## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI TEH KOMBUCHA PROBIOTIK TERHADAP BAKTERI Escherichia coli dan Staphylococcus aureus
Ferry Effendi , Anna P. Roswiem, Ernie Stefani Program Studi Farmasi Sekolah Tinggi Teknologi Industri dan Farmasi Bogor Email :

## ABSTRAK
Teh kombucha  telah  banyak  digunakan  sebagai  obat  tradisional  untuk  menstabilkan metabolisme dan menawarkan racun sehingga dipercaya dapat melancarkan pencernaan.Probiotik berfungsi menyeimbangkan mikroflora usus yang dapat mencegah dan mengobati infeksi diare. Tujuan penelitian ini adalah untuk menguji aktivitas antibakteri serta menentukan  Konsentrasi  Hambat  Minimum  (KHM)  dan  Konsentrasi  Bunuh  Minimum (KBM) dari teh kombucha probiotik berbahan baku teh sencha terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus aureus. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium.Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan dengan metode difusi agar.Penentuan KHM dan KBM dilakukan dengan metode dilusi padat.Hasil penelitian menunjukkan bahwa teh  kombucha  probiotik  mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap Escherichia  coli dan Staphylococcus  aureus. Jumlah  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  pada  teh  kombucha  probiotik sebesar 3 , 1 x 10 8 CFU/ml, sehingga dapat dikategorikan sebagai minuman probiotik.Diameter  zona  hambat  (DZH)  tertinggi  adalah  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus yaitu  terdapat  pada  konsentrasi  100%  (DZH  =  23,07  mm). Diameter  zona  hambat terhadap bakteri Escherichia coli pada konsentrasi 100% sebesar 21,76 mm. Namun diameter zona hambat Escherichia coli dan Staphylococcus aureus tersebut lebih rendah dibandingkan dengan diameter zona hambat kloramfenikol 30µg/ml sebagai kontrol positif yaitu berturut- turut  sebesar  24,87  mm  dan  26,25  mm.  KHM  dan  KBM  teh  kombucha  probiotik  terhadap bakteri Escherichia  coli terdapat  pada  konsentrasi  25%  dan  40%.  KHM  dan  KBM  teh kombucha  probiotik terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus terdapat  pada  konsentrasi  25% dan 35%.
Kata kunci: Teh kombucha, probiotik, antibakteri, Escherichia coli, Staphylococcus aureus

## ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF PROBIOTIC KOMBUCHA TEA OF ESCHERICHIA COLIANDSTAPHYLOCOCCUS AUREUSBACTERIAL

## ABSTRACT
Kombucha tea has been widely used as a traditional medicine to stabilize metabolism and neutralize poison, thus it is believed that it could expedite digestion. Probiotic is used to keep  the  balance  of  intestinal  microflora,  thus  it  may  help  prevent  and  treat  infectious diarrhea.  The  objective  of  this  study  is  to  determine  the  antibacterial  activity,  and  also determine  the  Minimum  Inhibitory  Concentration  (MIC)  and  Minimum  Bactericidal Concentration  (MBC)  of  probiotic  kombucha  tea  which  made  from  sencha  against Escherichia  coli and Staphylococcus  aureus.  This  study  was  experimental  research laboratory.  Antibacterial  activity  test  was determined  by  using  difussion  method  disc.  The fixation of MIC and MBC was determined by using solid dilution method. The result showed that  probiotic  kombucha  tea  provides  antibacterial  potency  on Escherichia  coli and Staphylococcus  aureus. The  amount  of Lactic  Acid  Bacteria  (LAB)  in  probiotic  kombucha tea was 3 . 1 x 10 8 CFU/ml, so it was categorized as a probiotic drinks. The highest inhibition zone diameter was against Staphylococcus aureus bacteria, which in a concentration of 100% (23.07 mm). Inhibition zone diameter against Escherichia coli bacteria was in a concentration
of  100%  (21.76  mm).  Nevertheless,  the  inhibition  zone  diameter  of  aforementioned Escherichia  coli and Staphylococcus  aureus was  lower  if  compared  with  inhibition  zone diameter of chloramphenicol 30µg/ml as a positive control that was 24.87 mm and 26.25 mm respectively. MIC and MBC of probiotic kombucha tea against Escherichia coli bacteria was in  a  concentration  of  25%  and 40%.  MIC  and  MBC  of  probiotic  kombucha  tea  against Staphylococcus aureus bacteria was in a concentration of 25% and 35%.
