## Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Bunga Belimbing Wuluh Terhadap Zona Hambat Pertumbuhan Streptococcus pyogenes
Dewi Agustin, Siti Zaenab, M. Agus Krisno Budiyanto, Atok Miftachul Hudha * Program Studi Pendidikan Biologi, FKIP Universitas Muhammadiyah Malang Jl. Raya Tlogomas No. 246 Malang No. Telp. 0341-464318
* e-mail : atok1964@gmail.com
Abstract: The Effect Of Concentrations Of Averrhoa Bilimbi On The Inhibition Zone Of  The  Growth  Of  Streptococcus  Pyogenes.  Streptococcus  pyogenes  can  cause pharyngitis (sore throat) and impetigo (skin infection). Then, the purpose of this study was to analyze the effect of various concentrations of Averrhoa bilimbi in the formation of inhibitory zones of the growth of Streptococcus pyogenes bacteria. The population in this  study  was  the  whole  of  Streptococcus  pyogenes  bacteria,  and  the  sample  of  this study  was  pure  culture  of  Streptococcus  pyogenes  bacteria.  The  data  analysis techniques used were the Kruskal Wallis Test  and the Mann Whitney Test.  The results showed that there was an effect of giving various concentrations of Averrhoa bilimbi to the  inhibition  zones  of  the  growth  of  Streptococcus  pyogenes  bacteria.  The concentration  of  Averrhoa  bilimbi  which  has  the  best  effect  on  the  inhibitory  zone diameter of  Streptococcus  pyogenes bacteria which is  25% with an average inhibition zone diameter of 1,392 mm.
Keywords: Averrhoa bilimbi, bacterial inhibit zone, Streptococcus pyogenes
Abstrak: Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Bunga Belimbing Wuluh Terhadap Zona Hambat  Pertumbuhan  Streptococcus  pyogenes . Streptococcus  pyogenes dapat menyebabkan  penyakit  faringitis  (radang  tenggorokan)  dan  impetigo  (infeksi permukaan  kulit).  Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  menganalisis  pengaruh berbagai konsentrasi ekstrak bunga belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi ) terhadap zona hambat  pertumbuhan  bakteri Streptococcus  pyogenes .  Populasi  dalam  penelitian  ini yaitu  keseluruhan bakteri  Streptococcus  pyogenes ,  dan  sampel  penelitian  ini  yaitu biakan  murni  bakteri Streptococcus  pyogenes .  Teknik  analisis  data  yang  digunakan adalah Uji Kruskal Wallis dan Uji Mann Whitney. Hasil penelitian menunjukkan bahwa ada  pengaruh  pemberian  berbagai  konsentrasi  ekstrak  bunga  belimbing  wuluh ( Averrhoa bilimbi ) terhadap zona hambat pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes . Konsentrasi  ekstrak  bunga  belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )  yang  memiliki pengaruh terbaik terhadap diameter zona hambat bakteri Streptococcus pyogenes adalah 25% dengan rata-rata diameter zona hambat 1,392 mm.
Kata  kunci:  belimbing  wuluh  (Averrhoa  bilimbi),  Streptococcus  pyogenes,  zona hambat bakteri

## PENDAHULUAN
Penyakit  infeksi  adalah  jenis penyakit  yang  menjadi  permasalahan dalam  kesehatan.  Penyakit  infeksi banyak  diderita  oleh n penduduk  di negara berkembang n termasuk
Indonesia.  Manusia  termasuk  makhluk hidup  yang  paling  rentan  terhadap infeksi  bakteri  dan  suatu  penyakit  akan timbul  apabila  infeksi  menyebabkan perubahan-perubahan pada fisiologi normal  tubuh    (Pratiwi,  2008).  Infeksi biasanya  disebabkan  karena  keadaan atau  kondisi  udara  yang  berdebu, temperatur  yang  hangat,  dan  lembab sehingga  mikroba  dapat  tumbuh  subur (Sari et al ., 2013). Penyakit infeksi pada umumnya  disebabkan  oleh  beberapa bakteri,  khususnya  bakteri  yang  hidup pada  binatang  dan  secara  tidak  sengaja menginfeksi  manusia.  Penyakit  infeksi bisa ditularkan dari satu u orang ke orang lain  serta  bisa  juga  ditularkan  dari hewan ke manusia (Jawetz, 2001).
