Volume 3, Nomor 2, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564
SKREENING POTENSI ANTIBAKTERI EKSTRAK Padina australis Hauck

## TERHADAP BAKTERI Vibrio harveyii
POTENCY SCREENING OF ANTIBACTERIAL OF Padina australis Hauck to Vibrio harveyii BACTERIA
1 Mohamad Gazali, 2 Eri Safutra
1 Jurusan Sumberdaya Akuatik, Fakultas Perikanan dan ilmu Kelautan, Universitas Teuku Umar, Meulaboh
2 Jurusan Akuakultur, Fakultas  Perikanan dan  Ilmu Kelautan  Universitas  Teuku  Umar, Meulaboh
Korespondensi : mohamadgazali@utu.ac.id

## Abstract
Nowadays,  a  lot  of  research  about  the  treatment  a  safe  and  environmentally sound which uses natural ingredients, one of which seaweed. In the last decade, a wide variety of structures is very unique bioactive compounds from algae isolates have been isolated.  But,  the  resource  utilization  of  bioactive  compound  from  algae  has  not  been done.  This  study  aimed  to  test  the  ability  of  marine  macroalgae P.  australis Hauck  in producing  antibacterial  compounds Vibrio  harveryi .  The  existence  of  macroalgae P.  australis antibacterial  producer  is  expected  to  decrease  the  number  of  pathogenic bacteria, so as to decrease the likelihood of developing a disease that attacks fish. The research  was  conducted  in  two  laboratories,  the  Laboratory  of  Biological  MIPA Universitas  Syiah  Kuala,  Banda  Aceh  and  Brackish  Water  Aquaculture  Institute (BBAP)  Batee  Ujong,  Aceh  Besar.  Marine  macroalgae  taken  from  the  waters  around Labuhan Haji South Aceh District. The location was selected because of macroalgae in the  area  are  plentiful  because  the  waters  are  clean.  Based  on  phytochemical  test  on P.  australis extract  containing  flavonoids,  tannins  and  saponins.  The  results  of measurements  of  inhibition  zone  formed  in  each  treatment  obtained  the  largest inhibition zone at 12:55 mm on a 80% concentration of the extract. While the smallest inhibitory  zone  at  6:19  mm  at  a  concentration  of  100%.  Thus,  inhibition  zone  on extracts  of P.  australis against V.  harveyi bacteria  at  a  concentration  of  80%  is  the optimum inhibition of the extract.
Keywords : P. australis , antibacterial, Vibrio harveyii , screening

