  dari  lokasi  penelitian. Selanjutnya sampel rumput laut yang terinfeksi  bakteri  akan  dilakukan isolasi dan identifikasi bakteri. Setelah  dipastikan  bahwa  bakteri hasil  isolasi  merupakan  bakteri Pseudomonas  spp  maka  dilanjutkan
dengan melakukan penanaman bakteri pada beberapa salinitas yang berbeda yaitu 30 ppt, 32 ppt, dan 34 ppt  dengan  3  kali  pengulangan. Dilanjutkan dengan penanaman pada salinitas  0  ppt,  2  ppt,  4 ppt,  6  ppt,  8 ppt, dan 10 ppt yang dilakukan unuk uji konfirmasi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Identifikasi Bakteri
Identifikasi  bakteri  dilakukan dengan  menggunakan  acuan  buku ientifikasi Bergey’s Manual Determinative Bacteriology Ninth Edition (Holt et. al 1984).

## Tabel 1 Hasil Pengamatan Morfologi
NO JENIS PENGUJIAN HASIL PEMERIKSAAN 1. Warna Koloni Krem 2. Tepi Koloni Rata 3. Elevasi Cembung 4. Struktur dalam Lembut Tabel 2 Hasil Uji Presumtif
NO JENIS PENGUJIAN HASIL PEMERIKSAAN Saraswati (2016) 1 Uji Gram - + 2 Uji Katalase + + 3 Uji Oksidase + +

## Tabel 3 Hasil Pengujian Biokimia
NO JENIS PENGUJIAN HASIL PEMERIKSAAN Saraswati (2016) 1. Uji Gula-gula - - 2. TSI Agar K/K K/K 3. Gas/H2S -/- -/- 4. O/F O O 5. Nitrate Reduction + + 6. Gelatin - - 7. MIO +/-/+ +/-/+ 8. Simmons Citrate + + 9. Malonate + + 10. Chirstensen's Urease + - 11. MR/VP -/- -/-
Berdasarkan  hasil  identifikasi  yang telah  dilaksanakan,  ditemukan  7 genus  bakteri  yang    terdapat  pada Thallus  rumput  laut  yang  memiliki gejala  klinis  terserang  penyakit  ice- ice diantaranya yaitu: Chromobacterium sp, Flavobacterium sp, Vibrio spp, Yersinia sp, Acinnobacter sp, Hafnia sp, dan Pseudomonas spp. Pengamatan morfologi bakteri dilakukan  untuk  mengamati  ciri-ciri koloni  bakteri.  Beberapa  kelompok mikroorganisme  menunjukan  ciri-ciri koloni yang berbeda, baik dilihat dari betuknya,  elevasi,  struktur  dalam bakteri,  maupun  bentuk  tepi  koloni. Hasil  pengujian  dapat  dilihat  pada Tabel 1.
Uji presumtif bakteri dilakukan bertujuan untuk memudahkan dalam tahap  identifikasi  sampai  tingkat genus, uji yang dilakukan meliputi uji
gram, uji katalase, uji oksidase, hasil pengujian dapat dilihat pada Tabel 2.
Uji  biokimia  dilakukan  untuk mengetahui spesies dari bakteri yang ditemukan  dan  telah  di  lakukan  uji Presumtif dan pengamatan morfologi untuk  mengetahui  genusnya,  hasil pengujian dapat dilihat pada Tabel 3.
Viabilitas  Bakteri  Pseudomonas spp  pada  Perlakuan  Salinitas
Berbeda Bakteri yang dikultur dipastikan merupakan bakteri Pseudomonas  spp  maka  dilanjutkan dengan  kultur  bakteri  pada  media TSA yang telah dimodifikasi salinitasnya hingga mencapai 30 ppt,
32  ppt,  dan  34  ppt  pada  wadah cawan  petri  (Gambar  2)  Selanjutnya diinkubasi  selama  2x24  jam  untuk diamati viabilitasnya. Rentan salinitas 30-34 ppt digunakan sebagai  acuan  untuk  memodifikasi (a) (b)                                      (c)
Gambar 2. Media TSA dengan salinitas (a) 30 ppt (b) 32 ppt (c) 34 ppt
Gambar 3. Pertumbuhan bakteri Pseudomonas spp pada media TSA miring
media ini berdasarkan pada salinitas normal bagi lingkungan hidup rumput laut  Kappaphycus  alvarezii  yang dapat  tumbuh  dengan  baik  pada perairan  dengan  salinitas  28- 34‰ (Santoso 2008).
