Spinal Structure of Mice Fetus ( Mus musculus L.) Treated by

## Acanthus ilicifolius L. Leaves Extract
Tunggul Van Roy, Nuning Nurcahyani, Sutyarso, Hendri Busman
Jurusan Biologi FMIPA Universitas Lampung Jl. Soemantri Brojonegoro, Gedung Meneng, Bandar Lampung, 35145, Lampung, Indonesia Email : vanroytunggul@gmail.com

## ABSTRACT
Jeruju had various chemical components. This study was conducted on the teratogenic test of jeruju leaf extract to determine abnormalities in fetal mice  ( Mus musculus L.). This study used a completely randomized design (CRD) method with 20 pregnant female mice divided into 4 groups: 1 group as a control and 3 groups treated with a dose of 3.75 mg/30grBB, 7.5 mg/30grBB,  15 mg/grBB,  each  with  jeruju  leaf  extract  consists  of  5 repetitions.  The  results showed  that  the  doses  of  7.5  mg/30grBB  and  15  mg/grBB  significantly  decreased  fetal weight  and  length  when  compared  with  controls.  This  is  suspected  because  there  is  an active substance in the jeruju leaf extract which is cytotoxic. Anatomically the administration of jeruju leaf extract does not cause abnormalities in the structure of the fetal spine of mice. This is due to the growing fetus taking priority from the many types of nutrients in the mother fluid so that the fetal bone can continue to grow and develop.
Keywords : leaves, mice, spinal, alizarin red

## PENDAHULUAN
Masyarakat Indonesia sudah meng- gunakan  sumber  bahan  obat  dari  alam sebagai  obat  tradisional  secara  turun- temurun.  Hingga  saat  ini  pemakaian  obat tradisional berkembang dengan baik sebagai salah satu alternatif untuk menanggulangi masalah kesehatan.
Tanaman  obat  akan  memberikan  hasil optimal  bila  dikonsumsi  secukupnya  untuk tujuan  pengobatan  (Agusta,  2011).  Jeruju merupakan  tumbuhan  akuatik  yang  biasa dimanfaatkan masyarakat di daerah pantai sebagai  obat  tradisional.  Untuk  saat  ini tumbuhan akuatik sangat digemari masyarakat  sebagai  tanaman  hias  taman, karena  keindahan  bentuk  dan  warna,  baik pada  daun  maupun  bunga  (Hidayat, et  al . 2004).  Tanaman  ini  dimanfaatkan  di banyak  negara  sebagai  obat  tradisional karena  memiliki  khasiat  sebagai    anti radang dan juga dapat digunakan sebagai obat  kanker,  obat  penyakit  hepatitis,  obat bisul  dan  juga  obat  penyakit  cacingan. Kandungan senyawa kimia dalam Acanthus  ilicifolius berfungsi  sebagai neuralgia, analgesik, antiinflamasi, antioksidan,  antifertilitass,  hepatoprotektif,
antitumor, antileukimia, antikanker, antimikroba,  antivirus  dan  antijamur,  serta dapat digunakan sebagai insektisida alami. Kandungan  senyawa  kimia  lain  yang dimiliki tanaman jeruju antara lain feniletanoid  glikosida  :  ilisifoliosida  A  dan ilisifoliosida  B7;  alkaloid:  akantisifolin: steroid:  stigmasterol,  flavonoid.  Mengingat banyak nya manfaat jeruju dan banyak nya kandungan  kimia  yang  terdapat  pada tanaman jeruju sedangkan tingkat keamanan  pemakainnya  belum  diketahui dengan  jelas,  maka  perlu  dilakukan penelitian  tentang  jeruju,  khususnya  pada ibu  hamil  yang  mengkonsumsi  jeruju sebagai  obat.  Pada  penelitian  ini  yang diamati  adalah  tentang  efek  samping ekstrak  daun  jeruju  terhadap  struktur tulang belakang pada fetus mencit.

## METODE PENELITIAN

## Persiapan  Kandang  dan  Hewan  Uji Kandang Mencit Beserta Penutupnya
Sebanyak  20  unit  dibersihkan  dengan alkohol  dan  diberi  alas  berupa  sekam padi.    20  ekor  mencit  jantan  dan  20  ekor mencit  betina  disiapkan  dalam  kondisi yang fertil,  berumur  10  minggu,  dan  berat
sekitar 40 gram. Mencit kemudian diaklimatisasi  selama  1  minggu  dengan diberi  pakan  berupa  pelet  dan  air  minum setiap  harinya.    Aklimatisasi  ini  bertujuan agar  mencit  melakukan  penyesuaian kondisi dengan  lingkungan sekitar.

