## Efek Nefroprotektif Ekstrak Etanol Bawang Putih ( Allium sativum

## L.) pada Tikus yang Diinduksi Gentamisin
Nephroprotective Effect of Ethanolic Extract of  Bawang Putih ( Allium sativum L.) on Rats Induced by Gentamicin
Tanti Azizah Sujono * , Fanny Atika Rizki Departemen Farmakologi dan Farmasi Klinik, Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta, Jl. A. Yani Tromol Pos I Pabelan Sukoharjo 57162, Indonesia
*E-mail: tanti_azizah@ums.ac.id
Received: 6 Maret 2020; Accepted: 7 Juni 2020; Published: 3 Juli 2020

## Abstrak
Penggunaan  gentamisin  dapat  menyebabkan  kerusakan  ginjal  karena  terjadinya  akumulasi  pada  sel-sel epithelial  korteks.  Akumulasi  ini  dapat  menyebabkan  terjadinya  peningkatan Reactive  Oxigen  Species (ROS) yang selanjutnya dapat memicu peningkatan radikal bebas sehingga menyebabkan penurunan fungsi ginjal,  yang  dapat  dilihat  dengan  parameter  BUN  ( Blood  Urea  Nitrogen )  dan  sCr  (serum  creatinine). Bawang putih ( Allium sativum L.) memiliki kandungan senyawa bioaktif, di antaranya alliin, allisin, ajoene, dan allil sistein. Allisin pada umbi bawang putih memiliki aktivitas antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk  menilai  pengaruh  ekstrak  etanol  bawang  putih  dalam  mencegah  penurunan  fungsi  ginjal  akibat induksi gentamisin dengan parameter BUN dan sCr. Metode permodelan tikus nefrotoksik dengan induksi gentamisin 100 mg/kgBB secara intraperitoneal selanjutnya dicek kadar BUN, sCr 24 jam setelah induksi hari  ke-10.  Hewan  uji  dibagi  5  kelompok  perlakuan,  yaitu  kelompok  kontrol  normal,  kontrol  negatif (gentamisin),  dan  tiga  kelompok  perlakuan  dengan  dosis  50,  120,  dan  300  mg/kgBB  selama  10  hari perlakuan secara bersamaan antara ekstrak dengan gentamisin. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak etanol  bawang  putih  dosis  50,  120,  300  mg/kgBB  mampu  mencegah  penurunan  fungsi  ginjal  akibat pemberian gentamisin secara signifikan jika dibandingkan dengan kontrol negatif (p < 0,05).
Kata Kunci : Blood Urea Nitrogen , Allium sativum L., gentamisin, kreatinin, nefroprotektif

## Abstract
Gentamicin can induce damage to the kidney because of the accumulation of epithelial cells in the cortex. This accumulation can cause an increase in Reactive Oxygen Species (ROS), which in turn can trigger an increase in free radicals which causes a decrease in kidney function, which can be seen with Blood Urea Nitrogen  (BUN)  and  sCr  (serum  creatinine)  parameters.  Garlic  (Allium  sativum  L.)  contains  several bioactive compounds, including alliin, allisin, ajoene, and allil cysteine. The content of allisin has activity as an antioxidant. This study used a nephrotoxic mouse modelling method with 100 mg/kgBW of gentamicin induction intraperitoneally, then BUN and sCr levels were checked 24 hours after the 10 th day induction. This study aimed to determine the effect of garlic ethanol extract in preventing the decline of renal function in  rats  induced  by  gentamicin  with  a  parameter  of  BUN  and  sCr.  The  animal  test  were  divided  into  5 treatment groups, normal control group, negative controls, and three treatment groups at a dose of 50, 120, and 300 mg/kgBW for 10 days of concurrent treatment between extracts with gentamicin. The results of the study  showed  that  garlic  ethanol  extract  with  a  dose  of    50,  120,  300  mg/kgBW  was  able  to  prevent  a decrease    in  kidney  function  due  to  the  administration  of  gentamicin  significantly  when  compared  with negative controls (p < 0,05).
