Jurnal Pro-Life, Volume 10 Nomor 2, Juli 2023
Karakteristik dan Potensi Bakteri Rhizosfer Penghasil Indole Acetic Acid yang Berasosiasi dengan Tanaman Kopi (Coffea spp.)
Ervinda Yuliatin 1,2* , Mamluatul Faizah 3
1 Program Studi Biologi, Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Mulawarman, Samarinda
2 Laboratorium Mikrobiologi dan Genetika Molekuler, Jurusan Biologi, FMIPA, Universitas Mulawarman, Samarinda
3 Progam Studi D-IV Teknologi Laboratorium Medik, Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Banyuwangi, Banyuwangi
*Corresponding author : eyuliatin@fmipa.unmul.ac.id

## Article History
Received    :   20 June 2023 Approved   :   16 July 2023 Published  :   22 July 2023

## Keywords
IAA, density, diversity index, PGPR.

## ABSTRACT
Coffee  (Coffea  spp.)  consumption  increased  faster  than  five years  ago.  However,  coffee  production  availability  declined due  to  the  limited  field,  soil  nutrient  deficiency,  and  chemical fertilizer.  The  aimed  research  was  to  obtain  a  bacteria- producing IAA hormone isolate and to evaluate its density and diversity  in  improving  soil  quality  and  fertility  for  coffee growth.  The  rhizosphere  soil  samples  were  collected  around the  coffee  plantation  in  UBF  at  Sumberwangi,  Malang.  The sample  was  isolated  using  serial  dilution  on  0.85%  NaCl  and spread on a Tryptic soy agar medium. The result revealed that the  total  number  of  bacteria-producing  IAA  was  36  isolates, and  two  isolates  (TAS1.2  and  TAS  2.6)  had  higher  IAA hormone  production  at  60  ppm.  The  selected  bacteria  can  be optimized  for  a  candidate  of  bacteria-based  fertilizer  coffee production.

## PENDAHULUAN
Kopi  ( Coffea sp.)  dalam  sektor perekonomian  tergolong  dalam  tanaman potensial. Setiap tahun permintaan komoditas  kopi  terus  meningkat  di Indonesia.  Produksi  kopi  terbanyak  ketiga di Jawa Timur berada di Malang. Namun,
faktor  curah  hujan  tinggi,  lahan  semakin terbatas  dan  penurunan  kesuburan  tanah berdampak pada penurunan jumlah produktivitas  kopi  di  Malang  pada  tahun 2017-2018.  Selain  itu,  pemanfaatan  pupuk alami  guna  pengelolaan  ketersediaan

