## UNPAD
Antibacterial Activity of Mangosteen Leaf and Bark Fraction Against

## Salmonella spp Causes Diabetic Ulcers
Salmah Wilujeng Anggraini 1 *, Susanti Erikania 1 , Vevi Maritha 1
1 Bachelor of Pharmacy study program, STIKES Bhakti Husada Mulia Madiun, East Java, Indonesia
Submitted 08 June 2021; Accepted 02 September 2021; Published 31 October 2022 *Corresponding author: wilujengsalma76@gmail.com

## Abstract
Diabetes mellitus is a degenerative disease due to impaired cell function β -pancreas in insulin production causing hyperglycemics accompanied by microvascular complications such as diabetic ulcers. This condition is aggravated by bacterial contamination, one of which is Salmonella spp . The use of natural ingredients that have the potential for the treatment of diabetic ulcers is the mangosteen plant ( Garcinia mangostana L.), so the identification of Salmonella spp in diabetic ulcers and testing the antibacterial activity of ethyl acetate and n-hexan leaves and mangosteen stem skins is carried out. The method started from the stage of bacterial identification using selective media, gram staining, biochemical testing,  and  antibacterial  activity  tests  by  diffusion  of  discs.  Results  showed  that Salmonella spp was positif in SSA-specific media, biochemical tests, red bacteria, rod-shaped. Antibiotic sensitivity tests obtained by ciprofloxacin had the strongest activity of 30.20±1.37mm. The largest antibacterial activity result at a concentration of 100% obtained the ethyl acetate fraction of mangosteen leaves is 17.30±0.5mm compared to the fraction of n-hexane leaves of 8.81±0.32mm, ethyl acetate fraction and n-hexan mangosteen stem skin of 13.28±0.95mm, 7.42±0.45mm.
Keywords: Antibacterial, Garcinia mangostana, Diabetic Ulcer, Salmonella spp. .
Aktivitas Antibakteri Fraksi Daun Dan Kulit Batang Manggis Terhadap

## Salmonella spp Penyebab Ulkus Diabetik

## Abstrak
Diabetes mellitus merupakan penyakit degeneratif karena gangguan fungsi sel β -pankreas dalam produksi insulin menyebabkan hiperglikemik disertai komplikasi mikrovaskuler seperti ulkus diabetik. Kondisi ini dapat diperparah oleh kontaminasi bakteri salah satunya Salmonella spp . Penggunaan bahan alam yang berpotensi untuk pengobatan ulkus diabetik adalah tanaman manggis ( Garcinia mangostana L.), sehingga dilakukan identifikasi dan isolasi Salmonella spp pada ulkus diabetik. Pengujian aktivitas antibakteri fraksi etil asetat dan n-heksan daun dan kulit batang manggis. metode pengujian dimulai dari ekstraksi dan fraksinasi daun dan kulit batang manggis, isolasi bakteri pada ulkus diabetik, identifikasi bakteri menggunakan media selektif, pewarnaan gram, uji biokimia dan uji aktivitas antibakteri secara difusi cakram. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ulkus diabetik positif mengandung Salmonella spp pada media spesifik Salmonella-Shigella Agar (SSA), uji biokimia, bakteri berwarna merah dan berbentuk  batang.  Uji  sensitivitas  antibiotik  diperoleh  ciprofloxacin  memiliki  aktivitas  paling  kuat yaitu 30,20±1,37mm. Hasil aktivitas antibakteri yang terbesar pada konsentrasi 100% diperoleh fraksi etil asetat daun manggis yaitu 17,30±0,5mm dibandingkan fraksi n-heksan daun sebesar 8,81±0,32 mm, fraksi etil asetat dan n-heksan kulit batang manggis berturut-turut 13,28±0,95mm, 7,42±0,45mm.

