## INDONESIA
Antiinflamasi Ekstrak Daun Trembesi (Samanea saman (Jacq.)Merr.) Terhadap

## Ekspresi Enzim Siklooksigenase-2 (COX-2)
Nikmatus Sa'adah, Prima Agusti Lukis, Arilis Larasati Ode Asri, Istiati Istiati, Yolanda Kartika Asmarani, Iqbal Moch Moelok, Agus Aan Adriansyah, Budhi Setianto
1 S1 Kedokteran Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi, Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Kediri, Indonesia
2 D3 Teknik Gigi, Fakultas Kedokteran Gigi, Institut Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata Kediri, Indonesia
3 S1 Kesehatan Masyarakat, Universitas Nahdlatul Ulama Surabaya, Indonesia
*alamat email korespondensi: prima.agusti.lukis@iik.ac.id

## Abstract
The enzyme cyclooxygenase-2 (COX-2) is the main source of prostanoids in inflammation and has various effects on nerve endings, blood vessels, and cells involved in inflammation. Trembesi  leaves  (Samanea  saman  (Jacq.)  Merr.)  are  one  of  the  herbal  plants  that  have anti-inflammatory  properties  because  they  contain  steroid  compounds  with  high antioxidant capacity, flavonoid active compounds, and tannins. With antioxidant activity and  high  flavonoid  content,  trembesi  leaf  extract  can  act  as  an  anti-inflammatory  and influence  the  COX-2  enzyme  and  can  cause  pro-inflammatory  effects.  Objective:  to determine the effect of trembesi leaf extract as an anti-inflammatory on the expression of the  COX-2  enzyme.  Research  Method:  In  vivo  laboratory  experimental  method  with  30 Wistar rats (Rattus norvegicus) divided into 3 sample groups, namely: CMC NA negative control  group,  and  the  treatment  group  given  trembesi  leaf  extract  at  a  dose  of  100 mg/kgBW  and  a  dose  of  200  mg/kgBW.  COX-2  expression  was  seen  using  the immunohistochemical  staining  method.  Data  analysis  was  continued  with  the  normality test, homogeneity test, Kruskal-Wallis test, and Mann Whitney test. Results: Trembesi leaf extract at a dose of 100 mg/kgBW with a concentration of 12% had the effect of inhibiting the  expression  of  the  COX-2  enzyme  compared  to  the  negative  control  group  and  the extract  group  at  a  dose  of  200  mg/kgBW  with  a  concentration  of  12%.  Conclusion: Trembesi  leaf  extract  has  an  effect  on  reducing  inflammation  of  the  cyclooxygenase-2 (COX-2) enzyme..
Keyword: Anti-Inflammatory, Inflammation, Cyclooxygenase-2 Enzyme, Trembesi Leaf Extract

## Abstrak
Enzim siklooksigenase-2 (COX-2) merupakan sumber utama prostanoid pada peradangan dan mempunyai berbagai efek pada ujung saraf, pembuluh darah, serta sel yang terlibat dalam peradangan. Daun trembesi (Samanea saman (Jacq.) Merr.) termasuk dalam salah satu  tanaman  herbal  yang  mempunyai  sifat  antiinflamasi  karena  mengandung  senyawa steroid  dengan  kapasitas  antioksidan  yang  tinggi,  senyawa  aktif  flavonoid,  dan  tanin. Dengan aktivitas antioksidan dan kandungan flavonoid yang tinggi, ekstrak daun trembesi dapat  berperan  sebagai  antiinflamasi  dan  mempengaruhi  enzim  COX-2  serta  dapat menimbulkan  efek  pro  inflamasi.  Tujuan:  untuk  mengetahui  efek  ekstrak  daun  trembesi sebagai  antiinflamasi  terhadap  ekspresi  enzim  COX-2.  Metode  Penelitian  :  Metode eksperimen laboratorium in vivo dengan 30 tikus wistar (Rattus norvegicus) dengan dibagi 3  kelompok  sampel  yaitu:  kelompok  kontrol  negatif  CMC  NA,  dan  kelompok  perlakuan diberi ekstrak daun trembesi dosis 100 mg/kgBB dan dosis 200 mg/kgBB. Ekspresi COX-2 dilihat  menggunakan  metode  pewarnaan  imunohistokimia.  Dilanjutkan  analisis  data dengan uji normalitas, uji homogenitas, uji Kruskal-Wallis, dan uji Mann Whitney. Hasil : Ekstrak daun trembesi dosis 100 mg/kgBB dengan konsentrasi 12% memiliki pengaruh menghambat ekspresi enzim COX-2 dibandingkan kelompok kontrol negatif dan kelompok ekstrak  dosis  200  mg/kgBB  konsentrasi  12%.  Kesimpulan  :  Ekstrak  daun  trembesi mempunyai efek pada penurunan inflamasi terhadap enzim siklooksigenase-2 (COX-2).
Kata Kunci: Antiinflamasi, Radang, Enzim Siklooksigenase-2, Ekstrak Daun Trembesi

