Isolasi Minyak Atsiri Daun Sirih Merah (Piper cf. fragile. Benth)
Marsah Rahmawati Utami 1) , Irmanida Batubara 2) , dan  Latifah K. Darusman 3)
1) Staf Pengajar, Fakultas Kependidikan dan Ilmu Pendidikan UNSIKA, Karawang , 2) Staf Pengajar Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan AlamIPB, Bogor
3) Staf Pengajar Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan AlamIPB, Bogor Korespondesi author: marsah.r.utami@gmail.com
Diterima 23 Oktober 2016/Disetujui 30 Januari 2017

## ABSTRACT
Piper  cf.  fragile  (sirih  merah)  is  one  of  herb  plants  that  contained    essential  oils  and  had  been  used  as medicinal substances traditionally in Indonesia. The purposes of this research were to isolate, fractionate and to find constituents  sirih merah essential oil. The research was done in 2011 at Bogor Agricultural Institute and was done in four  step,  there  were  material  collection,  essential  oil  isolation  by  hydrodistillation,  fractionation  by  column chromatography and  GC-MS analysis. The result show that  essential oil isolation was obtained 0,24% (v/b).The oil was  fractionated  by  column  chromatography  (heksana-kloroform-metanol  as  mobile  phase)  and  produced  4 fractions.The main constituents of crude essential oil by GC-MS analysis were alpha tuhyena, sabinena, beta mircena, alpha  terpinena  beta  felandrena,  gamma  terpinena,  alpha  terpirolena,  linalool,  4-terpineol,  trans  cariofilena, germakrena D, alpha copaena. The main constituen of fraction 1 are sabinena (38,67%) and beta mircena (22,94%) . The main constituents of fraction 2 arelinalool (20,36%) and 4-terpineol (31,67%). From the results can be concluded thatmain  constituents  of  essential  oilPiper  cf.  fragile  (sirih  merah)  were  monoterpene  (such  as  sabinene, mircene,Alpha  tuhjene,  Alpha  terpinene,  Gamma  terpinene)  and  sesquiterpene  (such  as  trans  caryophyllene  and germacrene D)
Key word: isolation, fractionation,hydrodistillation,Piper cf. fragile, essential oil.

## ABSTRAK
Piper  cf.  fragile  (sirih  merah)  adalah  salah  satu  tanaman herbal  yang  mengandung  minyak  atsiri  dan  telah digunakan sebagai bahan obat secara tradisional di Indonesia.Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengisolasi, memfraksionasi  dan  mengidentifikasi  komponen-komponen  yang  terkandung  dalam  minyak  atsiri  sirih  merah. Penelitian  dilakukan  pada  tahun  2011  di  Institut  Pertanian  bogor.  Penelitian  ini  dilakukan  empat  tahap,  yaitu pengumpulan  bahan,  isolasi  minyak  atsiri  daun  sirih  merah  dengan  destilasi  air,  fraksinasi  minyak  atsiri  dengan kromatografi kolom dan analisis komponen dengan GC-MS.Hasil penelitian menunjukan bahwa isolasi minyak atsiri yang  diperoleh  sebanyak  0,24  %  (v/b).  Minyak  atsiridifraksinasi  dengan  kromatografi  kolom  (heksana-kloroform- metanol  sebagai  fasa  gerak)menghasilkan  4  fraksi.  Hasil  analisis  GC-MS  dari  ekstrak  teridentifikasi  mengandung komponen utama : Alpha tuhyena, sabinena, beta mirsen, alpha terpinena beta felandrena, gamma terpinena, alpha terpirolena, linalool, 4-terpineol, trans kariofilena, germakrena D, alpha kopaena. Komponen utama fraksi 1 adalah sabinena (38,27%) dan beta mircena (22,94%) , pada fraksi 2 mengandung komponen utama  linalool (20,36%)dan 4- terpineol (31,67%). Dari hasilnyadapat disimpulkan bahwa minyak atsiri sirih merah mengandungkomponen utama monoterpene (seperti sabinen, mircen,Alpha tuhyen, Alpha terpinen, Gamma terpinen) dan sesquiterpen (seperti trans cariofillen and germacrenD)
Kata kunci: isolasi, fraksinasi, destilasi air, Piper cf. fragile, minyak atsiri.
PENDAHULUAN Sirih merah ( Piper cf . fragile. Benth) merupakan  salah  satu  tanaman  obat  potensial  yang diketahui  secara  empiris  memiliki  khasiat  untuk menyembuhkan  berbagai  jenis  penyakit.Tanaman  ini termasuk pada famili piperaceae dan biasanya tumbuh merambat  di  pagar  atau  pohon.Ciri  khas  sirih  merah adalah batangnya bulat, berwarna hijau keunguan dan tidak berbunga.Daunnya bertangkai membentuk
jantung  hati  dan  bagian  atasnya  meruncing  (Gambar 1).Sirih  merah  memiliki  aroma  yang  lebih  wangi dibandingkan dengan sirih hijau.Sirih merah merupakan  tanaman  herba  yang  secara  empiris  dapat menyembuhkan  berbagai  jenis  penyakit  seperti diabetes  mellitus,  hepatitis,  batu  ginjal,  menurunkan kolesterol,  mencegah  stroke,  asam  urat,  hipertensi, radang  liver,  radang  prostat,  radang  mata,  keputihan, maag,  kelelahan,  nyeri  sendi  dan  memperhalus  kulit (Manoi 2007).
Berdasarkan  beberapa  penelitian  kandungan fitokimia  yang  terdapat  di  dalam  daun  sirih  merah adalahalkaloid, saponin, tannin dan flavonoid . Ngaisah (2007)  melaporkan bahwa  kadar  minyak  atsiri  daun sirih  merah  dengan  metode  pemisahan  destilasi stahl adalah sebesar 0.727% (v/b). Beberapa penelitian yang berkaitan  dengan  aktivitas  ekstrak  daun  sirih  merah telah  dilakukan,  diantaranya  adalah  Safithri  dan Fahma  (2008)  menyimpulkan  bahwa  ekstrak  air  daun sirih  merah  mampu  menurunkan  kadar  gula  darah pada tikus sebanyak 10-38%. Wicaksono et al. (2009) melaporkan  bahwa  ekstrak  daun  sirih  merah  mampu menghambat proliferasi sel kanker payudara (T47D).

