Skrining dan Identifikasi Bakteri Pektinolitik Endosimbion dalam Sistem Pencernaan Serangga Penggerek Kopi ( Hypothenemus hampei Ferr.)
Gatot Kusiyanto 1) , Purwatiningsih 1) , Kahar Muzakhar 1)*
1) Program Studi Magister Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Jember, Jl.
Kalimantan No. 37, Jember, Jawa Timur, Indonesia
*) Alamat korespondensi: kaharmzk@unej.ac.id

## ABSTRAK
Serangga Hypothenemus  hampei memiliki  kemampuan  untuk  menggerek  biji  kopi,  dan digunakannya sebagai sumber makanan, tempat hidup dan siklus hidup. Aktivitas hidup dari H. hampei menyebabkan  rontoknya  buah  kopi  dan  penurunan  kualitas  serta  kuantitas  buah  kopi  hingga  40%. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  isolat  bakteri  pektinolitik  yang  memiliki  toleransi  tinggi terhadap  lingkungan  khususnya  kafein,  tanin  dan  polifenol.  Prosedur  penelitian  terdiri  dari  tahap pembuatan  media  skrining  bakteri  pektinase,  isolasi  bakteri  endosimbion  dan  identifikasi  spesies  serta fisiologi  bakteri.  Berdasarkan  hasil  identifikasi  dan  skrining  bakteri  pada  sistem  pencernaan H.  hampei didapatkan  15  isolat  bakteri  pektinolitik  endosimbion.  Hasil  identifikasi  tiga  isolat  terpilih  diketahui bahwa  isolat  2B  termasuk  golongan Enterobacter sp.  atau Actinobacillus sp.,  isolat  31B  masuk  ke  dalam Micrococcus sp.  dan  isolat  42B  termasuk Chromobacterium sp.  Penelitian  ini  berguna  sebagai  kajian untuk  strategi  penanganan  hama  serangga H.  hampei dengan  menghambat  pertumbuhan  bakteri pektinolitik.
Kata kunci : skrining, pektinolotik, Hypothenemus hampei , endosimbion
Screening and Identification of Pectinolytic Endosymbiontic Bacteria in the Digestive System of Coffee Berry Borer ( Hypothenemus hampei Ferr.)
Gatot Kusiyanto 1) , Purwatiningsih 1) , Kahar Muzakhar 1)*
1) Study Program of Biology Postgraduate, Faculty of Mathematics and Natural Sciences, University of Jember,
Kalimantan Street No. 37, Jember, East Java, Indonesia
*) Email: kaharmzk@unej.ac.id

## ABSTRACT
Hypothenemus  hampei insects  have  the  ability  to  drill  coffee  beans,  and  then  it  is  used  as  food sources, living places and life cycles. The life activity of H. hampei causes the fruit fall and decreased the quality and quantity of coffee fruit up to 40%. This study aimed to obtain isolates of pectinolytic bacteria that  tolerant  to  the  environment,  especially  caffeine,  tannins  and  polyphenols.  The  research  procedure consisted  of  the  making  of  screening  media  of  pectinase  bacteria,  the  isolation  and  identification  of bacterial species as well as its physiology. Based on the results of identification and screening of bacteria in the  digestive  system H.  Hampei, it  was  obtained  15  isolates  of  the  bacteria  pectinolytic  endosymbiont . Three  isolate  obtained  were  identified  which  were  2B  isolate  included  the Enterobacter sp.  or Actinobacillus sp.,  31B  isolate  was  similar  to Micrococcus sp.,  and  42B  isolate  was  close  to Chromobacterium sp.  This  research  was  useful  as  a  study  for  insect  pest  management  strategy  of H. hampei by inhibiting the growth of pectinolytic bacteria.
