## Pengaruh Lama Penyimpanan Ikan Sarden Kemasan Kaleng terhadap Kadar Pb dan Cu
Refilda* 1 , Shulhan Zhalil Aliju 1 , Indrawati 1 1 Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Andalas Padang, 25161, Indonesia e-mail: * refilda_59@yahoo.com refilda@sci.unand.ac.id
Diterima: 12 September 2020/ Disetujui: 27 November 2020/ Dipublikasi online: 14 Januari 2021 DOI: https://doi.org/10.22437/chp.v5i2.10468

## ABSTRAK
Ikan sarden (Sardinella sp.) dalam kaleng sangat praktis karena bisa disimpan dalam waktu yang cukup lama serta kontaminasi bakteri dan mikroorganisme dari luar dapat dikurangi. Akan tetapi kontak langsung ikan sarden dengan kemasan kaleng dalam waktu yang lama dapat menyebabkan kontaminasi  logam  berat.  Oleh  karena  itu  konsentrasi  logam  Pb  dan  Cu  ikan  sarden  (Sardinella sp.)  kaleng  ditentukan  dengan  metode  Spektrofotometri  Serapan  Atom.  Sampel  ikan  sarden didestruksi menggunakan campuran HNO 3 pekat dan H 2 O 2 15% (3:1). Sampel adalah ikan sarden dengan  lama  penyimpanan  36  bulan  (A),  18  bulan  (B)  dan  6  bulan  (C)  setelah  produksi.  Hasil analisis  logam  Pb  pada  sampel  A,  B,  dan  C  berturut-turut  yaitu  0,807;  0,512;  dan  0,387  mg/L. Konsentrasi  logam  Pb  yang  diperoleh  pada  semua  sampel  melebihi  nilai  ambang  batas  yang ditetapkan oleh BPOM yaitu 0,3 mg/L. Konsentrasi logam Cu pada sampel A, B, dan C berturut- turut yaitu 2,718; 1,996; dan 1,240 mg/L. Konsentrasi logam Cu pada semua sampel masih berada di  bawah  batas  yang  ditetapkan  oleh  BPOM  yaitu  5  mg/L.  Uji  t-test  menunjukkan  terdapat perbedaan  yang  signifikan  dari  konsentrasi  logam  Pb  dan  Cu  untuk  ketiga  jenis  sampel.  Dapat disimpulkan bahwa lama penyimpanan berpengaruh terhadap konsentrasi logam Pb dan Cu dalam ikan sarden (Sardinella sp.) kemasan kaleng.
Kata kunci: Destruksi basah, ikan sarden, logam berat, SSA

## ABSTRACT
Canned sardines (Sardinella sp.) are very practical because they can be stored for a long time and can  reduce  contamination of  bacteria  and  microorganisms  from outside.  However,  direct  contact with  canned  packaging  for  a  long  time  can  cause  heavy  metal  contamination.  Therefore, concentrations  of  Pb  and  Cu  from  canned  sardines  were  determined  by  Atomic  Absorption Spectrometer. Samples were digested using a mixture of  concentrated HNO 3 and 15% H 2 O 2 (3:1). The samples were sardines with a storage time of 36 months (A), 18 months (B) and 6 months (C) after  production.  The  concentration  of  Pb  in  samples  A,  B,  and  C  were  0.807;  0.512;  and  0.387 mg/L. Pb concentration in all samples exceeded the threshold value set by BPOM, at 0.3 mg/L. The concentration of Cu in samples A, B, and C were 2.718; 1.996; and  1.240 mg/L respectively. The concentration  of  Cu  in  all  samples  was  still  below  the  limit  set  by  BPOM  at  5  mg/L.  The  t-test showed  that  there  were  significant  differences  in  the  concentration  of  Pb  and  Cu  metals  for  the three types of samples. It can be concluded that storage time affects the concentration of Pb and Cu metals in canned sardines (Sardinella sp.).
Keyword: Wet destruction, sardines, heavy metal, AAS

