p-ISSN 2354-6565 / e-ISSN 2502-3438 DOI: 10.26874/kjif.v8i1.246
Penentuan Nilai FICI ( Fractional Inhibitory Concentration Index ) Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Karas ( Aquilaria microcarpa Baill.) dengan Amoksisilin terhadap Bakteri Salmonella typhi
Pratiwi Apridamayanti 1 , Trie Farica 1 , Robiyanto 1
1 Program Studi Farmasi, Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura, Pontianak, Kalimantan Barat, Indonesia
Corresponding author email : apridamayanti.pratiwi@gmail.com

## Abstrak
Karas ( Aquilaria microcarpa Baill.) adalah tanaman yang memiliki aktivitas antibakteri terhadap beberapa bakteri patogen. Tujuan dari penelitian ini untuk mengetahui nilai FICI dari  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  karas  ( Aquilaria  microcarpa Baill.)  dengan amoksisilin  terhadap  bakteri Salmonella  typhi .  Metode  yang  digunakan  adalah  metode difusi cakram Kirby-Bauer. Analisis data dilakukan secara deskriptif untuk mengetahui karakteristik  kombinasi.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  nilai  FICI  kombinasi ekstrak  etanol  daun  karas  ( Aquilaria  microcarpa Baill.)  dengan  amoksisilin  terhadap Salmonella  typhi adalah 4. Sehingga dapat disimpulkan bahwa karakteristik kombinasi terhadap bakteri Salmonella typhi bersifat indifferent atau tak berbeda.
Kata kunci : Aquilaria microcarpa Baill. , ekstrak etanol, amoksisilin, Salmonella typhi
FICI (Fractional Inhibitory Concentration Index ) Value Determination of Combination of Aquilaria microcarpa Baill. Ethanolic Extract with Amoxicillin against Salmonella typhi

## Abstract
Karas (Aquilaria microcarpa Baill.) is a plant that has antibacterial activity against some pathogenic  bacteria. The objective of this research was to determine the FICI value of combination  of  Aquilaria  microcarpa  Baill.  ethanolic  extract  with  amoxicillin  against Salmonella  typhi.  Method  used  was  Kirby-Bauer  disc  diffusion  method.  Data  analysis was  descriptively  to  know  combination  characteristic.  The  result  showed  that  the  FICI value  of  combination  of Aquilaria  microcarpa  Baill.  ethanolic  extract  with  amoxicillin against Salmonella typhi is 4. This show that the combination characteristic of bacteria is indifferent.
Keywords : Aquilaria microcarpa Baill., ethanolic extract, amoxicillin, Salmonella typhi.

## Pendahuluan
Demam  tifoid  merupakan  penyakit infeksi  sistemik  dan  salah  satu  dari foodborne disease
yang banyak ditemukan  di  semua  negara.    Tercatat angka  insidensi  mencapai  358/100.000 penduduk  per  tahun  di  daerah  pedesaan dan 760-810/100.000 penduduk per tahun di daerah perkotaan atau sekitar 600.000 dan 1,5 juta kasus per tahun dengan angka kematian  kasus  sebesar  1,6-3%  di Indonesia (Albert et al, 2003; Kementrian Kesehatan  Republik  Indonesia,  2011). Salmonella  typhi merupakan  bakteri patogen  penyebab  demam  tifoid.  Salah satu  antibiotik  yang  sering  digunakan dalam  pengobatan  demam  tifoid  adalah amoksisilin.  Kendala  yang  dihadapi dalam penggunaan  antibiotik  yaitu terjadinya resistensi antibiotik. Berdasarkan  data  penelitian  Juwita  dkk (2012)  persentase  resistensi  amoksisilin terhadap Salmonella  typhi sebesar  85% (Juwita,  Hartoyo,  &  Budiarti,  2012).
Berdasarkan hal tersebut, maka
diperlukan suatu alternatif untuk mengatasi kejadian resistensi amoksisilin, salah satunya yaitu dikombinasikan dengan bahan alam.
Penelitian  sebelumnya  menyebutkan bahwa    kombinasi  ekstrak Flammulina
velutipes dan  amoksisilin  mempunyai efek sinergis dalam menghambat
pertumbuhan B.cereus dan P.mirabilis (Tinrat,  2015).  Berdasarkan  penelitian tersebut,  maka kombinasi  tanaman  obat dan antibiotik merupakan salah satu cara untuk mengatasi dan mengurangi kejadian resistensi antibiotik serta
meningkatkan efektivitas antibiotik (Moussaoui  &  Alaoui,  2016).  Tanaman yang  telah  terbukti  memiliki  aktivitas antibakteri  adalah  daun  karas  (Sari, Muhani, & Fajriaty, 2017).
