## Induksi Kalus dan Regenerasi Tiga Genotipe Tomat
( Solanum lycopersicon L.) melalui Kultur Antera
Callus Induction and Regeneration of Three Tomato Genotypes (Solanum lycopersicon L.) through Anther Culture
Ratna Ningsih 1 , Bambang S. Purwoko 2* , Muhamad Syukur 2 , dan Iswari S. Dewi 3
Diterima 31 Maret 2016/Disetujui 06 Juli 2016

## ABSTRACT
The aims of this research were to evaluate culture ability of 3 tomato genotypes through their androgenic  response  in  callus  induction  and  regeneration  media.  Completely  randomized  design with  factorial  arrangement  and  5  replications  were  used.  Treatments  consisted  of  three  genotypes (Tora,  Ratna  and  hybrid  variety  Permata),  six  callus  induction  media  in  the  first  phase  and  three genotypes  and  two  regeneration  media.  The  result  showed  that  hybrid  variety  Permata  had  the highest  anther  culture  ability  then  other  genotypes.  Permata  had  the  highest  percentage  of  callus induction  (27%)  followed  by  Tora  (14%)  and  Ratna  (12%).  The  highest  percentage  of  callus induction  was  shown  in  DBMI  +  5  mg  L -1 Kinetin  +  2  mg  L -1 NAA  media  (39.7%)  followed  by DBMII  +  1  mg  L -1 Kinetin  +  2  mg  L -1 NAA  media  (33.0%).  Both  genotypes  and  media  gave  low percentage  of  shoot  induction.  The  percentage  of  shoot  induction  in  hybrid  variety  Permata  was 4.2% while in Tora was 2.1% and Ratna was 0%. The percentage of shoot induction in MS + 25 mg L -1 Zeatin was 2.8% while in MS + 1 mg L -1 Zeatin + 0.125 mg L -1 IAA was 1.4%.
Keywords: androgenesis, auxin, cytokinine, in vitro, medium, tomato

## ABSTRAK
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  daya  kultur  antera  tiga  genotipe  tomat  melalui percobaan  induksi  pembentukan  kalus  dan  regenerasi  tunas.  Percobaan  dirancang  menggunakan Rancangan Acak Lengkap faktorial dengan lima ulangan. Bahan tanam yang digunakan ialah tomat varietas  Tora,  Ratna  dan  varietas  hibrida  Permata.  Media  yang  digunakan  adalah  6  media  induksi kalus  dan  2  media  regenerasi  tunas.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  tomat  varietas  hibrida Permata  memiliki  daya  kultur  antera  yang  lebih  baik  dibandingkan  genotipe  lainnya.  Permata memiliki  persentase  jumlah  kalus  27%  lebih  tinggi  dibandingkan  Tora  (14%)  dan  Ratna  (12%). Media yang paling baik menginduksi kalus adalah media DBMI + 5 mg L -1 Kinetin + 2 mg L -1 NAA (39%) dan DBMII + 1 mg L -1 Kinetin + 2 mg L -1 NAA (33%). Baik genotipe maupun media yang digunakan  menghasilkan  jumlah  tunas  yang  rendah.  Persentase  induksi  tunas  varietas  hibrida Permata  4.2%  lebih  tinggi  dibandingkan  Tora  (2.1%)  dan  Ratna  (0%).  Persentase  induksi  tunas media  MS  +  0.25  mg  L -1 Zeatin  (2.8%)  lebih  tinggi  dibandingkan  media  MS  +  1  mg  L -1 Zeatin  + 0.125 mg L -1 IAA (1.4%).
Kata kunci: androgenesis, auksin, in vitro , media, sitokinin, tomat

