Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 4 No. 1 April 2018 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X

## Pengaruh Waktu Penyimpanan Pliek U Terhadap Pertumbuhan Aspergillus Flavus

## The Effect of Storage Time of Pliek U on Aspergillus Flavus Growth
Vera Novalia* 1 , Risa Nursanty 2 , Cut yulvizar 3
1 Program Studi Farmasi, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Ubudiyah Indonesia, Banda Aceh
2,3 Bagian Mikrobiologi, FMIPAUniversitas Syiah Kuala, Banda Aceh
* Korespondensi Penulis: taniaveranovalia@gmail.com

## Abstrak
Pliek  u adalah  salah  satu  produk  fermentasi  tradisional  dari  Aceh  yang  digunakan  sebagai bumbu  utama  kuah pliek  u dan  rujak. Pliek  u ini  dibuat  dari  daging  buah  kelapa  yang difermentasi  secara  alami.Kebiasaan  masyarakat  menyimpan pliek  u dalam  waktu  yang  lama berpeluang  terjadinya  kontaminasi  oleh  kapang.Salah  satu  kapang  yang  mengontaminasi makanan  pada  saat  pasca  panen  dan  pengolahan  adalah Aspergillus  flavus. Tujuan  penelitian ini  adalah  untuk  mengetahui  persentase Aspergillusflavus dan  kandungan  aflatoksinyang terdapat  dalam pliek  u. Penelitian  ini  menggunakan  metode  deskriptif  yaitu  berdasarkan lamanya  waktu  penyimpanan pliek  u yaitu  berkisar  antara  7-10  hari,  2-5  minggu,  6-9  bulan dan  12-15  bulan.  Tiap-tiap  sampel  diambil  secara  populasi.Hasil  penelitian  menunjukkan persentase Aspergillus  flavus pada  lama  penyimpanan  7-10  hari  sebanyak  15,8%  dan  2-5 minggu sebanyak 39,6%. Sedangkan pada lama penyimpanan 6-9 bulan persentase Aspergillus flavus sebanyak  61,7%.  Akan  tetapi  pada  lama  penyimpanan  12-15  bulan  persentasenya mengalami  penurunan  yaitu  sebesar  23,6%.  Hasil  pengujian  sampel pliek  u yang  memiliki persentase Aspergillus flavus paling tinggi (61,7%) mengandung aflatoksin (ppb) yakni B1 < 0,5, B2 < 1, G1 < 0,5 dan G2 < 1.Pertumbuhan Aspergillus flavus tertinggi terdapat pada lama penyimpanan 6-9 bulan (61,7%) sedangkan yang terendah terdapat pada lama penyimpanan 7- 10  hari  (15,8%).  Sampel pliek  u pada  lama  penyimpanan  6-9  bulan  (61,7%)  memiliki kandungan aflatoksin (ppb) yakni B1 < 0,5, B2 <1, G1 <0,5 dan G2 < 1.
Kata kunci: pliek u, Aspergillus flavus , kapang, alfatoksin

## Abstract
Pliek  u  is  one  of  the  traditional  fermented  products  from  Aceh  which  is  used  as  the  main ingredient for pliek u and rujak. Pliek u is made from naturally fermented  coconut meat. The habit of people storing pliek u for a long time is likely to cause contamination by mold. One of the molds that contaminates food during post-harvest and processing is Aspergillus flavus.The aim of this research is to determine the percentage of Aspergillus flavus and aflatoxin content contained  in  pliek  u.This  study  uses  a  descriptive  method  that  is  based  on  the  duration  of storage  time,  which  ranges  from  7-10  days,  2-5  weeks,  6-9  months  and  12-15  months.  Each sample is taken as a population.The percentage of Aspergillus flavus at 7-10 days of storage was  15.8%  and  2-5  weeks  as  much  as  39.6%.  While  the  storage  time  is  6-9  months,  the percentage  of  Aspergillus  flavus  is  61.7%.  However,  the  storage  duration  of  12-15  months decreased by 23.6%. The results of testing of pliek u samples which had the highest percentage
e-ISSN : 2615-109X
of Aspergillus flavus (61.7%) contained aflatoxin (ppb), namely B1 <0.5, B2 < 1, G1 <0.5 and G2 <1. The highest growth of Aspergillus flavus was found in the storage time of 6-9 months (61.7%) while the lowest was found in the storage time of 7-10 days (15.8%). Plaque samples at storage time of 6-9 months (61.7%) had aflatoxin (ppb) content namely B1 <0.5, B2 <1, G1 <0.5 and G2 <1.
Keywords: pliek u, Aspergillus flavus, mold, aflatoxin

