## PERBEDAAN AKTIVITAS ANTIOKSIDAN EKSTRAK DAUN ALPUKAT (Perseae americanae)  BERDASARKAN PERBEDAAN KETINGGIAN TEMPAT TUMBUH
Neni Sri Gunarti, Lia Fikayuniar, Dyah Anggun Fitriani*
Fakultas Farmasi, Universitas Buana Perjuangan Karawang, Jawa Barat, Indonesia *Penulis Koresponding: fm18.dyahfitriani@mhs.ubpkarawang.ac.id

## ABSTRAK
Daun  alpukat  merupakan  sumber  senyawa  aktif  flavonoid,  kuersetin  dan  polifenol  yang berfungsi sebagai antioksidan. Flavonoid merupakan salah satu metabolit sekunder yang terdiri dari  sekelompok  senyawa  polifenol  yang  memiliki  struktur  piron.  Antioksidan  diperlukan sebagai  penangkal  radikal  bebas,  antioksidan  sangat  diperlukan  oleh  tubuh  untuk  mentralisir radikal  bebas  dan  juga  untuk  mencegah  kerusakan  yang  diakibatkan  oleh  radikal  bebas. Penelitian  ini  dilakukan  dengan  metode  pra  eksperimental  dengan  rancangan one  shot  case study dengan  menggunakan  sampel  daun  alpukat  yang  tumbuh  pada  desa  Blitar  dan  desa Tulungagung  Pengujian  aktivitas  antioksidan  dilakukan  dengan  metode  DPPH  yang  diukur dengan  menggunakan  spektrofotometer Uv-Vis .  Hasil  aktivitas  antioksidan  yang  didapatkan oleh ekstrak etanol daun alpukat pada desa Blitar dengan nilai IC₅₀ sebesar 114,0851 ppm dan pada  desa  Tulungagung  dengan  nilai  IC₅₀  sebesar  99,2852  ppm.  Pada  penelitian  ini  dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun  alpukat  Blitar  memiliki  nilai  IC₅₀  114,0851  ppm  dan ekstrak  etanol  daun  alpukat  Tulungagung  memiliki  nilai  IC₅₀  99,2852  ppm.  Dan  dapat disimpulkan  ekstrak etanol daun alpukat (Tulungagung) yang berada didataran tinggi memiliki aktivitas antioksidan yang lebih kuat dibandingkan dengan ekstrak etanol daun alpukat (Blitar) yang berada didataran rendah.
Kata Kunci: Daun alpukat, Aktivitas antioksidan, IC₅₀, Perbedaan  ketinggian tempat tumbuh

## ABSTRACT
Avocado  leaves  are  a  source  of  flavonoid  active  compounds,  quercetin,  and  polyphenols  that function as  antioxidants.  Flavonoids  are  secondary  metabolites  consisting  of  a  group  of polyphenolic compounds that have a pyron structure. Antioxidants are needed as an antidote to free radicals, antioxidants are needed by the body to neutralize free radicals and also to prevent damage caused by free radicals. This research was conducted using a pre-experimental method with  a  one-shot  case  study  design  using  avocado  leaf  sampels  growing  in  Blitar  village  and Tulungagung  village.  Determination  of  antioxidant  activity  testing  was  carried  out  using  the DPPH  method  which  was  measured  using  a  Uv-Vis  spectrophotometer.  The  results  of  the extracts and the results of antioxidant activity obtained by the ethanol extract of avocado leaves in Blitar village with IC₅₀ value of 114.0851 ppm and Tulungagung village with IC₅₀ value of 99.2852  ppm.  Blitar  avocado  leaf  ethanol  extract  has  an  IC  value  of  114.0851  ppm  and Tulungagung  avocado  leaf  ethanol  extract  has  an  IC  value  of  99.2852  ppm.  And  it  can  be concluded  that  the  ethanol  extract  of  avocado  leaves  (Tulungagung)  in  the  highlands  has  a stronger  antioxidant  activity  than  the  ethanolic  extract  of  avocado  leaves  (Blitar)  in  the lowlands.
Keywords: Avocado leaves, Antioxidant activity, IC₅₀, Difference in altitude of growing place