## PENDAHULUAN
Ikan  sarden  ( Sardinella  sp. )  merupakan  ikan  olahan  yang  dikemas  dalam kaleng banyak diproduksi di dalam dan luar negeri. Kelebihan pengemasan ikan dalam  kaleng  adalah  praktis  bagi  para  konsumen  dalam  memasaknya,  dapat disimpan  lebih  lama  dan  dapat  meminimalisir  kontaminasi  dari  luar  seperti bakteri  dan  mikroorganisme  lainnya.  Kaleng  dapat  menjaga  bahan  pangan terhadap  perubahan  konsentrasi  air  yang  tidak  diinginkan.  Pada  umumnya proses pengalengan ikan terdiri atas beberapa tahap, yaitu persiapan wadah dan bahan,  pengisian  bahan  baku  ( filling ),  pengisian  medium,  penghampaan  udara ( exhauting ),  penutupan  wadah,  sterilisasi  ( processing ),  pendinginan,  pemberian label  dan  penyimpanan.  Penggunaan  kemasan  kaleng  perlu  diwaspadai  karena pada makanan kaleng dapat terjadi kontaminasi logam berat dari pengemasnya (Rahayu, 1992). Kontaminasi logam ini dapat terjadi selama proses pengolahan dan  kondisi  selama  penyimpanan.  Kontak  langsung  antara  bahan  makanan dengan  alat  atau  wadah  selama  proses  pembuatan  dan  pengemasan  dapat menyebabkan  masuknya  logam  ke  dalam  makanan.  Pada  logam  timbal  (Pb) digunakan sebagai logam campuran dalam pematrian tutup makanan kemasan kaleng,  sedangkan  logam  tembaga  (Cu)  merupakan  salah  satu  komponen terbanyak yang digunakan untuk bahan baku pembuatan badan kaleng. Kedua logam Pb dan Cu dapat larut ke dalam makanan yang bersifat asam (Azis, 2007).
Rusaknya  kemasan  kaleng  selama  proses  pemasaran  dan  sisa  udara dalam  kaleng  akan  mempercepat  reaksi  oksidasi  besi  sehingga  konsentrasi logam  dalam  makanan  kaleng  akan  semakin  tinggi  (Tehebijuluw et  al ,  2013). Beberapa  logam  berat  sangat  beracun,  biasanya  merupakan  logam  transisi seperti  Pb  dan  Cu  yang  menunjukkan  efek  toksik  berbahaya  bagi  kesehatan manusia, dan bahkan dapat menyebabkan kematian. Masuknya logam berat ke dalam  tubuh  manusia  bisa  juga  melalui  bahan  makanan  atau  minuman  yang telah terkontaminasi oleh logam berat. Untuk menjaga kemasan kaleng supaya tidak  terjadinya  korosi  atau  reaksi  pada  bagian  dalam  kaleng  dapat  dilakukan dengan  melapisi  bagian  dalam  kaleng  dengan  enamel.  Logam  timah  sebagai bahan pelapis kemasan kaleng yang memiliki daya tahan terhadap korosi lebih lambat  dibandingkan  dengan  besi. Makanan  atau  minuman  yang  mengandung bahan atau senyawa  kimia seperti logam berat dalam jumlah konsentrasi yang tinggi  apabila  masuk  ke  dalam  tubuh  manusia  dapat  menyebabkan  gangguan pada  sistem  saraf,  pertumbuhan  terhambat,  gangguan  reproduksi,  peka terhadap penyakit infeksi, kelumpuhan, kematian dan dapat juga  menurunkan
tingkat  kecerdasan  anak  (Darmono,  2001).  Beberapa  logam  yang  biasa ditemukan  dalam  makanan  kaleng  adalah  timbal,  timah,  tembaga  dan  besi. Sedangkan nilai ambang batas pada ikan atau makanan menurut BPOM Depkes RI tahun 1989 dari logam timbal 0,3 mg/L, timah 40 mg/L, tembaga 5 mg/L dan besi  0,50  mg/L.  Mengkonsumsi  makanan  kaleng  sebaiknya  memperhatikan batas cemaran logam karena  logam akan mudah terakumulasi  di dalam tubuh dan dapat mengganggu kesehatan tubuh manusia (SNI 7387, 2009).
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  pengaruh  lama penyimpanan ikan sarden ( Sardinella sp .) kemasan kaleng terhadap konsentrasi logam  Pb  dan  Cu.  Preparasi  sampel  ikan  sarden  dilakukan  dengan  metode destruksi basah dan konsentrasi logam Pb dan Cu diukur menggunakan metode Spektrofotometri  Serapan  Atom  (SSA).  Uji  t  dilakukan  untuk  mengetahui pengaruh lama penyimpanan terhadap konsentrasi logam Pb dan Cu.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Peralatan dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah neraca analitik, oven (Memmert,  UN  75  (74  ltr)),  desikator,  Spektrofotometer  Serapan  Atom  (SSA: Varian  AA240FS Fast  Sequential )  dan  alat-alat  gelas  yang  biasa  digunakan  di laboratorium.
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini,  yakni:  Asam  nitrat (HNO 3 )  pekat,  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 )  15%,  air  destilasi,  aluminium  foil, kertas  saring  whatman  42  dan  ikan  sarden  ( Sardinella  sp .)  kemasan  kaleng merek yang sama  dengan saus  tomat  dengan lama  penyimpanan  36  bulan  (A), 18 bulan (B) dan 6 bulan (C) setelah produksi.

