## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 71-77
Uji Toksisitas Ekstrak Etanol Daun Kapas Gossypium hirsutum Terhadap Larva Udang Artemia salina dengan Metode Brine Shrimp Lethality Test (BSLT)
Veronica S. Davis 1* , Wilmar Maarisit 1 ,  Ferdy A. Karauwan 2 ,  Sonny Untu 2
1 Program Studi Farmasi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
2 Program Studi Biologi, Fakultas MIPA, Universitas Kristen Indonesia Tomohon
* Penulis Korespondensi; vero.davis09@gmail.com Diterima: 19 Maret 2019; Disetujui : 29 Maret 2019

## ABSTRAK
Kapas  Gossypium  hirsutum  L.  merupakan  salah  satu  anggota  famili  Malvaceae  yang  telah banyak dimanfaatkan untuk kesehatan pada bagian  biji dan daunnya. Kapas G. hirsutum memiliki senyawa metabolit sekunder berupa flavonoid, tanin, saponin dan steroid yang dapat memberikan efek farmakologis. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas toksisitas dari daun kapas G. hirsutum.  agar  dapat  diolah  dan  dimanfaatkan.  Ekstrak  yang  diperoleh  digunakan  untuk  uji toksisitas  terhadap  larva  udang  Artemia  salina  L.  dengan  metode  Brine  Shrimp  Lethality  Test (BSLT). Konsentrasi ekstrak etanol daun kapas G. hirsutum yang digunakan yaitu 300 µg/mL, 200 µg/mL,  100  µg/mL,  50 µg/mL,  dan  25  µg/mL  beserta larutan  kontrol  yang  hanya  berisi  akuades. Jumlah larva Artemia salina diuji dengan tiga kali replikasi yaitu 30 ekor. Total larva Artemia salina yang digunakan yaitu 180 ekor larva. Presentasi kematian larva dianalisis dengan analisis probit menggunakan SPSS for windows. Hasil analisis probit menggunakan SPSS menunjukan nilai LC 50 dari ekstrak etanol daun kapas G. hirsutum sebesar 152,38 µg/mL.
Kata kunci : Daun Kapas, Toksisitas, BSLT, LC 50 .

## ABSTRACT
Cotton Gossypium hirsutum L is a member of the family Malvaceae that has been widely used for the  health  on  the  seeds  and  leaves.  Cotton  (Gossypium  hirsutum  L.)  has  a  secondary  metabolite compounds  in  the  form  of  flavonoids,  tannins,  saponins  and  steroids  that  can  provide pharmacological effects. Cotton (Gossypium hirsutum L.) is a member of the family Malvaceae that has been widely used for the health of the seeds and leaves. Cotton (Gossypium hirsutum L.) has a secondary metabolite compounds in the form of flavonoids, tannins, saponins and steroids that can provide  pharmacological  effects  . . This  research aims  to  determine the  toxicity  activity  of  cotton leaf (Gossypium hirsutum L.) in order to be processed and utilized. The acquired extract is used for the toxicity test of the shrimp larva Artemia salina L. With the Brine Shrimp Lethality Test (BSLT) method. The concentration of cotton leaf ethanol extract (Gossypium hirsutum L.) used is 300 μg/mL, 200 μg/mL, 100 μg/mL, 50 μg/mL, and 25 μg/mL along with a control solution that contains only akuades. The number of larvae of Artemia Salina was tested with three times of 30. Total larvae of Artemia (180 larvae). The death of larvae presentation is analyzed by probit analysis using SPSS for Windows. The results of probit analysis using SPSS showed the value of LC50 of cotton leaf ethanol extract (G. hirsutum) of 152.38 μg/mL.
Keywords : Leaf Cotton, Toxicity, BSLT, LC50.

