e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 127-134

## Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Akar Manukan
( Rhinacanthus nasutus (L) Kurz)
Indriani Maitulung 1* , Wilmar Maarisit 1 , Douglas N. Pareta 1 , Yessie K. Lengkey 2
1 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
2 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon *Penulis Korespondensi; Indrianimaitulung1999@gmail.com Diterima: 11 Mei 2022 Disetujui : 24 Oktober 2022

## ABSTRAK
Antioksidan  merupakan  zat  yang  menghambat  atau  mencegah  kerusakan  sel  akibat  oksidasi  dari radikal  bebas.  Salah  satu  tanaman  yang  berkhasiat  sebagai  alternatif  pengobatan  tradisional  dan berpotensi sebagai antioksidan adalah tanaman R. nasutus . Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah  akar  R. nasutus memiliki  aktivitas  antioksidan  menggunakan  KLT  Bioautografi  dan Spektrofotometer  UV-Vis.  Metode  penelitian  yang  dilakukan  merupakan  penelitian  eksperimental di Laboratorium dengan menggunakan akar R. nasutus dan diekstraksi dengan etanol 95% dengan metode  maserasi  kemudian  dilakukan  fraksinasi  menggunakan  kromatografi  kolom  dengan  fase diam ODS. Pengujian aktivitas antioksidan dilakukan secara kualitatif dengan KLT Bioautografi dan secara  kuantitatif  dengan  spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  517  nm  dengan perbandingan vitamin C. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa ekstrak kasar etanol dan ekstrak yang  dihasilkan  dari  fraksinasi  kolom  kromatografi  dengan  metanol  80%  menunjukkan  adanya aktivitas antioksidan secara kualitatif dan kuantitatif. Fraksi metanol 80% dan ekstrak kasar etanol akar  R. nasutus memiliki  aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC50  masing-masing  8.32ppm  dan 36.77ppm.
Kata kunci: Rhinacanthus nasutus, antioksidan, KLT Bioautografi, Spektrofotometer UV-Vis

## ABSTRACT
Antioxidants  are substances that  inhibit  or  prevent  cell  damage  due  to  oxidation  of  free  radicals. One  plant that  is  efficacious  as an  alternative  to traditional  medicine  and  has the  potential as  an antioxidant is the R. nasutus plant. The study aimed to find out whether the roots of R. nasutus have antioxidant  activity  using  KLT  Bioautography  and  UV-Vis  Spectrophotometers.  The  research method used is experimental research in the laboratory using the roots of R. nasutus and extracted with 95% ethanol by maceration method then fractionated using column chromatography with ODS stationary phase. Testing of antioxidant activity is carried out qualitatively with KLT Bioautography and quantitatively with a UV-Vis spectrophotometer at a wavelength of 517 nm with a ratio of vitamin C.  The  results  of  this  study  showed  that  crude  extracts  of  ethanol  and  extracts  resulting  from fractionation of chromatography columns with 80% methanol showed qualitative and quantitative presence  of  antioxidant  activity. The  80%  methanol  fraction  and  crude  extract  of  R.  nasutus  root ethanol have antioxidant activity with IC50 values of 8.32 ppm and 36.77 ppm, respectively.
Keywords: Rhinacanthus nasutus, antioxidant, KLT Bioautography, UV-Vis Spectrophotometer

