## ARTIKEL RISET
URL artikel: http://e-jurnal.fkg.umi.ac.id/index.php/Sinnunmaxillofacial
Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Sarang Semut ( Myrmecodia tuberosa Jack ) Terhadap Bakteri Aggregatibacter actinomycetemcomitans
Rahmat Wijaya Kusuma 1 , K Lilies Anggarwati Astuti 2 , Cicih Bhakti Purnamasari 3 , Yadi 4 , Nuryanni Dihin Utami 5 1,2,3,4,5 Fakultas Kedokteran, Universitas Mulawarman Email Penulis Korespondensi ( K ): liliesanggarwati@fk.unmul.ac.id rahmatkusuma14@gmail.com 1 , liliesanggarwati@fk.unmul.ac.id 2 , c.purnamasari@fk.unmul.ac.id 3, yadi@fk.unmul.ac.id 4 , nuryannidihin@gmail.com 5
(085255890557)

## ABSTRAK
Pendahuluan: Penyebab utama periodontitis berhubungan dengan aktivasi berlebihan respon imun-inflamasi host terhadap  bakteri  patogen.    Metabolit  sekunder  pada  tumbuhan  sarang  semut  ( Myrmecodia  tuberosa  Jack ) diantaranya  dari  golongan  flavonoid  dan  tanin  mempunyai  sifat  antibakteri. Tujuan  Penelitian: Untuk mengetahui  aktivitas  antibakteri  ekstrak  tanaman  sarang  semut  terhadap  pertumbuhan  bakteri A. Actinomycetemcomitans . Bahan  dan  Metode: dilakukan  uji  secara  in  vitro  berupa  penelitian  eksperimental dengan  12  kelompok  uji  yaitu  perlakuan  dengan  konsentrasi  125  mg/mL,  62,5  mg/mL,  31,25  mg/mL,  15,62 mg/mL,  7,81  mg/mL,  3,90  mg/mL,  1,95  mg/mL,  0,97  mg/mL,  0,48  mg/mL,  0,24  mg/mL,  0,12  mg/mL,  0,06 mg/mL, kelompok kontrol positif (Chlorhexidine gluconate 0,2%) dan kelompok kontrol negatif (DMSO 10%) dengan  metode  mikrodilusi  untuk  melihat  kadar  hambat  minimum. Hasil: hasil  penelitian  yang  dilakukan menunjukan adanya aktivitas antibakteri ditandai dengan terdapatnya sumuran yang tetap jernih pada beberapa konsentrasi. Kesimpulan: ekstrak  etanol  tanaman  sarang  semut  memiliki  kemampuan  untuk  menghambat pertumbuhan bakteri penyebab periodontitis agresif A. Actinomycetemcomitans.
Kata kunci: Aggregatibacter actinomycetemcomitans; Myrmecodia tuberosa jack; Periodontitis agresif.

## PUBLISHED BY:
Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Muslim Indonesia Address:
Jl. Pajonga Dg. Nagalle. 27 Pab’batong (Kampus I UMI) Makassar, Sulawesi Selatan.
Email : sinnunmaxillofacial.fkgumi@gmail.com ,
Article history: Received 5 Oktober 2023 Received in revised form 25 Oktober 2023 Accepted 28 Oktober 2023 Available online 30 Oktober 2023 licensed by Creative Commons Attribution-ShareAlike 4.0 International License .

## ABSTRACT
Introduction: The  main  cause  of  periodontitis  is  associated  with  the  overactivation  of  the  host’s  immune inflammatory response against bacterial pathogens. Secondary metabolites in ant plant (Myrmecodia tuberosa Jack)  include  the  class  of  flavonoid  and  tannin  which  have  antibacterial  properties. Objectives: To  test  the antibacterial  activity  of  ant  plant  extract  against  the  growth  of  A.  Actinomycetemcomitans  bacteria  in  vitro. Materials and Methods: This research was experimental research with 12 test groups in different concentration as follows; 125 mg/mL, 62.5 mg/mL, 31.25 mg/mL, 15.62 mg/mL, 7.81 mg/mL, 3.90 mg/mL, 1.95 mg/mL, 0.97 mg/mL,  0.48  mg/mL,  0.24  mg/mL,  0.12  mg/mL,  and  0.06  mg/mL.  There  were  also  positive  control  group (Chlorhexidine gluconate 0.2%) and negative control group (DMSO 10%) with microdilution method to assess the minimum inhibitory concentration. Results: The results of this research showed that there were antibacterial activities indicated by the wells in the well plate that remained clear at several concentration levels. Conclusions: Ethanol extract of ant plant has the ability to inhibit the growth of bacteria that cause aggressive periodontitis, i.e., A. actinomycetemcomitans.
