## UJI EFEKTIVITAS EKSTRAK DAUN KETAPANG ( Terminalia catappa

## L.) TERHADAP BAKTERI Bacillus amyloliquefaciens
Putricia V. Tampemawa 1) , Johanis J. Pelealu 1) , Febby E.F. Kandou 1)
1) Jurusan Biologi Fakultas MIPA Universitas Sam Ratulangi, 95115

## ABSTRACT
Tropical Almond plant (Terminalia catappa L.) is commonly found in the Pacific region, especially in Indonesia. Terminalia catappa L. has many benefits, mainly as a traditional medicinal plant. Bacillus amyloliquefaciens  is  a  soil  bacterium  of  the  genus  Bacillus.  The  bacteria  are  devoted  to  produce antibiotics. The aim of this research is to determine the effectiveness of tropical almond leaf extract againts B. amyloliquefaciens. The Kirby-Bauer method is used to determinate the effectiveness of the clear  zone,  formed  by  antibacterial  compounds  that  diffuse  in  bacterial  growth  media.  The  results showed,  more  concentration  of  the  extract  which  are  given,  greater  the  clear  zone  that  forms. Tropical almond antibacterial effectiveness is not better than the antibiotics tested.
Key words : Antibacterial, Bacillus amyloliquefaciens, Terminalia catappa. L

## ABSTRAK
Tanaman Ketapang ( Terminalia catappa L.) merupakan tanaman yang banyak ditemukan di daerah Pasifik  terutama  di  Indonesia,  selain  itu  memiliki  banyak  manfaat  terutama  fungsinya  sebagai tanaman obat tradisional. Bakteri Bacillus amyloliquefaciens merupakan salah satu bakteri tanah dari genus Bacillus. Bakteri tersebut dikhususkan untuk menghasilkan antibiotik. Penelitian ini bertujuan untuk  menentukan  efektivitas  ekstrak  daun  ketapang  terhadap  pertumbuhan  bakteri B. amyloliquefaciens .  Metode  yang  digunakan  adalah  metode  Kirby-Bauer,  dimana  penentuan efektivitas dilakukan berdasarkan zona bening yang terbentuk akibat pemberian senyawa antibakteri yang  berdifusi  pada  media  tumbuh  bakteri.  Hasil  menunjukan  bahwa  semakin  besar  pemberian konsentrasi  ekstrak  (90%)  maka  zona  bening  yang  terbentuk  semakin  besar.  Nilai  efektivitas antibakteri ketapang tidak lebih baik dari pada antibiotik yang diujikan.
Kata Kunci : Antibakteri, Bacillus amyloliquefaciens , Terminalia catappa. L

## PENDAHULUAN
Penyebaran penyakit yang diakibatkan  oleh  mikroorganisme  perlu dikendalikan agar dapat menekan penyebaran, perusakan, infeksi dan pembusukan pada inang atau produk yang terinfeksi  (Gustiani,  2009).  Pembasmian mikroorganisme pada inang yang terinfeksi  dapat  menggunakan  pestisida, bakterisida, fungisida, serta agen biokontrol berupa mikroorganisme. Di era globalisasi,  penggunaan  mikroorganisme untuk  meningkatkan  ketahanan  tanaman terhadap  cekaman  biotik  sudah  mulai mengalami  peningkatan  (Gul et  al., 2008;
Pastra,  2012).  Bakteri  rhizosfer  seperti Arthobacter, Pseudomonas, Serratia, Streptomyces,  dan  Bacillus    merupakan agen  biokontrol  yang  paling  umum digunakan untuk melawan bakteri patogen pada  tanaman  (Kloepper et  al .,  2004;  Gul et al., 2008; de Vasconcellos dan Cardoso,
2009).  Agen  biokontrol  dari  genus Bacillus  sudah  banyak  digunakan  untuk mengontrol  hama  dan  penyakit  pada tanaman  (Jacobsen et  al .,  2004).  Bakteri dari genus ini diketahui mampu mensekresikan  enzim  protease,  kitinase dan  lipopeptida  yang  berpotensi  dalam melisiskan  dinding  sel  bakteri  dan menghambat  pertumbuhannya  (Kloepper et  al .,  2004;  de  Azaredo et  al .,  2004; Rodas-Junco et  al .,  2009). Bacillus amyloliquefaciens merupakan  salah  satu bakteri dari genus Bacillus yang menunjukkan aktivitas
biokontrol.
Sebanyak  kurang  lebih  8%  dari  total genom B.  amyloliquefaciens dikhususkan
untuk menghasilkan antibiotik (Arguelles- Arias et al ., 2009; Borriss et al., 2011).
