JKPK (JURNAL KIMIA DAN PENDIDIKAN KIMIA) , Vol 2, No 3, Desember 2017 Program Studi Pendidikan Kimia Universitas Sebelas Maret https://jurnal.uns.ac.id/jkpk
ISSN 2503-4154 (online)

## UJI FITOKIMIA DAN UJI ANTIBAKTERI DARI AKAR MANGROVE
Rhizopora apiculata TERHADAP BAKTERI Escherichia coli

## DAN Staphylococcus aureus
Phytochemical Test and Antibacterial Test of Rhizopora apiculata Mangrove- Root against Escherichia coli and Staphylococcus aureus Bacteria

## Usman *
Program Studi Magister Pendidikan Kimia, FKIP, Universitas Mulawarman Jl. Muara Pahu Kampus Gn. Kelua, Samarinda, Kalimantan Timur, Indonesia
* Untuk korespondensi: e-mail: sainusman@ymail.com
Received: June 22, 2017
Accepted: December 30, 2018
Online Published: December 31, 2017 DOI : 10.20961/jkpk.v2i3.11850

## ABSTRAK
Indonesia  memiliki  berbagai  jenis  mangrove  namun  pemanfaatan  mangrove  sebagai produk  obat  dan  makanan  kesehatan  belum  banyak  dimanfaatkan  karena  masih  terbatasnya informasi dan penelitian mengenai kandungan senyawa bioaktif pada tumbuhan mangrove. Salah satu spesies mangrove yang banyak ditemukan di kawasan hutan mangrove Bontang Kalimantan Timur adalah R. apiculata. Tumbuhan ini dimanfaatkan oleh masyarakat pesisir sebagai bahan bakar, bahan bangunan, bahan pembuatan kapal, dan sebagai bahan obat tradisional. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui golongan senyawa metabolit sekunder dan aktivitas antibakteri ekstrak  metanol  akar  mangrove R.  apiculata .  Ekstraksi  dilakukan  dengan  metode  maserasi dengan menggunakan pelarut metanol. Golongan senyawa metabolit sekunder yang terkandung pada  sampel  mangrove  tersebut  ditentukan  secara  kualitatif  dengan  menggunakan  beberapa pereaksi uji fitokimia. Metode yang digunakan untuk uji antibakteri terhadap E. coli dan S. aureus adalah metode difusi dengan variasi konsentrasi ekstrak metanol akar mangrove R. apiculata 500 μg/well, 250 μg/well, dan 125 μg/well serta variasi waktu inkubasi 12 jam, 24 jam, 48 jam, dan 72 jam. Berdasarkan hasil uji Fitokimia dapat disimpulkan bahwa ekstrak metanol akar mangrove R. apiculata mengandung  golongan  senyawa  metabolit  sekunder:  alkaloid,  flavonoid,  dan triterpenoid.  Hasil  uji  antibakteri  ekstrak  metanol  akar  mangrove R.  apiculata mampu  meng- hambat pertumbuhan bakteri S. aureus pada konsentrasi 500 µg/well dengan waktu inkubasi 12 jam, 24 jam, 48 jam, dan 72 jam dengan zona hambat masing-masing 7.95 mm, 8.3 mm, 8.0 mm, dan 7.0 mm. Pada konsentrasi 250 µg/well dengan waktu inkubasi 48 jam memiliki zona hambat 7.5 mm. Namun ekstrak metanol akar mangrove R. apiculata tidak menghambat  pertumbuhan bakteri Escherichia coli . Berdasarkan data zona hambatan pada uji antibakteri terhadap S. aureus dapat  disimpulkan  bahwa  aktivitas  antibakteri  ekstrak  metanol  akar  mangrove R.  apiculata terhadap S. aureus tergolong kategori lemah.
Kata kunci: Rhizophora apiculata , senyawa metabolit sekunder, antibakteri

