Agri-SosioEkonomi Unsrat, ISSN (p) 1907– 4298, ISSN (e) 2685-063X , Terakreditasi Jurnal Sinta 5, Volume 18 Nomo r 1, Januari 2022 : 225 - 230

## ANALISIS KANDUNGAN SULFORAFAN PADA FASE KECAMBAH BEBERAPA JENIS  BROKOLI DALAM MEDIA MS YANG DIBERIKAN

## NAA DAN BAP SECARA IN VITRO

## ANALYSIS OF SULFORAPHAN CONTENT IN SPROUT PHASE OF SEVERAL TYPES OF BROCOLI IN MS MEDIA TESTED WITH NAA AND BAP BY IN VITRO
Edy F. Lengkong (*) , Wenny Tilaar (*) , Arthur Pinaria (*)
*) Dosen Fakultas Pertanian Universitas Sam Ratulangi, Manado
*Penulis untuk korespondensi : fredylengkong.fl@gmail.com Naskah diterima melalui Website Jurnal Ilmiah agrisosioekonomi@unsrat.ac.id : 25 Januari 2022 Disetujui diterbitkan : 28 Januari 2022

## ABSTRACT
This study aims to: (1) determine the content of sulforaphane in several types of broccoli sprouts. (2) Knowing the difference in sulforaphane content in the combination of NAA, BAP and types of broccoli grown on MS media; (3) knowing the difference in sulforaphane content in the combination of NAA and types of broccoli sprouts grown on MS media; (4) knowing the difference in sulforaphane content in the combination of BAP and the type of broccoli sprouts grown on MS media. This study used a completely randomized design (CRD) arranged in a factorial manner, namely factor A: NAA 0, 0,5, and 1 ppm. B: BAP 0, 1, 2 ppm and C : 2 Types of Broccoli. The variables observed were: germination time, germination weight, and sulforaphane content. The data were analyzed by analysis of variance and continued with the 5% BNT test. The results showed that germination time began to appear on day 3 and all seeds germinated. Sprout weight varied greatly, and the combination of treatments N1, B0 and BR2 gave the highest average weight  and  calculated  concentration  (ENT)  of  sulforaphane,  followed  by  treatments  N0B2BR2  and N0,5B0BR1.
Key Words: Sulforaphan; Sprout Phase; Broccoli

## ABSTRAK
Penelitian ini bertujuan untuk: (1) mengetahui kandungan sulforafan pada beberapa jenis kecambah brokoli.  (2)  Mengetahui  perbedaan  kandungan  sulforafan  pada  kombinasi  NAA,  BAP  dan  jenis  brokoli yang ditumbuhkan pada media MS; (3) mengetahui perbedaan kandungan sulforafan pada kombinasi NAA dan  jenis  kecambah  brokoli  yang  ditumbuhkan  pada  media  MS;  (4)  mengetahui  perbedaan  kandungan sulforafan pada kombinasi BAP dan jenis kecambah brokoli yang ditumbuhkan pada media MS. Penelitian ini menggunakan rancangan acak lengkap (RAL) yang diatur secara factorial, yaitu factor A: NAA 0, 0,5, dan  1  ppm.  B:  BAP  0,  1,  2  ppm  dan  C:  2  Jenis  Brokoli.  Adapun  variabel  yang  diamati  yaitu:  waktu berkecambah,  berat  kecambah,  dan  kandungan  sulforafan,  data  dianalisis  dengan  analisis  ragam  dan dilanjutkan dengan uji BNT 5%. Hasil penelitian menunjukkan waktu berkecambah mulai terlihat di hari ke 3 dan semua benih berkecambah. Berat kecambah sangat bervariasi, dan kombinasi perlakuan N1, B0 dan BR2 memberikan nilai berat  rata-rata dan konsentrasi terhitung (THT)  sulforafan tertinggi, diikuti perlakuan N0B2BR2 dan N0,5B0BR1.
Kata Kunci: Sulforafan; Fase Kecambah; Brokoli
Analisis Kandungan Sulforafan Pada Fase Kecambah…………………(Edy F. Lengkong, Wenny Tilaar, Arthur Pinaria)

