Efek Kombinasi Tanaman Dengan Variasi Konsentrasi Terhadap Mortalitas Larva Culex sp. (Diptera: Culicidae)
Mei Ahyanti 1 , Prayudhy Yushananta 1*
1 Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Tanjung Karang
Artikel Info:

## A b s t r a c t
Received March 30, 2024 Accepted May 9, 2024 Available online May 20, 2024 After  understanding  the  negative  impacts  of  the  long-term  use  of  synthetic  chemical  insecticides, botanical insecticides are the best choice for controlling disease vector mosquitoes. The research aims to evaluate  the  larvicidal  effect  of  a  combination  of  four  plant  types  on Culex sp. The  study  used  a completely randomized factorial design (with two replications) from March – July 2023. Four types of plants ( Catharanthus roseus, Annona muricata, Psidium guajava , and Averrhoa bilimbi ) were combined in pairs  with  concentrations  of  the  stratified  mixture  and  observed  for  24  hours.  Plant  extraction  by maceration using Ethanol (24 hours), evaporated until concentrated, and diluted with distilled water to the desired concentration. Culex sp. larvae reared from the egg phase to the first filial (F1). Twenty larvae (instar-III) were used in each test, with controls. Data were analyzed using two-way ANOVA (Confidence Level = 95%). Research found that A. muricata, P. guajava , and A. bilimbi leaf extracts (single or in pairs) caused  mortality  (5-20%)  of Culex sp.  larvae.  after  one  hour  of  exposure.  At  six  hours  of  exposure, A. muricata and P. guajava caused mortality up to 70%. Larval mortality reached 100% after 24 hours of exposure. The statistical analysis results did not show differences in larval mortality based on plant type (P = 0.084) and mixture concentration (P = 0.858). However, it significantly differed based on exposure time (P = 0.0001). Of the four examined, two plants showed the best larvicidal effect against Culex sp., namely A. muricata and P. guajava . Even though it shows promising results, using high concentrations is still an obstacle to application. Bioactive compound engineering is suggested to increase bio-larvicide activity.
Keyword:
A. muricata; A. bilimbi ; Bio- larvacide; Culex sp.; P. guajava
Kata kunci:
A. muricata; A. bilimbi ; Bio- larvasida; Culex sp.; P. guajava
Ruwa Jurai: Jurnal Kesehatan Lingkungan is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0
International License.
Insektisida  nabati  menjadi  pilihan  terbaik  untuk  mengendalikan  nyamuk  vektor  penyakit,  setelah pemahaman  dampak  negatif  dari  penggunaan  insektisida  kimia  sintetis  jangka  panjang.  Penelitian bertujuan mengevaluasi efek larvasida dari kombinasi empat jenis tanaman terhadap Culex sp. Penelitian menggunakan rancang acak lengkap faktorial (dengan dua ulangan), dilakukan selama bulan Maret – Juli 2023.  Empat  jenis  tanaman  ( Catharanthus  roseus,  Annona  muricata,  Psidium  guajava, dan Averrhoa bilimbi )  dikombinasikan  berpasangan  dengan  variasi  konsentrasi  campuran  bertingkat,  dan  diamati selama 24 jam. Ekstraksi tanaman dengan maserasi menggunakan Ethanol (24jam), dievaporasi hingga pekat, dan diencerkan dengan akuades untuk konsentrasi diinginkan. Larva Culex sp. dipelihara dari fase telur hingga turunan pertama (F1). Dua puluh larva instar-III digunakan pada setiap pengujian, dengan kontrol. Data dianalisis dengan ANOVA two-way ( Confidence Level = 95%). Hasil penelitian mendapatkan bahwa tiga dari empat tanaman memberikan efek mortalitas (5-20%) sejak satu jam setelah paparan, yaitu A.  muricata,  P.  guajava, dan C.  roseus .  Setelah  enam  jam  paparan, A.  muricata dan P.  guajava memberikan efek mortalitas tertinggi (70%). Setelah 24 jam paparan, seluruh larva mengalami kematian pada  semua  perlakuan.  Hasil  analisis  statistik  menunjukkan  perbedaan  mortalitas  larva  berdasarkan waktu  paparan  (P  =  0,0001),  namun  tidak  signifikan  berdasarkan  jenis  tanaman  (P  =  0,084)  dan konsentrasi campuran (P = 0,858). Dari empat yang diperiksa, dua jenis tumbuhan menunjukkan efek larvasida terbaik terhadap Culex sp. , yaitu A. muricata dan P. guajava. Walaupun menunjukkan hasil yang menjanjikan,  penggunaan  konsentrasi  tinggi  masih  menjadi  kendala  untuk  diaplikasikan  secara  luas. Rekayasa  senyawa  bioaktif  disarankan  untuk  meningkatkan  aktivitas  dan  menurunkan  konsentrasi larvasida.
⁎ Corresponding author: Prayudhy Yushananta Politeknik Kesehatan Kementerian Kesehatan Tanjung Karang Email: prayudhyyushananta@gmail. com

