Mekanisme Serangan Patogen Lodoh pada Semai Pinus ( Pinus merkusii ) 1
Attack Mechanism of Damping-off Pathogens of Pinus merkusii Seedling
Achmad 2* , S. Hadi 2*** , S. Harran 3** , E. Gumbira Sa’id 4 , B. Satiawiharja 5 dan M. Kosim Kardin 6**
1) Bagian dari disertasi penulis pertama, 2) Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan IPB, 3) Departemen Biologi, Fakultas MIPA IPB, 4) Departemen Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian IPB, 5) Departemen Ilmu dan Teknologi Pangan,  Fakultas Teknologi Pertanian IPB, 6) BB-Biogen, Badan Litbang Pertanian Kementerian Pertanian
*) Penulis untuk korespondensi, alamat: Departemen Silvikultur Fakutas Kehutanan IPB, Jl Lingkar Akademik Kampus IPB Darmaga PO Box 168 Bogor 16680, telp. 0251-8626806, faks. 0251-8626886, mobile 08129415399, e-mail depsilvik@ipb.ac.id, achmadrm@yahoo.com
**) Purnabakti ***) Almarhum

## ABSTRACT
The  study  aims  to  determine  the  attack  period  of  damping-off  pathogen,  i.e. F.  oxysporum and R.  solani ,  on P. merkusii , as well as studying the role of cellulolytic and pectolitic enzymes in the attack mechanism of both damping-off pathogens. Attack period determined by inoculated the two  pathogenic  fungi  to  seed  or  some  age  level  of P.  merkusii seedlings.  Cellulolytic  enzyme  activity,  represented by  cellulase-C1,  was  determined  by  spectrophotometric  techniques. Pectolitik enzyme activity, represented by polygalacturonase, determined by iodometric techniques and growth of the two pathogenic fungi in the medium containing pectin. The results showed that the attack period of damping-off pathogen, i.e. F. oxysporum and R. Solani , on P. merkusii seedling started from seed to 7-week old seedling, the 8-week old seedlings were  free  from damping-off.  Both  pathogens  showed  cellulase-C1  activity,  and the enzyme  activity  in F.  oxysporum is higher  than  that  in R.  solani .  Iodometric  technique  could  not  detect  the  polygalacturonase  activity  of  two  fungal pathogens, presumably because P. merkusii stem seedling substrate  which used in testing was too few. Nevertheless the two  pathogenic fungi  grew  more  intensively  in  medium containing  pectin  shown  by  higher mycelial  dry  weight than in media  without  pectin,  and  it  shows  the  that  the  fungi  capable  to  degrade  pectin  using  pectolytic  enzymes  and  use  the carbon produced for growth.
Keywords: seedling death percentagee, cellulase-C1, polygalacturonase

## PENDAHULUAN
Lodoh  merupakan  salah  satu  penyakit  utama  di pesemaian  tanaman  kehutanan  maupun  pertanian. Penyakit  ini  disebabkan  oleh  sekelompok  fungi penghuni tanah yang merupakan parasit fakultatif  tanpa kekhususan  dengan  inangnya  (Hartley  1921).  Hifa patogen  menyebar  melalui  tanah,  dan  ianteraksi  terjadi melalui  penetrasi  secara  langsung  pada  epidermis  yang masih  lemah  yang  melindungi  jaringan  sukulen  inang (Boyce 1961).
Pinus  merkusii merupakan  salah  satu  jenis  pohon asli  Indonesia.  Pohon  ini  menghasilkan  kayu  untuk bahan  bangunan,  bahan  korek  api,  terpentin  dan gondorukem,  serta  dimanfaatkan  sebagai  bahan  baku pembuatan  pulp  untuk  menghasilkan  kertas.  Oleh karena  itu P.  merkusii menjadi  salah  satu  jenis  pohon yang disarankan ditanam pada  Hutan Tanaman Industri (HTI).  Pada  HTI,  ditanam  pohon  sejenis  pada  skala yang  luas,  oleh  karena  itu  diperlukan  tersedianya  bibit dalam  jumlah  yang  cukup  agar  keberlangsungan  HTI terjaga.  Terkait  dengan  penyediaan  semai,  serangan patogen  lodoh  dapat  merupakan  salah  satu  diantara beberapa  penyebab  utama  berkurangnya  jumlah  semai. Intensitas serangan lodoh di pesemaian sangat bervariasi dan dapat mencapai 100% (Suharti et al . 1991).
Rhizoctonia sp.  dan Fusarium sp.  merupakan  jenis- jenis  fungi  patogen  lodoh  yang  dilaporkan  menyerang P.  merkusii di  pesemaian  (Sujud  1983;  Achmad et  al . 1994). Fusarium sp.  termasuk  famili  Tuberculariaceae dan  merupakan  fungi  penghuni  tanah  yang  terdiri  atas lebih  dari  40  spesies  (Booth  1971),  dan  yang diketahui menyebabkan  lodoh  pada  semai P.  merkusii adalah F. solani , F.  moniliforme , F.  ventricosum ,  dan F. acuminatum dengan  daya  patogenisitas  yang  bervariasi (Roth et  al .  1947).  Rhizoctonia  termasuk  ‘form-ordo’ Agonomycetales ‘form-klas’ Deuteromycetes (Alexopoulus  dan  Mims  1979).  Satu  diantara  spesies- spesies  yang  sering  menimbulkan  penyakit  lodoh  pada P. merkusii adalah R. solani . Virulensi ras-ras R. solani terhadap P.  merkusii beragam  (Roth  dan  Riker  1943). Rhizoctonia memiliki mekanisme variabilitas yang khas, yaitu anastomosis (Ogoshi 1987).
