Indonesian Journal of Pharmaceutical Science and Technology Journal Homepage : http://jurnal.unpad.ac.id/ijpst/

## UNPAD
Isolation and Activity Assay of Secondary Metabolites of Aspergillus niger in-Habiting in Termite’s Queen Nest Macrotermes gilvus Hagen. on Enriched Media

## Yohannes Alen*, Evi Guslianti, Netty Suharti

## Fakultas Farmasi, Universitas Andalas, Sumatera Barat - Indonesia
Submitted 2 February 2018; Revised 8 May 2018; Accepted 11 May 2018; Published 11 February 2018 *Corresponding author: yohannesalen@yahoo.co.id

## Abstract
The Fungus is a group of the microorganisms that produce secondary metabolites and may be changed in different media. Secondary metabolites from Aspergillus niger in habiting in termite’s queen nest Macrotermes gilvus Hagen are disappeared gradually in artificial media. It was the reason to enrich the media with termite’s queen nest. The purpose of this research was to obtain the similar secondary metabolites of A. niger as  it  grows  in  their  habitat.  Enrichment  was  done  with  the  experimental method. It used three concentrations of nest 0.25; 0.75 and 1 g/mL Sabouraud Dextrose Agar (SDA) media. Isolation was done by chromatography method. The antibiotic activities against Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 and Enterococcus faecalis ATCC 10541 were performed by the diffusion method. Results showed that enrichment of nest 1 g/mL media gave the best growth of fungus and it obtain the similar secondary metabolites as it grows in their habitat. Three pure compounds, EG-13-31- 2, EG-13-34-9, and EG-13-44-2 were obtained. Based on physicochemical data, all compounds were terpenoid class and one of them (EG-13-34-9) contain the phenolic group. All compounds have activity against P. aeruginosa ATCC 27853 and E. faecalis ATCC 10541 the bacteriostatic category. Keywords: Aspergillus niger , diffusion method, enriched media, isolation, Macrotermes gilvus Hagen, Sabouraud Dextrose Agar (SDA).
Isolasi dan Uji Aktivitas Metabolit Sekunder Aspergillus niger  “In-Habiting” Sarang Ratu Termite Macrotermes gilvus Hagen., pada Media diperkaya

## Abstrak
Jamur adalah kelompok mikroorganisme yang menghasilkan metabolit sekunder yang mungkin berubah pada media yang berbeda. Metabolit sekunder dari Aspergillus niger yang tinggal di sarang ratu termite Macrotermes gilvus Hagen, menghilang secara bertahap pada media buatan. Itulah alasan diperkayanya media dengan sarang ratu termite. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan metabolit sekunder A. niger yang sama seperti yang dihasilkan ketika tumbuh di habitatnya. Pengayaan dilakukan dengan metode eksperimen menggunakan tiga konsentrasi sarang 0,25; 0,75 dan 1 g/mL media Sabouraud Dextrose Agar (SDA). Isolasi dilakukan dengan metode kromatografi. Uji aktivitas terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 dan Enterococcus faecalis ATCC 10541 dilakukan dengan metode difusi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pengayaan dengan sarang 1 g/ mL memberikan pertumbuhan jamur yang terbaik dan menghasilkan metabolit sekunder yang sama dengan yang dihasilkan ketika tumbuh di habitatnya. Tiga senyawa murni, EG-13-31-2, EG-13-34- 9,  dan  EG-13-44-2  berhasil  diperoleh.  Berdasarkan  data  fisikokimia,  semua  senyawa  merupakan terpenoid dan salah satunya (EG-13-34-9) mengandung fenolik. Semua senyawa memiliki aktivitas terhadap P. aeruginosa ATCC 27853 dan E. faecalis ATCC 10541 dengan kategori bakteriostatik. Kata Kunci: Aspergillus niger , isolasi, Macrotermes gilvus Hagen, media diperkaya, metode difusi, Sabouraud Dextrose Agar (SDA).

