## ANALISIS KLT BIOAUTOGRAFI EKSTRAK KULIT BATANG TANAMAN KAYU JAWA
( Lannea coromandelica ) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus DAN Shigella dysentriae
[TLC Bioautography Analysis of Extract Javanese Wood Stem Bark ( Lannea coromandelica ) to Staphylococcus aureus and Shigella dysentriae Bacteria]
Yumita 1 , Abd. Rahman Razak 1* , Indriani 1 , Syaiful Bahri 1
1) Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, Palu Jl. Soekarno Hatta Km.9, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu, Telp. 0451- 422611
*)Coresponding author: arrazak@gmail.com
Diterima 2 Mei 2019, Disetujui 22 Juni 2019

## ABSTRACT
Java wood plants (Lannea coromandelica) is a traditional medicinal plant which is still often used by people to treat internal and external wounds. The study aims to determine the effect of solvent polarity in Javanese stem bark extract on Staphylococcus aureus and Shigella dysenteriae, and to identify the compound  groups  which  had  an  antibacterial  activity  against  Staphylococcus  aureus  and  Shigella dysenteriae  with  KLT-Bioautography  analysis.  The  results  show  that  the  n-hexane  extract  of Javanese  bark  is  not  showing  an  antibacterial  activity  against  Staphylococcus  aureus  and  Shigella dysenteriae, whereas the ethyl acetate extract and methanol of Javanese bark show an antibacterial activity  against  Staphylococcus  aureus  and  Shigella  dysenteriae.  The  results  of  the  TLC- Bioautography test show negative results for Staphylococcus aureus and Shigella dysenteriae.
Keywords : Lannea  coromandelica,  antibacterial,  Staphylococcus  aureus,  Shigella  dysentriae,  KLT- Bioautografi

## ABSTRAK
Tanaman  kayu  jawa  ( Lannea  coromandelica )  merupakan  salah  satu  tanaman  obat  tradisional  yang masih sering  digunakan masyarakat untuk mengobati  luka dalam maupun luar.  Tujuan penelitian ini untuk  mengetahui  pengaruh  kepolaran  pelarut  ekstrak  kulit  batang  kayu  jawa  terhadap Staphylococcus aureus dan Shigella dysenteriae dan mengetahui golongan senyawa apa saja yang mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus dan Shigella  dysenteriae dengan analisis  KLT-Bioautografi.  Hasil  penelitian  menunjukan  bahwa  ekstrak      n-heksan  kulit  batang  kayu jawa  yang  tidak  mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap Staphylococcus  aureus dan Shigella dysenteriae sedangkan  ekstrak  etil  asetat  dan  metanol  kulit  batang  kayu  jawa  mempunyai  aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dan Shigella dysenteriae . Hasil uji KLT-Bioautografi tidak menunjukan hasil yang positif terhadap Staphylococcus aureus dan Shigella dysenteriae .
Kata kunci : Lannea  coromandelica,  antibakteri,  Staphylococcus  aureus,  Shigella  dysentriae,  KLT- Bioautografi.