## 1. PENDAHULUAN
Di Indonesia, penyakit degeneratif cenderung meningkat disebabkan karena adanya perubahan gaya hidup masyarakat salah satunya pola makan yang tidak sehat. Pemicu terjadinya penyakit  degeneratif  adalah  radikal  bebas  yang disebabkan oleh atom atau molekul yang bersifat
reaktif.  Radikal  dengan  kereaktifan  yang  tinggi ini dapat memulai sebuah reaksi berantai dalam pembentukannya,  sehingga  dapat  menimbulkan senyawa abnormal dan  memulai reaksi berantai yang  dapat  merusak  sel-sel  penting  dalam tubuh 1 .
Antioksidan  berfungsi  sebagai  penangkal
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 127-134
radikal  bebas  yang  banyak  terbentuk  di  dalam tubuh  akibat  lingkungan  dan  pola  hidup  yang tidak  sehat.  Untuk  menangkal  terjadinya oksidasi  ini  diperlukan  antioksidan  yang berfungsi  menstabilkan  dengan  melengkapi kekurangan elektron dari radikal bebas sehingga sel-sel terlindungi dari senyawa reaktif tersebut 2 . Radikal bebas yang masuk ke dalam tubuh dan  menyerang  sel-sel  yang  sehat  kemudian terakumulasi  sehingga  kerusakan  tersebut berkontribusi  terhadap  beberapa  penyakit  dan menyebabkan kondisi yang biasa disebut sebagai penuaan dini 3 . Selain penuaan dini, radikal bebas juga  dapat  menyebabkan  penyakit  lain  seperti arteriosklerosis  dan  kanker  yang  disebabkan oleh kerusakan jaringan akibat reaksi oksidasi 4 . Secara empiris, sebagian besar masyarakat Talaud, khususnya di Desa Taturan, Kecamatan  Gemeh,  Kabupaten  Kepulauan Talaud    menggunakan  tanaman R.  nasutus sebagai  salah  satu  alternatif  pengobatan tradisional  untuk  mengobati  berbagai  penyakit seperti  diabetes, penyakit  kudis  dan  gatal-gatal. Tanaman  ini  berasal  dari  famili  Acanthaceae, tersebar luas di seluruh Asia Tenggara dan telah digunakan  sebagai  obat  tradisional  untuk pengobatan  penyakit  kulit,  diabetes,  hipertensi dan pneumonia 5,6 . Selain itu, penelitian sebelumnya juga menjelaskan bahwa bagian dari daun R.  nasutus memiliki  kemampuan  untuk menangkal radikal bebas 7 .
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas  maka penulis  tertarik  untuk  melakukan  penelitian mengenai uji aktivitas antioksidan ekstrak etanol akar manukan ( Rhinacanthus nasutus (L) Kurz).

## 2. METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu jas lab, sarung tangan, masker, tisu kering, beker  gelas,  labu  ukur,  kertas  saring,  batang pengaduk,  toples  kaca,  labu  destilasi  1000ml, timbangan  analitik,  tabung  reaksi,  rotary evaporator, corong pisah, kapas 25gr, aluminium foil, buret, klem, statif, pompa udara aquarium, sapu lidi, botol vial, gelas ukur, kertas plat KLT, mikropipet,  penggaris,  gunting,  pensil,  label, kuvet,  corong  kaca,  spatula,  erlenmeyer,  pipet tetes,  cawan  petri  dan  spektrofotometer  UV– 1800.  Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  adalah  akar  manukan R.  nasutus yang diperoleh dari Desa Taturan, Kecamatan Gemeh, Kabupaten  Kepulauan Talaud.  Bahan  lain  yang
digunakan sebagai bahan pengekstrak dan bahan kimia  untuk  analisis  yaitu  etanol  95%,  vitamin C,  aquadest,  DPPH,  etil  asetat,  30gr  ODS (oktadesil  silika)  dan  metanol  masing-masing berderajat pro analisis.

## Metode Penelitian
Penelitian  yang  dilakukan  merupakan penelitian eksperimental di Laboratorium.

## Penyiapan sampel
Akar R.nasutus yang diperoleh  dari Desa Taturan, Kecamatan Gemeh, Kabupaten Kepulauan  Talaud  disortasi  basah,  kemudian dicuci  dan  dibersihkan  menggunakan  air mengalir  setelah  itu  dipotong-potong  dengan ukuran kecil.

## Pembuatan Ekstraksi
Ekstrak  akar R.  nasutus diekstraksi dengan  cara  maserasi  dan  partisi.  Akar R. nasutus ditimbang sebanyak 700 gram ditambahkan  1L  pelarut  etanol  95%  dan direndam  selama  24  jam.  Proses  ini  dilakukan selama 3 hari dan di filtrasi menggunakan kertas saring.  Setelah  di  saring  akan  menghasilkan filtrat  pertama,  kedua  dan  ketiga  yang selanjutnya  dievaporasi  menggunakan  rotary evaporator  pada  suhu  40ºC  hingga  diperoleh ekstrak  pekat  etanol.  Tahap  selanjutnya  adalah proses  partisi,  dimana  ekstrak  pekat  etanol dilarutkan dengan akuades kemudian dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah  dan dicampurkan  dengan  etil  asetat  200ml  dan diulangi sebanyak 3 kali. Kemudian dikocok dan didiamkan  sehingga  terbentuk  lapisan  air  dan lapisan  etil  asetat. Setelah  diperoleh  lapisan  air dan  lapisan  etil  asetat  kemudian  diuapkan dengan menggunakan rotary evaporator.

