Abstrak —Selama  ini  pemuliaan  budidaya  tembakau  varietas somporis  masih  dilakukan  secara  konvensional.  Pemuliaan secara  konvensional  sering  mengalami  kendala  seperti  masa produksi  yang  lebih  lama  dan  hasil  yang  diperoleh  tidak seragam.  Oleh  karenanya  diperlukan  alternatif  teknik pemuliaan  budidaya  tembakau  yang  lebih  cepat  dan  efisien. Salah  satu  teknik  yang  dapat  dikembangkan  adalah  induksi ginogenesis untuk membentuk tanaman haploid menggunakan pollen  yang  diiradiasi  sinar  gamma.  Tahap  preparasi  pollen sebelum  dilakukan  penyinaran  sinar  gamma  sangat  penting dilakukan.  Proses  pembibitan  tanaman  tembakau  mulai  dari benih,  fase  vegetatif  hingga  fase  generatif  dilakukan  sesuai dengan  panduan  budidaya  tanaman  tembakau.  Bunga  yang digunakan  untuk  pemanenan  pollen  adalah  bunga  yang memiliki ciri panjang bunga ± 5 - 5,5 cm, ujung mahkota bunga sedikit membuka dan berwarna hijau kekuningan. Pollen yang didapat disimpan pada suhu 4 o C selama 3 hari untuk menunggu tanaman  donor  berbunga.  Hasil  penelitian  menunjukan tanaman  tembakau  varietas  somporis  menghasilkan  rata-rata 5,5  mg  pollen  per  bunga.  Setelah  dipolinasi  pada  tanaman donor, pollen yang telah disimpan selama 3 hari pada suhu 4 o C memiliki  viabilitas  yang  tinggi.  Hal  ini  dapat  dilihat  dari persentase pembentukan polongnya yang mencapai 100%.
Kata  Kunci —Ginogenesis,  Pembibitan,  Pollen,  Sinar  Gamma, Tembakau var. Somporis.

## I. PENDAHULUAN
OMODITI  tembakau  mempunyai  arti  yang  cukup penting,  tidak  hanya  sebagai  sumber  pendapatan  bagi para  petani,  tetapi  juga  bagi  negara  yaitu  pada  sektor  cukai pajak.  Tembakau  digunakan  salah  satunya  sebagai  bahan utama dalam industri rokok [1]. Selain itu tanaman tembakau juga  sering  dimanfaatkan  sebagai  biopestisida,  sebagai pelengkap makan sirih dalam upacara adat dan bijinya dapat digunakan sebagai bahan baku minyak cat [2].
Kementerian  Perindustrian  (Kemenperin)  mencatat, kebutuhan akan tanaman tembakau dari tahun ke tahun terus meningkat.  Berdasarkan  catatan  Kemenperin,  pertumbuhan produksi rokok naik pada kisaran 5% hingga 7,4% per tahun. Namun  hal  ini  tidak  diimbangi  dengan  faktor  produksi tembakau.  Saat  ini,  luas  lahan  kebun  tembakau  hanya 192.525  hektare  (ha)  dengan  produksi  sebesar  163.187  ton per  tahun.  Padahal  beberapa  tahun  lalu,  kebun  tembakau  di Indonesia bisa seluas 260.000 ha. Sehingga Indonesia masih mengimpor 40% dari total kebutuhan tembakau domestik [3].
Dalam  rangka  memenuhi  kebutuhan  produksi  tembakau tersebut,  dibutuhkan  varietas  unggul  yang  mampu meningkatkan  produktivitas  tanaman  tembakau.  Varietas yang  sedang  banyak  dikembangkan  saat  ini  adalah  varietas Somporis.  Keunggulan  dari  varietas  Somporis  ini  adalah
memiliki  ukuran  tanaman  yang  lebih  tinggi  dibandingkan varietas yang lain, serta tahan terhadap serangan virus TMV dan  TLC  [4].  Namun  keanekaragaman  benih  sangat  tinggi karena  umumnya  petani  membibitkan  tanaman  ini  tanpa melalui proses pembenihan yang ketat [5].
Selama ini pemuliaan budidaya tembakau masih dilakukan secara  konvensional  dengan  cara  penyerbukan  sendiri  ( self inbreeding ) yang diikuti dengan seleksi. Pemuliaan tembakau secara  konvensional  sering  mengalami  kendala-kendala seperti  masa  produksi  yang  lebih  lama  dan  hasil  yang diperoleh tidak seragam [6]. Di samping itu, teknik budidaya secara konvensional ini membutuhkan lahan pengembangan yang relatif luas. Hal ini dikarenakan teknik pemuliaan secara konvensional  mengharuskan  proses  seleksi  berkelanjutan minimal  hingga  keturunan  atau  generasi  ke-8  dan  waktu minimal  7  tahun  [7].  Oleh  karena  itu  diperlukan  alternatif teknik  pemuliaan  budidaya  tembakau  yang  lebih  cepat  dan efisien  untuk  mengurangi  lama  waktu  dan  ketidakstabilan genetik.  Salah  satu  teknik  yang  dapat  dikembangkan  untuk mengatasi  kendala-kendala  tersebut  adalah  teknik  double haploid  menggunakan  pollen  yang  diiradiasi  sinar  gamma untuk  membentuk  tanaman  galur  murni  atau  homozigot. Sebelum  perlakuan  iradiasi  sinar  gamma,  perlu  dilakukan preparasi  pollen  mulai  dari  pembenihan  hingga  tanaman memasuki fase generatif (berbunga). Setelah memasuki fase generatif  pollen  dapat  dipanen  dan  dikumpulkan.  Preparasi pollen  sangat  penting  untuk  mengetahui  kuantitas  pollen yang  dihasilkan  dan  untuk  menjaga  pollen  tetap  viabel, karena  pollen  memiliki  sifat  yang  sangat  rentan  terhadap kondisi eksternal yang kurang sesuai.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  memperoleh  informasi perlakuan  preparasi  pollen  tembakau  yang  baik  untuk mendapatkan  pollen  yang  berkualitas  sebelum  dilakukan penyinaran  sinar  gamma.  Sehingga  harapannya  akan  dapat berguna  untuk  penelitian  selanjutnya  yaitu  induksi pembentukan tanaman tembakau haploid.

