## Uji Aktivitas Antibakteri Pada  Ekstrak Etanolik Teripang Kering Dari Ujung Pangkah Gresik
M. Ainul Mahbubillah (1, Ca*), Putri Ayu Ika Setiyowati (2), Muhammad Badrut Tamam (3), Fika Nur Fitriana Putri Bukhori (4)
Program Studi S1 Biologi Fakultas Sains, Teknologi dan Pendidikan Universitas Muhammadiyah Lamongan
ainul.mahbubillah@hotmail.com (1, Ca*), putriayuikasetiyowati@gmail.com (2), mh.badruttamam@gmail.com (3), fikanurfitriana02@gmail.com (4)

## ABSTRAK
Teripang  merupakan  sub  sektor  perikanan  yang  potensial  namun  pemanfaatannya  masih  kurang  popular karena  bentuk  fisik  yang  kurang  disukai.  Namun  dari  bentuk  yang  tidak  disukai  tersebut,  teripang mengandung  banyak  manfaat  sebagai  nutrisi  dan  pengobatan,  termasuk  adanya  aktivitas  antimikroba. Pemanfaatan teripang sebagai nutrisi ini dimanfaatkan oleh masyarakat desa Ujung Pangkah Gresik sebagai kerupuk. Penelitian ini bertujuan membuktikan potensi antimikroba pada teripang kering bahan kerupuk dari desa Ujung Pangkah Gresik. Teripang telah direbus terlebih dahulu sebelum dilakukan pengeringan di bawah sinar  matahari. Teripang kering diblender kemudian dilakukan ekstraksi  menggunakan etanol 96%. Ekstrak kemudian disterilisasi dengan filtrasi menggunakan filter PTFE 0,2 µm. Ekstrak diuji menggunakan metode Kirby-Bauer  pada  medium  Mueller-Hinton  Agar  yang  diinokulasi  dengan Bacillus  subtilis , Staphylococcus aureus , Escherichia  coli , Pseudomonas  aeruginosa , Salmonella  typhimurium , Burkholderia  cepacia ,  dan khamir Candida  albicans .  Kontrol  antibiotik  tetrasiklin  30  µg/ml  dan  antifungal  flukonazol  2,5  µg/ml digunakan sebagai pembanding. Hasil dari penelitian ini didapatkan bahwa seluruh ekstrak etanolik teripang kering  dengan  konsentrasi  5%,  10%,  dan  15%  tidak  menunjukkan  zona  bening.  Sedangkan  zona  bening ditunjukkan pada kontrol tetrasiklin dan flukonazol. Hal ini disebabkan oleh hilangnya aktivitas antimikroba pada  ekstrak  etanolik  teripang  kering  yang  berasal  dari  peptida  antimikroba  yang  rusak  karena  adanya pemanasan saat perebusan .
Kata Kunci : Antimikroba, Ekstrak Etanolik, Teripang

## ABSTRACT
Sea cucumber is a potential fishery sub-sector, but its use still not popular because of its unfavorable physical form. However, from its unfavorable form, sea cucumbers contain many benefits as nutrition and medicine, including the presence of antimicrobial activity. The use of sea cucumbers as a nutrient is used by the people of Ujung Pangkah Gresik village as crackers. This study aims to prove the antimicrobial potential of dried sea cucumbers  with  crackers  from  Ujung  Pangkah  village,  Gresik.  The  sea  cucumbers  have  been  boiled  first before drying in the sun. The dried sea cucumbers were blended and then extracted using 96% ethanol. The extract was then sterilized by filtration using a 0.2 m PTFE filter. Extracts were tested using the Kirby-Bauer method  on  Mueller-Hinton  Agar  medium  inoculated  with Bacillus  subtilis , Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli , Pseudomonas  aeruginosa , Salmonella  typhimurium , Burkholderia  cepacia ,  and  yeast Candida  albicans .  The  control  antibiotic  tetracycline  30  µg/ml  and  antifungal  2,5  µg/ml  fluconazole  were used  as  comparisons.  The  results  of  this  study  showed  that  all  ethanolic  extracts  of  dry  sea  cucumber  with concentrations  of  5%,  10%,  and  15%  did  not  show  any  clear  zone. While  the  clear  zone  was  shown  in  the control of tetracycline and fluconazole. This was caused by the loss of antimicrobial activity in the ethanolic extract of dried sea cucumbers derived from antimicrobial peptides which were damaged by heating during boiling process.
Keywords : Antimicrobial, Ethanolic Extract, Sea Cucumber.