## PENDAHULUAN
Nyamuk  (masuk  dalam  famili  Culicidae) merupakan  vektor  yang  bertanggung  jawab terhadap penyebaran beberapa penyakit berbahaya  yang  dapat  menyebabkan  kematian, seperti  malaria  oleh Anopheles sp . ,  demam berdarah oleh Aedes sp . , dan filariasis oleh Culex sp . (Amutha et al., 2019; Kumar et al., 2020). Malaria mengakibatkan  lebih  dari  400.000  kematian, demam  berdarah  menginfeksi  sekitar  230  juta orang dengan 40.000 kematian, dan sekitar 51 juta orang  terinfeksi  filaria  dengan  kerugian produktivitas (Pratama & Yushananta, 2021; Putri &  Yushananta,  2022;  WHO,  2020,  2023; Yushananta, 2021).
Pengendalian  nyamuk  merupakan  metode utama  dalam  mencegah  penyebaran  penyakit. Pengendalian  pada  tahap  larva  menjadi  strategi yang  paling  efektif  untuk  mengurangi  populasi nyamuk vektor penyakit (Bilal et al., 2017; Duguma et  al.,  2017;  Floore,  2006).  Selama  lima  dekade terakhir, pengendalian nyamuk telah menggunakan  insektisida  kimia  sintetik  (Duguma et  al.,  2017;  Floore,  2006).  Namun,  penggunaan insektisida  kimia  sintetik  secara  luas  dan  terus- menerus  telah  mengakibatkan  pencemaran lingkungan,  resistensi  fisiologis  pada  vektor,  dan mempengaruhi siklus nutrisi pada produksi primer (Kamran  et  al.,  2022;  Khan,  2022;  Silalahi  et  al., 2022;  Smith  et  al.,  2016).  Pestisida  kimia  sintetik bertahan  lama  di  lingkungan  perairan  dan terakumulasi  dalam  lipid,  sehingga  memfasilitasi biomagnifikasi dalam rantai makanan perairan dan toksisitas  terhadap  predator  (Schlechtriem  et  al., 2012).  Untuk  itu  diperlukan  pencarian  dan pengembangan metode pengendalian vektor yang aman bagi lingkungan, dapat terurai secara hayati, berbiaya  rendah,  dan  dapat  digunakan  secara mudah  oleh  individu  dan  komunitas  (Mittal  & Subbarao, 2003).
Insektisida  nabati  merupakan  pilihan  terbaik untuk mengendalikan nyamuk karena mengandung  bahan  kimia  aktif  biologis  yang mudah terurai menjadi produk yang tidak beracun bagi spesies lain (Benelli & Beier, 2017; Pavela et al.,  2019;  Senthil-Nathan,  2020;  Yushananta  & Ahyanti,  2021).  Beberapa  tahun  terakhir,  telah dilaporkan  efektivitas  ekstrak  tumbuhan  sebagai insektisida  (terutama  terhadap  larva  nyamuk),
dapat terurai secara hayati, aman bagi lingkungan, dan  spesifik  sasaran  (Bilal  et  al.,  2017;  Mittal  & Subbarao, 2003; Pavela et al., 2019).
Senyawa  bioaktif  pada  ekstrak  tumbuhan adalah  (sesuai  abjad):  asetogenin,  alkaloid, alkamida,  antrakuinon,  kumarin,  flavonoid, limonoid, poliasetilen, seskuiterpen lakton, sterol, tiofena,  triterpenoid,  dan  xanton.  Sebagian  besar diketahui  berperan  penting  dalam  pertahanan kimia  tanaman  secara  konstitutif  atau  terinduksi terhadap  mikroorganisme,  seperti  jamur,  bakteri, virus, dan serangga berbahaya (Pavela et al., 2019). Penelitian  lain  menyimpulkan  bahwa  senyawa alkaloid,  saponin,  tanin  dan  flavonoid  pada tumbuhan dapat memberikan efek kematian pada larva melalui pencernaan, pernafasan, dan sistem syaraf  (Chaieb,  2017;  Govindarajan  et  al.,  2016; Hidayati  &  Suprihatini,  2020;  Pavela  et  al.,  2019; Rohmah et al., 2020; Yushananta & Ahyanti, 2021).
Hasil  penelitian  Ahyanti  dan  Yushananta terhadap  14  jenis  tanaman  (biasa  tumbuh  di pekarangan penduduk) mendapatkan empat jenis tanaman  berpotensi  yang  menjanjikan  sebagai insektisida  nabati  yaitu Annona  muricata L. (Magnoliales:  Annonaceae), Averrhoa  bilimbi L. (Oxalidales:  Oxalidaceae), Catharanthus  roseus L. (Gentianales: Apocynaceae), and Psidium guajava L.  (Myrtales:  Myrtaceae)  (Ahyanti  et  al.,  2023; Ahyanti  &  Yushananta,  2023a,  2023b).  Sejauh pengetahuan  kami,  belum  ada  laporan  yang mengkombinasikan  ekstrak  empat  jenis  tanaman untuk mengetahui efektifitasnya sebagai larvasida. Penelitian  bertujuan  untuk  menilai  potensi larvasida  dari  kombinasi  empat  tanaman berpotensi  terhadap  nyamuk Culex sp . ,  yaitu C. roseus, A. muricata, P. guajava, dan A. bilimbi .