Patogen  menyerang  inang  dengan  melibatkan beberapa  mekanisme.  Untuk  kasus  penyakit  lodoh, Agrios (1988) mengemukakan tahap-tahap infeksi untuk tipe  lodoh  benih.  Fungi  masuk  ke  dalam  benih  dengan mempenetrasi langsung melalui kulit benih yang lembab atau  melalui  rekahan  pada  permukaan  kulit,  serta selanjutnya mempenetrasi embrio atau jaringan kecambah  benih  melalui  tekanan  mekanik  dan penghancuran  oleh  enzim.  Pektinase  dilepaskan  fungi

## JURNAL SILVIKULTUR TROPIKA
Vol. 03 No. 01 April 2012, Hal. 57 – 64 ISSN: 2086-8227
58 Achmad et al.
untuk  menghancurkan  lamela  tengah  yang  menjadi pengikat  antar  sel  inang  sehingga  jaringan  termaserasi. Invasi  dan  penghancuran  jaringan  lebih  lanjut  terjadi akibat pertumbuhan miselia fungi di antara dan melalui sel-sel.  Hifa  yang  tumbuh  menembus  dinding  sel diameternya mengecil sehingga menjadi separoh ukuran normal. Protease mendegradasi  protoplas jaringan yang diinvasi,  sedangkan  kekuatan  fisik  dan kadang  selulase merusak dinding sel.
Pada  penelitian  ini  dipelajari  periode  serangan patogen  lodoh F.  oxysporum dan R.  solani terhadap P. merkusii .  Di  samping  itu  dipelajari  pula  peran  enzim selulolitik dan pektolitik  dalam mekanisme serangan P. merkusii oleh kedua jenis patogen lodoh.

## BAHAN DAN METODE
Percobaan  terdiri  atas  pengujian  periode  serangan patogen  lodoh  pada  benih  dan  semai P.  merkusii serta penentuan  aktivitas  selulolitik  dan  pektolitik  fungi patogen.  Pengujian  periode  serangan  patogen  lodoh dilakukan  di  rumah  plastik  di  lingkungan  PAU Bioteknologi  IPB,  sedangkan  penentuan  aktivitas selulolitik  dan  pektolitik  fungi  patogen  dilakukan  di laboratorium Biokimia FMIPA IPB. Penyiapan inokulum  fungi  patogen  dilakukan  di  Laboratorium Perlindungan  Hutan  Fahutan  IPB.  Benih  pinus  yang digunakan dalam penelitian diperoleh dari KPH Cianjur - Jawa Barat.
Isolat  patogen  lodoh F.  oxysporum dan R.  solani yang  digunakan  merupakan  isolat  dengan  tingkat patogenisitas tertinggi yang dipilih dari hasil pemurnian dan  pengujian  isolat-isolat  yang  diperoleh  dari  isolasi dari benih dan dari pangkal semai pinus terserang lodoh. Isolat F.  solani memiliki  karakteristik  sebagai  berikut (Gambar 1): koloni berwarna keunguan, miselium udara seperti  kapas,  awalnya  berwarna  putih  kemudian menjadi  keunguan,  memiliki  hifa  ø  2-4  μm,  mikro konidia  berukuran  4-9  x  2-3  μm,  makro  konidia berukuran 20-29 x 4-5 μm, konidia hialin, klamidospora berukuran  ø  5-10  μm.  Fungi  memiliki  percabangan konidiofor  pendek  yang  merupakan  karakter  khas F. oxysporum (Samson et  al .  1984).  Isolat R.  solani memiliki karakteristik khas yaitu memiliki percabangan hifa  tegak  lurus  (Gambar  2).  Karakterisrik  tersebut sesuai  dengan  yang  dikemukakan  oleh  Ogoshi  (1975) dan Sneh et al. (1991).
Benih P.  merkusii yang  akan  digunakan  direndam dalam  air  destilata  selama  24  jam.  Benih  yang tenggelam  kemudian  disterilkan  permukaannya  dengan merendam dalam larutan NaOCl 0.5% selama 10 menit, dan  selanjutnya  benih  dibilas  beberapa  kali  dengan  air steril.  Benih  kemudian  dikering-anginkan  dengan meletakkannya  dalam  wadah  yang  sudah  dialasi  kertas saring  steril,  selanjutnya  benih  ditabur  pada  bak pengecambah  berisi  media  tanam  steril.  Semai dipelihara  dengan  penyiraman  tiap  sore  hari  hingga mencapai umur yang diperlukan untuk perlakuan.
Fungi  patogen  dibiakkan  pada  media  PDA  ( Potato Dextrose Agar). Untuk membuat inokulum, 3 potongan koloni  patogen  ditanam  pada  media  CMS  ( Corn  Meal Sand )  yang  terdiri  atas  campuran  pasir,  hancuran  biji
jagung  dan air (96:4:20 g/g/ml) dalam labu Erlenmeyer volume  250  ml  yang  diotoklaf  (121 o C,  1  atmosfer) selama 60 menit. Potongan koloni patogen diambil dari biakan  murni  pada  media  PDA  berumur  5  hari menggunakan bor gabus ( cork borer ) dengan diameter 6 mm.  Labu  beserta  isinya  diinkubasi  pada  suhu  kamar selama  2  minggu.  Untuk  kontrol  media  patogen,  labu Erlenmeyer  berisi  jenis  media  campuran  yang  sama tanpa  diinokulasi  fungi  didiamkan  pada  suhu  kamar selama dua minggu.
