## SELEKSI ENZIM PROTEASE JAMUR ENDOFIT DAUN MANGROVE Avicennia marina DI PANTAI NOELBAKI
( SELECTION OF ENZYME PROTEASE OF MANGROVE LEAF ENDOPHITE FUNGUS Avicennia marina AT NOELBAKI BEACH )
Ocsryn L. Ludji Lobo 1 , Anggreini D.N. Rupidara 2 , Mellissa E.S. Ledo 2
1,2 Program Studi Pendidikan Biologi, Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan, Universitas Kristen Artha Wacana, Kupang, Indonesia.
Email Correspondence : ocsrynludji@gmail.com

## Abstrak
Jamur endofit dapat diartikan sebagai mikroba yang hidup berkoloni dalam jaringan internal makhluk hidup seperti pada daun tanpa menyebabkan efek yang merugikan secara langsung pada organisme tersebut. Jamur  endofit  mampu  menghasilkan  enzim  ekstraseluler,  salah  satunya  enzim  protease.  Penelitian  ini bertujuan  untuk  mengidentifikasi  jamur  endofit  penghasil  enzim  protease  yang  hidup  pada  daun  mangrove Avicennia marina di  Pantai Neolbaki.  Metode  yang digunakan adalah eksperimental dengan dua perlakuan yaitu  daun  tua  dan  daun  muda mangrove A.  marina. Data  karakterisasi  morfologi  secara  makroskopis  dan mikroskopis dianalisis secara kualitatif sedangkan data uji aktifitas protease dari jamur endofit dengan metode plug agar berupa hasil perhitungan zona bening secara kuantitatif dan dideskripsikan  dalam bentuk gambar dan tabel . Berdasarkan data penelitian ditemukan bahwa dari daun tua dan daun muda mangrove A. marina yang ada  di  pantai Noelbaki menghasilkan 12 total isolat hasil  isolasi. Dari total  12 isolat diperoleh 5  isolat jamur endofit penghasil enzim protease ekstraseluler yang terbagi atas 3 isolat dari daun tua dan 2 isolat dari daun muda. Pembentukan zona aktifitas proteolitik tertinggi pada daun tua A. marina dalam uji enzim protease ekstraseluler  terdapat  pada  kode  isolat  DT  Am  05  OLL  dengan  diameter  zona  proteolitik  sebesar  2,1  mm. sedangkan untuk daun muda A. marina aktivitas tertinggi terdapat pada kode isolat DM Am 02 OLL dengan diameter zona bening sebesar 1,9 mm.
Kata Kunci : Avicennia marina, Enzim protease ekstraseluler, Jamur endofit.

## ABSTRACT
Endophytic fungi can be defined as microbes that live in colonies in the internal tissues of living things such  as  leaves  without  causing  direct  adverse  effects  on  these  organisms.  Endophytic  fungi  are  able  to produce  enzymes, one  of which  is the  protease  enzymes. This study aims to identify Endophytic fungi that produce protease enzymes that live on mangrove leaves of Avicennia marina in Noelbaki Beach. The research used an experimental method with two treatments, namely old and young leaves of the A. marina mangrove. The macroscopic and microscopic morphological characterization data were analyzed qualitatively, while the protease  activity  test  data  of  endophytic  fungi  using  the  plug  agar  and  the  clear  zone  were  analyzed quantitatively, then described in the form of figures and tables. The founding of the research of the old and young leaves of A. marina from the Noelbaki beach had been isolated a total of 12 isolates of endophytic fungi. Of the 12 isolates, 5 isolates were shown to produce extracellular protease enzymes, consisting of 3 old leaves isolates and 2 young leaves isolates. In the extracellular protease enzyme test, the proteolytic activity zone was confirm as a clear zone was found to be the highest in the old leaves of A. marina found in the isolate code DT-Am-05-OLL with a proteolytic zone diameter of 2.1 mm. As for young leaves of A. marina, the highest activity was found in the DM-Am-02-OLL isolate code with a clear zone diameter of 1.9 mm.
Key Words : Avicennia marina, endophytic fungi, extracellular protease enzymes

