## SURVEI Odontoglossum ringspot virus (ORSV) YANG MENGINFEKSI ANGGREK ALAM TROPIS DI INDONESIA
SURVEY ON THE OCCURRENCE OF Odontoglossum ringspot virus (ORSV) INFECTING NATURE TROPICAL ORCHIDS IN INDONESIA
Mahfut 1) * , Budi Setiadi Daryono 2) , Tri Joko 3) , & Susamto Somowiyarjo 3)
1) Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Lampung Jln. Soemantri Brojonegoro No.1, Rajabasa, Bandar Lampung 35145
2) Fakultas Biologi, Universitas Gadjah Mada Jln. Teknika Selatan, Sekip Utara, Sleman, Yogyakarta 55281
3) Fakultas Pertanian, Universitas Gadjah Mada Jln. Flora 1, Bulaksumur, Sleman, Yogyakarta 55281
*Penulis untuk korespondensi. E-mail: mahfut.mipa@fmipa.unila.ac.id

## ABSTRACT
Natural orchids are one of the important ornamental plants that were cultivated in tropical countries, including Indonesia. Virus infections has been important limiting factor in orchids cultivation because it decreases the orchids quality. Odontoglossum ringspot virus (ORSV) is one of the most reported virus infecting orchids which spread widely in the world. During 2010–2014 surveys of viral infections were conducted in Indonesia. The orchids were found infected by virus, showed symptoms of mosaic, mottle, chlorotic, necrotic, streak, wilting leaf, and ringspot on leaf surface. Detection with serological test DAS-ELISA showed only 11 from 125 samples were infected by ORSV with total incidence of 8,8%. Nine leaf samples of Phalaenopsis sp. were infected, respectively. Thus, it was concluded that Phalaenopsis is orchids genus which is the most abundantly and susceptibly infected by ORSV. The results proved that ORSV have entered and spread widely by infected orchids in orchids landscape (nursery), semi-natural forests (botanical gardens), and natural forest (national park) throughout Indonesia. This is the first report of ORSV infecting natural tropical orchids in Indonesia.
Keywords: DAS-ELISA, Indonesia, nature tropical orchids, ORSV

## INTISARI
Anggrek alam merupakan salah satu kekayaan flora asli negara tropis, termasuk Indonesia. Keberadaan di habitat aslinya sudah sangat berkurang yang disebabkan kerusakan hutan dan adanya penyakit. Infeksi virus masih menjadi faktor pembatas terpenting dalam budidaya dan pengembangan potensi anggrek alam. Odontoglossum ringspot virus (ORSV) adalah salah satu jenis virus yang dilaporkan paling banyak menginfeksi anggrek serta memiliki penyebaran yang luas di dunia. Selama 2010-2014 telah dilakukan survei lapangan terhadap infeksi virus di Indonesia. Beberapa anggrek yang ditemukan terinfeksi oleh virus menunjukkan gejala berupa mosaik, belang, klorosis, nekrosis, streak , daun layu, dan bercak cincin pada permukaan daun. Deteksi dengan uji serologis DAS-ELISA menunjukkan bahwa 11 dari 125 sampel terinfeksi oleh ORSV dengan total kejadian 8,8%. Masing-masing sembilan dari total sampel daun terinfeksi merupakan Phalaenopsis sp. Hal ini menjelaskan bahwa Phalaenopsis adalah genus anggrek yang paling cocok dan rentan terhadap infeksi ORSV. Hasil penelitian survei kejadian infeksi Odontoglossum ringspot virus (ORSV) membuktikan bahwa virus ini telah masuk dan menyebar secara luas oleh anggrek-anggrek alam tropis yang terinfeksi di pertamanan anggrek (nurseri), hutan semi-alami (kebun raya), dan hutan alam (taman nasional) di seluruh wilayah Indonesia. Ini merupakan laporan pertama mengenai infeksi ORSV terhadap anggrek-anggrek alam tropis di Indonesia.
