## AKTIVITAS ANTIOKSIDAN DAN IDENTIFIKASI GOLONGAN SENYAWA AKTIF EKSTRAK KASAR MIKROALGA Chlorella vulgaris YANG DIKULTIVASI

## BERDASARKAN SUMBER CAHAYA YANG BERBEDA
Teni Novianti 1) ,  Muhammad Zainuri 2) , Ita Widowati 3)
*) Fakultas Teknologi Kelautan dan Perikanan, Universitas Nahdlatul Ulama Cirebon Jalan Sisingamangaraja No. 33 Cirebon 45112, Jawa Barat, Indonesia E-mail : teninovianti.83@gmail.com
#) Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro Jalan Prof. Soedarto Tembalang, Semarang50275, Jawa Tengah, Indonesia

## ABSTRAK
Chlorella  vulgaris termasuk  salah  satu  jenis  fitoplankton  dalam  kelas Chlorophyceae (alga  hijau)  yang  dapat  dimanfaatkan  sebagai  suplemen  maupun  sumber  obat  alami  yang berpotensi  sebagai  antioksidan.  Untuk  memaksimalkan  pertumbuhan  dan  senyawa  bioaktif C.vulgaris yang  dapat  menghasilkan  biomassa  dan  metabolit  sekunder  yang  memiliki aktivitas antioksidan membutuhkan sumber cahaya buatan terbaik. Tujuan dari penelitian ini adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  antioksidan  dan  golongan  senyawa  aktif  ekstrak  kasar mikroalga C.vulgaris yang dikultivasi  pada  sumber cahaya  yang berbeda.  Metode penelitian yang  digunakan  adalah  metode  eksperimental,  sedangkan  rancangan  penelitian  yang digunakan  adalah  Rancangan  Acak  Lengkap  Faktorial  terdiri  atas  6  perlakuan  dan  3  kali ulangan.  Perlakuannya adalah sumber cahaya neon (32 watt) yang ditambahkan dengan LED Merah,  LED  Hijau  dan  LED  Biru  masing-masing  16  watt  dengan  KAI C.vulgaris yang dikultivasi yaitu 10x10 4 sel/ml dan 100x10 4 sel/ml.  Hasil penelitian menunjukan penggunaan sumber  cahaya  neon  yang  ditambahkan  LED  berwarna  merah,  hijau  dan  biru  dengan kepadatan awal inokulum 100x10 4 sel/ml memperoleh hasil pertumbuhan C.vulgaris tertinggi pada  sumber  cahaya  LED  merah  sebesar  2057,7x10 4 sel/ml.  Sedangkan  sumber  cahaya  neon yang  ditambahkan  LED  biru  menghasilkan  aktivitas  antioksidan  terbaik  dengan  nilai  IC 50 38,900 (antioksidan sangat kuat) dan memiliki komponen bioaktif alkaloid, steroid, saponin, flavonoid dan kuinon.
Kata kunci : Chlorella vulgaris , sumber cahaya, LED, aktivitas antioksidan

## ABSTRACT
Chlorella  vulgaris is  included  as  one  of  phytoplankton  types  in  the Chlorophyceae (green algae) class which can be used as a supplement or natural medicinal resources potential as  antioxidant.  To  maximalize  the  growth  and  the  bioactive  compound  of C.vulgaris to produce biomass and secondary metabolites with antioxidant activity, the best synthetic light source is needed.The purpose of this study was to determine the antioxidant activity and the classification  of  active  compound  of  the Chlorella  vulgaris microalgae  crude  extract cultivated in adifferent light source.The method used was an experimental method, while the design of the study was a complete randomized factorial design consisted of 6 treatments and 3 repetitions.  The treatments  were light  sources  neon (32  watt) with  an additional red  LED, green LED and blue LED each for 16 watt with the Chlorella vulgaris inoculum initial density that was cultivated were 10x10 4 and 100x10 4 cells/ml.  The result showed that the use of neon light  added  with  red,  green  and  blue  LED  with  the  inoculum  initial  density  of  100x10 4 cells/ml  produced  the  highest  growth  of C.vulgaris in  the  red  LED  light  source  for  2057,7 x10 4 cells/ml. Meanwhile the neon light with blue LED produced the best antioxidant activity
with  IC 50 value of  38.900  ppm  (very  strong  antioxidant) and contained bioactive compounds alkaloid, steroid, saponin, flavonoid and quinone.
Key words : Chlorella vulgaris, light source, LED, antioxidant activity

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  tropis yang  memiliki  potensi  sumber  daya  alam kelautan  dan  memiliki  keanekaragaman hayati  yang  sangat  besar.    Salah  satu sumberdaya  hayati  yang  potensial  dan belum banyak dieksplorasi adalah mikroalga (Karseno et al. , 2013). Mikroalga  mampu  menghasilkan  senyawa utama  seperti  protein,  karbohidrat  dan lemak,  selain  itu  juga  memiliki  komponen aktif  yang  dimanfaatkan    dalam  bidang industri pangan, kosmetik, pharmaceutical dan neutraceutical (Abd  El-Baky,  2009).
Komponen  aktif  mikroalga  mempunyai aktivitas antimikroba, antijamur dan antivirus  (Priyadarshani  dan  Rath,  2012) serta  aktivitas  antioksidan  dan  antibakteri (Widowati et al. 2015).
Chlorella vulgaris merupakan mikroalga  yang  termasuk  dalam  kelas Chlorophyceae, memiliki  nilai  gizi  yang baik dan senyawa-senyawa bioaktif  alami seperti  karotenoid,  senyawa  fenol,  sulfat polisakarida  dan  vitamin  yang  salah  satu fungsi dari senyawa bioaktif tersebut dapat mempengaruhi regulasi sel, respon kekebalan  tubuh  dan  sebagai  antioksidan (de Fretes et al., 2012).
Saat ini penggunaan bahan pengawet dan antioksidan sintetis tidak direkomendasikan  oleh  Badan  Pengawas Obat dan Makanan (BPOM) karena diduga dapat  menginduksi  proses  karsinogenesis (Nawaly et  al., 2013).  Karena  itu  perlu dicari  alternatif  lain  yaitu  antioksidan alami  yang  bersumber  dari  bahan  alam
seperti  yang  terdapat  pada  semua  tumbuh- tumbuhan dan buah-buahan (Barus, 2009).
Potensi Chlorella sebagai antioksidan  dapat  dijadikan  antioksidan alami yang dapat menunda, memperlambat  dan  mencegah  terjadinya proses oksidasi. Antioksidan sangat bermanfaat bagi kesehatan seperti melindungi  tubuh  dari  berbagai  penyakit degeneratif, kanker, proses penuaan atau antiaging serta  berperan  penting  untuk mempertahankan  mutu  produk  pangan (Tamat et al., 2007).
Pengujian aktivitas antioksidan mikroalga C.vulgaris yaitu  pada  ekstrak biomassa.  Oleh  karena  itu, C.vulgaris dikultivasi  terlebih  dahulu  dalam  sumber cahaya  yang dapat  meningkatkan produksi (biomassa)  dan  komponen  bioaktif  yang berpotensi  sebagai  antioksidan. Light emitting  diode (LED)  merupakan  kandidat sumber  cahaya  artifisial  yang  ideal. Beberapa karakteristik penting LED sebagai  sumber  cahaya  artifisial  dalam produksi  mikroalga  antara  lain  masa penggunaan  lebih  lama,  bebas  merkuri, lebih  hemat  energi,  dan  menghasilkan cahaya  monokromatis  dengan  panjang gelombang  tertentu  (Blanken et  al .,  2013; Teo et  al., 2014).    Selain  itu  penggunaan LED  sebagai  sumber  cahaya  tambahan pada  kultur  mikroalga  dapat  menginduksi stres cahaya sehingga mampu menghasilkan  metabolisme  sekunder  beta karoten yang berpotensi sebagai antioksidan  (Helena et  al., 2016).    Oleh karena  itu  perlu  digunakan  lampu  neon
sebagai  cahaya  utama  pengganti  cahaya matahari  untuk  pertumbuhan Chlorella vulgaris dan  LED  merah,  hijau  dan  biru sebagai  sumber  cahaya  tambahan  untuk menginduksi  stress  cahaya  yang  dapat menghasilkan  aktivitas  antioksidan  pada ekstrak C. vulgaris.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui  aktivitas  antioksidan  dan golongan  senyawa  aktif  ekstrak  kasar mikroalga Chlorella vulgaris yang dikultivasi  pada  sumber  cahaya  yang berbeda. MATERI DAN METODE

