## IDENTIFIKASI DAN UJI RESISTENSI BAKTERI DARI PLAK GIGI DENGAN AMALGAM DI PUSKESMAS TIKALA BARU TERHADAP ANTIBIOTIK GOLONGAN METRONIDAZOL DAN KUINOLON
Nurhidayanti fabanyo 1) , Fatimawali 1) , gayatri citraningtyas 1)
1) Program studi farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
One  of  the  problems  about  oral  and  dental  health  is  dental  plaque.  Plaque  is  a  soft  layer formed  from  a  mixture  of  macrophages,  leukocytes,  enzymes,  inorganic  components,  extracellular matrix, oral epithelial, food debris and bacteria attached to the surface of the tooth. The aim of this research  was  to  investigate  the  bacteria  isolated  from  dental  plaque  of  patients  with  amalgam droplets  that  were  resistant  to  the  antibiotic  class  of  Metronidazole  and  Quinolone.  This  research used descriptive explorativ method with dental plaque sample from 3 patients at Tikala Baru Public Health Center for bacterial isolation. The results showed that there were 3 types of bacteria, namely Brucella  sp.,  Staphylococcus  sp  and  Phenylobacterium  sp  of  15  bacterial  isolates.  All  identified bacteria were resistant to antibiotic metronidazole and sensitive to ciprofloxacin.
Keywords : Dental plaque, bacteria, resistant, metronidazole, ciprofloxacin

## ABSTRAK
Salah  satu  masalah  tentang  kesehatan  mulut  dan  gigi,  yaitu  plak  gigi.  Plak  adalah  lapisan lembut yang terbentuk dari campuran antara makrofag, leukosit, enzim, komponen anorganik, matriks ekstraseluler,  epitel  rongga  mulut,  sisa-sisa  makanan  serta  bakteri  yang  melekat  dipermukaan  gigi. Tujuan  dari  penelitian  ini adalah  untuk  mengidentifikasi  bakteri  yang  diisolasi  dari  plak  gigi  pasien dengan  tumpatan  amalgam  yang  resisten  terhadap  antibiotik  golongan  metronidazol  dan  kuinolon. Penelitian ini menggunakan metode deskriptif eksploratif dengan sampel plak gigi dari 3 orang pasien di  Puskesmas  Tikala  Baru  untuk  dilakukan  isolasi  bakteri.  Hasil  penelitian  menunjukkan  terdapat  3 jenis  bakteri,  yaitu Brucella sp .,  Staphylococcus sp dan Phenylobacterium sp  yang  didapat  dari  15 isolat bakteri.  Semua  bakteri  yang  teridentifikasi  telah  resisten  terhadap antibiotik  metronidazol dan sensitif terhadap siprofloxacin.
Kata kunci : Plak gigi, bakteri, resisten, metronidazol, siprofloxacin
Masalah kesehatan khususnya kesehatan  gigi  dan  mulut  semakin  lama makin  meningkat.  Salah  satu  masalah tentang  kesehatan  mulut  dan  gigi,  yaitu plak gigi yang disebabkan adanya pembentukan biofilm  oleh mikroba mulut, jika  hal  ini  dibiarkan  maka  akan  terjadi penumpukan  plak  di  gigi  sehingga mengurangi  estetika  (Marsh,  2006).  Plak gigi juga dapat bersifat patologis
diantaranya  menyebabkan  karang  gigi  dan karies (Pintauli, 2008). Amalgam
merupakan  bahan  untuk  merestorasi  gigi yang  terkena  karies.    Amalgam  adalah campuran dari paduan logam (aloi) dan air raksa (Hg).
Plak  adalah  lapisan  lembut  yang terbentuk  dari  campuran  antara  makrofag, leukosit,  enzim,  komponen  anorganik, matriks  ekstraseluler,  epitel  rongga  mulut, sisa-sisa  makanan  serta  bakteri  yang melekat  di  permukaan  gigi.  Beberapa  cara dapat  dilakukan  untuk  menghambat  atau merusak  struktur  bakteri  biofilm  seperti menggunakan  obat  antibiotik  (Johansen et al., 1997). Antibiotik yang sering digunakan  untuk  infeksi  akibat  bakteri dimulut  antara  lain  adalah  obat  golongan metronidazol  dan kuinolon. Saat  ini sudah banyak  bakteri  yang  resisten  terhadap antibiotik  karena  pemakaian  yang  tidak sesuai aturan sehingga merubah pola kerja dari bakteri tersebut (Johnston, 2012).
Berdasarkan  hal  diatas,  peneliti telah melakukan penelitian tentang pengambilan sampel berupa plak gigi pada pasien  dengan  amalgam  di  Puskesmas Tikala  Baru  Manado  untuk  diidentifikasi bakteri dan melakukan pengujian resistensi terhadap Antibiotik golongan Metronidazol dan Kuinolon.
METODOLOGI PENELITIAN
Penelitian  ini  merupakan  jenis penelitian  Deskriptif  eksploratif  dengan pendekatan  studi  prospektif.  Pengambilan sampel  dilakukan  dengan  cara  mengambil 3  sampel  plak  gigi  pasien  dipoli  gigi Puskesmas Tikala Baru. Pada uji resistensi terhadap  antibiotik  digunakan  metode difusi  yaitu  metode disc  diffusion yang digunakan untuk menentukan aktivitas gen antibakteri.

