Efek Pemberian Pelepah Sawit Yang Difermentasi Dengan Prolinas Terhadap Karakteristik Rumen Sapi Perah PFH
Mardalena, S. Syarif dan Akmal
Fakultas Peternakan Universitas Jambi, Kampus Pinang Masak, Jl. Raya Jambi – Ma. Bulian Km 15 Ma.  Jambi 36136  Jambi,
E-mail: lenadjamas@yahoo.co.id

## Intisari
Penelitian  bertujuan    untuk  mengetahui  karakteristik  rumen  sapi  perah  PFH  yang  diberi pelepah sawit setelah difermentasi dengan prolinas (probiotik kulit nenas) secara in-vitro . Penelitian menggunakan  Rancangan  Acak  Lengkap  dengan  4  perlakuan  dan  4  ulangan.  Perlakuan  yang diujikan  terdiri  dari  perlakuan  A:  Pelepah  sawit  tanpa  fermentasi,  B:  Pelepah  sawit  difermentasi dengan prolinas 2,5 % BK, C: Pelepah sawit difermentasi dengan prolinas 5 % BK, D: Pelepah sawit difermentasi dengan prolinas 7,5 % BK. Peubah yang diukur adalah kecernaan bahan kering (KcBK) dan bahan organik (KcBO), kadar N-NH 3. pH,  konsentrasi volatile fatty acid (VFA) total dan parsial dalam rumen sapi perah PFH. Hasil penelitian menunjukkan bahwa pelepah sawit yang difermentasi dengan  prolinas  dengan  konsentrasi  prolinas  2,5%  BK  menunjukkan  hasil  terbaik  dalam meningkatkan kecernaan dan konsentrasi VFA total dalam rumen sapi perah
Kata kunci: Pelepah sawit, prolinas, karakteristik,rumen dan sapi perah.

## Abstract
The study aimed to determine the effect of prolinas (pineapple skin probiotics) on the rumen fluid characteristic of dairy cows through in vitro method. A Completely Randomized Design with 4 treatments  and  4  replications  was  applied .  The  treatments  consist  of  A:  oil  palm  fronds  without fermentation  (control),  B:  oil  palm  fronds  fermented  with prolinas of  2.5%  dry  matter  (DM),  C:  oil palm fronds fermented with prolinas of 5% DM, D: oil palm fronds fermented  with prolinas of 7.5% DM.  Parameters  measured  were  dry  matter  digestibility  (DMD)  and  organic  materials  digestibility, N-NH 3 , rumen pH, concentration of volatile fatty acid in the rumen. The results showed that oil palm fronds fermented with prolinas with concentration of 5% DM was the best results in improving DMD and total VFA concentration in  the rumen of dairy cows.
Keywords : Oil palm fronds, prolinas, characteristics, rumen and dairy cow

## Pendahuluan
Pakan  ternak  adalah  persoalan mendasar  yang  perlu  ditangani pemerintah.  Selama  ini  belum  ada teknologi  pakan  yang  disikapi  secara serius. Mengandalkan rumput sebagai pakan  ternak  sapi  pada  kondisi sekarang, sudah tidak memungkinkan lagi.  Ketersediaan lahan yang semakin
berkurang  dan  juga    pengaruh  iklim menyebabkan  kuantitas  dan  kualitas hijauan yang ada menjadi tidak stabil. Kualitas  pakan  yang  stabil  sangat berperan  dalam  mempertahankan produktivitas  sapi  perah.  Untuk mengatasi  hal  tersebut  perlu  dicari pakan  in  konvensional  yang  tersedia dalam jumlah cukup banyak
sepanjang  tahun.    Salah  satu  bahan pakan yang potensial untuk itu adalah pelepah sawit yang merupakan limbah dari perkebunan kelapa sawit.
