'Aini et  al. Pelita Perkebunan 29(1)  2013, 44-52

## Penghambatan Pertumbuhan Colletotrichum gloeosporioides oleh
Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Bacillus subtilis dan

## Pseudomonas fluorescens
Growth  Inhibition  of  Colletotrichum  gloeosporioides  by  Trichoderma harzianum,  Trichoderma  koningii,  Bacillus  subtilis and  Pseudomonas  fluorescens
Febrilia Nur ‘Aini 1*) , Sri-Sukamto 1) , Dwi Wahyuni 2) , Risma Galuh Suhesti 2) , dan Qurrotun Ayunin 2)
1) Pusat  Penelitian  Kopi  dan  Kakao  Indonesia,  Jl.  PB.  Sudirman  No.  90,  Jember,  Indonesia
2) Fakultas  Keguruan dan  Ilmu  Pendidikan,  Universitas  Jember,  Jl.  Kalimantan  37  Tegal Boto,  Jember,  Indonesia
*) Alamat penulis ( corresponding author ): febrilia.ifeb@yahoo.com Naskah diterima ( received ) 14 Februari 2012, disetujui ( accepted ) 25 Maret 2013

## Abstrak
Colletotrichum  gloeosporioides adalah  salah  satu  penyakit  yang  mampu menyebabkan  kehilangan  hasil  kakao  yang  cukup  besar.  Penelitian  ini  bertujuan untuk  meneliti  kemampuan  mikroba  antagonis Trichoderma  harzianum,  Tricho- derma  koningii , Bacillus  subtilis dan Pseudomonas  fluorescens dalam mengendalikan gloeosporioides secara hayati di laboratorium. Penelitian dilakukan di  Laboratorium  Proteksi  Tanaman,  Pusat  Penelitian  Kopi  dan  Kakao  Indonesia. Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  jamur  antagonis, T.  harzianum, T.  koningii, lebih  kuat  dalam  menghambat  pertumbuhan C.  gloeosporioides sekitar  83% dibandingkan  kemampuan  bakteri  antagonis, B.  subtilis dan P.  fluorescens, yang hanya  sebesar  49%.
Kata  kunci : Penghambatan pertumbuhan, Colletotrichum gloeosporioides , Trichoderma harzianum, Trichoderma koningii, Bacillus subtilis, Pseudomonas fluorescens.

## Abstract
Colletotrichum  gloeosporioides is  a  disease  which  can  cause  significant yield  loss  of  cocoa.  The  objective  of  this  research  is  to  investigate  the  ability of  antagonist  microbes, Trichoderma  harzianum,  Trichoderma  koningii,  Bacillus subtilis and Pseudomonas  fluorescens in  controlling  gloeosporioides  biologi- cally  in  laboratorium  condition.  The  experiment  was  carried  out  in  Crop  Pro- tection  Laboratory,  Indonesian  Coffee  and  Cocoa  Research  Institute.  Results of  this  research  showed  that  antagonist  fungi, T.  harzianum,  T.  koningii ,  had  a stronger  ability  in  inhibiting  growth  of C.  gloeosporioides about  83%  com- pared  to  the  ability  of  antagonist  bacteria, B.  subtilis and P.  fluorescens, only about  49%.
Key words: Growth  inhibition, Colletotrichum  gloeosporioides , Trichoderma  harzianum, Trichoderma koningii , Bacillus subtilis, Pseudomonas  fluorescens.
Penghambatan Colletotrichum gloeosporioides oleh T. harzianum,  T. koningii,  B. subtilis dan P.  fluorescens

