Sasebohe et al.

## Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Binahong Terhadap
Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes Penyebab Jerawat
Antibacterial Activity of Binahong Leaf Ethanol Extract Against Staphylococcus aureus and Propionibacterium acnes that Cause Acne
Vibe Yunita Sasebohe 1 , Vinsa Cantya Prakasita 1 * dan Dwi Aditiyarini 1
1 Fakultas Bioteknologi, Universitas Kristen Duta Wacana, Yogyakarta, Indonesia
Abstrak
Jerawat merupakan salah satu masalah pada kulit yang disebabkan oleh peningkatan produksi sebum, pengelupasan keratinosit, inflamasi serta pertumbuhan bakteri. Masalah ini sering dialami oleh banyak orang dan berdampak pada penurunan kepercayaan diri, menimbulkan rasa tidak nyaman, serta berkurangnya interaksi sosial. Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes merupakan bakteri yang sering menginfeksi jerawat. Pengobatan dengan antibiotik yang tidak tepat dapat menimbulkan resistensi bakteri penyebab jerawat. Tanaman binahong dimanfaatkan oleh masyarakat untuk pengobatan tradisional. Kandungan senyawa fitokimia yang ada pada daun binahong diduga memiliki aktivitas antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antibakteri dari ekstrak daun binahong terhadap Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes penyebab jerawat. Daun binahong diekstrak dengan metode maserasi menggunakan etanol 70% dan dilakukan screening fitokimia. Uji antibakteri dilakukan dengan metode diffuse disc , kemudian dilanjutkan dengan metode micro-dilution untuk mengetahui Minimum Inhibitory Concentration (MIC) dan metode swab untuk mengetahui Minimum Bactericidal Concentration (MBC) terhadap bakteri target. Ekstrak etanol daun binahong memiliki kandungan flavonoid, alkaloid, saponin, dan tannin yang memiliki daya hambat terbaik pada konsentrasi 80% terhadap Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes dengan masing-masing diameter zona hambat 14,66±0,57 mm (kuat) dan 11,66±0,57 mm (kuat). Nilai MIC terhadap Staphylococcus aureus sebesar 20% dan terhadap Propionibacterium acnes sebesar 5%. Nilai MBC terhadap Staphylococcus aureus sebesar 60% dan terhadap Propionibacterium acnes sebesar 5%.
Kata Kunci: Antibakteri, Ekstrak Etanol Daun Binahong, Propionibacterium acnes , Staphylococcus aureus
Abstract
Acne is a skin problem caused by increased sebum production, exfoliation of keratinocytes, inflammation and bacterial growth. This problem is often experienced by many people and has an impact on reducing self-confidence, causing discomfort, and reducing social interaction. Staphylococcus aureus and Propionibacterium acnes are bacteria that often infect acne. Improper antibiotic treatment can cause resistance to acne-causing bacteria. The binahong plant is used by the community for traditional medicine. The content of phytochemical compounds present in binahong leaves is thought to have antibacterial activity. This study aims to determine the antibacterial activity of binahong leaf extract against Staphylococcus aureus and Propionibacterium acnes that cause acne. Binahong leaves were extracted by maceration method using 70% ethanol and phytochemical screening was carried out. The antibacterial test was carried out using the diffuse disc method, followed by the micro-dilution method to determine the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and the swab method to determine the Minimum Bactericidal Concentration (MBC) of the target bacteria. The ethanol extract of binahong leaves contains flavonoids, alkaloids, saponins, and tannins which have the best inhibition at a concentration of 80% against Staphylococcus aureus and Propionibacterium acnes with each inhibition zone diameter of 14.66+0.57 mm (strong) and 11, 66+0.57mm (strong). The MIC value for Staphylococcus aureus is 20% and for Propionibacterium acnes is 5%. The MBC value for Staphylococcus aureus is 60% and for Propionibacterium acnes is 5%.
Keywords: Antibacterial, Binahong Leaf Ethanol Extract, Propionibacterium acnes, Staphylococcus aureus
* Corresponding author:

## Vinsa Cantya Prakasita
Fakultas Bioteknologi, Universitas Kristen Duta Wacana, Jl. Wahidin Sudirohusodo 5-25, Yogyakarta, 55224, Email: vinsa.cantya.p@staff.ukdw.ac.id
Sasebohe et al.
Pendahuluan Jerawat atau acne vulgaris merupakan k e a d a a n   p a d a   k u l i t   d i m a n a   p o r i - pori mengalami penyumbatan. Keadaan tersebut menyebabkan munculnya bintik merah,  abses  dan  peradangan.  Jerawat ini dapat terjadi pada semua orang baik laki-laki maupun perempuan (Afriyanti, 2015; Susanto et al , 2013). Hasil penelitian Widjajanto (2008) memaparkan data bahwa sebanyak 48,06% dari total jumlah kunjungan pasien di bagian kosmetik medik URJ RSUD Dr. Soetomo Surabaya pada tahun 2005 merupakan pasien kasus acne vulgaris. Persentase kejadian tersebut hampir sama di tahun-tahun setelahnya yaitu sebesar 40,54% di tahun 2006 dan 44,90% pada tahun 2007. Kelompok Studi Dermatologi Kosmetika Indonesia (2018) juga mencatat adanya kenaikan dari kejadian acne vulgaris yaitu 80% pada tahun 2007 serta 90% pada tahun 2009. Jerawat memiliki faktor utama p e n y e b a b n y a   y a i t u   p e n i n g k a t a n produksi sebum, pengelupasan dari keratinosit, inflamasi serta pertumbuhan bakteri (Athikomkulchai et al. , 2008). Menurut Ayudianti & Indramaya (2014), acne vulgaris pada wanita disebabkan oleh hormonal dan kosmetik, sedangkan pada pria oleh makanan dan stress. Menurut Meilina dan Hasanah  (2018),  kelenjar  minyak  yang aktif secara berlebihan dapat menyebabkan jerawat dan diperparah oleh adanya infeksi bakteri. Penelitian yang dilakukan oleh Dhillon & Varshney (2013), memperoleh data adanya dominasi Staphylococcus aureus (45%), serta Propionibacterium acnes (32%) pada lesi jerawat. Penelitian yang sama dilakukan oleh Shamsi et al. (2015), bahwa ditemukan Staphylococcus aureus (44%) dan Propionibacterium acnes sebanyak 34% dalam lesi jerawat.
Pengobatan terhadap jerawat dapat dilakukan dengan pemberian antibiotik baik secara oral maupun topikal menggunakan antibiotik klindamisin, tetrasiklin dan eritromisin (Kelompok Studi Dermatologi Kosmetik Indonesia, 2018). Pengobatan jerawat juga dilakukan dengan penggunaan benzoil peroksida dan retinoid.
Pengobatan tersebut memiliki efek samping merugikan seperti iritasi terhadap kulit serta dapat menyebabkan resistensi bakteri jika penggunaannya tidak tepat (Djajadisastra et al , 2009; Kemenkes RI, 2011). Hasil penelitian dari Sitohang et al. (2019), menunjukkan bahwa Staphylococcus aureus dilaporkan telah resisten terhadap eritromisin, sedangkan Propionibacterium acnes telah resisten terhadap beberapa antibiotik diantaranya eritromisin dan tetrasiklin.
I n d o n e s i a   a d a l a h   n e g a r a megabiodiversitas kedua di dunia yang memiliki keanekaragaman hayati termasuk ribuan spesies tanaman obat yang telah dimanfaatkan oleh masyarakat. Tanaman Binahong merupakan salah satu tanaman obat yang tumbuh subur pada daerah beriklim tropis. Tanaman ini dapat dengan mudah ditemukan karena dapat tumbuh di berbagai area yaitu dataran tinggi atau dataran rendah (Aini, 2014; Suparjo et al ., 2016). Senyawa fitokimia yang terkandung dalam tanaman binahong diantaranya saponin dan flavonoid. Senyawa ini diduga memiliki aktivitas antimikrobia. Senyawa aktif dari ekstrak daun binahong sebelumnya telah dibuktikan dapat menghambat pertumbuhan Eschericia coli dan Shigella flexnert (Darsana et al , 2012; Ainurrochmah et al , 2013). Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui aktivitas antimikrobia ekstrak etanol daun binahong terhadap Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes penyebab jerawat sehingga bisa dijadikan alternatif terapi penyembuhan jerawat.
Materi dan Metode Alat yang digunakan pada penelitian ini yaitu blender , saringan, rotary evaporator , timbangan digital, spatula, eppendorf, tabung reaksi, vorteks, pipet ukur, gelas ukur, object glass , pipet tetes, erlenmeyer , petri dish, autoclave , oven, bunsen, jarum ose, pinset, kertas cakram, inkubator, mikropipet, penggaris, mircroplate 96 well, dan microplate reader . Bahan-bahan yang dipakai dalam penelitian ini yaitu daun binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis), etanol 70%, HCl 2N, NaCl, mayer, wagner, Pb asetat 10%, NaOH 20%, FeCl 3 5% dan 10%, kristal violet, lugol,
Sasebohe et al.
aseton alkohol, safranin, H 2 O 2 3%, antibiotik klindamisin, akuades, kertas perkamen, karet, kapas, kertas cakram, cotton swab steril, media Blood Agar Plate (BAP), Mueller Hinton Agar (MHA), Nutrient Agar (NA), Brain Heart Infusion broth (BHIb), Tryptic Soy Agar (TSA) serta bakteri uji yaitu Staphylococcus aureus FNCC 0047 dan Propionibacterium acnes ATCC 11827.