Pengujian  periode  serangan  patogen  lodoh  disusun dengan  rancangan  petak  terbagi  dengan  rancangan lingkungan acak lengkap 2 ulangan. Satuan percobaannya  berupa  20  semai  yang  masing-masing ditanam  pada  wadah  tanam  terpisah,  yaitu  berupa politub yang memuat 100 g media tanam. Sebagai petak utama adalah inikulasi fungi patogen yeng terdiri atas 5 taraf, yaitu kontrol,  ditambah  media patogen, diinokulasi F  oxysporum ,  diinokulasi R.  solani ,  serta diinokulasi F  oxysporum dan R.  solani .  Sebagai  anak petak adalah umur semai  pinus dengan 6 taraf,  yaitu  0, 2,  4,  6,  7  dan  8  minggu,;  umur  0  menunjukkan  bahwa bahan pertanamannya adalah benih.
Inokulasi fungi patogen dilakukan dengan mencampur  2.5  g  inokulum  patogen  dengan  100  g media  tanam  dalam  politub,  kemudian  ditambah  10 ml air  steril,  selanjutnya  wadah  tanam  ditutup  dengan plastik  dan  diinkubasi  selama  4  hari.  Untuk  perlakuan ‘ditambah media patogen’, maka ke dalam media dalam politub  ditambahkan  2.5  g  media  patogen,  kemudian diinkubasi  selama  4  hari.  Pada  semua  perlakuan kemudian  dilakukan  penanaman  benih  atau  semai P. merkusii sesuai  taraf  perlakuannya.  Semai  diambil  dari bak  pengecambah,  dan  sebelum  ditanam  perakarannya disemprot lebih dahulu dengan air steril. Seluruh wadah tanam  kemudian  ditempatkan  di  bawah  rumah  plastik yang  dinaungi  paranet  70%  dan  dilakukan  penyiraman setiap  hari  pada  sore  hari.  Pengamatan  dilakukan terhadap semai yang mati atau benih yang tidak tumbuh pada 14 hari setelah inokulasi.
Aktivitas enzim patogen yang diuji adalah selulolitik dan pektolitik. Aktivitas enzim selulolitik  diwakili  oleh aktivitas  FP-ase  (‘Filter  Paper’-ase)  atau  selulase-Cl, pengukurannya dilakukan menggunakan teknik spektrofotometri,  dan  senyawa  standar  yang  digunakan adalah glukosa. Aktivitas enzim pektolitik diwakili oleh aktivitas  poligalakturonase,  pengukurannya  dilakukan dengan  teknik  iodometri,  dan  senyawa  standar  yang digunakan adalah asam galakturonat monohidrat.
Enzim diekstrak  dari  isolat  yang  ditumbuhkan  pada beberapa  macam  ‘media’.  Media  pertama  adalah  PDA dalam  cawan  petri  yang  ditanami  fungi  patogen  dan diinkubasi selama tujuh hari, dan sebagai kontrol adalah media  PDA  yang  tidak  ditanami  fungi  patogen.  Media ke  dua  adalah  CMS  steril  dalam  tabung  reaksi  yang diinokulasi  dengan  satu  potongan  koloni  fungi  patogen ø  6  mm  dan  diinkubasi  selama  tujuh  hari,  dan  sebagai kontrol adalah media CMS yang tidak diinokulasi fungi patogen. Media ke tiga adalah CMS steril dalam tabung reaksi  yang  di  atasnya  ditempatkan  0.1  gram  potongan batang  semai P.  merkusii  steril (panjang  potongan  ±  1 cm)  berumur  2  dan  8  minggu,  kemudian  media diinokulasi  dengan  satu  potongan  koloni  fungi  patogen
ø  6  mm  dan  selanjutnya  diinkubasi  selama  tujuh  hari. Kontrol  disiapkan  dengan  prosedur  sama,  hanya  saja tidak  dilakukan  inokulasi  fungi  patogen.  Sterilisasi permukaan  potongan  batang  semai P.  merkusii dilakukan  dengan  cara  merendamnya  dalam  HgCl 2 0.5 %  selama  3  menit  kemudian  dibilas  dua  kali  dengan merendam dalam air steril selama 15 menit.
Uji  lain  untuk  mendeteksi  produksi  pektinase  fungi patogen  dilakukan  dengan  menumbuhkan  kedua  jenis fungi  tersebut  pada  media  pektin  (Atlas  1993)  dan diinkubasi  selama  10  hari.  Produksi  pektinase  ditandai antara  lain  oleh  berubahnya  warna  media  dari  hijau kecoklatan menjadi merah.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Inokulasi  fungi  patogen lodoh nyata  mengakibatkan persentase semai atau benih mati yang tinggi dibanding kontrol  maupun  ditambah  media  patogen  (Gambar  3). Hasil  pengamatan  memperlihatkan  bahwa  tipe  lodoh yang terjadi mencakup lodoh benih, lodoh dalam tanah, dan  lodoh  pangkal  batang.  Lodoh  benih  ditunjukkan oleh  membusuknya  benih  sehingga  tidak  berkecambah. Lodoh dalam tanah ditunjukkan oleh benih yang mampu berkecambah  tetapi  membusuk  sebelum  hipokotil mencapai  permukaan  tanah.  Untuk  lodoh  pangkal batang,  patogen  menyerang  semai  yang  masih  sukulen dengan  gejala  khas  berupa  terjadinya  penggentingan hipokotil  akibat  maserasi  jaringan  diikuti  pembusukan hipokotil dekat permukaan tanah secara cepat, sehingga semai yang masih segar menjadi rebah.
