## PENETAPAN KADAR FENOLIK TOTAL DAN KADAR TANIN TOTAL
EKSTRAK ETANOL 96% DAUN WIJAYA KUSUMA ( Epiphyllum oxypetalum (DC.) Haw.) DENGAN METODE SPEKTROFOTOMETRI

## DETERMINATION OF TOTAL PHENOLIC LEVELS AND TOTAL TANIN
CONTENTS OF 96% ETHANOL EXTRACT WIJAYA KUSUMA LEAF (Epiphyllum oxypetalum (DC.) Haw.) USING SPECTROPHOTOMETRY

## METHOD
1 Agustin Yumita * , 2 Ni Putu Ermi Hikmawanti, 3 Riskha Fitri Andini, 4 Iis Nurwiati 1,2,3,4 Program Studi Farmasi, Fakultas Farmasi dan Sains, Universitas Muhammadiyah Prof. DR. HAMKA, Jalan Delima II/IV Jakarta Timur, Indonesia 13460.
Info Artikel Abstrak Sejarah Artikel : Submitted:2021-12-18 Accepted : 2023-12-07 Publish Online : 2023- 12-23
Latar  belakang: Indonesia  memiliki  berbagai  macam  tanaman  hias,  salah satunya  merupakan  spesies  kaktus.  Spesies  kaktus  yang  paling  banyak dibudidayakan  adalah Epiphyllum  oxypetalum (DC.)  Haw.  atau  dikenal  dengan nama  Wijaya  Kusuma.  Berdasarkan  uji  fitokimia,  ekstrak  etanol  daun  Wijaya Kusuma  dilaporkan  mengandung  senyawa  golongan  flavonoid,  fenol,  tanin  dan saponin. Tujuan: Ekstrak  etanol  96%  daun  wijaya  kusuma  akan  ditentukan kadar fenolik total dan kadar tannin total menggunakan metode spektrofotometri. Metode: Penentuan  kadar  fenolik  total  menggunakan  metode  Folin-Ciocalteu dan asam galat sebagai pembanding. Penentuan kadar tannin total dengan metode Vanilin-HCl  dan  katekin  sebagai  pembanding. Hasil: Hasil  penapisan  fitokimia dan identifikasi KLT mengandung senyawa fenol dan tannin. Kadar fenolik total ekstrak  etanol  daun E.  oxypetalum sebesar  369,7  ±  57,675 mg  GAE/g  ekstrak, sedangkan kadar tannin total sebesar 31,56 ± 1,285 %b/b EK. Simpulan: Ekstrak etanol 96% daun Wijaya Kusuma menunjukkan hasil positif mengandung fenolik dan tannin yang ditunjukkan dengan kadar total senyawa tersebut.
Kata Kunci:
Fenolik, Tanin, Spektrofotometri, Epiphyllum oxypetalum .
Keywords: Phenolics,  Tannins, Spectrophotometry,
Epiphyllum oxypetalum . Abstract Background: One  of  the  numerous  ornamental  plants  found  in  Indonesia  is  a cactus  variety.  The  most  extensively  cultivated  cactus  species  is  Epiphyllum oxypetalum  (DC.)  Haw.,  often  known  as  Wijaya  Kusuma.  Based  on phytochemical  screening,  it  is  known  that  the  ethanolic  extract  of  Wijaya Kusuma  contains  flavonoids,  phenolic,  tannins  and  saponins. Objective: The total phenolic content and total tannin content of a 96 percent ethanol extract of wijaya  kusuma  leaves  will  be  measured  using  spectrophotometric  techniques. Method: Total  phenolic  content  was  measured  using  the  Folin-Ciocalteu method  with  gallic  acid  as  a  comparison,  and  total  tannin  content  was measured  using  the  Vanilin-HCl  method  with  catechin  as  a  comparison. Results :  The  results  of  phytochemical  screening  and  TLC  identification contained phenolic compounds and tannins. The total phenolic content of the E. oxypetalum leaf extract  was 369.7 ± 57.675 mg GAE/g  extract,  while the total tannin  content  was  31.56  ±  1.285  %w/w  EK. Conclusions: The  96%  ethanol extract  of  Wijaya  Kusuma  leaves  showed  positive  results  containing  phenolic and tannin as indicated by the total content of these compounds.

