## ARTIKELPENELITIAN

## MORFOLOGI EOSINOFIL PADA APUSAN DARAH TEPI MENGGUNAKAN PEWARNAAN
GIEMSA, WRIGHT, DAN KOMBINASI WRIGHT-GIEMSA
1 Rinny Ardina, 2 Sherly Rosalinda
1 Dosen Program Studi D-III Analis Kesehatan Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Palangkaraya
2 Mahasiswa Program Studi D-III Analis Kesehatan Fakultas Ilmu Kesehatan Universitas Muhammadiyah Palangkaraya

## ABSTRAK
Pemeriksaan apusan darah tepi mampu menilai morfologi sel (eritrosit, leukosit, trombosit), menentukan  jumlah  dan  jenis  leukosit,  mengestimasi  jumlah  trombosit  dan  mengidentifikasi adanya  parasit.  Pewarnaan  Romanowsky  adalah  pewarnaan  yang  sering  digunakan  dan  di Indonesia  untuk  mewarnai  preparat  apusan  darah  tepi  digunakan  pewarnaan  Giemsa  dan terkadang  Wright  atau  kombinasi  Wright-Giemsa.  Dalam  menilai  kualitas  apusan  darah  tepi digunakan  penilaian  terhadap  morfologi  eosinofil,  karena  eosinofil  memiliki  ciri  yang  khas, jumlahnya  cukup  banyak  dan  mudah  diamati.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menggambarkan morfologi eosinofil pada apusan darah tepi dengan menggunakan pewarnaan Giemsa, Wright, dan  kombinasi  Wright-Giemsa.  Dilakukan  penelitian  deskritif  kualitatif  dengan  rancangan penelitian  seran  lintang  ( cross  sectional  study )  pada  30  sampel  yang  diambil  dengan  teknik Simple  Random  Sampling .  Sampel  darah  diwarnai  dengan  Giemsa,  Wright,  dan  kombinasi Wright-Giemsa. Gambaran morfologi eosinofil dengan pewarnaan Giemsa menunjukkan inti sel berwarna  biru  keunguan  dan  granula  tampak  cukup  jelas  terlihat  berwarna  merah  muda,  dan apusan  lebih  tahan  lama  setelah  disimpan.  Pada  pewarnaan  Wright  menunjukan  inti  sel  dan granula tampak lebih jelas terlihat kemerahan dengan warna yang lebih menonjol dibandingkan dengan  pewarnaan  Giemsa  namun kekurangan  pewarna Wright  yaitu  tidak tahan  lama  dalam iklim tropis. Pada apusan dengan pewarnaan kombinasi Wright-Giemsa terdapat kelebihan dari setiap zat warna dimana granula, plasma dan  inti lebih jelas terlihat dan pewarnaan lebih tahan lama disimpan.  Namun, perlu diperhatikan juga tujuan dari pembuatan preparat apusan darah tepi,  karena  apabila  ingin  menentukan  ada/tidaknya  parasit  akan  lebih  baik  menggunakan pewarnaan  Giemsa,  sedangkan  apabila  ingin  melihat  morfologi  basofil  akan  lebih  baik menggunakan  pewarnaan  Wright.Kata  Kunci: Eosinofil , Apusan  Darah  Tepi,  Giemsa,  Wright, Kombinasi Wright-Giemsa

