UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK n -HEKSAN, ETIL ASETAT DAN ETANOL KULIT BATANG KAYU EBONI ( Diospyros celebica Bakh.) MENGGUNAKAN

## METODE DIFUSI
[The Antibacterial Activity Test on n -Hexane, Ethyl Acetate, and Ethanol Extracts of Ebony Bark ( Diospyros Celebica Bakh.) Using Diffusion Method]
Ni Luh Sumitriasih 1* , Ahmad Ridhay 1 , Indriani 1
1) Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Tadulako, Palu Jl. Soekarno Hatta Km.9, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu, Telp. 0451- 422611
*)Coresponding author: niluhsumitriasih@gmail.com (hp. 082136622915)
Diterima 15 Desember 2018, Disetujui 9 Oktober 2019

## ABSTRACT
A  study  was  conducted  on  the  antibacterial  activity  test  on  n-hexane,  ethyl  acetate,  and  ethanol extracts  of  ebony  bark  ( Diospyros  celebica Bakh.)  using  a  diffusion  method.  The  purpose  of  this research  is  to  know  the  antibacterial  activity  of  ebony  bark  against Staphylococcus  aureus and Eshericia  coli bacteria  using n -hexane,  ethyl  acetate  dan  ethanol.  The  method  of  extraction  used  in this  research  was  maceration  method  with  three  polarity  levels  of  solvent.  The  antibacterial  activity test  was  performed  by  diffusion-well  test.  The  results  showed  that  ethyl  acetate  extract  gave  the highest inhibition of 26.14 mm in gram-positive bacteria ( Staphylococcus aureus ) and ethanol extract of 25.97 mm in gram-negative bacteria ( Escherichia coli ).
Keywords : Ebony (Diospyros celebica. Bakh ), tree bark, inhibitory, antibacterial

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  uji  aktivitas  antibakteri  terhadap  ekstrak  n-heksan,  etil  asetat  dan  etanol kulit batang kayu eboni ( Diospyros celebica Bakh.) menggunakan metode difusi. Tujuan penelitian ini adalah mengetahui aktivitas antibakteri dari kulit batang kayu eboni terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Eschericia  coli menggukan  pelarut  n-heksan,  etil  asetat  dan  etanol.  Metode  ekstraksi yang  digunakan  dalam  penelitian  yaitu  metode  maserasi  dengan  tiga  tingkat  kepolaran  pelarut. Pengujian aktivitas antibakteri dilakukan dengan uji metode sumur difusi. Hasil penelitian menunjukan bahwa  ekstrak  etil  asetat  memberikan  daya  hambat  tertinggi  26,14  mm  pada  bakteri  gram  positif ( Staphylococcus aureus ) dan ekstrak etanol 25, 97 mm pada bakteri gram negatif ( Escherichia coli ).
Kata kunci : Eboni (Diospyros celebica Bakh .), kulit kayu, daya hambat, antibakteri

