## Pengaruh Derajat Deasetilisasi Kitosan pada Coating Nata de coco-Kitosan sebagai Bahan Antibakteri
Kurnia Widhi Astuti 1* , Vina Fauza Rizqiyah 2 , Tokok Adiarto 3
1) Program Studi Analisis Kimia, Politeknik AKA Bogor, Jl. Pangeran Sogiri No. 283, Bogor, 16154
2,3) Program Studi Kimia, Universitas Airlangga, Jalan Dr. Ir. H. Soekarno, Surabaya 60115
Email: kurniawidhi@kemenperin.go.id (Received : 31 Oktober  2022; Accepted: 30 Desember 2022; Published: 31 Desember 2022)

## Abstrak
Kitosan banyak digunakan sebagai bahan pelapisi/ coating untuk buah-buahan, sebagai edible film, bahkan dapat digunakan sebagai coating pada batu-batuan. Selulosa bakteri merupakan satu produk yang telah banyak diaplikasikan pada  bidang  medis,  pangan,  dan  bahkan  dapat  menjadi  bahan  baku  alternatif  untuk  mengganti  beberapa  jenis  produk berbahan  baku  selulosa  tumbuhan. Tujuan  penelitian  ini  adalah  mengetahui  pengaruh  derajat  deasetilisasi  pada coating  nata  de  coco-kitosan  terhadap  kemampuan  kitosan  sebagai  antibakteri.  Kitosan  dilarutkan  dalam  asam asetat 2% kemudian dilapisi ( coating) pada lembaran kering nata de coco dan didiamkan pada suhu kamar hingga kering. Derajat deasetilasi dihitung menggunakan metode baseline dan diperoleh nilai derajat deasetilasi kitin dan kitosan  masing-masing  sebesar  81,52%;  77,87%;  dan  77%  sedangkan  derajat  deasetilasi  masing-masing  kitin adalah 58,34%; 55,76%; dan 62,10%. Derajat deasetilisasi 81,52% memiliki kemampuan antibakteri paling baik dibandingkan  derajat  deasetilisasi  77,87%  dan  77%.  Pengujian  antibakteri  dengan E.coli dan S.  aureus menggunakan metode difusi agar menunjukkan uji positif sebagai antibakteri dengan adanya zona bening disekitar sampel  nata  de  coco-kitosan.  Dari  hasil  pengujian  antibakteri  diperoleh  diameter  zona  bening  sebesar  1.17  cm pada E.coli dan 1,27 cm pada S.aureus .
Kata kunci : kitosan; selulosa bakteri; nata de coco; deasetilisasi; antibakteri;

## Abstract
Chitosan used as a coating material for fruits, as an edible film, and can even be used as a coating on stones. The purpose of this study was to determine the effect of the degree of deacetylation on the nata de coco-chitosan coating with the ability of chitosan as an antibacterial. Bacterial cellulose is a product that has been widely applied in the medical, food, and even alternative raw materials for replacing several types of products made from plant cellulose. Chitosan was dissolved in 2% acetic acid then coated on a dry sheet of nata de coco and allowed at room temperature. The degree of deacetylation was calculated using the baseline method and the values of the degree of deacetylation  of  chitin  and  chitosan  each  of  was  81.52%;  77.87%;  and  77%  while  the  degree  deacetylation  of chittin each of was 58.34%; 55.76%; and 62.10%. The degree of deacetylation of 81.52% had the best antibacterial ability compared to the degree of deacetylation of 77.87% and 77%. Antibacterial testing with E.coli and S. aureus using the agar diffusion method, showed a positive test as antibacterial in the presence of a clear zone around the nata de coco-chitosan sample. The results of the antibacterial test, the diameter of the clear zone was 1.17 cm for E.coli and 1.27 cm for S.aureus .
Keywords: chitosan; bacterial cellulose; nata de coco; deacetylation; antibacterial

