ANTIBACTERIAL ACTIVITY TEST OF N-HEXANE EXTRACT OF LANGSAT FRUIT SEEDS (Lansium domesticum Corr) AGAINST Staphylococus Aureus AND Klebsiella Pneumoniae BACTERIA

## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK N-HEKSAN BIJI BUAH LANGSAT
( Lansium domesticum Corr) TERHADAP BAKTERI Staphylococus Aureus DAN Klebsiella Pneumoniae
Anastasia P.R Nurhamidin 1) , Fatimawali 2) , Irma Antasionasti 3)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115 *anastasianurhamidin@gmail.com

## ABSTRACT
Langsat  fruit  seeds  (Lansium  domesticum Corr )  are    part  of  the  plant  that  is  known  to  be antibacterial. Therefore, exploration of langsat fruit as an antibacterial is needed. The purpose of this study was to determine the antibacterial activity of langsat  fruit seeds against Staphylococus aureus and Klebsiella pneumoniae using the disc method and the well method. Langsat fruit seed powder was macerated  using  the  maceration  method  with  n-hexane  solvent  and  tested  for  antibacterial  activity. Inhibition of the n-hexane extract of langsat fruit seeds showed the largest clear zone diameter value given  by  the  lowest  concentration  of  10%  by  the  disc  and  sumurun  method  on  the  Staphylococus aureus  and  Klebsiella  pneumoniaes  bacteria  13.6  mm;  12.6  mm;  13  mm;  and 14.6  mm.  This  shows that the n-hexane extract of langsat fruit seeds has strong antibacterial activity against Staphylococus aureus and Klebsiella pneumonia bacteria both by the disc method and the well method.
Keywords: langsat fruit seeds, Klebsiella pneumoniae, disc, pitting method, Staphylococus aureus

## ABSTRAK
Biji  buah  langsat  ( Lansium  domesticum Corr)  merupakan  salah  satu  bagian  tanaman  yang  telah dikenal  sebagai  antibakteri.  Maka  dari  itu,  eksplorasi  buah  langsat  sebagai  antibakteri  sangat diperlukan.  Tujuan  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  biji  buah  langsat terhadap bakteri Staphylococus aureus dan Klebsiella pneumoniae menggunakan metode cakram dan metode sumuran. Serbuk biji buah langsat dimaserasi menggunakan metode maserasi dengan pelarut n-Heksan  dan  dilakukan  uji  aktivitas  antibakteri.  Daya  hambat  ekstrak  n-Heksan  biji  buah  langsat menunjukkan  nilai  diameter  zona  bening  terbesar  diberikan  oleh  konsentrasi  terendah  10%  dengan metode  cakram  (13,6  mm  pada  bakteri Staphylococus  aureus dan  12,6  mm  pada  bakteri Klebsiella pneumoniae )  dan  metode  sumuran  (13  mm  pada  bakteri Staphylococus  aureus dan  14,6  mm  pada bakteri Klebsiella  pneumoniae ).  Hal  ini  menunjukkan  bahwa  ekstrak  n-Heksan  biji  buah  langsat memiliki  aktivitas  antibakteri  yang  kuat  terhadap  bakteri Staphylococus  aureus dan Klebsiella pneumoniae baik dengan metode cakram maupun metode sumuran.
Kata  Kunci : biji  buah  langsat, Klebsiella  pneumoniae ,  metode  cakram,  sumuran, Staphylococus aureus

## PENDAHULUAN
Langsat ( Lansium domesticum
Corr) merupakan  tanaman  yang  jumlahnya  cukup besar  di  Indonesia  dan  tersebar  luas  di Minahasa. Beberapa bagian dari langsat banyak dimanfaatkan oleh masyarakat untuk mengobati berbagai  penyakit,  antara  lain  sebagai  obat cacing,  obat  demam,  obat  diare,  dan  juga sebagai anti kanker (Mokosuli, 2008).
Berbagai  manfaat  tanaman  ini  sebagai  obat tradisional,  khususnya  sebagai  obat  antidiare mengindikasikan  bahwa  langsat  memiliki aktivitas  antibakteri.  menunjukkan  bahwa ekstrak kulit buah, biji dan kulit batang langsat memiliki  aktivitas  antibakteri.  Korompis et  al (2010)
Identifikasi senyawa aktif dalam biji langsat ( Lansium  domesticum  Corr) menunjukkan adanya kandungan alkaloid, flavonoid, terpenoid,  dan  saponin.  Aktivitas  antibakteri dapat  dipengaruhi  oleh  kandungan  senyawa terpenoid.  Biji  buah  langsat  mengandung senyawa  terpenoid  (Ragasa et  al .,  (2006); Saewan et  al .  (2006);  Shankar et  al .  (2014); Timoteus  (2014);  Yapp  dan  Yap  (2002)). Secara  umum,  mekanisme  kerja  senyawa antibakteri  terjadi  pada  dinding  sel,  membran sel, protein, metabolisme sel, dan sintesis asam nukleat.
Ragasa et  al .  (2006)  melaporkan  bahwa salah  satu  senyawa  aktif  dari  golongan terpenoid  kulit  buah  langsat  memiliki  aktivitas antibakteri  yang  lemah  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus . Korompis et al . (2010) melaporkan  bahwa  ekstrak  etanol  biji  buah langsat  dapat  menghambat  aktivitas antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus menggunakan metode  sumuran.  Oleh  karena  itu  perlu dilakukan  studi  lebih  lanjut  tentang  aktivitas antibakteri  ekstrak  n-Heksan  biji  buah  langsat terhadap bakteri Staphylococcus aureus dengan menggunakan  dua  metode  yang  berbeda,  yaitu metode cakram dan metode sumuran.
Penggunaan  dua  metode  yang  berbeda  untuk membandingkan  diameter  zona  hambat  yang terbentuk terhadap bakteri uji melalui mekanisme kerja yang berbeda.