## I. PENDAHULUAN

## 1. Latar Belakang
Sektor  perikanan  merupakan  salah  satu  komoditas  ekspor  yang  potensial,  salah  satu  sub sektornya adalah teripang (Utami and Indrayani, 2018). Pemanfaatan teripang di Indonesia sebagai  bahan  pangan  tergolong  rendah  dan  kurang  populer  dibanding  produk  perikanan lainnya,  disebabkan  teripang  memiliki  bentuk  fisik  yang  kurang  disukai.  Namun  dalam bentuk  yang  tidak  disukai  itu,  teripang  mengandung  nutrisi  yang  sangat  tinggi,  seperti protein, kalsium  dan kolagen  (Syamsulina  et  al.,  2012). Selain berpotensi  sebagai  nutrisi, teripang  juga  sejak  lama  dikenal  memiliki  potensi  pengobatan.  Beberapa  penelitian menunjukkan bahwa teripang dapat memberikan akivitas antikoagulan (Chen et al., 2012), antioksidan (Liu et al., 2012), antihipertensi (Vishkaei et al., 2016), antitumor (Zhang and Zhu,  2017),  antikanker  (Wargasetia  et  al.,  2018),  dan  antimikroba  (Shakouri  et  al.,  2017; Wang  et  al.,  2012).  Aktivitas  antimikrobia  terhadap  bakteria  dan  fungi  telah  banyak dibuktikan  pada  beberapa  penelitian.  Ekstrak  teripang  dapat  menimbulkan  zona  bening pada pertumbuhan Pseudomonas aeruginosa (Sukmiwati et al., 2020), Streptococcus spp. (Kiani  et  al.,  2014), Escherichia  coli ,  dan Candida  albicans (Shakouri  et  al.,  2017).
Aktivitas  antimikroba  ini  disebabkan  karena  kandungan  terpenoid,  saponin,  dan  fenol (Sukmiwati et al., 2020) dan peptida antimikroba (Fern et al., 2013; Xue et al., 2015) pada teripang.  Komoditas  teripang  di  desa  Ujung  Pangkah  Kabupaten  Gresik  merupakan komoditas utama selain ikan, kerang, dan udang. Masyarakat memanfaatkan komoditas ini sebagai  kerupuk.  Dalam  persiapan  penyajian,  masyarakat  melakukan  perebusan  dan pengeringan dengan sinar matahari sebelum dilakukan penggorengan pada produk teripang tersebut  (Muniroh  and  Amin,  2020).  Perlu  dilakukan  penelitian  mengenai  potensi antimikroba  pada  produk  teripang  kering  bahan  kerupuk  dari  Ujung  Pangkah  Gresik  ini untuk mengetahui manfaat dari produk teripang kering tersebut.

## 2. Perumusan Masalah
Perumusan masalah pada penelitian ini adalah bagaimana aktivitas antibakteri pada ekstrak etanolik teripang kering dari Ujung Pangkah Gresik

## 3. Tujuan Penelitian
Tujuan  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  mengetahui  aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak etanolik teripang kering dari Ujung Pangkah Gresik terhadap khamir.

## 4. Manfaat Penelitian
Manfaat  dari  penelitian  ini  adalah  untuk  memberikan  gambaran  terhadap  manfaat  dari teripang kering jika digunakan sebagai sumber pangan dalam kaitan aktivitas antimikroba.

## II. METODE Tempat dan Waktu
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada  bulan  November  2021  –  Januari  2022  di  Laboratorium Biologi  dan  Laboratorium  Mikrobiologi,  Program  Studi  S1  Biologi,  Fakultas  Sains, Teknologi dan Pendidikan, Universitas Muhammadiyah Lamongan.

