PENGARUH PEMBERIAN Lactobacillus sp. DENGAN DOSIS YANG BERBEDA TERHADAP SISTEM IMUN UDANG VANAME ( Litopenaeus vannamei ) YANG

## DIINFEKSI BAKTERI Vibrio parahaemolyticus
EFFECT OF Lactobacillus sp. WITH DIFFERENT DOSAGE FOR THE IMMUNE SYSTEM OF VANNAMEI (Litopenaeusvannamei) INFECTED BY Vibrio parahaemolyticus
Miftahul Jannah 1* , Muhammad Junaidi1, Dewi Nur’aeni Setyowati 1 , Fariq Azhar 1
1 Program Studi Budidaya Perairan, Universitas Mataram. Jl. Pendidikan No. 37 Mataram, NTB, Telp.0370 633007/Fax. 636041
* Corresponding author e-mail: miftahuljannahkunram13@gmail.com
Submitted: 26 Mei 2018 / Revised: 26 Desember 2018 / Accepted: 26 Desember 2018
http://doi.org/10.21107/jk.v11i2.3980

## ABSTRACT
Vannamei  is  an  introduced  shrimp  that  has  economic  value  in  both  local  and  international  market. One of the diseases that often attack vannamei shrimp is Vibrio parahaemolyticus. This study aims to determine the probiotic bacteria Lactobacillus sp. against vannamei shrimp immune response infected with  V.  parahaemolyticus,  Survival  rate,  and  bacterial  V.  parahaemolyticus  density  of  the  shrimp intestine.  Shrimp  used  are  shrimp  that  is  62  days  which  is  kept  in  aquarium  size  30x30x25  cm  as many  as  10  shrimp.  The  study  was  conducted  with  5  controls:  Control  (-)  (without  Lactobacillus  sp. and not infected), Control (+) (without Lactobacillus sp. and infected), P1 (Lactobacillus sp. 10 6 CFU / ml), P2 (Lactobacillus sp. 10 8 CFU / ml), P3 (Lactobacillus sp. 10 10 CFU / ml). The results showed that the  administration  of  Lactobacillus  sp.  with  a  dose  of  10 8 CFU  /  ml  was  able  to  increase  THC vannamei  shrimp  by  5.58  x  10 6 cells  /  ml,  hyaline  cells  and  granular  cells  required  in  the  shrimp immune  system,  increasing  shrimp  SR  value  by  86.67%  and  core  growth  of  V.  parahaemolyticus. Based on the results of this study is the use of probiotic Lactobacillus sp. which  is recommended in the  cultivation  of  vaname  shrimp  to  improve  the  immune  system,  the  level  of  shrimp  survival  and suppress the growth of bacteria V. parahaemolyticus is 10 8 CFU / ml.
Keywords: Lactobacillus sp., V. parahaemolyticus, vannamei, dose of Lactobacillus sp.

## ABSTRAK
Udang  vaname  merupakan  udang  hasil  introduksi  yang  memiliki  nilai  ekonomis  tinggi  baik  di  pasar lokal  maupun  di  pasar  internasional.  Salah  satu  penyakit  yang  sering  menyerang  udang  vaname adalah  Vibrio  parahaemolyticus.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menguji  pengaruh  pemberian  bakteri probiotik  Lactobacillus  sp.  terhadaprespon  imun  udang  vaname  yang  diinfeksikan  dengan  V. parahaemolyticus,  Survival  rate,  dan  kepadatan  bakteri  V.  parahaemolyticus  pada  usus  udang. Udang  yang  digunakan  adalah  udang  yang  berumur  62  hari  yang  dipelihara  dalam  akuarium berukuran 30x30x25 cm sebanyak 10 ekor. Penelitian dilakukan dengan 5 perlakuan yaitu  Kontrol( – )(tanpa Lactobacillus sp. dan tidak diinfeksi),  Kontrol(+) (tanpa Lactobacillus sp. kemudian diinfeksi), P1  (Lactobacillus  sp.  10 6 CFU/ml),  P2  (Lactobacillus  sp.  10 8 CFU/ml),  P3  (Lactobacillus  sp.  10 10 CFU/ml). Hasil penelitian menunjukkan bahwa pemberian  Lactobacillus sp.dengan dosis 10 8 CFU/ml mampu meningkatkan THC udang vaname sebesar 5,58 x 10 6 sel/ml, sel hialin dan sel granular yang berperan  penting  dalam  sistem  imun  udang,  meningkatkan  nilai  SR  udang  sebesar  86,67%  dan menekan  pertumbuhan  bakteri  patogen  V.  parahaemolyticus.  Berdasarkan  hasil  penelitian  ini, penggunaan  dosis  probiotik  Lactobacillus  sp.  yang  dianjurkan  pada  budidaya  udang  vaname  untuk meningkatkan sistem imun, tingkat kelangsungan hidup udang dan menekan pertumbuhan bakteri V. parahaemolyticus adalah 10 8 CFU/ml.
Kata kunci: Lactobacillus sp., V. parahaemolyticus, udang vaname, dosis Lactobacillus sp.

## PENDAHULUAN
Udang  vaname  merupakan  udang  hasil introduksi  yang  memiliki  nilai  ekonomis  tinggi baik  di  pasar  lokal  maupun  di  pasar internasional.Budidaya udang merupakan salah  satu  industri  perikanan  yang  cukup besar. Nilai ekspor udang ke berbagai negara pada tahun 2015 bahkan mencapai 145.007,9 ton  (BPS,  2017).  Selain  itu,  udang  vaname juga  memiliki  beberapa  keunggulan  yaitu pertumbuhan cepat, memiliki toleransi terhadap  kisaran  salinitas  yang  lebar  (0,5-45 ppt), relatif membutuhkan protein yang rendah yaitu sekitar 20-35%, nilai FCR rendah (Briggs et al., 2004), dan dapat dipelihara pada padat penebaran yang tinggi (Araneda et al., 2008).
Salah  satu  penyakit  yang  menginfeksi  udang vaname
adalah bakteri Vibrio parahaemolyticus (Widowati, 2008). V. parahaemolyticus dapat menyebabkan lisisnya sel-sel  darah  pada  tubuh  inang  (Hatmanti, 2003),  tubuh  udang  berubah  menjadi  merah dan  dapat  menyebabkan  kematian.  (Alapide- Tendencia  dan  Dureza,  1997).  Penyakit  yang disebabkan  oleh  baktei  vibrio  disebut  sebagai vibriosis. Vibriosis dapat menyebabkankematian  udang  hingga  100% dalam  waktu  1-2  hari  (Feliatra et  al., 2012). Berdasarkan  data  dari  Ditjen  P2HP-KKP (2010) dalam Sunorita  dan  Tjarsono  (2014) sebanyak 26-ton udang mengalami penolakan ekspor  oleh  Uni  Eropa  karena  terkena penyakit V.  parahaemolyticus pada  tahun 2005  dan  2007.    Kasus  terakhir  disampaikan oleh  Dinas  Kelautan  dan  Perikanan  pada tahun  2009  dan  2010  bahwa  ikan  Indonesia mengalami  penolakan  ekspor  oleh  China karena terinfeksi V. parahaemolyticus.
Salah  satu  alternatif  pencegahan  terhadap penyakit  vibriosis  adalah  pemberian  bakteri probiotik. Bakteri probiotik merupakan mikroba hidup  yang  dapat  meningkatkan  pemanfaatan nutrisi  pakan,  meningkatkan  sistem  imun, memperbaiki  kualitas  lingkungan  hidup  inang (Verschuere et  al., 2000),  meningkatkan kelangsungan  hidup  udang,  dan  menekan populasi  bakteri Vibrio spp.  (Widanarni et  al. ,
2008).  Berdasarkan  hasil  penelitian  Fernando (2016),  bakteri  yang  dapat  dijadikan  sebagai bakteri probiotik adalah dari kelompok Lactobacillus .  Bakteri  inimerupakan  bakteri penghasil  asam  laktat  yang  memproduksi antimikrobia  berupa  bakteriosin  yang  dapat menghambat pertumbuhan patogen dan memiliki fungsi dalam kecernaan nutrisi (Basir, 2014), namun penggunaannya dalam kegiatan  budidaya  belum  banyak  dilaporkan. Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan  penelitian
mengenai  pemberian  bakteri  probiotik  pada udang  vaname  terhadap  sistem  imun  udang vaname  yang  diinfeksi  dengan  bakteri V. parahaemolyticus.