## METODE

## Rancangan penelitian dan Etik
Penelitian  menggunakan  Rancang  Acak Lengkap  Faktorial,  dengan  dua  kali  ulangan. Variabel  yang  diteliti  (Tabel  1)  adalah  kombinasi ekstrak empat jenis tanaman (6 level), konsentrasi campuran  (9  level),  dan  waktu  paparan  (4  level). Keseluruhan proses penelitian telah mendapatkan persetujuan  etik  dari  Komisi  Etik  Politeknik Kesehatan  Tanjungkarang  Nomor  259/KEPK- TJK/IV/2023.

## Tabel 1. Level variabel penelitian.
No  Variabel Level Keterangan 1 Jenis tanaman 6 1. AB= C. roseus dan A. muricata 2. AC= C. roseus dan P. guajava
3. AD= C. roseus dan A. bilimbi 4. BC= A. muricata dan P. guajava 5. BD= A. muricata dan A. bilimbi 6. CD= P. guajava dan A. bilimbi 2 Konsentrasi campuran 9 1. 0% : 100%; 2. 10% : 90%; 3. 20% : 80%; 4. 30% : 70%; 5. 40% : 60%; 6. 50% : 50%; 7. 60% : 10%; 8. 70% : 30%; 9. 80% : 20%; 10. 90% : 10%; 11. 100% : 0% 3 Waktu paparan 4 1. 1 jam 2. 6 jam 3. 12 jam 4. 24 jam Koleksi tanaman dan ekstraksi
Daun seluruh tanaman ( C. roseus, A. muricata, P. guajava, dan A.  bilimbi )  dikumpulkan,  dicuci berulang dengan air leding untuk menghilangkan kotoran.  Selanjutnya  dipotong  halus,  dan dikeringkan tanpa sinar matahari langsung selama tujuh hari, dilanjutkan dengan oven (40 °C) selama enam  jam.  Daun  kering  kemudian  dihaluskan menggunakan  penggiling  listrik  (Anex  Germany). 100gram  bubuk  kering  (setiap  jenis  tanaman) direndam dalam labu dengan 1 liter ethanol 96% selama  2x24  jam.  Larutan  hasil  rendaman selanjutnya disaring dan diuapkan menggunakan rotary evaporator pada suhu 60 °C hingga tersisa bahan  pekat  (konsentrasi  100%).  Pencampuran ekstrak berdasarkan kombinasi jenis tanaman dan konsentrasi, mengikuti rancangan (Tabel 1).

