Terpenoid dari Fraksi n-Heksan dan Uji Aktivitas Antioksidan Daun Singkil (Premna serratifolia Linn)
Isnindar 1*, Sri Luliana 2 , Muhammad Zahid 3
1,2 Fakultas Kedokteran, Universitas Tanjungpura, Kota Pontianak, Indonesia.
3 Balai Besar Pengujian Mutu dan Sertifikasi Obat Hewan, Kabupaten Bogor, Indonesia * E-mail: isnindar@pharm.untan.ac.id
Article Info: Received: 19 Februari 2024 in revised form: 23 April 2024 Accepted: 24 Mei 2024 Available Online: 1 Juni 2024

## ABSTRACT
Singkil ( Premna serratifolia Linn.) is a plant that has a distinctive aroma  and  is  edible.  The  monoterpene  and  sesquiterpene content found in the singkil plant has the potential to be an active substance with medicinal benefits. This research aims to isolate, identify  and  test  the  antioxidant  activity  of  terpenoid compounds in the n-hexane fraction of singkil leaves using the GC-MS  method.  Singkil  leaves  were  extracted  by  maceration with  96%  ethanol  solvent  and  then  liquid-liquid  fractionated using  n-hexane  and  ethyl  acetate  solvents.  Hexane  obtained from  singkil  leaves  was  isolated  via  column  chromatography using a gradient mobile phase of n-hexane and ethyl acetate and tested  for  antioxidant  activity  using  the  DPPH  method.  The isolates obtained were identified as 20 compounds, among these compounds  were  12  compounds  belonging  to  the  terpenoid group,  including  2-Nonanol,  2,4-heptadienal  Terpenoid,  3- Ethyl-Santolina  Triene,  2,4-Decadienal,  Nonyl-Cetene,  2  ,4,6- Trimethyl-1-heptadecene,  3-  Tetramethyl-2-Hexadecen-1-ol,  1- Docosene,  13-tetradecen-11-yn-1-ol,  and  Cyclohexane.  The antioxidant test results showed that the n-Hexane fraction had a % inhibition value of 53.078%. Keywords :
Singkil leaves; Ethanol extract; n-hexane fraction; GC-MS
Corresponding Author:
Isnindar Jurusan
Farmasi Fakultas Kedokteran
Universitas
Tanjungpura  Kota Pontianak  Indonesia E-mail: isnindar@pharm.untan.ac.id
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.
How to cite (APA 6 th Style): Isnindar, Luliana, S, Zahid, M (2024). Terpenoid dari Fraksi n-Heksan dan Uji Aktivitas Antioksidan Daun Singkil (Premna serratifolia Linn) . Indonesian Journal of Pharmaceutical  (e-Journal), 4 (2), 286-295.
Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal) 2024; 4 (2): 286– 295 ISSN : 2775- 3670 (electronic) Journal Homepage: http://ejurnal.ung.ac.id/index.php/ijpe/index DOI: 10.37311/ijpe.v4i2.26860

## ABSTRAK
Singkil ( Premna serratifolia Linn.) adalah tanaman yang beraroma khas dan edible . Kandungan monoterpen dan seskuiterpen yang terdapat pada tanaman singkil berpotensi sebagai zat aktif yang bermanfaat obat. Penelitian ini bertujuan untuk isolasi, identifikasi dan uji aktivitas  antioksidan  senyawa  terpenoid  pada  fraksi  n-Heksan  daun  singkil  dengan menggunakan  metode  GC-MS.  Daun  singkil  diekstraksi  metode  maserasi  dengan pelarut etanol 96% dan selanjutnya difraksinasi cair-cair dengan pelarut n-Heksan dan Etil  Asetat.  Heksana  yang  diperoleh  dari  daun  singkil  diisolasi  melalui  kromatografi kolom dengan menggunakan fase gerak bergradien yang terdiri dari n-Heksana dan Etil Asetat  dan  diuji  aktivitas  antioksidannya  menggunakan  metode  DPPH.  Isolat  yang diperoleh  teridentifikasi  20  senyawa,  diantara  senyawa-senyawa  tersebut  yaitu  12 senyawa termasuk dalam golongan terpenoid, diantaranya 2-Nonanol, 2,4-heptadienal Terpenoid, 3- Ethyl-Santolina Triene, 2,4-Decadienal, Nonyl-Cetene, 2,4,6-Trimethyl-1- heptadecene, 3- Tetramethyl-2-Hexadecen-1-ol, 1-Docosene, 13-tetradecen-11-yn-1-ol, dan Cyclohexane.  Hasil  uji  antioksidan  menunjukkan  fraksi  n-Heksan  memiliki  nilai %inhibisi sebesar 53,078%.
Kata Kunci: Daun singkil; Ekstrak etanol; Fraksi n-Heksan; GC-MS, aktivitas antioksidan

