Tersedia  online  di:  http://ejournal-balitbang.kkp.go.id/index.php/jra
# Korespondensi:  Politeknik  Kelautan  dan  Perikanan  Sorong, KKD-BP  Kesehatan  Ikan  dan  Lingkungan.  Jl.  K.  Pattimura, Tj.  Kasuari,  Sorong,  Papua  Barat,  Indonesia Tel.  +  62  951  333741 E-mail:  achmadsuhermanto@kkp.go.id

## POLA INFEKSI Streptococcus agalactiae STRAIN NP105O DAN N
14 G PADA IKAN NILA (Oreochromis niloticus)
Achmad  Suhermanto *)# ,  Suhermin** ) ,  Ridwan*** ) ,  Indri  Astuti ****) ,  dan  Iis  Nurmawanti *****)
*) Politeknik Kelautan dan Perikanan Sorong, KKD-BP Kesehatan Ikan dan Lingkungan Jl. K. Pattimura, Tj. Kasuari, Sorong, Papua Barat
E-mail: achmadsuhermanto@kkp.go.id
**) Stasiun Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan Kelas I Palangkaraya Jl. Adonis  Samad, Panarung,  Pahandut,  Palangka Raya,  Kalimantan Tengah 74874
***) Stasiun Karantina Ikan, Pengendalian Mutu dan Keamanan Hasil Perikanan Kelas II Bima Jl. Sultan Salahuddin Airport, Palibelo Bima Nusa Tenggara Barat
****) Balai Perikanan Budi Daya Air Tawar Sungai Gelam Jambi Jl. Iswahyudi, No. 06, Pasir Putih - Chandra, Pasir Putih, Kec. Jambi Selatan, Jambi 36126
*****) Balai Perikanan Budidaya Air Tawar Mandiangin Jl. Tahura Sultan Adam Km. 14, Mandiangin Barat, Karang Intan, Cempaka, Banjar, Kalimantan Selatan 70661
(Naskah diterima: 8 Oktober 2019; Revisi final: 5 Desember 2019; Disetujui publikasi: 6 Desember 2019)

## ABSTRAK
Infeksi Streptococcosis yang disebabkan oleh bakteri patogen Streptococcus agalactiae dengan karakteristik strain berbeda menjadi permasalahan utama pada budidaya ikan nila. Penelitian ini bertujuan untuk menelaah pola infeksi bakteri S. agalactiae strain NP105O dan N 14 G, melalui performa organ target, gejala klinis, serta hematologi  ikan  nila  Oreochromis  niloticus.  Karakterisasi  S.  agalactiae  berdasarkan  pada  SNI  dan  API  20 STREP,  uji  pertumbuhan  bakteri  dilakukan  dengan  metode total  plate  count  (TPC).  Pengujian  eksistensi bakteri  dengan  cara  menginjeksikan  S.  agalactiae  secara  intraperitoneal  (IP)  dengan  konsentrasi  10 7 CFU.mL -1 ,  dan  pengamatan  dilakukan  dengan  pengambilan  darah  dan  dikultur  di  media  BHIA.  Hasil  uji biokimia  dan  konfirmasi  menggunakan  API  20  STREP  menunjukkan  bahwa  isolat  terkonfirmasi  positif sebagai S.  agalactiae,  dan  NP105O  dideteksi  sebagai  bakteri  -hemolitik.  Pertumbuhan  bakteri  NP105O lebih  cepat  daripada  N 14 G,  namun  eksistensi  di  darah  masing-masing  selama  72  jam  dan  24  jam.  Hasil pengamatan performa darah menunjukkan bahwa glukosa dan leukosit mengalami peningkatan signifikan masing-masing 53,5 ± 2,12 mg.dL -1 dan 6,51 ± 0,89 (10 5 sel.mm -3 ), sedangkan hematokrit dan eritrosit mengalami  penurunan  signifikan  (P<0.05)  masing-masing  21,10  ±  0,07%  dan  14  ±  4,5  (10 5 sel.mm -3 ) pascainjeksi S. agalactiae. Gejala klinis pascainfeksi berupa melanosis, respons lambat, anorexia, ocular opacity, purulens, unilateral atau bilateral eksoptalmia, gasping, erratic, C-shape, dan whirling. Pola infeksi S. Agalactiae strain  NP105O dan  N 14 G  berbeda  pada ikan  nila,  dan  sangat  dipengaruhi  oleh keberadaan  bakteri  pada organ ginjal, otak, dan mata.
KATA KUNCI: ikan nila; infeksi; organ; Streptococcus agalactiae
ABSTRACT: Patterns of Streptococcus agalactiae infection on tilapia (Oreochromis niloticus). By: Achmad Suhermanto, Suhermin, Ridwan, Indri Astuti, and Iis Nurmawanti
Streptococcosis infection caused by different strains of pathogenic bacteria Streptococcus agalactiae has been a major problem in tilapia culture. This research aimed to examine the patterns of S. agalactiae infection of NP105O and N 14 G strains, through targeted organ performance, clinical symptoms and hematological signs of tilapia, Oreochromis niloticus. The characterization of S. agalactiae was based on SNI and API 20 STREP. Bacterial growth test was carried out  using  the  total  plate  count  (TPC)  method.  Bacterial  infection  was  performed  by  injecting  S.  agalactiae intraperitoneally (IP) with a concentration of 10 7 CFU.mL -1 , and the observations were carried out by extracting and
culturing the fish blood in BHIA media. The result of the biochemical test and API 20 STREP confirmed that the isolates was identified as S. agalactiae and NP105O strain was detected as  -hemolytic bacteria. The growth of NP105O strain was faster than N 14 G strain, where their clear presence in blood was observed at 72 and 24 hours, respectively. The result of hematological parameters showed that glucose and leukocytes increased significantly with values of 53.5 ± 2.12 mg.dL -1 and 6.51 ±  0.89 (10 5 cell.mm -3 ), respectively. On  the other hand, hematocrit  and erythrocytes decreased significantly (P<0.05) 21.10 ± 0.07% and 14 ± 4.5 (10 5 cell.mm -3 ) post-S. agalactiae injection. Clinical signs post-infection consisted of melanosis, slow response, anorexia, ocular opacity, purulence, unilateral or bilateral exophthalmos, gasping, erratic movement, C-shape and whirling. NP105O, and N 14 G strains show different patterns of infections on tilapia and strongly influenced by the presence of bacteria in the kidneys, brain, and eyes.
KEYWORDS: infection; organ; Streptococcus agalactiae; tilapia
tindakan preventif yang harus dilakukan saat terjadi infeksi streptococcosis dan dapat memberikan informasi penting untuk pembuatan vaksin dan vaksinasi.
Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menelaah  pola infeksi bakteri S. agalactiae NP105O dan N 14 G, melalui pengamatan performa organ target, gejala klinis, serta hematologi ikan nila (O. niloticus).