## Pengumpulan dan Pemeliharaan Nyamuk
Telur  nyamuk Culex sp.  dikumpulkan  dari lingkungan  menggunakan ovitrap, yaitu  gelas plastik  berwarna  hitam,  berisi  2/3  air  bersih,  dan dipasangkan kertas saring untuk oviposisi nyamuk . Ovitrap yang  telah  diambil  kemudian  dipisahkan dengan  kertas  saring,  dikeringkan  pada  suhu ruangan,  dan  dilakukan  pengambilan  telur.  Telur yang  diperoleh  selanjutnya  ditetaskan  dan dilakukan  identifikasi  menggunakan  kunci identifikasi Harbach (Harbach, 1985).
Larva  yang  telah  terseleksi  selanjutnya dipelihara  hingga  dewasa  dan  bertelur.  Nyamuk dewasa dipelihara dalam kandang kaca berukuran 30x30x30  cm.  Koloni  dewasa  diberikan  larutan sukrosa  10%  dan  secara  berkala  diberi  darah. Setelah  tiga  hari, ovitrap disimpan  di  dalam kandang dan telur dikumpulkan dan dipindahkan ke nampan enamel. Selanjutnya menetaskan telur-
telur dan memelihara hingga menjadi larva instar- III  untuk  digunakan  sebagai  subjek  penelitian. Keseluruhan  proses  rearing  nyamuk  mengikuti Kauffman et al. (2017).

## Uji Bio-larvisida
Sesuai  dengan  WHO  (2005),  uji bioassay menggunakan  larva  instar-III.  Sebanyak  200  ml akuades  dimasukkan  ke  dalam  gelas  kimia  Pyrex 250 ml. Ekstrak (3 ml) dimasukkan ke dalam gelas, sesuai dengan rancangan perlakuan (Tabel 1). Dua puluh larva Culex sp . aktif dipaparkan pada setiap gelas  kimia,  sedangkan  kontrol  hanya  diberi akuades  (200  ml)  tanpa  penambahan  ekstrak tanaman.  Pengujian  dilakukan  dengan  dua pengulangan  untuk  setiap  perlakuan.  Mortalitas larva diamati dan dihitung selama 24 jam (1 jam, 6 jam, 12 jam, dan 24 jam). Percobaan dilakukan pada kondisi laboratorium pada suhu 28 ±2 °C dan kelembaban relatif 75 ±5%.

## Analisis statistik
Uji  ANOVA  Two-way  digunakan  untuk mengidentifikasi  perbedaan  mortalitas  larva berdasarkan ragam kombinasi tumbuhan, konsentrasi,  dan  waktu  paparan,  pada  Confident Level 95%. Analisis data menggunakan perangkat lunak statistik Statistical Program for Social Science (SPSS) 24.0.

