Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis
p-ISSN         : 2087-9423
e-ISSN         : 2620-309X DOI: http://dx.doi.org/10.29244/jitkt.v11i1.22299
PROTEIN HISTON PADA SIPUT GONGGONG BINTAN Strombus sp.

## SEBAGAI KANDIDAT PANGAN FUNGSIONAL
HISTONE PROTEIN OF BINTAN GONGGONG SNAIL Strombus sp.

## AS FUNCTIONAL FOOD CANDIDATE
Lily Viruly 1,2 , Nuri Andarwulan 2,3* , Maggy T. Suhartono 3 , dan Mala Nurilmala 4 1 Jurusan Teknologi Hasil Perikanan-FIKP, Universitas Maritim Raja Ali Haji
2 Department Ilmu dan Teknologi Pangan, FATETA, IPB, Bogor
3 Southeast Asian Food and Agricultural Science and Technology (SEAFAST), IPB, Bogor
4 Department Teknologi Hasil Perikanan, FPIK, IPB, Bogor
* E-mail: andarwulan@apps.ipb.ac.id

## ABSTRACT
Gonggong  is  one  of  the  sea  snails,  endemic  species  living  on  coastal  waters  of  Bintan  Island  and surrounding islands of the Riau Islands Province. Sea snail gonggong is an icon of Tanjungpinang- Riau Islands Province. Until now, research this snail is the least, whereas it is potential species. The purpose of this study was to characterize histone protein from Bintan gonggong snail Strombus sp . as functional  food  candidate.  Protein  profiling  used  SDS-PAGE.  Protein  contents  were  analyzed  by Bradford method. Boiled thick shelled gonggong were extracted by maseration method using ethanol PA 95% and antimicrobial activity tes using well method. Amino acid analized with HPLC. The result of  characterization  on  protein  profiles  in  meat  gonggong  showed  that  the  thin-shelled  and  thick- shelled gonggong had the same band as protein profiles by 11-37 kDa and protein profiles in mucus gonggong  were  found  the  same  band  as  protein  profiles  of  37  kDa.  The  type  of  protein  in  spesies Bintan  gonggong  had  been  predicted  a  histone  protein  because  DNA  identification  using  primer protein histone H2A and H2B had gen target of 75 bp. Antimicrobial activity test on S. aureus and E. coli  bacteria  had  value  DDH  of  25.65±0.02  mm  and  14.45±0.13 mm .  In  fact,  gonggong  snail  was potentially as antimicrobial peptide, so it will make local functional food candidate from Riau Islands Province.
Keywords: gonggong snail, protein profiles, histone protein, antimicrobial activity

## ABSTRAK
Gonggong termasuk sejenis siput laut, biota endemik yang banyak hidup di pantai Pulau Bintan dan sekitarnya  di  Provinsi  Kepulauan  Riau.  Gonggong  merupakan  ikon  kota  Tanjungpinang,  Provinsi Kepulauan  Riau.  Sampai  saat  ini,  penelitian  gonggong  masih  sangat  sedikit  padahal  siput  ini merupakan spesies yang sangat potensial. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengkarakterisasi protein histon dari siput gonggong Strombus sp. asal Bintan sebagai kandidat pangan fungsional. Karakterisasi profil  protein  menggunakan  SDS-PAGE.  Kadar  protein  pada  gonggong  dianalisis  dengan menggunakan  metode  Bradford.  Gonggong  rebus  bercangkang  tebal  diekstraksi  dengan  metode maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  PA  95%  dan  uji  aktivitas  antimikroba  menggunakan  metode sumur.  Asam  amino  dianalisis  menggunakan  HPLC.  Hasil  karakterisasi  profil  protein  pada  daging gonggong  menunjukkan  bahwa  gonggong  bercangkang  tipis  dan  gonggong  bercangkang  tebal memiliki pita profil protein yang sama pada berat molekul 11-37 kDa, sedangkan profil protein pada lendir gonggong bercangkang tebal dan tipis memiliki pita protein yang sama pada berat molekul 37 kDa.  Jenis  protein  pada  spesies  gonggong  Bintan  diprediksi  merupakan  protein  histon  karena  hasil amplifikasi menggunakan primer protein histon H2A dan H2B didapatkan gen target pada 75 bp dan uji  antimikroba pada  bakteri S.  aureus dan E.  coli memiliki  nilai  DDH  sebesar  25,65±0,02  mm  dan 14,45±0,13  mm,  sehingga  diduga  bahwa  gonggong  Bintan  berpotensi  sebagai  kandidat  pangan fungsional khas Kepulauan Riau.
Kata kunci: siput laut gonggong, profil protein, protein histon, aktivitas antimikroba