## PENDAHULUAN
Tomat  menempati  peringkat  ke  11 dalam 50 besar komoditas pertanian dunia dan menempati  peringkat  ke  8  di  Asia  (FAO,
2015).  Tomat  juga  termasuk  dalam  kategori buah  favorit  dunia  dengan  produksi  mencapai 60  juta  ton  tahun -1 melebihi  produksi  pisang, jeruk dan apel. Di Indonesia, tomat menempati peringkat  ke  lima  dalam  komoditas  sayuran
1 Program Studi Pemuliaan dan Bioteknologi Tanaman, Fakultas Pertanian, Sekolah Pascasarjana, Institut Pertanian Bogor (Bogor Agricultural University), Jl. Meranti, Kampus IPB Dramaga, Bogor 16680, Indonesia
2 Departemen Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian, Institut Pertanian Bogor (Bogor Agricultural University) Jl. Meranti Kampus Darmaga, Bogor 16680 Indonesia. Telp/ Faks. 62-251-8629353.
3 Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetika Pertanian, Jl. Tentara Pelajar No. 3 A Bogor, Indonesia email: bspurwoko@ipb.ac.id (*penulis korespondensi)
setelah kubis, kentang, cabai besar dan bawang merah  (Badan  Pusat  Statistik,  2013  dan
Direktorat Jenderal Hortikultura, 2011).
Produksi  tomat  nasional  masih  mengalami fluktuasi  sehingga  diperlukan  upaya  untuk meningkatkan  dan  menstabilkan  produksi. Salah satu  upaya yang dapat  dilakukan  adalah melalui penggunaan varietas unggul.
Varietas unggul dapat diperoleh melalui persilangan  tetua  galur  murni  dengan karakter unggul yang diinginkan, sehingga hibrida yang dihasilkan  memberikan  keuntungan  secara komersial  (Syukur et  al., 2012).  Umumnya galur  murni  diperoleh  melalui  persilangan yang  diikuti  oleh  serangkaian  seleksi  yang membutuhkan waktu lama, sehingga diperlukan  metode  yang  dapat  mempercepat perolehan  galur  murni.  Kultur  antera  dapat digunakan untuk mempersingkat siklus tersebut  karena  tanaman  dihaploid  yang dihasilkan  dapat  diperoleh  pada  generasi pertama.  Melalui  penggunaan  sistem  haploid waktu  yang  diperlukan  untuk  memperoleh galur  murni  dapat  dipercepat  menjadi  satu sampai dua generasi saja (Dewi dan Purwoko, 2011).
Antera  dan  mikrospora  memegang peranan yang penting dalam upaya peningkatan  produksi  (Harliani et  al., 2014;
Sudarmono  dan  Destri,  2013;  Kartikaningrum et  al., 2012).  Salah  satu  penggunaan  antera dalam  upaya  peningkatan  produksi  di  bidang pemuliaan  tanaman  adalah  melalui  kultur antera  untuk  mempercepat  perolehan  galur murni.  Penggunaan  kultur  antera  dalam program  pemuliaan  tomat  saat  ini  belum mendapat perhatian karena terbatasnya informasi  mengenai  kultur  antera  tomat  di Indonesia.  Berbagai  hasil  penelitian  kultur antera  tomat  yang  dilaporkan  dari  tahun  1972 hingga  2010  masih  terkait  respon  genotipe terhadap  kondisi  kultur  dan  kajian  mengenai faktor-faktor pembatas keberhasilannya (Motallebi-Azar,  2010;  Gresshoff  dan  Doy, 1972;  Sharp et  al., 1972).  Belum  ada  metode yang  stabil  hingga  saat  ini  disebabkan  karena besarnya  pengaruh  genotipe  yang  digunakan. Keberhasilan kultur antera tomat juga dipengaruhi oleh komposisi media kultur, fase perkembangan mikrospora (Seguì-Simarro dan Nuez,  2005),  kondisi fisiologi tanaman donor, pra  perlakuan  sebelum  kultur  (Motallebi-Azar dan Panahandeh, 2010), dan kondisi lingkungan  kultur.  Penelitian  ini  bertujuan
mengetahui  respon  tiga  genotipe  tomat  dalam kultur  antera  melalui  percobaan  induksi  kalus dan regenerasi tunas.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  dilaksanakan di  laboratorium Biologi  Sel  dan  Jaringan,  Balai  Besar Penelitian  dan  Pengembangan  Bioteknologi dan  Sumber  Daya  genetik  Pertanian  (BB Biogen), dan Rumah Kaca Cikeumeh,
Cimanggu,  Bogor  dari  bulan  April  2015 sampai April 2016.
Bahan  tanaman  yang  digunakan  adalah genotipe  Tora,  Ratna  (koleksi  Laboratorium Pemuliaan  Tanaman,  Departemen  Agronomi dan  Hortikultura,  IPB)  dan  genotipe  hibrida Permata  yang  diperoleh  dari  toko  pertanian. Media tanam yang digunakan terdiri atas enam media  induksi  kalus  dan  2  media  induksi tunas.  Media  induksi  kalus  yang  digunakan yaitu M1: DBMI + 5 mg L -1 kinetin + 2 mg L -1
NAA (Gresshoff dan Doy, 1972), M2: DBMII + 1 mg L -1 kinetin + 2 mg L -1 NAA (Gresshoff dan  Doy,  1972),  M3:  DBMIII  +  0.01  mg  L -1 kinetin +  5 mg  L -1 NAA (Gresshoff dan Doy,
1972), M4: MS + 1 mg L -1 2ip + 2 mg L -1 IAA
(Motallebi-Azar, 2010), M5: MS + 0.02 mg L -1
2.4-D  +  2  mg  L -1 kinetin  (Motallebi-Azar,
2010), dan M6: MS + 0.25 mg L -1 zeatin + 0.5 mg  L -1 IAA  (Zagorska et  al., 1998).  Media induksi tunas yang digunakan yaitu R1: MS + 1  mg  L -1 zeatin  +  0.125  mg  L -1 IAA (Motallebi-Azar, 2010) dan R2: MS + 0.25 mg L -1 zeatin  (Seguì-Simarro  dan  Nuez,  2007, 2005).

