## SKRINING FITOKIMIA DAN UJI ANTIOKSIDAN TERHADAP EKSTRAK BUNGA Limnocharis flava L DENGAN METODE DPPH
Ermi Abriyani*, Lia Fikayuniar, Mia Anisa Silvi, Arie Wichandar
Fakultas Farmasi, Universitas Buana Perjuangan Karawang, Jawa Barat, Indonesia. *Penulis Koresponding: ermi.abriyani@ubpkarawang.ac.id

## Abstrak
Tanaman  genjer  ( Limnocharis  flava L.)  merupakan  tanaman  yang  berbunga  sepanjang  tahun.  Bagian yang dapat dimanfaatkan pada tananam Limnocharis flava L. adalah daunnya, namun tidak jarang orang ikut  menyertakan  batang  dan  bunga Limnocharis  flava L.)  untuk  di  konsumsi.  Tujuan  penelitian  ini adalah untuk mengetahui hasil dari skrining fitokimia dan uji dari aktifitas antioksidan dari ekstrak bunga Limnocharis  flava L.).  Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu  ekstraksi  dengan  maserasi, skrining  fitokimia,  dan  uji  antioksidan  dengan  metode  DPPH  yang  merupakan  metode  yang  dilakukan dengan cara mengukur penangkapan radikal sintetik dalam pelarut organik polar pada suhu kamar. Hasil pengujian dari tiga ekstrak diperoleh nilai IC 5O ekstrak metanol bunga genjer sebesar 61,4224 ppm, nilai IC 50 ekstrak  Etil  asetat  bunga  genjer  sebesar  160,4368  ppm,  nilai  IC 50 ekstrak  n-heksana  bunga Limnocharis flava L. sebesar 433,2932 ppm. Kesimpulan dari penelitian yakni metabolit sekunder yang terdapat pada bunga genjer adalah flavonoid, saponin, tanin, polifenol dan kuinon. Hasil uji antioksidan dengan metode DPPH di dapatkan hasil antioksidan yang kuat pada ekstrak methanol.
Kata kunci: Limnocharis flava (L.) , skrining fitokimia, Antioksidan, DPPH method
Abstract
Genjer ( Limnocharis  flava L.) is  of  plants  that  bloom  throughout  the  year.  The  part  that  can  be  used  of Limnocharis  flava L. is  leaves,  but  more  people  used  stems  and  flowers  of Limnocharis  flava L. for consumption.  The  present  study  has  aim  to  determine  the  phytochemical  screening  and  antioxidants activity assay of Limnocharis flava L. bloom extracts. Method of the research are extraction by maceration, screening phytochemical, DPPH method which is by measuring the capture of synthetic radicals in polar organic  solvents  at  room  temperature.  The  results  of  phytochemical  screening  of Limnocharis  flava L. bloom  are  flavonoid,  saponin,  tannin,  polyphenols,  quinone.  Antioxidant  activity  assay  of Limnocharis flava L. bloom  from  three  extracts  have  resulted  IC 50 value  from  methanol  extract  61.4224  ppm,  ethyl acetate extract 160.4368 ppm and  n-hexane 433,2932 ppm. Methanol extract has a stronger antioxidant compared to ethyl acetate and n-hexane extracts by DPPH method.
Keywords: Limnocharis flava (L.), screening phytochemical, antioxidant, DPPH method

