## BIOEDUSAINS: Jurnal Pendidikan Biologi dan Sains
Volume 6, No 1, Januari - Juni 2023 e-ISSN : 2598-7453 DOI: https://doi.org/10.31539/bioedusains.v6i1.5288

## ISOLASI BAKTERI FIKSASI NITROGEN DAN FOSFAT PADA LIMBAH
CAIR KARET ( Hevea brasiliensis )
Sartika Kumala Dalimunthe 1 , Kartika Manalu 2
Universitas Islam Negeri Sumatera Utara 1,2
sartikakumala00@gmail.com 1

## ABSTRAK
Penelitian  ini  dilakukan  dengan  tujuan  untuk  mengetahui  bakteri  yang  mampu memfiksasi  nitrogen  dan  melarutkan  fosfat  pada  limbah  cair  karet  di  Desa Perdamean,  Kabupaten  Labuhanbatu.  Metode  penelitian  yang  digunakan  yaitu metode  deskripsi  dengan  teknik  isolasi  bakteri  kemudian  dilakukan  pengujian yaitu  uji  kemampuan  fiksasi  nitrogen,  dan  uji  kemampuan  pelarut  fosfat.  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  isolat  bakteri  yang  mampu  dalam  memfiksasi nitrogen ditemukan isolat yang memiliki nilai absorbansi tinggi yaitu 1.340 ABS. Pada  uji  kemampuan  pelarut  fosfat  terdapat  2  isolat  yang  tidak  mampu  dalam melarutkan fosfat. Kesimpulannya, melakukan isolasi bakteri fiksasi nitrogen dan fosfat  pada  limbah  cair  karet  merupakan  cara  untuk  mencegah  pencemaran  dan perusakan ekosistem yang ada dilingkungan.
Kata Kunci : Fiksasi Nitrogen, Limbah Cair Karet, Pelarut Fosfat

## ABSTRACT
This  research  was  conducted  with  the  aim  of  knowing  the  types  of  bacteria  that are  able  to  fix  nitrogen  and  dissolve  phosphate  in  liquid  rubber  waste  in Perdamean  Village,  Labuhanbatu  Regency.  The  research  method  used  is  the description method with bacterial isolation techniques, and then tests are carried out,  namely  testing  the  ability  of  nitrogen  fixation  and  testing  the  ability  of phosphate solubilizers. The results showed that bacterial isolates capable of fixing nitrogen  were  found  to  have  high  absorbance  values,  namely  1,340  ABS.  In  the phosphate  solubilizing  ability  test,  there  were  2  isolates  that  were  unable  to dissolve  phosphate.  In  conclusion,  isolating  nitrogen  and  phosphate  fixation bacteria  from  liquid  rubber  waste  is  a  way  to  prevent  pollution  and  the destruction of existing ecosystems in the environment.
Keywords : Nitrogen Fixation, Rubber Liquid Waste, Phosphate Solvent

