## KEMAMPUAN PENGHAMBATAN RADIKAL BEBAS  EKSTRAK METANOL DAUN SEPAT( Mitragynaspeciosa )
Submitted : 12 Januari 2020 Edited : 15 Juni 2020 Accepted : 25 Juni 2020 Rakhmadhan Niah * , Novia Ariani
Akademi Farmasi ISFI Banjarmasin Email : nia.rachma91@gmail.com

## ABSTRACT
Leaves Sepat (Mitragynaspeciosa) is a plant of Kalimantan. These plants are often used traditionally  to  reduce  blood  sugar  and  antibacterial.  The  effectiveness  is  related  with  strong antioxidant  activity  in  flavonoid  compounds.  Flavonoid  compounds  work  through  the mechanism of capturing free radicals, reducing oxidative stress. The purpose of this study was to measure the percentage of free radical inhibition in the hand sanitizer of methanol extract of leaves  Sepat  (Mitragynaspeciosa).  Sample  extraction  by  maceration  method  using  methanol. Qualitative  analysis  of  chemical  compounds  with  certain  eluents  using  Thin  Layer Chromatography (TLC). The antioxidant activity test using the DPPH immersion method (1,1- Diphenyl-2-picryl  Hidrazil)  measured  absorption  at  a  wavelength  of  517  nm.  The  largest percentage of free radical inhibition was obtained in a hand sanitizer concentration of 80 ppm, which is 51.07 ppm.
Keywords : Leaves Sepat, DPPH, HandSanitizer

## PENDAHULUAN
Radikal  bebas  yang  tinggi  didalam tubuh  dapat  menyebabkan  kerusakan  fungsi ginjal  dan  organ  lain.  Penyakit  diabetes, stres oksidatif yang diperantarai
hiperglikemia  memainkan  peran  penting dalam  perkembangan  penyakit (1) .  Radikal bebas bersifat tidak stabil dan sangat  reaktif yakni  cenderung  bereaksi  dengan  molekul lainnya  untuk  mencapai  kestabilan.  Radikal dengan  kereaktifan  yang  tinggi  ini  dapat menimbulkan  senyawa  yang  tidak  normal dan  memulai  reaksi  berantai  yang  dapat merusak  sel-sel  penting  dalam  tubuh (2) . Radikal bebas dapat diatasi dengan
penggunaan antioksidan (3) . Antioksidan merupakan senyawa antioksidan yang terdapat  secara  alami  dalam  tubuh  sebagai mekanisme pertahanan tubuh normal maupun  berasal  dari  asupan  luar  tubuh. Salah  satu  sumber  senyawa  antioksidan
adalah tanaman dengan  kandungan senyawa flavonoid  yang  tinggi . Salah  satu  tanaman yang mengandung senyawa flavonoid adalah Daun Sepat (Mitragyna Speciosa) (4) .
Daun sepat (Mitragynaspeciosa ) merupakan  tumbuhan  yang  banyak  tumbuh di  Kalimantan  Selatan.  Secara  empiris  daun sepat  digunakan  sebagai  antioksidan  yang pada tumbuhannya terdapat senyawa flavonoid (5) . Berdasarkan
penelitian sebelumnya,  diketahui  IC 50 ekstrak  metanol daun sepat adalah 34.70 μg/mL (6) . Selain itu, ekstrak  daun  sepat  juga  berpotensi  sebagai antibakteri,  terutama  bakteri Staphylococcus aureus . Konsentrasi ekstrak daun sepat yang digunakan  pada  zona  hambat  dan  zona bunuh bakteri Staphylococcus aureus adalah  24-30% (7,8) .  Ekstrak  daun  sepat diduga  berpotensi  dibuat  sediaan hand sanitizer.
Sediaan tersebut mudah diaplikasikan  dan  dalam  dipasarkan  dengan
harga  terjangkau.  Namun  sediaan hand sanitizer pada umumnya menyebabkan  kulit kering dan iritasi. Salah satu cara mengatasi hal  tersebut  adalah  membuktikan  bahwa ekstrak  daun  sepat  yang  dibuat hand sanitizer memiliki aktivitas antioksidan. Hal tersebut dikarenakan, sediaan yang memiliki aktivitas antioksidan dapat melindungi kulit.

## METODE PENELITIAN Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini  antara  lain  blender  (Philips  HR  2115 Blender  tango  Plastik),  vorteks  (lokal), rotary  evaporator  (Heidolph  Instrument Laborota  4000),  spektrofotometer  UV-Vis (U-2800 Hitachi), timbangan analitik (Ohaus), dan alat gelas (Pyrex). Bahan yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  daun sepat  daerah  Barabai  Kalimantan  Selatan. Bahan  lain  yang  digunakan  yaitu  metanol p.a  (Merck),  kuarsetin,  dan  1,1-diphenyl- 2picrylhydrazil(DPPH) (Sigmaaldrich).

