EFFECTIVENESS TEST OF ETHANOL EXTRACT OF GOTU KOLA LEAF (Centella asiatica (L.) Urban) AS ANTIDIABETIC AGAINST ALLOXAN INDUCED MALE WHITE
RAT ( Rattus norvegicus )
UJI EFEKTIVITAS EKSTRAK ETANOL DAUN PEGAGAN ( Centella asiatica (L.) Urban) SEBAGAI ANTIDIABETES TERHADAP TIKUS PUTIH JANTAN ( Rattus norvegicus ) YANG DIINDUKSI ALOKSAN
Grace Laury Tulung 1) , Widdhi Bodhi 1) , Jainer P. Siampa 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *gracelaury07@gmail.com

## ABSTRACT
Gotu Kola Leaf ( Centella asiatica (L.) Urban) are known to contain flavonoid compound, and flavonoid are known to decrease blood glucose level by stimulating pancreas beta cells to produce insulin. The aim of this research  is  to  find  out  wether  the  ethanol  extract  of  gotu  kola  leaf ( Centella  asiatica (L.)  Urban) has  the antidiabetic effectiveness or not. This research used Completely Randomized Design method. There were 15 rats used in this research that were split into 5 groups that is negative control (Aquadest), positive control (Metformin), and ethanol extract of gotu kola leaf with the dosage of 5.4 mg;10.8 mg;21.6 mg. The acquired data were analyzed with ANOVA test and LSD test. The analysis result showed that ethanol extract of gotu kola leaf had antidiabetic effectiveness against male white rat.
Keywords :  Centella asiatica (L.) Urban, antidiabetic , Rattus norvegicus

## ABSTRAK
Daun  Pegagan  ( Centella asiatica (L.)  Urban)  diketahui  mengandung  zat  flavonoid,  dimana  flavonoid telah diketahui  mempunyai  kemampuan  menurunkan  kadar  glukosa  darah  dengan  merangsang  sel  beta  pankreas untuk memproduksi insulin. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui apakah ekstrak etanol daun pegagan memiliki efekivitas antidiabetes. Penelitian ini menggunakan metode Rancangan Acak Lengkap. Tikus yang digunakan sebanyak 15 ekor dan dibagi dalam 5 kelompok  yaitu kontrol negatif (aquadest), kontrol positif (metformin),  dan  ekstrak  etanol  daun  pegagan  dengan  dosis  5,4  mg;  10,8  mg;  21,6  mg.  Data  yang  ada dianalisis dengan menggunakan uji ANOVA dan uji LSD. Hasil analisis menujukkan bahwa ekstrak etanol daun pegagan memiliki efektivitas antidiabetes terhadap tikus putih jantan ( Rattus norvegicus ).
Kata kunci : Centella asiatica (L.) Urban, antidiabetes, Rattus norvegicus

