Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(3): 99-108, Desember 2022
PREVALENSI VIRAL NERVOUS NECROSIS (VNN) PADA  IKAN KERAPU EKOR BULAN ( Variola sp.) DI PERAIRAN GORONTALO
Ahmad Ainul Nurkhozin 1) , Dewi Shinta Achmad 1*) , Nurqadri Syaia Bakti 1) , Indri Afriani Yasin 1) , Sitti Rosnany A. Natsir 2)
1 Program Studi Akuakultur, Fakultas Sains dan Ilmu Komputer Universitas Muhammadiyah Gorontalo
Jl. Prof. Dr. H. Mansoer Pateda Desa Pentadio Timur, Kec. Telaga Biru, Kab. Gorontalo 2 Stasiun Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan Gorontalo Jl. Achmad Nadjamudin No.20, Kota Gorontalo *e-mail: dewishintaachmad@umgo.ac.id

## ABSTRAK
Kerapu  (Famili  Serranidae)  merupakan  salah  satu  inang  betanodavirus. Betanodavirus dapat menginfeksi spesies di iklim tropis, subtropis, atau dingin. Hal ini menjadi perhatian utama karena telah dilaporkan menginfeksi berbagai ikan laut, baik ikan budidaya maupun ikan liar. Penyakit yang disebabkan oleh virus ini biasa dikenal dengan Viral Nervous Necrosis (VNN) atau Viral Encephalopathy and Retinopathy (VER). Penyakit VNN ini ditandai dengan nekrosis vakuolar sel yang ditemukan di otak, retina, dan sumsum tulang belakang, dapat menyebabkan kematian hingga 100% pada larva dan juvenil serta dapat menyebabkan kerugian yang signifikan pada ikan yang lebih tua. Ikan yang  terinfeksi,  baik  yang  liar  maupun  yang  dibudidayakan,  dapat  bertindak  sebagai reservoir (tempat bersarang dan berkembang biaknya virus) dan dapat menjadi sumber infeksi  bagi  spesies  yang  dibudidayakan.  Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  metode  deskriptif.  Pengujian  VNN  pada  ikan  kerapu  dengan  mengambil  organ target  (otak  dan  mata)  kemudian  difiksasi  dalam  etanol  95%,  selanjutnya  dilakukan pengujian  PCR  secara  konvensional  di  Laboratorium  Virologi.  Hasil  yang  didapat  dari pengujian  VNN  pada  ikan  kerapu  ekor  bulan  (Variola  sp.)  adalah  ikan  tersebut  dapat terinfeksi VNN tanpa menunjukkan gejala klinis. Hasil ini ditunjukkan pada sampel yang berasal  dari  Teluk  Tomini  dan  sampel  yang  berasal  dari  Teluk  Kwandang.  Tingkat prevalensi VNN dari Teluk Tomini lebih tinggi jika dibandingkan prevalensi dari Teluk Kwandang, selain itu ditemukam infeksi cacing Philometra sp. pada gonad ikan dari kedua perairan. Infeksi VNN pada ikan kerapu ekor bulan tidak berasosiasi dengan serangan cacing Philometra sp.
Kata Kunci: Betanodavirus, Kerapu, PCR, VNN

## ABSTRACT
Grouper (Family Serranidae) is one of the betanodavirus hosts. Betanodaviruses can infect species in tropical, subtropical or cold climates. This is a major concern because it has been reported to infect a variety of marine fish, both farmed and wild fish. The disease caused by this virus is commonly known as Viral Nervous Necrosis (VNN) or Viral Encephalopathy and Retinopathy (VER). This VNN disease is characterized by vacuolar necrosis of cells found in the brain, retina and spinal cord, can cause up to 100% mortality in larvae and juveniles and can cause significant losses in older fish. Infected fish, both wild and farmed, can act as
reservoirs (nesting sites and breeding grounds for viruses) and can be a source of infection for farmed species. The method used in this research is descriptive method. VNN testing on groupers by taking target organs (brains and eyes) and then fixed with 95% ethanol then carrying out conventional PCR testing at the Virology Laboratory. The results obtained from VNN testing on Lunar-Tailed grouper (Variola sp.) are that these fish can be infected with VNN without showing clinical symptoms. These results are shown in samples originating from Tomini Bay and samples originating from Kwandang Bay. The prevalence rate of VNN from  Tomini  Bay  was  higher  than  the  prevalence  from  Kwandang  Bay,  in  addition, Philometra  sp.  worm  infection  was  found.  on  the  gonads  of  fish  from  both  waters.  VNN infection in Lunar-Tailed grouper is not associated with Philometra sp. worm attack.
