Uji Daya Hambat Formulasi Salep Ekstrak Etanol Umbi Hati Tanah ( Angiopteris sp) terhadap Bakteri Staphylococcus aureus (Antibacterial Activity Of an Ethanol Extract Ointment of Angiopteris sp Against
Staphylococcus aureus )
Rezqi Handayani 1 , Nurul Qamariah 1
1 Program Studi D-III Farmasi Universitas Muhammadiyah Palangkaraya Email: rezqi.handayani@gmail.com

## ABSTRAK
Umbi hati tanah ( Angiopteris sp) merupakan bagian tumbuhan yang sering digunakan suku  Dayak  di  Kalimantan  Tengah  sebagai  obat  untuk  menyembuhkan  luka.  Tumbuhan  ini diketahui  memiliki  kandungan  senyawa    flavonoid,  saponin,  tannin  dan  katekol  yang  pada penelitian  sebelumnya  telah  dibuktikan  bahwa  ekstrak  etanol  tumbuhan  ini  mampu menghambat  pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus . S.  aureus adalah  bakteri  Gram- positif  yang  menyebabkan  infeksi  pada  luka.  Beberapa  strain  bakteri  ini  resisten  terhadap antibiotik  yang  tersedia.  Pada  penelitian  ini  digunakan  dua  basis  salep  yaitu,  basis  salep hidrokarbon  dan  basis  salep  larut  air.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  formulasi salep yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus . Ekstraksi tumbuhan dilakukan dengan  metode  soxhletasi.  Uji  daya  hambat  pada  penelitian  ini  menggunakan  metode penanaman  disc  yang  mengandung  zat  aktif  sebagai  bahan  uji  utama.  Hasil  penelitian menunjukkan  bahwa  formulasi  basis  salep  yang  memiliki  kemampuan  untuk  menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus adalah formulasi salep dengan basis larut air Kata Kunci : uji daya hambat, umbi hati tanah, Angiopteris sp, Staphylococcu aureus

## ABSTRACT
Hati Tanah tuber (Angiopteris sp) is a plant part that is often used by Dayak tribes in Central Kalimantan as a medicine to heal wounds. This plant is known to contain flavonoid, saponin, tannin and catechol compounds which in previous studies have proven that ethanol extract of this plant can inhibit the growth of Staphylococcus aureus bacteria. Staphylococcus aureus is a Gram-positive bacterium that causes infection in wounds. Some of these strains of bacteria are resistant to available antibiotics. In this study two bases of ointment were used, namely,  the  base  of  the  hydrocarbon  ointment  and  the  base  of  the  water-soluble  ointment. This  study  aims  to  determine  the  ointment  formulation  which  can  inhibit  the  growth  of  S. aureus  bacteria.  Plant  extraction  is  done  by  the  soxhletation  method.  The  inhibitory  test  in this  study  uses  a  method  of  planting  discs  that  contain  active  substances  as  the  main  test material.  The  results  showed  that  the  base  ointment  formulation  which  had  the  ability  to inhibit  the  growth  of  Staphylococcus  aureus  bacteria  was  an  ointment  formulation  with  a water-soluble base.
Keywords: antibacterial activity, Hati Tanah tuber, Angiopteris sp, Staphylococcus aureus