## I. PENDAHULUAN
Salah  satu  jenis  biota  laut  dari  sub kelas Prosobrancia (satu  sub  kelas  dengan abalon)  di  Kepulauan  Riau  (KEPRI)  yang bernilai ekonomis tinggi tetapi belum banyak dikenal  di  Indonesia  adalah  siput  laut gonggong  (gonggong).  Gonggong  me- rupakan  biota  endemik  sejenis  moluska  laut dari  kelas Gastropoda (famili Strombidae ) dan  banyak  hidup  di  pesisir  pantai  Pulau Bintan  dan  sekitarnya,  misalnya  Pulau Dompak,  Pulau  Lobam,  Pulau  Mantang. Produksi  gonggong  di  KEPRI  tidak  pernah tercatat  secara  resmi  di  Dinas  Kelautan  dan Perikanan.  Hal  ini  disebabkan  panen gonggong  tidak  dijual  melalui  pelabuhan pendaratan  ikan  dan  merupakan  hasil tangkapan  sampingan  nelayan.    Gonggong tersedia sepanjang tahun di Kepulauan Riau, sehingga menjadi “Icon” kota Tanjungpinang  Provinsi  KEPRI.  Gonggong rebus merupakan wisata kuliner khas Bintan. Gonggong  rebus  hanya  diolah  dengan  cara merebus  gonggong  secara  langsung  dengan air  laut  atau  direbus  dengan  air  tawar secukupnya  dan  ditambahkan  garam  sedikit serta dimakan bersama saus sambel atau saus kacang  (Viruly,  2011).  Pengalaman  empiris masyarakat  Pulau  Bintan  membuktikan bahwa gonggong mengandung protein tinggi yang berkhasiat untuk meningkatkan vitalitas dan kesehatan dengan rasa daging yang enak dan lezat.
Kajian  ilmiah  mengenai  gonggong sampai  saat  ini  masih  sangat  terbatas.  Studi pendahuluan  gonggong  difokuskan  pada komposisi  proksimat  oleh  Amini  (1986), kemudian  dilanjutkan  oleh  Viruly  (2011); Muzahar dan Viruly (2013).  Menurut Viruly (2011) kadar protein gonggong sangat tinggi (19,77%  b/b),  lebih  tinggi  daripada  kadar protein  pada  tiram  (9,47%).  Selain  itu, menurut  Muzahar  dan  Viruly  (2013) gonggong  masih  bebas  dari  logam  berat  Pb, Cd,  dan  Hg  sehingga  masih  aman  untuk dikonsumsi.
Menurut  Arularasan et  al .  (2010) bahwa daging siput laut gonggong dog conch Strombus  canarium dikonsumsi  masyarakat India sebagai pangan fungsional sebagai obat penyakit  jantung  karena  rendah  kolesterol. Gonggong  disajikan  dalam  bentuk  pangan yang  siap  makan.  Ribuan  senyawa  bioaktif telah  diidentifikasi  dari  organisme  laut,  hal ini  mengungkapkan  bahwa  hewan  laut  juga merupakan salah satu sumber obat ( pharmaceutical )  dan  pangan  fungsional, diantaranya adalah senyawa peptida antimikroba ( Antimicrobial Peptides , AMPs) (Li et  al., 2011). Antimicrobial  peptides merupakan  senyawa  dengan  bobot  molekul rendah,  berupa  protein  atau  peptida  pendek yang  diproduksi  oleh  sel-sel  dan  jaringan dalam  tubuh  makhluk  hidup  yang  berperan dalam  sistem  pertahanan  tubuh,  mulai  dari prokariot,  tumbuhan,  hewan  dan  manusia. AMPs dapat memiliki aktivitas menghambat atau  membunuh  mikroba  (Battison et  al ., 2008; Fitri, 2012) .  AMPs banyak ditemukan pada  beberapa  hewan  invertebrata  laut diantaranya  sponge  laut,  moluska,  dan krustasea ( Ovchinnikova et al ., 2006).
Kandungan asam amino pada moluska  sangat  menentukan  kemampuannya sebagai  peptida  antimikroba.  Umumnya AMPs  pada  moluska  mengandung  asam amino  arginin,  alanin,  serin,  glisin  selain asam  amino  prolin,  triptofan,  dan  sistein (Toke,  2005;  Sathyan et  al .,  2012). Gonggong  mengandung  asam  amino  yang bermuatan positif (kation) seperti arginin dan lisin,  serta  asam  amino  serin,  glisin  dan alanin (Viruly, 2011). Tahun 2009 diperoleh dari  spesies abalon  ( Haliotis  discus-discus ) dengan  nama Abhisin (AMPs  dari  jenis protein  Histon  H2A),  mengandung  asam amino  arginin  dan  lisin  serta  berat  molekul rendah  4,32  kDa  (Zoysa et  al., 2009). Selanjutnya pada tahun 2010 AMPs Defensin juga  ditemukan  pada  gastropoda  abalon ( Haliotis discus-discus ) dengan berat molekul 4,9 kDa, berstruktur α -helix dengan 3  jembatan  disulfida  (Zoysa et  al., 2010). Tahun  2012  ditemukan  AMPs Molluskin
(turunan  protein  histon  H2A)  mengandung asam  amino  arginin,  leusin,  serin,  glisin, alanin  dan  prolin  dengan  berat  molekul rendah  2,84  kDA  dan  struktur α -helix (Sathyan et al ., 2012).
Berdasarkan  informasi  ini,  maka perlu  dilakukan  kajian  lanjutan  untuk mengkarakterisasi  protein  histon  pada gonggong  Bintan Strombus sp.  yang  dapat digunakan sebagai kandidat peptida antimikroba dalam bentuk pangan fungsional gonggong rebus.

## II. METODE PENELITIAN

## 2.1.   Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan dari Agustus 2017-Mei  2018  di  Laboratorium Marine
Science FIKP,  Universitas  Maritim  Raja  Ali Haji,
KEPRI dan di Laboratorium Biomolekuler  Hasil  Perikanan,  THP,  IPB, Bogor.

## 2.2. Bahan dan Alat
Bahan  utama  yang  digunakan  yaitu gonggong (bercangkang
tebal dan bercangkang  tipis  masing-masing  100  ekor) yang diambil dari Desa Madong (0 ° 59,34’ N, 104 ° 27,22’  E).  Pulau  Bintan,  Provinsi Kepulauan Riau.  Pengambilan gonggong di- lakukan pada saat surut melalui penangkapan secara  langsung  di  wilayah  pesisir  Pulau Bintan  menggunakan  tangan  (dipungut secara  langsung  atau  menyelam).  Gonggong hidup  tersebut  kemudian  diaklimatisasi selama  3  hari  di  dalam  akuarium  berukuran 90x40x40  cm  sebelum  dibawa  ke  Bogor sekitar  4-5  jam  perjalanan  dalam  kondisi hidup  menggunakan  wadah  keranjang berpori.  Gonggong  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  berukuran  46,53-64,92  mm dengan outer  lip >  2  mm  untuk  gonggong bercangkang  tebal,  dan  ukuran outer  lip <  1 mm untuk gonggong bercangkang tipis yang merupakan  gonggong  dewasa/matang  gonad (Cob et  al .,  2009a).  Bahan-bahan  yang digunakan  untuk  analisis  adalah  DNeasy Blood  and  Tissue  Kit  (Qiagen),  DNeasy
MericonFood  Kit  (Qiagen),  proteinase  K, etanol  96%,  kloroform,  Kapa  Taq  Extra HotStart  ReadyMix  PCR  Kit  (Kapa Biosystems),  primer  foward  dan  reverse (fragmen  histon  H2A),  agarose  (Vivantis), Etium Bromida, gel loading buffer (Invitrogen), DNA ladder (Invitrogen).  Alat yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  antara lain pipet tips (Axygen Scientific, California- USA),  mikro  pipet  (Thermo  Scientific), tabung  mikro,  sentrifuse  (PerfectSpin  24 plus, Peqlab Biotechnologie GmbH, Erlangen Jerman), mesin PCR ( Termocycler Biometra T1,  Biometra  GmbH,  Gottingen  Jerman), inkubator  (Digital  Block  Heater  HX-1, Peqlab Biotechnologie GmbH,  Erlangen- Jerman),  elektroforesis  (Merk  Mupid-Exu, Tipe Electrophoresis  System ),  timbangan digital (Merk Adam Tipe PW254, England), spindown (PerfectSpin mini, Peqlab Biotechnologie GmbH,  Erlangen-Jerman), vortex  (peqTwist  vortex  mixer,  Peqlab Biotechnologie GmbH,  Erlangen-Jerman), waterbath  shaker (Merk  WiseBath  made  in: Korea model: WSB-30), evaporator, timbangan  (Fisher  Scientific  A-160),  oven (Yamato),  timbangan  digital  (Quattro),  pH meter  (HI  2211), Spectrophotometer  double beam (AMTAST  Seri  AMV18), High Performance
Liquid Chromatography
(Waters Coorporation USA).
2.3.      Analisa Data

