Cara Sitasi: Sugireng, S., Suwarny, S., Rahman, A. (2023). Pengaruh penundaan sampel sputum yang diperiksa langsung dan ditunda selama 12 jam terhadap hasil pemeriksaan mikroskopis pada penderita TB di Puskesmas Laonti. Teknosains: Media Informasi dan Teknologi , 17(3), 360-365. https://doi.org/10.24252/teknosains.v17i3.42767
Diajukan 16 Oktober 2023; Ditinjau 3 November 2023; Diterima 10 Desember 2023; Diterbitkan 30 Desember 2023 Copyright © 2023. The authors. This is an open access article under the CC BY-SA license

## Pengaruh penundaan sampel sputum yang diperiksa langsung dan ditunda selama 12 jam terhadap hasil pemeriksaan mikroskopis pada penderita TB di Puskesmas Laonti
Sugireng 1* , Suwarny 1 , Arif Rahman 1
1 Program Studi DIV Teknologi Laboratorium Medis Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Mandala Waluya Jl. A.H.Nasution No.G-37, Kendari, Sulawesi Tenggara, Indonesia. 93232 *E-mail: sugireng92@gmail.com
Abstrak: Tuberkulosis  merupakan  suatu  penyakit  infeksi  yang  disebabkan  oleh  bakteri Mycobakterium tuberculosis . Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh penundaan pemeriksaan sampel sputum yang diperiksa langsung dan ditunda selama 12 jam terhadap hasil pembacaan sediaan mikroskopis pada penderita tuberkulosis. Jenis penelitian ini adalah deskriptif  observasi.  Analisis  data  menggunakan  uji  beda Wilcoxon  test  dependent .  Hasil penelitian  menunjukkan  dari  ke  20  sampel  yang  langsung  diperiksa  diperolah  hasil  +1 sebanyak  3  sampel,  +2  sebanyak  9  sampel,  dan  +3  sebanyak  8  sampel,  sedangkan  pada sampel sputum yang ditunda selama 12 jam pada suhu ruang diperoleh hasil +1 sebanyak 9 sampel, +2 sebanyak 7 sampel, dan +3 sebanyak 4 sampel. Didapatkan sebanyak 9 sampel sputum yang kecenderungan hasilnya berkurang, hasil yang jumlahnya bertambah bertambah tidak ada, dan jumlah sampel sputum yang hasilnya sama antara langsung diperiksa dengan ditunda  selama  12  jam  pada  suhu  ruang  sebanyak  11  sampel.  Hal  ini  menunjukan  bahwa pemeriksaan sputum tunda 12 jam pada suhu ruang dapat mengakibatkan hasil negatif palsu atau positif palsu.
Kata Kunci: mikroskopik, negatif/ positif palsu, Mycobacterium tubercolusis , penderita TB, sputum
Abstract: Tuberculosis  is  an  infectious  disease  caused  by  the  bacterium Mycobacterium tuberculosis . This study aims to determine the effect of delaying the examination of sputum samples that are examined directly and delayed for 12 hours on the readings of microscopic preparations in tuberculosis patients. This type of research is descriptive observation. Data analysis used the Wilcoxon test dependent. The results showed that from the 20 samples that were directly examined, 3 samples obtained +1, 9 samples +2, and 8 samples +3, while the sputum sample which was delayed for 12 hours at room temperature obtained 9 +1 results. samples,  +2  as  many  as  7  samples,  and  +3  as  many  as  4  samples.  There  were  9  sputum samples  with  a  tendency  to  decrease  in  yield,  no  results  in  increasing  numbers,  and  11 samples of sputum samples with the same results being directly examined and delayed for 12 hours at room temperature. This shows that delayed sputum examination for 12 hours at room temperature  can  result  in  false  negative  or  false  positive  results.  There  is  an  effect  of  the results  between  direct  sputum  examination  and  being  delayed  for  12  hours  at  room temperature. It is recommended that TB sputum examination be carried out immediately to avoid false positive or false negative results from microscopic examination.
