## AKTIVITAS ANTIBAKTERI Lactobacillus paracasei

## ASAL AIR SUSU IBU (ASI) TERHADAP BAKTERI PATOGEN
ANTIBACTERIAL ACTIVITY OF Lactobacillus paracasei FROM HUMAN MILK AGAINST PATHOGENIC BACTERIA
Nosa Septiana Anindita
Program studi Bioteknologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas ‘Aisyiyah Yogyakarta Korespondensi: Nosa Septiana Anindita. Alamat email: nosa.nindita@unisayogya.ac.id

## ABSTRAK
Aktivitas  antibakteri  merupakan  salah  satu  kriteria  bagi  isolat  kandidat  probiotik  untuk  dapat diaplikasikan  dalam  pangan  fungsional.  Pemanfaatan  Air  Susu  Ibu  (ASI)  sebagai  sumber  probiotik  didasari bahwa  ASI  merupakan  bahan  pangan  kaya  nutrisi  yang  mengandung  human  milk  oligosaccharide  (HMOs) sehingga  menghasilkan  efek  bifidogenik  berupa  pertumbuhan  bakteri  menguntungkan,  diantaranya  adalah kelompok  Bakteri  Asam  Laktat  (BAL).  Keunggulan  BAL  asal  ASI  yaitu  memiliki  potensi  sebagai  probiotik sehingga  akan  diperoleh  isolat  lokal  probiotik  terseleksi.  Probiotik  yang  berasal  dari  manusia  seperti  ASI, berpeluang besar memiliki viabilitas tinggi dan adaptif pada saluran pencernaan ketika dimanfaatkan sebagai pangan fungsional. Penelitian ini diharapkan memperoleh kultur lokal probiotik asal ASI yang potensial dalam melawan bakteri patogen. Parameter pengujian yang diamati adalah aktivitas antibakteri yang dimiliki oleh 3 strain Lactobacillus paracasei ( L. paracasei ) asal ASI yaitu L. paracasei strain AS9, L. paracasei strain AS10 dan  L.  paracasei strain  AS12.  Sebanyak  4  bakteri  patogen  digunakan  dalam  pengujian  ini,  meliputi Enterococcus  faecalis  (Entr.  faecalis) 99  EF,  Staphylococcus  aureus  (Stph.  aureus)  FNCC  0047,  Escherichia coli  (E.  coli)  FNCC  0091  dan  Shigella  flexneri  (S.  flexnerii)  ATCC  12022.  Aktivitas  penghambatan  diperoleh dengan mengukur luasan zona bening yang dihasilkan selama proses inkubasi pada suhu 37ºC, 48 jam dengan metode  sumuran.  Berdasarkan  hasil  pengujian,  menunjukkan  bahwa  Lactobacillus  paracasei  strain  AS12 memiliki aktivitas penghambatan tertinggi dengan golongan daya hambat kuat berdasarkan luasan zona bening terhadap 4 bakteri pathogen uji. Sehingga Lactobacillus paracasei strain AS12 berpotensi dalam penghambatan bakteri patogen.
Kata Kunci: Bakteri Asam Laktat (BAL), Air Susu Ibu (ASI), L. paracasei, Antibakteri

## ABSTRACT
Antibacterial activity is one of the criteria for probiotic candidate isolates to be applied in functional foods. The utilization of human milk as a probiotics source is due to nutrient-rich food containing human milk oligosaccharides  (HMOs)  to  produce  a bifidogenic  factor growth  of  beneficial  bacteria,  including  Lactic  Acid Bacteria (LAB). The beneficial role LAB isolated from human milk is that it has the potential as a source of local probiotic  isolates.  Probiotics  derived  from  humans,  such  as  breast  milk,  are  likely  to  have  high  viability  and adaptability  to  the  digestive  tract  when  used  as  a  functional  food.  This  research  is  observed  local  cultures  of probiotics from breast milk that have the potential against pathogenic bacteria. The parameters observed were the  antibacterial  activity  of  three  strains  of  Lactobacillus  paracasei ( L.  paracasei )  asal ASI  yaitu  L.  paracasei strain  AS9,  L.  paracasei strain AS10  and  L.  paracasei strain  AS12.  A  total  of  four  pathogenic  bacterias  were used, including Enterococcus faecalis (Entr. faecalis) 99 EF, Staphylococcus aureus (Stph. aureus) FNCC 0047, Escherichia  coli  (E.  coli)  FNCC  0091  and  Shigella  flexneri  (S.  flexnerii)  ATCC  12022Inhibition  zone  was obtained by measuring the clear zone area produced during incubation at 37ºC for 48 h with the well diffusion method. The results showed that Lactobacillus paracasei strain AS12 had the highest inhibitory activity with the strong  inhibition  category  based  on  the  clear  zone  area  against  the  four  pathogenic  bacterias.  So  that  L. paracasei strain AS12 has the potential to inhibit pathogenic bacteria.
