Jurnal Farmasi Galenika (Galenika Journal of Pharmacy) 2019; 5 (1): 26 – 32 ISSN : 2442-8744 (electronic) http://jurnal.untad.ac.id/jurnal/index.php/Galenika/index
DOI: 10.22487/j24428744. 2019.v5.i1.12013

## Fungi  Endofit  dari  Tanaman  Secang  (Caesalpinia  sappan  L)  Sebagai Penghasil Senyawa Antioksidan
Endophytic  Fungi  from  Secang  (Caesalpinia  sappan  L)  as  Producer  of  Antioxidant Compounds
Amirullah, Sartini, Firzan Nainu
Fakultas Farmasi, Universitas Hasanuddin, Makassar, Indonesia, 90245
Article Info: Received: 01 March 2019 in revised form: 05 March 2019 Accepted: 20 March 2019 Available Online: 20 March 2019

## ABSTRACT
Endophytic fungi are microbes that  reside symbiotically in the plant tissues with undetected negative impacts to their host plants. These fungi are able to produce  elements  similar  to  those  produced  by  their  host  plants.  Secang ( Caesalpinia sappan L . ) has been known as one of the medicinal plants that contains compounds with antioxidant activity thus promote a hypothesis that its endophytic fungi may yield a similar antioxidant effect. In this study, the isolation  of  endophytic  fungi  from  Secang  as  the  producer  of  antioxidant compounds  was  carried  out.  At  the  initial  stage,  endophytic  fungi  were isolated from the leaves, the twigs, the stems, and the roots of Secang using the  agar  plate  method.  Pure  fungi  isolates  were  then  subjected  to fermentation  process  using  the  PDB  growth  medium  supplemented  with yeast extract and were constantly shaken for 12 days at a speed of 200 rpm to  produce  secondary  metabolites.  Fermentates  obtained  from  all  fungi isolates  were  then  extracted  using  ethyl  acetate  and  further  tested  for  their antioxidant  activities.  In  this  study,  of  19  isolates  that  were  obtained  from four  parts  of  the  Secang,  five  fungi  isolates,  coded  as  IFD1,  IFD4,  IFR5, IFA1,  and  IFA2  were  found  to  yield  antioxidant  activities  demonstrated  by the presence of yellow spots on the chromatogram.
Keywords :
Endosymbionts Caesalpinia sappan DPPH Antioxidant
Corresponding Author: Firzan Nainu Fakultas Farmasi, Universitas Hasanuddin
Makassar, 90245, Indonesia Phone: +62 411 588556
Email: firzannainu@unhas.ac.id
Copyright © 2019 JFG-UNTAD
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.

## How to cite (APA 6th Style):
Amirullah., Sartini., Nainu, F. (2019). Isolasi Fungi Endofit dari Tanaman Secang ( Caesalpinia sappan L), Sebagai Penghasil Senyawa Antioksidan. Jurnal
Farmasi Galenika : Galenika Journal of Pharmacy, 5 (1), 26-32. doi:10.22487/j24428744.2019.v5.i1.12013

## ABSTRAK
Fungi endofit hidup bersimbiosis di dalam jaringan tanaman tanpa memberikan efek berbahaya bagi  inangnya.  Fungi  endofit  tersebut  mampu  menghasilkan  senyawa  yang  mirip  dengan  yang dihasilkan  oleh  tanaman  inangnya.  Secang  ( Caesalpinia  sappan L.) merupakan  salah  satu  tanaman obat  yang  telah  diketahui  memiliki  kandungan  senyawa  dengan  aktivitas  antioksidan  sehingga mendorong hipotesis bahwa fungi endofit yang ada di dalamnya dapat menghasilkan efek antioksidan yang  serupa.  Pada  penelitian  ini,  isolasi  fungi  endofit  dari  Secang  sebagai  penghasil  senyawa antioksidan telah dilakukan. Pada tahap awal, isolasi fungi endofit dari daun, ranting, batang, dan akar Secang  dilakukan  dengan  metode  agar  cawan.  Isolat  murni  selanjutnya  diproses  melalui  fermentasi menggunakan  media PDB yang ditambahkan dengan  ekstrak yeast dan  dikocok selama 12 hari pada kecepatan  200  rpm  untuk  memproduksi  senyawa  metabolit  sekunder.  Fermentat  yang  diperoleh kemudian  diekstraksi  dengan  etil  asetat  untuk  memperoleh  ekstrak  yang  akan  digunakan  dalam pengujian  aktivitas  antioksidan.  Dalam  penelitian  ini  diperoleh  19  isolat  dari  empat  bagian  tanaman dimana  lima  isolat  fungi,  dengan  kode  IFD1,  IFD4,  IFR5,  IFA1,  dan  IFA2  diketahui  memiliki aktivitas antioksidan yang terlihat dengan adanya spot kuning pada kromatogram.
Kata Kunci : Endosimbion, Caesalpinia sappan , DPPH, Antioksidan

