EISSN: 2407-7690 https://ejournal3.undip.ac.id/index.php/jmr

## Profil Senyawa Metabolit Sekunder Ekstrak Daun Mangrove Lumnitzera racemosa
Asal Perairan Teluk awur, Jepara

## Sari Poncowati, Nirwani Soenardjo, Nur Taufiq-Spj, Mada Triandala Sibero*
Departemen Ilmu Kelautan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jl. Prof. H. Soedarto S.H, Tembalang, Semarang, Jawa Tengah 50275 Indonesia *Corresponding author, e-mail : madatriandalasibero@lecturer.undip.ac.id
ABSTRAK: Mangrove merupakan  tumbuhan  daerah  tropis  yang mampu  hidup  diwilayah  pasang surut  air  laut  dan  sering  dijadikan  sebagai  obat  herbal  tradisional  karena  memiliki  kandungan senyawa  bioaktif.  Salahsatu  mangrove  yang  berpotensi  namun  jarang  diteliti  yaitu Lumnitzera racemosa. Tujuan  dari  penelitian  ini  yaitu  untuk  mengetahui  senyawa  bioaktif  dari  ekstrak  daun mangrove Lumnitzera  racemosa asal  perairan  Teluk  awur,  Jepara,  serta  pengaruh  dari penggunaan  metode  panas  yaitu soxhletasi terhadap  senyawa  yang  didapatkan.  Penelitian  ini menggunakan  metode  ekstraksi soxhletasi bertingkat  dengan  pelarut  yang  berbeda  yaitu  n- heksana, etil asetat, dan methanol. Uji fitokimia dilakukan  untuk mengetahui kandungan senyawa alkaloid,  flavonoid,  fenol,  steroid,  triterpenoid,  kuinon,  dan  saponin.  Uji  TLC  dilakukan  dengan eluen  n-heksana  :  etil  asetat  (7:3).  Hasil  penelitian  menunjukkan  rendemen  terbanyak  dihasilkan oleh  ekstrak  methanol,  sehingga  dapat  disimpulkan  metode soxhletasi menghasilkan  rendemen lebih  banyak  daripada  maserasi  dan  methanol  mampu  mengekstraksi  sampel  dengan  lebih optimal.  Uji  fitokimia  dan  TLC  menunjukkan  mangrove L.  racemosa terdapat  senyawa  bioaktif seperti  alkaloid,  flavonoid,  fenol,  steroid,  terpenoid,  dan  kuinon.  Pereaksi  DPPH  yang  digunakan menunjukkan sampel L. racemosa positif berpotensi sebagai antioksidan.
Kata kunci: Lumnitzera racemose; Soxhletasi; Fitokimia; TLC

## Profile of Secondary Metabolic Compounds Extract from Mangrove Leaf Lumnitzera racemosa from Teluk awur, Jepara
ABSTRACT: Mangroves are tropical plants that are able to live in tidal areas and are often used as traditional herbal medicines due to containing bioactive compounds. One of the mangroves that has  the  potential  but  is  rarely  studied  is  Lumnitzera  racemosa.  The  purpose  of  this  study  was  to determine  the  bioactive  compounds  from  mangrove  leaf  extract  L.  racemosa  from  the  waters  of Teluk  Awur,  Jepara,  and  the  effect  of  using  the  heat  method,  namely  soxhletation,  on  the compounds obtained. This study used a stratified soxhlet extraction method with different solvents, namely n-hexane, ethyl acetate, and methanol. Phytochemical tests were conducted to determine the content of alkaloids, flavonoids,  phenols, steroids,  triterpenoids, quinones, and saponins. The TLC test was carried out with n-hexane: ethyl acetate as an eluent (7:3). The results showed that the highest yield was produced by methanol extract, so it can be concluded that the soxhletation method  produced  more  yield  than  maceration  and  methanol  was  able  to  extract  samples  more optimally.  Phytochemical  and  TLC  tests  showed  that  the  L.  racemosa  mangrove  contained bioactive  compounds  such  as  alkaloids,  flavonoids,  phenols,  steroids,  terpenoids,  and  quinones. Meanwhile,  the  DPPH  reagent  used  showed  positive  L.  racemosa  samples  as  potential antioxidants.
Keywords: Lumnitzera racemose; Soxhletasi; Phytochemistry; TLC.