## Jurnal pendidikan dan Sains Biologi
5(2) 2022
Indonesia merupakan salah satu negara yang terdiri atas banyak pulau. Kebanyakan pulau di Indonesia memiliki potensi ekosistem mangrove dan hutan pantai yang tersebar pada lebih dari 17.000  pulau  dengan  memiliki  garis  pantai  sepanjang  80.000  km  (Litbang,  2014).  Nusa  Tenggra Timur  (NTT)  merupakan  salah  satu  dari  jajaran  pulau-pulau  yang  memiliki  potensi  ekosistem mangrove. Data dokumen final rencana zonasi wilayah pesisir dan pulau-pulau kecil Provinsi Nusa Tenggara Timur, menjelaskan bahwa NTT memiliki ekosistem mangrove yang sangat potensial yaitu seluas  17.546.52  Ha.  Ekosistem  mangrove  tersebar  di  beberapa  pesisir  pantai  termasuk  pantai Noelbaki. Pantai ini memiliki luas 10.2 Ha dengan ekosistem mangrove yang melimpah dan masih asri. Terdapat beberapa Jenis mangrove yang ditemukan di pantai ini, salah satunya adalah jenis Avicennia marina (Abo dkk., 2015).
Avicennia  marina merupakan  tumbuhan  belukar  atau  pohon  yang  tumbuh  tegak  dan menyebar dengan ketinggian pohon mencapai 30 meter. Mangrove A. marina biasanya hidup pada daerah  pasang  surut  air  laut  yang  memiliki  substrat  berlumpur. A.  marina juga  memiliki  potensi ekonomi  dimana  bagian-bagian  mangrove  jenis  ini  juga  dimanfaatkan  untuk  berbagai  keperluan seperti  pada  daun  mangrove  juga  menghasilkan  jamur  endofit  (Kasi  dkk.,  2015).  Jamur  endofit adalah  jamur  yang  hidup  dalam  jaringan  tumbuhan  seperti  pada  daun  dan  mampu  membentuk koloni  dalam  jaringan tersebut tanpa  membawa dampak  negatif bagi  inangnya (Kasi  dkk.,  2015). Jamur mampu mengahasilkan motoksin, antibiotik, serta enzim (Sinaga, 2009). Enzim merupakan suatu kelompok protein, sehingga kemungkinan besar bahan organic sekunder (metabolit sekunder) dihasilkan  oleh  bahan  organik  primer  seperti  protein  (Nuryanti  dan  Pursitasari,  2014).  Enzim merupakan molekul protein kompleks yang dihasilkan oleh sel hidup dan bekerja sebagai katalisator dalam berbagai proses kimia di dalam tubuh. Berdasarkan letak dan fungsinya, enzim dibagi menjadi dua yaitu enzim intraseluler dan ekstraseluler. Salah satu enzim ekstraseluler yang sering digunakan adalah  enzim  protease  (Fatimah  dan  Wardani,  2014).  Enzim  Protease  adalah  enzim  yang memutuskan ikatan peptida pada protein (Murray dkk., 2003). Enzim Protease memiliki manfaat dan berpotensi untuk diaplikasikan dalam dunia industri antara lain industri detergen, industri makanan, industri farmasi, susu, kulit dan pengempukan daging (Ramadhani dkk., 2015).

## MATERI DAN METODE

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  September  sampai  dengan  Oktober  2020. Pengambilan sampel dilakukan di area Pantai Noelbaki, Kabupaten Kupang, Nusa Tenggara Timur (NTT).

## Gambar 1. Peta Lokasi Penelitian
Tahap  sterilisasi,  pembuatan  media,  isolasi,  purifikasi  dan  seleksi  jamur  selanjutnya dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  Pendidikan  Biologi,  Universitas  Kristen  Artha  Wacana
Indigenous Biologi Jurnal pendidikan dan Sains Biologi 5(2) 2022
Kupang.  Alat  yang  digunakan  untuk  pengambilan  sampel  yaitu  gunting,  plastik ziplock , coolbox , kamera dan alat tulis, oven, autoclave , jarum ose, bunsen, timbangan alanitik, erlenmeyer , hot plate , magnetic stirrer , petridish , beker gelas, scalpel atau pisau steril, inkubator, penggaris, blue tip dan alat pelindung diri berupa jas, masker dan gloves . Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun mangrove A. marina sebagai sampel penelitian, PDA ( Potato Dextrose Agar ), skim milk (1%), chloramphenicol , air laut steril, aquades, alkohol 70%.

## Metode Penelitian
Penelitian ini menggunakan metode eksperimen dengan dua perlakuan yaitu daun muda dan daun  tua A.  marina dan  tiga  ulangan.  Isolasi  dan  identifikasi  dilakukan  dengan  melihat  morfologi jamur baik secara makroskopis dan mikroskopis.

## Prosedur Penelitian

## a.  Pengambilan Sampel
Pengambilan sampel daun mangrove Avicennia marina dilakukan di Pantai Noelbaki. Sampel daun A. marina diambil dengan cara dipetik langsung dari pohonnya menggunakan gunting. Sampel daun yang digunakan adalah daun muda serta daun tua. Penentuan daun muda dan daun tua dilihat dari letak duduk daun. Daun muda terletak pada daun ke tiga dari ujung cabang batang sedangkan daun tua terletak pada pangkal cabang batang (Fadilah dkk., 2019). Masing-masing sampel daun mangrove dimasukan secara terpisah ke dalam kantong sampel (plastik ziplock ), disimpan di dalam cool box dan dibawa ke Laboratorium Mikrobiologi Pendidikan Biologi, UKAW untuk dianalisis.

