## KARAKTERISTIK PERTUMBUHAN DAN WAKTU GENERASI ISOLAT Azotobacter sp. DAN BAKTERI ENDOFITIK ASAL EKOSISTEM LAHAN SAWAH
( Growth Characteristic and Generation Time Azotobacter sp.
And Isolate from Wetland Ecosystem  )
Mieke Rochimi Setiawati 1 , Pujawati Suryatmana 1 , Diyan Herdiyantoro 1 , dan Zahra Ilmiyati 2
1 Staf Pengajar  Jurusan Agroteknologi Fakultas Pertanian
Universitas Padjadjaran
2 Mahasiswi Jurusan Agroteknologi Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran
Jl.  Raya Bandung Sumedang Km 21, Jatinangor (45363), Jawa Barat Telp. 022-7797200, Fax. 022-7796316, e-mail: miekesetiawati@yahoo.com

## ABSTRACT
Azotobacter sp. and N 2 -fixation endophytic bacteria are microbes that play a role in fixation the N 2 from the free air and helps supply of N to plants and can make efficient  use  of  N  derived  from  inorganic  fertilizer.  N 2 -fixation  microbes utilization  in  rice  fields  can  reduce  the  cost  of  production  of  rice  plants.  By studying the characteristics of the two types of beneficial bacteria that is expected to be engineered to enhance the role of these bacteria contribute in supplying N to rice  crops.  The  method  used  in  this  study  is  exploratory  and  observe  the characteristics of growth and generation time of bacteria for 72 hours. The results of this study indicate that the bacterial isolates of Azotobacter sp-1 has the highest population  in  48  hours  with  a  total  population  of  1.58  x10 7 cfu  ml -1 ,  whereas bacteria  Azotobacter  sp-2  has  the  highest  population  in  60  hours    with  a  total population of 3.12 x10 6 cfu ml -1 . Both N 2 -fixation endophytic bacteria populations reached  the  highest  peak  in  the  60th  hour  with  a  total  population  of  N 2 -fixation endophytic bacteria-1 at  1.12 x 10 8 cfu ml -1 of N 2 -fixation endophytic bacteria-2 of 9.4 x 10 7 cfu ml -1 of both isolates endophytic bacteria showed a similar growth pattern. Azotobacter sp. isolates from rhizosfir of the rice plant have a difference generation  time,  while  the  two  isolates  of  N 2 -fixation  endophytic  bacteria  from tissue of rice plants having the same generation time. Isolates of Azotobacter sp.-1 had  the  fastest  of  generation  time,  capable  of  generating  new  cells  every  158.66 minutes or every 2.64 hours.
Keywords:  Azotobacter, N 2 -fixation endophytic bacteria, Growth curve, Generation time

## PENDAHULUAN
Nitrogen  adalah  unsur  yang diperlukan tanaman untuk membentuk  senyawa  penting  di dalam  sel.  Tanaman  mengambil kebutuhan Nitrogen dari dalam tanah dalam bentuk NH 4 dan NO 3 . Sumber Nitrogen  yang  terdapat  di  dalam tanah, tidak selalu mencukupi kebutuhan  tanaman,  sehingga  perlu diberikan  pupuk  anorganik  yang merupakan  sumber  Nitrogen  untuk meningkatkan  produksi  pertanian. Akan  tetapi  penggunaan  pupuk anorganik  dalam  jangka  panjang dapat menimbulkan efek yang membahayakan lingkungan. Peran  dan  fungsi  mikroba tanah  juga  menentukan  berhasilnya keberlanjutan sistem produksi pertanian. Penambatan N 2 dari atmosfer oleh mikroba dapat membantu ketersediaan unsur N bagi tanaman  dan  dapat  mengefisienkan penggunaan  N  yang  berasal  dari pupuk anorganik. Pemanfaatan mikroba  penambat  N 2 ini  juga  akan mengurangi  biaya  produksi  tanaman (Razie dan Syaifuddin, 2005).
