Jurnal Silvikultur Tropika Vol. 06 No. 1, April 2015, Hal 55-58 ISSN: 2086-8227

## PERTUMBUHAN RADIAL DAN PRODUKSI BIOMASSA CENDAWAN ENTOMOPATOGEN Beauveria bassiana PADA BERBAGAI MEDIA
Radial Growth and Biomass Production of Entomopathogenic Fungal Beauveria bassiana on Various Media
Dewi Ramdhania, Achmad dan Noor Farikhah Haneda

## Departemen Silvikultur, Fakultas Kehutanan, IPB

## ABSTRACT
Three  different  types  of  solid  and  liquid  media  were  used  to  determine  radial  growth  and  biomass  production  of Beauveria  bassiana .  Radial  growth  in  solid  media  was  observed  for  about  15  day  after  inoculation  by  measuring  the fungal  colony  diameter  every  24  hours.  Maximum  average  growth  is  obtained  in  SDAY  media  (5.31  cm)  followed  by PDA(4.79 cm) and MEA (4.21 cm). While SDBY (0.24 g) as the liquid medium used for the biomass production after 4 weeks of incubation obtained the highest biomass followed by MEB (0.19 g) and PDB (0.18 g). The result showed that Sabouraud Dextrose with Yeast Extract is the most suitable medium for B. bassiana growth.
Key words : Beauveria bassiana, media, radial growth, biomass production

## PENDAHULUAN
Untuk  mengantisipasi  berbagai  dampak  negatif akibat  penggunaan  insektisida  kimia  kini  banyak dikembangkan  insektisida  berbahan  aktif  agens  hayati seperti  cendawan  entomopatogen. Beauveria  bassiana merupakan  salah  satu  dari  sekian  banyak  spesies cendawan  yang  dikembangkan  sebagai  agens  hayati untuk  mengendalikan  serangga  hama. B.  bassiana memiliki  tipe  pertumbuhan  dimorfik  yaitu  pada  saat tidak  ada  serangga  inang  yang  spesifik, B.  bassiana mengalami siklus hidup aseksual (Wan 2003). Aplikasi B.  bassiana yang  efektif  adalah  dengan cara  menyemprot  kanopi  tanaman  dengan  suspensi konidia B.  bassiana agar  terjadi  kontak  dengan  hama sasaran,  atau  ditaburkan/disemprotkan  pada  permukaan tanah,  atau  dicampur  dengan  tanah  atau  kompos (Soetopo 2007).
Khashaveh et al. (2011) menyatakan bahwa saat ini beberapa formulasi B. bassiana tersedia secara komersil dan terdaftar untuk digunakan pada fasilitas penyimpanan. Cendawan entomopatogen dapat digunakan untuk mengendalikan sisa hama pada tempat penyimpanan  yang  kosong  sebelum  hasil  panen  yang baru  dimasukkan  ke  dalam  tempat  penyimpanan tersebut.
Daya  simpan  produk  agens  hayati  juga  merupakan salah  satu  hal  yang  penting  untuk  dikaji.  Faria et  al. (2012)  memodifikasi  kemasan  produk B.  bassiana untuk  memperpanjang  daya  simpan  konidia  pada  suhu tinggi.
Sebagaimana  organisme  lainnya, B.  bassiana memerlukan nutrisi untuk pertumbuhannya. Mehta et al. (2012)  mengungkapkan  bahwa  sumber  karbon  terbaik untuk  memproduksi  biomassa B.  bassiana adalah
fruktosa  jika  dibandingkan  dengan  laktosa  dan dekstrosa.  Sementara  Sahayaraj  (2008)  menyatakan bahwa  wortel  dapat  dijadikan  media  padat  yang memproduksi  biomassa  tertinggi  dibandingkan  serbuk gergaji dan sekam padi.
Untuk  mencapai  pertumbuhan  optimal B.  bassiana membutuhkan  nutrisi  dari  media  yang  sesuai.  Hal  ini berkaitan  dengan  perbanyakan  isolat  secara  massal. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapatkan  media tumbuh  yang  paling  sesuai  untuk  memperbanyak  isolat B. bassiana .

## BAHAN DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan  penelitian  yang  digunakan  antara  lain  isolat B.  bassiana ,  PDA  ( Potato  Dextrose  Agar ), Malt Extract ,  SDA  ( Sabouraud  Dextrose  Agar ), Yeast Extract , peptone, dextrose, pure agar , kentang, aquades, dan antibiotik kloramfenikol. Sedangkan peralatan yang digunakan  antara  lain cawan  petri , botol  selai ,  laminar air flow , autoclave, dan beberapa peralatan laboratorium lainnya.