Manusia termasuk makhluk hidup yang  paling  rentan  terhadap  infeksi bakteri. Bakteri Streptococcus pyogenes merupakan  bakteri  gram  positif  yang bersifat  patogen  dan  berbentuk coccus yang apabila diamati di bawah mikroskop  tampak  membentuk  seperti rantai  panjang  (Erywiyatno et  al ., 2012). Streptococcus  pyogenes adalah flora  normal  dari  spesies Streptococcus yang  terdapat  pada  saluran  pernafasan dan  dapat  menyebabkan  infeksi  apabila pertahanan  tubuh  inang  terganggu  dan apabila  organisme  dapat  menembus pertahanan  konstitutif.  Kerongkongan kulit  merupakan  tempat  pertama  yang diserang  oleh  bakteri Streptococcus pyogenes sehingga  menyebabkan  rasa nyeri saat menelan (Awanis & Mutmainnah,  2016).  Setiap  individu normal  diperkirakan  5  sampai  15% memiliki bakteri Streptococcus
pyogenes dan  umumnya  terdapat  pada saluran  pernafasan,  akan  tetapi  tidak
menimbulkan n gejala penyakit (Kusuma,  2010).  Penyakit  yang  umum disebabkan  oleh  bakteri Streptococcus pyogenes adalah faringitis (sakit tenggorokan)  dan  impetigo.  Penyakit lain  yang  juga  sering  ditimbulkan  oleh bakteri Streptococcus pyogenes diantaranya erysipelas, cellulitis, necrotizing  fasciitis,  demam  puerperal, sepsis, endokarditis akut, glomerulonephritis, dan demam rematik (Jawetz et al., 2001). Sekitar 9.000-11.500 kasus Streptococcus  pyogenes yang  invasif muncul setiap tahunnya dan mengakibatkan  1.000-1.800  kematian dari  seluruh  kasus  yang  muncul  di Amerika  serikat.  Kasus  infeksi  yang disebabkan  oleh  bakteri Streptococcus pyogenes masih n menjadi masalah kesehatan di negara-negara berkembang seperti  Indonesia  (Ji et  al .,  2012). Farigitis dan pioderma merupakan jenis penyakit  yang  banyak  ditemukan  pada anak-anak  usia  sekolah  di  Indonesia maupun negara-negara berkembang lainnya. Puncak insiden penyakit faringitis  dan  pioderma  terdapat  pada kelompok m usia  5  sampai  15  tahun (Setiawan,  2017).  Penyakit  faringitis akut  masuk  dalam  10  besar  penyakit yang  dirawat  jalan  dengan  presentase jumlah  penderita  1,5%  atau  sebanyak 2.214.781  orang  di  Indonesia  pada tahun  2004.  Menurut  data  dari  Dinas Kesehatan  Kota  Bandar  Lampung, kasus  faringitis  akut  masuk  dalam  10 besar  dalam  urutan  penyakit  terbanyak dan  menduduki  urutan  ke  lima  pasien rawat  jalan  di  Puskesmas  Simpur  Kota Bandar  Lampung  periode  Januari- Desember  tahun  2013  (Sidharti et  al .,
2015). Pengobatan  untuk  infeksi  yang disebabkan  oleh  bakteri  patogen  dapat menggunakan antibiotik. Antibiotik merupakan  bahan  yang  diperoleh  dan dihasilkan  oleh  mikroorganisme,  bahan
tersebut memiliki kemampuan membunuh atau menghambat pertumbuhan  terhadap  mikroorganisme dan  banyak  digunakan  oleh  masyarakat untuk pengobatan infeksi yang disebabkan oleh bakteri patogen (Apriani et al ., 2014).
Antibiotik  mampu  memberikan khasiat  yang  tidak  perlu  diragukan ketika  digunakan  secara  tepat,  namun apabila  dalam  penggunaan  antibiotik tidak  tepat,  seperti  kurang  tepatnya indikasi penggunaan, penggunaan secara  bebas  oleh  masyarakat,  serta dosis  dan  lama  pemberian  yang  tidak tepat,  akan  menimbulkan  masalah  baru yaitu  meningkatnya  resistensi  bakteri terhadap  antibiotik  Kusumowati et  al ., (2014).  Penggunaan  antibiotik  yang tidak tepat mampu menimbulkan banyak  kerugian  dari  segi  kesehatan, ekonomi dan generasi yang akan dating (Utami,  2011).  Dengan  demikian  maka perlu  adanya  alternatif  lain  dalam pengobatan infeksi dengan memanfaatkan bahan-bahan dari alam. Pengobatan dengan memanfaatkan  bahan  dari  alam  dapat menjadi  alternatif  yang  dapat  diberikan kepada penderita setelah mengindikasikan  gejala-gejala  tertentu, selain  itu  pengobatan  secara  alami  ini dapat digunakan sebagai upaya meminimalisir  tingkat  resistensi  bakteri (Puteri  &  Milanda,  2016).  Pengobatan tradisional  yang  memanfaatkan  bahan- bahan  dari  alam  sudah  dilakukan  dari generasi  ke  generasi  selama  ribuan tahun sehingga dikenal sebagai tumbuhan obat nenek moyang. Berdasarkan kenyataan tersebut, diketahui  bahwa  penggunaan  tumbuhan obat  sudah  merupakan  bagian  dari tradisi masyarakat tradisional (Radam et al .,  2017).  Masyarakat  semakin  sadar akan  pentingnya  kembali  ke  alam dengan memanfaatkan bahan-bahan alam  sebagai  obat.  Penggunaan  obat
dari bahan-bahan alam dinilai mempunyai  efek  samping  relatif  kecil dibandingkan  dengan  penggunaan  obat dari bahan kimia. Keuntungan lain yang didapat  dari  penggunaan  obat  dari bahan-bahan  alam  yaitu  bahan  bakunya mudah  diperoleh  dan  memiliki  harga yang relatif lebih murah (Apriani et al ., 2014).
Hampir  semua  jenis  tumbuhan yang  tersebar  di  Indonesia  memiliki manfaat  sebagai  obat  alami  karena memiliki  senyawa  aktif  yang  mampu dimanfaatkan  sebagai  obat n tradisional, salah  satu  diantaranya  adalah  tanaman belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi ). Tanaman  belimbing  wuluh  banyak tumbuh  di  pekarangan  sehingga  mudah diperoleh  masyarakat.  Secara  umum belimbing wuluh telah dipercaya sebagai  obat  dan  banyak  dimanfaatkan untuk menyembuhkan berbagai penyakit (Maryam et al ., 2015). Belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi )  memiliki  kandungan  senyawa aktif  baik  pada  batang,  buah  dan  daun yang  berpotensi  sebagai  antibakteri. Belimbing  wuluh  sering    disebut belimbing  sayur  atau  belimbing  asam, sebab  memiliki  rasa  asam  dan  biasa digunakan sebagai bumbu masakan atau ramuan  jamu.  Hal  ini  karena  belimbing wuluh mengandung zat tannin, saponin, glukosa  sulfur,  asam  format,  peroksida, flavonoid, serta triterpenoid (Suryaningsih, 2016).