## Induksi  Pembentukan  Kalus  pada  Enam Media Kultur
Percobaan  1  dirancang  menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  dua  faktor.  Faktor pertama  yaitu  genotipe  yang  terdiri  atas  3 genotipe  (Tora,  Ratna,  dan  Permata).  Faktor kedua  yaitu  media  yang  terdiri  atas  6  media (M1,  M2,  M3,  M4,  M5,  dan  M6),  sehingga terdapat  18  kombinasi  perlakuan.  Tiap kombinasi  perlakuan  diulang  sebanyak  5  kali, sehingga  terdapat  90  satuan  percobaan.  Satu satuan percobaan adalah satu petri yang berisi 20 antera.
Kuncup yang berukuran 3 hingga 7 mm diambil  pada  pagi  hari  selama  25  hingga  30
hari  masa  berbunga  (Motallebi-Azar,  2010). Kuncup  yang  diambil  diberi  pra  perlakuan berupa penyimpanan pada suhu 5 0 C selama 48 jam  dalam  kondisi  gelap.  Kuncup  yang  telah diberi pra perlakuan selanjutnya disterilisasi di dalam Laminar  Air  Flow  Cabinet .  Kuncup direndam dalam larutan Clorox 20% selama 10 menit,  kemudian  dibilas  dengan  air  steril sebanyak  3  kali  dan  ditiriskan  pada  kertas saring steril. Antera kemudian dipisahkan dari kuncup  bunga  menggunakan  pinset  lalu diinokulasi pada petri yang berisi 10 ml media induksi kalus. Tiap petri berisi 20 antera yang berasal  dari  4  kuncup  bunga.  Petri  yang  telah berisi antera diinkubasi gelap selama 6 minggu pada  suhu  26  ±  2 0 C  kemudian  dipindahkan pada kondisi penyinaran 16/8 jam dengan suhu yang  sama.  Pengamatan  dilakukan  terhadap lamanya  inisiasi  kalus  dalam  Hari  Setelah Tanam (HST) dan jumlah kalus yang terbentuk. Data  primer  yang  diperoleh  digunakan  untuk menghitung  persentase  kalus  terhadap  jumlah antera.  Data  dianalisis  menggunakan  analisis ragam dan dilanjutkan dengan uji DMRT pada taraf  α=  5%  bila  terdapat  pengaruh  pada perlakuan.

## ( )
x 100%.

## Induksi  Pembentukan  Tunas  pada  Dua Media Regenerasi
Percobaan  2  dirancang  menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  dua  faktor.  Faktor pertama  adalah  kalus  dari  3  genotipe  (Tora, Ratna  dan  Permata)  yang  berasal  dari percobaan  1.  Faktor  kedua  adalah  media induksi tunas yang terdiri atas 2 media (R1 dan R2), sehingga terdapat 6 kombinasi perlakuan. Tiap  kombinasi  perlakuan  diulang  sebanyak  8 kali  sehingga  terdapat  48  satuan  percobaan. Satu  satuan  percobaan  adalah  satu  botol  yang berisi 3 kalus.
Kalus  dari  tiap  genotipe  yang  telah berukuran  2  mm  hingga  lebih  dipindahkan pada  media  induksi  tunas  R1  dan  R2  dan diinkubasi  pada  suhu  26  ±  2 0 C  dengan penyinaran  16/8  jam.  Pengamatan  dilakukan terhadap diameter kalus pada minggu ke-4 dan ke-6, lamanya inisiasi tunas dalam Hari setelah Tanam  (HST)  dan  jumlah  tunas.  Data  primer digunakan untuk menghitung persentase jumlah  tunas  terhadap  jumlah  kalus  dan pertambahan  diameter  kalus.  Data  dianalisis
menggunakan  analisis  ragam  dan  dilanjutkan dengan  uji  DMRT  pada  taraf  α=  5%  bila terdapat pengaruh pada perlakuan.
( )

## x 100%
Pertambahan  diameter  kalus  =  diameter  kalus minggu ke-6 diameter kalus minggu ke-4.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Induksi Pembentukan Kalus
Pembentukan  kalus  merupakan  salah satu  tahapan  dalam  pembentukan  tanaman pada  kultur  antera  tomat  (Motallebi-Azar, 2010;  Segui-Simarro  dan  Nuez,  2005)  yang juga  ditemukan  pada  berbagai  kultur  antera tanaman  seperti  cabai  (Muswita,  2003),  dan padi  (Safitri et  al., 2010;  Dewi et  al., 2009; 2007; Dewi dan Purwoko, 2001).