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 71-77

## PENDAHULUAN
Tumbuhan  obat  tradisional  merupakan ramuan bahan alam yang secara tradisional telah digunakan  untuk  pengobatan  berdasarkan pengalaman.  Di Indonesia terdapat sekitar 30.000 jenis tanaman dan 7000 ribu diantaranya memiliki khasiat sebagai obat. WHO pada tahun 2008  mencatat  bahwa  68%  penduduk  dunia masih  menggantungkan  sistem  pengobatan tradisional yang mayoritas melibatkkan tumbuhan  untuk  menyembuhkan  penyakit  dan lebih  dari  80  %  penduduk  dunia  menggunakan obat herbal untuk mendukung kesehatan mereka (Saifuddin, dkk., 2011).  Tumbuhan  obat  yang digunakan  masyarakat  sebagai  obat  tradisional, diantaranya  kapas G.  hirsutum L.  digunakan untuk  Antitusif,  pereda  demam  (Antipiretik), penyakit  kulit,  batuk  berdahak,  diare,  dan  anti radang  (Dalimartha, 2003).
Biji  kapas  ( G.  hirsutum )  merupakan salah  satu  bagian  tumbuhan  kapas  yang berpotensi  sebagai  bahan  obat  kontrasepsi herbal.  Biji  kapas  memiliki  kandungan  utama gosipol,  yaitu  suatu  zat  antifertilitas  yang mempengaruhi  kontrol  hormon  reproduksi  dan memiliki  efek  sitotoksik  (Gadelha, dkk., 2014). Kapas G. hirsutum memiliki senyawa metabolit sekunder  berupa  Flavonoid,  tanin,  saponin  dan steroid.  Berdasarkan  hasil  penelitian  Kumar, dkk. (2011) yang menyatakan bahwa daun kapas mempunyai  LC 50 sebesar  44,69  µg/ml,  dapat dijadikan  sumber  antioksidan  dan  dapat mencegah  penyakit  yang  disebabkan  oleh radikal bebas.
Beberapa  manfaat  dari  kandungan senyawa metabolit sekunder ini berpotensi sebagai antivirus, antikanker, insektisida dan antimikroba  (Saifudin,  2014).  Suatu  tumbuhan untuk  dapat  dijadikan  sebagai  obat  tradisional harus  memenuhi  standar  mutu  dari  WHO, meliputi standar kualitas, keamanan dan khasiat.
Uji  aktivitas  toksik  merupakan  salah satu prasyarat suatu tumbuhan dapat dikembangkan sebagai obat, khususnya sebagai antikanker.  Salah  satu  metode  yang  digunakan untuk  mengetahui  aktivitas  toksik  dari  suatu
ekstrak  atau  senyawa  bahan  alam  adalah Brine Shrimp  Lethality  Test (BSLT)  menggunakan larva udang laut Artemia salina L. Prosedurnya dengan menentukan nilai LC 50 ( Lethal Concentration )  dari  ekstrak  uji,  yaitu  jumlah dosis  atau  konsentrasi  ekstrak  uji  yang  dapat menyebabkan  kematian  terhadap  A. salina sejumlah  50%  setelah  masa  inkubasi  24  jam. Suatu  ekstrak  dikatakan  toksik  berdasarkan metode BSLT jika harga LC 50 < 1000 µg/ml [6] (Carballo, 2002).
Berdasarkan  uraian  diatas,  penulis tertarik  untuk  melalukan  penelitian  mengenai aktivitas  toksisitas  dari  ekstrak  etanol  daun kapas  menggunakan  metode Brine  Shrimp Lethality Test (BSLT).

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan November –  Desember  2018.  Tempat pelaksanaan penelitian di Laboratorium FMIPA Universitas  Kristen  Indonesia  Tomohon  dan laboratorium Kimia FMIPA Universitas Negeri Manado.

## Jenis Penelitian
Penelitian ini  merupakan  eksperimental di  Laboratorium  dengan  perlakuan  pemberian ekstrak  etanol  daun  kapas  ( G.  hirsutum ) terhadap  larva A.  salina dengan  metode Brine Shrimp Lethality  Test (BSLT).

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  antara  pot  saleb,  Gelas  ukur,  gelas erlenmeyer,  gelas  beaker,  batang  pengaduk, sudip,  cawan  petri,  timbangan  analitik,  pipet, alumunium  foil,  gunting,  kertas  saring,  toples kaca,  blender,  corong,  label,  rotary  evaporator, kaca  pembesar,  lampu  pijar,  wadah  penetasan dan  aerator.

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 71-77

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian

## Pembuatan Konsentrasi Sampel Uji
Pembuatan  larutan  stok  ekstrak  kental adalah daun G . hirsutum, telur A. Salina, air laut, etanol 70 % , Akuades, Tween 80 0,5%.

## Pengambilan Sampel
Sampel  yang  digunakan  ialah  daun kapas G . hirsutum yang diperoleh dari beberapa pekarangan rumah di Desa Kema 1, kecamatan Kema, Sulawesi Utara.

