## Livestock and Animal Research
Accredited by Directorate General of Strengthening for Research and Development No. 10/E/KPT/2019
Open Access Livest. Anim. Res. , July 2021, 19(2): 210-216
p-ISSN 2721-5326 e-ISSN 2721-7086
https://doi.org/10.20961/lar.v19i2.49186

## Original Article
Penambahan PGF 2α dalam pengencer semen dapat meningkatkan motilitas pasca thawing motility spermatozoa domba Waringin
Husnurrizal *, Ade Syahriani Aritonang, Tongku Nizwan Siregar, Teuku Armansyah, Hafizuddin
Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh, 23111 * Correspondence: husnurrizal@unsyiah.ac.id
Received: March 12 th , 2021; Accepted: July 25 th , 2021; Published online: July 30 th , 2021

## Abstrak
Tujuan: Tujuan  penelitian  ini  adalah  meningkatkan  motilitas  spermatozoa  domba  Waringin melalui penambahan PGF2α dalam pengencer semen . Metode: Sebanyak  3  ekor  domba  Waringin  berumur  2-3  tahun  digunakan  dalam  penelitian  ini. Sampel  semen  dikoleksi  menggunakan  vagina  buatan.  Evaluasi  kualitas  spermatozoa  dilakukan segera  setelah  koleksi  secara  makroskopis  dan  mikroskopis.  Setelah  sampel  semen  dikoleksi dan dievaluasi, kemudian ditambahkan pengencer Andromed. Sampel semen kemudian dibagi atas tiga grup dengan penambahan masing- masing, yakni: K1 (NaCl fisiologis), K2 (37,50 µg PGF2α), dan K3 (75,00 µg PGF2α). Setelah sa mpel disimpan dalam diekuilibrasi selama empat jam selanjutnya dilakukan  pemeriksaan  motilitas  spermatozoa  pasca  ekuilibrasi,  sedangkan  pemeriksaan post thawing motility dilakukan setelah semen mengalami proses pembekuan ( freezing ) dan setelah semen beku disimpan selama 24 jam. Seluruh data hasil penelitian dianalisis menggunakan analisis varian satu arah (ANOVA) dan uji lanjutan dengan uji berganda Duncan.
Hasil: Persentase  motilitas  pasca  ekuilibrasi  spermatozoadomba  Waringin  pada  K1;  K2;  dan  K3 masing-masing adalah 43,67 ± 1,20; 75,00 ± 4,00; dan 82,33 ± 3,18 (P<0,05) dan persentase motilitas pasca thawing spermatozoa domba Waringin pada K1; K2; dan K3 masing-masing adalah 25,33 ± 1,85; 49,33 ± 3,17; dan 54,00 ± 5,50 (P<0,05).
Kesimpulan: Disimpulkan bahwa terjadi peningkatan motilitas pasca ekuilibrasi dan pasca thawing spermatozoa  domba  Waringin  pada  perlakuan  dengan  penambahan  PGF2α  pada  pengencer Andromed.
Kata Kunci: domba Waringin; PGF2α ; motilitas spermatozoa; pasca ekuilibrasi; pasca thawing

## Abstract
Objective: The purpose of this research was to find out the rise of spermatozoa motility of Waringin sheep which was given additional amount of PGF2α in commercial semen diluents (Andromed) . Methods: A total of 3 Waringin sheep aged 2-3 years were used in this study. Semen samples were collected using an artificial vagina and evaluation of the quality of the spermatozoa was carried out macroscopically  and  microscopically.  This  study  used  a  unidirectional  completely  randomized design.  After  evaluated,  semen  samples  were  added with  Andromed  diluents  afterwards  divided into  three  groups  treatment,  K1;  K2;  and  K3  where  each  group  was  then  added  with  physiologic
NaCl,  37,5  µg  PGF2α,  and  75  µg  PGF2α.  All  of  the  samples  we re  equilibrated  in  refrigerator  for 4 hours and spermatozoa motility was examined, then after the freezing process was carried out and stored for 24 hours, the post thawing spermatozoa motility was examined. The data obtained was analyzed using one-way analysis of variance (ANOVA) and followed by Duncan test.