## PENDAHULUAN
Indonesia  merupakan  negara  kepulauan yang  sangat  luas,  mempunyai  kurang  lebih 35.000  pulau  yang  besar  dan  kecil  dengan
keanekaragaman  jenis  flora  dan  fauna  yang sangat tinggi. Di Indonesia diperkirakan terdapat 100  sampai  dengan  150  famili  tumbuh- tumbuhan,  dan  dari  jumlah  tersebut  sebagian
besar  mempunyai  potensi  untuk  dimanfaatkan sebagai tanaman industri, tanaman buah-buahan, tanaman  rempah-rempah  dan  tanaman  obat- obatan  (Nasution,  1992).  Selain  merupakan negara  kepulauan,  Indonesia  juga  memiliki jumlah  penduduk  yang  banyak  (sekitar  200  juta lebih) yang sebagian besar masyarakatnya masih tinggal  di  pedesaan.  Menurut  Sastropradjo (1990),  banyaknya  masyarakat  yang  tinggal dipedesaan terutama daerah yang sulit dijangkau (terisolir)  menyebabkan  pemerataan  hasil-hasil pembangunan  seperti  bidang  pendidikan  dan kesehatan sulit untuk dilaksanakan. Namun pada daerah-daerah  terisolir  pemanfaatan  lingkungan terutama tumbuhan untuk pemenuhan kebutuhan kesehatan  seperti  untuk  obat-oabatan  tradisional sangat tinggi (Sutarjadi, 1992).
Salah  satu  tumbuhan  obat  yang  memiliki manfaat  sebagai  obat  tradisional  dan  digunakan oleh  masyarakat  Kota  Palangka  Raya,  Provinsi Kalimantan Tengah adalah tumbuhan Hati Tanah ( Angiotepris Sp ) secara  empiris  umbi  tumbuhan ini  dipercaya  dapat  mengobati  luka,  luka  pasca melahirkan,  malaria,  dan  diare.  Penggunaan secara  empiris  dari  tumbuhan  hati  tanah  adalah dengan  merebus  umbinya  kemudian  air  rebusan tersebut  diminum.  Penelitian  sebelumnya  telah memberikan  catatan  ilmiah  mengenai  senyawa kimia  yang  terkandung  didalam  simplisia  umbi Hati  Tanah  yaitu  flavonoid,  saponin,  tannin  dan katekol.  Penelitian  juga  telah  dilakukan  untuk membuktikan  khasiat  umbi  Hati  Tanah  sebagai obat  luka.  Luka  adalah  kerusakan  struktur anatomi kulit yang menyebabkan gangguan kulit.
Kulit  merupakan  salah  satu  panca  indera manusia  yang  terletak  di  permukaan  tubuh. Berkaitan  dengan  letaknya  yang  ada  di permukaan  tubuh  maka  kulit  merupakan  organ pertama yang terkena pengaruh tidak menguntungkan dari lingkungan (Santoso, 2001). Pada kulit biasanya terjadi luka, baik luka tergores,  luka  infeksi  maupun  luka  bakar.  Luka adalah  hilang  atau  rusaknya  sebagian  jaringan tubuh atau rusaknya kesatuan/komponen jaringan,  dimana  secara  spesifik  terdapat substansi jaringan yang rusak atau hilang. Ketika luka  timbul,  beberapa  efek  akan  muncul diantaranya  hilangnya  seluruh  atau  sebagian fungsi  organ,  respon  stres  simpatis,  perdarahan dan  pembekuan  darah,  kontaminasi  bakteri  dan kematian  sel  (Kaplan  Dan  Hentz,  1992).  Secara alamiah  kulit  telah  berusaha  untuk  melindungi diri  dari  serangan  mikroorganisme  dengan adanya  tabir  lemak  di  atas  kulit  yang  diperoleh dari kelenjar lemak dan sedikit kelenjar keringat dari  kulit  serta  adanya  lapisan  kulit  luar  yang berfungsi  sebagai  sawar  kulit  (Wasitaatmadja, 1997).  Namun  dalam  kondisi  tertentu  faktor perlindungan  alamiah  tersebut  tidak  mencukupi dan  seringkali  akibat  bakteri  yang  melekat  pada kulit  menyebabkan  terjadinya  infeksi,  terutama pada  kulit  yang  terluka.  Salah  satu  bakteri  yang menyebabkan  infeksi  pada  kulit  yang  terluka adalah  bakteri Staphylococcus  aureus (Sim  dan Romi,  2009).  Hasil  penelitian  yang  dilakukan oleh  Chairunnisa  (2017)  ekstrak  etanol  umbi Hati  tanah  mampu  menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus pada  konsentrasi
1%,  5%,  10%,  dan  15%.  Kemampuan  ekstrak etanol  umbi  Hati  Tanah  untuk  menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus menjadi  potensi  yang  besar  dikembangkan menjadi  obat  tradisional.  Oleh  karena  itu  pada penelitian ini akan dibuat sebuah sediaan farmasi dari  umbi  Hati  Tanah  yaitu  sediaan  salep  yang diuji aktivitasnya dalam menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus.