## LATAR BELAKANG
Indonesia merupakan negara dengan  kekayaan  hayati  terbesar  kedua setelah Brazil. Tumbuhan yang ditemukan di  hutan  Indonesia  diperkirakan  30.000 jenis  di  antaranya  adalah  tumbuhan endemik.  Salah  satu  tumbuhan  endemik adalah  kayu  Eboni  ( Diospyros  celebica Bakh.)  yang  hanya  terdapat  di  wilayah hutan Sulawesi (Isnindar et al. , 2011).
Eboni  ( Diospyros  celebica Bakh.) adalah  nama  pohon  penghasil  kayu  yang mempunyai  nilai  komersial  tinggi,  yang termasuk  dalam  marga Diospyros  L .  dari suku  Ebenaceae.  Kayu  eboni  banyak digunakan untuk pembuatan mebel, patung, ukir-ukiran, alat-alat untuk dekorasi  dan  juga  untuk  konstruksi bangunan  seperti  tiang  rumah  dan jembatan (Allo, 2011).
Di  beberapa  negara  tumbuhan genus  Diospyros  digunakan  sebagai  obat tradisional  seperti  obat  batuk,  cegukan dan antibiotik (Mallavadhani, 1998). Sumber  senyawa  alam  sebagian  besar berasal  dari  tumbuhan,  baik  berupa  akar, kulit  batang,  daun,  bunga,  atau  bijinya. Salah satu bioaktivitas dari senyawa alam yang  banyak  di  teliti  adalah  sebagai antibakteri,  yang  memiliki  kemampuan untuk melawan bakteri (Dzen et al ., 2003).
Menurut  Borges et  al. (2007)
melakukan  pengujian  antimikroba  fraksi heksan  kulit  batang Diospyros  anisandra terhadap Mycobakterium tuberculosis yang  resisten  terhadap  antibiotik  memiliki
aktivitas  yang  sangat  kuat  dengan  nilai sebesar 6,25 ug/ml.
Beberapa peneliti melaporkan bahwa  tumbuhan  sejenis  dengan  kayu eboni  ini  mengandung  senyawa  golongan metabolit sekunder, daun kesemek ( Diospyros  kaki Thun  B.)  mengandung flavonoid,  tanin,  asam  organik,  dan  fenol (Isnindar et  al. ,  2011).  Tumbuhan  daun Diospyros bateri Gurke dilaporkan mengandung  alkaloid,  saponin  dan  tanin (Oluremi,  2010).  Sedangkan  tumbuhan Diospyros  anisandra  pada    kulit  kayunya dilaporkan  adanya  plumbagin  (Borges et al. ,  2007).  Namun  demikian,  belum banyak  artikel  ilmiah  yang  melaporkan aktivitas  biologis  maupun  kandungan kimia yang terkait dengan kayu eboni.
Proses ekstraksi bahan alam dipengaruhi  oleh  sifat  pelarut  yang  akan digunakan.  Suatu  senyawa  akan  mudah larut  dalam  pelarut  yang  mempunyai polaritas yang sama atau mirip (Sudarmadji et  al., 1989).  Menurut  prinsip like  dissolves  like,  suatu  pelarut  akan cenderung  melarutkan  senyawa  yang mempunyai  tingkat kepolaran  yang sama. Pelarut  yang  bersifat  polar  mampu mengekstraksi senyawa komponen fenolik, tannin, asam amino dan glikosida. Pelarut  semi  polar  mampu  mengekstrak senyawa  fenol,  terpenoid,  alkaloid  dan glikosida. Pelarut non polar dapat mengekstrak senyawa kimia lipid, karotenoid,  dan  minyak  yang  mudah menguap (Harborne, 1987).

## METODE PENELITIAN Bahan dan Peralatan
Bahan  dasar  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  mencakup  kulit  batang  kayu eboni diambil di daerah Sausu Kab. Parigi. Bahan  lainnya  berupa  bakteri  patogen Staphilococcus aureus dan Echericia coli , nutrien agar (NA), aquades, n -heksan, etil asetat, etanol, pereaksi dragendrof, kertas  saring,  serbuk  magnesium,  HCl pekat,  H 2 SO 4 pekat  dan  FeCl 3 5%, kertas saring, tissue, aluminium foil, klofamfenikol, dan asam asetat anhidrat..
Peralatan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  neraca  analitik, blender, ayakan 60 mesh, oven, , autoklaf (Hirayama), incubator (POL-EKO Aparatura), Laminar Air Flow (Esco Class II  BSC),  rotary  vakum  evaporator,  jangka sorong,  botol  semprot,  spatula,  sendok zat, bunsen, pipet tetes, dan jarum ose.

## Prosedur Penelitian
Ekstraksi  Kulit  Batang  Kayu  Eboni (Nurbaya, 2015)
Serbuk  kulit  batang  kayu  eboni sebanyak  100  gr  ekstraksi  menggunakan metode maserasi dengan tiga jenis pelarut yaitu n -heksan,  etil  asetat  dan  etanol.
Masing –  masing  ekstrak n -heksan,  etil asetat  dan  etanol  dilakukan  uji  fitokimia dan uji antibakteri terhadap
Staphilococcus aureus dan Echericia coli.