## PENDAHULUAN
Indonesia  memiliki  potensi  lahan  dengan  perkebunan  karet  yang  paling luas  didunia,  yaitu  sekitar  3,6  juta  hektare  area  (Ha),  juga  sebagian  besar merupakan perkebunan milik rakyat dengan produksi indonesia mencapai 3,6 juta ton  per  tahun.  Potensi  karet  alam  cukup  besar  di  pasar  internasional  dikarenakan oleh  keunggulannya  yang  memiliki  daya  elastis  sempurna,  memiliki  plastisitas yang  baik,  mempunyai  daya  aus  yang  tinggi,  tidak  mudah  panas  dan  memiliki
daya tahan yang tinggi terhadap retakan (Andriani et al., 2019).
Industri  karet  dengan  bahan  baku  yang  menghasilkan  limbah  cair  yang bersumber  dari  proses  koagulasi,  penggilingan,  peremahan,  dan  pencucian. Limbah  ini  bersifat  asam  dengan  nilai  pH  4,2-6,3  (Rusdiansyah,  2018).  Industri baru  yang  akan  dibangun  dapat  meningkatkan  kesejahteraan  bagi  masyarakat, namun  juga  dapat  berdampak  negatif  terhadap  lingkungan  hidup.  Permasalahan yang  timbul  perlu  diperhatikan  beberapa  efeknya  seperti  limbah  yang  dihasilkan salah  satunya  yaitu  industri  karet.  Industri  karet  akan  menghasilkan  limbah  cair yang mengandung senyawa organik yang relatif tinggi (Laina et al., 2018).
Limbah  akan  berpotensi  menimbulkan  pencemaran  terhadap  lingkungan salah  satunya  adalah  limbah  cair.  Limbah  cair  merupakan  campuran  atau gabungan  dari  air  dan  juga  bahan  pencemar  yang  terbawa  oleh  air,  baik  dalam keadaan  terlarut  maupun  tersuspensi  yang  terbuang  dari  sumber  domestik (perumahan,  perkantoran,  dan  perdagangan),  sumber  industri  dan  disaat  yang tertentu  akan  tercampur  dengan  air  dan  juga  tanah,  air  hujan  maupun  air permukaan (Sitorus et al., 2021).
Limbah cair industri karet merupakan habitat dari beberapa mikroba  yang ada  pada  limbah.Limbah  cair  karet  memiliki  beberapa  senyawa  salah  satunya nitrogen  dan  fosfat.  Metabolisme  nitrogen  mengandung  senyawa-senyawa  yang dimineralisasi  oleh  mikroorganisme  dan  nitrogen  akan  dilepas  sebagai  ammonia (Islam  et  al.,  2019).  Sama  halnya  dengan  bakteri  pelarut  fosfat  dapat  melarutkan fosfat  dengan  melepas  senyawa  fosfat  melalui  mekanisme  pembentukan  khelat, reaksi pertukaran, dan produksi asam organik (Asril & Lisafitri, 2020).
Maka  untuk  mengurangi  dampak  negatif  tersebut  dilakukannya  pengujian pada limbah untuk pemulihan secara biologi terhadap komponen lingkungan yang tercemar menjadi bentuk yang tidak mengandung racun. Penelitian tentang bakteri limbah cair industri karet telah dilakukan sebelumnya oleh Kuruvila et al. (2021) yang berfokus  pada  pengendalian  dan  pengelolaan  air  limbah  karet  dengan menggunakan  konsorsium  bakteri,  jamur,  actinomycetes  dan  bakteri.  Desa Perdamean merupakan desa yang terletak di Kecamatan Rantau Selatan Kabupaten Labuhanbatu  yang  memiliki  aliran  sungai  kecil  di  desa  tersebut.  Air  sungainya bercampur  dengan  limbah  pabrik  karet  sehingga  menyebabkan  sungai  di  Desa Perdamean  mengalami  pencemaran  dan  air  tersebut  memiliki  warna  hitam  dan berminyak.  Berdasarkan  hasil  survei  lapangan  dan  wawancara  warga  Desa Perdamean  bahwa  air  tersebut tidak  lagi  digunakan  dikarenakan  air  yang  sudah tercemar  oleh  limbah pabrik karet.
Jika kandungan bahan organik limbah cair karet tinggi dalam sungai yang tercemar  akan  menyebabkan  rusaknya  ekosistem  yang  ada  di  sungai  Desa Perdamean.  Untuk  mengurangi  pencemaran  lingkungan  tersebut  diperlukan pengujian  pada  limbah  cair  karet  tersebut.  Didalam  limbah  cair  terkandung beberapa  bahan  organik  seperti  nitrogen  dan  juga  fosfat,  sehingga  untuk mengetahui  kemampuan  bakteri  dalam  fiksasi  nitrogen  dan  melarutkan  fosfat
maka dilakukannya isolasi pada limbah cair karet di Desa Perdamean, Kabupaten Labuhanbatu.  Penelitian  terkait  limbah  cair  karet  belum  ada  yang  melakukan penelitian  di  Desa  Perdamean  Kecamatan  Rantau  Selatan Kabupaten Labuhanbatu,  sehingga  perlu  dilakukan  penelitian  tentang  isolasi  bakteri  fiksasi nitrogen  dan  fosfat  limbah  cair  karet  di  sungai  Desa  Perdamean.  Penelitian  ini dilakukan  dengan  tujuan  untuk  mengetahui  bakteri  yang  mampu  memfiksasi nitrogen  dan  melarutkan  fosfat  pada  limbah  cair  karet  di  Desa  Perdamean, Kabupaten Labuhanbatu.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  akan  dilakukan  pada  bulan  November  -  Desember  2022. Pengambilan sampel dilakukan pada pembuangan air limbah menuju sungai Desa Perdamean  Kabupaten  Labuhanbatu,  Rantauprapat.  Isolasi  bakteri  dilakukan di UPT.  Laboratorium  Mikrobiologi  FMIPA  USU,  Medan,  Jalan  Bioteknologi No.  1  Unit  3,  FMIPA,  Padang  Bulan,  Medan  Baru,  Medan.  Metode  penelitian yang  digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu  metode  deskripsi  yang  pengambilan sampelnya  dilakukan  dari  suatu  lingkungan  yang  akan  dideskripsikan.  Sampel yang  sudah  diambil  dari  tempat  pengambilan  aliran  limbah  menuju  sungai  akan diisolasikan  untuk  mengetahui  isolat  bakteri  yang  mampu  memfiksasi  nitrogen dan melarutkan fosfat pada limbah cair industri karet.

## Alat dan Bahan Penelitian
Peralatan  yang  digunakan  yaitu  autoklaf,  cawan  petri,  inkubator,  tabung reaksi,  gelas  ukur,  labu  ukur,  batang  pengaduk,  rak  tabung  reaksi,  lemari pendingin,  mikroskop,  spektrofotometer,  aluminium  foil,  pipet  tetes,  kamera, laminar air flow, kertas label, jarum oce, botol spesimen, kapas, tisu, spiritus, hot plate,  vortex,  cover  glass,  objek  glass,  spatula  dan  mikro  pipet.Bahan  yang digunakan  yaitu  media  NA  (Nutrinet  Agar)  sebagai  pertumbuhan  mikro- organisme,  aquades,  minyak  imersi,  safranin,  kristal  violet,  lugol,  alkohol  96%, NaCl,  Nitrat,  racikan  media  Pikovskaya,  Pepton  Broth,  dan  limbah  cair  karet diambil  dari  tempat  pembuangan  terakhir  limbah  karet  menuju  ke  sungai  tempat limbah tersebut akan dibuang.

## Pengambilan Sampel
Adapun sampel yang akan digunakan diambil dari 3 titik limbah cair karet sebelum  menuju  kesugai  tempat  limbah  akan  dibuang.  Kemudian  dimasukkan kedalam  botol  sampelnya  yang  akan  digunakan.  Sampel  diambil  dengan  cara membuka  tutup  botol  yang  akan  digunakan,  setelah  itu  tenggelamkan  botol tersebut kedalam sungai pembuangan limbah karet lalu ditutup kembali dan diberi label.

## Pembuatan Media
Dilarutkan media NA sebanyak 5 gram, lalu masukkan aquadest sebanyak 100  ml  kedalam  beaker  glass,  lalu  media  dihomogenkan  sekaligus  dipanaskan diatas  hot  plate  hingga  mendidih.  Setelah  itu,  media  NA  dimasukkan  kedalam autoklaf  untuk  disterilkan  selama  15  menit  pada  suhu  121 0 C.  Setelah  selesai  di sterilkan, media agar dituangkan kedalam cawan petri.

