Peran penambahan enzim pada pakan buatan terhadap pertumbuhan larva ikan lele afrika Clarias gariepinus Burchell, 1822

## [Supplemental enzyme in artificial diets for north african catfish larvae
Clarias gariepinus
Burchell, 1822]
Ucu Cahyadi 1 , Dedi Jusadi 2 , Ichsan Ahmad Fauzi 2 , Ade Sunarma 3
1 Program Studi Ilmu Akuakultur, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor
2 Departemen Budidaya Perairan, FPIK-IPB
3 Balai Besar Perikanan Budidaya Air Tawar Sukabumi Jl. Agatis, Kampus IPB, Dramaga, Bogor 16680
cahyadiucu@gmail.com, siflounder@gmail.com, ichsan.a.fauzi@gmail.com, juraganindoor@yahoo.co.id
Diterima: 29 Agustus 2020; Disetujui: 26 Juni 2020

## Abstrak
Penambahan enzim pada pakan buatan dengan dosis berbeda untuk ikan lele Afrika Clarias gariepinus (bobot awal 0,0048   ± 0,0001 g dan panjang  total 0,7633  ± 0,0392  cm)  telah  dilakukan selama 12  hari.  Tujuan penelitian  ini adalah untuk menganalisis efektivitas penambahan enzim pada pakan untuk pertumbuhan larva ikan lele. Cacing sutra (kontrol) dan multienzim ditambahkan pada pakan dengan dosis  0,00 g kg -1 (ME0), 1,00 g kg -1 (ME1) dan 2,00 g kg - 1 (ME2) pakan. Masing-masing dari empat perlakuan disusun secara acak dengan empat ulangan. Larva ditebar dalam 150  L  dengan  kepadatan 1350  ekor  per  akuarium.  Data  dianalisis  menggunakan  SPSS  20, dilanjutkan  dengan  uji Duncan. Hasil menunjukkan bahwas intasan dan faktor kondisi tidak berbeda nyata antarperlakuan. Nilai panjang dan bobot akhir, jumlah konsumsi pakan, panjang vili dan aktivitas enzim tertinggi diperoleh pada kontrol (P<0,05) dan berbeda  nyata  dengan  perlakuan  yang  lain.  Efisiensi  pakan  kontrol  berbeda  nyata  dengan  perlakuan  lainnya. Distribusi ukuran panen, pada kelompok kecil (1-2 cm) tidak menunjukkan perbedaan yang nyata, pada kelompok sedang (2-3 cm) dan kelompok besar (3-5 cm) kontrol menunjukkan perbedaan yang nyata, namun antara ME0, ME1 dan  ME2  tidak  berbeda  nyata.  Pada  perlakuan  pakan  buatan  yang  ditambahkan  enzim,  ME2  dapat  meningkatkan bobot dan panjang total 6,25% dan 13,4% dibandingkan ME0. Diduga bahwa penambahan enzim dapat meningkatkan struktur usus dan kinerja pertumbuhan pada larva lele Afrika. Penambahan enzim dengan dosis sampai 2 g kg -1 pakan dapat  meningkatkan  panjang  villi  usus,  namun  belum  mampu  meningkatkan  pertumbuhan  ikan  sebagaimana penggunaan cacing.
Kata penting: Clarias gariepinus, larva, cacing sutra, enzim

## Abstract
Supplemental enzyme in artificial diets with difference doses for African catfish Clarias gariepinus (initial weight of 0.0048±0.0001 g and total length 0.7633±0.0392 cm) were examined for 12 days feeding trial. The aim of this study was to analyze the effectiveness supplemental enzymes in diets for growth performance of catfish larvae. Tubifex sp. (control) and a multi enzyme was included at the level of 0.00 (ME0), 1.00 (ME1) and 2.00 g kg -1 (ME2 diet as a test diets. Each of the four experimental diets was randomly assigned to four plicate groups. Larva was allocated into 150 L aquaria at a density of 1350 larvae per aquarium. Data was analyzed using SPSS 20, followed by Duncan’s test. The result  showed that the survival rate and condition factors were no statistical  difference between experimental diets  and  control  group.  The  highest  final  length,  final  weight,  total  food  consumption,  villi  length  and  enzymes activity  were recorded in the Control (P<0.05) and significantly different with other treatments. Feed efficiency’s control significantly different with other. Harvest size distribution, in the small size group (1-2 cm) did not show significantly different, in the medium size group (2-3 cm) and large size group (3-5 cm) the Tubifex sp. treatment were  significantly  different  from the other  treatments (P<0.05)  whereas between  ME0,  ME1  and  ME2 treatments were not significantly different. Among the supplemental enzyme in test diets, ME2 can improve weight and total length 6.25% and 13.4%, respectively than ME0 treatment. The results suggested that enzyme supplementation can improve intestinal structure and growth performance of catfish larvae. The supplemental enzyme in diets with doses up to 2 g kg-1 can increase intestinal villi’s length but have not been able to increase fish growth performance as use worm.
Keywords: Clarias gariepinus, larvae, Tubifex sp., enzyme.