## b.  Sterilisasi dan Pembuatan Media
Semua peralatan yang akan digunakan akan disterilkan terlebih dahulu. Peralatan yang terbuat dari gelas, disterilkan dalam oven pada suhu 160˚C - 170˚C selama 1 jam. Sedangkan alat – alat yang tidak tahan pada pemanasan dengan suhu tinggi, disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit. Jarum ose disterilkan dengan cara pemanasan langsung menggunakan bunsen hingga memijar.
Media PDA dan air laut steril digunakan sebagai media isolasi jamur. Pembuatan media diawali dengan menimbang media PDA sebanyak 39 gram dan dilarutkan dalam 1000 mL air laut steril di dalam labu Erlenmeyer kemudian dipanaskan dan diaduk menggunakan Hot plate dan stirrer sampai homogen. Media yang sudah homogen disterilisasi menggunakan autoclave selama 15 menit pada suhu 121˚C. Selanjutnya pada media ditambahkan Chloramphenicol sebagai antibakteri, kemudian larutan PDA dituangkan ke dalam cawan petri dengan ketebalan ± 5 ml dengan kondisi tertutup, dan diamkan sampai membeku. Antibakteri digunakan 1 kapsul untuk 1L media. Sebelum digunakan, media disimpan selama 24 jam dalam suhu kamar.
c.  Isolasi Jamur Endofit
Sampel daun A. marina dicuci terlebih dahulu menggunakan air bersih yang mengalir. Sampel daun selanjutnya dikeringkan dengan tisu steril kemudian daun dibilas lagi dengan aquades steril selama  ±  1  menit.  Setelah  kering,  daun  dipotong  berbentuk  persegi  dengan  ukuran  ±1x1 menggunakan  pisau  steril  kemudian  ditanam  pada  media  PDA  ( Potato  Dextrose  Agar )  dengan proses pertumbuhan jamur selama ± 24 - 48 jam. Setelah potongan daun ditanam, maka dilakukan pengamatan setiap hari sampai jamur sudah tumbuh.
d.  Purifikasi (Pemurnian Jamur)
Setelah jamur tumbuh dilakukan purifikasi (pemurnian jamur). Pemurnian jamur bertujuan untuk memisahkan  koloni  dengan  mengamati  perbedaan  morfologi  koloni.  Pemurnian  jamur  dilakukan dengan  cara  miselium  jamur  yang  sudah  tumbuh  diambil  dengan  menggunakan  jarum  ose  yang steril kemudian bagian dari jamur tersebut dipindahkan kembali ke media PDA steril. Hal yang sama juga  dilakukan  pada  miselium  jamur  yang  memiliki  morfologi  makroskopis  koloni  yang  berbeda sampai dihasilkan biakan murni (Nuramalia, 2016).

## e.  Seleksi Jamur Proteolitik
Uji aktivitas protease menggunakan metode Plug Agar. Uji ini menggunakan media PDA yang diperkaya dengan skim milk (1%) . Setiap isolat murni jamur dipotong menggunakan pangkal Blue

## Indigenous Biologi Jurnal pendidikan dan Sains Biologi
5(2) 2022
tip dan ditotolkan pada media PDA yang diperkaya dengan skim milk , kemudian diinkubasi selama 24 - 48 jam pada suhu 37°C. Adanya aktivitas enzim protease ditandai dengan terbentuknya zona bening di sekitar koloni jamur setelah diinkubasi (Queendy dan Roza, 2019). Besarnya kemampuan jamur dalam menghasilkan protease dapat ditandai dengan indeks proteolitik. Indeks proteolitik yaitu perbandingan  antara  diameter  zona  bening  dengan  diameter  koloni  untuk  memperoleh  isolat potensial (Kabense, 2019). Indeks Proteolitik dirumuskan sebagai berikut.

## IP = Diameter Zona bening Diameter koloni
IP adalah Indeks proteolitik, dimana hasil pengukuran Indeks proteolitik  yang tergolong dalam kategori  rendah  adalah  kurang  dari  2,1  mm,  kategori  sedang  berkisar  antara  2,1 –  3,1  mm sedangkan yang termasuk dalam kategori tinggi adalah lebih dari 3,1 mm (Hastuti, 2017)

