## Jejak Evolusi dan Spesiasi Marga Indigofera

## Muzayyinah
Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor Indonesia (Alamat Instansi: Program Studi Pendidikan Biologi FKIP Universitas Sebelas Maret Surakarta-Indonesia)
Diterima 07 Juni 2012, disetujui 21 Juli 2012
ABSTRACT -Initially  trace  the  genealogy  of  a  taxon  is  an  impossibility,  when  only few parameters available. Many parameters must be taken into account in data collec- tion.  Genealogy  of  plants  is  much  more  complicated  than  other  creatures.  One  of which that believed to trace the genealogy at the same time ensuring that there is spe- ciation  in  plants  is  molecular  identification,  using  either  chloroplast  genomes,  mito- chondrial  genomes  and  nuclear  genomes.  Until  recently  molecular  analysis  options that address to what, and how Indigofera for the benefit of science .
Keywords : evolution, speciation, Indigofera

## Review
Marga Indigofera termasuk  salah satu  anggota  dari  sukua Leguminosae .Sukua  ini Leguminosae mempunyai jumlah  jenis  terbesar  ketiga  setelah Asteraceae .  dan Orchidaceae .  Menurut data  dari Royal  Botanic  Gardens ,  Kew and Missouri  Botanical  Garden ,  jumlah jenis  pada Angiospermae 352.000 Gym- nospermae 1000 Pteridophyta 13.000 dan Bryophyta 20.000. Jumlah jenis dari suku Asteraceae 27.773 Orchidaceae 27.135 dan Leguminosae 23.535  (Ariati et al. 2001). Suku Leguminosae dikelompokkan  menjadi  tiga  anaksuku, yaitu Mimosoideae,  Papilionideae ,  dan Caesalpinioideae .
Indigofera dalam bahasa latin be- rarti  warna indigo yang  menghasilkan warna biru alami dari organ daun dan ba- tang.  Marga Indigofera mempunyai
jumlah  jenis sangat  besar dan tersebar di seluruh  wilayah  tropik  dan  subtropik.  Di seluruh  dunia  tercatat  sejumlah  600-800 jenis (Willis 1985), 700 jenis (Sanjappa et al. 1985),  dan  750  jenis  (Xin-Fen  1912, Schrire  2009).  Pusat  keanekaragaman terbesar  berada  di    Afrika  dan  Madagas- kar  berjumlah  550  jenis  dan  di  Asia  105 jenis  (Schrire et  al. 2009).  Lebih  lanjut Kort  &  Thijsse  (1985)  menemukan sejumlah  39  jenis  di  Asia  tenggara.  Di China  terdapat 81 jenis (45 endemik dan 2  introduksi)  (Xin-Fen  2007),  di  Nigeria Barat  terdapat  78  jenis,  di  Pakistan ditemukan  24  jenis,  dan  di  Burma  ter- dapat 27 jenis (Sanjappa et al.
1985),bahkan di Saudi Arabia teridentifi- kasi sebanyak  20 jenis dan lima varietas (Al-Ghamdi 2011). Revisi marga Indigo- fera Asia Tenggara yang dikerjakan oleh Kort  &  Thijsse  (1985)  menyatakan
jumlah  jenis  yang  terdistribusi  di    Indo- nesia sebanyak 18 jenis.
Indigofera adalah  sosok  nama tumbuhan yang tidak asing bagi kalangan pecinta  warna  alami,  pecinta  batik  tulis, dan herbalis.  Beberapa tahun terakhir ini telah  terjadi  peningkatan  penggunaan pewarna dan warna alami untuk pewarna tekstil, termasuk batik, makanan, farmasi, dan  kosmetik.  Permintaan  meningkat  se- jalan dengan meningkatnya sifat pewarna sintetis  beracun  dan  bersifat  karsino- genik. Warna indigo yang oleh  masyara- kat  umum  dikenal  dengan  nila  terkan- dung di dalam jenis tumbuhan Indigofera .
Diantara  banyak  pewarna  alami  yang  di- akui  di  seluruh  dunia,  nila  merupakan warna paling tua (Laitonjam & Wangkheirakpam 2011). Senyawa indigo yang  terkandung  dalam  daun Indigofera- merupakan turunan dari glukosida berwarna  bentuk  enol  dari  indoxyl  yang dikenal  dengan  indikan  (indoxyl-β-D- glucoside). Warna  biru  Indigo  bisa  ter- bentuk  dari  indican  yang  mengalami fermentasi. Sifat  warna  biru,  yang  tidak luntur  dan  tetap  tahan  disebut  sebagai “ the king of colour ”.