Serangan  lodoh  terberat  dan  tercepat  terjadi  pada semai umur 2 minggu. Pada umur tersebut, inokulasi R. solani mengakibatkan  100%  semai  mati  pada  4  hari setelah  semai  ditanam.  Semai  mati  100%  untuk  umur yang  sama  akibat  dinokulasi F.  oxysporum atau  kedua jenis  patogen  berturut-turut  terjadi  pada  8  dan  6  hari setelah  semai  ditanam.  Pada  semai  umur  4  minggu, serangan R.  solani dan  kedua  jenis  patogen  masih mengakibatkan  100%  semai  mati,  sedangkan  inokulasi F.  oxysporum saja  mengakibatkan  semai  mati  80%. Pada semai umur 6 minggu, persentase semai mati nyata lebih rendah dibanding semai dengan umur lebih muda; semai  mati  tertinggi  adalah  55.5%  akibat  inokulasi R. solani .  Untuk  semai  umur  7  minggu,  semai  mati tertinggi  adalah 15% akibat inokulasi R.  solani , sedang semai  umur  8 minggu  telah  bebas  dari kematian akibat serangan lodoh (Gambar 3).
Terdeteksinya  glukosa  setelah  filtrat  biakan  fungi direaksikan  dengan  kertas  saring  sebagai  sumber selulosa,  menunjukkan  dihasilkannya  selulase-C1  oleh fungi  bersangkutan.  Hancuran  biji  jagung  pada  media CMS  maupun  potongan  batang  semai P.  merkusii mengandung  selulosa. R.  solani maupun F.  oxysporum menghasilkan  selulase-C1  bila  dibiakkan  pada  media yang  mengandung  selulosa  sebagai  sumber  karbon, yaitu  CMS  dan  CMS  yang  ditambah  potongan  batang semai P. merkusii , yang ditunjukkan oleh dihasilkannya glukosa (Tabel 1)
Sumber karbon pada PDA bukan selulosa melainkan gula  sederhana.  Filtrat  kontrol  PDA  menyebabkan terdeteksinya  glukosa  dengan  kadar  paling  tinggi dibanding  perlakuan  lainnya,  yaitu  mencapai  0.889 mg/ml.  Filtrat F.  oxysporum dan R.  solani yang dibiakkan  pada  PDA  menyebabkan  terdeteksinya glukosa  berturut-turut  sebesar  0.035  dan  0.143  mg/ml (Tabel 1).
Tanpa fungi yang dapat mendegradasi selulosa pada media,  kadar  glukosa  yang  ditimbulkan  oleh  filtrat kontrol CMS dan kontrol CMS yang ditambah potongan batang  semai P.  merkusii umur  dua  atau  delapan minggu  sangat  rendah,  yaitu  berturut-turut  hanya sebesar  0.013,  0.013,  dan  0.015  mg/ml.  Glukosa  yang terdeteksi  tersebut  dapat  dipastikan  berasal  dari  gula sederhana yang terdapat pada hancuran biji jagung pada CMS.  Dari  ketiga  macam  media  tersebut,  CMS  tanpa potongan  batang  semai  dapat  dipastikan  mengandung selulosa teredah, yaitu  yang terdapat pada hancuran biji jagung,  dan  kandungan  selulosa  media  makin meningkat    berturut-turut  oleh  penambahan  potongan batang semai P. merkusii umur dua minggu dan delapan minggu.
Kadar  glukosa  yang  ditimbulkan  oleh  filtrat  biakan F.  oxysporum pada  CMS  dan  CMS  yang  ditambah potongan  batang  semai P.  merkusii umur  dua  minggu atau delapan minggu berturut-turut sebesar 0.171, 0.213, dan 0.323 mg/ml. Kadar glukosa yang ditumbulkan oleh filtrat  biakan R.  solani pada  urutan  media  yang  sama juga  meningkat,  yaitu  sebesar  0.078,  0.157,  0.202 mg/ml.  Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa  aktivitas selulase-C1 kedua jenis fungi patogen makin meningkat dengan semakin banyaknya selulosa yang terdapat pada media.  Produksi  glukosa F.  oxysporum nyata  lebih tinggi  dibanding R.  solani pada  semua  media  yang mengandung  selulosa  sebagai  sumber  karbon.  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  aktivitas  selulase-C1 F. oxysporum lebih tinggi dibanding R. solani .
Berlainan  dengan  aktivitas  selulase-C1  kedua  jenis fungi  patogen  yang  dapat  dideteksi  pada  semua  media yang  mengandung  selulosa,  aktivitas  poligalakturonase ternyata  tidak  dapat  dideteksi  berdasarkan  teknik iodometri yang telah dilakukan. Hal tersebut ditunjukkan  oleh  kadar  asam  galakturonat  monohidrat yang  ditimbulkan  oleh  filtrat  biakan  fungi  pada  semua media  maupun  kontrolnya  yang  tidak  berbeda  nyata (Tabel 1).
Meskipun  aktivitas  poligalakturonase  kedua  fungi patogen  tidak  berhasil  dideteksi  dengan  teknik iodometri yang diterapkan, pembiakan kedua jenis fungi patogen pada medium pektin mengindikasikan dihasikannya  pektinase.  Pertumbuhan kedua  jenis fungi pada  medium  yang  mengandung  pektin  lebih  intensif dibanding pertumbuhan pada medium tanpa pektin, dan hal  tersebut  ditunjukkan  oleh  bobot  kering  kedua  jenis fungi  patogen  yang  nyata  lebih  tinggi  pada  medium berpektin  dibanding  kontrol  (Gambar  4). R.  solani tumbuh lebih intensif pada medium berpektin dibanding F.  oxysporum .  Bobot  kering R.  solani pada  medium berpektin  mencapai  24.5  kali  lipat  dibanding  bobot kering  pada  kontrol,  sedangkan F.  oxysporum hanya mencapai 3.2 kali lipat.