## Analisis Data
Data yang diperoleh disajikan secara deskriptif kualitatif dan deskriptif kuantitatif. Deskriptif kualitatif  meliputi  karakteristik  makroskopis  berupa  bentuk  serta  warna  koloni  jamur.  Deskriptif kuantitatif meliputi uji aktifitas protease dari masing-masing jamur yang berhasil diisolasi dari daun Avicennia marina.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Isolasi dan Purifikasi Jamur Dari Daun Mangrove Avicennia marina di Pantai Noelbaki. Sampel  daun Avicennia  marina yang  digunakan  berasal  dari  mangrove  di  Pantai  Noelbaki, Kecamatan Kupang Tengah, Kabupaten Kupang tahun 2020. Sampel daun mangrove A. marina di ambil dengan menggunakan gunting pada 1 tangkai.
Gambar 2. Foto duduk daun mangrove A. marina pada tangkai. (a) Letak daun tua; (b) Letak daun muda.
Daun mangrove A. marina yang diperoleh dicuci menggunakan air mengalir dengan tujuan untuk membersihkan permukaan daun dari kotoran. Daun dipotong per segi dengan ukuran 1 x 1 cm  kemudian  diletakkan  di  permukaan  media  PDA  yang  diperkaya  dengan Chloramphenicol sebagai  antibakteri.  Penggunaan Chloramphenicol pada  media  PDA  bertujuan  untuk  mencegah kontaminasi media oleh bakteri. Daun dibiarkan selama 3 hari sehingga terdapat pertumbuhan jamur pada media tersebut. Setelah 3 hari, jamur tumbuh dengan ciri-ciri terlihat seperti benang (hifa) di atas  daun.  Purifikasi  dilakukan  dengan  dikarakterisasi  berdasarkan  ciri  morfologi  yaitu  warna, permukaan koloni, tepi dan karakteristik mikroskopik seperti hifa dan spora yang dibentuk sesuai dengan buku petunjuk Illustrated Genera of Imperfect Fungi (Barnett dan Hunter, 2006).  Kemudian diambil potongan koloni jamur sebesar 1 x 1 cm  untuk dimurnikan sampai dengan mendapatkan isolat tunggal yaitu 1 koloni jamur dalam 1 media pertumbuhan. Purifikasi dilakukan dengan tujuan untuk memisahkan koloni jamur endofit berdasarkan karakter morfologinya agar didapatkan isolat tunggal jamur. Data isolat jamur endofit dapat dilihat pada tabel 1
Tabel 1. Karakteristik morfologi isolat jamur endofit
Kode Isolat Karakeristik Morfologi Secara Makroskopis Warna Permukaan Koloni Tepi DT-Am-01-OLL Hitam Halus dan rata Rata
Jurnal pendidikan dan Sains Biologi 5(2) 2022 DT-Am-02-OLL Putih keabuan Halus dan rata Rata DT-Am-03-OLL Putih Kehijauan Kasar dan tidak rata Tidak rata DT-Am-04-OLL Putih Halus dan tidak rata Rata DT-Am-05-OLL Hijau Tua Kasar dan tidak rata Tidak rata DT-Am-06-OLL Hijau tua pada bagian tengah dan hijau muda pada bagian tepi Kasar dan tidak rata Tidak rata DM-Am-01-OLL  Putih dengan warna hijau pada bagian tengah Halus dan rata Rata DM-Am-02-OLL  Putih kehijauan Kasar dan tidak rata Rata DM-Am-03-OLL  Hijau Tua Kasar dan tidak rata Rata DM-Am-04-OLL  Coklat Muda Kasar dan tidak rata Tidak rata DM-Am-05-OLL  Hitam pada bagian tengah dengan warna putih pada bagian tepi Halus dan rata Rata DM-Am-06-OLL  Putih kecoklatan Kasar dan tidak rata Tidak rata
Data  tabel menunjukkan  karakterisasi  isolat  jamur  endofit  secara  makroskopis  pada  daun tua dan daun muda mangrove A. marina. Berdasarkan warna, permukaan koloni, dan tepi diperoleh total 12 isolat murni jamur endofit. Pada daun tua A. marina (DT-Am) diperoleh 6 isolat jamur dengan kode isolat DT-Am-01-OLL, DT-Am-02-OLL, DT-Am-03-OLL, DT-Am-04-OLL, DT-Am-05-OLL dan DT-Am-06-OLL. Sedangkan pada daun muda A. marina (DM-Am) diperoleh 6 isolat jamur endofit dengan kode isolat DM-Am-01-OLL, DM-Am-02-OLL, DM-Am-03-OLL, DM-Am-04-OLL, DM-Am-05- OLL  dan  DM-Am-06-OLL.  Sedangkan  untuk  karakteristik  secara  mikroskopis  dapat  dilihat  pada tabel dibawah ini.
Tabel 2. Karakteristik jamur endofit dari daun mangrove Avicennia marina secara makroskopis dan mikroskopis.
Kode Isolat Gambar Isolat Secara makroskopis dan mikrodkopis Karakeristik Morfologi Secara Mikroskopis DT-Am-01-OLL Ada rhizoid, sporangiophor tidak bercabang, memperlihatkan konidiofordan  sporangium serta spora kecil dan bulat. DT-Am-02-OLL memiliki sporangium, hifa halus bercabang dan stolon yang halus dan bercabang DT-Am-03-OLL konidia panjang, adanya kolumella, sporangium dan spora bulat, sporangiophor tidak bercabang, serta hifa berseptat kecil dan bercabang DT-Am-04-OLL memiliki hifa halus dan bercabang, memiliki stolon lebih besar DT-Am-05-OLL hifa bersepta, sporangiophor tidak bercabang, sporangium bulat, konidia bulat serta adanya bagian stolon. DT-Am-06-OLL sporangiophor pendek dengan memperlihatkan bagian konidiofor, konidia bulat memanjang, hifa bersepta dan halus, serta terlihat adanya stolon