## BAHAN DAN METODE
Penelitian dilaksanakan dari bulan November 2018 sampai  April  2019  di  Instalasi  Riset  Pengendalian Penyakit Ikan (IRP2I) Depok, Jawa Barat.

## Ikan Uji
Ikan nila (Oreochromis niloticus) strain Bogor Enhanced Strain  of  Tilapia  (BEST)  digunakan  sebagai  ikan  uji dengan bobot 12-15 g, dipelihara dengan kepadatan 20 ekor/akuarium berukuran 60 cm x 35 cm x 35 cm, dan ketinggian air 25 cm. Aklimatisasi dilakukan selama 14  hari  hingga  ikan  siap  digunakan.  Ikan  uji  bebas patogen  atau  specific  pathogen  free  (SPF)  terhadap bakteri S. agalactiae. Ikan uji dipelihara secara selektif mulai dari seleksi telur, desinfektan telur, dan media pemeliharaan, serta secara berkala dilakukan pengujian pada  lima  ekor  ikan nila  dengan  mengisolasi  organ mata, otak,  dan ginjal ikan kemudian  dikultur pada media brain heart infussion agar (BHIA), hasilnya tidak ditemukan S. agalactiae pada semua organ.

## Bakteri
Bakteri S. agalactiae NP105O diisolasi dari ikan nila yang  berasal  dari  Danau  Sentani,  Papua  dan  N 14 G diperoleh saat terjadi wabah streptococcosis di Danau Cirata, Cianjur, Jawa Barat. Bakteri dikultur di media BHIA (Oxoid Ltd, UK) dan diinkubasi pada suhu 28°C selama  24  jam  (SNI  7545.3,  2009).  Optimalisasi performa  karakter  bakteri  dilakukan  dengan  uji postulat koch’s sebanyak dua kali pada ikan nila.
Pengujian fenotipe S. agalactiae berdasarkan SNI 7545.3  (2009).  Uji konfirmasi  menggunakan  API  20 strep system (bioMérieux Industry, Hazelwood, USA). Data yang diperoleh diidentifikasi menggunakan API

## PENDAHULUAN
Budidaya ikan nila menjadi tumpuan sektor budi daya ikan air tawar nasional. Produksi ikan nila setiap tahun mengalami peningkatan dan dari tahun 2011- 2017  tercatat  sebesar  111,61%  (DJPB,  2018).  Upaya peningkatan produksi melalui intensifikasi budidaya berdampak  pada risiko  mewabahnya infeksi  strepto- coccosis  yang  dominan  disebabkan  Streptococcus agalactiae pada budi daya ikan nila di dunia termasuk Indonesia (Lusiastuti et al., 2014; Pradeep et al., 2016). Infeksi streptococcosis  pada  ikan nila  memiliki  gejala klinis khas yaitu peradangan otak (meningoensefalitis), mata  menonjol  (pop-eye),  unilateral  atau  bilateral eksoptalmia, tulang belakang melengkung membentuk huruf  C,  berenang  tidak  menentu  (erratic),  dan berenang  berputar  (whirling)  (Al  Harbi,  2016; Suhermanto  et  al.,  2019).  Dampak  kerugian  yang ditimbulkan  secara  ekonomi  di  Indonesia  sebesar Rp15  milyar  per  tahun  dengan  kematian  ikan  nila sekitar 20%-60% (Taukhid, 2018; Suhermanto, 2019).
Infeksi  S.  agalactiae  terjadi  di  berbagai  sentra budidaya  ikan  nila  di  Indonesia,  menginfeksi  ikan berbagai  stadia  maupun  ukuran,  dan  diidentifikasi berasal  dari  golongan  biotipe-1  ( β -hemolitik)  dan biotipe-2  (non-hemolitik).  S.  agalactiae β -hemolitik ditemukan menyerang ikan nila ukuran konsumsi dan calon induk di Papua, Kalimantan Selatan, dan Jambi, sedangkan tipe non-hemolitik ditemukan di Pulau Jawa dan Gorontalo (Suhermanto et al., 2019). Kedua tipe bakteri  tersebut  dapat  dibedakan  secara  fenotipe, yaitu S. agalactiae tipe β -hemolitik dapat melisis me- dia blood agar (Suhermanto et al., 2018).
Penelitian tentang patogenisitas S. agalactiae telah dilakukan dan keberadaan gen virulen, serta komponen eksotoksin  extracellular  product  (ECP)  menjadi  salah satu  faktor  penting  penyebab  kematian  ikan  nila (Delannoy  et  al.,  2014;  Kayansamruaj  et  al.,  2014; Kannika  et  al.,  2017;  Suhermanto  et  al.,  2018). Penelitian pola  infeksi dan  keberadaan S.  agalactiae pada organ target ikan nila hingga menyebabkan gejala klinis,  dan  perubahan  parameter  hematologi  belum banyak ditelaah. Kajian ini diperlukan sebagai upaya
20 STREP V7.0 Software
(https:// apiweb.biomerieux.com).