## Preparasi Sampel Daun Binahong
Sampel daun binahong diperoleh dari Pasar Tradisional Beringharjo Yogyakarta dengan daun yang sudah kering. Daun binahong selanjutnya dipisahkan dari bagian tanaman lain (Daryono et al., 2014). Proses selanjutnya yaitu dilakukan penghalusan daun binahong dengan cara diblender dan disaring sehingga didapatkan serbuk halus (Surahmaida et al. , 2019).
Ekstraksi Daun Binahong Simplisia daun binahong diekstraksi dengan metode maserasi, pelarut yang digunakan adalah etanol 70% dengan perbandingan 1 : 7 (serbuk : larutan penyari). Simplisia daun binahong dimasukkan kedalam wadah bersama dengan etanol 70%. Proses ekstraksi didiamkan selama 3 hari dan sesekali diaduk, selanjutnya dilakukan re- maserasi kembali selama 2 hari. Penyaringan dilakukan dengan kertas saring dan hasilnya disebur filtrat. Setiap filtrat dimasukan ke dalam rotary evaporator dengan suhu 40 0 C. Hasil ekstrak yang didapatkan selanjutnya dimasukkan ke dalam oven dengan suhu yang sama hingga menjadi ekstrak kental (Puspitasari dan Proyogo, 2017; Samirana et al. , 2017; Putri et al. , 2013).
Kandungan Senyawa Fitokimia Alkaloid Sebanyak 0,3 g ekstrak daun binahong ditambahkan  5  ml  HCl  2N,  kemudian dipanaskan dalam waktu 2-3 menit sambil diaduk. Campuran tersebut ditambah 0.3 g bubuk NaCl, diaduk rata dan disaring. Filtrat yang didapatkan ditambah larutan 5 ml HCl 2N dan dibagi menjadi 3 bagian. Larutan pertama diteteskan pereaksi Mayer, dan larutan di tabung kedua diteteskan
perekasi Wagner, dan larutan di tabung ketiga digunakan sebagai blanko. Hasil positif alkaloid ditunjukkan dengan adanya kekeruhan atau endapan pada dasar larutan (Fitriyani et al ., 2011).
Flavonoid Sebanyak 0,1 g ekstrak daun binahong dilarutkan dalam 2 ml akuades dan dibagi menjadi 3 tabung. Tabung pertama digunakan sebagai kontrol, tabung kedua dituangkan 1 ml larutan timbal asetat 10%, dan tabung ketiga dituangkan beberapa tetes NaOH 20%. Tabung kedua positif mengandung flavonoid jika timbul endapan kuning. Hasil positif flavonoid ditunjukkan dengan adanya perubahan warna menjadi kuning (Yuda et al. , 2017).
Tanin Sebanyak 0,3 g ekstrak daun binahong dilarutkan dalam 2 ml akuades dan dibagi ke dalam 2 tabung. Tabung pertama digunakan sebagai kontrol. Tabung yang kedua diberi beberapa tetes larutan FeCl 3 5% atau FeCl 3 10%. Hasil positif tannin ditunjukkan dengan adanya perubahan warna menjadi hijau, biru atau menjadi gelap (Yuda et al. , 2017).
Saponin Sebanyak 1 g ekstrak daun binahong ditambah 10 mL air panas. Setelah dingin, larutan dikocok sampai benar-benar homogen dalam waktu 10 detik. Hasil positif saponin ditunjukkan dengan adanya buih dengan tinggi 1-10 cm setelah penambahan 1 tetes HCl 2 N dengan penghitungan waktu tidak kurang dari 10 menit buih yang terbentuk tetap tidak hilang (Mutmainnah, 2017).

