Formulasi dan uji aktivitas antibakteri sediaan salep kombinasi ekstrak etanol daun Sirih dan Binahong terhadap Staphylococcus aureus
Formulation and antibacterial activity test of a combination ointment of ethanol extract of Betel leaf and Binahong against Staphylococcus aureus
Qurratu Aini 1 , Rasidah 2 *

## Abstract
Background: Betel leaf ( Piper betle L) and Binahong leaf ( Anredera cordifolia (Tenor) Steenis ) are plants that are often used in traditional medicine. Both of these leaves are efficacious as antibacterials.
Objective: This study aimed to determine the stability and antibacterial activity of the combination ointment of Betel leaf extract and Binahong leaf and compare ointment preparations that best inhibit Staphylococcus aureus. Methods: This research  was experimentally conducted in  the laboratory of the Faculty of Mathematics and Natural Sciences,  Syiah  Kuala  University,  and  the  laboratory  of  the  Department  of  Pharmacy,  Poltekkes,  Ministry  of  Health, Aceh, in January 2023. Ointment formulation combination of Betel leaf extract and Binahong leaf in the ratio of (1:1), (2:1), and (1:2). Ointment  stability tests include organoleptic tests, homogeneity, pH, dispersion, and irritation tests performed on days 1 and 30. Antibacterial activity test using the pitting method. Data analysis was done descriptively and followed by an ANOVA statistical test.
Result: The organoleptic test results obtained no changes in the ointment preparation after the storage period. The results  of  the  homogeneity  test  show  that  the  resulting  ointment  preparation  has  homogeneous  properties.  The results of the pH evaluation of the ointment in the range of 4,5-4,8. The results of the evaluation of the dispersion of the ointment by 5,1-5,5 cm. The results of the irritation evaluation showed the absence of irritation on the skin after the ointment was applied. The results of the antibacterial activity test of the ointment preparation are known to be the  inhibitory  zone  of  the  combination  ointment  of  Betel  leaf  extract  and  Binahong  leaf  (2:  1)  of  28,56  mm  and  is significantly different from all treatments in inhibiting Staphylococcus aureus. Conclusion: The  combination  ointment  of  Betel  leaf  ethanol  extract  and  Binahong  leaf  meets  the  criteria  of  good ointment stability and can inhibit the growth of Staphylococcus aureus with powerful inhibitory power category

## Keywords
Antibacterial, Ointment, Staphylococcus aureus

## Abstrak
Latar Belakang: Daun sirih ( Piper betle L) dan daun binahong ( Anredera cordifolia (Tenor) Steenis) merupakan tanaman yang sering digunakan dalam pengobatan tradisional. Kedua daun ini telah terbukti berkhasiat sebagai antibakteri. Tujuan: Penerlitian bertujuan untuk mengetahui stabilitas dan aktivitas antibakteri dari salep kombinasi ekstrak daun sirih dan  daun  binahong  serta  untuk  mengetahui  perbandingan  sediaan  salep  yang  paling  baik  dalam  menghambat  bakteri Staphylococcus aureus.
Metode: Penelitian  ini  bersifat  eksperimental  yang  dilakukan  di  laboratorium  Fakultas  MIPA  Universitas  Syiah  Kuala  dan laboratorium Jurusan Farmasi Poltekkes Kemenkes Aceh pada Januari 2023. Formulasi salep kombinasi ekstrak daun sirih dan daun binahong dengan perbandingan (1:1), (2:1), dan (1:2). Uji stabilitas salep meliputi uji organoleptis, homogenitas, pH, daya sebar, dan uji iritasi yang dilakukan pada hari ke 1 dan 30. Uji aktivitas antibakteri menggunakan metode sumuran. Analisis data dilakukan secara deskriptif dan dilanjutkan uji statistik Anova.
Hasil: Hasil uji organoleptik diperoleh tidak adanya perubahan yang terjadi pada sediaan salep setelah masa penyimpanan. Hasil uji homogenitas menunjukkan bahwa sediaan salep yang dihasilkan memiliki sifat yang homogen. Hasil evaluasi pH
1 Jurusan Farmasi, Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh, Aceh, Indonesia. E-mail: qrratu02aini@gmail.com
2 Jurusan Farmasi, Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh, Aceh, Indonesia. E-mail: rasidah@poltekkesaceh.ac.id
Penulis Koresponding:
Rasidah : Jurusan Farmasi Politeknik Kesehatan Kemenkes Aceh, Aceh, Indonesia. E-mail: rasidah@poltekkesaceh.ac.id
SAGO: Gizi dan Kesehatan 2023, Vol. 5(1) 273-280 © The Author(s) 2023
DOI: http://dx.doi.org/10.30867/gikes.v5i1.1515 https://ejournal.poltekkesaceh.ac.id/index.php/ gikes Poltekkes Kemenkes Aceh
salep pada rentang 4,5-4,8. Hasil evaluasi daya sebar salep sebesar 5,1-5,5 cm. Hasil evaluasi iritasi diperoleh tidak adanya iritasi pada kulit setelah salep dioleskan. Hasil uji aktivitas antibakteri sediaan salep diketahui zona hambat salep kombinasi ekstrak  daun  sirih  dan  daun  binahong  (2:1)  sebesar  28,56  mm  dan  berbeda  nyata  dengan  semua  perlakuan  dalam menghambat Staphylococcus aureus.
Kesimpulan: Salep kombinasi ekstrak etanol daun sirih dan daun binahong memenuhi kriteria stabilitas salep yang baik dan dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus dengan kategori daya hambat sangat kuat.

