TheJournalish: Social and Government http://thejournalish.com/ojs/index.php/thejournalish/index
Vol. 4 No. 5 (2023): Social and Government DOI: https://doi.org/10.55314/tsg.v4i5.605 Hal. 138-153

## Pertumbuhan Dan Kandungan Lipid Mikroalga Yang Dikultur
Menggunakan Pupuk Walne Dan Ekstraksi Menggunakan Metode

## Microwave Assisted Extraction Sebagai Bahan Baku Biofuel Yang

## Berkelanjutan
Sarifah 1 , Wa Iba 2 , Ahmad Zaeni 3
1 Prodi Bioteknologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Halu Oleo
2 Prodi Budidaya Perairan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Halu Oleo
3 Prodi Kimia Fakultas Matematika da Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Halu Oleo Correspondence Email: wa.iba@uho.ac.id
Abstrak: Mikroalga adalah salah satu bahan baku bio-fuel generasi ketiga yang potensi untuk dikembangkan di Indonesia.  Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pertumbuhan dan kandungan lipid mikroalga yang dikultur menggunakan pupuk Walne dan diekstraksi menggunakan metode microve assisted extraction. Kultur mikroalga terdiri dari 3 perlakuan yaitu mikroalga jenis Chlorella vulgaris, Nannochloropsis sp. dan Tetraselmis chuii dalam media  Walne  dengan  3  kali  ulangan.  Kepadatan  sel  awal  kultur  mikroalga  adalah  10  x  104  sel.mL¯¹.    Kultur dilakukan  selama  8  hari  dengan  menghitung  kepadatan  setiap  2  hari  sekali  menggunakan  improved  neubeur haemocytometer. Salinitas media kultur adalah 32 psu dengan intensitas cahaya 19.03 µmol m−2 s−1, pH 8 dan 12:12  fotoperiod.    Pemamanen  dilakukan  dengan  menambahkan  etanol  10  mL  ke  dalam  kultur  mikroalga kemudian dikeringkan selama 1 hari, selanjutnya ditimbang beratnya dan dilakukan analisis lipid menggunakan microwave dengan daya 450 watt. Pertumbuhan dari ketiga jenis mikroalga yang tertinggi pada Nannochloropsis sp. sebesar 165,1 x 104 sel.mL¯¹, sedangkan pertumbuhan sel terendah pada C. vulgaris 31,01 x 104 sel.mL¯¹. Kandungan lipid mikroalga yang tertinggi terdapat pada T. chuii sebesar 37,44 %, sedangkan kadar lipid terendah terdapat  pada  C.  vulgaris  sebesar  23,07%.  Penelitian  ini  menunjukkan  bahwa  ekstraksi  mikroalga  hijau menggunakan microwave dengan daya rendah mampu menghasilkan lipid yang cukup tinggi.
Kata kunci: C. vulgaris, Nannochloropsis sp., T. chuii, Media Walne, Pertumbuhan, Kandungan Lipid.
Abstract: Microalgae is a third generation feed stock for bio fuel production.  This study aims to determine the growth and lipid content of microalgae cultured in Walne media and extracted using microve. Three species of green  microalgae  include  Chlorella  vulgaris,  Nannochloropsis  sp.  and  Tetraselmis  chuii  was  cultured  in triplicates.  The  initial  cell  was  10  x 104  sel.mL¯¹.  The  culture  was  carried  out  for  8  days  and  increasing  cell density was observed every other days using an improved Neubeur hemocytometer. The salinity of the culture was 32 psu with a light intensity of 19.03 µmol m− 2 s − 1, pH 8 and 12:12 photoperiod. The culture was harvested by  adding  10  mL  of  ethanol  into  the  culture  vessel,  washed  with  freshwater  and  then  air  dried  for  a  day. Microalgae then weighed and lipid analysis was performed using microwave at 450 watt. The highest growth was observed in Nannochloropsis sp. at 165.1x104 cells.mL¯¹, whereas the lowest cell growth was found in C. vulgaris at 31.01x104 cell.mL¯¹. The highest lipid content was found in T. chuii at 37.44%, whereas the lowest was in C.
vulgaris  at  23.07%.  This  study  showed  that  considerably  high  lipid  yield  can  be  obtained  using  low  energy microwave.
Keywords: C. vulgaris, Nannochloropsis sp., T. chuii, Walne Media, Growth, Lipid Content.
Article History : Received; 14-09-2023; Revised; 07-10-2023; Accepted; 04-11-2023

## PENDAHULUAN
Mikroalga  adalah  alga  berukuran  mikro  yang  bisa  dijumpai  di  air  tawar  maupun  air laut,  mikroalga  juga  disebut  sebagai  spesies  uniseluler  yang  dapat  hidup  soliter  maupun berkoloni. Mikroalga adalah bahan baku generasi ketiga untuk produksi biofuel.  Hal ini karena organisme  ini  dapat  menghasilkan  minyak  dalam  kisaran  antara  1.500–7.700 liter/hektar/panen,  sedangkan  umur  panen  untuk  satu  siklus  panen  antara  5–7  hari  (Basmal, 2008). Mikroalga mempunyai kandungan minyak yang cukup tinggi yaitu mencapai 70% dari berat  kering,  tidak  membutuhkan  tanah  subur,  tidak  berkompetisi  dengan  pangan  sehingga dapat dimanfaatkan sebagai senyawa bioaktif seperti dalam bidang pangan, kesehatan, industri dan  energi  terbarukan  yang  lebih  berkelanjutan  seperti  sebagai  bahan  baku  biodiesel, bioethanol, biomethane dan biohydrogen (Barqi, 2014).
Berbagai  jenis  mikroalga  telah  diidentifikasi  mempunyai  kandungan  lipid  dan mikroalga tersebut diantaranya adalah C. vulgaris, Nonnochloropsis sp. dan T. chui (Assadad dkk, 2010). Kandungan lipid pada mikroalga C. vulgaris sebesar 28-75%, Nonnochloropsis sp. sebesar  3168%  dan  T.    chui  sebesar  15-23%  (Pratama,  2011).      C.  vulgaris  merupakan mikroalga  yang  sering  dibudiyakan  untuk  energi  alternatif  (Amini  &  Susilowati,  2010). Nannochloropsis  sp.  merupakan  mikroalga  yang  mampu  menghasilkan  lipid  hingga  ±68% (berat kering) serta toleran dengan kondisi lingkungan. Kadar lipid yang besar tersebut dapat digunakan  untuk  keperluan  biofuel  (Widayat  &  Hadiyanto,  2016).  T.  chui  merupakan mikroalga dari golongan alga hijau yang mempunyai prospek sebagai sumber energi (meliputi gas aviasi, biodiesel, gasoline, dan bioetanol) (Maligan dkk., 2016).