## I. Pendahuluan

## 1.1. Latar Belakang
Indonesia  sebagai  negara  maritim  dianugrahi  biodiversitas  hayati  laut  yang tinggi.  Salah  satu  biodiversitas  hayati  laut  yang  banyak  dimanfaatkan  oleh  masyarakat Indonesia adalah makroalga. Chee et al., (2011) menjelaskan bahwa untuk kepentingan komersial,  makroalga  sudah  dilakukan  skreening  aktivitas  yang  bermanfaat  untuk bioproduk.  Hal  ini  meliputi  skreening  antibakteri  melawan  penyakit  bakteri  yang menyerang  biota  budidaya.  Makroalga  merupakan  tumbuhan  yang  hidup  di  laut, tergolong  dalam Thalophyta, karena    tidak  mempunyai  akar,  batang  dan  daun  sejati, melainkan hanya menyerupai batang yang disebut thallus (Handayani et al. , 2014).
Morfologi makroalga secara umum terdiri atas filoid, kaloid dan holdfast , ketiga komponen ini disebut thallus . Filoid merupakan thallus yang menyerupai daun. Kaloid
merupakan  thallus  yang  menyerupai  batang  terdapat  banyak  percabangan  menyerupai tumbuhan  darat  sedangkan holdfast adalah thallus yang  menyerupai  akar  berbentuk cakram,  berfungsi  untuk  melekat  pada  substrat.  Pada  beberapa  marga Phaeophyta ada yang mempunyai vesicle atau gelembung udara (Anggadiredja et al. , 2006).  Makro alga Phaeophyta sumber  potensial  senyawa  bioaktif  yang  bermanfaat  bagi  pengembangan industri  farmasi  sebagai  antibakteri,  anti  tumor,  anti  kanker  dan  industri  agrokimia terutama untuk fungisida dan herbisida (Bachtiar, 2007). Menurut Salem et al ., (2011) beberapa  jenis  makro  alga  dari  divisi Phaeophyta memiliki  daya  antimikroba,  antara lain Sargassum sp dan Turbinaria sp .
Kecenderungan menurunnya produksi ka di perairan tambak adalah merebaknya penyakit  pada  ikan  yang  disebabkan  oleh  bakteri  pathogen.  Penambahan  antibiotik  ke dalam  perairan  tambak  akan  menimbulkan  kekebalan.  Disamping  itu,  kandungan antibiotik  pada  komoditas  ikan  menyebabkan  jatuhnya  harga  ikan  di  pasaran.  Oleh karena  itu,  perlu  dilakukan  penelitian  untuk  mencari  alternatif  lain  dalam  mengatasi merebaknya penyakit ikan.
Hanya sedikit data yang bisa ditemukan tentang pengaruh organisme-organisme yang melawan bakteri patogen di dalam aktivitas budidaya (Bansemir et al ., 2006). Di antara bakteri patogen seperti spesies Aeromonas dan Vibrio dimana bertanggung jawab pada  mortalitas  berat  terhadap  organime  akuatik  baik  yang  di  alam  bebas  maupun dibudidayakan (Kayis et al ., 2009).
Dewasa  ini  telah  banyak  dilakukan  penelitian  tentang  pengobatan  yang  aman dan  berwawasan  lingkungan  yaitu  menggunakan  bahan-bahan  alami,  salah  satunya rumput  laut.  Hasil  penelitian  mengenai  rumput  laut  telah  banyak  dilaporkan,  yaitu  : Mtolera  (1996)  yang  mengekstrak  6  algae  hijau  dengan  bahan  pelarut  diethyl  eter terhadap  3  bakteri  uji  yaitu  : S.  aureus , B.subtilis , E.  coli ,  ekstrak Valonia  aegrophila paling  aktif  terhadap  semua  organisme  uji.  Vitor et  al .,  (2002),  ekstrak  Heksan, kloroform  dan  etanol  dari  6  makroalgae  laut  (Rhodophyta  dan  Chlorophyta) menunjukkan  bahwa  dari  ekstrak  makroalge  bersifat  menghambat  terhadap  bakteri. Choudhury  (2005)  melaporkan  tiga  ekstrak  algae  laut, G.  corticata,  U.  fasciata , E.  compressa dengan  menggunakan  heksan,  cloroform,  etil  asetat,  cloroform,  alkohol dan  metanol,  menunjukkan  penghambatan  terhadap  bakteri  pathogen  yaitu, E.  tarda, V.  alginolyticus,  P.  fluorescens,  P.  aeruginosa  dan  A.  hydrophila .  Menurut Taskin et  al .,  (2007),  ekstrak  kasar  dari semua  algae  yang  diuji    kecuali C.  officinalis menunjukkan  hambatan  terhadap S.  aureus dan U.  rigida merupakan  ekstrak  yang paling  efektif.  Aktivitas  hambatan  paling  tinggi  terdapat  pada E.  aerogenes (34.00  ±  1.00  mm)  dari C.  officinalis dan  diikuti  dengan E.  coli dan E.  faecalis . D.  dichotoma mempunyai  aktivitas  hambatan  yang  paling  rendah  (10.66  ±  1.52  mm). Ekstrak C. barbata mempunyai aktivitas spektrum yang paling luas, D. dichotoma dan H.  filicina mempunyai  aktivitas  yang  paling  rendah  terhadap  mikroorganisme. Metabolit  primer  atau  sekunder  dari  rumput  laut  ini  mungkin  mengandung  senyawa bioaktif  yang  berpotensi  untuk  industri  obat.  Hasil  penelitian  juga  dilaporkan  bahwa
Volume 3, Nomor 2, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564