## PENDAHULUAN
Lingkungan memberikan banyak manfaat bagi kehidupan manusia. Pemanfaatan perkarangan merupakan  salah  satu  bentuk  eksplorasi  sumber  daya  alam  serta  lingkungan  yang  telah memberikan banyak kebaikan pada manusia dan makhluk hidup lainnya  (Nurmayulis & Hermita, 2015).
Menurut (Atmojo, 2015) menyebutkan bahwa masyarakat memiliki pengetahuan bagaimana memanfaatkan  tanaman  sebagai  obat  yang  kebanyakan  hanya  terbatas  pada  pengetahuan  empiris yang  merupakan  bentuk  komunikasi  masyarakat  terhadap  lingkungannya  terutama  pada tumbuhan.  Salah  satu  tanaman  yang  dimanfaatkan  masyarakat  Indonesia  adalah Epiphyllum oxypetalum (DC.)  Haw.  atau  yang  lebih  dikenal  dengan  nama  wijaya  kusuma.  Wijaya  kusuma merupakan  tanaman  yang  termasuk  spesies  kaktus  dalam  keluarga  cactaceae.  Wijaya  kusuma adalah  tanaman  kaktus  hias  yang  banyak  dibudidayakan  dalam  genusnya.  Tanaman  yang  di Indonesia  memiliki  banyak  makna  mistis  ini  nyatanya  merupakan  tanaman  asli  Meksiko  Selatan atau dikenal dengan sebutan Queen of the Night yang bunganya akan mekar di malam hari. Nama oxypetalum mengacu  pada  bentuk  dari  kelopak  yang  tajam  (Dandekar  et  al.,  2015;  Devi  et  al., 2018).
Tanaman  ini  dilaporkan  mempunyai  beberapa  aktivitas  farmakologi  yang  cukup  baik. Penelitian yang dilakukan (Dandekar et al., 2015) membuktikan bahwa ekstrak etanol daun wijaya kusuma mempunyai aktivitas antiinflamasi, analgesik, antioksidan dan antibakteri. Menurut Dwita et  al.,  (2019)    melaporkan  daun  wijaya  kusuma  efektif  dalam  mempercepat  penyembuhan  luka pada tikus diabetes dengan konsentrasi pemberian 20%. Sedangkan (Artini & Aryasa, 2019; Dwita et  al.,  2019) menyatakan  bunga  wijaya  kusuma  mampu  menurunkan  kadar  asam  urat  pada  dosis 400 mg/kgBB.
Fenolik  adalah  salah  satu  senyawa  metabolit  sekunder  yang  memiliki  aktivitas  antoksidan alami dalam tumbuhan. Umumnya senyawa fenolik alami berupa polifenol, salah satunya  adalah tannin (Dhurhania & Novianto, 2018)). Tanin adalah senyawa metabolit sekunder yang kompleks yang  sifatnya  larut  dalam  air.  Senyawa  tanin  mempunyai  kemampuan  dalam  mengendapkan protein dan pengkelat logam (Ashok & Upadhyaya, 2012).
Berdasarkan  hasil  penelitian  sebelumnya,  diketahui  ekstrak  etanol  daun  wijaya  kusuma dilaporkan memiliki kandungan senyawa golongan flavonoid, fenol, tanin dan saponin (Devi et al., 2018). Senyawa fenolik dan tannin dilaporkan memiliki banyak  aktivitas farmakologi yang cukup baik.  Sehingga  perlu  dilakukan  penentuan  kadar  fenolik  total  dengan  tehnik  spektrofotometri dengan  menggunakan  standar  asam  galat  sebagai  pembanding  dan  penentuan  kadar  tannin  total dengan  tehnik  spektrofotometri  dengan  pembanding  standar  katekin  terhadap  ekstrak  etanol  daun E. oxypetalum .

## METODE PENELITIAN

## Bahan dan Alat
Daun Epiphyllum  oxypetalum (DC.)  Haw  segar  diambil  dari  Balai  Penelitian  Tanaman Rempah  dan  Obat  (BALITRO,  Bogor)  dan  dideterminasi  di  Pusat  Pemanfaatan  dan  Inovasi Iptek, LIPI Cibinong, Jawa Barat. Etanol 96% (PT. RIV Chemicals, Indonesia), Etanol p.a (Merck KGaA, Jerman), dan asam galat dan katekin (Markherb, Indonesia) sebagai pembanding.
Peralatan  yang  dipakai  selama  penelitian  yakni:  maserator,  blender  Miyako  BL-152GF, Indonesia), Vacuum  rotary  evaporator seri  N-1200  BS  (EYELA,  Shanghai,  Cina), waterbath
(LOKAL  tipe  H-WBE-8L),  dan  Spektrofotometer  UV-Vis  Seri  UV-1601  (Shimadzu,  Kyoto, Jepang).
Pembuatan Simplisia Daun E. oxypetalum
Daun E. oxypetalum segar disortasi basah yang kemudian dicuci bersih menggunakan air yang mengalir.  Daunnya  yang  cukup  tebal  dirajang  untuk  mempermudah  proses  pengeringan. Pengeringan  dilakukan  selama  ±  12-14  hari  dengan  cara  dikering-anginkan  terhindar  dari  cahaya matahari langsung. Daun yang kering selanjutnya dihancurkan untuk memperkecil ukuran partikel menggunakan blender dan ukuran serbuk dihomogenkan menggunakan ayakan mesh 40.

