Desember 2023, Vol. 10 No. 2: 9 – 16
pISSN : 2355-9942, eISSN:2656-792X
Terakreditasi Nasional, Dirjen Pendidikan Tinggi, Riset, dan Teknologi Kementerian Pendidikan, Kebudayaan, Riset dan Teknologi RI S.K. No. 105/E/KPT/2022 Received: 24 Mei 2023, Accepted: 23 Desember 2023 Published online: 26 Desember 2023 Doi: https://doi.org/10.35508/nukleus.v10i2.11175 https://ejurnal.undana.ac.id/index.php/nukleus/article/view/11175

## MOTILITAS DAN VIABILITAS SPERMATOZOA BABI DENGAN HOLDING TIME DAN LAMA THAWING BERBEDA
(Sperm motility and viability of boars in different holding and thawing time)
N. L. M. Sugiantini 1 , N. L. G. Sumardani 2* , I. W. Suberata 2
1 Program Studi Peternakan, Fakultas Peternakan, Universitas Udayana
2 Lab Reproduksi Ternak, Fakultas Peternakan, Universitas Udayana , Jln. Raya Bukit Jimbaran, Kuta Selatan, Badung, Bali, Indonesia, 80361
* Correspondent author, email: nlg_sumardani@unud.ac.id

## ABSTRAK
Motilitas dan viabilitas spermatozoa merupakan faktor utama dalam penentuan kualitas semen. Perlakuan semen sebelum  dan  setelah  pengenceran  menjadi  faktor  penentu  layak  atau  tidak  semen  tersebut  digunakan  dalam inseminasi buatan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh holding time dan lama thawing terhadap motilitas dan viabilitas spermatozoa babi. Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Reproduksi Ternak Kampus Bukit Jimbaran selama 1 bulan, menggunakan rancangan acak kelompok pola faktorial. Faktor pertama adalah holding time yang terdiri 3 taraf yaitu 0 jam (HT0), 2 jam (HT2), dan 3 jam (HT3). Faktor kedua adalah lama thawing  yang  terdiri  dari  3  taraf  yaitu  selama  2  menit  (T2),  3  menit  (T3),  dan  5  menit  (T5).  Terdapat  9 kombinasi dan 5  kelompok berdasarkan  waktu penampungan  semen.  Variabel  yang diamati  meliputi  motilitas dan  viabilitas  spermatozoa  babi.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  perlakuan  HT3  berbeda  nyata  (P<0,05) dengan motilitas spermatozoa mencapai 22% dan viabilitas spermatozoa mencapai 41,55%. Thawing selama 5 menit  (T5)  memberikan  hasil  motilitas  spermatozoa  mencapai  18,50%  dan  viabilitas  spermatozoa  mencapai 38,45%.  Dalam  penelitian  ini  tidak  terjadi  interaksi  antara  holding  time  dan  lama  thawing.  Kesimpulan  dari penelitian ini adalah spermatozoa babi menunjukkan hasil terbaik pada holding time 3 jam dengan lama thawing selama 5 menit.
Kata-kata kunci: spermatozoa babi, holding time, thawing, motilitas spermatozoa, viabilitas spermatozoa

## ABSTRACT
The motility and viability of sperm are the main factors in determining semen quality. The treatment of semen before  and  after  dilution  is  a  determining  factor  whether  or  not  the  semen  is  suitable  for  use  in  artificial insemination.  This  study  aims  to  determine  the  effect  of  holding  time  and  thawing  time  on  the  motility  and viability  of  boars  sperm.  This  research  was  conducted  at  the  Livestock  Reproduction  Laboratory,  Bukit Jimbaran  for  1  month,  using  a  factorial  randomized  block  design  The  first  factor  is  the  holding  time  which consists of 3 levels: 0 hours (HT0), 2 hours (HT2), and 3 hours (HT3). The second factor is the thawing time which consists of 3 levels: for 2 minutes (T2), 3 minutes (T3), and 5 minutes (T5). There are 9 combinations and 5  groups  based  on  sperm  storage  time.  The  observed  variables  included  the  motility  and  viability  of  boars sperm. The results showed that the HT3 treatment was significantly different (P<0.05) with 22% sperm motility and 41.55% sperm viability. Thawing for 5 minutes (T5) gave the best results with sperm motility 18.50% and sperm  viability  38.45%.  There  was  no  interaction  between  holding  time  and  thawing  time.  The  conclusion  of this study is that boars sperm shows the best results at holding time of 3 hours with a thawing time of 5 minutes.
Keywords: boars sperm, holding time, thawing, sperm motility, sperm viability

