## Studi Antibodi Poliklonal Anti-TBC dan Potensinya sebagai Rapid Test Kit Pendeteksi TBC
Muzaijadah Retno Arimbi 1*
Bagian Ilmu Penyakit Dalam Fakultas Kedokteran Universitas Wijaya Kusuma Surabaya 1 *e-mail: muzaijadaharimbi@gmail.com

## Abstrak
Kematian  akibat  penyakit  Tuberkulosis  (TB)  sampai  saat  ini  masih  menjadi  problem  dunia walaupun  berbagai  metode  telah  dilakukan  guna  dapat  diperoleh  diagnostik  yang  cepat,  dilakukan penangan dengan tepat,  sehingga dapat menekan prevalensi TB. Penelitian ini bertujuan untuk membuat Isolasi  protein  dari  serum  penderita  TBC  paru  dengan  sputum  BTA  (+),  melakukan  Isolasi  protein  dari serum  penderita  TBC  paru  dengan  sputum  BTA  (-),  serta  mengetahui  tingkat  spesifitas  antibodi  pada serum penderita TBC paru dengan sputum BTA (+) dan serum penderita TBC paru dengan sputum BTA (- ). Jenis penelitian yang digunakan adalah eksperimental laboratorik pada hewan coba tikus wistar dengan desain  penelitian  Control  Group  Post  Test  Design,    Rancangan  penelitian  yang  digunakan  dengan pemberian 3 perlakuan berbeda pada Kelompok tanpa perlakuan sebagai kontrol, Kelompok yang diberi isolat protein dari serum penderita TB Paru dengan sputum BTA (+)  sebagai kelompok 1 dan Kelompok yang diberi perlakuan dengan diberi isolat protein dari serum penderita TB Paru dengan sputum BTA (-) sebagai kelompok 2. Dari data yang terkumpul Setelah dilakukan dot blot, dilanjutkan pentabulasian hasil dot blot. Program CorelPhotopaint X4 untuk mendapatkan data rerata derajad ketebalannoda hitam yang diperiksa pada nitrosellulose membrane . Data yang terkumpul diolah dengan menggunakan perangkat lunak ( software ) statistik SPSS versi 11.5. Dari hasil uji elektroforesis sampel protein serum penderita TB Paru dengan BTA (+) dan protein dari serum penderita TB Paru dengan BTA (-), didapatkan protein spesifik dengan berat molekul 39 kDa. Dari hasil uji easternbloting protein serum 1 berasal dari penderita TB Paru dengan BTA (+) dan protein serum 2 berasal dari dari serum penderita TB Paru dengan BTA (-), terjadi reaksi positip antara antibodipoliklonal (anti 39 kDa) dengan protein serum   penderita TB Paru dengan BTA (+), atau protein dari serum  penderita TB Paru dengan BTA (-). Antibodi poliklonal anti TBC  pada penelitian nampaknya cukup sensitip sebagai Rapid tes pendeteksi TBC , namun tidak spesifisitas yang dibuktikan dengan hasil perhitungan statistik memiliki significansi > 0,0 5, sehingga  Antibodi poliklonal anti TBC  pada penelitian ini cukup sensitip, namun tidak spesifik digunakansebagai alat deteksi MTb
Kata kunci: Tuberkulosis, Protein spesifik, Antibodi poliklonal, Uji spesifitas

