Jurnal Farmasi Galenika ( Galenika Journal of Pharmacy ) 2019; 5 (2): 175 – 182 ISSN : 2442-8744 (electronic) http://jurnal.untad.ac.id/jurnal/index.php/Galenika/index DOI: 10.22487/j24428744.2019.v5.i2.13149
Pengaruh  Metode  Ekstraksi  Terhadap  Rendemen  Dan  Kadar  Fenolik Ekstrak Tanaman Kayu Beta-Beta (Lunasia amara Blanco)
( The  Effect  of  Extraction  Method  on  Yield  Value  and  Phenolic  Content  of  Beta-Beta (Lunasia amara Blanco ) Bark Extract )
Hasnaeni * , Wisdawati, Suriati Usman
Fakultas Farmasi, Universitas Muslim Indonesia, Makassar, Indonesia, 90231
Article Info: Received: 3 September 2019 in revised form: 18 September 2019 Accepted: 9 October 2019 Available Online: 9 October 2019

## ABSTRACT
Lunasia amara Blanco bark belonging to the family Rutaceae. The research aimed  to  determine  the  effect  of  extraction  method  on  yield  value  and phenolic  content  of  bark  extract  of Lunasia  amara Blanco  by  UV-Vis spectrophotometry. Sample was extracted by maceration, reflux, and soxhlet using methanol 70%. The extraction by maceration obtained the yield value of methanol extract of 2,352%; the reflux method of 1,611%; and the soxhlet method of 0,960% . T hen the chemical content was identified by the addition of FeCl 3 reagent and a blackish green color was formed positively indicating phenolic content . Afterward, phenolic identification was conducted by TLC with eluent n-hexane: ethyl acetate (2:8) containing phenolic because the Rf value  was  the  same  as  the  galic  acid  standard. The  results  showed  that the extraction  method  producing  the  highest  yield  of  bark  extract  of Lunasia amara Blanco was maceration. The phenolic content obtained by maceration was  66,548  mgGAE/g  extract  with  6.6548%  GAE;  the  reflux  was  73.645 mgGAE/g  extract  with  7.3645%  GAE;  and  the  soxhlet  was  74.806 mgGAE/g extract with 7.4806% GAE .
Keywords :
Phenolic Content Lunasia amara Blanco Beta-beta bark
UV-Vis Spectrophotometry
Corresponding Author: Hasnaeni Laboratorium Farmakognosi Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia Makassar, 90245 email: hasnaeni.hasnaeni@umi.ac.id
Copyright © 2019 JFG-UNTAD
This open access article is distributed under a Creative Commons Attribution (CC-BY-NC-SA) 4.0 International license.

## How to cite (APA 6th Style):
Hasnaeni,  Wisdawati,  &  Usman,  S.  (2019).  Pengaruh  Metode  Ekstraksi  Terhadap  Rendemen  Dan  Kadar  Fenolik  Ekstrak Tanaman Kayu Beta-Beta (Lunasia amara Blanco) . Jurnal Farmasi Galenika :Galenika Journal of Pharmacy, 5 (2), 175-182. doi:10.22487/j24428744.2019.v5.i2.13149

## ABSTRAK
Sampel  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  batang  kayu  beta-beta  ( Lunasia  amara Blanco) yang  termasuk  dalam  famili Rutaceae.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  pengaruh  metode ekstraksi terhadap rendemen dan kadar fenolik ekstrak batang kayu beta-beta ( Lunasia amara Blanco) dengan  spektrofotometri  UV-Vis.  Sampel  diekstraksi  dengan  cara  maserasi,  refluks,  dan  sokhletasi masing-masing  menggunakan  pelarut  metanol  70%  dan  diperoleh  rendemen  ekstrak  metanol  dari metode  ekstraksi  maserasi  yaitu  2,352%,  untuk  metode  refluks  yaitu  1,611%,  dan  untuk  metode sokletasi  yaitu  0,960%,  selanjutnya  diidentifikasi  kandungan  kimia  dengan  penambahan  pereaksi FeCl 3 dan  terbentuk  warna  hijau  kehitaman  yang  menandakan  positif  mengandung  fenolik  dan  juga dilakukan  uji  identifikasi  fenolik  menggunakan  KLT  dengan  eluen  n-Heksan:etil  asetat  (2:8)  dan menunjukkan  mengandung  fenolik  karena  nilai  Rfnya  sama  dengan  pembanding  asam  galat.  Hasil penelitian menunjukkan bahwa metode ekstraksi yang menghasilkan rendemen yang paling tinggi dari ekstrak  batang  kayu  beta-beta  ( Lunasia  amara Blanco)  adalah  maserasi  dan  kadar  fenolik  yang diperoleh untuk metode maserasi sebesar 66,548 mgGAE/g ekstrak dengan persentase 6,6548% GAE, untuk metode refluks sebesar 73,645 mgGAE/g ekstrak dengan persentase 7,3645% GAE, dan untuk metode sokletasi sebesar 74,806 mgGAE/g ekstrak dengan persentase 7,4806% GAE.
Kata kunci: Kadar Fenolik, Batang Kayu Beta-beta, Lunasia amara Blanco, Spektrofotometri UV-Vis.