Lipid  yang  terdapat  pada  mikroalga  diperkirakan  dapat  mencapai  200  kali dibandingkan dengan tumbuhan besar penghasil minyak, seperti kelapa sawit dan jarak pagar. Lipid yang terdapat dalam sel mikroalga dapat dikelompokan menjadi dua yaitu lemak netral glikolipid  (tersimpan  dalam  membran)  dan  lemak  polar  (tersimpan  dalam  bentuk  plasma). Lemak-lemak netral inilah yang dapat digunakan sebagai bahan baku pembuatan biofuel dan biodiesel  (Pratama,  2011).  C.  vulgaris,  Nonnochloropsis  sp.  dan  T.  chui  mengandung  asam lemak terutama asam palmitat yang tinggi berkisar antara 20-37 % (Jay et al., 2018; Chen et al., 2011; Schulze et al., 2016) sehingga memiliki potensi sebagai bahan yang dapat dipakai sebagai pengganti minyak fosil (Purwanti, 2015).
Pupuk Walne merupakan pupuk yang biasa digunakan sebagai media kultur mikroalga hijau  seperti  Spirulina  sp.  (Amanatin  &  Nurhidayati,  2013),  Chlorella  sp.  (Chilmawati  & Suminto,  2008),  Nannochloropsis  sp.  (Yanuaris dkk.,  2019)  dan  T.  chui  (Putra  dkk.,  2015).
Media  Walne  dapat  digunakan  sebagai  medium  berbasis  pupuk  komersial  untuk  kultur Nannochloropsis sp. yang mampu menghasilkan berat biomassa kering tertinggi yaitu sebesar 6,78  gram  (Sari  dkk.,  2012).  Menurut  Wijoseno  (2011),  dalam  penelitiannya  menyatakan bahwa mikroalga yang dikultivasi pada medium Walne memiliki kadar lipid tertinggi sebesar (42.58 %).
Proses  ekstraksi  lipid  dari  mikroalga  sebagai  suatu  produk  dapat  dilakukan  dengan menggunakan metode konvensional dan modern. Metode ekstraksi secara konvensional pada umumnya menggunakan pelarut organik yang memiliki dampak negatif seperti adanya residu yang beracun, perubahan kimia senyawa ekstrak dan limbah yang sulit terdegradasi (Sasongko et al., 2018). Ekstraksi secara konvensional menggunakan katalis basa homogen seperti KOH, NaOH,  CH3OK  dan  CH3ONa  (Hidayati  dkk,  2017).  Metode  ekstraksi  modern  merupakan ekstraksi  yang  menggunakan  alat-alat  seperti  ultrasonik  (EAE),  gelombang  mikro  (MAE), ekstraksi fluida superkritis (SFE) dan ekstraksi fluida bertekanan (Sulaswatty, 2019). Radiasi gelombang  mikro  (MAE)  telah  diketahui  mampu  mempercepat  proses  transesterfikasi sehingga  mengurangi  waktu  ekstraksi  (Faisal  dkk.,  2015).  MAE  juga  mampu  menghasilkan ekstrak  mikroalga  dalam  bentuk  lipid,  protein,  karbohidrat  dan  pigmen  yang  lebih  murni (Kapoore et al., 2018).
Beberapa penelitian tentang ekstraksi lipid mikroalga dengan menggunakan MAE telah dilakukan oleh Bintari dkk (2018), yang mengekstraksi lipid dari mikroalga S. platensis yang dikultur dalam media Walne dengan daya radiasi gelombang mikro dari 80 sampai 560 watt dengan meningkatnya rendemen lipid hingga 1,27%. Mikroalga T. chui yang diekstrak pada radiasi  yang  sama  menghasilkan  rendemen  lipid  sebesar  0.67%.  Sedangkan  Barqi  (2014), menyatakan  bahwa  ekstraksi  mikroalga  Chlorella  sp.  yang  dilakukan  dengan  daya  300  watt menghasilkan rendemen lipid sebesar 0.424%, sedangkan pada daya 450 watt sebesar 0.482%. Berbeda  halnya  dengan  penelitian  Nurmitasari  dan  Reza  (2017),  menyatakan  bahwa  lipid minyak tertinggi dari Chlorella sp. sebanyak 88.45% dihasilkan pada daya 300 watt, kemudian diikuti dengan yield 80.4% pada daya 450 watt, dan 74.4% pada daya 600 watt.
Walaupun  daya  microwave  yang  lebih  tinggi  (>1000  watt)  dan  suhu  tinggi  (>65°C) mampu menghasilkan lipid yang lebih tinggi (Kapoore et al., 2018) namun berbagai penelitian di  atas  menunjukkan  bahwa  daya  microwave  450  watt  cukup  efektif  dalam  menghasilkan ekstrak lipid yang tinggi untuk mikroalga hijau. Daya dan suhu yang rendah akan menghemat listrik dalam proses ekstraksi lipid untuk bahan baku bio-fuel terutama untuk negara-negara berkembang seperti Indonesia. Oleh karena itu, dalam penelitian ini ekstraksi lipid tiga jenis mikroalga hijau (C. vulgaris, Nannochlopsis sp. dan T. chui) yang dikultur dalam media Walne dilakukan dengan daya 450 watt untuk mengetahui efektivitasnya.

## METODE PENELITIAN
Media kultur yang digunakan adalah media Walne dalam air laut steril dengan kisaran salinitas 32 psu  dan suhu  25℃. Sel  yang diperbanyak berasal  dari stok  biakan murni dari Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Halu Oleo. Kultivasi dilakukan di dalam
ruang kultur menggunakan wadah botol plastik volume 1,5 L dengan volume kultur 1000 mL dengan tiga kali ulangan untuk setiap jenis mikroalga. Kepadatan awal kultur yang digunakan adalah 1×10 5 sel.mL -1.
Peningkatan jumlah sel mikroalga ditentukan dengan menghitung jumlah sel setiap 2 hari sekali menggunakan alat improved neubauer haemocytometer dan handcounter dibawah mikroskop cahaya dengan perbesaran 10 x selama 8 hari periode kultur (Iba et al., 2018).