Kata kunci: anggrek alam tropis, DAS-ELISA, Indonesia, ORSV
Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia, Vol. 20, No. 1, 2016: 1–6

## PENGANTAR
Anggrek alam merupakan salah satu kekayaan flora asli Indonesia yang dianggap memiliki peran penting sebagai induk persilangan (Rukmana, 2000). Anggrek ( Orchidaceae ) merupakan famili dengan anggota terbesar (Soetopo, 2009) mencakup kira- kira lebih dari 5.000 dari 50.000 jenis anggrek alam di dunia terdapat di Indonesia. Penyebarannya merata
hampir di seluruh pelosok negeri, meliputi hutan- hutan tropis di Sumatera Barat ke arah selatan, seluruh pulau Jawa, Kalimantan, Sulawesi, Nusa Tenggara, Maluku, dan Papua (Rukmana, 2000).
Keberadaan  anggrek  alam  tersebut  di  habitat asalnya dilaporkan sudah sangat berkurang yang disebabkan eksplorasi secara berlebihan serta kerusakan hutan (Johanis et al ., 2001). Salah satu usaha penyelamatan
Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia                                                                Vol. 20 No. 1
2
dilakukan melalui pembangunan kebun raya sebagai kawasan konservasi ex-situ (Anonim, 2011). Selain itu, infeksi penyakit masih menjadi kendala utama dalam budidaya dan pengembangan potensi anggrek alam (Kumalawati et al. , 2011). Odontoglossum ringspot virus (ORSV) atau disebut juga Tobbaco mosaic virus orchid strain (TMV-O) merupakan salah satu virus penting yang menginfeksi anggrek. ORSV termasuk ke termasuk ke dalam Genus Tobamovirus dan Familia Virgaviridae (Paul, 1975). Struktur partikel ORSV berbentuk batang kaku memanjang berukuran 300 nm ×18 nm dengan komposisi partikel asam nukleat ORSV mengandung 2−5% RNA dan sub unit protein virus merupakan residu 157 asam amino. Untuk analisis partikel virus, dapat digunakan rasio absorbansi pada 260 dan 280 nm (A260/280) (Hennig, 1972; Paul et al ., 1965 dalam Paul, 1975). ORSV relatif baru ditemukan di Indonesia walaupun telah diketahui di dunia sejak tahun 1951. Infeksi ORSV dapat menghambat pertumbuhan dan ketahanan tanaman, serta menurunkan nilai estetika dan daya jual secara berkala (Koh et al ., 2014). Gejala khas  infeksi  virus  adalah  bercak  bercincin  pada Odontoglossum grande (Jensen and Gold, 1951) dan diamond mottle pada Cymbidium (Inouye, 1966). Penyebaran virus melalui inokulasi mekanis, kontak antara tanaman sehat dan sakit, serta kontaminasi peralatan untuk perbanyakan vegetatif maupun pemanenan bunga.
Untuk memudahkan pengendalian penyakit maka sebaiknya dilakukan inventarisasi data sebagai informasi dasar mengenai infeksi tersebut. Survei kejadian penyakit merupakan tahap awal pengenalan penyakit melalui identitifikasi sebagai pemahaman jenis dan sifat suatu penyakit. Penelitian mengenai infeksi ORSV di Indonesia sampai saat ini masih sedikit sekali. Sebelumnya penelitian serupa juga berhasil dilakukan di Indonesia (Isnawati, 2009; Syahierah, 2010; Lakani et al ., 2010) tetapi hanya terbatas pada anggrek hibrida saja.
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui pola infeksi dan penyebaran ORSV yang menginfeksi anggrek-anggrek alam di Indonesia berdasarkan uji serologis DAS-ELISA. Selain itu, laporan survei kejadian penyakit ini dapat menjadi informasi dasar dalam upaya perlindungan tanaman yang mendukung penerapan konservasi anggrek di Indonesia. Penerapan upaya perlindungan tanaman melalui informasi survei kejadian penyakit ini diharapkan dapat membantu upaya pencegahan dan penyebaran penyakit anggrek yang disebabkan oleh virus sehingga keberadaan anggrek alam yang sangat berharga dapat terjaga kelestariannya.