## Lamanya Inisiasi Kalus
Antera  ditanam  pada  petri  yang  berisi 10  ml  media,  kemudian  diinkubasi  gelap selama 6 minggu untuk menginduksi pembentukan  kalus  (Gambar  1a).  Kalus  yang terbentuk  pada  ketiga  genotipe  dan  media induksi  kalus  memiliki  morfologi  yang  sama. Kalus yang terbentuk berwarna putih kekuningan, transparan dengan struktur remah, kompak (Gambar 1b) dan lunak (Gambar 1c).
Gambar 1. Induksi pembentukan kalus. Inokulasi antera  pada  media  induksi  kalus  (a), struktur  kalus  kompak,  berwarna putih  (b),  struktur  kalus  lunak, transparan dan berwarna putih kekuningan (c)
a b c
Hasil analisis ragam (Tabel 1) menunjukkan  bahwa  hanya  media  yang mempengaruhi lamanya inisiasi kalus sedangkan genotipe maupun interaksi keduanya tidak mempengaruhi lamanya inisiasi kalus. Hasil yang diperoleh menunjukkan  bahwa  kalus  pertama  terbentuk setelah  kultur  diinkubasi  selama  26.4  hari (Tora)  dan  27.7  hari  (Ratna  dan  Permata) (Tabel  2).  Tidak  ada  perbedaan  yang  nyata dalam  inisiasi  kalus  antara  media  M1,  M2,
M3,  M4  dan  M5.  Kalus  pertama  terbentuk setelah kultur diinkubasi selama 25 hari,  yaitu terjadi  pada  media  M1  (DBMI  +  5  mg  L -1 kinetin  +  2  mg  L -1 NAA),  dan  kalus  paling lama  terbentuk  selama  28  hari,  yaitu  pada media  M2  (DBMI  +  5  mg  L -1 kinetin  +  2  mg L -1 NAA)  (Tabel  3).  Hal  ini  sejalan  dengan penelitian Motallebi-Azar (2010) dan Asoliman et  al. (2007)  bahwa  pembentukan kalus pada kultur antera tomat terjadi setelah 4 minggu atau 28 hari kultur.
Tabel  1.  Hasil  analisis  ragam  pengaruh  genotipe  dan  media  terhadap  jumlah  kalus,  diameter  kalus dan jumlah tanaman pada kultur antera tomat
Sumber Keragaman Percobaan 1 Percobaan 2 Kuadrat Tengah Lamanya Inisiasi Kalus Jumlah Kalus Diameter Kalus Jumlah Tunas Genotipe 39.80 tn 3.99 ** 0.45 tn 0.002 tn Media 27.79 ** 6.69 ** 0.03 tn 0.0008 tn Genotipe x Media 39.92 tn 0.61 tn 0.10 tn 0.0008 tn KK 17.08 17.94 23.56 7.12
Keterangan: **= sangat nyata pada taraf 95%, tn= tidak nyata.
Tabel  2.  Hasil  uji  DMRT  perbedaan  respon  jumlah  kalus  serta  nilai  rata-rata  Induksi  kalus  dan persentase jumlah kalus pada genotipe yang berbeda
Genotipe Lamanya Inisiasi Kalus (HST)* Jumlah Kalus Persentase Jumlah Kalus (%)* Tora 26.4 2.8 b 14.0 Ratna 27.7 2.4 b 12.0 Permata 27.7 5.5 a 27.3
Keterangan: *: Data tidak dianalisis statistik. Angka yang diikuti huruf yang berbeda pada kolom yang sama adalah berbeda nyata pada uji DMRT taraf 5%.
Tabel  3.  Hasil  uji  DMRT  perbedaan  respon  jumlah  kalus  serta  nilai  rata-rata  induksi  kalus  dan persen jumlah kalus pada media yang berbeda Media Induksi Kalus (M) Lamanya Inisiasi Kalus (HST) Jumlah Kalus Persentase Jumlah Kalus (%)* M1 25.0 a 7.9 a 39.7 M2 28.6 a 6.6 a 33.0 M3 27.4 a 3.2 b 16.0 M4 26.4 a 1.8 bc 9.0 M5 27.6 a 1.8 bc 9.0 M6 0.0 b 0.0 c 0.0
Keterangan: *: Data tidak dianalisis. Angka yang diikuti huruf yang berbeda pada kolom yang sama adalah berbeda nyata pada uji DMRT taraf 5%.

