Jurnal Masker Medika e-ISSN : 2654-8658 p -ISSN :2301-8631
https://doi.org/10.52523/maskermedika.v11i2.563

## PENGARUH DIMETIL SULFOKSIDA (DMSO) DAN SUHU PRESERVASI BERBEDA TERHADAP BAKTERI Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA)
Effect of Dimethyl Sulfoxide (DMSO) and Different Preservation Temperatures on Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Bacteria
Chintia Agustina 1* , Kurniawan 2** , Ikhsan Mujahid 3*** , Kurnia Ritma Dhanti 4****
****Program Studi Teknologi Laboratorium Medik Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Purwokerto Korespodendi Email : kurniawan@ump.ac.id

## ABSTRAK
Pendahuluan: Bakteri S. aureus merupakan bakteri penyebab infeksi nosokomial di rumah sakit yang  mudah  mengalami  resistensi  terhadap  antibiotik  membentuk  strain  baru  seperti  bakteri MRSA yang resisten terhadap golongan antibiotik methicillin (β-lactams) . Bakteri MRSA bersifat patogen  dan  memiliki  persentase  bahaya  yang  cukup  besar  sehingga  perlu  dilakukan pemeliharaan dan penyimpanan kultur murni bakteri MRSA di laboratorium untuk kepentingan eksplorasi  dan  upaya  pengendalian  serta  pengobatan  penyakit  infeksi  yang  disebabkan  oleh bakteri  tersebut.  Salah  satu  larutan  yang  digunakan  dalam  preservasi  bakteri  adalah  larutan dimetil sulfoksida  (DMSO) yang  berguna  secara  universal.  Tujuan penelitian  ini adalah  untuk mengetahui  pengaruh  larutan  DMSO  dan  suhu  preservasi  yang  berbeda  dalam  preservasi bakteri  MRSA. Metode: Penelitian  ini  termasuk  penelitian  kuantitatif  dengan  analisis  uji multivariat  anova  yang  dilakukan  di  Laboratorium  Mikrobiologi  dan  Biokimia  Program  Studi Pendidikan Biologi Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan (FKIP) Universitas Muhammadiyah Purwokerto dari bulan Juli 2022 sampai bulan Oktober 2022. Hasil: Konsentrasi larutan DMSO dan  suhu preservasi yang  berbeda dapat mempengaruhi viabilitas bakteri  MRSA,  sedangkan suhu preservasi bakteri MRSA yang paling baik adalah pada suhu 4 o C dan 20-28 o C dengan nilai  signifikansi  (p=0.048). Diskusi: Berdasarkan  hasil  penelitian  dapat  diketahui  bahwa konsentrasi larutan DMSO yang tinggi dan suhu preservasi yang berbeda dapat mempengaruhi viabilitas bakteri MRSA. Suhu preservasi yang terbaik diperoleh pada suhu 4 o C.
Kata kunci: DMSO,  MRSA, Preservasi Bakteri, Suhu

## ABSTRACT
Introduction: S. aureus bacteria are bacteria that cause nosocomial infections in hospitals and that easily develop resistance to antibiotics, forming new strains such as MRSA bacteria that are resistant to the class of antibiotics methicillin (β-lactams). MRSA bacteria are pathogenic and carry a significant proportion of hazards, so it is necessary to maintain and store pure cultures of MRSA bacteria in the laboratory for the purposes of exploration and efforts to control and treat infectious diseases caused by these bacteria. One of the solutions used in bacterial preservation is dimethyl sulfoxide (DMSO) solution, which is universally used. This study aimed to determine the effect of DMSO solution and different temperatures on the preservation of MRSA bacteria. Methods: This study was a quantitative study using multivariate ANOVA test analysis conducted at the Microbiology and Biochemistry Laboratory, Biology Education Study Program, Teaching and  Education  Faculty  (FKIP),  Muhammadiyah  University,  Purwokerto,  from  July  2022  to October 2022. Results: DMSO solution concentration and temperature Different preservatives can  affect  the  viability  of  MRSA  bacteria,  while  the  best  temperature  for  preserving  MRSA bacteria  is between 4 o C and 20-28 o C  with a  significance  value  (p=0.048).  Discussion:  The research results show that the high concentration of DMSO solution and different preservation temperatures can affect the viability of MRSA bacteria. The best temperature preservation was obtained at 4 o C.
Keywords: Bacterial preservation, DMSO, MRSA, Temperature
Jurnal Masker Medika e-ISSN : 2654-8658 p -ISSN :2301-8631
https://doi.org/10.52523/maskermedika.v11i2.563

