## EFEKTIFITAS IMUNOSTIMULAN DARI EKSTRAK ETANOL DAUN BENALU KOPI ( Loranthus ferrugineus Roxb ) PADA TIKUS JANTAN DENGAN METODE TITER ANTIBODI
Novandi Purba 1 , Lasma Novita Sari 2 , Yanna Rotua Sihombing 3 Institut Kesehatan Medistra Lubuk Pakam e-mail: gultomvandi6196@gmail.com
DOI : https://doi.org/10.35451/jfm.v2i2.372
Abstract:
The  research  in  this  paper  aims  to  determine  the  effectiveness  of immunostimulants  from  ethanol  extract  of  coffee  parasite  leaves (Loranthus ferrugineus Roxb) with four variants of doses of 50mg / kgBB,  100mg  /  kgBB,  200mg  /  kgBB,  400mg  /  kgBB.  This  study used 18 male white rats with 200 gram BB which were divided into 6 treatment groups. Rats were injected with 0.1ml SDMS 1% for 7 consecutive  days  intraperitoneal,  then  on  the  7th  day  each  blood sample  was  taken  through  veins  in  the  tail,  CMC  Na  0.5% suspension, and Levamisole  suspension 50mg /  kgBB as a positive control was administered orally on the 8th day. Then blood samples were collected in a micro tube and then 1900rpm was centrifuged at a  temperature  of  4oC  for  10  minutes.  The  results  of  the  study  of ethanol  extract  of  coffee  parasite  leaves  proved  effective  as immunostimulants  because  they  have  a  value  close  to  positive control, starting from a dose of 200mg / kgBB to 400mg / kgBB.
Keywords : Benalu coffea leaf (Loranthus ferrugineus Roxb), Flavonoid, Titer Antibodi.

## PENDAHULUAN
Indonesia  sebagai  salah  satu  negara dengan  keanekaragaman  hayati  yang sangat  melimpah  dan  merupakan  peluang bagi  para  peneliti  khususnya  yang bergerak dalam bidang eksplorasi, inventarisasi  dan  perkembangan  obat hayati  dan  nabati.  Untuk  menjelajah  dan mengeskplorasi  kekayaan  tersebut  dalam rangka menemukan senyawa baru, spesies baru  bahkan  senyawa  bioaktif  baru diantaranya  diharapkan  sebagai  obat  bagi beberapa  penyakit  yang  sampai  saat  ini belum  ditemukan obatnya (Aldi,2014).
Salah  satu  Provinsi  penghasil  kopi terbesar di indonesia adalah Provinsi Aceh, yang  tepatnya  di  daerah  dataran  tinggi gayo,  ada  berbagai  jenis  tanaman  kopi
yang  tumbuh  di  daerah  tersebut,  selama ini  pemanfaatan  tanaman  kopi  secara komersial hanya terfokus pada pengolahan biji  kopi  sebagai  minuman  seduh  maupun bahan  tambahan      makanan.  Benalu  kopi merupakan  tumbuhan  parasit  pada  inang kopi  yang  dapat  merusak  tanaman inangnya.  Masyarakat  dataran  tinggi  gayo memanfaatkan  benalu  kopi  sebagai  obat tradisional  untuk  penyembuhan  berbagai penyakit  seperti  kanker  dengan  cara merebus  daun  benalu  kopi  yang  sudah kering  dan  meminum  hasil  rebusan tersebut (Raja,2008).
Beberapa  penelitian  telah  dilakukan untuk  mengkaji  pemanfaatan  ini  secara ilmiah.  Artanti  (2003)  telah  melakukan uji aktivitas  antioksidan  dan  bioaktivitas
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.2 Edisi September-April 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 31 Maret 2020 :: Accepted: 28 April 2019 :: Published: 30 April 2020
terhadap  ekstrak  air  dan  ekstrak  etanol daun  benalu  kopi  ( Loranthus  ferrugineus Roxb .)  yang  tumbuh  pada  inang  pohon nangka ( Artocarpus
heterophyllus ). Ekstrak air ekstrak etanol daun benalu kopi ( Loranthus ferrugineus Roxb .) aktif sebagai antioksidan dengan  nilai IC50 23,08pg/mL dan  21,56  pg/mL,  untuk  ekstrak  etanol baik  daun  maupun  ranting  memberikan IC50 di atas 100pg/mL (tidak aktif sebagai antioksidan  terhadap  DPPH).  Uji  aktivitas sistem  imun  dapat  dilakukan  dengan berbagai  metode  yaitu  dengan  melihat aktivitas  fagositosis  menggunakan  metode bersihan karbon (carbon clerance), respon hipersensivitas  tipe  lambat,  dan  uji hemaglutinasi titer antibodi (Seifu,2012).
Berdasarkan  pertimbangan  di  atas, penulis  merasa  penting  dan  perlu  untuk melakukan pengujian efek imunostimulator dari  ekstrak  etanol  dan  benalu  kopi ( Loranthus  ferrugineus  Roxb. )  dengan metode titer antibodi untuk melihat respon imun  spesifik  pada  tikus  jantan.  Maka, diperlukan penelitian ilmiah seperti penelitian  dan  pengujian  imunostimulator di bidang farmakologi.