Keywords: screening, pectynolitic, Hypothenemus hampei , endosymbiont

## PENDAHULUAN
Kopi ( Coffea sp.) merupakan komoditas perkebunan  utama  yang  ada  di  Indonesia. Produksi  kopi  di  Indonesia  pada  tahun  2012 mencapai  748  ribu  ton  yang  terdiri  dari  kopi
robusta  ( C.  Canephora )  sebesar    601.000  ton (80,4%) dan kopi arabika ( C. Arabica ) sebesar 147.000  ton  (19,6%)  atau  sekitar  6,6% produksi  kopi  dunia,  sehingga  Indonesia berada  di  posisi  ketiga  sebagai  produsen  kopi terbesar  setelah  Brazil  dan  Vietnam  [1].  Pada
saat  ini,  produksi  kopi  di  Indonesia  terus mengalami  penurunan  dari  tahun  ke  tahun selanjutnya  yaitu  740.000  ton  (2013),  712.000 ton  (2014),  550.000  ton  (2015),  664.000  ton (2016),  669.000 ton (2017) hingga pada tahun 2018  hanya  mencapai  674.000  ton  dan  pada akhirnya  Indonesia  berada  di  posisi  keempat produsen kopi setelah Kolombia [2]. Penyebab utama  penurunan  produksi  kopi  di  Indonesia adalah  adanya  hama  pada  kopi  yaitu  serangga penggerek kopi Hyphotenemus hampei Ferr. Serangga H. hampei memiliki kemampuan  untuk  menggerek  biji  kopi,  dan digunakannya sebagai sumber makanan, tempat hidup dan siklus hidup. Aktivitas hidup dimulai  dari  larva H.  hampei yang  berada  di dalam  biji  kopi,  memakan  biji  kopi  sampai dewasa,  sehingga  seluruh  siklus  hidupnya  ada di  dalam  biji  kopi.  Aktivitas  hidup  dari H. hampei menyebabkan rontoknya buah kopi dan penurunan  kualitas  serta  kuantitas  buah  kopi hingga  40%  [3].  Siklus  hidup  dari H.  hampei yang  berada  di  dalam  biji  kopi  menyebabkan sulitnya  penanganan  hama  tersebut.  Serangga ini  mampu  bertahan  hidup  walaupun  pada buah kopi mengandung kadar kafein, polifenol dan tannin tinggi yang bersifat toksik terhadap serangga tersebut [4].
Siklus  hidup H.  hampei yang  dominan berada  pada  substrat  ekstrem  yaitu  biji  kopi menunjukkan  bahwa  serangga  ini  memiliki kemampuan adaptasi dan toleransi yang tinggi terhadap  kondisi  lingkungan  pada  biji  kopi. Kemampuan  untuk  hidup  pada  biji  kopi tersebut  disebabkan  karena  adanya  bakteri endosimbion  pada  saluran  pencernaan H. hampei. Bakteri endosimbion pada serangga H. hampei berfungsi untuk membantu menyediakan  nutrisi,  meningkatkan  toleransi terhadap  lingkungan  dan  resistensi  terhadap parasit  [5].  Pada  alat  pencernaan H.  hampei terdapat  bakteri Pseudomonas  flavus yang membantu mendegradasi kafein  pada biji kopi [6].  Namun  selain  bakteri  endosimbion  yang membantu untuk mendegradasi kafein, serangga H.  hampei juga  memerlukan  sumber karbon  sederhana  untuk  metabolismenya. Sumber  karbon  sederhana  didapat  dengan memecah  substrat  polisakarida  kompleks menjadi monomer sederhana yang bisa diserap oleh  serangga.  Pada  biji  kopi,  terdapat kandungan  C  yang  cukup  tinggi  yang  berasal dari  polisakarida  seperti  selulosa  dan  pektin. Kandungan  selulosa  pada  biji  kopi  robusta sebesar 32-42%, pada biji kopi arabika sebesar
41-43%  sedangkan  pektin  pada  kopi  sebesar 2% [7].
Bakteri  pektinolitik  endosimbion  pada
H. hampei menghasilkan enzim pektinase yang mendegradasi  pektin  di  dalam  biji  kopi. Dengan ditemukannya fenomena bakteri endosimbion di  dalam alat pencernaan serangga  hama,  maka  dapat  digunakan  untuk pengendalian  populasi  dari  hama  yaitu  dengan pemutusan  mekanisme  rantai  simbiosis  yang ada di dalam alat pencernaan.
Sebagai  tahap  awal  yang  harus  diteliti dan  diketahui  adalah  melakukan  identifikasi bakteri pektinolitik yang bersimbiosis di dalam alat  pencernaan H.  hampei .  Tahap  kedua adalah  karakterisasi  enzim  pektinase  yang dihasilkan  oleh  bakteri  endosimbion  dan analisis mekanisme aktivasi. Dengan diketahui mekanisme aktivasi dan penghambatan ( blocking) aktivasi  pektinase  dalam  alat pencernaan H.  hampei akan  menyebabkan metabolisme pencernaannya terganggu.