## Pembahasan
Patogen  lodoh,  dalam  hal  ini  adalah F.  oxysporum dan R.  solani ,  dapat  menyerang P.  merkusii dari  benih hingga  semai  berumur  tujuh  minggu.  Rentang  periode serangan ini  lebih  panjang  dari  yang  dilaporkan  Hodge dan  Luchle  (1959),  yaitu  hingga  semai  berumur  empat atau lima minggu.
Kedua  jenis  fungi  patogen,  baik  sendiri-sendiri maupun  bersama-sama,  sangat  intensif  menyerang semai muda. Serangan pada semai berumur dua minggu sampai mengakibatkan  semua  semai mati,  sedang  pada semai berumur empat minggu masih dapat mengakibatkan semua semai mati. Pesentase semai mati akibat serangan patogen lodoh makin berkurang dengan makin  tuanya  semai.  Hal  tersebut  menunjukan  bahwa makin  tua  semai,  ketahanannya  terhadap  serangan patogen londoh makin meningkat.
Boyce  (1961)  mengaitkan  serangan patogen  dengan kondisi jaringan semai yang masih sukulen. Perkembangan  batang  semai P.  merkusii pada  yang dipelajari  penelitian  ini  menunjukan  bahwa  pada  umur dua  minggu,  semua  bagian  batang  masih  berupa jaringan  sukulen.  Sifat  sukulen  tersebut  makin berkurang  dengan  bertambah  tuanya  semai.  Batang semai  umur  lima  minggu  mulai  berkayu,  dan  makin bertambah  umur  semai,  batangnya  makin  keras. Pengamatan pada semai menunjukan bahwa pengkerasan bagian-bagian batang tidak terjadi serentak.  Batang  dekat  permukaan  tanah  adalah  yang paling  lambat  mengeras.  Bagian  batang  semai  umur lima  minggu  yang  dekat  dengan  leher  akar  (dekat permukaan  tanah) masih agak  sukulen,  sehingga  masih dapat diinfeksi patogen lodoh.
Agrios  (1988)  menguraikan  proses  infeksi  penyakit londoh tipe londoh benih yang melibatkan enzim-enzim pendegradasi  lamela  tengah  dan  dinding  sel,  meliputi pektinase,  selulase,  dan  protease.  Pada  londoh  pangkal batang, terjadi gejala maserasi dan pembusukan jaringan terinfeksi  secara  cepat.  Bateman  dan  Basham  (1976) menyatakan  bahwa  gejala  demikian  memperlihatkan terlibatnya  aktivitas enzim-enzim patogen pendegradasi lamela tengah dan dinding sel inang, yaitu pektinase dan selulase, dalam patogenesis.
Pengujian  aktivitas  selulase F.  oxysporum dan R. solani dilakukan dengan membiakkan kedua jenis fungi patogen pada tiga macam media, yaitu PDA, CMS, dan CMs  ditambah  potongan  batang  semai  pinus.  PDA merupakan  media  media  kaya  dengan  gula  sederhana sebagai  sumber  karbon.  Tingginya  kadar  glukosa  yang ditimbulkan  oleh  filtrat  media  PDA  kontrol  semata- semata  berasal  dari  gula  sederhana  yang  terdapat  pada media  tersebut.  Dari  filtrat  biakan  kedua  jenis  patogen pada  PDA,  terdeteksi  glukosa  dengan  kadar  yang rendah. Hal tersebut menunjukan bahwa gula sederhana pada PDA dikonsumsi oleh kedua jenis fungi.
Penambahan  filtrat  kedua  jenis  fungi  yang dibiakkkan  pada  media  CMS  pada  kertas  saring, menyebabkan  terdeteksinya  glukosa.  Hal  tersebut menunjukkan  aktivitas  selulase-Cl  kedua  jenis  fungi patogen  untuk  mendegradasi  selulosa  sebagai  sumber karbon yang terdapat pada hancuran biji jagung. Dengan
demikian selulase-Cl dihasilkan secara adatif oleh kedua jenis fungi patogen.
Sifat  adaptif  produksi  selulase-Cl  dikuatkan  oleh terdeteksinya glukosa yang diakibatkan oleh filtrat fungi yang dibiakkan pada media CMS yang diberi potongan batang  semai P.  merkusii .  Dibanding  pada  media  CMS saja, aktivitas selulase-Cl  kedua  jenis fungi pada media terakhir nyata  lebih  besar.  Hal ini  menunjukkan  bahwa potongan  batang  semai P.  merkusii menjadi  substrat selulosa  tambahan  di  samping  selulosa  yang  terdapat pada hancuran biji jagung. Kontrol media CMS dengan batang  semai P.  merkusii akan  tetapi  tidak  ditanami fungi  patogen  tidak  menunjukkan  adanya  aktivitas selulase-Cl. Hal tersebut karena glukosa yang terdeteksi dapat  dipastikan  berasal  dari  gula  sederhana  yang terdapat  pada  hancuran  biji  jagung  maupun  batang semai P. merkusii.
