## KATA PENGANTAR
Dengan penuh rasa syukur kehadirat Allah SWT, Media Farmasi Vol. 12 No. 1 Tahun 2015 telah terbit.
Pada edisi ini, Jurnal Media Farmasi menyajikan 11 artikel yang kesemuanya merupakan hasil penelitian. Enam artikel dari luar Fakultas Farmasi UAD membahas, (1) Formulasi dan evaluasi masker wajah peel-off yang mengandung kuersetin (2)  Pengaruh polivinil pirolidon (PVP) dalam absorpsi piroksikam (3) Uji perbandingan aktivitas antijamur Pityrosporum ovale dari kombinasi ekstrak etanol buah belimbing wuluh dan daun sirih (4) Aktivitas inhibisi α-amilase ekstrak karagenan dan senyawa polifenol (5) Uji antihipertensi infus kombinasi  biji dan rambut jagung (6) Layanan pesan singkat pengingat meningkatkan kepatuhan minum obat. Lima artikel dari peneliti Fakultas Farmasi UAD yang membahas tentang : (1) Formulasi emulgel minyak biji bunga matahari (2) Aktivitas antifungi fraksi etil asetat  ekstrak daun pacar kuku  (3) Karakteristik genetik Actinomycetes (4) Simvastatin sebagai hepatoprotektor (5) Faktor yang diprediksi berpengaruh terhadap pengobatan sendiri .
Harapan kami, jurnal ini dapat bermanfaat  bagi pembaca atau menjadi referensi peneliti lain. Kritik dan saran membangun, senantiasa kami terima dengan tangan terbuka.

## AKTIVITAS INHIBISI α-AMILASE EKSTRAK  KARAGENAN
DAN SENYAWA POLIFENOL DARI Eucheuma denticulatum
INHIBIT α -AMILASE ACTIVITY OF CARRAGEENAN AND POLYPHENOLS EXTRACT FROM Eucheuma denticulatum
Agung Giri Samudra 1 , Agung Endro Nugroho 2 , Amir Husni 3
Akademi Farmasi Al-Fatah 1 ,
Bagian Farmakologi Farmasi Universitas Gajah Mada Yogyakarta 2 , Mikrobiologi Perikanan Universitas Gajah Mada Yogyakarta 3 , Email: agunggirisamudra@gmail.com

## ABSTRAK
Penelitian  ini  untuk mengetahui kemampuan karagenan dan polifenol dari Eucheuma denticulatum terhadap  karbohidrat  enzim  α-amilase secara in  vitro . Ekstrasi karagenan menggunakan larutan kalium hidroksida  0,5%.  Polifenol diekstraksi dengan 50% (v/v) metanol.  Identifikasi karagenan ditentukan dengan Fourier Transform Infrared (FTIR). Kandungan total fenol ekstrak ditentukan menurut metode Folin-Ciocalteu. Kemudian hasil ekstraksi diuji daya hambat aktivitas  α-amilase.  Ekstrak karagenan dan polifenol mempunyai kemampuan menghambat aktivitas IC 50 α-amilase yaitu 12,16 dan 11,64 mg/mL. Ekstrak Polifenol memiliki daya hambat α-amilase  lebih tinggi dari  pada  ekstrak karagenan.
Kata Kunci: Eucheuma denticulatum, karagenan , polifenol, α-amilase.

## ABSTRACT
Carrageenan and polyphenols extract of Eucheuma denticulatum were tested for their ability to inhibit carbohydrate hydrolysis α -amylase enzymes in vitro methods. Extraction of carrageenan was using 0.5% KOH solution. Polyphenols were extracted from both marine algae by using 50% (v/v). Identification of carrageenan was determined by Fourier Transform Infrared (FTIR) spectroscopy. Total polyphenols contents from the extracts were determined according to the Folin-Ciocalteu method. Carrageenan and polyphenols  extracts from Eucheuma denticulatum showed the ability to inhibit the activity of α-amylase with an IC50 12.16 and 11.64 mg / mL. . Polyphenols extract more effective to inhibit α-amylase than carrageenan extract.
Keyword: Eucheuma denticulatum, carrageenan, polyphenols, α-amylase.