## PENDAHULUAN
Mangrove  merupakan  tumbuhan  daerah  tropis  yang  dapat  beradaptasi  dan  tumbuh  pada lingkungan pasang surut air laut (Halidah, 2014). Mangrove sering diteliti karena diketahui memiliki
kandungan  senyawa  bioaktif  yang  berasal  dari  metabolit  sekunder  yang  dihasilkan.  Metabolit sekunder  adalah  senyawa  organik  yang  bersifat  non  essensial  dari  hasil  proses  metabolisme. Golongan  senyawa  metabolit  sekunder  diantaranya  adalah  alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin, steroid  dan  triterpenoid  (Baud et  al., 2014).  Setiap  jenis  senyawa  metabolit  sekunder  memiliki fungsi yang berbeda. Senyawa ini tidak berperan penting untuk kelangsungan hidup bagi tanaman, namun dapat memberi beberapa keuntungan yakni sebagai mekanisme pertahanan tanaman, baik dari  ancaman  biotik  maupun  abiotik.  Senyawa  metabolit  sekunder  tertentu  dapat  dimanfaatkan oleh manusia sebagai antioksidan atau bahan baku obat (Setyorini dan Yusnawan, 2016).
Mangrove spesies L. racemosa menjadi salahsatu mangrove mayor yang banyak ditemukan di perairan Indonesia (Kitamura et al., 1997). Menurut penelitian Paul dan Ramasubbu (2017), L. racemosa yang  diteliti  mengandung  senyawa  fenol,  flavonoid,  alkaloid,  terpenoid,  sterol,  tannin, karbohidrat, kardiak glikosid, saponin, dan kuinon. Sedangkan menurut penelitian dari Quraishi et al., (2015),  ekstrak  dari L.  racemosa menunjukkan  sifat  antioksidan  yang  efektif.  Ekstrak  daun diketahui  memiliki  aktivitas  antioksidan  lebih  kuat  daripada  bagian  batangnya.  Senyawa  fenolik dari  tanaman  menjadikan  tanaman  ini  berpotensi  sebagai  antioksidan  untuk  dapat  dimanfaatkan dalam bidang kesehatan dan industri makanan. Namun, spesies L. racemosa masih terasa asing dilihat dari minimnya literatur yang membahas tentang spesies ini jika dibandingkan dengan genus lain seperti Rhizophora.
Metode  ekstraksi  yang  digunakan  adalah soxhletasi, yang  berbeda  dengan  yang  biasa dilakukan  (metode  ekstraksi  maserasi).  Ekstraksi  dilakukan  secara  bertingkat  menggunakan  tiga (3)  macam  pelarut  yang  berbeda  kepolarannya  untuk  mendapatkan  senyawa  bioaktif  yang berbeda juga. Melihat potensi mangrove inilah, yang menjadikan penelitian Mangrove Lumnitzera racemosa Asal Perairan Teluk Awur, Jepara ” penting untuk dilakukan.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  senyawa  bioaktif  metabolit  sekunder  dari ekstrak  daun mangrove L.  racemosa asal  perairan Teluk  awur,  Jepara,  serta  pengaruh  dari penggunaan  metode  ekstraksi  panas  yaitu soxhletasi bertingkat  terhadap  senyawa  bioaktif metabolit sekunder yang didapatkan.

## MATERI DAN METODE
Materi  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  mangrove  dari  spesies L.  racemosa bagian  daun  yang  sudah  tua  dan  berwarna  hijau  gelap,  yang  berasal  dari  lokasi  Mangrove Education  Center  of  KeSeMAT  (MECoK),  perairan  Teluk  awur,  Jepara,  Jawa  Tengah.  Penelitian dilakukan  pada  laboratorium  yang  bertempat  di  Laboratorium  Terpadu  Undip  dan  Laboratorium Kimia Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro, Semarang.
Pengambilan  sampel  dilakukan  pada  lokasi  dengan  titik  koordinat  -6 o 37.063`  S  dan  110 o 38.348` E (Gambar 1). Sebelum sampel diambil, dilakukan pengukuran kondisi lingkungan seperti, pH tanah, suhu tanah, intensitas cahaya dan kadar salinitas. Selanjutnya, pohon sampel dilakukan identifikasi  menggunakan  kunci  determinasi  oleh  Noor et  al., (2012)  untuk  memastikan  sampel merupakan  spesies L.  racemosa. Setelah  diidentifikasi,  daun  sampel  mangrove  dipetik  yang berwarna  hijau  tua,  tidak  cacat,  tanpa  batang  maupun  gagangnya.  Sampel  daun  yang  telah diambil disimpan kedalam ziplock dan diletakkan kedalam container box selama perjalanan hingga ke laboratorium untuk selanjutnya dilakukan tahap preparasi sampel untuk menjaga agar sampel tetap baik sebelum dilakukan pengujian.

## Preparasi sampel
Sampel  daun L.  racemosa yang  telah  diambil  dari  lapangan  kemudian  dibersihkan menggunakan tissue .  Selanjutnya  sampel  daun  dikeringkan  dengan  menggunakan  oven  pada suhu  40 o C  selama  3  hari  hingga  kadar  airnya  berkurang.  Sampel  daun  dikeluarkan  dalam  oven dan  dipotong  kecil-kecil  menggunakan  gunting  untuk  mempermudah  proses  dari  ekstraksinya. Hasil dari potongan daun L. racemosa selanjutnya ditimbang untuk diambil sebanyak 20 gram dan dimasukkan ke dalam erlenmeryer untuk selanjutnya ekstraksi daun (Kasitowati et al ., 2017).