Bagian  bunga  belimbing  wuluh
( Averrhoa bilimbi ) memiliki kandungan senyawa  aktif  yang  juga  berperan sebagai  antibakteri  dan  memiliki  peran utama dalam menghambat pertumbuhan maupun membunuh bakteri. Kandungan senyawa  aktif  tersebut  diantaranya saponin, polifenol, dan flavonoid
(Ardananurdin et al ., 2004). Hasil pengujian fitokimia menunjukkan  bahwa,  semua  ekstrak bunga  mengandung  senyawa  alkaloid
dan  tanin  serta  tidak  mengandung senyawa  steroid  (Novita,  2018).  Lebih lanjut  Novita,  (2018)  menunjukkan, bahwa  ekstrak  aseton  bunga  belimbing wuluh mengandung
flavonoid, triterpenoid,  glikosida  dan  fenolik  . Ekstrak  etanol  bunga  belimbing  wuluh juga  mengandung  saponin,  triterpenoid dan  fenolik,  sementara  ekstrak  akuades bunga  belimbing  wuluh  mengandung flavonoid dan saponin.
Adanya glikosidaBerdasarkan
hasil  skrining  fitokimia  esktrak  etanol bunga  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi )  juga  mengandung    senyawa aktif  glikosida  yang  merupakan  gugus amonioglikosida
yang memiliki
antiseptik dan bersifat sebagai antibiotik (Azmi,  2013).  Glikosida  merupakan senyawa  yang  juga  berpengaruh  dalam menghambat  aktivitas  bakteri  dan  telah banyak digunakan sebagai bahan antiseptik (Puteri & Milanda, 2014). Beberapa peneliti telah memanfaatkan  bagian  dari  tanaman belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )
sebagai antibakteri,
menurut Ardananurdin et  al .,  (2004)  dari
Program  Studi  Kedokteran  Fakultas Kedokteran Universitas Brawijaya, membuktikan  efektifitas m dekok  bunga belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi ) sebagai  antimikroba t terhadap  bakteri Salmonella a typhi
yang dapat menghambat  bakteri Salmonella  typhi pada  konsentrasi  10%,  sedangkan  yang dapat  membunuh  bakteri Salmonella typhi pada  konsentrasi  12,5%.  Azmi (2013),  juga  melakukan  penelitian tentang  skrining  fitokimia  dan  uji aktivitas antibakteri  ekstrak etanol serta fraksi-fraksi  bunga  belimbing  wuluh ( Averrhoa  bilimbi )  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Klebsiella pneumoniae . Hasil yang didapatkan dari penelitian  tersebut  menunjukkan  bahwa ekstrak  etanol  memberikan  daerah hambat yang efektif terhadap
pertumbuhan  bakteri Staphylococcus aureus dan Klebsiella  pneumonia . Sehubungan  dengan  hal  tersebut,  maka tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk mengetahui pengaruh berbagai
konsentrasi  ekstrak  bunga  belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )  terhadap pembentukan zona hambat pertumbuhan Streptococcus  pyogenes serta  menentukan  konsentrasi  ekstrak yang terbaik.

## METODE
Sterilisasi  Alat. Proses  strerilisasi alat,  yaitu  (a)  mencucui  semua  alat hingga  bersih  dan  membiarkannya hingga  kering  dan  (b)  membungkus semua  peralatan  menggunakan  kertas sampul dan mensterilkan dalam autoklaf  pada  suhu  125ºC  dengan tekanan 15 atmosfer selama 30 menit. Pembuatan Ekstrak Bunga Belimbing  Wuluh. Proses  pembuatan ekstrak  bunga  belimbing  wuluh  ,  yaitu (a)  mencuci  bersih  bunga  belimbing wuluh  lalu  di  kering  angina-anginkan hingga  tidak  mengandung  air;  (b) menghancurkan bunga belimbing wuluh dengan blender; (c) memasukkan bunga belimbing wuluh ke dalam Erlenmeyer; (d)  memberi  larutan  etanol  96% sebanyak 500 ml; (e) menutup
Erlenmeyer  dengan  alumunium  foil;  (f) menyimpan  bahan  pada  ruang  tertutup selama  2x24  jam  untuk  dilakukan proses  maserasi;  (g)  menyaring  ekstrak dengan  corong bucher dan  kain  saring kemudian  diambil  filtratnya;  (h)  filtrate atau hasil ekstrak dievaporasi
menggunakan rotary evaporator dengan suhu  60ºC  sampai  80ºC;  (i)  hasil evaporasi disimpan didalam oven dengan  suhu  40ºC;  (j)  pembuatan berbagai  konsentrasi  ekstrak  bunga belimbing  wuluh  sebesar  5%,  10%, 15%, 20%, 25% dilakukan pengenceran dengan aquades dari hasil ekstrak bunga belimbing wuluh 100%.
Pembuatan  BAP  (Blood  Agar Plate). Tahapan pembuatan BAP ( Blood
Agar  Plate ),  yaitu  (a)  menimbang bubuk BAB ( Blood Agar Base ) sebanyak  20  gram;  (b)  menambahkan aquades  steril  pada  bubuk  BAB  ( Blood Agar  Base );  (c)  menghomogenkan larutan BAB ( Blood Agar Base ) hingga tercampur menggunakan magnetic stirrer dengan suhu 300ºC dan kecepatan  8  rpm;  (d)  mensterilkan larutan  BAB  ( Blood  Agar  Base )  di dalam autoklaf pada suhu 121ºC dengan tekanan  15  atmosfer  selama  15  menit; (e) menambahkan darah segar sebanyak 35 ml dan homogenkan kembali dengan cara  digoyangkan;  (f)  menuangkan larutan  kedalam  cawan  petri  sebanyak 20  ml  pada  ruang  LAF;  dan  (g) membiarkan  suspense  hingga  padat didalam ruangan LAF steril.