## Metode
Pertumbuhan  radial  koloni B.  bassiana pada  media padat secara in vitro
Isolat B.  bassiana diperoleh  dari  Balai  Besar Perbenihan dan Proteksi Tanaman Perkebunan (BBP2TP)  Surabaya.  Media  tumbuh  padat  yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  PDA, Malt Extract  Agar (MEA),  dan  SDAY  ( Sabouraud  Dextrose Agar ditambah Yeast Extract ).
Metode  pengujian  pertumbuhan  radial  koloni  dan pertumbuhan  biomassa B.  bassiana mengacu  pada Senthamizhlselvan et  al (2010).  Isolat B.  bassiana berdiameter  8  mm  diinokulasikan    di  tengah  masing- masing  media  yang  telah  dituang  ke  cawan  petri berukuran  9  cm  secara  aseptik.  Isolat B.  bassiana diinkubasikan di laboraturium dengan ulangan dilakukan  sebanyak  4  kali.  Respon  pertumbuhan  radial dihitung  dengan  metode  mengukur  pola  pertumbuhan radial  yang  berupa  diameter  koloni.  Diameter  koloni ditentukan dengan cara membuat garis tegak lurus yang melewati  sumbu  koloni.  Batas  terluar  dari  koloni  yang merupakan  diameter  harian  ( )  ditandai  dan diukur  setiap  hari  sampai  salah  satu  cawan  petri dipenuhi  oleh  koloni  miselium B.  bassiana .  Rata-rata diameter harian didapatkan dari rumus berikut ini
Keterangan :
D : diameter rata-rata (cm)
: diameter pada sumbu x (cm)
: diameter pada sumbu y (cm)
Pertumbuhan  Biomassa B.  bassiana pada  Media Cair Secara In Vitro
Media  tumbuh  cair  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah Potato  Dextrose  Broth (PDB), Malt  Extract Broth (MEB), dan Sabouraud Dextrose Broth ditambah Yeast  Extract (SDBY).  Setiap  50  ml  media  cair dimasukkan  ke  dalam  botol  selai  lalu  disterilisasi menggunakan autoclave dengan  suhu  121 ⁰ C  dan tekanan  1  atm  selama  15  menit.  Isolat B.  bassiana berumur  3  bulan  dengan  diameter  8  mm  ditumbuhkan secara  aseptik  ke  dalam  botol  selai  yang  berisi  media yang  sudah  steril  kemudian  diinkubasikan  selama  4 minggu  (Gambar  1).  Ulangan  dilakukan  sebanyak  7 kali.
Gambar 1 Isolat  yang  ditumbuhkan  pada  media  cair  di botol selai.
Biomasa B.  bassiana dihitung  pada  minggu  ke empat  setelah  ditumbuhkan  pada  media.  Miselia B. bassiana dipisahkan dari media PDB, MEB, dan SDBY menggunakan  kertas  saring  yang  telah  diketahui  berat keringnya.  Kertas  saring  dan  miselia  yang  tersaring dikeringkan  dengan  oven  selama  24  jam  pada  suhu
60°C untuk memperoleh berat kering miselia dan kertas saring, sehingga biomassa B. bassiana dapat ditentukan dengan rumus
Biomassa (g) = B2 – B1
Keterangan : B2 = Berat kering miselia dan kertas saring (g) B1 = Berat kering kertas saring (g).