Bakteri  yang  berperan  sebagai  agen biokontrol  dapat  menghasilkan  senyawa antibakteri,  namun  pertumbuhan  agen biokontrol ternyata dapat dipengaruhi oleh senyawa-senyawa  lain  yang  memiliki aktivitas  antibakteri.  Maji  dan  Shaibu (2012)  melaporkan  bahwa  senyawa- senyawa  antibakteri  seperti  ampicilin, higomicin,  kanamicin  dan  rifampicin dapat  menghambat pertumbuhan beberapa koloni bakteri yang berperan sebagai agen biokontrol  seperti Bacillus  subtilis dan Pseudomonas fluorescens . Penelitian Maji dan  Shaibu  (2012)  menunjukkan  bahwa senyawa-senyawa  yang  memiliki  aktivitas antibakteri dapat menghambat pertumbuhan koloni bakteri yang berperan sebagai  biokontrol.  Tanaman  ketapang ( Terminalia  catappa L.)  merupakan  salah satu  tanaman  anggota  suku  Combretaceae yang berasal dari Asia Tenggara, khususnya  kepulauan-kepulauan  Melayu. Nilai guna dari tanaman ini sangat banyak, salah satunya sebagai antibakteri (Hardhiko et al ., 2004). Chee Mun (2003) melaporkan  bahwa  ekstrak  daun  ketapang mengandung senyawa tanin dan flavonoid yang diduga bersifat antibakteri.
Pemberian ekstrak ketapang menunjukkan daya hambat pada beberapa bakteri seperti Aeromonas salmonicida , Aeromonas hydrophila,
Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus (Sumino et  al .,
2013;  Rahardjo et  al .,  2014).  Sebagai antibakteri, kandungan metabolit sekunder pada serasah daun-daun ketapang
berpotensi  menghambat  pertumbuhan  dan perkembangan  bakteri  dari  genus  Bacillus di akar tanaman. Kajian untuk mengevaluasi pengaruh antibakteri ekstrak daun  ketapang  ( Terminalia  catappa L.)
terhadap aktivitas biokontrol B. amyloliquefaciens
belum diketahui dampak  efektivitasnya.  Oleh  karena  itu, dalam penelitian ini akan dilihat efektivitas ekstrak daun ketapang ( Terminalia catappa L.) terhadap pertumbuhan koloni bakteri agen biokontrol B. amyloliquefaciens .

## METODE PENELITIAN
Pembuatan Medium Bakteri dan
Pembiakan Bakteri
Penelitian ini menggunakan medium Nutrient  Agar (NA)  dan Nutrient  Broth (NB).  NA  yang  akan  dibuat  sebanyak  1.5 g  dalam  75  mL  aquades  dan  NB  0,26  g dalam  20  mL  aquades.  Larutan  NA  dan NB  dibuat  dalam  tabung  erlenmeyer selanjutnya  dipanaskan  menggunakan hot plate sampai  larutan  homogen,  kemudian diautoklaf  selama  15  menit  dengan  suhu 121ºC  di  bawah  tekanan  15  lbs.  Biakan murni  bakteri Bacillus sp . yang  akan digunakan,  diinokulasi  secara  aseptik  ke dalam 2 tabung reaksi yang berisi medium NB steril sebanyak 15  mL. Tabung reaksi diinkubasi pada suhu kamar selama 1 x 24 jam.
Pembuatan  Ekstrak  Daun  Ketapang ( Terminalia  catappa L.)  dan  Larutan

## Kontrol
Daun  ketapang  yang  digunakan adalah  daun  segar,  kemudian  dikeringkan dengan  cara  diangin-anginkan.  Daun
ketapang  yang  telah  kering  kemudian  di buat  serbuk  dengan  cara  diblender  hingga halus.  Serbuk  kemudian  ditapis  untuk mendapatkan  serbuk  yang  benar-benar halus. Serbuk ketapang ditimbang sebanyak  15  g  kemudian  dimaserasi dengan  pelarut  etanol  96%  sebanyak  150 mL selama 3 x 24 jam. Setelah dimaserasi, larutan  kemudian  di  saring  dengan menggunakan  kertas  saring Whatman no 11  untuk  memisahkan  residu  dari  filtrat. Ekstrak  etanol  96%  yang  telah  disaring kemudian dievaporasi dengan menggunakan  evaporator.  Ekstrak  hasil evaporator  berupa  pasta  dibuat  menjadi  3 konsentrasi yang berbeda yaitu 30%, 60%, dan  90%  dengan  cara  diencerkan  dengan aquades.  Larutan  antibiotik  pembanding yaitu Kotrimoksazol 10 mg yang dilarutkan  dalam  10  mL  aquades.  (Hasbi dan Tobo, 2002)
Pengujian  Daya  Hambat  Ekstrak  Daun Ketapang ( Terminalia catappa L.) terhadap Bakteri Bacillus sp.