## PENDAHULUAN
Masyarakat  Indonesia  telah  menggunakan  banyak tanaman  sebagai  obat  tradisional,  hampir  semua bagian tanaman dimanfaatkan. Bagian tanaman  yang biasa  digunakan  daun,  batang,  akar,  rimpang,  bunga dan bijinya.
Beragam  aktivitas  dari  tumbuhan  obat  disebabkan karena  adanya  kandungan  metabolit  sekunder  di dalamnya  seperti  fenolat,  alkaloid,  saponin,  steroid, terpenoid,  tanin  dan  sebagainya.  Kandungan  fenolik dalam  tumbuhan  berperan  sebagai  antioksidan  alami yang  dapat  menangkal  berbagai  oksidan  dan  radikal bebas  yang  berbahaya  bagi  kesehatan  (Balasundram, 2006).
Salah satu tanaman yang mengandung fenolik adalah tanaman  kayu  beta-beta  ( Lunasia  amara Blanco) merupakan  tanaman  obat  potensial  yang  berasal  dari Kawasan  Timur  Indonesia  yang  saat  ini  tergolong langka.  Tanaman  kayu  beta-beta  diambil  dari Kabupaten  Barru  yang  biasanya  digunakan  sebagai obat  kuat  pada  pria  (aprodisiaka)  dan  anti  inflamasi. Hal  tersebut  telah  dibuktikan  dari  penelitian  yang dilakukan  Arnida et  al., (2003)  yang  menyatakan bahwa  tanaman  kayu  beta-beta  memiliki  efek aprodisiaka,  selain  itu  dari  penelitian  Hasnaeni et  al.
(2016)  menyatakan  bahwa  tanaman  ekstrak  kayu beta-beta  memiliki  efek  anti  inflamasi.  Selain  itu, tanaman kayu beta-beta ( Lunasia amara Blanco) juga memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap  mikroba tuberculosis (Muscia et al ., 2014), dan juga memiliki efek antikanker (Zubair, 2010).
Senyawa aktif yang terdapat dalam batang kayu beta- beta yaitu alkaloida terpenoida dan fenolik (Arnida et al., 2003).  Selain  itu,  Sidik  tahun  1999  (dikutip dalam  Adhiyanto,  2001)  menyebutkan  bahwa kemaitan atau kayu beta-beta mengandung fitosterol, alkaloid  ( edulein,  graveolin,  hidroksin,  benakrin, limakridin,  lunakrin,  lunamarin,  lunidonin, dan lunin) dan flavonoid, dimana flavonoid ini merupakan turunan senyawa fenolik. Kemudian, pada penelitian  Hasnaeni  (2017)  menyatakan  bahwa batang kayu beta-beta mengandung senyawa kumarin yang merupakan turunan senyawa fenolik.
Untuk  mendapatkan  senyawa  fenolik  dari  batang kayu beta-beta perlu dilakukan proses ekstraksi. Cara ekstraksi  sangat  mempengaruhi  konsentrasi  atau hilangnya  efek  terapi  dari  simplisia  karena  beberapa simplisia  bersifat  relatif  stabil  dan  juga  dapat  terurai tergantung  dari  cara  ekstraksi  yang  digunakan (Djamal, 2010).
Berdasarkan  uraian  diatas,  maka  telah  dilakukan penelitian  tentang  pengaruh  metode  ekstraksi terhadap  ekstrak  batang  kayu  beta-beta  ( Lunasia amara Blanco)  dan  metode  yang  digunakan  adalah maserasi,  refluks  dan  sokletasi  agar  dapat  diketahui metode  ekstraksi  yang  menghasilkan  rendemen  yang tertinggi  pada  batang  kayu  beta-beta.  Kemudian, dilakukan  penentuan  kadar  fenolik  terhadap  ekstrak batang kayu beta-beta ( Lunasia amara Blanco).

## METODE PENELITIAN

## Alat dan Bahan
Alat-alat  yang  digunakan  yaitu  Alat-alat  gelas (Pyrex®),  alat  sokletasi,  alat  refluks,  bulk,  cawan porselin,  chamber,  eksikator,  kamera,  pinset,  pipa kapiler, pipet tetes, pipet volume, rotavapor ( Ika® RV 10  basic ),  spektrofotometer  UV-Vis  (UV-1601 Shimadzu (Kyoto, Japan)), timbangan analitik ( carat series ), wadah maserasi (toples kaca).
Bahan-bahan  yang  digunakan  adalah  Aquadest, aluminium  foil,  asam  galat,  batang  kayu  beta-beta ( Lunasia  amara Blanco),  etil  asetat,  FeCl 3 ,  kertas saring,  lempeng  KLT,  metanol  70%,  Na 2 CO 3 ,  n- Heksan, silika gel, pereaksi Folin-ciocalteau, tissue.