## LATAR BELAKANG
Tanaman kayu jawa ( Lannea coromandelica )  merupakan  salah  satu tanaman  obat  tradisional  yang  masih sering  digunakan  masyarakat  karena memiliki  berbagai  khasiat  antara  lain digunakan  untuk  mengobati  luka  dalam maupun  luar  seperti  diare,  mual  dan muntah (Rahayu et al. , 2006).
Berdasarkan skrining fitokimia, kulit batang  tanaman  kayu  jawa  ( Lannea coromandelica )  dilaporkan  mengandung senyawa  golongan  karbohidrat,  steroid, alkaloid,  terpenoid,  saponin,  tannin,  dan flavonoid (Manik et al. , 2013).
Beberapa  pengujian  pada  tanaman ini  di  sudah  dilakukan  salah  satunya  uji antibakteri  menggunakan  ekstrak  etanol. Hasil uji aktivitas antibakteri yang dilakukan  yaitu  bakteri Staphylococcus aureus menunjukan aktivitas pada konsentrasi  500  ppm  dengan  diameter zona hambat 7.1 mm. Bakteri Escherichia coli menunjukan aktivitas pada konsentrasi  500  ppm,  250  ppm  dan  125 ppm  dengan  diameter  zona  hambat berturut-turut  8.5  mm,  7.8  mm,  dan  7.0 mm. Bakteri Helicobacter pylori menunjukan  aktivitas  pada  konsentrasi 500  ppm  dan  250  ppm  dengan  diameter zona hambat 8.2 mm dan 7.3 mm. Bakteri Pseudomonas  aeruginosa menunjukan aktivatas  pada  konsentrasi  500  ppm  dan 250  ppm  dengan  diameter  zona  hambat 8.5  mm  dan  6.8  mm  (Rahmadani,  2015). Berdasarkan  hasil  penelitian  sebelumnya bahwa,  fraksi  n-heksan,  diklorometana,
dan  etil  asetat  kulit  batang  dan  daun tanaman  kayu  jawa  memiliki  aktivitas antimikroba  dan  trombolitik  (Manik et  al., 2013),  selain  itu  ekstrak  metanol  kulit batang  kayu  jawa  memiliki  aktivitas antidiare yang disebabkan mikroorganisme  patogen  (Rajib et  al. , 2013).
Meskipun  beberapa  penelitian  telah melaporkan  golongan  senyawa  dalam kayu,  namun  demikian  belum  diketahui bagaimana  distribusi  dan  prospektifitas senyawa yang terdapat dalam kulit batang kayu  jawa.  Oleh  karena  itu  diperlukan pengujian  yang  menghasilkan  data  lebih akurat  melalui  analisis  KLT-Bioautografi ekstrak  kulit  batang  tanaman  kayu  jawa ( Lannea  coromandelica )  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Shigella dysenteriae .

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Peralatan
Bahan  yang  digunakan  adalah  kulit kayu jawa,  n-heksan, etil asetat, metanol, klorofrom, aquadest, Nacl fisologis, media Natrium  agar  (NA),  spiritus,  DMSO, kloromfenikol, pereaksi penyemprot, aluminium foil, plat KLT, kertas saring dan tissu.
Alat-alat  yang  digunakan  meliputi neraca  analitik,  lumpang,  alu,  ayakan  60 mesh,  corong  Buchner, vacuum  rotary evaporator , jangka sorong, botol semprot,
sendok  zat,  pipet  tetes,  oven,  autoklaf (Hirayama), incubator (POL-EKO Aparatura), ose, lampu bunsen,
seperangkat  alat  KLT,  lampu  UV 254 nm dan  UV 366 nm, Laminar Air  Flow (Esco Class II BSC).

