http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
Selection of Isolates of Local Endophytic Bacteria Cellulolytic Strains from Mangrove Roots Ceriops tagal (Perr) C. B. Rob
Itnawita, Silvera Devi*, Mukhlis, Alfika Sari Jurusan Kimia FMIPA Universitas Riau Kampus Bina Widya Km 12,5, Jln Raya Soebrantas, Pekanbaru, Indonesia
*Correspondence e-mail: silvera.devi@lecturer.unri.ac.id

## Abstract
Cellulose agricultural waste is a source of environmental pollution and an alternative solution to overcome it is to degrade this waste with the help of cellulolytic enzymes. The Biochemistry Laboratory of FMIPA Riau University has a number of endophytic  bacterial  isolates  from  the  roots  of  Mangrove  Ceriops  tagal  (Perr)  C.  B.  Rob  in  the  Bengkalis  area  whose potential  to  produce  cellulolytic  enzymes  is  not  yet  known.  Qualitative  selection  in  carboxy  methyl  cellulose  (CMC)  solid media from 24 isolates of endophytic bacteria that were able to live because they produced cellulolytic enzymes, only 22 isolates. Quantitatively using the DNS (Dinitro Salicylic Acid) method, 3 of these 22 isolates had relatively higher activity than other isolates. The activity of isolate C-9 (LBKURCC332) was 572x10-4±0.0069U/mL, isolate C-23(LBKURCC346) was 423x10-4±0.0027U/mL and isolate C-30 (LBKURCC353) was 384x10-4± 0.0003 U/mL and statistically these 3 cellulolytic activities were significantly different Keywords : Bacteria, Endophytic, Cellulolytic

## Abstrak
Produksi  amilase  dari  Aspergillus  sp  LBKURCC304  dalam  medium  cair  selama  11  hari  pada  suhu  50oC  dengan  sumber Limbah pertanian selulosa merupakan sumber pencemaran lingkungan dan alternatif solusi untuk mengatasinya adalah dengan mendegradasi limbah tersebut dengan bantuan enzim selulolitik. Laboratorium Biokimia FMIPA Universitas Riau memiliki sejumlah isolat bakteri endofit dari akar Mangrove Ceriops tagal (Perr) C. B. Rob di daerah Bengkalis yang belum diketahui  potensinya  untuk  menghasilkan  enzim  selulolitik.  Seleksi  kualitatif  pada  media  padat  karboksi  metil  selulosa (CMC)  dari  24  isolat  bakteri  endofit  yang  mampu  hidup  karena  menghasilkan  enzim  selulolitik,  hanya  22  isolat.  Secara kuantitatif dengan metode DNS (Dinitro Salicylic Acid), 3 dari 22 isolat tersebut memiliki aktivitas yang relatif lebih tinggi dibandingkan isolat lainnya. Aktivitas isolat C-9 (LBKURCC332) sebesar 572x10-4±0,0069U/mL, isolat C-23(LBKURCC346) sebesar 423x10-4±0,0027U/mL dan isolat C-30 (LBKURCC353) sebesar 384x10-4± 0,0003 U/mL dan secara statistik ketiga aktivitas selulolitik ini berbeda nyata Kata kunci: Bakteri, Endofit, Selulolitik

## 1. Pendahuluan
Amilase merupakan enzim yang mampu menghidrolisis pati menjadi dekstrin, maltosa, dan glukosa (Simair et al., 2017). Amilase digunakan pada industri tekstil, farmasi, pulp dan kertas, pakan, detergen, dan juga industri makanan (Sindhu et al., 2017; Tiwari et al., 2015). Amilase termofilik merupakan salah satu jenis enzim amilase yang banyak diminati dalam proses industri dan bioteknologi karena dapat beraktivitas pada suhu tinggi yakni 50°C atau lebih (Mohammad et al., 2017), sehingga mampu memperkecil risiko terjadinya kontaminasi pada saat produksi (Dwianto, 2015).
Bakteri  endofitik  didefinisikan  sebagai  bakteri  yang  hidup  berkoloni  di  dalam  jaringan  internal tanaman  tanpa  menimbulkan  efek  negatif  terhadap  tanaman  inangnya  (Ingle  et  al.,  2006). Seluruh  siklus hidup  mikroorganisme    ini  terjadi  di  dalam  inangnya  tampa  menyebabkan  bahaya  bagi  inangnya  dan memiliki kemampuan untuk menghasilkan metabolit sekunder (Deshmukh et al., 2014; Rafi & Cheah, 2018) sehingga  dapat    memproteksi  tanaman  dalam  melawan  serangga  dan  mikroba  pathogen  (Pranoto  et  al., 2014). Bakteri endofit masuk ke dalam jaringan tumbuhan melalui daerah akar, bunga, batang dan kotiledon (Pimentel  et  al.,  2011) dan  dapat  juga  masuk  dengan  cara  menghidrolisis  dinding  tanaman  yang mengandung selulosa dengan mengeluarkan enzim selulolitik.