## PENDAHULUAN
Diabetes  melitus  adalah  suatu  penyakit kronis  dimana  organ  pankreas  tidak  memproduksi cukup insulin atau ketika tubuh tidak efektif dalam menggunakannya. Diabetes melitus adalah gangguan  metabolisme  yang  secara  genetis  dan klinis  termasuk  heterogen  dengan  manifestasi berupa  hilangnya  toleransi  karbohidrat  (WHO, 2016).
Pada umumnya pengobatan penyakit diabetes  adalah  melakukan  penyuntikan  insulin, penggunaan obat antidiabetes oral dan mengontrol gula  darah  agar  tetap  normal  sehingga  timbulnya penyakit lain (komplikasi) dapat dicegah.
Pengobatan  dengan  penyuntikan  insulin  dan  obat antidiabetes  kimiawi  memerlukan  biaya  yang  sulit dijangkau  oleh  seluruh  golongan  masyarakat khususnya  masyarakat  kelas  menengah  kebawah ( Rosmiati dan Alexius, 2017). Oleh karena itu, perlu dilakukan penelitian mengenai penggunaan  obat  herbal  sebagai  pengobatan alternatif  penyakit  diabetes  pada  tikus  putih jantan.  Salah  satu  tanaman  herbal  yang  dapat digunakan  yaitu  tanaman  pegagan  yang  dapat dimanfaatkan  daunnya  untuk  menurunkan kadar gula darah (Kinho et al., 2011).
Tanaman  pegagan  banyak  dimanfaatkan sebagai  tanaman  obat,  sayuran  segar,  lalapan  atau dibuat  jus.  Peneltian  ilmiah  menunjukkan  khasiat pegagan  diantaranya  efek  antineoplastik,  efek pelindung  tukak  lambung,  menurunkan  tekanan dinding  pembuluh,  mempercepat  penyembuhan luka, penambah nafsu makan, demam, gigitan ular, menyegarkan  badan,  menurunkan  panas,  batuk kering,  mimisan,  peningkatan  kecerdasan,  dan antitrombosis  (BPOM,  2010).  Selain  itu,  daun pegagan  juga  dapat  digunakan  sebagai  obat penyakit gula  (Kinho et al ., 2011).
Ekstrak  etanol  daun  pegagan  dilaporkan sebagai  antidiabetes  karena  mampu  menekan peningkatan  kadar  gula  darah  pada  tikus  yang diinduksi aloksan (Chauhan et al ., 2010). Senyawa bioaktif seperti brahmosida, brahminosida, kuersetin,  β-sitosterol,  dan  kaempferol diketahui memiliki efek hipoglikemik dan berkhasiat sebagai antidiabetes  melalui  mekanisme  penghambatan terhadap kerja α-glukosidase (Ernawati, 2016).
Tanaman pegagan mengandung antioksidan  di  seluruh  bagian  tanaman  mulai  dari daun  sampai  akar  (Lokanathan et  al .,  2016). Senyawa  aglikon  triterpen  dalam  pegagan  bersifat nonpolar yang apabila berikatan dengan 3 molekul gula  masih  tetap  kecil  kelarutannya  dalam  air  dan lebih  larut  dalam  etanol  96%.  Proses  ekstraksi
menggunakan etanol terbukti lebih baik dibandingkan dengan metanol dan air. Etanol dapat melarutkan dengan baik  senyawa aglikon triterpen terutama  kandungan  fenolik, asiaticoside, dan madecassoside (Nurlaily et al ., 2012).

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan Maret  -  September  2020  di  Laboratorium  Farmasi Lanjut Program Studi Farmasi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi.

## Rancangan Penelitian
Penelitian ini merupakan penelitian eksperimen laboratorium dengan metode Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang  dibagi menjadi  5  kelompok  dengan  masing-masing kelompok terdiri dari 3 tikus. Kelompok 1 sebagai kontrol negatif diberi induksi alosan dan aquadest, kelompok  2  sebagai  kontrol  positif  diberi  induksi aloksan  dan  metformin,  kelompok  3-5  diberi induksi  aloksan  dan  ekstrak  etanol  daun  pegagan dengan dosis masing-masing 5,4 mg; 10,8 mg; dan 21,6 mg.

## Alat dan Bahan Alat
Alat-alat  yang  digunakan  yaitu  kandang tikus,  tempat  makan  dan  minum  tikus,  blender ( Cosmos® ),  ayakan, aluminium  foil ,  kertas saring, oven,  timbangan  analitik  ( BB  ADAM ),  pipet  tetes, wadah  sampel,  lumpang  dan  alu, disposable syringe 1  mL,  alat  penyekok  oral  (sonde),  cawan petri, gunting, glukometer ( gluco Dr auto ), wadah kaca, gelas ukur ( Pyrex ), sonikator, alcohol swab .

## Bahan
Bahan yang digunakan yaitu daun pegagan ( Centella  asiatica (L.)  Urban),  tikus  putih  jantan ( Rattus  norvegicus ),  makanan  tikus,  etanol  96%, aquadest, aloksan, dan metformin.

## Prosedur Penelitian Pengambilan dan Pengolahan Sampel
Sampel yang digunakan pada penelitian ini adalah  daun  pegagan  yang  diambil  di  Kakaskasen 3,  Kec.  Tomohon  Utara,  Sulawesi  Utara.  Sampel berupa  daun  pegagan  yang  dikumpulkan  dan dibersihkan dari sisa kotoran. Setelah bersih, daun kemudian  dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan.  Kemudian,  sampel  yang  telah  kering
dihaluskan  menggunakan  blender  hingga  menjadi serbuk dan diayak.