## Prolife

## Jurnal Pendidikan Biologi, Biologi, dan Ilmu Serumpun
https://ejournal.uki.ac.id/index.php/prolife
© 2023 Universitas Kristen Indonesia Under the license CC BY-SA 4.0
nutrisi  dan  hasil  produksi  kopi  belum optimal  sehingga  membutuhkan booster alami agar manfaat pupuk organik semakin maksimal (Suharjono & Yuliatin, 2022).
Universitas  Brawijaya Forest (UBF) sebagai  Hutan  Pelatihan  dan  Penelitian Kopi Nasional melakukan inovasi penelitian untuk memperoleh sistem manajemen  nutrisi  tanah  dan  optimasi produksi  kopi  secara  organik.  Dengan adanya  pengelolaan  tanah  yang  sesuai diharapkan dapat mendukung produktivitas kopi yang ramah lingkungan dan berkelanjutan. Pemanfaatan pupuk organik sebagai  pendukung  pertumbuhan  kopi sudah  dilakukan  menggunakan  kompos. Namun,  belum  hasil  produksi  belum menunjukkan hasil yang signifikan.
Evaluasi  tingkat  kesuburan  dan kualitas  tanah  dapat  diukur  menggunakan mikroba sebagai bioindikator alami.
Mikroba  yang  memiliki  kuantitas  tertinggi di  tanah  yaitu  bakteri  (Yuliatin et  al., 2023),  sehingga  keberadaan  bakteri  dapat digunakan  sebagai  bioindikator  kesehatan tanah.  Bakteri  rhizosfer  yang  berada  di sekitar  perakaran  tanaman  berkontribusi penting  untuk  meningkatkan  kesuburan tanah dan produktivitas tanaman. Pemanfaatan bakteri rhizosfer dapat dijadikan  alternatif  untuk  meningkatkan jumlah  koloni  bakteri  tanah  sehingga proses mineralisasi dan dekomposisi bahan organik tanah maksimal dan tanaman dapat
ternutrisi  dengan  optimal  dikenal  sebagai PGPR (Moe, 2013).
Asosiasi bakteri PGPR pada tanaman dapat menghasilkan fitohormon dan metabolist  sekunder  yang  diperlukan dalam pertumbuhan dan  proteksi  tanaman. Fitohormon  yang  diporduksi  yaitu Indole Acetic  Acid (IAA)  oleh  bakteri  rizosfer terdapat  hampir  di  semua  jenis  tanaman (Suharjono  &  Yuliatin,  2022).  Estimasi bakteri rhizosfer memproduksi IAA sebesar  80%,  hamipr  98%  berasal  dari strain  PGPR  (Arruda et  al., 2013). Keberadaan  PGPR  pada  akar  tanaman menyebabkan  PGPR  hidup  berkoloni  di dekat  maupun  pada  permukaan  akar tanaman  (Amutha et  al., 2014).  Dengan adanya  potensi  tersebut,  bakteri  PGPR dapat dikembangkan sebagai solusi mengatasi penurunan produktivitas kopi di UBF.
Penelitian  Suharjono  &  Yuliatin, (2022)  terkait  eksplorasi  bakteri  penghasil IAA  yang  berasosiasi  dengan  tanaman kopi  yang  berbeda  di  UBF  menunjukkan karakteristik,  densitas,  indeks  diversitas dan  potensi  penghasil  IAA  spesifik. Namun,  informasi terkait  karakteristik dan potensi  bakteri  penghasil  IAA  yang berasosiasi  dengan  tanaman  kopi  yang ternaungi dan tidak ternaungi oleh tanaman lainnya  di  UBF  informasinya  sangat terbatas.  Dengan  demikian,  kajian  ini dilakukan  untuk  mempelajari  tingkat
densitas, diversitas, potensi bakteri penghasil  IAA  yang  berinteraksi  dengan tanaman  kopi  yang  ternaungi  dan  tidak ternaungi tanaman tegakan lainnya menjadi  penting  untuk  pengembangan pupuk  organik  berbasis  bakteri  penghasil IAA  lokal  untuk  produktivitas  tanaman kopi UBF.

## METODE PENELITIAN
Deskripsi Area dan Pengambilan

## Sampel
UBF terletak di area Lereng Gunung Arjuno,  Desa  Sumberwangi,  Kecamatan Karangploso,  Kabupaten  Malang.  Lokasi pengambilan  sampel  pada  titik  koordinat ‘0676950 BT dan ‘9133723 LS/LU dengan ketinggian  1048  m  dpl  serta  kelerengan 60% mengarah ke Tenggara. Jenis tanah di lokasi tergolong Inceptisol yang ditumbuhi oleh  pohon  pinus,  pohon  kopi,  pohon cengkeh,  pohon  pisang  dan  sayur-sayuran. Pengambilan sampel dilakukan pada lokasi A  (TA)  yaitu  tanaman  kopi  ternaungi langsung  oleh  pohon  pinus  sedangkan lokasi B (TB) kondisi tanaman kopi berada di  lereng  bawah  tanpa  naungan  pohon pinus.
Sampel  tanah  (50  g)  diambil  (±  5 cm)  dari  perakaran  tanaman  kopi  dengan kedalaman  tanah  10  cm.  Setiap  lokasi pengambilan  sampel  terdapat  5  titik dengan  tiga  kali  pengulangan.  Jarak  antar titik menyesuaikan dengan luas total lahan
pengambilan  sampel.  Sampel  dari  setiap pengulangan dikompositkan dalam kantong  sampel  sehingga  total  sampel yang  dari  dua  lokasi  berjumlah  6  sampel. Sampel  tanah  diberi  label  dan  disimpan dalam  box  pendingin  pada  suhu    4-10°C. Kondisi  suhu,  kadar  air,  pH,  bahan organik,  dan  diameter  juga  diukur  sebagai faktor  lingkungan  di  tempat  pengambilan sampel.

