Permatasari et al.

## Pengaruh Konsentrasi IAA dan Air Kelapa terhadap Pertumbuhan Biji Anggrek Dendrobium phalaenopsis secara In Vitro
Effect of IAA and Coconut Water Concentration on Dendrobium phalaenopsis Orchid Seeds Growth through In Vitro Culture
Utari Dwi Ayu Permatasari 1 , Ratih Restiani 1 * dan Aniek Prasetyaningsih 1
1 Fakultas Bioteknologi, Universitas Kristen Duta Wacana, Yogyakarta, Indonesia
Abstrak
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh variasi konsentrasi air kelapa dan Indole- 3-Acetic Acid (IAA) terhadap pertumbuhan biji anggrek Dendrobium phalaepnopsis secara in vitro . Bahan tanaman yang digunakan adalah buah anggrek D.phalaenopsis umur 4 bulan setelah polinasi yang diperoleh dari Nursery Titi Orchid di Pakem, Yogyakarta. Perlakuan terdiri dari variasi konsentrasi air kelapa (0, 5, 10, dan 15) % dan IAA (0, 0,5, 1, 1,5) ppm dalam media MS. Setiap perlakuan diulang sebanyak 2 kali. Pengamatan dilakukan selama 6 minggu untuk menentukan fase pertumbuhan biji dan penghitungan persentase  pertumbuhan biji anggrek D .phalaenopsis . Hasil penelitian menunjukkan bahwa biji anggrek dapat tumbuh pada semua media perlakuan termasuk kontrol namun pertumbuhan hanya dapat mencapai fase 3 (embrio mengalami pembengkakan, berwarna hijau dan sudah terlepas dari testa). Selain itu, perlakuan yang menunjukkan pertumbuhan biji tertinggi adalah variasi air kelapa 10% dan IAA 1 ppm yaitu sebesar 38,75% dibandingkan kontrol (24,21%). Berdasarkan hasil tersebut dapat disimpulkan bahwa penambahan air kelapa dan IAA pada berbagai konsentrasi berpengaruh terhadap pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek D .phalaenopsis . Konsentrasi air kelapa dan IAA yang memberikan respon pertumbuhan biji anggrek tertinggi adalah air kelapa 10% dan IAA 1 ppm yaitu sebesar 38, 75%.
Kata Kunci: Dendrobium phalaenopsis , air kelapa, IAA, biji
Abstract
The objective of this research was to determine the effect of coconut water and IAA concentration on growth of D.phalaenopsis orchid seeds through in vitro culture.  This research was used orchid capsule that contain orchid seeds. Orchid seeds were sown on MS medium with addition of coconut water (0, 5, 10 and 15) % and IAA (0, 0,5, 1, and 1,5) ppm. After six weeks observation, the results showed that the growth of orchid seeds could grow in all treatment media including control yet the growth could only reach phase 3 (the embryo was swollen, green and separated from the testa). In addition, the treatment which showed the highest response to seeds growth was the variation of 10% coconut water and 1 ppm IAA which was 38.75% compared to the control (24.21%). Based on these results, it can be concluded that the addition of coconut water and IAA at various concentrations affected the growth and development of D. phalaenopsis orchid seeds. The concentration of coconut water and IAA which gave the highest response to orchid seed growth (38.75%) was 10% coconut water and 1 ppm IAA.
Keywords: Dendrobium phalaenopsis , coconut water, IAA, seeds,
* Corresponding author: Ratih Restiani Fakultas Bioteknologi, Universitas Kristen Duta Wacana Jl. Wahidin Sudirohusodo 5-25, Yogyakarta, Indonesia 55244 Email : ratih.restiani@staff.ukdw.ac.id
Permatasari et al.