Pelepah sawit berdasarkan penelitian  Mathius et  al. (2005),  satu hektar lahan dengan 130 pohon kelapa sawit  bisa  didapat  20.020  kg  pelepah segar/tahun  atau  6400-7500  pelepah pertahun.  Satu  pelepah  sawit  akan menghasilkan  3,3  kg  daun  sawit. Semua  limbah  sawit  mempunyai potensi  nutrisi  yang  memungkinkan digunakan  sebagai  pakan  serat  yaitu kandungan gizinya terdiri dari protein  kasar  5-  7  %,    serat  kasar  40- 50%  dan  TDN  30-40  %.    Hasil penelitian Syarif (2010) bahwa pelepah sawit  dapat  mengganti  rumput rumput  lapang  sampai  taraf  50% karena mampu meningkatkan kecernaan    protein,  NDF  dan  ADF dalam rumen sapi potong . Selanjutnya  Darlis  dan  Syarif  (2011) mendapatkan
bahwa kombinasi rumput dengan pelepah sawit memberikan pertambahan bobot badan,  efisiensi  ransum  yang  lebih baik  dibandingkan  dengan  pemberian rumput  saja.  Penggunaan  pelepah sawit  tidak  bisa  sampai  taraf  100% karena    limbah  sawit  sebagaimana limbah  lainnya  mengandung  faktor pembatas  kecernaan  yaitu  kandungan lignin yang cukup tinggi.  Lignin yang berikatan dengan selulosa menyebabkan  selulosa  tidak  bisa dimanfaatkan  oleh  ternak  sehingga memerlukan pengolahan terlebih dahulu . Pengolahan  pakan  serat sudah  banyak  dilakukan  diantaranya pengolahan  secara  kimia  melalui amoniasi  dan  pengolahan  secara biologis  melalui  fermentasi.    Kedua teknik pengolahan ini terbukti mampu
memperbaili  kualitas  pakan  serat (Ningrat dan Khasrad, 2010).
Pengolahan  secara  biologis menggunakan  bakteri  asam  laktat (BAL)  sebagai  probiotik  memiliki peranan  penting  dalam  kehidupan ternak  dan  manusia,  baik  melalui keterlibatannya pada fermentasi makanan  maupun  kemampuannya tumbuh  pada  jalur intestine .  Melalui teknik  fermentasi  bakteri  asam  laktat terhadap  pakan  ternak,  akan  dapat meningkatkan  mutu  pakan  dan memiliki  daya  simpan  yang  cukup lama.  Fermentasi  BAL  dapat  juga meningkatkan  aroma  pakan,  sehingga menambah  nafsu  makan  ternak.  BAL selain  memiliki  sifat  antimikroba, beberapa spesies BAL  memiliki enzim BSH  ( Bile  Salt  Hidrolase )  yaitu  enzim yang  berfungsi  mendegredasi  lemak jenuh  menjadi  lemak  tak  jenuh, sehingga produk ternak yang dihasilkan  akan  rendah  kolesterol (Urnemi. 2012).