## METODE PENELITIAN
Pembuatan  media  skrining  bakteri peptinase. Langkah  awal,  Pembuatan  pektin agar  (pektin  0,5%,  Na 2 HPO 4 6  g/L.  KH 2 PO 4 3 g/L,  NaCL  0,5  g/L,  MgSO 4 0,2  g/L,  NH 4 Cl  1 mg/L,  pepton  2  g/L,  dan  agar  17  g/L)  dengan cara  mencampurkan  bahan-bahan  pembuatan media  agar  pektin.  Selanjutnya  dilakukan sterilisasi.  Setelahnya  media  pektin  agar  cair dituang  ke  dalam  cawan  petri,  selanjutnya didiamkan sampai padat.
Isolasi  bakteri  endosimbion .  Serangga dewasa H.  hampei pada  kopi  diseleksi  dari serangga  lain  dan  diambil  10  ekor.  Sampel dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  yang berisi  alkohol  40%  dengan  garam  fisiologis 0,9% (pengenceran 10 -1 ) dihomogenasi menggunakan  vorteks  kemudian  dilakukan pengenceran  bertingkat  sampai  10 -10 dengan mengambil 1 ml dari pengenceran sebelumnya. Kemudian  suspensi  diencerkan  dengan  9  mL NaCl  0,9%  steril.  Sebanyak  1  mL  suspensi serangga dewasa diambil dari pengenceran 10 -3 sampai  10 -10 ,  lalu  ditumbuhkan  pada  media pektin  agar.  Kultur  diinkubasi  selama  24-48 jam  pada  suhu  37°C.  Koloni  bakteri  yang tumbuh kemudian dimurnikan dengan menginokulasikannya  kembali  pada  media nutrient  agar dalam  cawan  petri  sampai didapatkan seluruh biakan tersebut benar-benar murni.
Identifikasi spesies dan fisiologi bakteri .  Identifikasi  secara  makroskopis diawali  dengan  dilakukan  pengujian  zona bening  dengan  menggunakan  larutan congo red (0,1%  w/v)  sebagai  larutan  penguji  dan NaCl  1%  sebagai larutan pencuci.  Sebanyak 1 ml  larutan congo  red (0,1%  w/v)  sampai merata  kemudian  diinkubasi  selama  15  menit pada  suhu  kamar.  Kemudian  sampel  dicuci dengan  menggunakan  larutan  NaCl  2  M sebanyak  dua  kali.  Kemudian  diamati  dan diukur  zona  bening  yang  terbentuk.  Indeks aktivitas  peptinase  dapat  diukur  dengan menggunakan persamaan sebagai berikut [8]:

## Indeks Aktivitas Enzim
= diameter zona bening (mm)
diameter koloni (mm)
Pengamatan  bakteri  secara  mikroskopik yang  meliputi  pewarnaan  Gram,  uji  motilitas, pewarnaan endospora dan bentuk sel.
Pengamatan dilakukan menggunakan mikroskop (Olympus CX 21) dengan perbesaran  1000  kali.  Uji  biokimia  dilakukan dengan  menginokulasikan  bakteri  ke  dalam larutan  yang  masing-masing  mengandung glukosa,  sukrosa,  laktosa,  arabinosa,  maltosa, dan mannitol. Setiap larutan mengandung BTB ( Brom  Timol  Blue )  sebagai  indikator  pH  dan ditambahkan  pepton  sebagai  sumber  nitrogen, vitamin,  dan  mineral.  Uji  katalase  dilakukan dengan  menambahkan  larutan  3%  H 2 O 2 pada koloni bakteri. Kemudian pembentukan
gelembung udara (positif) diamati yang terjadi pada  koloni.  Uji  sitrat  dilakukan  untuk mengetahui kemampuan bakteri dalam memfermentasi sitrat.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi dan skrining bakteri pektinolitik. Pada  tahap  awal  kegiatan  isolasi dan  skrining  bakteri    yang  terdapat  pada  alat pencernaan    serangga H.  hampei yang ditumbuhkan  pada  media Nutrient  Agar (NA) didapatkan  48 isolat.  Kemudian isolat  tersebut ditumbuhkan  pada  media  selektif  pektin  dan hanya ada 15  isolat mampu tumbuh yaitu 1A, 2B,  3A,  5A,  10B,  12A,  17A,  18A,  31B,  37A, 40A,  42B,  45B,  47A,  dan  48B.  Isolat  yang mampu  membentuk  zona  bening  ada  12  yaitu 2B, 5A, 10B, 12A, 17A, 18A, 31B, 37A, 40A, 42B, 47A, dan 48B.