## Kromatografi Kolom
Pada  kolom  kromatografi  dimasukkan kapas yang telah di basahi oleh metanol. Setelah itu,  masukkan  ke  dalam  kolom  kromatografi bubur  oktadesil  silika  30gram  yang  telah direndam  selama  1  malam  dengan  metanol. Kemudian,  masukkan  ekstrak  kental  ke  dalam kolom kromatografi di batas atas oktadesil silika. Selanjutnya  kombinasi  pelarut  metanol  dan  air dimasukkan  secara  terus  menerus  bersamaan dibukanya keran kolom. Larutan yang dimasukkan  terdiri  dari  beberapa  variasi konsentrasi  yaitu  20%,  40%,  60%,  80%  dan
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 127-134
100%  metanol.  Fraksi  kemudian  di  pisahkan sesuai konsentrasi lalu ditampung di dalam botol vial  dan  kemudian  dievaporasi  menggunakan rotary evaporator. Setelah itu setiap fraksi akan di analisis dengan Kromatografi Lapis Tipis.
Uji Antioksidan
Menggunakan KLT
Bioautografi Dalam  pengujian  antioksidan,  metode yang tepat digunakan adalah metode KLT dibuat batas atas dan batas bawah dengan menggunakan  pensil.  Sampel  di  totolkan  pada plat KLT kemudian dimasukkan pada gelas kaca yang berisi larutan pengembang yaitu etil asetat dan heksan dengan perbandingan yang berbeda. Setelah  itu  KLT  dibiarkan  hingga  larutan pengembang bergerak mencapai garis batas atas pada  plat  KLT  dan  diamati  spot  pemisahan senyawa  yang  terbentuk  secara  kasat  mata menggunakan sinar UV. KLT dilakukan hingga didapatkan perbandingan pelarut 8–10 .
Dari  hasil  pemisahan  KLT  juga  dapat diketahui nilai Rf (Retention factor) senyawanya.  Nilai  Rf  merupakan  perbandingan jarak  yang  ditempuh  oleh  senyawa  terhadap jarak  yang  ditempuh  pelarut.  Plat  kemudian diamati  pada  sinar  UV  dengan  panjang gelombang  254nm.  Setelah  itu  plat  KLT disemprot dengan  menggunakan larutan DPPH. Diamati  adanya  perubahan  warna  spot  selama kurang  lebih  10  menit.  Hasil  positif  adanya penangkapan  radikal  DPPH  oleh  senyawa antioksidan ditandai dengan perubahan area spot yang  semula  ungu  (setelah  disemprot  DPPH) berubah menjadi warna kuning. Fraksi yang aktif selanjutnya  di  uji  aktivitas  antioksidan  dengan menggunakan spektrofotometer UV-Vis.
Uji Antioksidan Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis 1. Pembuatan Larutan DPPH 0.1mM Serbuk DPPH (BM 394,32)
0.39432gram  dilarutkan  dengan  metanol  p.a 10ml.  Larutan  DPPH  0.1M  dipipet  100µl dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  100  ml dicukupkan dengan metanol p.a sampai tanda batas (DPPH 0.1mM).
2. Optimasi Panjang Gelombang DPPH Larutan  DPPH  0.1mM  sebanyak  2ml dimasukkan kedalam tabung reaksi,
ditambahkan  metanol  p.a  2ml,  divortex hingga  homogen,  diinkubasi  dalam  ruangan gelap selama 30 menit, lalu dituang ke dalam kuvet  dan  diukur  pada  panjang  gelombang
517nm dengan menggunakan
spektrofotometer  UV-Vis  dan  ditentukan panjang gelombangnya 10–16 .
3. Persiapan Larutan Uji
a. Pembuatan  larutan  induk  (konsentrasi 1000ppm) Sebanyak 10mg sampel dilarutkan  dengan  metanol  p.a  lalu dimasukkan  ke  dalam  labu  takar  10ml, volume  dicukupkan  dengan  metanol  p.a sampai tanda batas.
b. Pembuatan Larutan Seri Ekstrak  etanol  akar  R. nasutus dibuat dengan variasi konsentrasi 50ppm, 100ppm  150ppm,  200ppm  dan  250ppm. Masing-masing  dipipet  0,25ml;  0,5ml; 0,75ml;  1ml  dan  1,25ml  dimasukkan  ke dalam labu ukur masing-masing 5mL dan dicukupkan  volumenya  dengan  metanol p.a hingga 10mL.
4. Pembuatan Larutan Vitamin C
a. Pembuatan  Larutan  Induk  (konsentrasi 1000ppm)
Ditimbang vitamin C p.a sebanyak 50mg, dilarutkan dengan metanol p.a lalu dimasukkan  ke  dalam  labu  ukur  50mL, volume  dicukupkan  dengan  metanol  p.a sampai tanda batas.
b. Pembuatan  Larutan  Seri  (konsentrasi 1ppm; 2ppm; 3ppm; 4ppm dan 5ppm) Larutan  induk  vitamin  C,  masing- masing dipipet 0,005ml; 0,01ml; 0,015ml; 0,02ml dan 0,025ml dimasukkan ke dalam labu  ukur  masing-masing  5mL,  volume dicukupkan  dengan  metanol  p.a  sampai tanda batas.
5. Pengukuran Serapan Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis Sebanyak 2ml masing-masing
konsentrasi larutan uji dimasukkan ke dalam tabung  rekasi,  ditambahkan  2ml  larutan DPPH  0.1mM,  divortex  hingga  homogen, diinkubasi dalam ruang gelap dan pada menit ke 26 dan maksimal pada menit ke 30 diukur serapannya pada panjang gelombang 517nm.
6. Penentuan Persen Inhibisi Akitivitas penangkal radikal dinyatakan  sebagai  persen  inhibisi  yang dapat  dihitung  dengan  menggunakan  rumus sebagai berikut:
% 𝑖𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖 𝐷𝑃𝑃𝐻 = Absorbansi kontrol − Absorbansi bahan uji Absorbansi control
×  100%
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 127-134
7. Penentuan Nilai IC 50 (Inhibitory
Concentration)
Dari  %  peredaman  yang  diperoleh tentukan IC 50 yaitu konsentrasi yang mampu menghambat  50%  radikal  bebas.  Nilai  IC 50 ditentukan dengan rumus :
IC 50 = 50−𝑎 𝑏
Keterangan : a: nilai x pada kurva linear
b: nilai y pada kurva linear Senyawa  yang  dikatakan  sebagai antioksidan  sangat  kuat  apabila  nilai  IC 50 kurang  dari  50  ppm,  kuat  apabila  nilai  IC 50 antara 50-100 ppm, sedang apabila nilai IC 50 berkisar  antara  100-150  ppm,  dan  lemah apabila  nilai  IC 50 berkisar  antara  150-200 ppm. Semakin kecil nilai IC 50 suatu senyawa maka semakin kuat pula aktivitas antioksidan senyawa  tersebut  karena  dengan  konsentrasi yang  kecil  mampu  menghambat  radikal bebas DPPH dengan baik 17 .