## Metode Ekstraksi Maserasi
Serbuk  simplisia  kering  daun E.  oxypetalum sebanyak  1500  gram  dimaserasi  menggunakan pelarut  etanol  96%  di  suhu  ruang.  Sampel  direndam  selama  24  jam  dimana  6  jam  pertama dilakukan  pengadukan  secara  berkala.  Filtrat  yang  diperoleh  disaring  dengan  kertas  saring Whatmann  dan  residu  diremaserasi  sebanyak  3  kali  pengulangan  hingga  tersari  sempurna.  Filtrat dipekatkan  dengan vacuum  rotary  evaporator disuhu  50°C  yang  dilanjutkan  dengan waterbatch disuhu 50°C untuk memperoleh ekstrak kental (Kementerian Kesehatan Republik Indonesia, 2017).
Parameter Mutu Ekstrak Daun E. oxypetalum
Ekstrak  etanol  96%  daun E.  oxypetalum dilakukan  pengujian  organoleptic,  perhitungan rendemen  ekstrak,  susut  pengeringan  dengan  metode  gravimetri  dan  kadar  abu  dengan  mengikuti prosedur  yang  tercantum  dalam  Farmakope  Herbal  Indonesia  (Kementerian  Kesehatan  Republik Indonesia, 2017).

## Identifikasi Kualitatif Fenolik dan Tanin
Ekstrak  etanol  daun E.  oxypetalum sebanyak  50  mg  ditambahkan  air  panas  sebanyak  10ml, disaring dan filtrat dibagi dalam 4 tabung. Identifikasi ini mengacu pada prosedur yang tercantum dalam  (Hanani,  2015).    Tabung  I  sebagai  blanko,  tabung  II  ditambahkan  larutan  gelatin  1% sebanyak  2-3  tetes,  dan  tabung  III  ditambahkan  larutan  NaCl-gelatin  (larutan  gelatin  1%  dalam larutan  NaCl  10%,  perbandingan  1:1)  sebanyak  2-3  tetes.  Terbentuknya  endapan  putih menunjukkan  adanya  tannin  dalam  sampel.  Tabung  IV  ditambahkan  dengan  pereaksi  FeCl3  yang jika positif ditunjukkan dengan warna hijau kehitaman.

## Identifikasi KLT Senyawa Fenol dan Tanin
Lempeng  silica  gel  60  F 254 yang  sudah  diaktivasi  ditotolkan  sampel  ekstrak,  asam  galat sebagai  standar  fenolik  dan  katekin  sebagai  standar  tannin.  Fase  gerak  yang  digunakan  untuk  uji kualitatif KLT senyawa fenolik adalah etil asetat : n-heksana  dengan perbandingan 7:5. Sedangkan untuk  identifikasi  senyawa  tannin  fase  gerak  yang  digunakan  yaitu  butanol  :  asam  asetat  :  air dengan perbandingan 4:1:1 yang sudah dibuat sehari sebelumnya dan diambil lapisan atasnya. Spot noda diamati dibawah lampu UV 254nm dan lampu UV 366 nm. Penampak bercak yang digunakan yakni pereaksi FeCl 3 5%.

## Penentuan Kadar Fenolik dengan Spektrofotometri
Kadar  fenolik  total  ekstrak  etanol  daun E.  oxypetalum ditentukan  dengan  menggunakan pereaksi  Folin  ciocalteu  yang  kemudian  diukur  dengan  spektrofotometer  (Blainski  et  al.,  2013). Pembuatan  kurva  kalibrasi  menggunakan  larutan  asam  galat  sebagai  standar  dibuat  rangkaian
konsentrasi 212, 370, 528, 686, dan 844 µg/ml. Hubungan konsentrasi larutan asam galat sebagai x dengan  absorbansinya  sebagai  y  diplot  sampai  diperoleh  persamaan  garis  linier  y=bx±a.  Ekstrak etanol  daun E.  oxypetalum ditambahkan  dengan  pereaksi  Folin  ciocalteu  yang  telah  diencerkan (1:10)  dan    larutan  Na 2 CO 3 7,5%,  diinkubasi  60  menit  selanjutnya  diukur  absorbansinya  dengan alat spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 741,00 nm disuhu ruang. Pengujian sampel dilakukan  3  kali  pengulangan.  Kadar  fenolik  total  dinyatakan  sebagai  miligram  ekuivalen  asam galat tiap 1 gram ekstrak.

## Penentuan Kadar Tanin dengan Spektrofotometri
Prosedur  penentuan  kadar  tannin  dengan  metode  ini  mengacu  pada  prosedur  (Nur,  2020). Larutan sampel dipipet sebanyak 1 ml dimasukan kedalam labu ukur 25ml, lalu ditambahkan 1 mL reagen  vanilin  10%    (dalam  etanol  95%)  dan  ditambahkan  2  mL  larutan  HCl  pekat.    Larutan diinkubasi  di  suhu  ruang  selama  45  menit.  Absorbansi  larutan  diukur  menggunakan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang  gelombang  500  nm.  Pengujian  sampel  dilakukan  3  kali pengulangan. Kadar tanin dihitung sebagai mg ekivalen katekin (EC)/g ekstrak atau %b/b EK.