## Karakteristik Bakteri
Morfologi Koloni Metode  yang  digunakan  untuk menguji morfologi koloni dari bakteri yaitu pengkulturan bakteri dengan cara streak plate pada media BAP. Media ini dipakai untuk melihat kemampuan melisiskan darah dari bakteri (Djannatun, 2008).
Morfologi Sel Bakteri diambil menggunakan ose steril dan diletakkan pada gelas objek
Sasebohe et al.
yang sudah ditetesi dengan akuades steril, kemudian  difiksasi  sampai  kering.  Cat gram A diteteskan, kemudian dicuci dengan akuades setelah dibiarkan pada gelas objek selama 1 menit. Cat gram B diteteskan, kemudian dicuci dengan akuades mengalir setelah didiamkan diatas gelas objek selama 1 menit. Cat gram C diteteskan, kemudian dicuci menggunakan akuades sesudah didiamkan pada gelas objek selama 10-20 detik. Cat Gram D diteteskan, kemudian dicuci dengan air mengalir setelah didiamkan di atas gelas objek selama 15 detik. Fiksasi dilakukan pada gelas objek dan selanjutnya hasil pengecatan diamati dengan mikroskop (Hidayat & Alhadi, 2012; Dewi, 2013 ).
Katalase Bakteri Uji katalase dilakukan dengan mengambil biakan bakteri, kemudian diletakkan di atas gelas obyek. Sebanyak 1 tetes H 2 O 2 3% dituangkan di atas gelas objek dan dicampurkan dengan merata. Hasil positif ditunjukkan dengan adanya gelembung gas atau O 2 (Hidayat & Alhadi, 2012).
A k t i v i t a s   A n t i b a k t e r i   t e r h a d a p S t a p h y l o c o c c u s   a u r e u s d a n Propionibacterium acne
Disk Diffusion Metode disk diffusion yang digunakan dalam uji ini mengacu metode disk diffusion Kirby-Bauer, yaitu pengkulturan bakteri dengan penggoresan menggunakan cotton swab secara merata pada permukaan media. Konsentrasi ekstrak daun binahong dalam pengujian ini dibuat dengan beberapa variasi konsentrasi larutan yaitu 20%, 40%, 60%, 80% dan 100%. Kertas cakram direndam pada masing-masing konsentrasi ekstrak, begitu juga kontrol positif (klindamisin) dan kontrol negatif  (akuades  steril).  Kertas  cakram tersebut diletakan pada permukaan media MHA yang sudah diinokulasi bakteri target, kemudian media diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 24 jam. Pengujian dilakukan dengan 3 kali pengulangan. Diameter zona hambat yang terbentuk di sekitar kertas cakram diukur dengan penggaris dan dikategorikan (Bauer et al ., 1966; Novaryatiin et al. , 2018;
Savitri et al. , 2018).
Minimum Inhibition Concentration (MIC) Uji MIC dilakukan dengan metode mikrodilusi. Konsentrasi ekstrak etanol daun binahong terbaik dari uji disk diffusion digunakan sebagai dasar penentuan variasi konsentrasi pada uji MIC. Konsentrasi yang dipakai untuk menguji aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus yaitu 60- 0,03%, sedangkan Propionibacterium acnes 20-0,07% dengan metode two-fold dilution. Media BHI sebanyak 80 µL dituangkan ke dalam well . Sebanyak 10 µl masing-masing konsentrasi ekstrak daun binahong dan 10 µL bakteri target dengan konsentrasi 1x10 5 ditambahkan ke dalam well dan dihomogenkan. Kontrol positif menggunakan antibiotik Klindamisin sebanyak 10 µL, sedangkan kontrol negatif menggunakan akuades steril sebanyak 10 µL. Microplate diinkubasi selama 24 jam dalam suhu 37 0 C. Pembacaan kekeruhan ( optical density ) yang ditimbulkan dari pertumbuhan bakteri menggunakan microplate reader dengan panjang  gelombang 600 nm (Guo et al., 2016;
Socenta et al. , 2017; Asri et al ., 2019).
Minimum Bactericidal Concentration (MBC) Konsentrasi terbaik dari hasil uji MIC digunakan sebagai dasar pengujian MBC. Hasil OD terendah dari aktivitas hambat konsentrasi ekstrak daun binahong terhadap bakteri target di streak pada media agar padat. Media diinkubasi pada suhu 37 0 C selama 24 jam. Pertumbuhan bakteri diamati setelah 24 jam. Media agar yang tidak tumbuh koloni bakteri target dinyatakan sebagai nilai MBC (Iman et al. , 2014; Hendiani et al ., 2020).
Analisis Data Analisis data terhadap hasil pengujian nilai  MIC  dan  MBC  dilakukan  untuk menganalisis data terdistribusi normal dengan uji normalitas Shapiro -Wilk. Uji Shapiro Wilk digunakan karena cocok untuk data suatu sampel yang kecil (N<50). Data yang terdistribusi normal diteruskan uji parametrik One Way ANOVA, namun jika data tidak terdistribusi normal dianalisa dengan Uji non-parametrik Kruskal-Wallis. Analisis ini memakai perangkat lunak SPPS (Sirait, 2001; Suardi, 2019; Jamco & Balami, 2022).
Sasebohe et al.

## Hasil
Persentase Rendemen Ekstrak Etanol Daun Binahong Ekstrak etanol kental daun binahong didapatkan setelah dipisahkan ekstrak dengan pelarut menggunakan rotary evaporator . Dari proses tersebut didapatkan persentase rendemen sebesar 26,06% dan berat kental ekstrak 104,25.
Tabel 1. Hasil Persentase Rendemen Ekstrak Etanol
Daun Binahong Tanaman Berat Simplisia (gram) Berat Ekstrak (gram) Persentasi Yield (%) Daun Binahong 400 104,25 26,06 %

## Kandungan Senyawa Fitokimia
Pengujian fitokimia secara kualitatif dapat mendeteksi adanya senyawa metabolit sekunder lewat perubahan warna. Ekstrak etanol daun binahong positif terdeteksi adanya senyawa metabolit sekunder tannin, saponin, flavonoid, dan alkaloid.

## Karakteristik Staphylococcus aureus
P e n g u j i a n   m o r f o l o g i   k o l o n i Staphylococcus aureus menghasilkan koloni berwarna putih susu dengan zona hemolisis yaitu  gamma  hemolisis.  Morfologi  sel Staphylococcus aureus berbentuk coccus dan berawarna ungu yang membuktikan bahwa bakteri tersebut tergolong dalam bakteri Gram positif. Hasil uji katalase Staphylococcus aureus menunjukkan adanya gelembung gas setelah bakteri dicampurkan dengan H 2 O 2 3%.

## Karakteristik Propionibacterium acnes
Morfologi koloni Propionibacterium acnes berbentuk sirkuler, berwarna putih dan buram, dengan zona betta hemolisis. Sel Propionibacterium acnes berbentuk basil
Gambar 1. Morfologi Staphylococcus aureus hasil pengamatan mikroskop (A) Koloni Staphylococcus aureus berbentuk bulat, berwarna putih susu dengan zona gamma hemolisis , (B) Staphylococcus aureus berbentuk coccus dan berwarna ungu, (C) Hasil uji katalase Staphylococcus aureus, terdapat gelembung gas (panah merah)
Gambar 2. Morfologi Propionibacterium acnes hasil pengamatan mikroskop (A) Koloni Propionibacterium acnes berbentuk sirkuler, berwarna putih dan buram, dengan zona betta hemolisis, (B) Sel Propionibacterium acnes berbentuk basil (pleomorfik) dan berwarna ungu, (C) Hasil uji katalase Propionibacterium acnes terdapat gelembung gas (panah merah).
Tabel 2.  Kandungan Senyawa Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Binahong
Senyawa Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Binahong Tannin + Saponin + Flavonoid + Alkaloid + Keterangan  :  (+)  Senyawa  metabolik  sekunder terdeteksi A B C A
B C
Sasebohe et al.
(pleomorfik) dan berwarna ungu. Hasil uji katalase Propionibacterium acnes menunjukkan adanya gelembung gas setelah bakteri dicampurkan dengan H 2 O 2 3%.
Uji Disk Diffusion terhadap Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes Semua konsentrasi ekstrak etanol daun binahong memiliki daya hambat sedang hingga kuat terhadap Staphylococcus  aureus dan Propionibacterium acnes . Daya hambat terbaik dihasilkan pada konsentrasi 80% dengan masing-masing diameter zona hambat 14,66 ± 0,57 mm (kuat) dan 11,66 ± 0,57 mm (kuat).
Nilai MIC ekstrak terhadap Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes Hasil uji MIC ekstrak etanol daun binahong terhadap Staphylococcus aureus menunjukkan bahwa konsentrasi 20%
merupakan konsentrasi minimal yang masih dapat  menghambat  bakteri  (OD=0,082, P>0,05), sedangkan MIC ekstrak etanol daun binahong terhadap Propionibacterium acnes menunjukkan bahwa konsentrasi 5% merupakan konsentrasi terendah yang masih dapat  menghambat  bakteri  (OD=0,015; P>0,05).
Nilai MBC ekstrak terhadap Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes Nilai  MBC  ekstrak  etanol  daun binahong terhadap Staphylococcus  aureus menunjukkan bahwa tidak adanya pertumbuhan koloni Staphylococcus  aureus pada konsentrasi 60%. Hasil dari pengujian MBC ekstrak daun binahong 5% terhadap Propionibacterium acnes tidak menunjukkan adanya  pertumbuhan koloni sehingga konsentrasi tersebut dinyatakan sebagai konsentrasi bunuh minimum.
Tabel 3. Daya Hambat Ekstrak Etanol Daun Binahong terhadap Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes dengan metode disk diffusion
No Perlakuan Diameter zona hambat  (mm) Kekuatan zona hambat Staphylococcus aureus Propionibac terium acnes Staphylococcus aureus Propionibac terium acnes 1. Ekstrak 20% 8,66 ± 0,57 7,66 ± 0,57 Sedang Sedang 2. Ekstrak 40% 10,33 ± 0,57 8,66 ± 0,57 Sedang Sedang 3. Ekstrak 60% 12,33 ± 0,57 9,66 ± 0,57 Kuat Sedang 4. Ekstrak 80% 14,66 ± 0,57 11,66 ± 0,57 Kuat Kuat 5. Ekstrak 100% 14,33 ± 0,57 11,33 ± 0,57 Kuat Kuat 6. Kontrol + 27,66 ± 0,57 17,66 ± 0,57 Sangat Kuat Kuat 7. Kontrol - 0 ± 0 0 ± 0 Lemah Lemah
Gambar 3. Optical Density Uji MIC pada bakteri uji : (A) Staphylococcus aureus, ( B). Propionibacterium acnes
A
B
Sasebohe et al.
Gambar 4.Hasil Uji MBC Ekstrak Etanol Daun Binahong terhadap bakteri uji (A) Staphylococcus aureus, MBC 60%, (B) Propionibacterium acnes, MBC 5%