## PENDAHULUAN
Pemeriksaan  preparat  apus  darah  tepi merupakan  bagian  yang  penting  dari rangkaian pemeriksaan hematologi.
Keunggulan  dari  pemeriksaan  apus  darah tepi ialah mampu menilai berbagai unsur sel darah  tepi  seperti  morfologi  sel  (eritrosit, leukosit, trombosit), menentukan jumlah dan jenis leukosit, mengestimasi jumlah trombosit  dan  mengidentifikasi  adanya parasit (Riswanto, 2013).
Tujuan  dilakukannya  pewarnaan  pada preparat  apus  darah  tepi  yaitu  agar memudahkan  dalam  melihat  berbagai  jenis sel dan juga dalam mengevaluasi morfologi dari  sel-sel  tersebut  (Rodak, et  al .,  2007).
International  Council  for  Standardization  in Haematology (ICSH) merekomendasikan metode  pewarnaan  Romanowsky  karena pewarnaan  ini  mampu  memberikan  hasil memuaskan  pada  apusan  darah  tepi (Bain, 2014).
Beberapa  pewarnaan  yang  termasuk dalam  metode  pewarnaan  Romanowsky yaitu  pewarnaan  Wright,  Giemsa,  Wright- Giemsa,  Leishman,  May-Grundwald  dan pewarnaan  Jenner.  Pewarna  Romanowsky mengandung  pewarna  kationik  atau  basa seperti (1) azure B yang dapat memberikan warna  biru-ungu  atau  biru  pada  inti  sel, nukleoprotein,  granula  basofil  dan  granula neutrofil, dan (2) pewarna anion atau asam, seperti  eosin  Y  dapat  memberikan  warna
merah  atau  oranye  pada  eritrosit  dan granula  eosinofil  serta  mewarnai  inti  sel (McKenzie, 2014 ; Bain, 2014).
Di  Indonesia,  pewarnaan  yang  umum digunakan  ialah  pewarnaan  Giemsa  sebab Giemsa lebih tahan lama dalam iklim tropis. Beberapa klinik juga menggunakan pewarna  Wright  dalam  mewarnai  apusan darah  tepi.  Terkadang  pewarnaan  Giemsa juga dikombinasikan dengan Wright, dimana  diharapkan  kelebihan  dari  tiap-tiap zat  warna  Giemsa  dan  Wright  bisa didapatkan  dan  akan  menjadikan  sediaan apus  darah  tepi  lebih  jelas  terlihat  secara mikroskopis  dan  jadi  lebih  tahan  lama (Riswanto, 2013 ; Gandasoebrata, 2007).
Pada  apusan  darah  tepi  salah  satu  sel yang  dapat  diamati  ialah  leukosit.  Leukosit memiliki  sebuah  inti  yang  bentuk  dan ukurannya  bervariasi  sehingga  mudah dibedakan  dengan  eritrosit  dan  trombosit. Terdapat  5  jenis  leukosit  yang  utama,  yaitu neutrofil,  eosinofil,  basofil,  limfosit,  dan monosit.  Eosinofil  merupakan  salah  satu jenis sel leukosit yang memiliki ciri-ciri khas diantaranya  sel  bulat, inti  biasanya  hanya memiliki  2  lobus,  kromatin  berwarna  ungu, sitoplasma  mengandung  banyak  granula eosinofilik  (jingga)  yang  berukuran  sama besar dan lebih besar dibandingkan granula neutrofil  (Riswanto,  2013  ;  Palmer, et  al ., 2015).
Dalam  menilai  kualitas  apus  darah  tepi menggunakan  pewarnaan  Giemsa,  Wright,
dan  kombinasi  Wright-Giemsa  digunakan penilaian terhadap  morfologi eosinofil, karena  eosinofil  memiliki  ciri  yang  khas, jumlahnya  cukup  banyak  dan  mudah diamati.

## METODE PENELITIAN

## Jenis dan Rancangan Penelitian
Jenis  penelitian  pada  penelitian  ini adalah deskritif kualitatif dengan rancangan penelitian  seran  lintang  ( cross  sectional study ) yang bertujuan untuk mengambarkan morfologi  eosinofil  pada  apusan  darah  tepi menggunakan  pewarnaan  Giemsa,  Wright dan kombinasi Giemsa –Wright (Sastroasmoro dan Ismael, 2011).

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian dilaksanakan selama 2 bulan,  yaitu  mulai  bulan  Mei  2017  untuk penyusunan  proposal  hingga  bulan  Juni 2017 mendapatkan hasil penelitian.
Penelitia n dilakukan di Laboratorium  Kimia Klinik, Fakultas Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Palangkaraya.