## PENELITIAN

## Materi Penelitian
Mikroalga
Chlorella vulgaris diperoleh  dari  kultur  murni  Laboratorium Pakan  Alami  Budidaya  Air  Payau,  Balai Besar  Pengembangan  Budidaya  Air  Payau (BBPAP)  Jepara,    Jawa  Tengah  dan selanjutnya  ditumbuhkan  dalam  medium Walne (Zainuri et al ., 2014).

## Metode penelitian
Penelitian  terdiri  dari  5  tahap  yaitu  : (1).  Kultivasi C.vulgaris (eksperimen sumber cahaya), (2). Pemanenan biomassa C.  vulgaris mengacu  pada  Bariyyah et al., (2013) dan Kusumaningrum dan Zainuri,  (2013),  (3).  Ekstraksi  senyawa aktif  C. vulgaris mengacu  pada  Widowati et  al., (2014)  dan  Firdiyani et  al., (2015),
(4).  Uji  aktivitas  antioksidan  mengacu pada  metode  Widowati et  al .,  (2014)  ; Irondi et  al., (2012)  dan  (5)  Identifikasi Golongan  Senyawa  Aktif  mengacu  pada Kumoro (2015).
Kultivasi Chlorella vulgaris
Chlorella vulgaris dengan kepadatan awal  inokulum  100x10 4 sel/ml  dikultur dalam  botol  kaca  ( beker  glass )  dengan volume  media  3500  ml,    intensitas  cahaya sekitar 2.000-4500 lux. Penelitian menggunakan  rancangan  acak  lengkap (RAL)  dengan  tiga  perlakuan  dan  masing-
masing  tiga  ulangan.  Perlakuan  uji  yang diberikan  adalah  sumber  cahaya  buatan menggunakan 3 lampu neon putih (Phillips TL-D  32  W)  sekitar  2000-2500  lux penyinaran selama pengamatan dan penambahan  LED  merah  (R)  dengan panjang  gelombang  630-700  nm,  LED hijau (G) dengan panjang  gelombang 490- 560 nm dan LED biru (B) dengan panjang gelombang 430-490 nm (CE ROHS/Emico 16  W)  diinduksi  sebagai  stres  cahaya dengan  fluks  1500-2000  lux  dilakukan selama 12 jam/hari.

## Neon dan LED Merah (R)
Neon dan LED Hijau (G)

## Neon dan LED Biru (B)
Gambar 1 . Kondisi Kultur C.vulgaris : perlakuan neon yang ditambahkan LED merah (R) ; perlakuan LED hijau (G) ; perlakuan LED biru (B)
Pemanenan Biomasa Chlorella vulgaris
Pemanenan dilakukan pada awal fase stasioner kemudian hasil pemanenan
dipisahkan
menggunakan sentrifuge dengan  kecepatan  5500  rpm  selama  15 menit.  Setelah  didapatkan  biomassa  nya kemudianditimbang masing-masing
perlakuan untuk menentukan berat
basahnya

## Ekstraksi  Senyawa  Aktif  Mikroalga
C.vulgaris Biomasa kering Chlorella vulgaris ditimbang
masing-masing sebanyak  14  gram  dan  dimasukkan  ke dalam  erlenmeyer,  kemudian  ditambahkan pelarut hingga volume akhir mencapai 140 ml  dengan  perbandingan  1  :  10  (w/v). Prosedur ekstraksi dilakukan dengan merendam sampel dengan pelarut metanol  pada  tabung  erlenmeyer.    Hasil maserasi  kemudian  disaring  dengan  kertas saring Whatman sehingga dihasilkan filtrat dan  residu.  Perendaman  dilakukan  3  kali sampai  filtrat  mendekati  bening.  Filtrat atau  super  natan  yang  diperoleh  kemudian dipekatkandengan vacum rotary
evaporator pada  suhu  40 0 C  hingga diperoleh  ekstrak  kasar( crude  extract ) berupa pasta.