## PENDAHULUAN
Daun  alpukat  merupakan  salah satu  tanaman  obat  yang  berpotensi sebagai  bahan  obat  tradisional  yang memiliki  aktivitas  seperti  antioksidan, analgesik, antiinflamasi, antihepatotosik,  dan  lain  sebagainya (Yasir et  al ,  2010).  Pada  penelitian  ini sampel  yang  diambil  adalah  daun alpukat yang berada di daerah pedesaan Blitar  dan  Tulungagung.  Pada  daerah Kabupaten  Blitar  memiliki  ketinggian 167  m  di  atas  permukaan  laut  yang termasuk  dataran  rendah  sedangkan pada  daerah  Kalidawir  Kabupaten Tulungagung memiliki ketinggian < 500 m sampai 500 m di atas permukaan laut yang  termasuk  dataran  tinggi  (BPS
Kabupaten Blitar, 2020; BPS
Kabupaten  Tulungagung,  2020).  Daun alpukat  merupakan  sumber  senyawa aktif flavonoid, kuersetin, dan polifenol (Dwi et al , 2016). Flavonoid merupakan salah  satu  metabolit  sekunder  yang terdiri dari sekelompok senyawa polifenol  yang  memiliki  struktur  piron (Panche et al , 2016; Kumar and Pandey, 2013).  Flavonoid  sangat  berguna  bagi tubuh karena flavonoid memliki aktivitas  biologis  seperti  antioksidan, hepatoprotekstif, antiinflamasi, antibakteri,  antikanker,  antivirus  dan
lain  sebagainya  (Kumar  and  Pandey, 2013).  Antioksidan  diperlukan  sebagai penangkal  radikal  bebas,  antioksidan sangat  diperlukan  oleh  tubuh  untuk mentralisir radikal bebas dan juga untuk mencegah  kerusakan  yang  diakibatkan oleh radikal bebas (Parwata, 2016).

## METODE PENELITIAN
Metode  pada  penelitian  kali  ini menggunakan metode pra eksperimental dengan  rancangan one  shot  case  study . Yaitu  dengan  menggunakan  2  sampel ekstrak daun alpukat yang tumbuh pada Desa Blitar (EDAB) dan Desa Tulungagung (EDAT) dengan
menggunakan metode DPPH lalu diukur dengan spektrofotometri UV-Vis.
Sampel
Sampel daun alpukat yang diambil  pada  desa  Blitar  yaitu  daun alpukat yang berada di kebun rumah ibu Sutarti  dan  sampel  daun  alpukat  yang diambil  pada  desa  Tulungagung  yaitu daun alpukat yang berada di perkebunan Erwin.  Daun  alpukat  yang  diambil sebagai sampel merupakan daun alpukat yang  tumbuh  di  ranting  pohon  mulai dari  daun  kedua  setelah  pucuk.  Teknik pengambilan  daun  alpukat  sebagai sampel  untuk  penelitian  ini  adalah purposive  sampling ,  yang  merupakan pengambilan  sampel  yang  didasarkan
atas  kriteria  tertentu  seperti  ciri-ciri sampel,  sifat  sampel,  dan  jenis  sampel dan  umur  sampel.  Kriteria  sampel  yang diambil  yaitu:    daun  alpukat  yang berwarna hijau tua, yang sudah maksimal proses fotosintesis, mulai dari daun  kedua  setelah  pucuk  dan  usia pohon yang sama.

## Bahan
Simplisia  daun  alpukat  dari  desa Blitar  dan  desa  Tulungagung,  kuersetin (Sigma),  HCl,  akuades,  magnesium, amilalkohol, alumunium klorida (AlCl₃) 10%,  etanol  96%,  etanol  p.a  (Smart- lab),  methanol  p.a  (Smart-lab),  asam asetat  (Smartlab),  Dragendroff,  besi (III)  klorida  1%,  HCl  2%,  CHCl₃,
Lieberman  Burchard,  DPPH  (Smart- lab),  asam  askorbat,  alumunium  foil, diklorometan  (Merk)  dan  etil  asetat (Brathacem).
Alat
Spektrofotometer Uv-Vis
(Thermo), neraca analitik digital (Aeadam), labu ukur (Bomex), chamber ,  kaca  arloji  (Hebei),  spatel logam, pipet tetes, cawan penguap, vial, beaker  glass (Iwaki),  penjepit  kayu, tabung reaksi, corong (Xuebei). Simplisia
Tanaman  alpukat  yang  digunakan untuk membuat simplisia yaitu
merupakan  bagian  daun.  Sampel  daun alpukat  yang  didapatkan  di  Desa  Blitar dan  Desa  Tulungagung.  Daun  alpukat yang  digunakan  yaitu  daun  alpukat berwarna hijau tua, yang sudah maksimal proses fotosintesis, mulai dari daun  kedua  setelah  pucuk  dan  usia pohon  yang  sama.  Daun  alpukat disortasi  dari  benda  asing  terlebih dahulu,  dicuci  dengan  air  mengalir  lalu ditiriskan, kemudian dirajang  lalu dijemur di bawah sinar matahari selama 5  jam,  kemudian  daun  alpukat  dijemur sampai  kering.  Daun  alpukat  yang sudah kering dibuat serbuk dengan cara diblender  lalu  diayak  pada  ayakan  40 mesh.

