## PENDAHULUAN
Menurut  Organisasi  Kesehatan  Dunia  (WHO)  diare didefinisikan dimana feses dengan konsistensi lebih cair dari biasanya, dengan frekuensi tiga kali atau lebih dalam sehari.  Diare  di  Indonesia  merupakan  suatu  masalah kesehatan  masyarakat  yang  penting  kerena  memiliki tingkat morbiditas dan mortalitas yang tinggi (Kemenkes RI, 2011).
Menurut data WHO pada tahun 2013, diare merupakan penyakit ke-2 yang menyebabkan kematian pada balita (dibawah lima tahun). Sedangkan di Indonesia penyakit diare merupakan penyakit menular yang menyebabkan kematian  peringkat  ke-3  setelah  TB  dan  Pneumonia. Berdasarkan data DinKes kota Palembang tahun 2011- 2015  penyakit  diare  semakin  meningkat,  tetapi  pada tahun  2015  penyakit  diare  sedikit  menurun  dan  tidak ada yang mengalami kematian  akibat diare. Pada tahun
Uji Aktivtas Antibakteri Ekstrak Biji Alpukat ( Persea american Mill.) Terhadap Bakteri Penyebab Diare Escherichia coli dan Bacillus cereus
Antibacterial Activity Test of Avocado Seeds Extraction (Persea american Mill.) to Bacteria of Diarrhea Escherichia coli and Bacillus cereus
Rastria Meilanda 1*
Anggun Puspitasari 2
Kisdaryeti 3
*1 Institut Kesehatan Mitra Bunda, Batam, Kepulauan Riau,
Indonesia
2’3 STIK Siti Khadijah, Palembang, Sumstera Selatan, Indonesia
*email: rastri.m@gmail.com

## Abstrak
Diare  merupakan  penyakit  ke-2  di  dunia  yang  menyebabkan  kematian  pada  balita (dibawah  lima  tahun).  Pengobatan  diare  yang  disebabkan  oleh  infeksi  biasanya menggunakan antibiotik. Pemberian antibiotik menyebabkan resistensi mikroorganisme  patogen.  Sehingga  dibutuhkan  alternatif  lain  sebagai  pengobatan diare akibat infeksi. Salah satu pengobatan alternatif yang berkhasiat dari tumbuhan adalah alpukat. Biji alpukat ( Percea americana Mill.) mengandung alkoloid, flavonoid, saponin, dan tanin yang dapat digunakan sebagai antibakteri. Penelitian ini bertujuan untuk  mengetahui  pengaruh  konsentrasi  ekstrak  etanol  biji  buah  alpukat ( Perseaamericana Mill.) terhadap bakteri penyebab diare Escherichia coli dan Bacillus cereus . Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental menggunakan uji statistik One Whay ANOVA. Konsentrasi ektrak biji alpukat ( Percea amerinaca Mill.) yaitu 3%, 3,5%, 4%, 4.5%, dan 5%. Hasil menunjukkan ektrak biji alpukat ( Percea amerinaca Mill.) mempunyai  konsentrasi  hambat  minimum  (KHM)  sebesar  3%  terhadap  bakteri Escherichia  coli dan Bacillus  cereus .  Mempunyai konsentrasi  bunuh  minimum  (KBM) sebesar  3%  terhadap  bakteri Escherichia  coli dengan  diameter  2,2  mm dan  bakteri Bacillus  cereus dengan  diameter  5.3  mm . Pada  uji  statistik  bakteri Escherichiacoli menunjukkan nilai p = 0,007 dan Bacillus cereus menunjukkan nilai p = 0,001 berarti ada pengaruh antara ektrak biji alpukat terhadap bakteri Escherchia coli dan Bacillus cereus .

## Kata Kunci:
Percea americana Mill. Antibakteri Escherichia coli Bacillus cereus
Keywords : Percea americana Mill.
Antibacteri
Escherichia coli
Bacillus cereus

## Abstract
Diarrhea is 2 nd mortality of toddler. One of alternative treatment is avocado. The aim of this  study  was  to  know  the  influence  of  avocado  seed  ethanol  extract  concentrate (Perseaamericana  Mill.)  to  bacteria  of  diarrhea  Escherichia  coli  and  Bacillus  cereus.  The experimental method was used in this study. The one way ANOVA statistical test was use to analyze the data. The avocado seed extract concentrates (Percea amerinaca Mill.) were 3%, 3.5%, 4%, 4.5%, and 5%. The result of the study showed that avocado seed extract concentrates (Percea amerinaca Mill.) has minimum blocked concentrate as 3% to bacteria of Escherichia coli and Bacillus cereus and minimum killed concentrate as 3% to Escherichia coli  of  2.2  mm  diameter  and  Bacillus  cereus  of  5.3mm  diameter.  Moreover,  based  on statistical test, it was found that Escherichia coli got the p value= 0.007 and Bacillus cereus got the p value = 0.001. it means that there was an influence of avocado seed extract to bacteria of Escherichia coli and Bacillus cereus.