Jenis-jenis Indigofera penghasil warna  alami  tekstil  adalah I.tinctoria,
I.anil, I.disperma, I.argentea,
I.pseudotinctoria, I.augustifolia,
I.arcuata, I.carolimaria, I.cinerea., I.coerulea,I.endecaphylla,
I.arrectaI.glabra,I.hirsuta,
I.indica.I.emarginata (Georgievics  1892). Selain itu menurut Kort & Thijsse (1985) dan  Guirola  (2010), I.  arrecta,  I.  suffruti- cosa subsp. suffruticosa, dan I.suffruticosa subsp. guatemalensis juga menghasilkan  pewarna alami.
Kegunaan  lain, Indigofera juga bermanfaat  sebagai  tumbuhan  penutup tanah  yaitu: I.  arrecta,  I.  hirsuta,  I.  spi- cata,  I.  suffruticosa,  dan  I.  tinctoria; penghasil senyawa toksik,yaitu I. galegoides,  I.  hirsuta,  I.  linifolia,  I.  lin- naei,  dan  I.  spicata .  Diakui  pula  bahwa ekstrak I. tinctoria mengandung senyawa bioaktif  flavonoid,  saponin,  tannin,  ster- oid, terpen, phenol dan antroqui- non.Ekstrak daun dapat menghambat per- tumbuhan bakteri gram + dan kanker paru- paru  (Renukadevi  &Sultana  2011),  an- tiepileptik  (Garbhapu et  al .  2011),  dan sebagai  antioksidan  potensial  (Philip et al. 2010).
Beberapa  jenis Indigofera merupa- kan  tumbuhan  asli  Indonesia  yang ditemukan  di  Jawa  dengan  nama  tom (Jawa) dan tarum (Sunda). Tumbuhan ini sangat  mashur  dimasa  kolonial  Belanda dan telah diekspor ke Eropa pada abad 13 bersama rempah-rempah. Menurut Georgievics (1892), kandungan indoginin dalam  tumbuhan Indigofera yang  berasal dari  Indonesia  yang  dikenal  dengan  java indigo  berkisar  56-98%  merupakan
jumlah  yang  tinggi  jika  dibandingkan dengan tumbuhan dari India.
Adalah  ironis  nasib  yang  terjadi pada  marga Indigofera ini,  kemashuran warna  yang  dihasilkan  sebagai  warna alami  tidak  menjadikan  tumbuhan  ini menarik untuk diteliti. Tumbuhan ini be- gitu  asing  bagi  peneliti  namun  sangat dirindukan  oleh  sebagian  pembatik,  pe- lestari  lingkungan,  herbalis,  dan  pecinta warna alami. Sangat minim informasi un- tuk  marga Indigofera baik  di  luar  mau- pun di  Indonesia. Keterbatasan data baik karakter  morfologi,  anatomi,  sitologi maupun  karakter  molekuler  inilah  yang mendorong  untuk  dikaji  lebih  lanjut  in- formasi tentang Indigofera . Diakui hanya 12% dari sejumlah puak dan marga yang digunakan sebagai sampel penelitian baik secara  morfologi  maupun  molekuler (Schrire et  al .  2009).    Sebagai  langkah awal  dalam  mengumpulkan  serpihan- serpihan  data  tentang  tumbuhan Indigo- fera ,  maka  tulisan  ini  dimaksud  untuk menelusuri  jejak  evolusi  serta  kemung- kinan adanya spesiasi dari marga Indigo- fera melalui  ciri  morfologi  dan  ciri  lain yang dianalisis.
Ciri  Marga Indigofera
Marga Indigofera masuk  dalam subsukua Papilionideae .  Pengelompokan dibawah  sukua  menjadi  3  subsukua, masih  ada  keraguan  karena Mimosoideae dan Papilionoideae adalah  monofiletik,
sedangkan Caesalpinioideae adalah para- filetik.  Sistematika Leguminosae tradi- sional  ini  (tidak  jarang)  telah  memodifi- kasi  secara  substansial  urutan  rekon- struksi berbasis filogenetik.
Linnaeus  (1959)    pada  awalnya membedakan Indigofera menjadi  3  bagi- an  yang  didasarkan  pada  bentuk  polong. Sebagai  tipe  dalam  identifikasi  adalah Indigofera  tinctoria . Anil dan Ameri merupakan sinonim untuk  marga Indigo- fera . Selanjutnya pada tahun 1760 marga Anil dan Ameri digabung  kembalimenjadi marga Indigofera (Linnaeus  1959).  Pada perkembangan selanjutnya marga Indigo- fera merupakan  peleburan  kelompok marga lain yang telah dideskripsi seperti: Sphaeridiophorum , Oustro- pus , Hemispadon , Eilemanthus , Amerocarpus , Achantonotus , Indigas- trum , Microcharis ,  dan Vaughania  ( Kort
& Thijsse 1985) .