## ABSTRACT
Indonesia has many kinds of mangrove but they have not been widely utilized as health food and medicinal products because of the limited information and research on the content of bioactive  compounds  in  the  mangroves.  One  of  the  mangrove  species  that  are  found  in  the
Bontang mangrove forest, East Kalimantan is R. apiculata . It is used as fuel, building materials, shipbuilding,  and  as  traditional  medicine.  This  study  aims  to determine  the  class  of  secondary metabolites  compounds  and  the  antibacterial  activity  of  methanol  extract  of R.  apiculata mangrove roots. The extraction was performed by maceration method using methanol solvent. Secondary metabolites compounds class in the mangrove sample was determined qualitatively by using several phytochemical reagents. Antibacterial test against E. coli and S. aureus were performed  using  diffusion  method  with  various  concentration  of  the  roots-mangrove  methanol extract of 500, 250, and 125 ug/well. Incubation was performed in various time of 12, 24, 48 and 72  hours.  Phytochemical  test  results  showed  that  the  roots-mangrove  methanol  extract  of R. apiculata contained secondary metabolites classes of alkaloids, flavonoids and triterpenoids. The extract does not inhibit the growth of E. coli , but it could inhibit the growth of S. aureus at 500 ug / well with incubation time of 12, 24, 48 and 72 hours and have inhibition zones of 7.95 mm, 8.3 mm, 8.0 mm, and 7.0 mm, respectively. At a concentration of 250 ug/ well with an incubation time of 48 hours has a 7.5 mm of inhibition zone. Those inhibitions are relatively weak category.
Keywords: Rhizophora apiculata, secondary metabolites compounds, antibacterial

## PENDAHULUAN
Pemanfaatan tumbuhan untuk pengobatan secara tradisional telah diwaris-
kan  secara  turun  temurun  untuk  mengobati berbagai penyakit. Salah satu jenis tumbuhan  yang  berpotensi  sebagai  sumber bahan  obat  tradisional  adalah  tumbuhan mangrove karena tumbuhan ini mengandung senyawa  bioaktif,  diantaranya  senyawa golongan; alkaloid, steroid, terpenoid, saponin,  dan  tanin  serta  senyawa  golongan flavonoid  dan  quinon  dengan  berbagai bioaktivitas  seperti  antimikroba,  antifungi, antivirus, antitumor, antileukemia, dan insektisida [1,2].
Ekstrak  dari  beberapa  jenis  tumbuhan mangrove seperti Rhizophora stylosa, Soneratia griffithi,  Aegiceras  floridum dan Excoecaria agallocha memiliki  daya  hambat  terhadap pertumbuhan S. aureus . Ekstrak kloroform kulit batang  mangrove  bersifat  toksik  terhadap  ulat grayak  dan  berpotensi  sebagai  bioinsektisida alami  [3].  Hasil  uji  daya  toksissitas  larva serangga  nyamuk Culex  quinquefasciatus dengan  menggunakan  ekstrak  beberapa  jenis mangrove dari genus Rhizophoraceae
diantaranya  adalah R.  apiculata , R.  lamarckii,
dan R. mucronata . Hasil uji tersebut
menunjukkan  ekstrak  petroleum  eter R.
apiculata yang  paling  toksik  terhadap  larva nyamuk Culex  quinquefasciatus dengan  nilai LC 50 sebesar 25,7 mg/L [3].
Beberapa  senyawa  metabolit  sekunder telah  diisolasi  dari  tumbuhan  mangrove diantaranya  senyawa  golongan  steroid  yaitu kampesterol  (ergost-5-en-3-ol),  stigmasterol (stigmas-5,22-dien-3- ol), dan β-Sitosterol (stigmast-5-em-3-ol) dari ekstrak diklorometana kulit  batang R.  stylosa [2].  Senyawa  golongan flavonoid yaitu 3,7-O-diasetil (--)-epikatecin, 3-O- asetil (--)- epikatecin, 3,3’4’,5,7-O-pentaasetil (--)- epikatecin,  (+)-afzelecin,  kinkonain  Ib,  dan proantosianidin B2 dari ekstrak metanol batang dan  ranting R.  stylosa [4].  Kemudian  dua senyawa  golongan  steroid  yang  diisolasi  dari ekstrak  kloroform  kulit  batang R.  mucronata yaitu  4-metil-kolest-24-en-3-ol  dan  4-metil- stigmast-22-en-3- ol. Serta senyawa β-Sitosterol yang diisolasi dari ekstrak metanol kulit batang
R. mucronata yang memiliki aktivitas antiinflamasi dan antidiare [5].
Salah satu spesies tumbuhan mangrove yang  banyak  ditemukan  di  di  kawasan  hutan
mangrove Bontang Kalimantan Timur adalah R apiculata. Tumbuhan  ini digunakan  oleh masyarakat  pesisir  sebagai  bahan  bakar, bahan  bangunan,  dan  bahan  pembuatan kapal,  serta  sebagai  obat  tradisional  untuk mengobati penyakit disentri, dan melangsingkan badan.
Penggunaan tanaman mangrove yang berasal  dari  kawasan  hutan  mangrove Bontang  Kaltim  sebagai  antijamur  belum pernah dipublikasikan secara ilmiah.
Sehingga perlu dilakukan penelitian terhadap tumbuhan  mangrove  terutama  spesies R apiculata yang  berasal  dari  kawasan  hutan mangrove Bontang Kaltim mengenai
bioaktivitasnya dan senyawa metabolit sekunder  yang  terkandung  pada  tanaman mangrove  tersebut  yang  dapat  dijadikan sebagai sumber bahan obat antibakteri baru.