© 2023 The Authors. Published by Institute for Research and Community Services Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. This  is  Open  Access  article  under  the  CC-BY-SA  License  (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/).  DOI: https://doi.org/10.33084/jsm.v9i3.6472
2011, terdapat 45.593 penderita diare. Pada tahun 2012, terdapat  57.576  penderita  diare.  Pada  tahun  2013, terdapat  51.226  penderita  diare.  Pada  tahun  2014, terdapat 44.213 penderita diare. Dan pada tahun 2015, terdapat 38.721 penderita diare.
Diare  disebabkan  oleh  infeksi,  melabsorbsi,  alergi, keracunan, dan imunodefisiensi. Penyebab  yang sering ditemukan adalah keracunan makanan dan infeksi. Diare akibat  infeksi  disebabkan  oleh  bakteri  patogen  seperti Escherichia coli dan Bacilus cereus. Diare yang disebabkan oleh  infeksi  ditandai    dengan  sindrom  disentri,  dan keluhan abdomen seperti mulas, mual, muntah, demam, serta gejala dan tanda dehidrasi (Medicinus, 2009).
Pengobatan diare yang disebabkan oleh infeksi biasanya menggunakan antibiotik. Antibiotik yang biasa digunakan adalah  ciprofloxacin,  trimetoprim-sulfametoksazole, norfloxacin,  dan  levofloxacin  (Umar,  et  al.,  2014). Pemberian  antibiotik  dapat  menyebabkan  resistensi pada  mikroorganisme  patogen.  Sehingga  dibutuhkan alternatif lain sebagai pengobatan diare akibat infeksi.
Masyarakat memanfaatkan tumbuhan untuk menyembuhankan  penyakit  maupun  memelihara kesehatan.  Salah  satu  pengobatan  alternatif  yang berkhasiat dari tumbuhan adalah alpukat. Masyarakat biasanya hanya  memanfaatkan  daging  buahnya  saja  sedangkan  bijinya dibuang.  Menurut  penelitian  Zuhrotun  (2007),  biji  buah alpukat  mengandung  alkoloid,  flavonoid,  saponin,  dan  tanin yang dapat digunakan sebagai antibakteri.
Penelitian yang dilakukan oleh (Vinsensius, 2016) mengenai uji aktivitas antibakteri ekstrak biji alpukat ( Persea americana Mill.) terhadap Bacillus  cereus dan Vibrio  cholerae dengan  variasi pengekstrak  menunjukkan  aktivitas  antibakteri.  Berdasarkan penelitian  tersebut,  maka  perlu  dilakukan  penelitian  tentang aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak  etanol  biji  buah  alpukat ( Persea  americana Mill.)  penyebab  diare  terhadap pertumbuhan bakteri Escherichia coli dan Bacilus cereus.

## METODOLOGI

## Alat
Alat yang digunakan berupa alat seperangkat alat gelas, alat  timbang,  panci stainless  steel untuk  maserasi, penangas air, blander, ayakan, corong buchner, batang pengaduk,  dan rotary  evaporator .  cawan  petri,  lampu spiritus,  tabung  reaksi,  rak  tabung,  jarum  ose,  batang pengaduk,  mikropipet,  autoklaf,  inkubator, Laminar  Air Flow (LAF),  jangka  sorong,  beker  gelas,  erlenmayer, pipet, dan kertas cakram.

## Bahan
Bahan yang digunakan dalam penelitian ini yaitu biji buah alpukat  ( Persia  americana Mill.),  etanol  96%,  aquadest, Nutrient  Agar  (NA),Nutrient  Broth ( NB ),  H 2 SO 4 0,3  N, BaCl 2 , 2H 2 O 1,175%,  antibiotik Ciprofloxacin 500 mg, bakteri Escherichia coli dan Bacillus cereus .

## Metode
1. Pembuatan Ekstrak Etanol Biji Buah Alpukat Dalam  penelitian  ini  digunakan  metode  maserasi.
Serbuk biji alpukat sebanyak 100 gram dimasukkan kedalam  pelarut  etanol  96%  sampai  serbuk terendam pada maserator selama 24 jam.
