## KARAKTERISASI ENZIM KITINASE DARI ISOLAT BAKTERI TERMOFILIK B1211 ASAL AIR PANAS BORA
[Characterization of Chitinase from B1211 Thermophile Bacteria Isolates in Bora Hot Springs]
Jaya Hardi 1* , Ruslan 1 , Abd. Rahman Razak 1 , Silva 1
1 Jurusan Kimia Fakultas MIPA, Universitas Tadulako Jl. Soekarno Hatta Km.9, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu, Telp. 0451- 422611
Diterima  19 Juni 2017, Disetujui 2 Agustus 2017

## ABSTRACT
The  objective  of  this  research  was  to  characterize  of  chitinase  from  thermophile  bacteria  that  was living in Bora hot spring. The B1211 isolates were used to production of crude chitinase on MSM broth media  with  chitin  colloidal  concentration  of  1%  and  incubation  temperature  of  60 o C  for  3  days.  The chitinase  activity  was  analyzed  based  on  N-acetyl-D-glucosamine  standard.  The  results  showed that optimal temperature, optimal pH, and substrate concentration of crude chitinase is 600C, 7, and 2%, respectively. The kinetic of chitinase has Vmax and Km value of 0.72 U/ml and 0.01 mg/ml. The metal ions which were as activator are Hg 2+ , Zn 2+ , Al 3+ , and Cu 2+ ion, whereas Li 3+ , Ca 2+ ,  and K + ions were contributed as inhibitor
Keywords : thermophile bacteria, B1211 isolates, chitinase , characterization

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk mengkarakterisasi enzim kitinase dari bakteri termofilik asal sumber air panas Bora. Isolat bakteri B1211 digunakan pada produksi enzim kitinase pada media MSM cair yang diperkaya  dengan  konsentrasi  koloidal  kitin  1%  pada  suhu  inkubasi  60 o C  selama  3  hari.  Aktivitas enzim  kitinase  dianalisis  berdasarkan  standar  N-asetil-D-glukosamin  untuk  kondisi  suhu  dan  pH optimum,  pengaruh  substrat,  dan  pengaruh  ion  logam.  Hasil  penelitian  menunjukkan  enzim  kitinase memiliki  suhu  optimum,  pH  optimum,  dan  konsentrasi  substrat  terbaik,  masing-masing  60 0 C,  pH  7, dan 2%. Kinetika enzim kitinase memiliki Vmaks dan Km, yaitu 0,72 U/mL dan 0,01 mg/mL. Ion logam Hg 2+ ,  Zn 2+ ,  Al 3+ ,  dan  Cu 2+ berfungsi  sebagai  activator,  sedangkan  ion  Li 3+ ,  Ca 2+ ,  dan  K + cenderung sebagai inhibitor terhadap enzim kitinase.
Kata kunci : bakteri termofilik, isolat B1211, kitinase, karakterisasi
*)Coresponding author : jr.hardi0803@gmail.com, Hp.+6281341314717

## LATAR BELAKANG
Kitin  merupakan  biopolimer  berupa homopolimer dari β-1,4-N-asetil-D- glukosamin  dengan  kelimpahan  terbanyak di  alam  setelah  selulosa  (Chen et  al., 2010). Penelitian tentang kitin dan turunannya  telah  banyak  dikembangkan, seperti oligomer kitin, N-asetil-D- glukosamin,  dan  kitosan,  karena  produk- produk  tersebut  banyak  dimanfaatkan untuk  keperluan  biomedis,  farmasi,  dan pertanian (Purwani et al., 2002). Salah satu turunan  kitin  yang  memiliki  nilai  jual  tinggi adalah produk hasil hidrolisis senyawa kitin baik  dalam  bentuk  oligomer  maupun monomernya.  Oligomer  kitin  berfungsi untuk meningkatkan sistem imunitas tubuh, bersifat  antibakteri  dan  antijamur,  juga dapat  meningkatkan  daya  tahan  tanaman. Sementara monomer kitin dalam bentuk N- asetil-D-glukosamin  dimanfaatkan  sebagai suplemen,  obat  pengontrol  kadar  gula darah,  dan  memiliki  efek  antiinflamasi. Hasil hidrolisis kitin dalam bentuk monomer atau N-asetil-D-glukosamin dapat digmanfaatkan  pada  industri  kosmetik dalam
mengurangi hilangnya hiperpigmentasi (Herdyastuti et al ., 2009).
