JPHPI 2012, Volume 15 Nomor 2
Toksisitas ekstrak rumput laut cokelat, Firdaus, M. et al..

## TOKSISITAS AKUT EKSTRAK METANOL RUMPUT LAUT COKELAT Sargassum echinocarpum

## Acute Oral Toxicity of Methanol Extract from Brown Algae Sargassum echinocarpum
Muhamad Firdaus* 1 , Made Astawan 2 , Deddy Muchtadi 2 , Tutik Wresdiyati 3 , Sarwono Waspadji 4 , Setyawati S. Karyono 5 1 Teknologi Hasil Perikanan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan,  Universitas Brawijaya 2 Dept. Ilmu dan Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Pertanian, Institut Pertanian Bogor 3 Lab Anatomi, Fakultas Kedokteran Hewan, Institut Pertanian Bogor 4 Dept. Penyakit Dalam, Fakultas Kedokteran, Universitas Indonesia 5 Lab. Farmakologi, Fakultas Kedokteran, Universitas Brawijaya Diterima 2 Juni 2012/Disetujui 27 Juli 2012
Abstract The aim of this study was to evaluate acute toxicity of methanol extract of Sargassum echinocarpum on male and female of mice ( Mus musculus ) strain BALB/c two month age. S. echinocarpum was obtained from Talango Island in April 2008. The powder of S. echinocarpum was macerated by methanol (1:3) at 4 ° C for 3 x 24 hours, then concentrated, dried, and extracted. The extract was screened to observe the phytochemical compounds. For acute toxicity extracts was given orally and once on one hour before feeding. The dose treatments were 0; 625; 1250; 2500; and 5000 mg/kg body weight (BW). Parameters measured were phytochemical contain, body weight during the study, 50 percent of lethal doses, and histology score of liver and kidney. The phytochemical study showed that methanol extract of S. echinocarpum contained tannins, polyphenols, saponins, glycosides, and steroids. On 1250 mg/kg BW or more, methanol extract of S. echinocarpum inhibited the increasing of body weight on mice, but, until 5000 mg/kg BW, it did not cause mortality on mice. On 1250 mg/kg BW or more, methanol extracts caused necrosis on hepatocyt and tubulus.
Key words: acute toxicity, methanol extract, Sargassum echinocarpum
Abstrak
Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengevaluasi  toksisitas  akut  ekstrak  metanol Sargassum  echinocarpum pada mencit ( Mus musculus ) strain BALB/c umur 2 bulan, jenis kelamin jantan dan betina. S. echinocarpum didapat dari perairan pulau Talango pada April 2008. Tepung S. echinocarpum dimaserasi menggunakan metanol (1:3) pada suhu 4 ° C selama 3 x 24 jam, lalu dipekatkan, dikeringkan dan didapatkan ekstrak. Ekstrak  ditapis  untuk  mengetahui  kandungan  fitokimianya.  Ekstrak  diberikan  untuk  uji  toksisitas  akut secara oral dan sekali satu jam sebelum pemberian ransum. Dosis perlakuan meliputi: 0; 625; 1250; 2500; dan 5000 mg/kg bobot badan (BB). Parameter yang diamati: kenaikan bobot badan selama masa uji, dosis kematian 50 persen, dan skor histologis hati dan ginjal mencit uji. Hasil uji fitokimia menunjukkan bahwa ekstrak metanol S. echinocarpum mengandung tanin, polifenol, saponin, glikosida, dan steroid. Pemberian ekstrak  metanol S.  echinocarpum ≥  1250  mg/kg  BB  dapat  menghambat  kenaikan  bobot  badan,  namun hingga 5000 mg/kg BB tidak mengakibatkan kematian. Pengamatan histopatologis menunjukkan bahwa dosis pada 1250 mg/kg BB atau lebih dapat mengakibatkan nekrosis pada hepatosit dan tubulus.