Kemudian sampel disaring dengan kertas penyaring. Residu  kembali  dimaserasi  lagi  dengan  cara  yang sama,  sampai  3  x  24  jam.  Maserat  pertama  dan maserat hasil maserasi digabung menjadi  satu dan diuapkan untuk memisahkan pelarutnya. Penguapan dilakukan  dengan  menggunakan  alat rotary evaporator hingga  etanol  habis  menguap  hingga tersisa  ekstrak  kental  saja,  kandungan  air dihilangkan  dengan waterbath .  Kemudian  ekstrak tersebut digunakan untuk uji aktivitas antibakteri.
2. Skirining Fitokimia
a. Flavonoid
Ekstrak biji alpukat diambil sebanyak 5 ml lalu tambahkan 0,1 g serbuk Mg dan 1 ml HCl pekat dan 2 ml amil alkohol, dikocok, dan dibiarkan
memisah.  Flavonoid  pasitif  jika  terjadi  warna merah, kuning, jingga, pada lapisan amil alkohol.
b. Alkaloid Pemeriksaan  alkoloid  diambil  3  tetes  ekstrak yang diperoleh ditambahkan:
- 2  tetes  pereaksi  Mayer  menghasilkan endapan putih/kuning.
- 2 tetes pereaksi Bouchardat menghasilkan endapan coklat hitam.
- 2 tetes pereaksi Dragendrof menghasilkan endapan merah bata.
c. Saponin Ekstrak  biji  alpukat  diambil  sebanyak  3  tetes ditambah  10ml  aquades,  kemudian  dikocok selama  10  detik.Hasil  positif  ditandai  dengan adanya busa ± 1cm. Pada penambahan 1 tetes larutan  asam  klorida  2  N,  apabila  buih  tidak hilang menunjukkan adanya saponin.
d. Tanin Ekstrak biji alpukat diambil sebanyak 2 ml lalu ditambahkan 1-2 tetes perak besi (III) klorida.
Terjadi  warna  biru  atau  hijau  kehitaman menunjukkan adanya tanin.
e. Steroid dan Triterpenoid
a) 1 gram simplisia digerus dengan 5 ml eter kemudian dipipet sambil disaring menggunakan pipet yang disumbat dengan kapas (Filtrat B)
b) Filtrat  B  ditempatkan  dalam  cawan penguap,  kemudian  dibiarkan  menguap hingga kering
c) Kedalam residu diteteskan 2 hingga 3 tetes pereaksi liberman burchard. Terbentuknya warna biru hijau menunjukkan adanya golongan steroid.
f. Senyawa polifenolat 50  mg  serbuk  simplisia  dalam  tabung  reaksi didihkan  dalam  50  ml  air  selama  15  menit, kemudian didinginkan dan disaring (Filtrat A).
Kedalam  filtrat  ditambahkan  larutan  pereaksi
FeCl 3 1%  terbentuknya  warna  biru-hitam menunjukkan adanya senyawa polifenolat.
g. Kuinon
Sebanyak 50 mg serbuk simplisia dalam tabung reaksi  didihkan  dalam  50  ml  air  selama  15 menit  setelah  itu  didinginkan  dan  disaring. Kemudian  ditambahkan  larutan  KOH  5%. Terbentuknya warna kuning hingga merah yang menunjukkan adanya golongan kuinon.
h. Monoterpenoid dan sesquiterpenoid Sebanyak 1 gram simplisia digerus dengan 5 ml eter,  setelah  itu  disaring  menggunakan  pipet yang  disumbat  dengan  kapas.  Filtrat  yang dihasilkan  ditempatkan  dalam  cawan  penguap dan  dibiarkan  menguap  hingga  kering, kemudian diteteskan larutan vanillin 10% dalan H2SO4  pekat  melalui  pinggir  cawan. Terbentuknya warna-warna yang menunjukkan adanya senyawa monotrpenoid dan sesquiterpenoid.
3. Pewarnaan Gram Satu ose bakteri ratan pada kaca objek, kemudian difiksasi diatas bunsen, ditetesi dengan kristal violet selama  30  detik  kemudian  bilas  dengan  akuades, dikeringkan,  kemudian  ditetesi  dengan  larutan iodium selama 30 detik lalu bilas dengan akuadest, dikeringkan,  kemudian  hilangkan  warna  dengan meneteskan  alkohol  70%  selama  20  detik  dan dibilas dengan air, keringkan warnai kembali dengan safranin  selama  30  detik  lalu  bilas  dengan  air, keringkan diamati di bawah mikroskop. Apabila sel berwarna merah berarti Gram negartif dan warna ungu berarti Gram positif.