Keywords : Blood Urea Nitrogen, Allium sativum L., gentamicin, creatinine, nephroprotective

## PENDAHULUAN
Ginjal berfungsi dalam mengatur keseimbangan  air,  konsentrasi  garam  dalam darah,  keseimbangan  asam-basa  darah,  serta ekskresi kelebihan garam dan bahan buangan
termasuk zat-zat toksik yang masuk ke dalam tubuh.  Oleh  karena  itu  ginjal  menjadi  salah satu  organ  target  utama  dari  efek  toksik (Pearce,  2013).  Tes  fungsi  ginjal  dapat dilakukan  dengan  mengukur  kadar Blood
Urea Nitrogen (BUN), serum kreatinin (sCr) dan profil urin. Pada ginjal yang sudah tidak berfungsi  dengan  baik,  BUN  dan  sCr  akan tetap  tertahan  di  dalam  darah  yang  akan mengakibatkan terjadinya peningkatan kadar BUN  dan  sCr.  Kadar  serum  urea  atau BUN meningkat  pada  penyakit  ginjal  akut dan kronik. Kadar serum kreatinin meningkat ketika terjadi penurunan Glomerular Filtration  Rate (GFR)  yang  signifikan. Sekitar  50%  fungsi  ginjal  akan  menurun sebelum  peningkatan  kreatinin  serum  dapat dideteksi. Jadi serum kreatinin dan laju filtrasi glomerulus adalah penanda akhir dari cedera ginjal  akut  (Gounden  and  Jialal,  2019). Analisis  profil  urin  dilakukan  sebagai  data pendukung  karena  urin  merupakan  jalur utama  ekskresi  sebagian  senyawa  toksik. Secara klinis,  adanya sejumlah besar protein dalam urin (proteinuria) merupakan salah satu tanda awal dari hampir semua penyakit ginjal (Gowda et al., 2010)
Pada  penelitian  ini,  digunakan  antibiotik gentamisin,  merupakan  antibiotik  golongan aminoglikosida yang mempunyai efek samping nefrotoksik karena dapat menyebabkan  nekrosis  sel-sel  epitel  tubulus. Setelah difiltrasi melalui glomerulus, sebagian kecil  dari  gentamisin  akan  tertahan  pada tubulus proksimal terutama di dalam lisosom, aparatus  golgi,  dan  retikulum  endoplasma. Akumulasi  ini  yang  memicu  terjadinya gangguan  fungsi  ginjal  (Dehghani  et  al., 2011). Produksi spesies oksigen reaktif (ROS) juga berperan penting dalam proses nefrotoksisitas  gentamisin  yang  bersifat reversibel.  Spesies  oksigen  reaktif  secara langsung  mengakibatkan  rusaknya  molekul seluler  termasuk  asam  nukleat,  protein,  dan lipid yang dapat memicu terjadinya kematian sel,  menyebabkan  peradangan  dan  kontraksi mesangial  dan  pembuluh  darah.  Oleh  karena itu  penggunaan  antioksidan  untuk  mencegah peningkatan  ROS  di  dalam  sitosol  efektif pada kerusakan ginjal akibat induksi gentamisin  (Lopez-Novoa  et  al.,  2011). Bawang putih ( Allium sativum L.) mengandung  senyawa  allisin  yang  memiliki
akitivitas utama sebagai antioksidan (Rahman et  al.,  2012),  menurut  penelitian  yang  sudah dilakukan  sebelumnya,  kandungan  allisin  di dalam bawang putih dapat menurunkan kadar BUN  menjadi  normal  yaitu  13,0  mg/dL (Anusuya et al., 2013).
Pada  penelitian  ini,  digunakan  bawang putih  yang  dapat  dimanfaatkan  dalam  terapi nefrotoksik  dengan  menggunakan  hewan  uji tikus.  Bawang  putih  diharapkan  dapat melindungi kondisi ginjal tikus akibat induksi gentamisin.  Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan penelitian  lebih  lanjut  untuk  menilai  efek nefroproteksi  ekstrak  etanol  bawang  putih terhadap  fungsi  ginjal  tikus  yang  diinduksi dengan  gentamisin.  Penelitian  ini  bertujuan untuk menilai pengaruh ekstrak etanol bawang putih  dalam  mencegah  penurunan  fungsi ginjal  akibat  induksi  gentamisin  dengan parameter BUN dan sCr.

## METODE PENELITIAN Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu umbi bawang putih yang diambil dari daerah Tawangmangu,  Karanganyar,  Jawa  Tengah pada  bulan  Juli  2018.  Bawang  putih  segar lengkap  dengan  akar  dan  daunnya  di determinasi di Laboratorium Biologi Fakultas Keguruan  dan  Ilmu  Pendidikan  Universitas Muhammadiyah  Surakarta  dengan  nomor 045/A.E-I/LAB.BIO/IX/2018;  etanol  96% (teknis), gentamisin  sulfat  40 mg/mL injeksi (PT. Indofarma, Bekasi), NaCl  0,9% (teknis), akuades,  Reagen  Kit  Urea  FS*  (DiaSys), Reagen  Kit  Creatinine  FS*  dari  (DiaSys), urine  strip  (Verify),  pellet  (pakan  standar), serta aquadest.