## METODOLOGI PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  dilaksanakan  pada  bulan  Juni 2020 - Agustus 2020 di Laboratorium Terapan, Program  Studi  Farmasi,  Fakultas  Matematika
dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam,  Universitas  Sam Ratulangi, Manado

## Alat dan Bahan
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini antara lain: oven, blender, timbangan, peralatan maserasi, batang pengaduk kaca,cawan penguap, desikator, neraca analitik, mikropipet, cawan  petri,  tabung  reaksi,  gelas  ukur,  beaker glass, lumpang, mortir, kain kasa, kertas saring Whatman  no.1,  kertas  label,  stopwatch, aluminium  foil,  ayakan  no.  40  mesh,  gelas erlenmeyer.
Bahan Biji buah langsat ( Lansium domesticum Corr),  biakan  murni  bakteri
Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae ,  medium  Nutrient  Agar  (NA), NaCl 0.9%, Carboxy Methyl Cellulose (CMC), aluminium  foil, kertas  cakram,  kain  kasa, H 2 SO 4 1%, BaCl 2 1% n-heksana.

## Prosedur Penelitian Preparasi Sampel
Biji langsat dipisahkan dari daging buah dan dibersihkan dengan air yang mengalir, ditiriskan  kemudian  di  masukkan  dalam  oven. Setelah  sampel  kering  kemudian  dihaluskan dengan  cara  diblender . Selanjutnya  ditimbang 250 gram.

## Ekstraksi
Sebanyak  250  gram  serbuk  dimasukkan kedalam  wadah  dan  dimaserasi  dengan  n- Heksan  sebanyak  750  mL  sampai  terendam, disimpansambil  sesekali  diaduk  dan  ditutup dengan almunium  foil. Setelah  dimaserasi selama  5  hari,  larutan  tersebut  disaring menggunakan  kertas  saring  yaitu  (Whatman no.1)  yang  kemudian  dimasukkan  kedalam gelas  Erlenmeyer  untuk  dipisahkan  residu  dari filtrat  dan  dihasilkan  filtrat  1  dan  residu  1. Residu  yang  ada,  kemudian  ditambahkan  lagi n-Heksan  sebanyak  500  mL,  ditutup  dengan aluminiumfoil ,  dandibiarkan  selama  2  hari sambil  sesekali  diaduk.  Setelah  2  hari,  sampel disaring  menggunakan  kertas  saring  sehingga menghasilkan filtrat 2 danresidu 2. Filtrat 1 dan 2 dicampur menjadi satu, kemudian dikeringkan menggunakan oven selama 24 jam pada suhu 40 o C.

## Sterilisasi Alat yang Digunakan
Untuk  mencegah  terjadinya  kontaminasi pada  saat  melakukan  difusi  yang  akan menggunakan  sterilisasi  alat  –  alat  gelas  harus di  cuci  di  keringkan  dan  di  bungkus  dengan aluminium foil yang digunakan terlebih dahulu. Proses  sterilisasi  menggunakan autoclave pada suhu  121 o C  tekanan  15  psi  atau  sekitar  1  atm selama 15 menit.

## Pembuatan Media
1. Pembuatan Media Agar Miring
Nutrient  Agar  (NA)  sebanyak  2.8  g
dilarutkan dalam 100 mL aquades menggunakan  erlenmeyer.  Setelah  itu  di homogenkan dengan stirer di atas penangas air sampai mendidih. Sebanyak 3 mL dituangkan  masing–masing  pada  3  tabung reaksi steril dan ditutup dengan aluminium foil. Media tersebut disterilkan menggunakan autoklaf pada  suhu  121 o C  selama  15  menit, kemudian  dibiarkan  pada  suhu  ruangan  selama ±  30  menit  sampai  media  memadat  pada kemiringan  30 o .  Media  Agar  miring  digunakan untuk inokulasi bakteri.
2. Pembuatan Media Dasar Media  dasar  dibuat  dengan  cara  ditimbang Nutrient  Agar  (NA)  sebanyak  2,8g,  lalu dilarutkan di dalam 100 mL aquades menggunakan erlenmeyer. Media lalu dihomogenkan yaiu dengan menggaduk ( stirrer ) di atas penangas air sampai mendidih. Media  yang  sudah  homogen  ini  di  sterilkan dalam autoclave pada  suhu  121 o C  selama  15 menit. Media yang telah di sterilkan, didinginkan  hingga  suhu  dapat  digunakan sesuai  kebutuhan,  media  yang  telah  disterilkan bila  tidak  digunakan  disimpan  di  dalam  lemari pendingin.

