## ALCHEMY : JOURNAL OF CHEMISTRY

## Artikel Penelitian
Identifikasi dan Uji Toksisitas terhadap Larva Udang (Artemia salina L.) Ekstrak Bekatul Menggunakan Variasi Jenis Pelarut dan Lama Ekstraksi
Dewi Wardatul Jannah, Anik Maunatin, Akyunul Jannah *
Jurusan Kimia, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, Indonesia, 65144
INFO ARTIKEL ABSTRAK Riwayat Artikel Diterima 15 September 2020 Direvisi 20 Desember 2020 Tersedia online 25 Januari 2021 * Email penulis korespondensi: akyunul_jannah2008@yahoo.com Rice  bran  was  extracted  using  ultrasonic  method  with  varied  solvents  (ethanol, ethyl  acetate  and  n-hexane)  and  extraction  times  (20,  25  and  30  minutes).  The aim of this study was to determine toxicity value of rice bran extract with variation of  solvents  and  extraction  times.  Rice  bran  extracts  were  tested  its  toxicity  by
BSLT method and its secondary metabolite by phytochemical test with reagents. Mortality data of shrimp larvae was analyzed by probit to determine LC 50 values. Yield of ethanolic extract of rice  bran for E1-20, E1-25 and E1-30 samples was 18.159,  19.132  and  18.280%,  respectively.  Rice  bran  extracts  by  ethyl  acetate solvent  (E2)  and  n-hexane  (E3)  gave  different  yields  such  as  8.302%  (E2-20), 7.282%  (E2-25),  9.18%  (E2-30),  7.815%  (E3-20),  7.125%  (E3-25),  and  7.279% (E3-30). All of rice bran extracts contained flavonoids, steroids and triterpenoids. LC 50 values in ethanolic extract of rice bran for E1-20, E1-25 dan E1-30 samples were 613.258, 673.210 and 2217.255 ppm, respectively.   Toxicity (LC 50 ) values of ethyl acetate extract of rice bran were 1161.298 ppm (E2-20), 1170.774 ppm (E2- 25) and 701.532 ppm (E2-30), while toxicity (LC 50 ) values of n-hexane extract of rice bran were 592.901 ppm (E3-20), 617.425 ppm (E3-25) and 695.198 ppm (E3- 30).
Keywords: Rice bran, secondary metabolite, toxicity, ultrasonic method
Bekatul diekstrak menggunakan metode ultrasonik dengan variasi pelarut (etanol, etil  asetat  dan  n-heksana)  dan  lama  ekstraksi  (20,  25  dan  30  menit).  Tujuan penelitian  ini  adalah  mengetahui  nilai  toksisitas  ekstrak  bekatul  dengan  variasi pelarut dan lama ekstraksi. Ekstrak bekatul diuji kemampuan toksisitas terhadap larva  udang  dengan  metode  BSLT  dan  diuji  fitokimia  dengan  reagen.  Data kematian  larva  udang  dianalisis  dengan  analisis  probit  untuk  menentukan  nilai LC 50 . Rendemen ekstrak etanol bekatul yang diperoleh pada sampel E1-20, E1-25
dan  E1-30  masing-masing  sebesar  18,159;  19,132;  dan  18,280%.  Adapun rendemen  ekstrak  etil  asetat  dan  n-heksana  bekatul  sebesar  8,302%  (E2-20),
7,282%  (E2-25),  9,18%  (E2-30),  7,815%  (E3-20),  7,125%  (E3-25)  dan  7,279% (E3-30).  Senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung  pada  masing-masing ekstrak adalah flavonoid, steroid dan triterpenoid. Nilai LC 50 ekstrak etanol pada masing-masing  sampel  E1-20,  E1-25  dan  E1-30  adalah  613,258;  673,210  dan 2217,255 ppm. Ekstrak etil asetat bekatul pada sampel E2-20, E2-25 dan E2-30 memberikan  nilai  toksisitas  dengan  LC 50 sebesar  1161,398;  1170,774  dan 701,532  ppm,  berturut-turut.  Nilai  toksisitas  (LC 5 0 )  ekstrak  n-heksana  pada sampel  E3-20,  E3-25  dan  E3-30  adalah  592,901;  617,425  dan  695,198  ppm, berturut-turut.
Kata kunci: Bekatul, metabolit sekunder, toksisitas, metode ultrasonik

