## ANATOMI, KOMPONEN BIOAKTIF DAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAUN MANGROVE API-API ( Avicennia marina )

## Anatomy, Bioactive Compounds and Antioxidant Activity of Mangrove Api-api
(Avicennia marina) Leaf

## Agoes Mardiono Jacoeb*, Sri Purwaningsih, Rinto
Departemen Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor
*Korespondensi: Jalan Lingkar Akademik, Kampus IPB Dramaga 16680, Email: agoes58@yahoo.de

## Abstract
The study about chemical and physical characteristics, bioactive compounds and  antioxidant activity of mangrove api-api ( Avicennia marina) leaf have been done.  The structure of leaf tissues was analyzed with microscopic  method,  chemical  compositions  were  determined  by  proximate  analysis,  antioxidant  activity was  determined  by  DPPH  method,  while  bioactive  compounds  were  determined  by  phytochemical  assay. The microscopic analysis shown that api-api’s leaf have common feature dicotyl leaves structure, but it has a unique additional structure, that was salt extruding gland.  The result of proximate analysis showed that api-api’s leaf was high in crude fiber (4.12%) and carbohydrate (23.00%).  Ethyl acetate extract of api-api’s leaf showed higher antioxidant activity than hexane and methanol extracts, with IC 50 value is 182.33 ppm.  The ethyl acetate extract in concentration 300 ppm had higher ability to inhibite autooxidation that occurred in oil/water emulsion.  Flavonoid, steroid dan reduction sugar were detected in api-api leaf extract.
Keywords: antioxidant activity, Avicennia marina , DPPH, flavonoid, salt extruding gland.

## Abstrak
Kajian  mengenai  karakteristik  fisik  dan  kimiawi,  komponen  bioaktif  dan  aktivitas  antioksidan  daun mangrove api-api ( Avicennia marina ) telah dilakukan.  Struktur jaringan daun api-api dilihat dengan pengamatan mikroskopik, komposisi kimia diukur dengan analisis proksimat, aktivitas antioksidan diuji dengan metode DPPH, dan komponen bioaktif diketahui dengan metode fitokimia.  Hasil pengamatan mikroskopis menunjukkan daun api-api memiliki struktur jaringan yang hampir sama dengan daun dikotil pada umumnya, hanya saja daun api-api memiliki struktur tambahan berupa kelenjar garam.  Hasil analisis proksimat daun api-api menunjukkan bahwa daun api-api mengandung serat kasar (4,12%) dan karbohidrat (23,00%) yang cukup tinggi.  Ekstrak etil asetat daun  api-api  memiliki  aktivitas  antioksidan  tertinggi  dibandingkan  ekstrak  metanol  dan  heksan,  dengan  IC 50 sebesar 182,33 ppm (tergolong antioksidan lemah).  Ekstrak etil asetat daun api-api pada konsentrasi 300 ppm memiliki kemampuan penghambatan proses oksidasi pada emulsi minyak yang tertinggi.  Komponen bioaktif yang terdeteksi pada ekstrak daun api-api adalah flavonoid, steroid dan gula pereduksi.
Kata kunci: aktivitas antioksidan, Avicennia marina , DPPH, flavonoid, kelenjar garam.

## PENDAHULUAN
Radikal bebas merupakan salah satu penyebab timbulnya  penyakit  degeneratif  antara  lain kangker,  aterosklerosis,  stroke,  rematik,  jantung, gagal  ginjal,  hypertensi  dan  rusaknya  pembuluh darah otak dan penyakit kronik (Steinberg 2009; Theroux  dan  Libby  2005;  Prasad et  al. 2009; Saha et  al. 2008;  Meenakshi  dan  Gnanambigai 2009).    Aktivitas  radikal  bebas  dapat  diredam
dengan pemberian antioksidan atau mengonsumsi antioksidan (Ghosal et al. 1996; radikal Halliwell 2007; Kubola dan Siriamornpun 2008; Escudero et al. 2008; Mohsen dan Ammar 2009).  Antioksidan dapat  menetralkan  radikal  bebas  sehingga  dapat melindungi kehidupan organisme dari kerusakan akibat  produksi Reactive  Oxygen  Species dan turunannya  yang  tak  terkendali  (Ghosal et  al. 1996).  Berdasarkan  sumbernya,  antioksidan
digolongkan  dalam  dua  jenis,  yaitu  antioksidan sintetik dan antioksidan alami.  Contoh antioksidan sintetik yang sering digunakan masyarakat antara lain butylated  hydroxyanisole (BHA), butylated hydroxytoluene (BHT), tert-butylhydroquinone (TBHQ)  dan propyl  gallate (PG)  (Wichi  1988). Keuntungan  menggunakan  antioksidan  sintetik adalah  aktivitas  anti  radikalnya  yang  sangat kuat.  Namun,  berdasarkan  hasil  penelitian  yang dilakukan  Wichi  (1988)  serta  Thompson  dan Moldeus  (1988),  antioksidan  sintetik  BHA  dan BHT  berpotensi karsinogenik.  Pencarian sumber antioksidan  alami  sangat  dibutuhkan  untuk menggantikan peran antioksidan sintetik.
Mahera et al. (2011) menyatakan bahwa api- api merupakan salah satu spesies mangrove yang sangat    penting.  Mangrove  api-api  merupakan salah  satu  jenis  tumbuhan  yang  tersebar  di seluruh  Indonesia  dan  tersedia  melimpah  serta etnobotanis memberikan berbagai manfaat, yakni memiliki  aktivitas  antimalaria  dan  aktivitas sitotoksik  (Miles et  al. 1999),  anti  nematoda (Tariq et  al. 2007),  antibakterial  (Subashree et al. 2010) dan antiviral (Zandi et al. 2009). Selain itu, daun api-api juga telah lama digunakan dalam pengobatan tradisional untuk pengobatan penyakit kulit,  rematik,  cacar,  bisul  dan  pakan  hewan  di peternakan  (Fauvel et  al. 1993;  Bandaranayake 2002).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mempelajari karakteristik fisik, komposisi kimiawi, menentukan  secara  kualitatif  senyawa  bioaktif daun api-api dan menentukan aktivitas antioksidan serta aplikasinya.