Aktivitas  pektinolitik  dari  isolat  bakteri uji dilihat berdasarkan kemampuan membentuk  zona  bening  di  sekeliling  koloni bakteri  yang  ditumbuhkan  pada  media  pektin yang telah ditetesi larutan iodin 0,03%. Fungsi dari  larutan  iodin  0,03%  yaitu  mempercepat deteksi  dan  penyebaran  bakteri  dalam  kultur bakteri yang ditandai dengan zona bening yang terbentuk. Zona  bening  menunjukkan  bahwa isolat bakteri menggunakan pektin pada media untuk  pertumbuhan  dan  menyebabkan  pektin di  sekeliling  koloni  habis  terpakai  sehingga terbentuk    zona  bening.  Zona  bening  pada media  pektin  terbentuk  disekitar  pertumbuhan koloni  maupun  hanya  terbentuk  pada  area koloni  itu  sendiri  [9].  Semakin  besar  indeks pektinase,  maka  semakin  besar  pula  aktivitas pektinolitik yang dihasilkan [10].
Berdasarkan  hasil  pengukuran  zona bening  diperoleh  isolat  2B  memiliki  nilai indeks  aktivitas  pektinolitik  yaitu  9,91,  isolat 31B  dengan  nilai  indeks  aktivitas  pektinolitik sebesar  5,56  dan  isolat  42B  memiliki  nilai indeks  aktivitas  pektinolitik  yaitu  5,47  (Tabel 1).  Zona bening pada media pektin pada isolat 2B  memiliki  indeks aktivitas pektinolitik yang paling  tinggi  dibandingkan  dengan  dua  isolat lainnya yaitu isolat 31B dan isolat 42B, namun dalam  hal  ukuran  koloni  isolat  2B  memiliki diameter koloni paling kecil jika dibandingkan kedua  isolat  tersebut.  Hal  ini  menunjukkan bahwa isolat 2B memiliki  pertumbuhan koloni yang lebih rendah dibandingkan dengan kedua isolat  lainnya  pada  media  pektin.  Isolat  yang memiliki  zona  bening  yang  luas  tanpa  diikuti
oleh  tingginya  indeks  zona  bening  cenderung akan  memproduksi  enzim  dengan  aktivitas yang lebih tinggi [11].
Tabel 1. Indeks  aktivitas  bakteri  pektinolitik isolat uji No Kode isolat Diameter zona bening (mm) Diameter koloni (mm) Aktivitas pektinolitik 1. 1A 1,75 1,75 1 2. 2B * 33 3,33 9,90 3. 3A 4,75 4,75 1 4. 5A 13,75 16 0,86 5. 10B 9 6,25 1,44 6. 12A 1,75 1,75 1 7. 17A 2,5 2 1,25 8. 18A 13,75 6,67 2,06 9. 31B * 50,05 9 5,56 10. 37A 2 1,13 1,78 11. 40A 3 2 1,5 12. 42B * 40,13 7,33 5,47 13. 45B 7 7 1 14. 47A 10,1 6,33 1,59 15. 48B 9,43 11,67 0,80 * isolat terpilih Dari hasil perbandingan indeks aktivitas pektinolitik menunjukkan bahwa ada perbedaan  indeks  pektinase  yang  dihasilkan dalam  menghidrolisis  substrat  pektin  oleh masing-masing  isolat.  Setelah  melalui  proses tahapan uji zona bening pada akhirnya didapat 12  isolat  bakteri  yang  mampu  mendegradasi pektin. Di antara isolat tersebut yang memiliki zona  bening  terbesar  adalah  isolat  nomor  2B, 31B, 42B (Gambar 1) selanjutnya diidentifikasi secara makroskopik, mikroskopik dan uji biokimia.
(a) (b) (c)
Gambar  1. Hasil  uji  aktivitas  pektinolitik media  pektin  dengan  pemberian larutan  Iodine  0,03%  (a)  Isolat 2B; (b) Isolat 31B; (c) Isolat 42
Pengamatan secara makroskopik .
Pengamatan  makroskopik  bakteri  meliputi pengamatan  morfologi  dan  pengujian  zona bening [12, 13]. Karakteristik koloni isolat 2B yaitu bentuk koloni bulat, elevasi koloni datar, tepi  koloni  penuh,  dan  berwarna  putih  susu. Isolat 31B dan 42B bentuk koloni memanjang, elevasi  koloni  datar,  tepi  koloni  penuh  dan warna koloni putih (Gambar 2).