## Pembuatan Ekstrak
Pembuatan  ekstrak  dilakukan  dengan  cara maserasi  yaitu  dengan  menimbang  sampel  serbuk ekstrak  daun  pegagan  ( Centella  asiatica (L.) Urban) dan dimasukkan ke dalam wadah kaca lalu direndam  dengan  pelarut  etanol  96%.  Kemudian wadah  ditutup  dengan aluminium  foil dan dibiarkan  selama  5  hari  sambil  sesekali  diaduk, lalu  disaring  dengan  kertas  saring  sehingga menghasilkan  filtrat  1  dan  residu  1.  Kemudian, residu  yang  diperoleh  diremaserasi  selama  2  hari. Disaring  hingga  didapatkan  filtrat  2  dan  residu  2. Filtrat  1  dan  2  digabung  dan  diuapkan  dengan menggunakan  oven  dengan  suhu  40°C  sampai diperoleh ekstrak kental (Mongi, 2019).

## Pembuatan Larutan Uji
Ekstrak  kental  daun  pegagan  ( Centella asiatica (L.)  Urban)  ditimbang  terlebih  dahulu sesuai  masing-masing  dosis  yang  akan  digunakan yaitu  5,4  mg;  10,8  mg;  dan  21,6  mg.  setelah  itu, masing-masing  ekstrak  kemudian  dimasukkan  ke dalam  wadah  sampel  dan  ditambahkan  larutan aquadest  sebanyak  10  mL  dan  disonikasi  hingga homogen.  Setelah  homogen,  wadah  dari  masing- masing ekstrak diberi label.

## Pembuatan Larutan Aloksan
Dosis  induksi  aloksan  untuk  tikus  dengan BB 200 g ialah 150 mg/kgBB dan diberikan secara intraperitoneal  (Yuriska,  2009).    Serbuk  aloksan monohidrat  ditimbang  terlebih  dahulu  sebanyak 300 mg dan dilarutkan dengan 10 mL aquadest lalu dikocok hingga homogen dan wadah diberi label.

## Pembuatan Larutan Metformin
Tablet  metformin  digerus  halus  dan dilakukan uji keseragaman bobot dengan menimbang  20  tablet  dan  dihitung  bobot  rata- ratanya. Setelah itu, dbuat larutan stok dengan cara menimbang  metformin  dan  dimasukkan  ke  dalam wadah  sampel  lalu  ditambahkan  dengan  aquadest sebanyak 10 mL dan dikocok hingga homogen.

## Perlakuan Hewan Uji
Penelitian  ini  menggunakan  hewan  uji yaitu  tikus  putih  jantan  ( Rattus  norvegicus )  yang
dibagi menjadi 5 kelompok dengan masing-masing kelompok  terdiri  dari  3  tikus  yang  dipelihara  di dalam  kandang  dan  diadaptasi  dalam  ruangan selama  7  hari  dengan  diberi  makan  dan  minum yang  teratur.  Setelah  itu,  masing-masing  tikus dipuasakan  selama  8  jam  dan  diinduksi  aloksan sebanyak  1  mL  menggunakan  alat  penyekok  oral (sonde)  dan  ditunggu  selama  2  hari.  Kelompok  1 diberikan aquadest sebagai kontrol negatif sebanyak 1 mL. kelompok 2 sebagai kontrol positif diberikan  larutan  metformin  sebanyak  1  mL. kelompok  3-5  diberikan  larutan  ekstrak  etanol daun  pegagan  dengan  dosis  masing-masing  yaitu 5,4  mg;  10,8  mg;  dan  21,6  mg  sebanyak  1  mL. masing-masing  larutan  uji  diberikan  pada  tikus secara  oral  sekali  dengan  pemeriksaan  gula  darah setiap  40  menit  hingga  menit  ke  160  dengan menggunakan alat glukometer ( gluco Dr auto ).