## I. PENDAHULUAN
Sebagian  besar  penyakit  di  rongga mulut disebabkan oleh inflamasi yang berasal dari  bakteri.  Inflamasi  dalam  bahasa  romawi disebut  Rubor  et  Tumor  cum  calor  et  Dolor, yaitu  bengkak  disertai  panas  dan  sakit  oleh beberapa keadaan. Penyebab inflamasi antara lain:  terjadi  infeksi,  jaringan  rusak  atau gangguan respon imun dan diikuti pengeluaran prostaglandin, peningkatan histamin  dan  senyawa  vasodilatasi.  Enzim yang berperan sintesis prostaglandin,
siklooksigenase-1  (COX-1),  berperan  dalam respon  homeostatic  yang  bila  dihambat menimbulkan  efek  penggunaan  obat  AINS. Sedangkan enzim siklooksigenase-2 (COX-2) berperan keadaan inflamasi prostanoid peradangan  dan  memiliki  efek  pada  ujung saraf, pembuluh darah, dan sel radang. [1]
Hasil Riskesdas tahun 2018 menyatakan adanya peningkatan gangguan kesehatan gigi dan mulut pada gusi sebanyak 57,6%, dengan lebih  dari  80%  generasi  muda  dan  dewasa mengalami radang gusi. Kurangnya
kebersihan  mulut,  penumpukan  partikel makanan, bakteri atau penumpukan plak dapat menyebabkan  peradangan  gusi.  Penyakit periodontal  melibatkan  proses  inflamasi destruktif  yang  merusak  jaringan  di  sekitar gigi dan mempengaruhi 10-15% populasi. [2]
Peradangan diobati secara medis dengan obat  antiinflamasi  nonsteroid  (NSAID)  dan obat  antiinflamasi  steroid.  NSAID  (asam mefenamat, aspirin, indometasin, dan ibuprofen) menghambat enzim siklooksigenase  (COX-1  dan  COX-2).  Obat antiinflamasi yang digunakan dalam pengobatan  penyakit  periodontal  sebagai contohnya yaitu ibuprofen yang menghambat pembentukan prostaglandin melalui metabolisme asam arakidonat siklooksigenase-2,
sehingga dapat menghilangkan  rasa  sakit  dan  mencegah penyebaran  peradangan.  Penggunaan  obat antiinflamasi  memerlukan  bahan  alternatif yang  cenderung  lebih  aman  karena  obat antiinflamasi yang ada di pasaran saat ini bila digunakan  dalam  jangka  panjang  dapat menimbulkan efek samping. Bahan alternatif yang  dapat  digunakan  di  antaranya  adalah bahan  tumbuhan,  misal  daun  trembesi (Samanea saman (Jacq.) Merr.). [3]
Daun  trembesi  merupakan  tanaman kering  asli  daerah  tropis,  dimana  hasil skrining  fitokimia  dari  ekstrak  daun  tersebut mengandung  senyawa  tanin,  flavonoid,
saponin, steroid, dan terpenoid, serta mempunyai  sifat  antiinflamasi.  Penelitian terdahulu  menunjukkan  bahwa  ekstrak  daun trembesi  dengan  konsentrasi  12%  dapat memperingan peradangan. Flavonoid merupakan  golongan  senyawa  metabolit sekunder  yang  dapat  mengatasi  peradangan, mempunyai  efek  antibakteri,  pereduksi, antivirus, antihistamin, antihipertensi, antiseptik,  dapat  merangsang  pembentukan estrogen, serta mempunyai efek antijamur dan insektisida.  [4]  Peran  flavonoid  yaitu  dapat mengacaukan  pembentukan  asam  arakidonat yang  berasal  dari  fosfolipid  dan  memangkas produksi metabolit inflamasi. [5] Berdasarkan hasil penelitian lainnya, menunjukkan senyawa  flavonoid  mempunyai  kemampuan antioksidan  dan  memiliki  efek  antiinflamasi yang  tinggi  pada  penyakit  inflamasi  kronis. [6]  Kandungan  flavonoid  yang  tinggi  pada ekstrak  daun  trembesi  mempunyai  sifat antiinflamasi, dapat mencegah dan membentuk  mediator  inflamasi  dari  jalur lipooksigenase dari metabolisme asam arakidonat dan dapat mengurangi peradangan terhadap  enzim  siklooksigenase-2  (COX-2). [7]
Berdasarkan  penjelasan  yang  telah diuraikan,  dilaksanakanlah  penelitian  dengan menggunakan  ekstrak  daun  trembesi  sebagai inhibitor antiinflamasi, serta untuk
mengetahui  efek  antiinflamasinya  terhadap ekspresi enzim siklooksigenase-2 (COX-2).