## Bahan dan Peralatan
Alat yang dipakai pada penelitian ini adalah blender, waterbath, botol bersumbat berwarna coklat,  kertas  saring,  cawan  porselen,  oven,  Autoklaf,  kabinet Laminar  Air  Flow (LAF), pinset,  perforator  kertas,  labu  Erlenmeyer,  cawan  Petri,  tabung  reaksi,  gelas  ukur, mikropipet,  pipet  tip,  timbangan  analitik,  kapas  usap  steril,  siring  filter  FTFE  0,2  µm,
inkubator,  dan  jangka  sorong.  Bahan  yang  digunakan  pada  penelitian  ini  adalah  teripang kering,  Etanol  96%,  akuades,  tetrasiklin,  flukonazol,  isolat  bakteri Bacillus  subtilis (Bs), Staphylococcus  aureus (Sa), Escherichia  coli (Ec), Pseudomonas  aeruginosa (Pa), Salmonella  typhimurium (St), Burkholderia  cepacia (Bc),  dan  khamir Candida  albicans (Ca),  media nutrient  agar (NA), potato  dextrose  agar (PDA),  dan  Mueller-Hinton  Agar (MHA).

## Tahapan Penelitian

## Sumber Teripang
Teripang  didapatkan  dari  nelayan  di  Kecamatan  Ujung  Pangkah  Kabupaten  Gresik. Teripang  ditangkap  melalui  perairan  ujung  pangkah  kemudian  dibersihkan  dan  direbus. Selanjutnya teripang dikeringkan di bawah sinar matahari hingga kering.

## Ekstraksi Teripang
Sebanyak  500  g  teripang  kering  dihaluskan  menggunakan  blender  kemudian  dimaserasi selama  24  jam  dalam  1000  ml  etanol  96  %  dengan  menggunakan  botol  bersumbat berwarna  coklat  sambil  sekali-kali  dikocok  selama  6  jam  pertama,  kemudian  dibiarkan selama 72 jam dan disaring. Sejumlah 200 ml filtrat diuapkan hingga kering dalam cawan porselen yang telah dipanaskan dan ditara.

## Preparasi Ekstrak Etanolik Teripang dan Antibiotik
Ekstrak  teripang  ditimbang  masing-masing  0,25  g,  0,5  g,  dan  0,75  g.  Kemudian  masing- masing  dilarutkan  dalam  5  ml  akuades  steril  hingga  diperoleh  konsentrasi  5%,  10%,  dan 15%.  Selain  itu  disiapkan  10  ml  tetrasiklin  30  µg/ml  dan  flukonazol  2,5  µg/ml.  Ekstrak teripang  dan  antibiotik  dilakukan  sterilisasi  dengan  siring  filter  steril  membran  PTFE  0,2 μm.

## Subkultur Isolat Bakteri Patogen
Dengan menggunakan teknik aseptik, isolat bakteri Bs, Sa, Ec, Pa, St, Bc, dan khamir Ca diambil 1 koloni penuh dengan menggunakan jarum ose yang steril dan digoreskan secara penuh pada permukaan media NA steril miring (bakteri) dan PDA steril miring (khamir). Diinkubasi selama 48 jam pada suhu 37 ℃.

## Uji Antimikroba
Isolat  bakteri  dan  khamir  diambil  dengan  menggunakan  kapas  usap  steril.  Diusap  secara merata  pada  masing-masing  cawan  Petri  berisi  media  MHA.  Kertas  saring  berbentuk cakram  diambil  menggunakan  pinset  steril  dan  dicelupkan  pada  masing-masing  larutan ekstrak  teripang  dan  kontrol.  Kertas  saring  ditempelkan  pada  bagian  media  MHA  yang telah  ditandai.  Kultur  diinkubasi  selama  18  jam  dalam  suhu  37  °C.  Pengukuran  pada diameter  kertas  cakram  dan  luas  zona  bening  di  sekitar  kertas  cakram  dilakukan  dengan menggunakan jangka sorong