## Analisis Data
Hasil percobaan yang didapatkan kemudian dianalisis  untuk  melihat  adanya  perbedaan  yang nyata  terhadap  kadar  gula  darah  dari  masing- masing  kelompok  perlakuan.  Analisis  data  diolah dengan  menggunakan  program  SPSS  yang meliputi  uji  statistik  yaitu  uji  homogenitas,  uji normalitas, uji ANOVA.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pembuatan ekstrak daun pegagan dilakukan  dengan  menggunakan  proses  ekstraksi yaitu dengan metode maserasi dengan menggunakan pelarut etanol 96%. Ekstraksi adalah suatu  proses  pemisahan  dua  atau  lebih  komponen kimia yang diinginkan dengan menambahkan suatu pelarut  untuk  melarutkan  komponen  tersebut (Suryanto,  2012).  Pelarut  akan  menembus  dinding sel  dan  masuk  ke  dalam  rongga  sel  yang mengandung zat aktif (Nurhayati, 2011).
Hewan uji yang digunakan yaitu tikus putih jantan  ( Rattus  norvegicus ).  Tikus  jantan  dipilih karena  dapat  memberikan  hasil  penelitian  yang lebih  stabiil  karena  tidak  dipengaruhi  oleh  adanya siklus  ovulasi  dan  kehamilan  seperti  pada  tikus betina.tikus  putih  jantan  juga  memiliki  kecepatan metabolisme obat yang lebih tinggi serta memiliki kondis  fisik  tubuh  dan  hormonal  yang  lebih  stabil dibandingkan  dengan  tikus  betina  (Sugiyanto, 1995).
Pengujian antidiabetik dilakukan pada tikus yang mengalami diabetes sehingga untuk melakukan pengujian, tikus perlu diinduksi dengan aloksan secara intraperitoneal untuk membuat tikus
mengalami  diabetes.  Aloksan  dipakai  untuk menginduksi  tikus  karena  pemeberian  aloksan merupakan  cara  yang  cepat  untuk  menghasilkan kondisi  diabetik  eksperimental  (hiperglikemik) dengan menginduksi secara intravena, intraperitoneal,  atau  subkutan  pada  binatang percobaan  (Szkudelski,  2008).  Aloksan  bersifat toksik  selektif  terhadap  sel  beta  pankreas  yang memproduksi  insulin  karena  terakumulasinya aloksan  secara  khusus  melalui  transporter  gula (Husyanti,  2016).  Aloksan  bereaksi  dengan
merusak  substansi  esensial  di  dalam  sel  beta pankreas  sehingga  menyebabkan  berkurangnya granula-granula pembawa insulin di dalam sel beta pankreas (Manurung, 2012).
Penelitian ini mengggunakan 15 ekor tikus yang  dibagi  menjadi  5  kelompok  perlakuan  yaitu kontrol negatif, kontrol positif, ekstrak etanol daun pegagan  dengan  dosis  5,4  mg;  10,8  mg;  dan  21,6 mg. Masing-masing kelompok terdiri dari 3 tikus.
Tabel 1 . Hasil Pengukuran Rata-Rata Kadar Gula Darah
Perlakuan Rata-Rata Kadar Gula Darah T0 T1 T2 T3 T4 T5 Kontrol (-) Aquadest 87 553 582 581 379 398 Kontrol (+) Metformin 77 455 353 258 103 153 Dosis 1 80 332 264 291 161 124 Dosis 2 69 314 228 166 219 226 Dosis 3 73 377 257 172 156 97
*Keterangan: Kontrol (-): Kontrol negatif, Kontrol (+): Kontrol positif, Dosis 1: Ekstrak etanol daun pegagan dosis 5,4 mg,  Dosis  2:  Ekstrak  etanol  daun  pegagan  dosis  10,8  mg,  Dosis  3:  Ekstrak  etanol  daun  pegagan  dosis  21,6  mg,  T0: Kadar gula darah awal, T1: Kadar gula darah setelah 2 hari pemberian aloksan, T2: Kadar gula darah setelah 40 menit pemberian  metformin/ekstrak,  T3:  Kadar  gula  darah  setelah  80  menit  pemberian  metformin/ekstrak,  T4:  Kadar  gula darah  setelah  120  menit  pemberian  metformin/ekstrak,  T5:  Kadar  gula  darah  setelah  160  menit  pemberian metformin/ekstrak.
Gambar 1. Grafik Pengukuran Kadar Gula Darah