Hidrolisis  kitin  dapat  ditempuh  dengan cara  kimiawi  ataupun  enzimatik  (Chen et al., 2010). Degradasi kitin secara enzimatis memiliki  keunggulan  dibandingkan  secara kimiawi  karena  metode  yang  digunkanan sederhana,  cepat  dan  proses  pemotongan ikatan  glikosidik  yang  lebih  spesifik  untuk menghasilkan  senyawa-senyawa  turunan kitin.  Enzim  yang  umum  digunakan  dan
spesifik  pada  hidrolisis  kitin  adalah  enzim kitinase.
Kitinase (E.C. 3.2.1.14) dapat diperoleh  dari  beberapa  jenis  organisme, seperti  crustacea,  bakteri,  jamur,  dan serangga. Khusus pada penggunaan bakteri  sebagai  penghasil  enzim  kitinase dapat dilakukan deteksi awal berupa analis zona  bening  pada  medium  selektif  agar dan  dilanjutkan  dengan  perhitungan  nilai Indeks  Kitinolitik  (IK)  (Herdyastuti et  al ., 2009).  Selain  indeks  kitinolitik,  aktivitas kitinase menjadi parameter penting lainnya dalam  pemilihan  isolat  bakteri  termofil terbaik.  Salah  satu  bakteri  penghasil kitinase yang banyak mendapatkan perhatian  adalah  bakteri  termofil,  karena dapat  menghasilkan  enzim  yang  bersifat termostabil  atau  tahan  pada  suhu  yang tinggi  dan  menghasilkan  proses  reaksi yang  lebih  cepat.  Jenis  bakteri  termofil sebelumnya  telah  diisolasi  dari  sumur hidrotermal  di  Manado  Sulawesi  Utara dengan  nilai IK 2,40 (Chasanah,  2004 dan Purwani et  al., 2002).    Natsir et  al. (2009) melaporkan  isolasi  bakteri  termofil  (isolat ST-3) dilakukan pada pH 7 dan suhu 60 o C dengan aktivitas kitinase 0,225 U/mL.
Enzim kitinase yang bersifat termostabil  dapat  diperoleh  pada  bakteri yang  hidup  di  daerah  dengan  suhu  tinggi, seperti  sumur  hidrotermal,  kawah  gunung berapi, dan lain sebagainya (Purwani et al., 2002).  Indonesia  yang  kaya  akan  gunung berapi tentunya sejalan dengan melimpahnya  sumber  air  panas,  maka potensi  pengembangan  produksi  kitinase
dari isolasi bakteri termofil sangatlah besar. Salah  satu  dari  beberapa  potensi  tersebut ialah  air  panas  Bora  yang  terletak  di Kabupaten Sigi Provinsi Sulawesi Tengah.
Bakteri termofilik dari sumber air panas Bora  sebelumnya  telah  diisolasi  untuk menghasilkan  kitinase  dengan  aktivitas kitinolitik tertinggi pada isolat bakteri B1211 (Khoridah, 2015). Selanjutnya isolat bakteri B1211  tersebut  juga  telah  dikembangkan oleh Hardi et al. (2016) untuk memproduksi kitinase  kasar  dan  menunjukkan  aktivitas kitinase yang tinggi (0,75 U/mL). Berdasarkan  hal  tersebut  sangat  potensial untuk  mengembangkan  atau  melanjutkan kajian  pada  isolat  bakteri  B1211  tersebut ke  arah  karakterisasi  enzim  kitinase  yang dapat  dijadikan  acuan  untuk  aplikasinya yang lebih luas.