## Pengujian  Bakteri  pada  Ikan  Nila
Pengujian  dilakukan  dengan  menginjeksikan S. agalactiae yang telah diinkubasi selama 24 jam pada suhu  29°C-30°C  secara  IP  pada  20  ekor  ikan  nila dengan  dosis  10 7 CFU.mL -1 .  Pascainjeksi,  ikan dipelihara selama 14 hari dan dilakukan pengamatan gejala klinis, serta perubahan hematologi.

## Uji  Pertumbuhan  Bakteri
Isolat bakteri S. agalactiae NP105O dan N 14 G diuji dengan menumbuhkan di media brain heart infussion (BHI) kemudian diinkubasi dalam stuart orbital incuba- tor  selama masa  pengamatan  (36 jam).  Pengamatan dilakukan dengan rentang waktu empat jam hingga bakteri mencapai fase penurunan. Bakteri pada media BHI selama log phase menjadi stok awal, selanjutnya dilakukan  pengenceran  serial,  disebar  dalam  BHIA, diinkubasi selama 24 jam pada suhu 29°C-30°C, dan dihitung kepadatannya menggunakan metode total plate count  (TPC).

## Uji  Eksistensi  Bakteri pada  Darah  Ikan
Pengambilan darah ikan dilakukan menggunakan syrink terumo 1 mL pada jam ke-1, 2, 4, 6, 12, 24, 48, dan  72.  Dengan  menggunakan  ose,  darah  ikan digoreskan dalam media BHIA, kemudian diinkubasi pada suhu 29°C-30°C selama 24 jam, 48, dan 72 jam dan dilakukan pengamatan.

## Uji Pertumbuhan Bakteri pada Organ Target
Pascainjeksi bakteri NP105O dan N 14 G, dilakukan pengamatan dan uji pertumbuhan bakteri pada organ target  ginjal,  otak,  dan  mata.  Ikan  dianastesi menggunakan minyak cengkeh, kemudian dilakukan isolasi  organ  target  dan  dilakukan  pengenceran menggunakan larutan PBS g/mL. Selanjutnya dilakukan pengenceran berseri (serial dilution) dan sebanyak 100 µL organ yang telah diencerkan dikultur pada media BHIA, diinkubasi selama 24 jam pada suhu 29°C-30°C. Penghitungan  pertumbuhan  bakteri  menggunakan metode  total  plate  count  (TPC).  Pengamatan  dan penghitungan pertumbuhan bakteri dilakukan mulai jam ke-1, 2, 4, 6, 12, 24 (H-1), 48 (H-2), 168 (H-7), dan 336 (H-14).

## Gejala  Klinis
Gejala klinis yang diamati pascainfeksi S. agalactiae berupa gejala makroskopis antara lain: pola berenang, perubahan  anatomi  organ  luar  (kondisi  permukaan tubuh, kondisi mata, dan warna tubuh).

## Analisis  Performa  Darah  Ikan  Nila
Analisis  performa  darah  dilakukan  dengan mengamati sampel darah dari ikan perlakuan pada hari (H-)  ke-0,  7,  dan  14.  Sampel  darah  diambil menggunakan sirink 1-mL dan dimasukkan langsung dalam microtube, kemudian dilakukan penghitungan sel darah putih dan merah menggunakan haemositometer (neubauer),  kadar  hematokrit  (Ht)  diukur  dengan metode  mikrohematokrit  (Stoskopf,  1993). Pengukuran  kadar  glukosa  darah  mengacu  pada Wedemeyer & Yasutake (1977).

## Analisis  Data
Penelitian dilakukan dengan metode eksperimental terdiri atas tiga perlakuan dengan tiga ulangan. Data yang diperoleh ditabulasi dan dianalisis menggunakan program  Microsoft  excel  2013.  Pengaruh  perlakuan dianalisis dengan sidik ragam (ANOVA) dengan bantuan Software Minitab versi 17. Analisis yang menunjukkan pengaruh nyata, dilanjutkan dengan uji Fisher pada taraf kepercayaan 95%.Hasil uji pertumbuhan pada media BHIA  dan  organ  target,  biokimia  dan  API  20  STREP dianalisis secara deskriptif kualitatif.