## PENDAHULUAN
Diabetes melitus merupakan suatu penyakit metabolik dengan karakteristik hiperglikemia yang terjadi karena insufisiensi fungsi insulin dapat disebabkan oleh gangguan atau penurunan sekresi insulin atau penurunan sensitivitas insulin, atau keduanya. Salah satu tujuan utama terapi medis bagi pasien diabetes meliputi pengontrolan kadar glukosa darah mendekati normal dengan cara pemberian obat antidiabetik oral dan injeksi insulin. Namun, penggunaan obat antidiabetik masih memiliki efek samping, serta harga obat antidiabetik oral dan insulin tergolong mahal dan kurang terjangkau oleh masyarakat. Alasan ini,  peneliti  melakukan  penelitian pada    penggunaan    sumber alami yang berasal dari tumbuhan sebagai salah satu manejemen alternatif dalam menangani diabetes melitus.
Alga laut jenis Eucheuma denticulatum merupakan jenis-jenis yang banyak ditemukan dan cukup melimpah di Indonesia.  Polisakarida dari alga laut Eucheuma
denticulatum yaitu karagenan,
Karagenan,  alginat dan polifenol dapat menurunkan kadar glukosa darah pada hewan uji  (Wikanta dkk., 2008;  Nwosu  dkk., 2011).  Hingga saat ini, belum ditemukan sumber informasi penelitian tentang senyawa karagenan dan polifenol dari alga laut Eucheuma denticulatum yang berkhasiat sebagai penurun kadar glukosa darah dengan mekanisme menghambat  kerja  enzim  α-amilase Berdasarkan hal ini  menarik dilakukan penelitian uji daya inhibisi terhadap  enzim  α-amilase  terhadap senyawa karagenan, dan polifenol alga laut Eucheuma  denticulatum yang diperoleh dari Gunung Kidul Yogyakarta sebagai khasiat penurun kadar glukosa darah.

## METODE PENELITIAN
Ekstraksi karagenan.
Alga laut Eucheuma denticulatum diekstraksi menggunakan larutan KOH 0,5% pada suhu 90 o C selama 1 jam dengan perbandingan pelarut dan bahan baku 20 mL : 1 gr. Endapan disaring kemudian dikeringkan di dalam oven
Aktivitas Inhibisi α-Amilase Agung Giri, dkk 85
dengan suhu 50 º C selama 24 jam ( Ramalingam dkk., 2003).
Ekstraksi polifenol. Alga laut Eucheuma denticulatum dan Sargassum hystrix diekstrak dalam  metanol 50%. Metanol diuapkan dengan menggunakan evaporator rotari vakum (Zhang dkk.,  2006).
Identifikasi karagenan spektra FTIR.
S erbuk sampel yang telah disiapkan dicampurkan dengan KBr untuk dijadikan pelet.  Pengukuran spektrum dilakukan menggunakan spektrometer FTIR. Pengukuran dilakukan dengan transmisi bilangan gelombang 4000-650cm -1 , dengan keceptan scan 0,20 cm/s dan 30 akumulasi pada resolusi 4cm -1
(Gomez and Ruperez, 2011). Pengukuran kandungan total polifenol.
Pengujian ini menggunakan reagen Folin–Ciocalteu’s dan pereaksi natrium karbonat 7,5%. Larutan standar dan sampel masing- masing  diambil  100  μL  letakkan pada tabung reaksi . Larutan ditambahkan reagent folin– ciocalteu’s  sebanyak  500  μL  dan diinkubasi selama 5 menit. Larutan
ditambahkan natrium karbonat sebanyak  400  μL    dan  diinkubasi selama 2 jam pada tempat yang gelap. Pembacaan absorbansi menggunakan spektrofotometri dengan panjang gelombang 750  nm (Zhang dkk., 2006).
Uji  daya  inhibisi  terhadap  enzim  α- amilase.
