## POTENSI  EKSTRAK  DAUN  ASAM  KERANJI  ( Dialium  indum )  ACEH SEBAGAI ANTIOKSIDAN ALAMI
Syafrina Sari Lubis 1) , Ayu Nirmala Sari 2) , M. Haikal Fahmi 3) , Diky Setya Diningrat 4*)
1,2,3 Prodi Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, UIN Ar-Raniry Banda Aceh,
4* Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Medan, Medan, Sumatera Utara 4* Corresponding Author e-mail : dikysd@unimed.ac.id
Informasi Abstrak. Kata kunci . Dialium indum, DPPH, fitokimia
Penelitian  ini  dilakukan  untuk  menguji  aktivitas  fitokimia  ekstrak etanol  asam keranji ( Dialium indum) sebagai antioksidan secara in vitro. Aktivitas antioksidan yang dilakukan dalam beberapa model pengujian antioksidan secara in vitro yaitu menguji  aktivitas  reduksi  radikal  bebas  DPPH, radikal superoksida,  daya pereduksi ferric dan aktivitas hidrogen peroksida. Kapasitas total antioksidan juga ditentukan. Ekstrak  etanol  asam  keranji  menunjukkan  aktivitas  antioksidan dengan menghambat DPPH, superoksida dan hidrogen peroksida. Pada penelitian ini  juga  menunjukkan  kemampuan  ekstrak  etanolasam  keranji  mengurangi kemampuan  dalam mereduksi besi. Kapasitas  total  antioksidan  ekstrak  etanol asam  keranji17,66  mg/g  yang  dibandingkan  dengan  asam  askorbat  (Vitamin C). Aktivitas antioksidan yang signifikan dari ekstrak etanol Dialium indum diduga disebabkan oleh adanya senyawa Asam, Flavonoid, Fenol, Saponin,
Tannin  (senyawa  Fenolik)  dan  Triterpenoid  yang  ditemukan  dalam screening fitokimia sebelumnya. Information Abstract. Key  words. Dialium indum, DPPH, phytochemical Preliminary phytochemical screening and in-vitro antioxidant activity of Dialium indum extract were investigated. The antioxidant activity was studied in some in- vitro  antioxidant  models  like  DPPH  radical  scavenging  activity,  superoxide radical  scavenging  activity,  ferric  reducing  power  and  hydrogen  peroxide scavenging activity. Total antioxidant capacity was also determined. The Dialium indum  alcoholic  extract  showed  antioxidant  activity  by  inhibiting  DPPH, scavenging  superoxide  and  hydrogen  peroxide.  It  also  showed  reducing  power ability in ferric reducing model. Total antioxidant capacity was found to be 17.66 mg/g  expressed  as  ascorbic  acid.  Significant  antioxidant  activity  of  alcoholic extract of Dialium indum was found which might be due to the presence of Acidic compounds,  Flavonoids,  Phenols,  Saponins,  Tannis  (Phenolic  compounds)  and Triterpenoids found in the preliminary phytochemical screenin
Received: 10 Maret 2021 Accepted: 10 Mei 2021 © 2021 Jurusan Biologi FMIPA Unpatti, IAIFI Cab. Ambon

## A. PENDAHULUAN
Oksigen  merupakan  komponen  yang  sangat  esensial  untuk  kelangsungan  hidup  semua organisme  di  bumi  ini. Oksigen  berperan  dalam  proses  fisiologi  dan  metabolisme,  sekitar 5% oksigen tereduksi  secara univalen menjadi  oksigen  yang  merupakan  turunan  dari  radikal  bebas seperti superoksida, hidrogen peroksida, hidroksil, dan radikal oksida nitrat. Semua radikal bebas ini dikenal sebagai spesies oksigen reaktif (ROS) yang menjadi penanda stres oksidatif pada sel- sel  tubuh  manusia  yang  membuat  setiap  sel  menghadapi  sekitar  10.000  hit  oksidatif  per detik (Mondal et al ., 2008).