## Study of Anti-tuberculosis Polyclonal Antibody and Its Potential As A Rapid Test Kit for Tuberculosis Detection

## Abstract
Tuberculosis (TB) is one of the long-known diseases and is still the leading cause of death in the world. A variety of detection methods have been and are being implemented in order to suppress TB prevalence. The aim of this study was to isolate protein from serum pulmonary tuberculosis patients with sputum BTA (+), isolate protein from serum pulmonary tuberculosis patients with sputum BTA (-), and to know the level of  antibody  specificity  in  serum  pulmonary  tuberculosis  patients  with  sputum  BTA  (+)  and  serum pulmonary  tuberculosis  patients  with  sputum  BTA  (-).  The  type  of  research  used  was  laboratory experimental in Wistar rat experimental animals with Control Group Post Test Design research design. The research design was used with 3 different treatment groups, ie Control Group (without treatment), Group I (treated with isolate protein from serum of Pulmonary TB patients with sputum BTA (+)), and Group II (treated with protein isolate from serum of Pulmonary TB patient with sputum BTA (-) From collected data After dot blot is complete, tabulation of diagnostic test result (dot blot.) To obtain a standard in assessing the results of dot in each of these studies used CorelPhotopaint X4 program to obtain accurate data about
the  thickness  of  thin  black  spots  (nilaimean)  on  the  nitrocellulose  membrane  quantitatively.The  data collected is processed using software (software) statistics SPSS version 11.5 From the electrophoresis test results of an exciting protein sample m of Pulmonary TB patients with BTA (+) and protein from serum of Pulmonary TB patients with AFB (-), obtained specific protein with molecular weight of 39 kDa. From the serum 1 serum easternbloting test result from pulmonary TB patients with BTA (+) and serum 2 protein derived  from  serum  of  Pulmonary  TB  patients  with  BTA  (-),  positive  reaction  occurred  between antibodipoliklonal (anti 39 kDa) and serum protein of Pulmonary TB with BTA (+), or proteins from serum patients with pulmonary TB with AFB (-). The anti-tuberculosis polyclonal antibody in the study appears to be  quite  sensitive  as  Rapid  tuberculosis  detection  test,  but  no  specificity  as  evidenced  by  statistical calculation  has  significance>  0.05,  so  the  anti-tuberculosis  polyclonal  antibody  in  this  study  is  quite sensitive, but not specifically used as an MTb detection device
Keywords: tuberculosis, specific protein, polyclonal antibody, specificity test

## PENDAHULUAN
Kematian akibat penyakit Tuberkulosis sampai  saat  ini  masih  menjadi  problem  dunia walaupun  berbagai  metode  telah  dilakukan guna  dapat  diperoleh  diagnostik  cepat  telah lama dikenal dan sampai saat ini masih menjadi pdan tepat, sehingga dapat dilakukan penanganan  dengan  cepat  dan  tepat.  Setiap tahun,  8,74  juta  didiagnosis  sebagai  TB  aktif dengan angka kematian 2 juta per tahun. WHO mengumumkan  darur  global  pada  penyakit Tuberkulosis,  akibat  sebagian  besar  negara dijumpai  kejadian tak terkendali pada penyakit dengan perhatian utama pada ketidak berhasilan  terapi  tuberkulosis  dengan  sputum BTA  positif  merupakan  penderita  berpotensi menular. Kasus TB dan kematian akibat TB 90% dijumpai di negara berkembang yang menginfeksi  usia  produktif  (15  –  50  tahun) dengan angka lebih dari 75%  (1,2,3).
Kriteria  menetapkan  dugaan  TB  yang dikenal  saat  ini  diantaranya  pewarnaan  tahan asam.  Metode  pewarnaan  ini  hasilnya  kurang sensitif, oleh sebab jumlah >10 3 organisme / ml sputum,  merupakan  nilai  minimal  agar diperoleh hasil sputum BTA positif.
Mycobacterium  tuberkulosis  ( M.  tuberculosis ) akan  memberikan  gejala  apabila  individu terpapar  paling  cepat  5  minggu  setelah terinfeksi,  sehingga  diagnosis  TB  didasarakan atas gejala klinis dan gambaran radiologis yang dikonfirmasi  hapusan dan kultur sputum butuh waktu  2  bulan,  sehingga  terjadi  kelambatan diagnosis  dan  terapi.  Akibat  ketidak  sensitifan pewarnaan  sputum  BTA  dan  lambatnya perolehan  hasil  kultur  sputum  BTA,  maka dibutuhkan imunodiagnosis yang mudah, cepat diperoleh hasilnya dan murah, sehingga  dapat dipergunakan  mendeteksi  adanya  tuberkulosis
paru.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan  protein  spesifik  dari  serum penderita TBC paru dengan sputum BTA (+) dan protein  spesifik dari serum penderita TBC paru dengan  sputum  BTA  (-)  yang  dibuat  antibodi poliklonal  guna  keperluan  deteksi  Tuberculosis secara  cepat  dan  akurat  dengan  metode imunodiagnostik  pada  penderita  Tuberculosis paru aktif.