## Pendahuluan
Salah  satu  faktor  kunci  keberhasilan  dari budidaya  ikan  lele  afrika, C.  gariepinus adalah
benih  berkualitas  baik.  Dalam  proses  produksi benih  lele  afrika,  cacing  sutra  ( Tubifex sp.)
diperlukan  sebagai  pakan  awal  sampai  tahap
pemeliharaan  larva  selesai.  Dengan  demikian ketersediaan  cacing  sutra  menjadi  faktor  pem- batas  untuk  produksi  benih  ikan  lele.  Cacing sutra  tidak  tersedia  sepanjang  tahun,  terutama pada  musim  hujan  ketika  ketersediaan  di  alam menjadi  berkurang  (Nurhayati et  al .  2014).
Kekurangan  cacing  sutra  akan  meningkatkan harga per liternya, terutama pada daerah-daerah yang ketersediaan cacing sutranya terbatas atau tidak dapat memproduksi cacing sutra sendiri.
Salah satu usaha untuk menyelesaikan ma- salah  ketersediaan  cacing  sutra  ini  adalah dengan  memberikan  pakan  buatan  sedini mungkin.  Usaha  untuk  mengganti  dari  pakan alami  ke  pakan  buatan  sudah  dilakukan  oleh Verret  &  van  Tongeren  (1989)  dengan menggunakan pakan komersial untuk ikan trout ( Onchorhynchus  mykiss )  yang  diberikan  pada ikan  larva  ikan  lele  dan  hasilnya  menunjukkan bahwa  pemberian  pakan  buatan  pada  umur  5 hari setelah menetas dapat memberikan sintasan larva  ikan  lele  di  atas  90%,  tetapi,  larva  yang diberikan  pakan  buatan  pada  umur  5  hari memiliki  pertumbuhan  yang  lebih  rendah dibandingkan  dengan  larva  yang  diberi  pakan
Artemia .  Perbedaan  pertumbuhan  ini  berhu- bungan  dengan  sistem  pencernaan  larva  yang belum  berkembang  secara  sempurna  (Verret et
al .  1992),  oleh  sebab  itu  larva  tidak  dapat memanfaatkan  pakan  buatan  secara  maksimal. Ketidaksempurnaan  perkembangan  sistem  pen- cernaan  larva  tersebut  mencakup  struktur morfologi  maupun  kemampuan  sekresi  enzim. Artemia  merupakan  zooplankton  yang  meng- andung  enzim-enzim  pencernaan  (Lauf  dan Hofer  1984),  sehingga  ketersediaan  enzim diduga sangat dominan terhadap rendahnya per- tumbuhan larva yang diberi pakan buatan.
Untuk  memperbaiki  tingkat  pertumbuhan yang  rendah  pada  larva  yang  diberi  pakan buatan,  penambahan  enzim  pada  pakan  dapat menjadi  pertimbangan  untuk  dijadikan  sebagai salah satu solusi. Penambahan multienzim pada pakan  memecah  protein  menjadi  asam  amino dan  peptida;  lemak  menjadi  asam  lemak, tigliserida  dan  kolesterol;  karbohidrat  dapat berubah  menjadi  glukosa  yang  disimpan  dalam bentuk  glikogen.  Dengan  memecah  nutrien- nutrien  tersebut,  akan  meningkatkan  keterse- diaan  protein  lemak  dan  karbohidrat  dalam pakan.  Lebih  lanjut,  beberapa  hasil  penelitian juga  menduga  bahwa  penambahan  multienzim dapat  meningkatkan  pemanfaatan  pakan  buatan oleh  ikan.  Penambahan  enzim  pada  pakan buatan  dapat  meningkatkan  pertumbuhan dengan  meningkatkan  kecernaan  nutrien  pada ikan  rainbouw  trout    ( O.  mykiss )  (Drew et  al . 2005,  Farhangi  &  Carter  2007),  meningkatkan enzim-enzim  pencernaan  pada  ikan  nila ( Oreochromis  niloticus )  (Lin et  al .  2007), meningkatkan perkembangan struktur usus pada ayam broiler ( Gallus domesticus ) (Mathlouthi et al .  2002)  dan  kesehatan  usus  pada  ikan  grass carp    ( Ctenopharyngodon  idella )  (Zhou et  al . 2013).
Penelitian  lain  tentang  penambahan  kom- pleks  enzim  /  multi  enzim  (yang  di  dalam  nya berisi beberapa enzim) dilaporkan oleh Ze et al . (2016) bahwa dengan penambahan protease 150 atau  175  mg  kg -1 pada  pakan  dapat meningkatkan retensi protein dan retensi lemak sehingga  dapat  meningkatkan  pemanfaatan pakan dan pertumbuhan ikan komet ( Carrasius auratus ).    Hal  yang  sama,  dilakukan  pula  oleh Lin et  al .  (2013)  yang  meneliti  pengaruh  dari penambahan  enzim  (protease,  β-glucanase  dan xylanase)  pada  dosis  1,0  dan  1,5  g  kg -1 untuk
kinerja  pertumbuhan  benih  nila  hibrida ( Oreochromis  niloticus x Oreochromis  aureus ) yang diberi pakan dengan pakan berbahan dasar tumbuhan,  hasilnya  menunjukkan  bahwa  laju pertumbuhan  spesifik,  nisbah  efisiensi  pakan, retensi  protein,  aktivitas  protease  dan  amilase pada usus dan hepatopankreas meningkat secara signifikan  dengan  meningkatkan  kadar  enzim pada pakan. Hal ini diduga bahwa penambahan enzim dari luar dapat meningkatkan pengeluaran enzim dari dalam oleh ikan. Selain  itu, Yildirim
&  Turan  (2010),  Ghomi et  al .  (2012),  dan
Zamini et  al .  (2014)  menemukan  pengaruh positif  berbagai  macam  multi  enzim  komersial (phytase,  xylanase,  β-glucanase,  β-amylase, cellulase  dan  pectinase)  pada  performa pertumbuhan  dan  efisiensi  pakan  lele  Afrika, ikan  beluga  ( Huso  huso )  dan  ikan  salmon Caspian ( Salmo trutta ).
Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  menga- nalisis  efektivitas  penambahan  enzim  pada pakan untuk pertumbuhan larva ikan lele.

## Bahan dan metode
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  menggu- nakan  Rancangan  Acak  Lengkap,  terdiri  atas empat  perlakuan  dengan  empat  ulangan.  Perla- kuan yang diberikan disajikan pada Tabel 1.

## Persiapan pakan
Pakan  buatan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah pakan komersial untuk ikan sidat  (PT.  Suri  Tani  Pemuka,  JAFPA,  Banyu- wangi,  Indonesia).  Pakan  uji  diberikan  pada ikan  dalam  bentuk  pasta.  Pakan  tersebut mengandung  protein  45%,  karbohidrat  23%, lemak  3%,  serat  kasar  2%,  abu  16%  dan  air 11%.  Pakan  tersebut  ditambah  enzim  dengan nama  dagang  Superzyme  (PT.  Bright  Inter- national,  Bogor,  Indonesia)  dengan  kandungan
xylanase , glucanase , invertase , protease , cellulase , amylase , mannanase dan pectinase . Dosis  enzim  yang  digunakan  pada  perlakuan adalah  0,  1,  dan  2  g  kg -1 .  Penambahan  enzim pada  pakan  dilakukan  dengan  cara  sebagai berikut:  untuk  1  kg  pakan,  disiapkan  enzim sesuai dengan dosis perlakuan. Enzim ditambah 800  ml  air  dan  1  butir  telur  ayam,  lalu  diaduk dengan menggunakan blender sampai homogen. Telur juga ditambahkan pada pakan tanpa enzim namun  tidak  diberikan  pada  perlakuan  kontrol (cacing).  Campuran  tersebut  disemprotkan  ke pakan dengan menggunakan sprayer dan diaduk sampai  homogen.  Pakan  disimpan  di  dalam freezer suhu -25 o C sampai diberikan pada ikan. Untuk  memastikan  kualitas  pakan  selama penyimpanan  maka  dilakukan  pengukuran enzim pada pakan perlakuan.
Tabel 1. Rancangan percobaan penambahan enzim pada pakan buatan untuk larva ikan lele C. gariepinus Perlakuan Hari ke- pemeliharaan 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Cacing (K) Ar temia Ar temia Cacing sutra ME0 Pakan buatan tanpa ditambahkan enzim ME1 Pakan buatan + enzim dengan dosis 1 g kg -1 ME2 Pakan buatan + enzim dengan dosis 2 g kg -1 Keterangan : ME0 : Pakan buatan tanpa ditambahkan enzim, ME1 : Pakan buatan ditambah enzim dengan dosis 1 g kg -1 . ME2: Pakan buatan + enzim dengan dosis 2 g kg -1 .

## Pemeliharaan larva lele
Larva  ikan  lele  berumur  3  hari  dengan panjang total rata-rata 0,7633 ± 0,0392 cm dan bobot rata-rata 0,0048 ± 0,0001 g, diperoleh dari hasil  pemijahan  buatan  dari  induk  yang  dipeli- hara  di  Balai  Besar  Perikanan  Budidaya  Ikan Air  Tawar  Sukabumi,  Indonesia.  Empat  hari setelah menetas, larva dihitung dan dimasukkan ke dalam 150 L air yang terdapat pada akuarium berukuran 80 cm x 60 cm x 40 cm. Jumlah larva yang ditebar adalah 1350 ekor per akuarium.
Hari pertama dan kedua pemeliharaan, larva diberi  pakan  artemia  pada  pukul  08.00,  12.00, 16.00,  20.00,  24.00  dan  04.00  WIB.  Artemia diberikan setelah dipanen dari wadah penetasan, disaring  dengan  menggunakan  jaring  plankton 150 µ m,  ditakar  dengan  menggunakan  sendok kecil  dan  diberikan  pada  masing-masing  akua- rium. Pada umur 6 hari sampai dengan umur 14 hari,  larva  diberi  pakan  sesuai  dengan  perla- kuan. Cacing sutera dan pakan buatan diberikan sebanyak 4 kali sehari, pada pukul 07.00, 12.00, 17.00  dan  22.00  WIB.  Jumlah  pakan  yang diberikan  sesuai  dengan  kebutuhan  ikan. Pemberian  pakan  perlakuan,  kecuali  cacing, mengikuti  metode  yang  sudah  dilakukan  oleh Chepkirui-Boit et  al .  (2011)  bahwa  pakan diberikan  pada  ikan  sekenyangnya  dan  untuk meminimalkan  sisanya,  terlebih  dahulu  pakan dihitung dan dimasukkan ke dalam wadah untuk masing-masing akuarium.
Untuk menjaga kualitas air agar tetap baik, maka  setiap  hari  dilakukan  penyifonan  kotoran serta penggantian air sebanyak 10 %. Selain itu dilakukan penggantian air sebanyak 70 % setiap 3  hari.  Pengukuran  suhu  dan  pH  air  dilakukan setiap  hari  selama  pemeliharaan,  sedangkan pengukuran  oksigen  terlarut  dan  amoniak
dilakukan  pada  awal  dan  tengah  pemeliharaan. Pengukuran  suhu  dilakukan  dengan  mengguna- kan  termometer,  pH  menggunakan  pH  meter dan oksigen terlarut menggunakan DO meter.