Kata kunci: ekstrak metanol, Sargassum echinocarpum , toksisitas akut
*Korespondensi:  Jln.  Veteran  Malang,  Telp. +6281332774099 e-mail: muhamadfir@yahoo.com

## PENDAHULUAN
Sargassum  adalah  salah  satu  rumput laut  yang  banyak  terdapat  di  perairan
Indonesia. Rumput laut cokelat ini kaya akan zat gizi dan bioaktif. Ada 11 jenis Sargassum yang  ditemukan  di  perairan  Indonesia,
yaitu: Sargassum  binderi,  S.  crassifolium,  S. plagyophyllum,  S.  mollerii,  S.  siliquosum, S.  hystrix,  S.  gracilimum,  S.  duplicatum,  S.
cinereum, S. polycystum dan S. echinocarpum (Kadi 2005).
Di  Indonesia  meski  tidak  tercatat  dalam literatur obat tradisional, ternyata di lingkungan masyarakat pesisir beberapa jenis rumput laut sudah sejak lama digunakan untuk pengobatan. Studi  etnofarmakologi  di  beberapa  daerah  di Indonesia  diketahui  bahwa  21  jenis  dari  12 marga  rumput  laut  sudah  terbiasa  digunakan sebagai obat tradisional, yang meliputi 11 jenis dari 7 marga alga merah, 7 jenis dari 4 marga alga hijau dan 3 jenis dari 1 marga alga cokelat (Anggadireja et al . 1996).
Bahan  alam  telah  lama  dan  secara tradisional banyak digunakan oleh masyarakat untuk  memelihara  kesehatan  bahkan  untuk pengobatan  penyakit.  Masyarakat  lebih menyukai  menggunakan  bahan  alam  untuk keperluan  tersebut  karena  diketahui  dan dipercayai  serta  sudah  turun  temurun  tidak menimbulkan  efek  samping  pada  kesehatan. Studi  manfaat  fisiologis  rumput  laut  bagi kesehatan  baru  dilakukan  pada  awal  tahun 1980-an  dan  salah  satu  hasilnya  bahwa Sargassum sp dapat beraktivitas hipoglikemik (Lamela et al. 1989).
Studi  pendahuluan  kami  menunjukkan bahwa S.  echinocarpum yang  diperoleh dari  Perairan  Pulau  Talango  mempunyai aktivitas  antioksidan,  antihiperglikemik, antikegemukan,  antistres  oksidatif,  dan pencegah komplikasi diabetes melitus (Firdaus et al. 2007; Firdaus et al. 2010a; Firdaus et al . 2010b) .
Pengembangan bahan alam menjadi agen atau bahan yang dapat memberikan manfaat kesehatan  bagi  manusia  memerlukan  studi aktivitas,  kestabilan,  dan  keamanan  (Hays et  al. 2008).  Tujuan  penelitian  ini  adalah mendapatkan informasi mengenai  toksisitas akut ekstrak metanol S. echinocarpum.

## BAHAN DAN METODE
Bahan
Bahan yang digunakan adalah rumput laut cokelat ( S. echinocarpum ) yang diperoleh pada bulan April 2008 dari Perairan Pulau Talango,
Kabupaten  Sumenep,  Jawa  Timur;  metanol p.a.  (Merck);  mencit  ( Mus  musculus )  strain BALB/c  jantan  dan  betina  berumur  2  bulan dari  Universitas  Gajah  Mada,  Yogyakarta. Ekstrak  metanol S.  echinocarpum diperoleh berdasarkan  metode  Koivikko et  al .  (2005) yakni  ekstraksi,  sentrifugasi,  evaporasi,  dan pengeringan.  Bahan  lainnya  adalah  ransum, akuades, dan minyak wijen.

## Metode Penelitian Fitokimia
Analisis  fitokimia  terhadap  ekstrak metanol  dilakukan  menurut  Harborne (1984).  Pengujian  kualitatif  ekstrak  metanol S.  echinocarpum meliputi  tanin,  polifenol, alkaloid, saponin, glikosida, steroid, flavonoid, dan terpenoid.