Pendahuluan Anggrek Dendrobium phalaenopsis atau dikenal dengan nama lain anggrek larat merupakan salah satu anggrek endemik di Pulau Tanimbar, Kabupaten Maluku Tenggara Barat. Anggrek ini memiliki keunikan pada bunganya yang berwarna ungu, putih dan kombinasinya serta bentuk bunganya yang membulat menyerupai Phalaenopsis (Ivakdalam & Pugesehan, 2016; Setiari et al ., 2017). Keunikan bentuk bunganya membuat anggrek larat dijadikan induk untuk persilangan. Berdasarkan UU No 5 Tahun 1990 Pasal 21 ayat (1); PP No 7 Tahun 1999 dan SK Mentan No.37/5/1968, anggrek larat masuk dalam status langka. Salah satu penyebab kelangkaannya adalah karena kerusakan  habitat tumbuhnya di alam (Ivakdalam & Pugesehan, 2016). Selain itu, laju perkecambahan biji anggrek di alam yang relatif rendah juga menjadi penyebab kelangkaan tersebut (Semiarti et al ., 2010). Salah satu kendala dalam perbanyakan anggrek melalui biji secara alami adalah tidak adanya endosperm yang merupakan cadangan makanan sehingga menyebabkan laju perkecambahannya yang rendah. Selain itu, biji anggrek membutuhkan symbiosis dengan fungi untuk dapat mendukung perkecambahnnya (Dwiyani, 2013; Jainol & Gansau, 2017). Pendekatan dalam bioteknologi yang dapat dilakukan untuk mengatasi kendala tersebut adalah melalui kultur in vitro . Kultur in vitro dapat membantu perbanyakan anggrek dengan menyediakan nutrien dan zat pengatur tumbuh yang dibutuhkan dalam menginisiasi pertumbuhan dan perkembangan embrio dalam biji yang tidak memiliki endosperm (Budisantoso et al ., 2017; Dwiyani, 2010; Jainol & Gansau, 2017). Keberhasilan perbanyakan anggrek melalui kultur in vitro dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti pemilihan jenis media kultur, penambahan zat pengatur tumbuh (ZPT), dan senyawa organik kompleks (Budisantoso et al. , 2017). Salah satu ZPT yang sering digunakan dalam kultur in vitro anggrek adalah Indole- 3-Acetic Acid (IAA) yang merupakan golongan auksin alami. IAA berperan penting dalam mendukung
perkecambahan biji anggrek secara simbiotik di alam. IAA tersebut umumnya dihasilkan oleh bakteri dan fungi yang bersimbiosis dengan biji anggrek. IAA selanjutnya berperan dalam pembelahan , pembesaran dan diferensiasi sel dalam biji anggrek. Selain itu IAA juga berperan dalam morfogenesis anggrek (Novak et al ., 2014; Novak & Whitehouse, 2013; Vogel & Macedo, 2011). Berbagai penelitian mengenai pengaruh konsentrasi IAA terhadap perkecambahan biji anggrek dan perkembangan protokorm telah dilakukan. Pyati (2019), membuktikan bahwa penambahan IAA pada konsentrasi 0,57 µM ke dalam media KC dapat meningkatkan frekuensi perkecambahan biji anggrek Aerides ringens sebesar 89,3%. Selain itu, hasil penelitian Vogel & Macedo (2011), menunjukkan bahwa penambahan IAA pada konsentrasi 1 µM ke dalam media kultur dapat meningkatkan pertumbuhan PLB ( Protocorm Like Bodies ), anggrek Cyrtopodium glutiniferum secara in vitro. Pada perkecambahan biji anggrek Orchis coriophora , IAA (1 mg/L) merupakan jenis auksin terbaik dibandingkan jenis auksin lain meliputi NAA, IBA dan 2,4-D dalam meningkatkan perkecambahan biji anggrek yaitu sebesar 46,2% (Bektaş et al. , 2013). Selain ZPT, penambahan senyawa organik kompleks seperti air kelapa juga telah banyak diteliti pengaruhnya terhadap perkecambahan biji anggrek secara in vitro .