## PENDAHULUAN
Produk  alami  yang  ditemukan  dari  berbagai sumber  alam  umumnya  berupa  metabolit  sekunder yang  diproduksi  oleh  organisme  sebagai  respons terhadap  rangsangan  eksternal  misalnya  perubahan nutrisi atau infeksi akibat serangan pathogen (Strohl, 2001;  Tan et  al. 2001).  Melalui  serangkaian penelitian,  telah  diketahui  bahwa  tanaman  maupun mikroba  dapat  menghasilkan  metabolit  sekunder dengan  berbagai  aktivitas  biologik  yang  ternyata berkhasiat untuk mengobati berbagai penyakit (Radji, 2005; Strobel and Daisy, 2003).
Salah  satu  mikroba  yang  saat  ini  memperoleh perhatian  cukup  besar  dalam  dunia  farmasi  dan kedokteran adalah fungi endofit, Fungi ini merupakan organisme  multiseluler  yang  menetap  didalam jaringan  tanaman  tanpa  memberikan  efek  berbahaya bagi tanaman tersebut. Selain itu, fungi endofit dapat menghasilkan  senyawa  metabolit  yang  memiliki aktivitas serupa dengan yang dihasilkan oleh tanaman inangnya (Radji, 2005).
Dewasa  ini,  beberapa  penyakit/gangguan termasuk  penuaan  dini  dan  kanker  telah  diketahui timbul  akibat  meningkatnya  serangan  radikal  bebas (Ames  and  Shigenaga,  1992).  Radikal  bebas merupakan  istilah  ilmiah  untuk  atom-atom  atau molekul-molekul  yang  memiliki  elektron  tanpa pasangan. Atom maupun molekul tersebut cenderung
kurang  stabil  dan  akan  berupaya  untuk  mencari elektron  yang  lain  untuk  saling  berpasangan (Clarkson and Thompson, 2000). Radikal bebas dapat masuk  ke  dalam  tubuh  dan  menyerang  sel-sel  yang sehat sehingga menyebabkan sel-sel tersebut kehilangan fungsi dan strukturnya dan pada akhirnya berpotensi menyebabkan terjadinya kanker (Liochev, 2013).  Untuk  mengatasi  radikal  bebas,  tubuh  telah dilengkapi  dengan  sistem  antioksidan  endogen termasuk  di  antaranya  melalui  bantuan  enzim superoxide  dismutase (SOD),  enzim catalase ,  dan beberapa  enzim  lainnya  yang  diproduksi  sebagai respon terhadap peningkatan radikal bebas (Daniel et al. 2010).  Akan  tetapi,  dalam  kasus  peningkatan radikal  bebas  yang  terlalu  berlebihan,  penggunaan senyawa antioksidan eksogen sangat diperlukan oleh tubuh  agar  mencegah  terjadinya  stres  oksidatif  yang berkepanjangan.
Salah  satu  tanaman  yang  memiliki  potensi sebagai  penghasil  senyawa  antioksidan  eksogen adalah  Secang  ( Caesalpinia  sappan L.)  (Lim et  al. 1996;  Utari,  2017).  Menurut  Utari  (2017),  ekstrak kayu Secang memiliki aktivitas antioksidan berdasarkan  analisis  menggunakan  metode  DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil)  dimana  ekstrak  Secang memiliki  nilai  IC 50 sekitar  15,69  ppm  sehingga dikategorikan  sebagai  ekstrak  dengan  aktivitas antioksidan  yang  sangat  kuat.  Hingga  saat  ini, beberapa senyawa yang dihasilkan oleh fungi endofit
termasuk  di  antaranya  pestacin  dan  isopestacin  yang dihasilkan  oleh  endofit P.  microspora ,  telah dilaporkan  memiliki  aktivitas  sebagai  senyawa antioksidan. Senyawa-senyawa tersebut diduga berhasiat  sebagai  antioksidan  karena  struktur molekulnya mirip dengan flavonoid (Strobel, 2002).
Berangkat  dari  konsep  bahwa  tanaman  secang memiliki  kandungan  senyawa  antioksidan  yang sangat poten dan fungi endofit memiliki kemampuan untuk  menghasilkan  senyawa  serupa  tanaman inangnya,  kami  memiliki  hipotesis  bahwa  fungi endofit  tanaman  Secang  dapat  digunakan  sebagai sumber  alternatif  untuk  menghasilkan  senyawa antioksidan  poten  tersebut.  Hipotesis  tersebut kemudian  kami  buktikan  melalui  serangkaian eksperimen yang dilakukan dalam penelitian ini.

