## AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK DAGING KERANG BAKAU

## ( Geloina coaxans ) DARI KAWASAN MANGROVE TARAKAN TERHADAP Vibrio parahaemolyticus
Encik Weliyadi 1 , Awaludin 2 , Imra 1 *, Diana Maulianawati 2 1 Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan,
Universitas Borneo Tarakan, Jalan Amal Lama No 1, Tarakan Kalimantan Utara, 77123 Telepon (0551) 2052558, HP. 0811 530 7023
2 Program Studi Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Borneo Tarakan, Jalan Amal Lama, Tarakan Kalimantan Utara Telepon (0551) 2052558, HP. 0811 530 7023 *Korespodensi: imranmomo@gmail.com Diterima: 7 November 2017/ Disetujui: 2 April 2018
Cara sitasi: Weliyadi E, Awaludin, Imra, Maulianawati D. 2018. Aktivitas antibakteri ekstrak daging kerang bakau ( Geloina coaxans ) dari kawasan mangrove Tarakan terhadap Vibrio parahaemolyticus. Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia . 21(1): 35-41.
Abstrak
Kerang bakau ( Geloina coaxans ) merupakan salah satu jenis gastropoda yang diduga memiliki komponen bioaktif yang dapat digunakan sebagai antibakteri. Tujuan penelitian ini yaitu mengeksplorasi potensi kerang bakau  ( G. coaxans ) sebagai sumber bahan alami antibakteri terhadap Vibrio parahaemolyticus . Aktivitas antibakteri ekstrak G. coaxans diuji dengan metode difusi pada konsentrasi 10, 50 dan 100 mg/ mL, serta identifikasi senyawa aktif. Hasil penelitian menunjukkan rendemen ekstrak etanol G. coaxans yaitu 8,50%, senyawa fitokimia ekstrak etanol G. coaxans terdiri dari alkaloid, tanin, flavonoid, saponin, triterpenoid dan steroid. Aktivitas antibakteri menunjukkan ekstrak etanol G. coaxans memiliki zona hambat sebesar 25,05 pada konsentrasi 100 mg/mL terhadap V. parahaemolyticus.

## Kata kunci: farmaseutikal, kerang bakau, senyawa aktif
Antibacterial Activity of Bakau Shells (Geloina coaxans) Ekstract from Mangrove Area of Tarakan against Vibrio parahaemolyticus
Abstract
Bakau shells ( Geloina coaxans ) is one type of gastropod species, which suspected to have bioactive compounds that can be used as an antibacterial. The aim of this study was to explore the potential of mangrove shells ( G. coaxans ) as a source of natural antibacterial against Vibrio parahaemolyticus. The extracts were examined for antibacterial activity by using disk diffusion method, as well as screened for the presence of bioactive phytochemical constituents. The ethanol solvent produced 8.50% of extracts. The result showed the presence of phytochemical constituents in extracts could contribute on antibacterial activities. The qualitative results of G. coaxans extracts expressed presence of alkaloids, tannins, flavonoids, steroids and saponins. The inhibition zone of G. coaxans ethanol extract were 25.05 mm, 16.30 mm and 7.55 mm at 100 mg/mL, 50 mg/mL and 1 mg/mL of concentration, respectively against V. parahaemolyticus.

## Keyword: bioactive compound, mangrove shell, pharmaceutical

## PENDAHULUAN
Ekosistem
mangrove merupakan suatu sistem yang terdiri atas organisme (tumbuhan dan hewan) yang berinteraksi dengan faktor lingkungan dan dengan sesamanya  di  dalam  suatu  habitat  mangrove (Kusmana et al. 2003). Ekosistem mangrove adalah suatu sistem yang terdiri atas lingkungan biotik dan abiotik yang saling berinteraksi di dalam suatu habitat mangrove. Kota Tarakan merupakan pulau kecil dengan luas 657,33 km 2 yang terletak di bagian utara Kalimantan dengan luas ekosistem mangrove sebesar 1.224,8 ha (Rachmawani et al. 2010).
Available online: journal.ipb.ac.id/index.php/jphpi
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daging Kerang Bakau , Weliyadi et al.

