KADAR 1-DEOXYNOJIRIMYCIN DAN AKTIFITAS PENGHAMBATAN TERHADAP ENZIM Α- GLUKOSIDASE DALAM EKSTRAK, TEPUNG EKSTRAK DAN TEPUNG INSTANT DAUN MURBAI ( Morus alba L)
[1-Deoxynojirimycin Content and Inhibitory Activity on Α-Glucosidase Enzyme of Extract, Extract Powder and Instant Powder of Mulberry (Morus alba L)]
Kesuma Sayuti 1) * , dan Norio Muto 2)
1) Department of Agricultural Processing Technology, Faculty of Agricultural Technology, Andalas University, Kampus Unand Limau Manis, West Sumatra, Indonesia
2) Graduate School of Comprehensive Scientific Research, Program in Biological System Sciences, Prefectural University of Hiroshima, 562 Nanatsuka, Shobara 727-0023, Japan.
Diterima 31  Maret  2010 / Disetujui  17 Desember 2010

## ABSTRACT
Many  researcher  had  proved  that  the  mulberry  leaves  had  effective  enzyme  inhibitory  activity.  For  easy  serving,  the  leaves  had  been processed as extract powder and instant powder. In this study, The 1-deoxynojirimycin (DNJ) content, was analyzed by  high-performance liquid chromatography. Additionally, the inhibitory activity of extract, extract powder and mulberry (Morus alba L ) instant powder was studied by using rat intestinal homogenate enzyme, that was measured using maltose, and the absorbance was determined at 505 nm. Slightly higher than that in. The results showed that DNJ content in mulberry water fraction was 166.48 mg/g ± 3.24, in the extract powder was (0.82mg/g ± 0.01) which was the instant powder (0.75 mg/g ±0.01). The extract, extract powder and the mulberry instant powder had effective enzyme inhibitory activity. Inhibitory activity on the enzyme by extract was stronger than the extract powder, and inhibitory activity on the enzyme by extract powder was stronger than the instant powder.
Key word : Mulberry extracts powder, mulberry instant powder, inhibitory activity, 1-Deoxinojirimycin.

## PENDAHULUAN
1
WHO  memperkirakan  ada  sekitar  8,4  juta  orang  Indonesia menderita  diabetes  pada  tahun  2000,  jumlah  ini  akan  terus meningkat menjadi 21,3 juta pada tahun 2030 (Anonim, 2009). Banyak penelitian tentang pengaruh ekstrak daun Murbai yang telah  dilakukan  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun  tersebut dapat  menekan  kadar  glukosa  serum,  dimana  para  peneliti  di Jepang  telah  menemukan  bahwa  daun  Murbai  mengandung senyawa  yang  mampu  menghambat  aktifitas  enzim  α- glucosidase  usus  halus  (Miyahara et  al. ,  2004;  Asano et  al. , 1994).
Ekstrak  daun  Murbai  ( Morus  alba L)  secara  kuat  mampu menekan  hiperglikemia postprandial pada  tikus  setelah  diberi karbohidrat  berlebihan  melalui  penghambatan  aktifitas  enzim disakaridase dalam usus halus (Miyahara et al. , 2004). Sebuah studi pada manusia telah menunjukan bahwa pemberian secara oral  sebanyak  0,8  dan  1,2  g  1-deoxynojirimycin  (DNJ)  secara nyata  menekan  peningkatan  kadar  glukosa  darah postprandial dan  sekresi  insulin,  hal  ini  dikaitkan  dengan  dampak  fisiologi dari  DNJ  yang  terkandung  dalam  daun  Murbai  (Kimura et  al. , 2007). Ekstrak daun Murbai juga mampu mengurangi fluktuasi glukosa  darah,  yang  mungkin  dapat  mengurangi  komplikasi pada  penderita  diabetes  (Mudra et  al. ,  2007).  Efikasi  ekstrak
*Korespondensi penulis : E-mail : kesuma_sayuti@yahoo.com
daun  Murbai  dalam  memperbaiki  reaktifitas  pembuluh  darah dapat dikaitkan dengan penekanan stres oksidatif (Nawaboot et al. , 2009).