Toksisitas akut (OECD 2001) Seluruh prosedur pemeliharaan, penggunaan  dan  perlakuan  terhadap  hewan uji telah disetujui oleh komisi etik penelitian hewan, Universitas Brawijaya dengan nomor 34-KE tahun 2009.
Mencit  dibagi  secara  acak  dalam  lima kelompok,  masing-masing  kelompok  terdiri atas enam ekor yang terdiri atas tiga ekor jantan dan  tiga  ekor  betina.  Mencit  diaklimatisasi dalam  laboratorium  selama  tujuh  hari. Sebelum  diperlakukan,  mencit  dipuasakan selama  3-4  jam  dengan  tetap  diberi  minum. Dosis  ekstrak  metanol S.  echinocarpum yang diberikan berdasarkan Nagayama et al. (2002) dan OECD (2001) yaitu: 0, 625, 1250, 2500, dan 5000 mg/kg BB. Ekstrak diberikan secara  oral  dengan  sonde  satu  jam  sebelum pemberian  ransum  standar.  Ransum  standar dibuat  dengan  komposisi:  karbohidrat  75%, protein  8%,  lemak  5%,  mineral  5%,  vitamin 1%,  serat  1%,  dan  air  5%.  Karbohidrat bersumber  dari  pati  jagung,  protein  dari kasein, lemak dari minyak jagung, dan serat dari carboxy methyl cellulose (CMC). Ransum dan  air  minum  diberikan  secara ad  libitum , selanjutnya dalam 24 jam pertama hewan uji diamati jumlahnya yang mati, bila tidak ada
Toksisitas ekstrak rumput laut cokelat, Firdaus, M. et al..
yang  mati  pengamatan  dilanjutkan  hingga 14 hari dengan mengamati perubahan bobot badan  harian.  Penimbangan  bobot  badan dilakukan pada pagi hari sebelum pemberian ransum.  Persentase  kenaikan  bobot  badan dinyatakan sebagai persen nisbah perubahan bobot badan terhadap bobot badan awal.
Dosis Kematian 50% ( Lethal Dose 50%/ LD 50 ) Nilai  LD 50 ditentukan  berdasar  nisbah jumlah  hewan  percobaan  yang  mati  dan jumlah  hewan  uji  tiap  kelompok  dan dinyatakan dalam persen. Nilai yang didapat selanjutnya dilihat nilai probitnya pada tabel harga  probit,  dosis  perlakuan  dikonversi menjadi log. Dosis toksisitas akut 50% (LD 50 ) ditentukan  berdasar  hubungan  persamaan linier  antara  konsentrasi  dosis  (dalam  log) sebagai nilai absis (x) dan nilai probit sebagai ordinat (y).

## Perubahan Histopatologi Hati dan Ginjal
Pengamatan histopatologi dilakukan pada akhir masa uji atau pada hewan uji yang mati untuk mengamati perubahan sel atau jaringan pada  hati  dan  ginjal  mencit  uji.  Mula-mula mencit  dipingsankan  dengan  cara dislocatio cervicalis ,  selanjutnya  perut  dibedah.  Hati dan  ginjal  diambil,  dicuci,  dan  dimasukkan dalam  cairan  formalin  10%.  Sediaan histopatologis  meliputi  tahapan:  persiapan jaringan,  pembuatan  blok,  pemotongan blok,  pemasangan  pita  sayatan,  pewarnaan, penjernihan  dan mounting .  Pewarnaan terhadap  sayatan  jaringan  menggunakan haematoksilin dan eosin.
Pengamatan perubahan morfologi menggunakan  mikroskop  cahaya  pada pembesaran 400X. Tiap bagian sampel masing- masing diwakili oleh sediaan dan perhitungan dilakukan  pada  tiga  lapang  pandang  yang diambil secara acak. Pengamatan mikroskopis hati  dan  ginjal  didasarkan  pada  perubahan jaringan. Skor pembacaan perubahan histopatologis hati yaitu: 0 = normal, 1 = ringan, 2 = moderat,
dan  3  =  parah.  Hepatosit  dinyatakan  tidak mengalami  nekrosis  (normal)  bila  tidak ada  piknosis,  kariolisis,  karioreksis,  dan sel  radang,  Hepatosit  dinyatakan  nekrosis ringan  bila  perubahannya  <1/3,  moderat bila  perubahannya  1/3-2/3,  dan  parah  bila perubahannya  >2/3  tiap  lapang  pandang (Sigala et al. 2006).