Ekstraksi
Ekstraksi bawang putih dilakukan dengan  metode  maserasi  menggunakan pelarut etanol 96%. Umbi bawang putih yang sudah dipisahkan dari kulitnya, dicuci bersih kemudian  dihaluskan  menggunakan  blender. Sebanyak 620 gram bawang putih yang telah halus  dimaserasi  dengan  2  L  etanol,  diaduk selama  kurang  lebih  15  menit,  didiamkan selama  2x24  jam,  kemudian  disaring.  Filtrat
yang  didapatkan  selanjutnya  dievaporasi dengan rotary evaporator . Ekstrak cair  yang dihasilkan  dari  proses  evaporasi  dituang  ke dalam cawan porselin, diletakkan pada water bath suhu  40°C  selama  3  hari  sampai terbentuk ekstrak kental.
Penentuan  dosis  ekstrak  etanol  bawang putih
Menurut penelitian yang sudah dilakukan sebelumnya, pemberian ekstrak etanol bawang  putih  dengan  dosis  150  mg/kgBB merupakan  dosis  efektif  karena  dapat menurunkan  kadar Blood  Urea  Nitrogen menjadi normal (Anusuya et al., 2013). Maka, digunakan  50  mg/kgBB  sebagai  dosis terendah  dan  300  mg/kgBB  sebagai  dosis tertinggi.  Dosis  tengah  didapatkan  dengan rumus perhitungan sebagai berikut:
Dosis tengah = √ 𝐷𝑜𝑠𝑖𝑠 𝑡𝑒𝑟𝑏𝑒𝑠𝑎𝑟
𝐷𝑜𝑠𝑖𝑠 𝑡𝑒𝑟𝑘𝑒𝑐𝑖𝑙 𝑛−1
= √ 300 50 3−1 = 2,4 kalinya
Dosis tengah = Dosis terkecil x 2,4 = 50 mg/kgBB x 2,4 = 120 mg/kgBB
Oleh karena itu, pemberian ekstrak etanol bawang  putih  digunakan  3  dosis  bertingkat yaitu 50, 120, dan 300 mg/kgBB. Gentamisin yang  digunakan  sebagai  agen  nefrotoksik diberikan  pada  tikus  secara  intraperitonial dengan dosis 100 mg/kgBB (Dehghani et al., 2011)

## Pemodelan hewan uji
Tikus  diaklimatisasi  terlebih  dahulu terhadap  kondisi  lingkungan  selama  7  hari. Kemudian  tikus  diinduksi  gentamisin  100 mg/kgBB secara intraperitonial (i.p) satu kali sehari selama 10 hari (Dehghani et al., 2011). Pemantauan kadar BUN dan serum kreatinin dilakukan pada hari ke-0 ( baseline )  dan  hari ke-10 dengan mengambil darah melalui vena orbitalis  tikus  sebanyak  kurang  lebih  1  mL. Darah yang sudah diambil didiamkan terlebih dahulu  selama  5  menit  dan  disentrifuse dengan kecepatan 12000 rpm selama 5 menit,
selanjutnya  diambil    bagian  supernatan (beningan).  Pemeriksaan  kadar  protein  urin menggunakan  dipstick  urin  yang  dicelupkan ke  dalam  urin  yang  telah  ditampung sebelumnya (urin 24 jam), dan hasil langsung dibaca  dengan  mencocokkan  warna  dengan warna  standard  pada  dipstik  urin  (semi- kuantitatif).

## Perlakuan hewan uji
Penelitian  ini  dinyatakan  lolos  etik dengan surat kelayakan etik No. 1370/A.1/KEPK-FKUMS/VIII/2018.
Sebanyak  25  ekor  tikus  putih  jantan  galur Wistar yang dibagi dalam 5 kelompok diukur kadar BUN, serum kreatinin dan protein urin sebagai baseline .  Perlakuan  terdiri  dari kontrol  normal  (aquadest),  kontrol  negatif gentamisin  (G)  dan  pemberian  dosis  ekstrak etanol  bawang  putih  (EEBP)  selama  10  hari berturut-turut.  Pembagian  kelompok  setiap perlakuan sebagai berikut:
KI diberi aquadest p.o (kontrol normal) KII  diberi  aquadest  p.o  dan  gentamisin  100 mg/kgBB i.p (kontrol negatif) KIII  diberi  EEBP  50  mg/kgBB  p.o  dan gentamisin 100 mg/kgBB ip KIV  diberi  EEBP  120  mg/kgBB  p.o  dan gentamisin 100 mg/kgBB i.p
KV  diberi  EEBP  300  mg/kgBB  p.o  dan gentamisin 100 mg/kgBB ip.