## Prosedur penelitian

## Pengambilan dan pengolahan sampel
Sampel  penelitian  adalah  batang  tanaman  kayu  beta- beta (Lunasia  amara Blanco ) yang  diperoleh  dari Kabupaten Barru, Provinsi Sulawesi Selatan. Sampel yang  dikumpulkan  lalu  dibersihkan  dari  kotoran- kotoran  yang  melekat  selanjutnya  dikeringanginkan. Setelah kering, sampel kemudian diserbukkan.

## Ekstraksi sampel

## Maserasi
Dimasukkan  300  gram  serbuk  simplisia  batang  kayu beta-beta (Lunasia  amara Blanco ) kedalam  bejana maserasi,  ditambahkan  1500  mL  pelarut  metanol 70%.  Direndam  selama  3  hari  ditempat  yang terlindung dari cahaya sambil sesekali diaduk, setelah itu disaring dengan kertas saring kemudian dilakukan remaserasi  sebanyak  2  kali.  Setelah  itu,  dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator.

## Refluks
Ditimbang  seksama  300  gram  serbuk  simplisia batang  kayu  beta-beta (Lunasia  amara Blanco ) , dimasukkan  kedalam  labu  alas  bulat  1000  mL, ditambahkan  1500  mL  metanol  70%,  direfluks  pada suhu 40°C selama 3 jam, diangkat dan disaring. Lalu dipekatkan dengan menggunakan rotary evaporator .

## Sokletasi
Dipasang  alat  sokletasi,  kemudian  sampel  sebanyak 300 gram dibungkus dengan  kertas  saring, kemudian dimasukkan ke dalam alat soklet, dimasukkan pelarut metanol 70% sebanyak 1500 mL kedalam labu soklet 1000  mL.  Dilakukan  sokletasi  dengan  suhu  40°C sampai tetesan siklus tidak berwarna lagi atau kurang lebih  selama  3  jam.  Ekstrak  cair  yang  diperoleh kemudian  dipekatkan  dengan  menggunakan rotary evaporator .

## Uji Kualitatif Fenolik

## Uji fenolik
Ekstrak 100 mg dimasukkan ke dalam tabung reaksi, kemudian  ditambahkan  dengan  pelarut  metanol secukupnya,  lalu  ditambahkan  3  tetes  larutan  FeCl 3 . Terbentuknya  warna  hijau,  merah,  ungu,  biru,  dan hitam yang kuat menunjukkan adanya senyawa fenol dalam bahan (Alfian & Susanti, 2012).

## Identifikasi fenolik
Ekstrak batang kayu beta-beta ( L. Amara Blanco) dan pembanding  asam  galat  dilarutkan  dengan  metanol kemudian  ditotolkan  masing-masing  pada  lempeng KLT  (kromatografi  lapis  tipis)  dan  dielusi  dengan menggunakan  eluen  n-Heksan  :  etil  asetat  (2:8). Setelah  dielusi,  lempeng  KLT  kemudian  dilihat dibawah lampu UV 254 dan 366 nm dan selanjutnya dihitung  nilai  Rf.  Jika  nilai  Rf  sampel  dan pembanding sama maka sampel mengandung fenolik (Marliani et al., 2014).

## Analisis Kuantitatif Senyawa Fenolik
Pembuatan Pereaksi Na 2 CO 3 7%
Ditimbang  sebanyak  3,5  g  Na 2 CO 3, kemudian dilarutkan dengan aquadest hingga 50 mL (Ahmad et al ., 2015).