Penelitian  ini  menggunakan  metode Kirby-Bauer,  yaitu  metode  difusi  dengan menggunakan  kertas  cakram.  Biakan bakteri Bacillus sp . dipindahkan  secara aseptik  sebanyak  3    mL  dari  medium  NB ke  cawan  petri  steril  yang  telah  berisi medium  NA  yang  masih  cair,  lalu digoyang  secara  perlahan-lahan  sampai suspensi Bacillus sp . tersebar  secara merata.  Setelah  medium  memadat,  kertas cakram  masing  masing  dimasukan  ke dalam  konsentrasi  ekstrak  daun  ketapang yang  telah  dibuat  yaitu  30%,  60%,  dan 90%  serta  larutan  antibiotik  sebagai kontrol  positif  dan  aquades  sebagai
kontrol  negatif  selama  2  menit.  Kertas cakram  yang  telah  direndam  kemudian diangkat  menggunakan  pinset  steril  dan dipindahkan secara aseptik pada permukaan  medium  NA  yang  telah memadat, setelah itu diinkubasi pada suhu 40ºC  selama  1x24  jam.  Pengujian  daya hambat  ekstrak  daun  ketapang  terhadap bakteri Bacillus sp . dilakukan  sebanyak  3 kali  pengulangan.  Zona  bening  yang terbentuk  setelah  masa  inkubasi  dihitung dengan menggunakan jangka sorong.

## Identifikasi Bakteri
Materi  genetik  bakteri Bacillus sp. berupa  DNA  total,  di  isolasi  dengan menggunakan  teknik spin  column  based sesuai  dengan  prosedur (Lubenow et  al ., 2008;  Davenport,  2014).  Gen  yang mengekspresikan  RNA  Ribosomal  (16s rRNA gene ) diekstrak dari bakteri Bacilus sp.  yang  dibiakan  dalam  medium  NB ( Nutrient  Broth ).  Teknik  PCR  dilakukan untuk  memperbanyak  fragmen  DNA  16s rRNA.  Primer  gen  16s  rRNA  yang digunakan  yaitu  27F  (5’-AGA  GTT  TGA TCM TGG CTC AG- 3’) dan 1492R (5’ - GGT  TAC  CTT  GTT  ACG  ACTT-  3’), primer  tersebut  telah  digunakan  dalam penelitian  filogeni  dan  identifikasi  bakteri (Pradhab  dan  Selvisabhanayakam,  2011; Wang et  al., 2014).  Proses  elektroforesis dilakukan  untuk  mengetahui  berhasil tidaknya  Gen  16s  rRNA  teramplifikasi (Sambrook dan Russel, 2006). Selanjutnya proses Sekuensing dilakukan oleh penyedia  jasa  sekuensing First  Base Malaysia (Kolondam, 2015).

## Analisis Data
Perbandingan zona daya hambat dari ekstrak  daun  ketapang  disajikan  dalam tabel  dan  gambar.  Perhitungan  efektivitas antibakteri konsentrasi ekstrak daun ketapang  terhadap  antibiotik  dihitung berdasarkan  persamaan  (Tangapo,  2005), yaitu :
E = (D/Da) x 100% Keterangan : E : efektivitas antibakteri (%) D :  diameter  zona  hambat  ekstrak tumbuhan ketapang (mm)
Da :  diameter  zona  hambat  antibiotik
(mm)
Hasil  sekuensing  yang  dilakukan oleh  penyedia  jasa  sekuensing First  Base Malaysia , disunting dengan menggunakan progam  software  komputer Geneious v5.6.4 (Kolondam , 2015).
Hasil dan Pembahasan Ekstraksi  Daun  Tanaman  Ketapang ( Terminalia catappa L.)
Metode  ekstraksi  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  cara  dingin, yaitu  maserasi.  Maserasi  merupakan  cara ekstraksi  yang  paling  sederhana.  Dasar dari  maserasi  adalah  melarutnya  bahan kandungan  simplisia  dari  sel  yang  rusak, yang terbentuk pada saat penghalusan, dan difusi  bahan  kandungan  dari  sel  yang masih utuh. Proses maserasi akan berakhir ketika  bahan  yang  diekstraksi  dari  bagian dalam  sel  telah  berdifusi  ke  larutan  dan terjadi  keseimbangan  yang  menandakan berakhirnya  proses  difusi  (Istiqomah,
2013).  Pelarut  yang  dipakai  dalam penelitian  ini  adalah  etanol  (96%)  karena menurut  Harborne  (1996)  pelarut  yang dipakai  dalam  proses  ekstraksi  harus sesuai  dengan  sifat  kepolaran  senyawa aktif  yang  terkandung  dalam  tanaman. Tanaman  ketapang  ( Terminalia  catappa L.)  mengandung  senyawa  aktif  seperti
flavonoid, tanin, fenol, diterpen, dan asam lemak  (Lin et  al .,  2000;  Pauly,  2001; Ahmed et  al ., 2005; Jaziroh, 2008;  Saroja et  al .,  2011).  Senyawa-senyawa  tersebut menunjukkan  aktivitas  antibakteri  dan bersifat  polar  sehingga  perlu  digunakan pelarut  yang  juga  bersifat  polar,  yaitu etanol.
