## Uji Aktivitas Daya Hambat terhadap Bakteri Gram Positif dan Bakteri Gram Negatif Menggunakan Metode Sumur Difusi

## Anak Agung Ketut Eli Dana Sari
jungellids15@gmail.com
Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Udayana

## ABSTRAK
Antibiotika yang beredar dipasaran semakin meluas serta penggunaannya yang semakin irasional dapat menyebabkan resistensi bakteri. Resistensi merupakan bentuk pertahanan bakteri terhadap  antibiotik. Hal tersebut  dapat  diminimalisir  dengan  cara  mengarah  ke  penggunaan  antimikroba  yang  alami  yaitu memanfaatkan  tanaman obat yang berkhasiat. Untuk mengetahui potensi atau aktivitas daya hambat suatu antibiotik  terhadap  pertumbuhan  dan  perkembangan  bakteri  maka  dapat  dilakukan  assei  mikrobiologi dengan  metode  sumur  difusi  (kertas  saring (Kirby  and  Bauer)) .  Media  NA (Nutrient  Agar) yang  sudah memadat  dan  mengandung Staphylococcus  aureus (bakteri  Gram  positif)  dan Escherichia  coli  ( bakteri  Gram negatif)  pada  cawan  Petri  dibuat  sebanyak  tujuh  sumur.  Masing-masing  sampel  disortasi  hingga mendapatkan  ekstrak  cair  yang  cukup.  Dipipet  ekstrak  dari  masing-masing  sampel  dengan  mikropipet sebanyak 20 µl dengan konsentrasi 1 mg/ml pada sumur difusi yang tersedia, diberikan label. Sumur difusi kemudian  diinokulasi  di  dalam  inkubator  menggunakan  suhu  37 o C  selama  48  jam.  Kontrol  negatif  (air steril),  kontrol  positif  (antibiotik  Amoxicillin).  Aktivitas  daya  hambat  ekstrak  rimpang  jahe  pada  bakteri Gram positif 36,75%, bakteri Gram negatif 42,29%. Aktivitas daya hambat ekstrak daun sirih pada bakteri Gram  positif  18,97%,  bakteri  Gram  negatif  16,6%.  Aktivitas  daya  hambat  ekstrak  rimpang  kunyit  pada bakteri  Gram  positif  17,39%,  bakteri  Gram  negatif  20,94%.  Aktivitas  daya  hambat  ekstrak  daun  juwet memiliki persentase daya hambat terbesar pada Gram positif dan Gram negatif sebesar 73,12%. Sedangkan aktivitas daya hambat ekstrak daun mint dengan presentase hambat terkecil pada Gram positif dan Gram negatif sebesar 0%.
Kata Kunci: antibiotik, Nutrient Agar, bakteri gram positif, bakteri gram negatif, metode sumur difusi

## ABSTRACT
Antibiotics circulating in the market are increasingly widespread and their increasingly irrational use can lead to bacterial resistance.  Resistance is a form of bacterial defense against antibiotics. This can be minimized by leading to the use of natural antimicrobials, namely utilizing nutritious medicinal plants. To determine the potential or inhibitory activity of an antibiotic against the growth and development of bacteria, a microbiological assessment can be carried out using the disk diffusion method (filter paper (Kirby and Bauer)).  The NA (Nutrient Agar) media which had solidified and  contained  Staphylococcus  aureus  (Gram  positive  bacteria)  and  Escherichia  coli  (Gram  negative  bacteria)  in  the Petri dishes were made of seven disks.  Each sample was sorted to obtain sufficient liquid extract. The extract pipettes from each sample with a micropipette of 20 µl with a concentration of  1 mg / ml in the diffusion disk provided, were labeled.  The diffusion  disk was then inoculated in an incubator using a temperature of 37 o C for  48 hours. Negative control (sterile water), positive control (antibiotic Amoxicillin).  Inhibition activity of ginger rhizome extract on Gram- positive bacteria was 36.75%, and Gram-negative bacteria was 42.29%. The inhibitory activity of betel leaf extract on Gram positive bacteria was 18.97%, and Gram negative bacteria was 16.6%. Inhibition activity of turmeric rhizome extract on Gram positive bacteria 17.39%, Gram negative bacteria 20.94%.  The inhibitory activity of juwet leaf extract had the largest percentage of Gram-positive and Gram-negative as much as 73.12%.  While the inhibitory activity of mint leaf extract with the smallest inhibition percentage was Gram positive and Gram negative was 0%.