## METODE PENELITIAN

## Rancangan Penelitian
Rancangan  penelitian  eksperimental laboratorik  pada  hewan  coba  tikus  wistar dengan  desain  penelitian Control  Group  Post Test Design.

## Populasi dan Sampel
Rancangan  penelitian  yang  digunakan dengan  pemberian  3  perlakuan  berbeda,  yaitu Kelompok  tanpa  perlakuan  sebagai  kontrol, Kelompok yang diberi isolat protein dari serum penderita  TB  Paru  dengan  sputum  BTA  (+) sebagai  kelompok  1  dan  Kelompok  yang  diberi perlakuan  dengan  diberi  isolat  protein  dari serum penderita TB Paru dengan sputum BTA (- ), sebagai kelompok 2

## Prosedur Penelitian
Prosedur  Penelitian  ini  dibagi  menjadi  3 tahap  yakni  tahap  Isolasi  protein  kasar, pembuatan  antibodi  monoklonal  dan  Uji spesifisitas.

## Tahap Isolasi protein kasar
Isolasi protein dilakukan dari 2 sumber yakni  serum  penderita  TB  Paru  BTA  (+)  dan serum  penderita  TB  Paru  BTA  (-).  Isolasi  pada
darah  pasien  dilakukan  dengan  pengambilan darah  pasien  melalui  vena.  Darah  yang terkumpul segera di sentrifuse pada kecepatan 2000  g  selama  4  menit  pada  suhu  4 o C,  serum yang  telah  terbentuk  dipisahkan  dan  dianalisa kadar proteinnya menggunakan
spektrofotometri pada panjang gelombang 280 nm. Hasil absorbansi masing- masing yang telah diketahui,  ditentukan  rumus  kadar  proteinnya, selanjutnya  sejumlah  antigen  diberikan  secara intramuscular  dihitung  berdasar  kandungan protein  200  mikrogram  secara  intramuscular pada  tiap  pemberian.  Sebelum  pembuatan antibodi  terlebih  dahulu  protein  dari  serum penderita TB paru BTA (+) dan serum penderita TB  paru  BTA  (-)    dianalisa  berat  molekulnya dengan elektroforesis SDS PAGE. Elektroforesis SDS-PAGE  12.5%  diterapkan  pada  protein  dari serum.  Tiga  tahap  yang  dilakukan  dalam  SDS- PAGE, antara lain: persiapan gel, injeksi sampel dilanjutkan  proses  pewarnaan  dan  pencucian gel. Tahap persiapan gel, berupa pembuatan 2 macam gel, yaitu gel yang dipergunakan sebagai tempat  pengumpul  sampel  ( stacking  gel )  dan gel  akrilamid  merupakan  media  yang  berguna untuk  pemisahan  protein  ( separating  gel ). Campuran separating  gel dituangkan  dalam plate (wadah  untuk  lapisan  gel)  menggunakan mikropipet.  Campuran stacking  gel yang terbentuk  dituang  dipermukaan separting  gel dengan  sisir  yang  terpasang,  selanjutnya ditunggu  30  menit  sampai  terbentuk  gel. Selanjutnya sisir diangkat , plate dipasang pada alat elektroferesis dan running buffer dituangkan kedalam bejana elektroforesis. RSB (1:1)  ditambahkan  pada  sampel,  dipanaskan suhu 100 o C 5 menit, selanjutnya diinjeksikan 5 μL  pada  tiap  sumuran.  Dengan  arus  konstan 20mA dan tegangan 100 Volt dilakukan Running sampai sampel berlokasi 0.5 cm diatas dasar gel. Hasil  running  gel  dilakukan  perendaman  30-60 menit  dalam  larutan  staining,  selanjutnya dilakukan  perendaman  sampel  dalam  larutan destaining  yang  digerakkan  dengan  digoyang berkali-kali  /  didiamkan  selama  24  jam  agar warna  gel  larut,  selanjutnya  gel  ditutup filter paper, selanjtnya dihasilkan dilakukan scanning. Protein standar untuk mengukur massa molekul relatif,  sehingga  nilai  protein  serum  dapat diperoleh, selanjutnya persamaan regresi linier dengan  harga  log  massa  molekul  dibuat  pada posisi  sumbu  y  dengan  harga  Rf  dibuat  pada posisi  sumbu  x.  Harga  Rf  ( Retardaction  factor ) digunakan  rumus:  Rf  =  (Jarak  pergerakan
protein  dari  tempat  awa  l  /  Jarak  pergerakan warna dari tempat awal)