## HASIL DAN BAHASAN
Karakteristik kedua bakteri berdasarkan hasil uji biokimia antara lain sel berbentuk kokus, Gram positif, katalase,  dan  motilitas  negatif,  positif  tumbuh  di media bile salt 40% dan NaCl 6,5%; negatif uji D-Manni- tol dan Aesculin. Hasil uji tumbuh pada media blood agar menunjukkan karakter berbeda pada kedua isolat. Bakteri  S.  agalactiae  strain  NP105O  mempunyai kemampuan untuk melisis media blood agar, termasuk dalam kelompok  tipe β -hemolitik,  sedangkan  isolat S. agalactiae strain N 14 G tidak melisis darah, tergolong tipe non-hemolitik. Karakterisasi biokimia bakteri S. agalactiae pada ikan nila menunjukkan hasil yang relatif sama dengan penelitian sebelumnya (Anshary et al., 2014; Kannika et al., 2017; Suhermanto et al., 2019). Hasil  uji  API  20  STREP  menunjukkan  bakteri  â- hemolitik  NP105O  memiliki  kemampuan menghidrolisis gula lebih banyak yaitu acetoin (VIP), hipuric  acid,  arginindihidrolase,  ribose,  trehalose,  dan amidon/starch. Sebaliknya, bakteri non-hemolitik N 14 G mampu  menghidrolisis  acetoin  (VIP),  hipuric  acid, arginindihidrolase,  ribose,  dan  alkaline  phosphatase. Kemampuan bakteri dalam menghidrolisis gula pada uji  API  20  STREP  kemungkinan  berkorelasi  positif terhadap  kemampuan  bakteri  dalam  memanfaatkan glukosa dalam tubuh inang sebagai sumber energi.
Hasil  uji  pertumbuhan  bakteri  pada  media  BHIA disajikan pada Gambar 1. Pertumbuhan bakteri fase awal/lag  di  mulai  dari  jam  ke-0—8,  pada  bakteri NP105O fase  logaritma di mulai dari  jam ke-8—20,
sedangkan  bakteri  N 14 G  dari  jam  ke-12—20.  Fase stasioner  bakteri  NP105O  dari  jam  ke-20—28 konsentrasi 10 12 CFU.mL -1 , bakteri N 14 G pertumbuhan optimal  pada  jam  ke-24  dengan  konsentrasi  10 9 CFU.mL -1 , selanjutnya mengalami penurunan mulai jam ke-36.
Replikasi pertumbuhan sel  baru bakteri NP105O lebih  cepat  dibandingkan  N 14 G.  Hasil  penghitungan replikasi  bakteri  NP105O  pada  jam  ke-4,  8,  12,  16, 20, dan 24 masing-masing sebesar 2,2 x 10 3 ; 1,1 x 10 4 ; 1,9 x 10 7 ; 1,7 x 10 7 ; 3,2 x 10 7 ; 7,1 x 10 7 CFU.detik -1 ; sedangkan bakteri N 14 G masing-masing 7,5 x 10 2 ; 3,1 x 10 3 ; 1,5 x 10 6 ; 2,7 x 10 6 ; 8,1 x 10 6 ; 2,2 x 10 7 CFU.detik - 1 . Hasil penelitian yang sama dilakukan Delannoy et al. (2013) dan Suhermanto et al. (2019) bahwa S. agalactiae β -hemolitik  memiliki  pertumbuhan  lebih  cepat dibandingkan  bakteri  tipe  non-hemolitik.  Pola pertumbuhan bakteri yang berbeda pada media BHIA kemungkinan  besar  berpengaruh  terhadap  pola pertumbuhan pada organ target.
Hasil uji pertumbuhan bakteri pada organ target yaitu ginjal, otak, dan mata disajikan pada Gambar 2.
Gambar 2 menunjukkan perbedaan pola serangan dan pertumbuhan bakteri NP105O dan N 14 G pada or- gan target. Bakteri NP105O mampu melisis darah pada inang,  selanjutnya  menuju  organ  target,  sedangkan bakteri  N 14 G  lebih  awal  menuju  organ  target  yaitu ginjal, otak, dan mata. Pertumbuhan kedua bakteri di ginjal, fase log dimulai dari jam ke-4—24 pascainjeksi S.  agalactiae,  sedangkan  fase  stasioner  dari  jam  ke- 48—336. Pertumbuhan di organ otak, fase log dimulai
dari  jam  ke-6-48,  fase  stasioner  mulai  jam  ke-48 hingga  akhir  pemeliharaan.  Bakteri  S.  agalactiae tumbuh  pada  organ  mata  mulai  jam  ke-6-48, selanjutnya mengalami fase stasioner dan penurunan. Pertumbuhan bakteri cenderung berfluktuasi terutama pada  organ  otak.  Pertumbuhan  tertinggi  kedua bakteri  di  semua  organ  berada  pada  konsentrasi 10 7 CFU.mL -1 .
Bakteri NP105O dan N 14 G mengalami pertumbuhan yang cepat pada media BHIA dibandingkan pada organ ikan nila (Gambar 1 dan 2). S. agalactiae tumbuh opti- mal hingga konsentrasi 10 12 CFU.mL -1 pada media yang mengandung  nutrien  sesuai  kebutuhan,  sedangkan pada  organ  target  konsentrasi  lebih  rendah  10 7 CFU.mL -1 disebabkan keterbatasan nutrien dan adanya organ hematopoitik yang berfungsi memproduksi sel- sel darah sebagai komponen imunitas bawaan (innate immunity) yang dapat melisis bakteri. Perbedaan pada kedua  bakteri  kemungkinan  berpengaruh  terhadap gejala  klinis  yang  ditimbulkan,  serta  perubahan  pa- rameter hematologi darah ikan nila.