## PENDAHULUAN
Penggunaan  semen  cair  pada  inseminasi buatan (IB) babi lumrah ditemukan di Indonesia, sedangkan  penggunaan  semen  beku  masih sangat  terbatas  (Tuty  et  al.,  2017).  Preservasi yang  tepat  dalam  penggunaan  semen  cair  untuk
periode waktu yang relatif lebih lama diharapkan  mampu  mempertahankan  kualitas spermatozoa  yang  terkandung  pada  semen.  Hal ini  dikarenakan  kualitas  spermatozoa  (motilitas
dan  viabilitas  spermatozoa)  menjadi  salah  satu faktor krusial dalam keberhasilan fertilisasi.
Kualitas  spermatozoa  dipengaruhi  oleh struktur  phospholipid  pada  membran  plasma semen  babi.    Struktur  phospholipid  ini mengalami perubahan dari fase cair menjadi fase gel  pada  saat  suhu  rendah  (Stradivari  et  al., 2019)  dan  perubahan  ini  dapat  menyebabkan kerusakan  komposisi  lipid  membran  plasma sehingga motilitas spermatozoa akan mengalami penurunan  bahkan  kerusakan  secara  pemanen. Upaya  mempertahankan  kualitas  spermatozoa serta  memperbanyak  volume  semen,  maka semen  perlu  dicampur  dengan  bahan  pengencer yang  mampu  memberi  kebutuhan  fisik  dan kimia  spermatozoa.  Namun,  semen  babi  yang telah diencerkan tidak dapat langsung disimpan. Hal  ini  sangat  berpengaruh  pada  kerentanan spermatozoa terhadap cold shock. Maka dari itu, diperlukan  rentang  waktu  sebelum  dan  setelah penyimpanan. Rentang waktu sebelum penyimpanan  dikenal  dengan  istilah  holding time (Rienprayoon et al., 2012). Hasil penelitian
dari  Wasilewska  dan  Fraser  (2017)  menyatakan bahwa  holding  time  yang  terbaik adalah  selama dua  jam.  Namun  terdapat  perbedaan  hasil penelitian  Tuty  et  al.  (2017)  yang  menyatakan bahwa  holding  time  tidak  diperlukan  dalam mempertahankan  kualitas  semen  dari  segi motilitas dan viabilitas spermatozoa.
Semen  babi  perlu  diberikan  waktu pemulihan  setelah  penyimpanan  yang  lebih dikenal  sebagai  thawing.  Bearden,  et  al.  (2004) menyatakan  thawing  bertujuan  membuat  semen kembali  motil  dengan  suhu  yang  ideal.  Hasil penelitian  Simarmata  et  al.  (2018)  thawing terbaik  untuk  daerah  dingin  seperti  di  UPT BIBD Baturiti Provinsi Bali adalah selama lima menit dan tiga menit untuk daerah panas seperti di UPT BIBD Buruan Provinsi Bali.  Mengingat masih  adanya  perbedaan  hasil  penelitian mengenai rentang  waktu  holding time  dan lama thawing,  sehingga  belum  ada  dasar  kuat  yang membuktikan  berapa  lama  waktu  yang  ideal untuk  melakukan  holding  time  dan  thawing, maka penelitian penting untuk dilakukan.

## METODE PENELITIAN

## Materi Penelitian
Semen berasal dari dua ekor pejantan babi ras  landrace  dengan  umur  produktif  (1-1,5 tahun)  dengan  bobot  mencapai  100-200  kg. Pejantan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini dipelihara oleh inseminator berlokasi di Kecamatan  Manggis,  Kabupaten  Karangasem. Penampungan,  pengenceran,  dan  penilaian semen  secara  makroskopis  dilakukan  di  lokasi pemeliharaan  pejantan,  sedangkan  penilaian semen secara mikroskopis dilakukan di Laboratorium  Reproduksi  Fakultas  Peternakan Universitas Udayana.

## Metode Penelitian
Penelitian dirancang menggunakan rancangan acak kelompok pola faktorial. Faktor pertama  adalah  holding  time  yang  terdiri  dari  3 taraf yaitu 0 jam (HT0), 2 jam (HT2), dan 3 jam (HT3).  Faktor  kedua  adalah  lama  thawing  yang terdiri  dari  3  taraf  yaitu  selama  2  menit  (T2),  3 menit  (T3),  dan  5  menit  (T5).  Terdapat  9 kombinasi  dan  5  kelompok  berdasarkan  atas waktu penampungan semen.

