p-ISSN 2527-6751
Pengaruh Hormon dan Ukuran Eksplan terhadap Pertumbuhan Mata Tunas Tanaman Pisang ( Musa paradisiaca var. Raja Bulu) Secara In Vitro
The Hormone Effect and Explant Size to The Growth of Banana Shoot (Musa paradisiaca var. Raja Bulu ) In Vitro
Fifit Yuniati 1 , Sri Haryanti 2 , Erma Prihastanti 2
1) Program Studi Biologi, Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro
2) Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Matematika, Universitas Diponegoro Jl. Prof. Soedarto, SH, Tembalang, Semarang
*Email: fit_ufp@yahoo.co.id
Diterima 9 Desember 2016 / Disetujui 30 Januari 2018

## ABSTRAK
Penggunaan eksplan mata tunas pisang ( Musa paradisiaca var. Raja Bulu)  diduga lebih efektif  membentuk tunas  secara  langsung  ,sehingga  dapat  memotong  satu  tahapan  kultur in  vitro .  Tujuan  penelitian  ini mengetahui  kombinasi  hormon  dan  ukuran  eksplan  yang  terbaik  untuk  pertumbuhan  mata  tunas  secara in vitro .  Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  faktorial  (4x2)  dengan  3  kali  ulangan. Faktor pertama hormon (P) yaitu P0: tanpa zat pengatur tumbuh, P1: IAA 0,5 mg/l + BA 4,5 mg/l, P2: IAA 3 mg/l + BA 7 mg/l, P3: IAA 5,5 mg/l + BA 9,5 mg/l. Faktor kedua ukuran eksplan  yaitu B:  mata tunas besar (3  -  4  cm)  dan  K:  mata  tunas  kecil  (1  -  2  cm).  Parameter  yang  diamati  adalah  bobot,  diameter,  warna, morfologi mata tunas dan browning . Data dianalisis dengan Analysis of Variance (ANOVA) dan jika ada beda pengaruh  diuji  lanjut  Duncan’(DMRT)  signifikansi  95%.  Hasil  penelitian  menunjukkan    terdapat  interaksi perlakuan  kombinasi  hormon  dan  ukuran  mata  tunas  terhadap  diameter  mata  tunas,  namun  tidak  terdapat interaksi terhadap bobot mata tunas. Perlakuan hormon dan ukuran mata tunas masing – masing berpengaruh nyata  terhadap  bobot  mata  tunas.  Interaksi    hormon  IAA  5,5  mg/l  +  BA    9,5  mg/l  dan  mata  tunas  besar menghasilkan    diameter  mata  tunas  paling  tinggi,  sedangkan  masing-masing  perlakuan  menghasilkan  bobot mata  tunas  paling  tinggi.  Kombinasi  hormon  IAA  0,5  mg/l  +  BA    4,5  mg/l  menghasilkan    diameter  paling tinggi  pada  mata  tunas  kecil.  Semua  perlakuan  kombinasi  hormon  dan  mata  tunas  menyebabkan  eksplan membengkak  dan  mengelupas  kecuali  pada  kombinasi  hormon  IAA  3  mg/l  +  BA  7  mg/l  eksplan  hanya membengkak.  Warna eksplan menjadi hijau seiring dengan bertambahnya bobot.
Kata kunci : mata tunas, Raja Bulu, IAA, BA.

## ABSTRACT
The  use  of  buds  explants  pisang  ( Musa  paradisiaca var.  Raja  Bulu)  expected  to  be  more  effective  that  is expected to form shoots directly so as to cut the stage in vitro culture. The purpose of this study to determine the balance of hormones and explant size is best for the growth of the banana king feather buds in vitro. This study  uses  a  Completely  Randomized  Design  (CRD)  factorial  (4x2)  with  3  replications.  The  first  factor hormone (P) ie P0: without growth regulators, P1: IAA 0.5 mg / l + BA 4.5 mg / l, P2: IAA 3 mg / l + BA 7 mg / l, P3: IAA 5.5 mg / l BA + 9.5 mg / l. The second factor is the size of the buds  explant ie B: buds large diameter  (3-4  cm)  and  K:  buds  small  diameter  (1-2  cm).  The  parameters  were  the  weight,  diameter,  color, morphology  changes  buds  and  browning.  Data  were  analyzed  using  Analysis  of  Variance  (ANOVA)  and if there are different influences continued of Duncan '(DMRT)  95% significance. The results showed that there is  a  balance  of  hormone  treatment interaction and the  size  of the  buds to the  increase in  diameter  buds,  but there is no interaction against weight gain buds. The treatment of the balance of hormones and the size of the buds each - each significantly affect weight gain buds. Interaction IAA hormone balance of 5.5 mg / l BA + 9.5  mg  /  l  and  large  buds  produce  the  increase  in  diameter  highest  buds,  while  each  of  these  treatments produce weight gain highest buds. IAA hormone balance of 0.5 mg / l + BA 4.5 mg / l resulted in the increase in diameter was highest in small buds. All treatments balance of hormones and cause explant buds swell and
peel unless the balance of hormones IAA treatment 3 mg / l + BA 7 mg / l  just cause explants swell. Explants color changes to green with increasing weight.