Azotobacter  sp.    merupakan
salah  satu  mikroba  yang  dikenal mampu menambat N 2 serta menghasilkan  substansi  zat  pemacu tumbuh IAA, sitokinin, dan giberelin sehingga dapat memacu pertumbuhan akar (Alexander, 1977). Kemampuan Azotobacter dalam menambat N 2 dan menghasilkan  zat  pengatur  tumbuh dapat memberikan keuntungan
tersendiri.    Selain  meningkatkan ketersediaan  N  di  dalam  tanah  yang akan  meningkatkan  produksi  hasil,
Azotobacter  sp.  juga  tidak  akan mencemari lingkungan.
Selain Azotobacter sp.,
penambatan  nitrogen  dari  udara  juga
diketahui dapat dilakukan oleh mikroba endofitik. Menurut Saraswati  et  al.  (2004),  bakteri endofit  merupakan  bakteri  rizosfir yang  mampu  hidup  dalam  jaringan tanaman (endofit), berfungsi memacu pertumbuhan dan melindungi tanaman inangnya. Bakteri endofit hidup dalam jaringan hidup suatu tumbuhan tanpa merugikan  tanaman  inangnya  dan aktif  dalam  jaringan  tersebut  (Barac et  al.,  2004).  Bakteri  endofit  yang memiliki kemampuan dalam melakukan  penambatan  Nitrogen secara biologis disebut dengan bakteri  endofit  diazotrof  (Susilowati et al., 2007). Bakteri endofit terdapat pada berbagai macam jaringan tanaman, seperti bunga, daun, batang, akar, dan biji atau buah pada berbagai  tanaman  (Kobayashi  dan
Palumbo,  2000  dalam  Hung  dan
Annapurna, 2004).
Bakteri endofit memiliki banyak  manfaat  diantaranya  dapat meningkatkan  pertumbuhan  tanaman dengan  memproduksi  fitohormon, meningkatkan  produksi  penyerapan mineral, fiksasi Nitrogen, mengurangi kerusakan akibat perubahan  cuaca  dan  meningkatkan ketahanan  tanaman  dari  penyakit
(Zinniel et al., 2002). Studi molekuler  terbaru  tentang  bakteri endofit memperlihat- kan
keanekaragaman  yang  sangat  besar dari  spesies  ini.  Beberapa  endofit terdapat  dalam  benih,  tetapi  lainnya, ada  yang  melalui  proses  kolonisasi pada  tanaman.  Bakteri  ini  dapat mengeluarkan senyawa protein untuk mempermudah dalam proses kolonisasi.  Ekspresi  gen  tumbuhan menunjukkan bahwa, tumbuhan menyediakan  tanda  khusus  untuk dapat dipengaruhi oleh bakteri
endofit  (Rosenblueth  dan  Martínez- Romero, 2008).
Bakteri  Endofitik  Penambat N 2 dapat  meningkatkan  penambatan nitrogen  dari  udara.  Pada  tanaman tebu  kultivar  tertentu  di  Brazil  yang dapat  mengurangi  setengah  dari kebutuhan  nitrogen  melalui  aktivitas penambatan  N 2 ,  yaitu  lebih  dari  150 kg  ha -1 tahun -1 N  (Boddey  et  al., 1995).    Peningkatan  jumlah  populasi bakteri  endofitik  penambat    N 2 cenderung  meningkatkan  serapan  N tanaman  secara  nyata.  (Setiawati  et al., 2008).
Bakteri  Azotobacter  maupun bakteri endofitik penambat N 2 diduga mempunyai karakteristik pertumbuhan yang berbeda walaupun kedua  bakteri  tersebut  mempunyai fungsi  yang  sama  yaitu  dapat menambat  N 2 dari  udara  bebas. Karakteristik yang menentukan aktivitas  kedua  bakteri  tersebut adalah  kurva  pertumbuhan  dan waktu generasinya. Fase pertumbuhan  bakteri  dapat  dilihat dari  kurva  pertumbuhan  bakteri. Disamping  itu  dapat  diamati  pula waktu tumbuh optimumnya. Perubahan  kemiringan  pada  kurva, menunjukkan  transisi  dari  satu  fase perkembangan ke fase lainnya.