## Kata Kunci
Antibakteri, Salep, Staphylococcus aureus

## Pendahuluan
eanekaragaman  hayati  Indonesia  yang melimpah  dimanfaatkan  oleh  masyarakat sebagai bahan dasar pengobatan tradisional. Pengobatan  yang  dilakukan secara tradisional telah digunakan oleh masyarakat Indonesia  dengan  menggunakan  pengetahuan yang  diberikan  secara  turun-temurun  (Suraida  et al.,  2020).  Pemanfaatan  tanaman  herbal  sebagai bahan  obat  semakin  banyak  digunakan  oleh masyarakat  hingga  munculnya  istilah back  to nature ,  serta  semakin  sering  dilakukannya  kajian atau  studi  terkait  herbal  oleh  para  ilmuwan (Kumontoy et al., 2023). Salah satu tumbuhan yang sering  digunakan  adalah  daun  sirih  ( Piper  betle L) dan  daun  binahong  ( Anredera  cordifolia (Tenor) Steenis) (Utami et al., 2018).
Daun  sirih  ( Piper  betle L)  merupakan  salah satu tanaman yang dimanfaatkan oleh masyarakat untuk  mengobati  luka,  mengobati  sakit  mata, menyembukan penyakit asma, radang tenggorokan, mengobati sariawan, menghilangkan bau  mulut  dan  bau  badan,  mencegah  dan menghilangkan  jerawat,  mengatasi  keputihan, menyembuhkan asam urat, serta dapat digunakan sebagai pengusir serangga (Hulu et al., 2022; Utami et al., 2018).
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan oleh Mulangsri (2018) dari hasil orientasi pada  daun  sirih  0,5%  menunjukkan  adanya aktivitas antibakteri dengan diameter zona hambat 11mm.  Begitu  juga  dengan  hasil  penelitian  yang dilakukan  oleh  Cruz  (2021),  bahwa  ekstrak  daun sirih  memiliki  aktivitas  sebagai  antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus dengan  diameter zona hambat hingga 20,4 mm (sangat kuat)
Tingginya diameter zona hambat pada daun sirih  dipengaruhi  oleh  senyawa  metabolit sekunder yang terkandung di dalamnya. Senyawa metabolit  sekunder  dalam  daun  sirih  terdiri  dari saponin,  flavonoid,  polifenol,  dan  minyak  astari. Senyawa  saponin  dalam  daun  sirih  dapat  bekerja sebagai  antimikroba.  Senyawa  ini  akan  merusak
membran  sitoplasma  dan  membunuh  sel. Sedangkan  senyawa  flavonoid  diduga  memiliki mekanisme  kerja  mendenaturasi  protein  sel bakteri  dan  merusak  membran  sel  (Carolia  & Noventi, 2016).
Daun binahong ( Anredera cordifolia (Tenor) Steenis)  digunakan  masyarakat  untuk  mengobati luka,  mengatasi  jerawat,  mengatasi  maag, mengatasi  kolestrol,  mengurangi  asam  urat,  dan sebagai  obat  pasca  operasi  (Utami  et  al.,  2018). Ekstrak  daun  binahong  terbukti  dapat  digunakan sebagai  antibakteri.  Pada  hasil  penelitian  yang dilakukan  oleh  Gede  et  al.  (2020)  menyatakan bahwa  ekstrak  etanol  daun  binahong  memiliki aktivitas antibakteri yang kuat terhadap Staphylococcus  aureus dengan  rata-rata  zona hambat  12,97mm.  Sulistyarsi  &  Pribadi  (2018), menyatakan  bahwa  pemberian  ekstrak  daun binahong  dapat  menurunkan  jumlah  koloni bakteri Staphylococcus aureus hingga 80,5%.
Daun sirih dan daun binahong telah terbukti memiliki  khasiat  sebagai  antibakteri.  Salah  satu upaya  yang  dilakukan  untuk  mempermudah penggunaan  kedua  daun  ini  dengan  membuat sediaan  berupa  salep.  Salep  merupakan  sediaan setengah  padat  yang  ditujukan  untuk  pemakaian topikal  pada  kulit  atau  selaput  lender  (Kemenkes RI,  2020).  Bentuk  topikal  dari  salep  dipilih  karena sediaan  salep  yang  mudah  penggunaanya  dan paling  cocok  untuk  tujuan  pengobatan  pada  kulit (Isnaeni, 2019).
Sampai  saat  ini  belum  ada  penelitian  yang mengkombinasikan  ekstrak  daun  sirih  dan  daun binahong  menjadi  sediaan  salep.  Oleh  karena  itu peneliti  tertarik  untuk  membuat  sediaan  kulit berupa salep dari kombinasi ekstrak daun sirih dan daun  binahong  untuk  menghambat  pertumbuhan bakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui stabilitas  dan  aktivitas  antibakteri  dari  salep kombinasi  ekstrak  daun  sirih  dan  daun  binahong serta  untuk  mengetahui  perbandingan  sediaan salep yang paling baik dalam menghambat bakteri Staphylococcus aureus.
K
Formulasi dan uji aktivitas antibakteri sediaan salep ....