Keywords : Aggregatibacter actinomycetemcomitans; Myrmecodia tuberosa jack; aggressive periodontitis.

## PENDAHULUAN
Tumbuhan  sarang  semut  ( Myrmecodia )  adalah  salah  satu  tumbuhan  asli  dari  Indonesia  yang sudah digunakan sejak lama oleh masyarakat asli Papua dan Kalimantan untuk menyembuhkan berbagai penyakit. 1 Sarang semut di Indonesia dapat ditemukan di beberapa daerah yang ada di Indonesia seperti Papua, Papua Barat, Sumatera dan Kalimantan. 2 Metabolit sekunder yang terdapat di tumbuhan sarang semut  ( Myrmecodia  tuberosa  Jack )  diantaranya  yaitu  dari  golongan  flavonoid  dan  tanin. 3 Indonesia memiliki banyak jenis tanaman yang dapat dibudidayakan untuk mengobati berbagai penyakit karena mengandung  banyak  senyawa  kimia  yang  berguna  sebagai  obat,  salah  satunya  yaitu  flavonoid  yang mempunyai  sifat  antibakteri. 4 Antibakteri  merupakan  senyawa  yang  digunakan  untuk  menghambat pertumbuhan  bakteri,  mekanisme  kerja  senyawa  antibakteri  yaitu  dengan  merusak  dinding  sel, mengubah permeabilitas membran, mengganggu sintesis protein, dan menghambat kerja enzim. 5
Penyakit gigi dan mulut merupakan penyakit terbanyak ke enam pada penduduk di Indonesia. Karies dan penyakit periodontal adalah dua gangguan gigi dan mulut yang paling umum. Prevalensi penyakit periodontal telah mencapai 60%, hal tersebut cukup menjelaskan bahwa masyarakat Indonesia berisiko terkena penyakit periodontal. 6 Secara global 796 juta jiwa mengalami periodontitis di seluruh dunia. 7 Periodontitis  termasuk  masalah  kesehatan  masyarakat  dengan  angka  prevalensi  yang  tinggi menurut World Health Organization (WHO) yaitu mencapai 10-15% dari populasi dunia. 8 Penyebab utama  periodontitis  berhubungan  dengan  aktivasi  yang  berlebihan  dari  respon  imun-inflamasi  host terhadap  plak  bakteri  patogen.  Periodontitis  agresif  adalah  penyakit  yang  berkembang  dan  dapat merusak dengan sangat cepat. 6
Tujuan utama perawatan periodontal adalah menghilangkan biofilm supra dan subgingiva dari permukaan akar untuk menghilangkan bakteri patogen, yang memulai dan menyebabkan perkembangan penyakit  periodontal. 9 Perawatan  utama  periodontitis  agresif  dapat  dilakukan  dengan  terapi  mekanis ( scaling and root planing ) serta perawatan suportif berupa terapi kimiawi (antibiotik dan obat kumur) untuk menghilangkan sisa bakteri. 10
Saat ini masyarakat telah meminimalkan penggunaan obat-obatan sebagai bahan terapi, karena dapat  menimbulkan  efek  samping  berupa  resistensi  bakteri  terhadap  antibiotika  serta  gangguan pengecapan dan perubahan warna gigi. Masyarakat sudah beralih menggunakan tanaman obat sebagai bahan terapi. 10 Penelitian ini dilakukan untuk melihat apakah adanya aktivitas antibakteri oleh tanaman sarang semut ( Myrmecodia tuberosa Jack ) terhadap pertumbuhan bakteri penyebab periodontitis agresif yaitu A.actinomycetemcomitans .

