Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jra
# Korespondensi:  Departemen  Budidaya  Fakultas  Perikanan  dan Ilmu  Kelautan,  Institut  Pertanian  Bogor.
Jl.  Lingkar  Kampus  IPB,  Dramaga,  Bogor  16680,  Indonesia Tel.  +  62  81219894262 E-mail:  yanee_ aryati@yah oo.com
POTENSI  PREBIOTIK  MADU  KLENGKENG,  RANDU,  DAN  ORGANIK TERHADAP  KINERJA  PERTUMBUHAN  IKAN  NILA  (Oreochromis  niloticus)
Yani  Aryati *)# ,  Widanarni *) ,  Dinamella  Wahjuningrum *) ,  Iman  Rusmana **) ,  dan Angela  Mariana  Lusiastuti ***)
*) Departemen Budidaya Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor Jl. Lingkar Kampus IPB,  Dramaga,  Bogor 16680
**) Departemen Biologi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor Jl. Lingkar Kampus IPB, Dramaga, Bogor 16680
***) Balai Riset Perikanan Budidaya Air Tawar dan Penyuluhan Perikanan Jl. Sempur  No. 1, Bogor 16129
(Naskah  diterima:  19  Juni  2020;  Revisi  final:  18  Agustus  2020;  Disetujui  publikasi:  18  Agustus  2020)

## ABSTRAK
Salah  satu  upaya  untuk  meningkatkan  performa  pertumbuhan  dan  komposisi  mikroflora  dalam  usus, menghambat pertumbuhan patogen, dan meningkatkan imunitas ikan adalah dengan pemberian prebiotik. Madu  memiliki  kandungan  utama  berupa  oligosakarida,  salah  satu  material  yang  dapat  dimanfaatkan sebagai prebiotik. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi potensi madu klengkeng, randu, dan organik sebagai prebiotik dan menguji pengaruhnya terhadap kinerja pertumbuhan ikan nila (Oreochromis niloticus). Kriteria prebiotik yang diuji meliputi kandungan oligosakarida dari madu dan ekstraknya menggunakan kromatografi  lapis  tipis  (KLT),  hidrolisis  asam  lambung  dan  -amilase  dari  ketiga  ekstrak  madu,  serta stimulasi pertumbuhan bakteri probiotik dari ekstrak ketiga jenis madu. Pengujian pada ikan nila dilakukan selama 30 hari dengan perlakuan A (kontrol), B (1% madu klengkeng pada pakan), C (1% madu randu pada pakan),  dan  D  (1%  madu  organik  pada  pakan),  masing-masing  diulang  empat  kali.  Parameter  kinerja pertumbuhan  yang  diukur  meliputi  bobot  biomassa  awal,  bobot  biomassa  akhir,  pertambahan  bobot, konsumsi pakan, laju pertumbuhan spesifik, rasio konversi pakan, dan sintasan. Hasil pengujian dengan KLT menunjukkan ekstrak madu klengkeng dan randu merupakan oligosakarida. Hidrolisis asam lambung dan asam á-amilase selama tiga jam pengamatan mengalami peningkatan, baik dari ekstrak madu klengkeng, madu  randu,  dan  madu  organik.  Ekstrak  madu  randu  memiliki  kinerja  paling  baik  dalam  menstimulasi pertumbuhan  bakteri  probiotik.  Madu  klengkeng,  randu,  dan  organik  memenuhi  kriteria  prebiotik. Penambahan  madu  randu  pada  pakan  ikan  nila  mampu  meningkatkan  bobot  biomassa  akhir  tertinggi (28,42 ± 0,79); laju pertumbuhan spesifik tertinggi (11,15 ± 0,09), dan memberikan rasio konversi pakan terendah (1,77 ± 0,06) dibandingkan dengan perlakuan madu yang lain. Penambahan madu klengkeng, randu,  dan  organik  sebanyak  1%  melalui  pakan  mampu  meningkatkan  kinerja  pertumbuhan  ikan  nila dengan hasil terbaik adalah penambahan madu randu.
KATA KUNCI:  -amilase; kromatografi  lapis tipis;  hidrolisis asam  lambung; probiotik;
oligosakarida
ABSTRACT: Potentials  prebiotics  of  longan,  kapok,  and  organic  honey  on  the  growth  performance of  tilapia  (Oreochromis  niloticus).  By:  Yani  Aryati,  Widanarni,  Dinamella  Wahjuningrum,
Iman  Rusmana,  and  Angela  Mariana  Lusiastuti
One  of  the  efforts  to  improvethe  growth  performance  and  composition  of  microflora  in  the  intestine, inhibit  the  growth  of  pathogens,  and  increase  the  immunity  of  fish  is  through  the  application  of  prebiotics. Honey  is  known  to  contain  oligosaccharides,  which  can  be  used  as  prebiotics.  This  study  aimed  to  evaluate the  potential  of  longan,  kapok,  and  organic  honey  as  prebiotics  and  examine  their  effects  on  the  growth
performance  of  tilapia  (Oreochromis  niloticus).  The  prebiotic  criteria  tested  included  oligosaccharide content  from  the  honey  and  their  extracts  using  thin  layer  chromatography  (TLC),  gastric  acid  hydrolysis, and  -amylase  as  well  as  stimulation  of  growth  of  probiotic  bacteria  from  the  extract  of  the  honey.  Tests  on tilapia were carried out for 30 days with treatments A (control), B (1% longan honey added in the feed), C (1% kapok  honey  added  in  the  feed),  and  D  (1%  organic  honey  added  in  the  feed)  and  each  treatment  repeated four  times.  The  measured  growth  performance  parameters  included  initial  biomass  weight,  final  biomass weight,  weight  gain,  feed  consumption,  specific  growth  rate,  feed  conversion  ratio,  and  survival.  Test results  with  TLC  showed  that  the  extract  of  longan  honey  and  kapok  were  oligosaccharides.  Gastric  acid hydrolysis  and  á-amylase  acid  during  three  hours  of  observation  showed  an  increase,  both  from  the extract  of  longan,  kapok,  and  organic  honey.  The  extract  of  kapok  honey  has  the  best  performance  in stimulating  the  growth  of  probiotic  bacteria.  Longan,  kapok,  and  organic  honey  meet  the  criteria  required for  prebiotic.  The  addition  of  kapok  honey  intilapia  feed  attained  the  highest  final  biomass  weight  (28.42 ±  0.79),  the  highest  specific  growth  rate  (11.15  ±  0.09),  and  produced  the  lowest  feed  conversion  ratio (1.77  ±  0.06)  compared  to  the  other  honey  treatments.  The  addition  of  1%  longan,  kapok,  and  organic honey  in  feed  can  improve  the  growth  performance  of  tilapia,  of  which  kapok  honey  gives  the  best  result.
KEYWORDS:  -amilase;  thin  layer  chromathography;  gastric  acid  hydrolyzed;  probiotic; oligosaccharide
antioksidan,  antitumor,  antiinflamasi,  dan  antiviral (Sakine et al., 2016). Kandungan utama madu adalah fruktosa dan glukosa, oligosakarida, mineral, senyawa fenolik, enzim, dan air (Ruiz-Matute et al., 2010). Madu mampu meningkatkan peran probiotik dalam saluran gastrointestinal, meningkatkan level dari SCFA, serta meningkatkan resistansi terhadap patogen (Saran et al., 2011). Madu mempunyai kandungan FOS dan GOS yang dapat meningkatkan sintasan bakteri asam laktat (Landry et al., 2016). Hasil penelitian Fuandila et al. (2019)  menunjukkan  madu  multiflora  dapat meningkatkan kinerja pertumbuhan dan respons imun udang vaname terhadap infeksi Vibrio parahaemolyticus.  Ada  banyak  jenis  madu  yang diproduksi dan dipasarkan di Indonesia. Tujuan dari penelitian  ini  adalah  mengevaluasi  potensi  madu klengkeng, randu, dan organik sebagai prebiotik dan menguji pengaruhnya terhadap kinerja pertumbuhan ikan nila sebagai model.