Enzim  selulolitik  atau  enzim  selulase  merupakan  enzim  ekstraseluler  yang  terdiri  dari  tiga
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
komponen  enzim  yaitu  endo- β -1,4-glukonase  (CMCase,  Cx  selulase  endoselulase,  atau carboxymethyl selulase ), kompleks ekso- β -1,4-glukonase (aviselase,selobiohidrolase), dan β -1,4-glukosidase atau selobiase. Enzim selulase dapat menghidrolisis ikatan glikosida β -(1,4) yang terdapat pada selulosa (Okunowo et al., 2010)  sehingga  enzim  selulolitik  ini  dapat  dimanfaatkan  untuk  mendegradasi  limbah  pertanian  yang mengandung selulosa, menjadi produk yang bernilai ekonomis tinggi yaitu glukosa. Glukosa hasil degradasi ini, digunakan sebagai bahan baku untuk produksi alkohol (Qu et al., 2006) Aplikasi dari enzim selulolitik ini relatif sangat banyak dan secara komersial enzim ini dimanfaatkan dalam pengolahan kopi, industri tekstil, deterjen,  kertas  dan  dalam  industri  farmasi  (Kavitha  &  Nagarajan,  2011).  oleh  karena  itu  Laboratorium Biokimia  sejak  tahun  1999  mulai  fokus  melakukan  isolasi    mikroorganisme  yang  mampu  menghasilkan enzim  selulolitik  atau  beberapa  enzim  lainnya  dari  beberapa  daerah  di  Indonesia  termasuk  dari  daerah Riau.  Isolat  mikroorganisme  ini  disimpan  sebagai  stock  kultur  dengan  label  LBKURCC  (lab  Biokimia Universitas Riau Collection Culture ).
Pada tahun 2018 lab biokimia Fmipa Unri berhasil mengisolasi 67 isolat fungi dan 60 isolat bakteri endofitik dari akar Magrove yang tumbuh di sekitar Pantai Tangggayun dan Sungai Pakning salah satunya adalah dari spisies Ceriops tagal (Perr) C. B. Rob . Enam puluh isolat bakteri endofitik ini diduga mempunyi potensi untuk menghasilkan enzim selulolitik, oleh karena itu pada tahap pertama ini akan dilakukan seleksi 24  isolat  dari  60  stok  isolat  yang  ada  menggunakan  media  padat  selektif  yang  mengandung  CMC  1%, sedangkan untuk produksi enzim selulolitiknya dilakukan dalam media cairnya. Aktivitas enzim selulolitik yang dihasilkan diukur menggunakan metode DNS dan diharapkan isolat bakteri endofitik yang berpotensi menghasilkan  enzim  ini,  dapat  dimanfaatkan  sebagai  pendegradasi  beberapa  limbah  pertanian  yang mengandung selulosa.
Prinsip dari metode dinitrosalisilat (DNS) adalah gugus aldehid pada rantai polisakarida dioksidasi menjadi  gugus  karboksil,  disaat  yang bersamaan  gugus  aldehid  gula  akan  mereduksi  asam  3,5- dinitrosalisilat  menjadi  asam  3-amino-5-nitrosalisilat,  Reaksi  akan  berlangsung  secara  simultan  selama terdapat  gula  pereduksi  dalam  larutan  yang  akan  diujikan  (Hasanah  &  Iwan,  2015).  Gula  pereduksi  pada sampel  akan  bereaksi  dengan  larutan  DNS  yang  awalnya  berwarna  kuning  akan  menjadi  warna  jingga kemerahan atau membentuk senyawa asam 3-amino-5-nitrosalisilat berwarna kuning kecoklatan  (Pratiwi et al., 2018). Satu unit enzim adalah jumlah enzim yang dibutuhkan untuk memecah 1 μmol selulosa menjadi gula pereduksi per menit pada kondisi pengujian
OH O OH N + O O - N + O - O + O - O OH NH 2 N + O - O H OH O H O H H OH OH O OH H H H O H O H H H O OH OH H H OH + Asam 3,5-dinitrosalisilat D-glukosa 3-amino-5-nitrosalisilat
Asam D-glukonoat
Gambar 3. Reaksi antara pereaksi asam 3,5 dinitrosalisilat dan gula pereduksi

## 2. Metodologi

## 2.1. Alat dan Bahan
Alat: autoklaf Electric Model No. 25X (Winconsin Aluminium Foundry Co. Inc., Monitowoc), shaking incubator model LSI 301 6R (Daihan Lab Tech Co. LTD), pH meter  F1 83141 (HANNA), spektrofotometer UV-VIS  Genesis  10  S  (Thermo  Scienstific),  vortex  mixer  H-VM-300  (Health),  High-speed  Micro  Centrifuge
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
Model CT15RE, sentrifugasi centific  Model 228 (Fisher  scientific), waterbath  (GRANTH SUB28), incubator (Memmert), dan peralatan umum laboratorium lainnya sesuai dengan prosedur kerja.