## Pengambilan dan preparasi sampel
Sebelum  dilakukan  penebaran,  ikan  uji  di- timbang  menggunakan  timbangan  digital  de- ngan ketelitian 0,01 g untuk penimbangan bobot awal  sebanyak  30  ekor  dan  dilakukan  peng- ukuran  panjang  total  menggunakan  penggaris dengan ketelitian 0,1 cm untuk mengetahui rata- rata  panjang  total  awal.  Selain  itu  dilakukan pula  pengambilan  sampel  larva  sebanyak  10  g untuk  uji  aktivitas  enzim  sebelum  diberikan perlakuan.  Sebelum  dilakukan  pengukuran  uji aktivitas enzim, sampel ikan disimpan di dalam
freezer -80 o C.
Akhir  pemeliharaan,  dilakukan  pengam- bilan  sampel  untuk  aktivitas  enzim  empat  jam setelah  larva  diberi  pakan  uji.  Ikan  diambil dengan  menggunakan scopenet ,  masing-masing perlakuan  diambil  2  gram.  Jumlah  ikan  yang diambil dihitung, kemudian sampel dimasukkan ke  dalam  botol  sampel  dan  disimpan  di  dalam
freezer dengan suhu -80 o C. Sebelum melakukan uji  aktivitas  enzim,  terlebih  dahulu  dilakukan preparasi sampel. Sampel larva ikan yang sudah digerus  dtambahkan  larutan  Tris  (20  nM  Tris HCl,  1mM  EDTA,  10  mM  CaCl 2 ,  pH  7,5) dengan perbandingan 10%. Lalu dimasukkan ke dalam tabung effendorf dan disentrifuge selama 10 menit 12.000 rpm pada suhu 4 o C. Kemudian diambil  supernatannya  dan  dilakukan  analisis aktivitas  enzim  amilase,  protease,  tripsin  dan kimotripsin.
Untuk  parameter  pengukuran  panjang  vili, lima  ekor  benih  lele  hidup  diambil  secara  acak dari  masing-masing  ulangan  pada  hari  ke  14,
dibilas  dengan aquadest kemudian  disimpan  di dalam  larutan  Davidson  selama  24  jam. Pembuatan  preparat  histologi  terdiri  dari  bebe- rapa tahapan yaitu dehidrasi, impregnasi, pence- takan,  pemotongan,  peletakan  pada  gelas  objek dan  pewarnaaan  dengan  menggunakan hema- toxylin dan eosin .  Preparat  histologi  digunakan untuk  pengukuran  panjang  vili  yang  dilakukan dengan bantuan mikroskop.

## Parameter uji
Parameter uji biologi dan kimia yang diukur adalah  sintasan,  bobot  akhir  dan  panjang  akhir dan  distribusi  ukuran  panen.  Penimbangan bobot  dan  pengukuran  panjang  ikan  pada  awal dan  akhir  pemeliharaan  dilakukan  untuk mengetahui  laju  pertumbuhan  ikan.  Sintasan dapat  diketahui  dengan  membagi  jumlah  ikan pada  akhir  pemeliharaan  dengan  jumlah  ikan pada  awal  pemeliharaan  dikalikan  100%. Pemanenan ikan dilakukan pada hari ke-15. Ikan dipilah berdasarkan ukurannya, yakni kategori S (1-2  cm),  M  (2-3  cm),  dan  L  (3-5  cm)  dengan menggunakan alat grading berupa ember plastik yang dilubangi sesuai dengan ukuran ikan. Pada masing-masing ukuran, ikan dihitung jumlahnya untuk  menentukan  distribusi  ukuran  panen. Seluruh  ikan  pada  masing-masing  ukuran ditimbang  menggunakan  timbangan  digital dengan ketelitian 0,01 g. Total bobot ikan pada setiap  ukuran  dijumlahkan  untuk  mengetahui bobot  biomassa  ikan.  Bobot  individu  ikan  di setiap  ukuran  dapat  diketahui  dengan  membagi bobot total di setiap ukuran dengan jumlah ikan yang ada. Tiga puluh ekor ikan di setiap ukuran diambil,  lalu  dihitung  panjang  totalnya menggunakan  jangka  sorong  ketelitian  0,1 cm. Faktor kondisi dihitung menggunakan rumus:
k = [W/ L 3 ] x 100,
Keterangan: W = bobot basah ikan dalam gram L = panjang dalam sentimeter (Ali et al . 2007).
Aktivitas  enzim  amilase  diukur  dengan mengikuti  metode  Worthington  (1993).  Jumlah sampel  yang  digunakan minimal  sebanyak  2  g. Pengukuran aktivitas amilase dilakukan dengan cara  :  larutan  pati  1%  (  dalam  20  nM  sodium fosfat  pH  6,9)  yang  terkandung  dalam  6,0  mM NaCl  digunakan  sebagai  substrat.  Kemudian larutan pati tersebut dipipet sebanyak 0,5 ml dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi.  Lalu  di- tambahkan 0,5 ml sampel/contoh dan diinkubasi selama 3 menit pada suhu 95 o C. Setelah itu di- tambahkan 0,5 ml larutan dinitrosalicylic (DNS) untuk  memberhentikan  reaksi  yang  sedang berjalan, kemudian diinkubasikan kembali pada suhu  95 o C  selama  5  menit.  Selanjutnya absorbansinya  diukur  dengan  spektrofotometer pada panjang gelombang 540 nm.
Aktivitas  enzim  amilase  diukur  dengan menggunakan rumus di bawah ini :
E = M C × 3 menit Keterangan E  =  Aktivitas tripsin (unit/mg protein) M  =  µ mol maltosa yang dihasilkan C  =  mg enzim dalam campuran
Sebelum  melakukan  uji  aktivitas  enzim protease,  terlebih  dahulu  disiapkan  tabung reaksi  untuk  blanko,  standar,  dan  contoh (banyaknya  tabung  bergantung  kepada  jumlah contoh).  Aktivitas  enzim  protease  dilakukan dengan  membuat  campuran  yang  terdiri  atas  1 ml  buffer  fosfat  0,05  M  (pH  7),  1  ml  larutan substrat  casein  20  mg  mL -1 (pH  7).  Contoh sebanyak 0,2 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi  contoh  saja.  Larutan  standar  Tirosin  5 mmol/L sebanyak 0,2 mL dimasukkan ke dalam
tabung  reaksi  untuk  standar,  dan    aquadest sebanyak 0,2 mL dimasukkan ke dalam tabung reaksi  untuk  blanko.  Selanjutnya  campuran tersebut  diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  10 menit.  Kemudian  2  ml  larutan  asam
trichloroacetic (TCA)  0,1  M  ditambahkan  ke dalam  semua  tabung.  Larutan  CaCl 2 mmol/L sebanyak 0,2 mL dimasukkan ke dalam tabung blanko dan standar, sedangkan ke dalam tabung sampel/contoh  ditambahkan  0,2  mL  aquadest, lalu didiamkan pada suhu 37 o C selama 10 menit.
Campuran  tersebut  disentrifus  selama  10  menit dengan  kecepatan  3500  rpm.  Pada  filtrat  yang dihasilkan, dari masing – masing tabung diambil
1,5 mL, ditambahkan 5 ml Na 2 CO 3 0,4 M dan 1
ml  Folin  Ciaucalteau  ke  dalam  setiap  tabung, kemudian didiamkan selama 20 menit pada suhu 37 o C. Setelah itu dilakukan pengukuran dengan menggunakan  spektrofotometer  pada  panjang gelombang  578  nm  (Bergmeyer et  al .  1983).
Aktivitas protease diukur dengan menggunakan formula berikut ini :
AP = AC - AB
AS-AB × FK × 1