Pemanenan  kultur  mikroalga  dilakukan  pada  hari  ke-8  saat  kultur  telah  memasuki tahap stasioner sesuai metode oleh Iba et al. (2018).   Pemanenan untuk menghitung biomassa mikroalga  dilakukan  dengan  menyaring  10  mL  mikroalga  dari  masing-masing  perlakuan menggunakan  kertas  GF/F  whatman  microfiber  filter  (Ɵ=47  mm)  yang  telah  dikeringkan pada oven 100 °C selama 1 jam dan ditimbang, proses penyaringan dilengkapi dengan alat pompa  vacump.  Setelah  biomassa  mikroalga  didapatkan  langkah  selanjutnya  adalah membungkus hasil saringan dari biomassa mikroalga dengan menggunakan aluminium foil dan  disimpan  ke  dalam  desikator.  Sedangkan  pemanenan  untuk  ekstraksi  lipid  dilakukan dengan menambahkan 10 mL larutan NaOH 1 M ke dalam 1000 mL kultur mikroalga (larutan NaOH  1  M  dibuat  dengan  cara  melarutkan  10  gram  NaOH  ke  dalam  250  mL  aquades), kemudian didiamkan selama 1×24 jam hingga terbentuk endapan.  Selanjutnya menyaring hasil endapan dengan menggunakan kertas saring whatman nomor 93 yang telah ditimbang berat awalnya kemudian dibilas dengan air tawar untuk menghilangkan kadar garam dalam biomassa  mikroalga.    Mikroalga  yang  telah  disaring  kemudian  dikering  anginkan  selama 1×24 jam kemudian dikeringkan dengan oven pada suhu 75  ℃ selama 3 jam, selanjutnya berat mikroalga ditimbang menggunakan timbangan analitik dan disimpan ke dalam plastik sampel lalu dimasukkan ke dalam kulkas.

## Perhitungan Pertumbuhan dan Produksi Biomassa
Perhitungan laju pertumbuhan dilakukan menggunakan rumus yang mengacu pada Iba et al ., (2019) sebagai berikut ini:
𝜇 = %&
’(*

## …………………………………………  (1)
Keterangan : µ
=  Laju  pertumbuhan
harian (sel.mL -1 .hari -1 )
Nt    = Kepadatan sel akhir (sel.mL -1 )
No   =  Kepadatan  sel  awal  (sel.mL -1 )
T2-T1 = Waktu dari N 0 ke N t .
Selanjutnya produktivitas biomassa mikroalga dihitung berdasarkan presentase berat kering biomassa (dry weight/DW) dan presentase berat kering biomassa bebas abu (ash free dry weight/AFDW). DW diperoleh dengan mengeringkan biomassa pada microfiber filter di
dalam  oven  dengan  suhu  75 0 C  selama  3  jam.  DW  dihitung  menggunakan  rumus  yang mengacu pada persamaan yang dituliskan oleh Iba et al (2018), sebagai berikut:
𝐷𝑊 ( ) = 45678 9:;17<<7 =5&07& >:%856,45678 7?7%  >:%856 ……………………..(2) @;%A15 BA%8A6
AFDW  dihitung  dengan  cara  mengeringkan  filter  yang  mengandung  biomassa mikroalga  dalam  tanur  selama  5  jam  dengan  suhu  450 0 C.  Selanjutnya  AFDW  dihitung menggunakan rumus yang mengacu pada persamaan dalam Iba et al (2018), sebagai berikut:
𝐴𝐹𝐷𝑊 EF = 45678 >:%856 =5&07& 9:;17<<7 B56:&0,GH………………………..(3)
@;%A15 <71I5%
Selanjutnya  produktivitas  biomassa  mikroalga  dapat  dihitung  dengan  persamaan  6  yang mengacu pada Yuli (2020), berikut:
𝑃𝑟𝑜𝑑𝑢𝑘𝑡𝑖𝑣𝑖𝑡𝑎𝑠 𝑏𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑠𝑎 (g/L/hari) = 𝐴𝐹𝐷𝑊 ×
𝜇 ……………………………………..(4) Ekstraksi  dan  Perhitungan  Lipid  dengan

## Microwave
Mikroalga  diesktrak  kandungan  lipidnya  menggunakan  metode  microwave  dengan daya 450 watt mengacu pada Panjaitan dkk (2017).  Biomassa kering mikroalga sebanyak 2 gram  ke  dalam  labu  leher  satu  kemudian  ditambhakan  pelarut  (heksana;metanol,  1:5) sebanyak 10 mL.
Selanjutnya  dilakukan  proses  ekstraksi  dalam  microwave  dengan  daya  450  watt  dengan panjang  gelombang  2.45  GHz  pada  suhu  35-65 o C  selama  10  menit.  Selanjutnya  hasil ekstraksi didinginkan  dan disaring dengan filtrat vakum untuk memisahkan filtrat dan residu. Residu kemudian dicuci dengan 5 ml pelarut heksana-metanol (1:1 v/v) sebanyak tiga kali dengan  tujuan  agar  minyak  yang  tertinggal  diresidu  dapat  diperoleh  kembali.  Filtrat kemudian dimasukkan ke dalam corong pisah dan didistilasi untuk memisahkan pelarut dan lipid mikroalga.  Lipid yang dihasilkan kemudian dimasukkan ke dalam botol ampul yang telah  di  hitung  berat  awalnya  dan  menghitung  %  yield  yang  didapatkan.  Perhitungan presentase berat lipid berdasarkan Devita dkk. (2018), sebagai berikut:
𝑌𝑖𝑒𝑙𝑑 (%) = 45678 %:I:= c7&0 =:I56;%5d × 100……………(5) 45678 9:;17<<7 1:B6;7%07 B56:&0 c7&0  =:0A&7B7&

## Analisis Data
Pertumbuhan  mikroalga  disajikan  dalam  bentuk  grafik  dan  dianalisa  menggunakan Repeated Measure analysis of variance (ANOVA) sedangkan laju pertumbuhan spesifik, laju pertumbuhan spesifik,  kandungan lipid,  DW, AFDW dan produktivitas biomasaa pada jenis mikroalga  yang  berbeda  dianalisis  menggunakan one  way ANOVA.  Apabila  hasil  berbeda nyata (p<0.05) maka dilanjutkan dengan uji Duncan dengan bantuan aplikasi SPSS versi 22.0. Sedangkan untuk penyajian grafik menggunakan Microsoft Exel 2007.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pertumbuhan  harian  sel  mikroalga mengalami  fase  adaptasi  pada  setiap  jenis mikroalga. Nilai rata-rata kepadatan sel mikroalga dari yang tertinggi ke terendah untuk tiga jenis  mikroalga  yang  diperoleh  selama  kultivasi  berturut-turut  yaitu Nannochloropsis sp. sebesar  165,1x10 4 sel.mL¯¹,  kemudian  disusul  oleh  mikroalga T.  chui sebesar  91,9  x  10 4 sel.mL¯¹,  sedangkan  pertumbuhan  kepadatan  sel  terendah  terdapat  pada  mikroalga C. vulgaris sebesar 31,01 x 10 4 sel.mL¯¹ (Gambar 1)
Berdasarkan  hasil Repeated  Measure  ANOVA menunjukkan  bahwa  hari  dan  jenis mikroalga saling berinteraksi secara signifikan dan sangat mempengaruhi pertumbuhan sel mikroalga C. vulgaris, Nannochloropsis sp. dan T. chui selama penelitian (p= 0,01). Hasil uji lanjut Duncan menunjukkan bahwa pertumbuhan mikroalga C. vulgaris tidak berbeda nyata dengan mikroalga T. chuii namun berbeda nyata dengan mikroalga Nannochloropsis sp.