## METODE PENELITIAN
Bahan yang digunakan dalam
penelitian  adalah  sampel  akar  mangrove R. apiculata ,  metanol,  aquades,  kloroform, larutan H 2 SO 4 pekat, larutan HCl 2 N, larutan Dragendorff, larutan NaOH 1%, kertas label, kertas  saring,  aluminium  foil,  tisu,  vaselin, kapas  steril,  etanol  70  %  dan  40  %,  agar, glukosa,  nutrient  broth  (NB),  kloramfenikol, bakteri E. coli , bakteri S. aureus .

## Prosedur Kerja
a. Pengolahan Sampel.
Sampel yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  akar  mangrove R apiculata yang  diambil  dari  Kawasan Mangrove  Bontang,  Kalimantan  Timur. Sampel akar mangrove yang telah
dikumpulkan  dibersihkan  lalu  dikeringkan  di udara  terbuka.  Selanjutnya  sampel  tersebut dipotong-potong  kecil  lalu  digiling  sehingga diperoleh  sampel  berbentuk  serbuk  halus sebanyak 500 gram dengan ukuran 90 mesh.

## b. Ekstraksi dengan cara maserasi
Sebanyak 500 gram serbuk halus akar mangrove R.  apiculata diekstraksi  dengan cara maserasi dengan menggunakan pelarut metanol selama 1 x 24 jam (sebanyak 3 kali). Maserat yang  diperoleh  disaring  dan ditampung dalam Erlenmeyer serta senyawa yang  terkandung  pada  ekstrak  metanol dimonitoring  dengan  KLT.  Ketiga  maserat tersebut  digabung  kemudian  dipekatkan pelarutnya  dengan  menggunakan  rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak metanol pekat yang berwarna cokelat kehitaman dan ditentukan rendamennya.