## BAHAN DAN METODE
Madu yang digunakan adalah madu hasil budidaya dari  lebah  lokal  (Apis  cerana)  yang  berasal  dari  tiga jenis  nektar  bunga  yang  berbeda  yaitu  madu klengkeng,  madu  randu,  dan  madu  organik  yang berasal dari nektar berbagai macam bunga. Ketiga jenis madu tersebut berasal dari Depok, Jawa Barat.
Ekstraksi madu dilakukan mengacu Hernandez et al. (2009). Deteksi oligosakarida dengan kromatografi lapis tipis (KLT) menggunakan metode Smith (1969). Pengujian  kandungan  gula  pereduksi  menggunakan metode dinitrosalisilat, sedangkan karbohidrat total menggunakan metode fenol-sulfat. Resistansi terhadap hidrolisis asam lambung dan á-amilase menggunakan metode  Wichienchot  &  Rastall  (2010).  Pengujian dilakukan  dengan  tiga  kali  ulangan.  Persentase hidrolisis dihitung dengan rumus  sebagai berikut:

## PENDAHULUAN
Prebiotik didefinisikan sebagai bahan pangan yang difermentasi  secara  selektif  oleh  bakteri menguntungkan yang dapat menyebabkan perubahan komposisi maupun aktivitas mikrobiota usus dengan meningkatkan  pelepasan  metabolit  yang  memberi manfaat  bagi  inang  dengan  cara  merangsang pertumbuhan  dan  aktivitas  bakteri  di  dalam  usus sehingga menyehatkan inang (Cerezuela et al., 2011), serta  menghambat  pertumbuhan  bakteri  patogen (Ringo  et  al.,  2010).  Prebiotik  umumnya  berupa karbohidrat rantai pendek yang tidak dapat dicerna (Cummings et al., 2001), biasanya berupa polisakarida dan  oligosakarida  (Patel  &  Goyal,  2012).  Menurut tingkat  polimerisasinya,  prebiotik  diklasifikasikan menjadi  mono,  oligo,  atau  polisakarida  (Gibson  et al.,  2015).  Prebiotik  yang  telah  diteliti  dan diaplikasikan dalam akuakultur antara lain FOS, scFOS, MOS, GOS, XOS, IMO, dan inulin (Ringo et al., 2010). Hasil penelitian menunjukkan bahwa prebiotik mampu meningkatkan  pertumbuhan,  sintasan,  kecernaan pakan,  efisiensi pakan,  komposisi mikroflora  dalam usus,  menghambat  pertumbuhan  patogen,  dan meningkatkan imunitas ikan (Merrifield et al., 2010), serta berperan dalam pengaturan nafsu makan (Hobden et al., 2015).
Oligosakarida yang tidak dapat dicerna merupakan sumber  karbon  bagi  bakteri  probiotik  atau  bakteri menguntungkan  yang  hidup  di  usus.  Oligosakarida tersebut  akan  difermentasi  oleh  bakteri  probiotik dengan produk akhir seperti asam lemak rantai pendek (short  chain  fatty  acidi  (SCFA))  berupa  asam  laktat, butirat, propionat, dan asetat, yang merupakan sumber energi dan berperan penting pada proses fisiologi dan metabolisme di usus (Roy et al., 2006).
Madu  telah  lama  digunakan  dalam  pengobatan tradisional  yang  berfungsi  sebagai  antibakterial,
di mana:
Gpt = konsentrasi gula pereduksi jam ke-t Gp0= konsentrasi gula pereduksi jam ke-0 KH = konsentrasi karbohidrat

