## ISOLASI DAN KARAKTERISASI SENYAWA METABOLIT SEKUNDER FRAKSI ETIL ASETAT DARI KULIT BATANG TUMBUHAN Bauhinia purpurea L
Ardiansyah 1 , Herdini 2 , and Abdullah 3 .
1,2,3 Program Studi Pendidikan Kimia Fakultas Keguruan dan Ilmu Pendidikan Universitas Riau
1 blue_virtol@yahoo.com

## Abstract
Isolation  and  characterization  secondary  metabolite  of  ethyl  acetate  fraction  from Bauhinia  purpurea  L  stem  bark  has  been  conducted.  Bauhinia  purpurea  L  belonging  to biggest family of flowering plant in Asia. This plant was choosed as study sample evidence remedy  effect  for  some  disease  like  ulcer,  cough,  tumor,  puffing,  and  snakebite.  Isolation conducted  by  extraction  and  chromatograph  method.  Extraction  by  maceration  technique used  non  polar  and  semipolar  solvent  alternally,  n-hexane,  dichloromethane,  and  ethyl acetate.  The  extract  separated  by  liquid  vacuum,  coloum,  and  flash  chromatograph  until obtained  pure  compound.  The  melting  point  of  compound  was  determined  by  John-Fisher apparatus.The  compound  structure  was  determined  by  UV-Vis,  IR, 13 C-NMR spectroscopic.The  compound  spectroscopy  data  was  compared  with  standard  compound data.Extraction  resulted  n-hexane  fraction,  dichloromethane  fraction,  and  ethyl  acetate fraction.  Separation  of  ethyl  acetate  fraction  resulted  white  crystalline  powder  and  has melting point 220-221 0 C. Evidence on spectroscopy data were estimated the compound was a stigmasterol glycoside.
Key word : Bauhinia purpurea L; stem bark; ethyl acetate; stigmasterol glycoside.
Pendahuluan Indonesia termasuk negara yang memiliki keanekaragaman hayati yang melimpah.  Hal  ini  menjadikan  Indonesia sebagai  salah  satu  gudang  senyawa  organik terbesar  di  dunia.    Kekayaan  hayati Indonesia  yang  sangat  besar,  berpotensi untuk  dimanfaatkan  sebagai  sumber  obat, insektisida  alami,  bahan  kosmetik,  serta sebagai  penyedap  dan  pewarna  alami  untuk makanan.
Tumbuhan mempunyai kandungan senyawa kimia yang kompleks dan beragam. Kandungan senyawa tersebut dikelompokkan menjadi  senyawa  metabolit  primer  dan metabolit  sekunder.  Senyawa  metabolit primer merupakan senyawa hasil metabolisme yang dibutuhkan untuk menunjang  terjadinya  pertumbuhan  pada setiap organisme. Sedangkan senyawa
metabolit  sekunder  berupa  molekul  kecil yang dihasilkan secara terbatas oleh organisme. Pada umumnya senyawa metabolit  sekunder  mempunyai  bioaktivitas yang spesifik dan berfungsi sebagai pelindung  tumbuhan  terhadap  gangguan hama dan penyakit.
Bauhinia merupakan  salah  satu genus utama dari famili Leguminoceae yang diketahui  kaya  akan  senyawa  bioaktif. Pettit,    dkk.,  (2005)    berhasil    mengisolasi empat    senyawa    baru    yang    diberi    nama bauhiniastatin  1-4  dari Bauhinia  purpurea dan    aktif    sebagai    antikanker.  Aktivitas antimikroba  dilaporkan  oleh  Dhale (2011) dari    ekstrak    alkohol Bauhinia    variegata Linn.  Pepato   (2002)  juga  melaporkan  air rebusan    daun Bauhinia    forficata L. memiliki  aktivitas  antidiabetes.
Salah  satu  spesies Bauhinia ,  yaitu Bauhinia purpurea L banyak digunakan oleh masyarakat untuk mengobati berbagai macam  penyakit,  seperti  bisul,  batuk,  luka, tumor,  kembung,  wasir,  dan  gigitan  ular. Bauhinia purpurea L dilaporkan mempunyai aktivitas  farmakologis,  seperti  antioksidan, hepatoprotektif, hipoglisemik, dan antiproliferatif (Shajiselvin, dkk., 2011).