## Identifikasi Bakteri Uji Biokimia
uji  biokimia  meliputi  uji  indol,  uji  sitrat, uji  H 2 S,  uji  fermentasi  karbohidrat,  uji lisin  dan  uji  katalase.  Untuk  uji  indol mengguakan media NA, uji sitrat menggunakan  media Simmon’s  Citrate Agar, uji  H 2 S  dan  fermentasi  karbohidrat mengguakan  media  TSIA,  uji  lisin mengguakan  media Lysine  Iron  Agar dan uji  katalase  menggunakan  media  NB. Masing-masing  media  disterilkan  pada suhu  121°C  selama  15  menit.  Setelah  itu media  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi masing-masing  3  mL  dan  didinginkan hingga memadat, untuk , uji sitrat, uji H 2 S, uji  fermentasi  karbohidrat  dan  uji  lisin medianya dimiringkan 30˚ hingga memadat.  Bakteri  isolat  dari  agar  miring diambil  dan  diinokulasikan  ke  tabung pengujian.  Diinkubasi  pada  suhu  35°C selama  ±  24  jam  setelah  itu  dilihat hasilnya.  Untuk  uji  indol  ditambahkan  5 tetes reagen covac’s dan untuk uji katalase ditambahkan  H 2 O 2 setelah  diinkubasi (Lay, 1994).

## Uji Fisiologi
Disiapkan  media  motility  test  medium, kemudian media disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 C selama 15 menit. Setelah itu media dimasukkan dalam tabung reaksi masing-masing  5  mL,  lalu  didinginkan hingga memadat. Setelah itu, bakteri isolat
dari  agar  miring  diambil  menggunakan jarum  inokulasi  lurus  dan  diinokulasikan
ketabung pengujian
dengan cara ditusukkan  jarum  ose  sampai  ke  dasar media,  kemudian  diinkubasi  pada  suhu
37 C selama 24 jam (Talaro, 2008).