## Ekstraksi soxhletasi
Menurut Anam et al . (2014), metode ekstraksi soxhletasi adalah metode yang menggunakan proses  pemanasan.  Proses  ekstraksi  diawali  dengan  menyiapkan  bagian-bagian  dari  alat  yang bernama soxhlet dengan  kapasitas  pelarut  maksimal  sebesar  500  mL.  Sampel  dari L.  racemosa sebanyak 20 gram kemudian dibungkus menggunakan kertas saring dengan rapi agar tidak terjadi kebocoran  sampel  saat  proses  ekstraksi.  Sampel  yang  telah  dibungkus  kemudian  dimasukkan kedalam  tabung  alat soxhlet. Pelarut  pertama  yang  digunakan  untuk  ekstraksi  yaitu  n-heksane sebanyak  400  mL  yang  dimasukkan  ke  dalam  labu  alat soxhlet. Setelah  itu,  alat  dirakit  dengan bagian  pemanas  berada  paling  bawah,  labu  yang  berisi  pelarut  berada  diatasnya,  tabung yang telah  berisi  sampel  dirakit,  dan  paling  atas  dipasang  bagian  kondensor.  Selanjutnya  dilakukan pemanasan  hingga  pelarut  dalam  tabung tidak  berwarna  yang  artinya  ekstraksi  telah  selesai. Setelah ekstraksi menggunakan pelarut pertama selesai, alat dilepas, dibersihkan dan didapatkan pelarut  pertama  yang  bercampur  ekstrak  dan  residu.  Residu  di soxhletasi kembali  berturut-turut menggunakan  etil  asetat  400  mL  dan  methanol  400  mL  dengan  cara  yang  sama.  Ekstraksi dilakukan tiga (3) kali menggunakan pelarut yang berbeda secara bergantian dengan sampel yang sama.  Pelarut  akan  menguap  keatas,  pada  saat  pelarut  sampai  ke  ruang  pendingin,  pelarut tersebut  akan  mengalami  kondensasi  dan  menjadi  cair,  lalu  menetes  ke  tabung  yang  terdapat sampel. Pelarut akan memenuhi tabung dan mengekstrak sampel, setelah tabung penuh dengan pelarut maka pelarut akan luruh lagi kebagian labu.  Proses ini dinamakan satu (1) siklus. Proses yang terjadi  akan  berlangsung  secara  berulang-ulang  sehingga  didapatkan  ekstrak  kasar  sampel yang masih bercampur dengan pelarut
Ekstraksi  dilakukan  secara  bertingkat  dengan  menggunakan  tiga  (3)  pelarut  yang  berbeda. Pelarut pertama yang digunakan adalah n-heksane, dilanjut dengan etil asetat, dan yang terakhir adalah  methanol.  Ketiga  pelarut  memiliki  kepolaran  yang  berbeda-beda,  sehingga  dapat  dilihat pelarut  mana  yang  lebih  efektif  untuk  proses  ekstraksi.  Setelah  selesai  dilakukan  ekstraksi bertingkat dengan ketiga pelarut, didapatkan tiga (3) bentuk larutan yang selanjutnya melalui tahap pemekatan (Melisa et al., 2018)
Gambar 1. Peta lokasi sampling penelitian di Perairan Teluk awur, Jepara

## Pemekatan
Pemekatan bertujuan untuk memisahkan pelarut dari ekstraknya dengan menggunakan alat yang bernama rotary evaporator . Larutan pertama yaitu n-heksane dimasukkan kedalam labu alat. Selanjutnya  alat  dirakit  dan  dinyalakan  dengan  suhu  antara  30-45 o C.  Alat  akan  berputar  dan memisahkan  larutan  menjadi  pelarut  dengan  ekstrak.  Setelah  larutan  dipekatkan,  alat  dilepas kembali dan ekstrak yang berbentuk pasta diambil dan ditimbang. Selanjutnya larutan kedua dan ketiga  dipekatkan  dengan  metode  yang  sama  menggunakan rotary  evaporator .  Ketiga  ekstrak berbentuk  pasta  yang  didapatkan  kemudian  dimasukkan  kedalam  botol  sampel  dan  dilapisi menggunakan alumunium foil agar ekstrak tetap terjaga dan dimasukkan ke dalam freezer dengan suhu -20 o C untuk menjaga kestabilan dari senyawa (Miranti et al ., 2018).