Gambar 1. Grafik pertumbuhan  sel mikroalga dalam skala logaritma selama hari penelitian (rata-rata jumlah sel ± SE)
Mikroalga  diawal  kultivasi  mengalami  peningkatan  kepadatan  sel  sejak  hari  ke-2 kultivasi hingga hari ke-8. Hari ke-2 mikroalga C. vulgaris , Nannochloropsis sp . dan T. chuii telah  memasuki  fase  lag,  mikroalga  tersebut  sedang  melakukan  proses  adaptasi  dengan lingkungan  kultivasi.  Fase  ini  mikroalga  membutuhkan  waktu  untuk  menyesuaikan  diri, karena  lingkungan  media  cenderung  berbeda  dari  lingkungan  sebelumnya.  Selama  masa adaptasi sel alga lebih sensitif terhadap nutrien, temperatur, dan kondisi yang berbeda dari kondisi  aslinya  (Elystia dkk,  2019).  Hari  ke-4  dan  ke-6  mikroalga C.  vulgaris , Nannochloropsis sp . dan T. chui mengalami fase eksponensial. Selama fase ini sel membelah dengan cepat, sel-sel dalam keadaaan stabil dan jumlah sel bertambah. Pembelahan sel terjadi pada fase ini dikarenakan nutrien pada media Walne dan lingkungan kultivasi pertumbuhan mikroalga  masih  mendukung.  Fase  tersebut  ditandai  dengan  naiknya  laju  pertumbuhan hingga kepadatan populasi meningkat beberapa kali lipat (Setyawati dkk., 2017). Hari ke-8 kepadatan sel mikroalga C. vulgaris , dan T. chui belum mengalami fase stasioner atau masih mengalami fase log (fase pertumbuhan) berbeda halnya degan mikroalga Nannochloropsis sp.  mulai  mengalami  awal  fase  stasioner  yang  ditandai  dengan  penurunan  kepadatan  sel
dibandingkan dengan fase eksponensial. Pertumbuhan sel mulai menurun dikarenakan nutrisi yang ada pada media Walne tersebut sudah mulai berkurang seiring dengan waktu kultur dan laju kematian lebih tinggi dari laju pertumbuhan (fase kematian) (Istirokhatun dkk, 2017). Fase  ini  menunjukkan  bahwa  laju  pertumbuhan  mikroalga  sebanding  dengan  laju kematiannya sehingga kepadatan sel menjadi tetap, kondisi ini dapat digambarkan sebagai suatu grafik pertumbuhan yang konstan (Putra dkk., 2015).
Pertumbuhan  mikroalga  selain  dipengaruhi  oleh  perbedaan  jenis  mikroalga,  juga dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu nutrien pada media kultur. Secara garis besar nutrien dapat  dibedakan  menjadi  2  yaitu,  makronutrien  dan  mikronutrien.  Penelitian  ini menggunakan  media  Walne  sebagai  media  kultivasi,  media  Walne  digunakan  karena merupakan  media  umum  yang  digunakan  proses  kultivasi  mikroalga.  Sel  mikroalga melakukan konsumsi senyawa organik dan nutrien yang terdapat pada media Walne sebagai media  pertumbuhan  dan  perkembangan.  Unsur  N  berperan  dalam  pembelahan  sel  dalam proses reproduksi serta pembentukan dinding sel, sedangkan unsur Fosfor (P) digunakan oleh mikroalga untuk proses reproduksi (Dayanto dkk., 2013).
Nilai rata-rata laju pertumbuhan spesifik mikroalga dari yang tertinggi hingga rendah pada masing-masing perlakuan bertutur-turut yaitu mikroalga Nannochloropsis sp. sebesar 1,0 sel.hari 1 , kemudian disusul oleh mikroalga T. chuii yaitu 0,4 sel.hari -1 , sedangkan niai terendah terdapat pada mikroalga C. vulgaris yaitu 0,2 sel.hari -1 . Laju pertumbuhan spesifik dari masing-masing perlakuan menunjukkan peningkatan yang berbeda-beda. Pertumbuhan spesifik tertinggi atau fase logaritmik mikroalga C. vulgaris dan T. chui terjadi pada hari ke- 6  hingga  hari  ke-8,  sedangkan  pada  mikroalga Nannochloropsis sp.  terjadi  pada  hari  ke-2 hingga  hari  ke-6  (Gambar  2).    Perbedaan  laju  pertumbuhan  spesifik  ini  dikarenakan perbedaan jenis mikroalga yang digunakan (p=0.01). Perbedaan laju pertumbuhan spesifik dari  masing-masing  mikroalga  tersebut  juga  dapat  dipengaruhi  oleh  faktor  internal  dari mikroalga itu sendiri seperti ukuran sel yang mempengaruhi kecepatan pembelahan sel dan pemanfaatan nutrien dalam media kultur karena strain atau spesies mikroalga yang digunakan dalam penelitian ini berbeda (Ningsih dkk., 2017).