Senyawa  aktif  dari  tumbuhan  dapat diekstraksi  dengan  berbagai  macam  pelarut organik,  seperti  etanol,  diklorometan,  n- heksana,  dan  etil  asetat.  Berbagai  macam senyawa  metabolit  sekunder  yang  bersifat aktif  telah  berhasil  diisolasi  dari  fraksi  etil asetat.  Aderogba,  dkk.,  (2006)  melaporkan dua  senyawa  golongan  flavonoid  dari  fraksi etil  asetat  daun Bauhinia  monandra Kurz dan  memiliki  aktivitas  antioksidan  yang sangat tinggi. Anwar, dkk., (2010) melaporkan telah berhasil mengisolasi senyawa flavonoid dari fraksi etil asetat kulit batang  tumbuhan Bauhinia  hulletti Prain - yang bersifat sitotoksik terhadap sel kanker.
Penelusuran   literatur   yang   dilakukan menghasilkan    bahwa    belum    banyak penelitian  yang  dilakukan  terhadap  kulit batang  tumbuhan Bauhinia  purpurea L khususnya  pada  fraksi  etil  asetat.  Secara philogenetik (hubungan kekerabatan), tumbuh-tumbuhan  dalam  satu  famili  atau genus  biasanya  memiliki  kerangka  senyawa dan aktivitas yang sama. Dari uji pendahuluan kulit batang Bauhinia purpurea L  fraksi  etil  asetat  menunjukkan  positif terhadap  beberapa  metabolit  sekunder.  Pada penelitian  ini  akan  dilakukan  isolasi  dan karakterisasi  senyawa  metabolit  sekunder fraksi  etil  asetat  dari  kulit  batang Bauhinia purpurea L.

## Metode
Alat dan Bahan Sampel yang digunakan dalam penelititan  ini  adalah  kulit batang tumbuhan Bauhinia  purpurea L  yang    diambil  di Pekanbaru,    Riau.  Bahan  kimia  yang digunakan  terdiri  atas  kulit  pelarut  organik teknis dan pro analisis,  plat silika gel  GF 254 , silika  gel  F  60  (35  -  70)  mesh,    silika  gel  G
60 (70-230) mesh, silika gel H 60  (230-400) mesh, serium sulfat 1,5 % dalam H 2 SO 4 2 N.
Peralatan  yang  digunakan  terdiri  atas, Buchi  rotary  evaporator,  vakum,  neraca analitik  Ohaus  ,  alat  pengukur  titik  leleh Fisher-John, Spektrometer UV-Vis, Inframerah  FT/IR  4200,  dan 13 C-RMI, berbagai  kolom  kromatografi,  dan  berbagai alat gelas yang biasa digunakan di Laboratorium Kimia Organik.
Prosedur kerja Sampel dibersihkan dan dikeringanginkan  pada  temperatur  kamar, kemudian digiling halus sehingga menghasilkan  3  kg  serbuk.  Serbuk  kulit batang  kering  diekstraksi  dengan  metode maserasi menggunakan pelarut yang ditingkatkan  kepolarannya,  secara  berturut- turut  yaitu  n-heksana,  diklorometana,    etil asetat    dan    metanol.    Ekstraksi  dilakukan sebanyak  3    kali    untuk    masing-masing pelarut,  filtrat  yang  dipisahkan  dipekatkan dengan  menggunakan rotary  evaporator . Ekstrak  etil  asetat  dari  kulit  batang Bauhinia purpurea L selanjutnya dipisahkan dengan  menggunakan  kromatografi  vakum cair  (KVC).  Fraksi  yang  positif  metabolit sekunder dipisahkan lebih lanjut menggunakan  kromatografi  kolom  gravitasi, dan  kromatografi  flash  sampai  diperoleh senyawa  metabolit  sekunder  yang  murni. Isolat  murni  yang  didapatkan  diukur  titik lelehnya  menggunakan  alat  Fisher-John  dan dilanjutkan dengan mengelusidasi strukturnya
menggunakan teknik spektrometri  UV-Vis,  IR, 13 C-RMI  serta dibandingkan  dengan  senyawa  yang  telah diketahui strukturnya.

