Available online at https://jurnal.stikesmus.ac.id/index.php/avicenna
Avicenna : Journal of Health Research, Vol 3  No 1. Maret 2020 (119 -132)
POTENSI ANALGETIK EKSTRAK KLOROFORM DAUN TALOK (Muntingia calabura L) BESERTA PROFIL KROMATOGRAFI LAPIS TIPISNYA
NR. Widyaningrum 1,* , Sri Saptuti. 2 , Radianti 3 , Wella Sulistiyah 4
1 STIKES Mamba’ul ‘Ulum Surakarta 2,3,4 Poltekkes Bhakti Mulia Sukoharjo
1 thussannofx@gmail.com*

## Abstrak
Latar  Belakang  : Nyeri  merupakan  perasaan  yang  tidak  nyaman  akibat  adanya kerusakan  jaringan.  Selain  nyeri  kerusakan  jaringan  akan  diikuti  dengan peradangan/inflamasi,  kenaikan  subuh  dan  perubahan  warna  area.  Salah  satu tanaman yang digunakan untuk mengatasi nyeri adalah kersen atau talok, dimana memiliki kandungan antara lain flavonoid, alkaloid, saponin dan tanin.
Tujuan  : Untuk  melakukan  analisis  potensi  analgetik  ekstrak  kloroform  daun talok (EKDT) beserta identifikasi profil kromatografi lapis tipisnya.
Metode  : Pengujian  potensi  analgetik  EKDT  dilakukan  dengan  metode  induksi kimia  menggunakan  asam  asatet  1%  yang  disuntikkan  pada  mencit  secara intraperitonial. Pengambilan zat aktif pada daun talok dilakukan dengan maserasi menggunakan  pelarut  nonpolar,  yaitu  kloroform.  Maserat  yang  dihasilkan kemudian  diidentifikasi  kandungannya  menggunakan  kromatografi  lapis  tipis (KLT).  Pengujian  analgetik  dilakukan  dnegan  membagi  perlakuan  menjadi  5 kelompok,  yaitu  kontrol  positif  dengan  analgetik,  kontrol  negatif  atau  pelarut, EKDT dengan dosis 60 mg/kgBB, EKDT dengan dosis 120 mg/kgBB dan EKDT dengan dosis 240 mg/kgBB.
Hasil  : Rendemen  yang  dihasilkan  dari  maserasi  sebesar  6,59%,  dengan  hasil skrining  fitokimia  menunjukkan  positif  mengandung  alkaloid,  antrakinon, saponin,  polifenol  dan  flavonoid.  Identifikasi  KLT  menunjukkan  bercak  saponin dengan  hRF  91.25;  alkaloid  dengan  hRF  93.75;  fenolik  dengan  hRF  96.25  dan flavonoid  dengan  hRF  91,25.  Potensi  analgetik  dengan  pembanding  asetosal berturut-turut  pada  dosis  60  mg/kgBB;  120  mg/kgBB  dan  240  mg/kgBB  adalah 12,99%; 17,89% dan 24,51%, dimana potensi analgetik asetosal sebesar 47,55%. Simpulan : kandungan zat aktif EKDT sesuai dengan hasil KLT adalah saponin, alkaloid, fenolik dan flavonoid. EKDT memiliki potensi sebagai analgetik dengan metode induksi kimia pada mencit jantan.
Kata kunci : Ekstrak kloroform; talok; analgetik, KLT
ANALGETIC POTENTION OF TALOK LEAVES CHLOROFORM EXTRACT (MUNTINGIA CALABURA L) INCLUDING THIN LAYER

## CHROMATOGRAPHY PROFILE

## Abstract
Background : Pain is an uncomfortable feeling due to tissue damage. In addition to  pain  tissue  damage  will  be  followed  by  inflammation  /  inflammation,  dawn
increase  and  discoloration  of  the  area.  One  of  the  plants  used  to  treat  pain  is kersen or talok, which contains flavonoids, alkaloids, saponins and tannins Goal  : To  analyze  the  analgesic  potential  of  talok  leaves  chloroform  extract (TLCE) along with identification of the thin layer chromatographic profile
Methods  : TLCE  analgesic  potential  testing  was  carried  out  by  chemical induction method using 1% acetic acid injected into mice intraperitonially. Intake of  active  substances  on  talok  leaves  was  done  by  maceration  using  nonpolar solvents,  namely  chloroform.  The  resulting  maserate  was  identified  using  a  thin layer  chromatography  (TLC).  Analgesic  testing  was  carried  out  by  dividing  the treatment  into  5  groups,  namely  positive  control  with  analgesics,  negative  or solvent control, TLCE at a dose of 60 mg/kgBW, TLCE at a dose of 120 mg/kgBW and TLCE at a dose of 240 mg/kgBW.
Results  : The  yield  generated  from  maceration  was  6.59%,  with  phytochemical screening results showed positive containing alkaloids, anthraquinones, saponins, polyphenols  and  flavonoids.  TLC  identification  showed  saponin  spots  with  hRF 91.25;  alkaloids  with  hRF  93.75;  phenolic  with  hRF  96.25  and  flavonoids  with hRF 91.25. Analgesic potential with successive acetosal comparison at a dose of 60 mg/kgBW; 120 mg/kgBB and 240 mg/kgBB was 12.99%; 17.89% and 24.51%, where the analytical potential of acetosal was 47.55%.
