## Isolasi dan Identifikasi Bakteri Penyebab Bau Kaki

## Isolation and Identification of Bacteria Causing Foot Odor
Renna  Yulia  Vernanda *a) ,  Agnes  Dwi  Ariyanti a) ,  Claudia  Oktaviana a) ,  Firman  Sandi  Gunawan a) , Yohana  Maria  Vianney  Prastica a) ,  Flora  Raliana  Mauryn a) ,  Angelica  Krisensiani  Rati a) ,  Fridolin Putri Hasfayo a) , Margareta Vita Ribeiro a)
a) Fakultas Farmasi, Universitas Katolik Widya Mandala Surabaya
Article info: Received Date : 27/01/2023 Revised Date   : 03/03/2023 Accepted Date : 13/03/2023 Abstrak Bau kaki disebabkan oleh keringat yang bercampur dengan bakteri. Bau kaki dapat menurunkan  rasa percaya diri dan membuat tidak nyaman. Pada  penelitian  ini  dilakukan  isolasi  mikroba  pada  21  probandus dengan  kriteria:  laki-laki,  berusia  18-25  tahun,  menggunakan  sepatu selama 8 jam tanpa dilepas, dan cenderung memiliki kaki yang lembab serta  berbau. Isolasi mikroba  dari kaki  dilakukan  menggunakan cotton swab .  Dari  hasil  penelitian  ditemukan  tujuh  isolat.  Beberapa  isolat bakteri, yaitu Staphylococcus sp, Bacillus sp, Enterobacter sp. Selain itu, ditemukan isolat kapang
Aspergillus
sp, Penicillium sp, Syncephalastrum sp, dan isolat khamir Candida krusei .

## Abstract
Foot odor is caused  by combination of sweat and bacteria. Smelly feet can lead to lack of confidence and discomfort. In this study, isolation of microbes  was  conducted  on  21  probands  with  the  following  criteria: male, aged 18-25 years, wore shoes for 8 hours without taking them off, having  moist  and  smelly  feet.  Isolation  of  microbes  from  the  feet  was done using a cotton swab. From the result of the study 7 isolates were found. Several bacteria isolates, namely: Staphylococcus sp, Bacillus sp, Enterobacter sp.  In  addition,  isolates  from  fungi Aspergillus sp, Penicillium sp, Syncephalastrum sp,  and Candida  krusei yeast  were isolated.
Keywords: Foot odor Bacteria Fungi Yeast Cotton swab Corresponding Authors: Renna Yulia Vernanda Fakultas  Farmasi,  Universitas  Katolik  Widya
Mandala Surabaya
Jalan  Kalisari  Selatan  1,  Surabaya,  Indonesia 60112.
Email: renna_yulia@ukwms.ac.id

## PENDAHULUAN
Kaki  merupakan  salah  satu  bagian  tubuh yang tidak jarang mengeluarkan keringat  dengan frekuensi lebih sering dan banyak karena hampir sebagian  besar  bagian  kaki  sering  tertutup  oleh kaos kaki dan sepatu. Keadaan kaki yang tertutup serta didukung suhu yang tinggi atau panas dapat menjadi  salah  satu  faktor  timbulnya  masalah pada  kaki,  salah  satunya  adalah  bau  tidak  sedap atau  bau  kaki  ( The  Society  of  Chiropodists  & Podiatrists , 2011).
Bau  kaki  dapat  timbul  akibat  keringat  yang bercampur  dengan  bakteri.  Keringat  yang dikeluarkan  seseorang  dapat  menjadi  penyebab timbulnya  bau  badan  bila  kelenjar  apokrin  yang dihasilkannya  telah  terinfeksi  oleh  bakteri  yang berperan dalam proses pembusukan. Kebanyakan bakteri cocci pada  kaki  adalah Staphylococcus epidermidis . Staphylococcus  epidermidis dapat mendegradasi  leusin  yang  dihasilkan  oleh keringat,  sehingga  terbentuk  asam  isovalerat (Kobayashi,  1990).  Asam  isovalerat  merupakan asam lemak yang dapat menyebabkan timbulnya bau pada kaki (Ara et al ., 2006).
Bakteri  lain  yang  diduga  menjadi  penyebab bau  kaki,  yaitu Bacillus  subtilis (Iswandana  dan Sihombing,  2017)  dan Pseudomonas  aeruginosa
(Primono, 2019). Berdasarkan
penelitian Steglnska et  al. (2019),  dari  hasil  isolasi mikroorganisme  dari  permukaan  kulit  kaki dengan  cara swab ditemukan  juga  fungi Aspergilus  fumigatus , Penicillium  glabrum , Aspergilus candidus, dan Aspergilus niger . Selain itu, juga ditemukan khamir Naganishia diffluens dan  khamir Wickerhamomyces  anomalus. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menemukan adanya  bakteri Staphylococcus sp, Bacillus sp, Pseudomonas sp, dan Aspergillus sp yang diduga menyebabkan  bau  pada  kaki,  serta  menemukan mikroorganisme  lainnya  yang  mungkin  dapat menyebabkan bau pada kaki.