## PENDAHULUAN
Tanaman  air  di  Indonesia  sangatlah  beragam, baik yang ada di laut maupun di perairan darat. Salah satu  jenis  tanaman  di  perairan  darat  yang  telah  lama dimanfaatkan  oleh  masyarakat  Indonesia  adalah genjer    ( Limnocharis  flava L).  Genjer  merupakan tanaman  yang  hidup  di  daerah  perairan  yang  sejak lama  telah  dimanfaatkan  sebagai  bahan  pangan maupun  pakan.  Tanaman  ini  tumbuh  di  rawa-rawa, perairan  dangkal  misalnya  sawah,  kolam  ikan,  dan parit-parit  (Bergh  1994).  Tanaman  genjer  yang digolongkan sebagai tanaman sayur-sayuran, dimanfaatkan  oleh  masyarakat  di  Asia  khususnya Indonesia,  Thailand  dan  India  sebagai  sayuran pendamping  saat  makan.  Tanaman  perairan  dangkal ini  biasanya  bagian  yang  dimanfaatkan      adalah
daunnya, namun tidak jarang orang ikut menyertakan batang dan bunga genjer untuk  dikonsumsi. Tanaman genjer  mengandung  gizi  yang  cukup  lengkap,  dari protein, lemak, karbohidrat, mineral dan vitamin.
Keng-Fei ooH, et al (2015), melaporkan bahwa ekstrak dari tanaman Limnocharis flava L mengandaung  flavonoid  yakni  rutin  dan  juga  telah dilakukan  uji  antioksidannya.  Bagian  yang  diujinya adalah  akar,  batang  dan  daun.      Dari  penelitaian  ini maka  peneliti  tertarik  untuk  melakukan  penelitian dalam  menguji  skrining  fitokimia  dan  uji  antioksidan dengan  metoda  DPPH  pada  bunga  dari  tanaman Limnocharis flava L.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilakukan di laboratorium Kimia Bahan Alam,  Universitas  Buana  Perjuanagn  Karawang  dan jenis  penelitian  kualitatif.  Bahan  yang  digunakan dalam penelitian ini adalah Bunga genjer ( Limnocharis  flava L)  yang  dikumpulkan  dari  daerah Karawang,  n-  heksana,  etil  asetat,  methanol,  etanol p.a,  ammonia,  kloroform,  Amil  alkohol,  untuk identifikasi  flavonoid  dan  besi  (III)  flourida  (FeCl 0,1%),  Natrium  hidroksida  (NaOH),  aquadest, Vitamin C p.a ( Coated Ascorbic Acid Type Ec. Code 0425117 analysis 06202961), DPPH ( 1,1- diphenyl-2- picrylhydrazyl )  D9132-16,  Metanol  p.a  ( MERCK ), Etanol  p.a,    kertas  saring  dan  alumunium  foil.  Alat yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah Spektrofotometer  UV-  VIS  ( Thermo  Scientific 33- PPPTS2017-L205-0006), Neraca Analitik (ae- ADAM), Centrifuge PLC-025, incubator 601 MERCK (Gemmyco), Rotary Evaporator (EYELA OSB-2100- CE), water bath,  micro  pipet,  Vial  coklat  10  ml  dan alat-alat  yang  lazim  digunakan  dilaboratorium. Analisa data dengan menggunakan Microsoft excel.

## Prosedur Kerja

## Persiapan sampel
Sampel  yang  digunakan  adalah  Bunga  Genjer ( Limnocharis  flava L)  yang  di  determinasi  di Laboratorium  Sekolah  Ilmu  dan  Teknologi  Hayati Institut  Teknologi  Bandung  dengan  hasil  determinasi dengan  nomor  surat  1173/11.CO2.2/PL/2019.  Bunga genjer dikumpulkan dari bulan Februari sampai dengan Maret  2019  kemudian  dikering  anginkan  dan  di haluskan  seperti  serbuk,  disimpan  untuk  perlakuan berikutnya.

## Ekstraksi
Pembuatan  ekstrak  bunga  genjer  dilakukan  dengan metode  maserasi,  yaitu  500  gram  serbuk  bunga  genjer diekstraksi dengan menggunakan pelarut n-heksana, etil asetat  dan  metanol  secara  berturut-turut  dan  di kentalkan dengan rotary evaporator. Ekstrak kental dari masing-masing  pelarut  di  simpan  dan  dihitung  hasil persentase rendemennya.