## Uji Fitokimia (Harborne, 1987)
1.  Uji Alkaloid
Uji  alkaloid  dilakukan  dengan  cara memasukkan  1  ml  ekstrak  ke  dalam
tabung  reaksi  lalu  ditambahkan  2-3  tetes pereaksi  dragendorf.  Hasil  positif  adanya alkaloid  ditunjukkan  dengan  terbentuknya endapan oranye/jingga.

## 2.  Uji Flavonoid
Sebanyak  1  ml  ekstrak  ditambahkan 0,5 gram serbuk magnesium dan 10 tetes HCl  pekat,  bila  bereaksi  positif  akan menghasilkan  larutan  berwarna  jingga, merah muda atau merah.

## 3.  Uji Steroid
Sebanyak  2  ml  ekstrak  ditambahkan asam  asetat  anhidrat  sebanyak  10  tetes dan  asam  sulfat  pekat  sebanyak  2  tetes. Larutan  dikocok  perlahan  dan  dibiarkan selama  beberapa  menit.  Adanya  steroid ditunjukan  oleh  warna  biru  atau  hijau, sedangkan triterpenoid memberikan warna merah atau ungu.
4.  Uji Tanin
Untuk  uji  tanin,  sebanyak  1  ml ekstrak ditambahkan 3 tetes larutan FeCl3 5%, bila bereaksi positif akan menghasilkan  warna  hijau,  merah,  ungu, biru atau hitam.

## Uji Antibakteri
1.  Persiapan Bahan Uji Antibakteri
Sebanyak  28  gram    nutrient  agar (NA)  dilarutkan  dalam  1000  ml  aquades, kemudian  di  sterilkan  kedalam  autoclave pada  suhu  121°C  dengan  tekanan  1  atm selama 15 menit.
2.  Pengujian Aktivitas Antibakteri
Dengan Metode Sumur Difusi (Darmawati, 2009)
Pada pengujian zona hambat bakteri digunakan  metode  sumur  difusi.  Media
nutrien  agar  (NA)  sebanyak  25  ml dicampur  dengan  25  μL  suspensi  bakteri uji  ( Staphilococcus  aureus dan Eschericia coli ),  dihomogenkan  lalu  dituang  dalam cawan  petri  steril  dan  dibiarkan  sampai memadat.  Setelah  itu  dibuat  sumur  yang berdiameter ±6 mm dengan menggunakan alat pelubang. Setiap cawan berisi 3 lubang atau  sumur  (lubang  pertama  untuk  control negatif  berupa  pelarut n -heksan,  lubang kedua untuk kontrol positif berupa Kloramfenikol  0,1%  dan  1  lubang  untuk ekstrak n -heksan),  setiap  sumur  diisi ekstrak  dengan  kontrol  sebanyak  30  µL, untuk  ekstrak  etil  asetat  dan  etanol dilakukan  perlakuan  yang  sama    kemudian diinkubasi selama 24 jam  pada suhu 37˚C, selanjutnya  diamati  dan  diukur  diameter zona hambat dengan jangka sorong.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Metabolit Sekunder dalam Ekstrak Kulit Kayu Eboni
Pada  kulit  kayu  eboni  mengandung senyawa  metabolit  sekunder  yang  dapat berperan sebagai atibakteri. Untuk menganalisis senyawa metabolit sekunder yang terdapat pada kulit kayui eboni perlu dilakukan skrining fitokimia. Skrining fitokimia  merupakan  suatu  proses  untuk mengidentifikasi  kandungan  kimia  pada suatu  tumbuhan,  diantaranya  alkaloid, saponin, tannin dan senyawa fenolik.
Ekstrak n -heksana  kulit  ayu  eboni terdeteksi  adanya  senyawa  steroid,  tetapi tidak  terdeteksi  adanya alkaloid,  flavonoid dan  tannin  (Tabel  1).  Hal  tersebut
memberikan  keterangan  dalam  kulit  kayu eboni  terdapat  senyawa  steroid  yang bersifat  non  polar.  Untuk  ekstrak  etil asetat  terdeteksi  adanya  tanin  dan alkaloid. Kedua senyawa ini juga terdeteksi  dalam  ekstrak  etanol,  yang berarti  tanin  dan  alkaloid  yang  ada  pada kulit  kayu  eboni  terdiri  atas  tanin  dan alkaloid semi polar serta tanin dan alkaloid polar. Menurut Lestiani dan Lanny (2008), tingkat  kepolaran  pelarut  menentukan jenis  senyawa  yang  dapat  diekstrak  dari sampel. Pelarut akan mengekstrak senyawa-senyawa yang mempunyai kepolaran  yang  sama  atau  mirip  dengan kepolaran pelarut yang digunakan.
Tabel 1  Hasil  analisis  golongan  senyawa ekstrak  kulit  kayu  eboni  dari  ketiga jenis pelarut.
Golongan senyawa Jenis Ekstrak n - heksan Etil asetat Etanol Flavonoid - - + Alkaloid - + + Steroid + - - Tannin - + + Keterangan: (+) : Terdeteksi adanya senyawa
(-)  : Tidak terdeteksi adanya senyawa
Golongan senyawa flavonoid terdeteksi  dalam  ekstrak  etanol,  tetapi tidak  terdeteksi  dalam  ekstrak  etil  asetat maupun ekstrak n-heksan (Tabel 1), yang menunjukkan  flavonoid  yang  ada  dalam kulit  kayu  eboni  adalah  flavonoid  yang bersifat polar.