## METODE
Jenis penelitian ini merupakan penelitian eksperimental  yang  menggunakan  tikus jantan  sebagai  hewan  percobaan  untuk melihat efek imunostimulator ekstrak etanol daun  benalu  kopi (Loranthus  ferrugineus Roxb .). Penelitian ini meliputi pengumpulan dan pengolahan bahan tumbuhan, pemeriksaan  karakterisasi  simplisia  dan ekstrak,  pembuatan  ekstrak  etanol  daun benalu  kopi  ( Loranthus  ferrugineus  Roxb .), pembuatan  suspensi  ekstrak  etanol  daun benalu  kopi  ( Loranthus  ferrugineus  Roxb. ), dan  penyiapan  hewan  percobaan.  Metode pengujian yang digunakan adalah hipersensitivitas tipe lambat dan uji analisa data.instrumen,  prosedur  pengumpulan data,  dan  analisis  data  yang  dipaparkan dalam bentuk paragraf.
Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  ini  Alat-alat  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  adalah  alat-alat  gelas laboratorium,  aluminium  foil,  neraca  listrik (Vibra), seperangkat alat destilasi penetapan  kadar  air,  rotary  evaporator, blender  (National),  mortir  dan  stamfer, neraca  hewan,  spuit  1  ml  (Terumo),  oral sonde,  pletismometer  air  raksa,  centrifuge (Dynamic),  microtube,  microtitration  plate, micropipette (Socorex), dan kertas saring.

## Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  daun  benalu  kopi, karboksi  metil  selulosa  (CMC),  natrium klorida  (NaCl),  kalium  klorida  (KCl), dinatrium hidrogen fosfat, Stimuno, (Na2HPO4),  kalium  dihidrogen  fosfat (KH2PO4), aqua bidestilasi, heparin, etanol 96%, toluen, kloroform dan air suling.

