ISSN 2548-6462 (online), ISSN 2088-8740 (print)

## DOI: 10.30644/rik.v8i2.329

## Uji antioksidan dan bioaktivitas fraksi etil asetat batang jarak tintir
(Jatropha multifida L.)
Akhirul Kahfi Syam*, Fahrauk Faramayuda, Julia Ratnawati, Desti Hermawati, Puspita Satriyani Permatasari Surasa
Fakultas Farmasi Universitas Jenderal Achmad Yani, Cimahi, Indonesia, 40531 *Email korespondensi: akhirulkahfisyam@gmail.com
Accepted: 01 Februari 2020; revision: 11 Mei 2020; published: 30 Juni 2020

## Abstrak
Latar Belakang: Jatropha multifida L. atau jarak tintir merupakan tanaman yang digunakan secara empiris getahnya sebagai obat luka oleh masyarakat Indonesia sejak lama. Penelitian ini merupakan lanjutan dari penelitian sebelumnya mengenai batang jarak tintir yang telah diuji toksisitas dengan metode BSLT dan peredaman antioksidan dengan metode DPPH yang secara berturut memberikan nilai LC50 terendah 3,69 µg/mL  dan  IC50  56,85  µg/mL  pada  ekstrak  etil  asetat. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  nilai toksisitas BSLT dan aktivitas antioksidan dari fraksi etil asetat batang jarak tintir.
Metode: Penelitian meliputi tahap-tahap pengumpulan bahan uji batang jarak tintir, penyiapan simplisia, pembuatan  ekstrak  dengan  3  pelarut  yang  berbeda  kepolarannya  penapisan  fitokimia  dari  simplisia, fraksinasi menggunakan metode Kromatografi Cair Vakum (KCV) dari ekstrak etil asetat menjadi 4 fraksi. Hasil: Hasil  pengujian  antioksidan  metode  peredaman  DPPH  memberikan  IC50  terhadap  f1  (n-heksan 75%:etil asetat 25%), f2 (n-heksan 50%:etil asetat 50%), f3 (n-heksan 25%:etil asetat 75%), dan f4 (etil asetat  100%)  secara  berturut-turut  adalah  3759,06±  28,76  µg/mL;  790,50±  4,08  µg/mL;  167,44±  0,58 µg/mL; dan 164,91± 0,57 µg/mL. Hasil pengujian BSLT terhadap fraksi etil asetat memberikan hasil LC50 sebesar f1 64,43 µg/mL; f2 37,54 µg/mL; f3 41,94 µg/mL; dan f4 25,70 µg/mL. Kesimpulan: F4  merupakan  fraksi  dengan  nilai  IC50  dan  LC50  yang  paling  rendah  dari  seluruh  fraksi, yang  menunjukkan  f4  merupakan  fraksi  yang  paling  aktif  sebagai  antioksidan  dan  BSLT  serta  diduga golongan  flavonoid  yang  diketahui  dari  profil kromatogram  KLT  dengan  Rf  0,57  yang memberikan hasil positif terhadap penampak bercak FeCl 3 dan AlCl 3 merupakan senyawa aktif dari kedua aktifitas tersebut . Kata kunci: antioksidan, brine shrimp lethality test , DPPH, Jatropha multifida L.

## Abstract
Background: Jatropha multifida L. or jarak tintir was empirically used as wound treatment for the sap by Indonesian  people  for a  long  time ago.  The  toxicity  and  antioxidant  capacity  of the  jarak  tintir  stem  was done by brain shrimp lethality test (BSLT) with LC50 3.69 µg/mL and DPPH scavenging activity with IC50 56,85 µg/mL for ethyl acetate extract.