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  sumber  daya  perikanan yang  kaya  dan  potensial,  baik  dari  perikanan  laut, perairan umum maupun perikanan budidaya. Kepmen KP  Nomor  19/2022  isinya  tentang  Estimasi  Potensi Sumber  Daya  Ikan,  Jumlah  Tangkapan  Ikan  yang Diperbolehkan  (JTB),  dan  Tingkat  Pemanfaatan Sumber Daya Ikan di Wilayah Pengelolaan Perikanan Negara  Republik.  Sesuai  Kepmen  KP  tersebut,  total estimasi  potensi  sumber  daya  ikan  di  11  WPPNRI sebanyak 12,01 juta ton per tahun dengan JTB 8,6 juta
ton per tahun. Hal ini menunjukan tingginya minat para pelaku  usaha  perikanan  dalam  mengembangkan usahanya,  terutama  di  sub  sektor  perikanan  budaya (Kementerian Kelautan dan Perikanan, 2022).
Peningkatan  produksi  udang  secara  tidak langsung  akan  meningkatkan  limbah  udang,  yaitu kepala dan kulit udang. Kulit udang merupakan limbah dalam  industri  pengolahan  udang  yang  porsinya mencapai  30-70%  (Yati,  2016).  Limbah  ini  belum termanfaatkan  secara  baik  dan  berdaya  guna,  bahkan
merupakan limbah yang turut mencemari lingkungan. Kulit  udang  mengandung  kitin  yang  merupakan polimer terbesar kedua di alam setelah selulosa (Setiati dkk,  2020).  Kadar  kitin  dalam  berat  udang  berkisar antara  60-70%  dan  bila  diproses  menjadi  kitosan menghasilkan  15-20%).  Beberapa  negara  seperti Amerika dan Jepang, menggunakan limbah kulit udang untuk industri farmasi, biokimia, biomedikal, pangan, pertanian,  dan  kesehatan.  Limbah  kepala  udang  ini mencapai 35%-50% dari total berat udang. Oleh karena itu,  salah  satu  alternatif  upaya  pemanfaatan  limbah tersebut agar memiliki nilai dan daya guna tinggi yaitu dengan  cara  mengolah  kulit  udang  menjadi  kitin  dan kitosan (Rahmatul, 2018).
Kitosan merupakan senyawa hasil deasetilisasi kitin  terdiri  dari  unit  N-asetil  glukosamin  dan  N- glukosamin. Adanya gugus reaktif amino pada atom C- 2  pada  kitosan  bermanfaat  dalam  aplikasinya  secara luas.  Pada  dasar  nya,  salah  satu  alasan  yang menyebabkan kitosan memiliki kemampuan antibakteri  yaitu  adanya  gugus  amina  pada  kitosan yang  bermuatan  positif  dalam  larutan  asam  asetat membentuk (NH3+) yang mampu berinteraksi dengan membrane  sel  bakteri  bermuatan  negatif  yang menyebabkan rusaknya protein dan senyawa-senyawa lain dalam sel bakteri (Mardy dkk, 2016).
Kitin  dan  Kitosan  dapat  diaplikasikan  dalam bidang industri maupun kesehatan. Beberapa aplikasinya  antara  lain  di  industri  tekstil,  fotografi, kedokteran, fungisida, kosmetika, pengolahan pangan dan  penanganan  limbah.  Kitosan  juga  merupakan bahan  baku  pembuatan  membran,  diharapkan  dengan berhasilnya  melakukan  sintesis  produk  kitosan  akan menunjang  kebutuhan  terhadap  membran,  yang banyak  digunakan  untuk  berbagai  kebutuhan  filtrasi. Selain  itu  kitosan  dapat  berfungsi  sebagai  koagulan yang digunakan pada proses (Safitri, 2016).
Derajat deasetilisasi kitosan mempunyai pengaruh  terhadap  kemampuan  antibakteri,  karena kitosan  memiliki  derajat  deasetilisasi  tinggi,  maka gugus  amina  lebih  banyak  sehingga  lebih  reaktif. Kitosan banyak digunakan sebagai bahan pelapisan/coating  untuk  buah-buahan,  sebagai  edible film,  bahkan  dapat  digunakan  sebagai  coating  pada batu-batuan.  Uji  antibakteri  kitosan  dilakukan  pada lembaran nata de coco diharapkan mampu mengurangi bakteri  yang  menyebabkan  bau  pada  nata  de  coco. Selulosa bakteri memiliki beberapa keunggulan antara lain  kemurnia  tinggi,  derajat  kristalinitas  tinggi, kerapatan antara 300-900 kg/m 3 , kekuatan tarik tinggi, elastis dan biodegradable (Sivakarmi and Thandapani, 2013).
Selulosa bakteri merupakan polimer alam yang bersifat  sama  seperti  hydrogel  yang  diperoleh  dari polimer sintetik yaitu adanya kandungan air tinggi (98- 99%),  daya  serap  cairan  baik,  tidak  alergenik,  dapat disterilisasi  tanpa  mempengaruhi  karakteristik  dari bahan  tersebut.  Selain  bermanfaat  dalam  bidang makanan, dalam perkembangannya nata de coco dapat
dimanfaatkan  sebagai  membrane,  pengganti  kertas. Dalam bidang medis selulosa bakteri dapat dimanfaatkan sebagai pengganti kulit untuk luka bakar yang serius (Fitriani Dian dkk, 2019).
Hasil penelitian Farah dkk (2013) menunjukkan bahwa  pembentukan  selulosa  bakteri-kitosan  melalui reaksi  menggunakan  asam  sitrat  meningkatkan kapasitas absorbsi dan sifat antimikrobanya. Komposit tersebut memberikan nilai kapasitas. absorbsi dalam air DM  sebesar  2l.5  gig  dan  kapasitas  absorpsi  dalam larutan salin (NaCl 0,9%)sebesar 8 .2 g/g. Sedangkan hasil  penelitian  Magani  dkk  (2020)  diperoleh penghambatan  pertumbuhan  bakteri  S.  aureus  dan  E. coli tertinggi pada konsentrasi 0,5%, dengan diameter zona  hambat  hari  pertama  sampai  hari  ketiga  12,31 mm, 9,98 mm, dan 20,46 mm pada S. aureus dan 15,88 mm, 18,71 mm, dan 20,43 mm pada E. coli. Penelitian Fitriani  (2018)  diperoleh hasil  karakterisasi  selulosa bakteri, berat kering selulosa yang dihasilkan menggunakan media  sari  buah  pedada  dengan  penambahan  urea,  yeast, ekstrak kecambah kacang hijau berturut turut 0,37 g/L, 0,52 g/L,  dan  2,23  g/L,  sedangkan  selulosa  yang    dihasilkan menggunakan media sari buah kundur dengan penambahan urea, yeast, ekstrak kecambah  kacang hijau berturut turut 1,3 g/L, 0,32 g/L, dan 5,43 g/.
Pelapisan  kitosan  pada  nata  de  coco  (coating kitosan-nata  de  coco)  ini  menggunakan  teknik  spray. Kitosan  dilapiskan  pada  nata  de  coco  dengan  variasi konsentrasi.  Untuk  mengetahui  keefektifan  kitosan sebagai  antibakteri  yaitu  dengan  cara  melakukan  uji efektifitas  dengan  metode  difusi  agar,  dengan  cara mengambil larutan inoculum  ditambahkan agar lunak yang sesuai. Kertas cakram dipotong dan ditempatkan pada bakteri. Cetakan itu diperiksa secara visual untuk zona inhibisi sekitar lembaran kering nata de coco.
Berdasarkan fakta di atas, tujuan penelitian ini adalah  menentukan  formulasi  terbaik  terhadap aktivitas  antibakteri  coating  kitosan-nata  de  coco berdasarkan  pengaruh  derajat  deasetilisasi  sehingga memiliki  aktivitas  antibakteri  paling  baik.  Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan acuan dan referensi dalam pengembangan produk bahan antibakteri  penutup  luka  dengan  material  coating kitosan-nata  de  coco  yang  aman  serta  juga memperhatikan segi aspek biaya.