## II. METODE PENELITIAN
Jenis  penelitian  ini  merupakan  eksperimen laboratorium in vivo ,  rancangan desain   post test  only  control  group  design .  Populasi penelitian  ini  adalah  tikus  putih  berjenis kelamin  jantan  ( Rattus  norvegicus ).  Metode pengambilan  sampel  menggunakan  sampel acak yang dihitung dengan rumus Lemeshow, sehingga  diperoleh  3  kelompok  dengan  total 30 ekor tikus
2.1   Alat dan Bahan
Alat yang digunakan pada penelitian ini antara lain microplate  reader /  spektrofotometer, timbangan hewan, botol maserasi, timbangan analitik  (precisa  jarum  oral),  jarum  suntik, gelas  ukur,  beaker  glass,  lumpang  dan stamfer ,  corong,  erlenmeyer,  krus  porselen, labu  ukur,  kertas  saring, rotary  evaporator , pipet mikro, sumur mikroplate, waterbath dan sentrifuge .  Sedangkan  bahan-bahan  yang dimanfaatkan pada penelitian ini adalah daun trembesi  ( Samanea  saman  (Jacq.)  Merr .), tikus wistar putih jantan ( Rattus novergicus ), karagenan, etanol 96%, natrium klorida 0,9%, natrium  diklofenak,  natrium  karboksimetil selulosa,  makanan  tikus,  asam  klorida,  dan antibodi primer.

## 2.2. Prosedur Kerja

## 2.2.1 Persiapan Hewan Coba
Tikus wistar ( Rattus novergicus ) sebanyak 30 ekor,  umur  2-3  bulan,  berat  badan  kisaran 200-250  gram  dibagi  dalam  3  kelompok dengan pembagian masing-masing kelompok terdiri 10 ekor tikus per kandang. Hewan uji diaklimatisasi selama 7 hari sebelum perlakuan.