Keywords: Betanodavirus, Grouper, PCR, VNN

## PENDAHULUAN
Ikan  Kerapu  yang  dalam  dunia internasionalnya  biasa  disebut  dengan nama  grouper  ataupun coral  reef  fish merupakan  tipe  ikan  yang  biasa  hidup  di perairan  terumbu  karang  (Sajriawati  & Amir,  2019).  Menurut  (Achmad  et  al., 2018)  stok  ikan  kerapu  di  sebagian perairan  di  Indonesia  sudah  menghadapi penyusutan  populasi.  Penanda  yang  bisa menggambarkan penyusutan stok ini yaitu menyusutnya  dimensi  serta  jumlah  hasil tangkapan.  Aspek  yang  menimbulkan penyusutan  stok  ikan  kerapu  antara  lain disebabkan  aktivitas  penangkapan  yang besar, utamanya pemakaian perlengkapan tangkap yang bisa merusak dan menurunnya  daya  dukung  lingkungan (Prasetya, 2014).
Ikan  kerapu  di  perairan  Provinsi Gorontalo  saat  ini  termasuk  yang terdampak tekanan kegiatan penangkapan dan  degradasi  kualitas  lingkungan.  Salah
satu faktor penting yang dapat mempengaruhi  kualitas  suatu  lingkungan perairan  adalah  suhu.  Perubahan  iklim global  yang  disebabkan  oleh  pemanasan global  dapat  memicu  kenaikan  suhu permukaan  air  laut.  Kenaikan  suhu permukaan air laut dapat memberikan efek buruk  bagi  terumbu  karang  yaitu pemutihan terumbu karang ( coral bleaching ) yang berakibat matinya terumbu  karang.  Banyaknya  terumbu karang  yang  mati  selanjutnya  juga  akan mempengaruhi  ikan  maupun  ekosistem terumbu karang  (Faiqoh et al., 2019).
Pada  dasarnya  wabah  penyakit dapat  timbul  apabila  kualitas  lingkungan kurang  baik,  sehingga  menjadi  penyebab stress  pada  ikan  (Novriadi  et  al.,  2014). Salah satu penyakit yang biasa menyerang ikan  kerapu  adalah  virus  dari  golongan betanodavirus.  Penyakit  yang  disebabkan oleh  virus  ini  umumnya  dikenal  sebagai Viral  Nervous  Necrosis (VNN)  atau Viral
Encephalopati  and  Retinopati (VER)
(Yanong,  2019).  Secara  keseluruhan, betanodavirus  telah  terdeteksi  pada  lebih dari  160  spesies  ikan  dan  beberapa moluska,  baik  sebagai  inang  yang  rentan yaitu inang yang menunjukkan gejala klinis dan dampak yang signifikan saat terinfeksi, maupun  sebagai    inang  pembawa  yang biasanya tidak menunjukkan gejala (Toffan & Panzarin, 2020).