## Analisis Data
Pengujian antioksidan menggunakan metode KLT Bioautografi dan metode Spektrofotometer  UV-Vis  dianalisis  dengan melihat perubahan warna masing-masing sampel setelah  diinkubasi  bersama  DPPH.  Jika  semua elektron  DPPH  berpasangan  dengan  elektron pada  sampel  ekstrak  maka  akan  terjadi perubahan  warna  sampel  dimulai  dari  warna ungu  tua  yang  menjadi  warna  kuning  terang. Setelah itu larutan di hitung nilai absorbansinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis dengan panjang gelombang 517nm.

## 3. HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  dari  proses  maserasi  diperoleh maserat  berwarna  merah,  kemudian  dipekatkan dengan  menggunakan  rotary  evaporator  pada suhu  40ºC  sehingga  diperoleh  ekstrak  pekat sebanyak  52,21  gram.  Penguapan  dilakukan pada  suhu  40  ºC  bertujuan  untuk  mencegah dekomposisi  senyawa  yang  terkandung  di dalamnya.  Penguapan  pada  suhu  40ºC  juga dilakukan  karena  penggunaan  suhu  yang  tinggi dapat  menyebabkan  kerusakan  atau  penurunan kadar fenolik yang terkandung dalam sampel 8 . Selanjutnya  ekstrak  dipartisi,  dimana ekstrak  pekat  etanol  dilarutkan  dengan  akuades kemudian  dimasukkan  ke  dalam  corong  pisah dan  dicampurkan dengan  etil asetat 200 ml  dan diulangi sebanyak 3 kali. kemudian dikocok dan
didiamkan sehingga dihasilkan fraksi  etil asetat dan  fraksi  air  (H 2 O),  selanjutnya  fraksi  hasil partisi  diuapkan  dengan  menggunakan  rotary evaporator sehingga diperoleh ekstrak fraksi etil asetat (6,11gr), dan fraksi air (H 2 O) (149,07gr). Metode partisi dalam isolasi senyawa metabolit sekunder  bertujuan  untuk  mengklasifikasikan senyawa-senyawa berdasarkan perbedaan tingkat kepolaran 18 .