## Isolasi Bakteri
Sampel  limbah  karet  diencerkan  sebanyak  10  ml  kemudian  dimasukkan kedalam Erlenmeyer yang berisi 90 ml larutan NaCl yang dihomogenkan dengan vortex sehingga terbentuk pengenceran 10 -1 sampai 10 -7 . Diambil 1 ml suspensi pada  seri  pengenceran  terakhir  kemudian  disebar  diatas  cawan  petri  dengan metode  tuang  pada  media  lalu  diratakan  dan  diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama 24-48  jam.  Pemurnian  isolat  bakteri  dilakukan  dengan  menggunakan  metode cawan gores ( streak plate ) yang menunjukkan morfologi dan warna yang berbeda pada  koloni  bakteri.  Pemurnian  bakteri  dilakukan  secara  berulang  dengan memisahkan  koloni  hingga  diperoleh  kultur  murni  dengan  cara  isolat  murni diambil  sebanyak  2-3  ose  kemudian  dipindahkan  ke  media  NA,  lalu  diinkubasi selama 24-48 jam dengan suhu 37°C.

## Karakterisasi dan Morfologi Isolat Bakteri
Karakterisasi  dan  morfologi  bakteri  yang  tumbuh  secara  makroskopis meliputi bentuk, elevasi, tepian dan warna koloni. Pada pengamatan mikroskopis dilakukan  dengan  melakukan  pewarnaan  gram.  Uji  biokimia  bakteri  meliputi  uji katalase, uji sitrat, uji motilitas, dan uji TSIA (Triple Sugar Iron Agar).

## Uji Katalase
Biakan murni bakteri dari media agar diambil satu ose kemudian dioleskan keatas  kaca  objek.  Lalu  ditetesi  larutan  hidrogen  peroksida  1-2  tetes.  Reaksi dinyatakan positif apabila muncul gelembung gas.

## Uji Sitrat
Bakteri  diambil  satu  jarum  ose,  kemudian  ditanam  pada  media  simmon citrate  dengan  cara  menggoreskan  jarum  ose  runcing  secara  zig-zag.  Lalu diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37 0 C.  Reaksi  dinyatakan  positif  apabila timbul warna biru tua terang.

## Uji Motilitas
Biakan  bakteri  diambil  menggunakan  jarum  ose  secara  aseptik  dan diinokulasikan  secara  vertikal  pada  media  NA  kemudian  diinkubasi  selama  24 jam  pada  suhu  37 0 C  untuk  melihat  pertumbuhan  dari  bakteri.  Apabila pertumbuhan  pada  permukaan  medium  dan  tidak  ada  bekas  pada  tusukan  atau
menyebar dikatakan positif.

## Uji TSIA (Triple Sugar Iron Agar)
Satu  koloni  isolat  bakteri  diinokulasikan  pada  media  TSIA  dengan  cara ditusuk tegak lurus pada bagian ujung dan cara zig-zag pada bagian miring. Lalu biakan  diinkubasi  selama  24  jam  pada  suhu  37 0 C  kemudian  diamati  perubahan pada media.

## Uji Kemampuan Bakteri Fiksasi N
2
Bakteri ditumbuhkan pada media pepton broth sebanyak 10 ml selama 5-6 hari. Kemudian media pepton broth dilakukan sentrifugasi dengan kecepatan 4.00 rpm  selama  10  menit.  Tambahkan  1-2  tetes  garam  signette  dan  0,5  ml nessler  pada  supernatan  hasil  sentrifugasi,  kemudian  di  spektrofotometer  dengan panjang gelombang 425 nm di konvensi menjadi ppm dengan menggunakan kurva standar  NH4.  Perubahan  warna  yang  muncul  pada  sampel  dapat  menjadi  acuan adanya kandungan unsur nitrogen dalam bentuk ammonium.
Kemampuan melarutkan fosfat dapat dilakukan  dengan metode inokulasi. Diambil satu ose bakteri murni, lalu diinokulasikan membentuk titik pada media selektif Pikovskaya Agar. Kemudian dilakukan inkubasi selama 7 hari pada suhu ruang. Kemampuan melarutkan fosfat dapat ditandai dengan adanya zona bening yang mengelilingi koloni. Kemudian dilakukan penghitungan indeks zona bening.

## Pewarnaan Gram
Pewarnaan  gram  dilakukan  untuk  memudahkan  melihat  bakteri  dengan mikroskop, memperjelas ukuran dan bentuk bakteri, untuk melihat struktur luar dan  struktur  dalam  bakteri,  menghasilkan  sifat  fisik  dan  kimia  serta meningkatkan  kontras  mikroorganisme  disekitarnya.  Dioleskan  bakteri  yang sudah  dibiakkan  pada  kaca  objek  yang  sudah  di  tetesi  NaCl,  lalu  biarkan mengering. Kemudian preparat ditetesi larutan Kristal violet 0,5% lalu diamkan selama 30 detik, bilasdengan air zat warna yang berlebih.
Tambahkan  larutan  lugol  selama  30  detik,  lalu  bilas  dengan  air. Hilangkan warnanya menggunakan alkohol 96% selama 10- 20 detik, lalu bilas dengan air. Kemudian tetesi preparat  dengan larutan safranin 0,25% selama 30 detik, lalu bilas dengan air setelah  itu dibiarkan mengering. Jika sudah kering, teteskan  1  tetes  minyak  imersi.  Amati  dibawah  mikroskop.  Apabila  hasil pengamatan  berwarna  ungu  maka  dikatakan  bakteri  gram  positif,  sedangkan hasil pengamatan berwarna merah maka dikatakan bakteri gram negatif.

## Analisis Data
Teknik  analisis  data  yang  digunakan  yaitu  metode  analisa  deskritif kualitatif dan kuantitatif. Metode ini digunakan untuk menganalisis data dengan cara  mendeskripsikan  atau  menggabarkan  kondisi  yang  sudah  terkumpul melalui  pengamatan  disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan  juga  kurva  kemudian diuraikan untuk membuat kesimpulan.