## Gambar 1.  Daun sirih merah
Hasil  penelitian  Sulistiyani et  al. (2007) menunjukkan  bahwa  minyak  atsiri  daun  sirih  merah memiliki  aktivitas  antimikrobaterhadap C.albicans,S. aureus  dan  E.  coli .  Juliantina et  al. (2009) menyimpulkan bahwa ekstrak etanol daun sirih merah mampu  menghambat  pertumbuhan  bakteri  gram positif  dan  negatif  ( Staphylococcus  aureus ATCC 25923 dan Escherichia coli ATCC 35218).Batubara et al. (2011)  melaporkan  bahwa  monoterpena  dan sesquiterpena  minyak  atsiri  sirih  merah  mampu meningkatkan  aktivitas  monofenolase  dan  difenolase pada  enzim  tirosinase.Penelitian  ini  bertujuan  untuk mengisolasi, memfraksionasi dan menentukan komponen-komponen yang terkandung dalam minyak atsiri sirih merah.

## METODE PENELITIAN
Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Kimia Analitik  Departemen Kimia  dan Laboratorium Pusat Studi Biofarmaka Institut Pertanian Bogor sejak bulan Januari  sampai dengan Juni tahun 2011.
Bahan utama yang digunakan adalah daun sirih merah  ( Piper cf .  fragile )  yang  diperoleh  dari BALITTRO  Bogor.Peralatan  yang  digunakan  adalah neraca  analitik,  oven,  distilator  air,  kromatografi kolom, dan instrument GC-MS ( Gas Chromatograph- Mass Spectrometer ) Agilent Technologies 6890 .
Penelitian  ini  dilakukan  empat  tahap.yaitu pengumpulan  bahan,  isolasi  minyak  atsiri  daun  sirih merah  dengan  alat  distilasi  air  dan  fraksinasi  minyak atsiri  dengan  kromatografi  kolom  dan  analisis komponen dengan GC-MS.

## Preparasi  dan  Identifikasi  Bahan  Tanaman
( Muchtaridiet al. 2004)
Sampel  daun  sirih  merah  yang  digunakan adalah  sampel  sirih  merah  segar  dari  BALITRO Bogor.  Bahan  tanaman  yang  akan  diteliti  diambil bagian  ranting,  daun,  dan  akar.  Selanjutnya  spesimen ini diidentifikasi di Laboratorium Herbarium Bogoriense  LIPI  Cibinong  Bogor.  Sampel  ditentukan kadar air dan kadar abunya. Setelah itu, bahan sampel basah didestilasi dengan distilatorair.