Laju pertumbuhan spesifik (µ) merupakan parameter yang menggambarkan kecepatan pertambahan  sel  mikroalga  per  satuan  waktu.  Laju  pertumbuhan  spesifik  (specific  growth rate) berbanding lurus dengan pertumbuhan karena dengan laju pertumbuhan spesifik yang optimal akan menghasilkan pertumbuhan mikroalga tersebut akan optimal pula (Sigalingging dkk., 2019). Hal ini menunjukan bahwa proses pembelahan sel mikroalga Nannochloropsis sp.  menjadi  lebih  cepat  dibandingkan  mikroalga T.  chui dan C.  vulgaris sehingga pertambahan sel per satuan waktu menjadi lebih besar seiring dengan pertambahan waktu itu sendiri. Laju pertumbuhan spesifik menggambarkan hubungan antara pengaruh media Walne dengan kepadatan sel sehingga kecepatan pembelahan sel mikroalga per satuan waktu dapat dipakai  sebagai  tolak  ukur  untuk  mengetahui  daya  dukung  medium  atau  nutrien  terhadap pertumbuhan dan pembelahan sel mikroalga (Octhreeani dkk., 2014).
Gambar 2.  Laju  pertumbuhan spesifik  (rata-rata  ±  SE) tiga jenis mikroalga yang dikultur dalam media Walne

## Produksi Biomassa Mikroalga
Berat kering mikroalga dari yang tertinggi dan terendah yaitu jenis mikroalga T. chui sebesar 2,9 g.L -1 , kemudian di ikuti mikroalga Nannochloropsis sp. sebesar 2,7 g.L -1 , serta mikroalga C.  vulgaris dengan  perolehan  nilai  berat  kering  terendah  sebesar  2,5  g.L -1. (Gambar  3).    Berdasarkan  hasil  analisis  ragam  ANOVA  menunjukkan  bahwa,  jenis mikroalga yang berbeda dalam kultur media Walne memberi pengaruh sangat nyata terhadap berat kering (DW) mikroalga C. vulgaris , Nannochloropsis sp. dan T. chui (p=0,02). Hasil uji  Duncan  menunjukkan  bahwa  mikroalga C.  vulgaris tidak  berbeda  nyata  dengan mikroalga Nannochloropsis sp.  namun berbeda nyata dengan mikroalga T. chui .
Hasil  analisis  menujukkan  bahwa  berat  kering  (DW)  mikroalga  dipengaruhi  oleh proses  pemanenan  sebagaimana  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Djunaedi  (2015),  bahwa perlakuan pemanenan yang berbeda memberikan respon terhadap berat kering. Faktor lain yang  mempengaruhi  berat  kering  mikroalga  adalah  nutrisi,  aerasi,  salinitas,  pH  dan  suhu untuk pertumbuhan dari mikroalga tersebut (Ermavitalini et al., 2019). Jenis mikroalga juga merupakan faktor yang mempengaruhi berat kering mikroalga. Penelitian ini menggunakan jenis  mikroalga  yang  berbeda  yaitu C.  vulgaris , Nannochloropsis sp.  dan T.  chui dengan ukuran selnya tidak sama.  Mikroalga T. chui memiliki  ukuran sel yang  lebih besar yaitu berkisar 7-12 mikron (Nurmalitasari dkk., 2014) dibandingkan mikroalga Nannochloropsis sp.  memiliki  ukuran  sel  2-4  mikron  dan  mikroalga C.  vulgaris memiliki  ukuran  sel  2-8 mikron (Arifah, 2014) sehingga nilai berat kering mikroalga T. chui lebih besar.
Gambar 3.  Berat kering mikroalga (rata-rata ± SE) yang dikultur menggunakan media Walne
Nilai rata-rata berat kering bebas abu setiap perlakuan yang tertinggi adalah mikroalga T.  chui sebesar  2,0  g.L -1 ,  dan  mikroalga Nannochloropsis sp.  sebesar  1,7  g.L -1 ,  sedangkan yang terendah yaitu pada mikroalga C. vulgaris sebesar 1,6 g.L -1 (Gambar 4). Berdasarkan hasil  analisis  ragam  ANOVA  menunjukkan  bahwa,  jenis  mikroalga  yang  berbeda  dalam kultur media Walne memberi pengaruh sangat nyata terhadap berat kering bebas abu (AFDW) mikroalga C.  vulgaris , Nannochloropsis sp.  dan T.  chui (p=0.00).  Hasil  uji  Duncan menunjukkan  bahwa  mikroalga C.  vulgaris tidak  berbeda  nyata  dengan  mikroalga Nannochloropsis sp.  namun berbeda nyata dengan mikroalga T. chui .
Nilai  kadar  abu  (AFDW)  yang  tertinggi  diperoleh  pada  mikroalga T.  chui hal  ini disebabkan karena tingginya nilai berat kering T. chuii sebelum diabukan selain itu, mikroalga T. chuii dapat memanfaatkan kandungan garam pada media Walne karena ukuran selnya yang lebih besar. Kadar abu memiliki hubungan dengan mineral suatu bahan dan mineral tersebut dapat  berupa  garam.  Tingginya  kadar  abu  yang  diperoleh  pada  penelitian  ini  dapat dimanfaatkan sebagai sumber mineral (makro nutrien) (Darsi dkk., 2012). Mikroalga mampu menggunakan media Walne sebagai media pertumbuhannya dikarenakan dalam media Walne terdapat  unsur  mineral  berupa  logam,  fosfor  maupun  nutrien  lainnya  (Widianingsih  dkk., 2010).
Gambar 4.  Berat kering bebas abu (rata-rata ± SE) tiga jenis mikroalga
Nilai  rata-rata  produktivitas  biomassa  dari  masing-masing  kultur  mikroalga dari yang tertinggi terdapat pada mikroalga Nannochloropsis sp. sebesar 1,8 g.L -1 .hari - 1 , kemudian mikroalga T. chui sebesar 0,8 g.L -1 .hari- 1 dan produktivitas biomassa yang terendah  terdapat  pada  mikroalga C.  vulgaris sebesar  0,3  g.L -1 .hari- 1 (Gambar  5). Berdasarkan hasil analisis ragam ANOVA menunjukkan bahwa, jenis mikroalga yang berbeda  dalam  kultur  media  Walne  memberi  pengaruh  sangat  nyata  terhadap produktivitas  biomassa  mikroalga C.  vulgaris , Nannochloropsis sp.  dan T.  chui (p=0,01). Hasil uji Duncan menunjukkan bahwa mikroalga C. vulgaris tidak berbeda nyata  dengan  mikroalga T.  chui namun  berbeda  nyata  dengan  mikroalga Nannochloropsis sp.