## Stimulasi  Pertumbuhan  Bakteri  Probiotik
(Modifikasi Huebner  et  al.,  2008)

## Bakteri yang digunakan  adalah bakteri probiotik
Lactobacillus  plantarum  dan  bakteri  patogen  Strepto- coccus agalactiae. Media uji stimulasi yang digunakan adalah  10  mL  medium  deman  rogosa  sharpe  broth (MRSB)  untuk  bakteri  probiotik  dan  media  minimal sembilan  untuk  bakteri  S.  agalactiae.  Setiap  media ditambah dengan 1,0 mL larutan berisi 10 mg sampel. Kultur bakteri kemudian diinokulasi sebanyak 5,0% v/ v dengan kepadatan 10 -7 CFU/mL ke dalam media uji stimulasi dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37°C. Rapat  optik  (optical  density)  diukur  pada  panjang gelombang 600 nm pada jam ke-0, 12, dan 24. Aktivitas stimulasi dinyatakan secara kuantitatif dengan rumus sebagai berikut:
di mana:
Pp = OD probiotik pada prebiotik setelah t jam Pp0= OD probiotik pada prebiotik setelah 0 jam Pgt = OD probiotik pada kontrol (glukosa) setelah t jam Pg0= OD probiotik pada kontrol (glukosa) setelah 0 jam Ept = OD enterik pada prebiotik setelah t jam Ep0= OD enterik pada prebiotik setelah 0 jam Egt = OD enterik pada kontrol (glukosa) setelah t jam Eg0= OD enterik pada kontrol (glukosa) setelah 0 jam

## Kinerja  Pertumbuhan
Ikan nila yang digunakan pada penelitian ini adalah ikan  nila  ukuran  10  ±  0,24  cm  yang  berasal  dari Kabupaten  Purwakarta,  Jawa  Barat.  Sebelum  diberi perlakuan  pakan  dengan  penambahan  madu,  ikan diaklimatisasi selama satu minggu. Selanjutnya ikan dipelihara selama 30 hari dalam wadah pemeliharaan berupa akuarium  ukuran 100  cm x  60 cm  x 60  cm; dengan  padat  tebar  20  ekor  per  akuarium  dengan perlakuan  A  (kontrol),  B  (1%  madu  klengkeng  pada pakan), C (1% madu randu pada pakan), dan D (1% madu organik pada  pakan), masing-masing  diulang empat kali.  Dosis  perlakuan  ditentukan  berdasarkan  hasil penelitian Widanarni et al. (2019). Pemberian pakan
dilakukan secara  satiasi tiga  kali dalam  sehari yaitu pukul 07.00, 12.00, dan 18.00 WIB. Penyiponan dan pergantian air setiap pagi hari sebanyak 10% dari to- tal volume akuarium. Parameter kinerja pertumbuhan yang  diukur  meliputi  bobot  biomassa  awal,  bobot biomassa akhir, pertambahan bobot, konsumsi pakan, laju pertumbuhan spesifik, rasio konversi pakan, dan sintasan.  Data  sintasan,  laju  pertumbuhan  spesifik, dan rasio konversi pakan dievaluasi berdasarkan rumus:
a. Sintasan (SR) (Zokaeifar et al., 2012):
dimana:
Nt (ekor) = jumlah ikan pada akhir pemeliharaan No (ekor) = jumlah ikan pada awal pemeliharaan
b. Laju pertumbuhan spesifik (LPS):
di mana:
Wt (g) = rata-rata bobot individu pada akhir pemeliharaan Wb (g) = rata-rata bobot individu pada awal pemeliharaan t (hari) = lama waktu pemeliharaan
c. Rasio konversi pakan (RKP):
di mana: Bt (g) = Bobot ikan pada akhir penelitian Bo (g) = Bobot ikan pada awal penelitian F (g) = Jumlah pakan yang dikonsumsi selama penelitian

## HASIL DAN BAHASAN

## Karakteristik Warna Madu dan Ekstrak Madu
Hasil pengamatan secara visual menunjukkan bahwa warna  madu klengkeng,  randu,  dan organik  hampir sama yaitu kecoklatan. Warna madu ditentukan juga oleh kondisi tanaman, usia tanaman penghasil nektar, pemanenan madu, dan penyimpanan madu (Landry et al., 2016). Warna ekstrak madu klengkeng dan randu berwarna hitam mengilat, sedang madu organik lebih cerah.  Perubahan  warna  tersebut  berkaitan  dengan proses isolasi oligosakarida menggunakan arang aktif dan  terkait  dengan  warna  madu  sebelum  isolasi dilakukan. Ekstrak madu klengkeng dan randu terlihat mengilap yang diduga merupakan gula yang mengalami karamelisasi.
    100 x Gp0 KH total Gp0 Gp1 % Hidrolisis                      Eg0 Egt Ep0 Ept Pg0 Pgt Pp0 ppt stimulasi Aktivasi 100 x No Nt SR  100 x t Wb In Wt In LPS   Bo Bt F RKP  