## Jurnal pendidikan dan Sains Biologi
5(2) 2022
DM-Am-01-OLL hifa tidak bersekat, sporangium kuning, konidia bulat, terdapat stolon DM-Am-02-OLL memiliki rhizoid, sporangiophor tidak bercabang, konidiofor, sporangium berbentuk bulat, kionidia berbentuk bulat kuning dan tersusun memanjang DM-Am-03-OLL memiliki stolon, sporangiophor tidak bercabang, sporangium bulat, konidia kuning dan bulat DM-Am-04-OLL konidia bulat kuning, konidiofor bercabang, dengan memperlihatkan fialid DM-Am-05-OLL ada rhizoid, sporangiophor tidak bercabang, serta sporangium dan konidia bulat kecil DM-Am-06-OLL hifa halus berwarna sporangiophor tidak bercabang dan sporangium bulat
Isolat DT-Am-01-OLL mempunyai ciri-ciri miselium berwarna hitam, permukaan koloni halus dan rata serta tepi koloni rata. Pada pengamatan secara mikroskopis, isolat ini diduga termasuk ke dalam genus Aspergillus sp  karena  memperlihatkan  ciri-ciri  memiliki  rhizoid,  sporangiophor  yang  tidak bercabang, memperlihatkan bagian konidiofor, serta sporangium dan spora yang berbentuk bulat dengan  ukuran  yang  kecil  (Wahyuni,  2017).  Isolat  DT-Am-02-OLL  mempunyai  ciri-ciri  miselium berwarna  putih  keabuan,  permukaan  koloni  halus  dan  rata  serta  tepi  koloni  yang  rata  dan membentuk cincin. Pada pengamatan secara mikroskopis, isolat ini diduga termasuk kedalam genus Fusarium sp, karena ciri-cirinya memiliki sporangium, hifa halus yang bercabang, serta bagian stolon yang halus dan bercabang (Sholihah dkk., 2019). Isolat DT-Am-03-OLL mempunyai ciri-ciri miselium berwarna putih kehijauan, permukaan koloni kasar dan tidak rata, serta tepi koloni yang tidak rata. Pada pengamatan secara mikroskopis, isolat ini diduga termasuk ke dalam genus Aspergillus sp, karena  ciri-ciri  yang  diperlihatkan  memiliki  konidia  yang  panjang  dengan  adanya  kolumella, sporangium dan spora yang berbentuk bulat, sporangiophor yang tidak bercabang, memperlihatkan bagian konidiofor, walaupun spesies ini termasuk genus Aspergillus namn berbeda dengan DT-Am- 01-OLL karena adanya hifa bersepta kecil dan bercabang (Wahyuni, 2017). Isolat DT-Am-04-OLL mempunyai  ciri-ciri  miselium  berwarna  putih,  permukaan  halus  dan  bergelombang  membentuk zonasi serta tepi koloni rata. Pada pengamatan secara mikroskopis, isolat ini diduga termasuk ke dalam genus Fusarium sp, dengan ciri-ciri memiliki hifa yang halus dan bercabang serta memiliki stolon dengan ukuran yang lebih besar (Sholihah dkk., 2018). Isolat DT-Am-05-OLL mempunyai ciri- ciri miselium berwarna hijau tua, permukaan koloni yang kasar dan tidak rata, serta tepi koloni yang tidak  rata.  Pada  pengamatan  secara  mikroskopis,  isolat  ini  diduga  termasuk  ke  dalam  genus Aspergillus sp,  ciri-ciri  yang  dipunyai  yaitu  memiliki  hifa  bersepta,  sporangiophor  yang  tidak bercabang, memperlihatkan bagian konidiofor, sporangium berbentuk bulat, konidia berbentuk bulat serta bagian stolon yang menghubungkan satu sporangiophor dengan sporangiophor yang lain. Ciri stolon  yang  membedakan  isolat  ini  dengan  isolat  DT-Am-01-OLL  dan  DT-Am-03-OLL  (Wahyuni, 2017). Isolat DT-Am-06-OLL mempunyai ciri-ciri miselium berwarna hijau tua pada bagian tengah dan hijau muda pada bagian tepinya, permukaan koloni kasar dan tidak rata, serta tepi koloni tidak rata.  Pada  pengamatan  secara  mikroskopis,  isolat  ini  diduga  merupakan  genus Penicillium sp, adapun ciri-cirinya memiliki sporangiophor yang pendek dengan memperlihatkan bagian konidiofor, konidia  berbentuk  bulat  yang  tersusun  memanjang,  hifa  yang  bersepta  dan  halus,  serta  terlihat adanya stolon (Ristiari dkk., 2018).