## WI
Keterangan
AP =   Aktivitas protease (unit/mg protein) AC =  Absorbansi sampel AS =  Absorbansi standar AB =  Absorbansi blanko FK =  Faktor koreksi WI =  Waktu inkubasi
Pengukuran  aktivitas  enzim  tripsin  dilaku- kan dengan menggunakan metode dari Erlanger
et  al . (1961). Terlebih dahulu membuat larutan BAPNA  ( N-α-benzoyl-DL-arginine-p-nitroani- lide ),  yaitu  menimbang  BAPNA  43,5  mg  +  1 mL  Dimethyl  Sulfoxide  (DMSO),  kemudian dilarutkan dengan Tris HCl 0,05M yang meng- andung CaCl 2 .2H 2 O 0,02M sampai volume 100 mL. BAPNA  digunakan sebagai substrat. Lang-
kah selanjutnya adalah mengambil 25 µ L contoh ke  dalam  tabung  reaksi,  kemudian  ditambah larutan  BAPNA  sebanyak  1,25  mL.  Kemudian diinkubasi  pada  suhu  37 o C  selama  10  menit. Kemudian ditambahkan larutan asam asetat 30% sebanyak 0,5 mL, lalu diinkubasi lagi selama 10 menit  pada  suhu  37 o C.  Setelah  itu  absorbansi contoh  diukur  pada  spektrofotometer  dengan panjang  gelombang  410  nm.  Oleh  karena  satu unit tripsin per ml (U) telah ditetapkan sebagai satu  µmol  BAPNA  terhodirolisis  per  ml  dari sampel enzim per menit pada 410 nm. P -nitro- anilide memiliki koefisien molar  8800 cm 2 /mg. Aktivitas  tripsin  (unit  per  mg  protein)  dihitung mengikuti rumus :
AT = AT × 1000 × C 8800 × C Keterangan AT =   Aktivitas tripsin (unit/mg protein)
A  =  Abs410/min C  =  ml reaksi campuran
P  =  mg protein dalam reaksi campuran
Pengukuran  aktivitas  kemotripsin  mengacu pada  metode  Erlanger et  al .  (1961),  dengan membuat  larutan  SAPNA  0,1  mM  ( Succinyl- (Ala)2-Prophe-ρ-nitroanilide ) (C 30 H 36 N 6 O 9 , BM = 624.7) terlebih dahulu.
SAPNA ditimbang sebanyak 6.247 mg, lalu dilarutkan dengan Tris HCl 50 mM yang meng- andung  CaCl 2 .2H 2 O  20  mM,    sampai  volume 100  mL  dengan  pH  8,5.  Kemudian  larutan SAPNA yang sudah tercampur tersebut diambil dengan  menggunakan  pipet  sebanyak  0,59  ml dan  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  dan ditambahkan  dengan  10 µ L  contoh,  diinkubasi pada  suhu  25 o C  selama  10  menit.  Setelah  itu diukur absorbansi contoh pada spektrofotometer dengan  panjang  gelombang  410  nm.  Peng- ukuran dilakukan selama 5 menit, dicatat setiap
menit  data  absorbansi  contohnya.  Aktivitas kimotripsin dihitung mengikuti rumus :
AK = A × 1000 × V 8800 × P Keterangan
AK = Aktivitas tripsin (unit/mg protein) A  =  Abs410/min V  =  ml volume reaksi campuran P  =  mg protein uji
Pada  pengukuran  panjang  vili,  lima  ekor larva  lele  hidup  diambil  secara  acak  dari masing-masing ulangan pada hari ke 14, kemu- dian  sampel  disimpan  di  dalam  larutan  David- son  selama  24  jam.  Setelah  itu  sampel  ikan dibungkus dengan kain kasa dan dimasukkan ke dalam  wadah  berbentuk  kotak  seperti  kaset kemudian  dimasukkan  ke  dalam  tabung  besi pada Automatic  Tissue  Processor selama  24 jam.  Pada  proses  ini  sampel  didehidrasi, dihilangkan  kadar  airnya  dengan  menggunakan alkohol bertingkat. Langkah selanjutnya, sampel ditanam  dalam  paraffin  untuk  dipotong  dengan
Automatic  Rotary  Microtome merk  LEICA 2265,  jaringan  yang  terpotong  disimpan  di dalam waterbath suhu  55 o C,  lalu  disimpan  di dalam  objek  glass,  kemudian  diikuti  dengan pewarnaan  menggunakan  Hematoxylin  dan Eosin  (H  dan  E)  mengikuti  metode  dalam Fishcer et  al .  (2008).  Selanjutnya  jaringan diamati  di  bawah  mikroskop  dan  dilakukan pengukuran panjang villi.
Nisbah  efisiensi  protein  dapat  dihitung  de- ngan  memasukkan  data  bobot  ikan  pada formulasi berikut:

## EP = M P
Keterangan
EP  =  Nisbah efisiensi protein M  =  Total biomassa ikan (g) P  =  Jumlah protein yang dikomsumsi
Analisis  protein  dan  air  dilakukan  pada cacing sutra dan pakan buatan di semua perlaku- an.  Analisis  kimia  tersebut  dilakukan  dengan mengikuti metode AOAC (1990). Kadar protein pakan  dapat  digunakan  untuk  menghitung  nilai nisbah efisiensi protein.

## Analisis data
Analisis data dilakukan dengan  mengguna- kan Microsoft  Excel 2016  dan  SPPS  20. ANOVA dilakukan untuk mengetahui pengaruh pakan  perlakuan  terhadap  pertumbuhan  dan morfologi  usus.  Tingkat  beda  nyata  antar  nilai tengah  diuji  dengan  menggunakan  Duncan dengan tingkat kepercayaan P < 0,05. Sebelum data dianalisis, semua data diuji normalitas dan homogenitas  terlebih  dahulu.  Semua  data  ditu- liskan dengan nilai tengah dan simpangan baku.