Method: Extraction was  performed  by  continuous  extraction  with Soxhlet  apparatus  using  various polarity    solvents    (n-hexane,  ethyl  acetate,  and  methanol)  and  ethyl  acetate  extract  was  fractioned  by vacuum liquid chromatography (VLC) into 4 fraction with gradien eluen of n-hexane and ethyl acetate. Results: Antioxidant assay gave IC50 for f1 (n-hexane 75%:ethyl acetate 25%), f2 (n-hexane 50%: ethyl acetate 50%), f3 (n-hexane 25%: ethyl acetate 75%), and f4 (ethyl acetate 100%) respectively as 3759.06± 28.76 µg/mL; 790.50± 4.08 µg/mL; 167.44± 0.58 µg/mL; and 164.91± 0.57 µg/mL. BSLT assays for each fractions gave LC50 as f1 64.43 µg/mL; f2 37.54 µg/mL; f3 41.94 µg/mL; and  f4 25.70 µg/mL. Conclusion: Fraction 4 was the best fraction with the lowest IC50 and LC50 with flavonoid was suspected as responsible compound for both assays after TLC analysis that gave spot with Rf 0.57 and gave positive result after sprayed with FeCl 3 dan AlCl 3 spray reagent. Keywords: antioxidant, brine shrimp lethality test , DPPH, Jatropha multifida L
Uji antioksidan dan bioaktivitas fraksi etil asetat batang jarak
tintir ( Jatropha multifida L.)

## PENDAHULUAN
Perkembangan beberapa penyakit seperti penuaan, artritis, aterosklerosis, dan karsinogenik  yang  diderita  oleh  manusia pada saat ini memiliki kaitan dengan radikal bebas.  Radikal  bebas  dihasilkan  akibat adanya  stres  oksidatif  dimana  potensinya meningkat apabila adanya paparan  dari zat kimia, gaya hidup yang tidak sehat, merokok, polusi  udara,  dalam  kondisi  stres  dan lainnya.  Antioksidan  merupakan  senyawa yang  dapat  menetralisir  radikal  bebas tersebut  dan  dapat  mengurangi  dampak akibat  stres  oksidatif  yang  ditimbulkan 1 . Antioksidan  alami  dan  obat  tradisional merupakan  sumber  utama  dari  senyawa antioksidan  tersebut.  Diet  dengan  beragam jenis  makanan  yang  sehat  merupakan  cara terbaik  untuk  memperoleh  manfaat  dari senyawa antioksidan 2 .
Brine  shrimp  lethality  test (BSLT) merupakan  pengujian  toksisitas  pada  larva udang Artemia  salina L.  dimana  dapat mendeteksi  adanya  senyawa  bioaktif  yang bersifat toksik pada suatu tanaman. Metode ini  sudah  lama  digunakan  karena  mudah, murah,  cepat  dan  memiliki  keterulangan yang  baik  serta  dapat  digunakan  sebagai data pendahuluan untuk pengujian toksisitas yang  lazim  menggunakan  tikus  ataupun mencit 3 .
Tanaman jarak tintir ( Jatropha multifida L) merupakan tanaman yang banyak ditemukan  di  Indonesia.  Tanaman  yang secara  empiris  banyak  digunakan  daunnya oleh  masyarakat  untuk  mengurangi  rasa nyeri 4 . Namun sudah banyak penelitian yang dilakukan  berbagai  penelitian  aktivitas ataupun farmakologi terhadap bagian tanaman ini seperti antioksidan, antimikroba, antibakteri, imunomodulator, antimalaria dan antikanker 5 –8 .
Pada  penelitian  mengenai  batang  jarak tintir  ditemukan  senyawa  multifidone  yang merupakan  senyawa  diterpenoid  dan  telah diuji aktivitasnya terhadap sel kanker secara in  vitro.  Hasilnya  memberikan  gambaran bahwa senyawa multifidone memiliki aktifitas sitotoksik  dengan nilai  IC50  berkisar  antara 45-160  µM  pada  fraksi  non-pola r9 .  Telah ditemukan
juga senyawa-senyawa
diterpenoid dari bagian batang berupa 15- O- acetyl japodagrone, (4E)-
jatrogrossidentadione,
multidione,
multiﬁdanol dan multiﬁdenol 10 .