## METODOLOGI

## Alat dan bahan
Alat-alat  yang  digunakan  pada  penelitian ini  adalah  gelas  beaker,  gelas  ukur,  tabung reaksi, erlenmeyer, labu ukur, pipet ukur, batang pengaduk,  cawan  porselin,  cawan  petri,  gelas parel,  bunsen,  pinset, ballpipet ,  rak  tabung reaksi,  mortar  dan  stamper,  sokhlet, waterbath , neraca  digital, blender , rotary  evaporator , alumunium  foil,  ose,  kapas,  lidi  kapas  steril, jangka  sorong, Laminar  Air  Flow ,  autoklaf,  dan inkubator.
Bahan-bahan yang digunakan pada penelitian  ini  yaitu  ekstrak  etanol  umbi  Hati Tanah,  bakteri Staphylococcus  aureus ATCC 25923, disc kosong,  antibiotik  Clindaminisin,
Standar  Mac  Farland  0,5,  media Brain  Heart Infusion (BHI), Mannitol  Salt  Agar (MSA), media Mueller Hinton Agar (MHA), etanol 96%, aquadest,    N-butanol,  Vaselin  Album,  Adeps Lane, PEG 400, PEG 4000 dan NaCl 0,9%.

## Metode Penelitian
Pembuatan  Simplisia  dan  Ekstrak  Etanol Umbi Hati Tanah
Tahap awal pembuatan simplisia umbi Hati Tanah  dilakukan  dengan  mengumpulkan  umbi Hati  Tanah  yang  masih  segar  kemudian memisahkannya  dari  zat  pengotor.  Selanjutnya umbi  Hati  Tanah  yang  segar  dicuci  dengan  air mengalir  untuk  membersihkan  semua  kotoran yang  masih  menempel.  Setelah  dilakukan pencucian,  umbi  Hati  Tanah  yang  telah  bersih dirajang  menjadi  bagian-bagian  kecil  untuk memudahkan  proses  pengeringan.  Pengeringan dilakukan  dengan  menggunakan  sinar  matahari langsung  sesuai  dengan  pesyaratan  penjemuran dibawah  matahari  langsung  pada  pukul  07.00- 10.00  WIB.  Tahap  terakhir  adalah  mengubah bentuk  rajangan  simplisia  yang  telah  kering menjadi  simplisia  serbuk  dengan  ukuran  serbuk yang  telah  diteapkan.  Selanjutnya  setelah simplisia  serbuk  didapatkan,  maka  proses selanjutnya  adalah  proses  ekstraksi  dengan menggunakan  metode  ekstrak  Sokhletasi  dan pelarut  etanol  96%.  Dari  proses  ekstraksi didapatkan ekstrak kental umbi Hati Tanah yang akan dibuat menjadi formulasi salep.

## Pembuatan Salep Ekstrak Etanol Hati Tanah
Pembuatan  formulasi  salep  ekstrak  etanol umbi  Hati  Tanah  menggunakan  dua  basis  salep yaitu  basis  salep  hidrokarbon  dan  basis  salep larut  air.  Proses  pertama  yang  dilakukan  adalah membuat  formulasi  basis  salep  sesuai  dengan formulasi  basis  yang  telah  terstandar.  Formulasi
basis  salep  tersebut  dapat  dilihat  pada  tabel dibawah ini :
Tabel 1. Formulasi  Basis  Salep  Esktrak  Etanol Umbi Hati Tanah Bahan Tipe Basis Hidrokarbon Basis Larut Air Vaselin 85 gram - Adeps Lane 15 gram - PEG 4000 - 40 gram PEG 400 - 60 gram total 100 gram 100 gram Proses selanjutnya adalah membuat formulasi  salep  dengan  bahan  utama  ekstrak etanol  umbi  Hati  Tanah.  Konsentrasi  ekstrak etanol  umbi  Hati  Tanah  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  sebesar  1%  sesuai  dengan nilai Minimal  Inhibitor  Concentration (MIC) dari  penelitian  uji  daya  hambat  ekstrak  etanol umbi Hati Tanah
terhadap bakteri Staphylococcus  aureus. Formulasi  salep  dapat dilihat pada tabel dibawah ini:
Tabel 2. Formulasi Sediaan Salep Ekstrak Etanol Umbi Hati Tanah
Bahan Tipe Basis Hidrokarbon Basis Larut Air Basis Salep 17 gram 17 gram Ekstrak Etanol Umbi Hati Tanah (15%) 3 gram 3 gram Bobot Total 20 gram 20 gram