## MATERIAL DAN METODE

## Bahan dan Alat
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian ini yaitu daun api-api ( Avicennia marina ), larutan TBA, gifford, paraffin, pewarna safranin, akuades, kjeltab  selenium,  H 2 SO 4 p.a.  pekat,  H 3 BO 3 4% yang mengandung indikator bromcherosol green - methyl red (1:2), HCl 0,0947 N, HCl 10%, AgNO 3 0,10  N,  metanol  (p.a),  etil  asetat  (p.a),  heksan (p.a),  kristal  DPPH,  BHT,  indikator  pati,  asam asetat glasial, dan minyak kelapa.
Alat-alat  yang  digunakan  pada  penelitian  ini antara  lain  jangka  sorong,  pisau,  sudip,  cawan porselen, timbangan digital, botol film dan  botol kaca kecil, holder , kotak blok, pinset, kuas, oven, mikrotom Yamato RV-240, hot plate , gelas obyek, rak  pewarna,  mikroskop  cahaya  Olympus  tipe CH20  dan  kamera  mikroskop  Olympus  DP12, alumunium  foil ,  gegep,  desikator,  oven,  kompor listrik,  tanur  pengabuan,  kertas  saring  whatman 42  bebas  abu,  kapas  bebas  lemak,  labu  lemak, kondensator,  tabung  soxhlet,  penangas  air,  labu kjeldahl,  destilator,  labu  erlenmeyer,  buret, pipet  volumetrik,  pipet  mikro,  pipet  tetes,  gelas ukur, grindmill , orbital shaker , rotary vacuum evaporator ,  corong  kaca,  botol gelas,  gelas piala,  tabung  reaksi,  spektrofotometer  UV-VIS, inkubator dan vortex .

## Lingkup Penelitian
Penelitian  ini  terdiri  atas  pengukuran morfometrik,  pengamatan  struktur  jaringan dengan  pembuatan  preparat  awetan  dengan metode  paraffin,  uji  proksimat  yang  meliputi kadar  air,  kadar  abu,  lemak,  protein,  serat  kasar dan karbohidrat (AOAC 2005), ekstraksi tunggal dengan 3 jenis pelarut yang berbeda kepolarannya, pengujian  aktivitas  antioksidan  ekstrak  daun dengan  metode  DPPH  (Hanani et  al. 2005), pengujian  kualitatif  komponen  bioaktif  dengan metode fitokimia (Harborne 1987) dan pengujian kemampuan  ekstrak  terpilih  dalam  menghambat proses oksidasi yang terjadi pada emulsi minyak (Santoso et al . 2004).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Karakteristik Fisik daun api-api
Daun  api-api  memiliki  ciri-ciri  antara  lain warna  permukaan  atas  dan  bawahnya  berbeda; permukaan  atas  daun  berwarna  hijau  dan permukaan bawahnya berwarna hijau kekuningan dan dengan bertambahnya umur beberapa bagian bawah  berubah  menjadi  putih.  Daun  berbentuk oval/bulat  telur  dengan  ujung  meruncing. Permukaan atas daun memiliki tekstur licin halus, sedangkan  permukaan  bawah  memiliki  tekstur yang lebih kasar (Tabel 1)
Tabel 1 Karakteristik fisik daun Api-api Karakteristik fisik Keterangan Warna daun Bagian atas berwarna hijau tua, sedangkan bagian bawah berwarna hijau kekuningan dengan beberapa bagian terlihat putih Bentuk daun Daun berbentuk oval dengan ujung runcing membundar, tepi daun rata Permukaan daun Daun memiliki tekstur halus pada bagian atas dan agak kasar pada bagian bawah

## Morfometrik daun Api-api
Sampel  daun  Api-api  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  memiliki  panjang  daun  rata-rata sebesar  69,36  mm,  lebar  daun  rata-rata  sebesar 36,29  mm  dan  tebal  daun  rata-rata  sebesar  0,77 mm  (Tabel  2).  Metusalach  (2007)  menyatakan bahwa  pertumbuhan  suatu  biota  dipengaruhi faktor  eksternal  dan  internal.    Faktor  eksternal yaitu  habitat,  musim,  suhu  perairan,  jenis makanan  yang  tersedia  dan  faktor  lingkungan lainnya, sedangkan faktor internalnya yaitu umur, ukuran, jenis kelamin, kebiasaan makan dan faktor biologis lainnya.

## Struktur jaringan daun Api-api

## Tangkai daun
Potongan  melintang  tangkai  daun  Api-api memperlihatkan  adanya  jaringan  epidermis, korteks, floem, xilem dan parenkim sentral.  Sel- sel  epidermis  pada  sisi  atas  tangkai  daun  api- api  saling  berhubungan  dan  secara  keseluruhan terlihat lebih rata dibandingkan dengan rangkaian sel-sel  epidermis  bagian  bawah  tangkai  daun (Gambar 1).
Sel  epidermis  atas  tangkai  daun  Api-api terlihat  lebih  kecil  dibandingkan  dengan  sel- sel  di  bawahnya,  dinding  tangensial  atas  relatif lebih  tebal  dibandingkan  dinding  tangensial bawahnya.    Berbeda  dengan  sel  epidermis  atas, sel-sel  epidermis  bawah  tangkai  daun  Api-api lebih memiliki bentuk dan ukuran yang berbeda, dan  sebagian  terdiferensiasi  menjadi  trikoma dan kelenjar garam ( extrude salt gland ). Dengan pewarna  safranin,  lapisan  kutikula  terlihat berwarna merah.
Jaringan parenkim ditemukan setelah jaringan epidermis dan menuju ke arah pusat, sel parenkim terlihat  semakin  besar  ukurannya  dan  semakin tidak  beraturan  bentuknya.    Jaringan  ini  belum bisa  dibedakan  antara  jaringan  hipodermis  dan parenkim korteks.
Jaringan  pengangkut  dijumpai  pada  pusat jaringan  dan  pada  kedua  tepi  jaringan  tangkai daun Api-api, yang bisa dibedakan antara sel-sel xilem dan phloem. Sel sklerenkim xilem tersusun berdampingan mengarah ke parenkim sentral dan terlihat  berdinding  lebih  tebal  bila  dibandingkan dinding  sel  di  sekitarnya,  dan  berwarna  merah bila  diberi  safranin.  Sel-sel  parenkim  xilem terlihat  lebih  besar  dibandingkan  sel-sel  floem. Dua  berkas  jaringan  pengangkut  terdapat  pada bagian  tepi  jaringan  tangkai  daun  api-api  yang secara  keseluruhan  lebih  kecil  daripada  jaringan pengangkut utama.

