## Isolasi Bertahap Bakteri Pendegradasi Limbah Tandan  Kosong Kelapa Sawit di PT. Erasakti Wira Forestama Muaro Jambi
Isolation Gradual Degrading bacteria against Waste of an Empty palm stem in PT. Erasakti Wira Forestama, Muaro Jambi
Retni S. BUDIARTI 1) , Winda Dwi KARTIKA 1)
1) Program Studi Pendidikan Biologi PMIPA FKIP Universitas Jambi Jalan Raya Jambi-Ma.Bulian KM.15 Mendalo Darat Jambi
Email: rsb_nugraha@yahoo.co.id
Abstract. This  research  was  intended  to  get  isolate  bacteria  which  is  able  to  loosen  waste  of  an empty palm stem gradually. First stage of screening in the Nutrient broth and an empty palm stem which  was  shaking  with  150  rpm  in  3  days,  results  18  isolated  bacteria.  While  second  stage  of screening was using nutrient broth added with an empty stem of palm and enrich with first stage residue (nutrient broth added with an empty stem of palm which has been degraded by 18 isolated) shake in 3 days within 150 rpm speed. Resulted 6 isolated bacteria. According to Bergey’s manual of determinative Bacteriology book, isolate 1, isolate 2, isolate 3, isolate 5 and isolate 6 are counted to  seventh  group that  is  gram  bacteria  negative  aerobic  shaped  Coccus  and  stem.  While isolate  4 included to group 14 that is gram bacteria positive Coccus shaped.

## Key word: isolate, waste, empty palm stem gradually
Abstrak. Penelitian ini bertujuan untuk mendapatkan isolat bakteri yang mampu mengurai limbah tandan  kosong  kelapa  sawit  secara  bertahap.  Skrining  tahap  pertama  pada Nutrient  Broth dan Tandan Kosong Kelapa sawit yang dishaker 150 rpm selama 3 hari, dan diperoleh 18 isolat bakteri. Sedangkan  pada  skrining    tahap  kedua    menggunakan Nutrient  Broth ditambah  Tandan  Kosong Kelapa Sawit dan diperkaya dengan sisa medium tahap 1 ( Nutrient Broth ditambah Tandan Kosong Kelapa Sawit yang telah didegradasi oleh 18 isolat)  dishaker  selama 3 hari dengan kecepatan 150 rpm, didapatkan 6 buah isolat bakteri. Menurut buku Bergey Manual of Determinative Bacteriology Isolat 1, isolat 2, isolat 3, isolat 5 dan isolat 6 termasuk kelompok ke 7 yaitu bakteri gram negatif aerobik  bentuk  kokus  dan  batang.  Sedangkan  isolat  4  termasuk  ke  dalam    kelompok  ke  14  yaitu bakteri gram positif berbentuk kokus.

## Kata Kunci : Isolasi, Limbah, Tandan Kosong Sawit

## PENDAHULUAN
Limbah  Tandan Kosong Kelapa  Sawit  (TKKS) adalah  limbah  terbesar  yang  dihasilkan  oleh industri pengolahan sawit. Sejauh ini pemanfaatan  yang  telah  dilakukan  hanya terbatas  untuk  pengeras  jalan,  digunakan sebagai penetral pH dan dijadikan pupuk (Isroi, 2008).  Pusat  Penelitian  Kelapa  Sawit  (PPKS) telah  melakukan  Pengolah  Limbah  TKKS dengan  menggunakan  mikroorganisme  yang dikenal  dengan  teknologi  kompos  bioaktif. Teknik ini mampu mempercepat waktu pengomposan  menjadi  2-3  minggu    (Goenadi,
1997).  Pada  umumnya  limbah  mengandung senyawa  organik  dan  anorganik.  Limbah  yang mengandung senyawa organik dapat didegradasi oleh mikroba dan dapat dikendalikan  secara  biologis.  Salah  satu  teknik yang  digunakan  ialah  dengan  menggunakan teknik  isolasi.  Dalam  kegiatan  mikrobiologi, pembuatan  isolat  dilakukan  dengan  cara mengambil sampel mikrobiologi dari lingkungan  yang  ingin  diteliti.  Dari  sampel tersebut kemudian dibiakkan dengan menggunakan  media  universal  atau  media selektif lainnya sesuai dengan tujuan yang ingin dicapai.