Daun  karas  memiliki  kandungan senyawa  metabolit  sekunder  meliputi fenol,  flavonoid,  tanin,  saponin,  dan steroid.  Ekstrak  etanol  daun  karas  yang mengandung  senyawa-senyawa  tersebut menurut penelitian Sari dkk (2017) telah terbukti  memiliki  aktivitas  antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus dan Proteus mirabilis (Sari et al., 2017).  Oleh karena itu, penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  dan karakteristik  dari  kombinasi  daun  karas dengan  amoksisilin  berdasarkan  nilai
FICI ( Fractional Inhibitory Concentration  Index )  terhadap  bakteri Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa dan Proteus  mirabilis .  Nilai FICI menunjukkan
karakteristik
kombinasi  dua  senyawa  antibakteri  atau lebih  dalam  menghambat  bakteri,  yang dapat bersifat sinergis, aditif, tak berbeda atau  antagonis  (Brooks  et  al.,  2013; Olajuyigbe & Afolayan, 2013).

## Metodologi
Bahan. Bahan-bahan  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  akuades, amoksisilin (Shadhong Bio-Technology), aqua  pro  injeksi ,  asam  sulfat  (Merck), barium  klorida  (Merck),  etanol  96% (Brataco),  Folin  Ciocalteau  (Merck), ekstrak  etanol  daun  karas  ( Aquilaria microcarpa Baill.),
DOI: 10.26874/kjif.v8i1.246
larutan DMSO (Merck), metanol,
Mueller Hinton Agar (Himedia) , natrium karbonat  10%  (Merck),  aluminium triklorida  10%  (Merck),  natrium  asetat (Merck).
Metode. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental. Penelitian meliputi  dua  tahapan  yaitu  penentuan nilai Minimum  Inhibitory  Concentration (MIC)  amoksisilin  dan  penentuan  nilai Fractional Inhibitory Concentration
Index (FICI)  kombinasi  ekstrak  etanol daun  karas  dengan  amoksisilin.  Metode pengujian  yang  digunakan  yaitu  metode difusi cakram Kirby-Bauer.

## Hasil Dan Pembahasan
Fractional  Inhibitry  Concentration Index (FICI) merupakan nilai yang dapat menyatakan  karakteristik  dari  suatu kombinasi  antimikroba.  Kombinasi  dari dua atau lebih senyawa antimikroba dapat menghasilkan efek seperti pada Tabel 1.
Tabel 1. Karakteristik Kombinasi Berdasarkan Nilai FICI (Brooks., 2013) Nilai FICI Karakteristik ≤ 0,5 Sinergis 0,5 > x ≤ 1 Aditif 1 > x ≤ 4 Indifferent > 4 Antagonis Karakteristik  kombinasi  FICI  yang bersifat sinergis dan aditif dapat meningkatkan aktivitas antibiotik. Rumus
FICI  berdasarkan  Tinrat  (2015)  adalah sebagai berikut:
FICI=FIC A + FIC B FICI= [A] MIC (A) + [B] MIC (B) Keterangan : FICI = Fractional  InhibitoryConcentration
Index
FIC (A) = Fractional Inhibitory Concentration Ekstrak Etanol Daun Karas FIC (B) = Fractional Inhibitory Concentration Amoksisilin [A] = Nilai MIC ( Minimum Inhibitory Concentration ) Amoksisilin dalam kombinasi [B] =  Nilai  MIC  ( Minimum  Inhibitory Concentration )  Ekstrak  Etanol  Daun Karas dalam kombinasi MIC  (A)  =  Nilai  MIC  ( Minimum  Inhibitory Concentration ) dari Amoksisilin tunggal MIC  (B)  =  Nilai  MIC  ( Minimum  Inhibitory Concentration )  Ekstrak  Etanol  Daun Karas tunggal
Nilai  FICI  dapat  diketahui  melalui perhitungan  substansi  MIC  tunggal  dari masing  masing  senyawa  antimikroba. Pada penelitian ini, penentuan nilai FICI menggunakan  nilai  MIC  amoksisilin tunggal  dan  MIC  ekstrak  etanol  daun karas  ( Aquilaria  microcarpa Baill.) tunggal,  dan  kombinasi  ekstrak  etanol daun karas ( Aquilaria microcarpa Baill.) dan amoksisilin.