Keywords: microscopic, Mycobacterium tubercolusis , negative/false positive, sputum, TB sufferers

## PENDAHULUAN
uberculosis  atau  TB  paru  merupakan  penyakit  infeksi  yang  disebabkan  oleh Mycobacterium  tuberculosis yang  pada  umumnya  memengaruhi  paru-paru. Penyakit ini ditularkan dari orang ke orang melalui droplet dari tenggorokan dan paru-paru  seseorang  dengan  penyakit  pernapasan  aktif  (Amalaguswan  et  al.,  2017). Prevalensi nasional TB (berdasarkan diagnosis tenaga kesehatan dan keluhan responden) T
adalah 0,99%. Sebanyak 17 provinsi mempunyai prevalensi TB paru di atas prevalensi nasional, di mana salah satunya yaitu Provinsi Sulawesi Tenggara. Walaupun diagnosis pasti  Tuberkulosis  berdasarkan  pemeriksaan  sputum  Basil  Tahan  Asam  (BTA)  positif, diagnosis klinis sangat menunjang untuk diagnosis dini terutama pada penderita TB paru anak.  Dimana  dilaporkan  setiap  tahunnya  diperkirakan  ditemukan  sebanyak  539.000 kasus baru dengan kematian sekitar 101.000 (Amalaguswan et al., 2017).
Pemeriksaan  dahak  secara  mikroskopis  langsung  yang  bermutu  merupakan komponen  penting  dalam  penegakan  diagnosis  maupun follow  up .  Hasil  pemeriksaan dahak yang bermutu merupakan hal yang penting untuk menetapkan klasifikasi penderita, keputusan untuk memulai pengobatan dan menyatakan kesembuhan penderita. Mutu hasil pemeriksaan  laboratorium  merupakan  inti  keberhasilan  penanggulangan  tuberculosis. Setiap  laboratorium  yang  melakukan  pemeriksaan  TB  harus  melakukan  pemeriksaan BTA  secara  mikroskopis  (Kemenkes  RI,  2017).  Untuk  pemeriksaan  BTA  harus menggunakan sampel sputum yang baik  sesuai  dengan standar sehingga  menghasilkan hasil diagnosis  yang baik  agar tidak terjadi positif palsu  maupun negatif palsu  dan hal yang tidak diinginkan lainnya. Biasanya sampel yang baik untuk di jadikan pemeriksaan adalah  sampel  sputum  pagi  yang  dikeluarkan  pasien  saat  pagi  hari  saat  bangun  tidur karena dahak pada pagi hari adalah dahak yang masih memiliki banyak kuman. Sampel tersebut  dihasilkan  sebelum  makan  atau  minum  dan  sebelum  menggosok  gigi,  tetapi sudah berkumur dengan air untuk bisa membersihkan sisa makanan dalam mulut yang tertinggal. Sputum yang memenuhi syarat harus dari trakea dan bronki bukan berupa air ludah (Fujiki, 2015).
Kualitas  sputum  untuk  pemeriksaan  laboratorium  adalah  penting.  Sputum  yang baik mengandung beberapa partikel atau sedikit kental dan berlendir, kadang bernanah dan berwarna hijau kekuningan. Guna menjamin  spesimen bermutu baik,  harus segera dikirim  ke  laboratorium  setelah  pengambilan  dan  dilakukan  pemeriksaan.  Jika  sputum disimpan  pada  suhu  kamar  selama  satu  hari  (24  jam)  dapat  mengakibatkan  sputum menjadi  encer  dan  kualitas  sediaan  menjadi  tidak  baik,  dan  baunya  lebih  tajam.  Ada perbedaan hasil dan kualitas  sediaan antara sputum  langsung diperiksa dengan sputum ditunda pemeriksaannya setelah 24 jam pada suhu kamar (Budiharjo, 2016).
Kualitas  sampel  sangat  memengaruhi  jumlah  basil  tahan  asam.  Dalam  hal  ini, jumlah BTA pada sampel yang dilakukan penundaan pemeriksaan, karena di  lapangan kerja  terjadi  penundaan  sampel  disebabkan  banyaknya  sampel  yang  ditangani  oleh petugas  laboratorium,  sehingga  sering  kali  dilakukan  penundaan  pemeriksaan  (Rafika, 2020).  Selain  itu,  penundaan  pemeriksaan  dapat  disebabkan  karena  letak  geografis pengambilan sampel yang jauh dari akses pelayanan kesehatan.