## Persiapan  dan  Pembuatan  Ekstrak Daun Jeruju
Pada  penelitian  ini  untuk  mendapatkan ekstrak  daun  jeruju  digunakan  metode evaporasi.    Daun  jeruju  dibersihkan, dicuci, dan dijemur hingga kering.  Setelah kering,  daun  jeruju  kemudian  digiling hingga  menjadi  serbuk.    Kemudian dilakukan maserasi dengan cara merendam  500  gram  serbuk  daun  jeruju dalam 2 liter larutan etanol selama 24 jam. Kemudian  disaring  menggunakan  kertas saring.    Cairan  hasil  saringan  tersebut kemudian dipekatkan dengan cara
evaporasi menggunakan alat rotary evaporator selama  4  jam  dengan  suhu 50 o C  dan  tekanan  120  atm.    Setelah  itu didapatkan  ekstrak  daun  jeruju  sebanyak ± 200ml.

## Proses Kopulasi Mencit
Satu  ekor  mencit  betina  disatukan  secara alami  dengan  satu  ekor  mencit  jantan  ke dalam  satu  kandang  dan  diberi  pakan berupa  pelet  dan  air  minum.    Proses persetubuhan  mencit  jantan  dan  betina untuk tujuan fertilisasi atau disebut dengan kopulasi  mencit  ini  terjadi  pada  sore menjelang  petang.    Hal  ini  disebabkan proses  kopulasi  mencit  terjadi  pada  fase estrus,  dimana  fase  estrus  dimulai  antara pukul  16.00-22.00 WIB    (Mangkoewidjojo, dan Smith, 1988).

## Pembuktian Kopulasi Mencit
Pada keesokan pagi setelah mencit betina dan jantan disatukan, dilakukan pengamatan  di  daerah  vagina  pada mencit betina.  Sumbat vagina ( copulatory plug atau vagina  plug )  yaitu  sumbat kekuningan pada vagina yang merupakan campuran  sekret  betina  dengan  ejakulat jantan yang mengeras. Apabila ditemukan sumbat  vagina,  maka  mencit  dinyatakan telah  melakukan  kopulasi  dan  dihitung sebagai kehamilan hari ke-0 (Silvia, 2011).

## Pemberian Ekstrak Daun Jeruju
Dilakukan  dengan  cara  dicekok  (secara oral)  menggunakan  spuit  yang  ujungnya ditumpulkan  dan  diberi  pipa  karet  kecil. Untuk  setiap  perlakuan  digunakan  4  ekor mencit  dengan  5  kali  pengulangan. Perlakuan  pencekokan  ini  dilakukan  satu kali  sehari  selama  14  hari  dengan pemberian  dosis  yang  berbeda-beda untuk setiap kelompok perlakuan. Menurut Christijanti  (2009)  dosis  yang  diberikan pada tikus putih sebagai berikut:
1.  Kelompok kontrol dengan diberi 0 ml/ 200 grBB dalam 1 ml aquabides (A)
2.  Kelompok  dosis  10  mg/200  grBB dalam 1 ml aquabides (B)
3.  Kelompok  dosis  20  mg/200  grBB dalam 1 ml aquabides (C)
4.  Kelompok  dosis  40  mg/200  grBB dalam 1 ml aquabides (D)
Dosis  ini  diberikan  pada  hewan  uji  tikus putih  yang  beratnya  5  kali  mencit  (sekitar +200gr), dikonversi ke berat badan mencit sehingga  dosis  ekstrak  daun  jeruju  yang digunakan adalah sebagai berikut:
1.  Kelompok kontrol, perlakukan dengan diberi 0,3ml   aquabides
2.  Kelompok    dosis  3,75  mg/30  grBB dalam 0,3 ml aquabides (P1)
3.  Kelompok  dosis  7,5  mg/30  grBB dalam 0,3 ml aquabides (P2)
4.  Kelompok  dosis  15  mg/30  grBB dalam 0,3 ml aquabides (P3)

## Pengamatan
Pembedahan  terhadap  mencit  betina dilakukan dengan menggunakan seperangkat alat bedah setelah kehamilan hari  ke  18.    Seluruh  mencit  baik  dari kelompok  kontrol  maupun perlakuan dibius  menggunakan  kloroform.    Mencit dibedah dan fetus dikeluarkan dari uterus, kemudian dibersihkan dengan air mengalir dan  dilakukan  penimbangan  berat  badan dan pengukuran panjang fetus.
Selanjutnya dikeluarkan organ dalam fetus dan  dilakukan  preparasi  tulang  belakang fetus  dengan  pewarna  Alizarin  Red. Pembuatan  larutan  Alizarin  Red  dengan
cara  menambahkan  6  mg  bubuk  Alizarin Red  ke  dalam  1  liter  larutan  KOH  1% (Manson, 1982).