Skor pembacaan perubahan histopatologis ginjal  yaitu:  0  =  normal,  1  =  ringan,  2  = moderat,  dan  3  =  parah.  Perubahan  tubulus ginjal dinyatakan normal bila tidak ada dilatasi, sel  epitel  yang  terkelupas,  penggabungan antar  tubulus,  membran  dasar  tubulus yang  hilang,  dan  nekrosis.  Perubahan ringan  bila  perubahannya  <1/3,  moderat bila  perubahannya  1/3-2/3,  dan  parah  bila perubahannya  >2/3  tiap  lapang  pandang (Bayrak et al . 2008).

## Analisis Data
Data  persentase  kenaikan  bobot  badan dan LD 50 didapat dari rerata enam hewan uji. Data  perubahan  histopatologis  dinyatakan sebagai rerata dari lima lapang pandang tiap preparat.  Analisis  data  dilakukan  dengan analisis  keragaman  satu  arah  dan  perbedaan antar  perlakuan  diuji  dengan  beda  nyata terkecil dengan tingkat kepercayaan 1%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Fitokimia
Uji fitokimia bertujuan untuk mendapatkan gambaran secara kualitatif suatu simplisia atau ekstrak. Hasil uji fitokimia ekstrak metanol S. echinocarpum disajikan pada Tabel 1.
Tanin  dan  polifenol  yang  terdapat  pada rumput laut cokelat menurut Singh and Bharate (2006)  adalah  florotanin.  Hasil  penapisan menunjukkan ekstrak metanol S. echinocarpum positif  lemah  mengandung  saponin,  hal  ini kemungkinan  karena  keberadaan  glikon  dan steroidnya.  Springbob  dan  Kutchan  (2009) menyatakan  saponin  adalah  glikosida  yang aglikonnya  berupa  steroid  atau  triterpenoid. Steroid yang terkandung dalam Sargassum sp utamanya berupa fukosterol dan saringosterol,
seperti  yang  terdapat  dalam S.  fluitans,  S. vulgare,  S.  furcatum,  S.  carpophyllum, dan S. pallidum (Liu et al. 2009).

## Bobot badan
Hasil  analisis  data  menunjukkan  bahwa kenaikan bobot badan mencit antar perlakuan pada  akhir  masa  penelitian  berbeda  sangat nyata  (p  <  0,01),  kecuali  antara  perlakuan dosis 2500 mg/kg BB dan 5000 mg/kg BB yang tidak  menunjukkan  perbedaan  (p  =  0,341). Kenaikan  bobot  badan  mencit  uji  akibat pemberian  ekstrak  metanol S.  echinocarpum selama  masa  uji  toksisitas  disajikan  pada Gambar 1.