## c. Uji Fitokimia
Ekstrak  metanol yang  diperoleh, dilanjutkan  dengan  uji  fitokimia  Uji  fitokimia yang  dilakukan  adalah;  uji  alkaloid  dengan pereaksi Meyer, Wagner dan Dragendorf; uji flavonoid dengan pereaksi (serbuk Mg dalam 0,2 ml HCl pekat), uji fenolik dengan pereaksi FeCl 3 ,  uji  triterpenoid  dan  steroid  dengan pereaksi LB dan Salkowski serta Uji saponin dengan pereaksi busa.
d. Uji Antibakteri.
Bakteri  uji  yang  digunakan  dalam  penelitian ini adalah S. aureus (bakteri gram positif) dan E. coli (bakteri gram negatif). Pengujian daya hambat  ekstrak  metanol  akar  mangrove R apiculata terhadap  bakteri  uji  dilakukan dengan  metode  difusi  agar.  Konsentrasi ekstrak metanol akar mangrove R. apiculata
berbeda-beda yaitu; 500 µg/well, 250 µg/well, 125  µg/well.  Kontrol  positf  yang  digunakan adalah kloramfenikol 0,5 mg/mL, sedangkan
kontrol negatif yang digunakan adalah etanol 40  %.  Skema  penelitian  dapat  dilihat  pada
Gambar 1.
Gambar 1. Skema Penelitian, a. Pengolahan Sampel, b. Ekstraksi dengan Cara Maserasi, c. Uji Fitokimia, dan d. Uji Antibakteri