## Uji Daya Hambat Salep Ekstrak Etanol Umbi Hati Tanah
Uji daya hambat dilakukan dengan melihat kemampuan  dari  salep  ekstrak  etanol  umbi  Hati Tanah  untuk  menghambat  atau  membunuh bakteri Staphylococcus aureus. Proses awal yang dilakukan pada uji ada hambat adalah menumbuhkan  bakteri Staphylococcus  aureus pada media Mannitol Salt Agar yang merupakan
salah  satu  media  spesifik  untuk  menumbuhkan bakteri Staphylococcus  aureus. Tahap  kedua adalah pembuatan suspensi bakteri
Staphylococcus  aureus yang  telah  disesuaikan dengan  standar  kekeruhan  Mc  Farland  0,5. Tahap ketiga adalah melakukan streak suspense bakteri pada media Mueller Hinton Agar dengan menggunakan  kapas  lidi  steril.  Uji  daya  hambat pada  penelitian  ini  menggunakan  metode penanaman disc yang  mengandung  zat  aktif sebagai bahan uji utama. Pada penelitian ini disc yang  digunakan  adalah disc kosong  yang  akan dimasukkan  pada  salep  yang  telah  dibuat  serta disc kosong  untuk  kontrol  positif  yaitu  salep Clindamycin  300  mg.  Selanjutnya  adalah menginkubasi  media  uji  pada  suhu  37 0 C  selama 24-48 jam. Tahap selanjutnya adalah mengamati zona  hambat  yang  terdapat  pada  media  uji setelah proses inkubasi telah dilakukan.

## Analisis Data
Analisis  aktifitas  daya  hambat  salep  umbi Hati  Tanah  dilakukan  dengan  menghitung  zona radikal  yang  dibentuk  oleh  sampel  dan  kontrol yang digunakan.
a. Zona  Radikal  yaitu  suatu  daerah  di  sekitar disc dimana  sama  sekali  tidak  ditemukan adanya pertumbuhan bakteri. Potensi antibiotik  diukur  dengan  mengukur  diameter dari zona radikal.
b. Zona  Irradikal  yaitu  suatu  daerah  di  sekitar disc menunjukkan  pertumbuhan  bakteri dihambat  oleh  antibiotik  tersebut,    tetapi tidak  dimatikan.  Disini  terlihat  adanya pertumbuhan yang kurang subur
dibandingkan  dengan  daerah  luar  pengaruh antibiotik tersebut.
c. Cara menginterpretasikan Mengukur diameter  zona  hambat  (zona  jernih).  Misal didapatkan  zona  hambat  suatu  bakteri berdiameter  26  mm  untuk Clindamycin.
Maka  interpretasinya  adalah  bakteri  tersebut peka terhadap antibiotic Clindamycin.
Resistent :   tahan Intermediate :   medium Susceptible :   peka Metode Kirby Bauer yang telah dimodifikasi  diperkenalkan  pada  tahun  1966. Merupakan  suatu  metode  rujukan  dari  WHO yang  telah  distandarisasi  dan  dievaluasi  secara luas. Interpretasi ukuran zona hambat menggunakan penggaris yang dicocokan dengan tabel. Hasil penelitian ini disajikan dalam bentuk tabel dan foto yang disertai dengan perbandingan antara  hasil  penelitian  yang  diperoleh  dengan Clinical  Laboratory  Standart  Institute (CLSI) (2016).
Tabel 3 . Clinical Laboratory Standart Institute (2016) Antimicrobial Agent Test Cultures (Zona Diameter in mm) Resistent Intermediate Susceptible Gentamicin Staphylococcus aureus ≤ 12 mm 13-14 mm ≥ 15 mm