## METODE PENELITIAN Bahan dan Peralatan
Bahan  utama  penelitian  ini  adalah isolat  bakteri  B1211,  kitin,  MSM  cair dengan  kolidal  kitin  (komposisi:  0,1% KH 2 PO 4 ;  0,7%  (NH 4 ) 2 SO 4 ;  0.1%  NaCl; 0,01%  MgSO 4 .7H 2 O;  0.05%  ekstrak  ragi, dan  0.5%  koloidal  kitin),  NaCl  fisiologis 0.9%, bufer fosfat, bufer sitrat, bufer borat, HCl  pekat,  NaOH  12  N,  glass  wool,  NaCl,
HgCl 2 ,  CaCl 2 ,  MgCl 2 ,  ZnCl 2 ,  CuCl 2 ,  LiCl 2 , KCl,  FeCl 3 ,  AlCl 3 ,  etanol  96%,  dan aquades.  Bahan  lainnya  untuk  analisis meliputi: pewarna Schales,  dan N-asetil-D- glukosamin.
Alat yang digunakan meliputi spektrofotometer  UV-Vis, thermoshaker ,
pH meter, oven, inkubator , laminar air flow , sentrifugasi,  penangas  air,  pipet  mikro, vortex,  botol  sampel,    dan  alat-alat  gelas yang  umum  digunakan  di  laboratorium kimia.

## Prosedur Penelitian
Produksi Ekstrak Kitinase
Produksi
ekstrak kitinase menggunakan  metode  Hardi et  al. (2016). Kultur awal bakteri ( starter ) dibuat dari stok isolat  bakteri  B1211,  disuspensikan  pada 50  mL  larutan  fisiologis  0,9%  NaCl. Produksi  enzim  kitinase  diawali  dengan sebanyak  satu  mL  inokulum  diambil  dan dipindahkan  pada  media  starter  yaitu media  MSM  cair  (tanpa  koloidal  kitin)  dan diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam. Langkah  selanjutnya  diambil  sebanyak  1 mL  dan  dipindahkan  pada  media  produksi (MSM  cair  diperkaya  koloidal  kitin  1%), pada  pH  7  dan  selanjutnya  diinkubasi  di dalam termoshake pada kecepatan 60 rpm pada  suhu  60 o C  selama  3  hari.  Medium selanjutnya disentrifugasi dengan kecepatan  10.000  rpm  selama  15  menit. Supernatan  yang  diperoleh  adalah  ekstak enzim  kitinase  kasar  yang  siap  ditentukan aktivitasnya  (Ueda  &  Arai,  1992)  dan karakteristiknya.
Karakterisasi Estrak Kitinase (Modifikasi metode  Sarni  dkk.,  2015  dan  Noviendri dkk., 2008)

## 1.  Penentuan pH optimum
Aktivitas  kitinase  diuji  pada  beberapa variasi pH. Penentuan pH optimum dilakukan  dengan  mereaksikan  enzim dengan  buffer  pada  pH  yang  berkisar
antara  4-9.  Buffer  yang  digunakan  dalam penentuan pH optimum adalah 0,2 M buffer sitrat  (pH  4,  5,  dan  6),  buffer  fosfat  (pH  7 dan 8), dan buffer borat (pH 9).

## 2.  Penentuan suhu optimum
Mengukur  aktivitas  kitinase  pada  suhu inkubasi  yang  beragam.  Suhu  optimum ditentukan  dengan  mereaksikan  ekstrak kasar  enzim  dengan  substrat  pada  suhu 30 o C,  40 o C,  50 o C,  60 o C,  dan  70 o C  yang dilakukan pada pH optimumnya.