## Persiapan Bahan Pengencer
Penelitian  ini  menggunakan  Beltsville Thawing Solution (BTS) sebagai bahan pengencer,  merupakan  bahan  pengencer  tipe
short  term.  Pengencer  BTS  sebanyak  50  gr dilarutkan  dalam  1000  mL  aquades.  Bahan pengencer  ini  dihangatkan  secara  konstan  pada suhu  35-37ºC.  Pengencer  digunakan  dengan perbandingan  antara  semen  dan  pengencer sebesar  1:2  atau  1:3  berdasarkan  persentase motilitas  spermatozoa.  Motilitas  spermatozoa 65%  menggunakan  bahan  pengencer  dengan perbandingan 1:2 sedangkan motilitas spsrmatozoa  diatas  70%  menggunakan  bahan pengencer dengan perbandingan 1:3.

## Penampungan dan Evaluasi Semen
Semen  ditampung  setiap  tiga  hari  sekali pada  pagi  hari,  dengan  menggunakan  metode manual  (glove  hand  method).  Semen  dikoleksi dengan  tabung  yang  dilapisi  kain  kassa  pada mulut  tabung.  Hal  ini  dilakukan  untuk memisahkan fraksi gelatin semen yang ditampung. Setelah itu dilakukan evaluasi secara makroskopis  meliputi  volume,  warna,  bau, kekentalan,  dan  pH,  serta  evaluasi  secara mikroskopis  meliputi  motilitas  spermatozoa, konsentrasi spermatozoa, dan viabilitas spermatozoa.  Semen  yang  memenuhi  syarat dengan  kosentrasi  spermatozoa  mencapai  150- 300 x 106 sel/mL (Garner dan Hafez, 2000) dan motilitas  spermatozoa  diatas  65%,  dapat dilanjutkan ke proses pengenceran.

## Holding Time
Semen  yang  telah  diencerkan  dengan pengencer  BTS  dan  dikemas  dalam  ampul dengan  volume  80  mL/dosis  kemudian  di- holding  time  sesuai  perlakuan.  Holding  time dilakukan  pada  suhu  kamar  (20-25oC)  sebelum dilanjutkan  pada  tahap  penyimpanan  semen dengan  suhu  lemari  es  (16oC).  Holding  time bertujuan untuk memberikan waktu penyesuaian spermatozoa dengan pengencer.

## Penyimpanan Semen
Semen yang telah diencerkan dan dikemas dalam  ampul  80  mL,  kemudian  di-holding  time sesuai  perlakukan.  Setelah  itu  semen  kemudian ditaruh  di  lemari  es,  yang  sebelumnya  sudah diatur  pada  suhu  16oC.  Semen  diletakkan  pada rak  bagian  bawah  selama  pengamatan,  dan lemari es tidak dibuka selama penyimpanan agar tidak mempengaruhi suhu.

## Thawing dan Evaluasi Semen
Setelah  waktu  penyimpanan  berakhir, semen  kemudian  di-thawing  pada  suhu  37°C. dengan  lama  thawing  sesuai  perlakuan.  Semen yang  telah  di-thawing  kemudian  dievaluasi secara mikroskopis kembali diantaranya motilitas dan viabilitas spermatozoa.

## Variabel Penelitian
Variabel  dalam  penelitian ini  meliputi:  a) kualitas semen segar yaitu 1) volume semen; 2) warna  semen;  3)  konsistensi  semen,  konsistensi dinilai  dari  kecepatan  semen  kembali  ke  dasar tabung  yaitu  encer,  sedang,  kental;  4)  derajat keasaman (pH) semen; 5) konsentrasi spermatozoa  (jumlah  spermatozoa  per  ml semen),  penilaiannya  menggunakan  bantuan
haemositometer dan kamar hitung Neubauer dan cairan  NaCl  3%  dengan  perbandingan  1:1;  6) motilitas  spermatozoa,  dihitung  menggunakan mikroskop  pada  perbesaran  10x40.  Motilitas dinilai  dengan  membandingkan  spermatozoa yang  bergerak  maju  (progresif)  dengan  yang tidak  progresif  (linear).  Rentang  nilai  dari  0- 100%; dan 7) viabilitas spermatozoa (persentase spermatozoa hidup), penilaian dilakukan dengan menggunakan  pewarna  eosin  nigrosin  yang dihomogenkan dengan semen dengan perbandingan 1:1 atau 1:2 kemudian dihomogenkan secara cepat. Setelah dihomogenkan,  obyek  gelas  kedua  diambil  dan disinggungkan,  lalu  diulas  pada  obyek  gelas ketiga. Obyek gelas dikeringkan dengan heating table  selama  10-15  detik.  Kemudian  dilihat dengan  mikroskop.  Dilakukan  perhitungan  dari 10  lapang  pandang  dengan  jumlah  sel  minimal 200  sel.  Spermatozoa  yang  hidup/viable  tidak menyerap warna (transparan). Sedangkan spermatozoa  yang  mati  akan  menyerap  warna merah  pada  bagian  kepala,  dihitung  dengan rumus  (Arifiantini,  2012)  sebagai  berikut: Spermatozoa hidup =
(Σsperma hidup)/Σspermax 100%.
b)  Motiltas  spermatozoa  pada  holding time berbeda sebelum thawing, dan c) Motilitas dan  viabilitas  spermatozoa  pada  holding  time berbeda  setelah  thawing,  dan  d)  Motilitas  dan viabilitas spermatozoa pada thawing berbeda.