## BAHAN DAN METODE Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini adalah gelas beker, gelas ukur, labu ukur, pipet, pipet volume, pengaduk, stirrer, Erlenmeyer, pemanas, alat Spektroskopi IR, neraca digital Ohaus.
Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah  cangkang  udang,  NaOH,  HCl,  akuades,  asam asetat,  lembaran  nata  de  coco,  media  agar,  bakteri Staphylococus aureus, bakteri Eschericia coli.

## Metode
Pada  preparasi  kitosan  menggunakan  metode standar  yaitu:  1).  Tahap  deprotenasi  2).  Tahap demineralisasi 3). Tahap deasetilisasi. Adapun diagram alir penelitian dapat dilihat pada Gambar 1.

## Gambar 1. Diagram Alir Penelitian

## Preparasi Kitosan Tahap deproteinasi
Kulit  (cangkang)  udang  dicuci  sampai  bersih dari pengotor. Setelah itu dikeringkan di bawah  sinar matahari kemudian ditumbuk dan dihancurkan. Serbuk cangkang udang diayak dan  dimasukkan dalam gelas beker  dan  ditambah  larutan  NaOH  3,5  %  dengan perbandingan antara serbuk kulit udang windu dengan larutan  NaOH  1:10  (gram  serbuk/  ml  NaOH).  Proses ini  dilakukan  selama  2  jam  pada  suhu  65 0 C  disertai pengadukan, setelah itu larutan disaring dengan kertas saring  sehingga  didapatkan  residunya  dan  dicuci dengan aquades hingga pH air netral, kemudian dioven sampai  kering.  Hasil  yang  diperoleh  adalah  Crude kitin.

## Tahap demineralisasi
Crude  kitin  hasil  deproteinasi  dimasukkan  ke dalam gelas  beker dan ditambahkan larutan HCl 1 N dengan perbandingan antara crude kitin dengan larutan HCl 1:15 (gram serbuk/ ml HCl). Proses ini dilakukan
dengan pengadukan selama 30 menit pada suhu kamar. Setelah  itu  larutan  disaring  dengan  kertas  saring sehingga  didapatkan  residunya  dan  dicuci  dengan aquades sehingga pH air netral. Kemudian dikeringkan dalam oven sampai kering.

