JBE 6 (3) (2021) 244-250

## BIO-EDU: Jurnal Pendidikan Biologi
https://jurnal.unimor.ac.id/JBE/index

## UJI TOKSISITAS IN VITRO METODE BSLT DAN TOKSISITAS AKUT ORAL EKSTRAK ETANOL KULIT BATANG PAKOBA (Syzygium luzonense (Merr.) Merr.)
Mario Walean 1 , Rostina Melpin 1 , Mervina Rondonuwu 1 Dan Kinzie Feliciano Pinontoan 1
1 Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Prisma. Jl. Tikala Baru, Manado, Sulawesi Utara, Indonesia
Email: mario.walean@gmail.com
DOI: https://doi.org/10.32938/jbe.v6i3.1249

## Abstrak
Pakoba merupakan tanaman endemik Sulawesi Utara yang dimanfaat secara etnomedikal untuk mengobati pengobatan  diabetes,  ramuan  obat  setelah  melahirkan,  obat  sakit  ginjal  dan  sakit  perut.  Tujuan  dari penelitian ini untuk mengetahui tingkat toksisitas akut oral menggunakan tikus putih dan toksisitas secara in vitro metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) ekstrak etanol kulit batang pakoba (EEKBP). Hasil dari pengujian toksisitas metode BLST, EEKBP memiliki nilai LC50 = 380.19 ppm dan hasil uji toksisitas akut  EEKBP  dengan  dosis  1.000,  5.000,  10.000, dan  15.000  ppm  tidak  menimbulkan  gejala  toksik  dan kematian  pada  hewan  uji.  Perlu  ada  penelitian  lanjut  mengenai  Fraksinasi  EEKBP  dilanjutkan  dengan pengujian toksisitas metode BSLT dan aktivitas biologis dari masing-masing hasil fraksinasi.
Kata Kunci: BSLT; Pakoba; Syzygium luzonense ; Toksisitas Akut Oral.

## Abstract
Pakoba  is  an  endemic  plant  of  North  Sulawesi  that  is  used  ethnomedical  to  treat  diabetes  treatment, medicinal herbs after childbirth, medicine for kidney problems, and stomach aches. The purpose of this study was to determine the level of acute oral toxicity using white rats and the in vitro toxicity of the Brine Shrimp Lethality Test  (BSLT) method of pakoba stem bark ethanol extract (PSBEE). The results of the toxicity test of the BLST method, PSBEE had a value of LC50 = 380.19 ppm and the results of the acute toxicity test of EEKBP with doses of 1.000, 5.000, 10.000, and 15.000 ppm did not cause toxic symptoms and death in the test animals. There needs to be further research on PSBEE fractionation followed by testing the toxicity of the BSLT method and the biological activity of each fractionation.
Keywords: BSLT; Pakoba; Syzygium luzonense ; Acute Oral Toxicity