Pada  penelitian  sebelumnya,  bagian batang jarak tintir telah diuji toksisitas BSLT dan  antioksidan  metode  peredaman  radikal bebas  DPPH  yang  memberikan  nilai  LC50 terendah  3,69  µg/mL 11 dan  IC50  56,85 µg/mL pada ekstrak etil asetat dibandingkan dengan ekstrak n-heksan dan metanol. Hasil penelitian  tersebut  memberikan  gambaran bahwa  terdapat  senyawa  antioksidan  dan senyawa toksik pada ekstrak etil asetat yang memiliki  sifat  semi-polar  berbeda  dengan senyawa yang ditemukan pada tanaman ini yang bersifat sitotoksik.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk memandu  peneliti  dalam  menggali  potensi antioksidan  dan  toksisitas  batang  tanaman jarak  tintir  dari  hasil  fraksinasi  ekstrak  etil asetat  yang  memiliki  nilai  IC50  dan  LC50 terbaik yang diperoleh sebelumnya.
Pemeriksaan antioksidan dengan metode peredaman  radikal  bebas  DPPH  dan pemeriksaan  toksisitas  BSLT  digunakan untuk  memandu  peneliti  dalam  pencarian senyawa baru yang memiliki potensi sebagai calon senyawa antikanker yang baru 12 –14 .
Uji antioksidan dan bioaktivitas fraksi etil asetat batang jarak
tintir ( Jatropha multifida L.)

## METODE PENELITIAN
Penyiapan simplisia. Tanaman
dikumpulkan  dari  Perkebunan  Manoko Bandung  dan  telah  dilakukan  determinasi oleh  Sekolah  Ilmu  dan  Teknologi  Hayati Institut Teknologi Bandung terhadap identitas  tanaman  jarak  tintir  ini.  Cabang batang  tanaman  ini  dikumpulkan,  dirajang, disortasi,  dicuci  dan  dikeringkan.  Simplisia batang  yang  telah  diperoleh  kemudian diserbukkan  sebelum  dilakukan  pengujian selanjutnya.
Karakterisasi Simplisia. Simplisia dikarakterisasi dengan penentuan kadar air, kadar abu dan kadar sari 15
Penapisan
Fitokimia. Metabolit sekunder  yang  dimiliki  oleh  tanaman dilakukan  pemeriksaan  kualitatif  dengan metode metode penapisan fitokimia 16
Ekstraksi  dan  Fraksinasi. Simplisia diekstraksi menggunakan cara panas sinambung  alat  Soxhlet  dengan  pelarut sistem  gradien  (n-heksana,  etil  asetat, metanol).  Ekstrak  etil  asetat  kemudian dipekatkan dan dikentalkan sehingga menjadi ekstrak kental. Fraksinasi menggunakan  metode  Kromatografi  Cair Vakum (KCV) dari ekstrak etil asetat menjadi 4  fraksi.  Ekstrak  etil  asetat  dan  fraksi  etil asetat dilanjutkan untuk dilakukan pengujian antioksidan dan BSLT.
Uji  Bioaktivitas  Metode  Brine  Shrimp Lethality  Test  (BSLT). Proses  dilakukan dengan  penyiapan  ekstrak  dan  fraksi  uji dengan membuat minimal 6 konsentrasi dari setiap sampel ekstrak dan fraksi uji. Dimana masing-masing  konsentrasi  dilakukan  triplo dan ditambah kontrol pada tiap konsentrasi. Pengujian  dilakukan  selama  24  Jam terhadap  larva  yang  berumur  48  jam. Menurut  Meyer  1982  apabila  variasi konsentrasi yang dilakukan belum mencapai
50%  kematian  maka  dilakukan  pengujian kembali  dengan  variasi  konsentrasi  yang diperbesar.  Jumlah  larva  udang  yang  mati dihitung  dari  setiap  vial  untuk  seuruh konsentrasi. Kemudian menghitung mortalitas  dengan  cara  membagi  jumlah kematian  larva  udang  dengan  jumlah  larva yang diuji (total) dikali 100% 3 .