## Ekstraksi
Ekstraksi  pada  daun  alpukat menggunakan metode maserasi menggunakan  pelarut  etanol  96%. Simplisia  daun  alpukat  Blitar  sebanyak 150  gram  dan  simplisia  daun  alpukat sebanyak  300  gram  dimasukkan  ke dalam  maserator  kemudian  masing- masing simplisia ditambahkan dengan 1 L larutan etanol 96% didiamkan selama 3 x 24 jam. Hasil ekstrak yang disaring sebagai  filtrat  1.  Kemudian  melakukan ekstraksi  kembali,  menggunakan  sisa ampas  maserasi  sebelumnya,  dengan menambahkan  500  mL  larutan  etanol
96%  didiamkan  selama  1  x  24  jam lalu disaring  sebagai  filtrat  2.  Filtrat  1  dan filtrat 2 dicampurkan, kemudian dievaporasi  dengan rotary  evaporator hingga diperoleh ekstrak pekat.
Skrining Fitokimia

## Alkaloid
Ekstrak daun alpukat ditambahkan dengan  2  tetes  pereaksi  Dragendroff, diamati  hasil  jika  positif  alkaloid  maka akan terbentuk warna jingga.

## Flavonoid
Ekstrak  daun  alpukat  diambil sebanyak 1 mL, lalu dimasukkan 2 tetes HCl,  serbuk  magnesium  dan  2  tetes amilalkohol,  diamati  perubahan  yang terjadi  jika  adanya  flavonoid  maka terbentuk warna kuning atau jingga atau merah.

## Tanin
Ekstrak  daun  alpukat  diambil sebanyak  1  mL,  lalu  diteteskan  larutan besi  (III)  klorida  1%  secukupnya, diamati  perubahan  yang  terjadi.  Jika adanya  tanin  maka  terbentuk  larutan hitam kehijauan.
Saponin
Ekstrak  daun  alpukat  dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan  dengan air  panas.  Diamati perubahan  yang  terjadi  terhadap  busa, reaksi  positif jika  busa  bertahan  selama
30  menit  dan  tidak  hilang  jika ditambahkan dengan 1 tetes HCl 2N.

## Steroid
Ekstrak  daun  alpukat  diambil  dan dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi, lalu ditambahkan 2 tetes larutan CHCl₃, kemudian  ditambahkan  3  tetes  pereaksi Lieberman Burchard.
Diamati perubahan  yaitu  dengan  terbentuknya warna  merah  pertama  kali  pada  larutan yang  kemudian  berubah  menjadi  biru dan hijau.

## Triterpenoid
Ekstrak  daun  alpukat  dimasukkan ke dalam tabung reaksi, lalu ditambahkan  dengan  2  tetes  larutan CHCl₃,  kemudian  ditambahkan  3  tetes pereaksi  Lieberman  Burchard.  Diamati perubahan  yaitu  dengan  terbentuknya warna merah ungu.

## Penetapan Kadar Flavonoid

## Pembuatan Larutan Induk Kuersetin
Menimbang  sebanyak  10  mg kuersetin lalu dilarutkan 100 mL etanol pro  analisis  untuk  100  ppm,  kemudian dibuat  pengenceran  kuersetin  untuk konsentrasi 20; 40; 60; 80; dan 100 ppm dalam  10  mL  etanol  p.a.  (Diah et  al , 2018).
Larutan AlCl₃ 10%
Menimbang AlCl₃ sebanyak
1gram  kemudian  dilarutkan  dengan
etanol  dalam  labu  ukur  10  mL  lalu larutkan  dengan  aquadest  hingga  tanda batas (Diah et al , 2018).
Larutan Asam Asetat 5%
Melarutkan  5  mL  asam    asetat kemudian dicampurkan dengan aquadest  dalam  labu  ukur  100  mL  lalu ditambahkan  etanol  hingga  tanda  batas (Diah et al , 2018).