(a) (b) (c)
Gambar 2. Hasil pengamatan makroskopik (a) isolat 2B; (b) isolat 31B; (c) isolat 42B
Tabel 2. Pengamatan makroskopis bakteri pektinolitik No Kode Isolat Morfologi Koloni Bentuk Elevasi Tepi Warna 1 2B Bulat Datar Penuh Putih susu 2 31B Panjang Datar Penuh Putih susu 3 42B Panjang Datar Penuh Putih susu
Pengamatan secara mikroskopik .
Isolat  2B  dan  42B  adalah  Gram  negatif  dan selnya berbentuk batang. Sedangkan isolat 31B adalah Gram positif dan selnya berbentuk bulat (Gambar 3 dan 4).
(a) (b) (c)
Gambar  3. Uji  Gram  (a)  Isolat  2B;  (b)  Isolat
31B; (c) Isolat 42B (a) (b) (c)
Gambar  4 .  Hasil  pewarnaan  Gram  (a)  Isolat 2B; (b) Isolat 31B; (c) Isolat 42B (a) (b)
(c)
Gambar 5. Uji  oksidase  (a)  Isolat  2B;  (b) Isolat 31B; (c) Isolat 42B
Pada pewarnaan endospora semua isolat menunjukkan  hasil  NT  ( Not  Testable ).  Spora bakteri adalah mekanisme bakteri yang sengaja diatur  dalam  upaya  untuk  mengamankan  diri terhadap  efek  buruk  dari  lingkungan  eksternal [14].  Pewarna Malachite  Green dan  Safranin dapat bekerja dengan baik pada bakteri karena alkalin  (komponen chromophoric bermuatan positif),  sedangkan  sitoplasma  bakteri  bersifat basofilik,  hal  ini  menyebabkan  bakteri  dapat menyerap  zat  warna  dengan  baik  [15].  Uji motilitas digunakan untuk mengetahui pergerakan  bakteri.  Bakteri    bergerak  bebas memiliki  flagel  sebagai  alat  geraknya  [16]. Hasil  isolat  uji  2B  dan  42B  memiliki  hasil yang  positif  atau  motil.  Sedangkan  isolat  uji 31B memiliki hasil yang NT ( Not Testable ).
Uji  biokimia .  Uji  biokimia  meliputi  uji katalase,  uji  karbohidrat,  dan  uji  sitrat.  Uji biokimia bakteri adalah suatu perlakuan untuk memudahkan  identifikasi  bakteri  berdasarkan sifat-sifat fisiologinya [13].
Tabel 3. Hasil uji biokimia pada isolat uji
No Kode Isolat Uji Katalase Uji Karbohidrat Uji Sitrat 1. 2B - + + 2. 31B + NT + 3. 42B + + +
Keterangan:  NT  = Not  Testable (penelitian  yang tidak mungkin untuk dilakukan uji lanjutan)
Uji katalase digunakan
untuk mendeteksi bakteri yang mampu menghasilkan enzim  katalase.  Pembentukan  gelembung  saat penetesan  larutan  H 2 O 2 menunjukkan  hasil  tes positif  dengan  adanya  pelepasan  oksigen  [17]. Isolat  2B  adalah  negatif,  sedangkan  uji  pada
isolat  31B  dan  42B  memiliki  hasil  positif terhadap uji katalase (Gambar 5).
(a)
(b) (c)
Gambar 5. Uji  katalase  (a)  Isolat  2B;  (b)
Isolat 31B; (c) Isolat 42B
Uji  karbohidrat  dengan  hasil  positif diperoleh  apabila  terdapat  perubahan  warna dan  terbentuknya  gas  yang  menunjukkan bahwa  terjadinya  fementasi  glukosa  oleh bakteri. Fermentasi dapat menghasilkan berbagai senyawa asam seperti asam laktat dan propionat, ester, keton dan gas [18]. Dari hasil uji  karbohidrat  isolat  2B  dan  42B  hanya memiliki hasil positif pada uji glukosa, dan uji motilitas,  laktosa,  manitol  dan  sukrosa  yang dikonfirmasi oleh perubahan warna dari merah ke warna kuning serta terbentuknya gelembung gas (Tabel 3).