## Diskusi
Persentase Rendemen Ekstrak Etanol Daun Binahong
D a u n   b i n a h o n g   d i e k s t r a k s i menggunakan metode maserasi dengan pelarut etanol 70%. Sebanyak 400 g simplisia menghasilkan rendeman sebesar sebesar 26,06% dengan berat ekstrak kental 104,25 g (Tabel 1). Hasil rendemen penelitian ini lebih besar dari pada hasil penelitian Yani et al. (2016), dengan rendemen 12,2% dari 2000 g bubuk simplisia melalui maserasi 3x24 jam dengan etanol 96%. Penelitian lain oleh Selawa et al . (2013), juga menghasilkan rendemen yang rendah sebesar 3,29% melalui maserasi 24 jam dengan etanol. Perbedaan ini disebabkan oleh tahap remaserasi yang dilakukan dalam penelitian ini. Tahap remaserasi dapat meningkatkan waktu ekstraksi dan menarik sisa senyawa dari proses maserasi sebelumnya. Hal ini disebabkan oleh penggunaan pelarut etanol yang baru sehingga mampu menarik sisa senyawa pada residu maserasi sebelumnya. Ningsih et al . (2015), juga menyatakan waktu ekstraksi yang lama akan meningkatkan rendemen ekstrak yang diperoleh. Penelitian oleh Noviyanty et al . (2022), juga menunjukkan rendemen ekstrak etanol daun binahong melalui maserasi lebih rendah dibandingkan penelitian ini, yaitu sebesar 23%.

## Kandungan Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Binahong
Hasil  uji  fitokimia  menunjukkan adanya kandungan kelompok senyawa tanin, flavonoid, alkaloid, saponin pada ekstrak etanol daun binahong (Tabel 2). Hal disebabkan oleh spektrum polaritas pelarut etanol yang luas
sehingga mampu melarutkan senyawa yang bersifat polar, semi polar maupun non-polar (Gritter et al ., 1991). Penelitian Savitri (2017), menyatakan senyawa yang diperoleh pada hasil ekstraksi memiliki sifat kepolaran yang sama dengan pelarut. Ekstrak etanol daun binahong pada penelitian Veronita et al . (2017), juga mendeteksi kandungan flavonoid, tanin, saponin dan alkaloid. Penelitian oleh Yani et al . (2016), menunjukkan kandungan flavonoid, saponin dan steroid/triterpenoid pada ekstrak etanol daun binahong. Kandungan kelompok- kelompok senyawa tersebut menunjukkan adanya potensi farmakologis ekstrak etanol daun binahong sebagai antibakteri dalam menghambat pertumbuhan bakteri penyebab jerawat.

## Karakteristik Staphylococcus aureus
Morfologi Koloni Morfologi Staphylococcus aureus pada media BAP berbentuk bulat  dengan permukaan halus dan berwarna putih susu seperti yang  dinyatakan oleh Jawetz & Aldeberg (2005). Staphylococcus aureus pada media BAP menghasilkan zona gamma hemolisis.  Hasil  ini  juga  sama    seperti penelitian yang dilakukan oleh Ariyanti et al . (2011), yang  menunjukkan bahwa 54,55% Staphylococcus aureus menghasilkan  zona gamma hemolisis (Gambar 1A).
Morfologi Sel Berdasarkan hasil dari pengecatan Gram Staphylococcus aureus berbentuk bulat (coccus), tersusun secara berkelompok, dan berwarna ungu (Gambar 1B). Hal ini sesuai yang dinyatakan Jawetz & Aldeberg (2005), bahwa morfologi Staphylococcus aureus tidak tersusun secara rapi tapi berada dalam  beberapa kelompok. Warna ungu Staphylococcus aureus disebabkan  karena bakteri tersebut merupakan bakteri Gram positif yang  mempunyai peptidoglikan yang tebal sehingga dapat mengikat zat  warna kristal violet (Hamidah et al ., 2019).
Katalase Berdasarkan hasil pengujian katalase, Staphylococcus aureus yang  dicampurkan dengan H 2 O 2 3% menghasilkan gelembung
A B
Sasebohe et al.
gas  (Gambar 1C). Adanya  gelembung gas menunjukan hasil uji positif terhadap katalase. Enzim  katalase yang dimiliki oleh Staphylococcus aureus dapat  menghidrolisis hidrogen peroksida menjadi H 2 O dan O 2 seperti yang dikemukakan oleh Hidayat & Alhadi, (2012).

## Karakteristik Propionibacterium acnes
Morfologi Koloni Morfologi Propionibacterium acnes di media BAP berbentuk bundar dan berwarna putih sedikit  buram seperti yang dinyatakan Irianto & Koes (2006) (Gambar 2A). Hemolisis yang terbentuk  merupakan beta hemolisis sesuai dengan penelitian yang dilakukan oleh  Capoor et al . (2018).
Morfologi Sel
Hasil yang didapatkan untuk pengecatan Gram Propionibacterium  acnes terlihat memiliki bentuk batang atau basil, ujungnya agak sedikit melengkung dan berwarna ungu (Gambar 2B). Hal ini sesuai dengan pernyataan Cristina (2006), bakteri ini berbentuk batang dengan bagian tepi yang meruncing atau disebut dengan kokoid. Warna yang terlihat dari morfologi bakteri adalah warna ungu yang menandakan bakteri tersebut termasuk dalam Gram positif sesuai yang dinyatakan oleh Brooks et al . (2008).
Katalase Dari pengujian katalase, timbul gelembung gas dari hasil pencampuran bakteri dengan  H 2 O 2 3%  (Gambar  2C). Gelembung gas yang dihasilkan tersebut menandakan positif katalase. Gelembung gas dapat terbentuk  karena Propionibacterium acnes dapat memproduksi enzim katalase yang menguraikan hidrogen peroksida menjadi air dan oksigen sesuai dengan pernyataan Huda et al . (2012).