METODE PENELITIAN 1. Alat dan Bahan Timbangan  analitis  ( Sartorius  TE  214  S, Germany),  inkubator  ( Memmert  and  Binder , Germany),  penangas  air,  lemari  pendingin ( Sanyo, Jepang), micropipette ,  oven  ( Memmert, Germany),  autoklaf  ( All  America  Model  25x , USA),  mikroskop  ( Olympus, Jerman), vortex ( Labinco ,  Belanda), Laminar  Air  Flow (LAF), kamera optilab ,  cawan  petri,  batang  pengaduk, tabung reaksi, gelas ukur, gelas kimia, kawat ose, kaca  preparat, cotton  swab ,  Erlenmeyer ,  hot plate . Nutrient  Agar ( Merck, Jerman), Nutrient Broth ( Merck, Jerman), Sabouraud  Dextrose Agar ( Merck, Jerman)  dan Sabouraud  Dextrose Broth ( Merck, Jerman), Mannitol  Salt  Agar ( Merck, Jerman), Mueller  Hinton Broth ( Merck, Jerman), Nutrient  Red  Agar ( Merck, Jerman), Indonesia), Milk  Base  Agar ( Merck, Jerman), Nutrient  Agar , Starch  Agar ( Merck, Jerman), akuades steril (PT. Brataco Chemika, Indonesia),
etanol  96%  (PT.  Brataco  Chemika,  Indonesia), eter,  dan  larutan  lactofenol,  larutan  iodium,  dan minyak  imersi,  iodine,  kristal  violet, safranin Gram  stain,  soluble  starch ( Merck, Jerman), skimmed milk (Greenfield, Indonesia).
2. Rancangan Penelitian Protokol  penelitian  ini  telah  mendapat persetujuan dari komisi etik Medical and Health Research Ethics Committee (MHREC), Faculty of Medicine , Public  Health  and  Nursing ,  Gadjah Mada University ,  RS  Dr  Sardjito  dengan  nomor KE/FK/0970/EC/2021.  Penelitian  ini  adalah penelitian deskriptif dengan pendekatan observasional  laboratorium  untuk  mengisolasi dan  mengidentifikasi  bakteri  dan  kapang  pada probandus  (manusia,  usia  18-25  tahun  dengan jenis  kelamin  laki-laki)  yang  memiliki  masalah kaki  lembab  dan  berbau  tidak  sedap  akibat pemakaian sepatu tertutup minimal  8 jam tanpa dilepas.  Kriteria  inklusi  dalam  penelitian  ini adalah  laki-laki,  berusia  18-25  tahun,  memakai sepatu tertutup dengan kaos kaki,  menggunakan sepatu minimal 8 jam tanpa dilepas, dan memiliki masalah bau kaki/keringat berlebihan pada kaki. Kriteria  eksklusi  adalah  memakai  sepatu  yang tertutup  hanya  bagian  depan,  memiliki  penyakit kulit, dan mempunyai luka pada kaki.
a. Pengamatan Makroskopis
Pengamatan  makroskopis  bakteri  (pada media Nutrient  Agar dan Manitol  Salt  Agar ) meliputi  bentuk,  warna,  ukuran,  tepi,  kenaikan permukaan,  dan  tekstur  koloni  serta  perubahan warna  pada  media  jika  ada.  Pengamatan makroskopis kapang/khamir (pada media Sabouraud  Dextrose  Agar )  meliputi  bentuk koloni, sifat permukaan koloni dan warna koloni.
1) Staphylococcus sp Pemeriksaan  makroskopis Staphylococcus sp dilakukan  dengan  menginokulasikan   1 ose bakteri pada Mannitol Salt Agar (MSA) dalam  cawan  petri,  kemudian  diinkubasi pada  suhu  37 o C  selama  24  jam  lalu  dilihat bentuk,  warna,  ukuran,  tepi,  kenaikan permukaan  dan  tekstur  koloni  pada  media MSA.
2) Bacillus sp Pemeriksaan  makroskopis Bacillus  sp dilakukan  dengan  menginokulasikan  1  ose bakteri  pada  Nutrien  Agar  (NA)  dalam cawan petri, kemudian diinkubasi pada suhu 37°C  selama  24  jam  lalu  dilihat  bentuk, warna,  ukuran,  tepi,  kenaikan  permukaan dan tekstur koloni pada media NA.
3) Pseudomonas sp Pemeriksaan makroskopis Pseudomonas sp dilakukan  dengan  menginokulasikan  1  ose bakteri  pada  media Eosin  Methylene  Blue Agar (EMBA). Selanjutnya diinkubasi pada
suhu  37°C  selama  24  jam,  kemudian dilakukan  pengamatan  makroskopis  yang meliputi bentuk, warna, kenaikan permukaan, tepi, ukuran, dan tekstur koloni yang terbentuk pada media EMBA.