Key words: Kombucha tea, Probiotic, Antibacterial, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.
PENDAHULUAN Bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus merupakan  flora normal dalam tubuh manusia, tetapi keberadaannya  pada  makanan  merupakan suatu cemaran (Swarbrick, 2004).
Escherichia  coli merupakan  bakteri  gram negatif  yang  dapat  menyebabkan  gangguan pada  tubuh  apabila Escherichia  coli yang masuk  ke  tubuh  berkisar  10 6 sel/ml.  Gejala yang  akan  timbul adalah  perut  keram,  diare, sakit  kepala  dan  demam  (Ray,  2005). Demikian  pula,  keracunan  makanan  dapat disebabkan  oleh  kontaminasi  enterotoksin dari Staphylococcus aureus yang merupakan bakteri  gram  positif.  Waktu  timbulnya  dari gejala  keracunan  biasanya  cepat  dan  akut, tergantung  pada  daya  tahan  tubuh  dan banyaknya  toksin  yang  termakan.  Jumlah toksin  yang  dapat  menyebabkan  keracunan adalah 1,0 µg/gr makanan. Gejala keracunan ditandai oleh rasa mual, muntah-muntah, dan diare yang hebat tanpa disertai demam (Ryan et al., 1994; Jawetz et al., 1995).
Umumnya pemberian obat-obat sintetik  termasuk  antibiotik  dilakukan  untuk mencegah  infeksi  diare,  namun  kebanyakan mengakibatkan resistensi.
Pemilihan penggunaan  obat  tradisional  saat  ini  cukup tinggi.  Obat-obat  tradisional  tersebut  tidak hanya  digunakan  dalam  fase  pengobatan saja,  melainkan  juga  digunakan dalam  fase preventif,  promotif  dan  rehabilitasi. Salah satu  obat  tradisional  yang  cukup  banyak digunakan  dan  terbukti  bermanfaat  adalah teh kombucha (Suprapti, 2003).
Teh  kombucha  merupakan  produk minuman tradisional hasil fermentasi larutan teh  dan  gula  dengan  menggunakan  starter mikroba kombucha (simbiosis bakteri
dengan  khamir)  dan  difermentasi  selama  7- 10  hari.  Jenis  mikroba  utama  yang  berperan adalah Acetobacter  xylinum dan  dua  khamir yaitu Saccharomyces cerevisiae danSaccharomyces  ludwigii (Blanc,  2000). Zat-zat  yang  dihasilkan  dari  fermentasi kombucha  menjadi  benteng  dari  serangan bakteri patogen. Beberapa diantaranya berbagai macam vitamin (vitamin B kompleks,  vitamin  C),  asam  organik  (asam asetat,  asam  folat,  asam  glukoronat,  asam laktat) dan beberapa senyawa yang berfungsi sebagai antibiotik. Khasiat dari teh kombucha  ini  dapat  mempengaruhi  tubuh secara  menyeluruh  dengan  menstabilkan metabolisme  tubuh  dan  menawarkan  racun (Naland, 2008). Beberapa penelitian telah membuktikan  bahwa  teh  kombucha  juga memiliki khasiat sebagai berikut:
1. Penurunan  kadar  kolesterol  total  dalam darah (Winarni, 2010)
2. Sebagai  peluruh  batu  ginjal  (Anggriani, 2008)
3. Menurunkan  kadar  asam  urat  darah (Sriningsih et al., 2007) 4. Berfungsi sebagai antioksidan (Suhartatik dan Karyantina, 2008) Probiotik  adalah  makanan  suplemen berupa  mikroba  hidup  yang  menguntungkan manusia  khususnya  dalam  keseimbangan mikroflora  usus  (Fuller,  1999).  Probiotik secara langsung mampu membantu mikroflora yang berada di saluran pencernaan guna menghambat bakteri patogen  yang  dapat  mengganggu  saluran pencernaan.  Probiotik  juga  dapat  digunakan untuk membantu penderita lactose intolerance, dan  mencegah  penyakit  diare (Tannock, 2005).