## PENDAHULUAN
Pliek  u adalah  salah  satu  produk  fermentasi  tradisional  dari  Aceh  yang  digunakan sebagai bumbu utama kuah pliek u dan rujak. Pliek u ini dibuat dari daging buah kelapa yang difermentasi secara alami (Feryna, 2006). Proses pembuatan pliek u membutuhkan waktu lebih kurang  dua  minggu,  hingga  selanjutnya  dapat  digunakan  untuk  bumbu masakan. Masyarakat memiliki  kebiasaan  menyimpan pliek  u untuk  dikonsumsi  dalam  jangka  waktu  lama  hingga satu setengah tahun.
Kebiasaan masyarakat menyimpan pliek u dalam waktu yang lama berpeluang terjadinya kontaminasi  oleh  kapang.Salah  satu  kapang  yang  mengontaminasi  makanan  pada  saat  pasca panen  dan  pengolahan  adalah Aspergillus (Sumartini  dan  Yusnawan,  2005). Aspergillus merupakan kapang yang memiliki arti ekonomi penting karena dapat menyerang berbagai jenis bahan pangan di penyimpanan seperti: biji-bijian, kopra, buah berdaging, makanan dan bumbu yang  diproses  (Kartasapoetra,  1994).  Beberapa  spesiesnya  dapat  menghasilkan  toksin  seperti Aspergillus flavus . (Syarief et al ., 2003)Pertumbuhan kapang pada bahan pangan dipengaruhi oleh  faktor  suhu  penyimpanan,  kandungan  nutrisi,  aktivitas  air  dan  pH.Bahan  pangan  yang disimpan  dalam  jangka  waktu  lama  dapat  mengakibatkan  perubahan  warna,  perubahan  cita rasa,  penurunan  nutrisi  dan  juga  dapat  menyebabkan  penyakit  jika  dikonsumsi  secara  rutin (Sediaoetama, 1999).
Beberapa  penelitian  melaporkan  bahwa Aspergillus memiliki  kemampuan  menyerang kopra . Pitt  and  Hocking  (1997),  melaporkan  pada  sampel  kopra  yang  berasal  dari  Thailand diserang Aspergillus  flavus sebesar  20%.  Hasil  penelitian  Safika  (2006),  menemukan  bahwa sampel pliek  u yang  diambil  dari  pasar-pasar  tradisional  di  Banda  Aceh  dan  Lhokseumawe telah terkontaminasi Aspergillus flavus sebesar 1-35 x 10 2 cfu/g.
Keberadaan  spesies Aspergillus merupakan  persyaratan  untuk  memperkirakan kontaminasi  mikotoksin  pada  bahan  pangan.  Menurut  Dirjen  Badan  Pengawas  Obat  dan Makanan  telah  menetapkan  batas  maksimum  kadar  aflatoksin  pada  bahan  makanan  atau
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 4 No. 1 April 2018 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
produk olahan yang diizinkan untuk dikonsumsi adalah 20 ppb (BBPOM, 2001).  Kandungan aflatoksin tidak akan hilang walaupun bahan pangan telah mengalami proses pengolahan baik direbus, digongseng maupun pemanasan (Supardi dan Sukanto, 1999). Selama ini belum ada informasi  mengenai  kontaminasi Aspergillus  flavus di  kabupaten  Pidie  sehingga  perlu dilakukannya penelitian ini.

## METODE PENELITIAN

## Subjek Penelitian
Subjek penelitian ini adalah Sampel yang digunakan untuk penelitian ini adalah pliek u yang umur penyimpanannya berkisar antara 7-10 hari, 2-5 minggu, 6-9 bulan dan 12-15 bulan. Sampel penelitian berasal dari masyarakat Kecamatan Sakti Kabupaten Aceh Pidie.