Kenaikan  bobot  badan  hewan  uji mengalami  hambatan  akibat  pemberian ekstrak  metanol S.  echinocarpum ,  kecuali perlakuan  dosis  625  mg/kg  BB.  Perlakuan ini    menunjukkan  kecenderungan  kenaikan
yang  hampir  sama  dengan  perlakuan  kontrol negatif,  walau  pada  akhir  masa  uji,  keduanya mengalami perbedaan sangat nyata (p< 0,01). Hal  ini  menunjukkan  bahwa  perlakuan  dosis 625 mg/kg BB ekstrak metanol S. echinocarpum tidak  mengakibatkan  gangguan  metabolisme dalam  hewan  uji.  Nagayama et  al .  (2002) melaporkan bahwa mencit yang diberi ekstrak Ecklonia  kurome tidak  mengalami  gangguan pertumbuhan. Pertumbuhan suatu organisme sangat  tergantung  pada  penyerapan  dan ketersediaan ( bioavailability ) zat gizi, termasuk protein,  dalam  tubuh.  Ketiadaan  hambatan kenaikan bobot badan ini menunjukkan bahwa proses  penyerapan  protein  dalam  saluran pencernaan  tidak  terganggu  oleh  keberadaan florotanin (Stern et al . 1996). Perlakuan ekstrak metanol S. echinocarpum dosis  1250  mg/kg  BB,  2500 mg/kg  BB  dan  5000  mg/kg  BB  pada  awal perlakuan  mengakibatkan  hambatan  dan penurunan  bobot  badan  hewan  uji,  namun selanjutnya  hewan  uji  mengalami  kenaikan bobot badan. Ekstrak metanol S. echinocarpum dosis  1250  mg/kg  BB  dapat  mengakibatkan hambatan  kenaikan  bobot  badan  hingga hari  ke-2,  sedang  dosis  2500  mg/kg  BB  dan 5000  mg/kg  BB  hingga  hari  ke-6.  Stern et al .  (1996)  menyatakan  ekstrak  rumput  laut cokelat  dapat  menghambat  pertumbuhan organisme bila kadar yang dikonsumsikan > 10 g tiap kg bobot badan, hal ini diakibatkan adanya kemampuan florotanin dalam ekstrak rumput laut cokelat untuk membentuk ikatan
Tabel  1  Fitokimia  ekstrak  metanol S. echinocarpum Fitokimia Keterangan Tanin + Polifenol + Alkaloid - Saponin + Glikosida + Steroid + Flavonoid - Triterpenoid -
-6 -4 -2 0 2 4 6 8 10 12 14 16 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Lama (hari) Ke na ik an b er at b ad an (%)
0 mg/kg
625 mg/kg
1250 mg/kg 2500 mg/kg 5000 mg/kg
Gambar 1 Persentase kenaikan bobot badan mencit akibat pemberian ekstrak metanol S. echinocarpum .
Gambar 2 Fotomikrograf hati mencit akibat pemberian ekstrak metanol S. echinocarpum dosis 0 mg/kg BB (A), 625 mg/kg BB (B), 1250 mg/kg BB (C), 2500 mg/kg BB (D), dan 5000 mg/kg BB (E).
(Perbesaran 400 x) (Pewarnaan H&E) ( = 15  m)
Keterangan:
◄ = sel radang,       = nekrosis,      = vakuola, dan     = steatosis
a b c d C D E ◄ A B
Gambar 1 Persentase kenaikan bobot badan mencit akibat pemberian ekstrak metanol S. echinocarpum dengan konsentrasi 0 (◆), 625 ( ■) , 1250 ( ▲) , 2500 ( □ ), dan 5000 mg/kg ( ○).
Toksisitas ekstrak rumput laut cokelat, Firdaus, M. et al..
hidrogen  dengan  protein  termasuk  enzim dalam saluran pencernaan.
Dosis kematian 50% (LD 50 ) Hasil  uji  menunjukkan  bahwa  pemberian ekstrak  metanol S.  echinocarpum sekali secara oral hingga dosis 5000 mg/kg BB tidak mengakibatkan  kematian  pada  mencit  uji,  hal serupa dilaporkan oleh Nagayama et al. (2002) bahwa ekstrak E. kurome yang diberikan pada mencit pada suatu uji toksisitas akut dengan dosis mencapai  5000  mg/kg  tidak  mengakibatkan kematian,  hal  ini  menunjukkan  bahwa komponen atau senyawa yang terkandung dalam ekstrak  metanol S.  echinocarpum tergolong senyawa yang relatif tidak toksik. Derelanko dan Holinger  (1995)  menggolongkan  bahwa  suatu bahan atau senyawa bila dikonsumsikan secara oral pada hewan percobaan dengan dosis 5000 mg/kg  BB  dan  tidak  mengakibatkan  kematian tergolong  toksik  yang  moderat,  dan  bila  lebih dari  15000  mg/kg  BB  dinyatakan  sebagai senyawa yang tidak toksik.

