Kefir merupakan bahan pangan fungsional probiotik, terbuat dari susu yang difermentasi dengan kefir grains yang mengandung berbagai jenis bakteri dan ragi yang bermanfaat. Telah banyak dilakukan penelitian tentang efek kefir per oral pada sistem kekebalan tubuh, tetapi sedikit penelitian yang membuktikan efek komponen bioaktif kefir yaitu peptida dan eksopolisakarida (kefiran), terhadap respons imun. Tujuan penelitian ini adalah untuk membuktikan efek supernatan kefir susu kambing terhadap respons imun sukarelawan sehat secara in vitro .  Penelitian  dilakukan  pada  15  sukarelawan  sehat,  yang  diisolasi  PBMC-nya  dari whole  blood, kemudian dibagi menjadi 5 kelompok (K-, P1, P2, P3 dan P4) sebelum dilakukan kultur selama 4 hari. Hasil kultur diperiksa persentase sel T CD4 + , sel T CD8 + , IFN- γ, IL -4 menggunakan flowsitometri dan kadar IL-2, IL-10 menggunakan metode ELISA. Hasilnya didapatkan kefir tidak mempengaruhi persentase sel T CD4 + dan Sel T CD8+. Semakin tinggi  konsentrasi  kefir  yang  diberikan,  maka  semakin  tinggi  kadar  IFN- γ  dan  IL -4  yang  disekresikan,  namun terjadi penurunan pada kadar IL-2. Peningaktan signifikan terjadi pada kadar IL-10 kultur PBMC yang diberikan kefir dengan berbagai konsentrasi (p<0,01), terutama pada konsentrasi 1%. Hasil tersebut juga menunjukkan efek penting komponen bioaktif kefir terhadap respons imun. Kesimpulan dari penelitian ini adalah kefir dapat meningkatkan respons imun, melalui stimulasi sekresi IL-10 secara in vitro.
Kata kunci: kefir, eksopolisakarida, peptida, respons imun,  sitokin IL-10
Kefir is a functional foodstuff of probiotics, made from fermented milk with kefir grains containing various types of  beneficial  bacteria  and  yeast.  There  have  been  many  studies  on  the  effects  of  oral  kefir  on  the  immune system,  but  few  studies  have  shown  the  effect  of  bioactive  components  from  kefir  (peptides  and exopolysaccharides/ kefiran), on immune responses. The purpose of this study was to prove the effect of kefir supernatant from milk goat   on healthy immune volunteer response in  vitro. The study was conducted on 15 healthy volunteers, then isolated PBMC  from whole blood, then divided into 5 groups (K-, P1, P2, P3 and P4) before culture was done for 4 days. The harvested cells from culture were examined for the percentage of CD4 + T  cells,  CD8 + T  cells,  IFN- γ,  IL -4  using  flowsitometry  and  IL-2  levels,  IL-10  using  the  ELISA  method.  The  results obtained that kefir do not affect the percentage of CD4 + T cells and CD8 + T cells. The higher the concentration of kefir given, the higher levels of secreted IFN- γ and IL -4, but a decrease in IL-2 levels. Significant enhancement occurred  at  levels  of  IL-10  culture  PBMC  given  kefir  with  various  concentrations  (p  <0.01),  especially  at concentrations of 1%. These results also show the important effects of kefir bioactive components on immune responses. The conclusion of this study is that kefir can improve the immune response, through stimulation of IL-10 secretion in vitro.
Keywords: kefir, exopolysaccharides, peptide, immune response, IL-10 cytokine
Keywords: kefir, eksopolisakarida, peptide, immune response, IL-10 cytokine
Efek Kefir terhadap Respons Imun Sukarelawan Sehat Secara in vitro

## The effect of Kefir on The Immune Response of Healthy Volunteers In Vitro
Desie Dwi Wisudanti
Laboratorium Farmakologi Fakultas Kedokteran Universitas Jember Jalan Kalimantan No. 37 Kampus Tegalboto Jember 68121 e-mail korespondensi: desie.fk@unej.ac.id
Abstrak Abstract

## Pendahuluan
Bakteri yang termasuk flora normal  berperan dalam melindungi  tubuh  secara  imunologik  dengan menciptakan penghalang melawan kolonisasi bakteri patogen  (Calder and Kew,  2002).  Penghalang tersebut  dapat  dipelihara  dengan  cara  meyediakan suplemen  berisi  bakteri  hidup  yang  diinginkan disebut  sebagai  probiotik.  Organisme  probiotik dapat ditemukan dalam makanan fermentasi, antara lain  bakteri  asam  laktat  ( Lactobacillus  acidophillus , Lactobacillus  casei,  Enterococcus  faecium )  dan Bifidobacterium  spp .  Bakteri  probiotik  tersebut dapat berkompetisi dengan patogen dalam memperebutkan  nutrisi,  juga  dapat  meningkatkan respons imun usus terhadap bakteri patogen (Calder and Kew,  2002).  Selain  itu,  makanan  yang difermentasi  memiliki  daya  tahan  lebih  lama  dalam penyimpanan  dan  peningkatan  nilai  gizi  jika dibandingkan dengan makanan yang tidak difermentasi  (Farnworth,  2005).  Terdapat  beberapa hasil  olahan  fermentasi  susu  seperti  keju,  yoghurt, kefir, koumis dan yakult.