## MATERI DAN METODE Waktu dan Lokas Pengamatan
Penelitian ini dilaksanakan pada bulan September-Oktober  2017  yang  bertempat  di Laboratorium Program Studi Budidaya Perairan Universitas Mataram.

## Persiapan Penelitian
Udang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah benih udang vaname yang berumur sekitar 62 hari  yang  dipelihara  pada  akuarium  dengan ukuran  30  cm  x  30  cm  x  25  cm  sebanyak  15 buah  dengan  kepadatan  10  ekor  untuk  setiap unit  percobaan.  Pakan  yang  digunakan  pada penelitian  ini  berupa  pelet  komersil  X  dengan kandungan  protein  40%.  Pakan  ditambahkan dengan  bakteri Lactobacillus sp.  sesuai dengan dosis yang diujikan, yaitu Kontrol ( –) = pemberian pakan tanpa penambahan probiotik dan  tidak  diinfeksi,  Kontrol  (+)  =  pemberian pakan  tanpa  penambahan  probiotik  kemudian diinfeksi,  P1  =  pemberian  pakan  dengan penambahan  probotik  10 6 CFU/ml,  P2  = pemberian pakan dengan penambahan probotik  10 8 CFU/ml,  P3  =  pemberian  pakan dengan penambahan probotik 10 10 CFU/ml.
Larutan probiotik yang diberikan sebanyak 1% dari  total  pakan  (pelet  kering)  (Widanarni et al., 2008).Udang  dipelihara  selama  15  hari dan  diberikan  pakan  tanpa  penambahan probiotik  kemudian  udang  dipelihara  kembali selama 15 hari dan diberikan pakan  uji sesuai dengan  dosis  perlakuan  penelitian.  Pakan diberikan  sebanyak  5  kali  sehari  yaitu  pada pukul  07.00,  11.00,  15.00,  19.00  dan  23.00 sebanyak  5%  dari  biomassa  udang.  Uji tantang dilakukan selama 7 hari menggunakan bakteri V.  parahaemolitycus yang  diinjeksi pada  bagian  punggung  udang  sebanyak  10 4 CFU/ml per ekor udang.

## Pengamatan Total Hemocyte Count (THC)
Total  hemosit  diamati  dengan  mengambil hemolim  udang  sebanyak  0.1  ml  dari  pangkal kaki  jalan  ke  lima  dengan  menggunakan syringe yang sudah berisi 0.2 ml antikoagulan. Antikoagulan  yang  digunakan  adalah  hasil campuran  dari  0,44-gram  trisodium  citrat, 0,99-gram  sodium  chlorid,  0,19  gram  EDTA, dan  50  ml  akuades.  Campuran  hemolim  dan antikoagulan tersebut dihomogenkan selama 5 menit.  Tetesan  pertama  dibuang  dan  tetesan
kedua  diteteskan  ke  haemocytometer.  Total hemosit
dihitung
menggunakan haemocytometer  dengan  bantuan  mikroskop dengan  pembesaran  40x.  Adapun  rumus perhitungannya  berdasarkan  Ekawati et  al., 2012
Total Hemosit (sel/ml)= Jumlah sel yang dihitung Jumlah bidang pandang x 10 4 x FP
Keterangan : FP = faktor pengenceran

## Pengamatan Differential Hemosit Count
(DHC)
Srynge diisi  0,2  ml  antikoagulan  dan  diambil hemolim udang dari kaki jalan kelima udang uji menggunakan srynge yang  sama.  Campuran hemolim  dan  antikoagulan  dihomogenkan selama  5  menit  kemudian  diteteskan  pada gelas  objek.  Dibuat  ulasan  hemolim  pada gelas preparat dan dikering anginkan kemudian  difiksasi  dengan  methanol  100% selama 15 menit. Hemolim yang telah difiksasi dikering  anginkan  kembali  dan  diwarnai dengan  cara  direndam  pada  larutan  giemsa 10%  selama  15  menit.  Ulasan  hemolim  yang telah  diwarnai  dicuci  pada  akuades  mengalir selama  30  detik  dan  dibiarkan  mengering kembali. Preparat  diamati menggunakan mikroskop  perbesaran  40  kali  dan  dibedakan menurut jenisnya yaitu sel hialindan granular.Presentase  tiap  sel  hemosit  dihitung dengan  rumus(Amlacher,  1970;  Indraswati et al., 2014):
Presentase  jenis  sel  hemosit  = Jumlah tiap sel hemosit Total hemosit x100%

## Perhitungan Jumlah Bakteri
Perhitungan  jumlah  bakteri  yang  dilakukan adalah perhitungan jumlah bakteri V. parahaemolyticus dan  total  bakteri  yang berada  di  dalam  usus  udang.  Sampel  usus udang  yang  telah  diambil  dari  masing-masing perlakuan  dimasukkan  ke  dalam  tabung sampel  yang  sebelumnya  telah  dimasukkan sodium chloride 0.9%.  Tabung sampel kemudian  ditutup  rapat  dan  dimasukkan  ke dalam cool box . Perhitungan jumlah bakteri V. parahaemolyticus dan  total  bakteri  usus sesuai  dengan  metode  yang  dilakukan  oleh Yunita et al., (2015).
Survival rate (SR)
SR atau tingkat kelangsungan hidup merupakan  presentasi  jumlah  udang  yang
masih  hidup  setelah  dilakukannya  uji  tantang. Tingkat  kelangsungan  hidup  udang  dapat dihitung  dengan  menggunakan  rumus  dari penelitian Asma et al., (2016) berikut ini:
SR = No−Nt No x 100%
Keterangan : SR = Tingkat kelangsungan hidup udang (%) Nt  =  Jumlah  udang  yang  mati  setelah  uji tantang (ekor) No = Jumlah udang di awal penelitian (ekor)

## Gejala klinis
Pengamatan  mengenai  gejala  klinis  dilakukan pada  saat  udang  diuji  tantang.  Gejala  klinis diamati  selama  7  hari  setelah  uji  tantang selesai dilakukan.