## PENDAHULUAN
Latar Belakang
Brassicacea adalah tanaman sayuran yang termasuk  dalam suku  kubis-kubisan.  Jenis  sayuran kubis cukup populer sebagai bahan pangan. Brokoli paling  mirip  dengan  kembang  kol,  namun  brokoli berwarna  hijau,  sedangkan  kembang  kol  berwarna putih. Brokoli merupakan tanaman yang hidup pada habitat  yang  bercuaca  dingin    (Anonimous.  2009). Selanjutnya  kol  atau  kubis  serta  petsai  hanya dikonsumsi  daunnya.    Tanaman-tanaman  tersebut merupakan tanaman endemik dimana hanya terdapat pada  tempat-tempat  tertentu  dan  dapat  beradaptasi dibeberapa tempat di Indonesia. Selain mengandung gizi, tanaman brokoli, kembang kol, kubis dan petsai mengandung suatu senyawa yang sangat bermanfaat bagi kesehatan manusia.
Sayuran  jenis  kubis-  kubisan  disebutkan paling  kaya  zat  antioksidan,  baik  dalam  hal  jumlah maupun  jenisnya. Senyawa  antioksidan  yang penting  tersimpan  dalam  jenis  kubis  adalah sulforafan.  Selain  itu,  sayuran  ini  mengandung betakaroten,    kuersetin,  glutation.    Brokoli, kembang  kol  atau  kubis  bunga  putih,  kol,  dan petsai  terutama amat penting bagi wanita, karena mampu  membuang  kelebihan  estrogen  berbahaya yang  berpotensi  membangkitkan  kanker.  Bagi penderita  kencing  manis  ( diabetes  mellitus ), sayuran tersebut membantu meredam melonjaknya kadar  gula  darah,  karena  sayuran  tersebut  sangat kaya mikromineral kromium. Untuk itu, makanan penderita  diabetes  disarankan  lebih  sering memanfaatkan  sayuran  kelompok  kubis-kubisan, terutama brokoli (Apriadji, 2008).
Berbagai  kalangan  menamakan  sayuran kubis  sebagai superfood .  Banyak  riset  yang menunjukkan betapa makanan alami ini kaya akan zat-zat  yang  berfaedah  bagi  kesehatan.  Sebuah penelitian  terbaru  di  Inggris  mengindikasikan brokoli  dan juga  jenis  kubis  lainnya  memiliki  zat penting yang mampu memperbaiki dan mengembalikan  fungsi  pembuluh  darah  yang  rusak akibat  diabetes.  Zat  yang  bernama  sulforafan  pada tanaman    ini,  memiliki peran  besar  dalam memulihkan kembali pembuluh darah. Sulforafan mampu  merangsang  produksi  enzim-enzim  yang dapat melindungi pembuluh darah dan menurunkan  molekul- molekul  yang  menyebabkan kerusakan  sel-sel  secara  signifikan.  Sayuran  jenis Brassicacea seperti  brokoli  sebelumnya  memang berkaitan dengan rendahnya risiko serangan jantung dan stroke (Keck dan Finley, 2004).
Sayuran Brassicaceae ini  mengandung lemak,  protein,  karbohidrat,  serat,  air,  zat  besi, kalsium, mineral, dan bermacam vitamin (A, C, E, riboflamin,  nikotinamide).  Sayuran    tersebut mengandung  sulforafan,  yaitu  suatu  senyawa pencegah penyakit kanker. Sehingga  brokoli dan sayuran  kubis  lainnya  dikelompokan  sebagai tanaman obat (Jeffery dan Araya, (2009). Brokoli dan  jenis  kubis    berkhasiat  mempercepat penyembuhan  penyakit  serta  mencegah  dan menghambat  perkembangan  sel-sel  kanker  di dalam  tubuh,  terutama  penyakit  kanker  yang berkaitan dengan hormon, seperti kanker payudara pada wanita dan kanker prostat yang mengancam pria. Ini terbukti melalui penelitian yang dilakukan tim epidemologi dari Harvard University. Tanaman    ini  sangat  baik  dikonsumsi  penderita kencing manis. Kandungan chromium dan seratnya dapat mengatur kadar gula darah. Brokoli dan jenis kubis lainnya memperkuat sel-sel tulang. Apabila dikonsumsi  sejak  muda,  mencegah  penyakit pengeroposan  tulang  ( osteoporosis )  di  usia  tua. Brassicaceae berkasiat pula menghadang penyakit kulit  seperti  abses  atau  bisul  (Dalimartha,  2005) dan (Jeffery dan Araya,2009).
Melihat manfaat tanaman sayuran tersebut maka  perlu  untuk  diteliti  pada  fase  pertumbuhan mana  dan  jenis  kubis  mana  yang  memiliki kandungan  sulforafan  yang  tertinggi  secara  in vitro.