Huh et al . (2016), membuktikan bahwa bahwa penambahan air kelapa sebanyak 100 ml/L ke dalam media MS dapat meningkatkan persentase perkecambahan biji anggrek Cypripedium macranthos sebesar 70,8%. Selain itu, penambahan air kelapa  sebanyak 15% (v/v) ke dalam media VW secara signifikan dapat meningkat rasio pertumbuhan tunas dan akar kecambah anggrek Dendrobium lasianthera (Utami et al ., 2017). Air kelapa pada konsentrasi yang sesuai secara efektif dapat membantu meningkatkan perkecambahan biji karena mengandung gula, ion organik, vitamin, asam organik, pepton, dan berbagai jenis fitorhormon alami seperti IAA, zeatin dan sitokinin lain yang berfungsi dalam meningkatkan pertumbuhan dan regenerasi eksplan (Ambarwati et al ., 2021; Dewi, 2019;
Permatasari et al.
Huh et al ., 2016; Semiarti et al ., 2010; Utami & Hariyanto, 2019). Sejauh ini, belum ada penelitian yang mengoptimasi kombinasi IAA dan air kelapa terhadap pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek Dendrobium phalaenopsis secara in vitro . Oleh karena itu, penelitian ini penting dilakukan karena bertujuan untuk mengetahui konsentrasi IAA dan air kelapa yang optimal dalam mendukung pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek D.phalaenopsis secara in vitro .
Materi Dan Metode Waktu dan tempat penelitian Penelitian dilakukan di Laboratorium Bioteknologi Dasar II, Fakultas Bioteknologi Universitas Kristen Duta Wacana, Yogyakarta dari bulan Maret hingga Juni 2022. Sampel buah anggrek Dendrobium phalaenopsis yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari Titi Orchid Nursery di Pakem, Yogyakarta.
Desain penelitian Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental dengan desain Rancangan Acak Lengkap Faktorial dengan 2 faktor. Faktor pertama adalah air kelapa yang terdiri dari 4 konsentrasi (0, 5, 10, dan 15) ml /100 ml (%). Faktor kedua adalah IAA yang terdiri dari 4 konsentrasi (0, 0,5, 1, dan 1,5) ppm. Jumlah ulangan setiap perlakuan (termasuk kontrol) sebanyak 2 ulangan. Kombinasi kedua faktor diuraikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Kombinasi Air Kelapa dan IAA dalam medium MS pada berbagai konsentrasi
Konsentrasi Air Kelapa (AK) % Konsentrasi IAA (I) ppm 0 0,5 1 1,5 0 AK 0 I 0 AK 0 I 1 AK 0 I 2 AK 0 I 3 5 AK 1 I 0 AK 1 I 1 AK 1 I 2 AK 1 I 3 10 AK 2 I 0 AK 2 I 1 AK 2 I 2 AK 2 I 3 15 AK 3 I 0 AK 3 I 1 AK 3 I 2 AK 3 I 3 Alat dan Bahan Bahan utama yang digunakan adalah buah Dendrobium phalaenopsis berumur 4 bulan setelah polinasi berwarna kuning kehijauan (Gambar 1). Media yang digunakan adalah Murashige and Skoog (MS) padat. Air kelapa yang digunakan berasal dari buah
kelapa hijau yang masih muda dan daging buah tidak terlalu lunak. Auksin yang digunakan adalah Indole 3-Acetic Acid (IAA). Alkohol dan bunsen spiritus untuk sterilisasi eksplan.
Alat utama yang digunakan adalah Laminar Air Flow (LAF), autoklaf (Hirayama Manufacturing Corporation Tokyo-Japan), oven) (Memmert), dan timbangan analitik (AND).
(a) (b) Gambar 1(a). Buah anggrek umur 4 bulan, (b). Biji anggrek D.phalaenopsis (dok. pribadi) Keterangan: B: Biji anggrek
Inokulasi Eksplan Buah anggrek yang telah dipanen selanjutnya dicuci dengan detergen cair dan dibilas di bawah air mengalir sampai bersih (tahap pra-sterilisasi). Buah anggrek yang telah dicuci dibawa ke dalam Laminar Air Flow (LAF), untuk tahap sterilisasi. Buah dicelupkan ke dalam alkohol lalu dilewatkan di atas api (diflambir) diulangi sebanyak 3 kali. Selanjutnya buah yang telah steril dipotong memanjang untuk diambil bijinya. Biji anggrek ditabur ke dalam media MS yang mengandung air kelapa pada konsentrasi (0, 5, 10, dan 15) % dan  IAA pada konsentrasi (0, 0,5, 1, dan 1,5) ppm. Kultur selanjutnya diinkubasi di ruang kultur dengan suhu 25 0 C, 24 jam terang dan penyinaran menggunakan lampu TL putih.