## Panjang Gelombang Maksimum
Pada pengukuran panjang gelombang,  diambil  1  mL  larutan kuersetin  lalu  ditambahkan  dengan  1 mL  AlCl₃  10%  dan  8  mL  asam  asetat 5% lalu diukur dengan spektrofotometer Uv-Vis dengan  range  350  nm  sampai 450  nm,  hasil  panjang  gelombang maksimum  yang  didapatkan  yaitu 415,05 nm (Diah et al , 2018).

## Operating Time (OT)
Larutan kuersetin diambil sebanyak  1  mL  lalu  ditambahkan dengan 1 mL AlCl₃ 10% dan 8 mL asam asetat  5%,  lalu  diukur  menggunakan spektrofotometer Uv-Vis dengan panjang  gelombang  415,05  nm,  diukur dengan  interval  2  menit  selama  1  jam (Diah et al , 2018).

## Penetapan Kurva Baku Kuersetin
Dibuat seri konsentrasi 20; 40; 60; 80;  dan  100  ppm.  Diambil  sebanyak  1 mL  dari  larutan  masing-masing  seri
konsentrasi  lalu  ditambahkan  dengan AlCl₃  10%  sebanyak  1  mL  dan  asam asetat  8  mL.  pembacaan  absorbansi kurva  baku  dilakukan  menggunakan spektrofotometri Uv-Vis diamkan selama 30 menit pada panjang gelombang  415,05  nm  (Anita et  al ,
2019; Sukmawati et al , 2018).
Penetapan  Kadar  Flavonoid  Total Ekstrak Daun Alpukat
Menimbang  ekstrak  etanol  daun alpukat masing-masing sebanyak 10 mg yang  dilarutkan  didalam  labu  ukur dengan 10 mL etanol 96% hingga batas. Kemudian  larutan  dipipet  sebanyak  0,5 mL  lalu  ditambahkan  dengan  1,5  mL etanol  96%,  0,1  AlCl₃  10%,  0,1  mL natrium asetat 1M dan 2,8 mL aquadest. Setelah  itu  diinkubasi  selama  1  menit, kemudian  diukur  absorbansinya  pada spektrofotometer Uv-Vis dengan panjang  gelombang  400  nm,  dilakukan sebanyak 3 kali pengulangan (Sukmawati et  al ,  2018;  Dina,  2020).
Hasil data yang diperoleh dari pengukuran  absorbansi  yaitu  digunakan untuk  mencari  kadar  flavonoid  total ekstrak  etanol  daun  alpukat.  Rumus yang  digunakan  untuk  menghitung kadar flavonoid total, yaitu:
𝐾𝐹𝑇 = 𝐶 × 𝑉 × 𝐹𝑃 × 10¯³ 𝑚 × 100%
Keterangan:
C : Kesetaraan kuersetin (mg/L)
FP: Faktor pengenceran
V : Volume total ekstrak (mL)
m : Berat sampel (mg)
Aktivitas Antioksidan
Larutan DPPH Menimbang sejumlah 5 mg serbuk  DPPH  kemudian  dilarutkan kedalam  50  mL  etanol  pro  analisis  dan didapatkan konsentrasi 100 ppm (Muchammad dan Evie, 2020)

## Larutan Standar Vitamin C
Menimbang  sejumlah  2,5  mg asam  askorbat  (Vitamin  C)  kemudian dilarutkan  dengan  50  mL  etanol  p.a didalam  labu  ukur  50 mL  sampai tanda batas, kemudian dikocok hingga homogen  (Muchammad  dan  Evie, 2020).
Larutan  induk  vitamin  C  kemudian dibuat variasi konsentrasi 1; 3; 5; 7; dan 9  ppm  dari  larutan  vitamin  C.  lalu ditambahkan  10  mL  etanol  p.a  didalam labu ukur sampai tanda batas. Lalu dari masing-masing konsentrasi dipipet sebanyak  1  mL,  dan  ditambahkan dengan  1  mL  larutan  DPPH,  kemudian diinkubasi selama 30 menit. Selanjutnya diukur  nilai  absorbansinya  dengan menggunakan spektrometer Uv-Vis pada  panjang  gelombang  515  nm  dan
dilakukan  secara  tiga  kali  pengulangan (Muchammad dan Evie, 2020).
Pengujian Aktivitas Antioksidan
Menimbang masing-masing ekstrak  etanol  daun  alpukat  sebanyak 100  mg  kemudian  dilarutkan  dengan 100  mL  etanol  p.a  di  dalam  labu  ukur 100  mL,  kemudian  larutan  dibuat variasi konsentrasi 50; 70; 90; 110;  dan 130  ppm.  Setelah  itu  dari  masing- masing konsentrasi ditambahkan dengan  etanol  p.a  sebanyak  10  mL  di dalam  labu  ukur.  Kemudian  masing- masing  konsentrasi  dipipet  sebanyak  1 mL  dan  ditambahkan  larutan  DPPH sebanyak 1 mL, lalu di inkubasi selama 30  menit.  Selanjutnya  diukur  nilai absorbansinya  dengan  menggunakan spektrometer Uv-Vis pada  panjang gelombang  515  nm  dan  dilakukan secara tiga kali pengulangan
(Muchammad dan Evie, 2020;
Kusumawati et al ., 2021).