## Rumusan Masalah
Dari uraian pada bagian sebelumnya, maka permasalahan dapat dirumuskan sebagai berikut :
1.  Berapa  kandungan  sulforafan  pada  kecambah dari jenis-jenis brokoli.
2.  Berapa  kandungan  sulforafan  pada  kecambah yang  ditumbuhkan  pada  media  MS  yang diberikan NAA.
3. Berapa kandungan sulforafan pada kecambah yang  ditumbuhkan  pada  media  MS  yang diberi BAP.
4. Berapa kandungan sulforafan pada kecambah yang  ditumbuhkan  pada  media  MS  yang diberikan NAA dan BAP,

## Tujuan Penelitian
1. Untuk  mengetahui  perbedaan  kandungan sulforafan  pada  kecambah  beberapa  jenis Brokoli.
Agri-SosioEkonomi Unsrat, ISSN (p) 1907– 4298, ISSN (e) 2685-063X , Terakreditasi Jurnal Sinta 5, Volume 18 Nomo r 1, Januari 2022 : 225 - 230
2. Untuk  mengetahui  perbedaan  kandungan sulforafan  pada  kombinasi  NAA  ;  BAP  dan Jenis Kecambah  Brokoli yang ditumbuhkan pada media MS.
3. Untuk  mengetahui  perbedaan  kandungan sulforafan  pada  kombinasi  NAA  dan  Jenis Kecambah    Brokoli  yang  ditumbuhkan  pada media MS.
4. Untuk  mengetahui  perbedaan  kandungan sulforafan  pada  kombinasi  BAP  dan  Jenis Kecambah    Brokoli  yang  ditumbuhkan  pada media MS.

## Manfaat Penelitian
Manfaat  yang  diharapkan  dari  penelitian ini  adalah  Melalui  penelitian  tersebut  banyak masyarakat  mengetahui  tentang  kandungan sulforafan  yang  tertinggi baik  dari  fase tumbuh kecambah brokoli.

## METODE PENELITIAN

## Lokasi dan Waktu Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Bioteknologi  Fakultas  Pertanian    Unsrat  dan Laboratorium  Jurusan Teknik kimia Politeknik Negeri Malang. Penelitian ini dilakukan selama 1 tahun.

## Alat dan Bahan Penelitian
Alat yang digunakan adalah  sonicleaner, hot  plat,  sentrifuga,  mortal  dan  alat-alat  gelas lainnya.  ,  perangkat Liquid  Chromatography Mass  spectroscopy  Mass  Spectroscopy ,  kolom shim-Pack XR-ODSIL (50 mm x 2,0 mm I.D.), fase gerak A : 5 mmol/l ammonium format-air, fase  gerak  B  :  asetonitril,  laju  pengaliran  0,3 ml/menit,  volume  injeksi  5  ul,  temperature kolom 40 0 C, pengaliran gas 1,5 l/menit, tekanan gas kering 10 l/menit.
Bahan-bahan  yang  digunakan    adalah bibit  kecambah,  bibit  pindah  tanam  2  minggu, daun  tanaman  dewasa  dari  kubis  bunga  putih, kubis  bunga  hijau  (brokoli),  Kol,  dan  petsai serta  senyawa  kimia    untuk  ekstraksi  .  Bahan- bahan  tersebut  antara  lain  methanol  p.a, acetonitril,  ammonium  format      dan  akuades, dan standart sulforafan.

