Jurnal Pendidikan Biologi Undiksha p-ISSN : 2599-1450 e-ISSN : 2599-1485 Volume 7 Nomor  1 Tahun 2020 Open Acces : https://ejournal.undiksha.ac.id/index.php/JJPB/index

## ISOLASI DAN KARAKTERISASI BAKTERI ASAM LAKTAT DARI MADU HITAM SUMBAWA DAN POTENSINYA SEBAGAI SENYAWA ANTIMIKROBA
Baso Manguntungi 1)* , Arlinda Puspita Sari 2) , Ariandi 2) ,Riri Rimbun Anggih Chaidir 1) , Izzul Islam 1) , Lili Suharli 1) , Leggina Rezzy Vanggy 1) , Naning Sufiyanti 1) , Muhammad Fajri Al Fateeh 1) , Ulfa Febiana Whatin 1) , Intan Dwi Pratiwi 1) , Widya Dwi Kusuma 1)
1 Program Studi Bioteknologi, Universitas Teknologi Sumbawa, Sumbawa, Indonesia
2 Program Studi Pendidikan Biologi, Universitas Sulawesi Barat, Majene, Indonesia
e-mail: baso.manguntungi@uts.ac.id

## Abstrak
Madu  hitam  merupakan  salah  satu  ciri  khas  dari  daerah  Sumbawa  yang dihasilkan  oleh  lebah  jenis Trigona spp .  Madu  hitam  memiliki  rasa  asam yang  berbeda  dari  madu  lainnya  dan  memiliki  khasiat  sebagai  antibiotik. Penelitian ini bertujuan untuk menguji potensi bakteri asam laktat pada madu hitam sumbawa sebagai antimikroba. Diperoleh 20 isolat bakteri dari madu hitam  sumbawa,  10  diantaranya  merupakan  isolat  bakteri  asam  laktat. Metabolit sekunder dari 10 isolat bakteri asam laktat kemudian diuji dengan metode  difusi  agar  atau  sumur  untuk  melihat  efektivitas  bakteri  sebagai antimikroba terhadap  bakteri Salmonella thypi dan Staphylococcus  aureus yang  mewakili  bakteri  gram  negatif  dan  gram  positif.  Pengamatan  uji antimikroba  dilakukan  pada  jam  ke-2,  ke-4  dan  ke-6.  Hasil  uji  antimikroba menunjukkan bahwa metabolit sekunder dari isolat bakteri asam laktat MD 1 memiliki  kemampuan yang sangat baik dalam menghambat pertumbuhan bakteri S. thypi dan S. aureus.
Kata  kunci :  Madu  hitam,  bakteri  asam  laktat,  antimikroba,  metabolit sekunder

## Abstract
Black  honey  is  one  of  the  characteristics  of  the  Sumbawa  region  which  is produced by Trigona spp . Black honey has a sour taste that is different from others'  honey  and  has  efficacy  as  an  antibiotic.  This  research  aims    to examine the potential of lactic acid bacteria in Sumbawa black honey as an antimicrobial.  20  bacterial  isolates  were  obtained  from  Sumbawa  black honey, 10 of them were lactic acid bacteria isolates. Secondary metabolites from 10 LAB isolates were then  tested by well or agar diffusion method to see the effectiveness of their antimicrobial activities against Salmonella thypi
and Staphylococcus aureus bacteria which representing the gram-negative and gram-positive bacteria. Antimicrobial test observations were carried out at the 2nd, 4th, and 6th hours. The results of antimicrobial tests showed that secondary metabolites form MD 1 lactic acid bacteria isolate had an excellent ability to inhibit the growth of S. thypi and S. aureus bacteria.