Conclussions  : TLCE  active  substances  content  according  to  TLC  results  were saponins,  alkaloids,  phenolics  and  flavonoids.  TLCE  had  the  potential  as  an analgesic by chemical induction methods in male mice.
Keywords : analgetic; TLC; talok, chloroform

## PENDAHULUAN
Pada  era  kemajuan  zaman  yang  pesat  ini,  masyarakat  cenderung  sangat kritis  terhadap  derajat  tingkat  kesehatan  mereka.  Terlebih  lagi  dalam  pemilihan obat  yang  bermanfaat.  Mereka  cenderung  untuk  lebih  memilih  kembali  ke  alam atau back  to  nature dalam  rangka  memperoleh  manfaat  obat  yang  besar  dengan efek  samping  yang  cenderung  minimal.  Salah  satunya  adalah  pohon  talok  atau kersen.
Pohon  talok  (orang  jawa  tengah  menyebutnya)  atau  cery  atau  kersen merupakan tanaman perdu yang sangat disukai anak kecil, karena memiliki buah yang  rasanya  manis.  Pohon  talok  ini  biasanya  digunakan  sebagai  peneduh  di pinggir  jalan,  karena  daunnya  yang  rindang  dan  hijau.  Daun  talok  telah  lama dimanfaatkan  orang  Peru  sebagai  tanaman  obat  tradisional  sebagai  obat  sakit kepala  dan  antiradang.  Tanaman  talok  ini  mengandung  bermacam-macam flavonoida,  diantaranya  flavones,  flavanone,  flavan  dan  biflavan.  Selain  itu  juga alkaloid, saponin dan tannin (Sridhar, et al., 2011).
Zakaria et  al (2011)  meneliti aktivitas  ekstrak air, kloroform dan  methanol secara  invitro  sebagai  antiproliferatif  (menghambat  proliferatif  atau  perbanyakan sel  kanker)  dan  antioksidan  (menghambat  radikal  bebas).  Sridhar et  al (2011) menyatakan  bahwa  ekstrak  metanol  pada  daun  kering  talok  secara  signifikan dapat  menurunkan  kadar  glukosa  dalam  darah  pada  hewan  uji  tikus.  Profil kromatografi  lapis  tipis  pada  ekstrak  etanol  daun  talok  menunjukkan  bahwa
NR. Widyaningrum  et.al (Potensi Analgetik Ekstrak Kloroform Daun Talok …)
ekstrak tersebut  mengandung  beberapa  senyawa  aktif, seperti alkaloid, polifenol, tanin,  saponin  dan  flavonoid  (Widyaningrum, et  al .,  2016).  Fraksi  semipolar ekstrak  daun  talok  dengan  menggunakan  pelarut  etilasetat,  juga  menunjukkan bahwa  ekstrak  etil  asetat  daun  talok  mengandung  alkaloid,  antrakinon,  saponin dan  flavonoid  (Widyaningrum, et  al .,  2019).  Baik  fraksi  polar  dan  semipolar ekstrak daun talok menunjukan hasil yang positif untuk menanggulangi nyeri pada mencit  yang  telah  diinduksi  dengan  menggunakan  asam  asetat  1% (Widyaningrum, et  al .,  2016;  Widyaningrum, et  al .,  2019).  Penelitian  yang  lain terkait  dengan  peradangan,  bahwasanya  ekstrak  etanol,  etilasetat  dan  kloroform pada daun talok positif dapat digunakan sebagai antipiretik melalui induksi vaksin DPT  pada  mencit  dengan  rata-rata  persentase  daya  antipiretisnya  sebesar  78%- 87% (Widyaningrum, et al ., 2015).
Mekanisme kerja senyawa  flavonoid  yang terkandung pada senyawa polar, semipolar  dan  nonpolar  daun  talok  adalah  menghambat  kerja  enzim siklooksigenase  sehingga  produksi  prostaglandin  akan  menurun  dan  rasa  nyeri akan  berkurang  atau  bahkan  hilang  (Suryanto,  2012).  Flavonoid  juga  berperan dalam  penghambatan  degranulasi  neutrofil  sehingga  akan  menghambat pengeluaran  sitokin,  radikal  bebas  serta  enzim  yang  berperan  dalam  proses peradangan (Christiana, et al, 2012). Diduga karena hal inilah yang menyebabkan daun talok dapat digunakan sebagai analgetik.
Penelitian  mengenai  aktivitas  daun  talok  sebagai  analgetik  juga  masih jarang  dilakukan  sehingga  memungkinkan  untuk  dilakukan  penelitian  dan pengembangan aktivitas ekstrak daun talok dari senyawa  nonpolarnya. Penelitian ini  juga  dilengkapi  dengan  pengujian  skrining  fitokimia  dan  uji  pendahuluan kualitatif  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  yang  terdapat  pada  ekstrak kloroform daun talok.