Mikroalga  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  berberda-beda  sehingga produktivitas biomassanya juga berbeda, produktivitas biomassa Nannochloropsis sp. lebih  tinggi  dibandingkan C.  vulgaris dan T.  chui .  Nilai  produktivitas  biomassa dipengaruhi oleh laju pertumbuhan spesifik mikroalga dapat dilihat pada Gambar 2.
Mikroalga Nannochloropsis sp. memiliki laju pertumbuhan spesifik yang lebih tinggi dibandingkan C. vulgaris dan T. chui sehingga nilai produktivitas biomassanya lebih tinggi. Kultur Nannochloropsis sp. biasanya menggunakan pupuk Walne karena dalam waktu singkat pupuk dapat meningkatkan kepadatan sel sehingga setelah panen (masa puncak)  ±  5  (lima)  hari.  Keseluruhan  faktor  tersebut  akan  menentukan  waktu  yang dibutuhkan  oleh  kultur  mikroalga  hingga  mencapai  akhir  fase  eksponensial (Octhreeani dkk., 2014).
Gambar 5.  Produktivitas biomassa (rata-rata ± SE) tiga jenis mikroalga yang dikultur menggunakan media Walne

## Kandungan Lipid Mikroalga
Nilai kadar lipid tertinggi terdapat pada mikroalga T. chui sebesar 37.44 %, kemudian mikroalga Nannochloropsis sp. sebesar 24.32 %, sedangkan kadar lipid terendah terdapat pada mikroalga  C.  vulgaris  sebesar  23.07  %  (Tabel  1)  Meningkatnya  kadar  lipid  dari  mikroalga ditentukan dari besarnya biomassa yang diperolah, hal ini sejalan dengan penelitian Bintari & Elyani (2017), menyatakan bahwa peningkatan daya sebanding dengan transfer massa hingga mencapai titik tertentu, yakni diperolehnya rendemen yang optimum . Selain itu meningkatnya kadar lipid dari mikroalga ditentukan dari besarnya biomassa yang diperolah, hal ini sejalan dengan penelitian Bintari & Elyani (2017), menyatakan bahwa peningkatan daya sebanding dengan  transfer  massa  hingga  mencapai  titik  tertentu,  yakni  diperolehnya  rendemen  yang optimum.
Tabel  1. Kandungan  Lipid C.  vulgaris,  Nannochloropsis sp . dan T.  chui yang  diekstrak menggunakan MAE 450 watt selama 10 menit
No Jenis Mikroalga Kepadatan Sel (× 10 4 Sel.ml - 1 ) Lipid (%) 1 2 3 4 1. C. vulgaris 31,01 23.07 % 2. Nannochloropsis sp.   165,1     24.32 %
3. T. chui 91,9    37.44 %
Berdasarkan  hasil  analisis  ragam  ANOVA  menunjukkan  bahwa  pemberian  pupuk Walne  tmemberikan  pengaruh  nyata  terhadap  kadar  lipid  mikroalga C.  vulgaris , Nannochloropsis sp. dan T. chui (p=0,02). Menurut Hasanudin (2012), produksi lipid didalam sel  mikroalga  berhubungan  dengan  intensitas  cahaya  dan  ketersediaan  nutrisi.  Aktifitas fotosintesis  yang  semakin  cepat  akan  meningkatkan  pertumbuhan  sel,  namun  di  sisi  lain semakin  meningkatnya  pertumbuhan  sel  dapat  menurunkan  kandungan  nutrisi  yang  ada  di dalam  media,  sehingga  mikroalga  akan  cenderung  membentuk  lipid  sebagai  cadangan makanan.
Mikroalga  jenis Nannochloropsis sp.  dalam  penelitian  ini  tidak  memiliki  kandungan lipid yang tinggi seperti di penelitian lain yang mencapai 31-68 % berat kering (Wijanarko & Putri,  2012;  Purwanti,  2015;  Kapoore  et  al.  2018).    Hal  ini  diduga  karena  perbedaan  daya microwave dan lama ekstraksi.  Kapoore et al. 2018 melakukan ekstraksi lipid pada  kondisi 2.45  GHz,  1200  W,  120 o C  selama  50  min.    Namun  demikian  penelitian  ini  menunjukkan bahwa dengan kondisi microwave pada daya rendah dan waktu ekstraksi yang singkat dapat diperoleh lipid yang cukup tinggi pada ketiga jenis mikroalga yang dikultur.

## KESIMPULAN
Pertumbuhan dan produtivitas biomassa tertinggi pada mikroalga hijau yang dikultur menggunakan  media  Walne  ditemukan  pada  jenis Nannochloropsis sp.,  sedangkan  jenis  T. chui mengandung lipid paling tinggi saat diekstrak menggunakan microwave pada daya  450 W  selama  10  menit.    Oleh  karena  itu  penggunaan  microwave  untuk  ekstraksi  lipid  sangat disarankan untuk produksi lipid sebagai bahan baku biofuel yang berkelanjutan.

## DAFTAR PUSTAKA
Amanatin, D.R., & Nurhidayati, T. (2013). Pengaruh Kombinasi Konsentrasi Media Ekstrak Tauge (MET) dengan Pupuk Urea Terhadap Kadar Protein Spirulina sp. Jurnal Sains dan Seni Pomits, 2(2), 2–5.
Amini,  S.,  &  Syamdidi.  (2006).  Konsentrasi  Unsur  Hara  Pada  Media  dan  Pertumbuhan Chlorella vulgaris dengan Pupuk Anorganik Teknis dan Analis. Jurnal Perikanan, 8(2), 201–206. Https://Doi.Org/10.22146/Jfs.141
Arifah,  S.  (2014).  Studi  Kemampuan  Nannochloropsis  sp.  dan  Chlorella  sp.  Sebagai  Agen Bioremediasi  Logam  Berat  Merkuri  (Hg)  dan  Pengaruhnya  Terhadap  Pertumbuhan. Skripsi. Universitas Airlangga.
Assadad, L., Utomo, B.S.B., & Sari, R.N. (2010). Pemanfaatan Mikroalga Sebagai Bahan Baku Bioetanol. Jurnal Squalen, 5(2), 51–58.
Barqi, W.S. (2014). Pengambilan Minyak Mikroalga Chlorella sp. dengan Metode Microwave Assisted Extraction. Jurnal Bahan Alam Terbarukan, 4(1), 34–41.
