## VALIDASI METODE ANALISIS UNTUK PENETAPAN KADAR PARASETAMOL DALAM SEDIAAN TABLET SECARA SPEKTROFOTOMETRI ULTRAVIOLET
Grace Pricilia Tulandi 1) , Sri Sudewi 1) , Widya Astuty Lolo 1)
Prodi Farmasi, FMIPA, UNSRAT, Manado

## ABSTRACT
Now  a  days,  many  people  in  society  prefer  to  use  branded  medicine  compare  to generic ones. They think that branded medicine is more efficacious the generic medicine. The lack of knowledge in the society about the equality of effectiveness between generic medicine and branded medicine with the same active material, cause them to choose branded medicine. This  research  aiming  to  determine  the  paracetamol  content  in  tablet  preparations  and  the validation  test  using  ultraviolet  spectrophotometer  analysis.  From  the  analysis  validation result , precision and accuration method were obtained, that qualitied the analysis validation requirements, that is 0,0595 for standard deviation (SD) value, 0,0048 fr variation coefficient value, and 99,0795 % for accuration method. r = 0,9982 were obtained as linearity value with 1,4684  ppm  as  detection  limit  and  4,8985  as  quantity  limit.  The  average  result  from  the paracetamol content determination from generic and branded medicine successively are 3,034 ± 0,294 ppm; 3,049 ± 0,070 ppm; 3,019 ± 0,199 ppm; 3,079 ± 0,139 ppm.
Keyword : Paracetamol, Validation, Ultraviolet Spectrophotometer.

## ABSTRAK
Saat  ini  banyak  masyarakat  yang  lebih  memilih  menggunakan  obat  merek  dagang dibandingkan obat  generik.  Mereka menganggap  bahwa obat  merek dagang lebih berkhasiat dibanding  obat  generik.  Kurangnya  pengetahuan  masyarakat  tentang  efektifitas  yang  sama antara  obat  generik  dengan  obat  merek  dagang  yang  memiliki  bahan  aktif  yang  sama, menyebabkan  mereka  lebih  memilih  menggunakan  obat  dengan  merek  dagang.  Oleh  karena itu penelitian ini bertujuan untuk menetapkan kadar parasetamol dalam sediaan tablet dan uji validasinya menggunakan metode analisis spektrofotometri ultraviolet. Hasil validasi analisis yang  dilakukan  didapat  presisi  dan  akurasi  metode  yang  memenuhi  persyaratan  validasi analisis, yaitu untuk nilai standar deviasi (SD) sebesar 0,0595; koefisien variasi (KV) sebesar 0,0048  dan  akurasi  metode  sebesar  99,0795%.  Diperoleh  nilai  linearitas  sebesar  r  =  0,9982 dengan batas deteksi 1,4684 ppm dan batas kuantitasi 4,8945 ppm. Hasil rata-rata penetapan kadar parasetamol generik dan merek dagang secara berturut-turut adalah 3,034 ± 0,294 ppm; 3,049 ± 0,070 ppm; 3,019 ± 0,199 ppm; 3,079 ± 0,139 ppm.
Kata kunci : Parasetamol, Validasi, Spektrofotometri Ultraviolet.

## PENDAHULUAN
Obat  adalah  salah  satu  unsur penting dan paling tepat untuk pelaksanaan upaya  kesehatan,  terutama  untuk  upaya pencegahan  dan  penyembuhan.  Pemilihan parasetamol  sebagai  objek  penelitian disebabkan karena parasetamol merupakan salah satu obat analgetik - antipiretik yang banyak  digunakan  khususnya  di  fasilitas pelayanan  kesehatan  pemerintah,  karena selain  harganya  yang  terjangkau  juga memiliki  aktivitas  yang  mampu  menekan fungsi  sistem  saraf  pusat  secara  selektif dan relatif aman dengan penggunaan dosis terapi.  Pada  industri  Farmasi,  pengawasan mutu  merupakan  salah  satu  bagian  dari Cara  Pembuatan  Obat  yang  Baik  (CPOB) untuk memberikan kepastian bahwa produk  mempunyai  mutu  yang  sesuai dengan  tujuan  pemakaiannya,  agar  hasil produksi  yang  dipasarkan  memenuhi persyaratan  CPOB.  Pada  persyaratan  ini perlu dilakukan penetapan kadar parasetamol  dalam  tablet,  yang  menurut persyaratan  Farmakope  Indonesia  (FI) Edisi  IV  tahun  1995  yaitu  tidak  kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110,0%.
Penetapan kadar parasetamol dalam  suatu  sediaan  dibutuhkan  metode yang  teliti  dan  akurat.  Oleh  karena  itu terlebih  dahulu  perlu  dilakukan  validasi dimana  prosedur  ini  digunakan  untuk
membuktikan  bahwa  metode  analisis memberikan  hasil  seperti  yang  diharapkan dengan  kecermatan  dan  ketelitian  yang memadai.
Penelitian ini menggunakan metode spektrofotometri  ultraviolet.  Parasetamol mudah  larut  dalam  air  mendidih,  sangat mudah  larut  dalam  kloroform,  larut  dalam etanol, metanol, dimetil formamida, aseton dan  etil  asetat,praktis  tidak  larut  dalam benzen  (Ditjen  POM,  1995).  Berdasarkan kelarutan  dalam  metanol,  maka  dilakukan modifikasi  penetapan  kadar  parasetamol dengan menggunakan pelarut metanol.