## Kromatografi Madu dan  Ekstrak Madu dengan KLT
Rafinosa  adalah  standar  yang  digunakan  untuk oligosakarida. Glukosa dan fruktosa digunakan sebagai standar monosakarida sedangkan maltosa digunakan untuk  standar  disakarida.  Adanya  ekor  pada  spot kromatogram  mengindikasikan  adanya  beragam karbohidrat dalam jumlah yang rendah (Karimah et al., 2011).
Kromatogram  madu  klengkeng  menghasilkan  Rf 1,3  sehingga  tidak  sesuai  dengan  Rf  standar oligosakarida  (rafinosa)  dan  tiga  standar  lain  yang dipakai. Ekstrak madu klengkeng memiliki nilai Rf 2,3; sama  dengan  Rf  standar  rafinosa  yaitu  2,3  (Gambar 1). Hal tersebut mengandung arti bahwa ekstrak madu klengkeng  termasuk  oligosakarida.  Kromatogram madu randu menghasilkan Rf 1,7 sehingga tidak sesuai dengan Rf standar oligosakarida (rafinosa) maupun tiga standar  lain  yang  dipakai.  Ekstrak  madu  randu memiliki nilai Rf 2,0; sesuai dengan Rf standar rafinosa yaitu 2,0. Hal tersebut mengandung arti bahwa ekstrak madu  klengkeng  termasuk  oligosakarida. Kromatogram  madu  organik  menghasilkan  Rf  1,0 sehingga tidak sesuai dengan Rf standar oligosakarida (rafinosa) dan tiga standar lain yang dipakai. Ekstrak madu organik memiliki nilai Rf 1,3 tidak sesuai dengan keempat  standar  yang  dipakai.  Walaupun  tidak memiliki  nilai  Rf  yang  sama  dengan  standar oligosakarida yang dipakai (rafinosa), namun ekstrak madu organik sudah bukan madu murni lagi, karena
sudah mengalami proses hidrolisis, dibuktikan dengan tinggi Rf yang sudah berbeda dengan madu organik. Spot  hidrolisis  madu  organik  kemungkinan  juga termasuk  oligosakarida,  apabila  digunakan  standar oligosakarida yang lain (selain rafinosa).

## Karbohidrat  Total dan  Gula Pereduksi  Madu dan Ekstrak  Madu
Hasil pengamatan kandungan karbohidrat total dan gula  pereduksi  madu  dari  ketiga  jenis  madu  dan ekstraknya  ditampilkan  pada  Tabel  1.  Kandungan karbohidrat total dan gula pereduksi madu lebih tinggi dari ekstraknya.
Perbedaan nilai gula pereduksi karena madu yang belum  matang  telah  dipanen  menyebabkan  proses inversi oleh enzim invertase tidak sempurna sehingga konsentrasi sukrosa yang tinggi atau rendah karena sukrosa  tidak  ditransformasi  dengan  sempurna menjadi glukosa dan fruktosa (Kucuk et al., 2007).
Resistansi  Ekstrak  Madu  Terhadap  Asam Lambung  dan  Enzim  -Amilase
Salah satu syarat dari prebiotik adalah resistansi terhadap  asam  lambung  dan  á-amilase  (Roberfroid, 2007).  Hidrolisis  asam  lambung  dan  á-amilase  dan ketiga  jenis  ekstrak  madu  mengalami  peningkatan selama tiga jam pengamatan (Gambar 2 dan 3). Semua jenis ekstrak madu yang diuji menunjukkan hasil yang berbeda nyata pada jam yang sama (P<0,05) selama tiga jam  pengamatan. Hidrolisis  asam lambung  dari
Gambar 1. Kromatogram madu dan ekstrak madu klengkeng, randu, dan organik. Figure  1. Honey  chromatograms  and  longan,  kapok,  and  organic  honey  extracts.
Keterangan  (Note):
- (1A)= Madu klengkeng (longan honey); (2A)= ekstrak madu klengkeng (kapok honey  extract); (3A)= standar rafinosa (rafinose standard); (4A)= standar glukosa (glucose standard); (5A)= standar fruktosa (fructose  standard); (6A)= standar maltosa  (maltose  standard)
- (1B)= Madu randu (kapok honey); (2B)= ekstrak madu randu (kapok honey); (3B)= standar rafinosa (rafinose standard);
(4B)= standar glukosa (glucose standard); (5B)= standar fruktosa (fructose standard); (6B)= standar maltosa (maltose standard)
- (1C)= Madu organik; (2C)= ekstrak madu organik (organic honey extract); (3C)= standar rafinosa (rafinose standard);
(4C)= standar glukosa (glucose standard); (5C) = standar fruktosa (fructose  standard); (6C)= standar maltosa (maltose standard)

## A                                                 B                                                  C
1       2      3      4      5     6            1       2     3      4        5     6                  1     2    3      4      5    6
inulin lebih tinggi dibandingkan dengan ketiga jenis ekstrak madu yang diujikan. Hal tersebut mengandung arti bahwa ekstrak madu lebih resistan terhadap asam lambung dibandingkan dengan inulin.
Ketiga ekstrak madu yang diuji memiliki resistansi terhadap  hidrolisis  asam  lambung  dan  -amilase (Gambar 2 dan 3). Resistansi oligosakarida ini sesuai dengan Sanz et al. (2005) yang menyebutkan bahwa oligosakarida madu memiliki resistansi terhadap asam lambung dan enzim pencernaan lain secara in vitro.

