## ANALISIS FITOKIMIA DAN PENENTUAN NILAI LC

## 50 EKSTRAK METANOL DAUN LIWAS
Gerry Sumihe 1) Max R. J.Runtuwene 1) dan Johnly A. Rorong 1)
1 ) Jurusan Kimia FMIPA UNSRAT, Manado e-mail: 004Gerry@gmail.com ; max_runtuwene@yahoo.com ; rorongjohnly@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Penentuan  nilai  LC 50 dari  ekstrak  metanol  daun  liwas  menggunakan  metode Brine  Shrimp Lethality  Test (BSLT)  terhadap  hewan  indikator  udang Artemia  salina menunjukkan  nilai  LC 50 dari A. salina bersifat sangat toksik.Nilai LC 50 yang didapatkan sebesar 15,696 mg/L. Nilai LC 50 ditentukan  dengan  menggunakan  metode  SPSS  20.0.Ekstrak  metanol  daun  liwas  mengandung kandungan  senyawa  metabolit  sekunder  seperti  flavonoid,  tanin  dan  saponin  sebagai  hasil  uji fitokimia.
Kata kunci: BSLT, Daun Liwas, Metabolit Sekunder,LC 50 .

## PHYTOCHEMICAL ANALYSIS AND DETERMINING LC50 VALUE OF LIWAS LEAVE METHANOL EXTRACT

## ABSTRACT
Determination  of  LC 50 of  methanol  extract  of  leaves  liwas  using  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT) against animal indicator shrimp Artemia salina showed LC 50 values of A. salina is highly toxic.  LC 50 values  were  obtained  at  15.696  mg  /  L.  LC 50 values  determined  using  SPSS  20.0. Liwas  leaf  methanol  extract  contains  compounds  secondary  metabolites  such  as  flavonoids, tannins and saponins as phytochemical test results.
Keywords: BSLT, Leaves Liwas, Secondary Metabolites, LC 50 .

## PENDAHULUAN
Daun  liwas  merupakan  salah  satu tanaman  obat  yang  sering  digunakan  sebagai salah  satu  obat  tradisional  yang  digunakan sebagaianti rabies dan infeksi oleh masyarakat desa Liwutung, Minahasa
Tenggara, Sulawesi Utara.
Flavonoid, saponin, dan tanin merupakansenyawa  metabolit  sekunder  yang berkhasiat sebagai anti histamin, antioksidan, anti  virus,  anti  bakteri,  anti  inflamasi  sampai anti  kanker    (Harmanto,  2002).  Beberapa senyawa  metabolit  sekunder  merupakan senyawa  polar  dengan  gugus  OH - dan  dapat larut  dalam  pelarut  polar  seperti  etanol, metanol, butanol dan air (Markham, 1988).
Metanol  digunakan  sebagai  pelarut dalam  ekstraksi  maserasi  karena  metanol bersifat sebagai  pelarut  polar  mampu melarutkan unsur-unsur bioaktif yang bersifat
polar  pada  tanaman  herba  medisinalis (Santosa, 1995).
Khasiat  dari  daun  liwas  perlu  dikaji secara  ilmiah  tentang  kandungan  senyawa yang  terkandung  dalam  daun  liwas  tersebut. Berdasarkan  hal  terseebut  perlu  dilakukan penelitian  uji  toksisitas  ekstrak  metanol daun liwas terhadap udang A. salina Leach dengan menggunakan metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT).

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  dilakukan  pada  bulan  Juli- September  2013  di  Laboratorium  Kimia Advance  dan  Laboratorium  Kimia  Organik Jurusan Kimia Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.
Bahan
Bahan yang digunakan adalah:
sampel daun liwas, HCl, telur udang Artemia salina , aquades, garam tak beryodium, serbuk magnesium,  metanol,  FeCl 3 ,  vaselin  dan aluminium foil.

## Alat
Alat  yang  digunakan  antara  lain tabung reaksi, neraca analitik, rotary evaporator , waterbath ,  beker  gelas,  spatula, kertas  saring,  lampu  pijar  40  watt,  wadah bening, blender, thermometer, labu takar 100 mL,  Erlenmeyer,  desikator,  pipet  10  mL, pipet  tetes,  lemari  asam,  kac  pembesar  dan gelas arloji.

## Prosedur Penelitian Preparasi Sampel
Sebelum  dikeringkan  daun  liwas dicuci  dan  dipetik  kemudian  dikeringkan dalam  oven  pada  40 0 C.daun  dihaluskan menggunakan blender sampai menjadi serbuk dan diayak dengan ayakan 65 mesh  (Silaban, 2009).