## METODE PENELITIAN

## Alat dan bahan
Alat-alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini meliputi  Laminar  air  flow  (LAF),  lemari  pendingin, lampu  UV  254  nm  dan  366  nm,  Inkubator (Memmert),  Autoklaf  (Hirayama  HVA-85),  oven (Memmert) shaker, cawan petri (Normax), timbangan analitik  (Henher  Scale),  gelas  Erlenmeyer  (Pyrex), gelas kimia 250 dan 500 ml (Pyrex), pipa kapiler, dan vial.  Adapun  bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah aquadest, etil asetat, etanol 70%, media  Potato  dextrosa  agar  (PDA,  Merck ® ),  potato dextrosa  broth  (PDB,  Merck ® ),  metanol  (Merck ® ), etil asetat (Merck ® ), klorofom, kloramfenikol, DPPH (1,1-difenil-2-pikrilhidrazil),  ekstrak  yeast,  Natrium hipoklorit  (NaClO)  5,25  %,  Lactophenol  blue,  dan lempeng KLT GF254.

## Prosedur Penelitian

## 1. Isolasi fungi endofit dari tanaman Secang
Sampel yang diperoleh dari tanaman Secang, berupa daun,  ranting,  batang,  dan  akar  terlebih  dahulu dibersihkan dan dicuci dengan air mengalir selama 5 menit.Selanjutnya  direndam  menggunakan  etanol 70%  selama  5  menit.  Sampel  kemudian  dibilas menggunakan aquadest steril. Masing-masing bagian tanaman dipotong-potong kurang lebih 1 x 2 cm dan dilanjutkan  dengan  sterilisasi  permukaan,  berturut- turut  menggunakan  larutan  etanol  70  %  selama  3-5 menit  dan  NaClO  5,25  %  selama  3-5  menit  untuk bagian  akar  dan  kulit  batang  dan  1-3  menit  untuk bagian  daun  dan  ranting.  Potongan  tanaman kemudian  dikeringkan  di  atas  kertas  saring  steril,
kemudian  dibelah  menjadi  dua  bagian  yang  sama. Potongan  sampel  selanjutnya  ditempelkan  secara aseptik  pada  permukaan  media  PDA  steril  yang mengandung  antibiotik  kloramfenikol  0.05  %  lalu diinkubasi pada suhu kamar selama 5 sampai 14 hari. Bentuk dan warna koloni isolat fungi yang diperoleh kemudian  diamati  dan  selanjutnya  masing-masing isolat dengan bentuk dan warna koloni yang berbeda dipindahkan  ke  dalam  media  PDA  berulang  kali sampai  diperoleh  kultur  murni.  Setiap  koloni  yang murni  dipindahkan  ke  media  PDA  miring  untuk disimpan  sebagai  kultur  persediaan  ( stock  culture ) dan  kultur  kerja  ( working  culture )  (Sartini et  al. 2011).

## 2. Produksi metabolit sekunder
Pembuatan  kultur  starter  dibuat  dengan  cara mensuspensikan  koloni  yang  tumbuh  pada  media agar  miring  dengan  menggunakan  aquadest  steril kemudian  dituang  ke  dalam  erlemeyer  yang  berisi medium  PDB  yang  telah  ditambahkan  ekstrak  yeast (PDY).  Selanjutnya,  campuran  diinkubasi  pada  suhu 25  °C  selama  3  –  5  hari.  Sebanyak  50  ml  kultur starter  dimasukkan  ke  dalam  200  ml  medium  PDY kemudian  dishaker  selama  12  hari  pada  suhu  25 o C (Sartini et al . 2011).
3. Identifikasi fungi endofit secara makroskopik. Identifikasi makroskopik dilakukan untuk mengetahui  bentuk  morfologi  dari  isolat  yang diperoleh  dari  proses  isolasi.  Identifikasi  ini dilakukan  melalui  pengamatan  langsung  warna permukaan  koloni  dan  bentuk  koloni  (Summerbell, 1996).