## Hasil Kromatografi Kolom
Setelah melewati proses ekstraksi, kemudian  dilakukan  fraksinasi  menggunakan kolom  kromatografi  dengan  menggunakan kombinasi pelarut metanol : air yaitu 20%, 40%, 60%, 80% dan 100%. Fase diam yang digunakan adalah  oktadesil  silika  (C 18 )  tujuannya  adalah untuk mengisolasi senyawa-senyawa yang polar. Dapat dilihat pada Tabel 1. Sebagai berikut :
Tabel 1. Hasil Pemisahan Kromatografi Kolom
Fase Diam Fase Gerak Fraksi Gram Metanol : Air 30 gr ODS 100 ml + 400 ml 20% 0.05 200 ml + 300 ml 40% 0.23 300 ml + 200 ml 60% 0.53 400 ml + 100 ml 80% 4.45 500 ml 100% 0.39 Berdasarkan hasil pada Tabel 1 menunjukkan  bahwa  pada  variasi  konsentrasi 20% memiliki berat 0.05gr, 40% memiliki berat 0.23gr,  60%  memiliki  berat  0.53gr,  80% memiliki berat 4.45gr dan 100% memiliki berat 0.39gr.

## Hasil  Uji  Antioksidan  Menggunakan  KLT Bioautografi
Pada fraksi 100%, 80%, 60%, 40%, 20%, fraksi  air  (H 2 O)  dan  fraksi  etil  asetat  yang  di totolkan  pada  plat  KLT  terdapat  spot  berwarna kuning.  Spot  berwarna  kuning  menandakan bahwa pada ektrak R. nasutus terdapat aktivitas antioksidan.  Uji  antioksidan  kualitatif  ini dilakukan  untuk  mengetahui  ada  atau  tidaknya aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak R.  nasutus . Ekstrak R.  nasutus ditotolkan  pada  plat  KLT kemudian dielusi dengan  eluen  yang sesuai dan disemprot dengan larutan DPPH.
Ekstrak R.  nasutus telah  diidentifikasi memiliki  senyawa  metabolit  sekunder  yang sangat  penting  seperti  flavonoid,  antrakuinon, triterpen  steroid  dan  naftokuinon. Rhinacanthin
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 127-134
C golongan  naftokuinon  dilaporkan  memiliki aktivitas  antifungal,  antiviral,  antiinflamasi, sitotoksik, antitumor, antiproliferatif, imunomodulatory,  hepatoprotektif,  antioksidan, antiplatelet 19 . R.  nasutus juga  menunjukkan beberapa efek farmakologis khas lainnya seperti inhibitor agregasi trombosit, antidiabetik, antituberkulosis dan antikanker 20 .
(a) (b)                 (c)
Gambar 1. Hasil KLT (a) Sebelum Disinari, (b) Setelah  Disinari  UV  254,  (c) Disemprot DPPH.
Hasil pada gambar 1 menunjukkan bahwa titik  pertama  di  totolkan  fraksi  air  (H 2 O),  titik kedua di totolkan fraksi etil asetat, titik ketiga di totolkan  fraksi  20%,  titik  keempat  di  totolkan fraksi 40%, titik kelima di totolkan fraksi 60%, titik  keenam  di  totolkan  fraksi  80%  dan  titik ketujuh  di  totolkan  fraksi  100%.  Dari  ketujuh fraksi  yang  di  totolkan  pada  plat  KLT  terdapat adanya  perubahan  warna  pada  fraksi  etil  asetat dan  fraksi  80%.  Setelah  melewati  proses  uji aktivitas antioksidan menggunakan KLT, kemudian  fraksi  80%  dilakukan  uji  aktivitas antioksidan menggunakan spektrofotometer UV-Vis.