Results: The  result  of  the  research  showed  that  motility  of  post  equilibration  spermatozoa  (%)  of Waringin  sheeps  at  K1;  K2;  and  K3  were  43,67  ±  1,20;  75,00  ±  4,00;  and  82,33  ±  3,18  (P<0,05);  and motility of post thawing spermatozoa (%) of Waringin sheeps at K1; K2; and K3 were 25,33 ± 1,85; 49,33 ± 3,17; dan 54,00 ± 5,50 (P<0,05).
Conclusions: In conclusion that was the rise in motility of prefreezing spermatozoa and motility of post  thawing  spermatozoa  of  Waringin  sheep  which  given  additional  amount  of  PGF2α  on Andromed diluents.
Keywords: Waringin sheep; PGF2α ; spermatozoa motility; prefreezing; post thawing

## PENDAHULUAN
Daging  domba  merupakan  sumber protein  hewani  yang  memiliki  potensi dikembangkan  di  Indonesia  karena  rasanya yang khas dan nikmat [1]. Domba di Indonesia terdiri  atas  beberapa breed ,  di  antaranya adalah  domba  Waringin.  Domba  Waringin yang  merupakan  hasil  persilangan  dari empat  jenis  memiliki  sifat  berkembangbiak dengan  cepat,  prolifik  karena  mampu menghasilkan  2  sampai  4  anak  setiap kelahirannya  [2].  Domba  Waringin  berasal dari  persilangan  ( crossing )  domba  lokal dengan  domba  introduksi  yang  mempunyai garis  keturunan  domba Barbados  blackbelly (asal Karabia), domba St. Croix (asal Kepulauan Virgin,  Amerika  Serikat)  dan  domba Suffolk (asal Inggris) [3].
Usaha peningkatan kinerja ternak ruminansia  kecil  telah  dilakukan  dalam berbagai  cara,  antara  lain  penyediaan bibit  unggul,  pakan  yang  berkualitas dan  penerapan  teknologi  mutakhir  seperti inseminasi buatan (IB). Teknologi IB dilakukan  dengan  cara  mendeposisikan semen  cair  atau  semen  beku  pada  saluran reproduksi  betina.  Deposisi  semen  ini  dapat dilakukan  secara intravagina,  intracervix ataupun intrauterine [4].  Melalui  metode  IB diharapkan  dapat  dimanfaatkan  seekor pejantan  untuk  mengawini  banyak  betina dan  perkawinan  betina  dengan  pejantan yang  berasal  dari  tempat  yang  berbeda kondisi lingkungannya [5].
Beberapa faktor
memengaruhi keberhasilan  antara  lain  kualitas  semen, efisiensi
reproduksi ternak betina,
keterampilan  inseminator  dan  deteksi  birahi dari  peternak.  Pelaksanaan  program  IB umumnya  dilakukan  dengan  menggunakan semen beku. Namun ada beberapa permasalahan yang dihadapi dalam
penggunaan  semen  beku  antara  lain,  sekitar 30%  spermatozoa  mengalami  kematian selama proses pembekuan. Fertilitas spermatozoa  yang  bertahan  hidup  setelah proses  pembekuan  relatif  rendah.  Sebagai alternatifnya,  penggunaan  semen  cair  bisa dilakukan  sebagai  pengganti  dari  semen beku  [6].  Menurut  Inounu  [4]  keberhasilan IB  dengan  semen  beku  juga  dipengaruhi oleh  intensitas straw terpapar  oleh  suhu ruangan  dan  pada  saat  proses  pencairan semen beku ( thawing ) sebelum dilakukan IB.