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstrak  metanol  yang  diperoleh  dari hasil  maserasi  yang  diuapkan  dengan menggunakan alat rotary vacuum evaporator dan  dihasilkan  ekstrak  pekat  metanol  yang
berwarna  coklat  kehitaman  sebanyak  36,46 gram.
Uji  Fitokimia  merupakan  metode pendekatan yang digunakan dalam menentukan keberadaan senyawa metabolit sekunder pada tanaman. Golongan senyawa
dikeringkan dan dihaluskan dimaserasi dengan metanol 3 x 24 jam
disaring Filtrat 1 Residu 3
Filtrat 3 Filtrat 2 diidentifikasi dengan Kromatografi Lapis Tipis diuapkan dengan rotary evaporator digabung dikeringkan dalam oven ditimbang dengan vial yang telah diketahui bobot kosongnya dihitung rendamen Senyawa golongan metabolit sekunder yang berpotensi sebagai antibakteri Ekstrak kering metanol c d b Ekstrak metanol Akar Mangrove R. apiculata Filtrat gabungan Ekstrak pekat metanol Uji Antibakteri Uji Fitokimia a
metabolit sekunder ditentukan secara kualitatif  dengan  menggunakan  beberapa pereaksi  uji  fitokimia.  Golongan  Senyawa metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam ekstrak diketahui dengan adanya perubahan
warna,  pengendapan  atau  pembentukan busa sesuai dengan pereaksi yang digunakan. Hasil uji fitokimia ekstrak metanol akar  mangrove R.  apiculata dapat  dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil uji fitokimia ekstrak metanol akar mangrove R. apiculata No Golongan Senyawa Pereaksi Perubahan Hasil 1 Alkaloid Dragendorf Merah-kekuningan + Meyer Endapan putih + Wagner Tidak ada perubahan - 2 Flavonoid Mg + HCl 2% Merah/Jingga + 3 Steroid Lieberman-Burchard Tidak ada perubahan - 4 Triterpenoid Lieberman-Burchard Merah + 5 Saponin Air panas + HCl Tidak terbentuk busa stabil - Berdasarkan hasil uji Fitokimia
golongan senyawa metabolit sekunder  yang terkandung  pada  ekstrak  metanol  akar mangrove R.  apiculata yaitu  senyawa alkaloid,  flavonoid,  dan  triterpenoid  sedang- kan  senyawa  steroid  dan  sponin  tidak ditemukan  dalam  ekstrak  metanol  akar mangrove R. apiculata .
Hasil  uji  fitokimia  pada  spesies mangrove R. mucronata menunjukkan bahwa  hampir  seluruh  bagian  tanaman tersebut  mengandung  golongan  senyawa alkaloid, saponin, tanin dan flavonoid [6]. Hail penelitian  lain  terhadap  beberapa  jenis mangrove  melaporkan  bahwa  kandungan senyawa  metabolit  sekunder  pada  tanaman tersebut  adalah  golongan  senyawa  alkaloid, fenolik,  steroid,  dan  terpenoid  dimana kandungan  senyawa  aktif  tersebut  bersifat toksik  dan  farmakologik  [7].  Kandungan senyawa  metaboli  sekunder  yang  terdapat dalam  daun  mangrove  adalah  golongan
senyawa;  fenolik,  alkaloid,  dan  saponin  [8]. Hasil penelitian menunjukkan bahwa perbedaan  jenis  pelarut  yang  digunakan untuk  mengekstrak  berpengaruh  terhadap komponen  kimia  yang  diekstrak  pada  pada tanaman.  Pelarut  metanol  mampu  meng- ekstrak senyawa alkaloid, fenolik, karotenoid dan tanin, pelarut heksan dapat mengekstrak triterpenoid/  steroid,  sedangkan  komponen kimia  yang  mampu  larut  dalam  pelarut  etil asetat  yaitu  senyawa  fenolik,  flavonoid  dan terpenoid yang merupakan senyawa metabolit  sekunder  yang  dapat  diperoleh pada  bagian  jaringan  daun,  akar,  kayu batang, kulit batang, bunga, dan biji [5,9].
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak metanol akar mangrove  dengan konsentrasi 500  µg/well,  250  µg/well,  dan  125  µg/well terhadap bakteri S. aureus dan bakteri E. coli dengan  waktu  inkubasi  12  jam,  24  jam,  36 jam,  48  jam,  dan  72  jam  dapat  dilihat  pada Tabel 2 dan 3.
Tabel  2.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  metanol  akar  mangrove R.  apiculata terhadap bakteri S. aureus
Waktu Replikasi Diameter zona hambat (mm) Bakteri S. aureus Kontrol negatif Kontrol positif Ekstrak akar R. apiculata 500 μg/well 250 μg/well 125 μg/well 12 jam 1 7.0 24 7.6 7.0 7.0 2 7.0 26 8.3 7.0 7.0 Rata-rata 7.0 25 7.95 7.0 7.0 24 jam 1 7.0 25 8.6 7.0 7.0 2 7.0 23 8.0 7.0 7.0 Rata-rata 7.0 24 8.3 7.0 7.0 48 jam 1 7.0 22 8.0 8.0 7.0 2 7.0 23 8.0 7.0 7.0 Rata-rata 7.0 22.5 8.0 7.5 7.0 72 jam 1 7.0 27 7.0 7.0 7.0 2 7.0 25 7.0 7.0 7.0 Rata-rata 7.0 26 7.0 7.0 7.0