Kefir merupakan bahan pangan fungsional probiotik, terbuat  dari  susu  yang  difermentasi  dengan kefir grains yang mengandung  sekitar  40  jenis  bakteri ( beneficial  bacteria )  dan  ragi  ( yeast )  yang bermanfaat  (Farnworth,  2005;  Magalhaes et  al ., 2011).  Kefir  mirip  dengan  yogurt,  tetapi  kefir  lebih encer dan gumpalan susunya lebih lembut. Keunikan kefir  dibandingkan  susu  fermentasi  lain  adalah  cara pembuatannya  yang  menggunakan  biji-biji  kefir ( kefir  grains ),  berisi  berbagai  mikroorganisme  yang bermanfaat  (Sirirat,  2012).  Yogurt  lebih  dikenal daripada  kefir,  tetapi  analisis  terhadap  komposisi kefir menunjukkan adanya senyawa-senyawa bioaktif  yang  memberikan  manfaat  unik  bagi kesehatan.  Pada  saat  proses  fermentasi  akan terbentuk  peptida  dan  eksopolisakarida,  yang  kaya senyawa  bioaktif.  Kefir  merupakan  probiotik kompleks  karena  banyaknya  mikroorgnisme  di dalamnya  dan  beraneka  ragam  senyawa  bioaktif yang dapat terbentuk selama fermentasi (Farnworth, 2005).
Banyak  penelitian  mengenai  manfat  kefir  bagi kesehatan,  baik  dengan  menggunakan  supernatan kefir, kefir grains ataupun kefir itu sendiri, khususnya perannya sebagai imunomodulator. Fungsi imunomodulator  adalah  memperbaiki  sistem  imun yaitu  dengan  cara  stimulasi  (imunostimulan)  atau menekan/ menormalkan reaksi imun yang abnormal (imunosupresan). Imunomodulator terutama
dibutuhkan  untuk  kondisi  dimana  status  sistem imun  akan  mempengaruhi  kondisi  pasien  dan penyebaran  penyakit,  seperti  pada  kasus  terapi ajuvan  yang  melibatkan  infeksi  bakteri,  fungi  atau virus (Tjandrawinata et al ., 2005). Sel imun manusia terdiri  atas  sistem  imun  alami  ( innate  immune system )  dan  sistem  imun  adaptif  ( adaptive  immune system ).  Pada  sistem  imun  adaptif,  Sel  T  CD4 + akan berdiferensiasi  menjadi  sel  T h 1  dan  sel  T h 2, bergantung pada jenis antigen yang masuk ke dalam tubuh.  Diferensiasi  sel  T h 1  diperantarai  oleh beberapa  sitokin  antara  lain  IFN- γ  dan  IL -2,  yang akan  mengaktifkan  fungsi  makrofag  sedangkan  sel T h 2  diperantarai  oleh  sitokin  IL-4  dan  IL-10  sebagai sitokin  antiinflamasi.  Sitokin  sel  T h 1  dan  sel  T h 2 dapat  meregulasi  sekresi  antar  sitokin  dan  bahkan dapat  saling  menghambat  aktivitas  masing-masing sitokin  serta  merubah  keseimbangan  sitokin  yang disekresikan (Abbas and Litchman, 2010).