## Populasi dan Sampel
1.  Populasi
Populasi dalam  penelitian ini berjumlah 47  orang  dari  seluruh  mahasiswa  Analis Kesehatan  Semester  4,  Fakultas  Ilmu Kesehatan, Universitas Muhammadiyah
Palangkaraya.
2.  Sampel
Sampel yang diperoleh dalam penelitian ini yaitu sebanyak 30 orang yang diambil dengan menggunakan teknik Simple Random Sampling yaitu pengambilan sampel dilakukan undian secara acak pada seluruh  anggota  populasi  (Novita,  dkk., 2015).

## Instrumen Penelitian
1.  Alat
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  yaitu  mikroskop  CX  21, kaca objek,  tabung  vakum  ungu  (berisi K3EDTA), tourniquet ,  rak  pengecatan, dan pipet tetes.
2.  Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  antara lain  Wright  cair  siap  pakai,  Giemsa Stock,  metanol,  buffer  fosfat  6,4, aquades, dan kapas alkohol 70%.

## Prosedur Penelitian
1.  Pengambilan Sampel Darah Vena
a.  Posisi lengan pasien harus lurus dan siku  jangan  membengkok.  Dipilih lengan  yang  banyak  melakukan aktivitas.
b.  Pasien  diminta  untuk  mengepalkan tangan.
c.  Tourniquet dipasang ± 10 cm di atas lipat siku (tidak lebih dari 1 menit).
d.  Dipilih bagian vena mediana cubiti.
e.  Kulit    pada    bagian    yang    akan diambil    darahnya    dibersihkan
dengan  kapas  alkohol    70%    dan dibiarkan    kering  (jangan  dipegang lagi).
f.  Bagian  vena  tadi  ditusuk  dengan lubang  jarum  menghadap  keatas dengan    sudut    kemiringan    antara jarum    dan    kulit    adalah    15 0 .
Tabung  vakum  ditekan  sehingga darah terisap ke dalam tabung.
g.  Tourniquet  dilepaskan  dan  pasien diminta  untuk  melepaskan  kepalan tangan.
h.  Biarkan  darah  mengalir  ke  dalam tabung sampai selesai.
i.  Jarum ditarik lalu kapas alkohol 70%
diletakkan  di  atas  bekas  tusukan untuk  menekan  bagian  tersebut selama  ±  2  menit.  Setelah  darah berhenti, kemudian bagian ini diplester selama ± 15 menit (Depkes RI, 2008).

## 2.  Pembuatan  Preparat  Apus  Darah Tepi
Darah pada tabung vakum EDTA harus dikocok  keatas  dan  kebawah  agar  plasma darah  bercampur  dengan  sel-sel  darah. Kemudian  darah  diambil  menggunakan pipet  tetes  dan  diteteskan  pada  preparat ( obyek  glass ).  Selanjutnya obyek  glass diletakkan  pada  sudut  25°  -  30°  pada tetesan  darah,  kemudian  ditarik  lurus sampai ujung preparat (Zilvanhisna, 2017).
3.  Pewarnaan  Preparat  Apus  Darah
Tepi dengan Giemsa 10%
a.  Meneteskan metanol ke atas preparat  dan  dibiarkan  selama  5 menit. Lalu sisa metanol dibuang.
b.  Meneteskan  larutan  giemsa  10% (sampai  semua  apusan  tergenangi) dan dibiarkan selama 15 menit.
c.  Preparat dibilas dengan air kemudian  dikeringkan  di  udara (Priyana, 2010).