## Pembuatan Reagen
Pembuatan HNO 3 0,1 N
Larutan  HNO 3 65%  sebanyak  0,17  mL  dimasukkan  ke  dalam  gelas  ukur ditambahkan  air  destilasi  dan  diaduk  sampai  larutan  homogen,  setelah  itu dimasukkan ke dalam labu ukur 25 mL diencerkan sampai tanda batas dengan air destilasi dan diaduk sampai larutan homogen.

## Pembuatan Larutan Standar Pb 100 mg/L
Larutan  standar  Pb  1000  mg/L  dipipet  sebanyak  10  mL  dimasukkan  ke dalam labu 100 mL dan diencerkan sampai tanda batas dengan HNO 3 0,1 N.

## Pembuatan Larutan Standar Cu 100 mg/L
Larutan  standar  Cu  1000  mg/L  dipipet  sebanyak  10  mL  dimasukkan  ke dalam labu 100 mL dan diencerkan sampai tanda batas dengan HNO 3 0,1 N.

## Preparasi Sampel Ikan Sarden
Sampel  ikan  sarden  ( Sardinella  sp .)  kemasan  kaleng  sampel  A,  B  dan  C diperoleh  di  pasar  kota  Padang.  Ikan  diblender  lalu  di  keringkan  anginkan selama satu minggu, setelah kering sampel digerus dengan lumpang dan alu.

## Penentuan Kadar Air dalam Sampel Ikan Sarden
Masing-masing  sampel  ikan  yang  telah  digerus  dimasukkan  ke  dalam cawan penguap yang sudah ditimbang terlebih dahulu beratnya 5 gram. Setelah itu  sampel  dioven  pada  suhu  105 0 C  selama  3  jam  dan  didinginkan  di  dalam desikator,  kemudian  ditimbang.  Sampel  dikeringkan  lagi  sampai  didapatkan massa yang konstan.

## Destruksi Sampel Ikan Sarden
Destruksi sampel ini dilakukan untuk perombakan senyawa logam organik menjadi logam-logam anorganik dengan menggunakan asam sebagai pelarut dan juga pemecahan senyawa menjadi unsur-unsurnya sehingga dapat dianalisis.
Masing-masing  dari  sampel  A,  B  dan  C  kering  ditimbang  5  gram  dan dimasukkan  ke  dalam  labu  kjeldahl.  Ditambahkan  30  mL  HNO 3 pekat  dan  10 mL H 2 O 2 15%  secara berurutan, didestruksi sampai warna  coklat pada larutan hilang  dan  menjadi  larutan  jernih.  Pindahkan  larutan  hasil  destruksi  ke  labu ukur  25  mL  dan  diencerkan  dengan  HNO3  0.1  N  sampai  dengan  tanda  batas. Saring dan masukkan ke dalam botol vial untuk dianalisis dengan SSA.