Pengukuran  kadar  gula  darah  dilakukan sebanyak  6  kali  dalam  waktu  160  menit  dimana kadar  gula  darah  diukur  dengan  interval  waktu  40 menit. Rata-rata pengukuran kadar gula darah pada tikus  dapat  dilihat  pada  tabel  1  dan  gambar  1. Kadar  gula  darah  pertama  diukur  setelah  tikus dipuasakan  selama  8  jam  (T0).  Hasil  pengukuran menunjukkan  bahwa  kadar  gula  darah  tikus
sebelum  perlakuan  dalam  keadaan  normal  dengan rata-rata T0 pada kontrol negatif, positif, dosis 1, 2 dan 3 masing-masing yaitu 87, 77, 80, 69, dan 73. Kadar  gula  darah  puasa  normal  pada  tikus  dalam rentang antara 50-135 mg/dL (Kusumawati, 2004). Pemeriksaan kadar gula darah selanjutnya dilakukan  setelah  2  hari  pemberian  aloksan  untuk melihat  kenaikan  kadar  gula  darah  pada  tikus. Hasil  pengukuran  kadar  gula  darah  setelah pemberian  aloksan  menunjukkan  bahwa  telah terjadi  peningkatan  kadar  gula  darah  pada  tikus. Hal  ini  menunjukkan  bahwa  telah  terjadi penyerapan  glukosa  oleh  tubuh  tikus  dikarenakan pengaruh  fisiologis  tubuh  tikus  itu  sendiri. Kemampuan  dari  aloksan  yaitu  menimbulkan diabetes juga tergantung pada dosis senyawa, jalur penginduksian,  hewan  percobaan,  dan  status gizinya (Amma, 2009).
Selanjutnya,  tikus  diberikan  aquadest sebagai kontrol negatif. Penggunaan aquadest pada kontrol  negatif  hanya  sebagai  pembanding  untuk melihat peningkatan maupun penurunan kadar gula darah  dengan  perlakuan  kelompok  positif  maupun
kelompok  sampel  ekstrak  etanol  daun  pegagan (Mongi, 2019). Hasil pengukuran kadar gula darah setelah  pemberian  aquadest  tidak  mengalami penurunan  kadar  gula  darah  yang  signifikan  dari menit  ke  40  sampai  160  dikarenakan  aquadest tidak  memiliki  efek  ap-apa  sehingga  tidak  dapat menurunkan  kadar  gula  darah  tikus  secara signifikan.  Dari  hasil  juga  didapatkan  bahwa terdapat  perbandingan  yang  signifikan  antara  rata- rata kadar gula darah kelompok negatif dan positif serta  rata-rata  kadar  gula  darah  kelompok  negatif dan kelompok ekstrak etanol daun pegagan.
Pada  kelompok  kontrol  positif,  tikus diberikan  perlakuan  dengan  larutan  metformin. Hasil  menunjukkan  bahwa  setelah  pemberian larutan  metformin,  kadar  gula  darah  tikus mengalami  penurunan  yang  signifikan  hingga menit ke 120 tetapi meningkat kembali pada menit ke  160.  Hal  ini  disebabkan  karena  mekanisme kerja  dari  metformin  yaitu  menurunkan  kadar glukosa  darah  dengan  memperbaiki  transport glukosa ke dalam sel-sel otot (Dalimartha, 2007).
Pada  kelompok  dosis  1  dengan  pemberian ekstrak etanol daun pegagan dengan dosis 5,4 mg, hasil  menunjukkan  bahwa  rata-rata  kadar  gula darah  mengalami  penurunan  pada  menit  ke  40 namun  kembali  meningkat  pada  menit  ke  80  dan kembali  menurun  hingga  menit  ke  160.  Hal  ini menunjukkan  bahwa  kadar  ekstrak  etanol  daun pegagan mencapai puncak pada menit ke 40.
Pada  kelompok  perlakuan  dosis  2  dengan pemberian ekstrak etanol daun pegagan dosis 10,8 mg, hasil yang didapatkan dari rata-rata kadar gula darah tikus menagalami penurunan secara signifikan  pada  menit  ke  40  hingga  menit  ke  80 tetapi  meningkat  pada  menit  ke  120  hingga  menit ke 160. Hal ini menunjukkan bahwa kadar ekstrak etanol  daun  pegagan  pada  dosis  2  mencapai puncak pada menit ke 80.
Pada  kelompok  perlakuan  dosis  3  dengan pemberian ekstrak etanol daun pegagan dosis 21,6 mg, hasil yang didapatkan dari rata-rata kadar gula darah tikus mengalami penurunan hingga menit ke 160 yang menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun pegagan  dosis  3  dapat  menurunkan  kadar  gula darah tikus secara signifikan hingga menit ke 160. Dari  hasil  pengujian  menggunakna  ekstrak  etanol daun  pegagan  dengan  dosis  yang  berbeda,  dosis  3 yaitu 21,6 mg mempunyai kemampuan menurunkan  kadar  gula  darah  yang  paling  besar dibandingkan  dosis  ekstrak  lainnya,  karena  kadar gula darah yang diperoleh setelah pemberian dosis ini  dapat  mencapai  kadar  gula  darah  normal dengan penurunan yang signifikan.