## 1. Pendahuluan
Bekatul adalah hasil samping dari pengolahan padi yang umumnya digunakan untuk makanan ternak. Bekatul yang dihasilkan dari penggilingan padi dapat mencapai 8-12% dari jumlah total padi. Hasil sampingan lainnya adalah 15-20% sekam yang merupakan kulit terluar dan 3% menir [1]. Bekatul mangandung komponen bioaktif atau senyawa fitokimia yang  tinggi  seperti  tokoferol,  tokotrienol, γ -oryzanol  [2],  asam  fenolat  [3]  dan  karotenoid  [4].  Hasil  pengujian  fitokimia ekstrak bekatul menghasilkan senyawa fenolik, flavonoid, triterpenoid, alkanoid dan saponin menggunakan pelarut butanol, etil asetat dan n-heksana [5].
Pemilihan  metode  ekstraksi  penting  dilakukan  karena  hasil  ekstraksi  dapat  mencerminkan  tingkat  keberhasilan metode yang digunakan [6]. Metode maserasi merupakan metode yang umum digunakan untuk mengekstrak senyawa aktif dari bahan alam termasuk sampel bekatul. Salah satu parameter keberhasilan ekstraksi adalah persentase rendemen. Nilai rendemen dipengaruhi oleh jenis pelarut yang digunakan. Widarta dkk. [7] mengekstrak bekatul beras lokal dengan metode  maserasi  menghasilkan  rendemen  8,37-9,99%  dengan  pelarut  etanol.  Ekstraksi  bekatul  beras  ketan  hitam memberikan rendemen masing-masing sebesar 7.9% dan 9.5% dengan campuran pelarut n-heksana dengan metanol dan kloroform dengan metanol [8].
Optimasi ekstraksi bekatul dapat dilakukan dengan metode ultrasonik. Metode ini memanfaatkan gelombang akustik untuk memecah dinding sel [6]. Penelitian yang dilakukan oleh  Dewi [9] adalah mengekstrak bekatul dan mendapatkan rendemen sebesar 18,32% dengan pelarut n-heksana menggunakan metode ultrasonik. Penelitian tersebut menunjukkan bahwa  metode  ultrasonik  memiliki  kemampuan  untuk  mengekstrak  bekatul  lebih  baik  dibandingkan  dengan  maserasi. Pengunaan  metode  ultrasonik  dalam  ekstraksi  bekatul  pada  penelitian  ini  diharapkan  dapat  meningkat  nilai  rendemen yang diperoleh.
Aplikasi  pemanfaatan  ekstrak  bekatul  di  bidang  kesehatan  cukup  luas.  Ekstrak  minyak  bekatul  dapat  berfungsi sebagai antioksidan [10] dan antikanker [11]. Pengujian awal terhadap ekstrak bekatul dilakukan dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT). Metode ini umum digunakan untuk menguji aktivitas suatu senyawa menggunakan hewan uji berupa larva udang Artemia salina L. [12]. Tujuan penelitian ini untuk mengetahui pengaruh variasi pelarut dan lama ekstrak  bekatul  pada  larva  udang  dan  mengidentifikasi  senyawa  metabolit  sekunder  yang  terkandung  dalam  ekstrak bekatul.

## 2. Bahan dan Metode

## 2.1. Bahan
Bekatul  yang  digunakan  berasal  dari  beras  putih  varietas  Pertiwi  di  Desa  Ketetang,  Bangkalan.  Pelarut  yang digunakan  untuk  proses  ekstraksi  adalah  etanol  96%,  etil  asetat,  dan  n-heksana.  Bahan  yang  digunakan  untuk  uji toksisitas adalah dimetil sulfoksida (DMSO), ragi roti, air laut, dan larva udang (Artemia salina L.). Bahan kimia lain yang diperlukan adalah reagen Dragendroff, reagen Meyer, asam klorida 2%, metanol 50%, serbuk Mg, asam klorida pekat, kloroform, asam asetat anhidrat, asam sulfat pekat, asam klorida 1 N, FeCl 3 1% dan plat silika gel F 254 .

## 2.2. Persiapan Sampel
Bekatul  hasil  penggilingan  padi  sebanyak  100  g  dibersihkan  dan  diayak  dengan  ukuran  40  mesh.  Bekatul  yang sudah seragam ukurannya ditentukan kadar air berdasarkan prosedur AOAC [13].