Keywords: Lactic Acid Bacteria (LAB), Human milk, L. paracasei, antibacterial
How  To  Cite : Anindita,  N.  (2021).  AKTIVITAS  ANTIBAKTERI  Lactobacillus  paracasei  ASAL  AIR  SUSU IBU (ASI) TERHADAP BAKTERI PATOGEN.
Biomedika,
13(1), 36-47.
doi:https://doi.org/10.23917/biomedika.v13i1.10830
DOI : https://doi.org/10.23917/ biomedika.v13i1.10830

## PENDAHULUAN
Seiring  dengan  meningkatnya  tingkat pendidikan, status sosial ekonomi dan perubahan  gaya  hidup  masyarakat,  maka kesadaran  pola  hidup  sehat  masyarakat  serta kepedulian  akan  masalah  kesehatan  meningkat. Konsumsi  masyarakat  mulai  beralih  pada pangan  fungsional,  hal  ini  menyebabkan permintaan  konsumen  akan  pangan  fungsional menjadi  semakin  meningkat.  Pangan  fungsional merupakan pangan yang tidak hanya memberikan  zat  gizi  tetapi  juga  memberikan asupan  zat-zat  non  gizi  yang  penting  untuk kesehatan dan kebugaran. Secara umum pangan fungsional  yaitu  pangan  yang  mengandung komponen  biologi  aktif  yang  menawarkan manfaat  lebih  untuk  meningkatkan  kesehatan dan mengurangi risiko terkena penyakit.
Produk  pangan  fungsional  banyak memanfaatkan  aktivitas  metabolisme  bakteri yang  dapat  menghasilkan  senyawa  bioaktif  dan membentuk flavour spesifik pada produk pangan fungsional.  Bakteri  yang  sering  dimanfaatkan dalam  pembuatan  produk  pangan  fungsional berasal  dari  kelompok  Bakteri  Asam  Laktat (BAL),  namun  tidak  semua  BAL  dimanfaatkan dalam  pangan  fungsional.  Penggunaan  BAL
sebagai  salah  satu  bahan  pangan  fungsional berupa probiotik sangat marak dewasa ini.
Berbagai upaya dilakukan untuk mengisolasi BAL yang memiliki potensi sebagai probiotik dari berbagai sumber seperti asal ASI. Kriteria  isolat  BAL  sebagai  bakteri  probiotik diantaranya  bersifat  non  patogenik  dan  harus mampu bertahan hidup pada saluran pencernaan. Probiotik  harus  mampu  melewati  keasaman lambung  yang  tinggi  (pH  sekitar  2-3)  minimal 90 menit. Karakterisasi sifat-sifat probiotik baik secara in  vitro dan in  vivo diperlukan  untuk menyatakan  bahwa  isolat  tergolong  probiotik. Salah  satu  kriteria  BAL  dapat  digolongkan dengan  probiotik  diantaranya  adalah  adanya aktivitas  antibakteri  terhadap  bakteri  yang merugikan. Fungsionalitas probiotik pada produk pangan berdampak dalam meningkatkan kesehatan  dengan  mempengaruhi  keseimbangan mikroflora  usus  sehingga  dapat  mengatasi masalah gangguan pencernaan dapat tercapai.
Produk  pangan  fungsional  dengan memanfaatkan  aktivitas  probiotik  menunjukkan pertumbuhan  yang  pesat  dalam  kelompok pangan  kesehatan  dan  upaya  penelitian  intensif sedang dilakukan untuk mengembangkan produk-produk  probiotik  yang  mengandung bakteri  probiotik  seperti Lactobacillus dan
Bifidobacterium .  Produk  probiotik  tersebut dapat  memodulasi  komposisi  bakteri  dalam usus,  sehingga  dapat  meningkatkan  kesehatan usus,  diantaranya  melalui  peningkatan  toleransi terhadap laktosa pada penderita lactose intolerance atau  meningkatkan  daya  tahan terhadap bakteri patogen (An et al., 2010).
Bakteri probiotik yang banyak dimanfaatkan  dalam  pangan  fungsional  berasal dari  genus Lactobacillus dan Bifidobacterium .
Lactobacillus terdiri dari 106 spesies, dimana 56 spesies  diantaranya  memiliki  potensi  sebagai probiotik.  Di  sisi  lain, Bifidobacterium saat  ini terdiri  dari  30  spesies,  dimana  8  diantaranya memiliki  potensi  probiotik  (Otieno,  2011). Probiotik umumnya berasal dari golongan BAL, khususnya genus Lactobacillus dan Bifidobacterium yang  merupakan  bagian  dari flora  normal  saluran  pencernaan  manusia (Ogunshe et  al., 2011). Lactobacillus dan Bifidobacterium merupakan  beberapa  genus probiotik yang dapat memberikan efek menguntungkan bagi kesehatan seperti pencegahan  diare,  stimulasi  sistem  kekebalan ( immune )  tubuh,  penurunan  kadar  kolesterol, pencegahan kanker kolon dan usus, pencegahan dermatitis  atopik  pada  anak-anak  dan  penyakit irritable  bowel  syndrome ,  penanganan  alergi
serta  pencegahan  dan  penanganan  penyakit infeksi (Wolvers et al., 2010).