## Penentuan Konsentrasi Logam Pb dan Cu dalam Sampel Ikan Sarden Pembuatan Kurva Kalibrasi Standar Pb dan Cu
Larutan  standar  Pb  disiapkan  dengan  konsentrasi  0,00,  0,50,  1,00,  1,50, 2,00  dan  2,50  mg/L  dari  larutan  standar  Pb  100  mg/L  dengan  pengenceran bertingkat, kemudian diukur serapannya dengan alat Spektrofotometer Serapan Atom pada panjang gelombang 283,3 nm. Untuk pembuatan kurva standar Cu, larutan  standar  Cu  dengan  konsentrasi  0,00,  0,30,  0,60,  0,90,  1,20  dan  1,50
mg/L disiapkan dari larutan standar Cu 100 mg/L menggunakan pengenceran bertingkat  dan  diukur  serapannya  dengan  alat  Spektrofotometer  Serapan  Atom pada panjang gelombang 324,7 nm.

## Penentuan Konsentrasi Logam Pb dan Cu dalam Sampel Ikan Sarden
Sampel  hasil  destruksi  basah  ditentukan  serapannya  dengan  alat Spektrofotometer  Serapan  Atom.  Untuk  konsentrasi  logam  Pb  dan  Cu  dapat dihitung berdasarkan persamaan regresi dari kurva kalibrasi standar.

## Analisis Data

## Uji T-test
Uji t-tes merupakan uji statistik yang menguji kebenaran dari suatu data  yang diperoleh.  Untuk  uji  t-tes  digunakan  t-test: Two-sample  Assumsing  Equal Variences yaitu  untuk  menguji  perbedaan  rata-rata  dua  variabel  dari  sampel yang  berbeda  dengan  mengasumsikan  kedua  sampel  tersebut  dimana mempunyai varian yang sama persis. Uji t-tes dilakukan untuk mengetahui hasil data  analisis  bisa  dipercaya  atau  tidak  dipercaya  berdasarkan  keakuratan  dari data yang diperoleh dan uji t-test juga digunakan untuk membandingkan uji t- hitung dengan t-tabel ( Brannen, 1997).
LoD ( Limit of Detection ) dan LoQ ( Limit of Quantification )
Penentuan  LoD  dan  LoQ  menggunakan  hasil  regresi  dari  larutan  standar Pb dan Cu menggunakan Microsoft Excel 2013 dan hasil yang didapatkan berupa data-data  pada  tabel  setelah  itu  data  pada  tabel  dimasukkan  ke  dalam  rumus LoD dan LoQ.
LoD dan LoQ dapat dihitung dengan rumus:
LoD =
(1)
LoQ =
(2)

