## POTENSI ANTI-KANKER BIJI DURIO ZIBETHINUS YANG TELAH DIOLAH: BRINE SHRIMP LETHALITY TEST
Lathifah Dzakiyyah Zulfa 1 , Lawrent Ernts Sumilat 2 , Hanny Hadinata Wiranegara 3 Belencia Monike Naami 4 , Angela Lady Kezia 5
Fakultas Kedokteran, Universitas Kristen Indonesia, Indonesia 1,2,3,4,5
Email: Lathifahdzakiyyahz@gmail.com 1 , lawrentsumilat@gmail.com 2 , hadinatahanny@gmail.com 3 , monikebelencia@gmail.com 4 , angelaladykesia@gmail.com 5

## ABSTRAK
Kata  Kunci: anti-kanker, biji  durian,  bslt,  kolak durian, tepung biji durian Biji buah durian mengandung senyawa tanin dan amilosa yang  masing-masing  memiliki  potensi  anti  kanker dengan  cara  menurunkan  jumlah  sel  kanker  dan mengubah  ekspresi  gen  sehingga  menyebabkan  sel kanker  rentan  mati.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk menilai  sejauh  mana  biji Durio  zibethinus yang  telah diolah dapat memiliki sifat anti-kanker. BSLT digunakan sebagai indikator awal untuk mengukur aktivitas biologis potensial  dalam menghambat pertumbuhan sel.  Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah BSLT untuk mencari LC50 dari biji durian mentah, ekstrak biji durian yang telah diolah menjadi kolak biji durian, dan tepung biji durian yang dihomogenisasi dengan air suling. Hasil pengujian  menunjukkan  LC50  biji  durian  yang  telah diolah menjadi  kolak > tepung biji  durian > biji durian mentah,  dengan  hasil  masing-masing  sebesar  27,16203 ppm,  50,36486  ppm,  dan  4510,493  ppm.  Dapat disimpulkan  biji  durian  yang  telah  melalui  proses pembuatan  kolak  dan  tepung  biji  durian  mempunyai aktivitas antikanker, sedangkan biji durian mentah tidak.
Penelitian lebih lanjut seperti pada sel kanker secara in vitro  masih  perlu  dilakukan  untuk  mendukung pembuktian  efektivitas  antikanker  dari  masing-masing olahan biji  durian. disimpulkan bahwa biji  durian yang telah diolah menjadi kolak durian dan tepung biji durian memiliki bioaktivitas anti-kanker.

## Coresponden Author: Lathifah Dzakiyyah Zulfa
Email: Lathifahdzakiyyahz@gmail.com Artikel dengan akses terbuka dibawah lisensi

## Pendahuluan
Indonesia  merupakan  negara  tropis  yang  memiliki  beragam  buah-buahan  unik  salah satunya durian (Durio  zibethinus  Murr) namun  bagian buah yang paling  banyak dikonsumsi hanya  daging  buahnya  saja.  Sebanyak  5-15%  bagian  buah  berupa  biji  masih  jarang dimanfaatkan. Salah satu kegunaan bijinya adalah untuk dijadikan tepung yang teksturnya sama dengan  tepung  tapioka  namun  kandungan  amilosanya  lebih  banyak.  Tepung  biji  durian mengandung  fosfatida,  protein,  dan  polisakarida  (Sistanto,  Sulistyowati,  &  Yuwana,  2017). Pembuatan  tepung  ini  cukup  mudah,  cukup  direndam  dalam  air  jeruk  nipis  10%,  kemudian dipanggang  dengan  suhu  100  derajat  Celcius  selama  20  menit,  diblender  dan  diayak (Yudhayanti  &  Restiani,  2019).  Produk  lain  yang  terbuat  dari  biji  durian  adalah  dimasak bersama dengan kolak durian dan disajikan dengan ketan (orang juga menyebutnya kolak biji durian) (Efendi, 2016).