Tabel  3.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak  metanol  akar  mangrove R.  apiculata terhadap bakteri E. coli Waktu Replikasi Diameter zona hambat (mm) Bakteri E. coli Kontrol negatif Kontrol positif Ekstrak akar R. apiculata 500 μg/well 250 μg/well 125 μg/well 12 jam 1 7.0 27.0 7.0 7.0 7.0 2 7.0 29.0 7.0 7.0 7.0 Rata-rata 7.0 28.0 7.0 7.0 7.0 24 jam 1 7.0 25.0 7.0 7.0 7.0 2 7.0 23.0 7.0 7.0 7.0 Rata-rata 7.0 24.0 7.0 7.0 7.0 48 jam 1 7.0 26.0 7.0 7.0 7.0 2 7.0 26.0 7.0 7.0 7.0 Rata-rata 7.0 26.0 7.0 7.0 7.0 72 jam 1 7.0 23.0 7.0 7.0 7.0 2 7.0 21.0 7.0 7.0 7.0 Rata-rata 7.0 22.0 7.0 7.0 7.0
Keterangan: Kontrol negatif   = etanol 40% Kontrol positif  = kloramfenikol 0,5 mg/mL
Gambar 2. Hasil zona hambat uji aktivitas antibakteri ekstrak metanol akar R. apiculata , kontrol positif, dan kontrol negatif terhadap bakteri S. aureus .
Gambar 3. Hasil zona hambat uji aktivitas antibakteri ekstrak metanol akar R. apiculata , kontrol positif, dan kontrol negatif terhadap bakteri E. coli .
Keterangan:
(+), = kontrol positif (kloramfenikol 0,5 mg/mL) (-),  = kontrol negatif (etanol 40%) [A], = konsentrasi ekstrak 500 µg/wel [B]. = konsentrasi ekstrak 250 µg/well [C]. = konsentrasi ekstrak 125 µg/well
Hasil  pengujian  aktivitas  antibakteri ekstrak  metanol  akar R.  apiculata dengan variasi konsentrasi 500 µL/well, 250 µL/well, dan  125  µL/well  terhadap  pertumbuhan bakteri S.  aureus dan E.  coli denga  waktu inkubasi; 12 jam, 24 jam, 48 jam dan 72 jam dapat dilihat pada gambar 2 dan 3
Berdasarkan hasil uji aktivitas antibakteri sebagaimana yang disajikan pada Tabel  2,  menunjukkan  bahwa  ekstrak metanol  dari  akar  mangrove R.  apiculata pada konsentrasi 500 µL/well dengan variasi waktu inkubasi yaitu 12 jam, 24 jam, 48 jam dan  72  jam  memiliki  daya  hambat  terhadap pertumbuhan bakteri S. aureus dengan zona
hambat  antara  7,0 –  8,3  mm.  Pada konsentrasi  250  µL/well  dengan waktu inkubasi 48 jam hanya memperlihatkan daya hambat  terhadap  bakteri S.  aureus dengan zona  hambat  7.5  mm.  Sedangkan  pada konsentrasi  125  µg/well  tidak  menunjukkan daya  hambat  terhadap  pertumbuhan  bakteri uji.  Daya  hambat  ekstrak  metanol  akar mangrove R.  apiculata terhadap  bakteri S. aureus tergolong kategori lemah. Sedangkan ekstrak metanol akar mangrove R. apiculata tidak  menunjukkan  daya  hambat  terhadap bakteri E. coli.
Ekstrak  metanol  akar  mangrove R. apiculata memiliki aktivitas antibakteri
terhadap bakteri S. aureus. Hal ini disebabkan  oleh  adanya  golongan  senyawa alkaloid  yang  terkandung  pada  ekstrak metanol  tersebut  dimana  senyawa  alkaloid dapat menggangu komponen penyusunanan peptidoglikan pada sel bakteri yang mengakibatkan  dinding  sel  tidak  tebentuk secara  sempurna[10].  Daya  hambat  ekstrak metanol  akar  mangrove R.  Apiculata
terhadapa  bakteri  uji S.  aureus termasuk kategori  lemah,  hal  ini  diakibatkan  oleh  dua faktor  yaitu  faktor  biologi  dan  faktor  kimia. Faktor bagian  jaringan  tanaman  yang digunakan[11].  Sedangkan  faktor  kimia berkaitan  dengan  kandungan  senyawa metabolit sekuder pada tanaman. Faktor lain yang  berpengaruh  pada  penghambatan pertumbuhan bakteri adalah pemilihan media,  pelarut  yang  digunakan,  ketebalan media, pelarut yang digunakan dan konsentrasi ekstrak metanol yang digunakan. Ekstrak  metanol  akar R.  apiculata tidak menunjukkan zona  hambat terhadap bakteri E. coli pada berbagai variasi konsentrasi dan selama pengamatan (waktu inkubasi) 12 –72 jam, karena bakteri E. coli merupakan bakteri gram-negatif  dimana  struktur  selnya  lebih kompleks  dan  terdiri  atas  tiga  lapisan  yaitu lapisan (lipoprotein), lapisan tengah (lipopolisakarida), dan lapisan dalam (peptidoglikan) [12].