Beberapa  penelitian  tentang  efek  pemberian  kefir per oral terhadap sistem imun antara lain penelitian terhadap  supernatan  kefir  yang  diberikan  secara oral  pada  tikus  terbukti  mampu  mengaktifkan  sel imunitas  alami  seperti  merangsang  proliferasi  sel IgA + dan  sitokin-sitokin  tertentu  (Farnworth,  2008). Komponen  dinding  sel  dan  sitoplasma  beberapa jenis bakteri asam laktat menunjukkan efek sebagai imunostimulan  (Hong et  al. ,  2008).  Pada  penelitian lainnya,  kefir  mampu  memodulasi  sistem  imun mukosa bergantung dengan dosis (Farnworth, 2005) dan  memodulasi  respons  imun  pada  kultur  PBMC ( peripheral blood mononuclear cell ) pasien tuberkulosis  paru  dewasa  (Raras et  al. ,  2015).  Kefir mengandung  beberapa  senyawa  aktif  yang  baru sedikit  diketahui  jenisnya  karena  terbatasnya penelitian tentang kefir terutama dari susu kambing. Penelitian  tentang  kefir  banyak  yang  meneliti  efek mikroorganisme  di  dalam  kefir  terhadap  sistem imun,  namun  masih  sedikit  penelitian  tentang  efek komponen  bioaktif  kefir,  khususnya  kefir  susu kambing, terhadap respons imun.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  membuktikan pengaruh pemberian kefir susu kambing pada kultur PBMC  sukarelawan  sehat  melalui  perhitungan persentase  sel  T  CD4 + ,  CD8 + ,  IFN- γ,  IL -4,  dan  kadar sitokin IL-2, IL-10.

## Metode Penelitian
Sampel  kefir Kefir  dalam  penelitian  ini  berasal  dari fermentasi  susu  kambing  Ettawa,  dibuat  oleh
Fakultas Peternakan Universitas
Brawijaya, dinyatakan  sebagai  kefir  dengan  konsentrasi  100%. Kefir diberikan pada kultur sel PBMC dalam berbagai macam  konsentrasi  yaitu  0,5%, 1%, 2%,  5% dan 10% (v/v,  supernatan/  medium).  Kefir  disimpan  di  dalam lemari  es  tidak  lebih  dari  1  bulan,  sebelum  disimpan disentrifugasi terlebih dahulu dan kemudian supernatannya  disaring  dengan  filter  0,2  mikron, kemudian  ditambahkan  pada  kultur  atau  disimpan pada  suhu  -20 0 C.  Konsentrasi  kefir  ini  ditentukan berdasarkan penelitian yang dilakukan oleh Vinderola et  al. (2005)  dan  juga trial yang  dilakukan  peneliti  di laboratorium.  Konsetrasi  kefir  dengan  pengenceran 10%  menyebabkan  medium  berubah  warna  menjadi kekuningan  karena  keasaman  dari  kefir  yang digunakan,  sehingga  konsentrasi  tersebut  tidak digunakan agar tidak mempengaruhi hasil kultur.
Sampel  penelitian Penelitian  ini  merupakan penelitian  eksperimental  murni  ( true  experimental ) laboratorik  dengan  menggunakan post  test  only control group design . Penelitian ini dilakukan secara in  vitro untuk  membuktikan  pengaruh  pemberian supernatan  kefir  terhadap  persentase  sel  T  CD4 + , CD8 + ,  IFN- γ,  IL -4,  kadar  sitokin  IL-2  dan  IL-10    pada kultur peripheral  blood  mononuclear  cell (PBMC) yang  diisolasi  dari  sukarelawan  sehat  dewasa. Sebanyak  15  orang  berpartisipasi  dalam  penelitian ini  dengan  menandatangani  persetujuan  setelah penjelasan  atau  PSP  ( informed  consent ).  Penelitian ini  telah  mendapatkan  ijin  dari  Komisi  Etik  Fakultas Kedokteran
Universitas Brawijaya
yang mengeluarkan surat keterangan kelayakan etik.
Pengambilan  darah  dan  isolasi  PBMC Setelah dilakukan  pemilihan  sampel,  kemudian  dilakukan pengambilan  darah  sampel  pada  vena  mediana cubiti  sebanyak  10  ml,  yang  selanjutnya  dilakukan isolasi  PBMC  dengan ficoll  hypac ( Biolegend,  San Diego, CA, USA ).