## 1.  Pendahuluan
Termite adalah salah satu jenis serangga ordo Isoptera, sangat mudah dijumpai di berbagai tipe ekosistem seperti ekosistem hutan, pertanian, perkebunan dan juga ditemukan di ekosistem permukiman atau perkotaan. 1,2,3 Ratu termite sudah lama dijadikan sebagai obat tradisional. 4,5,6 Hal ini dikarenakan ratu termite mengandung protein total 43,55%, karbohidrat total 23,44%, lemak total 23,31%, kadar abu dan kadar air 6,99% dan  1,22%7,8,9.  Masyarakat  di  Nigeria memanfaatkan termite sebagai makanan karena mengandung crude protein dan  fiber. 10 Termite hidup didalam sarang yang dibuat oleh kasta pekerja menggunakan bahan tanah 3 , ada juga jenis termite yang menggunakan bahan untuk membangun sarang seperti: pasir kuarsa, pasir halus, tanah liat dan juga kayu. 11,12 Tanah ini direkatkan dengan air liur oleh kasta pekerja 1 , air liur ini diduga penyebab tumbuhnya jamur pada sarang termite. 2 Jamur Aspergillus niger hidup pada sarang termite dan diduga melakukan simbiosis dengan ratunya. Termite memanfaatkan jamur sebagai makanan untuk membantunya dalam mensintesa selulosa dan lignin. 13 Ada beberapa jamur yang hidup pada sarang termite, contohnya Tricoderme viride , Mucor himeralis , Rhizopus nigricans , Aspergillus flavus , Alternaria sp , Penicylium verucosum and Fusarium sp pada sarang Reticulitermes lucifugus. 14 Pada penelitian terdahulu telah berhasil dilakukan penapisan 4 jamur pada sarang ratu Macrotermes gilvus Hagen., yaitu A. niger , A.  flavus , Mucor dan Cladosporium, yang  masing-masingnya  memiliki  senyawa metabolit sekunder. 15 Jamur A. niger merupakan salah satu jamur yang mengandung metabolit sekunder yang aktif sebagai antibiotik.  Senyawa  tersebut  adalah  AM- 12-22-01 yang aktif terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27835  (MIC 1000 ppm), Enterococcus faecalis ATCC 29212 (MIC 125 ppm),  dan  senyawa  AM-12-60-01  terhadap Pseudomonas aeruginosa ATCC 27835 (MIC 500 ppm), dan Enterococcus faecalis ATCC 29212 (MIC 1000 ppm). 16
Pada jamur A.  flavus diketahui  bahwa senyawa  metabolit  yang  dihasilkan  hanya terdapat pada biakan pertama dan kedua sementara untuk biakan selanjutnya tidak lagi ditemukan. 17,18 Hal ini diduga juga terjadi pada A. niger . Hilangnya metabolit sekunder jamur ini merupakan pengaruh dari perbedaan media tumbuh, sehingga senyawa yang dihasilkan juga berbeda. 19
Merujuk pada pendekatan OSMAC (One strain many compound), yaitu suatu metode dengan merubah komposisi media, kultivasi dan penambahan enzim dapat mempengaruhi senyawa  metabolit  yang  dihasilkan 20,21 , seperti pada jamur Streptomyces sp , yang menghasilkan 14 senyawa lebih banyak ketika media tumbuhnya diperkaya menggunakan CaCO 3 dan Al 2 O. 20 Sedangkan jamur Nigospora sp MA75, ketika dibiakkan pada 3 media yang berbeda menghasilkan senyawa yang berbeda pada masing-masing biakan. 22 Senyawa  metabolit  sekuder  yang diisolasi dari A. niger sampai  tahun  2009 sudah  mencapai  99  senyawa 23 diantaranya Malformin, Naphtho-r-pyrones, Aurasperone D,  Nigerazine  B,  Nigragillin,  Ochratoxin A  dan  Oxalic  acid 24 (Gambar  1).  Salah satu  senyawa  yang  memiliki  aktivitas adalah malformin, yang dapat menghambat pertumbuhan Escherichia coli , Micrococcus luteus , Staphylococcus aureus , dan Proteus mirabilis. 23 Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengisolasi  senyawa  metabolit  sekunder yang dihasilkan A. niger pada media yang diperkaya sarang ratu termite dan untuk mengetahui aktivitas antibiotik senyawa hasil isolasi.

## 2.  Metode
2.1.  Alat
Laminar
Air Flow (Biobase ® BBSV800),  Autoklaf  (All  American ® ), Magnetic  stirer,  Stirer  (Iwaki ® Stirer BS- 46),  Rotary  evaporator  (Buchi ® Rotapor R-124),  Labu  rotary,  Pipet  mikro  (Bench Mate ® Digital micro pipette), Vortex (Iwaki ® Mixer  TM  151),  Timbangan  (Mettler ® PM- 200),  Lemari  pengering  (oven)  (Kirin ® ), Kolom  kromatografi,  Bejana  Kromatografi
Lapis  Tipis  (KLT),  Plat  KLT  GF254  nm, Lampu  UV254nm,  Jarum  Ose,  Cawan  Petri (Diameter=10 cm).