## Kadar Air
Serbuk  sampel  yang  sudah  diayak ditimbang untuk ditentukan kada  air. Sampel serbuk daun liwas sebanyak 170,61 g sebagai berat  awal.  Sampel  yang  sudah  diimbang dimasukkan  ke  dalam  oven  dengan  suhu 105 0 C  selama  3  jam.Didinginkan  selama  30 menit dalam desikator dan kemudian ditimbang  sebagai  berat  akhir.  Perlakuan yang  sama  dilakukan  sebanyak  tiga  kali (Sudarmadji, 1989).

## Ekstraksi Maserasi
Sampel  sebanyak  50  g  diekstraksi
dengan pelarut metanol menggunakan metode ekstraksi maserasi. Sampel didiamkan dalam 250 mL metanol selama 24 jam  dan  diaduk.Filtrat  disaring  dan  ampas dipisahkan  dari  filtrat  menggunakan  kertas saring. Sebanyak 250 mL metanol ditambahkan  lagi  ke  dalam  ampas  dan dimaserasi  selama  24  jam.  Kedua  filtrate digabungkan  dan  dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator pada  suhu  70 0 C.  Ekstrak yang  yang  didapat  didinginkan  di  dalam desikator.

## Uji Fitokimia Uji Flavonoid (Harborne, 1996)
Ekstrak  ditimbang  sebanyak  50  mg dan ditambahkan air panas sebanyak 100 mL kemudian  didihkan  selama  5  menit  dan disaring.  0,05  mg  serbuk  Magnesium ditambahkan  ke  dalam  filtrat  sebanyak  5  mL dan  1  mL  HCl  pekat,  kemudian  dikocok dengan  kuat.  Warna  merah  magenta  yang terbentuk  menunjukkan  adanya  senyawa flavonoid.

## Uji Tanin (Harborne, 1996)
Ekstrak  ditimbang  sebanyak  50  mg dilarutkan  dalam    2  mL  air  kemudian ditambahkan  2  tetes  larutan  FeCl 3 1%.
Adanya tannin ditunjukkkan dengan
terbentuknya warna biru kehitaman dan hijau kehitaman.

## Uji Saponin (Harborne, 1996)
Ekstrak  ditimbang  sebanyak  50  mg kemudian  ditambahkan  10  mL  air  dan dikocok selama 1 menit.Setelah itu ditambahkan  2  tetes  HCl  1  N.  Adanya saponin  ditunjukkan  dengan  terbentuknya busa yang  tetap stabil selama 7 menit.

## Penentuan LC 50

## Uji toksiksitas
10  ekor  udang Artemia  salina dimasukkan  kedalam  larutan  uji  dengan konsentrasi 1000, 500, 250, 100, 50 mg/L dan pada control 1 dan control 2.Setiap larutan uji dilakukan 2 kali pengulangan dan dibandingkan  dengan  kontrol.Pengamatan terhadap  udang Artemia  salina dilakukan selama 24 jam. Prosentase
kematian udang Artemia salina dihitung dengan persamaan berikut:
%Mortalitas= Jumlah larva yang mati Jumlah larva uji 𝑥 100%

## Rumus  Abbot’s  digunakan  apabila
pada kontrol ada udang yang mati:
%Mortalitas % Kematian pada uji−% Kematian pada kontrol 100−% 𝐾𝑒𝑚𝑎𝑡𝑖𝑎𝑛𝑝𝑎𝑑𝑎𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 x10
0%

## Penentuan Nilai LC
50
Penentuan  nilai  LC 50 menggunakan metode anilasa probit  SPSS 20.0.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kadar Air
Pengujian  kadar  air  terhadap  sampel serbuk daun liwas selama 3 kali pengulangan mendapatkan prosentase kadar air kurang dari 10%.  Nilai  kadar  air  daun  liwas  adalah sebesar 2,34%.
Nilai  tersebut  menunjukkan  bahwa kandungan  kadar  air  daun  liwas  sangat  baik karena  kurang  dari  10%  (Winarno,  1997). Semakin rendah kadar air suatu sampel, akan menghasilkan  rendemen  yang  lebih  banyak (Inayati, 2007).