Uji  Antioksidan  Metode  Peredaman Radikal  Bebas  DPPH  (2,2-diphenyl-1- picrylhydrazyl). Masing-masing  50  mg ekstrak  dan  fraksi  batang  jarak  tintir ditimbang  dan  dilarutkan  dalam  50  mL metanol  pro  analisis  dalam  labu  ukur, kemudian  dikocok  hingga  homogen  (1000 ppm). Dibuat pengenceran dengan mengambil  5  mL  dan  dilarutkan  dalam  100 mL metanol pro analisis (larutan standar 50 ppm).  Dari  larutan  standar  tersebut  dibuat pengenceran sebanyak 6 variasi konsentrasi dari  masing  masing  ekstrak  dan  fraksi. Kemudian  mencampurkan  2  mL  larutan DPPH  dan  2  mL  sampel  baik  ekstrak ataupun fraksi, lalu dikocok hingga homogen dan diinkubasi pada suhu ruang dan kondisi gelap  selama  30  menit.  Larutan  tersebut diukur serapannya pada panjang gelombang maksimun DPPH 17 .

## HASIL
Karakterisasi Simplisia. Seluruh
parameter pengujjian telah memenuhi persyaratan simplisia yang baik berdasarkan persyaratan  yang  telah  pada  monografi acuan  baik  Materia  Medika  Indonesia ataupun Farmakope Herbal Indonesia (Tabel 1).
Penapisan  Fitokimia. Hasil  penapisan fitokimia  dari  simplisia,  ekstrak  dan  fraksi menunjukkan reaksi positif terhadap flavonoid,  polifenol,  kuinon,  monoterpen- seskuiterpen, dan steroid-triterpenoid (Tabel 2).
Uji antioksidan dan bioaktivitas fraksi etil asetat batang jarak
tintir ( Jatropha multifida L.)
Tabel 1. Karakterisasi Simplisia Batang Jarak
Tintir 11 Parameter Hasil Kadar air (%v/b) 3,02 ± 0,05 Kadar abu total (%b/b) 5,17 ± 0,54 Kadar abu larut air (%b/b) 2,04 ± 0,15 Kadar abu larut asam (%b/b) 0,36 ± 0,07 Kadar sari larut air (%b/b) 11,46 ± 0,57 Kadar sari larut etanol (%b/b) 7,56 ± 0,33 Tabel 2. Hasil Penapisan Fitokimia Golongan Simp lisia Eks EtoAc F1  F2  F3  F4 Alkaloid - - - - - - Flavonoid + + + + + + Polifenol + + - + + + Kuinon + + + + + + Saponin + - - - - - Tanin - - - - - - Mono- seskuitepen + + + + + + Steroid- Triterpenoid + +
+ + + +
Uji  Bioaktivitas  Metode  Brine  Shrimp Lethality  Test  (BSLT). Hasil  pengujian (Tabel  3)  menunjukkan  ekstrak  etil  asetat dan F4 memiliki nilai LC50 terendah dengan rentang  nilai  LC50  fraksi  sebesar  25,70- 64,43 µg/mL.

## Tabel 3. Nilai LC50 Ekstrak dan Fraksi Etil Asetat
Sampel LC50 (µg/mL) Ekstrak Etil Asetat 7,90 Fraksi 1(n-heksana 75%:etil asetat 25%) 64,43 Fraksi 2(n-heksana 50%:etil asetat 50%) 37,54 Fraksi 3(n-heksana 25%:etil asetat 75%) 41,94 Fraksi 4 (etil asetat 100%) 25,70
Uji  Antioksidan  Metode  Peredaman Radikal  Bebas  DPPH. Hasil  pengujian antioksidan  metode  peredaman  DPPH (Tabel  4)  menunjukkan  bahwa  nilai  IC50 pada  fraksi  3  dan  4  lebih  rendah dibandingkan  dengan  ekstrak  etil  asetat dengan rentang IC50 fraksi sebesar 164,91- 3759,06 µg/mL.