## Tahap deasetilasi
Proses  deasetilasi  kitin  dengan  memanaskan kitin dalam larutan NaOH 50 % dengan perbandingan 1:10 (gram serbuk/ml NaOH) pada suhu 110 o C dengan waktu  pemanasan  90  menit.  Padatan  kemudian dipisahkan  dengan  cairan,  selanjutnya  dicuci  dengan aquades hingga netral. Setelah itu padatan dikeringkan pada suhu 60 o C dalam oven selama 24 jam. Kemudian dicuci  dengan  aquades  dan  disaring  menggunakan kertas  saring  dan  dikeringkan  dalam  oven  pada  suhu 60 0 C.

## Karakterisasi Kitosan Uji kelarutan
Serbuk kitin dilarutkan pada larutan asam asetat encer.  Jika  ternyata  tidak  larut,  maka  serbuk  tersebut adalah  kitin.  Dan  sebaliknya,  untuk  kitosan  uji kelarutannya  dapat  dilakukan  dengan  melarutkan  ke dalam  asam  asetat  encer.  Jika  serbuk  tersebut  larut, berarti  serbuk  tersebut  adalah  kitosan.  Kitosan  dapat larut  karena  terbentuk  amina  kuartener. Persentase kelarutan  ditunjukkan  dengan  kitin  atau  kitosan  yang tersisa dibandingkan dengan kitin atau kitosan awal.

## Uji derajat deasetilasi
Sampel  dicampur  dengan  KBr  pada  konsentrasi  5% berat dan sampel kitosan dibuat pellet terlebih dahulu. Spektra IR dibuat pada range frekuensi 4000-500 cm -1 . Untuk  menghitung  derajat  deasetilisasi  digunakan persamaan matematis (Baxter et al., 1992).
DD = 100 – [( A 1655 / A 3450 ) x 115 ]
Dimana  A 1655 dan  A 3450 merupakan  absorbansi  pada 1655  cm -1 dari  pita  amida-I  yang  menunjukkan kandungan  gugus  N-asetil  dan  3450  cm -1 dari  gugus hidroksil  sebagai  internal  standar  untuk  menentukan ketebalan  film  atau  perbedaan  konsentrasi  kitosan dalam pellet.

## Coating kitosan-nata de coco
Nata  de  coco  dikeringkan  terlebih  dahulu  dan kitosan  dilarutkan  pada  asam  asetat  2%.  Pelapisan kitosan  pada  lembaran  nata  de  coco  menggunakan teknik spray. Selanjutnya dikeringkan pada suhu kamar (±30 o C).  Setelah  diketahui  kemampuan  antibakteri kitosan  tersebut,  selanjutnya  dilakukan  pelapisan kitosan dengan variasi konsentrasi 1,0% ; 1,5%; 2,0%; dan 2,5% untuk mengetahui variasi konsentrasi kitosan terhadap kemampuan antibakterinya kemudian dilakukan uji antibakteri dengan metode difusi agar.
Cangkang Isolasi Kitin
Kitosan Pelapisan Kitosan Pada Lembaran Nata de Coco Uji Efektivitas Antibakteri coating kitosan-nata de coco Deproteinasi Demineralisasi Deasetilasi
Analisis: - IR - Kelarutan Metode Difusi Agar Lembaran nata de
Dikeringka n Lembaran kering nata de coco
Uji antibakteri kitosan dengan metode difusi agar
Uji
aktivitas antibakteri dilakukan menggunakan metode difusi agar dengan cara 100 µL larutan  inoculum  ditambahkan  ke  dalam  5  mL  agar lunak yang sesuai. Kertas cakram dipotong sesuai nata de coco uji (diameter= 1,7 cm) dan ditempatkan pada bakteri. Cetakan diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 ºC, kemudian cetakan diperiksa secara visual untuk zona  inhibisi.  Potensi  antibakteri  ditetapkan  dengan cara  membandingkan  diameter  hambatan  larutan sampel  dengan  diameter  hambatan  larutan  standar, pada dosis yang sama dilakukan pada biakan mikroba yang peka dan sesuai.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Deproteinasi
Deproteinasi  merupakan  proses  penghilangan protein-protein  yang  ada  pada  kulit  udang,  hasil deproteinasi  ini  disebut crude kitin  atau  kitin  kasar. Deproteinasi  ini  dilakukan  dengan  NaOH  3,5%  pada suhu  65 o C  selama  2  jam  dengan  pengadukan.  Pada penelitian  ini crude kitin  masing-masing  dibuat    dari 100  gram,  430  gram,  dan  295  gram  kulit  udang  dan setelah  melalui  tahap  deproteinasi  dihasilkan  berat masing-masing kulit udang yaitu 52,2 gram; 182 gram; dan  156  gram.  Pada  proses  deproteinasi  ini  terjadi perubahan  warna  kulit  udang  dari  coklat  kemerahan menjadi  kuning  gelap  atau  agak  kecoklatan,  hal  ini karena terjadi lepasnya pigmen kulit udang dan terjadi pemutusan ikatan antara protein dengan kitin.