Daun  Murbai  mengandung,  DNJ  yang  diketahui  mampu menghambat  aktifitas  enzim  α-glucosidase  usus  halus  secara kuat (Asano et al. , 1994), dan senyawa polifenol (Arslan et al. , 2004;  Arabhahi  dan  Urooj,  2007;  Kue,  2009),  seperti  flavonol glikosida (Katsube et al. , 2006; Chooi et al. , 2001). Kadar DNJ dipengaruhi oleh musim panen (Yatsunami et al. , 2008; Kimura et  al. ,  2007),  dimana  kadar  DNJ  dalam  ekstrak  daun  Murbai yang  dipanen  pada  bulan  Mei  lebih  rendah  dari  kadar  DNJ dalam ekstrak daun Murbai yang dipanen pada bulan Agustus, tetapi  aktifitas  penghambatan  dari  ekstrak  daun  Murbai  yang dipanen  pada  bulan  Mei  lebih  tinggi  dari  pada  aktifitas penghambatan  ekstrak  daun  Murbai  yang  dipanen  pada  bulan Agustus  (Yatsunami et  al. ,  2008).  Tumbuhan  Murbai  ( Morus alba L ) cukup banyak tumbuh di Sumatera Barat dan biasanya tumbuh  disekitar  rumah  dan  selama  ini  belum  dimanfaatkan secara optimal, selain hanya sebagai tumbuhan yang digunakan sebagai  pelindung.  Kimura et  al. (2007)  menyatakan  bahwa ekstrak daun Murbai mampu menekan kadar gula darah setelah konsumsi  karbohidrat  secara  berlebihan,  sehingga  dapat digunakan sebagai minuman bagi penderita diabetes. Beberapa bentuk olahan daun Murbai telah dipasarkan seperti daun kering dan ekstrak daun yang dijadikan bubuk kering yang dijual dalam bentuk  kapsul.  Pembuatan  ekstrak  kering  ini  membutuhkan peralatan yang cukup mahal yang sulit untuk dilakukan industri
rumahtangga.  Pengolahan  ekstrak  daun  menjadi  produk minuman  instant  yang  dapat  disajikan  dengan  mudah  belum dilakukan.  Pengolahan  daun  Murbai  menjadi  tepung  instant tidak  membutuhkan  alat  mahal  yang  dapat  dilakukan  pada tingkat industri rumahtangga. Daun Murbai telah diolah menjadi produk  olahan  yaitu  tepung  ekstrak  dan  dari  tepung  ekstrak diolah menjadi tepung instant.
Tepung  Instant  adalah  produk  makanan  seperti  tepung, teksturnya  remah,  mudah  larut  dalam  air  dingin  maupun  air panas  dan  tidak  mengendap  dan  mudah  dalam  penyajian. Prinsip  dari  minuman  instant  adalah  dalam  pengeringan  yang membutuhkan bahan pengisi untuk menghambat kerusakan zat gizi  selama  pengeringan.  Untuk  membuat  tepung  instant ditambahkan  dekstrin,  tween  80,  asam  sitrat  dan  aspartam. Dekstrin  berwarna  putih  sampai kekuningan  dengan  viskositas yang rendah. Mudah larut dalam air, mudah menyebar dan lebih stabil dari pati. Tween 80 sebagai pengemulsi membentuk busa. Asam sitrat lebih mudah larut dalam air dingin dari pada dalam air  panas,  membentuk  rasa  asam  dan  berfungi  sebagai pengawet  (Kumalasari,  2004).  Produk  olahan  daun  Murbai dibuat  dari  daun  yang  mengandung  mineral  seperti  N,  K,  Ca, Mg,  Fe,  Zn,  and  Mn  (Ercisli  dan  Orhan,  2007),  salah  satu  hal yang  penting  dalam  minuman  instant.  Tujuan  penelitian  ini adalah  untuk  mengukur  kadar  DNJ  dan  melihat  aktifitas penghambatan enzim α-glukosidase usus halus dalam ekstrak, tepung  ekstrak  dan  instant  daun  Murbai.  Hipotesis  pada penelitian  ini  adalah  ada  perbedaan  kadar  DNJ  dan  efektifitas penghambatan enzim α-glukosidase usus halus dalam ekstrak, tepung ekstrak dan instant daun Murbai.