Keywords: antibiotics, Nutrient Agar, gram positive bacteria, gram negative bacteria, disk diffusion method
Antibiotik merupakan suatu senyawa kimia  yang  dapat  diproduksi  oleh mikroorganisme  tertentu  dan  bersifat menghambat pertumbuhan atau
membunuh mikroorganisme lain (Rukmana, 2007). Antibiotika yang beredar dipasaran
semakin meluas serta penggunaannya  yang  semakin  irasional dapat  menyebabkan  resistensi  bakteri. Resistensi  merupakan  bentuk  pertahanan bakteri  terhadap  antibiotik.  Hal  tersebut dapat diminimalisir dengan cara mengarah  ke  penggunaan  antimikroba yang alami yaitu memanfaatkan  tanaman obat  yang  berkhasiat.  Antibiotik  juga dapat diproduksi oleh sel tumbuhan yang dihasilkan dari senyawa metabolit sekunder  tumbuhan.  Senyawa  metabolit sekunder yang dihasilkan mampu menghambat pertumbuhan bakteri maupun  membunuh  bakteri  lainnya (Rukmana, 2007).
Beberapa  tanaman  yang  berkhasiat dan  dimanfaatkan  sebagai    menghambat perkembangan  bakteri    yaitu  daun  juwet, daun  mint,  daun  sirih,  rimpang  jahe  dan rimpang  kunyit.  Penelitian  Sudarmi  dkk (2017),  menyatakan  juwet  memiliki senyawa metabolit sekunder yang mampu menghambat aktivitas bakteri S.aureus dan E.coli .  Penelitian  Hermawan  (2007), menyatakan  daun  sirih  memiliki  senyawa yang  efektif  dapat  menghambat  aktivitas bakteri S.aureus dan E.coli .  Penelitian Tabari et.al (2012), menyatakan kandungan minyak  pada  daun  mint  mampu menghambat  aktivitas  bakteri S.aureus yang  termasuk  bakteri  Gram  negatif . Penelitian  Azkiyah  (2020),  menyatakan
rimpang  jahe  dapat  memberikan  aktivitas antimikroba terhadap bakteri S.aureus dan E.coli . Penelitian
Lestari (2007), menyatakan  rimpang  kunyit  mampu untuk  menghambat  aktivitas  bakteri S.aureus .
Untuk  mengetahui  potensi  atau aktivitas  daya  hambat  suatu  antibiotik terhadap pertumbuhan dan perkembangan bakteri maka  dapat dilakukan  assei  mikrobiologi.  Assei mikrobiologi  merupakan  suatu  analisis pengukuran pada bahan untuk mengukur daya hambat dan kemampuan menghambat pertumbuhan mikroba, dimana  jasad  penguji  yang  digunakan adalah  mikroba  (Pelczar  dan  Chan,  2007). Hasil data yang akan diperoleh pada assei mikrobiologi ini berupa zona bening. Cara memperoleh data yaitu dengan mengukur diameter  zona  bening  dan  dihitung persentase  daya  hambat  dari  bahan  yang diujikan  (Nurainy  dan  Yudiantoro  2008). Metode  umum  yang  digunakan  pada pengujian assei mikrobiologi yaitu metode sumur difusi (disk diffusion) dan metode d’ Aubert (Kawuri et al., 2016).
Oleh  karena  itu,  penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui perbandingan  aktivitas daya hambat pada bakteri  Gram  positif  dan  Gram  negatif terhadap  tanaman  yang  diduga  memiliki aktivitas antibakteri. Sampel yang digunakan  yaitu  daun  juwet,  daun  mint, daun  sirih,  rimpang  jahe  dan  rimpang kunyit,  kontrol  negatif  (air  steril),  kontrol positif  (antibiotik  Amoxicillin)  dengan metode sumur difusi.

## II. METODELOGI PENELITIAN
Lokasi penelitian dilakukan di Laboratorium  Mikrobiologi  dan  Virologi Program  Studi  Biologi,  Fakultas  MIPA, Universitas  Udayana.  Penelitian  ini menggunakan  media  NA (Nutrient  Agar) dengan  sampel  daun  juwet,  daun  mint, daun  sirih,  rimpang  jahe  dan  rimpang kunyit.  Kontrol  positif  yang  digunakan berupa  antibiotik  Amoxicillin  dan  kontrol negatif  air  steril  untuk  mengetahui  daya hambat  bakteri  Gram  positif  dan  Gram negatif  pada  masing-masing  sampel. Bakteri yang digunakan
yaitu
Staphylococcus aureus (bakteri Gram positif) dan Escherichia coli ( bakteri Gram negatif). Sedangkan  alat  yang  digunakan  yaitu cawan  petri,  bunsen,  pinset,  gunting, mortir, stamper, kertas saring, mikropipet, dan inkubator.