## Aktifitas  Antibakteri    dan  Daya  Hambat Ekstrak Kulit Kayu Eboni
Berdasarkan  hasil  uji  antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus dan
Eschericia  coli masing-masing  3  kali pengulangan  diperoleh  perbedaan  zona hambat  dari  masing-masing  ekstrak  n- heksan, etil asetat dan etanol. Uji aktivitas ekstrak kulit kayu eboni terhadap pertumbuhan bakteri gram positif ( Staphylococcus aureus ) dan gram negatif ( Eschrichia  coli )  dengan  menggunakan metode  sumur  difusi,  yang  di  tandai dengan  terbentuknya  zona  bening  di sekitar sumuran. Antibiotik Chloramphenicol  sebagai  kontrol  positif dan  kontrol  negatif  berupa  3  pelarut  yaitu n-heksan, etil asetat dan etanol.
Pengamatan  terhadap  diameter  zona hambat dari masing-masing ekstrak dengan pengukuran menggunakan jangka sorong digital.
Tabel 2 Hasil  zona  hambat  bakteri  gram negative Esherichia  coli dan  bakteri gram positif Staphylococcus aureus. Ekstrak Diameter Rata-rata Zona Hambat (mm) Eschericia coli Staphylococcus aureus n -heksan 0 0 Etil asetat 26,14 23,38 Etanol 23,78 25,97 Kontrol positif chloramphenicol n -heksan 28,52 28,66 Etil Asetat 28,19 29,47 Etanol 28,23 29,12 Kontrol negatif pelarut n - Heksan 0 0 Etil asetat 0 0 Etanol 0 0
Ekstrak  n-heksan  tidak  memberikan daya  hambat  terhadap  semua  bakteri  uji. Ekstrak  etil  asetat  yang  mengandung
alkaloid  dan  tannin  memberikan  zona hambat  terhadap  semua  bakteri  uji, meskipun diameter zona hambatnya berbeda-beda  (Tabel  2).  Hal  ini  sesuai dengan  Parekh et  al .,  (2005)  juga menemukan  bahwa,  aktivitas  antibakteri dipengaruhi  oleh  polaritas  senyawa  yang diekstraksi  oleh    masing-masing  pelarut dengan  kemampuan  zat  tersebut  untuk menyebar  pada  media  yang  digunakan dalam  pengujian  aktivitas  antibakteri. Tanin  pada  tanaman  digunakan  sebagai proteksi dari mikroorganisme yang mensekresikan enzim yang dapat membuat dinding sel tanaman lisis, enzim ini akan inaktif ketika tanin yang ada pada tanaman  terikat  dengan  enzim  yang disekresikan oleh mikroorganisme patogen tersebut (Heldt dan Hans, 2004).
Ekstrak etanol