## PENDAHULUAN
Etnomedikal merupakan kearifan lokal masyarakat Indonesia dalam memanfaatkan tanaman obat untuk mengobati berbagai macam penyakit yang diturunkan terus menerus dari  generasi  ke  generasi.  Salah  satunya  adalah  pakoba  ( Syzygium  luzonense (Merr.) Merr.).  Secara  etnomedikal  bagian  kulit  batang  pakoba  dimanfaatkan  sebagian masyarakat  Minahasa,  Sulawesi  Utara  untuk  pengobatan  diabetes,  ramuan  obat  setelah melahirkan, obat sakit ginjal dan sakit perut.
Penelitian  sebelumnya  melaporkan  pemberian ekstrak etanol  kulit  batang  pakoba dapat memperbaiki pankreas tikus hiperglikemia yang diinduksi aloksan  (Walean dkk .,
2020a).    Pemberian  ekstrak  etanol  kulit  batang  pakoba  pada  tikus  urolithiasis,  dapat memperbaiki  kerusakan  sel  glomerulus  akibat  pemberian  etilen  glikol  (Walean dkk., 2018) .  Analisis  fitokimia  awal  menunjukan  bahwa  ekstrak  etanol  kulit  batang  pakoba memiliki kandungan tanin, alkaloid dan saponin (Kinho dkk. , 2011).
Penelitian-penelitian  tentang  pakoba  membuktikan  bahwa  kulit  batang  pakoba memiliki  potensi  sebagai  sumber  baru  bahan  baku  obat.  Sebelum  dijadikan  sebagai sumber bahan baku obat, perlu ada kajian tentang keamanan ekstrak kulit batang pakoba terlebih dahulu melalui pengujian toksisitas. Uji toksisitas adalah uji untuk mendeteksi tingkat  ketoksikan  suatu  zat/bahan  yang  akan  digunakan  sebagai  obat.  Hasil  yang diperoleh  memberikan  informasi  tentang  tingkat  keamanan  suatu  zat/bahan  sebelum zat/bahan tersebut digunakan (Meles, 2010).
Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  merupakan  uji  toksisitas  secara  in  vitro menggunakan  larva  udang Artemia salina Leach  untuk  mengetahui  nilai lethal concentration 50 (LC50) yang merupakan suatu perhitungan untuk menentukan keaktifan dari suatu ekstrak atau senyawa (Lestari dkk., 2019)
Penentuan  Nilai  LD50  dilakukan  pada  hewan  uji,  tujuannya  menentukan  tingkat ketoksikan suatu zat/bahan terhadap perubahan fungsi fisiologis maupun perubahan yang bersifat patologis pada organ vital dalam kurun waktu tertentu. Penentuan LD50 disebut juga  uji  toksisitas  akut.  Toksisitas  akut  mengkaji  tentang  efek  berbahaya  pada  suatu organisme melalui paparan jangka pendek  (Kuswara dkk. , 2015). Tujuan dilakukan uji toksisitas  akut  adalah  menentukan  bahaya  pemaparan  suatu  bahan  secara  akut  dan menentukan  batas  keamanan  ( margin  of safety )  suatu  bahan  dengan menentukan dosis yang menyebabkan kematian 50% hewan uji ( lethal dose 50% = LD50) (Meles, 2010) Sampai  saat  ini  masih  belum  ada  kajian  tentang  tingkat  toksisitas  kulit  batang pakoba.  Berdasarkan  uraian  tersebut,  maka  dilakukan  penelitian  untuk  mengetahui tingkat toksisitas ekstrak etanol kulit batang pakoba endemik Sulawesi Utara.

## METODE Alat dan Bahan
Alat  yang  d igunakan  yaitu  timbangan  analitik,  kertas  saring,  sonde  lambung, erlenmeyer , gelas  beaker,  gelas  ukur,  botol  vial  5  mL,  rotari  evaporator,  mikropipet, syringe 3mL, kandang tikus Bahan yang d igunakan yaitu kulit batang pakoba, aquades, etanol, NaCl,  tikus putih jantan dan betina ( Rattus norvegicus ), larva Artemia salina.

## Pembuatan Ekstrak
Kulit batang pakoba dibersihkan lalu dikering anginkan, kemudian blender sampai halus supaya proses maserasi lebih efektif. Ekstraksi dilakukan dengan metode maserasi, dimasukan sebanyak 400 gr simplisia kulit batang pakoba direndam dengan pelarut etanol 70%  sebanyak  2  Liter  dengan  perbandingan  1:5  kemudian  ditutup  rapat  dan  dibiarkan selama  3x24  jam,  kemudian  disaring.  Hasil  saringan  di  rotavapor  sehingga  diperoleh ekstrak etanol kulit batang pakoba (EEKBP)