## 2.3.1.   Karakterisasi profil protein
gonggong
Karakterisasi profil protein dilakukan menggunakan  SDS - PAGE  ( Sodium  Dodecyl Sulfate  Polyacrilamide  Gel  Electroforesis ) ( Bio-Rad ) merujuk pada modifikasi Nurilmala  dan  Ochiai  (2016)  yaitu  analisis jenis  protein  berdasarkan  berat  molekul. Metode  ini  sering  digunakan  untuk menentukan berat molekul suatu protein atau untuk memonitor pemurnian protein. Analisis  profil  protein  untuk  daging/otot gonggong meliputi daging lembut dan daging keras  menggunakan  SDS-PAGE  meliputi: persiapan sampel yaitu daging/otot gonggong
(bercangkang  tebal  dan  bercangkang  tipis) dipisahkan  antara  daging  lembut  dan  daging keras.  Masing-masing  daging  tersebut diambil  0,1  g,  kemudian  dihaluskan  dengan digerus  menggunakan  mortar.  Sampel  ter- sebut  kemudian  diencerkan  dengan  aquades 1:5,  kemudian  disentrifuge  10.000  rpm selama  15  menit  pada  suhu  4°C.    Filtrat masing-masing  sampel  diambil  20 µ L,  dan ditambahkan loading  buffer (1:1)  dan kemudian  dipanaskan  di  dalam waterbath pada  suhu  85°C  selama  10  menit.  Sampel daging diambil sebanyak 3 µ L untuk diinjek pada  analisis  profil  protein  menggunakan SDS-PAGE  menggunakan  marker  250  kDa dengan volume injek 3 µ L.
Sampel  lendir  dilakukan  preparasi tanpa pengenceran dengan aquades 1:5 tetapi langsung  diambil  25 µ L,  Sampel  langsung disentrifuge  10.000  rpm  selama  15  menit pada  suhu  4°C.    Filtrat  sampel  masing- masing  diambil  sebanyak  20 µ L  lalu ditambahkan loading  buffe r  (1:1)  dan kemudian  dipanaskan  di  dalam waterbath pada  suhu  85°C  selama  10  menit.  Masing- masing  sampel  lendir  diambil  sebanyak  10 µ L untuk diinjek pada analisis profil protein menggunakan  SDS-PAGE  menggunakan marker 250 kDa dengan volume injek 5 µ L. Analisis  profil  protein  menggunakan SDS-PAGE  meliputi:  persiapan  sampel, penambahan buffer loading (1:1) , separation and  retaining  gel  preparation,  running conditions (selama ± 3 jam) , gel staining (30 menit) ,  cleaning  color/destaining (1  jam) , dan  terakhir  dilakukan gel  photo  recording . SDS-PAGE pada penelitian ini menggunakan gel  pemisahan  12,5%  dan  gel  penahan  3%. SDS-PAGE  dijalankan  pada  100  Volt,  13 mA selama 3 jam.

## 2.3.2.   Identifikasi DNA yang Mengikat Protein Histon H2A pada
Gonggong Bintan Protein  histon  merupakan  jenis protein  yang  terdapat  pada  inti  sel  dan berikatan  langsung  dengan  DNA  suatu spesies.    Konfirmasi  keberadaan  protein
histon  dari  suatu  spesies  dapat  dilakukan melalui  penggunakan  primer  parsial  histon H2A dalam identifikasi DNA nya.

## 2.3.2.1.Ekstraksi dan Isolasi DNA
Ekstraksi DNA pada sampel mengacu pada  modifikasi  Latiolais et  al. (2006)  dan modifikasi  Sathyan et  al .  (2012).  Sampel menggunakan hemolimph yang  ada  didalam daging  gonggong  yang  diambil  secara  acak dari  50  sampel  gonggong.  Sampel  diambil menggunakan sryinge 5  ml  berupa  cairan, kemudian sampel sebanyak 25 µ L dimasukkan  ke  dalam  tabung mikro,  dan ditambahkan sebanyak 25 µ L larutan lisis sel dan  1,5 µ L  larutan  proteinase  K,  lalu dihomogenisasi  selama  3  detik.  Sampel kemudian  di vortex 1  detik  dan  diinkubasi dengan goyangan pada suhu 55°C selama 24 jam. RNA dieliminasi dengan menambahkan 1,5 µ L  RNase  (4  mg/mL)  ke  dalam  tabung mikro dan di vortex sebanyak 25x, diinkubasi pada  37°C  selama  60  menit,  selanjutnya diinkubasi pada suhu kamar. Sampel protein diendapkan  menggunakan  larutan  presipitasi protein  200 µ L,  di vortex 30  detik  untuk homogenisasi  dan  diinkubasi  dalam freezer selama  10-15  menit.    Sampel  disentrifugasi 12,000  rpm  (10  menit).  Isopropanol  100% (0,8 x volume cairan DNA) ditambahkan ke sampel dan tabung dibalik-balik sebanyak 50 kali, sebelum disentrifuge 12,000 rpm selama 10  menit,  kemudian  supernatan  dibuang  dan ditambahkan  300 µ L  etanol  dingin  70%. Sampel  disentrifugasi  12,000  rpm  lagi selama  10  menit,  etanol  dibuang  dan dikeringkan  selama  30  menit.  Setelah  itu, sampel  ditambahkan  50 µ L Nuclease  Free Water (NFW),  dan  dipanaskan  hingga  50°C selama  2  menit.  Pengenceran  sampel dilakukan sebanyak sepuluh kali.

## 2.3.2.2.Amplifikasi DNA
Penelitian  ini  menggunakan  DNA dengan  volume  2 µ L  dari  setiap  ekstraksi sampel.    Amplifikasi  sampel  menggunakan Polymerase  Chain  Reaction (PCR).  Semua reaksi  dilakukan  pada  volume  25 µ L,  terdiri
dari : campuran (enzim Mytaq, dNTP, DNA polymerase  dan  buffer)  sebanyak  10 µ L, primer  histone  H2A  (F)  dan  primer  histone H2B  (R)  masing-masing  2 µ L,  NFW (ddH 2 O)  dengan  volume    9 µ L.    Kondisi PCR dijalankan pada kondisi sebagai berikut: awal  pamanasan  94°C  selama  5  menit,  pra denaturasi  94°C  selama  5  menit,  DNA kemudian didenaturasi pada 94°C selama 25 detik, annealing pada 57°C selama 25 detik, dan extention pada  suhu    72°C  selama  25 detik,  suhu    pemanjangan  akhir  dilakukan pada 72°C selama 5 menit, serta  total  reaksi sebanyak 35 siklus. Target amplifikasi adalah pada  75  bp  dari  protein  histon  H2A.  Urutan sekuen  genomik  pada  penelitian  ini menggunakan foward primer  histon  H2A adalah  5'GAATTCATGTCTGGACGAGGA AAGGG-3',  sedangkan  urutan  sekuen reverse primer  H2B  5'GCGGCCGCATAG TTTCCCTTACGGAGCAGA-3'  (Sathyan et al., 2012).  Reaksi  PCR  divisualisasikan menggunakan gel agarose 2% dan elektroforesis  berlangsung  pada  200  V selama  30  menit.  Reaksi  ini  menghasilkan pita tunggal dari ukuran yang diharapkan (75 bp) (Modifikasi Sathyan et al .,  2012).