## Jumlah Kalus
Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan bahwa  pembentukan  kalus  hanya  terjadi  pada satu  bagian  antera,  yaitu  pada  daerah  bagian pangkal  antera,  sehingga  jumlah  kalus  sama dengan  jumlah  antera  yang  membentuk  kalus. Hasil  analisis  ragam  menunjukkan  bahwa genotipe dan media secara tunggal mempengaruhi  jumlah  kalus  yang  dihasilkan, sedangkan interaksi keduanya tidak mempengaruhi  jumlah  kalus  (Tabel  1).  Hasil yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  jumlah kalus  paling  tinggi  dihasilkan  oleh  genotipe Permata  sebesar  5.5  berbeda  nyata  dengan genotipe  Tora  dan  Ratna  yaitu  2.8  dan  2.4, sedangkan  jumlah  kalus  genotipe  Tora  dan Ratna  tidak  berbeda  diantara  keduanya  (Tabel
2).  Jumlah  kalus  yang  dihasilkan  oleh  media DBMI  +  5  mg  L -1 kinetin  +  2  mg  L -1 NAA (M1)  tidak  berbeda  nyata  dengan  DBMII  +  1 mg  L -1 kinetin  +  2  mg  L -1 NAA  (M2)  yaitu berturut-turut  7.9  dan  6.6,  namun  keduanya berbeda nyata dengan media lainnya. Perbedaan jumlah kalus antara genotipe tomat hasil kultur antera juga dilaporkan oleh Zamir et  al. (1980)  pada  genotipe  Person  dan  San Marzano,  masing-masing  45  dan  22  kalus. Farooq et  al. (2010)  juga  melaporkan perbedaan  jumlah  kalus  yang  dihasilkan  dari genotipe  Roma,  Maya  dan  Rio  Grande masing-masing 13, 20, dan 38 kalus.

## Efisiensi Pembentukan Kalus
Efisiensi pembentukan kalus dari setiap genotipe  yang  dikulturkan  pada  enam  media induksi  kalus  dinyatakan  dengan  persentase jumlah  kalus  terhadap  jumlah  antera.  Hasil yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  genotipe Permata memiliki efisiensi pembentukan kalus paling  tinggi  yaitu  sebesar  27%,  kemudian genotipe Tora  14%  dan Ratna  12%  (Tabel 2). Efisiensi  pembentukan  kalus  paling  tinggi dihasilkan  oleh  media  DBMI  +  5  mg  L -1 kinetin + 2 mg L -1 NAA (M1) dan DBMII + 1 mg L -1 kinetin + 2 mg L -1 NAA (M2) berturut- turut sebesar 39.7% dan 33% (Tabel 3). Media DBMI  +  5  mg  L -1 kinetin  +  2  mg  L -1 NAA juga  dilaporkan  menginduksi  kalus  secara optimal pada berbagai genotipe yang digunakan dalam penelitian-penelitian sebelumnya  (Motallebi-Azar,  2010;  Summers et  al., 1992;  Gresshoff  dan  Doy,  1972).  Hasil
ini  menunjukkan bahwa media DBMI  +  5  mg L -1 kinetin  +  2  mg  L -1 NAA  dapat  digunakan secara luas untuk berbagai genotipe tomat.
Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan bahwa  media  M3  menginduksi  kalus  dengan efisiensi  pembentukan  kalus  sebesar  16%, lebih tinggi dibandingkan media M4, M5, dan M6  (Tabel  3),  yang  mana  media  M4,  M5  dan M6 merupakan media yang berhasil menginduksi  kalus  dari  kultur  antera  tomat pada  penelitian  sebelumnya  (Motallebi-Azar, 2010;  Zagorska et  al., 1998).  Beragamnya jumlah  kalus  dan  efisiensi  pembentukan  kalus pada  media  yang  digunakan  menunjukkan bahwa  genotipe  yang  berbeda  mungkin  saja membutuhkan  media  yang  berbeda.  Hal  ini menyebabkan  sulitnya  memperoleh  media yang universal untuk kultur antera tomat.