Bahan: Nutrien  Agar  (NA)  (Cat.  No  1.05450.0500),  CMC,  MgSO4.7H2O,  KNO3,  KH2PO4, FeSO4.7H2O, CaCl2.2H2O, yeast extract, agar batang, kertas saring Filter Glass Fiber GF/C Whatman (Cat. No 1822055),  reagen  asam  3,5-  dinitrosalisilat  (DNS),  mikroorganisme  dan  bahan-bahan  lain  sesuai  dengan prosedur kerja.
Tabel 1. Kode isolat bakteri endofit dari tanaman mangrove spesies Ceriops tagal (Perr) C. B. Rob.
Kode isolat Label  Kultur C-9 LBKURCC332 C-10 LBKURCC333 C-11 LBKURCC334 C-12 LBKURCC335 C-13 LBKURCC336 C-14 LBKURCC337 C-15 LBKURCC338 C-16 LBKURCC339 C-17 LBKURCC340 C-18 LBKURCC341 C-19 LBKURCC342 C-20 LBKURCC343 C-21 LBKURCC344 C-22 LBKURCC345 C-23 LBKURCC346 C-24 LBKURCC347 C-25 LBKURCC348 C-26 LBKURCC349 C-27 LBKURCC350 C-28 LBKURCC351 C-29 LBKURCC352 C-30 LBKURCC353 C-31 LBKURCC354 C-32 LBKURCC355

## 2.1. Seleksi Bakteri Endofit Selulolitik
Dua puluh  empat (24) Isolat, masing-masing diremajakan di  media agar  miring pada suhu  37 ºC selama 24 jam. Selanjutnya isolat ini diinokulasikan masing-masing ke atas media padat selektif (CMC 1%) selulolitik  di  dalam  pertridish  dan  diinkubasi  kembali  pada  suhu  37  ºC  selama  24  jam.  Komposisi  media padatnya adalah KNO 3 0,075 g, K 2 HPO 4 0,002 g, CaCl 2 .2H 2 O 0,004 g, MgSO 4. 7H 2 O 0,020 g, FeSO 4 .7H 2 O 0,002 g, CMC 1 g, agar batang 1,500 g, dilarutkan dalam 100 mL buffer fosfat 0,05 M pH 7 kemudian disterilisasi dengan autoklaf ( 15 lb, 121 ºC,  20 menit). Isolat-isolat bakteri yang hidup pada media ini adalah bakteri yang mampu menghasilkan enzim selulolitik 2.2. Produksi dan Uji Aktivitas Enzim Selulolitik
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
Isolat  hasil  seleksi  masing-masing  diinokulasikan  kedalam  erlenmeyer  yang  berisi  50  mL  media Nutrient Broth (NB) steril. Selanjutnya diinkubasi di shaker incubator (agitasi 120 rpm, suhu 37 ºC, 12 jam). Suspensi  bakteri  ini  masing-masing  diukur  ODnya  (spektrofotometer  dengan  λ  660nm).    Suspensi  sel (inokulum) ini selanjutnya dimasukkan ke media produksi selulolitik dengan nilai OD yang sama yaitu 0,1 sebanyak  10 %.