4. Uji Akivitas Antibakteri Dengan Metode Dilusi Tabung  reaksi  disiapkan  5  buah  untuk  setiap pengenceran ekstrak. Masing-masing tabung reaksi diberi  label,  tabung  1-5  berisi Nutrient  Broth sebanyak 5 ml.  kemudian ekstrak biji buah alpukat yang  telah  ditentukan  konsentrasinya  dimasukkan
kedalam  tabung  reaksi  yang  berisi Nutrient  Broth dan dihomogenkan dengan vortex .
Suspensi  bakteri  uji  sebanyak  1  ml  diinokulasikan kedalam masing-masing tabung, kemudian di vortex .
Tabung reaksi kemudian diinkubasi pada suhu 37˚C selama  24  jam.  Antibiotik  ciprofloxacin  sebagai kontrol positif dan pelarut sebagai kontrol negatif. Dan pengujian dilakukan sebanyak tiga kali.
5. Uji Aktivitas Antimikroba Dengan Metode Difusi Teteskan  suspensi  bakteri  sebanyak  2  tetes kedalam  cawan  petri  yang  berisi  10  ml  media nutrien  agar  yang  telah  memadat  lalu  ratakan.
Cawan  petri  tersebut  digoyangkan  beberapa  kali secara horizontal agar suspensi bakteri ini merata pada seluruh permukaan agar. Kemudian dibiarkan pada suhu kamar selama 15 menit. Suspensi bakteri ditempatkan pada cawan petri untuk masing-masing larutan  uji  dan  pengujian  dilakukan  sebanyak  tiga kali.

## Analisa Data
Pengumpulan  data  dilakukan  dengan  pengukuran  zona bening (clear zone) pada tiap konsentrasi ekstrak etanol biji  alpukat  pada  bakteri  uji.  Data  yang  diperoleh diajukan  dalam  bentuk  tabel,  gambar,  dan  uji  statistik ANOVA One way .

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
1. Hasil Ekstraksi Biji Alpukat Serbuk simplisia biji alpukat sebanyak 100 gram dan diperoleh  randemen  sebanyak  16%.  Diperoleh ektrak kental biji alpukat sebanyak 16 gram.
2. Hasil Skrining Fitokimia
Dari  hasil  skrining  fitokimia  yang  sudah  dilakukan didapatkan bahwa biji alpukat mengandung senyawa metabolit  sekunder  golongan  Flavonoid,  alkoloid, tanin, saponin, dan kuinon.
3. Hasil Pengecatan Bakteri
Hasil pengecatan Gram yang diperoleh menunjukkan bahwa bakteri Escherichia coli adalah bakteri  Gram  negatif  karena  menunjukkan  warna merah.  Sedangkan  bakteri Bacillus  cereus adalah bakteri  Gram  positif  karena  menunjukkan  warna biru.
4. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri
Berdasarkan  hasil  pengujian  pada  tabel  I  dengan menggunakan metode dilusi cair, untuk menentukan  KHM  dapat  dilihat  dengan  adanya perubahan  warna  pada  tabung  uji  menjadi  lebih jernih.  Konsentrasi  3  %  ditetapkan  sebagai  KHM ekstrak biji alpukat terhadap bakteri Escherichia coli dan Bacillus cereus .
Tabel 1. Hasil Kadar Hambat Minimum (KHM)
Escherichiacoli dan Bacilluscereus metode dilusi cair Bakteri Bahan Uji Hasil Escherichia coli Ekstrak 3 % - Ekstrak 3,5% - Ekstrak 4% - Ekstrak 4,5% - Ekstrak 5% - K+ - K- + Bacillus cereus Ekstrak 3 % - Ekstrak 3,5% - Ekstrak 4% - Ekstrak 4,5% - Ekstrak 5% - K + - K - +
Keterangan :
+  : Larutan didalam tabung terlihat keruh, artinya terdapat pertumbuhan bakteri
- :  Larutan  didalam  tabung  mulai  jernih,  artinya  pertumbuhan bakteri mulai terhambat
K+: Ciprofloxacin K- : Aquadest steril
Berdasarkan hasil uji statistika menggunakan One Way ANOVA.  Dari  hasil  uji  statistik  bakteri Escherichiacoli menunjukkan  nilai  p  =  0,007  dan Bacillus  cereus menunjukkan nilai p = 0,001 yang berarti ada pengaruh antara ektrak biji alpukat terhadap bakteri Escherchia coli dan Bacillus cereus .