Nilai  FICI  dari  kombinasi  ekstrak etanol daun karas ( Aquilaria microcarpa Baill.)  dengan  amoksisilin  terhadap bakteri uji dihitung dengan menjumlahkan Fractional Inhibitory
Concentration amoksisilin  atau  FIC  (A)
dan Fractional  Inhibitory  Concentration
ekstrak  etanol  daun  karas Aquilaria microcarpa Baill. atau FIC (B). Sehingga didapatkan  nilai  FICI,  kemudian  dapat diketahui  karakteristik  dari  kombinasi berdasarkan  nilai  tersebut.  Konsentrasi yang   dimasukkan    dalam    perhitungan
yaitu konsentrasi kombinasi terkecil yang menghasilkan zona hambat, pada penelitian  ini  yang  dimasukkan  kedalam perhitungan yaitu konsentrasi B. Telah dilakukan penelitian sebelumnya  pada  ekstrak  etanol  daun karas  ( Aquilaria  microcarpa Baill.) diperoleh  nilai  MIC  terhadap  bakteri gram  negatif  yaitu Salmonella  typhi adalah  konsentrasi  200  mg/ml  dengan zona  hambat  7,02±0,004  mm.  Pada antibiotic amoksisilin diketahui nilai MIC terhadap  bakteri Salmonella  typhi pada konsentrasi  62,5  µg/ml  dengan  diameter 7,68±0,64  mm,  dapat  dilihat  pada Gambar 1 .
Larutan  kombinasi  dari  konsentrasi hambat  minimum  (MIC)  ekstrak  etanol daun  karas  ( Aquilaria  microcarpa Baill) dan  amoksisilin  dikombinasikan  dengan perbandingan  volume  1:1,  kemudian larutan  kombinasi  diuji  menggunakan metode  difusi  cakram  Kirby-Bauer
seperti  yang  digunakan  pada  penentuan nilai  diameter  zona  hambat  hasil kombinasi  larutan  ekstrak  etanol  daun karas  ( Aquilaria  microcarpa Baill)  dan amoksisilin. Pengujian larutan kombinasi ektrak  etanol  daun  karas  ( Aquilaria microcarpa Baill) dan amoksisilin terhadap bakteri Salmonella typhi menggunakan 5  variasi konsentrasi yaitu 4 kali; 2 kali; 1 kali; ½ kali dan ¼ kali dari MIC  amoksisilin  dan  MIC  ekstrak.  Pada penelitian  diperoleh  nilai  zona  hambat pada  variasi  konsentrasi  kombinasi ekstrak yaitu pada konsentrasi 2 kali dari MIC amoksisilin dan MIC ekstrak etanol daun  karas  ( Aquilaria  microcarpa Baill) adalah 8,23±0,25 mm.  Hasil pengukuran terhadap  variasi  konsentrasi  larutan kombinasi  ekstrak  etanol  daun  karas ( Aquilaria microcarpa Baill) dan amoksisilin dapat dilihat pada Gambar 2 ,
diameter zona hambat dapat dilihat pada Tabel 2.
I II
Gambar 1. Penentuan MIC Ektrak Etanol Daun Karas ( Aquilaria microcarpa Baill) I dan MIC Amoksisilin (II) terhadap bakteri Salmonella typhi
K eterangan :
I = Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Karas ( Aquilaria microcarpa Baill) 200 mg/ml II = Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Karas ( Aquilaria microcarpa Baill ) 250 mg/ml III   = Zona Hambat Ekstrak Etanol Daun Karas ( Aquilaria Microcarpa Baill) 300 mg/ml
B = Zona Hambat Amoksisilin 0,5 mg/ml
C = Zona Hambat Amoksisilin 0,25 mg/ml
D   = Zona Hambat Amoksisilin 0,125 mg/ml
E = Zona Hambat Amoksisilin 0,0625 mg/ml
F = Zona Hambat Amoksisilin 0,0312 mg/ml
DOI: 10.26874/kjif.v8i1.246
Gambar  2.  Hasil  FICI  Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Karas ( Aquilaria microcarpa Baill.) dengan Amoksisilin  terhadap Salmonella typhi .