Usaha  dalam  meningkatkan  kualitas spermatozoa  pada  domba  telah  dilaporkan oleh  Azawi  dan  Hussein  [7],  yaitu  dengan penambahan α -tokoferol dan antibiotik dalam pengencer  pada  domba  dapat  meningkatkan kualitas  spermatozoa.  Namun  belum  ada penelitian  mengenai  kualitas  spermatozoa pada  domba  Waringin.  Alternatif  lain dalam  meningkatkan  kualitas  spermatozoa adalah penambahan PGF2α. Menurut Sen dan Akcay  [8] pemberian  PGF2α  secara in  vitro dapat  meningkatkan  motilitas  spermatozoa disebabkan  efek  PGF2α  pada  elemen kontraktil  spermatozoa.  Kowalczyk et  al.
[9] menjelaskan bahwa prostaglandin hadir  dalam  semen  yang  diejakulasikan beraksi melalui reseptor prostaglandin E2  EP1  (PTGER1)  dan  prostaglandin  E2 EP3  (PTGER3)  yang  memodulasi  motilitas sperma, kapasitasi spermatozoa, reaksi akrosom,  dan  peningkatan  kemampuan
fertilisasi  spermatozoa  dengan  memediasi peningkatan konsentrasi kalsium intraseluler. Menurut  Aslam et  al .  [10]  reseptor  PTGER3 juga  diekspresikan  pada  sapi  jantan  yang fertilitasnya  rendah.  Beberapa  penelitian penambahan  PGF2α  secara in  vitro dalam pengencer  dengan  tujuan  meningkatkan kualitas  spermatozoa  yang  telah  dilakukan antara lain pada sapi [11], babi hutan [12], dan kambing [13].

## MATERI DAN METODE

## Lokasi Penelitian
Pelaksanaan  seleksi  sampel  domba jantan,  dan  koleksi  spermatozoa  domba dilakukan di Unit
Pelaksana
Teknis
Hewan  Coba  Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas  Syiah  Kuala,  Banda  Aceh, sedangkan  pembuatan  serta  pengolahan bahan pengenceran semen, perlakuan penambahan PGF2α  pada  pengencer  semen , evaluasi  kualitas  spermatozoa,  pengenceran semen,  equilibrasi,  proses filling dan sealing semen, evaluasi pre freezing motility, pembekuan  semen  dan  pemeriksaan post thawing  motility dilakukan  di  Laboratorium Reproduksi  Fakultas  Kedokteran  Hewan Universitas Syiah Kuala, Banda Aceh.

## Desain Eksperimen
Dalam  penelitian  ini  digunakan  tiga domba  Waringin  yang  berumur  2-3  tahun. Penelitian  dirancang  dengan  rancangan acak  lengkap  (RAL)  pola  searah.  Perlakuan dibagi  atas  tiga  grup  dengan  penambahan PGF2α  (Sincrovall®  Mevet,  MPA  Veterinary Medicines  and  Additives  Spain)  dalam pengencer Andromed (Minitub) yakni masing-masing K1 (NaCl fisiologis), K2 (37,50 µg PGF2 α), dan K 3 (75,00 µg PGF2 α) .

## Prosedur Penelitian Penampungan dan Evaluasi Semen
Metode  koleksi  semen  menggunakan vagina  buatan  yang  dilaksanakan  pada pukul  08.00  WIB  sesuai  dengan  metode yang  dianjurkan  Ariyanto  [14].  Selanjutnya semen  dievaluasi  secara  makroskopis  [12] dan  mikroskopis  [13].  Evaluasi  secara makroskopis terdiri atas pemeriksaan volume, warna, pH, dan konsistensi,
sedangkan  pemeriksaan  mikroskopis  terdiri atas  konsentrasi,  motilitas,  viabilitas  dan abnormalitas.
Pembuatan/Pengolahan  Bahan  Pengenceran Semen
Proses pengenceran semen yang dilakukan  adalah  dengan  menggunakan pengencer Andromed. Pembuatan pengencer dilakukan  dengan  mencampurkan  aquades dan Andromed dengan perbandingan 4:1  (20  ml  aquades  ditambahkan  5  ml
Andromed), lalu dihomogenkan dan selanjutnya  diletakkan dalam waterbath pada suhu 38 °C.