## Hasil dan Pembahasan
Maserasi  3  kg  serbuk  kering  kulit batang Bauhinia  purpurea L  menghasilkan ekstrak n-heksan
21,925
gram, diklorometana  24,01  gram  dan  etil  asetat 37,879  gram.  Didapatkan  persentase  hasil keseluruhan sebesar 2,79%. Fraksi etil asetat dipilih  untuk  dipisahkan  lebih  lanjut  karena mempunyai massa fraksi terbesar.
Pemisahan diawali dengan kromatografi vakum cair (KVC)
menggunakan  pelarut  n-heksana  dan  etil asetat yang ditingkatkan kepolarannya sehingga fraksi yang turun diawali dari fraksi yang  paling  rendah  kepolarannya  sampai fraksi yang paling polar.
Fraksi  –fraksi  hasil  KVC  diawasi dengan  kromatografi  lapis  tipis  (KLT). Pengawasan dilakukan  dengan  melihat kromatogram  hasil  KVC,  yang  mana  fraksi- fraksi  yang  memiliki  kemiripan  pola  noda digabungkan menjadi  satu fraksi.  Dihasilkan 6  fraksi  hasil  KVC,  yaitu  fraksi  A-F.  Fraksi A,  B,  C,  D,  dan  E  merupakan  fraksi-fraksi yang  menunjukkan  (+)  metabolit  sekunder, sehingga merupakan alternatif untuk pemisahan lebih lanjut.
Fraksi  D  (1,2574  gr)  dipilih  untuk dipisahkan  lebih  lanjut.  Pemilihan  fraksi  D berdasarkan pada hasil KLT yang menunjukkan  bahwa  fraksi  D  memiliki  pola noda  yang  sederhana.  Kesederhanaan  pola noda  ini  akan  berpengaruh  pada  pemisahan selanjutnya.
Fraksi D dipisahkan dengan kromatografi kolom gravitasi (KKG) menggunakan  pelarut  n-heksana  dan  etil
asetat yang ditingkatkan kepolarannya sehingga  diperoleh  enam  fraksi  yaitu  fraksi D 1 – D 6 . Fraksi D 5 dipilih untuk dimurnikan lebih lanjut.
Fraksi  D (5) dipisahkan  lebih  lanjut dengan  kromatografi  kolom  flash  (KKF). KKF merupakan pemisahan yang menghasilkan  kemurnian  relatif    paling tinggi (Gritter et al ., 1999). Kemurnian hasil pemisahan menunjukkan efektifitas pemisahan  yang  dipengaruhi  oleh  ukuran adsorben (silika gel) dan laju elusidasi. KKF menggunakan silika gel G 60 (70-230 ) mesh yang relatif berukuran sedang.
Elusidasi  fraksi  D (5) dengan  KKF dilakukan sebanyak dua kali hingga diperoleh  fraksi  turunan  D (5.6.2) sebanyak 13,6 mg. Kromatogram hasil KKF menunjukkan  bahwa    fraksi  D (5.6.2) memiliki satu  noda  dan  mempunyai  titik  leleh  220- 221 0 C sehingga dianggap telah murni.

## Data Spektrofotometri UV-Vis
Spektrum UV-Vis menunjukan puncak pada panjang  gelombang λ=216 nm.  Hal  ini mengindikasikan adanya satu ikatan rangkap tak  berkonjugasi  dalam  senyawa  (Pavia, dkk.,2007).
Gambar 1. Spektrum UV-Vis

## Data Spektrofotometri Inframerah (IR)
Spektrum  IR  memperlihatkan  4  pita serapan  penting  pada  ύ  =  3367  cm -1 (pita serapan  –OH,  alkohol),  2923  cm -1 (pita serapan  –CH),  1646,91  cm -1 (pita  serapan
C=C, alkena), dan 1049 cm -1 (pita serapan C- O) (Pavia, dkk., 2007).

## Gambar 2. Spektrum Inframerah
Data Spektrometri 13 C-RMI
Spektrum  “Fully  decoupled” 13 C-RMI menggambarkan  bahwa  metabolit  sekunder hasil  isolasi  disusun  oleh  35  atom  karbon. Suatu  karbon  metin  memberikan  puncak pada pergeseran kimia 100,70 yang menunjukkan  adanya  satu  C-anomer  dan diduga  senyawa  hasil  isolasi  terikat  suatu monosakarida.  Monosakarida  diduga  adalah piranosa  karena  memberikan  puncak  pada  δ 70,1;  76,9  ;  70,1;  76,8;  dan  61,1  berturut- turut untuk „C-2, „C-3, ‟C-4, „C-5, dan „C-6.