Menurut  Sumarsih  (2003) waktu  generasi  bakteri  adalah  waktu
yang diperlukan bakteri untuk membelah  sel  nya  dari  satu  sel menjadi  dua  sel  anak  dengan sempurna.  Waktu  generasi  pada setiap  bakteri  tidak  sama,  ada  yang hanya  memerlukan  20  menit  sampai berjam-jam atau berhari-hari. Dengan  mempelajari  karakteristik kedua  bakteri  yang  bermanfaat  ini diharapkan  dapat  direkayasa  untuk meningkatkan  peran  bakteri  tersebut berkontribusi  dalam  mensuplai  N untuk tanaman padi sawah.

## BAHAN DAN METODE
Bakteri Azotobacter sp. diisolasi  dari  rhizosfir  tanaman  padi sawah sedangkan dan bakteri endofitik  penambat  N 2 diisolasi  dari jaringan  akar,  batang,  dan  daun tanaman  padi  yang  tumbuh  di  lahan sawah  di  desa  Cileles,  Jatinangor, Kabupaten  Sumedang.  Media  isolasi yang  digunakan  untuk  mengisolasi bakteri  Azotobacter  adalah  media Ashby  cair  dan  padat,  untuk  bakteri endofitik  digunakan  media  Triptic Soy  Agar  (TSA)  dan  JNFb  semi solid.  Media  yang  digunakan  untuk mengamati  waktu  generasi  kedua bakteri tersebut masing-masing digunakan  media  Ashby  cair  dan
Triptic Soy Broth (TSB).
Karakteristik kedua jenis bakteri  tersebut  yang  diamati  dari kurva pertumbuhannya. Pertumbuhan  kedua  bakteri  diamati setiap  4  jam  dan  dibuat  kurva pertumbuhannya.  Populasi  bakteri yang tumbuh selama proses penentuan kurva pertumbuhan dihitung  dengan  metode  Total  Plate Count (TPC). Waktu generasi bakteri dihitung dengan menggunakan rumus (Ni’matuzahroh, 2010) :
Keterangan: G = Waktu generasi t = Interval waktu antara pengukuran jumlah sel awal (a) dan jumlah sel pada titik tertentu (b) a = Populasi bakteri awal b = Populasi bakteri setelah waktu
3,32 = faktor konversi
HASIL DAN PEMBAHASAN Karakteristik Pertumbuhan Bakteri Hasil isolasi bakteri Azotobacter  dari  rhizosfir  tanah sawah  dihasilkan  3  isolat.  Dua  isolat yang  mempunyai  karakteristik  yang sama  sedangkan  isolat  yang  ketiga berbeda sehingga diambil dua isolate yang berbeda untuk diamati karakteristik  pertumbuhannya.  Isolat
Azotobacter  pertama  (Azotobacter sp.-1) mempunyai ciri koloni bundar, permukaan cembung mucoid, dengan tepian  rata,  berwarna  putih  bening. Isolat Azotobacter kedua (Azotobacter  sp.-2)  mempunyai  ciri koloni  bundar,  permukaan  cembung mucoid, dengan tepian rata,
berwarna bening kecoklatan.