Menurut  Bandín  &  Souto  (2020), sebaran  VNN  di  perairan  laut  di  Asia Tenggara  dan  Australia  adalah  dari  jenis Red-spotted Grouper Nervous Necrosis Virus (RGNNV). Selama ini identifikasi VNN yang dilakukan  sering  terbatas  pada  beberapa jenis ikan laut yang dibudidayakan seperti identifikasi  VNN  pada  Kerapu  Macan (Kurniawati  et  al.,  2019),  Kerapu  Hibrida (Kerapu  Cantang  dan  Cantik),  Ikan  Kakap putih  (Sembiring  et  al.,  2018)  Ikan  Nila (Prihartini,  2016),  maupun  berbagai  jenis ikan laut maupun tawar lainnya  (Bandín & Souto,  2020).  Sedangkan  pengujian  VNN pada Ikan kerapu ekor bulan ( Variola sp.) belum  pernah  dilakukan.  Selain  itu, penyakit  VNN  dapat  menyebabkan  gejala klinis seperti rusaknya jaringan mata, otak, warna  tubuh  yang  pucat  ataupun  gelap (Sembiring et al., 2018) ; (Bandín & Souto, 2020),  peradangan  pada  otot  jantung dan limpa  (Sudaryatma  &  Tri  Lestari,  2014) sehingga dapat menurunkan kualitas mutu
ikan hasil tangkapan. Padahal Ikan kerapu ekor  bulan  sering  ditangkap  nelayan  dan diperjual-belikan  oleh  masyarakat  di wilayah  Gorontalo.  Di  negara-negara tertentu  seperti  Maladewa  dan  India  ikan ini dijual secara lokal maupun diekspor dan juga diperdagangkan sebagai ikan akuarium dan perdagangan makanan ikan hidup (Nair, 2018).

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan tempat
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan Oktober 2022. Jumlah lokasi penelitian ini yaitu sebanyak 2 lokasi. Lokasi I berada di TPI Tenda, Kota Gorontalo yang merupakan  tempat  bersandarnya  kapal perikanan yang berasal dari Perairan Teluk Tomini. Sedangkan Lokasi II adalah di TPI Kwandang,  Kabupaten  Gorontalo  Utara yang  merupakan  tempat  bersandarnya kapal  perikanan  dari  Perairan  Teluk Kwandang, Laut Sulawesi. Adapun pengujian VNN dilaksanakan di Laboratorium  Virologi  Stasiun  Karantina Ikan,  Pengendalian  Mutu  dan  Keamanan Hasil Perikanan Gorontalo. Lokasi penelitian dapat dilihat di Gambar 1.

## Metode Pengujian VNN
Pengujian  VNN  dilakukan  dengan metode Polymerase  Chain  Reaction (PCR) secara konvensional. PCR termasuk teknik melipat  gandakan  bagian  fragmen  DNA yang terdapat dalam komplek makromolekul  genom  dari  berbagai organisme  yang  berasal  dari  hewan, tumbuhan, bakteri, maupun virus sehingga menjadi sebanyak 2 n kali lipatnya  dengan bantuan  enzim  tertentu.  Teknologi  ini memiliki  tingkatan  sensitifitas  yang lumayan  baik  dan  hanya  membutuhkan sebagian  kecil  contoh  DNA  saja  untuk memperoleh  jutaan  kopi  DNA  baru (Budiarto, 2015).
Adapun  tahapan  pengujian  VNN  di SKIPM Gorontalo adalah sebagai berikut:
Langkah  pertama  yaitu  mengambil ikan  sampel.  Sampel  yang  diambil  dari perairan  Gorontalo  berasal  Teluk  Tomini dan  Teluk  Kwandang  pada  bulan  Oktober 2022. Pengambilan sampel ikan dari Teluk Tomini  dilakukan  di  TPI  Tenda,  Kota Gorontalo,  sedangkan  sampel  ikan  dari Teluk  Kwandang  diambil  dari  TPI Kwandang,  Kabupaten  Gorontalo  Utara. Jenis ikan kerapu ekor bulan yang diambil terdiri dari dua spesies yang berbeda yaitu Variola  albimarginata dan Variola  louti . Ikan  yang  diambil  sebagai  sampel sebaiknya  adalah  ikan  yang  memiliki tanda-tanda  visual  seperti  warna  pucat,
Gambar 1. Lokasi Penelitian (Data ESRI Image diolah dengan QGIS)
gelap  atau  yang  mengalami  kerusakan pada  mata.  Jika  tidak  didapatkan,  maka diambil  sampel  secara  sampling.  Sampel yang  sudah  diperoleh  kemudian  diambil organ  mata  dan  otaknya  dan  dimasukkan ke dalam larutan fiksatif Ethanol 95%.