## Kawasan hutan konservasi mangrove Kota
Tarakan merupakan bagian ekosistem pesisir Kota Tarakan yang menyediakan sumberdaya alam produktif, baik sebagai sumber pangan, mineral, tambang, energi, bahan obat-obatan dan kawasan rekreasi maupun pariwisata. Peran hutan mangrove secara ekologi salah satunya adalah sebagai habitat bagi biota perairan. Bivalvia merupakan biota yang yang hidup melimpah di ekositem mangrove. Bivalvia merupakan salah satu kelas dari tujuh kelas pada filum moluska. Jenis bivalvia di antaranya tiram, remis, kerang, kerang kapah, kerang bakau banyak ditemukan di daerah tropis terutama di daerah pantai yang berhutan bakau. Beberapa penelitian menyebutkan bahwa bivalvia atau kerang- kerangan memiliki potensi pharmaceutical
antibakteri. Rochmawati et al. (2015)
melaporkan  bahwa  ekstrak  kerang  pisau ( Solen sp.) dan kerang simping ( Placuna placenta ) memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. aureus dengan zona penghambatan masing-masing 32,10 mm dan 27,63 mm. Kerang simping diketahui memiliki senyawa bioaktif yaitu saponin, steroid, dan flavonoid (Suptijah et al. 2014).
Hasan et al. (2014) melaporkan ekstrak kerang Atactodea striata memiliki aktivitas antibakteri terhadap S. aureus (25,17  mm)  dan E. coli 13,56 mm. Abdullah et al. (2013) melaporkan bahwa kerang bulu mengandung asam amino yang paling tinggi adalah asam glutamat dengan nilai 1,74% pada daging dan 1,22% pada jeroan. Nurjanah et al. (2013) melaporkan kandungan asam lemak kerang pisau terdiri atas dari lemak jenuh dengan kandungan tertinggi yaitu palmitat dan stearat, kandungan asam lemak tidak jenuh tunggal yang tertinggi terdiri dari palmitoleat dan oleat, sedangkan asam lemak tidak jenuh majemuk tertinggi yaitu EPA dan DHA.
Kerang kapah di Kota Tarakan dibedakan menjadi tiga jenis sesuai dengan habitat dan lingkungannya, yaitu jenis Meretrix meretrix dan Meretrix lyrata dapat ditemukan di sekitar wilayah pantai berpasir, dan yang ketiga Geloina coaxans , kerang ini juga dikenal sebagai kerang bakau atau kerang mangrove.
Kerang bakau ( G. coaxans ) termasuk salah satu jenis kerang yang habitat dan lingkungannya
masih dipengaruhi oleh ekosistem mangrove. G. coaxans dapat ditemukan di area hutan mangrove, karena sesuai untuk kehidupan organisme dan merupakan sumber beberapa jenis nutrient (Macintosh et al. 2002). Kerang kapah jenis G. coaxans dapat ditemukan di hampir  semua kawasan pesisir Kota Tarakan yang masih di tumbuhi oleh mangrove, karena merupakan habitat yang sesuai bagi kerang kapah jenis G. coaxans yang dipengaruhi oleh substrat berlumpur serta masih dipengaruhi oleh arus pasang surut air laut. Kerang baku G. coaxans banyak tersebar di wilayah pesisir Kota Tarakan, namun potensinya kurang dioptimalkan karena belum banyak diketahui oleh masyarakat setempat. Kerang bakau G. coaxans belum menjadi komoditas pasar di Kota Tarakan, baik daging maupun kulitnya, hal ini disebabkan karena kurangnya informasi dan pengetahuan mengenai kerang bakau G. coaxans serta kurangnya pengetahuan masyarakat dalam meng-eksploitasi dan memanfaatkan kerang bakau G. coaxans secara maksimal, lestari dan berkelanjutan. Kajian  mengenai  kerang  bakau  jenis G. coaxans masih jarang di lakukan, terutama di daerah Kalimantan bagian Utara, khususnya di Pulau Tarakan. Hal ini dikarenakan kurangnya literatur ataupun informasi mengenai kerang bakau. Berdasarkan uraian tersebut, maka perlu dilakukan eksplorasi potensi farmaseutikal kerang G. coaxans yang meliputi aktivitas antibakteri dan komponen bioaktif. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri G. coaxans terhadap Vibrio parahaemolyticus , serta komponen bioaktif G. coaxans .