2.2.  Bahan
Isolat jamur A. niger yang hidup pada sarang ratu termite M. gilvus Hagen., sarang ratu termite M. gilvus Hagen., Saboraud Dextrose  Agar  (SDA)  (Merck ® ),  Nutrient Agar  (NA)  (Merck ® ),  Metanol,  Aquadest, Etanol 70%, Etil asetat, Kloroform, Natrium sulfat anhidrat, Dimetil sulfoksida (DMSO), Pereaksi FeCl 3 , Vanilin asam sulfat, Dragendorff,  Silika  gel  P  60  (0,063-0,200 mm, catt 1.07734.1000 Merck ® ),  Silika  60 PF 254  tebal  1mm  (catt.  1.07747.100  Merck), NaCl  fisiologis,  Kloramfenikol,  2  bakteri uji  ( E. faecalis ATCC  29212, P. aeruginosa ATCC 27853).
2.3.  Prosedur Percobaan
2.3.1. Penyiapan Sampel Sarang Ratu dan Pembuatan Media Sampel sarang ratu termite M. gilvus Hagen., diambil di perkebunan sawit daerah Teluk  Kuantan,  Riau.  Sarang  ratu  termite digerus hingga halus, lalu ditimbang dengan beberapa berat yang berbeda diantaranya 0,25; 0,75 dan 1 g/mL media. Media dibuat dengan melarutkan 65 g serbuk SDA dalam 1 Liter aquadest dan dipanaskan sambil diaduk sampai terbentuk larutan yang jernih, kemudian ditambah perlahan serbuk sarang ratu termite aduk lagi sampai homogen sebelum disterilisasi.
2.3.2. Pembiakan Jamur Isolat jamur A. niger dibiakkan dengan cara menggoreskan satu Ose isolat yang diambil dari stok murni pada permukaan media  yang  diperkaya    dalam  cawan  Petri, lalu diinkubasi pada suhu kamar selama tiga minggu sampai pertumbuhan maksimal ditandai dengan permukaan petri dish sudah dipenuhi oleh spora.
2.3.3. Metode Isolasi
Jamur diektraksi dengan cara memasukkan pelarut metanol ke dalam cawan petri, diaduk perlahan supaya medium
agar  tidak  terbawa,  kemudian  dipindahkan ke  dalam  wadah  maserasi  (botol).  Jamur dimaserasi dengan metanol masing-masing 1,5 L selama 3 hari dan kemudian disaring. Gabungan  maserat  metanol  diuapkan  secara in-vacuo sehingga didapatkan ekstrak kental. Ekstrak kental kemudian difraksinasi dengan etil asetat menggunakan corong pisah, kemudian diuapkan secara in-vacuo sehingga diperoleh fraksi kental etil 1,360 gram dan fraksi  kental  sisa  0,915  gram.    Masing- masing fraksi selanjutnya diuji aktivitas antibiotiknya.
Fraksi etil asetat dikromatografi kolom dengan silika gel 60 dengan fase gerak kombinasi n-heksan, etil asetat dan metanol dengan peningkatan kepolaran Step Gradient Polarity  (SGP)  sehingga  diperoleh  beberapa sub-fraksi,  dan satu senyawa murni EG-13- 31-2 (20 mg, 1,47%). Sub-fraksi (EG-13-31- 22) dikromatografi lapis tipis preparatif silika gel 60 PF 254 didapatkan senyawa murni EG- 13-34-9 (5 mg, 0,306%). Fraksi  sisa  dikromatografi  kolom dengan silika gel 60 dengan fase gerak kombinasi butanol, butanol jenuh air dan metanol dengan peningkatan kepolaran Step Gradient  Polarity  (SGP)  sehingga  diperoleh beberapa sub-fraksi. Sub-fraksi (EG-13-43-1) dikromatografi  lapis  tipis  preparatif  dengan silika gel 60 PF 254  dan  didapatkan  senyawa EG-13-44-2 (33 mg, 3.60%).
2.3.4. Uji Aktivitas Antibiotik Uji aktivitas dilakukan dengan metode difusi agar terhadap dua bakteri uji P. aeruginosa ATCC 27853 dan E. faecalis ATCC 10541. Media Nutrien Agar sebanyak 20 g/L digunakan untuk medium pembiakan bakteri.  Kedua  bakteri  sebelum  diinokulasi dalam  media  NA,  disuspensikan  dalam NaCl 0,9%. Kekeruhan suspensi dalam NaCl 0,9%  untuk  bakteri  diukur  pada  serapan λ580nm,  T=25% 24 . Masing-masing sampel konsentrasi 200, 100 dan 50 µg/ 10 µl, dipipet dengan micro syring pada kertas cakram dan diletakkan  pada  media  agar  dalam  cawan petri yang sudah mengandung bakteri uji, diinkubasi  pada  37ᵒC  dan  diukur  zona hambatnya setelah 24 jam.