aktivitas  algae  dapat  digunakan  sebagai  antiviral,  antibakteri  dan  antifungal  yang berpengaruh terhadap beberapa pathogen (Vitor et al ., 2002).
Antibiotik dan desifektan merupakan salah satu solusi dalam mengatasi penyakit akibat  bakteri    dalam  aktivitas  budidaya  (Austin  dan  Austin,  2007).  Namun  demikian, penggunaan  antibiotik  dan  desifektan  dalam  aktivitas    budidaya  memiliki  kerugian khususnya  yang  berhubungan  dengan  generasi  toksikan  dimana  menyebabkan resiko-resiko pada lingkungan dan resistansi bakteri pada antibiotik (Jones et al ., 2004). Antibiotik yang digunakan dalam manusia dan hewan sudah diuji secara eksperimental dapat  mengobati  infeksi  bakteri  pada  ikan.  Permasalahannya  adalah  solubilitas, palabilitas,  toksisitas,  biaya  dan  layanan  dan  aturan  pemerintah  sudah  membatasi ketersediaan  antibiotik  untuk  diseleksi  khususnya  ikan  budidaya  yang  dikonsumsi. Menurunnya  khasiat  dan  resistansi  patogen  pada  antibiotik  diperlukan  pengembangan alternatif  baru  (Smith et  al .,  1994).  Oleh  karena  itu,  solusi  lain  untuk  mencegah penyakit  akibat  bakteri  dalam  aktivitas  budidaya  yakni  menggunakan  makroalga  laut seperti  rumput  laut  dan  padang  lamun  (Bansemir et  al .,  2006).  Banyak  bioaktif  dan substansi  aktif  farmakologi  sudah  diisolasi  dari  alga.  Misalnya,  ekstrak  alga  laut dilaporkan menunjukkan aktivitas antibakteri (Siddhanta et al ., 1997).
Dalam  dekade  terakhir  ini,  berbagai  variasi  struktur  senyawa  bioaktif  yang sangat unik dari isolat alga telah berhasil diisolasi. Namun pemanfaatan sumber bahan bioaktif dari alga belum banyak dilakukan. Berdasarkan proses biosintesisnya, alga laut kaya  akan  senyawa  turunan  dari  oksidasi  asam  lemak  yang  disebut  oxylipin.  Melalui senyawa ini berbagai jenis senyawa metabolit sekunder diproduksi (Putra,  2006).  Misonou et  al .,  (2003)  melaporkan  bahwa  jenis  rumput  laut  merah Phorphyra  yeszoensis mengandung  potensi  senyawa  antioksidan  yang  dapat menghambat penetrasi sinar UV yang kuat kedalam jaringan atau sel. Menurut Kardono (2004) terdapat sekitar 2500 jenis senyawa bioaktif dari laut yang telah berhasil diisolasi dan diidentifikasi, dan 93 % diantaranya diperoleh dari rumput laut.  Di Afrika Selatan ekstrak  methanol  dari  56  rumput  laut  yang  berasal  kelas  Chlorophyta  (hijau), Phaeophyta  (coklat)  dan  Rhodophyta  (merah),  dari  ketiga  kelas  rumput  laut  tersebut yang  mempunyai  antibakteri  paling  tinggi  terdapat  pada  kelas  Phaeophyta (Choudhury, et  al .,  2005).  Salah  satu  alternatif  yang  dapat  dilakukan  guna  mengatasi masalah  penyakit  adalah  penggunaan  rumput  laut  sebagai  bahan  antimikroba.  Dengan demikian,  perlu  alternatif  lain  untuk  mengganti  antibiotik  dengan  bioaktif  yang  ramah lingkungan dan mudah terurai. Senyawa bioaktif yang mulai banyak dikaji yaitu rumput laut  yang  mengandung  senyawa  bioaktif  sebagai  antibakteri.  Salah  satu  rumput  laut yang banyak ditemukan di perairan Indonesia adalah rumput laut jenis K. alvarezii dan E. denticullatum . Dengan adanya kandungan senyawa bioaktif pada rumput laut maka, dipandang  perlu  untuk  melakukan  penelitian  mengenai  pemanfaatan  rumput  laut sebagai  antibakteri.  Dari  ekstrak K.  alvarezii dan E.  denticullatum ,  diharapkan  dapat berfungsi sebagai antibakteri yang dapat mengontrol pertumbuhan bakteri A. hydrophila dan V. harveyii .
Bakteri genus Vibrio pada umumnya ditemukan di perairan pesisir dan estuaria. Beberapa  strain Vibrio bersifat  patogenik  yang  dapat  menyebabkan  Vibriosis  yang merupakan  suatu  penyakit  infeksi  serius  yang  menyerang  biota  ikan  baik  di  alam  liar maupun  yang  dibudidayakan  (Austin  dan  Austin,  1993). Vibrio  harveyii merupakan bakteri patogenik dalam budidaya air laut and diakui sebagai agen kausatif utama vibrio yang  sering  menghasilkan  mortalitas  massal  pada  biota  laut  yang  dibudidayakan (Premananthan et  al .,  1999).  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  kemampuan makroalga  laut P.  australis Hauck  dalam  menghasilkan  senyawa  antibakteri Vibrio harveryi . Keberadaan makroalga P. australis penghasil antibakteri ini diharapkan dapat menurunkan jumlah bakteri patogen, sehingga mampu menurunkan kemungkinan berkembangnya penyakit yang menyerang ikan.