Prolinas adalah produk probiotik yang berasal dari kulit nenas setelah  melalui  serangkaian  uji  coba untuk bisa dikatakan sebagai probiotik.  Hasil  identifikasi  molekuler hasil  isolasi  kulit  nenas  ditemukan bakteri asam laktat L. Plantarum dan L. Pentosus (Mardalena et  al .,  2015). Untuk  mengoptimalkan  pemanfaatan pakan  serat  berkualitas  rendah  yang dikandung  limbah  sawit,  perlu teknologi  fermentasi  dengan  prolinas. Teknologi fermentasi dipandang sebagai  langkah  yang  strategis  dalam meningkatkan kualitas ransum karena probiotik dapat meningkatkan kualitas pakan  dan  pakan  dapat  disimpan dalam  waktu  yang  relatif  lama  lama. Menurut  Haryanto et  al .,  1998) penggunaan  probiotik  pada  ternak ruminansia dapat meningkatkan
produksi susu sapi perah, pertambahan  bobot  hidup,  dan efisiensi  pakan  pada  penggemukan sapi  potong.  Penggunaan  probiotik  di Indonesia  dilaporkan  juga  dapat memberikan pengaruh positif terhadap ternak ruminansia

## Metode Penelitian
Penelitian  ini  dilakukan  di Laboratorium  Nutrisi  Ternak  Fakultas Peternakan  Institut  Pertanian  Bogor. Analisis  proksimat  sample  pelepah sawit fermentasi dilakukan di
Laboratoriun  Nutrisi  dan  Makanan Ternak
Fakultas
Peternakan
Universitas Jambi

## Bahan dan Peralatan
Bahan  yang  dibutuhkan  untuk uji KcBK dan KcBO antara lain larutan HgCl2,  kertas  saring,  dan  aquadest. Bahan  yang  dibutuhkan  untuk  uji NH3  antara  lain  asam  borat,  Na2CO3 jenuh, dan H2SO4 0,005N. Bahan yang digunakan  untuk  uji  VFA  antara  lain NaOH  0,5N,  HCl  0,5N  dan  H2SO4 15%.  Pengukuran  produksi  gas  total diperlukan  bahan  sebagai  berikut, larutan  mikro  mineral  (CaCl 2 .2H 2 O, MnCl 2 .4H 2 O, CoCl 2 .6H 2 O dan FeCl 3 .6H 2 O),  larutan  buffer  rumen (NH 4 HCO 3 dan  NaHCO 3 ),  larutan makro (NaHPO 4 , KH 2 PO 4 dan MgSO 4 .7H 2 O),  larutan  resazurin  0,1% dan larutan pereduksi (NaOH 1N dan NaS.9H 2 O)  dan  cairan  rumen  sapi perah.
Peralatan yang digunakan dalam penelitian ini antara lain neraca analitik,  eksikator,  syringe  glass Hohenheim  100  ml,  tabung  gas  CO 2 , termos,  kain  penyaring,  waterbath, cawan  Conway,  sentrifus,  pompa vakum, labu penyuling, labu Erlenmeyer, oven 105ºC, tanur, gegep,
sudip,  magnetic  stirrer,  destilator, buret,  kondensor,  tabung  fermentor, tutup karet, pipet volumetik, bulp dan cawan porselen.
Penelitian bertujuan untuk mendapatkan dosis prolinas (probiotik kulit nenas) terbaik dalam memfermentasi  pelepah  sawit  secara in-vitro (Metode Tilley and Terry, 1969) guna meningkatkan proses  fermentasi dalam rumen. Rumen yang digunakan  adalah  rumen  sapi  perah yang  didapatkan  dari  Rumah  Potong Hewan.  Penentuan  dosis  Prolinas mengacu  pada  Urnemi  (2012).  Materi utama yang digunakan adalah pelepah kelapa sawit sebagai substrat, prolinas, sumber  karbohidrat  terlarut  yaitu bekatul,  dan  jagung  giling.  Bahan tambahan  yang  digunakan  adalah urea dan molases.

## Metode Penelitian
Percobaan disusun menggunakan    Rancangan  Acak Lengkap  dengan  4  perlakuan  dan  4 ulangan.  Penelitian  bertujuan  untuk mengetahui  konsentrasi  probiotik untuk  memfermentasi  pelepah  sawit terbaik dalam uji in-viro dengan level konsentrasi prolinas yang terdiri dari 4 perlakuan yaitu :
A1: Pelepah sawit tanpa fermentasi (kontrol)
A2 : Prolinas 2,5 % g BK A3 : Prolinas 5 % g BK A4 : Prolinas 7,5 % g BK Peubah yang diukur:
1. Kecernaan Bahan kering (KcBK) dan Bahan Organik (KcBO)
2. Kadar  N-NH 3. dengan    teknik Mikrodifusi  Conway (General Laboratory Procedure, 1966 ) . 3. pH dengan pHmeter
4. Konsentrasi  Volatile  Fatty  Acid (VFA) total dan parsial (General Laboratory Procedure, 1966 ).

## Analisis  Statistik
Data  dianalisis  dengan  Anova satu  arah  dengan  menggunakan program  SAS  (2007).  Perbedaan  antar perlakuan  diuji  menggunakan  uji lanjut Duncan Multiple Range Test

## Hasil dan Pembahasan
1. Kecernaan  Bahan  kering  dan Bahan Organik
Kecernaan bahan kering pada ruminansia  menunjukkan  tingginya zat  makanan  yang  dapat  dicerna  oleh mikroba  dan  enzim  pencernaan  pada rumen.  Semakin  tinggi  persentase kecernaan  bahan  kering  suatu  bahan pakan,  menunjukkan  bahwa  semakin tinggi  pula  kualitas  bahan  pakan tersebut.  Kecernaan  yang  mempunyai nilai  tinggi  mencerminkan  besarnya sumbangan  nutrien  tertentu  pada ternak,  sementara  itu  pakan  yang mempunyai kecernaan rendah menunjukkan  bahwa  pakan  tersebut kurang  mampu  menyuplai  nutrien untuk  hidup  pokok  maupun  untuk tujuan  produksi  ternak  (Yusmadi, 2008).  Rataan  nilai  koefisien  cerna bahan  kering    dan  bahan  organik pelepah  sawit  yang  difermentasi dengan probiotik kulit nenas
(prolinas)  dapat  dilihat  pada  Tabel  1. Hasil  analisis  statistik  menunjukkan bahwa pengaruh perlakuan fermentasi pelepah  sawit  dengan  prolinas  nyata (P<0.05) berpengaruh terhadap kecernaan  bahan  kering  tetapi  tidak nyata  (P>0,05)  terhadap  kecernaan bahan organik.
Hasil  uji  lanjut  menunjukkan bahwa kecernaan bahan kering dalam rumen sapi perah pada  perlakuan P1, P2  dan  P3  nyata  <  0,05  lebih  tinggi dibanding  kontrol  (P0).  Diantara semua  perlakuan,  ternyata  perlakuan P3 (dosis prolinas 7,5%) menghasilkan nilai  koefisien  cerna  tertinggi  yaitu terjadi  peningkatan  sebesar  17,41% dibanding kontrol. Menurut  Harjanto (2005) bahwa semakin banyak mikrobia  yang  terdapat  dalam  rumen maka  jumlah  pakan  tercerna  akan semakin tinggi pula.
Menurut Arora (1989) pemberian  pakan  dengan  probiotik menyebabkan mikroba dalam probiotik  dapat  merombak  ikatan lignin  dan  serat  kasar  (selulosa  dan hemiselulosa)  didalam  rumen.  Lignin itu sendiri dapat mengurangi kecernaan melalui pembentukan ikatan  hidrogen  dengan  selulosa  dan hemiselulosa yang membatasi aktivitas enzim selulase untuk mencerna serat kasar.        Hasil penelitian menunjukkan bahwa besaran nilai kecernaan bahan Tabel 1.  Rataan Koefisien Cerna Bahan Kering dan Bahan Organik Pelepah Sawit Fermentasi (%) Parameter Perlakuan SEM P-Value P0 P1 P2 P3 KcBK 28,11 b 32,42 a 33,47 a 34,04 a 2,19 25,5 KcBO 28,63 31,28 29,78 31,69 1,98 1,16
Keterangan : Nilai dengan superskrip yang berbeda pada baris yang sama menunjukan  berbeda nyata (P<0,05).
kering  (Tabel  1)  relatif  sama  dengan nilai  kecernaan  bahan  organik.  Hasil ini  tidak  sesuai  dengan  pendapat Menurut  Fathul  dan  Wajizah ., (2010) nilai  kecernaan  bahan  organik  lebih tinggi dibanding dengan nilai kecernaan  bahan  kering,  hal  ini disebabkan karena pada bahan kering masih  terdapat  kandungan  abu, sedangkan  pada  bahan  organik  tidak mengandung  abu,  sehingga  bahan tanpa  kandungan  abu  relatif  lebih mudah  dicerna.    Kandungan  abu memperlambat  atau  menghambat tercernanya  bahan  kering  ransum. Peningkatan kecernaan bahan organik dikarenakan  kecernaan  bahan  kering juga  meningkat.  Adanya  peningkatan kandungan protein kasar akan menyebabkan  meningkatnya  aktivitas mikrobia  rumen,  digesti  terhadap bahan organik.