Antioksidan  ditambahkan  sebagai  sistem  redoks  yang  memiliki potensi oksidatif  yang lebih  tinggi daripada  obat  yang  dirancang  untuk  melindungi  atau  sebagai  penghambat  rantai dari penguraian  radikal  yang  diinduksi. Secara  umum,  efek  antioksidan  adalah  memecah rantai yang  terbentuk  selama  proses  propagasi  dengan  memberikan  atom  hidrogen  atau elektron  ke radikal bebas dan menerima energi berlebih yang dimiliki oleh molekul teraktivasi (Lachman et al .,  1986). Pada  penelitian  sebelumnya  buah-buahan,  sayuran, tumbuhan  alami  dilaporkan mengandung  berbagai  macam  zat  yang  disebut  phytochemical  yang ada  dalam  tanaman  dan merupakan sumber antioksidan utama yang dapatmengurangi potensi stres yang disebabkan oleh ROS. Antioksidan alami memiliki  kemampuan  mereduksi  radikal  bebas,  agen  pereduksi, komplek potensial dari prooksidan, pendingin oksigen dan lain-lain (Ebadi, 2002)
Antioksidan dapat
mengganggu proses oksidasi dengan bereaksi denganradikal bebas (Gupta et  al .,  2004). Perkembangan  pesat  dalam  penemuan antioksidan alami untuk digunakandalam makanan atau bahan obat untuk menggantikan antioksidan sintetis yang sedang dibatasi penggunaannya karena efek sampingnya seperti karsinogenisitas (Kumaran et  al .,  2007).  Prinsip-prinsip  antioksidan  dari  sumber  daya  alam memiliki banyak  segi dalam banyak dan besarnya aktivitas mereka dan menyediakan ruang lingkup yang sangat besar dalam memperbaiki ketidakseimbangan (Shriwaikar et al ., 2006). Industri makanan menggunakan antioksidan alami sebagai pengganti antioksidan sintetis konvensional (Govindarajan, 2003).
Kranji  ( Dialium  indum L.)  berbentuk  seperti  kelereng,  dengan  kulityang  agak  keras berwana  hitam,  daging  buah  berwarna  orange  ataupun  hitam,  yang  memiliki  rasa  yang  asam manis dan biji yang keras berwarna coklat muda (Osman et al ., 2018). Buah keranji merupakan buah musiman, di  Indonesia pohon ini berbunga dari Nopember-Desember dan berbuah hingga siap panen antara bulan Januari-April setiap 1 tahun sekali (Rifkowaty dan Muttaqin, 2016).
Hasil  analisis  GCMS  pada  daun  mengandung lupeol,  β-Amirin,  stigmasterol, pentriacontane, hentricontane, α dan β klorofil, resin, asam tartarat, campuran triterpen saponin, derivatif  antrakuinon,  alkaloid,  betain,kolin  dan trimetilamin  (Osman et  al .,  2018). Dialium indum  ini  dipercaya  sebagai antivirus,  diuretik, anti  alergi,  antibiotik,  sakit  perut, sebagai  pembersih  darah  dan  rematik  (Akoji, 2019).  Oleh  karena  itu,  tujuan  dari  penelitian  ini adalah evaluasi in vitro aktivitas antioksidan ekstrak daun Dialium indum .

## B. METODE PENELITIAN
Bahan  kimia: Asam  askorbat, rutin, gallic acid,  hidrogen  peroksida,  kalium  ferricyanide, trikloroasetat asam, besiklorida, reagen Folin-Ciocalteu, indigosulphonic asam, α-
α difenil β picryl hydrazyl (DPPH),
Riboflavin, Nitro Biru Tetrazolium (NBT)dan Dimetil sulfoksida (DMSO)  semuanya  dibeli dari  bahan  kimia  SD-fine,  India,  semua  pereaksi lainnya yang digunakan memiliki tingkat analitis.
Alat: Spektrofotometer  UV  (Shimadzu-UV-1601), Mesin Centrifuge (Eltek-research  centrifuge- TC-4100D).
Bahan  tanaman: Daun Dialium indum dikumpulkan secara  lokal  dari  daerah  sekitar Banda  Aceh.  Ekstraksi  Bahan  Tumbuhan: Bahan  tanaman  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah daun Dialium indum dikumpulkan secara lokal dari daerah sekitar Banda Aceh.