## METODOLOGI

## Bahan
Daun  Murbai  dipanen  pada  Oktober  2009  dari  tanaman yang  tumbuh  disekitar  rumah-rumah  di  Padang  panjang Sumatera barat, Indonesia.

## Ekstrak daun Murbai
Daun  Murbai  diekstrak  dengan  air  panas  pada  suhu  80 0 C sebanyak  10  kali  jumlah  daun,  selama  1  jam  dengan menggunakan  magnetik  stirer.  Setelah  itu  larutan  disaring dengan  menggunakan  kertas  saring  untuk  mendapatkan ekstrak. Ekstrak ini kemudian diencerkan sebanyak 10 kali.

## Senyawa aktif pada ekstrak daun Murbai
Diaion  HP-20  column chromatography digunakan  untuk memisahkan senyawa aktif dalam ekstrak daun Murbai. Diaion HP-20 adalah resin sintetik yang mempunyai kemampuan untuk menyerap  senyawa  hidrophobic  ( adsorb  hydrophobic compounds )  secara  efisien,  sehingga  dapat  digunakan  untuk memisahkan  fraksi  larut  air  dan  fraksi  larut  metanol  dalam ekstrak daun Murbai.
Tepung  ekstrak  daun  Murbai  ( Mulberry  extract powder )
Daun Murbai diekstrak dengan  menggunakan air mendidih (x10 daun Murbai) selama 5 menit. Setelah itu disaring dengan
menggunakan  saringan,  sehingga  didapatkan  ekstrak.  Ekstrak tersebut  dicampur  dengan  tween  80  dan  dekstrin  dengan menggunakan mixer sampai  terbentuk  busa,  dan  dituangkan kedalam  loyang  dengan  ukuran  30  x  30  cm  dan  dikeringkan selama  6  jam  pada  suhu  60 O C  dengan  menggunakan  oven vacum.  Lapisan  kering  yang  terbetuk  ditumbuk  dan  diayak dengan  menggunakan  ayakan  dengan  ukuran  60  mesh. Sebanyak  100  mg  tepung  dilarutkan  dalam  1  ml  air  dan digunakan sebagai larutan sampel.
Tepung  instant  daun  Murbai  ( Mulberry  instant powder ) Tepung  ekstrak  daun  Murbai  ditambah  kan  dengan  asam sitrat (10%) dan aspartame (1 %), dan kemudian diaduk dengan menggunakan  blender,  dan  kemudian  diayak  dengan  ayakan ukuran  60  mesh.  Sebanyak  100  mg  tepung  instant  tersebut dilarutkan  dalam  1  ml  air  dan  digunakan  sebagai  larutan sampel.

## Penentuan  kadar  1-  deoxynojirimycin  (DNJ)  dengan HPLC.
DNJ  standar  ditimbang  secara  tepat  dan  dilarutkan  dalam air  (5  mg/ml  H 2 O),  kemudian  disuntikan  kedalam  kolom chromatografi (5 µl/injeksi). Sebanyak 0,1 g tepung ekstrak dan tepung  instant  daun  Murbai  dimasukan  dalam  tabung  mikro yang  berbeda  dan  kemudian  kedalam  masing-masing  tabung ditambahkan sebanyak 1 ml H 2 O. Larutan tersebut diputar pada 10.000  rpm  selama  5  menit.  Kemudian  diambil  sebanyak  5  µl supernatant  yang  berasal  ekstrak,  tepung  ekstrak  dan  tepung instant daun Murbai dan 5 µl pelarut disuntikan ke dalam kolom HPLC.  Konsentrasi  DNJ  dihitung  dengan  menggunakan  kurva kalibrasi.
Sistem HPLC terdiri dari sebuah pompa Shimadzu LC-10AT (Tokyo, Japan), dan sebuah injektor Reodyne kapasitas 100 μL sample  loop.  Column  Shodex  NH2P-50  (4.6  ×  250  mm; Asahipak,  Japan).  Pemisahan  menggunakan  campuran acetonitrile dan air distilasi (65:35, v/v). Kecepatan aliran diatur sampai  0.7  mL/min,  tekanan  100  kg/cm 2 .  Eluent  yang  keluar dikirim  kesebuah  SPD-10A,  detektor  UV-Vis  W.L.  210  nm (Shimadzu, Japan). Puncak area dicatat dengan menggunakan sebuah Chromatopac Shimadzu C-R6A.