## 1. Pendahuluan
Singkil  ( Premna  serratifolia Linn.)  adalah  tumbuhan  yang  sering  dijadikan bahan  pangan  dan  obat  tradisional.  Tanaman  ini  diyakini  dapat  mengatasi inflamasi, batuk, asma, bronkitis, perut kembung [1]. Premna serratifolia memiliki ciri morfologi  daun  tunggal yang bewarna hijau dengan tulang daun yang menyirip, ujung  daun  meruncing  serta  tidak  berpelepah.  Singkil  memiliki  batang  berkayu dengan  bunga  majemuk  dengan  aroma  yang  khas  [2].  Tanaman  singkil mengandung alkaloid, terpenoid, steroid, saponin, tannin dan flavonoid [3].
Senyawa  terpenoid  dari  daun  singkil  diketahui  mempunyai  bioaktivitas sebagai obat. Beberapa senyawa terpenoid yang telah dilaporkan yaitu Bicyclo (3.1.1) hept-2-ene-2-methanol, 6,6-dimethyl-, Cyclohexanol, 5-methyl-2-1-(1-methylethenyl)-,(1R- (1a,2a,5a)-,  Caryophyllene,  Longifolene-(V4),  3,7,11,15-Tetramethyl-2-hexadecen-1-ol, Phytol,  dan  Squalene .  Senyawa  tersebut  diketahui  memiliki  beberapa  bioaktivitas yaitu  sebagai  anti  tumor,  analgesik,  antibakteri,  fungisida,  sedatif  dan imunostimulan  [4].  Penelitian  ini  dilakukan  di  India  yang  mana  memiliki lingkungan  dan  hara  yang  berbeda  dengan  Indonesia,  sehingga  perlu  adanya penelitian isolasi senyawa yang ada di dalam daun singkil di Indonesia. Senyawa terpenoid  yang  memiliki  karakteristik  volatilitas  dapat  diidentifikasi  melalui metode Gas Chromatography – Mass Spectrometry (GC-MS) [5].

## 2. Metode
Metode  penelitian  berupa  eksperimen.  Ekstrak  etanol  96%  daun  singkil difraksinasi cair-cair dengan pelarut n-Heksan, dan diperoleh fraksi n-Heksan yang selanjutnya  diisolasi  menggunakan  kromatografi  kolom  dan  diuji  aktivitas antioksidan dengan menghitung %inhibisi. Kegiatan dilaksanakan di Laboratorium Biologi Farmasi, Kimia Farmasi Fakultas Kedokteran Universitas Tanjungpura, dan Laboratorium Analisis Kimia Universitas Padjajaran.

## Alat dan Bahan
Komponen yang digunakan meliputi daun singkil ( Premna serratifolia Linn.), n- Heksan (teknis), Etil Asetat (teknis), etanol 96% (teknis), silika gel 60 GF 254 (0,063 – 0,200 mm) (Merck), dan pelat KLT (Merck). Alat-alat yang digunakan mencakup GC-MS (Schimadzu-QP-5050A),  kolom  kromatografi  kaca  (60  x  3  cm  dan  30  x  1,5  cm), evaporator (BUCHI R-100), oven (Memmert), Neraca analitik (Ohaus) dan peralatan gelas laboratorium.

## Penyiapan Sampel
Daun  singkil  diperoleh  dari  Pasar  Tradisional  Jalan  Komyos  Sudarso Pontianak Barat. Daun Singkil segar dicuci menggunakan air bersih dan mengalir, dipisahkan  dari  tangkainya  dan  kemudian  dirajang.  Daun  singkil  selanjutnya dijemur  dibawah  matahari  dengan  dilapisi  kain  hitam  untuk  melindungi  dari pengotor dan sinar matahari langsung.[6] Daun singkil yang telah kering dan rapuh selanjutnya diblender hingga halus dan disimpan pada wadah kaca.

