## UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK DAUN SIRSAK

## (Annona murcata L.) TERHADAP PERTUMBUHAN JAMUR Candida albicans
Agista Pratiwi Masloman 1) , D.H.C. Pangemanan 1) , P.S. Anindita 1)
1) Program Studi Pendidikan Dokter Gigi Fakultas Kedokteran UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Fungal infections of the oral cavity often caused by Candida albicans.it is known as candidiasis. The use of antifungal drugs often lead to fungal resistance. Alternative treatments traditional any as an may  avoid  resistance.  One  of  plants  are  used  as  traditional  medicine  are  the  soursop  leaves.  Soursop leaves contain natural compound flavonoids wich serves an antifungal. This research aims to determine the inhibitiom of soursop leaf extract on the growth of Candida albicans. Using pure experimental design with post test only control design with Kirby bauer using filter paper. Subjects of this research is the third soupsop leaves many fifty from the top are extracted by maceration method using ethanol 96%. The result of  this  research,  the  average  diameter  of  inhibit  zone  soursop  leaf  axtract  (Annona  murcata  L)  on  the growth  of  the  fungus  Candida  albicans  12,5mm.  Inhibition  of  soursop  leaf  extract  include  strong category. Inhibition zone diameter of soursop leaf extract is smaller than the diameter of inhibition zone of antifungal drugs.
Keywords : Soursop leaf extract (Annona murcata L), Candida albicans

## ABSTRAK
Infeksi jamur pada rongga mulut yang sering disebabkan oleh Candida albicans . Infeksi tersebut tampak dalam bentuk kandidiasis. Pemberian obat anti jamur yang dilakukan untuk mengatasi hal tersebut menyebabkan  resistensi  terhadap  jamur.  Penggunaan  obat  tradisonal  dapat  menjadi  pilihan  untuk menghindari hal tersebut. Salah satu obat tradisional yaitu daun sirsak. Daun sirsak memiliki kandungan senyawa  alami  flavonoid  yang  berfungsi  sebagai  anti  jamur.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui daya  hambat  ekstrak  daun  sirsak  terhadap  pertumbuhan  jamur Candida  albicans .  Penelitian  ini merupakan  penelitian  eksperimental  laboratorium,  menggunakan  rancangan  eksperimental  murni  ( true experimental  design )  dengan  rancangan  penelitian post  test  only  control  design dengan  metode Kirbybauer menggunakan kertas saring. Subjek penelitian ini yaitu daun sirsak urutan ketiga sebanyak 50 buah  dari  pucuk  yang  dieksraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%.  Hasil penelitian menunjukkan rata-rata diameter zona hambat ekstrak daun sirsak ( Annona murcata L ) terhadap pertumbuhan jamur Candida albicans sebesar 12,5 mm. Daya hambat dari ekstrak daun sirsak termasuk kategori kuat menurut David dan Stout.
Kata kunci : Ekstrak daun sirsak ( Annona murcata L ), Candida albicans

## PENDAHULUAN
Infeksi  jamur  yang  paling  sering terjadi  di  rongga  mulut  yaitu  kandidiasis. (Morgan dkk, 2012). Kandidiasis merupakan suatu  infeksi  yang  disebabkan  oleh  jenis mikroorganisme  jamur Candida  albicans (Irianto, 2013) Organisme ini dapat menimbulkan infeksi oportunistis jika terdapat faktor predisposisi yang mendukung  seperti  kondisi  imunosupresi, keganasan,  penggunaan  antibiotik  spektrum luas,  pemakaian  gigi  tiruan,  merokok,  dan xerostomia  (Ongole  &  Praveen,  2013). Candida  albicans bukan  hanya  dapat tumbuh  pada  rongga  mulut  tetapi  juga berada  di  saluran  pencernaan,  pernafasan dan genital wanita (Irianto, 2014).
Untuk pengobatan kandidiasis diperlukan  terapi  anti  jamur.  Namun, penggunaan obat anti jamur dapat menimbulkan resistensi terhadap jamur serta dapat menimbulkan efek samping (Setiabudy,  2013).  Terdapat  pilihan  lain dalam mengobati penyakit kandidiasis, yaitu dengan memanfaatkan obat tradisional.
Penggunaan  obat  tradisional  sudah mulai  banyak  direkomendasikan  di  negara- negara  berkembang  termasuk  di  Indonesia. Penggunaan  obat  tradisional  menjadi  salah satu pilihan masyarakat dalam penyembuhan penyakit  karena  memiliki  efek  samping yang  sedikit  serta  tidak  terjadi  resistensi seperti obat sintesis. Keuntungan penggunaan  obat  tradisional  yaitu  biaya yang  murah  dan  mudah  didapat  (Widjijono &  Harsini,  2008).  Salah  satu  tanaman  yang sering  dijadikan  obat  yaitu  tanaman  sirsak (Annona murcata L.) .
Tanaman  sirsak  merupakan  tanaman yang  hidup  di  daerah  tropis  dan  dapat
tumbuh  berbuah  sepanjang  tahun  jika kondisi air tanah terpenuhi selama pertumbuhannya. Seluruh  bagian  tanaman sirsak dapat dimanfaatkan sebagai obat salah satunya daun sirsak  (Mardiana  & Ratnasari, 2007).
Daun  sirsak  dimanfaatkan  sebagai obat  ambeien,  hipertensi  ,  dan  sakit pinggang.  Kandungan  senyawa  Asetogenin pada  daun  sirsak  mampu  membunuh  sel kanker.  Kandungan  lain  yang  terdapat  pada daun  sirsak  yaitu  flavonoid,  flavonoid memiliki  senyawa  fenol  yang  bersifat fungistatik  atau  anti  jamur  (Yulianti  &  Sri, 2011).
Penelitian yang dilakukan sebelumnya oleh  Tuna  M  2015  menunjukkan  bahwa ekstrak  daun  sirsak  dapat  menghambat bakteri  sthaphylococcus  aureus  (  Tuna, 2015).  Berdasarkan  latar  belakang  di  atas penulis  tertarik  untuk  melakukan  penelitian tentang uji daya hambat  ekstrak daun  sirsak ( Annona murcata  L. ) terhadap pertumbuhan jamur Candida albicans .