## Aktivitas Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Binahong
Daya Hambat Ekstrak Etanol Daun Binahong terhadap Staphylococcus  aureus dan Propionibacterium acnes dengan Disk Diffusion Berdasarkan hasil penelitian uji antibakteri dengan metode disk diffusion,
semua konsentrasi ekstrak etanol daun binahong memiliki daya hambat sedang hingga kuat terhadap Staphylococcus  aureus dan Propionibacterium acnes . Daya hambat terbaik dihasilkan pada konsentrasi 80% dengan masing-masing diameter zona hambat 14,66±0,57 mm (kuat) dan 11,66±0,57 mm (kuat) (Tabel 3). Ekstrak etanol daun binahong dengan konsentrasi 100% memiliki daya hambat yang lebih rendah jika dibandingkan dengan  konsentrasi 80%, yaitu sebesar 0,33 mm. Hal ini sejalan dengan hasil penelitian  Saraswati (2011), dan Nomer et al. (2019), pada konsentrasi tinggi terjadi penurunan diameter zona  hambat. Salah satu faktor yang mungkin dapat mempengaruhi adalah ekstrak yang tidak bisa berdifusi dengan baik pada media kultur. Hal ini didukung oleh pernyataan Maleki et al . (2008), bahwa senyawa yang terkandung dari ekstrak menjadi tidak larut atau  mengalami kejenuhan karena konsentrasi ekstrak yang terlalu pekat. Berbeda dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Sulistyarsi & Pribadi (2018), dengan ekstrak etanol daun binahong 100% memiliki daya hambat terbaik. Semakin besar konsentrasi maka daya hambatnya semakin besar pula karena kandungan konsentrasi juga semakin besar. Besar kecilnya  zona hambat juga dipengaruhi oleh beberapa faktor yaitu tingkat sensitivitas  dari bakteri, suhu inkubasi, pH dari keadaan sekitar, komposisi dari media,  kepadatan dari bakteri, waktu inkubasi, aktivitas metabolisme bakteri, reaksi  dari senyawa dengan medium, serta besarnya kandungan senyawa yang terdapat dari larutan uji (Dali et al. , 2011). Terjadinya penghambatan dari ekstrak etanol daun binahong dalam penelitian ini karena terdapat kandungan  senyawa fitokimia yang dapat menghambat bakteri Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes seperti senyawa  flavonoid, tannin, alkaloid dan saponin.
Antibiotik Klindamisin digunakan sebagai kontrol positif dengan diameter zona hambat 27,66±0,57 mm (sangat kuat) terhadap Staphylococcus aureus . Hal ini dapat terjadi karena Klindamisin merupakan  antibiotik yang mampu menghambat (bakteriostatik)
Sasebohe et al.
dan membunuh (bakteriosidal) patogen. Klindamisin  menghambat bakteri Gram positif dengan cara menghambat sintesis protein  dari bakteri (Setiabudy, 2012).
Uji MIC Ekstrak Etanol Daun Binahong terhadap Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes Konsentrasi uji MIC ekstrak etanol daun binahong terhadap Staphylococcus aureus yang digunakan adalah konsentrasi hasil uji disk diffusion dengan diameter zona hambat kategori sedang-kuat (60%, 40% dan 20%) sampai kadar terendahnya  ( two-fold dillution ). Metode mikrodilusi merupakan metode yang  dikembangkan dari metode dilusi cair dengan media, bakteri dan  senyawa uji dari segi jumlah yang lebih sedikit. Kekeruhan yang diamati  pada larutan uji dianggap sebagai nilai optical density menggunakan instrumen microplate reader dan diperlihatkan sebagai nilai absorbansi (Rollando et al. , 2019). Minimum Inhibitory Concentration merupakan konsentrasi terkecil dari  sampel uji yang memiliki kemampuan menghambat pertumbuhan bakteri (Aristyawan et al. , 2017). Hasil uji MIC menunjukkan bahwa konsentrasi 20% merupakan konsentrasi minimal yang masih dapat menghambat bakteri (OD=0.082, P>0.05), meskipun nilai OD kontrol positif Klindamisin masih jauh lebih rendah (OD=0,004) (Gambar 3A). Hasil MIC pada penelitian ini tidak jauh berbeda dengan hasil penelitian yang dilakukan oleh Sulistyarsi & Pribadi (2018), nilai MIC ekstrak daun binahong terhadap Staphylococcus aureus adalah 25% . Konsentrasi uji MIC ekstrak etanol daun binahong terhadap Staphylococcus aureus yang digunakan adalah konsentrasi hasil uji disk diffusion dengan diameter zona hambat kategori sedang-kuat (20%, 10% dan 5%) sampai kadar terendahnya ( two-fold dillution ). Hasil uji MIC menunjukkan bahwa konsentrasi 5% merupakan konsentrasi terendah yang masih dapat menghambat bakteri (OD=0,015; P>0.05), meskipun nilai OD kontrol positif Klindamisin lebih rendah (Gambar 3B). Konsentrasi 5% lebih rendah penghambatannya dari kontrol  positif. Demikian juga konsentrasi 5% dibandingkan
dengan kontrol negatif  akuadest memiliki nilai OD lebih rendah.
Uji MBC Ekstrak Etanol Daun Binahong terhadap Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes Tiga  konsentrasi  yang  memiliki OD  terendah  pada  uji  MIC  dilakukan pengkulturan pada media TSA dan NA. Jika tidak ada pertumbuhan  koloni sesudah inkubasi pada setiap media, maka ditetapkan sebagai MBC (Hariyati et al. , 2015). Nilai MBC  ekstrak  etanol  daun  binahong terhadap Staphylococcus aureus menunjukkan bahwa tidak adanya pertumbuhan koloni Staphylococcus aureus pada konsentrasi 60% . Hasil penelitian yang dilakukan oleh Simanjuntak (2014), yaitu ekstrak etanol daun binahong memiliki nilai MBC 9,624%. Hal ini sangat berbeda dengan hasil MBC pada penelitian ini yaitu konsentrasi 60% pada bakteri Staphylococcus aureus . Hasil dari pengujian MBC ekstrak daun binahong 5% terhadap Propionibacterium acnes tidak menunjukkan adanya  pertumbuhan koloni sehingga konsentrasi tersebut dinyatakan sebagai  konsentrasi bunuh minimum.  Hasil tersebut berbeda dengan penelitian yang dilakukan oleh Prijayanti (2011),  fraksi kloroform daun binahong memiliki nilai MBC 1,25%  terhadap Propionibacterium acnes . Menurut Jawetz & Aldeberg (2005), faktor yang mempengaruhi daya antibakteri yaitu konsentrasi ekstrak, kandungan senyawa metabolit dan jenis bakteri yang  dihambat. Kemungkinan terdapat perbedaan dari kadar kandungan senyawa  metabolit dari ekstrak etanol Daun Binahong pada penelitian ini dengan  penelitian sebelumnya. Hal tersebut didukung karena terdapat perbedaan pada waktu maserasi. Pada penelitian Simanjuntak (2014), dilakukan 5 hari maserasi dan 5 hari remaserasi memungkinkan senyawa yang dihasilkan lebih banyak. Menurut Wahyuni dan Widjanarko (2015), semakin lama waktu ekstraksi maka akan membuat banyak sel dari bagian tanaman yang diekstraksi pecah sehingga melarutkan lebih banyak kandungan senyawa atau bahan aktif. Hal ini kemungkinan menjadi penyebab senyawa dari ekstrak etanol daun binahong pada penelitian ini mungkin
Sasebohe et al.
masih terhitung sedikit karena maserasi hanya 3 hari dan remaserasi 2 hari.
Mekanisme Kerja Antibakteri Tanaman binahong dapat menghambat pertumbuhan Staphylococcus aureus dan Propionibacterium acnes didukung oleh kandungan senyawa fitokimia seperti flavonoid, tannin, alkaloid dan saponin. Senyawa fitokimia tersebut mempunyai mekanisme kerja dalam menghambat bakteri target . Senyawa bioaktif tanin pada ekstrak daun binahong dapat mengganggu kerja enzim reverse transcriptase dan DNA topoisomerase sampai akhirnya sel bakteri  tidak menjadi sel yang sempurna (Kumalasari et al , 2020). Tannin juga memiliki  kemampuan untuk mengkerutkan dinding sel atau membran sel sehingga membuat permeabilitas sel tersebut terganggu dan berujung sel tidak bisa melanjutkan aktivitas kehidupan sehingga menyebabkan pertumbuhannya tidak  lancar dan akhirnya mati (Ajizah, 2004). Saponin bertindak antibakteri dengan menurunkan tegangan permukaan dinding sel bakteri, juga merusak  permeabilitas membran yang sangat penting dalam perkembangan bakteri (Harborne, 1996). Saponin dapat masuk lewat membran luar dan dinding sel bakteri, selanjutnya mengikat membran sitoplasma dan merusak kestabilan dari membran sel dan membuat sitoplasma menjadi bocor kemudian keluar dari sel bakteri sehingga menyebabkan sel dari bakteri menjadi mati (Cavalieri et al. , 2005). Saponin bekerja sebagai antibakteri dengan melarutkan enzim dan protein dari dalam sel bakteri  (Madduluri et al. , 2013). Senyawa flavonoid memiliki aktivitas antibakteri yaitu dengan melepaskan energi transduksi ke membran sitoplasma bakteri dan menghambat motilitas dari  bakteri (Erlianda et al. , 2017). Flavonoid juga memiliki efek antibakteri dengan  mengganggu metabolisme energi yaitu dengan menghambat pemakaian oksigen dari bakteri, dan menyebabkan metabolisme tidak berjalan dengan baik sehingga pembentukan molekul dari bakteri tidak sempurna (Cushnie & Lamb, 2005). Alkaloid dapat mengganggu kerja enzim topoisomerase dari sel bakteri dan juga