## Pembuatan  Ekstrak
Simplisia daun singkil ditimbang sejumlah 900 g, dimaserasi dengan etanol 96%  hingga  benar-benar  terendam.  Proses  maserasi  berlangsung  selama  5  hari dengan pergantian pelarut yang dilakukan satu kali setiap 24 jam. Pelarut maserasi kemudian dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator [7].

## Isolasi dan Identifikasi
Ekstrak  daun  singkil  dilarutkan  dengan  akuades  (suhu  50 ℃ )  selanjutnya dipartisi cair-cair dengan n-Heksan, Etil Asetat sehingga diperoleh tiga fraksi [8]. Semua fraksi kemudian dipekatkan hingga kental. Fraksi n-Heksan sebanyak 5,2 g digerus dengan silika gel 10 g sehingga menjadi serbuk kering. Sampel kemudian dimasukkan  ke  dalam  kolom  (diameter  3  cm  dan  panjang  60  cm).  Tahap  elusi, menggunakan  pelarut  gradien  n-Heksan  dan  Etil  Asetat,  dimulai  dari  100%  n- Heksan.; 95:5; 90:10; 85:15; 80:20; 75:25; 70:30; 65;35; 60:40; 55:45; dan 50:50. Isolat yang dihasilkan  disimpan  ke  dalam  vial.  Hasil  kolom  diperoleh  sebanyak  50  vial.  Isolat kemudian diidentifikasi menggunakan KLT [9].

## Identifikasi  KLT
Ekstrak yang cukup pekat dilarutkan dengan pelarut etanol 96%. Selanjutnya, ekstrak diterapkan ke plat silika. Proses elusi dilakukan dengan menggunakan eluen n-Heksan : Etil Asetat (2:1v/v) dan menunggu eluen mencapai batas atas pada pelat kromatografi lapis tipis (KLT). Pelat hasil elusi kemudian diberi perlakuan dengan pereaksi  warna  terpenoid,  seperti  vanilin-asam  sulfat.  Deteksi  terpenoid  positif terjadi perubahan warna bercak menjadi berwarna ungu ketika dipanaskan.

## Identifikasi  GC-MS
Proses  pengujian  dilaksanakan  di  laboratorium  analisis  kimia  Universitas Padjajaran. Sampel yang diperoleh dari hasil kromatografi kolom dianalisis dengan instrumen GC-MS. Selama analisis,suhu diawal pada perangkat  yaitu disuhu  50 ℃ , kemudian  ditingkatkan  secara  terprogram  yaitu  peningkatan  sebesar  10 ℃ setiap menitnya. Kolom kromatografi yang dipakai adalah jenis Agilent 122 -5532, ukuran 30  meter  x  250  mikrometer.  Kloroform  digunakan  sebagai pelarut untuk sampel yang akan dianalisis. Proses pemisahan antara komponen dalam sampel tergantung pada  waktu  relatif  yang  diperlukan  oleh  sampel  untuk  berinteraksi  dengan  fase
diam. Selanjutnya, sampel akan bertransformasi membentuk ion, dan medan listrik akan  membelokkan  ion-ion  ini  untuk  mengidentifikasi  berat  molekul  yang diperoleh  [10].  Hasil  identifikasi GC-MS yaitu kromatogram dan spektra massa  lalu disesuaikan dengan bank data masshunter .

## Uji Aktivitas Antioksidan
Larutan  fraksi  n-Heksan  20  ppm  direaksikan  dengan  larutan  DPPH  40  ppm perbandingan 1:1 kemudian didiamkan kurang lebih setengah jam dan terlindung dari cahaya. Absorbansi sampel diukur menggunakan alat  spektrofotometer  UV-Vis  dan dihitung  nilai  %inhibisi  [3].
%inhibisi = 𝐴 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − 𝐴 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙 × 100%
𝐴 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙

## 3. Hasil dan Pembahasan

## Pembuatan Simplisia
Daun singkil ( Premna serratifolia Linn . ) didapat dari pasar tradisonal Jalan Kom yos  Sudarso  Pontianak  Barat.  Proses  pembuatan  simplisia  dari  daun  singkil dilaksanakan  melalui  serangkaian  tahapan  yang  mencakup  seleksi  daun  dalam kondisi segar, tahap pencucian, pemotongan, pengeringan, seleksi daun yang sudah kering, proses penghalusan, dan pengayakan [11].
Ekstrak kental yang didapat menunjukkan warna hijau gelap, aroma spesifik daun singkil. Rendamen ekstraksi ditunjukkan pada tabel 1.
Tabel 1. Hasil ekstraksi Berat Simplisia Berat Ekstrak % Rendemen 900 g 230 g 25,56%
Bobot  rendemen  yang  dihasilkan  lebih  besar  dibandingkan  dengan penelitian Puspita, dkk (2020) yaitu 21,42%. Perbedaan hasil rendemen ini diduga dipengaruhi oleh lama  waktu  ekstraksi yang dilakukan dimana  pada  penelitian Puspita, dkk (2020) selama 3 hari, sedangkan pada penelitian ini selama 5 hari [12].