Penentuan  aktifitas  penghambatan  enzim  α- Glucosidase dari ekstrak, tepung ekstrak dan instant daun Murbai
Diambil 5, 10 dan 20 µl sampel (ekstrak, tepung ekstrak dan tepung instant daun Murbai) dengan 10 x pengenceran, dan 10 µl  dari  sampel  dengan  pengenceran  10x,  20x,  40x,  80x. Masing-masing  diletakan  dalam  sebuah  tabung  mikro  ( micro tube );  ditambahkan  dengan  buffer  sebanyak  120  atau  130  µl, dan 10 µl enzim usus tikus (rat intestinal homogenate enzyme), serta  maltosa  4%  sebanyak  50  µl.  Kemudian  dibuat  blanko dengan cara yang sama, tetapi tanpa penambahan enzim dan diganti  dengan  air  destilasi  ( destillated  water ).  Kemudian diletakan  diatas  pemutar,  sehingga  larutan  tercampur  dengan baik  dan  letakan  dalam  incubator  pada  suhu  37 0 C,  selama  20 menit.  Kemudian  letakan  tabung  dalam  air  mendidih  selama  5
menit.  Diputar  pada  6000  rpm,  selama  5  menit.  Diambil sebanyak  20  µl  supernatant,  diletakan  dalam  sebuah  tabung mikro  dan  ditambah  dengan  reagent  pewarna,  diaduk  dengan meletakan  diatas mixer untuk  menghomogenkan  larutan  dan letakan dalam incubator selama  5 menit pada suhu 37 0 C, dan diukur absorbansinya pada panjang gelombang 505 nm.

## Analisis statistik.
Telah  digunakan  rata-rata  dan  standar  deviasi  dengan menggunakan Excel.

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Kandungan 1- deoxynojirimycin (DNJ)
Untuk  menentukan  kadar  DNJ  dengan  menggunakan HPLC,  pertama  ditentukan  kolom  kromatografi  yang  paling cocok  untuk  pemisahan  DNJ,  yaitu  senyawa  dengan  polaritas yang  tinggi.  Pada  penelitian  ini  tepung  ekstrak  dan  tepung instant  daun  Murbai  diekstrak  dengan  menggunakan  air  pada tabung  yang  berbeda  dan  dilakukan  sentrifugasi. Supernatannya disuntikan secara langsung pada kolom HPLC. Elusi  DNJ  dalam  tepung  fraksi  larut  air,  tepung  ekstrak  dan instant dilihat puncaknya pada waktu retensi 6,08 menit.
Tabel 1. Kadar  1-deoxinojirimycin  (DNJ)  dalam  tepung  fraksi  larut  air,
tepung ekstrak dan tepung instant daun Murbai. Sampel DNJ (mg/g) Tepung fraksi larut air 166,48±3,24 Tepung ekstrak 0,82±0,01 Instant 0,75±0,01
Seperti  ditunjukan  dalam  Tabel  1.  Kadar  DNJ  dalam  tepung ekstrak  adalah  sebesar  0,82±0,01  mg/g,  dan  kadarnya  dalam tepung  instant  adalah  sebesar  0,75±0,01  mg/g.  Kadar  DNJ tepung  instant  adalah  lebih  rendah  dari  pada  dalam  tepung ekstraknya yakni sebesar 6,9%. Kadar DNJ dalam tepung fraksi larut  air  adalah  sebesar  166,48±3,24  mg/g.  Dari  50  g  daun Murbai didapatkan tepung fraksi larut air sebesar 2,0378 g. Jadi kadar DNJ dalam daun Murbai segar adalah 6,78 mg/g (166,48 x 2,0378)/ 50 g).