Keyword :  Black  honey,  lactic  acid  bacteria,  antimicrobial  activities, Secondary metabolites

## PENDAHULUAN
Sumbawa  merupakan  salah  satu daerah  yang  dikenal  sebagai  daerah penghasil madu di Indonesia. Salah satu jenis madu Sumbawa yaitu madu hitam. Madu  hitam  adalah  jenis  madu  yang dihasilkan  oleh  lebah Trigona spp
(Fitrianingsih et  al .,  2014)  dan  memiliki rasa yang masam. Madu yang dihasilkan  oleh  lebah Trigona spp . diketahui memiliki kandungan vitamin C yang  tinggi  dan  berfungsi  sebagai antibiotik,  antioksidan,  antitoksin,  serta meningkatkan  sistem  kekebalan  tubuh (Putra et al ., 2014). Manfaat yang diperoleh dari madu hitam sumbawa salah satunya
disebabkan  oleh  adanya  bakteri  asam laktat pada madu tersebut. Bakteri asam laktat (BAL) merupakan salah satu jenis mikroba  yang  mampu  hidup  dalam kondisi  asam  terutama  pada  bahan makanan.  BAL  merupakan  kelompok bakteri gram positif yang tidak menghasilkan  spora.  BAL  mampu meproduksi  asam  laktat  sebagai  hasil fermentasi bahan makanan seperti gula dan  karbohidrat  (Pato,  2003).  Secara umum  bakteri  asam  laktat  memiliki  ciri yaitu  bereaksi  negatif  terhadap  uji katalase  dan  bereaksi  positif  terhadap pewarnaan  gram  (Romadon et  al ., 2012).  Beberapa  marga  dari  bakteri asam  laktat  yang  telah  diketahui  yaitu
Lactobacillus , Streptococcus , Enterococcus , Pediococcus , Tetragenococcus , Leuconostoc ,  dan Lactococcus . (Widyastuti, 1999).
Selain menghasilkan asam laktat,
BAL juga diketahui mampu menghasilkan senyawa antimikroba seperti bakteriosin,  hidrogen peroksida, dan asam organik (sitrat, laktat, dan lain- lain)  (Desniar et  al. ,  2016).  Bakteriosin adalah senyawa yang digunakan
sebagai  pengawet,  sedangkan  asam asetat, asam laktat, dan asam propionat merupakan  agen  antimikroba  yang banyak digunakan dalam industri pangan  (Threon  dan  Lues,  2011).
Senyawa  antimikroba  yang  dihasilkan oleh BAL seperti senyawa yang dihasilkan oleh bakteri L. plantarum NS (9)  dilaporkan  mampu  menghambat pertumbuhan  dari  patogen  makanan (Desniar et  al .,  2013),  juga  dapat menghambat  pertumbuhan  dari  bakteri E. coli, B. cereus, L. monocytogenes, S. aureus, dan S. thypimurium (Desniar et al ., 2016) .
Penelitian  ini  dilakukan  untuk mengisolasi dan mengkarakterisasi bakteri  asam  laktat  dari  madu  hitam Sumbawa  yang  diharapkan  mampu menghasilkan senyawa antimikroba yang bermanfaat.

## METODE PENELITIAN Isolasi Bakteri
Madu  hitam  diperoleh  dari  Desa Kelungkung,  Kecamatan  Batu  Lanteh, Kabupaten  Sumbawa.  Madu  hitam diambil sebanyak 1 ml dan ditambahkan dalam 5 ml media MRSB. Sampel madu kemudian  dinkubasi  pada  suhu  37 o C selama  24  jam.  Sampel  dengan pengenceran 10 -3 , 10 -4 , dan 10 -5 disebar pada media MRSA, dan diinkubasi pada suhu  37 o C  selama  24  jam  (Chotiah, 2013).
Uji Morfologi
Uji  morfologi  bakteri  meliputi bentuk, warna, tepian, elevation , ukuran, appearance dan teksturnya.
Uji Pewarnaan Gram Kaca preparat yang akan
digunakan  dibersihkan  dengan  alkohol kemudian  dipanaskan  di  dekat  nyala api. Isolat  bakteri diteteskan pada kaca preparat menggunakan mikropipet,
kemudian  dipanaskan  di  dekat  api hingga  isolat  kering.  Isolat  bakteri ditetesi  dengan  kristal  ungu,  didiamkan selama 1 menit, dicuci dengan aquades. Hasil  pewarnaan  kristal  ungu  ditetesi dengann  lugol,  didiamkan  selama  2 menit  dan  kemudian  dicuci  dengan aquades. Hasil pewarnaan lugol ditetesi dengan  etanol  dan  kemudian  dicuci dengan  akuades.  Hasil  pewarnaan dengan etanol ditetesi dengan safranin, didiamkan  selama  1  menit  kemudian dicuci  kembali  dengan  aquades  dan hasil pewarnaan
diamati (Hadioetomo,1993).