Dari  regresi  linier  biji  alpukat  ( Percea  americana Mill.) terhadap  bakteri Bacillus  cereus pada  gambar  1 didapatkan  rumus  Y=  2.8200  X  –  2.4400  sehingga banyaknya  simplisia  yang  dapat  digunakan  untuk ekuivalen terhadap ciprofloxacin 500 mg adalah 0.1327 gram  ektrak  biji  alpukat  atau  0,83  gram  simplisia  biji alpukat.
Gambar 1. Persamaan  linier  biji  alpukat  ( Percea americana Mill.) terhadap bakteri Bacillus cereus
Dari  regresi  linier  biji  alpukat  ( Percea  americana Mill.) terhadap  bakteri Escherichia  coli  pada  gambar  2 didapatkan  rumus  Y=  1.4800  X  –  2.4400  sehingga banyaknya  simplisia  yang  dapat  digunakan  untuk ekuivalen terhadap ciprofloxacin 500 mg adalah 0,1854 gram  ektrak  biji  alpukat  atau  1,2  gram  simplisia  biji alpukat.
Gambar II. Persamaan  linier  biji  alpukat  ( Percea
americana Mill.) terhadap bakteri
Escherichia coli

## Pembahasan
Pembuatan ekstrak biji alpukat ( Percea americana Mill.) dilakukan  dengan  menggunakan  metode  maserasi. Pemilihan metode maserasi karena maserasi digunakan untuk mengekstrak sampel yang relatif tidak tahan panas dan  metode  ini  dapat  menghindari  kerusakan
komponen  senyawa  karena  tidak  menggunakan  panas sehingga baik untuk sampel yang tidak tahan.
Proses ektraksi dilakukan dengan cara merendam 100 gram serbuk biji alpukat dengan 1 L etanol 96% selama 3x24  jam.  Pemilihan  pelarut  etanol  karena  pelarut etanol  karena  pelarut  yang  memiliki  sifat  semi  polar sehingga  komponen  aktif  dengan  kepolaran  yang beragam  tereaksi  lebih  sempurna,  serta  dapat melarutkan senyawa organik baik polar, semipolar dan nonpolar. Setelah proses maserasi selesai dan diperoleh maserat kemudian dilakukan proses penguapan maserat dengan menggunakan rotary evaporator tujuan proses ini adalah  untuk  menghilangkan  etanol  (pelarut)  pada maserat  sehingga  maserat  menjadi  lebih  kental  dan nantinya ekstrak yang diperoleh tidak lagi mengandung etanol. Setelah dievaporasi diperoleh ektrak yang masih mengandung  etanol,  sehingga  untuk  menghilangkan kandungan  etanol  dilakukan  penguapan  dengan menggunakan waterbath .  Setelah  penguapan  dengan waterbath selesai dilakukan diperoleh ektrak kental, dari 100  gram  serbuk  simplisia    diperoleh  ekstrak  kental sebanyak 16 gram (rendemen 16%).
Skrining  fitokimia  merupakan  senyawa-senyawa  yang dihasilkan  dari  sintesis  tanaman  yang  kebanyakan merupakan senyawa aktif yang memiliki fungsi fisiologis bagi  tubuh.  Uji  fitokimia  dilakukan  untuk  mengetahui metabolit  skunder  dari  tumbuhan.  Dari  hasil  skrining fitokimia  biji  alpukat  mengandung  flavonoid,  alkoloid, saponin, dan tanin. Sama seperti penelitian sebelumnya (Vinsensius, 2016) yang menyebutkan bahwa biji alpukat memiliki  beberapa  jenis  senyawa  seperti  flavonoid, alkoloid,  tanin,  dan  saponin  yang  merupakan  senyawa yang  berpotensi  sebagai  antibakteri.  Mekanisme antibakteri  senyawa  flavonoid  yaitu  dengan  cara perubahan  permeabilitas  memberan  sel.  Mekanisme antibakteri  senyawa  alkoloid  yaitu  berpengaruh menghambat  sintesis  dinding  sel  dan  mengubah permeabilitas  memberan  sel.  Mekanisme  antibakteri senyawa  tanin  menghambat  pertumbuhan  bakteri
dengan  cara  mengkerutkan  dinding  sel.  Sedangkan mekanisme antibakteri senyawa saponin bekerja dengan cara  meningkatkan  permeabilitas  memberan  sehingga terjadi  hemolisis  sel,  apabila  saponin  berinteraksi dengan bakteri, maka bakteri tersebut akan pecah atau lisis.