## PENDAHULUAN
Bakteri Staphylococcus  aureus ( S. aureus ) merupakan  bakteri  penyebab infeksi nosokomial di rumah sakit dengan bentuk  sel  bulat,  Gram-positif  dengan konformasi  seperti  buah  anggur.  Bakteri ini  banyak  ditemukan  pada  saluran pernafasan  (30%)  dan  juga  permukaan kulit (20%) dari pasien atau tenaga medis yang bekerja di rumah sakit (Nismawati et al ., 2018).
Bakteri S.  aureus termasuk  salah satu spesies bakteri yang mudah mengalami  resistensi  terhadap  antibiotik. Berdasarkan tingkat sensitifitasnya terhadap antibiotik  dari  golongan  β-
laktam,  bakteri  ini  dapat  dibedakan menjadi  dua  kelompok  yaitu  bakteri
MRSA atau Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus dan bakteri MSSA atau Methicillin-Sensitive  Staphylococcus aureus (Oktavian et  al .,  2020).  Strain bakteri MRSA menunjukkan fitur mikrobiologis,  terapeutik  dan  klinis  yang berbeda jika dibandingkan dengan kelompok  bakteri  lainnya  yang  sensitif terhadap antibiotik methicillin (Kurniawan et al ., 2021)
MRSA merupakan kelompok bakteri S.  aureus yang  sudah  resisten  (tahan) terhadap  golongan  antibiotik isoxazoyl penicillins seperti methicillin,  oxacillin, cefoxitin, dan flucloxacillin dan  bersifat patogen yang dapat menyebabkan infeksi nosokomial.  Bakteri  MRSA  mengalami resistensi  akibat  adanya  perubahan genetik  yang  disebabkan  oleh  paparan antibiotik yang tidak rasional dan terkontrol (Suyasa, 2020). Penyakit infeksi merupakan penyakit  yang  disebabkan  oleh  bakteri patogen  yang  berasal  dari  lingkungan atau fasilitas kesehatan yang kurang baik sehingga tingkat morbiditas dan mortilitasnya relatif tinggi. Salah satu jenis penyakit  infeksi  yang  sudah  banyak diketahui adalah infeksi nosokomial yang terjadi  di  rumah  sakit  atau  fasilitas kesehatan lainnya dan menyerang pasien-pasien  yang  sedang  menjalani perawatan, tenaga medis atau pengunjung  rumah  sakit  akibat  adanya perpindahan  atau  penularan  bakteri
patogen dari tenaga kesehatan ke pasien, pasien  ke  pengunjung,  atau  dapat  juga melalui  peralatan  dan  lingkungan  rumah sakit (Wikansari, 2012).
Infeksi nosokomial  dapat ditularkan melalui  udara,  air,  makanan,  lantai, tenaga  kesehatan,  pasien,  pengunjung dan  peralatan  medis  maupun  non-medis yang berada di rumah sakit (Palawe et al. , 2015).  Salah  satu  spesies  bakteri  yang banyak  ditemukan  di  rumah  sakit  adalah bakteri S.  aureus yang  sebenarnya merupakan  flora  normal  pada  saluran pernafasan dan kulit, namun pada kondisi tertentu berubah menjadi patogen (Rahmadani et al ., 2017)
Mengingat persentase bahaya yang ditimbulkan  dari  bakteri  MRSA  cukup besar,  maka  perlu  dilakukan  beberapa upaya  pemeliharaan  dan  penyimpanan kultur murni bakteri MRSA di laboratorium. Hal ini perlu dilakukan agar semua  hal  yang  terkait  dengan  karakter atau  sifat  dari  bakteri  tersebut  dapat dieksplorasi  dan  dipelajari  sehingga nantinya dapat diketahui upaya pengendalian  dan  pengobatan  penyakit yang  disebabkan  oleh  infeksi  bakteri MRSA ini.
Pemeliharaan  dan  penyimpanan kultur murni bakteri merupakan salah satu kunci penting di laboratorium mikrobiologi. Memiliki  kultur  murni  bakteri  akan mempermudah proses pembelajaran dan juga penelitian-penelitian yang dilaksanakan di laboratorium. Atas dasar itulah, maka koleksi kultur bakteri patogen yang diperoleh dari pasien harus dilestarikan  (Susilawati  &  Purnomo, 2016).
Penyimpanan atau preservasi kultur bakteri  dapat  dilakukan  dalam  periode jangka  pendek  maupun  jangka  panjang. Tujuan  dari  dilakukannya  preservasi bakteri ini adalah untuk menghambat atau mengendalikan laju aktivitas metabolisme bakteri  sehingga  sifat  dan  karakter fisiologisnya  tidak  berubah,  masih  tetap sama  dengan  karakter  ketika  bakteri  ini pertama kali ditemukan atau diisolasi.
Pemilihan  periode  (masa  simpan) bakteri umumnya ditentukan berdasarkan pada  beberapa  faktor  seperti  tujuan
Jurnal Masker Medika e-ISSN : 2654-8658 p -ISSN :2301-8631
https://doi.org/10.52523/maskermedika.v11i2.563
preservasi,  pemanfaatan  bakteri,  ciri morfologi,  ciri  fisiologis  (biokimia)  dan kemampuan  bakteri  untuk  hidup  pada lingkungan alami maupun buatan (Susilawati & Purnomo, 2016). Preservasi bakteri jangka pendek umumnya digunakan  untuk  kegiatan  rutin  seperti praktikum  dan  penelitian,  sedangkan preservasi  jangka  panjang  umumnya digunakan di bidang industri atau terapan. Keberhasilan  preservasi  bakteri  sangat ditentukan oleh teknologi yang digunakan, fasilitas yang tersedia dan juga kemampuan dan keterampilan dari pengelolanya.
Preservasi  bakteri  dengan  periode yang  panjang  dan  paling  efektif  adalah preservasi menggunakan metode liofilisasi atau  kering  beku.  Dengan metode  ini,  karakter  morfologi,  fisiologis (sifat biokimia) dan juga viabilitas bakterinya  dapat  dipertahankan  dengan baik,  proses  perubahan  karakter  tetap ada,  namun  persentasenya  sangat  kecil. Namun sayangnya, metode ini tidak dapat dilakukan di semua laboratorium, mengingat  metode  ini  membutuhkan sumber daya baik berupa sarana prasarana, pengelola dan juga pendanaan  yang  sangat  tinggi  (Fariani, 2021).
Metode  preservasi  bakteri  untuk jangka  pendek  dapat  dilakukan  dengan cara  transfer  kultur  murni  bakteri  secara rutin  (berkala)  dari  satu  media  ke  media baru.  Selain  itu,  juga  dapat  dilakukan dengan  cara  mengawetkan  bakteri.  di dalam  bahan-bahan  agen  preservasi seperti minyak mineral, parafin cair, tanah steril, akuades steril, manik-manik porselen,  lempeng  gelatin  dan  vakum P 2 O 5. Metode  preservasi  jangka  pendek ini umumnya digunakan oleh laboratorium-laboratorium mikrobiologi yang memiliki keterbatasan sarana prasarana  dan  juga  pendanaan  (Fariani, 2021).
Hasil  penelitian  (Criste et  al ., 2014)menyatakan bahwa diantara beberapa  metode  yang  digunakan  untuk mengawetkan  bakteri, cryopreservation dan freeze  drying merupakan  metode yang  paling  efektif  dan  tahan  lama .
Cryopreservation membutuhkan penggunaan  suhu  yang  sangat  rendah untuk  menjaga  struktur  sel  dan  jaringan tetap  utuh.  Parveen et  al. (2016) menyatakan  bahwa  umur  bakteri  pada alat  pendingin  biasa  adalah  1-2  tahun. Hasil  penelitian  dari  Susilowati  dan Purnomo  (2016)  menunjukkan  bahwa preservasi bakteri dapat dilakukan menggunakan bahan Cryoprotectant yang  mengandung  10% skim  milk, 10% gliserol  dan  10%  dimetil  sulfoksida (DMSO), dan hasilnya memberikan viabilitas  yang  lebih  baik  pada  bakteri E. coli, S. aureus, S. flexneri dan B. Subtilis (Supriatin et al ., 2020) .
Larutan  dimetil  sulfoksida  (DMSO) merupakan  larutan  kimia  yang  termasuk dalam  bahan Cryoptectant  Agent (CPA) yang  berguna  secara  universal  untuk sebagian  besar  sampel.  Larutan  ini bersifat selective  permeable sehingga dapat  menembus  membran  sel.  Menurut Gagel et al. (2017), larutan DMSO dengan konsentrasi 5% menjadi agen
cryoprotectant yang  lebih  disukai  untuk sebagian  besar  strain  bakteri  (Ali et  al ., 2021).  Atas  dasar  inilah,  maka  peneliti merasa tertarik untuk melakukan penelitian  mengenai  preservasi  bakteri MRSA menggunakan larutan DMSO dan suhu  preservasi  berbeda  dengan  tujuan untuk  mengetahui  pengaruh  larutan DMSO dan suhu preservasi yang berbeda dalam preservasi bakteri MRSA.