Probiotik dapat memproduksi bakteriosin  untuk  melawan  patogen  yang bersifat  selektif  hanya  terhadap  beberapa  strain patogen.  Probiotik  juga  memproduksi  asam laktat, asam asetat, hidrogen peroksida, laktoperoksidase, lipopolisakarida, dan beberapa antimikrobial lainnya. Probiotik juga menghasilkan  sejumlah  nutrisi  penting  dalam sistem  imun  dan  metabolisme  host,  seperti vitamin  B  (Asam  Pantotenat),  pyridoksin, niasin,  asam  folat,  kobalamin,  dan  biotin  serta antioksidan penting  seperti  vitamin  K.  Bahan antibakteri merupakan senyawa yang digunakan untuk mengendalikan pertumbuhan bakteri yang bersifat  merugikan.  Pengendalian  pertumbuhan mikroorganisme  bertujuan  untuk  mencegah penyebaran  penyakit  dan  infeksi,  membasmi mikroorganisme pada inang yang terinfeksi, dan mencegah  pembusukan  serta  perusakan  bahan oleh  mikroorganisme.  Antimikrobia  meliputi golongan  antibakteri,  antimikotik,  dan  antiviral (Adams and Moss, 2000).
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dapat dilakukan  dengan  metode  difusi  dan  metode pengenceran. Disc  diffusion  test atau  uji  difusi disk dilakukan dengan mengukur diameter zona
bening (clear  zone) yang  merupakan  petunjuk adanya  respon  penghambatan  pertumbuhan bakteri  oleh  suatu  senyawa  antibakteri  dalam ekstrak.  Syarat  jumlah  bakteri  untuk  uji kepekaan/sensitivitas  yaitu  10 5 -10 8 CFU/mL.
Pengamatan aktivitas penghambatan atau antibakteri bertujuan untuk mengetahui kemampuan  bakteriosin  dalam  menghambat bakteri target (Hermawan, 2007).
Sebagian besar isolat probiotik berasal dari luar negeri yang berdampak pada tingginya harga  produk  pangan  probiotik.  Selama  ini probiotik  di  Indonesia  banyak  diperoleh  dari makanan fermentasi maupun makanan lokal asli daerah  serta  asal  hewan.  Sedangkan  sumber isolat  asal  manusia  seperti  ASI  masih  jarang digunakan. Keunggulan BAL asal ASI memiliki potensi sebagai probiotik, yang dapat meningkatkan  system  kekebalan,  sehingga akhirnya  akan  diperoleh  isolat  lokal  probiotik terseleksi  yang  dapat  digunakan  sebagai imunostimulan.  Probiotik  yang  berasal  dari tubuh  manusia  sendiri  seperti  ASI,  berpeluang besar memiliki viabilitas tinggi dan adaptif pada saluran  pencernaan.  Kemampuan  probiotik tersebut  dapat  diaplikasikan  dalam  pembuatan pangan  kesehatan  ( Functional  Food )  atau pangan  kesehatan  ( Nutraceutical  Food )  yang
memenuhi  syarat Generally  Recognized  as  Safe (GRAS). Mengkonsumsi pangan kesehatan yang mengandung  probiotik,  akan  membantu  tubuh dalam menjaga keseimbangan mikroflora saluran  pencernaan,  sehingga  akan  menambah nilai guna dari isolat lokal tersebut.
Berdasarkan  hal  tersebut  perlu  upaya untuk  mendapatkan  isolat  BAL  probiotik indigenus,  salah  satunya  bersumber  dari  ASI yang memiliki kemampuan dalam penghambatan  bakteri  patogen.  Sehingga  perlu dilakukan  penelitian  terkait  pengujian  aktivitas antibakteri  isolat  BAL  kandidat  probiotik  asal ASI.  Hasil  dari  penelitian  diharapkan  akan memperkaya kultur koleksi lokal Indonesia asal manusia  khususnya  dari  ASI,  yang  dapat diaplikasikan dalam pangan kesehatan.

## METODE

## Tahapan Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian laboratorium  yang  mencakup  beberapa  tahap penelitian,  yaitu:  peremajaan  kultur  bakteri patogen,  preparasi  isolat  kandidat  probiotik, penyiapan media uji, optimasi konsentrasi kultur bakteri  patogen  dan  isolat  kandidat  probiotik, pengujian  aktivitas  antibakteri  isolat  kandidat probiotik kemudian analisis data hasil pengujian.

## Lokasi Penelitian
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Teknologi Susu dan Telur, Bagian Teknologi  Hasil  Ternak,  Fakultas  Peternakan, Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

## Variabel yang diamati
Variabel  yang  diamati  pada  penelitian ini  adalah  aktivitas  antibakteri  dengan  bakteri patogen  yang  digunakan  berasal  dari  kelompok Gram positif dan Gram negatif.