## Analisis Statistik
Data  yang  diperoleh  diuji  secara  statistik. Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak lengkap (RAL) dan diuji dengan menggunakan SPSS  kemudian  diuji  lanjut  dengan  uji DUNCAN.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Total Hemocyte Count (THC)
Hasil  analisis  statistik  uji One-Way  Annova menunjukkan  bahwa  pemberian  probiotik memberikan pengaruh yang signifikan (P<0,05)  terhadap  nilai  THC  udang  vaname. Udang  vaname  yang  telah  diberikan  bakteri probiotik Lactobacillus memiliki  nilai  THC berkisar  antara  0,60-5,58  x  10 6 sel/ml (Gambar 1).
Total  hemosit  pada  tubuh  krustasea  sangat penting keberadaannya dalam menjaga resistensi  terhadap  patogen.  Apabila  total hemosit  tinggi,  maka  dapat  meningkatkan kemampuan  darah  untuk  memfagositosis. Total hemosit yang tinggi juga dapat meningkatkan sel granular yang dapat merangsang aktivasi Prophenoloxidase (ProPO) untuk menghasilkan aktivitas phenoloxidase (PO), sehingga mampu bertahan terhadap serangan patogen. Sedangkan  sebaliknya,  apabila  total  hemosit menurun, maka hal tersebut dapat mengakibatkan  infeksi  akut  yang  mematikan (Febriani et  al., 2012).  Pengaktifan  sistem proPO  akan  menghasilkan  produksi  berbagai protein,  termasuk  PO  yang  berpartisipasi dalam  melanisasi  di  sekitar  parasit  dan pembunuhan mikroba secara langsung (Eknath et al., 2009).
Awalnya, PO mengkatalisis hidroksilasi monofenol menjadi diphenol dan oksidasi lebih lanjut  dilakukan  dari  diphenol  ke  dalam quinones yang  dapat  secara  nonspesifik  akan membentuk melanin yang tidak larut.
Quinones kemudian  akan  memproduksi  suatu zat  untuk  sklerotisasi  (proses  mengerasnya) kutikula,  dan  sklerotisasi  kutikula  ini  berubah menjadi penghalang infeksi. Zat yang dihasilkan  oleh quinones sangat  beracun  dan akan dibantu oleh proses melanisasi di sekitar patogen  dalam  membunuh  patogen  secara langsung (Song dan Li, 2014).
Reaksi  melanisasi  merupakan  respon  umum terhadap masuknya parasit ke dalam invertebrata,  terutama  arthropoda.  Melanisasi merupakan suatu proses menghasilkan pigmen  coklat  tua  yangbertanggung  jawab untuk  melakukan  inaktivasi  terhadap  partikel asing dan  mencegahnyamenyebar ke seluruh tubuh  inang,  dan  juga  untuk  menyembuhkan kerusakan kutikula(Sritunyalucksana dan Söderhäll,  2000).  Selain  itu,  menurut  Ratcliffe et  al., (1985) dalam Battistella et  al., (2009) melanin  merupakan  pigmen  yang  berwarna coklatatau  kekuningan  yangdiproduksi  di kutikula  sebagaihasil  dari  efek  luka  atau serangan  parasit.  Sedangkan  opsonisasi merupakan  suatu  proses  pelenyapan  bakteri
atau  zat-zat  asing  dengan  cara  dikelilingi  dan dilekatkan  pada  antibodi  untuk  memperkuat dan memperlancar proses fagositosis oleh sel hialin (Tjay dan Rahardja, 200).
Pada  penelitian  ini,  terlihat  bahwa  perlakuan P2 yaitu pemberian probiotik dengan dosis 10 8 CFU/ml  mampu  memproduksi  total  hemosit paling  tinggi  setelah  dilakukan  infeksi  dengan bakteri Vibrio  parahameolitycus dibandingkan dengan  dosis  10 6 ,  10 10 CFU/ml  dan  Kontrol sehingga  dapat  meningkatkan  sistem  imun udang terhadap infeksi bakteri V. parahaemolyticus .  Hal ini  sesuai  dengan hasil penelitian  yang  dilakukan  oleh  Vieira et  al., (2010)  yang  menunjukkan  bahwa  pemberian bakteri probiotik berupa Lactobacillus plantarum dengan  dosis  0.7  x  10 8 CFU/ml memberikan ketahanan tubuh udang terhadap serangan  penyakit  bakteri Vibrio  harveyi. Penelitian lain juga melaporkan bahwa dengan mengkonsumsi  probiotik  yang  mengandung Lactobacillus GG  dapat  meransang  aktivitas fagositosis dalam meningkatkan sistem imunitas.  Dalam  hal ini,  probiotik bertanggung jawab  dalam  merangsang  sistem  imun  udang baik seluler maupun humoral. Sistem imunitas sendiri  merupakan  pertahanan  yang  utama dalam melawan
mikroba patogen (Soeharsono et al. , 2010).
Gambar 1. Total hemosit udang vaname