## Pembiakan Bakteri
Mengambil  bakteri  Uji  dengan  jarum  steril, lalu  ditanamkan  pada  media  agar  miring dengan  cara  menggores.Selanjutnya  diinkubasi dalam  inkubator  pada  suhu  37 o C  selama  24 jam. (Siregar, 2009)
Pembuatan Larutan Standar 0,5 Mc. Farland Pembuatan  standar  kekeruhan  0,5 Mc. Farland dibuat  dari  campuran  H 2 SO 4 1% sebanyak  9,95  mL  dan  larutan  BaCl 2 1% sebanyak  0,05  mL.  Kemudian  dikocok  sampai terbentuk  larutan  yang  keruh.  Kekeruhan  ini
dipakai  sebagai  standar  kekeruhan  suspensi bakteri uji dan setara dengan kepadatan bakteri 10 8 CFU/mL (Sutton, 2011).

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Mengambil Bakteri uji yang telah diinokulasi dengan kawat steril lalu disuspensikan  kedalam  tabung  yang  berisi  2 mL  larutan  NaCl  0,9%  hingga  di  peroleh kekeruhan yang sama dengan standar kekeruhan larutan Mc. Farland .

## Pembuatan Kontrol Negatif dan Kontrol Positif
Kontrol  negatif  dibuat  dari  CMC  1% dengan cara: 1 g serbuk CMC dilarutkan dalam 100 mL aquades steril. Dikocok sampai larutan homogen.
Pembuatan Kontrol Positif (Metode Difusidengan Kertas Cakram)
Kontrol positif Menggunakan Ciprofloxacin Antimicrobial Susceptibility Disks (5ug)

## Pembuatan  kontrol  Positif  (Metode  Difusi dengan sumuran)
Kontrol  positif  dibuat  dari  sediaan  obat tablet  Ciprofloxacin  500  mg.  Ditimbang  10 tablet  dan  dihitung  berat  pertablet.  Tablet Ciprofloxacin  digerus,  lalu  ditimbang  dan disetarakan  dengan  50  mg  ciprofloxacin. Kemudian  serbuk  Ciprofloxacin  dilarutkan dengan  larutan  CMC  dalam  labu  ukur  ukuran 50 mL sampai batas, untuk memperoleh larutan Ciprofloxacin 50 μg/50 μl.

## Pembuatan Larutan Uji
Larutan  stok  dengan  konsentrasi  ekstrak 50%  b/v  dibuat  dengan  cara  ditimbang  5  g ekstrak  n-Heksan  biji  langsat  kemudian dilarutkan  dalam  larutan  CMC  1%  hingga volume  10  mL  menggunakan  labu  ukur. Selanjutnya  dibuat  larutan  uji  dalam  berbagai konsentrasi dengan cara sebagai berikut:
1) Larutan  uji  10%  v/v  dibuat  dengan  cara dipipet  2  mL  larutan  stok  kemudian ditambahkan 8 mL larutan CMC
2) Larutan  uji  20%  v/v  dibuat  dengan  cara dipipet  4  mL  larutan  stok  kemudian ditambahkan 6 mL larutan CMC
3) Larutan  uji  30%  v/v  dibuat  dengan  cara dipipet  6  mL  larutan  stok  kemudian ditambahkan 4 mL larutan CMC
4) Larutan  uji  40%  v/v  dibuat  dengan  cara dipipet  8  mL  larutan  stok  kemudian ditambahkan 2 mL larutan CMC

