Jurnal Pharmascience, Vol. 07 , No.01, Februari 2020, hal: 92 - 98 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 https://ppjp.ulm.ac.id/journal/index.php/pharmascience
Research Article

## Aktivitas Anti-Inflamasi Eupatorium inulifolium dan Kalsium Karbonat Pada Tikus Jantan
Dwi Rizki Febrianti 1 * , Siska Musiam 2
1 Laboratorium Biologi Farmasi Akademi Farmasi ISFI Banjarmasin, Indonesia 2 Laboratorium Kimia, Akademi Farmasi ISFI Banjarmasin, Indonesia *Email: dwirizki@akfar-isfibjm.ac.id

## ABSTRAK
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mempelajari  potensi  daun  Kumpai Mahung  ( Eupatorium  inulifolium )  dan  kalsium  karbonat  sebagai  anti-inflamasi, berdasarkan  obat  tradisional  di  pegunungan  Dayak  Meratus  Indonesia.  Metode  yang digunakan untuk mendapatkan ekstrak adalah maserasi menggunakan pelarut metanol dengan rasio 1:10. Uji kualitatif Penapisan fitokimia fenolik dengan senyawa FeCl3 dan kuantitatif dengan spektrofotometri UV-Vis dengan kuersetin sebagai standar, panjang gelombang 418 nm konsentrasi 10-50 ppm. Ekstrak Eupatorium inulifolium dan calcium carbonat  diformulasikan  menjadi  salep  sederhana  dengan  penambahan  vaselin  album (1:3). tes anti-inflamasi menggunakan tikus jantan yang telah diinduksi oleh karagenin 3%.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pada  pengujian  kualitatif  dan  kualitatif, adalah  positif  senyawa  fenolik,  Mengandung  3,68%  flavonoid.  Ekstrak Eupatorium inulifolium dan  kalsium  karbonat  dalam  salep  dapat  secara  signifikan  mengurangi edema pada kaki tikus dibandingkan dengan kontrol negatif (14,1%).
Kata kunci: Edema, Salep, Anti Inflamasi

## ABSTRACT
The  purpose  of  this  research  was  to  study  the  potential  Kumpai  Mahung  leaf (Eupatorium  inulifolium)  and  calcium  carbonate  as  an  anti-inflammation,  based  on  folk medicine  in  Dayak  meratus  mountains  of  Indonesia.  The  methods  used  to  obtain  the extract  is  maceration  using  methanol  solvent  with  the  ratio  of  1:10.    Qualitative  test Phytochemical  Screening  of  phenolic  with  FeCl3  and  quantitative  flavonoids  compounds with  spectrophotometry  UV-vis  with  quercetin  as  standard,  wavelength  418  nm concentration  10-50  ppm.  Eupatorium  inulifolium  extracts  and  calcium  carbonate  are formulated  into  simple  ointments  with  the  addition  of  vaseline  album  (1:  3)  anti- inflammation test using male mice that had been inducted by carrageenan 3%. The result showed that on qualitative and qualitative testing, is positive phenolic compounds, contains 3,68%  of  flavonoids.  Eupatorium  inulifolium  extract  and  calcium  carbonate  in  the ointment  can  significantly  alleviate  the  edema  on  mice’s  paw  compared  to  a  negative control (14,1%).
Keywords: Rat Paw Edema, Ointment, Anti-Inflammation