## Isolasi Bakteri Penghasil IAA
Tanah  dari  setiap  sampel  sebanyak 25  g  dilarutkan  dalam  225  mL  larutan garam fisiologis NaCl 0,85 % secara serial pengenceran  (10 -1 hingga  10 -6 ).  Suspensi tanah  (0,1  mL)  dari  setiap  tingkat pengenceran diinokulasikan pada permukaan media Tryptic Soy Agar (TSA) + triptofan 200 µg/mL secara spread plate (inkubasi  suhu  28  °C,  48  jam).  Koloni bakteri  yang  tumbuh  disetiap  pengenceran dienumerasi  angka  lempeng  total  (TPC) untuk  dibandingkan  jumlah  kelimpahan koloni  bakteri  dan  dipresentasekan  isolat yang  mendominasi  pada  setiap  lokasi pengambilan sampel. Diversitas komunitas bakteri penghasil IAA diukur menggunakan perhitungan indeks diversitas Simpson, yaitu dengan menghitung  jumlah  sel  isolat  dengan rumus (1) (Roswell et al., 2021).
(1)
Keterangan:
D  = Indeks Diversitas Simpson n  = Jumlah individu jenis ke-i
N = Jumlah total individu s  = Jumlah total spesies di dalam komunitas
Setiap isolat yang tumbuh dikarakterisasi  secara  makroskopis  dan mikroskopis  yaitu  dengan  mengamati morfologi  koloni  (bentuk  koloni,  tepi koloni,  elevasi  permukaan  koloni,  tekstur permukaan koloni, konsistensi  permukaan, ciri  optik  dan  warna  koloni)  sedangkan karakterisasi mikroskopis dilakukan dengan  pewarnaan  Gram  dan  pengamatan bentuk  sel  di  bawah  mikroskop  (Varghese & Joy, 2014).

## Potensi Bakteri Penghasil Hormon IAA
1. Uji Kolorimetri dengan  Membran

## Nitrocellulose
Setiap  satu  ose  isolat  diinokulasikan ke dalam media Tryptic Soy Broth (20 mL) yang  mengandung  triptofan  triptofan  100 μg/mL  (inkubasi  72  jam,  suhu  28  °C).
Kemudian,  suspensi  kultur  isolat  (0,5  mL) ditumbuhkan  pada  media  TSA  yang mengandung  200  μg/mL  menggunakan metode spread  plate .  Permukaan  media TSA  kemudian  ditambahkan  membran nitrocellulose (0,45  µ)  (inkubasi  72  jam, suhu 28 °C). Kemudian isolat bakteri yang tumbuh pada permukaan membran nitrocellulose dipindahkan  ke  cawan  petri baru  untuk  diteteskan  reagen  Salkowski (0,1  mL)  lalu  larutan  diinkubasi  gelap  (30 menit). Perubahan warna membran
nutriselulosa  diamati  menggunakan  sistem skor  warna  ( Tabel  1 )  (Suharjono  & Yuliatin, 2022).
Tabel 1. Sistem skor warna IAA Warna Skor Merah pekat 4 Merah 3 Merah muda gelap 2 Merah muda pudar 1 2. Uji Kolorimetri dengan Reagen Salkowski
Isolat  terpilih  berdasarkan  hasil  skor warna  IAA  yang  muncul  diuji  lebih  lanjut secara  kuantitatif.  Media  TSB (20  mL)  + triptofan  200  µg/mL  digunakan  sebagai kultur  starter.  Satu  ose  setiap  isolat  bakteri diinokulasikan  ke  dalam  medium  (inkubasi 48  jam,  suhu  ruang).  Kemudian,  densitas kultur starter diukur pada panjang gelombang  535  nm.  Nilai  densitas  optik semua  isolat  disetarakan  berdasarkan  nilai densitas  terkecil  kemudian  diinkubasi kembali (waktu 24 jam, suhu ruang).
Kultur  starter  dengan  densitas  dan usia yang sama dipergunakan sebagai kultur produksi.  Suspensi  kultur  starter  (4  mL) diinokulasikan ke dalam media TSB 36 mL dengan  penambahan  200  µg/mL  dan diinkubasi  pada  suhu  ruang.  Setiap  kultur produksi dipanen pada jam ke-0, 24, 48, 72, dan  96  jam  dengan  medium  tanpa ditambahkan  inokulum  bakteri  sebagai kontrol.
Setiap  suspensi  bakteri  diambil  1,5 mL  dan  disentrifugasi  (10.000  rpm,  10
menit).  Hasil  supernatan  bakteri  yang diperoleh  ditambahkan  reagen  Salkowski  2 mL  (inkubasi  gelap,  1  jam)  kemudian intensitas warna suspensi diukur menggunakan  spektrofotometer  (λ  =  535 nm).  Prosedur  ini  mengacu  pada  metode (Suharjono & Yuliatin, 2022).
Konsentrasi  produksi  IAA  setiap isolat  ditentukan  menggunakan  persamaan kurva  standar  IAA  yang  diperoleh  dari serial  konsentrasi  IAA  sintetik  dengan penambahan  Reagen  Salkowsi  pada  media TSB ( Tabel 2 ). Adapun komponen kombinasi  larutan  produksi  IAA  sintetik pada Tabel  2 .  Berdasarkan  persamaan Y=ax+b kurva standar IAA, maka konsentrasi  IAA  yang  diproduksi  oleh setiap isolat dapat ditentukan.
Tabel 2 . Produksi IAA sintetik sebagai kurva
standar Konsentrasi (ppm) IAA sintetik (mL) TSB (mL) 0 0 2 2 0,16 1,84 4 0,32 1,68 6 0,48 1,52 8 0,64 1,36 10 0,8 1,2 12 0,96 1,04 14 1,12 0,88 16 1,28 0,72 18 1,44 0,5 20 1,6 0,4

