## KARAKTERISASI  MICRORNA  TRIPLE  HELIX  MELALUI  METODE HYDROGEL SCAFFOLD  SPESIFIK  TERHADAP  MICRORNA-26A DAN  HSA-MICRORNA-15A:  MODALITAS  KURATIF  MUTAKHIR PADA PENYAKIT KATARAK
Nisrina Hanifah Afnan 1 , Endah Sari Ratna Kumala 1 , Mochamad Afifudin 1 ,
1 Medical Education Study Program, Faculty of Medicine, Indonesian Islamic University, Yogyakarta e-mail: ninaafnan14@gmail.com

## Abstract
Cataract  is  an  eye  disease  that  is  marked  by  it  decrease  in  lens  transparency.  Cataract  is  a  major  cause  of blindness.  Data  The  World  Health  Organization  (WHO)  in  2010  showed  that  there  were  285  million  people have visual impairments worldwide, 39 million of them blindness where 33% of them are caused by cataracts. Governance cataracts are currently limited to surgical efforts and administration of eye drops as antioxidant. But both have flaws because of the risk of complications limited ocular and lens penetrating ability. Therefore, the author reviewed the potential for triple helix microRNA characterization through specific Hydrogel Scaffold methods against microRNA-26a and hsa-microRNA-15a as the latest curative modalities on cataract disease. microRNA is a non coding RNA molecule consisting of 22 nucleotide. microRNA is known to have a specific target  gene  so  it  will  increase  the  effectiveness  of  therapy  in  cataracts.  The  method  used  in  this  writing  is  a study of literature. The author reviews various sources, the majority come from a global journal. The author enters several keywords such as cataract, microRNA, triplex nanoparticle, and Hydrogel Scaffold. The website is  used  including  nature,  sciencedirect,  pubmed,  and  ebsco.  After  extraction  based  on  the  inclusion  and exclusion  criteria  that  have  been  determined,  the  journal  is  then  analyzed  and  synthesized  whose  results  are written  in  this  review  literature.  based  on  literature  obtained,  microRNA-26a  has  decreased  expression  in cataract cases. So that when microRNA-26a is transfected, there will be an increase in regulation which can increase the positive effect on inhibiting the process of fibrosis on cataract  pathomechanism  mediated  by  Notch  /  Jagged-1.  Meanwhile,  microRNA-  15a  overexpresses,  so  that when transfected antagomir microRNA-15a, then this microRNA will decrease and give negative feedback so the expression of bcl-2 and mcl-1 as antiapoptotic and antioxidant proteins will be increased. To increase its stability,  both  microRNA-26a  and  antagomir  microRNA-15a  will  be  formed  into  a  triple  helix  RNA  structure through addition dendrimer with the Hydogel Scaffold method. This allows the microRNA become more stable in circulation and can be released in specific genes. By therefore, through the triple helix RNA characterization specific to microRNA-15a and microRNA-26a, cataract therapy is expected to be more effective and efficient.
Keywords : cataracts, triple helix microRNA, microRNA-15a, microRNA-26a

## Abstrak
Katarak  merupakan  salah  satu  penyakit  mata  yang  ditandai  dengan  adanya  penurunan  transparansi  lensa. Katarak merupakan penyebab utama dari kebutaan. Data World Health Organization (WHO) pada tahun 2010 menunjukkan  bahwa  terdapat  285  juta  orang  memiliki  gangguan  pengelihatan  di  seluruh  dunia,  39  juta diantaranya mengalami kebutaan dimana 33% diantaranya disebabkan karena katarak. Tatalaksana katarak saat ini  terbatas  pada  upaya  pembedahan  dan  pemberian  obat  tetes  mata  sebagai  antioksidan.  Namun  keduanya memiliki kekuarangan karena adanya risiko komplikasi ocular dan kemampuan menembus lensa yang terbatas. Oleh  karena  itu,  penulis  mereview  potensi  karakterisasi micro RNA triple  helix melalui  metode  Hydrogel Scaffold  spesifik  terhadap micro RNA-26a  dan  hsa- micro RNA-15a  sebagai  modalitas  kuratif  mutakhir  pada penyakit katarak. micro RNA merupakan molekul non coding RNA yang terdiri dari 22 nukleotida. micro RNA diketahui  memiliki  target  gen  yang  spesifik  sehingga  akan  meningkatkan  efektivitas  terapi  pada  penyakit katarak. Metode yang digunakan dalam penulisan ini adalah studi literatur. Penulis mereview berbagai sumber yang mayoritas berasal dari jurnal global. Penulis memasukkan beberapa kata kunci seperti cataract, microRNA, triplex nanoparticle, dan Hydrogel Scaffold. Adapun website yang digunakan antara lain nature, sciencedirect, pubmed, dan ebsco. Setelah dilakukan ekstraksi berdasarkan kriteria inklusi dan eksklusi yang telah ditentukan, jurnal  kemudian  dianalisis  dan  disintesis  yang  hasilnya  tertulis  dalam literature  review ini.  Berdasarkan literature yang didapatkan, micro RNA-26a mengalami penurunan ekspresi pada kasus katarak. Sehingga ketika micro RNA-26a ditransfeksikan, maka akan terjadi peningkatan regulasi yang dapat meningkatkan efek positif
terhadap  penghambatan  proses  fibrosis  pada  patomekanisme  katarak  yang  dimediasi  oleh  Notch/Jagged-1. Sementara itu, micro RNA- 15a mengalami overekspresi, sehingga ketika ditransfeksikan antagomir micro RNA- 15a, maka micro RNA ini akan mengalami penurunan dan memberikan feedback negatif sehingga ekspresi bcl-2 dan mcl-1 sebagai protein antiapoptosis dan antioksidan akan meningkat. Untuk meningkatkan kestabilannya, baik micro RNA-26a  dan  antagomir micro RNA-15a  akan  dibentuk  menjadi  struktur  RNA  triple  helix  melalui penambahan dendrimer dengan metode Hydogel Scaffold. Hal ini memungkinkan micro RNA tersebut menjadi lebih  stabil  dalam  sirkulasi  dan  dapat  terlepas  pada  gen  yang  spesifik.  Oleh  karena  itu,  melalui  karakterisasi RNA triple helix spesifik terhadap micro RNA-15a dan micro RNA-26a, diharapkan terapi pada katarak menjadi lebih efektif dan efisien.