Salah  satu  daerah  di  Sulawesi  Tenggara  yang  aksesnya  jauh  dari  pelayanan Puskesmas  yaitu  di  Kecamatan  Laonti.  Data  hasil  rekam  medik  Puskesmas  Laonti berdasarkan 3 bulan terakhir tahun 2020 diperoleh data terhadap pasien yang menderita Tuberculosis  sebanyak  20  orang.  Berdasarkan  survei,  sebagian  masyarakat  di  daerah tersebut harus menggunakan transportasi laut untuk dapat ke Puskesmas Laonti. Kondisi tersebut  menyebabkan  proses  pemeriksaan  sampel  TB  yang  diambil  dari  suspek  TB disimpan  terlebih  dahulu  pada  suhu  ruang  kemudian  diperiksa  (Yunus,  2018). Berdasarkan hal tersebut, maka dilakukan penelitian pengaruh penundaan sampel sputum yang diperiksa langsung dan ditunda selama 12 Jam terhadap hasil pemeriksaan sediaan mikroskopis pada penderita TB di Puskesmas Laonti.

## METODE PENELITIAN
Penelitian dilaksanakan pada bulan Agustus tahun 2021. Jenis penelitian ini adalah penelitian deskriptif analitik. Tahapan kerja pada penelitian ini yaitu:
1. Persiapan tindakan
Menyiapkan  pot  sputum  yang  ideal  yang  diberi  label  identitas  pasien  yang  jelas pada dinding pot sputum, yaitu nama, jenis kelamin, umur.
2. Persiapan pasien
Memberikan  informasi  kepada  pasien  tentang  tindakan  yang  akan  dilakukan  dan minta persetujuan atas tindakan yang akan dilakukan, dan jelaskan kepada pasien bahwa sputum akan diambil sebanyak 3 kali (SPS), sesuai dengan jumlah tabung yang disiapkan, kemudian informasikan kepada pasien untuk tidak makan, minum atau merokok sebelum sputum  besok  pagi  (P)  dibatukkan,  setelah  itu  menjelaskan  kepada  pasien  tentang kemungkinan hasil yang akan diperoleh.
3. Pengumpulan sputum
Menginstruksikan  kepada  pasien  untuk  berkumur  dengan  air  (jangan  ditelan) sebelum  sputum  dikumpulkan,  untuk  meminimalisir  kontaminasi  spesimen  oleh  sisa makanan atau kotoran lain di dalam mulut, setelah itu tanyakan kepada pasien bila pasien memakai  gigi  palsu,  minta  pada  pasien  untuk  melepaskannya,  kemudian  beritaukan kepada pasien agar menarik napas panjang dan dalam sebanyak 2-3 kali dan setiap kali hembuskan napas dengan kuat, kemudian buka penutup pot sputum lalu dekatkan pada mulut, setelah itu batuk secara dalam untuk mengeluarkan sputum (bukan air liur) dari dalam  dada  ke  dalam  pot  sputum  dan  ulangi  sampai  mendapatkan  sputum  yang berkualitas baik dan volume yang cukup (3-5 ml/ 1 sendok teh), kemudian segera tutup rapat tabung dengan cara memutar tutupnya, lalu masukkan ke dalam pembungkus atau kantong plastik.
4. Pengambilan sputum
Mengambil dan memilih bagian dari dahak yang purulent setelah itu meletakkan sputum yang terdapat pada ose ke kaca sediaan. Sediaan dibuat tersebar merata, ukuran 2 x  3  cm,  dan  tidak  terlalu  tipis  untuk  menghindari  apusan  menjadi  kering  sebelum diratakan, kemudian ratakan sediaan dengan membuat spiral-spiral kecil sewaktu apusan setengah kering dengan menggunakan lidi lancip sehingga didapat sebaran leukosit lebih rata  dan  area  baca  lebih  homogen.  selanjutnya,  mengeringkan  apusan  di  udara  bebas, setelah dikeringkan dilakukan fiksasi apusan dengan pemanasan.