## Metode
Penelitian ini bersifat eksperimental di Laboratorium Biosistematika  Jurusan  Biologi  Fakultas  MIPA Universitas Syiah Kuala, Laboratorium Biologi Jurusan Farmasi  Poltekkes  Kemenkes  Aceh,  Laboratorium Farmasetika  Jurusan  Farmasi  Poltekkes  Kemenkes Aceh,  dan  Laboratorium  Mikrobiologi  Jurusan Farmasi Poltekkes Kemenkes Aceh. Waktu penelitian yaitu pada Januari 2023.
Alat yang digunakan pada penelitian ini antara lain  blender, cork  borer ,  neraca  analitik  (sartorius), bejana  maserasi,  pengaduk  kayu,  corong,  kertas saring, vacuum  rotary  evaporator (Buchi),  beaker glass,  gelas  ukur,  kaca  arloji,  penangas  air,  cawan porselen,  lumpang  dan  alu,  sudip,  spatula,  batang pengaduk,  cawan  petri,  ose  bulat,  bunsen, mikropipet, kaca objek, autoklaf, erlenmeyer, kertas label,  kertas  buram,  pH  meter  (infarm),  jangka sorong, pot plastik, pipet tetes, penggaris dan spidol.
Bahan  yang  digunakan  adalah  Daun  sirih ( Piper betle L), daun binahong ( Anredera cordifolia (Tenore) Steenis), etanol 96%, aquadest, PEG 400, PEG  4000,  alfa  tokoferol,  metil  paraben,  bakteri Staphylococcus  aureus ,  NaCl  0,9%,  dan Nutrien agar (NA).

## Penyiapan Simplisia
Diambil  daun  sirih  dan  daun  binahong  yang  telah tua  (warna  daun  hijau  lebih  gelap,  diambil  pada
posisi  daun  ke  5,  6,  7,  8,  dan  seterusnya  dari pucuk).  Dicuci  bersih  daun  sirih  yang  telah diperoleh  Ditiriskan  dan  dikeringkan  daun  sirih dengan  cara  diangin-anginkan  pada  suhu  ruang. Diblender halus daun sirih yang telah kering hingga menjadi serbuk (Novita et al., 2017).

## Pembuatan ekstrak secara maserasi
Masing-masing  serbuk  daun  sirih  dan  daun binahong ditimbang sebanyak 200 gram, kemudian dimasukkan  2000mL  etanol  96%.  Didiamkan selama 6 jam pertama sambil sesekali di aduk, lalu diamkan  selama  18  jam.  Selanjutnya  dipisahkan masing-masing  maserat  daun  sirih  dan  daun binahong dengan cara filtrasi.
Dilakukan pengulangan penyarian menggunakan  etanol  96%  sebanyak  1000mL. Dikumpulkan  semua  maserat  yang  diperoleh,  lalu diuapkan  menggunakan vacuum  rotary  evaporator hingga  diperoleh  ekstrak  kental  (Pratimasari  et  al., 2015).