Keterangan : (A) = Kombinasi 4 kali MIC ekstrak dan 4 kali MIC amoksisilin (B) =  Kombinasi 2 kali MIC ekstrak dan 2 kali MIC amoksisilin (C) =  Kombinasi 1 kali MIC ekstrak dan 1 kali MIC amoksisilin (D) = Kombinasi ½ kali MIC ekstrak dan ½ kali
MIC amoksisilin (E) = Kombinasi ¼ kali MIC ekstrak dan ¼ kali MIC amoksisilin Tabel 2. Diameter zona hambat kombinasi  ekstrak  etanol  daun  karas ( Aquilaria microcarpa Baill.) dan amoksisilin terhadap bakteri Salmonella typhi Konsentrasi (mg/mL) x ± SD (mm)* Amoksisilin  Ekstrak 0,25 V 0,125 W 0,0625 X 16 V 8 W
4 X 10,95 ± 0,4 8,23 ± 0,25
0
0,0312 Y 2 Y 0 0,0156 Z 1 Z 0
Keterangan : x = rata-rata, SD = standar deviasi, V = konsentrasi 4 kali MIC W = konsentrasi 2 kali MIC X = konsentrasi 1 kali MIC Y = konsentrasi ½ kali MIC Z = konsentrasi ¼ kali MIC * = Uji dilakukan 3 kali replikasi
Menurut  perhitungan  dengan  rumus FICI terhadap hasil nilai MIC kombinasi larutan  uji  yaitu  ekstrak  etanol  daun karas  ( Aquilaria  microcarpa Baill)  dan amoksisilin  dengan  perbandingan  1:1 memiliki nilai FICI sebesar 4, nilai FICI yang  diperoleh  kemudian  merujuk  pada Tabel 1 sehingga dapat diketahui bahwa karakteristik  kombinasi  amoksisilin  dan ekstrak  etanol  daun  karas  ( Aquilaria microcarpa Baill.)  terhadap Salmonella typhi bersifat indifferent atau  tak berbeda,  hasil  perhitungan  dapat  dilihat pada tampilan Tabel 2 dan Tabel 3.
Berdasarkan Tabel  2 ,  diketahui karakteristik  kombinasi  ekstrak  etanol daun karas dengan amoksisilin  terhadap Salmonella typhi bersifat indifferent atau tak berbeda, artinya efek yang dihasilkan setelah  kombinasi  hampir  sama  dengan efek tunggal dari antibiotik atau ekstrak saja.  Penelitian  yang  dilakukan  oleh Apridamayanti et al., 2018 dan Apridamayanti  et  al.,  2020  diketahui kombinasi antara amoksisilin dan ekstrak  etanol  daun  karas  ( Aquilaria microcarpa Baill)  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococus
epidermidis memiliki karakteristik bersifat indifferent sehingga penggunaan antibiotik  tunggal  atau  ekstrak  tunggal lebih baik dibandingkan dengan penggunaan kombinasi. Telah dilakukan skrining  fitokimia  terhadap  Esktrak etanol daun karas ( Aquilaria microcarpa Baill.)  diperoleh  metabolit  sekunder yaitu flavonoid, fenol, tanin, saponin dan streoid  (Sari  et  al.,  2017).  Tanin diketahui memiliki aktivitas sebagai
Tabel 3. Hasil Penetuan Nilai FICI Kombinasi Ekstrak Etanol Daun Karas  ( Aquilaria microcarpa Baill.) dengan Amoksisilin terhadap Bakteri Uji
Bakteri uji Konsentrasi dalam kombinasi (mg/mL) FIC (A) FIC (B)  FICI  Karakteristik Amoksisilin Ekstrak Salmonella typhi 0,125 8 2 2 4 Indifferent
Keterangan : FIC(A) = konsentrasi hambat fraksi amoksisilin, FIC(B) = konsentrasi hambat fraksi ekstrak etanol daun karas, FICI = Fractional Inhibitory Concentration Index
antimikroba dengan menghambat pertumbuhan  dan  aktivitas  protease bakteri dengan berikatan dengan dinding sel  bakteri  (Chandra  et  al.,  2017). Sedangkan amoksisilin merupakan antibiotik golongan β -laktam yang dapat berikatan  dengan  PBP  sehingga  terjadi penghambatan  biosintesis  dinding  sel bakteri  (Kaur,  Rao,  &  Nanda,  2011). Berdasarkan  hal  tersebut  dapat  dilihat bahwa  keduanya  memiliki  target  yang sama yaitu pada dinding sel bakteri.
Kesamaan target antara keduanya menjadikan keduanya bersifat kompetitif. Sehingga efek yang dihasilkan hanya dari salah satunya saja ketika dikombinasikan dan menghasilkan  karakteristik  kombinasi
indifferent atau tak berbeda.