## Analisis Statistika
Data  yang  diperoleh  dianalisis  dengan sidik  ragam  (Anova)  dan  apabila  pengaruh perlakuan berbeda nyata (P<0,05) maka dilanjutkan  dengan  Uji  Jarak  Berganda  Duncan (Steel dan Torrie, 1993).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kualitas Semen Segar
Hasil  evaluasi  semen  segar  babi  landrace dari  lima  kali  penampungan  menunjukkan kualitas  semen  yang  baik  (Tabel  1)  dan memenuhi syarat untuk diproses lebih lanjut.

## Motilitas  dan  Viabilitas  Spermatozoa  Pada Holding Time Berbeda
Motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa menjadi  dua  variabel  penentu  krusial  dalam penilaian kualitas spermatozoa. Motilitas spermatozoa  adalah  penilaian  daya  gerak
spermatozoa  secara  progresif  (pergerakan  aktif dan  lincah).  Viabilitas  spsrmatozoa  adalah penilaian  spermatozoa  berdasarkan  total  jumlah spermatozoa  yang  hidup  dalam  satuan  persen. Rataan  motilitas  spermatozoa  (Tabel  2)  pada holding  time  berbeda  sebelum  thawing  pada perlakuan  HT0  menghasilkan  rata-rata  tertinggi sebesar  67%±0,28,  berbeda  nyata  (P<0,5) dibandingkan  dengan  HT2  dan  HT3  sebesar 60%±0,28.
Tabel 1 Kualitas semen segar babi landrace
Kualitas semen Hasil Pengamatan Volume (mL) 220±24,08 Warna Putih susu Konsistensi Encer Derajat keasaman (pH) 7,5±0,19 Konsentrasi (x 10 6 sel/mL) 304,5±44,25 Motilitas spermatozoa (%) 67±1,0 Viabilitas spermatzoa (%) 84,3±2,43
Tabel 2. Motilitas spermatozoa pada holding time berbeda sebelum thawing
Parameter Holding Time (Jam) SEM HT0 HT2 HT3 Motilitas (%) 67 b 60 a 60 a 0,28
Keterangan: Nilai dengan huruf yang berbeda dalam satu baris menunjukkan hasil berbeda nyata (P<0,05)
Penurunan  nilai  motilitas  spermatozoa masih  dalam  rentangan  normal  motilitas  yaitu 50-80%.  Rienprayon  et  al.  (2012)  menyatakan bahwa  semen  yang  terlebih  dahulu  di-holding time mampu mempertahankan motilitas spermatozoa  setelah  pengenceran.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  pengencer  BTS  dapat secara  efektif  melindungi  kualitas  dan  motilitas sperma  babi  pada  suhu  ruang  (27-28°C). Pengencer  BTS  mampu  mengurangi  tingkat kematian  spermatozoa  sebelum  dilanjutkan  ke
proses penyimpanan. Hasil penelitian menunjukkan  perlakuan  holding  time  pasca thawing selama 3 jam memiliki hasil terbaik dan secara signifikan berbeda (P<0,05) dari perlakuan holding time selama 0 jam dan 2 jam. Motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa  pada holding  time  berbeda  pasca  thawing  (Tabel  3) pada perlakuan HT3 memiliki rata-rata tertinggi sebesar  masing-masing  22%  dan  41,55%±2,36, berbeda  nyata  (P<0,05)  dengan  perlakuan  HT2 dan HT0.
Tabel 3. Motilitas dan viabilitas spermatozoa pada holding time berbeda setelah thawing
Parameter Holding Time (Jam) SEM HT0 HT2 HT3 Motilitas (%) Viabilitas (%) 11,17 a 28,75 a 15,17 a 35,16 ab 22,00 b 41,55 b 2,06 2,36
Keterangan: Nilai dengan huruf yang berbeda dalam satu baris menunjukkan hasil berbeda nyata (P<0,05)
Rendahnya  nilai  motilitas  spermatozoa belum sesuai dengan Standar Nasional Indonesia (SNI)  yang  mengharuskan  besar  motilitas spsrmatozoa pasca thawing sebelum diinseminasikan sekurang-kurangnya 40%. Rendahnya  nilai  ini  diduga  disebabkan  oleh kurangnya  perlindungan  yang  diberikan  oleh pengencer  BTS  terhadap  dampak  cold  shock yang  menyebabkan  tingkat  kematian  sperma tinggi.
Persentase penurunan motilitas dan viabilitas  spermatozoa  terendah  pada  perlakuan holding  time  3  jam  mengindikasikan  bahwa pada waktu tersebut spermatozoa telah berdaptasi  dengan  pengencer  dan  sudah  mampu memanfaatkan  salah  satu  bahan  kandungan pengencer  yaitu  sukrosa.  Terdapatnya  sukrosa
yang terkandung dalam pengencer BTS menjadi sumber  energi  bagi  spermatozoa.  Anwar  dan Jiyanto  (2019)  melaporkan  bahwa  pada  saat proses penyimpanan semen dengan suhu rendah, sukrosa mampu melindung membran plasma sel dari kerusakan dalam fungsinya sebagai pelindung ekstraseluler.
Persentase  motilitas  spermatozoa  pada holding  time  0  jam  dan  2  jam  lebih  rendah daripada holding time 3 jam, diduga disebabkan oleh waktu yang  terlalu singkat untuk spermatozoa menyesuaikan diri dengan kandungan  pengencer.  Penyimpanan  pada  suhu yang  lebih  rendah  spermatozoa  rentan  terhadap cold  shock  yang  mempengaruhi  nilai  motilitas dan viabilitasnya turun.  Selain itu,  holding time yang terlalu cepat menyebabkan
ketidakseimbangan  intraseluler  spermatozoa. Hal ini didukung oleh Zhang et al. (2016), yang menyatakan  bahwa  jika  suatu  sel  didinginkan terlalu cepat
akan
mengalami ketidakseimbangan intraseluler dikarenakan keluarnya  sedikit  air  yang  terkandung  di  dalam sel.  Namun,  sel  spermatozoa  akan  mengalami dehidrasi  dan  pengkerutan  yang  berakibat  pada rendahnya  viabilitas apabila  mengalami  holding time  dengan  rentang  yang  lama.  Rentang holding  time  yang  kurang  tepat  mengakibatkan asam  laktat  sisa  metabolisme  spermatozoa meningkat  dan  menyebabkan  toksik  bagi spermatozoa.  Selain  itu  struktur  membran spermatozoa mengalami kerusakan yang diakibatkan  oleh  terbentuknya  perioksida  lipid. Spermatozoa  yang  mengalami  metabolisme yang  diakibatkan  oleh  holding  time  yang  lama akan  menghasilkan  zat  radikal  bebas  yang
tertumpuk pada semen. Hal ini akan menyebabkan kerusakan pada fosfolipid membran sel spermatozoa (Solihati et al., 2018).