Uji  eksistensi  kedua  bakteri  di  darah  ikan  nila menunjukkan hasil yang berbeda (Tabel 1). Eksistensi bakteri NP105O di darah hingga jam ke-72, berbeda dengan bakteri N 14 G ditemukan di darah hingga jam ke-24,  sedangkan  pada  jam  ke-48  dan  72  hasilnya negatif.
Bakteri  NP105O  merupakan  bakteri β -hemolitik identik dengan biotipe 1a, dan memiliki gen virulen spesifik yaitu cylE  ( β -hemolysin) (Suhermanto,  2019). Bakteri  ini  memerlukan  unsur  Fe  yang  dibutuhkan
Gambar 1. Pertumbuhan S. agalactiae strain NP105O dan N 14 G secara in vitro pada media BHI.
Figure 1. Growth of S.  agalactiae NP105O  and N 14 G  strains in  vitro on  BHI media. 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 0 4 8 12 16 20 24 28 32 36 Lo g C FU s el -1 Log C FU c el l -1 Pertumbuhan bakteri NP105O dan N 14 G (atas) serta rerata replikasi bakteri β -hemolitik dan non-hemolitik/detik (bawah)
NP105O N14G β -hemolytic Non-hemolytic
Gambar 2. Pertumbuhan S. agalactiae strain NP105O dan N 14 G pada organ ginjal (A), otak (B), dan mata (C).
Figure 2. Growth of S. agalactiae NP105O and N 14 G strains in the kidneys, brain and eyes.
Tabel 1. Eksistensi S. agalactiae strain NP105O dan N 14 G pada darah ikan nila Table 1. The presence of S. agalactiae NP105O and N 14 G strains in tilapia blood
1 2 4 6
12 24 48 72 NP105O + + + + + + + + N 14 G + + + +
+
+ - - Jam ke- (Hours ) Bakteri (Bacteria )
untuk pertumbuhan, melisis darah dan meningkatkan faktor virulensi (D’Urzo et al., 2014; Rosini & Margarit, 2015;  Suhermanto,  2019).  S.  agalactiae  tipe  non- hemolitik N 14 G tidak mampu melisis darah, sehingga ketika bakteri ini diinjeksikan ke ikan nila, langsung bergerak  mengikuti  aliran  darah  menuju  organ  tar- get.  Hasil  identifikasi  keberadaan  S.  agalactiae  N 14 G di darah ikan nila yang dilakukan dengan metode loop- mediated isothermal amplification (LAMP) menunjukkan bahwa pada jam ke-24 bakteri masih berada di darah ikan nila (Caruso & Pepey, 2018).
Perbedaan polainfeksi kedua bakteri memberikan dampak gejala klinis yang muncul cepat pada ikan nila
yang diinjeksi bakteri NP105O yaitu melanosis, respons lambat, anorexia umumnya terjadi 2-3 jam pascainjeksi, sedangkan bakteri N 14 G memberikan dampak gejala yang sama namun terjadi sekitar dua hari pascainjeksi. Gejala  khas  streptococcosis  lainnya:  ocular  opacity, purulens, unilateral  atau bilateral  eksoptalmia,  gasp- ing, erratic, C-shape, dan whirling muncul pada ikan nila sekitar 4-14 hari pascainjeksi. Terjadinya gejala klinis pada ikan nila sebagai  dampak infeksi S.  agalactiae, kemungkinan tidak terjadi secara parsial, namun ada korelasi positif di semua organ dalam tubuh ikan. Su et al. (2017) menyatakan adanya korelasi positif antara kerusakan  yang  terjadi  di  otak  dan  mata,  serta
0.000 2.000 4.000 6.000 8.000 1 2 4 6 12 24 48 168 336 Lo g C FU s el -1 (L og C FU c el l -1 ) Pertumbuhan bakteri jam ke- Time bacterial growth NP105O/g N14G/g 0.000 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000 1 2 4 6 12 24 48 168 336 Lo g C FU s el -1 (L og C FU c el l -1 ) Pertumbuhan bakteri jam ke- Time bacterial growth NP105O/m N14G/m 0.000 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000 1 2 4 6 12 24 48 168 336 Lo g C FU s el -1 Log C FU c el l -1 Pertumbuhan bakteri jam ke- Time bacterial growth NP105O/o N14G/o
menunjukkan bahwa kedua organ tidak berdiri sendiri, saraf optik berfungsi sebagai rute penting transportasi S. agalactiae antara mata dan otak.
Hasil analisi performa darah menunjukkan bahwa kadar glukosa darah ikan nila yang diinjeksi bakteri NP105O mengalami peningkatan signifikan (P<0,05) pada  H-7  dan  H-14  pemeliharaan  pascainjeksi, dibandingkan kontrol dan perlakuan, demikian juga dengan  kadar  hematokrit,  menunjukkan  perbedaan signifikan (P<0,05) antar pelakuan pada H-7. Jumlah total  leukosit  mengalami  peningkatan  signifikan (P<0,05) pada perlakuan pascainjeksi H-7 dan H-14. Total eritrosit pada ikan nila pascainjeksi S. agalactiae NP105O dan N 14 G berbeda signifikan (P<0,05) pada perlakuan H-7 masa pemeliharaan (Tabel 2).