Pada  penelitian  ini,  harapan  peneliti adalah  kombinasi  amoksisilin  dan ekstrak  etanol  daun  karas  ( Aquilaria microcarpa Baill.) menghasilkan karakteristik  sinergis  terhadap  bakteri uji. Namun berdasarkan hasil penelitian didapatkan  karakteristik indifferent atau tak  berbeda.  Oleh  karena  itu,  peneliti
menyarankan untuk penelitian selanjutnya melakukan pemisahan misalnya  memisahkan  dalam  bentuk fraksi berdasarkan kepolarannya.

## Kesimpulan
Nilai Fractional Inhibitory Concentration Index (FICI) dari kombinasi  ekstrak  etanol  daun  karas ( Aquilaria  microcarpa Baill.)  dengan amoksisilin terhadap bakteri Salmonella typhi yaitu  4,  yang  artinya  memiliki karakteristik indifferent atau tak berbeda

## Daftar Pustaka
Albert,  M.V.,  Soegianto,  A.,  Suwandi, W.,  Charles,  S.,  Henri,  V.A.,  Leo, G.  V.  (2003).  Risk  in  factor  for typhoid  fever  .  Jakarta, Indonesia : Premilinary results of a case control study. Majalah  Kedokteran  Atma Jaya , 2 , 70. Apridamayanti, P., Rizan, H.Z., Novitasari,  D.,  Sari,  R.  (2020). Antibacterial  activity  and  fici category combination with amoxicillin of ethanolic extract
DOI: 10.26874/kjif.v8i1.246
karas leaves ( Aquilaria microcarpa baill.)  against  bacteria  pathogen. Journal  of  Pharmaceutical  Science and  Reaserch  (JPSR):  Vol  12(1), 79-85.
Apridamayanti,  P.,  Robiyanto,  R.,  Sari, R.  (2018).  Fractional  inhibitory concentration index value determination of combination Aquilaria microcarpa Baill. ethanolic  extract  with  amoxicillin against  urinary  tract  infection bacteria.  Drug  Invention  Today
(DIT):  Vol  10  Special  Issue  5, 3756-3759.
Brooks,  G.F.,  Carroll,  K.C.,  Butel,  J.S.,
Murse, S.A.,  Mietzner,  T.A., Jawetz,  M.  &  A.  (2013). Medical Microbiology.  26th  ed. New York:
Mc-Graw Hill. Chandra,  H.,  Bishnoi,  P.,  Yadav,  A., Patni,  B.,  Mishra,  A.,  &  Nautiyal, A. (2017). Antimicrobial Resistance  and  the  Alternative Resources  with  Special  Emphasis on  Plant-Based  Antimicrobials—A Review. Plants , 6 (2), 16. https://doi.org/10.3390/plants6020 016 Juwita, S., Hartoyo, E., & Budiarti, L. Y. (2012).  Pola  Sensitivitas  In  Vitro Salmonella Typh I Terhadap Antibiotik Kloramfenikol , Amoksisilin  ,. Program  Studi Pendidikan Dokter Fakultas Kedokteran  Universitas  Lambung Mangkurat , (September), 25–34. Kaur, S. P., Rao, R., & Nanda, S. (2011). Amoxicillin :  A  Broad  Spectrum Antibiotic, 3 (3). Kementrian Kesehatan Republik
Indonesia. (2011). Profil Kesehatan
Indonesia 2010 .
Moussaoui,  F.,  &  Alaoui,  T.  (2016). Evaluation  of  antibacterial  activity and  synergistic  effect  between antibiotic  and  the  essential  oils  of some  medicinal  plants. Asian
Pacific Journal of Tropical Biomedicine , 6 (1), 32–37. https://doi.org/10.1016/j.apjtb.2015 .09.024 Olajuyigbe,  O.  O.,  &  Afolayan,  A.  J.
(2013). Evaluation of Combination Effects  of  Ethanolic  Extract  of Ziziphus mucronata Willd . subsp . mucronata  Willd  .  and  Antibiotics against Clinically Important Bacteria, 2013 . Robiyanto, Sari, R. (2017). Comparison of Antibacterial Activity of Ethanolic  Extract  of  Aquilaria microcarpa  Baill.  and  Aquilaria malaccencis Lamk. Leaves .
Sari,  R.,  Muhani,  M.,  &  Fajriaty,  I. (2017).  Uji  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak Etanol  Daun  Gaharu (Aquilaria microcarpa Baill.) Terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus dan Proteus  mirabilis . Pharm Sci Res , 4 (3), 143–154. Tinrat, S. (2015). Antimicrobial activities and synergistic effects of the  combination  of  some  edible mushroom extracts with antibiotics against pathogenic strains. International Journal of Pharmaceutical  Sciences  Review and Research , 35 (2), 253–262.