Berdasarkan  hal  di  atas  maka  perlu dilakukan penelitian terhadap aktivitas antibakteri teh kombucha dengan penambahan  bakteri  asam  laktat  yang berpotensi sebagai probiotik
yang diperkirakan dapat bermanfaat sebagai antibakteri. METODE PENELITIAN
Bahan : Teh hijau, starter kombucha, kultur isolate campuran bakteri probiotik Lactobacillus  acidophilus,  Bifidobacterium lactis dan
Streptococcus thermophilus (1:1:1). Kultur biakan bakteri berasal dari PT Cisarua Mountain Dairy
Cara Kerja Penelitian ini dilakukan dalam beberapa  tahap  yaitu  (1)  Pembuatan  teh kombucha  probiotik,  (2)  Analisis  jumlah Bakteri Asam Laktat (BAL), (3) Uji aktivitas antibakteri  dengan  difusi  agar,    (4) Penentuan  nilai  KHM  dan  KBM  dengan dilusi padat dan (5) Pengukuran pH.

## Pembuatan Teh Kombucha Probiotik
Teh  Kombucha  dibuat  sesuai  prosedur dari  Naland  (2008)  dengan  cara  teh  sencha difermentasi dengan starter kombucha selama  ±  7-10  hari  pada  suhu  23-27°C  atau setelah  mencapai  pH  ±  3.  Pembuatan  teh sencha  menggunakan  20g/L  teh  dengan konsentrasi  gula  pasir  10%  sehingga dihasilkan  teh  sencha  manis.  Pembuatan  teh kombucha probiotik dilakukan dengan
menambahkan kultur isolat bakteri Lactobacillus  acidophilus,  Bifidobacterium lactis dan Streptococcus  thermophilus dengan perbandingan  1:1:1 sebanyak  10% ke  dalam  starter  kombucha  berbahan  baku teh  sencha,  kemudian  diinkubasi pada  suhu 43°C selama 7 jam.
Analisis  Jumlah  Bakteri  Asam  Laktat (Fardiaz, 1992)
Teh kombucha probiotik dipipet sebanyak  1  mL  dan  dimasukkan  ke  dalam larutan  NaCl  0,85% sebanyak  9  ml, kemudian dihomogenkan menggunakan vortex,  sehingga  didapat  pengenceran  10 -1 .
Selanjutnya  pengenceran  dibuat  sampai  10 -7 menggunakan  larutan  NaCl  0,85%  sebanyak 9 mL. Pemupukan dilakukan pada pengenceran  10 -5 sampai  10 -7 dengan menggunakan media MRS (de Mann Rogosa Sharp) Agar dalam cawan petri. Pemupukan dilakukan  duplo  pada  setiap  pengenceran. Dilakukan  pula  pengujian  terhadap  teh kombucha  (tanpa  ada  penambahan  bakteri probiotik)  sebagai  kontrol  negatif.  Cawan petri  selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu  35°C selama 48 jam kemudian dilakukan perhitungan jumlah koloni yang tumbuh dan dinyatakan dalam CFU/mL.