Tabel 4. Nilai IC50 Ekstrak dan Fraksi Etil Asetat
Sampel IC50 (µg/mL) Kuersetin 3,96±0,03 Ekstrak Etil Asetat 249,97±0,50 Fraksi  1  (n-heksana  75%:  etil asetat 25%) 3759,06± 28,76 Fraksi 2  (n-heksana 50%: etil asetat 50%) 790,50± 4,08 Fraksi  3  (n-heksana  25%:  etil asetat 75%) 167,44± 0,58 Fraksi 4 (etil asetat 100%) 164,91± 0,57 Profil Kromatogram.
Hasil profil kromatogram  dari  ekstrak  dan  fraksi  yang telah  disemprot  berbagai  penampak  bercak (Gambar  1)  memberikan  gambaran  terkait senyawa yang bertanggung jawab terhadap aktivitas  BSLT  dan  antioksidan.  Fraksi  3-4 memiliki  senyawa  flavonoid  dan  polifenol dengan  Rf  0,57,  sedangkan F1-F2  memiliki gambaran senyawa terpenoid pada Rf 0,93.

## PEMBAHASAN
Penapisan  Fitokimia. Hasil  penapisan fitokimia menunjukkan ekstrak dan fraksi etil asetat  masih  memiliki  senyawa  flavonoid dan  polifenol  walaupun  diperoleh  dari  hasil ekstraksi  menggunakan  cara  panas,  ini menunjukkan senyawa flavonoid dan polifenol yang terkandung dalam ekstrak dan fraksi tersebut bersifat termostabil. Beberapa penelitian  yang  telah  dilakukan  terdapat korelasi  atau  hubungan  senyawa  flavonoid dan  polifenol  terhadap  aktivitas  antioksidan dan  BSLT 12,13 .  Sehingga  dengan  adanya kedua  senyawa  ini  secara  kualitatif  sampel fraksi  yang  digunakan  memiliki  potensi antioksidan dan BSLT.
Ekstraksi  dan  Fraksinasi. Metode panas    digunakan    karena  mengingat simplisia  berasal  dari  batang  yang  memiliki tekstur  yang  cukup  keras  sehingga  untuk memaksimalkan penarikan metabolit
Uji antioksidan dan bioaktivitas fraksi etil asetat batang jarak
tintir ( Jatropha multifida L.)
sekunder  memerlukan  energi  yang  cukup besar yang dapat diperoleh dari pemanasan. Sistem  pelarut  gradien  dalam fraksinasi  bertujuan  untuk  mendistribusikan metabolit sekunder yang dimiliki oleh ekstrak
etil asetat berdasarkan perbedaan koefisien distribusi dari campuran pelarut (n- heksan:etil  asetat)  yang  digunakan  saat fraksinasi.
Gambar 1.   Profil  kromatogram  ekstrak  dan  fraksi  etil  asetat  (F1-F4),  fase  diam  silika  gel  GF254,  fase gerak n-heksan:etil asetat (1:1)
Keterangan: E    = Ekstrak etil asetat
F1  = Fraksi n-heksan : etil asetat (75:25)
F2  = Fraksi n-heksan : etil asetat (50:50) F3  = Fraksi n-heksan : etil asetat (25:75) F4  = Fraksi n-heksan : etil asetat (0:100)
A  = Visual B  = UV 254 nm
C   = UV 366 nm D  = Visual+FeCl3 10%
E  = Visual+Folin-Ciocalteu F  = UV 366 nm +AlCl 3
Uji  Bioaktivitas  Metode  Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT). Menurut Mayer nilai LC50  dari  seluruh  fraksi  termasuk  kedalam kategori toksisitas sedang dengan konsentrasi  10-100  µg/ml 3 kecuali  ekstrak dan  fraksi  4  yang  memiliki  sifat  sitotoksik menurut Mclaughlin dengan konsentrasi <30 µg/ml 18 .  Semakin  rendah  nilai  LC50  maka semakin toksik sifat sampel tersebut.