Langkah  kedua  adalah  melakukan ekstraksi  sampel  yang  bertujuan  untuk memurnikan  DNA/RNA.  Ekstraksi  sampel menggunakan metode Silica Extraction Kit (GeneReach Biotecnology Corp, Taiwan).
Langkah  ketiga  adalah  amplifikasi DNA. Amplifikasi bertujuan memperbanyak  fragmen  DNA  secara eksponensial  sehingga  lebih  mudah dideteksi.  Amplifikasi  DNA  dilakukan dengan menggunakan alat Thermal Cycler TC Plus (TEHNE).
Langkah keempat adalah elektroforesis. Elektroforesis berarti perpindahan  molekul-molekul  bermuatan di  dalam  medan  yang  dialiri  listrik (Rohmana  et  al.,  2016)  yang  diawali dengan mempipetkan hasil amplikasi DNA ke dalam medium agarose yang kemudian diberi  aliran  listrik,  sehingga  setiap molekul  yang  mengandung  DNA  tersebut mengarah ke kutub positif ataupun kutub negatif  tergantung  pada  muatannya.  Tiap molekul  yang  bermuatan  negatif  akan berpindah  menuju  kutub  positif  (anoda), sebaliknya,  molekul  bermuatan  positif akan  bergeser  ke  kutub  negatif  (katoda).
Durasi perpindahan elektroforesis dipengaruhi  oleh  panjang-pendeknya  pita DNA.  Artinya  jika  pita  DNA  semakin panjang,  maka  proses  yang  dibutuhkan semakin lama.
Langkah terakhir adalah interpretasi hasil.  Tahap  ini  merupakan  tahap identifikasi VNN dengan menggunakan alat UV  Transilluminator (UVITEC  Essential V6).  Hasil  uji  VNN  dinyatakan  positif apabila menunjukkan 230 bp (Kurniawati et al., 2019); (Nurlita et al., 2020) dengan cara  mengecek band (pita) yang  terletak sejajar  degan  garis  kontrol  positif  (DNA dari  VNN),  namun  jika  tidak  muncul  pita ( band ) pada  sampel  yang  diuji  tersebut maka  negatif  VNN.  Setelah  selesai identifikasi, maka dihitung jumlah prevalensi  VNN  pada  ikan.  Perhitungan nilai  prevalensi  menurut  Sembiring  et  al., (2018) adalah:
Jumlah terinfeksi Penyakit Prevalensi = x100 %

## Jumlah sampel

## Analisis Data
Data  yang  diperoleh  pada  saat penelitian  ini  akan  dianalisis  secara deskriptif. Penelitian deskriptif ini dimaksudkan  untuk  menjelaskan  sebuah kondisi suatu objek, menentukan frekuensi kemunculan sesuatu, memilah-milah informasi,  serta  untuk  mengungkap  fakta yang ditemui ( fact finding ). Hasil riset lebih
ditekankan  pada  pemberian  cerminan secara objektif tentang keadaan sesungguhnya  dari  objek  yang  diteliti, kemudian  menginterpretasikan  hasilnya sebaik mungkin (Raihan, 2017).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  pengujian  VNN  dengan metode  PCR  pada  total  22  sampel  ikan kerapu  ekor  bulan  yang  terdiri  dari  12
sampel  berasal  dari  TPI  Tenda  (Teluk Tomini)  dan  10  sampel  berasal  dari  TPI Kwandang (Teluk Kwandang) menunjukkan bahwa sebanyak 3 ekor ikan yang positif terinfeksi VNN (2 sampel yang positif  VNN  berasal  dari  TPI  Tenda  dan  1 sampel  positif  VNN  dari  TPI  Kwandang),
sedangkan 19 ekor lainnya hasilnya negatif VNN.  Hasil  Pengujian  PCR  pada  ikan  dari Teluk  Tomini  dan  Teluk  Kwandang  dapat dilihat pada Gambar 2 dan Gambar 3.