## Helaian daun
Helaian  daun  Api-api  termasuk  seri  elips dengan  bentuk  jorong  ( ovalis ; elipticus )  (Tabel 1),  hal  ini  karena  perbandingan  panjang  dan lebar daun api-api adalah 1,9 : 1.  Helaian daun dikatakan  berbentuk  jorong  jika  perbandingan panjang dan lebar adalah 1,5-2 : 1 (Tjitrosoepomo 2007).  Struktur  anatomi  helaian  daun  api-api disajikan pada Gambar  2 sampai Gambar 5.
Tabel 2 Morfometrik daun Api-api Parameter Rata-rata (mm) Panjang daun 69,36 ± 5,12 Lebar daun 36,29 ± 3,39 Tebal daun 0,77 ± 0,11
Gambar  3  Anatomi  bagian  tangkai  daun  Api-api,  A  (perbesaran  4x10),  B (perbesaran  10x10),  a=  kutikula  dan  epidermis  atas,  b=  parenkim, c=  sklerenkim,  d=  xilem,  e=  floem,  f=  parenkim  sentral,    g=  epidermis bawah, h= kelenjar garam.
Gambar  1  Anatomi  bagian  tangkai  daun  Api-api,  A (perbesaran 4x10), B (perbesaran 10x10), a=  kutikula  dan  epidermis  atas,  b= parenkim,  c=  sklerenkim,  d=  xilem,  e= floem, f= parenkim sentral,  g= epidermis bawah, h= kelenjar garam.
Helaian  daun  api-api  tersusun  jaringan epidermis atas beserta lapisan kutikula; beberapa lapisan sel yang bisa digolongkan sebagai sel-sel hipodermis; jaringan palisade sebanyak 3-4 lapis yang kompak dan menunjukkan sedikit ruang antar sel; jaringan parenkim asimilasi sebagai pengganti jaringan bunga karang, yang menunjukkan sedikit ruang antar sel; sklerenkim yang terletak di luar jaringan  pembuluh  pengangkut,  yang  bereaksi merah  dengan  pewarna  safranin;  jaringan pengangkut, epidermis bawah dan trikoma berupa
kelenjar garam.
Daun  api-api  bertipe  dorsiventral,  mengingat daun  api-api  hanya  memiliki  jaringan  palisade (tiang)  pada  sisi  bagian  atas  daun  saja.    Daun dikatakan  mempunyai  tipe  dorsiventral  apabila jaringan  palisade  hanya  terdapat  pada  sisi  atas daun (Nugroho et al. 2006).  Daun yang bertipe dorsiventral  biasanya  memiliki  permukaan  atas yang  lebih  berwarna  (biasanya  lebih  berwarna hijau)  dibandingkan  bagian  bawah,  karena
Tabel 3 Komposisi kimia daun Api-api (% berat basah)
Komposisi kimia api-api ( A. marina ) Ceriops  decandra (Griff) * Bruguiera parviflora (Roxb.) * Rhizopora mucronata (Poir)* Kadar air 68,16 52,51 51,75 46,63 Kadar protein 3,67 2,00 2,08 1,96 Kadar lemak 0,72 0,35 0,12 0,41 Kadar abu 4,45 1,82 1,38 1,25 Karbohidrat 23,00 19,06 22,14 22,29 Serat kasar 4,12 - - - Keterangan: *  Bunyapraphatsara et al. (2002)
Gambar  4    Anatomi  bagian  pangkal  daun  Api-api,  A  (perbesaran  10x10),  B (perbesaran 20x10), a= kutikula, dan epidermis, b= palisade, c= bunga karang,  d=  sklerenkim,  e=  xilem,    f=  floem,    g=  epidermis  bawah, h= kelenjar garam. i= hipodermis
Gambar  5    Anatomi  bagian  tengah  daun  Api-api,  A  (perbesaran  20x10),  B
(perbesaran  40x10),  a=  kutikula  dan  epidermis  atas,  b=  hipodermis, c=  palisade,  d=  sklerenkim,  e=  xilem,  f=  floem,    g=  bunga  karang, h= kelenjar garam, i= epidermis bawah.
Gambar  6  Anatomi  bagian  tepi  daun  Api-api,  A  (perbesaran  20x10),  B (perbesaran 40x10), a= kutikula, dan epidermis atas, b= hipodermis, c= palisade, d= bunga karang, e= epidermis bawah, f= kelenjar garam
Gambar  7  Anatomi  bagian  ujung  daun  Api-api,  A  (perbesaran  20x10),  B (perbesaran 40x10), a= kutikula dan  epidermis atas, b= hipodermis, c=  palisade,  d=  bunga  karang,  e=  korteks,  f=  epidermis  bawah, g= kelenjar garam
Gambar 2  Anatomi bagian pangkal daun Api-api, A (perbesaran 10x10), B (perbesaran 20x10), a= kutikula, dan epidermis, b= palisade, c= bunga karang, d= sklerenkim, e= xilem,  f= floem,    g=  epidermis  bawah,  h=  kelenjar garam. i= hipodermis
Gambar  3    Anatomi  bagian  tengah  daun  Api-api, A  (perbesaran  20x10),  B  (perbesaran 40x10), a= kutikula dan epidermis atas, b= hipodermis,  c=  palisade,  d=  sklerenkim, e=  xilem,  f=  floem,    g=  bunga  karang, h= kelenjar garam, i= epidermis bawah.
Gambar  4  Anatomi  bagian  tepi  daun  Api-api,  A (perbesaran  20x10),  B  (perbesaran 40x10),  a=  kutikula,  dan  epidermis  atas, b=  hipodermis,  c=  palisade,  d=  bunga karang,  e=  epidermis  bawah,  f=  kelenjar garam
Gambar  5  Anatomi  bagian  ujung  daun  Api-api, A  (perbesaran  20x10),  B  (perbesaran 40x10), a= kutikula dan  epidermis atas, b=  hipodermis,  c=  palisade,  d=  bunga karang, e= korteks, f= epidermis bawah, g= kelenjar garam.
kandungan kloroplas lebih banyak pada jaringan palisade sehingga warna hijau lebih terlihat pada permukaan  atas  daun  dibandingkan  permukaan bawah daun.
Helaian  daun  api-api  memiliki  dua  lapis jaringan  epidermis,  yaitu  epidermis  atas  dan epidermis  bawah.  Jaringan  epidermis  atas  daun api-api tersusun atas 1 lapis sel tipis yang dilapisi kutikula.  Jaringan epidermis bawah disusun oleh 1  lapis  sel  tipis  yang  terdiferensiasi  membentuk organ  tambahan  berupa  kelenjar  garam  ( salt extruding  gland ).  Hipodermis  daun  api-api disusun atas sel-sel yang lebih besar daripada sel penyusun, jaringan epidermis atas.  Borkar et al. (2011) menyatakan hipodermis pada helaian daun api-api berfungsi sebagai tempat penyimpan air
Jaringan  mesofil  helaian  daun  api-api (Gambar  1-5)  terdiri  atas  jaringan  palisade  dan jaringan  parenkim  asimilasi  pengganti  jaringan bunga  karang.    Jaringan  mesofil  pada  tumbuhan Dicotyledoneae umumnya berdiferensiasi menjadi jaringan  palisade  dan  bunga  karang  (Nugroho et al. 2006). Palisade pada daun api-api disusun atas 3 sampai 4 lapis sel yang memanjang vertikal dibawah hipodermis.  Jaringan parenkim asimilasi pengganti jaringan bunga karang pada daun api-api disusun oleh 2 sampai 3 sel tipis di bawah jaringan palisade dan tersusun secara tidak beraturan dan kpompak, dengan menyisakan sedikit ruang antar sel.    Jaringan  berkas  pengangkut  pada  helaian daun  api-api  dapat  dilihat  pada  semua  gambar anatomi  bagian-bagian  daun  api-api.  Berkas pengangkut  daun  api-api  terdiri  atas  pembuluh xilem pada bagian dalam dan floem pada bagian luar (Gambar 2).  Berkas pengangkut pada daun api-api  termasuk  dalam  tipe  kolateral  terbuka, karena  xilem  dan  floem  terletak  berdampingan dan dibatasi oleh kambium.
Struktur  tambahan  yang  berada  di  bawah epidermis  bawah  yaitu  kelenjar  garam  ( salt extruding  gland ).    Kelenjar  garam  merupakan organ yang berasal dari modifikasi sel epidermis bawah  yang  terjadi  akibat  adaptasi  terhadap kelebihan  garam    pada  daun.    Setiap  kelenjar garam pada daun api-api terdiri atas 2 sampai 4 kumpulan sel, 1 sel batang dan 8-12 sel ekskresi.
Kelenjar garam yang ada pada daun api-api juga mengalami  adaptasi  sesuai  dengan  habitatnya. Borkar et  al. (2011)  menyatakan  bahwa  pada salinitas  yang  lebih  rendah  kelenjar  garam  akan lebih pendek sedangkan pada salinitas yang lebih tinggi kelenjar garam akan lebih panjang. Adanya kelenjar  garam  dan  kemampuan  kelenjar  garam beradaptasi  terhadap  lingkungan  yang  memiliki salinitas  berbeda  membuat  mangrove  api-api dapat  hidup  di  habitat  yang  salinitasnya  rendah maupun ekstrim.