## Stimulasi  Pertumbuhan  Bakteri  Probiotik
Salah  satu  parameter  dalam  menentukan  suatu material  layak  dijadikan  kandidat  prebiotik  adalah kemampuannya  dalam  menstimulasi  pertumbuhan bakteri  probiotik.  Pada  jam  ke-12,  ekstrak  madu klengkeng, ekstrak madu randu, ekstrak madu organik, dan inulin mampu menstimulasi pertumbuhan bakteri probiotik  Lactobacillus  plantarum  (Tabel  2).  Ekstrak madu randu memiliki kinerja paling baik dibandingkan dengan  dua  jenis  madu  yang  lain,  karena  mampu menstimulasi pertumbuhan probiotik hingga 3,82 kali pada  jam  ke-12,  dan  mampu  mempertahankan kemampuannya sampai jam ke-24 sebanyak 0,75 kali. Selama  24  jam  masih  terdapat  glukosa  yang  bisa dimanfaaatkan sebagai sumber karbon.
Ketiga jenis madu menunjukkan kemampuan dalam menstimulasi pertumbuhan secara selektif yaitu dapat digunakan  oleh  bakteri  probiotik  (L.  plantarum) (Gambar  4),  tetapi  sedikit  digunakan  oleh  bakteri enterik  (S.  agalactiae)  karena  oligosakarida meningkatkan  pertumbuhan  bakteri  probiotik  dan menekan bakteri patogen (Gambar 5).
Madu  mengandung  oligosakarida  sehingga  akan bermanfaat bagi pertumbuhan bakteri asam laktat pada usus  dan  bersifat  antagonis  pada  bakteri  patogen
dengan  membatasi  proliferasinya.  Indikator  dari efektivitas prebiotik adalah kemampuannya menahan pertumbuhan dan aktivitas bakteri patogen (Gibson et al., 2010). Prebiotik oligosakarida akan difermentasi oleh  bakteri  probiotik,  sehingga  pengunaan  pakan yang diperkaya dengan prebiotik akan menyebabkan peningkatan  kinerjanya  di  usus  besar  (Kaplan  & Hutkins, 2000).

