e-issn: 2716-4608 p-issn: 2655-366X
ABILITY OF AMILOLYTIC BACTERIA ( Bacillus paramycoides AND Enterobacter cloacae ) IN DEGRADING ORGANIC MATERIALS OF MANGROVE LITTLE
Redila Aprilivia Putri 1 *, Nursyirwani 1 , Feliatra 1
1 Department of Marine Science, Faculty of Fisheries and Marine Universitas Riau, Pekanbaru *redilaapril@gmail.com

## ABSTRACT
This  study  aims  to  find  out  that Bacillus  paramycoides and Enterobacter  cloacae bacteria  can  produce  amylase  enzymes  and  have  the  ability  to  degrade  organic  matter, especially  mangrove  litter. From  this  study  it  was  found  that  the  optimal  growth  of B.paramycoides and E. cloacae bacteria occurred at 12 th hour. The results of measurements and  calculations  of  absorbance  values  at 630  10.238  x  10 8 cells/mL  ( B.  paramycoides )  and 12.030  x  10 8 cells/mL  ( E.  cloacae )  using  the  spectrophotometric  method.  Meanwhile,  with the  TPC  method  at  12  hours,  the  number  of  bacterial  cells  was  2.08  x  10 8 CFU's/mL (B.paramycoides ) and 2.44 x 10 8 CFU's/mL ( E. cloacae ). The ability to produce the largest amylolytic  bacterial  amylase  enzyme  also  occurred  at  12  hours  as  much  as  0.306  mg/mL ( B.paramycoides )  with  an  increase  of  0.046  mg/mL  and  0.243  mg/mL  ( E.  cloacae )  with an increase  of  0.028  mg/mL.  The  bacteria  that  have  the  highest  amylase  enzyme  ability  is E.cloacae as evidenced by the diameter of the clear zone of 10.10 mm. Testing the ability of amylolytic bacteria in degrading mangrove litter was carried out by adding amylase enzyme as  much  as  0%,  50%  and  100%.  Amylolytic  bacteria  can  degrade  organic  matter  by hydrolyzing starch contained in mangrove litter. The most degraded starch content was in the 100%  enzyme  treatment,  which  was  1.021  mg/mL  ( B.  paramycoides )  and  1.189  mg/mL ( E.cloacae ).
Keywords: Enzyme, Bacillus, Enterobacter, Degradation, Starch

## I. PENDAHULUAN
Bakteri amilolitik dalam tanah mangrove  berperan  penting  dalam  proses degradasi  amilum  menjadi  senyawa  yang lebih  sederhana  dan  menjadi  nutrisi  dalam tanah  [1].  Bakteri  amilolitik  merupakan bakteri  yang  dapat  menghasilkan  enzim amilase  yang  mampu  memecah  pati menjadi  glukosa  [2].  Proses  tersebut  dapat berlangsung apabila terjadi kontak langsung antara sel bakteri dengan substrat.
Penelitian  yang  berkaitan  tentang mikroorganisme  khususnya  bakteri  yang berasal  dari  sedimen  ekosistem  mangrove di  Indonesia  masih  jarang  dilakukan,
sehingga  perlu  dilakukan  eksplorasi  untuk menemukan bakteri yang mampu memproduksi enzim. Pada penelitian sebelumnya  telah  ditemukan  jenis  bakteri amilolitik dari sedimen ekosistem mangrove  Stasiun  Kelautan  Dumai.  Jenis bakteri  amiloitik  yang  ditemukan  antara lain Bacillus  paramycoides (kode  isolat TR6), Enterobacter  cloacae (kode  isolat TR  11)  [3].  Namun,  bakteri  bakteri  yang ditemukan  tersebut  masih  belum  diketahui kemampuannya dalam mendegradasi bahan organik  khususnya  serasah  mangrove,  oleh karena  itu,  adanya  penelitian  ini  adalah bertujuan  untuk  mengetahui  kemampuan
bakteri  amilolitik  yang  diisolasi  dari sedimen  ekosistem  mangrove  Stasiun Kelautan  Dumai  dalam  mendegradasi serasah  mangrove.  Dengan  sampel  serasah yang  diambil  dari  area  hutan  mangrove  di Muala Sungai Dumai.