## Pengamatan
Observasi terhadap kultur biji anggrek D .phalaenopis dilakukan setiap minggu selama 6 minggu. Parameter yang diamati adalah fase pertumbuhan biji anggrek dan penghitungan persentase biji yang tumbuh. Penentuan fase pertumbuhan biji anggrek ditentukan berdasarkan perubahan bentuk, ukuran dan warna embrio (Setiari et al ., 2017).
B
Permatasari et al.
Penentuan fase pertumbuhan biji penting untuk membantu menghitung persentase pertumbuhan biji dalam media kontrol dan perlakuan. Dokumentasi gambar terhadap biji anggrek pada berbagai media perlakuan dan kontrol dilakukan dari minggu ke-0 sampai minggu ke-6.
Analisis Data Data kuantitatif yang diperoleh selanjutnya diolah menggunakan Microsoft Excel dan disajikan dalam bentuk  tabel dan diagram batang. Data kualitatif berupa fase pertumbuhan biji disajikan dalam bentuk gambar. Data kualitatif dan kuantitif selanjutnya dianalisis secara deskriptif.
Hasil Fase Pertumbuhan Biji Angrek Dendrobium phalaenopsis
Pertumbuhan biji anggrek D .phalaenopsis pada media MS dengan penambahan berbagai konsentrasi air kelapa dan IAA diamati selama 6 minggu. Fase pertumbuhan biji D .phalaenopsis ditunjukkan pada Gambar 2. Hasil tersebut menunjukkan bahwa biji anggrek yang telah ditabur ke dalam media MS dengan penambahan air kelapa dan IAA
menunjukkan respon pertumbuhan yang dapat dilihat berdasarkan perubahan bentuk, ukuran dan warna embrio dalam biji yang semula kuning menjadi hijau. Tahap pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek D .phalaenopsis yang dikultur selama 6 minggu baru mencapai fase pembentukan protokorm. Fase ini ditandai dengan pembentukan struktur embrio yang besar membulat dan berwarna hijau serta sudah terlepas dari kulit biji (testa) (Gambar 2 f,g). Setiari et al. (2017), menyatakan bahwa tahap pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek Dendrobium phalaenopsis yang dikultur dalam media VW dengan penambahan air kelapa, pepton dan ekstrak tomat selama 8 minggu inkubasi meliputi 6 fase yaitu fase 1 : embrio berwarna hijau dan dilindungi testa (1 MST), fase 2: embrio membengkak (2 MST), fase 3 : embrio membenuk protokorm (3 MST), fase 4 : protokorm memiliki SAM (4 MST), fase 5 : protokorm memiliki daun primordia (6 MST), dan fase 6 : protokorm memiliki daun pertama (8 MST).
Berdasarkan hasil yang diperoleh dalam penelitian ini, biji angrek D .phalaenopsis yang dikulturkan dalam media MS basal (kontrol)
Gambar 2. Fase pertumbuhan biji anggrek D.phalaenopsis selama 6 minggu (a)Embrio berwarna kuning dan berada pada testa yang masih utuh, (b,c) Embrio membengkak, berwarna kuning kehijauan dan masih memiliki testa, (d,e) Embrio membengkak berwarna kuning kehijauan dan embrio  mulai terlepas dari testa (f,g) Embrio semakin membesar, warna menjadi hijau dan keluar dan terlepas dari kulit biji (testa) Keterangan : (T) Kulit biji (Testa), (E) Embrio dan (P) Protokorm

## E
T
Permatasari et al.