Jika  dianalisis,  pengelompokan menuju  marga  tidak  mendasarkan  pada kandungan  zat  kimia  tetapi  cenderung pada  ciri  vegetatif.  Karakter  yang digunakan  dalam  penggolongan  marga- Indigofera meliputi  tangkai  daun  mene- bal,  bentuk  daun,  trikoma,  perbun- gaan,bentuk dan kedudukan buah, bentuk kelenjar pada endocarp, tanin pada endo- karp dan keberadaan asam  amino kanav- anin.  Tidak  semua  karakter  morfologi yang  digunakan  sebagai  penanda  meru-
pakan karakter unik, karena ciri trikoma- biramous merupakan karakter yang sama dengan  karakter  yang  ada  pada Astraga- lus .  Adanya  tangkai  daun  yang  menebal merupakan  ciri  dalam Tephrosieae,  Ro- binieae dan marga Galegeae . Perbungaan pada ketiak merupakan ciri dari Robinie- ae .
Marga Indigofera mempunyai perawakan  berupa  pohon,  perdu,  atau herba.  Beberapa  jenis  mempunyai  nodul pada  akar  (Kort  &  Thijsse  1984).  Pada semua  jenis  permukaan  batangnya- mempunyai  indumentum  berupa  trikoma uniseluler  ( malpighiaceus ). I.  tinctoria mempunyai trikoma pada permukaan ep- idermis,  pada I.  erelensis ditutup  oleh trikoma dengan panjang berbeda. Pada I. hirsuta trikoma  secara  ekstrim  tersebar pada  satu  sisi.  Anggota I.  colutea selain mempunyai  trikoma  biramous  juga plu- riceluler yang  berkelenjar  pada  bagian ujung,  tetapi  cepat  luruh.  Beberapa  jenis mempunyai  tipe  trikoma  biramous  pada permukaan  bawah  daun  dan  mempunyai kelenjar  berwarna  kuning-kehitaman  ( I. glandulosa ).  Bentuk  kelenjar  pada  mate- rial  hidup  sering  ditemukan  berbeda dengan  material  kering.  Ketika  masih segar  kelenjar  bentuk  bulat,  tetapi  dalam material kering berbentuk cakram.
Keanekaragaman  bentuk  daun dan bentuk polong menjadi karakter spe- sifik  pada  setiap  jenis. I.  cordifolia
mempunyai  daun  menjantung, I.  linifoli- a bentuk  daun  memita,  atau  bundar  telur sungsang  memanjang,  daun  tunggal  ter- dapat  pada  jenis I.  squalid,  I.  trifoliate,  I. minbuensis, dan I. sootopensis.
Perbungaan  bentuktandan  di  keti- ak  daun  terdapat  pada  semua  jenis.  Pan- jang  perbungaan  bervariasi,  perbungaan yang sangat pendek terdapat pada I. cor- difolia ,  ukuran  perbungaan  terpanjang pada  jenis I.  laxiflora .  Braktea  berbentuk segitiga memanjang dengan ujung  lancip kadang menyegitiga atau loncos, panjang bervariasi,  tidak  ada  brakteola.  Bunga kupu-kupu, semua jenis mempunyai vexi- lum tertutup  yang  mempunyai  trikoma, bentuk  trikoma  pada  bunga  bervariasi. Pada I.  trifoliate mempunyai  kelenjar hitam pada vexilum dan luna.
Seluruh  jenis  mempunyai  bentuk buah polong, namun letak dan kedudukan polong  terhadap  cabang  batang  sangat bervariasi  demikian  pula  bentuk  polong. Polong pada I. trifoliata bersayap pendek sepanjang  sutura, I.  glandulosa bagian tepi  melebar,  sementara  pada I.  nummu- larifolia bentuknya valcata dan  ujung meluncip  seperti  duri, I.  trifoliata mempunyai kelenjar bentuk cakram pada permukaan  bawah, I.  colutea glandula tersebar,  trikoma  merebah  pada  seluruh pemukaan  polong.  Pada I.  zollingeriana kedudukan buah tegak dengan batang.
Bentuk  buah  polong  yang  berva- riasi  digunakan  sebagai  dasar  penge- lompokan  kategori  dibawah  marga.  Ber- dasarkan  bentuk  polong  dan  jumlah  biji, marga indigofera dikelompokkan  men- jadi 4 yaitu: 1) Acanthonotus ( Echinate ): polong  bentuk  lancor  dengan  ujung  ber- duri,  2  bakal  biji,  1  biji,  contoh I.  num- mularifolia ;  2) Sphaeridiophorum: po- long  bulat  (spherical),  1  bakal  biji,  con- toh: I.  linifolia;  dan 3) Indigofera ( Eu- indigofera ):  polong  bundar;  1-20  ovul, contoh I.  tinctoria ;  dan  4) Amecarpus : polong  memipih,  ovule  1-20  contoh: I. senegalensis . Sementara ciri percabangan trichoma,  indumentum  dalam  veksilum dan bentuk polong digunakan sebagai ciri pembeda  untuk  pengelompokan  jenis  di Afrika.