## BAHAN DAN METODE

## Survei dan Koleksi Sampel
Sampel berupa daun anggrek yang menunjukkan gejala terinfeksi virus yang diduga ORSV dilakukan tiga kali, yaitu selama bulan Mei−Agustus 2010, April−Juni 2011, dan Mei−Juli 2014 pada 13 lokasi pembudidayaan anggrek di Indonesia: Kebun Raya Bogor (Bogor), Kebun Raya Cibodas (Jawa Barat), Kebun Raya Purwodadi (Jawa Timur), Kebun Raya Balikpapan (Kalimantan Timur), Kebun Raya Enrekang (Sulawesi Selatan), Hutan Adat Wonosadi (Yogyakarta), Hutan Sultan Adam (Kalimantan Selatan), Taman Nasional Bali Barat (Bali), Hutan Gunung Cyclop (Papua), Balai Tanaman Hias (Cianjur), Borobudur Orchids  Center (Magelang),  dan  Mekar  Lestari nurseri (Yogyakarta). Kontrol negatif ORSV dikoleksi dari lokasi Rumah Bunga Rizal (Bandung).

## Uji Serologis
Prinsip dasar teknik DAS-ELISA adalah antigen yang diapit oleh dua lapisan antibodi yang salah satunya dilabel dengan enzim (Clark and Adams, 1977). Pada penelitian ini, uji serologis DAS-ELISA dilakukan sesuai dengan protokol PathoScreen kit (Agdia Inc.).
Tahap awal dilakukan penggerusan sampel daun tanaman yang menunjukkan gejala terinfeksi dengan tambahan Agdia general extract buffer (GEB) pada perbandingan 1:10 (berat sampel dalam gram dan volume buffer dalam ml). Mikrotiter plate sebelumnya sudah diisi dengan capture antibody yang diencerkan dengan carbonat coating bauffer dan diinkubasi selama 4 jam pada suhu 4ºC. Setiap set uji (sumuran) pada plate masing-masing dimasukkan sap hasil ekstraksi sebanyak 100 µl/sumuran.Setelah diinkubasi semalaman dan dicuci dengan PBST 1× ( wash buffer ) sebanyak 7 kali, plate diisi dengan 100 µl/ sumuran enzim konjugat yang berisi detection antibodies yang telah dikonjugasikan dengan enzim fosfatase RUB6 enzyme conjugate (inkubasi 2 jam pada suhu kamar). Plate dicuci kembali sebanyak 8 kali dan diisi 100 µl/ sumuran PNP substrate (inkubasi 60 menit pada suhu kamar). Hasil ELISA selanjutnya dianalisis secara kuantitatif menggunakan ELISA- reader pada absorbansi 405 nm.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Survei dan Koleksi Sampel
Total sampel yang diperoleh adalah 125 sampel yang dikoleksi dari 13 lokasi survei. Dengan demikian, lokasi-lokasi  tersebut  diharapkan  mampu  mem- presentasikan pola infeksi dan penyebaran ORSV
pada anggrek alam antar pulau di Indonesia, mengingat setiap  lokasi  memiliki  kondisi  lingkungan  yang berbeda-beda. Data sampel yang dikoleksi disajikan pada Tabel 1.