## 2. METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan bulan Agustus 2020. Uji kemampuan degradasi  oleh  bakteri  amilolitik  dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Laut Jurusan Ilmu  Kelautan  Fakultas  Perikanan  dan Kelautan  Universitas  Riau.  Pengambilan serasah mangrove dilakukan di area   Hutan Mangrove Stasiun Kelautan Dumai.

## Metode Penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  metode  eksperimen, yaitu menguji kemampuan bakteri amilolitik serta pengaruh perbedaan konsentrasi  enzim  amilase  yang  digunakan dalam mendegradasi bahan organik serasah mangrove.  Isolat  bakteri  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  ada  dua,  yaitu  isolat bakteri Bacillus  paramycoides (TR6)  dan Enterobacter  cloacae (TR11)  dengan  tiga kali  pengulangan  dan  dua  konsentrasi enzim  amilase  yang  diberikan  yaitu  50% dan  100%.  Rancangan  percobaan  yang digunakan  adalah  rancangan  acak  lengkap satu faktor.

## Prosedur Penelitian
Peremajaan Isolat Bakteri Bakteri yang digunakan pada penelitian  ini  adalah  bakteri  yang  telah diisolasi dari Sedimen Ekosistem Mangrove  Stasiun  Kelautan  Purnama Dumai  dan  telah  diidentifikasi  secara molekuler berdasarkan
penelitian sebelumnya    [3].  Jenis  bakteri  yang digunakan adalah ada 2 yaitu isolat bakteri
Bacillus paramycoides (TR6) dan Enterobacter cloacae (TR11). Isolat bakteri amilolitik
diremajakan berdasarkan
prosedur  dari  [4]  yaitu  dengan  cara memindah  ulang  isolat  ke  dalam  medium agar  miring  Marine  Agar  Zobell  dengan menambahkan  amilum  1%  steril  secara aseptis  dengan  jarum  ose  kemudian diinkubasi  pada  suhu  30 o C  selama  2x24 jam.

## Persiapan Bakteri Uji
Pembuatan suspensi bakteri
dilakukan  dengan  mengambil  6-7  ose bakteri dari hasil peremajaan dan dimasukkan  ke  dalam  botol  berisi  akuades sebanyak  100  mL  yang  telah  disterilkan. Kemudian  larutan  berisi  bakteri  tersebut divorteks  sampai  terbentuk  suspensi  lalu dibandingkan  dengan  larutan  Mc.Farland 0,5 standard .
Suspensi  dari  Isolat  bakteri  yang terbentuk  kemudian  diambil  sebanyak  10 mL  ke  dalam  media  TSB  ( Tryptic  Soy Broth ) yang telah ditambahkan amilum 1% steril  sebagai  media  pertumbuhan  bakteri kemudian  divorteks  sampai  homogen. Isolat  tersebut  kemudian  dinkubasi  selama 24  jam  dalam shaker  bath .  Pengamatan pertumbuhan  bakteri  dan  produksi  enzim dilakukan setiap enam jam sekali.