## Demineralisasi
Tahap demineralisasi merupakan proses penghilangan  senyawa  anorganik  atau  mineral  yang terkandung dalam kulit udang. Mineral yang ada dalam kulit  udang  biasanya  berupa  CaCO 3 dan  Ca 3 (PO 4 ) 2 . Hasil  demineralisasi  dari crude kitin  masing-masing yaitu 23 gram; 86,5 gram; dan 80 gram. Berkurangnya berat  menunjukkan  mineral  yang  terikat  pada crude kitin  larut  dalam  pereaksi  dan  akan  hilang  dengan pencucian  dan  pada  proses  ini  dihasilkan crude kitin yang berwarna kuning muda.

## Perubahan kitin menjadi kitosan
Transformasi  kitin  menjadi  kitosan  dilakukan untuk  mengubah  gugus  asetamida  menjadi  gugus amina  melalui  reaksi  adisi  oleh  ion  OH - ,  reaksi eliminasi  dan  serah  terima  proton  (Fessenden  & Fessenden, 1995). Proses ini dilakukan dengan NaOH pekat  yaitu  NaOH  50%.  Larutan  NaOH  konsentrasi tinggi  (>40%)  berfungsi  memutuskan  ikatan  antar gugus karboksil dengan atom nitrogen dari kitin yang memiliki struktur kristal tebal dan panjang (Siripan and Stephan,  2010).  Tingginya  konsentrasi  NaOH menyebabkan  gugus  fungsional  amino  (-NH 3 + )  yang mensubstitusi gugus asetil kitin di dalam sistem larutan semakin  aktif  sehingga  proses  deasetilasi  semakin baik.  Hasil  yang  diperoleh  berupa  serbuk  berwarna lebih putih dari kitin. Dan dari proses deasetilasi ketiga kitin  tersebut  dihasilkan  kitosan  masing-masing  14 gram;  45  gram;  dan  30  gram.  Hasil  isolasi  kitin  dan kitosan dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil Isolasi Kitin dan Kitosan Kulit udang (gram) Kitin (gram) % Kitin Kitosan (gram) % Kitosan I 100 23 23 14 14 II 430 86,5 20,12 45 10,46 III 295 80 27,12 30 10,17

## Hasil Uji Kelarutan dalam Asam Asetat Encer
Kelarutan kitosan dalam asam asetat merupakan salah  satu  parameter  utama  dalam  standar  penilaian mutu kitosan. Semakin tinggi kelarutan kitosan dalam asam  asetat  2%  menunjukkan  mutu  kitosan  yang dihasilkan  semakin  baik  (Prisiska,  2012).  Kelarutan diamati  dengan  membandingkan  kejernihan  larutan kitosan  dengan  kejernihan  pelarutnya  (Edward  dkk, 2016).
Uji  kelarutan  merupakan  salah  satu  uji sederhana  untuk  mengetahui  kitosan  benar-benar terbentuk  dari  proses  deasetilasi.  Dalam  asam  asetat encer,  kitosan  hasil  deasetilasi  akan  larut  sedangkan kitin tidak dapat larut dalam asam asetat encer. Hal ini disebabkan pada kitosan terdapat gugus fungsi amina
yang  dapat  membentuk  ikatan  hidrogen  karena memiliki pasangan elektron bebas yang terdapat pada nitrogen N pada gugus amina. Adanya gugus karboksil dalam asam asetat akan memudahkan pelarutan kitosan karena  terjadinya  interaksi  hidrogen  antara  gugus karboksil dengan gugus amina dari kitosan (Dunn et al . 2001). Semakin tinggi derajat deasetilasi kitosan, maka gugus asetil kitosan semakin rendah sehingga interaksi antar  ion  dan  ikatan  hidrogennya  akan  semakin  kuat (Edward dkk, 2016).