Evolusi pada Marga Indigofera
Dalam  memahami  evolusi  suatu takson  diperlukan  analisis  komprehensif tentang ciri adaptif takson tersebut. Tum- buhan  yang  termauk  dalam  suku Legumi- nosae mengalami  peristiwa  evolusi dibuktikan  dengan  ditemukannya  fosil daun  dan  buah  yang  diidentifikasi  se- bagai anggota dari anakpuak Glycininae, puak Phaseoleae, subsukua Papilionideae .  Melalui  penga- matan terhadap fosil yang ditemukan pa- da  serpihan diatomaceus di  wilayah Lingu Shandong China yang di- perkirakan hidup  pada pertengahan  masa
Miocen  diidentifikai  sebagai Pueraria shanwangensis .  Pada  masa  yang  sama fosil  daun    berbentuk  daun  trifolit ditemukan  di  wilayah  Chojabaru  Kepu- lauan Iki Jepang diidentifikasi sebagai P. miothunbergia (Wang et  al. 2010).  Fosil lain  dari  sukua Leguminosae ditemukan pula di  Eropa, Amerika  Utara,  Australia, Slovenia, Austria dan Italia tetapi identif- ikasinya tidak sempurna.
Diversifikasi  yang  telah  terjadi pada  sukuLeguminosae  dimungkinkan oleh  sifat  koevolusi  dengan  polinator secara  baik.  Bunga  yang  actinomorf dinyatakan  lebih  primitif  dibandingkan dengan  bunga  yang zigomorf .  Laju  evo- lusi  dari actinomorf ke  dalam  bentuk zy- gomorf dipengaruhi  oleh gen cycloidea ( CYC ) (Cronk 2006). Evolusi pada sime- trisasi  bunga  ini  terjadi  karena  adaptasi terhadap polinator. Bunga zigomorf lebih efisien  dengan  bentuk  bagian  ventral bibir (labelum) yang mempunyai manfaat sebagai  panduan  visual  dan  tempat  lan- dasan  bagi  polinator.  Jumlah  benangsari yang  mereduksi,  menjadikan  serangga mudah  menjangkau  nektar.  Bunga  pada Papilionoideae tersusun atas sepal, petal, dan  organ  generatif.  Petal  bermodifikasi menjadi  tiga  bagian  yang  disebut  veksi- lum merupakan modifikasi  dari petal ba- gian  ventral,  sayap  merupakan  modifi- kasi  dari  petal  bagian  lateral  dan  lunas merupakan  modifikasi  dari  petal  bagian
dorsal.    Variasi  dan  perbedaan  tipe  petal epidermal  merupakan  ciri  evolusi  dari Papilionideae (Ojeda et al. 2009).
Karakter  lain  yang  mengalami evolusi  adalah  perawakan,  perawakan suatu  takson  dianggap  sebagai  ciri  prim- itif. Perawakan dari Leguminosae sebagi- an  besar  pemanjat  kuat,  menjalar,  dan perdu.
Penelitian  lain  terhadap  sifat  fisi- ologis  adalah  gelendong  kristal  protein (forisom) dalam jaringan elemen papilio- noid.  Identifikasi  terhadap  keberadaan forisom  berekor  dan  tidak  berekor menghasilkan  keanekaragaman  dalam puak Papilionoideae .  Anakpuak Galege- ae tidak  semua  anggotanya  mempunyai forisom.  Hal  ini  juga  terjadi  pada anaksuku Caesalpinioideae dan Mimosoi- deae (Peters et al. 2010).
Sejalan  dengan  evolusi  yang  ter- jadi  pada Leguminosae ,  laju  evolusi  da- lam  marga Indigofera sangat  dinamis.
Evolusi  yang  terjadi  pada Indigofera di- pengaruhi oleh faktor geografis, ekologis, dan  adaptasi  (Schrire  2009).  Penelitian molekuler  pada  marga Indigofera yang terdapat di negara Timur Jauh (Cina, Ko- rea  dan  Jepang)  dengan  penanda  nrDNA ITS  oleh  Choi  &  Kim  (1997)  bertujuan mengevaluasi  status  jenis  yang  ada  dan mengetahui  hubungan  kekerabatan  antar jenis.  Anggota  marga Indigofera yang diteliti  adalah  jenis I.  kirilowi,  I.  grandi-
flora,  I.  koreana,  I.  decora,  I.  venulosa dan I.  pseudotinctoria .  Dari  analisis  pe- runutan  DNA  dihasilkan  panjang  pasan- gan basa pada wilayah ITS-1 230-240 bp, ITS-2  211-213  bp,  sementara  pada  wila- yah 5,8S sebesar 161 bp. Sementara uku- ran  dan  isi  untuk  G  +  C  pada  wilayah ITS-1  (50,83  -  54,74%),  ITS-2  (44,69  - 48,36%).  Hasil  analisis  menunjukkan adanya  tingkat  evolusi  yang  berbeda  an- tara ITS-1 dan ITS-2. Analisis menggunakan  penanda  molekuler  ini dapat  menjawab  keraguan  dan  membuk- tikan bahwa I. kirilowi berbeda dengan I. koreana yang  semula  direkomendasikan sebagai  sinonim. I.  kirilowi telah  men- galami  kemandirian  evolusi  secara  cepat dari tetuanya I. pseudotinctoria . Dari an- alisis  ini  pula  dibuktikan  telah  terjadi evolusi  pada  jenis I.  decora dan I.  venu- losa yang  dipisahkan  oleh  Semenanjung Korea.