Kata kunci : katarak, microRNA triple helix, microRNA-15a, microRNA-26a

## PENDAHULUAN
Katarak  merupakan  salah  satu  penyakit pada mata yang ditandai dengan hilangnya transparansi  pada  lensa 1 .  Penyakit  ini merupakan penyebab terbesar dari kebutaan 2 . Data World Health Organization (WHO)  pada  tahun  2010 menunjukkan  bahwa  terdapat  285  juta orang  memiliki  gangguan  pengelihatan  di seluruh  dunia,  39  juta  diantaranya mengalami  kebutaan 3 .  Katarak  sendiri menyumbang  sebesar  33%  penyebab kebutaan. Sebanyak 47,8% penduduk dunia menderita  katarak  pada  usia  diatas  50 tahun.  Di  Eropa,  penderita  katarak  dengan usia  50-62  tahun  sebanyak  5%  dan  30% untuk  usia  60-69  tahun.  Penduduk  dengan usia  lebih  dari  70  tahun  sebanyak  64%. Data  tersebut  menunjukkan  bahwa  usia menjadi salah satu etiopatogenesis tertinggi dari penyakit katarak. 4 Katarak merupakan penyebab  utama  kebutaan  di  Indonesia. Data  tersebut  diperoleh  melalui  metode Rapid  Assasment  of  Avoidable  Cataract (RAAB)  yang  dilakukan  di  15  provinsi  di Indonesia,  prevalensi  kebutaan  mencapai 4,4%  pada  populasi  usia  50  tahun  dan  64- 95%  diantaranya  disebabkan  oleh  katarak. Diperkirakan  setiap  tahunnya  penderita katarak  bertambah  sebesar  0.1%  dari jumlah penduduk. Operasi Katarak merupakan  cara  penanggulangan  buta akibat  katarak.  Kebutuhan  operasi  katarak di  Indonesia  mencapai  240.000  orang setiap  tahunnya  sementara  kemampuan untuk  melakukan  operasi  katarak  baru mencapai  180.000/tahun. 5 Biaya  operasi
katarak  pada  negara  di  Eropa  berbeda- beda.  Negara  Denmark  memiliki  biaya operasi  katarak  sebesar  €  714  per  orang atau  sebesar  Rp.  11.540.000  dan  di  Italia sebesar € 437 atau Rp. 7.063.00. Sementara pada negara Inggris biaya yang dikeluarkan untuk  lensa  adalah  €  157  atau  Rp. 2.536.000. 4
Tatalaks ana  pada  penyakit  katarak dapat  ditempuh  dengan  pembedahan/ operasi  maupun  pemberian  obat-obatan. Sampai  saat  ini,  pembedahan  menjadi metode  yang  paling  efektif  dalam menangani  katarak.  Meskipun  demikian, terapi yang terbilang mahal tersebut masih sulit  diterapkan  pada  Negara  berkembang. Selain  karena  biaya  yang  mahal,  tingkat kesadaran  yang  rendah  serta  minimnya tenaga  ahli  bedah  mata  yang  professional juga  menjadi  hambatan.  Hal  inilah  yang menjadikan  outcome  terapi  pembedahan katarak  pada  Negara  berkembang  buruk. Pemerintah setempat biasanya juga menerapkan pembedahan
insisi ekstrakapsular  kecil  yang  memiliki  tingkat efisiensi  yang  rendah. 6 Selain  itu,  terapi bedah  juga  masih  sulit  menghasilkan prognosis  yang  baik  pada  kasus dense brunescent  cataract (katarak  dengan tingkat  keparahan  tinggi;  berat).  Operasi katarak  dapat  menimbulkan  beberapa komplikasi intraoperatif, seperti kehilangan vitreous  dan  pendarahan  pada  anterior chamber. Bahkan pada kasus-kasus tertentu juga dapat menimbulkan cedera endothelial pada  kornea,  rupture  kapsul  posterior,  dan dialisis  zonular. 7 Disisi  lain,  terdapat beberapa  obat  tetes  mata  yang  dapat
digunakan  untuk  menurunkan  progresi patofisiologi  katarak.  Obat  tetes  mata  ini hanya digunakan pada kasus-kasus katarak yang  bersifat  simptomatik  atau  sebagai pencegahan  pada  lanjut  usia.  Namun sebagian besar obat tetes mata yang sering digunakan, seperti L-carnosine, tidak dapat memprenetrasi  mata  dengan  baik.  Obat tersebut hanya akan menembus kornea dan berhenti  didepan  chamber  atau  lokasi katarak berada, sehingga akan menurunkan efek  antioksidan  yang  dikandungnya. 8 Sementara  katarak  kongenital  atau  yang disebabkan  karena  faktor  genetik,  hanya dapat  diterapi  dengan  pembedahan  dan beberapa terapi paliatif. 9 Oleh  karena  itu,  penulis  mengusulkan intervensi  penyakit  katarak  dengan  terapi berbasis  RNA.  Dalam  hal  ini,  penulis mereview  potensi  karakterisasi micro RNA triple  helix melalui  metode  Hydrogel Scaffold  spesifik  terhadap micro RNA-26a dan  hsa- micro RNA-15a  sebagai  modalitas kuratif  mutakhir  pada  penyakit  katarak. micro RNA merupakan molekul non coding RNA  yang  terdiri  dari  22  nukleotida. 10 micro RNA dapat menargetkan gen spesifik. 11 Pada  kasus  katarak,  terdapat beberapa micro RNA  yang  mengalami overekspresi  seperti  hsa- micro RNA-15a dan  beberapa micro RNA  yang  mangalami penurunan  ekspresi  seperti micro RNA- 26a. 12 Terapi  menggunakan micro RNA banyak  digunakan  pada  penyakit-penyakit yang berkaitan dengan proses interaksi gen dengan  persinyalan  seluler  seperti  kanker dan beberapa penyakit neurodegeneratif. 13,14 Namun,  penerapan micro RNA  pada  klinis  masih  terbatas karena memiliki stabilitas dan waktu paruh yang rendah. 15 Oleh karena itu, diperlukan metode formulasi terbaru guna meningkatkan efikasi farmakokinetik micro RNA.  Dalam  hal  ini,  penulis mereview  potensi  pembentukan  struktur triplex  atau micro RNA  triple  helix  yang dapat  disintesis  menggunakan  metode hydrogel  scaffold.  Melalui  intervensi micro RNA  triplex  yang  tersusun  dari micro RNA-15a dan micro RNA-26a,