Ekstrak  etanol  daun  pegagan  dapat meurunkan  kadar  gula  darah  tikus  yang  diinduksi aloksan  karena  daun  pegagan  mengandung senyawa antioksidan termasuk flavonoid (Yasuri et al .,  2016).  Pegagan  merupakan  sumber  asam amino,  flavonoid,  minyak  esensial,  alkaloida  dan senyawa  fenolik  dan  tanin  yang  merupakan kontributor  utama  aktivitas  antioksidan  dari ekstrak  pegagan  yang  dapat  menekan  peningkatan kadar gula darah pada tikus yang diinduksi aloksan (Chauhan et al ., 2010).
Selanjutnya dilakukan uji normalitas ( Tests of  Normality ),  uji  homogenitas  varian  ( Tests  of Homogenity  of  Variance ),  uji  statistik  parametrik One Way ANOVA ( Analysis of Variance ), dan uji LSD ( Least Significant Difference ) untuk memperoleh  data  yang  lebih  spesifik  tentang adanya  efek  antidiabetik  dari  ekstrak  etanol  daun pegagan  ( Centella  asiatica (L.)  Urban)  pada  tikus putih jantan ( Rattus norvegicus ).
Dari  hasil  uji  normalitas  data,  diperoleh hasil  dari  nilai  signifikansi  dengan  metode Shapiro-Wilk yang  menunjukkan  bahwa  data berdistribusi  normal.  Penggunaan  uji  statistik parametrik  dan  non  parametrik  didasari  pada distribusi  data  yang  digunakan  sebagai  salah  satu asumsi dasar. Jika data berdistribusi normal, maka statistik  parametrik  dapat  digunakan,  namun  jika distribusi  data  tidak  normal  maka  statistik  non parametrik  yang  digunakan  (Oktaviani  dan  Hari, 2014).  Uji  normalitas  pada  penelitian  ini menggunakan metode Shapiro-Wilk karena metode ini  penggunaannya  terbatas  untuk  sampel  yang kurang dari 50 agar menghasilkan keputusan yang akurat (Razali dan Wah, 2011).
Gambar 2. Uji Normalitas
Selanjutnya,  dilakukan  uji  homogenitas untuk  mengetahui  apakah  kelima  kelompok perlakuan memiliki varian yang homogen. Pada uji ini, diperoleh nilai signifikansi rata-rata kadar gula darah  tikus  yang  menunjukkan  bahwa  data  yang diperoleh homogen.
Gambar 3. Uji Homogenitas
Selanjutnya,  pada  uji  ANOVA  didapatkan hasil  nilai  signifikansi  0,023  (sig  <  0,05).  Dari hasil  ini  dapat  dikatakan  bahwa  rata-rata  kadar gula  darah  kelima  kelompok  tikus  berbeda  secara signifikan  yang  berarti  hipotesis  menolak  H0  dan menerima H1.
Gambar 4. Uji ANOVA
Selanjutnya  dilakukan  uji  LSD  ( Least Significant  Difference ).  Hasil  uji  ini  menunjukkan bahwa  terdapat  perbedaan  bermakna  antara kelompok  negatif  dan  kelompok  positif  dengan nilai  signifikansi  yaitu  0,017  (sig  <  0,05)  yang berarti kelompok positif lebih berefek dibandingkan kelompok negatif dalam menurunkan  kadar  gula  darah  tikus.  Begitupun dengan  nilai  signifikansi  yang  diperoleh  antara kelompok negatif dengan kelompok dosis 1, 2 dan 3 masing-masing yaitu 0,008; 0,007; dan 0,004 (sig < 0,05) yang berarti kelompok dosis lebih berefek dibandngkan kelompok negatif dalam menurunkan kadar  gula  darah  tikus.  Nilai  signifikansi  yang diperoleh  antara  kelompok  kontrol  positif  dengan kelompok  dosis  1,  2  dan  3  masing-masing  yaitu 0,752;  0,704;  dan  0,567  (sig  >  0,05)  yang  berarti kelompok  positif  dan  kelompok  dosis  ekstrak memiliki  rata-rata  penurunan  kadar  gula  darah yang sebanding.
Gambar 5. Uji LSD