## 1.  Pendahuluan
Diabetes mellitus (DM) adalah penyakit yang disebabkan karena adanya gangguan fungsi sel β pankreas dalam memproduksi insulin sehingga kadar glukosa dalam darah meningkat dan terjadi hiperglikemik. Diabetes mellitus merupakan salah satu penyakit dengan jumlah prevalensi yang mengalami peningkatan setiap tahunnya baik di negara maju  maupun  berkembang.  Hasil  Riset Kesehatan Dasar Departemen Kesehatan Republik  Indonesia  (2018)  melaporkan bahwa rata – rata prevalensi diabetes mellitus dengan umur ≥ 15 tahun mengalami peningkatan pada tahun 2018 mencapai 2%. Penyakit ini dapat meningkatkan resiko komplikasi makrovaskuler seperti penyakit jantung, infark miokard (serangan jantung), stroke, hipertensi, penyakit vaskuler. Sedangkan mikrovaskular meliputi kerusakan pada retina mata (retinopati), kerusakan ginjal (nefropati), kelainan bintik hitam pada kulit (dermopati) dan neuropati perifer yang mengakibatkan ulkus diabetik. Ulkus diabetik terjadi karena kadar gula yang tinggi mengakibatkan penyumbatan pembuluh darah sehingga terjadi neuropati perifer akibatnya pasien tidak merasakan adanya luka, dan luka tersebut menjadi parah dengan adanya kontaminasi bakteri patogen 1 ,2 . Berdasarkan pada penelitian Nurwahidah  dkk.  (2014)  menemukan bahwa bakteri patogen yang menginfeksi ulkus diabetik yaitu Escherichia coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumonia, Salmonella spp, dan Stahpylococcus aureus . Salmonella spp termasuk dalam famili Enterobacteriaceae merupakan bakteri Gram negatif, bersifat anaerob, memiliki bentuk batang hingga spiral dengan ukuran 0,2 – 2 µm dan memiliki flagel.  Bakteri Salmonella spp dilaporkan terdapat dalam kultur pus penderita diabetes 3 . Berdasarkan Lipsky dkk, (2013), pengobatan pada ulkus diabetik dapat menggunakan antibiotik dan perawatan luka 4 . Berdasarkan pada penelitian Kurniawan dkk. (2011) menyatakan bahwa uji kepekaan antibiotik terhadap ulkus diabetik banyak yang mengalami resistensi bakteri, hal ini dapat
disebabkan karena penggunaan antibiotik yang tidak tepat dan pengobatan jangka panjang 5 . Penelitian tersebut juga diperkuat oleh penelitian dari Wulansari dkk. (2018) yang melaporkan uji sensitivitas antibiotik mengalami resistensi terhadap kelompok bakteri Enterobacteriaceae penyebab ulkus diabetik seperti Salmonella, Klebsiella, Serratia, Shigella, E. coli dan Yersinia 6,7 . Saat ini penggunaan bahan alam dapat menjadi alternatif pengobatan diabetes mellitus salah satunya adalah tanaman manggis ( Garcinia mangostana L.). Tanaman ini memiliki aktivitas antibakteri sehingga mampu mengurangi tingkat keparahan ulkus diabetik. Menurut penelitian Turahman taufik dan Ghani NFS (2018) fraksi air daun manggis dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada konsentrasi tertinggi 50% dengan rata – rata zona hambat 10 mm 8 . Pada penelitian Dimas dkk. (2014) kombinasi ekstrak etanol kulit batang dan kulit buah manggis ( Garcinia mangostana L.) mampu menghambat pertumbuhan bakteri Shigella dysentriae pada  konsentrasi  6,25% daya hambat 5,66 mm. Pada penelitian Salim dkk.  (2019)  ekstrak  metanol  daun  manggis mengandung antrakuinon, karbohidrat, terpenoid,  saponin,  flavonoid,  glikosida, tanin dan polifenol 10 . Penelitian Dimas dkk. (2014)  melaporkan  senyawa  yang  terdapat pada kulit batang manggis adalah fenolik, flavonoid, alkaloid, saponin, terpenoid, tanin, dan steroid. Sedangkan penelitian tentang aktivitas daun dan kulit batang manggis pada salah satu bakteri penyebab ulkus diabetik belum pernah dilakukan 9 . Tujuan penelitian ini untuk mengidentifikasi  bakteri Salmonella spp pada ulkus diabetik dan mengetahui adanya aktivitas antibakteri paling kuat antara fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan dari daun dan kulit batang manggis terhadap Salmonella spp hasil isolasi ulkus diabetik menggunakan metode difusi cakram.

## 2.  Metode
2.1.  Alat Corong pisah, beaker glass 100, 250 dan 500 ml. batang pengaduk, rotary evaporator ,
oven, cawan petri, ose bulat, cotton swab sterile, incubator, hot plate, beaker glass , corong, gelas ukur dan Erlenmeyer (pyrex), pipet tetes, batang pengaduk, rotary evaporator ( Heldolph tipe Hei-VAP), oven ( Memmert tipe UP 400), waterbath ( Memmert tipe  WNB14),  timbangan  analitik  ( Precisa tipe  XB  4200C  dan  BEL  tipe  M254Ai), aluminium foil, bejana maserasi.
2.2.  Bahan
Daun dan kulit batang manggis, metanol teknis Merck, etil asetat teknis Merck, n-heksan teknis Merck, Nutrient Agar Merck, Mac Conkey Agar Merck, cakram disk kosong Oxoid, H 2 SO 4 Merck, besi (III) klorida, asam asetat glasial Merck, serbuk magnesium, larutan amonia 10% Merck, etanol teknis Merck, kloroform Merck, HCl pekat Merck, pereaksi dragendorf, cakram disk Oxoid amoxicillin, ampicillin, ciprofloxacin, cefotaxim, gentamicin, erytromicin, doxycycline, ulkus diabetik, NaCl  0.9%  RL,  DMSO  10%,  aquadestilata, larutan gram A, larutan gram B, larutan gram C, larutan gram D, Salmonella – shigellae Agar Oxoid, TSIA Oxoid, SIM Oxoid, MR- VP  Oxoid,  Sitrat  Oxoid,  Reagen Ehrlich Oxoid , dan Reagen Methyl Red Merck.