## Penentuan  Waktu  Optimum  Produksi Enzim Amilase
Pengamatan  uji  penentuan  waktu optimum produksi enzim amilase dilakukan 6 jam sekali selama 24 jam.  Prosedur yang digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah dengan  cara  mengambil  masing  masing  1 mL  isolat  bakteri  kedalam  mikro  tub kemudian  disentrifugasi  selama  30  menit dengan  kecepatan  9000  rpm.  Dari  hasil sentrifugasi tersebut akan terbentuk larutan enzim  pada  bagian  atas  tub  sedangkan  sel bakteri  akan  mengendap  dibagian  bawah. Larutan  tersebut  yang  kemudian  diambil menggunakan  pipet  tetes  dan  di  masukkan kedalam  kuvet  untuk  di  amati  absorbansi- nya menggunakan spektrofotometer dengan panjang gelombang 660.
p-issn: 2655-366X Penentuan Waktu Optimum Pertumbuhan Bakteri Amilolitik Uji penentuan waktu optimum pertumbuhan  bakteri  dilakukan  dengan  2 tahap yaitu yang pertama adalah perhitungan jumlah koloni bakteri amilolitik dengan metode TPC ( Total Plate
Count )  yaitu  dengan  mempersiapkan  5 botol  tabung  reaksi  berisi  10  mL  akuades steril.  Sebanyak  1  mL  isolat  bakteri dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  lalu divorteks prosedur tersebut diulangi sampai pengenceran  10 -5 .  Pada  pengenceran  10 -5 diambil  sebanyak  0,1  mL  dan  ditebarkan kedalam cawan petri berisi media PCA dan diratakan  menggunakan  batang  L.  Cawan tersebut  dibungkus  menggunakan plastic wrap dan  diinkubasikan  selama  24  jam untuk kemudian dihitung jumlah koloninya. Untuk  perhitungan  jumlah  koloni  bakteri menggunakan rumus [5]:
CFU/ml  =  (Jumlah Koloni/Faktor Pengenceran)  x  (1/Faktor Pengenceran(10 1 ))
Untuk pengukuran pertumbuhan bakteri menggunakan spektrofotometer yang  diawali  dengan  pembuatan  blanko untuk  menentukan  panjang  gelombang optimal.  Pembuatan  blanko  menggunakan media  TSB  yang  tidak  berisi  bakteri kemudian  diukur  absorbansinya  dengan panjang gelombang
600-660 nm.
Selanjutnya  5  ml  isolat  bakteri  diambil menggunakan  spuit  steril  dan  dimasukkan kedalam kuvet untuk
dihitung absorbansinya menggunakan spektro- fotometer dengan panjang gelombang yang telah ditentukan.
Uji Enzim Amilase Uji amilase dilakukan dengan menginokulasikan  isolat  ke  medium    yang mengandung    amilum    dengan    cara goresan.    Setelah    diinkubasi  selama    24 jam    pada  suhu    30 o C  kemudian    ditetesi reagen lugol’s  iodine . Amilase merupakan enzim yang mampu menghidrolisis molekul amilum  menjadi  glukosa  atau  oligo-
sakarida.  Dengan  indikator  larutan  iodin tersebut  akan  memberikan  warna  bening yang  menandakan  bahwa  isolat  tersebut dapat  menghidrolisis  amilum.  Adanya zona  bening  di sekitar  koloni  menunjuk- kan  aktivitas  enzim  amilase.

## Uji  Kemampuan  Isolat  Bakteri  dalam mendegradasi Serasah Mangrove
Uji  kemampuan  bakteri  amilolitik dalam  mendegradasi  serasah  mangrove dilakukan  dengan  cara  10  g  serasah mangrove yang telah dihaluskan dan diayak diencerkan  dengan  menambahkan  akuades sebanyak  100  mL  kemudian  ditambahkan enzim  dari  bakteri  amilolitik,  enzim amilase  yang  ditambahkan  sebanyak  0%, 50%  dan  100%.  Pada  uji  ini  dilakukan pengamatan  kadar  amilum  pada  awal inkubasi  dan  akhir  inkubasi.  Apabila bakteri  dapat  mendegradasi  amilum  maka kadar  amilum  akan  berkurang  selama proses berlangsung.

## Pengukuran Kadar Amilum
Sebanyak 1 mL larutan pati dimasukkan  ke  dalam  tabung  reaksi  dan ditambahkan  dengan  3  mL  pereaksi  DNS, selanjutnya  dipanaskan  pada  penangas  air mendidih  selama  5  menit  kemudian didinginkan  pada  suhu  ruang.  Larutan dipindahkan  ke  dalam  kuvet,  absorbansi diukur  pada  panjang  gelombang  550  nm. Kadar gula ditentukan dengan menggunakan persamaan regresi absorbansi larutan standar. Pengujian kandungan amilum
dilakukan dengan mengambil 1 mL sampel serasah mangrove dengan perlakuan penambahan  enzim  amilase  0%,  50%  dan 100%  dan  diinkubasi  selama  60  menit kedalam  tabung,  kemudian  ditambahkan  1 mL reagen DNS dan 2 ml aquades. Tabung reaksi  dipanaskan  di  dalam water  bath selama  5  menit  agar  terjadi  reaksi  antara glukosa  dengan  DNS.  Absorbansi  tiap larutan  diukur  menggunakan  spektro-
fotometer  dengan  panjang  gelombang  550 nm [6].