## METODE

## 1. Maserasi
Pembutan  ekstrak  dilakukan  dengan  maserasi.  Sebelumnya  daun  kersen
( Muntingia  calabura  L) segar  yang  sudah  tua  disortasi,  kemudian  dicuci  dan dibilas  dengan  aquadest  guna  menghilangkan  kotoran.  Selanjutnya  daun  kersen dikeringkan  selama  3  hari  dengan  suhu  rata-rata  50 o C ,  daun  kersen  kering selanjutnya  diblender  sampai  menjadi  serbuk,  kemudian  merendam  300  gram serbuk  daun  kersen  dimasukkan  dalam  bekker  glass  kemudian  ditambah  cairan penyari kloroform sebanyak 1000 ml.
Maserasi  dilakukan  dengan  pengadukan  selama  6  jam  kemudian  didiamkan selama  18  jam,  selanjutnya  dilakukan  penyaringan  dengan  menggunakan  kain flanel.  Filtrat  hasil  penyaringan  selanjutnya  diuapkan  hingga  diperoleh  ekstrak kental.Ekstrak kental disimpan pada wadah.
2. Skrining Fitokimia
1) Uji Pendahuluan Zat  dipanaskan  dengan  air  10  ml  selama  30  menit  diatas  tangas  air mendidih,  larutan  disaring.  Larutan  berwarna  kuning  sampai  merah, menunjukkan adanya senyawa yang mengandung kromofor.
2) Uji Alkaloid
Zat dipanaskan dalam tabung reaksi besar dengan HCl 1% (10 ml)  selama 30 menit dalam penangas air mendidih. Suspensi disaring ke dalam tabung reaksi  A  dan  B  larutan  sama  banyak.Larutan  A  ditambah  pereaksi Dragendroff  dan  larutan  B  ditambah  pereaksi  Mayer.  Terbentuknya endapan  dengan  kedua  pereaksi  alkaloid  tersebut  menunjukkan  adanya alkaloid.
3) Uji Antrakinon
Zat  dididihkan  selama  2  menit  dengan  KOH  0,5  N  (10  ml)  dan  larutan H 2 O 2 (1  ml).  Setelah  dingin,  suspensi  disaring.  Filtrat  (5  ml)  ditambah asam  asetat  sampai  pH  5,  lalu  ditambahkan  toluene.  Lapisan  atas dipisahkan  dan ditambahkan  KOH 0,5 N, warna  merah  yang terjadi  pada lapisan air menunjukkan adanya antrakinon.
4) Uji Polifenol Zat dipanaskan dengan air selama 10 menit di atas penangas air mendidih.
Isaring  panas-panas,  setelah  dingin  ditambah  pereaksi  FeCl 3 .  Terjadi warna hijau-biru menunjukkan adanya polifenol. Uji diulang dengan filtrat hasil  pndidihan  zat  dengan  etanol  80%  selama  10  menit  dalam  penangas air.
5) Uji Tannin Zat dipanaskan dengan air  selama 30  menit diatas penangas  air. Disaring filtrat (5  ml) ditambah  larutan  NaCl 2% (1  ml), bila terjadi  suspensi atau endapan disaring melalui kertas saring, kemudian filtrate ditambah larutan gelatin 1% (5 ml). terbentuk endapan menunjukkan adanya tannin atau zat samak.
6) Uji Saponin Zat  dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi,  tambahkan  10  ml  air  panas,
dinginkan  dan  kemudian  kocok  kuat-kuat  selama  10  detik  .  terbentuknya buih yang mantap selama tidak kurang dari 10 menit, setinggi 1 cm sampai 10 cm. pada penambahan 1 tetes HCl 2N, buih tidak hilang.
7) Uji Flavonoid
Zat dipanaskan dengan 10  ml  methanol  selama 10  menit di penangas air. Disaring  selagi  panas,  encerkan  filtrate  dengan  10  ml  air.  Setelah  dingin tambahkan  5  ml  wash  benzene,  kocok  hati-hati,  diamkan.  Ambil  lapisan methanol  (lapisan  bawah),  uapkan.  Residu  dilarutkan  dalam  5  ml  etil asetat, disaring. Uji Taubeck : Uapkan hingga kering 1 ml, basahkan residu dengan aseton, tambahkan sedikit asam borat dan asam oksalat, panaskan hati-hati  di  atas  tangas  air  dan  hindari  pemanasan  berlebihan.  Campur residu yang diperoleh dngan 2 ml eter. Amati dengan UV 366 nm, larutan berflourecensi kuning intensif, menunjukkan adanya flavonoid.
3. Identifikasi Zat Aktif dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT)
1. Membersihkan alat dengan etanol dan dikeringkan
2. Menyiapkan fase gerak dan dijenuhkan
3. Menyiapkan fase diam (Silika gel GF 254) dan diberi tanda untuk totolan dan batas eluasi dan dioven selama 3 menit
4. Menyiapkan cuplikan standar dan sampel
5. Menotolkan cuplikan fase diam
NR. Widyaningrum  et.al (Potensi Analgetik Ekstrak Kloroform Daun Talok …)