## a) Pengukuran Aktivitas Antioksidan
Hasil  data  yang  diperoleh  dari pengukuran  absorbansi  yaitu  digunakan untuk  mencari  presentase  hambatan (Shafirany et  al .,  2021).  Rumus  yang digunakan untuk menghitung presentase hambatan DPPH yaitu:
%𝐼𝑛ℎ𝑖𝑏𝑖𝑠𝑖
= 𝐴𝑏𝑠 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙 − 𝐴𝑏𝑠 𝑠𝑎𝑚𝑝𝑒𝑙

## 𝐴𝑏𝑠 𝑘𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙
× 100%
b) Perhitungan Nilai IC₅₀
Nilai  IC₅₀  menyatakan  hubungan antara konsentrasi larutan uji (x) dengan %  inhibisi  (y).  Nilai  IC₅₀  dihitung dengan cara memperoleh dari persamaan regresi linear, yaitu:

## 𝑦 = 𝑏𝑥 + 𝑎
Keterangan: y: 50 (% hambatan)  a: intersep x: Konsentrasi IC₅₀  b: Slop

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Penetapan Kadar Flavonoid
Penentuan  kadar  flavonoid  total direaksikan dengan AlCl₃ akan
membentuk kompleks dikarenakan
memiliki  gugus  keto  C-4  dengan  gugus
hidroksil C-3 atau C-5 yang bersebelahan sehingga terjadinya pergeseran panjang gelombang sehingga  bisa  dilihat  adanya  warna kuning pada larutan dan juga penambahan asam asetat bisa menstabilkan  pembentukkan  kompleks AlCl₃ (Senet et al , 2018). Ekstrak etanol daun  alpukat  (Blitar  dan  Tulungagung) dibuat  dengan  konsentrasi  1000  ppm lalu  ditambahkan  dengan  AlCl₃  10% dan  asam  asetat  5%  yang  didiamkan selama 30 menit dan kemudian dianalisis  dengan  spektrofotometer Uv- Vis pada  panjang  gelombang  415,05 nm,  ekstrak  dibuat  3  kali  replikasi  agar hasil yang keluar akurat. Hasil penetapan  kadar  flavonoid  total  ekstrak etanol daun alpukat (Blitar dan Tulungagung)  dapat  dilihat  pada  Tabel
1. Tabel 1. Hasil Analisis Kadar Flavonoid Total Golongan Sampel C (mg/L) KFT (mgQE/g) Rata-rata KFT (mgQE/L) SD KFT ± SD Dataran Rendah Blitar 125,492 125,258 125,847 125,492 125,258 125,847 125,532 0,296 125,532 ± 0,297 Dataran Tinggi Tulung agung 99,904 100,095 100,375 99,904 100,095 100,375 100,124 0,236 100,125 ± 0,237
Berdasarkan  hasil  pada  Tabel  1 dan  Gambar  1  menyatakan  bahwa hasil analisis  kadar  flavonoid  total  dari ekstrak  etanol  daun  alpukat  (Blitar  dan
Tulungagung)  dilakukan  sebanyak  3 kali  pengulangan  yang  mempunyai tujuan  untuk  mendapatkan  hasil  yang akurat.  Kadar  flavonoid  ditentukan
dengan  cara  menggunakan  larutan standar  baku  kuersetin  karena  kuersetin masuk  ke  dalam  golongan  flavonoid dengan  gugus  keto  C-4  dengan  gugus hidroksil  C-3  atau  C-5.  Hasil  analisis EDAB memiliki kadar flavonoid sebesar 125,532 ± 0,297 mgQE/g ekstrak sedangkan hasil analisis EDAT
memiliki kadar flavonoid sebesar 100.125 ± 0.237  mgQE/g  ekstrak  yang berarti  hasilnya  merupakan  kesetaraan dengan  larutan  pembanding  ekstrak. Perbedaan kadar flavonoid yang didapatkan  dari  EDAB  dan  EDAT dikarenakan  adanya  hubungan  erat dengan  faktor  lingkungan  internal ataupun  eksternal,  seperti  ketinggian tempat  tumbuh.  Oleh  karena  itu  kadar flavonoid  total  ekstrak  daun  alpukat yang berasal dari daerah dataran rendah memiliki  nilai  yang  tinggi  sementara kadar  flavonoid  yang  berasal  dari daerah  dataran  tinggi  memiliki  nilai yang  rendah,  dikarenakan  flavonoid pada  tanaman  memerlukan  gula  dalam produksinya.  Gula  merupakan  salah satu  komponen  yang  diperoleh  dari proses fotosintesis pada tumbuhan yang mengandung klorofil.
Proses
fotosintesis  akan  dipengaruhi  oleh ketinggian tempat tumbuh yang dimana semakin  tinggi  tempat tumbuh  tanaman
maka  intensitas  cahaya  akan  semakin kecil (Anah, 2022).