## Hasil uji spektroskopi IR
Uji spektroskopi IR dilakukan untuk menganalisa  gugus  fungsi  dan  untuk  menentukan derajat deasetilasi dari kitin dan kitosan yang dilakukan
dengan spektroskopi FTIR. Kitin dan kitosan terlebih dahulu  dipreparasi  sebelum  dianalisa,  yaitu  digerus bersam  KBr  dengan  perbandingan  1:10  (w/w).
Penggunaan  KBr  karena  sel  tempat  tempat  cuplikan sampel  harus  terbuat  dari  bahan  yang  dapat  tembus sinar infra merah, sepeti NaCl dan KBr.
Gambar 2. Spektra IR kitin I
Gambar 3. Spektra IR kitosan I
Dari  spektra  IR  terlihat  pita  tajam  yang  khas untuk  gugus  karbonil  amida  (C=O)  pada  bilangan gelombang 1690-1650 cm -1 yang pada gambar terlihat pada  puncak  1663,3  cm -1 dan  terdapat  pita  serapan untuk  (N-H)  pada  3500-3300  cm -1 ,  menunjukkan adanya  gugus  amida  (asetamida).  Selain  itu  juga terdapat  puncak  pita  serapan  gugus  hidroksil  (O-H) pada  daerah  3650-3200  cm -1 dengan  puncak  3484,8 cm -1 . Berdasarkan spektra di atas tampak telah terjadi transformasi  dari  kitin  ke  kitosan  bila  dilihat  dari hilangnya  serapan  1663,3  cm -1 pada  daerah  amida 1690-1650 cm -1 .
Derajat Deasetilisasi (DD)
Derajat deasetilisasi merupakan suatu parameter  yang  menentukan  mutu  kitosan,  dimana nilai  DD  menunjukkan  persentase  gugus  asetil  yang dapat dihilangkan dari rendemen kitin maupun kitosan. Semakin  tinggi  derajat  deasetilisasi  kitosan,  maka gugus  asetil  kitosan  rendah  semakin  rendah  sehingga interaksi antar ion dan ikatan hydrogen akan semakin kuat (Knoor, 2004).
Derajat deasetilisasi digunakan untuk mengetahui  terbentuknya  kitosan  dari  kitin.  Derajat deasetilisasi  kitosan  pada  penelitian  ini  ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil derajat deasetilasi kitin dan kitosan
Kitin DD (%) Kitosan DD (%) I 58,34 I 81,52 II 55,76 II 77,87 III 62,1 III 77
Dari  tabel  di  atas  menunjukkan  bahwa  kitosan  I memiliki  nilai  DD  yang  lebih  besar  dibandingkan dengan  kitosan  lain  yaitu  sebesar  81,52%,  yang ditentukan  berdasarkan  metode  spektrofotometer  IR
dengan metode Baseline (Khan et al, 2002). Semakin tinggi  derajat  deasetilasi  kitosan,  maka  gugus  asetil kitosan  semakin  rendah  sehingga  interaksi  antar  ion dan ikatan hidrogennya akan semakin kuat (Knorr,
2000).  Hasil  perhitungan  Derajat  deasetilasi  kitosan sesuai  dengan  stnadar  Protan  Laboratory  yang menyatakan bahwa derajat deasetilisasi kitin terhadap kitosan  berkisar  antara  70-100%  (Siraleartmukul, 2004).

## Coating kitosan-nata de coco
Pelapisan kitosan pada nata de coco dilakukan dengan melarutkan kitosan dalam asam asetat 2% yang ditunjukkan pada Gambar 3.
Gambar 4. Coating kitosan-nata de coco
Pelapisan  nata  de  coco  dengan  kitosan  terjadi  pada permukaan  nata  de  coco  melalui  interaksi  adsorpsi, yaitu  keadaan  dimana  kitosan  akan  menempel  pada nata  de  coco  karena  adanya  gaya  intermolekul  dari kedua  material  (Prameela  et  al.,  2010).  Ikatan  yang terjadi  pada coating kitosan  pada  nata  de  coco  yaitu
ikatan  hidrogen,  gugus  (-NH 2 )  dari  kitosan  melalui dipol-dipol  berinteraksi  dengan  gugus  (-OH)  pada molekul selulosa. Ikatan hidrogen cukup penting dalam ikatan permukaan ( interfacial ) untuk hemiselulosa dan selulosa yang memiliki banyak gugus hidroksil (Vick, 2000).