6. Mengeluasi cuplikan
7. Setelah batas akhir, eluasi fase diam dikeringkan
8. Diamati  dibawah  sinar  uv  254  nm  dan  366  nm  warna  bercak  dan digambar bercak pemadamannya.
9. Diukur jarak eluasi
10. Dievaluasi dan dihitung harga Rf dan hRf.
Penetapan harga Rf bercak ekstrak etanol, ekstrak kloroform dan ekstrak etil asetat  daun  kersen  menggunakan  metode  kromatografi  lapis  tipis  dengan  fase diam berupa silica gel GF 254 dan fase gerak ekstrak etanol yaitun-Butanol: Asam asetat  :  Air  (4:1:5).  Ekstrak  kloroform  dan  etil  astat  menggunakan  fase  gerak berupa  Etil  asetat  :  Benzena  (9:11).  Menggunakan  penyemprot  :  Liebermann Burcard, Vanilin Asam sulfat, FeCL 3 , KOH etanolis dan Uap amonia.  Penampak noda  dilihat  dengan  detektor  UV  254  nm  atau  366  nm,  noda  terlihat  dari pemadaman flouresensi
Perhitungan KLT
Rf =
hRf   =  Rf x 100
4. Pengujian Analgetik
a. Pembuatan asam asetat 1% Mengambil  1  ml  asam  asetat,  dilarutkan  dalam  gelas  beker  dengan sedikit aquadest. Lalu masukkan dalam labu takar 100 ml dan tambahkan aquadest ad 100 ml.
b. Pembuatan Larutan Aspirin Aspirin  sebagai  kontrol  positif  pada  uji  analgetik.Dosis  yang  digunakan adalah 65mg/kgBB. Pembuatan  larutan aspirin  adalah ditimbang aspirin
26  mg  dilarutkan  dengan  minyak  goreng  ad  10  ml.  volume  pemberian pada mencit seberat 20 gram adalah 0,5 ml diberikan  secara oral.
c. Pengujian Analgetik Rancangan  uji  mengikuti  acak  lengkap  pola  searah  dengan  hewan  uji mencit putih jantan galur swiss dengan berat badan 20-30 gram dan umur
2,5-4 minggu sebanyak 25 ekor dibagi 5 kelompok.
1) Kelompok I adalah kontrol negatif. Mencit diberi pelarut sediaan uji minyak goreng secara oral.
2) Kelompok II adalah kontrol positif. Mencit diberi aspirin dosis 65 mg/kg BB secara oral.
3) Kelompok III  adalah  kelompok dosis 240 mg/kg BB Mencit  di  beri  ekstrak  kloroform  daun  kersen  dengan  dosis  240 mg/kg BB secara oral.
4) Kelompok IV adalah kelompok dosis 120 mg/kg BB. Mencit  diberi  ekstrak  kloroform  daun  kersen  dengan  dosis  120 mg/kg BB secara oral.
5) Kelompok V adalah kelompok dosis 60 mg/kg BB.
Mencit diberi ekstrak kloroform daun kersen dengan dosis 60 mg/kg
BB secara oral.
Setelah perlakuan diatas, mencit disuntik asam asetat 1% dosis 300 mg/kg BB secara  intraperitoneal  dengan  selang  waktu    yang  dipilih  berdasarkan  orientasi. Kemudian  dilakukan    pengamatan  geliat  dan  dihitung  jumlah  geliat tiap  5  menit selama satu jam.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
1. Hasil Maserasi
Tabel 1. Hasil maserasi EKKT Warna Ekstrak Bau Bentuk Bobot Rendemen Persentase Rendemen Hitam kehijauan Khas kersen Ekstrak kental  6,59 gram 6,59%

## 2. Hasil Pengujian Kualitatif dengan Kromatografi Lapis Tipis
Tabel 2. Hasil KLT EKDT Pereaksi Warna hRf Sebelum Setelah 254 366 254 366 Liebermann burchard - Jingga, hijau hijau Jingga, hijau 81,25; 87,5 Vanillin : H 2 SO 4 jingga jingga Jingga Jingga 72,5; 81,25 87,5; 91,25 FeCl 3 Jingga - Jingga - 93,75 KOH etanolis Kuning   Jingga Kuning Jingga, coklat 81,25; 93,75 Uap amonia - Jingga - Kuning 72,5; 82,5

## Tabel 3. Warna standar penampakan bercak berdasarkan literatur
Pereaksi Warna Jenis senyawa Libermann burchard Hijau, kuning, merah, biru Saponin Vanillin : asam sulfat Berbagai warna Alkaloid FeCl 3 Berbagai warna, biru-hitam Fenol, tannin KOH etanolis Merah Antrakinon UV 220 nm-290 nm Kuning Antrakinon Uap amonia Kuning, hijau Flavonoid
Sumber: Metode fitokimia (Harborne, J.B., 2010). Petunjuk praktikum fitokimia (Maryati dan Sri wahyuni, 2010). (Markham, 2010). (Parmadi, 2010).
Pembuatan  ekstrak  kloroform  daun  talok  menggunakan  metode  maserasi dengan hasil rendemen sebesar 6,59%b/b, dimana organoleptis dari maserat yang diperoleh adalah  berbentuk ekstrak kental, warna  hitam kehijauan,  memiliki rasa pahit dan getir serta memiliki bau aromatis kersen. Pelarut yang digunakan adalah kloroform,  hal  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  zat  aktif  dari  daun  talok  yang memiliki sifat nonpolar.