## Aktivitas Antioksidan
Uji  aktivitas  antioksidan  dengan metode DPPH dilakukan dengan menggunakan spektrofotometer Uv-Vis. Dengan  cara  memasukkan  larutan DPPH  dan  larutan  sampel  1:1  kedalam spektrofotometer Uv-Vis pada  panjang gelombang  515  nm.  Syarat  nilai absorbansi  yaitu  berkisar  dari  rentang 0,2  sampai  0,8  (Sari,  2019).    Nilai absorbansi  sampel  yang  diperoleh  dari spektrofotometer Uv-Vis dapat ditentukan  nilai  persentasi  peredaman DPPH  (%  inhibisi)  kemudian  juga didapatkan nilai IC₅₀ ( inhibitory concentration ).  Nilai  IC₅₀  digunakan untuk  menentukan  konsentrasi  dari sampel yang diuji aktivitas antioksidannya, sehingga mampu menghambat  50%  aktivitas  radikal bebas.  Semakin  rendah  nilai  IC₅₀  maka akan  semakin  tinggi  pula  aktivitas antioksidannya. Untuk menghitung nilai IC₅₀  maka  dibuat  kurva  antara konsentrasi  sampel  ekstrak  dan  persen inhibisi yang akan menghasilkan persamaan  regresi  linier  (Sari,  2019). Dan  hasil  uji  aktivitas  antioksidan EDAB  dan  EDAT  dapat  dilihat  pada Tabel 2.
Tabel  2. Hasil Uji Aktivitas Antioksidan dan Nilai IC₅₀ Ekstrak Etanol Daun Alpukat (Blitar dan Tulungagung).
Golongan Sampel Konsentrasi (ppm) Peredaman (%) IC₅₀ (ppm) Dataran Rendah Blitar 50 70 90 110 130 28,1904 ± 1,711 33,7904 ± 1,487 40,8 ± 2,472 49,8285 ± 0,114 55,2 ± 0,8 114,0851 Dataran Tinggi Tulung agung 50 70 90 110 130 34,0952 ± 0,401 40 ± 1,839 47,8857 ± 0,342 55,2380 ± 0,263 58,0952 ± 0,174 99,2852
Data hasil uji aktivitas antioksidan dan  nilai  IC₅₀  ekstrak  etanol  daun alpukat  (Blitar  dan  Tulungagung)  dapat dilihat  pada  Tabel  2  dan  Gambar  2 menunjukkan  bahwa  nilai  absorbansi sampel pada ekstrak etanol daun alpukat (Blitar  dan  Tulungagung)  semakin berkurang dengan bertambahnya konsentrasi  ekstrak  daun  alpukat.  Hal ini terjadi karena ada peredaman radikal bebas (DPPH) oleh antioksidan (ekstrak daun  alpukat).  Jika  konsentrasi  ekstrak daun  alpukat  semakin  tinggi  maka  nilai absorbansi  yang  didapat  akan  semakin rendah,  dikarenakan  partikel  –  partikel senyawa  antioksidan  yang  ada  didalam suatu  konsentrasi  ekstrak  daun  alpukat yang semakin banyak dan juga menyebabkan aktivitas antioksidan yang  semakin  besar  (Sari,  2019). Variasi  konsentrasi  sampel  eksatrak