Keywords : buds, raja bulu, IAA, BA

## PENDAHULUAN
Tanaman  Pisang  Raja  Bulu  merupakan tanaman  monokotil,  sistem  perakarannya  sangat kuat,  dan  berumur  genjah/  cepat  berbuah  (12-15 bulan) (Siregar dkk, 2013). Berdasarkan keterangan  eksportir  buah-buahan  di  Jakarta, pisang  Raja  Bulu  merupakan  jenis  pisang  yang diminati  di  Saudi  Arabia  dan  negara  pengimpor lainnya  (Maslukha,  2008).  Hal  ini  mendorong petani ataupun pengusaha agribisnis membudidayakan  pisang  Raja  Bulu  secara komersial  pada  skala  usaha  yang  lebih  luas,  baik untuk  memenuhi  pasar  lokal  maupun  ekspor (Supriyati, 2011).
Teknologi  budidaya  pisang  cakupannya luas,  namun  yang  paling  dasar  dan  sangat menentukan  hasil  adalah  penyediaan  bibit  yang bermutu  (Dewi,  2016).  Penyediaan  bibit  melalui kultur jaringan sangat dimungkinkan mendapatkan bahan  tanam  dalam  jumlah  besar  dalam  waktu singkat  bibit  kondisinya  sehat  dan  seragam  (Nisa dan  Rodinah,  2005),  namun  ditemukan  kendala berupa pertumbuhan bibit yang lambat pada pisang raja  Bulu  (Isnaini,  2016). Hal  tersebut  disebabkan oleh  eksplan  yang  bersifat  spesifik,  dominansi apikal  sangat  kuat,  dan  sulit  berproliferasi membentuk  tunas  (Kasutjianingati  dkk,  2010). Upaya  untuk  mengatasi  permasalahan  tersebut sangat diperlukan, salah satunya dengan menambahkan  zat  pengatur  tumbuh  secara  tepat pada media kultur.
Pertumbuhan  dan  morfogenesis  eksplan diatur  oleh  interaksi  dan  keseimbangan  zat pengatur  tumbuh  pada  media  dengan  hormon endogen  yang  terdapat  dalam  eksplan  (Rainiyati dkk,  2007).  IAA  (Indole  Acetic  Acid)  merupakan auksin yang aktif di dalam tumbuhan (endogenous)  yang  diproduksi  dalam  jaringan meristematik  yang  aktif  (Ardiyani  dan  Rina, 2012).  BA  (Benzyl  Adenin)  merupakan  jenis sitokinin  sintetik  yang  mempunyai  aktivitas  yang kuat,  lebih  efektif  daripada  kinetin  karena  BA mempunyai gugus benzil (Lestari, 2011).
Nisa  dan  Rodinah  (2005)  menyatakan bahwa  dalam  pertumbuhan  jaringan,  sitokinin bersama-sama dengan auksin memberikan pengaruh  interaksi  terhadap  deferensiasi  jaringan. Alitalia  (2008)  menyebutkan  bahwa  nisbah sitokinin-auksin  yang  tinggi  akan  mendorong pembentukan tunas. Ernawati dkk, (2005) melakukan percobaan inisiasi menggunakan kombinasi  hormon  BAP  7  mg/l  +  3  IAA    mg/l, mampu menghasilkan tunas mikro eksplan jantung pisang  Rajabulu  sebanyak  12  tunas  pada  musim kemarau  dan  6  tunas  pada  musim  penghujan, sedangkan  eksplan  anakan  sebanyak  5  tunas  pada musim  kemarau  dan  7  tunas  pada  musim penghujan.
Penelitian ini akan dilakukan kultur in vitro menggunakan  eksplan  mata  tunas  pisang  ( Musa paradisiaca var.  Raja  Bulu)  pada  medium  MS dengan  penambahan  kombinasi  hormon  IAA  dan BA  yang  bertujuan  untuk  mengetahui  imbangan hormon  IAA  dan  BA  yang  terbaik  untuk pertumbuhan  mata  tunas.  Mata  tunas  merupakan organ yang tersusun oleh jaringan muda yang sel- selnya masih aktif membelah (meristematik). Mata tunas  memiliki  ukuran  diameter  yang  berbeda- beda  yang  menunjukkan  fase  pertumbuhan  secara fisiologi  yang  berbeda  pula,  sehingga  digunakan ukuran  diameter  mata  tunas  untuk  mengetahui pertumbuhan  yang  lebih  optimum  secara in  vitro . Penggunaan mata tunas pada kultur in vitro diduga lebih  efektif  karena  sudah  terbentuk  calon  tunas yang  diharapkan  dapat  membentuk  tunas  secara langsung  sehingga  dapat  memotong  satu  tahapan kultur in vitro .

## METODE PENELITIAN

## Waktu dan Tempat
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  Juli sampai  dengan  September  2016  di  Laboratorium Biologi Struktur dan Fungsi, Departemen Biologi, Fakultas  Sains  dan  Matematika,  Universitas Diponegoro.
Bahan  yang  digunakan  meliputi  mata  tunas pisang  ( Musa  paradisiaca var.  Raja  Bulu)  yang diperoleh  dari  UPTD  Balai  Benih  Pertanian  Kota Semarang,  media  dasar  MS,  IAA,  BA,  aquades steril,  HCl,  NaOH,  fungisida,  bakterisida,  alkohol 70%, alkohol 96%, H 2 O 2, betadine, spiritus,  sabun cair,  bayclin,  agar-agar,  myoinositol,  gula  pasir, tisu, alumunium foil , plastik wrap cling , dan air.