Https://Doi.Org/10.15294/Jbat.V3i1.5764
Basmal,  J.  (2008).  Peluang  dan  Tantangan  Produksi  Mikroalga  Sebagai  Biofuel.  Jurnal Squalen, 3(1), 34–39.
Bintari, Y.R.,  &  Elyani, H. (2017). Ekstraksi  Senyawa Bioaktif dari Cladophora sp. dengan Metode  Solvent  Free  Microwave  Assisted  Extraction  (SFMAE).  Journal  Of  Islamic Medicine Research, 1(1), 1–11.
Chen,  C.Y.,  Yeh,  K.L.,  Aisyah,  R.,  Lee,  D.J.,  &  Chang,  J.S.  (2011).  Cultivation, Photobioreactor  Design  and  Harvesting  of  Microalgae  for  Biodiesel  Production:  A Critical
Review. Bioresource Technology, 102(1), 71–81. https://doi.org/10.1016/j.biortech.2010.06.159
Chilmawati,  D.,  &  Suminto.  (2008).  Penggunaan  Media  Kultur  yang  Berbeda  Terhadap
Pertumbuhan Chlorella sp. Jurnal Saintek Perikanan, 4(1), 42–49. Https://Doi.Org/10.14710/Ijfst.4.1.42-49
Darsi,  R.,  Supriadi,  A.,  &  Sasanti,  A.D.  (2012).  Karakteristik  Kimiawi  dan  Potensi Pemanfaatan Dunaliella salina dan Nannochloropsis sp. Journal Fishtech, 1(1), 14–25. Https://Www.Neliti.Com/Id/Publications/60990
Dayanto, L. B. D., Diantari, R., & Hudaidah, S. (2013). Pemanfaatan Pupuk Cair TNF® untuk Budidaya Nannochloropsis sp. Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya Perairan, 2(1), 1–6.
Devita, I., Isnaini, & Diansyah, G. (2018). Kultivasi Mikroalga Chaetoceros sp. dan Spirulina sp. untuk Potensi Biodiesel. Jurnal Maspari, 10(2), 123–130.
Djunaedi,  A.  (2015).  Produksi  Biomassa  Mikroalga  (Tetraselmis  chuii)  dengan  Sistem Pemanenan Berbeda. Jurnal Kelautan Tropis, 18(2), 107–111.
Elystia, S., Lestari, A.S., & Muria, S.R. (2019). Peningkatan Kandungan Lipid dan Biomassa Mikroalga  Scenedesmus  sp.  dari  Media  Kultivasi  Limbah  Cair  Tahu  Sebagai  Bahan Baku Biodiesel. Jurnal Teknik Lingkungan, 5(2), 19–28.
Ermavitalini, D., Dwirejeki, S., Nurhatika, S., & Saputro, T.B. (2019). Pengaruh Kombinasi Cekaman  Nitrogen  dan  Fotoperiode  Terhadap  Biomassa,  Kandungan  Kualitatif Triasilgliserol  dan  Profil  Asam  Lemak  Mikroalga  Nannochloropsis  sp.  Jurnal  Akta Kimindo, 4(1), 32–49.
Faisal,  A.,  Usman,  T.,  &  Alimuddin,  A.H.  (2015).  Transesterifikasi  Langsung  Mikroalga (Chlorella sp.) dengan Radiasi Gelombang Mikro. JKK, 4(2), 76–80.
Hasanudin,  M.  (2012).  Pengaruh  Perbedaan  Intensitas  Cahaya  Terhadap  Pertumbuhan  dan Kadar  Lipid  Mikroalga  Scenedesmus  sp.  yang  Dibudidayakan  pada  Limbah  Cair Tapioka. Skripsi. Https://Doi.Org/10.1017/Cbo9781107415324.004
Hidayati, N., Ariyanto, T.S., & Septiawan, H. (2017). Transesterifikasi Minyak Goreng Bekas Menjadi Biodiesel dengan Katalis Kalsium Oksida. Jurnal Teknologi Bahan Alam, 1(1), 1–5.
Iba,  W.,  Rice,  M.,  Maranda,  L.,  &  Wikfors,  G.  (2018).  Growth  Characteristics  of  Newly Isolated
Indonesian Microalgae Under Different Salinity. Journal Indonesian Aquaculture, 13(2), 71– 81. Https://Doi.Org/10.15578/Iaj.13.2.2018.71-81
Iba,  W.,  Utami,  C.,  &  Balubi,  A.  M.  (2019).  The  Growth  of  Chlorella  vulgaris  Cultured  in Liquid  Organic  Fertilizer  of  Water  Hyacint  H  (Eichhornia  crassipes)  at  Different Salinities. Aquacultura Indonesiana, 20(2), 117–126. https://doi.org/10.21534/ai.v20i2.158
Istirokhatun, T., Aulia, M., & Utomo, S. (2017). Potensi Chlorella sp. untuk Menyisihkan COD dan Nitrat dalam Limbah Cair Tahu. Jurnal Presipitasi : Media Komunikasi dan Pengembangan  Teknik Lingkungan,   14(2),  88.
Https://Doi.Org/10.14710/Presipitasi.V14i2.88-96
Jay, M.I., Kawaroe, M., & Effendi, H. (2018). Lipid and Fatty Acid Composition Microalgae Chlorella vulgaris Using Photobioreactor and Open Pond. IOP Conference Series: Earth and Environmental Science, 141(1), 2–8. https://doi.org/10.1088/1755- 1315/141/1/012015
Kapoore,  R.V.,  Butler,  T.O.,  Pandhal,  J.,  &  Vaidyanathan,  S.  (2018).  Microwave-Assisted Extraction  for  Microalgae:  From  Biofuels  to  Biorefinery.  Biology,  7(1),  18. https://doi.org/10.3390/biology7010018
Maligan,  J.M.,  Adhianata,  H.,  &  Zubaidah,  E.  (2016).  Produksi  dan  Identifikasi  Senyawa Antimikroba dari Mikroalga Tetraselmis chuii dengan Metode UAE (Kajian Jenis Pelarut dan Jumlah Siklus Ekstraksi). Jurnal Teknologi Pertanian, 17(3), 203–213.
Ningsih,  D.R.,  Widiastuti,  E.L.,  Murwani,  S.,  &  Tugiyono.  (2017).  Kadar  Lipid  Tiga  Jenis Mikroalga  pada  Salinitas  yang  Berbeda.  Jurnal  Biologi  Eksperimen  dan Keanekaragaman Hayati, 4(1), 23–29.