## I. PENDAHULUAN
Peradangan  adalah  salah  satu  tema yang  paling  menarik  untuk  dipelajari karena mencakup banyak mediator, dan ini menyebabkan  banyak  agen  peradangan seperti antibodi monoklonal dan antagonis peradangan  mulai  dikembangkan  dan dilaporkan  ada  obat  lain  seperti  asam askorbat  monosiklik,  garam  kalsium  dan kalsium  karbonat  juga  memiliki  aspek anti-inflamasi  terutama  yang  disebabkan sengatan  serangga  (Karnad,  Patil  dan Majagi,  2006).  Peradangan  memiliki beberapa respons berdasarkan penyebabnya; salah satu respons peradangan  yang  biasa  terjadi  adalah edema. Edema terjadi karena meningkatnya  aliran  darah  lokal  ke  area luka,  dan  itu  menyebabkan  lebih  banyak mediator  kimia  dan  histamin  dilepaskan sehingga  permeabilitas  kapiler  meningkat (Sousa, Vieira dan Pinho, 2010). Efek dari pembengkakan ini termasuk ketidaknyamanan,  rasa  sakit,  dan  ruam (Isrofah, Sagiran, dan Afandi, 2011). Obat antiinflamasi sebagian besar bekerja dengan  menurunkan  permeabilitas  kapiler dengan menurunkan jumlah histamin yang dilepaskan  oleh  basofil,  menghambat fungsi  fagositosis  leukosit  dan  makrofag sehingga pembengkakan dapat mereda.
Penggunaan  sumber  daya  alam  di Kalimantan  Indonesia,  belum  dilakukan secara  maksimal  karena  keanekaragaman
yang  tinggi.  Penggunaan  ramuan  alami dalam  pengobatan  meningkat  terutama  di kota-kota,  tetapi  kondisinya  sebaliknya dengan  kenyataan;  sumber  utama  obat tradisional yang umumnya terletak di desa dan  atau  di  dekat  hutan  (Norcahyati, 2012).  Pengakuan  atas  potensi  sumber alam  dan  tanaman  telah  diakui  sejak dahulu  kala,  dan  efeknya  juga  telah diketahui sebagian.
Daun  Kumpai  Mahung  Mahung ( Eupatorium  inulifolium H.B  &  K.) Tumbuh  di  wilayah  Dayak  Meratus  dan Dayak  Amandit,  Kalimantan  Selatan. Umumnya, daun Kumpai Mahung digunakan  sebagai  obat  tradisional  untuk demam berdarah dan sakit perut. CaCO3 / Kalsium  Karbonat  yang  biasa  digunakan dalam produksi makanan; Proses perendaman dalam larutan kalsium karbonat dapat memberikan tekstur, meminimalkan  rasa  yang  tidak  diinginkan seperti  rasa  hambar  dalam  memproduksi keripik  (Siregar  dan  Setyohadi,  2015). Studi  lain  menunjukkan  bahwa  kalsium karbonat  dapat  menurunkan  agregasi trombosit  pada  sel  endotel  (Karnad,  Patil dan Majagi, 2006). Penelitian ini bertujuan untuk  memaksimalkan  potensi  tanaman alami  dan  meningkatkan  penggunaan kalsium  karbonat  di  antara  masyarakat sehingga jika aspek-aspek tersebut digabungkan, kami berharap bahwa hasilnya  akan  memiliki  potensi  besar
sebagai  salah  satu  alternatif  pilihan  yang mungkin  yang  ada,  lebih  baik  daripada obat sintetis lainnya.

## II. METODE

## A. Peralatan dan Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  tanaman  Kumpai Mahung  ( Eupatorium  inulifolium H.B.  &
K), metanol pa (Merck), Vaseline (pudak), Kalsium Karbonat (Merck), κ-Carrageenan (Merck), hidrokortison salep ®.
Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah jangka sorong dengan akurasi 0,05 mm (Krisbow), Alat Perlindungan  Pribadi,  kandang  Tikus, terumo  syirige®  1  mL,  skala  analitik (Ohaus  Pioneer®  Plus  Analytica  PA124), penangas  air  (Memmert  WNB  10),  rotary set peralatan maserasi evaporator (heidolph), thermogenesis 10s UV-Vis.