Pemberian  gentamisin  i.p  dan  ekstrak etanol bawang putih p.o dijeda selama 3 jam. Kadar BUN, serum kreatinin dan protein urin diukur  pada  hari  ke-0  (awal)  dan  24  jam setelah hari ke-10.

## Penentuan kadar BUN
Kadar  BUN  ditentukan  menggunakan reagen  kit  Urea  FS*  (DiaSys).  Kadar  BUN diukur  menggunakan  spektrofotometer  UV pada panjang gelombang ( λ) 340nm.
Kadar BUN  (mg/dL) = konsentrasi urea (mg/dL) x faktor konversi (0.467).
Penentuan kadar serum kreatinin
Kadar serum kreatinin diukur menggunakan  reagen  kit  Creatinine  FS*
(DiaSys) diukur
menggunakan spektrofotometer visibel pada panjang gelombang 492 nm.
Pemeriksaan protein dalam urin
Pemeriksaan protein dalam urin dilakukan  untuk  mengetahui  hasil  secara kualitatif  yang  dilakukan  dengan  cara mencelupkan  reagen  strip  ke  dalam  urin dengan  membandingkan  warna  dari  panel strip dengan warna terdekat pada bagian hasil uji  (Prabaswara,  2015).  Protein  urin  diukur menggunakan  urin  tampung  selama  24  jam menggunakan dipstik urin (semi-kuantitatif). Selama  pemeriksaan,  hewan  uji  dipuasakan dan diletakkan dalam metabolic cage . Penentuan indeks ginjal
Indeks  ginjal  dihitung  berdasarkan perbandingan berat ginjal dibagi berat badan tikus

## Analisis data
Data  berupa  kadar  BUN,  kadar serum kreatinin dan kadar protein urin (semi- kuantitatif) yang diperoleh dianalisis menggunakan  SPSS (Statistical  Package  for Social  Sciences). Normalitas  data  diuji menggunakan Shapiro-Wilk, data  yang dimasukkan  yaitu baseline sebelum  diberi perlakuan (hari ke-0) dan pada pada jam ke- 24 setelah hari ke-10 untuk mengetahui nilai p value .  Data  hasil  pengukuran  kadar  BUN tikus  dianalisis  menggunakan  uji  parametrik One Way ANOVA karena data homogen dan terdistribusi  normal  (p>0,05)  dengan  taraf kepercayaan  95%  untuk  mengetahui  ada tidaknya  perbedaan  perlakuan.  Sedangkan data  hasil  pengukuran  serum  kreatinin  tikus dianalisis dengan uji non parametrik ( Kruskal-Wallis )  karena  pada  uji  normalitas menunjukkan  data  terdistribusi  tidak  normal (p<0,05)  dan  dilanjutkan  ke  uji Mann- Whitney untuk  mengetahui  ada  tidaknya perbedaan tiap kelompok perlakuan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  menilai pengaruh ekstrak etanol bawang putih dalam perbaikan  fungsi  ginjal  tikus  akibat  induksi gentamisin dengan parameter serum kreatinin,  BUN,  dan  proteinuria  (semi- kuantitatif).  Proses  ekstraksi  umbi  bawang putih  dilakukan  dengan  metode  maserasi
menggunakan  pelarut  etanol  96%  dengan perbandingan  3:10  sebagai  penyarinya. Bawang  putih  digunakan  karena  memiliki kandungan  senyawa  seperti  allisin,  S-allil sistein  yang  mempunyai  aktivitas  sebagai antioksidan yang berperan dalam meningkatkan sitoproteksi terhadap senyawa asing dan radikal bebas (Rahman et al., 2012; Colin-Gonzalez  et  al.,  2012).  Etanol  96% bersifat  polar  sehingga  diharapkan  dapat melarutkan  senyawa  allisin  di  dalam  umbi bawang  putih  yang  bersifat  polar  juga (Rahman et al., 2012). Pada ekstraksi bawang putih  dipilih  metode  maserasi  karena  selain praktis,  juga  dapat  mencegah  hilangnya  zat penting  ketika  proses  ekstraksi  dan  menjaga zat  aktif  dari  kerusakan  pada  senyawa  yang termolabil  (Prasonto  et  al.,  2017).  Dari  620 gram  bawang  putih  yang  sudah  dihaluskan menghasilkan  ekstrak  kental  sebanyak  25 gram (rendemen 4,03 %).