## Uji Aktivitas Antioksidan dengan DPPH
( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ) Konsentrasi ekstrak sampel Chlorella vulgaris yang digunakan adalah 5  ppm,  10  ppm,  25  ppm,  50  ppm  dan  100 ppm  dilakukan  3  kali  ulangan.  Masing- masing  konsentrasi  tersebut  dipipet  75 µlekstrak  dan  dicampurkan  dengan  225  µl larutan DPPH.Campuran tersebut dimasukan kedalam microtiterplate 300µL kemudian diinkubasi selama 30 menit pada tempat  gelap.    Setelah  itu  diukur absorbansinya dengan menggunakan microplate reader pada panjang gelombang maksimum (517 nm). Kemampuan untuk meredam radikal bebas DPPH (inhibisi) dihitung dengan menggunakanpersamaan :
% inhibisi = A DPPH – A Sampel x 100%
A DPPH
Keterangan:
A DPPH : absorbansi larutan DPPH (blanko)
A Sampel : absorbansi sampel
Nilai  konsentrasi  penghambatan aktivitas  radikal  bebas  sebanyak  50% (IC 50 )  dihitung  dengan  menggunakan persamaan  regresi  yang  diperoleh  dari perpotongan  garis  antara  daya  hambatan dan sumbu konsentrasi, kemudian dimasukan ke dalam persamaan y = a + bx,
dengan  y  =  50  dan  nilai  x  menunjukan IC 50. Penggolongan  aktivitas  antioksidan ini  menurut  Molyneux  (2004)  berdasarkan pada  nilai  IC 50 yang  dimiliki  oleh  suatu bahan,  yaitu  sangat  kuat  (IC 50 <50  ppm), kuat (50 ppm<IC 50 <100 ppm), sedang (100 ppm<  IC 50 <150  ppm),  lemah(150  ppm< IC 50 <  200  ppm)  dan  sangat  lemah (IC 50 >200 ppm).
Identifikasi  Golongan  Senyawa  Aktif Ekstrak Kasar C.vulgaris (1). Uji Alkaloid
Uji alkaloid dilakukan dengan melarutkan  ekstrak  dengan  10  tetes  asam sulfat 2 N kemudian diuji dengan pereaksi dragendorff. Hasil uji positif diperoleh bila terbentuk endapan merah hingga jingga. (2). Uji Triterpenoid dan Steroid
Sejumlah  1  gram  sampel  ekstrak dilarutkan  dalam  5  ml  eter  dalam  tabung reaksi  yang  kering  kemudian  disaring menggunakan  kertas  saring.    Terbentuk filtrat  berwarna  hijau  kemudian  filtrat diuapkan dalam cawan penguap menggunakan  kasa  asbes  kaki  tiga  hingga kering  dan  berbentuk  serbuk  hitam. Setelah  itu    serbuk  dimasukan  ke  tabung reaksi  ditambahkan  10  tetes  pereaksi Liberman Burchard. Reaksi positif ditunjukkan  dengan  terbentuknya  larutan berwarna  merah  atau  ungu  untuk  pertama kali  (senyawa  triterpenoid)  kemudian berubah  menjadi  biru  dan  hijau  (senyawa steroid).
(3). Uji Saponin
Saponin  dapat  dideteksi  dengan  uji busa dalam air panas.  Tabung reaksi yang berisi  sampel  di  rendam  pada backerglass yang sudah terisi air, kemudian dipanaskan selama  10  menit.  Setelah  itu  angkat  dan sampel  dikocok  kuat  kemudian  amati.
Busa yang stabil akan terus terlihat selama 5 menit dan tidak hilang pada penambahan 1  tetes  HCl  2  N  menunjukkan  adanya saponin.
(4). Uji Flavonoid
Sejumlah  5  ml  sampel  ekstrak dimasukan kedalam tabung reaksi kemudian  ditambahkan  serbuk  magnesium 1  gram  dan  5  ml  HCL  2  N. Tube yang sudah  tercampur  dimasukan  ke  dalam backerglass yang  telah  terisi  air  kemudian dipanaskan  selama  10  menit.    Filtrat  yang dihasilkan  yaitu  berwarna  cokelat  muda atau  kuning  keemasan.    Setelah  itu  filtrat disaring  menggunakan  kertas  saring  dan ditambahkan 1 ml Amil Alkohol kemudian campuran dikocok. Reaksi positif ditunjukkan  dengan  terbentuknya  warna merah,  kuning  atau  jingga  pada  lapisan amil alkohol.
(5). Uji Kuinon Sejumlah  2  ml  sampel  ekstrak ditambahkan  2  ml  NaOH  1  N  kemudian diamati  perubahan  warnanya.  Reaksi positif  ditunjukkan  dengan  terbentuknya warna kuning.