## B. Persiapan Sampel
Kumpai Mahung (Eupatorium inulifolium  H.B.  &  K)  yang  berlokasi  di Kawasan  Hutan  Dengan  Tujuan  Khusus (KHDTK)  di  Samboja,  Kalimantan  Timur dan  diidentifikasi  oleh  Balai  Penelitian Teknologi Konservasi Sumber Daya Alam, Samboja, Kalimantan Timur.
1. Proses ekstraksi
Sekitar  1  kg  serbuk  daun  Kumpai Mahung  diekstraksi  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut
metanol  10L  dengan  perbandingan 1:10.  Ekstraksi  dilakukan  dalam  3x24 jam dengan 6 jam pengadukan selama 10 menit, dan maserasi ulang dilakukan  dua  kali.  Ekstrak  disaring menggunakan  Buchner  filter  sampai filtrat  diperoleh,  kemudian  filtrat dimasukkan ke dalam rotary evaporator pada 60ºC sehingga ekstrak  cair  dapat  diuapkan  dalam waterbath  di  60°C  sampai  massa konstan diperoleh
2. Analisis kualitatif
Pengujian  fenolik  dilakukan  dengan menambahkan  1  mL  ekstrak  yang direaksikan  dengan  0,5  mL  larutan FeCl3 1% (Febrianti, 2018)
3. Analisis kuantitatif
Uji flavonoid dalam ekstrak menggunakan metode
spektrofotometri UV-Vis, dengan kuersetin  sebagai  standar,  panjang gelombang  418nm  konsentrasi  10-50 ppm.
4. Persiapan salep
Konsentrasi  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  tiga  kelompok salep sederhana, hasil ekstraksi ditambahkan dalam basis salep seperti Vaseline  dengan  rasio  1:  3  (75mg  : 225mg).  Formula  I  adalah  kontrol
negatif,  formula  II  adalah  salep ekstrak,  formula  III  adalah  salep Kalsium karbonat.
5. Persiapan Hewan Hewan yang digunakan dalam penelitian ini adalah 15 tikus Sprague- Dawley  (@  5  tikus  masing-masing kelompok). Hewan-hewan itu diadaptasi  12:  12h  siang-malam  dan diberi  makanan  dan  minuman  secara ad libitum.
6. Pengujian Antiinflamasi Kaki tikus dibersihkan dengan larutan fisiologis  NaCl  0,9%.  Tikus  diberi injeksi sub-plantar karagenan 3% 0,05 ml. Setelah satu jam, volume pembengkakan  diukur  sebagai  Vo (volume  0),  kemudian  perawatan dengan  salep  pengujian  (Formula  I dengan grup 1, formula II dengan grup 2  dan  formula  III  dengan  grup  3) diberikan satu jam setelahnya.
Penurunan volume kemudian dihitung pada  0,1,2,3  dan  4  jam  setelahnya dengan akurasi kaliper 0,05 mm.
7. Analisis data Profil hubungan antara rata-rata ketebalan  edema  dari  kontrol  negatif, salep  kalsium  karbonat  dan  salep ekstrak.  Menurut  perhitungan  AUC (Area  Under  Curve),  maka  persentase
efek  antiinflamasi  dihitung  dengan rumus ini.
Catatan:  Ctn-1:  ketebalan  rata-rata  untuk edema pada kedua kalinya, Ctn : ketebalan rata-rata untuk edema pada kali pertama. Persentase penghambatan ketebalan edema dihitung berdasarkan persentase penurunan edema  menggunakan  rumus  di  bawah  ini (Erawati et al., 2011):
Catatan:  AUCk  =  Kurva  AUC  untuk ketebalan  edema  rata-rata  dengan  waktu kontrol negatif, AUCp = AUC kurva untuk ketebalan edema rata-rata untuk kelompok perlakuan untuk setiap individu.
Data dari percobaan kemudian dianalisis menggunakan SPSS dengan uji normalitas dan homogenitas, dilanjutkan dengan pengujian ANOVA sesudahnya

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Analisis kualitatif
Tes  fenolik  adalah  ketika  warna kehitaman-kehitaman  pada  ekstrak  setelah penambahan  FeCl3  1%  karena  reaksi  itu sendiri  membentuk  senyawa  kompleks dengan ion Fe3 +.