## Kinerja  Pertumbuhan
Madu mengandung prebiotik FOS, GOS, dan inu- lin yang banyak diteliti untuk akuakultur dan terbukti meningkatkan performa pertumbuhan, dan resistansi penyakit. Data performa pertumbuhan ikan nila yang diberi 1% prebiotik madu disajikan pada Tabel 3.
Hasil  penelitian  terhadap  penambahan  1%  madu pada pakan ikan nila mendapatkan hasil bobot akhir dan  pertambahan  bobot  berbeda  nyata  antara perlakuan madu dengan kontrol (P<0,05); dengan nilai tertinggi adalah madu randu. Nilai LPS secara statistik berbeda nyata antar perlakuan (P<0,05) dengan nilai tertinggi adalah madu randu. Nilai RKP yang diperoleh pada perlakuan prebiotik madu lebih rendah (P<0,05) dibandingkan kontrol, dengan nilai RKP terendah pada penambahan madu randu, yang tidak berbeda nyata terhadap madu klengkeng dan organik. Beberapa hasil penelitian  menunjukkan  prebiotik  mampu meningkatkan  pertumbuhan,  sintasan,  kecernaan pakan,  efisiensi pakan,  komposisi mikroflora  dalam usus,  menghambat  pertumbuhan  patogen,  dan meningkatkan imunitasi kan (Merrifield et al., 2010). Hal  tersebut  berkaitan  dengan  hasil  fermentasi karbohidrat oleh mikroflora di dalam usus berupa asam lemak rantai pendek (SCFA) seperti asam laktat, asam asetat,  asam  propionat,  dan  asam  butirat  (Ringo  et al., 2014), selanjutnya akan diserap oleh usus dan akan berperan dalam pemenuhan kebutuhan energi inang.
Tabel 1. Gula  pereduksi  dan  karbohidrat  total  dari  madu  klengkeng,  randu,  organik,  dan ekstraknya
Table  1. Reducing  sugars  and  total  carbohydrates  from  longan,  kapok,  organic  honey,  and their  extracts
Gula pereduksi Reduction sugar  (%) Karbohidrat total Total carbohydrate  (%) Ekstrak madu klengkeng (Longan honey extract ) 33 ± 2.25 49 ± 8.34 Madu klengkeng (Longan honey ) 45 ± 4.17 68 ± 3.03 Ekstrak madu randu (Kapok honey extract ) 55 ± 4.48 60 ± 4.14 Madu randu (Kapok honey ) 27 ± 3.82 72 ± 0 Ekstrak madu organik (O rganic honey exract ) 55 ± 8.47 70 ± 6.43 Madu organik (O rganic honey ) 55 ± 1.23 61 ± 0 Inulin (Inulin ) 25 ± 1.42 71 ± 3.89
Gambar 2. Resistansi  terhadap  hidrolisis  asam  lambung  dari  ekstrak  madu klengkeng, randu, dan organik.
Figure  2. The  resistance  of  longan,  kapok,  and  organic  honey  extracts  to gastric  acid  hydrolysis.
Gambar 3. Resistansi  terhadap  hidrolisis  -amilase  dari  ekstrak  madu klengkeng, randu, dan organik.
Figure  3. The  resistance  of   -amylase  hydrolysis  of  longan,  kapok,  and organic  honey  extracts.
0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 1 2 3 4 H id ro li si s
H yd ro ly ze d (% ) Waktu (Time) Ekstrak madu klengkeng (Longan honey extract) Ekstrak madu randu (Kapok honey extract) Ekstrak madu organik (Organic honey extract Inulin 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 1 2 3 4 H id ro li si s H yd ro ly ze d (% ) Waktu (Time) Ekstrak madu klengkeng (Longan honey extract) Ekstrak madu randu (Kapok honey extract) Ekstrak madu organik (Organic honey extract) Inulin
Tabel 2. Efek stimulasi madu pada pertumbuhan bakteri probiotik terhadap bakteri patogen Table  2. The  stimulating  effects  of  honey  on  the  growth  of  probiotic  bacteria  on  pathogenic  bacteria
Efek stimulasi Stimulation effect Ekstrak madu klengkeng Longan honey extract Ekstrak madu randu Kapok honey extract Ekstrak madu organik Organic honey extract Inulin Jam ke-12 (12 hours ) 4,29 3,82 3,66 5,16 Jam ke- 24 (24 hours ) 0,5 0,71 0,25 0,24
Ekstrak madu klengkeng (Longan honey extract)
Ekstrak madu randu (Kapok honey extract)
Ekstrak madu organik (Organic honey extract)
Inulin Ekstrak madu klengkeng (Longan honey extract)
Ekstrak madu randu (Kapok honey extract) Ekstrak madu organik (Organic honey extract) Inulin
Hasil penelitian El-Gawad et al. (2016) menyatakan bahwa  pemberian  FOS  dosis  2%  menghasilkan pertumbuhan, efisiensi pakan, dan sintasan yang lebih tinggi.  Hal  tersebut  disebabkan  oleh  adanya  peran bakteri  menguntungkan  yang  dapat  memanfaatkan prebiotik yang terkandung di dalam madu. Menurut
Gambar 4. Kepadatan  bakteri  S.  agalactiae  (CFU/mL)  dalam  media  yang diperkaya ekstrak madu klengkeng, randu, dan organik.
Figure  4. Bacterial  density  of  S.  agalactiae  (CFU/mL)  in  media  enriched with  longan,  kapok,  and  organic  honey  extracts.
Gambar 5. Kepadatan  bakteri  L.  plantarum  (CFU/mL)  dalam  media  yang diperkaya ekstrak madu klengkeng, randu, dan organik.
Figure  5. Bacterial  density  of  L.  plantarum  (CFU/mL)  in  media  enriched  with longan,  kapok,  and  organic  honey  extracts.
Ai et al. (2011), bakteri saluran pencernaan berperan dalam dekomposisi nutrien, memberikan bahan aktif secara fisiologis seperti enzim, asam amino, dan vi- tamin pada makroorganisme, sehingga memfasilitasi pemanfaatan pakan dan pencernaan yang lebih baik. RKP akan turun karena ada peningkatan pemanfaatan
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0 12 24 K ep ad at an b ak te ri B av te ri al d en si ty
(l o g c fu /m L) Waktu, Jam ke- (Time) S. agalactiae + ekstrak madu klengkeng S. agalactiae + longan honey extract S. agalactiae + ekstrak madu randu S. agalactiae + kapok honey extract S. agalactiae + ekstrak madu organik S. agalactiae + organic honey S. agalactiae + inulin 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6 0 12 24 K ep ad at an b ak te ri B ac te ri al d en si ty (l o g c fu /m L) Waktu, jam ke- (Time ) L. plantarum + ekstrak madu klengkeng L. plantarum + longan honey extract L. plantarum + ekstrak madu randu L. plantarum + kapok honey extract L. plantarum + ekstrak madu organik L. plantarum + organic honey extract L. plantarum + inulin

## S. agalactiae + ekstrak madu klengkeng
S. agalactiae +  longan  honey  extract S. agalactiae +ekstrak madu randu
S. agalactiae + kapok  honey extract
S. agalactiae +ekstrak madu organik
S. agalactiae + organic  honey extract S. agalactiae +  Inulin
L. plantarum + ekstrak madu klengkeng L. plantarum +  longan honey  extract L. plantarum +ekstrak madu randu
L. plantarum + kapok honey extract
L. plantarum +ekstrak madu organik
L. plantarum + organic honey extract
L. plantarum +  Inulin
pakan  dalam  usus,  sehingga  terjadi  peningkatan aktivitas enzim yang dilakukan oleh bakteri probiotik, serta peningkatan aktivitas saluran usus (Anguiano et al., 2013).