Komposisi media produksi enzim selulolitiknya mengandung K2HPO4 0,002 g, MgSO4.7H2O 0,020 g, KNO3 0,075 g, CaCl2.2H2O 0,004 g, FeSO4.7H2O 0,002 g, yeast extract 0,200 g dan CMC 1 g (Meryandini et al.,  2010)  dilarutkan  dalam  100  mL  buffer  fosfat  0,05  M  pH  7,  dan  disterilisasi  menggunakan  autoklaf  ( tekanan  15  lb,  121  ºC,  20  menit).  Selanjutnya  inokulum  sebanyak  10%  dengan  OD  0,1  masing-masing diinokulasikan ke dalam media produksi enzim selulolitik dan diinkubasi di shaker incubator ( kecepatan agitasi 150 rpm,  suhu  37 ºC, 24 jam).  Ekstrak kasar enzim  dipisahkan dari isolatnya dengan sentrifugasi (kecepatan 9500 rpm, 10 menit) dan disaring dengan Filter glass fiber (Whatman GF/C). Jika ekstrak kasar enzim tidak langsung dianalisis aktivitas enzimnya, ditambahkan NaN3 hingga konsentrasi larutan 0,02 % (b/v).
Aktivitas ekstrak kasar selulolitik dianalisis dengan menggunakan substrat CMC 1 % pada suhu 30 ºC, pH 7 dan gula pereduksi hasil hidrolisis CMC oleh  aktivitas enzim  selulase ditentukan dengan metode DNS. Prosedurnya sebagai berikut: Tabung uji, kontrol, dan blanko dilakukan dengan tahap sebagai berikut: Tabung uji diisi dengan 1 mL substrat (CMC 1 %) yang dilarutkan ke dalam larutan buffer fosfat 0,05 M pH 7,  kemudian  ditambahkan  ekstrak  kasar  enzim  selulolitik  sebanyak  1  mL,  dikocok  kuat  dengan  vortex, selanjutnya diinkubasi selama 30 menit pada suhu 30 ºC, dan reaksi enzim dihentikan dengan pendidihan pada suhu 100 ºC selama 15 menit. Setelah itu, campuran reaksi ditambahkan dengan 1 mL DNS, didihkan pada suhu 100 ºC selama 15 menit. Selanjutnya absorbansi diukur menggunakan spektrofotometer uv-vis pada  λ  575  nm.  Perlakuan  kontrol  dan  blanko  dilakukan  secara  bersamaan  dengan  metode  dan  tahapan yang sama. Pada kontrol, enzim  yang akan direaksikan dengan substrat telah  diinaktivasi terlebih  dahulu dengan  memanaskan  enzim  selama  15  menit  dalam  air  mendidih.  Pada  blanko,  larutan  enzim  diganti dengan  akuades  untuk  direaksikan  dengan  substrat.  Aktivitas  selulase  dinyatakan  dalam  satuan internasional yaitu U/mL. Satu unit merupakan jumlah enzim yang dibutuhkan untuk menghasilkan 1 μmol gula  pereduksi  per  menit  pada  kondisi  pengujian.  Standar  glukosa  dibuat  pada  berbagai  konsentrasi. Pengukuran  aktivitas  enzim  dilakukan  masing-masing  tiga  kali  pengulangan  untuk  setiap  sampel. Absorbansi  masing-masing  larutan  diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis  Genesis  10S  pada  panjang gelombang 575 nm.
Data aktivitas enzim selulolitik yang diperoleh dari percobaan ini dianalisis secara statistik dengan Anova dan dilanjutkan dengan uji Duncan’s New Multiple Range Test (DNMRT) pada taraf 5 %.