(a) (b)
Gambar 1 . Daun tanaman ketapang ( Terminalia catappa L.) yang telah dihaluskan (a) dan dimaserasi (b).
Hasil penyaringan akan
meninggalkan  filtrat  yang  merupakan senyawa-senyawa  aktif  yang  terkandung dalam  tanaman  (Gambar  1).  Proses evaporasi harus dilakukan untuk memastikan kandungan residu sepenuhnya merupakan senyawa-senyawa aktif tanaman,  tanpa  etanol.  Etanol  merupakan senyawa  volatil  yang  mudah  menguap, sehingga  yang  tersisa  setelah  proses evaporasi  adalah  senyawa-senyawa  aktif yang diinginkan. Residu setelah evaporasi berupa  pasta  diambil  dan  dibuat  larutan ekstrak dengan konsentrasi 30%, 60% dan 90%  untuk  mewakili  konsentrasi  rendah, sedang,  dan  tinggi.  Pembuatan  larutan
ekstrak  dengan  berbagai konsentrasi dilakukan karena menurut Lathifah (2008), kemampuan ekstrak dalam menghambat pertumbuhan bakteri tergantung pada konsentrasi senyawa aktif yang terkandung dalam larutan ekstrak.

## Hasil Identifikasi Bakteri
Hasil sekuens yang didapatkan dari penyedia  jasa  sekuens  berupa  kromato gam  kemudian  disunting  dan  diedit dengan  menggunakan  pro  gam Geneious v.5.6 untuk mendapatkan daerah inti ( core region ).  Sekuens  urutan  awal  dan  urutan akhir  dihapus  kurang  lebih  150  bp. Penghapusan  sekuens  dilakukan  untuk
menghilangkan  sisa  sekuens  dari  primer yang  digunakan,  sisa  primer  tersebut menempel  pada  bagian  awal  dan  akhir sekuens.  Setelah  dilakukan  pengeditan sekuens,  maka  didapatkan  urutan  sekuens DNA gen 16s rRNA gene dengan panjang 795  bp.  Urutan  sekuens  tersebut  disalin dalam  format  FASTA  ( Fast  Alignment ) untuk  dilakukan  pencarian  kemiripan sekuens dalam situs NCBI BLAST ( Basic Local  Alignment  Search  Tool ).  Hasil identifikasi  bakteri  yang  diidentifikasi memiliki  keidentikan  dengan  spesies bakteri  dalam  genus Bacillus diantaranya Bacillus methylotriphicus , Bacillus subtilis dan Bacillus  amyloliquefaciens .  Hasil yang  paling  banyak  ditunjukan  oleh Bacillus amyloliquefaciens dengan jumLah  yang  tinggi  dalam  basis  data. Maka  spesies  bakteri  yang  diidentifikasi merupakan  spesies  yang  termasuk  dalam genus Bacillus , yaitu Bacillus amyloliquefaciens . Gambar 2. Zona Bening Ekstrak Ketapang ( Terminalia catappa L.) pada Pertumbuhan Bakteri Bacillus amyloliquefaciens .
Daya Hambat Ekstrak Tanaman Ketapang ( Terminalia catappa L.)
Diameter zona bening yang menunjukkan daya hambat ekstrak ketapang  terhadap  pertumbuhan  bakteri diukur  setelah  1x24  jam.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  faktor  konsentrasi ekstrak  menyebabkan  adanya  perbedaan diameter  zona  bening  pada  pertumbuhan bakteri  setelah  masa  inkubasi.  Zona bening  pada  ekstrak  ketapang  dengan konsentrasi  30%  menunjukkan  rata-rata diameter  sebesar  8,8267  mm,  lebih  kecil daripada  zona  bening  pada  konsentrasi 60%  yakni  dengan  rata-rata  diameter 11,2533  mm.  Di  lain  pihak,  zona  bening ekstrak  ketapang  pada  konsentrasi  90% menunjukkan  diameter  zona  bening  rata- rata  sebesar  12,4976  mm,  lebih  tinggi daripada  diameter  zona  bening  pada konsentrasi  ekstrak  30%  dan  60%  (Tabel 1).
Tabel 1. Diameter Zona Bening Ekstrak Daun Ketapang ( Terminalia catappa L.)
terhadap Pertumbuhan Bakteri Bacillus amyloliquefaciens . Konsentrasi Diameter Zona Bening (mm) 30% 8,8267 ±1,0408 60% 11,2533±1,1209 90% 12,4967±0,1650
Zona  bening  menunjukkan  area dimana  pertumbuhan  bakteri  terhambat oleh adanya suatu senyawa aktif. Semakin tinggi diameter zona bening menunjukkan semakin  tinggi  pula  kemampuan  suatu senyawa  aktif  menghambat  pertumbuhan bakteri,  yang  tentu  saja  bergantung  pada konsentrasi  senyawa  tersebut.  Davis  dan Stout  (1971)  menggolongkan  kemampuan daya  hambat  suatu  ekstrak  berdasarkan diameter  zona  bening  yang  terbentuk. Diameter  zona  bening  pada  konsentrasi ekstrak 30% (8,8267 mm) termasuk dalam kategori  daya  hambat  sedang  (5-10  mm), konsentrasi  ekstrak  60%  (11,2533  mm) termasuk dalam kategori daya hambat kuat (10-20  mm)  dan  konsentrasi  ekstrak  90% (12,4967  mm)  termasuk  dalam  kategori daya hambat kuat.