diharapkan modalitas kuratif pada penyakit katarak menjadi lebih efektif dan efisien.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Katarak  merupakan  penyakit  yang memiliki banyak faktor risiko seperti faktor genetik,  jenis  kelamin,  etnis,  penuaan, diare  atau  dehidrasi,  hipertensi,  merokok, stress  oksidatif,  akumulasi  profil  lipid berlebih,  dan  trauma.  Pada  faktor  genetic, ditemukan  data  bahwa  1/3  dari  penyakit katarak  kongenital  bersifat  herediter.  Ciri khas  dari  katarak  akibat  faktor  ini  adal disertai  dengan  mikroopthalmia,  aniridia, anomaly  chamber  anterior,  degenerasi retina,  dan  sindrom  Lowe.  Gen  yang dipercaya  menjadi  penyebab  dari  katarak kongenital  adalah  gen  PITX3. 16,17 Jenis kelamin  juga  menunjukkan  data  yang menarik  dimana  katarak  pada  wanita memiliki tingkat insidensi yang lebih tinggi dibanding  pada  pria.  Namun,  hal  ini disebabkan  karena  berkurangnya  kadar estrogen tubuh pada wanita menopause. 18,19
Sementara  itu,  hipertensi  juga  dapat menjadi  faktor  risiko  katarak,  karena  pada kasus hipertensi terjadi penurunan kemampuan dari pompa ion Na K ATPase. Hal  ini  secara  tidak  langsung  dapat menimbulkan  kekeruhan  atau  opasifikasi pada lensa. 20,21,22,23
Dari  sekian  banyak  faktor  risiko katarak, pada dasarnya, mayoritas penderita katarak disebabkan karena faktor penuaan. 24 Salah  satu  mekanisme  yang mendasarinya  adalah  terjadinya  penurunan elastisitas. Peningkatan daya refraksi lensa yang terjadi dengan akomodasi diakibatkan oleh perubahan ketebalan dan kelengkungan lensa, yang disebabkan oleh kontraksi  otot  siliaris.  Pada  pengamatan Scheimpflug dan MRI menunjukkan bahwa 90  persen  peningkatan  ketebalan  lensa aksial disebabkan oleh penebalan inti lensa. Namun,  peningkatan  kekakuan  lensa dimulai sejak lahir. Hingga usia sekitar 40 tahun,  akan  ada  peningkatan  kekakuan lensa yang terus-menerus seiring bertambahnya  usia. 25 Selain  itu,  semakin
bertambahnya  usia,  maka  akan  terjadi penurunan aktivitas chaperone α- crystallin . Protein  ini  akan  mencapai  aktivitas fisiologis  maksimum  pada  dekade  kelima, setalah  itu  akan  terjadi  penurunan  dan menyumbang peningkatan agregasi protein tidak larut, hamburan cahaya dan hilangnya transparansi  lensa. 26 Mekanisme  ini merupakan prekursor patomekanisme katarak. Perubahan diperkuat oleh berkurangnya  ketersediaan  antioksidan yang  mampu  melindungi  protein  tersebut yang rentan terhadap oksidasi. Di atas usia 50  tahun,  hampir  semua  α- crystallin ditemukan  dalam  fraksi  WIS  dari  inti lensa. 26,27 Kondisi  ini  sejatinya  akan mengarah pada proses fibrogenesis (pembentuk jaringan ikat pada lensa) yang seringkali dimediasi oleh TGF-β. 28 Fibrosis  merupakan  penyakit  kronis yang  dapat  muncul  di  berbagai  organ  dan memiliiki  rerata  harapan  hidup  yang  lebih rendah  dibanding  penyakit  kanker.27,28 Epithelial  to  Mesenchymal  Transition (EMT)  merupakan  aspek  terpenting  dalam kejadian  fibrosis,  baik  fibrosis  pulmoner, renal,  hepatic,  maupun  okular. 29 Dalam jaringan fibrosis, terjadi akumulasi miofibroblast yang mensekresikan kolagen berlebih  sehingga  akan  merusak  fungsi organ. Kejadian fibrosis pada lensa terbagi menjadi  2,  yakni anterior  subcapsular cataract (ASC)  dan posterior  capsule opacification (PCO).  ASC  merupakan katarak  primer  yang  ditandai  dengan terhamburnya  cahaya  pada  area  fibrotik  di kapsul  lensa  anterior.  Beberapa  penyebab ASC  adalah  trauma  ocular,  inflamasi,  dan iritasi.  Sementara  itu,  PCO  merupakan katarak  sekunder  yang  biasanya  muncul sebagai komplikasi dari operasi katarak. 30,31
Mekanisme  seluler  ASC  dan  PCO ditandai dengan adanya proliferasi, migrasi, dan EMT sel epithelial lensa, yang mengakibatkan  terjadinya  transisi  dari  sel epitel  ke  fibroblast  dan  produksi  protein matriks  ekstraseluler  (ECM)  seperti kolagen  tipe  I  dan  IV,  serta  fibronectin. Pada  akhirnya,  protein  tersebut  akan
membentuk  plak  subkapsular  di  area kapsul lensa anterior atau posterior. 32
Disisi lain, terdapat regulasi persinyalan intraseluler  yang  dimediasi  oleh  Notch pada  beberapa  penyakit  yang  ditandai dengan  adanya  fibrosis.  Inaktivasi  Notch secara  tidak  langsung  dapat  membantu menurunkan  risiko  resistensi  obat  dan mengembalikan fenotip EMT yang terinaktivasi. 33 Notch  memiliki  4  reseptor (Notch 1-4) dan 5 ligan (Jagged 1-2, Delta- like  1,  Delta-like  3-4).  Ketika  Notch berikatan  dengan  ligannya,  reseptor  Notch akan  terpotong  oleh  γ-sekretase  sehingga Notch  Intracellular  Domain (NICD) tersintesis.  NCID  akan  bertranslokasi  ke nukleus sehingga dapat meregulasi penurunan  gen  target  seperti  Hes  dan Hey. 34 Beberapa  penelitian  sebelumnya telah menunjukan bahwa melalui penargetan  Notch,  proses  fibrosis  di  ginjal dan  sel  epithelial  alveolar  dapat  dihambat melalui  mekanisme  yang  dimediasi  oleh Jagged-1//Notch  guna  menginhibisi  TGF- β1, sehingga EMT dapat terhambat. 35,36
Sebagai  upaya  penargetan  Notch, penulis mengusulkan digunakannya micro RNA.