Mekanisme  kematian  larva  udang  akibat flavonoid diduga dikarenakan adanya interaksi  antara  gugus  hidroksi              (-OH) dengan  protein  integral  pada  membran  sel sehingga tidak dapat menghentikan transport  aktif  dari  ion  Na + dan  K + .  Hal  ini dapat menyebabkan pecahnya membran sel yang mengakibatkan kematian larva Artemia salina 19 .
Uji antioksidan dan bioaktivitas fraksi etil asetat batang jarak
tintir ( Jatropha multifida L.)
Penelitian  BSLT  terhadap  jarak  tintir sudah  banyak  dilakukan  namun  sebagian besar  berasal  dari  ekstrak  dan  fraksi  yang bersifat non polar 10,20,21 . Penemuan senyawa baru yang bersifat sitotoksik  dari tanaman ini juga  merupakan  senyawa  diterpenoid 22 . Dimana  senyawa-senyawa  tersebut  diduga mengganggu organ pencernaan larva sehingga menyebabkan kematian 23 .
Ekstrak  etil  asetat  memiliki  nilai  LC50 yang  cukup  rendah  diduga  dikarenakan adanya  potensi  sinergisme  dari  senyawa- senyawa yang dimiliki oleh batang jarak tintir serta  terdapat  dugaan  adanya  senyawa- senyawa  terpenoid  yang  masih  tertarik kedalam  pelarut  etil  asetat.  Hal  ini  terlihat dari  hasil  fraksi  yang  mengakibatkan peningkatan  nilai  LC50  4-10  kali  lipat  dari nilai  LC50  ekstrak  sehingga  dapat  dilihat potensi  toksisitas  dari  fraksi  lebih  menurun dibandingkan  dengan  ekstrak.  Fraksi  4 merupakan  fraksi  dengan  sifat  sitotoksik, dimana  terdapat  senyawa  fenolik,  kuinon dan terpenoid yang menyebabkan kematian dari larva.
Uji  Antioksidan  Metode  Peredaman Radikal Bebas DPPH. Menurut Blois fraksi 3  dan  4  merupakan  antioksidan  lemah dengan rentang konsentrasi 100-150 µg/mL 24 .
Hasil penelitian baik ekstak ataupun fraksi etil asetat tidak memiliki potensi yang cukup kuat sebagai antioksidan. Lemahnya kemampuan  antioksidan  dari  senyawa flavonoid yang dimiliki oleh ekstrak dan fraksi etil  asetat  dapat  disebabkan  jumlah  gugus hidroksi  (OH)  yang  cukup  sedikit,  tidak adanya 3-OH dan ada atau  tidaknya gugus OH pada cincin B 25 .
Pada penelitian sebelumnya pada ekstrak etil  asetat  diperoleh  IC50  56,85  µg/mL, namun  setelah  dilakukan  pengulangan
terdapat  kenaikan  nilai  sebesar  5  kali  lipat. Hal  ini  dapat  dikarenakan  sumber  tanaman yang digunakan pada penelitian ini dipanen pada  tahun  dan  musim  yang  berbeda. Musim  akan  dengan  perbedaan  keadaan lingkungan  seperti,  nilai  pH  ( Power  of hydrogen ),  intensitas  matahari,  jumlah  dan kualitas  dari  nutrisi  yang  diserap  oleh tumbuhan  akan  menyebabkan  perbedaan jumlah dan kualitas metabolit sekunder yang dihasilkan akan berbeda pula 26 –28 .

## KESIMPULAN
Fraksi  3  dan  fraksi  4  memiliki  nilai  IC 50    terendah    dan    termasuk    kedalam antioksidan lemah berada pada rentang 150- 200  µg/mL.  Fraksi  4  merupakan  senyawa dengan  nilai  LC50  terendah  dengan  25,70 µg/mL  dan  bersifat  sitotoksik  <30  µg/mL. Fraksi  3-4  memiliki  senyawa  flavonoid  dan polifenol dengan Rf 0,57. Untuk pengembangan penelitian selanjutnya dapat dilakukan  penentuan  kadar  flavonoid  dan polifenol  dari  fraksi  etil  asetat  untuk  dapat melengkapi data ilmiah dari fraksi etil asetat batang jarak tintir. Kemudian dapat dilakukan penelitian isolasi terhadap fraksi 3 dan  4  yang  diduga  merupakan  senyawa antioksidan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti mengucapkan terima kasih kepada Lembaga Penelitian Dan
Pengabdian  kepada  Masyarakat  (LPPM) Universitas  Jenderal  Achmad  Yani  atas pendanaan  penelitian  berdasarkan  SKEP Rektor No. SKEP/174/UNJANI/VIII/2018.