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  adalah  timbangan  (boeco),  gelas  kimia,  labu  erlenmeyer, tabung  reaksi  serta  raknya,  penyumbat  botol,  pipet  ukur,  gelas  ukur,  autoklaf,  cawan  petri, lampu  bunsen,  lup  inokulasi,  pH  meter,  penangas  (E.  G.  O),  jarum  Ose  bulat,  inkubator gallenkamp,  oven  (tested  midi/4/ss), colony  counter (stuar  scienttific),  dan  kaca  benda  dan mikroskop cahaya.
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah Pepton Dilution Fluid (PDF), Potato DextroseAgar (PDA), kloramfenikol, kapas, alkohol 70% dan akuadest.

## Rancangan Penelitian
Penelitian  ini  menggunakan  metode  deskriptif  yaitu  berdasarkan  lamanya  waktu penyimpanan pliek u yaitu berkisar antara 7-10 hari, 2-5 minggu, 6-9 bulan dan 12-15 bulan. Tiap-tiap  sampel diambil secara populasi.

## Prosedur Kerja

## 1. Sterilisasi Alat dan Bahan
Alat-alat  gelas  disterilkan  dalam  oven  pada  suhu  180 0 C  selama  2  jam  untuk disterilkan. Media  dan  larutan  pengencer  yang  telah  dibuat  sebelum  digunakan  dalam pengujian terlebih dahulu disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15 menit.
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 4 No. 1 April 2018 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X

## 2. Pembuatan Media
a. Media Pepton Dilution Fluid (PDF)
Sebanyak  25,5  g  media  PDF  dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer,  kemudian ditambahkan  1  liter  akuades  dan  dihomogenkan  selama  30  detik.  Selanjutnya  ditutup dengan  penyumbat  kapas  dan  disterilkan di  dalam  autoklaf  selama  15  menit  pada suhu 121 0 C.

## b. Media Potato Dextrose Agar (PDA)
Sebanyak  39  g  media  PDA  dimasukkan  ke  dalam  erlenmeyer,  kemudian ditambahkan 1 liter akuades dan dihomogenkan selama 30 detik. Lalu dipanaskan hingga mendidih.  Selanjutnya  ditutup  dengan  penyumbat  kapas  dan  disterilkan  dalam  autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15 menit.
c. Kloramfenikol
Dimasukkan  serbuk  kloramfenikol  sebanyak  100  mg/1  L  ke  dalam  media  PDA yang  telah  dibuat.  Media  PDA  yg  telah  mengandung  kloramfenikol  disterilkan  dalam autoklaf pada suhu 121 0 C selama 15 menit.
3. Uji Angka Kapang
a. Persiapan Sampel
Secara aseptik ditimbang 25 g sampel dan dimasukkan ke dalam erlenmeyer yang telah  berisi  225  ml  larutan  PDF,  dihomogenkan  sehingga  diperoleh  suspensi  dengan pengenceran  10 -1 .  Kemudian  dipipet  sebanyak  1  ml  dan  dimasukkan  ke  dalam  tabung reaksi yang telah berisi 9 ml larutan PDF sehinnga diperoleh pengenceran 10 -2 (BBPOM, 2000).
b. Inokulasi
Pada setiap pengenceran (10 -1 dan 10 -2 )  dipipet sebanyak 0,5 ml ke dalam cawan petri  yang  telah  berisi  media  PDA  dan  kloramfenikol,  kemudian  digoyangkan  sambil diputar  hingga  suspensi  tersebar  merata  dan  dibuat  duplo.  Selanjutnya  diinkubasi  pada suhu 20 0 C–25 0 C dan diamati pada hari ke-7..
c. Isolasi
Dilakukan  isolasi A.  flavus dengan  metode slide  culture (metode  Riddel)  untuk mengetahui bentuk morfologinya, yaitu: sepotong media PDA (6 mm x 6 mm x 2 mm) diletakkan  pada  bagian  tengah  kaca  obyek  steril  dan  tiap  sisinya  diinokulasi  dengan
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 4 No. 1 April 2018 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
koloni  kapang.  Kaca  penutup  steril  diletakkan  pada  bagian  atas  potongan  agar. Kemudian  dinokulasikan  di  dalam  cawan  petri  pada  sepotong  kertas  saring  lembab. Diamati  pada  hari  ke-3  dengan  menggunakan mikroskop  untuk  melihat  bentuk  vesikel, bentuk  permukaan  spora  dan  konidiofor  pada  pembesaran  10  x  100  (Gunawan et  al., 2006).
d. Interpretasi Hasil
Jumlah  koloni  yang  tumbuh  diamati  dan  dihitung  sesuai  dengan  petunjuk (BBPOM,  2000).Selanjutnya  dihitung  persentase  dari A.  Flavus dengan  mengamati warna koloni pada media agar. Perhitungan persentase menggunakan rumus berikut :
Persentase A. flavus : x 100%