Langkah  selanjutnya  yaitu  uji in  vivo untuk melihat khasiat ekstrak etanol bawang putih  terhadap  penurunan  kadar  kreatinin, BUN,  dan  protein  dalam  urin.  Uji in  vivo dimulai dengan membuat permodelan hewan uji  menggunakan  tikus  yang  diinduksi gentamisin 100 mg/kgBB secara intaperitonial  (i.p)  (Dehghani  et  al.,  2011). Gentamisin  adalah  antibiotik  golongan aminoglikosida  yang  bersifat  sangat  polar sehingga absorbsi gentamisin secara per oral rendah, oleh karena itu gentamisin diberikan secara parenteral. (Mohan et al., 2015)
Efek samping gentamisin sebagian besar dapat  mempengaruhi  ginjal  (nefrotoksisitas) pada  10–20%  kasus  terapi,  gangguan  saraf (neurotoksisitas) dan pendengaran (ototoksisitas)  (Lintong  et  al.,  2012). Sitotoksisitas  gentamisin  terjadi  pada  sel-sel dimana  obat  tersebut  terakumulasi.  Pada ginjal, akumulasi terjadi pada sel-sel epitelial korteks,  terutama  pada  bagian  tubulus proksimal,  tubulus  distal,  dan  duktus pengumpul.  Tingginya  akumulasi  obat  yang terjadi  menginduksi  terjadinya  ekspresi
transporter  dan  menyebabkan  terbentuknya kompleks endositik oleh kubulin dan megalin, yang  terbatas  pada  tubulus  proksimal. Terbentuknya  kompleks  tersebut  digunakan oleh  gentamisin  untuk  bisa  masuk  ke  dalam sel  (proses  endositosis).  Setelah  obat  masuk ke dalam kompartemen endosomal, gentamisin akan terakumulasi pada retikulum endoplasma  (RE),  lisosom,  dan  aparatus golgi, dan menyebabkan terjadinya phospholipidosis yang berkaitan erat  dengan tingkat  toksisitas  gentamisin  pada  sel-sel epitelial  korteks.  Sedangkan  akumulasi gentamisin  pada  sitosol  dapat  menginduksi apoptosis  melalui  aktivasi  jalur  intrinsik langsung  maupun  tidak  langsung  dalam mitokondria,  dengan  mengganggu  rantai pernafasan, mengganggu produksi ATP, dan menghasilkan stres oksidatif akibat peningkatan  hidroksil  radikal  dan  anion superperoksida yang selanjutnya berkontribusi  dalam  menginduksi  kematian sel (Lopez-Novoa et al., 2011).
Setelah  tikus  diinduksi  gentamisin terlihat  adanya  peningkatan  kadar  serum kreatinin  (Gambar  1), Blood  Urea  Nitrogen (Gambar 2), protein urin (Gambar 3).
Berdasarkan  Gambar  1  terlihat  adanya kenaikan  kadar  kreatinin  akibat  induksi
gentamisin.  Pada  kontrol  negatif  terjadi kenaikan  kadar  kreatinin  3  kali  lipat dibandingkan baseline yaitu  1,50  0,39 mg/dL.  Kenaikan  kadar  kreatinin  ini  terjadi akibat  peningkatan Reactive  oxygen  species (ROS)  di  dalam  sitosol  yang  diinduksi  oleh gentamisin  100  mg/kgBB  (Lopez-Novoa  et al.,  2011). Reactive  oxygen  species yang berlebihan dapat menyebabkan stres oksidatif dan  mengakibatkan  kerusakan  sel,  jaringan, hingga organ di dalam tubuh (Khaira, 2010). Peningkatan  kadar  kreatinin  di  dalam  darah menunjukkan  kerusakan  terhadap  fungsi ginjal  dan  sebanding  dengan  penurunan fungsi  ginjal.  Kadar  serum  kreatinin  normal pada  tikus  Wistar  yaitu  0,30-0,50  mg/dL (Fitria  et  al.,  2019).  Berdasarkan  Gambar  1, perbandingan  rerata  kadar  sCr  pada  masing- masing  perlakuan  mengalami  peningkatan jika dibandingkan dengan kadar sCr baseline , akan  tetapi  masih  dalam  rentang  normal kecuali  pada  kontrol  negatif  yaitu  terjadi peningkatan menjadi 3 kalinya baseline . Hal ini  membuktikan  bahwa  terjadi  penurunan fungsi  ginjal  akibat  induksi  gentamisin  100 mg/kgBB. Hasil analisis statistik menunjukkan  bahwa  ekstrak  etanol  bawang putih menurunkan kadar sCr secara signifikan (p<0,05).  Hasil  uji  perbandingan  berganda