## Histopatologis hati dan ginjal
Hasil  analisis  data  menunjukkan  bahwa skor  histologis  hati  mencit  antar  perlakuan berbeda sangat nyata (p < 0,01). Fotomikrograf
dan  skor  histologis  hati  mencit  yang  diberi ekstrak  metanol S.  echinocarpum disajikan pada Gambar 2 dan 3. Pemberian ekstrak metanol S. echinocarpum dosis  >1250  mg/kg  BB  pada mencit  uji  telah  dapat  mengakibatkan perubahan  histologis  pada  hepatosit  hingga mengalami  nekrosis.  Sudha et  al .  (2008) dan  Hsu et  al. (2011)  menunjukkan  bahwa pemberian  tanin  >1500  mg/kg  BB  dapat mengakibatkan kerusakan hati (hepatotoksik). Ada dua hal yang memungkinkan tanin pada dosis  tersebut  bersifat  hepatotoksik,  yakni: (1) pada dosis tersebut, tanin dapat merusak membran  mitokondria.  Perusakan  ini  akan memicu  pembentukan  spesies  oksigen
Gambar 2 Fotomikrograf hati mencit akibat pemberian ekstrak metanol S. echinocarpum dosis 0 mg/kg BB (A), 625 mg/kg BB (B), 1250 mg/kg BB (C), 2500 mg/kg BB (D), dan 5000 mg/kg BB (E).
(Perbesaran 400 x) (Pewarnaan H&E) ( = 15  m)
Keterangan: ◄ = sel radang,       = nekrosis,      = vakuola, dan     = steatosis C D E ◄ A B
Gambar 2 Fotomikrograf hati mencit akibat pemberian ekstrak metanol S. echinocarpum dosis 0 mg/kg BB (A), 625 mg/kg BB (B), 1250 mg/kg BB (C), 2500 mg/kg BB (D), dan 5000 mg/kg BB (E). (Per- besaran 400 x) (Pewarnaan H&E) ( = 15 µm). Keterangan: = sel radang, = nekrosis, = vakuola, dan = steatosis. 0 1 2 3 0 625 1250 2500 5000 Dosis (mg/kg BB) Sk or hi stol ogi s
Gambar 3 Skor histologis hati mencit akibat pemberian ekstrak metanol S. echinocarpum.
reaktif hingga dapat memberi efek sitotoksik dan  (2)  pemberian  dosis  yang  sangat  besar sekaligus  dapat  mengakibatkan  kerusakan jaringan.  Damjanov  (1996)  menyatakan  bila rangsangan luar yang mengenai jaringan atau sel  melebihi  kapasitas  sel  beradaptasi,  maka akan terjadi cedera sel tak balik dan akhirnya sel mati (nekrosis).
Hasil  analisis  data  menunjukkan  bahwa skor histologis ginjal mencit antar perlakuan berbeda sangat nyata (p < 0,01). Fotomikrograf dan skor histologis ginjal mencit yang diberi ekstrak  metanol S.  echinocarpum disajikan pada Gambar 4 dan 5. Pemberian ekstrak metanol S. echinocarpum dosis  >1250  mg/kg  BB  pada mencit  uji  telah  dapat  mengakibatkan perubahan  histologis  pada  tubulus  ginjal hingga  mengalami  nekrosis.  Sudha et  al . (2008)  dan  Hsu et  al. (2011)  menunjukkan bahwa  pemberian  tanin  >1500  mg/kg  BB dapat  mengakibatkan  kerusakan  ginjal  dan nefrotoksik,  hal  ini  dimungkinkan  karena adanya  efek  lipid  peroksidasi  dan  pemekatan tanin pada tubulus. Rodrigo dan Rivera (2002) menyatakan kerusakan atau kematian sel ginjal dapat diakibatkan oleh stres oksidatif. Hervas et  al .  (2003)  menyatakan  lipid  peroksidasi
dapat dipicu oleh pemberian tanin >1500 mg/ kg BB melalui mekanisme perusakan membran mitokondria.  Desphande  (2002)  menyatakan bahwa  tubulus  mudah  mengalami  kerusakan atau nekrosis oleh zat dari luar karena jaringan ini merupakan tempat pemekatan zat sebelum diekskresikan dari tubuh.