## BAHAN DAN METODE
Desain penelitian yang digunakan adalah eksperimen ( true experimental ) dan menggunakan jenis penelitian post  test  only  control  group .  Peneliti  membagi  dua  kelompok  yang  terdiri  atas  kelompok tanaman  uji  dan  kelompok  kontrol.  Pada  penelitian  ini  ekstrak  tanaman  sarang  semut  ( Myrmecodia tuberosa jack ) diuji dalam beberapa konsentrasi dan kelompok kontrol, yang terdiri dari satu kontrol positif  menggunakan Chlorhexidine  gluconate ,  kontrol  negatif  menggunakan  DMSO  10%  dengan metode mikrodilusi.
Penelitian dilakukan dengan tiga kali pengulangan ( triplo ) pada kelompok uji, dan dilakukan masing-masing 1 kali pada masing-masing kelompok kontrol. Bahan yang digunakan adalah ekstrak sarang  semut  ( Myrmecodia  tuberosa  Jack ), Chlorhexidine  gluconate 0,2%  sebagai  kontrol  positif, DMSO 10%, aquadest steril, bakteri A. actinomycetemcomitans , Brain Heart Infusion Broth (BHI-B), Mueller  Hinton  Broth (MHB)  Peralatan  yang  digunakan  adalah  spektrofometer,  gelas  laboratorium, autoclave ,  inkubator, Bio  Safety  Cabinet ,  mikropipet,  oven,  timbangan  analitik, hot  plate ,  dan wells microplate 96.

## HASIL
Uji aktivitas antibakteri dilakukan dengan menggunakan 12 konsentrasi ekstrak tanaman sarang semut ( Myrmecodia tuberosa Jack ) yang berbeda pada 12 kolom seperti pada gambar 5.1 dengan 3 kali pengulangan  yaitu  pada  baris  B,  C,  dan  D  memiliki  konsentrasi  yang  sama  yaitu  125  mg/mL,  62,5 mg/mL,  31,25  mg/mL,  15,62  mg/mL,  7,81  mg/mL,  3,90  mg/mL,  1,95  mg/mL,  0,97  mg/mL,  0,48 mg/mL, 0,24 mg/mL, 0,12 mg/mL, 0,06 mg/mL. Larutan kontrol dapat dilihat pada gambar 5.1 yang terdiri dari dua yaitu kontrol negatif pada baris F sebanyak 12 konsentrasi, dan kontrol positif pada baris H sebanyak 12 konsentrasi dengan jumlah pengulangan masing-masing larutan kontrol sebanyak 1 kali.
Gambar 1. Uji aktivitas antibakteri tanaman sarang semut ( Myrmecodia tuberosa jack ) terhadap bakteri A.actinomycetemcomitans dengan metode mikrodilusi sebelum inkubasi (Sumber: Dokumen Pribadi)
Larutan  kontrol  tidak  memberikan  efek  daya  hambat  terhadap  bakteri  menggunakan  DMSO 10% ditambahkan ke dalam sumuran pada baris F sebanyak 12 konsentrasi, dan kontrol positif yang memiliki daya hambat terhadap bakteri menggunakan chlorhexidine gluconate 0,2% ditambahkan ke dalam sumuran pada baris H sebanyak 12 konsentrasi.
Hasil  uji  aktivitas  ekstrak  etanol  sarang  semut  ( Myrmecodia  tuberosa  jack )  selama  24  jam pertama  dapat  dilihat  pada  Gambar  5.2  dan  Tabel  5.1  dan  hasilnya  menunjukan  terdapat  aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  tanaman  yang  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri A. Actinomycetemcomitans.
Gambar 2. Uji aktivitas antibakteri tanaman sarang semut ( Myrmecodia tuberosa jack ) terhadap bakteri A.actinomycetemcomitans dengan metode mikrodilusi setelah inkubasi 24 jam pertama (Sumber: Dokumen Pribadi)
Larutan uji yang terdapat pada kolom 1B, 2B, 3B, 4B dan 5B begitu juga pada pengulangan kedua 1C, 2C, 3C, 4C, 5C serta pengulangan ketiga 1D, 2D, 3D, 4D, 5D dengan konsentrasi 125 mg/ml, 62,5 mg/mL, 31,25 mg/mL, 15,62 mg/mL, dan 7,81 mg/mL dapat menghambat pertumbuhan bakteri yang ditandai dengan tetap jernihnya warna sumuran, sementara itu pada kolom 6B, 7B, 8B, 9B, 10B, 11B dan 12B serta pengulangan kedua dan ketiga dengan konsentrasi  3,90 mg/mL, 1,95 mg/mL, 0,97 mg/mL, 0,48 mg/mL, 0,24 mg/mL, 0,12 mg/mL, 0,06 mg/mL terdapat pertumbuhan bakteri atau tidak adanya daya hambat yang ditandai dengan berubahnya warna larutan menjadi ungu.