## Cara Kerja
1. Sterilisasi  Alat  dan  Botol  :  semua  alat  dicuci dengan  sabun  cair  dan  dibilas  hingga  bersih kemudian dikeringkan. Setelah kering dibungkus  dengan  kertas,  sedangkan  botol kultur  ditutup  dengan alumunium  foil .  lalu disterilkan  dalam  autoklaf    (pada  suhu  121°C pada  tekanan  1  atm,  30  menit).  Selanjutnya alat-alat diletakkan di dalam oven.
2. Pembuatan Larutan Stok ZPT: IAA        (4 mg) dan  BA  (5  mg)  ditempatkan  pada  gelas  piala yang  berbeda.  kemudian  IAA  dilarutkan terlebih  dahulu  dengan  NaOH,  sedangkan  BA dilarutkan terlebih dahulu dengan HCl.
Kemudian masing-masing ditambahkan aquadest  sampai  200  ml,  kemudian  diaduk dengan  magnetic  stirer  tanpa  pemanasan sampai  larut  dan  homogen,  lalu  dimasukkan dalam  botol  dan  ditutup  kemudian  disimpan dalam refrigerator.
3. Pembuatan  1  liter  Media:  garam-garam  dari media  MS  yang  telah  dibuat  menjadi  larutan stok  diambil  sesuai  dengan  konsentrasi  yang dibutuhkan  dan  ditambah  IAA  dan  BA  (sesuai perlakuan). Kemudian ditambahkan gula (30 g) dan  akuadest  hingga  mencapai  800  ml. Penyesuaian pH antara 5,6-5,8 dengan menambahkan NaOH 0,1 N bila pH kurang dari 5,6  dan  ditambahkan  HCl  0,1  N  bila  pH  lebih besar  dari  5,8.  Selanjutnya  ditambahkan  agar- agar  (7  g)  dan  akuadest  sampai  volume  media mencapai 1 liter, dan dipanaskan sambil diaduk hingga  mendidih  dan  homogen.  Kemudian media dimasukkan ke dalam botol kultur steril, lalu  ditutup  dengan alumunium  foil dan  plastik wrap  cling ,  kemudian  disterilisasi  dengan autoklaf  (20 menit).
4. Persiapan  Eksplan:  Mata  tunas  diambil  dari pohon  anakan  pisang  yang  berasal  dari  induk yang  pernah  berbuah  dan  unggul.  Mata  tunas dipilih  dengan  ukuran  mata  tunas  kecil  (K= diameter 1-2 cm) dan besar (B= diameter 3 - 4 cm)  dengan  ciri-ciri  berwarna  putih  dan  lunak. Mata    tunas  ini  diambil  dan  dimasukkan  ke dalam kantong plastik hitam.
5. Sterilisasi Eksplan dan Penanaman:
- Mata tunas dicuci dengan sabun cair dan dibilas hingga  bersih,  lalu  dimasukkan  ke  dalam  botol berisi  fungisida  (2  g/l)  dan  bakterisida  (2  g/l), lalu  botol  ditutup  dan  didiamkan  selama  24 jam.  Selanjutnya  diambil  dan  dimasukkandala ke  dalam  LAF  yang  sudah  disterilkan  dengan alkohol  70%  dan  disinari  sinar  UV  (30 menit)penyinaran  dihentikan    lampu  blow dinyalakan.  Selanjutnya  eksplan  dikupas  sekali lalu  dicuci  dengan  akuadest  steril  (1  menit,  3 kali),  lalu  direndam  dalam  larutan  H 2 O 2 10% (10  menit)  sambil  digojok,  kemudian  dicuci dengan  akuades  steril  (1  menit,  3  kali).  Lalu eksplan  dimasukkan  ke  dalam  larutan  bayclin 30% (30 menit), 20% (20 menit), dan 10% (10 menit) secara berurutan sambil digojog.
- Selanjutnya  dibilas  dengan  akuades  steril digojok  selama  10  menit,  dibilas  lagi  5  menit. Selanjutnya  eksplan  dikupas  sekali  lagi  lalu dicuci  akuadest steril dan betadine 5 menit lalu eksplan diletakkan  petridish dan ditanam pada media  kultur  dengan  pinset  steril  dan  botol ditutup alumunium foil dan plastik wrap cling . 6. Pemeliharaan  pada  ruang  steril  ,  pencahayaan lampu neon daya 10 Watt/Joule (24 jam), suhu ruangan  25°C.  Setiap  3  hari sekali  botol  kultur disemprot dengan alkohol 70 %.
Penelitian  ini  menggunakan  Rancangan Acak  Lengkap  (RAL)  Faktorial  (4x2).  Faktor pertama    hormon  dan  faktor  kedua  ukuran  mata tunas, yaitu :
1. Kombinasi hormon :
P0 = tanpa zpt (zat pengatur tumbuh) P1 = IAA 0,5 mg/l + BA 4,5 mg/l)
P2 = IAA 3 mg/l + BA 7 mg/l)
P3 = IAA 5,5 mg/l + BA 9,5 mg/l)
2. Ukuran diameter  :
B = mata tunas besar (diameter 3 - 4 cm)
K = mata tunas kecil (diameter 1 - 2 cm)
Pengaruh Hormon dan Ukuran Eksplan terhadap Pertumbuhan Mata Tunas Tanaman Pisang (Musa paradisiaca var.