Setelah diketahui jumlah sampel yang terinfeksi, selanjutnya dihitung Prevalensi VNN.  Hasil  dari  perhitungan  prevalensi diperoleh  prevalensi  serangan  VNN  pada sampel ikan kerapu yang berasal dari Teluk Tomini  adalah  sebanyak  16,66  %.
Sedangkan  prevalensi  VNN  pada  sampel yang  berasal  dari  Teluk  Kwandang  yaitu sebesar 10 %. Tingkat prevalensi VNN yang diperoleh  pada  ikan  kerapu  yang  berasal dari Teluk Tomini lebih tinggi dibandingkan  ikan  kerapu  yang  berasal dari Teluk Kwandang.
Gambar 2. Hasil uji PCR sampel dari Teluk Tomini Keterangan Gambar 2: M : Marker (garis tanda) 100 bp (+) : Kontrol positif DNA VNN (-) : Kontrol negatif 1,4 : Sampel uji positif VNN 2-3 : Sampel uji negatif VNN 5-12 : Sampel uji negatif VNN
Apabila  dilihat  dari  gejala  klinis, hanya ada 1 ekor ikan yang memiliki gejala klinis  terserang  VNN,  yakni  gejala  pucat pada  seluruh  tubuhnya  yakni  sebanyak  1 ekor  menunjukkan  hasil  positif  saat  diuji VNN.  Sementara  itu,  sebanyak  21  ekor sampel  lainnya  tidak  menunjukkan  gejala klinis  terinfeksi,  namun  2  diantaranya menunjukkan  hasil  positif  saat  diuji  VNN.
Pada  saat  pemeriksaan  gejala  klinis  pada gelembung  renang  dan  ginjal  pada  ikan, tidak  terlihat  tanda-tanda  klinis  yang abnormal secara visual seperti mengalami pembengkakan  atau  kerusakan  organ. Namun  hal  yang  menarik,  pada  saat pemeriksaan  gonad  pada  ikan  ditemukan infeksi  cacing  pada  4  ekor  ikan.  Parasit cacing  menginfeksi  2  ekor  ikan  dari  TPI
Keterangan Gambar 3:
M : Marker (garis tanda) 100 bp
(+) : Kontrol positif DNA VNN (-) : Kontrol negatif 1-3 : Sampel uji negatif VNN 4 : Sampel uji positif VNN
5-10 : Sampel uji negatif VNN Gambar 3. Hasil uji PCR sampel dari Teluk Kwandang
Gambar 4a. Infeksi cacing pada gonad  ikan 4b. Cacing Philometra sp. dengan panjang ± 13 cm
b C a C
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(3): 99-108, Desember 2022
Tenda dan 2 ekor dari TPI Kwandang. Dari sebanyak  4  ikan  yang  terinfeksi  cacing, spesies  ikan  kerapu Variola  louti merupakan yang jenis yang paling banyak terserang  yaitu  sebanyak  3  ikan. Sedangkan  1  ekor  lainnya  yang  terserang cacing  adalah  Ikan  kerapu Variola albimarginata .  Jumlah  parasit  pada masing-masing ikan adalah 1 individu/ekor. Infeksi  cacing  pada  gonad ikan kerapu ekor bulan ( Variola sp.) dapat dilihat pada Gambar 4.
Setelah dilakukan identifikasi parasit, jenis  cacing  yang  menginfeksi  adalah cacing Philometra sp. Cacing Philometra sp. adalah  cacing  dari  Filum  Nematoda  yang sering  menginfeksi  gonad    ikan  laut
(Rasheed,  1963);  (Moravec  et  al.,  2017) juga  menginfeksi  pada  mata  dan  gonad ikan  kerapu Variola  louti (Dewi  &  Palm, 2013).      Berdasarkan  hasil  pengamatan, infeksi Philometra sp.  pada  ikan  tidak berasosiasi  terhadap  infeksi  VNN.  Hal  ini dibuktikan  dengan  adanya  sampel  yang tidak  terinfeksi  cacing  dan  tidak  memiliki gejala  klinis,  yaitu  17  sampel  ikan  yang justru  2  diantaranya  terinfeksi  VNN. Perbandingan  hasil  pengujian  penyakit pada  masing-masing  perairan  Gorontalo dapat dilihat di grafik pada Gambar 5.