## Rancangan Percobaan
Rancangan  percobaan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  Rancangan Acak  Lengkap  dengan  4  perlakuan  dan masing-masing perlakuan dilakukan pengulangan  sebanyak  5  kali.    Dalam penelitian  ini  terdapat    20  ekor  mencit yang  dibagi  menjadi  4  kelompok,  yaitu  1 kelompok sebagai kontrol dan 3 kelompok sebagai perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Tulang Belakang Fetus
Fetus mencit yang sudah dikeluarkan dari uterus  dan  dibersihkan  organ  dalamnya kemudian dilakukan preparasi untuk mengamati struktur tulang belakang menggunakan  larutan  Alizarin  Red.    Hasil pengamatan tulang belakang fetus mencit setelah diberi ekstrak daun jeruju disajikan pada Tabel 1.

## Tabel 1. Struktur anatomi tulang belakang fetus mencit setelah pemberian ekstrak daun jeruju
Perlakuan Jumlah Fetus Keseluruhan (ekor) Kejadian Kelainan Tulang Belakang Servikalis Torakalis Lumbalis A 20 - - - B 25 - - - C 38 - - - D 19 - - -
Keterangan : A = Kontrol (0,4), B = Dosis 3,75 mg/30 gram BB, C = Dosis 7,5 mg/30 gram BB, D = 15mg/30 gram BB
Berdasarkan  Tabel  1,  pengamatan  ter- hadap  tulang  belakang  fetus  mencit dilakukan dengan cara mengamati struktur tulang  belakang  fetus  meliputi  servikalis, torakalis, dan lumbalis. Setelah dibandingkan antara tulang belakang fetus normal  dan  yang  diberi  perlakuan,  tidak ditemukan  adanya  kelainan  pada  tulang belakang  pada  semua  tingkatan  dosis. Perbandingan  antara  tulang  belakang fetus  normal  (kontrol)  dengan  fetus  yang diberi  perlakuan  ekstrak  rimpang  teki disajikan pada gambar 1.
Dari  hasil  fiksasi  dengan  larutan  alizarin red  dapat    diamati  secara  visual  atau secara deskriptif terhadap struktur anatomi  tulang  belakang  fetus  setelah pemberian  ekstrak  daun  jeruju  ( Acanthus ilicifolius  . L)  pada  induk  mencit  yang menunjukkan  tidak  adanya  pengaruh
ataupun  tidak  adanya  kelainan  pada  tiap- tiap  perlakuan.  Hal  ini  dapat  diketahui dengan        membandingkan  antara  fetus kontrol dengan fetus dari induk yang telah diberikan    perlakuan.  Pada  fetus  normal (kontrol)  terdapat  7  tulang  servik,  13 tulang  thorak,  6  tulang  lumbalis,  6  tulang sakral,  dan  2  atau  3  tulang  kaudal (Sukandar, dkk., 2008). Dari perbandingan tersebut  juga  diketahui  pada  perlakuan dengan  dosis  3,75  mg/30  gram  BB  juga memiliki 7 tulang servik, 13 tulang thorak, 6  tulang  lumbalis,  6  tulang  sakral,  dan  2 atau 3 tulang kaudal,begitupun pada dosis 7,5  mg/30  gam  BB  dan  dosis  15  mg/30 gram BB diketahui juga 7 tulang servik, 13 tulang  thorak,  6  tulang  lumbalis,  6  tulang sakral, dan 2 atau 3 tulang kaudal memiliki menghasilkan dengan tidak adanya kelainan  pada  fetus  yang  diberikan  tiap- tiap perlakuan.
Proses  kalsifikasi  (penulangan)  terjadi melalui  dua  cara,  yaitu  osifikasi  intra membran dan endokondral.  Osifikasi intra membran merupakan proses pembentukan tulang dari jaringan mesenkim menjadi jaringan tulang, misalnya pembentukan tulang pipih. Osifikasi  endokondral  merupakan  proses pembentukan  tulang  yang  terjadi  dimana sel-sel  mesenkim  berdifferensiasi  terlebih dahulu  menjadi  kartilago  (jaringan  tulang rawan),  lalu  berubah  menjadi  jaringan tulang,  misalnya  pembentukan  tulang panjang, ruas tulang belakang,  dan pelvis (Muna, dkk., 2011).