## II. Metode Penelitian

## 2.1. Bahan dan Alat
Bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  meliputi  :  biakan  murni  bakteri V.  harveyii ,  rumput P.  australis .  Media  TSA  ( Tryptone  Soy  Agar )  dan  media  TCBSA (Thiosulfat  Citrate  Bilesalt  Sucrose  Agar),  NB  ( Nutrient  Broth ),  Alumonium  foil, Aquades, Kertas cakram ( paper disc ), Metanol (99,8%)  dan etanol (99,8%) semuanya dengan  grade  PA.    Peralatan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  meliputi  : rotary vacuum  evaporator, pH  meter,  Autoclave , Micro  pipette , Cawan  petri,  Tabung  reaksi, Erlenmeyer,  Jarum  ose,  Bunsen,  Oven,  Timbangan  Analitik,  blender,  Inkubator, penyaring, kertas saring, Water pump filtrasi, Colony Counter, Pinset, Triangle.

## 2.2. Lokasi, Persiapan Penelitian dan Ekstraksi
Penelitian ini dilaksanakan di 2 laboratorium  yaitu  Laboratorium MIPA  Hayati Universitas  Syiah  Kuala,  Banda  Aceh  dan  Balai  Budidaya  Air  payau  (BBAP)  Ujong Batee,  Aceh  Besar.  Makroalga  laut  diambil  dari  perairan  sekitar  Labuhan  Haji Kabupaten  Aceh  Selatan.  Lokasi  ini  dipilih  karena  makroalga  di  daerah  tersebut berlimpah  karena  perairannya  bersih.  Simplisia  tersebut  diekstraksi  dengan  metode maserasi  tunggal  yang  mengacu  pada  Quinn  (1988) dalam Darusman  (1995)  yakni menggunakan  pelarut  organik  dengan  tingkat  kepolaran  yang  berbeda  yaitu  metanol (polar),  etil  asetat  (semi  polar)  dan  n-heksan  (non  polar).  Tujuan  menggunakan  ketiga pelarut  tersebut  untuk  mengetahui  rendemen  dan  senyawa  aktif  dari P.  australis berdasarkan  tingkat  kepolarannya.  Sebelum  diekstraksi, P.  australis terlebih  dahulu dibersihkan  dengan  menggunakan  air  bersih.  Hal  ini  bertujuan  untuk  membersihkan P.  australis dari  garam  dan  parasit  yang  menempel.  Ekstraksi  dilakukan  dengan menggunakan  tiga  (3)  macam  pelarut  yaitu  metanol,  etil  asetat  dan  n-heksan.  Tujuan menggunakan tiga pelarut  yaitu untuk memastikan senyawa bioaktif P. australis dapat terlarut pada pelarut polar, semi-polar dan non-polar.  Sebelum diekstraksi, P. australis direndam  dalam  air  selama  24  jam,  kemudian  dicuci  dan  dijemur  hingga  kering. Ekstrasi dilakukan sebanyak 3 ulangan ( triplo ) dengan bobot 50 g pada setiap ulangan sehingga  menghasilkan  3  ekstrak  kasar  yaitu  ekstrak  metanol,  ekstrak  etil  asetat  dan
Volume 3, Nomor 2, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564
ekstrak n-heksan. Ekstrak tersebut  disaring menggunakan kertas saring dan dipekatkan dengan penguap putar ( rotary evaporator ) pada suhu 30 0 C (Batubara et al ., 2010).