## Differential Hemocyte Count (DHC)
Jenis  sel  hemosit  yang  diamati  adalah  sel hialin  dan  sel  granular  (termasuk  didalamnya sel  semi  granular).  Berdasarkan  dari  hasil analisis statistik uji One-Way Annova menunjukkan  bahwa  pemberian  probiotik memberikan pengaruh yang signifikan (P<0,05)  terhadap  nilai  DHC  udang  vaname (Gambar 2).
Haemosit  terdiri  dari  tiga  jenis  sel  yang dibedakan berdasarkan dari butiran di sitoplasma  masing-masing  sel;  yaitu  hialin, granular,  dan  semi  granular.  Tiga  jenis  sel tersebut  berfungsi  menghancurkan  partikel asing  yang  masuk  ke  tubuh  udang  melalui fagositosis,  enkapsulasi,  pembentukan  nodul, dan produksi komponen humoral yang tersimpan  dalam  butiran  haemocytic  yaitu protein  antikoagulan,  aglutinin,  enzim  PO,
1,37 0.60 3,32 5.58 2.23 0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00 6,00 7,00 Kontrol - Kontrol + P1 P2 P3 TH C ( x1 0 6 sel /m l) Perlakuan
peptida  antimikroba,  dan  protease  inhibitor (Jayasree et  al., 2006).  Fagositosis  adalah reaksi  pertahanan  seluler  yang  paling  umum terjadi  dan  bersama  dengan  komponen humoral.  Semua  jenis  sel  hemosit  dapat melakukan  aktifitas  fagositosis,  namun  pada umumnya  sel  hialin  yang  memiliki  peran lebih aktif dalam aktifitas fagositosis (Gudding et al., 2014).  Pada  poses  fagositosis  ini,  sel  hialin akan  menelan  dan  menghancurkan  patogen dan partikel asing yang masuk ke dalam tubuh udang (Lesmanawati, 2013).
Berdasarkan dari hasil penelitian yang dilakukan,  presentase  sel  hialin  tertinggi
ditunjukkan  oleh  perlakuan  Kotrol  +  (58,47%) dan  berbeda  nyata  (P<0,05)  terhadap  semua perlakuan.  Tingginya  presentasi  sel  hialin pada  udang  yang  dipelihara  pada  perlakuan Kontrol  +  disebabkan  karena  adanya  upaya dari  udang  untuk  mempertahankan  diri  dari tingginya jumlah V. parahaemolyticus yangtelah diinfeksikan  sebelumnya  ke  tubuh udang  karena  tidak  adanya  dukungan  dari bakteri probiotik untuk melawan patogen.  Hal ini juga dikarenakan sel hialin berperan dalam proses fagositosis, dimana fagositosis merupakan  garis  pertahanan  pertama  untuk menghalau patogen (Guidding et al., 2014).
Gambar 2. Presentasi differensial hemosit (hialin dan granular) udang vaname.
Akan  tetapi  jika  dilihat  dari  jumlah  sel  hialin yang dihasilkan dari masing-masing perlakuan, jumlah sel hialin terbaik ditunjukkan pada  perlakuan  P2  (dosis  probiotik  10 8 CFU/ml) yaitu sebesar 2,29x 10 6 CFU/ml yang berbeda  nyata  (P<0,05)  terhadap  semua
perlakuan  (Tabel  1).  Salah  satu  penelitian menerangkan bahwa pemberian bakteri probiotik Lactobacillus sp.  juga  terbukti  dapat meningkatkan respon imun melalui pengaktifan  fagositosis  (Amrouche et  al. , 2006)
Tabel 1. Jumlah sel hialin dan granular berdasarkan perhitungan presentase.
Perlak uan THC (x10 6 CFU/ml) Hialin (%) Jumlah sel hialin (x10 6 CFU/ml) Granulosit (%) Jumlah sel granular (x10 6 CFU/ml) Kontrol + 0,60 58,47 0,40 a 41,59 0,29 a Kontrol - 1,37 52,67 0,72 b 47,33 0,65 b P3 2,23 48,83 1,01 c 51,17 1,05 c P1 3,32 46,15 1,53 d 53,85 1,79 d P2 5,58 39,57 2,29 e 60,43 3,49 e
Selain  hialin,  jenis  sel  hemosit  lain  yang berperan dalam sistem imun udang adalah sel granular.  Sel  ini  akan  melakukan  degranulasi pada  tahap  awal,  dimana  sel  hemosit  (jenis granular)  akan  berubah  menjadi  sel  yang memiliki  lapisan  pipih  konsentris  dan  akan terjadi  nekrosis.  Proses  ini  akan  membunuh organisme asing yang mendekati atau setidaknya mengurangi pergerakan dan
menghambat pertumbuhan benda asing tersebut (Battistella, 2009).
Fungsi  lain  dari  hemosit  adalah  enkapsulasi dari  benda  asing  yang  terlalu  besar  dan  tidak dapat  ditangani  pada  proses  fagositosis. Proses enkapsulasi ini juga dijalankan oleh sel granular  yang  dimulai  dengan  sel  darah  yang mengalami  penambahan  sel  tunggal  dan jumlah  darah  yang  lebih  banyak  tersebut menyebabkan sel-sel mengepung tubuh
52,67 58.47 46,15 39,57 48.83 47,33 41.53 53,85 60,43 51.17 0,00 20,00 40,00 60,00 80,00 Kontrol - Kontrol + P1 P2 P3 D if e re n si al H e m os it ( % ) Perlakuan Hialin Granular
benda  asing  asing  (patogen)  yang  berada  di dalam  tubuh  udang.  Kemudian  sel  granular akan  membentuk  nodul  dalam  waktu  3-9  jam, sehingga  terbentuk  kapsul  yang  terjadi  antara 24-48  jam  atau  lebih  lama  dimana  ada sejumlah  besar  sel  darah  yang  mengelilingi benda  asing  tersebut.  Pembentukan  nodul terjadi  apabila  tubuh  inang  diserang  oleh partikel-partikel  kecil  dalam  jumlah  yang banyak (Supramattaya et al., 2003).
Presentase sel granular tertinggi pada penelitian  ini  ditunjukkan  oleh  perlakuan  P2 yaitu  sebesar  60,43%  dan  diikuti  oleh perlakuan  P1  (53,85%),  P3  (51,17%),  Kontrol –  (47,33%)  kemudian  Kontrol  + (41,59%)  dan jumlah  sel  granular  tertinggi  juga  ditujukkan oleh  perlakuan  P2  (3,49  x  10 6 CFU/ml)  dan berbeda  nyata  (P<0,05)  terhadap  semua perlakuan.  Berdasarkan  dari  penelitian  ini, pemberian probiotik dengan dosis 10 8 CFU/ml pada  perlakuan  P2  merupakan  dosis  yang optimal  untuk  meningkatkan  sel  hiain  dan  sel granulosit  pada  tubuh  udang.  Selain  dalam proses  enkapsulasi,  sel  granular  memiliki fungsi  mengaktifkan  sistem  proPO  (Andrade, 2011). Pengaktifan sistem proPO ini merupakan  respon  awal  dalam  pengenalan partikel  asing.  Pengaktifan  sistem  proPO menghasilkan adanya produksi protein, termasuk  phenoloxidase  (PO)  yang  berperan dalam  membunuh  mikroba  secara  langsung (Das danSethi, 2009).PO merupakan suatu
enzim  yang  terlibat  dalam  formasi  melanin. Formasi melanin erat kaitannya dalam membantu  fase  akhir  penyembuhan  luka (Sritunyalucksana dan Soderhall, 2000; Manoppo dan Kolopita, 2014).
Penambahan  bakteri  probiotik Lactobacillus sp.  dalam  penelitian  ini  dapat  merangsang modulasi kekebalan tubuh, meningkatkanaktivitas  PO  dan  proPO  dari L.Vannamei (Chiu et  al., 2007;  Kongnum  dan Hongpattarakere,
2012),
meningkatkan peroksinektin  (PE)  yang  merupakan  molekul imun relatif terhadap sistem proPO.Peningkatan  PE  dapat  meningkatkan aktivitas  biologis  adhesi  sel,  opsonisasi, degranulasi,  peroksidase  dan  enkapsulasi pada  sel  darah  udang  (Chiu et  al., 2007). PE juga  memiliki fungsi untuk memicu  munculnya
fagositosis  oleh  sel  hialin  udang  (Effendy et al ., 2004).Selain itu, Lactobacillus sp. bertindak  sebagai  sumber  peptidoglikan  yang didugadapat  menstimulasi  sistem  kekebalan bawaan udang (Chiu et al., 2007).
Menurut  Hauton  (2012),  jika  konsentrasi  sel granular tinggi pada hemolymph maka aktivitas  PO  juga  akan  menjadi  tinggi  dan meningkatkan ketahanan tubuh udang terhadap penyakit. Pada jalur pertahanan lain, sel granular juga memiliki senyawa antibacterial  peptides yang  berperan  dalam menghalangi  masuknya  bakteri  patogen  ke dalam tubuh udang (Smith et al. , 2003).