## II. METODOLOGI PENELITIAN

## A. Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilakukan  selama  6  bulan  (Februari  -  Juli 2017)  di  Greenhouse  Urban  Farming  ITS  Surabaya  yang meliputi persiapan media pembibitan, perawatan bibit semai, persiapan  media  tanam,  pemindahan  bibit  semai  ke  media tanam,  perawatan  tanaman,  dan  pemanenan  bunga. Selanjutnya  sampel  pollen  dipreparasi  dan  disimpan  di Laboratorium  Biosains  dan  Teknologi  Tumbuhan  untuk menunggu  tanaman  donor  berbunga.  Benih  tanaman

## Preparasi Pollen Tanaman Tembakau

## ( Nicotiana tabacum L.) Untuk Penyinaran Sinar Gamma
Faishal Aliwardana dan Nurul Jadid Departemen Biologi, Fakultas Ilmu Alam, Institut Teknologi Sepuluh Nopember (ITS)
e-mail : nuruljadid@bio.its.ac.id
K
tembakau  varietas  Somporis  didapat  dari  PT  Sadhana Purwosari.

## B. Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah nampan, sprayer ,  gunting,  penggaris,  kamera, polybag, sekrup, ziplock ,  cawan  Petri,  plastik wrap ,  saringan,  botol  plakon, lemari pendingin, kuas, sedotan, tali, neraca analitik.
Bahan  yang digunakan  untuk penelitian ini adalah  tanah, pupuk kompos, NPK, KNO 3 , cocopeat , fungisida, pestisida, herbisida, pasir, aquades, air.

## C. Cara Kerja
Penelitian  ini  terdiri  atas  beberapa  persiapan  media pembibitan,  perawatan  bibit  semai,  persiapan  media  tanam, pemindahan bibit semai ke media tanam, perawatan tanaman, pemanenan bunga, pemisahan anter dari bunga, pemanenan dan penyimpanan pollen, serta uji viabilitas pollen.