4) Aspergillus sp Pemeriksaan  makroskopis Aspergillus  sp dilakukan  dengan  menginokulasikan  1  ose koloni kapang yang tumbuh pada Sabouraud  Dextrose  Agar yang berumur 4 hari,  dilakukan  pemeriksaan  makroskopis meliputi  bentuk  koloni,  sifat  permukaan koloni, dan warna koloni.
b. Pengamatan Mikroskopis
Pengamatan  mikroskopis  bakteri  meng- gunakan pengecatan Gram . Pengecatan dilakukan dengan mengambil 1 ose bakteri lalu disuspensikan  dengan  akuades  steril  pada  kaca obyek  yang  telah  dibersihkan  dengan  alkohol. Preparat  difiksasi  dengan  cara  melewatkannya pada  api beberapa  kali.  Preparat ditetesi dengan larutan  kristal  violet  modifikasi Hucker , didiamkan  selama  1  menit,  lalu  dicuci  dengan menggunakan  air  kran.  Selanjutnya  preparat ditetesi  dengan  larutan  iodium  dan  didiamkan selama  1  menit.  Lalu,  dicuci  dengan  alkohol aseton hingga alkohol aseton yang meninggalkan preparat tidak berwarna lagi. Setelah itu, preparat dibilas dengan  air  kran  dan  dikeringkan  dengan menggunakan tissue .  Preparat  ditetesi  dengan Safranin  Gram  Stain dan  didiamkan  selama  30 detik.  Preparat  dibilas  dengan  air  kran  lalu dikeringkan  menggunakan tissue dan  diamati dengan  mikroskop  pada  perbesaran  10x100. Pengamatan  mikroskopis  untuk  mengetahui bentuk sel, struktur sel, susunan sel bakteri serta ada atau tidaknya endospora melalui pengecatan Gram . Pengamatan  mikroskopis  kapang/khamir dilakukan dengan cara membersihkan kaca objek yang  disterilkan  dengan  memijarkannya  pada spiritus.  Lalu  dipijarkan  kawat  ose  siku  dan berkolong,  kemudian  diletakkan  1  tetes  larutan lactofenol di atas kaca obyek, dipindahkan koloni kapang  dengan  ose  siku  dan  ose  berkolong  ke atas tetesan lactofenol dan jangan diusap. Setelah itu,  preparat  ditutup    dengan  kaca  penutup. Pengamatan  bagian  spesifik  dilakukan  di  bawah mikroskop untuk kapang maksimum pembesaran 10 x 10 dengan mengamati sel kaki, hifa vegetatif bersekat,  vesikel,  konidiofor,  konidia,  dan sterigma.
c.  Uji Biokimia
Uji  biokimia  dilakukan  untuk  memastikan sifat  biokimia  dari  suatu  bakteri  yang  dapat membantu dalam penentuan jenis bakteri secara lebih spesifik. Untuk kapang dan khamir sebelum diuji  biokimia,  dipindahkan  terlebih  dahulu  ke SDB  lalu  diinkubasi selama  2-5  hari  pada  suhu 25 o C.  Koloni  kapang  dan  khamir  yang  tumbuh
dipindahkan ke  media  yang  digunakan  untuk  uji biokimia  dan  diinkubasi  selama  24  jam  pada suhu ruang.
Uji  katalase  dilakukan  dengan  H2O2 yang diteteskan  di  atas  kaca  obyek  yang  kemudian ditambahkan  1  ose  koloni  bakteri  yang  berasal dari  media  padat.  Adanya  pembentukan  gas oksigen diamati sebagai katalase positif.
Pengujian pembentukan H2S dan fermentasi  gula  dari  bakteri  dilakukan  dengan menggunakan  media  KIA.  Kultur  murni  yang telah  didapat  diinokulasikan  pada  media  KIA dengan cara penggoresan dan dilanjutkan dengan penusukan.  Selanjutnya  sampel diinkubasi  pada suhu 37°C selama 24 jam.
Uji  koagulase  dilakukan  untuk  membeda- kan Staphylococcus yang  bersifat  patogen dengan  yang  non-patogen.  Satu  ose  koloni bakteri Staphylococcus sp. diinokulasikan di atas kaca preparat yang telah ditetesi NaCl 0,9%, lalu ditambahkan 1-2 ose plasma sitrat dan  dicampur. Hasil  koagulase  positif  apabila  terjadi  peng- gumpalan dalam waktu kurang dari 1 menit.
Hidrolisa  amilum  dilakukan  dengan menggunakan  media starch agar  dalam  cawan petri yang telah diberi tanda pembagian menjadi 2  sektor.  Lempengan starch agar  pada masing- masing sektor diinokulasikan dengan 1 ose kultur murni  cair,  serta  disediakan  pula  blanko  negatif sebagai  pembanding.  Cawan  petri  kemudian diinkubasi pada suhu 37°C selama 24 jam. Setelah inkubasi, pertumbuhan koloni selanjutnya diberi larutan  iodine sebanyak  6  ml  lalu  diperhatikan warna  yang  dihasilkan  di  sekitar  koloni.  Koloni yang  menghasilkan enzim  amilase  menghasilkan warna  merah  kecoklatan  atau  jernih  di  sekitar koloni.