## KESIMPULAN
Hasil  yang  didapat  dari  pengujian VNN pada ikan kerapu ekor bulan ( Variola
Gambar 5. Grafik Hasil Pengujian Penyakit
sp.)  adalah  ikan  kerapu  ekor  bulan  dapat terinfeksi  VNN  tanpa  menunjukkan  gejala klinis.  Hasil  ini  bukan  saja  ditunjukkan pada  sampel  yang  berasal  dari  Teluk Tomini, namun juga pada ikan sampel yang berasal  dari  Teluk  Kwandang.  Tingkat prevalensi  VNN  dari  Teluk  Tomini  lebih tinggi  jika  dibandingkan  prevalensi  dari Teluk  Kwandang.  Terdapat  infeksi  cacing Philometra sp.  pada  gonad  ikan  kerapu ekor bulan yang berasal dari Teluk Tomini maupun teluk Kwandang. Infeksi VNN pada ikan  kerapu  ekor  bulan  tidak  berasosiasi dengan serangan cacing Philometra sp.

## DAFTAR PUSTAKA
Achmad,  D.,  Alam  Ali,  S.,  &  Yusran  Nur Indar.  (2018).  Potensi  Lestari  Ikan Kerapu di Teluk Kwandang Kabupaten Gorontalo Utara
Maximum  Suistainable  Yield  of Grouper  in. Prosiding  Simposium Nasional  Kelautan  Dan  Perikanan  V , 127 – 134.
Bandín, I., & Souto, S. (2020). Betanodavirus and VER disease: A 30- year  research  review.  In Pathogens (Vol.  9,  Issue  2).  MDPI  AG. https://doi.org/10.3390/pathogens 9020106
Budiarto,  B.  R.  (2015).  Polymerase  Chain Reaction (PCR) : Perkembangan  dan Perannya dalam Diagnostik Kesehatan. BioTrends , 6 (2),  29 – 38. http://www.scienceguardian.com/bl og/a-
Dewi,  K.,  &  Palm,  H.  W.  (2013).  Two  New Species  of  Philometrid  Nematodes (Nematoda: Philometridae) in
Epinephelus coioides (Hamilton, 1822)  from  the  South  Bali  Sea, Indonesia. Zootaxa , 3609 (1),  49 – 59. https://doi.org/10.11646/zootaxa.3 609.1.3
Faiqoh,  Elok.,  I  Wayan  G.A.K  &  Dwi  Budi Wiyanto (2019). Dampak Pemutihan Karang  Keras  pada  Komunitas  Ikan Karang  dan  Makrozoobenthos  di Wilayah Perairan Tejakula, Buleleng, Bali. Rekayasa: Journal of Science and Technology, 12(1): 24-29
Kurniawati,  M.  D.,  Sumaryam,  &  Nurul Hayati.  (2019).  Aplikasi  Polymerase Chain  Reaction  (PCR)  Konvensional dan  Real  Time-PCR  untuk  Deteksi Virus  VNN  ( Viral  Nervous  Necrosis ) pada Ikan Kerapu Macan
( Epinephelus  fuscoguttatus ). Jurnal TECHNO-FISH , 3 (1).
Moravec, F., Chaabane, A., Neifar, L., Gey, D.,
&  Justine,  J.-L.  (2017).  Species  of Philometra ( Nematoda, philometridae )  from  Fishes  Off  the Mediterranean Coast of Africa, with a Description  of Philometra rara n. sp. from Hyporthodus  haifensis and  a Molecular  Analysis  of Philometra saltatrix from Pomatomus  saltatrix . Parasite ,
24 (8), 1 – 12. https://doi.org/10.1051/para
Nair,  R.  J.  ,  A.  S.  C.  M.  S.  (2018). IUCN.UK.2018- 2.RLTS.T132738A100572909.en.2vari olalouti . https://doi.org/ttp://dx.doi.org/10. 2305/IUCN.UK.2018-
2.RLTS.T132738A100572909.en
Novriadi,  R.,  Agustatik,  S.,  Hendrianto,  H., Pramuanggit,  R.,  &  Wibowo,  A.  H. (2014). Penyakit Infeksi Pada Budidaya  Ikan  Laut  di  Indonesia .