## Maserasi
Metode maserasi dipilih unuk digunakan karena mudah dioperasikan, kerusakan  komponen  dapat  dihindari  dan relatif    lebih  murah,  tetapi  memiliki kelemahan  dari  segi  waktu  yang  lebih  lama dan  penggunaan  pelarut  yang  relatif  banyak (Wulandari, 2005). Ekstraksi maserasi dilakukan sebanyak dua kali terhadap sampel daun  liwas.Setelah  direndam  selama  2x24 jam,  diperoleh  19,57  g  ekstrak  dari  50  g sampe  dengan  prosentase  rendemen  sebesar 39,14%.  Penggunaan  pelarut  metanol  dalam proses ekstraksi menghasilkan jumlah ekstrak yang  besar.  Menurut  Khopkar  (1980)  untuk
mendapatkan  hasil  pemisahan  baik,  proses ekstraksi    harus  diulang  beberapa  kali. Besarnya  luas  permukaan  sampel  dan rendahnya  kandungan  kadar  air  dari  sampel daun  liwas  menyebabkan  jumlah  rendemen yang lebih banyak (Inayati, 2007).

## Uji Fitokimia
Uji  fitokimia  dilakukan  sebagai  uji pendahuluan  untuk  mengetahui  tentang kandungan senyawa bioaktif yang terkandung di  dalam  daun  liwas.  Uji  fitokimia  ekstrak metanol  daun  liwas  menunjukkan  adanya kandungan senyawa bioaktif seperti flavonoid, tannin dan saponin.Menurut Markham (1988) flavonoid dapat larut dalam pelarut  polar  seperti  metanol,  sehingga  hasil menunjukkan  (+)  adanya  senyawa  flavonoid dalam  ekstrak  metanol  daun  liwas.  Adanya senyawa  tannin  karena  senyawa  tannin  dapat ditemukan  hampir  disetiap  bagian  dari tanaman  (Hagerman,  2002).  Sedangkan saponin  dapat  larut  dalam  air  dan  dapat menyebabkan tegangan aktif permukaan serta bersifat polar (Wu et al ., 2007).
Penentuan Nilai LC 50 Hasil  uji brine  shrimp  lethality  test ekstrak metanol daun liwas terhadap udang A. salina dapat di lihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Uji Toksisitas Konsentrasi (mg/L) Mortalitas (%) 0 0 25 42,85 50 57,14 100 64,24 250 71,42 500 85,71 1000 100 Berdasarkan  data  dari  (Tabel.  1) dapat dilihat bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak dalam larutan uji semakin besar  jumlah  kematian  udang A.  salina .
Semakin besar  jumlah udang A.  salina yang mati  pada  larutan  uji  dengan  kandungan ekstrak  daun  liwas  yang  kecil  menunjukkan pengaruh  ekstrak  metanol  daun  liwas  dapat mematikan pada konsentrasi yang kecil.
Nilai  LC 50 diperoleh  dari  data  pada tabel di atas dan dianalis probit menggunakan SPSS  20.    Hasil  yang  dieroleh  adalah  15,69 mg/L.  Nilai  ini  menunjukkan  bahwa  pada
konsentrasi 15,69 mg/L ekstrak metanol daun liwas mampu membunuh larva udang sampai 50% populasi. Berdasarkan nilai LC 50 ekstrak metanol  daun  limas  menunjukan  toksiksitas yang  sangat  baik.  Menurut  (Meyer et  al ., 1982), Tingkat toksisitas suatu ekstrak adalah sebagai  berikut:  LC 50 ≤  30  mg/L  =  Sangat toksik;  LC 50 ≤  1.000  mg/L  =  Toksik;  LC 50 > 1.000 mg/L = Tidak toksik.
Kematian  50%  udang A.  salina disebabkan oleh kandungan senyawa metabolit  sekunder  dalam  ekstrak  metanol daun  liwas.  Udang A.  salina memiliki
membran  kulit  yang  sangat  tipis  sehingga difusi zat dari lingkungan yang mempengaruhi  metabolisme  dalam  tubuhnya dapat  terjadi  (Mudjiman,  1989).  Semakin kecil  nilai  LC 50 dari  suatu  sampel  maka semakin tinggi senyawa bioaktifnya.
Tingginya  aktivitas  bioaktif  dari  ekstrak metanol daun liwas terhadap udang A. salina disebabkan  adanya  kandungan  senyawa saponin  dan  fenolik  yang  cukup  tinggi (Harborne,  1996).  Adanya  flavonoid  dalam lingkungan sel dapat menyebabkan pecahnya membran  sel.  pemasukan  ion  Na + yang  tidak terkendali  ke  dalam  sel,  yang  menyebabkan pecahnya  membran  sel.  Hal  ini  disebabkan gugus  OH - pada  flavonoid  berikatan  dengan protein  integral  membran  sel  sehingga terbendungnya  transport  aktif    Na + dan  K + . Transpor  aktif  yang  berhenti  menyebabkan pemasukan  ion  Na + yang  tidak  terkendali  ke dalam  sel,  yang  menyebabkan  pecahnya membran  sel.  Pecahnya  membran  sel  inilah yang  menyebabkan  kematian  sel  (Scheuer, 1994).