Schrire et  al .  (2009)  meneliti hubungan  filogenetik  pada  190  jenis Indigofera  yang  berasal  dari  Afrika  (173 jenis),  Madagaskar  9  jenis,  Asia  7  jenis dan  Autralia  1  jenis  yang  khusus dikoleksi  dari  wilayah  Palaeotropikal dengan teknik nrDNA ITS dan morfologi.  Data  molekuler  nrDNA  ITS mendukung data morfologi yang mengelompokkan
jenis Indigofera menjadi 4
subkelompok, yaitusubkelompok I.argentea-I.nyassica,
subkelompok I. compressa - I. tetrasperma ,  subkelompok I.  mysorensis -  I.  uniflora dan  subkelompok I. tanganyikensis  -  I.  bainesii .  Jenis-jenis yang berkelompok menjadi satu subkelompok  merupakan  jenis  yang mempunyai  geografi  dan  ekologi  yang sama.Dengan  demikian,  analisis  dengan penanda  molekuler  mendukung  asumsi bahwa  evolusi  terjadi  karena  faktor ekologi dan biogeografi.
Penelitian  dengan  teknik  dan metode  yang  sama  dilakukan    oleh Schrire et  al . (2009) terhadap 274 aksesi (266  jenis  ) Indigofera dan  5  marga  lain sebagai outgroup. Indekss retensi sebesar 0,753,  indekss  konsistensi  0,213,  jumlah nukleotid  833,  indel  33,  sementara karakter  morfologi  sebanyak  80  state. Data  filogenetik  menghasilkan  5  klade besar  yaitu:  CRIM  klade,  Paleotropical klade, Pantropical klade, Cape klade, dan Tethyan klade. CRIM merupakan kepanjangan dari
Cymopsis,
Rhynchotropis, Indigastrum, dan Microcharis ). Masing-masing klade tersusun  dari  subklade  dengan  jumlah populasi  berbeda  dari Indigofera yang mempunyai  tingkat  kekerabatan  terdekat dan  mempunyai  kesamaan    genetik, morfologi,  ekologi  maupun  geografi tinggi.
Spesiasi pada marga Indigofera
Spesiasi  adalah  proses  kreatif yang  mengarah  pada  penciptaan    keane- karagaman  jenis.  Jenis  baru  yang  ter- bentuk  mampu  mengadakan  pertukaran gen  atau  melakukan  perkawinan  secara alami ( interbreeding ) untuk menghasilkan  keturunan  yang  fertil. Anggota-anggota  suatu  jenis  memiliki lungkang  gen( gene  pool )  yang  sama  dan dengan aliran gen( gene flow ) yang bebas di  antara  organisme-organismenya.  Spe- siasi  merupakan  puncak  dari  proses  evo- lusi. Pertanyaan utama yang muncul ada- lah: apa penyebabspesiasi, dan bagaimanatingkat  spesiasibervariasidari waktu  ke  waktu?  Pertanyaan  mendasar ini akan sulit dijawab ketika mempelajari spesiasi hanya menggunakan fosil. Untuk dapat  menggambarkan apa dan bagaima- na  spesiasi  terjadi,  kita  harus  meng- gabungkan  data  genealogi  dengan  data filogenetik.
Dimasa  lalu  ada  teknik  untuk menggambarkan  tingkat  spesiasi  dari pohon  filogeni  yang  mencantumkan semua jenismenggunakan informasi pada waktu  berlalu  digambarkan  secara  grafis dengan  memplot  jumlah  pewarisan  me- lalui  waktu.  Jika  tingkat  spesiasi  telah konstan  selama  waktu  dan  antara  garis keturunan  dan  belum  ada  kepunahan, maka  spesiasi  dapat  diperkirakan.  Pen- dekatan ini telah digunakan  untuk mem- perkirakan  rata-rata  tingkat  spesiasi
selama  radiasi  di  Hawaii  pada  suku-
Asteraceae  ( Schrire et al . 2009). Namun pendekatan  ini  dipandang  kurang  akurat manakala  didapatkan  data  yang  tidak konsisten. Pendekatan itu harus memungkinkan  estimasi  lebih  luas  dari berbagai  parameter,  seperti  tingkat  para- filetik  dan  monofiletik  serta  frekuensi spesiasi hibrida.