## Komposisi Kimia Daun Api-api
Hasil  analisis  proksimat  menunjukkan  daun api-api  mengandung  kadar  air  sebesar  68,16% (Tabel 3). Kadar air daun api-api lebih besar jika dibandingkan  dengan  kadar  air  daun  mangrove lainnya,  namun  secara  umum  kadar  air  pada daun  mangrove  relatif  rendah.    Kecenderungan ini  mungkin  disebabkan  habitat  mangrove yang  bersalinitas  tinggi  dan  suhu  habitat  yang tinggi  karena  pengaruh  transfer  panas  dari  laut, sebagaimana yang dikemukakan oleh Krzynowek dan Murphy (1987) bahwa kadar lemak dan kadar air untuk beberapa spesies berfluktuasi tergantung dengan musim dan lokasi pengambilan.
Hasil  analisis  proksimat  menunjukkan  kadar protein kasar daun api-api sebesar 3,67% (Tabel 3).  Kandungan  protein  daun  api-api  lebih  besar jika  dibandingkan  dengan  kadar  protein  daun mangrove  lainnya.  Hasil  penelitian  Wibowo et al. (2009)  menunjukkan  bahwa  daun  api-api ( Avicennia sp.) mengandung asam amino esensial yang cukup lengkap, yaitu sebanyak 9 asam amino esensial.
Hasil analisis proksimat menunjukkan bahwa
Gambar 1 Rendemen ekstrak daun Api-api Gambar 6 Rendemen ekstrak daun Api-api.
daun api-api memiliki kandungan lemak sebesar 0,72%  (Tabel  3).    Kandungan  lemak  ini  sangat rendah  jika  dibandingkan  dengan  senyawa  yang lain, namun lebih tinggi jika dibandingkan dengan kadar  lemak  daun  mangrove  lainnya.    Hasil  ini sama  dengan  hasil  penelitian  yang  dilakukan oleh  Bunyapraphatsara et  al. (2002)  yang  juga menunjukkan  bahwa  dari  semua  jenis  daun mangrove  yang  dianalisis  proksimatnya,  nilai kadar lemaknya rata-rata kurang dari 0,5%.
Hasil analisis proksimat menunjukkan bahwa daun api-api  memiliki  kadar  abu  sebesar  4,45% (Tabel 3).  Kadar abu yang dimiliki daun api-api jauh lebih tinggi jika dibandingkan dengan kadar abu yang ada pada daun tanaman mangrove lainnya. Perbedaan  kadar  abu/mineral  pada  tanaman dipengaruhi banyak faktor, antara lain kesuburan tanah, genetika tanaman, dan lingkungan dimana tanaman itu tumbuh (Fennema 1996).
Daun  api-api  memiliki  kadar  serat  kasar yang  cukup  tinggi,  yaitu  4,12%.    Nilai  ini  jauh berbeda  jika  dibandingkan  dengan  kadar  serat kasar  pada  daun  mangrove Canavalia  maritima dan Canavalia catharthica .  Hasil penelitian yang dilakukan Seena dan Sridhar (2005) menunjukkan bahwa  kedua  daun  tanaman  mangrove  tersebut mengandung kadar serat yang lebih rendah, yakni sebesar 2,23% dan 2,83%.
Karbohidrat  daun  api-api  dihitung  dengan metode by  different ,  artinya  kadar  karbohidrat didapatkan  dengan  mengurangi  total  bahan dengan persentase setiap kandungan bahan selain karbohidrat.  Hasil  perhitungan  menunjukkan bahwa  daun  api-api  mengandung  karbohidrat sebesar  23,00%.    Jumlah  ini  sangat  besar  jika dibandingkan dengan kadar karbohidrat yang ada pada daun tanaman air yang lain, misalnya selada
air.  Kandungan karbohidrat pada daun selada air sebesar  1,90%  (Permatasari  2011),  namun  jika dibandingkan dengan kadar karbohidrat pada daun tanaman  mangrove  lainnya,  kadar  karbohidrat daun  api-api  tidak  jauh  berbeda.  Tingginya karbohidrat terlihat dari tingginya nilai kadar serat yang terukur, kadar serat daun api-api lebih besar dibandingkan  kadar  serat  pada  daun  tanaman mangrove lainnya.  Hasil analisis struktur anatomi jaringan juga menunjukkan bahwa pada jaringan daun  banyak  terdapat  senyawa  yang  diduga merupakan  senyawa  polisakarida  yang  tampak berwarna merah saat diberi pewarna safranin.