Profil kimia biji durian (Durio zibethinus Murr) telah dideskripsikan melalui skrining fitokimia  dan  analisis  komponen  biji  durian  yang  dilakukan  dengan  kromatografi  lapis  tipis (TCL),  menunjukkan  adanya  kandungan  alkaloid,  flavonoid,  tanin,  saponin,  steroid,  dan steroid.  terpenoid  pada  ekstrak  metanol,  dan  adanya  steroid  dan  terpenoid  pada  ekstrak  n- heksana (Ginting, 2016). Tanin yang terkandung dalam biji durian merupakan senyawa yang larut dalam air dan kelarutan serta kadarnya akan meningkat bila dilarutkan dalam air panas (Puspitasari, 2018). Tanin telah terbukti sebagai senyawa antikanker melalui penelitian in vivo yang menunjukkan penurunan jumlah spesimen sel kanker hidup (Fitriana, 2019). Kandungan amilosa  yang  juga  terdapat  pada  biji  durian  meningkat  pada  pemanasan,  namun  terdapat ambang batas suhu maksimal pada saat pemanasan (Rozali, 2018).
Amilosa sebagai antikanker dapat mengubah ekspresi gen bak dan bcl-xl yang berfungsi sebagai antiapoptosis pada sel kanker. Perubahan ekspresi gen antiapoptosis menyebabkan sel kanker menjadi  abadi  (Panyoo &  Emmambux,  2017) (Rozali, 2018). Selain  itu, uji aktivitas antioksidan pada biji durian diidentifikasi dengan parameter metode 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil radikal  assay  (DPPH),  dan  biji  durian  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC50 sebesar 197,217 ppm (Asmarawati, Yanti, Boedijono, & No, 2014). Tinjauan literatur tersebut memberi penulis dasar yang kuat untuk menyelidiki bioaktivitas makanan berbahan dasar biji durian.
Sejalan  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Riska  Yuli  Nurvianthi  tentang  “Uji Toksiksitas  Akut  Ekstrak  Etanol  Akar  dan  Biji  Cempedak  (Artocarpus  Champeden  Spreng) Asal Luwu Utara Terhadap Larva Udang (Artemia Salina Leach) Dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BST)”. Berdasarkan kesimpulan yang dihasilkan yaitu dianggap cukup untuk melihat  efektifitas  akut  akar  dan  biji  cempedak  untuk  virus  kanker  dan  dapat  diolah  secara modern  sebagai  obat  herbal  (Nurvianthi,  2022).  Maka  penelitian  ini  dapat  mengetahui  lebih detail mengenai potensi biji durio yang telah diolah.
Manfaat  dari  penelitian  ini  adalah  dapat  memberikan  kontribusi  dalam  diversifikasi produk  pangan  dengan  memanfaatkan  biji  durian  untuk  membuat  tepung.  Selain  itu, penggunaan  biji  durian  dalam  kolak  dapat  memberikan  variasi  menu  dan  nilai  tambah  pada produk olahan. Penelitian ini juga bertujuan untuk menilai sejauh mana biji Durio zibethinus yang  telah  diolah  dapat  memiliki  sifat  anti-kanker.  BSLT  digunakan  sebagai  indikator  awal untuk mengukur aktivitas biologis potensial dalam menghambat pertumbuhan sel.

## Metode Penelitian
Metode penelitian ini adalah eksperimental laboratorium yang akan menguji aktivitas antioksidan  dengan  menggunakan  metode  DPPH  (1,1-difenil2-pikrilhidrazil).  Larutan terhomogenisasi aquadest dari biji durian mentah, biji durian olahan (dari masakan Indonesia kolak  biji  durian),  dan  tepung  biji  durian  diencerkan  menjadi  0,001%,  0,005%,  0,01%,  dan 0,05% dengan air laut buatan. Masing-masing konsentrasi diuji menggunakan BSLT selama 24 jam  dengan  10  ekor larva  Athermia salina.  Pengujian  dilakukan  dengan  teknik  triplo  (tiga ulangan).  Rata-rata  persentase  kematian  larva  dari  tiga  tabung  akan  dihitung.  Nilai  tersebut selanjutnya  akan  diuji  dengan google  spreadsheet untuk  mendapatkan  persamaan  linier  (uji regresi  linier).  Selanjutnya  nilai  LC50  akan  dihitung  menggunakan  persamaan  linier  dari pengujian sebelumnya (analisis probit). Nilai Y diisi dengan probit LC50 (5) (Sulaimon, Ola- Mudathir,  Abdullahi,  Mukhtar,  &  Obuotor,  2021).  Pada  penelitian  ini  penulis  menggunakan BSLT,  karena  dapat  mengidentifikasi  kuatnya  aktivitas  antikanker  dari  senyawa  yang  diuji, namun  untuk  memiliki  variasi  aktivitas  anti  kanker  yang  lebih  sensitif  maka  diperlukan pengujian pada sel kanker manusia (Akhbari, Kord, Jafari Nodooshan, & Hamedi, 2019).