## 2.2.2 Pembuatan Ekstrak Daun Trembesi
Daun trembesi dicuci dan disortir, dipanaskan dengan  diletakkan  di  bawah  sinar  matahari ditutup  dengan  kain  berwarna  hitam  hingga kering.  Daunnya  dihaluskan,  dan  diperoleh bubuk  simplisia.  Bubuk  daun  trembesi sebanyak  100gr  dan  200gr  dimasukkan  ke dalam bejana maserasi, kemudian ditambahkan etanol 96% di atas shaker hingga homogen  dan  didiamkan  1x24  jam.  Maserat disaring  dan  dilakukan  penguapan  dengan rotary evaporator dengan suhu 60°C selama 2 jam hingga etanol terpisah sehingga didapatkan  100%  ekstrak  daun  trembesi kemudian  ditambahkan  aquades  sehingga menjadi  konsentrasi  trembesi  12%.  Ekstrak daun trembesi selanjutnya dibuat dalam dosis 100 mg/kgBB dan 200 mg/kgBB.

## 2.2.3 Pemekatan Ekstrak
Ekstrak  daun  trembesi  dilakukan  pemekatan menggunakan rotary evaporator dan waterbath sampai  didapatkan  ekstrak  pekat.
Ekstrak  disimpan  di  wadah  gelap  dan terlindung  sinar  matahari.  Penyimpanan hingga  2  hari  karena  menghasilkan  daya antibakteri yang tinggi.

## 2.2.4 Pembuatan Suspensi Natrium
Karboksimetil Selulosa (CMC-Na) 0,5%
Natrium  karboksimetil  selulosa  (CMC-Na) sebanyak  100  mg  ditambahkan  dengan  air panas  30x  berat  CMC-Na  hingga  larut, kemudian ditambahkan aquades 10 ml hingga homogeny  lalu  diinjeksikan  CMC-Na  dosis 0,5 ml.

## 2.2.5 Pembuatan Suspensi Ekstrak Daun Trembesi
Sediaan  uji  dibuat  dengan  ekstrak  daun trembesi  disuspensi  dengan  CMC  Na  0,5%. CMC-Na  100  mg  kemudian  ditambahkan dengan  air  panas  20x  berat  CMC-Na, dimasukkan  ekstrak  daun  trembesi  hingga dosis 100 mg dan 200 mg sesuai konsentrasi 12%  dan  dicukupkan  volume  larutan  dengan aquades 10 ml.

## 2.2.6 Pembuatan Suspensi Karagenan 1%
Karagenan sebanyak 1 gram disuspensikan dalam 100 mL CMC-Na 0,5%.

## 2.2.7 Perlakuan membuat radang setelah kelompok sampel sesuai pemeliharaan
Karagenan  diberikan  untuk  menginduksi peradangan  dan  dosis  0,1  ml  disuntikkan secara subplantar ke telapak kaki tikus dengan dosis  100  mg/kgBB  untuk  kelompok perlakuan  1  dan  dosis  200  mg/kgBB  untuk kelompok perlakuan 2.

## 2.2.8 Pembuatan Preparat Histologi
Setelah 6 jam, tikus didekaputasi dan dibiopsi 3x3mm pada telapak kaki tikus. Jaringan yang telah dibiopsi dimasukkan tabung fiksasi NBF 10%  perbandingan  1:20,  disimpan  ke  dalam deep freezer (kondisi sangat dingin) sebelum dilakukan processing jaringan. Processing jaringan  dilakukan  dengan  cara  pemotongan blok parafin histosec 4 mm, lalu dimasukkan ke  dalam waterbath dan  diparafinisasi, selanjutnya  diletakan  kondisi  utuh  di  kaca objek (khusus IHC).