## Ekstraksi Senyawa Aktif

## Ekstrak kasar
Hasil  ekstraksi  yang  diperoleh  memiliki karakteristik  yang  berbeda  sesuai  dengan  jenis pelarut  yang  digunakan.    Ekstrak  metanol berbentuk cairan berwarna hijau pekat, ekstrak etil asetat berbentuk pasta agak kental berwarna hijau kecoklatan, sedangkan ekstrak heksana berbentuk pasta  pekat  berwarna  kuning  tua.    Perbedaaan hasil  ekstraksi  tidak  hanya  dari  sisi  warna  dan bentuk,  namun  dari  segi  persentase  rendemen juga  terdapat  perbedaan.  Perbedaan  persentase rendemen  ekstrak  daun  api-api disajikan  pada Gambar 6.
Ekstraksi  dengan  metanol  menghasilkan rendemen  sebesar  9,61%,  ekstraksi  dengan  etil asetat sebesar 1,28% dan ekstraksi dengan heksan menghasilkan  rendemen  0,62%.  Kepolaran senyawa  aktif  dari  berbagai  bahan  berbeda-beda dan komponen aktif  hanya akan terekstrak oleh pelarut  yang  tingkat  kepolarannya  sama  dengan kepolaran  komponen  aktif  tersebut,  hal  ini diperkuat  oleh  hasil  penelitian  yang  dilakukan oleh  Salamah et  al. (2008),  bahwa  rendemen ekstrak  hasil  maserasi  dengan  pelarut  yang berbeda menghasilkan persentase rendemen yang berbeda pula.  Senyawa aktif yang terkandung di dalam daun   api-api secara umum bersifat polar. Persentase  rendemen  ekstrak  terbesar  adalah rendemen ekstrak metanol yang merupakan pelarut polar.    Metanol  yang  merupakan  pelarut  polar mampu  mengekstrak  banyak  sekali  komponen aktif suatu bahan, menurut Harborne (1987) pelarut
Tabel 4 Hasil uji aktivitas antioksidan
Jenis sampel Persamaan Regresi R 2 IC 50 (ppm) BHT y = 8,839x - 1,755 0,944 5,85 Ekstrak methanol y = 0,153x + 10,59 0,992 257,58 Ekstrak etil asetat y = 0,206x + 12,44 0,976 182,33 Ekstrak heksan y = 0,050x - 0,183 0,967 1003,66
yang bersifat polar mampu mengekstrak senyawa alkaloid kuartener, komponen fenolik, karotenoid, tannin, gula, asam amino dan glikosida.  Besarnya rendemen  ekstrak  metanol  diduga  dipengaruhi oleh  keberadaan  klorofil  yang  ikut  terekstrak, klorofil merupakan komponen yang keberadaanya cukup  besar  pada  daun,  sedangkan  metanol merupakan salah satu pelarut terbaik yang dapat mengekstrak  klorofil.    Wasmund et  al. (2006) menyatakan bahwa klorofil merupakan zat warna hijau yang banyak terdapat pada daun.   Klorofil dapat  diekstrak  dengan  pelarut  polar,  misalnya metanol, aseton, dan etanol.