Aktivitas enzim(U. mL −1 ) )   =
Kadar glukosa(µg. mL −1 ) Mr glukosa(µg. µmol −1 ) x waktu inkubasi (menit) x volume enzim(mL)

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Seleksi Bakteri Endofit Selulolitik
Bakteri  endofit  yang  tumbuh  pada  media  padat  selektif  selulase  adalah  bakteri  yang  mampu menghasilkan enzim selulolitik dan dari 24 isolat yang di seleksi hanya ada dua isolat yang tidak tumbuh dan datanya dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Aktivitas Selulolitik dari isolat bakteri endofit
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
No Kode Isolat Seleksi isolat Aktivitas selulolitik ( x 10⁻⁴ ) U/mL 1 C9 LBKURCC332 hidup 572 ±0.0069 a 2 C10 LBKURCC333 hidup 159 ±0.0002 k 3 C11 LBKURCC334 hidup 311 ±0.0001 de 4 C12 LBKURCC335 hidup 126 ±0.0006 k 5 C13 LBKURCC336 hidup 12 ±0.0001 o 6 C14 LBKURCC337 hidup 37 ±0.0000 mno 7 C15 LBKURCC338 mati Tidak di deteksi 8 C16 LBKURCC339 hidup 15 ±0.0001 o 9 C17 LBKURCC340 hidup 53 ±0.0007 lmn 10 C18 LBKURCC341 mati Tidak di deteksi 11 C19 LBKURCC342 hidup 66 ±0.0002 lm 12 C20 LBKURCC343 hidup 80 ±0.0001 l 13 C21 LBKURCC344 hidup 22 ±0.0004 no 14 C22 LBKURCC345 hidup 344±0.0001 d 15 C23 LBKURCC346 hidup 423±0.0027 b 16 C24 LBKURCC347 hidup 255 ±0.0049 gh 17 C25 LBKURCC348 hidup 143 ±0.0002 k 18 C26 LBKURCC349 hidup 271 ±0.0025 fgh 19 C27 LBKURCC350 hidup 293 ±0.0002 ef 20 C28 LBKURCC351 hidup 203±0.0006 j 21 C29 LBKURCC352 hidup 282±0.0004 efg 22 C30 LBKURCC353 hidup 384±0.0003 c 23 C31 LBKURCC354 hidup 243±0.0012 hi 24 C32 LBKURCC355 hidup 214±0.0019 ij
Catatan: pangkat huruf yang tidak sama menyatakan berbeda nyata pada tingkat 5% (p≥0,05)
Data pada Tabel 2. menginformasikan bahwa dari 22 isolat, ada 3 kelompok isolat dengan aktivitas sebagai berikut: kelompok ke-1, 3 isolat  mempunyai aktivitas enzim selulolitik  relatif lebih tinggi dari isolat lainnya yaitu berturut-turut C9, C23 dan C30 dengan aktivitas selulolitiknya 572 x 10⁻⁴ ± 0.0069 > 423  x 10⁻⁴  ±  0.0027  >  384    x  10⁻⁴  ±  0.0003  dan  secara  statistik  data  ini  berbeda  secara  nyata.  Kelompok  ke-2 adalah isolat C-22 aktivitas enzimnya 344  x 10⁻⁴ ± 0.0001,  tidak berbeda nyata dengan isolat C-11, C-24, C- 26, C-27, C-28, C-29, C-31, C-32.  Kelompok ke-3 aktivitas selulolitik isolat C-10 sebesar 159 x 10-4 ± 0,0002 U/mL  yang  tidak  berbeda  nyata  dengan  isolat  C-12  dan  C-25.  Kelompok  ke-4  adalah  isolat  C-20  aktivitas enzimnya sebesar 80 x 10-4 ± 0,0001 U/mL tidak berbeda nyata dengan isolat C-13, C-14, C-16, C-17, C-19, dan C-21.
Aktivitas  senzim  selulolitik  yang  dihasilkan  dihitung  berdasarkan  jumlah  gula  pereduksi  yang terbentuk dari proses hidrolisis substrat carboxymethyl cellulose (CMC) oleh enzim selulolitik. Satu unit (U) aktivitas  enzim  didefenisikan  sebagai  banyaknya  µmol  gula  pereduksi  hasil  1  mL  enzim  permenit.  Data aktivitas selulolitik ini dapat dilhat dalam bentuk grafik pada Gambar 1.
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
Gambar 1 . Grafik aktivitas enzim selulolitik.

## 3.2. Seleksi Bakteri Endofit Selulolitik
Isolat bakteri endofitik  yang diidentifikasi potensinya menghasilkan enzim selulolitik, berasal dari akar  tumbuhan  mangrove  spesies  Ceriops  tagal  (Perr)  C.  B.  Rob  dari    Dermaga  Sei  Pakning  dan  Pantai Tenggayun,  Kabupaten  Bengkalis,  Riau.  Bakteri  yang  mampu  menghasilkan  enzim  selulase    dapat  juga disebut dengan kelompok  bakteri selulolitik. Enzim  selulase yang diproduksi  oleh  bakteri selulolitik pada umumnya merupakan enzim ekstraseluler (Saropah et al., 2012). Bakteri akan mensintesis enzim selulase selama  dia  tumbuh  pada  media  selektif  selulase  (Yogyaswari  et  al.,  2016).  Pada  penelitian  ini  untuk menyeleksi adanya aktivitas enzim ekstraseluler yang dihasilkan oleh bakteri endofit ini, dilakukan dengan cara  meinokulasikan  bakteri  ke  permukaan  media  padat  yang  mengandung  CMC  1%  dan  kemudian diinkubasi pada suhu 37 °C selama 24 jam.