## B. Analisis kuantitatif
Kuersetin berfungsi sebagai pembanding kadar flavonoid dalam
ekstrak.  Dengan  konsentrasi  10-50  ppm, hasil  kurva  standar  y  =  0,008022x  + 0,22464  dengan  nilai-R  0,99874.  (gbr.1) Kemudian,  dengan  menghitung  kadar flavonoid  dalam  triplo,  diperoleh  kadar 3,68%.
Gambar 1. Kurva baku kuersetin (pembanding)
C. Tes anti-inflamasi
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  efek  antiinflamasi  ekstrak salep  sederhana  dan  ekstrak  kalsium karbonat pada tikus jantan. Hasil penelitian  menunjukkan  dari  nilai  AUC (penurunan ketebalan edema) ekstrak salep
(AUC  =  0,9)  dan  salep  kalsium  karbonat
(AUC = 0,56) memiliki efek anti-inflamasi yang  lebih  baik  daripada  kontrol  negatif (AUC  =  -1,22).  setelah  nilai  AUC dilanjutkan  perhitungan  persentase  efek antiinflamasi,  dapat  dilihat  bahwa  ekstrak
salep  (13,79%)  lebih  baik  daripada  salep kalsium karbonat (14,17%) (Gbr.2). Pengujian  statistik  uji-T  dengan  p  =  95% (α  =  0,05),  dapat  diketahui  bahwa persentase  penurunan  edema  berbeda nyata. Dari hasil itu dapat  dilihat aktivitas penghambatan yang lebih baik.
Gambar  2. Grafik  potensi  anti-intlamasi semua perlakuan
Penelitian  ini  menggunakan  bahan salep  karena  dapat  bertindak  sebagai perlindungan  untuk  iritasi  kimia  dan mekanik  permukaan  kulit,  stabil  dalam penggunaan, didistribusikan dengan merata  dan  mudah,  dan  dalam  kasus peradangan  akut;  itu  bisa  menenangkan, bertindak sebagai vasokonstriktor.
Penggunaan  salep  berminyak  seperti Vaseline  ditentukan  karena  alasan  seperti itu  tidak  mengandung  air,  hidrofobik  dan non-air  larut,  yang  berarti  tidak  mudah larut,  sehingga  waktu  kontak  dengan  kulit lebih  lama,  mengarah  untuk  efek  terapi
yang  lebih  lama  (Isrofah,  Sagiran,  dan Afandi, 2011).
Karaginan menyebabkan edema tungkai  yang  menyebabkan  pelepasan mediator  seperti  histamin,  serotonin, bradikinin, trombosit, faktor pengaktif dan prostaglandin  (de  Sousa  et  al.,  2010; Ahmad  et  al.,  2013)  menunjukkan  bahwa senyawa fenolik dapat meringankan jumlah pro sitokin -inflamasi seperti TNF- a,  IL-1ß,  IL-6  dan  MCP-1  pada  model tikus  yang  diinduksi  oleh  karaginan. Sitokin  proinflamasi  ini  mengaktifkan neutrofil,  monosit,  sel-T,  dan  merangsang kemotaksis, pertumbuhan, dan diferensiasi sel-sel  inflamasi.  Selain  itu,  mereka  juga menginduksi  ekspresi  molekul  adhesi  dan mengelola  gen  inflamasi  dan  produksi nitrit  oksida  (Commins,  Borish  dan Steinke,  2010).  Mekanisme  anti-inflamasi kalsium karbonat adalah untuk mengurangi siklus monosit, blokade makrofag, dan mengurangi agregasi platelet  pada  sel  endotel  sehingga  proses inflamasi  dapat  dikurangi  (Karnad,  Patil dan Majagi, 2006). Kalsium karbonat juga dapat  meminimalkan  biomarker  serum pro-inflamasi (IL-6) dan TNF-alpha (Mustafar  et  al.,  2014).  Mekanisme  kerja kalsium anti-inflamasi tidak dapat dijelaskan  berdasarkan  temuan  ini,  namun di  sisi  lain  ada  beberapa  mekanisme  yang telah  diusulkan  sebelumnya.  Karnad  et  al. (2006) berspekulasi bahwa kalsium
dobesilat  dapat  meminimalkan  jumlah aliran monosit, menghambat aksi makrofag untuk meningkatkan peradangan, dan juga menunjukkan bahwa hal  itu  dapat  mendorong  produksi  faktor agregasi  trombosit  di  dalam  sel  endotel, sehingga  penumpukan  cairan  (edema) dapat dikurangi, dan ini juga berlaku untuk kalsium karbonat. Faktanya, telah dilaporkan bahwa kalsium dapat memberikan  efek  vasodilatasi  yang  lebih baik dengan menstabilkan sel-sel membran dalam endotel dan menyebabkan penurunan  efusi,  sehingga  edema  dapat dikurangi dan diratakan (Karnad, Patil dan Majagi, 2006).

## IV. KESIMPULAN
Dalam penelitian ini, dapat ditunjukkan  bahwa  pengobatan  topikal dapat secara signifikan menghambat edema  pada  kaki  tikus,  dan  ini  dapat menunjukkan  bahwa  ekstrak  salep  dan kalsium  karbonat  memiliki  aktivitas  anti- inflamasi

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian Ini Didukung Oleh KEMENRISTEKDIKTI,  Penelitian  Dosen Pemula  Hibah  Dan  Perbaikan  Artikel Melalui Lokakarya Klinik Penulisan Jurnal Internasional Di Makassar Oleh Direktorat Manajemen Kekayaan
Intelektual, KEMERISTEKDIKTI Indonesia