Spektrum  DEPT-135  memperlihatkan bahwa  senyawa  terdiri  dari    14  buah  atom karbon  metin  (-CH-),  12  buah  atom    karbon metilen  (-CH 2 -)  dan  6  buah  atom  karbon metil  (-CH 3 ),  dan  3  buah  atom  karbon kuartener  (-C-).    Tidak  adanya  puncak  yang muncul  pada  δ  140  adalah  cocok  untuk
karbon  kuartener  C-5  pada  sebagian  steroid. Munculnya  puncak  untuk  atom  karbon tersier pada δ 121 diperkirakan berasal atom karbon  metin  C-6  yang  berikatan  rangkap dengan karbon kuartener C-5.
Berdasarkan spektrum UV-Vis, IR, dan 13 C-RMI  diperkirakan  bahwa  senyawa  hasil isolasi memiliki kerangka dasar steroid  yang dibangun  oleh  29  atom  karbon  (stigmastan) yang terikat gula piranosa dan memiliki satu ikatan rangkap dua. Dibandingkan pergeseran  kimia 13 C-RMI  senyawa  hasil isolasi  dengan  suatu  senyawa  standar golongan  steroid  yang  mempunyai  35  atom karbon, yaitu stigmast-5-en-3-O-β-D- glukopiranosida (sitosterol-β-D-glukosida) (Gambar  3)  yang  telah  berhasil  dielusidasi dan  ditentukan  strukturnya  oleh  Khatun, dkk., (2012) .
O H H H H O H OH H OH O OH C H 3 CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 CH 3
Gambar 3. Senyawa Pembanding (stigmast-5,22-dien-3-O-β-D-glukopiranosida)
Tabel 1. Perbandingan Geseran Kimia 13 C Senyawa Hasil Isolasi dan Pembanding
Nomor Atom C Jenis Atom C Pergeseran Kimia (δ) ppm Hasil Isolasi Pembanding C-1 -CH 2 - 36,80 36,85 C-2 -CH 2 - 29,30 29,12 C-3 -CH- 73,50 75,62 C-4 -CH 2 - 38,30 38,20 C-5 -C- 140 139,98 C-6 -CH- 121 121,54 C-7 -CH 2 - 31,49 31,41 C-8 -CH- 28,70 28,74 C-9 -CH- 48,60 49,83 C-10 -C- 36,23 36,27 C-11 -CH 2 - 20,06 20,21 C-12 -CH 2 - 39,20 42,12 C-13 -C- 41,87 41,88 C-14 -CH- 56,18 56,26 C-15 -CH 2 - 23,90 23,79 C-16 -CH 2 - 27,80 27,76 C-17 -CH- 55,40 55,66 C-18 -CH 3 11,70 11,27 C-19 -CH 3 19 19,10 C-20 -CH- 31,40 31,46 C-21 -CH 3 18,60 18,69 C-22 -CH 2 - 33,30 33,51 C-23 -CH 2 - 25,40 25,64 C-24 -CH- 45 45,49 C-25 -CH- 35,50 35,70 C-26 -CH 3 19,10 18,69 C-27 -CH 3 19,10 18,35 C-28 -CH 2 - 22,60 22,6 C-29 -CH 3 11,80 12,29 „C-1 -CH- 100,70 100,74 „C-2 -CH- 70,10 73,21 „C-3 -CH- 76,90 78,61 „C-4 -CH- 70,10 69,90 „C-5 -CH- 76,80 76,18 „C-6 -CH 2 - 61,10 61,36 Perbandingan pergeseran kimia senyawa  hasil  isolasi  dengan  senyawa pembanding (Tabel 1) menunjukkan bahwa  hampir  semua  pergeseran  kimia 13 C-RMI  senyawa  hasil  isolasi  mendekati pergeseran  kimia  senyawa  pembanding. Diduga  bahwa  struktur  senyawa  hasil isolasi hampir menyerupai struktur senyawa  pembanding.  Namun,  jenis  gula yang  terikat  pada  cincin  steroid  senyawa hasil  isolasi  tidak  bisa  ditentukan  dari
perbandingan  pergeseran  kimia 13 C-RMI karena  stereoisomer  gula  yang  berbeda akan  memberikan  pergeseran  kimia 13 C- RMI yang relatif sama.