## PENDAHULUAN
Salah satu penyakit penting pada tanaman kakao  di  Indonesia  adalah  antraknosa colletotricum  yang disebabkan  oleh  jamur Colletotrichum gloeosporioides (Sri-Sukamto et  al., 2008).  Serangan  jamur C.  gloeo- sporioides dapat  menimbulkan  kerusakan pada  tanaman  kakao  yang  besarnya tergantung pada intensitas serangan penyakit. Infeksi  pada  buah-buah  muda  ikut menurunkan produksi kakao, karena buah- buah tersebut akan layu dan mengering. Dari hasil  pengamatan yang  dilakukan  di  Jawa Timur, diketahui bahwa serangan pada buah muda dari klon rentan adalah sebesar 73% dan kehilangan hasil diduga bisa mencapai 75%. Pada tanaman yang  terserang berat, jumlah daun dan buah hanya sedikit sehingga produksi sangat rendah (Sri-Sukamto et al., 2008).
Selain di Indonesia, penyakit ini telah ditemukan di Malaysia, Brunei, Filipina, Sri Lanka, dan India Selatan. Pada tahun 1980- an di Jawa Timur serangan jamur C. gloeo- sporioides pada kakao tampak meningkat, sehingga menarik cukup banyak perhatian (Sri-Sukamto & Junianto, 1987).
Saat  ini  perhatian  pada  pengendalian alternatif  yang  lebih  ramah  lingkungan semakin  besar  untuk  menurunkan  peng- gunaan  pestisida  sintesis  yang  marak digunakan,  dan  salah  satunya  adalah pengendalian  hayati  (Sulistyowati et  al., 2009). Pengendalian hayati terhadap patogen pada  umumnya  dapat  melalui  antibiosis dan  kompetisi,  kadang-kadang  melalui hiperparasitisme  (Sitepu,  1993).  Usaha pengendalian  penyakit  antraknosa  secara biologi  dapat  dengan  mikroorganisme antagonis  (Stirling  &  Stirling,  1997). Aktivitas  biologi  tersebut  berkaitan  erat dengan  sifat  antagonisme  mikrobia,  baik secara  langsung  melalui  kompetisi  atau antibiosis,  maupun  secara  tidak  langsung
melalui  induksi  resistensi  tanaman  inang (Trigalet et al ., 1994).
Pemanfaatan jamur dan bakteri rizosfer sebagai  agensia  pengendali  hayati  untuk patogen  tanaman  telah  banyak  dilakukan karena  dapat  tumbuh  dengan  cepat  dan mampu menggunakan berbagai substrat di bawah  kondisi  lingkungan  yang  berbeda (Cook & Baker, 1983). Beberapa jenis bakteri merupakan penghasil antibiotik sedangkan yang lain merupakan pengkoloni akar yang efektif dan dapat tumbuh dengan cepat pada rizosfer  tanaman  (O’Sullivan  &  O’Gara, 1992).
Trichoderma merupakan  jamur  yang umum  terdapat  dalam  tanah  dan  telah dilaporkan secara luas sebagai agensia hayati yang  mampu  menghambat  pertumbuhan beberapa jenis patogen (Harman et al. , 2004). Mekanisme  penghambatan Trichoderma terhadap patogen antara lain melalui proses kompetisi,  parasitisme  dan  antibiosis (Bailey et  al. ,  2008).  Hifa Trichoderma mampu  melilit  hifa  patogen  sehingga pertumbuhan patogen terhambat, selain itu juga mampu mengeluarkan  enzim kitinase dan  -1,3 glukanase yang mampu merombak dinding sel patogen. Selain itu, Trichoderma mampu  menghasilkan  antibiotik 3-2- hydoxyprophyl-4-2-hexadienyl)-2-5(5H)- furanon yang  mampu  menghambat  per- tumbuhan spora dan hifa mikroba patogen.
Bacillus subtilis merupakan bakteri gram positif yang mampu menghasilkan antibiotik streptovidin,  basitrin,  surfaktin,  iturin  A, polimiksin, difisidin, subtilin, subtilosin dan mikobasilin  yang  mampu  menghambat pembentukan  dinding  sel  jamur  patogen (Soesanto,  2008).  Bakteri  lain  adalah Pseudomonas fluorescens yang merupakan bakteri pengkoloni akar, agresif dengan waktu generasi yang cepat dalam zona perakaran (Campbell, 1989; Arwiyanto, 1997). Bakteri ini  dikenal  juga  mampu  meningkatkan
'Aini et  al.
pertumbuhan tanaman secara tidak langsung dengan  mengendalikan  mikroorganisme pengganggu tanaman (Howell & Stipanovic, 1979).  Banyak strain P. fluorescens telah menunjukkan  penekanan  pada  bermacam- macam penyakit tanaman yang disebabkan oleh  patogen  tular  tanah  termasuk mikroorganisme  beracun  (Weller,  1988). Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengkaji keefektifan jamur dan bakteri antagonis dalam menghambat pertumbuhan jamur C. gloeo- sporioides secara in vitro.