## Pembuatan  salep  kombinasi  ekstrak  daun  sirih dan daun binahong
Salep  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih dan  daun  binahong  yang  dibuat  dengan bobot 50  gram  (Putri  et  al.,  2020).  Formulasi sediaan  salep  dapat  dilihat  pada  tabel  1 dibawah ini:
Tabel 1. Formulasi basis salep dan salep kombinasi ekstrak etanol daun sirih dan daun binahong Komposisi Bahan Basis Salep Formula 1:1 Formula 1:2 Formula 2:1 Ekstrak Daun Sirih (g) - 3 2 4 Ekstrak Daun Binahong (g) - 3 4 2 PEG 400 (g) 40 35,2 35,2 35,2 PEG 4000 (g) 10 8,8 8,8 8,8 Metil paraben (g) 0,01 0,01 0,01 0,01 Alfa Tokoferol (g) 0,0005 0,0004 0,0004 0,0004 Semua bahan ditimbang sesuai
perhitungan. Kemudian dimasukkan PEG 4000 ke dalam  cawan  porselen,  lalu  dileburkan  diatas penangas  air.  Dimasukkan  PEG  4000  yang  telah meleleh  ke  dalam  lumpang  panas,  kemudian diaduk hingga homogen. Dimasukkan PEG 400 ke dalam  lumpang  panas,  gerus  hingga  homogen. Ditambahkan  metil  paraben  dan  alfa  tokoferol lalu  digerus  hingga  terbentuk  massa  salep  yang kental dan homogen. Ditambahkan ekstrak daun sirih  dan  ekstrak  daun  binahong  sedikit  demi
sedikit, kemudian digerus hingga campuran salep homogen.  Dikeluarkan  salep  dari  lumpang, kemudian  dimasukkan  ke  dalam  pot  (Larasati  et al., 2022).

## Evaluasi Sediaan Salep
Uji Organoleptis
Uji  organoleptis  bertujuan  untuk  mengetahui sifat  fisik  dan  mengamati  adanya  perubahan warna, bentuk, dan bau dari sediaan salep selama masa penyimpanan (Soediono et al., 2019).
Uji Homogenitas Uji  homogenitas  bertujuan untuk  mengetahui sediaan  salep  tersebar  secara  merata  atau  tidak. Uji  sediaan  dilakukan  dengan  cara  diambil  0,05  g sediaan  salep,  lalu  dioleskan  pada  sekeping  kaca atau  bahan  transparan  lainnya  (Novita  et  al., 2017).

## Uji pH
Uji  pH  dilakukan  dengan  cara  ditimbang  salep sebanyak  0,5  g  salep  diencerkan  dengan  5  ml aquadest,  lalu  dilakukan  pengecekan  pH  larutan (Novita et al., 2017).

## Uji Daya Sebar
Uji  daya  sebar  dilakukan  dengan  cara  0,5  g salep  diletakkan  diatas  kaca  objek,  kemudian diletakkan  kaca  objek  lain  diatasnya  diberi  beban 100  g  lalu  dibiarkan  selama  1  menit.  Setelah  1 menit  diukur  diameter  sebar  salep  (Novita  et  al., 2017).

## Uji Iritasi
Uji  iritasi  dilakukan  dengan  cara  mengoleskan salep kepada 5 orang responden selama 15 menit dipunggung bagian dalam tangan kanan (Novita et al., 2017).

## Rancangan Uji Antibakteri
Rancangan  uji  antibakteri  yang  digunakan  adalah Rancangan Acak Lengkap (RAL) dengan 6 perlakuan dan  masing-masing  pengulangan  sebanyak  4  kali. Perlakuan  pada  uji  ini  meliputi  kontrol  negatif (aquadest),  kontrol  positif  (salep  kloramfenikol), basis  salep,  kombinasi  ekstrak  (1:1),  kombinasi ekstrak (2:1) dan kombinasi ekstrak (1:2).

## Uji Mikrobiologi Metode Sumuran
Semua  alat  yang  akan  digunakan  disterilisasi terlebih dahulu menggunakan autoclave pada suhu 121⁰C selama 15 menit (Novita et al., 2017).
Sebanyak 1 ml suspensi bakteri Staphylococcus  aureus dimasukkan kedalam masing-masing  cawan  petri.  Dituangkan  media Nutrien  Agar kedalam  masing-masing  cawan  petri sebanyak  60  ml,  lalu  digoyang  perlahan  hingga tercampur  dan  didiamkan  hingga  mengeras. Masing-masing  cawan  dibagi  menjadi  6  bagian, kemudian  dilubangi  dengan  diameter  ±6  mm. Dimasukkan salep pada tiap bagian (P0, P1, P2, P3, P4,  P5).  Diinkubasi  semua  cawan  petri  pada  suhu 37⁰C  selama  2x24  jam.  Diamati  perk embangan bakteri  pada  setiap  perlakuan.  Diukur  diameter zona  hambat  bakteri Staphylococcus  aureus dengan menggunakan jangka sorong (Novita et al., 2017).

## Analisis Data
Analisis  data  yang  digunakan  pada  penelitian  ini adalah secara deskriptif dan analisis statistik. Data evaluasi  sediaan  salep  dianalisis  secara  deskriptif. Hasil uji aktivitas antibakteri dianalisis menggunakan  statistik  ANOVA  dan  uji  lanjut Duncan.

## Hasil

## Hasil Uji Evaluasi Sediaan Salep
Pemekatan  ekstrak  kental  daun  sirih  dan  daun binahong  menggunakan vacuum  rotary  evaporator diperoleh ekstrak kental daun sirih sebanyak 21,12 g dan ekstrak kental daun binahong sebanyak 10,6 g.