Masing-masing ekstrak dibuat seri kadar 1,25; 2,5; 5; 10 dan 20 mg/mL. Setiap larutan seri kadar ekstrak di ambil 25 μL ditambahkan ke dalam 25 μL  mengandung  α- amilase dengan konsentrasi 750 U/mL dalam 20 mM bufer fosfat pH 6,9  dan diinkubasi pada suhu 37°C selama 10 menit. Larutan tersebut ditambahkan 25 μL mengandung pati konsentrasi 0,5% dalam 20mM buffer fosfat pH 6,9 dan larutan diinkubasi pada suhu 37°C selama 10 menit. Reaksi dihentikan dengan penambahan larutan 50 μL mengandung 96 mM asam 3,5- dinitrosalisilat (DNS) dan larutan diinkubasi diatas penangas air selama 5 menit. Larutan didinginkan sampai suhu ruangan 37 o C.  Absorbansi dibaca pada panjang gelombang 540 nm (Apostolidis, 2007).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ekstraksi Ekstraksi karagenan dalam penelitian ini menggunakan larutan KOH 0,5% menurut Basmal dkk., (2003) ekstraksi menggunakan larutan KOH 0,5% dapat menghasilkan ekstrak karagenan yang paling tinggi di bandingkan larutan  konsentrasi KOH 0; 2 dan 3,5 %.  Larutan KOH  konsentrasi yang lebih tinggi saat pembentukan karagenan kation K + terperangkap dalam koagulan karagenan sehingga menyebabkan adanya kation K + sulit untuk membentuk karagenan. Faktor lain  adanya  hidrolisis pada larutan KOH  konsentrasi yang lebih tinggi mengakibatkan terbawanya ( leaching-out ) karagenan ke dalam larutan KOH selama proses ekstraksi. Larutan KOH juga dapat menurunkan kadar sulfat dalam karagenan dengan membentuk garam K 2 SO 4 dan asam sulfat (Basmal dkk., 2003).  Hasil rendemen karagenan sebesar  22 ± 2,31% dapat dilihat pada Tabel I.
Ekstraksi  polifenol dari alga laut Eucheuma  denticulatum dan
Sargassum hystrix diekstrak menggunakan metode maserasi. Pelarut ekstraksi yang  digunakan yaitu metanol karena mempunyai kemampuan yang paling baik mengekstrak polifenol.  Hal ini telah dibuktikan oleh penelitian Aryudhani (2007) mengekstrak polifenol alga laut Caulerpa racemosa menggunakan pelarut metanol sebagai pelarut polar menunjukan nilai rendemen polifenol tertinggi sebesar 40,47% dibandingkan pelarut etil asetat sebagai pelarut semipolar  sebesar 2,74% dan n- heksan sebagai pelarut nonpolar sebesar 1,07%.  Pelarut metanol terbukti dapat mengekstrak kandungan fenol total alga Sargassum swartzii dengan hasil yang paling baik sebesar 12,00 dibandingkan pelarut etanol; kloroform; n-heksan berturut-turut sebesar 0,81; 11,05; 6,41 (mg asam galat/ 100g sampel kering) (Sadati dkk., 2011). Rendemen  polifenol Eucheuma denticulatum sebesar 12% dapat dilihat pada Tabel I.
Aktivitas Inhibisi α-Amilase Agung Giri, dkk 87
Tabel I. Rendemen karagenan, polifenol
dari Eucheuma denticulatum Ekstrak Rendemen (%) Karagenan 22 ± 2,31 Polifenol 12 ± 1,52 Keterangan: Nilai yang tertera berupa purata
± SEM (n=3).

## Identifikasi Ekstrak Karagenan
Karagenan standart yang digunakan dalam penelitian ini yaitu tipe κ-karagenan. Hasil spektra yang didapat dari pengujian spektra karagenan standart dan spektra karagenan ekstrak dapat dilihat pada gambar 1 dan tabel II. Band pertama spektrum karagenan standart frekuensi vibrasi daerah 1639,55cm -1 dan spektrum karagenan ekstrak vibrasi frekuensi daerah 1640,2cm -1 , menunjukan adanya ikatan gugus grup karbonil  daerah 1650cm -1 .