## Penyiapan Simplisia
Tahap  pendahuluan  adalah  dengan melakukan  pengolahan  simplisia.  Simplisia tersebut  dihaluskan  hingga  lolos  mesh  60.
Serbuk kering ditimbang dengan menghitung  rendemen  simplisia.  Serbuk simplisia diuji secara
analisis kualitatif/Skrining  Fitokimia (9) .  Serbuk  daun kemudian  diekstraksi  dengan  menggunakan metode  maserasi  dengan  pelarut  metanol. Ekstrak  kental  yang  diperoleh  dihitung persentase rendemennya (10) . Identifikasi kandungan kimia Flavonoid (kuersetin) Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
Buat  fase  gerak  n-heksan  :  etil asetat  (6:4).  Untuk  fase  diam,  potong silica gel dengan ukuran 10x6cm. Elusikan  fase  gerak  hingga  jenuh.  Ambil 10  mg  ekstrak  metanol  daun  sepat  dan larutkan  dalam  1  ml  metanol.  Totolkan
ekstrak  dan  kuersetin  dengan  bantuan pipa  kapiler  di  titik  yang  berbeda. Elusikan  dengan  fase  gerak  yang  sudah jenuh. Setelah mencapai garis maksimum, keringkan  lalu  lihat  hasil  pada  UV  254 nm  dan  366  nm.  Hitung  nilai  Rf  pada masing-masing titik.

## Uji  Aktivitas  Antioksidan  Sediaan
Hand Sanitezer DPPH ( 1,1-diphenyl 2 picrylhydrazyl )  dibuat  larutan  stok  80 ppm.  Buat  konsentrasi  sampel  sediaan hand  sanitizer 20  ppm,  40  ppm,  60  ppm dan  80  ppm.  Masing-masing  sampel  uji diambil  2  mL  dan  dimasukkan  kedalam tabung  reaksi.  Tambahkan  larutan  DPPH sebanyak  2  mL,  kemudian  dikocok  dan diinkubasi  selama  ±15  menit.  Hitung serapan  menggunakan  spektrometer  UV- VIS  dengan  panjang  gelombang  517 nm (11) .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Antioksidan  merupakan  senyawa yang  dapat  mengatasi  kerusakan  akibat radikal  bebas  yang  dapat  berperan mencegah  berbagai  macam  penyakit.
Penelitian ini dilakukan dengan melakukan determinasi tumbuhan dilakukan di Laboratorium FMIPA Universitas  Lambung  Mangkurat,  hasil determinasi  menunjukan  species  dari daun kayu sepat adalah Mitragynaspeciosa . Daun sepat dikeringkan  menggunakan  oven  dengan suhu yang konstan. Pengeringan
dilakukan  untuk  mencegah  terjadinya reaksi  enzimatis  (aktivitas  mikroba)  dan mencegah  tumbuhnya  jamur  sehingga dapat disimpan lebih lama dan lebih tidak mudah rusak sehingga komposisi kimianya  tidak  mengalami  perubahan. Serbuk  daun  kayu  sepat  yang  didapat sebanyak  300  gram.  Susut  pengeringan yang  diperoleh  dari  pengolahan  simplisia
tersebut adalah 0,67 %. Susut
pengeringan  tersebut  menjadi  indikator tentang  besarnya  senyawa  yang  hilang pada proses pengeringan.  Adapun  ekstrak kental  yang  diperoleh  adalah  ekstrak metanol daun sepat sebesar 17,00%.
Skrining  fitokimia  profil  senyawa yang  dilakukan  meliputi  uji  alkaloid, antrakinon,  polifenol,  tanin  dan  uji saponin.  Digunakan  uji  fitokimia  karena dapat  mendeteksi  komponen  bioaktif yang  tidak  terbatas  hanya  pada  metabolit sekunder  saja,  tetapi  terhadap  metabolit primer yang memberikan aktivitas
biologis  fungsional,  seperti  protein  dan peptida (12) . Pengujian polifenol menunjukkan hasil positif dengan
terbentuknya  perubahan  warna  ekstrak menjadi  warna  hijau  kehitaman  setelah penambahan  FeCl 3 ,  warna  positif  pada pengujian  karena  terbentuknya  kompleks Fe 3+ dengan  fenol (13) .  Analisis  kuantitatif juga  dilakukan  menggunakan  KLT,  untuk menganalisis  kandungan  flavonoid.  Uji kualitatif  menggunakan  parameter  Rf ( retardation  factor ).  Fase  diam  yang digunakan  pada  percobaan  ini  adalah
silica  gel ,  karena  sedikit  bersifat  asam. Sedangkan  fase  gerak  yang  digunakan adalah  n-heksan    dan  etil  asetat  yang cenderung  bersifat  nonpolar.  Plat  silica gel  yang  digunakan  pada  KLT  ini sebelumnya  dipanaskan  terlebih  dahulu dalam oven dengan suhu 100 ℃ selama 15 menit yang bertujuan untuk menghilangkan  kadar  air  yang  terdapat pada  plat.  Larutan  pembanding  yang digunakan  adalah  senyawa  kuersetin 0,1%.  Kuersetin  adalah  salah  satu  zat aktif  di  kelas  flavonoid  yang  secara biologis amat kuat. Eluen yang memberikan hasil pemisahan terbaik pada KLT  yaitu  n-heksana  :  etil  asetat  dengan perbandingan  6  :  4.  Hasil  elusi  dapat dilihat pada gambar 1.