microRNA merupakan molekul non-coding RNA yang terdiri dari 22  nukleotida. micro RNA  dapat  diaktivasi melalui  beberapa  proses.  Pertama,  single stranded  Stem  akan  dikenali  oleh  protein DGCR8  dan  Drocha  untuk  memotong RNA  menjadi  prekursor micro RNA. Prekursor  ini  kemudian  akan  ditransfer  ke sitosol melalui bantuan exportin-5. Setelah bertemu  dengan  enzim  Dicer  yang  akan mengubah  microRNA  double  stranded menjadi  microRNA  single  stranded, bersama dengan protein argonout, microRNA  akan  membentuk  RISC  atau RNA  induce  silencing  complex.  RISC merupakan  microRNA  yang  sudah  aktif dan dapat melakukan silencing melalui dua proses,  yakni  dengan  pemotongan  target massanger  rna  dan  inhibisi  translasi melalui pengikatan subunit ribosom. 37,38
Beberapa micro RNA yang telah terbukti dapat  meregulasi  EMT  adalah micro RNA- 200, micro RNA-29b, micro RNA-34a,  dan
micro RNA-491-5p. 39,40,41,42 Disisi  lain,
famili
micro RNA-26 yang matur ( micro RNA-26a dan micro RNA-26b) telah terbukti dapat menjadi tumor supresor pada kasus  karsinoma  hepatosellular,  kanker payudara,  dan  glioma. 43,44,45,46 micro RNA- 26b  diketahui  lebih  spesifik  dengan menargetkan Prostaglandin-Endoperoxide Synthase 2  (PTGS2)  dan Solute  Carrier Family  7  Member  11 (SLC7A11)  guna menginduksi  apoptosis  dan  menghambat migrasi serta invasi sel kanker dengan EPH receptor A2  (EphA2).  Pada  patologi fibrosis, berdasarkan penelitian Liang et al , micro RNA-26  melalui  penargetan  Smad4 dapat  menghambat  translokasi  nuklear  p- Smad3  dan  EMT. micro RNA-26a  secara spesifik  juga  terbukti  dapat  menghambat fibrosis  jantung  dan  fibrosis  pulmoner idiopatik  melalui  penargetan  Kolagen  tipe
1, Connective  Tissue  Growth  Factor
(CTGF),  dan High  Mobility  Group  AT- hook  2 (HMGA2).  Sementara  itu, penelitian  Dong et  al pada  tahun  2014 menunjukkan  bahwa  ekspresi micro RNA- 26b secara signifikan
mengalami penurunan pada kasus PCO dan overekspresi  dari micro RNA-26b  dapat mengcegah  LEC-EMT  melalui  penargetan Smad4  dan Cyclooxygenase-2 (COX-
2). 47,48,49,50
Gambar 1 . Analisis pengaruh transfeksi micro RNA-26a/b  mimic  terhadap  kultur  sel Lens Epithelial Cell (LEC) SRA01/04. 51
Penelitian  Chen et  al pada  tahun  2017 telah  mengkonfirmasi  bahwa micro RNA- 26a/b  menjadi  salah  satu  dari  223
micro RNA yang mengalamai underekspresi  pada  kasus  ASC.  Penelitian tersebut juga menunjukkan bahwa
micro RNA-26a/b  mengalami  penurunan respon pada perlakuan TGF-β pada jam ke 24 dan 48 hingga 35% dan 39%. 51
Gambar 2. Tingkat ekspresi micro RNA pada sel ASC. Respon micro RNA-26-a/b terhadap TGF-β. 51
Penelitian  Chen et  al. tersebut  juga menganalisis pengaruh transfeksi micro RNA-26a/b mimic terhadap kultur sel Lens  Epithelial  Cell (LEC)  SRA01/04. Hasil analisis Real-time PCR menunjukkan bahwa micro RNA  tersebut  mengalami overekspresi  pada  SRA01/04  dibanding perlakuan  inhibitor  oligonukleotida  dan kelompok  kontrol  negatif  yang  mana  hal ini menunjukkan spesifisitas dari
micro RNA  tersebut.  Analisis Wound Healing  assay juga  menunjukkan  bahwa micro RNA  26a/b  juga  dapat  menghambat proliferasi  dan  migrasi  LEC  yang  ditandai dengan penurunan biomarka kolagen tipe I dan  IV,  α-SMA,  Snail,  Slug,  dan fibronektin secara signifikan. 51 Pada analisis mekanisme tertarget micro RNA  26  a/b,  penelitian  tersebut
melakukan identifikasi menggunakan PicTar  dan  TargetScan  4.2  untuk menganalisis  target  pada  Jagged-1  mutan. Alhasil ditemukan bahwa micro RNA 26a/b berikatan  secara  langsung  dengan  2  situs pada untranslated region (UTR) Jagged-1. Hasil  ini  menunjukkan  bahwa  efek inhibitor micro RNA 26a/b
dapat menghambat   EMT melalui jalur mekanisme Jagged-1/Notch. 51
Efek  inhibitorik micro RNA-26a/b  yang dimediasi  oleh  Jagged-1/Notch  akan menghambat  kerja Fibroblast  Growth Factor (FGF)  malaui  jalur Mitogen Activated  Protein  Kinase/Extracelullar- signal-regulated  Kinase (MAPK/ERK). Ketika MAPK/ERK dapat dihambat, maka sintesis Notch  2  Intracellular  Domain
(N2ICD)  dan  Hes5  yang  merupakan efektor  dari  Notch  juga  akan  terhambat. Alhasil  proses  diferensiasi  dan  proliferasi FGF juga dapat dihambat. 52 Sementara  itu,  penelitian  Li et  al. pada tahun  2015  telah  menganalisis  level ekspresi  dari  hsa- micro RNA-15a  dan  hsa- micro RNA-16-1  di  sel  epitel  lensa  pada pasien  katarak  akibat  faktor  penuaan. Penelitian  dilakukan  pada  60  orang penderita katarak dengan rincian, 20 orang menderita  katarak  kortikal,  20  orang menderita  katarak  nuklear,  dan  20  orang menderita  katarak  subscapular  posterior. Penelitian  tersebut  menggunakan  PCR untuk  mengukur  ekspresi  dari  hsa- micro RNA-15a-5p, hsa- micro RNA-15a- 3p,      hsa- micro RNA-16-1-5p,  dan  hsa- micro RNA-16-1-3p.  Adapun  gen  target dari micro RNA  tersebut  yakni  bcl-2  dan mcl-1  juga  dievaluasi.  Alhasil,  Ekspresi dari  hsa-microRNA-15a-5p  pada  katarak kortikal sebesar 8,76±0,09, katarak nuklear 14,26±4,00,  dan  26,39  ±  2,07  untuk katarak subscapular posterior. Ekspresi dari hsa-microRNA-15a-3p,  6,68  ±  0,04  untuk katarak kortikal, 9,07 ± 0,06 untuk katarak nuklear,  dan  23,72  ±  3,59  untuk  katarak subscapular posterior. Untuk orang normal hsa-microRNA-15a-5p dan hsa- microRNA-15a-3p berjumlah 1,00 ± 0,15 (P < 0,01). 53
Untuk  hsa-microRNA-16-1-5p  paling tinggi  terlihat  di  pasien  katarak  kortikal yaitu 5,56 ± 0,17), katarak nuklear 10,94 ± 1,49,  dan  katarak  subsscapular  posterior 4,29  ±  0,98  (P<0,01)  .  Untuk  has- microRNA-16-1-3p, peneliti tidak mendeteksi  adanya  ekspresi  pada  katarak kortikal  dan  katarak  nuklear  tetapi, terdeteksi  0,01  ±  0,00  untuk  katarak subscapular  posterior.  Kadar  normal  pada lensa orang normal adalah 1,02 ± 0,28 (P < 0,01). 53