Band kedua spektrum karagenan standar frekuensi vibrasi daerah 1265,24cm -1 dan spektrum karagenan ekstrak vibrasi frekuensi daerah 1227,88cm -1 ,  menunjukan adanya ikatan sulfat ester (O-SO 3- )  pada daerah frekuensi 1210-1260 cm -1
t erdapat  di  tipe  κ-,ι-,  dan  λ- karagenan. Band ketiga dan keempat spektrum karagenan standart terdapat vibrasi frekuensi daerah 1069,78cm -1
; 928,64cm -1 dan spektrum karagenan ekstrak terdapat vibrasi frekuensi daerah 1073,02cm -1 ; 930,44cm -1 menunjukan adanya kandungan 3,6- anhidro-D-galaktosa  daerah frekuensi 1070cm - 1;  928-933 cm -1
t erdapat  di  tipe  κ-karagenan.  Band kelima spektrum  karagenan standart terdapat vibrasi frekuensi daerah 847,34cm -1 dan spektrum karagenan ekstrak terdapat vibrasi frekuensi daerah 848,94cm -1 hal ini menunjukan adanya kandungan D- galaktosa-4-sulfat  daerah frekuensi 840-850cm -1 terdapa t di tipe κ- dan ι- karagenan.  Dengan adanya spektrum yang sama antara standar karagenan dengan ekstrak karagenan dapat disimpulkan bahwa senyawa ekstrak identik dengan senyawa standart, tipe karagenan standart dan ekstrak yaitu tipe κ-karagenan.
Kadar Polifenol Eucheuma
denticulatum
Nilai ekivalen asam galat ekstrak polifenol Eucheuma denticulatum alga laut merah 8,62 μg asam galat ekivalen / mg ekstrak. Menurut penelitian Mageid., dkk (2009) kandungan fenol di alga merah Asparagopsis taxiformis
berkisar 9mg katekin ekivalen (CE)/g sampel kering.
Daya inhibisi α-amilase Enzim  α-amilase  dan  α- glukosidase merupakan enzim yang bekerja untuk pencernaan karbohidrat menjadi glukosa. Penghambatan enzim pencernaan akan mengurangi laju pelepasan dan penyerapan glukosa sehingga dapat menekan kejadian hiperglikemia. Inhibisi aktivitas enzim merupakan penurunan kecepatan ataupun kemampuan suatu reaksi enzimatik karena adanya zat yang menghambat kerja  aktifitas  enzim.  Enzim  α- amilase mempunyai spesifitas memotong  ikatan  α-1,4-glikosida pada pati secara acak dan tidak akan memotong cabang yang memiliki ikatan α-1,6-glikosida.
Percobaan ini untuk mengetahui pengaruh sampel terhadap aktivitas penghambatan enzim  α-amilase dalam memecah pati menjadi gula-gula sederhana seperti glukosa dan maltosa. Gula sederhana  yang terbentuk akan bereaksi dengan 3,5-dinitrosalisilat (DNS). Larutan DNS berfungsi untuk menghentikan rekasi dan
mengukur kandungan gula-gula sederhana yang terbentuk dari hasil reaksi enzim α-amilase  sehingga kadarnya dapat diukur secara spektrofotometri.
Inkubasi dalam pengujian aktivitas daya inhibisi terhadap enzim  α-amilase dilakukan 2 kali masing-masing selama 10 menit dengan  suhu 37 o C. Waktu inkubasi yang digunakan 10 menit untuk enzim  α-amilase bereaksi dengan sampel uji. Suhu yang digunakan 37 o C merupakan suhu optimum untuk  enzim  α-amilase  bekerja. Inkubasi pertama dimaksudkan agar enzim  α-amilase bereaksi terlebih dahulu dengan sampel uji dalam menghambat aktivitas enzim. Inkubasi yang kedua untuk mengetahui  aktivitas  enzim  α- amilase  yang telah bereaksi dengan sampel uji dalam memecah pati menjadi gula-gula sederhana.
Hasil uji aktivitas E. denticulatum daya inhibisi terhadap enzim  α-amilase dapat dilihat pada Tabel III.