maupun medium dengan penambahan air kelapa dan IAA menunjukkan pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek yang relatif lebih lambat karena biji mencapai fase embrio mengalami pembengkakan menjadi lebih besar dan warna berubah menjadi kehijauan (fase 3) pada minggu ke-6. Hasil tersebut berbeda dengan kecepatan pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek D.phalaenopsis pada medium VW dengan penambahan air kelapa, pepton dan ekstrak tomat yang mencapai fase pembentuk protokorm dengan daun primordia (fase 5) pada minggu ke-6 (Setiari et al ., 2017). Perbedaan kecepatan fase pertumbuhan biji tersebut dapat disebabkan karena jenis medium, ZPT dan senyawa organik kompleks yang berbeda dengan penelitian ini.

## Persentase Pertumbuhan Biji Angrek
Dendrobium phalaenopsis Penambahan air kelapa dan IAA pada berbagai konsentrasi dalam media MS (termasuk kontrol) menunjukkan adanya respon pertumbuhan biji anggrek D.phalaenopsis . Respon pertumbuhan biji anggrek tersebut ditunjukkan dengan variasi persentase pertumbuhan biji dan perbedaan fase pertumbuhan biji pada setiap perlakuan dan kontrol (Tabel 2 dan Gambar 3).
Tabel 2. Persentase pertumbuhan biji anggrek D.phalaenopsis pada konsentrasi IAA dan air kelapa yang berbeda setelah minggu ke-6 pengamatan
Air Kelapa % (AK) IAA ppm (I) 0 (I0) 0,5 (I1) 1 (I2) 1,5 (I3) 0 (AK0) 24,21% 30,65% 23,66% 27,08% 5 (AK1) 34,23% 20,53% 29,48% 29,16% 10 (AK2) 28,12% 21,25% 38,75% 31,87% 15 (AK3) 22,72% 26,66% 33,37% 28,21% Tabel 2 menunjukkan bahwa medium
MS basal (kontrol) mampu menghasilkan persentase pertumbuhan biji anggrek sebesar 24,21%. Hal ini dapat disebabkan karena media MS mengandung komponen nutrien yang lebih lengkap dan konsentrasi
yang lebih tinggi dari medium kultur lain khususnya amonium dan nitrat (Arditti, 1967; Pradhan et al ., 2014; Utami & Hariyanto, 2019). Oleh karena itu, nutrien yang tersedia dapat mendukung pertumbuhan serta perkembangan dari bij anggrek D.phalaenopsis. Konsentrasi air kelapa dan IAA yang memberikan respon terbaik dalam persentase pertumbuhan biji terbaik adalah air kelapa 10% dan IAA 1 ppm. Konsentrasi tersebut menghasilkan persentase pertumbuhan tertinggi sebesar 38,75% jika dibandingkan kontrol (24,21%). Namun hasil ini masih lebih rendah jika dibandingkan persentase pertumbuhan biji D.phalaenopsis yang dikulturkan dalam media VW dengan penambahan 100 ml/L air kelapa dan ekstrak tomat serta 2mg/L peptone yaitu sebesar 94,42% (Setiari et al ., 2017). Semakin tinggi konsentrasi IAA menyebabkan penurunan persentase perkembangan biji anggrek. Selain itu, konsentrasi air kelapa pada level yang lebih tinggi dari 10% memberikan pengaruh dalam penurunan kemampuan perkembangan biji anggrek(Tabel 2, Gambar 3).
Konsentrasi air kelapa sebesar 10% menunjukkan adanya peningkatan persentase perkembangan biji pada konsentrasi IAA (0; 0,5 ; dan 1) ppm. Hal ini menunjukkan adanya interaksi antara IAA dan air kelapa sehingga dapat mendukung peningkatan persentase pertumbuhan biji anggrek D.phalaenopsis . Air kelapa mengandung senyawa analaog fitohormon, salah satunya adalah IAA, zeatin serta komponen nutrisi lainnya. Hal ini dapat menjadi faktor yang memungkinkan dalam mendukung pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek.