Hasil  Seleksi  dari  24  bakteri  endofit  di  dalam  media  padat  selektif  yang  mengandung  CMC  1% sebagai sumber karbonnya, ternyata ada 22 isolat yang dapat hidup, sedangkan 2 lainnya tidak hidup yaitu C-15  dan  C-18  dan  isolat  ini  diduga  tidak  mampu  menghasilkan  enzim  selulolitik.  Dua  puluh  dua  (22) bakteri  yang  tumbuh  pada  media  selektif  ini,  karena  menghasilkan  enzim  selulolitik  dan  enzim  ini selanjutnya  akan  menghidrolisis  CMC  pada  media  menjadi  glukosa  dan  kemudian  glukosa  ini  akan digunakan sebagai sumber karbon selama pertumbuhan berlangsung. Hal ini di konfirmasi oleh pernyataan (Nurrochman,  2015),  bahwa  bakteri  selulolitik  merupakan  bakteri  yang  dapat  menghidrolisis  kompleks selulosa menjadi oligosakarida yang lebih kecil dan akhirnya menjadi glukosa. Glukosa tersebut digunakan sebagai  sumber  nutrisi  dan  karbon  bagi  pertumbuhan  mikroba  tersebut  (Retno  &  Nuri,  2011).  Menurut (Hidayat,  2009),  bakteri  endofit  pada  tumbuhan  umumnya  berasal  dari  akar  dan  selanjutnya  menyebar melalui jaringan xylem ke berbagai organ lain. Mekanisme bakteri endofit masuk ke dalam jaringan tanaman yaitu  bakteri  akan  menempel  pada  permukaan  tanaman  dan  melakukan  penetrasi  melalui  luka,  ruang intraseluler  (Compant  et  al.,  2005)  atau  dengan  cara  menghidrolisis  tumbuhan  yang  kaya  akan  selulosa dengan bantuan enzim selulase (Kaga et al., 2009).
Ke-22 isolat bakteri endofit yang positif tumbuh pada media padat CMC 1% diduga masuk ke dalam jaringan  tumbuhan  mangrove  dengan  cara  mendegradasi  selulosa  dinding  sel  tumbuhan  dengan  bantuan enzim  selulolitiknya.  Pada  saat  melakukan  penetrasi  ke  dalam  jaringan  tumbuhan  enzim  selulolitik  akan mendegradasi dinding sel tumbuhan yang mengandung selulosa. Keberadaan ke dua isolat C-15 dan C-18 di
0 100 200 300 400 500 600 700 C-9 C-10 C-11 C-12 C-13 C-14 C-16 C-17 C-19 C-20 C-21 C-22 C-23 C-24 C-25 C-26 C-27 C-28 C-29 C-30 C-31 C-32 ak ti vi ta s se lu la se ( x 10 ⁻⁴ U .m L ⁻¹) Kode isolat
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
akar,    dapat  terjadi  masuk  ke  dalam  jaringan  mangrove  Ceriops  tagal  (Perr)  C.  B.  Rob  melalui  jaringan tumbuhan yang terbuka atau luka dan bukan karena adanya aktivitas selulase atau terjadinya penetrasi ke dalam  jaringan  tumbuhan  karena  jaringan  dari  dinding  sel  tumbuhan  yang  mengandung  selulosa  sudah rusak atau luka sehingga bakteri ini mudah masuk ke dalam jaringan tumbuhan mangrove.

## 3.3. Produksi dan Uji Aktivitas Enzim Selulolitik
Produksi  enzim  selulolitik  dari  isolat  bakteri  endofit  ini  dilakukan  dalam  media  produksi  cair menggunakan  substrat  CMC  1%  sebagai  sumber  karbohidrat  dan  sekaligus  sebagai  induser.  Enzim selulolitik/selulase  pada  umumnya  merupakan  jenis  enzim  ekstraseluler  sehingga  enzim  yang  dihasilkan berada  dalam  media  produksi  dan  dengan  mudah  dapat  dipisahkan  dari  sel  dengan  cara  sentrifugasi. Ekstrak  kasar  enzim  diperoleh  dengan  cara  mensentrifugasi  media  produksi  dalam  keadaan  dingin  (4°C) yang  bertujuan  agar  enzim  tidak  terdenaturasi.  Supernatan  yang  diperoleh  kemudian  disaring  filter  glass fiber  (Whatman  GF/C)  agar  ekstrak  kasar  enzim  terpisah  dengan  susbtrat  yang  masih  terdapat  dalam supernatan.