Berdasarkan data pada Tabel 1, lokasi pengambilan sampel dibagi menjadi tiga kategori, yaitu: hutan alam (taman nasional), hutan semi alami (kebun raya), dan pertamanan anggrek ( nursery ). Pemilihan kebun raya sebagai lokasi pengambilan sampel disebabkan pada wilayah ini merupakan kawasan pelestarian alam untuk tujuan koleksi tumbuhan yang alami atau bukan alami, jenis asli dan atau bukan asli, yang dimanfaatkan bagi  kepentingan  penelitian,  ilmu  pengetahuan, pariwisata, dan rekreasi sehingga banyak sekali di- jumpai anggrek alam. Berbeda pada lokasi hutan alam, keberadaaan  anggrek alam  merupakan vegetasi asli yang dibiarkan tumbuh  secara alami tanpa campur tangan manusia.Sedangkan nurseri termasuk pertamanan anggrek yang sengaja dibuat dan dipelihara oleh manusia dimana vegetasi yang dipelihara umumnya memiliki nilai ekonomis dengan tujuan untuk diperjual- belikan.
Keseluruhan sampel yang dikoleksi terdiri dari 27 genus dengan jumlah sampel yang paling banyak ditemukan bergejala adalah genus Phalaenopsis (37 sampel). Hal ini menunjukkan bahwa anggota dari anggrek Phalaenopsis alam koleksi yang paling banyak menunjukkan gejala seperti terinfeksi ORSV. Berdasarkan Tabel 1 juga diketahui bahwa gejala infeksi virus yang  paling  umum  diamati  pada  masing-masing lokasi adalah mosaik, nekrosis, nekrotik dan klorotik, selain itu juga dijumpai gejala daun menggulung ( curling leaf ) dan kelayuan ( wilting leaf ) (Gambar 1). Infeksi ORSV memiliki gejala khas berupa bercak bercincin  ( ringspot )  seperti  awal  mula  virus  ini ditemukan (Jensen & Gold, 1951). Pada beberapa penelitian sebelumnya juga dijumpai gejala infeksi bergaris ( streak ) yang merupakan kondisi infeksi yang parah. Hal ini menunjukkan bahwa infeksi ORSV di Indonesia memerlukan penanganan yang sangat serius.

## Uji Serologis
Suatu  sampel  uji  dikatakan  positif  terinfeksi berdasarkan DAS-ELISA apabila nilai absorbansi pada panjang gelombang 405 nm mendekati nilai absorbansi kontrol positif, atau memiliki nilai 2−3 kali nilai absorbansi buffer kontrol(Daryono & Natsuaki, 2009). Pengujian ini dilakukan dua kali pada waktu yang berbeda. Hasil uji serologis DAS-ELISA (Tabel 2) mengindikasikan 11 dari 125 total sampel (KRB2, KRB12, KRP18, KRP20, KRBp5, W2, BOC4, BTH1, BTH4, T1, and P1) yang menunjukkan positif terinfeksi ORSV dengan rerata nilai absorbansi 0,623−0,674
( microtiter plate 1) dan 1,125−1,152 ( microtiter plate 2) atau total kejadiannya sebesar 8,8%.
Sampel positif tersebut masing-masing merupakan koleksi dari Kebun Raya Bogor (KRB2 dan KRB 12), Kebun Raya Purwodadi (KRP18 dan KRP20), Kebun Raya Balikpapan (KRBp5), hutan adat Wonosadi (W2),  Borobudur Orchid  Center (BOC4),  Balai Tanaman Hias (BTH1 dan BTH4), Taman Nasional Bali Barat (T1), dan Hutan Gunung Cyclop (P1). Keseluruhan sampel positif ORSV berdasarkan uji serologis DAS-ELISA ditampilkan pada Tabel 3.
Dari total 11 sampel yang positif terinfeksi ORSV, 9 diantaranya merupakan anggrek Phalaenopsis sp. Hal ini menunjukkan bahwa anggrek Phalaenopsis sp. merupakan tanaman inang yang cocok dan paling rentan  terhadap  infeksi  ORSV.  Respon  tanaman inang terhadap patogen ORSV adalah mendukung pertumbuhan  dan  perkembangan  virus  sehingga virus mampu menimbulkan kerusakan pada tanaman (Hull, 2002). Menurut Hull (2009) faktor utama yang  dapat  mempengaruhi  kerentanan  tanaman terhadap infeksi penyakit adalah komposisi genetik tanaman inang-virus dan kondisi lingkungan. Selain faktor umur tanaman serta interaksi kompatibel juga sangat berpengaruh dalam menentukan hubungan infeksi selanjutnya, pasca virus masuk ke dalam sel tanaman.