Kontrol  negatif  yang  digunakan  DMSO  10%  tidak  dapat  menghambat  pertumbuhan  bakteri yang dapat dibuktikan dari semua sumuran kontrol negatif pada kolom 1F sampai 12F berubah warna yang  berarti  semua  kontrol  negatif  ditumbuhi  bakteri A.actinomycetemcomitans ,  sedangkan  kontrol positif chlorhexidine gluconate 0,2% dapat menghambat bakteri sesuai dengan sifatnya sebagai bahan yang digunakan sebagai obat kumur pada kolom 1H-7H yang ditandai tetap jernih warna sumuran yang diberikan chlorhexidine gluconate pada beberapa konsentrasi yang dimulai dari konsentrasi 0,2%. Hal ini membuktikan uji yang dilakukan 5 sumuran di awal microplate dengan 3 kali pengulangan tetap jernih sehingga MIC yang didapatkan yaitu pada konsentrasi 7,81 mg/mL.
Tabel 1. Hasil Uji aktivitas antibakteri tanaman sarang semut ( Myrmecodia tuberosa jack ) terhadap bakteri A.actinomycetemcomitans dengan metode mikrodilusi setelah inkubasi 24 jam pertama
Konsentrasi (mg/mL) 12 5 62, 5 31,2 5 15,6 2 7,8 1 3,90  1,95 0,97 0,48 0,24 0,12 0,06 EESS - - - - - + + + + + + + EESS - - - - - + + + + + + + EESS - - - - - + + + + + + + Konsentrasi (%) 10 5 2,5 1,25  0,6 2 0,31  0,15  0,07 0,03 0,01 0,009  0,004 K(-) + + + + + + + + + + + + Konsentrasi (%) 0,2  0,1  0,05  0,02  0,0  0,00  0,00  0,00  0,000  0,000  0,000  0,000 1 6 3 1 7 3 1 09 K(+) - - - - - - - + + + + +
Keterangan:
EESS  : ekstrak etanol sarang semut
K (-)  : kontrol negatif K (+)  : kontrol positif
(+) : ada pertumbuhan bakteri
(-) : tidak ada pertumbuhan bakteri

## PEMBAHASAN
Chlorhexidine  gluconate sebagai  kontrol  positif  memiliki  efek  antibakteri  terhadap pertumbuhan  dari  bakteri A.actinomycetemcomitans .  Obat  kumur  yang  kandungan  utamanya chlorhexidine  gluconate 0,2%  sering  digunakan  dalam  bidang  kedokteran  gigi  karena  kandungan chlorhexidine yang dipercaya sebagai standar dan sering digunakan sebagai dasar atau patokan utama untuk dilakukan pengujian perbandingan dengan bahan obat kumur yang lainnya. 11
DMSO digunakan sebagai pelarut ekstrak etanol sarang semut untuk didapatkan konsentrasi yang  akan  dilakukan  uji  terhadap  bakteri.  DMSO  10%  sebagai  kontrol  negatif  tidak  memiliki  efek antibakteri  terhadap  pertumbuhan  bakteri A.actinomycetemcomitans seperti  yang  dapat  dilihat  dari gambar 1 dan 2 pada gambar tersebut semua sumuran yang diberikan kontrol negatif berupa DMSO yang  dimulai  dari  konsentrasi  10%  tidak  menghambat  pertumbuhan  bakteri  yang  ditandai  dengan terjadinya perubahan warna pada semua sumuran yang terdapat kontrol negatif tersebut. Hal tersebut sejalan dengan penelitian yang dilakukan Pratiwi et al bahwa DMSO yang dimulai dari konsentrasi 10% tidak menghambat pertumbuhan bakteri. 12
Aktivitas  antibakteri  yang  ditunjukkan  dengan  nilai  MIC  ditentukan  dengan  metode mikrodilusi. Penentuan aktivitas antibakteri dilakukan secara in vitro dengan metode mikrodilusi karena metode  pengujian  yang  sederhana,  sampel  yang  dibutuhkan  lebih  sedikit,  sensitivitas  dari  uji  yang dilakukan lebih tinggi dan hasilnya kuantitatif. 13,14