Pembahasan Fase pertumbuhan dan persentase pertumbuhan biji anggrek dapat dipengaruhi oleh faktor internal dan eksternal. Faktor internal yaitu umur buah, tingkat kemasakan biji dan dormansi biji sedangkan faktor eksternal meliputi jenis media, ZPT dan senyawa organik kompleks. Dalam penelitian ini, perbedaan tahap pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek D.phalaenopsis dibandingkan
Permatasari et al.
dengan penelitian menggunakan biji anggrek yang sama oleh (Setiari et al. , 2017, 2018) dapat dipengaruhi oleh beberapa faktor diantaranya adalah umur buah yang berpengaruh terhadap umur biji dan kandungan hormon endogen di dalamn biji, jenis media, zpt, dan senyawa organik kompleks yang ditambahkan ke dalam media kultur.
Buah anggrek D .phalaenopsis yang digunakan dalam penelitian ini berumur 4 bulan sedangkan umur buah angrek yang digunakan dalam penelitian (Setiari et al. 2017, 2018) adalah 2,5 bulan. (Dwiyani, 2013), menyatakan bahwa biji angrek Vanda tricolor yang berasal dari buah anggrek muda memiliki kemampuan pembentukan protokorm lebih cepat dibandingkan biji dari buah anggrek yang tua. Hal ini dapat dikaitkan dengan hasil penelitian ini, bahwa perbedaan kecepatan fase pertumbuhan dan perkembangan biji ditentukan dari umur buah anggrek yang digunakan. Selain itu jenis media kultur yang digunakan juga dapat mempengaruhi kecepatan pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek. Media yang digunakan dalam penelitian ini adalah MS (Murashige and Skoog), sedangkan media kultur dalam penelitian (Setiari et al ., 2017), menggunakan VW (Vacin and Went). Perbedaan kedua jenis media ini adalah pada konsentrasi nitrogennya, dimana MS mengandung nitrogen lebih tinggi dan kompleks dibandingkan media VW. Arditti (1967) , menyatakan bahwa pada awal perkembangan biji anggrek membutuhkan nitrogen dalam jumlah sedikit sedangkan kandungan nitrogen yang tinggi dapat menghambat perkecambahan biji angrek. Hal tersebut sesuai dengan hasil penelitian ini karena media MS mengandung nitrogen yang lebih tinggi sehingga tahap pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek D .phalaenopsis menjadi relatif lebih lambat. Faktor lain adalah penambahan auksin dan senyawa organik kompleks ke dalam media. Penelitian ini menggunakan variasi IAA dan air kelapa, sedangkan penelitian (Setiari et al. , 2017), tidak menambahkan auksin eksogen ke dalam media kultur namun
menambah berbagai jenis senyawa organik kompleks seperti air kelapa, ekstrak tomat dan pepton. Hal ini dapat menjelaskan perbedaan kecepatan pertumbuhan dan perkembangan embrio dalam biji anggrek D.phalaenopsis . Penambahan berbagai jenis senyawa organik kompleks terbukti lebih mampu meningkatkan kecepatan perkecambahan biji anggrek D.phalaenopis . Selain itu, penambahan IAA pada kosentrasi yang tepat dapat meningkatkan frekuensi perkecambahan biji anggrek secara in vitro . Pyati (2019) membuktikan bahwa penambahan IAA pada konsentrasi 0,57 µM ke dalam media KC dapat meningkatkan frekuensi perkecambahan biji anggrek Aerides ringens sebesar 89,3%. Peningkatan konsentrasi IAA sebesar 2,85 dan 5,71 µM menunjukkan respon penurunan persentase perkecambahan bij anggrek sebesar 81,3 % dan 52%. Hal ini menunjukkan bahwa penambahan konsentrasi ZPT yang optimal dibutuhkan dalam meningkatkan perkecambahan biji anggrek. Semakin tinggi konsentrasi IAA cenderung memiliki efek penghambatan terhadap perkecambahan biji karena mempengaruhi tekanan osmotik media kultur.