## Uji Toksisitas In Vitro Metode BSLT
Larva udang didapat dengan menetaskan telur A. salina yang diinkubasi dalam air laut  selama  48  jam.  Sebanyak  10  larva  dimasukkan  ke  dalam  vial  5  mL  kemudian ditambahkan ekstrak yang dilarutkan dalam air laut dengan konsentrasi 25, 50, 100, 250, 500, 800 dan 1000 ppm, diinkubasi 24 jam, di bawah cahaya lampu neon 18 watt. Sebagai kontrol, digunakan 10 ekor larva A. salina Leach tanpa diberi ekstrak  (Dewijanti dkk .,
2014). Nilai LC50 adalah konsentrasi senyawa atau ekstrak yang dapat mematikan larva udang A.  salina hingga  50%  dibandingkan  terhadap  kontrol.  Pengamatan  dilakukan setelah  24  jam.  Jumlah  larva  udang  yang  mati  dicatat  kemudian  dihitung  persentase kematiannya.  Data  yang  diperoleh  diolah  dengan  menggunakan analisis  probit  (Kaban dkk ., 2016)

## Penentuan LD50 toksisitas akut oral
Dosis letal 50% merupakan nilai kumulatif dari hasil uji toksisitas akut oral yang dilakukan  dengan  metode  resmi  yang  ditetapkan  oleh  Pusat  Pengawasan  Obat  dan Makanan  Departemen  Kesehatan  RI  (BPOM,  2014).  Tikus  Putih  jantan  dan  betina masing-masing  50  ekor  dengan  berat  120  gr,  dibagi  secara  acak  menjadi  1  kelompok kontrol dan 4 kelompok perlakuan, masing-masing kelompok terdiri dari 5 ekor, diberi perlakuan dosis 1.000; 5.000, 10.000 dan 15.000 mg/kg BB ekstrak etanol kulit batang pakoba.  Sediaan  uji  dapat  diberikan  beberapa  kali  dalam  jangka  waktu  pemberian  zat tidak boleh melampaui 24 jam (BPOM, 2014). Semua diberikan dengan volume 2 mL per rata rata bobot badan secara oral menggunakan sonde lambung. Pakan diberikan 3 jam setelah pemberian perlakuan
Pengamatan  dilakukan  tiap  hari  selama  sekurang-kurangnya  14  hari.  Selama pengujian, diamati perilaku dari hewan uji. Perhatian khusus diberikan terhadap gejala toksik  yang  muncul  seperti adanya tremor,  kejang,  salivasi,  diare,  letargi,  lemah,  tidur dan koma. Pengamatan juga meliputi waktu timbul dan hilangnya gejala toksik serta saat terjadinya  kematian.  Hewan  uji  yang  sekarat  dikorbankan  dan  dimasukkan  dalam perhitungan sebagai hewan yang mati.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  ekstraksi  diperoleh  EEKBP  sebanyak  24,5  gr  yang  berwarna  merah  darah dengan  aroma  khas  kulit  batang  pakoba.  Penggunaan  pelarut  etanol  70%  dalam pengumpulan ekstrak  agar  semua  senyawa  kimia  dari  yang  kurang  polar  sampai  polar dalam sampel dapat terambil semaksimal mungkin, selain itu pelarut etanol relatif lebih aman dan biasa untuk sediaan fitofarmaka (Dewijanti dkk., 2014) BSLT adalah metode skrining farmakologi awal yang relatif murah dan telah teruji hasilnya dengan tingkat kepercayaan 95%. Penggunaan larva udang ( A. salina Leach.) dalam bioassay toksisitas ekstrak kasar tanaman memenuhi validitas karena individu yang digunakan  memenuhi  syarat  untuk  analisis  statistik.  BSLT  telah  digunakan  sebagai bioassay pendahuluan dalam rangka menilai toksisitas ekstrak fungi, tumbuhan,  logam berat, substansi toksin dari sianobakteri dan pestisida (Carballo dkk. , 2002). Sekitar 300 bioaktif baru dari tumbuhan awalnya diskrining dengan metode BSLT (Mclaughlin dkk. , 1998).