## METODE PENELITIAN

## Persiapan Isolat
Isolat C.  gloeosporioides diperoleh melalui isolasi dari buah kakao yang terserang penyakit  antraknosa.  Isolasi  dilaksanakan dengan  cara  mengambil  kulit  buah  kakao yang  terserang  antraknose  dengan  ukuran 0,5  cm  x  0,5  cm  kemudian  dicelupkan  ke dalam larutan alkohol 70% selama 3 menit dan  dibilas  dengan  aquades  steril  selama 3  menit.  Potongan  kulit  buah  tersebut dipindahkan pada kertas saring, diletakkan secara aseptik di atas permukaan media PDA pada cawan petri yang telah diberi satu tetes asam laktat 20%, kemudian diinkubasi dalam kondisi  gelap  dengan  suhu  26 0 C  selama 3  hari.  Koloni  yang  tumbuh  diidentifikasi
berdasarkan ciri-ciri morfologinya menurut Barnett & Hunter (1972).
Isolat jamur T. harzianum dan T. koningii masing-masing  dibiakkan  dalam  media Potato Dextrose Agar (PDA) di dalam cawan petri dan diinkubasi pada suhu 26 0 C hingga biakan murni tumbuh sampai tepi cawan petri. Isolat B. subtilis dan P. fluorescens terlebih dahulu  dikarakterisasi  meliputi  pewarnaan gram, uji katalase, hidrolisis gelatin, produksi indol  dan  pati.  Isolat B.  subtilis dibiakkan dalam  media Natrium  Agar sedangkan P. fluorescens dibiakkan dalam media King’s B dan diinkubasi pada suhu kamar.

## Uji Antagonis Secara In Vitro
Uji in-vitro dilakukan  dengan  cara melakukan  uji  antagonis  tunggal  setiap isolat jamur dan bakteri antagonis terhadap C.  gloeosporioides. Masing-masing  isolat T. harzianum, T. koningii, B. subtilis, P. fluo- rescens dan C. gloeosporioides diambil dengan menggunakan  bor  gabus  yang  berdiameter 0,3 cm. Setiap isolat antagonis diuji dengan C.  gloeosporioides secara  simultan  dalam cawan  petri  yang  berdiameter  9  cm.  Isolat jamur dan bakteri antagonis diletakkan pada sisi yang berlawanan dengan jamur patogen, jarak antarisolat antagonis dan patogen adalah 3 cm sedangkan jarak setiap isolat dari tepi

## Tabel  1. Sumber isolat jamur dan bakteri yang digunakan dalam penelitian
Table  1. Sources of fungal and bacterial isolates used in this research
Isolat Isolates Asal Sources T. harzianum Koleksi Laboratorium Proteksi Tanaman Pusat Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia Collection of Crop Protection Laboratory, ICCRI T. koningii Koleksi Laboratorium Proteksi Tanaman Pusat Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia Collection of Crop Protection Laboratory, ICCRI B.  subtilis Koleksi Laboratorium FMIPA Universitas Jember Collection of Laboratory of Science Faculty, University of Jember P. fluorescens Koleksi Laboratorium FMIPA Universitas Jember Collection of Laboratory of Science Faculty, University of Jember C. gloeosporioides Isolasi dari buah kakao di Kebun Percobaan Kaliwining Pusat Penelitian Kopi dan Kakao Indonesia Isolate of cocoa pod from Kaliwining Experimental Station, ICCRI
Penghambatan Colletotrichum gloeosporioides oleh T. harzianum,  T. koningii,  B. subtilis dan P.  fluorescens
cawan  petri  adalah  3  cm.  Sebagai  kontrol, ditumbuhkan jamur C. gloeosporioides pada media PDA tanpa jamur antagonis. Inkubasi dilakukan dalam kondisi gelap pada suhu 26 0 C selama tujuh hari.