Selanjutnya  hasil  maserasi  diidentifikasi  menggunakan  metode  skrining fitokimia  untuk  mengetahui  kandungan  senyawa  aktif  pada  ekstrak  fase nonpolarnya secara kualitatif. Diperoleh  hasil  yang positif  mengandung senyawa aktif  berkromofor,  dimana  warna  yang  dihasilkan  dari  kuning  sampai  merah,
NR. Widyaningrum  et.al (Potensi Analgetik Ekstrak Kloroform Daun Talok …)
kemudian  ditambahkan  KOH  menjadi  lebih  intensif.  Pada  skrining  fitokimia diperoleh  hasil  bahwa  ekstrak  kloroform  daun  talok  (EKDT)  mengandung alkaloid,  antrakinon,  polifenol,  saponin  dan  flavonoid.  Kemudian  dilanjutkan pengujian  bercak  totolan  menggunakan  KLT  lalu  diamati  jarak  elusidasinya, sesuai dengan tabel 2.
Hasil  KLT  atau  totolan  dilengkapi  dengan  menyemprotkan  pereagen spesifik  pada  bercak-bercak  yang  dihasilkan.  Deteksi  Lieberman  Buchardad menunjukkan  positif  saponin  jika  muncul  warna  kuning,  jingga  dan  hijau  pada pengamatan  UV.  Positif  alkaloid  dapat  dideteksi  menggunakan  vanillin  asam sulfat dimana akan muncul warna hijau, biru atau jingga pada UV 254nm dan UV 366nm.  Positif  fenolik  ditandai  dengan  warna  jingga  atau  berbagai  warna  mulai dari  hijau,  merah,  ungu,  biru  atau  hitam  yang  berlatarbelakang  kuning  (Wagner, 2010)
254nm 366nm Visibel
Gambar 1. EKDK pada sinar UV 254nm, 366nm dan setelah disemprot Liberman
burchard
Penampakan  bercak  totolan  pada  pengamatan  UV  254nm  dan  UV  366nm adalah sebagai berikut : pada hasil KLT EKDT  positif saponin, muncul 2 bercak dengan hRf 81,25 dan 87,5; dimana jika positif saponin maka hRF standar bercak berada  pada  nilai  81,25.  Pereaksi  semprot  yang  digunakan  adalah  Lieberman Buchardad.
Pada  pereaksi  semprot  vanillin  asam  sulfat  pekat  positif  menunjukkan alkaloid  dengan  timbul  warna  hijau,  biru  dan  jingga.  Ekstrak  kloroform menampakkan warna jingga biru dengan nilai hRf 72, 5-91,25 serta warna jingga pada daerah hRf 72,5.
254nm
366nm Visibel
Gambar 2. EKDK pada sinar UV 254nm, 366nm dan setelah disemprot vanilin asamsulfat pk.
Pereaksi  FeCl 3 akan  positif  jika  terdapat  senyawa  fenolik  dengan  timbul warna jingga atau berbagai warna. Adanya gugus fenol ditunjukkan dengan warna hijau kehitaman atau biru tua setelah ditambahkan dengan FeCl 3 , sehingga apabila uji  dengan  FeCl 3 memberikan  hasil positif  dimungkinkan dalam sampel terdapat senyawa  fenol  dan  dimungkinkan  salah  satunya  adalah  tannin  karena  tanin merupakan  senyawa  polifenol.  Pada  sinar  UV  pendek  menghasilkan  warna lembayung.  Hal  ini  diperkuat  oleh  Harborne,  (2010).  Ekstrak  kloroform menimbulkan bercak warna jingga dan hRf  93,75, menggunakan pereaksi FeCl 3 . Bercak yang ditimbulkan bersifat non polar karena cenderung terikat dengan fase gerak.
254nm 366nm Visibel
Gambar 3. EKDK pada sinar UV 254nm, 366nm dan setelah disemprot FeCl 3
Deteksi kandungan antrakinon  menggunakan deteksi peraksi semprot KOH etanolis,  dimana  jika  positif  maka  akan  muncul  warna  kuning  pada  sinar  UV antara  220  –  290  nm  (Harborne,  1987).  Pada  ekstrak  kloroform  menampakkan bercak  berwarna  kuning  dilihat  pada  sinar  UV  254  nm,  bercak  tersebut  diduga bercak antrakinon, dengan hRf 81,25 dan 93,75.
254nm
366nm Visibel
Gambar 4. EKDK pada sinar UV 254nm, 366nm dan setelah disemprot KOH
etanolis 254nm 366nm Visibel
Gambar 5.EKDK pada sinar UV 254nm, 366nm dan setelah disemprot uap amonia
Pereaksi  dengan  uap  amonia  digunakan  untuk  mendeteksi  flavonoid.  Pada ekstrak  kloroform  menampakkan  bercak  berwarna  kuning  dengan  hRf    72,5  dan 82,5.Bercak yang ditimbulkan bersifat non polar karena cenderung terikat dengan fase gerak.