2.3.  Prosedur Penelitian
2.3.1. Penyiapan Sampel
Sampel berupa daun manggis dikumpulkan sebanyak 6 kg dan kulit batang sebanyak 3 kg disortasi kering dan sortasi basah, kemudian dikeringkan dibawah sinar matahari ditutupi dengan kain hitam. Setelah kering diblender untuk mendapatkan serbuk halus 11 . 2.3.2. Ekstraksi Serbuk daun manggis sebanyak 1,4 kg dan kulit batang sebanyak 1,25 kg diekstraksi dengan cara maserasi menggunakan pelarut metanol dengan perbandingan 1:10 selama 3 x 24 jam sambil diaduk. Selanjutnya filtrat disaring dan dipekatkan dengan rotary evaporator dengan suhu 60 o C 11 . 2.3.3. Fraksinasi secara ECC Fraksinasi dilakukan dengan metode ECC (Ekstraksi Cair-Cair) menggunakan
pelarut n-heksan, etil asetat, metanol. Ekstrak kental 30 gram dilarutkan dalam metanol, dimasukkan ke dalam labu pisah dan ditambahkan pelarut n-heksan dengan perbandingan 1:1, dikocok secara perlahan, didiamkan akan terjadi pemisahan pelarut akan menghasilkan fraksi n-heksan dan fraksi metanol. Fraksi n-heksan dipisahkan, kemudian diulangi dengan cara yang sama sampai larutan berwarna bening. Fraksinasi dilanjutkan menggunakan etil asetat dengan proses yang sama. Fraksi n-heksan dan fraksi etil asetat dipekatkan dengan rotary evaporator hingga diperoleh fraksi kental 11 . 2.3.4. Uji Bebas Pelarut Organik Fraksi kental ditambahkan asam sulfat encer dalam tabung reaksi dan dipanaskan. Fraksi dikatakan bebas etil asetat jika tidak tercium bau asetat (cuka). Pengujian juga dilakukan pada fraksi n-heksan.
2.3.5. Skrining Fitokimia
Masing – masing fraksi dilakukan pengujian fitokimia meliputi uji flavonoid, uji polifenol, uji alkaloid, uji tanin, uji saponin, uji terpenoid/steroid untuk mengetahui kandungan senyawa dalam fraksi daun dan kulit batang manggis 12 . 2.3.6. Sterilisasi Alat Proses sterilisasi dilakukan secara sterilisasi kering menggunakan autoclave pada suhu 121 o C selama 15 menit. 2.3.7. Penyiapan Sampel Ulkus Diabetik Sampel ulkus diabetik diperoleh dari Puskesmas Klecorejo Caruban, Madiun. Kemudian dibawa ke Laboratorium Mikrobiologi Farmasi STIKES Bhakti Husada Mulia Madiun pada hari yang sama untuk dilakukan preparasi sampel. Spesimen ulkus diambil dengan cotton swab steril kemudian dimasukkan dalam tabung reaksi yang sudah diberi NaCl 0,9% b/v. Kemudian dilakukan pengenceran spesimen dengan cara diambil 1 mL suspensi dimasukkan dalam 9 mL NaCl 0,9% b/v sebanyak 7 kali untuk mendapatkan suspensi bakteri 10 -7 CFU/mL ( Colony-forming Unit ).
2.3.8. Pembuatan Media Ditimbang 10 gram Nutrient Agar, dilarutkan dengan 500 ml aquadest. Ditimbang 7.5  gram Mac Conkey Agar dilarutkan
dengan 300 ml aquadest. Ditimbang 12 gram Salmonella-Shigella Agar (SSA) dilarutkan 200  ml  aquadest,  lalu  dipanaskan  hingga mendidih. Selanjutnya dituang ke dalam cawan petri steril didinginkan dan disterilisasi menggunakan autoclave pada suhu 121 o C selama 15 menit. 2.3.9. Identifikasi Bakteri Ulkus Diabetikum a. Penanaman Sampel Ulkus Hasil suspensi bakteri 10 -7 CFU/ mL diambil 0,1 mL ditanam pada media Nutrient  Agar  (NA)  diratakan  secara  zig  – zag  dengan  media  SSA  dengan  cara  yang sama lalu diinkubasi 1 x 24 jam dengan suhu 37 o C. Bakteri yang tumbuh pada media SSA dilanjutkan ke pewarnaan gram, uji TSIA dan uji biokimia.
b. Pewarnaan gram Satu koloni diambil dari media SSA menggunakan jarum ose bulat dan digoreskan diatas kaca preparat fiksasi kembali. Kemudian ditetesi dengan larutan gram A selama 1-3 menit buang tanpa dicuci, selanjutnya ditetesi dengan larutan gram B selama 1 menit cuci dengan  aquades.  Tetesi  dengan  larutan gram C diamkan 30 detik sampai warna cat hilang/luntur. Tetesi kembali dengan larutan gram D diamkan selama 1-2 menit bilas  kembali  dengan  aquadest.  Setelah  itu kaca preparat ditetesi dengan minyak imersi untuk memperjelas pengamatan dibawah mikroskop  dengan  perbesaran  10x  dan  40x. Apabila Bakteri gram negatif akan berwarna merah sedangkan bakteri gram positif akan berwarna ungu 13 .