Ekstrak dari alga laut E.denticulatum yaitu karagenan dan polifenol mempunyai kemampuan
Aktivitas Inhibisi α-Amilase Agung Giri, dkk 89
menghambat  aktivitas  α-amilase. Karagenan ekstrak mempunyai daya hambat dengan nilai IC 50 12,16 mg/mL sedangkan  karagenan
standart dengan nilai IC 50 12,22
mg/mL tidak berbeda signifikan (p>0,05), artinya karagenan  ekstrak dan karagenan standart mempunyai kemampuan yang sama dalam
Gambar 1. Spektrum FTIR karagenan standart (a), karagenan ekstrak (b)
Tabel II. Bilangan gelombang puncak FTIR karagenan standart dan sampel
Band Panjang Gelombang Karagenan (cm -1 ) Vibrasi gugus fungsioanl Standart Ekstrak 1 1639,55 1640,27 Ikatan gugus karbonil 2 1265,24 1227,88 Ikatan sulfat ester 3 1069,78 1073,02 3,6-anhidro-D-galaktosa 4 928,64 930,44 3,6-anhidro-D-galaktosa 5 847,34 848,94 D-galaktosa-4-sulfat
Tabel III. Nilai IC 50 inhibisi aktivitas enzim α-amilase in vitro
Senyawa Uji IC 50 α-amilase (mg/mL) Kontrol Positif (akarbose) 10,71 ± 0,11 a Karagenan Standart 12,22 ± 0,21 b Karagenan Ekstrak 12,16 ± 0,20 b Polifenol E.denticulatum
11,64 ± 0,15 b
Keterangan: Nilai yang tertera berupa purata ± SEM (n=3). tanda notasi huruf menunjukan adanya perbedaan signifikan (p<0,05).
menghambat  aktivitas  enzim  α- amilase. Polifenol ekstrak mempunyai daya hambat dengan nilai IC 50 11,64 mg/mL. Polifenol mempunyai daya hambat aktivitas enzim  α-amilase lebih baik daripada karagenan namun tidak berbeda signifikan (p>0,05), artinya karagenan  ekstrak dan polifenol ekstrak mempunyai kemampuan yang sama dalam menghambat aktivitas  enzim  α-amilase. Jika karagenan dan polifenol dari alga laut E.denticulatum dibandingkan dengan kontrol positif akarbose  nilai
IC 50 berbeda signifikan (p<0,05), artinya ekstrak alga laut E.denticulatum tidak lebih baik atau tidak dapat menyamai kemampuan hambat  aktivitas  enzim  α-amilase dari akarbose.
Dari hasil penelitian bahwa kemampuan dalam menghambat aktivitas α-amilase yang paling besar memberikan pengaruh yaitu metabolit sekunder (polifenol) dari pada metabolit primer (polisakarida). Karagenan termasuk polisakarida mempunyai serat yang mudah larut dalam air. Polisakarida ini dapat membentuk kisi-kisi seperti jala
mampu mengikat kuat banyak molekul air. Kisi-kisi jala yang terbentuk memungkinkan menjerat substrat ataupun enzim yang larut air (Sankalia  dkk., 2006; Sankalia  dkk., 2007). Substrat maupun enzim yang terjerat kisi-kisi dan tertutup dalam polisakarida sehingga  tidak saling bereaksi. Substrat tidak bereaksi dengan enzim maka tidak terjadi pembentukan gula-gula sederhana.
Polifenol memiliki efek penghambatan  terhadap  enzim  α- amilase melalui ikatan hidroksilasi dan substitusi pada cincin β. Prinsip penghambatan ini serupa dengan akarbosa, yaitu dengan menghasilkan penundaan hidrolisis karbohidrat dan disakarida dan absorpsi glukosa serta menghambat metabolisme sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa (You dkk., 2012). Penghambatan pada enzim  α-amilase  dan  α-glukosidase oleh kandungan fenol ini mengakibatkan gagalnya proses pemecahan karbohidrat menjadi bentuk monosakarida. Hal inilah yang menjelaskan efek kandungan fenol dalam menurunkan kadar glukosa darah.
Aktivitas Inhibisi α-Amilase Agung Giri, dkk 91
Keberadaan inhibitor terhadap enzim tidak selalu berakibat negatif, namun juga dapat memberikan efek positif, misalnya membantu dalam pengembangan suatu obat. Contoh dalam penelitian ini adalah adanya senyawa dari ekstrak alga laut E.denticulatum yang mampu menghambat  aktivitas  enzim  α- amilase.