Dimasa  sekarang  untuk  mem- perkirakan  adanya  proses  evolusi  yang mengarah  pada  spesiasi  dan  bahkan  ter- jadinya spesiasi disepakati, alat yang pal- ing  tepat  digunakan  adalah  perunutan DNA.  Filogeni  dengan  data  molekuler dapat  menjelaskan  pola  percabangan yang  tidak  dapat  dijelaskan  dengan  pen- dekatan  klasik  sebelumnya.  Pendekatan perunutan  DNA  lebih  diterima  karena DNA  dan  protein  umumnya  berevolusi lebih  teratur,  jumlahnya  lebih  melimpah dan merupakan data genetik. Tentu  yang lebih  diperhatikan  adalah  pemilihan wilayah  sekuensing,  teknik  dan  metode pengambilan  sampel,  demikian  pula faktor geografi dan ekologi yang menjadi pertimbangan  dalam  penetapan  sampel populasi.Selain faktor tersebut masih ada faktor  lain  yang  sangat  penting,  yaitu adanya variasi dalam wilayah, variasi da- lam  taksa,  adanya  pergeseran  dalam  re- lung  dan  perkawinan  aseksual  yang mempunyai  potensi  untuk  membentuk spesiasi(Barraclough &Nee, 2001).
Spesiasi  pada  populasi  tumbuhan umumnya dapat disebabkan oleh mekanisme  pengisolasian,  mutasi  dan seleksi alam, serta poliploidi. Mekanisme pengisolasian dapat terjadi karena adanya isolasi  geografi  pada  populasi  yang  se- lanjutnya  dapat  menciptakan  spesiasi simpatrik, alopatrik, peripatrik parapatrik dan spesiasi simpatrik karena poliploidi.
Hasil penelitian Sotuyo et al. (2007)  terhadap  jenis Caesalpinia  hin- tonii menarik  untuk  menjadi  contoh pembuktian  adanya  spesiasi  dengan keterbatasan  data  sepertitidak  memiliki data  fosil,  waktu  dan  jarak  penyebaran tidak diketahui, sehingga hipotesis mengenai  adanya  vikarian  dan  dispersal menjadi  dasar  pemikiran.  Namun    pem- ilihan  sampel  penelitian  yang  sangat cermat.  Jenis C.  hintonii merupakan  jenis endemik  di  wilayah  hutan  kering  Rio Balsas  Depression  (RBD)  dan  Tehuacan Cuicatlan Valley (TCV) yang terdiri  atas 6  jenis.  Analisis  DNA  pada  amplifikasi wilayah intron trnL, wilayah spacer trnL- F,  wilayah  intergenik  trnH-psbA  dan wilayah  accD-psal  digunakan  untuk melihat  aliran  genetik.  Hasilnya  menun- jukkan  tidak  ada  aliran  genetik  di  wila- yah  timur  yang  dihuni C.oyamae, C.epifanioi dan C.melanadenia .  Penga- matan terhadap dua populasi dari C. hin- tonii di  kedua  wilayah  menunjukkan kesamaan  genetik  tetapi  morfologi  ber-
beda.  Kedua  populasi  bisa  dianggap  se- bagai  jenis samar ( criptik ). Tidak mudah untuk  memutuskan  adanya  spesiasi  pada Caesalpinia  oyamae mengingat  tidak terjadinya aliran gen antar jenis. Diversi- fikasi  jenis  ini  menjadi  kompleks  terkait dengan kondisi lingkungan, orogeni, vul- kanisme dan glasiasi. Oleh karena itu di- perlukan  data  kompleks  lainnya  selain menggunakan  data  molekuler  seperti DNA  untuk  menentukan  tingkat  spe- siasi(Sotuyo et al . 2007).
Data  molekuler  untuk Indigofera sangat  terbatas.  Penelitian  yang  sudah dilakukan menggunakan pendekatan molekuler baru terbatas pada jenis di Af- rika dan Korea. Indigofera dari Indonesia belum  diteliti  secara  molekuler.  Choi  & Kim  (1997)  menganalisis  nrDNA  wila- yah  ITS  dan  5,8S  pada Indigofera yang ditemukan  di  China,  Korea  dan  Jepang dengan  menggunakan  6  jenis  yang  ber- masalah.  Permasalahan  yang  terjadi  ada- lah  adanya  hipotesis  bahwa  antara I. kirilowi yang  ditemukan  di  Chungnam Korea  dianggap  sinonim  dari I.  koreana yang ditemukan di Chunbuk Korea, I. ko- reana sangat  mirip  dengan I.  dekora yang ditemukan di China.