Kementerian Kelautan dan Perikanan
Direktorat
Jenderal Perikanan Budidaya  Direktorat  kesehatan  Ikan dan Lingkungan.
Jurnal Ilmu Perikanan dan Kelautan, Vol. 4(3): 99-108, Desember 2022
https://www.researchgate.net/publi cation/292477034
Nurlita,  W.,  I  Gde  Suranaya  Pandit,  &  Ni Made  Darmadi.  (2020).  Detection  of The  Existence  of  Viral  Nervous Necrosis  on  Fry  Cantang  Grouper  at Rain  Season. SEAS  (Sustainable Environment  Agricultural  Science) ,
4 (1), 46 – 52.
https://doi.org/10.22225/seas.4.1.1
687.46-52
Prasetya,  R.  (2014).  Laju  Eksploitasi
Sumberdaya Ikan Kerapu di PERAIRAN Teluk Lasongko, Kabupaten Buton, Sulawesi Tenggara. AquaMarine (Jurnal FPIK UNIDAYAN) ,
2 (1), 1 – 10.
Prihartini,  N.  C.  (2016).  Distribusi Pathognomik  Virulensi  VNN  pada Benih Nila ( Oreochromis sp. Samakia: Jurnal Ilmu Perikanan , 7 (2), 51 – 56.
Raihan,  R.  (2017). Metodologi  Penelitian . Universitas Islam Jakarta.
Rasheed, S. (1963). A Revision of the Genus Philometra Costa, 1845. In Journal of Helmintkology .
Rohmana,  A.,  Fuad,  M.,  Ulfin,  I.,  & Kurniawan,  F.  (2016).  Penggunaan Agar-agar  Komersial  sebagai  Media Gel  Elektroforesis  Pada  Zat  Warna Remazol: Pengaruh Komposisi Buffer, pH  Buffer  dan  Konsentrasi  Media. JURNAL  SAINS  DAN  SENI  ITS , 5 (2), C130 – C133.
Sajriawati,  S.,  &  Amir,  A.  (2019).
Identification Fishing Gear of Groupers  Environmentally  Friendly,
in Gusung Island Selayar Archipelago Regency. Musamus  Fisheries  and Marine Journal , 1 – 10. https://doi.org/10.35724/mfmj.v2i1 .1765
Sembiring,  S.  B.  M.,  Gigih  Setia  Wibawa, Ketut Mahardika, Zeny  Widiastuti,  & Haryanti.  (2018).  90  Prevalensi Infeksi Viral Nervous Necrosis (VNN) dan  Iridovirus  pada  Hatcheri  dan Budidaya
Ikan Laut. Media
Akuakultur , 13 (2), 83.
Sudaryatma, P. E., & Tri Lestari, A. (2014). Imunohistokimia  Patogenitas  Viral Nervous  Necrosis  Isolat  Lapang  Bali yang  Diinfeksikan  pada  Kerapu Macan Budidaya (Imunohistochemistry of Pathogenicity Viral Nervous Necrosis Bali Field Isolate are Infected in Tiger Grouper  Marine  Culture). ACTA VETERINARIA  INDONESIANA , 2 (2), 54 – 61. http://www.journal.ipb.ac.id/indeks. php/actavetindones
Toffan,  A.  P.  v.  (2020).  6.  Viral
Encephalopathy and Retinopathy/Viral  Nervous  Necrosis (VER/VNN). Options
Méditerranéennes , B (75),  45 – 60. http://om.ciheam.org/article.php?ID PDF=00007939http://www.ciheam. org/http://om.ciheam.org/
Yanong,  R.  P.  E.  (2019). Viral  Nervous Necrosis (Betanodavirus) Infections in Fish 1 . https://edis.ifas.ufl.edu