## 2.2.9 Pewarnaan Imunohistokimia
Prosedur dimulai dengan melakukan deparafinasi preparat dengan xylene sebanyak 3  kali  masing-masing  3  menit.  Selanjutnya dilakukan  rehidrasi  preparat  menggunakan etanol  100%  selama  2  menit,  etanol  95% selama  2  menit  dan  etanol  70%  selama  1 menit,  kemudian  dengan  air  selama  1  menit. Preparat direndam selama 10 menit pada suhu kamar  dalam peroxidase  blocking  solution , diinkubasi  dalam prediluted  blocking  serum 25°C  selama  10  menit.  Preparat  direndam
dalam  buffer  sitrat  pH  6,0  dipanaskan  dalam waterbath suhu  95°  (20  menit)  dan dikeluarkan  sampai  suhu  ruang  ±  20  menit.
Selanjutnya preparat dicuci dengan phosphate buffer  saline (PBS)  selama  5  menit,  lalu
diinkubasikan
dengan kromogen diaminobenzidine  (DAB)  25°C  selama  10 menit, dilanjutkan inkubasi dengan hematoksilin  eosin  selama  3  menit.  Preparat dicuci  dengan  air  mengalir,  kemudian dibersihkan  dan  ditetesi  mounting  media. Preparat  ditutup  dengan  coverslip  dan dilakukan pengamatan menggunakan mikroskop  cahaya  dengan  pembesaran  400x dalam  8  lapang  pandang  Preparat  berwarna coklat  sel  menandakan  COX-2,  sedangkan biru, sel tidak diekspresikan enzim COX-2.

## 2.2.10 Skoring Pewarnaan
Imunohistokimia (IHC) Skoring ditentukan berdasarkan hasil pewarnaan  IHC  dengan  ketentuan  skor  0: negatif (persentase 0%), skor 1: positif ‘ weak’
(persentase 1-25%), skor 2: positif ‘ moderate’
(persentase  26-50%),  skor  3:  positif  ‘ strong’
(persentase  51-75%),  skor  4:  positif  ‘-‘ (persentase 76-100%).