## Pengujian Antibakteri
Uji  antibakteri  terhadap  derajat  deasetilasi kitosan dilakukan untuk mengetahui pengaruh derajat deasetilasi  kitosan  terhadap  aktivitas  antibakterinya. Sampel  untuk  uji  ini  yaitu  nata  de  coco  yang  telah
dilapisi dengan kitosan dengan derajat deasetilasi yang berbeda-beda,  setelah  itu  dilakukan  uji  bakteri  E.coli dan  S,aureus  dengan  metode  difusi  agar.  Hasil pengujian dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Uji antibakteri kitosan (a). E.coli (b). S.aureus
Hasil  pengujian  di  atas  menunjukkan  adanya  kontrol negatif  untuk  uji  antibakteri  pada  kitosan  sebagai pelapis nata de coco. Hasil pengujian antibakteri pada
kitosan  masing-masing derajat deasetilasi ditunjukkan pada Gambar 4.
a b
Gambar 4. Derajat deasetilasi kitosan pada S.aureus
Pada Gambar 4 menunjukkan hasil uji positif S.aureus ketiga kitosan tersebut menunjukkan uji positif sebagai antibakteri  dengan  adanya  zona  bening  disekitar
sampel nata de coco. Sedangkan hasil uji positif bakteri E.coli dapat ditunjukkan pada Gambar 5.
Gambar 5. Derajat deasetilasi kitosan pada E.coli
Pada Gambar 5. menunjukkan bahwa kitosan II dan III pada uji antibakteri terhadap E.coli tidak terlihat adanya  penghambatan  terhadap E.coli ,  sedangkan untuk  kitosan  I  menunjukkan  uji  positif  terhadap
E.coli .  Pengujian  antibakteri  menunjukkan  uji  positif sebagai  antibakteri  dengan  adanya  zona  bening disekitar sampel nata de coco yang dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Diameter zona bening bakteri E.coli dan S.aureus
Derajat DeasetilasiKitosan (%) Diameter zona bening E.coli Diameter rata-rata Diameter zona bening S.aureus Diameter rata-rata cm (cm) (cm) (cm) 1 2 3 1 2 3 81,52 1 1,2 1,3 1,17 1,2 1,3 1,3 1,27 77,87 0 0 0 0 1,1 1,2 1,2 1,17 77 0 0 0 0 1 1 1,3 1,1
Kitosan  I  memiliki  derajat  deasetilasi  paling besar  dari  kitosan  II  dan  III.  Derajat  deasetilasi menunjukkan banyaknya gugus asetil yang putus pada gugus  amida,  dimana  kitosan  yang  memiliki  derajat deasetilasi besar akan memiliki banyak gugus amina (- NH 3 + )  dalam  larutannya  sehingga  kitosan  akan bermuatan  positif  dan  apabila  terdifusi  dalam  sel bakteri  dapat  menyebabkan  lisis  pada  sitoplasma bakteri  (Thatte,  2004).  Aktivitas  antibakteri  kitosan pada S.aureus lebih aktif dibandingkan bakteri E.coli . Sel-sel  penyusun  dinding  sel  pada  bakteri E.coli memiliki  struktur  yang  sederhana,  dimana  diluar membran  sitoplasmanya  hanya  terdapat  lapisan
peptidoglikan  sehingga  molekul-molekul  asing  dapat dengan mudah masuk kedalam sel. Sedangkan bakteri S.aureus memiliki  dinding  sel  yang  sangat  rumit, dimana  struktur  bilayer  tersebut  berpotensi  dalam menghalangi molekul-molekul asing yang akan masuk kedalam sel (Chun, 2011).

## KESIMPULAN
Hasil penelitian ini dapat disimpulkan bahwa terdapat pengaruh  derajat  deasetilasi  kitosan  terhadap  proses coating  nata  de  coco-kitosan.  Kitosan  dengan  derajat deasetilasi  tinggi  memiliki  kemampuan  lebih  baik dalam  menghambat  bakteri.  Derajat  deasetilisasi
a b
c
I II III
81,52%  memiliki  kemampuan  antibakteri  paling  baik dibandingkan  derajat  deasetilisasi  77,87%  dan  77%. Pengujian  antibakteri  pada  coating  kitosan-nata  de coco dengan bakteri E.coli dan S. aureus menunjukkan uji  positif  sebagai  antibakteri  dengan  adanya  zona bening disekitar sampel nata de coco-kitosan masing- masing  diameter  zona  bening  sebesar  1.17  cm  pada E.coli dan 1,27 cm pada S.aureus