## Hasil Kromatografi Kolom
Hasil kromatografi kolom (Gambar 1) terlihat belum murni yang terdapat di subfraksi hasil isolasi.
Gambar 1. Gambaran bercak KLT (n-Heksan:Etil Asetat 2:1v/v)
Isolat  yang  dihasilkan  perlu  dimurnikan  kembali  dengan  menurunkan gradien  menjadi  lebih  kecil.  Tiga  subfraksi  (F15,  F16,  F17)  dengan  hasil  positif terpenoid  digabungkan  dan  diperoleh  bobot  subfraksi  500  mg.  Sampel  dielusi kembali  dengan  fase  diam  yang  sama  tetapi  ukuran  kolom  lebih  kecil  dengan diameter 1,5 cm panjang 30 cm. Fase gerak yang digunakan adalah pelarut n-Heksan : Etil Asetat 98:2; 96:4; 94:6; 92:8; dan 90:10. Volume setiap pelarut yang digunakan sebanyak 100 mL. Isolat yang diperoleh dimasukkan ke dalam vial ukuran 20 mL dan  diperoleh  20  sub  fraksi.  Semua  sub-fraksi  diidentifikasi  menggunakan  pelat KLT,  fase  gerak  n-Heksan  :  Etil  Asetat  (95:5v/v)  (Gambar  2).  Sub-fraksi  F18 menunjukkan hasil yang lebih murni dan lebih mayor kemudian diuji dengan GC- MS.
Gambar 2. Gambaran Bercak KLT (n-Heksan:Etil Asetat 95:5v/v)