## Hasil  Uji  Antioksidan  Menggunakan Spektrofotometer UV-Vis
Pada  uji  aktivitas  antioksidan  dengan spektrofotometer  UV-Vis  menggunakan  2 sampel  yaitu  ekstrak  fraksi  metanol  80%  dan ekstrak  kasar  etanol  serta  vitamin  C  sebagai pembanding.  Masing-masing  dapat  dilihat  pada tabel 2, 3 dan 4.
Tabel 2. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Fraksi Metanol 80% Akar R. nasutus Konsentrasi (ppm) Ulangan Rata- rata % Inhibisi IC 50 (ppm) U1 U2 U3 50 ppm 0.717 0.715 0.698 0.710 12.77 8 .32 100 ppm 0.700 0.690 0.694 0.694 14.66 150 ppm 0.589 0.592 0.536 0.572 29.68 200 ppm 0.574 0.534 0.533 0.547 32.80 250 ppm 0.561 0.528 0.545 0.544 33.08 Kontrol DPPH 0.816 0.813 0.813 0.814 0
Tabel 3. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar Etanol Akar R. nasutus Konsentrasi (ppm) Ulangan Rata- rata % Inhibisi IC 50 (ppm) U1 U2 U3 50 ppm 0.401 0.440 0.400 0.413 49.18 36.77 100 ppm 0.315 0.376 0.338 0.343 57.86 150 ppm 0.315 0.302 0.31 0.309 62.03 200 ppm 0.297 0.276 0.273 0.282 65.35 250 ppm 0.252 0.252 0.252 0.252 69.04 Kontrol DPPH 0.816 0.813 0.813 0.814 0
Tabel 4. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan Vitamin C Sebagai Pembanding
Konsentrasi (ppm) Ulangan Rata- rata % Inhibisi IC 50 (ppm) U1 U2 U3 1 ppm 0.347 0.345 0.345 0.345 57.53 1.22 2 ppm 0.289 0.288 0.288 0.288 64.57 3 ppm 0.233 0.231 0.232 0.232 71.49 4 ppm 0.095 0.095 0.095 0.095 88.32 5 ppm 0.087 0.087 0.087 0.087 89.31 Kontrol DPPH 0.816 0.813 0.813 0.814 0
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 127-134
Pada  Tabel  2,  3  dan  4  dapat  dijelaskan bahwa  penghambatan  radikal  bebas  terhadap ekstrak R. nasutus menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka absorbansi dari R.  nasutus semakin  menurun,  yang  artinya R. nasutus dapat menangkal atau meredam radikal bebas  DPPH.  Pada  gambar  2,  3  dan  4 menunjukkan korelasi antara variasi konsentrasi sampel  dengan  %  inhibisi,  dimana  semakin tinggi  konsentrasi  maka  nilai  absorbansi  akan semakin kecil akibat adanya senyawa antioksidan.  Dari  nilai  absorbansi  masing- masing  konsentrasi maka dapat dihitung persen inhibisinya,  yaitu  kemampuan  suatu  senyawa untuk  menghambat  reaksi  oksidasi  yang memiliki aktivitas sebagai antioksidan.
Aktivitas  antioksidan  metode  DPPH dinyatakan dengan IC 50 yaitu konsentrasi sampel yang  dapat  menghambat  aktivitas  DPPH sebanyak  50%.  Nilai  IC 50 semakin  kecil  berarti semakin  kuat  daya  antioksidannya.  Suatu senyawa dikatakan memiliki aktivitas antioksidan  sangat  kuat  apabila  nilai  IC 50 <50 ppm. Berdasarkan hasil nilai IC 50 tersebut maka dapat  dikatakan  bahwa  ekstrak  akar R.  nasutus memiliki  aktivitas  antioksidan  sangat  kuat. Semakin  kecil  nilai  IC 50 maka  aktivitas peredaman radikal bebas semakin tinggi. Prinsip kerja dari pengukuran ini adalah adanya radikal bebas  stabil  yaitu  DPPH  yang  dicampurkan dengan  senyawa  antioksidan  yang  memiliki kemampuan  mendonorkan  hidrogen,  sehingga radikal  bebas  dapat  diredam.  Uji  aktivitas antioksidan dengan DPPH ( 1,1-difenil-2- pikrilhidrazil )  dipilih  karena  metode  ini  adalah metode sederhana, mudah, cepat dan peka serta hanya  memerlukan  sedikit  sampel  untuk evaluasi  aktivitas  antioksidan  dari  senyawa bahan  alam  sehingga  digunakan  secara  luas untuk  menguji  kemampuan  senyawa  yang berperan sebagai pendonor elektron 21 . Mekanisme  kerja  dalam  metode  DPPH yaitu dimana senyawa antioksidan akan bereaksi dengan radikal DPPH melalui mekanisme donasi atom  hidrogen  dan  menyebabkan  terjadinya perubahan  warna  DPPH  dari  warna  ungu  ke kuning  yang  kemudian  diukur  pada  panjang gelombang  517  nm.  DPPH  yang  merupakan suatu molekul radikal bebas dengan warna ungu dapat  berubah  menjadi  senyawa  yang  stabil dengan  warna  kuning  oleh  reaksi  dengan antioksidan,  dimana  antioksidan  memberikan satu  elektronnya  pada  DPPH  sehingga  terjadi peredaman  pada  radikal  bebas  DPPH.  Elektron
yang tidak berpasangan pada DPPH memberikan suatu absorbansi yang kuat, maksimum pada λ = 517 nm  dan berwarna ungu. Peredaman radikal bebas  oleh  antioksidan  terjadi  ketika  elektron tidak berpasangan menjadi berpasangan dengan adanya  donor  hidrogen,  sehingga  membentuk DPPH yang stabil 22 .
Pengukuran  serapan  dilakukan  selama rentang  waktu  inkubasi  memasuki  menit  ke-26 hingga  menit  ke-30  agar  terjadi  reaksi  DPPH sebagai radikal bebas dengan sampel yang diuji secara maksimal. Karena operating time dengan serapan  yang  stabil  meningkat  pada  senyawa antioksidan terjadi di menit ke-15 sampai menit ke-30 dan absorbansi maksimalnya terjadi pada menit ke-26 sampai 30 menit 23 .
Dari  hasil  kurva  konsentrasi  ekstrak dengan  menggunakan  program  Microsoft  exel 2010  diperoleh  persamaan  regresi  linear  dalam penelitian ini dapat dilihat pada gambar 2, 3 dan 4.
Gambar 2 .  Kurva Hubungan Antara Konsentrasi Ekstrak Fraksi Metanol  80%  Dengan  Aktivitas Antioksidan
Gambar 3. Kurva
Hubungan Antara Konsentrasi  Ekstrak  Kasar  Etanol
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 127-134