Untuk  hsa-microRNA-16-1-5p  paling tinggi  terlihat  di  pasien  katarak  kortikal yaitu 5,56 ± 0,17), katarak nuklear 10,94 ± 1,49,  dan  katarak  subsscapular  posterior
4,29  ±  0,98  (P<0,01)  .  Untuk  has- microRNA-16-1-3p, peneliti tidak mendeteksi  adanya  ekspresi  pada  katarak kortikal  dan  katarak  nuklear  tetapi, terdeteksi  0,01  ±  0,00  untuk  katarak subscapular  posterior.  Kadar  normal  pada lensa orang normal adalah 1,02 ± 0,28 (P < 0,01). 53
Ekspresi untuk bc-2 dan mcl-1 menurun bagi ketiga penderita. Bcl-2 dan mcl-l pada penderita  katarak  kortikal  0,38  ±  0,02  dan 0,24  ±  0,05,  pada  katarak  nuklear  0,54  ±
0,05  dan  0,25  ±  0,07,  dan  untuk  katarak subscapular posterior 0,54 ± 0,54 dan 0,28 ± 0,07. Kadar bcl-2 dan mcl-l lensa normal adalah 1,00 ± 0,05 (P<0,01). 53
Jika  disimpulkan,  hasil  penelitian tersebut  menunjukkan  bahwa  tingkat ekspresi hsa- micro RNA-15a-5p, hsa- micro RNA-15a-3p,  hsa- micro RNA-16-1- 5p  yang  terdapat  pada  sel  epitel  pada pasien  katarak  ditemukan  mengalami peningkatan  (P<0,01).  Sedangkan  hsa- microRNA-16-1-3p diketahui banyak diekspresikan pada lensa orang normal dan menurun  pada  lensa  penderita  katarak (P<0,01). Sementara gen target micro RNA tersebut,  yakni  bcl-2  dan  mcl-1  ditemukan juga
mengalami
penurunan
Gambar  4. Analisis  ekspresi  hsa- micro RNA-15a- 5p,  hsa- micro RNA-15a-3p,  hsa- micro RNA-16-1- 5p, dan hsa- micro RNA-16-1-3p pada kasus katarak kortikal,  katarak  nuklear,  dan  katarak  subscapular posterior. 53
ekspresi  pada  penderita  katarak  (P<0,01). Hasil ini memunculkan sebuah kesimpulan bahwa  meningkatnya  ekspresi  dari  hsa- microRNA-15a-5p, hsa-microRNA-15a- 3p, hsa-microRNA-16-1-5p menekan ekspresi  gen  anti-apoptosis  bcl-2  dan  mcl- 1. 53 Baik  hsa-microRNA-15a  maupun  hsa- microRNA-16-1 diketahui bertanggungjawab  pada  regulasi  14%  dari genom manusia, yang diprediksi mengandung  25.000  gen.  hsa-microRNA- 15a  dan  hsa-microRNA-16-1  meregulasi secara  negatif  ekspresi  dari  anti-apoptosis Bcl-2  dan  mcl-1  sehingga  mengakibatkan adanya  induksi  kematian  sel  malalui  jalur apoptosis.  Pada  dasarnya,  kematian  pada sel epithelial lensa dapat disebabkan karena adanya  paparan  sinar  UV,  kalsium iontophoresis, maupun akumulasi hydrogen peroksida yang dapat mengaktivasi kaskade  apoptosis  seperti  c-Myos,  c-Fos, dan  caspase  3.  Baik  Bcl-2  maupun  mcl-1 sejatinya merupakan inhibitor dari hydrogen  peroksida  sehingga  bersifat antagonis  apotosis.  Selain  itu,  mcl-1 merupakan  salah  satu  faktor  maturasi  dan perkembangan lensa. 53,54
Intervensi  antagomir micro RNA-15a diharapkan  dapat  memberikan feedback negatif agar ekspresi Bcl-2 dan mcl-1 dapat kembali  meningkat.  Mekanisme  aksi  yang mendasari  Bcl-2  dan  Mcl-1  pada  dasarnya
cukup  sama,  hal  ini  dikarenakan  2  protein antiapoptosis  tersebut  berasal  dari  family yang  sama.  Fakta  tentang  Bcl-2  yang ditemukan  Mao  pada  sel  epitel  lensa kelinci menunjukkan bahwa Bcl-2 memiliki  resistensi  yang  tinggi  pada prooksidan.  Kedua,  intervensi  antioksidan akan melindungi sel dari apoptosis. Penelitian  tersebut  menunjukkan  bahwa Bcl-2 resisten terhadap intervensi staurosporine  dan  camptothecin  yang merupakan  senyawa  peningkat  radikal bebas.  Meskipun  demikian,  peningkatan ekspresi  Bcl-2  pada  sel  lensa  sample mengakibatkan penurunan protein cystallin yang  juga  merupakan  protektor  lensa. Namun,  karena  resistensi  crystalline terhadap radikal bebas rendah, maka Bcl-2 dihipotesakan  dapat  menggantikan  peran antioksidan  crystalline.  Selain  itu,  Bcl-2 juga  berkaitan  dengan  ekspresi  gen-gen tertentu,  seperti  halnya  p21Bax  yang merupakan  gen  regulator  siklus  sel. Penelitian  Vairo  juga  menunjukkan  bahwa Bcl-2  dapat  meningkatkan  akumulasi protein  p27  dan  p130  serta  menurunkan protein 107 pada fase G0 ke S sehingga hal ini  akan  berdampak  baik  karena  dapat menghambat  regulasi  FGF.  Mekanisme yang mendasari
Bcl-2 terhadap pengaruhnya pada gen-gen tertentu diketahui dimediasi oleh NF-kB. Melalui perubahan afinitas IkBa terhadap NF-kB, maka transaktivasi NF-kB dapat ditingkatkan. NF-kB merupakan jalur persinyalan  yang  kompleks,  sehingga ketika terjadi transaktivasi, maka dimungkinkan  adanya  pengaruh  pada  gen lain  yang  tidak  diregulasi  langsung  oleh Bcl-2,  seperti  halnya  terjadi  feedback negatif pada gen p53 dan p21. Mekanisme memungkinkan  adanya  penghambatan perubahan  dari  procaspase-3  menjadi caspase  3.  Sehingga  inaktivasi  dari caspase-3 akan membuat tingkat kelangsungan hidup sel meningkat. 53,54,55
Gambar 5. Ilustrasi karakterisasi RNA triple helix/nanopartikel triplex menggunakan hydrogel scaffold. 59
Penggunaan  terapi  berbasis micro RNA pada penerapan klinis terbatas pada sistem penghantar  yang  tidak  stabil,  biodistribusi yang tidak spesifik, dan efek samping yang tidak terkontrol. Meskipun terdapat beberapa
pengembangan metode penghantar micro RNA  seperti  penggunaan nanopartikel inorganik (emas dan magnetik),  liposom,  lipid,  misel,  peptida asam  nukleat,  dan  beberapa  nanopartikel polimer,  namun  semuanya  mengalami kegagalan  dalam  pengujian  klinik  fase  II karena  memiliki  efek  peredaman  yang minimal.  Meskipun  demikian,  pada  awal 2012  telah  ditemukan  bahwa  melalui pembentukan  struktur  oligonukleotida  3 dimensi,  agen imaging dan  transfer  gen akan  menjadi  lebih  stabil.  Pembentukan DNA  triple  helix  sebagai  nuklease  buatan juga menunjukkan adanya aktivitas pengenalan  protein  maupun  reseptor  yang lebih spesifik. 56,57,58,59
Oleh  karena  itu,  penulis  mensintesakan pembentukan  RNA  triple  helix  yang  telah diuji oleh Conde et al. pada 2015 terhadap microenvironment tumor  melalui  metode Hydrogel Scaffold.