## Analisis Data
Data  dari  setiap  tahapan  penelitian dianalisis  menggunakan  metode  yang
beragam.  Parameter  lingkungan  dianalisis menggunakan uji T-Test (SPSS V.20), data karakteristik isolat bakteri dianalisis kelompok  dan  kemiripan  antar  isolat melalui clustering (PAST3.1),  data  skor warna  dan  data  produksi  hormon  IAA dianalisis ragam Two-way ANOVA (SPSS V.20) pada taraf kepercayan 95% kemudian  diuji Tukey untuk  mengevaluasi perbedaan  kemampuan  masing-masing isolat bakteri penghasil IAA.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Karakteristik  Faktor  Lingkungan  di Agroforestri UB Forest
Sampel  tanah  dari  lokasi  A  dan  B memiliki  karakteristik  yang  tidak  jauh berbeda.
Parameter lingkungan menunjukkan  bahwa  pH  tanah  dikedua lokasi berada pada rentang 4,92 ± 0,5 (TA) dan  4,93  ±  0,4 (TB)  tergolong  tanah  asam (Balai  Penelitian  Tanah,  2005)  dengan suhu  tanah  antara  20,4˚C  ±  1,0  sampai 22,2˚C ± 1,9 . Sementara itu, bahan organik dari  lokasi  A  dan  B  berbeda  signifikan sebesar  81,2  ±8,6  dan  14,8  ±  0,5  secara berurutan.  Kondisi  lingkungan  di  sekitar tanah  seperti  pohon  kopi  digunakan  untuk pengambilan  sampel  memiliki  rata-rata diameter antara 5,66 cm ± 0,9 ˗ 7,56 cm ± 0,4.
Tabel 3. Faktor lingkungan dari tanaman kopi, UB Forest
Parameter Lingkungan Lokasi A B pH 4,92 ± 0,5 a 4,93 ± 0,4 a Suhu Tanah (˚C) * 20,4  ±1,0 a 22,2  ± 1,9 b Bahan Organik Tanah (%) * 8,2 ±8,6 b 14,8  ± 0,5 a Kadar Air Tanah (%) 79  ± 2,9 a 74,8 ± 4 a Diameter Pohon (cm) 5,66  ± 0,9 a 7,56  ± 0,4 a
Keterangan: Baris huruf yang berbeda pada setiap parameter menunjukkan nilai signifikan (p>0,05) antara dua sampel tanah dari lokasi dan tipe tumbuhan naungan yang berbeda
Faktor  fisikokimia  tanah seperti  pH tanah asam, suhu tanah, dan bahan organik mempengaruhi  pertumbuhan  bakteri  di tanah (Mamangkey et al ., 2019).
Kandungan  pH  asam  mengindikasikan bahwa  asam-asam  organik  yang  terbentuk di  tanah  disebabkan  adanya  proses dekomposisi  bahan  organik  tanah.  Di lokasi pengambilan sampel, jumlah serasah daun  memiliki  ketebalan  ±  2  cm  sehingga kadar organik tanah cukup tunggi (Wicaksono et al. , 2015).
Tabel  2 menunjukkan  suhu  tanah berkisar  antara  20˚C  -  24˚C  merupakan suhu yang cukup ideal untuk pertumbuhan populasi  bakteri  di  tanah.  Sementara  itu, kadar  air  tanah  mencapai  74,8%-79% tergolong  baik  karena  ketersediaan  air pada  tanah  akan  diserap  oleh  tanaman sebagai  nutrisi  pertumbuhan  kopi.  Hal  ini dikarenakan  hormon  pertumbuhan  seperti auksin, sitokinin dan giberelin terstimulasi dengan baik  (Zhao et al. , 2021). Kadar air sampel  di  sekitar  tanaman  kopi  ini  cukup untuk  mencegah  adanya leaching nutrisi dalam tanah sehingga tidak berdampak
pada defisit nutrisi pada tanaman (Caldwell et al., 2015).
Densitas dan Diversitas Bakteri