## Ekstraksi Sampel
Daun G. hirsutum ditimbang sebanyak 2 kg  kemudian  dicuci  bersih  lalu  diangin- anginkan tanpa terkena sinar matahari langsung selama  5  hari.  Daun G.  hirsutum yang  telah kering  kemudian  dihaluskan  menggunakan blender.
Metode ekstraksi yang digunakan dalam penelitian ini adalah maserasi . Serbuk simplisia halus  sebanyak  400  gram  dimasukkan  dalam toples kaca, lalu direndam dalam pelarut etanol 70%  dengan  perbandingan  1:3  dengan  sesekali diaduk.  Proses  perendaman  ini  berlangsung selama  5  hari.  kemudian  dilanjutkan  dengan proses  penyaringan,  maserat  yang  diperoleh diuapkan  pelarutnya  menggunakan rotary evaporator hingga diperoleh ekstrak kental.

## Uji Toksisitas dengan Metode BSLT
Penyiapan Larva Artemia salina L.
Penetasan  telur A.  salina dilakukan dengan cara merendam sebanyak 50 mg telur A. salina dalam  wadah  berisi  air  laut  sebanyak  2 Liter  dibawah  cahaya  lampu  25 watt. Telur A. salina akan  menetas  dan  menjadi  larva  setelah 24  jam.  Larva A.  salina yang  baik  digunakan untuk  uji  BSLT  yaitu  yang  berumur  48  jam sebab  jika  lebih  dari  48  jam  dikhawatirkan kematian A. salina bukan disebabkan toksisitas melainkan oleh terbatasnya persediaan makanan (Lisdawati dan wiryowigdagdo, 2006).
etanol  70%  daun G . hirsutum ditimbang menggunakan  neraca  analitik  hingga  mencapai berat 200 mg. Kemudian ekstrak kental tersebut dilarutkan  dengan  tween  80  sebanyak  5  ml. Selanjutnya,  diaduk  dan  ditambahkan  akuades sebanyak  95  ml  hingga  volumenya  mencapai 100  ml  sehingga  diperoleh  konsentrasi  2.000 ppm sebagai larutan induk.
Konsentrasi  larutan  uji  untuk  BSLT adalah 300 µg/mL, 200 µg/mL, 100 µg/mL, 50 µg/mL,  dan  25  µg/mL  dan  larutan  kontrol  (0 ppm) tanpa penambahan ekstrak. Kemudian dari larutan stok tersebut dibuat pengenceran dengan menggunakan rumus pengenceran:
Keterangan: V 1 = Volume awal M 1 = Konsentrasi awal M 2 = Konsentrasi akhir V 2 = Volume akhir

## Pelaksanaan Uji Toksisitas
Disiapkan  6  wadah  dan  1  wadah sebagai  kontrol.  Pada  uji  toksisitas  masing  - masing  konsentrasi  dilakukan triplo (3  kali pengulangan) dengan tiap kelompok dimasukkan  10  ekor  larva  udang A.  salina . Pengamatan  dilakukan  selama  24  jam  terhadap kematian larva A. salina . Kriteria standar untuk menilai kematian larva A. salina yaitu bila larva tidak menunjukkan pergerakan selama pengamatan.

## Analisis Data
Pengujian  efek  toksik  dihitung  dengan menentukan  nilai  LC 50 .  Perhitungan  nilai  LC 50 dilakukan  dengan  menghitung  %  kematian (mortalitas) larva A. salina pada tiap konsentrasi.  Jumlah A.  salina yang  mati  dalam tiap  wadah selama 24  jam  di  hitung.  Ciri larva
V 1. M 1 = V 2 . M 2