## Aktivitas Antioksidan
Hasil  perhitungan  menunjukkan  larutan BHT  memiliki  IC 50 5,85  ppm,  IC 50 ekstrak metanol  sebesar  257,58  ppm,  ekstrak  etil  asetat sebesar  182,33  ppm  dan  ekstrak  heksan  sebesar 1003,66  ppm  (Tabel  4).    Molyneux  (2004) menyatakan  bahwa Inhibitor  Concentration 50 (IC 50 ) merupakan  parameter  kuantitatif  yang dipakai  untuk  menunjukkan  besarnya  aktivitas antioksidan suatu bahan. Inhibitor Concentration 50 didefinisikan sebagai konsentrasi substrat yang dapat  menyebabkan  hilangnya  50%  aktivitas DPPH.
Larutan  BHT  memiliki  nilai  IC 50 terkecil dibandingkan  ketiga  jenis  ekstrak  kasar  daun Api-api. Nilai IC 50 BHT sebesar 5,85 ppm, hal ini berarti  hanya  dibutuhkan  larutan  BHT  sebanyak 5,85 ppm untuk mereduksi 50% aktivitas radikal bebas (DPPH).  Nilai ini tidak jauh berbeda dengan hasil  penelitian  yang  dilakukan  oleh  Nurjanah et  al. (2011),  nilai  IC 50 BHT  yang  diuji  sebesar 4,91  ppm. Butylated  Hidroxy  Toluene (BHT) merupakan  antioksidan  sangat  kuat,  karena  nilai IC 50 kurang dari 50 ppm.
Penelitian yang dilakukan Herawati dan Akhlus (2006)  juga  memperkuat  pendapat  bahwa  BHT adalah senyawa antioksidan sintetik yang sangat kuat, karena BHT merupakan senyawa penangkap radikal  yang  lebih  efektif  dibandingkan  dengan antioksidan  yang  digunakan  dalam  penelitian tersebut,  karena  lebih  mampu  menghambat peningkatan  bilangan  peroksida  minyak  sawit lebih baik dibandingkan β-karoten dan β-tokoferol.
Besarnya  nilai  IC 50 yang  dimiliki  masing- masing  ekstrak  berbeda  antara  satu  sama  lain. Ekstrak kasar daun api-api yang diperoleh dengan pelarut etil asetat memiliki aktivitas penghambatan tertinggi dengan nilai IC 50 terendah di antara yang lain yaitu sebesar 182,33 ppm (Tabel 4)  Ekstrak kasar daun api-api yang diekstrak dengan metanol dan  heksana  berturut-turut  memiliki  nilai  IC 50 sebesar 257,58 ppm dan 1003,66 ppm.  Tingginya aktivitas  penghambatan  radikal  bebas  ekstrak etil  asetat  yang  ditandai  dengan  rendahnya  nilai IC 50 disebabkan  oleh  sifat  etil  asetat  yang  semi polar  sehingga  menyebabkan  etil  asetat  dapat mengekstrak  senyawa  antioksidan  yang  bersifat polar maupun senyawa antioksidan yang bersifat nonpolar,  sehingga  terdapat  beragam  jenis senyawa  antoksidan  yang  terekstrak  walaupun rendemen  ekstrak  yang  dihasilkan  etil  asetat lebih  kecil.    Tensiska et  al. (2007)  menyatakan bahwa  pelarut  etil  asetat  bersifat  semi  polar, sehingga  hasil  ekstraksi  mungkin  mengandung lebih  banyak  komponen  isoflavon  baik  nonpolar (aglikon) maupun polar (glikon).  Hasil penelitian yang  dilakukan  oleh  Tensiska et  al. (2007) menunjukkan  bahwa  dari  dua  parameter  yang digunakan  untuk  menguji  aktivitas  antioksidan ekstrak kasar isoflavon ampas tahu yaitu bilangan peroksida  dan  kadar  diene  terkonjugasi,  ekstrak etil asetat memberikan hasil terbaik dibandingkan dengan ekstrak etanol dan ekstrak heksan.
Tabel 5 Hasil uji fitokimia ekstrak daun Api-api terpilih
Uji Hasil uji Standar acuan (perubahan warna atau endapan) Alkaloid: Dragendorf - Endapan merah atau jingga Meyer - Endapan putih kekuningan Wegner - Endapan coklat Steroid + Perubahan dari merah menjadi biru/hijau Flavonoid + Lapisan amil alkohol berwarna merah/kuning/hijau Saponin - Terbentuk busa Fenol hidroquinon - Warna hijau atau hijau biru Molisch - Warna ungu antara 2 lapisan Benedict + Warna hijau/kuning/endapan merah bata Biuret - Warna ungu Ninhidrin - Warna biru
Ekstrak  kasar  metanol  memiliki  rendemen yang paling tinggi, namun hal ini tidak diimbangi dengan aktivitas antioksidannya.  Nilai IC 50 ekstrak metanol sebesar 257,58 ppm.  Nilai rendemen yang tinggi tersebut diduga disebabkan oleh komponen senyawa yang tidak memiliki aktivitas antioksidan yang  ikut  terekstrak  sehingga  hanya  menambah jumlah ekstrak tetapi tidak meningkatkan aktivitas antioksidannya. Nilai IC 50 ekstrak metanol masih jauh  lebih  baik  jika  dibandingkan  dengan  IC 50 ekstrak heksan yang hanya memiliki IC 50 sebesar 1003,66 ppm.
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  heksan  sangat kecil,  yang  kemungkinan  komponen  yang terekstrak  bukanlah  senyawa  antioksidan  yang kuat.  Penelitian  yang  dilakukan  Suratmo  (2009) pada  ekstrak  daun  sirih  dan  menunjujkkan hasil  bahwa  pada  fraksi  ekstrak  n-heksana  tidak menunjukkan  aktivitas  antioksidan,  dan  diduga hanya mengandung senyawa non-polar, misalnya minyak atsiri, lemak dan minyak
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  etil  asetat tergolong  antioksidan  lemah  karena  IC 50 ekstrak etil asetat sebesar 182,33 ppm masuk dalam kisaran kelompok  antioksidan  lemah  yaitu  150  ppm- 200 ppm.  Aktivitas antioksidan ekstrak metanol tergolong  antioksidan  sangat  lemah  karena  IC 50 ekstrak  methanol  257,58  ppm  lebih  besar  dari kisaran  kelompok  antioksidan  lemah  yaitu  lebih besar dari selang 150-200 ppm.  Ekstrak heksan juga  tergolong  ke  dalam  kelompok  antioksidan yang  sangat  lemah,  karena  nilai  IC 50 sebesar 1003,66  ppm  jauh  melebihi  kisaran  kelompok antioksidan lemah (150-200 ppm).  Blois (1958) menyatakan,  suatu  senyawa  dikatakan  sebagai antioksidan  sangat  kuat  apabila  nilai  IC 50 <  0,05 mg/L (50 ppm), kuat apabila nilai IC 50 antara 0,05- 0,10  mg/L  (50  ppm-100  ppm),  sedang  apabila nilai IC 50 berkisar 0,10-0,15 mg/L (100 ppm-150 ppm) dan lemah apabila nilai IC 50 berkisar antara 0,15mg/L-0,20 mg/L (150 ppm-200 ppm).

## Senyawa bioaktif ekstrak kasar daun api-api terpilih
Hasil uji fitokimia pada menunjukkan ekstrak kasar  daun  api-api  yang  telah  diekstrak  dengan etil  asetat  mengandung  3  dari  9  komponen
bioaktif yang diuji berupa flavonoid, steroid dan gula pereduksi (Tabel 5).  Senyawa bioaktif yang berpotensi  menjadi  senyawa  antioksidan  adalah flavonoid dan steroid.  Percival (1998) menyatakan bahwa flavonoid memiliki aktivitas antiinflamasi, antialergenik, antiviral, anti- aging , antikanker dan antioksidan.