Kultur  PBMC Hasil  isolasi  PBMC  dikultur  pada  96- well  plate sebanyak  5x10 5 sel/  ml  dalam  setiap sumurnya,  dengan  menambahkan  medium  RPMI 1640    (Sigma-Aldrich,  USA),  berisi  2    mM    glutamin (Gybco,  USA), Penicilin-streptomicin 10.000  U/ml (Gybco,  USA),  dan  10% Fetal  Bovine  Serum (Gybco, USA),  kemudian  diinkubasi  selama  4  hari  pada suhu  37°C  dengan  5%  C0 2 .  Sel  dikultur  setelah mendapatkan  suplementasi  kefir  berbagai konsentrasi  dengan  rincian  pembagian  kelompok sampel  didapatkan  5  kelompok,  yaitu  K  (kelompok kontrol),  P1  (kelompok  perlakuan  kefir  konsentrasi 0,5%),  P2  (kelompok  perlakuan  kefir  konsentrasi
1%),  P3  (kelompok  perlakuan  kefir  konsentrasi  2%), P4 (kelompok perlakuan kefir konsentrasi 5%) . Analisis  Flowsitometri Untuk  menilai  ekspresi  sel  T CD4 + , CD8 + , IFN- γ , dan IL-4, sel yang diberi perlakuan kefir dikultur selama 4 hari, kemudian disentrifugasi pada  2.500  rpm  selama  3  menit.  Supernatan dipisahkan  dan  disimpan  pada  suhu  -20 0 C  sampai digunakan  untuk  mengukur  kadar  IL-2  dan  IL-10 dengan  ELISA,  sedangkan  pellet  diberi  pewarnaan antibodi anti  human CD4,  CD8,  IFN  dan  IL-4 (Biolegend,  USA)  dan  langsung  dianalisis  dengan flowsitometri (BD, USA).

## Enzyme-linked  immunoabsorbent  assay  (ELISA)
Setelah  diinkubasi,  supernatan  dari  setiap  well diambil  dan  dianalisis  kadar  IL-2  dan  IL-10 menggunakan  metode  ELISA  sandwich  (Biolegend, USA)  sesuai  dengan  protokol  pabrik.  Densitas  optik diukur pada panjang gelombang 450 nm menggunakan automated  ELISA  reader  ELX  800 (BioTek,  Winooski,  VT,  USA)  dan  kadar  sitokin ditentukan bedrdasarkan pada kurva semi logaritma yang dibentuk menggunakan standar.
Analisis  statistik Data  dianalisis  secara  statistik menggunakan program perangkat lunak SPSS 20 for Windows .  Sebelum  dilakukan  analisis  data,  data diuji  normalitasnya  dengan  menggunakan    uji Kolmogorv  Smirnov  dan  uji  homogenitas  data dengan  menggunakan  uji  Levenne.  Dilanjutkan dengan  uji One  way  Anova ,  dengan  derajat kepercayaan 95% ( α = 0,05), bermakna bila p < 0,05. Untuk  mengetahui  kelompok  mana  yang  berbeda, dilakukan post  hoc  test .  Data  disajikan  sebagai mean ± SEM ( standard error of mean ).

## Hasil Penelitian
Kultur  PBMC  sukarelawan  sehat  dewasa  dilakukan selama  4  hari.  Sebelumnya  dilakukan trial kultur selama  1  hari,  2  hari,  3  hari  dan  4  hari,  didapatkan hasil  dengan  jumlah  sel  mononuklear  (monosit  dan limfosit)  terbanyak  pada  kultur  4  hari,  ditunjukkan dengan  sel  mononuklear  yang  memenuhi plate kultur,  sehingga  untuk  selanjutnya  dilakukan  kultur selama  4  hari.  Hasil  pengamatan  kultur  sel  PBMC sukarelawan sehat  dapat dilihat pada Gambar 1.
Gambar 1 Pengamatan Kultur Sel PBMC: (a) hari pertama, tampak sel limfosit dan sel monosit dalam plate kultur, (b) setelah  4  hari  kultur,  tampak  sel  hampir  memenuhi seluruh  lapang  pandang.  Sel  tampak  semakin  bertambah jumlahnya, dan mulai saling menempel satu sel dengan sel yang  lain,  sel  mencapai  tahap  konfluensi.  Pengamatan menggunakan inverted microscope (200x), tanpa pewarnaan.  Tanda  panah  merah  menunjukkan  sel monosit. Tanda panah hitam menunjukkan limfosit.
Aktivasi  sel  T  CD4+  dan  Sel  T  CD8+  pada  sel  PBMC yang dipapar kefir Hasil pengukuran persentase sel T  CD4 + dan  CD8 + menggunakan  flowsitometri (Gambar  2),  diketahui  bahwa  pemberian  kefir dengan berbagai konsentrasi (0,5%, 1%, 2% dan 5%) tidak  memberikan  pengaruh  pada  persentase  sel  T CD4 + dan  CD8 + .    Persentase  sel  T  CD8 + yang disekresikan  pada  semua  kelompok  (K-,  P1,  P2,  P3 dan  P4)  menunjukkan  jumlah  yang  sedikit  lebih banyak daripada persentase sel T CD4 + , namun tidak berbeda  signifikan.  Maka  pada  semua  kelompok tersebut,  baik  kelompok  yang  diberi  kefir  maupun yang  tidak  diberi  kefir,  menunjukkan  keseimbangan jumlah  sel  T  CD4 + dan  sel  T  CD8 + serta  pemberian kefir tidak mempengaruhi keseimbangan tersebut.