Rancangan/Metodologi Penelitian Peremajaan Kultur Bakteri Patogen .
Sebanyak 4 bakteri patogen digunakan dalam  pengujian  ini  yaitu Entr.  faecalis 99  EF,
Stph.  aureus FNCC  0047, E.  coli FNCC  0091 dan S.  flexneri ATCC  12022.  Bakteri  patogen yang  berasal  dari  kultur  persediaan  induk diremajakan dengan cara diambil sebanyak satu ose,  diinokulasi  dalam  media  segar  agar  miring Nutrient Agar (NA), diinkubasi pada suhu 37◦C selama  24  jam.  Selanjutnya  sesuai  dengan kebutuhan  uji  antibakteri,  bakteri  patogen ditumbuhkan  kembali  pada  media  cair.  Bakteri patogen  sebanyak  satu  ose,  diinokulasi  dalam media Nutrient Broth (NB) dan diinkubasi pada suhu 37◦C selama 24 jam.
Preparasi isolat kandidat Probiotik .
Isolat kandidat probiotik asal ASI yang digunakan  pada  penelitian  ini  merupakan  hasil isolasi  penelitian  terdahulu.  Pada  penelitian terdahulu  diperoleh  13  isolat  BAL  yang  terdiri atas 6 L. paracasei, 2 L. casei, 2 P. acidilactici dan  masing-masing  2  isolat  lainnyaadalah L. plantarum serta W.  confusa. Semua  isolat  BAL yang  berhasildiisolasi  tersebut  memiliki  potensi probiotik  secara in  vitro berdasarkan  parameter uji yaitu ketahanan terhadap asam lambung (pH 2)  dan  garam  empedu  (0,3;  0,5;  1,0  dan  1,5%) dan  pemanfaatan  prebiotik  inulin.  Isolat  yang digunakan  pada  penelitian  ini  yaitu  3  strain L. paracasei yaitu L.  paracasei strain  AS9, L. paracasei strain  AS10  dan L.  paracasei strain AS12  .  Isolat  tersebut  selanjutnya  dilakukan peremajaan/ reculture. Isolat dari kultur persediaan  induk  diremajakan  dengan  cara diambil  sebanyak  satu  ose,  diinokulasi  dalam media cair yaitu de Man Rogosa Sharpe (MRS) broth yang  telah  disuplementasi  L- cystein HCl 0,05%  dan bile  salt 0,15%  dalam  media.  Isolat tersebut  kemudian  diinkubasi  selama  24  jam pada  suhu  37⁰C.  Setelah  diinkubasi,  kerapatan optik  (densitas)  bakteri  diukur  menggunakan spektrofotometer  pada  panjang  gelombang  580 nm  dengan  menggunakan  blanko MRS  broth .
Selanjutnya dilakukan pemisahan antara
supernatan dengan sel bakteri melalui sentrifugasi  pada  kecepatan  13.000  rpm  selama 15  menit.  Selanjutnya  supernatan  dipindahkan ke  dalam conicle yang  baru  dan  steril  secara aseptis.  Supernatan  inilah  yang  nantinya  akan dimasukkan  ke dalam sumuran untuk dilakukan pengujian antibakteri (Klare et al., 2005).
Penyiapan Media Uji Aktivitas Antibakteri .
Sebanyak  2  erlenmeyer,  1  erlenmeyer disiapkan  dan  diisi  dengan  media  NA  1,2% sebanyak 12 ml (sebagai seed layer ), sedangkan 1  erlenmeyer  lagi  diisi  dengan  larutan  agar teknis  1,8%  sebanyak  15  ml  (sebagai based layer ).  Media based  layer diletakkan  pada cawan  petri  steril,  diratakan  dan  didiamkan hingga  memadat.  Setelah  memadat,  dibuat sumuran  dengan  meletakkan  ring  berdiameter  1 cm dan kemudian di sekeliling ring dituang seed layer yang  telah  ditambahkan  kultur  patogen.
Sebanyak  5%  kultur  patogen  yang  digunakan uji,  dimasukkan  ke  dalam  15  ml  media seed layer ,  divortex  hingga  homogen,  dituang  pada permukaan  media based  layer yang  telah memadat, diratakan, didiamkan hingga memadat.
Pengujian aktivitas antibakteri isolat kandidat probiotik .
Pengujian aktivitas antibakteri terhadap  patogen  dilakukan  melalui  teknik sumuran  (Nuraida et  al., 2011).  Sebanyak  5% kultur  patogen  yaitu Entr. faecalis 99  EF, Stph. aureus FNCC  0047, E.coli FNCC  0091  dan S. flexneri ATCC  12022  diinokulasikan  pada media  alas.  Setelah  memadat,  pada  sumuran kemudian  ditambahkan  200  µl  supernatan  dari masing-masing  isolat  kandidat  probiotik  dan kemudian diinkubasi pada suhu 37ºC selama 48 jam. Setelah 48 jam inkubasi, zona penghambatan  diukur.  Zona  bening  dengan ukuran lebih dari 2 mm pada sekeliling sumuran diindikasikan sebagai penghambatan positif.