Pada  titik  noda  ekstrak  metanol daun  sepat  (  no  2)  dan  Sediaan hand sanitizer (no  3)  dan  titik  noda  kuarsetin (no  1)  menghasilkan  nilai  yang  sama, yaitu  0,02875.  Walaupun  dari  gambar terlihat  no  2  dan  3  lebih  tinggi,  hal tersebut dikarenakan jarak awal penotolan yang  berbeda,  sehingga  fisik  gambar terlihat  berbeda.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  metanol  daun  sepat mengandung kuersetin. Penelitian dilanjutkan  dengan  membuat  sediaan hand  sanitizer dengan  formulasi  seperti pada tabel 1 (13) .
Formulasi  sediaan  tersebut  sudah dievaluasi  dari  penelitian  sebelumnya (13) . Oleh  karena  itu,  penelitian  dilanjutkan dengan menguji kemampuan
penghambatan  radikal  bebas  sediaan tersebut.  Absorbansi  sampel  pada  spektro UV-Vis  dengan  panjang  gelombang  517 nm dengan volume sampel yang digunakan  0,5  mL  dan  DPPH  sebanyak 3,5 mL (14) .
Tabel 1. Komposisi Sediaan Hand Sanitizer Ekstrak Metanol Daun Sepat
Komposisi F1 F 2 F 3 F 4 Ekstrak Metanol Sepat 20 ppm 40 ppm 60 ppm 80 ppm CMC-Na 3 g 3 g 3 g 3 g Propilen Glikol 20 mL 20 mL 20 mL 20 mL Metil Paraben 100 mg 100 mg 100 mg 100 mg Propil Paraben 50 mg 50 mg 50 mg 50 mg Aquadest Ad 100 mL Ad 100 mL Ad 100 mL Ad 100 mL
Tabel 2. Hasil Persentasi Hambat Radikal Bebas Sediaan Hand Sanitizer Ekstrak Daun Sepat Sampel Absorbansi % Inhibisi DPPH 0,932 nm 0 Hand Sanitizer 20 ppm 1,027 nm - Hand Sanitizer 40 ppm 0,799 nm 14,27 Hand Sanitizer 60 ppm 0,632 nm 32,19 Hand Sanitizer 80 ppm 0,456 nm 51,07 Sedangkan hasil pengukuran absorbansi Hand Sanitizer dapat dilihat pada tabel 2. Hasil penelitian tabel 2
menunjukkan  semakin  besar  konsentrasi yang  digunakan,  maka  persentasi  hambat radikal bebas juga akan semakin besar. Hasil tersebut  menunjukan hand  sanitizer 80  ppm memiliki  %  Inhibisi  51,07  %,  yang  berarti dengan  konsentrasi  sekitar  80  ppm,  sudah dapat ditemukan nilai IC 50 . Namun konsentrasi yang digunakan pada pembuatan sediaan  tersebut,  lebih  besar  dari  pada konsentrasi  pada  penelitian  sebelumnya (6) .
Hal  ini  diduga  komposisi  sediaan  seperti CMC-Na dan Propilen glikol memiliki peran dalam  mengurangi  kemampuan  antioksidan sediaan hand sanitizer .
Penelitian  ini  menunjukkan  dengan konsentrasi ekstrak metanol sepat sebesar 80 ppm  atau  0,08  g/L  atau  0,8  %  dapat memberikan  aktivitas  antioksidan.  Hal tersebut diduga ketika sediaan hand sanitizer ekstrak  metanol  daun  sepat  dibuat  sebagai sediaan  antibakteri  dengan  konsentrasi  20-
30% (7,8) memiliki potensi sediaan yang dapat dikembangkan menjadi hand sanitizer berdaya  antibakteri  sekaligus  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  dapat  melindungi kulit.    Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  terkait  potensi antibakteri hand  sanitizer dan  antioksidan pada konsentrasi 20-30%.