## 3.  Hasil
Secara  visual  terlihat  bahwa  pada media yang diperkaya dengan 1 g/mL sarang memberikan pertumbuhan yang palig baik, karena menghasilkan spora yang paling banyak (Gambar 2).
Hasil  pemantauan  senyawa  metabolit sekunder ekstrak metanol jamur terlihat bahwa  beberapa  senyawa  metabolit sekunder jamur yang tidak terbentuk ketika ditumbuhkan pada media SDA saja, kembali terbentuk ketika media tumbuhnya diperkaya dengan sarang ratu termite dan memiliki pola noda yang sama dengan ekstrak peneliti sebelumnya (Gambar 3).
Hasil kultivasi jamur A. niger sebanyak 50 Petri diperoleh ekstrak kental metanol sebanyak 2,285 gram (23,083%), 1,360 gram (59,518 %) fraksi kental etil asetat dan 0,915 gram (40,043 %) fraksi kental sisa.
Hasil pemisahan dan pemurnian terhadap fraksi etil asetat dengan kromatografi kolom  didapat  senyawa  murni  EG-13- 31-2  seberat  20  mg  (1,47%)  dan  dengan kromatografi    lapis  tipis  preparatif  senyawa EG-13-34-9 seberat 5 mg (0,306%).
Hasil pemisahan dan pemurnian terhadap  fraksi  sisa  dengan  kromatografi kolom dan kromatografi lapis tipis preparatif didapat senyawa EG-13-44-2 seberat 33 mg (3,60%). Masing-  masing  senyawa  dipertegas kemurniannya dengan metode Multiple Developing System (MDS),  yang  tetap menunjukkan pola KLT satu noda meskipun dilakukan  KLT  berulang  pada  satu  plat tersebut. 16,26
Hasil  identifikasi  dan  karakterisasi dengan  spektrum  UV-visibel,  senyawa  EG- 13-31-2 memberikan serapan maksimum pada panjang gelombang 223,40 nm, senyawa EG-13-34-9 pada panjang gelombang 272,00 nm, serta senyawa EG-13-44-2 pada panjang gelombang 262,20 nm (Tabel 1).
4.  Pembahasan Pada penelitian ini dilakukan isolasi dan uji aktivitas dari metabolit sekunder jamur A. niger . Jamur dibiakkan pada media yang diperkaya dengan sarang ratu termite M. gilvus Hagen. Tujuan media diperkaya adalah untuk mengkondisikan jamur agar
Gambar 1. Metabolite sekunder A.niger (1) Malformin, (2) Nigerazine B, (3) Aurasperone D, (4) Nigragillin, (5) Ochratoxin A24.
dapat tumbuh pada media yang menyerupai habitat  aslinya. Karena pada dasarnya jamur dapat mengalami perubahan ketika habitatnya berubah. 20 Penelitian dimulai dengan menentukan konsentrasi sarang  yang paling cocok untuk digunakan. Media diperkaya dengan tiga konsentrasi sarang yaitu 0,25; 0,74 dan 1 g/ mL  media.  Hasilnya  menunjukkan  bahwa penambahan 1 g/mL media memberikan pertumbuhan yang paling baik dibandingkan dengan konsentrasi lainnya. Terlihat dari jumlah spora yang dihasilkannya lebih banyak dan  memenuhi  permukaan  cawan  petri (Gambar  2).  Hal  ini  dikarenakan  semakin banyak sarang ratu yang ditambahkan maka unsur hara atau nutrisi yang didapatkan jamur untuk pertumbuhannya juga semakin banyak, sehingga pertumbuhannya bagus,
namun apabila media diperkaya dengan jumlah melebihi 1 g/mL media mengalami keretakan. 27 Berdasarkan  profil  KLT,  terlihat bahwa    metabolit  sekunder  yang  dihasilkan A. niger yang dibiakkan pada media yang diperkaya  sama  dengan  senyawa  ketika A. niger hidup dihabitatnya. Hal ini diduga karena  habitat  asli  jamur  ini  (sarang  ratu) memiliki komposisi yang dapat menunjang pembentukan metabolit sekunder jamur. Sarang ratu termite mengandung protein , lemak, abu,  Ca  dan P 7,8,9 , selain itu juga terdapat beberapa metabolit sekunder berupa fenol dan terpenoid. 28 Sementara media SDA hanya terdiri dari nutrisi untuk pertumbuhan jamur diantaranya mycological peptone 10 g, glukose 40 g dan agar 15 g dan tidak memiliki kandungan lemak dan logam seperti
Gambar 2. Profil pertumbuhan isolat jamur Apergillus niger pada media Saboraud Dextrose Agar dengan berbagai penambahan sarang.