## HASIL PENELITIAN Hasil Isolasi Bakteri
Hasil  isolasi  bakteri  dari  sampel  limbah  cair  karet  di  Desa  Perdamean diperoleh  10  isolat  bakteri.  Berikut  adalah  hasil  isolasi  bakteri  pada  limbah karet.
(a) (b) (c)
Gambar 1. (a) Sampel 1 Limbah Cair Karet, (b) Sampel 2 Limbah Cair Karet, (c) Sampel 3 Limbah Cair Karet
Gambar  1.  diatas  dapat  dilihat  bahwa  pada  sampel  1  koloni  bakteri  yang tumbuh  ada  3  koloni.  Pada  sampel  ke  2  hanya  terdapat  1  koloni  bakteri  yang tumbuh  pada  media.  Kemudian  pada  limbah  ke  3  koloni  bakteri  yang  tumbuh melebihi  ambang  batas  sehingga  tidak  diketahui  berapa  banyak  bakteri  yang tumbuh sehingga koloni yang akan digunakan ada 6 koloni bakteri.

## Karakterisasi dan Morfologi Isolat Bakteri
Pengamatan  karakteristik  isolat  bakteri  berupa  bentuk,  elevasi,  tepi  dan warna koloni. Berikut hasil pengamatan karakteristik morfologi isolat bakteri .
Tabel 1. Karakteristik Morfologi Isolat Bakteri
No. Kode Isolat Karakteristik Morfologi Isolat Bentuk Tepi Elevasi Warna 1 BS 1 Circular Entire Flat Putih Susu 2 BS 2 Circular Entire Convex Putih Susu 3 BS 3 Circular Entire Flat Putih Susu 4 BS 4 Circular Entire Raised Putih Susu

## Tabel 1. (Lanjutan)
No. Kode Isolat Karakteristik Morfologi Isolat Bentuk Tepi Elevasi Warna 5 BS 5 Circular Entire Flat Putih Susu 6 BS 6 Circular Entire Flat Pink 7 BS 7 Circular Entire Convex Pink 8 BS 8 Circular Entire Convex Pink 9 BS 9 Circular Undulate Flat Putih Susu 10 BS 10 Circular Entire Flat Putih Susu
Tabel  1.  diatas  dapat  diihat  bahwa  bentuk  yang  dominan  dari  koloni bakteri  yang  didapat  adalah  sirkular,  tepi  yang  banyak  didapatkan  adalah  entire, elevasi yang banyak didapatkan adalah flat dan warna yang dominan pada koloni bakteri adalah warna putih susu.
Bentuk  sirkular  pada  koloni  bakteri  yang  didapatkan  ada  10  isolat  yaitu BS 1 ,  BS 2 ,  BS 3 ,  BS 4 ,  BS 5 ,  BS 6 ,  BS 7 ,  BS 8 ,  BS 9 ,  dan  BS 10 .  Tepi  entire  yang didapatkan  pada  koloni  bakteri  ada  9  isolat  yaitu  BS 1 ,  BS 2 ,  BS 3 ,  BS 4 ,  BS 5 ,  BS 6 , BS 7 , BS 8 , dan BS 10 . Elevasi flat yang didapatkan pada koloni bakteri ada 6 isolat yaitu  BS 1 ,  BS 3 ,  BS 5 ,  BS 6 ,  BS 9 ,  dan  BS 10 .  Kemudian  warna  putih  susu  yang didapatkan  pada  koloni  bakteri  ada  7  isolat  yaitu  BS 1 ,  BS 2 ,  BS 3 ,  BS 4 ,  BS 5 ,  BS 9 , dan BS 10 .

## Uji Biokimia
Sepuluh  isolat  yang  diperoleh  dari  hasil  isolasi  bakteri  pada  limbah  karet dilakukan  uji  biokimia  yaitu  uji  katalase,  uji  sitrat,  uji  motilitas,  dan  uji  TSIA. Berikut  hasil  uji  biokimia  dari  sepuluh  isolat  bakteri  pada  limbah  karet  dapat dilhat pada tabel.
Tabel 2. Uji Biokimia No.  Kode Isolat Uji Biokimia Katalase Sitrat Motilitas TSIA 1 BS1 + + + K  gas + K  H2S - 2 BS2 + + + K  gas - A  H2S - 3 BS3 + + - K  gas + K  H2S - 4 BS4 + + - K  gas + K  H2S - 5 BS5 - - - K  gas - K  H2S - 6 BS6 + + + K  gas + K  H2S + 7 BS7 + + + K  gas + K  H2S + 8 BS8 + + + K  gas + K  H2S -
Tabel 2. (Lanjutan) No.  Kode Isolat Uji Biokimia Katalase Sitrat Motilitas TSIA 9 BS9 + + + K  gas + K  H2S - 10 BS10 + + + K  gas + K  H2S -
Pada  tabel  terlihat  bahwa  10  isolat  memiliki  hasil  dari  uji  biokimia  yang berbeda-beda.  Pada  uji  katalase,  9  isolat  yang  menunjukkan  reaksi  positif  yaitu isolat BS 1 , BS 2 , BS 3 , BS 4 , BS 6 , BS 7 , BS 8 , BS 9 , dan BS 10 . Uji sitrat yang dilakukan terdapat 9 isolat yang menunjukkan reaksi positif yaitu isolat BS 1 , BS 2 , BS 3 , BS 4 , BS 6 ,  BS 7 ,  BS 8 ,  BS 9 ,  dan  BS 10 .  Pada  uji  motilitas  didapatkan  7  isolat  yang menunjukkan reaksi positif  yaitu isolat BS 1 , BS 2 , BS 6 , BS 7 , BS 8 , BS 9 , dan BS 10 . Kemudian  uji  TSIA  didapatkan  8  isolat  yang  menunjukkan  reaksi  positif  yaitu BS 1 , BS 3 , BS 4 , BS 6 , BS 7 , BS 8 , BS 9 , dan BS 10 .
Uji Kemampuan Bakteri Bakteri Fiksasi N 2
Isolat  bakteri  yang  didapatkan  melalui  pengamatan  kemampuan  fiksasi N 2 dikonvensi  dengan  menggunakan  uv-spektrofotometer.  Berikut  hasil pengamatan kemapuan fiksasi N 2 dapat dilihat pada tabel.
Tabel 3. Uji Kemampuan Bakteri Fiksasi N 2
No. Kode Isolat Nilai Absorbansi (ABS) 1 BS 1 0,852 2 BS 2 1.112 3 BS 3 1,196 4 BS 4 1,305 5 BS 5 1,992 6 BS 6 1,340 7 BS 7 1,120 8 BS 8 1,103 9 BS 9 1,024 10 BS 10 0,947
Tabel 3 menunjukkan bahwa 10 isolat yang di uji kemampuan fiksasi N 2 memiliki nilai absorbansi  yang berbeda. Pada uji kemampuan fiksasi  N 2, nilai ABS  terkecil  terdapat  pada  isolat  BS 1 ,  sedangkan  nilai  ABS  yang  tertinggi terdapat  pada  isolat  BS 5 .  Adapun  kurva  standar  fiksasi  nitrogen  dapat  dilihat sebagai berikut.
K URVA S TANDAR F IKSASI N 2 1600 1400 1200
1000 800 600 400 200 N ILAI A BSORBANSI (ABS)
Gambar 2. Kurva Standar Fiksasi N 2