berperan sebagai interkelator dari DNA. Proses kerja dari senyawa alkaloid  membunuh bakteri juga dengan merusak bagian yang menjadi pembentuk  peptidoglikan sel bakteri. Hal ini membuat lapisan dinding sel dari bakteri tidak tersusun dengan sempurna dan mengakibatkan sel bakteri menjadi tidak berfungsi dan mati (Ningsih et al. , 2016). Alkaloid menyebabkan sel bakteri tidak terbentuk dengan sempurna karena alkaloid merusak bagian yang menyusun peptidoglikan, serta mengganggu sintesis peptidoglikan. Bentuk sel menjadi tidak sepenuhnya utuh karena dinding selnya hanya tersusun oleh membran sel dengan tidak tersusunnya peptidoglikan (Retnowati et al. , 2011).
Kesimpulan Ekstrak etanol daun binahong memiliki aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus aureus dengan diameter daya hambat terbaik 14,66±0,57 mm (kuat), MIC 20%, dan MBC
60% serta Propionibacterium acnes dengan diameter daya hambat terbaik 11,66±0,57 mm (kuat), MIC 5%, dan MBC 5%. Aktivitas antibakteri ini disebabkan oleh karena kandungan senyawa fitokimia kandungan senyawa fitokimia  seperti flavonoid, tannin, alkaloid dan saponin.
Daftar Pustaka Afriyanti, RN. (2015). Acne vulgaris pada Remaja. Jurnal Majority , 4(6):10-17. Aini, S.Q. (2014). Pengaruh salep ekstrak daun Binahong ( Anredera cordifolia (Tenore) Steenis)  terhadap  pembentukan jaringan luka bakar tikus sprague dawley. [Skripsi] Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah, Jakarta.
Ainurrochmah, A., Ratnasari, E., & Lisdiana, L. (2013). Efektivitas Ekstrak Daun Binahong ( Anredera cordifolia ) terhadap Penghambatan Pertumbuhan Bakteri Shigella flexneri dengan  Metode Sumuran. Lentera Bio , 2(3):233-237. Ajizah, A., (2004). Sensitivitas Salmonella thypimurium terhadap Ekstrak Daun Psidium guajava L . Journal Biosciences,
1(1): 31-38.
Aristyawan, A.D., Sugijanto, N.E., & Suciati.
(2017). Potensi Antibakteri dari Ekstrak
Sasebohe et al.
Etanol Sponse Agelas Cavernosa . Jurnal Farmasi dan Ilmu Kefarmasian Indonesia,
4(1):39-43.
Ariyanti, D., Salasia, S.I.K., & Tato, S. (2011). Characterization of Haemolysin of Staphylococcus aureus Isolated from Food of Animal Origin. Indonesian Journal of Biotechnology, 16(1):32-37. Asri, R. M., Yahya, H., Rehan, M. M., &
Yahya, H. N. (2019). Antibacterial Properties of Ethanolic Extract of Mushrooms Sold in Malaysian Local Market. East African Scholars Journal of Agriculture and Life Sciences, 2(11): 516–523. https://doi.org/10.36349/ easjals.2019.v02i11.001
Athikomkulchai, S., Watthanachaiyingcharoen, R., Tunvichien, S., Vayumhasuwan, P., Karnsomkiet, P., & Sae-Jong, P. (2008). The Development of Anti - Acne Products from Eucalyptus globulus and Psidium guajava Oil. Journal of Health Research , 3(22):109-113. Ayudianti, P. M & Indramaya, D. (2014). Studi Retrospektif: Faktor Pencetus Akne Vulgaris. Berkala Ilmu Kesehatan Kulit & Kelamin, 26 (1):41-47. Bauer,  A.W.,  Kirby,  M.  D.,  Sherrish, J.C., & Turck, M.(1966). Antibiotic S u s c e p t i b i l i t y   T e s t i n g   B y   A Standardized Single Disk Method. The American Journal of Clinical Pathology, 45(4):493-496. Brooks, G.F., Janet, S. B., & Stephen A.M. (2008).Mikrobiologi Kedokteran. Alih
Bahasa Huriawati Hartono. Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.
Capoor, M.N., Ruzicka, F., Sandhu, G.,
Rollason, J., Mavrommatis, K., Ahmad, F.S., Schimtz,  J.E., Raz, A., Bruggeman, H., Lambert, P.A., Fischetti, V.A., &  Staby,  O.  (2018).  Importance  of Propionibacterium acnes hemolytic in human invertebral discs: A microbiological study, Public Library of Science (PLOS ONE) ,13(11):1-10. Cavalieri, S.J., I.D. Rankin., R.J. Harbeck., R.S. Sautter., Y.S. McCarter., S.E. Sharp., J.H.
Ortez.,& C.A. Spiegel.(2005). Manual of Antimicrobial Susceptibility Testing.
American Society for Microbiology,
USA. Cristina,  O.  (2006).  Characterisation  of Antibiotic Resistant Propionibacterium acnes from Acne Vulgaris and Other Disease.  Karolinska.  Institutet. Stockhlom.
Cushnie,  T.P.T.,  &  Lamb,  A.J.  (2005). Antimicrobial Activity of Flavonoids. International Journal of Antimicrobial Agents, (26):343-356.
Dali, S., Natsir, H., Usman, H., & Ahmad,A. (2011). Bioaktivitas Antibakteri Fraksi protein Alga Merah Gelidiumamansii dari Perairan Cikoang Kabupaten Takalar, Sulawesi Selatan. Majalah
Farmasi dan Farmakologi , 15(1):47-52. Darsana, I.G.O., Besung, I.N.K., & Mahatmi
H. (2012). Potensi daun Binahong ( Anredera cordifolia (Tenore)  (Steenis ) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Eschericia coli secara in vitro. Indonesia Medicinus Veterinus, 1(3):337 -351.
Daryono, E.D., Pursitta, A.T., & Isnaini, A. (2014). Ekstraksi Minyak Atsiri pada Tanaman Kemangi dengan Pelarut N-Heksana. Jurnal Teknik Kimia, 9 (1):1-7. Djajadisastra, J.,  Mun’im, A., & Dessy, N.P. (2009).  Formulasi  gel  topikal  dari ekstrak Nerii Folium dalam sediaan anti jerawat. Jurnal Farmasi Indonesia 4(4): 210-216.
Djannatun, T.,  Rochani, J.T., Wikaningrum, R., Widiyanti, D., & Pane, A.R. (2008). Pemanfaatan Darah Manusia Sebagai Pengganti Darah Domba Dalam
Pembuatan Media Agar Darah Plate (ADP). Jurnal Kedokteran Yarsi, 16(2):1-7. Dewi,  A.K.  (2013).  Isolasi,  Identifikasi dan Uji sensitivitas Staphylococcus aureus terhadap Amoxillin dari sampel susu kambing Peranakan etawa (PE) Penderita masisitis) di Wilayah Grimulyo Kulonprogo, Yogyakarta. Jurnal Sains Veteriner, 31(2) : 138-150.
Dhillon, K. S., & Varshney, K. R. (2013). Study of Microbiological Spectrum in Acne Vulgaris: An In Vitro Study. Scholars Journal of Applied Medical Sciences (SJAMS), 1(6), 724–727. https://doi. org/10.36347/sjams.2013.v01i06.0017
Sasebohe et al.
Erlianda  D.,  Rizal,  M.F.,  &  Budiardjo, S.B. (2017). Antibacterial Effect of Flavonoids from Propolis Produced by Trigona on ATPase Activity of Streptococcus Mutans . International Journal Applied Pharmaceutics, 9 (2): 6-9.
Fitriyani, A., Winarti, L., Muslichah, S., & Nuri. (2011). Uji Anti Inflamasi Ekstrak Metanol  Daun  Sirih  Merah  ( Piper Crocatum Ruiz & Pav ) Pada Tikus Putih. Traditional Medicine Journal, 16(1):34-42. Gritter, R.I., Bobbie, J.N., & Schwarting, A.E. (1991). Pengantar Kromatografi. Terj. Kosasih. Padmawinata. Edisi II. Bandung : ITB. Press.
Guo, M., Lu, Y., Yang, J., Zhao, X.,  & Lu, Y. (2016). Inhibitory effects of Schisandra chinensis extract on ance-related inflammation and UVB -induced photoageing. Pharmaceutical Biology, 54(12):2987-2994. Hamidah, M.N., Rianingsih, L., & Romadhon. (2019).  Aktivitas Antibakteri Isolat Bakteri Asam Laktat dari Peda dengan Jenis Ikan Berbeda terhadap E. coli dan S. aureus. Jurnal Ilmu dan Teknologi Perikanan, 1(2):11-21.
Harborne, J., (1996). Metode Fitokimia: Penuntun Cara Modern Menganalisis.