## HASIL PENELITIAN
Pemeriksaan mutu ekstrak  etanol 96% daun E. oxypetalum dapat dilihat pada Tabel 1 . Hasil penelitian menunjukkan bahwa persentase rendemen ekstrak sebesar 5,75%. Kadar abu total yang dilakukan  dengan  3  kali  pengulangan  menunjukkan  hasil  1,69%  dan  hasil  susut  pengeringan diperoleh 5,49%.
Hasil identifikasi kualitatif tannin dimana tabung II diberi penambahan gelatin dan tabung III diberi  gelatin-NaCl  menunjukkan  hasil  berupa  terbentuknya  endapan  putih.  Sedangkan  tabung  IV yang  ditambahkan  pereaksi  FeCl 3 menunjukkan  perubahan  warna  menjadi  hijau  kehitaman.  Hasil skrining  ditunjukkan  pada Tabel  2 . Profil  KLT  sampel  ekstrak  dengan  pembanding  standar  asam galat  menunjukkan  warna  spot  noda  yang  sama  setelah  disemprot  dengan  FeCl 3 dan  nilai  Rf keduanya 0,7. Sedangkan  untuk profil KLT senyawa tannin menunjukkan nilai Rf sampel  ekstrak etanol E.  oxypetalum ketika  diamati  dibawah  sinar  UV254,  dan  setelah  disemprot  dengan  FeCl 3 diperoleh  nilai  Rf  0,82,  dan  nilai  Rf  pada  pembanding  katekin  baik  di  UV254,  dan  setelah disemprot FeCl 3 menunjukkan nilai Rf yang sama. Analisis dengan kromatografi lapis tipis sampel ekstrak etanol E. oxypetalum dengan pembanding standar dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 1. Paramater Mutu Ekstrak Etanol 96% Daun E. oxypetalum
No. Jenis Uji Hasil 1 Organoleptis Bentuk Ekstrak kental Warna Coklat kehitaman Bau Rasa Khas Agak pahit 2 Rendemen Ekstrak 5,75% 3 Kadar abu total 1,69% 4 Susut Pengeringan 5,49%
Tabel 2. Hasil Identifikasi Kualitatif Fenolik - Tanin Ekstrak Etanol 96% Daun E. oxypetalum
Tabel 3. Identifikasi Kualitatif KLT Fenolik dan Tanin ekstrak Etanol 96% Daun E.
Oxypetalum
Berdasarkan Gambar 1 . rentang konsentrasi asam galat yang digunakan adalah 212 – 847 ppm.  Larutan  standar  asam  galat  adalah  senyawa  golongan  fenolik  turunan  dari  asam hidroksibenzoat yang sifatnya stabil dan sederhana (Sari & Ayuchecaria, 2017). Kurva kalibrasi asam galat menunjukkan persamaan regresi linier y = 0,0003x ± 0,2179 dengan nilai R sebesar 0,9983.  Dalam  pengukuran  senyawa  fenolik  total  dilakukan  3  kali  pengulangan  dengan  hasil kadar  fenolik  total  senyawa  ekstrak  daun  etanol E.  oxypetalum adalah  369,7  ±  57,675 mg GAE/g  ekstrak  yang  menyatakan  dalam  satu  gram  ekstrak  etanol  daun  wijaya  kusuma  setara dengan 369,7 mg asam galat.
Berdasarkan Gambar  2. rentang  konsentrasi  katekin  yang  digunakan  untuk  penentuan kurva baku katekin adalah 57 ppm – 225 ppm. Kurva kalibrasi katekin menghasilkan persamaan garis linier y = 0,015x + 0,1978 dengan nilai r = 0,9998. Nilai r yang mendekati 1 menunjukkan persamaan  regresi  tersebut  adalah  linier.    Kandungan  tannin  dalam  sampel  ditentukan berdasarkan penambahan reagen vanillin 10%. Sebagian besar senyawa katekin dan derivatnya dapat  dideteksi  dengan  penambahan  vanillin  HCl  yang    memberikan  warna  merah  (Macek, 1972). Larutan senyawa kompleks berwarna merah diukur serapannya pada panjang gelombang 500nm.    Pengujian  dikerjakan  dengan  3  kali  pengulangan.  Hasil  penetapan  kadar  tannin
No. Pereaksi Hasil 1 Gelatin 1% + 2 Gelatin-NaCl + 3 FeCl 3 + Sampel Sebelum disemprot FeCl 3 (UV254) Setelah disemprot FeCl 3 Nilai Rf
Fenolik
Ekstrak  Etanol 96% Daun E. oxypetalum Coklat tua/Hitam Hijau kecokelatan 0,7 Asam galat Coklat tua/Hitam Hijau kecokelatan 0,7 Tanin Ekstrak  Etanol 96% Daun E. oxypetalum Coklat tua/Hitam Hijau kecokelatan 0,82 Katekin Coklat tua/Hitam Hijau kecokelatan 0,82
menggunakan  metode  spektrofotometri  diperoleh  kadar  tannin  total  ekstrak  etanol E. oxypetalum sebesar 31,56 ± 1,285%b/b EK.
Gambar 1. Kurva Kalibrasi Asam Galat