## Raja Bulu) Secara In Vitro
Masing-masing perlakuan dengan 3
ulangan,  setiap  botol  kultur  masing-masing  berisi satu eksplan.

## Parameter Penelitian
1. Penambahan  bobot  mata  tunas:  ditentukan dengan  rumus=  bobot  akhir  (B t) –  bobot  awal (B o ). 2. Penambahan  diameter  mata  tunas:  diukur lebar bagian bawah titik tumbuh utama dari sisi satu ke  sisi  lainnya  yang  diukur  diluar  botol. Pengamatan  dilakukan  setiap  1  minggu  sekali sampai akhir pengamatan (4 MST).
3. Warna  mata  tunas:  diamati  setiap  satu  minggu sekali  sampai  akhir  pengamatan  (4  MST) dengan skoring: 0= coklat; 1= putih kecoklatan 2=  putih;  3=  kuning;  4=  hijau  muda;  5=  hijau; 6= hijau tua.
4. Perubahan  morfologi  dan browning pada eksplan:  diamati  secara  visual  setiap  hari sampai akhir pengamatan (30 HST).

## Analisis Data
Data  bobot  dan  diameter  mata  tunas dianalisis  dengan  ANOV  taraf  signifikansi  95% dan jika ada beda pengaruh dilanjutkan dengan uji Duncan’(DMRT).

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Rata  –  rata  pertambahan  bobot  mata  tunas pisang Raja Bul
Gambar 1. Histogram rata-rata pertambahan bobot mata  tunas  pisang  Raja  Bulu  pada perlakuan hormon selama 30 hari
Keterangan : P0 = tanpa zpt;  P1 = 0,5 mg/l IAA + 4,5 BA  mg/l;  P2  =  3  mg/l  IAA  +  7  BA  mg/l; P3 = 5,5 mg/l IAA + BA 9,5 mg/l
Hasil  uji  ANOVA  ( Analysis  of  Variance ) pada  taraf  signifikansi  95%  terhadap  bobot  mata tunas pisang Raja Bulu menunjukkan bahwa tidak terdapat  interaksi  perlakuan  kombinasi  hormon dan  ukuran  mata  tunas.  Uji  lanjut  pengaruh hormon  memberikan  pengaruh  nyata  terhadap bobot mata tunas (Gambar 1).
Perlakuan  hormon  menghasilkan  rata-rata bobot mata tunas  meningkat terutama pada P1 da P3  dibandingkan  kontrol.  Hal  ini  dikarenakan hormon eksogen IAA dan BA yang diberikan pada eksplan  akan  meningkatkan  konsentrasi  hormon endogen pada eksplan, yang kemudian merangsang  aktivitas  sel  untuk  membelah  dan membentang,  sehingga  mengakibatkan  mata  tunas tumbuh  lebih  cepat.  Perlakuan  imbangan  hormon IAA  5,5  mg/l  +  BA    9,5  mg/l  (P3)  menghasilkan bobot  mata  tunas  paling  tinggi  yaitu  0,827  g (Gambar 1).
Menurut  Alitalia  (2008),  sitokinin  mampu mendorong  pembelahan  sel.  Aktivitas  sitokinin sendiri dipengaruhi oleh auksin. Menurut Nisa dan Rodinah  (2005),  auksin  meningkatkan  sintesa protein, sehingga dapat digunakan sebagai sumber tenaga  dalam  pertumbuhan.  Hayati  dkk,  (2010) menyatakan bahwa auksin (IAA) pada media, akan berdifusi  ke  dalam  sel-sel  eksplan  melalui  luka pada  ujung-ujung  eksplan.  Ketika  IAA  telah berada  di  dalam  sel  yang  mempunyai  pH  7,  IAA akan  terionisasi  yang  menyebabkan  IAA  tetap berada di dalam sel dikarenakan membran plasma kurang  permeabel  terhadap  ion.  Kemudian,  IAA akan  mengaktifasi  pompa  proton  (ion  H + )  yang terletak pada membran plasma, yang menyebabkan pH  pada  bagian  dinding  sel  lebih  rendah  yaitu mendekati  pH  pada  membran  plasma  (sekitar  pH 4,5).  Aktifnya  pompa  proton  tersebut  dapat memutuskan  ikatan  hidrogen  diantara  mikrofibril selulosa  dinding  sel  yang  menyebabkan  dinding sel merenggang sehingga tekanan dinding sel akan menurun  dan  mengakibatkan  pelenturan  sel. Demikian,  sel  mudah  mengambil  air  melalui osmosis  dan  sel  akan  bertambah  panjang.  Derajat keasaman (pH) yang rendah juga dapat mengaktivasi enzim tertentu pada dinding sel yang dapat mendegradasi protein atau polisakarida yang menyebar pada dinding sel yang lunak dan lentur, sehingga pembesaran sel dapat terjadi.