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar Air dalam Sampel Ikan Sarden ( Sardinella sp .) Kemasan Kaleng
Hasil  penentuan  kadar  air  dalam  sampel  ikan  sarden  ( Sardinella  sp .) kemasan kaleng dapat dilihat pada Tabel 1. Penentuan kadar air dalam sampel ikan  sarden  kemasan  kaleng  dengan  pemanasan  dalam  oven  atau thermogravimetry yaitu  menguapkan  air  yang  ada  dalam  sampel  dengan  cara pemanasan da lam oven pada suhu 105˚C (Martono, 2009).
Tabel 1. Kadar Air dalam Sampel Ikan Sarden ( Sardinella sp .) Kemasan Kaleng No Nama Sampel Kadar Air dalam Sampel (%) 1.  Sarden ( Sardinella sp.) 36 Bulan setelah produksi (A) 11,19 2.  Sarden ( Sardinella sp.) 18 Bulan setelah produksi (B) 18,38 3.  Sarden ( Sardinella sp.) 36 Bulan setelah produksi (C) 10,25
Berdasarkan data yang diperoleh kadar air sampel ikan sarden ( Sardinella sp .) A, B dan C berturut-turut adalah 11,19%, 18,38% dan 10,25%. Sampel ikan sarden  ( Sardinella  sp .)  B  memiliki  kadar  air  paling  tinggi.  Tingginya  kadar  air dalam  makanan  kaleng  dapat  disebabkan  kesalahan  pengemasan  secara hermetis  (Ahmad,  2014).  Jika  terdapatnya  kadar  air  yang  tinggi  akan mempercepat  pertumbuhan  mikroba  pada  sampel  ikan  dalam  kemasan  kaleng (Anggraeini et  al ,  2013).  Tingginya  kadar  air  pada  ikan  kaleng  juga mempengaruhi  masa  kadaluarsa  dari  produk  tersebut  karena  produk  dalam kemasan  tidak  dapat  menerima  sensori  dari  masa  kadaluarsa  sehingga mempengaruhi masa umur penyimpanan produk kaleng (Winarno et al , 1980).

## Hasil Destruksi Sampel
Penggunaan  HNO 3 untuk  destruksi  sampel  ikan  sarden  berfungsi  sebagai oksidator  kuat  atau  sebagai  pengoksidasi  yang  baik,  sedangkan  H 2 O 2 dapat meningkatkan  kemampuan  oksidasi  serta  meningkatkan  kinerja  disolusi    dari HNO 3 .  Proses  destruksi  ini  berlangsung  dengan  pemanasan  yang  bertujuan untuk dekomposisi bahan organik yang ada dalam sampel. Gas berwarna coklat yang  dihasilkan  akan  keluar  dan  destruksi  telah  sempurna  kalau  larutan sampel sudah jernih tanpa adanya sisa gas coklat lagi. Berikut hasil reaksi yang terjadi antara logam Pb dan HNO 3 serta setelah penambahan H 2 O 2 :
3Pb (s) + 8HNO 3(aq) → 3Pb 2+(aq) + 6NO 3-(aq) + 2NO (g) ↑ + 4H 2 O (3)
2H 2 O 2(l) → 2H 2 O (aq) + O 2(g) (4) 2NO 2(g) + H 2 O → HNO 3(aq) + HNO 2(aq) (5)
2HNO 2(aq) → H 2 O (aq) + NO 2(g) +NO (g) (6) Pada proses reaksi ini gas NO 2 bereaksi dengan H 2 O setelah penambahan H 2 O 2 ,  dimana  H 2 O 2 terurai  menjadi  H 2 O  dan  O 2 .  Pada  HNO 3 dan  H 2 O 2 terjadi reaksi  yaitu  HNO 3 untuk  mendestruksi  zat  organik  yang  masih  tersisa, sedangkan  H 2 O 2 akan  terurai  dengan  adanya  pemanasan  menjadi gas  NO 2 dan NO.  Proses  destruksi  tersebut  akan  terus  berlangsung  sampai  semua  bahan- bahan  organik  yang  terdapat  pada  sampel  terdekomposisi  sempurna  (Harmita, 2004).