## Gambar 2. Kurva Kalibrasi Katekin

## PEMBAHASAN
Maserasi  banyak  dipilih  karena  pengerjaannya  yang  cukup  sederhana  dan  murah,  akan tetapi  proses  ekstraksinya  membutuhkan  waktu  yang  cukup  lama  (Naviglio  et  al.,  2019). Maserasi digunakan dengan tujuan memaksimalkan perolehan senyawa tannin yang terkandung dalam  sampel.  Pelarut  etanol  96%  yang  dipakai  dalam  penelitian  ini  bertujuan  untuk  menarik senyawa  tannin  yang  terkandung  dalam  sampel.  Etanol  diketahui  menjadi  pelarut  terbaik dibandingkan  pelarut  metanol,  nheksana  dan  aseton  dalam  menarik  senyawa  tannin  ditanaman putri  malu  (Marnoto,  2012).    Untuk  mendapatkan  senyawa  katekin  umumnya  diekstraksi menggunakan pelarut air, pelarut organic polar dan campurannya (Vuong et al., 2010 ; Pineiro et  al.,  2004).  Penelitian  lain  yang  dilakukan  Hu  et  al.,  (2015)  katekin  dapat  dengan  mudah diekstraksi dari teh hijau dengan pelarut campuran etanol dan air.
Standarisasi  mutu  ekstrak  yang  dilakukan  menunjukkan  hasil  susut  pengeringan  ekstrak etanol E.  oxypetalum sebesar  5,49%  yang  masuk  dalam  standar  persyaratan  yang  tercantum
dalam  Farmakope  Herbal  Indonesia  yakni  <10%.  Susut  pengeringan  dalam  hal  ini memungkinkan  hilangnya  molekul  air,  pelarut  etanol  dan  minyak  atsiri  akibat  pemanasan (Utami  et  al.,2017).  Pengujian  kadar  abu  ekstrak  bertujuan  untuk  melihat  kandungan  mineral internal  maupun  eksternal  dari  awal  proses  hingga  menjadi  ekstrak.  Kadar  abu  total  ekstrak etanol E. oxypetalum sebesar 1,69%, yang menggambarkan semakin tinggi persentase kadar abu maka mineral yang terkandung dalam sampel ekstrak juga semakin tinggi (Depkes RI, 2000).
Hasil  skrining  fitokimia  senyawa  tannin  dalam  daun E.  oxypetalum dengan  penambahan pereaksi  FeCl 3 maupun  dengan  gelatin  menunjukkan  hasil  positif.  Penambahan  FeCl 3 akan menunjukkan keberadaan gugus fenol yang juga memungkinkan adanya tannin yang merupakan senyawa  polifenol.  Terjadinya  perubahan  warna  menjadi  hijau  kehitaman  akibat  terbentuknya kompleks  antara  tannin  dengan  FeCl 3 .  Sampel  ekstrak  menunjukkan  reaksi  positif  membentuk kompleks  berwarna  hijau  kehitaman  karena  penambahan  FeCl 3 .  Reaksi  ini  menandakan keberadaan  katekin  dalam  sampel  ekstrak  (Fajrina  et  al,  2017  ;  Nur  et  al.,2020).  Namun, identifikasi  spesifik  untuk  mengetahui  keberadaan  tannin  yakni  dengan  uji  gelatin.  Senyawa tannin  akan  menimbulkan  endapan  sekalipun  dalam  jumlah  sedikit  maupun  banyak  apabila ditambahkan  dengan  larutan  gelatin  (Harborne,  1987).  Berdasarkan  penelitian  yang  dilakukan Supendra & Khandelwal (2012) ; Devi et al., (2018) terhadap ekstrak etanol daun E. oxypetalum menunjukkan hasil positif adanya fenol dan tannin.
Kromatografi lapis tipis merupakan metode pemisahan senyawa kimia yang menggunakan fase diam dan fase gerak. Prinsip metode ini adalah adsorbsi dan partisi yang dipengaruhi oleh fase  diam  dan  fase  gerak  yang  digunakan.  Masing-masing  komponen  kimia  akan  bermigrasi keatas  dengan  jarak  yang  berbeda  sesuai  tingkat  afinitas  masing-masing  senyawa  tersebut (Stahl,  2013).  Identifikasi  KLT  dimulai  dengan  memilih  fase  gerak  yang  tepat  agar  dapat memisahkan  komponen  senyawa  berupa  spot  noda  dalam  jumlah  yang  banyak.  Penjenuhan bertujuan agar proses elusi berjalan lebih mudah akibat tekanan dari uap pelarut (Makatamba et al,  2020).    Uji  kualitatif  senyawa  fenolik  dalam  ekstrak  etanol  daun E.  oxypetalum dengan metode  KLT  menggunakan  pembanding  asam  galat  dan  fase  gerak  etil  asetat  –  nheksana  7:5. Lempeng yang sudah ditotol dengan sampel ekstrak dan pembanding standar kemudian dielusi sehingga  diperoleh  spot  noda  yang  dapat  terdeteksi  dibawah  sinar  UV254  nm.  Saat  diamati dibawah  sinar  UV  254  nm  terlihat  noda  berwarna  coklat  tua/hitam  dengan  perkiraan  nilai  Rf yang sama antara  kedua sampel ekstrak maupun pembanding asam galat. Selanjutnya lempeng disemprot dengan FeCl 3 sehingga memunculkan warna noda hijau kecoklatan disampel ekstrak daun wijaya kusuma dan pembanding asam galat. Nilai Rf sampel ekstrak 0,7 dan nilai Rf asam galat 0,7. Identifikasi ini menunjukkan bahwa sampel ekstrak etanol daun E. oxypetalum positif terdapat senyawa fenolik ( Tabel 3 ).