## Tabel  2. Hasil uji organoleptik
Evaluasi Hari ke- Basis Salep Kombinasi Ekstrak (1:1) Kombinasi Ekstrak (2:1) Kombinasi Ekstrak (1:2) Bentuk 1 Semi padat Semi padat Semi padat Semi padat 30 Semi padat Semi padat Semi padat Semi padat Warna 1 Putih Hijau tua pekat Hijau tua kecoklatan Hijau lumut muda 30 Putih Hijau tua pekat Hijau tua kecoklatan Hijau lumut muda Bau 1 Bau basis salep Khas ekstrak daun sirih dan binahong Khas ekstrak daun sirih  Khas ekstrak daun binahong 30 Bau basis salep Khas ekstrak daun sirih dan binahong Khas ekstrak daun sirih  Khas ekstrak daun binahong
Formulasi dan uji aktivitas antibakteri sediaan salep ....
Uji  stabilitas  sediaan  salep  dilakukan  pada hari ke 1 dan hari ke 30 setelah penyimpanan salep pada  suhu  ruang.  Evaluasi  sediaan  meliputi  uji homogenitas, organoleptis, daya sebar, pH, dan uji iritasi.
Hasil  uji  homogenitas  pada  sediaan  salep kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih  dan  daun binahong  menunjukkan  bahwa  tidak  adanya partikel  lain  yang  terdapat  pada  salep  saat dioleskan  pada  kaca  objek.  Hasil  uji  organoleptis sediaan salep dapat dilihat pada Tabel 2.
Hasil uji daya sebar sediaan salep kombinasi ekstrak etanol daun sirih dan daun binahong yang dilakukan  pada  hari  ke  1  dan  hari  ke  30, menunjukkan  bahwa  semua  sediaan  salep  yang dihasilkan  memiliki  daya  sebar  yang  baik.  Hasil pengujian pH menunjukkan sediaan salep kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih  dan  daun binahong  memiliki  nilai  yang  tidak  jauh  berbeda dan memenuhi kriteria pH salep yang baiK. Hasil uji daya sebar dan pH dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel  3. Hasil uji daya sebar dan uji pH
Formula Pengamatan Daya Sebar (cm) pH Hari-1  Hari-30  Hari-1  Hari-30 Basis salep 5,1 5,3 4,5 4,5 Kombinasi ekstrak (1:1) 5,2 5,5 4,5 4,5 Kombinasi ekstrak (2:1) 5,1 5,4 4,6 4,6 Kombinasi ekstrak (1:2) 5,3 5,5 4,8 4,8
Hasil  pengujian  pH  menunjukkan  sediaan salep kombinasi ekstrak etanol daun sirih dan daun binahong  memiliki  nilai  yang  tidak  jauh  berbeda
dan memenuhi kriteria pH salep yang baik. Hasil uji iritasi pada sediaan salep kombinasi ekstrak etanol daun sirih dan daun binahong menunjukkan bahwa tidak  adanya  gejala  iritasi  setelah  salep  dioleskan pada kulit.

## Hasil Uji Antibakteri
Hasil uji antibakteri salep kombinasi ekstrak etanol daun sirih dan daun binahong dapat menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus. Hal ini  ditandai  dari  terbentuknya  zona  bening disekitar sumuran (Gambar 1).
Diameter zona hambat terkecil pada sediaan salep kombinasi ekstrak etanol daun sirih dan daun binahong  (1:1)  adalah  25,54mm.  Sedangkan diameter  zona  hambat  terbesar  terbentuk  pada sediaan  salep  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih dan daun binahong (2:1), yaitu sebesar 28,56mm.
Gambar 1. Hasil  uji  antibakteri  salep  kombinasi ekstrak  etanol  daun  sirih  dan  daun binahong.
Tabel  4. Hasil  uji  lanjut  Duncan  rata-rata  diameter  zona  hambat  sediaan  salep  kombinasi  ekstrak  etanol daun sirih dan daun binahong terhadap pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus Perlakuan Rata-rata diameter zona hambat ± Standar Deviasi (mm) Kategori Kontrol negatif 0,00 a ± 0,000 Lemah Kontrol positif 24,02 ᵇ ± 0,97 Sangat Kuat Basis salep 0,00 a ± 0,000 Lemah Kombinasi ekstrak (1:1) 25,54 ᵇ c ± 0,99 Sangat kuat Kombinasi ekstrak (2:1) 28,56 ᵈ ± 1,16 Sangat kuat Kombinasi ekstrak (1:2) 26,88 c ± 2,09 Sangat kuat
Huruf superscript yang berbeda menunjukkan adanya perbedaan yang nyata (P<0,05).
Hasil  uji  statistik  (Tabel  4)  menggunakan Anova  menunjukkan  bahwa  salep  kombinasi ekstrak  etanol  daun  sirih  dan  daun  binahong sangat berpengaruh dalam menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus (p= 0,000).  Setelah  dilakukan  uji  lanjut  Duncan diketahui  bahwa  sediaan  salep  kombinasi  ekstrak etanol daun sirih dan daun binahong (2:1) berbeda nyata  dengan  semua  perlakuan  (p  <  0,05)  dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus. Berdasarkan  kategori  daya  hambat pertumbuhan  bakteri,  semua  sediaan  salep kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih  dan  daun binahong berada dalam kategori sangat kuat.