## METODE PENELITIAN Jenis Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian eksperimental  laboratorium  menggunakan rancangan post test only control design.
Definisi Operasional
1. Ekstrak  daun  sirsak    ( Annona murcata  L. ) yaitu daun  sirsak  muda (urutan  ketiga  dihitung  dari  pucuk ranting tanaman sirsak) yang didapat dengan cara diektraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 96%
2. Candida  albicans merupakan  jamur yang  diperoleh  dari  rongga  mulut
yang sudah disediakan oleh
Laboratorium  Mikrobiologi  Fakultas Kedokteran Universitas Sam Ratulangi Manado.

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian  ini  yaitu  Pisau,  oven  memmert, kompor  listrik,  blender,  timbangan,  corong bucher, kertas  saring,  evaporator,  gelas ukur,  cawan  petri,  tabung  reaksi,  pinset, kapas  lidi  steril,  strerilisator dry  heat, incubator, bunsen,  jangka  sorong,  labu erlenmeyer,  kamera,  spidol,  masker,  sarung tangan, p erforator
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  daun  sirsak,  jamur Candida  albicans,  e tanol  90%,  s abaround Glucose-2%  Agar,  paperdisc Ketokonazol, larutan NaCl 0,9%.

## Prosedur Kerja
Sterilisasi Alat
Cawan petri, pinset dan labu Erlenmeyer  dicuci  terlebih  dahulu  dengan sabun  antiseptik  kemudian  dimasukkan  ke sterilisator dry  heat beserta  kapas  lidi  steril dan  kertas  saring  untuk  disterilkan  dengan suhu 170 o C selama satu jam.
Pembuatan Ekstrak Daun Sirsak
Pembuatan  ekstrak  daun  sirsak dilakukan di Laboratorium Farmasi Fakultas M-IPA  Universitas  Sam  Ratulangi.  Daun sirsak  muda  (urutan  ketiga  dihitung  dari pucuk  ranting  tanaman  sirsak)  diambil  dari perkebunan  di  daerah  Tondano  Kabupaten Minahasa  seberat  500  gram.  Daun  sirsak
yang  diambil  dicuci  menggunakan  air mengalir kemudian ditiriskan lalu dikeringkan  dengan  cara  diangin-anginkan selama  tujuh  hari.  Daun  sirsak  yang  telah kering  lalu  diblender  hingga  berbentuk serbuk  halus.  Serbuk  tersebut  ditimbang sampai  seberat  100  gram.  Proses  maserasi sirsak  dilakukan  dengan  mencampur  serbuk sirsak  yang  telah  ditimbang  dengan  pelarut etanol  96%  sebanyak  1  liter  sampai  serbuk terendam  lima  hari  sambil  diaduk  setiap harinya  selama  kurang  lebih  15  menit  agar supaya  daun  sirsak  dan  etanol  96% homogen.
Larutan  tersebut  kemudian  disaring dengan  corong bucher kemudian  diuapkan dari sisa pelarutnya dengan evaporator pada suhu  40 o C.  Setelah  itu,  larutan  diuapkan kembali  menggunakan  oven  dengan  suhu 40 o C  untuk  mendapatkan  ekstrak  murni. Ekstrak  murni  daun  sirsak  yang  didapat berwarna  hijau  kehitaman  dan  kental. Setelah  itu  dituang  ke  dalam  botol  steril kaca  tertutup  dan  disimpan  di  lemari pendingin.
Pembuatan  Media Sabaroud  Glucose-2% Agar
Sabaroud  Glucose-2%  Agar ditimbang seberat 39 gram dan dicampur dengan 1000 ml akuades kemudian ke dalam gelas kimia. Media  kemudian  ditutup  dengan  aluminium foil  lalu  disterilkan  dalam  autoklaf  dengan temperatur  121 o C  selama  15-20  menit, kemudian dituangkan ke cawan petri.
Pembuatan Suspensi Jamur
Pembuatan suspensi jamur uji dilakukan dengan  mengambil  satu  kapas  lidi  steril
jamur Candida  albicans dan  dimasukan  ke dalam  tabung  reaksi  yang  berisi  larutan NaCl  0,9%  sebanyak  3  ml,  kemudian dicampur  hingga  homogen  ditandai  dengan cairan berubah menjadi keruh sesuai standar kekeruhan McFarland 0,5.
Penanaman  jamur  di  Media Sabaroud Glucose-2% Agar
Sebelum  jamur  ditanam  pada  media