Kandungan senyawa kimia yang dimiliki Phalaenopsis sp. juga diduga sangat dimungkinkan berperan dalam proses replikasi genom dan perkembangan virus. Selain senyawa polipeptida khas yang disandi oleh gen virus yang mengandung nitrogen, seperti pada zat pengatur tumbuh dan senyawa fenol, yang berperan penting adanya gejala sistemik sebagai hasil interaksi virus- inang, keberadaan hasil metabolisme pada Phalaenopsis sp. sangat melimpah yang tentu saja sangat efektif untuk sintesis virus. Tentu saja ini berkaitan dengan tekstur daun anggrek Phalaenopsis sp. yang lebar dan lunak karena mengandung banyak air, serta perannya sebagai penyimpan cadangan makanan. Meskipun diketahui beberapa jenis Phalaenopsis dilaporkan memiliki kandungan bahan kimia sebagai obat yang berperan dalam kajian fitokimia dan farmakologi untuk menyembuhkan beberapa infeksi bakteri maupun virus (Hossain, 2011). Seperti Phalaenopsine (Bulpitt et al. , 1977) yang spesifik terdapat pada Phalaenopsis mannii Rchb. f., Phalaenopsis equestris (Schauer) Rchb. f., Phalaenopsis ambilis (L.) (Hossain, 2011). Keseluruhan sampel daun anggrek yang dikoleksi merupakan  anggrek  alam  yang  diintroduksi  dari daerah asalnya di Indonesia. Variasi gejala infeksi ORSV masing-masing sampel positif adalah mosaik, streak, klorotik, nekrosis, and wilting leaf . Gejala
Tabel 1. Lokasi, jumlah sampel, dan gejala infeksi sampel yang dikoleksi dari masing-masing lokasi
Tabel 2. Kisaran nilai rerata absorbansi berdasarkan DAS-ELISA pada panjang gelombang 405 nm
Pulau Lokasi Jumlah sampel Gejala infeksi virus Kebun Raya Bogor 35 Mosaik, klorosis, nekrosis, mottling , vein clearing , wilting leaf , dan deformasi daun Kebun Raya Cibodas 17 Mosaik, klorosis, nekrosis Kebun Raya Purwodadi 25 Mosaik, klorosis, nekrosis Jawa Balai Tanaman Hias 8 Mosaik, klorosis, nekrosis Rumah Bunga Rizal 1 - Borobudur Orchid Center 4 Mosaik, klorosis, nekrosis, streak , dan ringspot Hutan Adat Wonosadi 4 Mosaik, klorosis, nekrosis Nurseri Mekar Lestari 12 Mosaik, klorosis, wilting leaf , mottling , dan ringspot Bali Taman Nasional Bali Barat 4 Mosaik, wilting leaf , dan mottling Kalimantan Kebun Raya Balikpapan 6 Mosaik, klorosis, nekrosis, dan curling leaf Hutan Sultan Adam 4 Mosaik, klorosis, nekrosis Sulawesi Kebun Raya Enrekang 4 Mosaik, klorosis, nekrosis Papua Hutan Gunung Cyclop 1 Mosaik dan nekrosis Sampel uji Nilai rerata absorbansi (λ405 nm) Buffer Kontrol Positif Kontrol Negatif Sampel Positif Sampel Negatif Microtiter plate I* 0,257 0,53 0,244 0,623−0,674 0, 275−0,348 Microtiter plate II** 0,129 1,515 0,129 1,125−1,152 0,126−0,227 *) Dibaca dengan ELISA- reader Bio-Rad, LPPT UGM, pada Juli 2011 **) Dibaca dengan ELISA- reader BioTek, FALITMA Fakultas Biologi UGM, pada 7 Agustus 2014
Gambar 1. Gejala infeksi ORSV pada anggrek alam hasil koleksi, meliputi (A) klorotik, (B) mosaik dan nekrosis, (C) streak , (D) mosaik, (E) kelayuan ( wilting leaf ), (F) menggulung ( curling leaf ); bar = 1 cm
Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia                                                                Vol. 20 No. 1