Biospecies Vol. 9 No.1, Januari 2016, hal. 7-14.
Umumnya  isolat-isolat  yang  dihasilkan  masih menggunakan  pengkultivasian    dengan  metode “ spread ”  atau  media  sebar  pada  media  padat.
Sementara  isolasi  bertahap  merupakan  suatu prosedur  yang  hampir  sama,  perbedaannya hanya  pada  tahapannya  saja.  Isolasi  bertahap sangat memperhatikan kemampuan suatu bakteri  yang  hidup  pada  suatu  komunitas  yang ada  pada  suatu  habitat  untuk  bisa  memecah secara  bertahap.  Tahapan-tahapan  pengiso- lasian  akan  mendapatkan  isolat-isolat  bakteri yang  mampu  memecah  nutrisi  yang  sederhana sampai pada nutrisi yang lebih komplek. Dalam suatu penelitian, Pikoli (2000) mampu mengisolasi    bakteri  termofilik  pendegradasi minyak  bumi  melalui  3  tahapan.  Dimana tahapan  pertama  sampai  ketiga  memperoleh isolat-isolat yang memiliki kemampuan berbeda dalam  mendegradasi  senyawa-senyawa  yang ada pada minyak bumi.
Tiga  tahapan  pengisolasian  bakteri  yang dilakukan  oleh  pikoli  (2000)  dapat  dijadikan sebuah  acuan  dalam  mendegredasi  limbah tandan  sawit.  Karena  limbah  tandan  kosong kelapa  sawit  adalah  sumber  nutrient  organik komplek  yang  tersusun  dari  sebagian  besar senyawa selulosa dan lignisellulosa yang sangat sulit  terdegradasi.  Selain  itu  dengan  memper- hatikan “Postulat Koch”, dimana  mikroba yang berpotensi  mengolah  limbah  pasti  terdapat  di dalam  limbah  dan  dapat  diisolasi  yang selanjutnya  dapat  dikultur  secara  murni.  Oleh sebab  itu,  untuk  pengisolasian  bakteri  secara bertahap  terhadap  limbah  tandan  sawit  kosong dilakukanlah  upaya  menyeleksi  isolat-isolat
unggul  pada  tingkatan  sinergis  untuk  bekerja mendegradasi limbah kosong kelapa sawit.

## BAHAN DAN METODE
Penelitian  ini  merupakan  jenis  penelitian deskriptif  eksploratif  dengan  menggunakan teknik  isolasi  bertahap  yang  mengeksplor mikroba  pendegradasi  limbah  tandan  kosong kelapa sawit dari PT. Era Sakti Wira Forestama Muaro Jambi selama lebih kurang 5 bulan. Pada tahap  isolasi  satu,  kegiatan  yang  dilakukan adalah menginokulasi 5 g limbah kosong kelapa sawit  pada  erlenmeyer  yang  telah  berisi medium pertumbuhan mikroba dan memutarnya pada rotary shaker dengan kecepatan 150 rpm. Kemudian  dilakukan  isolasi  kultur  murni sampai didapat isolat murni (ISOLAT I).
Pada tahap isolasi dua, kegiatan yang dilakukan adalah  menginokulasi  ISOLAT  I  yang  sudah diaktivasi pada medium Nutrient Broth ditambah  sisa  medium  hasil  degradasi  1  dan menambahkannya  dengan  5  g  limbah  tandan kosong  kelapa  sawit,  lalu  diputar  dan selanjutnya diisolasi untuk mendapatkan ISOLAT  II.  Tahapan  selanjutnya  adalah mengidentifikasi seluruh isolat yang ditemukan baik  secara  morfologi  (bentuk  koloni  pada medium  padat  dan  cair,  tepi  koloni,  elevasi, warna  permukaan  koloni,  penampakan  koloni, bentuk  sel  dan  sifat  gram)  untuk  setiap  isolat bakteri  yang  diperoleh.  Selanjutnya  dilakukan tes  biokimia  yang  dipandu  dengan  kunci identifikasi  “ Bergey  Manual  Determinative  of Bacteriologis ”.