c. Uji Biokimia Pengujian biokimia dilakukan menggunakan media Triple Iron Sugar Agar (TSIA), Uji Sulfide Indol Motility (SIM), Uji Citrate , Uji Methyl Red diinkubasi 1 x 24 jam pada suhu 37 o C 14,15 . 2.4.1. Uji aktivitas Antibakteri
a. Peremajaan Bakteri Salmonella spp Satu ose biakan bakteri Salmonella spp dari media SSA diinokulasi pada media miring NA dengan cara digores dan ditusuk, kemudian diinkubasi pada suhu 37 o C selama 24 jam 16 .
b. Uji Resistensi Antibiotik Uji sensitivitas dilakukan pada
antibiotik  yaitu  Amoxicillin  25  µg/disk, Ampicillin  10  µg/disk,  Ciprofloxacin  5  µg/ disk, Cefotaxim 30 µg/disk, Gentamicin 10 µg/disk, Doxyciclin 30 µg/disk, dan Erytromicin 15 µg/disk secara difusi cakram. 1 biakan bakteri hasil isolasi diambil menggunakan ose bulat lalu digoreskan pada media NA padat diinkubasi 1 x 24 jam untuk menentukan daya hambat yang paling besar. c. Pembuatan Larutan Uji Konsentrasi fraksi daun manggis yang akan digunakan masing – masing adalah  25%  b/v,  50%  b/v  dan  100%  b/v. Konsentrasi larutan tersebut dibuat dengan cara menimbang fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan  masing-masing  sebanyak  250  mg, 500 mg, dan 1 gram kemudian masing-masing konsentrasi diencerkan dengan menggunakan pelarut DMSO 10% sebanyak 1 ml.
d.
Pengujian Aktivitas Antibakteri Bakteri Salmonella spp hasil isolasi digoreskan pada media NA padat menggunakan jarum ose lurus. Cakram disk kosong direndam pada masing – masing konsentrasi perlakuan dan DMSO 10 % sebagai kontrol negatif selama 30 menit kemudian diletakan di atas media yang berisi bakteri. Kontrol positif yang digunakan adalah hasil uji resistensi antibiotik. Media diinkubasi pada suhu 37 o C selama 1 x 24 jam dan diukur zona hambat (mm) (replikasi 3x). e.

## Analisis Data
Data yang diperoleh dengan mengukur diameter daya hambatnya dan analisis One Way Anova menggunakan SPSS versi 25 ( License Amerika Serikat) dengan membandingkan diameter daya hambat kontrol positif dengan semua perlakuan terhadap bakteri Salmonella spp hasil isolasi ulkus diabetik.

## 3.  Hasil
Data yang diperoleh dengan mengukur diameter daya hambatnya dan analisis One Way Anova menggunakan SPSS versi 25 (License Amerika Serikat) dengan membandingkan diameter daya hambat kontrol positif dengan semua perlakuan terhadap bakteri Salmonella spp hasil isolasi ulkus diabetik.
3.1.  Fraksinasi Sebelum proses fraksinasi dilakukan,
Tabel 1. Skrining Fitokimia
Daun dan kulit batang manggis dimaserasi menggunakan pelarut metanol selama 3 hari. Ekstrak yang diperoleh difraksinasi menggunakan pelarut n-heksan dan etil asetat. Hasil ekstrak kental daun manggis diperoleh sebanyak  303,9  gram  dari  bobot  serbuk  1,4 kg, sedangkan bobot ekstrak kental kulit batang manggis 70,2 gram dari bobot serbuk 1,25  kg.  Rendemen  fraksi  etil  asetat,  fraksi n-heksan daun dan kulit batang manggis didapatkan berturut – turut 9,3 gram, 6 gram, 6,7 gram, dan 5,1 gram.
Kadar air mempengaruhi hasil dari besarnya rendemen ekstrak yang diperoleh. Banyaknya rendemen bergantung kepada sifat kelarutan komponen bioaktifnya. Hal ini  dikarenakan  kelarutan  zat  pada  suatu pelarut sangat ditentukan oleh kemampuan zat  tersebut  membentuk  ikatan  hidrogen 17 . Beberapa faktor yang dapat mempengaruhi hasil rendemen adalah waktu ekstraksi, metode ekstraksi yang digunakan, ukuran sampel, penyimpanan, dan perbandingan jumlah sampel dengan jumlah pelarut. Nilai rendemen dapat diartikan dengan banyaknya kandungan senyawa aktif 18 .
3.2. Identifikasi Fitokimia Identifikasi  secara  kimia  bertujuan untuk  mengetahui  kandungan  zat  aktif  atau metabolit sekundernya seperti alkaloid,
flavonoid,  steroid,  saponin  dan  tanin.  Hasil skrining fitokimia ekstrak etanol dapat dilihat pada tabel dibawah ini.
Hasil  identifikasi  senyawa  metabolit sekunder pada fraksi masing-masing sampel menunjukkan kesamaan jenis kandungan senyawa kimia. Ekstrak daun manggis menunjukkan hasil positif pada semua senyawa  yaitu  flavonoid,  alkaloid,  tanin, saponin, steroid, terpenoid dan polifenol. Sedangkan pada kulit batang manggis menunjukkan hasil positif terhadap senyawa alkaloid dan tanin.