## Pembuatan Larutan Standar Asam Galat
Larutan  standar  asam  galat  100  ppm  dibuat  dengan menimbang  10  mg  asam  galat  dilarutkan  dengan metanol  70%  hingga  volume  100  mL.  Dari  larutan tersebut dipipet 1,5; 2; 2,5; 3; 3,5 mL dan dicukupkan dengan  metanol  hingga  10  mL,  sehingga  dihasilkan konsentrasi 15, 20, 25, 30 dan 35 ppm (Ahmad et al ., 2015).
Pembuatan Larutan Ekstrak Kayu Beta-beta
Ditimbang  20  mg  ekstrak  kayu  beta-beta (Lunasia amara Blanco ), kemudian  dilarutkan  dengan  20  mL metanol,  sehingga  dihasilkan  larutan  ekstrak  kayu beta-beta  dengan  konsentrasi  1000  ppm (Ahmad et al ., 2015).
Penentuan Panjang Gelombang
Penentuan  panjang  gelombang  maksimum  dilakukan dengan membuat larutan standar asam galat 100 ppm dengan cara menimbang 10 mg asam galat dilarutkan dengan  metanol  70%  hingga  volume  100  mL. Kemudian  dipipet  2  mL  lalu  ditambahkan  0,4  mL reagen  Folin-Ciocalteau,  kemudian  dihomogenkan dan didiamkan selama 8 menit, lalu ditambahkan 4,0 mL  larutan  Na 2 CO 3 7%  kemudian  dikocok  hingga homogen.  Ditambahkan  aquabidestillata  hingga  10 mL, lalu didiamkan selama 2 jam pada suhu ruangan kemudian  diukur  absorbansinya  pada  panjang gelombang 400-800 nm (Alfian & Susanti, 2013).
Pengukuran Larutan Standar Asam Galat
Untuk masing-masing konsentrasi 15, 20, 25, 30 dan 35 ppm ditambahkan 0,4 mL reagen Folin-Ciocalteau dikocok  dan  dibiarkan  4-8  menit,  ditambahkan  4,0 mL  larutan  Na 2 CO 3 7%  kocok  hingga  homogen. Ditambahkan  aquabidestillata  hingga  10  mL  dan didiamkan  selama  2  jam  pada  suhu  ruangan.  Diukur absorbansi  pada  panjang  gelombang  748  nm,  dibuat kurva  kalibrasi  hubungan  antara  konsentrasi  asam galat  (μg/mL)  dengan  absorbansi (Ahmad et  al ., 2015).
Penetapan Kadar Fenolik Total
Penetapan  kadar  fenolik  total  batang  kayu  beta-beta (Lunasia  amara Blanco ). Dipipet  sebanyak  2  mL larutan  ekstrak  batang  kayu  beta-beta,  kemudian sampel  ditambahkan  dengan  0,4  mL  reagen  Folin- Ciocalteau  dikocok  dan  dibiarkan  4-8  menit, ditambahkan  4,0  mL  larutan  Na 2 CO 3 7%  kocok
hingga homogen. Tambahkan aquabidestillata hingga 10  mL  dan  didiamkan  selama  2  jam  pada  suhu ruangan. Ukur serapan pada panjang gelombang 748 nm.  Dilakukan  5  kali  pengulangan  sehingga  kadar fenol  yang  diperoleh  hasilnya  didapat  sebagai  mg ekuivalen asam galat/g ekstrak (Ahmad et al ., 2015).

## Analisis data rendemen ekstrak
Analisis data digunakan untuk mengetahui persentasi ekstrak  yang  dihasilkan  dari  100  gram  simplisia batang kayu beta-beta ( Lunasia amara Blanco).
% Rendemen = Bobot   ekstrak   (akhir ) Bobot   simplisia  (awal ) x 100%

## Analisis data kadar fenolik
Kadar  fenolik  yang  diperoleh  dinyatakan  sebagai penyetaraan asam galat (mgGAE/g ekstrak). Analisis data  terlebih  dahulu  dilakukan  dengan  metode  kurva standar,  regresi  linear  y  =  bx  +  a  dibuat  berdasarkan data  absorbansi  dan  konsentrasi  dari  larutan  standar. Kemudian  dihitung  total  senyawa  fenolik  dengan rumus:
Volume larutan  ×  konsentrasi awal (X) ×  Faktor pengenceran Berat Ekstrak