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui efek ekstrak daun trembesi sebagai antiinflamasi terhadap ekspresi enzim COX-2. Hasil  penelitian  pada  kelompok  perlakuan yang  menggunakan  ekstrak  daun  trembesi didapatkan  ekspresi  enzim  COX-2  lebih rendah  dibandingkan  dengan  kelompok kontrol  sehingga  dikatakan  ekstrak  daun trembesi 12% mempunyai efek penghambatan terhadap ekspresi enzim COX-2.
Perhitungan  ekspresi  enzim  COX-2  dengan mikroskop pembesaran 400x, gradasi semikuantitatif didapatkan skor :
a.  Kelompok perlakuan 1 ekstrak daun trembesi dosis 100 mg kg/BB. Skor 1 : Positif ‘weak’ (Persentase 1-25%).
b.  Kelompok perlakuan 2 ekstrak daun trembesi dosis 200 mg kg/BB. Skor 1: Positif ‘weak’ (Persentase 1-25%).
c.  Kelompok kontrol CMC NA 0,5%. Skor
3: Positif ‘Strong’ (Persentase 51-75%)
Tabel 1. Rerata ekspresi enzim siklooksigenase-2 (COX-2) Kelompok Rerata  Ekspresi Enzim COX-2 Kelompok Kontrol 48.57 Kelompok Perlakuan Ekstrak Daun Trembesi  100 mg/kgBB 13.00 Kelompok Perlakuan Ekstrak Daun Trembesi 200 mg/kgBB 16.50
Hasil pemeriksaan imunohistokimia menunjukkan ekspresi enzim COX-2 dihitung berdasarkan  jumlah  sel  neutrofil  yang terekspresi.  Sel  dengan  sitoplasma  berwarna
coklat kegelapan artinya mengekspresi enzim COX-2  sedangkan  biru  keunguan  tidak mengekspresi enzim COX-2.
Gambar 1 Ekspresi enzim COX-2. (A). Kelompok perlakuan 1 ekstrak daun trembesi dosis 100 mg kg/BB. Skor 1. (B). Kelompok perlakuan 2 ekstrak daun trembesi dosis 200 mg kg/BB. Skor 1. (C). Kelompok kontrol CMC NA 0,5% Skor 3.
Tabel 2 Uji Krusskall-Wallis Ekstrak Daun Trembesi Mean ± SD Signifikansi 100 mg/kgBB 13 ± 2,582 0.000 200 mg/kgBB 16.50 ± 3.375 CMC NA 48,57 ± 3,780
Berdasarkan Tabel 2 , ekspresi rata-rata enzim COX-2  dalam  kelompok  yang  diberi  ekstrak daun  trembesi  100  mg/kgBB  adalah  13, sedangkan kelompok yang diberi ekstrak daun
trembesi  200  mg/kgBB  sebesar  16.50.  Nilai signifikansi  0.000  <  0.05  dapat  diartikan bahwa  ada  perbedaan  antar  masing-masing kelompok.
Tabel 3 Uji Mann-Whitney Hasil Perlakuan 100 mg dengan dosis 200 mg
Ekstrak Daun Trembesi Mean ± SD Selisih Mean Signifikansi 100 mg/kgBB 13±2,582 -3,5 0.024 200 mg/kgBB 16.50±3.375 Berdasarkan Tabel 3 , Selisih rata-rata antara kelompok  yang  diberi  ekstrak  daun  trembesi
100 mg/kgBB dan 200 mg/kgBB adalah  -3.5. Kelompok  yang  diberikan  ekstrak  daun
trembesi 200 mg/kgBB lebih unggul dibandingkan  kelompok  yang  diberikan ekstrak daun trembesi dengan kandungan 100 mg/kgBB.  Nilai  signifikansi  0.024  dapat
diartikan terdapat perbedaan antara kelompok yang diberikan ekstrak   daun   trembesi   100 mg/kgBB  dengan  kelompok  yang  diberikan ekstrak daun trembesi 200 mg/kgBB.
Tabel 4 . Uji Mann-Whitney Perlakuan 100 mg vs CMC NA. Ekstrak Daun Trembesi Mean ± SD Selisih Mean Signifikansi 100 mg/kgBB 13±2,582 -35,57 0.000 CMC NA 48,57±3,780
Berdasarkan Tabel 4 , Selisih rata-rata antara kelompok  yang  diberikan  ekstrak  daun trembesi  100  mg/kgBB  dengan  kelompok kontrol  CMC-Na  adalah  -35,57.  Kelompok yang  diberikan  ekstrak  daun  trembesi  100 mg/kgBB lebih kecil dibandingkan kelompok
yang  diberi  CMC-Na.  Nilai  signifikansinya 0.000  dapat  diartikan  terdapat  perbedaan antara kelompok yang diberikan ekstrak daun trembesi  100  mg/kgBB  dengan  kelompok kontrol CMC-Na.
Tabel 5 Uji Mann-Whitney Perlakuan 200 mg vs CMC NA Ekstrak Daun Trembesi Mean ± SD Selisih Mean Signifikansi 200 mg/kgBB 16.50±3.375 -32,07 0.000 CMC NA 48,57±3,780