Bahwa  selulase  merupakan  enzim  adaptif,  antara lain  terlihat  dari  metode-metode  pengujian  produksi selulase  jasad  renik  secara in-vitro yang  selalu menggunakan  media  yang  disertai  selulosa  sebagi sumber  karbon  untuk  membiakkan  jasad  renik  yang akan  diuji  untuk  memicu  produksi  selulase  jasad  renik bersangkutan.  Untuk R.  solani ,  produksi  selulase  dan aktivitasnya  telah  dilaporkan  antara  lain  oleh  Bateman (1964). Yoshida et al . (1989) melaporkan dihasilkannya enzim selulolitik oleh F. oxysporum strain SUF850. Jika strain  tersebut  dibiakkan  dengan  polisakarida  Avicel, CMC (Carboksimetil  Selulosa) atau xylan, maka  ketiga sumber  karbon  tersebut  didegradasi.  Dari  filtrat  biakan fungi  pada  avicel  mereka  berhasil  memurnikan  empat macam  enzim  selulolitik  yaitu  CMCase-I,  CMCase  II, F-nitrofenil-β-D-selobiosidase, dan silanase.
Aktivitas  selulase  filtrat  biakan  kedua  jenis  fungi pada  media  dengan  potongan  batang  semai  umur  8 minggu  lebih  tinggi  dibanding  aktivitas  selulase  filtrat biakan  kedua  jenis  fungi  pada  media  dengan  potongan batang  semai  berumur  2 minggu.  Hal  ini  menunjukkan bahwa  kadar  selulosa  batang  semai  8  minggu  lebih besar  dibanding  kadar  selulosa  batang  semai  yang berumur  2  minggu,  dengan  asumsi  bahwa  perbedaan aktivitas  selulase  C1  tersebut  semata-mata  disebabkan oleh  faktor  substrat.  Selulosa  merupakan  komponen utama pada dinding sel sekunder, yaitu dinding sel yang terbentuk setelah sel mengalami pembesaran maksimum dan merupakan karakteristik seluler pada  jaringan yang telah terdiferensiasi sempurna (Esau, 1958).
Bila  aktivitas  selulase-C1  nyata  terdeteksi  pada filtrat  biakan  kedua  jenis  fungi  patogen  pada  media yang  mengandung  selulosa,  maka  aktivitas  pektinase, dalam  hal  ini  adalah  poligalakturonase  (PG),  tidak berhasil  dideteksi  menggunakan  teknik  iodometri  yang diterapkan. Tidak terdeteksinya aktivitas PG pada ketiga kontrol dapat difahami karena tidak ada fungi penghasil PG,  demikian  pula  pada  filtrat  biakan  fungi  pada  PDA karena  tidak adanya  substrat yang sesuai  bagi PG yang dihasilkan  fungi,  yang  sekaligus  menunjukkan  bahwa produksi  PG  bersifat  adaptif.  Akan  tetapi  filtrat  biakan kedua jenis patogen pada CMS maupun CMS ditambah potongan  batang  semai P.  merkusii juga  tidak menunjukkan  aktivitas  PG.  Hancuran  biji  jagung  pada media  CMS  seharusnya  dapat  menjadi  sumber  pektat
sebagai substrat PG, terlebih lagi potongan batang semai P. merkusii .
Tidak  terdeteksinya  aktivitas  PG  melalui  teknik iodometri  pada  penelitian  ini  diduga  berkaitan  dengan kuantitas  bahan  tanaman  sebagai  sumber  pektat  dan teknik deteksinya. Dalam penelitian ini digunakan 0.1 g potongan  batang  semai P.  merkusii sebagai  sumber pektat dan deteksi  dilakukan dengan teknik iodometrik. Bateman  (1963)  juga  menggunakan  teknik  deteksi iodometri,  akan  tetapi  contoh  sumber  pektatnya  jauh lebih  banyak  yaitu  100  g  hipokotil  semai P.  vulgaris . Ayers et al . (1966) mendeteksi  aktivitas PG dan PATE (‘pectic  acid  transeliminase’  atau  poligalakturonat transeliminase) dengan teknik spektrofotometri. Aktivitas  PG  dideteksi  pada  panjang  gelombang  515 nm,  dan  teknik  tersebut  mampu  mendeteksi  asam galakturonat  yang  merupakan  produk  aktivitas  PG hingga 0.05 mg/ml.
Meskipun  dengan  teknik  iodometri  aktivitas poligalakturonase  tidak  berhasil  dideteksi,  pembiakan pada  medium  pektin  mengindikasikan  bahwa  kedua jenis fungi  patogen menghasilkan pektinase. Dibanding aktivitas  pektinase F.  oxysporum, aktivitas      pektinase R. solani diduga lebih tinggi. Hal tersebut  ditunjukkan oleh  lebih  tingginya  peningkatan  bobot  kering  miselia R.  solani pada  medium  pektin  yang  menunjukan bahwa  pektinase  fungi  patogen  tersebut  lebih  efektif mendegradasi pektin dan selanjutnya memanfaatkannya sebagai  sumber  karbon  dibanding F.  oxysporum. Dugaan  lebih  tingginya  aktivitas  pektinase R.  solani tersebut  juga  didukung  oleh  perubahan  warna  medium yang  lebih  tajam,  disamping  itu  fungi  patogen  tersebut juga mengakibatkan medium menjadi transparan.