## Uji Morfologi
Kaca  objek  dibersikan  dengan kapas  yang telah diberi  alkohol lalu diberi label.  Biakan  bakteri  pada  agar  miring diambil  dengan  menggunakan  jarum  ose, kemudian  ditotolkan  pada  bagian  tengah kaca objek sampai merata dan ditambahkan  satu  tetes  NaCl  0,9%. Preparat selanjutnya difiksasi di atas lampu Bunsen.
Sediaan  yang  sudah  direkatkan diwarnai  dengan  kristal  violet  selama  1 menit.Kemudian Kristal  violet  dicuci  pada air  mengalir  dan  diganti  dengan  larutan lugol  (larutan  J2+KJ)  dibiarkan  selama  1 menit.  Larutan  lugol  dicuci  pada  air mengalir  dan  sediaan  dicuci  dengan alkohol  96%  selama  1  menit.  Selanjutnya sediaan  dicuci  dengan  air  dan  diwarnai dengan  safranin  selama  1  menit.  Sediaan dicuci pada air yang mengalir, dikeringkan dan  diperiksa  di  mikroskop  dengan
menambahkan  minyak  imersen  (Talaro, 2008).
Uji Kepekaan Bakteri Terhadap

## Antibiotik
Dipipet  suspensi  bakteri  uji  sebanyak  200 μL  dan  dituangkan  ke  seluruh  permukaan media Luria Bertani Agar s Plate selanjutnya  diratakan  menggunakan L- Glass dan  diamkan  selama  5  menit. Tempatkan cakram Metronidazol 5 μg dan Siprofloxacin 5 μg, pada permukaan media
Luria  Bertani  Agar s Plate. Cakram Antibiotik  ditekan  menggunakan  pinset agar  dapat  menempel  secara  sempurna  di permukaan  agar.  Selanjutnya  diinkubasi pada suhu 37oC selama 18-24 jam. Dibuat tiga  kali  ulangan  pada  cawan  petri  yang berbeda.  Setelah  inkubasi,  diamati  zona pertumbuhan  bakteri  di  sekitar  cakram antibiotik  metronidazol  dan  siprofloxacin. Kemudian  zona  hambatan  dibandingkan berdasarkan  pedoman  CLSI  ( Clinical  and Laboratory Standards Institute ).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Identifikasi Bakteri

## Tabel 1. Hasil Identifikasi Bakteri
Kode Isolat Uji Fisiologi Uji Biokimia Uji Morfologi Motil Indol Sitrat H 2 S Fermentasi Karbohidrat Lisin Katalase Bentuk Gram G L S Gas 1 - - + + + - - - + + Kokus Positif 2 - - + + - - - - + + Kokus Positif 3 - - + - + - - + + + Kokus Positif 4 - - + + + - - - + + Kokus Negatif 5 - - + - + - - + + + Kokus Positif 6 - - + - + - - + + + Kokus Negatif 7 - - + - + - - - + + Kokus Positif 8 - - + - + - - + + + Kokus Positif 9 - - + - + - - + + + Kokus Negatif 10 - - + - + - - + + + Kokus Positif 11 - - + + - - - - + + Kokus Positif
12 - - + - + - - + + + Kokus Positif 13 - - + - + + + + + + Kokus Positif 14 - - + - + - - + + + Kokus Negatif 15 - - + - + - - + + + Kokus Negatif Semua  data  yang  diperoleh  dari identifikasi  bakteri  yang  meliputi  uji morfologi,
fisiologi, dan biokimia digabungkan dan digunakan untuk menentukan bakteri  yang terkandung pada
masing-masing  isolat.  Penentuan  bakteri dilakukan  dengan  membandingkan  hasil uji  yang  diperoleh  dengan  data-data  yang terdapat  dalam  buku Bergey’s  Manual Determinative of Bacteriology .
Tabel 2. Hasil Identifikasi Bakteri Kode Isolat Hasil identifikasi bakteri 1 Staphylococcus sp. 2 Staphylococcus sp. 3 Staphylococcus sp. 4 Brucella sp. 5 Staphylococcus sp . 6 Phenylobacterium sp. 7 Staphylococcus sp. 8 Staphylococcus sp. 9 Phenylobacterium sp. 10 Staphylococcus sp. 11 Staphylococcus sp. 12 Staphylococcus sp. 13 Staphylococcus sp. 14 Phenylobacterium sp. 15 Phenylobacterium sp.