Sabaroud
Glucose-2% Agar, bagian belakang  cawan  petri  dibagi  menjadi  tiga bagian  dengan  menggunakan  spidol.  Jamur kemudian  diambil  dengan  kapas  lidi  steril lalu  digoreskan  secara  merata  pada  media agar dengan metode zigzag. Setiap pekerjaan  laboratorium  dilakukan  di  dekat api  Bunsen  guna  menjaga  sterilitasnya. Setelah  itu  cawan  petri  dimasukkan  ke dalam inkubator selama 24 jam dengan suhu 37 o C.

## Metode Pengujian
Metode  yang  digunakan  yaitu  metode difusi  lempeng  agar (Kirby  Bauer) yang merupakan  metode  uji  kepekaan  langsung. Sabaroud  Glucose-2%  Agar disediakan sebanyak  lima  cawan  petri. Candida albicans diambil  dari  sediaan  dan  digores dengan  menggunakan  kapas  lidi  steril  pada permukaan Sabaroud Glucose-2% Agar.
Kertas    saring  dibentuk  dengan menggunakan perforator sebanyak  sepuluh buah,  lima  buah  diberi  ekstrak  daun  sirsak, lima buah lagi diberikan etanol 96% sebagai
kontrol  negatif,  dan  sebagai  kontrol  positif digunakan paperdisc yang berisi ketokonazol.
Kertas saring tersebut kemudian  diletakannya  pada  media  agar yang telah digores dengan Candida albicans ,  kemudian  diinkubasi  selama  24 jam  dengan  suhu  37 0 C.  Diameter  zona hambat  yang  terlihat  sebagai  zona  bening diukur menggunakan jangka sorong.
Daun  sirsak dimanfaatkan  sebagai obat ambeien, hipertensi dan sakit pinggang. Kandungan  senyawa  Asetogenin  pada  daun sirsak  mampu  membunuh  sel  kanker. Kandungan  lain  yang  terdapat  pada  daun sirsak  yaitu  flavonoid.  Flavonoid  memiliki senyawa fenol yang dapat bersifat fungistatik atau anti jamur. 8
Penelitian sebelumnya yang dilakukan oleh  Tuna  tahun  2015  menunjukkan  bahwa ekstrak  daun  sirsak  dapat  menghambat bakteri Sthaphylococcus aureus . 9
Berdasarkan  latar  belakang  di  atas  penulis tertarik  untuk  melakukan  penelitian  tentang uji daya hambat ekstrak daun sirsak (Annona murcata  L.) terhadap  pertumbuhan  jamur Candida albicans .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Penelitian  ini  menggunakan  daun sirsak muda ke tiga dari pucuk yang diambil dari daerah Tondano Minahasa. Cawan petri yang  berisi Sabaroud  glucose-2%  agar dan jamur Candida  albicans yang  telah  diberi perlakuan  diambil  dari  inkubator  setelah diinkubasi selama 1x24 jam (Gambar 1).
Gambar 1. Zona hambat yang terbentuk pada media SGA
Keterangan : A : Zona hambat ekstrak daun sirsak (Annona murcata L.) B : Zona hambat kontrol positif ketokonazol C : Zona hambat kontrol negatif etanol
Dalam  satu  cawan  petri  terdapat  tiga macam  perlakuan  yang  dilakukan  dilima cawan  petri.  Zona  hambat  yang  dihasilkan masing-masing perlakuan memiliki hasil dan bentuk  yang  berbeda-beda.  Pengamatan
dilakukan  dengan  cara  mengukur  diameter horizontal  dan  vertikal  dari  zona  yang terbentuk pada cawan petri. Kedua diameter tersebut dihitung menggunakan rumus untuk mencari nilai rerata diameter zona hambat.
Tabel 1. Perbandingan Diameter Zona Hambat Ekstrak Daun Sirsak, Ketokonazol dan Etanol 96%
Diameter zona hambat (mm) Pengulangan Ekstrak daun sirsak Ketokonazol (kontrol positif) Etanol 96% (kontrol negatif) 1 11,5 35,0 0 2 17,5 36,0 0 3 12,5 32,5 0 4 12,0 34,0 0 5 13,5 33,0 0 Rerata 12,5 34,1 0
A B C
Tabel  1  menunjukkan  cawan  petri  yang ke  dua  memiliki  diameter  zona  hambat ekstrak  daun  sirsak  yang  besar  yaitu  17,5 mm,  lima  cawan  petri  dengan  ekstrak  daun sirsak  memiliki  rerata  zona  hambat  sebesar 12,5 mm. Zona hambat ketokonazol (kontrol positif) memiliki rerata sebesar 34,1 mm.