## Isolasi  Minyak  Atsiri  dengan  Destilasi  Air (Anggraeni 2010)
Bahan  daun  segar  yang  telah  diiris  halus ditimbang sebanyak 250 g dan ditambahkan 1250 mL akuades  (perbandingan  sampel  :  akuades;  1  :  5) kemudian  didestilasi  selama  3  jam  dengan  distilator air,  pada  suhu  berkisar  antara  95-105 o C.  Distilat minyak  atsiri  yang  diperoleh  disimpan  di  dalam refrigerator,  diuji  KLT  untuk  mencari  eluen  terbaik dan diidentifikasi dengan GC-MS

## Fraksinasi  Minyak  atsiri  dengan  Kromatografi Kolom
Fraksinasi  dilakukan  setelah  penentuan  eluen terbaik  dengan  menggunakan  KLT.Setelah  diperoleh eluen  terbaik,  selanjutnya  dilakukan  pemisahan minyak  atsiri  secara  bertahap.Sebanyak  2.24  gram ekstrak minyak atsiri, difraksinasi dengan kromatografi  kolom  dengan  menggunakan  metode elusi  gradien  (heksana-kloroform-metanol).  Setiap eluat  ditampung  dalam  tabung  reaksi  dengan  volume masing-masing  3  mL  dan  diuji  dengan  kromatografi lapis tipis menggunakan eluen terbaik hasil penentuan dengan  KLT  yaitu  heksana  :  kloroform,  7:3.  Eluat dengan pola spot yang sama digabungkan menjadi satu fraksi. Fraksi 1 dan 2  diidentifikasi dengan GC-MS.

## Analisis Komponen minyak atsiri dengan GC-MS
Identifikasi  kandungan  senyawa-senyawa  yang terdapat dalam distilat kasar, fraksi 1 dan fraksi 2 dari minyak atsiri sirih merah dilakukan dengan  instrumen GC-MS  menggunakan  kolom  kapiler  HP  WAX dimensi 25 m x 0.25 mm, dengan kondisi laju alir 0.6 μl/menit,  gas  pembawa  Helium,  suhu  injektor  250 o C, suhu  interface  280 o C,  program  suhu    60 o C    selama  1 menit,  kemudian  suhu  ditingkatkan  150 o C  selama  2 menit  dan  terakhir  laju  ditingkatkan  15 o C/menit hingga 240 o C selama 20 menit, kondisi spektrofotometer  massanya  adalah  energi  ionisasi  70 eV, metode ionisasinya adalah Electron Impact