## METODELOGI PENELITIAN

## Pembuatan  Larutan  Baku  Parasetamol Kosentrasi 330 ppm
Sebanyak  16,6  mg  parasetamol baku dimasukkan dalam  labu takar 50 mL dan  dilarutkan  dengan  metanol  sampai tanda  batas  sehingga  akan  diperoleh kosentrasi  330  ppm.  Dari  larutan  baku kosentrasi  330  ppm  inilah  yang  akan digunakan untuk pembuatan seri konsentrasi.
Penetapan Panjang Gelombang Maksimum Dipipet 0,36 mL dari larutan induk kemudian dimasukkan dalam labu takar 10 mL,  diencerkan  dengan  metanol  sampai
tanda  batas  kemudian  larutan  tersebut dikocok  hingga  homogen  dan  dimasukkan kedalam kuvet kemudian dibaca absorbansinya  pada  panjang  gelombang 200-400 nm.

## Penetapan Operating Time
Dari  larutan  baku  Parasetamol  330 ppm dibuat larutan baku dengan konsentrasi  12,0  ppm  dengan  cara  seperti pada  pembuatan  seri  konsentrasi.  Larutan baku dengan konsentrasi 12,0 ppm tersebut dikocok  hingga  homogen  dan  dimasukkan ke dalam kuvet kemudian dibaca absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum  sampai  diperoleh  absorbansi yang  relatif  konstan  dengan  rentang pembacaan setiap 1 menit sekali.

## Pembuatan Kurva  Baku
Larutan baku dengan seri konsentarsi  3,0;  6,0;  9,0;  12,0;  dan  15,0 ppm  didiamkan  selama  waktu operating time kemudian  dibaca  absorbansinya  pada panjang  gelombang  maksimum.  Dari  data hasil  absorbansi,  selanjutnya  dihitung persamaan kurva bakunya sehingga diperoleh persamaan garis y = bx + a.

## Ketelitian (Precision)
Dari  larutan  baku  parasetamol  330
ppm dibuat larutan baku dengan
konsentrasi  12,0  ppm  dengan  cara  seperti pada  pembuatan  seri  konsentrasi.  Larutan baku  parasetamol  dengan  konsentrasi  12,0 ppm  tersebut  didiamkan  selama  waktu operating time kemudian dibaca absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum.  Uji  ketelitian  ini  dilakukan dengan lima kali pengulangan.