## SIMPULAN
Sediaan Hand Sanitizer Ekstrak Metanol  Daun  Sepat  memiliki  persentase hambat  radikal  bebas  sebesar  51,07  %  pada sediaan hand sanitizer 80 ppm.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Ganesan,  P.,  Chandini,  S.,  &  Bhaskar, N.  Antioxidant  Properties  Of  Methanol Extract  And  Its  Solvent  Fractions Obtained  From  Selected  Indian  Red Seaweeds.  Bioresource  Technology. 2018, 99, 2717–2723.
2. Badarinath,  A.,  Rao,  K.,  Chetty,  C.,
Ramkanth, S., Rajan, T., & Gnanaprakash, K. A Review on In-vitro
Antioxidant  Methods :  Comparisons, Correlations, and Considerations. International  Journal  of  PharmTech Research. 2010, 1276–1285. 3. Mandal,  S.,  Yadav,  S.,  &  Nema,  R. Antioxidants.  A  Review  Journal  of Chemical and Pharmaceutical Research. 2009, 102–104. 4. Tristantini,  D.,  Ismawati,  A.,  Pradana, B. T., & Gabriel, J. Pengujian Aktivitas Antioksidan Menggunakan Metode DPPH  pada  Daun  Tanjung  ( Mimusops elengi L ). Universitas Indonesia. 2016,
2.
5. Adhayanti, I., Abdullah, T., & Romantika,  R.  Uji  Kandungan  Total Polifenol  Dan  Flavonoid  Ekstrak  Etil Asetat  Kulit  Pisang  Raja.  Musa Paradisiaca Var. Sapientum. 2018,14(1), 39–45. 6. Niah,  R.,  &  Kumalasari,  E.  Profil Senyawa  Dan  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak Daun Sepat ( Mitragynaspeciosa ) Dan Daun Dadangkak  ( Hydrolea  Spinosa L.). Jurnal  Ilmiah  Ibnu  Sina.  2019,  4(2), 391-399.
7. Husnani, H., Suhaimi, S., Puspasari, H.,
&  Sari,  Y.  Uji  Daya  Hambat  Ekstrak Kental Daun Kratom ( Mitragyna Speciosa Korth)  Terhadap  Bakteri Staphylococcus Aureus Sebagai Penyebab Jerawat. Medical Sains. 2020, 4(2), 95-100. 8. Munawwarah, L., Ramadhan, A. M., & Ardana,  M.  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak Daun Sapat ( Mitragyna speciosa Korth.)  Terhadap  Bakteri
Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus .  In Proceeding  of  Mulawarman
Pharmaceuticals  Conferences.  2016,
Vol. 4, pp. 180-186. 9. Ariani,  N.,  &  Niah,  R.  Uji  Daya Hambat  Ekstrak  Kulit  Buah  Pisang Kepok ( Musa paradisiaca forma typica )  Terhadap Shigella  dysenteriae Dan Salmonella  typhi .  Jurnal  Ilmiah Ibnu Sina. 2018, 3 (2), 312-317.
10. Niah,  R.  Uji  Aktivitas  Ekstrak  Etanol
96%  Daun  Karamunting  ( Melastoma Malabathricum L.) Terhadap Salmonella Typhi . Jurnal Insan Farmasi Indonesia. 2018, 1 (1), 113-121.
11. Febrianti,  D.  R.,  &  Niah,  R.  Analisis Kandungan  Flavonoid  Dan  Aktivitas
Antihiperurisemia Ekstrak Etanol Daun
Sirsak  ( Anona  muricata L.)  Pada Mencit  Jantan  Secara  In  Vivo.  Jurnal
Ilmiah Ibnu Sina. 2018, 3(2), 304311.
12. Agustin, D. Pengaruh Berbagai Konsentrasi  Ekstrak  Bunga  Belimbing Wuluh  ( Averrhoa  Bilimbi )  Terhadap Zona Hambat Pertumbuhan Streptococcus Pyogenes Sebagai Sumber  Belajar  Biologi,  Doctoral Dissertation, University Of Muhammadiyah Malang. 2018. 13. Gunawan,  Tiffany.  Optimasi  Formula Hand Sanitizer Ekstrak Buah Mengkudu  ( Morinda  citrifolia L.)
Dengan  Gelling  Agent  CMC-Na  dan Humektan  Propilen  Glikol.  Skripsi,
Fakultas  Farmasi,  Universitas  Sanata Dharma. 2017. 14. Phongpaichit, S., Nikom, J., Rungjindamai, N., Sakayaroj, J., Hutadilok Towatana, N., et al. Biological  Activities  of  Extracts  From Endophytic Fungi Isolated From Garcinia Plant. FEMS. 2007.