Menurut Hayati dkk (2010), peran sitokinin secara  langsung  adalah  dalam  proses  transkripsi dan  translasi  RNA  dalam  proses  sintesis  protein yang  berlangsung  dalam  tahap  interfase.  Proses translasi  RNA  dilanjutkan  dengan  pembentukan asam-asam  amino  yang  merupakan  komponen dasar  protein.  Protein  yang  terbentuk  antara  lain berupa enzim-enzim yang berperan dalam pembelahan  sel,  yaitu  enzim  polymerase  DNA yang  berperan  dalam  memperpanjang  rantai  DNA dan  memperbaiki  kesalahan  penyusunan  basa nitrogen  pada  DNA  dan  enzim  ligase  yang berperan dalam menggabungkan fragmen-fragmen DNA  yang  terputus-putus  saat  proses  replikasi. Ketersediaan  enzim-enzim  ini  di  dalam  sel  akan menyebabkan  proses  pembelahan  sel  berlangsung lebih efektif.
Gambar 2. Histogram rata-rata pertambahan bobot mata  tunas  pisang  Raja  Bulu  pada diameter yang berbeda selama 30 hari
Keterangan : B = mata tunas besar (diameter 3 - 4 cm); K = mata tunas kecil (diameter 1 - 2 cm)
Berdasarkan  uji  lanjut  menunjukkan  bahwa perlakuan ukuran mata tunas memberikan pengaruh  nyata  terhadap  bobot  mata  tunas.  bobot mata  tunas  lebih  tinggi  pada  mata  tunas  ukuran besar  (B)  yaitu  0,625  gr  (Gambar  2).  Mata  tunas mengandung  karbohidrat,  yang  nantinya  ketika ditanam  pada  media  kultur  akan  melakukan katabolisme  karbohidrat  sebagai  energi  awal pertumbuhannya.  Secara  fisiologis,  mata  tunas besar  (B)  telah  memiliki  cadangan  karbohidrat yang  lebih  banyak  dibandingkan  mata  tunas  kecil (K),  yang  mana  sel-selnya  akan  membelah    lebih cepat dan bertambah besar sehingga bobotnya pun
bertambah.  Untuk  itu,  penggunaan  eksplan  mata tunas sebaiknya diambil yang berukuran minimal 3 cm.

## Pertambahan diameter mata tunas pisang Raja Bulu
Gambar  3.  Histogram  rata-rata  pertambahan ukuran  diameter  mata  tunas  pisang Raja  Bulu  pada  kombinasi  hormon pada  diameter  mata  tunas  yang berbeda selama 30 hari
Keterangan  :  P0B  =  tanpa  zpt  +  mata  tunas  besar (diameter 3 - 4 cm); P1B = 0,5 mg/l IAA + 4,5 BA mg/l + mata tunas besar ; P2B = 3  mg/l  IAA  +  7  BA  mg/l  +  mata  tunas besar  ;  P3B  =  5,5  mg/l  IAA  +  9,5  BA mg/l  +  mata  tunas  besar  ;  P0K  =  Tanpa zat  pengatur  tumbuh  +  mata  tunas  kecil (diameter 1- 2 cm);  P1K = 0,5  mg/l IAA + 4,5 BA mg/l + mata tunas kecil; P2K = 3  mg/l  IAA  +  7  BA  mg/l  +  mata  tunas kecil  ;  P3K  =  5,5  mg/l  IAA  +  9,5  BA mg/l + mata tunas kecil.
Kombinasi  hormon  IAA  5,5  mg/l  dan  BA 9,5 mg/l (P3K) mampu menghasilkan pertambahan diameter  paling  tinggi  pada  mata  tunas  kecil namun  tidak  berbeda  nyata  dengan  perlakuan kombinasi hormon IAA 0,5 mg/l dan BA 4,5 mg/l (P1K).  Sedangkan  kombinasi  hormon  IAA  0,5 mg/l  dan  BA  4,5  mg/l  (P1B)  menghasilkan penambahan  diameter  paling  tinggi  pada  mata tunas  besar,  namun  tidak  berbeda  nyata  dengan perlakuan  tanpa  zat  pengatur  tumbuh  (P0B)  dan perlakuan  kombinasi  hormon  IAA  5,5  mg/l  dan BA  9,5  mg/l  (P3B).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa kombinasi  hormon  IAA  dan  BA  yang  sama
Pengaruh Hormon dan Ukuran Eksplan terhadap Pertumbuhan Mata Tunas Tanaman Pisang (Musa paradisiaca var. Raja Bulu) Secara In Vitro
memberikan  pengaruh  yang  berbeda  pada  eksplan mata tunas dengan ukuran yang berbeda pula.
Pertambahan  diameter  pada  perlakuan kombinasi hormon IAA 5,5 dan BA 9,5 mg/l lebih optimum  diberikan  pada  eksplan  mata  tunas  kecil yaitu  3,5  mm,  sedangkan  kombinasi  hormon  IAA 0,5 dan BA 4,5 mg/l lebih optimum diberikan pada eksplan  mata  tunas  besar  yaitu  3,5  mm,  tetapi keduanya tidak berbeda nyata (Gambar 3). Hal ini menunjukkan bahwa terdapat interaksi zat pengatur  tumbuh  dan  hormon  endogen  pada eksplan.  Mata  tunas  besar  maupun  kecil  sama- sama tersusun oleh jaringan muda secara fisiologi. Hormon  endogen  pada  mata  tunas  terdapat  di pucuknya yang merupakan tempat awal munculnya  tunas  daun.  Proporsi  ukurannya,  mata tunas  besar  memiliki  pucuk  lebih  membentang daripada  mata  tunas  kecil,  yang  memungkinkan mengandung  hormon  endogen  lebih  tinggi  pada mata  tunas  kecil,  sehingga  mata  tunas  kecil membutuhkan  penambahan  zat  pengatur  tumbuh yang lebih tinggi untuk pertumbuhannya.