Uji  hidrolisa  kasein  dilakukan  dengan menggunakan media susu skim agar pada cawan petri. Setiap dasar lempengan cawan petri dibagi menjadi  2  sektor,  di  mana  setiap  sektor diinokulasikan  1  ose  kultur  murni  cair  dan blanko  negatif.  Sampel  kemudian  diinkubasi pada  suhu  37°C  selam  24  jam.  Pengamatan dilakukan  dengan  mengamati  adanya  daerah “transparan” di sekitar koloni yang berarti bakteri tersebut  menghasilkan  enzim  penghidrolisa kasein. Koloni yang menghasilkan enzim casease akan  menghasilkan  daerah  transparan  di  sekitar koloni.
Pengujian hidrolisa gelatin dilakukan pada media gelatin agar dalam cawan petri yang telah dibagi  menjadi  2  sektor.  Kultur  cair  murni digoreskan  pada  permukaan  media,  disediakan pula  blanko  negatif.  Cawan  petri  kemudian diinkubasi  pada  suhu  37°C  selama  24  jam. Pengamatan  dilakukan  dengan  mengamati endapan  putih  yang  terjadi  pada  koloni  setelah dituangi  larutan  HgCl2  12.5%  dalam  HCl sebanyak 6 ml. Koloni yang menghasilkan enzim gelatinase akan menghasilkan daerah transparan di sekitar koloni setelah penuangan HgCl2 12,5%.
Hidrolisa  lemak  yang  akan  dilakukan menggunakan  media  neutral  red  agar  yang ditambahkan  dengan  margarine  steril  dan  telah dituangkan dalam cawan petri. Selanjutnya 1 ose kultur  murni  cair  digoreskan  pada  media  dan diinkubasi  pada  suhu  kamar  selama  24  jam. Pengamatan  dilakukan  dengan  dibandingkan terhadap blanko negatif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  isolasi  bakteri,  kapang,  dan  khamir dari kaki dapat dilihat pada Tabel 1 dan Tabel 2. Hasil  isolat  yang  didapat  pada  kaki  dalam penelitian ini adalah Staphylococcus sp, Bacillus sp, Enterobacter sp, Aspergillus sp, Penicillium sp, Syncephalastrum sp,  dan Candida  krusei (Tabel 3). Pada penelitian ini diperoleh data dari 21  probandus  yang  memenuhi  kriteria  inklusi. Data  yang  digunakan  adalah  hasil  isolasi  yang homogen  kemudian  diidentifikasi  lebih  lanjut (Tabel  4-7,  Gambar  1-7).  Terdapat  tiga  macam isolat  bakteri  yang  homogen  dalam  penelitian ini.  Isolat Staphylococcus sp  terdapat  pada probandus  dengan  nomor  2g,  Isolat Bacillus sp pada  probandus  dengan  nomor  2h,  dan  isolat Enterobacter sp pada probandus 2k. Sedangkan, untuk  kapang  dan  khamir  didapatkan  beberapa isolat,  yaitu: Aspergillus sp, Penicillium sp, Syncephalastrum sp, dan Candida krusei . Berdasarkan  penelitian  Steglinska et  al. (2019),  mikroorganisme  yang  terdapat  pada permukaan  kulit  kaki  dalam  persentase  besar adalah  bakteri Staphylococcus  haemolyticus (90%), Staphylococcus  hominis (52,5%),  dan Micrococcus  liteus (22,5%).  Pada  penelitian  ini tidak ditemukan
bakteri
Pseudomonas aeruginosa padahal bakteri ini diduga merupakan salah satu bakteri penyebab bau kaki. Menurut  Tang et  al .  (1996),  beberapa  spesies Pseudomonas yang  diketahui  menyebabkan penyakit  pada  manusia  berhubungan  dengan infeksi  oportunistik. Pseudomonas  aeruginosa merupakan  salah  satu  contoh  dari  bakteri  Gram negatif  aerob.  Bakteri  ini dapat  ditemui  di  kaki pasien  penderita  ulkus  diabetikum  karena  pada pasien  tersebut  memiliki  luka  yang  terbuka sehingga  dapat  menjadi  tempat  masuknya bakteri Pseudomonas aeruginosa yang kemudian dapat  menyebar  secara  cepat  dan  dapat menyebabkan kerusakan berat pada jaringan.
Data  pada  penelitian  ini  juga  sudah diiden-tifikasi  lebih  lanjut  di  Balai  Besar Laboratorium  Kesehatan  (BBLK),  Surabaya (Tabel  8). Staphylococcus  epidermidis me- megang peranan 86,5% dalam menyebabkan bau kaki. Bakteri Staphylococcus sp merupakan salah satu  isolat  homogen  yang  ditemukan  pada probandus.