infeksi memang tidak selalu spesifik untuk tiap jenis tanaman, bahkan beberapa sampel lain yang menunjuk- kan gejala khas ORSV tetapi ternyata tidak positif terinfeksi. Hal ini sangat dimungkinkan karena gejala infeksi yang muncul tersebut merupakan gejala yang ditimbulkan  oleh  virus  atau  patogen  lain  seperti bakteri dan jamur yang seringkali berasosiasi dan bersama-sama memunculkan gejala seperti terinfeksi ORSV. Bawden (1964) menjelaskan bahwa suatu virus dapat menimbulkan gejala yang berlainan pada tanaman yang berbeda, sementara virus yang berbeda dapat menyebabkan gejala yang hampir sama pada tanaman inang yang sama. Variasi gejala yang disebabkan oleh infeksi ORSV pada tanaman anggrek tergantung pada strain virus, kultivar, dan kondisi lingkungan (Navalinskiene et al. 2005). Koleksi anggrek alam dari beberapa lokasi memiliki domentasi lengkap perihal dari mana tanaman koleksi tersebut berasal, tetapi banyak juga yang hilang atau bahkan tanpa dokumen. Kedua sampel positif koleksi Balai Tanaman Hias (Cianjur) adalah anggrek Phalaenopsis amabilis yang merupakan anggrek alam dari Segunung Sindur  (Jawa  Barat),  sedangkan  sampel  koleksi Kebun Raya Bogor dan Kebun Raya Balikpapan masing-masing berupa anggrek Phalaenopsis amboinensis yang berasal dari Sulawesi Selatan dan Phalaenopsis modesta J.J.Sm.  dari  Muara  kanan,  Kutai  Barat. Sampel positif dari Hutan Gunung Cyclop (Papua) yaitu anggrek Phalaenopsis amabilis yang merupakan anggrek alam asli setempat. Hal ini mengindikasikan bahwa  infeksi  ORSV  di  Indonesia  sudah  sangat parah terbukti dengan adanya sampel positif hasil koleksi dari nurseri, kebun raya, dan hutan alam. Kemungkinan  infeksi  ini  disebabkan  kurangnya pemahaman masyarakat dan pihak pengelola konservasi terhadap perlindungan tanaman serta minimnya pengetahuan infeksi penyakit berupa virus.
Kisaran  inang  ORSV  sangat  luas,  beberapa penelitian menyebutkan bahwa ORSV telah mampu menginfeksi 27 genus anggrek di dunia. Di Indonesia, ORSV dilaporkan telah menginfeksi 8 genus anggrek yaitu: Grammatophyllum (Syahierah, 2010), Dendrobium (Syahierah, 2010; Lakani et al ., 2010), Phalaenopsis (Inouye & Gara, 1996; Syahierah, 2010), Bulbophylum , Calanthe , Cattleya , Oncidium , (Inouye & Gara, 1996), dan Coelogyne (Syahierah, 2010). Hal ini menjelaskan bahwa anggrek-anggrek di Indonesia sudah saatnya mendapat perhatian terhadap adanya infeksi ORSV, terlebih pada anggrek Phalaenopsis sp. Upaya perlindungan ini memerlukan kerjasama dengan berbagai pihak baik pemerintah, masyarakat, peneliti, serta para petani dan  pecinta  anggrek.  Pembangunan  kebun  raya sebagai upaya konservasi ex-situ serta perlindungan hutan alam tropis sebagai habitat anggrek dilakukan pemerintah sebagai upaya perlindungan dengan kerja sama masyarakat. Teknik rekayasa genetik dengan menghasilkan anggrek yang tahan terhadap ORSV serta pembentukan antiviral dan imun dari tanaman yang toleran diduga sebagai salah satu alternatif upaya perlindungan yang sedang diupayakan para peneliti. Upaya ini juga tidak lepas dari kontribusi para petani dan pecinta anggrek yang memiliki peran sebagai ujung tombak penyebaran dan perlindungan anggrek di Indonesia.