## Skrining Fitokimia
a. Uji Alkaloid
Ekstrak  sebanyak  1  ml  ditambah  2  ml  HCl  2N  dan dikocok.  Campuran  selanjutnya  dibagi  dalam  2 tabung  berbeda.  Masingmasing  tabung  ditetesi  1 tetes reagen Dragendorff pada tabung pertama, pada tabung. kedua ditetesi 1 tetes reagen Mayer. Adanya senyawa  alkaloid  ditunjukkan  dengan  terbentuknya endapan  kuning  pada  penambahan  reagen  Mayer dan  terbentuknya  endapan  merah  pada  penambahan reagen Dragendorff (Tiwari et al . 2011)
b. Uji Flavonoid
Ekstrak  sebanyak  1  ml  ditambahkan  serbuk magnesium  secukupnya  dan  10  tetes  asam  klorida pekat. Adanya flavonoid ditandai dengan terbentuknya  warna  hitam  kemerahan,  kuning  atau jingga.
c. Uji Fenolik
Ekstrak  sebanyak  1  ml  ditambah  10  tetes  FeCl3 1%.  Hasil  positif  adanya  senyawa  fenolik  adalah terbentuknya  warna  merah,  biru,  ungu,  hitam  atau hijau (Harborne 1987).
d. Uji Saponin
Uji  saponin  dilakukan  dengan  melarutkan  sampel dalam  aquadest  kemudian  dipanaskan  selama  15 menit  lalu  dikocok  selama  15  atau  10  detik.  Jika terbentuk  buih  yang  stabil  selama  kurang  lebih  10 menit  dan  tidak  hilang  saat  ditambahkan  beberapa tetes  asam  klorida  2N,  maka  sampel  positif mengandung saponin (Harborne, 1987).
e. Uji Tanin
Uji  fitokimia  tanin  dilakukan  dengan  penambahan larutan  gelatin  dalam  ekstrak.  Hasil  positif ditunjukkan dengan adanya endapan putih. Sebanyak 3 ml ekstrak dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian ditambahkan dengan 5 tetes larutan gelatin,  jika  terbentuk  endapan  putih  maka  positif mengandung tanin (Kusumaningsih, 2015).
f. Uji Kuinon
Ektrak  bunga  genjer  dimasukkan  dalam  tabung reaksi,  lalu  ditambahkan  peraksi  NaOH,  jika terbentuk  larutan  warna  kuning  tua,  jingga  atau merah maka positif mengandung Kuinon (Harborne, 1987).

## Uji Antioksidan Dengan Metode DPPH
Metode  DPPH  adalah  metode  uji  aktivitas antioksidan  yang  sederhana,  mudah,  cepat  dan  peka, serta  hanya  menggunakan  sedikit  sampel.  DPPH merupakan  senyawa  radikal  bebas  stabil  kelompok nitrit  oksida.  Senyawa  ini  mempunyai  ciri-ciri  padatan berwarna  ungu  kehitaman,  larut  dalam  pelarut  etanol atau  methanol  (Prakash,  2001).  Metode  peredaman radikal  bebas  DPPH  didasarkan  pada  reduksi  dari radikal  bebas  DPPH  yang  berwarna  oleh  penghambat radikal  bebas  (Shivaprasad.,  2005).  Larutan  DPPH dengan  konsentrasi  50  ppm  dibuat  dengan  cara menimbang  DPPH  sebanyak  5mg  lalu  dilarutkan dengan  100ml  metanol  p.a  dalam  labu  ukur  lalu diamkan  selama  30  menit.  Larutan  sampel  dibuat dengan  konsentrasi  31,25  ppm,  62,5  ppm,  125  ppm, 250 ppm dan 500 ppm, dibuat dengan cara menimbang ekstrak  n-heksan,  etil  asetat  dan  metanol  bunga  genjer ( Limnocharis  flava L)  sebanyak  5mg  dan  dilarutkan dengan  metanol  p.a  sambil  dikocok  lalu  di  tambahkan larutan  metanol  sampai  dengan  100  ml  dalam  labu
ukur.  LArutan  pembanding  yang  dipakai  adalah Vitamin  C.  Absorbansi  di  ukur  dengan  menggunakan Spektrosdkoi  UV-Vis  pada  Panjang  gelombang  517 nm. Kemampuan  dalam  meredam  radikal  DPPH (inhibisi) dihitung dengan menggunakan persamaan  berikut;
X 100
Selanjutnya  dilakukan  perhitungan  IC 50 yang merupakan  konsentrasi  sampel  untuk  dapat meredam  50%  aktifitas  radikal  DPPH.  Nilai  IC 50 diperoleh  dari  plot  garis  antara  50%  daya  inhibisi dengan konsentrasi sampel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Ekstraksi  Bunga  Genjer  (Limnocharis  flava L.)
Ekstraksi  terhadap  serbuk  simplisia  bunga  genjer (Limnocharis flava L .) dilakukan dengan menggunakan ekstraksi  cara  dingin,  yaitu  dengan  metode  maserasi. Berikut  adalah  hasil  dari  maserasi  dan  persentase rendemennya.
Tabel  1.  Rendemen  Ekstrak  Bunga  Genjer  (Limnocharis
Flava L) Pelarut Ekstrak Kental (gram) Rendeme n % N-heksan 5 gram 0,5 % Etil Asetat 4 gram 0,4 % Metanol 50 gram 5 %