Terdapat  6  isolat  bakteri endofitik  yang  diisolasi  dari  akar, batang,  dan  daun  tanaman  padi sawah. Keenam isolat tersebut ditumbuhkan  pada  agar  tegak  media JNFb  semi  solid  untuk  menseleksi bakteri endofitik penambat N 2
dengan  dicirikan  terbentuk  cincin putih  di  bawah  permukaan  media JNFb  yang  berwarna  biru.  Diperoleh dua isolat yang menunjukkan adanya cincin putih pada media JNFb. Isolat bakteri endofitik penambat N 2 pertama (1) berasal dari jaringan akar tanaman  padi  sawah  mempunyai  ciri koloni  bundar,  permukaan  rata, dengan  tepian  rata,  berwarna  putih
bening. Isolat bakteri endofitik penambat  N 2 kedua  (2)  berasal  dari jaringan  daun  tanaman  padi  sawah mempunyai ciri koloni oval, permukaan  rata,  dengan  tepian  rata, berwarna bening kekuningan. Penentuan kurva pertumbuhan dilakukan untuk melihat fase pertumbuhan dari kedua jenis  bakteri  Azotobacter  sp.  dan bakteri endofitik penambat N 2 . Perubahan  kemiringan  pada  kurva yang  terlihat,  menunjukkan  transisi dari  satu  fase  perkembangan  ke  fase lainnya.  Kurva  pertumbuhan  bakteri dapat dipisahkan menjadi empat fase utama:  fase  lag  (fase  lamban),  fase pertumbuhan eksponensial (fase pertumbuhan  cepat),  fase  stationer (fase statis) dan fase decline (penurunan populasi). Fase-fase tersebut mencerminkan keadaan
bakteri  dalam  kultur  pada  waktu tertentu.  Di  antara  setiap  fase terdapat  suatu  periode  peralihan  di mana  waktu  dapat  berlalu  sebelum semua sel memasuki fase yang baru.
Penentuan kurva pertumbuhan yang dilakukan memerlukan waktu hingga jam ke 72 dalam    labu  kultur    yang    diinkubasi pada alat pengocok dengan kecepatan  120  rpm.  Pertumbuhan diukur dalam interval waktu setiap 4 jam  dengan  metode  TPC  di  dalam petridish. Kurva
pertumbuhan bakteri Azotobacter sp. (Gambar 1).
Azotobacter sp.-1 :                 Azotobacter sp.-2 :
Gambar 1.  Grafik pertumbuhan bakteri Azotobacter sp.-1 dan Azotobacter sp. -2 (x10 3 cfu ml -1 )
Pratiwi  (2008)  menjelaskan  bahwa pertumbuhan  bakteri  dipengaruhi oleh  faktor  fisik  dan  faktor  kimia. Faktor-faktor fisik yang mempengaruhi  pertumbuhan  bakteri,
yaitu  temperatur,  tekanan  osmosis, pH,  oksigen,  dan  radiasi.  Sedangkan faktor  kimia  yang  mempengaruhi pertumbuhan  bakteri,  yaitu  nutrisi dan  media  kultur.    Perbedaan  yang cukup  besar  pada  jumlah  populasi bakteri  saat  titik  tumbuh  optimum terjadi  karena  faktor  genetik  pada masing-masing bakteri. Genetik merupakan  faktor  intrinsik  dalam suatu  mikroorganisme  yang  tidak dapat dirubah karena setiap makhluk hidup  pasti  memiliki  gen  yang berbeda  satu  sama  lain.  Bakteri Azotobacter sp. dapat hidup pada pH 4,8-8,5  dengan  pH  optimum  untuk pertumbuhan  dan  fiksasi  nitrogen 7,0-7,5. Namun selama pertumbuhannya,  aktivitas  mikroba di dalam media dapat mempengaruhi kadar  pH  di  dalamnya.  Kadar  pH  di dalam  media  kultur  juga  dapat
meningkat akibat proses pembentukan  ammonia  dari  unsur nitrogen  yang  tergandung  dalam media. Pada Gambar 2 hasil pengamatan populasi bakteri endofitik  penambat  N 2 -1  dan  bakteri endofitik  penambat  N 2 -2  tiap  4  jam sekali  selama  tiga  hari  pada  media pertumbuhan  TSB  memperlihatkan pola  pertumbuhan  yang  hampir sama,  tetapi  sangat    berbeda  bila dibandingkan dengan pola pertumbuhan Azotobacter sp. (Gambar 1) Dari Gambar 2 terlihat bahwa terdapat perbedaan pola kurva pertumbuhan  pada  bakteri  endofitik penambat  N 2 -1  dan  bakteri  endofitik penambat  N 2 -2  pada  tiap  4  jam terjadi  fluktuasi.  Populasi  bakteri endofitik  penambat  N 2 -1  dan  bakteri endofitik  penambat  N 2 -2  mencapai puncak  yang  tertinggi  pada  jam  ke- 60,  kedua  bakteri  endofitik  kembali mencapai puncak tertinggi dan berulang lagi pada
Bakteri Endofitik Penambat N 2 -1:               Bakteri Endofitik Penambat N 2 -1 :
Gambar  2.  Grafik  Pertumbuhan  bakteri  endofitik  penambat  n 2 -1  dan  bakteri endofitik penambat N 2 -2 (x10 3 cfu ml -1 )
pengamatan  jam  ke-72.  Oleh  karena itu  isolat  kedua  bakteri  endofitik pada jam ke-60 setelah inkubasi pada media  cair  TSB  dapat  dipanen  dan diaplikasikan  ke  tanaman  padi. Populasi  bakteri  endofitik  penambat N 2 -1  pada  jam  ke-60  sebesar  1,12  x 10 8 cfu  ml -1 lebih  tinggi  sebesar 18,62  %  bila  dibandingkan  bakteri endofitik penambat N 2 -2  sebesar 9,4 x 10 7 cfu ml -1 pada jam yang sama.