Daun Dialium indum segar  yang  akan  diteliti  ditimbang  dan  dicuci  bersih  dengan  air, dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan  (tanpa  terkena  sinar  matahari  langsung).  Daun Dialium indum yang  telah  kering  kemudian  dihaluskan  menggunakan  blender  hingga  menjadi serbuk,  ditimbang  kemudian  diayak  dengan  menggunakan  mesh  30  hingga  diperoleh  serbuk halus.
Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun  kranji  100  gram  serbuk  daun  katuk  yang  telah dikeringkan  dan  dihaluskan  dengan  derajat  kehalusan  tertentu  dimaserasi  kinetik  selama  1  jam dengan  menggunakan  pelarut  etanol  96%  atau  80%  sebanyak  800  ml,  didiamkan  semalam kemudian disaring dan dipisahkan ampas dan filtratnya. Pada ampas dilakukan maserasi kinetik ulang  (maserasi  kinetik  ulang  dilakukan  3  kali).  Dari  filtrat  yang  didapat  dikumpulkan  dan campuran ekstrak tersebut dipekatkan dengan rotary evaporator dan diuapkan diatas waterbath ± 60 o C  sampai  didapatkan  bobot  konstan.  Kemudian  hasilnya  ditimbang  pada  cawan  yang  telah ditara dan disimpan dalam eksikator.
Persiapan Larutan  Stok Dialium : Ekstrak  etanol Dialium disiapkan  pada  konsentrasi 1.000 μg /  ml dalam etanol. Dari larutan stok konsentrasi  yang berbeda  yaitu. 10, 20, 40, 60, 80 dan 100 μg/ml disiapkan dalam etanol dan digunakan untuk studi antioksidan.
Persiapan  Solusi  Stok  Standar  Asam  askorbat  (Vitamin  C). Asam  askorbat digunakan  sebagai standar untuk penelitian ini dan larutan stoknya disiapkan dalam konsentrasi 1.000 μg / ml dalam metanol. Itu disiapkan segar dan segera digunakan untuk penelitian. Dari larutan stok konsentrasi yang berbeda yaitu. 10, 20, 40, 60, 80 dan 100  μg / ml disiapkan dalam metanol dan digunakan untuk studi antioksidan .
Total
Kapasitas
Antioksidan: Total uji kapasitas antioksidan,0,3ml yang Dialium ekstrak(10  mg/ml)  dilarutkan  dalam  air  dan  dicampur  dengan  3  ml  reagen solusi (asam 0,6 M sulfat, 28mm natrium fosfat dan 4 mM amonium molibdat) di Eppendorf tube.Tabung  ditutup  dan  diinkubasi  dalam blok termal pada  95 o C  selama  90 menit. Setelah 90 menit, campuran didinginkan hingga suhu kamar , absorbansi diukur pada 695 nm  terhadap  reagen  kosong.  Metanol  (0,3  ml)  di  tempat  ekstrak  digunakan  sebagai kosong. Asam  askorbat digunakan  sebagai  standar  dan  total  kapasitas  antioksidan  dinyatakan sebagai padanan asam askorbat (Kumaran, 2007).

## C. HASIL DAN PEMBAHASAN

## Hasil
Kegiatan  Pembersihan  Radikal  DPPH. Ekstrak  tumbuhan  dan larutan asam  askorbat standar (0,1 ml) dengan konsentrasi berbeda, yaitu. 10, 20, 40, 60, 80 dan
100 μg/ml ditambahkan ke 3 ml larutan metanol DPPH 0,004%. Jumlah metanol dan DPPH yang sama berperan sebagai kontrol. Setelah 30 menit inkubasi dalam gelap, absorbansi tercatat pada 517 nm, dan persentase aktivitas penghambatan dihitung dari [(A0-A1) / A0 ] × 100, di mana A0
adalah absorbansi kontrol, dan A1 adalah absorbansi dari ekstrak / standar. Aktivitas antioksidan ekstrak dinyatakan sebagai IC50. Nilai IC50 didefinisikan sebagai konsentrasi (dalam μg/ml) ekstrak  yang  menghambat  pembentukan  radikal  DPPH  sebesar  50%. Semua tes dilakukan dalam rangkap tiga dan grafik diplot dengan rata-rata tiga pengamatan (Kumaran , 2007).