Kombinasi  hormon  IAA  3  mg/l  dan  BA  7 mg/l  (P2K)  pada  media  kultur  menghasilkan diameter mata tunas paling rendah pada mata tunas kecil namun tidak berbeda nyata dengan perlakuan pada  mata  tunas  besar  (P2B),  perlakuan  tanpa  zat pengatur  tumbuh  (kontrol)  pada  mata  tunas  kecil (P0K),  dan  perlakuan  IAA  0,5  mg/l  dan  BA  4,5 mg/l  pada  kelompok  mata  tunas  kecil  (P1K). Kombinasi  hormon  IAA  3  mg/l  dan  BA  7  mg/l menghasilkan pertambahan diameter paling rendah dapat disebabkan oleh imbangan hormon IAA dan BA  yang  diberikan  pada  eksplan  dan  hormon endogen yang diproduksi oleh tanaman kemungkinan  berada  pada  posisi  yang  stagnan menurut  nisbah  sitokinin  dan  auksin,  yang  dapat menyebabkan sel membelah dan membesar secara lambat  dan  tidak  mengalami  proses  diferensiasi sel,  sehingga  tidak  terjadi  perkembangan  jaringan pada  eksplan.  Menurut  Samudin  (2009),  interaksi dan  perimbangan  zat  pengatur  tumbuh  yang ditambahkan  dalam  media  dan  yang  diproduksi oleh  sel  tanaman  secara  endogen  menentukan kecepatan  dan  arah  perkembangan  suatu  kultur. Penambahan  auksin  dan  sitokinin  eksogen  pada konsentrasi yang tepat dapat memacu
pertumbuhan  eksplan,  terutama  pembentukan tunas.

## Perubahan  warna  dan  morfologi  mata  tunas pisang Raja Bulu
Gambar  4.  Perubahan  Warna  Mata  Tunas  Pisang Raja Bulu selama 30 Hari
Tabel  1.  Perubahan  warna    dan  morfologi  mata tunas pisang Raja Bulu selama 30 hari
Perlakuan Warna Perubahan morfologi P0B hijau bengkak, mengelupas P1B hijau bengkak, mengelupas P2B Kecoklata n Bengkak P3B hijau muda bengkak, mengelupas P0K putih bengkak, mengelupas P1K hijau muda bengkak, mengelupas P2K kuning Bengkak P3K hijau tua bengkak, mengelupas, tunas
Keterangan  :  P0B  =  tanpa  zpt+  mata  tunas  besar (diameter  3  -  4  cm),  P1B  =  0,5  mg/l IAA + 4,5 BA mg/l + mata tunas besar , P2B = 3 mg/l IAA + 7 BA mg/l + mata tunas besar , P3B = 5,5 mg/l IAA + 9,5 BA  mg/l  +  mata  tunas  besar,  P0K  = Tanpa  zat  pengatur  tumbuh  +  mata tunas  kecil  (diameter  1-  2  cm),  P1K  = 0,5  mg/l  IAA  +  4,5  BA  mg/l  +  mata tunas kecil , P2K = 3 mg/l IAA + 7 BA mg/l + mata tunas kecil, P3K = 5,5 mg/l IAA + 9,5 BA mg/l + mata tunas kecil.
P3B P1B P0B
P2B P0K P1K P2K P3K
Perlakuan  tanpa  zat  pengatur  tumbuh  pada mata  tunas  besar  berubah  warna  menjadi  hijau, mengalami  pembengkakan  dan  pengelupasan (Gambar  4).  Menurut  Rainiyati  dkk  (2009), eksplan  yang  dikulturkan  pada  kondisi  di  bawah cahaya  mengalami  perkembangan  klorofil  karena adanya  rangsangan  cahaya  dan  dimulainya  proses fotosintesis. Terjadinya proses fotosintesis ini juga disertai dengan penyerapan unsur hara dan air dari media  tanam  sehingga  terjadi  pembesaran  dan pembengkakan.  Rahayu  dkk,  (2003)  menyatakan bahwa  sintesis  klorofil  terjadi  melalui  fotoreduksi protoklorofilid  menjadi  klorofilid  a  dan  diikuti dengan esterifikasi fitol untuk membentuk klorofil a yang dikatalisis enzim klorofilase.
Berdasarkan  Tabel  1.  menunjukkan  bahwa perlakuan  tanpa  zat  pengatur  tumbuh  pada  mata tunas  kecil,  eksplan  tetap  berwarna  putih,  dan sedikit  membengkak.  Menurut  Maslukha  (2008), auksin  dalam  kultur  jaringan,  selain  berfungsi merangsang pemanjangan sel juga berfungsi dalam pembentukan  klorofil.  Rahayu  dkk,  (2003) menyebutkan kenaikan kadar auksin akan menurunkan kandungan klorofil. Penurunan kandungan klorofil diduga karena pengaruh auksin pada metabolisme karbohidrat. Apabila metabolisme  karbohidrat  terganggu  maka  sintesis klorofil juga akan terganggu.
Pembengkakan  pada  eksplan  dalam  media tanpa  zat  pengatur  tumbuh  dapat  disebabkan  oleh adanya  hormon  endogen  dan  cadangan  makanan pada  mata  tunas.  Menurut  Marlin  dkk  (2012), sebagian  besar  berupa  karbohidrat  dan  protein, yang  akan  terakumulasi  pada  jaringan  luka, sehingga mengakibatkan eksplan membengkak.