Pembentukan
micro RNA triple  helix membutuhkan  2 micro RNA terapeutik yang akan membentuk  ikatan  Watson-Crick  dan ikatan  Hoogsteen  hydrogen. Triplex- forming  Oligonucleotides (TFO)  yang terbentuk akan berikatan secara antiparallel pada untai RNA yang tersusun dari banyak basa  purin,  tidak  memikiliki  aktifitas protonasi  (penambahan  proton  pada  suatu atom), dan tidak bergantung pada pH. Dua oligonukleotida micro RNA yang terbentuk
terdiri  dari  antagomiR  (sebagai  efek inhibitorik pada micro RNA yang mengalami  overekspresi)  dan micro RNA mimic (sebagai terapi pengganti/ replacement  micro RNA  yang mengalami  penurunan  ekspresi).  Kedua micro RNA  tersebut  akan  dikonjugasikan dengan  dendrimer  serta  penambahan dextran  aldehyde  guna  meningkatkan kontrol  pelepasan micro RNA  pada  gen target.  RNA  triplex  yang  tersisntesis  akan disemupurnakan  dengan  polyamidoamine (PAMAM)  G5  sehingga  akan  terlihat struktur  nanoscopik  yang  dapat  terlihat pada cryo-electron  microscopy atau mikroskop  electron  dengan  resolusi tinggi. 59
RNA 3
D  yang  terbentuk  akan bereaksi  dengan  dextran  aldehid  guna membentuk  hydrogel  triplex  dextran- dendrimer-RNA.  Penelitian  Conde et  al. pada  tahun  2015  yang  membuat  struktur triple  helix  dari micro RNA-205  dan antagomir-221  menunjukkan  adanya  rasio molar  1:1:1  pada  suhu  ruang  di  incubator. Pengamatan  menggunakan  metode  gel elektroforesis  pada  suhu  25  0C  memiliki rerata migrasi yang lebih lambat dibandingkan  dengan  bentuk  struktur double  helix  maupun  Oligonukleotida single. RNA triple helix juga memiliki nilai melting temperature (Tm) sebesar 74.5±3.20C, lebih tinggi dibanding struktur single  stranded dengan  nilai  Tm  sebesar 55.1±1.90C  maupun double  helix dengan nilai  Tm  sebesar  64.8.1±2.6  0C.  Hal  ini menunjukkan  tingkat  stabilitas  RNA  triple helix  baik  pada  suhu,  pH,  maupun  kadar
urea tertentu. Pada penelitian tersebut juga dianalisis  internalisasi  seluler  untuk menilai  kemampuan  RNA  triple  helix dalam  mengintervensi  tingkat  sel.  Analisis ini menggunakan kultur sel MDA-MB-231
TNBC yang menunjukkan bahwa komplek
RNA triplex-dendrimer dapat ditransfesikan  100%  (99.8±2.5%)  secara spesifik.  Pada  analisis  tersebut  terdapat  4 kelompok antara lain Q1 (Sel mengandung dye Quasar 705 ), Q2 (Sel mangandung dye Quasar 570),  Q3  (Mengandung dye Quasar keduanya),  dan  Q4  sebagai kelompok  kontrol  negatif.  Hasil  ini dikonfirmasi  dengan Confocal  Microscopy selama 24 jam.59
Penelitian  Coden  (2017)  tersebut  juga menganalisis  mekanisme  endositosis  RNA triple  helix.  Secara  umum,  endositosis dapat terbagi menjadi 3, yakni makropinositosis, Clathrin-dependent
endositosis, dan Caveolae-mediated endositosis. Analisis mekanisme endositosis dilakukan dengan menggunakan  molekul  yang  memiliki kemampuan  dalam  menghambat  setiap proses  persinyalan  intraseluler  pada  ketiga jalur endositosis tersebut. Inhibitor endositosis  yang  digunakan  antara  lain klorpromazie, filipin, rottlerin, brefeldin A, kolsikin, dan kloroquine.
Alhasil, ditemukan  bahwa  RNA  triple  helix  dapat melakukan
endositosis via makropinositosis  dan Caveole-mediated, meskipun  pada  jalur caveole-mediated terjadi  perubahan  ukuran  struktur  RNA triple helix menjadi 60-80 nm. 59

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Karakterisasi
RNA triple helix menggunakan  metode  Hydrogel  Scaffold spesifik  terhadap  microRNA-15a  dan microRNA-26a
berpotensi dalam menurunkan laju fibrosis dan menghambat apoptosis  pada  katarak  melalui  jalur  yang dimediasi  oleh  Notch,  Bcl-2,  dan  mcl-1
untuk  menjadi  terapi  alternative  mutakhir berbasis RNA pada penyakit katarak.

## Saran
Dipelukan analisis karakterisasi konjugasi RNA triple helix dari microRNA-26a  dan  microRNA-15a  serta diperlukan  uji  klinis  agar  kedepannya metode  terapi  berbasis  RNA  ini  dapat diimplementasikan.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Shiels  A,  Fielding  Hejtmancik  J. Molecular  genetics  of  cataract.  eLS. 2001 May 30.
2. Sinha  R,  Kumar  C,  Titiyal  JS.
Etiopathogenesis  of  cataract:  Journal review. Indian journal of ophthalmology. 2009 May;57(3):245.
3. World  Health  Organization  (2013) ‘ Universal eye health: a global action plan  2014-2019. ’  ISBN  978  92  4 150656 4
4. Prokofyeva,  E.,  Wegener,  A.,  & Zrenner,
E. (2012). Cataract prevalence  and  prevention  in  Europe: a literature review. Acta Ophthalmologica, 91(5), 395– 405. doi:10.1111/j.1755- 3768.2012.02444.x 5. Departemen kesehatan Republik
Indonesia,  2017 .  Deteksi  Dini  ‘Pupil Mata  Putih’  Cegah  Kebutaan  pada Anak ,  Pusat  Penyluhuan  Kesehatan,
Kesehatan  Masyarakat  Jakarta  : Indonesia
6. Tabin  G,  Chen  M,  Espandar  L. Cataract  surgery  for  the  developing world. Current opinion in ophthalmology. 2008 Jan 1;19(1):55-9.
7. Crispim  J,  Jung  LS,  Paz  L,  Allemann N,  Schor  P.  The  surgical  challenges dense  brunescent  cataracts  present. Expert  Review  of  Ophthalmology. 2015 Jan 2;10(1):13-22.
8. Dubois VD, Bastawrous A. N - acetylcarnosine  (NAC)  drops  for
age - related cataract. Cochrane
Database  of  Systematic  Reviews.
2017(2).