Waktu  Generasi  Azotobacter  sp. dan  Bakteri  Endofitik  Penambat N 2 Berdasarkan uji analisis statistik yang sudah dilakukan, kedua isolat bakteri Azotobacter sp.
mempunyai  waktu  generasi  yang berbeda,  sedangkan  kedua  isolat bakteri endofitik penambat N 2 mempunyai  waktu  generasi  yang sama.  Waktu  generasi  isolat  bakteri endofitik  penambat  N 2 lebih  lambat dari
pada waktu generasi Azotobacter sp. Waktu generasi yang lebih  tinggi  pada  tabel  menunjukkan pertumbuhan  yang  lebih  lambat, sedangkan waktu generasi yang lebih rendah  menunjukan  pertumbuhan bakteri yang lebih baik, karena angka yang  lebih  rendah menunjukan bakteri  hanya  memerlukan  waktu yang  lebih  sedikit  untuk  membelah selnya menjadi 2x lipat.
Tabel 1.  Waktu Generasi bakteri Azotobacter sp. dan bakteri endofitik penambat N 2 Nama Isolat Waktu Generasi (menit/generasi) A.   Azotobacter sp-1 158,66 a B.   Azotobacter sp-2 234,33 b C.   Bakteri endofitik penambat N 2 -1 255,00 c D.   Bakteri endofitik penambat N 2 -2 263,00 c
Keterangan: Angka yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda   nyata pada taraf uji Duncan 5 %
Waktu generasi bakteri Azotobacter sp.-1 mempunyai pertumbuhan  yang  paling  cepat  di antara  semua  isolat  yang  dihasilkan dari  ekosistem  lahan  sawah.  Isolat Azotobacter  sp.-1  mampu  membelah menghasilkan  sel  baru  setiap  158,66 menit  atau  setiap  2,64  jam  sekali. Waktu  generasi  adalah  waktu  yang diperlukan oleh mikroorganisme untuk  meningkatkan  jumlah  sel menjadi dua kali lipat jumlah semula (Yudhabuntara, 2003). Kurva pertumbuhan  mikroorganisme  terdiri atas empat fase, yaitu fase penyesuaian (lag phase), fase eksponensial  atau  fase  logaritmik, fase  stasioner  dan  fase  kematian.
Pada fase eksponensial terjadi peningkatan jumlah sel dan digunakan  untuk  menentukan  waktu generasi. Waktu generasi tercepat  pada setiap  jenis  bakteri  berbeda  hal  ini terjadi  karena  sifat  genetis  yang dapat dipacu dengan mengkondisikan  lingkungan  yang optimum  untuk  bakteri  tersebut.