3.3. Identifikasi Salmonella Spp pada Ulkus diabetik Hasil  identifikasi  Bakteri Salmonella Spp menunjukan hasil positif pada media Salmonella-shigella Agar, media TSIA, Uji Sulfide,  Uji  Motility,  Uji  Sitrat,  Uji Methyl Red ditandai adanya perubahan warna pada masing – masing media uji.

## 3.4.  Uji Resistensi Antibakteri
Hasil pengujian sensitivitas antibiotik didapatkan  ciprofloxacin  memiliki  rata  – rata  zona  hambat  sangat  kuat  yaitu  30,20  ± 1,37  mm  diikuti  dengan  cefotaxim  23,04  ± 1,80 mm, doxycycline 22,24 ± 0,97 mm dan gentamycin 16.32 ± 0,92 mm dengan kategori kuat.
No Nama sampel Flavonoid Alkaloid Saponin Polifenol Tanin Steroid Terpenoid 1 FEAD + + - + - - - 2 FNHD - - - - - + - 3 FEAKB + + - + - - - 4 FNHKB - - - - - - + Ket. (+) Terdapat metabolit sekunder, (-) Tidak terdapat metabolit sekunder FEAD = Fraksi Etil Asetat Daun  Manggis
FNHD = Fraksi N-Heksan Daun Manggis
FEAKB = Fraksi Etil Asetat Kulit Batang Manggis FNHKB = Fraksi N-Heksan Kulit Batang Manggis
Tabel 2. Hasil Media Selektif dan Uji Biokimia
No. Pengujian Hasil Keterangan 1 Media SSA Koloni membentuk warna hitam + 2 Media TSIA Alkalis/Asam + 3 Uji Sulfide (H2S) Adanya warna hitam + 4 Uji Indol Tidak terdapat cincin indol - 5 Uji Motility Adanya pergerakan + 6 Uji Sitrat Perubahan warna hijau ke biru + 7 Uji Methyl Red Perubahan warna ungu ke merah +
Ket. (+) Terdapat perubahan, (-) Tidak terdapat perubahan
Tabel 3. Hasil Uji Resistensi Antibiotik Terhadap Bakteri Salmonella spp
Antibiotik µg / disk Diameter Daya Hambat (mm) Rata – rata ± SD (mm) Respon Hambatan I II III IV Amoxicillin 25 6,00 6,00 6,00 6,00 6,00 ± 0 Rendah Ampicilin 10 6,00 6,00 6,00 6,00 6,00 ± 0 Rendah Ciprofloxacin 5 31,10 30,10 28,30 31,30 30,20 ± 1,37 Sangat Kuat Cefotaxim 30 25,22 20.87 23,46 22,63 23,04 ± 1,80 Sangat Kuat Gentamicin 10 15,05 17,23 16,35 16,66 16.32 ± 0,92 Kuat Doxyciclin 30 21,17 23,21 21,67 22,91 22,24 ± 0,97 Sangat Kuat Erytromicin 15 6,00 6,00 6,00 6,00 6,00 ± 0 Rendah
Tabel 4. Hasil Uji Resistensi Antibiotik Terhadap Bakteri Salmonella spp Antibiotik mg / disk Diameter Daya Hambat (mm) Rata – rata ± SD (mm) Respon Hambatan I II III IV Kontrol (+) 5 µg/ disk 30,1 28,5 28,96 29,14 29,17 ± 0,67 Sangat Kuat Kontrol (-) - 0 0 0 0 0 ± 0 - FEAD 25% 250 12,1 11,14 12,55 10,78 11,64 ± 0,82 Kuat FEAD 50% 500 13,05 14,45 13,31 12,68 13,37 ± 0,76 Kuat FEAD 100% 1000 17,2 17,32 16,66 18,05 17,30 ± 0,57 Kuat FNHD 25% 250 6,65 7,02 6,5 5,89 6,51 ± 0,47 Sedang FNHD 50% 500 6,56 7,30 7,56 8,00 7,35 ± 0,60 Sedang FNHD 100% 1000 8,34 9,05 9,00 8,86 8,81 ± 0,32 Sedang FEAKB 25% 250 5,90 6,56 6,33 7,00 6,44 ± 0,45 Sedang FEAKB 50% 500 9,44 7,90 8,60 8,5 8,61 ± 0,63 Sedang FEAKB 100% 1000 12,05 14,32 13,12 13,66 13,28 ± 0,95 Kuat FNHKB 25% 250 6,10 5,78 5,65 7,00 6,13 ± 0,60 Sedang FNHKB 50% 500 6,50 5,89 6,36 7,21 6,48 ± 0,54 Sedang FNHKB 100% 1000 7,31 7,50 8,00 6,90 7,42 ± 0,45 Sedang
Ket. (+) Kontrol positif diberi perlakuan Ciprofloxacin 5 µg/disk, (-) Kontrol negatif diberi perlakuan DMSO 10%,
Gambar 1. Fraksi Etil Asetat dan Fraksi n-Heksan Daun Manggis
3.5. Hasil uji aktivitas antibakteri Hasil uji aktivitas antibakteri didapatkan konsentrasi fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan daun dan kulit batang manggis yang memiliki  zona  hambat  paling  baik  adalah konsentrasi 100%. Hasil analisis One-way Anova menunjukkan terdapat perbedaan signifikan dari ketiga konsentrasi dari masing – masing fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan daun dan kulit batang manggis dengan kontrol negatif dan kontrol positif ciprofloxacin 5µg/ disk.