Analgetik  adalah  bahan  atau  obat  yang  digunakan  untuk  menekan  atau mengurangi  rasa  sakit  atau  nyeri  tanpa  menyebabkan  hilangnya  kesadaran.  Uji daya  analgetik  daun  kersen  pada  percobaan  ini  dilakukan  karena  melihat  dari pemanfaatan tanaman obat di masyarakat masih belum dilakukan secara optimal. Belum  banyak  orang  yang  mengetahui  khasiat  dari  tanaman  kersen  untuk kesehatan.  Dari  latar  belakang  tersebut  maka  dilakukan  penelitian  uji  daya analgetik ekstrak kloroform daun kersen terhadap hewan uji mencit.
Mencit putih jantan digunakan pada penelitian ini sebagai hewan uji, hal ini dilakukan  dengan  alasan  kondisi  biologis  yang  lebih  stabil  dibanding  mencit betina  yang  kondisi  bologisnya  dipengaruhi  oleh  masa  siklus  esterus.  Selain keseragaman  jenis  kelamin,  juga  digunakan  keseragaman  berat  badan  (20-30  g)
dan  umur  (35  hari).  Hal  ini  bertujuan  untuk  memperkecil  variabilitas  biologis antara hewan uji yang digunakan, sehingga dapat memberikan respon yang relatif lebih  seragam  terhadap  rangsangan  kimia  yang  digunakan  pada  penelitian  ini. Pengelompokan  hewan  uji  dilakukan  secara  acak,  maksudnya  adalah  setiap anggota  dari  masing-masing  kelompok  memiliki  kesempatan  yang  sama  untuk dijadikan sampel.
Proses  untuk  mengetahui  potensi  analgetik  ekstrak  kloroform  daun  kersen terhadap  hewan  uji  mencit  dilakukan  dengan  membagi  hewan  uji  menjadi  lima kelompok, yang masing-masing kelompok terdiri dari empat ekor mencit. Variasi dosis  yang  digunakan  adalah  dosis  60  mg/kgBB,  120  mg/kgBB,  dan  240 mg/kgBB,  dengan  alasan  karena  pada  tanaman  obat  tidak  ada  acuan  seberapa dosis  mutlak  yang  harus  diberikan  pada  hewan  uji.  Persen  daya  analgetik  dari variasi  dosis  tersebut  akan  dibandingkan  dengan  persen  daya  analgetik  kontrol positif    yaitu  asetosal  dengan  dosis  500  mg/kgBB  mencit  dan    kontrol  pelarut yaitu  minyak  goreng.  Pengamatan  dilakukan  berdasarkan  jumlah  geliat  yang merupakan reaksi nyeri yang diperlihatkan oleh hewan uji pada uji daya analgetik.
Gambar 6. Grafik Hubungan antara Waktu Percobaan dengan Geliat pada Hewan Uji Mencit.
Dari  grafik  diatas  dapat  dilihat  geliat  paling  banyak  terjadi  pada  kontrol pelarut  (minyak  goreng)  dan  geliat  paling  sedikit  pada  kontrol  positif  (asetosal) dan pada ekstrak kloroform daun kersen dosis 240 mg/kgBB. Hal ini dikarenakan minyak goreng tidak memiliki efek analgetik sedangkan asetosal merupakan obat kimia yang memiliki efek  analgetik yang kuat.
Penggunaan  minyak  goreng  sebagai  pelarut  ekstrak  kloroform  sekaligus kontrol negatif karena ekstrak kloroform bersifat non polar dan tidak larut dengan air  ataupun  senyawa  polar  lainnya,  sedangkan  minyak  goreng  juga  bersifat  non polar.  Dari  sini  diperkirakan  ekstrak  kloroform  akan  dapat  larut  pada  minyak
goreng.  Daun  kersen  dipilih  karena  sebagai  obat  tradisional  diyakini  memiliki potensi analgetik.
Gambar 7. Grafik Hubungan antara jenis perlakuan dengan rata-rata jumlah Geliat bentuk diagram batang.
Dari  grafik  diatas  terlihat  bahwa  percobaan  pada  mencit  dengan  kontrol negatif  (minyak  goreng)  memiliki  rata-rata  jumlah  geliat  yang  paling  besar dibanding dengan percobaan pada  mencit dengan esktrak kloroform daun kersen dosis  60  mg/kgBB,  120  mg/kgBB,  240  mg/kgBB,  dan  juga  kontrol  positif (asetosal). Pada percobaan ekstrak kloroform daun kersen dosis 60 mg/kgBB, 120 mg/kgBB, dan 240  mg/kgBB, rata-rata jumlah geliat secara berturut-turut  adalah 88,75  :  83,75:  77.  Dari  hasil  tersebut  maka  dapat  dilihat  bahwa  pola  rata-rata jumlah geliat menurun seiring dengan peningkatan dosis.
Hal ini disebabkan semakin tinggi dosis yang diberikan, maka jumlah geliat sebagai  tanda  nyeri  juga  semakin  menurun.  Pada  grafik  di  atas  terlihat  bahwa kontrol pelarut (minyak goreng)  memiliki daya geliat  yang paling tinggi. Hal  ini sangat  relevan  karena  minyak  goreng  tidakmemiliki  efek  analgetik,  dan  ketika hewan uji merasakan nyeri maka geliat akan semakin bertambah tinggi.