## KESIMPULAN
Senyawa golongan metabolit
sekunder  yang  terkandung  dalam  ekstrak akar mangrove R. apiculata adalah senyawa alkaloid,  flavonoid,  dan  triterpenoid.  Ekstrak metanol akar mangrove R. apiculata
menunjukkan  aktivitas  anti  bakteri  tertinggi dengan diameter zona hambat 8,3 mm pada konstrasi 500 µg/well dengan waktu inkubasi 48  jam  terhadap  bakteri S.  aureus dan tergolong  kategori  lemah.  Ekstrak  metanol akar mangrove R. apiculata Tidak
menunjukkan daya hambat terhadap pertumbuhan bakteri E. coli.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis sampaikan kepada Ibu Harlinda  Kuspradini,  Ph.D.  selaku  Kepala Laboratorium  Kimia  Hasil  Hutan  Fakultas Kehutanan  Universitas  Mulawarman  atas bantuan dalam pengujian aktivitas antibakteri dan Mahasiswa/Mahasiswi Prodi S1 Pendidikan Kimia FKIP Universitas Mulawarman Angkatan 2012 yang
melakukan penelitian laboratorium.

## DAFTAR RUJUKAN
[1]  Sutarno  S. “Potensi  dan  Manfaat Tumbuhan  Mangrove  Sebagai  Sumber Bahan  Bioaktif ”,  Acta  Pharmaceutica Indonesia. 12(4), 84-103, 2000.
[2]  Mukharromah R.R dan Suyatno.
“Senyawa  Metabolit  Sekunder  dari
Ekstrak  Diklorometana  Kulit  Batang Bakau  Merah  ( R.  Stylosa ) ”.  UNESA
Jaurnal of Chemistry. Vol.3, No.3, 2014.
[3]  Rohmah  I.F,  Tukira. “Uji  Bioaktivitas Ekstrak Kloroform Mangrove Rhizophora apiculata  Blume  terhadap Spodoptera littura Fabr  Sebagai  Insektisida  Nabati ”, Prosiding Seminar Nasional Unesa ISBN :978-979-028-550-7, Surabaya 25 Februari 2012.
[4]  Li, D.L. et al., “Flavonol Derivaties from R.  stylosa and  Their  DPPH  Radical Scavening  Activity ”,  Molecules  12:
1163 –1169, 2007.
[5]  Diastuti  H  dan  Warsinah. “Identifikasi Senyawa Antikanker dari Ekstrak Kloroform  Kulit  Batang Rhizophora mucronata ” . Majalah Farmasi Indonesia, 21(14), 266 –271, 2010.
[6]  Sutiman  dan  Elli  Rohaeti.  Teknologi Pembelajaran. FMIPA UNY. Yogyakarta, 2010.
[7] Bandaranayake  W.M.,  “Bioactivities, Bioaktive  Compounds  of  Chemical Constituen  and  Mangrove  Plants ”. Wetlands  Ecology  and  Management Journal, 10: 421 – 452, 2002.
[8]  Suciati  A.  et  al., “Efektivitas  Ekstrak Daun Rhizophora  mucronata Dalam Menghambat  Pertumbuhan  Aeromonas
salmonicida  dan  Vibrio  harveyi ”.  E- Jurnal Rekayasa dan Teknologi Budidaya  Perairan.  1(1),  ISSN:2302- 3600, 2012.
[9]  Harborne, Metode Fitokimia: Penentuan Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan: K. Padmawinata dan I Soediro. Penerbit ITB, Bandung, 1987.
[10]  Sjahid,  I.R., “Isolasi  dan  Identifikasi Flavonoid dari Daun Dewandaru ( Eu genia uniflora L ) ” Skripsi Universitas Muhammadiyah Surakarta, 2008.
[11]  Sawitti  M.Y.  et  al., “Daya  Hambat Perasan  Daun  Sambiloto  Terhadap Pertumbuhan Bakteri E. coli ” . Indonesia Medicus Veterinus 2(2): 142 –150, 2013
[12]  Park S.B.T. and T.S. Jung. “Pathogenesis of  and  Strategiesw  for  Preventing
Edwardsiella  tarda Infections  in  Fish ”. Veterinary Research 43: 67 –72, 2012.