## Indigenous Biologi
Isolat  DM-Am-01-OLL  mempunyai  ciri-ciri  miselium  berwarna  putih  dengan  bagian  tengah berwarna  hijau,  permukaan  koloni  halus  dan  rata,  serta  tepi  koloni  yang  rata.  Pada  pengamatan secara  mikroskopis,  isolat  ini  diduga  termasuk  ke  dalam  genus Mucor sp,  karena  ciri-ciri  yang diperlihatkan  memiliki  hifa  yang  tidak  bersekat  dengan  sporangium  berwarna  kuning,  konidia berbentuk bulat, terdapat stolon serta menunjukan adanya vesikel (Sanjaya dkk., 2019). Isolat DM- Am-02-OLL  mempunyai  ciri-ciri  miselium  berwarna  putih  kehijauan,  permukaan  koloni  kasar  dan tidak  rata  serta  tepi  koloni  yang  rata.  Pada  pengamatan  secara  mikroskopis,  isolat  ini  diduga merupakan genus Aspergillus sp, karena ciri-cirinya yaitu memiliki rhizoid, sporangiophor yang tidak bercabang, memperlihatkan bagian konidiofor, serta sporangium berbentuk bulat, kionidia berbentuk bulat  dan  berwarna  kuning  dan  tersusun  memanjang.  Spesies  ini  mirip  dengan  DT-Am-03-OLL namun  berbeda  pada  konidia  yang  berwarna  kuning  dan  tersusun  memanjang  (Wahyuni,  2017). Isolat DM-Am-03-OLL  mempunyai ciri-ciri miselium berwarna hijau tua,  permukaan koloni  kasar dan tidak rata, tepi koloni rata. Pada pengamatan secara mikroskopis, isolat ini diduga termasuk ke dalam genus Aspergillus sp, yang memperlihatkan ciri-ciri memiliki stolon, sporangiophor yang tidak bercabang,  memperlihatkan  bagian  konidiofor,  sporangium  berbentuk  bulat,  konidia  berwarna kuning dan berbentuk bulat, perbedaan utama dengan genus Aspergillus lainnya adalah konidianya berwarna kuning dan berbentuk bulat (Wahyuni, 2017). Isolat DM-Am-04-OLL mempunyai ciri-ciri miselium berwarna cokelat muda, permukaan koloni kasar dan tidak rata, serta tepi yang rata. Pada pengamatan  secara  mikroskopis,  isolat  ini  diduga  merupakan  genus Trichoderma sp,  karena memperlihatkan ciri-ciri memiliki konidia bulat  dan berwara kuning, konidiofor bercabang, dengan memperlihatkan  fialid  pada  bagian  percabangannya  (Purwantisari  dan  Hastuti,  2009).  Isolat  DM- Am-05-OLL mempunyai ciri-ciri miselium berwarna hitam dan putih, permukaan koloni yang halus dan rata, serta tepi koloni rata. Pada pengamatan secara mikroskopis, isolat ini diduga termasuk ke dalam  genus Aspergillus sp,  ciri-ciri  yang  dimiliki  yaitu  adanya  rhizoid,  sporangiophor  yang  tidak bercabang, memperlihatkan bagian konidiofor, sporangium serta bentuk konidia yang bulat dengan ukuran kecil  yang mencirikan  perbedaan  dengan  genus serupa  pada  isolat  daun A.marina muda lainnya (Wahyuni, 2017). Isolat DM-Am-06-OLL mempunyai ciri-ciri miselium berwarna putih dengan bagian tengah berwarna coklat, permukaan koloni yang kasar dan tidak rata, serta tepi koloni yang tidak  rata.  Pada  pengamatan  secara  mikroskopis,  isolat  ini  diduga  termasuk  ke  dalam  genus Aspergillus sp, yang memperlihatkan ciri-ciri memiliki sporangiophor yang tidak bercabang dengan memperlihatkan bagian konidiofor. Memiliki Sporangium berbentuk bulat. Perbedaan spesifik isolat ini  adalah  hifanya  yang  halus  berwarna  putih  dan  stolon  sebagai  penghubung  bagi  setiap sporangiophor (Wahyuni, 2017).

## B.  Uji Aktifitas Protease
Dari 12 isolat jamur endofit yang telah diperoleh dan di identifikasi dari daun mangrove A. marina, kemudian  dilakukan  pengujian  lanjut  terhadap  kemampuannya  menghasilkan  enzim protease ekstraseluler menggunakan media PDA yang diperkaya dengan Skim milk 1%. Jamur endofit yang menghasilkan enzim protease ekstraseluler ditandai dengan pembentukan zona bening pada sekitar koloni jamur endofit. Semakin besar zona bening yang dihasilkan maka semakin tinggi  enzim  protease  yang  dihasilkan  (Hastuti,  2017).    Berikut  data  isolat  jamur  endofit  yang menghasilkan enzim protease ekstraseluler yang disajikan pada tabel 3.
Tabel 4.2 Pengujian Jamur endofit penghasil enzim protease ekstraseluler
Nomor Kode Sampling Reaksi protease Diameter zona bening (mm) 1 DT Am 01 OLL - - 2 DT Am 02 OLL + 1,6 3 DT Am 03 OLL - - 4 DT Am 04 OLL ++ 2 5 DT Am 05 OLL ++ 2,1 6 DT Am 06 OLL - - 7 DM Am 01 OLL - - 8 DM Am 02 OLL + 1,9 9 DM Am 03 OLL + 1,6 10 DM Am 04 OLL - -