Goodman et  al .  (1986)  mengemukakan  bahwa pektinase terdiri atas enzim-enzim pektin metil  esterase (PME), poligalakturonase (PG), pektin metil galakturonase  (PMG),  pektintranseliminase  (PTE)  dan poligalakturonat  transeliminase  (PATE).  Pembiakan fungi  pada  medium  pektin  dapat  memberikan  indikasi dihasilkannya  pektinase,  akan  tetapi  tidak  dapat diketahui  macam  enzim  yang dihasilkan  oleh tiap  jenis fungi  patogen  tersebut.  Meskipun  demikian  secara umum  hasil  ini  mendukung  hasil  penelitian  Bateman (1963)  yang  berhasil  mendeteksi  aktivitas  PG  dalam filtrat biakan R. solani dengan menggunakan hipokotil Phaseolus vulgaris sebagai sumber pektat.  Ayers et al. (1966) juga berhasil mendeteksi aktivitas PG dan PATE dari  hipokotil  jenis tanaman  yang  sama  yang  terinfeksi R.  solani .  Fernandes et  al .  (1993)  mempelajari  enzim pektolitik  yang  dihasilkan  enam  isolat F.  oxysporum. Jika  isolat  dibiakkan  pada  media  yang  mengandung pektin  sebagai  sumber  karbon,  aktivitas  PG  dapat dideteksi  pada  filtrat  biakan  setelah  tiga  hari.  Aktivitas endo-PG  hanya  terdeteksi  pada  satu  isolat.  Peran aktivitas  enzim  selulolitik  dan  pektolitik  dalam patogenesis  penyakit  busuk  batang  pada  jagung  oleh Fusarium sp.  dan Rhizoctonia sp.  dilaporkanAhmad et al . (2006). Aktivitas  selulase-C1 F.  oxysporum lebih  tinggi dibanding  aktivitas  selulase-C1 R.  solani. Meskipun demikian  ternyata  hasil  pengujian  periode  serangan londoh  memperlihatkan R.  solani lebih  agresif menyerang  semai P.  merkusii dibanding F.  oxysporum.
Bateman (1963) mengemukakan bahwa ‘enzim maserase’  yang  terlibat  dalam  proses  infeksi  oleh R. solani terutama  tersusun  atas  PG  dan  selulase.  Kedua enzim  secara  sinergistik  berperan  dalam  maserasi jaringan.  Keberadaan  PG  dalam  maserasi  jaringan terinfeksi  sifatnya  esensial.    Selulase  komersial  bila tanpa  PG  tidak  mengakibatkan  maserasi  jaringan., sedangkan PG bekerja  lebih baik bila  terdapat selulase. Dugaan  bahwa  pektinase  yang  dihasilkan R.  solani lebih  aktif  mendegradasi  pektin  dibanding  pektinase yang  dihasilkan F.  oxysporum dapat  menerangkan fenomena lebih agresifnya R. solani terhadap  semai P. merkusii dibanding F.  oxysporum, meskipun  fungi patogen  yang  disebut terakhir  menghasilkan  selulase dengan aktivitas yang lebih tinggi.

## KESIMPULAN
1. Serangan  lodoh  pada  semai P.  merkusii terjadi hanya pada periode umur tertentu, yaitu dari benih hingga  semai  berumur  tujuh minggu.  Semai  umur delapan minggu telah bebas dari serangan lodoh.
2. Kedua  jenis  fungi  patogen  menghasilkan  enzim selulotik dan pektolitik. Aktivitas selulase-C1 pada F.  oxysporum lebih  tinggi  dibanding  pada R. solani .  Pektinase R.  solani lebih  efektif  men- degradasi  pektin  dibandingkan  pektinase F. oxysporum.

## DAFTAR PUSTAKA
Achmad,  Fakuara  Y,  Wulandari  AS,  Herliyana  EN. 1994. Studi kemampuan mikoriza dalam perlindungan  hayati  terhadap  patogen  lodoh  dan pengaruhnya  terhadap  pertumbuhan  semai Pinus merkusii .  Laporan  Hasil penelitian.  Bogor:  Fakultas Kehutanan IPB. 45hal.
Ahmad  Y,  Hameed  A,  Ghaffar  A.  2006.  Enzymatic activity of fungal pathogens in corn. Pakistah J. Bot. 38(4):1305-1316.
Agrios  GN.  1988. Plant  Pathology 3 rd ed.  New  York: Academic Press.803p.
Alexopoulus  CJ,  Mims  CW.  1979. Introductory Mycology 3 rd ed.  New  York:  John  Wiley  &  Sons. 632p.
Atlas  RM.  1993. Handbook  of  Microbiological  Media . Boca Raon: CRC Press. 1079p.
Ayers  WA,  Papavizas  GC,  Diem  AF.  1966.
Polygalacturonate trans-eliminase and
polygalacturonase production by Rhizoctonia solani . Phytopathology 56:1006-1011.
Bateman  DF.  1963.  The  “macerating  enzyme”  of Rhizoctonia solani . Phytopathology 53:1178-1186.
Bateman  DF.  1964.  Cellulase  and  the Rhizoctonia disease of bean. Phytopathology 54:1372-1377.
Bateman  DF,  Basham  HG.  1976.  Degradation  of  plant cell  walls  and  membranes  by  mycrobial  enzymes.
62 Achmad et al.
Dalam: Heitefuss R, Williams PH (Eds.) Physiological  Plant  Pathology  vol.  4.  Berlin: Springer-Verlag.
Booth  C.  1971. The  Genus  Fusarium .  Key,  Surrey:
Commonwealth Mycological Institute. 237p.
Boyce  JS.  1961. Forest  Pathology .  New  York:
McGraw-Hill Co. Inc. 572p.
Esau   K.  1958. Plant Anatomy . New York:  John Wiley & Sons.767p.
Fernandes    N,  Patino  B,  Vasgues  C.  1993.  Pectin degrading  enzymes  secreted  by  six  isolates
Fusarium oxysporum . Mycological Research 97:461-466.
Goodman  RN,  Kiraly  Z,  Wood  KR.  1986. The Physiologi  and  Biochemistry  of  Plant  Disease . Columbia: Univ. Missouri Press. 433p.
Hartley  C.  1921.  Damping-off  in  forest  nursery.  Bull. No.34  p.  1-90.  Washington:  Bureau  of  Plant Industry.