Menurut  Ara et  al .  (2006),  isolat  bakteri Bacillus sp juga ditemukan dalam  penelitian  ini. Bacillus sp  diketahui  juga  memiliki  peranan penting  sebagai  bakteri  penyebab  bau  kaki sekitar  11,5%.  Sebenarnya Bacillus sp  juga
merupakan  salah  satu  spesies  flora  normal  yang banyak  ditemukan  pada  kulit.  Bacillus  memiliki enzim leucine  dehydrogenase paling  tinggi, sehingga  bakteri  ini  mampu  menimbulkan  bau kaki  yang  paling  menyengat  (Ara et  al .,  2006). Bakteri Enterobacter sp  juga  ditemukan  pada kaki  salah  satu  probandus  dalam  penelitian  ini. Hal ini sesuai dengan penelitian sebelumnya oleh Rafiq et  al .  (2020)  yang  melakukan  isolasi mikroba  pada  kaus  kaki  anak  sekolah  dan ditemukan  bakteri Gram negatif  bentuk  batang, salah satunya adalah Enterobacter aerogenes . Aspergillus sp  ditemukan  pada  kaki  tiga probandus  yang  ada  dalam  penelitian  ini. Aspergillus sp  merupakan  fungi  golongan non dermatophyta
(Khusnul, Kurniawati dan Hidana,  2018).  Fungi  ini  juga  sebagai  indikasi adanya  kontaminasi  pada  kulit,  rambut,  dan kuku  yang  licin  (Bassiri-Jahromi and Khaksar, 2010). Aspergillus sp  juga  dapat  menginfeksi kuku  sehingga  kuku  akan  tampak  bercak-bercak putih keruh (Natalia, Pratiwi dan Faklhun, 2016). Menurut  Steglinska et  al. (2019),  spesies Aspergillus sp  yang  banyak  ditemukan  saat isolasi  dari  permukaan  kaki  dengan  cara swab adalah Aspergillus  candidus (12,5%)  dan Aspergillus niger (12,5%).
Kapang  lain  yang  ditemukan  pada probandus dalam penelitian ini adalah Penicillium sp. Menurut Rafiq et al . (2020), Fungi yang  ditemukan  pada  saat  isolasi  mikroba  pada kaus  kaki  anak  sekolah  adalah Penicillium spp sehingga  dapat  dikatakan  bahwa Penicillium merupakan  salah  satu  kapang  yang  ditemukan pada permukaan kulit kaki. Hal ini diperkuat juga oleh  penelitian  lain  yang  dilakukan  oleh Steglinska et al. (2019), hasil isolasi mikroorganisme  dari  permukaan  kulit  kaki dengan  cara swab yang  ditemukan  dalam persentase  cukup  besar  adalah Penicillium glabrum (17,5%).  Juga  ditemukan  spesies Penicillium lain  meskipun  dalam  jumlah  yang sedikit  yaitu P.  citrinum,  P.  corylophilum,  P. funiculosum, P. Sclerotiorum . Isolat  kapang Syncephalastrum sp  juga banyak  ditemukan  pada  kaki  probandus  dalam penelitian  ini.  Pada  penelitian  sebelumnya tentang  isolasi  mikroorganisme  pada  kaki  jarang ditemukan  atau  bahkan  belum  ada  yang menemukan  adanya  kapang  ini.  Menurut penelitian Rakhmawati (2009), Syncephalastrum sp      merupakan      salah      satu  kapang  yang ditemukan  pada  hasil  isolasi  kacang  tanah ( Arachis  hypogaea L.)  yang  dijual  di  Pasar Beringharjo Yogyakarta. Selain itu juga ditemukan  pada  penelitian  tentang  kapang endofit  pada  tanaman  Galam  ( Malaleuca cajuputi )  terhadap Collletotrichum  truncatum . Isolat Syncephalastrum sp  mampu  mengeluar- kan  senyawa  metabolit volatil sehingga  merupa- kan  kapang  antagonis  yang  telah  teruji  efektif untuk  mengendalikan  penyakit  antraknosa  pada
berbagai  tanaman  (Huda,  Imaningsih,  dan Hakim, 2019).
Pada penelitian ini juga ditemukan khamir. Satu-satunya  khamir  yang  homogen  yang  dapat diisolasi  adalah Candida  krusei .  Menurut  Tierno (2001), khamir yang dapat menyebabkan bau kaki adalah Candida  albicans .  Keduanya  merupakan anggota  dari  genus Candida spp.  Menurut Mlinaric-Missoni et  al .  (2005), Candida spp merupakan  khamir  yang  paling  banyak  diisolasi pada  kaki  penderita  diabetes  yang  luka  (5-21%). Tetapi  pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh Samaranayake, Yuthika dan Samaranayake (1994) ditunjukkan  bahwa Candida  krusei berbeda dengan  spesies  lainnya  yang  merupakan  genus Candida spp. Candida  krusei merupakan organisme  yang  hidupnya  sementara  dan ditemukan pada permukaan mukosa.