Kondisi  lingkungan  yang  dapat dimanipulasi  untuk  meningkatkan waktu  generasi  yaitu  suhu,  pH,  dan nutrisi.    Bakteri  penambat  N  justru akan terhambat pertumbuhannya bila ada  penambahan  N  pada  media
tumbuhnya  terutama  menghambat aktivitas  kerja  nitrogenase.    Bila  di dalam nutrisinya dilakukan pemberian  P  dan  Mo  dengan  jumlah yang cukup, maka akan menyebabkan waktu generasi bakteri penambat N 2 meningkat. Leigh  (1995)  menjelaskan bahwa unsur Fosfor dan Molibdenum merupakan faktor pembatas  bagi  aktivitas  bakteri penambat  N.  Fosfor  merupakan unsur  yang  berfungsi  dalam  proses transfer energi, suatu proses terpenting bagi pertumbuhan (Tisdale  et  al.,  1985),  sedangkan molibdenum  merupakan  komponen esensial  yang  diperlukan  untuk metabolisme  bakteri  (Thiel  et  al.,
2002 dalam Armiadi, 2009).
Pemberian  fosfor  dan  molibdenum yang mempengaruhi kemasaman dan jumlah  suplai  N 2 pada  media  kultur akan  mempengaruhi  waktu  generasi dari bakteri Azotobacter sp.
Keberadaan  unsur  fosfor  dan molibdenum dalam media perbanyakan bakteri terlihat
memberikan  pengaruh  pada  waktu generasi  dari  bakteri  Azotobacter  sp. Metabolisme bakteri yang meningkat akibat  pemberian  unsur  fosfor  dan molibdenum  yang  membantu  proses reduksi  N 2 dan  memproduksi  NH 4
diduga  menjadi  salah  satu  faktor yang  menentukan  waktu  generasi. Wibowo  (2012)  menjelaskan  bahwa pertumbuhan  koloni  dan  kecepatan pertumbuhan  sebuah  bakteri  akan dibatasi  oleh  produk  metabolit  yang dihasilkan oleh mikroorganisme tersebut. Kemasaman  sebuah  medium biakan  merupakan  faktor  lain  yang mempengaruhi kecepatan pertumbuhan generasi bakteri. Ni’matuzahroh  (2011)  menyatakan bahwa pH yang optimum merupakan salah  satu  faktor  fisik  yang  harus dimiliki  sebuah  media  kultur  untuk menumbuhkan bakteri. Bakteri Azotobacter sp. memiliki pH optimum untuk melakukan pertumbuhan  dan  proses  fiksasi nitrogen,  yaitu  pada  pH  7,0-7,5
(Wibowo, 2012).

## SIMPULAN
1. Isolat  bakteri  Azotobacter  sp.-1 terlihat memiliki populasi tertinggi  pada  jam  ke  48  dengan total  populasi  1,58  x10 7 cfu  ml -1 , sedangkan  bakteri  Azotobacter sp.-2 memiliki  populasi  tertinggi pada    jam    ke    60    dengan  total populasi 3,12 x10 6 cfu ml -1 .
2. Kedua  populasi  bakteri  endofitik penambat  N 2 mencapai  puncak yang  tertinggi    pada  jam  ke-60 dengan  total  populasi  bakteri endofitik  penambat  N 2 -1  sebesar 1,12  x  10 8 cfu  ml -1 bakteri endofitik  penambat  N 2 -2    sebesar 9,4  x  10 7 cfu  ml -1 kedua  isolat bakteri endofitik tersebut memperlihatkan pola pertumbuhan yang hampir sama 3. Isolat bakteri Azotobacter sp. asal rhizosfir tanaman padi mempunyai  waktu  generasi  yang berbeda,  sedangkan  kedua  isolat
bakteri  endofitik  penambat  N 2 asal jaringan tanaman padi mempunyai  waktu  generasi  yang sama. 4. Isolat Azotobacter sp.-1
mempunyai  waktu  generasi  yang tercepat,  mampu  menghasilkan sel baru setiap 158,66 menit atau setiap 2,64 jam sekali.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  Terimakasih  kami sampaikan  kepada  DITLITABMAS Ditjen  Pendidikan  Tinggi yang membiayai  penelitian  ini  melalui skema  penelitian  STRANAS  dengan nomor kontrak 1046/UN6.R/PL/2014 Tanggal  12  Mei  2014.  Kepada berbagai  pihak  yang  membantu kelancaran pelaksanaan kegiatan penelitian ini kami ucapkan terimakasih.