## Identifikasi GC-MS
Identifikasi GC-MS di laboratorium kimia analisis Universitas Padjajaran. Diperoleh  44  zat  aktif,  24  diantaranya  berupa  pengganggu.  Grafik  analisis kromatografi fraksi n-Heksan dari daun singkil di gambar 3.
Gambar 3. Hasil Analisis Kromatogram
Pada  Tabel 2,  terdapat  informasi mengenai  20  senyawa  yang  berhasil diidentifikasi dengan menggunakan GC-MS.
Tabel 2. Senyawa Hasil GC-MS No Waktu Retensi Nama Senyawa 1 3,842-3,928 2-Nonanol 2 7,214-7,292 2,4-Heptadienal, (E,E)- 3 7,483-7,548 Cyclohexene, 3-ethyl- 4 11,836-11,879 Santolina triene 5 11,898-11,944 2,4-Decadienal 6 12,240-12,284 1,3,7-Octatriene, 2,7-dimethyl- 7 13,181-13,221 Cyclopropane, nonyl- 8 15,709-15,749 Cetene 9 15,792-15,833 Octane, 2,4,6-trimethyl- 10 18,096-18,144 1-Heptadecene 11 18,699-18,767 Neophytadiene 12 19,077-19,144 3,7,11,15-Tetramethyl-2-hexadecen-1-ol 13 19,368-19,432 3,7,11,15-Tetramethyl-2-hexadecen-1-ol 14 20,041-20,100 Cyclopentaneundecanoic acid, methyl ester 15 21,000-21,052 1-Docosene 16 22,328-22,388 13-Tetradece-11-yn-1-ol 17 23,398-23,443 1-Docosene 18 25,390-25,436 3-Eicosene 19 27,116-27,170 Cyclohexane,  1,1'-(2-methyl-1,3-propanediyl)bis- 20 34,088-34,183 Ginsenol
Salah  satu  metode  yang  digunakan  dalam  upaya  penelitian  tumbuhan berkhasiat  obat  adalah  dengan  menggunakan  spektrofotometer  GC-MS. Spektrofotometer  GC-MS  adalah  alat  yang  dimanfaatkan  untuk  mendeteksi senyawa-senyawa atsiri, sehingga menghasilkan data yang lebih akurat [13]. Dengan menggunakan metode  spektrofotometer GC-MS ini,  penelitian  tumbuhan berkhasiat obat dapat dilakukan dengan lebih efisien dan akurat, Suhu GC-MS dimulai di 50 ℃ dan  selanjutnya  dinaikkan  10 ℃ setiap  menitnya.  Pemilihan  kolom  kromatografi adalah Agilent 122-5532 dengan dimensi 30m x 250 µm x 0,25 µm. Selanjutnya untuk pelarut  yang  digunakan  untuk  melarutkan  sampel  adalah  Kloroform,  sehingga memungkinkan  identifikasi  zat-zat  monoterpen  dan  seskuiterpen  yang  mungkin memiliki potensi obat.
Diperoleh  ekstrak  daun  singkil  ( Premna  serratifolia Linn . ).  metode  pemisahan dalam pengujian ini  yaitu maserasi selama 5 hari,  perolehan hasil  rendemen  sebesar 230g atau 25,56% dengan karakteristik hijau pekat dengan aromatik khas daun singkil. Pada  tahap  isolasi  dan  identifikasi  sampel  sejumlah  150  g  dilarutkan  dalam  170ml akuades  dan  selanjutnya  dipisahkan  dengan  corong  pisah  menggunakan  pelarut  n- Heksan  sejumlah  150  ml,  hingga  didapatkan  hasil  akhir  rendemen  sebanyak  12,4% (18,6g). Proses isolasi kromatografi kolom dilakukan dengan 2 tahap. Pada tahap satu kromatografi  kolom  didapatkan  tiga  subfraksi  yang  menunjukan  hasil  positif terpenoid dengan kode (F15, F16, F17). Pada tahap kedua kromatografi kolom subfraksi F15,  F16,  dan  F17  digabung  dan  diisolasi  kembali  menggunakan  kolom  dengan ukuran  lebih  kecil  dihasilkan  20  subfraksi,  isolat  positif  terpenoid  dengan kemurnian  terbaik  ditunjukkan  oleh  subfraksi  F18  yang  selanjutnya  dilakukan pengujian GC-MS.
Identifikasi isolat daun singkil ( Premna serratifolia Linn.) mengunakan metode Spektrofotometer GC-MS ( Gas Chromatography-Mass Spectrometry ) didasarkan pada
Isnindar et al., 2024; Indonesian Journal of Pharmaceutical Education (e-Journal); 4(2): 286-295
proses  pemisahan  senyawa  sampel  menggunakan  GC-MS  yang  bergerak melalui kolom kromatografi gas pada tingkat yang berbeda berdasarkan sifat fisik dan kimia senyawa  yang  akan  diidentifikasi.  Senyawa-senyawa  tersebut  dipisahkan  dan diindentifikasi menggunakan detektor GC berdasarkan waktu retensi atau waktu yang  diperlukan  senyawa  untuk  melewati  kolom.  Sinyal  yang  dihasilkan  dari pemisahan  senyawa  tersebut  akan  menciptakan  waktu  retensi  yang  berbeda  dan kemudian hasil dianalisis serta dibandingkan dengan waktu retensi dan spektrum massa dari senyawa dalam sampel dengan database senyawa yang sudah diketahui [14].
Berdasarkan  hasil  retensi  yang  didapatkan  dari  identifikasi  menggunakan Spektrofotometer  GC-MS  ( Gas  Chromatography-Mass  Spectrometry )  didapatkan  waktu retensi senyawa dengan waktu terkecil sebesar 3,842 hingga yang terbesar 34,183, yang secara lengkap dijelaskan di bawah ini:
2- Nonanol
Dengan  rumus  molekul  [C 9 H 20 O]  yang  teridentifikasi  pada  spektrum  massa dengan  waktu  retensi  3,842  -  3,928,  senyawa  2-Nonanol  termasuk  dalam  senyawa terpenoid, dimana dapat berpotensi sebagai antikanker [15].