## 4. Ekstraksi hasil fermentasi
Hasil  fermentasi  yang  diperoleh  dari  proses fermentasi  tiap  isolat  fungi  endofit  kemudian diekstraksi  sebanyak  dua  kali  dengan  menggunakan pelarut  etil  asetat  (1:1  v/v)  dalam  corong  pisah selama 20 menit. Selanjutnya ekstrak yang diperoleh diuapkan  lalu  disimpan  pada  desikator  untuk digunakan pada uji selanjutnya (Peterson et al. 2005).

## 5. Uji aktivitas antioksidan secara kromatografi
Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  secara kualitatif  menggunakan  metode  kromatografi  lapis tipis  (KLT)  dimana  ekstrak  fermentat  ditotolkan pada lempeng KLT GF254 dan dielusi menggunakan fase  gerak  klorofom:metanol  dengan  perbandingan 8:1.  Selanjutnya  hasil  kromatogram  kemudian disemprot  dengan  larutan  DPPH.  Hasil  positif
diindikasikan  oleh  terbentuknya  spot  warna  kuning dengan  latar  ungu  pada  lempeng  KLT  yang menunjukkan  kandungan  senyawa  dengan  aktivitas antioksidan (Demirezer et al. 2001).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Eksperimen  untuk  mengisolasi  fungi  endofit tanaman  Secang  ( C.  sappan L.)  memberikan  hasil berupa  19  isolat  fungi  endofit  yang  memiliki karakteristik  warna  dan  bentuk  yang  berbeda (Gambar 1 dan Tabel 1). Dari Gambar 1 dan Tabel 1 terlihat  bahwa  19  isolat  fungi  endofit  berhasil diisolasi  dari  empat  bagian  tanaman  Secang  ( C. sappan L.)  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini. Lima isolat (kode IFD1-IFD5) diperoleh dari bagian daun, delapan isolat (kode IFR1-IFR8) diperoleh dari bagian  ranting,  tiga  isolat  (kode  IFB1-IFB3)
diperoleh  dari  bagian  batang,  dan  tiga  isolat  (kode IFA1-IFA3)  diperoleh  dari  bagian  akar,  dimana isolat-isolat fungi yang diperoleh memiliki karakteristik morfologi yang berbeda meliputi warna, dan  bentuk  koloni.  Seluruh  isolat  yang  diperoleh kemudian  diproses  ke  dalam  uji  skrining  aktivitas metabolit  sekunder  terhadap  beberapa  bakteri  uji (data  tidak  ditampilkan).  Dari  pengujian  skrining antibakteri  diperoleh  lima  isolat  fungi  endofit  yang memiliki  potensi  antibakteri.  Selanjutnya,  kelima isolat  fungi  endofit  tersebut  diproses  ke  dalam pengujian aktivitas antioksidan menggunakan DPPH untuk melihat potensi aktivitas antioksidannya. Pada penelitian  kali  ini,  tidak  semua  isolat  fungi  endofit yang  diperoleh  dilanjutkan  ke  pengujian  aktivitas antioksidan.
Gambar 1. Karakteristik morfologifungi endofit tanaman Secang ( C. sappan L.). Ket: IFD Isolat Fungi Daun, IFR Isolat Fungi Ranting, IFB Isolat Fungi Batang, IFA Isolat Fungi Akar.
Tabel  1.  Karakteristik  hasil  isolasi  fungi  endofit tanaman Secang ( C. sappan L.)