## Analisis Data
Analisis  ragam  dilakukan  terhadap  data  respon pertumbuhan  isolat B.  bassiana pada  berbagai  media kultur  menggunakan  program  SAS.  Analisis  dilakukan pada  taraf  uji  5%  dan  jika  pengaruh  perlakuan  bersifat nyata maka dilanjutkan dengan uji Duncan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Respon pertumbuhan radial koloni B. bassiana pada media padat secara in vitro
Gambar 2 Laju  pertumbuhan  koloni B.  bassiana pada media  PDA,  MEA,  dan  SDAY  selama  15 hari setelah ditumbuhkan.
Data pengukuran koloni B. bassiana pada hari ke 15 setelah tanam (hst) pada media PDA, MEA, dan SDAY secara berurutan adalah 4.79 cm, 4.21 cm, dan 5.31 cm (Gambar  2).  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  Desyanti (2007)  yang  mengungkap  pertumbuhan  radial B. bassiana dalam  media  SDAY  selama  15  hst  berkisar antara 3.98 cm sampai dengan 5.36 cm.
Desyanti  (2007)  juga  menyatakan  bahwa  spesies cendawan  entomopatogen B.  bassiana menunjukkan pertumbuhan  yang  lebih  lambat  dibandingkan  dengan pertumbuhan  spesies  cendawan  entomopatogen  lainnya seperti Fusarium  oxysporum dan Aspergillus  flavus yang  sudah  memenuhi  cawan  petri  berukuran  9  cm dalam  waktu  dua  minggu.  Data  tersebut  juga  sesuai dengan  hasil  penelitian  Senthamizhlselvan et  al (2010) yang  mengungkapkan  bahwa  koloni B.  bassiana pada media  yang  mengandung Sabouraud  Dextrose  Agar mengalami  pertumbuhan  radial  yang  lebih  cepat dibandingkan  dengan  koloni B.  bassiana pada  media PDA.
Tabel 1  Hasil  uji  lanjut  Duncan  pengaruh  jenis  media padat  terhadap  pertumbuhan  diameter  rata-rata
B. bassiana . Jenis Media Diameter rata-rata (cm) * SDAY 2.85042 a PDA 2.59125 b MEA 2.34125 c
*Nilai  diameter  yang  diikuti  huruf  yang  berbeda  menunjukkan perbedaan  nyata  pada  taraf  α  0.05  berdasarkan  uji  jarak  berganda Duncan.
Pertumbuhan  radial  koloni B.  bassiana pada  media PDA,  MEA,  dan  SDAY  selama  15  hst  menunjukkan hasil  yang  berbeda  nyata  antar  masing-masing  media. Pertumbuhan  radial  koloni B.  bassiana yang  tercepat diperoleh  pada  media  SDAY  yang  diikuti  oleh  media PDA  dan  MEA  (Tabel  1).  Dengan  demikian  dapat diketahui  bahwa  di  antara  ketiga  media  yang dibandingkan,  media  SDAY  mengandung  nutrisi  yang paling  optimal  untuk  perkembangan  radial  koloni B. bassiana pada  media  padat  secara in  vitro .  Diameter koloni  pada  substrat  yang  miskin  nutrisi  sering  terlihat mirip  dengan  jenis  media  lain  yang  lebih  kaya  nutrisi namun pertumbuhannya terlihat sangat tipis (Kamp et al 2002)
Respon  Pertumbuhan  Biomassa B.  bassiana pada Media Cair Secara In Vitro
Biomassa B.  bassiana yang  diinkubasikan  pada media  PDB,  MEB  dan  SDBY  selama  4  minggu  secara berturut-turut  adalah  0.18  g,  0.19  g,  dan    0.24  g. Sehingga  dapat  diketahui  bahwa  biomassa  tertinggi diperoleh isolat yang diinkubasikan pada media SDBY, diikuti oleh isolat pada media MEB, dan biomassa yang terendah  diperoleh  isolat  yang  diinkubasikan  pada media PDB ( Gambar 3).
Gambar 3 Biomassa B.bassiana pada  media  PDB, MEB, dan SDBY selama 4 minggu.
Tabel 2   Hasil  uji  lanjut  Duncan  pengaruh  jenis  media cair terhadap produksi biomassa B. bassiana . Jenis Media Biomassa (g) * SDBY 0.24286 a MEB 0.19286 b PDB 0.18571 b
*Nilai  biomassa  yang  diikuti  huruf  yang  berbeda  menunjukkan perbedaan  nyata  pada  taraf  α  0.05  berdasarkan  uji  jarak  berganda
Duncan .
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa  produksi biomassa B. bassiana pada media SDBY berbeda nyata terhadap  biomassa B.  bassiana pada  media  PDB  dan MEB  (Tabel  2)  sedangkan  produksi  biomassa B. bassiana pada  media  PDB  dan  MEB  tidak  berbeda nyata.  Hal  ini  bertolak  belakang  dengan  pertumbuhan radial koloni B. bassiana pada media padat antara PDA dan MEA yang menunjukkan perbedaan yang nyata.
Namun  demikian  terdapat  korelasi  antara  nilai biomassa B.  bassiana pada  media  tumbuh  cair  dengan pertumbuhan  radial  koloni B.  bassiana pada  media tumbuh  padat.  Dari  kedua  tipe  media  tumbuh  tersebut dapat  diketahui  bahwa  media  tumbuh  cair  SDBY menghasilkan  biomassa B.  bassiana terbesar,  linear dengan  hasil  pertumbuhan  radial  koloni B.  bassiana pada  media  tumbuh  padat  SDAY  yang  menunjukkan hasil tercepat. Sehingga media SDBY dan SDAY adalah yang  paling  sesuai  untuk  produksi  biomassa  ataupun pertumbuhan  radial  koloni B.  bassiana .  Kandungan nutrisi  dari  media  tersebut  yang  menyebabkan pertumbuhan B.  bassiana menjadi  optimal  (Tabel  3). Sharma  (2002) dalam Senthamizhlselvan et  al. (2010) melaporkan bahwa pertumbuhan B. bassiana yang baik dengan  medium  cair  Sabouraud  mungkin  dikarenakan keberadaan pepton sebagai sumber nitrogen.
Tabel 3  Daftar  komposisi  nutrisi  yang  terdapat  pada
masing-masing media tumbuh Media Komposisi Gram/liter SDAY Peptone Dextrose Agar Yeast Extract 2.5 10 3.75 2.5 MEA Malt Extract Agar 15 15 PDA Kentang Dextrose Agar 200 20 15 SDBY Peptone Dextrose Yeast Extract 2.5 10 2.5 MEB Malt Extract 15 PDB Kentang Dextrose 200 20
Nitrogen  merupakan  unsur  yang  berperan  dalam pembentukan  molekul  protein  dan  asam  nukleat  yang salah  satu  fungsinya  adalah  sebagai  sumber  energi, sehingga  isolat B.  bassiana yang  ditanam  pada  media yang  lebih  banyak  mengandung  molekul  nitrogen memiliki  sumber  energi  yang  lebih  besar  untuk melakukan  aktivitas  selulernya  dalam  membentuk  sel- sel  baru.  Selain  itu  karbon  yang  merupakan  unsur penting  sebagai  penyusun  komponen  dinding  sel tersedia  dalam  dextrose.  Hasilnya  adalah  pertumbuhan radial  koloni B.  bassiana lebih  cepat  dan  produksi biomassanya  lebih  tinggi  pada  media  Sabouraud dibandingkan dengan media lainnya.
Jenis media cair