Uji  Aktivitas  Antibakteri  Dengan  Difusi

## Agar
Jenis  penelitian  ini  adalah  penelitian eksperimental laboratorium. Rancangan penelitian  yang  digunakan  adalah  rancangan acak  lengkap  (RAL).  Pengujian  ini  dilakukan dengan  11  perlakuan  dan  setiap  perlakuan terdiri  atas  3  ulangan. Perlakuan yang dilakukan dalam penelitian ini adalah berbagai variasi  konsentrasi  teh  kombucha  probiotik, kontrol  positif menggunakan  kloramfenikol 30µg/ml  dan  kontrol  negatif menggunakan akuades  (Samy  dan  Ignacimuthu,  2000;  Kaur dan Arora, 2009; Naid et al., 2013).
Variasi pengenceran dengan cara melarutkan  larutan  teh  kombucha  probiotik dengan akuades steril. Dibuat beberapa variasi konsentrasi  teh  kombucha  probiotik,  meliputi konsentrasi  100  %,  90%,  80%,  70%,  60%, 50%, 40%, 30% dan 20%.
Dilakukan  pula  pengujian  terhadap  teh kombucha  (tanpa  ada  penambahan  bakteri probiotik)  sebagai  kontrol  negatif. Media  NA (Nutrient  Agar) sebanyak  15  mL  dituang  ke dalam  cawan  petri  steril,  diinokulasikan masing-masing  suspensi  bakteri  uji  sebanyak 0,1  mL,  dihomogenkan  kemudian  didiamkan beberapa  saat  hingga  memadat.  Kemudian pada  permukaan  media  agar  diletakkan  kertas cakram,  ditetesi  masing-masing  konsentrasi larutan  kombucha  probiotik  yang  telah ditentukan  sebanyak  20µl.  Pengujian  juga dilakukan terhadap kontrol positif menggunakan  kloramfenikol  30µg/mL  dan kontrol negatif dengan menggunakan akuades.
Cawan petri yang sudah diberi perlakuan  dengan  berbagai  konsentrasi, kontrol positif, dan kontrol negatif diinkubasi  pada  35°C  selama  24 - 48  jam. Daerah bening di sekitar cakram menunjukkan  adanya  daerah  hambatan bakteri.  Diameter  daerah  hambat  (DDH) diukur  dalam  satuan  milimeter  (mm) menggunakan jangka sorong. Dilakukan pula pengujian terhadap teh kombucha (tanpa ada penambahan  bakteri  probiotik)  sebagai perbandingan.
Konsentrasi  dimana  larutan  kombucha probiotik  sudah  tidak  dapat  menghambat pertumbuhan  bakteri E.coli dan S.aureus digunakan  sebagai  acuan  konsentrasi  pada penentuan  nilai  KHM  dan  KBM. Pada  uji aktivitas  antibakteri  kombucha  probiotik dengan  difusi  agar  ini  menggunakan  kontrol kontaminasi media dan kontrol pertumbuhan bakteri uji E.coli dan S.aureus.

## Penentuan  Nilai  KHM  dan  KBM Dengan Dilusi Padat
Pada  penentuan  nilai  KHM  dan  KBM dengan  dilusi  padat  ini  menggunakan  dua macam  kontrol,  yaitu  kontrol  kontaminasi media  dan  kontrol  pertumbuhan  bakteri  uji E.coli dan S.aureus (kontrol negatif).
Metode  dilusi  ini  digunakan  untuk menentukan  konsentrasi  minimum  dari  zat antibakteri yang dapat menghambat pertumbuhan  bakteri.  Metode  ini  dilakukan dengan  cara  mencampurkan  zat  pada  media pembenihan  yang  kemudian  diinokulasikan dengan  bakteri  lalu  diinkubasikan.  Hasil pengujian  didapat  dengan  mengamati  ada atau  tidaknya  pertumbuhan  bakteri  (Pratiwi, 2008).