## Uji Kepekaan Bakteri terhadap Antibiotik
Tabel 3 . Hasil pengukuran zona hambat
Kode Isolat Metronidazol Siprofloxacin Hasil Rata-rata Keterangan Hasil Rata-rata Keterangan 1 2 3 4
5 6 P 1 : 7
P 2 : 8 P 3 : 7
P 1 : 7 P 2 : 7 P 3 : 8 P 1 : 8 P 2 : 8 P 3 : 8 P 1 : 8 P 2 : 7 P 3 : 9 P 1 : 8 P 2 : 7 P 3 : 0 P 1 : 7
7 7 8
8 5 8 R R
R R
R
R P 1 : 22
P 2 : 29 P 3 : 21 P 1 : 26 P 2 : 26 P 3 : 26 P 1 : 26
P 2 : 21 P 3 : 27
P 1 : 26 P 2 : 22
P 3 : 31 P 1 : 27 P 2 : 24 P 3 : 29
P 1 : 32 24
26 25
26,3 27 30,3 S S S S S
7
8 9 10 11 12 13
14
15
P 2 : 8 P 3 : 9 P 1 : 7
P 2 : 8
P 3 : 7
P 1 : 8
P 2 : 0
P 3 : 9
P 1 : 10
P 2 : 7
P 3 : 7
P 1 : 7
P 2 : 0
P 3 : 7
P 1 : 0
P 2 : 7
P 3 : 7
P 1 : 7
P 2 : 7 P 3 : 7
P 1 : 9
P 2 : 7 P 3 : 7
P 1 : 8
P 2 : 9
P 3 : 0
P 1 : 8 P 2 : 7 P 3 : 7
7
6
8 5 5 7 8 6 7 R R R R R R R R R
P 2 : 31 P 3 : 28
P 1 : 24 P 2 : 26 P 3 : 27 P 1 : 24 P 2 : 24 P 3 : 24 P 1 : 24 P 2 : 27 P 3 : 25 P 1 : 29 P 2 : 27 P 3 : 28 P 1 : 27 P 2 : 34 P 3 : 35 P 1 : 27 P 2 : 38 P 3 : 30 P 1 : 26 P 2 : 26 P 3 : 25 P 1 : 38 P 2 : 33 P 3 : 35 P 1 : 28 P 2 : 29 P 3 : 31 26 24 25,3 28 32 32 26 35,3 29,3 S S S S S S S
S S
Keterangan :  R= Resisten, I= Intermediate, S= Sensitif
P 1 = Pengulangan pertama
P 2 = Pengulangan kedua P 3 = Pengulangan ketiga
Berdasarkan  hasil  uji  kepekaan antibiotik pada tabel 4 antibiotik Metronidazol  Resisten  pada  semua  isolat bakteri  dan  Siprofloxacin  Sensitif  pada semua isolat bakteri
.
Tabel  4.  Persentase  kepekaan  bakteri  dari  isolat  plak  gigi  terhadap  antibiotik    Metronidazol dan Siprofloxacin
Antibiotik Metronidazol Siprofloxacin S - 15 I -
-
R
15 - Persentase (%)
S - 100%
I
- - R 100%
-
Keterangan : R= Resisten, I= Intermediate, S= Sensitif
Berdasarkan  tabel  4  dapat  dilihat bahwa  antibiotik  metronidazol  100% Resisten  terhadap  semua  isolat  bakteri. Menurut  Gilman  (2012),  Metronidazol memiliki  resistensi  paling  tinggi  terhadap bakteri yaitu 96,43%. Metronidazol merupakan  antiprotozoa  dan  antibakteri yang  efektif  melawan  parasit  protozoa anaerob  dan  basil  Gram-negatif  anaerob, dan  Gram-positif  anaerob  pembentuk- spora.  Metronidazol  tidak  efektif  terhadap bakteri  aerob,  karena  bakteri  aerob  tidak memiliki  komponen  transpor  elektron seperti organisme anaerobik. Pada penelitian ini semua bakteri  yang diisolasi merupakan  bakteri  aerob.  Penjelasan  di atas  dapat  menjelaskan  mengapa  semua isolat  bakteri  resisten  terhadap  antibiotik metronidazol.
Sedangkan  untuk  pengujian  pada antibiotik  siprofloxacin    dapat  dilihat bahwa  antibiotik  ini  sensitif  terhadap semua bakteri yang diisolasi dari plak gigi dengan  presentase  100%.  Hasil  yang diperoleh  ini  hampir  mirip dengan penelitian yang dilakukan oleh Yadav et al (2015)  dimana  sensitivitas  bakteri  Gram positif  terhadap  antibiotik  siprofloksasin sebesar  94,27%  dan  sensitifitas  bakteri Gram  negatif  terhadap  siprofloksasin sebesar  100%.  Terjadinya  sensitifitas bakteri terhadap siprofloksasin disebabkan karena  siprofloxacin  merupakan  antibiotik golongan kuinolon
yang
daya
antibakterinya kuat terhadap bakteri Gram-
Negatif.  Adanya  bakteri  yang  masih sensitif terhadap siprofloxacin dapat masuk  kedalam  sel  dengan  cara  difusi pasif  melalui  kanal  protein  terisi  air (porins) pada membran luar bakteri secara intraseluler,  secara  unik  obat-obat  ini menghamat  replikasi  DNA  bakteri  dengan cara  mengganggu  kerja  DNA  girase
selama pertumbuhan dan reproduksi bakteri (Mycek dan Mary, 2001).