Status  fisiologis  ikan menjadi  bagian  komponen penting  dalam  menentukan  status  kesehatan  ikan (Kum  &  Sekkin,  2011).  Parameter  hematologi merupakan indikator  penting dalam  penentuan sta- tus fisiologis ikan. Infeksi patogen menjadi salah satu faktor penyebab terjadinya peningkatan glukosa darah ikan nila sebagai akibat adanya pelepasan kortisol dan glikogenolisis (Evans et al., 2003). Peningkatan kadar glukosa darah menjadi indikator stres pada ikan (Evans et  al.,  2005)  dan  kondisi  ini  juga  dapat  dijadikan indikator  tingkat  imunitas  ikan  (Zeng  et  al.,  2017). Sumber energi penting bagi ikan berasal dari glukosa, dihasilkan  dari  proses  glikogenolisis  dan glukoneogenesis, berfungsi untuk mempertahankan
kondisi homeostatis dan respons imunitas pada ikan nila (O. mossambicus) (Baltzegar et al., 2014).
Penurunan kadar  hematokrit akan  memengaruhi kadar  hemoglobin  dan  jumlah  eritrosit  pada  ikan. Kenaikan  dan  penurunan  kadar  hematokrit  dapat dijadikan indikator gejala anemia dan polisetemia pada ikan (Alsaid et al., 2014). Terjadinya anemia berdampak negatif  bagi  ikan  karena  proses  metabolisme terganggu  (Suhermanto  et  al.,  2013;  Hamed  et  al., 2019). Hasil penelitian Laith et al. (2017); Suhermanto et al. (2018) diperoleh hasil bahwa infeksi S. agalactiae menyebabkan abnormalitas organ hematopoitik yaitu ginjal, limpa, dan hati ikan.
Eritrosit mengandung hemoglobin yang berperan mengikat dan mendistribusikan oksigen. Rendahnya eritrosit menyebabkan terjadinya anoxia, pengaturan suhu  tubuh  terganggu,  serta  abnormalitas pertumbuhan.  Hasil  penelitian  ikan  nila  merah pascainfeksi  S.  agalactiae  menunjukkan  adanya penurunan yang signifikan jumlah eritrosit, persentase hematokrit,  dan  hemoglobin  (Alsaid  et  al.,  2014), disebabkan  organ  yang  memproduksi  darah  merah yaitu ginjal dan limpa, serta organ hemopoitik lainnya terganggu (Sirimanapong et al., 2018).
Gabriel et al. (2015) menyatakan peningkatan total leukosit pascainjeksi S. agalactiae merupakan respons alami  ikan  terhadap  serangan  patogen,  dan  dapat dijadikan  sebagai  indikator  awal  adanya  infeksi patogen  pada  ikan.  Pascainfeksi  bakteri,  ikan
Parameter
Parameters Kode Code H-0 H-7 H-14 Kontrol (Control) 28 ± 2.8 39 ± 4.24 b 40.5 ± 7.7 b NP105O 28 ± 2.8 52.5 ± 4.95 a 53.5 ± 2.12 a N 14 G 28 ± 2.8 47 ± 1.41 ab 45 ± 5.66 ab Kontrol (Control) 39.59 ± 1.2 32.19 ± 0.52 a 21.59 ± 1.61 b NP105O 39.59 ± 1.2 21.10 ± 0.07 b 31.91 ± 0.46 a N 14 G 39.59 ± 1.2 36.90 ± 2.63 a 34.69 ± 0.02 a Kontrol (Control) 4.47 ± 0.41 3.7 ± 0.31 b 4.78 ± 0.14 b NP105O 4.47 ± 0.41 6.24 ± 0.75 a 6.51 ± 0.89 a N 14 G 4.47 ± 0.41 5.39 ± 0.07 a 5.98 ± 0.08 a Kontrol (Control) 17.4 ± 1.6 16.9 ± 1.3 ab 18.9 ± 1.6 a NP105O 17.4 ± 1.6 14 ± 4.5 b 18.87 ± 1.8 a N 14 G 17.4 ± 1.6
21.8 ± 1.2 a 20.47 ± 1.8 a
Hematokrit Hematocrit  (%) Leukosit  (10 5 sel.mm -3 ) Leukocytes (10 5 cell.mm -3 )
Eritrosit (10 5 sel.mm -3 ) Erythrocytes (10 5 cell.mm -3 ) Glukosa Glucose  (mg.dL -1 )
Tabel 2. Performa  nilai  glukosa,  hematokrit,  leukosit,  dan  eritrosit  pada  darah  ikan  nila
O. niloticus
Table 2. Value  performance  of  glucose,  hematocrit,  leukocytes,  and  erythrocytes  of  tilapia, O.  niloticus
umumnya mengalami leukositosis seperti penelitian yang  dilakukan  pada  ikan  nila  merah  dan  ikan  mas (Alsaid et al., 2014; Suhermanto et al., 2013).
Pola  serangan  S.  agalactiae  NP105O  dan  N 14G memberikan  pengaruh yang  berbeda  pada ikan  nila terutama parameter respons imun non-spesifik. Ikan nila  yang  diinfeksi  bakteri  NP105O  mengalami peningkatan total leukosit dibandingkan dengan ikan nila yang diinfeksi bakteri N 14 G. Leukosit merupakan komponen utama respons imun non-spesifik pada ikan melalui  aktivitas  pagositik  yang  dilakukan  oleh  sel- sel  leukosit.  Infeksi  bakteri  dicegah  oleh  sistem leukosit dan sel-sel jaringan leukosit melalui proses pagositosis dan pembentukan antibodi. Peningkatan produksi total leuosit diarahkan menuju area inflamasi dan  merupakan  respons  dalam  bentuk  proteksi terhadap adanya infeksi bakteri.
Eritrosit yang merupakan parameter respons imun non-spesifik mengalami perbedaan pascauji tantang S. agalactiae NP105O dan N 14 G. Ikan nila yang diinfeksi bakteri NP105O mengalami penurunan yang signifikan dibandingkan  infeksi  bakteri  N 14 G.  Bakteri  NP105O merupakan  bakteri  tipe β -hemolitik  yang  dideteksi memiliki gen virulen cylE ( β -hemolysin cytolysin).  Gen ini  berfungsi  melisis  darah  merah  ikan  sehingga menyebabkan terjadinya penurunan total eritrosit dan hematokrit, yang akan mengganggu metabolisme ikan (Suhermanto, 2019).