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
1. Metode Cakram
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode Kirby-Bauer,
yaitu  metode  difusi  dengan  cakram  kertas. Medium NA dituang ke cawan petri sebanyak 10 mL. Bakteri biakan dalam uji ( Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae) dipisahkan  lalu  diambil  satu  per satu  dengan  pipet  dari  medium  larutanNaCl 0.9%  ke  cawan  petri  steril  sebanyak  200  μl. cawan petri kemudian digoyang secara perlahan-lahan untuk menyebarkan biakan  bakteri  secara  merata  dan  didiamkan hingga
medium memadat (Tangopa,2005).  Cakram  kertas  yang  telah direndam  dengan  ekstrak  n-  heksan  pada  biji buah langsat larutan CMC, dipindahkan dengan pinset
steril ke  medium  NA  berisi  bakteri Staphylococcus aureus dan Klebsiella  pneumoniae secara aseptis, kemudian diinkubasi selama 1 x 24 jam dengan suhu 37 o C. 2. Metode Sumuran Media  uji  dibuat  dengan  dengan  2lapisan media  agar,  yang  pengerjaannya seperti berikut : a) Lapisan  dasar  dibuat  dengan  menuangkan masing-masing 10 mL NA ke masingmasing  3  cawan  petri,  kemudian dibiarkan memadat.
b) Setelah memadat, permukaan lapisan dasar ditanam  5  pencadang  baja  yang  diatur jaraknya  agar  daerah  pengamatan  tidak bertumpu.
c) Mencampurkan Suspensi bakteri ke dalam media pembenihan NA.
d) Menuangkan  10  mL  NA  pada  tiap  cawan petri  yang  diletakan  pencadang  sebagai lapisan kedua.
e) Setelah lapisan kedua memadat, pencadang diangkat secara aseptik menggunakan  pinset  dari  masing-masing cawan  petri,  sehingga  terbentuk  sumur- sumur  yang  akan  digunakan  dalam  uji bakteri.
f) Sumuran  yang  terbentuk  diisi  dengan larutan kontrol positif
larutan ciprofloxacin dan kontrol negatif larutanCMC  dan  larutan  uji  masing- masing 50 mikroliter
g) Selanjutnya  semua  media  di  inkubasi dalam  inkubator  pada  suhu  37 ℃ selama 24jam.

## Pengamatan Dan Pengukuran
1. Metode Cakram Melakukan  pengukuran  dilakukan  setelah
1x24  jam  masa  inkubasi.  Daerah  bening merupakan petunjuk kepekaan bakteri terhadap bahan  antibakteri  lainnya  yang  digunakan sebagai bahan uji yang dinyatakan dengan lebar diameter  zona  hambat.  Diameter  zona  hambat diukur dalam satuan milimeter (mm) menggunakan penggaris berskala.
2. Metode Sumuran
Melakukan  Pengamatan  yang  dilakukan 1x24 jam masa inkubasi. Daerah pada sekitaran sumuran  muncul  kepekaan  mikroba  terhadap antibiotik  atau  bahan  antimikroba  yang digunakan  sebagai  bahan  uji  yang  dinyatakan dengan  diameter  zona  hambat  atau  zona bening.  Diameter  zona  hambat  diukur  dalam satuan  millimeter  (mm)  menggunakan  jangka sorong  dengan  cara  mengukur  jarak  dari  tepi sumur  uji  ke  batas  lingkaran  zona  hambat. Kemudian  diameter  zona  hambat  tersebut dikategorikan  kekuatan  daya  anti  bakterinya berdasarkan penggolongan.

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi
Sampel biji langsat dikeringkan kemudian sampel di blender sampai menghasilkan  serbuk  simplisia  sebanyak  250 gram,  proses  maserasi  menggunakan  n-Heksan sebanyak  1.250  ml.  Cara  maserasi  selama  5 hari  dan  remaserasi  selama  3  hari,  maserasi agar  lebih  efisien  dilakukan  berulang  kali dibandingkan hanya dilakukan sekali, sehingga di peroleh ekstrak kental sebanyak 1 g. Metode maserasi  dipilih  karena  cara  pengerjaan  yang sederhana,  peralatan  yang  mudah  didapat  dan tidak memerlukan alat khusus. Proses ekstraksi dilakukan  dengan  menggunakan  pelarut  n- Heksan  karena  pelarut  ini  hampir  keseluruhan kandungan simplisia baik non polar (Mujipradhana,2018).

## Uji Aktivitas Antibakteri
Penentuan  aktivitas  antibakteri  ekstrak  n- Heksan biji buah langsat ( Lansium domesticum corr )  menggunakan  metode  difusi  yang didasarkan pada kemampuan difusi dari ekstrak n-Heksan  biji  buah  langsat  yang  telah
diinokulasikan  dengan  bakteri Staphylococus aureus dan Klebsiella  pneumoniae .  Hasil pengamatan  yang  diperoleh  berupa  ada  atau tidaknya  zona  hambatan  yang  akan  terbentuk disekeliling ekstrak selama masa inkubasi.Terbentuknya  daerah  zona  hambat menunjukkan terjadinya penghambatan pertumbuhan koloni bakteri yang diduga akibat pengaruh senyawa bio aktif yang terdapat pada ekstrak biji buah langsat (Poetry et al, 2019).