Gambar 1. Bagan Isolasi Bertahap Bakteri dari Limbah Tandan Kosong Kelapa Sawit

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada skrining tahap I, didapatkan 18 buah isolat yang  mampu  tumbuh  pada  substrat  diperkaya (Nutrient broth ditambah  tandan kosong kelapa sawit).  Isolat-isolat  tersebut  memiliki  ciri-ciri morfologi  koloni  seperti  yang  terdapat  pada Tabel  1.  Isolat  1  sampai  isolat  18  pada umumnya  berbentuk  irreguler  dan  circular. Selai itu, isloat 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 11, 13, 15, 16,  17,  18  merupakan  bakteri  gram  postif,
sedangkan  untuk  isolat  7,  9,  12,  14  merupakan bakteri gram negatif. Adapun hasil pengamatan dari  permukaan  isolat  diperoleh  hasil  bahwa isolat  1,  2,  4,  5,  7,  8,  9,  11,  12,  13,  17 mempunyai  permukaan  yang  halus,  kemudian untuk isolat 3, 6, 10, 14, 15, 16, 18 mempunyai permukaan yang kasar. Hal-hal  tersebut  cukup untuk mernbuktikan  bahwa  koloni yang ada di berbagai  macam  isloat  mulai  dari  isolat  1 sampai  dengan  isolat  18  tersebut  mempunyai kemiripan yang hampir sama.
Tabel 1. Data Pengamatan Morfologi Koloni dan Pewarnaan Gram Sel Bakteri
Kode Isolat Ciri Koloni Sel Gram Permukaan Bentuk Tepi Elevasi Warna G. 1 Irreguler Entire Flat Kuning Basil Positif Halus G. 2 Circular Entire Convex Putih Basil Positif Halus G. 3 Circular Serrate Raised Putih Basil Positif Kasar G. 4 Circular Entire Convex Putih Coccus Positif Halus G. 5 Circular Undulate Raised Putih Basil Positif Halus G. 6 Circular Undulate Flat Putih Basil Positif Kasar G. 7 Circular Entire Raised Putih Coccus Negatif Halus G. 8 Irreguler Entire Convex Kuning Coccus Positif Halus G. 9 Circular Serrate Raised Putih Basil Negatif Halus G. 10 Irreguler Filamen Raised Putih Basil Positif Kasar G. 11 Circular Entire Convex Putih Coccus Positif Halus G. 12 Circular Serrate Convex Kuning Basil Negatif Halus G. 13 Irreguler Entire Convex Putih Coccus Positif Halus G. 14 Circular Entire Flat Kuning Basil Negatif Kasar G. 15 Circular Filamen Convex Putih Basil Positif Kasar G. 16 Circular Entire Raised Kuning Basil Positif Halus G. 17 Circular Entire Raised Putih Coccus Positif Halus G. 18 Circular Undulate Flat Putih Basil Positif Kasar Keterangan Tabel 1: Irreguler : tidak beraturan Filamen : berupa helaian Circular : bulat Raised : muncul Lobate : bergelombang Entire : utuh Flat : datar Serrate : bergerigi Convex : cembung Undulate : berombak Pulvinate : cembung bertingkat
Isolat  yang  diperoleh  dari  skrining  tahap  I memiliki  ciri-ciri  fisiologi  dalam  memecah nutrient di lingkungannya. Hasil yang diperoleh dalam  uji  ini  menunjukan  variasi  kemampuan masing-masing  isolat  dalam  memecah  nutrien yang  berbeda.  Kemampuan  masing-masing isolat  dalam  memecah  nutrien  dapat  dilihat
dalam  Tabel  2.  Hasil  pengamatan  yang diperoleh menunjukan bahwa uji biokimia yang dilakukan  menunjukan  bahwa  isolat  1  sampai 18 mampu mengurai substrat dekstrosa, laktosa dan sukrosa yang merupakan golongan karbohidrat dan tidak mampu mengurai substrat VP dan H 2 S.