## KESIMPULAN
Madu  klengkeng,  randu, dan  organik  memenuhi kriteria  sebagai  prebiotik,  sehingga  dapat diaplikasikan pada ikan budidaya yang lain. Penambahan madu randu pada pakan ikan nila mampu meningkatkan bobot biomassa akhir tertinggi (28,42 ± 0,79); laju pertumbuhan spesifik tertinggi (11,15 ± 0,09), dan memberikan rasio konversi pakan terendah (1,77 ± 0,06) dibandingkan dengan perlakuan madu yang lain. Penambahan  madu  klengkeng,  randu,  dan  organik sebanyak  1%  melalui  pakan  mampu  meningkatkan kinerja  pertumbuhan  ikan  nila  dengan  hasil  terbaik adalah penambahan madu randu.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampaikan  kepada Kementerian Kelautan dan Perikanan Republik Indo- nesia,  yang  telah  mendanai  penelitian  ini  melalui beasiswa  Badan  Riset  dan  Sumber  Daya  Manusia Keluatan  dan  Perikanan  (BRSDMKP),  Kementerian Kelautan dan Perikanan Republik Indonesia.

## DAFTAR  ACUAN
Ai, Q., Xu, H., Mai, K., Xu, W., Wang, J., & Zhang, W.
(2011).  Effects  of  dietary  supplementation  of Bacillus  subtilis  and  fructooligosaccharide  on growth  performance,  sur vival,  nonspecific immune response and disease resistance of juve- nile large yellow croaker, Larimichthy scrocea. Aqua- culture, 317, 155-161.
Anguiano,  M.,  Pohlenz,  C.,  Buentello,  A.,  &  Gatlin, D.M.  (2013).  The  effects  of  prebiotics  on  the digestive  enzymes  and  gut  histomorphology  of red drum (Sciaenops ocellatus) and hybrid striped bass (Morone chrysops x M. saxatilis). British Journal of  Nutrition,  109,  623-629.
Cerezuela, R.,  Meseguer, J., & Esteban,  M.A. (2011). Current knowledge in synbiotic use of fish aqua- culture:  a  review.  Journal  of  Aquaculture  Research and  Development,  1,  1-8.
Cummings,  J.H.,  Macfarlane,  G.T.,  &  Englyst,  H.N. (2001).  Prebiotic  digestion  and  fermentation. American Journal of Clinical Nutrition, 73,  415-420.
El-Gawad, A., Ashraf, M., El-latif, A., & Shourbela, R.M. (2016). Enhancement of antioxidant activity, non- specific immunity and growth performance of nile tilapia,  Oreochromis  niloticus  by  dietar y
Tabel 3. Performa  pertumbuhan  ikan  nila  (Oreochromis  niloticus)  yang  diberi  prebiotik  madu  1% Tabel3. Growth  performance  of  tilapia  (Oreochromis  niloticus)  feed  with1%  honey  prebiotic
Keterangan: Angka pada baris yang sama yang diikuti oleh huruf yang sama tidak berbeda nyata pada taraf uji 5% (uji selang  berganda Duncan) Note: The  numbers  in  the  same  row,  followed  by  the  same  letter,  indicate  no  significant  difference  at  the  5% test  level  (Duncan’s  multiple  interval  test) Parameter Parameters Kontrol Control Madu klengkeng Longan honey Madu randu Kapok honey Madu organik Organic honey Bobot biomassa awal Initial biomass weight  (W0) (g) 20.66 ± 0.37 a 20.56 ± 0.28 a 20.44 ± 0.23 a 20.52 ± 0.29 a Bobot biomassa akhir Final biomass weight  (W30) (g) 31.27 ± 0.97 c 46.58 ± 0.95 b 48.86 ± 0.58 a 45.81 ± 0.98 b Pertambahan bobot Weight gain (∆W) (g) 10.61 ± 1.13 c 26.01 ± 1.13 b 28.42 ± 0.79 a 25.29 ± 1.13 b Konsumsi pakan Feed consumption  (FC ) (g) 470.55 ± 3.23 b 500.33 ± 3.36 a 500.67 ± 2.45 a 500.39 ± 3.30 a Laju pertumbuhan spesifik (LPS) Specific growth rate (SGR ) (%/day ) 7.85 ± 0.35 c 10.85 ± 0.14 ab 11.15 ± 0.09 a 10.76 ± 0.14 b Rasio konversi pakan (RKP) Feed conversion ratio  (FCR ) 2.5 ± 0.125 a 1.81 ± 0.10 b 1.77 ± 0.06 b 1.82 ± 0.08 b Sintasan Survival rate  (SR) (%) 96 ± 0.04 a 96 ± 0.025 a 98 ± 0.025 a 96 ± 0.04 a
fructooligosaccharide. Journal Aquaculture Research & Development, 7, 1-7. https://doi: 10.4172/2155- 9546.1000427.
Fuandila,  N.N.,  Widanarni,  &  Yuhana,  M.  (2019).
Growth performance and immune response of pre- biotic honey fed pacific white shrimp Litopenaeus vannamei to Vibrio parahaemolyticus infection. Jour- nal  of  Applied  Aquaculture.  DOI:  10.1080/ 10454438.2019.1615593.
Gibson, P.R., Varney, J., Malakar, S., & Muir, J.G. (2015). Food components and irritable bowel syndrome. Gastroenterology, 148, 1158-1174.
Gibson,  G.R.,  Scott,  K.P.,  Rastall,  R.A.,  Tuohy,  K.M., Hotchkiss,  A.,  Dubert-Feradon,  A.,  &  Loh  G. (2010). Dietary prebiotics: current status and new definition.  The  Food  Science  and  Technology Bulletin: Functional Foods, 7, 1-19.