Data aktivitas selulolitik pada Tabel 2. dan Gambar 1. setelah diuji secara statistic dengan metode Duncan jarak berganda, ternyata dari 22 isolat bakteri endofit dari akar mangrove Ceriosptagal (Perr) C. B. Rob  diperoleh  ada  3  isolat  yang  aktivitas  enzimnya  relatif  lebih  tinggi  dibandingkan  isolat  lainnya.  Tiga isolat  ini  aktivitas  selulolitiknya    berbeda  secara  nyata  dengan  isolat  yang  lain  yaitu  isolat  C-9,  C-23  dan isolat C-30 dengan aktivitas selulolitik berturut-turut 572 x 10-4 ± 0,0069U/mL, 423 x 10-4 ± 0,0027U/mL, dan  384  x  10-4  ±  0,0003  U/mL,  sedangkan  kelompok  isolat  lainnya    yang  aktivitas  selulolitiknya  secara statistik  tidak  berbeda  nyata  yaitu;    isolat  C-22  dengan  aktivitas  selulolitik    sebesar  344  x  10-4  ±  0,0001 U/mL tidak berbeda nyata dengan aktivitas isolat C-11, C-24, C-26, C-27, C-28, C-29, C-31, C-32. Kelompok lainnya yaitu isolat C-10 aktivitas enzim  selulotiknya sebesar 159 x 10-4 ± 0,0002 U/mL yang tidak berbeda nyata dengan isolat C-12, dan C-25. Selanjutnya kelompok isolate dengan aktivitas  terendah yaitu isolat C- 20 sebesar 80 x 10-4 ± 0,0001 U/mL tidak berbeda nyata dengan isolat C-13, C-14, C-16, C-17, C-19, dan C- 21.
Ketiga  isolat  yang  memiliki  aktivitas  selulolitik  tertinggi  yaitu  C-9;  C-23  dan  C-30  dengan aktivitas  selulotik  yang  berbeda  secara  nyata,  dapat  diduga  bahwa  ke-3  isolat  ini  spesies  memang berbeda,  sedangkan  untuk  isolat  yang  memiliki  aktivitas  secara  statistik  tidak  berbeda  secara  nyata, ada beberapa kemungkinan antara lain,  pertama isolat ini adalah isolat dengan spisies yang sama, atau spesiesnya  berbeda  tapi  menghasilkan  enzim  selulolitik  dengan  aktivitas  yang  sama,  oleh  karena  itu perlu dilakukan analisis botaninya untuk memastikan apakah isolat ini berbeda atau sama spesiesnya.

## 4. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan  bahwa hasil seleksi dari 24  isolat  bakteri  endofit  dari  akar  tumbuhan  mangrove  Ceriops  tagal  (Perr)  C.  B.  Rob.  pada  media selektif diperoleh 22 isolat hidup  positif menghasilkan enzim selulase dan aktivitas enzim selulase 3 tertinggi dari 22 isolat berturut-turut adalah isolat C-9 sebesar 572 x 10-4 ± 0,0069 U/mL > isolat C- 23  sebesar  423  x  10-4  ±  0,0027  U/mL>  isolat  C-30  sebesar  384  x  10-4  ±  0,0003  U/mL  aktivitas berbeda nyata dengan isolat yang lainnya.

## Daftar Pustaka
Compant,  S.,  Reiter,  B.,  Sessitsch,  A.,  Nowak,  J.,  Clément,  C.,  &  Barka,  E.  A.  (2005).  Endophytic colonization of Vitis  vinifera L. by  plant growth-promoting bacterium Burkholderia sp. strain
PsJN. Applied and Environmental Microbiology, 71(4).
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
https://doi.org/10.1128/AEM.71.4.1685-1693.2005
Deshmukh, S. K., Verekar, S. A., & Bhave, S. V. (2014). Endophytic fungi: A reservoir of antibacterials.
In Frontiers in Microbiology. https://doi.org/10.3389/fmicb.2014.00715
Hasanah, N., & Iwan, S. (2015). Aktivitas selulase isolat jamur dari limbah media tanam jamur merang.
Jurnal  Prosedium  Seminar  Masyarakat  BIODIV  Indonesia,  1(Imas  2009),  1110–1115. https://doi.org/10.13057/psnmbi/m010524
Hidayat, A. (2009). Sumberdaya Lahan Indonesia: Potensi, Permasalahan, dan Strategi Pemanfaatan.