## 2.3. Uji Fitokimia
Uji fitokimia merupakan uji pendahuluan untuk mengetahui kandungan senyawa spesifik  seperti  alkaloid,  triterpenoid,  steroid,  saponin,  flavonoid,  kuinon,  tanin  dan fenol secara kualitatif  (Harborne 1987).

## 2.4. Uji Alkaloid
Ekstrak P. australis dengan bobot tertentu dilarutkan dengan ml kloroform dan beberapa  tetes  NH 4 OH  kemudian  disaring  ke  dalam  tabung  reaksi  bertutup.  Ekstrak kloroform  dalam  tabung  reaksi  dikocok  dengan  10  tetes  H 2 SO 4 2  M  dan  lapisan asamnya  dipisahkan  ke  dalam  tabung  reaksi  lain.  Lapisan  asam  ini  diteteskan  pada lempeng  tetes  dan  ditambahkan  pereaksi  Mayer,  Wagnerdan  dragendorf  yang  akan menimbulkan endapan dengan warna berturut-turut putih, coklat,dan merah jingga.

## 2.5. Uji Saponin dan Flavonoid
Ekstrak P.  australis dengan  bobot  tertentu,  dimasukkan  ke  dalam  gelas  kimia besar kemudian ditambahkan 100 ml air panas dan dididihkan selama 5 menit, setelah itu  disaring  dan  filtratnya  digunakan  untuk  pengujian.  Uji  saponin  dilakukan  dengan pengocokan  10  ml  filtrat  dalam  tabung  reaksi  tertutup  selama  10  detik  kemudian dibiarkan  selama  10  menit,  adanya  saponin  ditunjukkan  dengan  terbentuknya  buih stabil.  Sebanyak  10  ml  filtrat  yang  lain  ditambahkan  0,5  g  serbuk  magnesium,2  ml alkohol  klorhidrat  (campuran  HCl  37  %  dan  etanol  95  %  dengan  volume  yang  sama) dan 20 ml amil alkohol kemudian dikocok kuat-kuat, terbentuknya warna merah, kuning dan jingga pada lapisan amil akohol menunjukkan adanya flavonoid.

## 2.6. Uji Tanin
Ekstrak P. australis ditambah 100 ml air panas dididihkan selama 5 menit dan disaring.  Lalu  ke  dalam  sebagian  filtrat  ditambahkan  larutan  FeCl3,  bila  terjadi  warna hitam kehijauan menunjukkan adanya tanin.

## 2.7. Pengujian Efektivitas ekstrak P. australis
Pengujian  efektivitas  ekstrak P.  australis sebagai  antibakteri Vibrio  harveyii menggunakan uji difusi  menurut Kirby – Bauer dengan metode oles (Lay, 1994). Pada media  dioleskan  satu  ose  bakteri Vibrio  harveyi ,  kemudian  kertas  media  cakram  yang telah  mengandung  ekstrak P.  australis letakkan  pada  media  dan  ditekan  agar  ekstrak P.  australis meresap  pada  media  dengan  baik.  Pembacaan  hasil  dilakukan  setelah diinkubasi  pada  suhu  35 0 C  selama  24  jam  dengan  cara  mengukur  daerah  hambatan (zona  bening)  di  sekitar  kertas  cakram  menggunakan  kertas  millimeter atau  penggaris. Perlakuan yang digunakan pada dalam pengujian  ini yaitu ekstrak dengan konsentrasi 40%,  60%  dan  80%  dan  100%  (b/v).  Analisis  data  menggunakan  Rancangan  Acak
Volume 3, Nomor 2, 2016 ISSN: 2355-5564
Lengkap yang dilanjutkan dengan uji acak berganda Duncan dengan taraf kepercayaan 95%.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Hasil Ekstraksi
Hasil  ekstraksi P.  australis dengan menggunakan  pelarut  etanol  96%  diperoleh ekstrak cair berwarna hijau tua kemudian dievaporasi menggunakan rotary evaporator diperoleh ekstrak kasar berwarna hijau tua (Gambar 1).
(a) (b)                                              (c)
Gambar 1. Hasil Ekstraksi P. australis tiga pelarut (a) Metanol ; (b) etil asetat ; (c) n-heksan
Hasil  maserasi  sebanyak  50  g  simplisia P.  australis dengan  pelarut  metanol diperoleh  ekstrak  cair  berwarna  hijau  pekat  dan  setelah  dipekatkan  menjadi  ekstrak kasar yang berwarna hijau dan simplisia P. australis dengan pelarut etil asetat diperoleh ekstrak cair berwarna kekuning-kuningan dan setelah dipekatkan menjadi ekstrak kasar berwarna kuning muda. Sementara maserasi simplisia P. australis dengan menggunakan pelarut  n-heksan  diperoleh  ekstrak  cair  berwarna  putih  kekuningan  dan  setelah dipekatkan  menjadi  ekstrak  cair  berwarna  bening.  Rendemen  ekstrak  metanol  sebesar 11,3 %. Sementara, rendemen ekstrak etil asetat sebesar 6,2 % dan rendemen ekstrak n- heksan  sebesar  5,2  %.  Rendemen  ekstrak  metanol  mempunyai  polaritas  yang  tinggi sehingga  mampu  melarutkan  senyawa  aktif  dalam  simplisia P.  australis lebih  banyak dibandingkan  jika  menggunakan  pelarut  lainnya.  Selain  itu,  metanol  mempunyai  titik didih  dan  cenderung  aman  apabila  digunakan  sebagai  pelarut.  Hasil  ekstrak  kental mengindikasikan  bahwa  ekstrak P.  australis mengandung  komponen  senyawa  aktif yang larut dalam pelarut polar.