## BAHAN DAN METODE Desain, Tempat dan Waktu
Penelitian  ini  menggunakan  jenis penelitian
kuantitatif dengan menggunakan  Uji Multivariat  anova . Dilakukan  penelitian  dengan  perlakuan pemberian larutan DMSO dengan konsentrasi yang berbeda yaitu konsentrasi  5%  (K 1 )  dan  25%  (K 2 ),  serta penyimpanan  kultur  bakteri  pada  suhu yang  berbeda  yaitu  suhu  -20 o C  (freezer) (S 1 ), suhu 4 o C (refrigerator) (S 2 ), dan 20- 28 o C  (suhu  ruang)  (S 3 ).  Atas  dasar tersebut,  maka  diperoleh  rancangan penelitian  dengan  kombinasi  kode  K 1 S 1 , K 1 S 2 , K 1 S 3 , K 2 S 1 , K 2 S 2 , dan K 2 S 3
Jurnal Masker Medika e-ISSN : 2654-8658 p -ISSN :2301-8631
https://doi.org/10.52523/maskermedika.v11i2.563
Penelitian  ini  telah  dilakukan  di
Gedung  Laboratorium  Terpadu,  yaitu Laboratorium  Mikrobiologi  dan  Biokimia Program Studi Pendidikan Biologi Fakultas  Keguruan  dan  Ilmu  Pendidikan (FKIP) Universitas Muhammadiyah
Purwokerto.  Periode  waktu  penelitian dimulai dari bulan Juli 2022 sampai bulan Oktober 2022.

## Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini  meliputi  autoklaf  (Hirayama  HVE-50), ice  box, inkubator  ( Binder  ED  115) , tabung  reaksi, hot  plate (Scilogex  MS7- H550-S) ,  stirring  hotplate, Laminar  Air Flow ( Mascotte Model LV-S) , cawan petri, jarum ose, kulkas dan freezer (Refrigerator  Sanyo  2  Pintu  Type  SR- 1780BSD),  kamera,  timbangan  analitik (Ohaus), colony counter ( Stuart Scientific 7755) , beaker glass, botol vial, botol kaca, batang  pengaduk,  mikropipet  (Socorex), blue  tip ,  bunsen, microtube ,  penjepit tabung.
Bahan habis pakai yang digunakan pada  penelitian  ini  meliputi  media Plate Count Agar (PCA), media Triptic Soy Agar (TSA),  akuades, cotton  bud streril, silica gel, larutan  dimetil  sulfoksida  (DMSO), spiritus,  tissu,  alkohol  90%, wrapping, alumunium  foil ,  kapas,  kantong  plastik dan  kultur  bakteri Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (MRSA).