## Total Bakteri Usus dan Bakteri Vibrio
parahaemolitycus
Berdasarkan  dari  hasil  analisis  statistik  uji One-Way  Annova menunjukkan  bahwa pemberian  probiotik  memberikan  pengaruh yang signifikan (P<0,05) terhadap total bakteri dan  total  bakteri V.  parahaemolyticus pada usus  udang  vaname.  Total  bakteri  di  dalam usus udang vaname setelah 15 hari penambahan  probiotik  berkisar  antara  0,29- 0,52  x  10 5 CFU/ml  (Gambar  3).  Berdasarkan dari  hasil  uji  lanjut Duncan’s, perlakuan  P3 menunjukkan  hasil  tertinggi  yaitu  0,52  x  10 5 CFU/ml.  Setelah  9  hari  diinfeksi  dengan V. parahaemolyticus kisaran total bakteri mengalami  peningkatan  menjadi  6,68-20,18  x 10 5 CFU/ml  (Gambar  4).  Perlakuan  P2 menunjukkan  hasil  tertinggi  yaitu  20,18  x  10 5 CFU/ml dan berbeda nyata (P<0,05) terhadap semua perlakuan.
Total  bakteri V.  parahaemolyticus yang teramati  pada  hari  kedua  pasca  infeksi berkisar  antara  0,00-0,90  x  10 5 CFU/ml. Berdasarkan  dari  hasil  uji  lanjut Duncan’s, Kontrol  (+)  menunjukkan  hasil  tertinggi  yaitu 0,90  x  10 5 CFU/ml.  Setelah  9  hari  diinfeksi, kisaran total bakteri bakteri V. parahaemolyticus meningkat  menjadi  0,00- 12,80  x  10 5 CFU/ml.  Perlakuan  Kontrol  (+) juga  menunjukkan hasil tertinggi yaitu 12,80 x 10 5 CFU/ml  dan  berbeda  nyata  (P<0,05) terhadap semua perlakuan. Sedangkan bakteri V.  parahaemolyticus paling  rendah terletak pada perlakuan P2 dan berbeda nyata (P<0,05) terhadap semua perlakuan.
Gamabar 3. Total bakteri di dalam usus udang vaname
Gambar 4. Total bakteri Vibrio parahaemolitycus dalam usus udang vaname
Usus  yang  terdapat  pada  saluran  pencernaan sangat  erat  kaitannya  dengan  kesehatan tubuh udang. Bakteri Lactobacillus merupakan bakteri  yag  tergolong  dalam  bakteri  asam laktat  (BAL)  yang  menghasilkan  sejumlah komponen  antimikrobial,  dalam  hal  ini  adalah bakteriosin.  Bakteriosin  adalah  toksin  yang menyerupai  proein  yang  disekresikan  oleh bakteria  bersangkutan  untuk  menghambat pertumbuhan  bakteri  lain  yang  merugikan. Bakteri  merugikan  pada  penelitian  ini  adalah V. parahaemlyticus . Selain itu, bakteri probiotik  dari  asam  laktat  dapat  memberikan daya  tahan  dan  pemulihan  kesehatan  saluran pencernaan, mengurangi bau feses yang tidak enak  memberi  suasana  asam  pada  saluran pencernaan,  metabolit  yang  dihasilkan  dapat menghambat  patogen,  dan  meningkatkan sistem imunitas (Soeharsono et al. , 2010).
Sedangkan  pada  perlakuan  P1  (10 6 CFU/ml), diduga  dosis  bakteri  probiotik  yang  diberikan masih  belum  cukup  untuk  memproduksi bakteriosin  yang  menghambat  pertumbuhan bakteri  vibrio  yang  diinfeksikan  dan  pada perlakuan  P3  (10 10 CFU/ml)  dosis  yang diberikan terlalu banyak sehingga
menimbulkan persaingan nutrisi yang menyebabkan fungsi bakteri probiotik melemah sehingga keberadaan bakteri probiotik  menurun  oleh  serangan  bakteri V. parahaemolyticus. Menurut  Kurniawan et  al.,
(2016),  semakin  banyak  jumlah  bakteri Lactobacillus yang  ada  di  dalam  saluran pencernaan, maka akan semakin meningkatkan ketersediaan nutrien yang akan diserap  dalam  saluran  pencernaan  inang. Akan  tetapi  jika  dosis  prbiotik  yang  diberikan terlalu  banyak  dapat  berdampak  kurang  baik bagi  inang.  Hal  ini  sesuai  dengan  pernyataan Mulyadi  (2011)  bahwa  jumlah  bakteri  yang terlalu  banyak  dapat  menyebabkan  bakteri cepat membentuk spora sehingga Lactobacillus sp.  tidak  dapat  menjalankan fungsi  dan  aktivitasnya  dengan  optimal.  Oleh karena  itu  pada  penelitian  ini,  udang  yang dipelihara  pada  perlakuan  P2  dengan  dosis probiotik Lactobacillus 10 8 CFU/ml  memiliki bakteri V.  parahaemolyticus di  dalam  usus paling rendah dibandingkan dengan perlakuan Kontrol +, P1 dan P3.
0,29 0,38 0,42 0,49 0,52 6,68 13,07 17,68 20,18 15,70 0 5 10 15 20 25 Tot al b akt e ri u su s (x1 0 5 C FU /m l) Perlakuan Total bakteri awal Total bakteri akhir 0,00 0,90 0,40 0,57 0,84 0,00 12,80 9,25 6,62 10,02 0,00 2,00 4,00 6,00 8,00 10,00 12,00 14,00 16,00 Tot al V ib ri o p a ra h a em o lit yc u s (x1 0 5 C FU /m l) Perlakuan Total vibrio awal Total vibrio akhir