## Skrining fitokimia
Skrining  Fitokimia  dilakukan  terhadap  bunga  segar genjer,  simplisia  dan  ekstrak  bunga  genjer,  skrining fitokimia  bertujuan  untuk  mengetahui  informasi  awal golongan senyawa metabolit sekunder. Selain itu juga bertujuan  untuk  mengetahui  apakah  suatu  jenis tumbuhan  tersebut  potensial  untuk  dimanfaatkan (Harborne, 1978).
Tabel 2. Hasil skrining Fitokimia bunga genjer No. Golongan senyawa Simplisia 1. Alkaloid - 2. Flavonoid + 3. Saponin + 4. Tanin - 5. Polivenol - 6. Kuinon +
Keterangan : ( + ) : terdeteksi  ( - ) : tidak terdeteksi
Menurut Sirwutubun (2016), pelarut dapat mengekstrak  senyawa  senyawa  yang  memiliki kepolaran  yang  sama  atau  mirip  dengan  kepolaran pelarut  yang  digunakan.  Hasil  dari  skrining  fitokimia memperlihatkan adanya componen-komponen senyawa  bioaktif  dari  suatu  sampel  (E.  Abriyani, 2020).  Dari  hasil  skrining  fitokimia  terlihat  bahwa bunga genjer memiliki kandungan senyawa flavonoid, saponin dan kuinon.

## Uji aktivitas Antioksidan dengan metode DPPH
Penelitian  yang  dilakukan  adalah  menguji  aktivitas antioksidan  terhadap  ekstrak  bunga  genjer  yang dilakukan  dengan  metode  DPPH.  Metode  ini  dipakai karena memiliki beberapa keuntungan yaitu pengujiannya sederhana, mudah, cepat dan memerlukan  sampel  dan  jumlah  yang sedikit  dengan waktu  yang  singkat.  Selain  itu  metode  ini  terbukti  akurat dan praktis (Molyneux, 2004).
Pada  prinsipnya  pengukuran  aktivitas  antioksidan menggunakan  metode  DPPH  adalah  adanya  perubahan intensitas  warna  ungu  DPPH  yang  sebanding  dengan konsentrasi  larutan  DPPH  tersebut.  Radikal  bebas DPPH  yang  tidak  memiliki  pasangan  elektron  akan memberikan  warna  ungu  dan  warna  akan  berubah menjadi kuning saat elektronnya berpasangan. Perubahan  intensitas  warna  ungu  ini  terjadi  karena adanya  peredaman  radikal  bebas  yang  dihasilkan  oleh bereaksinya molekul DPPH dengan atom hidrogen yang dilepaskan  oleh  molekul  senyawa  sampel  sehingga terbentuk senyawa difenil pikril hidrazil dan menyebabkan  terjadinya  perubahan  warna  DPPH  dari ungu menjadi kuning. Perubahan warna ini mengakibatkan  perubahan  absorbansi  pada  panjang gelombang maksimum DPPH menggunakan spektrofotometri  UV-Vis  sehingga  akan  diketahui  nilai aktivitas  peredaman  radikal  bebas  yang  dinyatakan dengan nilai IC 50 (Molyneux, 2004).
Uji aktivitas antioksidan terhadap 50 mg ekstrak bunga genjer  dilakukan  dengan  membuat  seri  konsentrasi larutan 31,25, 62,5, 125, 250, 500 ppm. Hasil pengujian dari  tiga  ekstrak  diperoleh  nilai  IC 5O ekstrak  metanol bunga  genjer  sebesar  61,4224  ppm,  nilai  IC 50 ekstrak Etil  asetat  bunga  genjer  sebesar  160,4368  ppm,  nilai IC 50 ekstrak  n-heksana  bunga  genjer  sebesar  433,2932 ppm, seperti yang terlihat pada garfik 1, grafik2, dan grafik 3 secara berturut-turut.
Grafik  1. Grafik  konsentrasi  ekstrak  metanol  bunga  genjer terhadap % inhibisi
Grafik 2. Grafik konsentrasi ekstrak etil asetat  bunga genjer terhadap % inhibisi
Grafik 3. Grafik konsentrasi ekstrak n-heksana bunga genjer terhadap % inhibisi
Hal  ini  menunjukan  bahwa  dari  ketiga  ekstrak  yang mempunyai  antioksidan  yang  kuat  adalah  ekstrak metanol  karena  mempunyai  nilai  IC 50 50-100  ppm.  Ini disebabkan  karena  adanya  ekstrak  methanol  memiliki senyawa  fenolik  yang  atom  hydrogennya  bereaksi dengan radikal DPPH atau meredam radikal bebas dari senyawa  DPPH  seperti  pada  reaksi  berikut  seperti gambar 1.
Gambar  1.  Reaksi  Radikal  DPPH  dengan  Antioksidan (Windono et al., 2001)