## KESIMPULAN
Media  padat  SDAY  dan  media  cair  SDBY merupakan  media  tumbuh  yang  paling  sesuai  untuk pertumbuhan dan perbanyakan cendawan B. bassiana .

## DAFTAR PUSTAKA
Desyanti.  2007.  Kajian  Pengendalian  Rayap  Tanah
Coptotermes spp . (Isoptera: Rhinotermitidae) Dengan  Menggunakan  Cendawan  Entomopatogen Isolat  Lokal  [disertasi].  Bogor  (ID):  Institut Pertanian Bogor.
Faria  M,  JH  Hotchkiss,  SP  Wraight.  2012.  Application Of  Modified  Atmosphere  Packaging  (Gas  Flushing And  Active  Packaging)  For  Extending  The  Shelf Life  Of  Beauveria  bassiana  Conidia  At  High Temperatures. Biological Control. 61:78-88.
Kamp  AM,  MJ  Bidochka.  2002.  Conidium  Production by  Insect  Pathogenic  Fungi  on  Commercially Available Agars. Lett Appl Microbiol 35:74-77.
Khashaveh  A,  Y  Ghosta,  M  H  Safaralizadeh,  M  Ziaee. 2011.  The  Use  Of  Entomopathogenic  Fungus, Beauveria  bassiana  In  Assays  With  Storage  Grain Beetles. J. Agric. Sci. Tech 13: 35-43.
Mehta  J,  Madhulika  J,  Sudha  C,  Jishan  M,  Dilip  S,
Pawan  K,  Priyanka  G,    and  Meenu  M  N.  2012. Impact  of  Carbon  &  Nitrogen  Sources  on  The Trichoderma  viride  (Biofungicide)  And  Beauveria bassiana (entomopathogenic fungi). European Journal of Experimental Biology 2(6) : 2061-2067. Sahayaraj  K,  SKR  Namasivayam.  2008.  Mass Production  Of  Entomopathogenic  Fungi  Using Agricultural  Products  And  By  Products.  African Journal  of  Biotechnology  Vol.  7  (12),  pp.  1907- 1910.
Senthamizhlselvan  P,  J  Alice  R.  P.  Sujeetha,  C Jeyalakshmi.  2010.  Growth,  Sporulation  and Biomass  Production  of  Native  Entomopathogenis Fungal  Isolates  on  A  Suitable  Medium.  Journal  of Biopesticides 3(2): 466-469.
Soetopo  D  dan  Igaa  Indrayani.  2007.  Status  Teknologi dan Prospek Beauveria bassiana
Untuk
Pengendalian Serangga Hama Tanaman Perkebunan Yang Ramah Lingkungan. Perspektif , 6, 29-46. Wan H. 2003. Molecular Biology of The Entomophatogenic  Fungus  Beauveria  bassiana: Insect-cuticle Degradation Enzyms and Development of A New Selection Marker for Fungal Transformation [Inaugural Dissertation]. Heidelberg: Ruprecht Karls Universitat.