Identifikasi  kualitatif  senyawa  tannin  dalam  ekstrak  daun  wijaya  kusuma  dengan  metode KLT  menggunakan  pembanding  katekin  yang  ditotolkan  pada  lempeng  silika  gel  60  F 254 dan dielusi  dengan  butanol  :  asam  asetat  :  air  (4:1:1).  Setelah  dielusi,  diamati  dibawah  lampu  UV 254 nm yang menunjukkan adanya spot noda dengan nilai Rf 0,82 (Tabel 3. ). Komponen kimia akan terlihat dibawah sinar UV 254 nm jika memiliki minimal dua ikatan rangkap terkonjugasi (Alen et al., 2017). Nilai Rf pada KLT menunjukkan sampel ekstrak etanol daun E. oxypetalum memiliki  nilai  Rf  yang  sama  dengan  pembanding  katekin  dan  spot  noda  setelah  disemprot dengan FeCl 3 menunjukkan warna hijau kecoklatan (Bruneton, 1999).
Reagen Folin-ciocalteu digunakan dalam penentuan kadar fenolik total ekstrak etanol daun wijaya  kusuma  yang  diukur  dengan  spektrofotometer  UV-Vis.  Senyawa  fenolik  yang terkandung  dalam  sampel  akan  bereaksi  saat  ditambahkan  reagen  Folin-ciocalteu  sehingga
larutan  membentuk  kompleks  berwarna  biru  dengan  tingkat  kepekatan  warna  sesuai  kadar fenolik  yang  terkandung  didalam  sampel,  kemudian  diukur  absorbansinya.  Pada  penelitian  ini digunakan larutan asam galat sebagai standar karena sifatnya yang cukup stabil dan sederhana. Keberadaan  senyawa  fenolik  terlihat  saat  larutan  asam  galat  direaksikan  dengan  reagen  Folin- ciocalteu  menghasilkan  larutan  berwarna  kuning.  Kemudian  larutan  campuran  diberi  larutan Na 2 CO 3 untuk  menciptakan  suasana  basa.  Reaksi  yang  terjadi,  gugus  hidroksil  dalam  struktur fenolik  bereaksi  saat  ditambahkan  reagen  Folin-ciocalteu  sehingga  terbentuk  kompleks molybdenum-tungsten berwarna biru  yang diukur dengan spektrofotometer. Tingkat kepekatan warna  biru  yang  terbentuk  tergantung  dari  banyaknya  jumlah  senyawa  fenolik  dalam  sampel. Apabila  kadar  fenolik  tinggi  maka  warna  semakin  pekat  karena  makin  berlimpah  ion  fenolak yang mereduksi asam heteropoli (fosfomolibdat-tungsten) menghasilkan kompleks molybdenum-tungsten (Tahir et al.,2017). Kurva kalibrasi asam galat menghasilkan persamaan regresi linier y = 0,0003x + 0,2179 dengan nilai r = 0,9983 ( Gambar 1 ).
Sifat kepolaran pada pelarut yang digunakan saat ekstraksi akan mempengaruhi banyaknya senyawa fenolik yang tertarik. Senyawa fenolik lebih mudah larut dalam pelarut polar sehingga memungkinkan  konsentrasi  fenolik  didalam  ekstrak  lebih  banyak  (Mohsen  &  Ammar,  2009). Kadar  fenolik  ekstrak  daun  wijaya  kusuma  dihitung  menggunakan  persamaan  regresi  linier. Penentuan  kadar  fenolik  total  ekstrak  etanol  daun E.  oxypetalum diperoleh  sebesar  369,7  ± 57,675 mg  GAE/g  ekstrak . Pengukuran  dilakukan  sebanyak  3  kali  pengulangan. Berdasarkan penelitian yang dilakukan Devi et al., (2018) pada ekstrak metanol daun wijaya kusuma dalam penentuan  kadar  fenolik  total  menggunakan  kurva  standar  katekol  didapatkan  kadar  fenolik sebesar 19,09 ± 0.08 µg/0,6 ml.
Tanin  merupakan  kelompok  heterogen  senyawa  polifenol  yang  sifatnya  larut  dalam  air dimana  senyawa  ini  memiliki  bobot  molekul  yang  tinggi  dan  mempunyai  20  gugus  hidroksil (De Jesus et al., 2012). Penentuan kadar tannin terkondensasi pada ekstrak etanol daun  wijaya kusuma dengan uji vanillin-HCl. Pereaksi vanillin-HCl  spesifik terhadap katekin. Prinsip  kerja pereaksi  ini  yakni  vanillin  terprotonasi  didalam  larutan  HCl  yang  bersifat  asam  dan menghasilkan  karbokation  yang  kemudian  bereaksi  denga  flavonoid.  Selanjutnya  senyawa antara yang didapatkan menunjukkan reaksi dehidrasi sehingga terbentuk larutan berwarna ungu atau merah (Salunkhe et al.,1990). Kurva kalibrasi katekin menghasilkan persamaan regresi y = 0,0015x + 0,1978 dengan nilai r = 0,999 (Gambar 2.) . Nilai r yang mendekati 1 menunjukkan persamaan  regresi  tersebut  adalah  linier.  Hasil  penentuan  kadar  tannin  total  yang  diperoleh sebesar  31,56  ±  1,285  %b/b  EK.  Penentuan  kadar  tannin  dengan  metode  yang  berbeda  oleh Devi et al., (2018) didapatkan kadar senyawa tannin total ekstrak metanol daun wijaya kusuma sebesar 31,32 ± 18%. Walaupun kedua ekstrak berbeda pelarut, namun persentase kadar tannin total dalam daun E. oxypetalum tidak jauh berbeda.