## Pengukuran Daya Hambat
Pengukuran  jari-jari  penghambatan jamur  dan  bakteri  antagonis  terhadap C.  gloeosporioides dilakukan  setelah miselium C. gloeosporioides pada kontrol telah  mencapai  pinggir  cawan  petri. Persentase  penghambatan  jamur  dan bakteri  antagonis  terhadap  pertumbuhan C.  gloeosporioides dihitung  berdasarkan Fokkema & Van der Meulen (1976), dengan mengukur jari-jari koloni C. gloeosporioides pada  kontrol  (r 1 )  dan  jari-jari  koloni C.  gloeosporioides yang  berhadapan dengan  jamur  antagonis  (r 2 ).  Persentase penghambatan  koloni C.  gloeosporioides dihitung menggunakan rumus:
I = persentase penghambatan
r 1 = jari-jari koloni jamur pada kontrol
r 2 = jari-jari koloni jamur pada perlakuan

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Morfologi  jamur C. gloeosporioides diamati secara visual dan mikroskopis. Hasil isolasi  dari  buah  kakao  yang  terserang antraknosa  menunjukkan  bahwa  miselium C. gloeosporioides yang  berumur  muda berwarna  putih  dan  kemudian  berangsur- angsur  berubah  menjadi  orange  dan keabu-abuan  saat  sudah  tua  (Gambar  1). Secara  mikroskopis, C.  gloeosporioides
menunjukkan  karakteristik  konidia  hialin, berbentuk bulat lonjong, bersel 1 (Barnett, &  Hunter,  1972),  terbentuk  pada  ujung konidiofor  yang  sederhana  (Semangun, 1988).
) . a b
Gambar 1. Miselium jamur C. gloeosporioides (a) . Spora  jamur C.  gloeosporioides pada perbesaran 400x (b).
Figure 1. Mycelium  o f C.  gloeosporioides fungus (a). Spores of C. gloeosporioides fungus at 400x magnification (b).

## Pengamatan  morfologi  terhadap
T. koningii dan T. harzianum menunjukkan bahwa  warna  koloni  pada T.  harzianum berwarna  hijau tua sedangkan T.  koningii menunjukkan warna hijau muda kekuning-
r 1 - r 2 r 1 I = X 100%
'Aini et  al.
kuningan , tekstur miselium pada T. koningii lebih  halus  dan  pertumbuhannya  sedikit lebih  lambat  jika  dibandingkan  dengan T. harzianum (Gambar 2) .
Hasil uji pewarnaan gram menunjukkan bahwa B. subtilis merupakan bakteri gram positif karena menghasilkan warna ungu saat ditetesi dengan larutan KOH. Warna ungu yang muncul pada pewarnaan gram tersebut dikarenakan dinding sel B. subtilis mampu mempertahankan  zat  warna  kristal  violet.
Pada  hasil  pewarnaan  gram  menunjukkan P.  fluorescens termasuk  golongan  bakteri gram  negatif  karena  hasil  pewarnaan menunjukkan warna merah yang disebabkan karena bakteri tersebut mampu melunturkan zat warna ungu kristal violet dan mengikat safranin (Tabel 2).
Tabel 2. Hasil  uji biokimia B. subtilis dan P. fluorescens
Table  2.  The  results  of  biochemical tests  of B.  subtilis  and
P. fluorescens
Uji  biokimia  yang  dilakukan  pada dasarnya  adalah  sebagai  konfirmasi isolat yang digunakan agar tidak terjadi kesalahan. Uji biokimia didasarkan pada Leary & Chun (1988). Pada uji  katalase, baik B.  subtilis maupun P.  fluorescens menghasilkan gelembung  kecil  setelah  ditetesi  larutan hidrogen peroksida 3%, hal ini menunjukkan bahwa kedua bakteri tersebut mengandung antimetabolit  yang  dihasilkan  oleh  enzim katalase yang dapat mengubah H 2 O 2 menjadi O 2 dan H 2 . Hasil uji hidrolisis gelatin juga menunjukkan hasil yang sama pada kedua bakteri tersebut yaitu mampu menghidrolisis gelatin  yang  ditunjukkan  oleh  mencairnya medium gelatin setelah diinokulasikan oleh bakteri  tersebut.  Pada  uji  produksi  indol, B.  subtilis menunjukkan  hasil  negatif sedangkan P. fluorescens menunjukkan reaksi positif  yang  berarti  mampu  memproduksi indol. Uji hidrolisis pati menunjukkan hasil positif  dari  kedua  bakteri,  hal  tersebut menandakan bahwa baik B. subtilis maupun
Uji  ( Tests )
Reaksi ( Reaction ) B.  subtilis P. fluorescens Gram Gram + - Katalase + + Catalase Hidrolisis  gelatin + + Gelatin hydrolysis Produksi  indol - + Indol production
Hidrolisis  pati + + Starch hydrolysis a b
Gambar 2. Miseliu m T.  harzianu m (a)  dan T. koningii (b).
Figure 2. Mycelium  of T.  harzianum (a)  and
T. koningii (b).
Penghambatan Colletotrichum gloeosporioides oleh T. harzianum,  T. koningii,  B. subtilis dan P.  fluorescens
P. fluorescens mampu menghasilkan enzim amilase  yang  dapat  menghidrolisis  pati menjadi molekul-molekul maltosa, glukosa dan dekstrin.