Gambar 3 Profil KLT ektrak metanol jamur A.niger dengan etil asetat : metanol (9,5:0,5) (1) Ekstrak metanol jamur pada media SDA yang diperkaya sarang 1 g/mL media (2) Ekstrak metanol jamur pada media SDA saja (3) Ekstrak metanol jamur peneliti sebelumnya
pada sarang ratu. Sehingga ketika dilakukan kombinasi antara media SDA dengan sarang ratu memberikan pertumbuhan yang baik bagi Aspergillus niger.
Selanjutnya jamur dibiakkan sebanyak 50 petri. Jamur diinkubasi selama 3 minggu, karena jamur A. niger menghasilkan spora yang maksimum sampai 3 minggu. 15
Kemudian  jamur  diekstraksi  menggunakan metanol, Pemilihan metanol sebagai pelarut untuk maserasi karena metanol mempunyai kepolaran yang hampir sama dengan air sehingga  dapat  melarutkan  senyawa- senyawa yang bersifat polar tetapi juga dapat melarutkan senyawa yang non-polar.
Berdasarkan hasil uji aktivitas antibiotik terhadap ekstrak metanol, fraksi etil asetat dan fraksi sisa, diketahui bahwa kedua fraksi memiliki aktivitas terhadap kedua bakteri uji sehingga dilakukan isolasi terhadap kedua fraksi, yang selanjutnya juga dilakukan uji
aktivitas. Metode ini disebut juga dengan istilah Bioassay fractination guided yaitu suatu metode untuk melihat keberadaan senyawa aktif suatu sampel, mulai dari ektrak, fraksi dan senyawa murni. 29
Hasil pemisahan dan pemurnian fraksi etil  asetat  dengan  kromatografi  didapatkan senyawa  EG-13-31-2  dan  EG-13-34-9. Senyawa  EG-13-31-2  (minyak  kuning,  20 mg  (1,47%),  sukar  larut  dalam  n-heksan, larut  baik  dalam  etil  asetat  dan  metanol). Sementara  senyawa  EG-13-34-9  (amorf jingga, 5 mg (0,306%), larut dalam metanol, sukar larut dalam etil asetat dan tidak larut dalam n-heksan).
Hasil pemisahan dan pemurnian fraksi sisa didapatkan senyawa EG-13-44-2 (amorf putih, 33 mg (3,60%), larut dalam metanol dan butanol, dan tidak larut dalam etil asetat dan n-heksan). Senyawa ini merupakan senyawa polar, karena terdapat pada fraksi sisa dan
Gambar 4. Profil KLT hasil pemurnian dengan metode multiple developing system (MDS)(a) Senyawa EG-13-31-2 (¬n-heksan: etil asetat (9,5:0,5) (b) Senyawa EG-13-34-9 (n-heksan: etil asetat (3,5:6,5)(c) Senyawa EG-13-44-2 (butanol jenuh air : metanol (9,5:0,5)
Notasi Senyawa Bentuk UV λ max nm, Abs IR νmax cm-1 EG-13-1-2 Minyak, kuning 223,40 (0,472) 735;  965;  1100;  1271; 1375; 1456; 1730; 1951;  2035;  2152; 2868; 2928; 3352 EG-13-34-9 Amorf, jingga 349,60 (0,206); 272,00 (0,242) 1093;  1230;  1397; 1948; 2092; 2592; 3258 EG-13-44-2 Amorf, putih 262,20 (0,388) 638; 788; 873; 1100; 1413; 1556; 2170; 3362
MeOH

## Tabel 1. Identifikasi dan Karakterisasi senyawa murni
hanya larut dalam butanol dan metanol. Berdasarkan reaksi kimia dengan vanillin  asam  sulfat  senyawa  EG-13-31-2 bewarna  merah  sementara  senyawa  EG- 13-31-2  dan  EG-13-34-9  bewana  ungu, menandakan  ketiga  senyawa  ini  positif terpenoid.  Karena  senyawa  yang  memiliki gugus isopren akan meberikan warna merah- ungu ketika direaksikan dengan vanillin dan asam sulfat 29 . Reaksi kimia dengan FeCl3 senyawa  EG-13-34-9  memberikan  warna biru  kehitaman  yang  menandakan  senyawa ini positif fenolik.