3.  Penentuan pengaruh konsentrasi substrat
Analisis aktivitas enzim dengan menggunkan  konsentrasi  substrat  (koloidal kitin) yang divariasikan yakni dari 0,1%; 0,2 %;  0,3%;  0,4%;  0,5%;  0,6%;  0,7%;  dan 0,8%.  Perlakuan  ini  menggunakan  pH  dan suhu optimum yang telah diperoleh sebelumnya dengan waktu inkubasi selama  30  menit.    Selanjutnya  ditentukan kinetika enzim kitinase.
4.  Penentuan pengaruh ion logam
Pengujian dilakukan dengan mereaksikan  enzim  pada  pH,  suhu  dan konsentrasi  substrat  optimum.  Pada  saat reaksi,  ion  logam  ditambahkan  ke  dalam tabung  sampel  dan  kontrol.  Beberapa  ion logam  yang  digunakan  merupakan  kation bivalen  dengan  konsentrasi  10  mM  antara lain  Hg 2+ ,  Zn 2+ ,  Mg 2+ ,  Li 2+ ,  Cu 2+ ,  Ca 2+ ,  Na + , K + ,  Al 3+ ,  dan  Fe 3+ dalam  bentuk  garam kloridanya.  Pada  saat  bersamaan,  dibuat kontrol  positif  yang  tidak  ditambahkan dengan ion logam. Hasil reaksi selanjutnya ditentukan nilai aktivitas enzimnya.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik Ekstrak Kitinase
1.  pH Optimum
Tingkat  keasaman  lingkungan  akan mempengaruhi  kecepatan  kerja  enzim dalam  mengkatalisis  suatu  reaksi,  karena konsentrasi  ion  H + dapat  mempengaruhi struktur tiga dimensi enzim dan aktivitasnya. pH optimum enzim merupakan  kondisi  dimana  struktur  tiga dimensi  enzim  sangat  efektif dalam berinteraksi  dengan  susbstrat  sehingga reaksi  mencapai  optimal  (Lehninger,  1982 dan Purkan et al., 2014).

## Gambar 1  Hubungan  antara  aktivitas  kitinase terhadap pH
Kitinase  dari  isolat  B1211  memiliki kondisi  optimum  pada  pH  7  dengan aktivitas  0,64  U/mL  (Gambar  1).  Hal  ini sesuai  dengan  pH  lingkungan  normalnya. Pada penelitian sebelumnya, ekstrak kitinase  dari  isolat  bakteri  ST-3,2b  juga memiliki  pH  optimum  pada  pH  7    dengan aktivitas  0,26  U/mL  (Natsir et  al .,  2009).
Nilai  pH  optimum  7  juga  ditemukan  pada enzim  kitinase  dari  isolate  bakteri  termofil 13,5 asal Manado (Jayanti, 2002), isolat K- 29-14  yang  diisolasi  dari  kawah  kamojang jawa barat (Rahayu et al ., 2004) dan isolat
0.3000 0.4000 0.5000 0.6000 0.7000 3 4 5 6 7 8 9 10 A k tiv ita s U/m L pH
bakteri  termofilik  GP18  yang  diisolasi  dari sumber air panas Gunung Pancar (Lestari, 2000).

## 2.  Suhu Optimum
Temperatur atau suhu dapat meningkatkan  aktivitas  enzim  sebanyak dua kali lipat hingga pada kondisi optimum setiap  kenaikan  10 0 C  di  atas  suhu minimumnya (Lehninger, 1982).