Pemberian PGF2α Sebelum ditambahkan PGF2 α, p engencer semen  dibagi  ke  dalam  tiga  tabung (kelompok)  yakni  K1,  20  ml  pengencer Andromed  ditambahkan  0,5  ml  NaCl 0,9%;  K2,  20  ml  pengencer  Andromed ditambahkan  PGF2 α sebanyak  37,5  g (0,5 ml); dan K3, 20 ml pengencer Andromed ditambahkan  PGF2 α sebanyak  75  g  (1  ml). Selanjutnya  dilakukan  pengenceran  semen sesuai dengan metode yang ditetapkan [12].

## Tahap Pembekuan Semen
Setelah  dilakukan  pengenceran,  semen diekuilibrasi  di  dalam refrigerator dengan suhu ±5 °C selama 4 jam, kemudian dilakukan proses filling dan sealing menggunakan straw berukuran  0,25  ml.  Tahap  awal pembekuan  dilakukan prefeezing.  Prefreezing dilakukan  dengan  menyusun straw di  atas rak  yang  diletakkan  sekitar  8  cm  di  atas permukaan  nitrogen  cair  dalam styrofoam yang  ditutup  rapat  selama  10  menit.  Setelah proses prefreezing selesai,  selanjutnya straw dicelupkan  ke  dalam  nitrogen  cair  dan dimasukkan  ke  dalam goblet lalu  disimpan dalam  kontainer  N 2 . Straw diletakkan  dalam tangki  yang  telah  berisi  N 2 (YDS-50;  50  liter) selama 24 jam.
Proses Thawing Metode thawing yang  dilakukan  dengan memasukkan straw ke  dalam  air  suhu  37  °C selama 30 detik.
Pemeriksaan  Kualitas  Spermatozoa Post Thawing Motility
Kualitas  PTM  spermatozoa  diamati dengan cara meneteskan satu tetes spermatozoa  di  atas  objek  gelas,  selanjutnya ditambahkan NaCl fisiologis sebanyak
satu  tetes.  Objek  gelas  kemudian  ditutup dengan cover  glass .  Evaluasi  motilitas spermatozoa  dilakukan  di  bawah  mikroskop (Olympus  CX21LED)  dengan  pembesaran 40x10  mengikuti  prosedur  yang  dilakukan Prestiya et al . [10]

## Analisis Data
Kualitas  semen  yaitu  motilitas  pasca ekuilibrasi  dan  pasca  thawing  kemudian dianalisis  dengan  analisis  varian  satu  arah dan dilanjutkan dengan uji Duncan.

## HASIL
Kualitas  semen  segar  domba  Waringin ditampilkan  pada  Tabel  1.  Rerata  volume semen  segar  domba  Waringin  adalah 1,2 ± 0,23 ml, berwarna krem, rataan pH 6,3 ± 0,57 dan konsistensi  kental. Kualitas tersebut menunjukkan  bahwa  semen  yang  telah diejakulasikan masuk dalam kategori normal.
Secara mikroskopis, rerata konsentrasi
spermatozoa domba
Waringin sebesar 2.186,67  ±  319,74  juta/ml,  rerata  motilitas semen  segar  sebesar  66,68  ±  5,43%,  dan persentase viabilitas  mencapai  67,39 ± 5,99%, serta  tingkat  abnormalitas  sebesar  16,07  ± 8,60%.
Persentase  motilitas  spermatozoa  pasca ekuilibrasi domba Waringin setelah perlakuan
penambahan  PGF2 α pada  kelompok  K1,  K2, dan K3 masing-masing adalah 43,67 ± 1,20%; 75,00  ±  4,00%;  82,33  ±  3,18%,  sedangkan persentase  motilitas  spermatozoa  pasca thawing setelah  perlakuan  penambahan PGF2 α pada  kelompok  K1,  K2,  dan K3 masing-masing adalah 43,67 ± 1,20%; 75,00 ± 4,00%; 82,33 ± 3,18%. Motilitas spermatozoa domba Waringin pasca ekuilibrasi dan pasca thawing pada  K2  dan  K3  meningkat dibandingkan  K1  (P<0,05),  namun  motilitas antara K2 dan K3 baik pada pasca ekuilibrasi maupun pasca thawing menunjukkan perbedaan  yang  tidak  signifikan  (P>0,05). Peningkatan  motilitas  spermatozoa  domba Waringin  yang  lebih  tinggi  tampak  pada penambahan PGF2 alpha dosis 75,0  g PGF2 α (Tabel 2).