Pengujian aktivitas antibiotik dilakukan dengan metode difusi. Metode ini dipilih karena relatif lebih sederhana dan praktis dibandingkan dengan metode dilusi dan bioautografi serta hasil yang didapatkan cukup teliti untuk mengetahui adanya aktivitas antibiotik. Prinsip kerja dari metode difusi adalah mengamati adanya daerah bening di sekeliling cakram yang menunjukkan bahwa sampel mempunyai aktivitas menghambat pertumbuhan bakteri. 30
Zona bening ini dihasilkan karena adanya aktivitas antibiotik dari senyawa yang terdapat pada cakram, senyawa aktif tersebut akan berdifusi ke media yang telah diinokulasi bakteri. Aktivitas antibiotik dikategorikan memiliki  sensitifitas  tinggi  apabila  diameter zona bening mencapai >12 mm, sedangkan sensitifitas sedang bila diameter zona bening sekitar  9-12  mm,  dan  kategori  sensitifitas rendah  bila  diameter  berkisar  antara  6-9 mm  serta  bila  resisten  apabila  6  mm  (tidak memiliki zona hambat). 31
Pada metode ini digunakan kloramfenikol 1mg/mL sebagai kontrol positif dan DMSO sebagai kontrol negatif.
Ketiga senyawa bersifat bakteriostatik, karena hanya dapat menghambat pertumbuhan
bakteri tidak membunuhnya. Hal ini terlihat dari zona bening sekeliling cakram, setelah lebih dari 24 jam tidak ada lagi zona bening. Berdasarkan pita serapan maksimum yang diperoleh dari spektrum UV terindikasi adanya ikatan rangkap berkonyugasi, karena sistem konyugasi menyerap cahaya pada panjang gelombang diatas 200 nm dan manandakan adanya kromofor yang memberikan transisi dari π ke π*32. Pemeriksaan spektrum inframerah senyawa  EG-13-31-2  menunjukkan  ada ikatan  C-O  pada    968,78  cm -1 , C-C pada 1100,66 cm -1 ,  C=C  alifatik  pada  1730,50 cm -1 dan C-H pada  2928,13 cm -1 . Senyawa EG-13-34-9  memiliki  ikatan  C-O  1093,49 cm -1 ,  C=C aromatik pada 1587,00 cm -1 dan gugus O-H pada 3258,68 cm -1 . Senyawa EG- 13-44-2 memiliki ikatan C-O dan C-C pada 873,90  cm -1 dan  ikatan  C=C  pada    1556,41 cm -1 . Pemeriksaan spektrum inframerah ini bertujuan untuk mengetahui absorbansi ikatan yang  khas  dan  spesifik  dari  gugus  fungsi senyawa  organik  dengan  membandingkan daerah sidik jarinya. 33
5.  Kesimpulan Pengayaan sarang 1 g/mL media pada SDA memberikan pengaruh terhadap pertumbuhan dan metabolit sekunder dari Aspergillus niger in-habiting sarang ratu termite. Dalam penelitian ini didapatkan tiga senyawa  murni    yaitu  EG-13-31-2,  EG-13- 34-9, EG-13-44-2.
Berdasarkan hasil reaksi kimia senyawa dengan vanillin asam sulfat, data spektrum uv-vis  dan  data  inframerah  ketiga  senyawa adalah terpenoid dan hasil reaksi kimia senyawa  EG-13-34-9  dengan  FeCl3 , data
K a d a r senyawa
(µg/disk) Diameter (mm) zona hambat mikroba uji Enterococcus faecalis ATCC 29212 Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 EG-13-1-2 EG-13-34-9 EG-13-44-2 EG-13-1-2 EG-13-34-9 EG-13-44-2 200 8±1,0 10±0,3 8±0,6 8±0,5 9±0,6 9±0,3 100 8±0,3 7±0,3 - 7±0,3 7±0,5 7±0,0 50 6±0,6 - - - 6±0,0 6±0,6

## Tabel 2. Data diameter hambat senyawa murni terhadap kedua bakteri uji
hasil spektrum uv-vis dan data inframerah, senyawa EG-13-34-9 adalah fenolik. Masing-masing  senyawa  hasil  isolasi memiliki daya hambat terhadap kedua bakteri uji  ( Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 dan Enterococcus faecalis ATCC  29212) dalam kategori bakteriostatik.
Daftar Pustaka 1.  Alen Y. Ratu Termite Macrotermes gilvus
Hagen.,  Kajian  Awal  Saintifik  Dalam Pandangan Farmasi. Abstrak Seminar Nasional  dan  Workshop  Perkembangan Terkini Sains Farmasi dan Klinik 6: 23 - 24 September 2016: Padang, Indonesia. 2016a.
2. Subekti  N,  Duryadi  D,  Nandika  D, Surjokusumo  S,  Anwar  S.  Distribution and Morphology Characteristic of Macrotermes gilvus Hagen., in The Natural  Habitat.  J  Ilmu  dan  Tek  Hasil. 2008;1(1): 27-33.
3. Robert  OE,  Frank  UO,  Agbonsalo  OU. Influence  of  Ativities  of  Termites  on Some Physical and Chemical Properties of Soil under Different Land Use Ptterns: A riview. Int J.Soil. Sci. 2007; ISSN:1816- 4978..