## KESIMPULAN
Pada  penelitian  ini  ditemukan  isolat Staphylococcus sp, Bacillus sp, dan Aspergillus sp yang  merupakan  penyebab  utama  bau  kaki. Bakteri Enterobacter sp,  kapang Penicillium sp, kapang Syncephalastrum sp, dan khamir Candida krusei juga  ditemukan  saat  isolasi  mikro- organisme pada kaki dalam penelitian ini.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  terima  kasih kepada  PPOT Research  Project Pusat  Penelitian Obat  Tradisional  Lembaga  Penelitian  dan Pengabdian  Masyarakat  Universitas  Katolik Widya Mandala Surabaya.

## DAFTAR PUSTAKA
Ara, K., Hama, M., Akiba, S., Koike, K., Okisaka, K., Hagura, T., Kamiya  T.,  Tomita,  F.,  2006,  Foot  odor  due  to  microbial metabolism  and  its  control, Canadian  Journal  of Microbiology, 52:357-364.
Bassiri-Jahromi, S. dan Khaksar, A.A., 2010m
Nondermatophytic  moulds  as  a  causative  agent  of onychomycosis  in  Tehran, Indian  Journal  of  Dermatology 55(2): 140-143.
Huda,  N.,  Imaningsih,  W.,  dan  Hakim,  S.S.,  2019,  Uji antagonisme  kapang  endofit  tanaman  galam  ( Melaleuca cajuputi )  terhadap Colletotrichum  truncatum , Jurnal Mikologi Indonesia, 3(2): 59-74.
Iswandana,  R.  dan  Sihombing,  L.K.M.,  2017,  Formulasi  uji stabilitas  fisik,  dan  uji  aktivitas  secara in  vitro sediaan  spray antibau  kaki  yang  mengandung  ekstrak  etanol  daun  sirih ( Piper  betle L.), Pharmaceutical  Sciences  and  Research, 4:3, DOI: 10.7454/psr.v4i3.3805.
Khusnul, Indri, K. dan Rudy, H., 2018, Isolasi dan identifikasi jamur  dermatophyta  pada  sela-sela  jari  kaki  petugas kebersihan  di  Tasikmalaya, Jurnal  Kesehatan  Bakti  Tunas Husada, 18(1): 45-50.
Kobayashi,  S.,  1990,  Relationship  between  an  offensive  smell given  off  from  human foot  and Staphylococcus  epidermidis , Nihon Saikingaku Zasshi, 45 (4): 797-800.
Mlinaric-Missoni,  E.,  Kalenic,  S.,  Vukelic,  M.,  de  Syo,  D., Belicza,  M.  dan  Vazic-Babic,  V.,  2005,  Candida  infections  of diabetic ulcers, Diabetalogia Croatica, 34:1.
Natalia, D., Pratiwi, S.E. dan Faklhun, S., 2016, Prevalensi dan identifikasi  jamur  penyebab  tinea  pedis  pada  satuan  polisi pamong  praja  Pontianak, Jurnal  Kedokteran  Diponegoro, 5(4): 35-50.
Primono,  S.H.,  2019,  Pemanfaatan  ekstrak  ampas  kopi  dan daun  gugur  ketapang  sebagai foot-spray anti  bau  kaki, https://osf.io/jgfme, diakses pada tanggal 21 Februari 2021.
Rafiq,  S.,  Yasmin,  M.R.S.,  Raja,  F.  and  Shahina,  S.J.,  2020, Microbiological  analysis  of  bacteria  and  fungi  from  socks  of school  children  and  antibacterial  activity  of  herbal  foot disinfectant  spray, International  Journal  of  Scientific  and Technology Research , 9(1): 4028-4031.
Rakhmawati,  A.,  2009,  Isolasi  dan  identifikasi  kapang kontaminan  pada  kacang  tanah  ( Arachis  hypogaea L.)  yang dijual  di  pasar  Beringharjo  Yogyakarta, Berkala  Penelitian Hayati Edisi Khusus , 3C: 9-14.
Samaranayake,  Y.  dan  Samarayanake,  L.P.,  1994, Candida krusei: biology,  epidemiology,  pathogenicity,  and  clinical manifestations  of  an  emerging  pathogen, Journal  of  Medical Microbiology, 41(5):295-310.
Steglińska, A., Jachowicz, A., Szulc, J., Adamiak, J., Otlewska, A.,  Pielech-Przybylska,  K.  dan  Gutarowska,  B.,  2019,  Factors influencing  microbiological  biodiversity  of  human  foot  skin, International  Journal  of  Environmental  Research  and Public Health, 16(18):3503.
Tang,  H.B.,  DiMango,  E.,  Bryan,  R.,  Gambello,  M.,  Iglewski, B.H., Goldberg, J.B., Prince, A., 1996, Contribution of specific Pseudomonas aeruginosa virulence factors to pathogenesis of pneumonia  in  a neonatal  mouse model  of infection, Infection and Immunity , 64(1):37-43.
The  Society  of  Chiropodists  &  Podiatrists,  2023, https://www.informationnow.org.uk/organisation/the-society -of-chiropodists-and-podiatrists/, diakses November 2022.
Tierno,  P.M.,  2001, The  Secret  Life  of  Germs:  Observations and Lessons from a Microbe Hunter, Pocket Books, New York.