## Hasil
Data  kinerja  pertumbuhan  larva  ikan  lele yang  diberi  pakan  dengan  penambahan  dosis enzim  berbeda  selama  14  hari  disajikan  pada Tabel 1. Pada akhir penelitian ini, data pertum- buhan panjang akhir dan bobot akhir ikan yang diperoleh,  secara  signifikan  (P<0,05)  nilai  ter- tinggi  yaitu  pada  pakan  perlakuan  cacing dibandingkan  perlakuan  lainnya,  sedangkan pada  perlakuan  pakan  ME0,  ME1,  dan  ME2 tidak  berbeda  nyata.  Pertumbuhan  lele  pada perlakuan  cacing  berkorelasi  dengan  distribusi ukuran.  Ikan  lele  pada  perlakuan  cacing  hanya memiliki  dua  ukuran,  yakni  ukuran  sedang (70,47 %) dan besar (29,53 %), sedangkan pada perlakuan  pakan  buatan,  ikan  terdistribusi  di ukuran  kecil,  sedang  dan  besar,  dengan mayoritas  ukuran  sedang  (98,25  –  99,52  %). Ikan  pada  perlakuan  cacing,  mengkonsumsi
pakan  lebih  dari  13  kali  lebih  banyak  daripada perlakuan pakan buatan. Di sisi lain, pemberian pakan  buatan  memberikan  nilai  efisiensi  pakan yang  lebih  baik  daripada  perlakuan  cacing. Efisiensi pakan di setiap perlakuan pakan buatan nilainya  tidak  berbeda  nyata.  Parameter  sin- tasan, faktor kondisi dan nisbah efisensi protein
dari  masing-masing  perlakuan  tidak  menun- jukkan hasil yang berbeda nyata.
Pengaruh  pakan  perlakuan  pada  aktivitas enzim percernaan (amilase, protease, tripsin dan kemotripsin)  pada  hari  ke-4  dan  ke-18  setelah menetas disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2. Kinerja pertumbuhan larva ikan lele yang diberi pakan dengan penambahan dosis enzim berbeda pada hari ke-18 setelah menetas Parameter (satuan) Pakan Cacing ME0 ME1 ME2 Panjang akhir (cm) 2,21 ± 0,05 b 1,52 ± 0,33 a 1,52 ± 0,05 a 1,7 ± 0,08 a Bobot akhir (mg) 103,59 ± 6,27 b 37,52 ± 1,80 a 37,95 ± 4,77 a 49,06 ± 8,43 a Distribusi ukuran panen (%) Kecil (1-2 cm) 0,00 ± 0,00 a 0,49 ± 0,27 a 0,46 ± 0,24 a 1,39 ± 1,19 a Sedang (2-3 cm) 70,47 ± 6,76 a 99,44 ± 0,26 b 99,52 ± 0,51 b 98,25 ± 1,15 b Besar (3-5 cm) 29,53 ± 6,76 b 0,06 ± 0,02 a 0,02 ± 0,02 a 1,18 ± 0,80 a Sintasan (%) 93,06 ± 1,87 a 90,02 ± 0,52 a 91,02 ± 1,54 a 92,48 ± 1,81 a Jumlah konsumsi pakan (g) 1508,76 ± 6,67 b 114,86 ± 4,30 a 114,67 ± 0,94 a 114,56 ± 1,18 a Efisiensi pakan (%) 0,66 ± 0,03 a 2,84± 0,07 b 2,89 ± 0,40 b 3,84 ± 1,40 b Nisbah efisiensi protein 2,06 ± 0,08 b 2,03 ± 0,005 b 1,50 ± 0,17 a 1,83 ± 0,26 ab Faktor kondisi (k) 0,95 ± 0,049 a 1,08 ± 0,078 a 1,06 ± 0,065 a 0,99 ± 0,131 a
Keterangan:
Huruf tika atas yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (P<0,05). Nilai yang tertera merupakan rata-rata dan nilai setelah  tanda ± merupakan simpangan baku. Pakan tanpa enzim (ME0), pakan dengan multienzim 1 g kg -1 (ME1), pakan dengan multienzim 2 g kg -1 (ME2)
Tabel 3. Aktivitas enzim larva ikan lele yang diberi pakan perlakuan pada hari ke-18 setelah menetas
Parameter Larva 4 hari Aktivitas enzim pada hari ke-18 Cacing ME0 ME1 ME2 Amilase (IU mg -1 protein) 2,5113 ± 0,0190  3,3735 ± 0,0235 a 3,1635 ± 0,0215 b 3,1695 ± 0,0085 b 3,0210 ± 0,000 c Protease (IU mg -1 protein) 0,0100 ± 0,0001  0,0083 ± 0,0110 a 0,0050 ± 0,0002 b 0,0051 ± 0,0040 b 0,0050 ± 0,0110 b Tripsin (IU mg -1 protein) 0,0274 ± 0,0091  0,0125 ± 0,0125 a 0,0072 ± 0,0056 a 0,0101 ± 0,0077 a 0,0044 ± 0,0012 a Kemotripsin (IU mg -1 protein) 0,0032 ± 0,0006  0,0115 ± 0,0060 a 0,0050 ± 0,0003 a 0,0051 ± 0,0060 a 0,0036 ± 0,0030 a Keterangan :
Huruf tika atas yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda  nyata (P<0,05). Nilai  yang  tertera  merupakan  rata-rata  dan  nilai  setelah  tanda  ±  merupakan  simpangan  baku.  Pakan  tanpa  enzim (ME0), pakan dengan multienzim 1 g kg -1 (ME1), pakan dengan multienzim 2 g kg -1 (ME2)
Aktivitas  enzim  amilase  pada  benih  ikan lele  meningkat  setelah  diberi  pakan  dengan penambahan  dosis  enzim  yang  berbeda  selama masa  pemeliharaan  14  hari.  Aktivitas  enzim amilase  dengan  nilai  tertinggi  yaitu  pada  benih yang  diberi  cacing,  berbeda  secara  signifikan (P<0,05)  dengan  perlakuan  ME0  dan  ME1, perlakuan  ME2  berbeda  nyata  dengan  ketiga perlakuan yang sudah disebutkan sebelumnya.
Aktivitas  enzim  protease  pada  benih  ikan lele  yang  diberi  pakan  dengan  penambahan dosis  enzim  berbeda  menurun  pada  hari  ke-18 (P<0,05).  Diantara  perlakuan  pakan  uji,  nilai aktivitas enzim protease tertinggi diperoleh pada benih  dengan  pakan  cacing,  berbeda  secara signifikan (P<0,05) dengan perlakuan yang lain- nya,  sedangkan  nilai  aktivitas  enzim  protease untuk  perlakuan  ME0,  ME1  dan  ME2  tidak berbeda nyata.
Aktivitas enzim tripsin pada benih ikan lele yang  diberi  pakan  dengan  penambahan  dosis
enzim  berbeda,  rata–rata  menurun  (P<0,05) pada  hari  ke-18,  sedangkan  aktivitas  enzim kimotripsin  rata-rata  meningkat  pada  peng- ukuran  hari  ke  18.  Setelah  dilakukan  analisis data,  hasil  menunjukkan  tidak  berbeda  nyata (P<0,05) antar masing-masing perlakuan.
Hasil  pengukuran  panjang  vili  usus  benih ikan lele yang diberi pakan dengan penambahan dosis  enzim  berbeda  disajikan  pada  Gambar  1. Perbedaan penambahan dosis pada pakan mem- berikan  pengaruh  yang  berbeda  pula  pada  pan- jang villi usus ikan lele. Nilai tertinggi ada pada perlakuan  benih  ikan  lele  yang  diberi  pakan cacing, sedangkan nilai yang terendah ada pada perlakuan  ME0.  Hasil  menunjukkan  berbeda nyata (P < 0,05) antar perlakuan.
Hasil  pengamatan  gambaran  histologi  usus secara  keseluruhan  pada  masing-masing  perla- kuan  disajikan  pada  Gambar  2.  Gambaran histologi  usus  secara  visual  menunjukkan adanya  perbedaan  panjang  vili  dari  larva  yang
Keterangan:
Huruf yang berbeda pada baris di atas bar menunjukkan pengaruh perlakuan yang berbeda nyata (P<0,05). Pakan tanpa enzim (ME0), pakan dengan multienzim 1 g kg -1 (ME1), pakan dengan multienzim 2 g kg -1 (ME2)
Gambar 1  Panjang vili usus larva ikan lele yang diberi pakan dengan penambahan dosis enzim berbeda
selama 14 hari
Cacing ME0 ME1 ME2 0 50 100 150 200 250 Perbedaan dosis enzim P an jan g Vil li (µ m ) b c b a
diberi pakan cacing, pakan dengan penambahan enzim dan pakan tanpa enzim yang diukur pada hari ke-18 setelah menetas.
Kualitas  air  selama  masa  pemeliharaan berada  dalam  kisaran  layak  untuk  larva  ikan lele. Oksigen terlarut : 4,13 mgL -1 , suhu berkisar antara  23,93-23,98 o C  (pagi),  24,58-24,81 o C (siang),  24,84-25,06 o C  (sore);  pH  berkisar antara 7,68-7,74 (pagi), 7,76-7,76 (siang), 7,49- 7,64  (sore);  dan  NH 3 :  0,12  mgL -1 dan  NO 2 : 0,006 mgL -1 .