Uji  letalitas  brine  shrimp  secara  umum  merupakan  metode  untuk  mengetahui bioaktivitas  suatu  senyawa  dari  bahan  alami  dan  menguji  efek  toksiknya  (Nirwan,  2021) (Mokosuli,  2021)  (Sarah,  Anny,  &  Misbahuddin,  2017).  BSLT  terutama  digunakan  karena memiliki spektrum aktivitas farmakologi yang mudah dilakukan, sederhana, cepat, dan murah dengan tingkat kepercayaan 95%, namun terdapat keterbatasan seperti kondisi percobaan yang konsisten  pada  suhu,  salinitas,  aerasi,  cahaya,  dan  suhu.  pH  (Siddhardha,  Dyavaiah,  & Kasinathan,  2020)  (Simorangkir,  Nainggolan,  Juwitaningsih,  &  Silaban,  2021).  Toksisitas suatu  senyawa  dinyatakan  dengan  nilai  LC50.  Nilai  LC50  merupakan  indikasi  konsentrasi senyawa penyebab kematian larva udang hingga 50% populasi. Suatu sampel dikatakan toksik jika  mempunyai  nilai  LC50  <1000  µg/ml.  Selain  itu,  uji  BSLT  dapat  digunakan  untuk menyaring  sifat  lethalitas  ekstrak  tumbuhan,  nanopartikel,  ion  logam,  dan  toksisitas  logam berat,  uji  insektisida,  dan  sebagai  uji  pendahuluan  senyawa  sitotoksik  atau  anti  kanker (Simorangkir et al., 2021).

## Hasil dan Pembahasan Hasil
Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas dari penangkal radikal bebas, di uji pada spektrofotometer. Hasil pengujian disajikan pada tabel dibawah ini
Tabel 1. Jumlah Larva Mati
Konsentrasi Jumlah Larva Mati pada sampel biji durian mentah terlarut (A) Total % mati Jumlah Larva Mati pada sampel larutan biji durian yang telah diolah menjadi kolak (B) Tot al % mati Jumlah Larva Mati pada sampel tepung biji durian terlarut (C) Total % mati 1  2 3 1 2 3 1 2  3 0,001% 1  2 0 3 10% 4 4 3 11 36,67 % 3 1  2 6 20% 0,005% 2  0 2 4 13,3 % 5 6 5 16 53,3 % 4 3  4 11 36,67 % 0,01% 2  2 2 6 20% 7 7 8 22 73% 6 8  7 21 70%
0,05% 3  3 4 10 33% 1 0 1 0 1 0 30 100% 1 0 1 0 8 28 93,3 % Control 0  0 0 0 0% 0 0 0 0 0% 0 0  0 0 0%
Terdapat data linier untuk seluruh sampel yang digunakan dalam penelitian ini. Semakin besar konsentrasi maka semakin tinggi pula jumlah larva yang mati. Data ini kemudian diubah menjadi angka probit (Anliza & Rachmawati, 2021).