Dari  grafik  di  bawah  dapat  dilihat  bahwa  rata-rata  jumlah  persen  daya analgetik  untuk  kontrol  positif  (asetosal)  lebih  besar  dibandingkan  dosis  ekstrak kloroform daun kesen pada dosis 60 mg/kgBB, 120 mg/kgBB dan 240 mg/kgBB. Hasil data yang diperoleh dari pengujian analgetik ini selanjutnya dianalisis secara statistik dengan uji ANOVA untuk melihat adanya perbedaan nyata efek analgetik dari  kelima  perlakuan  yang  sebelumnya  harus  memenuhi  syarat  normalitas  dan homogenitas data.
Langkah  pertama  data  diuji  normalitasnya  dengan  menggunakan  uji One- Sample Kolmogorov-Smirnov Test , data dikatakan normal apabila nilai signifikasi P  >  0,05  hal  ini  berarti  data  mempunyai  varian  yang  sama,  data  terdistribusi
normal. Uji normalitasdigunakan untuk mengukur apakah data memiliki distribusi normal  sehingga  dapat  dipakai  dalam  statistik  parametrik.  Berdasarkan  hasil  uji One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test bahwa nilai signifikasi 0,457 >0,05, maka dari data tersebut dapat diketahui data yang diperoleh terdistribusi normal.
Gambar 8. Grafik Hubungan antara jenis perlakuan dengan rata-rata persendaya analgetik
Langkah  selanjutnya  data  di  analisis  menggunakan Levene  Test diperoleh hasil  nilai  signifikasi  0,605  >  0,05  maka  data  yang  diperoleh  mempunyai  varian yang  homogen.  Kemudian dilakukan analisis oneway ANOVA,  berdasarkan  hasil analisis oneway ANOVA,  nilai probabilitas yang  tercantum  pada  kolom signifikasi  0,000  <  0,05  maka  H0  ditolak,  ada  perbedaan  yang  signifikan  antara persen  daya  analgetik  daun  kersen.  Selanjutnya  dilakukan  uji Post  Hoc  Test (LSD), dosis pemberian asetosal dengan dosis 60 mg/kgBB, asetosal dengan 120 mg/kgBB,  asetosal  dengan  240  mg/kgBB  mempunyai  nilai  signifikasi  0,000  < 0,05  maka  H0  ditolak,  ada  perbedaan  yang  signifikan  antara  pemberian  asetosal dengan ekstrak kloroform daun kersen.
Dosis  perlakuan  60  mg/kgBB  dengan  dosis  120  mg/kgBB  diperoleh  hasil signifikasi  0,134  >  0,05  maka  H0  diterima,  tidak  ada  perbedaan  yang  signifikan antara  dosis  60  mg/kgBB  daun  kersen  dengan  dosis  120  mg/kgBB  daun  kersen. Dosis  perlakuan  60  mg/kgBB  dengan  240  mg/kgBB,  60  mg/kgBB  dengan asetosal diperoleh hasil signifikasi 0,000 < 0,05 maka H0 ditolak, ada perbedaan yang  signifikan  antara  dosis  perlakuan  ekstrak  kloroform  daun  kersen  dan asetosal.  Dosis  120  mg/kgBB  dengan  dosis  60  mg/kgBB  diperoleh  hasil  dengan signifikasi  0,134  >  0,05  maka  H0  diterima,  tidak  ada  perbedaan  yang  signifikan antara  dosis  perlakuan  120  mg/kgBB  daun  kersen  dan  dosis  60  mg/kgBB  daun kersen.  Dosis  120  mg/kgBB  dengan  dosis  240  mg/kgBB  diperoleh  hasil
signifikasi  0,051  >  0,05  maka  H0  diterima,  tidak  ada  perbedaan  yang  signifikan antara  dosis  perlakuan  120  mg/kgBB  dan  dosis  240  mg/kgBB.  Dosis  perlakuan 120 mg kgBB dengan asetosal mempunyai nilai signifikasi 0,000< 0,05 maka H0 ditolak, ada perbedaan  yang  signifikan antara pemberian ekstrak kloroform daun kersen dan asetosal.
Dosis 240 mg/kgBB dengan dosis 60 mg/kgBB mempunyai nilai signifikasi 0,003  <  0,05  maka  H0  ditolak,  ada  perbedaan  yang  signifikan  antara  pemberian dosis  240  mg/kgBB  dan  dosis  60  mg/kgBB.  Dosis  240  mg/kgBB  dengan  120 mg/kgBB  mempunyai nilai signifikasi 0,051 > 0,05 maka H0 diterima, tidak ada perbedaan  yang  signifikan  antara  dosis  240  mg/kgBB  dan  dosis  120  mg/kgBB. Dosis  240  mg/kgBB  dengan  asetosal  mempunyai  nilai  signifikasi  0,000  <  0,05 maka  H0  ditolak,  ada  perbedaan  yang  signifikan  antara  pemberian  ekstrak kloroform daun kersen dan asetosal.