Pembuatan Suspensi dan Larutan  Pembanding  Mac  Farland. Tahapan pembuatan suspensi dan larutan Mac Farland, yaitu (a) membuat larutan  dengan  memasukkan  Bariun Clorida  (BaCl 2 )  1%;  (b)  membuat larutan  dengan  memasukkan  Asam Sulfat  (H 2 SO 4 )  1%;  (c)  mencampur kedua  larutan  pada  tabung  reaksi, dengan  perbandingan  0,1  ml  BaCl 2 1% dan  9,9  ml  H 2 SO 4 1%;  (d)  menyimpan larutan  dalam  ruangan  LAF;  (e) mengambil  3-7  koloni  biakan  bakteri Streptococcus pyogenes kemudian diencerkan dengan aquades 9 ml hingga tercapai larutan homogen untuk mendapatkan  kepadatan  bakteri  yaitu 1,5 x 10 8 sel/mm; (f) membandingkannya dengan larutan
standar  Mac  Farland  0.5.  Jika  biakan bakteri Streptococcus  pyogenes belum sama dengan larutan pembanding, maka ditambahkan  bakteri  dengan  jarum  ose hingga mencapai kekeruhan yang sama.
Inokulasi  Bakteri  Streptococcus pyogenes. Proses  inokulasi  bakteri
Streptococcus pyogenes , yaitu (a)
mendinginkan  selama  beberapa  saat media  BAP  ( Blood  Agar  Plate )  dengan tujuan  untuk  menghilangkan  uap  air yang  terdapat  pada  cawan  petri;  (b) mengambil suspensi Streptococcus pyogenes yang telah diencerkan menggunakan  kapas  lidi  kemudian menginokulasi  secara  merata  pada permukaan  medi  BAP  ( Blood  Agar Plate )  dengan  teknik  sinambung;  (c) menetesi paper  disk dengan  berbagai konsentrasi  ekstrak  bunga  belimbing wuluh dan perlakuan kontrol positif dan negatif;  (d)  memasukkan paper  disk ke dalam  cawan  petri  yang  telah  terisi media  agar  dan  diletakkan  tepat ditengah  media;  (e)  menutup  kembali cawan  petri  sambil  diputar  180º  diatas api  bunsen  dengan  tujuan  agar  lebih steril;  (f)  membungkus  atau  melapisi bagian  tepi  cawan  petri  dengan  plastik warp; (g) menginkubasi dalam inkubator  pada  suhu  37ºC  selama  24 jam  dengan  posisi  tutup  cawan  petri terbalik.
Tahap pengamatan penelitian, yatu  (a)  meletakkan  cawan  petri  secara berurutan  di  atas  meja  sesuai  dengan perlakuannya;  (b)  meletakkan  cawan petri  secara  terbalik  dna  tutup  cawan petri  tidak  terbuka;  dan  (c)  mengukur diameter  zona  hambat  yang  muncul pada  masing-masing  perlakuan  dengan menggunakan jangka sorong.
Jenis  penelitian  yang  digunakan adalah True  Experimental  Research . Rancangan  penelitian  yang  digunakan yaitu The  Posttest  Only  Control  Group Design ,  dalam  design  ini  terdapat  dua kelompok  yaitu  kelompok  eksperimen dan  kelompok  kontrol.  Rancangan percobaan  yang  digunakan  adalah rancangan  acak  lengkap  (RAL)  non- faktorial karena penelitian ini dilakukan di lingkungan laboratorium yang dianggap  homogen.  Serta  perlakuannya diletakkan  dan  dilakukan  secara  acak pada  setiap  percobaan,  hal  ini  berarti
seluruh unit percobaan memiliki peluang  yang  sama  untuk  menerima perlakuan.  Penelitian  ini  menggunakan 7  kelompok  perlakuan,  yaitu  kontrol negatif aquades, kontrol positif
amoxilin, konsentrasi ekstrak 5%, 10%,
15%,  20%,  25%.  Analisis  data  yang dilakukan dengan terlebih dahulu menggunakan uji normalitas ( Klomogorov smirnov ) dan homogenitas ( Levene  test )  kemudian  dilanjutkan dengan uji Kruskal Wallis dan dilanjutkan dengan uji Man Whitney .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil uji pengaruh berbagai konsentrasi  ekstrak  bunga  belimbing wuluh ( Averrhoa bilimbi ) terhadap zona hambat pertumbuhan Streptococcus pyogenes ,  diperoleh  data  pengukuran diameter  zona  hambat  pada  masing- masing perlakuan. semakin tinggi konsentrasi yang diberikan maka semakin  besar  diameter  zona  hambat yang  terbentuk.  Hasil  dari  penelitian berbagai  konsentrasi  ekstrak  bunga belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi ) mampu menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus  pyogenes adanya senyawa  antibakteri  berupa    saponin, polifenol,  flavonoid,  dan  glikosida. Peningkatan besar diameter zona hambat pertumbuhan
bakteri
Streptococcus  pyogenes berdasarkan perbedaan  konsentrasi  ekstrak  bunga belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi ) terlihat pada Tabel 1.
Berdasarkan  Gambar  1  dapat menginformasikan bahwa semakin tinggi konsentrasi ekstrak maka semakin  meningkat  hasil  diameter  zona hambat.  Perlakuan  kontrol  diameter zona  hambat  terbesar  terdapat  pada perlakuan kontrol positif (amoxilin) dan diameter  zona  hambat  terkecil  pada perlakuan  kontrol  negatif  (aquades) sedangkan  untuk  perlakuan  berbagai konsentrasi  ekstrak  bunga  belimbing
wuluh ( Averrhoa bilimbi ) diameter zona hambat  terbesar  pada  konsentrasi  25%. Berikutnya  dilakukan  uji  normalitas untuk  mengetahui  data  berdistribusi normal atau tidak.