T u m b u h a n .   C e t a k a n   k e d u a . Penerjemah:  Padmawinata,  K.  & Soediro, I. Edisi I. Penerbit ITB Bandung Hariyati,  T.,  Soelistya,  D.,  Jekti,  D.,  & Andayani, Y. (2015). Pengaruh Ekstrak Etanol Daun Jambu Air ( Syzygium Aqueum) terhadap Bakteri Isolat Klinis. Journal Penelitian Pendidikan IPA (JPPIPA), 1(2): 31-38. Hendiani, I., Susanto, A., Carolina, D.N., Ibrahim,  R.,  &  Balafif,  F.F  (2020). Minimum Inhibitory Concentration (MIC)  and  Minimum  Bactericidal Concentration (MBC) of Mangosteen (Garcinia mangostana Linn.) rind extract against Aggregatibacter actinomycetemcomitans . Padjajaran Journal of Densitry, 32(2):131-135. Hidayat, R., & Alhadi, F. (2012). Identifikasi Streptococcus Equi dari Kuda yang Diduga Menderita Stangles. Jurnal Ilmu Pertanian Indonesia (JIPI), 17(3):199-203.
Huda, C., Salni & Melki. (2012). Penapisan Aktivitas Antibakteri dari Bakteri yang Berasosiasi dengan Karang
Lunak Sarcophyton sp. Maspari Journal , 4(1):69-76. Iman, E.R.S., Waskita, M.A., & Lamid, M.
(2014). Daya Antibakteri Supernatan Isolat Bacillus Subtilis dari  Tanah Terhadap Bakteri Aeromonas Hydrophila dan Staphylococcus Aureus Secara In Vitro. V eterinaria Medika , 7(2):106-113. Irianto  &  Koes.  (2006).  Mikrobiologi. Bandung: Yrama Widya.
Jamco, J. C. S & Balami, A. M. (2022). Analisis Kruskal-Wallis untuk Mengetahui
Konsentrasi  Belajar  Mahasiswa Berdasarkan Bidang Minat Program Studi  Statistik  FMIPA  UNPATTI. PARAMETER: Jurnal Matematika, Statistika Dan Terapannya, 1(1): 39–44. https://ojs3.unpatti.ac.id/index.php/ parameter
Jawetz,  M  &  Aldeberg,  J.  L.  (2005). Mikrobiologi Kedokteran. Edisi 22. Jakarta : EGC.
Kelompok Studi Dermatologi Kosmetik Indonesia.  (2018).  AKNE.  Jakarta: Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia.
Kementerian Kesehatan Republik Indonesia. ( 2 0 1 1 ) .   P e d o m a n   P e l a y a n a n . Kefarmasian untuk Terapi Antibiotik. Jakarta: Kementerian Kesehatan Republik Indonesia.
Kumalasari,  E.,  Aina,  A.N.,    &  Aisyah N. (2020). Uji Aktivits Antibakteri Ekstrak Etanol Daun Bawang Dayak (Eleutherine palmifolia (L.) Merr) terhadap pertumbuhan Propionibacterium acne . Jurnal Insan Farmasi Indonesia , 3(2):261- 270. Madduluri, S., Rao, K., Babu., & Sitaram,
B.  (2013).  In  vitro  evaluation  of antibacterial activity of five indegenous plants extract against five bacterial pathogens of human. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences . 5(4):679-684.
Maleki, S.,  Seyyednejad, S.M., Damabi, N.M.,
& Motamedi, H. (2008). Antibacterial Activity of The Fruits of Iranian Torilis
Sasebohe et al.
leptophylla Against Some Clinical Pathogens. Pakistan Journal of Biology Sciences, 11(9):1286-1289. Meilina,  N.E  &  Hasanah,  A.N.  (2018). Review Artikel: Aktivitas antibakteri ektrak Buah Pepaya ( Carica Papaya L.) Terhadap Bakteri Penyebab Jerawat. Jurnal Farmaka, 16(2):322-328. Mutmainnah, B. (2017). Skrining Fitokimia Senyawa Metabolit Sekunder dari Ekstrak Etanol Buah Delima (Punica granatum L ) Dengan Metode Uji Warna. Jurnal Media Farmasi Poltekkes Makassar , 13(2):23-28.
Ningsih, G., Utami, S.R., & Nugrahani, R.A. (2015). Pengaruh Lamanya Waktu Ekstraksi Remaserasi Kulit Buah
Durian Terhadap Rendeman Saponin dan Aplikasinya Sebagai Zat Aktif Anti Jamur. KONVERSI , 4(1):8-16. Ningsih, D.R., Zusfahir., & Dwi, K. (2016).
Identifikasi  Senyawa  Metabolit Sekunder Serta Uji Aktivitas Ekstrak Daun  Sirsak  Sebagai  Antibakteri.
Molekul, 11(1): 101-111.
Nomer, N.M.G.R., Duniaji, A.S., & Nocianitri, K.A.  (2019).  Kandungan  Senyawa Flavonoid dan Antosianin Ekstrak Kayu Secang ( Caesalpina sappan L .) Serta Aktivitas Antibakteri terhadap Vibrio cholerae.  Jurnal Ilmu dan Teknologi Pangan , 8(2):216-225.
Novaryatiin, N., Handayani, R., Chairunnisa, R. (2018). Uji Daya Hambat Ekstrak Etanol Umbi Hati Tanah ( Angiotepria sp. Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus. Jurnal Surya Media, 3(2): 23-31. Noviyanty, Y., Herlina., & Adha, A. Y. (2022). Pengaruh Metode Ekstraksi Terhadap Kadar Flavonoid Ekstrak Etanol Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Dengan  Metode  Spektrofotometri UV-VIS. Oceana Biomedicina Journal ,
5 (2):93–106. Prijayanti,  A.J.  (2011).  Uji  Aktivitas Antibakteri Fraksi Daun Binahong ( (Anredera cordifolia (Tenore) Steenis ) terhadap Proponibacteriium acnes ATCC 6919 dan Staphylococcus epidermidis FNCC 0048 [Skripsi]. Universitas Islam
Indonesia, Yogyakarta.
Puspitasari, A.D & Proyogo, L.S. (2017). Perbandingan  Metode  Ekstraksi Maserasi dan Sokletasi terhadap Kadar Fenolik Total Ekstraksi Etanol Daun Kersen ( Muntingia calabura ). Jurnal Ilmiah Cendekia Eksakta , 2(1):1-8. Putri, W.S., Warditiani, N.K., & Larasanty,
L.P.F. (2013). Skrining Fitokimia Ekstrak Kulit Buah Manggis (Garcinia mangostana
L.). Jurnal Farmasi Udayana , 2(4):56-60. Retnowati,  Y.,  Bialangi,  N.,  &  Posangi N.W. (2011). Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus pada  Media Yang Diekspos Dengan Infus Daun Sambiloto (Andrographis paniculata). Jurnal Saintek , 6(2).
Rollando, R., Prasetyo, Y.S.A., & Sitepu, R. (2019). Uji Antibakteri Minyak Atsiri Masoyi ( Massoia aromatica ) terhadap Bakteri Streptococcus mutans . Majalah Farmasi dan Farmakologi , 23(2):52-57. Samirana, P.O, Swastini. D.A., & Satriani,
N. W. (2017). Pengaruh Pemberian
Ekstrak Etanol 70% Daun Binahong (Anredera scandens (L.) Moq.) terhadap Makroskopik dan Biokimia Ginjal Mencit Jantan Galur  Balb/C. Jurnal Farmasi Udayana , 6(2) : 28-35. Saraswati, D. (2011). Pengaruh Konsentrasi Ekstrak Daun Sirih terhadap Daya Hambat Eschericia coli . Jurnal Health & Sport , 3(2):285-362. Savitri,  E.,  Fakhrurrazi,  &  Harris,  A. (2018). Uji Antibakteri Ekstrak Daun Kelor (Moringa oleifera L .) terhadap Pertumbuhan Bakteri Staphylococcus aureus . Jurnal Ilmiah Mahasiswa Veteriner, 2(3):373-379. Savitri, I., Suhendra, L., & Wartini, N.M. (2017). Pengaruh Jenis Pelarut Pada  Metode Maserasi  Terhadap  Karakteristik Ekstrak Sargassum polycystum. Jurnal Rekayasa dan Manajemen Agroindustri, 5(3):93-101. Selawa, W., Revolta, M., Runtuwene, J., & Citraningtyas, G. (2013). Kandungan Flavonoid dan Kapasitas Antioksidan Total Ekstrak Etanol Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). PHARMACON Jurnal Ilmiah Farmasi- UNSRAT, 2(01):18–22.
Sasebohe et al.
Setiabudy R. (2012). Farmakologi dan Terapi. Edisi 5. Universitas Indonesia. Jakarta: Balai Penerbit FKUI.
Shamsi, M.S., Goel, S., Singh, A., Gupta, A.,
Bhardwaj, A., & Chhoker, V.K., Surana, A., Singh, L.K. (2015). An appraisal of  microbiological spectrum in acne vulgaris from a tertiary care teaching institution. Journal Institiute Agama Islam Ma’arif , 2(7) :82-86.
Simanjuntak,  J.M.  (2014).  Uji  Aktivitas Antibakteri Fraksi Etanol Daun Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) terhadap Staphylococcus aureus . [Skripsi]. Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, Indonesia. Sirait, A.M. (2001). Analisis Varians (ANOVA) dalam Penelitian Kesehatan. Media Litbang Kesehatan , 9(2):39-43. Sitohang, I.B.S., Fathan, H., Effendi, E., & Wahid, M. (2019). The Susceptibility of pathogens associated with acne vulgaris to antibiotics. Medical Journal of Indonesia , 28(1):21-7. Socenta, D.P., Suprihadi, A., & Raharjo, B. (2017). Efektivitas Kombinasi Ekstrak Bahan Herbal (Mengkudu, Pepaya, Kunyit) Terhadap Daya Hambat Pertumbuhan Aeromonas hydrophila Secara In Vitro.
Jurnal Biologi, 6(2):7-16. Suardi. (2019). Pengaruh Kepuasan Kerja terhadap Kinerja Pegawai pada PT.BANK MANDIRI, Tbk. Kantor Cabang Pontianak. Journal Business Economics and Entrepreneurship , 1(2). Sulistyarsi, A & Pribadi, N.W. (2018). Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.)