## BAHAN DAN METODE Bahan dan Alat
Bahan yang digunakan yaitu kerang bakau ukuran 5-8 cm yang berasal dari kawasan hutan konservasi mangrove Kota Tarakan serta bakteri V. parahaemolyticus yang diperoleh dari koleksi Karantina ikan kelas II Kota Tarakan. Etanol (Merck, co), asam sulfat (Merck, co), kloroform (Merck, co), asam klorida (Merck, co). Peralatan utama yang digunakan dalam penelitian ini adalah shaker (IKA Jerman), vaccum rotary evaporator
(IKA RV 05 basic Jerman), spektrofotometer UV-Vis mini 1240 (Jerman), laminar air flow (buatan lokal), autoclaf (ALP Jerman) dan inkubator (INB-400 Memert Jerman).

## Metode Penelitian
Preparasi dan ekstraksi G. coaxans Penelitian ini dilakukan dalam dua tahapan. Tahap pertama adalah preparasi dan ekstraksi. Preparasi sampel kerang bakau dilakukan dengan memisahkan cangkang dan daging, kemudian daging dikeringkan di bawah sinar matahari selama 2 hari. Daging yang telah kering dipotong kecil- kecil lalu diblender. Daging kerang bakau yang telah halus kemudian diekstraksi dengan pelarut etanol konsentrasi 96%.
Sampel sebanyak 25 gr dilarutkan dalam 100 mL etanol 1:4 (b/v), kemudian dimaserasi selama 48 jam. Larutan sampel disaring, filtrat  yang  terkumpul  di  evaporasi  pada  suhu 40-60 o C untuk mendapatkan ekstrak dalam bentuk pasta. Ekstrak kasar berbentuk pasta kemudian ditimbang untuk mendapatkan nilai rendemen. Tahap kedua meliputi uji antibakteri dan analisis kandungan senyawa aktif dari kerang bakau.
Pengujian antibakteri Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan menggunakan metode difusi sumur agar modifikasi Holo et al. (1991). Bakteri V. parahaemolyticus dibenamkan ke media alkaline pepton water , kemudian diinkubasi selama 24 jam. Nilai kepadatan bakteri (OD) diukur menggunakan spektrofotometer pada panjang gelombang 600 nm. Bakteri yang digunakan untuk pengujian zona hambat yakni jika didapatkan nilai absorbansi berkisar 0,5–0,8. Bakteri ditanamkan pada media agar TCBS dengan konsentrasi ekstrak yang digunakan adalah 10, 50 dan 100 mg/mL. Media uji diinkubasi selama 24 jam pada suhu 30 o C. Kontrol positif menggunakan antibiotik kloramfenikol 0,0015 mg/mL dan kontrol negatif menggunakan pelarut etanol. Aktivitas antibakteri ditentukan dengan mengukur zona bening disekitar sumuran, kemudian dikurangkan dengan diameter sumur.