## Uji  Aktivitas  Antibakteri  Menggunakan Metode Cakram
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dengan metode  cakram  menggunakan  media Nutrient
Agar (NA). Media Nutrient Agar (NA) merupakanmedium yang baik sebagai tempattumbuhnya beberapa bakteri gram positifdan gram
negatif
yang dimanfaatkansebagai sumber nutrisi bagi pertumbuhanbakteri.
Berdasarkan  hasil  penelitian  pada  Tabel  1 dan Gambar 1, pertumbuhan bakteri staphylococus  aureus pada  ekstrak  n-Heksan biji  buah  langsat  untuk  konsentrasi  10% menunjukkan diameter zona hambat yang besar yaitu  13,6  mm.  Hal  ini  menunjukkan  bahwa aktivitas antibakteri ekstrak n-Heksan biji buah langsat termasuk dalam kategori kuat berdasarkan Davis dan Stout (1971).
Tabel  1. Hasil  Pengukuran  Daya  Hambat Staphylococus aureus (mm)
Perlakuan U1 U2 U3 Rata- rata K(-) 0 0 0 0 K(+) 13 10 9,6 10,8 10% 13 18 10 13,6 20% 12 11 13 12 30% 10 15 9 11,3 40% 9 9 8 8,6
Tabel  2. Hasil  Pengukuran  Daya  Hambat
Klebsiella pneumoniae (mm) metode cakram Perlakuan U1 U2 U3 Rata- rata K(-) 0 0 0 0 K(+) 14 10 9 11 10% 13 15 10 12,6 20% 12 11 13 12 30% 10 13 10 11 40% 9 10 8 9
Hal  yang  sama  juga  ditunjukkan  pada aktivitas antibakteri ekstrak n-Heksan biji buah langsat terhadap bakteri klebsiella pneumoniae . Pada  Tabel  2  menunjukkan  bahwa  ekstrak  n- Heksan  biji  buah  langsat  dengan  konsentrasi 10% memberikan daya hambat terbesar sebesar 12,6  mm  dibandingkan  dengan  konsentrasi yang lebih besar. Dalam hal ini dapat dikatakan bahwa  ekstrak  n-Heksan  biji  buah  langsat dengan  konsentrasi  10%  memiliki  kategori yang  kuat  dalam  membunuh  bakteri klebsiella pneumoniae berdasarkan  Davis  dan  Stout (1971).
Selain  itu,  berdasarkan  Tabel  1,  Tabel  2, Tabel  3  dan  Tabel  4  dapat  dilihat  bahwa aktivitas antibakteri ekstrak n-Heksan biji buah langsat  pada  bakteri Staphylococus  aureus dan bakteri Klebsiella  pneumoniae menunjukkan bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  maka  daya hambat  yang  diberikan  semakin  kecil.  Hal  ini berbanding  terbalik  dengan  hasil  penelitian yang  dilaporkan  oleh    Rahmawati  (2014)  yang menyatakan  bahwa  semakin  besar  konsentrasi maka  interaksi  ekstrak  yang  diberikan  akan semakin  besar  puladiameter  daya  hambat  yang terbentuk  terhadap  kedua  bakteri,  karena semakin  banyak  komponen  bioaktif  yang terkandung didalam ekstrak. Hal ini ditunjukkan  oleh  diameter  daya  hambat  yang terbentuk  dipengaruhi  oleh  semakin  banyak komponen  bioaktif  yang  terkandung  didalam ekstrak.  Dalam  penelitian  ini,  diameter  zona hambat paling kuat ditunjukkan oleh ekstrak n- Heksan biji buah langsat pada konsentrasi 10% (konsentrasi  paling  kecil  dibandingkan  20%, 30% dan 40%). (Putra dkk., 2015).
Pertumbuhan  bakteri Staphylococus  aureus dan  bakteri Klebsiella  pneumoniae yang terhambat dapat disebabkan oleh penghambatan terhadap  sintesis  dinding  sel(Poetry et al, 2019).Namun,  daya  hambat  pada  bakteri Staphylococus  aureus (13,6  mm)  lebih  besar dibandingkan dengan bakteri Klebsiella pneumoniae (12,6  mm).  Hal  ini  dapat dipengaruhi oleh perbedaan dinding sel bakteri gram  positif  ( Staphylococus  aureus )  dan bakteri  gram  negatif  ( Klebsiella  pneumoniae ).
Dinding  sel  bakteri  Gram  positif  lebih  tipis dibandingkan dengan dinding sel bakteri Gram negatif  sehingga  dinding  bakteri  gram  positif lebih mudah dirusak.
Selain  itu,  aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak n-Heksan  biji  buah  langsat  dapat  pula dipengaruhi oleh kandungan senyawa alkaloiddan tannin (Kusriani dan Zahra, 2015).
Aktivitas antibakteri senyawa alkaloid
terbentuk  karena  terjadinya  presipitasi  protein (Masduki, 1996) dan mengkoagulasi protoplasma bakteri (Pratiwi, 2008). Ekstrak n-
Heksan  biji  buah  langsat  dengan  konsentrasi 10%  memiliki  daya  hambat  yang  lebih  besar dibandingkan dengan kontrol positif Ciprofloxacin Antimicrobial Susceptibility
Disks .  Hal  ini  juga  dapat  disebabkan  oleh kemampuan  ekstrak  dan  kontrol  positif berdifusi ke dalam agar, yang mana dipengaruhi  oleh  konsentrasi  masing-masing. Dalam penelitian ini juga menggunakan kontrol negatif untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh pelarut terhadap pertumbuhan bakteri uji Staphylococus  aureus dan Klebsiella pneumoniae ,  sehingga  dapat  diketahui  bahwa yang  mempunyai  aktivitas  antibakteri  adalah zat uji bukan pelarut (Dwijendra, 2014).Kontrol negatif  yang  digunakan  adalah  aquades. Berdasarkan  Tabel  1,  Tabel  2,  Tabel  3  dan Tabel  4,  kontrol  negatif  tidak  memperlihatkan adanya daya hambat untuk bakteri uji.