Larva udang memiliki kulit yang tipis dan peka terhadap lingkungannya. Zat atau senyawa  asing  yang  ada  di  lingkungannya  akan  terserap  ke  dalam  tubuh  dengan  cara difusi dan langsung mempengaruhi kehidupan larva. Larva udang yang sensitif ini akan mati apabila zat atau senyawa asing dalam larutan bersifat toksik.
Metode uji toksisitas metode BSLT menggunakan A. Salina , juga merupakan uji pendahuluan untuk mengetahui adanya bioaktivitas dari suatu sampel. Menurut Veni dan Pushpanathan  (2014)  Uji  BSLT  dapat  digunakan  untuk  menentukan  berbagai  aktivitas biologis pada ekstrak tanaman seperti aktivitas sitotoksik, fototoksik, pestisida, inhibisi enzim, dan regulasi ion. Selain itu uji BSLT juga dapat digunakan sebagai dasar untuk uji toksisitas terhadap sel line, aktivitas antitumor dan antikanker (Janakiraman dan Johnson,
2016).  Keuntungan  dari  uji  ini  yaitu  cepat,  mudah,  hasilnya  dapat  diulang,  serta  tidak membutuhkan biaya yang mahal (Hamidi dkk. , 2014)
Hasil  uji  toksisitas  metode  BSLT  dinyatakan  dengan Lethal  Concentration 50 (LC50), yakni konsentrasi optimum ekstrak yang mampu membunuh 50% populasi larva A.  salina .  Nilai  LC50  yang  semakin  rendah  menunjukkan  efek  sitotoksisitas  yang semakin  tinggi.  Suatu  senyawa  dapat  dikatakan  memiliki  bioaktivitas  jika  nilai  LC50 <1000 µg/mL karena memiliki sifat toksik pada rentang nilai tersebut (Meyer dkk ., 1982). Pengujian hasil BSLT menunjukkan bahwa EEKBP  memiliki toksisitas LC50 = 380.19 ppm.  Berdasarkan  hasil  pengujian  EEKBP  memiliki  potensi  bioaktivitas  karena menunjukkan  nilai  LC50  yang  sesuai  dengan  pernyataan  Meyer dkk .,  (1982).  Potensi bioaktivitas  EEKBP  tidak  lepas  dari  kandungan  fitokimia  yang  ada  didalamnya.  Hasil skrining  fitokimia  secara  kualitatif  EEKBP  yang  dilakukan  oleh  Walean dkk .,  (2020) melaporkan EEKBP mengandung alkaloid, flavonoid dan tanin yang cukup banyak.
Data yang diperoleh merupakan data pertama yang melaporkan tentang toksisitas EEKBP menggunakan metode BSLT. Namun beberapa penelitian yang telah melaporkan beberapa  bioaktivitas    dari  EEKBP    yaitu  sebagai  antihiperglikemia  dan  antioksidan (Walean dkk ., 2020b). Haryati dkk ., (2015) melaporkan hasil uji toksisitas metode BSLT fraksinasi ekstrak dan daun merah tanaman pucuk merah ( Syzygium myrtifolium Walp.) terdapat  pada  fraksi  etil  asetat  dengan  nilai  LC50  sebesar  149,86  ppm  dan  memiliki kemampuan  sebagai  antibakteri  terhadap Escherichia  coli karena  senyawa  golongan alkaloid, triterpenoid, steroid, fenolik dan flavonoid dalam ekstrak ini.