## Uji fitokimia
Ekstrak  berbentuk  pasta  ditimbang  sebanyak  dua  (2)  mg  dan  diencerkan  dengan  aquades steril sebanyak 2 mL. Selanjutnya, ekstrak dibuat menjadi konsentrasi 50% dengan mengambil 0,5 ml larutan ekstrak kental dan ditambahkan 9,5 ml aquades steril (Mainawati et al., 2017). Ekstrak yang telah diencerkan selanjutnya dapat digunakan untuk metode uji fitokimia. M
Uji  alkaloid  dilakukan  dengan  cara  dua  (2)  mL  ekstrak  dari  masing-masing  pelarut  (n- heksane,  etil  asetat  dan  methanol)  diambil  dan  ditaruh  ke  dalam  tabung  reaksi.  Asam  sulfat (H 2 SO 4 )  2N  ditambahkan  sebanyak  1  mL,  kemudian  digoyang  ( shake )  hingga  ekstrak  larut,  lalu disaring  menggunakan  kertas  saring whatman 0,45  µm.  Pelarut Dragendorff sebanyak  1  tetes diteteskan  ke  dalam  larutan.  Kemudian  perubahan  warna  yang  terjadi  diamati.  Indikasi  adanya senyawa  alkaloid  ditandai  dengan  terjadinya  perubahan  warna  menjadi  coklat  kemerahan  atau jingga (Mainawati et al., 2017).
Uji Flavonoid dilakukan dengan cara mengambil ekstrak yang telah diencerkan dari masing- masing pelarut (n-heksane, etil asetat dan methanol) diambil sebanyak 2 mL  kemudian ditaruh di dalam tabung reaksi. HCl pekat sebanyak 0,25 mL ditambahkan, kemudian dipanaskan selama 15 menit.  Kemudian  perubahan  warna  yang  terjadi  diamati.  Indikasi  adanya  senyawa  flavonoid ditandai dengan warna orange, merah tua atau magenta (Kasitowati et al., 2017).
Uji  Fenolik  dilakukan  dengan  cara  mengambil  ekstrak  dari  masing-masing  pelarut  (n- heksane,  etil  asetat  dan  methanol)  diambil  sebanyak  2  mL  kemudian  ditaruh  di  dalam  tabung reaksi.  Larutan  FeCl3  1%  diteteskan,  kemudian  diamati  perubahan  warna  yang  terjadi.  Indikasi adanya senyawa fenolik ditandai dengan terbentuknya warna biru kehitaman (Akasia et al ., 2021). Uji  Triterpenoid  dan  Steroid  dilakukan  dengan  cara  mengambil  ekstrak  dari  masing-masing pelarut  (n-heksane,  etil  asetat  dan  methanol)  diambil  sebanyak  2  mL  kemudian  ditaruh  di  dalam tabung  reaksi.  Tiga  tetes  asetat  anhidrida  ditambahkan,  kemudian  dipanaskan  hingga  mendidih selanjutnya  didinginkan  pada  suhu  ruangan.  Selanjutnya  tambahkan  satu  tetes  asam  sulfat (H 2 SO 4 )  melalui  dinding  tabung  reaksi  kemudian  diamati  perubahan  warnanya.  Indikator  adanya senyawa  golongan  steroid  yaitu  dengan  terbentuknya  warna  hijau  dilapisan  atas,  dan  indikator adanya triterpenoid dengan warna merah pekat pada lapisan bawah (Endarini, 2016).
Uji kuinon dilakukan dengan cara mengambil ekstrak masing-masing pelarut (n-heksane, etil asetat  dan  methanol)  sebanyak  2  mL  kemudian  ditaruh  di  dalam  tabung  reaksi.  Aquadest sebanyak  1,25  mL  ditambahkan,  selanjutnya  ditambahkan  larutan  NaOH  2N  sebanyak  0,25  mL. Kemudian  diamati  perubahan  yang  terjadi.  Indikator  adanya  senyawa  kuinon  ditandai  dengan adanya warna kuning (Endarini, 2016).
Uji  Saponin  dilakukan  dengan  mengambil  ekstrak  dari  masing-masing  pelarut  (n-heksane, etil  asetat  dan  methanol)  diambil  sebanyak  2  mL  kemudian  ditaruh  di  dalam  tabung  reaksi. Aquadest  sebanyak  1,25  mL  ditambahkan  kemudian  tabung  reaksi  tersebut  dipanaskan  hingga mendidih.  Setelah  larutan  mendidih  kemudian  tabung  reaksi  dikocok  ( shake )  secara vertical hingga  terbentuk  busa.  Tabung  reaksi  didiamkan  selama  30  menit,  lalu  diteteskan  HCl  2N sebanyak  1  tetes  ke  tengah  permukaan  larutan.  Kemudian  amati  adanya  perubahan.  Indikator adanya senyawa saponin adalah dengan terbentuknya busa yang tetap stabil (Sibero et al., 2020). Metode Thin Layer Chromatography (TLC) dilakukan untuk mengetahui kandungan senyawa organik  yang  berada  pada  sampel.  Metode  ini  menggunakan  beberapa  eluen  dengan  tingkat
kepolaran yang berbeda, eluen yang digunakan adalah n-heksane : etil asetat (7:3) (Frederick et al., 2021).  Ekstrak  yang  berbentuk  pasta  dari  masing-masing  pelarut  (n-heksane,  etil  asetat  dan methanol)  ditimbang  sebanyak  0,5 mg  kemudian  dilarutkan  dengan  100  µL  pelarut  awal masing- masing  (n-heksane,  etil  asetat  dan  methanol).  Plat  TLC silica  gel disiapkan  dengan  ukuran panjang  8  cm,  lalu  ditandai  untuk  masing  masing  ekstrak  (n-heksane,  etil  asetat  dan  methanol). Masing-masing  ekstrak  yang  telah  diencerkan  kemudian  ditotolkan  menggunakan  pipa  kapiler pada  plat  TLC sillica  gel. Plat  TLC  kemudian  diletakkan  ke  dalam chamber atau  wadah  tertutup yang  telah  diisi  oleh  campuran  pelarut  n-heksane  dan  etil  asetat  dengan  perbandingan  7:3.  Plat TLC didiamkan hingga fase gerak TLC berhenti bergerak, kemudian plat TLC diambil dan diamati dibawah sinar UV 366 nm. Selanjutnya, plat TLC dilakukan penyemprotan menggunakan pereaksi untuk  menentukan  golongan  senyawanya.  Pereaksi  yang  digunakan  yaitu dragendorff (alkaloid) , FeCl 3 (fenolik),  vanillin  (terpenoid  dan  steroid),  AlCl 3 (flavonoid),  dan  DPPH  (antioksidan)  yang telah  disiapkan.  Plat  TLC  pada  setiap  pereaksi  dilihat  perubahan  indikatornya  dan  dihitung  nilai Retardation factor nya (Rf). Nilai Rf dapat dihitung menggunakan rumus (Frederick et al., 2021):
Nilai R f = Jarak yang ditempuh komponen Jarak yang ditempuh pelarut