## Aktivitas Antioksidan Ekstrak Terpilih
Hasil  uji  bilangan  peroksida  pada  emulsi minyak  kelapa  yang  ditambah  dengan  ekstrak kasar  daun  api-api  terpilih  (ekstrak  etil  asetat) menunjukkan  bahwa  ekstrak  dapat  menghambat proses oksidasi yang terjadi pada emulsi minyak kelapa.  Santoso et  al .  (2004)  menyatakan, penambahan  zat  antioksidan  dalam  emulsi minyak  akan  menghambat  pembentukan peroksida.    Emulsi  minyak  kelapa  (sampel  0 ppm)  memiliki  bilangan  peroksida  sebesar  2,72 Meq/ Kg. Emulsi yang ditambahkan ekstrak kasar daun  api-api  terpilih  pada  konsentrasi  50  ppm memiliki  bilangan  peroksida  sebesar  1,33  Meq/ Kg.  Emulsi yang ditambahkan ekstrak kasar pada konsentrasi 100 ppm memiliki bilangan peroksida sebesar 0,84 Meq/Kg. Emulsi yang ditambahkan ekstrak kasar pada konsentrasi 200 ppm memiliki bilangan  peroksida  sebesar  0,64  Meq/Kg  dan emulsi  yang  ditambahkan  ekstrak  kasar  pada konsentrasi 300 ppm memiliki bilangan peroksida sebesar 0,42 Meq/Kg (Gambar 7).  Semakin tinggi konsentrasi  ekstrak  yang  ditambahkan,  semakin
Gambar  2  Hubungan  bilangan  peroksida  pada  emulsi  minyak  kelapa  dengan konsentrasi ekstrak daun Api-api.
Keterangan:  Angka-angka  pada  histogram  yang  diikuti  dengan  huruf  berbeda  pada konsentrasi ekstrak yang digunakan menunjukkan beda nyata (p < 0,05).
Gambar 7 Hubungan bilangan peroksida pada emulsi minyak  kelapa  dengan  konsentrasi  ekstrak daun  Api-api.  Keterangan:  Angka-angka pada histogram yang diikuti huruf berbeda pada  konsentrasi  ekstrak  yang  digunakan menunjukkan beda nyata (p < 0,05).
rendah bilangan peroksida yang terbentuk, dan hal ini berarti semakin besar aktivitas antioksidannya. Rendahnya nilai bilangan peroksida yang terbentuk seiring  tingginya  konsentrasi  ekstrak  yang ditambahkan  karena  semakin  tinggi  konsentrasi yang ditambahkan menyebabkan semakin banyak senyawa antioksidan yang menghambat aktivitas agen oksidasi.
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa perbedaan  konsentrasi  ekstrak  etil  asetat  yang ditambahkan  ke  dalam  emulsi  minyak  kelapa memberikan  pengaruh  nyata  (α=0,05)  terhadap jumlah bilangan peroksida yang terbentuk dalam emulsi minyak. Uji Duncan menunjukkan bahwa konsentrasi sebesar  0 ppm berbeda nyata dengan semua  sampel  yang  ditambahkan  ekstrak  daun api-api.  Hasil ini sesuai dengan hasil penelitian Permatasari  (2011)  yang  menyatakan  bahwa konsentrasi 0 ppm ekstrak selada air berbeda nyata dengan  semua  semua  konsentrasi  ekstrak  selada air  yang  ditambahkan  ke  dalam  emulsi  minyak kelapa.  Emulsi minyak dengan konsentrasi ekstrak 300 ppm juga berbeda nyata dengan sampel yang lain.  Sampel emulsi dengan konsentrasi ekstrak 200 ppm tidak berbeda nyata dengan konsentrasi ekstrak  100  ppm  dan  300  ppm.  Hasil  tersebut menunjukkan  bahwa  penambahan  ekstrak  daun selada air sebesar  200 ppm tidak menghasilkan perbedaan yang signifikan dengan konsentrasi   100 ppm dan 300 ppm.  Konsentrasi ekstrak 300 ppm merupakan  konsentrasi  yang  memiliki  aktivitas penghambatan  terbaik  terhadap  pembentukan peroksida, karena mampu menghasilkan bilangan peroksida terkecil sebesar 0,42 Meq/Kg.

## KESIMPULAN
Daun api-api memiliki struktur jaringan yang hampir  sama  dengan  tanaman  dikotil  lainnya dengan  organ  tambahan  berupa  kelenjar  garam, selain itu daun api-api juga tinggi akan kandungan serat dan karbohidrat.  Komponen bioaktif yang terdeteksi  pada  daun  Api-api  adalah  flavonoid, steroid  dan  gula  pereduksi.    Daun  Api-api  juga terbukti  memiliki  aktivitas  antioksidan  dan mampu menghambat proses oksidasi pada emulsi minyak, namun masih tergolong lemah.