## 2.3. Ekstraksi dengan Metode Ultrasonik
Lima  gram  bekatul  dimasukkan  dalam  erlenmeyer  berbeda  yang  sudah  dilabel.  Kemudian,  masing-masing erlenmeyer  dimasukkan  50  mL  pelarut  etanol,  etil  asetat  dan  n-heksana  atau  dengan  perbandingan  sampel:pelarut sebanyak  1:10.  Sampel  dimasukkan  dalam  ultrasonic  bath  dengan  frekuensi  20  kHz  pada  suhu  kamar.  Variasi  waktu yang digunakan adalah 20, 25 dan 30 menit. Ekstrak bekatul disaring dan filtrat yang diperoleh dievaporasi menggunakan rotary  vacuum  evaporator  pada  suhu  60°C  dan dihitung  rendemennya  [14]. Total  sampel  ekstrak  bekatul  berjumlah  9 yang diberi kode E1-20, E1-25, dan E1-30 untuk pelarut etanol, E2-20, E2-25, E-30 untuk pelarut etil asetat dan E3-20, E3-25, E3-30 untuk pelarut n-heksana.

## 2.4. Uji Toksisitas terhadap Larva Udang
Ekstrak bekatul sebanyak 100 mg dilarutkan menggunakan tiga pelarut berbeda (etanol, etil asetat, dan n-heksana) sebanyak  10  mL.  Larutan  tersebut  diambil  sebanyak  1000,  500,  200,  100,  50,  dan  25  µL,  kemudian  dimasukkan  ke dalam botol vial dan pelarutnya diuapkan hingga kering. Selanjutnya, ekstrak kering sampel ditambah 100 µL DMSO, setetes larutan ragi roti, dan 2 mL air laut. Campuran dikocok sampai ekstrak dapat larut dalam air laut dan dipindahkan ke  dalam  labu  ukur  10  mL  dan  dimasukkan  10  ekor  larva  udang.  Larutan  tersebut  ditandabataskan  dengan  air  laut
sampai volumenya menjadi 10 mL. Konsentrasi akhir masing-masing larutan menjadi 1000, 500, 200, 100, 50, dan 25 ppm.
Kontrol digunakan sebagai pembanding dibuat dengan cara yang sama dengan prosedur diatas akan tetapi tanpa penambahan ekstrak. Pengamatan dilakukan selama 24 jam terhadap kematian larva udang. Perhitungan LC 50 dilakukan menggunakan analisis probit menggunakan SPSS 20 dengan tingkat kepercayaan 95% [15].

## 2.6. Uji Fitokimia pada Ekstrak Bekatul

## 2.6.1. Alkaloid
Ekstrak  kasar  bekatul  dimasukkan  dalam  tabung  reaksi  sebanyak  1  mg  dan  ditambah  0,5  mL  asam  klorida  2%. Campuran tersebut dibagi dalam dua tabung dimana tabung I ditambahkan 2-3 tetes reagen Dragendorff dan tabung II ditambahkan  2-3  tetes  reagen  Meyer.  Apabila  pada  tabung  I  terbentuk  endapan  jingga  dan  pada  tabung  II  terbentuk endapan kekuning-kuningan maka sampel mengandung alkaloid [16].

## 2.6.2. Flavonoid
Ekstrak kasar bekatul dimasukkan dalam tabung reaksi sebanyak 1 mg dan dilarutkan dalam 1-2 mL metanol panas 50%.  Setelah  itu,  ditambah  serbuk  Mg  dan  4-5  tetes  asam  klorida  pekat.  Larutan  berwarna  merah  atau  jingga  yang terbentuk menunjukkan adanya flavonoid [16].

## 2.6.3. Triterpenoid dan Steroid
Ekstrak kasar bekatul dimasukkan dalam tabung reaksi sebanyak 1 mg dan dilarutkan dalam 0,5 mL kloroform, lalu ditambah dengan 0,5 mL asam asetat anhidrat. Campuran ini selanjutnya ditambah dengan 1-2 mL asam sulfat pekat melalui  dinding  tabung  tersebut.  Cincin  kecoklatan  atau  violet  pada  perbatasan  dua  pelarut  menunjukkan  adanya triterpenoid, sedangkan terbentuknya warna hijau kebiruan menunjukkan adanya steroid [16].