## Prosedur Penelitian
Ekstraksi Kulit
batang kayu jawa dikeringkan,  dipotong-potong  kecil  dan dihaluskan.  Kemudian  diayak  dengan ayakan  60  mesh  untuk  memperoleh serbuk  kulit  kayu  jawa.  Serbuk  kulit  kayu jawa sebanyak 100 gram direndam dalam pelarut  N-heksan  sebanyak  1000  mL selama  3  x  24  jam  sesekali  diaduk. Selanjutnya ekstrak yang diperoleh disaring  menggunakan  corong Buchner dan  diuapkan  pelarutnya  menggunakan vacuum rotary evaporator sampai diperoleh  ekstrak  kental.  Perlakuan  yang sama  juga  dilakukan  pada  pelarut    etil asetat dan metanol.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri dengan
Metode Sumur Difusi (Darmawati, 2009)
Alat-alat  kaca  yang  digunakan dicuci  bersih  dan  dibungkus  kertas dimasukkan dalam oven pada suhu 175°C selama 90-120 menit (pemanasan kering). Alat yang telah disterilkan dapat langsung dipakai  atau  disimpan  dalam  keadaan tertutup rapat. Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan dengan menggunakan metode difusi sumur.
Media  Nutrien  Agar  (NA)  sebanyak  25  ml dicampurkan  dengan  500  µL  suspense bakteri uji sesuai perlakuan ( Staphylococcus  aureus dan Shigella dysenteriae ),  kemudian  dihomogenkan
lalu  dituang  kedalam  cawan  petri  steril dan dibiarkan sampai memadat. Selanjutnya dibuat 3 sumur yang berdiamater  ±6  mm  menggunakan  alat pelubang. Pada
masing-masing lubang/sumur diisi dengan control negatif , control positif berupa kloromfenikol, ekstrak  n-heksan,  ekstrak  etil  asetat  dan ekstrak  metanol,  setiap  sumur  diisi ekstrak  dan  control  sebanyak  100  µL. Kemudian  diingkubasi  selama  24  jam pada suhu 37°C.
Pengujian  KLT-Bioautografi    (Rozalia, 2013).
Uji KLT bioautografi dilakukan untuk mendeteksi senyawa aktif yang mempunyai  aktifitas  sebagai  antibakteri. Pada  plat  KLT    ditotolkan  ekstrak  n- heksan,  ekstrak  etil  asetat  dan  ekstrak methanol. Kemudian dielusi dalam bejana dengan  fase  gerak  berbagai  sistem campuran  eluen.  Setelah  itu  Plat  KLT hasil  delusi  ditempelkan  pada  media  NA (Natrium  agar) yang  telah  diinokulasi dengan  1000  μl  bakteri.  Kemudian  plat KLT didiamkan selama 30 menit, lalu plat KLT  diangkat.  Setelah  itu  amati  jika  ada bercak  pada  kromatogram    yang  ditandai dengan  adanya  zona  jernih  yang  tidak ditumbuhi mikroba. selanjutnya noda yang membentuk  zona  hambat  pada  lempeng KLT  disemprot  dengan  pereaksi  semprot untuk  menentukan  jenis  senyawa  yang menghambat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil Ekstraksi
Hasil  ekstrak  pekat  yang  diperoleh pada  simplisa  kayu  jawa  untuk  ekstrak N-heksan  sebanyak  1,20  gram,  ekstrak etil  asetat  sebanyak  4,87  gram,  dan ekstrak  metanol  sebanyak  27,57  gram. Rendeman  yang  diperoleh  untuk  ekstrak n-heksan  sebanyak  1,20%,  etil  asetat
sebanyak  4,87%,  dan  metanol  sebanyak 27,57%.

## Hasil Uji Aktivitas Antibakteri
Uji  ekstrak  N-heksan,  etil  asetat, dan  metanol  kulit  batang  kayu  jawa terhadap Staphylococcus  aureus dan Shigella  dysentriae dilakukan  dengan difusi agar.
Tabel 1. Hasil diameter zona hambat ekstrak n-heksan, etil asetat, dan metanol
Ulangan Diameter zona hambat (mm) Staphylococcus aureus Shigella dysentriae n-heksan Etil asetat Metanol n-heksan Etil asetat Metanol I 0 12.25 9.03 0 12.25 9.03 II 0 12.75 12.13 0 10.15 10.35 III 0 14.33 12.85 0 11.75 11.03 Rata-rata 0 13.11 11.34 0 11.38 10.14
Berdasarkan  hasil  penelitian  diatas dapat  diketahui  bahwa  ekstrak  n-heksan tidak  memiliki  aktivitas  antibakteri  hal  ini ditandai dengan tidak adanya zona bening pada  ekstrak  tersebut.  Ekstrak  etil  asetat dan  ekstrak  metanol  kulit  batang  k a yu jawa (Lannea  coromandelica) memiliki aktivitas antibakteri terhadap bakteri
Staphylococcus  aureus dan Shigella dysentriae yang  ditandai  dengan  adanya zona  bening.  Hal  ini  sesuai  dengan Parekh et  al .  (2005)  yang  menemukan bahwa,  aktivitas  antibakteri  dipengaruhi oleh  polaritas  senyawa  yang  diekstraksi oleh masing-masing pelarut.
Menurut  Davis  dan  Stout  (1971), berdasarkan  zona  bening  yang  terbentuk daya  hambat  dikelompokkan  menjadi  4
kelompok  yaitu  sangat  kuat  bila  zona hambat >20 mm, kuat 10-20 mm, sedang 5-10 mm dan lemah <5 mm. Berdasarkan literatur  diatas  maka  senyawa  antibakteri dalam  ekstrak  etil  asetat  dan  metanol termasuk  kelompok  antibakteri  dengan daya hambat kuat terhadap kedua bakteri uji.