## Cara Kerja
1. Peremajaan Kultur
Kultur  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  bakteri  MRSA yang diperoleh dari salah satu Rumah Sakit  di  Kabupaten  Purbalingga.
Isolat  bakteri  diperbanyak  pada media TSA miring dan diinkubasikan pada suhu 37 °C selama 2 x 24 jam.
2. Pembuatan  stok  kultur  bakteri MRSA
Isolat  bakteri  yang  diperoleh (umur  2  x  24  jam)  ditumbuhkan kembali ke dalam media TSA cawan secara spread  plate dan  diinkubasi selama  2  x  24  jam.  Koloni  bakteri yang tumbuh pada media TSA cawan tersebut dipanen menggunakan silica
gel yang  dimasukkan  ke  dalam cawan petri, digoyang-goyang sehingga silica gel akan bergerak ke segala  arah  dan  koloni  bakteri  akan menempel  pada  permukaan silica gel. Setelah  itu,  ke  dalam microtube 1,5 ml, dimasukkan  3 butir sillica gel yang  telah  mengandung  bakteri
MRSA .
3. Preparasi Larutan DMSO
Penelitian ini menggunakan satu jenis cryprotectant  agents yaitu larutan  dimetil  sulfoksida  (DMSO) dengan  konsentrasi  yang  berbeda, yaitu konsentrasi 5% dan 25%.
4. Pembuatan suspensi kultur bakteri MRSA dengan larutan DMSO
Pada  setiap microtube yang sudah diisi dengan silica gel ditambahkan  sebanyak  1  ml  larutan DMSO  dengan  konsentrasi  berbeda yaitu :
• Microtube 1:  berisi  1  ml  larutan DMSO  5%  dan silica  gel bakteri MRSA
• Microtube 2:  berisi  1  ml  larutan DMSO  25%  dan silica  gel bakteri MRSA
5. Penyimpanan kultur bakteri MRSA Microtube yang  berisi  larutan DMSO dan sel bakteri disimpan pada 3 tempat yang berbeda suhunya yaitu pada  suhu  ruang  (20-28 o C),  suhu  4 °C (refrigerator) dan -20 o C ( freezer ).
6. Uji viabilitas bakteri MRSA
Kultur  bakteri  MRSA  yang  telah disimpan pada 3 tempat dengan suhu yang  berbeda  diambil  setiap  bulan untuk dilakukan pengecekan viabilitasnya  dalam  kurun  waktu  4 bulan. Dari setiap boks penyimpanan diambil  sebanyak  1 microtube kultur bakteri MRSA untuk kemudian ditumbuhkan  kembali  ke  dalam medium  PCA  cawan  secara spread plate ,  dan  diinkubasi  selama  2  x  24 jam  pada  suhu  37  °C.  Setelah  itu dilakukan  pengamatan  ada  tidaknya pertumbuhan  koloni  bakteri,  apabila ada  koloni  bakteri  yang  tumbuh, maka dilakukan penghitungan jumlah koloni  bakteri  yang  tumbuh  pada
Jurnal Masker Medika e-ISSN : 2654-8658 p -ISSN :2301-8631
https://doi.org/10.52523/maskermedika.v11i2.563
masing-masing  media  PCA  cawan menggunakan colony counter

## HASIL
Penelitian telah dilaksanakan
dengan  baik  dan  lancar  dengan  hasil penelitian seperti ditunjukkan pada tabel 1 berikut.
Tabel 1 . V iabilitas bakteri MRSA pada larutan DMSO dan suhu penyimpanan
berbeda. Kode Jumlah koloni (x 10 3 ) cfu/m 3 1 2 3 4 K 1 S 1 <30 (0,1) 0 1,2 5,0 K 1 S 2 >3,0 (5,4) >3,0 (3,7) <3,0 (0,1) 0
K 1 S 3 <3,0 (0,6) 0 0 <3,0 (0,1) K 2 S 1 0 2,2 8,2 1,1 K 2 S 2 >3,0 (6,1) >3,0 (6,2) 0 >3,0 (3,0) K 2 S 3 0 <3,0 (0,1) 0 0
Keterangan :
• K 1 S 1 : DMSO 5% suhu freezer • K 1 S 2 : DMSO 5% suhu 4 o C • K 1 S 3 : DMSO 5% suhu ruang • K 2 S 1 : DMSO 25% suhu freezer • K 2 S 2 : DMSO 25% suhu 4 o C • K 2 S 3 : DMSO 25% suhu ruang
Tabel 2. Uji statistik deskriptif rerata pertumbuhan  bakteri.
Kelompok   Suhu N (Mean ± Std) cfu/ml K 1 S 1 1575.00 ± 2347.161 S 2 2300.00 ± 2689.586 S 3 180.00 ± 285.657 Total 1351.67 ± 2083.711 K 2 S 1 2875.00 ± 3661.853 S 2 3825.00 ± 2951.130 S 3 25.00 ± 50.00 Total 2241.67 ± 2979.463
Keterangan :
• cfu/ml : colony forming units • K 1 : DMSO 5%
• K 2 :DMSO 25%
Tabel 3. Uji homogenitas Levene's Test of Equality of Error Variances a