## Rhizosfer penghasil IAA
Densitas dan diversitas bakteri penghasil  IAA  dari  lokasi  A  dan  B  tidak signifikan (p>0,05).
Hal ini mengindikasikan  bahwa  karakteristik  dan populasi bakteri yang melimpah dari kedua lokasi  tersebut  hampir  sama.  Meskipun demikian,  densitas  bakteri  lokasi  A  (TA) lebih rendah dibandingkan densitas bakteri di lokasi B yaitu 33 × 10 5 CFU/g dan 37,3 ×  10 5 CFU/g  secara  berurutan  ( Gambar 1a ).  Hal  ini  berkaitan  dengan  kandungan bahan  organik  tanah  di  lokasi  A  (8,2%) lebih  kecil  dibandingkan  di  lokasi  B (14,8%).
Komponen  bahan  organik  yang tinggi berkorelasi positif dengan peningkatan  kelimpahan  densitas  bakteri penghasil IAA yang berkontribusi terhadap suplai  hormon  pertumbuhan  bagi  tanaman kopi  (Suharjono  &  Yuliatin,  2022). Sementara  itu,  indeks  diversitas  bakteri penghasil IAA dari kedua lokasi
menunjukkan indeks diversitas yang tinggi yaitu  antara  0,81-0,86  ( Gambar  1b ). Artinya, semakin indeks diversitas mendekati  nilai  1,  maka  semakin  tinggi diversitasnya.  Meskipun  demikina,  lokasi A  memiliki  indeks  diversitas  yang  tinggi dengan total isolat yang diperoleh yaitu 16
isolat.  Berbeda  halnya  di  lokasi  B,  indeks diversitas sebesar 0,81 dengan jumlah total isolat  yang  diperoleh  yaitu  20  isolat.  Hal ini  menandakan  bahwa  pada  lokasi  B terdapat isolat yang mendominasi mencapai  >60%  yaitu  TBS1.3  (38%) ( Gambar 1c ).
Gambar 1. Profil komunitas sel bakteri penghasil IAA yang berasosiasi dengan tanaman kopi. Nilai densitas bakteri tertinggi TB (37,3× 10 5 CFU/g) (a), nilai indeks diversitas bakteri tertinggi TA (0,86) (b) dan presentase dominasi relatif tertinggi TB (TBS1.3, 38%) (c)