## 2.6.4. Saponin
Ekstrak kasar bekatul dimasukkan ke dalam tabung reaksi sebanyak 1 mg dan ditambah air (1:1) sambil dikocok selama  1  menit.  Apabila  menimbulkan  busa  ketika  ditambahkan  asam  klorida  1  N  dan  busa  yang  terbentuk  dapat bertahan selama 10 menit dengan ketinggian 1-3 cm maka ekstrak positif mengandung saponin [16].

## 2.6.5. Tanin
Ekstrak kasar bekatul masukkan ke dalam tabung reaksi sebanyak 1 mg dan ditambahkan dengan 2-3 tetes larutan FeCl 3 1%. Jika larutan menghasilkan warna hijau kehitaman atau biru tinta maka ekstrak bekatul tersebut mengandung tanin [16].

## 2.7. Pemisahan Senyawa Aktif dengan Kromatografi Lapis Tipis Analitik (KLTA)
Pemisahan dengan KLTA dilakukan terhadap golongan senyawa yang positif terhadap uji fitokimia dan memiliki nilai LC 50 paling  rendah  berdasarkan  uji  toksisitas.  Pemisahan  dilakukan  dengan  plat  silika  gel  F 254 yang  sudah  diaktifkan dengan pemanasan pada suhu 100°C selama 30 menit. Masing-masing plat memiliki ukuran 1x10 cm. Ekstrak bekatul ditotolkan sebanyak 10 kali pada jarak 1 cm dari tepi bawah plat dengan pipa kapiler. Kemudian, plat diletakkan dalam chamber yang sudah berisi eluen campuran etil asetat dan n-heksana (2:8) yang sudah dijenuhkan selama 1 jam. Noda hasil pemisahan diamati di bawah sinar UV pada panjang gelombang 366 nm [17].

## 2.8. Pemisahan Senyawa Aktif dengan Kromatografi Lapis Tipis Preparatif (KLTP)
Pemisahan  dengan  KLTP  menggunakan  plat silika  gel  F 254 dengan  ukuran  10x20  cm.  Ekstrak  bekatul  ditotolkan sepanjang  plat  pada  jarak  1  cm  dari  garis  bawah.  Selanjutnya,  plat  dikeringanginkan  dan  ekstrak  ditotolkan  kembali hingga  10  kali  penotolan.  Eluen  yang  digunakan  adalah  campuran  etik  asetat:n-heksana  dengan  komposisi  2:8.  Elusi dihentikan ketika eluen sampai pada garis batas. Plat hasil elusi dikeringkan dan noda yang terbentuk diamati dengan lampu UV pada panjang gelombang 366 dan 254 nm serta dihitung nilai Rf-nya [17].

## 3. Hasil dan Pembahasan

## 3.1. Persiapan Sampel
Pada  penelitian  ini  menggunakan  bekatul  beras  putih  dengan  ukuran  40 mesh.  Penyeragaman ukuran  bertujuan untuk mempermudah kelarutan komponen bioaktif. Adapun kadar air pada sampel bekatul sebesar 8,069% (b/b). Kadar air tersebut cukup baik untuk dilakukan proses ekstraksi secara maksimal dan dapat disimpan dalam jangka waktu yang cukup  panjang.  Kadar  air  yang  kurang  dari  10%  (b/b)  dapat  menghentikan  reaksi  enzimatis  yang  dapat  menguraikan
senyawa aktif [18]. Semakin kecil kadar air suatu sampel, maka semakin mudah pelarut untuk mengekstrak komponen senyawa aktif, sehingga akan diperoleh rendemen semakin besar [19].

## 3.2. Ekstraksi Bekatul
Ekstraksi dilakukan menggunakan metode ultrasonik dengan pelarut etanol, etil asetat dan  n-heksana dengan lama ekstraksi yaitu 20, 25 dan 30 menit. Ketiga pelarut memiliki sifat kepolaran yang berbeda-beda dengan variasi lama ekstraksi yang bertujuan untuk mengoptimalkan hasil ekstraksi. Hasil rendemen ekstraksi ultrasonik ditunjukkan pada Tabel 1.
Berdasarkan  Tabel  1,  nilai  rendemen  yang  diperoleh  bervariasi  bergantung  jenis  pelarut  dan  lama  ekstraksi. Hasil  penelitian  menunjukkan  nilai  rendemen  tertinggi  pada  ekstrak  bekatul  diperoleh  dengan  pelarut  etanol  yaitu sebesar 18,159-19,132%. Hal ini mengindikasikan bahwa senyawa yang ada pada pada ekstrak bekatul cenderung memiliki polaritas yang sama dengan etanol. Adapun nilai rendemen ekstrak bekatul dengan pelarut etil asetat dan n- heksana masing-masing sebesar 7,282-9,180% dan 7,125-7,815%. Variasi lama ekstraksi tidak banyak berpengaruh terhadap hasil rendemen. Hal ini ditunjukkan dengan nilai rendemen yang tidak berbeda jauh.
Tabel 1. Rendemen Ekstrak Bekatul Sampel Rendemen (%) E1-20 18,159 E1-25 19,132 E1-30 18,280 E2-20 8,302 E2-25 7,282 E2-30 9,180 E3-20 7,815 E3-25 7,125 E3-30 7,279