Uji Katalase Uji  katalase  dilakukan  dengan meneteskan  hidrogen  peroksida  (H 2 O 2 ) 3% pada gelas obyek yang bersih. Isolat bakteri kemudian diteteskan pada gelas obyek  yang  telah  ditetesi  hidrogen peroksida. Suspensi dihomogenkan secara  perlahan  dan  hasil  positif ditandai dengan terbentuknya gelembung-gelembung udara (Hadioetomo, 1993). Uji Antimikroba Uji antimikroba menggunakan metode  difusi  agar  atau  sumur.  Bakteri uji  yang  digunakan  adalah  bakteri Staphylococcus aureus dan Salmonella thypi .  Antimikroba  yang  digunakan adalah metabolit sekunder yang dihasilkan  oleh  bakteri  asam  laktat  dari madu  hitam  Sumbawa.  Kontrol  positif terhadap bakteri S. aureus dan S. thypi menggunakan antibiotik ampicillin .
Sebanyak  3  ml  (telah  dilakukan pengenceran)  bakteri  uji  ditambahkan dalam  20  media  NA, kemudian  dituang ke  dalam  cawan  petri  steril,  ditunggu hingga  memadat.  Setelah  memadat dibuat sumur dengan ukuran diameter 6 mm. Metabolit sekunder dimasukkan ke dalam sumur sebanyak 50 µl. kemudian diinkubasi pada suhu 37 o C. Pengamatan  zona  bening  dilakukan pada jam ke-2, ke-4 dan ke-6
(Purwijantiningsih, 2014).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Uji  Morfologi,  Pewarnaan  Gram  dan Katalase
Hasil  isolasi  dari  madu  Hutan Sumbawa  diperoleh  20  isolat  bakteri. Pengamatan morfologi dari ke dua puluh isolat  bakteri  menunjukkan  ciri  koloni yang  relatif  seragam  yakni  berbentuk bulat, berwarna putih, tepian gelombang, ketinggian cembung, ukuran  kecil,  mengkilap  dan  teksturnya mukoid. Kedua puluh isolat bakteri kemudian  diuji  untuk  mengidentifikasi isolat  yang  merupakan  bakteri  asam laktat.  Bakteri  asam  laktat  merupakan bakteri  yang  bereaksi  positif  pada pewarnaan  gram  dan  bereaksi  negatif dengan uji katalase. Tabel 1
menunjukkan  hasil  uji  pewarnaan  gram dan  uji  katalase,  dimana  diperoleh  10 isolat  bakteri  asam  laktat  yaitu  MD  1,
MD2, MD 3, MD 5, MD 6, MD 14, MD 15, MD 17, MD 18 dan MD 20.
Tabel 1. Hasil uji pewarnaan gram dan uji katalase Isolat Bakteri Asam Laktat Uji Pewarnaan Gram Uji Katalase MD 1 + - MD 2 + - MD 3 + - MD 4 + + MD 5 + - MD 6 + - MD 7 + + MD 8 + + MD 9 + + MD 10 - - MD 11 - - MD 12 - -
MD 13 - - MD 14 + - MD 15 + - MD 16 + + MD 17 + - MD 18 + - MD 19 + + MD 20 + -
Keterangan: Pewarnaan gram: (+) bakteri gram positif, (-) bakteri gram negatif.
Uji Antimikroba Isolat bakteri yang yang dinyatakan  sebagai  bakteri  asam  laktat berdasarkan pengujian pewarnaan gram  dan  uji  katalase  kemudian  diuji untuk  melihat  aktivitas  antimikrobanya.
Dalam pengujian antimikroba ini digunakan dua bakteri patogen yaitu S.
aureus dan S . thypi yang  masing- masing mewakili kelompok bakteri gram positif  dan  negatif.  Adanya  aktivitas penghambatan ditandai dengan adanya zona  bening  di  sekitar  sumur.  Zona
bening  yang  terbentuk  terdiri  dari beberapa  variasi  ukuran,  dikarenakan isolat  bakteri  asam  laktat  tersebut memiliki  kemampuan  penghambatan yang berbeda-beda. Menurut Purwijantiningsih  (2014),  setiap  strain mikroorganisme memiliki resistensi yang  berbeda  terhadap  bakteri  ujinya.
Tabel 2 menunjukkan hasil uji antimikroba  terhadap  bakteri S.  thypi dan  Tabel  3  menunjukkan  hasil  uji antimikroba pada bakteri S. aureus .