## 2.3.3.   Analisis Kadar Protein
Analisa  kadar  protein  hanya  dilaku- kan  pada  daging  gonggong  menggunakan metode Bradford mengacu  pada  Dang et  al. (2011).  Daging gonggong kering (segar dan rebus)  ditimbang  1  g  dan  dilarutkan  dalam Buffer Tris HCl 50 mM (pH 7,5), kemudian sampel  dihomogenisasi  selama  5  menit. Selanjutnya disentrifuge 12,000 rpm bersuhu 4°C  selama  15  menit,  lalu  diambil  0,5  mL dan  masing-masing  sampel  diencerkan sebanyak  4  kali,  kemudian  diukur  nilai absorbansinya  menggunakan  spektrofoto- meter double  beam .  Kurva  standar  meng- gunakan  BSA  ( bovine  serum  albumin ) dengan 6 level konsentrasi (0 ppm, 20 ppm, 40  ppm,  60  ppm,  80  ppm,  dan  100  ppm). Hasil  absorbansi  sampel  yang  diperoleh, kemudian diolah menggunakan data absorbansi  dan  konsentrasi  dari  larutan
standar  BSA  berdasarkan  analisis  regresi linier, sehingga didapatkan kadar protein dari masing-masing sampel.

## 2.3.4.   Ekstraksi Daging Gonggong Rebus Bercangkang Tebal
Metode  ekstraksi  daging  gonggong Bintan  mengacu  pada  modifikasi    Ali et  al . (2006)  dan  Nam et  al .  (2015).  Daging gonggong  rebus  bercangkang  tebal  dipilih untuk  diekstraksi  karena  berdasarkan  uji hedonik  terhadap  gonggong  bercangkang tipis  dan  gonggong  tebal  didapatkan  bahwa masyarakat  dan  wisatawan  lebih  menyukai gonggong  rebus  bercangkang  tebal  (Viruly, 2011).    Gonggong  rebus  setelah  dikeluarkan dari cangkangnya diekstraksi dengan metode maserasi  menggunakan  etanol  PA  95%. Gonggong  rebus  didapatkan  dengan  cara merebus  gonggong  (masih  bercangkang) pada suhu 100°C selama 5 menit (gonggong direbus  sebanyak  50  ekor  dalam  1,5  L  air dengan  penambahan  garam  2  g).  Pertama- tama  daging  gonggong  rebus  dikeringkan menggunakan oven bersuhu 60°C selama 24 jam,  selanjutnya  daging  gonggong  kering dihaluskan  menggunakan  blender.  Daging gonggong rebus yang sudah halus, ditimbang 6  g  dan  dilarutkan  kedalam  etanol  180  mL. Selanjutnya  diinkubasi  dengan  goyangan  1 jam  dan  diultrasonikasi  selama  30  menit, kemudian  diinkubasi  lagi  dengan  goyangan selama  1  jam,  lalu  dilakukan  penyaringan menggunakan  kertas  saring Whatman No  1 (125  mm).  Hasil  penyaringan  kemudian dievaporasi  menggunakan rotary  eva- poration pada  suhu  55°C  selama  30  menit dan didapatkan ekstrak kasar gonggong rebus bercangkang tebal sebanyak 30 mL.

## 2.3.5.  Pengujian Aktivitas Antimikroba Ekstrak Daging Gonggong Rebus
Pengujian  aktivitas  antimikroba  di- lakukan  dengan  mengacu  pada  metode modifikasi  Ali et  al. (2006)  dan  Modifikasi Jagessar et al . (2008). Hasil ekstraksi daging gonggong  yang  sudah  diketahui  kadar proteinnya  kemudian  digunakan  untuk
analisis  aktivitas  antimikroba.  Aktivitas antimikroba dievaluasi menggunakan metode sumur.  Uji  penghambatan  pertumbuhan bakteri  patogen  menggunakan  konsentrasi bakteri  sebanyak  1  x  10 6 cfu/mL  koloni bakteri Gram positif ( Staphylococcus aureus ) dan  Gram  negatif  ( Escherichia  coli )  yang diinokulasi  secara  individual  sebanyak  250 mL  kedalam  larutan  agar  250  mL  media Mueller Hinton agar (MHA) dan didiamkan dulu selama 30 menit, selanjutnya campuran tersebut  dimasukkan  kedalam  cawan  petri sebanyak  25  mL/cawan.  Sampel  ekstrak daging  gonggong  rebus  bercangkang  tebal sebanyak  40 µ L  dipipet  ke media  agar  yang mengandung  mikroba  uji,  kemudian  sampel diinkubasi  pada  37°C  semalaman.  Aktivitas antimikroba  diamati  melalui  pengukuran diameter daerah hambat (DDH).

## 2.3.6.   Analisis Asam Amino
Analisis  asam  amino  dilakukan mengacu pada Mohtar et al. (2010) terhadap sampel  daging  gonggong  Bintan  dan  larutan standar  asam  amino.  Prosedur  analisis  asam amino adalah sebagai berikut: sampel daging gonggong Bintan 0,1 gram dilarutkan dengan 5  mL  HCl  6  N,  lalu  divorteks,  sampel dihidrolisis selama 22 jam pada suhu 11 o C; didinginkan dan dipindahkan ke labu ukur 50 mL  serta  ditetapkan  hingga  tanda  batas. Sampel  disaring  menggunakan  filter  0,45 µm, filtrat 500 µL ditambah dengan 40 µm α - Aminobutyric  acid  (AABA)  dan  460  µL akuabides.  Larutan  sebanyak  10  µL  di- tambahkan  dengan  70  µL  JaccQ- Fluor Borate dan dihomogenkan, lalu ditambahkan dengan  20  µL reagent  fluor A  hingga homogen  dan  diinkubasi  pada  suhu  55 o C selama  10  menit;  selanjutnya  diinjeksi  pada bagian HPLC.
Analisis  larutan  standar  dilakukan dengan  mencampurkan  40  µL  standar  asam amino  dengan  40  µL  internal  standar α - Aminobutyric  acid  (AABA)  dan  920  µL akuabides, kemudian dihomogenkan. Larutan standar sebanyak 10 µL ditambahkan dengan 70  µL  AccQ- Fluor  Borate kemudian
dihomogenkan.  Larutan  ditambahkan  20  µL reagent  fluor A  hingga  homogen  kemudian diinkubasi pada suhu 55 o C selama 10 menit. Sampel standar diinjeksikan ke dalam HPLC. Sebanyak  5  µl  larutan  sampel  dan standar diinjeksikan ke dalam kolom HPLC, kemudian ditunggu sampai pemisahan semua asam amino selesai.  Waktu yang diperlukan sekitar 25 menit.  Kondisi operasi alat HPLC yang  digunakan  adalah  sebagai  berikut: Temperatur  27 o C  (suhu  ruang),  jenis  kolom Ultra  Techspere, dengan  kecepatan  aliran eluen  adalah  1  ml/menit,  tekanan  sebesar 3000 psi ,  fase  mobil  (eluen)  terdiri  dari  dua macam  buffer  yaitu  buffer  A  (buffer  asetat 0,025  M,  pH  6,5)  dan  buffer  B  (larutan methanol 95%), detektor fluoresensi , panjang gelombang eksitasi 350  nm  dan  panjang gelombang emisi 450  nm  serta  kolom derivatisasi berupa pre-column  derivati- zation.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN

## 3.1. Karakterisasi Profil Protein pada Gonggong
Karakterisasi profil protein dilakukan untuk mengetahui jenis protein yang terdapat pada  daging/otot  gonggong  (daging  lembut dan daging keras).  Hasil karakterisasi profil protein  menggunakan  SDS-PAGE  didapat- kan bahwa gonggong bercangkang tebal dan bercangkang  tipis  memiliki  profil  protein yang  sangat  beragam  dan  unik  (Gambar  1). Profil  protein  antara  gonggong  bercangkang tebal  dan  bercangkang  tipis  pada  daging lembut dan daging keras memiliki kesamaan pada  berat  molekul  11-37  kDa  sedangkan profil  protein  diatas  berat  molekul  diatas  37 kDa  memiliki  jenis  protein  yang  berbeda. Berdasarkan  karakterisasi  profil  protein  ini maka  diprediksi  bahwa  jenis  protein gonggong  pada  berat  molekul  11-37  kDa (gonggong  bercangkang  tebal  dan  ber- cangkang  tipis)  merupakan  protein  histon karena  memiliki  berat  molekul  antara  11-37 kDa  (Joshi et  al., 2012).  Protein  histon adalah  jenis  protein  yang  terdapat  pada  inti
sel  eukariota  yang  terbungkus  DNA,  yang kemudian  bersama-sama  dengan  DNA menyusun  struktur  nukleosom.    Ada  lima jenis sub unit protein histon yaitu histon H1, H2A, H2B, H3 dan H4.  Masing-masing sub unit protein histon ini kaya akan asam amino kationik  (asam  amino  yang  bermuatan positif) dan bersifat hidrofobik (Jusuf, 2001). Protein  histon  (H2A)  pada  gastropoda umumnya  merupakan  peptida  antimikroba (Sathyan et  al .,  2012;  Zoysa et  al .,  2010). Keberadaan  protein  histon  pada  daging gonggong  Bintan  harus  dibuktikan  melalui identifikasi  DNA  gonggong  Bintan  meng- gunakan  primer  protein  histon  yaitu  histon H2A dan H2B.
Gambar 1.    Profil Protein pada daging gonggong. A. Gonggong bercangkang tipis, B. Gonggong bercangkang tebal. (Line 1 dan 2) = daging keras;
(Line 3 dan 4) = daging lembut.
Profil  protein  lendir  gonggong  dapat dilihat  pada  Gambar  2.  Gambar  2 menunjukkan  bahwa  profil  protein  pada lendir  gonggong  bercangkang  tebal  dan bercangkang  tipis  memiliki  kesamaan  profil protein  pada  berat  molekul  37  kDa,  akan tetapi pada gonggong bercangkang tebal pita proteinnya  lebih  tebal  yang  berarti  bahwa kandungan  jenis  protein  dengan  berat molekul 37 kDa lebih banyak pada gonggong bercangkang tebal.  Protein histon pada suatu spesies  umumnya  terdapat  pada  daging  atau jaringan ekskresi (lendir) (Joshi et al., 2012).
Gambar 2.   Profil protein pada Lendir Gonggong. Lendir gonggong bercangkang tebal (Lb); Lendir gonggong bercangkang tipis (Lp).
Hewan  Invertebrata  laut  umumnya memiliki  protein  histon  yaitu  histon  H2A, yang dapat berfungsi sebagai innate immune berupa  peptida  antimikroba  (AMPs)  dengan berat molekul sangat kecil yaitu sekitar 2,84 kDa  (Sethyan et  al .,  2012).  Jenis  protein histon  (H2A)  secara  umum  memiliki  berat molekul yang rendah yaitu sekitar 5 kDa atau sekitar  146  bp  (North et  al .,  2014). Berdasarkan informasi ini, jika dibandingkan antara  profil  protein  pada  daging  gonggong dengan  lendir  gonggong  diduga  kuat  bahwa protein  pada  daging  gonggong  merupakan protein histon H2A yaitu pada berat molekul antara  11-37  kDa,  sedangkan  pada  lendir
A 11 kDa 37 kDa B 37 kDa 11 kDa kDa 37 bp
gonggong  pada  pita  protein  dengan  berat molekul  37  kDa.    Menurut  Nikapitiya et  al . (2010)  bahwa  sifat  antimikroba  dari  peptida antimikroba pada gastropoda abalon ( Haliotis  discus  discus )  juga  efektif  pada berat  molekul  86,5  kDa,  sedangkan  profil protein  pada  lendir  dan  daging  gonggong yang  memiliki  berat  molekul  diatas  80  kDa, pita  proteinnya  tidak  jelas  (pitanya  sangat tebal)  sehingga  masih  perlu  penelitian lanjutan.
Jenis  protein  gonggong  sangat berkontribusi  terhadap  fenotipe  gonggong. Jenis protein sangat dipengaruhi oleh kondisi lingkungan  dan  makanan  gonggong  pada habitatnya.  Gonggong  merupakan  salah  satu organisme  bentik  intertidal  yang  dapat melindungi  dirinya  dari  berbagai  macam patogen  melalui  jenis  protein  (peptida)  yang terdapat dalam jaringan daging/ototnya (Cob et  al., 2010).  Menurut  Amini  (1986) gonggong hidup tersebar di sepanjang pantai dengan dasar perairan pasir lumpur atau pasir campur  lumpur  yang  banyak  ditumbuhi tanaman laut seperti rumput setu , samo-samo ( Enhalus  accoroides ), Thalassia spp.  dan lain-lain.  Fakta-fakta  tersebut  dapat  me- nyebabkan  perbedaan  dalam  profil  protein pada suatu spesies (Nam et al., 2015; Cob et al .,  2009b;  Duval et  al .,  2009).    Respon metamorfosis larva gonggong sangat dipengaruhi  oleh  sedimen  dan  substrata detrital  sebagai  makanan  gonggong  dari habitat alami yang memungkinkan perbedaan jenis  protein  gonggong  yang  bermutasi karena  untuk  mempertahankan  diri  (Cob et al., 2010; Duval et al ., 2009).