## Jurnal pendidikan dan Sains Biologi
5(2) 2022
11 DM Am 05 OLL - - 12 DM Am 06 OLL - -
Keterangan : +++  = Positif tinggi (3,1 mm)  ++ = Positifsedang (2,1 – 3,1 mm) +  = Positif rendah (2,1 mm)   -  = Negatif
Berdasarkan  tabel  4.2  seleksi  jamur  endofit  yang  diperoleh  dari  daun  tua  (DT) A.  marina terdapat 3 isolat yang menghasilkan enzim protease ekstraseluler yaitu isolat DT-Am-02-OLL, DT- Am-04-OLL  dan  DT-Am-05-OLL  dengan  masing-masing  diameter  zona  bening  adalah  1,6  mm (positif rendah), 2 mm (positif sedang), dan 2,1 mm (positif sedang). Sedangkan untuk daun muda (DM) terdapat 2 isolat  dengan kode DM-AM-02-OLL dan DM-Am-03-OLL dengan masing-masing diameter  zona  bening  adalah  1,9  mm  dan  1,6  mm  yang  memiliki  reaksi  protease  positif  rendah.. sehingga total isolat yang menghasilkan enzim protease ekstraseluler sebanyak 5 isolat.
Gambar 3. Hasil uji enzim protease ekstraseluler. (a) Pada daun tua (DT), (b) Pada daun muda (DM).
Pembentukan zona aktivitas proteolitik tertinggi pada daun tua A. marina dalam pengujian enzim  protease  ekstraseluler  terdapat  pada  kode  isolat  DT  Am  05  OLL  dengan  diameter  zona proteolitik sebesar 2,1 mm. sedangkan untuk daun muda A. marina aktivitas tertinggi terdapat pada kode  isolat  DM  Am  02  OLL  dengan  diameter  zona  bening  sebesar  1,9  mm  sesuai  dengan pengukuran Indeks proteolitik  yang tergolong dalam kategori rendah adalah kurang dari 2,1 mm, kategori  sedang  berkisar  antara  2,1 –  3,1  mm  sedangkan  yang  termasuk  dalam  kategori  tinggi adalah lebih dari 3,1 mm (Hastuti, 2017).
Isolat jamur endofit yang positif ditandai dengan adanya zona bening disekitar isolat pada media skim  milk .  Media skim  milk memiliki  kandungan  protein  yang  akan  dipecah  oleh mikroorganisme proteolitik menjadi senyawa nitrogen terlarut sehingga pada koloni dikelilingi area bening  (Harun  dkk.,  2018).  Hasil  perombakan  polimer  protein  ditunjukkan  dengan  adanya  zona bening  yang  menandakan  adanya  aktifitas  enzim  protease  yang  mengkatalis  pemecahan  ikatan peptida  dalam  peptida,  polipeptida  dan  protein  dalam  media  melalui  reaksi  hidrolisis  menjadi molekul-molekul yang lebih sederhana seperti peptide rantai pendek dan asam amino (Naiola dan Widhyastuti,  2002).  Protein  yang  terdapat  pada  media skim  milk bertindak  sebagai  induser  bagi enzim  protease.  Zona  bening  yang  dihasilkan  merupakan  hasil  hidrolosis  substrat  protein  yang terkandung dalam media skim milk oleh enzim protease yang dihasilkan oleh isolat jamur (Yuniati dkk., 2015).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian maka dapat disimpulkan bahwa hasil isolasi jamur endofit pada daun  mangrove Avicennia  marina, diperoleh  total  isolat  jamur  endofit  sebanyak  12  isolat  yang terbagi atas 6 isolat pada daun tua dan 6 isolat lagi pada daun muda. Setelah dilakukan pengujian aktivitas  protease  pada  media skim  milk diperoleh  total  5  isolat  jamur  endofit  yang  memiliki kemampuan menghasilkan enzim protease ekstraseluler yaitu isolat dengan kode DT-Am-02-OLL, DT-Am-04-OLL, DT-Am-05-OLL, DM-Am-02-OLL dan DM-Am-03-OLL. Tiga isolat jamur endofit dari daun tua A. marina memiliki aktifitas protease dengan diameter zona bening tertinggi terdapat pada kode  isolat  DT-Am-05-OLL  sebesar  2,1  mm.  2  isolat  jamur  endofit  pada  daun  muda A.  marina memiliki aktifitas protease dengan diameter zona bening tertinggi terdapat pada kode isolat DT-Am- 02-OLL sebesar 1,9 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Abo,  M.,  Banilodu,  L.,  dan  Eduk,  E.J.,  2015.  Struktur  Vertikal  Komunitas  Mangrove  di  Pantai Noelbaki,  Kupang  Tengah,  Kupang  [Skripsi].  Universitas  Katolik  Widya  Mandira  Kupang. Kupang.
Barnett, H.L., and Hunter, B.B., 2006. Illustrated Genera of Imperfect Fungi. Fourth Edition (4 th ). The American Phytophatological Society St. Paul, Minnesota.