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini,  isolasi  minyak  atsiri  dari daun segar sirih merah dilakukan dengan menggunakan  destilasi  air  pada  suhu  95-105 o C.  Pada metode  destilasi  ini,  bahan  yang  akan  disuling
berkontak langsung dengan air yang mendidih dan uap air  akan  membawa  komponen  minyak  atsiri  keluar melalui  kondensor  dan  menetes  dalam  alat  pemisah. Alat destilasi air  ini bekerja dengan proses hidrodifusi sehingga  agar  lebih  efektif  bahan  yang  akan  disuling harus dirajang terlebih dahulu.
Gambar 2 Minyak atsiri daun sirih merah
Minyak  atsiri  yang  dihasilkan  pada  penelitian ini  berwarna  sedikit  kuning  hingga  tidak  berwarna (Gambar  2).  Rendemen  minyak  atsiri  yang  diperoleh adalah  0.24%  (v/b)  berdasarkan  bobot  basah  dengan bobot  jenis  0.78  g/ml.  Hasil  penelitian  ini  tidak  jauh
berbeda  dengan  penelitian  yang  dilaporkan  Batubara et  al. (2011)  yang  menyebutkan  bahwa  sirih  merah mengandung  0.21%  minyak  atsiri  berdasarkan  bobot basah.
Fraksinasi  minyak  atsiri  sirih  merah  pada penelitian  ini  dilakukan  dengan  menggunakan kromatografi  kolom.  Fase  diamnya  adalah  silika G 60 F 254 dan  proses  elusinya  dilakukan  secara  gradien (peningkatan  kepolaran)  dengan    eluen  n-heksana, kloroform dan metanol.  Eluen terbaik yang digunakan untuk  pemisahan  fraksi-fraksi  pada  penelitian  ini adalah n-heksana:kloroform (7:3) karena menghasilkan jumlah noda terbanyak yaitu 7 noda dan terpisah. Pemilihan eluen terbaik berdasarkan pengembangan informasi dari Harborne (1987) bahwa eluen  yang  umum  digunakan  dalam  pemisahan minyak  atsiri  adalah  campuran n-heksana :  kloroform (3:2),  klorofom  :  metanol  (99:1)  atau  dietileter  : kloroform:  etil  asetat  (2:2:1).  Data  hasil  fraksinasi minyak atsiri sirih merah pada penelitian ini disajikan pada Tabel 1.
Tabel 1. Hasil fraksinasi minyak atsiri sirih merah dengan kromatografi kolom (elusi gradien) Jenis eluen Fraksi ke Bobot  (g) Jumlah noda Rendemen(%) H 1 1.165 2 52.00 C:H 2 0.195 2 8.71 C 3 0.234 3 10.45 M 4 0.204 1 9.12
H =  n-heksana; C:H = kloroform:n-heksana; C = kloroform; M = metanol
Fraksi  dengan  rendemen  terbanyak  (fraksi  1) dan  fraksi  dengan  jumlah  rendemen  paling  sedikit (fraksi  2)    bersama  distilat  kasar  dari  minyak  atsiri sirih  merah  kemudian  diidentifikasi  komponen senyawa  kimianya  dengan menggunakan  GC-MS  dan diuji  aktivitasnya  secara in  vivo .  Pemilihan  fraksi  1 dan  2  didasarkan  kepada  rendemen  dan  aroma  yang terbentuk. Fraksi 1 memiliki rendemen terbanyak dan aroma  yang  khas,  sedangkan  fraksi  2  meskipun memiliki  rendemen  yang  paling  sedikit  tetapi  aroma
yang  dihasilkan  lebih  wangi  dan  tajam  dibandingkan fraksi 3 dan fraksi 4.
Identifikasi  kandungan  senyawa-senyawa  yang terdapat dalam distilat kasar, fraksi 1 dan fraksi 2 dari minyak atsiri sirih merah dilakukan dengan  instrumen GC-MS.  Kromatogram  ion  total  dari  senyawa- senyawa yang terkandung dalam distilat kasar, fraksi 1 dan  fraksi  2  dapat  dilihat  pada  Gambar  3,4,5. Perbedaan  senyawa-senyawa  yang  terkandung  dalam distilat  kasar,  fraksi  1  dan  fraksi  2  disajikan  pada Tabel 2.
Tabel 2.  Perbedaan  kandungan  senyawa  dalam  destilat  kasar,  fraksi  1,  dan  fraksi  2  minyak  atsiri  sirih  merah berdasarkan hasil analisis GC-MS Golongan Nama senyawa Rendemen (%) Distilat kasar Fraksi 1 Fraksi 2 Monoterpena Alpha tuhyena 2.83 - - Beta pinena 2.13 - - Sabinena 36.64 38.27 13.2 Beta mirsena 11.22 22.94 7.46 Alpha terpinena 2.45 6.38 2.51 Beta felandrena - 2.93 1.54 Gamma terpinena 3.44 11.4 4.30 Alpha terpinolena 0.90 2.83 1.10 Monoterpena alcohol Linalool 8.27 - 20.36 4-terpineol 4.67 - 31.67 Sesquiterpena Trans kariofilena 2.91 4.48 1.48 Germakrena D 5.6 3.18 - Alpha kopaena 0.22 0.42 -
Gambar 3.  Kromatogram  ion  total  hasil  GC-MS
destilat kasar
Gambar 4.  Kromatogram  ion  total  hasil  GC-MS Fraksi 1
Gambar 5. Kromatogram  ion  total  hasil  GC-MS Fraksi 2
Berdasarkan  komponen  yang  teridentifikasi, komponen minyak atsiri sirih merah terbagi menjadi 3 golongan  terpena  yaitu  monoterpena,  monoterpena alkohol  dan  seskuiterpena.Komponen  yang  termasuk golongan monoterpena adalah sabinena, beta mirsena, alpha  tuhyena,  beta  pinena,  alpha  terpinena  dan gamma terpinena.Sedangkan  yang termasuk ke dalam golongan  monoterpena  alkohol  adalah  linalol  dan  4- terpineol  dan  yang  termasuk  golongan  sesquiterpena adalah trans-kariofilena, alpha kopaena dan germakrena D (Gambar 6).
Perbedaan komponen yang terdapat pada fraksi 1  dan  fraksi  2      terletak      pada  adanya  komponen monoterpena  alkohol  seperti  linalool  dan  4-terpineol pada  fraksi  2,  dan  tidak  adanya  alpha  kopaena  dan germakrena  D  .  Hasil  analisis  komponen  ekstrak minyak  atsiri  ini  sedikit  berbeda  dengan  hasil penelitianNurhidayati,. At  all (2012)  pada    analisis komponen ekstrakminyak atsiri sisirh merah
menemukan  adanya  komponen  eugenol  (10,11%). Perbedaan  ini  bisa  disebabkan  karena  adanya pengambilan  sampel  ditempat  yg  berbeda    karena tempat  tumbuhnya  tanaman  berpengaruh  pada kandungan komponen pada tanaman.
Gambar 6.  Struktur  senyawa-senyawa  utama  dalam minyak atsiri sirih merah