Uji  toksisitas  metode  BSLT menggunakan A.  salina merupakan  uji  pendahuluan untuk mengetahui adanya bioaktivitas dari suatu sampel. Terdapat beberapa faktor yang mempengaruhi nilai LC50 ekstrak tanaman. Sari dkk ., (2013) melaporkan bahwa bagian tanaman yang berbeda mengandung senyawa fitokimia yang berbeda serta menghasilkan nilai  LC50  yang  berbeda  pula.  Kandungan  metabolit  sekunder  dapat  mempengaruhi aktivitas  farmakologis  dari  tanaman  tersebut  (Saxena dkk .,  2013).  Selain  itu,  faktor ekstraksi  dan  pelarut  yang  berbeda  juga  mempengaruhi  komponen  aktif  yang  tertarik sehingga dapat menyebabkan bioaktivitas yang berbeda pula (Azmir dkk ., 2013).
Hewan  uji  yang  umum  digunakan  untuk  uji  toksisitas  akut  adalah  tikus  putih mengikuti  pedoman  yang  ditetapkan  oleh  BPOM  (2014).  Prinsip  toksisitas  akut  yaitu pemberian  secara  oral  suatu  zat  dalam  beberapa  tingkatan  dosis  kepada  beberapa kelompok hewan uji. Penilaian toksisitas akut ditentukan dari kematian hewan uji sebagai parameter akhir.
Hasil  pengamatan  pada  masing-masing  perlakuan  sampai  pada  hari  ke  14 Pemberian EEKBP dosis 1.000, 5.000, 10.000, dan 15.000 mg/KgBB, tidak menimbulkan kematian pada hewan uji dan tidak menimbulkan efek toksik yaitu adanya tremor, kejang, salivasi,  diare,  letargi,  jalan  dengan  perut,  lemah,  tidur  dan  koma  pada  hewan  uji  di masing-masing perlakuan.
Hasil  toksisitas  akut  dievaluasi  berdasarkan  kriteria  bahaya  untuk  obat,  obat tradisional  bahan  lainnya  ( Generally  Recognized  As  Safe/GRAS )  seperti  bahan  pangan (BPOM 2014). Data yang  diperoleh EEKBP memiliki LD50 lebih dari 15 gr/kgBB dan termasuk pada golongan relatif tidak membahayakan.
Data yang diperoleh merupakan data pertama yang melaporkan tentang toksisitas akut oral EEKBP. Kajian toksisitas akut oral genus Syzygium sudah banyak dilakukan. Kuswara dkk .,  (2015)  melaporkan  infusa  daun Syzygium  polyanthum (Wight)  Walp.) dosis  toksik  tidak  menimbulkan  kerusakan  hepar.  Loha dkk .,  (2019)  melaporkan  uji toksisitas akut dan subakut ekstrak metanol daun Syzygium guineense tidak menimbulkan
gejala tanda-tanda keracunan dan kerusakan pada hati dan ginjal tikus putih. Hal sama dilaporkan  oleh  Okwuofu dkk .,  (2017)  bahwa  ekstrak  metanol  kulit  batang Syzygium guineense tidak menimbulkan kerusakan pada organ tikus putih. Evaluasi uji toksisitas akut  dan  toksisitas  kronis  daun Syzygium  cumini yang  diberikan  secara  oral  tidak menimbulkan gejala toksik pada hewan uji (Silva dkk. , 2012).
Pada  penelitian  ini  EEKBP  memiliki  potensi  bioaktivitas  dan  tergolong  tidak toksik, hal ini dapat menjadi dasar untuk pengembangan pakoba sebagai sumber baru obat herbal. Walaupun demikian penelitian lebih lanjut perlu untuk dilakukan yaitu fraksinasi EEKBP,  dilanjutkan  dengan    pengujian  toksisitas  dan  aktivitas  biologis  dari  masing- masing hasil fraksinasi.