Terdapat hubungan antara aktifitas penghambatan terhadap enzim α-glukosidase dengan konsentrasi DNJ, dimana semakin tinggi  konsentrasi  DNJ,  semakin  kuat  aktifitas  penghambatan terhadap enzim α-glucosidase (Yatsunami et al. , 2008). Seperti ditunjukkan  dalam  Tabel  1,  kadar  DNJ  dalam  tepung  ekstrak (0,82 mg/g atau 0,082%) sedikit lebih tinggi dari instantnya (0,75 mg/g atau 0,075%). Temuan pada penelitian ini sejalan dengan penelitian  lain  yang  dilaporkan,  yakni  semakin  tinggi  DNJ, semakin kuat aktifitas penghambatan.
Konsentrasi DNJ dalam tepung ekstrak sedikit lebih rendah dari  konsentrasi  DNJ  dalam  tepung  instantnya.  Ini  disebabkan karena  tepung  instant  dibuat  dari  tepung  ekstrak  yang ditambahkandengan  asam  sitrat  (10%)  dan  aspartame  (1%). Tetapi konsentrasi DNJ dalam tepung ekstrak jauh lebih rendah dari  ekstrak  daun  Murbai.  Miyahara et  al. (2004)  telah melaporkan  bahwa  ekstrak  Murbai  mengandung  DNJ  sebesar 1,1%

## Aktifitas  penghambatan  enzim  α-glucosidase  dari ekstrak daun Murbai
Gambar  1  menunjukan  bahwa  ekstrak  daun  Murbai  yang telah diencerkan mempunyai kemampuan penghambatan yang kuat  terhadap  aktifitas  α-glucosidase.  Aktifitas  penghambatan terhadap enzim α-glukosidase adalah sebesar 54±0,06  % dan 77±0,02  % untuk 5,0 µl, dan 10,0 µl sampel/campuran reaksi berturut-turut,  dimana  semakin  meningkat  konsentrasi  ekstrak daun Murbai, semakin kuat penghambatan aktifias enzim. Hasil penelitian  ini  menguatkan  penelitian  yang  telah  dilakukan  oleh peneliti  lain  sebelumnya  bahwa  ekstrak  daun  Murbai mempunyai  kemampuan  menghambat  aktifitas  enzim  α- glukosidase.
Gambar 1.   Aktifitas  penghambatan  terhadap  enzim  α-glukosidase oleh ekstrak daun Murbai dengan pengenceran 10x ,
Chromatography kolom  Diaion  HP-20,  telah  digunakan untuk  memisahkan  fraksi  larut  air  dengan  fraksi  larut  metanol. Setelah dilakukan pemisahan tersebut, Aktifitas penghambatan enzim  pada  fraksi  larut  air  dan  fraksi  larut  metanol  ditunjukan dalam Gambar 2.
Gambar 2, menujukkan bahwa fraksi larut air punya potensi menghambat aktifitas enzim α-glukosidase ( 82±0,01  %) , dan aktifitas  penghambatan  terhadap  enzim  tersebut  oleh  ekstrak (yang  terdiri  dari  fraksi  larut  air  bercampur  dengan  fraksi  larut metanol)  lebih  rendah  yakni  sebesar  67±0,03  %,  sedangkan fraksi  larut  metanol  tidak  menunjukkan  aktifitasnya  terhadap penghambatan  terhadap  enzim  α-glukosidase  (4±0,05  %).  Ini menunjukan bahwa substansi penghambat α-glucosidase dalam ekstrak  daun  Murbai  adalah  substansi  yang  larut  air.  Aktifitas penghambatan  enzim  oleh  fraksi  larut  metanol  bisa  dikatakan hampir tidak ada yaitu hanya sekitar 4±0,05 %.
Gambar 2.   Aktifitas penghambatan enzim oleh ekstrak,fraksi larut air dan larut metanol dengan pengenceran 10 x.
Gambar  3  menunjukan  hubungan  antara  tingkat pengenceran fraksi larut air dalam ekstrak daun Murbai dengan
Ekstrak daun Murbai dengan pengeceran 10 x (µl/campuran reaksi)
Pe ng ha m ba tan (%) Pengeceran 10 x (10 µl/campuran reaksi ) Ekstrak Fraksi larut air Fraksi pelarut metanol Pe ng ha m ba tan (%)
aktifitas  penghambatan  terhadap  enzim.  α-glucosidase. Semakin  tinggi  tingkat  pengenceran  semakin  rendah  aktifitas penghambatan terhadap enzim tersebut. Tingkat penghambatan enzim α-glucosidase pada berbagai tingkat pengenceran adalah 79±0,002  %  (10x);  67±0,01%  (20x);  52±0,01%  (40x); 38±0,01% (80x).