Nurmalitasari, E., Ridlo, A., & Sunaryo. (2014). Injeksi Karbon Dioksida (CO2) pada Media Pemeliharaan  Terhadap  Biomassa  dan  Kandungan  Total  Lipid  Mikroalga  Tetraselmis chuii. Journal Of Marine Research, 3(3), 388–394.
Nurmitasari,  Y.,  &  Reza,  A.R.  (2017).  Ekstraksi  Minyak  dari  Microalgae  (Chlorella  sp.) dengan Microwaved Assisted Extraction Sebagai Bahan Pembuatan Biodiesel. Skripsi. Institut Teknologi Sepuluh Nopember.
Octhreeani, A.M., Supriharyono, & Soedarsono, P. (2014). Pengaruh Perbedaan Jenis Pupuk Terhadap Pertumbuhan Nannochloropsis sp. Dilihat dari Kepadatan Sel dan Klorofil Α Pada Skala Semi Massal. Journal Diponegoro Of Maquares, 3(2), 102–108.
Panjaitan,  R.,  Asrim,  W.O.M.,  &  Dr.  Lailatul  Qadariyah,  S.T.,  M.  .  (2017).  Pembuatan Biodiesel  Dari  Mikroalga  Chlorella  sp.  dengan  Metode  Microwave-Assisted Transesterification Secara In Situ. Skripsi. Institut Teknologi Sepuluh Nopember.
Pratama,  I.  (2011).  Pengaruh  Metode  Pemanenan  Mikroalga  Terhadap  Biomassa  dan Kandungan Esensial Chlorella vulgaris. Skripsi. Universitas Indonesia.
Purwanti,  A.  (2015).  Pengaruh  Proses  Ekstraksi  Bertekanan  dalam  Pengambilan  Lipid  dari Mikroalga  Jenis  Nannochloropsis  sp.  dengan  Pelarut  Metanol.  Jurnal  Teknologi Technoscientia, 7(2), 112–117.
Putra, I.K.R.W., Anggreni, A.A.M.D., & Arnata, I.W. (2015). Pengaruh Jenis Media Terhadap Konsentrasi  Biomassa  dan  Klorofil  Mikroalga  Tetraselmis  chuii.  Jurnal  Rekayasa  dan Manajemen Agroindustri, 3(2), 40–46.
Sari, A.S.P., Wisanti, & Ratnasar, E. (2012). Pengaruh Pemberian Jenis Pupuk yang Berbeda Terhadap Laju Pertumbuhan Populasi dan Kadar Lemak Nannochloropsis oculata. Jurnal Lentera Bio, 1(1), 55–62.
Sasongko,  A.,  Nugroho,  R.W.,  Setiawan,  C.E.,  Utami,  I.W.,  &  Pusfitasar,  M.D.  (2018).
Aplikasi
Metode Nonkonvensional pada Ekstraksi Bawang Dayak. Jurnal Teknologi Terpadu, 6(1), 8– 13. Https://Doi.Org/10.32487/Jtt.V6i1.433
Schulze,  P.S.C.,  Pereira,  H.G.C.,  Santos,  T.F.C.,  Schueler,  L.,  Guerra,  R.,  Barreira,  L.A., Perales,
J.A.,  &  Varela,  J.C.S.  (2016).  Effect  of  Light  Quality  Supplied  by  Light  Emitting  Diodes (LEDs) on Growth and Biochemical Profiles of Nannochloropsis oculata and Tetraselmis chuii. Algal Research, 16(1), 387–398. https://doi.org/10.1016/j.algal.2016.03.034
Setyawati,  F.,  Satyantini,  W.H.,  Arief,  M.,  &  Kismiyati.  (2017).  Teknik  Kultur  Tetraselmis chuii dalam Skala Laboratorium Di PT. Central Pertiwi Bahari, Rembang, Jawa Tengah. Journal of Aquaculture And Fish Health, 7(2), 63–69.
Sigalingging,  F.A.,  Padil,  &  Muria,  S.R.  (2019).  Kultivasi  Mikroalga  Menggunakan  Media AF6
Berdasarkan Perbedaan Volume Solution A Media AF6. Jurnal Jom Fteknik, 6(1), 247–255.
Sulaswatty,  A.  (2019).  Penerapan  Teknologi  Nonkonvensional  dalam  Ekstraksi  Komponen Utama Atsiri dan Produk Turunannya Di Indonesia (LIPI (Ed.)). Agustus 2019.
Widayat,  &  Hadiyanto.  (2016).  Pemanfaatan  Limbah  Cair  Industri  Tahu  untuk  Produksi Biomassa Mikroalga Nannochloropsis sp. sebagai Bahan Baku Biodiesel. Reaktor, 15(4), 253. Https://Doi.Org/10.14710/Reaktor.15.4.253-260
Widianingsih,  Ridho,  A.,  Hartati,  R.,  &  Harmoko.  (2010).  Kandungan  Nutrisi  Spirulina platensis  yang  Dikultur  pada  Media  yang  Berbeda.  Jurnal  Ilmu  Kelautan,  13(3),  167– 170. Https://Doi.Org/10.14710/Ik.Ijms.13.3.167-170
Wijanarko,  B.,  &  Putri,  L.  D.  (2012).  Ekstraksi  Lipid  dari  Mikroalga  (Nanochloropsis  sp.) Dengan Solven Methanol dan Chloroform. Jurnal Teknologi Kimia Dan Industri, 1(1), 130–138.
Wijoseno, T. (2011). Uji Pengaruh Variasi Media Kultur Terhadap Tingkat Pertumbuhan dan Kandungan Protein, Lipid, Klorofil, dan Kaotenoid Pada Mikroalga Chlorella vulgaris Buitenzorg. Skripsi. Universitas Indonesia.
Yanuaris, L. M., Kusdarwati, R., & Kismiyati. (2019). Pengaruh Fermentasi Actinobacillus sp. pada Kotoran Sapi Sebagai Pupuk Terhadap Pertumbuhan Nannochloropsis Sp. Jurnal Ilmiah   Perikanan dan Kelautan, 4(1),   1–6.
Https://Doi.Org/10.1017/Cbo9781107415324.004
Yuli,  N.  (2020).  Pertumbuhan  dan  Kandungan  Protein  Mikroalga  Chlorella  vulgaris  yang Dikultur Menggunakan Limbah Cair Hotel. Skripsi. Universitas Halu Oleo.