Hernandez, O., Ruiz-Matute, A.I., Olano, A., Moreno, F.J.,  &  Sanz,  M.L.  (2009).  Comparison  of  frac- tionation  techniques  to  obtain  prebiotic galactooligosaccharides.  International  Dairy  Jour- nal, 19, 531-536.
Hobden,  M.R.,  Guerin-Deremaux,  L.,  Rowland,  I., Gibson,  G.R.,  &  Kennedy,  O.B,  (2015).  Potential anti-obesogenic properties of non-digestible car- bohydrates:  Specific  focus  on  resistant  dextrin. Proceeding Nutrition Society, 7, 258-67.
Huebner,  J., Wehling,  R.L.,  Parkhurst,  A., &  Hutkins, R.W.  (2008).  Effect  of  processing  conditions  on the  prebiotic  activity  of  commercial  prebiotics. International Dairy Journal, 18, 287-293.
Kaplan,  H.  &  Hutkins,  R.W.  (2000).  Fermentation  of fructo oligosaccharides by lactic acid bacteria and bifido bacteria. Applied and Environmental Microbi- ology, 66, 2682-2684.
Karimah,  U.,  Anggowo,  Y.N.,  Falah,  S.,  &  Suryani. (2011).  Isolasi  oligosakarida  madu  lokal  dan analisis  prebiotiknya.  Jurnal  Gizi  dan  Pangan,  6, 217-224.
Kucuk, M., Kolaylh, S., Karaoglu, S., Ulusoy, E., Baltaci, C., & Candan, F. (2007). Biological activities and chemical  composition  of  three  honeys  of different types from anatolia. Food Chemistry, 100, 526-534.
Landry,  B.K.U.,  Jayabalan,  R.,  &  Sahoo,  M.  (2016). Honey, probiotics, and prebiotics: review.  Research Journal  of  Pharmaceutical,  Biological  and  Chemical Sciences, 7, 2428-2438.
Merrifield,  D.L.,  Dimitroglou,  A.,  Foey,  A.,  Davies, S.J.,  Baker,  R.T.M.,  &  Ringø,  E.  (2010).  The current status and future focus of probiotic and
prebiotic applications for salmonids. Aquaculture, 302, 1-18.
Patel, S. & Goyal, A. (2012). The current trends and future perspectives  of prebiotics research:  A re- view. Biotechnology, 2, 115-125.
Ringo, E., Zhou, Z., He, S., & Olsen, R.E. (2014). Ef- fect  of  stress  on  intestinal  microbiota  of  Arctic charr (Atlantic salmon, Rainbow trout and Atlan- tic cod. African Journal of Microbiology, 8, 609-618.
Ringo,  E.,  Olsen,  R.E.,  Gifstand,  T.O.,  Dalmo,  R.A., Amlund,  H.,  &  Bakke, A.M.  (2010).  Prebiotics  in aquaculture. Aquaculture Nutrition, 16, 117-136.
Roberfroid, M. (2007). Prebiotics: the concept revis- ited. Journal of Nutrition, 137, 830-837.
Roy, C.C., Kien, C.L., Bouthillier, L., & Levy, E. (2006). Short-chain  fatty  acids:  Ready  for  prime  time. Nutrition Clinical Practise, 21, 351-66.
Ruiz-Matute,  A.I.,  Brokl,  M.,  Soria,  A.C.,  Sanz,  M.L., &  Matinez-Castro.  (2010).  Gas  chromatographic mass  spectrometric  characterisation  of  tri-  and tetrasaccharides in honey. Food Chemical, 120, 637- 642.
Sakine, B., Rahimi, S., & Miran, S.N.K. (2016). Effects of propolis, royal jelly, honey and bee pollen on growth performance and immune system of  Japa- nese quails. Veterinary Research Forum, 7, 13-20.
Sanz, M.L., Polemis, N., & Morales, V. (2005). In vitro investigation into the potential prebiotic activity of honey oligosaccharides. Journal Agriculture Food Chemistry, 53, 2914-2921.
Saran,  S.,  Singh,  K.,  Bisht,  M.S.,  Teotia,  U.V.S.,  & Dobriyal,  A.K.  (2011).  Comparison  of  prebiotics for the functional attributes of an indigenous iso- late of Lactobacillus acidophilus. International Jour- nal of Probiotics and Prebiotics, 6, 173-178.
Smith, I. (1969). Chromatograhic and Electrophoretic.
Volume 1, 3 rd edition. Medical book Ltd.
Wichienchot, S. & Rastall, R.A. (2010). Oligosaccha- rides of pitaya (dragon fruit) flesh and their pre- biotic properties. Food Chemical, 120, 850-857.
Widanarni,  Putri,  F.N.,  &  Rahman.  (2019).  Growth performance of white shrimp Litopenaeus vannamei fed with various dosages of prebiotic honey. IOP Conf. Series: Earth and Environmental Science, 278 012079.
Zokaeifar,  H.,  Balcázar,  J.L.,  Saad,  C.S.,  Kamarudin, M.S.,  Sijam,  K.,  &  Nejat,  N.  (2012).  Effects  of Bacillus subtilis on the growth performance, diges- tive  enzymes,  immune  gene  expression  and disease  resistance  of  white  shrimp,  Litopenaeus vannamei.  Fish  &  Shellfish  Immunology,  33, 683-689.