## Pengujian Kandungan Aflatoksin
Sampel  yang  memiliki  persentase Aspergillus  flavus tertinggi  di  uji  kandungan aflatoksinnya di Laboratorium Tanah dan Tanaman SEAMEO BIOTROP, Bogor. Prinsip kerja untuk  pengujian  kandungan  aflatoksin  dalam  sampel  dilakukan  dengan  cara  diekstrak memakai  metanol  dan  dihilangkan  lemaknya  menggunakan  n-heksana.  Pemurnian  dilakukan memakai  kloroform  dan  dehidrasi  dilakukan  memakai  sodium  sulfat  anhidrat.  Selanjutnya identifikasi aflatoksin dilakukan memakai metode kromatografi lapis tipis.Data yang diperoleh dari penelitian ini dianalisis secara deskriptif.

## HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

## 1. Karakteristik Aspergillus flavus
Secara makroskopis koloni kapang yang tumbuh terlihat berwarna hijau kekuningan yang merupakan indikator adanya Aspergillus flavus (Gambar 1).
Koloni A. flavus Total  kapang
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 4 No. 1 April 2018 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
Gambar 1. Koloni kapang pada hari ke-7
Secara  mikroskopis  dengan  menggunakan  metode slide  culture . Aspergillus  flavus memiliki  struktur  seperti:  bentuk  konidia  bulat  berwarna  hijau  kekuningan,  fialida berbentuk  langsung  pada  metula,  vesikula  berbentuk  bulat  hingga  semibulat,  konidiofor berwarna terang seperti  yang terlihat pada Gambar 1.  Ini sesuai dengan identifikasiGanjar et al . (2000).
Gambar 2. Morfologi Aspergillus flavus pada pembesaran 10 x 100
Keterangan : a. Konidia    c. Metula
b. Fialida      d. Konidiofor
2.  Persentase Aspergillus flavus serta Kandungan Aflatoksin
a. Persentase Aspergillus flavus
Pliek u diperoleh dari masyarakat Desa Jeumpa Kecamatan Sakti Kabupaten Aceh Pidie. Hasil penelitian menunjukkan bahwa semua sampel pliek u ditumbuhi oleh Aspergillus flavus .
Tabel 1. Rata-rata hasil persentase Aspergillus flavus pada pliek u.
Lama penyimpanan Aspergillus flavus (%) 7-10 hari 15,8 2-5 minggu 39,6 6-9 bulan 61,7 12-15 bulan 23,6
Pada  Tabel1  dapat  diamati  bahwa  persentase Aspergillus  flavus pada  lama penyimpanan  7-10  hari  sebanyak  15,8%  dan  2-5  minggu  sebanyak  39,6%.  Sedangkan pada lama penyimpanan 6-9 bulan persentase Aspergillus flavus sebanyak 61,7%. Akan tetapi  pada  lama  penyimpanan  12-15  bulan  persentasenya  mengalami  penurunan  yaitu sebesar  23,6%. Sedangkan pada lama penyimpanan 12-15 bulan persentasenya sebesar
d a c a b a a a
Journal of Healthcare Technology and Medicine Vol. 4 No. 1 April 2018 Universitas Ubudiyah Indonesia e-ISSN : 2615-109X
3,3%.  Hasil  penelitian  tersebut  memperlihatkan  bahwa  semua  sampel  tercemari  oleh Aspergillus flavus .