## Motilitas  dan  Viabilitas  Spermatozoa  Pada Thawing Berbeda
Thawing  atau  pencairan  kembali  adalah rentang waktu kritis spermatozoa yang disebabkan  oleh  perubahan  suhu  dan  sangat menentukan  daya  fertilitas  spermatozoa.  Hasil penelitian (Tabel 4) menunjukkan pada variabel motilitas  spermatozoa  pada  perlakuan  T5 memiliki rata-rata tertinggi sebesar 18,50%±2,06,  tidak  berbeda  nyata  (P>0,05) dengan  perlakuan  T2  dan  T3.  Pada  variabel viabilitas  spermatozoa  perlakuan  T5  memiliki rata-rata  tertinggi  sebesar  38,45%±2,36,  tidak berbeda  nyata  (P>0,05)  dengan  perlakuan  T2 dan T3.
Tabel 4. Motilitas dan viabilitas spermatozoa pada thawing berbeda
Parameter Thawing (menit) SEM T2 T3 T5 Motilitas (%) Viabilitas (%) 12,50 a 32,77 a 17,33 a 34,24 a 18,50 a 38,45 a 2,06 2,36
Keterangan: Nilai dengan huruf yang berbeda dalam satu baris menunjukkan hasil berbeda nyata (P<0,05)
Selama proses penyimpanan dan thawing, spermatozoa  akan  melewati  suhu  kritis  yang berdampak  pada  penurunan  viabilitas  dan motilitasnya.  Spermatozoa  yang  telah  di- thawing  dapat  dengan  mudah  mengalami kerusakan  karena  perubahan  tiba-tiba  dalam kondisi  osmotik  (Munazaroh  et  al.,  2013). Turunnya nilai motilitas dan viabilitas spermatozoa diakibatkan oleh turunnya komposisi  protein  plasma  semen  babi  dan membran spermatozoa akibat penyimpanan pada suhu rendah (Zahn et al., 2006). Selain itu, suhu tinggi  pada  saat  thawing  dapat  menyebabkan rendahnya  persentase  membran  plasma  utuh (MPU)  spermatozoa  yang  dapat  mengakibatkan protein dalam semen mengalami denaturasi. Hal ini dapat mengakibatkan perubahan protoplasma kompleks  dan  tidak  dapat  diperbaiki  kembali, sehingga  spermatozoa  mengalami  kematian (Indriani dan Wahyuningsih, 2013).
Tuty  et  al.  (2017)  menyatakan  setelah proses  thawing  spermatozoa  dapat  mengalami kerusakan  pada  membran  plasma  semen, terutama  pada  bagian  ekor  yang  disebut
midpiece.  Midpiece  berperan  penting  pada proses  metabolisme  sebagai  penghasil  energi melalui mitokondria.  Metabolisme perombakan adenosine triphosphat (ATP) menjadi adenosinediphosphat  (ADP)  ataupun  adenosine monophosphat  (AMP)  mengalami  gangguan yang diakibatkan oleh kerusakan membran pada suhu  rendah  yang  mengakibatkan  tidak  adanya energi  digunakan  oleh  spermatozoa  untuk bergerak. Adenosine monophosphat (ATP) hasil metabolisme  inilah  yang  mempunyai  peran penting  bagi  motilitas  spermatozoa  (Fiqri, 2014).
Dalam  penelitian  ini,  ditemukan  bahwa nilai viabilitas spermatozoa lebih tinggi daripada motilitas  sperma  setelah  di-thawing.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  pada  saat  suhu  rendah kandungan  BTS  cukup  untuk  melindungi membran plasma spermatozoa dengan kandungan sukrosa yang menyisip pada membran  plasma  dan  membuatnya  lebih  lentur sehingga  tidak  mudah  rusak  selama  proses penyimpanan dengan suhu rendah maupun pada saat thawing (Tuty et al., 2017).
Interaksi  Antara  Holding  Time  dan  Lama Thawing
Hasil  penelitian  dari  hasil  analisis  data interaksi  perlakuan  holding  time  dan  lama thawing  tidak  berpengaruh  nyata  (P>0,05) terhadap nilai motilitas dan viabilitas spermatozoa. Motilitas dan viabilitas spermatozoa  pada  perlakuan  HT3T5  (Tabel  5) memiliki  rata-rata  tertinggi  sebesar  masing- masing  29,50%%±2,06  dan  46,16%%±2,49 tidak  berbeda  nyata  (P>0,05)  dengan  perlakuan lainnya.