## Pembuatan Ekstrak
Pembuatan  ekstrak  etanol  dilakukan dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut etanol 96%. Sebanyak 5 kg serbuk simplisia  dimasukkan  kedalam  wadah kaca,  lalu  ditambahkan  pelarut  etanol sampai serbuk simplisia terendam, kemudian  didiamkan  selama  3  hari  lalu ekstrak  disaring,  setelah  itu  ekstrak dimaserasi kembali dan setelah di skrining ditemukan ekstrak mengandung flavonoid, kemudian  diuapkan  menggunakan  rotary evaporator  dengan  suhu  sekitar  40ºC, hasilnya  diperoleh  ekstrak  kental  (Depkes RI, 1979).
Pembuatan  Suspensi  Ekstrak  Etanol Daun benalu kopi ( Loranthus ferrugineus Roxb .)
Dalam    pengujian  akan  digunakan  4 variasi dosis yakni dosis 50, 100, 200, dan 400  mg/kgBB.  Ditimbang  50  mg  Ekstrak Etanol  Daun  benalu  kopi  ( Loranthus ferrugineus  Roxb .).  Dimasukkan  ke  dalam lumpang,  kemudian  tuang  sedikit  demi
sedikit  suspensi  CMC  Na  0,5%  sambil digerus hingga homogen, setelah homogen dituangkan ke dalam labu tentukur 100 ml. Demikian  dengan  variasi  dosis  100,  200, dan 400 mg/kgBB.
Penyiapan Kontrol, Suspensi
Stimuno®,  inokulum  bakteri  dan  uji titer antibody
a. Pembuatan Suspensi CMC Na 0,5% Pembuatan  suspensi  CMC  Na  0,5% dilakukan dengan cara sebagai berikut: sebanyak 0,5 gram CMC Na ditaburkan ke  dalam  lumpang  yang  berisi  air panas  sebanyak  20  ml.  Didiamkan selama  15  menit,  kemudian  digerus hingga diperoleh massa yang transparan,  diencerkan  dengan  sedikit air,  kemudian  dituang  ke  dalam  labu tentukur  100  ml,  ditambah  air  suling sampai batas tanda.
b. Penyiapan suspensi levamisole Pengambilan  sampel  tablet  levamisole yaitu  dengan  cara  timbang  setara  dan diserbukhaluskan  tidak  kurang  dari  10 tablet.  Serbuk  yang  telah  dihaluskan tersebut  kemudian  ditimbang  setara dengan lebih kurang 50 mg levamisole. Pembuatan suspensi levamisole dilakukan dengan cara sebagai berikut: ditimbang  serbuk  levamisole  dan dimasukan  kedalam  lumpang.  Digerus serbuk kemudian ditambahkan
suspensi  CMC  Na  0,5%  secukupnya. Digerus hingga homogen dan
dituangkan  kedalam  labu  tentukur  25 ml, dan kemudian ditambahkan suspensi  CMC  Na  0,5%  sampai  batas tanda.
c. Penyiapan  Phosphate  Buffered  Saline (PBS) Pembuatan PBS dilakukan dengan cara sebagai  berikut:  sebanyak  8  g  NaCl, 0,2  g  KCl,  1,44  g  Na2HPO4,  0,24  g KH2PO4, dilarutkan dalam 800 ml aqua bidestilasi,  kemudian  dicek  pH  dengan indikator pH hingga pH ± 7 dan dapat disesuaikan  dengan  penambahan  HCl
atau NaOH, tambahkan aqua bidestilasi hingga 1 L (Rahmi, 2011).
d. Uji Titer Antibodi Tiap  kelompok  hewan  percobaan diinjeksikan  dengan  0,1  ml  SDMS  1% dalam  PBS  sebagai  antigen  secara intraperitoneal pada hari ke-0. Perlakuan  dimulai  dari  hari  ke-0  dan diberikan  satu  kali  sehari  selama  7 hari.  Pada  hari  ke-7,  sampel  darah masing-masing  tikus  diambil  melalui pembuluh  darah  vena  di  bagian  ekor. Caranya  dengan  modifikasi  yaitu bagian  ujung  dari  ekor  tikus  disayat dengan    menggunakan  silet  kemudian darah  yang  keluar  disedot  dengan menggunakan  spuit  1  ml,  selanjutnya sampel  darah  dikumpulkan  dalam tabung  mikro  (microtube),  kemudian dilakukan  pemusingan  1900  rpm dengan alat sentrifugasi pada suhu 4oC selama 10 menit dan diambil serumnya.
Nilai titer antibodi
ditentukan
dengan
teknik hemaglutinasi.  25  μl  serum  diteteskan ke dalam sumur microtitration plate 96 lubang,  ditambahkan  PBS  dan  SDMS dengan  volume  yang  sama,  dan diencerkan  dua  kali  lipat  (1:2;  1:4; 1:8; 1:16; 1:32; 1: 64; 1:128; 1:256; 1:512;  1:1024;  1:2048;  1:4096) kemudian  diinkubasi  pada  suhu  37oC selama
1 jam dan diamati hemaglutinasi  secara  visual.  Nilai  titer antibodi ditentukan berdasarkan pengenceran terakhir di mana antibodi masih terdeteksi melalui hemaglutinasi yang  terlihat  secara  visual.  Nilai  titer antibodi tersebut selanjutnya ditransformasikan dengan
[2log(titer)+1] (Marbun, 2018).