Gambar 2  Hubungan  antara  aktivitas  kitinase terhadap suhu
Gambar 2 menunjukkan bahwa aktivitas  ekstrak  enzim  kitinase  isolat B1211  meningkat  mulai  suhu  30 0 C  hingga 50 0 C  dengan  aktivitas  tertinggi  0,71  U/mL dan  selanjutnya  pada  suhu  60 0 C  terjadi penurunan aktivitas ekstrak enzim kitinase. Pada  penelitian  Natsir et  al .  (2009),  isolat bakteri ST-3,2b meningkat mulai suhu 37 0 C sampai  60 0 C  tetapi  mengalami  penurunan aktivitas  pada  suhu  65 0 C  dengan  aktivitas kitinase  tertinggi  0,10  U/mL.  Aktivitas enzim akan meningkat seiring meningkatnya suhu sampai tingkat optimal, kenaikan  suhu  akan  meningkatkan  energi kinetik  sehingga  tumbukan  antar  molekul akan  semakin  cepat,  sehingga  semakin mudah  terbentuk  kompleks  enzim-substrat dan  produk  yang  terbentuk  juga  semakin
banyak  (Natsir et  al .,  2009).  Akan  tetapi, pada suhu yang lebih tinggi akan menyebabkan  aktivitas  enzim  menurun karena  terjadi  denaturasi  atau  kerusakan struktur enzim (Pratiwi et al ,, 2015).
3.  Pengaruh Konsentrasi Substrat
Konsentrasi  substrat  maksimum  isolat bakteri  termofil  B1211  dihasilkan  pada konsentrasi  0,2%  dengan  aktivitas  0,71 U/mL (Gambar 3). Pada penelitian Natsir et al., (2009), konsentrasi substrat maksimum dari  isolat  bakteri  ST-3,2b  dihasilkan  pada konsentrasi  0,3%  dengan  aktivitas  0,05 U/mL.  Pada  penelitian  ini  aktivitas  kitinase yang dihasilkan lebih tinggi bila dibandingkan  dengan  aktivitas  kitinase pada  penelitian  Natsir et  al .  (2009).
Gambar 3  Hubungan  antara  aktivitas  ekstrak kitinase  dengan            konsentrasi substrat
Pada  konsentrasi  rendah,  substrat hanya  sedikit  terikat  pada  bagian  aktif enzim, sedangkan jika konsentrasi diperbesar, maka semakin banyak substrat yang  berinteraksi  dengan  sisi  aktif  enzim. Akan  tetapi,  apabila  konsentrasi  substrat berlebih, maka kecepatan reaksi katalisispun  menjadi  konstan  (Poedjiadi dan Supriyanti, 2006).
0.5000 0.5500 0.6000 0.6500 0.7000 0.7500 20 30 40 50 60 70 80 A k tiv ita s (U/m L) Suhu (ᴼC) 0.600 0.620 0.640 0.660 0.680 0.700 0.720 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 A k tiv ita s (U/m L) Konsentrasi Substrat (%)

## 4.  Pengaruh Ion Logam
Salah  satu  zat  yang  dapat  berfungsi sebagai  aktivator  atau  inhibitor  dalam proses  katalisis  enzim  adalah  ion  logam. Palmer  (1991)  yang  diacu  dalam  Sarni et al. (2015)  mengemukakan  bahwa  ion logam  pada  konsentrasi  tertentu  dapat berfungsi  mengaktifkan  enzim  (aktivator) dan  juga  dapat  menghambat  kerja  enzim (inhibitor).
Gambar 4  Pengaruh ion logam terhadap aktivitas kitinase
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa ion  logam  Hg 2+ ,  Zn 2+ ,  Na + ,  Al 3+ ,  dan  Cu 2+
meningkatkan  aktivitas  enzim  kitinase (aktivator)  dengan  aktivitas  tertinggi  pada penggunaan logam Cu 2+
yang meningkatkan aktivtias kitinase 19%.
Sementra  ion  logam  Li + ,  K + ,  dan  Ca 2+
cenderung  menurunkan  aktivitas  enzim atau  bertindak  sebagai  inhibitor  dengan penurunan  tertinggi  (>5%)  terjadi  pada  ion Litium  (Gambar  4).  Noviendri et  al. (2008) melaporkanbahwa kation Mn 2+ , Mg 2+ , Cu 2+ ,
Co 2+ ,  Zn 2+ ,  Ba 2+ ,  NH 4+ ,  K + ,  dan  Na +
bertindak sebagai inhibitor terhadap kitinase isolat T5a1, sedangkan kation Fe 3+
dan Ca 2+ berfungsi sebagai aktivator.