## Tahap Pembuatan antibodi poliklonal
Antibodi poliklonal Mycobacterium Tuberculosis diperoleh dari serum tikus wistar yang imunisasi dengan protein serum penderita TB Paru dengan sputum  BTA  (+)  dan  protein  dari  serum penderita dengan sputum TB Paru BTA (-). Pada kelompok kontrol diimunisasi dengan Complette Freund’s Adjuvant (CFA) tanpa antigen sebanyak 100 μl.  Pada  kelompok  kedua dan  ketiga, diinjeksi  dengan  protein  serum  penderita  TB Paru  sputum  BTA  (+)  dan  protein  dari  serum penderita  TB  Paru  sputum  BTA  (-)  dengan campuran antigen sebesar 200 μg/injeksi berat badan.  Perbandingan  Antigen  dan  CFA  1:1 dihomogenisasi sehingga terbentu emulsi putih.
2  minggu  kemudia    injeksi booster dilakukan. Sedangkan pada kontrol diinjeksi IFA ( Incomplette  Freund’s  Adjuvant )  tanpa  antigen sebanyak 100 μl. Kelompok dua dan tiga masing- masing  dilakukan  imunisasi  dengan  protein serum penderita TB Paru dengan sputum BTA (+) dan  protein  dari  serum  penderita  TB  Paru dengan sputum BTA (-)  diemulsikan dengan IFA 1:1.  Setelah  mencapai  2  minggu  dilakukan pengambilan  darah  tikus,  selanjutnya  darah yang terkumpul diambil serumnya dengan cara sentrifuse pada kecepatan 3000 rpm, 10 menit dan  suhu  4 o C.  Selanjutnya  serum  dipipet kedalam  tabung  eppendorf  untuk  di freezer sampai  purifikasi  serum  tiba.  Purifikasi  serum memakai  ammonium  sulfat  jenuh  50%  dan ammonium  sulfat  dengan  perbandingan  1:1, selanjutnya sebanyak 3 kali dilaksanakan vortex tiap 10 menit pada suhu 4 0 C, serum selanjutnya disentrifugasi  3000  rpm  selama  20  menit  pada suhu 4 o C, setelah supernatan dibuang presipitat dipipet dan ditambah dengan ammonium sulfat 1:10,  disentrifugasi  3000  rpm  ,  20  menit  pada suhu  4 0 C.    Supernatan  dibuang,  selanjutnya presipitat dilarutkan menggunakan buffer fosfat 0,05  M  pH  7  (1:1).  Setelah  divortex,  serum dipipet  dan  dimasukkan  dalam  selofan  dan didialisis dengan 0,01 M buffer fosfat pH 7 pada suhu rendah selama 12 jam.

## Tahap Uji Spesifisitas
Estern blot atau Dot blot merupakan uji serologis berfungsi sebagai deterktor spesifisitas antigen  dan  antibodi.  Antibodi  yang  dibuat dicampurkan  dalam  PBS  dengan  kandungan NaN3  (  berupa  1  mL  Na-Azida  9  mL  PBS)
dipipetkan  pada  membran  nitroselulosa  yang dibasahi  dengan  larutan  PBS.  Selanjutnya membran  dipasangkan  pada  alat  dot  blotter, kemudian  sampel  disentuhkan  sebanyak  50μl, alat  dot  blotter  dijalankan  sampai  antigen terserap dalam membran, selanjutnya dibloking dengan buffer 1 jam dan pencucian dengan PBS Tween-20  0,05%  sebanyak  3  kali.  Selanjutnya hasil blotter diinkubasi dengan antibodi primer dalam  PBS-Skim  Milk  1%    selama  2  jam,  dicuci dengan PBS Tween-20 0,05% diulang sebanyak 3 kali.  Selanjutnya  hasil  diinkubasi  ulang  dengan antibodi sekunder Igg AP ( Alkaline Phosphatase ) dalam  waktu  1  jam,  kemudian  dicuci  kembali dengan PBS Tween-20 pengulangan sebanyak 3 kali.  Hasil  diinkubasikan  dalam  substrat  BCIP dalam  ruang  gelap,  sehingga  diperoleh perubahan  warna  pada  hasil  akhir,    dilakukan penambahan  aquades  untuk  menghentikan proses, selanjutnya membran diambil dari mesin dot blotter dan dikeringkan pada udara terbuka.