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
1. Ekstrak metanol daun liwas memiliki senyawa  bioaktif  flavonoid,  tannin dan saponin.
2. LC 50 ekstrak  metanol  daun  liwas adalah 15,89 mg/L

## Saran
Uji  kandungan  fitokimia  terhadap daun  liwas  untuk  perlu  dilakukan  lagi terhadap  pelarut  lain  untuk  mengetahui kandungan senyawa bioaktif lainnya.

## DAFTAR PUSTAKA
Hagerman,  A.E.  2002. Tannin  Handbook. Department  of  Chemistry  and
Biochemistry . Miami University. Harbone,  J.B.  1996.  Metode  Fitokimia: Penentuan Cara Modern Menganalisa Tumbuhan . Terjemahan Kosasih Padmawinata  dan  Iwang  Soediro. ITB, Bandung. Harmanto,  N.  2002.  Sehat  dengan  Ramuan
Tradisional.Edisi  ke-4.  Agromedia Pustaka, Tangerang.
Inayati,  H.  2007.  Potensi  Anti  Bakteri Ekstrak Daun Kedondong Bangkok ( Spondias  dulcis Forst.)  [Skripsi]. FMIPAIPB, Bogor.
Khopkar,  S.M.  1980.  Konsep  Dasar  Kimia Analitik.  Cet.  1  Terjemahan  :
Saptorahardjo,  H.,  Nurhadi,  A.  UI Press, Jakarta. Markham,  K.R.  1988.  Cara  Mengidentifikasi Flavanoid. Divisi kelima Departemen Penelitian Ilmu Pengetahuan  dan  Industeri,  Petone Selandia Baru. Penerbit ITB,
Bandung.
Meyer,  B.N.,  N.R.  Ferrigni.,  J.E.  Putnam.,
L.B.  Jacobsen.,  D.E.  Nichols.,  and J.L.  Mc  Laughlin.  1982.  Brine shrimp:  A  Convenient  General Bioassay for Active Plant Constituents. J.  Planta  Medica . 45(5): 31-45.
Santosa,  M.H.  1995.  Penyediaan  Bahan Penelitian  Tumbuhan  Obat:  Dalam Rapat  Kerja  Penelitian  Tumbuhan Obat Indonesia. Lembaga Penelitian Universitas Airlangga, Surabaya. Scheuer,  J.S.  1994.  Produk  Alami  Lautan. IKIP Semarang Press, Semarang. Silaban, L.W. 2009. Skrinning Fitokimia dan Uji  Aktivitas  Anti  bakteri  dari Kulit  Buah  Sentul  ( Sandoricum koetjape (Burm.f.)Merr)  terhadap beberapa  Bakteri  secara in  vitro
[Skripsi].  Fakultas  Farmasi  USU, Medan.
Sudarmadji, S., B. Haryono., dan Suhardi.1989.  Prosedur  Analisis untuk Bahan Makanan dan Pertanian. Liberty, Yogyakarta. Winarno,  M.W.  1997.  Efek  Daun  Katu ( Saurophus androgenus Merr.) terhadap  Diare  Tikus  Putih. J.
Cermin dunia Farmasi . 33: 31-35.
Wu,  J.,  Tang.,  H.M.Wu.,  and  Z.R.  Zhou. 2007. Hillasides A and B, Two New Cytoyoxic  Triterpene  Glycosides from  the  Sea Cucumber  holoyhuria hilla  lesson. J.  Asian  Natural Products Reseach . 9(7): 609-615. Wulandari,  N.D.M.  2005.  Perbandingan Metode  Ekstraksi  Buah  Mahkota Dewa  ( Phaleria  macrocarpa )  dan Uji  Toksisitas  Sub-kronis  pada Tikus Putih [Skripsi]. FMIPA  IPB, Bogor.