## Gejala Klinis
Gejala  klinis  dapat  dilihat  pada  Gambar  5. Udang  vaname  pada  Gambar  5a  merupakan udang  yang  sehat.  Udang  memiliki  ciri  warna tubuh  transparan,  usus  terisi  penuh  dan terlihat  lebih  segar.  Setelah  uji  tantang dilakukan,  satu  hari  kemudian  timbul  gejala klinis  infeksi V.  parahaemolitycus pertama (Gambar  5b)  berupa  jaringan  otot  mati
(nekrosis)  hampir  di  seluruh  tubuh  udang (ditandai  dengan  berubahnya  warna  tubuh
menjadi  kemerahan)  serta  terdapat  bercak hitam  di  bagian  kaki  renang.Selanjutnya  pada hari  berikutnya  nekrosis  masih  terlihat  di hampir  seluruh  tubuh  udang  (tubuh  masih berwarna  putih  dan  kemerahan  di  bagian kepala  dan  ekor)  serta  bercak  hitam  meluas ke  bagian  kepala,  kaki  jalan,  dan  ekor  udang (Gambar 5c). Infeksi nekrosis terus meluas ke seluruh  tubuh  udang,  usus  kosong,  hingga akhirnya udang mati (Gambar 5d).
(a)                                    (b)
(c)                                    (d) Gambar 5. Udang normal (a); nekrosis pada bagian kepala dan bercak hitam pada kaki renang (b); Bercak hitam pada kaki jalan dan ekor serta nekrosis pada bagian kepala(c); Kulit rusak, nekrosis pada hampir seluruh tubuh udang, terdapat bercak hitam di bagian kepala serta usus kosong (d).
Gejala-gejala  yang  timbul  pasca  udang diinfeksi  oleh V.  parahaemolyticus sesuai dengan hasil penelitian Rahmanto et al. (2012) yaitu  tubuh  berwarna  pucat,  kaki  memerah, ekor  memerah,  ekor  merah  kecoklatan  lalu geripis,  karapas  lunak,  usus  kosong,  serta timbulnya bercak hitam pada tubuh udang dan nekrosis (Rukyani 1993; Hasan, 2011).
Usus  udang  yang  sebagian  besar  kosong pada  perlakuan  kontrol  +  disebabkan  karena kurangnya  nafsu  makan  udang  setelah diinjeksi  dengan V.  parahaemolyticus .  Hal tersebut  terlihat  dari  banyaknya  sisa  pakan  di dalam  akuarium.  Selain  itu,  di  dalam  usus udang, umumnya terdapat dua jenis mikroorganisme yakni mikroorganisme indogeneus  atau  mikroorganisme  yag  habitat aslinya berasal dari dalam usus dan eksogeneus atau datang dari luar tubuh inang. Keseimbangan  mikroba  di  dalam  usus  sangat dinamis  keberadaanya  dan  dapat  berubah setiap  saat.  Apabila  mikroorganisme  yang mendominasi  di  dalam  tubuh  udang  adalah bakteri  patogen  (Kontrol  +)  maka  akan berakibat  buruk  bagi  inang.  Begitu  pula sebaliknya,  apabila  mikroorganisme  yang mendominasi  di  dalam  tubuh  udang  adalah bakteri baik/probiotik (P2) maka akan berakibat  positif  bagi  inang.  Oleh  karena  itu, perlu  dilakukannya  penambahan  bakteri  baik
dari  luar  tubuh  udang  (Soeharsono et  al. , 2010). Selain itu, pemberian probiotik Lactobacillus dapat  memberikan  beberapa keuntungan, diantaranya
adalah
meningkatkan  nafsu  makan,  meningkatkan mikroba  dalam  usus,  mensintesis  vitamin  dan menstimulasi sistem kekebalan tubuh (Nahasson, 1996; Amirullah, 2017).

## Survival rate (SR)
Berdasarkan  dari  hasil  analisis  statistik  uji One-Way  Annova menunjukkan  bahwa pemberian  probiotik  memberikan  pengaruh yang  signifikan  (P<0,05)  terhadap  tingkat kelangsungan hidup udang vaname. Kelangsungan hidup udang vaname setelah 9 haridiinfeksi dengan V. parahaemolytius melalui  injeksi  berkisar  antara  20,00-90% (Gambar 6).
Sintasan  tertinggi  ditunjukkan  oleh  perlakuan Kontrol - (90%). Akan tetapi,  berdasarkan dari hasil  uji  lanjut Duncan’s, perlakuan  terbaik udang  vaname  yang  diinfeksi  dengan V. parahaemolyticus ditunjukkan  pada  perlakuan P2  (86,67%)  dan  berbeda  nyata  (P<0,05) terhadap  semua  perlakuan  kecuali  kontrol  -. Sedangkan  kelangusngan  hidup  terendah terdapat  pada  perlakuan  kontrol  +  (20,00%) dan  berbeda  nyata  (P<0,05)  terhadap  semua perlakuan
Gambar 6. Presentase kelangsungan hidup udang vaname
Tingginya  tingkat  kelangsungan  hidup  pada perlakuan  P2  sejalan  dengan  tingginya  THC udang pada perlakuan P2 yang meningkatkan sistem  imun  udang,  sehingga  saat  diinjeksi oleh  penyakit  bakteri V.  parahaemolyticus udang  dapat  bertahan  hidup.  Menurut  Martin (2004) dalam Rahmanto et  al., (2012),  udang yang  diinfeksi  oleh  V. parahaemolyticus sebanyak  10 4 CFU  dapat  membunuh  50% udang  selama  7  hari.  Dengan  pemberian bakteri  probiotik  berupa Lactobacillus sp. terbukti dapat meningkatkan ketahanan terhadap penyakit dan menyehatkan pencernaan  usus  (Sivakumar et  al., 2014). Dalam  kasus  lain,  Shivakumar et  al., (2012) juga  menunjukkan  bahawa  udang  windu  yang diberikan probiotik berupa Lactobacillus acidophilus dengan dosis 10 7 CFU.g -1 memberikan tingkat kelangsungan hidup tertinggi yaitu 86,67%.
Jika  dilihat  dari  gejala  klinis  udang,  perlakuan kontrol  +  menunjukkan  kematian  udang vaname  terlihat  pada  hari  ke-2  pasca  infeksi dengan V. parahaemolyticus hingga di hari ke- 3  kematian  massal  udang  vaname  terjadi karena  nekrosis  yang  terjadi  di  tubuh  udang dan  kosongnya  usus  udang  (Gambar  6d). Sedangkan  pada  perlakuan  yang  lain  terjadi kematian bertahap pada hari ke-4 hingga akhir pengamatan.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Pemberian  bakteri  probiotik Lactobacillus sp. dengan dosis 10 8 CFU/ml dapat meningkatkan Total  Hemocyte  Count (THC)  udang  vaname sebesar  5,58  x  10 6 sel/ml,  sel  hialin  dan  sel granular  yang  berperan  penting  dalam  sistem imun  udang,  meningkatkan  nilai  SR  udang sebesar  86,67%  dan  menekan  pertumbuhan bakteri  patogen Vibrio  parahaemolitycus. Berdasarkan  hasil  penelitian  ini,  penggunaan dosis probiotik Lactobacillus sp. yang dianjurkan  pada  budidaya  udang  vaname untuk  meningkatkan  sistem  imun,  tingkat
kelangsungan  hidup  udang  dan  menekan pertumbuhan  bakteri V.  parahaemolyticus adalah 10 8 CFU/ml. Berdasarkan hasil penelitian  ini,  penggunaan  dosis  probiotik Lactobacillus sp.  yang  dianjurkan  pada budidaya  udang  vaname  untuk  meningkatkan sistem  imun,  tingkat  kelangsungan  hidup udang  dan  menekan  pertumbuhan  bakteri .parahaemolyticus adalah 10 8 CFU/ml.