Gambar  2 Persentase  sel  T  CD4 + dan  CD8 + pada  kultur PBMC  sukarelawan  sehat  yang  dipapar  berbagai konsentrasi kefir
Produksi  sitokin  ekstraseluler  pada  sel  PBMC  yang dipapar  kefir Hasil  pengukuran  kadar  sitokin  IFN- γ dan  IL-4  menggunakan  flowsitometri  (Gambar  3), menunjukkan  bahwa  semakin  tinggi  konsetrasi  kefir yang diberikan, maka semakin tinggi kadar IFN- γ dan IL-4  yang  disekresikan,  namun  tidak  terjadi peningkatan  signifikan.  Pada  semua  kelompok  baik
yang  diberi  kefir  maupun  yang  tidak  diberi  kefir, tidak terjadi perubahan keseimbangan antara sitokin sel T h 1 dan sitokin sel T h 2 yang disekresikan.
Gambar  3 Kadar  sitokin  IFN- γ  dan  IL -4  pada  kultur  PBMC sukarelawan sehat yang dipapar berbagai konsentrasi kefir
Produksi  sitokin  intraseluler  pada  sel  PBMC  yang dipapar  kefir Hasil  pengukuran  kadar  sitokin  IL-2 dan  IL-10  menggunakan  metode  ELISA  (Gambar  4), menunjukkan  bahwa  pada  sampel  sukarelawan sehat  dewasa  yang  mendapatkan  kefir  dengan konsentrasi  berbeda,  terjadi  penekanan  kadar sitokin  IL-2  dan  peningkatan  IL-10  mulai  dari  P1 sampai  P4.  Pada  kelompok  kontrol  negatif,  yaitu kultur  PBMC  sukarelawan  sehat  dewasa  yang  tidak diberi  kefir  terjadi  keseimbangan  antara  kadar sitokin  IL-2  dan  IL-10  yang  disekresikan.  Namun dengan  pemberian  kefir,  terjadi  peningkatan signifikan kadar sitokin IL-10  pada  semua  kelompok perlakuan,  terutama  pada  P2,  P3  dan  P4  (p<0,01). Sedangkan kadar sitokin IL-2 mengalami penurunan, terlihat  pada  kelompok  P4  dengan  kadar  IL-2 terendah.
Sehingga terjadi perubahan
keseimbangan  kadar  sitokin  ektraseluler  yang disekresikan yaitu ke arah sitokin sel T h 2.
Gambar  4 Kadar  sitokin  IL-2  dan  IL-10 pada  kultur  PBMC sukarelawan  sehat  yang  dipapar  berbagai  konsentrasi kefir. (*) p<0,05; (***) p<0,01
Tabel 2 Produksi sitokin sel T h 1 dan sel T h 2 dari kultur sel PBMC sukarelawan sehat selama 4 hari
Konsentrasi kefir SI (%) SE (pg/ml) Kadar IFN- γ Kadar IL-4 Kadar IL-2 Kadar IL-10 0 (K-) 0,5% (P1) 1% (P2) 2% (P3) 5% (P4) 26,91±3,51 20,47±5,14 26,15±4,26 21,77±6,88 35,56±8,46 18,8±3,35 15,46±3,38 21,89±2,39 22,24±9,96 25,17±5,94 139±30,12 184±60,81 105±8,19 98±21,63 69±20 125±31,66 343±86,77 632±174,11 603±153,53 506±84,72

## Pembahasan
Beberapa studi telah dilakukan dengan hewan model mengenai  kefir  yang  memiliki  efek  sebagai imunomodulator  yang  membuktikan  bahwa  kefir merangsang  sekresi  sitokin  sel  T h 1,  termasuk  IL-2, yang  diketahui  berperan  dalam  melawan  bakteri patogen  melalui  TLR-2 pathway (Hong et  al. ,  2008). Namun  demikian  belum  ada  penelitian  yang menggunakan  isolasi  PBMC  dari  sukarelawan  sehat untuk  membuktikan  efek  supernatan  kefir  dari  susu kambing  terhadap  sistem  imun.  Penelitian  ini merupakan  yang  pertama  kali  membuktikan  efek imunomodulator  kefir  dari  susu  kambing  pada sukarelawan  sehat  secara in  vitro ,  dengan  menilai persentase  sel  T  CD4 + ,  sel  T CD8 + ,  IFN- γ  dan  IL -4, serta kadar IL-2  dan IL-10, pada kultur sukarelawan sehat  dewasa  yang  dipapar  kefir  dengan  berbagai konsentrasi.