## KESIMPULAN
Ekstrak  metanol S.  echinocarpum mengandung  tanin,  polifenol,  saponin, glikosida, dan steroid,  tergolong toksik yang moderat, dan aman dikonsumsi pada dosis < 1250 mg/kg BB.
Gambar 4 Fotomikrograf tubulus ginjal mencit akibat pemberian ekstrak metanol S. echinocarpum dosis 0 mg/kg BB (A), 625 mg/kg BB (B), 1250 mg/kg BB (C), 2500 mg/kg BB (D), dan 5000 mg/kg BB (E). (Perbesaran 400 x) (Pewarnaan H&E) ( = 15  m)
Keterangan: ◄ = dilatasi,       = nekrosis,      = epitel terkelupas E D C B A ◄
Gambar 4 Fotomikrograf tubulus ginjal mencit akibat pemberian ekstrak metanol S. echinocarpum dosis 0 mg/kg BB (A), 625 mg/kg BB (B), 1250 mg/kg BB (C), 2500 mg/kg BB (D), dan 5000 mg/kg BB (E). (Perbesaran 400 x) (Pewarnaan H&E) ( = 15 µm). Keterangan: = dilatasi, = nekrosis,
= epitel terkelupas. 0 1 2 3 0 625 1250 2500 5000 Dosis (mg/kg BB) Sk or hi stol ogi s 0.30 0.53 1.60 2.03 2.43 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 0 625 1250 2500 5000 Dosis (mg/kg BB) Sk or hi stol og is
Gambar  3  Skor  histologis  ginjal  mencit  akibat pemberian  ekstrak  metanol S.
echinocarpum..
Toksisitas ekstrak rumput laut cokelat, Firdaus, M. et al..
Penulis  menyampaikan  terima  kasih kepada DP2M DIKTI melalui program PHB dan  Hibah  Doktor  tahun  2009  atas  bantuan pendanaan penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Anggadiredja  J,  Irawati  S,  Kusmiyati.  1996. Potensi  dan  manfaat  alga  Indonesia dalam  bidang  farmasi.  Di  dalam: Prosiding  Seminar  Nasional  Alga.  Juni 1996. Jakarta.
Bayrak  O,  Bavbek  N,  Karatas  OF,  Bayrak  R, Catal F, Cimentepe E, Akbas A, Yildirim E, Unal D, Akcay A. 2008. Nigella sativa protects  against  ischaemia/reperfusion injury in rat kidneys. Nephrology Dialysis Transplantation 23(7): 2206-2212. Damjanov I. 1996. Histopathology . New York: Williams and Wilkins. Derelanko  MJ,  Hollinger  MA,  editor.  1995. CRC Handbook  of  Toxicology. Boca Raton: CRC Press. Desphande  SS.  2002. Handbook  of  Food Toxicology. New York: Marcel Dekker. Firdaus  M,  Astawan  M,  Muchtadi  D,
Wresdiyati  T,  Waspadji  S,  Karyono  SS. 2007.  Efisiensi  antiradikal  florotanin Sargassum  polycystum dan Sargassum echinocarpum yang  terlarut  dalam berbagai  pelarut  polar. Jurnal  Penelitian Perikanan 9: 157-161. Firdaus  M,  Astawan  M,  Muchtadi  D, Wresdiyati  T,  Waspadji  S,  Karyono SK.  2010a.  Prevention  of  endothelial dysfunction  in  streptozotocin-induced diabetic rats by Sargassum echinocarpum extract. Medical Journal of  Indonesia 19: 32-35.
Firdaus  M.  Astawan  M,  Muchtadi  D,
Wresdiyati  T,  Waspadji  S,  Karyono  SS. 2010b.  Effects  of  brown  algae  extract to  function  of  aorta  endothelium  cells in  diabetic  rats. Indonesian  Journal  of Pharmaceutical 21: 151-157. Harborne    JB.  1984. Phytochemical  methods. 2nd edition. London: Chapman and Hall.