## PEMBAHASAN
Rerata  volume  semen  domba  Waringin yang  diperoleh  adalah  1,2  ±  0,23  ml.  Hasil ini  berada  dalam  kisaran  normal  volume semen  domba  pada  umumnya  menurut Santoso  dan  Herdis  [15]  yakni  0,82 ±  0,16  ml dan  Nalley  dan  Arifiantini  [16]  yakni 0,65  ±  0,32  ml.  Warna,  pH  dan  konsistensi semen  yang  diejakulasikan  oleh  domba Waringin  dalam  penelitian  ini  memiliki kualitas  yang  hampir  sama  yaitu  dengan
Tabel 1. Rerata (±SD) kualitas semen segar domba Waringin Pemeriksaan Kualitas Hasil Pemeriksaan Makroskopis: Volume (ml) 1,2 ± 0,23 Warna Krem pH 6,3 ± 0,57 Konsistensi Kental Mikroskopis: Konsentrasi (juta/ml) 2186,67 ± 319,74 Motilitas (%) 66,68 ± 5,43 Viabilitas (%) 67,39 ± 5,99 Abnormalitas (%) 16,07 ± 8,60
Tabel 2. Rerata (±SE) motilitas spermatozoa domba Waringin pada saat pasca ekuilibrasi dan pasca .. thawing setelah perlakuan penambahan PGF2 alpha
Pemeriksaan Kualitas Semen Kelompok Perlakuan K1 (kontrol) K2 (37,5  g PGF2 α) K3 (75,0  g PGF2 α) Motilitas pasca ekuilibrasi (%) 43,67 ± 1,20 a 75,00 ± 4,00 b 82,33 ± 3,18 b Motilitas pasca thawing (%) 25,33 ± 1,85 a 49,33 ± 3,17 b 54,00 ± 5,50 b
a,b Superskrips yang berbeda pada baris yang sama menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05)
warna  krem,  rataan  pH  6,3  ±  0,57  dan konsistensi kental. Semen yang diejakulasikan dalam  penelitian  ini  tergolong  normal [16].  pH  normal  semen  domba  yang dilaporkan  oleh  Herdis  [17]  berkisar  antara 6,2-7 dan menurut  Solihati et al. [18] berkisar antara  6,5-6,8.  Konsentrasi  spermatozoa domba  Waringin  yang  diperoleh  dalam penelitian ini rata-rata berkisar antara 2.186,67 ±  319,74  juta  sperma/ml.  Nilai  ini  sebanding dengan  konsentrasi  spermatozoa  domba yang dilaporkan oleh Jha et al.
[19]  yaitu  berkisar  antara  2.644,4  ±  555,9 – 3.628,1  ±  654,1  juta  sperma/ml,  meskipun lebih  rendah  dari  laporan  Azizunnesa et  al.
[20]  yakni  antara  4,8  ±  1,8 – 5,4  ±  1,9x10 9 sperma/ml.
Motilitas  rata-rata  spermatozoa  segar domba Waringin yang diperoleh yaitu 66,68 ± 5,43%. Jha et al. [19] melaporkan bahwa domba jantan  memiliki  60,0  ±  9,0 – 87,0  ±  2,7% spermatozoa motil, namun juga lebih rendah dari  laporan  Azizunnesa et  al. [20].  Adapun persentase  viabilitas  spermatozoa  domba Waringin  yang  diperoleh  pada  penelitian ini  yaitu  sebesar  67,39  ±  5,99%.  Viabilitas spermatozoa  domba  yang  dilaporkan  oleh Jha et  al. [19]  terlihat  lebih  tinggi  yakni berkisar  antara  79,7  ±  3,6 – 94,7  ±  1,0%  dan 87,3  ±  0,2%.  Selain  itu  persentase  rataan abnormalitas  yang  diperoleh  pada  penelitian ini  (16,07  ±  8,60)  lebih  tinggi  dari  laporan Sujoko et  al. [21]  yakni  sebesar  7,84%.