## KESIMPULAN
Isolasi  minyak  atsiri  daun  sirih  merah  dengan destilasi  air  menghasilkan  rendemen  0.24%  dengan bobot  jenis  0.78  g/ml.  Fraksinasi  minyak  atsiri  daun sirih  merah    dilakukan  dengan  elusi  gradien  (n- heksana, kloroform, metanol) menggunakan kromatografi  kolom  silika  dan  pengelompokan  fraksi dengan  KLT  menggunakan  eluen  terbaik  n-heksana: kloroform  (7:3)  menghasilkan  4  fraksi.  Minyak  atsiri sirih merah mengandung senyawa golongan monoterpena, monoterpena alkohol dan seskuiterpena.

## DAFTAR  PUSTAKA
Anggraeni A. 2010. Fraksinasi Senyawa Aktif Minyak Atsiri
Temulawak sebagai Pelangsing
Aromaterapi  secara  In  vivo .  Skripsi:  Bogor. Departemen Kimia. Institut Pertanian Bogor.
Batubara I, Rahminiwati M, Darusman LK, Mitsunaga T. 2011.Tyrosinase Activity  of Piper betle and Piper  crocatum Essential  Oil .Proceeding  of International Conference on Basic Science. Malang : Faculty of Science, University of Brawijaya. 50-53.
Harborne JB.1987. Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern  Menganalisis  Tumbuhan .  Ed  ke- 2.Padmawinata  dan  Sudiro  I,  penerjemah.
Bandung: Institut Teknologi Bandung.
Terjemahan  dari: Phytochemical  Method .  Hlm 137-139.
Juliantina R F, Ayu Citra ,  Nirwani  B, Nurmasitoh T,
Tri Bowo E. 2009. Manfaat Sirih merah ( Piper crocatum )  sebagai  Agen  Bakterial  terhadap Bakteri  Gram  Positif  dan  Bakteri  Gram Negatif. Jurnal  kedokteran  dan  Kesehatan
Indonesia 1(1).
Ngaisah  S.  2007. Identifikasi  dan  Uji  Aktivitas Antibakteri  Minyak  Atsiri  Daun  Sirih  Merah (piper  crocatum  ruiz&  pav.) Asal  Magelang. Abstract. Departemen Kimia. UNS.
Manoi, F. 2007, Sirih Merah Sebagai Tanaman Multi
Fungsi , Warta Puslitbangun Vol.13 (2).
Nuhidayati L, Desmiati Y, Mariani S. 2012. Penetapan
Kadar Eugenol dalam Minyak Atsiri dari Daun Sirih Merah ( Piper cf. fragile Benth. ) dan sirih
hijau    ( Piper  Betle  L. ,)  secara  Kromatografi Gas. Seminar Nasional POKJANAS TOI XLII, 15-16 Mei 2012.
Safithri M, Fahma F. 2008. Potency of Piper crocatum Decoction  as  an  Antihiperglycemia  in  Rat Strain Sprague dawley.Hay J Bio 15(1): 45-48 Sangat  H,  Roematyo.1996.  Aromatherapy  Plants:  A Etnopharmacology  Study. Proc  Sim  Nas  I
Tumbuhan Aromatik APINMAP; 22-23 Oktober 1996.
Sulistyani  N,  Sasongko  H,  Hertanti  M,  Meilana  L.
2007.  Aktivitas  Minyak  Atsiri  Daun  Sirih Merah ( Piper crocatum Ruiz and Pav) terhadap Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan Candida albicans sertaIdentifikasi Komponen Kimianya. Med Far . Vol 6 (2):33 – 39.
Sumarni,  Nunung  BA,  Solekan.  2010.  Pengaruh Volume Air dan Berat Bahan pada Penyulingan Minyak  Atsiri. Institut  Sains  dan  Teknologi AKPRIND . Yogyakarta
Wicaksono  BD,  Handoko  YA,  Arung  ET,  Kusuma IW,  Yulia  D,  Pancaputra  AN,  Sandriansyah  F. 2009.  Antiproliferative  Effect  of  the  Methanol Extract  of Piper  crocatum Ruiz  &  Pav  leaves on Human Breast (T47D) Cell In-vitro. Trop J
of  Pharm Res 8(4):345-352.