Berdasarkan Tabel 5 , Selisih rata-rata antara kelompok  yang  diberikan  ekstrak  daun trembesi  200  mg/kgBB  dengan  kelompok kontrol  CMC-Na  adalah  -32,07.  Kelompok yang diberikan ekstrak daun trembesi dengan dosis 100 mg/kgBB lebih kecil dibandingkan kelompok  yang  diberi  CMC-Na.  Nilai
signifikansi  0.000  dapat  diartikan  terdapat perbedaan  antara  kelompok  yang  diberikan ekstrak  daun  trembesi  200  mg/kgBB  dengan kelompok kontrol CMC-Na.
Proses  inflamasi  menyebabkan  peningkatan prostaglandin.  Peningkatan  prostaglandin merangsang  saraf  nyeri  dan  meningkatkan
respon  inflamasi.  Kerusakan  jaringan  terjadi ketika  bekuan  darah  terbentuk,  diikuti  fase inflamasi  pada  hari  ke  1-3,  fase  proliferasi pada hari ke 3-7 dan remodelling pada hari ke 7-14  pasca  cidera.  [8]  Berdasarkan  hasil pengukuran  ekspresi  enzim  COX-2,  ekstrak daun  trembesi  100  mg  konsentrasi  12% memberikan  efek  penghambatan  ekspresi enzim COX-2 dibandingkan kelompok perlakuan  dosis  200  mg    dan  kelompok kontrol negatif CMC Na. [9] Kapabilitas  dalam  menghalangi  aktivasi NFkB menghaalangi sintesis IL-1 dan TNF- α sehingga menyebabkan berkuranganya stimulasi fosfolipid pada membran penyembuhan  luka,  kemudian  menyebabkan asam arakhidonat melekat pada membran sel fosfolipid akibat aktivasi fosfolipase.
Menurunnya  sintesis  protein  COX-2  serta biosintesis  prostaglandin,  dapat  mengurangi respon  keradangan.  Penelitian  terdahulu menunjukkan  bahwa  flavanoid  yang  berasal dari ekstrak daun trembesi bersifat antioksidan.  Mengurangi  peradangan  pada area  yang  tidak  terjadi  vasodilatasi  dan peninggian  permeabilitas  kapiler,  sehingga aktivasi  C5a  gagal  dan  menghambat  adhesi neutrofil, sehingga dapat mengurangi migrasi neutrofil masuk ke jaringan, dan menyebabkan penurunan inflamasi. [10] [11]
Imunohistokimia merupakan teknik pewarnaan  histologis  yang  memungkinkan
deteksi  antigen  jaringan  (marker)  dalam sampel menggunakan prinsip interaksi antigen-antibodi  yang  spesifik.  Ekspresi enzim  meningkat  dan  bervariasi  pada  setiap kelompok.  Pada  uji  Kruskal-Wallis  diamati dengan mengetahui efek antiinflamasi ekstrak daun  trembesi  terhadap  ekspresi  enzim siklooksigenase-2  (COX-2).  Pada  uji  Mann Whitney  diketahui  bahwa  pada  ketiga perlakuan  kedua  sampel  terdapat  perbedaan yang  signifikan.  Hasil  analisis  konsisten dengan  pengaruh  ekstrak  daun  trembesi sebagai antiinflamasi terhadap ekspresi enzim siklooksigenase-2 (COX-2). [12]
Ekstrak daun trembesi membantu mengurangi peradangan sebesar 12% karena mengandung senyawa flavonoid. Efek antiinflamasi ekstrak daun  trembesi  mengganggu  pembentukan fosfolipid  asam  arakidonat  dan  mengurangi produksi  metabolit  inflamasi.  [13]  Hasil penelitian lain menunjukkan bahwa flavonoid memiliki sifat antioksidan tinggi dan memberi efek antiinflamasi pada peradangan kronis. [6] Senyawa steroid pada daun trembesi mempunyai aktivitas antioksidan, menghambat enzim fosfolipase dan mempengaruhi enzim siklooksigenase-2 (COX-2). Kandungan antioksidan yang tinggi serta  kadar  flavonoid  dari  ekstrak  daun trembesi  memberi  efek  antiinflamasi  dengan mempengaruhi  siklooksigenase-2  (COX-2) sehingga  mediator  inflamasi  terhambat.  [7]
Hasil  penelitian  ini  membuktikan  bahwa ekstrak  daun  trembesi  ( Samanea  saman (Jacq.) (Merr.) mempunyai pengaruh terhadap penurunan inflamasi terhadap enzim siklooksigenase-2 (COX-2).