## SIMPULAN DAN SARAN
Berdasarkan  hasil  penentuan  kadar  fenolik  total  dan  tannin  total  terhadap  ekstrak  etanol daun E. oxypetalum menggunakan metode spektrofotometri menghasilkan kadar fenolik 369,7 ± 57,675 mg GAE/g ekstrak dan kadar tannin 31,56 ± 1,285%b/b EK.

## UCAPAN TERIMAKASIH
Tim  penulis  mengucapkan  terima  kasih  kepada  Lembaga  Penelitian  dan  Pengembangan Universitas  Muhammadiyah  Prof.  Dr.  Hamka  yang  telah  memberikan  Dana  Hibah  Penelitian
Internal Skema Penelitian Dasar Keilmuan Batch 1 Tahun 2020 sehingga penelitian ini berjalan dengan baik.

## REFERENSI
Alen, Y., Agresa, F. L., & Yuliandra, Y., (2017). Analisis Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan Aktivitas Antihiperurisemia Ekstrak Rebung Schizostachyum brachycladum Kurz (Kurz) pada Mencit Putih Jantan. Jurnal Sains Farmasi & Klinis , 3 (2), 146–152.
Artini,  N.  P.  R.,  &  Aryasa,  I.  W.  T.,  (2019).  Efektivitas  Bunga  Wijaya  Kusuma  (Epiphyllum oxypetalum)  Terhadap  Penurunan  Kadar  Asam  Urat  Tikus  Wistar. The  Journal  of Muhammadiyah Medical Laboratory Technologi 2 (2), 37–46.
Ashok,  P.  K.,  &  Upadhyaya,  K.,  (2012).  Tannins  are  Astringent. Journal  of  Pharmacognosy and Phytochemistry , 1 (3), 45–50.
Atmojo  E.  S.,  (2015).  Pengenalan  Etnobotani  Pemanfaatan  Tanaman  Sebagai  Obat  Kepada Masyarakat  Desa  Cabak  Jiken  Kabupaten  Blora . Jurnal  Ilmiah  WUNY XV Nomor  1 FKIP-Universitas PGRI Yogyakarta.
Blainski, A., Lopes, G., & de Mello J., (2013). Application and Analysis of the Folin Ciocalteu Method for the Determination of the Total Phenolic Content from Limonium Brasiliense L. Molecules.10 , 10;18 (6), 6852–6865.
Bruneton,  J.,  (1999). Pharmacognosy  Phytochemistry  Medicinal  Plants,  2 nd Ed .  Lavoisier Publishing.
Dandekar, Fegade, B., & Bhaskar, V., (2015). GC-MS Analysis of Phytoconstituents in Alcohol Extract  of Epiphyllum  oxypetalum leaves. Journal  of  Pharmacognosy  and Phytochemistry , 4(1) , 149–154.
De  Jesus  NZ,  Falcao,  D.  S.,  IF,  G.,  TJ,  D.  A.  L.,  GR,  D.  M.  L.,  &  Barbosa-Filho.,  (2012).
Tannins, peptic ulcers and related mechanisms. Int J Mol Sci , 13 : 3203 .
Depkes RI. (2000). Parameter Standar Umum Ekstrak Tumbuhan Obat . Departemen Kesehatan Republik Indonesia, Jakarta.
Devi,  K.  R.  S.,  Narayana,  S.  L.,  Menghani,  P.,  &  Georgekutty,  J.,  (2018).  Microscopic, pharmacognostic  and  phytochemical  screening  of Epiphyllum  oxypetalum (dc)  haw leaves. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry , 7 (6), 972–980.
Dhurhania,  C.  E.,  &  Novianto,  A.,  (2018).  Uji  Kandungan  Fenolik  Total  dan  Pengaruhnya terhadap   Aktivitas  Antioksidan  Dari  Berbagai  Bentuk  Sediaan  Sarang  Semut (Myrmecodia pendens). Jurnal Farmasi Dan Ilmu Kefarmasian Indonesia , 5 (2).
Dwita,  L.  P.,  Hasanah,  F.,  Srirustami,  R.,  Repi,  Purnomo,  R.,  &  Harsodjo,  S.,  (2019).  Wound healing  properties  of  Epiphyllum  oxypetalum  (DC.)  Haw.  leaf  extract  in  streptozotocin- induced diabetic mice by topical application. Wound Medicine , 26 (1).
Fajrina,  A.,  Jubahar,  J.,  &  Sabirin,  S.,  (2017).  Penetapan  Kadar  Tanin  pada  The  Celup  yang Beredar  di  Pasaran  secara  Spektrofotometri  Ultraviolet  Sinar  Tampak. Urnal  Sains  Dan Teknologi Farmasi , 19 (1).
Hanani, E., (2015). Analisis Fitokimia . EGC, Jakarta.