## KESIMPULAN
Hasil penelitian ini menjadi bukti laporan pertama mengenai  keberadaan  ORSV  yang  telah  mampu menginfeksi anggrek-anggrek alam di Indonesia. Total 11 dari 125 sampel yang positif terinfeksi ORSV atau kejadian penyakit 8,8% dengan 9 sampel di antaranya merupakan anggrek Phalaenopsis sp..
Pulau Lokasi Genus Nama spesies Gejala infeksi (Kode sampel) Jawa Kebun Raya Bogor Phalaenopsis P. amabilis (KRB2) Mosaik P. amabilis (KRB12) Mosaik Kebun Raya Purwodadi Phalaenopsis P. amabilis (KRP18) Mosaik Dendrobium D. salacence (KRP20) Streak Balai Tanaman Hias Phalaenopsis Phalaenopsis sp. (BTH1) Klorosis dan nekrosis Phalaenopsis Phalaenopsis sp. (BTH4) Mosaik Borobudur Orchid Center Phalaenopsis Phalaenopsis sp. (BOC4) Klorosis dan nekrosis Hutan Adat Wonosadi Liparis Liparis sp. (W2) Klorosis Bali Taman Nasional Bali Barat Phalaenopsis Phalaenopsis sp. (T1) Curling leaf Kalimantan Kebun Raya Balikpapan Phalaenopsis Phalaenopsis sp. (KRBp5) Klorosis Papua Hutan Gunung Cyclop Phalaenopsis Phalaenopsis sp. (P1) Mosaik
Tabel 3. Lokasi, genus, nama spesies dan gejala infeksi dari sampel positif ORSV berdasarkan uji serologis DAS-ELISA
Mahfut et al. : Survei ORSV yang Menginfeksi Anggrek Alam Tropis di Indonesia

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada Indonesia- Managing  Higher  Education  for  Relevance  and Efficiency (IM-HERE) No.: UGM/BI/1302/I/05/04 dan No.: UGM/BI/1628/I/05/04, serta Kemenristek Dikti atas bantuan hibah Penelitian Disertasi Doktor No.: 0299/E3/2016 untuk menyelesaikan penelitian ini. Terima kasih juga penulis sampaikan kepada Bapak/Ibu pimpinan Kebun Raya Bogor (Bogor), Kebun Raya Cibodas (Jawa Barat), Kebun Raya Purwodadi (Jawa Timur), Kebun Raya Balikpapan (Kalimantan Timur), Kebun Raya Enrekang (Sulawesi Selatan), Hutan Adat Wonosadi (Yogyakarta), Hutan Sultan Adam (Kalimantan Selatan), Taman Nasional Bali Barat (Bali), Hutan Gunung Cyclop (Papua), Balai Tanaman Hias (Cianjur), Borobudur Orchids Center (Magelang), dan Mekar Lestari (Yogyakarta) beserta staf dan jajarannya atas perijinan, kesempatan, dan bantuannya.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2011. Peraturan Presiden Republik Indonesia Nomor 93 Tahun 2011 Tentang Kebun Raya . Jakarta, 12 p.
Bawden, F.C. 1964. Plant Viruses and Virus Diseases: Introduction  and  Odontoglossum  ringspot  virus (ORSV), p. 222−240. In T. Kull & J. Arditti (eds.), Orchid Biology: Reviews and Perspectives, VIII : Ronald Press, New York.