## Pembahasan
Pakan  awal  untuk  larva  ikan  lele  dapat berupa  pakan  hidup  ataupun  pakan  buatan
(Verret  &  van  Tongeren  1989,  Uys  &  Hecht 1987,  Adewumi  2015).  Pada  penelitian  ini, pakan  awal  untuk  semua  perlakuan,  menggu- nakan  artemia  selama  2  hari,  hal  ini  merujuk pada Verret & van Tongeren (1989) yang mela- porkan  bahwa  dengan  pemberian  artemia  se- bagai pakan awal pada hari pertama dan kedua dapat  meningkatkan  sintasan  hingga  di  atas 90%.  Pada  penelitian  ini  nilai  sintasan  berkisar antara 90,02±0,52-93,06±1,87%. Hal ini diduga adanya  keterlibatan  eksogenus  enzim  yang berasal  dari  artemia  yang  dapat  merang-sang keluarnya  endogenous  enzim.  Enzim  dapat memberikan pengaruh yang positif pada mikro- biota yang terdapat di usus melalui peningkatan
Keterangan: Tanda panah menunjukkan gambar vili usus. Pakan tanpa enzim (ME0), pakan dengan multienzim 1 g kg -1 (ME1), pakan dengan multienzim 2 g kg -1 (ME2).
Gambar 2  Gambaran melintang histologi usus larva ikan lele yang diberi pakan perlakuan pada pengukuran hari ke-18 setelah menetas
daya  cerna  dan  menambah  daya  serap  nutrien (Ayodeji et  al .  2016).  Pemberian  jenis  pakan
(alami  dan  buatan)  pun  dapat  berpengaruh terhadap  sintasan,  seperti  penelitian  yang  dila- kukan  oleh  Chepkirui-Boit et  al .  (2011)  yang menyatakan  bahwa  larva  ikan  lele  yang  diberi pakan  100%  naupli  artemia  menghasilkan sintasan  95,3%,  sedangkan  larva  yang  diberi pakan 100% pakan buatan memperoleh sintasan 65,9%.
Ikan  lele  yang  diberi  pakan  berupa  cacing memiliki  bobot  dan  panjang  akhir  lebih  besar dibandingkan  dengan  ikan  lele  yang  diberi pakan buatan. Jumlah enzim yang ditambahkan di dalam penelitian ini, dari 0 ke 2 g kg -1 pakan, tidak  menyebabkan  perbedaan  pertumbuhan ikan.  Tingginya  pertumbuhan  ikan  pada  perla- kuan  cacing  didukung  dengan  data  distribusi ukuran  ikan  saat  panen.  Ikan  pada  perlakuan cacing,  29,53%  memiliki  kriteria  ukuran  besar, sisanya  70,47%  berukuran  sedang.  Sementara itu, ikan pada perlakuan-perlakuan pakan buatan hanya  didominasi  oleh  ukuran  sedang  (98,25- 99,52%).
Ikan  pada  perlakuan  cacing  mampu mengonsumsi  pakan  sebanyak  1508,76  g, sedangkan  ikan  pada  perlakuan  pakan  buatan hanya  mengkonsumsi  pakan  114,56-114,86  g. Hal  ini  berdampak  pada  jumlah  protein  yang dikonsumsi,  pada  perlakuan  cacing  jumlah protein  yang  dikonsumsi  sebanyak  33,54  g, sedangkan  pada  perlakuan  pakan  buatan berkisar  antara  4,01-7,08  g.  Perbedaan  jumlah konsumsi  protein  mengakibatkan  jumlah  keter- sediaan  nutrien  untuk  pertumbuhan  pun  akan berbeda.  Rendahnya  jumlah  konsumsi  pakan pada  perlakuan  pakan  buatan  diduga  kuat menjadi  faktor  penyebab  rendahnya  pertum- buhan  ikan  di  perlakuan  ini. Walau  mengha-
silkan  pertumbuhan  yang  lebih  tinggi,  efisiensi pakan  pada  perlakuan  cacing  lebih  rendah dibandingkan  dengan  perlakuan  pakan  buatan. Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  kecernaan bahan pada pakan buatan lebih tinggi, ditambah dengan  penambahan  enzim  pada  pakan  buatan yang dapat memecah molekul komplek menjadi molekul  yang  lebih  sederhana  sehingga  nutrien yang  ada  dalam  pakan  buatan  lebih  mudah dimanfaatkan  oleh  ikan  untuk  proses  pertum- buhan. Nisbah efisiensi protein merupakan ang- ka  yang  menyatakan  jumlah  bobot  ikan  yang dihasilkan  dibagi  dengan  jumlah  protein  yang dikonsumsi.  Rendahnya  nilai  nisbah  efisiensi pakan pada perlakuan pakan yang ditambahkan enzim menunjukkan bahwa pemanfaatan jumlah protein yang lebih banyak dibandingkan dengan perlakuan  pakan  tanpa  enzim  dan  perlakuan cacing.
Perolehan  panjang  dan  bobot  akhir  yang tinggi pada perlakuan cacing (22,1±0,5 mm dan 103,59±6,27 mg) diduga karena aktivitas enzim yang tinggi pada saluran pencernaan, dalam hal ini  aktivitas  enzim  amilase  (3,3735±0,0235  IU mg-1  protein)  yang  berguna  untuk  memecah karbohidrat menjadi glukosa dan aktivitas enzim protease (0,0083±0,0110 IU mg-1 protein)  yang memecah protein menjadi asam amino sehingga nutrien pada pakan dapat diserap dan diedarkan ke sel – sel yang membutuhkan. Aktivitas enzim yang rendah dapat mempengaruhi pertumbuhan dan  perkembangan  organ.  Pertumbuhan  organ tubuh  yang  lambat  menyebabkan  pertumbuhan larva  kurang  dan  dapat  menyebabkan  kematian (Jusadi et al. 2015). Pada perlakuan ME2, dapat meningkatkan  panjang  akhir  dan  bobot  akhir sebanyak  6,25%  dan  13,4%  jika  dibandingkan dengan  perlakuan  ME0.  Sesuai  dengan  peneli- tian  sebelumnya  yang  dilakukan  oleh  Yildirim
&  Turan  (2010)  yang  menyatakan  bahwa  ikan
C. gariepinus yang diberi pakan dengan penam- bahan  multienzim  dengan  kandungan  fungal
xylanase, β -glucanase,  pentosonase, β -amilase,
fungal β -glucanase,  hemicellulace,  pectinase, cellulase,  cellubiase dosis  0,75  g  kg -1 mem- peroleh kinerja pertumbuhan dan efisiensi pakan yang optimum dibandingkan kontrol.
Faktor kondisi merupakan hasil pengukuran berdasarkan hubungan antara bobot dan panjang ikan,  yang  menggambarkan  kondisi  masing- masing individu. Nilai ideal yang biasa diguna- kan adalah mendekati 1 (Nash et al . 2006). Nilai faktor  kondisi  yang  diperoleh  berkisar  antara 0,95±0,049-1,08±0,078,  hal  ini  menunjukkan proporsi tubuh ikan dalam penelitian ini adalah normal.