## Dengan Aktivitas Antioksidan
Gambar 4. Kurva Hubungan Antara Konsentrasi  Vitamin  C  Dengan Antioksidan

## 4. KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang diperoleh, maka dapat disimpulkan bahwa fraksi metanol 80% dan ekstrak kasar etanol memiliki aktivitas antioksidan dengan nilai IC 50 8.32ppm dan 36.77ppm.

## 5. DAFTAR PUSTAKA
1.  Badarinath A V, Rao KM, Madhu C, et al. A Review  On  In-Vitro  Antioxidant Methods:  Comparisions,  Correlations and  Considerations. Int  J  PharmTech
Res . 2010;2(2):1276-1285. https://www.sid.ir/en/journal/ViewPa per.aspx?ID=383951 2.  Sembiring  HB,  Lenny  S,  Marpaung  L. AKTIVITAS ANTIOKSIDAN SENYAWA  FLAVONOIDA  DARI DAUN BENALU KAKAO (Dendrophthoe  pentandra  (L.)  Miq.). Chim Nat Acta . 2016;4(3):117. doi:10.24198/cna.v4.n3.10920 3.  Liochev SI. Reactive oxygen species and the free  radical  theory  of  aging. Free
Radic Biol Med . 2013;60:1-4. doi:10.1016/J.FREERADBIOMED.2
013.02.011
4.  Miryanti  YA,  Sapei  L,  Budiono  K,  Indra  S.
EKSTRAKSI ANTIOKSIDAN DARI KULIT  BUAH  MANGGIS  (Garcinia mangostana  L.). Res  Rep  -  Eng  Sci . 2011;2. doi:Bandung: Universitas Katolik Parahyangan
5.  Motohashi  N.  “Dietary  Fiber,  Fruit  and Vegetable  Consumption  and  Health,” Chap.  4,  ed.  by  Friedrich  K.,  Georg
M.,. Nov  Sci  Publ  Inc,  New  York . Published online 2010:119-155.
6.  Maarisit  W,  Yamazaki  H,  Abdjul  DB, Takahashi O, Kirikoshi R, Namikoshi
M.  A  new  pyranonaphtoquinone derivative, 4-oxo-rhinacanthin a, from roots  of  Indonesian  rhinacanthus nasutus. Chem Pharm Bull . 2017;65(6):586-588. doi:10.1248/cpb.c17-00074 7.  Upendra, R.M.; Sreenivasulu, M; Chengaiah,
B.;  Ravikrishna,  D.;  Jaganmohan, R.K.;  Sangeetha,  K.;  Chetty  CM. Rhinacanthus nasutus (LINN.) kurz: A comprahensive  review. Int  JPharm Res Dev . 2010;2:article no. 7.
8.  Aryati  DL,  Rohadi,  Pratiwi  E.  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Kelopak  Bunga Rosela ( H . sabdariffa L .) Merah Pada
Berbagai  Suhu  Pemanasan. J  Teknol Pangan dan Has Pertan . 2020;15(1):1-9. 9.  Syawal Y, Maarisit W, Tjie Jan T, Reinhard Pinontoan    dan.  Skrining  Aktivitas Antioksidan dari Mikroalga. J
Biofarmasetikal Trop . 2019;2(2):23.
10. Binuni R, Maarisit W, Hariyadi, Saroinsong Y.  Uji  Aktivitas  Antioksidan  Ekstrak Daun  Mangrove  Sonneratia  alba  Dari Kecamatan  Tagulandang,  Sulawesi Utara Menggunakan Metode DPPH. J Biofarmasetikal Trop 2020 .
2020;3(1):79-85.
11.  Juwita,  D.  A.,  Muchtar,  H.  ,  Putri  RK.  Uji Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Kulit Buah  dan  Daging  Buah  Menteng (Baccaurea  racemosa  (Blume)  Mull. Arg.)  dengan  Metode  DPPH(1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl). Sci J Farm  dan  Kesehatan .  2020;10(1):56- 62.
12.  Gusungi  DE,  Maarisit  W,  Potalangi  NO.
