## Kualitas  Semen  Cair  Dingin  Domba  Garut  pada  Tiga  Jenis  Larutan Pengencer
(Quality of Garut Ram Chilled Semen in Three Types Of Semen Extenders)
Yahya Hudy Rhoyan, Tita Damayanti Lestari, dan Rangga Setiawan Fakultas Peternakan Universitas Padjadjaran Jl. Raya Bandung-Sumedang Km.21. Jawa Barat 40600 e-mail: royan.shuna@gmail.com atau royan_shuna@yahoo.co.id

## Abstrak
Penggunaan pengencer dalam pengolahan semen domba Garut masih sangat terbatas di kalangan masyarakat, sehingga  ketersediaan  baik  semen  cair  maupun  semen  beku  masih  sedikit.  Oleh  karena  itu,  penelitian  ini dilakukan dengan tujuan untuk mengetahui pengaruh bahan pengencer Tris susu sapi, Tris kuning telur, dan Tris sari kedelai terhadap daya tahan hidup dan abnormalitas spermatozoa domba Garut yang disimpan dalam suhu  5ºC.  Metode  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  eksperimen  menggunakan  Rancangan  Acak Lengkap (RAL) dengan tiga perlakuan yaitu semen segar yang ditambahkan Tris susu sapi, Tris kuning telur, dan  Tris  sari  kedelai  dengan  pengulangan  masing-masing  sebanyak  6  kali.  Data  dianalisis  lebih  lanjut menggunakan  Uji  Jarak  Berganda  Duncan.  Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  pengaruh  perlakuan terhadap  daya  tahan  hidup  spermatozoa  berbeda  nyata  (P<0,05).  Daya  tahan  hidup  spermatozoa  pada  Tris kuning telur 79 jam,  Tris  air susu sapi 68  jam, dan  Tris sari  kedelai  59 jam. Sedangkan  pengencer  Tris sari kedelai menunjukkan presentase abnormalitas terendah (5%) yang berbeda nyata (P<0,05) dari Tris susu sapi (7%) dan Tris kuning telur (6%). Hasil penelitian  ini disimpulkan bahwa  Triskuning telur adalah pengencer yang memberikan pengaruh terbaik terhadap daya tahan hidup, sedangkan Tris sari kedelai adalah pengencer yang memberikan abnormalitas spermatozoa terendah dibandingkan pengencer lain.

## Kata Kunci : Semen Domba Garut, Pengencer Semen, Kualitas Semen

## Abstract
The used of extenders in Garut ram’s semen is limited which is affecting either on the availability of chilled or frozen semen.  Therefore, the objective  of this  study was  to figure  out the effect  of three extenders (Tris- fresh  milk,  Tris-egg  yolk,  and  Tris-extracted  soybean)  on  the  Quality  of  Garut  ram  chilled  semen  stored  at 5ºC. This research used completely randomized design with three treatments and six replications. Data were analyzed statistically and  followed  by  Duncan's  test.  It was observed  that the effects  of extenders on  sperm viability were significant (P<0,05). The sperm viability in the extender of Tris-fresh milk, Tris-egg yolk, and Tris-extracted soybean were 68, 79, and 59 hours, respectively.  It was  found also that abnormality of sperm was significantly affected by the extenders. The best result of sperm abnormality was found in the extender of Tris-extracted  soybean  (5%),  followed  by  Tris-egg  yolk  (6%),  and  by  Tris-fresh  milk  (7%).  In  conclusion, Egg yolk-Tris extender is the best extender to be used for viability and Tris-extracted soybean gives the lowest sperm abnormality of Garut ram than other types of extenders.
Keywords : Garut Ram’s Semen, Semen Extenders, Semen Quality
Pendahuluan
Pengembangan  domba  Garut  sampai  saat masih menggunakan kawin alam. Walaupun mempunyai  tingkat  fertilitas  yang  baik,  kawin  alam mempunyai beberapa kelemahan antara lain ketersediaan  pejantan  unggul  yang  masih  terbatas karena  harga  pejantan  unggul  domba  Garut  lebih mahal  dibandingkan  dengan  bangsa  domba  lainnya. Masalah  keterbatasan  pejantan  dapat  diatasi  melalui pengolahan semen dalam program Inseminasi Buatan (IB).
Bahan  pengencer  yang  berasal  dari  kuning telur  dan  susu  biasa  digunakan  di  kalangan masyarakat, tetapi bahan tersebut masih mengandung bakteri  dan  mycoplasma  yang  membahayakan  bagi spermatozoa  maupun  saluran  reproduksi  betina
(Bousseau,  dkk.  1998).  Untuk  mengatasi  masalah tersebut  diperlukan  bahan  pengencer  yang  tidak mudah terkontasminasi oleh bakteri dan mycoplasma.
Sari  kedelai  merupakan  salah  satu  teknologi pangan  yang mengekstrak fraksi terlarut dari kedelai dengan kualitas yang tidak jauh berbeda dengan susu sapi  (Dongaran,  dkk.  2007).  Secara  alamiah,  lesitin ditemukan  pada  kacang  kedelai  1,48-3,08%,  lebih tinggi  dari  kacang  tanah  1,11%,  hati  anak  sapi 0,85%,  gandum  0,61%,  makanan  dari  gandum 0,65%,  telur  0,39%  dan  4-6%  pada  otak  manusia (Kayu  dan  Allison,  1981  dalam  Soy  center,  2005). Sari  kedelai  memiliki  protein  yang  hampir  setara dengan  susu  sapi,  bahkan  menurut  Liu  (1978) kandungan protein sari kedelai lebih besar
(3,6g/100g)  daripada  susu  sapi  (2,9g/100g).  Sari kedelai  hanya  mengandung  sepertiga  jumlah  lemak yang ada pada susu sapi, tetapi kaya akan lesitin dan asam  lemak  jenuh  seperti  asam  linoleat  (Shurtleff dan  Aoyogi,  1984).  Lesitin  diketahui  dapat melindungi  selubung  lipoprotein  spermatozoa  dari kejutan  dingin  akibat  penurunan  suhu  yang  tajam sehingga  kualitas  spermatozoa  terjaga  (Toelihere, 1993).  Dari  bahasan  diatas  terlihat  bahwa  sari kedelai  memiliki  potensi  sebagai  bahan  pengencer semen domba Garut.