## 4.  Pewarnaan  Preparat  Apus  Darah
Tepi dengan Wright
a.  Meneteskan  larutan  Wright  ke  atas preparat  (sampai  semua  apusan tergenangi)
b.  Meneteskan  larutan  buffer  pH  6,4 (sampai  semua  apusan  tergenangi) dan dibiarkan 5-12 menit.
c.  Apusan  dibilas  dengan  air  dan bagian  belakang  apusan  yang  kotor dibersihkan dari sisa zat warna.
d.  Preparat  apus  darah  tepi  dibiarkan kering di udara (Priyana, 2010).
5.  Pewarnaan  Preparat  Apus  Darah Tepi  dengan  Kombinasi  Wright- Giemsa
a.  Meneteskan  larutan  Wright  ke  atas preparat  sampai  semua  apusan tergenangi,  lalu  dibiarkan  selama  2 menit.
b.  Menambahkan  larutan  Giemsa  10%
sampai  apusan  tergenangi  semua, lalu dibiarkan selama 15 menit.
c.  Preparat dibilas dengan air kemudian dikeringkan di udara (Gandasoebrata, 2007).

## Pengolahan dan Analisis Data
Analisis  yang  dilakukan  yaitu  analisis deskriptif kualitatif dimana gambaran morfologi eosinofil dan juga ketahanan lama penyimpanan  preparat  apus  darah  tepi dideskripsikan secara subjektif berdasarkan gambaran  yang  ditampilkan  pada  hasil penelitian.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Hasil  gambaran  morfologi  eosinofil dengan  menggunakan  pewarnaan  Giemsa, Wright dan kombinasi Giemsa –Wright dapat dilihat pada gambar berikut.
(a)
(b)
(c)
Gambar 1. (a) pewarnaan Giemsa 10%,
(b) pewarnaan Wright, (c) pewarnaan Kombinasi Wright-Giemsa
Gambaran morfologi eosinofil yang diwarnai dengan tiga pewarnaan berbeda menunjukkan kualitas dan kuantitas warna yang berbeda pula.
Apabila ditinjau dari ketahanan lama penyimpanan preparat apus darah tepi dari penggunaan ketiga pewarnaan tersebut, diperoleh gambaran sebagai berikut.
Gambar 2. Ketahanan Preparat dengan Pewarnaan Giemsa 10%
(a)  Setelah  dicat  dengan  pewarnaan Giemsa  10%,  (b)  Pewarnaan  Giemsa setelah disimpan 5 hari.
(a) (b)
(a) (b)
Gambar 3. Ketahanan Preparat dengan
Pewarnaan Wright
(a) Setelah dicat dengan pewarnaan Wright, (b)  Pewarnaan  Wright  setelah  disimpan  5 hari.
(a)

## (b)

## Gambar 4. Ketahanan Preparat dengan Pewarnaan Wright
(a)  Setelah  dicat  dengan  pewarnaan kombinasi,  (b)  Pewarnaan  Wright-Giemsa setelah disimpan 5 hari.