Kegiatan  Pemulungan  Radikal  Superoksida. Setiap  campuran  reaksi  3ml mengandung 50 mM buffer  natrium  fosfat  (pH  7,6),  20 mg riboflavin,  dan  12 mM EDTA  dan  0,1  mg  NBT dan 1 ml larutan sampel. Reaksi dimulai dengan menerangi campuran reaksi dengan konsentrasi ekstrak  tanaman  yang  berbeda  dan larutan  asam  askorbat  standar  yaitu. 10,  20,  40,  60,  80  dan 100 μg/ml   selama  5  menit. Segera setelah  penerangan,  absorbansi  diukur  pada  590 nm. Tabung identik dengan  campuran  reaksi  dan  1  ml  metanol  disimpan  dalam  kegelapan dan berfungsi  sebagai  kontrol. Persentase  penghambatan  generasi  anion  superoksida dihitung dari  [(A0-A1)  /  A0]  × 100,  di  mana  A0  adalah  absorbansi  kontrol,  danA1  adalah  absorbansi ekstrak/  standar. Aktivitas  antioksidan  ekstrak dinyatakan  sebagai  IC50. Semua  tes  dilakukan dalam rangkap tiga dan grafik diplot dengan rata-rata tiga pengamatan (Kumaran , 2007).
Pembilasan Hidrogen Peroksida. Suatu larutan hidrogen peroksida (20 mM) dibuat dalam saline fosfat  (pH  7,4),  konsentrasi  yang  berbeda dari  ekstrak  tumbuhan  dan  larutan  asam  askorbat standar  yaitu 10,  20,  40,  60,  80  dan 100 μg/ml dalam  metanol  (1  ml)  di  mana  ditambahkan  ke larutan  hidrogen  peroksida  (2  ml). Absorbansi  hidrogen  peroksida  pada  230  nm  ditentukan setelah  10  menit  terhadap larutan  kosong  yang  mengandung  dapar  fosfat  tanpa  hidrogen peroksida. Untuk setiap konsentrasi, sampel kosong yang terpisah digunakan untuk pengurangan ground  kembali. Persentase  penghambatan  dihitung  dari  [(A0-A1)/A0]  × 100,  di  mana  A0 adalah absorbansi  kontrol  dan  A1  adalah  absorbansi  ekstrak/  standar. The aktivitas  antioksidan dari ekstrak dinyatakan sebagai IC50. Semua tes dilakukan dalam rangkap tiga dan grafik diplot dengan rata-rata tiga pengamatan.
Penentuan  Daya  Pengurangan  Besi. Perbedaan  konsentrasi ekstrak tumbuhan dan larutanasam  askorbat  standar  yaitu. 10,  20,  40,  60,  80  dan  100 μg/ml dalam 1ml  metanol dicampurdengan buffer fosfat (2,5 ml, 0,2 M pH 6,6) dan kalium ferricyanide [K 3 Fe(CN) 6 ] (2,5 ml, 1%).Campuran diinkubasi pada 50 o C selama 20 menit.Sebagian (2,5 ml) asam trikoloroasetat (10%)  ditambahkan  ke dalam  campuran,yang  kemudian  disentrifugasi pada  3.000  g  (rpm)  selama  10  menit  pada suhu kamar. Lapisan  atas  larutan  (2,5  ml)  dicampur dengan  air  suling (2,5  ml)  dan  besi  klorida  (FeCl 3 )  (0,5  ml,  0,1%)  dan  absorbansi campuran reaksi  menunjukkan  peningkatan  daya  reduksi. Absorbansi diukur  pada  700  nm. Semua  tes dilakukan  dalam  rangkap  tiga  dan  grafik diplot  dengan  rata-rata  tiga  pengamatan  (Kumaran , 2007 dan Kumar, 2005).