## DAFTAR PUSTAKA
Alexander,  M.  1977.  Introduction  to Soil  Microbiology.  2nd  ed. John  Wiley  and  Sons,  Inc.,
New York. Armiadi.  2009.  Peranan  Unsur  Hara Molibdenum dalam Penambatan Nitrogen. WARTAZOA. Vol. 19. Bogor. Barac,  T.,  Taghavi,  S.,  Borremans, B.,  Provoost,  A.,  Oeyen,  L., Colpaert, J.V., Vangronsveld, J.,  dan  Lelie,  D.V.D.  2004. Engineered Endophytic Bacteria Improve Phytoremediation  of  Water- Soluble,  Volatile,  Organic Pollutants. Nature Biotechnology Volume 22. Didi, R.S., R.D.M. Simanungkalit, S.
Rasti,  D.H.  Ratih,  dan  H.  Edi. 2006.  Pupuk  Organik  dan Pupuk  Hayati.  Balai  Besar
Penelitian  dan  Pengembangan Sumberdaya  Lahan  Pertanian. Bogor. Hung,  P.Q.,  dan  Annapurna,  K. 2004. Isolation and Characterization of Endophytic Bacteria in Soybean (Glycine sp.). Omonrice 12: 92-101. Jones, J.B., B. Wolf, and H. A. Mills.
1991.  Plant  Analysis  Book  a Practical  Sample,  Preparation,
Analysis,  and  Interpretation Guide. Micro-Macro Publ.  Inc.
Georgia. 213 pp. Ni’matozahroh,  2010.  Pertumbuhan Bakteri.  Fakultas  Sains  dan teknologi, Universitas Airlangga Surabaya. Surabaya. Pratiwi, Sylvia, T. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Erlangga. Jakarta. Razie,  F.,  dan  Syaifuddin.  2005. Potensi  Azotobacter  spp.  dari Persawahan Lahan Pasang Surut Kalimantan Selatan: Kemampuannya Menambat Nitrogen  dan  Memasok  N untuk  Pertumbuhan  Padi  IR- 64. Agroscientiae. 12:106-133. Rosenblueth,  M.,  dan  Martínez- Romero, E. 2006. The American  Phytopathological Society.  MPMI.  Vol.  19,  No. 8:827–837. Saraswati,  R.,  Prihatini,  T.,  dan Hastuti, R.D. Teknologi Pupuk Mikroba untuk Meningkatkan Efisiensi Pemupukan dan Keberlanjutan Sistem Produksi Padi Sawah.http://balittanah.litban g.deptan.go.id/dokumentasi /buku/tanahsawah6.pdf. [Diakses 4 Maret 2013]. Setiawati, M.R., Dedeh, H.A.,
Pujawati,  S.,  dan  Ridha,  H.
2008. Formulasi Pupuk Hayati Bakteri Endofitik Penambat N 2 dan Aplikasinya untuk  Meningkatkan  Hasil Tanaman Padi. Penelitian Jurusan  Ilmu Tanah, Fakultas Pertanian, Universitas Padjadjaran. Bandung. Sumarsih,  S.,  2003.  Mikrobiologi Dasar. Universitas Pembangunan Nasional Veteran, Yogyakarta. Susilowati,  D.  N.,  Saraswati  R., Hasttuti,  D.,  dan  Yuniarti,  E. 2007. Peningkatan Serapan N pada Kedelai yang Diinokulasi Bakteri Diazotrof Endofit di Medium Vermiculit.  Indonesian  Soil and Climate Journal. Tisdale,  S.L  and  W.L  Nelson,  and J.D Beaton. 1985. Soil Fertility and  Fertilizers.    4th  ed. Collier
Macmillan Company, New York. 754 p. Wibowo,  MS.  2012.  Pertumbuhan dan  Kontrol  Bakteri.  Gajah Mada University Press.Yogyakarta. Yudhabuntara, D. 2003. Pengendalian  Mikroorganisme dalam  Bahan  Makanan  Asal Hewan.  Fakultas  Kedokteran
Hewan, UGM. Yogyakarta.