## III. HASIL
Pengamatan terhadap zona bening yang terbentuk pada ekstrak etanolik teripang 5%, 10%, dan  15%  menunjukkan  tidak  ada  zona  bening  yang  terbentuk  pada  seluruh  isolat  bakteri (Bs,  Sa,  Pa,  Ec,  Bc,  dan  St)  maupun  khamir  (Ca)  (Gambar  1).  Hal  yang  berbeda ditunjukkan  pada  kontrol  antibiotik  tetrasiklin  dan  flukonazol  yang  menunjukkan  adanya zona  bening  pada  seluruh  isolat  bakteri  dan  khamir.  Tidak  adanya  zona  bening  pada kontrol  tanpa  penambahan  ekstrak  etanolik  teripang  maupun  antibiotik  menandakan validitas dari penelitian ini.
Gambar 1 . Grafik Zona bening dari ektrak teripang E1: 5%, E2: 10%, E3: 15% terhadap Bs: Bacillus  subtillis ,  Sa: Staphylococcus  aureus ,  Pa: Pseudomonas aeuriginosa , Ec: Escherichia coli , Bc: Burkholderia cepacia , St: Salmonella typhimurium , dan Ca: Candida albicans . C: Kontrol Negatif, Tc: Tetrasiklin, Fc: Flukonazol.
Zona bening pada kultur mikroorganisme dalam media MHA dengan metode Kirby-Bauer adalah  merupakan  aktivitas  antimikroba  pada  sampel.  Aktivitas  antimikroba  pada  sampel akan  menghambat  pertumbuhan  dari  mikroorganisme  yang  telah  disebarkan  pada permukaan  medium  MHA  di  sekitar  kertas  cakram  (Bauer  et  al.,  1959).  Aktivitas antimikroba  pada  teripang  merupakan  aktivitas  alami  yang  merupakan  respon  imunitas terhadap  serangan  mikroorganisme  patogen  yang  dapat  berbahaya  bagi  tubuh.  Respon pertahanan terhadap patogen melibatkan ekspresi dari beberapa gen termasuk diantaranya adalah peptida antimikroba (Xue et al., 2015). Peptida antimikroba adalah peptida pendek (8-50 asam  amino) dengan berat  molekul  yang rendah. Sebagian besar peptida ini adalah kationik  yang  mengandung  residu  hidrofobik  dan  menunjukkan  spektrum  antimikroba yang luas (Brogden, 2005; Hancock and Chapple, 1999; Nicolas and Mor, 2003). Beberapa kelas  peptida  antimikroba  ditemukan  pada  mamalia,  arachnida,  amfibi,  tumbuhan,  fungi, dan mikroorganisme bersel satu (Shah et al., 2016).
Aktivitas antimikroba pada peptida antimikroba dapat dipengaruhi oleh pemanasan, enzim proteolitik,  dan  senyawa  kimia  seperti  xylol  (Bizani  et  al.,  2005).  Teripang  kering  yang didapat  dari  Ujung  Pangkah  Gresik  telah  melalui  proses  perebusan  sehingga  dapat menghilangkan  aktivitas  dari  peptida  antimikroba.  Aktivitas  antimikroba  yang  dapat disebabkan oleh senyawa lain seperti saponin terpenoid, saponin, dan fenol (Sukmiwati et al., 2020) juga tidak didapatkan dari proses preparasi ini. Aktivitas penghambatan mikroba pada kontrol tetrasiklin disebabkan oleh pengikatan region lestari pada 16S RNA ribosom (rRNA)  pada  subunit  ribosom  30S.  Pengikatan  tersebut  menyebabkan  penghalangan terhadap  penempelan  amino  acyl-transfer  RNA  (tRNA)  selama  elongasi.  Selain  itu tetrasiklin  juga  dapat  menghambat  pembentukan double  stranded RNA  (dsRNA)  yang menyebabkan  rentang  hambatan  tetrasiklin  menjadi  lebih  luas.  Rentang  hambatan
0 5 10 15 20 25 Bs Sa Pa Ec Bc St Ca E1 E2 E3 C Tc Fc
tetrasiklin  meliputi  bakteri  patogen,  virus,  protozoa,  dan  helminthes  yang  merupakan implikasi dari penghambatan pembentukan dsRNA (Chukwudi, 2016).
Aktivitas  penghambatan  pada  kontrol  flukonazol  disebabkan  oleh  mekanisme  hambatan flukonazol yang menghambat sintesis ergosterol pada C. albicans (Pereira De Sousa et al., 2016).  Sedangkan  aktivitas  hybrid  dari  flokonazol  dapat  menghambat  cytochrome  P450 14α-demethylase (CYP51) pada bakteri dan fungi yaitu B. subtilis , S. aureus , E. coli dan P. aeruginosa , dan fungi patogen C. albicans dan Aspergillus niger (Borade et al., 2021).