## Analisa Data
Proses  dot  blot  yang  telah  selesai, ditabulasi hasil uji diagnostiknya. Nilai standard diperoleh dengan menilai hasil dot dalam setiap penelitian  untuk  memperoleh  data  akurat berupa  nila  rerata  ketebalan  noda  hitam  pada membran  nitroselulosa  dengan  menggunakan program Corel Photopaint  X4 .  Data  yang terkumpul diolah dengan menggunakan perangkat  lunak  ( software )  statistik  SPSS  versi 11.5.

## HASIL PENELITIAN

## Isolasi Protein Kasar
Hasil  uji  elektroforesis  sampel  protein serum  penderita  TB  Paru  dengan  BTA  (+)  dan protein  dari  serum  penderita  TB  Paru  dengan BTA  (-),  didapatkan  protein  spesifik  dengan berat molekul 39 kDa.
Gambar  1 .  Elektroforesis  serum  penderita  TB Paru

## Uji Spesifitas
Gambar 2. Hasil Uji  Easternbloting
Hasil uji Eeastern bloting protein serum 1 berasal  dari  penderita  TB  Paru  dengan  BTA  (+) dan  protein  serum  2  berasal  dari  serum penderita TB Paru dengan BTA (-), terjadi reaksi positip  antara  antibodipoliklonal  (anti  39  kDa) dengan  protein  serum    penderita  TB  Paru dengan  BTA  (+),  maupun  protein  dari  serum penderita TB Paru dengan BTA (-)
Serum2 Serum1 Kontrol Ulangan 1 Ulangan 2 Ulangan 3

## Analisa Data Hasil Penellitian
Hasil  Uji  Anova  untuk  spesifisitas Antibodi Poliklonal terhadap antigen MTB dalam serum  penderita  TB  Paru  dengan  BTA  (+)  / kelompok  1  maupun  serum  penderita  TB  Paru
dengan  BTA  (-)  /kelompok  2  dibanding kelompok  kontrol  dengan  nilai  signifikansi    > 0,05,  maka  tidak  ada  beda  antara  kelompok kontrol dengan kelompok 1 dan kelompok 2
Hasil  Multiple  Comparasi  LSD  untuk spesifisitas Antibodi Poliklonal terhadap antigen MTB nampak pada kelompok kontrol dibanding kelompok perlakuan 1 /serum 1  memiliki mean (12,683  +  13,053)  dengan  significansi  0,347; kelompok kontrol dibanding kelompok perlakuan 2 /serum 2 memiliki mean (23,328  + 13,053)  dengan  significansi  0,094;  sedangkan kelompok  perlakuan  1  /serum  1  dibanding kelompok perlakuan 2 /serum 2 memiliki mean (10,645 + 13,053) dengan significansi 0,428 .