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  pegagan ( Centella  asiatica (L.)  Urban)  dapat  memberikan efek  terhadap  penurunan  kadar  gula  darah  tikus putih  jantan  ( Rattus  norvegicus )  yang  diinduksi aloksan  dengan  waktu  pemberian  ekstrak  selama sehari dan pemeriksaan kadar gula darah setiap 40 menit  hingga  menit  ke  160  dengan  dosis pemberian  yaitu  5,4  mg;  10,8  mg;  dan  21,6  mg. dimana  antara  ketiga  dosis  tersebut  yang  paling terbaik ialah dosis 21,6 mg.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut untuk  menentukan  dosis  minimum,  maksimum serta  dosis  toksik  agar  ditemukan  dosis  yang optimal dalam menurunkan kadar gula darah.

## DAFTAR PUSTAKA
Amma, R. 2009. Efek Hipoglikemik Ekstrak Daun Murbei  ( Morus  Multicaulis )  terhadap  Kadar Glukosa  Darah  Tikus  DM.  [Tesis].  Program Studi  Gizi  Masyarakat  dna  Sumber  Daya Keluarga IPB, Bogor.
Badan POM RI. 2010. Acuan Sediaan Herbal. Vol.
5  Edisi  ke-1.  Direktorat  Obat  Asli  Indonesia. Badan Pengawas Obat dan Makanan Republik Indonesia, Jakarta.
Chauhan, P.K., Pandey, I.P., Dhatwalia, V.K.,  dan Singh,  V.  2010.  Antidiabetic  Effect  of Ethanolic  and  Methanolic  Leaves  Extract  of Centella asiatica on Alloxan Induced Diabetic Rats. Int J. Pharm Bio Sci . (6)2: 1-6.
Dalimartha,S.  2007.  Ramuan  Tradisional  untuk
Pengobatan Diabetes Mellitus. Penebar
Swadaya, Jakarta. Ernawati, M. 2016. Analisis Komunitas Aktinobakteri  Endofit  Pegagan  ( Centella asiatica (L.)  Urban)  Berdasarkan  Gen  16S rRNA  dan  Potensinya  sebagai  Antidiabetes.
[Tesis]. Sekolah Pascasarjana IPB, Bogor.
Husyanti,  R.L.  2016.  Efektivitas  Taurin  terhadap Penurunan  Kadar  Glukosa  Darah  Mencit Jantan  ( Mus  musculus )  yang  diinduksi Aloksan.  [Skripsi].  Universitas  Lampung, Bandar Lampung.
Kinho,  J.,  Diah,  I.D.A.,  Jafred,  H.,  Lis,  N.,
Halidah.,  Yeremias,  K.,  dan  Moody,  C.K. 2011. Tumbuhan Obat Tradisional di Sulawesi  Utara.  Jilid  ke-  2.  Badan  Penelitian dan Pengembangan Kehutanan, Manado.
Kusumawati,  D.  2004.  Bersahabat  dengan  Hewan Coba.  Gadjah  Mada  University  Press. Yogjakarta.
Lokanathan,  Y.,  Omar,  N.,  Ahmad  Puz,  N.N.,
Saim,  A.,  dan  Hj  Idrus,  R.  2016.  Recent Updates in Neuroprotective and Neuroregenerative  Potentian  of Centella asiatica . Malaysian J Med Sci . 23(1): 4-14.
Manurung,  S.  2012.  Efek  Antihiperglikemik  dari