## DAFTAR PUSTAKA
1.   Bagchi D, Bagchi M, Stohs SJ, Das DK, Ray  SD,  Kuszynski  CA,  et  al.  Free radicals and grape seed proanthocyanidin extract: importance in human health  and disease prevention. Toxicology. 2000 Aug;148(2 –3):187–97. 2.   Jamshidi-Kia  F,  Wibowo  JP,  Elachouri
Uji antioksidan dan bioaktivitas fraksi etil asetat batang jarak
tintir ( Jatropha multifida L.)
M, Masumi R, Salehifard-Jouneghani A, Abolhassanzadeh  Z,  et  al.  Battle between plants as antioxidants with free radicals  in  human  body.  J  Herbmed Pharmacol. 2020;9(3):191 –9.
3.   Meyer  BN,  Ferrigni  NR,  Putnam  JE, Jacobsen  LB,  Nichols  DE,  McLaughlin JL. Brine Shrimp: A Convenient General Bioassay  for  Active  Plant  Constituents. Planta Med. 1982;45(5):31 –4.
4.   Hutapea  J.  Inventaris  Tanaman  Obat Indonesia. 2000.
5.   Rampadarath S, Puchooa D, Ranghoo-
Sanmukhiya M. Antimicrobial, Phytochemical and Insecticidal Properties of Jatropha Species and wild
Ricinus communis L. Found in Mauritius.
Int  J  Pharmacogn  Phytochem  Res. 2014;6(4):831 –40.
6.   Sabandar  CW.  A  Review  of  Jatropha multifida Linn . 2008;1 –3.
7.   Falodun A, Imieje V, Erharuyi O, Joy A, Langer  P,  Jacob  M,  et  al.  Isolation  of antileishmanial, antimalarial and
antimicrobial metabolites from Jatropha multifida.  Asian  Pac  J  Trop  Biomed. 2014;4(5):374 –8.
8.   Fitria  A,  Suparmi,  Upziah  DN,  Lestari SLW. Studi Studi Aktivitas dan Analisis Kandungan Senyawa Antioksidan
Batang Jatropha multifida L. J Ilm Farm. 2016;12(2):52 –9.
9.   Das  B,  Ravikanth  B,  Ravinder  K, Thirupathi  P,  Venugopal  T,  Sridhar  B. Phytochemistry Diterpenoids from
Jatropha  multifida  q.  Phytochemistry [Internet]. 2008;69(14):2639 –41.
10.  Das B, Ravikanth B, Laxminarayana K, Ramarao B, Raju TV. New Macrocyclic Diterpenoids  from  Jatropha  multifida. Chem Pharm Bull. 2009;57(3):318 –20.
11.  Syam  AK,  Insanu  M,  Wirasutisna  KR. Isolation  Of  8-Hidroxy-6  ,  7-Dimethoxy Coumarin  From  Jarak  Tintir  Stem (Jatropha  Multifida  L  .)  And  Its  Toxicity Value Using Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Tradit Med J. 2017;22(1):21 –4. 12.  Tanjung  M,  Tjahjandarie  TS,  Sentosa
MH.  Antioxidant  and  cytotoxic  agent
from  the  rhizomes  of  Kaempferia pandurata.  Asian  Pacific  J  Trop  Dis. 2013;3(5):401 –4.
13.  Nurcholis W, Priosoeryanto BP, Purwakusumah ED. Antioxidant , Cytotoxic  Activities  and  Total  Phenolic Content  of  Four  Indonesian  Medicinal Plants. 2012;2(4).