Fermentasi  metabolit  sekunder  fungi  endofit dilakukan dengan metode fermentasi cair menggunakan  medium  PDY  (medium  PDB  yang telah  ditambahkan  ekstrak yeast )  kemudian  dikocok selama  12  hari  pada  suhu  ruangan.  Setelah  proses fermentasi  dilakukan,  fermentat  kemudian  disaring untuk  memisahkan  biomassa  dan  cairan  fermentat. Cairan  fermentasi  diekstraksi  dalam  corong  pisah menggunakan  pelarut  etil  asetat  (1:1  v/v)  dalam corong  pisah  kemudian  diuapkan.  Penggunaan pelarut etil asetat dikarenakan oleh sifat senyawa etil asetat  yang  mampu  menarik  senyawa  polar  dan  non polar yang ada dalam cairan fermentat, sesuai konsep like  dissolve  like (Ansel,  1989)  dimana  senyawa yang  bersifat  polar  akan  larut  ke  dalam  bagian  polar dari pelarut dan senyawa bersifat nonpolar akan larut ke  dalam  bagian  nonpolar.  Selanjutnya  ekstrak  yang diperoleh  kemudian  digunakan  dalam  pengujian aktivitas antioksidan.
Pada  pengujian  aktivitas  antioksidan  secara kualitatif  digunakan  metode  kromatografi  lapis  tipis kontak.  Pada  proses  elusi  menggunakan  fase  diam silika  gel  GF254  dan  fase  gerak  eluen  campuran klorofom:metanol dengan perbandingan 8:1. Lempeng kromatogram yang telah  dielusi kemudian disemprot  dengan  larutan  DPPH.  Pada  lempeng tersebut terlihat bercak berwarna kuning dengan latar ungu  sesaat  setelah  penyemprotan  DPPH  dilakukan, mengindikasikan  bahwa  ekstrak  tersebut  memiliki kandungan  senyawa  dengan  potensi  antioksidan.  Uji antioksidan  DPPH  didasarkan  pada  kemampuan senyawa  aktif  antioksidan  untuk  meredam  aktifitas radikal bebas DPPH yang berwarna ungu membentuk senyawa  stabil  non-radikal  yang  bewarna  kuning. Aktivitas  penambahan  senyawa  DPPH  menunjukkan adanya  kemampuan  senyawa  antioksidan  untuk mendonorkan  elektron  atau  hidrogen  sehingga merubah radikal menjadi nonradikal yang lebih stabil (Bougatef et al . 2009).
Menurut  Sutomo et  al .  (2013),  bercak  noda pada  lempeng  kromatogram  (yang  terindikasi memiliki  aktivitas  antioksidan)  dapat  menangkap radikal  bebas  dan  menghasilkan  warna  kuning dengan warna latar ungu dalam waktu tidak lebih dari 30 menit. Hasil pengujian kami menunjukkan bahwa spot  kuning  terbentuk  pada  lempeng  kromatogram hasil fermentasi lima isolat, yaitu isolat dengan kode IFD1,  IFD4,  IFR5,  IFA1,  dan  IFA2  dalam  waktu kurang dari 30 menit, mengindikasikan bahwa kelima sampel  tersebut  memiliki  aktivitas  antioksidan (Gambar  2).  Dari  hasil  ini  terlihat  bahwa  fungi endofit  yang  berhasil  diisolasi  dari  bagian  daun,
Kode Isolat Ciri Makroskopik Fungi Endofit Hasil Isolasi dari Secang ( C. sappan L.) IFR1 Warna  koloni  coklat  kehitaman,  warna miselia  putih  keabu-abuan,  bentuk  koloni circular IFR2 Warna  koloni  putih  dengan  bentuk circular , pertumbuhan miselia halus
IFR3 Warna  koloni  putih  dengan  bentuk circular , pertumbuhan miselia halus dan melebar.