## Induksi Pembentukan Tunas Pertambahan Diameter Kalus
Nilai  pertambahan  diameter  kalus diperoleh dengan mengurangi besarnya diameter  kalus  minggu  ke-6  dengan  diameter kalus  minggu  ke-4.  Hasil  analisis  ragam menunjukkan  bahwa  pertambahan  diameter kalus selama 2 minggu yaitu, dari minggu ke-4 hingga  minggu  ke-6  saat  kultur  tidak dipengaruhi  oleh  genotipe,  media  maupun interaksi  keduanya.  Baik  media  maupun genotipe yang digunakan menunjukkan besarnya  pertambahan  diameter  kalus  yang sama.
Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan bahwa  pertambahan  diameter  kalus  tomat Tora,  Ratna  dan  Permata  selama  2  minggu, yaitu  sebesar  2.75,  1.40  dan  2.00  mm. Pertambahan diameter kalus pada media MS + 1 mg L -1 zeatin + 0.125 mg L -1 IAA dan MS + 0.25  mg  L -1 zeatin  berturut-turut  adalah  1.97 dan  2.13  mm  (Tabel  4).  Bertambahnya diameter kalus pada media induksi tunas dapat disebabkan  oleh  faktor  genetik,  yang  mana genotipe  yang  digunakan  memiliki  daya regenerasi  yang  rendah,  sehingga  kalus  terus berproliferasi  tanpa  adanya  inisiasi  tunas. Disamping itu, diduga keseimbangan konsentrasi  dan  jenis  ZPT  yang  digunakan belum sesuai dengan genotipe yang digunakan sehingga belum mampu menginduksi munculnya tunas secara optimal.
Tabel 4. Pertambahan diameter kalus, lamanya inisiasi tunas, jumlah tunas dan persen jumlah tunas
terhadap jumlah kalus pada tiga genotipe tomat dan dua media regenerasi Perlakuan Pertambahan Diameter Kalus (mm) Lamanya Inisiasi Tunas (HST) Jumlah Tunas Persentase jumlah Tunas Terhadap Jumlah Kalus (%) Genotipe Tora 2.75 57 0.19 2.1 Ratna 1.40 0 0.00 0.0 Permata 2.00 60 0.38 4.2 Media R1 1.97 68 0.01 1.4 R2 2.13 58 0.25 2.8

## Lamanya Inisiasi Tunas
Tunas  pada  genotipe  Permata  pertama kali  muncul  pada  umur  60  hari  dan  68  hari (Tabel  4).  Masing-masing  tunas  muncul  pada media MS + 0.25 mg L -1 Zeatin (R1) dan MS +  1  mg  L -1 Zeatin  +  0.125  mg  L -1 IAA  (R2). Tunas pada genotipe Tora pertama kali muncul pada umur 57 hari yaitu pada media R2. Bakal tunas kedua genotipe tumbuh cepat di hari-hari pertama  pertumbuhan  yaitu  saat  berumur  39 hingga  46  hari  (Gambar  2a,  b,  c),  kemudian pertumbuhan  melambat  yang  diikuti  dengan pencokelatan  pada  tunas  setelah  mencapai umur  91  hingga  138  hari  (3-4  bulan)  dikultur (Gambar 2d, e, f).
Bakal  tunas  yang  muncul  memiliki bentuk  yang  abnormal.  Tangkai  dan  helaian daun  genotipe  Permata  pada  media  R1 menunjukkan  pertumbuhan  memanjang  dari permukaan  kalus  tanpa  adanya  batang.  Daun tidak membuka sempurna namun terlihat jelas urat  dan  tulang  daun,  selain  itu  tidak  ada inisisasi  daun  atau  pun  tunas  baru  selama inkubasi kultur (Gambar 2a). Bakal tunas yang abnormal  juga  ditunjukkan  oleh  genotipe Permata  pada  media  R2.  Daun  terlihat  kecil dan  memanjang,  runcing  pada  bagian  ujung dengan tepi daun menggulung ke bagian dalam (Gambar  2b).  Tunas  yang  abnormal  juga dihasilkan oleh genotipe Tora pada media R2. Tunas terlihat transparan, dengan bentuk daun yang  abnormal  (Gambar  2c).  Semua  tunas yang  terbentuk  mengalami  pencokelatan setelah 3 hingga 4 bulan dikultur (Gambar 2d, e,  f).  Pencokelatan  pada  tunas  diawali  pada bagian  pangkal  tunas,  kemudian  menyebar  ke seluruh  bagian  tunas  yang  menandai  akhir pertumbuhan tunas. Tunas yang terbentuk tidak dapat  diregenerasikan  pada  media  perakaran
karena  telah  mengalami  pencokelatan  dan tunas yang terbentuk tunas yang abnormal.
Gambar 2. Pertumbuhan tunas pada media R1 dan  R2.  Tunas  tumbuh  baik  saat berumur 39 hingga 46 hari dikultur (a,  b,  c).  Tunas  mengalami pencokelatan  setelah  berumur  91 hingga 138 hari (d, e, f)