14.  Emrizal,  Fernando  A,  Yuliandari  R, Rullah K, Indrayani NR, Susanty A, et al. Cytotoxic Activities of Fractions and Two Isolated Compounds from Sirih Merah ( Indonesian red betel ),. Procedia Chem [Internet]. 2014;13:79 –84.
15.  Depkes.  Paramater  Standar  Umum Ekstrak  Tumbuhan  Obat.  Jakarta: Departemen Kesehatan RI; 2000.
16.  Farnsworth N. Biological and
Phytochemical  Screening  of  Plants.  J Pharm Sci. 1966;55(3):243 –68. 17.  Molyneux P. The Use of the Stable Free Radical Diphenylpicryl-hydrazyl (DPPH) for  Estimating  Antioxidant  Activity.
Songklanakarin J Sci
Technol.
2004;26:211 –219.
18.  McLaughlin,  L  J.  Crown  Gall  Tumours on  Potato  Discs  and  Brine  Shrimp Lethality:  Two  Simples  Bioassays  for
Higher Plant Screening and
Fractination.  Methods  Plant  Biochem.
1991;6:8 –10.
19.  Scheuer  JS.  Produk  Alami  Lautan Cetakan  Pertama.  Semarang:  IKIP Semarang Press; 1994.
20.  Shashi  B,  Satya  A,  Balaji  D,  Hari  K, Venugopal  T,  Ganesh  C,  et  al. Bioorganic  &  Medicinal  Chemistry Letters  New  bioactive  macrocyclic diterpenoids  from  Jatropha  multifida  q. Bioorg  Med  Chem  Lett  [Internet]. 2011;21(22):6808 –10.
21.  Das  B,  Ravinder  K,  Ravikanth  B, Venugopal T, Sridhar B, Usman P, et al. Multifidone: A novel cytotoxic lathyrane- type  diterpene  having  an  unusual  six- membered A ring from Jatropha multifid. Bioorg  Med  Chem  Lett  [Internet]. 2009;19(1):77 –9.
22.  Das B, Laxminarayana K, Krishnaiah M,
Uji antioksidan dan bioaktivitas fraksi etil asetat batang jarak
Desti Hermawati, Puspita Satriyani Permatasari Surasa
tintir ( Jatropha multifida L.)
Srinivas  Y.  Multidione  ,  a  novel diterpenoid  from  Jatropha  multifida. Tetrahedron Lett [Internet].
2009;50(34):4885 –7.
23.  Ngoc  TH,  Ngoc  QN,  Tran  A,  Van  T, Phung  N.  Hypolipidemic  Effect  of Extracts  from  Abelmoschus  esculentus L.  (Malvaceae)  on  Tyloxapol-Induced Hyperlipidemia  in  Mice.  J  Pharm  Sci. 2008;35(1 –4):42–6.
24.  Blois MS. Antioxidant Determinations by the  Use  of  a  Stable  Free  Radical. Nature. 1958;181:1199 –200.
25.  Heim  KE,  Tagliaferro  AR,  Bobilya  DJ. Flavonoid antioxidants: Chemistry,
metabolism and structure-activity relationships. J Nutr Biochem.
2002;13(10):572 –84.
26.  Yang  B,  Zheng  J,  Laaksonen  O, Tahvonen R, Kallio H. Effects of latitude and  weather  conditions  on  phenolic compounds  in  currant  (Ribes  spp.) cultivars. J Agric Food Chem.
2013;61(14):3517 –32. 27.  Figueiredo  AC,  Barroso  JG,  Pedro  LG, Scheffer JJC. Factors affecting secondary  metabolite  production  in plants: volatile components and essential oils. Flavour Fragr J [Internet]. 2008;23:213 –26.
28.  Januar  H,  Wikanta  T.  Kadar  Caulerpin dalam  Caulerpa  racemosa.  Jumal Penelit Perikan lndonesia. 2004;10(3):1 –6.