## KESIMPULAN DAN SARAN

## Kesimpulan
Hasil uji toksisitas metode BLST, ekstrak etanol kulit batang pakoba memiliki nilai LC50 = 380.19 ppm dan hasil uji toksisitas akut ekstrak etanol kulit batang pakoba dengan dosis  1.000,  5.000,  10.000,  dan  15.000  ppm  tidak  menimbulkan  gejala  toksik  dan kematian pada hewan uji.

## Saran
Fraksinasi  EEKBP  perlu  dilakukan  dan  dilanjutkan  dengan    pengujian  toksisitas metode BSLT dan aktivitas biologis dari masing-masing hasil fraksinasi.

## DAFTAR RUJUKAN
Azmir,  J.,  Zaidul,  I.S.M.,  Rahman,  M.M.,  Sharif,  K.M.,  Mohamed,  A.,  Sahena,  F., Jahurul,  M.H.A.,  Ghafoor,  K.,  Norulaini,  N.A.N.  and  Omar,  A.K.M.,  2013. Techniques for extraction of bioactive compounds from plant materials: A review. Journal  of  Food  Engineering ,  [online]  117(4),  pp.426–436.  Available  at: <http://dx.doi.org/10.1016/j.jfoodeng.2013.01.014>.
Carballo,  J.L.,  Hernández-Inda,  Z.L.,  Pérez,  P.  and  García-Grávalos,  M.D.,  2002.  A comparison  between  two  brine  shrimp  assays  to  detect  in  vitro  cytotoxicity  in marine natural products. BMC Biotechnology , 2, pp.1–5.
Dewijanti, I.D., Angelina, M., Hartati, S., Dewi, B.E. and Meilawati, L., 2014. Nilai LD 50 dan LC 50 Ekstrak Etanol Herba Ketumpangan Air (Peperomia pellucida (L .) Kunth). Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia , 12(2), pp.255–260.
Hamidi, R.M., Jovanova, B. and Kadifkova Panovska, T., 2014. Toxicological evaluation of the plant products using Brine Shrimp (Artemia salina L.) model. Macedonian Pharmaceutical Bulletin , 60(01), pp.9–18.
Haryati, N., Saleh, C. and Erwin, 2015. Uji Toksisitas Dan Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun  Merah  Tanaman  Pucuk  Merah  (Syzygium  Myrtifolium  Walp.)  Terhadap Bakteri Staphylococcus Aureus Dan Escherichia Coli. Jurnal Kimia Mulawarman , 13(1), pp.35–40.
Janakiraman, N. and Johnson, M., 2016. Ethanol Extracts of Selected Cyathea Species
Decreased Cell Viability and Inhibited Growth in MCF 7 Cell Line Cultures. JAMS Journal of Acupuncture and Meridian Studies , [online] 9(3), pp.151–155. Available at: <http://dx.doi.org/10.1016/j.jams.2016.04.004>.
Kaban,  A.N.,  Daniel  and  Saleh,  C.,  2016.  Uji  Fitokimia,  Toksisitas  dan  Ativitas Antioksidan  Fraksi  n-heksan  dan  Etil  Asetat  Terhadap  Ekstrak  Jahe  Merah (Zingiber officinale var. amarum.). Jurnal Kimia Mulawarman , 14, pp.24–28.
Kinho, J., Arini, D.I.D., Halawane, J., Nurani, L., Halidah, Kafiar, Y. and Karundeng, M.C.,  2011. Tumbuhan  obat  tradisional  di  Sulawesi  Utara .  Balai  Penelitian Kehutanan Manado.
Kuswara,  R.,  Trianto,  F.H.  and  Pratiwi,  E.S.,  2015. Uji  Toksisitas  Akut  Infusa  Daun Salam (Syzygium polyanthum (Wight) Walp.) Terhadap Gambaran Histopatologi Hepar Tikus Galur Wistar . Universitas Tanjungpura . Universitas Tanjungpura.
Lestari, D., Kartika, R. and Marliana, E., 2019. Uji Brine Shrimp Lethality Test ( BSLT ) Umbi Bawang Tiwai ( Eleutherine bulbosa ( Mill .) Urb ) dan Uji Toksisitas Akut Fraksi Aktif. Jurnal Riset Kefarmasian Indonesia , 1(1), pp.1–10.