Berdasarkan  hasil  evaluasi,  kualitas  semen segar  tergolong  normal  [14]  sehingga disimpulkan  bahwa  semen  segar  domba Waringin  yang  dihasilkan  layak  diproses lebih lanjut.
Motilitas  spermatozoa  domba  Waringin setelah  pemberian PGF2α sesuai  laporan Karahan [22], Sen dan Akcay [8], dan Prestiya et  al. [13].  Motilitas  spermatozoa  setelah penambahan  125,0 µg  atau  250,0  µg  PGF2α pada  sapi  Brown-Swiss  meningkat  secara signifikan  meskipun  telah  disimpan  selama 24  jam  dengan  suhu  4°C  [22].  Penambahan PGF2α  juga  mampu  meningkatkan  motilitas spermatozoa  kuda  [7]  dan  kambing  Nubian [10].
Peningkatan motilitas spermatozoa yang  terjadi  ini  merupakan  efek  positif dari  penambahan PGF2α  yang bekerja
melalui  inaktivasi  PGF2α  pada  spermatozoa. Hal ini dapat dibuktikan dengan cara  menginkubasi  spermatozoa  dalam prostaglandin  15- hydroxydehydrogenase yang menyebabkan penurunan motilitas spermatozoa  [23].  Fungsi  prostaglandin (PGs) sebagai
regulator motilitas spermatozoa  dimediasi  oleh  ATP  yang terdapat  dalam  mitokondria  ( mitochondrial sheath )  pada  ekor  spermatozoa  [24]. Şen dan  Akçay  [8]  menjelaskan  bahwa  PGs memberikan  efek  secara  langsung  terhadap pada  spermatozoa  dengan  mengaktifkan elemen kontraktil yang mengelilingi axonema dan  terdapat  pada  bagian  ekor spermatozoa  [25]. Axonema adalah  struktur inti  dari  ekor  sperma  yang  mengandung lengan  dynein,  yang  berfungsi  sebagai motor  penggerak  /  motilitas  spermatozoa [25].
Pemberian PGF2α dalam  pengencer semen dapat meningkatkan motilitas spermatozoa domba Waringin sesuai
laporan  Prestiya et  al .  [13]  pada  kambing Nubian.  Motilitas  merupakan  salah  satu tolak ukur terhadap daya hidup spermatozoa serta  memiliki  kontribusi  yang  penting pada saat transportasi di saluran
reproduksi betina yaitu usaha untuk mencapai  oosit  dan  penetrasi  zona pellucida .
Oleh  karena  itu  dilakukan  pengontrolan dan mempertahankan kualitas semen dengan  pengenceran  dan  penyimpanan pada  suhu  rendah  sebelum  digunakan untuk  IB.  Nilai  persentase post  thawing motility untuk  IB  menurut  SNI  minimal 40% [26].

## KESIMPULAN
Disimpulkan bahwa pemberian
PGF2α  pada  pengencer  semen  Andromed menyebabkan peningkatan persentase motilitas  spermatozoa  domba  Waringin pada  tahap  pasca  ekuilibrasi  dan  pasca thawing .

## KONFLIK KEPENTINGAN
Penulis  menyatakan  tidak  ada  konflik kepentingan  dengan  pihak  manapun  terkait materi yang ditulis dalam naskah ini.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Sunando,  H.,  S.  Rahayu,  dan  M.  Baihaqi. 2016.  Tingkah  laku  domba  garut  jantan muda  dengan  pemeliharaan  intensif  yang diberi  ransum  limbah  tauge  pada  waktu pemberian  yang  berbeda.  Jurnal  Ilmu Produksi dan Teknologi Hasil Peternakan . 4(1):218-226.