A q u a d e s t A q u a d e s t + G E E B P   5 0 + G E E B P   1 2 0 + G E E B P   3 0 0 + G 0 . 0 0 . 5 1 . 0 1 . 5 2 . 0 K e l o m p o k   p e r l a k u a n K a d a r se ru m k re a ti n in ( m g /d L ) B a s e lin e H a r i k e - 1 0 * * * *
* p<0.05 (signifikan) terhadap kontrol gentamisin (G)
Gambar 1. Kadar serum kreatinin ( mean ±SEM) pada hari ke-0 ( baseline ) dan setelah perlakuan ekstrak etanol bawang putih (EEBP) selama 10 hari pada tikus yang diinduksi gentamisin (n=5)
metode  Bonferroni  menunjukkan  adanya perbedaan  yang  bermakna  antara  kelompok kontrol negatif (gentamisin) dengan kelompok EEBP pada dosis 50, 120, dan 300 mg/kgBB  (p<0,05).  Peningkatan  dosis  tidak menunjukkan adanya peningkatan efek dalam menurunkan kadar serum kreatinin (p>0.05). Hal  ini  sesuai  dengan  penelitian  yang  sudah dilakukan  sebelumnya  bahwa  ekstrak  etanol bawang  putih  dosis  150  dan  300  mg/kgBB dapat  mencegah  terjadinya  peningkatan radikal  bebas  pada  sel-sel  epithelial  korteks (Anusuya et al., 2013) .
Gentamisin  ip  dosis  100  mg/kgBB mampu meningkatkan kadar BUN pada tikus. Dari gambar 2 terlihat adanya kenaikan 2 kali lipat  nilai  rerata  kadar  BUN  pada  kontrol negatif  dibandingkan baseline .  Peningkatan ini  terjadi  akibat  tertahannya  urea  dalam darah  yang  tidak  bisa  dikeluarkan  melalui urin. Blood  Urea  Nitrogen (BUN)  adalah produk  hasil  buangan  dari  protein.  Darah mengangkut protein ke dalam sel, dan setelah protein dipakai oleh sel, sisa produk buangan akan  dikembalikan  ke  dalam  darah  dalam bentuk urea yang mengandung nitrogen. Pada ginjal  yang  sehat  BUN  akan  disaring  dari darah dan dikeluarkan melalui urin, sedangkan  pada  ginjal  yang  sudah  tidak berfungsi  dengan  baik,  urea  akan  tetap
tertahan  di  dalam  darah.  Oleh  karena  itu, peningkatan  kadar  BUN  di  dalam  darah menjadi  salah  satu  indikator  terjadinya gangguan  pada  ginjal  (Mohan  et  al.,  2015). Kadar BUN normal pada tikus Wistar adalah 13,37-21,49 mg/dL (Widyastuti et al., 2019). Pada  Gambar  2  juga  terlihat  adanya peningkatan  nilai  rerata  kadar  BUN  semua kelompok  perlakuan  jika  dibandingkan dengan kadar BUN baseline , namun peningkatan  kadar  BUN  pada  kelompok EEBP dosis 50, 120, dan 300 mg/kgBB masih dalam rentang batas normal. Hasil uji statistik dengan Mann-Whitney menunjukkan adanya perbedaan  yang  bermakna  antara  kelompok kontrol  negatif  dengan  kelompok  kontrol normal dan EEBP dosis 50 mg/kgBB, EEBP 120  mg/kgBB,  dan  EEBP  300  mg/kgBB (p<0,05).  Hasil  uji  ini  menunjukkan  bahwa ekstrak etanol bawang putih dapat menurunkan  kadar  BUN  tikus  secara signifikan  pada  dosis  50,  120,  dan  300 mg/kgBB.