Skeleton pada fetus berasal dari perkembangan  mesoderm.  Pada  meso- derm  terjadi  differensiasi  meliputi  meso- derm kepala, badan, dan ekor yang dalam tingkat perkembangan ini disebut mesenkim embrional.  Mesenkim berkem- bang  menjadi  struktur  mesoderm  tubuh, termasuk  jaringan  pengikat  yaitu  kartilago (tulang  rawan)  dan  tulang  sejati  (Sagi, 1977;  Muna, dkk., 2011).
Skeleton mempunyai fungsi sebagai penunjang,  pelindung  tubuh,  dan  sebagai tempat penyimpanan Ca 2+ . Di samping itu, tulang  merupakan  tempat  pertautan  otot dan  tendon  sebagai  alat  gerak.  Proses kalsifikasi tulang diawali dengan penimbunan  garam  kalsium  pada  serabut kolagen yaitu suatu proses yang diinduksi oleh  proteoglikan  dan  glikoprotein  yang mengikat kalsium berafinitas besar (Junqueira  &  Cameiro,  2008).    Per- tumbuhan skeleton merupakan salah satu parameter  yang  sering  diamati  untuk melihat  ada  tidaknya  efek  teratogenik
suatu  senyawa  yang  terkandung  pada organisme. Menurut Dewoto (2007), nutrisi yang paling penting untuk pertumbuhan  dan  perkembangan  tulang adalah  kalsium.    Kalsium  memegang  dua peranan fisiologis penting di dalam tubuh. Di  dalam  tulang,  garam-garam  kalsium berperan pada proses kalsifikasi, sehingga tulang menjadi keras.
Pengerasan tulang ber-fungsi untuk menopang  berat  badan.  Dalam  cairan ekstraseluler dan sitosol, kalsium berperan  pada  berbagai  proses  biokimia tubuh  dalam  bentuk  ion-ion  kalsium (Setiyohadi, 2009).
Dari  pengamatan  yang  telah  dilakukan secara  deskriptif  dengan  menggunakan larutan  pewarna  alizarin  red,  pada  fetus normal  (kontrol)  terdapat  7  tulang  servik, 13  tulang  thorak,  6  tulang  lumbalis,  6 tulang  sakral,  dan  2  atau  3  tulang  kaudal (Sukandar,  dkk.,  2008).  Kemudian  hasil tersebut  dibandingkan  dengan  tulang pada fetus  yang  telah  diberi  ekstrak  daun jeruju dengan dosis 3,75 mg/30 gram BB, dosis  7,5  mg/30  gam  BB,  dan  dosis  15 mg/30  gram  BB.  Dari  hasil  perbandingan tersebut tidak ditemukan adanya perbedaan  dengan  tulang  pada  fetus normal  baik  jumlah  ruas  belakangnya maupun  strukturnya.  Tidak  terjadinya kelainan  struktur  tulang  belakang  pada ketiga    fetus  tersebut  setelah  diberi perlakuan  ekstrak  daun  jeruju  diduga disebabkan  oleh  fetus  yang  sedang tumbuh mengambil prioritas dari banyaknya jenis nutrisi dalam cairan induk sehingga tulang fetus  dapat  terus tumbuh dan  berkembang.    Hal  ini  berhubungan dengan  fungsi  plasenta  sebagai  tempat
(a)                              (b)                                (c) (d)
Gambar 1.  Perbandingan antara tulang belakang fetus normal (kontrol) dengan fetus yang diberi perlakuan ekstrak rimpang teki;  A = Kontrol (0,4) , B = Dosis 3,75 mg/30 gram BB, C = Dosis 7,5 mg/30 gram BB, D= 15mg/30 gram BB
kombinasi ekstrak umbi lapis bawang putih  dan  ekstrak  rimpang  kunyit tehadap  janin  mencit  Swiss-Webster. JKM , 8(1), 36-44.
penyimpanan  nutrisi  bagi  fetus.    Plasenta menyimpan  sejumlah  besar  nutrisi  seperti kalsium,  besi,  protein,  dan  glukosa  yang digunakan  untuk  pertumbuhan  fetus. Selain  plasenta,  sebagian  kalsium  juga disimpan  dalam  tubuh  induk  seperti  pada gigi  dan  tulang.    Apabila  kebutuhan kalsium  fetus  berkurang  maka  simpanan kalsium  pada  tulang  dan  gigi  inilah  yang akan  dimobilisasi  untuk  osifikasi  tulang pada fetus (Guyton, 1990).