Tabel 2. Hasil uji antimikroba terhadap bakteri Salmonella thypi Sampel Ukuran Zona Bening (mm) Jam ke- 2 Jam ke- 4 Jam ke- 6 Kontrol - 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 1 10 ± 0,816 d 8,7 ± 0,471 d 8,3 ± 0,471 d MD 2 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 3 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 b MD 5 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 6 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 14 0 ± 0 a 2 ± 0 b 1 ± 0 b MD 15 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 17 0 ± 0 a 1,7 ± 0,942 b 1 ± 0 b MD 18 1 ± 0 b 1,3 ± 0,471 b 1 ± 0 b MD 20 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a Kontrol + 4 ± 0 c 6 ± 0 c 4 ± 0 c
Keterangan: Angka yang diikuti dengan huruf yang sama pada kolomyang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada uji one-way ANOVA dengan level of significant 0,05 .
Berdasarkan  Tabel  2  hasil  uji antimikroba pada bakteri S. thypi jam ke- 2,  isolat  bakteri  asam  laktat  MD  1 memiliki  zona  bening  dengan  diameter paling  besar  yaitu  10  ±  0,816  mm berbeda  nyata  dengan  kontrol  positif yaitu  4 mm,  isolat  BAL MD  18 memiliki diameter  zona  bening  sebesar  1  mm, sedangkan isolat BAL MD 3, MD 5, MD
6, MD7, MD 14, MD 15, MD 17 dan MD 20 tidak memiliki zona bening.
Pengamatan jam ke-4, isolat BAL MD  1  memiliki  zona  bening  dengan diameter paling besar yaitu 8.7 ± 0,471 mm  berbeda  nyata  dengan  kontrol positif yaitu 6 mm, isolat BAL MD 17 dan MD  18  memiliki  diameter  zona  bening sebesar 1,7 ± 0,942 mm dan 1,3 ± 0,471
mm, sedangkan isolat BAL MD 3, MD 5, MD 6, MD7, MD 14, MD 15 dan MD 20 tidak memiliki zona bening.
Pengamatan jam ke-6, isolat BAL MD  1  memiliki  zona  bening  dengan diameter paling besar yaitu 8.3 ± 0,471 mm  berbeda  nyata  dengan  kontrol positif yaitu 4 mm, isolat BAL MD 17 dan MD  18  memiliki  diameter  zona  bening sebesar  1  mm,  sedangkan  isolat  BAL MD 3, MD 5, MD 6, MD7, MD 14, MD 15 dan MD 20 tidak memiliki zona bening.
Hal  ini  menunjukkan  bahwa  dari 10 isolat bakteri asam laktat, isolat MD 1
merupakan  bakteri  asam  laktat  yang paling efetif sebagai antimikroba. Hal ini ditandai  dengan  luasnya  zona  bening yang  terbentuk  dibandingkan  isolat  lain dan kontrol positif, baik pada pengamatan  jam  ke-2,  ke-4,  maupun jam ke-6. Kemampuan pengahambatan bakteri  asam  laktat  dipengaruhi  oleh produksi  metabolit  sekunder  bakteri tersebut,  diantaranya  adalah  hidrogen peroksida, karbondikosaida
dan senyawa  peptida  antimikroba  yakni bakteriosin (Purwijantiningsih, 2014). Tabel 3. Hasil uji antimikroba terhadap bakteri Staphylococcus aureus Sampel Aktivitas Antibakteri/Jam (mm) Jam 2 Jam 4 Jam 6 Kontrol - 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 1 5,7 ± 2,357 b 7 ± 2,16 b 8,7 ± 2,357 b MD 2 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 3 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 5 0 ± 0 a 1 ± 0 a 0 ± 0 a MD 6 0 ± 0 a 1 ± 0 a 0 ± 0 a MD 14 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 15 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 17 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 18 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a MD 20 0 ± 0 a 0 ± 0 a 0 ± 0 a Kontrol + 9 ± 0 c 10 ± 0 c 8 ± 0 b
Keterangan: Angka yang diikuti dengan huruf yang sama pada kolom yang sama menunjukkan tidak berbeda nyata pada uji one-way ANOVA dengan level of significant 0,05 .