Protokorm merupakan salah satu tahap penting pada awal perkecambahan biji anggrek untuk selanjutnya berkembang menjadi kecambah yang utuh ( seedling ). Pada penelitian ini, penambahan IAA ke dalam media kultur terbukti dapat membantu menstimulasi pertumbuhan biji anggrek sampai di fase awal sebelum terbentuknya protokorm (fase 3). Selain itu, penambahan air kelapa juga menunjukkan pengaruhnya terhadap pertumbuhan dan perkembangan embrio dalam biji anggrek D .phalaenopsis . Air kelapa mengandung berbagai jenis nutrien seperti asam amino, asam organik, pepton, gula, vitamin, zeatin (sitokinin), auksin, dan giberelin yang dibutuhkan dalam pertumbuhan dan perkembangan embiro dalam biji anggrek. Hal ini dibuktikan juga pada beberapa jenis anggrek yang diperbanyak melalui kultur in vitro diantaranya D .phalaenopsis (Setiari et al ., 2017), D .anosmum (Dewi, 2019), Phalaenopsis sp . (Mukminin et al ., 2016), dan Oncidium sp.(Ambarwati et al ., 2021).
Permatasari et al.
Kesimpulan Berdasarkan hasil penelitian, dapat disimpulkan bahwa penambahan air kelapa dan IAA pada berbagai konsentrasi berpengaruh terhadap pertumbuhan dan perkembangan biji anggrek D .phalaenopsis . Konsentrasi air kelapa dan IAA yang memberikan respon pertumbuhan biji anggrek tertinggi adalah air kelapa 10% dan IAA 1 ppm yaitu sebesar 38,75%.

## Daftar Pustaka
Ambarwati, I. D., Narulita Alfian, F., & Dewanti, P. (2021). Respon Anggrek Dendrobium sp., Oncidium sp., dan Phalaenopsis sp. Jurnal Agrikultura , 2021 (1): 27–36. Arditti, J. (1967). Factors affecting the germination of o r c h i d s e e d s 1. 33 (Hatch 1953).
Bektaş, E., Cüce, M., & Sökmen, A. (2013). In vitro germination, protocorm formation, and plantlet development of Orchis coriophora (Orchidaceae), a naturally growing orchid species in Turkey. Turkish Journal of Botany , 37 (2): 336–342. https://doi.org/10.3906/bot-
1205-28
Budisantoso, I., Amalia, N., & Kamsinah, K. (2017). In Vitro Callus Induction from Leaf Explants of Vanda sp Stimulated by 2,4-D. Biosaintifika: Journal of Biology & Biology Education , 9 (3): 492. https://doi. org/10.15294/biosaintifika.v9i3.11018 Dewi, N. P. Y. A. (2019). Pengaruh Pemberian
Air Kelapa terhadap Perkembangan Embrio pada Dendrobium anosmum Lindl. Bio-Edu: Jurnal Pendidikan Biologi ,
4 (1): 22–28. https://doi.org/10.32938/ jbe.v4i1.343 Dwiyani, R., Purwantoro, A., Indrianto, A., & Semiarti, E. (2010). Konservasi anggrek alam indonesia Vanda tricolor Lindl. varietas suavis Melalui Kultur Embrio Secara In-Vitro. Bumi Lestari Journal of Environment , 93–98. Dwiyani, R. (2013). Perkecambahan Biji dan
Pertumbuhan Protokorm Anggrek dari Buah dengan Umur yang Berbeda pada Media Kultur yang Diperkaya dengan
Ekstrak Tomat Seed Germination and
Growith of Protocorms of Vanda tricolor Lindl. Orchid from Pods with Different Age on Tomato. Jurnal Hortikultura Indonesia , 4 (2): 90–93. Huh, Y. S., Lee, J. K., Nam, S. Y., Paek, K. Y., & Suh, G. U. (2016). Improvement of asymbiotic seed germination and seedling development of Cypripedium macranthos Sw. with organic additives. Journal of Plant Biotechnology , 43 (1): 138–145. https://doi.org/10.5010/
JPB.2016.43.1.138 Ivakdalam, L. M., & Pugesehan, D. J.