## Steenis) terhadap Pertumbuhan Bakteri
Staphylococcus aureus dan Pseudomonas aeruginosa. Journal of Pharmaceutical Science and Medical Research , 1(1) :26-36. Suparjo,  Royani  J.I.,  Rosmalawati,  S., Tajuddin,  T.,  &  Riyadi,  A.  (2016).

## Pengaruh Auksin dan Sitokinin
Terhadap  Perbanyakan  Mikro Tanaman Binahong ( Anredera cordifolia (Tenore) Steenis). Jurnal Bioteknologi dan Biosains Indonesia, 3(2):57-65.
Surahmaida, S., Umarudin, U., & Junairiah, J. (2019). Senyawa Bioaktif Daun Kumi
Kucing (Orthosiphon Stamineus). Jurnal Kimia Riset, 4(1):81-88.
Susanto,  R.C.,  Made,  G.A.,  &  Ari,  M. (2013). Penyakit Kulit Dan Kelamin. Yogyakarta:Nuha Medika.
Veronita, F., Wijayanti, N., & Musiti, S. (2017). Isolasi dan Uji Aktivitas Antibakteri Daun Binahong serta aplikasinya sebagai Hand Sanitizer. Indonesian
Journal of Chemical Science, 6(2):138-144. Widjajanto, H. (2008). Identifikasi dan pola kepekaan Propionibacterium acnes terhadap antibiotika dari isolat Acne vulgaris tipe papulopustular. [Skripsi]. Universitas Airlangga, Surabaya.
Wahyuni, D.T & Widjanarko, S.B. (2015).
Pengaruh jenis pelarut dan lama ekstraksi terhadap ekstrak karotenoid l a b u   k u n i n g   d e n g a n   m e t o d e gelombang ultrasonic. Jurnal Pangan dan Agroindustri, 3(2):390-401. Yani, T. N., Anwar, E., & Saputri, F. C.
(2016).  Formulasi  Emulgel  yang Mengandung Ekstrak Etanol Daun Binahong ( Anredera cordifolia (Ten.) Steenis) dan Uji Aktivitasnya terhadap Propionibacterium acnes secara In Vitro, Jurnal Kefarmasian Indonesia, 6(2): 89–97.
Yuda,  P.E.S.K.,  Cahyaningsih,  E.,  & Winariyanthi, N.L.P.Y. (2017). Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi Lapis Tipis Ekstrak Tanaman Patikan
Kebo (Euphorbia hirta L.). Jurnal Ilmiah Medicamento, 3(2): 62-63.