Teknik Pengumpulan Data Dan Analisis Data
Teknik pengumpulan data pada penelitian  ini  menggunakan  teknik  sampling dengan kriteria  dan  data  dianalisis  secara deskriptif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kemampuan probiotik dalam penghambatan  bakteri  patogen  memungkinkan bakteri  tersebut  untuk  berkompetisi  sehingga mampu mempertahankan keseimbangan mikrobia  dalam  saluran  pencernaan  (An et  al.,
2010).  Bakteri  patogen  yang  digunakan  dalam pengujian ini yaitu Stph. aureus FNCC 0047 dan Entr.  faecalis 99  EF  mewakili  bakteri  Gram
positif  pembentuk  spora,  sedangkan E.  coli FNCC  0091  dan S.  flexneri ATCC  12022 merupakan bakteri Gram negatif.
Pengujian aktivitas antibakteri
dilakukan  dengan  metode  sumuran  dan  diukur zona penghambatan. Hasil uji aktivitas antagonistik  3  isolat L.  paracasei terhadap bakteri  patogen  menunjukkan  bahwa  isolat-
isolat  tersebut  memiliki  aktivitas  penghambatan yang  beragam  (tabel  1).  Pengujian  dilakukan sebanyak 2 kali ulangan. Antibakteri merupakan senyawa  kimia  khas  yang  dihasilkan  oleh organisme hidup dalam konsentrasi rendah serta dapat menghambat proses penting didalam suatu mikroorganisme.
Tabel 1. Rerata Zona Penghambatan (mm) Aktivitas Antibakteri
Isolat Bakteri patogen S. flexneri E. coli Stph. aureus Entr. faecalis L. paracasei strain AS9 8,62 7,45 5,82 5,25 L. paracasei strain AS10 7,62 7,46 6,82 5,36 L. paracasei strain AS12 15,16 15,18 16,13 17,18
Berdasarkan hasil pengukuran zona bening yang terbentuk (tabel 1), menunjukkan bahwa adanya variasi daya hambat berdasarkan masing-masing isolat  untuk  setiap  jenis  bakteri  patogen. Efektifitas antibakteri dipengaruhi oleh beberapa faktor, antara lain: jenis, jumlah, umur dan latar belakang  kehidupan  bakteri,  konsentrasi  zat antibakteri,  suhu  dan  waktu  kontak  serta  sifat fisika-kimia  substrat  (seperti:  pH),  kadar  air, tegangan  permukaan,  jenis  dan  jumlah  zat terlarut,  dan  senyawa  lainnya)  (Frazier and Wetshof, 1988). Hasil uji antibakteri menunjukkan  bahwa  aktivitas  antagonistik terhadap  bakteri  patogen  oleh  BAL  tidak tergantung  dari  spesiesnya,  sebab  strain  dari
spesies  yang  sama  menunjukkan  perbedaan derajat  penghambatan.  Selain  itu  juga  terlihat bahwa strain yang diisolasi dari jenis yang sama tidak  memberikan  derajat  penghambatan  yang sama,  dengan  demikian  aktivitas  penghambatan terhadap  bakteri  patogen  oleh  BAL  bersifat strain dependent .
Menurut  hasil  penelitian  (tabel  1) sangat  terlihat  dengan jelas  bahwa L.  paracasei strain  AS12  (gambar  1  dan  3)  memiliki  daya hambat  yang  kuat  untuk  semua  jenis  bakteri patogen  yang  digunakan.  Isolat L.  paracasei strain AS12 menunjukkan adanya daya penghambatan rata-rata > 10 mm pada 4 bakteri patogen  yaitu S.  flexneri (15,16±0,18) ,  E.  coli
(15,18±0,06) ,  Stph.  aureus (16,13±0,21) dan
Entr.  faecalis (17,18±0,06) . Kriteria  daya
hambat  anti-bakteri  dapat  dilihat  pada  tabel  2.
Tabel 2. Kriteria Kekuatan Daya Hambat Anti-bakteri menurut Davis and Stout (1971) Tingkat Kekuatan Hambat Diameter Zona Hambat (mm) Sangat Kuat > 20 Kuat 10-20 Sedang 5-10 Lemah 0-5
Gambar 1. Daya hambat Lactobacillus Sp. terhadap bakteri. Keterangan:  Daya  hambat Lactobacillus  paracasei strain  AS12  terhadap Shigella  flexnerii ATCC  12022  (a), Enterococcus faecalis 99 EF (b), Staphylococcus aureus (c), dan Esherichia coli (d). Daya hambat Lactobacillus paracasei strain  AS10 terhadap Shigella flexnerii ATCC 12022 (e) dan Enterococcus faecalis 99 EF (f). Daya hambat Lactobacillus paracasei strain AS9 terhadap Staphylococcus aureus (g) dan Esherichia coli (h).