## Ketepatan (Accuracy)
Ditimbang  setara  16,6  mg  serbuk tablet parasetamol sampel secara duplo dan masing-masing dimasukkan ke dalam  labu takar.  Pada  salah  satu    labu  takar ditambahkan 2 mL larutan baku Parasetamol  dengan  konsentrasi  330  ppm. Kedua  sampel  selanjutnya  mengalami perlakuan  yang  sama  yaitu  ditambahkan metanol  hingga  volumenya  50  mL. Dikocok  hingga  homogen  kemudian  dari masing-masing  larutan  tersebut  diambil 0,09  mL  dan  diencerkan  dengan  metanol hingga volumenya tepat 10 mL lalu dibaca absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum  dan operating  time. Uji ketepatan metode dilakukan dengan penambahan larutan baku 330 ppm dengan pengulangan  sebanyak  5  kali.  Hasil absorbansi  digunakan  untuk  menghitung harga perolehan kembali ( recovery).
Penetapan Kadar Sampel
Ditimbang  16,6  mg  zat  aktif parasetamol  lalu  larutkan  dengan  metanol hingga  volumenya  50  mL  dari  larutan tersebut diencerkan dengan metanol seperti pada  pembuatan  seri  kosentrasi  hingga  3 ppm.  Selanjutnya,  dua  puluh  tablet  yang telah memenuhi keseragaman bobot kemudian  digerus  hingga  halus  dan homogen.  Sampel  serbuk  ditimbang  dan dilarutkan,  buat  perhitungan  penimbangan sampel  untuk  menentukan  berat  sampel dan  volume  larutan  yang  dibutuhkan masing-masing sampel dan larutkan hingga kosentrasi  330  ppm  lalu  encerkan  hingga kosentrasi  3  ppm,  kemudian  dibaca absorbansinya  pada  panjang  gelombang maksimum  dan operating  time. Penetapan kadar  dilakukan  dengan  pengulangan sebanyak  tiga  kali  dan  dilakukan  terhadap dua  sampel  tablet  parasetamol  merek dagang  dan  dua  sampel  tablet  parasetamol generik.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Larutan Baku Parasetamol
Larutan baku parasetamol dengan kosentrasi  tertentu  dibuat  dengan  cara melarutkan  bahan  parasetamol  tersebut kedalam  pelarut  yang  digunakan.  Pelarut yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah metanol.  Penggunaan  metanol  sebagai pelarut  karena  parasetamol  larut  dalam
metanol. Selain itu juga, diketahui metanol memiliki serapan pada panjang gelombang dibawah  210  nm,  sehingga  metanol  akan meneruskan  atau  tidak  akan  menyerap sinar  dengan  panjang  gelombang  diatas 210  nm,  akibatnya  metanol  tidak  akan menggangu spektrum serapan dari parasetamol.
Penentuan
Panjang Gelombang

## Maksimum Pada Parasetamol
Panjang  gelombang  maksimum  (λ maks) merupakan  panjang  gelombang  dimana terjadi eksitasi elektronik yang memberikan absorbansi maksimum. Alasan dilakukan pengukuran pada panjang  gelombang  maksimum  adalah perubahan  absorban  untuk  setiap  satuan kosentrasi  adalah  paling  besar  pada panjang  gelombang  maksimum,  sehingga akan  diperoleh  kepekaan  analisis  yang maksimum. Penentuan panjang gelombang pada  penelitian  ini  dilakukan  dengan mengukur  absorbansi  dari  parasetamol pada  panjang  gelombang  ultraviolet  yaitu antara  panjang  gelombang  200  nm  –  400 nm.  Dari  hasil  penelitian  yang  diperoleh panjang gelombang maksimum adalah 248 nm.  Secara  teoritis  serapan  maksimum untuk  parasetamol  adalah  244  nm,  terjadi pergeseran karena pada parasetamol memiliki  gugus  auksokrom  yang  terikat pada gugus kromofor. Apabila Auksokrom
terikat pada gugus kromofor akan mengakibatkan  pergeseran  pita  absorbansi menuju  ke  panjang  gelombang  yang  lebih besar  (pergeseran  batokromik)  disertai
dengan peningkatan intensitas (hiperkromik).

## Panjang Gelombang Maksimum Parasetamol

## Penentuan operating time
Penentuan operating  time yang bertujuan  untuk  mengetahui  lama  waktu yang  dibutuhkan  larutan  untuk  mencapai absorbansi konstan. Optimasi waktu kestabilan ini ditentukan dengan mengukur absorbansi  dari  larutan  baku  parasetamol pada  panjang  gelombang  maksimum  yaitu
248  nm  dengan  waktu  0  -  10  menit menggunakan spektrofotometer ultraviolet. Dari  hasil  penelitian  yang  dilakukan diperoleh  operating  time  setelah  optimasi waktu  hingga  menit  ke-6  karena  hasil absorbansinya  relatif  konstan.  Optimasi waktu kestabilan dapat dilihat pada tabel.