## Analisis Data
Hasil  dari  data  aktivitas  antioksidan dilakukan  pengolahan  data  menggunakan analisis  ragam  atau analisis  of  variance (ANOVA)  yang  sebelumnya  terlebih
dahulu  dilakukan  uji  normalitas,  uji homogenitas dan uji additivitas.
Selanjutnya  apabila  ada  perbedaan  maka diuji  lanjut  dengan  uji  Tukey  berdasarkan nilai  signifikansi  p<0,05  atau  pada  tingkat kepercayaan  95%.  Dalam  pengolahan  data
menggunakan  SPSS  22.0  for  windows, sedangkan  data  identifikasi  golongan senyawa  aktif  ekstrak  kasar C.  vulgaris dianalisis secara kualitatif.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kultivasi Chlorella vulgaris Kultivasi C.vulgaris dilakukan  dalam Medium Walne menggunakan beaker glass 3500  ml.Media  Walne  merupakan  salah satu  sumber  media  yang  paling  baik digunakan untuk meningkatkan kandungan nutrisi  dan  pertumbuhan  mikroalga C. vulgaris (Satriaji et  al., 2016). C.  vulgaris dikultur  selama  6  hari  dengan  perlakuan sumber  cahaya  yang  berbeda.Cahaya mempunyai  peranan  yaitu  sebagai  sumber energi dalam proses fotosintesis.
Penyinaran  dengan  lampu  neon  selama kultur  digunakansebagai  cahaya  utama pengganti cahaya matahari untuk pertumbuhan Chlorella  vulgaris dan  LED merah,  hijau  dan  biru  sebagai  sumber cahaya tambahan untuk menginduksi stress cahaya  yang  dapat  menghasilkan  aktivitas antioksidan pada ekstrak C. vulgaris.
Perkembangan kepadatan sel
Chlorella  vulgaris yang  teramati  dalam penelitian  ini  meliputi  fase lag (adaptasi ) , faseeksponensial  (fase  logaritmik),    fase puncak dan fase stasioner.  Pada setiap fase nya mikroalga Chlorella vulgaris mengalami  perubahan  warna  pada  media kultur.    Pada  umur  kultur  hari  ke-1  dan  2, media Chlorella  vulgaris terlihat  masih berwarna  hijau  bening,  setelah  hari  ke  3 media Chlorella  vulgaris sudah  mulai terlihat  perubahan  warna  menjadi  hijau muda  dengan  adanya  biomassa  yang mengendap  di  bawah  atau  dasar  media kultur.  Pada umur kultur hari ke-4 dan ke-
5  terjadi  perubahan  warna  hijau  muda menjadi  hijau  lebih  tua  dari  sebelumnya. Setelah  hari  ke-5  warna  semakin  hijau mendekati  pekat  dengan  biomassa  yang semakin terlihat jelas dan banyak di sekitar dasar media kultur
Hasil penelitian menunjukkan bahwa kultur C.  vulgaris yang  diberi  perlakuan sumber  cahaya  LED  Merah  mengalami peningkatan  kelimpahan  sel  yang  tertinggi sebesar  2057,7x10 4 sel/ml  dihari  keempat kultur.  Sedangkan kepadatan pertumbuhan sel C.vulgaris terendah  pada  perlakuan LED  hijau  dengan  nilai  1661,3x10 4 sel/mldihari  kelima  kultur.    Hal  tersebut menandakan  bahwa  sumber  cahaya  LED Merah  lebih  baik  dalam  menghasilkan kelimpahan  sel C.  vulgaris .    Adapun Grafik  Pertumbuhan C.  vulgaris pada perlakuan  sumber  cahaya  yang  berbeda dapat dilihat pada Gambar 2.
LED  merah  merupakan  sumber cahaya yang paling efektif bagi pertumbuhan  mikroalga  hijau  terutama Chlorella vulgaris. Berdasarkan penelitian yang  dilakukan  oleh  Syafriyudin et  al.,
(2015),  Cahaya  berperan  utama  dalam proses  fotosintesis  melalui  fitokrom  yang merupakan  protein  warna  pada  tumbuhan dan  mengandung  susunan  atom  khusus yang  mengabsorpsi  cahaya.  Fitokrom merupakan  penerima  atau  reseptor  cahaya yang  paling  efektif  dalam  menyerap  atau mendeteksi  cahaya  dan  sebagai  sensor fitokrom  terangsang  oleh  cahaya  merah dan  infra  merah  dibandingkan  dengan cahaya yang lain. Fitokrom dapat
mendeteksi  gelombang  cahaya  dari  300- 800  nm  dengan  sensitifitas  maksimum pada cahaya merah (R, 600-700 nm dengan puncak  penyerapan  pada  660  nm)  dan merah  jauh  (FR,  700-800  nm  dengan
puncak penyerapan pada 730 nm). Cahaya yang  berpengaruh  terhadap  pertumbuhan adalah  pada  spektrum  merah  dengan panjang gelombang 660 nm.
Gambar 2. Grafik  Pertumbuhan Chlorella  vulgaris pada  Perlakuan  Sumber  Cahaya  yang Berbeda
Diperkuat  dengan  Kimball  (2000), menyatakan  bahwa  proses  fotosintesis yang  dihasilkan  oleh  mikroalga  dengan cara  mereaksikan  karbondioksida  dan  air menjadi  gula  dengan  bantuan  energi cahaya matahari dan klorofil.  Fotosintesis merupakan  proses  biologi  yang  kompleks, proses ini menggunakan nutrisi dan energi cahaya  yang  dapat  dimanfaatkan  oleh klorofil  yang  terdapat  dalam  kloroplas. Hasil penggunaan sinar LED dengan warna merah,  hijau  dan  biru  menghasilkan pertumbuhan  tertinggi  dengan  LED  merah karena  warna  merah  dapat  menghasilkan
karoten  a  yang  dapat  mempercepat  proses pertumbuhan.    Hal  ini  sesuai  dengan  hasil penyelidikan        Thomas-Hill et  al., (2007) yang menyinari mikroalga Chlorella berganti-ganti  dengan  sinar  merah,  jingga, kuning,  hijau,  biru,  nila  dan  ungu  maka hasil  fotosintesis  yang  tertinggi  adalah sinar  merah.    Untuk  itu  penelitian  ini sesuai dengan apa yang dilakukan Thomas- Hall et  al., (2007)  bahwa  pertumbuhan mikroalga dengan memberikan sinar merah akan  tumbuh  dengan  cepat  dibandingkan dengan sinar lainnya.
Pemanenan Mikroalga Chlorella vulgaris Biomassa  yang  digunakan  sebagai
sampel  antioksidan  dan  fitokimia  yaitu
biomasa  sel C.vulgaris yang  dipanen setelah  kultur  mencapai  fase  puncak  dan memasuki  tahap  awal  stasioner  yaitu  pada hari  ke-5.  Proses  pemanenan  dilakukan
0 500 1000 1500 2000 2500 1 2 3 4 5 6 K e p ad atan C.vul ga ri s ( x10 4 sel /m l) Hari ke- LED Merah LED Hijau LED Biru Fase
Adaptasi Fase Logaritmik Fase Puncak Fase Stasioner Fase Kematian
saat  sel  pada  fase  awal  stasioner,  hal  ini dikarenakan pada fase ini terjadi pembentukan  senyawa  metabolit  sekunder yang  berfungsi  untuk  pertahanan  hidup seperti senyawa fenol, alkaloid, triterpenoid  (Bariyyah et  al. ,  2013)  dan senyawa bioaktif lainnya seperti betakaroten yang berpotensi sebagai antioksidan  (Helena et  al., 2016).  Hal tersebut juga sesuai dengan penelitian yang dilakukan  oleh  Rafaelina et  al., (2016) bahwa  biomasa  yang  dipakai  untuk  uji antioksidan  dipanen  pada  saat fase stasioner dengan  tujuan  untuk  mencegah mikroalga Chlorella mengalami penurunan jumlah  sel  yang  drastis.  Selain  itu dikarenakan pada fase ini terjadi metabolisme  sekunder  yang  merupakan
keseluruhan proses sintesis dan
perombakan produk metabolit primer Ekstraksi  Senyawa  Aktif  Mikroalga Chlorella vulgaris Ekstraksi Chlorella vulgaris
dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol.Maserasi ini digunakan karena prosesnya mudah, sederhana  dan  tidak  menggunakan  suhu tinggi  yang  dimungkinkan  dapat  merusak senyawa  aktif  pada  mikroalga  C. vulgaris . Hasil ekstraksi menunjukkan bahwa ekstrak kasar C.vulgaris memiliki persentase  rendemen  yang  cukup  tinggi yaitu lebih dari 50% (Tabel 1) dan ekstrak yang dihasilkan berbentuk serbuk berwarna hijau pekat .
Tabel 1 . Hasil Ekstraksi Mikroalga Chlorella vulgaris Sumber Cahaya Berat Kering Sampel (gram) Berat Ekstrak (gram) Rendemen Ekstrak (%) LED Merah 14 7,43 53,07 LED Hijau 14 7,18 51,28 LED Biru 14 7,32 52,28 Pelarut  yang  dipakai  pada  saat ekstraksi yaitu menggunakan pelarut metanol yang merupakan pelarut polar dan sering digunakan karena penetrasi kedalam dinding sel lebih efisien sehingga menghasilkan  metabolit  sekunder  lebih banyak.    Hal  ini  menyebabkan  maserasi dengan pelarut metanol akan menghasilkan ekstrak dengan kandungan metabolit sekunder  lebih  banyak  dan  beragam. Diperkuat  dengan  hasil  penelitian  yang dilakukan  oleh    Firdiyani et  al., (2015),
bahwa  pelarut  memiliki  kemampuan  yang berbeda-beda  dalam  mengambil  senyawa bioaktif  suatu  sampel.Rendemen  terbesar diperoleh dari ekstrak polar seperti metanol karena senyawa polar memiliki
kemampuan  untuk  mengekstrak  senyawa dari  kisaran  senyawa  polar  hingga  semi polar  dan  memiliki momen  dipole yang besar  yaitu  jumlah  vektor  momen-momen ikatan lebih besar dari nol.
Uji Aktivitas Antioksidan Ekstrak Kasar Chlorella vulgaris