2. Volatil Vatty Acid (VFA), pH dan NH 3
Asam  lemak  mudah  terbang atau  volatile  fatty  acids  (VFA) merupakan  produk  utama  fermentasi mikroba  rumen.  Produksi  VFA mencerminkan  fermen-tabilitas  pakan dan  merupakan  sumber  energi  utama bagi  ternak.  VFA  merupakan  produk akhir dari fermentasi nutrien, khususnya  protein  dan  karbohidrat (Van Houtert, 1993).
Rataan nilai VFA, pH dan NH 3 pelepah  sawit  yang  difermentasi dengan probiotik kulit nenas (prolinas)  dapat  dilihat  pada  Tabel  2. Hasil  analisis  statistik  menunjukkan bahwa pengaruh perlakuan fermentasi pelepah  sawit  dengan  prolinas  nyata (P<0.05)  berpengaruh  terhadap  VFA total  tetapi  tidak  nyata  (P>0,05) berpengaruh terhadap pH dan  NH 3.
Hasil  uji  lanjut  menunjukkan bahwa konsentrasi VFA dalam rumen sapi perah  pada perlakuan P1, P2 dan P3 nyata < 0,05 lebih tinggi dibanding kontrol (P0). Diantara semua perlakuan,  ternyata  perlakuan  P3 (dosis  prolinas  7,5%)  menghasilkan nilai  VFA  tertinggi  yaitu  terjadi peningkatan sebesar 29,45% dibanding kontrol.
Peningkatan jumlah VFA
menunjukkan  mudah  atau  tidaknya pakan  tersebut  difermentasi  oleh mikroba  rumen  (karbohidrat  dan protein  terlarut).  Jika  protein  dalam pakan memiliki kelarutan yang tinggi, maka protein tersebut akan mengalami  fermentasi  dalam  rumen dan  menghasilkan  VFA  dan  amonia. Di  lain  pihak,  jika  protein  dalam pakan  memiliki  tingkat  kelarutan rendah,  maka  protein  tersebut  relatif
Tabel 2.  Rataan  VFA ( Volatil Vatty Acid ), pH dan  NH 3 Pelepah Sawit Fermentasi Parameter Perlakuan SEM P-Value P 0 P 1 P 2 P 3 VFA Total (mM) 67,97 b 89,25 a 88,77 a 90,70 a 13.57 7.01 pH 7,10 7,11 7,09 7,10 0.095 0.02 NH 3 14,64 14,84 14,88 17,76 5.22 0.30
Keterangan  :  Nilai  dengan  superskrip  yang  berbeda  pada  baris  yang  sama  menunjukan  berbeda nyata (P<0,05).
tidak  mengalami  perubahan ketika  melalui  rumen  (by  pass) (Widiawati dan Thalib,2008).
Nilai pH rumen hasil penelitian ini rata-rata 7,1 diatas kisaran menurut Nagaraja dan Titgemeyert (2007) yang melaporkan bahwa pH rumen umumnya  lebih  tinggi  dari  5,5  dan sering dalam kisaran 5,8-6,5 pada sapi. Tingginya  pH  disebabkan  pakan hanya  berupa  pelepah  sawit  tanpa konsentrat.  Calsamiglia et  al .  (2008) menjelaskan  bahwa  terjadinya  pH rumen  rendah  karena  terbentuk  asam asam  lemak  hasil  fermentasi  ransum yang kaya konsentrat secara cepat.