Setiap sumuran dimasukkan bakteri yang disiapkan dalam media yang sama setelah dilakukan pengenceran  suspensi  bakteri  yang  disesuaikan  dengan  skala  0,5 McFarland ,  kemudian microplate diinkubasi dengan kondisi yang sesuai tergantung dari mikroorganisme yang diuji. Setelah inkubasi, pertumbuhan  pada  setiap  sumur  diperiksa  dan  MIC  ditentukan. 15 MIC  ( minimum  inhibitory concentration ) merupakan konsentrasi terkecil dari suatu senyawa antimikroba yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba uji. 16,17 Pengamatan untuk menentukan nilai MIC atau kadar hambat minimum suatu  senyawa  dapat  dilakukan  langsung  secara  visual  dengan  menambahkan  reagen  MTT.  MIC ditetapkan  pada  sumur  dengan  konsentrasi  terendah  yang  tidak  memberikan  warna  ungu  atau  tidak berubah warna setelah ditambahkan MTT. 1,15
Hasil penelitian yang telah dilakukan menunjukkan bahwa tanaman sarang semut ( Myrmecodia tuberosa jack ) memiliki aktivitas antibakteri ditandai sumuran yang tetap jernih setelah diberikan MTT pada sumuran dengan konsentrasi 7,81 mg/mL yang menandakan adanya kadar hambat minimum atau MIC tanaman sarang semut yaitu pada konsentrasi 7,81 mg/mL. Perubahan warna pertama kali pada sumuran yaitu konsentrasi 3,90 mg/mL yang menandakan bakteri masih dapat tumbuh pada konsentrasi tersebut. Hal ini sejalan dengan pendapat Balouiri et al, terjadinya perubahan warna dari kuning menjadi ungu  menandakan  bahwa  pada  sumuran  tersebut  masih  terdapat  bakteri  atau  terdapat  pertumbuhan bakteri. 1,15

## KESIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan  didapatkan  kemampuan  tanaman  sarang  semut dalam  menghambat  pertumbuhan  bakteri A.actinomycetemcomitans ,  ditandai  dengan  tetap  jernihnya larutan  uji  pada  beberapa  konsentrasi  sampai  konsentrasi  terkecil  yaitu  pada  7,81  mg/mL    yang menandakan adanya daya hambat minimum pada konsentrasu tersebut, dan adanya perubahan warna pertama kali pada konsentrasi 3,90 mg/mL, yang berarti tanaman sarang semut masih tidak memilki kemampuan menghambat pertumbuhan bakteri A.actinomycetemcomitans pada konsentrasi tersebut.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] Sari, Y. P., Susanto, D. & Hutauruk, E. A. Pengaruh Kombinasi Media Tanam Dan Pemupukan Terhadap  Pertumbuhan  Biji  Tumbuhan  Sarang  Semut  (Myrmecodia  Tuberosa  Jack.). Al- Kauniyah J. Biol. 6, 26–36 (2013).
[2] Pattiwael, M., Wattimena, L. & Klagilit, Y. Pemanfaatan Tumbuhan Sarang Semut ( Myrmecodia Pendens) Sebagai Obat Tradisional Oleh Masyarakat Kampung Wailen Distrik Salawati Tengah Kabupaten Raja Ampat. Median 13, 131–137 (2021).
[3] Nugroho,  R.  A.,  Sari,  Y.  P.,  Hardi,  E.  H.  &  Aryani,  R. Myrmecodia . Encyclopedia  Of  Social Insects (DEEPUBLISH, 2019). doi:10.1007/978-3-030-28102-1_300094.