Uji  kuantitatif  potensi  antioksidan pada  ekstrak Chlorella  vulgaris dalam penelitian  ini  menggunakanmetode  DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazil). Metode ini didasarkan  pada  perubahan  warna  radikal DPPH. Perubahan warna tersebut disebabkan oleh reaksi antara radikal bebas DPPH  dengan  satu  atom  hidrogen  yang dilepaskan  senyawa  yang  terkandung
dalam  bahan  uji  untuk  membentuk senyawa 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazin
yang berwarna kuning.
Hasil pembacaan absorbansi
ekstrak  kasar C.vulgaris dengan  berbagai konsentrasi ekstrakmenggunakan microplate reader pada panjang gelombang 517 nm.Semakin tinggi aktivitas antioksidan  yang  ditunjukkan  oleh  ekstrak yaitu  semakin  kecil  absorbansi  yang diperoleh  dan  semakin  tinggi  konsentrasi sampel  maka  semakin  tinggi  kandungan antioksidannya . Hal  ini  disebabkan  karena kemampuan  antioksidan  suatu  zat  dalam sampel  untuk  meredam  radikal  bebas
DPPH  semakin  besar.  Jika  suatu  senyawa memiliki  aktivitas  sebagai  antioksidan, maka akan terjadi penurunan nilai absorbansi DPPH yang ditunjukkan dengan  terjadinya  degradasi  warna  ungu DPPH menjadi kuning Pengujian aktivitas antioksidan dalam  ekstrak  mikroalga C.  vulgaris yaitu dengan variasi konsentrasi 5 ppm, 10 ppm, 25  ppm,  50  ppm  dan  100  ppm.    Hasil aktivitas antioksidan dengan metode DPPH diinterpretasikan  dalam  parameter  nilai persentase  inhibisi  ekstrak  C. vulgaris disajikan pada Gambar 3.
Gambar 3 .  Persen Inhibisi Ekstrak Kasar Mikroalga C.vulgaris pada Perlakuan Sumber Cahaya Berbeda
Berdasarkan pengujian aktivitas antioksidan  ekstrak  kasar C.  vulgaris menunjukkan nilai presentase inhibisi yang berbeda-beda.  Semakin  tinggi  konsentrasi ekstrak maka semakin tinggi nilai persentase inhibisinya.Yulianti et al.
(2015)  menyatakan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi  pelarut,  maka  semakin  tinggi persentase  inhibisinya,  hal  ini  disebabkan pada  sampel  yang  semakin  banyak,  maka
semakin  tinggi  kandungan  antioksidannya sehingga  berdampak  juga  pada  tingkat penghambatan radikal bebas yang dilakukan oleh zat antioksidan tersebut.
Data  persen  inhibisi  selanjutnya dilakukan  analisis  regresi  linier  sederhana untuk melakukan prediksi nilai konsentrasi dalam  melakukan  peredaman  radikal DPPH 50% (IC 50 ). Menurut Firdiyani et al.
(2015),  besarnya  aktivitas  antioksidan ditandai dengan nilai IC 50 , yaitu
0 10 20 30 40 50 60 70 5 10 25 50 100 % In h ib isi Konsentrasi (ppm) Red LED Green LED Blue LED
konsentrasi larutan sampel yang dibutuhkan untuk menghambat 50% radikal  bebas  DPPH.  Semakin  kecil  nilai
IC 50 maka aktivitas antioksidannya
semakin  tinggi  (Molyneux,  2004).  Data nilai  IC 50 ekstrak  kasar C.vulgaris yang dikultivasi  berdasarkan  sumber  cahaya berbeda ditunjukkan pada Tabel 2.
Tabel 2. Nilai  IC 50 Ekstrak  Kasar  Mikroalga Chlorella  vulgaris yang  Dikultivasi Berdasarkan Sumber Cahaya Berbeda
Perlakuan Sumber Cahaya y = a + b*x R 2 R IC 50 (ppm) Kriteria IC 50 LED Merah y = 27,644 + 0,367*x 0,870 0,933 60,915 Kuat LED Hijau y = 33,248 + 0,355*x 0,806 0,898 47,188 Sangat Kuat LED Biru y = 36,307 + 0,352*x 0,787 0,887 38,900 Sangat Kuat
Aktivitas  antioksidan  ekstrak  C. vulgaris yang dihasilkan selama penelitian cukup potensial sebagai sumber antioksidan  dari  bahan  alami  karena  nilai IC 50 yang  dihasilkan  antara  38,900-60,915 ppm.    Hal  ini  berarti  aktivitas  antioksidan yang  dihasilkan  tergolong  pada  kriteria sangat kuat sampai kuat.Antioksidan dapat secara efektif mendonorkan sebuah elektron  kepada  radikal  bebas.  Apabila radikal  bebas  telah  mendapatkan  elektron dari  antioksidan  maka  radikal  bebas  akan menjadi stabil. Setelah antioksidan mendonorkan sebuah elektronnya, antioksidan  akan  berubah  menjadi  radikal bebas,  akan  tetapi  dalam  fase  ini  tidak berbahaya  karena  mampu  menyesuaikan perubahan  kehilangan  elektron  tanpa berubah  menjadi  reaktif  (Panjaitan et  al.,
2008).
Perbedaan  perlakuan  dari  ekstrak
kasar C. vulgaris yang dikultivasi berdasarkan  sumber  cahaya  menunjukkan
tren linier persen inhibisi yang berbeda dan nilai  aktivitas  antioksidan  yang  berbeda (Gambar  4).  Berdasarkan  garis  tren linieritas  menunjukkan  bahwa  perlakuan LED  biru  memiliki  tren  linier  persen inhibisi  paling  tinggi  dari  pada  perlakuan sumber cahaya yang lain dengan persamaan  regresi  linier  y  =  36,307  + 0,352x,  nilai  koefisien  determinan  (R²) sebesar  0,787  dan  koefisien  korelasi  (R) sebesar  0,887.  Sedangkan  perlakuan  LED merah  memiliki  tren  linier  persen  inhibisi yang  paling  rendah  dengan  persamaan regresi  linier  y  =  27,644  +  0,367x,  nilai koefisien  determinan  (R²)  sebesar  0,870 dan  koefisien  korelasi  (R)  sebesar  0,933. Ekstrak kasar C. vulgaris perlakuan sumber cahaya  LED  hijau  memiliki  persamaan regresi  linier  y  =  33,248  +  0,355xdengan nilai  koefisien  determinan  (R²)  sebesar 0,806  dan  koefisien  korelasi  (R)  sebesar 0,898.
Gambar 4 .  Regresi Linier Sederhana dari Persen Inhibisi Ekstrak C. vulgaris
Data aktivitas  antioksidan ekstrak C. vulgaris dari  semua  perlakuan  memiliki kriteria  sebagai  antioksidan  yang  baik. Hasil  yang  didapat  berdasarkan  nilai  IC 50 sebesar  38,900ppm  tergolong  antioksidan dengan  kriteria  sangat  kuat  karena  kurang dari 50 ppm pada perlakuan sumber cahaya LED  Biru.    Sedangkan  hasil  aktivitas antioksidan terendah pada perlakuan sumber  cahaya  LED  Merah  dengan  nilai IC 50 sebesar 60,915 ppm tergolong kriteria antioksidan kuat karena berkisar antara 50- 100  ppm. Kuat  atau  lemahnya  aktivitas antioksidan suatu senyawa dapat dipengaruhi  beberapa  faktor  lingkungan diantaranya  yaitu  kondisi  habitat  yang meliputi  cahaya,    temperatur,  salinitas  dan media C.vulgaris pada saatkultivasi.
Diperkuat dengan penelitian yang dilakukan  oleh  Rafaelina et  al., (2016),
Proses kultivasi pada Chlorella sp dipengaruhi  oleh  faktor  lingkungan  yang
secara  langsung  akan  mempengaruhi pertumbuhan dan proses metabolisme.
Berdasarkan  hasil  uji One  Way Anova terdapat  perbedaan  yang  nyata antara sumber cahaya yang berbeda dengan variabel antioksidan memiliki nilai signifikansi (Sig.) 0,000 < 0,05 dan nilai F hitung  lebih  besar  dari  F  tabel  yaitu 540,662>4,351 yang berarti bahwa terdapat  perbedaan  nyata  antar  perlakuan. Hal  ini  mengindikasikan  bahwa  perlakuan selama  kultivasi C.vulgaris berdasarkan sumber  cahaya  yang  berbeda  mampu memberikan  pengaruh  terhadap  aktivitas antioksidan.    Pengaruh  tersebut  berkaitan dengan perlakuan selama kultur mengakibatkan  tekanan  atau  cekaman lingkungan  sehingga  dapat  menstimulasi aktivitas antioksidan  pada  C. vulgaris. LED biru  memiliki  aktivitas  antioksidan  terbaik dibandingkan  perlakuan  LED  hijau  dan LED merah. Hal ini dikarenakan LED biru dapat meningkatkan akumulasi beta
0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 % in h ib isi Konsentrasi (ppm) Linear (Red LED) Linear (Green LED)
Linear (Blue LED)
karoten  dan  metabolit  sekunder  lainnya pada  C. vulgaris. Diperkuat  dengan penelitian Goiris et al., (2012) menyatakan bahwa aktivitas antioksidan dari mikroalga laut  seperti  C. vulgaris bisa  berasal  dari pigmen  seperti  klorofil  dan  karotenoid, vitamin dan prekursor vitamin termasuk α- tokoferol,  α-karoten,  β-karoten  niasin, tiamin, asam askorbat, flavonoid,
terpenoid,  peptida,  dan  zat  antioksidatif lain.
Uji Fitokimia Ekstrak Chlorella vulgaris Uji fitokimia dilakukan untuk mengetahui kandungan senyawa aktif pada tanaman.  Uji  fitokimia  pada  penelitian  ini dilakukan  terhadap  ekstrak  metanol C. vulgaris .  Hasil  uji  fitokimia  mikroalga C.vulgaris ditunjukkan  dalam  Tabel  3.
Tabel 3 .  Hasil Pengamatan Uji Fitokimia Ekstrak Mikroalga Chlorella vulgaris
Perlakuan Komponen Bioaktif Alkaloid  Triterpenoid Steroid Saponin Flavonoid Kuinon LED Merah ++ - + + + - LED Hijau ++ - - ++ ++ + LED Biru ++ - ++ ++ ++ ++
Keterangan :
++ : Ada kuat dalam ekstrak,  + : Ada dalam ekstrak,  - : Tidak ada dalam ekstrak