Aktivitas  enzim  tripsin  pada  larva C. gariepinus terdeteksi  pada  larva  umur  4  hari setelah  menetas  (0,0274±0,0091  IU  mg -1
protein), meningkat seiring dengan perkembang- an  larva.  Sesuai  dengan  yang  dinyatakan  oleh Nazir et  al . (2018), keadaan ini  diduga bahwa keberadaan  enzim  protease  dalam  tubuh  larva sudah  siap  mencerna  protein  sebelum  fungsi perut betul-betul berkembang yang ditandai de- ngan  terbentuknya  lambung  secara  utuh  ketika terjadi  perubahan  dari  tahap  larva  menjadi  be- nih. Lebih lanjut Nazir et al . (2018) menyatakan bahwa aktivitas awal enzim tripsin selama masa perkembangan  awal  larva  terdeteksi  pada  saat larva  masih  memiliki  kuning  telur,  kemudian akan mengalami penurunan.
Pada  pengukuran  hari  ke-18  setelah  mene- tas,  nilai  aktivitas  enzim  tripsin  menurun  pada setiap  perlakuan.  Hal  ini  sesuai  dengan  yang dikemukakan  oleh  Nazir et  al .  (2018)  bahwa setelah  hari  ke-18  enzim  tripsin  meng-alami penurunan,  merupakan  indikasi  dari  proses
acidifikasi pada usus atau bisa dikatakan sebagai masa perkembangan dari perut. Hasil penelitian yang  lain  menunjukkan  bahwa  aktivitas  enzim mengalami  peningkatan  saat  fase  awal  berte- patan dengan diberikannya naupli Artemia , teta- pi  aktivitas  enzim  tripsin  ini  terlihat  menurun lagi pada hari ke-16 setelah menetas yang dapat dihubungkan  dengan  penyempurnaan  bentuk dari  pankreas  esokrin  (Tong et  al .  2012). Penuruan  aktivitas  tripsin  bertepatan  dengan tahap  perkembangan  lambung  (Gisbert et  al . 2009).
Kimotripsin adalah enzim pencernaan yang berada  di  jaringan  pankreas  yang  dikeluarkan menuju usus dua belas jari (Geiger 1985). Pada penelitian ini, hasil uji aktivitas enzim kimotrip- sin  pada  larva  berumur  4  hari  setelah  menetas (habis  kuning  telur)  adalah  0,0032±0,0006  IU mg -1 protein  dan  rata-rata  meningkat  pada pengukuran hari ke-18 setelah menetas. Hal ini sesuai  dengan  yang  dikemukakan  oleh Chakrabarti et  al .  (1995)  bahwa  aktivitas kimotripsin  yang  rendah  terjadi  ketika  telur menetas, meningkat dengan sangat lambat  pada 2-3 minggu pertama, kemudian meningkat tajam pada 3 hari berikutnya akhirnya meningkat pada tingkatan  yang  konstan.  Hal  ini  membuktikan bahwa umur ikan berpengaruh terhadap konsen- trasi dan aktifitas kimotripsin.
Lebih jauh  Elert et  al . (2004) menyatakan bahwa  konsetrasi  kemotripsin  10 5 kali  lebih tinggi  dalam  usus  dari  pada  di  jaringan  selain usus  namun  aktivitas  dan  konsentrasi  sangat tergantung  pada  spesies  ikan  dan  lingkungan dimana  ikan  hidup.  Spesies  ikan  memberikan pengaruh  yang  nyata  pada  konsentrasi  dan aktivitas  kimotripsin.  Berdasarkan  kebiasaan makan  mereka,  ikan  dibagi  menjadi  karnivora, omnivora dan herbivora. Kebiasaan makan ikan
akan mempengaruhi pada nisbah bobot usus dan bobot tubuh serta aktivitas enzim proteolitiknya (Chakrabarti et  al .  1995;  Hidalgo et  al .  1999).
Hofer  dan  Schiemer  (1981)  melaporkan  bahwa aktivitas  proteolitik  berhubungan  dengan  ke- biasaan  makan,  meskipun  karnivora  memiliki usus yang lebih kecil daripada herbivora, tetapi memiliki aktivitas yang lebih tinggi. Chakrabarti
et  al .  (1995)  dan  Hidalgo et  al .  (1999)  mene- mukan hasil yang sama.
Usus merupakan tempat utama proses pen- cernaan dan penyerapan nutrien. Di dalam usus terdapat vili yang merupakan salah satu struktur lapisan  mukosa  usus  yang  berfungsi  memper- luas  area  penyerapan  zat  nutrien  sehingga meningkatkan  efisiensi  penyerapan  (Sari et  al.
2016).  Pada  pengukuran  panjang  vili  diperoleh hasil bahwa pada larva yang diberi pakan cacing memperoleh  nilai  tertinggi,  kemudian  berturut- turut  diikuti  oleh  perlakuan  ME2  yang  tidak berbeda nyata dengan ME1 dan perlakuan ME0 yang  berbeda  nyata  dengan  semua  perlakuan lainnya.  Adanya  perbedaan  pertumbuhan    dan perbedaan  jumlah  ukuran  hasil  panen  pada penelitian  ini  diduga  karena  kecukupan  nutrien pada pakan dan terjadinya peningkatan kapasitas pencernaan  dan  penyerapan  nutrien  oleh  ikan . Hal  ini  ditunjukkan  dengan  data  panjang  vili yang  berbeda  nyata  antara  perlakuan  cacing, pakan  buatan  dengan  enzim  dan  pakan  buatan tanpa  enzim. Panjang  vili  mampu  meningkat- kan  tingkat  penyerapan  yang  terjadi  pada  sa- luran pencernaan sehingga lebih banyak nutrien yang  tersedia  sebagai  material  dasar  proses metabolisme  tubuh  (Vinasyiam  2014).  Hal  ini didukung  oleh  pernyataan  Mathlouthi et  al.
(2002)  bahwa  manfaat  dari  penambahan  enzim pada  pakan  dapat  memperbaiki  kapasitas  daya serap dengan meningkatkan ukuran vili usus dan
ini  akan  menekan  dekonjugasi  asam  empedu lebih awal. Hal ini diduga adanya pengurangan oleh  bakteri  yang  menghidrolisis  asam  empedu (Smits  &  Annison,  1996).  Qiyou et  al .  (2011) menyatakan  bahwa  peningkatan  panjang  vili, jumlah  lipatan  usus  dan  luas  permukaan  vili dapat  menyebabkan  penyerapan  dan  peman- faatan  nutrien  menjadi  lebih  baik  karena  luas area  permukaan  penyerapan  nutrien  yang  lebih banyak  sehingga  meningkatkan  nutrien  yang diserap  untuk  dimetabolisme  dan  pernyataan Mathlouthi et  al .  (2002)  menyebutkan  bahwa penambahan  enzim  pada  pakan  gandum  dapat meningkatkan  ukuran  dan tinggi  villi,  sehingga jika dibandingkan antara pakan yang ditambah- kan  enzim  dengan  pakan  tanpa  enzim  ada perbedaan  yang  nyata  (P<0,05)  pada  struktur panjang vili usus.