4.  Alen Y, Indraini RA. dan Yuliandra Y. Toksisitas Akut dan Sub – akut Freeze Drying Ratu Anai – anai ( Macrotermes gilvus  Hagen.)  terhadap  fungsi  hati mencit.  Abstrak  Seminar  Nasional  dan Workshop  Perkembangan  Terkini  Sains Farmasi dan Klinik 6; 23 - 24 September 2016; Padang, Indonesia. 2016b.
5.  Alen Y, Putri D, Damris M, Putri SFR,  Dwithania  M  dan  Suharti  N.  Uji Antibakteri Freeze Drying Ratu Rayap Macrotermes gilvus Hagen. Abstrak Seminar  Nasional  POKJANAS  TOI  ke- 52; 12-13 April 2017; Riau, Indonesia. Indonesia:  STIFAR RIAU; 2017a.
6.  Alen Y, Damris M, Putri dan Almahdy. Kajian  Praklinik  Serta  Potensi  Freeze Drying Ratu Rayap Macrotermes gilvus Hagen.,  Sebagai  Kandidat  Obat  Herbal Dalam Sediaan Kapsul. Abstrak Seminar Nasional POKJANAS TOI ke-52; 12-13 April 2017; Riau, Indonesia. Indonesia:
STIFAR RIAU; 2017b.
7. Alen Y, Suarmin O, Suci LN, Kurniawan R, Yasardi F dan Ramadhani V. Analysis Levels of Fatty Acids from Freeze- dried Termite Queen Macrotermes gilvus  Hagen.,  using  GC-MS  and Anti- hyperlipidemia Test. Abstract Paper of The Conference on Advancing the Life Science and Public Health Awrence; 10- 11 July; Nagoya, Japan. 2016c.
8. Alen Y, Suci LN, Suarmin O, Suparman A, Larrasati A, Yeni YF dan Febriyenti. Isolasi  (Penetapan  Kadar)  Metabolit Primer  Ratu  Anai-Anai  (Macrotermes gilvus)  Hagen.,  dan  Potensi  sebagai Obat Luka Bakar. Abstrak Paper dan Prosiding Seminar Nasional & Workshop Perkembangan Terkini Sains Farmasi dan Klinik  V;  6-7  November  2015;  Padang,
Indonesia. 2015a.
9.  Alen Y, Suci LN, Suarmin O dan Rivai H. Analisis of  Amino Acid  Levels of Freeze Dried Termite Queen Macrotermes gilvus Hagen. Int J  of ind Herb and drug. 2017c;2(3):1-5.
10. Alamu  OT,  Amao  AO,  Nwokedo  CI, Oke  OA  and  Lawa  IO.  Diversity  and Nutritional  Status  of  Edible  Insects in  Nigeria:  A  Review.  Int  J.  Biod  and Conver. 2013;5(4): 215-222.
11. Korb, J. Termite Mound Architecture, from Function to Construction in Biol¬ogy of Termites: A Modern Synthesis. London: Springer  Dordrecht  Heidel¬berg.  349- 374pp; 2011.
12. Sujada  N,  Sungthong  R  and  Lumyong S.  Termite  Nest  as  an Abundant  Source of Cultivable Actinobacteria for Biotechnological Purposes. Microbes Environ. 2014; 29(2).
13. Mathew GM, Ju YM, Lai CY, Mathew DC and Huang CC. Microbial Community Analysis in The Termite Gut and Fungus Comb of Odontotermes formosanus: The Implication of Bacillus as Mutualists. FEMS Microbiol Ecol. 2012;79: 504-517.
14. Wójcik A  and  B Andres.  Mildew  Fungi Found  in  Termites  (Reticulitermes lucifugus)  and  Their  Nests.  J  Ento  and Acaro Res. 2016;47: 2184.

## 15. Alen Y, Sari MP dan Putra DP.
Penapisan Jamur dari Sarang Anai-Anai (Macrotermes  gilvus  Hagen.)  dan  Uji Aktivitas Anti-Jamur. Abstrak Paper dan Prosiding Seminar Nasional & Workshop Perkembangan Terkini Sains Farmasi dan Klinik  V;  6-7  November  2015;  Padang, Indonesia. 2015b.
16. Alen Y, Melati A dan Djamaan A. Isolasi Senyawa  Antibiotika  Jamur  Aspergilus niger Simbiotik Sarang Ratu Anai- anai Macrotermes gilvus Hagen. Abstrak Seminar  Nasional  dan  Workshop Perkembangan Terkini Sains Farmasi dan  Klinik  6:  23  -  24  September  2016: Padang, Indonesia. 2016d.