## Penghambatan oleh T. harzianum dan
T. koningii
Berdasarkan Tabel 3. dapat diketahui bahwa  pertumbuhan  miselium C.  gloeo- sporioides pada hari pertama baik pada kontrol maupun pada perlakuan memiliki ukuran jari- jari  yang  sama  yaitu  sebesar  0,3  cm.  Uji antagonis dengan menggunakan T. harzianum pada  hari  kedua  telah  terjadi  proses penghambatan  pertumbuhan,  hal  tersebut dapat diketahui dari pertumbuhan miselium C. gloeosporioides yang mengalami stagnasi sampai dengan akhir pengamatan dengan jari- jari miselium sebesar 0,5 cm.
Sedangkan pada uji antagonis dengan menggunakan T.  koningii ,  proses  peng- hambatan pertumbuhan C. gloeosporioides mulai terjadi pada hari ketiga dan juga terjadi proses stagnasi pada pertumbuhan miselium. Pada  perlakuan  kontrol,  terlihat  bahwa pertumbuhan miselium C. gloeosporioides tetap  tumbuh  sampai  dengan  akhir pengamatan. Hal ini berarti bahwa C. gloeo-
sporioides tumbuh  dengan  optimal  tanpa adanya jamur antagonis.
Pada hari pertama sampai dengan hari keenam  terlihat  tidak  ada  perbedaan  yang signifikan  di  antara  kedua  antagonis dalam  menghambat  C. gloeosporioides, tetapi setelah  pengamatan  hari  ketujuh terlihat bahwa T. harzianum memiliki daya hambat lebih besar dibandingkan T. koningii (Tabel  3).  Pada  hari  ketujuh  pengamatan, daya hambat T. harzianum terhadap C. gloeo- sporoides mencapai  84,65%  sedangkan T. koningii mencapai 80,94% (Tabel 3) yang berarti  bahwa  masing-masing  jamur antagonis  tersebut  memiliki  kemampuan yang  baik  dalam  menghambat  patogen. Interaksi C. gloeosporioides dengan jamur T. harzianum dan T. koningii adalah melalui mekanisme antagonisme langsung (Jeffries &  Young,  1994).  Hal  ini  sejalan  dengan Bailey et al. (2008) yang menyatakan bahwa Trichoderma merupakan agensia antagonis yang  sangat  agresif  dalam  mekanisme mikoparasit,  antibiosis  dan  kolonisasi terhadap  patogen  tumbuhan.  Proses  anta- gonis yang terjadi juga melalui interferensi hifa (Sri-Sukamto et al. , 1997), yaitu suatu bentuk antagonisme yang berlangsung bila dua  buah  hifa  yang  bersifat  antagonistik
Pertumbuhan  miselium C . gloeosporioides ,  cm Growth of mycelium of C. gloeosporioides, cm
Hari Day Kontrol Control Perlakuan Treatments T. harzianum T. koningii 1 0.3 0.3 0.3 0 ± 0 0 ± 0 2 0.8 0.5 0.5 35.6 ± 9.8 31.9 ± 6.4 3 1.5 0.5 0.7 60.8 ± 6.0 51.3 ± 2.2 4 2.2 0.5 0.7 74.9 ± 3.1 68.8 ± 2.4 5 2.6 0.5 0.7 78.9 ± 2.6 73.7 ± 2.1 6 3.3 0.5 0.7 82.9 ± 2.6 77.6 ± 1.1 7 3.7 0.5 0.7 84.7 ± 2.6 80.9 ± 1.3 Catatan ( Note ): *) Rerata ± SD ( Mean ± SD ).
Tabel  3. Pertumbuhan  miselium  jamur  dan  persentase  penghambatan  pertumbuhan C . gloeosporioides pada  uji  antagonis menggunakan T. harzianum dan T. koningii Table  3. Growth of fungal mycelium  and  the mean  percentage growth inhibition of C. gloeosporioides on antagonism  test using T.  harzianum and T.  koningii
Rerata persentase penghambatan *) Mean inhibition percentage T. harzianum T. koningii
'Aini et  al.
secara kontak atau berdekatan. Akibat utama interferensi  hifa  ini  adalah  terjadinya penambahan permeabilitas sel yang berakhir dengan kematian hifa.