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Masyarakatnya  Sulawesi  Selatan  khususnya  pada daerah  kabupaten  Barru  menggunakan  batang  kayu beta-beta  sebagai  obat  demam  dengan  cara  direbus kemudian  airnya  diminum  dan  pada  daerah  Bone rebusan  kayu  beta-beta  berkhasiat  sebagai  obat  kuat pada  pria,  dari  beberapa  penelitian  juga  dapat digunakan  sebagai  antiinflamasi (Hasnaeni et  al ., 2016).
Pada  penelitian  ini  digunakan  sampel  batang  kayu beta-beta  yang  diperoleh  dari  Desa  Kamiri, Kecamatan  Balusu,  Kabupaten  Barru,  Sulawesi Selatan,  yang  telah  melalui  proses  determinasi. Determinasi  pada  sampel  dilakukan  bertujuan  untuk memastikan  kebenaran  jenis  tanaman  atau  tumbuhan yang  akan  digunakan  dalam  penelitian.  Dari  hasil determinasi  bahwa  sampel  tersebut  merupakan  jenis tanaman Lunasia amara Blanco.
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  menentukan rendemen dan kadar fenolik yang tertinggi berdasarkan beberapa metode ekstraksi yaitu
maserasi,  refluks,  dan  soklet  dengan  menggunakan metode spektrofotometer UV-Vis.
Senyawa  fenolik  merupakan  senyawa  biologi  aktif yang  memiliki  peran  besar  terhadap  kepentingan manusia.  Senyawa  fenolik  merupakan  molekul  yang bertindak  sebagai  antioksidan  untuk  mencegah penyakit  jantung,  mengurangi  peradangan  serta mengurangi  tingkat  mutagenesis  pada  sel  manusia (Khoddami et al., 2013).
Batang  kayu  beta-beta  yang  diperoleh,  dibersihkan terlebih  dahulu,  kemudian  dikeringkan  pada  ruangan yang  terlindung  dari  sinar  matahari.  Sampel kemudian diserbukkan untuk memperkecil ukurannya dan  memperluas  area  kontak  antara  serbuk  simplisia dengan  cairan  penyari,  sehingga  kandungan  zat aktifnya  banyak  tersari  (Agustina et  al., 2014) . Selanjutnya, simplisia batang kayu beta-beta diekstraksi  dengan  menggunakan  metode  maserasi, refluks dan soklet. Ketiga metode tersebut digunakan untuk  mengetahui  metode  ekstraksi  yang  digunakan untuk  sampel  batang  kayu  beta-beta  dengan  melihat jumlah  rendemen  dan  kadar  fenolik  yang  paling tinggi.  Pelarut  yang  digunakan  untuk  mengekstrak sampel  kayu  beta-beta  adalah  pelarut  metanol, digunakan  pelarut  metanol  karena  pelarut  ini  hampir melarutkan  senyawa  organik  yang  ada  pada  sampel, mudah  menguap  sehingga  mudah  dihilangkan  dari ekstrak  ekstrak  (Andayani,  2008).  Pelarut  yang bersifat  polar  mampu  melarutkan  fenol  lebih  baik sehingga  kadarnya  dalam  ekstrak  menjadi  tinggi (Moein  &  Mahmood,  2010).  Menurut  Eskin & Przybylski . (2001), metanol merupakan pelarut yang paling baik dalam mengekstrak senyawa fenol.
Metode maserasi adalah metode ekstraksi cara dingin dan metode ini yang paling sederhana dimana cairan penyari  akan  menembus  dinding  sel  tanaman  dan akan  masuk  ke  rongga  sel  yang  mengandung  zat aktif,  sehingga  zat  aktif  yang  merupakan  larutan terpekat  akan  didesak  keluar  dari  sel  karena  adanya perbedaan  konsentrasi  antara  larutan  zat  aktif  yang didalam sel dengan yang diluar sel (Wahyulianingsih et al., 2016).
Metode  refluks  adalah  metode  ekstraksi  dengan bantuan  pemanasan.  Hal  yang  sangat  berpengaruh terhadap  ekstraksi  menggunakan  refluks  adalah adanya  penambahan  pemanasan  dan  pelarut  yang digunakan  akan  tetap  dalam  keadaan  segar  karena adanya  penguapan  kembali  yang  terendam  pada bahan. Ekstraksi refluks digunakan untuk
mengekstraksi  bahan-bahan  yang  tahan  terhadap pemanasan  dan  memiliki  tekstur  yang  kasar  seperti batang, biji, akar (Adrian, 2000).