Tabel  1  Data  Rerata  Diameter  Zona Hambat Bakteri Streptococcus pyogenes Perlakuan Diameter Zona Hambat (mm) U1 U2 U3 U4 Rerata (mm) A (5%) 0,85 0,81 0,85 0,87 0,85 B (10%) 0,84 0,83 0,81 0,87 0,84 C (15%) 0,89 0,93 1,09 0,78 0,92 D (20%) 1,19 1,16 0,99 1,06 1,10 E (25%) 1,17 1,79 1,39 1,22 1,39 KA 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 KB 2,79 2,98 2,76 2,68 2,80
Pengujian  kenormalan  residual dilakukan  menggunakan Kolmogorov
Smirnov ,  dengan  kriteria  apabila  nilai D hitung <  D tabel maka  residual  dinyatakan normal.  Hal  ini  dapat  diketahui  bahwa pengujian  normalitas  residual  pengaruh berbagai  konsentrasi  ekstrak  bunga belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi ) terhadap diameter zona hambat pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes menghasilkan statistik Kolmogorov  Smirnov sebesar  0,224. Hal ini dapat diketahui bahwa pengujian normalitas  residual  menghasilkan  nilai D hitung (0,224)  <  D tabel (0,257),  sehingga residual tersebut dinyatakan normal.
Pengujian  kehomogenan  residual pengaruh  berbagai  konsentrasi  ekstrak bunga  belimbing  wuluh  ( Averrhoa bilimbi ) terhadap diameter zona hambat pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes dilakukan menggunakan Levene  Test ,  dengan  kriteria  apabila nilai Levene  statistics <  F  tabel  maka residual  dinyatakan  homogen.  Hasil
pengujian homogenitas residual menghasilkan  statistik Levene sebesar 3,247 dengan F tabel sebesar 2,573. Hal ini  dapat  diketahui  bahwa  pengujian residual  menghasilkan Levene  Statistic
(3,247)  >  F  tabel  (2,573)  sehingga residual tersebut dinyatakan tidak memiliki ragam yang homogen. Hasil perhitungan analisis  kruskal wallis  bertujuan  untuk  mengetahui perbedaan pengaruh berbagai
konsentrasi  ekstrak  bunga  belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )  terhadap diameter  zona  hambat  pertumbuhan bakteri Streptococcus  pyogenes yang hasilnya dapat dilihat pada Tabel 2.
Tabel 2. Hasil Pengujian Kruskal Wallis H 𝝌 𝒕𝒂𝒃𝒆𝒍 𝟐 24,592 12,592 Tabel 2 menginformasikan bahwa pengujian  perbedaan  menghasilkan  uji Kruskal  Wallis  (H)  sebesar  24,592 dengan 𝝌 𝒕𝒂𝒃𝒆𝒍 𝟐 sebesar  12,592.  Hal  ini dapat  diketahui  bahwa  statistik  uji  (H) > 𝝌 𝒕𝒂𝒃𝒆𝒍 𝟐 ,  sehingga  H0  ditolak.  Oleh karena itu, dapat  dinyatakan bahwa  ada perbedaan pengaruh
berbagai konsentrasi  ekstrak  bunga  belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )  terhadap diameter  zona  hambat  pertumbuhan bakteri Streptococcus  pyogenes yang berbeda signifikan.
Uji pengaruh berbagai konsentrasi ekstrak bunga belimbing wuluh
( Averrhoa  bilimbi )  terhadap  diameter zona  hambat  pertumbuhan  bakteri Streptococcus  pyogenes yang  berbeda signifikan  dilakukan  menggunakan  uji Mann  Whitney dengan  kriteria  bahwa apabila  Z  statistik>Z  tabel  5%  (1,96) maka  dapat  dinyatakan  bahwa  terdapat perbedaan pengaruh berbagai
konsentrasi  ekstrak  bunga  belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )  terhadap diameter  zona  hambat  pertumbuhan
bakteri Streptococcus  pyogenes .    Hasil analisis
Mann  Whitney  Test dapat diketahui melalui Tabel 3. Hasil analisis di atas menginformasikan  bahwa  perlakuan yang  paling  baik  untuk  menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes adalah  hasil  perlakuan  yang memberikan pengaruh sangat nyata dan perlakuan  yang  mempunyai  frekuensi beda  nyata  terbesar  dengan  perlakuan lain  yaitu  pada  perlakuan  berbagai konsentrasi  ekstrak  bunga  belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )  paling  baik terhadap  diameter  zona  hambat  bakteri Streptococcus  pyogenes adalah  pada konsentrasi  25%.  Konsentrasi  5%,  10% dan  15%  memiliki  kemampuan  yang sama  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri Streptococcus  pyogenes dan untuk  perlakuan  konsentrasi  15%  dan 20%  juga  memilki  kemampuan  yang sama  dalam  menghambat  pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes . Pemberian  berbagai  konsentrasi ekstrak  bunga  belimbing  wuluh  yang digunakan  yaitu  5%,  10%,  15%,  20%, dan  25%  terhadap  diameter  zona hambat pertumbuhan bakteri
Streptococcus  pyogenes menunjukkan adanya  pengaruh  dari  setiap  perlakuan yang  berbeda-beda  terhadap  diameter zona  hambat  yang  dihasilkan  dengan melihat  ukuran  diameter  zona  hambat. Daerah  bening  yang  dihasilkan  di sekitar  cakram  disk  disebabkan  karena adanya  pengaruh  pemberian  ekstrak bunga belimbing wuluh, dengan demikian  ekstrak  bunga  belimbing wuluh  mampu  memberikan  pengaruh terhadap hambatan pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes .

## Tabel 3. Hasil analisis Mann Whitney Test
Hasil  penelitian  adanya  pengaruh berbagai  konsentrasi  ekstrak  bunga belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi ) terhadap senyawa aktif yang terkandung dalam  bunga  belimbing  wuluh  yang sifatnyya sebagai antimikroba. Senyawa tersebut  diantaranya  saponin,  polifenol, flavonoid,  dan  glikosida.  Secara  umum masing-masing  senyawa  aktif  yang berperan  sebagai  antimikroba  tersebut memiliki fungsi  yang relatif sama yaitu untuk  menghambat  pertumbuhan  atau membunuh bakteri Streptococcus
pyogenes ,  namun  dari  masing-masing senyawa  tersebut  memiliki  mekanisme kerja antimikroba yang berbeda.
Penelitian  mengenai  pengaruh berbagai  konsentrasi  ekstrak  bunga belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi ) juga  menggunakan  2  perlakuan  kontrol yaitu  kontrol  negatif  (aquadest)  dan kontrol  positif  (amoxilin).  Perlakuan kontrol  negatif  (aquadest)  ternyata setelah  dilakukan  pengamatan  rata-rata diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan 0,00  mm,  yang  artinya  pada  perlakuan kontrol negatif tidak memiliki pengaruh terhadap  zona  hambat  pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes .
Sedangkan  untuk  perlakuan  kontrol positif  (amoxilin)  ternyata  memiliki rata-rata  diameter  zona  hambat  sebesar 2,80  mm,  yang  artinya  pada  perlakuan kontrol positif terdapat pengaruh terhadap  zona  hambat  pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes .
Hasil penelitian yang telah dilakukan terlihat, bahwa diameter zona hambat  yang  dihasilkan  dari  setiap perlakuan berbeda. Hal tersebut dipengaruhi  oleh  berbagai  konsentrasi ekstrak  bunga  belimbing  wuluh  yang memiliki  kadar  kandungan  senyawa aktif  antimikroba  yang  berbeda  setiap konsentrasi,  sehingga  dengan  adanya perbedaan  kadar  kandungan  senyawa aktif  tersebut  akan  mempengaruhi ukuran  zona  hambat  bakteri  yang dihasilkan.  Semakin  tinggi  konsentrasi pemberian  ekstrak  bunga  belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )  semakin besar  diameter  zona  hambat  yang terbentuk.  Hal  ini  sesuai  dengan pendapat  Afifi,  Erlin,  &  Rachmawati, (2018)., bahwa konsentrasi zat antimikroba dapat mempengaruhi pertumbuhan  mikroorganisme,  artinya apabila  konsentrasi  zat  antimikroba berbeda  maka  pertumbuhan  mikroba pun  akan  berbeda,  dimana  konsentrasi yang  paling  besar  akan  menyebabkan jumlah  kematian  yang  lebih  besar  pula terhadap mikroba
Hasil penelitian menunjukkan bahwa  konsentrasi  5%,  10%,  15%  dan 20%  memiliki  pengaruh  yang  sangat kecil  terhadap  hambatan  pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes.  Pada konsentrasi 25% menunjukkan
pengaruh  yang  paling  besar  dengan rerata  diameter  zona  hambat  1,39.  Hal ini  menunjukkan,  bahwa  semakin  besar Perlakuan Rata-Rata Z Statistik Notasi KA B A C D E KB KA (Aquades) 0.00 2.31  2.31  2.31  2.31  2.31  2.31 a B (10%) 0.84 2.31 0.58  1.15  2.31  2.31  2.31 b A (5%) 0.85 2.31  0.58 1.15  2.31  2.31  2.31 b C (15%) 0.92 2.31  1.15  1.15 1.73  2.31  2.31 bc D (20%) 1.10 2.31  2.31  2.31  1.73 2.02  2.31 c E (25%) 1.39 2.31  2.31  2.31  2.31  2.02 2.31 d KB (Amoxilin) 2.80 2.31  2.31  2.31  2.31  2.31  2.31 e
kadar konsentrasi yang diberikan
semakin  besar  pula  komponen  zat  aktif antimikroba yang terkandung di dalamnya.  Keadaan  demikian  akan menghasilkan  ukuran  diameter  zona hambat  yang  berbeda  pada  setiap perlakuan konsentrasi yang diberikan.
Bunga  belimbing  wuluh  memiliki banyak manfaat salah satunya di bidang kesehatan yang sejak dulu telah banyak dimanfaatkan  atau  digunakan  oleh masyarakat  untuk  pengobatan  secara alami.
Bunga belimbing wuluh memiliki  kandungan  senyawa  aktif antimikroba  guna  menghambat  atau membunuh mikroorganisme yang sifatnya  patogen.  Kandungan  pada ekstrak  bunga  belimbing  wuluh  yang efektif untuk menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus  pyogenes yaitu saponin, polifenol, flavonoid, dan glikosida. Saponin memberikan efek antimikroba dengan membentuk kompleks polisakarida pada dinding sel.
Interaksi  saponin  dengan  dinding  sel akan  menyebabkan  rusaknya  dinding dan  membran  sel  sehingga  akan bakterilisis.  Mekanisme  kerja  saponin sebagai antibakteri yaitu dapat menyebabkan  kebocoran  protein  dan enzim  dari  dalam  sel  (Madduluri,  Rao, & Sitaram, 2013). Saponin memiliki zat aktif yang permukaannya mirip detergen, sehingga saponin akan menurunkan tegangan permukaan dinding  sel  bakteri  dan  merusak permeabilitas membran. Rusaknya
membran sel akan mengganggu kelangsungan  hidup  bakteri.  Saponin berdifusi  melalui  membran  luar  dan dinding  sel  yang  rentan  akan  mengikat membran sitoplasma sehingga mengganggu serta mengurangi kestabilan  sel.  Hal  ini  menyebabkan sitoplasma  bocor  keluar  dari  sel  yang mengakibatkan  kematian  sel  (Ernawati
& Sari, 2015).