Berdasarkan  spektrum  UV-Vis,  IR,
13 C-RMI,  dan  perbandingan  pergeseran kimia  dengan  senyawa  standar,  maka diperkirakan  senyawa  hasil  isolasi  adalah suatu glikosida sitosterol (stigmast-5-en-3- O-glikopiranosida) (Gambar 4).
C H 3 CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 CH 3 O R R = piranosa
Gambar 4. Struktur Senyawa Hasil Isolasi (stigmast-5-en-3-O-glikopiranosida)
Kesimpulan Berdasarkan penelitian yang
dilakukan    terhadap    kulit  batang Bauhinia purpurea L,  telah  berhasil  diisolasi  isolat berupa kristal jarum berwarna putih sebanyak  13,6  mg  dari  fraksi  etil  asetat. Analisis  spektroskopi  menunjukkan  bahwa senyawa  hasil  isolasi  adalah  suatu  steroid yang  diduga  bernama  stigmast-5-en-3-O- glikopiranosida.  Namun,  perlu  dilakukan elusidasi  struktur  menggunakan  RMI  dua dimensi senyawa hasil isolasi untuk mendapatkan  data  struktur  yang  lebih lengkap.  Selain  itu,  perlu  juga  dilakukan  uji farmakologi  untuk  mengetahui  aktivitas senyawa hasil isolasi sehingga dapat dimanfaatkan.

## Daftar Pustaka
Achmad,  S.A.,  Murniana,  Silvester,  S. Udjiana,  Norio,  A.,  Euis  H.  Hakim dan Lukman, M., 1998, Tiga
Senyawa  Flavan-3-ol  dari  tumbuhan Bauhinia  purpurea,  Jurnal  Lembaga
Penelitian, Institut
Tehnologi
Bandung.
Aderogba, M. A., A. O. Ogundaini and J. N.
Eloff,  2006,  Isolation  of  Two
Flavonoids From Bauhinia monandra
(Kurz) Leaves and Their Antioxidative  Effects, Afr.    J. Traditional, Complementary and Alternative Medicines , 3(4): 59-65 Anwar, L., Julinar dan Fitrya, 2010, Senyawa Flavanon dari Kulit Batang Bauhinia hullettii Prain dan  Uji  In  Vitro  Sel
Kanker Murine P388 , Makalah disampaikan pada Seminar dan Rapat Tahunan  BKS  PTN  MIPA  Wilayah Barat  ke-23,  Pekanbaru,  10-11  Mei 2010.
Anwar,  L.,  Novitasari,  E.,  dan  Fitrya,  2010,
Isolasi  Senyawa  Fenolat  dari  Fraksi Etil  Asetat  Kulit  Batang  Tumbuhan Gandaria, Jurnal  Penelitian  Sains ,
Vol (13):1.
Awad,  A.  B.,  Chan,  K.  C.,  Downie,  A.  C.,
2000,  Peanuts  As  A  Source  of Betasitostol, A Sterol with
Anticancer  Properties,  Nurt  Cancer 36: 238-1.
Breitmaier,    Eberhard    (1993), Structure Elucidation    By    NMR    in    Organic Chemistry  Apractical  Guide ,    John
Wiley & Sons.
Creswell,  C.  J.,  Olaf  A.  Runquist,  and Malcolm  M.  Campbell, Analisis Spektrum    Senyawa    Organik ,
Penerbit  ITB Bandung, 1982.
Daniel,  2010,  Isolasi  dan  Identifikasi Senyawa  Flavonoid  pada  Fraksi  Etil Asetat  dari  Daun  Tumbuhan  Sirih Merah, Mulawarman scientifile vol.10, No.1
Day,  R.  A.,  1991, Analisis  Kualitatif ,
Erlangga Press, Yogyakarta.
Edeoga,  2005.  Phytochemical  Constituents Of  Some  Nigerian  Medicinal  Plants. African Journal of Biotechnology .
El–Hossary,  G.  A.,  Selim,  M.  A.,  Sayed,  A. E., Khaleel, A. E., 2000, Study of the flavonoid  content of Bassia  muricata and Bauhinia  racemosa , Bulletin  of
Faculty of Pharmacy, Cairo University 38:93-97.
Francisco,  2012, Chemical  composition  and anxiolytic-like effects of the Bauhinia platypetala. Sociedade  Brasileira  de Farmacognosia, Curitiba.