Setelah  proses  ekstraksi  dari  hasil  skrining  fitokimia yang  sudah  dilakukan  didapatkan  bahwa  biji  alpukat mengandung  senyawa  metabolit  sekunder  golongan Flavonoid, alkoloid, tanin, saponin, dan kuinon.
Pengecatan  Gram  bakteri  merupakan  salah  satu  cara yang  dilakukan  untuk  membantu  mengidentifikasi bakteri Escherichia coli dan Bacillus cereus . Bakteri Gram positif setelah dilakukan pengecatan Gram, bakteri akan menunjukkan  warna  ungu,  sedangkan  untuk  bakteri Gram negatif akan berwarna merah. Sel bakteri Gram positif  akan  mengikat  senyawa  kristal  violet-iodin  dari cat  Gram  sehingga  tetap  berwarna  biru  setelah diberi alkohol,  sedangkan  bakteri  Gram  negatif  warna  akan hilang.  Sel  bakteri  Gram  negatif  yang  tidak  berwarna kemudian  ditambahkan counterstain (  misalnya  safranin pewarna  merah  )  akan  berwarna  merah,  sedangkan bakteri  Gram  positif  setelah  ditambahkan counterstain akan tetap berwarna biru (Jawetz, et al, 2013).
Hasil  yang  diperoleh  menunjukkan  bahwa  bakteri Escherichia  coli adalah  bakteri  Gram  negatif  karena menunjukkan warna merah. Sedangkan bakteri Bacillus cereus adalah bakteri Gram positif karena menunjukkan warna biru.
Penelitian  uji  aktivitas  antibakteri  dilakukan  di laboratorium  mikrobiologi  Balai  Besar  Laboratorium Kesehatan  (BBLK)  Palembang  pada  tanggal  9  agustus 2018.
Uji aktivitas antibakteri menggunakan sampel biji alpukat ( Percea americana Mill.) terhadap bakteri penyebab diare
Escherichia  coli dan Bacillus  cereus .  Ektrak  biji  alpukat dibuat dalam 5 konsentrasi 3% ,3.5% ,4%, 4.5% dan 5% dengan  pelarut  aquadest  steril.  Kontrol  positif  yang
digunakan  ciprofloxacin  dan  kontrol  negatif  yang digunakan  aquadest  steril.  Aquades  steril  digunakan sebagai kontrol negatif karena merupakan pelarut yang universal.  Ciprofloxacin  sebagai  kontrol  positif merupakan  antibiotik  berspektrum  luas  yang  aktif terhadap  Gram  positif  dan  Gram  negatif  dan diindikasikan sebagai antidiare (Umar, et al., 2014).
Uji aktivitas bakteri dilakukan dengan metode Dilusi cair untuk menentukan KHM. Dapat dilihat dengan adanya perubahan  warna  pada  tabung  uji  menjadi  lebih  jernih (Santoso, 2010). Dari hasil penelitian dapat dilihat pada Tabel I Konsentrasi Hambat Minimum (KHM) ektrak biji alpukat  ( Percea  americana Mill.)  terhadap  bakteri Escherichia coli dan Bacillus cereus yaitu pada konsentrasi 3%  pertumbuhan  bakteri  mulai  terhambat.  Hal  ini disebabkan  ektrak  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri  dari  konsentrasi  kecil  karena,  semakin  besar konsentrasi jumlah senyawa aktif dalam ektrak semakin banyak sehingga kemampuan ekstrak dalam menghambat bakteri semakin tinggi
Uji  aktivitas  antibakteri  selanjutnya  menggunakan metode disc diffusion untuk menentukan  KBM dengan pengukuran  zona  bening.  Dari  hasil  penelitian  dapat dilihat pada Tabel 2 untuk bakteri Escherichia coli zona bening  yang  terbesar  terdapat  pada  konsetrasi  5% dengan  diameter  rata-rata  4,5  mm,  kontrol  positif (Ciprofloxacin)  didapatkan  diameter  25  mm  untuk bakteri Escherichia coli.
Tabel II. Nilai  rata-rata  daya  hambat  ektrak  biji alpukat (Percea americana Mill.) terhadap bakteri  Escherichia  coli  dan  Bacillus cereus.