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Keadaan umum lingkungan pengambilan sampel daun L. racemosa disajikan dalam Tabel 1. Berdasarkan hasil pengukuran parameter lingkungan yang dilakukan, menunjukkan suhu tanah 25 o C, termasuk suhu optimal sesuai dengan penelitian Hambran et al., (2014), bahwa pertumbuhan mangrove yang baik memerlukan suhu rata – rata >20 o C. Salinitas tanah diperoleh angka 32 0 / 00 , yang  menunjukkan  bahwa  mangrove L.  racemosa termasuk  toleran  terhadap  salinitas  tinggi.  pH tanah stabil dikisaran 7,0, tanah termasuk lembab atau basah, dan intensitas cahaya rendah yang dapat disebabkan mangrove disekelilingnya lebih tinggi dan menutupi L. racemosa serta keadaan mangrove  yang  rimbun . Substrat  dilokasi  adalah  pasir  yang  disukai  oleh  jenis  ini. L.  racemosa dapat disimpulkan tumbuh dengan baik pada lokasi ini.
Ekstraksi  soxhletasi  adalah  ekstraksi  panas  dengan  prinsip  penyaringan  secara  berulang untuk  mendapatkan  hasil  yang  sempurna  dengan  penggunaan  pelarut  yang  relatif  sedikit  (Anam dan  Agustini,  2014).  Rendemen  hasil  ekstraksi  disajikan  dalam  Tabel  2.  Hasil  menunjukkan rendemen ekstrak terbanyak dihasilkan oleh pelarut methanol, etil asetat, dan yang paling sedikit adalah  n-heksana.  Sampel  sebelum  di  soxhletasi  dikeringkan  menggunakan  oven  untuk menghilangkan kandungan air yang terdapat dalam sampel dan dihaluskan untuk mempermudah terlarutnya senyawa (Utomo, 2016). L. racemosa memiliki daun yang tebal berdaging dan banyak kandungan  airnya  (Kitamura et  al., 1997),  sehingga  pengovenan  penting  dilakukan  agar  yang terekstrak hanya senyawanya, bukan kandungan airnya.
Penelitian  menggunakan  3  (tiga)  pelarut  yang  berbeda,  yaitu  n-heksana,  etil  asetat,  dan methanol.  Penggunaan  pelarut  ini  dikarenakan  setiap  pelarut  memiliki  kepolaran  yang  berbeda sehingga  akan  mengekstraksi  sampel  dengan  sempurna.  Hasil  ekstraksi  dapat  dilihat  bahwa efektivitas  pelarut  dapat  mempengaruhi  hasil  dari  rendemen.  Hal  ini  sesuai  pernyataan  dari Manuhuttu  dan  Saimima  (2021),  bahwa  hasil  rendemen  dapat  menyatakan  efektivitas  pelarut tertentu  terhadap  ekstraksi,  namun  tidak  menunjukkan  tingkat  aktivitas  ekstrak  tersebut. Rendemen terbanyak dari methanol dikarenakan sifat methanol yang dapat mengekstraksi segala jenis senyawa dengan kepolaran yang berbeda, sehingga sering disebut pelarut “ sapu jagat ”.

## Uji Fitokimia
Uji  fitokimia  merupakan  salahsatu  metode  kualitatif  untuk  mengetahui  adanya  senyawa metabolit sekunder dengan indikasi perubahan warna, pengendapan, maupun pembentukan busa sesuai  dengan  pereaksi  fitokimia  yang  digunakan  (Agustina et  al., 2016).  Hasil  uji  fitokimia disajikan dalam Tabel 3.
Journal of Marine Research Vol 11, No. 4 November 2022, pp. 794-804
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan,  dapat  diketahui L.  racemosa menghasilkan  senyawa  alkaloid,  flavonoid,  fenol,  steroid,  dan  kuinon.  Uji  saponin  menunjukkan hasil  negatif  dengan  tidak  adanya  tanda  gelembung  setelah  dilakukan  pengujian.  Sedangkan menurut  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Fitri  (2021),  uji  fitokimia L.  racemosa mengandung senyawa  alkaloid,  steroid,  triterpenoid  dan  saponin.  Triterpenoid  dan  saponin  tidak  ditemukan diduga karena proses ekstraksi yang digunakan berbeda yaitu maserasi dan soxhletasi . Hasil menunjukkan senyawa alkaloid dari L. racemosa dapat diekstrak menggunakan pelarut polar maupun non polar. Hasil uji flavonoid menunjukkan bahwa dari ketiga ekstrak, hanya ekstrak methanol yang memiliki senyawa flavonoid. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa flavonoid dari L. racemosa dapat  diekstraksi  dengan  menggunakan  pelarut  polar.  Hasil  didukung  oleh  penelitian dari  Fitri  (2021)  terhadap L.  racemosa menunjukkan  senyawa  flavonoid  terdapat  pada  ekstrak etanol, namun pada n-heksana dan etil asetat tidak terdapat senyawa flavonoid. Flavonoid bersifat polar  karena  mengandung  gula  dan  gugus  hidroksil,  oleh  hal  ini  lah  golongan  senyawa flavonoid hanya dapat di ekstrak oleh pelarut polar seperti methanol dam etanol (Wakeel et al., 2019). Fenol merupakan  senyawa  induk  dari  fenolik  dari  banyak  terdapat  pada  tumbuhan.  Hasil  uji menunjukkan  senyawa  fenol  terdapat  dalam  ekstrak  methanol.  Selain  methanol,  dimungkinkan juga terdapat pada etil asetat namun dalam jumlah yang sedikit. Hal ini karena etil asetat bersifat semi polar dan methanol bersifat polar sehingga methanol dapat mengekstraksi dengan lebih baik. Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  Fitri  (2021)  terhadap L.  racemosa yang  menunjukkan  total perhitungan fenol tertinggi terdapat pada pelarut etanol atau polar, dan terendah terdapat pada n- heksana. Methanol bersifat  polar yang dapat melarutkan senyawa – senyawa yang bersifat polar seperti golongan fenol.
Berdasarkan  hasil  uji  yang  telah  dilakukan,  sampel L.  racemosa mempunyai  aktivitas senyawa  steroid  pada  ketiga  ekstrak,  namun  negatif  untuk  triterpenoid.  Hal  ini  didukung  oleh penelitian  Fitri  (2021),  yang  menguji  fitokimia L.  racemosa dan  mendapatkan  aktivitas  senyawa steroid  dari  ketiga  ekstrak.  Beberapa  penelitian  menggunakan  metode  maserasi  menunjukkan hasil  yang  positif  terhadap  triterpenoid,  namun  dalam  penelitian  ini  menunjukkan  hasil  yang negatif.  Diduda  hasil  negatif  dipengaruhi  karena  sifat  soxhletasi  yang  tidak  dapat  digunakan terhadap  senyawa  termolabil  sedangkan  maserasi  lebih  baik  apabila  digunakan  untuk  senyawa yang  termolabil.  Menurut  penelitian  yang  dilakukan  Yurleni  (2018),  ekstrak  yang  diperoleh  dari maserasi dan soxhletasi memiliki perbedaan hasil, hasil maserasi positif terdapat triterpenoid, dan soxhletasi menunjukkan negatif terhadap triterpenoid.