## Analisis komponen aktif
Ekstrak kerang bakau dianalisis fitokimia untuk mengetahui golongan senyawa aktif (Harborne 1987). Pengujian komponen aktif dilakukan untuk mengetahui ada tidaknya komponen-komponen bioaktif yang terdapat pada ekstrak kasar kerang bakau. Uji komponen aktif meliputi uji alkaloid, uji steroid/triterpenoid, tanin, saponin dan fenol hidrokuinon. Alkaloid Sampel sebanyak 0,01 g dilarutkan dalam beberapa tetes asam sulfat 2 N. Pengujian menggunakan tiga pereaksi alkaloid yaitu pereaksi Dragendorff, pereaksi Meyer dan Pereaksi Wagner. Hasil uji dinyatakan positif bila dengan pereaksi Dragendorff terbentuk endapan merah hingga jingga, endapan putih kekuningan dengan pereaksi Meyer dan endapan cokelat dengan pereaksi Wagner (Samejo et al. 2013). Steroid /Triterpenoid Sampel sebanyak 0,01 g dilarutkan dalam 2 mL kloroform dalam tabung reaksi yang kering, setelah itu ditambahkan 10 tetes anhidra asetat dan 3 tetes asam sulfat pekat. Reaksi positif ditunjukan dengan terbentuknya larutan berwarna merah untuk pertama kali kemudian berubah menjadi biru dan hijau (Samejo et al. 2013). Flavonoid Sampel sebanyak 0,01 g ditambahkan 0,1 mg serbuk magnesium dan 0,4 mL amil alkohol (campuran asam klorida 37% dan etanol 95% dengan volume yang sama) dan 4 mL alkohol kemudian campuran dikocok.
Flavonoid ditunjukan dengan terbentuknya warna merah, kuning atau jingga pada lapisan amil alkohol (Samejo et al. 2013).
Saponin (uji busa) Saponin dapat dideteksi dengan uji busa dalam air panas. Busa yang stabil selama 30 menit dan tidak hilang pada penambahan 1 tetes HCl 2N menunjukan adanya saponin (Samejo et al. 2013).
Fenol Hidrokuinon (Pereaksi FeCl 3 ) Sampel sebanyak 0,01 g diekstrak dengan 20 mL etanol 70%. Larutan yang dihasilkan diambil sebanyak 1 mL kemudian ditambahkan 2 tetes larutan FeCl 3 5%.
Senyawa fenol dalam bahan ditunjukkan
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daging Kerang Bakau , Weliyadi et al.
dengan terbentuknya warna hijau atau hijau biru (Samejo et al. 2013).
Tannin
Sampel kering sebanyak 0,5 g dididihkan dalam 10 mL akuades dan disaring. Larutan sampel kemudian ditambahkan 2-3 tetes 0,1% FeCl 3 . Warna biru-kehitaman pada hasil uji mengindikasikan keberadaan tannin dalam ekstrak (Samejo et al. 2013).
HASIL DAN PEMBAHASAN Kerang Bakau ( Geloina coaxans ) Geloina coaxans secara umum biasa dikenal sebagai kerang bakau atau kerang mangrove. Kerang bakau ( G. coaxans ) termasuk salah satu jenis kerang yang habitat dan lingkungannya masih dipengaruhi oleh  ekosistem  mangrove  (Gambar  1). G. coaxans merupakan salah satu spesies dari grup Corbucilidae kelas bivalvia, sub-kelas heterodonta (Okutani 2000). G. coaxans dapat
ditemukan di area hutan mangrove, karena sesuai untuk kehidupan organisme dan merupakan sumber beberapa jenis nutrien (Macintosh et al. 2002). Kerang kapah jenis G. coaxans dapat ditemukan di hampir semua kawasan pesisir Kota Tarakan yang masih di tumbuhi oleh mangrove, karena merupakan habitat yang sesuai bagi kerang kapah jenis G. coaxans yang dipengaruhi oleh substrat berlumpur serta masih dipengaruhi oleh arus pasang surut air laut (Macintosh et al. 2002).
Rendemen Ekstrak G. coaxans Kerang bakau yang telah didapatkan kemudian dilakukan preparasi dengan memisahkan daging dengan cangkang (Gambar 2). Daging kemudian dikeringkan dan dihaluskan untuk selanjutnya dilakukan proses ekstraksi dengan pelarut etanol.
Gambar 1 (a) hutan kawan konservasi Kota Tarakan, (b) G. coaxans pada substrat lumpur hutan bakau.
Figure 1 (a) Tarakan’s conservation forest of Tarakan City, (b) G. coaxans on mangrove sludge substrate.
Gambar 2 (a) G. coaxans , (b) daging G. coaxans segar, (c) G. coaxans kering. (Figure 2 (a) G. coaxans, (b) fresh meat G. coaxans, (c) dry G. coaxans) a b a b c
Ekstrak kerang bakau yang dihasilkan pada proses ekstraksi menggunakan pelarut etanol pa 96% berupa ektrak kasar berbentuk pasta berwarna kuning kecokelatan.
Rendemen merupakan perbandingan antara bobot ekstrak yang dihasilkan dengan bobot awal yang dinyatakan dalam persen (%). Nilai rendemen ekstrak kerang bakau dengan pelarut etanol yang didapatkan yaitu 8,50%.
Etanol merupakan pelarut universal yang dapat menarik semua jenis komponen baik dari senyawa polar, semipolar dan nonpolar (Harborne 1987).
Komponen Aktif Ekstrak G. coaxans Komponen senyawa aktif pada ekstrak G. coaxans diamati dengan pengujian senyawa aktif secara kualitatif. Uji fitokimia yang dilakukan meliputi; alkaloid, flavonoid, steroid, tannin, fenol hidroquinon dan sapononin. Hasil pengujian komponen aktif dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2 menunjukkan ekstrak G. coaxans terdeteksi mengandung senyawa dari golongan alkaloid, flavonoid, tanin, steroid dan saponin. Senyawa flavonoid, steroid, saponin dan tanin diketahui memiliki potensi sebagai antibakteri. Saponin, steroid  dan flavonoid memiliki sifat antibakteri dengan mekanisme kerjanya  merusak  membran  sel  bakteri (Darsana et al. 2012). Tanin mempunyai aktivitas antibakteri karena dapat menghambat pertumbuhan dan aktivitas
protease  dan  mengikat  dinding  sel  bakteri (Zeeuthen et al. 2003).