## Hasil Dan Pembahasan
Pada  penelitian  ini,  pengujian  efek imunomodulator  ekstrak  etanol  daun benalu kopi ( Loranthus ferrugineus Roxb.)/ EEBK  dilakukan  dengan  metode  respon metode  titer  antibodi  yang  digunakan
untuk  mengetahui  pengaruh  daun  benalu kopi ( Loranthus ferrugineus Roxb.) terhadap respon imun spesifik humoral.
Pengujian  dilakukan  dengan  cara menginduksi  sel  imun  tikus  dengan  sel darah merah sapi (SDMS) secara intraperitonium pada hari ke-0. Pemberian SDMS 1% yang digunakan sebagai antigen pada tikus dimaksudkan untuk merangsang pembentukan antibodi spesifik.  Injeksi  ini  dilakukan  secara intraperitonium agar didapat reaksi respon imun  yang  cepat  dan  maksimum.  Pada pembuatan  SDMS  1%  digunakan  PBS ( Phosphate  buffer  saline)  Buffered  Saline ) sebagai  larutan  pencuci  dan  larutan pengencer.  Pencucian  SDMS  bertujuan untuk  memperoleh  sel  darah  merah  sapi yang  murni  artinya  tidak  dicemari  oleh protein serum (Puri, 1993).
Pengukuran  nilai  titer  antibodi dilakukan pada hari ke-7 dengan menggunakan metode hemaglutinasi. Hemaglutinasi  adalah  ikatan  antara  sel darah  merah  sebagai  antigen  dengan antibodi  sehingga  menimbulkan  suatu
gumpalan  yang  dapat  dilihat.  Pada lingkungan  dengan  pH  netral,  sel  darah merah  bermuatan  negatif  sehingga  akan terjadi  aksi  tolak  menolak  antar  sel.  Oleh karena  itu  sel  darah  merah    yang digunakan  disuspensikan  dalam    larutan penyangga  dengan  Ph  ±  7  (PBS)  untuk menjaga  agar  sel  darah  merah  tetap dalam  kondisi  pH  netral,  sehingga  tetap bermuatan negatif. Hemaglutinasi terbentuk  karena  adanya  ikatan  silang antara sel darah merah dengan antibodi.
Antibodi yang mempunyai kemampuan lebih  besar  untuk  berikatan  dengan  sel darah merah adalah IgM. IgM mempunyai ukuran yang besar dan valensi yang tinggi, sehingga dapat melawan rintangan elektrik dan  membentuk  ikatan  silang  dengan  sel darah  merah  sehingga  menyebabkan aglutinasi.  Antibodi  lainnya  seperti  IgG mempunyai ukuran dan valensi yang lebih kecil,  sehingga  kemampuannya  melawan rintangan elektrik lebih lemah
dibandingkan dengan
IgM (Puri,et al.,1993).  Data  nilai  titer  antibodi  dapat dilihat pada Tabel 1 di bawah ini. Tabel 1 . Data nilai titer antibodi No. Perlakuan Nilai titer antibody Titer antibody [2(Log titer)+1] 1  CMC Na 0,5% 16 3,40 2  Suspensi Levamisole 25 mg/kgBB 256 5,81 3  Suspensi EEBK 50 mg/kgBB 32 4,01 4  Suspensi EEBK 100 mg/kgBB 57,6 4,49 5  Suspensi EEBK 200 mg/kgBB 102,4 5,02 6  Suspensi EEBK 400 mg/kgBB 128 5,21
Hemaglutinasi  terbentuk  karena adanya  ikatan  silang  antara  sel  darah merah  dengan  antibodi.  Antibodi  yang mempunyai  kemampuan  lebih  besar  untuk berikatan  dengan  sel  darah  merah  adalah IgM.  IgM  mempunyai  ukuran  yang  besar dan  valensi  yang  tinggi,  sehingga  dapat melawan rintangan
elektrik
dan membentuk ikatan silang dengan sel darah
merah  sehingga  menyebabkan  terjadinya aglutinasi.  Antibodi  lainnya  seperti  IgG mempunyai  ukuran  dan  valensi  yang  lebih kecil,  sehingga  kemampuannya  melawan rintangan elektrik lebih lemah dibandingkan dengan  IgM.  Data  nilai  titer  antibodi  dapat dilihat pada Gambar 1 di bawah ini.
Suspensi EEBK 50 EEBK 100 EEBK 200 EEBK 400 levamisole mg/kgBB mg/kgBB mg/kgBB mg/kgBB Blanko 2 1 0 3,4 3 4,01 4,49 4 5,21 5,02 Nilai titer antibodi 7 6 5 5,81
Gambar 1. EEBK 50,100, 200, 400 mg/kgBB

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Peningkatan dosis ekstrak etanol daun benalu kopi  ( Loranthus ferrugineus  Roxb .) dapat  meningkatkan  nilai  titer  antibodi pada  tikus  jantan.  Peningkatan  dosis terbaik  ekstrak  etanol  daun  benalu  kopi ( Loranthus  ferrugineus  Roxb .)  dapat
meningkatkan  respon  imun  spesifik  pada tikus jantan.