Uji simon sitrat digunakan untuk melihat kemampuan bakteri enterik dapat memfermentasi  sitrat  menjadi  sumber  karbon. Mikroorganisme  yang  mampu  menggunakan sitrat,  akan  menyebabkan  kekurangan  asam sehingga  terjadi  peningkatan  pH  dan  terjadi perubahan warna dari hijau ke biru.
Identifikasi  bakteri .  Hasil  pengamatan secara  makroskopik,  mikroskopik  dan  uji biokimia  menunjukkan  bahwa  isolat  2B diketahui memiliki karakter yang sama dengan bakteri Enterobacteriaceae sp. atau Actinobacillus sp.  Isolat  31B  memiliki kesamaan  dengan  bakteri Micrococcus sp., sedangkan isolat 42B dengan bakteri Chromobacterium sp. (Tabel 4).
Tabel 4. Hasil identifikasi bakteri No Kode Isolat Jenis bakteri 1. 2B Enterobacter sp. Actinobacillus sp. 2. 31B Micrococcus sp. 3. 42B Chromobacterium sp.
Enterobacter sp.  merupakan  bakteri Gram  negatif,  bersifat  fakultatif  anaerobik, berbentuk  batang  dan  bisa  bergerak  (motil).
Bakteri  berbentuk  batang,  dan  panjangnya  1-5 m.  Suhu  pertumbuhan  optimum  30-40°C. Apabila Enterobacter sp.  dikembangbiakkan pada  media  buatan,  maka menunjukan aktivitas mengubah glukosa, selanjutnya membentuk  asam  dan  gas.  Bakteri  ini  dapat membentuk  kapsul,  sitrat,  dan  asetat  yang dapat  digunakan  sebagai  sumber  karbon  satu- satunya [13].
Actinobacillus sp. merupakan  bakteri berukuran  sekitar  0,7  x  1,0  m.  Bakteri  ini dapat  tumbuh  soliter  atau  berkoloni,  tidak bergerak,  bersifat  fakultatif  anaerob  dan kapnofilik  [19]. Actinobacillus sp.  memiliki fimbriae,  membran  sel  yang  mengandung protein  dan  mampu  menghasilkan  leukotoksin serta komponen seluler lain.
Micrococcus sp.  merupakan  bakteri dengan  bentuk  selnya  bulat.  Diameter  koloni 1-2  m.  Koloni  muncul  di  atas  permukaan media NA. Koloni berwarna kuning.
Permukaan  koloni  mengkilat.  Termasuk  ke dalam bakteri Gram positif. Suhu pertumbuhan optimum 25-37°C. Kebutuhan oksigen termasuk  aerob  dan  anaerob.  Termasuk  pada bakteri  yang  tidak  mampu  bergerak.  katalase, oksidase,  dan  produksi  H 2 S  bersifat  positif. Mampu  tumbuh  dengan  baik  pada  media salinitas 7,5% NaCl.
Chromobacterium sp. merupakan bakteri  fakultatif  anaerob,  Gram  negatif  dan berbentuk  batang  serta  berpigmen  ungu. Bakteri  ini  umumnya  ditemukan  di  daerah beriklim  tropis  dan  subtropis,  pada  air  dan tanah,  juga  pada  manusia  dan  hewan  (bila terjadi infeksi) [20].

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil identifikasi dan skrining  bakteri  pada  sistem  pencernaan H.
hampei maka  didapatkan  15  isolat  bakteri pektinolitik  endosimbion.  Hasil  identifikasi tiga  isolat terpilih  didapatkan  bahwa  isolat  2B termasuk  golongan Enterobacter sp.  atau Actinobacillus sp.,  isolat  31B  termasuk  ke dalam Micrococcus sp.  dan  isolat  42B termasuk Chromobacterium sp.  Identifikasi spesies  bakteri  lebih  lanjut  menggunakan pendekatan molekuler perlu dilakukan.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih disampaikan kepada Program  Studi  Magister  Biologi  Fakultas
MIPA Universitas Jember dan pihak yang telah membantu proses penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Kementerian  Perindustiran  Republik Indonesia (2013) Produksi kopi nusantara  ketiga  terbesar  di  dunia . http://www.kemenperin.go.id/artikel /6611/Produksi-Kopi-Nusantara-Ketiga- Terbesar-Di-Dunia, Diakses  pada  25 Agustus 2018.