## Dependent Variable: Jumlah Bakteri MRSA
F df1 df2 Sig.
2.454 5 18 .073
Berdasarkan  Tabel 3. mengenai uji homogenitas data, diperoleh nilai p=0.073 yang  menunjukkan  bahwa  tidak  ada perbedaan  pengaruh  antara  perlakuan pemberian DMSO dengan suhu.
Tabel 4. Kelompok perlakuan DMSO
(I) Kel (J) Kel Rerata ± SD Perbedaan Rerata P K 1 K 2 1351.6 ± 2083.711 -890.000 .360 .360 K 2 K 1 2241.67± 2979.463 890.000
Berdasarkan data yang tersaji pada Tabel  4,  diketahui  bahwa  tidak  terdapat perbedaan  jumlah  sel  bakteri  yang signifikan,  tetapi  jumlah  sel  bakteri  yang tumbuh  pada  perlakuan  K 2 lebih  banyak pada perlakuan K 1 .
Tabel 5. Kelompok perlakuan suhu
Penyimpanan (I) Suhu (J) Suhu Rerata ± SD Perbedaan Rerata P S 1 S 2 2300.00 ± 2689.586 -837.500 .480 S 3 180.00 ± 285.657 2122.500 .083 S 2 S 1 1575.00 ± 2347.161 837.500 .480 S 3 25.00 ± 50.00 2960.000 * .019 S 3 S 1 2875.00 ± 3661.853 -2122.500 .083 S 2 3825.00 ± 2951.130 -2960.000 * .019
Keterangan : • S 1 : Suhu freezer
• S 2 : Suhu 4 o C
• S 3 : Suhu ruang
Dari Tabel 5, diketahui bahwa perlakuan  suhu  S 2 dan  S 3 menunjukkan adanya  perbedaan  yang  signifikan  dengan nilai p=0.19.
Tabel 6. Multiple Comparison
(I) Suhu (J) Suhu Mean Difference Std. Error  Sig. S 1 S 2 -837.50 1162.763  .755 S 3 2122.50 1162.763  .187
Jurnal Masker Medika e-ISSN : 2654-8658 p -ISSN :2301-8631
https://doi.org/10.52523/maskermedika.v11i2.563
S 2 S 1 837.50 1162.763  .755 S 3 2960.00 * 1162.763  .048* S 3 S 1 -2122.50 1162.763  .187 S 2 -2960.00 * 1162.763  .048* Keterangan : • * : Beda signifikan
Tabel 6. Menunjukkan adanya
perbedaan  yang  signifikan  dengan  nilai p=0.48* antara perlakuan S 2 dengan S 3 .