Ekstrak Kulit Buah Manggis ( Garcia mangostana L.)  terhadap  Tikus  Putih  Jantan
Galur  Wistar  ( Rattus  norvegicus L.)  yang diinduksi  Sukrosa. PHARMACON  Jurnal Ilmmiah Farmasi-UNSRAT . 1(2): 58-67.
Mongi,  R.  2019.  Uji  Aktivitas  Penurunan  Kadar Gula Darah Ekstrak Etanol Daun Pinang Yaki ( Areca  vestiaria ) terhadap Tikus  Putih Jantan
Galur  Wistar  ( Rattus  norvegicus )  yang diinduksi  Aloksan. PHARMACON  Jurnal Ilmiah Farmasi-UNSRAT. 8(3): 34-41.
Nurhayati. 2011. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Ubi Jalar ( Ipommoea batatas L.), Kultivar  Umbi  Putih  terhadap  Bakteri Staphylococcus  aureus dan Pseudomonas aeruginosa . [Skripsi]. Fakultas
Ilmu
Kesehatan Universitas Islam Negeri Alauddin,
Makassar.
Nurlaily,  A.,  Noor,  B.A.R.,  dan  Musalmah,  M. 2012.  Comparative  Antioxidant  and  Anti- inflammatory Activity of Different Extracts of Centella  asiatica L.  Urban  and  its  Active Compounds, Asiaticoside and Madecassoside. Med&Health . 7(2): 62-72.
Oktaviani, M.A dan Hari, B.N. 2014. Perbandingan Tingkat Konsistensi Normalitas Distribusi Metode Kolmogorov-Smirnov,
Lilliefors, Shapiro-Wilk, dan Skewness- Kurtosis . Jurnal Biometrika dan
Kependudukan . 3(2): 127-135.
Razali,  N.M  dan  Wah,  Y.B.  2011.  Power Comparision  of Shapiro-Wilk , Kolmogorov- Smirnov , Lilliefors ,  and  Anderson-Darling Tests. Journal  of  Statistical  Modeling  and Analytic . 2(1): 21-33.
Rosmiati,  K  dan  Alexius,  L.  2017.  Uji  Efektivitas Antidiabetes  Ekstrak  Etanol  Daun  Ungu ( Graptophyllum  pictum )  terhadap  Mencit Putih  Jantan  ( Mus  musculus ). Jurnal  Sains dan  Teknologi Laboratorium  Medik . 2(1): 8- 13.
Sugiyanto.  1995.  Petunjuk  Farmasi.  Edisi  ke-  4.
UGM. Yogyakarta.
Suryanto,  E.  2012.  Fitokimia  Antioksidan.  Putra Media Nusantara Press, Surabaya.
Szkuldeski,  T.  2008.  The  Mechanism  of  Alloxan and  Stretozotocin  in  Action  in  B  Cells  of  the Rat Pancreas. J Physiol . 50: 536-546.
World  Health  Organization  (WHO).  2016. Global Report on Diabetes . WHO, France.
Yasurin, P., Sriariyanun, M., dan Phusantisampan, T.  2016.  Review:  The  Bioavaibility  Activity of centella asiatica . KMUTNB Int J. Appl Sci Technol . 9(1): 1-9.
Yuriska,  F.A.  2009.  Efek  Aloksan  terhadap  Kadar Glukosa  Darah  Tikus  Wistar.  [Skripsi]. Fakultas Kedokteran  Universitas  Diponegoro. Semarang.