Prihandono  (2001)  menyatakan bahwa konsentrasi amonia mencerminkan jumlah protein ransum yang  banyak  di  dalam  rumen  dan nilainya  sangat  dipengaruhi  oleh kemampuan  mikroba  rumen  dalam mendegradasi protein ransum. Menurut Sutardi (2003) konsentrasi N- NH3  optimal  untuk  kebutuhan mikroba  berkisar  antara  4.08  –  8.09 mM.  Amonia  (NH3)  merupakan produk utama hasil fermentasi protein pakan  di  dalam  rumen  oleh  mikroba rumen, dimana semakin tinggi konsentrasi  NH3  semakin  tinggi protein  pakan  mengalami  fermentasi di  dalam  rumen.  Konsentrasi  amonia dalam  rumen  ikut  menentukan efisiensi  sintesa  protein  mikroba  yang akhirnya mempengaruhi hasil fermentasi  bahan  organik  pakan berupa  asam  lemak  mudah  terbang (VFA)  yang  merupakan  sumber energy  utama  bagi  ternak  (Haryanto, 2004).

## Kesimpulan
Dari  hasil  penelitian  dapat disimpulkan bahwa menunjukan bahwa prolinas dengan dosis 7,5% BK
mampu meningkatkan kecernaan bahan  kering  dan  VFA  total  pelepah sawit di dalam rumen sapi perah.

## Ucapan Terima Kasih
Penulis  mengucapkan  terima kasih  kepada  Direktorat  Jenderal Penelitian  dan  Pengabdian    kepada Masyarakat, Kementerian
Riset, Tekhnologi  dan  DIKTI  yang  telah menyediakan dana program
penelitian  Hibah    Bersaing  Tahun  I dibiayai  oleh  DIPA  UNJA/DIPA DP2M dengan No. Kontrak 37/UN21.6/PL/2015  Tanggal    03 Maret  2015  Sesuai  dengan  Perjanjian Pelaksanaan  Hibah  Bersaing  No: 103/UN21/PL/2015 Tanggal 27 Maret 2015

## Daftar pustaka
Arora, S.P. 1989 . Pencernaan Mikroba Pada  Ruminansia  Srigondo,  B (ed).  Yogyakarta:  Gajah  Mada University Press.
Darlis dan S. Suhessy. .2011. Pengaruh
Penggunaan  Pelepah  Sawit
Terhadap  Pertumbuhan  Sapi Bali.
Prosiding Seminar Nasional Vol.3. Fakultas
Pertanian Universitas Sriwijaya. Elseed,  F.,    A.M.A,  Rania,  M.A.
Abusamra.  2007.  Effects  of Supplemental Yeast (Saccharomyces cerevisiae)
Culture  on  NDF  Digestibility and  Rumen  Fermentation  of Forage Sorghum Hay in Nubian Goat’s  Kids.  Res.  J.  Agric.  & Biol. Sci., 3(3): 133-137.
Fathul,  F.,  &  S.  Wajizah.  2010.  Penam bahan mikromineral Mn dan Cu dalam ransum terhadap aktivitas  biofermentasi  rumen
domba  secara in vitro . JITV .
15(1): 9-15.
Giger-Reverdin,  S.,  D.  Sauvant,  J. Tessier, G.Bertin,
P. and Morand-Fehr,  2004.  Effect  of live yeast culture supplementation  on  rumen fermentation  in  lactating  dairy goats.  S.  Afri.  J.  Anim.  Sci.,  34: 89-91.
Haddad,  S.G.,  S.N.  Goussous,  2005.
Effect of yeast culture supplementation  on  nutrient intake,  digestibility  and  growth performance  of  Awassi  lambs. Anim.  Feed  Sci.  Technol.,  118: 343-348.