## HASIL
Hasil  penelitian  (Gambar  1)  mendapatkan bahwa  perlakuan  dengan  ekstrak  tunggal ( A.  muricata,  P.  guajava, dan A.  bilimbi )  mampu memberikan  efek  mortalitas  setelah  satu  jam paparan,  yaitu  AB-1,  AD-1,  BC-11,  BD-1,  CD-1. Sedangkan perlakuan dengan kombinasi
campuran  pada  AB-2,  AC-10,  AD-10,  BC-2,  BC-5, BC-7,  BC-8,  BC-9,  BD-2,  BD-3,  BD-6,  BD-7,  BD-9, CD-2, CD-6, dan CD-7.
Setelah  enam  jam  paparan,  hampir  seluruh variasi  perlakuan  (54  dari  66  perlakuan) memberikan  efek  50%  mortalitas  larva.  Ekstrak tunggal dengan efek mortalitas 50% adalah AB-11, AC-11,  AD-1,  AD-11,  BC-1,  BC-11,  BD-1,  BD-11, CD-1,  dan  CD-11.  Sedangkan  pada  perlakuan kombinasi,  efek  mortalitas  50%  pada  44  variasi perlakuan. Pada akhir pengamatan (24 jam setelah paparan),  seluruh  larva  mengalami  kematian (mortalitas = 100%) pada seluruh perlakuan.
Gambar 1.d memberikan temuan menarik dari percobaan ini. Ekstrak tunggal A. muricata mampu
memberikan  efek  mortalitas  larva  hingga  70%, enam  jam  setelah  paparan.  Efek  mortalitas  yang sama  juga  diperoleh  pada  kombinasi  ekstrak A. muricata dan P. guajava, yaitu BC-2 dan BC-10. Sementara,  kombinasi  ekstrak  lainnya  hanya mampu  memberikan  efek  mortalitas  hingga  65% (Gambar 2). Hasil ini menunjukkan bahwa ekstrak A.  muricata dengan P.  guajava dapat  digunakan secara  tunggal  atau  berpasangan  dengan perbandingan 1/9 (atau 9/1).
(a) (b) (c) (d) (e) (f)
Gambar 1. Mortalitas larva Culex sp. berdasarkan jenis tanaman, konsentrasi campuran, dan waktu paparan. (a) AB= C. roseus dan A. muricata; (b) AC= C. roseus dan P. guajava; (c) AD= C. roseus dan A. bilimbi , (d) BC= A. muricata dan P. guajava ; (e) BD= A. muricata dan A. bilimbi ; dan (f) CD= P. guajava dan A. bilimbi .
10 5 25 40 30 35 40 45 40 45 35 45 50 65 55 70 65 60 55 60 55 65 55 50

## AB1  AB2 AB3 AB4 AB5 AB6 AB7 AB8 AB9 AB10 AB11
1 jam 6 jam 12 jam 24 jam 10 45 50 50 55 60 60 55 50 55 50 55 55 50 50 45 40 40 45 50 45 40 45 AC1 AC2 AC3 AC4 AC5 AC6 AC7 AC8 AC9 AC10 AC11
1 jam 6 jam 12 jam 24 jam 5 5 45 50 55 55 55 50 50 55 50 45 60 50 50 45 45 45 50 50 45 50 50 40

## AD1 AD2 AD3 AD4 AD5 AD6 AD7 AD8 AD9 AD10 AD11
1 jam 6 jam 12 jam 24 jam
5 5 5 5 5 20 50 65 65 60 50 60 55 50 60 70 50 50 30 35 40 45 40 40 45 35 30 30 BC1 BC2 BC3 BC4 BC5 BC6 BC7 BC8 BC9 BC10 BC11
1 jam 6 jam 12 jam 24 jam 5 5 5 10 5 10 50 60 55 65 60 45 45 65 55 50 55 45 35 40 35 40 45 50 35 35 50 45

## BD1 BD2 BD3 BD4 BD5 BD6 BD7 BD8 BD9 BD10 BD11
1 jam 6 jam 12 jam 24 jam
10 5 5 5 50 45 55 50 45 45 50 55 50 60 65 40 50 45 50 55 50 45 45 50 40 35