## Analisis Data
Data  laju  degradasi  bahan  organik serasah  mangrove  oleh  bakteri  amilolitik disajikan  dalam  bentuk  gambar  dan  tabel. Kemudian  data  tersebut  dijelaskan  secara deskriptif  berdasarkan  literatur  terkait dengan  penelitian  ini.  Untuk  mengetahui kemampuan isolat bakteri dalam mendegradasi  bahan  organik  digunakan uji
ANOVA.
3.  HASIL DAN PEMBAHASAN Pertumbuhan Bakteri Amilolitik
Bakteri  amilolitik B.  paramycoides (TR6)  dan E.  cloacae (TR11)    diinkubasi selama  24  jam  diamati  pertumbuhannya setiap  6  jam  sekali  menggunakan  metode spektrofotometri  dan  metode Total  Plate Count (TPC).  Hasil  dari  nilai  absorbansi pertumbuhan  bakteri  dan  perhitungan jumlah koloni (TPC) kedua bakteri tersebut kemudian
dikonversikan
dengan menggunakan  rumus  regresi  linier  y=ax-b yang  didapat  dari  nilai  kurva  standar Mc.farland 0,5  sehingga  didapatkan  hasil seperti pada Tabel 1 dan Tabel 2. Tabel 1 . Jumlah Bakteri Amilolitik dari Hasil Perhitungan dengan Metode Spektrofotometri. Isolat Bakteri Jumlah sel bakteri per jam (x 10 8 sel/mL) 0 6 12 18 24 TR6 0,312±0,296 4,801±0,160 10,248±0,154 11,687±0,089  12,047±0,051 TR11 2,017±0,219 5,829±1,789 12,030±0,030 12,201±0,154  12,407±0,089 Tabel 2. Perhitungan Jumlah Sel Bakteri Amilolitik dengan Metode TPC Kode Bakteri Jumlah sel bakteri per jam (×10 8 CFU/mL) 0 6 12 18 24 TR6 1,14 ± 0,015 1,56 ± 0,031 2,08 ± 0,126 1,88 ± 0,127 1,97 ± 0,205 TR11 1,25 ± 0,113 1,59 ±0,24 2,44 ± 0,274 2,02 ± 0,185 1,76 ± 0,157
Keterangan: TR 6 : B. paramycoides ; TR11 : E. cloacae
Tabel  1  tersebut  diketahui  bahwa puncak  pertumbuhan  bakteri  amilolitik terjadi pada jam ke 12 yaitu
B.paramycoides (TR6) mengalami pertumbuhan  sel    sebanyak  10.238  x  10 8
sel/mL dan E. cloacae (TR11)  mengalami pertumbuhan  sel  sebanyak  12,030  x  10 8 sel/mL.  Fase  logaritmik  ini  disebabkan pembelahan bakteri yang meningkat karena telah  beradaptasi  dengan  lingkungannya serta nutrisi yang terdapat di dalam medium mencukupi  bagi  bakteri  [7].  Menurut  [8] fase logaritmik menggambarkan sel membelah  diri  dengan  laju  yang  konstan, masa  menjadi  dua  kali  lipat  dengan  laju sama  dan  aktivitas  metabolisme  konstan. Fase logaritmik menggambarkan sel membelah  diri  dengan  laju  yang  konstan, masa  menjadi  dua  kali  lipat  dengan  laju sama,  aktifitas  metabolisme  konstan,  serta
keadaan  pertumbuhan  seimbang.  Menurut [9]  kecepatan  pertumbuhan  pada  fase  ini sangat  dipengaruhi  oleh  media  tempat tumbuhnya  seperti  pH  dan  kandungan nutrien,  juga  kondisi  lingkungan  termasuk suhu serta kelembaban udara.
Tabel  2  diketahui  waktu  optimal pertumbuhan bakteri amilolitik yang dianalisis  dengan  metode  TPC  terjadi  pada jam  ke  12  yaitu  dengan  jumlah  koloni B. paramycoides sebanyak  2,08x10 8 CFU’s/ mL  dan E.  cloacae sebanyak  2,44  x  10 8 CFU’s/mL.