## Pembahasan
Melalui penelitian ini dapat ditunjukan bahwa  zona  hambat  terbentuk  pada  kertas saring  ekstrak  daun  sirsak  dan  kertas  saring kontrol  positif  ketokonazol.  Zona  hambat tersebut  dapat  dilihat  dengan  adanya  zona bening,  sedangkan  kontrol  negatif  etanol 96% pada penelitian ini tidak memiliki daya hambat.
Zona  hambat  yang  terbentuk  pada ekstrak  daun  sirsak  disebabkan  adanya  zat- zat aktif yang terkandung dalam daun sirsak seperti tanin, saponin, dan flavonoid.(Mardiana  &  Ratnasari,  2007) Mekanisme  kerja  tanin  menciutkan  dan mengendapkan  protein  dari  larutan  dengan membentuk  senyawa  yang  tidak  larut,  tanin berperan dalam sistem pertahanan tubuh dan mempunyai  aktivitas  antikosidan.(Tjay  H, Rahardja K 2007) Saponin bersifat surfaktan yang berbetuk polar sehingga akan memecahkan lemak pada membran sel yang pada  akhirnya  menyebabkan  gangguan permeabilitas  membran  sel.  Hal  tersebut mengakibatkan proses difusi bahan atau zat- zat  yang  diperlukan  oleh  jamur  dapat terganggu,  akibatnya  sel  jamur  dapat membengkah  dan  bahkan  pecah  (Suranto, 2011). Mekanisme  kerja  flavonoid  yaitu mengganggu  proses  difusi  makanan  ke dalam  sel  sehingga  pertumbuhan  jamur terhenti  atau  jamur  tersebut  mati  (Sirait,
2007). Tidak diketahui secara pasti zat aktif mana yang berpengaruh dalam menghambat pertumbuhan Candida albicans .
Penelitian  ini  menggunakan  kertas saring  sebagai  media  perlekatan  ekstrak. Berdasarkan  pengamatan  yang  dilakukan dilima  cawan  petri  dengan  kertas  saring ekstrak daun sirsak yang diperoleh memiliki diameter  zona  hambat  yang  berbeda-beda yaitu  11,5  mm,  17,5  mm,  12,5  mm,  12  mm dan  13,5  mm.  Hal  ini  dikarenakan  jumlah Candida  albicans yang  digores  pada  media Sabaroud  glucose-2%  agar tidak  merata  di tiap bagian sehingga pada penelitian tersebut mendapatkan hasil yang berbeda-beda ditiap cawan petri. Selain itu kelemahan dari kertas saring  yaitu  tidak  dapat  mengukur  jumlah ekstrak  yang  diserap  oleh  kertas  saring tersebut.
Obat anti jamur ketokonazol dijadikan sebagai  kontrol  positif  karena  ketokonazol merupakan  salah  satu  pilihan  obat  anti jamur.  Mekanisme  kerja  ketokonazol  yaitu berinteraksi dengan enzim untuk menghambat  demetilasi  lanosterol  menjadi ergosterol  yang  penting  untuk  membran jamur.(Cushine & Lamb, 2005).
Perbandingan hasil ekstrak daun sirsak dengan kontrol positif ketokonazol menunjukkan  bahwa  zona  hambat  kertas saring  ekstrak  daun  sirsak  lebih  kecil dibandingkan  dengan  zona  hambat  kertas saring  kontrol  positif  ketokonazol.  Hal  ini karena  ketokonazol  merupakan  salah  satu obat  anti  jamur  yang  telah  dipatenkan  dan sudah digunakan masyarakat sebagai pengobatan anti jamur.
Pada  tahun  2015  daun  sirsak  juga menjadi  objek  penelitian  yang  dilakukan oleh  Tuna  yaitu  uji  daya  hambat  esktrak
daun sirsak terhadap pertumbuhan Staphylococcus  aureus secara  in  vitro menunjukkan  rerata  zona  hambat  ekstrak daun sirsak yaitu 12,3 mm yang dikategorikan  kuat.(Tuna,  2015).  Adapun penelitian  lain  menggunakan  daun  yang berbeda  tetapi  menggunakan  jamur  yang sama  oleh  Kandoli  tahun  2016  tentang  uji daya  hambat  ekstrak  daun  durian  terhadap Candida  albicans menunjukkan  rerata  zona hambat  dari  ekstrak  daun  durian  3,55  mm yang dikategorikan lemah.(Kandoli, 2016).
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan bahwa  ekstrak  daun  sirsak  memiliki  daya hambat terhadap pertumbuhan jamur Candida  albicans dengan  rerata  12,5  mm yang dikategorikan kuat dengan menggunakan  kriteria  menurut  Davis  dan Stout.  Rerata  diameter  zona  hambat  kontrol positif  ketokonazol  sebesar  34,1  mm dikategorikan  sangat  baik  menurut  David dan  Stout  sedangkan  kontrol  negatif  etanol 96% tidak memiliki daya hambat