Metode  soklet  yaitu  metode  ekstraksi  panas  dingin. Pada  ekstraksi  ini  pelarut  dan  sampel  ditempatkan secara terpisah. Prinsipnya adalah ekstraksi dilakukan secara  terus-menerus  menggunakan  pelarut  yang relatif  sedikit.  Bila  ekstraksi  telah  selesai  maka pelarut  dapat  diuapkan  sehingga  akan  diperoleh ekstrak.  Biasanya  pelarut  yang  digunakan  adalah pelarut-pelarut yang mudah menguap atau mempunyai titik didih yang rendah (Leba, 2017).
Ekstrak  metanol  yang  diperoleh  dari  batang  kayu beta-beta  dengan  metode  maserasi  sebanyak  7,057 gram,  metode  refluks  sebanyak,  dan    4,8347  gram, dan  metode  sokletasi  sebanyak  2,8805  gram. Sedangkan  hasil  rendemen  dari  metode  maserasi sebanyak  2,352%,  metode  refluks  sebanyak  1,611%, dan  metode  sokletasi  sebanyak  0,960%.  Hasil rendemen yang paling tinggi terdapat pada rendemen ekstrak  maserasi  diduga  karena  dari  waktu  ekstraksi yang  dilakukan  yaitu  selama  3  hari  kemudian dilakukan remaserasi sebanyak 2 kali jadi kemungkinan  proses  penarikan  senyawanya  lebih maksimal  dibandingkan  dengan  metode  lainnya. Hasil  rendemen  dari  suatu  sampel  sangat  diperlukan karena  untuk  mengetahui  banyaknya  ekstrak  yang diperoleh  selama  proses  ekstraksi.  Selain  itu,  data hasil  rendemen  tersebut  ada  hubungannya  dengan senyawa  aktif  dari  suatu  sampel  sehingga  apabila jumlah  rendemen  semakin  banyak  maka  jumlah senyawa  aktif  yang  terkandung  dalam  sampel  juga semakin banyak. Sebagaimana yang  telah dilaporkan Harbone (1987) bahwa tingginya senyawa aktif yang terdapat  pada  suatu  sampel  ditunjukkan  dengan tingginya jumlah rendemen yang dihasilkan. Adapun hasil  rendemen  yang  diperoleh  dari  ekstrak  batang kayu beta-beta dapat dilihat pada tabel 1.
Tabel  1.  Hasil  perhitungan  persen  rendemen  ekstrak metanol  batang  kayu  beta-beta  ( Lunasia  amara Blanco)
Metode ekstraksi Berat sampel (g) Berat ekstrak (g) Rendemen ekstrak (%) Maserasi 7,057 2,352 Refluks 300 4,8347 1,611 Soklet 2,8805 0,960
Uji  kualitatif  untuk  mengetahui  kandungan  fenolik terhadap  ekstrak  metanol  batang  kayu  beta-beta dilakukan  dengan  menggunakan  uji  tabung  dengan penambahan  pereaksi  spesifik  yaitu  FeCl 3. Ekstrak maserasi  dilarutkan  dengan  metanol  kemudian ditambahkan  pereaksi  FeCl 3 menghasilkan  warna hitam  pekat  yang  menunjukkan  bahwa  ekstrak maserasi  mengandung  senyawa  fenolik.  Ekstrak refluks  dilarutkan  dengan  sedikit  pelarut  metanol kemudian  ditambahkan  dengan  pereaksi  FeCl 3 menghasilkan warna hijau kehitaman yang menunjukkan  bahwa  ekstrak  tersebut  mengandung senyawa  fenolik.  Dan  selanjutnya,  eksktrak  soklet dilarutkan  dengan  sedikit  pelarut  metanol  kemudian ditambahkan dengan pereaksi FeCl 3 juga
menghasilkan warna hijau kehitaman yang menunjukkan  bahwa  ekstrak  tersebut  mengandung senyawa  fenolik.  Sebagaimana  yang  dilaporkan  oleh Harbone (1987) bahwa uji fenolik dengan penambahan  pereaksi  FeCl 3 menunjukkan  hasil positif yang ditunjukkan dengan terjadinya perubahan warna dari warna kecoklatan menjadi biru kehitaman, hijau  kehitaman  atau  hitam  pekat.  Adapun  hasil  uji kualitatif senyawa fenolik ekstrak metanol kayu beta- beta dapat dilihat pada tabel 2.
Tabel  2.  Hasil  uji  kualitatif  senyawa  fenolik  ekstrak tanaman kayu beta-beta ( Lunasia amara Blanco) Metode ekstraksi Uji fenolik (FeCl 3 ) Hasil pengamatan Berdasarkan literatur Maserasi + Berwarna hitam pekat Berwarna hijau kehitaman, hitam pekat (Harbone, 1987) Refluks + Berwarna hijau kehitaman Soklet + Berwarna hijau kehitaman
Keterangan:
(+) = mengandung senyawa fenolik