Tabel 2. Data Uji Biokimia
Kode Isolat Uji Biokimia Karbohidrat Indol e MR VP SC H 2 S K at a la se G el at in
Star ch
D ekst ro sa
L aktos a Su krosa G. 1 + + + - - - + - + + + G. 2 + + + - + - - - - + - G. 3 + + + - + - - - - + - G. 4 + + + - - - - - + + - G. 5 + + + - - - - - + + + G. 6 + + + - - - + - + + - G. 7 + + + - - - - - - + - G. 8 + + + - - - - - + + + G. 9 + + + + + - - - + - - G. 10 + + + - - - - - + + + G. 11 + + + - + - - - - - - G. 12 + + + + + - - - + + - G. 13 + + + - - - + - + - + G. 14 + + + - - - - - + - - G. 15 + + + - - - - - + + + G. 16 + + + - - - + - + + + G. 17 + + + - + - - - - - - G. 18 + + + - + - - - - + +
Keterangan:  (+) menandakan reaksi positif (mampu mengurai substrat) (-) menandakan reaksi negatif (tidak mampu mengurai substrat) (Nugraha. A, 2014)
Setelah dilakukan identifikasi, ke 18 isolat hasil skrining  tahap  I  termasuk  kedalam  genus: Bacillus /A (G1), Actinomycetes (G2), Bifidobacterium (G3), Planococcus (G4),
Baccillus /S (G5), Khurtia
(G6), Acidaminococcus (G7), Micrococcus (G8), Agrobacterium (G9), Micromonospora (G10), Pediococcus (G11), Pseudomonas (G12), Stoptylococcus (G13), Flavobacterium (G14),
Streptomyces (G15), Cellulomonas (G16), Ruminococcus (G17), dan Clostridium (G18)
Sisa hasil isolasi tahap 1 dibawa ke isolasi tahap 2. Hasil skrining Tahap II memperoleh  6 isolat bakteri yang dianalisis dari bentuk koloni (pada medium  padat  dan  cair),  tepi  koloni,  warna permukaan  koloni,  bentuk  sel  dan  sifat  gram. Adapun  hasil  analisis  yang  diperoleh  dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3 Ciri Morfologi Koloni Isolat Bakteri pada Skrining Tahap II
Isolat Ciri-ciri Bentuk Tepi Warna Pewarnaan Gram Bentuk Sel 1 Circullar Entire Bening Negatif Coccus 2 Irregular Lobate Putih Negatif Coccus 3 Irregular Undulate Putih Negatif Basil 4 Circullar Entire Putih Kekuningan Positif Coccus 5 Irregular dan spreading Entire Putih Susu Negatif Coccus 6 Round Entire Putih Susu Negatif Coccus
Isolat 1                           Isolat 2                         Isolat 3
Isolat 4                           Isolat 5                         Isolat 6 Gambar 2 Pewarnaan Gram
Biospecies Vol. 9 No.1, Januari 2016, hal. 7-14.
Hasil pengamatan yang diperoleh untuk isolat 1 dan isolat 4 pada umumnya berbentuk irreguler dan  circular  sedangkan  isolat  5  berbentuk Irregular  dan  spreading  dan  isolat  6  berbentuk round.  Kemudian,  isloat  1,  2,  3,  5  dan  6 menunjukan  tergolong  kedalam  bakteri  gram negatif,  sedangkan  untuk  isolat  4  tergolong kedalam gram positif. Sel isolat 1, 2, 3, 5 dan 6
berbentuk  cocus  sedangkan  isolat  3  berbentuk basil.  Setiap  mikroba  memiliki  karakteristik biokimia  tersendiri  yang  disebut biochemical fingerprints . Dasar ini digunakan untuk melihat adanya  persamaan  dan  perbedaan  masing- masing  isolat.  Ciri-ciri  biokimia  pada  bakteri hasil  scrining  Tahap  II  yang  dapat  dilihat  pada Tabel 4.