## Table 2. Konversi ke Probit
Konsentrasi ppm Log ppm Probit dari % kematian pada larutan A Probit dari % kematian pada larutan B Probit dari % kematian pada larutan C 0,001% 10 1 3.72 4.67 4.16 0,005% 50 1.6989 7 3.87 5.05 4.67 0,01% 100 2 4.16 5.58 5.52 0,05% 500 2.6989 7 4.56 7.37 6.48
Masing-masing  data  dari  sampel  dimasukkan  ke  dalam Google  Spreadsheet untuk dilakukan  uji  regresi  linier  guna  mendapatkan  persamaan  liniernya.  Persamaan  tersebut memberikan informasi LC50 dalam log ppm sehingga untuk mengubahnya menjadi ppm perlu dilakukan konversi dengan persamaan berikut (Hendri, Diansyah, & Tampubolon, 2010):
LC50 (ppm) = 10 LC50 (log ppm)
Gambar 1. Kurva Regresi Linear

## Tabel 3. Tingkat Toksisitas (Andis and Fitriana 2021; Tlili et al, 2019)
Sampel LC50 (log ppm) LC50 (ppm) Tingkat Toksisitas A 3.654 4510 Non toxic B 1.434 27.162 Highly toxic C 1.702 50.365 Highly toxic
Terdapat  perbedaan  tingkat  toksisitas  antar  masing-masing  larutan,  pada  urutan  biji durian  yang  dijadikan  kolak  biji  durian  >  tepung  biji  durian  >  biji  durian  mentah.  Berbeda dengan tepung biji durian dan biji durian olahan, larutan biji durian mentah tidak bersifat racun atau dapat diartikan tidak memiliki aktivitas anti kanker.

## Pembahasan
Bioaktivitas dari biji durian yang telah diolah menjadi makanan khas Indonesia berupa kolak  biji  durian  dan  tepung  terjadi  karena  adanya  kandungan  antioksidan  pada  biji  durian, seperti  pada  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Amir  dan  Saleh  (2014)  dengan  metode  DPPH menunjukkan bahwa ekstrak etanol biji durian mempunyai aktivitas antioksidan dengan nilai EC50  sebesar  23,15  g/mL.  Perbedaan  nilai  LC50  atau  tingkat  toksisitas  pada  ketiga  sampel kemungkinan  disebabkan  oleh  peningkatan  kadar  amilosa  dan  tanin  pada  proses  pemanasan (Dian  Puspitasari,  2018).  Hasil  penelitian  ini  juga  sejalan  dengan  penelitian  Pernando  tahun 2021 yang mengungkapkan bahwa pemanasan meningkatkan kadar karbohidrat. Pada proses pembuatan tepung biji durian pemanasan lebih tinggi dibandingkan pembuatan kolak biji durian sehingga kandungan amilosa dapat menurun.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengevaluasi  aktivitas  penangkal  radikal  bebas  dari berbagai  sampel  biji  durian,  termasuk  biji  durian  mentah,  larutan  biji  durian  yang  diolah menjadi  kolak,  dan  tepung  biji  durian.  Pengujian  dilakukan  menggunakan  spektrofotometer, dan  hasilnya  disajikan  dalam  Tabel  1,  yang  menunjukkan  jumlah  larva  mati  pada  berbagai konsentrasi  sampel.  Hasil  pengujian  menunjukkan  data  linier,  di  mana  semakin  besar konsentrasi, semakin tinggi jumlah larva yang mati. Data tersebut kemudian diubah menjadi angka probit untuk masing-masing konsentrasi dan sampel (Tabel 2).
A B C
Menggunakan  Google  Spreadsheet,  dilakukan  uji  regresi  linier  untuk  mendapatkan persamaan linier dan LC50  (konsentrasi  yang menyebabkan 50% kematian) dalam log  ppm. Persamaan tersebut kemudian diubah menjadi nilai LC50 dalam ppm dengan persamaan khusus (Hendri, Diansyah, & Tampubolon, 2010). Kurva regresi linear dapat dilihat pada Gambar 1, dan hasil LC50 (log ppm) serta LC50 (ppm) disajikan dalam Tabel 3.
Berdasarkan  tingkat  toksisitas,  dapat  disimpulkan  bahwa  larutan  biji  durian  mentah memiliki tingkat toksisitas yang rendah (non toxic), sedangkan larutan biji durian yang diolah menjadi  kolak  dan  tepung  biji  durian  memiliki  tingkat  toksisitas  yang  tinggi  (highly  toxic). Hasil  ini  menunjukkan  perbedaan  signifikan  dalam  aktivitas  penangkal  radikal  bebas  antar masing-masing larutan biji durian, dengan urutan kolak biji durian > tepung biji durian > biji durian mentah.