## 3.2.    Identifikasi DNA Gonggong Bintan untuk Konfirmasi Keberadaan
Protein Histon
Identifikasi  DNA  pada  penelitian  ini dilakukan  sebagai  lanjutan  untuk  meng- konfirmasi  keberadaan  protein  histon  dari penelitian  profil  protein  gonggong  yang mendapatkan hasil bahwa pada profil protein daging gonggong memiliki berat molekul 11- 37  kDa  dan  pada  lendir  37  kDa.    Profil
protein pada daging dan lendir gonggong ini diprediksi  merupakan  protein  histon.    Hasil identifikasi  DNA  gonggong  menggunakan primer  protein  histon  H2A  dan  H2B  dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar  3  menunjukkan  bahwa  pada gonggong  Bintan  terdapat  protein  histon H2A  dan  H2B  pada  inti  selnya.  Hal  ini ditunjukkan oleh tercapainya target amplifikasi  DNA  gonggong  pada  75  bp menggunakan primer protein histon H2A dan H2B.  Protein histon merupakan jenis protein pada inti sel yang berikatan dengan DNA inti sel.  Secara umum protein histon pada hewan moluska  banyak  terdapat  pada  cairan  darah ( hemolimph ) yang terdapat didalam dagingnya,  sehingga  sampel  pada  penelitian ini  menggunakan hemolimph gonggong. Hemolimph adalah sel darah pada gastropoda (2000  sel/mL)  yang  mengandung  protein histon. Hemolimph membawa  oksigen  ke seluruh  tubuh  moluska  dan  berperan  dalam kekebalan bawaan. (Gorbushin dan Iacovleva 2006).
Gambar 3.  Visualisasi hasil amplifikasi DNA gonggong Bintan meng- gunakan gen parsial histon H2A dan  H2B.  A = hemolimph gonggong tebal; B = hemolimph gonggong tipis; M = marker.
Dua  pasang  dari  tiap  protein  histon H2A dan H2B serta H3 dan H4 membentuk protein  histon  oktomer  dengan  145-147 pasangan basadan berikatan langsung dengan asam deoksiribonukleat (DNA) yang membungkusnya membentuk inti nukleosom. Masing-masing  sub  unit  protein  histon  ini kaya akan asam amino kationik (asam amino
75 bp
yang  bermuatan  positif)  dan  bersifat hidrofobik  (Jusuf,  2001).  Umumnya  protein histon  pada  gastropoda  yang  berfungsi sebagai  peptida  antimikroba  berupa  protein histon  H2A  (Sathyan et  al .,  2012;  Zoysa et al., 2009).    Gambar  3  membuktikan  bahwa DNA  gonggong  Bintan  berikatan  dengan salah satu protein histon yaitu protein histon H2A  dan  H2B.    Informasi  ini  menguatkan peneliti melakukan ekstraksi terhadap daging gonggong  Bintan  secara  maserasi  yang dikombinasikan  dengan  ultrasonikasi  karena pada  gonggong  Bintan  mengandung  protein histon  yang  merupakan  protein  antibiotik ( innate immune ).

## 3.3.    Kadar Protein pada Daging Gonggong
Setelah  diketahui  profil  proteinnya maka  kadar  protein  pada  daging  gonggong perlu dianalis dengan tujuan untuk mengetahui jumlah protein total pada daging gonggong.  Kadar  protein  pada  daging gonggong dapat dilihat pada Tabel 1.  Tabel 1  menunjukkan  bahwa  kadar  protein  pada gonggong  bercangkang  tipis  (0,31  mg/mL gonggong  segar  dan  0,46  mg/mL  gonggong rebus)  memiliki  kandungan  protein  yang lebih tinggi daripada gonggong bercangkang tebal (0,26 mg/mL gonggong segar dan 0,44 mg/mL  gonggong  rebus).    Perbedaan  kadar protein  pada  gonggong  dipengaruhi  oleh kandungan  nutrisi  pada  habitatnya  (Cob et al .,   2010).  Kadar  protein  ini  sangat  penting untuk  mengetahui  konsentrasi  protein  pada sampel saat pengujian aktivitas antimikroba.
Tabel 1.  Kadar protein pada daging gonggong.
Sampel Daging Gonggong Kadar Potein (mg/mL) Gonggong Bercangkang Tebal Gonggong Bercangkang Tipis Gonggong segar ( fresh ) 0,26 0,31 Gonggong rebus ( boiled ) 0,44 0,46

## 3.4.    Pengujian Aktivitas Antimikroba pada Ekstrak Daging Gonggong Bintan
Uji aktivitas antimikroba pada ekstrak daging  gonggong  Bintan  rebus  bercangkang tebal dianalisis terhadap bakteri Gram positif ( Staphylococcus  aureus) dan  Gram  negatif ( Escherichia  coli ).  Aktivitas  antimikroba ekstrak daging gonggong rebus bercangkang tebal  pada  bakteri S.  aureus lebih  baik daripada  bakteri E.  coli ,  dengan  daerah penghambatan  diameter  rata-rata  (DDH) pada  pada  bakteri S.  aureus sebesar 26,6±0,02 mm dan nilai DDH pada bakteri E. coli sebesar 14,45±0,13 mm (Gambar 4).
Gambar  4.   Nilai rata-rata DDH ekstrak gonggong rebus bercangkang tebal pada bakteri E.coli dan S.aureus ; 1= DDH pada bakteri Gram negatif( E.coli); 2= DDH pada bakteri Gram positif ( S.aureus).
Gambar  4  menunjukkan  bahwa Ekstrak  gonggong  Bintan  lebih  sensitif terhadap  bakteri  Gram  positif S.  aureus daripada  Gram  negatif E.  coli ,  hal  ini
1
2
disebabkan  karena  bakteri  Gram  positif S. aureus memiliki  kandungan  peptidoglikan yang  tipis  (membran  plasma  tunggal) sedangkan  Gram  negatif E.  coli memiliki membran  ganda  (membran  plasmanya  di- lindungi oleh membran luar yang permeable berupa  peptidoglikan),  dan  membran  dalam berupa  lipopolisakarida,  sehingga  membran bakteri S.  aureus lebih  cepat  mengalami kerusakan  oleh  peptida  antimikroba  (AMPs) daripada bakteri E. coli (Sathyan et al ., 2012; Xuguang et al ., 2008). Aktivitas antimikroba pada gonggong diduga karena gonggong memiliki protein  histon  pada  dagingnya  ( hemolimph ) dan lendirnya dari hasil analisis profil protein dan identifikasi DNA gonggong Bintan.
Umumnya  moluska  (invertebrata laut)  banyak  memiliki  protein  histon  yang berfungsi  sebagai  kekebalan  tubuh  bawaan ( innate immune system) dengan nama peptida antimikroba  (AMPs)  berupa  protein  atau peptida  yang  mengandung  asam  amino hidrofobik,  bersifat  kationik,  sekuen  asam aminonya  mulai  dari  10  hingga  50  residu asam  amino  (Sathyan et  al., 2012;  Nam et al., 2015).