## Pembahasan
Berdasarkan  hasil  pengamatan  secara mikroskopis  pada  apusan  darah  tepi  yang sudah  diwarnai  menggunakan  pewarnaan Giemsa,  Wright  dan  kombinasi  Wright- Giemsa,  didapat  hasil  yang  menunjukan perbedaan  pada  warna  granula  dan  inti  sel eosinofil,  serta  perbedaan  ketahanan  lama penyimpanan preparat apus darah tepi.
Pada  gambar  1  (a)  nampak  gambaran morfologi  eosinofil  dengan  pewarnaan Giemsa  10%  menunjukkan  warna  granula yang  cukup  jelas  terlihat  yaitu  berwarna merah muda dengan inti sel yang berwarna biru keunguan. Namun apabila dibandingkan  dengan  gambaran  morfologi eosinofil  dengan  pewarnaan  Wright  pada gambar  1  (b),  nampak  warna  granula  yang
jauh lebih menonjol yaitu berwarna kemerahan  dengan  inti  berwarna  kebiruan dibandingkan  hasil  dengan  pewarnaan Giemsa 10%. Pewarnaan dengan kombinasi  Wright-Giemsa  pada  gambar  1 (c)  menunjukkan  kelebihan  dari  setiap  zat warna  dimana  granula  dan  inti  eosinofil terwarnai dengan sangat baik dan menonjol.
Apabila  ditinjau  dari  segi  ketahanan lama  penyimpanan  preparat  apus  darah tepi, pewarnaan Wright memiliki kekurangan  yaitu  tidak  tahan  lama  dalam iklim  tropis  hal  ini  terlihat  pada  gambar  3 dimana  pewarnaan  Wright  setelah  diwarnai memang  nampak  lebih  tegas,  akan  tetapi setelah disimpan selama lima hari warnanya semakin memudar dari sebelumnya.  Hal  ini  berbeda  dengan preparat  yang  diwarnai  dengan  Giemsa 10%  seperti  yang  terlihat  pada  gambar  2, dimana  tidak  terdapat  perubahan  warna pada  apusan  darah  tepi  baik  setelah diwarnai maupun setelah lima hari penyimpanan. Begitu pula dengan pewarnaan dengan  kombinasi  Wright- Giemsa  seperti  pada  gambar  4,  dimana tidak terdapat perubahan kualitas pewarnaan  baik  setelah  diwarnai  maupun setelah disimpan selama lima hari.
Di  Indonesia,  pewarnaan  yang  umum digunakan untuk mewarnai apus darah tepu adalah  Gimesa.  Giemsa  sangat  baik  untuk mengidentifikasi berbagai sel granulosit dan
sel-sel darah lainnya, menghasilkan gambaran inti yang jelas, sangat baik dalam membedakan  komponen  basofilik  atau eosinofilik  dari  sel  limfoid  dan  mieloid,  dan keunggulan utama Giemsa ialah lebih tahan lama  dalam  iklim  tropis  dan  sangat  baik untuk  mempelajari  parasit-parasit  darah (Barcia, 2007; Riswanto, 2013). Oleh sebab itu, eosinofil yang terwarnai dengan Giemsa memberikan hasil yang representatif dengan  warna  granula  oranye-merah  dan preparat  apus  darah  tepi  juga  dapat bertahan  dengan  baik  pada  iklim  tropis Indonesia.
Penggunaan pewarna Wright di Indonesia disebabkan Wright telah mengandung metil alkohol dalam
konsentrasi  tinggi,  sehingga  tidak  perlu dilakukan fiksasi. Kelebihan dari pewarnaanWright  yaitu  plasma  dan  inti  sel lebih  jelas  terlihat.  Hal  itu  disebabkan karena  komposisi  dari  Wright,  yang  terdiri dari  methylene  blue  yang  akan  memberi warna  biru  pada  inti  (nukleus)  yang mengandung DNA dan eosin yang memberi warna  merah  pada  sitoplasma.  Sedangkan kekurangan  pewarna  Wright  yaitu  tidak tahan  lama  dalam  iklim  tropis  (Freund, 2012; Kiswari, 2014).
Pewarnaan  Wright-Giemsa  merupakan modifikasi  pewarnaan  Romanowsky  yang mengandung  kombinasi  zat  warna  basa seperti methylene blue dan produk oksidatifnya,  azure  A  dan  azure  B,  dan  zat
warna  asam  seperti  eosin.  Pewarnaan  ini sudah  rutin  digunakan  di  laboratorium hematologi  untuk  mewarnai  apusan  darah tepi dan sumsum tulang. Teknik pewarnaan dengan Wright-Giemsa diketahui baik untuk menilai  morfologi  eosinofil-neutrofil-basofil, dan  Wright    untuk    basofil,  sedangkan Giemsa  untuk  parasit-parasit  dalam  darah (Barcia, 2014 ; Sudiro, dkk., 2010).