## 1) Persiapan Media Pembibitan
Benih  tanaman  tembakau  disemai  dalam  nampan berlubang  dengan  komposisi  media  tanam  tanah,  pupuk kompos dan cocopeat dengan perbandingan 2:1:1. Selain itu diberikan  juga  pupuk  NPK,  KNO 3 dan  fungisida.  Benih sebelumnya direndam selama sehari semalam pada aquades. Setelah itu benih disebar rata pada permukaan media tanam secara vertikal dari bagian ujung atas nampan hingga bagian ujung bawah nampan dengan terlebih dahulu benih dicampur secara  merata  dengan  butiran  pasir  halus.  Bagian  bawah media  diberi  wadah  yang  berisi  sedikit  genangan  air  untuk menjaga kelembapan media tanam

## 2) Perawatan Bibit Semai
Bibit semai disiram dua kali sehari pada pagi dan sore hari dengan sprayer. Wadah bagian bawah media harus selalu diisi dengan  sedikit  genangan  air  agar  tingkat  kelembapan  tanah terjaga.  Bibit  semai  disiram  dengan  pupuk  NPK  setiap  tiga hari  sekali.  Setelah  tumbuh  dua  daun  dan  ukurannya menutupi media, daun sedikit dipangkas (kliping).
3) P e rsiapan Media Tanam
Tanaman  tembakau  ditanam  di  dalam  greenhouse menggunakan polybag dengan komposisi media tanam tanah, pupuk  kompos  berupa  arang  sekam  dan cocopeat dengan perbandingan 2:1:1. Selain itu diberikan juga pupuk NPK dan KNO 3 pada  media  tanam  sebelum  media  ditanami  bibit tembakau.

## 4) Pemindahan Bibit Semai ke Media Tanam
Sebelum  bibit  dipindah,  terlebih  dahulu  media  disiram hingga benar-benar basah. Bibit yang dipilih untuk dipindah dan ditanam pada polybag adalah bibit yang memiliki ukuran seragam dan juga memiliki stem yang besar dan kokoh, agar saat dipindah ke  media polybag bibit tidak mudah layu dan mati.

## 5) Perawatan Tanaman
Perawatan  tanaman  dilakukan  dengan  pemberian  pupuk pertama menggunakan pupuk NPK, setelah berumur 21 hari dilakukan pemupukan dengan KNO 3 . Penyiraman dilakukan setiap hari saat awal, dan setiap 3 hari setelah tanaman benar- benar  hidup.  Pemberian  pestisida  dan  fungisida  dilakukan sebulan sekali.

## 6) Pemanenan Bunga
Setelah  berumur  ±  60  hst  (hari  setelah  tanam)  tanaman tembakau  varietas  somporis  memasuki  fase  generatif  dan dapat  mengasilkan  bunga.  Bunga  yang  digunakan  untuk pemanenan pollen adalah bunga yang memiliki ciri panjang bunga ± 5 - 5,5 cm, ujung mahkota bunga sedikit membuka dan berwarna hijau kekuningan. Bunga tersebut dikumpulkan dalam ziplock dan disimpan didalam laboratorium.

## 7) Pemisahan Anter dari Bunga
Kuncup bunga tanaman tembakau yang telah dikumpulkan disobek  pada  bagian  ujungnya  dan  dibuka  secara  perlahan. Terdapat  5  anter  didalam  kuncup  bunga  tembakau  dan usahakan ke lima anter tersebut dalam kondisi belum pecah saat pemisahan dari bunga. Anter dipisahkan dan dimasukan ke  dalam  cawan  petri  yang  telah  diberi  alas  berupa  kertas. Anter  tersebut  kemudian  disimpan  pada  suhu  pendingin ruangan (± 19 o C).

## 8) Pemanenan dan Penyimpanan Pollen
Setelah  anter  pecah  maka  butiran  pollen  akan  keluar. Butiran pollen dipisahkan dari anter yang mengering dengan alat  bantu  saringan.  Pollen  yang  telah  terpisah  dari  anter kemudian dimasukan dalam botol plakon dan ditutup dengan rapat. Botol plakon tersebut kemudian disimpan pada lemari pendingin  dengan  suhu  ±  4 o C  untuk  menjaga  pollen  tetap viabel sambil menunggu tanaman donor berbunga.