## (-) = tidak mengandung senyawa fenolik
Analisis  kualitatif  dilakukan  untuk  memastikan adanya  senyawa  tanin  dalam  (Harborne  1987), ekstrak  metanol  batang  kayu  beta-beta  mengandung senyawa  fenolik  yang  dapat  dideteksi  dengan  uji KLT  menggunakan  eluen  n-Heksan:etil  asetat  (2:8). Hasil  KLT  dapat  dilihat  pada  gambar  16 menunjukkan  bahwa  sampel  metanol  batang  kayu
beta-beta  mengandung  senyawa  fenolik  karena  nilai Rfnya sama dengan pembanding asam galat.
Selanjutnya dilakukan uji kuantitatif terhadap ekstrak metanol  batang  kayu  beta-beta  untuk  menentukan kadar fenolik dengan menggunakan metode spektrofotometri. Metode ini dipilih karena mempunyai  kepekaan  analisis  yang  cukup  tinggi, dapat  menganalisis  suatu  zat  dalam  jumlah  kecil, pengerjaannya  mudah,  sederhana,  cukup  sensitif  dan selektif (Munson, 1991).
Penentuan  kadar  fenolik  digunakan  standar  sebagai larutan  pembanding  yaitu  asam  galat.  Penggunaan asam  galat  sebagai  standar  karena  asam  galat termasuk  dalam  senyawa  fenolik  turunan  asam hidroksilbenzoat yang tergolong asam fenol sederhana  dan  juga  memiliki  ketersediaan  substansi yang stabil dan murni (Syarif et al., 2016).
Penetapan  kadar fenolik  juga digunakan reagen folin ciocalteau  karena  senyawa  fenolik  dapat  bereaksi dengan  Folin  membentuk  larutan  berwarna  yang dapat  diukur  absorbansinya.  Prinsip  dari  metode folin-ciocalteau adalah terbentuknya senyawa kompleks  berwarna  biru  yang  dapat  diukur  pada panjang gelombang maksimal. Pereaksi ini mengoksidasi  fenolat  (garam  alkali)  dan  gugus fenolik-hidroksi mereduksi asam heteropoli (fosfomolibdat-fosfotungstat)  yang  terdapat  dalam pereaksi    Folin-ciocalteau  menjadi  suatu    kompleks molybdenum-tungsten (Alfian  &  Susanti,  2012). Senyawa  fenolik  bereaksi  dengan  reagen  hanya dalam suasana basa agar terjadi disosiasi proton pada senyawa  fenolik  menjadi  ion  fenolat,  sehingga ditambahkan larutan Na 2 CO 3 (Apsari et al., 2011).
Dalam  penentuan  kadar  fenolik,  langkah  awal  yang dilakukan  adalah  penentuan  panjang  gelombang maksimal  dengan  cara  mengukur  absorbansi  larutan standar  pada  panjang  gelombang  400-800  nm.  Dan pada  penelitian  ini  diperoleh  panjang  gelombang maksimal  untuk  larutan  standar  adalah  748  nm. Larutan  standar  dengan  konsentrasi  15,  20,  25,  30, dan  35  ppm  kemudian  diukur  absorbansinya  pada panjang  gelombang  748  nm  yang  diperoleh  dari pengukuran absorbansi tertinggi dari asam galat yang diukur  menggunakan  spektrofotometri.  Adapun  hasil pengukuran absorbansi  asam  galat dapat dilihat pada tabel 3.
Tabel 3. Hasil pengukuran absorbansi larutan standar asam galat
Konsentrasi (ppm) Absorbansi 10 0,197 15 0,290 20 0,353 25 0,436 30 0,498 35 0,597
Gambar 1. Kurva kalibrasi asam galat