Kondisi ini menunjukkan bahwa masyarakat kurang cermat dalam pengolahan dan proses  penyimpanan pliek  u .  Berdasarkan  Dharmaputra  (2004),  bahwa Aspergillus sangat berpotensi menyerang bahan pangan pada saat prapanen, pada waktu panen, atau selama penyimpanan. Proses penyimpanan dalam jangka waktu lama akan memberikan peluang yang lebih besar untuk tercemari oleh kapang dibandingkan penyimpanan dalam waktu pendek karena akan terjadi peningkatan suhu dan kelembaban.  Hal ini didukung oleh  penelitian  Kuswinanti  (2005),  bahwa  persentase  biji  kakao  yang  terinfeksi Aspergillus  flavus tertinggi  diamati  pada  masa  penyimpanan  3  bulan  sebesar  92% sedangkan terendah terdapat pada umur 2 bulan sebesar 88%.
Penurunan Aspergillus  flavus pada  lama  penyimpanan  12-15  bulan  tidak  dapat diketahui  dengan  pasti  apa  penyebabnya.  Kondisi  tersebut  diduga  karena  adanya  daya hambatan yang diberikan Aspergillus niger terhadap Aspergillus flavus . Hasil penelitian Dharmaputra et  al .  (2002)  menunjukkan  bahwa Aspergillus  niger yang  diperoleh  dari hasil  isolasi  di  areal  pertanaman  kacang  tanah  dapat  menghambat  pertumbuhan Aspergillus  flavus sebesar  80%  dan  juga  dapat  menurunkan  produksi  aflatoksin. Kemungkinan yang lain dapat juga dikarenakan oleh  aktivitas antimikroba yang dimiliki oleh pliek u . Hal ini didasarkan penelitian Nurliana et al. (2009), bahwa ekstrak etanol pliek  u berpotensi  sebagai  senyawa  antimikrobayang  dapat  menghambat  pertumbuhan Candida albicans, bakteri Gram Positif dan bakteri Gram Negatif. Menurut Pelczar dan Chan  (1986),  bahwa  antimikroba  dapat  menghambat  pertumbuhan  mikroba  melalui mekanisme  merusak  dinding  sel,  merubah  permeabilitas  membran  dan  menghambat sintesis asam nukleat serta protein.
b. Kandungan Aflatoksin
Sampel pliek  u yang  tertinggi  persentase Aspergillus  flavus diuji  kandungan aflatoksinnya.Sampel  tersebut  dikirim  ke  Laboratorium  Tanah  dan  Tanaman  SEAMEO BIOTROP, Bogor. Aspergillusflavus dapat menghasilkan aflatoksin yang berbahaya bagi kesehatan.Menurut  Fardiaz  (1999),  bahwa  jika  dikonsumsi  secara  terus  menerus walaupun  dosis  kecil  dapat  menyebabkan  kanker  hati.  Hasil  pengujian  sampel pliek  u yang  memiliki  persentase Aspergillus  flavus paling  tinggi  (61,7%)  mengandung
e-ISSN : 2615-109X
aflatoksin (ppb) yakni B1  < 0,5, B2 < 1, G1 < 0,5 dan G2 < 1. Hal ini juga ditemukan pada  penelitian,  bahwa  sebanyak  20  sampel  makanan  berbahan  baku  kacang  tanah  dan jagung  yang diperiksa 15 sampel (75%) mengandung aflatoksin B1 dengan konsentrasi berkisar antara 0,3 – 53,1 ppb.

## KESIMPULAN
1. Pertumbuhan Aspergillus  flavus tertinggi  terdapat  pada  lama  penyimpanan  6-9  bulan (61,7%) sedangkan yang terendah terdapat pada lama penyimpanan 7-10 hari (15,8%).
2. Sampel pliek u pada lama penyimpanan 6-9 bulan (61,7%) memiliki kandungan aflatoksin (ppb) yakni B1 < 0,5, B2 <1, G1 <0,5 dan G2 < 1.