Perlakuan  kombinasi  hormon  IAA  0,5  mg/l dan BA 4,5 mg/l pada mata tunas besar mengalami perubahan  warna  hijau,  sedangkan  mata  tunas kecil  berwarna  kehijauan,  semua  eksplan  pada semua perlakuan membengkak, kemudian mengelupas  (Gambar  4.).  Menurut  Hayati  dkk (2010),  keseimbangan  konsentrasi  auksin  dan sitokinin  dalam  kultur in vitro diketahui  dapat memacu pembesaran dan pembelahan sel.
Perlakuan  kombinasi  hormon  IAA  3  mg/l dan  BA  7  mg/l    pada  semua  ukuran  mata  tunas mengalami  respon  paling  lambat.  Secara  teknis, eksplan mengalami browning , sehingga
mengakibatkan  gangguan  pada  pertumbuhannya. Menurut Hutami (2008), perubahan warna menjadi coklat  dalam  kultur  jaringan  terjadi  karena akumulasi  polifenol  oksidase  yang  dilepas  atau disintesis jaringan dalam kondisi teroksidasi ketika sel  dilukai,  sehingga  jaringan  yang  diisolasi menjadi  berwarna  coklat.  Menurut  Nisa  dan Rodinah  (2005),  keberadaan  sejumlah  genom  B mempengaruhi  tingkat  kandungan  fenol  dan aktivitas  polifenol  oksidase,  yang  mana  semakin banyak  jumlah  genom  B  semakin  tinggi  pula aktivitas enzim polifenol oksidase.
Eksplan  pada  kombinasi  hormon  IAA  5,5 mg/l  dan  BA  9,5  mg/l    untuk  mata  tunas  besar (P3B)  sedikit  membengkak  dan  menghijau, sedangkan pada kelompok mata tunas kecil (P3K), eksplan  membengkak  dan  telah  tumbuh  tunas. Diduga  kandungan  hormon  endogen  berupa sitokinin pada mata tunas kecil kemungkinan lebih rendah  daripada  mata  tunas  besar,  sehingga membutuhkan  konsentrasi yang lebih tinggi untuk memacu  pertumbuhan  tunas.  Sebaliknya,  mata tunas  besar  membutuhkan  konsentrasi  yang  lebih rendah untuk memacu pertumbuhannya.
Inisiasi  tunas  dipengaruhi  oleh  konsentrasi sitokinin  yang  optimum  pada  media.  Menurut Kasutjianingati dkk (2010), perkembangan eksplan membentuk  tunas  tergantung  dari  zat  pengatur tumbuh  dan  spesifikasi  eksplan.  Makin  responsif eksplan  terhadap  konsentrasi  sitokinin  media, makin  merangsang  induksi  tunas.  Menurut Wijayani dkk (2007), induksi tunas terjadi melalui peristiwa  diferensiasi  sel  yaitu  sel  yang  sudah mencapai  volume  akhirnya  menjadi terspesialisasi dengan  cara  tertentu.  Menurut  Eriansyah  dkk (2014),  eksplan  berdiferensiasi  dengan  cara mengelupas  seludangnya  satu  -persatu  kemudian akan  terbuka  hingga  kelapisan  yang  paling  dalam dan akan mulai membentuk tunas.

## KESIMPULAN
1. Terdapat interaksi perlakuan kombinasi hormon  dan  ukuran  mata  tunas  terhadap pertambahan  diameter  mata  tunas,  namun tidak  terdapat  interaksi  terhadap  pertambahan bobot  mata  tunas.  Kombinasi  hormon  dan ukuran mata tunas masing - masing
Pengaruh Hormon dan Ukuran Eksplan terhadap Pertumbuhan Mata Tunas Tanaman Pisang (Musa paradisiaca var. Raja Bulu) Secara In Vitro
berpengaruh  nyata  terhadap  pertambahan bobot mata tunas.
2. Interaksi  kombinasi  hormon  IAA                  5,5 mg/l  +  BA    9,5  mg/l  dan  mata  tunas  besar menghasilkan  pertambahan  diameter  mata tunas paling  tinggi, sedangkan  masing-masing perlakuan  tersebut  menghasilkan  pertambahan bobot  mata  tunas  paling  tinggi.  Imbangan hormon  IAA  0,5  mg/l  +  BA    4,5  mg/l menghasilkan  diameter  paling  tinggi  pada mata tunas kecil.
3. Semua  kombinasi  hormon  dan  ukuran  mata tunas menyebabkan eksplan membengkak dan mengelupas  kecuali  perlakuan  kombinasi hormon  IAA  3  mg/l  +  BA  7  mg/l  hanya menyebabkan  eksplan  membengkak.  Warna ekplan menjadi hijau seiring dengan
bertambahnya bobot.

## DAFTAR PUSTAKA
Alitalia,  Y.  2008.  Pengaruh  Pemberian  BAP  dan NAA terhadap Pertumbuhan dan Perkembangan Tunas Mikro Kantong Semar
( Nepenthes  mirabilis )  secara  In  Vitro.
Skripsi .  Program  Studi  Hortikultura,  Fak.
Pertanian, Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Ardiyani,  F  dan  R.  Arimarsetiowati.  2012.