## 5.  Kinetika Ekstrak Kitinase
Laju  maksimum  reaksi  enzimatik dapat  ditentukan  dengan  meningkatkan konsentrasi substrat hingga laju pembentukan  produk  menjadi  konstan. Pada  kondisi  laju  yang  maksimum  (V maks ), sisi  aktif  enzim  akan  berikatan  secara menyeluruh  dengan  substrat  sehingga kompleks  enzim  substrat  (ES)  berjumlah sama dengan jumlah total enzim (Lehninger, 1982).
Gambar 5  Grafik Lineweaver - Burk, hubungan antara  konsentrasi  substrat  (S) dengan laju reaksi (Vo)
Kurva di atas gambarkan pembentukan  produk  pada  saat  awal  oleh suatu  enzim  pada  kadar  substrat  yang bervariasi  (S).  Berdasarkan  Gambar  5 dapat  diperoleh  nilai  V maks dan  K m ekstrak enzim  kitinase  dari  isolat  bakteri  B1211 adalah  0,72  U/mL  dan  0,01  mg/mL.  Bila dibandingkan  dengan  enzim  kitinase  dari isolat  bakteri  T5a1  asal  terasi  dengan  nilai V maks dan  K m yaitu  0,005  U/mL  dan  1,04 U/mL  (Noviendri et  al .,  2008).  Hasil  yang diperoleh  pada  penelitian  ini  berbeda dengan hasil penelitian tersebut dikarenakan bakteri yang digunakan berbeda  yaitu  isolat  bakteri  T5a1  asal
0 20 40 60 80 100 120 A k tiv ita s re la tif e nz im (% ) Ion Logam y = 0.0142x + 1.3925 1.35 1.40 1.45 1.50 1.55 1.60 0.00 5.00 10.00 15.00 1 /Vo
1/[S]
terasi.  Penelitian  Chasanah et  al .  (2009) juga menghasilkan nilai V maks dan K m enzim kitosanase  bakteri  asal  lingkungan  laut yaitu 1,25 U/mL dan 0,33 mg/mL.

## KESIMPULAN
Kitinase dari isolate B1211 memiliki pH dan  suhu  optimum,  masing-masing  7  dan 50 0 C.  Konsentrasi  substrat  maksimum didapatkan pada koloidal kitin 0,2% dengan nilai  V max dan  K m ,  masing-masing  0,72
U/mL  dan  0,01  mg/mL.  Ion  logam  Hg 2+ ,
Zn 2+ , Na + , Al 3+ , dan Cu 2+ bertindak sebagai aktivator, sedangkan ion logam Li + , K + , dan
Ca 2+ bertindak sebagai inhibitor.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Ucapan  terimakasih  penulis  haturkan kepada  pihak  DRPM  Kemenristek  Dikti yang telah memberikan hibah penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Chasanah E. 2004. Chitosanase of Bacillus luchenformis MB-2 Isolatd form Manado  Hot  Spring Water. Disertasi .
Bogor: Program Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Chasanah, E., Zilda, D.S., Uria, A.R. 2009.
Screening  dan  Characterization  of Bacterial  Chitosanase  from  Marine Environment. Journal  of  Coastal developmen. 12 (2) : 64-72.
Chen  JK,  Shen  CR,  Liu  CL.  2010.  N- Acetylglucosamine:  Production  and Applications  (Review). Marine  Drugs . 8: 2493-2516.