## Penghambatan  oleh  B.  subtilis  dan
P. fluorescens
Tabel 4 menunjukkan bahwa C . gloeo- sporioides mulai terhambat pertumbuhannya oleh B. subtilis dan P. fluorescens pada hari ketiga  setelah  aplikasi.  Pertumbuhan C . gloeosporioides pada uji antagonis dengan B. subtilis mulai berhenti pada hari kelima, sedangkan  pada  perlakuan  uji  antagonis dengan P.  fluorescens, pertumbuhan C . gloeosporioides mulai berhenti pada hari keenam. Hal tersebut menunjukkan bahwa B. subtilis mempunyai  daya  hambat  lebih tinggi dibandingkan P. fluorescens.
B.  subtilis menghasilkan  antibiotika yang bersifat racun terhadap mikroba lain. Antibiotika  yang  dihasilkan  antara  lain streptovidin, basitrasin, surfaktin, fengisin, iturin  A,  polimiksin,  difisidin,  subtilin, subtilosin,  dan  mikobasilin.  Subtilosin merupakan antimikroba berbentuk protein, sedangkan  subtilin  merupakan  senyawa peptida,  dan  surfaktin,  fengisin,  serta
iturin A merupakan lipoprotein. Basitrasin merupakan polipeptida yang efektif terhadap bakteri gram positif dan bekerja menghambat pembentukan  dinding  sel  jamur  patogen (Soesanto, 2008).
Berdasarkan hasil yang disajikan dalam Tabel 4, dapat diketahui bahwa persentase penghambatan  pertumbuhan C.  gloeo- sporioides oleh B. subtilis sampai pengamatan hari  ketujuh  lebih  besar  dibandingkan penghambatan oleh P. fluorescens. Persentase penghambatan  oleh B.  subtilis sebesar 52,23%  sedangkan  persentase  peng- hambatan  oleh P.  fluorescens sebesar 45,10%. B.  subtilis mampu  menghasilkan enzim degradatif makromolekul yang bisa menghancurkan  dinding  sel  jamur,  seperti protease (intraseluler) dan beberapa enzim yang  disekresikan  pada  medium  seperti levansukrase,  - glukanase ,  - amylase , xilanase,  kitinase  dan  protease (Kunst &  Rapoport,  1995).  Terhambatnya  per- tumbuhan C . gloeosporioides oleh P. fluo- rescens disebabkan oleh adanya antibiotik seperti  agrocin,  herbicolin,  oomycin  A, phenazine, pyoluteorin yang diproduksi oleh Pseudomonas (Latupapua  &  Nurhidayat, 2003).  Mekanisme  lain  yang  ditunjukkan oleh P. fluorescens adalah dengan mensekresi-
Tabel  4. Pertumbuhan  miselium  jamur  dan  persentase  penghambatan  pertumbuhan C . gloeosporioides pada  uji  antagonis menggunakan B. subtilis dan P. fluorescens.
Table  4. Growth of fungal mycelium and  the percentage  growth inhibition of C. gloeosporioides on antagonism  test  using B.  subtilis and P.  fluorescens. 1 0.2 0.2 0.2
0 ± 0 0 ± 0 2 0.8 0.8 0.8 11.0 ± 0 11.0 ± 0 3 1.5 1.4 1.3 14.9 ± 3.4 12.8 ± 0.5 4 2.1 1.7 1.6 19.5 ± 6.2 21.3 ± 7.5 5 2.7 1.9 1.9 34.4 ± 7.4 27.7 ± 8.3 6 3.2 1.9 2.0 46.4 ± 4.3 38.6 ± 2.9 7 3.9 1.9 2.0
52.2 ± 0.7
45.1 ± 3.5
Hari Day Pertumbuhan  miselium C . gloeosporioides ,  cm Growth of mycelium of C. gloeosporioides , cm
Kontrol Control Perlakuan Treatments
B.  subtilis P. fluorescens
Rerata persentase penghambatan *) The mean inhibition percentage B.  subtilis P. fluorescens
Catatan ( Note ): *) Rerata ± SD ( Mean ± SD ).
Penghambatan Colletotrichum gloeosporioides oleh T. harzianum,  T. koningii,  B. subtilis dan P.  fluorescens
kan  suatu  siderofor  pseudobactin  yang diproduksi  dalam  keadaan  ion  ferric  yang terbatas (Hu & Boyer, 1996).