IFR4 Warna koloni putih cream, berbentuk circular pertumbuhan miselia padat dan agak rapat IFR5 Warna  koloni  coklat  kehitaman,  bentuk koloni  irregular,  pertumbuhan  miselia  halus agak berwarna putih IFR6 Warna  koloni  abu-abu,  berbentuk circular , pertumbuhan miselia halus dan rapat IFR7 Warna  koloni  putih  gading,  berbentuk circular , berlendir dan tidak memiliki miselia IFR8 Warna  koloni  putih,  berbentuk  irregular dengan  pertumbuhan  miselia  menyebar  dan halus. IFB1 Warna  koloni  putih  berbentuk circular dengan  pertumbuhan  miselia  menyebar  dan halus IFB2 Warna koloni putih agak kekuningan berbentuk circular ,  miselium  menyebar  dan halus IFB3 Warna  koloni  coklat  dengan  warna  miselia putih  keabu-abuan,  pertumbuhan  miselia menyebar dan halus IFA1 Warna  koloni  berwarna  abu-abu  kehitaman, dengan  bentuk  koloni  irregular,  pertumbuhan isolat terlihat kaku dan mengeras IFA2
Warna  koloni  hitam  dengan  warna  miselia abu-abu  tua,  koloni  berbentuk circular ,
pertumbuhan isolat terlihat kaku dan keras
IFA3 Warna  koloni  hitam,  berbentuk circular dengan pertumbuhan koloni yang kasar. IFD1 Warna  koloni  putih  dengan  bentuk  koloni circular ,  pertumbuhan  miselia  menyebar  dan halus IFD2
Warna koloni coklat dengan miselia berwarna abu,  bentuk  koloni circular ,  pertumbuhan miselia menyebar dan halus IFD3 Warna  koloni  putih  berbentuk circular dengan  pertumbuhan  miselia  menyebar  dan halus IFD4 Warna koloni putih agak kekuningan berbentuk circular ,  miselium  menyebar  dan halus IFD5
Warna  koloni  coklat  dengan  warna  miselia putih  keabu-abuan,  pertumbuhan  miselia menyebar dan halus
ranting,  dan  akar  Secang  mampu  menghasilkan metabolit  sekunder  yang  terindikasi  memiliki aktivitas  antioksidan.  Hal  ini  sesuai  dengan  hasil penelitian  sebelumnya  yang  melaporkan  bahwa ekstrak  daun  dan  ekstrak  batang  Secang  ( C.  sappan L.)  mengandung  senyawa  yang  memiliki  aktivitas antioksidan (Harjit et  al. 2016;  Utari,  2017).  Namun sayangnya,  dalam  penelitian  ini  kami  tidak melakukan  pengujian  terhadap  fungi  endofit  yang berhasil  diisolasi  dari  bagian  batang.  Walaupun demikian, berdasarkan pengujian aktivitas antioksidan  terlihat  bahwa  ekstrak  daun  maupun ekstrak  metabolit  sekunder  fungi  endofit  yang berhasil  diisolasi  dari  daun  Secang  ( C.  sappan L.) dapat  menghasilkan  senyawa  dengan  aktivitas antioksidan  serupa,  mengindikasikan  bahwa  transfer genetik  dapat  terjadi  antara  fungi  dengan  tanaman inangnya untuk menghasilkan senyawa yang memiliki  aktivitas  antioksidan.  Pada  akhirnya,  untuk membuktikan  keberadaan  proses  transfer  genetik antara  Secang  ( C.  sappan L.)  dan  fungi  endofitnya (maupun  sebaliknya),  maka  isolasi  dan  karakterisasi senyawa  dengan  aktivitas  antioksidan  yang  berasal baik  dari  bagian  tanaman  maupun  fungi  endofit  dari bagian  tanaman  tersebut  perlu  untuk  dilakukan  di kemudian hari.
Gambar 2. Hasil identifikasi secara kromatografi dan pengujian  aktivitas  antioksidan  isolat  fungi  endofit dari Secang ( C. sappan L.).
Ket:  IFD  Isolat  Fungi  Daun,  IFR  Isolat  Fungi Ranting, IFA Isolat Fungi Akar.