## DAFTAR PUSTAKA
Bahtiar  dan  Rizal.  (2006).  Pengelolaan  Budidaya Udang  Indonesia.  http://www.brawijaya.ac.id, 24 April 2006.
Chun,  HK.  and  Choi  KS.  (2011).  Synthesis  and Antibacterial Activity of Quaternized Chitosan Derivatives Having Different Methylene Spacers.  Departement  of  Industrial  Chemistry. College  of  Engineering.  Hanyang  University. Seoul 133-791.
Dunn,  ET.,  Grandmaison,  EW.,  dan  Goosen,  MFA.
(2001). Applications and Properties of
Chitosan. Technomic Pub , Basel. p 3-30.
Edward J, Marni K., Riardi P. (2016). Isolasi Kitin Dan Kitosan  Dari  Limbah  Kulit  Udang.  Majalah Biam. e-ISSN: 2548-4842. P-ISSN: 0215-1464.
Fitriani Dian, dkk. (2019). Biosintesis dan Karakterisasi  Selulosa  Bakteri  menggunakan Media Sari Pedada ( Sonneratia caseolaris ) dan Kundur ( Bennica hispida ). Jurnal Selulosa. Vol. 9, No. 1, p-ISSN:2088-7000.
Kementerian  Kelautan  dan  Perikanan.  (2022). KKP Perbarui  Data  Estimasi  Potensi  Ikan,  Totalnya 12,01 Juta Ton per Tahun. Artikel. https://kkp.go.id/djpt/artikel/39646-kkp- perbarui-data-estimasi-potensi-ikan-totalnya- 12-01-juta-ton-per-tahun .
Khan,  T.A,  Peh,  K.K,  dan  Chang,  H.S.  (2002).
Reporting  Degree  of  Deacetylation  Values  of Chitosan  :  The  Influences  of  Analytical Methods . J.Pharm.Sci . 5 (3) : 205-212 Knoor  D.  (2004).  Functional  properties  of  chitin  and chitosan. J. Food. Sci. 47 : 36 – 38.
Magani, Alce dkk. (2020). Uji Antibakteri Nanopartikel  Kitosan  terhadap  Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia Coli. Jurnal Bios Logos. Vol.10 No. 1, Februari. Mardy DC, Sudjari S, Rahayu SI (2016). Perbandingan Efektivitas  Kitosan  (2-Acetamido-2-Deoxy-D- Glucopyranose)  dan  Nano  Kitosan  terhadap Pertumbuhan  Bakteri Enterococcus  faecalis secara In  Vitro .  Majalah  Kesehatan  FKUB 2(4):229-240.
Prameela, K. et al. (2010). Bioremediation of Shrimp
Biowaste  by  Using  Natural  Probiotic  for Chitin  and  Carotenoid  Production  an Alternative  Method  to  Hazardous  Chemical Method. International  Journal  of  Applied Biology  and  Pharmaceutical  Technology . Vol. I: Issue-3: Nov-Dec.
Rahmatul Fajri, Yulida Amri. (2018). Uji Kandungan Kitosan  Dari  Limbah  Cangkang  Tiram (Crassostrea  sp.).  Jurnal  Jeumpa,  5  (2)- Desember 2018.
Salleh, E., Muhamad. (2005). Starch-Based Antimicrobial Films Incorporated With Lauric Acid And Chitosan. Department Of Bioprocess Engineering, Faculty Of Chemical Engineering
And Natural Resources Engineering. Universitas  Teknologi  Malaysia  (Utm)  81310 Johor. Malaysia.
Savitri  E,  Soeseno  N  dan  Adiarto  T.  (2010).  Sintesis
Kitosan,  Poli  (2-amino-2-deoksi-D-Glukosa). Skala  Pilot  Project  dari  Limbah  Kulit  Udang sebagai  bahan  baku  Alternatif  Pembuatan Biopolimer. Prosiding Seminar Nasional Teknik Kimia. Yogyakarta.
Setiati,  Rini,  dkk.  (2020). Potensi  Keberhasilan  Kulit Udang  Sebagai  Bahan  Dasar  Polimer  Kitosan: Studi  Literatur.  Jurnal  Penelitian  dan  karya Ilmiah Lembaga Penelitian Universitas Trisakti. http://dx.doi.org/10.25105/pdk.v6i1.86 37
Siraleartmukul,  K.  (2004).  The  Relationship  between
Crystallinity  and  Degree  of  Deacetylation  of Chitin  from  Crab  Shell. Journal  of  Metals Materials and Minerals .
Sivakami MS, Thandapani, G (2013). Preparation and Characterization of Nano Chitosan for Treatment Wastewaters. In journal of biological macromolecules 57:204-21.
Synowiecki,  J.,  and  Al-Khateeb,  N.A.  (2003). Production,  Properties,  and  Some  New Applications of Chitin and its Derivatives.
Thatte,  M.R.  (2004).  Synthesis  And  Antibacterial Assessment  Of  Water-Soluble  Hydrophobic Chitosan  Derivatives  Bearing  Quaternary Ammonium  Functionality.  Louisiana  State University and  A & M College. Baton Rouge. LA.
Vick,  C.B.  (2000).  Adhesive  Bonding  of  Wood Material.  Forest  Product  Technology.  USDA Forest Service. Wisconsin.
Yati  Sudarsih  and  Evi  Triana.  (2016).  Pemanfaatan Limbah  Kulit  Udang  untuk  Menghasilkan
Enzim Kitinase
dari Streptomyces macrosporeus InaCC  A45.  Jurnal  Kimia Terapan  Indonesia.  Pp  91-101.  P-ISSN:  0853- 2788. E-ISSN: 2527-7669.