(2016). Keragaman Jenis Tanaman Anggrek (Orchidaceae) di Cagar Alam Angmarwase, Kabupaten Maluku Tenggara Barat. Jurnal Agroforestri , 11 (3): 161–168. Jainol, J. E., & Gansau, J. A. (2017). Embryogenic callus induction from leaf tip explants and protocorm-like body formation and shoot proliferation of Dimorphorchis lowii: Borneon endemic orchid. Agrivita , 39 (1), 1–10. https:// doi.org/10.17503/agrivita.v39i1.895 Mukminin, L. H., Al Asna, P. M., & Setiowati, F. K. (2016). Pengaruh Pemberian Giberelin dan Air Kelapa terhadao Perkecambahan Biji Anggrek Bulan ( Phalaenopsis sp.). Bioeksperimen: Jurnal Penelitian Biologi , 2 (2):90. https://doi. org/10.23917/bioeksperimen.v2i2.2487 Novak, S. D., Luna, L. J., & Gamage, R. N. (2014). Role of auxin in orchid development. Plant Signaling and Behavior , 9 (10):1–8. https://doi. org/10.4161/psb.32169 Novak, S. D., & Whitehouse, G. A. (2013).
Auxin regulates first leaf development and promotes the formation of protocorm trichomes and rhizome-like structures in developing seedlings of Spathoglottis plicata ( Orchidaceae ).
1–12. https://doi.org/10.1093/aobpla/
pls053
Pradhan, S., Tiruwa, B., Subedee, B. R., & Pant, B. (2014). In vitro germination and propagation of a threatened medicinal orchid, Cymbidium aloifolium (L.) Sw. through artificial seed. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine , 4 (12),
Permatasari et al.
971–976. https://doi.org/10.12980/
APJTB.4.2014APJTB-2014-0369
Pyati, A. N. (2019). PTC & B In vitro Seed
Germination , Protocorm Formation and Plantlet. Plant Tissue Culture and Biotechnology, 29(1): 49–62.
Semiarti, E., Indrianto, A., Purwantoro, A., Martiwi, I. N. A., Feroniasanti, Y. M. L., Nadifah, F., Mercuriana, I. S., Dwiyani, R., Iwakawa, H., Yoshioka, Y., Machida, Y., & Machida, C. (2010). High-frequency genetic transformation of Phalaenopsis amabilis orchid using tomato extract-enriched medium for the pre-culture of protocorms. Journal of Horticultural Science and Biotechnology ,
85 (3): 205–210. https://doi.org/10.108 0/14620316.2010.11512655
Setiari, N., Purwantoro, A., Moeljopawiro, S., & Semiarti, E. (2017). Peptone and tomato extract induced early stage of embryo development of Dendrobium phalaenopsis Orchid. Journal of Tropical Biodiversity and Biotechnology , 1 (2): 77. https://doi.org/10.22146/jtbb.15498
Setiari, N., Purwantoro, A., Moeljopawiro, S., & Semiarti, E. (2018). Micropropagation of Dendrobium phalaenopsis orchid through overexpression of embryo gene AtRKD4. Agrivita , 40 (2): 284–294. https://doi.org/10.17503/agrivita. v40i2.1690 Utami, E. S. W., & Hariyanto, S. (2019). In vitro seed germination and seedling development of a rare indonesian native orchid phalaenopsis amboinensis
J.J.Sm. Scientifica 2019 (5): 1-6. https:// doi.org/10.1155/2019/8105138
Utami, E. S. W., Hariyanto, S., & Manuhara, Y. S. W. (2017). In vitro propagation of the endangered medicinal orchid,
Dendrobium lasianthera J.J.Sm through mature seed culture. Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine , 7 (5): 406–410. https://doi.org/10.1016/j. apjtb.2017.01.011
Vogel, I. N., & Macedo, A. F. (2011). Influence of IAA, TDZ, and light quality on asymbiotic germination, protocorm formation, and plantlet development of Cyrtopodium glutiniferum Raddi., a
medicinal orchid. Plant Cell, Tissue and Organ Culture , 104 (2): 147–155. https:// doi.org/10.1007/s11240-010-9810-9