Rendahnya  nilai  motilitas  dan  viabilitas spermatozoa  diduga  dikarenakan  kandungan bahan BTS yang kurang memproteksi
spermatozoa,  lama  penyimpanan  pada  suhu rendah  yang  terlalu  lama,  dan  aktivitas  seluler dari spermatozoa yang terlalu cepat dan optimal sebelum  diencerkan.  Bahan  pengencer  BTS tidak mengandung bahan yang dapat melindungi sel spermatozoa dari serangan radikal bebas atau reactive  oxygen  species  (ROS)  yang  terbentuk selama  prosessing  semen  (Bebas  et  al.,  2016). Reactive  oxygen  species  (ROS)  menyebabkan kerusakan membran plasma sel dan menyebabkan inaktivasi enzim, kerusakan DNA, serta kematian sel. Oleh karena itu, ROS sangat berbahaya bagi kehidupan spermatozoa (Susilowati dan Triana, 2016).
Tabel 5 Tabel interaksi holding time dengan lama thawing
Variabel Holding Time Thawing Rataan SEM 2 3 5 Motilitas (%) 0 2 3 11,00 a
11,00 a 15,50 a 14,00 a 17,00 a 21,00 a 8,50 a
17,50 a 29,50 a 11,16 15,16 22,00 2,06 Rataan 12,50 17,33 18,50 Viabilitas (%) 0 2 3 29,01 a
32,40 a 36,90 a 27,27 a 33,89 a 41,59 a 30,01 a 39,12 a 46,16 a 28,75 35,16 41,55 2,49 Rataan 32,77 34,24 38,45
Keterangan:  Nilai  dengan  huruf  yang  berbeda  dalam  satu  baris  (huruf  kecil)  dan  dalam  satu  kolom  menunjukkan  berbeda nyata (P<0,05)
Selain  spermatozoa  mengalami  ROS, suhu rendah yang rendah pada proses penyimpanan mengakibatkan spermatozoa rentang dengan kejutan dingin (cool shock). Hal ini juga menyebabkan ketidakseimbangan intraseluler  sebagai  akibat  dari  pengeluaran  air yang berlebihan. Pada saat thawing, konsentrasi elektrolit  yang  berlebihan  akan  melarutkan selubung  lipo  protein  dinding  sel  spermatozoa mengakibatkan permeabilitas membran spermatozoa berubah. Semua ini mengakibatkan kerusakan  yang  berujung  pada  sel  spermatozoa yang rentan mati (Pratiwi et al., 2014).
Terbentuknya peroksida lipid menyebabkan  membran  plasma  spermatozoa rusak,  dan  hal  ini  menjadi  masalah  yang  sering muncul pada prosesing semen babi. Terakumulasinya  kandungan  asam  lemak  tak jenuh  pada  membran  spermatozoa  babi  inilah yang  menyebabkan  rentannya  pembentukan peroksida  lipid  (Fadilah  et  al.,  2016).  Menurut Savitri  dan  Surhayati  (2014),  semen  babi  yang
disimpan  dengan  rentang  waktu  yang  lama  dan terbentuknya  akan  menurunkan  motilitas  dan viabilitas spermatozoa yang mengganggu proses pengawetan  semen.  Ditambah  dengan  lamanya penyimpanan dalam suhu yang rendah, menyebabkan  spermatozoa  mengalami  stres yang juga menjadi penyebab penurunan motilitas dan viabilitas (Sades et al., 2016)
Selain kandungan dalam BTS yang belum mampu  melindungi  sperma  serta  jangka  waktu penyimpanan  yang  lama,  faktor  penyebab rendahnya motilitas dan viabilitas pada penelitian ini diduga karena aktivitas seluler dari spermatozoa  yang  terlalu  cepat  dan  optimal sebelum  diencerkan.  Dalam  penelitian  ini, diduga spermatozoa mengalami aktivitas seluler dengan  cepat.  Hal  ini  menyebabkan  energi, terutama  glukosa,  cepat  habis  sehingga  asam laktat  hasil  metabolisme  terakumulasi  menjadi racun  yang  bisa  menyebabkan  kematian  bagi spermatozoa.