## Uji  Aktivitas  Antibakteri  Menggunakan Metode Sumuran
Pengujian  aktivitas  antibakteri    dari  ekstrak biji  buah  langsat  dilakukan  pada  bakteri
Staphylococcus Aureus dan Klebsiella pneumoniae .  Pengujian  aktivitas  bakteri  ini menggunakan metode difusi (sumuran). Masing-masing  ektsrak  diujikan  pada  masing- masing  bakteri.  Metode  difusi  digunakan karena  prosedurya  sederhana  mudah  dan praktis  untuk  dikerjakan  dan  dapat  melihat sensitivitas  berbagai  jenis  mikroba  terhadap antimikroba  (Kowal et  al.,2018 ).Penggunaan bakteri  ini  bertujuan  melihat  apakah  ekstrak biiji buah langsat memiliki aktivitas antibakteri. Hasil  yang  diperoleh  dalam  uji  aktivitas antibakteri  dilakukan  pengamatan  selama  1x24 jam  masa  inkubasi  dengan  dilakukannya  3x pengulangan  terhadapa  bakteri Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae , 3x pengulangan  untuk  bakteri Staphylococcus aureus  dan  Klebsiella  pneumoniae. aktivitas yang  terbentuk  terlihat  dengan  adanya    zona hambat  (zona  bening)  disekitaran  sumuran dengan  ukuran  pecandang  baja  7  mm, membuktikan  bahwa  ekstrak  biji  buah  langsat yang  diam  yang  diuji  menunjukan  kepekaan terhadap salah satu bakteri yaitu Staphylococcus aureus dan Klebsiella pneumoniae dan  antibiotik  yang  digunakan sebagai kontrol postif.
Tabel 3. Hasil Pengukuran Daya Hambat
Staphylococus aureus (mm) Perlakuan U1 U2 U3 Rata- rata K(-) 0 0 0 0 K(+) 14 14 13 13,6 10% 13 16 10 13 20% 12 11 13 12 30% 10 16 9 11,6 40% 9 11 8 9,3
Hasil  pengamatan  aktivitas  antibakteri  pada bakteri  uji Staphylococus  aureus antibakteri atau  tidak  ada  zona  terdapat  aktivitas  dengan adanya  zona  hambat  disekitar  bakteri  uji dengan rata-rata ukuran sekitar 5-9 mm jumlah. Pada  ekstrak  biji  buah  langsat  pada  ulangan  1 terdapat sedikit zona hambat yang terlihat yaitu sekitar 4 mm, sedangkan pada ulangan dua dan tiga tidak ada aktivitas.
Tabel 4. Hasil Pengukuran Daya Hambat
Klebsiella pneumoniae (mm)
Perlakuan U1 U2 U3 Rata- rata K(-) 0 0 0 0 K(+) 13 13 12 12,6 10% 13 18 13 14,6 20% 12 11 13 12 30% 10 12 9 10,3 40% 9 9 8 8,6
Hal  yang  sama  juga  ditunjukkan  pada aktivitas antibakteri ekstrak n-Heksan biji buah langsat  terhadap  bakteri Klebsiella  pneumonia . Pada  Tabel  4  menunjukkan  bahwa  ekstrak  n- Heksan  biji  buah  langsat  dengan  konsentrasi 10% memberikan daya hambat terbesar sebesar 12,6  mm  dibandingkan  dengan  konsentrasi yang lebih besar. Dalam hal ini dapat dikatakan bahwa  ekstrak  n-Heksan  biji  buah  langsat dengan  konsentrasi  10%  memiliki  kategori yang  kuat  dalam  membunuh  bakteri Klebsiella pneumoniae berdasarkan  Davis  dan  Stout (1971).
Selain  itu,  berdasarkan  Tabel  1,  Tabel  2, Tabel  3  dan  Tabel  4  dapat  dilihat  bahwa aktivitas  antibakteri  ekstrak  n-heksan  biji  buah langsat  pada  bakteri staphylococus  aureus dan bakteri klebsiella  pneumonia menunjukkan
bahwa  semakin  tinggi  konsentrasi  maka  daya hambat  yang  diberikan  semakin  kecil.  Hal  ini berbanding  terbalik  dengan  hasil  penelitian yang  dilaporkan  oleh    Rahmawati  (2014).  Hal ini  ditunjukkan  oleh  diameter  daya  hambat yang  terbentuk  dipengaruhi  oleh  semakin banyak  komponen  bioaktif  yang  terkandung didalam ekstrak. Dalam penelitian ini, diameter zona  hambat  paling  kuat  ditunjukkan  oleh ekstrak  n-heksan  biji  buah  langsat  pada konsentrasi  10%  (konsentrasi  paling  kecil dibandingkan  20%,  30%  dan  40%).  Hal  ini disebabkan  karena  semakin  tinggi  konsentrasi maka  membuat  tingkat  kelarutan  menurun sehingga  zat  aktif  tidak  dapat  berdifusi  ke dalam  agar  sehingga  diperoleh  daya  hambat yang berkurang (Putra dkk., 2015).