## 2,4 Heptadienal Nonanol
Dengan  rumus  molekul  [C 7 H 10 O],  teridentifikasi  pada  waktu  retensi  7,214  - 7,292,  senyawa  2,4  heptadienal  termasuk  dalam  terpenoid,  berdasarkan  penelitian sebelumnya berpotensi sebagai antifungal fumigant [16]. Cyclohexene
Dengan rumus molekul [C 6 H 12 ] bersifat analgesik  dan teridentifikasi pada waktu retensi 7,483-7,548, senyawa Cyclohexene termasuk senyawa terpenoid minyak atsiri sehingga berpotensi untuk dikembangkan sebagai antiinflamasi [17].
2- Ethyl-Santolina Triene
Dengan rumus molekul [C 10 H 16 ], teridentifikasi pada waktu retensi 11,836- 11,87 berdasarkan  penelitian  lain  dapat  dimanfaatkan  sebagai  antimikroba [18].
2,4 Decadienal
Dengan  rumus  molekul  [C 10 H 16 O],  teridentifikasi  pada  waktu  retensi  11,836- 11,879 dan teridentifikasi sebagai senyawa hidrokarbon, dimana berdasarkan penelitian lain dapat dimanfaatkan sebagai agen antibakteri [19].
2,7- Dimethyl-Cyclopropane
Dengan rumus molekul [C 8 H 16 ], teridentifikasi pada waktu retensi 12,240-  12,284 dan  teridentifikasi  sebagai  senyawa hidrokarbon. Dapat dimanfaatkan sebagai  bahan pembuatan obat analgesik [17].

## Nonyl-Cetene
Dengan  rumus  molekul  [C 16 H 32 ],  teridentifikasi  pada  waktu  retensi  15,709- 15,749  dan  teridentifikasi  sebagai  senyawa  terpenoid.  Dapat  dimanfaatkan  sebagai antibakteri [15].
2,4,6 Trimethyl -1- Heptadece
Dengan  rumus  molekul  [C 10 H 18 ],  teridentifikasi  pada  waktu  retensi  15,709- 15,749  dan  teridentifikasi  sebagai  senyawa  terpenoid.  Dapat  dimanfaatkan  sebagai antiinflamasi [15].

## Neophytadiene
Dengan rumus molekul [C 20 H 38 ], teridentifikasi pada waktu retensi 18,699-18,767 dan teridentifikasi sebagai senyawa terpenoid. Dapat dimanfaatkan sebagai agen inflamasi [24].
3,7,11,15- Tetramethyl -2- Hexadecen --1-o l Rumus molekul [C 20 H 40 O], teridentifikasi pada dua waktu retensi yaitu 19,077- 19,144  dan  19,368-19,432,  teridentifikasi  sebagai  senyawa  terpenoid.  Dapat
dimanfaatkan sebagai anti inflamasi [20].

## Cyclopentaeundecanoic  Acid
Dengan  rumus  molekul  [C 16 H 30 O 2 ],  teridentifikasi  pada  waktu  retensi  19,077- 19,144  dan  teridentifikasi  sebagai  asam  karboksilat.  Dapat  dimanfaatkan  sebagai antiiflamasi [21].

## Metil  Ester
Dengan  rumus  molekul  [C 2 H 3 O 2 R],  teridentifikasi  pada  waktu  retensi  20,041- 20,100  dan  teridentifikasi  sebagai  asam  lemak.  Dapat  dimanfaatkan  sebagai  minyak sayur [22].
1- Docosene
Dengan  rumus  molekul  [C 22 H 44 ],  teridentifikasi  pada  waktu  retensi  21,000- 21,052 dan teridentifikasi sebagai terpenoid. Dapat dimanfaatkan sebagai antikanker [23].
13- Tetradecen 11- yn -1- ol Dengan  rumus  molekul  [C 14 H 24 O]  teridentifikasi  pada  waktu  retensi  22,328- 22,388 dan teridentifikasi sebagai terpenoid.  Dapat dimanfaatkan sebagai antimikroba [24].
3- Eicosene
Dengan  rumus  molekul  [C 20 H 40 ],  teridentifikasi  pada  waktu  retensi  25,390- 25,436  dan  teridentifikasi  sebagai  terpenoid.  Dapat  dimanfaatkan  sebagai  aktivitas antimikroba [25].
2- Methy l-1,3- Propanedyl
Dengan  rumus  molekul  [C 15 H 28 O 4 ]  teridentifikasi  pada  waktu  retensi  27,116- 27,170 dan teridentifikasi sebagai terpenoid. Dapat dimanfaatkan sebagai antibakterial [24].