## Potensi Bakteri Penghasil IAA dari Rhizosfer Tanaman Kopi
Isolat  bakteri  penghasil  IAA  yang diperoleh dari tanaman kopi dari lokasi A
dan B secara berurutan berjumlah 16 isolat dan  20  isolat.  Total  36  isolat  diuji berdasarkan  uji  kolorimetri  menggunakan membran nitrocellulose ,  terdapat  10  isolat
a
b
c
yang  menunjukkan  warna  sesuai  dengan kriteria  skor  warna  yaitu  merah  muda pucat,  merah  muda,  merah  dan  merah kecokelatan ( Gambar 2 ). Kesepuluh isolat bakteri  dengan  kemampuan  menghasilkan
warna  tersebut  yaitu  5  isolat  dari  lokasi  A (TAS1.2,  TAS2.2,  TAS2.4,  TAS3.51,  dan TAS3.52) dan 5 isolat lainnya dari lokasi B yaitu  TBS1.2,  TBS2.3,  TBS2.5,  TBS2.6 dan TBS3.1 ( Gambar 3 ).
Gambar  2. Warna  membrane  nutricellulose  yang  mengindikasikan  isolat  positif  memproduksi hormon IAA. Skor warna 1 (a-e), skor warna 2 (f), skor warna 4 (g-j)
Gambar 3. Isolat bakteri penghasil hormon IAA dari lokasi A (kuning) dan lokasi B (cokelat)
Isolat  dengan  penampakan  warna merah  muda,  merah  maupun  merah  pekat pada membran nutriselulose setelah direkasikan  dengan  reagen  Salkowsi, menunjukkan  adanya  hormon  IAA  yang diriliskan  oleh  isolat  tersebut.  Hal  ini dikarenakan  adanya  interaksi  antara  IAA dan  Fe  membentuk  senyawa  kompleks [Fe 2 (OH) 2 (IA) 4 ]  dan  IA  ( indole-3-acetate ) saling berinteraksi dalam suasana asam
(Bunsangiam et  al., 2021).  Hasil  uji  IAA
tersebut diperoleh 10 isolat yang berpotensi  menghasilkan  hormon  IAA diantaranya  5  isolat  terdapat  di  tanah  atas dan  5  isolat  di  tanah  bawah.  Namun, terdapat  2  isolat  nilai  skor  warna  tertinggi diperoleh  di  tanah  atas  pada  isolat TAS3.51 dan TAS 3.52.
Kesepuluh  isolat  bakteri  penghasil IAA kemudian diuji kolorimetri berdasarkan  konsentrasi  hormon  yang
diproduksi yang dilakukan pada jam ke-24, 48, 72 dan 96 ( Gambar 4 ). Secara umum, pada  rentang  waktu  antara  24  jam  hingga 48  jam  merupakan  fase  produksi  IAA terbaik  dibandingkan  pada  waktu  lainnya. Hal ini dikarenakan setiap isolat memasuki fase pertumbuhan.
Hasil Gambar  4 menunjukkan bahwa  pada  rentang  waktu  48  jam  hingga 72  jam  terjadi  penurunan  konsentrasi  IAA yang  dramatis  pada  semua  isolat.  Hal  ini dimungkinkan karena adanya fase stasioner  setiap  bakteri.  Namun,  pada perubahan  waktu  antara  72  jam  dan  96 jam,  semua  isolat  memproduksi  hormon IAA  kembali  meskipun  konsentrasinya lebih rendah dibandingkan pada perubahan
produksi hormon di hari ke-1, kecuali pada isolat TAS2.6. Kondisi ini dapat dikarenakan setiap isolat bakteri memaksimalkan produksi metabolit sekundernya  (Tallapragada et  al., 2015), (Hanh,  2017)  sehingga  semua  bakteri mampu  memproduksi  IAA  meskipun  80% isolat hanya mampu memproduksi rata-rata kurang  dari  10  ppm.  Namun,  20%  isolat lainnya  mampu  memproduksi  IAA  lebih tinggi dibandingkan pada fase stationernya yang  ditunjukkan  pada  isolat  TAS1.2  dan TAS2.6. Dengan adanya perbedaan produksi  konsentrasi  IAA  menunjukkan bahwa  setiap  isolat  memiliki  karakter  dan potensi yang berbeda-beda.
Gambar 4. Sepuluh isolat bakteri penghasil hormon IAA dari jam ke-24, 48, 72 dan 96. Isolat TAS2.1 dan TAS2.6 mampu memproduksi hormon IAA > 65 ppm di jam ke-96
Produksi  hormon  IAA  dari  isolat TAS1.2 dan TAS 2.6 lebih tinggi
dibandingkan  hasil  Muleta et  al., (2013) sebesar  57,08  ppm  dari  isolat  yang