## DAFTAR PUSTAKA
[AOAC]  Association  of  Official  Analytical  Chemist.
2005. Official Method of Analysis of The Association of  Official Analytical  of  Chemist .   Arlington: The Association of Official Analytical Chemist, Inc.
Bandaranayake.    2002.    Bioactivities,  bioactive compounds and chemical constituents of mangrove plants. Wetlands  Ecology  Management 10:  421- 452. Blois MS. 1958. Antioxidant determinations by the use of stable free radical. Nature 181:1199-1200. Borkar  MU,  Athalye  RP,  Goldin  Q.  2011.    Salinity induced changes in the leaf anatomy of the mangrove Avicennia  marina along  the  anthropogenically stressed  tropical  creek. Journal  of  Coastal Development 14(3): 191-201. Bunyapraphatsara  N,  Srisukh  V,  Jutiviboonsuk  A,
Sornlek P, Thongbainoi W, Chuakut W, Fong HHS,
Pezzuto JM, Kosmeder J.  2002.  Vegetables from the mangrove areas. Thai Journal of Phytopharmacy 9(1): 1-12.
Escudero MR, Escudero SR, Remsberg CM, Takemoto JK, Davies NM, Yanez ZA.  2008.  Identification of  polyphenols  and  antioxidant  capacity  of  Piper aduncum  L. The  Open  Bioactive  Compounds Journal 1:18-21. Fauvel MT, Bousquet M, Moulis A, Gleye CJ, Jensen
SR.    1993.    Iridoid  glycosydes  from Avicennia germinans . Journal of Phytocemistry 23: 93-97. Fennema  OR.  1996. Food  Chemistry .  Ed  ke-3.  New York: Marcel Dekker, Inc.
Ghosal  S,  Tripathi  VK,  Chaeruham  S.  1996.   Active constituents  of  Emblica  officinalis.  part  I.  the chemistry  and  antioxidative  effects  of  two  new hydrolysable tannins, emblicanin A dan B. Indian Journal of Chemistry 35;941-948. Halliwell B.  2007.  Dietary polyphenols: good, bad or indifferent for your health. Journal Cardiovascular Research 73;341-347.
Hanani  E,  Mun’im A,  Sekarini  R.  2005.  Identifikasi senyawa antioksidan dalam spons Callyspongia sp. dari Kepulauan Seribu. Majalah Ilmu Kefarmasian 2(3):127-133. Harborne JB.  1987.  Metode Fitokimia Penuntun Cara Modern  Menganalisis  Tumbuhan.  Padmawinata K,  penerjemah.  Edisi  kedua.    Bandung: Institut  Teknologi  Bandung.  Terjemahan  dari: Phytochemical Methods.
Herawati,  Akhlus  S.    2006.    Kinerja  BHT  sebagai antioksidan  minyak  sawit  pada  perlindungan terhadap  oksidasi  oksigen  singlet. Akta  Kimindo 2(1): 1 – 8.
Krzynowek J, Murphy J.  1987.  Proximate Composition, Energy,  Fatty  Acid,  Sodium,  and  Cholesterol Content  of  Finfish,  Shellfish,  and  their  Products. NOAA Technical Report NMFS 55 .  United of State: Departement of Commerce.
Kubola J, Siriamornpun S.  2008.  Phenolic contents and antioxidant  activities  of  bitter  gourd  ( Momordica carantia L.) leaf, stem and fruit fraction extracts in vitro. Food Chemistry 110:881-890. Mahera  SA,  Ahmad  VU,  Saifullah  SM,  Mohammad FV, Ambreen K.  2011.  Steroids and treiterpenoids from grey mangrove Avicennia marina . Pakistan Journal of Botany 43(2): 1417-1422. Meenakshi  S,  Gnanambigai  DM.    2009.    Total flavonoid  and  in  vitro  antioxidant  activity  of  two seaweeds of Rameshwaram coast. Global Journal of Pharmacology 3(2):59-62. Metusalach.  2007.  Pengaruh fase bulan dan ukuran tubuh terhadap rendemen, kadar protein, air dan abu daging kepiting rajungan Portunus spp. Jurnal Ilmu Kelautan  dan  Perikanan  Universitas  Hasanuddin 17(3):233-239.
Miles  DH,  Kokpol  U,  Chittawong  V,  Tip-Pyang  S, Tunsuwan K, Nguyen C.  1999.  Mangrove forest: The importance of conservation as a bioresource for ecosystem diversity and utilization as a source of chemical constituents with potential medicinal and agricultural value. 1999 IUPAC 70(11): 1-9. Mohsen  SM,  Ammar  ASM.    2009.    Total  phenolic contents  and  antioxidant  activity  of  corn  tassel extracts. Journals Food Chemistry 112;595-598. Molyneux  P.  2004.  The  use  of  stable  free  radical diphenylpicrylhydrazyl  (DPPH)  for  estimating antioxidant  activity. Songklanakarin  Journal  of Science Technology 26(2):211-219. Nugroho  LH,  Purnomo,  Sumardi  I.    2006. Struktur dan  Perkembangan  Tumbuhan. Jakarta:  Penebar Swadaya.
Nurjanah, Abdullah A, Apriandi A.    2011.   Aktivitas antioksidan  dan  komponen  bioaktif  keong  ipong- ipong  ( Fasciolaria  salmo ). Jurnal  Pengolahan Hasil Perikanan Indonesia 14(1): 22-29. Percival M.   1998.  Antioxidants. Clinical Nutrition Insights 31(10):1-4. Permatasari  E.  2011.    Aktivitas  Antioksidan  dan Komponen  Bioaktif  pada  Selada  air  ( Nasturtium officinale L.  R.  Br).  [Skripsi].    Bogor:  Program Studi Teknologi Hasil Perairan, Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Institut Pertanian Bogor. Prasad NP, Yang B, Dong X, Jiang G, Zhang H, Xie H, Jiang Y.  2009.  Flavonoid contents and antioxidant activities from Cinnamomum sp . Journal Innovative Food science and emerging technologies 10: 627-632. Saha MR, Hasan SMR, Akter R, Hossain MM, Alam MS, Alam MA,  Mazumder MEH.   2008.  In  vitro free radical scavenging activity of methanol extract of the leaves of Mimusops elengi linn. Bangladesh Journal of Veteriner Medicine 6(2):197-200 Salamah  E,  Ayuningrat  E,  Purwaningsih  S.    2008. Penapisan  awal  komponen  bioaktif  dari  kijing Taiwan ( Anadonta woodiana Lea .) sebagai senyawa antioksidan. Buletin  Teknologi  Hasil  Perikanan
11(2): 119-132. Santoso  J,  Yoshie  Y,  Suzuki  T.  2004.  Antioxidant activity  of  methanol  extract  from  Indonesian seaweeds in an oil emulsion model. Journal of Fish Science 70:183-188. Seena  S,  Sridhar  KR.  2005.  Physicochemical, functional and cooking properties of under explored legumes, Canavalia of the southwest coast of India. Food Research International 38: 803-804. Steinberg D. 2009. The ldl modification hypothesis of atherogenesis. Journal of Lipid Research 50:376-381. Subashree M, Mala P, Umamaheswari m, Jayakumari M, Maheswari K, Sevanti T, Manikandan T. 2010. Screening  of  antibacterial  properties  of Avicennia marina  from  Pichavaram  mangrove. International Journal of Current Research 1:016-019. Suratmo. 2009. Potensi ekstrak daun sirih merah ( Piper crocatum )  sebagai  antioksidan. Jurnal  penelitian 205(1):1-5. Tariq M, dawar S, Fatima S, Mehdi , Zaki J . 2007.  Use of Avicennia marina (Forsk.) Vierh in the control of root knot nematode Meloidogyne javanica (Treub) chitwood on okra and mash bean. Turkish Journal of Biology 31:225-230.
Tensiska, Marsetio, Yudiastuti SON.  2007.  Pengaruh jenis pelarut terhadap aktivitas antioksidan ekstrak kasar isoflavon dari ampas tahu. [Hasil penelitian]. Bandung:  Jurusan  Teknologi  Industri  Pangan, Universitas Padjajaran.
Theroux P, Libby P. 2005. Pathophysiology of coronary artery disease. Circulation 111: 3481-3488 Thompson  D,  Moldeus  P.  1988.  Cytotoxicity of  butylated  hydroxyanisole  and  butylated hydroxytoluene  in  isolated  rat  hepatocytes. Biochemical Pharmacology 37: 2201-2207 . Tjitrosoepomo  G.    2007. Morfologi  Tumbuhan . Yoyakarta: Gadjah Mada University Press.
Wasmund  N,  Topp  I,  Schories  D.  2006.    Optimising the storage and extraction of chlorophyll samples. Oceanologia 48 (1): 125–144.
Wibowo  C,  Kusmana  C,  Suryani  A,  Hartati  Y, Oktadiyani P. 2009.  Pemanfaatan pohon mangrove api-api (Avicennia spp.) sebagai bahan pangan dan obat.    Di  dalam: Prosiding  Seminar  Hasil-Hasil Penelitian IPB 2009 Buku 1: Bidang pangan dan energi. Bogor: LPPM-IPB.
Wichi  HP.    1988.  Enhanced  tumour  development by  butylated  hydroxytoluene  (BHT)  from  the properties of effect on fure stomach and esophageal aquamoua epithelium. Food Chemical toxicology 26:727-723.
Zandi  K,  Taherzadeh  M,  Yaghoubi  R,  Tajbakhsh S,  Rastian  Z,  Fouladvand  M,  Sartavi  K.    2009. Antiviral  activity  of Avicennia  marina against herpes simplex virus type 1 and vaccine strain of poliovirus (an in vitro study). Journal of Medicinal Plants Research 3(10):771-775.