Pertumbuhan  bakteri Staphylococus  aureus dan  bakteri Klebsiella  pneumoniae yang terhambat dapat disebabkan oleh penghambatan terhadap  sintesis  dinding  sel  (Poetry et al, 2019).Namun,  daya  hambat  pada  bakteri Staphylococus  aureus (13,6  mm)  lebih  besar dibandingkan dengan bakteri Klebsiella pneumoniae (12,6  mm).  Hal  ini  dapat dipengaruhi oleh perbedaan dinding sel bakteri gram  positif Staphylococus  aureus dan  bakteri gram  negatif Klebsiella  pneumoniae .  Dinding sel bakteri gram positif lebih tipis dibandingkan dengan  dinding  sel  bakteri  gram  negatif sehingga  dinding  bakteri  gram  positif  lebih mudah dirusak.
Penghambatan pertumbuhan bakteri
Staphylococus  aureus dan  bakteri Klebsiella pneumoniae akibat  pemecahan  dinding  sel bakteri  dapat  disebabkan  oleh  senyawa  aktif antibakteri  yang  terkandung  dalam  ekstrak  n- Heksan  biji  buah  langsat.  Selain  itu,  aktivitas antibakteri  dari  ekstrak  n-Heksan  biji  buah langsat dapat pula dipengaruhi oleh kandungan senyawa  alkaloid  dan  tannin  (Kusriani  dan Zahra,  2015).  Aktivitas  antibakteri  senyawa alkaloid  terbentuk  karena  terjadinya  presipitasi protein  (Masduki,  1996)  dan  mengkoagulasi protoplasma  bakteri  (Pratiwi,  2008).  Senyawa tannin  merusak  dinding  sel  bakteri  melalui mekanisme  pengkelatan  dan  mengkerutkan  sel sehingga pertumbuhan bakteri terganggu (Volk dan Wheeler, 1993).
Ekstrak  n-Heksan  biji  buah  langsat  dengan konsentrasi  10%  memiliki  daya  hambat  yang lebih besar dibandingkan dengan kontrol positif Ciprofloxacin Antimicrobial Susceptibility Disks .  Hal  ini  juga  dapat  disebabkan  oleh kemampuan  ekstrak  dan  kontrol  positif
berdifusi ke dalam agar, yang mana dipengaruhi oleh konsentrasi masing-masing. Dalam  penelitian  ini  juga  menggunakan kontrol  negatif  untuk  mengetahui  ada  tidaknya pengaruh pelarut terhadap pertumbuhan bakteri uji Staphylococus  aureus dan Klebsiella pneumoniae ,  sehingga  dapat  diketahui  bahwa yang  mempunyai  aktivitas  antibakteri  adalah zat uji bukan pelarut (Dwijendra, 2014).Kontrol negatif  yang  digunakan  adalah  aquades. Berdasarkan  Tabel  1,  Tabel  2,  Tabel  3  dan Tabel  4,  kontrol  negatif  tidak  memperlihatkan adanya  daya  hambat  untukbakteri  uji.  Hal  ini sesuai  dengan  penelitian  yang  dilakukan  oleh Wewengkang et
al .,(2014) dan Mujipradhana,(2018) membuktikan bahwa kontrol negatif yang digunakan tidak berpengaruh  pada  uji  antimikroba,  sehingga daya  hambat  yang  terbentuk  tidak  dipengaruhi oleh  pelarut  melainkan  karena  aktivitas senyawa yang ada dalam biji buah langsat. Metode cakram, tapi yang membedakan nya adalah kalau sumuran pada media agar MHA di buat lubang seperti sumur sedangkan pada disk tidak  dibuat  lubang.  Pada  hasil  pengamatan  di dapatkan berupa diameter zona hambat, dengan metode  sumuran  diameter  zona  hambat  lebih besar  daripada  metode  difusi  disk.  Hal  ini terjadi  karena  banyak  faktor  dan  teori,  pada metode  sumuran ekstrak langsung di masukan ke setiap lubang maka efek untuk menghambat bakteri  menjadi lebih kuat.