Diameter zona bening pada konsentrasi  30%  (8,  8267  mm)  dan  60% (11,  2533  mm)  berada  dalam  kategori penghambatan  yang  berbeda  berdasarkan Davis dan Stout (1971), yakni sedang dan kuat.  Hal  tersebut  dikarenakan  jumLah senyawa  aktif  yang  terdifusi  keluar  dari kertas cakram pada konsentrasi 60% lebih banyak  daripada  konsentrasi  30%.  Zona bening  pada  konsentrasi  ekstrak  90% menunjukkan  rata-rata  diameter  12,4967 mm  dimana  jumLah  senyawa  aktif  yang terikat  pada  kertas  cakram  konsentrasi ekstrak  90%  sangat  banyak  sehingga  laju difusi  senyawa  yang  memiliki  aktivitas antibakteri  pada  ekstrak  daun  ketapang lebih  tinggi  (Gambar  2).  Penurunan  laju difusi  disebabkan  oleh  karena  gadien konsentrasi  yang  mulai  menurun  antara
kertas  cakram  dengan  media  sekitarnya. Media  tumbuh  bakteri  yang  awalnya bersifat  hipotonik  mulai  menunjukkan peningkatan kelarutannya karena akumulasi senyawa-senyawa produk bakteri B. amyloliquefaciens.
Senyawa antibakteri yang dihasilkan oleh B. amyloliquefaciens tidak mempengaruhi  aktivitas  dari  bakteri B. amyloliquefaciens karena  gen-gen  bakteri mengenal  senyawa  yang  merupakan  hasil ekspresi gen dari bakteri B. amyloliquefaciens tersebut (Campbell, 2002).  JumLah  bakteri  di  akhir  masa inkubasi  1x24  jam  menjadi  lebih  banyak, sehingga  produk-produk  kimia yang dihasilkan  sebagai  aktivitas  biokontrol seperti senyawa-senyawa antimikroba dari kelompok surfaktin bacillomycin D, fengycin,  macrolatin,  bacillane,  bacilysin dan  difficidin  juga  terakumulasi  lebih banyak. Senyawa-senyawa ini tidak berdampak  secara  langsung  terhadap senyawa-senyawa  aktif  dari  ekstrak  daun ketapang,  tetapi  akumulasi  senyawa- senyawa  produk  bakteri  ini  menghambat senyawa  aktif  ekstrak  ketapang  untuk berdifusi  lebih  jauh  lagi.  Akumulasi senyawa-senyawa  produk  bakteri  ini mempercepat  terjadinya  kesetimbangan, yang menandakan difusi berhenti.
Pembentukan  zona  bening  dalam media  tumbuh  bakteri  harus  disertai dengan  kontrol  sebagai  pembanding. Kontrol  adalah  kelompok/unit  penelitian yang  tidak  diberi  perlakuaan  apa-apa, dalam  hal  ini  tidak  dibuat  dalam  tiga
konsentrasi  yakni  30%,  60%  dan  90%. Dalam  penelitian  ini  digunakan  dua macam  kontrol  yaitu  kontrol  positif  dan kontrol  negatif.  Kontrol  positif  haruslah berupa  bahan  yang  mengandung  senyawa yang sudah terbukti menunjukkan aktivitas antibakteri,  misalnya  kotrimoksazol.  Di lain pihak, kontrol negatif haruslah berupa larutan/bahan  yang  sama  sekali  tidak menunjukkan aktivitas antibakteri, misalnya aquades. Kotrimoksazol merupakan kombinasi dari
sulfametoksazol  dan  trimetoprim  dengan perbandingan  5:1,  bersifat  bakterisida dengan  spektrum  kerja  lebih  lebar dibandingkan dengan sulfonamida. Trimetoprim sama dengan sulfametoksazol, meskipun daya
antibakterinya  20-100  kali  lebih  kuat  dari sulfametoksazol (Mariana, 1995).
Hasil pengamatan menunjukkan bahwa pemberian kontrol positif
kotrimoksazol mengakibatkan terbentuknya zona bening dengan diameter 24,16  mm  yang  menurut  Davis  dan  Stout (1971)  tergolong  dalam  kategori  sangat kuat (> 20 mm). Di lain pihak, pada cawan petri yang diberikan kontrol negatif berupa aquades,  tidak  ditemukan  adanya  zona bening  yang  terbentuk  (Gambar  3).  Hal tersebut  menunjukkan  bahwa  zona  bening hanya akan terbentuk apabila ada aktivitas antibakteri  dari  suatu  senyawa.  Berbeda dengan  kotrimoksazol,  aquades  tidak menunjukkan  aktivitas  antibakteri  karena aquades  merupakan  air  murni  tanpa kandungan  senyawa  aktif  yang  memiliki sifat antibakteri.