## Ginsenol
Dengan  rumus  molekul  [C 15 H 26 O],  teridentifikasi  pada  waktu  retensi  34,088- 34,183 dan teridentifikasi sebagai terpenoid. Dapat dimanfaatkan sebagai analgesik [24].
Tabel 4. Nilai %Inhibisi Fraksi n-Heksan
Sampel (20 ppm) Repetisi Absorbansi Persen Inhibisi (%) Rata-Rata (n=3) SD %RSD Fraksi n- heksan 1 0,405 52,962 53,078 0,201 0,380 2 0,405 52,962 0,380 3 0,402 53,310 0,377
Hasil penilaian terhadap potensi antioksidan terdapat pada Tabel 4. Nilai %inhibisi dapat menggambarkan aktivitas antioksidan fraksi n-Heksan. Semakin tinggi  nilai  %inhibisi,  maka  semakin  baik  kemampuan  fraksi  untuk  meredam radikal bebas [26]. Rata-rata nilai %inhibisi fraksi n-Heksan yaitu 53,078% dimana fraksi ini berpotensi sebagai antioksidan.

## 4. Kesimpulan
Hasil isolasi daun-singkil dengan pelarut n-Heksan berhasil mengidentifikasi sebanyak 20 senyawa. Diantaranya terdapat 12 golongan terpenoid yaitu 2-Nonanol, 2,4  Heptadienal  Nonanol,  Nonyl-Cetene,  2,4,6  Trimethyl-1-heptadece,  3  Tetramethyl-2 Hexadecen-1-ol, 1-Docosene, 13-tetradecen 11-yn-1-ol, 3 Eucosene, 2-Methyl-1,3-Propanedyl, Ginsenol,  Neophytadiene,    dan  Cyclohexane .  Nilai  %inhibisi  fraksi  n-Heksan  yaitu 53,078%.