## Uji  Aktivitas  Antibakteri  dengan  Dilusi Padat
Diambil  masing-masing  bakteri  uji dengan jarum ose, kemudian dibuat suspensi bakteri  yang  disetarakan  kekeruhannya dengan larutan standar Mc Farland 0,5 (1,5 x 10 8 CFU/mL).  Teh  kombucha  probiotik dengan  kadar  tertentu  (sesuai  dengan  hasil pada uji sebelumnya) ditambahkan sebanyak 1  mL  ke  dalam  suspensi  bakteri  (E.coli dan
S.aureus) masing-masing 0,1 ml. Selanjutnya dicampur  rata  dengan  15  ml Nutrient  Agar cair  (suhu  45 - 50°C),  kemudian  dituang dalam  cawan  petri  secara  cawan  tuang. Diinkubasikan dalam suhu 35°C selama 24 - 48 jam.
Pertumbuhan  bakteri  dapat  dilihat  dari media  yang  menjadi  keruh.  Semakin  subur pertumbuhan  bakteri  pada  media,  maka semakin  keruh  media  tersebut.  Pembacaan hasil daya antibakteri diberi penilaian dengan menggunakan notasi (++) untuk
pertumbuhan  yang  tampak  keruh,  (+)  agak keruh dan (-) jernih.
Kekeruhan  masing-masing  perlakuan dibandingkan  dengan  kontrol  kontaminasi media dan kontrol pertumbuhan bakteri atau kontrol negatif.
Penentuan  nilai  KHM  dan  KBM dilakukan  dengan  metode streak  plate (Goresan  di  cawan) dari  hasil  uji  aktivitas antibakteri secara dilusi padat. Hasil uji yang digunakan  adalah  semua  media  yang memberikan  kejernihan  media  secara  visual. KHM adalah konsentrasi terkecil yang dapat menghambat  bakteri,  ditandai  dengan E.coli dan S.aureus masih dapat tumbuh pada hasil goresan  di  cawan  sedangkan  KBM  adalah konsentrasi  terkecil  yang  dapat  membunuh bakteri, ditandai  dengan E.coli dan S.aureus sudah tidak dapat tumbuh pada hasil goresan di  cawan  yang  menandakan  masing-masing bakteri  uji  mati  karena  larutan  uji  dengan konsentrasi  tersebut  (McKane  dan  Kandel, 1996; Koneman et al., 1997).

## Pengukuran pH (AOAC, 2005)
Teh  kombucha  probiotik  sebanyak  25 ml,  diukur  pHnya  dengan  pH  meter  yang telah  dikalibrasi  dengan  larutan  standar buffer  pH  4,0  dan  pH  7,0.  Nilai  pH  diukur sebanyak  3  kali  ulangan.  Dilakukan  pula pengujian terhadap teh kombucha (tanpa ada penambahan bakteri  probiotik)  sebagai kontrol negatif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Perhitungan  nilai  CFU/ml  dihasilkan dari perhitungan menggunakan metode pour plate. Perbedaan  yang terlihat dalam tabel 1
bahwa  pada  teh  kombucha  probiotik mengandung Bakteri  Asam  Laktat  (BAL) yang  tinggi  (3 , 1 x 10 8 CFU/ml)  sedangkan teh  kombucha  (tanpa  penambahan bakteri probiotik) mengandung Bakteri Asam Laktat (BAL) sebanyak 2,8 x 10 2 CFU/ml.
Asam  laktat  yang  dihasilkan  dari proses fermentasi teh kombucha berasal dari Bakteri  Asam  Laktat  (BAL)  yang  dapat mensintesis laktosa menjadi asam laktat.
Pada proses fermentasi terjadi pemecahan senyawa kompleks seperti karbohidrat,  protein  dan  lemak  dengan bantuan mikroorganisme tertentu yang dapat menghasilkan asam organik, karbon dioksida, dan zat-zat lainnya. Proses fermentasi  dapat  menyebabkan  perubahan
sifat fisika dan kimia bahan pangan (Surono, 2004).