4.  Pembahasan Pada hasil idetifikasi fitokimia fraksinasi daun dan kulit batang manggis Tabel 1 . Senyawa-senyawa tersebut memiliki aktivitas antibakteri dengan mekanisme yang berbeda. Mekanisme kerja flavonoid sebagai antibakteri salah satunya yaitu dengan menghambat fungsi sel dengan cara membentuk senyawa kompleks dengan protein ekstraseluler dan
terlarut sehingga dapat merusak membrane sel bakteri dan diikuti dengan keluarnya senyawa intraseluler 19 . Mekanisme kerja saponin yaitu dapat menyebabkan kebocoran protein dan  enzim  dari  sel.  Saponin  dapat  menjadi antibakteri  karena  zat  aktif  permukaannya mirip dengan detergen, sehingga saponin menggunakan tegangan permukaan dinding sel dan merusak permebilitas membrane, dimana rusaknya membran sangat mengganggu kelangsungan hidup bakteri. Mekanisme kerja tanin yaitu mempunyai daya antibakteri dengan cara memprepitasi protein, yaitu menghambat enzim reverse transcriptase dan DNA topoisomerase sehingga sel bakteri tidak dapat terbentuk 19 . Mekanisme kerja alkaloid sebagai antibakteri yaitu dengan cara menganggu komponen penyusun peptidoglikan pada sel bakteri, sehingga lapisan dinding sel tidak terbentuk secara utuh dan menyebabkan kematian sel tersebut. Mekanisme kerja steroid sebagai antibakteri berhubungan dengan membrane lipid dan
Gambar 2. Fraksi Etil Asetat dan Fraksi n-Heksan Kulit Batang Manggis
sensitivitas terhadap komponen steroid yang menyebabkan kebocoran pada liposom. Sedangkan mekanisme kerja triterpenoid sebagai antibakteri yaitu bereaksi dengan porin (protein trans membran) pada membran luar dinding sel bakteri, membentuk ikatan polimer yang kuat sehingga mengakibatkan rusaknya porin 19 . Hasil  Identifikasi  bakteri Salmonella spp pada ulkus diabetic pada Tabel 2 . dilakukan dengan penanaman pada media Mac Conkey Agar bertujuan untuk menekan pertumbuhan bakteri gram positif dan menumbuhkan bakteri gram negatif. Selanjutnya dilakukan penanaman pada media Salmonella Shigella Agar. Pada penelitian ini didapatkan bakteri Salmonella spp yang mampu memproduksi H 2 S dengan mengubah koloninya menjadi warna hitam. Bakteri ini tidak dapat memfermentasi laktosa dan akan mengubah  kandungan  Na-Tiosulfit  sebagai sumber sulfur untuk memproduksi H 2 S. Langkah selanjutnya adalah pewarnaan gram pada hasil penelitian ini didapatkan bakteri gram negatif yang mampu mempertahankan zat  warna  merah  (safranin)  dan  berbentuk batang.  Hasil  identifikasi Salmonella spp menandakan positifnya uji motilitas adanya pergerakan dari tempat tusukan menyebar ke permukaan agar, positif memproduksi H 2 S karena mampu mendesulfurasi asam amino dan methion ditandai dengan permukaan media yang berwarna hitam, positif uji Methyl Red menandakan bakteri mampu memfermentasi glukosa, positif uji citrat bakteri mampu memanfaatkan sitrat sebagai sumber karbonnya, positif uji TSIA mampu memfermentasi glukosa dan fruktosa ditandai dengan warna merah pada bagian slant bersifat alkalis (K) dan warna kuning pada bagian butt bersifat asam (A). Penelitian tersebut sesuai dengan peneitian yang dilakukan oleh Dewi, I.D.A.D.Y. dkk, (2013) yang melaporkan koloni Salmonella spp pada media SSA berwarna hitam dan positif pada uji biokimia 20 . Hasil pengujian sensitivitas antibiotic pada Tabel 3 .  didapatkan  ciprofloxacin memiliki  rata  –  rata  zona  hambat  sangat kuat  yaitu  30,20  ±  1,37  mm  diikuti  dengan