## Pembahasan
Hasil  evaluasi  sediaan  salep  harus  memenuhi kriteria  salep  yang  baik.  Uji  stabilitas  fisik  sediaan salep dilakukan pada hari ke 1 dan pada hari ke 30 pada  suhu  ruang,  uji  evaluasi  terdiri  dari  uji organoleptis,  uji  homogenitas,  uji  daya  sebar,  dan uji pH (Larasati et al., 2022).
Uji  organoleptis  sediaan  salep  bertujuan untuk  mengetahui  sifat  fisik  dan  mengamati  ada atau  tidaknya  perubahan  bentuk,  warna,  dan  bau dari  sediaan  selama  masa  penyimpanan  (Putri  et al.,  2020).  Hasil  uji  organoleptis  sediaan  salep kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih  dan  daun binahong, diperoleh bahwa tidak adanya perubahan yang terjadi pada sediaan salep setelah masa penyimpanan.
Pengujian homogenitas sediaan salep bertujuan untuk mengetahui tekstur sediaan salep. Salep  yang  homogen  ditandai  dengan  tidak terdapatnya  gumpalan  pada  saat  pengolesan, memiliki  struktur  yang  rata  dan  memiliki  warna yang seragam dari titik awal pengolesan (Novita et al.,  2017).  Hasil  uji  homogenitas  sediaan  salep kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih  dan  daun binahong menunjukkan bahwa  sediaan salep yang dihasilkan  memiliki sifat  yang  homogen  (tidak ada butiran-butiran  kasar  pada  saat  salep  dioleskan pada kaca objek).
Uji daya sebar dilakukan untuk melihat daya sebar salep di kulit pada saat diaplikasikan. Sediaan salep  yang  baik  ditandai  dengan  diameter  sebar salep  antara  5-7cm.  Hasil  uji  daya  sebar menunjukkan  bahwa  semua  sediaan  salep kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih  dan  daun binahong  yang  dibuat  menghasilkan  daya  sebar
5,1-5,5  cm  selama  30  hari  penyimpanan.  Hasil  ini menunjukkan  bahwa  sediaan  salep  memenuhi parameter  daya  sebar  yang  baik  (Soediono  et  al., 2019).
Pengukuran pH dilakukan untuk menghindari  terjadinya  iritasi  akibat  pengolesan salep di kulit.  pH kulit normal berkisar antara 4,5- 8. Nilai pH yang melampaui 8 dikhawatirkan dapat menyebabkan  iritasi  pada  kulit  (Pratimasari  et  al., 2015). Sediaan salep dengan pH terlalu asam dapat mengiritasi kulit,  sedangkan  sediaan  salep  dengan pH yang terlalu basa dapat membuat kulit menjadi bersisik.  Hasil  pengujian  nilai  pH  dengan  bantuan pH  meter  dari  keempat  sediaan  salep  kombinasi ekstrak  etanol  daun  sirih  dan  daun  binahong memiliki  nilai  pH  4,5-4,8.  Hasil  ini  menunjukkan bahwa  sediaan  salep  memenuhi  kriteria  pH  salep yang baik (Pratimasari et al., 2015).
Hasil  uji  iritasi  yang  dilakukan  terhadap kelima  responden  setelah  pengaplikasian  salep  di kulit,  tidak  muncul  kemerahan  ataupun  rasa  gatal di  kulit.  Uji  iritasi  yang  dilakukan  bertujuan  untuk melihat ada atau tidaknya iritasi yang terjadi pada kulit  setelah  salep  dioleskan.  Iritasi  ditandai dengan  timbulnya  kemerahan,  gatal-gatal,  dan atau  bengkak  pada  bagian  yang  diolesi  salep (Fauziah et al., 2022).
Hasil uji aktivitas antibakteri terhadap ketiga sediaan  salep  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih dan  daun  binahong  menghasilkan  daya  hambat terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dengan kategori  sangat  kuat.  Hasil  pada  uji  statistika dengan menggunakan metode Anova menunjukkan  nilai  (p=  0,000),  yang  menyatakan bahwa  salep  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih dan  daun  binahong  sangat  berpengaruh  terhadap pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus . Setelah  dilakukan  uji  lanjut  Duncan,  hasil  yang diperoleh  adalah  salep  kombinasi  ekstrak  daun sirih  dan  daun  binahong  (2:1),  yang  memiliki diameter zona hambat sebesar 28,56 mm, berbeda nyata dengan semua perlakuan dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus (Pamudi et al., 2021) .
Rata-rata  diameter  zona  hambat  salep dengan  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih  dan daun binahong pada perbandingan (1:1), (2:1), dan (1:2) menghasilkan diameter zona hambat dengan kategori  sangat  kuat,  begitu  juga  dengan  kontrol positif  (salep  kloramfenikol).  Namun  diameter zona  hambat  terbesar  terbentuk  pada  salep kombinasi  ekstrak  (2:1).  Diameter  zona  hambat
Formulasi dan uji aktivitas antibakteri sediaan salep ....
pada  kombinasi  ekstrak  (2:1)  lebih  besar dibandingkan dengan kontrol positif (kloramfenikol).  Hal  ini  mungkin  disebabkan  oleh kandungan  metabolit  sekunder  yang  terdapat  di dalam daun sirih dan daun binahong yang bekerja secara sinergis (Tjahjani & Lestari, 2022).
Salep  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih dan  daun  binahong  telah  terbukti  efektif  dalam menghambat  bakteri  S taphylococcus  aureus. Namun penelitian ini masih terdapat keterbatasan, diantaranya  belum  dilakukan  penetapan  kadar senyawa  aktif  yg  terdapat  dalam  ekstrak  dan belum dilakukannya penentuan Hambat Minimum (KHM)  serta  Kadar  Bunuh  Mikroba  (KBM)  dari sediaan  salep  kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih dan  daun  binahong.  Diharapkan  dapat  dilakukan penelitian  lanjutan  terhadap  Kadar  Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Mikroba (KBM).