mengandung senyawa-senyawa polar (flavonoid, alkaloid dan tanin) juga memberikan zona hambat  terhadap  semua  bakteri  uji.  Zona hambat  tertinggi  (25,97  mm)  ditemukan pada Staphylococcus  aureus dan  zona hambat  terendah  (23,78)  ditemukan  pada Esherichia coli . Kandungan ekstrak etanol berupa  senyawa  flavonoid  merupakan kelompok  senyawa  fenol  yang  berperan dalam mengikat protein, sehingga menganggu proses metabolisme (Ganiswara,  1995).  Sabir  (2005)  dalam penelitiannya  menjelaskan  bahwa  gugus hidroksil  yang  terdapat  pada  struktur senyawa  flavonoid  akan  mengakibatkan timbulnya  efek  toksik  terhadap  bakteri. Sedangkan untuk ekstrak tanin terdiri dari
campuran  senyawa  polifenol  yang  sangat kompleks  dan  biasanya  tergabung  dari karbohidrat rendah seperti glukosa (Linggawati et  al. ,  2002).  Senyawa  tanin dapat berperan sebagai antibakteri karena dapat  menganggu  sintesa  peptidoglikan sehingga pembentukan dinding sel bakteri menjadi  kurang  sempurna.  Etanol  absolut memiliki  efek  bakterisidal  yang  lebih lemah  dibandingkan  campuran  antara alkohol dan air. 100% etanol mengkoagulasi  protein  pada  dinding  sel, sehingga  terjadi  pengerasan  protein  pada dinding sel.
Menurut  Parekh et  al .,  (2005) aktivitas  antibakteri  dipengaruhi  oleh polaritas  senyawa  yang  diekstraksi  oleh masing-masing  pelarut.  Menurut  Schlegel (1993),  bahwa  setiap  senyawa  dapat memberikan  efek  yang  berbeda  dalam menghambat pertumbuhan bakteri.
Perbedaan aktivitas yang terjadi disebabkan  oleh  metabolit  sekunder  yang terkandung  memiliki  efek  sinergis  yang berbeda tergantung dari sifat dan morfologi dari bakteri tersebut. Faktor lain yang  menyebabkan  perbedaan  diameter zona  hambat  dari  ekstrak tersebut  adalah perbedaan  senyawa  aktif  yang  terdapat pada  ekstak.  Hal  ini  sesuai  dengan pendapat  Prescott  (2005),  bahwa  ukuran dari  zona  hambat  dipengaruhi  oleh beberapa  hal,  seperti  tingkat  sensitifitas dari  organisme  uji,  kecepatan  difusi  dari senyawa  antibakteri  dan  konsentrasi senyawa antibakteri.
Menurut  Davis  dan  Stout  (1971) dalam  Arista  (2013),  berdasarkan  zona jernih  atau  zona  bening  yang  terbentuk, daya  hambat  dikelompokkan  menjadi  4 kelompok  yaitu  sangat  kuat  bila  zona hambat  >20  mm, kuat  10-20 mm, sedang 5-10 mm dan lemah <5 mm. Berdasarkan pernyataan  Davis  dan  Stout  (1971) Senyawa  antibakteri  dalam  ekstrak  etil asetat  dan  etanol  dapat  dikategorikan antibakteri  daya  hambat  sangat  kuat terhadap kedua bakteri uji.