## 9) Uji Viabilitas Pollen
Setelah  tanaman  tembakau  donor  mulai  berbunga,  bunga tanaman  donor  tersebut  diberi  perlakuan  emaskulasi (pengebirian).  Perlakuan  emaskulasi  ini  dilakukan  sebelum bunga  mekar  sempurna  dan  sebelum  anter  pecah.  Setelah diemaskulasi, putik tanaman tersebut dipolinasi menggunakan pollen  yang telah disimpan dan dikumpulkan sebelumnya. Polinasi pollen ke putik menggunakan alat bantu kuas. Setelah dipolinasi, putik ditutup dengan sedotan  yang telah disumbat pada bagian atasnya dan ditandai dengan tali kecil. Jumlah tanaman donor yang dipolinasi adalah sejumlah tiga  tanaman  dengan  masing-masing  tanaman  lima  bunga yang dipolinasi.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Pemanenan Bunga dan Total Pollen yang Dihasilkan
Bunga  tanaman  tembakau  varietas  somporis  yang digunakan untuk pemanenan pollen adalah yang memiliki ciri panjang  bunga  ±  5  -  5,5  cm,  ujung  mahkota  bunga  sedikit membuka dan berwarna hijau kekuningan (gambar 1). Bunga ini dipilih karena anter masih dalam keadaan utuh dan belum pecah,  sehingga  kuantitas  pollen  yang  dapat  dipanen jumlahnya  optimal.  Jika  anter  telah  pecah  sebelum dipisahkan  dari  bunga  akan  menyebabkan  banyak  pollen yang jatuh sebelum dapat dikumpulkan. Setelah dipanen dan dikumpulkan,  pollen  dari  stage  bunga  ini  menghasilkan cairan  yang  lengket  dan  basah  yang  menandakan  pollen dalam keadaan matang dan siap untuk berkecambah. Hal ini sesuai dengan [8] yang mengatakan bahwa pollen tembakau menghasilkan  pollenkit  yang  basah,  lengket  dan  berwarna. Pollenkit  ini  mengandung  lemak,  protein,  karbohidrat  dan senyawa fenolik serta enzim. Peningkatan kelekatan butiran tepung sari  ini  mengindikasikan bahwa  tepung  sari tersebut telah  siap  untuk  berkecambah.  [9]  juga  mengatakan  bahwa semakin  tua  umur  bunga  akan  semakin  tinggi  frekuensi
JURNAL SAINS DAN SENI ITS Vol. 7, No. 1 (2018), 2337-3520 (2301-928X Print)                                                          E 3
mikrospora pada tahap lebih lanjut ( late uninucleat dan early binucleat ). Untuk meningkatkan persentase perkecambahan, mikrospora  harus  berada  pada  tahap  perkembangan  yang sesuai,  yakni  mulai  dari  tahap  uninukleat  tengah  “ mid- uninucleate ” hingga tahap binukleat awal “ early-binucleate ”. Populasi  mikrospora  uninukleat  yang  lebih  besar  sangat berhubungan dengan ukuran bunga. Tahapan perkembangan mikrospora  di  dalam  anter  sangat  ditentukan  oleh  ukuran bunga dan antera, sehingga penggunaan ciri morfologi bunga atau  ukuran  kuncup  adalah  cara  yang  tepat  dalam menentukan tahap perkembangan mikrospora.
Gambar 1. Bunga tembakau var. somporis yang digunakan untuk pemanenan pollen
Berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  didapatkan total pollen yang dihasilkan adalah sebanyak 0,11 g dari 20 bunga.  Jadi  rata-rata  total  pollen  yang  dihasilkan  bunga tembakau varietas somporis adalah sebanyak ± 5,5 mg pollen per bunga.

## B. Penyimpanan Pollen
Pollen  yang  telah  didapatkan  dimasukan  dalam  wadah botol dan disimpan pada lemari pendingin dengan suhu 4 o C. Hal ini bertujuan agar pollen tetap dalam keadaan viabel pada jangka waktu yang lama. Hal ini sesuai dengan pendapat [10] yang  mengatakan  bahwa  penyimpanan  pada  suhu  rendah metabolisme  sel  menurun  akibat  kadar  oksigen  berkurang sehingga  menyebabkan  respirasi  sel  dan  aktivasi  enzim menurun.  Hal  inilah  yang  menyebabkan  pollen  yang disimpan pada suhu rendah memiliki daya simpan yang lebih lama. Pada suhu ruang dan suhu tinggi viabilitas pollen akan cepat  menurun.  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  [11],  pada tanaman Nicotiana  alata yang  diberi  perlakuan  suhu  20 o C viabilitasnya mampu bertahan selama ± 400 jam. Pada suhu 30 o C  viabilitasnya  menurun  drastis  menjadi  ±  80  jam. Menurunnya  viabilitas  pollen  menurut  [12]  adalah  karena pollen yang diberi cekaman suhu tinggi pertumbuhan tabung pollennya terhambat, yang menyebabkan pollen tube (tabung pollen)  hanya  mencapai  stilus  dan  tidak  dapat  mencapai ovule, sehingga tidak terjadi fertilisasi. Pemberian cekaman suhu 80 o C pada pollen mengakibatkan denaturasi protein dan kematian  sel.  Berdasarkan  penelitian  tersebut  didapatkan bahwa pollen tidak dapat disimpan  dalam jangka waktu lama pada suhu tinggi dan suhu udara normal, sehingga diperlukan pemberian  perlakuan  suhu  rendah  untuk  menyimpan  pollen agar viabilitasnya tetap terjaga.