Tabel 4 Ciri Biokimia Isolat Bakteri pada Skrining Tahap II
Koloni ke-
Uji Biokimia Karbohidrat Sit ra t H 2 S A m il um
K at a la se Indol MR VP S D L 1 - + + g + + + + - - - 2 + + - + + + + - - - 3 + + - + + + + - - - 4 - - - + + + + - - - 5 + g + - + + + + - - + 6 + + g - + + + + - - +
Keterangan:  (+) menandakan reaksi positif (mampu mengurai substrat) ( + g ) menandakan reaksi positif dan menghasilkan gas (-) menandakan reaksi negatif (tidak mampu mengurai substrat)
Gambar 3 Hasil Hidrolisis Amilum

## Keterangan
1. Medium Starch Agar dengan Isolat 1  reaksi positif
2. Medium Starch Agar dengan Isolat 2  reaksi positif
3. Medium Starch Agar dengan Isolat 3  reaksi positif
4. Medium Starch Agar dengan Isolat 4  reaksi positif
5. Medium Starch Agar dengan Isolat 5  reaksi positif
6. Medium Starch Agar dengan Isolat 6  reaksi positif
Hasil  hidrolisis  amilum  menunjukan  bahwa isolat  1  hingga  isolat  6  mampu  diurai  dengan baik. Hasil ini menunjukan bahwa seluruh isolat mampu  memecah  karbohidrat  dari  jenis polisakarida  dengan  menghasilkan  eksoenzim dengan  cara  mengerluarkan  enzim  dari  dalam selnya  sehingga  makanan  yang  terdapat  di  luar selnya mampu dicerna dengan baik.
Hasil  pengamatan  pada  skrining  tahap  dua untuk isolat 1 menunjukan ciri morfologi koloni bentuk  circular,  tepi  entire,  warna  bening, bentuk sel coccus gram negatif. Sedangkan ciri biokimia  sukrosa  negatif,  dektrosa  positif, laktosa  positif,  sitrat  positif,  H 2 S  positif, amilum  positif,  katalase  positif,  indol  negatif, methyl red negatif, dan voges proskauer negatif. Isolat  2  menunjukan  ciri  morfologi  koloni bentuk  irregular,  tepi  lobate,  warna  putih, bentuk sel coccus gram negatif. Sedangkan ciri biokimia  sukrosa  positif,  dektrosa  positif, laktosa  negatif,  sitrat  positif,  H 2 S  positif, amilum  positif,  katalase  positif,  indol  negatif, methyl red negatif, dan voges proskauer negatif. Isolat  3  menunjukan  ciri  morfologi  koloni bentuk  irregular,  tepi  undulate,  warna  putih, bentuk  sel  basil  gram  negatif.  Sedangkan  ciri biokimia  sukrosa,  dektrosa,  dan  laktosa  positif, sitrat  positif,  H 2 S  positif,  amilum  positif, katalase  positif,  indol  negatif,  methyl  red negatif,  dan  voges  proskauer  negatif.  Isolat  4 menunjukan  ciri  morfologi  koloni  bentuk circullar,  tepi  entire,  warna  putih  susu,  bentuk sel  coccus  gram  positif.  Sedangkan  ciri biokimia  sukrosa,  dektrosa,  laktosa  negatif, sitrat  positif,  H 2 S  positif,  amilum  positif, katalase  positif,  indol  negatif,  methyl  red negatif,  dan  voges  proskauer  negatif.  isolat  5 menunjukan  ciri  morfologi  koloni  bentuk irregular/  spreading,  tepi  entire,  warna  putih susu,  bentuk  sel  coccus  gram  negatif. Sedangkan ciri biokimia sukrosa positif dengan gas,  dektrosa  positif,  laktosa  negatif,  sitrat positif,  H 2 S  positif,  amilum  positif,  katalase positif,  indol  negatif,  methyl  red  negatif,  dan voges  proskauer  negatif.  Isolat  6  menunjukan ciri  morfologi  koloni  bentuk  round,  tepi entire, warna  putih  susu,  bentuk  sel  coccus  gram negatif.  Sedangkan  ciri  biokimia  sukrosa, dektrosa  positif,  laktosa  negatif,  sitrat  positif, H 2 S  positif,  amilum  positif,  katalase  positif, indol  negatif,  mrthyl  red  negatif,  dan  voges proskauer positif.