5. Pewarnaan sediaan dan pengamatan dengan mikroskop Meletakkan  sediaan  dengan  bagian  apusan  menghadap  ke  atas  pada  rak  yang ditempatkan  di  atas  bak cuci  atau  baskom,  antara  satu  sediaan  dengan  sediaan  lainnya masing-masing berjarak kurang lebih 1 jari, setelah itu menggenangi seluruh permukaan sediaan  dengan carbol  fuchsin 0,3%,  selanjutnya  dipanasi  dari  bawah  dengan menggunakan  sulut  api  setiap  sediaan  sampai  keluar  uap  (sekitar  5  menit),  didiamkan kemudian dipanasi lagi sebanyak 3 kali. Kemudian, didiamkan sediaan selama 5 menit, kemudian dibilas dan dimiringkan sediaan menggunakan penjepit kayu atau pinset untuk membuang  air,  kemudian  genangi  dengan  asam  alkohol  sampai  tidak  tampak  warna merah carbol  fuchsin ,  kemudian  dibilas  dan  digenangi  permukaan  sediaan  dengan methylene  blue 0,1%  selama  1  menit,  kemudian  dibilas  dan  dikeringkan.  Selanjutnya, diamati menggunakan mikroskop dengan perbesaran 100x.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## A. Pengamatan Makroskopis (Karakteristik Sputum) dan Mikroskopis
Berdasarkan hasil pengamatan secara makroskopis dan mikroskopis pada sampel sputum yang diperiksa langsung dan ditunda selama 12 jam dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil pengamatan makroskopis dan mikroskopis pada sampel sputum yang diperiksa sebelum dan sesudah penundaan
No Aspek Pengamatan Jenis sputum Langsung Tunda 12 jam 1 Pengamatan makroskopis Sputum prulen Sputum encer Dapat dipisahkan antara sputum dengan saliva Tidak  dapat  dipisahkan  antara sputum dan saliva Warna sputum keruh dan saliva bening Warna sputum keruh bercampur dengan dengan saliva Mudah dibuat sediaan Sulit dibuat sediaan 2 Pengamatan mikroskopis Latar belakang lebih kontras dan sebaran dahak merata Latar  belakang  kurang  kontras dan sebaran dahak tidak merata Kesalahan  perhitungan  BTA positif lebih rendah Kesalahan  hitung  BTA  positif lebih tinggi karena latar belakang kurang kontras
Berdasarkan Tabel 5 menunjukan bahwa hasil dari penelitian secara makroskopis dan miroskopis didapatkan sampel sputum pemeriksaan BTA yang lansung dan ditunda 12  jam  terdapat  beberapa  perbedaan  fisik  yaitu  kekentalan, sputum awalnya  kental (mukoid), setelah disimpan di suhu ruang menjadi encer. Hal ini disebabkan karena suhu ruang  yang  cenderung  hangat  dalam  waktu  lama  dapat  membuat  konsistensi sputum menurun. Konsistensi sebuah kloid dapat menurun akibat suhu yang hangat atau panas. Menurut  Imaningsih  (2013)  penyebab  encernya sputum dapat  disebabkan  karena  suhu hangat  dapat  menyebabkan  pecahnya  granula-granula  pada  senyawa sputum sehingga cairan akan keluar dari granula dengan demikian sputum tampak lebih encer. Kondisi sputum encer  sebagai  tanda  kualitasnya  menurun. Sputum encer  akan menyulitkan pada saat pembuatan sediaan BTA, karena hasil sediaan yang dibuat menjadi tipis dan tidak rata, sehingga susah untuk di lihat dan dibaca pada mikroskop. Menurut Kemenkes RI (2012), kondisi sediaan yang baik adalah dari sputum yang tebal berukuran panjang sekitar 3 cm dan lebar 2 cm berbentuk oval dan rata.