## PENUTUP Kesimpulan
Dari  penelitian  ini  dapat  disimpulkan  bahwa  skrining fitokimia  dari  bunga  genjer  memperlihatkan  adanya kandungan  flavonoid,  saponin  dan  kuinon.  Pada  uji antioksidan dengan memakai metode DPPH memberikan  hasil  bahwa  dari  ekstrak  methanol
antioksidannya  kuat  (61-100  ppm)  yakni  dengan  IC 50 61,4224 ppm.

## Saran
Berdasarkan  dari  penelitian  yang  telah  dilakukan disaran  untuk  melakukan  kelanjutan  penelitian  dari bunga  genjer  ini  sehingga  dapat  diselidiki  senyawa yang memiliki bioaktifitas dari berbagai pelarut.

## DAFTAR PUSTAKA
Abriyani,  E.,  &  Fikayuniar,  L.  (2020).  Screening Phytochemical , Antioxidant Activity and Vitamin C  Assay  from  Bungo  perak-perak  (  Begonia versicolar Irmsch ) leaves. 10(3), 1–5.
Bergh MH. 1994. Limnocharis flava (L) Buchenau. Di dalam: Siemonsma JS dan Piluek K, editor. Plant
Resources  of  South-East  Asia.  Bogor:  Prosea. hlm 192-194
Harborne.  (1987).  Metode  Fitokimia,  Penentuan Modern Menganalisa Tumbuhan, Terbitan ke-2. Terjemahan  Padmawinata,  K.  dan  Soediro,  I. Bandung: Penerbit ITB.
Keng-fei Ooh, Hean-Chooi Ong, Fai-Chu Wong dan Tsun- Thai  Chai,  (2015),  hplc  profiling  of  phenolic  acids and  flavonoids  and  evaluation  of  anti-lipoxygenase and  antioxidant  activities  of  aquatic  vegetable limnocharis flava,
Kusumaningsih,  Triana., et.al .  2015.  Pengurangan Kadar  Tanin  Pada  Ekstrak  Stevia  Rebaudiana Dengan  Menggunakan  Karbon  Aktif .  Alchemy Jurnal Penelitian Kimia Vol. 11
Molyneux,  P.,  2004,  The  Use  of  The  Stable  Free Radical  Diphenylpicryl-hydrazyl  (DPPH)  for Estimating Antioxidant Activity, Songklanakarin J. Sci. Technol. , 26(2), 211-21
Prakash,  A.,  2001,  Antioxidant  Activity,  Medallion
Laboratories Analytical Progress, vol. 19, No.2.
Sediaoetama,A.D.  1993.  Ilmu  Gizi  Jilid  II.  Dian Rakyat. Jakarta.
Shivaprasad, H.N., Mohan, S., Kharya, M.D., 2005. In- vitro model  for  antioxidant  activity  evaluation.  a review.
Sirwutubun,  M.,  M.  M.  Ludong,  D.  Rawung.  2016.
Pengaruh Konsentrasi Etanol terhadap Karakteristik  Ekstrak  Pewarna  Alami  Buah Merah (Pandanus conoideus Lamk) dan Aplikasinya  pada  Produk  Pangan.  Fakultas Pertanian UNSRAT.
Tiwari, P., Kumar, B., Kaur, M., Kaur G. & Kaur H.,
2011, Phytochemical Screening And Extraction: A Review, International Pharmaceutica Sciencia, 1 (1), 98-106.