Nilai  divergensi  yang  dihasilkan dari  analisis  berkisar  0  -  13,49%,  indeks konsisitensi  sebesar  0,97  dan  indeks  re- tensi  sebesar  0,83;  jumlah  indel  ITS-1= 17,    ITS-2=  10;  besarnya  transisi  untuk
ITS-1=10 dan ITS-2=5; sementara besarnya  transversi  untuk  ITS-1=25  dan untuk  ITS-2=19;  nilai  divergensi  antara jenis  berkisar  0,00-1,15%.  Hasil  analisis filogenetik menunjukkan bahwa subseksi Psiloceratiae yang  terdiri  atas  5  taksa merupakan monofiletik meskipun mempunyai  resolusi  rendah.  Pada I. kirilowi ditemukan  adanya  penyimpan- gan  dari  jenis  ancestor  akibat  evolusi secara mandiri yang ditandai oleh adanya variasi  nukleotida  yang  tinggi.  Secara genetik I.  koreana berbeda  dengan I. kirilowi .Data  molekuler  ini  mendukung data morfologi yang berbeda antar kedua jenis tersebut,  yaitu pada bunga,   rambut pada bunga serta  geografi, dimana  untuk I.  koreana terdapat  di  sebelah  barat  daya Korea  sementara I.  kirilowi terdapat  di timur  laut  Korea.  Dengan  demikin  adan- ya proses spesiasi di Semenanjung Korea ini  menjadi    bukti  bahwa  telah  terjadi proses  evolusi  dalam  marga Indigofera. Penyimpangan genetik  juga   terjadi pada I. dekora yang mengalami poliploidi dari tetuanya I.  pseudotinctoria .  Dengan demikian keraguan status takson antara I kirilowii denga I koreana menjadi jelas. I dekora merupakan  hasil  proses  spesiasi melalui poliploidisasi.

## Ucapan Terima kasih
Ucapan terima kasih tak terhingga disampaikan kepada Bapak Mien A Rifai yang  selalu  mendorong  untuk  selalu menimba  dan  membaharui  ilmu  serta memberi  masukan  untuk  sempurnanya tulisan  ini.  Terima  kasih  pula  kepada  te- man-teman  di  BOT  Departemen  Biologi IPB  yang  telah  berkenan  membaca  dan memberi masukan guna perbaikan tulisan ini  dan  segenap  redaktur  Jurnal  Bi- oedukasi  Program  Studi  Pendidikan  Bi- ologi  FKIP  UNS  Solo  yang  menerbitkan makalah ini.

## Daftar Pustaka
Al-Ghamdi  FA.  (2011).  “Seed  Morphol- ogy  of  Some  Species  of Indigo- fera  (Fabaceae )  from  Saudi Arabia (Identification of Species and  Systematic  Significance)”.
American  Journal  of  Plant  Sci- ence , 2,484-495.
Ariati  S.R.,  Titut  Y.,Adi  S.  (2001).
Koleksi  Polong-polongan  Kebur Raya  Purwodadi .  Kebun  Raya Purwodadi, LIPI Lawang Barraclough  TG  &  Nee  S.(2001).  “Phy- logenetic and Speciation”. Trend in Ecology & Evolution
Vol.16:391-399
Choi B.H and Kim J.H. (1997). “ITS Se- quences  and  Speciation  on  far Eastern Indigofera (Legumi- nosae)”. Journal  of  Plant  Re- search 110:339-346
Cronk Q.C. 2006. “Legume Flower Bear Fruit”. Proc.  Natl.  Acad.  Sci . USA Vol. 103 (13): 4801-4802 Garbhapu  A,  Yalavarthi  P,  Koganti  P.
2011.”Effect  of  Ethanolic  Ex- tract  of Indigofera  tinctoria on Chemically-Induced Seizures and  Brain  GABA  Levels  in  Al- bino  Rats”. Iranian  Journal  of
Basic
Medical
Sciences Vol.14(4):318-326 Georgievics  V.G.  1892. Der  Indi- go(Praktischen und Theo- retischen Standpunkt) . Leipzig &
Wien. Franz Deuticke. Guirola C. (2010). “ Natural Dyes ”. Aso- ciation Flaar Mesoamerica:
American .
Harvey W. & OW. Sonder. (1894). Flora Capensis Vol. 2. Leguminosae to Loranthaceae .  Lovell  Reeve  & Co:London.
Jain  S,  Nayak  S  and  Joshi  P.(2010).