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 71-77
yang mati adalah larva yang sudah tidak bergerak lagi dalam pengamatan.
Presentase  kematian  larva  Artemia dapat dihitung menggunakan rumus Abbot.
penyari  semakin  banyak.  Ukuran  bahan  yang sesuai  akan  menjadikan  proses  ekstraksi berlangsung  dengan  baik  dan  tidak  memakan waktu yang lama (Ningsih, et al., 2016) .
% Kematian = 𝑗𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ  𝑙𝑎𝑟𝑣𝑎  𝑚𝑎𝑡𝑖 𝐽𝑢𝑚𝑙𝑎ℎ 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑙𝑎𝑟𝑣𝑎 𝑎𝑤𝑎𝑙 x 100%
Ekstraksi
Metode ekstraksi yang digunakan dalam
Pengolahan  data  dilakukan  dengan menggunakan metode analisis probit menggunakan  SPSS for  windows untuk mendapatkan  persamaan  garis,  sehingga  dapat dilakukan  perhitungan  nilai  LC 50 (Busvine, 1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Persiapan Sampel
Daun G. hirsutum yang digunakan pada penelitian  diperoleh  dari  beberapa  pekarangan rumah  di  Desa  Kema  1,  Kecamatan  Kema, Sulawesi  Utara.  daun G.  hirsutum diambil sebanyak  2  kg  basah.  Daun  yang  diperoleh dilakukan  sortasi,  diambil  daun  yang  tidak rusak,  tidak  terlalu  tua,  dan  tidak  berwarna kuning sehingga diharapkan kandungan zat aktif dalam  daun  tersebut  sudah  cukup  banyak. Sampel  yang  telah  diperoleh  dibersihkan kemudian  dikeringkan  dengan  cara  diangin- anginkan  dalam  ruangan  dengan  tidak  disinari matahari  langsung  selama  5  hari.  Pencucian sampel  dimaksudkan  untuk  membersihkan simplisia  dari  kotoran-kotoran  yang  melekat pada  simplisia.  Pengeringan  juga  merupakan tahapan  yang  penting  dalam  upaya  penyediaan bahan simplisia yang baik.
Simplisia kering hasil proses pengeringan  mengandung  sedikit  air,  sehingga dengan  proses  pengeringan  ini  maka  dapat mengurangi kontaminasi kapang/khamir.
Setelah  daun  kapas  menjadi  kering,  dilakukan proses  penghalusan  dengan  alat  blender kemudian diayak menggunakan ayakan. Tujuan sampel  dihaluskan  untuk  memaksimalkan proses ekstraksi, karena dengan ukuran partikel yang  kecil  menghasilkan  luas  permukaan  yang besar sehingga kontak serbuk dengan cairan
penelitian  ini  adalah  metode  maserasi.  Serbuk simplisia daun kapas yang digunakan sebanyak 400  g  dimasukkan  kedalam  toples  kaca  lalu direndam  dalam  pelarut  etanol  70  %  dengan total  pelarut  2  liter.  Perendaman  dilakukan selama 5 hari dan disimpan dalam ruangan yang terlindung dari cahaya matahari langsung untuk mencegah reaksi yang dikatalis cahaya.
Tujuan  dari  proses  ekstraksi  ini  adalah untuk  menarik  komponen  kimia  yang  terdapat dalam  simplisia  hanya  dengan  menggunakan pelarut. Proses ini sangat menguntungkan dalam isolasi  senyawa  bahan  alam,  karena  selama perendaman  terjadi  peristiwa  plasmolisis  yang menyebabkan  terjadi  pemecahan  dinding  sel akibat perbedaan tekanan didalam dan diluar sel, sehingga  senyawa  yang  ada  dalam  sitoplasma akan  terlarut  dan  proses  ekstrasi  senyawa  akan sempurna karena dapat diatur lama perendaman yang diinginkan (Ningsih, et al., 2016).
Filtrat  yang  diperoleh  dari  hasil maserasi  yaitu  berwarna  coklat  kemerahan, selanjutnya  filtrat  tersebut  dipekatkan  dengan bantuan alat Rotary evaporator untuk menguapkan pelarut sehingga diperoleh ekstrak pekat.  Ekstrak  pekat  yang  diperoleh  sebanyak 20,54  gram  yang  berwarna  coklat  kemerahan. Hasil penguapan maserat berupa ekstrak dengan bau yang khas berwarna coklat kemerahan, dan bentuknya cairan kental.

## Pengujian  Toksisitas dengan Metode BSLT
Pengujian  toksisitas  dilakukan  dengan metode  BSLT  ( Brine  Shrimp  Lethality  Test ) menggunakan larva Artemia salina L. Penetasan dilakukan  didalam  wadah  plastik  kotak  yang diberi pencahayaan lampu. Cahaya lampu akan mempercepat pemisahan cangkang telur dengan larva karena sifat artemia yang tertarik pada