Dari  hasil  penelitian  ini,  terbukti  bahwa  pemberian supernatan  kefir  dapat  meningkatkan  kadar  sitokin IL-10 yang merupakan sitokin sel T h 2, dengan sekresi tertinggi  pada  kefir  konsentrasi  1%.  Hasil  ini  serupa dengan  studi  Raras et  al. (2015)  yang  menilai  efek pemberian  kefir  secara in  vitro pada  pasien tuberkulosis paru dewasa, membuktikan bahwa kefir dapat  menginduksi  sekresi  sitokin  IL-10.  Sedangkan pada  penelitian  Vinderola et  al .  (2005),  pada  tikus sehat  yang  diberikan  kefir  per  oral  selama  7  hari berturut-turut,  terjadi  peningkatan  signifikan  pada IL-4,  IL-2  dan  IgA + .  Pemberian  kefir  juga meningkatkan  kadar  IFN- γ,  IL -10  dan  IL-6  pada pengenceran  1/100  (konsentrasi  1%)  (Vinderola et al., 2005).  Hasil  tersebut  sedikit  berbeda  dengan hasil penelitian kami, kemungkinan disebabkan oleh jenis  kefir  yang  digunakan  berbeda  dan  pemberian kefir  yang  berbeda  yaitu  per  oral  pada  tikus, sehingga  dapat  dipastikan  bahwa  terdapat  peran mikroorganisme secara langsung dalam merangsang respons imun, khususnya respons imun mukosa.
Sitokin  IL-10  diproduksi  oleh  bermacam-macam  sel imun antara lain monosit teraktivasi, sel T (CD4 + dan CD8 + ),  makrofag  dan  sel  dendritik  (Tadokera et  al. ,
2013).  Sitokin  IL-10  memiliki  efek  biologis  yang beragam,  termasuk  sebagai  imunoregulator  dan efek  antiinflamasi  pada  tipe  sel  yang  berbeda. Fungsi  IL-10  terutama  meregulasi  sitokin  sel  T h 1, MHC  II  ( major  histocompatibility  class II)  dan molekul  B7,  meregulasi  ekspresi  dari  molekul kostimulator  pada  makrofag  yang  penting  untuk mengoptimalkan aktivasi sel T. Dengan menghambat ekspresi  dari  molekul-molekul  tersebut  pada  APC ( antigen  presenting  cells ),  IL-10  secara  langsung menekan  aktivasi  sel  T  dan  produksi  sitokin  yang berasal dari sel T, seperti IFN- γ dan IL -2 (Tadokera et al. ,  2013).  Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  kami yaitu terjadi penekanan terhadap sekresi sitokin IL-2 dengan  pemberian  kefir  yang  semakin  meningkat konsentrasinya.  Sitokin  IL-10  yang  meningkat  pada pola keseimbangan T h 1/T h 2, menunjukkan peningkatan  diferensiasi  sel  T h 2  dan  menekan aktivitas sel T h 1 (Strieter et al. , 2002).
Sel  T h 1  diketahui  penting  dalam  inflamasi,  imunitas sel T  sitotoksik,  komplemen  (ikatan  pada  Fcγ -R) sebagai  bagian  dalam  pertahanan  melawan organisme  intraseluler,  sedangkan  sel  T h 2  berperan dalam menghasilkan antibodi. Sitokin IL-10 mendorong  pada  terbentuknya  sitokin  sel  T h 2 dengan  cara  menghambat  produksi  IFN- γ  oleh  sel lmfosit T, sebagian melalui penekanan sintesis IL-12 oleh sel aksesori. Berdasarkan hal tersebut, maka IL- 10 membantu merangsang proliferasi dan diferensiasi  sel  B,  yang  penting  bagi  pertahanan tubuh  melawan  parasit  usus,  menetralkan  toksin bakteri  dan  pertahanan  lokal  pada  mukosa.  Sitokin IL-10  menekan  produksi  sitokin  proinflamasi  dan kemampuan  APC  (monosit/  makrofag  dan  sel dendritik) (Asadullah et al. , 2003).