## KESIMPULAN
Agensia  hayati T.  harzianum, T. koningii, B. subtilis dan P. fluorescens efektif  menghambat  pertumbuhan  jamur Colletotrichum gloeosporioides penyebab penyakit antraknosa pada kakao. Persentase penghambatan pertumbuhan T. harzianum sebesar 84,6%, T. koningii sebesar 80,9%,
B. subtilis sebesar 52,2% dan P. fluorescens sebesar 45,1%.

## DAFTAR PUSTAKA
Arwiyanto,  T.  (1997).  Pengendalian  hayati pen yakit  layu  bakter i  tembakau: 1.  Isolasi  bakteri  antagonis. Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia, 1, 54-60
Barnett, H.L. & B.B. Hunter (1972). Ilustrated Genera of Imperfect  Fungi .  Burgess
Publishing Company. Minnesota, USA.
Bailey, B.A.; H. Bae; M.D. Strem; J. Crozier;
S.E.  Thomas;  G.J.  Samuels;
B.T. Vinyard & K.A. Holmes (2008). Antibiosis, mycoparasitism, and colo- nization  for  endophytic  Tricoderma isolates with biological control poten- tial in Theobroma cacao . Biological Control , 46, 24-35.
Campbell,  R.  (1989). Biological  Control  of Microbial Plant Pathogens . Cambrigde University Press. New York.
Cook, R.J. & K.F. Baker (1983). The Nature and Practice of Biological Control of Plant Pathogens . American Phytopathological Society, St. Paul, Minnesota.
Fokkema, N.J. & F.  van der Meulen (1976). Antagonism of yeast-like phyllosphere fungi  against Septoria  nodorum on wheat leaves. Netherlands Journal of
Plant Pathology , 82, 13-16.
Harman,  G.E.;  C.R.  Howell;  A.  Viterbo  & I.  Chet  (2004).  Trichoderma  spp. –opportunistic  avirulent  plant  sym- bionts. Nature Reviews , 2, 43-56.
Howell, C.R. & R.D. Stipanovic (1979). Control of Rhizoctonia solani on cotton seed- ling  with Pseudomonas  flouresens and  with  an  antibiotik  produced  by the  bacterium. Phytopathology, 69,
480-482.
Hu,  X.  &  G.L.  Boyer  (1996).  Siderophore sediated aluminium uptake by Bacil- lus megetarium . Microbiology Review,
56, 4044-4048.
Jeffries, P. & T.W.K. Young (1994). Interfungal Parasitic  Relationship .  CAB  Inter- n ation al  Mycological  In stitute,
Wallingford, United Kingdom.
Kunst, F. & G. Rapoport (1995). Salt stress is an  environmental  signal  affecting degradaative  enzyme  synthesis  in Bacillus subtilis . Journal of Bacterio- logy , 177, 2403-2407.
Latupapua,  H.J.D.  &  N.  Nurhidayat  (2003). Isolasi dan identifikasi Pseudomonas dari tanah kebun biologi Wamena dan uji  awal  sebagai  agen  biokontr ol Fusarium. Jurnal Ilmu-Ilmu Hayati , 6,