## 3.2. Uji Toksisitas terhadap Larva Udang
Tingkat  toksisitas  ekstrak  bekatul  diukur  menggunakan  parameter  LC 50 (Lethal  Concentration  50%).  LC 50 merupakan nilai dosis dimana senyawa dapat membunuh 50% dari hewan uji. Proses kematian larva udang disebabkan oleh  senyawa  metabolit  sekunder  yang  bersifat  toksik.  Masuknya  metabolit  sekunder  dalam  larva  udang  dapat mengganggu metabolisme tubuh [12]. Nilai LC 50 dari sembilan sampel ekstrak bekatul terangkum pada Tabel 2.

## Tabel 2. Hasil Uji Toksisitas Menggunakan Metode BSLT
Sampel LC 50 (ppm) E1-20 613,258 E1-25 673,210 E1-30 2217,255 E2-20 1161,398 E2-25 1170,774 E2-30 701,532 E3-20 592,901 E3-25 617,425 E3-30 695,198
Berdasarkan hasil uji toksisitas pada Tabel 2, menunjukkan E3-20 (hasil ekstraksi menggunakan n-heksana selama 20  menit)  memiliki  nilai  LC 50 terendah.  Semakin  rendah  nilai  LC 50 maka  kemampuan  ekstrak  dalam  membunuh  larva udang semakin baik atau memiliki toksisitas tinggi [20]. Lama waktu ekstraksi juga mempengaruhi nilai LC 50 dimana nilai LC 50 ekstrak bekatul cenderung meningkat dengan bertambahnya lama waktu ekstraksi. Nilai toksisitas ekstrak bekatul dengan pelarut etanol meningkat seiring meningkatnya lama ekstraksi. Sedangkan pada pelarut etil asetat, semakin lama waktu  ekstraksi,  nilai  LC 50 ekstrak  bekatul  semakin  kecil. Pada  ekstrak  bekatul  dengan  n-heksana,  nilai  LC 50 sampel relatif tidak berubah dengan peningkatan waktu ekstraksi, hal ini menandakan bahwa waktu ekstraksi tidak berpengaruh terhadap senyawa aktif. Berdasarkan lama ekstraksi, ekstrak bekatul dengan pelarut n-heksana menit 20 (E3-20) bersifat lebih toksik dengan nilai LC 50 sebesar 592,901 ppm.

## 3.3. Uji Kandungan Senyawa Aktif
Hasil uji fitokimia pada ekstrak bekatul dengan pelarut etanol, etil asetat dan n-heksana menunjukkan semua ekstrak  bekatul  mengandung  senyawa  triterpenoid  dan  steroid  (Tabel  3).  Senyawa  steroid  ditandai  dengan terbentuknya  warna  hijau  kekuningan,  sedangkan  senyawa  triterpenoid  ditandai  dengan  terbentuknya  cincin kecoklatan atau violet. Pada penelitian ini, sampel bekatul yang digunakan berasal dari beras putih varietas Pertiwi berasal dari Desa Tumpang, Malang. Penelitian lain juga menyebutkan bahwa ekstrak bekatul mengandung senyawa steroid dan triterpenoid [17]. Bekatul dari padi beras putih varietas Cempo Ireng (Desa Sayegan, Yogyakarta), Woja Laka (Kepanjen, Malang), Toraja (Bandar Lampung, Lampung) dan IR64 (Desa Minggiur, Yogyakarata) mengandung senyawa  aktif  fenol,  flavonoid,  terpenoid,  dan  steroid  [21].  Kandungan  senyawa  aktif  dalam  bekatul  bervariasi bergantung varietas dan daerah penanaman padi.