Uji  lain  yang  digunakan  sebagai parameter  kerusakan  ginjal  adalah  uji  semi- kuantitatif proteinuria yang digunakan sebagai data pendukung terjadinya gangguan fungsi  ginjal  menggunakan  dipstik  urin (Gambar 3). Ginjal bertanggung jawab dalam mengekskresikan  senyawa  toksik  dalam
A q u a d e s t A q u a d e s t + G E E B P   5 0 + G E E B P   1 2 0 + G E E B P   3 0 0 + G 0 1 0 2 0 3 0 K e l o m p o k   p e r l a k u a n k a d a r B U N ( m g /d L ) B a s e l in e H a r i k e - 1 0 * * * *
* p<0.05 (signifikan) terhadap kontrol gentamisin (G)
Gambar 2. Kadar Blood Urea Nitrogen (BUN) ( mean ±SEM) pada hari ke-0 ( baseline ) dan setelah perlakuan ekstrak etanol bawang putih (EEBP) selama 10 hari pada tikus yang diinduksi gentamisin (n=5)
tubuh  yang  sudah  tidak  diperlukan  lagi melalui  urin  (Gowda  et  al.,  2010).  Oleh karena itu, pemeriksaan profil urin dilakukan untuk mengetahui zat-zat yang dalam keadaan normal  tidak  terdapat  di  dalam  urin  atau perubahan  kadar  zat  yang  dalam  keadaan normal  terdapat  dalam  urin,  salah  satunya adalah  protein  urin.  Pada  ginjal  yang  masih berfungsi dengan baik, protein akan tersaring oleh  glomerulus  sehingga  tidak  keluar bersama urin.
Berdasarkan Gambar 3 terjadi peningkatan  rerata  kadar  protein  urin  pada kelompok  kontrol  normal  dan  kontrol  dosis setelah  perlakuan  jika  dibandingkan  dengan kadar  protein  urin baseline .  Akan  tetapi peningkatan  kadar  protein  urin  masih  dalam rentang normal yaitu kurang dari 100 mg/dL. Berbeda  dengan  kontrol  negatif,  dimana
peningkatan  rerata  kadar  protein  urin  terjadi melebihi batas normal yaitu  757,50  242,50 mg/dL  (meningkat  10  kalinya).  Peningkatan rerata  kadar  protein  urin  ini  terjadi  karena glomerulus  merupakan  bagian  pertama  dari ginjal  yang  kontak  dengan  agen  kimia. Gentamisin  dapat  menyebabkan  perubahan filtrasi glomerulus dengan beberapa mekanisme yaitu dengan perubahan morfologi  yaitu  terjadinya  pembengkakan pada  glomerulus,  menginduksi  terjadinya kontraksi pada mesangial sehingga menyebabkan  terjadinya  pengurangan  GFR, memicu  terjadinya  proliferasi  mesangial, peningkatan apoptosis sel-sel glomerulus, dan menghilangkan  barier  selektif  pada  filtrasi glomerulus  sehingga  dapat  menyebabkan proteinuria (Lopez-Novoa et al., 2011)
A q u a d e s t A q u a d e s t + G E E B P   5 0 + G E E B P   1 2 0 + G E E B P   3 0 0 + G 0 2 5 0 5 0 0 7 5 0 1 0 0 0 1 2 5 0 K e l o m p o k   p e r l a k u a n B a s e lin e H a r i k e - 1 0 * * * * P ro te in d al am u ri n ( m g /d L ) * p<0.05 (signifikan) terhadap kontrol gentamisin (G)
Gambar 3. Kadar protein urin ( mean ±SEM) pada hari ke-0 ( baseline ) dan setelah perlakuan ekstrak etanol bawang putih (EEBP) selama 10 hari pada tikus yang diinduksi gentamisin (n=5)
Tabel 1. Efek pemberian ekstrak etanol bawang putih (EEBP) terhadap profil indeks renal (mean±SD)
(n=3) Kelompok Berat ginjal (g) Berat badan tikus hari ke-10 (g) Rasio ginjal Akuades 0,55±0,04 125,33±20,31 0.89±0,08 Akuades+G 0,86±0,06 154,67±25,42 1,12±0,12 EEBP 50+G 0,62±0,08 150,67±8,62 0,83±0,07 EEBP 100+G 0,66±0,07 133,67±6,03 0,99±0,15 EEBP 200+G 0,82±0,18 164,33±29,91 1,00±0,14
G (Gentamisin); EEBP (Ekstrak Etanol Bawang Putih dosis 50, 120, dan 300 mg/kgBB)
Dari uji ini menunjukkan bahwa ekstrak etanol bawang putih dengan dosis 50,120,300 mg/kgBB  dapat  menurunkan  kadar  protein urin dalam rentang normal yaitu <100 mg/dL.
Ekstrak  etanol  bawang  putih  dapat menurunkan indeks ginjal. Kontrol nefrotoksik  gentamisin  menunjukkan  indeks ginjal  paling  tinggi  dibanding  kelompok kontrol  dan  kelompok  perlakuan  EEBP meskipun  perbedaannya  tidak  signifikan (p>0,05) (Tabel 1).