## KESIMPULAN
Ekstrak  kulit  batang  kayu  eboni mempunyai  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Esherichia  coli .  Ekstrak  etil  asetat  kulit kayu  eboni  memilki  aktivitas  antibakteri yang  sangat  kuat  terhadap  bakteri  gram positif Esherichia  coli dengan  zona hambat  26,14  mm,  sedangkan  ekstrak etanol  kulit  kayu  eboni  memiliki  aktivitas sangat kuat terhadap bakteri gram negatif Staphylococcus  aureus dengan  zona hambat 25,97 mm.

## DAFTAR PUSTAKA
Allo  K.M.  2011. Pengenalan  Waktu Berbuah  Eboni  (Diospyros  celebica Bakh.)  Pada  Beberapa  Tempat Tumbuh  Di  Sulawesi. Makassar: Balai Penelitian Kehutanan
Makassar.
Arista,  Y.  N.  2013.  Formulasi  dan  Uji Aktivitas  Gel  Antijerawat  Ekstrak Umbi  Bakung  (Crinum  Asiaticum  L.) terhadap  Bakteri  Staphylococcus aureus secara In Vitro. ( http://ejournal.unstrat.ac. id/index.
php/pharmacon/article/  view/1552 ).
Diakses 1 April 2019.
Borges.  AR,  Isabel.  C,  Luiz.  M,  Said.  SF, dan  Maria,  G.  2007.  Antimicrobial activity  of  Diospyros  anisandra.
Fitoterapia, 78 : 370 –372.
Darmawati,  S.  2009.  Keanekaragaman Genetik Salmonella  typhi . Jurnal Kesehatan, 2 (1): 28-32.
Dzen, Sjoekoer M., et al. 2003.
Bakteriologi  Medik .  Edisi  1.  Malang: Bayumedia Publishing.
Ganiswara,  S.G.  1995. Farmakologi  dan terapi Edisi ke-4 . Jakarta: FRUT.
Harborne,  J.  B.,  1987, Metode  Fitokimia Penuntun Cara Modern Menganalisis Tumbuhan, Edisi
kedua, Hal  5,  69-76,  diterjemahkan oleh  Kosasih  Padmawinata  dan Iwang Soedira. Bandung: ITB Press.
Heldt dan Hans. 2004. Plani Biochemistry. New York: Elsevier Academic Press.
Isnindar,  Wahyuono.  S,  Setyowati.E.P.
2011.  Aktivitas  Antioksidan  Daun
Kesemek ( Diospyros kaki L.F) Dengan Metode DPPH (2,2-Difenil-1 Pikrilhidrazin). Majalah Obat
Tradisional, 16(2): 63 – 67.
Linggawati,  A.,  Muhadariana,  Erman,
Azman dan Midiarty. 2002.
Pemanfaatan  tanin  limbah  kayu industri  kayu  lais  untuk  modifikasi resin fenol formaldehid. Jurnal Natur Indonesia, 4 (1) 165-171.
Mallavadhani.  U.  V.  1998. Pharmacology and  Chemotaxonomy  of  Diospyros.
India: Regional Research Laboratory (CSIR), Bhubaneswar-751 013,
Orissa,
Nurbaya.  2015.  Kajian  Ekstrak  Etanol Bunga  Kembang  Telang  ( Clitoria ternate ) Sebagai Bioindikator
Asam  Basa. Skripsi .  Palu:  MIPA Universitas Tadulako.
Oluremi, B. B., Osungunna, M O., Ogbole,
O  O.  2010.  Phytochemical  and Antimicrobial    Screening  of  the Leaf  Extract  of Diospyros  barteri Gurke. Pharmacognosy  Journal,
2(11):405 –408.
Parekh,  J.,  Jadeja,  D.,  Candra,  S.  2005. Efficaccy  of  Aqueous  and  Mathanol Extracts  of  Some  Medicinal  Plants for  Potential  Antibacterial  Activity.
Turk J Biol ., 29:203-210.
Prescott,  LM.  2005. Microbiology. New York: Mc.Grow-Hill.
Sabir,  A.  2005.  Aktivitas  Antibakteri flavonoid Propolis trigono sp
terhada bakteri Streptococcus mutans ( in Vitro ). Majalah
Kedokteran Gigi, 38(3): 135-141.
Schlegel, G. Hans. 1993. General Microbiologi. Seventh Edition .
England: Cambridge University Press.
Sudarmadji,  S.,  Haryono,  B.,  &  Suhardi. 2007. Analisa Bahan Makanan dan Pertanian. Yogyakarta:Liberty.  hal 93-94. Biology, vol. 864. New York: Springer Science :