Dari  data  di  atas  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  kloroform  daun  kersen memiliki  potensi  analgetik.  Persentase  daya  analgetik  ekstrak  kloroform  24,51% mendekati  persentase  kontrol  positif  (asetosal)  sebagai  pembandingnya  yaitu 47,55%.  Dalam  ekstrak  kloroform  daun  kersen  memiliki  potensi  analgetik kemungkinan  dikarenakan  adanya  flavonoid  dalam  sediaan  tersebut,  flovonoid yang  memiliki  struktur kimia  hampir sama dengan parasetamol  yang  merupakan obat kimia  yang  memiliki efek  analgetik kuat. Mekanisme analgetik disebabkan adanya penghambatan pelepasan prostaglandin dan mediator-mediator serupa. Hal ini juga mungkin berhubungan dengan kehadiran saponin, flavonoid, dan berbagai senyawa  yang  terdapat  di  dalam  ekstrak  kloroform  daun  kersen (Muntingia calabura  L). Flavonoid  yang  mempunyai  cincin  ikatan  rangkap  hampir  sama kerjanya  dengan  parasetamol,  sehingga  memiliki  daya  analgetik  seperti parasetamol yang merupakan obat kimia yang memiliki efek analgetik kuat. Hasil statistik  pada  uji  analgetik  menunjukkan  bahwa  ekstrak  kloroform  daun  kersen memiliki perbedaan yang signifikan dengan kontrol positif (asetosal) dari nilai p < 0,05.

## SIMPULAN
Kandungan zat aktif EKDT sesuai dengan hasil KLT dan pengujian skrining fitokimia  adalah  saponin,  alkaloid,  fenolik  dan  flavonoid.  Tanin  tidak  nampak karena hasilnya adalah negatif.
Potensi analgetik dengan pembanding asetosal  berturut-turut pada dosis  60 mg/kgBB; 120 mg/kgBB dan 240 mg/kgBB adalah 12,99%; 17,89% dan 24,51%, dimana potensi analgetik asetosal sebesar 47,55%.

## SARAN
Dilakukan  penelitian  lanjutan  untuk  aktivitas  antipiretik  dan  antiinflamasi untuk  ekstrak  fraksi  polar,  semipolar  dan  nonpolar.  Perlu  dilakukan  penelitian lebih lanjutan mengenai dosis letal dan dosis toksik utuk analgetik.
Pemisahan  bercak  pada  saat  identifikasi  KLT  tidak  sempurna,  masih terdapat  tumpang  tindih,  maka  bisa  dilakukan  penelitian  menggunakan  metode yang  lebih teliti  seperti HPLC atau dilakukan  fraksinasi  senyawa  nonpolar untuk senyawa yang lebih spesifik.

## DAFTAR PUSTAKA
Christiana, I., Evacuasiany, E., Hidayat, M., 2012, The Analgetic Effect of Kayu Rapat Bark Infusion ( Parameria laevigata (Juss) Moldenke) On Male Mice Treated With Thermal Induction, Journal of Medical Planta , Vol. 2 No. 1
Departemen Kesehatan Republik Indonesia.  2010. Sediaan Galenik . Dirjen Jakarta : Pengawasan Obat dan Makanan.
Harborne, J.B. 2010. Metode Fitokimia II. Bandung: ITB.
Maryati  dan  Wahyuni,  Sri.  2010. Petunjuk  Praktikum  Fitoki mia.  Surakarta: Laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi UMS.
Parmadi, A. 2010. Skrining Fitokimia Terhadap Tanaman Yang Mempunyai Daya Sitotoksik Terbesar  Terhadap  Artemia  Salina  (leech)  Dari  Beberapa Tanaman  Suku  Compositae .  Skripsi.  Fakultas  Farmasi  Universitas Surabaya.
Sridhar M, Thirupathi K, Chaitanya G, Kumar R, Mohan KG, 2011,  Antidiabetic effect  of  Leaves Muntingia  calabura L  in  Normal  And  Alloxan-Induced Diabetic  Rats ,  Jurnal  of  Pharmacologyonline  2:  626-632 ,  University College of Pharmaceutical Sciences; India
Wagner,  H,  Bladt,  S.,  Zgainski  EM.  2010. Plant  Drug  Analysis .  Berlin- heidelberg-New York: Springer Verlag Page 8, 9, 54, 55, 94, 153, 196, 226, 227.
Widyaningrum, NR., Parmadi, A., Candra, Agus, F., Budiyanto, E. 2015. Aktivitas Ekstrak Etanol, Etilasetat dan Kloroform Talok ( Muntingia calabura L) sebagai Agen  Penurun  Panas  melalui  Induksi  Vaksin  DPT  pada  Mencit  Ras  Swiss. Prosiding . Molecules, Vol 20.
Widyaningrum,  NR.,  Saptuti,  S.,  Agustina,  T.,  2019.  Identifikasi  Kromatografi Lapis  Tipis  Dan  Efektivitas  Ekstrak  Etilasetat  Daun  Talok  ( Muntingia calabura L ) Sebagai Analgetik, Avicenna, 84 2, 84–94.
Widyaningrum,  N.R.,  Parmadi,  A.,  Wicaksono,  W.,  2016.  Profil  Kromatografi Lapis  Tipis  Ekstrak  Etanol  Daun  Talok  ( Muntingia  calabura  L )  Beserta Potensinya  Sebagai  Pereda  Nyeri, Indonesian  Journal  On  Medical Science , 3 (1), 105-114