## PEMBAHASAN
Pada penelitian yang telah dilakukan terhadap bakteri MRSA selama 4  bulan,  diperoleh  informasi  bahwa perbedaan konsentrasi larutan DMSO dan suhu penyimpanan dapat  mempengaruhi viabilitas bakteri MRSA. Hasil ini didasarkan  pada  perhitungan  jumlah koloni  bakteri  yang  tumbuh  pada  media PCA menggunakan metode SPC/TPC.
Jumlah  koloni  bakteri  MRSA  yang dipreservasi pada larutan DMSO 5% (K 1 ) secara umum lebih rendah jika dibandingkan  dengan  jumlah  koloni bakteri  MRSA  pada  larutan  DMSO  25% (K 2 ).  Jumlah  koloni  bakteri  pada  larutan DMSO  5%  paling  tinggi  dicapai  pada perlakuan  K 1 S 2 dengan  jumlah  5,4  x  10 3 cfu/ml,  sedangkan  jumlah  koloni  bakteri pada  larutan  DMSO  25%  paling  tinggi dicapai  pada  perlakuan  K 2 S 1 dengan jumlah  8,2  x  10 3 cfu/ml.  Menurut  (Rojas- Tapias  et  al.,  2013)  DMSO  merupakan cryoprotectant yang  dapat  menurunkan titik otentik air sehingga dapat mencegah pembentukan  kristal  es  di  dalam  sel bakteri . Jumlah  koloni  bakteri  MRSA  yang dipreservasi  pada  suhu  -20 o C  (S 1 ) umumnya  lebih  tinggi  jika  dibandingkan dengan bakteri yang disimpan pada suhu 4 o C (S 2 ) dan suhu 20-28 o C (S 3 ). Hal ini dapat  dilihat  pada  tabel  1,  bahwa perlakuan  K 2 S 1 memiliki  jumlah  koloni yang  paling  tinggi  yaitu  8,2  x  10 3 cfu/ml.
Suhu penyimpanan dapat mempengaruhi viabilitas bakteri dengan cara mengganggu metabolisme
bakteri.
Menurut Mahmmoud, (2020) suhu terbaik untuk mempertahankan bakteri S. aureus adalah  pada  suhu  -20 o C,  bakteri  tidak hanya  memiliki  morfologi  yang  tidak berubah pada suhu ini, tetapi
penyimpanan  pada  suhu  ini  juga  dapat memperlambat  reaksi  biokimia  di  dalam sel sehingga produk-produk metabolisme yang bersifat toksik tidak terbentuk.
Pada penelitian ini, suspensi bakteri yang  membeku  dikeluarkan  dari  boks penyimpanan  dan  dibiarkan  beberapa saat  pada  suhu  kamar  sampai  suspensi bakteri  mencairkan.  Untuk  mempercepat proses  tersebut,  maka  dilakukan  proses thawing dengan cara memutar-mutar tube menggunakan  telapak  tangan . Adanya proses thawing ini  menyebabkan  sel-sel bakteri yang terdapat di dalam tube akan mengalami goncangan dan saling bertabrakan  dengan  sel  lain  ataupun dengan  partikel  es  sehingga  banyak  sel bakteri  yang  mengalami  kematian  dan berimplikasi pada viabilitas bakteri menjadi  rendah.  Menurut  Setiaji  et  al.,
(2015),  proses thawing yang  baik  dapat dilakukan dengan cara merendam microtube yang berisi suspensi bakteri ke dalam  air  hangat  dengan  suhu  37 o C selama 60-90 detik.
Berdasarkan  data  pada  tabel  2 tentang  uji  statistik  deskriptif  rerata pertumbuhan  bakteri,  dapat  diketahui bahwa  suhu  yang  paling  baik  untuk preservasi  bakteri  MRSA  adalah  suhu  4 o C dengan rerata jumlah sel bakteri paling tinggi  untuk  masing-masing  konsentrasi DMSO  yaitu  2300.00 ± 2689.586  cfu/ml dan 3825.00 ± 2951.130 cfu/ml. Menurut penelitian  Amriani  &  Tuahatu  (2021), bakteri S.  aureus dapat  ditumbuhkan kembali  dengan  baik  pada  media pertumbuhan  setelah disimpan selama 6 bulan pada suhu 4 o C. Selain itu, menurut Fitriana  (2019),  menyatakan  bahwa semakin  rendah  suhu  penyimpanan, maka  akan  semakin  lambat  pula  proses metabolisme di dalam sel bakteri tersebut dan  bahkan  sampai  berhenti.  Semakin lambat  proses  metabolisme,  maka senyawa  toksik  yang  dihasilkan  dari proses metabolisme semakin sedikit.
Pada  tabel  3  uji  homogenitas didapatkan  (p=0.073)  yang  menandakan tidak  ada  perbedaan  pengaruh  antara perlakuan  pemberian  DMSO  dengan suhu.  Menurut  Hine et  al .,  (2019) penggunaan DMSO pada suhu yang tidak
Jurnal Masker Medika e-ISSN : 2654-8658 p -ISSN :2301-8631
https://doi.org/10.52523/maskermedika.v11i2.563