Hardi, J., Jusman, J., Razak, A. R., & Silva,
S.  (2016).  Produksi  dan  Uji  Aktivitas Enzim  Kitinase  Dari  Isolat  Bakteri
Termofilik  B1211  Asal  Air  Panas Bora. KOVALEN , 2 (3)
Herdyastuti  N,  Raharjo  TJ,  Mudasir,
Matsjeh  S.  2009.  Chitinase  and Chitinolytic  Microorganism:  Isolation,
Characterization and Potential.
Indonesian  Journal  Chemistry .  9(1): 37-47.
Jayanti,  J.  F.L.  2002.  Studi  Kitinase  dan Kitin  Deasetilase  Termostabil  dari Isolat  Asal  Manado. Skripsi .  Bogor:
Jurusan  Teknologi  Pangan  dan  Gizi Fakultas Teknologi Pertanian IPB.
Khoridah  EN.  2015.  Produksi  Enzim
Kitosanase dari Isolat Bakteri Termofil  Sumber  Air  Panas  Bora.
Skripsi .  Palu:  Jurusan  Kimia  FMIPA
Universitas Tadulako.
Lehninger AL. 1982. Dasar-Dasar Biokimia, jilid  1 ,  (diterjemahkan  oleh:  Maggy Thenawijaya). Jakarta: Erlangga.
Lestari P. 2000. Eksplorasi Enzim
Termostabil  dari  Mikroba  Termofil.
J.Hayati . l7:21-25
Natsir  H,  Dali  S,  Astin,  Trisanova.  2009.
Isolasi dan Karakterisasi Enzim Kitinase  dari  Bakteri  Termofil  Isolat
ST-3,2b. Jurnal Ilmiah Biologi
Makassar . 4(1): 51-58.
Noviendri  D,  Fawzya  YN,  Chasanah  E.
2008. Karakterisasi dan Sifat Kinetika Enzim  Kitinase  dari  Isolat  Bakteri T5a1 Asal Terasi. Jurnal Pascapanen dan Bioteknologi Kelautan dan Perikanan . 3(2): 123 – 129.
Pratiwi  RS,  Susanto    TE,  Wardani  YAK,
Sutrisno A. 2015. Enzim Kitinase Dan Aplikasi  di  Bidang  Industri:  Kajian Pustaka.
Jurnal Pangan dan
Agroindustri . 3 (3): 878-887.
Poedjiadi  A.,  Supriyanti  T.  2006. Dasar- Dasar  Biokimia  Edisi  Revisi .  Jakarta: UI-Press.
Purkan,  Azizah  B,  Baktir  A,  Sumarsih  S.
2014.  Eksplorasi  Bakteri  Kitinolitik dari  Sampah  Organik:  Isolasi  dan
Karakterisasi  Enzim  Kitinase. J.
Molekul. 9 : 128-135.
Purwani  EY.,Toharisman  A,  Chasanah  E, Laksmi  JF,  Welan  V,  Suhartono, Purwadaria  T,  Hwang  JK,  Pyun  YR. 2002.  Studi  Pendahuluan  Enzim Kitinase  Extraseluler  yang  Dihasilkan Oleh  Isolat  Bakteri  Asal  Manado.
Jurnal Teknologi dan Industri
Pangan . 8(2): 111-117.
Rahayu, S., Tanuwidjaya, F., Rukayadi, Y., Suwanto, A., Suhartono, M.T., Hwang, J.K., Pyun, Y.R. 2004. Study of  Thermostable  Chitinase  Enzymes from  Indonesian  Bacillus  K29-14. J.
Microbiol. Biotechnol. 14(4): 647-652.
Sarni, Natsir H, Dali S. 2015. Produksi dan Karakterisasi  Enzim  Kitosanase  Dari Isolat  Bakteri Klebsiella  sp . Jurnal Techno . 4(2): 8 – 15.
Ueda  M,  Arai  M.  1992.  Purification  and Some  Properties  of  Chitinases  from Aeromonas  sp. No.  1OS-24. Biosci.
Biotech  and  Biochem .  56(3):  460- 464.