## Aktivitas Antibakteri Ekstrak
G. coaxans Ekstrak pasta G. coaxans yang akan dilakukan pengujian aktivitas antibakteri dibuat dengan berbagai konsentrasi yaitu 10 mg/mL, 50 mg/mL dan 100 mg/mL dengan melarutkan ekstrak dalam pelarut etanol (Gambar  4).  Aktivitas  antibakteri  ekstrak G. coaxans terhadap V.parahaemolyticus dapat dilihat pada Tabel 3. Hasil uji aktivitas antibakteri dapat dilihat pada tabel 3. Ekstrak G. coaxans memiliki  zona  penghambatan  terhadap V. parahaemolyticus sebesar 25,05 mm pada konsentrasi 10%.  Aktivitas antibakteri ekstrak G. coaxans tergolong sangat kuat. Menurut Thomas et al. (2014) kemampuan suatu ekstrak dalam menghambat pertumbuhan bakteri berdasarkan diameter zona hambat, zona hambat dengan diameter kurang dari 5 mm dikategorikan lemah, zona hambat 5-10 mm dikategorikan sedang, zona hambat 10-20 dikategorikan kuat sedangkan zona hambat 20 mm atau lebih dikategorikan sangat kuat.
Aktivitas antibakteri G. coaxans juga cukup tinggi dibandingkan dengan penelitian pada berbagai jenis kerang-kerangan lainya. (Ramasamy et al. 2010; 2012 dan 2014) melaporkan adanya zona penghambatan pada kerang A. granosa sebesar 16 mm, M. casta sebesar 8 mm dan T. maxima sebesar 10 mm.
Tabel 2 Senyawa aktif ekstrak G. coaxans ( Table 2 Active compounds of G. coaxans extract ) Komponen aktif/ Active compound Hasil/ Result Indikator/ Indicator Alkaloid/ Alkaloids - Wagner + Red brick - Meyer + Yellow deposits - Dragendorff + Red brick deposits Fenol hidrokuinon/ Phenol hidroquinone - - Tanin/ Tanin + Blue-blackish Flavonoid/ Flavonoids + Yellowish green Saponin/ Saponins + Foamed white Triterpenoid/ steroid + Green Information: + : detected; - : not detected
Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daging Kerang Bakau , Weliyadi et al.

## Tabel 3 Diameter zona hambat ekstrak G. coaxans
( Table 3 Inhibition zone diameter of G. coaxans extract ) Sample Test organism Solvent Inhibition zone (mm) G. coaxans 10% V. parahaemolyticus Ethanol 96% 25.05 ± 6.58 G. coaxans 5% V. parahaemolyticus Ethanol 96% 16.30 ± 0.00 G. coaxans 1% V. parahaemolyticus Ethanol 96% 7.55 ± 0.78 Positive control V. parahaemolyticus Ethanol 96% 26.80 ± 4.24 Negative control V. parahaemolyticus Ethanol 96% 0.70 ± 0.00 A. granosa (Ramasamy 2012) S. aureus Ethanol 96% 16 M. casta (Ramasamy 2014) E.coli Ethanol 96% 8 T. maxima (Ramasamy 2010) S. aureus Ethanol 96% 10 Information : Positive control chloramphenicol 0,0015 mg/mL Negative control ethanol.