649-653.
Leary, J.W. & W.W.C. Chun (1988). Labora- tory Guide for Identification of Plant Pathogenic  Bacteria .  APS  Press, St. Paul, Minnesota, USA.
O’Sullivan, D.C. & F. O’Gara (1992). Traits of flourescen s Pseudomonas spp. involved in suppresion of plant roots pathogen. Microbiologycal Review, 56, 662-676.
Semangun,  H.  (1988). Penyakit-Penyakit Tanaman  Perkebunan  di  Indonesia .
Gadjah  Mada  University  Pr ess, Yogyakarta.
Sitepu, D. (1993). Konsep pengendalian hayati pada  penyakit  tanaman. Kumpulan Makalah  Simposium  Pendidikan Fitopatologi dan Pengendalian Hayati. Yogyakarta. p. 69-79.
'Aini et  al.
Soesanto, L. (2008). Pengantar Pengendalian Hayati Penyakit Tanaman .  PT.  Raja Grafindo Persada, Malang.
Sri-Sukamto (2008).  Pengendalian penyakit. p. 154-169. In: T. Wahyudi; R. Pang- gabean & Pujiyanto (Eds.). Panduan Lengkap  Kakao:  Manajemen  Agri- bisnis dari Hulu hingga Hilir . Penebar Swadaya, Jakarta.
Sri-Sukamto;  H.  Semangun  &  A.  Harsoyo (1997).  Identifikasi  beberapa  isolat jamur   dan   sifat  an tagonismen ya terhadap Phytophthora  palmivora pada  kakao. Pelita  Perkebunan ,  13, 156-157.
Sri-Sukamto & Y.D. Junianto (1987). Penyakit- penyakit penting pada tanaman kakao di Jawa Timur dan usaha pengedalian- n ya.  Kon gres  Nasion al  IX  PFI, Surabaya.  16 p.
Stirling, M. & G. Stirling (1997). Disease mana- gement:  Biological  control  in  plant path ogen s  an d  plant  diseases.
p.  427-439. In: J.F.  Br own   & H.J.  Ogle  (Eds.). Australian  Plant Pathology Society , Armidale.
Sulistyowati, E.; Sri-Sukamto & A. Purwantara (2009). Pedoman  Teknis  Hama  dan Penyakit  Utama  Tanaman Kakao. Puslitkoka, Jember.
Tjahjono, B. (2000). Bakteri untuk pengendalian hayati  penyakit  tanaman. Makalah Seminar  Sehari  Fitopatologi  Indo- nesia , Malang.
Trigalet, A.; P. Frey & D.T. Demery  (1994). Bio- logical control of bacterial wilt caused by Pseudomonas  solanacearum .
p.  225-233. In: A.C.  Hayward  & G.L. Hartman (Eds.). Bacterial Wilt the Disease  and  Its  Causative  Agent, Pseudomonas solanacearum . Walling- ford, UK: CAB Internasional.
Weller, D.M. (1988). Biological control of soil- borne plant pathogens in the rhizosfer with bacteria. Annual Review Phyto- pathology, 26, 376-407.
*********.
(2009). Pedoman  Teknis  Hama  dan