berasosiasi dengan tanaman kopi. Meskipun  demikian,  hasil  produksi  IAA dari  dua  isolat  di  atas  masih  lebih  rendah dibandingkan  penelitian  (Suharjono  & Yuliatin,  2022)  karena  isolat  bakteri  yang dikoleksi  dari  tanaman  kopi  di  UB  Forest mampu  memproduksi  IAA  mencapai  rata- rata  96,3  ppm.  Berdasarkan  informasi  ini, maka  dapat  diketahui  bahwa  meskipun lokasi pengambilan sampel dari lokasi dan jenis tanaman yang sama, namun karakteristik lingkungan dan waktu
pengambilan  sampel  yang  berbeda  akan mempengaruhi  karakteristik  bakteri  yang berbeda.
Hasil  produksi  IAA  dari  10  isolat potensial  tersebut  kemudian  diobservasi secara makroskopis dan mikroskopis untuk mengetahui  tingkat  kesamaan  antar  isolat. Adapaun  karakter  morfologi  dan  sel  isolat ditunjukkan  pada Tabel  3 .  Setiap  karakter isolat tersebut kemudian dianalisis kemiripannya  sehingga  akan  diperoleh isolat yang memiliki karakter yang sama.
Gambar 5. Pengelompokkan ( Clustering ) karakteristik isolat bakteri penghasil IAA
Klasterisasi  karakteristik  morfologi dan  sel  kesepuluh  isolat  bakteri  penghasil IAA  menunjukan  bahwa  pada  jarak  0,5 terdapat  6  kelompok.  Namun  kelompok yang  paling  dekat  kemiripannya  yaitu TAS3.51  dan  TAS3.52  dengan  presentase kemiripan  85%.  Meskipun  kedua  isolat tersebut  memiliki  kemiripan  yang  dekat, namun letak perbedaannya pada karakter
tepi koloni, tekstur permukaan, konsistensi permukaan  dan  warna  koloni.    Sementara itu, pada tingkat kemiripan 80% terdapat 2 kelompok yaitu antara TBS2.6 dan TBS3.1 serta TBS 2.3 dan TAS2.2. Klasterisasi ini dapat  digunakan  sebagai  identifikasi  awal untuk  menentukan  pola  umum  karakter fenotip  yang  muncul  pada  isolat  sebelum dilakukan  identifikasi  spesifik  berbasis sekuen DNA.
Tabel 3. Karakteristik Pertumbuhan Koloni Rhizobakteria Penghasil Hormon IAA
Parameter Isolat Bakteri Penghasil IAA Terpilih TAS1.2 TAS2.2 TAS2.4 TAS3.51 TAS3.52 TAS2.2 TBS1.2 TBS2.3 TBS2.5 TBS2.6 TBS3.1 Bentuk koloni ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ + ˗ + + + Bulat Bulat bertepi karang ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Bulat bertepi timbul ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Berbenang + + ˗ ˗ ˗ + ˗ +
˗ ˗ ˗ Tak beraturan ˗ ˗ + + + ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Tepi Koloni Licin ˗ ˗ ˗ + ˗ ˗ + ˗ + + + Berombak + ˗ + ˗ + ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Berlekuk ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Tak beraturan ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Seperti benang ˗ + ˗ ˗ ˗ + ˗
+ ˗ ˗ ˗ Elevasi permukaan Datar ˗ + + + + + ˗ + ˗ ˗ ˗ Timbul + ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ + ˗ + + + Cembung ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Tekstur permukaan Kasar ˗ ˗ + ˗ + ˗ + + + ˗ ˗ Berkontur + + ˗ + ˗ + ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Berbatasan (radial) ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ + + Konsistensi permukaan Kering dan rapuh ˗ ˗ ˗ ˗ + ˗ ˗ + ˗ + ˗ Tipis bermembran ˗ ˗ + ˗ ˗
˗
+ ˗ ˗ ˗ ˗ Lekit + + ˗ + - + ˗ ˗ + ˗ + Ciri optik Opalens ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗
Iridesens ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Pudar + + + + + + + + + + +
Berkilat
˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Warna Koloni Merah ˗ ˗ ˗ ˗
˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗
Kuning
˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ + ˗ ˗ Krim ˗ + + +
+ + + ˗ + ˗ Putih + ˗ ˗ ˗ + ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ +
Orange
˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Pewarnaan Gram Gram positif ˗ ˗
+
˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ ˗ Gram negatif + + ˗ +
+ + ˗ + + + + Bentuk sel Basil + + + + + + + + ˗ + +
Coccus
˗ ˗ ˗ ˗
˗ ˗ ˗ ˗ + ˗ ˗