Berdasarkan hasil pengujian pada tabel 1,  hampir  semua  isolat  BAL  memiliki kemampuan dalam menghambat bakteri patogen, akan tetapi hasil bervariasi untuk setiap jenis  isolat  BAL  dan  bakteri  patogen.  Hal  ini terlihat  bahwa,  daya  hambat  terhadap  patogen yang  dimiliki L.  paracasei strain  AS9  (gambar 1g  dan  1h)  dan L.  paracasei strain  AS10
(gambar 1e dan 1f) tergolong sedang untuk ke-4 jenis  bakteri  patogen  uji.  Hal  ini  ditunjukkan bahwa  rata-rata  diameter  zona  bening  5-9  mm. Widiana (2012) menyampaikan bahwa
mekanisme  penghambatan  senyawa  antibakteri terhadap  pertumbuhan  mikrobia  dapat  terjadi dengan  beberapacara,  diantaranya:  menggangu pembentukan dinding sel, merusak permeabilitas membran  sel  sehingga  terjadi  kebocoran  materi intraseluler,  menghambat  aktivitas  enzim  dan mengganggu  pembentukan  asam  nukleat  (RNA dan DNA) sehingga menyebabkan terganggunya transfer informasi genetik.
Berdasarkan  hasil  pengukuran  zona penghambatan  dari  ke-3  strain  bakteri L. paracasei asal  ASI,  masing-masing  strain
a b f h g d c e
menunjukkan  kemampuan  yang  berbeda-beda untuk  setiap  jenis  bakteri  patogen  walaupun masih  dalam  satu  spesies.  Adanya  perbedaan kemampuan  penghambatan  pada L.  paracasei asal ASI, hal ini menandakan bahwa penghambatan tersebut bersifat strain dependent . Sebagai pembanding dengan sumber isolat berasal dari material manusia berdasarkan kemampuan  penghambatan  terhadap  patogen juga  disampaikan  oleh  Bendali et  al. (2011) bahwa Lactobacillus paracasei subsp. Paracasei yang  diisolasi  dari  feses  bayi  yang  baru  lahir memiliki  penghambatan  yang  kuat  terhadap Stph.  aureus S 3 dengan  zona  hambat  20  mm.
Beberapa  genus  probiotik  lainnya  yang  berasal dari  material  manusia  juga  dilaporkan  memiliki aktivitas  antimikrobia.  Verdenelli et  al. (2009) melaporkan  bahwa Lactobacillus  paracasei IMC502  yang  berhasil  diisolasi  dari  feses manusia  (orang  dewasa  dengan  pemberian makanan  yang  diatur)  memiliki  penghambatan terhadap C. albicans.
Savino et  al. (2011) juga   melaporkan mengenai  kemampuan  penghambatan  patogen oleh genus Lactobacillus dan Pediococcus yang diisolasi  dari  feses  manusia  dan  saluran pencernaan.  Studi  mengenai L.  plantarum MB 456  yang  diisolasi  dari  feses  bayi  yang  masih
mengkonsumsi ASI dilaporkan memiliki kemampuan antagonistik terhadap bakteri patogen E.  coli CG  15b  (8,33±0,89  mm), K. oxytoca GC  Y  (7,75±0,76  mm), Entr.  faecalis GC  W  (8,16±0,56  mm), Entr.  aerogenes GC  K (7,25±0,25  mm),  dan Entr.  cloacae CG  6a (7,05±0,35  mm)  yang  ditunjukkan  dengan  zona penghambatan.
Hal  lain  juga  disampaikan  oleh Ogunshe et  al. (2011)  bahwa Lactobacillus sp yang  diisolasi  dari  feses  bayi  yang  masih mengkonsumsi  ASI  memiliki  kemampuan antibakteri  pada E.  coli NTCC  11560  dengan zona  hambat  sebesar  18  mm.  Hasil  lain dikemukakan oleh Nawaz et al. (2011) bahwa L. fermentum NWS29 yang diisolasi dari feses bayi yang  masih  mengkonsumsi  ASI  menunjukkan penghambatan  terhadap E. ATCC25922, S. dysenteriae CMCC51383, Stph.  aureus ATCC 25923  dengan  zona  hambat  >  4  mm.  Anindita (2013) menyampaikan hasil pengujian penghambatan  bakteri  patogen  menunjukkan aktivitas  yang  beragam  dari  masing-masing isolat,  walaupun  merupakan  spesies  yang  sama. Penghambatan  terbesar  terhadap Stph.  aureus FNCC  0047  ditunjukkan  oleh  isolat P. acidilactici strain  AA,  penghambatan  terhadap Entr.  faecalis 99  EF  ditunjukkan  oleh  isolat L.
casei strain AG. Sedangkan isolat L. casei strain AP menunjukkan penghambatan terbesar terhadap S.  flexneri ATCC  12022  dan  isolat L. casei strain  AF  menunjukkan  penghambatan terbesar terhadap E. coli FNCC 0091.