Tabel 1. Hasil isolasi bakteri dari kaki No Kode Macam Koloni NA MSA MHA CA EMBA Identifikasi 1 1 1a a Coccus (-) Coccus (+) Tidak tumbuh - 1a b Heterogen - 1a c Heterogen - 2 1b a Heterogen - 1b b Heterogen - 3 1c a Heterogen - 1c b Heterogen - 4 1d a Heterogen - 1d b Heterogen - 1d c Heterogen - 5 1e a Heterogen - 1e b Heterogen - 1e c Heterogen - 6 1f a Heterogen - 1f b Coccus (-) Coccus (+) Tidak tumbuh - 7 1g a Heterogen - 1g b Heterogen - 8 1h a Heterogen - 1h b Coccus (-) Coccus (+) Tumbuh Heterogen - 1h c Heterogen - 1h d Heterogen - 9 1i a Coccus (-) Coccus (+) Tumbuh Heterogen Tumbuh Heterogen - 1i b Heterogen - 1i c Heterogen - 10 1j a Heterogen - 1j b Heterogen - 1j c Coccus (+) Coccus (-) Tumbuh Heterogen - 11 2a a Heterogen - 2a b Bacil (+) Basil (-) Tumbuh Heterogen Tidak tumbuh - 2a c Heterogen - 12 2b a Basil (+) Basil (-) Tidak tumbuh Tidak tumbuh - 2b b Heterogen - 2b c Heterogen - 2b d Heterogen - 2b e Coccus (-) Coccus (+) Tumbuh Heterogen Tidak tumbuh - 13 2c a Basil (+) Basil (-) Tumbuh Heterogen - 2c b Heterogen - 14 2d a Heterogen - 2d b Heterogen - 2d c Heterogen - 2d d Heterogen - 2d e Heterogen - 15 2e a Heterogen - 2e b Heterogen - 16 2f a Heterogen - 2f b Heterogen - 17 2g a Coccus (+) Homogen Tumbuh Homogen Staphylococcus sp 2g b Heterogen -

## Tabel 1. Hasil isolasi bakteri dari kaki (Lanjutan)
No Kode Macam Koloni NA MSA MHA CA EMBA Identifikasi 18 2h a Basil (+) Homogen Tumbuh Homogen Bacillus sp b Heterogen - 19 21 a Heterogen - b Heterogen - 20 2j a Heterogen - b Heterogen - 21 2k a Coccus (-) Coccus (+) Tidak tumbuh X b Basil (-) Homogen Tumbuh Homogen Tidak Tumbuh Tumbuh Homogen Enterobacter sp Keterangan: (+) = bakteri Gram positif (-) = bakteri Gram negatif
Tabel 2. Isolasi kapang dan khamir pada kaki No Macam Koloni SDA Kapang/ Khamir Homogen/ Heterogen Ket Identifikasi 1 1a Tidak tumbuh - 2 1b 1 Kapang Homogen Puyer, hitam, Filamen Aspergillus sp 1b 2 Heterogen - 3 1c 1 Kapang Homogen Ragi, beludru, putih kehijauan Penicillium sp 1c 2 Kapang Homogen Puyer, hitam, Filamen Aspergillus sp 1c 3 Kapang Homogen Kapas, Filamen, abu2 Syncephalastrum sp 4 1d Tidak tumbuh - 5 1e Tidak tumbuh - 6 1f 1 Heterogen - 2 Kapang Homogen Puyer, hitam, Filamen Aspergillus sp 7 1g Tidak tumbuh - 8 1h 1 Kapang Homogen Kapas, filamen, abu- abu Syncephalastrum sp 2 Khamir Heterogen - 9 1i Tidak tumbuh - 10 1j Tidak tumbuh - 11 2a 1 Khamir Homogen Putih Candida krusei 2 Khamir Homogen Putih Candida krusei 12 2b 1 Kapang Heterogen - 13 2c 1 Kapang Homogen Filamen, kapas, abu Syncephalastrum sp 2 Heterogen - 3 Heterogen - 14 2d 1 Kapang Heterogen - 2 Kapang Heterogen -

## Tabel 2. Isolasi kapang dan khamir pada kaki (lanjutan)
No Macam Koloni SDA Kapang/ Khamir Homogen/ Heterogen Ket Identifikasi 15 2e Tidak tumbuh - 16 2f 1 Khamir Homogen Putih Candida krusei 2 Khamir Homogen Putih Candida krusei 17 2g 1 Kapang Heterogen - 18 2h Tidak tumbuh - 19 2i Tidak tumbuh - 20 2j Tidak tumbuh - 21 2k 1 Kapang Homogen Ragi, beludru, putih kehijauan Penicillium sp 2 Kapang Homogen Ragi, Beludru, putih kehijauan Penicillium sp Tabel 3. Hasil isolasi mikroba pada kaki No Isolat Spesies 1 Bakteri Staphylococcus sp 2 Bakteri Bacillus sp 3 Bakteri Enterobacter sp 4 Kapang Aspergillus sp 5 Kapang Penicellium sp 6 Kapang Syncephalastrum sp 7 Khamir Candida krusei
Gambar 1. a) Makroskopis isolat Staphylococcus sp pada media Manitol Salt Agar (MSA).b) Mikroskopis isolat Staphylococcus sp dengan pengecatan Gram pada perbesaran 10 x 100.