Pengamatan yang dilakukan pada  salinitas  30-34  ppt  yang  talah diinkubasi  selama  ±48  jam  dengan menggunakan  3  kali  pengulangan pada  setiap  salinitas  menunjukan hasil  bahwa  bakteri  tumbuh  dengan normal  pada  keseluruhan  media yang  dibuat.  Tidak  terdapat  tanda kontaminasi pada
media pengamatan.  Sehingga dilakukan  uji konfirmasi.    Uji  konfirmasi  dilakukan dengan  menggunakan    media  TSA miring  pada  tabung  reaksi.  Hal  ini dilakukan  untuk  menurunkan  resiko kontaminasi  dari  pada  penanaman bakteri  pada  plate  atau  cawan  petri. Sehingga pengujian dilanjutkan
dengan  rentan  salinitas  yang  lebih tinggi  untuk  memperoleh  batas  atas dan  bawah  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas spp. Penanaman dilakukan  yaitu  pada  salinitas  0,  20,
40, 60, 80 dan 100 ppt (Gambar 3). Penggunaan  media  miring ini bertujuan untuk hanya mengamati pertumbuhan dari bakteri Pseudomonas spp. Hasil yang diperoleh setelah inkubasi selama 48 jam  pada  suhu  ±35°C  adalah  pada
salinitas  0  ppt  bakteri  tumbuh melimpah  dan  hampir  memenuhi media.  Pada  salinitas  20-60  ppt bakteri tumbuh dengan normal pada media. Salinitas 80 ppt pertumbuhan bakteri  mengalami  penurunan  atau hanya  sedikit  bakteri  yang  hidup. Pada  salinitas  100  ppt  bakteri  tidak dapat tumbuh sama sekali (Tabel 4).
Bakteri dikategorikan tumbuh normal 100% apabila pertumbuhan  bakteri  sesuai  dengan goresan jarum ose, jika pertumbuhan tidak  memenuhi  goresan  jarum  ose maka  dapat  dikatakan  pertumbuhan bakteri mengalami penurunan. Apabila  bakteri  tumbuh  diluar  dari goresan  jarum  ose  maka  dapat dikatakan bakteri mengalami kontaminasi.    Berdasarkan  gambar dan  tabel  diatas  dapat  dilihat  bahwa bakteri  Pseudomonas  spp  tetap tumbuh normal pada rentan salinitas
0 sampai 20 ppt. Namun pertumbuhan mulai mengalami penurunan  pada  salinitas  40  ppt,  60 ppt dan 80 ppt, dan sama sekali tidak tumbuh pada salinitas 100 ppt. Hal ini dipengaruhi oleh sifat bakteri Pseudomonas  spp  yang  merupakan bakteri  halofilik  atau  merupakan bakteri  yang  dapat  tetap  tumbuh pada  kadar  salinitas  yang  tinggi. Suriawiria (1996) menyatakan bahwa
Tabel 4 Hasil Penanaman Bakteri pada Media TSA
No Jenis Media Salinitas (Ppt) Pertumbuhan Keterangan 1. TSA Plate 30 Tumbuh Normal 100% 2. TSA Plate 32 Tumbuh Normal 100% 3. TSA Plate 34 Tumbuh Normal 100% 4. Tsa Miring 0 Tumbuh Normal 100% 5. Tsa Miring 20 Tumbuh Normal 100% 6. Tsa Miring 40 Tumbuh Normal 90% 7. Tsa Miring 60 Tumbuh Normal 50% 8. Tsa Miring 80 Tumbuh Normal 10% 9. Tsa Miring 100 Tumbuh Tidak tumbuh
terdapat  beberapa  mikroorganisme yang  dapat  menyesuaikan  diri  dan dapat  tetap  tumbuh  pada  kadar garam  atau  kadar  gula  yang  tinggi. Bahkan  beberapa  mikroorganisme dapat  tahan  di  dalam  substrat dengan kadar garam sampai 30%.
Bakteri  halofilik  merupakan bakteri yang pertumbuhannya tergantung  pada  kadar  NaCl  dan mampu  tetap  tumbuh  pada  salinitas tinggi  (Pelczar  dan  chan  1998).
Kadar  garam  habitat  bakteri  halofilik berkisar  antara  2%  hingga  30% (Ventosa  1995).  Bakteri  halofilik membutuhkan konsentrasi NaCl minimal tertentu untuk pertumbuhannya.  Kebutuhan  garam untuk pertumbuhan optimum bervariasi  yaitu  20-50  ppt  untuk bakteri  halofilik  ringan,  50-200  ppt untuk  bakteri  halofilik  sedang,  200- 300  ppt  untuk  bakteri  halofilik ekstrem.  Namun  pada  penelitian  ini bakteri  Pseudomonas  spp  tetap tumbuh  pada  media  dengan  kadar salinitas  0  ppt  hal  ini  sesuai  dengan pendapat  Holt  et  al.  (1994)  yang menyatakan  bahwa  Pseudomonas merupakan  bakteri  yang  tergolong kedalam halofilik dengan kemampuan  tumbuhnya  di  medium yang  memiliki  kadar  NaCl  0  ppt hingga 300 ppt.