## Tabel 3. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Bekatul
Sampel Alkaloid Flavonoid Steroid Triterpenoid Tanin Saponin E1-20 - - + ++ - - E1-25 - - ++ ++ - - E1-30 - - + ++ - - E2-20 - - + ++ - - E2-25 - - + + - - E2-30 - - ++ + - - E3-20 - - + + - - E3-25 - - + + - - E3-30 - - ++ + - - Tanda “+” menunjukkan sampel mengandung metabolit sekunder dengan warna hasil uji  lebih muda, tanda
“++“ menunjukkan sampel mengandung metabolit sekunder dengan warna hasil uji lebih pekat, dan tanda “- “ menunjukkan sampel tidak mengandung metabolit sekunder.

## 3.4. Pemisahan Senyawa Aktif dengan KLTA
Pemisahan golongan senyawa aktif menggunakan KLTA dengan silika yang dilapiskan pada plat aluminium sebagai fasa diam dan campuran n-heksana:etil asetat (8:2) sebagai fasa gerak. Hasil pemisahan KLTA dibawah lampu UV pada panjang  gelombang  366  nm  ditunjukkan  pada  Gambar  1. Hasil  pemisahan  pada  ekstrak  n-heksana  menunjukkan terbentuknya 5  noda  dengan nilai  R f yang  berbeda  (0,0275-0,65)  (Tabel  4). Perbedaan  ini  karena  adanya  perbedaan struktur  dan  distribusi  senyawa  aktif  terhadap  fasa  gerak  dan  fasa  diam.  Senyawa  yang  memiliki  nilai  distribusi  yang besar maka akan tertahan dalam fasa diam sehingga memiliki nilai  R f yang kecil. Adapun senyawa yang memiliki nilai distribusi kecil akan terdistribusi dalam fasa gerak sehingga nilai R f senyawa tersebut besar.
(a)                             (b)
Gambar 1. (a) Noda pada plat, dan (b) Ilustrasi pola pemisahan
Perbedaan  warna  noda  dikarenakan  setiap  senyawa  memiliki  panjang  gelombang  yang  berbeda  sehingga absorbansi  juga  berbeda.  Pada  panjang  gelombang  366  nm,  adanya  flavonoid  ditandai  dengan  warna  biru,  steroid ditandai dengan warna hijau dan triterpenoid ditandai dengan warna merah. Pada uji fitokimia, golongan senyawa bersifat polar  seperti  flavonoid  tidak  tampak.  Hal  ini  dikarenakan  uji  fitokimia  merupakan  tahapan  awal  untuk  mengidentifikasi kandungan senyawa pada sampel sehingga diperlukan uji lanjut.
Tabel 4. Hasil Identifikasi Ekstrak n-Heksana dengan Lampu UV 366 nm Ekstrak Jumlah Noda R f Warna Dugaan Senyawa E3-20 5 0,275 Merah Triterpenoid 0,3375 Merah Triterpenoid 0,4 Biru Flavonoid 0,55 Hijau Steroid 0,6125 Biru Flavonoid E3-25 5 0,275 Merah Triterpenoid 0,35 Merah Triterpenoid 0,3875 Biru Flavonoid 0,55 Hijau Steroid 0,6125 Biru Flavonoid E3-30 5 0,2875 Merah Triterpenoid 0,375 Merah Triterpenoid 0,4125 Biru Flavonoid 0,5875 Hijau Steroid 0,65 Biru Flavonoid