## KESIMPULAN
Ekstrak kerang bakau G. coaxans dengan pelarut etanol memiliki potensi sebagai antibakteri terhadap V. parahaemolyticus dengan nilai zona hambat tertinggi 25,05 mm pada konsentrasi 10%. Kandungan komponen aktif yang terkandung dalam ekstrak G. coaxans yakni alkaloid, tanin, saponin, flavonoid dan steroid. Kerang bakau G. coaxans dapat dinyatakan memiliki potensi farmaseutikal sehingga dapat dikembangkan dalam bidang pangan dan obat-obatan.

## DAFTAR PUSTAKA
Abdullah A, Nurjanah, Taufik H, Vitriyone Y. 2013. Profil asam amino dan asam lemak kerang bulu ( Anadara antiquata ). Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia.
16(2): 159-167 Darsana IGO, Besung INK, Mahatmi H. 2012. Potensi daun binahong ( Anredera cordifolia ) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli secara In Vitro. Indonesia Medicus Veterinus. 1(3): 337-351
Harborne JB. 1987. Metode Fitokimia. Edisi ke-
2. Padmawinata K, Soediro I, penerjemah. Bandung (ID): ITB. Terjemahan dari: Phytochemical Methods.
Hasan T, Patong R, Wahab AW, Djide MN.
2014. Isolasi dan Implementasi Protein Biaktif Kepah ( Atactodea striata ) sebagai Bahan Obat Antibakteri. Journal UIN-
Alauddin. 47-57.
Holo H, Nilssen, Ness IF. 1991. Lactococcin A, a new bacteriocin from Lactococcus lactis spp. cremoris: isolation and characterization of the protein and its gene. Journal of Bacteriology. 38: 79-87.
Kusmana C. 2003. Teknik Rehabilitasi Mangrove. Bogor (ID): IPB Pers. Macintosh DJ, Ashton EC, Havanon S. 2002. Mangrove Rehabilitation and Intertidal Biodiversity: A Study In The Ranong Mangrove Ecosystem Thailand. Estuarine Coastal and Shelf Science. 55(3): 331-345. Nurjanah, Jacoeb AM, Fetrisia, RG. 2013. Komposisi Kimia Kerang Pisau dari Pantai Kejawanan, Cirebon, Jawa Barat.
Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia. 16(1): 22-32 Okutani T. 2000. Marine Mollusks in Japan. Japan (JPN): Tokai University Press. Rachmawani D, Yulianda F, Yulianto G. 2010. Kajian pengelolaan ekosistem mangrove secara berkelanjutan Kota Tarakan Kalimantan Timur (Studi Kasus Desa Binalatung Kecamatan Tarakan Timur).
Jurnal Aquarine. 1(2): 2085-9449.
Rochmawati I, Ibrahim M, Ambarwati R. 2015. Aktivitas antibakteri ekstrak kerang pisau ( Solen sp.) dan kerang simping
( Placuna placenta ). Journal of Biology and Biology Education. 7(2): 128-135.
Ramasamy M, Sukumaran V, Ayyavoo. 2010.
Potential Antibacterial Activity of Marine Bivalves Meretrix casta and Tridacna
maxima from South East Coast of India.
Journal Advances in Bioresearch. 1(1): 92- 96 Ramasamy M, Balasubramanian U. 2012. df (LINN.) International Journal of Science and Nature. 3(2): 263-266 Ramasamy M, Balasubramanian U. 2014. Study on Antimicrobial Activity of Marine Bivalves Meretrix casta and Anadara granosa from Muthupet and Tutcorin South East Coast of India. International Journal of Science and Nature. 5(1): 109- 112 Suptijah P, Yanuarizki O, Nurjanah. 2014. Aktivitas antioksidan dan komponen bioaktif kerang simping ( Amusium
pleuronectes ). Jurnal Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia 16(3): 242-248 Thomas, John, Thanigaivel, S, Vijayakumar S, Acharya, Kuntal, Shinge, Dhairyasheel,          Jeba-Seelan T,  Samuel, Mukherjee, Amitava, Chandrasekaran, Natarajan. 2014. Pathogenecity of Pseudomonas aeruginosain Oreochromis mossambicus and treatment using lime oil nanoemulsion. Colloids Surf. B: Biointerfaces 116: 372–377. Zeuthen P, Surensen LB. 2003. Food
Preservation Techniques. England (US): Cambridge England CRC Press.