Siapkan  media  NA  yang  sudah memadat dan  mengandung Staphylococcus aureus (bakteri  Gram  positif)  dan Escherichia coli ( bakteri Gram negatif) pada cawan Petri yang telah berisi tujuh sumur. Masing – masing sampel dilakukan sortasi, dicuci  hingga  bersih  dan  dipotong  untuk memperkecil  ukuran  sampel,  kemudian masing–masing sampel ditimbang sebanyak  10  gram.  Lalu,  dimasukan  ke dalam  mortir  dan  dihaluskan  dengan menambahkan  sedikit  demi  sedikit  air steril  hingga  10  ml.  Selanjutnya,  disaring sampel  dengan  kertas  saring  hingga mendapatkan  ekstrak  cair  yang  cukup. Dipipet  ekstrak  dari  masing-masing sampel  dengan  mikropipet  pada  sumur difusi yang tersedia sebanyak 20 µl dengan konsentrasi  1  mg/ml  dan  diberikan  label, kontrol  negatif  (air  steril),  kontrol  positif (antibiotik Amoxicillin).
Sumur  difusi  yang  telah  terisi  dengan masing-masing sampel selanjutnya diinokulasi  dalam  inkubator  dengan menggunakan suhu 37 o C selama 48 jam.
Gambar 1. Cawan Petri dengan medium NA yang telah terisi sampel pada masing – masing sumur sebelum diinkubasi pada suhu 37 o C selama 48 jam.
Hasil  yang  akan  diperoleh  yaitu  zona bening  yang  terbentuk  disekitar  sumur difusi,  kemudian  diamati  dan  dihitung diameter  zona  yang  terbentuk  dengan membagi  daya  hambat  pada  perlakuan dengan  daya  hambat  pada  kontrol  dan dikalikan 100%. Semua Kegiatan dilakukan  di  dekat  nyala  api  Bunsen. Rumus  hitung  daya  hambat  yang digunakan:
% 100 kontrol bening zona diameter sampel bening zona diameter Hambat Daya  

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Berikut merupakan tabel hasil presentase hambatan bakteri Gram negatif dan  Gram  positif  pada  masing-masing sampel uji.
Tabel  1.  Hasil  presentase  uji  aktivitas  daya hambat bakteri Gram positif dan Gram negatif
Sampel
(%) Aktivitas Daya Hambat Bakteri Gram
Inn      (+)                        (-) Daun juwet 73,12                     73,12 Daun mint 0                             0 Daun sirih 18,97                     16,6 Rimpang jahe 36,75                     42,29 Rimpang kunyit 17,39                     20,94
Berikut  merupakan  hasil  uji  aktivitas daya  hambat  bakteri  Gram  positif  dan Gram negatif pada masing-masing sampel uji.
Gambar 2. Cawan Petri dengan medium NA yang telah terisi sampel pada masing – masing sumur sesudah diinkubasi pada suhu 37 o C selama 48 jam. (1)Rimpang Kunyit, (2)Daun Mint, (3)Kontrol negatif , (4)Daun Sirih, (5)Daun Juwet, (6)Rimpang Jahe, (7)Kontrol Positif.
Perbedaan  efektivitas  antara  bakteri Gram  positif  dan  negatif  pada  masing- masing  sampel  uji  yaitu  pada  daun  juwet memiliki  efektifitas  yang  sama  terhadap daya  hambat  bakteri  Gram  positif  dan negatif.  Sedangkan  pada  sampel  uji lainnya yaitu daun sirih, rimpang jahe dan rimpang  kunyit  memiliki  efektivitas  yang signifikan  terhadap  bakteri  Gram  positif dan negatif.
Hasil  pengujian  pada  daun  juwet menunjukan  persentase  hambatan  pada bakteri  Gram  negatif  dan  Gram  positif
sebesar  73,12%  yang  menandakan  ekstrak daun juwet mampu menghambat aktivitas bakteri.  Senyawa  fenol  yang  terkandung pada  daun  juwet  bersifat  bakterisidal  dan memiliki  aktivitas  antimikroba  dengan spektrum  luas.  Senyawa  fenol  pada  daun juwet  memiliki  mekanisme  kerja  dengan meningkatnya permeabilitas pada memban  sitoplasma,  hal  tersebut  akan menyebabkan  terjadinya  kebocoran  pada komponen  intraseluler  dan  koagulasi sitoplasma  sehingga  terjadi  lisis  sel  pada bakteri. Kandungan senyawa lainnya yang terdapat  pada  daun  juwet  yaitu  senyawa steroid,  saponin  dan  alkaloid  (Sudarmi dkk., 2017).