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 71-77
cahaya  (fotoaksis  positif).  Selain  cahaya,  suhu juga bepengaruh terhadap pertumbuhan artemia. Suhu  yang  baik  berkisar  antara  25-30 0 c sehingga penetasan dilakukan pada suhu kamar selama 48 jam. Selain itu, proses penetasan juga membutuhkan  aerator  sebagai  sumber  oksigen (Wulandari, 2014).
Larva yang digunakan adalah larva yang berumur 48 jam dan aktif bergerak. Pada fase ini disebut  dengan  fase  naupli  atau  telur  menjadi larva,  fase  ini  merupakan  fase  paling  aktif membelah  secara  mitosis  sehingga  identik dengan sel kanker.
Kemampuan  toksisitas  dari  ekstrak etanol daun kapas dalam mematikan larva udang secara  berturut-turut  dengan  konsentrasi  300 µg/mL, 200 µg/mL, 100 µg/mL,  50 µg/mL, dan
25  µg/mL  beserta  larutan  kontrol  yang  hanya berisi akuades dapat dilihat dalam tabel 1.
Penambahan  larutan  kontrol  dilakukan untuk  mengetahui  pengaruh  larutan  akuades maupun  faktor  lain  yang  berpengaruh  terhadap kematian  larva.  Sehingga  dapat  dipastikan bahwa  kematian  larva  hanya  karena  pengaruh ekstrak  yang  ditambahkan.  Parameter  yang ditunjukan  untuk  mengetahui  adanya  aktivitas biologi pada suatu senyawa terhadap hewan uji adalah  dengan  menghitung  jumlah  larva  yang mati  karena  pengaruh  pemberian  senyawa dengan dosis atau konsentrasi yang ditentukan.
Data  hasil  penelitian  berupa  rata-rata kematian larva A Salina dan mortalitas kematian setelah  pemberian  Konsentrasi  Ekstrak  Etanol Daun  G.  Hirsutum  pada  masing-masing kelompok uji disajikan dalam tabel 1.
Tabel 1. Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Etanol Daun G. Hirsutum Terhadap Larva Artemia Salina
Laech
Konsentrasi Perlakuan Total Rata-rata Persen (ppm) Replikasi  Replikasi  Replikasi Kematian  Kematian Kematian
Pada  tabel  1.  dapat  dilihat  kematian larva tertinggi pada konsentrasi 300 µg/mL dan terendah  25  µg/mL.  Selain  itu,  terdapat peningkatan  kematian  larva A.  salina yang selaras  dengan  peningkatan  konsentrasi  ekstrak etanol  daun G.  hirsutum ,  pada  kontrol  negatif tidak  didapatkan  larva  yang  mati,  sehingga kematian  larva  murni  karena  ekstrak  yang diberikan .
Mekanisme  kematian  larva  udang berhubungan dengan senyawa metabolit sekunder ekstrak yang bersifat toksik yang dapat
menghambat  daya  makan  larva  udang.  Ketika senyawa tersebut tertelan oleh larva udang, alat pencernaannya  akan  terganggu.  Selain  itu, senyawa  ini  menghambat  reseptor  perasa  pada daerah mulut larva udang. Sehingga larva udang tidak bisa  makan, sehingga  menyebabkan larva udang mati (Meyer et al., 1982).
Hasil yang diperoleh dibuat grafik yang terlihat  pada  gambar  5  yang  menunjukan hubungan  antara  presentase  kematian  larva Artemia salina dengan konsentrasi ekstrak yang larut dalam etanol
1 2 3 (%) 0 0 0 0 0 0 0 25 4 2 4 10 3,33 33,33% 50 4 5 6 15 5 50 % 100 6 6 5 17 5,66 56,66% 200 8 7 9 24 8 80% 300 10 10 10 30 10 100%