## Konsentrasi Logam Pb dan Cu dalam Sampel
Konsentrasi logam  Pb  dan Cu  dalam  sampel  ikan  sarden  kemasan  kaleng dihitung berdasarkan persamaan regresi yang terdapat pada Gambar 1. Hasilnya dapat dilihat pada Gambar 2.
Gambar 1. Kurva Kalibrasi larutan standar Pb dan Cu.
Gambar.  2 Konsentrasi  Logam  Pb  dan  Cu  pada  Sampel  Ikan  Sarden ( Sardinella sp .) A, B dan C
Berdasarkan  hasil  yang  diperoleh,  konsentrasi  logam  Cu  lebih  besar dibandingkan  dengan  konsentrasi  logam  Pb.  Konsentrasi  logam  Cu  yang terdapat  dalam  ikan  sarden  sampel  A,  B  dan  C  berturut-turut  adalah  2,718 mg/L,  1,996  mg/L  dan  1,240  mg/L,  sedangkan  konsentrasi  logam  Pb  sampel ikan  sarden  A,  B  dan  C  adalah  berturut-turut  0,807  mg/L,  0,512  mg/L  dan 0,387  mg/L.  Konsentrasi  logam  Cu  dan  Pb  tertinggi  diperoleh  pada  sampel  A, kemudian  diikuti  oleh  sampel  B  dan  sampel  C.  Hal  ini  disebabkan  karena lamanya  ikan  sarden  ( Sardinella  sp .)  berada  dalam  kemasan  kaleng,  sehingga asam yang terdapat dalam saus tomat akan melarutkan logam Pb dan Cu yang ada  pada  kemasan  kaleng.  Ion  hidrogen  dari  asam  askorbat  yang  terkandung dalam saus tomat pada ikan sarden dapat mengoksidasi lapisan dalam kemasan kaleng sehingga mempengaruhi tingginya konsentrasi logam Pb dan Cu.
Logam yang terlarut akan meresap ke dalam ikan sarden kemasan kaleng. Batas maksimum cemaran logam dalam makanan kemasan kaleng berdasarkan SK Dirjen BPOM No. 03725/B/SK/VII/89 untuk Pb 0,3 mg/L dan Cu 5 mg/L. Konsentrasi  logam  Cu  dari  semua  sampel  masih  di  bawah  batas  maksimum yang ditetapkan BPOM, sedangkan logam Pb pada semua sampel  berada di atas maksimum (Kristianingrum, 2012).

## Hasil Uji T-tes
Uji  t-tes  ( Two-sample  Assumsing  Equal  Vasriences) dilakukan  untuk melihat  pengaruh  lama  penyimpanan  terhadap  konsentrasi  logam  Pb  dan  Cu. Nilai  t-hitung  untuk  kedua  logam  diperoleh  besar  dari  nilai  t-tabel.  Hal  ini menunjukkan  terdapat  perbedaan  yang  nyata  dari  konsentrasi  logam  untuk ketiga  sampel  ikan  sarden.  Dapat  dikatakan  bahwa  lama  penyimpanan  ikan sarden ( Sardinella sp .) kemasan kaleng dapat mempengaruhi konsentrasi logam Pb dan Cu.
LoD ( Limit of Detection ) dan LoQ ( Limit of Quantification )
Hasil  Perhitungan  nilai  limit  deteksi  (LoD)  untuk  logam  Pb  dan  Cu  yaitu 0,0651  mg/L,  0,0425  mg/L.  Logam  Cu  pada  semua  sampel  diperoleh  nilai konsentrasi  di  atas  limit  deteksi  maka  hasil  pengukurannya  dapat  dipercaya. Pada  logam  Pb  juga  diperoleh  nilai  konsentrasi  di  atas  limit  deteksi  yang  bisa dipercaya  atau  hasil  pengukurannya  akurat.  Konsentrasi limit  kuantitasi  (LoQ) berbanding  lurus  dengan  presisi  atau  ketepatan  data  analisis.  Pada  hasil perhitungan diperoleh nilai limit kuantitasi logam Pb dan Cu yaitu 0,2170 mg/L dan  0,1416  mg/L.  Nilai  konsentrasi  logam  Pb  dan  Cu  berada  di  atas  limit kuantitasi,  hal  ini  menunjukkan  hasil  pengukuran  yang  akurat  dan  bisa dipercaya  pada  semua  sampel  ikan  sarden  ( Sardinella  sp .)  kemasan  kaleng (Riyanto, 2002).