Berdasarkan  Tabel  3  hasil  uji antimikroba pada bakteri S. aureus jam ke-2,  isolat  bakteri  asam  laktat  MD  1 memiliki  zona  bening  dengan  diameter paling  besar  yaitu  5,7  ±  2,357  mm berbeda  nyata  dengan  kontrol  positif yaitu 9 mm, sedangkan isolat BAL MD 3, MD 5, MD 6, MD 7, MD 14, MD 15, MD 17,  MD  18,  dan  MD  20  tidak  memiliki zona bening.
Pengamatan jam ke-4, isolat BAL MD  1  memiliki  zona  bening  dengan diameter paling besar yaitu 7 ± 2,16 mm berbeda  nyata  dengan  kontrol  positif yaitu 10 mm, isolat BAL MD 5 dan MD 6 memiliki  diameter  zona bening  sebesar 1  mm,  sedangkan  isolat  BAL  MD  3, MD7, MD 14, MD 15, MD 17, MD 18 dan MD 20 tidak memiliki zona bening.
Pengamatan jam ke-6, isolat BAL MD  1  memiliki  zona  bening  dengan diameter paling besar yaitu 8.7 ± 2,357 mm tidak berbeda nyata dengan kontrol positif yaitu 8 mm, sedangkan isolat BAL MD 3, MD 5, MD 6, MD 7, MD 14, MD 15,  MD  17,  MD  18,  dan  MD  20  tidak memiliki zona bening.
Seperti halnya pengujian antimikroba  dengan  bakteri S.  thypi , pengujian  dengan  bakteri S.  aureus menunjukkan  hasil  yang  sama,  yakni isolat  BAL  MD  1  merupakan  bakteri yang paling efektif sebagai antimikroba.
Bakteri asam laktat menghasilkan berbagai  senyawa  antimikroba  seperti senyawa asam laktat, hidrogen peroksida  (H 2 O 2 ),  karbon  dioksida, diacetil,  dan  senyawa  massa  molekul
tinggi  seperti  bakteriosin  (Mobolaji  dan Wuraola,  2011).  Senyawa  asam  laktat merupakan asam organik dari fermentasi  BAL  (Ammor et  al .,  2006).
Asam laktat memiliki kemampuan antimikroba karena mampu menggangu kerja membran sel, menghambat
transpor aktif, mengurangi pH intraseluler  dan  menghambat  berbagai fungsi metabolisme (Rattanachanaikunsopon dan Phumkhachorn, 2010). Bakteri  asam  laktat  juga  mampu menghasilakan senyawa hidrogen peroksida  (H 2 O 2 )  (Abbas et  al .,  2010).
Kemampuan  antimikroba  dari  senyawa hidrogen  peroksida  dihasilkan  dari oksidasi gugus sulfhidril yang menyebabkan denaturasi sejumlah enzim,  dan  dari  peroksidasi  membran lipid sehingga terjadi peningkatan permeabilitas  membran  dan  sebagai prekursor  untuk  produksi  radikal  bebas bakterisida  seperti  superoksida  dan hirdoksil  yang  dapat  merusak  DNA (Ammor et al ., 2006).
Adanya  perbedaan  kemampuan masing-masing  isolat  bakteri  asam laktat dalam menghambat pertumbuhan S. aureus dan S. thypi dapat disebabkan karena perbedaan jenis senyawa metabolit  yang  dihasilkan.  Selain  itu terdapat  beberapa  faktor  yang  dapat mempengaruhi  besar  kecilnya  zona bening  yang  dihasilkan  oleh  metabolit sekunder  bakteri  asam  laktat  terhadap bakteri  patogen  yaitu  kemampuan bakteri asam laktat dalam menghasilkan senyawa  metabolit  sekunder,  jumlah senyawa  metabolit  sekunder  yang dihasilkan, komposisi medium dan lama waktu inkubasi (Situmeang et al ., 2017).

## SIMPULAN
Ditemukan 10 isolat  bakteri asam laktat  (BAL)  yang  berasal  dari  madu hitam  Sumbawa.  Dari  kesepuluh  isolat bakteri  tersebut,  bakteri  asam  laktat MD1  menghasilkan  metabolit  sekunder yang  paling  efektif  sebagai  antimikroba terhadap bakteri S. thypi dan S. aureus yang  diamati  pada  jam  ke-2,  ke-4  dan ke-6.