## 1. Alkaloid
Komponen  alkaloid  pada  seluruh perlakuan terdeteksi kuat dalam ekstrak C. vulgaris .  Uji  alkaloid  menunjukkan  hasil positif ditandai  dengan timbulnya endapan berwarna  merah  hingga  jingga  dengan pereaksi  dragendorf  Diperkuat  dengan penelitian  yang dilakukan oleh  Fithriani et al., (2015)  bahwa  terdapat  senyawa alkaloid  pada  mikroalga Chlorella sp. dengan  identifikasi  terbentuk  endapan berwarna  jingga.  Alkaloid  merupakan senyawa  yang  bersifat  semi  polar  dan digunakan  sebagai  agen  anastesi  serta banyak ditemukan pada tanaman obat.
2. Triterpenoid
Komponen triterpenoidtidak terdeteksi  atau  menunjukkan  hasil  negatif ditandai  dengan  tidak  terbentuk  sama sekali  larutan  berwarna  merah  kecoklatan.
Hal  ini  disebabkan  karena  perbedaan tingkat  kepolaran  dari  pelarut  yang digunakan  diduga  akan  berdampak  pada
hasil ekstrak dengan senyawa bioaktif yang berbeda  juga. Menurut  Firdiyani et  al.,
(2015), senyawa  triterpenoid  bersifat  non polar  yang  dapat  dijumpai  pada  tumbuhan berfungsi sebagai pelindung untuk menolak serangga dan serangan mikroba.
3. Steroid
Komponen  steroid  memiliki  reaksi positif  pada  ekstrak  C. vulgaris perlakuan LED  merah  dan  biru  dengan  terbentuknya filtrat berwarna hijau serta memiliki reaksi negatif pada perlakuan LED hijau. Menurut  Firdiyani et  al., (2015),  jenis pelarut yang digunakan dapat
mempengaruhi penarikan komponen senyawa  bioaktif.    Steroid  merupakan senyawa  yang  tergolong  non  polar, biasanya senyawa  non  polar  akan  tertarik oleh pelarut non polar ( like dissolved like ), akan tetapi senyawa steroid disini menunjukkan positif pada pelarut metanol. Faktor  yang  mempengarui  hal  tersebut terjadi  adalah  adanya  momen  dipol
senyawa  polar  yang  akan  menginduksi molekul  non  polar  yang  tidak  memiliki dipol sehingga akan terjadi gaya elektrostatik  di  antara  keduanya.  Gaya  ini menyebabkan  senyawa  non  polar  dapat larut  atau  sedikit  larut  dalam  pelarut  polar maupun non polar.Steroid memiliki kecenderungan  sebagai  sumber  antibakteri dan antioksidan.
4. Saponin Saponin
merupakan golongan
senyawa  bioaktif  yang  bersifat  polar  dan termasuk  golongan  fenolik  yang  diduga dapat menghambat radikal bebas (Firdiyani et  al., 2015).    Komponen  saponin  pada seluruh  perlakuan  menunjukkan  reaksi positif  pada  ekstrak  C. vulgaris dan terdapat  kuat  pada  perlakuan  sumber cahaya  LED  biru  dan  LED  hijau  yaitu terbentuk busa yang stabil dan kuat dengan penambahan  1  tetes  HCl  2  N .  Diperkuat dengan  hasil  penelitian  yang  dilakukan oleh Fithriani et  al., (2015),  teridentifikasi senyawa  bioaktif  saponin  pada  ekstrak mikroalga Chlorella sp dengan terbentuknya  busa  permanen.Timbulnya busa pada uji saponin menunjukkan adanya glikosida  yang  mempunyai  kemampuan untuk  membentuk  buih  dalam  air  yang terhidrolisis  menjadi  glukosa  dan  senyawa lainnya.
5. Flavonoid
Perlakuan pada saat kultivasi menggunakan sumber cahaya yang berbeda menunjukkan reaksi positif flavonoid  ditandai  dengan  terbentuknya warna  merah,  kuning  atau  jingga  pada lapisan amil alkohol.  Hasil tersebut sesuai dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Fithriani et  al., (2015)  bahwa  ekstrak Chlorella  sp memiliki  reaksi  positif  pada komponen  flavonoid.    Flavonoid  adalah salah  satu  dari  banyak  molekul  yang
digunakan  oleh  sel  untuk  melindungi bahaya reaktif oksigen spesies dan saat ini menjadi fokus perhatian karena potensinya yang  menguntungkan  terhadap  kesehatan diantaranya memiliki aktivitas antioksidan, anti  tumor,  anti  alergi  dan  anti  inflamasi. Posisi  grup  hidroksil  dan  grup  lain  dalam struktur  kimia  flavonoid  sangat  penting untuk mencegah radikal bebas (Procházková et al., 2011).