## KESIMPULAN
Hasil penelitian menunjukkan bahwa:
1. Metode ekstraksi berpengaruh terhadap rendemen ekstrak  dari  batang  kayu  beta-beta  ( Lunasia amara Blanco).  Metode  maserasi  menghasilkan rendemen  yang  paling  tinggi  yaitu  sebesar 2,352%,  kemudian  refluks  sebesar  1,611%,  dan soklet 0,960%.
2. Metode  ekstraksi  berpengaruh  terhadap  kadar fenolik  ekstrak  batang  kayu  beta-beta  ( Lunasia amara Blanco).  Kadar  fenolik  untuk  metode maserasi  sebesar  6,6548%  GAE,  untuk  metode refluks  sebesar  7,3645%  GAE, dan  untuk  metode sokletasi sebesar 7,4806% GAE.

## DAFTAR PUSTAKA
Adhiyanto,  E.  (2001).  Kajian  Beberapa  Aspek Ekologi  Kemaitan  ( Lunasia  amara Blanco)  di Tanaman  Nasional  Meru  Betiri,  Jawa  Timur. Fakultas  Kehutanan  Institut  Pertanian  Bogor. Bogor.
Adrian,  P.  (2000). Analisa  Ekstraktif  Tumbuhan Sebagai  Sumber  Bahan  Obat .  Universitas Negeri Andalas Padang: Pusat Penelitian.
Agustina,  T.,  Sunyoto,  &  Agustina,  A.  (2014). Penetapan  Kadar  Tanin  Pada  Daun  Sirih Merah ( Piper Crocatum Ruiz) Secara Spektrofotometri UV-VIS. Journal Of Pharmacy Science .
Ahmad, A.R., Juwita., Ratulangi, S. A. D.,  & Malik, A.  (2015).  Penetapan  Kadar  Fenolik  dan Flavonoid  Total  Ekstrak  Buah  dan  Daun Patikala (Etlingera  elatior (Jack)  R.M.SM). Pharmaceutical  Sciences  and  Research , 2 (1), 1-10.
Alfian,  R.,  &  Susanti,  H.  (2012).  Penetapan  Kadar Fenolik Total Ekstrak Metanol Kelopak Bunga Rosella Merah (Hibiscus sabdariffa L.) dengan Variasi Tempat Tumbuh secara Spektrofotometer UV-Vis. Jurnal Ilmu Kefarmasian , 2 (1), 75-78. Andayani, R. (2008). Penentuan Aktivitas
Antioksidan  Kadar  Fenolat  Total  dan  Likopen pada  Buah  Tomat  ( Solanamum  lycopersicum L.). Jurnal  Sains  dan  Teknologi  Farmasi , 13(1).
Apsari,  Pramudita,  D.,  &  Susanti,  H.  (2011). Penetapan  Kadar  Fenolik  Total  Ekstrak Metanol  Kelopak  Bunga  Rosella  merah ( Hibiscus  sabdariffa  Linn )  dengan  Variasi Tempat  Tumbuh  secara  Spektrofotometri. Jurnal Ilmiah Kefarmasian, 2 (1).
Arnida,  Donatus,  I.  A.,  &  Wahyuono,  S.  (2003).
Isolasi  fraksi  aktif  afrodisiaka  dari  kayu  beta- beta  ( Lunasia  amara Blanco). Majalah Farmasi Indonesia, 14 (4).
Balasundram,  N.,  Sundram,  Kk.,  &  Samman,  S.
(2006).  Phenolic  componds  in  plants  and agriindustrial by-products: Antioxidant activity,  occurrence,  and  potential  uses. Food Chemistry , 99 .
Djamal,  R.  (2010). Kimia  Bahan  Alam:  Prinsip- Prinsip Dasar Isolasi dan Identifikasi . Padang:
Universitas Baiturrahmah.
y = 0.015x + 0.047 R² = 0.996 0 0.5 1 0 20 40 A b so rb an si Konsentrasi Asam Galat absorbansi Linear
(absorbansi)
Eskin,  N.  A.  M.,  &  Przybylski,  R..  (2001). Antioxidants  and  Shelf  Life  of  Foods .  Florida: CRC Press LLC.
Harborne,  J.  B.  (1987). Metode  Fitokimia,  Penuntun Cara  Modern  Menganalisa  Tumbuhan.  (Edisi II) . Bandung: Penerbit ITB.
Hasnaeni,  Sudarsono,  Arief,  N.,  &  Sitarina,  W.
(2016).  Kajian  Efek  Anti  Radang  Kayu  Beta- beta  ( Lunasia  amara Blanco). PHARMACON Jurnal lmiah Farmasi, 5 (2).
Hasnaeni.  (2017).  Aktivitas  Anti  Inflamasi  Ekstrak Etanol  Kayu  Beta-beta  ( Lunasia  amara Blanco)  pada  Mencit  Model  Rheumatoid
Arthritis  dan  Identifikasi  Senyawa  Penanda.
Fakultas  Ilmu  Farmasi  Universitas  Gadjah Mada. Yogyakarta.
Khoddami,  A.,  Wilkes,  M.  A.,  &    Roberts,  T.  H.
(2013).  Technique  For  Analysis  of  Plant Phenolic Compound. Molecule 18 , 2328.
Leba,  M.  A.  U.  (2017). Ekstraksi  dan  Real Kromatografi , Yogyakarta: Deepublish.
Marliani,  L.,  Sari,  N.  I.,  &  Yuniarti,  S.  (2014).
Aktivitas Antioksidan dan Kandungan
Senyawa  Fenolat  Biji  Jamblang  ( Syzygium cumini (L.)  Skeels). Jurnal Farmasi Galenika ,
01 (02), 43-47.
Moein,  S.,  &  Mahmood,  M.  R.  (2010).  Relationship between  antioxidant  properties  and  phenolics in Zhumeria  majdae . Journal  of  Medical Plants Research, 4 (7), 517-521.
Munson,  J.  W.  (1991). Analisis  Farmasi  Metode Modern . Surabaya: Airlangga University Press.
Muscia, G. C., Buldain, G. Y.,  & Asis, S. E. (2014). Design,  Syntesis  and  Evaluation  of  Acridine and  Fused-Quinolone  Derrivates  as  Potensial Anti-tuberculosis  Agents. Eur.  J. Med. Chem ., 73 .
Syarif,  R.  A.,  Sari,  F.,  &  Ahmad,  A.  R.  (2016). Rimpang Kecombrang (Etlingera elator Jack.)
Sebagai  Sumber  Fenolik. Jurnal  Fitofarmaka Indonesia, 2 (2), 104-105.
Wahyulianingsih, Handayani, S., & Malik, A. (2016). Penetapan kadar Flavonoid Total Ekstrak Daun
Cengkeh  ( Syzygium  aromaticum (L.)  Merr  dan Perry). Jurnal  Fitofarmaka  Indonesia,  3 (2),
189.
Zubair,  M.  S.,  &  Subehan.  (2010).  Molecular Docking  of  Lunacridine  from Lunasia  amara to  DNA:  Its  Inhibiton  and  Interaction  Study Correlated with the Cytotoxic Activity on P388 Murine Leukemia Cells. Indonesian Journal of Cancer Chemoprevention , 1 (2).