Hasil  pengujian  pada  daun  mint menunjukan  persentase  hambatan  pada bakteri  Gram  negatif  dan  Gram  positif sebesar  0%  yang  menandakan  ekstrak daun  mint  tidak  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri. Hasil tersebut tidak sesuai dengan pustaka yang menyebutkan daun mint mengandungminyak atsiri yang dapat  digunakan  sebagai  antibakteri (Lutony  dan  Rahmawati,  2000).  Hal tersebut dapat terjadi karena minyak mint yang  telah  menguap  akibat  penyimpanan yang lama dan mengakibatkan konsentrasinya rendah (Viviek dkk., 2009).
Hasil  pengujian  pada  daun  sirih menunjukan  persentase  hambatan  pada bakteri  Gram  negatif  16,6%  dan  Gram positif  18,97%  yang  menandakan  ekstrak daun sirih dinyatakan dapat menghambat aktivitas  bakteri.  Senyawa  kavikol  dan kavibetol adalah turunan fenol pada daun sirih  yang  mempunyai  aktivitas  daya hambat bakteri 5 kali lipat dari fenol biasa terhadap  bakteri  Gram  positif.  Minyak atsiri  dengan betle  phenol dan  turunannya yang  terdapat  pada  daun  sirih  memiliki
Zona bening
aktivitas  sebagai  antibakteri  dengan mekanisme  kerja  yaitu  menghambat pertumbuhan bakteri dengan cara merusak  dinding  sel  bakteri  (Ali  Shahab, 2016).
Hasil  pengujian  pada  rimpang  jahe menunjukan  persentase  hambatan  pada bakteri  Gram  negatif  42,29%  dan  Gram positif  36,75%  yang  menandakan  ekstrak rimpang jahe dapat menghambat aktivitas bakteri.  Hal  ini  disebabkan  karena rimpang  jahe  mengandung  antibakteri gingerol,  shogaol,  paradol  and  gingeron (Giriraju  dan  Yunus,  2013).  Pertumbuhan bakteri  akan  dihambat  pada  stabilitas membran sel lipid bilayer dan mengakibatkan  kebocoran  membran  sel bakteri (Maekawa et al., 2015).
Hasil  pengujian  pada  rimpang  kunyit menunjukan  persentase  hambatan  pada bakteri  Gram  negatif  17,39%  dan  Gram positif  20,94%  yang  menandakan  ekstrak rimpang  kunyit  dapat  menghambat aktivitas  bakteri.  Hal  ini  disebabkan karena  kunyit  mengandung  flavanoid, fenol,  alkaloid  dan  minyak  atsiri  (Retno dan  Romas,  2010).  Struktur  tiga  dimensi protein akan terbuka dan berubah menjadi struktur  acak  pada  senyawa  fenol  yang terkandung pada rimpang kunyit sehingga menyebabkan  metabolisme  pada  bakteri terganggu (Lau, 2013).

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan,  aktivitas  antibiotik  yang diperoleh  dari  masing-masing  ekstrak tanaman  yang  digunakan  memberikan persentase  daya  hambat  yang  bervariasi pada  pertumbuhan  bakteri.  Ekstrak  yang memberikan daya hambat  terbesar adalah ekstrak  daun  juwet  dengan  persentase
daya  hambat  pada  bakteri  Gram  positif dan  negatif  sebesar  73,12%.  Sedangkan ekstrak  yang  memberikan  daya  hambat terkecil  adalah  ekstrak  daun  mint  dengan presentase  hambat  pada  bakteri  Gram positif dan negatif sebesar 0%.

## DAFTAR PUSTAKA
Ali  Shahab,  M.,  Ardiyansah.  2016. Aktivitas  Antibakteri  Ekstrak  Daun Sirih  Hijau (Piper  betle L. ) Terhadap Bakteri  Patogen  dari  Susu  Segar. Skripsi .  Fakultas  Peternakan.  Institut Pertanian Bogor. Bogor.
Azkiyah,  Siti  Zamilatul.  2020.  Pengaruh Uji Antibakteri Ekstrak Rimpang Jahe Terhadap  Pertumbuhan S.aureus dan E.coli Secara  In  Vitro. Jurnal  Farmasi Tinctura . Vol. 1(2): 71-30.
Giriraju,  A.,  dan  Yunus,  G.Y.  2013.