Pada  penelitian  ini  bakteri Pseudomonas  spp  dapat  tumbuh normal  pada  kadar  garam  0-40  ppt.
Pada  konsentrasi  garam  40-80  ppt pertumbuhan Pseudomonas spp mulai  terganggu  ditandai  dengan pertumbuhan nya yang menurun atau sedikit. Pada konsentrasi 80-100 ppt bakteri  Pseudomonas  spp  tidak dapat  tumbuh  sama  sekali,  dapat  di aertikan  bahwa  pada  konsetrasi  80- 100  ppt  merupakan  batas  atas  bagi pertumbuhan  bakteri  Pseudomonas spp.

## SIMPULAN
Berdasarkan penelitian pengaruh perbedaan salinitas terhadap viabilitas bakteri Pseudomonas spp yang telah dilakukan maka dapat diambil kesimpulan yaitu, Perlakuan salinitas yang berbeda mempengaruhi pertumbuhan  bakteri  Pseudomonas spp.  Bakteri  ini  memiliki  toleransi tinggi  terhadap  salinitas  yaitu  0  ppt hingga 40 ppt, pertumbuhan menurun pada salinitas 40 hingga 80 ppt  hingga  pertumbuhan  bakteri terhenti pada salinitas 80 hingga 100
ppt.

## DAFTAR PUSTAKA
Agustono,  Hari,  S.  dan  Muhajir.  2012. Strategi  Bakteri  Probiotik  untuk Menekan  Pertumbuhan  Bakteri
Patogen  didalam  Pengenceran Kerapu  Chromileptes  altivelis dengan  Memproduksi  Beberapa Bakterial Substansi. Jurnal Ilmiah Perikanan dan Kelautan. Fakultas Perikanan dan Kelautan Universitas  Airlangga.  Surabaya. Vol. 4 No. 2 : 199-205. Aslan,  L.M.  1991.  Budidaya  Rumput Laut. Penerbit Kanisius, Yogyakarta
Arisandi, A.,  Akhmad, F., Eva, A, W., Siti, R.  2013. Dampak Infeksi Ice-ice dan Epifit terhadap Pertumbuhan Eucheuma cottonii. Ilmu Kelautan 18 (1) 1 – 6.
Darmayanti,  Y.,  A.  Hatmanti,  N.  Farida dan Surahman 2001. Studi hama dan  penyakit.  Laporan  akhir Penelitian  Pengembangan  Bibit Unggul Rumput Laut, Pengelolaan  Kualitas  Air  serta Hama  dan  Penyakitnya.  Proyek
Penelitian,  Pengembangan  dan Pemanfaatan  Sumberdaya  Laut Dalam. Pusat Penelitian Oseanografi-LIPI Jakarta. 7 Hal. Holt,  J.G.,  Krieg,  N.R.,  Sneath,  H.A., Stanley,  J.T.  dan  William,  S.T. 1994. Bergey’s Manual of Determinative  Bacteriology  9th Edition.  Williams  and  Wilkins, Baltimor. Khasanah, U. 2013. Analisis Kesesuaian Perairan  Untuk  Lokasi  Budidaya Rumput  Laut  Eucheuma  Cottonii Di Perairan Kecamatan Sajoanging  Kabupaten  Wajo. Skripsi tidak diterbitkan. Makasar: Universitas Hasanuddin. Msuya,  F.E.,  &  D.  Salum.  2007.  The Effect  of  Cultivation,  Duration, Seasonality and Nutrient Conentration of The Growth Rate and  Biomasa  Yield  Of  The Seaweeds  Kappaphycusalvarezii and  Eucheuma  denticulatum  in Zanzibar, Tanzania. MARG-I Final  Report  submitted  to  The Western  Indian  Ocean  Marine Sciences Association (WIOMSA), 23 pp. Pelczar, Michael dan E.C.S.Chan. 1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Cetakan I. Jakarta: UI-Press. Hal. 101. Santoso,  L.,  Yudha,  T,  N.  2008. Pengendalian  Penyakit  Ice-Ice
Untuk  Meningkatkan  Produksi Rumput  Laut  Indonesia.  Jurnal
Saintek Perikanan Vol. 3 No. 2, : 37 - 43 Suriawiria, U. 1996. Mikrobilologi Air dan Dasar-Dasar Pengolahan Air Buangan Secara Biologis, Penerbit Alumni, Bandung. Ventosa,  A.,  Nieto,  J.J.  dan  Oren,  A. 1998.  Biology  of  Moderately Halophilic Aerobic Bacteria. Microbiol. Mol Biol. Rev 62: 504- 544