9. Hejtmancik JF, Kantorow M.
Molecular  genetics  of  age-related cataract.  Experimental  eye  research. 2004 Jul 1;79(1):3-9.
10. Iorio  MV,  Croce  CM.  MicroRNA dysregulation  in  cancer:  diagnostics, monitoring  and  therapeutics.  A comprehensive review. EMBO molecular medicine. 2012 Mar 8;4(3):143-59.
11. Lewis  BP,  Burge  CB,  Bartel  DP. Conserved  seed  pairing,  often  flanked by adenosines, indicates that thousands of human genes are microRNA targets. cell. 2005 Jan 14;120(1):15-20.
12. Dunmire  JJ,  Lagouros  E,  Bouhenni RA, Jones M, Edward DP. MicroRNA in  aqueous  humor  from  patients  with cataract.  Experimental  eye  research. 2013 Mar 1;108:68-71.
13. Lu  J,  Getz  G,  Miska  EA,  Alvarez- Saavedra  E,  Lamb  J,  Peck  D,  Sweet-
Cordero  A,  Ebert  BL,  Mak  RH, Ferrando AA, Downing JR. MicroRNA expression profiles classify human cancers. nature. 2005
Jun;435(7043):834.
14. Junn  E,  Mouradian  MM.  MicroRNAs in neurodegenerative diseases and their therapeutic potential. Pharmacology & therapeutics.  2012  Feb  1;133(2):142- 50.
15. Li  Z,  Rana  TM.  Therapeutic  targeting of  microRNAs:  current  status  and future  challenges.  Nature  reviews Drug discovery. 2014 Aug;13(8):622.
16. Hejtmancik  JF,  Kaiser-Kupfer  MI, Piatigorsky  J.  Molecular  biology  and inherited disorders of the eye lens. In: Scriver  CR,  Beaudet  AL,  Valle  D, editors.  The  Metabolic  and  Molecular Basis  of  Inherited  Disease.  8th  ed. New  York:  McGraw  Hill;  2001.  pp.
6033–62.
17. Semina  EV,  Ferrell  RE,  Mintz-Hittner HA,  Bitoun  P,  Alward  WL,  Reiter  RS, Funkhauser  C,  Daack-Hirsch  S, Murray  JC ,Harvey  Simon,  David
Zieve.,  editors.  New  York:  Time Health  Guide;  [Last  updated  and reviewed  on  2010  June  23,  Last accessed on 16.4.11]
18. Bigsby  RM,  Cardenas  H,  Caperell- Grant  A,  Grubbs  CJ  Proc  Natl  Acad Sci  U  S  A.  1999  Aug  3;  96(16):9328- 32.Nat Genet. 1998 Jun; 19(2):167-70.
19. Yu  X,  Lyu  D,  Dong  X,  He  J,  Yao  K. Hypertension  and  risk  of  cataract:  a meta-analysis.  PloS  one.  2014  Dec 4;9(12):e114012.
20. Mansberger  SL,  Gordon  MO,  Jampel H,  Bhorade  A,  Brandt  JD,  Wilson  B, Kass  MA,  Ocular  Hypertension Treatment  Study  Group.  Reduction  in intraocular  pressure  after  cataract extraction:  the  Ocular  Hypertension Treatment  Study.  Ophthalmology. 2012 Sep 1;119(9):1826-31.
21. Kanthan  GL,  Wang  JJ,  Rochtchina  E, Mitchell  P.  Use  of  antihypertensive medications  and  topical  beta-blockers and the long-term incidence of cataract and cataract surgery. British Journal of Ophthalmology. 2009 Sep 1;93(9):1210-4. 22. Crasta M, Clode AB, McMullen Jr RJ, Pate  DO,  Gilger  BC.  Effect  of  three treatment  protocols  on  acute  ocular hypertension after phacoemulsification and  aspiration  of  cataracts  in  dogs.
Veterinary ophthalmology.
2010 Jan;13(1):14-9. 23. Sharma  KK,  Santhoshkumar  P.  Lens aging: effects of crystallins.
Biochimica  et  Biophysica  Acta (BBA)-General  Subjects.  2009  Oct 1;1790(10):1095-108.
24. Truscott,  R.  J.  2009  Presbyopia. Emerging  from  a  blur  towards  an understanding  of  the  molecular  basis for  this  most  common  eye  condition. Exp.  Eye  Res.  88,  241  –247. (doi:10.1016/j.exer.2008.07.003)
25. Costello, M. J., Johnsen, S., Metlapally, S., Gilliland, K.,
26. Ramamurthy,  B.,  Krishna,  P.  & Balasubramanian, D. 2008 Ultrastructural  analysis  of  damage  to
nuclear  fiber  cell  membranes  in advanced  age-related  cataracts  from India. Exp. Eye Res. 87, 147 –158.
27. Vrensen, G. F. 2009 Early cortical lens opacities:  a  short  overview.  Acta Ophthalmol. 87, 602 –610.
28. Lovicu  FJ,  Shin  EH,  McAvoy  JW. Fibrosis in the lens. Sprouty regulation of TGFβ-signaling prevents lens EMT leading  to  cataract.  Experimental  eye research. 2016 Jan 1;142:92-101.
29. Kalluri R, Weinberg RA. The basics of epithelial-mesenchymal transition. The Journal  of  clinical  investigation.  2009 Jun 1;119(6):1420-8.
30. Martinez  G,  De  Iongh  RU.  The  lens epithelium  in  ocular  health  and disease.  The  international  journal  of biochemistry & cell biology. 2010 Dec 1;42(12):1945-63.
31. Walker J, Menko AS. Integrins in lens development and disease. Experimental  eye  research.  2009  Feb
2;88(2):216-25.
32. Eldred JA, Dawes LJ, Wormstone IM. The  lens  as  a  model  for  fibrotic disease.  Philosophical  Transactions  of the  Royal  Society  B:  Biological Sciences. 2011 Apr 27;366(1568):1301-19. 33. Chen X, Ye S, Xiao W, Wang W, Luo L,  Liu  Y.  ERK1/2  pathway  mediates epithelial-mesenchymal  transition  by cross-interacting with TGFβ/Smad and Jagged/Notch  signaling  pathways  in lens  epithelial  cells.  International journal  of  molecular  medicine.  2014 Jun 1;33(6):1664-70.
34. Kopan  R,  Ilagan  MX.  The  canonical Notch  signaling  pathway:  unfolding the  activation  mechanism.  Cell.  2009 Apr 17;137(2):216-33.
35. Edeling  M,  Ragi  G,  Huang  S,
Pavenstädt H, Susztak K.
Developmental  signalling  pathways  in renal  fibrosis:  the  roles  of  Notch,Wnt and  Hedgehog.  Nature  Reviews Nephrology. 2016 Jul;12(7):426.