## KESIMPULAN
Nilai IC 50 diperoleh dari  hasil uji aktivitas enzim senyawa polifenol dari E.  denticulatum mempunyai kemampuan    yang    lebih tinggi dari pada karagenan E.  denticulatum dalam menghambat aktivitas kerja enzim α-amilase , namun penghambatan ini tidak lebih baik dari pada akarbose.

## DAFTAR PUSTAKA
Apostolidis, E., Kwon, Y.I. and Shetty, K.,  2007, Inhibitory Potential of Herb Fruit and Fungal-Enriched Cheese Against Key Enzymes  Linked to Type 2 Diabetes   And
Hypertension,
Innovative Food Science and
Emerging Technologies, 8: 46–
54. Aryudhani, N.,  2007,  Kandungan Senyawa Fenol Rumput Laut Caulerpa racemosa dan Aktivitas Antioksidannya, Skripsi , Program Studi Teknologi Hasil Perikanan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Institut Pertanian Bogor, Bogor. Basmal, J., Syarifudin., Ma’ruf,W.F., 2003, Konsentrasi Larutan Potasium Hidroksida terhadap Mutu Kappa-Karaginan yang Diekstraksi dari Eucheuma cottonii, Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia , 9 (5): 95- 103. Gómez, E. and Rupérez, P.,  2011, FTIR-ATR Spectroscopy as A Tool for Polysaccharide Identification in Edible Brown and Red Seaweeds, Food Hydrocolloids, 2: 1514-1520.
Mageid, A. E., Salama, N. A., Saleh,
M. A., Taleb, H. M.,  2009,
Antioxidant  and Antimicrobial Characteristics of Red and Brown Algae Extracts, 4th
Conference on Recent
Technologies in Agriculture,
818-828. Nwosu, F., Morris, J., Victoria, A.L., Stewart, D., Heather, A.R., Gordon, J.M, 2011, Anti- Proliferative and Potential Anti-
Diabetic Effects of Phenolic-
Rich Extracts from Edible Marine Algae, Food Chemistry, 126:1006–1012.
Ramalingam, J.R., Kaliaperumal, N.
and Kalimuthu, S., 2003, Commercial Scale Production of Carrageenan from Red Algae, Seaweed Res. Utiln, 25 (1 & 2) : 37 – 46.
Sadati, N., Khanavi, M., Mahrokh, A.,  Nabavi, SMB., Sohrabipour, J.,  Hadjiakhoondi,    A., 2011, Comparison of Antioxidant Activity and Total   Phenolic Contents of Some Persian Gulf Marine Algae, Journal of Medicinal Plants. 10 (37) :73-
79.
Sankalia, M.G., Mashru, R.C., Sankalia, J.M., Sutariya, V.B., 2006, Stability Improvement of Alpha-Amylase Entrapped in Kappa- Carrageenan Beads: Physicochemical Characterization and Optimization  Using  Composite
Index, International  Journal  of Pharmaceutics, 312:1–14. Sankalia, M.G., Mashru, R. C., Sankalia, J.M., Sutariya, V.B., 2007, Reversed Chitosan–
Alginate Polyelectrolyte Complex for Stability Improvement of   Alpha-
Amylase: Optimization and Physicochemical Characterization, Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 65:215–232.
Wikanta, T., Kurniawan, R., Rahayu,
L., 2005, Pengaruh Pemberian ß- Karaginan dan Ê-Karaginan Terhadap Penurunan Kadar Glukosa Darah dan Histopatologi Usus Kelinci,
Jurnal Penelitian Perikanan Indonesia, 11 (8) :1-10. You, Q., Chen, F., Wang, X., Jiang, Y.  and Lin, S., 2012, Anti- Diabetic Activities
of Phenolic Compounds in Muscadine Against Alpha-
Glucosidase and Pancreatic
Lipase, LWT - Food Science and Technology, 46: 164-168.
Zhang, Q., Zhang, J., Shen, J., Silva, A., Dennis, D., Barrow, C.,
2006,  A Simple 96-Well
Microplate Method for Estimation of Total Polyphenol Content in Seaweeds, Journal of Applied Phycology , 18: 445– 450.