## PEMBAHASAN
Deteksi  keberadaan  antigen  di  dalam tubuh  dilakukan  oleh  antibodi.  Pembuatan antibodi  secara  konvensional  dapat  dilakukan dengan  cara  vaksinasi    hewan  coba,  kemudian mengisolasi antibodi dalam serum hewan coba, sehingga diperoleh antibodi poliklonal. Antibodi poliklonal  dalam  jumlah  besar  dapat  diperoleh dengan  melakukan  vaksin  pada  binatang  coba dengan  jumlah  yang  banyak  sesuai  dengan
kebutuhan  vaksin,  sehingga  jumlah  antibodi poliklonal  dirasakan  sangat  kurang.  Antibodi spesifik  dapat  dibuat  secara in  vitro ,  sehingga antibodi  dapat  diproduksi  dalam  jumlah  besar tanpa terkontaminasi dengan antibodi lain yang tidak  diinginkan.  Antibodi  spesifik  yang diperoleh  dari  Antibodi  poliklonal  jumlahnya sangat  sedikit  dan  bersifat  heterogen  karena antibodi  poliklonal  mengikat  berbagai  macam epitop,  sehingga  sangat  sulit  menghilangkan antibodi  lain  yang  tidak  diinginkan  (4). Sedangkan  Antibodi  monoklonal,  merupakan antibodi homogen, diperoleh dari satu klon sel hibrid  yang  dibuat  dengan  imuniasasi  pada hewan  coba,  selanjutnya  sel  limfosit  hewan coba difusikan dengan sel mieloma, sehingga sel hibrid yang diperoleh dapat dibiakkan ( immortal ).  Spesifisitas  Antibodi  monoklonal lebih  besar  dibanding  antibodi  poliklonal, karena  1  epitop  antigen  saja  yang  dapat  diikat Antibodi monoklonal, sehingga antibodi jenis ini dapat dibuat dalam banyak. Antibodi
ANOVA
spesifitas
1636,788 2 818,394 1,601 ,234 7666,815 15 511,121 9303,603 17 Between Groups Within Groups Total Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Multiple Comparisons Dependent Variable: spes ifitas
LSD
12,68333 13,05273 ,347 -15,1379 40,5046 23,32833 13,05273 ,094 -4,4929 51,1496 -12,68333 13,05273 ,347 -40,5046 15,1379 10,64500 13,05273 ,428 -17,1762 38,4662 -23,32833 13,05273 ,094 -51,1496 4,4929 -10,64500 13,05273 ,428 -38,4662 17,1762 (J) kelompok serum 1 serum 2 kontrol serum 2 kontrol serum 1 (I) kelompok kontrol serum 1 serum 2 Mean Difference (I-J) Std. Error Sig. Lower Bound Upper Bound 95% Confidence Interval
monoklonal  dibuat  dengan  penggabungan  dua jenis  sel,  yakni  sel  limfosit  B  sebagai  penghasil antibodi  dan  sel  mieloma  sebagai  sel  yang membelah  tak  terkendali,  dengan  hasil penggabungan  yang  dikenal sebagai  hibridoma (5)
Diagnosis  TB  Paru  pada  penderita ditegakkan  berdasarkan  hasil  sputum  smear Batang  Tahan  Asam  (BTA)  dan  berdasarkan gambaran  pada  Thoraks  foto.  Diagnosis  akhir yang diperoleh yaitu Penderita yang terdiagnosis  secara  klinis  (gambaran  pada  foto thoraks  adanya  fibroinfiltrat/infiltrat  dengan sputum  smear  BTA  negatif),  serta  Penderita yang terdiagnosis secara bakteriologi (gambaran foto  thoraks  adanya  fibroinfiltrat/infiltrat dengan sputum smear BTA positip). Kuman MTB pada  sputum  penderita  TB  Paru  terdeteksi apabila  jumlahnya  mencukupi,  yaitu  >10 3 organisme/ml  sputum  (TB  Update,2017).  Pada penelitian  ini  dipergunakan  Antibodi  poliklonal yang  diharapkan  dapat  menjadi  rapid  test  kit sebagai  pendeteksi  kuman  MTB.  Antibodi Poliklonal  pada  penelitian  ini  diperoleh  dari  2 kelompok, yaitu kelompok 1 adalah serum tikus coba  yang  di  vaksin  Isolat  protein  serum penderita TB Paru aktif dengan sputum BTA (+) dan kelompok 2 adalah serum tikus coba yang di vaksin  Isolat  protein  dari  serum  penderita  TB Paru aktif dengan sputum BTA (-).