## Materi dan Metode
Metode  yang digunakan dalam penelitian ini adalah  metode  eksperimen.  Rancangan  percobaan
yang  digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap (RAL)  sesuai  petunjuk  Steel  dan  Torrie  (1995) dengan  tiga perlakuan dan  masing-masing perlakuan diulang  sebanyak  enam  kali,  untuk  mengetahui pengaruh  tiap  perlakuan  dilakukan  analisis  statistik menggunakan  analisis sidik  ragam. Kemudian  untuk mengetahui  perbedaan  antar  perlakuan  dilakukan dengan uji Jarak Berganda Duncan.

## Peubah yang Diamati
Peubah  yang  diamati  adalah  daya  tahan  hidup  (jam) hingga  jumlah  sperma  hidup  tersisa  40%  dan abnormalitas  spermatozoa.  Prosedur  analisis  yang dilakukan adalah sebagai berikut:
1. Perhitungan Daya Tahan Hidup (Ridwan, 2008):
Motilitas Spermatozoa (%) = Konsentrasi sperma total – jumlah sperma mati X 100% Konsentrasi sperma total 2. Abnormalitas Spermatozoa: Abnormalitas Spermatozoa (%) = B X 100% B+A
Keterangan : A= Jumlah spermatozoa dengan bentuk normal B = Jumlah spermatozoa dengan bentuk abnormal

## Rancangan Percobaan dan Analisis Statistik
Percobaan menggunakan tiga perlakuan  dan masing- masing perlakuan diulang sebanyak enam kali, untuk mengetahui  pengaruh  tiap  perlakuan  dilakukan analisis  statistik  menggunakan  analisis  sidik  ragam, selanjutnya  untuk  mengetahui  perbedaan  antar perlakuan  dilakukan  analisis  dengan  menggunakan Uji  Jarak  Berganda  Duncan  (Gaspersz,  2006). Perlakuan yang dicobakan adalah sebagai berikut: P1 = 80% Tris + 20% susu sapi.
P2 = 80% Tris + 20% kuning telur. P3 = 80% Tris + 20% sari kedelai.