cefotaxim  23,04  ±  1,80  mm,  doxycycline 22,24 ± 0,97 mm dan gentamycin 16.32 ± 0,92 mm dengan kategori kuat. Berdasarkan hasil uji  sensitivitas  tersebut  maka  Ciprofloxacin digunakan sebagai kontrol positif.  Hasil uji sensitivitas antibiotik tersebut sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh Vebiola dkk., (2020) dan Purwanitiningsih dkk., (2020) yang  memperoleh  antibiotik  ciprofloxacin memiliki  zona  hambat  yang  sangat  baik terhadap bakteri Salmonella 21,22 . Sedangkan untuk antibiotik amoxycillin, ampicillin, dan erytromicin memiliki sensitivitas paling rendah, hal ini sesuai dengan penelitian Nyoman  dkk.,  (2019)  dan  Kartika  dkk., (2019) yang melaporkan bahwa bahwa ketiga antibiotik tersebut memiliki sensitivitas yang rendah  terhadap bakteri Salmonella spp 23,24 . Fraksi etil asetat daun manggis pada Tabel 4 . menunjukan aktivitas antibakteri kuat pada semua konsentrasi uji dibandingkan fraksi n-heksan pada daun, fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan kulit batang manggis. Pada penelitian Anggraini, dkk (2021) juga menyatakan bahwa fraksi kulit batang manggis terhadap bakteri Salmonella Thypi ATCC 13311 menghasilkan daya hambat antibakteri yang cukup, hal ini menunjukkan adanya senyawa kimia potensial yang lebih banyak terkandung dalam daun manggis dibandingkan kulit batang manggis 25 . Besarnya senyawa kimia dalam daun manggis juga ditunjukkan pada persentase rendemen fraksi, dimana fraksi etil asetat daun manggis yang memiliki nilai rendemen tertinggi dibandingkan fraksi n-heksan daun, fraksi etil asetat dan fraksi n-heksan kulit batang manggis. Nilai rendemen menunjukkan besarnya kandungan senyawa kimia. Hasil penelitian ini sejalan dengan penelitian Ghani dkk, (2018) yang menunjukkan bahwa fraksi etil asetat yang mengandung flavonoid daun manggis memiliki aktivitas antibakteri lebih besar dari pada ekstrak dan fraksi n-heksan 26,27 . Keterbatasan dalam penelitian ini adalah peneliti tidak dapat menghitung jumlah koloni yang tumbuh dalam setiap cawan,  mengidentifikasi  bakteri  apa  saja yang terdapat pada isolasi ulkus diabetik selain Salmonela spp, dan  mengidentifikasi
senyawa pada kedua fraksi yang paling besar aktivitasnya dalam menghambat pertumbuhan bakteri.
5.  Kesimpulan Pada penelitian ini dapat disimpulkan bahwa ditemukan bakteri Salmonella spp pada ulkus diabetik. Fraksi etil asetat daun manggis memiliki aktivitas antibakteri tertinggi pada Salmonella spp hasil isolasi ulkus  diabetik  dengan  zona  hambat  sebesar 17,30  ±  0,57  mm  pada  konsentrasi  100%. Hasil analisi One-way Anova menunjukkan terdapat  perbedaan  signifikan  dari  semua konsentrasi kelompok uji dengan kontrol positif  ciprofloxacin  5µg/disk  dan  kontrol negative DMSO.

## Daftar Pustaka
1. Hasil  Riset  Kesehatan  Dasar.  Diabetes Mellitus. Jakarta: Badan Penelitian dan Pengembangan Kesehatan Kementerian Kesehatan RI; 2018.
2.  Bayu, M. Z. H., dkk.. Diabetic Foot Infection (Infeksi Kaki Diabetik): Diagnosis dan Tatalaksana. Jurnal CDK. 2019;46(6).
3. Nurwahidah,  Dkk.  Identifikasi  Jenis Bakteri Pada Luka Kaki Diabetik Berdasarkan  Penyebab  Luka  Di  Rumah Perawatan Luka Dan Poliklinik Luka Di Kota Makassar. Jurnal Kesehatan Manarang. 2018;4(2).
4. Lipsky dkk. Guidelines for Diabetic Foot Infections. Texas: Clinical Infections Diseasses. 2013;39.
5. Kurniawan, L. B., T. Esa, dan N. Sennang. Pola Kuman Aerob dan Kepekaan Antimikroba Pada Ulkus Diabetk. Journal Of Clinical Pathology and Medical Laboratory. 2011;18(1):1-3.
6.  Wulansari dkk. Uji Sensitivitas Bakteri Pada Penderita Ulkus Diabetikum Di  RSUD  Sidoarjo.  Jurnal  Analisis Kesehatan. 2018;7(1):533–537.
7. Umidayati.  dkk.  Identifikasi  Salmonella sp Pada cacing Sutra (Tubifex sp.) Tangkapan Dari alam dan hasil Budidaya. Journal  of Aquaculture  and  fish  Health. 2020;9(2).
8. Turahman, Taufik. Ghani NFS. Aktivitas
Antibaktei Ekstrak Dan Fraksi daun Manggis Terhadap Staphylococcus aureus. Jurnal Farmasi Indonesia. 2018, 15(2):115-122.
9. Dimas, P., Derwis, W., Astuti, Sri. Uji Aktivitas Antibakteri Kombinasi Kulit Batang dan Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana Linn) Terhadap Shigella dysentriae. Jurnal ilmu lingkungan. 2014;12(2):83-91.