Gambar 2. a) Makroskopis Isolat Bacillus sp pada media Nutrien Agar (NA). b) Mikroskopis isolat Bacillus sp dengan pengecatan Gram pada perbesaran 10 x 100. c) Mikroskopis solat Bacillus sp. dengan pengecatan endospora pada perbesaran 10 x 100.
a b b a c Endospora

## Tabel 4. Hasil pengamatan makroskopis dan mikroskopis bakteri
Pengamatan Staphylococcus sp Bacillus sp Enterobacter sp Makroskopis Warna koloni Kuning Putih pucat Merah muda Bentuk koloni Titik Bulat Bulat Kenaikan permukaan Sedikit cembung Datar Cembung Tepi koloni Utuh Bergerigi utuh Tekstur koloni Opaque , halus dan mengkilat Opaque , kasar, dan kering Halus, mukoid, opaque Ukuran koloni < 1 mm 1-2 mm 0,4 x 5,0µm Mikroskopis Bentuk sel Bulat Batang Batang Susunan sel bakteri Bergerombol Tunggal Tunggal, berpasangan, dan memiliki rantai pendek Reaksi pada pengecatan Gram Ungu Ungu Merah Reaksi pada pengecatan endospora
Adanya endospora berwarna hijau dan berbentuk elips di bagian tengah sel
Gambar 3. a) Makroskopis isolat Enterobacter sp pada media EMBA. b) Mikroskopis isolat Enterobacter sp. dengan pengecatan Gram pada perbesaran 10 x 100.
Tabel 5. Hasil pengamatan makroskopis dan mikroskopis kapang dan khamir
Pengamatan Aspergillus sp Penicillium sp Syncephalastrum sp Candida crusei Makroskopis Tipe Koloni Filamentous colony Filamento us colony Filamentous colony Bulat Sifat Permukaan Puyer Beludru ( Valvety ) Kapas Licin Warna Hitam Hijau abu- abu, tepi berwarna putih Abu-abu Putih Mikroskopis Vesikel Bulat
Sporangium membentuk cabang- cabang lateral yang membengkok Berbentuk oval Konidiofor Panjang Monoverti- cillata Konidia Bulat, berwarna coklat Bulat
a b
Gambar 4. a) Makrokopis isolat Aspergillus sp pada media SDA. b) dan c) Mikroskopis isolat Aspergillus sp pada perbesaran 10x100.
Gambar 5. a) Makroskopis isolat Penicillium sp pada media SDA. b) Mikroskopis isolat Penicillium sp pada perbesaran 10x100.
Gambar 6. a) Makroskopis isolat Syncephalastrum sp pada media SDA. b) Mikroskopis isolat Syncephalastrum sp pada perbesaran 10x40. c) pada perbesaran 10x100.
a b c a b a b c Konidia Konidiofor Foot cell Konidia Sporangium
Gambar 7. a) Makroskopis isolat Candida crusei pada media SDA. b) Mikroskopis isolat Candida crusei pada perbesaran 10x100.
Tabel 6. Hasil uji biokimia bakteri
Keterangan: (-)= tidak dilakukan uji
Tabel 7. Hasil uji biokimia kapang dan khamir
Keterangan: (-)= tidak dilakukan uji
Tabel 8. Hasil identifikasi Isolat pada BBLK Surabaya
Nomor Lab Dugaan Identifikasi Awal Hasil Uji Lab Keterangan L21013304/516 PM Staphylococcus sp Staphylococcus sp Sesuai L21013304/515 PM Bacillus sp Bacillus sp Sesuai L21013304/517 PM Pseudomonas sp Enterobacter sp Tidak sesuai L21013304/511 PM Rhizopus sp Syncephalastrum sp Tidak sesuai L21013304/513 PM Aspergillus sp Aspergillus sp Sesuai L21013304/512 PM Penicillium sp Penicillium sp Sesuai L21013304/514 PM Saccharomyces sp Candida krusei Tidak sesuai No. Uji Biokimia Staphylococcus sp Bacillus sp Enterobacter sp 1 Katalase Positif Positif Positif 2 Koagulase Negatif - - 3 Hidrolisa kasein Negatif Positif Positif 4 Hidrolisa amilum Negatif Positif Positif 5 Hidrolisa gelatin Negatif Positif Positif 6 Hidrolisa lemak Positif - Positif 7 Pembentukan H 2 S - - Negatif 8 Pembentukan gas - - Positif No Uji Biokimia Aspergillus sp Penicillium sp Syncephalastrum sp Candida crusei 1 Hidrolisa kasein Negatif - Positif Negatif 2 Hidrolisa amilum Negatif Positif Positif Negatif 3 Hidrolisa gelatin Positif Positif Negatif Negatif 4 Hidrolisa lemak Positif - Positif Negatif
a
b