Jurnal Sumberdaya Lahan, 3(2), 107–117.
https://media.neliti.com/media/publications/133835-ID-none.pdf
Ingle,  S.  S.,  Panchal,  V.,  &  Chhatpar,  H.  S.  (2006).  Studies  on  carbohydrate  metabolism  in  Bacillus sphaericus 1593. African Journal of Biotechnology. https://doi.org/10.5897/AJB06.054
Kaga, H., Mano, H., Tanaka, F., Watanabe, A., Kaneko, S., & Morisaki, H. (2009). Rice Seeds as Sources of
Endophytic Bacteria. Microbes Environ, 24(2), 154–162.
https://doi.org/10.1264/jsme2.ME09113
Kavitha,  S.,  &  Nagarajan,  P.  (2011).  Production  of  Endoglucanase  in  Mixed  Culture  of  Trichderma viride  and  Aspergillus  niger-Kinetics  and  Modeling.  International  Journal  of  ChemTech Research.
Meryandini, A., Widosari, W., Maranatha, B., Sunarti, T. C., Rachmania, N., & Satria, H. (2010). Isolasi
Bakteri Selulolitik Dan Karakterisasi Enzimnya. Makara of Science Series.
https://doi.org/10.7454/mss.v13i1.369
Nurrochman,  F.  (2015).  Eksplorasi  Bakteri  Selulolitik  Dari  Tanah  Hutan  Mangrove  Kretek,  Bantul,
Yogyakarta. Naskah Publikasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Okunowo, W. O., Gbenle, G. O., Osuntoki, A. A., Adekunle, A. A., & Ojokuku, S. A. (2010). Production of cellulolytic  and  xylanolytic  enzymes  by  a  phytopathogenic  Myrothecium  roridum  and  some avirulent fungal isolates from water hyacinth. African Journal of Biotechnology.
Pimentel, M. R., Molina, G., Dionísio, A. P., Maróstica Junior, M. R., & Pastore, G. M. (2011). The Use of
Endophytes  to  Obtain  Bioactive  Compounds  and  Their  Application  in  Biotransformation Process. Biotechnology Research International. https://doi.org/10.4061/2011/576286
Pranoto, E., Fauzi, G., & Hingdri. (2014). Isolasi dan Karakterisasi Bakteri Endofit Pada Tanaman Teh (Camellia  Sinensis  (L.)  O.Kuntze)  Produktif  dan  Belum  Menghasilkan  klon  GMB  7  Dataran Tinggi. Biospecies, 7(1), 1–7.
Pratiwi, Y. H., Ratnayani, O., & Wirajana, I. N. (2018). Perbandingan Metode Uji Gula Pereduksi Dalam
Penentuan Aktivitas ?-L-Arabinofuranosidase Dengan Substrat Janur Kelapa (Cocos Nucifera). Jurnal Kimia, 134. https://doi.org/10.24843/jchem.2018.v12.i02.p07
Qu, Y., Zhu, M., Liu, K., Bao, X., & Lin, J. (2006). Studies on cellulosic ethanol production for sustainable
supply of liquid fuel in China. In Biotechnology Journal.
http://ejurnal.umri.ac.id/index.php/photon
https://doi.org/10.1002/biot.200600067
Rafi,  M.  I.,  &  Cheah,  Y.  K.  (2018).  Bacterial  Endophytes:  A  Reservoir  of  Bioactive  Anti-Microbial
Compounds. Life Sciences, Medicine and Biomedicine.
https://doi.org/10.28916/lsmb.2.1.2018.8
Retno, D. T., & Nuri,  W. (2011).  Pembuatan Bioetanol dari Kulit Pisang. Prosiding Seminar Nasional
Teknik  Kimia  “Kejuangan”  Pengembangan  Teknologi  Kimia  untuk  Pengolahan  Sumber  Daya Alam Indonesia, E11-1-E11-7.
Saropah,  D.  A.,  Jannah,  A.,  &  Maunatin,  A.  (2012).  Kinetika  Reaksi  Enzimatis  Ekstrak  Kasar  Enzim Selulase Bakteri Selulolitik Hasil Isolasi Dari Bekatul. Alchemy, 2(1–2), 34–45.
Yogyaswari, S. A., Rukmi, M. G. I., & Raharjo, B. (2016). Ekplorasi Bakteri Selulolitik Dari Cairan Rumen
Sapi Peranakan Fries Holland (PFH) Dan Limousine Peranakan Ongole (Limpo). Jurnal Biologi,
5(4), 70–80.