10. Salim, E., Yogi Afritunando, Nindi Antika Febriana, Mai Efdi. Studi Optimasi Ekstraksi Kandungan Senyawa Polifenolik Total Dan Uji Aktivitas Antioksidan Dari Daun Manggis (Garcinia mangostana Linn.). Jurnal Riset Kimia. 2019;10(1).
11. Wulandari, Sekar. Susanti Erikania. Vevi Maritha. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak dan Fraksi Etil Asetat Daun Jarak Pagar (Jatropa curcas L.) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus. Journal of Vocational Health Studies. 2021;Vol. 5.
12. Yuliani. N. N., J. Sambara, dan M.A. Uji Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat  Ekstrak  Etanol  Rimpang  Jahe Merah (Zingiber officinale var. Rubrum) Dengan Metode DPPH (1,1-Dyphenyl-2- Picrylhydrazyl).  Jurnal  Info  Kesehatan. 2016;14(1).
13. Ningsih,  D.R.  Zusfahair,  dan  Mantari, D. Ekstrak Daun Mangga (Mangifera Indica L.) Sebagai Antijamur Terhadap Jamur Candida Albicans Dan Identifikasi Golongan Senyawanya. Jurnal Kimia Riset. 2017;2(1).
14. Isnaeni, D., dan Rahmawati. Isolasi Dan Karakterisasi Mikrosimbion Dari Spons Callyspongia Vaginalis Dan Uji Daya Hambat Terhadap Staphylococcus Aureus Dan Salmonella Thypi. Jurnal Farmasi. 2016;13(2).
15. Yusriana, S. C., Budi, Setya Chrismawan., Dewi Trisna. “Uji Daya Hambat Infusa Daun Nangka (Artocarpus Heterophyllus) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus Aureus”. Jurnal Permata Indonesia. 2014;5(2).
16. Savitri. I., L. Suhendra, N. M. Wartini.
Pengaruh Jenis Pelarut Pada Metode Maserasi Terhadap Karakterstik Ekstrak
Sargassum polycystum. Jurnal Rekayasa dan Manajemen Agroindustri. 2017, 5(3):93-101. 17. Fadhly. E., D. Kusrini, E. Fachriyah.
Isolasi  Identifikasi  Senyawa  Alkaloid Dari  Daun  Rivina  Humilis  L.  Serta  Uji Sitotoksik Menggunakan Metode BLST (Brine Shrimp Lethality Test). Journal of Scientific  and Applied  Chemistry.  2015, 18(2):67–72.
18. Prabowo, dkk. Ekstraksi Senyawa Metabolit Sekunder yang Terdapat pada Daun Mangrove Xylocarpus granatum dengan Pelarut yang Berbeda. Jurnal ResearchGate 2014.
19. Bobbarala V. Antimicrobial Agents. Croatia: Intech. 2012.
20. Dewi,  I.D.A.D.Y.  dkk.  Identifikasi Kandungan Kimia Ekstrak Kulit Buah Manggis. Jurnal Farmasi Udayana. 2013. 21. Vebiola, Vanessa K., Simbala H. M. I., Karla  L.  R.  M.  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Sesewanua (Clerodendron Squamatum Vahl.) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus, Escherichia coli, dan Salmonella typhi. Jurnal Mipa. 2020, 9(2):86 – 90.
22. Purwanitiningsih, E., D. Lestari. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Cocor Bebek (Kalanchoe Pinnata (Lam)) Terhadap Pertumbuhan Bakteri Salmonella Typhi Dengan Metode Kirby Bauer. Jurnal Ilmiah Kesehatan. 2020,
2(2):142 -148.
23. Nyoman,  Ni  R.,  Indriani,  Syamsuddin, A. R. Razak. Aktivitas Antibakteri Fraksi N-Heksan, Kloroform, Etil Asetat Bunga Kamboja (Plumeria Alba) Terhadap Bakteri Staphylococcus Aureus Dan Salmonella  Typhi.  Jurnal  Riset  Kimia Kovalen. 2019, 5(2):173-181.
24. Kartika  Devy  H.,  Erina,  Rinidar, Fakhrurrazi,  Rosmaidar,  A.  Sayuthi. Daya Hambat Ekstrak Etanol Daun Mengkudu (Morinda Citrifolia L.) Terhadap Pertumbuhan Salmonella Sp. Dan Escherichia Coli. Jurnal Ilmiah Mahasiswa Veteriner. 2019, 3(2):87-97
25. Anggraini, S.W., S. Erikania, V. Maritha. 2022. Aktivitas Antibakteri Fraksi Kulit Batang Manggis (Garcinia Mangostana L.) terhadap Salmonella Thypi ATCC 13311. Journal of Vocational Health Studies. 2022;Vol. 5(3).
26. Ghani, N. F. S., dan T. Turahman. Aktivitas Antibakteri Ekstrak dan Fraksi Daun Manggis (Garcinia mangostana) terhadap Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa. Prosiding Seminar Nasional Unimus; 2018(1)
27. Nitima Tatiya-aphiradee, et al. In vivo antibacterial activity of Garcinia mangostana pericarp extract against methicillin-resistant Staphylococcus aureus  in  a  mouse  superficial  skin infection model. Journal Pharmaceutical Biology. 2016, 54(11):2606–2615.