## Tabel 1. Data Hasil Penentuan Operating Time.
Waktu (Menit)                         Absorbansi
0,0                                          0,61 1.0                                           0,61 2,0                                           0,61 3,0                                           0,61 4,0                                           0,61
5,0                                           0,61 6,0                                            0,61 7,0                                            0,62 8,0                                            0,62 9,0                                            0,62 10,0                                           0,62
Kurva  baku  adalah  kurva  yang diperoleh dengan memplotkan nilai absorban dengan kosentrasi larutan standar yang  bervariasi  menggunakan  panjang gelombang maksimum. Kurva ini merupakan  hubungan  antara  absorbansi dengan  kosentrasi.  Bila  hukum  Lambert- Beer  terpenuhi  maka  kurva  kalibrasi
berupa  garis  lurus.  Pada  pembuatan  kurva baku  ini  digunakan  persamaan  garis  yang diperoleh  dari  metode  kuadrat  terkecil yaitu  y  =  bx  +a,  Persamaan  ini  akan menghasilkan  koefisien  korelasi  (r).  Nilai koefisien korelasi yang memenuhi persyaratan  adalah  lebih    dari0,9770.
Gambar 1. Kurva baku A B S O
R
B
A
N
S
I
K on s e n t r a s i (ppm)
Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantitasi (LOQ).
Setelah  mendapatkan  kurva  kalibrasi
yang memenuhi persyaratan analisis,
selanjutnya data yang diperoleh dari kosentrasi  tiap  analit  yang  memberikan absorbansi  berbeda  untuk  diolah  untuk menentukan  batas  deteksi  (LOD)  dan  batas kuantitas (LOQ). Pada penelitian ini memberikan  harga  LOD  yang  didapat sebesar  1,4684  ppm  yang  artinya  pada kosentrasi  tersebut  masih  dapat  dilakukan pengukuran  sampel  yang  memberikan  hasil ketelitian  suatu  alat  berdasarkan  tingkat akurasi  individual  hasil  analisis.  Sedangkan, harga LOQ sebesar 4,8945 ppm artinya pada kosentrasi tersebut bila dilakukan
pengukuran masih dapat memberikan kecermatan analisis.
Tabel 2. Nilai LOD dan LOQ
∑(Y-Yi) 2 0,0004556
SB                            0,0107
LOD (ppm)              1,4684
LOQ (ppm)              4,8945

## Ketelitian Atau Presisi Parasetamol
Presisi  seringkali  diukur  sebagai persen  Relative  Standard  Deviation  (RSD) atau  Coefficient  of  Variation  (CV)  untuk sejumlah sampel yang berbeda bermakna secara
statistik.  Kriteria  presisi  diberikan  jika
metode  memberikan  nilai  CV  2%  atau kurang  (Harmita,  2004).  Hasil  pengujian presisi dapat dilihat pada tabel berikut :
Tabel 3.Data Ketelitian Hasil Uji Presisi Parasetamol.
Harmita tahun  2004,  menjelaskan bahwa  ketepatan  pada  dasarnya  adalah ukuran  yang  menunjukan  derajat  kedekatan hasil  analisis  dengan  kadar  analit  yang sebenarnya. Range nilai persen (%) recovery analit  yang  dapat  diterima  adalah  90-110%. Range  tersebut  bersifat  fleksibel  tergantung dari kondisi analit yang diperiksa berdasarkan    jumlah  sampel  dan  kondisi laboratorium.  Berikut  ini  adalah  tabel  data ketepatan atau Accuracy :