## 6. Kuinon
Senyawa  kuinon  banyak  ditemukan dalam  bentuk  glikosida,  terdapat  dalam vakuola  sel  dan  mudah  larut  dalam senyawa  polar.    Selain  itu  digunakan sebagai antikanker dan antioksidan (Firdiyani et  al., (2015). Komponen kuinon  pada  ekstrak  C. vulgaris memiliki reaksi  positif  dan  terdeteksi  kuat  ada  pada ekstrak  C. vulgaris perlakuan  LED  biru dengan  terbentuknya  filtrat  berwarna kuning.    Selanjutnya  pada  perlakuan  LED merah  tidak  terjadi  reaksi  positif.    Hal  ini berkaitan dengan perlakuan sumber cahaya yang  diberikan  selama  kultivasiyaitu  pada perlakuan LED birudapat memicu metabolit  sekunder  ekstrak  C. vulgaris seperti  terdeteksi  kuat  pada  komponen kuinon yang berpotensi sebagai antioksidan.    Diperkuat  dengan  penelitian yang  dilakukan  oleh  Fithriani et  al., (2015), adanya  perbedaan  reaksi  pada identifikasi  golongan  senyawa  bioaktif ekstrak Chlorella sp.  dapat  dipengaruhi oleh  beberapa  faktor  diantaranya  yaitu stress  pada  sel  mikroalga  selama  kultur.
Sumber  cahaya  di  alam  yaitu  dengan adanya  paparan  sinar  matahari  merupakan salah  satu  bentuk  pemicu  stres  yang  dapat meningkatkan biosintesis kandungan senyawa  bioaktif  seperti  komponen  fenol pada jaringan tanaman.