[2] Indonesia  Investments  (2017)  Kopi . https://www.indonesia-
investments.com/id
/bisnis/komoditas/kopi/item186, Diakses pada 25 Agustus 2018.
[3] Vega  F,  Jaramillo  J,  Castillo  A,  Infante
F  (2009)  The  coffee  berry  borer,
Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleoptera:  Curculionidae):  A  short review,  with  recent  findings  and  future research directions. Terrestrial Arthropod Reviews 2 (2): 129:147. [4] Navarro  JAC,  Vega  FE,  Karaoz  U,  Hao Z,  Jenkins  S,  Lim  HC  (2015)  Gut microbiota mediate caffeine
detoxification  in  the  primary  insect  pest of  coffee.  Nature  Communication 1 (2):1-8.
[5] Raina  HS,  Singh  A,  Popli S,  Pandey  N, Rajagopal  R  (2015)  Infection  of bacterial  endosymbionts  in  insects:  A comparative study of two techniques viz PCR  and  FISH  for  detection  and localization  of  symbionts  in  Whitefly. Bemisia  tabaci. PLoS  ONE  10  (8): e0136159. doi:10.1371/journal. pone.0136159.
[6] Marino YAC, Ospina OE, Rodrigues JV (2018)  High  diversity  and  variability  in the  bacterial  microbiota  of  the  coffee berry borer (Coleoptera:  Curculionidae), with emphasis on Wolbachia. Journal of Applied Micorbiology 125 (2): 528-543.
[7] Berlitz  HD,  Grosch  W,  Schieberle  P (2009) Food Chemistry . Springer Berlin, Heidelberg.
[8] Kasana  RC,  Salwan  R,  Dhar  H,  Dutt  S, Gulati  A  (2008)  A  rapid  and  easy method  for  the  detection  of  microbial cellulases  on  agar  plates  using  Gram’s iodine.  Current  Microbiology 57:  503- 507.
[9] Rautela GS, Cowling, EB (1966) Simple cultural  test  for  relative  celluloytic activity  of  fungi.  Applied  Microbiology 14 (6): 892-898.
[10] Apun  K,  Jong  BC,  Salleh  MA  (2000) Screening  and  isolation  of  a  cellulolytic and  amylolytic  Bacillus  from  sago  pith waste.  The  Journal  of  General  and
Applied Microbiology 46: 263–267.
[11] Purwadaria  T,  Marbun  PA,  Sinurat  AP, Ketaren  PP  (2003)  The  comparison  of cellulase  activities  from  bacteria  and molds  isolated  from  termites.  Jurnal
Ilmu  Ternak  dan  Veteriner 8(4):  213- 219.
[12] Jutono  J,  Soedarsono  S,  Hartadi  S, Kabirun  S,  Suhadi  D,  Soesanto  (1980) Pedoman praktikum mikrobiologi umum untuk  perguruan  tinggi.  UGM  Press,
Yogyakarta.
[13] Pelczar M, Chan EC (1986) Dasar-dasar Mikrobiologi. Universitas Indonesia Press, Jakarta.
[14] Waluyo  L  (2004)  Mikrobiologi  Umum. UMM Press, Malang.
[15] Volk  W  (1988)  Mikrobiologi  Dasar. Erlangga, Jakarta.
[16] Swift  FR  (1963)  A  hanging-drop technique  for  general  laboratory  use. Microchemical Journal 7 (1): 120–136.
[17] Serra B, Zhang J, Morales MD, de Prada GV,  Reviejo  J,  Pingarrón  JM  (2008)  A rapid  method  for  detection  of  catalase- positive  and  catalase-negative  bacteria based  on  monitoring  of  hydrogen peroxide  evolution  at  a  composite peroxidase  biosensor.  Talanta  75 (4): 1134–1139.
[18] Alatawi  A,  Susilowati  A,  Hailu  H (2015)  Biochemical  and  molecular characterization  of  food  contaminating bacteria isolates from food stall
vegetables. British Microbiology Research Journal 5 (5): 405–411.
[19] Socransky  SS,  Haffajee  AD,  Bogren  A,
Hasturk  H,  Feres  M,  Lopez  NJ  (2004)
Subgingivalis chronic periodontitis
subjects  from  different  geographic locations. Journal of Clinical Periodontology 31: 996-1002. [20] Madigan MT, Martinko JM, Dunlap PV, Clark DP (2008) Biology of
Microorganisms  12 th Edition . Pearson, San Fransisco.