## Jumlah Tunas
Hasil  analisis  ragam  menunjukkan bahwa  banyaknya  tunas  yang  terbentuk  tidak dipengaruhi oleh genotipe maupun media yang digunakan  (Tabel  1).  Media  maupun  genotipe yang  digunakan  menunjukkan  respon  yang sama  dalam  menghasilkan  tunas  (Tabel  4). Genotipe  Permata  menghasilkan  tunas  paling banyak,  yaitu  0.38  sedangkan  genotipe  Ratna tidak  menghasilkan  tunas  sama  sekali.  Tunas hanya muncul sekali pada tiap kalus, dan tidak
a b c d e f
terjadi inisiasi tunas baru selama pertumbuhan tunas pertama. Media MS + 0.25 mg L -1 Zeatin dan MS + 1 mg L -1 Zeatin + 0.125 mg L -1 IAA menginduksi  tunas  berturut-turut  sebanyak 0.25 dan 0.1 tunas. Efisiensi  pembentukan  tunas  paling tinggi  hanya  mencapai  4.2%  yaitu  dihasilkan oleh genotipe Permata. Efisiensi pembentukan tunas  genotipe  Tora  dan  Ratna  lebih  rendah yaitu  berturut-turut  2.1%  dan  0%.  Efisiensi pembentukan  tunas  paling  tinggi  dihasilkan oleh  media  MS  +  0.25  mg  L -1 Zeatin  yaitu sebesar 2.8%, sedangkan media MS + 1 mg L -1
Zeatin  +  0.125  mg  L -1 IAA  menghasilkan efisiensi  pembentukan  kalus  1.4%  (Tabel  4). Hasil penelitian terdahulu menggunakan media MS + 1 mg L -1 Zeatin + 0.125 mg L -1 IAA dan MS + 0.25 mg L -1
Zeatin mampu menghasilkan  tanaman  hingga  aklimatisasi (Motallebi-Azar, 2010; Zagorska et al., 1998). Hal  ini  menunjukkan  bahwa  genotipe  sangat menentukan  keberhasilan  kultur  antera  tomat (Motallebi-Azar,  2010;  Shtereva et  al., 1998;
Zagorska et al., 1998).

## KESIMPULAN
Tomat  Permata  memiliki  respon  kultur antera  yang  lebih  baik  dibandingkan  genotipe Tora  dan  Ratna  dalam  jumlah  kalus  maupun jumlah  tunas.  Media  yang  paling  baik menginduksi kalus adalah media M1 (DBMI + 5 mg L -1 kinetin + 2 mg L -1 NAA)  (39%) dan M2  (DBMI  +  1  mg  L -1 kinetin  +  2  mg  L -1
NAA)  (33%).  Media  yang  paling  baik menginduksi  tunas  adalah  media  R2  (MS  + 0.25 mg L -1 zeatin) (2.8%).