Keterangan : P1 : Pengulangan 1 P2 : Pengulangan 2 P3 : Pengulangan 3 K + : Kontrol + (Ciprofloxacin) K - : Kontrol – (Aquadest)
Sedangkan untuk bakteri Bacillus cereus pada konsentrasi 5%  dengan  diameter  rata-rata  11  mm,  kontrol  positif (Ciprofloxacin)  didapatkan  diameter  35  mm  untuk bakteri Bacillus cereus . Kontrol negatif (aquadest steril) tidak terbentuk zona bening di sekitar cakram.
Hasil uji statistik One Way ANOVA menunjukkan bahwa ektrak  biji  alpukat  ada    pengaruh  terhadap  bakteri Bacillus cereus dan Escherichia coli dapat dilihat pada nilai p=  0,001 Escherichia  coli, sedangkan  nilai  p=  0,007 Bacillus cereus .
Dari hasil keseluruhan dapat dilihat bahwa ekstrak biji alpukat  lebih  efektif  terhadap  bakteri Bacillus  cereus dibandingkan dengan Escherichia coli dikarenakan adanya perbedaan  struktur  dinding  sel  antara  kudua  bakteri yang  mempengaruhi  kerja  ektrak  biji  alpukat  sebagai tumbuhan antibakteri. Struktur dinding sel bakteri gram positif  lebih  sederhana,  yaitu  lapisan  tunggal  dengan kandungan  lipid  yang  rendah  sehingga  memudahkan bahan bioaktif merusak kedalam sel (Salni, et al., 2011). Sementara  struktur  dinding  sel  gram  negatif  lebih kompleks,  berlapis  tiga,  yaitu  lapisan  luar  lipoprotein, lapisan  tengah  liposakarida  yang  berperan  sebaga penghalang  masuknya  bahan  bioaktif  antibakteri,  dan lapisan  dalam  berupa  peptidoglikan  dengan  kandungan lipid  tinggi  (Salni,  et  al.,  2011).  Adanya  perbedaan struktur  dan  komponen  dindingsel  tersebut  yang menyebabkan Escherichia coli bakteri gram negatif lebih resisten.  dibandingkan  dengan Bacillus  cereus sebagai gram positif.
Berdasarkan  data  tabel  2  menunjukkan  semakin besar konsentrasi semakin besar diameter zona bening yang terbentuk.  Hal  ini  terjadi  karena  semakin  besar  zona bening  maka  semakin  besar  juga  suatu  bahan  dalam membunuh  pertumbuhan  bakteri  karena  peningkatan
konsentrasi, diikuti dengan peningkatan konsentrasi zat bioaktif sehingga efek antibakterinya makin tinggi pula.
Hasil  penelitian  (Vinsensius,  2016)  uji  aktivitas antibakteri  ektrak  biji  alpukat  ( Percea  americana Mill.) terhadap  bakteri Bacillus  cereus dan Vibrio  cholerae dengan  variasi  pengekstrak  diperoleh  KHM  pada konsentrasi  3,625%  terhadap  bakteri Bacillus  cereus . Sedangkan pada penelitian ini terhadap bakteri Bacillus cereus diperoleh KHM 3%.
Hasil  penelitian  (Riadi,  2014)  aktivitas  antimikroba ektrak  biji  alpukat  ( Percea  americana Mill.)  terhadap beberapa  mikroba  patogen  secara  in  vitro  diperoleh KHM pada konsentrasi 5% diameter 7,50 mm terhadap bakteri Escherichia  coli. Sedangkan  pada  penelitian  ini pada Escherichia coli diperoleh KHM 3%.
Berdasarkan  hasil  penelitian  ini  dibandingkan  dengan teori  Tortora,  2001  dan  penelitian  sebelumnya Vinsensius,  2016  dan  Riadi,  2014  memiliki  hasil  yang sama,  yaitu  semakin  besar  konsentrasi  semakin  besar diameter  zona  bening  yang  terbentuk.  Sehingga  hasil dari penelitian ini tidak jauh berbeda dan sesuai dengan teori dan penelitian sebelumnya.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian aktivitas antibakteri Ekstrak biji  alpukat  ( Persea  americana Mill.)  terhadap  bakteri penyebab diare Escherichia coli dan Bacillus cereus dapat disimpulkan  bahwa  konsentrasi  ekstrak  biji  alpukat ( Persea  americana Mill.)  meberikan  pengaruh  terhadap bakteri Escherichia  coli dan Bacillus  cereus .  Antibakteri ekstrak  biji  alpukat  ( Percea  americana Mill.)  ekuivalen terhadap antibakteri ciprofloxacin. Banyaknya simplisia yang dibutuhkan untuk ekuivalen terhadap ciprofloxacin adalah  1,2  gram  pada  bakteri Escherichia  coli dan  0,83 gram pada bakteri Bacillus cereus .