Bulpitt, C.J, Y. Li, P.F. Bulpitt, & J. Wang. 2007. The Use of Orchids in Chinese Medicine. Journal of The Royal Society of Medicine 100: 558–563.
Clark, F. & A.N. Adams. 1977. Characteristics of the Microplate Method of Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Detection of Plant Viruses. Journal of General Virology 34: 475−483.
Daryono, B.S. & K.T. Natsuaki. 2009. Survei Virus yang Menyerang Labu-Labuan di Yogyakarta dan Jawa Tengah. Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia 15: 83–89.
Hossain, M.M. 2011. Review Therapeutic Orchids: Traditional Uses and Recent Advances - An Overview. Fitoterapia 82: 102–40.
Hull, R. 2002. Matthews Plant Virology . 4 th ed. Acad. Press, San Diego. 1056 p.
Hull,  R.  2009. Comparative  Plant  Virology:  In Introduction to  Plant  Viruses. Overview  of  Plant Viruses. 2 nd ed. Elsevier Acad. Press, United Kingdom. 400 p.
Inouye, N. & I.W. Gara. 1996. Detection and Identification of Viruses of Orchid in Indonesia. Bulletin of the Earthquake Research Institute 4: 109−118.
Isnawati, L. 2009. Deteksi dan Identifikasi Odontoglossum ringspot  virus  (ORSV)  pada  Tanaman  Anggrek. Institut Pertanian Bogor, Bogor. 39 p.
Jensen, D.D. & H.A. Gold. 1951. A Virus Ringspot of Odontoglossum Orchid, Symptoms, Transmission and Electron Microscopy. In Lawson & Sahfqat Ali. The Handbook on Orchid Pests and Disease. American Orchid Society 4: 62−100.
Johanis, P., G. Djunaedi, W. Harry, E.N. Rusdy, dan Irawati. 2001. Tumbuhan Langka Indonesia . Puslitbang LIPI, Bogor. 86 p.
Koh,  KW, H.C.  Lu,  & M.T.  Chan.  2014. Virus Resistance in Orchids. Plant Science 228: 26−38. Kumalawati, A.D., S. Abdullah, B.S. Setiadi, & Mahfut. 2011. Study on Genetic Diversity and Conservation of Orchids in Wonosadi Forest, Gunung Kidul Based on Molecular Analysis, p. 72−79. In Y.A. Purwestri, (ed.), International Conference on Biological Science: Advances in Biological Science , Faculty Biology UGM, Yogyakarta. September 23 rd −24 th 2011.
Lakani, I., G. Suastika, N. Mattjik, and T.A. Damayanti. 2010. Identification and Molecular Characterization of  Odontoglosum  ringspot  vVirus  (ORSV)  from Bogor, Indonesia. Hayati Journal of Biosciences 17: 101−104.
Navalinskiene, M., J. Raugalas, & M. Samuitiene. 2005. Viral Diseases of Flower Plants 16. Identification of  Viruses Affecting  Orchids  (Cymbidium  Sw.). Biologija 2: 29−34. Paul, H.L. 1975. Odontoglossum ringspot virus . http:// www.dpvweb.net/dpv/showdpv.php?dpvno=155, modified 27/06/16. 155 p.
Rukmana, R. 2000. Anggrek Bulan . Penerbit Kanisius, Yogyakarta. 96 p. Soetopo, L. 2009. Keanekaragaman dan Pelestarian Tanaman Anggrek . Penerbit Citra, Malang. 91 p. Syahierah, P. 2010. Respon Berbagai Jenis Anggrek (Orchidaceae) terhadap Infeksi Cymbidium Mosaic virus (CyMV) dan Odontoglossum Ringspot Virus ORSV) . Institut Pertanian Bogor, Bogor. 39 p.
Jurnal Perlindungan Tanaman Indonesia                                                                Vol. 20 No. 1 6