Kilas  balik  dari  perjalanan  kuman  MTB dalam  tubuh  diawali  dari  masuknya  kuman kedalam  saluran  napas  sampai  pada  alveoli, selanjutnya  kuman  MTB  ditangkap  oleh makrofag  dan  masuk  ke  dalam  endosom makrofag  yang  diperantarai  reseptor  manosa makrofag, sehingga makrofag mengenali glikolipid  berselubung  manosa  di  dinding  sel MTB,  selanjutnya  MTB  menghambat  respon mikrobisida normal dengan cara manipulasi pH dan penghentian pematangan endosom. Akibat terganggunya pembentukan fagolisosom efektif oleh makrofag, maka MTB leluasa berproliferasi dalam  makrofag  alveolus  tanpa  gangguan sampai terjadi bakterimia dan penyebaran luas ke  berbagai  tempat.  Oleh  sebab  itu  mengapa Isolat  protein  dari  serum  penderita  TB  Paru dapat  dijumpai  baik  yang  dalam  sputumnya terdeteksi  adanya  kuman  MTB  maupun  tidak terdeteksi  adanya  kuman  MTB  (Pedoman Nasional  Pengendalian  Tuberkulosis,  2014). Spesifisitas  tes  serologis  awal  yang  dibuat  dari antigen  kasar  adalah  rendah,  karena  reaksi silang dengan spesies Mycobacterium lingkungan.  Spesifisitas  dapat  ditingkatkan
dengan menggunakan antigen yang dimurnikan. Berbagai  antigen  telah  terjadi  disesuaikan dengan  serodiagnosis  TB.  Antigen  tertentu adalah  ditemukan  memiliki  signifikansi  lebih diagnostik,  salah  satunya,  38  kDa  antigen  yang merupakan  protein  pengikat  fosfat,  dilaporkan spesifik  untuk  kompleks  M.  tuberculosis. Antigen  ini  telah  diidentifikasi  sebagai  reagen potensial digunakan untuk skrining TB (8). Pada penelitian ini Protein Isolat diperoleh dari serum penderita  TB  Paru  dengan  sputum  BTA  (+) maupun BTA (-) dengan berat molekul 39 kDa.
Spesifisitas  adalah  kemampuan  dalam mendeteksi  pada  individu  yang  memiliki keadaan  khusus  (misalnya:  penyakit  tertentu), dibanding  kesalahan  dalam  pengelompokan sejumlah  individu  sehat  sebagai  individu  yang sakit. Spesifisitas adalah kemampuan mendeteksi  negatif  sejati,  sehingga  spesifisitas yang  besar,  artinya  individu  dengan  penyakit tertentu akan menunjukan hasil positif dengan pemeriksaan (tes) tertentu, sehingga peningkatan hasil positif palsu, dimana individu sehat  terdeteksi  sebagai  individu  sakit  (9). Sensitivitas  adalah  kemampuan  mendeteksi pada  individu  yang  memiliki  keadaan  khusus (misalnya: penyakit tertentu) tanpa meloloskan beberapa  individu  sakit.  Peningkatan  hasil negatif  palsu,  akan  menurunkan  sensitivitas  , sehingga sejumlaj negatif palsu akan mengurangi sensitivitas (9).
Pada penelitian ini Kelompok kontrol yang diimunisasi  dengan  CFA  ( Complette  Freund’s Adjuvant ) 100 μl, dibanding kelompok 1, yaitu: tikus  coba  yang  diimunisasi  dengan  isolat protein  serum  penderita  TB  Paru  aktif  dengan sputum BTA (+) maupun kelompok 2, yaitu: tikus coba  yang  diimunisasi  dengan  isolat  protein serum  penderita  TB  Paru  aktif  dengan  sputum BTA (-) memiliki nilai signifikansi 0,234 (nilai sig > 0,05), artinya tidak dijumpai beda signifikansi antara kontrol, perlakuan 1 dan perlakuan 2. Hal ini  terjadi  diduga  akibat  lemahnya  antibodi poliklonal  dalam  perolehan  antibodi  spesifik, karena antibodi yang diperoleh secara poliklonal kemungkinan  besar  terkontaminasi  dengan antibodi  lain  yang  tidak  dikehendaki,  sehingga antibodi  yang  spesifik  untuk  MTB  jumlahnya sangat  sedikit.  Heterogenitas  antibodi  terjadi akibat banyaknya antibodi kurang spesifik dalam kemampuannya  mengikat  berbagai  epitop, akibatnya tidak mudah  menghilangkan antibodi lain  yang  tidak  diinginkan.  Pada  penelitian pengamatan  perbedaan  warna  gumpalan antigen  antibodi  dari  hasil  uji  Estern  blooting
kelompok  perlakuan  lebih  pekat/warna  lebih biru  ke  unguan  artinya  kandungan  proteinnya lebih  tinggi  dibanding  kelompok  kontrol, sehingga secara kualitatif warna gumpalan isolat protein penderita TB paru sebagai antigen yang berrespon  terhadap  antibodi  poliklonal  tikus coba, sehingga dikatakan bahwa hasil penelitian ini cukup sensitive. Disimpulkan bahwa Antibodi poliklonal  anti  TBC  pada  penelitian  ini nampaknya cukup sensitip, namun tidak spesifik digunakan sebagai sebagai alat deteksi MTB