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan  yang  dapat  diambil  dari penelitian  ini  adalah  ekstrak  daun  trembesi mempunyai  efek  pada  penurunan  inflamasi terhadap  enzim  siklooksigenase-2  (COX-2). Penelitian  untuk  menguji  toksisitas  ekstrak daun trembesi (Samanea Saman (Jacq.) Merr.) perlu  dilakukan  untuk  menguji  keamanan penggunaan ekstrak daun trembesi (Samanea Saman (Jacq.) Merr.) sebagai alternatif terapi sebagai antiinflamasi.

## V. UCAPAN TERIMA KASIH
Penelitian ini dapat dilaksanakan dengan  baik  berkat  bantuan  dari  berbagai pihak,  untuk  itu  peneliti  mengucapkan terimakasih  kepada  DPASR  Institut  Ilmu Kesehatan Bhakti Wiyata, Universitas Airlangga  dan  seluruh  rekan  peneliti  yang telah turut berkontribusi dalam penelitian ini. Kolaborasi  yang  erat  antara  kami  telah membuka  pintu  pemahaman  yang  lebih mendalam terhadap topik yang kami teliti.

## DAFTAR PUSTAKA
[1] V.  Kumar,  A.  Abbas  and  J.  Aster,
Robbins Basic Pathology,
Philadelphia: Elsevier, 2015.
[2] E. Sukanti, "Pengaruh Status Kebersihan
Gigi  dan  Mulut  (OHI-S2017. terhadap Status Gingiva (GI) pada Siswa SMP
PSM Kota
Bukittinggi," Menara  Ilmu, vol.
11, no. 74, pp. 77-82, 2017.
[3] R. Panettieri, D. Schaafsma, Y. Amrani, C.  Koziol-White,  R.  Ostrom  and O.  Tliba,  "Non-Genomic  Effects Of  Glucocorticoids:  An  Updated
View," Trends In Pharmacological  Sciences, vol.
40, no. 1, pp. 38-49, 2019.
[4] A.  Sari,  Erba  and  Vidya,  "Ekstraksi Flavonoid dari Temu Ireng (Curcuma  Aeruginosa  Roxb)  dan Aplikasinya Pada Sabun Transparan," Jurnal Konversi, vol.
5, no. 1, p. 18, 2016.
[5] S. Maleki, J. Crespo and B. Cabanillas, "Anti-  Inflammatory  Effects  Of Flavonoids," Food Chemistry, vol.
30, no. 299, p. 125124, 2019.
[6] M. Sajid, M. Khan, S. Shah, M. Majid, H.  Ismail  and  S.  Maryam,  "
Investigations On Anti-
Inflammatory And Analgesic Activities  Of  Alnus  Nitida  Spach (Endl)  Stem  Bark  in  Sprague Dawley Rats," Journal of Ethnopharmacology, vol. 198, no.
407-16, p. 23, 2017.
[7] I.  Ifora,  B.  Sintia  and  Y.  Srangenge,
"Pengaruh  Penghambatan  Enzim Siklooksigenase-2  dan  Aktivitas Antiinflamasi  dari  Ekstrk  Daun
Ketumbar  (Coruandrum  Sativum L.)," Jurnal Kefarmasian
Indonesia, vol.  11,  no.  1,  pp.  17- 24, 2021.
[8] K.  Kharisma,  D.  Wahyuni,  R.  J. Hesturini  and  A.  D.  Lestari, "Aktivitas Analgesik Daun Trembesi (Samanea Saman (Jacq.)
Merr.)," Jurnal Wiyata, vol. 7, no.
2, pp. 130-143, 2020.
[9] T. S. Dewi, N. Puspawati and D. Suarya,
"Keterkaitan Cyclooxygenase
(Cox)-2  Terhadap  Perkembangan Terapi Kanker," Jurnal Kimia, vol.
9, no. 1, pp. 13-19, 2015.
[10] A. Fajrin, "Keterkaitan Cyclooxygenase
(Cox)-2  Terhadap  Perkembangan Terapi  Kanker," Stomatognatic,
vol. 10, no. 1, pp. 6-11, 2013.
[11] E.  Lenselink,  "Role  of  Fibronectin  in
Normal
Wound Healing,"
International Wound Journal, vol.
12, pp. 313-316, 2015. [12] K. R. Pertiwi, "Penerapan Immunohistokimia  pada  Riset Laboratorium Histopatologi: Deteksi Kematian Sel pada Trombus  Koroner  dengan  Teknik Virtual Multipel
Immunohistokimia,"  Universitas Negeri  Yogyakarta,  Yogyakarta, 2015.
[13] R. Tungadi and A. Kadir, "Burn Wound Healing Effect of Trembesi (Samanea  saman)  Leaves  Extract Gel on Rats (Rattus novergicus)," Int J Pharmtech Res, vol. 7, no. 4, 2015.