## KESIMPULAN
Perlakuan  sumber  cahaya  yang berbeda pada saat kultivasi selain mempengaruhi  pertumbuhan  tetapi  juga berpengaruh terhadap aktivitas antioksidan ekstrak C. vulgaris. Pencahayaan menggunakan neon kombinasi LED merah secara konsisten menghasilkan produksi C. vulgaris tertinggi  dibandingkan  perlakuan pencahayan  neon  dengan  LED  hijau  dan LED  biru.    Sedangkan  pencahayaan menggunakan neon
kombinasi LED biru memiliki aktivitas  antioksidan  terbaik  karena  dapat menstimulan pembentukan metabolit sekunder yang berpotensi sebagai antioksidan  seperti  komponen  alkaloid, flavonoid,  steroid,  saponin  dan  kuinon yang  teridentifikasi  positif  pada  ekstrak C.vulgaris yang  dapat  melawan  senyawa radikal  bebas  dan  menghambat  bahaya radikal  bebas  seperti  timbulnya  penyakit degeneratif  dan  meningkatkan  sistem imunitas.

## DAFTAR PUSTAKA
Abd  El-Baky  HH.  2009.  Enhancing antioxidant  availability  in  grains  of wheat  plants  grown  under  seawater- stress  in  response  to  microalgae extracts treatments . African Journal of Biochemistry Research , 3(4): 077-083.
Bariyyah  SK,  Fasya  AG,  Abidin  M.
Hanapi  A.    2013..    Uji  Aktivitas Antioksidan  terhadap  DPPH  dan
Identifikasi  Golongan  Senyawa  Aktif Ekstrak  Kasar  Mikroalga  Chlorella sp.Hasil  Kultivasi  dalam  Medium Ekstrak  Tauge. Jurnal  Alchemy  UIN Maulana  Malik  Ibrahim  Malang ,  2
(2): 150-204.
Barus  P.  2009. Pemanfaatan  Bahan Pengawet dan Antioksidan Alami pada Industri  Bahan  Makanan .  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam.  Universitas  Sumatera  Utara. Medan.
Blanken  W,  Cuaresma  M,  Wijffels  MH, Janssena  M.  2013.  Cultivation  of microalgae on artificial  light  comes at a cost. Mikroalgal. Res , 2: 333-340.
De  Fretes  H,  Susanto  AB,  Prasetyo,  B. Limantara  L.  2012.    Karotenoid  dari
Mikroalga  dan  Makroalga  :  Potensi Kesehatan  Aplikasi  dan  Bioteknologi. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan . XXIII (2): 221-228.
Firdiyani  F,    Agustini  TW,  Ma’ruf  WF.. 2015.  Ekstraksi  Senyawa  Bioaktif Sebagai  Antioksidan  Alami  Spirulina Platensis  Segar  dengan  Pelarut  yang Berbeda . Jurnal  Pengolahan  Hasil Perikanan Indonesia , 18(1): 28-37.
Fithriani  D,    Amini  S,  Melanie  S.  dan Susilowati  R.    2015.    Uji  Fitokimia Kandungan  Total  Fenol  dan  Aktivitas Antuoksidan  Mikroalga Spirulina sp, Chlorella sp. dan Nannochloropsis sp. Jurnal  JPB  Kelautan  dan  Perikanan , 10(2): 101–109.
Goiris K, Muylaert K, Fraeye I, Foubert I,, Brabanter  JD,  Cooman  LD.    2012. Antioxidant potential of microalgae in relation to their phenolic and carotenoid  content. Journal  Appl Phycol, 1-10.    DOI  10.1007/s10811- 012-9804-6.
Helena  S,  Zainuri  M,  Suprijanto  J.    2016.
Microalgae Dunaliella salina (Teodoresco,  1905)  Growth  using  the
LED Light (Light Limiting Dioda) and
Different  Media. Aquatic  Procedia 7 (2016): 226 – 230.
Irondi  G.  Oboh,  Akintunde  JK.    2012.
Comparative and Synergistic Antioxidant  Properties  of  Carica Papaya and Azadarichta Indica
Leaves. International  Journal  of Pharmaceutical Science and Research . 3(12): 4773-4779.
Karseno I. Handayani, Setyawati R..  2013. Aktivitas  dan  Stabilitas  Antioksidan Ekstrak  Pigmen  Alga Oscillatoria  sp . Jurnal  Agritech  Universitas  Jenderal Soedirman . 33 (4): 371-376.
Kimball JW.  2000. Biologi.  Edisi Kelima Jilid 1. Jakarta: Erlangga.
Kumoro  AC.    2015. Teknologi  Ekstraksi Senyawa  Bahan  Aktif  dari  Tanaman Obat. Plantaxia.Yogyakarta.
Kusumaningrum HP dan Zainuri M. 2013.
Aplikasi Pakan Alami Kaya Karotenoid untuk Post Larvae Penaeus  monodon Fab. Jurnal  Ilmu Kelautan , 18(3): 143-149. ISSN 0853- 7291.
Molyneux P. 2004. The Use of The Stable Free  Radical  Diphenylpicryl-hydrazil (DPPH)  for  Estimating  Antioxidant Activity . Songklanakarin J.  Science Technology , 26(2): 211-219.
Nawaly  H,  Susanto  AB,  Uktolseja  JLA.
2013. Aplikasi  Antioksidan  dari Rumput  Laut. Prosiding  Seminar Nasional  X  Biologi  UNS  Vol  10  (1)  : 12-19.
Panjaitan  TD,  Prasetyo  B.  Limantara  L. 2008. Peranan  Karotenoid  Alami
Dalam  Menangkal  Radikal  Bebas  di Dalam  Tubuh. Prosiding  Seminar Nasional  Universitas  Sumatera  Utara. Hal 79-86.
Priyadarshani  I,  dan  Rath  B.  2012. Commercial and industrial applications  of  micro  algae .  Journal
Algal  Biomass  Utln .  3(4):  89–100. ISSN: 2229- 6905.
Procházková,  D,  Boušová  I,  Wilhelmová N..  2011.  Antioxidant  and  prooxidant properties  of  flavonoids . Journal Fitoterapia, 82: 513–523. Rafaelina  M,  Rustam  Y,  Amini  S.  2016. Pertumbuhan dan Aktivitas Antioksidan  dari  Mikroalga Chlorella sp. Jurnal Bioma , 12(1): 12-21
Satriaji DE, Zainuri M. Widowati I.  2016. Study of Growth and C, N, P Content of  Microalgae  Chlorella  vulgaris Cultivated  in  Different  Culture  Media and  Light  Intensity. Jurnal  Teknologi (Sciences & Engineering) , 78:4–2: 27–
31.
Syafriyudin.,  S.  Priyambodo,  Saudah  S. Ledhe NT.  2015. Pengaruh Variabel
Warna Lampu LED Terhadap Pertumbuhan Tanaman Krisan .
Proseding  Seminar  Nasional  Teknik Industri  “Sustainable  Manufacturing”. UPN Jawa Timur : 1-9.
Tamat  SR,  Wikanta  T,  Maulina  LS.  2007. Aktivitas  antioksidan  dan  toksisitas senyawa  bioaktif  dari  ekstrak  rumput laut  hijau  Ulva  reticulata  Forsskal. Jurnal  Ilmu  Kefarmasian  Indonesia 5(1), 31-36.
Teo  CL,  Idris  A,  Wahidin  S,  Lai  LW..
2014.  Effect  of  Different  Light Wavelength  on  the  Growth  of  Marine Microalgae. Jurnal Teknologi (Sciences & Engineering) , 67 (3) : 97–
100.
Thomas-Hall, S., J.H. Mussgnug., J.Rupprecht.,  A.Foo.,  V.Klassen.,  A. McDowall.,  P.M  Schenk.,  O.Kruse and  B.  Hankamer.    2007 .    Enginering Photosyntetic  Light  Capture  Impact
On Improved Solar Energy to Biomass Conversion .  Journal Plant Biotechnol. Vol 5 : 802-814
Widowati  I,  Lubac  D,    Puspita  M,. Bourgougnon  N.    2014.  Antibacterial and Antioxidant Properties of the Red Alga  Gracilaria  Verrucosa  From  the North  Coast  of  Java,  Semarang, Indonesia. International  Journal  of Latest  Research  in  Science  and Technology , 3(3): 179-185.
Widowati  I,  Zainuri  M.,  Kusumaningrum HP,  Mouget  JL.  2015. Salina Sustanaible Valorization of Indonesian Phytoplankton  in  Aquaculture  :  New Approaches  to  Control  Infection Deseas. Laporan Penelitian Kerjasama Luar Negeri dan Publikasi Internasinal.  Fakultas  Kelautan  dan Perikanan.    Universitas  Diponegoro.
Semarang.
Yulianti  H.  Natsir,  Wahab  AW.    2015. Analisis  Kadar  Betakaroten  dalam Ekstrak  Petroleum  Eter  Daun  Kelor dari  Daerah  Pesisir  dan  Pegunungan Serta Potensinya Sebagai Antioksidan . Jurnal Repository Universitas Hasanudin Makasar .  Hal 1-10. Zainuri M., Kusumaningrum HP, Kusdiyantini E. 2014. Microbiological and  Ecophysiological  Characterisation of  Green  Algae  Dunaliella  sp.  for Improvement of Carotenoid
Production. Jurnal  Natur  Indonesia , 10(2) : 66-69.