## 3.2. Hasil Uji Fitokimia
Analisis  fitokimia  merupakan  salah  satu  cara  untuk  mengetahui  kandungan metabolit  sekunder  pada  suatu  sampel  (Harborne,  1984).  Analisis  ini  sangat  berguna untuk  menentukan  golongan  utama  senyawa  aktif  dari  ekstrak P.  australis memiliki potensi  sebagai  antibakteri.  Uji  yang  dilakukan  meliputi  uji  saponin,  flavonoid  dan
Volume 3, Nomor 2, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564
tanin. Berdasarkan uji fitokimia pada ekstrak P. australis mengandung flavonoid, tanin dan  saponin.  Adapun  hasil  pengujian  fitokimia  ekstrak P.  australis ditunjukkan  pada Tabel 1.
Tabel 1.  Hasil analisis fitokimia ekstrak kasar Identifikasi senyawa Flavonoid Tanin Saponin n- heksana Etil asetat Metanol - -
+++
-
- +++
- -
++
Keterangan : +: kurang pekat, ++: sedang dan +++ : pekat.
Berdasarkan  Tabel  1  menunjukkan  bahwa  filtrat  ekstrak P.  australis dengan menggunakan  pereaksi  etanol  menunjukkan  adanya  flavonoid  dengan  kisaran  pekat, sedangkan  senyawa  saponin  berada  pada  kisaran  pekat.  Saponin  nampak  jelas  ketika ada  busa  stabil  pada  saat  filtrat  dipanaskan.  Tanin  pada  filtrat P.  australis mempunyai kisaran  pekat.  Menurut  Basmal  (1999),  bahwa  senyawa  tanin  dan  triterpenoid merupakan  suatu  senyawa  metabolit  sekunder  yang  dapat  dijumpai  pada  jenis makroalga  dan  mempunyai  aktivitas  sebagai  antibakteri.  Pendapat  Fitriyani  (2012) mengemukakan bahwa dalam ekstrak makroalga terdeteksi senyawa alkaloid, tanin dan triterpenoid yang mempunyai aktivitas sebagai antibakteri.