## DAFTAR PUSTAKA
Asoliman,  S.S.,  T.A.  Ismail,  M.A.  Zaki,  E.S. Amer.  2007. Genetic  studies  on  tomato anther culture. Factors affecting induction  of  androgenesis  in  tomato anther  culture.  Afr.  Crop  Sci.  8:  759- 768.
[BPS]  Badan  Pusat  Statistik.  2013.  Produksi Sayuran di Indonesia Tahun 1997-2013. http://www.bps.go.id. [4 September 2014].
Dewi,  I.S.,  B.S.  Purwoko.  2011.  Kultur in vitro untuk  produksi  tanaman  haploid androgenik.  Halaman  107-142. In G.A. Wattimena,  A.M.  Nurhajati,  N.M.A. Wiendi,  A.  Purwito,  D.  Efendi,  B.S. Purwoko,  N.  Khumaida.  Bioteknologi dalam Pemuliaan Tanaman. Bogor. IPB Press.
Dewi, I.S., B.S. Purwoko. 2001. Kultur antera untuk  mendukung  program  pemuliaan tanaman padi. Bul. Agron. 29: 59-63.
Dewi,  I.S.,  B.S.  Purwoko,  H.  Aswidinnoor, I.H.  Somantri,  M.A.  Chozin.  2009. Plant  regeneration  from  anther  cultures of  several  genotypes  of  indica  rice tolerant to alumunium toxicity. Indonesian J. Agric. 2(1): 1-5.
Dewi,  I.S.,  B.S.  Purwoko,  H.  Aswidinnoor,
I.H. Somantri. 2007. Regenerasi tanaman  pada  kultur  antera  padi: pengaruh  persilangan  dan  aplikasi putresin. Bul. Agron. 35(2): 68-74. Direktorat Jenderal Hortikultura. 2011. Rencana  Strategis  Direktorat  Jenderal Hortikultura Tahun  2011-2014.  http://
www.pertanian.go.id/sakip/admin/file/R ENSTRAHOR.pdf . [21 Januari 2015].
[FAO]  Food  and  Agricultural  Organization. 2015. Food and Agricultural Commodities Production/Commodities  by  Regions. faostat3.fao.org. [04 Maret 2015].
Farooq,  A.M.,  B.  Tabassum,  I.A.  Nasir,  T. Husnain. 2010. Androgenesis induction, callogenesis, regeneration and cytogenetic studies of tomato haploid. J. Agric. Res.
48(4): 457-470.
Gresshoff, P.M., C.H. Doy. 1972. Development  and  differentiation  of haploid Lycopersicon esculentum (tomato). Planta. 107: 161-170.
Harliani,  E.N.,  E.R.  Palupi,  D.S.  Wahyudin. 2014.  Potensi  penyimpanan  serbuk  sari dalam produksi benih hibrida mentimun ( Cucumis  sativus L)  varietas  KE014.  J. Hort. Indonesia. 5(2): 104-117.
Kartikaningrum, S., A. Purwito, G.A. Wattimena,  B.  Marwoto,  D.  Sukma. 2012. Induksi tanaman haploid Dhiantus sp.  melalui  pseudofertilisasi menggunakan  polen  yang  diiradiasi dengan sinar gamma. J. Hort. Indonesia. 4(1): 16-25.
Motallebi-Azar, A. 2010. Androgenic response of  tomato  ( Lycopersicon  esculentum
Mill.)  lines  and  their  hybrids  to  anther culture. Russian Agric. Sci. 4: 250-258.
Motallebi-Azar,  A.,  J.  Panahandeh.  2010. Effects  of  colchicine  and  cold  duration pretreatments on androgenesis responses of  tomato  ( Lycopersicon  esculentum Mill.) via anther culture. Russian Agric. Sci. 5: 338-341.
Safitri,  H.,  B.S.  Purwoko,  D.Wirnas,  I.S.
Dewi,  B.  Abdullah.  2010.  Daya  kultur antera  beberapa  persilangan  padi  gogo dan padi tipe baru. J. Agron. Indonesia.
38(2): 81-87.
Seguì-Simarro, J.M., F. Nuez. 2007. Embryogenesis induction, caullogenesis and  plant  regeneration  by in  vitro culture  of  tomato  isolated  microspores and  whole  anthers.  J.  Exp.  Botany.  58: 1119-1132.
Seguì-Simarro,  J.M.,  F.  Nuez.  2005.  Meiotic metaphase  I to telophase II  as the  most responsive  stage  during  microspore development  for  callus  induction  in tomato  ( Solanum licopersicum )  anther cultures.  Acta  Physiol.  Plantarum.  27: 675-685.
Sudarmono,  Destri.  2013.  Fungsi  tuas  stamen dalam  penyerbukan  dan  potensi  bunga Salvia  sebagai  tanaman  hias  di  kebun raya  Cibodas.  J.  Hort.  Indonesia.  4(2):
94-97.
Shtereva, L.A., N.A. Zagorska. B.D. Dimitrov. M.M.  Kruleva,  H.K.  Oanh.  1998. Induced androgenesis in tomato ( Lycopersicon  esculentum Mill).  II. Factors affecting induction of androgenesis.  Plant  Cell  Reports.  18: 312-317.
Sharp,  W.R.,  R.S.  Raskin,  H.E,  Sommer. 1972.  The  use  of  nurse  culture  in  the development  of  haploid  clones  in tomato. Planta (Berl). 104: 357-361.
Summers, W.L., J. Jaramillo, T. Bailey. 1992. Microspore  developmental  stage  and anther lenght influence the induction of tomato  anther  callus.  HortScience. 27(7): 838-840.
Syukur,  M.,  S.  Sujiprihati,  R.  Yunianti.  2012. Teknik  Pemuliaan  Tanaman . Penebar Swadaya, Jakarta.
Zagorska,  N.A.,  A.  Shtereva,  D.  Dimitrov, M.M. Kruleva. 1998. Induced androgenesis  in  tomato  ( Lycopersicon esculentum Mill.)  I.  Influence  of genotype  on  androgenetic  ability.  Plant Cell Reports. 17: 968-973.
Zamir, D., R.A. Jones, M. Kedar. 1980. Anther culture of male-sterile tomato ( Lycipersicon  esculentum Mill.)  mutants. Plant Sci. Letters. 17: 353-361.