Terdapat beberapa sitokin yang termasuk famili dari IL-10 antara lain IL-10, IL-19, IL-20, IL-22, IL-24, IL-26 dan lebih jauh terkait dengan IL-28A, IL-28B dan IL- 29. Sitokin-sitokin tersebut muncul sebelum respons imun adaptif, menimbulkan mekanisme pertahanan tubuh  yang  beragam,  khususnya  dari  sel  epitel selama  terjadi  infeksi.  Sitokin-sitokin  ini  penting untuk  memelihara  integritas  dan  homeostasis jaringan  epitel,  dapat  mendorong  respons  imun alami  dari  jaringan  epitel  untuk  membatasi kerusakan  yang  disebabkan  oleh  infeksi  virus  dan bakteri.  Sitokin  ini  juga  dapat  memudahkan  proses penyembuhan jaringan disebabkan oleh infeksi atau inflamasi.  Sitokin  IL-10  dapat  menekan  respons proinflamasi  dan  membatasi  kerusakan  yang  tidak penting  akibat  inflamasi.  Dengan  demikian,  sitokin dari  famili  IL-10  memiliki  fungsi  yang  sangat
diperlukan  dalam  banyak  penyakit  menular  dan inflamasi (Ouyang et al., 2011).
Interleukin-10  sebagai  sitokin  imunoregulator  yang berperan  penting  dalam  inflamasi  dan  reaksi  imun, merupakan  antiinflamasi  poten  dan  memiliki aktivitas imunosupresif pada fungsi sel mieloid yang menjadi  dasar  penggunaannya  pada  penyakit inflamasi  akut  dan  kronik,  juga  berperan  pada penyakit  seluler  autoimun  seperti  multipel  sklerosis (MS)  (Beebe et  al., 2002).  IL-10  dapat  digunakan sebagai terapi pada beberapa model hewan dengan artritis  untuk  menurunkan  inflamasi,  infiltrat  seluler dan  kerusakan  sendi.  Terdapat  beberapa  penyakit dimana  IL-10  berperan  sebagai  homeostatik  yang penting  seperti  intestinal  bowel  disease  (kolitis ulseratif  dan  Crohn’ disease ).  IL-10  juga  diketahui berperan  dalam  melindungi  hepar  pada  hewan hepatitis  yang  diinduksi  dengan concavalin A  atau galaktosamin  dan  lipopolisakarida.  Pada  hewan model  asma  alergi,  IL-10  menunjukkan  kemampuan menghambat inflamasi saluran nafas dan responsiveness yang diiduksi oleh alergen, menurunkan  produksi  IgE  spesifik  alergen  dan meningkatkan  IgG  spesifik  alergen  (Iyer and Cheng, 2012).
Dari  penelitian  ini  membuktikan  bahwa  peran  kefir sebagai  imunomodulator,  tidak  hanya  diperankan oleh mikroorganisme yang ada di dalam kefir, tetapi juga  membuktikan  efek  penting  substansi  yang dikeluarkan  selama  proses  fermentasi  berlangsung untuk  menghasilkan  kefir.  Hal  ini  didukung  oleh penelitian  yang  dilakukan  Farnworth  (2005),  yang membuktikan  bahwa  stimulasi  sistem  imun  juga terjadi  disebabkan  oleh  kerja  dari  eksopolisakarida (kefiran)  yang  terdapat  dalam kefir  grains .  Ektraksi kefiran  dari kefir  grains menghasilkan  fraksi polisakarida  larut  air  yang kemudian diberikan pada tikus,  terjadi  penurunan  pertumbuhan  tumor dihubungkan  dengan  respons  imun  seluler  dan tampak  bahwa  dosis  total  polisakarida  menentukan efektivitasnya.  Fraksi  tersebut  memiliki  aktivitas sebagai  imunomodulator  dengan  menstimulasi  sel Peyer’s patch , menyebabkan sekresi fraksi yang larut air,  sehingga  meningkatkan  respons  mitogenik  dari timosit dan splenosit  pada  tikus normal  (Farnworth, 2005).  Suplementasi kefir dan supernatannya  ( kefir cell-free  fraction /  KF) pada  tikus  model  kanker payudara  selama  2  hari  menunjukkan  hambatan terhadap perkembangan tumor, dengan menginduksi turunnya  IL-6 dan  meningkatkan kadar IL-10  sebagai  sitokin  regulator  pada  semua  sampel (Farnworth, 2008).
Keterbatasan dalam penelitian ini adalah konsentrasi  kefir  yang  digunakan  kecil,  karena konsentrasi  besar  sangat  asam  dan  dapat mempengaruhi  hasil  kultur,  padahal  konsumsi  kefir adalah  dengan  konsentrasi  100%.  Maka  untuk mengetahui konsentrasi kefir yang dapat memberikan  efek  optimum,  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  dengan  menggunakan  kefir konsentrasi lebih tinggi. Efek kefir tanpa pengenceran  dan  diberikan  dalam  jangka  waktu lebih lama akan menarik untuk diamati pada sistem imun  sukarelawan  sehat  yang  meminum  kefir  susu kambing dalam jangka waktu lebih lama untuk dapat merangsang respons imun.