## Tabel 1 . Keadaan Umum Lingkungan
Parameter Kondisi Lingkungan Suhu ( o C) 25 Salinitas ( 0 / 00 ) 32 pH 7,0 Kelembapan Tanah Basah Intensitas Cahaya Rendah Substrat Pasir Tabel 2 . Rendemen Ekstraksi Sampel Daun L. racemose Pelarut Berat Ekstrak (mg) Rendemen (%) Bentuk n-Heksana 1.045,7 5,2 Pasta Etil Asetat 1.852,1 9,3 Pasta Methanol 2.297,4 11.5 Pasta
Journal of Marine Research Vol 11, No. 4 November 2022, pp. 794-804
Hasil uji senyawa kuinon yang didapat, menunjukkan adanya aktivitas senyawa kuinon pada ekstrak  methanol.  Kuinon  umumnya  mudah  larut  dalam  senyawa  nonpolar,  namun  methanol merupakan  pelarut  universal  yang  dapat  menarik  sebagian  besar  senyawa  polar  dan  nonpolar, sehingga  dimungkinkan  kuinon  juga  dapat  tertarik  pada  ekstrak  methanol.  Kuinon  merupakan salah  satu  turunan  dari  fenol  yang  menunjukkan  aktivitas  biologis  seperti  antijamur,  antimalaria, antibakteri,  antikanker,  dan  antioksidan  (Mutrikah et  al., 2018).  Hasil  penelitian  menunjukkan negatif terhadap saponin dengan indikator tidak adanya buih yang terbentuk. Menurut Puspitasari (2018),  saponin  rentan  terhadap  suhu  yang  tinggi  sehingga  senyawa  bioaktif  tersebut  dapat mengalami kerusakan apabila dipanaskan dengan suhu tinggi.

## Uji Thin Layer Chromatography (TLC)
Hasil  uji  TLC  pada  ekstrak  daun L.  racemosa dengan  pereaksi  AlCl 3 untuk  mengetahui adanya  senyawa  flavonoid  dapat  dilihat  pada  Gambar  2.  Berdasarkan  uji  TLC  dengan menggunakan pereaksi AlCl 3 terhadap ekstrak dengan pelarut etil asetat menunjukkan hasil positif dengan  adanya  warna  kuning  kehijauan  dibawah  sinar  UV-Vis  dengan  Rf  0,1  dan  0,25.  Hasil negatif  terhadap  ekstrak  dengan  pelarut  n-heksane,  sedangkan  methanol  terdeteksi  adanya flavonoid namun tidak berjalan. Pereaksi  vanillin untuk mengetahui adanya terpenoid dan steroid pada Gambar 3. Berdasarkan uji TLC dengan pereaksi vanillin terhadap ketiga ekstrak didapatkan 8 noda (0,5; 0,6; 0,65; 0,73; 0,76; 0,83; 0,9; 0,96) pada pelarut n-heksane, 4 noda (0,65; 0,76; 0,9; 0,98) pada pelarut etil asetat, dan 6 noda (0,3; 0,53; 0,65; 0,76; 0,9; 0,98) pada pelarut methanol. Sedangkan,  warna  ungu  kehitaman  menunjukkan  adanya  senyawa  terpenoid  dan  steroid. Pereaksi  FeCl 3 untuk  mengetahui  adanya  senyawa  fenolik  dapat  dilihat  pada  Gambar  4. Berdasarkan uji TLC dengan pereaksi FeCl 3 terhadap ketiga ekstrak didapatkan 2 noda (0,9; 0,95) pada  pelarut  n-heksane,  2  noda  (0,9;  0,95)  pada  pelarut  etil  asetat,  dan 3  noda (0,36;  0,9;  0,95) pada  pelarut methanol. Sedangkan,  warna  biru kehitaman  menunjukkan  adanya  senyawa  fenolik dalam ekstrak. Pereaksi dragendorff untuk mengetahui adanya senyawa alkaloid pada Gambar 5. Berdasarkan  uji  TLC  dengan  pereaksi dragendorff terhadap  ketiga  ekstrak  didapatkan  1 noda (0,9) pada pelarut n-heksane, 1 noda (0,91) pada pelarut etil asetat, dan 1 noda (0,68) pada pelarut methanol.  Sedangkan,  warna  coklat  jingga  menunjukkan  adanya senyawa  alkaloid  dalam ekstrak. Nilai Rf adalah faktor retardasi atau perbandingan jarak yang ditempuh fase gerak, mulai dari  awal  hingga  garis  akhir.  Nilai  Rf  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  salahsatunya  dengan pemilihan pelarut sebagai eluennya. Komponen kimia akan bergerak naik (katalis) mengikuti fase gerak.  Daya  serap  setiap  komponen  kimia  yang  tidak  sama  menyebabkan  komponen  kimia bergerak membentuk spot dengan jarak yang berbeda pula. Suatu zat yang memberi warna noda dan  harga  Rf  yang  sama  pada  TLC  yang  sama  memungkinkan  merupakan  zat  yang  sama. Pengunaan  senyawa  polar  akan  terbawa  dalam  pelarut  polar,  senyawa  semipolar  akan  terbawa dalam  pelarut  yang  semipolar  dan  senyawa  nonpolar  akan  terbawa  dalam  pelarut  nonpolar. Apabila Rf memiliki nilai yang sama maka senyawa tersebut dapat dikatakan memiliki karakteristik yang sama atau mirip, begitu pula sebaliknya.