## KESIMPULAN
Dari penelitian yang telah dilakukan dapat bahwa  Struktur  Tulang  Belakang  Fetus Tidak  menyebabkan  kelainan  setelah pemberian  ekstrak  daun  jeruju  dengan dosis  3,75  mg/30  gram  BB,  dosis  7,5 mg/30 gam BB, dan dosis 15 mg/30 gram BB.  Hal  ini  disebabkan  oleh  fetus  yang sedang  tumbuh  mengambil  prioritas  dari banyaknya jenis nutrisi dalam cairan induk sehingga tulang fetus  dapat  terus tumbuh dan  berkembang.    Hal  ini  berhu  bungan dengan  fungsi  plasenta  sebagai  tempat penyimpanan  nutrisi  bagi  fetus.    Plasenta menyimpan  sejumlah  besar  nutrisi  seperti kalsium,  besi,  protein,  dan  glukosa  yang digunakan untuk pertumbuhan fetus.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut mengenai  zat  atau  kandungan  spesifik dalam  ekstrak  daun  jeruju  yang  dapat menyebabkan  efek  teratogen  terhadap fetus mencit.

## DAFTAR PUSTAKA
Agusta, A. (2011). Perbandingan komponen  kimia  rimpang  temu  hitam ( curcuma aeruginosa roxb.) dan temu putih  ( c.  zedoaria )  yang  tumbuh  di indonesia dengan gajatsu ( c. zedoaria )  asal  jepang. Artikel  Ilmiah . Laboratorium Fitokimia, Bidang Botani, Puslit Biologi-LIPI.
Christijanti,  W.  (2009).  Penurunan  jumlah dan  motilitas  spermatozoa  setelah pemberian  ekstrak  biji  pepaya  (kajian
potensi  biji  papaya  sebagai  bahan kontrasepsi  alternatif). Biosaintifika. 19 – 26.
Dewoto,  H.  R.  (2007). Farmakologi  dan Terapi:  Vitamin  dan  Mineral  Edisi  5 . Balai Penerbit FK UI. Jakarta.
Guyton, A. C. (1990). Fisiologi Kedokteran . Terjemahan Dharrna, A., dan P., Lukmanto. Jakarta: EGC.
Hidayat,  S.,  Yuzammi,  S.,  Hartini,  I., Astuti, P. (2004). Tanaman Air Kebun Raya Bogor.  1(5) .
Junqueira  L.C.,  Carneiro,  J.,  Kelley,  R.O.
(1998). Histologi  Dasar .  Terjemahan Jan  Tambayong.  Edisi  8.  Jakarta: Penerbit Buku  Kedokteran EGC.
Mangkoewidjojo dan Smith. (1988).
Pemeliharaan,
Pembiakan, dan Penggunaan    Hewan  Percobaan  di Daerah Tropis . Jakarta: UI Press.
Manson,  J.  M.,  Zenick,  H.,  dan  Costlow,
R. D. (1982). Teratology Test Methods for Laboratory Animals. New
York: Ravent Press.
Muna,  L.,  Astirin,  O.  P.,  dan  Sugiyarto.
(2011). Uji teratogenik ekstrak Pandanus  conoideus varietas    buah kuning terhadap perkembangan embrio tikus putih ( Rattus norvegicus ). Nusantara    Bioscience ,
2, 126-134.
Sagi, M. (1997). Embriologi Perbandingan Pada  Vertebrata .  Fakultas  Biologi, Yogyakarta: Universitas Gadjah
Mada.
Setiyohadi,  B.  (2009) .  Peran  Kalsium  dan Vitamin  D  Pada  Metabolisme  Tulang . Jakarta:  Sub  bagian  Reumatologi,
Bagian Ilmu Penyakit Dalam FKUI/RSCM.
Sukandar,  E.  Y.,  Fidrianny,  I.,  dan Garmana,  A.  N.  (2008).  Pengaruh