## B. Hasil Pembacaan BTA secara Mikroskopis
Berdasarkan  hasil  pembacaan  sediaan  BTA  secara  mikroskopis  pada  sampel sputum yang diperiksa langsung dan ditunda selama 12 jam dapat dilihat pada Tabel 2. Berdasarkan  hasil  penelitian  pada  dapat  dihasilkan  bahwa  dari  20  sampel sputum langsung  dan  ditunda  selama  12  jam  pada  suhu  ruang  setelah  dilakukan  pemeriksaan mikroskopis, didapatkan 9 sampel dengan hasil yang berbeda. Pada sampel sputum yang langsung  diperiksa  diperoleh  hasil  positif  1  sebanyak  3  sampel,  positif  2  sebanyak  9 sampel, dan positif 3 sebanyak 8 sampel, sedangkan pada sampel sputum yang ditunda selama  12  jam  pada  suhu  ruang  diperoleh  hasil  positif  1  sebanyak  9  sampel,  positif  2 sebanyak 7 sampel, dan positif 3 sebanyak 4 sampel. Dari 20 sampel sputum langsung diperiksa dengan ditunda selama 12 jam pada suhu ruang, didapatkan sebanyak 9 sampel sputum yang  kecenderungan  hasilnya  berkurang  (negatif),  hasil  yang  jumlahnya bertambah bertambah (positif) tidak ada 0 dan jumlah sampel sputum yang hasilnya sama antara langsung di periksa dengan ditunda selama 12 jam pada suhu ruang sebanyak 11 sampel.

## Tabel 2. Hasil pembacaan mikroskopis sediaan BTA
Kode Sampel Varian waktu penundaan/ jam Sputum langsung Sputum tunda 12 jam 1 Positif 1 Positif 1 2 Positif 2 Positif 1 3 Positif 3 Positif 2 4 Positif 2 Positif 1 5 Positif 3 Positif 3 6 Positif 2 Positif 1 7 Positif 2 Positif 2 8 Positif 2 Positif 1 9 Positif 2 Positif 2 10 Positif 1 Positif 1 11 Positif 3 Positif 3 12 Positif 3 Positif 3 13 Positif 2 Positif 1 14 Positif 3 Positif 2 15 Positif 2 Positif 2 16 Positif 1 Positif 1 17 Positif 3 Positif 2 18 Positif 2 Positif 2 19 Positif 3 Positif 3 20 Positif 3 Positif 1
Berdasarkan hasil pemeriksaan dan analisis dihasilkan bahwa pemeriksaan sputum yang ditunda selama 12 jam pada suhu ruang dapat mengakibatkan jumlah bakteri tahan asam  (BTA) menurun yang dapat  menyebabkan  hasil  negatif semu.  Penurunan jumlah BTA  ini  dapat  dipengaruhi  oleh  beberapa  faktor  yaitu  nutrisi,  proses  enzimatis  pada sputum dan  perubahan  konsistensi sputum .  Sama  seperti  bakteri  lainnya,  bakteri  tahan asam juga membutuhkan nutrisi untuk dapat bertahan hidup. Pada sputum , BTA hanya dapat  menggunakan  nutrisi  yang  ada  di  dalamnya.  Nutrisi  dalam sputum ini  terbatas jumlahnya, sehingga ketika nutrisi dalam sputum akhirnya habis akibat digunakan secara terus menerus, BTA akan kehilangan sumber energinya dan mati. Hal ini sesuai dengan teori kurva pertumbuhan yang menyatakan bahwa sebagian besar populasi bakteri akan mulai mengalami kematian karena nutrisi di dalam medium sudah habis, adanya zat racun dan  habisnya  energi  cadangan  di  dalam  sel  (Wuryanti,  2012).  Penurunan  jumlah  BTA adalah  proses  enzimatis  yang  terjadi  dalam sputum .  Sel  leukosit  dalam  sputum mengandung enzim- neutrophilelastase dan alpha-naphtyl acetate esterase yang masih dapat bekerja sampai 72 jam meski aktivitasnya akan terus menurun. Neutrofil elastase disekresikan oleh neutrofil selama peradangan, dan menghancurkan bakteri dan jaringan inang (Jugniot et al., 2019). Proses enzimatis ini menyebabkan rusaknya struktur dinding BTA sehingga menghilangkan sifat tahan asam yang dimiliki BTA. Bakteri tahan asam yang  seharusnya  menyerap  warna  merah  dari carbol  fuchsin tidak  dapat  lagi mempertahankan  warnanya  saat  ditambahkan  dengan  alkohol  asam  dan  ikut  terwarnai oleh  metilen  blue  sehingga  berwarna  biru.  Akibatnya  sel  tidak  terbaca  sebagai  BTA sehingga berpengaruh pada penurunan jumlah BTA.