Fadilah, W.A.N., Soenardjo, N., Setyati, W.A., 2019. Tingkat Herbivori Daun Mangrove Rhizophora stylosa  dan  Avicennia  marina  di  Pesisir  Pasar  Banggi  Jawa  Tengah. Buletin  Oseanografi Marina 8(2): 81-86.
Fatimah,  A.N.,  dan  Wardani,  A.K.,  2014.  Ekstraksi  dan  Karakterisasi  Enzim  Protease  Dari  Daun Kelor (Moringa oliefera Lamk.). Jurnal Teknologi Pertanian 15(3): 191-200.
Harun, A., Muchlissin, S.I., Mukaromah, A.H., Darmawati, S., dan Ethica, S.N., 2018. Isolasi Bakteri Penghasil Enzim Protease Staphilococcus hominis Pada Oncom Merah Pasca Fermentasi 120 Jam. Seminar Nasional Edusaintek 23-30.
Hastuti, U.S., Nugraheni, F.S.A., Asna, P.M.A., 2017. Identifikasi dan Penentuan Indeks Hidrolisis Protein  Pada  Bakteri  Proteolitik  dari  Tanah  Mangrove  di  Margomulyo,  Balikpapan. Proceeding Biology Education 14(1): 265-270.
Kabense,  R.  2019.  Penapisan  Bakteri  Proteolitik  yang  Bersimbiosis  Dengan  Alga  Gracillaria  sp. Jurnal Ilmiah Platax 7(2): 413-418.
Kasi, Y.A., Posangi, J., Wowor, P.M., dan Bara, R., 2015. Uji Efek Anti Bakteri Jamur Endofit Daun Mangrove  Avicennia  marina  Terhadap  Bakteri  Uji  Staphylococcus  aureus  dan  Shigella dysenteriae. Jurnal e-Biomedik 3(1).
Litbang. 2014. Pengelolaan Hutan Mangrove dan Ekosistem Pantai. Kementrian Kehutanan Badan Penelitian dan Pengembangan Kehutanan
Murray,  R.K.,  Granner,  D.K.,  Mayes,  P.A.,  and  Rodwell,  V.W.,  2003.  Biokima  Harper.  Edisi  25. Jakarta ECG.
Naiola,  E.,  dan  Widhyastuti,  N.,  2002.  Isolasi,  Seleksi  dan  Optimasi  Produksi  Protease  Dari Beberapa Isolat Bakteri. Berita Biologi 6(3): 467-473.
Nuramalia.  2006.  Isolasi  dan  Identifikasi  Mikrofungi  Endofit  pada  Serasah  dan  Daun  Mangrove (Rhizopora sp.) di Perairan Sei Ladi Kota Tanjungpinang [Skripsi]. FIKP Universitas Maritim Raja Ali Haji. Tanjung pinang.
Nuryanti,  E.S.  dan  Pursitasari,  I.D.,  2014.  Uji  Kualitatif  Senyawa  Metabolit  Sekunder  Pada  Daun Palado (Agave angustifolia) Yang Di Ekstraksi Dengan Pelarut Air Dan Etanol. Jurnal Akad Kimia 3(3): 165-172.
Purwantisari,  S.,  dan  Hastuti,  R.B.,  2009.  Isolasi  dan  Identifikasi  Jamur  Indigenous  Rhizofer Tanaman Kentang dari Lahan Pertanian Kentang Organik di Desa Pakis, Magelang. BIOMA 11(2): 45-53.
Queendy, V., dan Roza, R.M., 2019. Aktivitas Antifungi Isolat Aktinomisetes Arboretum Universitas Riau  Terhadap  Jamur  Fusarium  oxysporum  f.sp  lycopersici  Dan  Ganoderma  boninense. Jurnal Biologi 12(1): 73-88.
Ramadhani,  P.,  Rukmi,  I.,  Pujiyanto,  S.,  2015.  Produksi  Enzim  Protease    Dari  A.  niger  PAM18A Dengan Variasi pH dan Waktu Inkubasi. Jurnal Biologi 4(2): 25-34.
Indigenous Biologi Jurnal pendidikan dan Sains Biologi 5(2) 2022
Ristiari,  N.P.N.,  Julyasih,  K.S.M.,  dan  Suryanti,  I.A.P.,  2018.  Isolasi  Dan  Identifikasi  Jamur Mikroskopis  Pada  Rizofer  TAnaman  Jeruk  Siam  (Citrus  nobilis  Lour.)  Di  Kecamatan Kintamani, Bali. Jurnal Pendidikan Biologi Undiksha 6(1): 10-19.
Sanjaya,  Y.,  Nurhaeni,  H.,  dan  Halima.,  M.,  2010.  Isolasi,  Identifikasi,  dan  Karakterisasi  Jamur Entomopatogen dari Larva Spodoptera litura (Fabricus). Bionatura Jurnal Ilmu-Ilmu Hayati dan Fisik 12(3): 136-141.
Sinaga,  M.H., 2009. Pengaruh Bio Va-Mikoriza  dan Pemberian Arang Terhadap Jamur Fusarium oxysporum  pada  Tanaman  Cabai  (Capsicum  annuum)  di  Lapangan  [Skripsi].  Universitas Sumatera Utara. Medan.
Sholihah,  R.I.,  Sritamin,  M.,  dan  Wijaya,  I.N.,  2019.  Identifikasi  Jamur  Fusarium  solani  Yang Berasosiasi Dengan Penyakit Busuk Batang Pada Tanaman Buah Naga (Hylocereus sp.) Di Kecamatan Bangorejo, Kabupaten Banyuwangi. E-Jurnal Agroekoteknologi Tropika 8(1): 91- 102.
Wahyuni,  S.H.  2017.  Identifikasi  Jamur  Endofit  Asal  Tanaman  Tebu  (Saccharum  officinarum  L.) Dalam  Menghambat  Xanthomonas  albilineans  L.  Penyebab  Penyakit  Vaskular  Bakteri. Jurnal Agrotek Lestari 4(2): 1-11.
Yuniati, R., Nugroho, T.T., dan Puspita F., 2015. Uji Aktivitas Enzim Protease Dari Isolat Bacillus sp. Galur lokal Riau. JOM FMIPA 1(2): 116-122.