## 3.5. Pemisahan Senyawa Aktif dengan KLTP
KLTP  dilakukan  untuk  mendapatkan  isolat  senyawa  aktif  pada  plat  berukuran  10x20  cm.  Elusi  dilakukan menggunakan  eluen  etil  asetat:n-heksana  (2:8).  Hasil  pemisahan  KLTP  terhadap  ekstrak  n-heksana  bekatul ditunjukkan pada Gambar 2, 3, dan 4. Pemisahan KLTP pada ekstrak n-heksana pada lama ekstraksi 20 menit (E3- 20) menghasilkan 6 noda, sedangkan ekstrak n-heksana pada lama ekstraksi 25 menit (E3-25) dan 30 menit (E3-30) menghasilkan 7 noda (Tabel 5).
(a)                              (b)                                 (c) Gambar 2. Pemisahan sampel E3-20 pada (a) 366 nm, (b) 254 nm dan (c) Ilustrasi pola pemisahan
(a)                              (b)                                  (c)
Gambar 3. Pemisahan sampel E3-25 pada (a) 366 nm, (b) 254 nm dan (c) Ilustrasi pola pemisahan
(a)                             (b)                               (c)
Gambar 4. Pemisahan sampel E3-30 pada (a) 366 nm, (b) 254 nm dan (c) ilustrasi pola pemisahan
Tabel 5. Hasil Pemisahan KLTP Ekstrak Bekatul dengan n-Heksana
Sampel R f Warna Noda Dugaan Senyawa E3-20 0,5444 Merah Triterpenoid 0,6222 Biru Flavonoid 0,6778 Merah Triterpenoid 0,7333 Hijau Steroid 0,8333 Hijau Steroid 0,9243 Biru Flavonoid E3-25 0,3167 Merah Triterpenoid 0,5278 Hijau Steroid 0,6056 Merah Triterpenoid 0,6889 Hijau Steroid 0,7333 Hijau Steroid 0,8056 Biru Flavonoid 0,85 Biru Flavonoid E3-30 0,5444 Merah Triterpenoid 0,4778 Merah Triterpenoid 0,6444 Biru Flavonoid 0,7056 Hijau Steroid 0,7556 Biru Flavonoid 0,8278 Biru Flavonoid 0,8722 Hijau Steroid
Berdasarkan Tabel  5, ekstrak n-heksana pada sampel bekatul mengandung senyawa triterpenoid, steroid dan flavonoid. Pelarut n-heksana yang bersifat non-polar mampu mengekstrak senyawa-senyawa yang bersifat non-polar seperti sterol dan terpenoid [18]. Oleh karena itu, pada pemisahan KLTP ini pelarut n-heksana munculnya senyawa steroid  ditandai  dengan  warna  hijau  dan  merah,  sedangkan  triterpenoid  berwarna  merah.  Steroid  dapat  dideteksi dengan sinar UV berupa warna hijau dan flavonoid berwarna biru [19].

## 4. Kesimpulan
Ekstrak n-heksana bekatul dengan lama ekstraksi 20 menit memberikan nilai toksisitas terbaik dengan LC 50 sebesar 592,901 ppm. Ekstrak n-heksana bekatul setelah dilakukan pemisahan dengan KLT mengandung senyawa aktif golongan flavonoid, steroid dan triterpenoid.