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Pada  penelitian  ini  didapatkan  formulasi salep  ekstrak  etanol  umbi  Hati  Tanah  dengan menggunakan  variasi  basis  salep  hidrokarbon dan basis larut air. Pemiilihan variasi basis salep dengan  tujuan  untuk  mencari  formulasi  salep yang baik untuk dapat menghambat pertumbuhan  bakteri Staphylococcus  aureus . Basis  salep  yang  digunakan  dalam  sebuah formulasi  obat  harus  bersifat  inert  dengan  kata lain  tidak  merusak  ataupun  mengurangi  efek terapi  dari  obat  yang  dikandungnya  (Anief, 2007).    Basis  salep  yang  digunakan  pada penelitian  ini  adalah  basis  salep  hidrokarbon yang terdiri dari Vaselin dan Adeps Lanae, serta basis  salep  larut  air  yang  terdiri  dari  PEG (Polietilena  glikol)  400  dan  4000.  Basis  salep hidrokarbon  adalah  basis  salep  yang  bebas  akan air  dan  memiliki  kelebihan  dapat  bertahan  pada kulit  untuk  waktu  yang  cukup  lama  dan  tidak memungkinkan  larinya  lembab  ke  udara  dan sukar dicuci (ansel, 1989). Kekurangan dari basis ini  adalah  daya  serap  air  kecil  dan  berlemak (Lachman et al , 1994). Basis larit air merupakan campuran  dari  polietilen  glikol  dengan  bobot molekul yang tinggi dan polietilen glikol dengan bobot  molekul  yang  rendah.  Kombinasi  dari polietilen glikol dengan bobot molekul yang dan polietilen  glikol  dengan  bobot  molekul  yang rendah akan menghasilkan produk-produk dengan  konsistensi  seperti  salep  yang  melunak atau  meleleh  jika  digunakan  pada  kulit. 21
Pembuatan  salep  dengan  basis  ini  tidak memerlukan air. Basis ini larut dalam air karena
adanya  gugusan  polar  dan  ikatan  eter  yang banyak. Keuntungan menggunanakan PEG  yaitu tidak  mengiritasi,  memiliki  daya  lekat  dan distribusi  yang  baik  pada  kulit  serta  tidak
menghambat  pertukaran  gas  dan  produksi keringat, sehingga efektifitas lebih lama.
Hasil  penelitian  uji  daya  hambat  salep ekstrak  etanol  umbi  Hati  Tanah  dapat  terlihat pada tabel dibawah
Tabel 4.  Hasil  Uji  daya  Hambat  Ekstrak  Etanol  Umbi  Hati  Tanah  terhadap  Bakteri

## Staphylococcus aureus
Uji Konsentrasi Zona Hambat (mm) Rata-rata Zona Hambat Interprestasi Daya Hambat I II III IV Kontrol Positif Gentamicin 1% 25,1 20,5 22,5 24,3 23,1 Susceptible Basis Hidrokarbon - - - - - - - Basis Larut Air - - - - - - Resistent Salep Ekstrak Etanol Hidrokarbon 1 1% - - - - - - Salep Ekstrak Etanol Hidrokarbon 2 1% - - - - - - Salep Ekstrak Etanol Larut Air 1 1% 9,0 9,3 11,4 - 9,9 Resistent Salep Ekstrak Etanol Larut Air 2 1% 9,0 8,1 8,5 - 8,5 Resistent
Tabel  diatas  menunjukkan  hasil  yang positif  pada  formulasi  salep  dengan  basis  salep larut  air.  Hal  ini  dapat  dikarenakan  oleh  basis larut  air  mempunyai  kelebihan  dibandingkan basis  hidrokarbon  yaitu  dimana  dalam  basis  ini tidak  mengandung  bahan  berlemak  dan  dapat dicuci  dengan  air  sehingga  salep  dengan  basis larut air lebih mudah terabsosrbsi sehingga dapat memberikan  efektifitas  yang  lebih  besar. Dibandingkan  dengan  kontrol  positif  salep Gentamycin,  hasil  yang  didapatkan  termasuk dalam  rentang resistant .  Artinya  kemampuan daya  hambat  dari  salep  dengan  basis  air  pada konstrasi bahan utama 1% masih daalm kategori lemah  untuk  menghambat  pertumbuhan  bakteri
Staphylococcus  aureus. Hal  ini  dapat  menjadi masukkan  bagi  penelitian  selanjutnya  untuk meningkatkan  konsentrasi  ekstrak  etanol  umbi Hati  Tanah  dan  kembali  diuji  kemampuan  daya hambatnya  terhadap  bakteri Staphylococcus aureus. Kemampuan  daya  hambat  formulasi salep  dengan  basis  larut  air  dipengaruhi  oleh kandungan  metabolit  sekunder  yang  terdapat  di dalam ekstrak etanol umbi Hati Tanah. Metabolit sekunder  yang  terdapat  di  dalam  ekstrak  etanol umbi Hati Tanah yang memiliki aktivitas sebagai penghambat pertumbuhan bakteri adalah flavonoid.  Menurut  Sulistyawati  dan  Mulyati (2009)  dalam  Haerazi et  al. (2016),  flavonoid bekerja  dengan  menghambat  pembelahan  atau
proliferasi  sel  bakteri.  Senyawa  ini  mengikat protein  pada  mikrotubulus  dalam  sel  dan mengganggu fungsi mitosis sehingga menimbulkan penghambatan pertumbuhan bakteri.  Senyawa  fenol  sebagai  antibakteri adalah dengan mendenaturasi ikatan protein pada membran  sel  sehingga  membran  sel  lisis  dan memungkinkan  fenol  menembus  ke  dalam sitoplasma  yang  menyebabkan  bakteri  tidak berkembang.

## KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan  formulasi  basis  salep  yang  memiliki kemampuan  untuk  menghambat  pertumbuhan bakteri Staphylococcus  aureus adalah  formulasi salep dengan basis larut air.

## DAFTAR PUSTAKA
Anief.  2007.  Farmasetika.  Yogyakarta.  Gadjah Mada University Press.
Ansel,  H.C.  1989.  Pengantar  Bentuk  Sediaan Farmasi.  Jakarta.  University  Indonesia
Press.
Chairunnisa,  R.  2017.Uji  Daya  Hambat  Ekstrak Etanol  Umbi  Hati  Tanah (Angiotepris  Sp ) Terhadap Staphylococcus  aureus.  KTI Universitas Muhammadiyah Palangkaraya. Clinical  Laboratory  Standart  Institute.  2016.
Performance  Standart  for  Antimicrobial Susceptibility Testing; Twentieth Information Supplement. USA.
Haerazi,  A.,  Dwi  S.  D.  J.,  dan  Yayuk  A.  2016. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Kencur ( Kaempferia  galangal L.)  Terhadap Pertumbuhan  Bakteri Staphylococcus aureus dan Streptococcus viridans . Mataram  :  Jurnal  Ilmiah  Pendidikan Biologi  Bioscientist.  Vol.  2  No.  1  Hal. 75-82.
Kaplan  NE,  Hentz  VR.  1992.  Emergency Management  of  Skin  and  Soft  Tissue Wounds,  AnIllustrated  Guide.  USA.  Little Brown Boston.
Lachman,  L.,  Lieberman,  H.A.,  dan  Kanig,  J.L. 1994.  Semi  Padat,  Teori  dan  Praktek
Farmasi  Industri. Nasution,  R.E.  1992.  Prosiding  Seminar  dan Loka Karya Nasional Etnobotani. Departement  Pendidikan  dan  Kebudayaan RI-LIPI. Perpustakaan Nasional RI.
Jakarta.
Santoso,  D.  2001. Ramuan  Tradisional  untuk Penyakit  Kulit,  Edisi  Kedua .  Jakarta. Penebar Swadaya.
Sastropradjo.  1990.  Tumbuhan  Obat.  Lembaga Biologi  Nasional  LIPI.  Balai  Pustaka. Jakarta.
Sim  dan  Romi.  2009.  Kejadian  Infeksi  Luka Episitomi dan Pola Bakteri pada Persalinan
Normal  di  RSUD  H.  Adam  Malik  dan RSUD dr. Pirngadi Medan. Tesis Universitas Sumatera Utara
Sutarjadi.  1992.  Tumbuhan  Indonesia  Sebagai Sumber  Obat,  Komestika  dan  Jamu. Prosiding  Seminar  dan  Loka  Karya Nasional  Etnobotani.  Fakultas  Farmasi Universitas Airlangga. Surabaya.
Wasitaatmadja,  S.  M.  1997.  Penuntun  Ilmu Kosmetik  Medik.  Jakarta.  Universitas Indonesia Press.