Hodge  CS,  Luchle  JL.  1959.  Nursery  diseases  of southern-pines.  Forest  Pest  Leaflet  no.  32. Washington:  US  Department  of  Agriculture  Forest Service.
Ogoshi  A.  1975.  Grouping  of Rhizoctonia  solani Kuhn and  their  perfect  stages.  Plant  Protection  Research 8:93-103.
Ogoshi  A.  1987.  Ecology  and  pathogenicity  of anastomosis and intraspecific groups of Rhizoctonia
solani Kuhn.  Annual  Review  of  Phytopathology 25:125-143.
Roth LF, Riker AJ, Brener WH.  1947. Some ecological treatments and their influence of damping-off, weed control  and  winter  injury  of  red-pine  seedlings.  J. Agric. Res. 47:87-95.
Samson  RA,  Hoekstra  ES,  van  Oorschot  CAN.  1984. Introduction  to  Food-borne  Fungi .  Baarn  –  Delf: Centraalbureau voor Schimmelcultures. 248p.
Sneh  B,  Bupree  L,  Ogoshi  A.  1991. Identification  of Rhizoctonia  species .  St  Paul  –  Minnesota:  The American Phytopathological Society Press. 135p.
Sudjud  DA.  1983.  Tinjauan  antagonisme  antara Trichoderma sp.  dengan Pythium sp., Rhizoctonia sp.,  dan Fusarium sp.  dalam  rangka  usaha pengendalian/penekanan  secara  biologis  terhadap kerugian  akibat damping-off .  Bogor:  Lembaga Penelitian Hutan.
Suharti  M,  Hardi  T,  Rianto  RSB..  1991.  Mengenal beberapa  hama,  penyakit  penting  pada  hutan tanaman  industri.  Seminar  Nasional  Peningkatan Produktivitas  HTI  Melalui  Upaya  Pengendalian Hama  dan  Penyakit  Secara  Terpadu  31  Juli  1991. Bogor: Fahutan IPB – Dephut – RI.
Yoshida  N,  Fukushima  T,  Saito  M,  Shimosaka  M, Okazaki  M.  1989.  Cellulase  and  Xylan  degrading enzymes  of  the  plant  pathogenic  fungus Fusarium oxysporum SUF850.  Agric.  Bio.  Chem,  53:1829- 1836.
Gambar 1.  Karaktersitik F.  oxysporum .  Koloni  pada  MEA  (A)  dan  PDA  (B),  fialid  (tanda  anak  panah  -1), klamidospora (tanda anak panah -2), mikrokonidia (tanda anak panah -3).
Gambar 2. Rhizoctonia sp.  A:  biakan  pada  media  PDA,  B:  mikrograf  miselia,  khas  ditandai  oleh  percabangan miselia tegak lurus (tanda anak panah)
Gambar 3.  Semai P.  merkusii yang mati  atau benih yang tidak  tumbuh pada beberapa  tingkat  umur pada  14 hari setelah  inokulasi . K:  kontrol  tanpa  inokulasi,  MP:  ditambah  media  patogen,  Fo:  diinokulasi F. oxysporum , Rs: diinokulasi R. solani , Fo-Rs: diinokulasi F. oxysporum dan R. solani
Gambar  4.  Bobot kering miselia F. oxysporum dan R. solani pada medium berpektin beserta  kontrolnya
Tabel 1.  Kadar glukosa dan asam galakturonat monohidrat yang ditimbulkan oleh filtrat biakan F. oxysporum dan R. solani pada beberapa media beserta kontrolnya.
Perlakuan 1) Kadar glukosa (mg/ml) 2) (aktivitas selulasi-C1) Kadar asam galakturonat monohidrat (mg/ml) 2) (aktivitas pektinase) Fo – PDA 0.035  ± 0.0021 (0.188  b  ) 1.378  ± 0.0516 Rs – PDA 0.143  ± 0.0014 (0.378  d  ) 1.353  ± 0.0869 Kontrol PDA 0.889  ± 0.0389 (0.943  h  ) 1.305  ± 0.0000 Fo – CMS 0.171  ± 0.0155 (0.413  e  ) 1.378  ± 0.0700 Rs – CMS 0.078  ± 0.0035 (0.280  c  ) 1.353  ± 0.0346 Kontrol CMS 0.013  ± 0.0000 (0.114  a  ) 1.323  ± 0.0438 Fo – CMS – semai 2 m 0.213  ± 0.0163 (0.462  f  ) 1.311  ± 0.0658 Rs – CMS – semai 2 m 0.157  ± 0.0056 (0.396  de) 1.323  ± 0.0084 Kontrol CMS – semai 2 m 0.013  ± 0.0014 (0.114  a  ) 1.354  ± 0.0169 Fo – CMS – semai 8 m 0.323  ± 0.0120 (0.569  g  ) 1.311  ± 0.0777 Rs – CMS – semai 8 m 0.202  ± 0.0056 (0.449  f   ) 1.329  ± 0.0176 Kontrol CMS – semai 8 m 0.015  ± 0.0014 (0.122  a  ) 1.323  ± 0.0438
1)  Fo: F. oxysporum , Rs: R. solani , PDA: media PDA, CMS: media CMS, semai 2 m: ditambah potongan batang semai pinus umur 2 minggu, semai 8 m: ditambah potongan batang semai pinus umur 8 minggu
2)   Nilai tanpa  tanda kurung: rataan ± simpang baku, nilai dalam tanda kurung: transformasi akar kuadrat nilai rataan di depannya, nilai dalam tanda kurung yang diikuti huruf yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada  0.05 berdasarkan uji jarak berganda Duncan