“Phytochemical Study and Phys- ical  Evaluation  of Indigofera tinctoria Leaves”. Pharmacia Globale (IJCP), Vol.01 :1-5
John P. & Angelini LG. (2009). “Indigo– Agricultural  Aspect”. Handbook of  Natural  Colorants. John Wiley & Sons:United Kingdom Kadolph  S,  (2008).  “ Natural  Dyes:  A Traditional  Craft  Experience New  Attention ”.  Departmen  of
Apparel,  Educational  Studies and  Hospital  management  at  Io- wa State University: USA
Kort  ID.  & Thijsse G.  (1984). “Revision of  The  Genus Indigofera ( Leg- umenosae-Papilionoideae ) in
Southeast  Asia”. Blumea 30 (1984): 89-151.
Laitonjam W.S.  and  Wangkheirakpam S.D. (2011). “Comparative study of the major components of the indigo dye obtained from Stro- bilanthes flaccidifolius Nees. and
Indigofera tinctoria Linn”. In- ternational Journal of Plant Physiology and Biochemistry vol.3 (7): 108-116 Linnaeus C. 1959. Species Plantarum .
Bernard Quaritch LTD. Berdnar Quartch: London Masih T., Khan A., Meo AA., Akhtar T. (2005).  “Palynological  Studies of  Some  Genera  of  Legumi- nosae”. Journal Science & Tech- nology.  Peshawar  University. 2005 , 29 (1): 19-26
Ojeda,  Ortega  F.,  Cronk  Q.C.  (2009).
”Evolution  of  Petal  Epidermal
Micromorphology  in  Legumi- nosae and Its Use as a Marker of Petal  Identity”. Annals  of  Bota- ny . Nov: 104 (6): 1099-1100 Peters  WR.,  Haffer  D.,  Hanakam  C.B., Van  Bel  A.J.E.,  Knoblauch  M.
(2010). “Legume Phyloheny and The Evolution of A Unique Con- tractile  Apparatus  That  Regu- lates  Phlom  Transport”. Ameri- can  Journal  of  Botany 97  (5): 797-808
Philip A, Philip S,
Arul V,Padmakeerthiga  B,  Santha  S, Sethupathy S. (2010).”Free Rad- ical Scavenging Activity of Leaf Extracts  of  Indigofera  Aspala- thoides-An  in  vitro  Analysis”. Journal  of  Pharmaceutical  Sci- ences and Research . Vol.2(6):322-328
Renukadevi  K.P.  &  Sultana  S.S.  (2011).
“Determination of Bacterial, An- tioxidant and Cytotoxicity Effect of Indigofera  tinctoria on  Lung Cancer Cell Line NCI - h69”. In- ternational  Journal  of  Pharma- cology 7 (3): 356-362
Rifai M.A. (1979). Daftar Istilah Biologi . Pusat  Pembinaan  dan  Pengem- bangan Bahasa. Departemen Pendidikan dan Kebudayaan: Ja- karta
Sanjappa M. (1985). “The Marga Indigo- fera L. (Fabaceae-papilionaceae) In Burma”. Reindwardtia Vol. 10
(2): 211-244 .
Schrire B.D.,  Lavin  M.,  Barker N.P.  and Forest  F.  (2009).  Phylogeny  of The  Tribe Indigofereae ( Legu-
minosae-Papilioniodeae ):  Geo- graphically  Structure  more  in Succulent-Rich  and  Temperate Setting  Than  in  Grass-Rich  En- vironments). American  Journal of Botany 96 (4): 816-825
Siva,  R.  (2007).  “Status  of  Natural  dyes and  dye-yielding  Plants  in  In- dia”. Current  Science,  Vol.  92.  ( 27): 916-925
Sotuyo  S,  Salinas  A.D,,  Chase  M.W., Lewis  G.P,  and  Oyama  K. (2007).  “Cryptic  Speciation  in the  Caesalpinia  hintonii  Com- plex  (Leguminosae:  Caesalpin- ioideae)  in  a  Seasonally  Dry Mexican  Forest”. Annals  of Botany 100: 1307-1314
Soladoye  M.O.,  Sonibare  M.A.  and Chukwuma  E.C.  (2010).  “Mor- phometric  Study  of  the  Marga
Indigofera Linn.  ( Leguminosae- Papilionanideae ) in South- Western Nigeria”. International Journal of Botany :1-9
Wang  Q,  Manchester  S.R,  Dilcher  D.L.
(2010).”Fruit  and  Folliage  of Pueraria  (leguminosae,  Papili- onoideae) From The Neogene of Eurasia and Their Biogeographic Implications”. American Journal of Botany 97 (2): 1982-1998.
Willis  J.C.  (1985). A  Dictionary  of  the Flowering  Plants  and  Fern . Cambridge  University  Press: London.
Xin-Fen.  (2007).  “Two  Newly  Recorded Species  of Indigofera ( Fabace- ae) in  China. Acta  Phytotaxo- nomica Sinica 45(6): 841-848