## Referensi
[1] Wulandari  R.  Skrinning  Fitokimia  Dan  Aktivitas  Antioksidan  Teh  Herbal Daun Buas – Buas (Premna cordifolia Roxb.). J Din Penelit Ind. 2019;30(2):117 – 22.
[2] Diningrat Ds, Restuati M, Kusdianti K, Sari An, Marwani E. Analisis Ekstrak Etanol  Tangkai  Daun  Buasbuas  (Premna  pubescens)  Menggunakan  Gas Chromatography Mass Spectrophotometer (Gcms). Elkawnie. 2018;4(1):1 – 12.
[3] Oktaviani  E,  Wibowo  MA,  Idiawati  N.  Penapisan  Fraksi  Antioksidan  Daun Buas- Buas ( Premna serratifolia Linn.). Jkk. 2015;4(3):40 – 7.
[4] R  RC,  Vasantha  K,  Maruthasalam  A.  Identification  of  bioactive  compounds from ethanolic leaf extracts of Premna serratifolia Linn. using GC-MS. Bioscience Discovery 2015;6(2):96 – 101.
[5] Hadiarti  D.  Identifikasi  Ekstrak  N-Heksana  Senyawa  Singkil  ( Premna serratifolia Linn) Menggunakan Gc-Ms. J Bul Al-Ribaath. 2016;12(1):21 – 8.
[6] Supriningrum  R,  Handayani  F,  Liya.  Karakterisasi  Dan  Skrining  Fitokimia Daun.  J Ilm Ibnu Sina. 2017;2:232 – 44.
[7] Koirewoa  Ya,  Fatimawali,  Wiyono  WI.  Isolasi  Dan  Identifikasi  Senyawa Flavonoid Dalam Daun Beluntas (Pluchea indica L.). Pharmacon. 2012;1(1):47 – 52.
[8] Candra  Rm,  Isnindar  I,  Luliana  S.  Isolasi  Dan  Identifikasi  Terpenoid  Fraksi Heksan Daun. 2023;5:363 – 71.
[9] Marcelinda A, Ridhay A. The Atioxidant Activity Of Husk Coffea (Coffea sp) Extract Base On Various Levels Of Polar Solvent. Online J Nat Sci. 2016;5(1):21 – 30.
[10] Darmapatni  Kag.  Pengembangan  Metode  Gc-Ms  Untuk  Penetapan  Kadar Acetaminophen  Pada  Spesimen  Rambut  Manusia.  J  Biosains  Pascasarj. 2016;18(3):255.
[11] Wahyuni R, Guswandi, Rivai H. Pengaruh Cara Pengeringan Dengan Oven, Kering  Angin  Dan  Cahaya  Matahari  Langsung  Terhadap  Mutu  Simplisia Herba Sambiloto. 2014;6(2).
[12] Puspita W, Yuspita Sari D, Ristia Rahman I. Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol  Daun  Singkil  ( Premna  serratifolia Linn.)  Asal  Kabupaten  Melawi Provinsi  Kalimantan  Barat  Dengan  Metode  Dpph.  J  Insa  Farm  Indones. 2020;3(2):405 – 12.
[13] Dewi  Str,  Karim  D,  Damaris  D.  Identifikasi  Kandungan  Daun  Nggorang (Salvia  occindentalis  sw)  Menggunakan  Spektrofotometer  GC-MS.  Media Farm. 2020;16(2):244.
[14] Lynch HN, Authement CC, Maczko A, Parker M, Beaty K, Liyana Pathiranage A.  Gas  Chromatography-Mass  Spectrometry  Analysis  Of  Cannabis: Undergraduate  Organic  Chemistry  Laboratory  Exercise.  J  Chem  Educ. 2023;100(3):1303 – 12.
[15] Masyita A, Mustika Sari R, Dwi Astuti A, Yasir B, Rahma Rumata N, Emran T Bin,  Et  Al.  Terpenes  And  Terpenoids  As  Main  Bioactive  Compounds  Of Essential  Oils,  Their  Roles  In  Human  Health  And  Potential  Application  As Natural Food Preservatives.      Food      Chem      X.      2022;13:100217. Available      From:Https://Doi.Org/10.1016/J.Fochx.2022.100217
[16] Ma  W,  Johnson  ET.  Natural  Flavour  (E,E)-2,4-Heptadienal  As  A  Potential Fumigant For Control Of Aspergillus Flavus In Stored Peanut Seeds: Finding New  Antifungal  Agents  Based  On  Preservative  Sorbic  Acid.  Food  Control. 2021;124.
[17] Shintawati,  Zulfahmi.  Identifikasi  Minyak  Sereh  Wangi  Dengan  Gcms  Dan Aplikasinya Pada Formulasi Minyak Angin Aromaterapi. 2020;25(2):62 – 70.
[18] Zielińska - Błajet  M,  Feder -Kubis  J.  Monoterpenes  And  Their  Derivatives —
Recent  Development  In  Biological  And  Medical  Applications.  Vol.  21, International Journal Of Molecular Sciences. 2020. P. 1 – 38.
[19] Nuraini FR, Setyaningsih R, Susilowati A. Antibacterial Activity Of Bioactive Compound Produced By Endophytic Fungi Isolated From Mangifera Casturi Kosterm  Endemic  Plant  From  South  Kalimantan,  Indonesia.  Indonesia  J Biotechnol. 2023;28(2):77 – 85.
[20] Rahmiyani  I.  Isolasi  Dan  Identifikasi  Senyawa  Minyak  Atsiri  Daun  Gamal (Gliricidia Sepium [Jacq] Walp). J Farm Udayana. 2020;134.
[21] Vaithiyanathan  V,  Mirunalini  S.  Quantitative  Variation  Of  Bioactive  Phyto Compounds  In  Ethyl Acetate  And  Methanol  Extracts  Of  Pergularia  Daemia (Forsk.) Chiov. J Biomed Res. 2015;29(2):169 – 72.
[22] Arjoon  Karuna  K,  Speight  James  G.  Biofuels.  In  Sustainable  Solutions  For Environmental Pollution (Vol. 1). 2021.
[23] Fajriah S, Megawati, Hudiyono S, Kosela S, Hanafi M. Chemical Constituents And Potential Cytotoxic Activity Of N- Hexane Fraction From Myristica Fatua Houtt Leaves. Aip Conf Proc. 2017;1862.
[24] Olena Z, Yang Y, Tingting Y, Xiaotao Y, Hailian R, Xun X, et al. Simultaneous Preparation  Of  Antioxidant  Peptides  And  Lipids  From  Microalgae  By Pretreatment With Bacterial Proteases. Bioresour Technol. 2022;348.
[25] Gautam  V,  Kohli  SK,  Arora  S,  Bhardwaj  R,  Kazi  M,  Ahmad  A,  et  al. Antioxidant  And  Antimutagenic  Activities  Of  Different  Fractions  From The  Leaves  Of  Rhododendron  Arboreum  Sm.  And  Their  Gc-Ms  Profiling. Molecules.  2018;23(9).
[26] Faisal Ap, Nasution Pr, Wakidi Rf. Aktivitas Antioksidan Dari Daun Bintangur (Calophyllum  inophyllum  L.)  Terhadap  Radikal  Bebas  Dpph  (1,1  Difenil-2- Pikrihidrazil. J Ris Kefarmasian Indones. 2022;4(1):1 – 10.