## Hasil dan Pembahasan
Pengaruh  Tiga  Jenis  Larutan  Pengencer  Semen Terhadap  Daya  Tahan  Hidup  Spermatozoa Domba Garut
Hasil  penelitian  pengaruh  tiga  jenis  larutan pengencer  yang  berbeda  terhadap  daya  tahan  hidup spermatozoa domba Garut disajikan dalam Tabel 1.
Tabel 1. Daya Tahan Hidup Spermatozoa Domba Garut pada Tiga Jenis Larutan Pengencer
Ulangan Perlakuan P1 P2 P3 …..jam….. 1 74 88 62 2 71 81 65 3 66 77 58 4 63 74 55 5 68 79 57 6 66 80 59 Total 408 474 356 Rata-rata 68 79 59,3 Keterangan:
P1 = 80% Tris + 20% susu sapi. P2 = 80% Tris + 20% kuning telur. P3 = 80% Tris + 20% sari kedelai.
Tabel  1  menunjukan  bahwa  rata-rata  daya tahan  hidup  spermatozoa  tertinggi  selama  79  jam dihasilkan oleh P2. Sedangkan pada P3 menunjukkan rataan  daya  tahan  hidup  spermatozoa  domba  Garut yang  paling  rendah,  yaitu  selama  59  jam. Berdasarkan  hasil  analisis  statistik  menunjukkan bahwa  perlakuan  menunjukkan  perbedaan  nyata (P<0,05).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan  dengan  menggunakan  Tris  kuning  telur merupakan perlakuan yang terbaik dan menghasilkan daya  tahan  hidup  spermatozoa  paling  lama.  Hal  ini diduga  karena  kuning  telur  mampu  menyediakan sumber  makanan  lebih  lengkap  bagi  spermatozoa. Tris kuning telur mengandung komposisi bahan yang berperan dalam mempertahankan daya  tahan spermatozoa,  terutama  lipoprotein,  lesitin,  dan fruktosa.  Sedangkan  unsur  elektrolit  seperti  Na,  Ca, K  berperan  sebagai  agen  cryoprotectant  di  dalam pengencer (Eduard, 1997: Solihati, 2008).
Rendahnya  daya  tahan  hidup  disebabkan aktivitas  metabolisme spermatozoa yang membentuk asam  laktat  dalam  media  pengencer.  Asam  laktat yang  berlebih  dalam  pengencer  merubah  pH  yang dapat  menimbulkan  efek  racun  dan  kematian  yang tinggi  bagi spermatozoa (Widjaya, 2011). Selain  itu,
pada  pengencer  Tris  sari  kedelai  tidak  terdapat karbohidrat  dibandingkan  dengan  kuning  telur  yang mengandung  0,6%  karbohidrat  (Manjunath,  dkk. 2002). Karbohidrat tersebut berperan sebagai sumber energi bagi spermatozoa.