tepat  dapat  menyebabkan  terjadinya pembengkakan  atau  kerusakan  sel. Menurut  Siddiqui et  al .,  (2017),  larutan DMSO  dengan  konsentrasi  2,5%,  5%, 10%  dan  15%  dapat  digunakan  untuk preservasi  dengan  masa  simpan  selama enam bulan dengan viabilitas sel tertinggi (75%)  terjadi  pada  konsentrasi  DMSO 10%, sedangkan pada konsentrasi DMSO 15%,  viabilitas  selnya  paling  rendah (53%).
Tabel  4  pada  kelompok  perlakuan DMSO  diperoleh  hasil  tidak  terdapat perbedaan  jumlah  sel  bakteri  yang signifikan,  tetapi  jumlah  sel  bakteri  yang tumbuh  pada  perlakuan  K 2 lebih  banyak dari  pada  K 1. Menurut  Prakash et  al .,
(2013)  DMSO  memiliki  kemampuan penetrasi yang lebih baik jika dibandingkan  dengan  gliserol,  tetapi penggunaan  larutan  DMSO  terbatas karena  memiliki  sifat  yang  toksik  pada konsentrasi  yang  lebih  tinggi.  Selain  itu, menurut  Siddiqui et  al .,  (2017)  larutan DMSO  dapat  menyebabkan  kerusakan sel bakteri karena sifat sitoksitasnya. Oleh karena itu  penentuan konsentrasi terbaik DMSO  untuk  preservasi  bakteri  sangat penting.
Tabel 5 menunjukan terdapat beda signifikan diantara suhu 4 o C dengan 20- 28 o C  dengan  nilai  (p=0.019).  Hal demikian  juga  terlihat  pada  tabel  6  yang menunjukan  adanya  perbedaan  yang signifikan  dengan  nilai  p=0.048*  antara perlakuan  S 2 dengan  S 3 .  Dari  tabel  5 dapat  diketahui  bahwa  pertumbuhan bakteri  MRSA  paling  baik  terjadi  pada kedua suhu ini. Penyimpanan pada suhu dingin  (4 o C)  dapat  mempertahankan kondisi  sel  bakteri  dalam  jangka  pendek (Siburian et al ., 2012). Menurut penelitian Soltys et  al .,  (2012)  menyatakan  bahwa bakteri S.  aureus yang  disimpan  pada suhu 25 o C menunjukkan perubahan lebih besar  dalam  jumlah  sel  yang  dikultur. Selain  itu,  penyimpanan  pada  suhu  ini juga  berkaitan  dengan  penggunaan DMSO sebagai agen preservasi. Pemilihan DMSO sebagai agen preservasi memiliki risiko yang lebih tinggi jika dibandingkan dengan agen preservasi
lainnya  karena  sifat  toksisitasnya  yang tinggi pada suhu ruang.
Suhu  penyimpanan  dan  waktu penyimpanan mempunyai pengaruh yang signifikan  terhadap  kelangsungan  hidup bakteri yang diuji. Berdasarkan penelitian (Amriani  &  Tuahatu,  2021)  menjelaskan bahwa terdapat pengaruh suhu dan waktu penyimpanan  terhadap  viabilitas  bakteri patogen.
Penyimpanan  bakteri  pada  suhu dingin  atau  beku  (-20 o C) terjadi penurunan  jumlah  sel  bakteri  yang signifikan  akibat  adanya  kerusakan  sel. Waktu penyimpanan juga dapat berpengaruh terhadap pertumbuhan bakteri, semakin lama waktu
penyimpanan maka nutrisi di dalam media akan  berkurang  sehingga  sel-sel  bakteri akan saling berkompetisi untuk mendapatkan  nutrisi  yang  terbatas  dan akhirnya banyak sel bakteri yang mengalami kematian (Amriani & Tuahatu, 2021)
Kriopreservasi  adalah  pengawetan jangka  panjang  sel,  jaringan  dan  organ. Pada  suhu  rendah,  membran  sel  dan sitoplasma  sel  bakteri  dapat  mengalami lisis.  Untuk  mencegah  proses  tersebut, maka  digunakan  larutan  DMSO  dengan konsentrasi  yang  lebih  tinggi  dengan harapan  dapat  mencegah  pembentukan es  di  dalam  sel,  jaringan  dan  organ selama proses kriopreservasi. Larutan ini lebih mudah menembus ke dalam sel dan membuat sel bakteri menjadi lebih plastis sehingga  dapat  mengikat  air  yang  pada gilirannya dapat mencegah sel bakteri dari kekeringan dan pembentukan kristal es di dalam sel (Susilawati & Purnomo, 2016)
Pada penelitian ini, terdapat keterbatasan berupa adanya kontaminasi selama  proses  uji  viabilitas.  Hal  ini kemungkinan  disebabkan  oleh  beberapa faktor seperti penggunaan silica gel tidak dilakukan proses sterilisasi terlebih dahulu karena  menganggap  bahwa  silica  gel yang  digunakan  sudah  dikemas  dalam kondisi steril. Selain itu, penggunaan LAF ( Laminar Air Flow ) secara bersama-sama (bersebelahan)  juga  dapat  menimbulkan kontaminasi.
Jurnal Masker Medika e-ISSN : 2654-8658 p -ISSN :2301-8631
https://doi.org/10.52523/maskermedika.v11i2.563