etanol daun alpukat (Blitar dan Tulungagung) yang digunakan untuk uji aktivitas antioksidan adalah 50 ppm, 70 ppm,  90  ppm,  110  ppm  dan  130  ppm. Pada  hasil  dari  sampel  ekstrak  etanol daun  alpukat  (Blitar)  yang  merupakan dataran  rendah  menunjukkan  nilai  IC₅₀ sebesar  114,0851  ppm  yang  berarti memiliki  aktivitas  antioksidan  yang tergolong  sedang  karena  memiliki  nilai IC₅₀ 100 sampai 250 ppm dan pada hasil dari sampel ekstrak etanol daun alpukat (Tulungagung) yang merupakan dataran tinggi  menunjukkan  nilai  IC₅₀  sebesar 99,2852  ppm  yang  berarti  memiliki aktivitas  antioksidan  yang  tergolong kuat  karena  memiliki  nilai  IC₅₀  50 sampai 100 ppm.
Senyawa  flavonoid  yang  ada  di dalam  tumbuhan  berperan  sebagai aktivitas  antioksidan,  semakin  besar
kandungan  flavonoid  maka  semakin besar  juga  aktivitas  antioksidannya (Anah,  2022;  Farhamzah et  al .,  2022).
Tetapi  pada  penelitian  ini  nilai  kadar flavonoid dan nilai aktivitas antioksidan berbanding terbalik. Hal ini memungkinkan  terjadi  bahwa  aktivitas antioksidan  bisa  saja  bukan terkandung dalam  senyawa  metabolit  sekunder flavonoid  melainkan  dari  senyawa metabolit sekunder lainnya yang termasuk  kedalam  senyawa  fenolik.
Aktivitas  antioksidan  secara  umum dapat  dipengaruhi  oleh  senyawa fenolik (asam  galat,  asam  protokatekuat,  asam kafeat, asam rosmarinat, asam klorogenik, asam ferulik, asam hidrobenzoat,  asam  pirokatekuat,  asam sinapik  dan  asam  resorsilik)  dan flavonoid (quersetin, katekin, naringenin, senyawa kaempferol, luteolin,  isohamnetin,  epikatekin  dan apigenin)  (Deuschla et  al ,  2019).
Senyawa  fenolik  yang  terkandung didalam  daun  alpukat  antara  lain  asam galat,  asam  kafeat,  asam  ferulat,  asam P-kmarat, asam klorogenat, asam resorsalat, asam sinapinat, asam siringat, asam vanilat, asam 4-
hidroksibenzoat,  asam  protokatekuat dan asam 2,3-dihidroksibenzoat
(Deuschla et  al ,  2019).  Dan  flavonoid
yang  terkandung  didalam  daun  alpukat adalah  quersetin  (Elly et  al ,  2018), kaempferol (Park et al , 2019), quersetin-
3- HAI -arapyranosida, luteolin, apigenin,
epikatekin, quersetin- 3- HAI - 𝛽 - glukopiranosida,
HAI -glukosida, isohamnetin kaempferol-3-
HAI - arabinopiranosida,  rammnopiranosida, quersetin-3-HAI- 𝛽 - D- glukosida (Deuschla et al , 2019).