Hays  NP,  Galassetti  PR,  Coker  RH.  2008.
Prevention  and  treatment  of  type 2  diabetes:  Current  role  of  lifestyle, natural  product,  and  pharmacological interventions. Pharmacology & Therapeutics 118(2): 181-191. Hervás G, Pérez V, Giráldez FJ, Mantecón AR, Almar MM, Frutos P. 2003. Intoxication of sheep with quebracho tannin extract. Journal of  Comparative  Pathology 129(1):
44-54.
Hsu YW, Tsai CF, Chen WK, Huang CF, Yen CC. 2011. A subacute toxicity evaluation of green tea ( Camellia sinensis ) extract in mice. Food  and  Chemical  Toxicology 49: 2624-2630.
Kadi  A.  2005.  Beberapa  catatan  kehadiran marga Sargassum di Perairan Indonesia.
Oseana 30: 1-14. Koivikko  R,  Loponen  J,  Honkanen  T, Jormalainen  V.  2005.  Contents  of soluble,  cell-wall-bound  and  exuded phlorotannins  in  the  brown  alga Fucus vesiculosus ,  with  implications  on  their ecological functions. Journal of  Chemical Ecology 31(1): 195-212.
Lamela  M,  Anca  J,  Villar  R,  Otero  J,  Calleja
JM.  1989.  Hypoglycemic  activity  of several  seaweed  extracts. Journal  of Ethnopharmacology 27(1-2):35-43.
Liu  X,  Wang  CY,  Shao  CL,  Wei  YX,  Wang BG, Sun LL, Zheng CJ, Guan HS. 2009. Chemical  constituents  from Sargassum pallidum (Turn.) C. Agardh. Biochemical Systematics and Ecology 37(2): 127–129. Nagayama K, Iwamura Y, Shibata T, Hirayama I,  Nakamura  T.  2002.  Bacterial  activity of  phlorotannins  from  the  brown  alga Ecklonia kurome . Journal of Antimicrobial Chemotherapy 50: 889-893.
[OECD]  Organisation  of  Economic  Co- operation and Development. 2001. Acute Oral Toxicity. OECD Guideline for testing of chemicals No. 425. http://iccvam.niehs. nih.gov/SuppDocs/FedDocs/OECD/ OECDtg425.pdf [5 Pebruari 2009].
Rodrigo  R,  Rivera  G.  2002.  Renal  damaged mediated  by  oxidative  stress:  A
hyphothesis  of  protective  effects  of  red wine. Free  Radical  Biology  &  Medicine 33(3): 409-422. Sigala F, Theocharis S, Sigalas K, Markantonis- Kyroudis S, Papalabros E, Triantafyllou A, Kostopanagiotou G, Andreadou I.  2006. Therapeutic  value  of  melatonin  in  an experimental  model  of  liver  injury  and regeneration. Journal of  Pineal Research 40(3): 270-279.
Singh  IP,  Bharate  SB.  2006.  Phloroglucinol compounds  of  natural  origin. Natural Product  Report 23(4): 558-591. Springbob K, Kutchan TM. 2009. Introduction to the different classes of natural products.
In: Osbourn AE, Lanzotti V, editor. Plant-
derived  Natural  Products. Heidelberg:
Springer. Stern JL, Hagerman AE, Steinberg PD, Winter
FC,    Estes  JA.  1996.  A  new  assay  for quantifiying  brown  algal  phlorotannins and  comparisons  to  previous  methods.
Journal of  Chemical Ecology 22(7): 1273- 1293. Sudha,  Munuswamy,  Gnanamani  A,  Deepa G,  Sudha  M,  Madhavacharyulu  E, Deivanai  K,  Sadulla  S.  2008.  In  vivo studies on evaluation of potential toxicity of  unspent  tannins  using  albino  rats ( Rattus  norvegicus ). Food  and  Chemical Toxicology 46(6): 2288-2295.