## SIMPULAN
Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa perlakuan  holding  time  3  jam  dan  thawing selama  5  menit  memberikan  hasil  terbaik
terhadap  motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa babi. Dalam penelitian ini tidak terjadi interaksi antara perlakuan holding time dan lama thawing.

## SARAN
Berdasarkan  data  hasil  penelitian  yang diperoleh  dapat  disarankan  agar  dilakukan penelitian  lanjutan  mengenai  holding  time  dan lama thawing yang terbaik dalam
mempertahankan motilitas dan viabilitas spermatozoa  babi  dengan  rentang  waktu  yang lebih beragam.

## DAFTAR PUSTAKA
Anwar  P  ,  Jiyanto  J.  2019.  Efektivitas  sukrosa sebagai proteksi aktif membran ekstraseluler  spermatozoa  Sapi  Bali pada zona pre-freezing. Jurnal Agripet . 19(1): 77-84. https://doi.org/10.17969/agripet.v19i1.1 4468 Arifiantini  RI.  2012. Teknik  Koleksi  dan Evaluasi Semen Pada Hewan . PT
Penerbit IPB Press. Bogor.
Bearden  HJ,  Fuquay  F,  Willard  ST.  2004.
Applied  Animal  Reproduction .  6 th Ed. Pearson  Prentaice  Hallm.  New  Jersey. USA.
Bebas  W,  Buyona  GL,  Budiasa  MK.  2016. Penambahan  vitamin  E  pada  pengencer BTS® terhadap daya hidup dan motilitas  spermatozoa  babi  landrace pada penyimpanan 15°C. Buletin Veteriner Udayana . 8(1): 1-7. https://ojs.unud.ac.id/index.php/buletinv et/article/download/19665/13056
Fadilah  ZN,  Isnaini  N,  Ihsan  MN.  2016.
Kualitas  semen  cair  Sapi  Bali  selama penyimpanan  suhu  ruang  menggunakan pengencer skim milk dengan penambahan  filtrat  kecambah  kacang hijau. Ternak Tropika Journal of
Tropical  Animal  Production . 17(1):  22-
30. https://doi.org/10.21776/ub.jtapro.2016. 017.01.3
Fiqri  MM.  2014.  Motilitas  Spermatozoa  Sapi Brahman  dengan  berbagai  konsentrasi dalam  engencer  CEP-D  yang  disimpan dalam  refrigerator. Lentera  Bio .  3(3):
181-185.
https://ejournal.unesa.ac.id/index.php/le nterabio/article/view/9611
Garner DL,  Hafez ESE. 2000. Spermatozoa and Seminal  Plasma .  In:  Hafez  B.  Hafez ESE,  editor.  Reproduction  in  Farm Animals.  7 th Ed.  Philadelphia  (US): Lippincott Williams and Wilkins.
Indriani TS,  Wahyuningsih S. 2013. Daya hidup spermatozoa Sapi Limousin yang dipreservasi dengan metode water jacket dan  free  water  jacket. Jurnal  Veteriner September . 14(3): 379-386. https://ojs.unud.ac.id/index.php/jvet/arti cle/view/7276
Munazaroh  A  M,  Wahyuningsih  S,  Ciptadi  G. 2013.  The  quality  of  boer  goat  freezing sperms using mr. frosty equipments with different Andromed equilibration. Jurnal Ternak Tropika . 14(2): 63-71.
Pratiwi  RI,  Suharyati  S,  Hartono  M.  2014. Analisis  kualitas  semen  beku  Sapi Simmental menggunakan pengencer Andromed®  dengan  variasi  waktu  pre freezing. Jurnal Ilmiah Peternakan Terpadu . 2 (3): 8-15. https://jurnal.fp.unila.ac.id/index.php/JI