## Metoda Penelitian
Rancangan yang digunakan adalah factorial dalam RAL dengan 3 faktor  Yaitu  A. NAA 0; 0,5 ; 1 ppm B.  BAP 0 ; 1 ; 2 ppm dan C. 2 Jenis brokoli. Setiap  perlakuan  diulang  3  kali.  Variabel  yang diamati : waktu berkecambah, berat kecambah dan kandungan  sulforafan.  Data  dianalisis  dengan analisis ragam dan dilanjutkan dengan uji BNT 5 %.

## Prosedur Ekstraksi Bahan Kecambah Brokoli Dan Analisis Sulforafan

## 1. Ekstraksi dan isolasi sulforafan
Ekstraksi  sulforafan  diawali  dengan penimbangan  berat  bibit  kecambah,  bibit  pindah tanam 2 minggu, daun dan bunga tanaman dewasa dari  kubis  bunga  hijau  (brokoli)  jenis  Lucky Taichung  dan  hibrida    Bahan-bahan  tersebut ditimbang  pada  timbangan  digital.  Kemudian dimasukan pada mortal dan ditambahkan dengan 1 -2  ml  metilklorida  dan  digerus  sampai  hancur  . Kecambah brokoli yang telah digerus dipindahkan ke tabung flash dan ditambahkan dengan 25  – 50 ml  metilklorida.  Selanjutnya  dilakukan  sonifikasi selama  30  menit  untuk  mengeluarkan  sulforafan dari  jaringan  kecambah  brokoli.    Kemudian ekstrak  sulforafan  yang  dihasilkan  disaring menggunakan  kertas waltmen dan dipindahkan ke suatu    tabung  dan  diletakan  pada  kotak  pemanas atau hot plat  dengan tempertaur 70  sampai  80 o C sampai  menghasilkan  supernatant.  Residu  yang kering  ini  ditambahkan  5  ml  NaSO4  dan dipanaskan  kembali  pada  hot  plat  dengan  70 sampai 80 o C sampai supernatant kering.  Residu yang  kering  ini  ditambahkan  10  ml  asetonitril, kemudian    disaring  dengan  kertas  waltmen  dan larutan    tersebut  disentrifuge  selama  15  menit dengan  4000  rpm.  Terakhir  larutan  yang mengandung residu tadi dipindahkan ke microtube dan  di  masukan  ke  LC    tandem  MS  untuk menentukan kandungan sulforafan kecambah.

## 2. Analisis kualitatif dan kuantitas sulforafan
Analisis  kualitatif  dan  kuantitatif  untuk sulforafan  dilakukan  dengan  alat  LC  MSMS Plus.  Fase  gerak  A  :  5  mmol/l  ammonium format-air,  fase  gerak  B  :  asetonitril,  laju pengaliran  0,3  ml/menit,  volume  injeksi  5  ul, temperature  kolom  40 0 C,  pengaliran  gas  1,5 l/menit, tekanan gas kering 10 l/menit.  Panjang
Analisis Kandungan Sulforafan Pada Fase Kecambah…………………(Edy F. Lengkong, Wenny Tilaar, Arthur Pinaria)
gelombang  UV yang digunakan untuk mendeteksi sulforafan  adalah  254  nm.  Sebelum  analisis dilakukan  ,  terlebih  dahulu  dilakukan  filtrasi terhadap  fase  gerak  dan  larutan  sampel  dengan membrane  filter  selulosa  asetat  PTFE)  0,4  um. Sebagai senyawa pembanding digunakan sulforafan standart yang diperoleh dari  Pusat Ilmu Pengetahuan Biofarma. Analisis kualitatif dilakukan dengan membandingkan  waktu retensi antara  sulforafan  standar  dengan  waktu  retensi sampel. Bila dalam sampel terdapat senyawa yang mempunyai waktu retensi sama dengan   sulforafan standar , maka senyawa tersebut adalah sulforafan. Koinjeksi  standar  dan  sampel  dilakukan  untuk memastikan keberadaan sulforafan pada sampel.
Analisis  kuantitatif  untuk  mendapatkan konsentrasi  sulforafan  diperoleh  dengan  cara mengkonversikan  luas  area  sampel  dengan  luas area standar  yang telah diketahui  konsentrasinya pada  kurva  kaliberesi  standar.  Kurva  kalibrasi standar  diperoleh  dari  data  luas  area  berbagai konsentrasi  larutan  sulforafan  standar  kemudian dibuat  hubungan  antara  luas  area  dengan kandungan sulforafan.