## Daftar Pustaka
[1] Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Pascapenen Pertanian, “Mengolah Dedak Menjadi Minyak (Rice Bran Oil),” Warta Penelitian dan Pengembangan Pertanian, vol. 29, no.4, pp. 8-10, 2007.
[2] M.-H Chen & C. J. Bargmen, “A Rapid Procedure for Analysing Rice Bran Tocopherol, Tocotrienol, and γ-Oryzanol Contents,” Journal of Food Composition and Analysis, vol. 18, no. 2-3, pp. 139-151, 2005.
[3] Faizah,  F.  Kusnandar,  &  S.  Nurjanah,  ”Senyawa  Fenolik,  Oryzanol,  dan  Aktivitas  Antioksidan  Bekatul  yang Difermentasi dengan Rhizopus oryzae,” Jurnal Teknologi dan Industri Pangan, vol. 31, no.1, pp. 86-94, 2020.
[4] A. J. Henderson, C. A. Ollila, A. Kumar, E. C. Borresen, K. Raina, R. Agarwal, & E. P. Ryan, “Chemopreventive Properties of Dietary Rice Bran: Current Status and Future Prospects,” Advances in Nutrition, vol. 3, no. 5, pp. 643- 653, 2012.
[5] E. M. Moko, H. Purnomo, J. Kusnandi, & F. G. Ijong, “Phytochemical Content and Antioxidant Properties of Colored and Non Colored Varieties of Rice Bran from Minahasa, North Sulawesi, Indonesia,” International Food Research Journal, vol. 21, no. 3, pp. 1053-1059, 2014.
[6] M.  N.  Abubacker  &  T.  Deepalakshmi,  “In  Vitro  Antifungal  Potentials  of  Bioactive  Compound  Methyl  Ester  of Hexadecanoic Acid Isolated from Annona muricata Linn. Leaves,” Biosciences Biotechnology Research Asia, vol. 10, no. 2, pp. 879-884, 2013.
[7] I.  W.  R.  Widarta,  K.  A.  Nocianitri,  &  L.  P.  I.  P.  Sari,  “Ekstraksi  Komponen  Bioaktif  Bekatul  Beras  Lokal  dengan Beberapa Jenis Pelarut,” Jurnal Aplikasi Teknologi Pangan, vol. 2, no. 2, pp. 75-79, 2013.
[8] M. Iqbal, “Uji Aktivitas dan Identifikasi Senyawa Antioksidan dari Ekstrak Minyak Bekatul Beras Ketan Hitam (Oryza sativa Glutinosa),” Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2016.
[9] I. G. A. D. P. Dewi, ”Kajian Rasio Bahan dengan Pelarut dan Waktu Ekstraksi terhadap Karakteristik Minyak Bekatul Beras Merah dengan Metode Ultrasonik,” Skripsi, Universitas Udayana, Bali, 2016.
[10] P. Rana, S. Vadhera, & G. Soni, “In vivo Antioxidant Potential of Rice Bran Oil (RBO) in Albino Rats,” Indian Journal of Physiology and Pharmacology, vol. 48, no. 4, pp. 428-436, 2004.
[11] A. Ghasemzadeh, H. Z. E. Jaafar, A. S. Juraimi, & A. T. Meigooni, “Comparative Evaluation of Different Extraction Techniques and Solvents for the Assay Phytochemicals and Antioxidant Activity of Hashemi Rice Bran,” Molecules Journal, vol. 20, pp. 10822-10838, 2015.
[12] B.  N.  Meyer,  N.  R.  Ferrigni,  J.  E.  Putnam,  L.  B.  Jacobsen,  D.  E.  Nichols,  &  J.  L.  McLaughlin,  “Brine  Shrimp:  A Convenient General Bioassay for Active Plant Constituents,” Planta Medica, vol. 45, no. 5, pp. 31-34, 1982.
[13] AOAC, Official Methods of Analysis, 18 th Ed. Arlington: Association of Official Analytical Chemists, 2005.
[14] R.  Hendryani,  M.  Lutfi,  &  L.  C.  Hawa,  “Ekstraksi  Antioksidan  Daun  Sirih  Merah  Kering  (Piper  crotatum)  dengan Metode  Pra-Perlakuan  Ultrasonic  Assisted  Extraction  (Kajian  Perbandingan  Jenis  Pelarut  dan  Lama  Ekstraksi),” Jurnal Bioproses Komoditas Tropis, vol. 3, no. 2, pp. 33-38, 2015.
[15] N. Inayah, R. Ningsih, & T. K. Adi, “Uji Toksisitas dan Identifikasi Awal Golongan Senyawa Aktif Ekstrak Etanol dan n- Heksana Teripang Pasir (Holothuria scabra) Kering Pantai Kenjeran Surabaya,” ALCHEMY, vol. 2, no. 1, pp. 92-100, 2012.
[16] J.  B.  Harborne,  Metode  Fitokimia:  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan.  Bandung:  Institut  Teknologi Bandung, 1987.
[17] S. T. Ulfa, “Identifikasi dan Uji Aktivitas Senyawa Antioksidan dan Bekatul dengan Menggunakan Variasi Pelarut,” Skripsi, Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim, Malang, 2016.
[18] Departemen  Kesehatan  Republik  Indonesia,  Farmakope  Herbal  Indonesia.  Jakarta:  Departemen  Kesehatan Republik Indonesia, 2008.
[19] L. K. Dewi, “Kajian Ekstrak Umbi Gadung (Dioscorea hispida), Biji Rerak (Sapindus rarak) dan Biji Sirsak (Annona muricata L.) sebagai Bahan Pengawet Alami Kayu,” Skripsi, Institut Pertanian Bogor, Bogor, 2007.
[20] J. L. McLaughlin, C. J. Chang, & D. L. Smith, “Bench - Top Bioassays for the Discovery of Bioactive Natural Products an Update” in Studies in Natural Products Chemistry. Amsterdam: Elsevier, 1991.
[21] R. M. Rukmana, N. P. Soesilo, Rumiyati, & R. Pratiwi, “The Effect of Ethanolic Extract of Black and White Rice Bran (Oryza sativa L.) on Cancer Cells, “ Indonesian Journal of Biotechnology, vol. 21, no.1, pp. 63-69, 2016.