Beberapa  penelitian  lainnya juga  telah melaporkan  potensi  aktivitas  antimikrobia  dari L.  paracasei yang  diisolasi  dari  produk  pangan fermentasi.  Liasi et  al. (2009)  menyampaikan bahwa L.  paracasei LA02  yang  diisolasi  dari produk  fermentasi  ikan  tradisional  yaitu  Budu memiliki penghambatan yang sangat kuat (15-18 mm)  terhadap B.  cereus ATCC  17781, Stph. aureus ATCC  25923, S.  enterica ATCC  1331 dan L. monocytogenes ATCC 15313. Islam et al.
(2021)  menyampaikan  bahwa L.  paracasei  ssp. paracasei-1 yang diisolasi  dari  produk  susu fermentasi  yaitu  yogurts  lokal  asal  daerah Khulna, Bangladesh memiliki aktivitas antimikrobia. L.  paracasei  ssp.  paracasei-1 memiliki efek penghambatan terhadap 6 bakteri pathogen  yaitu E.  coli,  V.  cholerae,  S. dysenteriae,  Str.  paratyphi,  Str.  epidermis dan Str. pyogenes.
Potensi L.  paracasei asal  produk pangan fermentasi juga dilaporkan oleh Lozo et al. (2004)  melaporkan L.  paracasei  subsp. paracasei BGBUK2-16  yang  diisolasi  dari
produk  fermentasi  tradisional  di  Serbia  yaitu keju  acar  putih  memiliki  aktivitas  antimikrobia pada  beberapa  bakteri  patogen  uji.  Aktivitas penghambatan  tersebut  bervariasi  terhadap Salmonella sp. (> 4 mm), P. aeruginosa ATCC
27853  (>  4  mm), E.  coli ATCC  25922  (<  2 mm), B.  cereus ATCC  11778  (>  4  mm), Str. faecalis ATCC 29212 (2-4 mm), Str. pneumonie ATCC  49619  (>  4  mm), Micrococcus  flavus ATCC  10240  (>  4  mm)  dan B.  fragilis ATCC 25285 (< 2 mm). Penelitian yang dilakukan oleh Coman et al. (2014) menyampaikan bahwa salah satu  probiotik  komersial L.  paracasei IMC 502 ® memiliki  kemampuan  penghambatan  yang bervariasi  pada  jenis  patogen  yang  berbeda. Variasi  aktivitas  penghambatan  ini  terjadi  pada Str. mutans ATCC 20523 (15 mm), Stph. aureus ATCC 25923 (30 mm), B. cereus DSM 345 (25 mm), C. albicans ATCC 10261 (> 30 mm) dan
S. enterica DSM 14221 (15 mm).

## SIMPULAN DAN SARAN
Isolat  BAL L.  paracasei strain  AS12 merupakan  kandidat  probiotik  potensial  dalam pengujian  penghambatan  terhadap  4  bakteri patogen  uji  yaitu Entr.  faecalis 99  EF, Stph. aureus FNCC  0047, E.  coli FNCC  0091  dan S. flexneri ATCC  12022.  Isolasi  dan  identifikasi molekuler  senyawa  antibakteri  yang  dimiliki
oleh L.  paracasei strain  AS12  asal  ASI  perlu dilakukan,  untuk  mengetahui  jenis  senyawa antibakteri secara spesifik.

## PERSANTUNAN
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih kepada  LLDIKTI  Wilayah  V  yang  telah mendanai penelitian ini melalui skema
Penelitian  Dosen  Pemula  (PDP),  Program Bantuan  Dana  Penelitian  DIPA  LLDIKTI Wilayah  V  tahun  2017  berdasarkan  Surat Keputusan  Nomor  1496  /K5/KM/2018  tanggal 31 Mei 2018.

## DAFTAR PUSTAKA
Adams,  M.R.,  and  Moss,  M.O.  2000. Food Microbiology .  2 nd Edition.  Royal  Society of Chemistry. United Kingdom
An, H.M., Baek, E.H., Jang, S., Lee, D.K., Kim, M.J., Kim, J.R., Lee, K.O., Park, J.G., and Ha,  N.J.  2010.  Efficacy  of  Lactic  Acid Bacteria (LAB) supplement in management  of  constipation  among nursing home residents. J. Nutr. 9: 5-14.
Anindita, N.S. 2013. Identifikasi dan Karakterisasi  Isolat  Bakteri  Asam  Laktat Potensi  Probiotik  Pensintesis Conjugated Linoleic  Acid (CLA).  Tesis.  Pasca Sarjana. Universitas Gadjah Mada.
Bendali,  F.,  Nassim,  M.,  and  Djamila,  S.  2011.
Beneficial effects of a strain of
Lactobacillus  paracasei subsp. paracasei in Staphylococcus aureus -induced intestinal and colonic injury. International Journal  of  Infectious  Diseases.  15  (11): 787-794.