## Uji Aktivitas Enzim Amilase
Pengujian  enzim  amilase  dilakukan dengan  mengamati  zona  bening  yang terbentuk pada media agar dengan penambahan pati yang telah diinokulasikan oleh  bakteri B.  paramycoides (TR6)  dan
E.cloacae (TR11) . Dari  hasil  percobaan tersebut  diketahui  bahwa  bakteri  mampu memproduksi  enzim  amilase  dibuktikan dengan adanya zona bening yang terbentuk
oleh  bakteri B.  paramycoides sebesar  9.03 mm  dan  bakteri E.  cloacae memiliki  zona bening sebesar 10.10 mm atau dapat dilihat pada Tabel 3.
Tabel 3. Diameter Zona Bening yang dihasilkan Bakteri Amilolitik (mm) Kode Isolat Pengulangan Rata Rata (mm) 1 2 3 B. paramycoides (TR6) 10,30 9,60 7,20 9,03 E. cloacae (TR11) 8,60 11,00 10,70 10,10 Bakteri B. paramycoides dan E.cloacae dapat  dikatakan  memiliki  daya amilolitik.  berdasarkan  pernyataan  [10] bahwa  isolat  bakteri  yang  menghasilkan diameter  zona  bening  dua  atau  tiga  kali diameter koloni merupakan produsen enzim yang potensial. Aktivitas amilase
ditentukan  berdasarkan  zona  bening  yang terbentuk pada medium yang telah ditambahkan larutan reagen lugol’s  iodine . Bakteri  yang  memiliki  aktivitas  enzim amilase  ekstraseluler  dapat  menghidrolisis pati  (amilosa  dan  amilopektin)  yang terkandung  dalam  medium  agar  sehingga pati  yang  telah  terdegradasi  tidak  dapat berikatan dengan iodin (I 2 ) dan
menghasilkan  zona  bening  di  sekeliling koloni  bakteri.  Daerah  yang  patinya  belum terhidrolisis  akan  berwarna  biru  ungu dikarenakan  adanya  ikatan  antara  pati dengan iodin [11].
Produksi Enzim
Amilase Bakteri

## Amilolitik
Hasil  pengukuran  produksi  enzim kasar  amilase  oleh  isolat  bakteri  amilolitik dikonversikan  menggunakan  rumus  regresi linear    y=ax+  b  yang  didapat  dari  kurva standar DNS. Hasil konversi dari pengukuran  absorbansi  tersebut  dapat dilihat pada Tabel 4. Tabel 4 . Konsentrasi Enzim Amilase dalam Ekstrak Sel Bakteri (mg/mL) Isolat Bakteri Pengukuran Produksi Enzim  per jam (mg/ml) 0 6 12 18 24 TR6 0,202±0,008 0,260±0,008 0,306±0,019 0,244±0,004 0,230±0,018 Peningkatan Produksi Enzim - 0,058 0,046 -0,062 -0,014 TR11 0,205±0,005 0,215±0,005 0,243±0,009 0,224±0,022 0,215±0,008 Peningkatan Produksi Enzim - 0,01 0,028 -0,019 0,009
Berdasarkan  penelitian  [12]  tentang karakterisasi  enzim  amilase  dari  bakteri B.megaterium pada  variasi  suhu,  pH  dan konsentrasi  substrat,  dari  hasil  penelitian tersebut  didapatkan  hasil  bahwa  suhu optimum  bakteri B.megaterium dalam memproduksi  enzim  amilase  pada  suhu 37 o C  dengan  aktivitas  amilase  sebesar 1,279  U/mL.  Karakterisasi  enzim  yang kedua,  dilihat  dari  pH  optimum  bakteri dalam memproduksi enzim amilase,
didapatkan  hasil  bahwa  pH  optimum bakteri B. megaterium dalam memproduksi enzim  amilase  yakni  pada  pH  5,0  dengan aktivitas  enzim  sebesar  1,241  U/mL. Karakterisasi  enzim  yang  ketiga,  dilihat dari  konsentrasi  substrat  optimum  bakteri dalam memproduksi enzim amilase didapatkan hasil bahwa konsentrasi substrat 1,50%  menjadi  konsentrasi  substrat  yang optimum  dengan  aktivitas  enzim  amilase sebesar  0,548  U/mL.  Enzim  amilase  yang
dihasilkan  oleh  bakteri B.  Paramycoides dan E.  Cloacae relatif  lebih  sedikit dikarenakan tidak adanya perlakuan kontrol terhadap  pH  maupun  suhu  dan  konsentrasi substrat. Selain itu waktu optimal pertumbuhan  bakteri  juga  mempengaruhi jumlah enzim yang dihasilkan.
Enzim  amilase  yang  dihasilkan  oleh bakteri B.  paramycoides dan E.  cloacae relatif  lebih  sedikit  dikarenakan  tidak adanya  perlakuan  kontrol  terhadap  pH maupun  suhu  dan  konsentrasi  substrat. Pada  penelitian  oleh  [12]  pengamatan
aktivitas  enzim  selama  140  jam  sedangkan penelitian  ini  hanya  selama  24  jam  karena adanya keterbatasan waktu.