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167 (The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 71-77
Hasil analisis probit menggunakan SPSS menunjukan nilai LC 50 dari ekstrak etanol daun kapas  ( G.  hirsutum )  sebesar  152,38  µg/mL. Ekstrak dikatakan bersifat toksik jika harga LC 50 <  1000  ppm,  sedangkan  untuk  senyawa  murni jika  LC 50 <  200  ppm  berpotensi  sebagai  anti kanker (Meyer., et al 1982).
Jumlah  larva  Artemia  salina  diuji dengan tiga kali replikasi yaitu 30 ekor. Jumlah total larva Artemia salina yang digunakan yaitu 180 ekor larva. Total kematian diperoleh dengan menjumlahkan  larva  yang  mati  pada  setiap konsentrasi, sedangkan rata-rata kematian larva diperoleh dengan membagi total kematian larva pada setiap konsentrasi dengan jumlah replikasi yang  dilakukan  yaitu  tiga  kali.  Kemudian dihitung presentase kematian larva dari rata-rata kematian  pada  setiap  konsentrasi.  Hasil  dari analisis  dengan  menggunakan  regresi  linear sederhana  menunjukan  nilai  LC 50 dari  ekstrak etanol daun kapas adalah 152,38 µg/mL.
BSLT  (brine  shrimp  lethality  test) merupakan  salah  satu  uji  praskrining  atau pendahuluan  untuk  mendapatkan  aktivitas biologi  yang  sederhana  unutk  menentukan tingkat  toksisitas  suatu  senyawa  atau  ekstrak dengan  menggunakan  artemia  salina  sebagai hean  uji.  Ekstrak  etanol  daun G.  hirsutum memiliki  nilai LC 50 < 1000 ppm bersifat toksik terhadap  larva  artemia  salina  leach.  Sehingga berdasarkan  nilai  LC 50 yang  diperoleh  dengan metode  BSLT,  tanaman  ini  dapat  dilakukan penelitian lanjutan untuk dikembangkan sebagai obat antikanker.
Korelasi antara uji toksisitas dengan uji sitoktoksik  adalah  jika  mortalitas  terhadap artemia  salina  yang  ditimbulkan  memiliki  nilai LC 50 < 1000 µg/mL. LC 50 (lethal concentration 50) merupakan konsentrasi zat yang menyeabkan  terjadinnya  kematian  pada  50% hewan uji.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  Ekstrak  etanol daun G.  hirsutum .  memiliki  toksisitas  terhadap larva A.  salina menggunakan  metode  BSLT dengan nilai LC 50 sebesar 152.38 µg/mL.

## DAFTAR PUSTAKA
Saifuddin,  A.,  Rahayu.,  Yuda,  Hilwan.  2011.
Standarisasi Bahan Obat Alam. Graha Ilmu. Yogyakarta. Hal.1-22.
Dalimartha  Setiawan.  2003.  Atlas  Tumbuhan obat Indonesia jilid 3. Puspa Swara. Jakarta.
Gadelha, I.C.N., N.B.S, fonsesa., S.C.S, Oloris., M.M, Melo., S.B, Blanco. 2014. Gossypol Toxicity  From  Cottonseed  Products.  Sci world. 14: 1-9.
Kumar,  S.  P.,  S.  S,  Singh.,  N.  P,  Singh.,  P, Mayur.  2011. In-vitro  Antioxidant  Activity of  Gossypium  Herbaceum  L.  internasional Research Journal of Pharmacy . 2(7).
Saifudin,  A.,  2014.  Senyawa  Alam  Metabolit Sekunder. Deepublish.  Yogyakarta.
Carballo, J.L., Inda, Z.L.H., Perez, P., Gravalos, M.D.G. 2002. A Comparison Between Two Brine  Shrimp  Assays  To  Detect  In  Vitro
10 8 6 4 2 0 Series1 y = 4.1593x - 2.633
Predicted 4,5684 Linear (Series1) 0 1 2 3
LOG KONSENTRASI
Linear (Predicted 4,5684) N ila i P ro b it

## Biofarmasetikal Tropis
e - ISSN 2685-3167
(The Tropical Journal of Biopharmaceutical) 2019, 2 (1), 71-77
Cytotoxicity  In  Marine  Natural  Product. BMC biotechnology 2 (17): 1-5 Lisdawati, V., Wiryowigdagdo, S., dan Kardono, L.B., 2006. Brine shrimp lethality test  (BSLT)  dari  berbagai  ekstrak  daging buah dan kulit biji  mahkota dewa (Phaleria macrocarpa).  Bul.  Penelitian  kesehatan.  34 (3).
Busvine,  J.  R.  1971.  A  Critical  Review  of  the Techniques for Testing Insecticides 2nd Ed. The Commonwealth Institudeof Entomologi .
London.UK. Ningsih,  D.R.,  Zusfahair,  D.,  Kartika.  2016.
Identifikasi  senyawa  metabolit  sekunder serta  uji  aktivitas  ekstrak  daun  sirsak sebagai  antibakteri.  Molekul.  11  (1):  101- 111.
Wulandari,  F.,  2O14.  Uji  toksisitas  esktrak metanol  daun  mahkota  dewa  (Phaleria macrocarpa [Scheff.] Boerl). Terhadap larva
Artemia  salina  Leach  dengan  metode  brine shrimp  lethality  test  (BSLT).  [skripsi].
Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta. Jakarta.