## KESIMPULAN
Pola infeksi S. agalactiae strain NP105O dan N 14 G menunjukkan pola yang berbeda pada ikan nila. Hal ini dipengaruhi oleh keberadaan bakteri pada organ ginjal,  otak,  dan  mata.  Waktu  infeksi  bakteri S. agalactiae strain NP105O yang lebih lama di dalam darah, akan  berpengaruh terhadap gejala  klinis dan perubahan profil dan konposisi sel darah ikan nila (O. niloticus).

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima kasih kepada Badan Riset dan Sumber Daya Kelautan  dan  Perikanan,  Kementerian  Kelautan  dan Perikanan  (BRSDMKP-KKP),  Balai  Riset  Perikanan Budidaya  Air  Tawar  dan  Penyuluhan  Perikanan (BRPBATPP)  Bogor,  Instalasi  Riset  Pengendalian  dan Penyakit Ikan (IRP2I) Depok, dan Balai Karantina Ikan, Pengendalian  Mutu  dan  Keamanan  Hasil  Perikanan (BKIPM 1) Jayapura Papua.

## DAFTAR  ACUAN
Al Harbi, A.H. (2016). Phenotypic and genotypic cha- racterization  of  Streptococcus  agalactiae  isolated from  hybrid  tilapia  (Oreochromis  niloticus  × O. aureus). Aquaculture, 464, 515-520.
Alsaid,  M.,  Abuseliana,  A.F.,  Daud,  H.H.,  Mustapha, N.M., Bejo, S.K., Abdelhadi, Y.M., & Hamdan, R.H. (2014). Haematological, biochemical and clinical signs changes following experimental infection of Streptococcus  agalactiae  in  red  hybrid  tilapia (Oreochromis  sp.).  Aquacultura  Indonesiana,  15, 86-93.
Anshary, H., Kurniawan, R.A., Sriwulan, S., Ramli, R., & Baxa, D.V. (2014). Isolation and molecular iden- tification of the etiological agents of streptococco- sis in nile tilapia (Oreochromis niloticus) cultured in net  cages  in  Lake  Sentani,  Papua,  Indonesia. SpringerPlus, 3(627), 1-11.
Baltzegar, D.A., Reading, B.J., Douros, J.D., & Borski, R.J. (2014). Role for leptin in promoting glucose mobilization during acute hyperosmotic stress in teleost  fishes.  Journal  of  Endocrinology,  220(1), 61-72.
Caruso, D. & Pepey, E. (2018). Diagnostic of Strepto- coccus agalactiae by loop-mediated isothermal am- plification (LAMP) on Oreochromis niloticus. Semi- nar: Streptococcal Disease: Detection and Preven- tion. Depok, Indonesia, November 9, 2018.
Direktorat Jenderal Perikanan Budidaya [DJPB]. (2018). Data  teknis  Direktorat  Jenderal  Perikanan Budidaya, Kementerian Kelautan dan Perikanan.
D’Urzo, N., Martinelli, M., Pezzicoli, A., Cesare, V.D., Pinto, V.,  Margarit, I.,  Telford, J.L.,  & Maione,  D. (2014).  Acidic  pH  strongly  enhances  in  vitro bioûlm formation by a subset of hypervirulent ST- 17 Streptococcus agalactiae strains. Applied and En- vironmental Microbiology, 80(7), 2176-2185.
Delannoy,  C.M.J.,  Crumlish,  M.,  Fontaine,  M.C., Pollock,  J.,  Foster,  G.,  Dagleish,  M.P.,  Turnbull, J.F.,  &  Zadoks,  R.N.  (2013).  Human  Streptococcus agalactiae  strains  in  aquatic  mammals  and  fish. BMC Microbiology, 13(1), 41.
Delannoy,  C.M.J.,  Zadoks,  R.N.,  Crumlish,  M., Rodgers,  D.,  Lainson,  F.A.,  Ferguson,  H.W.,  & Fontaine,  M.C.  (2014).  Genomic  comparison  of virulent and non-virulent Streptococcus agalactiae in fish. Journal of Fish Diseases, 39(1), 13-29.
Evans,  J.J.,  Shoemaker,  C.A.,  &  Klesius,  P.H.  (2003). Effects  of  sublethal  dissolved  oxygen  stress  on blood glucose and susceptibility to Streptococcus agalactiae in nile tilapia Oreochromis niloticus. Jour- nal of Aquatic Animal Health, 15(3), 202-208.
Evans,  J.J.,  Klesius,  P.H.,  Shoemaker,  C.A.,  & Fitzpatrick,  B.T.  (2005).  Streptococcus  agalactiae vaccination  and  infection  stress  in  nile  tilapia, Oreochromis niloticus. Journal of Applied Aquaculture, 16, 105-115.
Gabriel,  N.N.,  Qiang,  J.,  He,  J.,  Ma,  X.Y.,  Kpundeh, M.D.,  &  Xu,  P.  (2015).  Dietary  aloe  vera  supple- mentation  on  growth  performance,  some haemato-biochemical parameters and disease re- sistance against Streptococcus iniae in tilapia (GIFT). Fish & Shellfish Immunology, 44, 504-514.
Hamed,  M.,  Soliman,  H.A.,  Osman,  A.G.,  &  Sayed, A.E.D.H.  (2019).  Assessment  the  effect  of  expo- sure  to  microplastics in  nile  tilapia  (Oreochromis niloticus) early juvenile: I. Blood biomarkers. Che- mosphere, 228, 345-350.