## Pengaruh  Tiga  Jenis  Larutan  Pengencer  Semen Terhadap  Abnormalitas  Spermatozoa  Domba Garut
Hasil  penelitian  pengaruh  tiga  jenis  larutan pengencer  yang  berbeda  terhadap  abnormalitas spermatozoa domba Garut disajikan dalam Tabel 3.
Tabel  3  menunjukkan  bahwa  abnormalitas spermatozoa  domba  Garut  rata-rata  terendah  5% dihasilkan  pada  perlakuan  yang  menggunakan  Tris sari  kedelai.  Sementara  rata-rata  abnormalitas spermatozoa pada pelakuan  yang  menggunakan susu sapi  dan  kuning  telur  adalah  7%  dan  6%. Berdasarkan  analisis  statistik  diperoleh  bahwa perlakuan menunjukkan perbedaan nyata (P<0,05).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa perlakuan  Tris  susu  sapi  (P1)  dan  Tris  kuning  telur (P2)  memberikan  hasil  yang  berbeda  dengan perlakuan  Tris  sari  kedelai  (P3),  sedangkan perlakuan  Tris  kuning  telur  (P2)  memberikan  hasil yang  tidak  jauh  berbeda  dengan  perlakuan  Tris  susu sapi (P1).
Tabel 2. Uji Duncan Daya Tahan Hidup Spermatozoa Domba Garut
Perlakuan Rataan Daya Tahan Hidup Spermatozoa Signifikansi ….jam…. P1 68 b P2 79 a P3 59,3 c
Tabel 3. Abnormalitas Spermatozoa Domba Garut pada Tiga Jenis Larutan Pengencer
Ulangan Abnormalitas Spermatozoa P1 P2 P3 …..%….. 1 6,50 5,00 4,50 2 5,50 7,00 6,00 3 7,00 5,50 3,50 4 6,50 7,00 5,00 5 9,00 6,50 5,00 6 7,00 4,50 4,00 Total 41,50 35,50 28,00 Rata-rata 6,91 5,91 4,67 Keterangan:
P1 = 80% Tris + 20% susu sapi. P2 = 80% Tris + 20% kuning telur. P3 = 80% Tris + 20% sari kedelai.
Tabel 4. Uji Duncan Abnormalitas Spermatozoa Domba Garut Perlakuan Rataan Abnormalitas Spermatozoa Signifikansi ….%…. P1 6,91 b P2 5,91 b P3 4,67 a
Perlakuan  dengan  menggunakan  Tris  sari kedelai  merupakan  perlakuan  yang  menghasilkan abnormalitas  spermatozoa  paling  rendah.  Diduga pada larutan pengencer Tris sari kedelai tersusun atas komposisi  bahan  yang  lebih  baik  dalam  menjaga bentuk normal spermatozoa saat proses pendinginan. Selain  itu,  kandungan  phosphatidylcholine  pada kedelai melindungi membran untuk tetap mempertahankan  konfigurasi  normal  phospholipid bilayer  yang  merupakan  susunan  utama  membran spermatozoa (Aku, dkk. 2007).
Penurunan  suhu  saat  penyimpanan  semen mengakibatkan  cold  shock  pada  spermatozoa. Persentase  abnormalitas  spermatozoa  akan  tinggi apabila  semen  disimpan  tanpa  bahan  yang  dapat melindungi  dari  cold  shock.  Cold  shock  merusak konfigurasi  normal  membrane  spermatozoa  menjadi hexagonal  dan  mengakibatkan  stres.  Stres  pada spermatozoa  ditandai  dengan  ekor  melengkung, gerakan  berputar-putar  dan  gerak  mundur  serta menurunkan motilitas progresif (Evans dan Maxwell, 1987: Rehman, 2012).
Kandungan  sari  kedelai  dalam  pengencer seperti  lesitin  terbukti  dapat  melindungi  dan menekan  angka  abnormalitas  spermatozoa  selama masa penyimpanan. Hal ini didukung oleh penelitian Aries, dkk.  (2003) bahwa lesitin  dari  kacang  kedelai memiliki  bahan  yang  mirip  dengan  lesitin  dari kuning telur, berperan melindungi integritas selubung  protein  sel  spermatozoa  sehingga  lebih tahan  terhadap  pengaruh  cold  shock.  Aku,  dkk. (2007)  menambahkan  bahwa  penggunaan  lesitin nabati  mengurangi  efek  cekaman  dingin  serta mengurangi  kontaminasi  mikroorganisme  pada spermatozoa.
Sari kedelai juga diketahui memiliki kecenderungan  terkontaminasi  bakteri  lebih  kecil daripada  kuning  telur  dan  air  susu  sapi  sehingga menekan  angka  abnormalitas  lebih  kecil.  Menurut penelitian  Bousseau,  dkk.  (1998)  bahwa  tidak ditemukannya  mikroorganisme  yang  membahayakan bagi spermatozoa pada pengencer  yang mengandung lipoprotein  dan  lesitin  nabati  seperti  kacang  kedelai, sedangkan kuning telur dan susu terkontaminasi oleh bakteri dan mycoplasma.
Dalam  penelitian  ini,  pengencer  Tris  sari kedelai  lebih  unggul  dalam  mempertahankan
abnormalitas  spermatozoa  dibandingkan  Tris  kuning telur  maupun  Tris  susu  sapi.  Berdasarkan  Penelitian Amirat, dkk. (2005), mereka  menyatakan bahwa low density  lipoproteins melindungi  spermatozoa  dari kerusakan  selama  preservasi  sedangkan high  density lipoproteins yang  terkandung  dalam  kuning  telur dapat menghambat respirasi dan motilitas spermatozoa.  Lebih  lanjut  Gil,  dkk.  (2003) menemukan  bahwa  kuning  telur  dan  susu  dalam pengencer  dapat  mengubah  struktur  kromatin  sel spermatozoa  sehingga  kualitas  semen  menurun setelah thawing.

## Kesimpulan
Pengencer  Tris  kuning  telur  merupakan pengencer  yang  memberikan  pengaruh  daya  tahan hidup  paling  lama,  sedangkan  pengencer  Tris  sari kedelai  merupakan  pengencer  dengan  pengaruh abnormalitas  spermatozoa  domba  Garut  paling rendah pada penyimpanan suhu 5 °C.
Berdasarkan hasil penelitian yang didapatkan,  disarankan  bagi  pelaku  Inseminasi Buatan  menggunakan  Tris  kuning  telur,  Tris  susu sapi,  dan  Tris  sari  kedelai  sesuai  dengan  kebutuhan. Walaupun  tiap  pengencer  menghasilkan  daya  tahan hidup  spermatozoa  berbedabeda,  tetapi  abnormalitas spermatozoa masing-masing pengencer masih berada dalam tingkat yang normal.