Perubahan  jumlah  BTA  juga  dipengaruhi  karena  suhu  penyimpanan  pada  suhu ruang.  Menurut  Zhao  et  al.  (2013)  spesimen sputum yang  disimpan  pada  suhu  ruang (25 0 C)  selama  24  jam  dapat  mengakibatkan sputum mengalami  perubahan  fisik  yang awalnya kental ( purulent atau mukopureulen ) menjadi encer. Sediaan yang berasal dari sampel sputum yang ditunda selama 12 jam pada suhu ruang membutuhkan waktu yang lebih  lama  dalam  pembuatan  sediaan,  karena  kualitas  sampel sputum sudah  encer  dan
menghasilkan sediaan yang tipis yang artinya kualitas contoh uji dan ketebalan tidak baik (Budiharjo & Purjanto, 2016).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  dilakukan,  kesimpulan  yang  diperoleh  yaitu terdapat  pengaruh  hasil  terhadap  penundaan  pemeriksaan  sampel sputum langsung periksa  dan  ditunda  selama  12  jam  pada  suhu  ruang  terhadap  hasil  pengamatan makroskopis dan mikroskopis.

## DAFTAR PUSTAKA
Amalaguswan, A., Junaid, J., & Fachlevy, A. F. (2017). Analisis faktor risiko kejadian penyakit Tb paru di Wilayah  Kerja  Puskesmas  Puuwatu  Kota  Kendari. Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa  Kesehatan,
Masyarakat , 2(7), 250-731.
Budiharjo, T., & Purjanto, K. A. (2016). Pengaruh penanganan sputum terhadap kualitas sputum penderita TBC secara mikroskopis Bakteri Tahan Asam. Jurnal Riset Kesehatan , 5(1), 40-44. Fujiki,  A.  (2015). Mikroskopis  Tuberculosis  (TB)  Untuk  Program  Tuberculosis  Nasional .  Jakarta WHO Indonesia
Jugniot,  N.,  Voisin,  P.,  Bentaher,  A.,  &  Mellet,  P.  (2019). Neutrophil  estalase  activity  imaging:  Recent approaches  in  design  and  application  of  activity  based  probes. Contrast  Media  &  Molekuler Imaging, 1-12. Kementerian Kesehatan RI. (2017). Kebijakan Penanggulangan TB . Jakarta: Kemenkes RI. Kementrian  Kesehatan  RI.  (2012).  Modul  Pelatihan  Pemeriksaan  Dahak  Mikroskipik  TB.  Jakarta: Direktorat Jendral Bina Upaya kesehatan.
Kementrian Kesehatan RI. (2012). TBC Masalah Kesehatan Dunia. Jakarta: Kemenkes RI. Muin, W. O. N., Kalma, A., & Rafika, R. (2020). Pengaruh lama penyimpanan dahak pagi pada suhu kamar terhadap jumlah tahan asam (BTA). Jurnal Media Analis Kesehatan , 2(11): 106. Wuryanti,  W.  (2012).  Pengaruh  penambahan  biotin  pada  media  pertumbuhan  terhadap  produksi  sel Aspergillus niger . Bioma: Berkala Ilmiah Biologi , 10(2), 46-50.
Yunus,  M.  Y.  (2018).  Faktor  risiko  yang  berhubungan  dengan  kejadian  Tb  paru  di  wilayah  pesisir Kecamatan Tallo Kota Makassar (wilayah kerja Puskesmas Rappokalling).  Makassar: Universitas Hasanuddin.
Zhao, J., Evans, C. R., Carmody, L. A., & Li Puma, J. J. (2015). Impact of storage conditions on metabolite profiles of sputum samples from persons with cystic fibrosis. Journal of Cystic Fibrosis , 14(4): 468– 473.