Polifenol bekerja melalui masuknya polifenol ke dalam sel bakteri dengan melewati dinding sel bakteri dan membran  sitoplasma,  di  dalam  sel bakteri senyawa polifenol menyebabkan denaturasi protein penyusun protoplasma, sehingga keadaan demikian  metabolisme  menjadi  inaktif dan pertumbuhan bakteri menjadi terhambat (Dwidjoseputro, 1994). Polifenol bersifat toksik terhadap mikroorganisme, hidroksilasi yang meningkat menyebabkan toksisitas yang meningkat  pula.  Mekanisme  yang dianggap  bertanggung  jawab  terhadap toksisitas  fenolik  pada  mikroorganisme adalah  bahwa  fenol  berperan  sebagai inhibitor  enzim,  merusak  membran sitoplasma yang menyebabkan metabolit penting, mengadakan interaksi  non-spesifik  dengan  protein dan  secara  total  dapat  mengendapkan protein sel (Afifi et al., 2018). Flavonoid bekerja
dengan merusak dinding sel bakteri yang terdiri atas  lipid  dan  asam  amino.  Lipid  dan asam  amino  akan  bereaksi  dengan gugus  alkohol  pada  senyawa  flavonoid sehingga  dinding  sel  akan  rusak  dan flavonoid  akan  masuk  kedalam  inti  sel bakteri.  Flavonoid  yang  berada  dalam inti sel akan bereaksi berkontak dengan DNA  sehingga  menyebabkan  rusaknya struktur  lipid  DNA  sehingga  bakteri akan  lisis  dan  sel  akan  mati.  Reaksi pengrusakan struktur lipid DNA disebabkan karena perbedaan kepolaran antara  lipid  penyususn  DNA  dengan gugus  alkohol  flavonoid  (Ernawati  & Sari,  2015).  Glikosida  bekerja  dengan cara  membentuk  senyawa  kompleks dengan  membran  sel  melalui  ikatan hidrogen  yang  dapat  menghancurkan sifat  permeabilitas  dinding  sel  bakteri yang  akan  menimbulkan  kematian  sel bakteri  tersebut  (Ernawati  &  Sari, 2015).
Penelitian  ini  juga  menggunakan perlakuan  aquades  sebagai  perlakuan kontrol  negatif  dan  perlakuan  amoxilin
sebagai perlakuan kontrol positif.
Perlakuan  kontrol  negatif  (aquades) setelah  pengamatan  rata-rata  diameter zona  hambat  0,00  mm  artinya  tidak terdapat  daerah  bening  yang  muncul  di sekitar  paper  disk  sehingga  perlakuan kontrol negatif (aquades) tidak memiliki pengaruh terhadap diameter zona hambat bakteri Streptococcus pyogenes . Perlakuan  kontrol  positif  (amoxilin) mampu menghasilkan zona hambat, hal ini  ditandai  dengan  munculnya  daerah bening  di  sekitar  paper  disk.  Rata-rata diameter  zona  hambat  yang  dihasilkan oleh amoxilin yaitu 2,8 mm.

## SIMPULAN
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa ada pengaruh berbagai
konsentrasi  ekstrak  bunga  belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )  terhadap diameter  zona  hambat  pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes . Konsentrasi  25%  memiliki  pengaruh terbaik  terhadap  diameter  zona  hambat pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes dengan  rerata  diameter  zona hambat 1,39 mm. berdasarkan kesimpulan tersebut maka dapat diberikan saran, yaitu (1) perlu dilakukan  penelitian  lanjutan  untuk menentukan konsentrasi hambat
minimum  (KHM)  dan  konsentrasi bunuh  minimum  (KBM)  ekstrak  bunga belimbing  wuluh  ( Averrhoa  bilimbi )
terhadap pertumbuhan
bakteri Streptococcus  pyogenes ;  (2)  perlu dilakukan  penelitian  serupa  dengan menggunakan  konsentrasi  yang  lebih tinggi  agar  mendapatkan  hasil  diameter zona  hambat  lebih  besar;  dan  (3)  perlu dilakukan  penelitian  tambahan  yang menguatkan teori ataupun hasil penelitian  ini  dengan  menggunakan
bakteri  uji  lain  yang  sifatnya  patogen dan tergolong bakteri gram negatif.

## DAFTAR RUJUKAN
Afifi,  R.,  Erlin,  E.,  &  Rachmawati,  J. 2018.  Uji  Anti  Bakteri  Ekstrak Daun Belimbing Wuluh  ( Averrhoa bilimbi  L )  terhadap  Zona  Hambat Bakteri  Jerawat  Propionibacterium acnes  secara  in  vitro. Quangga: Jurnal Pendidikan Dan Biologi , 10
(1): 10–17. Apriani, D., Amaliawati, N., & Kurniati,  E.  2014.  Efektivitas berbagai  konsentrasi  infusa  daun salam  (Eugenia  polantha  Wight) terhadap daya antibakteri Staphylococcus  aureus  secara  in vitro. Teknologi  Laboratorium ,  3 (1).
Ardananurdin,  A.,  Winarsih,  S.,  & Widayat,  M.  2004.  Uji  efektifitas dekok  bunga  Belimbing  Wuluh (Averrhoa Bilimbi) sebagai antimikroba terhadap bakteri Salmonella  Typhi  secara  in  vitro. Jurnal Kedokteran Brawijaya , 20(1): 30–34.