## Variabel Yang Diamati
Sulforafan secara kualitatif dan kuantitatif : kecambah, dari brokoli lucky Taichung dan jenis hibrid.

## Analisis Data
Data dikumpulkan, ditabulasi dan dianalisis  secara  statistik    untuk  penarikan kesimpulan  .  Data  hasil  penelitian  akan  disajikan dalam  bentuk  persentase,  table,  grafik  atau  kurva sesuai  dengan  jenis  data  yang  diperoleh    dalam penelitian  ini.  Uji  statistik  untuk  mengetahui perbedaan  rataan    kandungan    sulforafan    pada kecambah  brokoli jenis lucky  Taichung  dan  jenis hibrida,    dilakukan  dengan  penimbangan  berat masing-masing  jenis  brokoli  dan  dianalisis kandungan  sulforafan  menurut  fase  pertumbuhan kecambah.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  hasil  pengamatan    tentang kandungan sulforafan  yang  terukur  pada kecambah  brokoli  jenis  hibrida  dan  jenis  lucky Taichung  menunjukkan  tertinggi  pada  jenis hibrida  dibandingkan  dengan  jenis  Taichung yaitu  pada  perlakuan  NAA  0,5  ppm  dan  BAP  0
ppm. Kandungan sulforafan terukur berkisar antara 1,086.65 ng/g sampai 1,154 ng/g bahan kecambah brokoli  jenis  hibrida.  Sedangkan  yang  terendah berkisar  98,19  ng/g  sampai  105,19  ng/g  bahan kecambah  brokoli  hibrida  yaitu  pada  perlakuan NAA 0 ppm dan 0  ppm BAP.
Dari  hasil  pada  tabel  diatas  menunjukan pula  bahwa  jenis  hibrida  lebih  tinggi  kandungan sulforafan bila dirangsang dengan kombinasi NAA dan BAP dan bila tanpa NAA dan BAP kandungan sulforafannya  lebih  sedikit  dari  menggunakan  zat pengatur  tumbuh  tersebut.  Ini  berarti  bahwa genetic  dari  jenis  hibrida  lebih  respons  bila diberikan Zat pengatur tumbuh NAA dan BAP baik secara kombinasi maupun secara terpisah. BAP  1 dan 2 ppm merangsang sintesis sulforafan terutama pada kecambah jenis hibrida tetapi ini pula terjadi pada kecambah  jenis Lucky Taichung hanya masih kurang sintesis sulforafan dibandingkan pada jenis hibrida.  Selanjutnya  kombinasi  NAA  dan  BAP menekan sintesis sulforafan. Sedangkan pemberian NAA 1 ppm dapat merangsang sintesis sulforafan kecambah  jenis  hibrida  pada  yang  sangat    tinggi yaitu 1.154,00 ng.