Studi  Aktivitas  Antioksidan  dan Antikanker Payudara (MCF-7) Ekstrak Etanol Daun Benalu Langsat Dendrophthoe pentandra. J Biofarmasetikal  Trop .  2020;3(1):166- 174.
13.  Nathania  EK,  Maarisit  W,  Potalangi  NO, Tapehe  Y.  Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Kecubung Hutan (Brugmansia  Suaveolens  Bercht.  &  J. Presl)  Dengan  Menggunakan  Metode DPPH
(1,1-diphenyl-2-
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2022, 5 (2), 127-134
picrylhydrazyl). J  Biofarmasetikal
Trop . 2020;3(2):40-47. 14.  Tamunu  MSS,  Pareta  DN,  Karauwan  FA.
SKRINING  FITOKIMIA  DAN  UJI
AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK  DAUN  BENALU  PADA KERSEN  Dendrophtoe  pentandra  (  L .)  DENGAN  METODE  2  ,  2- DIPHENYL -1- PICRYLHYDRAZYL  (  DPPH  ). Published online 2022:79-82. 15. Simatupang RAL, Tombuku JL, Pareta DN, Lengkey YK. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Bunga Bougenville Bougainvillea glabra Sebagai  Antioksidan. Biofarmasetikal Trop . 2021;4(1):30-39. doi:10.55724/j.biofar.trop.v4i1.305
16. Popala JS, Mongie J, Tulandi SS, Montolalu F. Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Pining Bawang ( Horntedtia alliacea ). 2022;5(1):18-28.
17.  Syaifuddin  S.  Uji  Aktivitas  Antioksidan Bayam  Merah  (Alternanthera  amoena voss.) Segar dan Rebus dengan Metode DPPH. UIN  Walisongo  Semarang .
Published online 2015.
18.  Saputra,  Tri  Reksa;  Ngatin,  Agustinus; Sarungu  YT.  Penggunaan  metode ekstraksi  maserasi  dan  partisi  pada tumbuhan  cocor  bebek  (Kalanchoe pinnata)  dengan  kepolaran  berbeda.
Fuller  J  Chem  [SI], .  2018;v.3(n.1,
p):5-8,. 19.  Bhusal,  N. ;  Panichayupakaranant,  P. ; Reanmongkol  W.  In  vivo  analgesic and  anti-inflammatory  activities  of  a standardized  Rhinacanthus  nasutus leaf  extract  in  comparison  with  its major  active  constituent  rhinacanthin- C. Songklanakarin  J  Sci  Technol .
2014;Vol. 36(No.3):pp.325-331.
20. Bukke S, Raghu PS, Sailaja G, Kedam TR. The study on morphological, phytochemical  and  pharmacological aspects  of  Rhinacanthus  nasutus.  (L) kurz  (A  review). J  Appl  Pharm  Sci . 2011;1(8):26-32.
21. Ridho EA. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Metanol Buah Lakum (Cayratia trifolia)  Dengan  Metode  DPPH  (2,2- DIFENIL-1-PIKRILHIDRAZIL). Naskah  Publ  Progr  Stud  Farm  Fak Kedokt  Univ  Tanjungpura  Pontianak . Published online 2013. 22.  Yuhernita, Juniarti. Analisis Senyawa Metabolit  Sekunder  dari  Ekstrak Metanol Daun Surian yang Berpotensi sebagai  Antioksdan. Fak Kedokt Univ Yars Jakarta . 2011;15(1):48-52.
23.  Widyowati,  H.,  Ulfah,  M.  S.  Uji  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanolik  Herba Alfalfa  (Medicago  savita  L.)  Dengan Metode DPPH. J Ilmu Farm dan Farm Klin . 2014;11(1):25-33.