## Tabel 3 . Hasil Uji Fitokimia
Pengujian Hasil Pengujian Indikator n-Heksane Etil asetat Methanol Alkaloid + + + Coklat kemerahan/ jingga Flavonoid - - + Merah tua/ magenta Fenol - - + Biru kehitaman Steroid / triterpenoid + + + Lapisan atas hijau Lapisan bawah merah pekat Kuinon - - + Kuning Saponin - - - Busa stabil
Keterangan: (+) menunjukkan hasil positif adanya senyawa; (-) menunjukkan hasil negatif adanya senyawa
a b
Gambar 2. Hasil TLC dengan AlCl 3 (a) dan UV-Vis (b)
a b
Gambar 3. Hasil TLC dengan Vanilin (a) dan UV-Vis  (b) .
a b
Gambar 4. Hasil TLC dengan FeCl 3 (a) dan UV-Vis (b)
R f1 R f2 R f1 = R f1 R f2 R f3 R f4 R f5 R f6 R f7 R f8 R f2 R f4 R f4 R f9 R f6 R f6 R f8 R f8 R f9 R f9 R f1 R f2 R f3 R f3 R f2 R f2 R f3
a b
Gambar 5. Hasil TLC dengan dragendorff (a) dan UV-Vis (b)
a b
Gambar 6. Hasil TLC dengan DPPH (a) dan UV-Vis (b)\
Pereaksi DPPH untuk mengetahui adanya potensi antioksidan dapat dilihat pada Gambar 6. Berdasarkan  uji  TLC  dengan  pereaksi  DPPH  terhadap  ketiga  ekstrak  didapatkan  2  noda  (0,22; 0,86) pada pelarut n-heksane, 2 noda (0,22; 0,93) pada pelarut etil asetat, dan 3 noda (0,28; 0,45; 0,93)  pada  pelarut  methanol.  Sedangkan,  warna  kuning  menunjukkan  deteksi  adanya  potensi antioksidan dalam ekstrak.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah  dilakukan,  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak  daun mangrove L.  racemosa dari  perairan  Teluk  awur,  Jepara  memiliki  aktivitas  senyawa  bioaktif metabolit  sekunder  antara  lain:  alkaloid,  flavonoid,  fenol,  steroid,  terpenoid  dan  kuinon,  serta berpotensi untuk dikembangkan sebagai antioksidan.