## Kemampuan  Bakteri  Amilolitik  dalam Mendegradasi Serasah Mangrove
Hasil  dari  nilai  absorbansi  amilum yang  didapatkan  kemudian  dikonversikan menggunakan rumus regresi linear y= ax+b yang  didapat  dari  kurva  standar  DNS  dan hasil  dari  konversi  tersebut  dapat  dilihat pada Tabel 5.
Tabel 5. Hasil Pengukuran Amilum Terlarut Serasah Mangrove
Kode Bakteri Dosis Enzim Ulangan Kadar Amilum (mg/mL) TR6 0% 1 1,719 2 1,603 3 1,483 Rata rata 1,602 50% 1 1,231 2 1,330 3 1,208 Rata rata 1,256 100% 1 1,062 2 0,971 3 1,030 Rata rata 1,021 TR11 50% 1 1,335 2 1,272 3 1,230 Rata rata 1,279 100% 1 1,235 2 1,086 3 1,244 Rata rata 1,189
Berdasarkan  Tabel  5  dapat  dilihat bahwa  kadar  amilum  yang  terdegradasi paling banyak adalah pada perlakuan enzim sebanyak 100%  yaitu dengan amilum  yang tersisa  pada  sampel  adalah  sebesar  1.021 mg/mL  ( B.  paramycoides )  dan  1.189 mg/mL ( E.cloacae ). Berdasarkan penelitian
[13]  tentang  analisis  unsur  hara  dan kandungan proksimat pada detritus mangrove,  mangrove  jenis S.  alba dan R. apiculata memiliki  kandungan  karbohidrat sebanyak masing masing 7,08% dan 6,27%.
Enzim  amilase  pada  bakteri  terdiri dari  α-amilase,  yang  berfungsi  memutus ikatan  glukosil,  memproduksi  gula  yang berukuran  kecil  dekstrin  dengan  glukosa dan maltose [14]

## 4. KESIMPULAN DAN SARAN Kesimpulan
Waktu optimal produksi enzim amilase oleh bakteri amilolitik adalah pada jam  ke  12  yaitu  sebesar  0.306  mg/mL ( B.paramycoides ) dan 0.243 mg/mL ( E.cloacae ).  Bakteri  amilolitik  dibuktikan
dapat  mendegradasi  bahan  organik  dengan cara  menghidrolisis  amilum  yang  terdapat dalam  serasah  mangrove.  Kadar  amilum yang  terdegradasi  paling  banyak  adalah pada perlakuan enzim sebanyak 100% yaitu sebanyak  1.021  mg/mL  ( B.  paramycoides ) dan 1.189 mg/mL ( E. cloacae ).

## Saran
Adapun saran dari penelitian ini yaitu sebaiknya  dilakukan  pengujian  pertumbuh- an  dan  produksi  enzim  bakteri  amilolitik berdasarkan  variasi  suhu  dan  pH  dan pengujian  kemampuan  bakteri  amilolitik dalam  mendegradasi  bahan  lain,  seperti misalnya limbah organik.