## KESIMPULAN
1. Ekstrak  n-Heksan  dapat  menghambat pertumbuhan bakteri
Staphylococus
aureus dan Klebsiella  pneumoniae ,  yaitu terdapat  aktivitas  antibakteri  yang  kuat dengan  daya  hambat  terbesar  pada  bakteri Staphylococus aureus.
2. Metode  cakram  menghasilkan  diameter zona  hambat  pada  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus 13,6  mm  dan Klebsiella pneumonia 12,6 mm.Sedangkan pada  Metode  sumuran  diameter  zona hambat  pada  bakteri Staphhylococcus aureus 13 mm dan Klebsiella pneuomonia 14,6.

## SARAN
Perlu  dilakukan  penelitian  lebih  lanjut tentang  isolat  dari  ekstrak  nonpolar  biji  buah langsat  ( Lansium  domesticum  cor )  yang berkhasiat sebagai antibakteri terhadap
Staphylococus aureus dan
Klebsiella pneumoniae .

## DAFTAR PUSTAKA
Dwijendra,  I.  M.  2014. Aktivitas  Anti  bakteri dan  Karakterisasi  Senyawa  Fraksi Spos .
Korompis .GEC, Danes V R, Sumampouw  OJ. 2010. Uji in vitro aktivitas anti bakteri d an  Langsat  (Lansium  domesticum). Bul Penenlitian Kesehatan 3: 1319.
Masduki,  I.  1996.  Efek  Antibakteri  Ekstrak Biji  Pinang  ( Areca  catechu )  terhadap Saureus dan E.  coli invitro.  Jurnal CerminDunia Kedokteran. 109: 21-24.
Pratiwi,  S.  T.2008. Mikrobiologi  Farmasi Jakarta: Erlangga.
Ragasa,  Consolacion  Y.,  Labrador,  Pamela.
Dan Rideout, John A. 2006. Antimicrobial Terpenoids from Lansium  domesticum.  (online).  Diakses pada  15  Januari  2015.  The  Philippine
Agricultural Scientist .
Rahmawati.  2014.  Interaksi  Ekstrak  Daun Lidah  Buaya  (  Aloe  vera  L.  )  dan
Daun.Sirih  (Piper  betle  l.)  terhadap Daya Hambat Staphylococcus aureus Secara In vitro. Jurnal EduBio  Tropika. Vol   2 (1): 121- 186
Saewan,  Nisakorn.,  Sutherland,  John  D.,  dan Chantra  promma,  Kan.  2006.  Anti malarial  Tetranortriterpenoids  from  the Seeds  of Lansium  domesticum  Corr .
(online).  Diakses  pada  13  Januari  2015. Journal of Phytochemistry 67 (2006).
Shankar,  Shiv.,  Jaiswal,  Lily.,  Aparna,  RSL., dan  Prasad,  RGSV.  2014.  Synthetis, Characterization, in
vitro  Biocom
patibility,  and  Antimicrobial  Activity  of Gold, Solver  and  Gold  Silver  Alloy Nanoparticles  Prepared  from  Lansium domesticum  Fruit  Peel  Extract.(online). Diakses   pada13  Januari  2015.  Journal of  Materials  Letters  137  (2014)75- 78(http://www.sciencedirect.c om/science/article/pii/S0167577X1997)
Siregar, S. F. 2009., Uji Aktivitas   Anti bakteri, Ekstrak  Etanol  dan  Air  Rebusan KulitBatang  Ingul  (Toonasinen  sis  M. Roem)  Terhadap  Beberapa  Bakteri [Skripsi].
Sutton,  S.  2011.  Measurement  of      Microbial Cells  by  Optical  Density. Journal  of Validat ionTechnology. 17 :(1) ,46-49.
Tangapo,  A.  M.  2005. Efektivitas  Antibakteri Ekstrak Tumbuhan Daun Sendok (Plantagomajor)Terhadap Staphylocc cus aureus dan Pseudomonas aeruginosa [Skripsi]. Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Universitas Sam Ratulangi ,Manado.
Timoteus,  Agus  Hendra  Rao.  2014.  Uji
Aktivitas  Anti  bakteri  Ekstrak  n-
Heksana  Biji  Buah  Langsat  (Lansium domesticum  Corr)  Terhadap  Bakteri Escherichia coli secara in vitro.
Pontianak:FK Universitas Tanjungpura. Volk, W.A.,Wheeler.2008. Mikrobiologi Dasar . Penerbit Erlangga. Jakarta.
Wewengkang, D., Deiske. S., Hengki. R. 2014. Karakterisasi dan bioaktif Antibakteri da n senyawa spons Haliclona sp.Dariteluk manado. Jurnal LPPM Bidang  Sains dan Teknologi . 1 (1).
Yapp,  Donald  TT  dan  Yap,  S.Y.  2002.  Lans ium domesticum: Skin and Leaf Evtracts of this Fruit Tree  Interrupt  the Lifecycle  of  Plasmodium  falciparu  m, and are Active Towards a Chloroquin e-r esistant  Strain  of  the  Parasite  (T9) invitro.