## IV. KESIMPULAN
Kesimpulan dari penelitian ini adalah ekstrak etanolik teripang kering dari Ujung Pangkah Gresik  yang  diperoleh  dari  Ujung  Pangkah  Gresik  tidak  memberikan  zona  bening  bagi isolat  bakteri Bacillus  subtillis,  Staphylococcus  aureus,  Pseudomonas  aeuriginosa, Escherichia  coli,  Burkholderia  cepacia,  Salmonella  typhimurium, dan  khamir Candida albicans .  Tidak  adanya  aktivitas  antibakteri  pada  ekstrak  etanolik  teripang  kering  ini karena  preparasi  yang  melibatkan  proses  perebusan  pada  teripang  sebelum  dijemur  yang dapat menghilangkan aktivitas peptida antimikroba pada ekstrak etanolik teripang kering.

## DAFTAR PUSTAKA
Bauer,  A.W.,  Perry,  D.M.,  Kirby,  W.M.M.,  1959.  Single-Disk  Antibiotic-Sensitivity Testing of Staphylococci:  An Analysis of Technique and Results. A.M.A.  Archives of Internal Medicine 104, 208–216.
Bizani,  D.,  Dominguez,  A.P.M.,  Brandelli,  A.,  2005.  Purification  and  partial  chemical characterization  of  the  antimicrobial  peptide  cerein  8A.  Letters  in  Applied Microbiology 41, 269–273.
Borade,  N.A.,  Saple,  S.R.,  Gaikwad,  N.D.  and  Jadhav,  S.D.,  2021.  Hybrids  Of Fluconazole:  Synthesis  and  Antimicrobial  Activity.  NVEO-Natural  Volatiles  & Essential Oils Journal, 8573-8584.
Brogden,  K.A.,  2005.  Antimicrobial  peptides:  pore  formers  or  metabolic  inhibitors  in bacteria. Nature reviews microbiology, 3(3), 238-250.
Chen, S., Hu, Y., Ye, X., Li, G., Yu, G., Xue, C., Chai, W., 2012. Sequence determination and  anticoagulant  and  antithrombotic  activities  of  a  novel  sulfated  fucan  isolated from  the  sea  cucumber Isostichopus  badionotus .  Biochimica  et  Biophysica  Acta (BBA) - General Subjects 1820, 989–1000.
Chukwudi, C.U., 2016. rRNA binding sites and the molecular mechanism of action of the tetracyclines. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 60, 4433–4441.
Ortiz-Vazquez,  E.,  Rodriguez-Canul,  R.  and  Olivera-Castillo,  L.,  2013.  Antimicrobial activity  of  aqueous  extracts  of  sea  cucumber  ( Isostichopus  badionotus )  from  the coast  of  Yucatan,  Mexico.  African  Journal  of  Microbiology  Research,  7(28),  3621- 3626.
Hancock,  R.E.W.,  Chapple,  D.S.,  1999.  Peptide  antibiotics.  Antimicrobial  Agents  and Chemotherapy 43, 1317–1323.
Kiani,  N.,  Heidari,  Behrooz,  Rassa,  M.,  Kadkhodazadeh,  M.,  Heidari,  Bijan,  2014. Antibacterial  activity  of  the  body  wall  extracts  of  sea  cucumber  (Invertebrata; Echinodermata)  on  infectious  oral  streptococci.  Journal  of  Basic  and  Clinical Physiology and Pharmacology 25, 367–373.
Liu,  X.,  Sun,  Z.,  Zhang,  M.,  Meng,  X.,  Xia,  X.,  Yuan,  W.,  Xue,  F.,  Liu,  C.,  2012. Antioxidant and antihyperlipidemic activities of polysaccharides from sea cucumber Apostichopus japonicus . Carbohydrate Polymers 90, 1664–1670.