## KESIMPULAN DAN SARAN
Pada  penelitian  telah  didiperoleh    isolat
protein spesifik dari protein serum penderita TB Paru dengan BTA (+) dan  BTA (-) dengan berat molekul  39  kDa.  Uji  spesifitas  protein  ini menunjukkan  hasil  positif  sebesar  rerata 162,703 pada protein serum penderita TB Paru dengan  BTA  (+)  serta  sebesar  rerata    150,37 pada  protein  dari  serum  penderita  TB  Paru dengan  BTA  (-).  Antibodi  poliklonal  anti  TBC pada  penelitian  nampaknya  cukup  sensitip sebagai  Rapid  tes  pendeteksi  TBC,  sehingga antibodi poliklonal anti TBC  pada penelitian ini cukup sensitip, namun tidak spesifik digunakan sebagai sebagai alat deteksi MTB

## DAFTAR PUSTAKA
1. Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2002.  Pedoman  nasional  penanggulangan tuberkulosis, cetakan VI, Jakarta.
2. Kumaresan PR, Lai WC, Chuang SS, Bennett, M, Mathew PA, 2002. CS1, a novel member of  the  CD2  family,  is  hemophilic  and regulates  NK  cell  function. Mol  Immunol . 39(1-2): 1-8
3. Blanc  L,  Chaulet  P,  Espinal  M, et  al ,  2003. Treatment  of  tuberculosis.  Guidelines  for national  programmes 3 rd ed. World Health Organization, Geneva.
4. Gordon S, 2008. Elie Metchnikoff : Father of natural immunity. Eur. J. Immunol . 38 (12): 3257–3264.  Köhler  G  and  Milstein  C,  1975. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature . 256 (5517): 495-497.
5. Köhler  G  and  Milstein  C,  1975.  Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined  specificity. Nature .  256  (5517):
495-497.
6. TB UPDATE IX, 2017. Novel Management to end  TB.  Proceeding  Book.  Workshop,
Simposium, Pameran. Hotel Bumi Surabaya,
29-30  April.  Departemen  Pulmonologi  dan
Ilmu  Kedokteran  Respirasi,  FK-Unair  RSUD Dr. Soetomo Surabaya 7. Pedoman Nasional Pengendalian Tuberkulosis, 2014. Indonesia Bebas Tuberkulosis. Kementerian Kesehatan Republik  Indonesia  Dirjen  Pengendalian Penyakit dan Penyehatan Lingkungan. 8. Pfyffer GE, Brown-Elliot BA, Wallace WC Jr, 2003. Mycobacterium : General Characteristics, Staining Procedures. Manual  of  Clinical  Microbiology  Volume  1 , 8th edition. Edited by: Murray PR, Baron EJ, Jorgensen JH, Pfaller MA, Yolken  RH. Washington, DC: ASM Press; 532-559.
9. Sharma  SK,  Kohli  M,  Yadav  RN,  Chaubey  J, Bhasin D, Sreenivas V et al , 2015. Evaluating the  Diagnostic  Accuracy  of  Xpert  MTB/RIF Assay in Pulmonary Tuberculosis. PLOS One. 10(1): 1-9