Gambar 3.   Aktifitas penghambatan fraksi larut air dalam ekstrak daun Murbai  dengan  berbagai  tingkat  pengenceran  (x10,  x20, x40, x80)

## Aktifitas penghambatan enzim α-glucosidase oleh tepung ekstrak dan tepung instant daun Murbai
Pada  penelitian  ini  telah  dilakukan  pembuatan  tepung ekstrak dan tepung instant dari ekstrak daun Murbai. Gambar 4, menunjukkan  bahwa  ada  pengaruh  yang  berbeda  terhadap penghambatan  aktifitas  enzim  α-glucosidase  oleh  tepung ekstrak dan  tepung instant daun Murbai. Tepung ekstrak daun Murbai  dengan  pengenceran  10  x,  menunjukan  aktifitas penghambatan terhadap enzim α-glukosidase sedikit lebih tinggi dari pada aktifitas penghambatan terhadap enzim α-glukosidase oleh  tepung  instant  daun  Murbai.  Aktifitas  penghambatan terhadap  enzim  oleh  tepung  ekstrak  daun  Murbai  adalah 73±0,02  %;  81±0,02;  87±0,04%  untuk  5  µl,  10  µl,  dan  20  µl sampel/campuran reaksi berturut-turut. Semakin banyak tepung ekstrak  daun  Murbai  yang  ditambahkan  semakin  kuat penghambatan terhadap aktifitas enzim α-glukosidase. Aktifitas penghambatan  oleh  tepung  instant  daun  Murbai  dengan pengenceran  10  x  terhadap  aktifitas  enzim  α-glucosidase adalah 65±0,01 %; 72±0,01; 78±0,02% (untuk 5 µl, 10 µl, dan 20  µl  sampel/campuran  reaksi  berturut-turut).  Semakin  tinggi konsentrasi  instant  daun  Murbai  semakin  tinggi  aktifitas penghambatan.
Gambar 4.   Aktifitas penghambatan tepung ekstrak dan tepung instant dengan pengenceran 10x
Rata-rata  ada  perbedaan  penghambatan  terhadap  aktifitas enzim α-glukosidase oleh tepung ekstrak dibandingkan dengan tepung  instantnya,  yakni  sebesar  sekitar  9  %,  dimana  aktifitas penghambatan  oleh  tepung  instant  lebih  rendah.  Ini dihubungkan dengan konsentrasi DNJ.
Gambar 5 menunjukkan hubungan tingkat pengenceran dari tepung ekstrak dan tepung instant daun Murbai dengan aktifitas penghambatan  terhadap  enzim  α-glucosidase.  Semakin  tinggi tingkat  pengenceran  artinya  semakin  rendah  konsentrasi mengakibatkan  semakin  rendah  aktifitas  penghambatan terhadap  enzim  tersebut.  Tingkat  penghambatan  enzim  α- glucosidase  oleh  tepung  ekstrak  dengan  konsentrasi  yang berbeda adalah 81±0,01 % (10x) ; 73±0,01% (20x); 64±0,01% (40x);  48±0,03%  (80x).  Sedangkan  tingkat  penghambatan enzim α-glucosidase oleh tepung instantnya adalah 72±0,01 % (10x) ; 61±0,02% (20x); 52±0,01% (40x); 39±0,03% (80x).
Gambar 5.   Aktifitas penghambatan tepung ekstrak dan tepung instant dengan beberapa tingkat pengenceran (x10, x20, x40, x80)
Aktifitas penghambatan terhadap enzim α-glukosidase oleh tepung  ekstrak  berbeda  dengan  tepung  instantnya.  Aktifitas penghambatan  terhadap  enzim  α-glukosidase  oleh  tepung ekstrak lebih tinggi.