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian, ikan sarden ( Sardinella sp .) kemasan kaleng A,  B  dan  C  mengandung  logam  Pb  dan  Cu.  Konsentrasi  logam  Pb  dan  Cu dipengaruhi  oleh  lama  penyimpanan  ikan  sarden  dalam  kemasan  kaleng. Semakin  lama  penyimpanan  ikan  dalam  kemasan  kaleng  semakin  tinggi konsentrasi logam Pb dan Cu dalam ikan.

## DAFTAR PUSTKA
Ahmad, NA. 2014. Kajian Terhadap Konsentrasi Air Tepung Jagung dan Tepung Karaginan  sebagai  Bahan  Baku  Puding  Jagung.  Universitas  Negeri Gorontalo. Gorontalo. 1-10
Anggraeini,  R.,  S.  Sheilica  dan  Bhatara  Ayi  Maeta.  2013.  Makalah  Proses Thermal  Hasil  Perikanan  Sejarah  Pengalengan  dan  Pengalengan  Secara Umum. Universitas Gadjah Mada. Yogyakarta. 19(2): 140-147
Azis,  V.  2007.  Analisis  Kandungan  Sn,  Zn  dan  Pb  dalam  Susu  Kental  Manis Kemasan  Kaleng  Secara  Spektrofotometri  Serapan  Atom.  Skripsi.  Jurusan Ilmu Kimia. Universitas Islam Indonesia. Yogyakarta. 29-30
Brannen,  Julia.  1997.  Memadu  Metode  Penelitian  Kualitatif  dan  Kuantitatif. Pustaka Pelajar. Yogyakarta. 4(1): 137-141
Darmono.  2001.  Lingkungan  Hidup  dan  Pencemaran  (Hubungannya  dengan Toksikologi Senyawa Logam). Universitas Indonesia Press. Jakarta. 1-97
Harmita. 2004. Petunjuk Pelaksanaan Validasi Metode dan Cara
Perhitungannya. Majalah Ilmu Kefarmasian. 1(3): 117-135
Kristianingrum, S. 2012. Kajian Berbagai Proses Destruksi Sampel dan Efeknya. Prosiding  Seminar  Nasional.  Jurdik  Kimia  FMIPA  UNY.  Yogyakarta.  195- 202
Kusnandar  F.  2006.  Desain  Percobaan  dalam  Penetapan  Umur  Simpanan Produk Pangan dengan Metode ASLT (Model Arrhenius dan Konsentrasi Air Kritis).  Modul  Pelatihan:  Pendugaan  dan  Pengendalian  Umur  Simpanan Bahan dan Produk Pangan. IPB. Bogor. 5(1): 42-52
Martono, Y. 2009. Validasi Metode KCKT Isokratik untuk Penetapan Konsentrasi Asam  Galat,  Kafein  dan  EGCG  pada  Berbagai  Produk  The  Celup.  Tesis Program  Pascasarjana  Fakultas  Farmasi.  Universitas  Gadjah  Mada. Yogyakarta. 4(1): 39-44
Rahayu, W.P. 1992. Teknologi Fermentasi Produk Perikanan. Departemen Pusat antar Universitas Pangan dan Gizi Institut Pertanian Bogor. Bogor. 1-140
Riyanto. 2002. Validasi dan Verifikasi Metode Uji Sesuai dengan ISO/IEC 17025 Laboratorium Pengujian dan Kalibrasi. Deepublish. Yogyakarta. 21-71
Standar Nasional Indonesia. 2009. SNI 7387. Batas Maksimum Cemaran Logam Berat dalam Pangan. Badan Standarisasi Nasional. Jakarta. 2-8
Tehebijuluw,  H,  Eirene,  GF,  dan  Semuel.  2013.  Penentuan  Kandungan  Logam Cd  dan  Cu  dalam  Produk  Ikan  Kemasan  Kaleng  secara  Spektrofotometri Serapan Atom. Cakra Kimia Indonesia E-Journal of Applied Chemistry . 1(1): 9-12
Winarno F. G., S. Fardiaz dan D. Fardiaz. 1980. Pengantar Teknologi Pangan. PT Gramedia. Jakarta. 83-89