## Uji Kemampuan Bakteri Pelarut Fosfat
Isolat  bakteri  yang  didapatkan  melalui  pengamatan  kemampuan  pelarut fosfat  ditandai  dengan  terbentuknya  zona  bening  disekitar  koloni  kemudian selanjutnya  dilakukan  penghitungan  indeks  pelarut  fosfat.  Berikut  hasil  uji kemampuan bakteri pelarut fosfat dapat dilihat pada tabel.

## Tabel 4. Uji Kemampuan Bakteri Pelarut Fosfat
No. Kode Isolat Zona Bening Diameter Koloni Indeks Pelarut Fosfat (IPF) 1 BS 1 0,4 0,4 0 2 BS 2 1,8 0,6 3 3 BS 3 2,1 1,1 1,9 4 BS 4 1,9 0,6 3,1 5 BS 5 2,1 0,4 5,2 6 BS 6 2,2 1,2 1,8 7 BS 7 1,6 1,6 0 8 BS 8 1,7 1,1 1,5 9 BS 9 1 0,8 1,2 10 BS 10 1,5 0,8 1,8
Tabel  4.  menunjukkan  bahwa  dari  10  isolat  yang  dilakukan  pengujian kemampuan bakteri pelarut fosfat diperoleh 8 isolat yang memiliki potensi pelarut fosfat, sedangkan 2 isolat tidak menunjukkan adanya potensi pelarut fosfat. Dari pengujian  kemampuan  pelarut  fosfat  masing-masing  isolat  mempunyai  aktivitas yang berbeda-beda.
Pada  bakteri  uji  kemampuan  pelarut  fosfat  yang  didapatkan  zona  bening pling  besar  pada  isolat  BS 6 ,  sedangkan  zona  bening  kecil  didapatkan  pada  isolat BS 2 , BS 3 , BS 4 , BS 5 , BS 8 , BS 9 , BS 10 dan 2 isolat yang tidak menunjukkan adanya potensi  pelarut  fosfat  yaitu  BS 1 dan  BS 7 .  Berdasarkan  kemampuan  pelarut  fosfat
beberapa  bakteri  uji,  maka  10  isolat  dilakukan  untuk  pewarnaan  gram  dan  uji biokimia.

## Pewarnaan Gram
Pewarnaan  gram dilakukan untuk mengidentifikasi bakteri  yang ada pada limbah cair karet, dilakukan dengan menggunakan beberapa media. Sepuluh isolat bakteri  yang  ditemukan  pada  limbah  cair  karet  dilakukan  uji  pewarnaan  gram yang  bertujuan  agar  dapat  membedakan  bakteri  kedalam  dua  kelompok  besar yaitu  gram  positif  dan  gram  negatif.  Hasil  pewarnaan  gram  dapat  dilihat  pada tabel.
Tabel 5. Pewarnaan Gram No. Kode Isolat Pewarnaan Gram Bentuk Keterangan 1 BS1 Monokokus Gram Positif 2 BS2 Monobasil Gram Negatif 3 BS3 Monobasil Gram Negatif 4 BS4 Monobasil Gram Negatif 5 BS5 Monobasil Gram Negatif 6 BS6 Streptobasil Gram Negatif 7 BS7 Streptobasil Gram Positif 8 BS8 Streptokokus Gram Positif 9 BS9 Streptobasil Gram Positif 10 BS10 Streptobasil Gram Positif
Tabel  5.  menunjukkan  bahwa  10  isolat  yang  diuji  pewarnaan  gram, didapatkan gram positif berbentuk monokokus yaitu BS 1 , sedangkan gram negatif berbentuk  monobasil  yaitu  BS 2 ,  BS 3 ,  BS 4 ,  dan  BS 5 .  Isolat  bakteri  gram  positif berbentuk  streptokokus  yaitu  BS 8 ,  lalu  gram  positif  berbentuk  streptobasil  yaitu BS 9 dan  BS 10 ,  kemudian  gram  positif  berbentuk  treptokkokus  yaitu  BS 7 , sedangkan  gram  negatif  berbentuk  streptobasil  yaitu  BS 6 .  Isolat  bakteri  gram positif  ditandai  dengan  sel  yang  berwarna  ungu  sedangkan  isolat  bakteri  gram negatif ditandai dengan sel yang berwarna merah.