Senyawa  aktif  dalam  daun  Murbai  yang  menunjukan pengaruh  terhadap  aktifitas  enzim  α-glukosidase  adalah  gula yang  mengandung  nitrogen  yang  disebut  1-Deoxinojirimycin (DNJ). Senyawa tersebut adalah sebuah analogi dari D-glukosa dengan  sebuah  gugus  NH  yang  menggantikan  posisi  atom oksigen pada cincin piranosa (Asano et al. ,1994). Oleh karena struktur  yang  mirip  dengan  glukosa,  ini  mengakibatkan  ada kompetisi  dalam  hidrolisis  pati  oleh  enzim  saluran  pencernaan (intestinal), dengan demikian adanya DNJ dalam makanan akan mengurangi penyerapan glukosa dari makanan tersebut.
Penghambatan terhadap aktifitas enzim α-glukosidase oleh ekstrak  Murbai  dihubungkan  dengan  konsentrasi  DNJ,  dimana semakin  tinggi  konsentrasi  DNJ,  semakin  kuat  penghambatan terhadap enzim (R 2 =0,9419; y = 527,76 + 6,53x) (Yatsunami et al. ,  2008).  Dilihat  dari  koefisien  determinasi  yang  ditunjukan oleh Yatsunami et al. , menggambarkan bahwa hubungan antara konsentrasi  dengan  tingkat  penghambatan  terhadap  aktifitas enzim  α-glukosidase  adalah  sangat  kuat  yakni  94,19%.  Ini artinya  bahwa  94,19%  penghambatan  dipengaruhi  oleh
Pe ng ha m ba tan (%) Fraksi air pada beberapa pengeceran (10 µl/campuran reaksi ) Pe ng ha m ba tan (%) 10 µl/campuran reaksi Tepung ekstrak
Instan
Pe ng ha m ba tan (%)
Pengeceran 10 x (µl/campuran reaksi)
Instan Tepung ekstrak
konsentrasi  DNJ,  sedangkan  hanya  sekitar  (100-94,19)%, tingkat penghambatan dipengaruhi oleh variabel lain.
Penelitian  ini  membuktikan  bahwa  tepung  ekstrak  dan tepung  instant  daun  Murbai  mempunyai  potensi  sebagai penghambat  aktifitas  enzim  α-glukosidase.  Ini  menunjukan bahwa  tepung  ekstrak  dan  tepung  instant  yang  diolah  dari ektrak  daun  Murbai  mempunyai  harapan  sebagai  makanan fungsional ( functional food ) .

## KESIMPULAN
Ekstrak daun Murbai menunjukkan potensi yang kuat dalam menghambat  aktifitas  enzim  α-glucosidase.  Substansi penghambatan yang utama dalam ekstrak adalah fraksi larut air. Dengan menggunakan ekstrak ini, dua sampel telah dihasilkan; yaitu tepung ekstrak dengan komposisi dekstrin dan tween-80, dan  tepung  instant  yang  dibuat  dari  tepung  ekstrak  ditambah dengan  asam  sitrat  dan  aspartame.  Kedua  produk  ini memperlihatkan  aktifitas  penghambatan  terhadap  enzim  α- glucosidase, dimana tepung ekstrak menunjukan aktifitas sedikit lebih  tinggi  dari  tepung  instantnya.  Aktifitas  penghambatan  ini dikaitkan  dengan  kandungan  DNJ,  dimana  kandungan  DNJ dalam tepung ekstrak sedikit lebih tinggi dari tepung instantnya. Hasil  penelitian  ini  menunjukan  bahwa  tepung  ekstrak  dan instantnya  mempunyai  potensi  sebagai  makanan  fungsional functional food.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian  ini  didukung  dengan  Program  Academic Recharging-C  (PAR-C),  DIKTI,  Departement  Pendidikan Nasional  Indonesia  dan  Graduate  School  of  Comprehensive Scientific  Research,  Program  in  Biological  System  Sciences, Prefectural  University  of  Hiroshima,  562  Nanatsuka,  Shobara 727-0023, Japan.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim. 2009. Penderita diabetes di Indonesia lebih besar dari penduduk  Australia.  2009.  http://rumahdiabetes.com /2009/12/ [30 Desember 2009]
Arabshahi-Delouee  S,  Urooj  A.  2007.  Antioxidant  properties  of various  solvent  extracts  of  mulberry  (Morus  indica  L.) leaves. Food Chem 102; 1233-1240.