## Kesimpulan
Kombinasi  ekstrak  etanol  daun  sirih  dan  daun binahong  dapat  diformulasikan  menjadi  sediaan salep  yang  memenuhi  stabilitas  salep  yang  baik. Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  sediaan  salep menunjukkan bahwa salep kombinasi ekstrak etanol daun  sirih  dan  daun  binahong  dapat  menghambat bakteri Staphylococcus  aureus ,  dengan  diameter zona  hambat  paling  besar  pada  kombinasi  ekstrak (2:1)  sebesar  28,56  mm  dengan  kategori  sangat kuat.
Saran,  dapat  dilakukan  penelitian  lanjutan tentang penetapan Kadar Hambat Minimum (KHM) dan Kadar Bunuh Mikroba (KBM) dari sediaan salep kombinasi  ekstrak  daun  sirih  dan  daun  binahong terhadap bakteri Staphylococcus aureus .

## Deklarasi Konflik Kepentingan
Penulis menyatakan bahwa pada penelitian ini tidak ada  potensi  konflik  kepentingan  baik  dari  penulis maupun  instansi  sehubungan  dengan  penelitian, kepengarangan, dan/atau publikasi pada artikel ini.

## Ucapan Terima Kasih
Terimakasih  kepada  semua  pihak  yang  telah membantu terlaksananya penelitian ini.

## Daftar Rujukan
Carolia,  N.,  &  Noventi,  W.  (2016).  Potensi  Ekstrak Daun  Sirih  Hijau  (Piper  betle  L.)  sebagai Alternatif  Terapi  Acne  vulgaris. Majority , 5 (1), 140 – 144. Cruz, H. S. Da. (2021). Kajian Aktivitas Ekstrak Daun Sirih  (Piper  betle  L.)  Terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus  Dan  Streptococcos pyogenes .  Universitas  Ngudi  Waluyo  Ngudi Waluyo.
Kemenkes  RI.  (2020).  Farmakope  Indonesia  edisi
VI.  In Departemen  Kesehatan  Republik Indonesia (Edisi  VI).  Kementerian  Kesehatan RI.
Fauziah, Arsyi, U., Rizki, M., & Safrida, Y. D. (2022).
Studi  Formulasi  Dan  Uji  Stabilitas  Fisik Sediaan  Salep  Dan  Krim  Ekstrak  Etanol
Daging Buah Kopi Robusta (Coffea canephora). Jurnal  SAINS  &  Kesehatan
Darussalam , 2 (1), 1 – 9.
Gede,  I.  P.,  Purwa  Hita,  A.,  Eka  Arimbawa,  P.,  &
Windydaca  Bp,  D.  (2020).  Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  70%  Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) Terhadap  Bakteri  Staphylococcus  aureus.
Jurnal Farmasi Dan Kesehatan , 9 (2), 49 – 54. Hulu,  L.  C.,  Fau,  A.,  &  Sarumaha,  M.  (2022).
Pemanfaatan Daun Sirih Hijau (Piper betle L) Sebagai  Obat  Tradisional  Di  Kecamatan Lahusa. Jurnal  Pendidikan  BiologiJurnal Pendidikan Biologi , 3 (1), 2 – 3.
Isnaeni, D. (2019). Formulasi Sediaan Salep Ekstrak Daun  Kaktus  Pakis  Giwang  (Euphorbia  milii Ch.Des  Moulins)  Kombinasi  Basis  Modifikasi PEG  4000  Dan  PEG  400  serta  Aktivitas Antibakteri Terhadap
Staphylococcus
epidermis. Jurnal  Herbal  Indonesia , 1 (1),
2685 – 9343.
Kumontoy, G. D., Deeng, D., & Mulianti, T. (2023).
Pemanfaatan  tanaman  herbal  sebagai  obat tradisional  untuk  kesehatan  masyarakat  di Desa  Guaan  Kecamatan  Mooat  Kabupaten Bolaang  Mongondow  Timur. HOLISTIK,