Assessment of Antimicrobial
Potential  of  10%  Ginger  Extract Against Streptococcus mutans , Candida albicans ,  and Enterococcus  faecalis :  An in Vitro Study. Indian Journal of Dental Research. Vol. 24(4): 397-400.
Hermawan,  Anang.  2007.  Pengaruh Ekstrak  Daun  Sirih  ( Piper  betle L.) Terhadap  Pertumbuhan S.aureus dan E.coli dengan  Metode  Difusi  Disk. Skripsi. Fakultas  Kedokteran  Hewan.
Universitas Airlangga. Surabaya. Kawuri,  R.,  I.B.G.  Darmayasa  dan  Y.
Ramona.  2016. Penuntun  Praktikum Mikrobiologi  dan  Virologi  Farmasi . Jurusan  Biologi  FMIPA  Universitas Udayana. Bali.
Lau, S.H.A. 2013. Uji Aktivitas Antibakterim  dari  Ekstrak  Etanol Rimpang  Kunyit (Curcuma  domestica Val.) Terhadap Bakteri Escherichia coli dan Stapylococcus  aureus Resisten
Antibiotik. Skripsi.
Universitas Hassanudin. Makassar. Lestari,S.  2007.  Uji  Antibakteri  Serbuk Rimpang Kunyit
(Curcuma domestika  Val)  Terhadap  Bakteri E.coli,
http:etd.library.ums.ac.id/index.php.
dikutip tgl 05.05.2009.
Lutony,  T.  L.,  dan  Y.  Rahmawati. Minyak Atsiri. Penebar Swadaya. Jakarta. Maekawa, L.E.,Rossoni, R.D., Barbosa, J.O., Jorge,  A.O.C.,Junqueira,J.C.,Valera,
M.C.  2014.  Different  Extracts  of Zingiber officinale
Decrease
Enterococcus  faecalis Infection  in
Galleria  mellonella . Brazilian  Dental Journal. Vol. 26(2): 105-109.
Nazzaro,  F.,    Fratianni,  F.,  Martino,  L.D., Coppola,  R.,  Vincenzo,  D.F.  2013.
Effect of Essential Oils on Pathogenic Bacteria. Pharmaceuticals .  Vol.  6(12): 1451-1474.
Nurainy, F., S. Rizal dan Yudiantoro. 2008.
Pengaruh Konsentrasi Kitosan Terhadap Aktivitas Antibakteri
Dengan Metode Difusi Agar (Sumur).
Jurnal  Teknologi  Industri  dan  Hasil Pertanian. Vol. 13(2): 232 – 236.
Pelczar,  M.  J.,  dan  E.  C.  S.  Chan.  2007.
Dasar–Dasar  Mikrobiologi .  UI  Press.
Jakarta. Retno,  F.D.M.,  dan  A.M.  Romas.  2010.
Pengaruh  Ekstrak  Rimpang  Kunyit (Curcuma  domestica  Val.) Terhadap Bakteri Stapylococcus  aureus ATCC
6538 dan Escherichia coli ATCC 11229 Secara  in  Vitro. Skripsi. Universitas Muhammadiyah Surakarta.
Surakarta.
Rukmana,  R,.  2007.  Bertanam  Petsai  dan Sawi .  Kanisius. Yogyakarta.  Hal:11-
35.
Sudarmi,  K.,  I.B.G.  Darmayasa  dan  K.
Muksin. 2017. Uji Fitokimia dan Daya
Hambat Ekstrak Daun Juwet (Syzygium cumini) Terhadap
Pertumbuhan  Bakteri Escherichia  coli dan Stapylococcus aureus ATCC. Jurnal Simbiosis . Vol. 2: 47 – 51.
Sulistijowati, R., J. Nurhajati dan I. Awom.
2015.  The  Effectiveness  Inhibition Filtrate Bacteriocins Lactobacillus acidophilus Toward  Contaminants Bacteria  from  Swordfish  ( Auxis rochei )  Stew. International  Journal  of Bio-Science  and  Bio-Technology .  Vol.  7 (3): 163-174.
Toma,  A.,  dan  Deyno,  S.  2014.
Phytochemistry and Pharmacological Activities of
Moringa  oleifera . International  Journal of Pharmacognosy . 1(1): 222 – 231.
Viviek,  S.  N.  Sharma.,  H.  Singh,
Srivastava.,  K.D  Phatania.,  V.
Singh.,
B.C.R. Gupta. 2009. Comparative  Account  on  GC-MS Analysis of Mentha arvenis L.“Commit”  from  Three  Different Location of North India. International Journal of Drug Development  and  Research .  Vol. 1(1):1-9.