## Kesimpulan
Kefir  susu  kambing  dapat  meningkatkan  respons imun  melalui  stimulasi  sekresi  IL-10  secara in  vitro. Peran  kefir  sebagai  imunomodulator,  tidak  hanya diperankan oleh mikroorganisme yang ada di dalam kefir,  tetapi  juga  membuktikan  efek  penting substansi  (komponen  bioaktif)  yang  dikeluarkan selama  proses  fermentasi  berlangsung  untuk menghasilkan kefir.

## Daftar Pustaka
Abbas  AK  and  Litchman  AH.  2010. Basic Immunology:  Functions  and    Disorders  of Immune  System. 3 rd Edition.  Elsevier  Inc. Philadelphia.
Asadullah K, Sterry W, Volk HD. 2003. Interleukin-10 Therapy:  Review  of  a  New  Approach.
Pharmacological Reviews . 55 (2): 242-263.
Beebe  AM,  Cua  DJ,  de  Waal  MR.  2002.  The  Role  of Interleukin-10  in  Autoimmune  Disease: Systemic  Lupus  Erythematosus  (SLE)  and Multiple  Sclerosis  (MS). Cytokine  Growth Factor Reviews . 13 (4-5): 403-412.
Calder  PC  and  Kew  S.  2002.  The  Immune  System:  a Target  for  Functional  Foods?. British  Journal of Nutrition. 88 : 165-176.
Farnworth ER. 2005. Kefir-a Complex Probiotic. Food Science  and  Technology  Bulletin:  Functional Foods . 2 (1): 1-17
Farnworth  ER.  2008. Effects  of  The  Supernatants  of Fermented  Milks  on  Health  and  Disease . Handbook of Fermented Functional Food. 2 nd Edition.  The  Copyright  Clearance  Center  Inc. Danver. 215-221.
Hong  W,  Chen  H,  Chen  Y,  Chen  M.  2008.  Effects  of Kefir  Supernatant  and  Lactic  Acid  Bacteria Isolated  from  Kefir  Grain  on  Cytokine Production  by  Macrophage. International Dairy Journal . 19 (2009): 244-251
Iyer  SS  and  Cheng  G.  2012.  Role  of  Interleukin  10 Transcriptional  Regulation  in  Inflammation and  Autoimmune  Disease. Critical  Reviews  in Immunology . 32 (1): 23-63.
Magalhaes KT, Pereira GVM, Campos CR, Dragone G, Schwan  F.  2011.  Brazilian  Kefir:  Structure, Microbial Communitites and Chemical Composition. Brazilian Journal of Microbiology . 42 : 693-702.
Ouyang  W,  Rutz  S,  Crelli  NK,  Valdez  PA,  Hymowitz SG. 2011. Regulation and Functions of the IL- 10  Family  of  Cytokines  in  Inflammation  and Disease. Abstracts Annual Review of
Immunology . 29 : 71-109.
Raras  TYM,  Rusmini  H,  Wisudanti  DD,  Chozin  IN. 2015.  Kefir  Stimulates  Anti-Inflammatory Response  in  TB-AFB  (+)  Patients.  Pakistan Journal of Nutrition. 14 (6): 330-334
Sirirat  D.  Kefir:  2012.  Fermented  Milk  from  Various Microrganisms. KKU  Science  Journal . 40 (2):
366-379.
Strieter RM, Belperio JA, Keane MP. 2002. Cytokines in  Innate  Host  Defense  in  The  Lung. The Journal  of  Clinical  Investigation . 109 :  699- 705.
Tadokera  R,  Wilkinso,  KA,  Meintjes  GA, et  al. 2013. Role of the Interleukin-10 Family of Cytokines in  Patients  With  Immune  Reconstitution Inflammatory Syndrome Associated With HIV Infection  and  Tuberculosis. The  Journal  of Infectious Diseases . 207 : 1148-1156.
Tjandrawinata  RR, Maat S, Noviarny  D. 2005. Effect of  Standardized Phyllanthus  niruri Extract  on Changes in Immunologic Parameters:
Correlation  Between  Pre-clinical  and  Clinical Studies. Medika . XXXI (6): 367-371.
Vinderola  CG,  Duarte  J,  Thangavel  D,  Perdigon  G,
Farnworth  E.  2005.  Immunomodulating Capacity  of  Kefir. Journal  of  Dairy  Research.
72 : 195 – 202.