## 3.5.   Profil Asam Amino pada Ekstrak Daging Gonggong Rebus Bercangkang Tebal
Hasil  ekstraksi  daging  gonggong rebus  bercangkang  tebal  yang  memiliki aktivitas  antimikroba  selanjutnya  dianalisis asam  aminonya  menggunakan  HPLC  untuk mengetahui  komposisi  asam  amino  yang dapat  berfungsi  sebagai  antimikroba.  Profil asam  aminonya  pada  hasil  ekstrak  daging gonggong  rebus  bercangkang  tebal  dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel  2  menunjukkan  bahwa  ekstrak daging  gonggong  rebus  bercangkang  tebal yang  telah  mengalami  denaturasi  akibat perebusan  pada  suhu  100°C  selama  5  menit berupa  peptida  bioktif  yang  kaya  akan  asam amino  prolin  (14,08  mg/kg),  selain  itu  juga kaya  akan  asam  amino  serin,  glisin  dan alanin.
Tabel 2.  Profil asam amino pada ekstrak daging gonggong rebus ber- cangkang tebal. Asam amino Kadar (mg/kg) L-fenilalanin 8,13 L-serin 13,13 L-arginin 2,03 L-glisin 9,80 L-asam Aspartat 12,26 L-asam Glutamat 6,43 L-threonin 2,97 L-alanin 13,62 L-prolin 14,08 L-lisin HCl 1,40 L-tirosin 6,66 L-valin 3,45 L-isoleusin 2,93 L-leusin 2,64
Keberadaan  asam  amino  prolin  pada peptida  antimikroba  dapat  berfungsi  untuk membantu mempertahankan rigiditas formasi peptida    melalui  kemampuannya  untuk mempertahankan  sudut  torsi  tertentu  pada rantai  peptida  sehingga  peptida  tidak  mudah mengalami kerusakan karena pemanasan dan enzim  (Tidona et  al., 2009).  Menurut Satyhan et  al. (2012)  bahwa  asam  amino prolin  sangat  berperan  dalam  membunuh mikroba  dengan  mengikat  DNA  mikroba sehingga  dapat  membunuh  mikroba  dengan sangat  cepat  (anti-resisten).    Asam  amino prolin  membentuk  ring  prolin  bersama-sama dengan  asam  amino  lainnya  (arginin, leusin, alanin,  serin  dan  glisin)  dalam  mengikat DNA mikroba (Satyhan et al., 2012). Selain  itu  Tabel  3  menunjukkan bahwa  asam  amino  pada  ekstrak  daging gonggong  rebus  bercangkang  tebal  memiliki asam  amino  yang  sama  dengan  gatropoda lain  yang  dapat  berfungsi  sebagai  peptida antimikroba (arginin, serin, alanin, glisin dan prolin).  Aktivitas  antimikroba  sangat  di- pengaruhi oleh keberadaan asam amino pada peptidanya  (Tidona et  al., 2009).    Informasi
ini  mendorong  peneliti  ke  depan  untuk melakukan penelitian lanjutan, yaitu mengsekuensing  peptida  hasil  ekstraksi daging gonggong bercangkang tebal, sehingga  didapatkan  susunan  dan  panjang asam  aminonya. Namun  demikian  ekstrak daging  gonggong  rebus  bercangkang  tebal dapat  diduga  memiliki  sifat  sebagai  peptida antimikroba  (AMPs)  berdasarkan  komposisi asam  amino  pada  Tabel  3,  sehingga diprediksi pada masa yang akan datang dapat menjadi  alternatif  pangan  fungsional  khas Kepulauan  Riau  berupa  pangan  gonggong rebus.
Tabel 3.  Perbandingan asam amino pada gonggong dan gastropoda lain yang berpotensi sebagai peptida antimikroba (AMPs).