Gambar 3. Kontrol Positif
(Kotrimoksazol)  dan  Kontrol  Negatif (Aquades)  pada  Pertumbuhan  Bakteri Bacillus amyloliquefaciens .
Efektivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun
Ketapang ( Terminalia catappa L.) terhadap Pertumbuhan Bakteri Bacillus amyloliquefaciens
Hasil penelitian menunjukkan bahwa senyawa-senyawa  aktif  dalam  ekstrak daun ketapang memiliki aktivitas antibakteri  terhadap B.  amyloliquefaciens. Penghitungan  nilai  efektivitas  antibakteri dari  data  diameter  zona  bening  diperoleh nilai efektivitas antibakteri pada konsentrasi  ekstrak  30%  sebesar  36,53, lebih  rendah  daripada  nilai  efektivitas pada  konsentrasi  60%  (46,57)  dan  90% (51,72).  Di  lain  pihak,  hasil  tersebut  juga menunjukkan bahwa efektivitas antibakteri  senyawa-senyawa  aktif  yang terkandung  dalam  daun  ketapang  tidak sebaik  kontrol  positif  yang  dipakai,  yaitu kotrimoksazol, karena masih dalam kisaran  30-50%  efektivitas  kotrimoksazol (Tabel 2).
Tabel 2. Efektivitas Antibakteri Ekstrak Daun Ketapang ( Terminalia catappa L.)
terhadap Pertumbuhan Bakteri Bacillus amyloliquefaciens .
Hasil  tersebut  menunjukkan  bahwa semakin  tinggi  konsentrasi  ekstrak  daun ketapang,  maka  diameter  zona  bening yang  dihasilkan  dan  nilai  efektivitas antibakteri  akan  menjadi  semakin  tinggi. Penelitian  Ainurrochmah et  al., 2013 menunjukan  pemberian  optimal  ekstrak daun  binahong  ( Anredera  cordifolia ) untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri Shigella  flexneri strain  BW  1201  adalah konsentrasi  100%  dengan  diameter  27,2 mm  dan  dalam  penelitian  yang  dilakukan oleh  Razak et  al., 2013  semakin  tinggi konsentrasi (100%) air perasan buah jeruk nipis  ( Citrus  aurantifolia S.)  maka  zona bening yang dihasilkan untuk menghambat bakteri Staphylococcus  aureus semakin besar  (10,5  mm).  Nilai  efektivitas  dan ukuran zona bening mengalami peningkatan, karena pemberian
konsentrasi  ekstrak  yang  tinggi.  Hal tersebut diakibatkan oleh jumLah senyawa bioaktif  yang  lebih  tinggi  dibandingkan ekstrak yang telah diencerkan.
KESIMPULAN
Pemberian  ekstrak  daun  ketapang
( Terminalia catappa L.) terhadap pertumbuhan bakteri Bacillus amyloliquefaciens menunjukkan perbedaan respons bakteri di tiap konsentrasi  ekstrak  30%,  60%,  dan  90%. Ekstrak  daun  ketapang  di  tiga  macam konsentrasi  menunjukkan  adanya  zona bening  pada  daerah  sekitar  kertas  cakram yaitu  8,8267  (30%),  11,2533  (60%),  dan 12,4967  (90%)  sehingga  menunjukkan adanya  daya  hambat  terhadap  bakteri B. amyloliquefaciens yang  berperan  sebagai agen  biokontrol.  Hasil  penelitian  ini  juga menunjukkan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak daun ketapang, semakin  tinggi  pula  diameter  zona  bening yang  terbentuk.  Meskipun  demikian,  nilai efektivitas antibakteri ekstrak daun ketapang  tidak  lebih  baik  daripada kotrimoksazol,  karena  nilai  efektivitasnya 51,72 (90%) hanya separuh dari kotrimoksazol 24,16 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahmed, S.M., V. Swamy., P.G.R. Dhanapal dan V.M. Chandrashekara. 2005. Antidiabetic Activity of Terminalia cattapa . Iranian Journal of Pharmacology  and  Therapeutics . 4(1):36-40 Ainurrochmah,  A.,  E.  Ratnasari  dan  L. Lisdiana. 2013. Efektivitas Ekstrak Daun Binahong ( Anredera cordifolia ) terhadap Penghambatan Konsentrasi Efektivitas Antibakteri (%) 30% 36,53±0,04 60% 46,57±0,04 90% 51,72±0,006
Pertumbuhan Bakteri Shigella
flexneri dengan  Metode  Sumuran.
LenteraBio . 2(3): 233-237
Arguelles-Arias,  A.,  Marc  Ongena.,  B.