2. Rahayu,  Y.  G.,  T.  N.  Siregar,  G.  Gholib, C.  N.  Thasmi,  H.  Herrialfian,  R.  Daud, Z. Zuhrawati, H. Hamdan, dan
R. Rasmaidar. 2019. Perbandingan konsentrasi  progesteron  selama  siklus birahi  pada  domba  waringin  yang diinduksi  PGF2α  dan  kombinasi  PGF2α dan  GnRH.  Jurnal  Ilmiah  Peternakan Terpadu . 6(2):101-105.  Doi:  10.23960/jipt.
v6i2.p101-105
3. Alam, S. 2018. Majalah Infovet. PT. Gallus Indonesia Utama, Jakarta Selatan.
4. Inounu,  I.  2014.  Upaya  meningkatkan keberhasilan  inseminasi  buatan  pada ternak ruminansia kecil. Wartazoa . 24(4):201-209. Doi: 10.14334/wartazoa. v24i4.1091
5. Gibbons,  A.  E.,  J.  Fernandez,  M.  M. Bruno-Galarraga, M. V. Spinelli, and M. I. Cueto.  2019.  Technical  recommendations for artificial insemination  in sheep. Anim. Reprod . 16(4):803-809.  Doi:  10.21451/1984- 3143-AR2018-0129
6. Susilawati, T., F. E. Wahyudi, I. Anggraeni, N.  Isnaini,  dan  M.  N.  Ihsan.  2016. Penggantian Bovine Serum Albumin pada pengencer CEP-2 dengan serum darah sapi dan  putih  telur  terhadap  kualitas  semen cair  sapi  limousin  selama  pendinginan. Jurnal  Kedokteran  Hewan . 10(2):98-102. Doi: 10.21157/j.ked.hewan.v10i2.5025
7. Azawi, O. I. and E. K. Hussein. 2013. Effect of vitamins C or E supplementation to Tris diluent  on  the  semen  quality  of  Awassi rams  preserved  at  5  C.  Vet.  Res.  Forum . 4(3):157.
8. Şen, Ç. Ç. and E. Akcay. 2015. The effect of oxytocin  and  prostaglandin  hormones added  tosemen  on  stallion  sperm  quality. Turk. J. Vet. Anim. Sci . 39(6):705-708. Doi:
10.3906/vet-1412-69
9. Kowalczyk, A., E. Gałęska,
E.
Czerniawska- Piątkowska,  A.  Szul,  and
L.  Hebda.  2021.  The  impact  of  regular sperm  donation  on  bulls’  seminal  plasma hormonal  profile  and  phantom  response. Sci.  Rep . 11(1):1-12.  Doi:  10.1038/s41598-
021-90630-8
10. Aslam,  M.  M.,  A.  Kumaresan,  V.  K. Sharma,  M.  Tajmul,  S.  Chhillar,  A. Chakravarty,  A.  Manimaran,  T.  Mohanty, A.  Srinivasan,  and  S.  Yadav.  2014. Identification  of  putative  fertility  markers in  seminal  plasma  of  crossbred  bulls through differential proteomics. Theriogenology . 82(9):1254-1262. Doi: 10.1016/j.theriogenology. 2014.08.007
11. Majeed,  A.,  A.  Omar,  K.  Ahmed, R.  Mahmood,  and  R.  Hassan.  2017.
Effect  of  addition  of  prostaglandin PGF2  alpha  and  oxytocin  invitro  to diluted  and  cooled  semen  of  fresian bull.  Euphrates  Journal  of  Agriculture Science.  Second  Veterinary  Conference: 563-568.
12. Pandur,  I.  D.  and  N.  Pacala.  2012.  Sperm motility after the addition of prostaglandin F2α  to  the  landrace  boar  diluted  semen. Scientific  Papers:  Animal  Science  and
Biotechnologies . 45(1):222-225.