Loha, M., Mulu, A., Abay, S.M., Ergete, W. and Geleta, B., 2019. Acute and Subacute Toxicity of Methanol Extract of Syzygium guineense Leaves on the  Histology of the Liver and Kidney and Biochemical Compositions of Blood in Rats. Evidence- based Complementary and Alternative Medicine , 2019(March), pp.2017–2027.
Mclaughlin, J.L., Rogers, L.L. and Anderson, J.E., 1998. The use of biological assays to evaluate botanicals. Therapeutic Innovation & Regulatory Science , 32(2), pp.513– 524.
Meles, D.K., 2010. Perab Uji Praklinik Dalam Bidang Farmakologi . Pidato Pengukuhan Jabatan  Guru  Besar  dalam  Bidang Farmakologi  dan  Toksikologi  pada  Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga di . Universitas Airlangga.
Meyer,  B.N.,  Ferrigni,  N.R.,  Putnam,  J.E.,  Jacobsen,  L.B.,  Nichols,  D.E.  and McLaughlin,  J.L.,  1982.  Brine  shrimp:  A  convenient  general  bioassay  for  active plant constituents. Planta Medica , 45(1), pp.31–34.
Okwuofu, E.O., Ozolua, R.I., Yibala, O.I. and Akhigbemen, A.M., 2017. Evaluation of acute and sub-acute safety profile of Syzygium guineense ( Wild ) DC methanol stem  bark  extract  in  rodents  Evaluation  of  acute  and  sub-acute  safety  profile  of Syzygium  guineense  (  Wild  )  DC  methanol  stem  bark  extract  in  rodents. The Pharma Innovation Journal , 6(January), pp.174–179.
Sari, R.K., Melianti, D., Syafii, W. and Agungpriyono, D.R., 2013. Aktivitas Antioksidan dan Toksisitas Akut Zat Ekstraktif dari Residu Penyulingan Surian (Toona sinensis Roemor). Jurnal Ilmu dan Teknologi Kayu Tropis , 11(2), pp.192–201.
Saxena,  M.,  Saxena,  J.,  Nema,  R.,  Singh,  D.  and  Gupta,  A.,  2013.  Phytochemistry  of medicinal plants. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry , 1(6), pp.13–14.
Silva,  S.  do  N.,  Abreu,    iracelle  C.,  Silva,  C.F.G.,  Ribeiro,  M.R.,  Lopes,  A.  de  S., Cartagenes,  M.  do  S.,  Freire,  S.M.  de  F.,  Borges,  R.C.  and  Borges,  M.O.  de  R., 2012.  The  toxicity  evaluation  of  Syzygium  cumini  leaves  in  rodents. Brazilian Journal  of  Pharmacognosy ,  [online]  22(1),  pp.102–108.  Available  at:  <chrome- extension://dagcmkpagjlhakfdhnbomgmjdpkdklff/enhanced-
reader.html?openApp&pdf=http%3A%2F%2Fwww.scielo.br%2Fpdf%2Frbfar%2 Fv22n1%2Faop15911.pdf> [Accessed 30 Nov. 2020].
Veni,  T.  and  Pushpanathan,  T.,  2014.  Comparison  of  the  Artemia  salina  and  Artemia fransiscana  bioassays  for  toxicity  of  Indian  medicinal  plants. Journal  of  Coastal Life Medicine , 2(6), pp.453–457.
Walean,  M.,  Melpin,  R.,  Rondonuwu,  M.  and  Pinontoan,  K.F.,  2020a.  Perbaikan Histopatologi  Pankreas  Tikus  Hiperglikemia  setelah  Pemberian  Ekstrak  Etanol Kulit  Batang  Pakoba  (  Syzygium  luzonense  (  Merr  .)  Merr  .). Biosfera ,  37(1), pp.43–48.
Walean,  M.,  Melpin,  R.,  Rondonuwu,  M.  and  Pinontoan,  K.F.,  2020b.  Phytochemical screening  and  biological  activities  of  pakoba  (  Syzygium  luzonense  )  stem  bark ethanol extract. Biodiversitas , 21(6), pp.2377–2382.
Walean, M., Rumondor, R., Maliangkay, H.P. and Melpin, R., 2018. Pengaruh Pemberian Ekstrak  Etanol  Kulit  Batang  Pakoba  (  Syzygium  sp  )  Terhadap  Gambaran Histopatologi  Ginjal  Tikus  Putih  yang  Diinduksi  Etilen  Glikol. Chemistry Progress , 11(1), pp.29–34.