## PT/article/view/496
Rienprayoon  CC,  Klangnak  S,  Onton  C, Tretipskul,  Tummaruk  P.  2012.  A comparative  study  on  the  efficacy  of four  semen  extenders  and  thawing  by seminal plasma  on the  quality  of  frozen thawed boar semen. The Thai Journal of Veterinary  Medicine. 42(2):  195-200. https://digital.car.chula.ac.th/tjvm/vol42/ iss2/9
Sades  AM,  Isnaini  N,  Wahjuningsih  S.  2016. Pengaruh  suplementasi  filtrat  kecambah kacang  hijau  ( Phaseolus  radiatus L.) terhadap kualitas semen Sapi Simmental
dalam  pengencer  skim  milk  pada  suhu dingin. Ternak  Tropika  Journal  of Tropical  Animal  Production . 17(1):  1- 10. https://doi.org/10.21776/ub.jtapro.2016. 017.01.1
Savitri  FK,  Suharyati  S.  2014.  Kualitas  semen beku  Sapi  Bali  dengan  penambahan berbagai  dosis  vitamin  C  pada  bahan pengencer  skim  kuning  telur. Jurnal Ilmiah Peternakan Terpadu . 2(3): 30-36. https://jurnal.fp.unila.ac.id/index.php/JI PT/article/view/499
Simarmata  YNS,  Sumardani  NLG,  Artiningsih RN.  2018.  Effect  of  thawing  length  on quality of boar semen attechnical service unit of artificial insemination centre Bali
Province. Jurnal  Peternakan  Tropik . 6(2): 501-508. https://ojs.unud.ac.id/index.php/tropika/
article/view/41841
Solihati  N,  Rasad  SD,  Setiawan  R,  Nurjanah  S. 2018.  Pengaruh  kadar  gliserol  terhadap kualitas  semen  domba  lokal. Jurnal
Biodjati . 3(1): 63-71. https://doi.org/10.15575/biodjati.v3i1.23 57 Steel  RGD,  Torrie  JH.  1993. Prinsip  dan Prosedur Statistika (Pendekatan Biometrik).  Penerjemah  B.  Sumantri. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta. Stradivari  MPF,  Sumardani  NLG,  Mariani  NP. 2019.  Prosesing  semen  beku  di  Unit Pelaksana Teknis (UPT) Balai
Inseminasi Buatan Daerah Provinsi Bali.
Jurnal  Peternakan  Tropika .  7(1):  163- 168. https://ojs.unud.ac.id/index.php/tropika/ article/view/47298
Susilowati  S,    Triana  IN.  2016.  Protein  kasar plasma  seminalis  sapi  menurunkan kejadian  nekrosis  spermatozoa  kambing yang disimpan pada suhu dingin. Jurnal
Veterine., 17(1): 57-63. http://dx.doi.org/10.19087/jveteriner.20 16.17.1.57
Tuty  LY,  Arifiantini  RI,  Dapawole  RR,  Nalley WMM. 2017. Kualitas semen beku babi dalam pengencer komersial yang disuplementasi dengan Trehalosa. Jurnal  Veteriner .  18(1):  69- 75. https://ojs.unud.ac.id/index.php/jvet/arti cle/view/29655
Wasilewska  K,  Fraser  L.  2017.  Boar  variability in  sperm cryo-tolerance after  cooling of semen  in  different  long-term  extenders at various temperatures. Ani Reprod Sci , 185(-): 161-173. https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.201 7.08.016 Zhang  M,  Oldenhof  H,  Sieme  H,  Wolkers  WF.
2016. Freezing-induced uptake of trehalose  into  mammalian  cells  facilitates cryopreservation. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)- Biomembranes . 1858(6): 1400-1409. https://doi.org/10.1016/j.bbamem.2016.03 .020