## DAFTAR PUSTAKA
Alapide-Tendancia  E.V  dan  L.A.  Dureza. (1997).  Isolation  of Vibrio spp.  From Penaeus  monodon (Fabricius)  with  Red Disease Syndrome. Aquaculture, 154 (2)
107-114.
Amirullah. (2017). Pengaruh Pemberian
Probiotik  Organ  Dalam  pada  Boiler.
Skripsi . Makassar: Jurusan Ilmu Peternakan Fakultas Sains dan
Teknologi  Universitas  Islam  Negeri
Alauddin Makassar.
Amrouche  T.,  Y.  Boutin,  G.  Prioult,  I.  Fliss.
(2006). Effects of Bifidobacterial
Cytoplasm, Cell Wall and Exopolysaccharide on Mouse Lymphocyte  Proliferation  and  Cytokine Production. International Dairy Journal , 16 (1),70 –80.
Andrade  A.J.  (2011).  Shrimp  Immunological Reactions  Against  WSSV:  Role  of Haemocytes  on  WSSV  Fate. Tesis .
Faculty  of  Bioscience  Engineering, Ghent University.
Asma  N,  Z.A.  Muchlisin  ,  I.  Hasri.  (2016). Pertumbuhan  dan  Kelangsungan  Hidup Benih  Ikan  Peres  ( Osteochilus  vittatus ) pada  Ransum  Harian  yang  Berbeda. Jurnal  Ilmiah  Mahasiswa  Kelautan  dan Perikanan Unsyiah, 1 (1), 1-11.
Araneda  M,  E.P.  Perez,  E.G.  Leyva.  (2008).
White Shrimp Penaeus vannamei
Culture in Freshwater at Three Densities:  Condition  State  Based  on
90 20 60 86,67 46,67 0 50 100 150 Kontrol - Kontrol + P3 P4 P5 Su rv iv al Ra te ( % ) Perlakuan
Length  and  Weight. Aquaculture,  283 , 13-18.
Badan  Pusat  Statistik.  (2017).  Ekspor  Udang Menurut  Negara  Tujuan  Utama  2000- 2015. https://www.bps.go.id/LinkTabelSt atis/view/id/1015 [21 April 2017].
Basir  B.  (2014).  Kerja  Probiotik Lactobacillus lactic dalam Saluran Pencernaan Udang Vanamei ( Litopenaeus vannamei ) dengan Pemberian Pakan yang disuplemen  Probiotik  Kacang  Hijau. Jurnal Balik Diwa, 5 (2). Battistella  S.,  P.  Bonivento,  G.A.  Amirante. (2009).  Hemocytes  and  Immunological Reactions in Crustaceans. Italian Journal  of  Zoology .  ISSN:  1125-0003 (Print)  1748-5851  (Online).  Journal homepage: http://www.tandfonline.com/l oi/tizo20 .
Briggs  M,  S.F.  Smith,  R.  Subasinghe,  M. Philips. (2004). Introductions and Movement  of Penaeus  vannamei and Penaeusstylirostris in  Asia  and  the Pacific.Food and Agriculture Organization  of  the  United  Nations.
Regional  Office  for  Asiaand  the  Pacific.
Bangkok .  RAP  Publication 2004/10.  12 pp.
Chiu  C.H.  Y.K.  Guu,  C.H.  Liu.  T.M.  Pan.  W. Cheng. (2007). Immune Responses and Gene  Expression  in  White  Shrimp, Litopenaeus  Vannamei,  Induced  by
Lactobacillus plantarum . Fish &
Shellfish Immunology. 23 , 364-377. Das  B.K  dan  S.N  Sethi.  (2009). Immune Functions in Crustaceans. Application of Molecular  and  Serological  Tools  in  Fish Disease  Diagnosis  (CIFA ).  Orisaa. India.
Effendy  S.,  R.  Alexander,T.  Akbar.  (2004). Peningkatan  hemosit  benur  udang windu  Penaeus  monodon  (Fab.).  Pasca perendaman
ekstrak ragi
roti
Saccharomyces cerevisiae pada konsentrasi yang berbeda. J. Sains dan Teknologi, 14 (2), 46-53. Ekawati,  A.  W.,  Nursyam,  H.,  Widjayanto,  E., &  Marsoedi,  M.  (2012).  Diatomae Chaetoceros ceratosporum dalam
Formula  Pakan  Meningkatkan  Respon Imun  Seluler  Udang  Windu  ( Penaeus monodon Fab.). The Journal of Experimental Life Science, 2 (1), 20-28. Eknath A.E., B.K. Mishra, B.K. Das, P. Swain. (2009).  Aplication  of  Molecular  and Serological  Tools  in  Fish  Disease Diagnosis. ICAR.
Febriani D. (2012). Kappa-Karagenan sebagai
Imunostimulan untuk Pengendalan
Penyakit  Infectious  Myonecrsis  (IMNV)
pada  Udang  Vaname, Litopenaeus vannamei.  Skripsi. Bogor:  Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor.
Feliatra, Zainuri, D. Yoswaty. (2012). Pathogenitas Bakteri Vibrio sp. Terhadap  Udang  Windu  ( Penaeus monodon) . Jurnal Sungkai, 2 (1), 23-36. Fernando  E.  (2016).  Pengaruh  Variasi  Dosis dan  Frekuensi  Pemberian  Probiotik pada  Pakan  Terhadap  Pertumbuhan Serta Mortalitas Udang Vaname ( Litopenaeus vannamei ). Skripsi . Surabaya: Fakultas Sains dan Teknologi Universitas Airlangga.
Gudding R., A. Lillehaug, O. Evensen.  (2014).
Fish  Vaccination .  Willey  Blackwell.
Amerika.
Haliman  R.B  dan  D.  Adijaya.  (2008). Udang Vananamei . Jakarta: Penebar Swadaya.
Hauton,  C.  (2012).  The  scope  of  the crustacean  immune  system  for  disease control. Journal of invertebrate pathology, 110 (2), 251-260. Hatmanti,  A.  (2003).  Penyakit  Bakterial  pada Budidaya Krustasea serta Cara
Penanganannya. J.  Oseana,  28 (3),  1- 10.
Indraswati  V.O.,  S.  Supono,  A.  Saefullah.
(2015).  Suplementasi  Minyak  IKan untuk Peningkatan Imunitas Non Spesifik  Udang  Vaname  ( Litopenaeus vannamei ). Jurnal  Ilmu  Perikanan  dan Sumberdaya Perairan, 3 (2).