Pengaruh  Penambahan  Auxin  terhadap Pertunasan  dan  Perakaran  Kopi  Arabika Perbanyakan Somatik Embriogenesis. Pelita Perkebunan 28(2): 82-90.
Dewi,  N.  2016.  Pengaruh  Ukuran  Belah  Bonggol terhadap  Pertumbuhan  Bibit  Pisang  Raja ( Musa  Paradisiaca L.).  Laporan  Penelitian Dosen.  Fakultas  Pertanian,  Universitas Baturaja, BatuRaja.
Eriansyah,  M.,  Susiyanti  dan  Y.  Putra.  2014.
Pengaruh Pemotongan Eksplan dan Pemberian Beberapa Konsentrasi Air Kelapa terhadap Pertumbuhan dan
Perkembangan Eksplan Pisang Ketan ( Musa
Paradisiaca )  secara  In  Vitro. Agrologia 1(3): 54-61.
Ernawati, A., A. Purwito, dan J.M. Pasaribu. 2005. Perbanyakan Tunas Mikro Pisang Raja Bulu (Musa  AAB  Group)  dengan  Eksplan
Anakan dan Jantung. Bul. Agron. 2(33): 31- 38.
Hayati,  S.K.,  Y.  Nurchayati,  dan  N.  Setiari. Induksi  Kalus  dari  Hipokotil  Alfalfa ( Medicago Sativa L.) secara In Vitro dengan Penambahan  Benzyl  Amino  Purine  (BAP) dan  Α-Naphtalene  Acetic  Acid  (NAA).
Bioma 1(12): Hal. 6-12.
Hutami,  S.  2008.  Ulasan  Masalah  Pencoklatan pada  Kultur  Jaringan. Jurnal  Agrobiogen 2(4):83-88
Isnaini,  M.  2016.  Pertumbuhan  Bibit  Pisang  Raja Bulu  Kuning  pada  Beberapa  Jenis  Media dan Konsentrasi Magnesium  dengan  Sistem Hidroponik  Substrat.  Thesis.  Universitas Sebelas Maret, Surakarta.
Kasutjianingati,  R.  Poerwanto,  N.  Khumaida,  dan D.  Efendi.  2010.  Kemampuan  Pecah  Tunas dan Berbiak Mother Plant Pisang Raja Bulu dan  Pisang  Tanduk  (AAB)  dalam  Medium Inisiasi In Vitro. Agriplus 1(20): 09-17.
Lestari, E.G. 2011. Peranan Zat Pengatur Tumbuh dalam Perbanyakan Tanaman melalui Kultur  Jaringan. Jurnal  AgroBiogen 7(1): 63-68.
Maslukha,  U.  2008.  Ekstrak  Pisang  sebagai Suplemen  Media  MS  dalam  Media  Kultur Tunas Pisang Raja Bulu ( Musa paradisiaca L.  AAB  Group)  In  Vitro. Skripsi. Program Studi  Hortikultura  Departemen  Agronomi dan Hortikultura, Fakultas Pertanian Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Nisa  C.  dan  Rodinah.  2005.  Kultur  Jaringan Beberapa  Kultivar  Buah  Pisang  ( Musa paradisiaca L.) dengan Pemberian Campuran  NAA  dan  Kinetin. Bioscientiae
2(2): 223-36.
Rahayu,  B.,  Solichatun,  dan  E.  Anggarwulan. Pengaruh  Asam  2,4-Diklorofenoksiasetat (2,4-D) terhadap Pembentukan dan
Pertumbuhan Kalus serta Kandungan Flavonoid  Kultur  kalus Acalypha  indica L. Biofarmasi 1(1): 1-6.
Rainiyati,  D.  Martino,  Gusniwati,  dan Jasminarni.
2007.  Perkembangan  Pisang  Raja  Nangka ( Musa sp.)  secara  Kultur  Jaringan  dari
Eksplan  Anakan  dan  Meristem  Bunga.
Jurnal Agronomi 1(11): 35-40.
Rainiyati,  Lizawati,  dan  M.  Kristiana.  2009.
Peranan IAA dan BAP terhadap Perkembangan  Nodul  Pisang  (Musa  AAB)
Raja  Nangka  secara  In  Vitro Jurnal Agronomi 1(13): 51-57.
Samudin,  S.  2009.  Pengaruh  Kombinasi  Auksin- Sitokinin terhadap Pertumbuhan Buah Naga. Media Litbang Sulteng 2 (1) : 62 - 66.
Siregar,  I.Z.,  N.  Khumaida,  D.  Noviana,  M.H. Wibowo,  dan  Azizah.  2013. Buku  Varietas Tanaman  Unggul Institut  Pertanian  Bogor. Institut Pertanian Bogor, Bogor.
Supriyati,  Y.  2011.  Prospek  Teknik  Kultur Jaringan  untuk  Pengadaan  Bibit  Pisang.
Edisi  19-25  Oktober  2011  No.3427  Tahun XLII. Balai Besar Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik Pertanian, Bogor.
Wijayani,  Y.,  Solichatun,  dan  W.  Mudyantini.
Pertumbuhan  Tunas  dan  Struktur  Anatomi Protocorm Like Body Anggrek Grammatophyllum  scriptum (Lindl.)  Bl. dengan  Pemberian  Kinetin  dan  NAA. Bioteknologi 4 (2): 33-40.