17. Alen Y, Sarina G dan Djamaan A. Isolasi Senyawa  Mayor  Metabolit  Sekunder Jamur Aspergilus flavus Simbiotik Sarang Ratu Anai  – Anai  (  Macrotermes  gilvus Hagen.). Abstrak  Seminar  Nasional  dan Workshop  Perkembangan  Terkini  Sains Farmasi dan Klinik 6: 23 - 24 September 2016: Padang, Indonesia. 2016e.
18. Alen Y,  Amelia R, Rahmi OA dan Djamaan A. Profil Klt Fraksi Etil Asetat Metabolit Sekunder Isolat Jamur Aspergillus flavus Dengan Penambahan Tanah Sarang Ratu Termite  Macrotermes  gilvus  HAGEN.,
Pada Media SDA. Abstrak Seminar Nasional POKJANAS TOI ke-52; 12-13 April 2017; Riau, Indonesia. Indonesia: STIFAR RIAU; 2017d.
19. Alen  Y,  Guslianti  E  dan  Suharti  N. Uji  Aktivitas  Fraksi  Etilasetate  Ektrak Metanol Aspergilus niger, Simbiotik Sarang Ratu Termite Macrotermes gilvus Hagen., dengan Pengayaan Media SDA. Abstrak  Seminar  Nasional  POKJANAS TOI ke-52; 12-13 April 2017; Riau, Indonesia. Indonesia:  STIFAR RIAU; 2017e.
20. Bode HB, Bethe B, Hofs R and Zeeck A. Big Effects from Small Change: Possible Ways  to  Explore  Nature’s  Chemical Diversity. ChemBioChem; 2002
21. Wei H, Li Z, Li D, Gu Q and T Zhu. 2010. OSMAC  (one  strain  many  compounds) approach in the research of microbial metabolites--a  review.  Wei  Sheng  Wu
Xue Bao. 2010;50 (6).
22. Shang Z, Li XM, Li CS and Wang BG. Diverse Secondary Metabolite Produced by  Marine-Derived  Fungus  Nigrospora sp. MA75 on Various Culture Media. Chemistry & Biodiversity; 2012.
23. Nielsen  KG,  Mogensen  JMM,  Johansen TO, Larsen and Frisvad JC.  Review of Secondary  Metabolites  and  Mycotoxins from Aspergillus niger group. Anal Bioanal Chem. 2009;395:1225-1242.
24. Blumethal  C  Z.  Produktion  of  Toxic Metabolites in Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, and Trichoderma reesei:  Justification  of  Micotoxi  Testing in  Food  Grade  Enzyme  Preparations Derived From the Tree Fungi. Regulatory
Toxicology and Pharmacology.
2004;39:214-228.
25. Elidahanum  H,  Mardella  S,  Deddi  PP. Studi aktifitas Antimikroba Ekstrak Akar Calophyllum soulatrii Burm.F. J Mat dan Peng Alam. 2004; 13(2): 95-99.
26. Handayani D, Handayani C, Krisyanella. Isolasi Senyawa Kimia Utama dari Fraksi Aktif Sitotoksik Spon Laut Petrosia sp (MN05). J Far. Higea. 2012; 4(1):24-30.
27. Alen Y, Amelia R, Djamaan A. Profil KLT dan Uji Aktivitas Metabolit Sekunder Aspergillus  flavus  “In-Habiting”  Sarang Ratu Termite Macrotermes gilvus pada Media Diperkaya. Ind J of Phar Sci and Tech. 2018; 5(1):31-42.
28. Alen Y, Afnillia F, Rustini. 2017c. Uji Antibakteri Metabolit Sekunder Ekstrak  Metanol  sarang  Ratu  Termite Macrotermes gilvus Hagen. Abstrak Seminar  Nasional  POKJANAS  TOI  ke- 52; 12-13 April 2017; Riau, Indonesia. Indonesia:  STIFAR RIAU; 2017f.
29. Syafiudin   A.  Senyawa Alam  Metabolit Sekunder. Yogyakarta: The Publish Publisher; 2014
30. Hudzicki  J.  Kirby-Bauer  Disk  Diffusion Suspectibility Test Protocol. American Society For Microbiology; 2009.
31. Arora  DS  and  Bhardwaj.  Antibacterial Activity of Some Medicinal Plants. Geo. Bios.1997;(24):127-131.
32. Gandjar I, Abdul G. Analisis obat secara
spektrofotometri  dan  kromatografi. Yogyakarta: Pustaka Pelajar; 2013 33. Dachriyanus D. Analisis Struktur Senyawa
Organik Secara Spektrofotometri. Padang: Andalas University Press; 2004