## DAFTAR PUSTAKA
1. Hastuti,  U.S.,  S.A.N.  Febriani  dan  M.A.A.  Putri.  (2017).  Isolasi  dan  Identifikasi Spesies  Bakteri  Amilolitik  yang  Berasal  dari  Tanah  Mangrove  di  Margomulyo, Balikpapan, Kalimantan Timur. Prosiding Seminar Nasional III.
2. Murtius, W.S. (2016). Aktivitas amilolitik pada Parutan Ubi Kayu ( Manihot uttilissima ) yang  Diperam  dengan  Waktu  yang  Berbeda. Jurusan  Teknologi  Pertanian  Andalas , 20(1) : 1410-1920
3. Silitonga,  L.R.,  Nursyirwani,  dan  I.  Effendi.  (2020).  Isolation,  Identification  and Sensivitity  of  Amilolitic  Bacteria  from  Mangrove  Ecosystem  Sediment  in  Purnama Marine Station Dumai on the Pathogenic Bacteria. Asian Journal of Aquatic Sciences, 2(3): 257-266
4. Ningsih, D.R., U. Rastuti dan R. Kamaludin. (2012). Karakterisasi Enzim Amilase dari Bakteri Bacillus  amyloliquefaciens . Prosiding  Seminar  Nasional .  UNSOED. Purwokerto. 39-45.
5. Sukmawati.,  Ratna  dan  A.  Fahrizal.  (2018).  Analisis  Cemaran  Mikroba  pada  Daging Ayam Broiler di Kota Makassar. Jurnal Scripta Biologica , 5(1): 68-71.
6. Julaeha, E., S. Rustiyaty., N. N. Fajri., F. Ramdlan dan R. Tantra. (2016). Pemanfaatan Tepung  Gadung  ( Dioscorea  hispida Dennst.)  pada  Produksi  Amilase  Menggunakan Bacillus Sp. E journal Universitas Pendidikan Indonesia , 1(1).
7. Oktavia,  Y.,  S.D.    Lestari.,  S.  Lestari.,  Herpandi  dan  M.  Jannah.  (2018).  Optimasi Waktu  Inkubasi  Produksi  Protease  dan  Amilase  Isolat  Bakteri  Asal  Terasi  Ikan  Teri Stolephorus sp . Jurnal Ilmu dan Teknologi Kelautan Tropis , 10(3) : 719-725.
8. Reiny,  S.S.  (2012).  Potensi Lactobacillus  acidophilus ATCC  4796  sebagai Biopreservatif Pada Rebusan Daging Ikan Tongkol. J. IJAS , 2(2): 604–613.
9. Setyati,  W.  A.,  E.  Martani.,  T.  Subagiyo  dan  M.  Zainuddin.  (2015).  Kinetika Pertumbuhan  dan  Aktivitas  Protease  Isolat  36k  dari  Sedimen  Ekosistem  Mangrove, Karimunjawa, Jepara. Jurnal Ilmu Kelautan , 20(3): 163– 169.
10. Ochoa-Solano, J., and J. Olmos-Soto. (2006). The  Functional Property of Bacillus for Shrimp Feeds. Food Microbiology, 23: 519–525.
11. Zahidah, D., dan M. Shovitri. (2013). Isolasi, Karakterisasi dan Potensi Bakteri Aerob Sebagai  Pendegradasi  Limbah  Organik .  Jurnal  Sains  dan  Seni  POMITS, 2(1)  :  2337- 3520
12. Istia’nah, D., U. Utami dan A. Barizi. (2020). Karakterisasi Enzim Amilase dari Bakteri Bacillus  megateriu m  pada  Variasi  Suhu,  pH  dan  Konsentrasi    Substrat .  Jurnal  Riset Biologi dan Aplikasinya, 2(1).
13. Faldin., A. I. Nur dan M. Ramli. (2016). Studi Kualitas Detritus pada Jenis Mangrove Rhizophora  apiculata dan Sonneratia  alba di  Kelurahan  Lalowaru,  Kecamatan Moramo  Utara,  Kabupaten  Konawe  Selatan. Jurnal  Manajemen  Sumber  Daya Perairan, 2(1): 51-61
14. Andry,  M.  P.  U  dan  M.  Shovitri.  (2014).  Bakteri  Tanah  Pendegradasi  Bahan  Organik Desa Talango Pulau Poteran Sumenep. Jurnal Sains dan Seni Pomits , 3(2).