36. Aoyagi-Ikeda  K,  Maeno  T,  Matsui  H, Ueno  M,  Hara  K,  Aoki  Y,  Aoki  F,
Shimizu  T,  Doi  H,  Kawai-Kowase  K, Iso  T.  Notch  Induces  Myofibroblast Differentiation  of  Alveolar  Epithelial Cells  via  Transforming  Growth Factor–β–Smad3  Pathway.  American journal  of  respiratory  cell  and molecular biology. 2011 Jul;45(1):136-44. 37. Li L, Xu J, Yang D, Tan X, Wang H. Computational approaches for
microRNA studies: a review.
Mammalian  Genome.  2010  Feb 1;21(1-2):1-2.
38. Winter  J,  Jung  S,  Keller  S,  Gregory RI,  Diederichs  S.  Many  roads  to maturity: microRNA biogenesis pathways  and  their  regulation.  Nature cell biology. 2009 Mar;11(3):228.
39. Gregory  PA,  Bert  AG,  Paterson  EL, Barry  SC,  Tsykin  A,  Farshid  G  et  al. The  miR-200  family  and  miR-205 regulate  epithelial  to  mesenchymal transition by targeting ZEB1 and SIP1. Nat Cell Biol 2008; 10: 593–601.
40. Ru P, Steele R, Newhall P, Phillips NJ, Toth  K,  Ray  RB.  miRNA-29b suppresses  prostate  cancer  metastasis by  regulating  epithelial-mesenchymal transition  signaling.  Mol  Cancer  Ther 2012; 11: 1166–1173.
41. Siemens  H,  Jackstadt  R,  Hunten  S, Kaller  M,  Menssen  A,  Gotz  U  et  al. miR-34  and  SNAIL  form  a  double- negative  feedback  loop  to  regulate epithelial-mesenchymal transitions.
Cell Cycle 2011; 10: 4256–4271.
42. Zhou  Q,  Fan  J,  Ding  X,  Peng  W,  Yu X,  Chen  Y  et  al.  TGF-{beta}-induced MiR-491-5p expression promotes Par- 3  degradation  in  rat  proximal  tubular epithelial  cells.  J  Biol  Chem  2010; 285: 40019–40027
43. Kota J, Chivukula RR, O'Donnell KA, Wentzel EA, Montgomery CL, Hwang HW  et  al.  Therapeutic  microRNA delivery suppresses tumorigenesis in a murine liver cancer model. Cell 2009; 137: 1005–1017.
44. Li  J,  Kong  X,  Zhang  J,  Luo  Q,  Li  X,
Fang L. MiRNA-26b inhibits
proliferation  by  targeting  PTGS2  in breast  cancer.  Cancer  Cell  Int  2013;
13: 7.
45. Liu  XX,  Li  XJ,  Zhang  B,  Liang  YJ, Zhou  CX,  Cao  DX  et  al.  MicroRNA- 26b is underexpressed in human breast cancer  and  induces  cell  apoptosis  by targeting  SLC7A11.  FEBS  Lett  2011; 585: 1363–1367.
46. Wu N, Zhao X, Liu M, Liu H, Yao W, Zhang Y et al. Role of microRNA-26b in  glioma  development  and  its mediated  regulation  on  EphA2.  PLoS ONE 2011; 6: e16264.
47. Wei C, Kim IK, Kumar S, Jayasinghe S,  Hong  N,  Castoldi  G  et  al.  NF- kappaB  mediated  miR-26a  regulation in  cardiac  fibrosis.  J  Cell  Physiol 2013; 228: 1433–1442.
48. Liang  H,  Gu  Y,  Li  T,  Zhang  Y, Huangfu  L,  Hu  M  et  al.  Integrated analyses  identify  the  involvement  of microRNA-26a in epithelial- mesenchymal transition during idiopathic  pulmonary  fibrosis.  Cell Death Dis 2014; 5: e1238.
49. Wang Y, Li W, Zang X, Chen N, Liu T, Tsonis PA et al. MicroRNA-204-5p regulates epithelialto-mesenchymal transition  during  human  posterior capsule  opacification  by  targeting SMAD4.  Invest  Ophthalmol  Vis  Sci 2013; 54: 323–332.
50. Dong  N,  Xu  B,  Benya  SR,  Tang  X. MiRNA-26b  inhibits  the  proliferation, migration, and epithelial-mesenchymal transition  of  lens  epithelial  cells.  Mol Cell Biochem 2014; 396: 229–238.
51. Chen X, Xiao W, Chen W, Liu X, Wu M, Bo Q, Luo Y, Ye S, Cao Y, Liu Y. MicroRNA-26a  and-26b  inhibit  lens fibrosis  and  cataract  by  negatively regulating  Jagged-1/Notch  signaling pathway.
Cell death and differentiation. 2017 Aug;24(8):1431. 52. Saravanamuthu  SS,  Gao  CY,  Zelenka PS.  Notch  signaling  is  required  for lateral  induction  of  Jagged1  during FGF-induced lens fiber differentiation.
Developmental  biology.  2009  Aug 1;332(1):166-76.
53. Li Y, Liu S, Zhang F, Jiang P, Wu X, Liang Y. Expression of the microRNAs  hsa-miR-15a  and  hsa- miR-16-1  in  lens  epithelial  cells  of patients  with  age-related  cataract.
International  journal  of  clinical  and experimental medicine.
2015;8(2):2405.
54. Liu SJ, Wang WT, Zhang FL, Yu YH, Yu  HJ,  Liang  Y,  Li  N,  Li  YB.  miR- 15a-3p  affects  the  proliferation, migration  and  apoptosis  of  lens epithelial  cells.  Molecular  medicine reports. 2019 Feb 1;19(2):1110-6.
55. Mao  YW,  Xiang  H,  Wang  J, Korsmeyer  S,  Reddan  J,  Li  DW. Human  bcl-2  gene  attenuates  the ability  of  rabbit  lens  epithelial  cells against
H2O2-induced apoptosis through  down-regulation  of  the  αB- crystallin  gene.  Journal  of  Biological Chemistry. 2001 Nov 16;276(46):43435-45. 56. Lee HM, Nguyen DT, Lu LF. Progress and  challenge  of  microRNA  research in  immunity.  Frontiers  in  genetics. 2014 Jun 12;5:178.
57. Sethupathy  P.  The  promise  and challenge  of  therapeutic  microRNA silencing  in  diabetes  and  metabolic diseases.  Current  diabetes  reports. 2016 Jun 1;16(6):52.
58. Andreasen  D,  Fog  JU,  Biggs  W, Salomon  J,  Dahslveen  IK,  Baker  A, Mouritzen  P.  Improved  microRNA quantification  in  total  RNA  from clinical  samples.  Methods.  2010  Apr 1;50(4):S6-9.
59. Conde  J,  Oliva  N,  Atilano  M,  Song HS,  Artzi  N.  Self-assembled  RNA- triple-helix  hydrogel  scaffold  for microRNA  modulation  in  the  tumour microenvironment.  Nature  materials. 2016 Mar;15(3):353.penulisan