## SARAN
Diharapkan  Masyarakat  lebih  teliti  dalam  memilih  wadah  dan  cara  penyimpanan  yang layak untuk pliek u sehingga tidak terdapat Aspergillus flavus .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Peneliti  mengucapkan  banyak  terima  kasih  kepada  Pihak  Dana  Hibah  Penelitian Program  Indonesia-Managing  Higher  Education  for  Relevance  and  Efficiency  (I-MHERE) DIKTI Tahun 2010 yang telah memberikan dana penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Feryna,  E.  N.  2006.  Variasi lama  pemanasan  dan  kosentrasi  bahan  pewangi  pada pembuatan minyak  kemenyan  dari  minyak pliek  u (minyak  kelapa  hasil  fermentasi  khas  aceh).
Skripsi. Fakultas Pertanian Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh.
Sumartini dan Yusnawan E. 2005. Upaya menghambat perkembangan Aspergillus flavus pada kacang tanah. Jurnal Litbang Pertanian. 24 (3): 109-112.
Kartasapoetra, 1994. TeknologiPenanganan Pasca Panen . Rineka Cipta, Jakarta.
Syarief, R., Ega L. dan Nurwitri C. C. 2003. Mikotoksin Bahan. IPB Press, Bogor.
Sediaoetama, A. D. 1999. Ilmu Gizi . Dian Rakyat, Jakarta.
Pitt,  J.  I.  and  Hocking  A.  D.  1997. Fungi  and  Food  Spoilage. Blackie  Acadamic  & Profesional, London
Safika,  2006.  Korelasi Aspergillus  flavus dan Aspergillus  parasiticus dengan  aflatoksin  pada pliek  u dan  ikan  kayu. Laporan  Penelitian  Dosen  Muda .  Kedokteran  Hewan Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh.
e-ISSN : 2615-109X
Anonimus,  2001. Keputusan  Dirjen  POM  Nomor:  05018/KBPOM/2001,  Batas  Maksimum Cemaran Mikroba dalam Makanan, Jakarta.
Supardi,  I  dan  Sukanto.  1999. Mikrobiologi  dalam  Pengolahan  dan  KeamananPangan . Adikarya Ikapi, Bandung.
Anonimus,  2000. Metode  Analisa  Nomor  69/MIK/00. Pusat  Pengujian  Obat  dan  Makanan Nasional (PPOMN), Jakarta
Gunawan,  A.  W.,  Dharmaputra  O.  S.,  Rahayu  G,  Sudirma  L,  Sukarno  N.  dan Listiyowowati S.  2006. Cendawan Dalam Praktik Laboratorium. IPB Press, Bogor.
Ganjar,  I.,  Samson  R.  A.,  Tweel-Vermulen  K.,  Oetari  A.  dan  Santoso  I.  2000. Pengenalan Kapang Tropik Umum . Yayasan Obor Indonesia, Jakarta.
Kuswinanti, T. 2005. Pengaruh lama penyimpanan terhadap keberadaan cendawan dan bakteri pasca panen pada biji kakao. Jurnal Sains dan Teknologi. 5 (3) : 154-157.
Dharmaputra,  O.  S.  2004 .  Cendawan  Perusak  Pascapanen .  Makalah  disampaikan  pada Pelatihan  Mikrobiologi  Dosen  Perguruan  Tinggi  Negeri  Se  Kalimantan  dan  Nusa Tenggara Barat. Bogor, 10-20 Agustus 2004.
Nurliana. 2009.  Sudarwanto M., Sudirman  L.  I., dan Sanjaya A. W., 2009. Prospek makanan tradisional  aceh  sebagai  makanan  kesehatan:  deteksi  awal  aktivitas  antimikroba minyak pliek u dan ekstrak kasar dari pliek u. Forum Pascasarjana 32 (10) : 1-10
Pelczar,  M.  J.  dan  Chan  E.  C.  S.  1986. Dasar-Dasar  Mikrobiologi .  Diterjemahkan  dari Elements of  Microbiology oleh R. S Hadioetomo, T. Imas, S. S. Tjitrosomo dan  S. L. Angka. UI-Press, Jakarta.
Fardiaz, S. 1999 . Analisis Mikrobiologi Pangan . Raja Grafindo Persada, Jakarta.