## PEMBAHASAN Isolasi Bakteri
Pengambilan  sampel  limbah  cair  karet  dari  3  titik  yang  berbeda  pada pengenceran  10 -7 menghasilkan  10  isolat.  Hasil  pembiakan  bakteri  dari  ketiga sampel tumbuh dua jenis koloni yaitu koloni yang tidak memiliki warna terdapat pada  sampel  ke  1  dan  2  kemudian  koloni  berwarna  merah  muda  terdapat  pada sampel  ke  3.  Pertumbuhan  koloni  bakteri  warna  merah  menunjukkan  bahwa bakteri  tersebut  dapat  memfermentasi  laktosa  dan  memproduksi  asam  dari  hasil fermentasi  sehingga  dapat  merubah  warna  menjadi  merah, sedangkan pertumbuhan  koloni  yang  tidak  berwarna  menunjukkan  bakteri  tersebut  tidak mampu memfermentasikan laktosa (Ginting et al., 2018).
Pada  sampel  1  memiliki  3  koloni  bakteri,  kemudian  pada  sampel  2 memiliki 1 koloni, dan sampel 3 memiliki jumlah koloni  yang memilihi ambang batas. Sepuluh isolat yang didapatkan kemudian diberi kode BS 1 , BS 2 , BS 3 , BS 4 , BS 5 , BS 6 , BS 7 , BS 8 , BS 9 , dan BS 10 . Berdasarkan hasil penelitian  yang dilakukan dapat  dilihat  koloni  yang  tumbuh  pada  media  yang  berwarna  putih,  memiliki bentuk yang bulat dan juga bersifat universal sehingga bakteri tumbuh baik gram positif  maupun  gram  negatif.  Dilakukannya  isolasi  guna  untuk  mempermudah dalam  menghitung  koloni  bakteri  yang  akan  tumbuh.  Koloni  dari  berbagai konsentrasi pengenceran yang tumbuh dihitung sehingga dapat dilihat hasilnya.

## Karakteristik dan Morfologi Isolat Bakteri
Hasil karakteristik yang dilakukan pada 10 isolat limbah cair karet secara mikroskopik morfologi  yang di amati didapatkan bentuk, tepi, elevasi dan warna yang  berbeda-beda.  Menurut  Ismail  et  al.  (2017)  bahwa  karakteristik  dapat dilakukan  berdasarkan  sifat  morfologi  koloni,  morfologi  sel  dan  biokimia. Sepuluh  isolat  yang  didapat  memiliki  morfologi  yang  berbeda  seperti  pada  BS 1 memiliki  bentuk  bulat,  margin  yang  rata,  dengan  elevasi  hampir  rata  dengan medium  dan  berwarna putih  susu. Pada  BS 2 memiliki bentuk  bulat,  margin  yang rata, dengan elevasi cembung dan berwarna putih susu. Pada BS 3 memiliki bantuk bulat,  margin  yang  rata,  dengan  elevasi  hampir  rata  dengan  medium,  dan berwarna  putih  susu.  Pada  BS 4 memiliki  bentuk  bulat,  margin  yang  rata,  dengan elevasi rata pada seluruh permukaan, dan berwarna putih susu.
Kemudian  pada  BS 5 memiliki  bentuk  bulat,  margin  yang  rata,  dengan elevasi hampir rata dengan medium, dan berwarna putih susu. Pada BS 6 memiliki bentuk  bulat,  margin  yang  rata  dengan  elevasi  hampir  rata  dengan  medium,  dan berwarna  merah  muda.  Pada  BS 7 memiliki  bentuk  bulat,  margin  yang  rata, kemudian elevasi cembung dan berwarna merah muda. Pada BS 8 memiliki bentuk bulat,  margin  yang  rata  kemudian  elevasi  permukaan  melengkung  dan  berwarna merah  muda.  Pada  BS 9 memiliki  bentuk  bulat,  margin  bergelombang  kemudian elevasi nyaris rata dengan medium dan berwarna putih susu. Pada BS 10 memiliki bentuk  bulat,  margin  yang  rata  kemudian  elevasi  nyaris  rata  dan  berwarna  putih susu.

## Uji Biokimia
Isolasi bakteri limbah cair karet dilakukan tes uji biokimia yang terdiri dari katalase,  sitrat,  motolitas,  dan  TSIA.  Hasil  uji  katalase  pada  isolat  limbah  cair karet  BS 1 ,  BS 2 ,  BS 3 ,  BS 4 ,  BS 6 ,  BS 7 ,  BS 8 ,  BS 9 ,  dan  BS 10 menunjukkan  reaksi positif yang ditandai dengan terbentuk gelembung oksigen pada permukaan koloni setelah ditetesi dengan H 2 O 2 menunjukkan bahwa organisme menghasilkan enzim katalase  yang  mengubah  hydrogen  peroksida  menjadi  air  dan  oksigen  (Kosasi  et al., 2019).
Pada uji sitrat pada isolat limbah cair karet pada BS 1 , BS 2 , BS 3 , BS 4 , BS 6 ,
BS 7 , BS 8 , BS 9 , dan BS 10 menunjukkan reaksi positif. Adanya reaksi positif  yang ditandai  dengan  perubahan  media  bewarna  hijau  berubah  menjadi  warna  biru (Kosasi et al., 2019). Pengujian pada isolat BS 5 menunjukkan hasil negatif.
Pada  uji  motilitas  terdapat  7  isolat  yang  bereaksi  positif  yaitu  BS 1 ,  BS 2 , BS 6 ,  BS 7 ,  BS 8 ,  BS 9 ,  dan  BS 10 sedangkan  isolat  BS 3 ,  BS 4 ,  dan  BS 5 menunjukkan reaksi negatif yang tidak memiliki reaksi uji motilitas. Dilakukannya uji motilitas agar  dapat  mengetahui  apakah  reaksi  bakteri  yang  diamati  bergerak  atau  tidak (Panjaitan et al., 2020).
Hasil  uji  TSIA  pada  isolat  BS 2 menghasilkan  reaksi  kuning/merah.Warna merah  pada  agar  menunjukkan  reaksi  basa  sedangkan  warna  kuning  pada  agar menunjukkan  reaksi  asam.  Pada  permukaan  agar  berwarna  merah  menunjukkan bahwa terjadinya fermentasi glukosa, sedangkan pada warna kuning dipermukaan dan bawah tabung menunjukkan terjadinya fermentasi laktosa dan sukrosa (Kosasi et  al.,  2019).  Pada  isolat  BS 1 ,  BS 3 ,  BS 4 ,  BS 6 ,  BS 7 ,  BS 8 ,  BS 9 ,  dan  BS 10 menunjukkan hasil kuning/kuning.
Hasil  uji  TSIA  yang  menunjukkan  adanya  reaksi  suatu  bakteri menghasilkan  gas  ada  pada  isolat  BS 1 ,  BS 3 ,  BS 4 ,  BS 6 ,  BS 7 ,  BS 8 ,  BS 9 ,  dan  BS 10 . Tujuan dilakukannya uji TSIA yaitu untuk mengetahui kemampuan suatu bakteri dalam  memfermentasikan  gula  untuk  menghasilkan  asam  atau  gas. Kemudian isolat  bakteri  dengan  kode  BS 6 dan  BS 7 menunjukkan  hasil  positif  H 2 S.  Hasil TSIA  menunjukkan  adanya  H 2 S  positif  menunjukkan  adanya  endapan  berwarna hitam pada bagian dasar media yang digunakan (Kosasi et al., 2019).
Uji Kemampuan Bakteri Fiksasi N 2
Uji  kemampuan  bakteri  pada  limbah  cair  karet  dengan  menggunakan fiksasi  N 2 dilakukan  dengan  menggunakan  metode  uv-vis  spektrofotometer kemudian dilihat nilai absorbansinya, setelah itu dibuat kurva standar isolasi yang didapatkan. Berikut ini hasil uji kemampuan bakteri fiksasi nitrogen dapat dilihat dari kurva sebagai berikut.
Pada  kurva  standar  isolasi  diatas  menunjukkan  bahwa  nilai  absorbansi yang  paling  tinggi  didapat  pada  BS 6 dengan  nilai  absorbansinya  sebesar  1,340, sedangkan  nilai  yang  paling  kecil  didapat  pada  BS 1 dengan  nilai  absorbansinya sebesar  0,852.  Kegunaan  dari  spektrofotometer  uv-vis  untuk  menganalisis nitrogen  pada  sedimen  melalui  interaksi  antara  cahaya/sinar  pada  panjang gelombang tertentu dengan materi berupa atom atau molekul (Angraini & Yanti, 2021).