ArslanO, Erzengin M, Sinan  S, Ozensoy O.  2004. Purifikasi of mulberry  (Morus  alba  L)  polyphenol  oxidase  by  affinity chromatography  and  investigation  of  its  kinetic  and elektrophoretic properties. Food Chem 88;479-484.
Asano  N,  Tomiyoko  E,  Kizu  H,  Matsui  K.  1994.  Sugars  with nitrogen in ring isolated from leaves of mulberry bombycis. Carbohydr Res 253:235-245.
Chooi Y L, Simb SM, Cheng HM. 2008. Phenylacetic acids were
detected in the plasma and urine of rats administered with low-dose mulberry leaf extract. Nutr Res 28; 555-563.
Ercisli S, Orhan  E. 2007  Chemical composition of white (Mors alba),  red  (Morus  rubra)  and  black  (Morus  nigra)  mulberry fruits. Food Chem 103; 1380–1384.
Dharmananda  S.  2003.  Fruit  as  medicine:  Morus  Fruit. http://www.itmonline.org/arts/morus.htm  [30  December 2009]
Katsube  T,  Imawaka  N,  Kawano  Y,  Yamazaki  Y,  Shiwaku  K, Yamane  Y.  2006.  Antioxidant  flavonol  glycosides  in mulberry  (Morus  Alba  L.)  leaves  isolated  based  on  LDL antioxidant activity. Food Chem 97; 25-31.
Kimura T, Nakagawa, Kubota H, Kojima Y, Goto Y, Yamagishi K,  Oita  S,  Oikawa  S,  Miyazawa  T.  2007.  Food-Grade Mulberry  Powder  Enriched  with  1-Deoxynojirimyn Suppresses the Elevation of Postprandial Blood Glucose in Humans. J. Agric. Food Chem 55; 5869-5874.
Kuei-huan  Chan,  Hsieh-Hsun  Ho,  Chen-Ning  Huang,  Ming- Cheng Lin, Hsiang-Mei Chen, and Chau-Jong Wang. 2009. Mulberry  leaf  extract  inhibits  vascular  smooth  muscle cellmigration involving a block of small GTPase and akt/NF- kB signal. J. Agric. Food Chem 57; 9147–9153
Kumalaningsih,  S.  2004.  Membuat  Makanan  Siap  Saji. Surabaya. Trubus Agrisarana.
Miyahara C, Miyazawa M, Satoh S, Sakai A, Mizusaki S. 2004.
Inhibitory  effects  of  mulberry  leaf  extract  on  postprandial hyperglycemia in normal rats. J Nutr Sci Vitaminol 50; 161- 164.
Mudra  M,  Ercan-Fang  N,  Zhong  L,  Furne  J,  Levitt  M.  2007.
Influence of mulberry leaf extract on the blood glucose and breath hydrogen response to ingestion of 75 g Sucrose by Type  2  Diabetic  and  Control  Subjects.  Diabetes  Care. Volume 30, number 5.
Naowaboot  J, Pannangpetcha  P,  Kukongviriyapana  V, Nakmareong  S,  Itharat  A.  2009.  Mulberry  leaf  extract restores  arterial  pressure  in  streptozotocin-induced  chronic diabetic rats. Nutrition Research 29; 602-608.
Samad MA, Salam KA, Tang MD. Abul Kashem Absar N, 2005.
Nutritional  Change  of  Four  Varieties  of  Mulberry  Leaves Infected  with  Fungus  (cercospora  moricola)  Dammam Community College. Ministry of Higher Education King Fadh University of Petrolium and Minerals
Srivastava  S , Kapoor  R r , Thathola  A,  Srivastava  RP.  2006. Nutritional quality of leaves of some genotypes of mulberry (Morus  alba).International  Journal  of  food  Science  and Nutrition. Vol. 57, No. 5-6 ： 305-313
Yatsunami  K,  Ichida  M,  Onodera  S.  2008.  The  relationship between  1-deokxynojirimycin  content  and  α-glucosidase inhibitory activity in leaves of 276 mulberry cultivars (Morus spp)  in  Kyoto,  Japan.  J  Nat  Med  62:63-66