Teh  kombucha  tanpa  ada  penambahan bakteri  probiotik belum  dapat  memenuhi syarat  jumlah  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL) untuk dikategorikan sebagai minuman probiotik karena jumlah Bakteri Asam Laktat (BAL) yang  telah  diteliti  jauh  di  bawah syarat viabilitas Bakteri Asam Laktat (BAL) sebagai  probiotik. Viabilitas Bakteri  Asam Laktat (BAL) pada teh kombucha tanpa ada penambahan bakteri  probiotik tidak  terlalu baik  karena  jumlahnya  tidak  memenuhi syarat sebagai probiotik (<10 7 -10 9 CFU/ml). Berdasarkan  hal  tersebut,  maka  dilakukan inokulasi Bakteri  Asam  Laktat  (BAL) pada teh  kombucha  untuk  meningkatkan  jumlah Bakteri Asam Laktat (BAL).
Tabel 1. Hasil Analisis Jumlah Bakteri Asam Laktat (BAL)
Ket : Ul : Ulangan
TBUD : Terlalu Banyak Untuk Dihitung (>300 CFU/ml)
Hasil  Uji  Aktivitas  Antibakteri  Teh Kombucha Probiotik dengan Difusi Agar
Hasil  pengukuran  Diameter  Zona
Hambat (DZH) dengan menggunakan
metode difusi agar dapat dilihat pada gambar 1.  Hasil  pengukuran  menunjukkan  bahwa semakin  besar  konsentrasi  teh  kombucha probiotik  yang  digunakan,  maka  semakin besar  pula  Diameter  Zona  Hambat (DZH) pertumbuhan  bakteri  yang  terbentuk,  karena pada  konsentrasi  yang  lebih  besar  makin banyak  zat  aktif  yang  terdapat  di  dalam  teh kombucha probiotik. Teh kombucha probiotik tidak lebih baik dari kloramfenikol 30  µg/ml  dalam menghambat  pertumbuhan bakteri E.coli dan S.aureus.
Hasil  Penentuan  nilai  KHM  dan  KBM dengan Dilusi Padat
Untuk  memastikan  nilai  KHM  dan KBM,  maka  dilakukan  penegasan  hasil dengan  metode streak  plate pada  semua konsentrasi  yang  menghasilkan  media  yang jernih.

## Hasil pengamatan pertumbuhan bakteri
E.coli dapat  dilihat  pada  Tabel  2.  Hasil pengamatan  pada konsentrasi  25,  30,  dan 35%  masih  ada  pertumbuhan  bakteri, sedangkan pada konsentrasi 40, 45, 50, 60,70 dan 100% tidak terlihat adanya pertumbuhan bakteri.  Maka  dapat  disimpulkan  bahwa KHM  dari  teh  kombucha  probiotik  terhadap bakteri E.coli adalah 25% dan KBM dari teh kombucha  probiotik  terhadap  bakteri E.coli
Sampel Ul Jumlah Koloni Pada Pengenceran CFU/ml Rata-rata (CFU/ml) 10 -5 10 -6 10 -7 Teh Kombucha Probiotik 1 TBUD 190 39 2,9 x 10 8 3,1 x 10 8 2 TBUD 203 45 3,3 x 10 8 3 TBUD 208 40 3,0 x 10 8 Sampel Ul Pengenceran CFU/ml Rata-rata (CFU/ml) 10 -0 10 -1 10 -2 Teh Kombucha 1 243 23 1 2,4 x 10 2 2,8 x 10 2 2 265 32 3 2,9 x 10 2 3 282 34 3 3,1 x 10 2
adalah  40%.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri dapat dilihat pada tabel 2.