Halimi.,  Y.  Lara.,  A.  Brans.,  B. Joris dan P. Fickers. 2009. Bacillus
amyloliquefaciens GA1 as a source of  potent  antibiotics  and  other secondary
metabolites for biocontrol  of  plant  pathogens. Microbial Cell Factories . 8:63 doi: 10.1186/1475-2859-8-63
Borriss,  R.,   X.H  Chen.,  C.  Rueckert.,  J.
Blom., A. Becker., B. Baumgarth.,
B. Fan., R. Pukall., P.
Schumann., C.  Spröer.,  H.  Junge., J. Vater., A. Pühler dan H.P Klenk. 2011.  Relationship  of Bacillus amyloliquefaciens clades
associated  with  strains  DSM  7T and  FZB42T:  a  proposal  for
Bacillus  amyloliquefaciens subsp. amyloliquefaciens  subsp.  nov.  and Bacillus  amyloliquefaciens subsp.
plantarum  subsp.  nov.  based  on complete genome sequence comparisons. Int  J  Syst  Evol Microbiol .  61:  1786-1801,  doi:
10.1099/ijs.0.023267-0
Cambell,  N.A.,  J.B.  Reece  dan  L.G.
Mitchell.  2002. Biologi .  Edisi  5 jilid 1. Penerbit Erlangga.
Chee Mun, F. 2003. Ketapang ( Terminalia cattapa L.)  Leaves-Black  Water:
Understanding  Black  Water. INBS
ForumIndex . http://www.joyabetta.com
Davenport, C. 2014. Using DNA Barcodes to  Identify  and  Classify  Living Things. Cold Spring Harbor Laboratory  DNA  Learning  Center: United Stated
Davis,  W.W  dan  T.R  Stout.  1971.  Disc Plate  Methods  of  Microbiological Antibiotic  Assay. Microbiology .22(4):659-665.
De Azeredo, L.A.I., D.M.G Freire, R.M.A Soares,  S.G.F  Leite  dan  R.R.R Coelcho.  2004.  Production  and
Partial Characterization of Thermophilic Proteases from
Streptomyces  sp.  Isolated  from Brazilian  Cerrado  Soil. Enzyme Microbiology  Technology .  34:354- 358.
De  Vasconcellos,  R.L.F  dan  E.J.B.N
Cardoso. 2009. Rhixopheric Streptomyces as Potential
Biocontrol  Agents  of Fusarium and Armillaria Pine  Rot  and  as PGPR for Pinus taeda . Biocontrol . 54:807-816.
Gül,  A.,  F.  Kidoglu.,  Y.  Tüzel  dan  I.  H. Tüzel.  2008.  Effects  of  nutrition and Bacillus  amyloliquefaciens on tomato  ( Solanum  lycopersicum L.) growing in perlite. Spanish Journal of A gicultural . 6(3), 422-429
Gustiani,  E.  2009.  Pengendalian  Cemaran Mikroba  pada  Bahan  Pangan  Asal
Ternak  (Daging  dan  Susu)  Mulai dari Peternakan sampai Dihidangkan. Jurnal Litbang Pertanian. 28(3) 96-100 Harborne,  J.B.  1996. Metode  Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisa Tumbuhan . Bandung. Institut Teknologi Bandung. Hardhiko,  R.S.,  A.G.  Suganda  dan  E.Y. Sukandar. 2004. Aktivitas Antimikroba Ekstrak Etanol, Ekstrak Air Daun yang Dipetik dan
Daun  Gugur  Pohon  Ketapang ( Terminalia  cattapa L.). Acta Pharmaceutica Indonesia. 29: 129- 133.
Hasbi,  H.M  dan  H.F.  Tobo.  2002. Teknik Penapisan  dan  Uji  Efekbiologik Senyawa  Bioaktif  dari  Bahan Alam . FMIPA UNHAS. Makassar
Istiqomah.  2013.  Perbandingan  Metode Ekstraksi  Maserasi  dan  Sokletasi terhadap Kadar Piperin Buah Cabe Jawa ( Piperis  rectrofracti fructus ). [SKRIPSI] Universitas Islam
Negeri  (UIN)  Syarif  hidayatullah Jakarta. Jacobsen,  B.J.,  N.K.  Ridack  dan  B.J. Larson. 2004. The Role of Bacillus-Based  Biological  Control Agents in Intergrated Pest Management System: Plant Diseases. The America Phytopathological  Society .  94(11): 1272-1275
Jaziroh,  S.  2008. Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Aktif  dalam  Ekstrak  n-Heksana Daun Ketapang (Terminalia
cattapa L .) [SKRIPSI].  Jurusan  Kimia Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas Diponegoro Semarang.
Kloepper,  J.W.,  C.M  Ryu  dan  S.  Zhang.
2009. Induced Systemic Resistance and  Promotion  of  Plant  gowth  by Bacillus spp. Phytopathol .
94:1259-1266.