## DAFTAR PUSTAKA
Abbas,  M.E.,  Luo,  W.,  Zhu,  L.,  Zou,  J.,
dan  Tang,  H.  2010.  Fluorometric determination of hydrogen
peroxide in milk by using a Fenton reaction system. Food Chemistry . 120: 327-331. Ammor, S., Tauveron, G., Dufour, E., & Chevallier,  I.  2006.  Antibacterial activity  of  lactic  acid  bacteria against  spoilage  and  pathogenic bacteria  isolated  from  the  same meat  small-scale  facility:  1 — Screening and characterization of the antibacterial compounds. Food control . 17(6): 454-461. Chotiah,  S.  2013.  Penapisan  Bakteri Asam Laktat Penghambat Pertumbuhan    Staphylococcus aureus. Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan veteriner 2013. Desniar,  Rusmana.  I.,  Suwanto.  A., Mubarik. N.R. 2013. Characterization  Of  Lactic  Acid Bacteria Isolated from An Indonesian Fermented Fish (Bekasam) And Their Antimicrobial Activity Against Pathogenic  Bacteria.  Emir. J. Food Agric . 25(6): 489-494. Desniar, I. Setyaningsih., Y. I. Purnama. 2016.  Penapisan  dan  Produksi Antibakteri Lactobacillus plantarum NS(9)  yang  diisolasi dari  Bekasam  Ikan  Nila  Atin. JPHPI . 19(2). Fitrianingsih, S.R., Khairat, A., Choesrina,  R.  2014.  Aktivitas Antibakteri Madu Hitam Pahit dan Madu  Hitam  Manis  Terhadap Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus . Jurnal
Farmasi Galenika . 1(2): 32-37. Hadioetomo,  R.S.  1993. Mikrobiologi Dasar  Dalam  Praktek  Teknik  dan Prosedur  Dasar  Laboratorium .
Penerbit Gramedia. Jakarta. Mobolaji,  OA  &  Wuraola,  FO.  2011.
Assesment  of  the  antimicrobial activity  of  lactic  acid  bacteria isolated from two fermented maize products-ogi and kunni-zaki.
Malaysian Journal of Microbiology . 7 (3): 124-128. Pato,  U.  2003.  Potensi  Bakteri  Asam Laktat  yang  diisolasi  dari  Dadih untuk Menurunkan Resiko Penyakit  Kanker.  Jurnal  Natur Indonesia. 5(2): 162-166. Purwijantiningsih,  E.  2014.  Viabilitas Bakteri Asam Laktat dan Aktivitas Antibakteri Produk Susu Fermentasi  Komersial  terhadap Beberapa Bakteri Patogen Enterik. Biota . 19(1): 15-21. Putra. P.A.H., N.L.Watniasih., N.M.Suartini.  2014.  Struktur  dan Produksi Lebah Trigona spp. pada Sarang  Berbentuk  Tabung  dan Bola. JURNAL  BIOLOGI .  18  (2)  : 60-64. Rattanachaikunsopon, P., dan Phumkhachorn,  P.  2010.  Lactic acid  bacteria:  their  antimicrobial compounds and their uses in food production. Annals  of  biological research . 1(4): 218-228.
Romadon, Subagiyo, S. Margino. 2012. Isolasi  dan  Karakterisasi  Bakteri Asam  Laktat  dari  Usus  Udang Penghasil  Bakteriosin  sebagai Agen  Antibakteria  pada  Produk- Produk  Hasil  Perikanan. Jurnal Saintek Perikanan . 8(1).
Situmeang  S.M.F,  Musthari,  Riadi  S.
2017.  Isolasi  Dan  Uji  Aktivitas Antimikroba  Bakteri  Asam  Laktat (Bal) Dari Yoghurt Dalam Menghambat Pertumbuhan Bakteri Escherichia coli dan Salmonella typhi. Jurnal Biosains . 3(3): 144-152. Theron M.M., Lues J.F.R. 2011. Organic
Acids  and  Food  Preservation. United States: CRC Press . 273. Widyastuti.  Y.,  dan  Sofarianawati,  E. 1999.  Karakter  Bakteri  Asam Laktat Enterococcus sp.  yang diisolasi dari Saluran Pencernaan Ternak. Jurnal Mikrobiologi Indonesia . 4 : 50-53.