## Saran
Untuk peneliti selanjutnya disarankan perlu melakukan  penelitian  lebih  lanjut  untuk melihat apakah Ekstrak Etanol daun benalu kopi  ( Loranthus  ferrugineus Roxb.)  dapat diformulasikan  sebagai  sediaan  farmasi (Herbal).

## DAFTAR PUSTAKA
Buku: Harborne,  J.B.  (1998). Phytochemical Methods .  Third  edition.  United  of Kingdom:  University  of  Reading. Halaman 214.

## Jurnal:
Artanti,  N.,  Jamilah,  dan  Hartati,
S.(2003).  Laporan  Teknis  Sub Tolok Ukur Pengembangan Senyawa  Potensial  antikanker dari Taxus sumatrana dan Benalu, Puslit Kimia LIPI,
Serpong.
Aldi,  Rasyadi,  Y.,  dan  Handayani,  D. (2014).Aktivitas  Imunomodulator dari  Ekstrak  Etanol  Meniran
(Phyllanthus niruri Linn.) terhadap  Ayam  Broiler.  Jurnal Sains Farmasi dan Klinis Fakultas Farmasi. 1(1): 20-26. Marbun, R. (2018). Test Of Immunomodulatory  Effects  From Ethanol  Extract  Herbs  Binara (Artemisia  Vulgaris  L.)  In  Male Rats. Asian Journal Pharmaceutical and Clinical
research . 11(1):246.
Marbun, R., Suwarso, E. and Yuandani, Y. (2018) “IMMUNOMODULATORY EFFECTS  OF  ETHANOL  EXTRACT ARTEMISIA VULGARIS L. IN MALE RATS”,
Asian Journal of
Jurnal Farmasi,  e-ISSN: 2655-0814 Vol. 2 No.2 Edisi September-April 2020 http://ejournal.medistra.ac.id/index.php/JFM ============================================================================================ Received: 31 Maret 2020 :: Accepted: 28 April 2019 :: Published: 30 April 2020
Pharmaceutical and Clinical
Research,  11(13),  pp.  245-247. doi:10.22159/ajpcr.2018.v11s1.2
6619. Baratawidjaja,  K.  (2012).  Imunologi Dasar.  Edisi  ke  IX.  Yogyakarta: Balai Penerbit Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Halaman 418. Puri,  S.,  dan  Bagchi,  K.  (1993).  Free Radical  and  Antioxidant  in Health and Disease. Eastern
Mediterranean  Health  Journal. 4(2): 1979-249.
Raja L.L.(2008).Uji Efek Ekstrak Etanol Daun  Benalu  Kopi  ( Swietenia mahagoni Jacq) terhadap Penurunan  Kadar  Gula  Darah Tikus  Putih, Skripsi ,  Fakultas Farmasi USU.
Rahmi, T.F. (2011). Gambaran Higiene dan  Sanitasi  Penyelenggaraan Makanan PT Nuansa Boga
Sehatama  Tahun  2011.  Skripsi. Fakultas  Farmasi.  Universitas Islam  Negeri  Syarif  Hidayatullah: Jakarta. Halaman 37-39.
Seifu,D.,  Assefa,  F.  &  Abay,  S.M. (2012).  Medicinal  plants  as antioxidant  agent:  understanding their  mechanism  of  action  and therapeutic efficacy. In Capasso,(ed). Medicinal Plants as Antioxidant Agents: Understanding  Their  Mechanism of Action and Therapeutic Efficacy . Pp. 97 – 145.
Oktianti, Dian,
Nova,H.F., dan Agnes,B.  (2015).  Uji  Aktivitas Imunostimulan Infusa Daun Cermai  (Phyllanthus  acidus  L. Skeells)  Pada  Tikus  Jantan  Galur
Sprague  Dawley  yang  Diinduksi Sel  Darah  Merah  Domba.  Jurnal
Farmasi dan Obat Alam.2(3): 28- 34.

## Peraturan dan Undang-undang:
Depkes  RI.  (1979).  MateriaMedika Indonesia.Jilid III. Jakarta: Departemen Kesehatan RI. Halaman 33, 167-170.