Jayasree L, P. Janakiram, R. Madhavi. (2006).
Characterization of Vibrio spp. Associated  with  Diseased  Shrimp  from Culture  Ponds  of  Andhra  Pradesh (India). Journal of The World Aquaculture Society, 37 (4), 523-532.
Kongnum,  K.,  &  Hongpattarakere,  T.  (2012).
Effect of Lactobacillus plantarum isolated  from  digestive  tract  of  wild shrimp  on  growth  and  survival  of  white shrimp
(Litopenaeus
vannamei) challenged  with  Vibrio  harveyi. Fish  & shellfish immunology, 32 (1), 170-177.
Kurniawan  L.A.,  M.  Arief,  A.  Manan,  D.D. Nindarwi.  (2016).  Pengaruh  Pemberian Probiotik Berbeda pada Pakan
Terhadap  Retensi  Protein  dan  Retensi Lemak  Udang  Vaname  ( Litopenaeus vannamei ). Journal  of  Aquacuture  and Fish Health, 6 (1).
Lesmanawati  W.  (2013).  Aplikasi  Sinbiotik pada  Udang  Vaname Litopenaeus vannamei : Resistensi terhadap Infectious Mynocrosis Virus dan
Performa  Pertumbuhan. Tesis .  Bogor: Program
Studi Ilmu Akuakultur. Fakultas
Perikanan  dan  Ilmu  Kelautan,  Institut Pertanian Bogor.
Manoppo  H.  dan  M.  E.F.  Kolopita.  (2014). Respon  Imun  Krustase. Review  Artikel,
2 (22), 22-26.
Mulyadi  A.E.  (2011).  Pengaruh  Pemberian
Probiotik pada Pakan Komersil terhadap Laju  Pertumbuhan  Benih  Ikan  Patin
Siam ( Pangasius hypopyhalmus ). Skripsi. Jatinagor:  Fakultas  Perikanan dan Ilmu Kelautan Unpad.
Rahmanto S.P., Sarjito, D. Chimawati.  (2014). Karakterisasi  dan  Uji  Postulat  Koch Bakteri  Genus  Vibrio  yang  berasal  dari Media  Kultur  Massal  Mikroalga. Journal
f Aquaculture Management and Technology, 3 (4), 230-237.
Sivakumar N., M. Sundararaman, G. Selvakumar.  (2012).  Probiotic  Effect  of Lactobacillus acidophilus Against
Vibriosis  in  Juvenile  Shrimp  ( Penaeus monodon ). African Journal of Biotechnology, 11 (91), 15811-15818. Sivakumar N., G. Selvakumar, P. Varalakshmi, B.  Ashokkumar.  2014. Lactobacillus sp. a  Potent  Probiotic  for  Disease  Free Shrimp Aquaqulture. International Journal  of  Recent  Scientific  Research, 5 (4), 1031-1045.
Smith,  V.  J.,  Brown,  J.  H.,  &  Hauton,  C. (2003). Immunostimulation in crustaceans:  does  it  really  protect against  infection? Fish  &  Shellfish Immunology, 15 (1), 71-90.
Soeharsono,  L.  A.,  Safitri,  R.,  Sjofjan,  O., Abdullah,  S.,  Rostika,  R.,  Lengkey,  H. A.,  &  Mushawwir,  A.  (2010).  Probiotik Basis  Ilmiah,  Aplikasi,  dan  Aspek Praktis. Penerbit  Widya  Padjadjaran. Bandung.
Song Y.L dan C.Y. Li. (2014). Shrimp Immune System –  Special  Focus  on  Penaeidin.
Journal of Marine Science and Technology , 22 (1), 1-8.
Sunorita M. dan I. Tjarsono. (2014). Kebijakan Hambatan Non Tarif di Pasar Uni Eropa Terhadap  Ekspor  Komoditas  Udang Indonesia. Jurnal Transnasional, 6 (1).
Supramattaya  K.,  J.  Ruangsri,  T.  Itami,  V. Chitiwan, W. Phromkunthong, K.
Muroga. (2003). Morphology and Immunological Roles of Hemocytes and
Fixed Phagocytes in Black Tige Shrimp Penaeus monodon. Fish Pathology , 38
(2), 33-39.
Sritunyalucksana,  K.,  &  Söderhäll,  K.  (2000). The  proPO  and  clotting  system  in crustaceans. Aquaculture,  191 (1-3),  53- 69. Tjay T.H. dan K. Rahardja.  (2007). Obat-Obta Penting  Khasiat,  Penggunaan,  dan Efek-Efek  Sampingnya .  Jakarta:  PT
Elex Media Komputindo.
Verschuere L., G. Rombaut, P. Sorgeloos, W.
Verstraete.  (2000).  Probiotics  Bacteria as  Biocontrol  Agents  in  Aquaculture. App. Environ. Microbiol , 64 , 655-671. S. Vieira  F.N.,  C.C.  Buglione,  J.P.L.  Mourino,  A. Jatoba,  M.L.  Martins,  D.D.  Schleder, E.R.  Andreatta,  M.A.  Barraco,  L.A. Vinatea.  (2010).  Effect  of  Probiotic Suplemented  Diet  on  Marine  Shrimp Survival  After  Challenge  with Vibrio harveyi.  Arquivo  Brasileiro  de  Medicina
Veterinaria e Zootecnia.On-line version. 63 (3). ISSN: 1678- 4162.Widanarni, Sukenda, M. Setiawati. 2008.  Bakteri  Probiotik  dalam  Budidaya Udang: Seleksi, Mekanisme Aksi,
Karakterisasi,  dan  Aplikasinya  Sebagai Agen  Biokontrol. Jurnal  Ilmu  Pertanian Indonesia,  13 (2),  80-89.  ISSN:  0853- 4217.
Widowati R. (2008). Keberadaan Bakteri Vibrio parahaemolitycus pada  Udang  yang dijual di Rumah Makan Kawasan Pantai Pangandaran. VIT VITALIS, 1 (1).
Yennie Y. (2011). Isolasi dan Identifikasi Vibrio parahaemolitycus
Patogenik pada Udang Tambak. Skripsi . Bogor: Sekolah Pascasarjana Institut Pertanian Bogor.
Yunita  M.,  Y.  Hendrawan,  R.  Yulianingsih. 2015.  Analisis  Kuantitatif  Mikrobiologi pada  Makanan  Penerbangan  ( Aerofood ACS)  Garuda  Indonesia  Berdasarkan TPC ( Total Plate Count) dengan Metode Pour Plate. Jurnal Keteknikan Pertanian Tropis dan Biosistem, 3 (3), 237-248.