## Uji Kemampuan Bakteri Pelarut Fosfat
Uji  kemampuan  bakteri  dengan  menggunakan  pelarut  fosfat  ditandai dengan  terbentuknya  zona  bening  disekitar  koloni  kemudian  dilanjutkan  dengan penghitungan  indeks  pelarut  fosfat.  Hasil  dari  uji  tersebut  menunjukkan  hasil
bahwa  terdapat  2  isolat  yang  tidak  berpotensi  dalam  pelarut  fosfat  yaitu  pada isolat  BS 1 dan  BS 7 .  Isolat  yang  memiliki  nilai  indeks  zona  bening  tertinggi terdapat pada isolat BS 5 dengan indeks pelarut fosfat sebesar 5,2. Kemudian isolat yang  memiliki  zona  bening  terbesar  selanjutnya  terdapat  pada  isolat  BS 4 dengan indeks pelarut fosfat sebesar 3,1. Terbentuknya zona bening menunjukkan bahwa bakteri  tersebut  mampu  dalam  melarutkan  fosfat  sehingga  terbentuknya  zona bening  disekitar  koloni  bahwa  isolat  mampu  menghasilkan  asam  organik  yang mampu  berikatan  dengan  ion  Ca-  membentuk  senyawa  Ca 3 (PO 4 ) 2 pada  media pikovskaya  dan  mem-bebaskan  ion  H 2 PO 4 - sehingga  membentuk  area  berwarna lebih jernih (Asril & Lisafitri, 2020).

## Pewarnaan Gram
Hasil  pengujian  pewarnaan  gram  yang  dilakukan  pada  10  isolat  limbah cair  karet  terdapat  2  jenis  isolat  berwarna  ungu  dan  juga  warna  merah.  Pada  10 isolat  yang  dilakukan  uji  pewarnaan  gram,  didapatkan  gram  positif  yang berbentuk batang dengan kode BS 7 , BS 9 , dan BS 10 , sedangkan gram negatif yang berbentuk  batang  dengan  kode  BS 2 ,  BS 3 ,  BS 4 ,  BS 5 ,  dan  BS 6 .  Gram  positif  yang didapatkan  dari  pewarnaan  gram  berbentuk  bulat  yaitu  BS 1 dan  BS 8 ,  sedangkan gram  positif  yang  berbentuk  bulat  tidak  terdapat  pada  hasil  pewarnaan  gram. Tujuan  dilakukan  perwanaan  gram  guna  untuk  mempermudah  dalam  melihat bakteri  secara  mikroskopik,  melihat  struktur  dalam  bakteri,  memperjelas  bentuk dan  ukuran  bakteri  dan  juga  menghasilkan  sifat  fisik  serta  kimia  yang  ada  pada bakteri melalui zat warna (Bulele et al., 2019).
Bakteri  yang  berbentuk  monobasil  pada  kode  isolat  BS 2 ,  BS 3 ,  BS 4 ,  dan BS 5 menunjukkan  hasil  gram  negatif.  Pada  bakteri  yang  berbentuk  streptobasil dengan kode isolat BS 6 menunjukkan hasil gram negatif. Bakteri  yang berbentuk streptobasil pada kode isolat BS 7 , BS 9 dan BS 10 menunjukkan hasil gram positif. Pada  bakteri  yang  berbentuk  monokokus  terdapat  pada  kode  isolat  BS 1 yang termasuk  dalam  gram  positif,  sedangkan  streptokokus  pada  kode  isolat  BS 8 termasuk  dalam  gram  positif.  Pada  hasil  pengamatan  bakteri  apabila  bakteri berwarna ungu maka dikatakan bakteri gram positif, sedangkan bakteri berwarna merah maka termasuk bakteri gram negatif (Rahmawati et al., 2021).