Kolondam,  B.J.  2015.  Applying  matK
Gene for Identification of Liliopsida  Plant  Species  from North  Sulawesi  through  BOLD System. Int.  J.  App.  Biol.  Pharm. Tech. 6(2): 242-245.
Lathifah,  Q.A.  2008.  Uji  Efektivitas Ekstrak Kasar Senyawa Antibakteri  Pada  Buah  Belimbing
Wuluh  ( Averrhoa  bilimbi L.) dengan Variasi Pelarut [SKRIPSI]. Universitas Islam Negeri Malang.
Lin, Y., Y. Kuo, M. Shiao, C. Chen dan J. Ou.  2000.  Flavonoid  Glycocides from Terminalia cattapa L. Journal of  the  Chinese  Chemical  Society . 47(1) : 253-256
Lubenow,  H.,  M.  Scherer  dan  D.  Herold.
2008.  Automated  Extraction  of Forensic Samples Using Estabilished Spin Column
Technology on the QIAcube. R&D Departement QIAGEN . Germany
Maji, E.A dan A.A Shaibu. 2012. Effect of Antibiotics  on  Biological  Control Agents  and  their  Efficacy  to Control  Rice  Sheath  Blight  ( R. solani AG-I.1). Journal  of  A gicultural  Technology. 8(3)  993- 997.
Mariana,  Y  dan  R.  Setiabudy.  1995.
Sulfonamid, Kotrimoksazol. Dalam S.  G.  Ganiswara:  Farmakologi dan Terapi . Edisi 4.Jakarta: Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia. Pastra, D.A, Melki dan H. Surbakti. 2012. Penapisan Bakteri yang Bersimbiosis  dengan  Spons  Jenis Aplysina sp.  sebagai  Penghasil Antibakteri  dari  Perairan  Pulau Tegal  Lampung. Maspari  Journal . 4(1), 77-82
Pradhap,  M,  Selvisabhanayakam,  V.
Mathvianan.,
Parthasarathy, J.V.A.A  Ayyapan  dan  S.S  Kumar.
2011.  Study  on  16S  rRNA  based PCR  method  for  spesific  detection of Salmonella  entrica typhi  from gut  of  infected  silkworm Bombyx mori (Linn.).  J  Sci  Ind  Res. 70:909–911.
Pratiwi, S.T. 2008. Mikrobiologi Farmasi . Jakarta. Erlangga Medical Series.
Rahadjo,  B.,  A.R.  Erwiyani  dan  A.
Muhziddin.  2014.  Effectiveness  of Gel  Formulation  Leafs  Extract  of Ketapang  ( Terminalia  catappa L.) 0.03%  As  an  Antiseptic  Hand
Sanitizer  Bacteria Escherichia  coli and Staphylococcus aureus . chalmers.academia.edu
Razak,  A.  Djamal  dan  G.  Revilla.  2013.
Uji  daya  hambat  air  perasan  buah jeruk  nipis  ( Citrus  aurantifolia  S. ) terhadap pertumbuhan bakteri
Staphylococcus aureus
Rodas-Junco,  B.A.,  H.F  Magana-Sevilla,
J.M  Tun-Suarez  dan  A.  Reyes-
Ramirez. 2009. Antifungal Activity In  Vitro  of  Native Bacillus sp . Strains against Macrophomina  phaseolina (Tassi) Goid. Research Journal of Biological . 2(4):83-86 Sambrook,  J  dan  D.W.  Russell.  2006. Agarose Gel Elecrophoresis Protocol. Csh  Protocols  (doi: 10.1101/pdb.prot4020) Saroja, M., R.Santhi dan S.Annapoorani.2011.  Antioxidant
Activity  of  Phenolic  of  Terminalia Catappa  in  Ela  Propagated  Swiss Albino Mice . Journal of Advanced Scientific Research . 2(3): 70-72
Sumino,  A.  Supriyadi  dan  Wardiyanto. 2013.  Efektivitas  Ekstrak  Daun Ketapang  ( Terminalia  cattapa L.) untuk Pengobatan Infeksi Aeromonas  salmonicida pada  Ikan Patin ( Pangasioniodon hypophthalmus). JURNAL  SAINS
VETERINER .  JSV  31  (1),  ISSN: 0126 - 0421
Tangapo, A.M. 2005. Efektivitas
Antibakteri  Ekstrak  Tumbuhan
Daun  Sendok (Plantago  major)
Terhadap Staphylpcoccus  aureus
dan Pseudomonas aeruginosa [SKRIPSI]. Universitas Sam
Ratulangi Manado.
Wang,  Y.,  R.M  Tian.,  Z.M  Gao.,  S.
Bougouffa  dan  P.Y  Qian.  2014. Optimal Eukaryotic 18S and Universal 16S/18S Ribosomal RNA Primers and Their Application in a Study of Symbiosis. PLoS  ONE .9(3):
e90053. doi:10.1371/journal.pone.0090053