## KESIMPULAN
Gambaran  morfologi  eosinofil  dengan pewarnaan  Giemsa  menunjukkan  inti  sel berwarna  biru  keunguan  dan  granula tampak cukup jelas terlihat berwarna merah muda, dan apusan lebih tahan lama setelah disimpan. Pada pewarnaan Wright menunjukan  inti  sel  dan  granula  tampak lebih jelas terlihat kemerahan dengan warna yang  lebih  menonjol  dibandingkan  dengan pewarnaan  Giemsa  namun  kekurangan pewarna  Wright  yaitu  tidak  tahan  lama dalam  iklim  tropis. Pada  apusan  dengan pewarnaan kombinasi Wright-Giemsa terdapat  kelebihan  dari  setiap  zat  warna dimana granula, plasma dan  inti lebih jelas terlihat  dan  pewarnaan  lebih  tahan  lama disimpan.  Namun,  perlu  diperhatikan  juga tujuan  dari  pembuatan  preparat  apusan darah tepi, karena apabila ingin menentukan ada/tidaknya parasit akan lebih baik  menggunakan  pewarnaan  Giemsa, sedangkan  apabila  ingin  melihat  morfologi
basofil  akan  lebih  baik  menggunakan pewarnaan Wright.

## DAFTAR PUSTAKA
Bain, B.J.. 2014. Blood cells: a practical guide . John Wiley & Sons.
Barcia,  J.J.  2007.  The  Giemsa  Stain: Its  History  and  Applications. International Journal of Surgical Pathology . 15 (3) : 292-
296. Departemen Kesehatan Republik Indonesia  (DEPKES  RI).  2008. Pedoman Praktek  Laboratorium  yang  Benar  (Good Laboratory Practice) . Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Freund, M. H. 2012. Atlas Hematologi : Praktikum  Hematologi  dengan  Mikroskop, Edisi 11 . Kedokteran EGC, Jakarta.
Gandasoebrata  R.  2007. Penuntun Laboratorium Klinik . Dian Rakyat, Jakarta.
Kiswari,  R.  2014. Hematologi  dan
Transfusi . Elangga, Jakarta.
McKenzie, S.B.
2014. Clinical Laboratory Hematology. Pearson Education Inc, New Jersey.
Novita  L.,  R.  Andriyani,  dan  M. Megasari.  2015. Buku  Ajar  Metodologi Penelitian Kebidanan . Deepublish, Sleman.
Palmer, L., C. Briggs, S. McFadden, G. Zini,  J.  Burthem,  G.  Rozenberg,  M. Proytcheva,  and  S.  J.  Machin.  2015.  ICSH Recommendations  for  The  Standardization of Nomenclature And Grading of Peripheral Blood
Cell Morphological Features. International Journal of Laboratory
Hematology . 37 (3) : 287-303.
Priyana,  A.  2010. Patologi  Klinik  Untuk Kurikulum  Pendidikan  Dokter  Berbasis
Kompetensi . Jakarta. Universitas Trisakti.
Riswanto. 2013. Pemeriksaan Laboratorium  Hematologi .  Alfamedia  dan Kanal Medika, Yogyakarta.
Rodak ,  B.F., George,  A.  F , and Kathryn,  D .  2007. Hematology:  Clinical Principles and Applications . Sanders Elsevier. USA.
Sastroasmoro, S., dan Ismael, S. 2011. Dasar-dasar  Metodologi  Penelitian  Klinis, Edisi Ke-4 . Sagung Seto, Jakarta.
Sudiro,  M.,  T.  H.  S.  Madiadipoer,  dan B.  Purwanto.  2010.  Eosinofil  Kerokan Mukosa  Hidung  Sebagai  Diagnostik  Rinitis Alergi. Majalah Kedokteran Bandung . 42 (1) : 1-6.
Zilvanhisna  E.  F.  2017.  Klasifikasi Trombosit  Pada  Citra  Hapusan  Darah  Tepi Berdasarkan  Gray  Level  Co-Occurrence Matrix Menggunakan Backpropagation. Institut Teknologi Sepuluh Nopember. Surabaya.