Muniroh,  A.,  Amin,  M.N.,  2020.  Perempuan  Dan  Sekolah  Lapang  Hasil  Laut.
Engagement: Jurnal Pengabdian Kepada Masyarakat 4, 116–137.
Nicolas,  P.  and  Mor,  A.,  1995.  Peptides  as  weapons  against  microorganisms  in  the chemical defense system of vertebrates. Annual review of microbiology, 49(1), 277- 304.
Sousa, J., Costa, A., Leite, M., Guerra, F., Silva, V., Menezes, C., Pereira, F. and Lima, E., 2016.  Antifungal  activity  of  citral  by  disruption  of  ergosterol  biosynthesis  in fluconazole  resistant Candida  tropicalis .  International  Journal  of  Tropical  Disease Health, 11(4), 1-11.
Shah, P., Hsiao, F.S.H., Ho, Y.H., Chen, C.S., 2016. The proteome targets of intracellular targeting antimicrobial peptides. Proteomics 16, 1225–1237.
Shakouri,  A.,  Shoushizadeh,  M.R.,  Nematpour,  F.,  2017.  Antimicrobial  activity  of  sea cucumber  ( Stichopus  variegatus )  body  wall  extract  in  Chabahar  Bay,  Oman  sea. Jundishapur Journal of Natural Pharmaceutical Products 12.
Sukmiwati,  M.,  Ilza,  M.,  Putri,  A.E.,  Sidauruk,  S.W.,  2020.  Antibacterial  activity  of  sea cucumber  ( Holothuria  atra )  against Pseudomonas  aeruginosa .  IOP  Conference Series: Earth and Environmental Science 404, 012047.
Syamsulina,  R.,  Rizal,  M.,  Rochyani,  L.,  2012.  Composition  of  organic  and  inorganic compounds  of Holothuria  Scabra and Stichopus  Hermanii that  Biocompatible  with the pulp tissie.
Utami, T.N. and Indrayani, E., 2018. Komoditas Perikanan. Universitas Brawijaya Press.
Sadegh Vishkaei, M., Ebrahimpour, A., Abdul-Hamid, A., Ismail, A. and Saari, N., 2016. Angiotensin-I  converting  enzyme  (ACE)  inhibitory  and  anti-hypertensive  effect  of protein hydrolysate from Actinopyga lecanora (Sea Cucumber) in rats. Marine drugs, 14(10), 176.
Wang,  Z.,  Zhang,  H.,  Yuan,  W.,  Gong,  W.,  Tang,  H.,  Liu,  B.,  Krohn,  K.,  Li,  L.,  Yi,  Y., Zhang,  W.,  2012.  Antifungal  nortriterpene  and  triterpene  glycosides  from  the  sea cucumber Apostichopus japonicus Selenka. Food Chemistry 132, 295–300. Wargasetia,  T.L.,  Permana,  S.,  Widodo,  2018.  The  Role  of  Sea  Cucumber  Active Compound  and  Its  Derivative  as  an  Anti-Cancer  Agent.  Current  Pharmacology Reports 2018 4:1 4, 27–32.
Xue, Z., Li, H., Wang, X., Li, X., Liu, Y., Sun, J., Liu, C., 2015. A review of the immune molecules in the sea cucumber. Fish & Shellfish Immunology 44, 1–11.
Zhang, J.J., Zhu, K.Q., 2017. A novel antitumor compound nobiliside d isolated from sea cucumber ( Holothuria nobilis Selenka). Experimental and Therapeutic Medicine 14, 1653–1658
Accepted Date Revised Date Decided Date Accepted to Publish 24 Maret 2022 30 Maret 2022 02 April 2022 Ya