Hasil pengamatan pertumbuhan bakteri S.aureus  dapat  dilihat  pada  tabel  3.  Hasil pengamatan  pada konsentrasi  25  dan 30% masih ada pertumbuhan  bakteri,  sedangkan pada  konsentrasi  35,  40,  45,  50,  60,70  dan
100%  tidak  terlihat  adanya pertumbuhan bakteri.  Maka  dapat disimpulkan  bahwa KHM  dari  teh  kombucha  probiotik  terhadap bakteri S.aureus adalah  25%  dan  KBM  dari teh  kombucha  probiotik  terhadap  bakteri S.aureus adalah 35%.
Gambar 1. Perbandingan Diameter Zona Hambat Teh Kombucha Probiotik Terhadap E.coli dan S.aureus
Tabel 2. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri terhadap E.coli dengan Dilusi Padat
Konsentrasi Pertumbuhan Bakteri / Kekeruhan Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Kontrol Positif - - - 100% - - - 70% - - - 60% - - - 50% - - - 45% - - - 40% - - - 35% - - - 30% - - - 25% - - - 20% ++ ++ ++ Kontrol Negatif ++
++ ++ Keterangan : ++ : keruh, + : agak keruh, - : jernih 0 5 10 15 20 25 30 K+ 100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% K- D ia m ete r Z o n a H a m b a t (m m ) Konsentrasi Teh Kombucha Probiotik E.coli S.aureus
Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri terhadap S.aureus dengan Dilusi Padat
Konsentrasi Pertumbuhan Bakteri / Kekeruhan Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3 Kontrol Positif - - - 100% - - - 70% - - - 60% - - - 50% - - - 45% - - - 40% - - - 35% - - - 30% - - - 25% - - - 20% + + + Kontrol Negatif ++ ++ ++
Keterangan : ++ : keruh, + : agak keruh, - : jernih

## Tabel 4. Hasil Uji pH
Ulangan ke- Rata-rata 1 2 3 3.05 3.05 3.09 3.06
Nilai  pH  teh  kombucha  dan  teh kombucha  probiotik ini  memenuhi  tingkat keasaman  standar  dari  teh  kombucha  yaitu 2.7-3.2  (Naland,  2008).  Pada  umumnya semakin  meningkatnya  kandungan  asam suatu  bahan  maka  nilai  pH  akan  semakin turun.  Penurunan  pH  teh  kombucha  diduga disebabkan oleh peningkatan konsentrasi zat- zat asam selama proses fermentasi. Zat asam yang  terlarut  akan  melepaskan  proton  yang menyebabkan  penurunan  pH  (Suhiman, 2012).
Penurunan  pH  terjadi  karena  selama proses  fermentasi  khamir  dan  bakteri mensintesis  sukrosa  menjadi  asam-asam organik,  seperti  asam  asetat,  asam  glukonat dan beberapa asam organik lainnya, sehingga dengan  peningkatan  konsentrasi  asam-asam organik  tersebut  mengakibatkan  penurunan pH  pada  medium  fermentasi.  Penurunan lebih lanjut pada pH teh kombucha probiotik dikarenakan  pada  saat  proses  inkubasi bakteri  probiotik  10%  ke  dalam  teh kombucha,  terjadi  proses  fermentasi  oleh bakteri  probiotik  yang  menghasilkan  asam laktat  sehingga  terjadi  penurunan  pH mencapai 3.06.

## SIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat disimpulkan  bahwa  teh  kombucha  probiotik memiliki aktivitas antibakteri terhadap pertumbuhan  bakteri E.coli dan S.aureus. Teh  kombucha  probiotik  memiliki  nilai KHM  sebesar  25%  terhadap  bakteri E.coli dan S.aureus serta  memiliki  nilai  KBM sebesar  40%  terhadap  bakteri E.coli dan sebesar 35% terhadap bakteri S.aureus.

## DAFTAR PUSTAKA
[AOAC]  Association  of  Official  Analytical Chemist.    2005. Official  Methods  of Analysis. Ed ke-14. Arlington: Association  of  Official  Analytical
Chemist.