## IV.    KESIMPULAN
Profil  protein  daging  gonggong bercangkang  tebal  dan  bercangkang  tipis memiliki  kesamaan  pada  berat  molekul  11- 37  kDa.  Lendir  gonggong  yang  merupakan hasil sekresi juga memiliki berat molekul 37 kDa.    Hasil  pendugaan  protein  histon  pada profil protein daging ( hemolimph ) dan lendir dibuktikan  dengan  hasil  identifikasi  DNA gonggong  Bintan  menggunakan  primer protein histon H2A dan H2B pada gen target
75  bp,  sehingga  dapat  dikonfirmasi keberadaan  protein  histon  pada    gonggong Bintan.  Aktivitas  antimikroba  pada  ekstrak daging  gonggong  Bintan  rebus  bercangkang tebal  yang  mengandung  protein  histon sebagai  pangan  favorit  di  Bintan  memiliki kemampuan  dalam  menghambat  bakteri S.aureus dan E.coli ,  sehingga  diduga  kuat bahwa  gonggong  rebus  Bintan  ini  dapat dijadikan  kandidat  pangan  fungsional gonggong  rebus  khas  Bintan  Kepulauan Riau.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali,  A.,  Y.  Hala,  dan  Darminto.    2006. Penapisan  dan  karakterisasi  parsial senyawa  antimikroba  Siput  Bakau dan  profil  kromatografi  lapis  tipis fraksi  aktif. B.  Penelitian  Hayati, 12:63-68.  http://dx.doi.org/10.23869 /bphjbr.12.1.200611.
Amini,  S.  1986.  Studi  pendahuluan gonggong  ( Strombus  canarium )  di perairan pantai Pulau Bintan-Riau. J. Penelitian  Perikanan  Laut, 36:23-29. http://dx.doi.org/10.14710/jkt.v2li2.2 969.
Arularasan,  S.,  P.S.  Lyla,  K.  Kesavan,  and S.A.  Khan.    2010.  Recieps  for  the Mesogastropod Strombus  canarium . Advance  J.  Food  Science  and Technology, 2(1):31-35. Battison, A.L. ,  R.  Summerfield,  and  A. Patrzykat.  2008.    Isolation  and characterisation  of  two  antimicrobial peptides  from  haemocytes  of  the American lobster Homarus americanus . J.  fish  and  Shellfish immunology, 25:181-187. http://dx. doi.org/10.1016/j.fsi.2008.04.005.
Cob, Z.C., A. Arshad, J.S. Bujang, and M.A. Ghaffar.    2010.    Metamorphosis induction of the Dog Conch Strombus canarium (Gastropoda:  Strombidae) using  cues  associated  with  conch nursery  habitat. J.  Applied  Sciences, 10(8):628-635.
Spesies Asam Amino Pustaka Gonggong ( Strombus sp .) Arginin, serin, alanin, glisin, dan prolin Data primer Abalon ( Haliotis sp.) Arginin, lisin, sistein Xuguang (2008); Zoysa et al . (2009)
Ficus gracilis dan Bullia vitata Arginin, leusin, serin, glisin, alanin, prolin Sathyan et al . (2012)
Cob, Z.C., A. Arshad, J.S. Bujang, and M.A. Ghaffar.    200  age,  growth,  mortality and  population  structure  of Strombus canarium :  Variation  in  male  and female  sub  population. J.  Applied Sciences, 9:3287–3297. http://dx. doi. org/0.3923/jas200932873297
Cob, Z.C., A. Arshad, J.S. Bujang, and M.A. Ghaffar.    2009a.    Spesies  and distribution  of Strombus (Mollusca: Strombidae) in  Johor  Straits  and  its surrounding  areas. J.  Sains Malaysiana, 38(1):39–46. Cob,  Z.C.,  A.  Arshad,  J.S.  Bujang,  M.A. Ghaffar,  and  W.L.  Wan  Muda. 2009b.    Development  and  growth  of larvae  of  the  Dog  Conch, Strombus canarium (Mollusca:  Gastropoda),  in the laboratory. J. Zoological Studies, 48(1):1-11.
Cob,  Z.C.,  A.  Arshad,  H.M.  Idris,  J.S. Bujang,  and  M.A.  Ghaffar.    2008.
Sexsual
polymorphism in a population  of Strombus  canarium Linnaeus 1758 (Mollusca: Gastropoda)  at  Merambong  Shoal,
Malaysia. J.  Zoological  Studies, 47(3):318-325.
Dang,  V.T.,  K.  Benkendorff,  and  P.  Speck.
2011.  In  vitro  antiviral  activity against  herpes  simplex  virus  in  the abalone Haliotis laevigata. J. General Virology, 92:627-637.  http://dx.  doi. org/10.1099/vir000252470. Duval,  E.,  C.  Zatylny,  M.  Laurencin,  M. Baudy-Floc’h,  and  J.  Henry.    2009. A  cationic  peptide  designed  to  exert antibacterial  activity. J.  Peptides,
30:1608-1612.  http://dx.doi.org/10.1 016/jpeptides200906022.
Fitri,  N.  2012.  Antimicrobial  peptides sebagai obat alternatif pada resistensi antibiotik. J. Kefarmasian Indonesia, 2 (2): 62-67.
Gorbushin, A.M., and N.V. Iacovlevo.  2006.
Haemogram  of Littirina  littorea . J. Marine  Bio  Ass  of  the  United Kingdom , 86:1175-1181.
Jagessar,  R.A.,  A.  Mars,  and  G.  Gomes. 2008.  Selective  antimicrobial  pro- perties  of  phyllanthus  acidus  leaf extract  against Candida  albicans , Escherichia  coli and Staphylococcus aureus using  stokes  disc  diffusion, well  diffusion,  streak  plate  and  a dilution  method. J.  Nature  and  Sci, 2(6): 24-38.
Jusuf,  M.  2001.  Genetika  I:  struktur  dan ekspresi  gen.  Jakarta.  Sagung  Seto Press. 300 hlm.
Joshi, S.R., Y.C Sarpong, R.C Peterson, and W.M  Scovell.    2012.    Nucleosome dynamics: HMGB1 relaxes canonical nucleosome  structure  to  facilitate estrogen  receptor  binding. Nucleic Acid  Research ,  40(20):10161-10171. http://dx. doi.org/10.1093/nar/gks815. Li,  H.,  M.G.  Parisi,  N.  Parrinello,  M. Cammarata,  and  P.  Roch.    2011. Molluscan  antimicrobial  peptides,  a review  from  activity-based  evidences to  computer-assisted  sequences. J. International  Scholarly  Research, 8:85-97.
Latiolais,  J.M.,  M.S. Taylor,  K.  Roy  K,  and M.E.  Hellberg.    2006.    A  molecular phylogenetic  analysis  of  strombid gastropod morphological diversity. J. Molecular  Phylogen  and  Evo., 41: 436–444.  http://dx.doi.org/10.1016/
j.ympev.2006.05.027.
Mohtar,  N.F.,  C.  Perera,  and  S.Y.  Quek. 2010.  Optimisation  of  gelatine extraction  from  hoki  ( Macruronus novaezelandiae ) skins and
measurement  of  gel  strength  and SDS–PAGE. J. Food Chemistry, 122: 307- 313.
Muzahar dan L. Viruly.  2013. Karakterisasi kimia,  sensori  dan  laju  pemijahan gonggong (Strombus  sp .)  sebagai  ikon Kepulauan Riau. J. Dinamika Maritim PPSPL UMRAH, 2:20-29.
Nam,  B.H.,  J.K.  Seo,  M.J.  Lee,  Y.O.  Kim,
D.G.  Kim,  C.M.  An,  and  N.G.  Park. 2015.    Functional  analysis  of  pacific
oyster ( Crassostrea gigas ) β - thymosin :  Focus  on  antimicrobial activity. J.  Fish  and  Shellfish Immunology, 45:167-174.  http://dx. doi.org/10.1016/jfsi201503035.
Nikapitiya,  C.,  M.D.  Zoysa,  C.  Oh,  Y.  Lee,
Ekanayake, I. Whang, C.Y. Choi, J.S. Lee, and J. Lee.  2010.  Disk abalone (Haliotis  discus  discus)  expresses  a novel  antistatin-like  serine  protease inhibitor:  molecular  cloning  and immune  response  against  bacterial infection. J.  Fish  and  Shellfish Immunology, 28:661-671. http://dx. doi.org/10.1016/jfsi200912027.
North,  J.A.,  M.  Simon,  M.B.  Ferdinand, M.A.  Soffner,  J.W.  Picking,  C.J. Howard,  A.M.  Mooney,  J.V.  Noort, M.G. Poirier, and J.J. Ottesan.  2014. Histon  H3  phosphorylation  near  the nucleosome  dyad  alters  cromatin structure. J.  Nucleic  Acid  Research, 42:4922-4933. http://dx.doi.org/10. 1093/nar/gku150.
Nurilmala,  M.  dan  Y.  Ochiai.    2016.
Molecular characterization of
southern  bluefin  tuna  myoglobin ( Thunnus  maccoyii ). J.  Fish Fisiology  and  Biochemistry, 42:
1407-1416.  http://dx.  doi.org/10.100
7/s1069501602280.
Ovchinnikova,  T.V.,  S.V.  Balandin,  G.M. Aleshina, A.A. Tagaev, Y.F. Leonova, E.D. Krasnodembsky, A.V. Men’shenin,  and  V.N.  Kokryakov. 2006.  Aurelin, a novel antimicrobial peptide  from  jellyfish  Aurelia  aurita with  structural  features  of  defensins and  channel-blocking  toxins. J. Biochemical and Biophysical Research  Communications, 348:514– 523. 10.1016/jbbrc200607078.
Sathyan, N., R. Philip, E.R. Chaithanya, and P.RA. Kumar.  2012.  Identification
and  molecular  characterization  of molluskin,  a  histone-H2A-derived antimicrobial  peptide  from  molluscs. J.  International  Scholarly  Research Network,
2012 :1-6. http://dx.
doi.org/ 10.5402/2012/219656 Toke,  O.  2005. Antimicrobial  peptides:  new candidates  in  the  fight  against bacterial  infections. J.  Biopolymers
(Peptide Science) , 80:717–735. http://dx. doi.org/ 10.1002/bip20286. Tidona,  F.,  A.  Criscione,  A.M  Guastella,  A. Zuccaro,  S.  Bordonaro,  and  D. Marletta. 2009.  Bioactive peptides in dairy  products. Ital  J.  Anim  Sci , 8:315-340. 10.4081/ijas.2009.315. Viruly,  L.    2011.    Pemanfaatan  siput  laut gonggong  ( Strombus  canarium )  asal Pulau Bintan Kepulauan Riau
Menjadi Seasoning Alami.  Institut Pertanian Bogor. Bogor. 94 hlm.
Zoysa,  M.D.,  I.  Wang,  Y.  Lee,  S.  Lee,  S.J. Lee,  and  J.  Lee.    2010.    Defensin from  disk  abalone Haliotis  discus discus :  Molecular  cloning,  sequence characterizatioan and immune response against bacterial infection. J Fish  and  Shellfish  Immun. 28:  261- 266. http://dx.doi.org/ 10.1016/jfsi20 0911005.
Zoysa,  M.D.,  C.  Nikapitiya,  I.  Whang,  J.S. Lee,  and  J.  Lee.    2009.  Abhisin:  a potential antimicrobial peptide derived  from  histone  H2A  of  disk Abalone  ( Haliotis  discus  discus ). J. Fish  and  Shellfish  Immunology , 27
:639-646. http://dx.doi.org/10. 1016/jf si200908007. Received : 11 October 2018 Reviewed : 30 January 2019 Accepted : 18 March 2019