Coman,  M.M.,  Verdenelli,  M.C.,  Cecchini,  C., Silvi,  S.,  Orpianesi,  C.,  Boyko,  N.,  and Cresci,  A.  2014.  In  vitro  evaluation  of antimicrobial  activity  of Lactobacillus
rhamnosus IMC  501(®), Lactobacillus paracasei IMC  502(®)  and  SYNBIO(®) against  pathogens.  Journal  of  Applied Microbiology.117: 518-527.
Davis,  W.W.  and  T.R  Stout.  1971.  Disc  plate methods  of  microbiological  antibiotic assay. J. Microbiology. 4. Pp: 659-65.
Frazier,  W.C.,  and  Westhoff,  D.C.  1988. Food Microbiology 4 th edition.  McGraw  Hill
Book Company, New York. Hermawan  A.  2007.  Pengaruh  Ekstrak  Daun Sirih ( Piper betle L.) terhadap
Pertumbuhan Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli Dengan  Metode  Difusi Disk, Artikel Ilmiah , Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Airlangga Surabaya.
Islam,  T.,  Farah,  S.,  Emdadul,  I.M.,  Morsaline, M.B., and Didarul, I.K.M. 2012. Analysis of Antimicrobial Activity of Lactobacillus paracasei ssp. paracasei-1 Isolated  from
Regional  Yogurt.  International Research Journal of Applied Life Sciences (IRJALS). 1 (4): 80-89.
Klare,  I.,  Konstabel,  C.,  Muller-Bertling,  S., Reissbrodt,  R.,  Huys,  G.,  Vancanneyt, J.M.,  Swings.,  Goossens,  H.,  and  Witte, W.  2005.  Evaluation  of  new  broth  media for  microdilution  antibiotic  susceptibility testing of Lactobacilli, Pediococci, Lactococci, and Bifidobacteria .  Appl. Environ. Microbiol. 71(12): 8982-8986.
Liasi, S.A., Azmi,T.I., Hassan, M.D., Shuhaimi, M.,  Rosfarizan,  M.,  and  Ariff,  A.B.2009. Antimicrobial  activity  and  antibiotic sensitivity  of  three  isolates  of  lactic  acid bacteria  from  fermented  fish  product, Budu. Malay. Journal of Microbiology. 5: 33-37.
Lozo,  J.,  Maja,  V.,  Ivana,  S.,  and  Ljubisa,  T. 2004.  Characterization  and  Antimicrobial Activity  of  Bacteriocin  217  Produced  by Natural  Isolate Lactobacillus  paracasei subsp.paracasei BGBUK2-16.  Journal  of Food Protection. 67 (12): 2727–2734.
Nawaz, M., Wang, J., Zhou, A., Ma, C., Wu, X., and  Xu,  J.  2011.  Probiotic lactobacilli from breast-fed healthy babies in
Pakistan.  African  J.  Microbiol.  Res . 5(12): 1428-1436.
Nuraida, L., Winarti, S., Hana., dan Prangdimurti,  E.  2011.  Evaluasi  in  vitro terhadap  kemampuan  bakteri  asam  laktat asal  air  susu  ibu  untuk  mengasimilasi kolesterol  dan  mendekonjugasi  garam empedu.  Jurnal  Teknologi  dan  Industri Pangan. 22(1): 46-52.
Ogunshe, A.A.O., Sanni, A.I., and Olukoy, D.K. 2011.  Potential  probiotics  from  faecal specimens of breastfed Nigerian infants as a  therapy  for  bacterial  gastroenteritis.  Sri Lanka J. Child Health. 40(3): 116-124.
Otieno,  D.O.  2011.  Biology  of  Prokaryotic
Probiotics. In M.T. Liong (Ed.) Probiotics,  Microbiology  Monographs. Berlin: Springer-Verlag. 21: 1-25.
Savino,  F.,  Cordisco,  L., Tarasco, V.,  Locatelli,
E.,  Gioia,  D.D.,  Oggero,  R.,  and
Matteuzzi, D. 2011. Antagonistic effect of
Lactobacillus strains against gas- producing coliforms isolated from colicky infants. BMC Microbiol. 11: 157-169. Verdenelli,  M.C.,  Francesca,  G.,  Stefania,  S., Carla,  O.,  Cinzia,  C.,  and  Alberto,  C. 2009. Probiotic properties of Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus  paracasei isolated  from human  faeces.  European  Journal  of Nutrition. 48: 355–363.
Widiana, R. 2012. Konsentrasi Hambat Minimum  (KHM)  Ekstrak  Daun  Teh ( Camelia  sinensis L.)  pada Escherichia coli dan Salmonella sp.  e-Jurnal  Pelangi STKIP PGRI Sumbar . 4 (2): 1—12.
Wolvers,  D.,  Antonie,  J.M.,  Myllyluoma,  E.,
Schrezenmeir,  J.,  Szajewska,  H.,  and Rijkers, G.T. 2010. Guidance for Substantiating the Evidence for Beneficial
Effects  of  Probiotics:  Prevention  and
Management  of  Infections  by  Probiotics. J. Nutr. 140(3): 698-712