Fessenden,  R.  J.,  Fessenden,  J.  S.,  1992,
Kimia  Organik, cetakan  ketiga,  Jilid I, Penerbit Erlangga, Jakarta.
Fessenden,  R.  J.,  Fessenden,  J.  S.,  1995, Kimia  Organik, cetakan  ketiga,  Jilid II, Penerbit Erlangga, Jakarta.
Fitria,  Muharni,  dan  Kobaywa,  M.,  2012, Senyawa  Fenolat  dari  Fraksi  Etil Asetat  Buah  Tumbuhan  Mempelas, Jurnal  Penelitian  Sains  Volume  15 Nomor 3(C) Juli 2012
Ginting, B., Murniana, 2008, Isolasi
Senyawa  Antimikrobial  Ekstrak  Etil Asetat Bunga Cempaka Putih (Michella Alba DC) Dan Karakteristisasinya Dengan Kromatografi Gas-spektroskopi Massa (Laporan Penelitian), Indonesia  Science  &  Technology digital library.
Gritter,  R.  J.,  James,  M.  B.  dan  Atur,  E.  S.,
1991, Pengantar Kromatografi . Edisi ke-2, ITB, Bandung.
Gupta,  Daksha  Chandrashekar.,  Richard,
Lobo.,  Yogendra.,  Nilesh  ,  2012,    In vitro  Antidiabetic  activity  of  stem bark  of Bauhinia  purpurea Linn. Scholars  Research  Library  Der Pharmacia Lettre , 4 (2):614-6
Harborne, J. B., 1987, Metode Fitokimia, 2 nd
ed ., Terjemahan Kosasih
Padmawinata,  dan  Iwang  Soediro,
ITB, Bandung. Harborne,  J.  B.,  1971, Metode  Fitokimia Penentuan Cara Modern Menganalisa  Tumbuhan ,  Terjemahan
Kosasih  Padmawinata  dan  Iwang Soediro, ITB, Bandung.
Hidayati, N. D., Arifin, I., dan Susilowati, S.,
Uji  Sitotoksisitas  Fraksi  Etil  Asetat
Ekstrak Etanol Herba Alfalfa
Terhdap  Sel  Kanker  Payudara  T47D dan  Sel  Kanker  Leher  Rahim  Serta
Uji  Kandungan  Senyawa  Kimianya ,
Fakultas  Farmasi  Universitas  Wahid Hasyim Semarang Hostettman, K., Hostettman, M. dan
Marston, A., 1995, Cara Kromatografi Preparatif :Penggunaan  pada  Isolasi  Senyawa Alam . Terjemahan Kosasih
Padmawinata, ITB, Bandung.
Khatun,  M.,  Billah,  M.,  Quader,  A.,  2012,
Sterols  and  Sterol  Glucoside  from Phyllanthus  Species,  Dhaka  Univ.  J. Sci. 60(1): 5-10, 2012 .
Larson,  K.  L.,  1974, Species  of  Bauhinia , Oxford University, London.
Lenny,  S.,  2006, Senyawa  flavonoida, fenilpropanoida dan alkaloida [makalah], Medan, Departemen Kimia,  Fakultas  Matematika  dan Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas Sumatera Utara.
Lenny,  S.,  2006, Senyawa  terpenoida  dan steroida [makalah], Medan, Departemen Kimia, Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Sumatera Utara. MachLatchy,  D.  L.,  dan  Van  Der  Kroak,  G. J., 1995, The Phytoestrogen Betasitosterol Alters The Reproductive  Endocrine  Etatus  of Goldfish, Toxicol  Appl  Pharmacol; 134: 305-2.
Markham,
K. R., 1988, Cara Mengidentifikasi Flavonoid ,
Terjemahan  :  Kosasih  Padmawinata,
ITB, Bandung.
Maryanti,  E.,  2006,  Karakterisasi  Senyawa Alkaloid  Fraksi  Etil  Asetat  Hasil solasi  dari  Daun  Tumbuhan  Pacah
Piriang ( Ervatamia coronaria (Jacq.)  Stapf), Jurnal  Gradien  Vol. 2 No. 2 Juli 2006 : 176-178
Mohrig,  R.  J.,  N.  C.,  Hammond,  F.  P., Schatz,  and  C.  T.,  Morrill,  2003, Techniques  in  Organic  Chemistry . W. H. Freeman Company.