## 3.3. Uji Efektivitas Ekstrak P. australis terhadap Bakteri Vibrio harveyi
Pengujian  efektivitas  ekstrak P.  australis terhadap  antibakteri Vibrio  harveyi dilakukan  dengan  mengukur  zona  hambat  pada  variasi  konsentrasi  rendemen  ekstrak secara  berturut-turut  60%,  80%,  dan  100%.  Hasil  pengukuran  zona  hambat  dapat disajikan pada Tabel 2.
Tabel 2.  Hasil analisis fitokimia ekstrak kasar
Zona Hambat ekstrak P. australis (mm) 60% 80% 100% 12.18 12.55 6.19
Lebar zona hambat yang terbentuk ini dipengaruhi oleh konsentrasi bahan aktif yang terkandung dalam ekstrak P. australis , sensitivitas bakteri Vibrio harveyi terhadap ekstrak,  serta  kecepatan  difusi  bahan  aktif  yang  terdapat  dalam  ekstrak  terhadap medium  agar.  Selain  itu,  kondisi  lingkungan  media  bakteri  uji  yaitu  suhu,  waktu inkubasi,  umur  bakteri  juga  mempengaruhi  lebar  zona  hambat  yang  terbentuk  dalam setiap perlakuan konsentrasi ekstrak.   Hal ini sesuai dengan pendapat Rajendra (2011) bahwa senyawa tanin yang terkandung dalam makroalga dapat menyebabkan denaturasi
dan  koagulasi  protein  sel  bakteri,  sehingga  menyebabkan  kematian  sel  bakteri. Hadioetomo  (1993),  menyatakan  bahwa  waktu  inkubasi,  umur,  dan  jumlah  sel  bakteri berpengaruh  terhadap  pengujian  daya  hambat  suatu  bahan  sebagai  antibakteri. Sementara  Dwijoseputro  (1987),  menyatakan  bahwa  tingkat  efektivitas  suatu  bahan menggunakan  metode  Kirby  Bauer  dikatakan  sensitif  jika  terbentuk  zona  hambat (daerah  bening)  di  sekeliling  kertas  cakram.  Hasil  pengukuran  zona  hambat  yang terbentuk  pada  tiap  perlakuan  diperoleh  zona  hambat  terluas  sebesar  12.55  mm  pada konsentrasi  ekstrak  80%.  Sementara  zona  hambat  terkecil  sebesar  6.19  mm  pada konsentrasi  100%.  Jadi,  zona  hambat  pada  ekstrak P.  australis terhadap  bakteri V.  harveyi pada  konsentrasi  80%  merupakan  penghambatan  optimum  dari  ekstrak tersebut.
P.  australis memiliki  kandungan  senyawa  bioaktif  yang  berpotensi  sebagai antibakteri  (Atmadja,  1992).  Hasil  penelitian  uji  fitokimia  dengan  ekstrak  aseton diperoleh  bahwa P.  australis mengandung  senyawa  steroid,  terpenoid,  polifenol  dan saponin yang berpotensi sebagai antibakteri (Salosso, 2012). Selain itu, hasil penelitian Izzati  (2007)  menunjukkan Padina sp  efektif  untuk  menekan  pertumbuhan  bakteri Pseudomonas .  Makroalga  mempunyai  kandungan  metabolit  primer  seperti  vitamin, mineral,  serat,  alginat,  karaginan  dan  agar  yang  digunakan  dalam  industri  farmasi, kosmetik  dan  tekstil  (Pratomo  dan  Sulistyowati,  2001).  Makroalga  juga  memiliki kandungan  metabolit  sekunder  berupa  senyawa  bioaktif  yang  berpotensi  sebagai antibakteri, antivirus, antijamur dan sitostatik (Zainuddin dan Malina, 2009).
Selain itu Kerans (2010) menyatakan bahwa Padina sp. adalah rumput laut yang berasal  dari  kelas  Phaeophyta  (rumput  laut  coklat)  dan    memiliki  banyak  kegunaan. Padina sp.  dilaporkan  memiliki  potensi  sebagai  antimikroba  karena  mengandung senyawa bioaktif diantaranya 1,4-Naphthoquinone dan triterpenoid.
Gambar 1. Zona Hambat pada konsentrasi  60%
Volume 3, Nomor 2, 2016
ISSN: 2355-5564
Gambar 2. Zona Hambat pada konsentrasi 80%
Gambar 3. Zona Hambat pada konsentrasi 100%
Ardiansyah  (2007),  menyatakan  bahwa  kemampuan  antimikroba  dalam memberikan  penghambatan  terhadap  mikroorganisme  yang  merusak  bahan  pangan sangat  tergantung  pada  konsentrasi  dan  kandungan  senyawanya.  Pada  dasarnya mekanisme  penghambatan  mikroorganisme  oleh  antimikroba  dapat  disebabkan  oleh beberapa  faktor  diantaranya  1)  Gangguan  pada  senyawa  penyusun  dinding  sel;  2)
Peningkatan  permeabilitas  membran  sel  yang  dapat  menyebabkan  kehilangan komponen  penyusun  sel;  3)  Menginaktivasi  enzim  dan  4)  Kerusakan  fungsi  material genetik.
Rachmaniar  (1996) dalam Prajitno  (2006)  mengatakan  bahwa  beberapa  jenis rumput laut dari perairan pantai Indonesia mempunyai aktivitas sebagai zat antibakteri, antara  lain E.  cottonii,  E.  spinosum,  G.  Verrucosa,  G.  conferviodes,  Sargassum  sp, H.  opuntia yang  menunjukkan  aktivitas  antibakteri  patogen  pada Staphylococcus aureus, Bacillubtilis, V. parahaemolyticus dan Vibrio harveyii . Hal ini dipertegas oleh Prajitno  (2006)  menyatakan  bahwa Halimeda  opuntia yang  mempunyai  kandungan fenol  sebagai  zat  antibakteri  lebih  dari  50  %  berat  basah.  Menurut  Prajitno,  (2006) menyatakan bahwa pada E. cottonii, Gracilaria maupun H. opuntia pada konsentrasi 3 %  mempunyai  sifat  bakteriostatik  dan  bakteriosidal  terhadap  bakteri Vibrio  harveyii , pada  ekstrak H.  opuntia mengandung  52,25%  fenolik  (flavonoid).  Hal  ini  dipertegas oleh Pelczar, et al (1988) menyatakan bahwa persenyawaan fenolik sebagai antibakteri menghambat  pertumbuhan  dan  metabolisme  bakteri  dengan  cara  merusak  membran sitoplasma  dan  mendenaturasi  protein  sel.  Golongan  senyawa  kimia  utama  yang mempunyai  sifat  antibakteri  adalah  fenol,  alkohol,  halogen,  logam  berat,  zat  warna, deterjen,  senyawa  kuarter,  asam  dan  basa.  Senyawa  fenol  dapat  berinteraksi  dengan komponen  dinding  sel  bakteri  sehingga  mengakibatkan  permeabilitas  pada  sel  bakteri dan dapat juga berdifusi kedalam sel.

## IV. KESIMPULAN DAN SARAN

## 4.1. Kesimpulan
Berdasarkan  hasil  penelitian  disimpulkan  bahwa  zona  hambat  yang  terbentuk pada tiap perlakuan diperoleh zona hambat terluas sebesar 12.55 mm  pada konsentrasi ekstrak 80%. Sementara zona hambat terkecil sebesar 6.19 mm pada konsentrasi 100%. Jadi, zona hambat pada ekstrak P. australis terhadap bakteri V. harveyi pada konsentrasi 80%  merupakan  penghambatan  optimum  dari  ekstrak  tersebut.  Berdasarkan  uji fitokimia pada ekstrak P. australis mengandung flavonoid, tanin dan saponin.  Hal ini menunjukkan  bahwa  senyawa  polar  memiliki  peranan  penting  dalam  menghambat pertumbuhan bakteri V. harveyi .