## Simpulan
Penambahan  enzim  dengan  dosis  sampai 2 g kg -1 pakan dapat meningkatkan panjang villi usus,  namun  belum  mampu  meningkatkan pertumbuhan  ikan  sebagaimana  penggunaan cacing.
Perlu  dilakukan  evaluasi  lanjutan  terkait peningkatan  jumlah  pemberian  pakan  harian, melalui peningkatan frekuensi pemberian pakan agar  jumlah  konsumsi  pakan  buatan  setara  de- ngan cacing.

## Daftar pustaka
Adewumi  AA.  2014.  Growth  performance  and survival  of Clarias  gariepinus hatchlings fed  different  starter  diets. Advances  in Agricultural,  Sciences  and  Engineering Research , 4(6): 1659-1664.
Ali  A,  Al-Ogaly  SM,  Asgah  NA,  Goddard  JS, Ahmed SI. 2007. Effect of feeding different protein to energy (P/E) ratios on the growth performance  and  bodu  composition  of
Oreochromis  niloticus fingerlings. Journal of Applied Ichthyology 24 (1):1-37.
AOAC  (Association  of  Official  Analytical
Chemists).  1990. Official  Methods  of Analysis . AOAC : 1928.
Ayodeji  AA,  Yomla  R,  Torres  AJ,  Rodiles  A, Merrifield DL, Davies SJ. 2016. Combined effects of exogenous enzymes and probiotic on  Nile  tilapia Oreochromis  niloticus growth,  intestinal  morphology  and microbiome. Aquaculture , 462: 61-70.
Bergmeyer  HU,  Grossl  M,  Walter  HE.  1983.
Reagent  for  enzymatic  analysis. In : Bergmeyer  HU  (Editor).
Method of Enzymatic Analysis , 3rd Edition, Volume II. Verlag Che-mie, Weinheim. pp. 274-275.
Chakrabarti  I,  Gani  MA,  Chaki  KK,  Sur  R, Misra  KK.  1995.  Digestive  enzyme  in  11 freshwater teleost fish species in relation to food  habit  and  niche  segregation. Comparative Biochemistry and  Physiology.
112A (1) : 167-177.
Chepkirui  V,  Ngugi  CC,  Bowman  J,  Oyoo- Okoth E, Rasowo J, Mugo-Bundi J, Cherop L.    2011.  Growth  performance,  survival, feed  utilization  and  nutrient  utilization  of African  catfish Clarias  gariepinus larvae co-fed artemia and a micro-diet containing freshwater  atyid  shrimp Caridina  nilotica during  weaning. Aquaculture  Nutrition ,  17 (2):82-89.
Drew MD, Racz VJ, Gauthier R, Thiessen DL. 2005.  Effect  of  adding  protease  to coextruded  flax  :  pea  or  canola  :  pea product on nutrient digestibility and growth performance of rainbow trout, Oncorhynchus mykiss . Animal Feed Science and Technology , 119 (1-2):117-128.
Elert EV, Agrawal MK, Gebauer C, Jaensch H, Ulrike  B.  2004.  Protease  activity  in  gut  of daphnia  magna  :  evidence  for  trypsin  and chymotrypsin enzymes. Comparative Biochemistry  and  Physiology  part  B: Biochemistry and Molecular Biology . 137(3): 287 – 296.
Erlanger BF, Kokowski N, Cohen W. 1961. The preparation  and  properties  of  two chromogenic  substances  of  trypsin.
Archives  of Biochemistry  and  Biophysic . 95(2): 271-278
Farhangi M, Carter CG. 2007. Effect of enzyme supplementation  to  dehulled  lupin-based
diets  on  growth,  feed  efficiency,  nutrient digestibility  and  carcass  composition  of rainbow  trout, Oncorhynchus mykiss
(Walbaum). Aquaculture  Research , 38(12): 1274 – 1282.
Fishcer  AH,  Jacobson  KA,  Rose  J,  Zeller  R.
2008.  Hematoxylin  and  eosin  staining  of tissue  and  cell  sections.  Cold  Spring  Harb Protoc 5.
Geiger  R.  1985. Chymotrypsin.  In  methods  of enzymatic  analysis,  3rd ,  Bergmeyer  HU. Ed. VCH pub : Deerfield. 5 : 99-118.
Ghomi MR, Shahriari R, Langroudi HF, Nikoo M, von Elert E. 2012. Effects of exogenous dietary  enzyme  on  growth,  bodu composition,  and  fatty  acid  profiles  of cultured  great  sturgeon Huso huso fingerlings. Aquaculture International , 20(2): 49-254. Gisbert E, Gimenez G, Fernandez I, Kotzamanis
Y,  Estevez  A.  2009.  Development  of digestive  enzymes  in  common  dentex, Dentex  dentex  during  early  ontogeny.
Aquaculture , 287(3-4): 381-387.
Hidalgo  MC,  Urea  E,  Sanz  A.  1999.
Comparative study of digestive enzymes in fish  with  different  nutritional  habits. Proteolytic and amylase activities. Aquaculture , 170(3-4): 267 - 283 Hofer R, Schiemer F. 1981. Proteolytic activity in  digestive  tract  of  several  species  of  fish with  different  feeding  habits. Oecologia , 48(3): 42-345.
Jusadi  D,  Anggraini  RS,  Suprayudi  MA.  2015. Kombinasi cacing Tubifex dan pakan buatan pada  larva  ikan  patin
Pangasianodon hypophthalmus . Jurnal Akuakultur Indonesia , 14(1): 30-37. Lauff  M, Hofer R. 1984. Proteolytic enzymes in fish  development  and  the  importance  of dietary  enzymes. Aquaculture ,  37(4):  335- 346.
Lin S, Mai K, Tan B. 2007. Effect of exogenous enzyme supplementation in diets on growth and feed utilization in tilapia, Oreochromis niloticus x O. Aureus . Aquaculture Research , 38(15):1645-1653.
Lin  SY,  Selle  PH,  Court  SG,  Cowieson  AJ.
2013.  Protease  supplementation  of sorghum-based  broiler  diets  enchances amino acid digestibility coefficients in four
small  intestinal  sites  and  accelerates  their rates of digestion. Animal Feed Science and Technology , 183(3-4): 175-183. Mathlouthi  N,  Lalles  JP,  Lepercq  P,  Juste  C, Labrier  M.  2002.  Xylanase  and  beta- glucanase supplementation improve conjugated  bile  acid  fraction  in  testinal contents  and  increase  villus  size  of  small intestine wall in broiler chickens fed a rye- based  diet. Journal  of    Animal  Science , 80(11): 2773 – 2779.
Nash RDM, Valencia AH, Geffen AJ. 2006.The origin of Fulton’s condition factor – setting the record straight. Fisheries History , 31(5): 236-238.
Nazir  MI,  Srivastava  PP,  Bhat  IA,  Muralidhar AP, Varghese T, Gireesh-Babu P, Jain KK.
2018. Expression and activity of trypsin and pepsin during larval development of indian walking catfish, Clarias magur . Aquaculture , 491: 266-272.
Nurhayati,  Bambang  NPU,  Setiawati  M.  2014.
Perkembangan  enzim  pencernaan  dan pertumbuhan larva ikan lele dumbo, Clarias
gariepinus Burchell  1822,  yang  diberi kombinasi  cacing  sutra  dan  pakan  buatan.
Jurnal Ikhtiologi Indonesia , 14(3) : 167-178
Qiyou  X,  Qing  Z,  Hong  X,  Chang’an  W, Dajiang  S.  2011.  Dietary  glutamine supplementation  improves  growth  perfor- mance  and  intestinal  digestion/absorption ability in young hybrid sturgeon ( Acipenser schrenckii female  x Huso  dauricus male).
Journal  of  Applied  Ichthyology , 27(2):721- 726
Sari  MN,  Wahyuni  S,  Hammy,  Jalaluddin  M,
Sugito,  Masyitha  D.  2016.  Efek penambahan  ampas  kedelai  yang  difer- mentasi  dengan Aspergillus  niger dalam ransum  terhadap  histomorfometri  vili  usus halus  ayam  kampung, Gallus  domesticus .
Jurnal Medika Veterinaria , 10(2):115-119.
Smits  CHM,  G.  Annison.  1996.  Non-starch plant  polisaccharides  in  broiler  nutrition  : towards a physiologically valid approach to theri  determination. World’s  Poultry Science Journal , 52(2): 203-221.
Tong XH, Xu SH, Liu QH, Li J, Xiao ZZ, Ma
DY.  2012.  Digestive  enzymes  activites  of turbot,  Scophthalmus  maximus  L  during early  development  stages  under  culture condition. Fish  Physiology  and  Bio- chemistry , 38(3): 715 – 724.
Uys  W,  Hecht  T.  1987.  Assay  on  the  digestve enzymes  of  sharptooth  catfish, Clarias gariepinus (Pisces: Clariidae). Aquaculture ,
63 (1-4): 301 – 313.
Verret  JAJ,  Torreele  E,  Spazier  E,  van  der Sluiszen  A,  Rombout  JHWM,  Booms  R, Segner  H.  1992.  The  development  of  a functional  digestive  system  in  the  african catfish Clarias gariepinus (Burchell). Journal  of  the  World  Aquaculture  Society , 23(4): 286-298.
Verret J, van Tongeren M. 1989. Weaning time in Clarias  gariepinus (Burchell)  larvae.
Aquaculture , 83(1-2): 81-88.
Vinasyiam A. 2014. Aktivitas enzim pencernaan dan  kinerja  pertumbuhan  ikan  nila Oreochromis  niloticus yang  diberi  pakan mengandung  hormon  pertumbuhan  rekom- binan  ikan. Tesis .  Sekolah  Pascasarjana. Institut Pertanian Bogor.
Worthington  V.  1993. Worthington  Enzyme Manual .  Enzymes  and  Related  Bio- chemicals  Worthington  Chemmical,  New Jersey, USA. 399 p.
Yildirim  YB,  Turan  F.  2010.  Effects  of exogenous enzyme supplementation in diets on  growth  and  feed  utilization  in  African catfish, Clarias  gariepinus . Journal  of Animal  Veterinary  Advances ,  9  (2):  327- 331.
Zamini A, Kanani H, Esmaeili A, Ramezani S, Zoriezahra  S.  2014.  Effects  of  two  dietary exogenous  multi-enzyme  supplementation, natuzyme  and  beta-mannanase  (Hemicell), on growth and blood parameters of Caspian salmon, Salmon  trutta  caspius . Compa- rative Clinical Pathology . 23 (1): 187-192.
Ze S, Qin Lin X, Chowdhury MAK, Nan Chen J,  Jun  Leng  X. 2 016.  Effects  of  protease supplementatin  in  low  fish  meal  pelleted and  extruded  diets  on  growth,  nutrient retention  and  digestibility  of  gibel  carp , Carrasius  auratus  gibelio. Aquaculture, 460: 37-44.
Zhou Y, Yuan X, Liang X, Fang L, Li J, Guo X, Baik  X,  He  S.  2013.  Enhancement  of growth and intestinal flora in grass carp: the effect of exogenous cellulose. Aquaculture , 416-417: 1-7