Perhitungan rasio bobot ginjal dan berat badan  tikus  dilakukan  untuk  mengoreksi
faktor berat badan, tikus yang memiliki berat badan lebih besar akan memiliki berat ginjal yang lebih besar pula.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan,  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol  bawang  putih  dengan  dosis  50,  120, dan 300 mg/kgBB dapat mencegah penurunan  fungsi  ginjal  pada  tikus  akibat induksi  gentamisin  dengan  parameter  serum kreatinin  (sCr)  dan Blood  Urea  Nitrogen (BUN).

## Daftar Pustaka
Anusuya,  N.,  Durgadevi,  P.,  Dhinek,  A.,  and  Mythily,  S.,  2013.  Nephroprotective  Effect  of Ethanolic Extract of Garlic (Allium sativum L.) on Cisplatin Induced Hephrotoxicity in Male Wistar Rats 6, 6–9.
Colin-Gonzalez, A.L., Santana, R.A., Silva-Islas, C.A., Chanez-Cardenas, M.E., Santamaria, A., and Maldonado, P.D., 2012, The Antioxidant Mechanisms Underlying the Aged Garlic Extract  and  S-allylcysteine-Induced  Protection,  Oxidative  Medicine  and  Celluler Longevity, doi : 10.1155/2012/907162
Dehghani,  F.,  Namavar,  M..,  Noorafshan,  A.,  Karbalay-Doust,  and  Esmaeilpour,  T.,  2011. Evaluation of the Kidney Extract on Gentamicin Induced-Nephrotoxicity in Rat. Kidney Res. J. 1, 24–32.
Fitria, L., Lukitowati, F., and Kristiawati, D., 2019, Nilai Rujukan untuk Evaluasi Fungsi Hati dan  Ginjal  pada  Tikus  (Rattus  norvegicus  Berkenhout,  1769)  Galur  Wistar,  Jurnal Pendidikan Matematika dan IPA,10 (2), 243-258
Gounden, V., and Jialal, I., 2019. Renal Function Tests. StatPearls Publishing.
Gowda, S., Desai, P.B., Kulkarni, S.S., Hull, V.V., Math, A.A.K and Vernekar, S.N., 2010,
Markers of renal function test, N Am J Med Sci, 2 (4), 170-173
Khaira, K., 2010. Menangkal Radikal Bebas dengan Anti-Oksidan. J. Saintek II, 183–187.
Lintong,  P.M.,  Kairupan,  C.F.,  and  Sondakh,  P.L.N.,  2012.  Gambaran  Mikroskopik  Ginjal Tikus  Wistar  (Rattur  norvegicus)  setelah  Diinduksi  dengan  Gentamisin. J.  Biomedik 4, 185–192.
Lopez-Novoa, J.M., Quiros, Y., Vicente, L., Morales, A.I., and Lopez-Hernandez, F.J., 2011. New Insights Into the Mechanism of Aminoglycoside Nephrotoxicity : an Integrative Point of View. Kidney Int. 79, 33–45. https://doi.org/10.1038/ki.2010.337
Mohan, M., Shetty, D.,  Shetty, T., and Banerjee, S., 2015. Gentamicin : Myths  and Truths. Nitte Univ. J. Heal. Sci. 5, 4–7.
Pearce,  E.C.,  2013.  Anatomi  dan  Fisiologi  untuk  Paramedis.  PT  Gramedia  Pustaka  Utama, Jakarta.
Prabaswara,  F.G.,  2015.  Profil  Kimia  Urin  Tikus  Putih  setelah  Diberi  Ekstrak  Etanol Lempuyang  Gajah  (Zingiber  zerumbet)  selama  28  Hari.  Universitas  Muhammadiyah Surakarta.
Prasonto, D., Riyanti, E., and Gartika, M., 2017, Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Bawang Putih (Allium sativum), Dental Journal, 4 (2), 122-128
Rahman,  M.M.,  Fazlic,  V.,  and  Saad,  N.W.,  2012,  Antioxidant  Properties  of  Raw  Garlic (Allium sativum) Extract, International Food Research Journal, 19 (2), 589-591
Widyastuti, D.A., Ristianti, M.A., and Sari, I.M., 2019, The Study of Blood Creatinin and Urea Concentration of Wistar Rats (Rattus norvegicus) due to Sodium Nitrite Induction, Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, Vol 17, No 1, 14-20