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmad,  S.  F. et  al. (2013)  ‘Grape  Seed Proanthocyanidin  Extract  Protects
Against  Carrageenan-Induced  Lung
Inflammation  in  Mice  Through
Reduction of Pro-inflammatory Markers and Chemokine Expressions.’  doi:  10.1007/s10753- 013-9764-2.
Commins, S. P., Borish, L. and Steinke, J. W.  (2010)  ‘Immunologic  messenger molecules :  Cytokines  ,  interferons  , and chemokines’, Journal of Allergy and  Clinical  Immunology .  Elsevier Ltd,  125(2),  pp.  S53–S72.  doi: 10.1016/j.jaci.2009.07.008.
Febrianti  Dwi  Rizki  (2018)  ‘Analisis
Kandungan Flavonoid Dan Aktivitas Antihiperurisemia  Ekstrak  Etanol Daun  Sirsak  (Anona  Muricata  L.) Pada Mencit Jantan Secara In Vivo’, jurnal  ilmiah  ibnu  sina ,  3(oktober 2018), pp. 304–311.
Isrofah,  Sagiran  and  Afandi,  M.  (2011)
‘Efektiﬁtas  Salep  Ekstrak  Daun Binahong (Anredera Cordifolia (Ten)  Steenis)  Terhadap  Proses Penyembuhan  Luka  Bakar  Derajat  2 Termal  pada  Tikus  Putih  (Rattus
Novergicus)’, Muhammadiyah Journal of Nursing , pp. 99–108. Karnad, A. S., Patil, P. A. and Majagi, S. I. (2006)  ‘Calcium  enhances  the antiinflammatory  activity  of  aspirin in  albino  rats’, Indian  Journal Pharmacol , 38(6), pp. 397–402.
Mariana  (2015) Uji  Aktivitas  Antioksidan Ekstrak  Daun  Kersen  (Muntingia
Calabura  L.)  Dan  Daun  Waru (Hibiscus  Tiliaeceus  L.)  Dengan Metode Dpph (2,2-Difenil-1- Pikrilhidrazil) . Minhatun Nafisah, Tukiran, Suyatno,  dan N.  H.  (2014)  ‘Phytochemical
Screening Test On hexan,
Chloroform  and  Methanol  Extracts
of Patikan Kebo (Euphorbiae hirtae)’, pp. 279–286.
Mustafar,  R.  B. et  al. (2014)  ‘Clinical immunology The effects of calcitriol with calcium carbonate
supplementation  on  inflammatory biomarkers in chronic kidney disease patients’  with  low  vitamin  D’,
Central European Journal of
Immunology , 2(2), pp. 236–242. doi:
10.5114/ceji.2014.43729. Norcahyati (2012) Buku Tumbuhan Berkhasiat Obat Etnis Asli
Kalimantan .
Siregar, N. E. and Setyohadi, M. N. (2015) ‘Effect  Of  The  Lime  Concentration And  Soaking  Time  On  The  Quality Of  Durian  Stone  Chips’, Jurnal Rekayasa  Dan  Pertanian ,  3(2),  pp. 193–197.
Sousa, O. V. et al. (2010) ‘Antinociceptive and  Anti-Inflammatory  Activities  of the  Ethanol  Extract  of  Annona muricata  L.  Leaves  in  Animal Models’, International  Journal  of Molecular  Sciences ,  11(5),  pp.
2067–2078. doi: 10.3390/ijms11052067.
Sousa, O. V. De, Vieira, G. D. and Pinho,
J. D.  J. R. G. De (2010)
‘Antinociceptive and Anti- Inflammatory Activities of the Ethanol  Extract  of  Annona  muricata L  .  Leaves  in  Animal  Models’, International  Journal  of  Molecular Sciences ,  200,  pp.  2067–2078.  doi: 10.3390/ijms11052067.
Widji  Soeratri,  Tristiana  Erawati,  Diny Rahmatika, N. R. (2014) ‘Penentuan
Dosis Asam p-metoksisinamat
(APMS) Sebagai Antiinflamasi
Topikal  dan  Studi  Penetrasi  APMS Melalui  Kulit  Tikus  dengan  dan Tanpa  Stratum  Korneum’, Jurnal Farmasi  dan  Ilmu  Kefarmasian Indonesia , 1(1), pp. 28–30.