Selain itu, ditemukan bahwa larutan biji durian mentah tidak memiliki sifat racun atau aktivitas anti kanker. Temuan ini menarik karena menunjukkan bahwa pengolahan biji durian dapat mempengaruhi potensi aktivitas penangkal radikal bebas dan toksisitasnya. Oleh karena itu,  penelitian  ini  memberikan  wawasan  penting  terkait  potensi  biji  durian  dalam  aplikasi kesehatan dan nutrisi, serta perlu dilakukan lebih lanjut untuk memahami mekanisme di balik perbedaan aktivitas tersebut.

## Kesimpulan
Berdasarkan Penelitian yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bahwa biji durian yang telah  diolah  menjadi  kolak  durian  dan  tepung  biji  durian  memiliki  bioaktivitas  anti-kanker. Tingkat toksisitas keduanya sangat tinggi sedangkan pada biji durian yang tidak diolah, tidak tergolong toksik. Penelitian lebih lanjut diperlukan untuk mendukung pembuktian efektivitas antikanker dari masing-masing olahan biji durian seperti dengan metode in vitro menggunakan beberapa sel kanker.
Penelitian  ini  berhasil  mengevaluasi  aktivitas  penangkal  radikal  bebas  pada  berbagai sampel  biji  durian  dengan  menggunakan  metode  probit  dan  uji  regresi  linier.  Hasil menunjukkan  perbedaan  tingkat  toksisitas  antar  masing-masing  sampel,  dengan  kolak  biji durian  dan  tepung  biji  durian  menunjukkan  potensi  aktivitas  anti-kanker  yang  lebih  tinggi. Namun, penelitian lebih lanjut mungkin diperlukan untuk memahami mekanisme dan senyawa aktif yang terlibat dalam aktivitas tersebut.

## Bibliografi
Akhbari,  Maryam,  Kord,  Reza,  Jafari  Nodooshan,  Saeedeh,  &  Hamedi,  Sepideh.  (2019).
Analysis and evaluation of the antimicrobial and anticancer activities of the essential oil isolated  from  Foeniculum  vulgare  from  Hamedan,  Iran. Natural  Product  Research , 33 (11), 1629–1632.
Anliza,  Syarah,  &  Rachmawati,  Nurmeily.  (2021).  Cytotoxic  Activity  of  Ethanol  Extract  in Namnam  Leaves  (cynometra  cauliflora  l.)  to  Hela  Cell. Walisongo  Journal  of Chemistry , 4 (2), 107–112.
Asmarawati,  Reny  Angelina,  Yanti,  Aprilita  Rina,  Boedijono,  Eddy  Purwoto,  &  No,  Jalan Arjuna Utara. (2014). Characteristic amylum jackfruit seeds (Artocarpus heterophyllus Lamk.) AND IN VITRO ANTIOXIDANT ACTIVITY TEST .
Dian  Puspitasari,  Desrita.  (2018).  Pengaruh  metode  perebusan  terhadap  uji  fitokimia  daun mangrove Excoecaria agallocha. Jurnal Penelitian Pendidikan Sosial Humaniora , 3 (2), 424–428.
Efendi,  Herman.  (2016). Studi  Penambahan  Gula  Merah  dan  Daging  Buah  Durian  (Durio zibhetinus) Untuk Menentukan Komponen Bahan Pada Kolak Durian .
Fitriana, Syaifud Dina. (2019). Uji aktivitas antikanker ekstrak dan isolat tanin rumput bambu (Lophaterum  gracile  B.)  yang  diembankan  pada  zeolit  NaX  terhadap  sel  kanker payudara T47D dengan metode MTT . Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim.
Ginting, Elpina. (2016). Skrining Fitokimia dan Analisa Kromatografi Lapis Tipis Komponen Kimia Biji Durian (Durio zibethinus) dalam Ekstrak Metanol dan N-heksan . Universitas Sumatera Utara.