## SIMPULAN DAN SARAN

## Simpulan
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa konsentrasi larutan DMSO yang tinggi dan suhu  preservasi  yang  berbeda  dapat mempengaruhi  viabilitas  bakteri  MRSA. Suhu  preservasi  yang  terbaik  diperoleh pada suhu 4 o C.

## Saran
Saran  pada  penelitian  ini  perlu diadakannya  pengembangan  penelitian selanjutnya  dapat  dilakukan  dengan menggunakan cryoprotectant yang berdeda  sehingga  diperoleh  perbedaan pertumbuhan  bakteri  pada  media  yang berbeda  sebagai  pembeda  satu  dengan lainnya.  Selain  itu  perlu  dilakukan pemilihan dan penggunaan metode yang lebih  efektif  agar  dapat  meminimalisasi faktor-faktor  yang  dapat  mempengaruhi pertumbuhan bakteri.

## FUNDING
Penelitian ini tidak menerima bantuan pendanaan dari pihak manapun.

## KONFLIK KEPENTINGAN
Tidak ada potensi konflik kepentingan yang dilaporkan penulis.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terimakasih  kepada  pihak-pihak yang  membantu  pelaksanaan  kegiatan penelitian ini.

## KEPUSTAKAAN
Ali, P., Fucich, D., Shah, A. A., & Hasan, F. (2021). Kriopreservasi  Cyanobacteria dan Mikroalga Eukariotik Menggunakan Exopolysaccharide Diekstraksi dari Bakteri Gletser . Amriani,  Y.  A.,  &  Tuahatu,  J.  W.  (2021). Jurnal Penelitian Sains. Jurnal Penelitian Sains , 21 (3), 163 –167.
Criste, A., Giuburuncă, M., Negrea, O., Dan, S.,  &  Zăhan,  M.  (2014).  Research Concerning Use of Long-Term Preservation Techniques
for
Microorganisms. Scientific  Papers:
Animal  Science  and  Biotechnologies , 47 (2), 47.
Fariani,  R.  (2021). Perbandingan  Teknik
Penyimpanan  Menggunakan  Medium Yang  Berbeda  Terhadap  Viabilitas Kapang  Colletotrichum  capsici  dan Prycularia oryzae . 3 (2), 69 –76. Fitriana. (2019). Preservation of Corynebacterium  striatum  bacteria using  silica  gel. Pros  Sem  Nas  Masy Biodiv Indon , 5 (1), 134 –138. https://doi.org/10.13057/psnmbi/m050 125 Hine,  T.  M.,  Uly,  K.,  Nalley,  W.  M.,  & Armadianto, H. (2019). Kualitas Sperma Beku Sapi Bali dalam Pengencer  Air  Kelapa  Modifikasi dengan Berbagai Aras Dimethyl Sulfoxide  (Frozen  Sperm  Quality  Of
Bali  Bulls  In  Modified  Coconut  Water Extender  With  Different  Dimethyl Sulfoxide Concentration). Jurnal Veteriner , 20 (1), 93. https://doi.org/10.19087/jveteriner.201 9.20.1.93 Kurniawan,  Adining  T.E.,  &  Supriyadi. (2021).  Prevalensi  Bakteri  Methicillin- Resistant Staphylococcus aureus (MRSA) Pada Peralatan Laboratorium.
The Journal of  Muhamadiyah Medical Laboratory  Technologist , 2 (4),  188 – 200. Mahmmoud,  E.  N.  (2020).  Comparison  of preservation methods of staphylococcus aureus and
escherichia  coli  bacteria. Journal  of Pure and Applied Microbiology , 14 (3),
2173 –2180.
https://doi.org/10.22207/JPAM.14.3.5 8 Nismawati,  Sjahril,  R.,  &  Agus,  R.  (2018). Deteksi Methicillin Resistant Staphylococcus aureus (MRSA)  Pada Pasien Rumah Sakit Universitas Hasanuddin  Dengan  Metode  Kultur. Prosiding  Seminar  Nasional  Biologi ,
4 (1), 978 –602.
Oktavian, H. I., Nyoman, N., Budayanti, S., Darwinata,  A.  E.,  Hendrayana,  M.  A.,
Kedokteran, F., Udayana, U.,
Mikrobiologi,  B.,  Fakultas,  K.,  &
Udayana,  U.  (2020). PREVALENSI KARIER Methicillin Sensitive Staphylococcus aureus DAN Methicillin  Resistant  Staphylococcus aureus . 9 (11), 6 –9.
Palawe, B. V., Kountul, C., & Waworuntu, O.
(2015).  Identifikasi  Bakteri  Aerob  Di Udara Ruang Operasi Instalasi Bedah
Jurnal Masker Medika e-ISSN : 2654-8658 p -ISSN :2301-8631
https://doi.org/10.52523/maskermedika.v11i2.563
Sentral  (Ibs)  Rsup  Rof.  Dr.  R.  D. Kandou  Manado. Jurnal  E-Biomedik , 3 (3). https://doi.org/10.35790/ebm.3.3.2015
.10563
Prakash, O., Nimonkar, Y., & Shouche, Y. S.
(2013).  Practice  and  prospects  of microbial preservation. FEMS
Microbiology  Letters , 339 (1),  1 –9. https://doi.org/10.1111/1574-
6968.12034 Rahmadani,  A.,  Budiyono,  &  Suhartono. (2017). Gambaran Keberadaan Bakteri Staphylococcus Aureus, Kondisi  Lingkungan  Fisik,  Dan  Angka Lempeng Total Di Udara Ruang Rawat Inap Rsud Prof. Dr. M.a Hanafiah Sm Batusangkar. Jurnal Kesehatan Masyarakat  (e-Journal) , 5 (5),  492 – 501.
Rojas-Tapias, D., Ortiz-Vera, M., Rivera, D., Kloepper,  J.,  &  Bonilla,  R.  (2013).
Evaluation  of  three  methods  for preservation of Azotobacter chroococcum and Azotobacter vinelandii. Universitas  Scientiarum , 18 (2), 129 –139. https://doi.org/10.11144/Javeriana.SC 18-2.etmp
Setiaji,  J.,  Iskandar  Johan,  T.,  &  Meliya
Widantari,    dan.  (2015).  Pengaruh
Gliserol Pada Media Tryptic Soy Broth (Tsb)  Terhadap  Viabilitas  Bakteri
Aeromonas hydrophila Effect of
Glycerol at the Tryptic Soy Broth (TSB)
Media  on  Aeromonas  hydrophila Bacteria  Viability. Jurnal  Dinamika Pertanian , XXX (April), 83 –91.
Siburian,  E.  T.  P.,  Dewi,  P.,  &  Kariada,  N.
(2012).  Pengaruh  suhu  dan  waktu penyimpanan  terhadap  pertumbuhan bakteri dan fungi ikan bandeng. Jornal of Life Science , 1 (2), 101 –105.
Siddiqui,  M.,  Parvin,  R.,  Giasuddin,  M., Chowdhury, S., Islam, M., &
Chowdhury,  E.  (2017).  The  effect  of different  concentrations  of  Dimethyl sulfoxide  (DMSO)  and  glycerol  as cryoprotectant in preserving Vero cells. Bangladesh  Veterinarian , 33 (1),  1 –7. https://doi.org/10.3329/bvet.v33i1.333 07 Soltys,  R.  C.,  Balen,  J.  Van,  &  Hoet,  A.  E. (2012). 1  Comparative  Toxicity  of Cryoprotectants  on  Staphylococcus aureus  at  Room  Temperature  Rachel
C. Soltys, Joany Van Balen, Armando E. Hoet . 1 , 1 –7.
Supriatin, Y., Fadhilah, F., & Sumirat, V. A.
(2020). Penyimpanan Bakteri Escherichia  coli  Dan  Streptococcus pneumonie Pada Media Cryoprotective Dengan Metode Freeze Drying . 12 , 24 –30. https://doi.org/10.25134/quagga.v12i1 .2148.Received Susilawati,  L.,  &  Purnomo,  E.  (2016). Viabilitas Sel Bakteri Dengan Cryoprotectant Agents Berbeda (Sebagai  Acuan  Dalam  Preservasi Culture  Collection  di  Laboratorium Mikrobiologi). Biogenesis: Jurnal Ilmiah Biologi , 4 (1), 34 –40. https://doi.org/10.24252/bio.v4i1.1118 Suyasa,  I.  B.  O.  (2020).  Gambaran Methicillin  Resistant  Staphylococcus aureus (MRSA) Pada Petugas
Kesehatan  RSUD  Wangaya  Kota Denpasar. Meditory :  The  Journal  of Medical  Laboratory , 8 (1),  46 –52. https://doi.org/10.33992/m.v8i1.1074 Wikansari,  N.  (2012).  Pemeriksaan  Total Kuman  Udara  Dan  Staphylococcus Aureus Di Ruang Rawat Inap Rumah Sakit  X  Kota  Semarang. Jurnal Kesehatan  Masyarakat  Universitas Diponegoro , 1 (2), 18795.