## Tabel 4.Data Ketepatan atau Accuracy Parasetamol
Pengulangan Absorbansi Konsentrasi % Recovery X 100% Sebelum Sesudah + baku 2mL Sebelum Penambahan Sesudah Penambahan 1 0,408 0,451 2,835 4,807 98,630% 2 0,409 0,452 2,881 4,853 98,625% 3 0,410 0,454 2,927 4,945 100,918% 4 0,412 0,455 3,018 4,990 98,600% 5 0,414 0,457 3,110 5,083 98,625% RATA-RATA 99,079%
Tabel 5.Hasil Penetapan Kadar Parasetamol Pada Sediaan Tablet.
Sampel ABS Konsentrasi Kadar (%) Kadar Rata- Rata Sampel (%) Kadar Rata- Rata Sampel (ppm) Keterangan Parasetamol 0,409 2,881 96,024 Generik (A) 0,413 3,064 100,612 100,612 3,034 ± 0,294 Terdeteksi 0415 3,156 105,199 Parasetamol 0,411 2,973 99,083 Generik (B) 0,414 3,110 103,666 101,627 3,049 ± 0,070 Terdeteksi 0,413 3,064 102,133 Parasetamol 0,410 2,927 97,554 Merek (C) 0,409 2,881 96,024 100,612 3,019 ± 0,199 Terdeteksi 0,417 3,246 108,257 Parastamol 0,410 2,927 97,554 Merek (D) 0,414 3,110 103,666 102,651 3,079 ± 0,139 Terdeteksi 0,416 3,202 106,733
Penetapan  kadar    ini  bertujuan  untuk menjamin mutu serta keamanan suatu produk obat.  Pada  penetapan  kadar  parasetamol  ini digunakan limit deteksi (LOD) untuk melihat kosentrasi  terendah  yang  masih  dapat terdeteksi oleh suatu alat.
Perbedaan  kadar  tablet  terlihat  pada keempat  sampel  parasetamol  ini.  Ini  dapat terjadi  karena  perbedaan  metode  produksi dari  masing-masing  produsen,  termasuk pemilihan  bahan  tambahan  tablet  yang digunakan.  Beberapa  bahan  tambahan  yang mungkin  akan  berpengaruh  terhadap  hasil absorbansi  sehingga  akan  berpengaruh  juga
terhadap kadar yang terukur. Dengan adanya perbedaan  kadar  dalam  tablet  parasetamol generik  dan  parasetamol  merek,  maka dimungkinkan akan terdapat perbedaan kadar yang  terabsorbsi  kedalam  darah.  Kadar  obat dalam  darah  akan  menunjukkan  banyaknya obat  yang  berikatan  dengan  reseptor  hingga menimbulkan  efek  terapi  yang  dihasilkan sehingga  tablet  parasetamol  generik  dan merek mempunyai efek terapi yang berbeda.
Pada keempat sampel tersebut menunjukkan  kadar  rata-rata  yang  sesuai menurut persyaratan     Farmakope  Indonesia
(FI)  Edisi  IV  tahun  1995  yaitu  tidak  kurang dari 90,0% dan tidak lebih dari 110,0%.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa :
1. Hasil  validasi  analisis  yang  dilakukan didapat  presisi  dan  akurasi  metode  yang memenuhi  persyaratan  validasi  analisis, yaitu untuk nilai SD sebesar 0,0595; KV sebesar  0,0048  dan  akurasi  metode sebesar 99,0795%. Diperoleh nilai linearitas  sebesar  r  =  0,9982  dengan batas  deteksi  1,4684  ppm  dan  batas kuantitasi 4,8945 ppm.
2. Hasil rata- rata penetapan kadar parasetamol  generik  dan  merek  dagang secara  berturut-turut  adalah  3,034  ± 0,294 ppm; 3,049 ± 0,070 ppm; 3,019 ± 0,199 ppm; 3,079 ± 0,139 ppm.
3. Kadar  parasetamol  generik  dan  merek dagang  memenuhi  persyaratan  yang ditetapkan  pada  Farmakope  Indonesia (FI)  Edisi  IV  tahun  1995  yaitu  tidak kurang  dari  90,0%  dan  tidak  lebih  dari 110,0%

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  validasi metode tentang penetapan kadar parasetamol menggunakan  metode  yang  lain  misalnya metode spektrofotometri sinar tampak .

## DAFTAR PUSTAKA
Cranswick, N., Coghlan D. 2000. Paracetamol  Efficacy  and  Safety  In
Children  The  First  40  Years .Clinical
Pharmacologist, Royal Children’s Hospital : Victoria.
Dachriyanus.2004. Analisis Struktur
Senyawa Organik Secara Spektroskopi ,
Edisi  I.  Penerbit  Andalas  University Press : Padang.
Departemen  Farmakologi  dan  Terapeutik.
2007. Farmakologi  dan  Terapi ,  Edisi
V. Fakultas Kedokteran UI : Jakarta.
Dirjen POM. 1995. Farmakope Indonesia ,Edisi IV.Departemen Kesehatan Republik Indonesia: Jakarta. Gandjar,  I.G.,dan  Rohman,  A.2007. Kimia Farmasi Analisis . Cetakan II : Yogyakarta.
Harmita.2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara
Perhitungannya .  Didalam:  Majalah Ilmu  Kefarmasian,  Desember.Vol.  1, No.3,  pp.  117  –  135.  Departemen Farmasi FMIPA-UI : Jakarta.
Lusiana  Darsono.  2002. Diagnosis  dan Terapi Intoksikasi Salisilat
danParasetamol .  Farmakologi  Dasar dan  Klinik  Buku  3  Edisi  8.  Salemba Medika : Surabaya.
Moffat,  A.c,dkk.  2005. Clarke’s Analysis Of
Drug  and  Poisons  Thirth  Edition . Pharmaceutical Press Electronic Version : London.
Mulja,  M.,and  Suharman.  1995. Analisis
Instrumental . Airlangga University Press: Surabaya.Hal 2,6,33-34.
Rohman,  A.  2007. Kimia  Farmasi .  Pustaka Pelajar : Yogyakarta.
Satiadarma,  K.  2004. Azas  Pengembangan
Prosedur Analisis . Airlangga University  Press  :  Surabaya.  Hal  300. 303.
Tan, H.T dan Raharja, K. 2010. Obat-Obatan Sederhana  Untuk  Gangguan  Sehari-
hari .    Elek  Media  Komputindo  : Jakarta.
WHO.
(1992). The International Pharmacopeia . Edisi
ke-empat.
Electronic  Version  Geneva  :World Health Organization. Hal 98.