Kannika,  K.,  Pisuttharachai,  D.,  Srisapoome,  P., Wongtavatchai, J., Kondo, H., Hirono, I., Unajak, S., & Areechon, N. (2017). Molecular serotyping, virulence gene profiling and pathogenicity of Strep- tococcus agalactiae  isolated  from tilapia  farms  in Thailand by multiplex PCR. Journal of Applied Mi- crobiology, 122(6), 1497-1507.
Kayansamruaj,  P.,  Pirarat,  N.,  Katagiri,  T.,  Hirono,  I.,
& Rodkhum, C. (2014). Molecular characterization and virulence gene profiling of pathogenic Strep- tococcus  agalactiae  populations  from  tilapia (Oreochromis  sp.)  farms  in  Thailand.  Journal  of Veterinary Diagnostic Investigation, 26(4), 488-495.
Kum C. & Sekkin S. (2011). The immune system drugs in fish: Immune function, immunoassay, drugs. In Recent  Advances  in  Fish  Farms.  Intech  Open, p. 169-216.
Laith,  A.A.,  Ambak,  M.A.,  Hassan,  M.,  Sheriff,  S.M., Nadirah,  M.,  Draman,  A.S.,  Wahab,  W.,  Wan Ibrahim,  W.N.,  Aznan,  A.S.,  Amina  Jabar,  A.,  & Najiah,  M.  (2017).  Molecular  identification  and histopathological  study  of  natural  Streptococcus agalactiae infection in hybrid tilapia (Oreochromis niloticus). Veterinary World, 10(1), 101-111
Lusiastuti, A.M., Textor, M., Seeger, H., Akineden, Ö., & Zschöck, M. (2014). The occurrence of Strepto- coccus  agalactiae  sequence  tipe  261  from  fish disease outbreaks of tilapia Oreochromis niloticus in Indonesia. Aquaculture Research, 45, 1260-1263.
Pradeep,  P.J.,  Suebsing,  R.,  Sirthammajak,  S.,
Kampeera,  J.,  Jitrakorn,  S.,  Saksmerprome,  V.,  & Jeffs, A. (2016). Evidence of vertical transmission and tissue tropism of Streptococcosis from natu- rally infected red tilapia (Oreochromis spp.). Aqua- culture Reports, 3, 58-66.
Rosini, R. & Margarit, I. (2015). Biofilm formation by Streptococcus  agalactiae:  Influence  of  environ- mental  conditions  and  implicated  virulence  fac- tors. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology, 5(6), 1-4.
Sirimanapong,  W.,  Thompson,  K.D.,  Shinn,  A.P., Adams, A., & Withyachumnarnkul, B. (2018). Strep- tococcus agalactiae infection kills red tilapia with chronic  Francisella  noatunensis  infection  more rapidly than the fish without the infection. Fish & Shellfish Immunology, 81, 221-232.
Standar  Nasional  Indonesia  7545.3.  [SNI].  (2009).
Metode  identifikasi  bakteri  pada  ikan  secara konvensional. Bagian 2.
Stoskopf, M.K. (1993). Fish medicine. Sounders W.B., Philadelphia, P.A. (USA). 882 pp.
Su, Y., Feng, J., Liu, C., Li, W., Xie, Y., & Li, A. (2017). Dynamic bacterial  colonization and  microscopic lesions in multiple organs of tilapia infected with low and high pathogenic Streptococcus agalactiae strains. Aquaculture, 471, 190-203.
Suhermanto, A., Sri, A., & Maftuch. (2013). Effect of total phenol of sea cucumber (Holothuria scabra) on  the  non-specific  immune  response  of  carp (Cyprinus  carpio.).  Jurnal  Bumi  Lestari,  13(2), 225-233.
Suhermanto, A., Sukenda, S., Zairin, J.M., Lusiastuti, A.M., & Nuryati, S. (2018). Toksisitas sel utuh dan extracellular product (ECP) Streptococcus agalactiae β -hemolitik  dan  non-hemolitik  pada  ikan  nila (Oreochromis niloticus). Jurnal Riset Akuakultur, 13(4), 317-328.
Suhermanto, A., Sukenda, S., Zairin, J.M., Lusiastuti, A.M.,  &  Nuryati,  S.  (2019).  Characterization  of Streptococcus  agalactiae  bacterium  isolated  from tilapia (Oreochromis niloticus) culture in Indonesia. AACL Bioflux, 12(3), 756-766.
Suhermanto, A. (2019). Vaksin polivalen S. agalactiae untuk pencegahan penyakit streptococcosis pada ikan nila.  Disertasi.  Pascasarjana.  Institut  Pertanian Bogor.
Taukhid. (2018). Current status of streptococcosis (tila- pia)  in  Indonesia.  In  Workshop  Streptococcus agalactiae  bacteria  detection  assisted  by  loop- mediated  isothermal  amplification  (LAMP).  Depok, November 9. Fish Health Laboratory.
Wedemeyer,  G.A.  &  Yasutake,  W.T.  (1977).  Clinical methods for the assessment of the effect on en- vironmental stress on fish health. Technical Papers of the  U.S.  Fish and  Wildlife  Service. US  Depart- ment of the Interior. United States Fish and Wildlife Service, 89, 1-17.
Zeng,  Z.H.,  Du,  C.C.,  Liu,  S.R.,  Li,  H.,  Peng,  X.X.,  & Peng, B. (2017). Glucose enhances tilapia against Edwardsiella tarda infection through metabolome reprogramming.  Fish  &  Shellfish  Immunology,  61, 34-43.