[4] Manik,  D.  F.,  Hertiani,  T.  &  Anshory,  H.  Analisis  Korelasi  Antara  Kadar  Flavonoid  Dengan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Dan Fraksi-Fraksi Daun Kersen (Muntingia Calabura L.) Terhadap Staphylococcus Aureus. Khazanah 6, 1–11 (2014).
[5] Septiani,  Dewi,  E.  N.  &  Wijayanti,  I.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Lamun  (  Cymodocea Rotundata  )  Terhadap  Bakteri  Staphylococcus  Aureus  Dan  Escherichia  Coli  Antibacterial Activities Of Seagrass Extracts ( Cymodocea Rotundata ) Against Staphylococcus Aureus And Escherichia Coli. Saintek Perikan. 13, 1–6 (2017).
[6] Rahmania,  R.,  Epsilawati,  L.  &  Rusminah,  N.  Densitas  Tulang  Alveolar  Pada  Penderita Periodontitis Kronis Dan Periodontitis Agresif Melalui Radiografi. J. Radiol. Dentomaksilofasial Indones. 3, 7–10 (2019).
[7] Bernabe, E. et al. Global, Regional, and National Levels and Trends in Burden of Oral Conditions from 1990 to 2017: A Systematic Analysis For The Global Burden Of Disease 2017 Study. J. Dent. Res. 99, 362–373 (2020).
[8] Harsas, N. A. et al. Curettage Treatment On Stage III And IV Periodontitis Patients. J. Indones. Dent. Assoc. 4, 47–54 (2021).
[9] Haag, P. A., Steiger-Ronay, V. & Schmidlin, P. R. The In Vitro Antimicrobial Efficacy Of PDT Against Periodontopathogenic Bacteria. Int. J. Mol. Sci. 16, 27327–27338 (2015).
[10] Alibasyah,  Z.  M. et  al. Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  70%  Daun  Biduri  (Calotropis Gigantea) Terhadap Aggregatibacter Actinomycetemcomitans ATCC 29523. Cakradonya Dent J 12, 56–63 (2020).
[11] Pambudi, A. R., Wasiaturrahmah, Y. & Aspriyanto, D. Antibacterial Effectiveness Of Kecapi Sentul Extract (Sandoricum Koetjape Merr.) Against Streptococcus Mutans. ODONTO Dent. J. 8, 1–10 (2021).
[12] Pratiwi,  R.  S.,  Tjiptasurasa  &  Wahyuningrum,  R.  Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Kayu Nangka  (Artocarpus  Heterophylla  Lmk.)  Terhadap  Bacillus  Subtilis  Dan  Escherichia  Coli Refriana. PHARMACY 08, 1–10 (2011).
[13] Aristyawan, A. D., Sugijanto, N. E. & Suciati. Potensi Antibakteri Dari Ekstrak Etanol Spons Agelas Cavernosa. J. Farm. Dan Ilmu Kefarmasian Indones. 4, 39–43 (2017).
[14] Aziz, G. Uji Aktivitas Antibakteri Dan Antioksidan Dari Ekstrak Etil Asetat Kapang Endofit Daun Tanaman  Bakung  Rawa  (Crinum  Jagus  (J.Thomps.)  Dandy) . Fakultas  Kedokteran  dan  Ilmu Kesehatan UIN Syarif Hidayatullah (2017).
[15] Balouiri,  M.,  Sadiki,  M.  &  Ibnsouda,  S.  K.  Methods  For  In  Vitro  Evaluating  Antimicrobial
Activity: A Review. J. Pharm. Anal. 6, 71–79 (2016).
[16] Soelama, H. J. J., Kepel, B. J. & Siagian, K. V. Uji Minimum Inhibitory Concentration (Mic) Ekstrak Rumput Laut (Eucheuma Cottonii) Sebagai Antibakteri Terhadap Streptococcus Mutans. e-GIGI 3, 374–379 (2015).
[17] Salasa, A. M., Ratnah, S. & Ibrahim, I. Penentuan Nilai Mic (Minimum Inhibitory Concentration) Dan  Mkc  (Minimum  Killing  Concentration)  Ekstrak  Daun  Kecombrang  (Etlingera  Elatior) Terhadap Candida Albicans Penyebab Keputihan. Media Farm. 16, (2019).