13. Prestiya, A., T. N. Siregar, H. Husnurrizal, S.  Wahyuni,  E.  M.  Sari,  H.  Hafizuddin, dan  B.  Panjaitan.  2020.  Peningkatan motilitas  spermatozoa  kambing  Nubian setelah pemberian
PGF2α
dalam pengencer  andromed.  Jurnal  Agripet . 20(1):32-37 .  Doi:  10.17969/agripet.v20i1.15 509
14. Ariyanto, K. B., L. Khotijah, D. A. Astuti, R. I.  Arifiantini,  and  J.-B.  Menassol.  2020.
Semen  quality  of  garut  rams  feed  by different  protein  sources  and  their implementation potential in small farms of West Java. Jurnal Agripet . 20(1):47-55. Doi:
10.17969/agripet.v20i1.15391
15. Santoso  dan  Herdis.  2014.  Peranan raffinosa  ke  dalam  mempertahankan kualitas  semen  beku  domba  Garut. Prosiding  Seminar  Nasional  Asosiasi Reproduksi  Hewan  Indonesia.  2013:110- 114.
16. Nalley,  W.,  and  R.  Arifiantini.  2013. The  hypo-osmotic  swelling  test  in  fresh garut  ram  spermatozoa.  J.  Indones.  Trop.
Anim.  Agric.  38(4):212-216.  Doi:  10.14710/ jitaa.38.4.212-216
17. Herdis, H. 2018. Karakteristik semen segar domba  Garut  tipe  laga  pada  tiga  waktu penampungan  semen.  Zoo  Indonesia . 26(1):8-19. Doi: 0.52508/zi.v26i1.3531
18. Solihati,  N.,  S.  Rasad,  R.  Setiawan, and    C.  Alvionita.  2018.  Quality  and
viability  of  Javanese  local  ram  semen at different age. Proceedings of International
Seminar on Livestock
Production  and  Veterinary  Technology
2016 . 5:265-270. Doi: 10.14334/Proc.Intsem. LPVT-2016-p.265-270
19. Jha, P., M. Alam, M. Al-Mansur, M. Islam, and  F.  Bari.  2018.  Selection  of  breeding rams by evaluating semen quality. J. Appl. Anim. Res. 11(1):9-20.
20. Azizunnesa,  B.  Zohara,  F.  Bari,  and  M. Alam. 2014. Baseline study of reproductive performances  of  indigenous  rams  in Bangladesh.  J.  Agric.  Vet.  Sci.  7(6):83-89. Doi: 10.9790/2380-07618389
21. Sujoko, H., M. A. Setiadi, dan A. Boediono. 2009. Seleksi spermatozoa domba Garut dengan metode sentrifugasi Gradien Densitas Percoll. Jurnal Veteriner .
10(3):125-132.
22. Karahan,  İ.,  G.  Türk,  and  S.  Gür.  2006.  In vitro  effects  of  prostaglandin  F2α  and metamizol  on  motility  of  diluted  bull semen. Turk. J. Vet. Anim. Sci. 30(2006):271-278.
23. Siregar,  T.  N.,  M.  Akmal,  S.  Wahyuni,
H.  Tarigan,  M.  Mulyadi,  dan  I.  Nasution. 2014. Pemberian ekstrak vesikula seminalis meningkatkan kualitas spermatozoa tetapi  tidak  memengaruhi  konsentrasi spermatozoa  dan  testosteron  tikus  putih ( Rattus  norvegicus ).  Jurnal  Kedokteran
Hewan . 8(2):90-93.  Doi:  10.21157/j.ked.
hewan.v8 i2.2620
24. Senger,  P.  2012.  Pathways  to  pregnancy and parturition. Current Conceptions, Inc., Redmon, Oregon.
25. Lehti, M. S. and
A. Sironen.
2017.  Formation  and  function  of  sperm tail structures in association with sperm  motility  defects.  Biol.  Reprod.
97(4):522-536. Doi: 10.1093/ biolre/iox096
26. Badan Standardisasi Nasional [SNI].  2014. SNI  No. 4869.3 Semen  beku – Bagian  3: Kambing dan domba. Badan Standardisasi Nasional, Jakarta.