## 4.2. Saran
1. Perlu  adanya  penelitian  lanjutan  mengenai  uji  pemanfaatan  ekstrak  bioaktif P. australis pada pemeliharaan ikan pada skala laboratorium.
2. Perlu adanya uji histologi ikan yang sehat, sakit, dan setelah pengobatan

## Daftar Pustaka
Anggadiredja, J. T., A. Zatnika, H. Purwoto dan S. Istini. 2006. Rumput Laut . Cetakan I. Jakarta : Penerbit Swadaya
Volume 3, Nomor 2, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564
Ardiansyah. 2007. Antimikroba dari Tumbuhan (Bagian Kedua). Berita Iptek Online. 4
hal. http ://www.beritaiptek.com/zberita-beritaiptek2007-06-0Antimikroba- dariTumbuhan.
Austin,  B.B.  &  Austin,  D.A.  1999. Bacterial  Fish  Pathogens:  Disease  of  farmed  and Wild Fish. Chichester, United Kingdom: Praxis Publishing Ltd.
Atmadja, WS. 1992. Rumput Laut Sebagai Obat. Oseana, Vol: XXII No 1:1-8. LIPI.
Bachtiar,  A.  2007.  Penelusuran  Sumber  Daya  Hayati  Laut  (Alga)  sebagai  Biotarget Industri.  Fakultas  Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan.  Universitas  Padjajaran. Jatinagor.
Bansemir, A., Blume, M., Schröder, S. & Lindequist, U. 2006. Screening of cultivated seaweeds for antibacterial activity against fish pathogenic bacteria. Aquaculture 252: 79-84.
Basmal, JJT. Murtini dan Yunizal. 1999. Teknologi Ekstraksi Alginat dari Rumput Laut
Coklat . Badan penelitian dan Pengembangan Pertanian. Jakarta.
Batubara I, Darusman LK, Mitsunaga T, Rahminiwati M, Djauhari E. 2010. Potency of indonesia medicinal plants as tyrosinase inhibitors and antioxidant agent. J. Biol. Sci 10 (2) : 138-144.
Chee,  S-Y.,  Wong,  P-K.  &  Wong,  C-L.  2011.  Extraction  and  characterisation  of alginate  from  brown  seaweeds  (Fucales,  Phaeophyceae)  collected  from  Port Dickson, Peninsular Malaysia. Journal of Applied Phycology 23: 191-196.
Choudhury  S,  Sree  A,  Mukherjee  S  C,  Pattnaik  P  and  Bapuji  M.  Antibacterial  Algae and mangrove against fish pathogen, Asian Fisheries Sci ., 18 (2005) 287 – 296
Darusman LK, Sajuthi D, Sutriah K, Pamungkas D. 1995. Ekstraksi Komponen Bioaktif sebagai Bahan Obat dari Karang-Karangan, Bunga  Karang dan  Ganggang  Laut di  perairan  Pulau  Pari  Kepulauan  Seribu.  Buletin Kimia.  Bogor:  Institut Pertanian Bogor.
Dwijoseputro.  1987. dasar-dasar  Mikrobiologi .  Universitas  Brawidjaya,  Djambatan,
Malang.
Fitriany, P. 2012. Kandungan Fenol, Senyawa Fitokimia, Aktivitas Antioksidan Rumput Laut  Padina  australis. Bogor.  Departemen  Teknologi  Hasil  Perairan,  Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor.
Hadioetomo, Ratna Siri. 1993. Mikrobiologi dasar dalam Praktek , Teknik dan Prosedur Dasar Laboratorium. PT Gramedia, Pustaka Utama, jakarta.
Harborne  JB.  1987.  Metode Fitokimia.  Padmawinata  K,  Soediro  I,  Penerjemah;
Niksolihin S, Editor. Bandung: ITB. Terjemahan dari: Phytochemical Methods. Handayani,  S.  Setia,  TM.  Rahayu,  SE.  2014.  Pengenalan  makro  alga  Indonesia.  Dian Rakyat.  Jakarta.
Izzati,  M.  2007.  Skreening  potensi  antibakteri  pada  beberapa  spesies  rumput  laut terhadap bakteri patogen pada udang windu. Bioma  ISSN : 1410-8801 , 9(2): 62- 67.
Jones,  O.A.H.,  Voulvoulis,  N.  &  Lester,  J.N.  2004.  Potential  ecological  and  human health risks associated with the presence of pharmaceutically active compounds in the aquatic environment. Critical Reviews in Toxicology 34: 335-350.
Kayis, S., Ozcelep, T., Capkin, E. & Altinok, I. 2009. Protozoan and metazoan parasites of  cultured  fish  in  Turkey  and  their  applied  treatments. The  Israeli  Journal  of Aquaculture 61: 93-102.
Kerans FA. 2010. Optimasi lama waktu maserasi dan volume metanol terhadap aktivitas antibakteri  ekstrak Padina sp.  (Linn.)  pada Klebsia  pneumoniae MGH  76578,
Staphylococcus aureus SNCC 0047, dan Bacillus subtilis SNCC 0061  [skripsi].
Yogyakarta (ID): Universitas Atma Jaya Yogyakarta.
Kardono,  L.B.  2004.  Prospecting  on  Marine  Natural  Products  for  Potensial  Functional Foods    and    Bioactive  Substance . Makalah  disampaikan  pada  forum Bioteknologi  Kelautan  dan  Perikanan,  Badan  Riset  Kelautan  dan  Perikanan.
Departemen Kelautan dan Perikanan, 25 Maret 2004. 15 pp.
Mtolera  and  AK.  Semeso.  1996.  Antimicrobial  Activity  of  Extracts  from  Six  Green
Algae from Tanzania. University of Dar es Salaam. Tanzamania.
Misonou,  T.  Saitoh,  J.  Oshiba,  S.  Tokitomo,  Y.  Maegawa,  M.  Inoue,  Y.  Hori,  H  and Sakurai,  T.  2003.  UVAbsorbing  Substance  in  Red  Alga  Porphyra  Yezoensis (Bangiales,  Rhodophyta)  Block  Thymine  Photodimer  Production. Mar. Biotechnol . 5 : 194-200
Pelczar,  M.  J  dan  E.C.S.  dan  Chan.  1988.  Dasar-Dasar  Mikrobiologi  Jilid  2.  Alih Bahasa  R.S.  Hadioetomo,  T.  Imas,  S.S.  Tjitrosomo  dan  S.L.  Angka.  Penerbit Universitas Indonesia. Jakarta. 88 hal.
Pratomo,  H.  Sulistyowati,  L.  2001.  'Studi  Karakter  Fisika  dan  Kimia  Perairan  Pulau Kelapa  untuk  Penentuan  Lokasi  Budidaya  Rumput  Laut'.  Laporan  Penelitian, Universitas Terbuka, Universitas Terbuka, Jakarta
Prajitno, A. 2006. Pengendalian Penyakit Vibrio harveyii dengan Ekstrak Rumput laut
( Halimeda opuntia )  pada  Udang  Windu  ( Penaeus  monodon  Fab)  PL-13 . Disertasi. Program Pascasarjana Universitas Brawijaya Malang.
Putra,  I.N.  K.  2007.  Study  Daya  Antimikroba  Ekstrak  Beberapa  Bahan  Tumbuhan Pengawet  Nira  Terhadap  Mikroba  Perusak  Nira  Serta  Kandungan  Senyawa Aktifnya. Disertasi.
Premanathan,  M.,  Rajendran,  S.,  Ramanathan,  T.,  Kathiresan,  K.,  Nakashima,  H.  & Yamamoto, N. 2000. A survey of some Indian medicinal plants for anti-human immunodeficiency  virus  (HIV)  activity. Indian  Journal  of  Medical  Research 112: 73-77.
Rajendra,  C.E.,  Gopal  S.,  Mahaboob  Ali.,  Yashoda  S.V.,  Manjula  M.  2011.
Phytocemical  screening  of  the  Rhizome  of  Kaempferia  galanga .  Internasional Journal of Pharmacognosy and Phytocemical Research 2011:3 (3): 61-63
Salem,  WM.  Galal,  H.  Nasr,  EF.  2011.  Screening  for  antibacterial  activities  in  some marine  algae  from  The  Red  Sea  (Hurghada,  Egypt). African  Journal  of Microbiology Research , 5 (15): 2160-2167.
Salosso, Y. 2012.  Pemberian ekstrak aseton Padina Australis sebagai antibakteri alami dalam  pengobatan  ikan  kerapu  tikus  ( Cromileptus  altivelis )  yang  terinfeksi Vibrio alginolyticus . Jurnal Bahan Alam Indonesia , Vol. 8 No. 1 Smith, P., M.P. Hiney and O.B. Samuelsen. 1994. Bacterial resistance to antimicrobial agents used in  fish farming. Annual Review of Fish Diseases  4: 273-313.
Volume 3, Nomor 2, 2016
http://utu.ac.id/index.php/jurnal.html ISSN: 2355-5564
Siddhanta, A.K,  K.H. Mody,  B.K. Ramavat, V.D.  Chauhan, H.S.  Garg,  A.K.  Goel, M. Jinandra  Doss,    M.N.  Srivastava,  G.K.  Patnaik  and  V.P.  Kamboj.  1997. Bioactivity  of  marine  organisms:  Part    VIII-Screening  of  some  marine  flora  of Western coast of India. Indian Journal Experimental  Biology 35:638-643.
Taskin, E., Oz. turk, M. & Kurt, O. 2007. Antibacterial activities of some marine algae from the Aegean Sea (Turkey). African Journal Biotechnology 6: 2746-2751.
Vitor  J.M,  Carvalho  A.F.F.U,  Freitas  S.M,  Melo  V.M.M.  2002.  Antibacterial  Activity of  Extracts  of    Six  Macroalgae  From  The  Northeastern  Brazilian  Coast.. Departamento de Microbiologia, Instituto de Ciencias Biologicas, Universidade Federal  de  Minas  Gerais,  Belo  Horizonte;Departamento  de  Biologia, Universidade  Federal  do  Ceara,  Fortaleza,  CE,  Brasil.  Brazilian Journal  of Microbiology . 33:311-313.
Zainuddin,  EN.  Malina,  AC.  2009.  Skrining  Rumput  Laut  Asal  Sulawesi  Selatan sebagai  Antibiotik  Melawan  Patogen  pada  Ikan.  Laporan  Penelitian  Research Grant, IMHERE-DIKTI, IMHERE DIKTI.