## SIMPULAN
Parameter  lingkungan  berpengaruh pada keberadaan bakteri penghasil hormon
IAA.  Sementara  itu,  isolasi  bakteri penghasil IAA di UBF memiliki tingkat
densitas  33×10 5 CFU/g  (lokasi  A) dan  37,3×10 5 CFU/g  (lokasi  B) sedangkan  indeks  diversitas  secara berurutan  yaitu  0,86  dan  0,81.  Total isolat  bakteri  penghasil  IAA  yang
diperoleh  yaitu  36  isolat  dari  kedua lokasi.  Hasil  uji  kolorimetri  dengan membran nitrocellulose diperoleh 10 isolat yang terdeteksi sebagai bakteri penghasil  IAA.  Sementara  itu,  hasil uji kolorimetri dengan reagen
Salkowski, diperoleh 2 isolat potensial yang mampu menghasilkan IAA  tertinggi  yaitu  TAS1.2  dan TAS2.6 sebanyak 60 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
Amutha, R., Karunakaran, S., Dhanasekaran,  S.,  Hemalatha, Monika, R., Shanmugapriya, P.,
& Sornalatha, T. (2014).
Isolation  and  mass  production of biofertilizer (Azotobacter and
Phosphobacter). International
Journal  of  Latest  Research  in Science  and  Technology  ISSN , 3 (1),
79–81. http://www.mnkjournals.com/ijl rst.htm
Arruda,  L.,  Beneduzi,  A.,  Martins, A.,  Lisboa,  B.,  Lopes,  C., Bertolo,  F., Passaglia, L. M. P., &  Vargas,  L.  K.  (2013). Screening of rhizobacteria isolated  from  maize  ( Zea  mays L.)  in  Rio  Grande  do  Sul  State (South  Brazil)  and  analysis  of their  potential  to  improve  plant growth. Applied  Soil  Ecology , 63 ,
15–22. https://doi.org/https://doi.org/10
.1016/j.apsoil.2012.09.001 Bunsangiam,  S.,  Thongpae,  N., Limtong,  S.,  &  Srisuk,  N.
(2021).  Large  scale  production of  indole-3-acetic  acid  and evaluation  of  the  inhibitory effect of indole-3-acetic acid on weed growth. Scientific Reports ,
11 (1),
13094. https://doi.org/10.1038/s41598-
021-92305-w
Caldwell,  A.  C.,  Silva,  L.  C.  F.,  da Silva, C. C., & Ouverney, C. C. (2015).  Prokaryotic  diversity  in the  rhizosphere  of  organic, intensive, and transitional coffee farms  in  Brazil. PLOS  ONE ,
10 (6), e0106355. https://doi.org/10.1371/journal.p one.0106355 Hanh TTH, M. W. (2017). Correlation  of  growth  and  IAA production  of Lysinibacillus Fusiformis UD  270. Journal  of Applied  and  Physical  Sciences ,
3 (3).
Mamangkey, J., Suryanto, D., Munir,
E.,  Lutfia,  A.,  Hartanto,  A.,
Huda, M.K. (2019). First Report of  Plant  Growth  Promoting Endophytic Bacteria from Medicinal Invasive Plants (Chromolaena  odorata).  IOP Conf. Series: Earth and
Environmental  Science  305:
012091
Moe,  L.  A.  (2013).  Amino  acids  in the  rhizosphere:  from  plants  to microbes. American  Journal  of Botany , 100 (9),  1692–1705. https://doi.org/10.3732/ajb.1300 033
Muleta, D., Assefa, F., Börjesson, E.,
& Granhall,
U. (2013).
Phosphate-solubilising rhizobacteria  associated  with
Coffea  arabica L.  in  natural coffee  forests  of  southwestern Ethiopia. Journal  of  the  Saudi
Society of Agricultural Sciences , 12 (1), 73–84. https://doi.org/10.1016/j.jssas.2
012.07.002
Roswell, M., Dushoff, J., & Winfree,
R.  (2021).  A  conceptual  guide to  measuring  species  diversity. Oikos , 130 (3), 321–338. https://doi.org/https://doi.org/10 .1111/oik.07202 Suharjono,  &  Yuliatin,  E.  (2022). Bacteria  communities  of  coffee plant  rhizosphere  and  their potency as plant growth promoting.
Biodiversitas , 23 (11),
5822–5834. https://doi.org/10.13057/biodiv/ d231136 Tallapragada,  P.,  Dikshit,  R.,  &
Seshagiri,  S.  (2015).  Isolation and optimization of IAA producing Burkholderia seminalis and  its  effect  on seedlings of tomato. In Songklanakarin  J.  Sci.  Technol (Vol. 37, Issue 5). http://www.sjst.psu.ac.th Varghese,  N.,  &  Joy,  P.  P.  (2014). Microbiology Laboratory
Manual .  Kerala  Agricultural University. Wicaksono,  T,  Saeri  Sagiman,  I.  U. (2015). Kajian aktivitas mikroorganisme tanah pada beberapa cara penggunaan lahan di  desa  PAL  IX  Kecamatan Sungai  Kakap  Kabupaten  Kubu Raya. Jurnal  Sains  Pertanian Equator , 13 (3), 1576–1580.
Yuliatin,  E.,  Rosadi,  I.,  Hariani,  N.,
Oktavianingsih, L., & Fadhlillah,  L.  (2023).  The Ecological Significance of Plant Growth Promoting Rhizobacteria  in  Tropical  Soil Kalimantan : A Narrative Review. Journal  of  Tropical
Life  Science,  13 (2),  407–420. https://doi.org/10.11594/jtls.13. 02.20.E Zhao,  X.,  Stein,  K.  R.,  Chen,  V.,
Griffin,  M.  E.,  &  Hang,  H.  C. (2021).  Chemoproteomics  of microbiota  metabolites  reveals small-molecule agonists for orphan receptor GPRC5A. BioRxiv , 1–40.