## KESIMPULAN
Ekstrak  daun  sirsak (Annona  murcata L.) memiliki daya hambat terhadap pertumbuhan jamur Candida albicans dengan rerata diameter zona hambat sebesar 12,5  mm  yang  dikategorikan  kuat  menurut David dan Stout.
SARAN
1. Diharapkan dapat dilakukan penelitian lebih lanjut minimal inhibitory  concentration pada  daun sirsak  ( Annona  murcata  L. )  terhadap pertumbuhan jamur Candida albicans . 2. Diharapkan dapat dilakukan penelitian tentang daun sirsak terhadap  bakteri  khususnya  pada  gigi dan mulut.
3. Diharapkan dapat dilakukan uji fitokimia  pada  daun  sirsak,  untuk mengetahui zat-zat aktif yang terdapat di daun sirsak.

## DAFTAR PUSTAKA
Cushnie  T,  Lamb  AJ.  2005.  Antimicrobial activity  of  flavonoids. International. Journal of antimicrobial agents. 2005; 26: 343-56.
Irianto  K.  2013. Mikrobiologi  medis . Bandung: Alfabeta. h 45.
Irianto  K.  2014. Bakteriologi  medis, mikrobiologi  medis  dan  virology medis .  Bandung:  Alfabeta.  2014.  h 365.
Kandoli  F.  2016. Uji  daya  hambat  ekstrak daun  durin  terhadap  pertumbuhan Candida  albicans [skripsi].  Manado. Universitas sam ratulangi.
Mardiana L, Ratnasari J. 2007. Ramuan dan khasiat sirsak . Penebar swadaya. h 21- 33.
Morgan  G,  Coleman  D,  Sulliva  D.  2012.
Candida  albicans versus Candida dubliniensis why  is Candida  albicans more pathogenic. International
journal of microbiology .;7: p 1.
Ongole  R,  Praveen  BN.2013. Textbook  of oral medicine, oral diagnosis dan oral radiology . India: Elseveir. p 153-4.
Sirait  M.  2007. Penuntun  fitokimia  dalam farmasi .  Bandung:  Institut  teknologi Bandung.
Setiabudy R. 2013. Farmakologi dan terapi.
Ed  5:  Fakultas  kedokteran  universitas Indonesia.. h 18.
Tjay H, Rahardja K. 2007. Obat-obat penting kasiat, penggunaan, dan efek sampingnya . Jakarta: Gramedia. 2007.
h 29-32.
Tuna  M.  2015. Uji  daya  hambat  ekstrak daun  sirsak  (Annona  murcata  L)
terhadap
pertumbuhan
Staphylococcus  aureus  secara  in  vitro
[skripsi].  Manado.  Universitas  sam ratulangi.
Widjijono,  Harsini.  2008.  Penggunaan herbal  di  bidang  kedokteran  gigi. Majalah kedokteran gigi ; h 61-64.