## KESIMPULAN
Penelitian ini berhasil mendapatkan koleksi isolat  bakteri  pendegradasi  limbah  tandan kosong kelapa sawit yang diperoleh melalui 2  tahap skrining .  Pada  tahap  pertama didapatkan  18  buah  isolat  yang  kemudian diteruskan pada tahapan kedua dan diperoleh  6  isolat  bakteri.  Ke  6  isolat tersebut  memiliki  ciri-ciri  sebagai  berikut: isolat1:    circular,  bening,    coccus,  gram negatif,  sukrosa,  dektrosa,  laktosa  positif, sitrat  positif,  H 2 S  positif,  katalase  positif, indol negatif, methyl red negatif, dan voges proskauer negatif.
Isolat  2:  irregular,    lobate,  warna  putih, coccus,  gram  negatif,  sukrosa    dektrosa positif,  laktosa  negatif,  sitrat  positif,  H 2 S positif,  amilum,  katalase  positif,  indol, methyl  red  negatif,  dan  voges  proskauer negatif.
Isolat  3:  irregular,  undulate,  warna  putih, basil  gram  negatif.    Sukrosa,  dektrosa,  dan laktosa  f,  sitrat  ,  H 2 S  ,  amilum  ,  katalase positif,  indol,  methyl  red,  dan  voges proskauer negatif.
Isolat 4  circullar,  entire, warna putih susu, coccus,  gram  positif.  sukrosa,  dektrosa, laktosa  negatif,  sitrat,  H 2 S,  amilum, katalase  positif,  indol,  methyl  red,  dan voges proskauer negatif.
Isolat  5  irregular/spreading,  entire,  warna putih  susu,  coccus  gram  negatif.  sukrosa positif dengan gas, dektrosa positif, laktosa negatif, sitrat, H 2 S, amilum, katalase positif, indol,  methyl  red  dan  voges  proskauer negatif.
Isolat  6  round,  warna  putih  susu,  coccus gram negatif.  sukrosa, dektrosa, sitrat, H 2 S, amilum,  katalase  positif,  indol,  laktosa, mrthyl  red  negatif,  dan  voges  proskauer positif.
Disarankan untuk menguji lebih lanjut baik morfologi,  biokimia  serta  uji  lapangan sehingga  didapatkan  genus  atau  spesies yang tepat.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Ucapan  terima  kasih  disampikan  kepada  Tim
Penyandang  Dana  PNBP  Lembaga  Penelitian Universitas Jambi Tahun 2014 No. 451/UN21.6/PL/2014  dengan  Surat  Kontrak
No:  357/UN21/PL/2014/Tanggal  12  Juni  2014, Manajemen  dan  Staf  PT.  Erasakti  Wira Forestama  Muaro  Jambi  Serta  seluruh  pihak yang  tidak  dapat  disebut  satu  persatu,  atas segala bantuan demi lancarnya  penelitian ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Brock, D. Thomas, Brock, M. Katherine. 1978. Basic  Microbiology  with  Application second  edition. Prentice-Hall,  Inc, Englewood Cliffs. New Jersey.
Cappuccino,  J.  G.,  and  Sherman,  N.  1987. Microbiology  A  Laboratory  Manual . Addison Wesley Company. New York.
Goenadi,  D.  H.,  1997, Kompos  Bioaktif  dari Tandan Kosong Kelapa Sawit. Kumpulan  Makalah  Pertemuan  Teknis
Bioteknologi. Bogor.
Isroi,  2008.  Diakses  taggal,  15  juli  2013. Cara Mudah Mengomposkan Tandan Kosong Kelapa Sawit . http://isroi.com/2008/02/20/makalah-
tentang- kompos/.
Pikoli,  M.R,  2000. Isolasi  Bertahap  Bakteri Termofilik Pendegradasi Minyak Bumi , Tesis magister Bidang Khusus
Mikrobiologi ITB. Bandung.
Schlegel,  H.  G.  and  Schmidt,    K.  1984.
Mikrobiologi Umum . Terjemahan
Tedjo,B. UGM Press. Yogyakarta.