Journal of Social and Culture, 16 (3), 1 – 16. Larasati,  D.,  Istiqomah,  F.,  &  Hernowo,  B.  (2022). Evaluasi  Sifat  Fisik  Salep  Kunyit  (Curucuma domestica)  dengan  Variasi  Konsentrasi Vaselin  Album. Jurnal  Kesehatan  Madani Medika, 13 (01), 93 – 99.
Mulangsri,  D.  A.  K.  (2018).  Aktivitas  Antibakteri Ekstrak  Etanol  Daun  Muda  dan  Daun  Tua
Sirih  Hijau  (Piper  betle  L.)  Terhadap  Bakteri Staphylococcus aureus. Jurnal Ilmiah
Cendikia Eksakta , 2528 – 5912 , 1 – 4.
Novita,  R.,  Munira,  M.,  &  Hayati,  R.  (2017). Formulasi Sediaan Salep Ekstrak Etanol Pliek U  Sebagai  Antibakteri. AcTion:  Aceh Nutrition Journal , 2 (2), 103 – 108.
Pamudi, B. F., Munira, M., Saha, R. A., & Nasir, M.
(2021).  Pengaruh  lama  maserasi  daun ketapang  merah  (Terminalia  Catappa  L.) terhadap  daya  hambat  Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Jurnal SAGO Gizi
Dan Kesehatan , 2 (2), 158 – 163.
https://doi.org/10.30867/gikes.v2i2.664 Pratimasari,  D.,  Sugihartini,  N.,  Yuwono,  T., Program,  M.,  Sarjana,  P.,  Dahlan,  U.  A., Farmasi, F., & Dahlan, U. A. (2015). Evaluasi Sifat  Fisik  Dan  Uji  Iritasi  Sediaan  Salep Minyak  Atsiri  Bunga  Cengkeh  Dalam  Basis Larut Air. Jurnal Ilmiah Farmasi , 11 (1), 9 – 15. Putri,  R.,  Hardiansah,  R.,  &  Supriyanta,  J.  (2020).
Formulasi  dan  evaluasi  fisik  salep  anti jerawat  ekstrak  etanol  96%  daun  pepaya (Carica papaya L) Terhadap Bakteri Propionibacterium acnes. Jurnal
Farmagazine , 7 (2).
Soediono, J. B., Zaini, M., Sholeha, D. N., & Jannah,
N. (2019). Uji Skrining Fitokimia Dan Evaluasi
Sifat Fisik Sediaan Salep Ekstrak Etanol Daun Kemangi  (Ocimum  santum  (L.))  Dengan Menggunakan  Basis  Salep  Hidrokarbon  Dan Basis  Salep  Serap. Jurnal  Kajian  Ilmiah Kesehatan Dan Teknologi , 1 (1), 5 – 7. Sulistyarsi, A., & Pribadi, N. W. (2018). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong
(Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis)  Terhdap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus Dan  Pseudomonas  aeruginosa. Journal  of
Pharmaceutical Science and Medical Research , 1 (1), 26. https://doi.org/10.25273/pharmed.v1i1.227 1
Suraida,  Susanti,  T.,  &  Sholichin,  M.  (2020).
Pengetahuan Tumbuhan Obat Oleh Suku Bali &  Jawa  di  Desa  Simpang  Bayat  Sumatera Selatan (I). CV. Jivaloka Mahacipta.
Tjahjani,  N.  P.,  &  Lestari,  D.  W.  (2022).  Potensi
Ekstrak Etanol 70% Daun Binahong (Anredera  cordifolia  (Ten.)  Steenis.)  Dan Ektrak  Etanol  96%  Daun  Sirih  Hijau  (Piper betle L.) Terhadap Bakteri Proteus mirabilis. Jurnal Pranata Biomedika , 1 (1), 64 – 77. Utami, F. P., & Matahari, R. (2018). TOGA Manfaat dan Cara Pengolahannya (Rahmani
Sofianingsih  (ed.)).  CV.  Pustaka  Ilmu  Group Yogyakarta.