## KESIMPULAN
Bakteri  yang  teridentifikasi  dari plak  gigi  pasien  di  Tikala  Baru  adalah bakteri Staphylococcus sp .,  Brucella sp .
dan Phenylobacterium sp. Bakteri Brucella sp., Staphylococcus sp.  dan Phenylobacterium
sp.  telah  resisten  terhadap  Antibiotik
Metronidazol dan Sensitif terhadap Antibiotik Siprofloxacin.

## SARAN
Dalam penggunaan terapi antibiotik  disarankan  kepada  Instansi terkait untuk dapat menjadikan Siprofloksasin sebagai salah satu
pertimbangan dalam penatalaksanaan terapi  antibiotik  pada  masalah  plak  gigi pasien dengan tetap didasarkan pada kultur bakteri dan uji kepekaan bakteri.
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  dengan  jumlah  sampel  yang  lebih banyak  dengan  menggunakan  antibiotik yang  berbeda  untuk  mengetahui  antibiotik yang tepat dalam terapi pada plak gigi.

## DAFTAR PUSTAKA
Fatimawali. 2016. Toksikologi: Detoksifikasi Merkuri . Unsrat Press, Manado
Pratiwi,  S.  2008 .  Mikrobiologi  Farmasi . Erlangga, Jakarta.
Gilman,  G.A.2012.  Goodman  &  Gilman
Dasar  Farmakologi  Terapi  Ed  10. EGC. Jakarta.
Johansen  C,  Falholt  P,  Gram,  L.1997.
Enzymatic  Removal  and  Disinfectan of  bacterial  biofilm .  Appl  Environ Microbio  63:372 4-8
Johnston, L.2012.
Rational use of antibiotics  in  respiratory  tract
infections. Medpharm. Jakarta.
Lay,W.B.1994. Analisa Mikroba di Laboratorium .Edisi I. Raja Grafindo Persada. Jakarta.
Marsh, P.2006, Dental Plaque as a Biofilm and  a  Microbial  Community – Implications for Health and
Disease.  BMC  Oral  Health.  6 (Suppl 1), 514.
Mycek., Mary, J. 2001. Farmakologi Edisi 2. Widya Medika. Jakarta. Pintauli,  S.,  Hamada  T.2008. Menuju  gigi dan mulut sehat: pencegahan dan pemeliharaanya . Ed.I.  USU Press. Medan
Talaro, K P.2008. Foundation in Microbiology, 4th ed . The McGraw-Hill Company. New
York.