## C. Uji Viabilitas Pollen
Tanaman donor berbunga setelah pollen yang dipreparasi disimpan  selama  3  hari.  Tanaman  donor  yang  dipilih  untuk
dipolinasi adalah tanaman dengan bunga yang telah matang dan  anter  yang  belum  pecah.  Kematangan  bunga  pada tanaman  tembakau  donor  ditandai  dengan  warna  ujung kuncup mahkota bunga berwarna hijau kemerahan dan bagian pangkal  bunga  berwarna  hijau  cerah,  selain  itu  kematangan bunga  ditandai  dengan  pada  bagian  putik  terdapat  cairan kental yang berguna sebagai media pelekatan pollen. Setelah bunga  didapatkan,  mahkota  bunga  disobek  secara  perlahan dan dilakukan perlakuan emaskulasi (pengebirian). Perlakuan emaskulasi bertujuan untuk menghilangkan anter dari benang sari  agar  pollen  dari  tanaman  donor  tersebut  tidak mengkontaminasi putik, sehingga polinasi terjadi antara putik tanaman  donor  dengan  pollen  yang  telah  di  preparasi  dan disimpan sebelumnya. Polinasi pollen ke putik mengggunakan  alat  bantu  kuas.  Setelah  dipolinasi  pollen ditutup  dengan  sedotan  yang  telah  disumbat  pada  bagian atasnya.  Penutupan  ini  bertujuan  untuk  melindungi  putik yang  telah  dipolinasi  dari  faktor  pengganggu  biotik  dan abiotik  dari  lingkungan  eksternal,  seperti  air  hujan,  debu, hama  dan  lain  sebagainya.  Kemudian  putik  yang  telah dipolinasi tersebut ditandai dengan tali kecil.
Hasil penelitian menunjukan viabilitas dan kualitas pollen yang telah preparasi dan disimpan selama 3 hari pada suhu 4 o C  cukup  tinggi.  Hal  ini  ditunjukan  dengan  dari  15  bunga pada  tiga  tanaman  donor  yang  dipolinasi  menggunakan pollen  yang  telah  di  preparasi,  seluruhnya  berhasil menghasilkan  polong  yang  normal  (gambar  2).  Hal  ini mengindikasikan bahwa perlakuan preparasi dan penyimpanan polen telah dilakukan dengan benar dan tidak mempengaruhi  kualitas  dan  viabilitas  pollen.  Keberhasilan pembentukan  polong  mengindikasikan  bahwa  pollen  dapat berkecambah dengan baik saat berada pada stigma. Selain itu perkembangan dan pemanjangan pollen tube tidak terhambat sehingga pollen tube dapat mencapai ovula dan terjadi proses fertilisasi [12].
Menurut [13] Polong (buah) tanaman tembakau berbentuk seperti  telur  ayam  dengan  panjang  antara  1,5  –  2  cm.  Saat muda  buah  berwarna  hijau  dan  saat  matang  berubah  warna menjadi  cokelat.  Ovarium  terletak  diatas  dasar  bunga  dan mempunyai dua ruang yang membesar. Pada umumnya setiap buah menghasilkan 2000 - 3000 biji, dengan berat 1000 biji kurang  lebih  0,05  –  0,09  g.  Setiap  tanaman  menghasilkan rata-rata 6 - 7 g biji.
Proses  preparasi  pollen  dilakukan  untuk  mengetahui kuantitas  pollen  yang  dapat  dihasilkan  dari  bunga  tanaman tembakau  varietas  somporis.  Preparasi  pollen  ini  juga dilakukan untuk mengetahui pengaruh perlakuan pemanenan dan  penyimpanan  pollen  terhadap  kualitas  dan  viabilitas pollen  tersebut.  Hasil  proses  preparasi  pollen  ini  akan digunakan  untuk  penelitian  selanjutnya  yaitu  induksi ginogenesis  menggunakan  pollen  yang  diberi  penyinaran sinar gamma untuk membentuk tanaman tembakau haploid. Berdasarkan  penelitian  [14]  pada  tanaman  tembakau pemberian  dosis  iradiasi  sinar  gamma  600  gy  pada  pollen dapat menjamin terbentuknya tanaman haploid.