Harjanto,
K. 2005. Pengaruh
Penambahan  Probiotik  Bio  H+ Terhadap  Kecernaan  Bahan Kering  dan  Bahan  Organik Ransum Sapi PFH Jantan. (tidak dipublikasi).  Fakultas  Pertanian UNS. Surakarta Haryanto, B. Supriyati, & S.N. Jarmani.
2004.  Pemanfaatan  probiotik dalam bioproses untuk meningkatkan nilai nutrisi jerami  padi  untuk  pakan domba. : Pros.Seminar Nasional Teknologi Peternakan dan Veteriner.  Bogor,  4-5  Agustus 2004.  Puslitbang  Peternakan, Bogor. hlm. 298-304 Lesmeister,  K.E.  A.J.  Heinrichs,  and M.T.  Gabler,  2004.    Effects  of supplemental
yeast
( Saccharomyces cerevisiae ) culture on rumen development, growth characteristics, and blood parameters  in  neonatal  dairy calves.  J.  Dairy  Sci.,  87:  1832- 1839.
Mathius,  L.W.,  A  .P  .  Sinurat,  D. Sitompul,  B  .P  .  Manurung  dan Azmi.  2005  .  Pemanfaatan
produk  fermentasi  lumpur- bungkil  sebagai  bahan  pakan sapi  potong  .  Dalam:  Prosiding Seminar  Nasional  Teknologi Peternakan  dan  Veteriner  . Bogor.
Nagaraja,  T.G.  and  E.C.  Titgemeyert. 2007. Ruminal acidosis in  beef cattle: the current microbiological and
nutritional  outlook.  J.  Dairy. Sci. 90: 17-38.
Ningrat,  RWS  and  Khasrad,  2010. Improving  carcass  quality  of indigenous  cattle  of  West Sumatera fed local feed resources.  Pakistan  Journal  of Nutrition. 9(8): 822-826.
Prihardono,
R. 2001. Pengaruh Suplementasi Probiotik Bioplus, Lisinat  Zn  dan  Minyak  Man Lemuru Terhadap Tingkat Penggunaan Pakan dan Produk Fermentasi  Rumen  Domba. (tidak  dipublikasi).  Jurusan Ilmu  Nutrisi  dan  Makanan Ternak,  Fakultas  Petemakan Institut Pertanian Bogor SAS.  2007.  SAS/STAT  User’s  Guide (Release 9.1.3 Ed.). SAS Institute Incorporation Cary. North Carolina.
Syarif.,  S.  2010.  Kecernaan  In  Vitro Ransum  Yang  Mengandung Pelepah  Sawit  (Digestibility Value  of  Diet  Wich  Included Palm  of  Frond/POF).  Jurnal Embrio  2 (3) : 41 – 48.
Tilley, J. M. , and  R. A. Terry.  1969.  A two  stage  technique  for in vitro digestion  of  forage  crops.J.  Br. Grassland  Society  18  (2):  104  – 111.
Urnemi.  2012.  Isolasi,  penentuan antimikrobial  dan  karakterisasi molekuler  bakteri  asam  laktat
dari  fermnetasi  biji  kakao ( Theobroma  cacao  Lin )  asal Sumatera Barat dan aplikasinya untuk  menunjang  kesehatan masyarakat. Disertasi Universitas Andalas Padang. Van  Houtert,  M.J.F.  1993.  The production  and  metabolism  of volatile fatty acids by ruminants fed  roughages.  Animal  Feed Science Technology. Vol. 43:189. Widiawati,  Y.  dan    A.  Thalib.  2007. Comparison fermentation kinetics  (in  vitro)  of  grass  and shrub  legume  leaves:  The pattern  of  VFA  concentration, estimated  CH4  and  microbial biomass  production.  JITV  12(2): 96-104. Yusmadi.  2008.  Kajian  mutu  dan palatabilitas  silase  dan  hay ransum komplit berbasis sampah  organik  primer  pada kambing  PE.  [Tesis].  Bogor: Program  Pascasarjana,  Institut Pertanian Bogor.