Evaluasi
Statistik: Hasil eksperimen rata-rata ± SEM dari tiga pengukuran paralel. Analisis regresi linier digunakan untuk menghitung nilai IC50. Student's t-test digunakan untuk  perbandingan  antara  dua  cara  untuk kemungkinan  hubungan  yang  signifikan. Data dianggap signifikan secara statistik hanya ketika nilai p <0,05.
Total Kapasitas
Antioksidan. Total kapasitas antioksidan dalam ekstrak daun Dialium diukur  secara spektrofotometri adalah  17,66  mg/gm dibandingkan  dengan  asam askorbat.
Kegiatan  Pembersihan  Radikal  DPPH. Gambar  1  mengilustrasikan  penurunan  yang signifikan
(p<0,05) dalam
konsentrasi radikal
DPPH karena
kemampuan membersihkan ekstrak Dialium.  Aktivitas  ini  tergantung  pada  dosis. Aktivitas pemulungan maksimum (57,10%) diamati pada konsentrasi 100 μg/ml dan nilai IC50 ekstrak Dialium dan asam askorbat ditemukan masing-masing 85,28μg/ml dan 41,41 μg/ml.
Gambar 1. Aktivitas DPPH radical scavenging dari Ekstrak Etanol Dialium
Kegiatan Pemulungan Radikal Super Oksida. Gambar. 2, mengungkapkan bahwa hubungan respon dosis (p <0,05) yang signifikan ditemukan dalam aktivitas pemulungan radikal bebas superoksida dalam ekstrak Dialium. Aktivitas pemulungan maksimum (65,29%) diamati  pada konsentrasi 100 μg/ml  dan  nilai  IC50  dari ekstrak Dialium dan  asam askorbat ditemukan masing-masing 71,82 μg/ml dan 35,99 μg/ml.
Gambar 2.  Aktivitas Superoxide radical scavenging dari Ekstrak Etanol Dialium.
Aktivitasa  radikal  Hidrogen  Peroksida. Pada  gambar.  3  mengungkapkan  bahwa respon tergantung  dosis  (p  <0,05) yang  signifikan ditemukan  dalam aktivitas  pemulungan hidrogen
peroksida dalam ekstrak Dialium. Aktivitas pemulungan maksimum (65,26%) diamati pada konsentrasi 100 μg/ml dan  nilai  IC50  dari ekstrak Dialium dan  asam  askorbat ditemukan masing-masing 72,55 μg/ml dan 39,84 μg/ml.
Gambar 3. Aktivitas hidrogen peroksida radical scavenging dari Ekstrak Etanol Dialium.
Penentuan  Daya  Pengurangan  Besi. Gambar.  4  mengungkapkan  bahwa  mengurangi kekuatan ekstrak Dialium secara  statistik  signifikan  (p  <0,05). Hasilnya  jelas menunjukkan bahwa  kekuatan  reduksi  dari ekstrak Dialium meningkat  dengan  meningkatnya konsentrasi  dan sebanding dengan asam askorbat standar, maka ia memiliki aktivitas antioksidan.
Gambar 4. Mengurangi kekuatan ekstrak Dialium

## Pembahasan
Total  kapasitas  antioksidan  dalam ektrak  Dialiumditentukanolehparapembentukan komplek  phosphomolybdenum.  Dialium ekstrak  itu mampu  mengurangi  DPPH  radikal  stabil untuk  kuning berwarna diphenylpicrylhydrazine ,  itu  juga  ditemukan  untuk  menjadi  pemulung efisien sistem  yang  dihasilkan  di  riboflavin-NBT-light  superoksida  radikal  in-vitro danaktivitasmerekadalam  sebanding  dengan  asamaskorbat.  Pengurangan fitokimia  flavin
menghasilkan  radikal  oksigen  yang  mengurangi  NBT,  menghasilkan  pembentukan formazan biru.
Ekstrak  dialium  menghambat  pembentukan formazan  biru  dan juga membersihkan radikal  hidroksil  beracun  yang  dihasilkan  oleh  hidrogen  peroksida.  Kemampuan  reduktif ditemukan dari transformasi Fe 3+ -Fe 2+ di hadapan para Dialium ekstrak.