## DAFTAR PUSTAKA
Akasia,  A.I.,  Putra,  I.D.N.N.,  &  Putra,  I.N.G.,  2021.  Skrining  Fitokimia  Ekstrak  Daun  Mangrove
R f2 R f2 R f1 R f3 R f1 R f3 R f1 R f2 R f3 R f1
Journal of Marine Research Vol 11, No. 4 November 2022, pp. 794-804
Rhizophora  mucronata dan Rhizophora  apiculata yang  Dikoleksi  dari  Kawasan  Mangrove Desa Tuban, Bali. Journal of Marine Research and Technology , 4(1):16 –22.
Agustina, S., Ruslan, R. & Wiraningtyas, A. 2016. Skrining Fitokimia Tanaman Obat di Kabupaten Bima. Indonesian E-Journal of Applied Chemistry , 4(1):71-76.
Anam,  C.  &  Agustini,  T.W.  2014.  Pengaruh  Pelarut  yang  Berbeda  pada  Ekstraksi Spirulina platensis Serbuk  sebagai  Antioksidan  dengan  Metode Soxhletasi . Jurnal  Pengolahan  dan Bioteknologi Hasil Perikanan , 3(4):106-112.
Baud, G.S., Sangi, M.S. & Koleangan, H.S., 2014. Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Batang Tanaman Patah  Tulang  ( Euphorbia  tirucalli L . )  dengan  Metode Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Jurnal Ilmiah Sains, 14(2):106-112. Endarini, L.H. 2016. Farmakognosi dan Fitokimia. Pusdik SDM Kesehatan. Fitri,  A.K.  2021. Pengaruh  Konsentrasi  Ekstrak  Daun  Mangrove Lumnitzera  racemosa Terhadap Viabilitas Sel HeLa. Doctoral dissertation, Universitas Brawijaya.
Frederick,  E.H.,  Sibero,  M.T.,  Wijaya,  A.P.,  Syafitri,  E.,  Siswanto,  A.P.,  Murwani,  R.,  Wijayanti,
D.P., Sabdono, A., Pringgenies, D., & Radjasa, O.K. 2021. Preliminary Evaluation of Anti Fish Pathogenic  Bacteria  and  Metabolite  Profile  of  Andaliman  Fruit  ( Zanthoxylum  acanthopodium DC.)  Ethanol  Extract. IOP  Conference  Series:  Earth  and  Environmental  Science , 750(1):p. 012026.
Halidah,  H.  2014. Lumnitzera  littorea (Jack)  Voight,  Mangrove  Sejati  yang  Terancam Punah. Buletin Eboni , 11(2):129-137.
Hambran, R.L. & I. Lovadi. 2014. Analisa Vegetasi Mangrove di Desa Sebubus Kecamatan Paloh Kabupaten Sambas. Jurnal Protobiont , 3(2):201-208. DOI: 10.26418/protobiont.v3i2.6815 Kasitowati,  R.D.,  Yamindago,  A.  &  Safitri,  M.  2017.  Potensi  Antioksidan  dan  Skrining  Fitokimia Ekstrak Daun Mangrove Rhizophora Mucronata , Pilang Probolinggo. Journal of Fisheries and Marine Science, 1(1): 72 –77. DOI: 10.21776/ub.jfmr.2017.001.02.4.
Kitamura,  S.C.,  Anwar,  A.C.,  &  Baba,  S.  1997.  Handbook  of  Mangroves  in  Indonesia.  Bali  dan Lombok.  The  Development  of  Sustainable  Mangrove  Management  Project.  Ministry  Of Forestry Indoensia and Japan International Cooperation Agency.
Mainawati,  D.  2017. Uji  Kandungan  Metabolit  Sekunder  Tumbuhan  Obat  yang  terdapat  Di Kecamatan  Rambah  Samo  Kabupaten  Rokan  Hulu.  Doctoral  dissertation,  Universitas  Pasir Pengaraian.
Manuhuttu, D. & Saimima, N.A. 2021. Potensi Ekstrak Daun Mangrove ( Sonneratia alba ) sebagai Antibakteri Terhadap Salmonella, Staphylococcus aureus , dan Escherichia coli . Jurnal Biologi, Pendidikan dan Terapan , 7(2): 71-79.
Melisa, S.L., Daniel, L. & Septriyanto, D. 2018. Uji Aktivitas Antibakteri Alga Hijau ( Ulva Sp.) dari Pantai  Sorido  Biak  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli . Jurnal  Ilmiah Farmasi , 1(1): 9-15.
Miranti,  D.I.,  Ichiura,  H.  &  Ohtani,  Y.  2018.  The Bioactive  Compounds  and Antioxidant  Activity  of Food  Products  of Rhizophora  stylosa Fruit  (Coffee  and  Tea Mangrove). International Journal of Forestry Research, p.1-8.
Mutrikah, M., Santoso, H., & Syauqi, A. 2018. Profil Bioaktif pada Tanaman Temulawak ( Curcuma xanthorriza Roxb) dan Beluntas ( Pluchea indica Less), Biosaintropis, 4(1): 15-21. Noor, Y.R., Khazali, M., & Suryadiputra, I.N.N. 2012. Panduan Pengenalan Mangrove di Indonesia. PHKA/WI-IP: Bogor.
Paul,  T.  &  Ramasubbu,  S.  2017.  The  Antioxidant,  Anticancer  and  Anticoagulant  Activities  of Acanthus ilicifolius L. roots and Lumnitzera racemosa Willd. Leaves, from Southeast Coast of India. Journal of Applied Pharmaceutical Science, 7(3): 81-87.
Puspitasari,  D.  2018.  Pengaruh  Metode  Perebusan  Terhadap  Uji  Fitokimia  Daun  Mangrove Excoecaria agallocha . Jurnal Penelitian Pendidikan Sosial Humaniora , 3(2): 424-428. Quraishi,  F.M.,  Jadhav, B.L.  &  Kumar,  N.  2015. In  Vitro  Antioxidant  Activities  and  Phytochemical Analysis  of  Methanol  Extracts  of  Leaves  and  Stems  of Lumnitzera  racemosa . European Journal of Medicinal Plants, 81(1):50-59.
Setyorini,  S.D.  &  Yusnawan,  E.  2016.  Peningkatan  Kandungan  Metabolit  Sekunder  Tanaman Aneka Kacang sebagai Respon Cekaman Biotik. Iptek Tanaman Pangan , 11(2):167 –174. Sibero,  M.T.,  Siswanto,  A.P.,  Murwani,  R.,  Frederick,  E.H.,  Wijaya,  A.P.,  Syafitri,  E.,  Farabi,  K.,
Saito,  S.  and  Igarashi,  Y.  2020.  Antibacterial,  cytotoxicity  and  metabolite  profiling  of  crude methanolic  extract  from  andaliman  ( Zanthoxylum  acanthopodium )  fruit. Biodiversitas, 21(9): 4147 –4154. DOI: 10.13057/biodiv/d210928.
Utomo, S. 2016. Pengaruh Konsentrasi Pelarut (n-heksana) Terhadap Rendemen Hasil Ekstraksi Minyak Biji Alpukat untuk Pembuatan Krim Pelembab Kulit. Jurnal Konversi , 5(1): 39-47. Wakeel,  A.,  Jan,  S.A.,  Ullah,  I.,  Shinwari,  Z.K.  &  Xu,  M.  2019.  Solvent  Polarity  Mediates Phytochemical Yield and Antioxidant Capacity of Isatis tinctoria . PeerJ, 7: e7857. Yurleni,  Y.  2018.  Penggunaan  Beberapa  Metode  Ekstraksi  pada  Rimpang  Curcuma  untuk Memperoleh Komponen Aktif secara Kualitatif. Biospecies , 11(1):48-56.