## Hasil  Uji  Kromatografi  Lapis  Tipis (KLT)
Pemisahan  senyawa  ekstrak  etil asetat  kulit  batang  kkayu  jawa  ( Lannea coromandelica )
secara
KLT
menggunakan campuran eluen n-heksan : etil  asetat  (7:3),  dan  pemisahan  senyawa ekstrak  metanol  kulit  batang  kkayu  jawa ( Lannea  coromandelica )  secara  KLT menggunakan campuran eluen klorofrom :
metanol (8:2) dari hasil penotolan kemudian dilihat bercaknya dengan menggunakan  lampu  UV 254  nm ,  lampu UV 366  nm ,  penampak  bercak  FeCl 3 ,  H 2 SO 4 dan Dragendroff.
Pada  penyemprotan  ekstrak  etil asetat  dengan  H 2 SO 4 10%  noda  pada nomor 2 memberikan warna orange hal ini menunjukan  adanya  senyawa  saponin Kemudian dilakukan penyemprotan ekstrak  etil  asetat  dengan  FeCl 3 noda nomor  5  dan  6  memberikan  warna  hitam hal  ini  menunjukan  adanya  kandungan flavonoid hal ini sesuai dengan
Nugrahaningtyas (2005)
yang menyatakan bila senyawa flavonoid direaksikan  dengan  pereaksi  FeCl 3 akan menghasilkan warna hitam/abu-abu.
Selanjutnya  penyemprotan  ekstrak  etil asetat  dengan  dragendroff  noda  pada nomor 1 memberikan warna coklat . H al ini menandakan
adanya
kandungan golongan  senyawa  alkaloid  hal  ini  sesuai dengan Wagner (1996) yang menyatakan bahwa senyawa alkaloid setelah direaksikan  dengan  dragendrof  akan berwarna coklat pada sinar tampak.
Penyemprotan ekstrak metanol dengan H 2 SO 4 10% dan dragendroff tidak memberikan  warna  sama  sekali  dan penyemprotan ekstrak metanol kulit batang kayu jawa ( Lannea coromandelica )  yang  disemprot  dengan FeCl 3 menberikan  warna  hitam  hal  ini menandakan adanya kandungan senyawa tanin,  hal  ini  sesuai  dengan  penelitian lainnya  dimana  senyawa  tanin  akan
memberikan warna hitam apabila disemprotkan  dengan  FeCl 3 (Banu  dan Nagarajan, 2014).

## Hasil Uji KLT-Bioautografi
Bioautografi  adalah  suatu  metode pendektesian  untuk  menemukan  suatu senyawa antimikroba yang belum teridentifikasi  dengan  cara  melokalisir aktivitas  antimikroba  tersebut  pada  suatu kromatogram hasil kromatografi lapis tipis (KLT).
Hasil  KLT-Bioautografi  ekstrak  etil asetat  dan  ekstrak  metanol  kulit  batang kayu  jawa  tidak  memberikan  hasil  yang positif,  hal  ini  disebabkan  karena  ekstrak pada  lempeng  kromatogram  yang  terlalu sedikit (konsentrasi senyawa yang sedikit) sehingga  senyawa  aktif  dalam  ekstrak tidak  cukup  kuat  untuk  menghasilkan hambatan.