Hendri, Muhammad, Diansyah, Gusti, & Tampubolon, Jetun. (2010). Konsentrasi Letal (LC50- 48 jam) Logam Tembaga (Cu) dan Logam Kadmium (Cd) Terhadap Tingkat Mortalitas Juwana Kuda Laut (Hippocampus spp). Jurnal Penelitian Sains , 13 (1).
Mokosuli, Yermia Semuel. (2021). Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) Ekstrak Sarang Lebah Madu (Apis dorsata Binghami. Jurnal Pendidikan Biologi Undiksha , 8 (3), 138–144.
Nirwan,  Advani.  (2021). Isolasi  Senyawa  Metabolit  Sekunder  dari  Ekstrak  Heksana  Daun Tumbuhan  Sungkai  (Peronema  canescens  Jack)  dan  Uji  Toksisitas  dengan  Metode BSLT (Brine Shrimp Lethality Test) . Universitas Andalas.
Nurvianthi, Riska Yuli. (2022). Uji Toksiksitas Akut Ekstrak Etanol Akar Dan Biji Cempedak (Artocarpus  Champeden  Spreng)  Asal  Luwu  Utara  Terhadap  Larva  Udang  (Artemia Salina  Leach)  Dengan  Metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (Bst). Jurnal  Kesehatan Luwu Raya , 9 (1), 41–54.
Panyoo,  A.  Emmanuel,  &  Emmambux,  M.  Naushad.  (2017).  Amylose–lipid  complex production  and  potential  health  benefits:  A  mini‐review. Starch‐Stärke , 69 (7–8), 1600203.
Rozali,  Zalniati  Fonna.  (2018). Pengembangan  Tepung  Beras  Tinggi  Pati  Resisten  dan Potensinya  dalam  Menghambat  Proliferasi  Sel  Kanker  Kolon  HCT-116. IPB  (Bogor Agricultural University).
Sarah, Quazi Sahely, Anny, Fatema Chowdhury, & Misbahuddin, Mir. (2017). Brine shrimp lethality assay. ||| Bangladesh Journal of Pharmacology||| , 12 (2), 186–189.
Siddhardha, Busi, Dyavaiah, Madhu, & Kasinathan, Kaviyarasu. (2020). Model organisms to study biological activities and toxicity of nanoparticles . Springer.
Simorangkir, Murniaty, Nainggolan, Bajoka, Juwitaningsih, Tita, & Silaban, Saronom. (2021). The  Toxicity  of  n-Hexane,  Ethyl  Acetate  and  Ethanol  Extracts  of  SarangBanua (Clerodendrumfragrans  Vent  Willd)  Leaves  by  Brine  Shrimp  Lethality  Test  (BSLT) Method. Journal of Physics: Conference Series , 1811 (1), 12053. IOP Publishing.
Sistanto,  Sistanto,  Sulistyowati,  E.,  &  Yuwana,  Yuwana.  (2017).  Pemanfaatan  limbah  biji durian (Durio zibethinus Murr) sebagai bahan penstabil es krim susu sapi perah. Jurnal Sain Peternakan Indonesia , 12 (1), 9–23.
Sulaimon,  Lateef  Adegboyega,  Ola-Mudathir,  Fausat  Kikelomo,  Abdullahi,  Bunyamin Alhassan,  Mukhtar,  Ahmad  Ila,  &  Obuotor,  Efere  Martins.  (2021).  A  Comparative Study on Antioxidant and Cytotoxic Potentials of Methanol Extract of Jatropha curcas Seeds and Leaves. Journal of Drug Delivery and Therapeutics , 11 (6-S), 43–48.
Yudhayanti, Devita, &  Restiani,  Mila. (2019).  Uji  Mutu Tepung Biji  Durian Sebagai  Bahan Pangan  Alternatif  Berdasarkan  Kadar  Air  Dan  Kadar  Abu  Serta  Cemaran  Mikroba. MEDFARM: Jurnal Farmasi Dan Kesehatan , 8 (2), 43–48.