## KESIMPULAN
Dari  tanaman  Secang ( C.  sappan L.) diperoleh  19 isolat  fungi  endofit  yang  terdiri  dari  lima  isolat  dari bagian  daun,  delapan  isolat  dari  bagian  ranting,  tiga isolat  dari  bagian  batang,  dan  tiga  isolat  dari  bagian akar. Dari jumlah isolat yang diperoleh terdapat lima isolat  fungi  endofit  dengan  kode  IFD1,  IFD4,  IFR5, IFA1  dan  IFA2  yang  telah  dibuktikan  memiliki aktivitas antioksidan.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  rekan- rekan  dalam  tim  penelitian  di  grup  FN.  Penelitian yang  dilaksanakan  oleh  grup  FN  dibiayai  oleh Universitas  Hasanuddin  menggunakan  skema  biaya Benua  Maritim  Indonesia  Spesifik  (BMIS)  dan World Class University (WCU).

## DAFTAR PUSTAKA
Ames,  B.N.,  Shigenaga,  M.K.  (1992). DNA  damage by endogenous oxidants and mitogenesis as causes of aging and cancer. In: Scandalios (ed.),  Molecular  Biology  of  Free  Radical Scavenging  Systems .  Cold  Spring  Harbor
Laboratory Press. pp.1-2. Ansel,  H.C.  (1989). Pengantar  bentuk  sediaan farmasi .  Edisi  4.  UI  Press.  Jakarta.  hal  96,
147. Bougatef,  A.,  Muhammed,  H.,  Rafik,  B.,  Imen,  L., Yosra,  T.E.  and  Moncef,  N.  (2009). Antioxidant  and  free  radical-scavenging activities  of  smooth  hound  (Mustelus) muscle protein hydrolysates by gastrointestinal  proteases. Food  Chemical . 114:1198-12.
Clarkson,  P.M  and  Thompson,  H.S.  (2000). Antioxidants:  what  role  do  they  play  in physical  activity  and  health? Am.  J.  Clin. Nut . 72(2 Suppl):637S-46S.
Daniel,  R.M.,  Stelian,  S.,  and  Dragomir,  C.  (2010). The effect of acute physical exercise on the antioxidant status of the skeletal and cardiac muscle  in  the  Wistar  rat. Romanian Biotechnological  Letters .  15(3)  suppl:56- 61.
Demirezer,  L.O.,  Kruuzum-Uz,  A.,  Bergere,  I., Schiewe,  H.J.,  &  Zeeck,  A.  (2001).  The Structures  of  antioxidant  and  cytotoxic agents  from  natural  source:  Antraquinones and  tannin  from  roots  of Rumex  patientia , Phytochemistry . 58:1213-1217.
Harjit,  K.,  Amini,  M.H.,  and  Suttee,  A.  (2016). Evaluation  of  antioxidant  and  anthelmintic properties of Caesalpinia sappan L. leaves.
International  Journal  of  Pharmacognosy and  Phytochemical  Research .  8(2):  362- 368.
Liochev,  S.I.  (2013).  Reactive  oxygen  species  and the  free  radical  theory  of  aging, Free
Radical Biology and Medicine. 60:1-4.
Lim,  D.K.,  Choi,  U.,  and  Shin,  D.H.  (1996). Antioxidative  activity  of  some  solvent extract from Caesalpinia sappan L. Korean Journal  of  Food  Science  and  Technology .
28(1):77-82.
Peterson, S.W., Vega, F.E., Posada, F., and Nagai, C. (2005). Penicillium coffeae , a new
endophytic  species  isolated  from  a  coffee plant and its phylogenetic relationship to P.
fellutanum and P.  brocae based  on parsimony  analysis  of  multilocus  DNA sequences, Mycologia.
Radji,  M.  (2005).  Peran  bioteknologi  dan  mikroba endofit  dalam  pengembangan  obat  herbal, Pharmaceutical  Sciences  and  Research. 2(3):113-126.
Strohl,  W.A,  Rouse,  H.,  and  Fisher  B.D.  (2001).
Lippincott Illustrated Reviews: Microbiology.  Lippincott  Williams  & Wilkins. USA.
Strobel,  G.A.  (2002).  Microbial  gifts  from  rain forests. Can J Plant Pathol . 24:14-20.
Strobel,  G.A.,  and  Daisy,  B.  (2003).  Bioprospecting for  microbial  endophytes  and  their  natural products. Microbiol Mol Biol Rev.
67(4):491-502.
Sartini,  S.,  Asri,  R.M.,  dan  Ismail,  I.  (2017).
Pengaruh pra perlakuan sebelum pengeringan  sinar  matahari  dari  kulit  buah kakao  terhadap  kadar  komponen  fenolik dalam  ekstrak. Bioma:  Jurnal  Biologi Makassar. 2(1): 15-20.
Summerbell,  R.  (1996).  Identifying  filamentous fungi:  A  clinical  laboratory.  Ontario Ministry  of  Health.  Pennsylvania  State university. pp. 15-20.
Sutomo,  Wahyuono,  S.,  Rianto,  S.,  and  Setyowati, E.P.  (2013).  Isolation  and  identification  of active compound of n-hexane fraction from kasturi ( Mangifera casturi Kosterm.) against antioxidant and immunomodulatory activity, J. Biol. Sci . 13(7):596-604.
Tan, R.X. and Zou, W.X. (2001). Endophytes: a rich source  of  functional  metabolites. Nat  Prod Rep . 18(4):448-459.
Utari, F.D. (2017). Produksi antioksidan dari ekstrak kayu  secang  ( Caesalpinia  sappan L.) menggunakan  pengering  berkelembaban rendah, Jurnal  Aplikasi  Teknologi  Pangan. 6(3):1-4.