Harborne,  J.,  (1987). Metode  Fitokimia,  Penuntun  Cara  Modern  Menganalisis  Tumbuhan.
Terjemahan Padmawinata K dan Soediro. Penerbit ITB, Bandung.
Hu,  C.-J.,  Gao,  Y.,  Liu,  Y.,  Zheng,  X.-Q.,  Ye,  J.-H.,  Liang,  Y.-R.,  &  Lu,  J.-Laing.,  (2015). Studies on the mechanism of efficient extraction of tea components by aqueous ethanol. .
Food Chemistry, 194, 312-318. , 194 , 312–318.
Kementerian  Kesehatan  Republik  Indonesia.  (2017). Farmakope  Herbal  Indonesia  Edisi  II . Kementerian Kesehatan RI, Jakarta.
Macek,  K.  (1972). Pharmaceutical  Application  of  Thin-Layer  and  Paper  Kromatography.
Elscrier Publishing Company.
Makatamba,  V.,  Fatimawali,  &  Rundengan,  G.  (2020).  Analisis  Senyawa  Tanin  dan  Aktivitas Antibakteri  Fraksi  Buah  Sirih  (Piper  betle  L.)  Terhadap  Streptococcus  mutans. Jurnal MIPA , 9 (2), 75–80.
Marnoto,  Tjukup.,  Haryono,  G.,  Gustinah,  D.,  &  Putra,  FA.  (2012).  Ekstraksi  Tannin  Sebagai Bahan  Pewarna  Alami  Dari  Tanaman  Putrimalu  (Mimosa  pudica)  menggunakan  Pelarut Organik. Reaktor Chemical Engineering Journal. , 14 (1), 39–45.
Mohsen,  S.,  &  Ammar,  A.  (2009).  Total  phenolic  contents  and  antioxidant  activity  of  corn tasselextracts. Food Chem. , 112 (3), 595–598.
Naviglio,  D.,  Scarano,  P.,  Ciaravolo,  M.,  &  Gallo,  M.  (2019).  Rapid  Solid-Liquid  Dynamic Extraction  (RSLDE):  A  Powerful  and  Greener  Alternative  to  the  Latest  Solid-Liquid Extraction. Techniques Foods , 8 , 1–22.
Nur,  S.  (2020).  Identifikasi  Dan  Penentuan  Kadar  Katekin  Dari  Seduhan  Dan  Ektrak  Etanol Produk  Teh  Hijau  (Camelia  sinensi  L)  Komersial  Secara  Spektrofotometri  Uv-Visible. Majalah Farmasi Dan Farmakologi , 24 (1), 1–4.
Nurmayulis,  U.,  &  Hermita,  N.  (2015).  Potensi  Tumbuhan  Obat  Dalam  Upaya  Pemanfaatan Lahan  Pekarangan  Oleh  Masyarakat  Desa  Cimenteng  Kawasan  Taman  Nasional  Ujung Kulon. Jurnal Agrologia , 4(1) , 1–7.
Pineiro, Z., Palma, M., & Barroso, C. (2004). Determination of catechins by means of extraction with pressurized liquids. J. Chromatogr. A , 1026 , 19–23.
Salunkhe,  D., Chavan,  J.,  &  Kadam,  S.  (1990). Dietary  Tannins  Consequences  and Remedies. CRS Press.
Sari,  A.,  &  Ayuchecaria,  N.  (2017).  Penetapan  Kadar  Fenolik  Total  dan  Flavonoid  Total Ekstrak  Beras  Hitam  (Oryza  sativa  L.)  dari  Kalimantan  Selatan. Jurnal  Ilmu  Ibnu  Sina , 2 (2), 327–335.
Stahl, E. (2013). Thin-Layer Chromatography : A Laboratory Handbook. Springer.
Supendra,  R.,  &  Khandelwal,  P.  (2012).  Assessment  of  Nutritive  Values,  Phytochemical Constituents  and  Biotherapeutic  Potentials  of  Epiphyllum  oxypetalum. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences , 4 (5).
Tahir, M., Muflihunna, A., & Syafrianti. (2017). Penentuan Kadar Fenolik Total Ekstrak Etanol Daun  Nilam  (Pogostemon  cablin  Benth)  Dengan  Metode  Spektrofotometri  UV-Vis. Jurnal Fitofarmaka Indonesia (JFFI) , 4 (1).
Utami,  Y.,  Umar,  A.,  Syahruni,  R.,  &  Kadullah,  I.  (2017).  Standarisasi  Simplisia  dan  Ekstrak Etanol  Daun  Leilem  (Clerodendrum  minahassae  Teisjm.  &  Binn). Journal  of Pharmaceutical and Medicinal Sciences , 2 (1), 32–39.
Vuong, Q., Golding, J., Nguyen, M., & Roach, P. (2010). Extraction and Isolation of catechins from tea. J. Sep. Sci. , 33 , 3415–3428.