## D. KESIMPULAN
Ekstrak  Dialium  menunjukkan  aktivitas  antioksidan  dengan  menghambat  DPPH, mengais-ngais  yang  super  oksida  serta  hidrogen  peroksida  dan  mengurangi  kemampuan  daya yang  mungkin  disebabkan  adanya  Flavonoid,  Phenol,  Tannis  (senyawa  fenolik)  dan Triterpenoids ditemukan di skrining fitokimia pendahuluan.
Dengan  demikian,  aktivitas  pembersihan  radikal  menunjukkan  bahwa  55%  v/v  ekstrak alkohol Dialium indum . Kegiatan  antioksidan invitro . Penelitian  lebih  lanjut  diperlukan  untuk mengevaluasi potensi antioksidan in-vivo dari ekstrak Dialium dalam berbagai model hewan.

## E. UCAPAN TERIMA KASIH
Prodi Biologi Fakultas Sains dan Teknologi UIN Ar-Raniry, LPPM UIN Ar-Raniry.

## F. DAFTAR PUSTAKA
Mondal,  S.  K.,  Saha,  P.,  Mondal,  N.  B.,  &  Mazumder,  U.  K.  (2008).  Free  radical  scavenging property  of  Annona  reticulata  leaves. Oriental  pharmacy  and  experimental medicine , 8 (3), 260-265.
Lachman,  L.,  Lieberman,  H.  A.,  &  Kanig,  J.  L.  (1986).  The  theory  and  practice  of  industry pharmacy. by  Lachman  L.,  Lieberman  HA,  Kanig  JL,  Lea  &  Febiger,  Philadelphia , 760-803.
Ebadi, M. (2006). Pharmacodynamic basis of herbal medicine . CRC press. Gupta, Y. K., Sharma,  M.,  Chaudhary, G., & Katiyar, C. K. (2004). Hepatoprotective effect  of New Livﬁt®, a polyherbal formulation, is mediated through its free radical scavenging activity. Phytotherapy Research: An International Journal Devoted to Pharmacological and Toxicological Evaluation of Natural Product Derivatives , 18 (5), 362-364. Kumaran, A., & Karunakaran, R. J. (2007). In vitro antioxidant activities of methanol extracts of five  Phyllanthus  species  from  India. LWT-Food  Science  and  Technology , 40 (2),  344- 352.
Shirwaikar,  A.,  Shirwaikar,  A.,  Rajendran,  K.,  &  Punitha,  I.  S.  R.  (2006).  In  vitro  antioxidant studies  on  the  benzyl  tetra  isoquinoline  alkaloid  berberine. Biological  and Pharmaceutical Bulletin , 29 (9), 1906-1910.
Govindarajan, R., Rastogi, S., Vijayakumar, M., Shirwaikar, A., Rawat, A. K. S., Mehrotra, S., &  Pushpangadan,  P.  (2003).  Studies  on  the  antioxidant  activities  of  Desmodium gangeticum. Biological and pharmaceutical Bulletin , 26 (10), 1424-1427.
Osman, M., Mohd Hassan, N., Khatib, A., & Tolos, S. (2018). Antioxidant Activities of Dialium indum  L.  Fruit  and  Gas  Chromatography-Mass  Spectrometry  (GC-MS)  of  the  Active Fractions. Antioxidants , 7 (11), 154.
Rifkowaty, E. E., & Muttaqin, K. (2016). Penentuan Umur Simpan Sirup Kranji (Dialium indum L.)  menggunakan  Metode  Accelerated  Shelf-Life  Testing  (ASLT)  Suhu. TEKNOLOGI PANGAN: Media Informasi dan Komunikasi Ilmiah Teknologi Pertanian , 7 (1).
Akoji,  J.  N.  (2019).  Adsorption  Performance  of  Packed  Bed  Column  for  the  Removal  of  Lead (II)  Using  Velvet  Tamarind  (Dialium  indum)  Shells. Asian  Journal  of  Applied Chemistry Research , 1-14.