## KESIMPULAN
Ekstrak etil asetat dan metanol kulit batang kayu jawa ( Lannea coromandelica )  dengan  konsentrasi  4% menghasilkan  aktivitas  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dengan  diameter zona hambat rata-rata yaitu 13,11mm dan 11,34 mm dan bakteri Shigella dysentriae dengan  diameter  zona  hambat  rata-rata yaitu 11,38 mm dan 10,14 mm, sedengkan  ekstrak  n-heksan  kulit  batang kayu  jawa  dengan  konsentrasi  4%  tidak mempunyai  aktivitas  antibakteri.  Hasil KLT-Bioautografi  ekstrak  etil  asetat  dan ekstrak  metanol  kulit  batang  kayu  jawa tidak  memberikan  hasil  yang  positif
sehingga perlu dilakukan penelitian lanjutan.

## DAFTAR PUSTAKA
Banu, R. H., Nagarajan, N. 2014. TLC and HPTLC fingerprinting of leaf extracts of  Wedelia  chinensis (Osbeck) Merrill).  Journal  of  Pharmacognosy and Phytochemistry , 2(6): 29-33.
Darmawati,  S.  2009.  Keanekaragaman Genetik Salmonella  Typhi. Jurnal Kesehatan , 2(1) : 28 – 32.
Davis dan Stout. 1971. Disc plate method of  microbiological  antibiotic  essay.
Journal Of Microbiology 22(4).
Manik,  M.A. Wahid,  S.M.A.  Islam,  A.  Pal,
K.T.  Ahmad.  2013. A Comparative
Study
of the Antioxidant, Antimicrobial and Thrombolytic Activity  of  the  Bark  and  Leaves  of Lannea coromandelica (Anacardiaceae) . International Journal of
Pharamaceutical
Sciences  and  Research, 4(7):2609- 2614.
Nugrahaningtyas, K, D., Sabirin, M., Tutik,
D,  W.,  2005,  Isolasi  dan  Identifikasi
Senyawa Flavonoid dalam Rimpang Temu  Ireng (Curcuma  aeruginosa Roxb.) Biofarmasi, 3 (1): 32-38 .
Parekh,  J.,  Darshana,  T.,  Jadeja,  R.  and
Sumitra,  C.  2005.  Efficacy  of
Aqueous  and  Methanol  Extracts  of
Some  Medicinal  Plants  for  Potential Antibacterial Activity. Turk J Biol , 29: 203-210.
Rahayu,  Sunarti,  S.  Diah,  P.  Suhardjono. 2006. Pemanfaatan Tumbuhan Obat Secara Tradisional  oleh Masyarakat
Lokal  di  Pulau  Wawonii,  Sulawesi
Tenggara. Jurnal Biodiversitas, 7(3).
Rahmadani, F. 2015. Uji Aktivitas Antibakteri  dari  Ekstrak  Etanol  96%
Kulit  Batang  Kayu  Jawa (Lannea coromandelica) Terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Helicobacter
pylori,
Pseudomonas  aeruginosa . Skripsi.
Jakarta:  Fakultas  Kedokteran  dan Ilmu Kesehatan.
Rajib  Majumder,  Md.  Safkath  Ibne    Jami, Md.  Efte  Kharul  Alam  and  Md. Badrul  Alam. 2013. Antidiarrheal
Activity  of Lannea  coromandelica
Linn . Bark Extract. American- Eurasian Journal of Scientific
Research, 8(3):128-134.
Rozalia,  Maria. 2013. Aktivitas Antibakteri dan Bioautografi Ekstrak Etanol Kulit
Kayu  Akway (Drymis  piperita  Hook. F.)
Terhadap Staphylococcus
epidermis dan Salmonella  thypi. Skripsi. Surakarta: Universitas Muhammadiyah Surakarta.