Awanis,  M.  A.,  &  Mutmainnah,  A.  A.
2016. Uji  antibakteri  ekstrak oleoresin  jahe  merah  (Zingiber officinale  var.rubrub)  terhadap bakteri  Streptococcus  pyogenes . 3(1): 52–62. Azmi, N. U. R. 2013. Skrining fitokimia dan uji aktivitas antibakteri ekstrak  etanol  serta  fraksi-fraksi
Bunga Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi  L.)  terhadap  antibakteri Staphylococcus aureus dan Klebsiella  pneumonia .  Universitas
Sumatera Utara.
Ernawati,  &  Sari,  K.  2015.  Kandungan senyawa kimia dan aktivitas antibakteri  ekstrak  kulit  buah alpukat  (Persea  americana  P.Mill) terhadap bakteri Vibrio alginolyticus. Jurnal Kajian
Veteriner , 3(2): 203–211.
Erywiyatno,  L.,  Djoko,  &  Krihariyani. 2012.  Pengaruh  madu  terhadap pertumbuhan bakteri Streptococcus pyogenes. Analis Kesehatan Sains , pp. 30–37.
Jawetz,  Melnick,  &  Adelberg’s.  2001.
Mikrobiologi  kedokteran (1st  ed.). Jakarta: Salemba Medika. Ji, Y. S., Dian, N., & Rinanda, T. 2012. Uji  aktivitas  antibakteri  ekstrak etanol  kelopak  bunga  Rosella (Hibiscus  sabdariffa  L)  terhadap Streptococcus  pyogenes  secara  in vitro. Jurnal  Kedokteran  Syiah Kuala . 12(4): 31–36.
Kusuma,  S.  A.  F.  2010. Streptococcus pyogenesis . Retrieved from https://docplayer.info/32702709- Makalah-bakteri-streptococcus- pyogenes-oleh-sri-agung-fitri- kusuma-m-si-apt.html Kusumowati,  I.  T.  D.,  Rosita,  M.,  &
Prasetyawan, A. 2014. Daya antibakteri  ekstrak  etano,  daun
senggani  (Melastoma  affine  D.
Don). Biomedika , 6(2): 22–25.
Madduluri,  S.,  Rao,  B.,  &  Sitaram,  B. 2013.  In  vitro  evaluation  of antibaterial activity of five indigenous  plants  extrak  against five bacterial  pathogens  of human. Academi  Sciences:  International Journal of Pharmacy and
Pharmaceutical  Sciences .  5(4): 679–684.
Maryam, S., Juniasti, S., & Kosman, M.
2015.  Uji  aktivitas  antibakteri ekstrak  etanol  buah  belimbing wuluh  ( Averrhoa  bilimbi  L. )  asal kota Watampone. Asy-Syifaa , 07(01): 60–69.
Novita,  N.  T.  2018. Skrining  fitokimia,
aktivitas peredaman radikal DPPH dan  sititiksis  ekstrak  bunga  dan buah  belimbing  wuluh  (Averrhoa bilimbi L.) . (Online), (https://repository.ipb.ac.id/jspui/bi
tstream/123456789/95605/1/G18nt n.pdf).
Pratiwi,  S.  T.  2008. Mikrobiologi farmasi . Yogyakarta: Erlangga.
Puteri, T., & Milanda, T. 2016. Uji daya hambat  ekstrak  daun  Lidah  Buaya ( Aloe  vera  L .)  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Staphylococcus  aureus:  Review. Farmaka Suplemen . 14(2): 9–17. Radam,  R.,  Soendjoto,  M.  A.,  & Prihatiningtyas, E. 2017. Pemanfaatan tumbuhan yang berkhasiat obat oleh masyarakat di kabupaten Tanah Bumbu, Kalimantan Selatan. Prosiding
Seminar  Nasional  Lahan  Basa . 486-492.
Repi,  N.,  Mambo,  C.,  &  Wuisan,  J. 2016.  Uji  efek  antibakteri  ekstrak kulit  Kayu  Manis  (  Cinnamomum burmannii  )  terhadap  Escherichia coli  dan  Streptococcus  pyogenes. Jurnal E-Biomedik (EBm) . 4(1): 1-
5.
Sari,  R.,  Nour,  F.,  Mustari,  A.,  &
Wahdaningsih,  S.  2013.  Aktivitas antibakteri minyak atsiri kulit jeruk Pontianak terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli. Traditional Medicine Journal . 18(2): 121-126.
Setiawan, A. T. 2017. Upaya penanganan  gangguan  nyeri  akut pada  a.n  C  dengan  faringitis . (Online),  (  http://eprints.ums.ac.id/ 52248/4/NASKAH PUBLIKASI.pdf). Sidharti, L., Pemula, G., Lisiswanti, R., &  Soleha,  T.  U.  2015.  Kesesuaian peresepan penyakit faringitisa akut terhadap  standar  pengobatan  di puskesmas  rawat  inap  Simpur Bandar  Lampung  tahun  2013. Jurnal  Agromedicine .  2(3):  196–- 202.
Suryaningsih,  S.  2016.  Belimbing wuluh  (Averrhoa  Bilimbi)  sebagai
sumber  energi  dalam  sel  Galvani.
Jurnal  Penelitian  Fisika  Dan Aplikasiny .  6(1):  11–17.  Retrieved from https://journal.unesa.ac.id /index.php/jpfa/article/view/880/66 9 Utami, E. R. 2011. Antibiotika, resistensi  dan  rasionalitas  terapi. El-Hayah . 1(4): 191–198. (Online), (https://www.research gate.net/publication/265579606_A NTIBIOTIKA_RESISTENSI_DA
N_RASIONALITAS_TERAPI).