## KESIMPULAN
Pada penelitian ini dapat disimpulkan  bahwa  ekstrak  etanol  daun alpukat  Blitar  memiliki  nilai  IC₅₀ 114,0851  ppm  dan  ekstrak  etanol  daun alpukat  Tulungagung  memiliki  nilai IC₅₀ 99,2852 ppm. Dan dapat disimpulkan    ekstrak  etanol  daun alpukat  (Tulungagung)  yang  berada didataran  tinggi  memiliki  aktivitas antioksidan yang lebih kuat dibandingkan  dengan  ekstrak  etanol daun  alpukat  (Blitar)  yang  berada didataran rendah.

## DAFTAR PUSTAKA
Anggorowati,  D.A.,  Gita  P.,  Thufail. Potensi  Daun  Alpukat  ( Persea
Americana Miller ) Sebagai Minuman Teh Herbal yang Kaya Antioksidan. Industri  Inovatif . 2016, 6(1): 1-7.
Ariskah,  A.  2022.  Pengaruh  Ketinggian Tempat Tumbuh Terhadap Kadar  Flavonoid  dan  Aktivitas Antioksidan Ekstrak Daun Kipahit  ( Tithonia  diversifolia ). Universitas Islam Negeri Maulana Malik Ibrahim. Malang. Bappenas. Alpukat/Avokad (Persea americana Mill/Persea gratissima Gaerth). 2000. Sistem Informasi Manajemen Pembangunan  Di  Perdesaan BAPPENAS . Jakarta.
Depkes. Materia Medika Indonesia Jilid I .  1977.  Departemen  Kesehatan Republik  Indonesia. Jakarta.
Depkes. Materia Medika Indonesia Jilid II .  1978.  Departemen  Kesehatan
Republik Indonesia. Jakarta.
Dewi,  I.P.,  Hendri,  G.S  dan  Verawaty. Uji Aktivitas Antioksidan Infusa Daun Kersen ( Muntingia Calabura L. ) Dengan Menggunakan  Metode  DPPH ( 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl ). Jurnal Akademi Farmasi Prayoga . 2020, 5(1): 1-9. Farhamzah, Kusumawati, A.H., Alkandahri,  M.Y.,  Hidayah,  H., Sujana,  D.,  Gunarti,  N.S.  et  al. Sun  Protection  Factor  Activity of Black Glutinous Rice
Emulgel  Extract  ( Oryza  sativa var glutinosa). Indian Journal of Pharmaceutical  Education  and Research . 2022, 56(1): 302- 310.
Hikmawanti, N.P.E., Endang, H., Shintia, M., Ajeng I.W.P. Kadar Piperin Ekstrak Buah Cabe Jawa Dan  Lada  Hitam  Dari  Daerah
Deangan  Ketinggian  Berbeda.
Jurnal  Jamu  Indonesia .  2021, 6(1): 16-22.
Kemit, N., I Dewa G. M. P dan Pande Ketut  D.  K.  Stabilitas  Senyawa Flavonoid Ekstrak Daun Alpukat  ( Persea  americana Mill. )  Terhadap  Perlakuan  pH dan Suhu. Media Ilmiah
Teknologi  Pangan .  2019,  6(1).
34-42.
Kusumawati,  AH.,  Farhamzah,  F.,
Alkandahri, MY., Sadino,
A., Agustina, LS., and Apriana, SD. Antioxidant Activity  and  Sun Protection Factor  of  Black  Glutinous  Rice ( Oryza  sativa var.   glutinosa). Tropical  Journal  of  Natural Product  Research .  2021, 5(11):
1958-1961. Panche,  A.N.,  Diwan,  A.D.,  and Chandra,  S.R.  Review  Article Flavonoids: An Overview .
Journal  of  Nutritional  Science .
2016, 5(47): 1-15.
Rustanti,  E  dan  Qurrotu  A.  L.
Identifikasi  Senyawa  Kuersetin dari  Fraksi  Etil Asetat  Ekstrak Daun Alpukat ( Persea americana Mill .). Alchemy: Journal  Of  Chemistry. 2018,
6(2): 38-42.
Safrina,  D  dan  Wahyu  J.P.  Pengaruh
Ketinggian Tempat Tumbuh dan Pengeringan Terhadap Flavonoid Total Sambang Colok ( Iresine Herbstii ). Jurnal Penelitian Pascapanen Pertanian . 2018, 15(3): 147-154. Senet,  M.R.M.,  I  Made,  O.A.P.,  dan  I
Wayan,  S.  Kandungan  Total Fenol  dan  Flavonoid  Dari  buah Kersen ( Muntingia Calabura L. )
Serta  Aktivitas  Antioksidannya. Jurnal  Kimia .  2017,  11(2):  187- 193.
Shafirany,  M.Z.,  Indawati,  I.,  Sulastri, L.,  Sadino,  A.,  Kusumawati, A.H.,   and  Alkandahri,  MY. Antioxidant Activity of Red and Purple  Rosella   Flower  Petals Extract ( Hibiscus sabdariffa L.).
Journal of Pharmaceutical Research  International .  2021, 33(46B): 186-192.
Sukmawati, S.S., dan Julius, P. Optimasi  Dan  Validasi  Metode Analisis Dalam Penetuan Kandungan Total Flavonoid Pada  Ekstrak  Daun  Gedhi  Hijau ( Abelmoscus  Manihot  L .)  Yang Diukur Menggunakan Spektrofotometri  Uv-Vis. Jurnal Ilmiah  Farmasi .  2018,  7(3):  32- 41.
Yasir,  M.,  Sattwik  D.,  Kharya  M.D. Review Article: The Phytochemical and Pharmacological Profile of Persea americana Mill.
Pharmacognosy  Reviews .  2010, 4(7): 77-84.