## Daftar Pustaka
Aires  V.A.,  K.D.  Hinsch,  F.M.  Schloesser,  K. Bogner,  E.  Hinsch.  2003. In  vitro  and  in  vivo comparison  of  egg  yolk-based  and  soybean lecithin  based  extenders  for  cryopreservation of  bovine  semen .  Theriogenology.  60(2):269- 279.
Aku,  A.S.,  N.  Sandiah,  D.P.  Sadsoeitoeboen,  R.M. Amin,  Herdis.  2007. Manfaat  Lesitin  Nabati pada  Preservasi  dan  Kriopreservasi  Semen . Kajian  Pustaka.  Journal  Animal  Production. 9(1):49-52.
Amirat,  L.,  M.  Anton,  D.  Tainturier,  G.R. Chatagnon,  I.  Battut,  J.L.  Courtens.  2005 . Modifications  of  bull  spermatozoa  induced  by three  extenders:  BIOCIPHOS®,  low  density and Triladyl, before, during and after freezing and thawing. Reproduction. 129:535-543.
Bousseau,  S.,  J.P.  Brillard,  G.B.  Marquartle,  B. Guerin,  A.  Camme,  M.  Lecha.  1998. Comparison  of  bacteriological  qualitiy  of various  egg  yolk  sources  and  the  in  vitro  and in  vivo  fertilizing  potential  of  bovine  semen frozen  in  egg  yolk  or  lecithin  based  diluents. Theriogenology. 50:699-706.
Dongaran,  N.,  L.  Kustiyah,  S.A.  Marliyati.  2007. Pembuatan  Susu  Kedelai  Berkalsium  Tinggi dengan  Penambahan  Tepung  Tulang  Ikan Kakap  Merah  (Lutjanus  Sanguineus). Media Gizi dan Keluarga. 71-79.
Eduard,  G.  1997. Pengaruh  Jenis  Pengencer  dan Kadar  Gliserol  Tehadap  Kualitas  Semen Domba  Priangan  Pasca  Pembekuan. Jurnal Fakultas  Peternakan  Universitas  Padjadjaran. Bandung.
Evans,  G.,  W.M.C.  Maxwell.  1987. Salamon’s Artificial  Insemination  of  Sheep  and  Goats . Butherwoths  Pty  Limited,  Sidney,  Boston, London, Durban, Singapore, and Weelington. Gaspersz, V. 2006. Teknik Analisis Dalam Penelitian Percobaan 1 . Tarsito. Bandung. 108-110; 123- 131.
Gil, J., N. Lundeheim, L. Soderquist, H. Rodriguez- Martinez.  2003. Influence  of  extender, temperature, and addition of glycerol on post- thaw  sperm  parameters  in  ram  semen. Theriogenology. 59:1241–1255.
Manjunath,  P.,  V.  Nauc,  A.  Bergeron,  M.  Ménard.
2002. Major  proteins  of  bovine  seminal plasma  bind  to  the  low-density  lipoprotein fraction  of  hen’s  egg  yolk .  J  Biol  Reprod. 67:1250-1258.
Rehman,  F.U.  2012. Substitution  of  Animal  Protein source with Plant  Protein in Semen Extenders of  Various  Cattle  Breeds. Tesis.  Faculty  of Animal  Husbandry  and  Veterinary  Sciences Khyber  Phaktunkhwa  Agricultural  University Peshawar Pakistan. Pakistan.
Ridwan.  2008. Pengaruh  Jenis  Pengencer  Semen Terhadap  Motilitas,  Abnormalitas  dan  Daya Tahan  Hidup  Spermatozoa  Ayam  Buras  Pada Penyimpanan  Suhu  5°C .  Jurnal  Agroland Fakultas  Pertanian  Universitas  Tadulako. 15(3):229-235.
Shurtleff,  W.,  A.  Aoyagi.  1984. Tofu  and  Soymilk Production,  2 .  Lafayette  :  Soyfood  Center. California.
Solihati,  N.,  2008..  Jurnal  Fakultas  Peternakan Universitas Padjadjaran. 403-404. Studi Terhadap  Kualitas  dan  Daya  Tahan  Hidup Spermatozoa  Cauda  Epididimidis  Domba Garut Menggunakan Berbagai Jenis Pengencer Soyfoods  Center,  2005. History  of  Soy  Lecithin .  In: The  world’s leading souces  of  Information on soyfoods. 1-2.
Steel,  R.G.D.,  and  J.  Torrie.  1995. Prinsip  dan Prosedur Statistika Suatu Pendekatan Parametrik .  Ed  2.  Gramedia  Pustaka  Utama. Jakarta.
Toelihere, M. 1993. Inseminasi Buatan Pada Ternak . Angkasa, Bandung.
Widjaya,  N.  2011. Efek  Penambahan  Vitamin  E dalam  Pengencer  Glukosa  terhadap  Daya Tahap Hidup Spermatozoa Domba pada Suhu 5 °C . Sains Peternakan. 9 (1):25-31.