## Hasil pengamatan suforafan Kecambah Brokoli Untuk Konsenterasi Terhitung ug/g bahan
Berdasarkan  hasil  analisis  kandungan sulforafan  dengan  konsenterasi  terhitung  maka diperoleh kandungan sulforafan meningkat 1000 kali lipat dibandingkan dengan penelitian sebelumnya,  sebab  nilai  yang  diperoleh  yang biasanya hanya dengan satuan nanogram (ng) saat ini telah  mencapai  tertinggi  269.73  ug/g  bahan
Agri-SosioEkonomi Unsrat, ISSN (p) 1907– 4298, ISSN (e) 2685-063X , Terakreditasi Jurnal Sinta 5, Volume 18 Nomo r 1, Januari 2022 : 225 - 230
kecambah.  Hal  ini  juga  perbandingannya  sama dengan  pada  konsenterasi  terukur  dari  sulforafan pada  tabel  1.  Lonjakan  hasil  sintesis  kandungan sulforafan  ini  disebabkan  dengan  menggunakan eksplan  benih  yang  dikecambahkan  dalam  media kultur  yang  diberikan  NAA    dan  BAP.  Hasil penelitian  Tilaar,  Polii-Mandang  dan  Pinaria, 2018, yang dilakukan di kebun bunga di Tomohon menunjukkan bahwa kecambah brokoli lebih baik dari  jenis  kol  batu,  petsai,  kubis  bunga  putih  dan lebih baik disbanding fase tumbuh lainnya. Dengan dasar hasil tersebut dilakukan penelitian di media kultur dengan penambahan NAA dan BAP. Hasil menunjukan  bahwa  pada  kecambah  hibrida  yang dikulturkan  pada  media  MS  dengan  penambahan NAA  1  ppm  tanpa  BAP  yang  tertinggi konsenterasinya  sebaimana  dijelaskan  di  atas. Hasil yang tinggi ini dapat menjadi suatu pertanda bahwa  dalam  ekstrak  kecambah  brokoli  hibrida sangat  sesuai  untuk  metode  peningkatan  sintesis sulforafan.  Selain  itu  dapat  direkombinasikan adalah perlakuan BAP 2 ppm tanpa NAA dimana mencapai  hasil  sintesis  sulforafan  sebesar  242,20 ug/g  bahan  kecambah  brokoli  jenis  hibrida. Selanjutnya  kombinasi  NAA  dan  BAP  menekan sintesis sulforafan sehingga tidak direkomendasikan untuk digunakan  dalam kultur kecambah brokoli dalam mendapatkan kandungan sulforafan  yang  tinggi.  Demikian  pula  dengan penggunaan  jenis  local  seperti  Lucky  Taichung kurang  menghasilkan  sulforafan  sebab  kurang respons genetiknya.
Analisis Kandungan Sulforafan Pada Fase Kecambah…………………(Edy F. Lengkong, Wenny Tilaar, Arthur Pinaria)

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Pemberian  NAA  pada  konsentrasi  0,  0,5 dan  1  ppm  tidak  berpengaruh  nyata  terhadap peningkatan  berat  dan  konsentrasi  sulforafan terhitung  (THT)  pada  fase  kecambah  brokoli. Perlakuan  BAP  dan  jenis  brokoli  yang  berbeda memberikan  pengaruh  yang  nyata  terhadap  berat dan  konsentrasi sulforafan terhitung (THT).  Jenis varitas brokoli sangat menentukan dan mempengaruhi penambahan maupun pengurangan berat terukur dan konsentrasi terhitung sulforafan. Kombinasi  perlakuan  N1,  B0  dan  BR  2 memberikan nilai rata-rata berat sulforafan terukur dan konsentrasi sulforafan terhitung paling tinggi, diikuti perlakuan N0B2BR2 dan N0,5B0BR1.

## Saran
Disarankan untuk mendapatkan
kandungan berat sulforafan terukur dan konsentrasi  sulforafan  terhitung  yang  tertinggi dari tanaman brokoli yaitu dengan menggunakan brokoli  varitas  BR2  yang  dikombinasikan dengan NAA 1 ppm tanpa tambahan BAP.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonimous. 2009. Brokoli. http://www.iptek.net.id/ind/pd_tanoba t/view.php?mnu =2&id=207.  (Diakses pada  hari  Senin  tanggal  20  Februari 2009 pukul 09.00 WIB).pp. 1 Apriadji,  W.H.  2008.  Menimbang  Keunggulan Sayuran Daun  pp. 1
Keck  A.S  and  J.W  Finley,  2004. Cruciferous Vegetables : Cancer Protective Mechanisms of Glucosinolate Hydrolysis  Products  and  Selinium .
Intregative  Cancer  Therapies 3(1)  p. 5-12.
Jeffery E.H and M. Araya. 2009. Physiological Effects  of  Broccoli  Consumtion . Phytochem Rev . (2009) 8: 283-298.
Dalimartha,  S.  2005.  Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia  Jilid  2.  Trubus  Agriwidya. Jakarta.