Monitto,  P.,  1981, Biosinthesis  of  Natural Product ,  Ellis  Harwood  Limited, London.
Mudjirahmi,  D.,  dan  Ersam,  T.,  2007, Turunan  4-Fenilkumarin  Dari  Fraksi
Polar Ekstrak Etil Asetat Pada Batang Garcinia  balica Miq. Akta  Kimindo Vol. 3 No.1 : 55 – 60.
Mulja,  M.,  Suharman,  1995, Analisis Instrumental ,
Universitas Air
Langga, Surabaya.
Patil,  G.  G.,  P.  Y.  Mali  dan  V.  V.  Bhadane,
2008,  Folk  Remedies  Used  Againts Respiratory Disorder in Jalgon District,  Maharashtra, Nat.  Prod. Radiance, 7:354-358.
Pavia,  D.  L.,  Lampman,  G.M.,  Kriz,  G.S., dan Vyvyan, J.R. 2007. Introduction to  Spectroscopy .  Sauders  College. Philadelphia.
Peckock,  R.  L.,  Shield,  I.  d.,  Cairns,  T.  dan Mc  William,  I,  G.,  1976, Modern Methods  of  Chemical  Analysis .  Jhon Willey & Son, New York.
Pudjaatmaka,  A.  H,.  2002, Kamus  Kimia , Balai Pustaka, Jakarta.
Rajaram,  N.  dan  K.  Janardranan,  1991,
Chemical Composition and Nutritional  Potential  of  Tribal  Pulse, B.  purpurea,  B.  Racemosa,  B.  vahili ,
J.  Sci.  Food.  Agricultural  55  :  423- 431
Ratnayani, K., Asih, I.A.R.A., Swardanan, I.
B.,  2012,  Isolasi  dan  Identifikasi
Senyawa  Golongan  Flavonoid  dari Madu Kelengkeng ( Nephelium
longata L.), Jurnal  Kimia  6  (1), Januari 2012 : 27-28 Robinson,  T.,  1995, Kandungan  Organik Tumbuhan Tinggi , Edisi VI, Hal 191-
216,  Diterjemahkan  oleh  Kosasih Padmawinata, ITB, Bandung.
Sari,  O.  P.,  dan  Taufiqurrohmah,  T.,  2006,
Isolasi  dan  Identifikasi  Senyawa Flavonoid Fraksi Etil Asetat Rimpang Tumbuhan Temu Kunci (Boesenbergia pandurata (Roxb)
Schelecht)  (Zingiberaceae), Indo.  J.
Chem., 2006, 6 (2), 219 - 223 219 Sastrohamidjojo,  H.,  1985 ,  Kromatografi , Edisi ke-2, Liberty, Yogyakarta. Sastrohamidjojo,  H.,  1992, Spektroskopi Inframerah , Liberty, Yogyakarta.
Shajiselvin,  C.  D.,  Muthu,    Kottai  A.,  2011,
Antioxidant activity of various
extracts from whole plant of Bauhinia Purpurea (Linn): An in vitro evaluation, Journal  of  Advanced Pharmaceutical Research 2(1): pp.31-37 .
Sharp,  J.  T.,  Goesney,  I.,  Bowley,  A.  G.,
1989, Practical  Organic  Chemistry : A  Student  Handbook  of  Techniques , Chapmann and Hall, London.
Skoog,  D.  A.,  Holler,  P.  J.,  Nieman,  T.  A.,
2004, Principles  of  Instrumental
Analysis. Ed ke-5 , Philadelphia: Hartcaurt Brace .
Slabaugh, P., 1980, Melting Point As A Pure Test , Oxford University, London.
Sudjadi,  1988, Penentuan  Struktur  Senyawa Organik , Ghana Indonesia, Jakarta.
Tatu,  A.,  Miettinen  A.,  Helena,  G.,  In effective decrease of serum cholestrol by  simvastatin  in  a  subgroup  of hypercholestrolemic coronary patients. Atherosclerosis.  2002;  164:
147-2.
Zak,  A.,  Vecka,  M.,  Turzicka,  E.,  2005, Composition  of  Plasma  Fatty  Acids and non-Cholestrol Sterols in Anorexia  nervosa , Physiol  Res  54: 433-1.