## SIMPULAN
Hasil  penelitian  yang  dilakukan  diperoleh  kesimpulan  yaitu  didapatkan hasil isolasi pada limbah cair karet terdapat 10 isolat bakteri dari 3 sampel limbah cair karet di Desa Perdamean, Kabupaten Labuhanbatu. Isolat bakteri limbah cair karet  ada  yang  mampu  dalam  melarutkan  fosfat,  yaitu  dari  10  isolat  yang  telah diuji  kemampuannya  dalam  melarutkan  fosfat  didapatkan  8  isolat  yaitu BS 2 ,BS 3 ,BS 4 ,  BS 5 ,  BS 6 ,  BS 8 ,BS 9 ,  dan  BS 10 .  Sedangkan  isolat  bakteri  yang  tidak mampu  dalam  melarutkan  fosfat  yaitu,  BS 1 dan  BS 7 .  Isolat  bakteri  limbah  cair karet  yang  mampu  dalam  fiksasi  nitrogen  ada  7  isolat  yang  memiliki  nilai
absorbansi  yang tinggi  yaitu, BS 2 , BS 3 , BS 4 , BS 6 , BS 7 , BS 8 , dan BS 9 . Kemudian isolat yang memiliki nilai absorbansi yang rendah yaitu, BS 1 , BS 5 , dan BS 10 .

## DAFTAR PUSTAKA
Andriani, Y., Sari, I. R. J., Fatkhurrahman, J. A., & Harihastuti, N. (2019). Potensi Cemaran  Lingkungan  di  Industri  Karet  Alam  Crumb  Rubber. Prosiding SNPBS (Seminar Nasional Pendidikan Biologi dan Saintek) Ke-4 , 445–451. Angraini,  N.,  &  Yanti,  F.  (2021).  Penggunaan  Spektrofotometer  Uv-Vis  untuk Analisis Nutrien Fosfat pada Sedimen dalam Rangka Pengembangan Modul Praktikum  Oseanografi  Kimia. Jurnal  Penelitian  Sains , 23 (2),  78. https://doi.org/10.56064/jps.v23i2.620
Asril,  M.,  &  Lisafitri,  Y.  (2020).  Isolasi  Bakteri  Pelarut  Fosfat  Genus Pseudomonas dari Tanah Masam Bekas Areal Perkebunan Karet di Kawasan Institut  Teknologi  Sumatera. Jurnal  Teknologi  Lingkungan , 21 (1),  40–48. https://doi.org/10.29122/jtl.v21i1.3743
Bulele,  T.,  Rares,  F.  E.,  &  Porotu’o,  J.  (2019).  Identifikasi  Bakteri  dengan Pewarnaan  Gram  pada  Penderita  Infeksi  Mata  Luar  di  Rumah  Sakit  Mata Kota Manado. EBiomedik , 7 (1), 1–7.
Ginting,  S.  S.  B.,  Suryanto,  D.,  &  Desrita,  D.  (2018).  Isolasi  dan  Karakterisasi Bakteri Potensial Probiotik pada Saluran Pencernaan Ikan Bandeng (Chanos chanos). Acta Aquatica: Aquatic Sciences Journal , 5 (1). https://doi.org/10.29103/aa.v5i1.390
Islam, H., Nelvia, N., & Zul, D. (2019). Isolasi dan Uji Potensi Bakteri Fiksasi N Non  Simbiotik  Asal  Tanah  Kebun  Kelapa  Sawit  dengan  Aplikasi  Tandan Kosong  dan  Limbah  Cair  Pabrik  Kelapa  Sawit. Jurnal  Agroteknologi , 9 (2), 35. https://doi.org/10.24014/ja.v9i2.4508
Ismail,  Y.  S.,  Yulvizar,  C.,  &  Putriani,  P.  (2017).  Isolasi,  Karakterisasi  dan  Uji Aktivitas  Antimikroba  Bakteri  Asam  Laktat  dari  Fermentasi  Biji  Kakao (Theobroma Cacao L.). Jurnal Bioleuser , 1 (2), 45–53.
Kosasi,  C.,  Lolo,  W.  A.,  &  Sudewi,  S.  (2019).  Isolasi  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  dari  Bakteri  yang  Berasosiasi  dengan  Alga  Turbinaria  Ornata (Turner)  J.  Agardh  serta  Identifikasi  secara  Biokimia. PHARMACON , 8 (2), 351. https://doi.org/10.35799/pha.8.2019.29301
Kuruvila, S., Suresh, A., Vijayan, A., Chandrasekhar, R., & Davis, D. (2021). A Study  on  the  Microbial  Processing  of  Natural  Rubber  Wastewater  Effluent From  a  Rubber  Processing  Unit.  In Advances  in  Bioscience  and Biotechnology Research, 1 . Darshan Publishers.
Laina, L., Mida, M., Roaini, R., & kapli Hari, H. (2018). Uji kualitas Air Sungai Sekitar  Penduduk  Desa  Kebagusan  Kec.  Gedongtataan  Kab.  Pesawaran terhadap  Limbah  Cair  di  PTPN  VII  Way  Berulu. Prosiding  Seminar Nasional Sains dan Teknologi Terapan (Vol. 1) , 131–135.
Panjaitan,  F.  J.,  Bachtiar,  T.,  Arsyad,  I.,  Lele,  O.  K.,  &  Indriyani,  W.  (2020). Karakterisasi Mikroskopis dan Uji Biokimia Bakteri Pelarut Fosfat (Bpf) dari Rhizosfer  Tanaman  Jagung  Fase  Vegetatif. CIWAL  (Jurnal  Ilmu  Pertanian dan Lingkungan) , 1 (1), 9–17.
Rahmawati,  A.  R.,  Ulkhaq,  M.  F.,  Susanti,  D.,  Kenconojati,  H.,  &  Fasya,  A.  H.
(2021).  Identification  of  Aeromonas  Salmonicida  and  Edwardsiella  Ictalury in  Live  Fish  that  Will  Be  Trafficked  from  Yogyakarta  Special  Region.
Journal of Marine and Coastal Science , 10 (2), 68.
https://doi.org/10.20473/jmcs.v10i2.27658
Rusdiansyah, A. I. (2018). Kumpulan Esai Inovatif . GUEPEDIA.
Sitorus,  E.,  Sutrisno,  E.,  Armus,  R.,  Gurning,  K.,  Fatma,  F.,  Parinduri,  L.,  & Priastomo, Y. (2021). Proses Pengolahan Limbah . Yayasan Kita Menulis.