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  kami  ucapkan  kepada  INSTITUT KESEHATAN MITRA BUNDA dan STIK Siti Khadijah atas selesainya penelitian kami.

## REFERENSI
Benget,  Vinsensius,  Sidharta,  Rahardjo,  Pranata, F.Sinung. 2016. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak BijiAlpukat ( Persea  americana Mill.) terhadap
Bakteri  Bacillus  cereus  dan  Vibrio  cholerae dengan Variasi Pengekstrak . Fakultas Teknologi Universitas Atmajaya Yogyakarta.
BPOM RI. 2007. Acuan Sediaan Herbal , Volume.3 edisi.1
Brooks,  G.F.,  Butel,  J.S.,  Ornston,  L.N.,  2013. Jawetz,
Melnick  &  Adelberg.  Medical  Mikrobiologi. By Mc Graw-Hill Companies.
Christianto,  C.W.  (2012). Efek  Antibakteri  Ekstrak  Biji Alpukat  (Persea  americana  Miller)  Terhadap Pertumbuhan Streptococcus mutans , Oral Biol Dent J., 4 (2) : 40-44
Dalimartha,  Setiawan.  2008. Atlas  Tumbuhan  Obat Indonesia  Jilid  5 .  Penerbit    Pustaka  Bunda, jakarta.
Darsana,  I.  Besung,  I.  Mahatmi,  H.  2012. Potensi  daun Binahong  dalam  Menghambat  Pertumbuhan Bakteri  Escherichia  coli  secara  In  Vitro. Indonesia Medicus Veterinus.
Departemen Kesehatan Republik Indonesia, 2011. Buku Saku Petugas Kesehatan.
Green, J.R.S. 2005. Pengobatan Alami Mengatasi Bakteri. Prestasi Pustaka, Jakarta. Halaman 11.
Indriani,  Y.  dan  Suminarsih,  E.  1997. Alpukat. Penebar Swadaya, Jakarta. Halaman 10.
Kementrian Kesehatan Republik Indonesia, 2011. Situasi
Diare di Indonesia , jakarta.
Madigan, M. T., Martinko, J. M., Bender, K. S., Buckley,
D. H., dan Stahl, D.A. 2015. Brock Biology of Microorganism  Fourteenth Edition.  Pearson Education, Boston. Halaman 171-178.
Medicinal, 2009. Probiotics . Volume 22 nomor 3
Notoadmodjo, S. 2012. Metodologi Penelitian Kesehatan . Jakarta : Rineka Cipta
Nursalam.  2014. Konsep  dan  Penerapan  Metodologi Penelitian  Ilmu  Keperawatan .  Yogyakarta Salemba Medika.
Pratiwi  T,  Sylvia.  2008. Mikrobiologi  Farmasi. Penerbit Erlangga, Jakarta.
Radji,  M.  2011. Mikrobiologi. Buku  Kedokteran  ECG, Jakarta. Halaman 97.
Riadi, 2014. Statistika Penelitian Analisis Manual dan IBM SPSS, Yogyakarta.
Robinson, T. 1995. Kandungan Organik Tumbuhan Tinggi. Terjemahan Prof. Dr. Kosasih Padmawinata. ITB, Bandung. Halaman 20.
Salni,  Hanifa,  dan  Ratna.  2011.  Isolasi  Senyawa Antibakteri Dari Daun Jengkol ( Pithecolobium lobatum Benth) dan Penentuan Nilai KJM-nya. Universitas Sriwijaya.
Santoso, S.C. 2010. Efektivitas Ekstrak Daun Teh Hijau ( Camellia  sinensis )  dalam  Menghambat Pertumbuhan Candida albicans secara In Vitro . Universitas Brawijaya Malang.
Sugiyono.  2016. Metode  Penelitian  Kuantitatif  Kualitatif dan R&D. Bandung : Alfabeta.
Tortora,  G.  J.,  Funke,  B.  R.,  Case,  C.  L.,  2001, Microbiology : An Introduction, 7 th edition, San Fransisco : Benjamin Cummings, p. 125.
Utami,  E.R.  2012.  Antibiotika,  Resistensi,  dan Rasionalitas Terapi. J. Saintis . 1(1):124-138.
Umar,  Zein,  Khalid,  Huda,  Zagala  dan  Josi,  Ginting.
2014. Diare Akut Disebabkan Bakteri. Fakultas Kedokteran Universitas Sumatera Utara.