## IV. KESIMPULAN
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian perlakuan preparasi  pollen  mulai  dari  pembibitan  hingga  pemanenan dan  penyimpanan  pollen  telah  dilakukan  dengan  baik. Tanaman  tembakau  varietas  somporis  menghasilkan  pollen rata-rata  5,5  mg  pollen/bunga.  Pollen  yang  dipreparasi memiliki kualitas dan viabilitas yang tinggi yang ditunjukan
dengan  persentase  keberhasilan  pembentukan  polongnya yang mencapai 100%.
Gambar 2 A: Polong  yang dihasilkan setelah dipolinasi. A: tanaman donor 1; B: tanaman donor 2; C: tanaman donor 3

## DAFTAR PUSTAKA
[1] C. Hanum, Teknik Budidaya Tanaman Jilid 3 . Jakarta: Departemen
Pendidikan Nasional, 2008.
[2] Suwarso,  “Pewarisan  Ketahanan  Terhadap  Penyakit  Lanas  Pada Tembakau Madura Prancak-95,” Zuriat , vol. 20, no. 1, 2009.
[3]
Kemenperin,  “Artikel  Produksi  Tembakau  Siap  Bangkit,”
kemenperin.go.id , 2016. [Online]. Available: kemenperin.go.id/artikel/13782/. [4] Sadhana, Buku Kunci Identifikasi Tanaman Tembakau . Purwosari: SAC, 2016. [5]
Ballitas, “Booklet Tembakau Virginia Di Jawa Timur,” Surabaya,
1991.
[6] P.  Daisy,  H.  Sriyanti,  and  W.  Ari, Teknik  Kultur  Jaringan : Pengenalan  dan  Petunjuk  Perbanyakan  Tanaman  Secara Vegetatif-Modern . Yogyakarta: Kanisius, 1994.
[7] dan  I.  Suwarso,  A.  Herwati,  A.  Rachman, Heterosis  Pada Persilangan  Antara  Tembakau  Madura  dan  Oriental .  Malang: Balittas, 1997.
[8] M. Griffin, A. R., and Sedgley, Sexual Reproduction of Tree Crop . San Diego: Academic Press, inc, 1989.
[9] F. Volcov, R. A., Irina, Panchuk, I., Schoffl, “Small Heat Shock Proteins Are Differentially Regulated During Pollen Development and Following Heat Stress in Tobacco,” Plant Mol. Biol. , vol. 57, pp. 487–502, 2005.
[10] E.  Alwi,  M.,  Yuniati,  “Efek  Radiasi  Sinar  Gamma  Terhadap Perkecambahan  Serbuk  Sari  dan  Pembuahan  Cabai  Besar,” Biocelebes , vol. 3, no. 2, 2009.
[11] J. Hoekstra, F.A. and Bruinsma, “Viability of Compositae pollen: germination in vitro and influences of climatic conditions during dehiscence,” Zeitschrift  fur  Planzenphysiologie ,  vol.  76,  pp.  36– 43, 1975.
[12] M.  Shivanna,  K.R.,  Linskens,  H.  F  and  Cresti,  “Responses  of tobacco  pollen  to  high  humidity  and  heat  stress:  viability  and germinability in vitro and in vivo,” Sex. Plant Reprod. , vol. 4, pp. 104–109, 1991.
[13] S.  Basuki,  S.,  Suwarso,  Herwati,  A.,  Yulaikah, Biologi  dan Morfologi Tembakau Madura . Malang: BALITTAS, 2000.
[14] Suharsono, “Effet Du Gene Mitochondrial Atp9 Non- Edite Sur La Fertilite, Chez Des Plantes Transgeniques De Nicotiana tabacum,”
These Dr. Univ. Bordeaux II , 1993.
A B C