Anggriani,  Y.D.  2008.  Pengaruh  Pemberian Teh  Kombucha  Dosis  Bertingkat  Per Oral  Terhadap  Gambaran  Histologi Ginjal  Mencit  BAL  B/C[skripsi]. Semarang: FK Universitas Diponegoro. Blanc,  P.J.  2000. Characterization  Of  The Tea Fungus Metabolites. www.kombucha-research.com[09 Agustus 2013].
Fuller,  R.  1999. Probiotics  for  Farm
Animals.  Tannock,  G.W.,  editor.  New York: Horizon Scientific Press. Jawetz,  E. et  al.  1995. Mikrobiologi
Kedokteran.  Edisi  ke-20.  Nugroho, R.F.Maulany,  penerjemah;  Jakarta  :
Penerbit Buku Kedokteran EGC. hlm
211-215.
Kaur,  G.J.,  Arora,  D.S.  2009.  Antibacterial Activity  of  Some  Indian  Medicinal plants. J Nat Med 61(1): 313-317. Naid,  T.,  Kasim,  S.,  Marzuki,  A.  Produksi Antibiotika  Secara  Fermentasi  dari Biakan  Mikroorganisme  Simbion Rumput  Laut Eucheuma  cottonii. Majalah  Farmasi  dan  Farmakologi 17(3): 61-68.
Naland,  H.  2008. Kombucha,  Teh  Dengan Seribu  Khasiat.  Jakarta:  AgroMedia
Pustaka. Pratiwi,  S.T.  2008. Mikrobiologi  Farmasi. Jakarta : Erlangga. hlm 188-191. Ray, B. 2005. Fundamental Food Microbiology. 3 rd ed.  Florida:  CRC Press LLC.
Ryan, K.J. et al. 1994. Medical Microbiology
An Introduction
to Infectious Diseases. 3 rd ed. Connecticut:
Appleton & Lange. hlm 254. Samy, R.P., Ignacimuthu, S. 2000. Antibacterial Activity of Some Folklore  Medicinal  Plants  Used  by Tribals  in  Western  Ghats  of  India. Journal of
Ethnopharmacology 69(1): 63-71. Sriningsih,  S.,  Sari,  P.,  Priyanto.  2007. Pengaruh  Pemberian  Teh  Kombucha Terhadap  Kadar Asam  Urat  Darah
Tikus  Putih  Jantan.  Jurnal  Bahan
Alam  Indonesia  ISSN  1412-2855 6(3): 118-121.
Suhartatik,  N.,  Karyantina,  M.  2008. Kombucha  Dengan  Variasi  Kadar Gula Kelapa Sebagai Sumber Karbon. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan 19(2): 165-169. Suhiman,  S.  2012.  Teh  Kombucha  Sebagai Minuman Fungsional Untuk Meningkatkan  Daya  Tahan  Tubuh. Di dalam : Hadipoentyanti, E., editor.
Warta Penelitian dan Pengembangan
Tanaman  Industri; Bogor,  Agustus 2012. Bogor: Balitro. Hlm 26 - 30. Suprapti,  M.L.  2003. Teh  Jamsi  dan
Manisan  Nata  Berkhasiat  Obat.
Jakarta: Penerbit Kanisius. Surono,  I.S.    2004. Probiotik  Susu Fermentasi  dan  Kesehatan. Jakarta  : PT. Tri Cipta Karya. Swarbrick, J. 2004. Microbial Contamination Control in the Pharmaceutical Industry.Volume 142. New York : Marcel Dekker Inc. Tannock, G.W. 2005.Probiotics and Prebiotics:  Scientific  Aspects. New York:  Horizon  Scientific  Press.  hlm. 43. Winarni,  D.  2010.  Pengaruh  Pemberian  Teh Kombucha Terhadap Penurunan Kadar Kolesterol Total dalam Darah[skripsi].  Surakarta:  FK-UNS.