## CD1 CD2 CD3 CD4 CD5 CD6 CD7 CD8 CD9 CD10 CD11
1 jam 6 jam 12 jam 24 jam
Gambar 2 . Mortalitas (%) larva Culex sp. enam jam setelah paparan.
Berdasarkan  waktu,  mortalitas  larva  diamati selama  24  jam  paparan,  dicatat  dalam  empat waktu, yaitu 1 jam, 6 jam, 12 jam, dan 24 jam. Pada pengamatan  satu  jam  setelah  paparan,  diketahui bahwa  mortalitas  larva  terdapat  pada  21  jenis perlakuan. Mortalitas tertinggi pada perlakuan BC- 11  (20%),  yaitu  campuran A.  muricata (0%)  dan P.  guajava (100%).  Diikuti  mortalitas  10%  pada perlakuan  AB-1,  AC-10,  BD-6,  BD-9,  dan  CD-1. Sedangkan  sisanya  memberikan  efek  mortalitas 5% pada AB-2, AD-1, AD-10, BC-2, BC-5, BC-7, BC- 8, BC-9, BD-1, BD-2, BD-3, BD-7, CD-2, CD-6, dan CD-7.  Dari  hasil  tersebut  maka  jenis  tumbuhan yang  paling  cepat  memberikan  efek  mortalitas terhadap  larva Culex sp. secara berurutan  adalah A. muricata (B) , P. guajava (C) , dan A. bilimbi (D) .
Setelah  enam  jam  paparan,  mortalitas  larva Culex sp . tertinggi (70%) pada perlakuan BC-2. BC- 10,  dan  BC-11.  Diikuti  mortalitas  65%  pada perlakuan  BC-3,  BC-9,  BD-2,  BD-4,  BD-8,  BD-9. Mortalitas 60% pada perlakuan AC-5, AC-6, AC-10, AD-11, BC-4, BC-6, BC-7, BD-3, BD-5, Cd-1, CD-10. Sedangkan  mortalitas  terendah  pada  perlakuan AB-3, sebesar 30%. Hasil ini menunjukkan bahwa ekstrak A.  muricata (B)  dan P.  guajava (C) memberikan efek larvasida terbaik terhadap Culex sp.
Pada  pengamatan  24  jam  setelah  paparan, seluruh  larva  mengalami  kematian  (mortalitas= 100%)  pada  seluruh  jenis  perlakuan  (variasi kombinasi  jenis  tanaman  dan  variasi  konsentrasi campuran). Namun, berdasarkan hasil pengamatan secara  bertahap  (satu  dan  enam  jam),  dua  jenis tumbuhan  menunjukkan  efek  terbaik  terhadap mortalitas  larva Culex  sp., yaitu A.  muricata dan P. guajava.
Uji  two-way  ANOVA  (Alpha  5%)  diterapkan untuk menilai efek perlakuan terhadap mortalitas larva Culex sp.  Hasil  analisis  (Tabel  2)  tidak menunjukkan perbedaan mortalitas larva berdasarkan  kombinasi  tanaman  (P  =  0,084)  dan konsentrasi  campuran  (P  =  0,858).  Sementara, perbedaan  mortalitas  larva Culex sp.  secara signifikan  terlihat  berdasarkan  waktu  paparan (P  =  0,0001).  Waktu  paparan  menunjukkan hubungan positif dengan mortalitas larva; semakin lama  paparan  maka  semakin  tinggi  mortalitas larva.

## PEMBAHASAN
Hasil  penelitian  telah  membuktikan  bahwa empat  jenis  tanaman  yang  digunakan  ( C.  roseus, A.  muricata,  P.  guajava, dan A.  bilimbi )  memiliki efek  larvasida  terhadap Culex sp.  Seluruh  larva mengalami  kematian  setelah  terpapar  ekstrak tanaman  selama  24  jam,  baik  dengan  ekstrak tunggal  maupun  berpasangan  (Gambar  1).  Hasil penelitian ini sesuai dengan penelitian sebelumnya yang  menyimpulkan  bahwa  ekstrak C.  roseus memberikan  efek  larvasida  yang  signifikan terhadap Culex sp. ,  Anopheles sp., Aedes sp. (Ahyanti & Yushananta, 2022; Kamatchi et al., 2023; Pavunraj  et  al.,  2017;  Supenah,  2018).  Demikian pula  potensi  larvasida  dari  ekstrak A.  muricata (Ahyanti  &  Yushananta,  2022;  Kewa  et  al.,  2020; Kusnatin et al., 2012; Rodrigues et al., 2019, 2020; Santhosh  et  al.,  2015;  Widyastuti  et  al.,  2019), ekstrak P. guajava (Kartini & Sofia, 2022; Ntoumba et al., 2020; Rwang PG et al., 2016), dan A. bilimbi (Ahyanti et al., 2023; Rohmah et al., 2020).
70 70 70 20 30 40 50 60 70 80 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 M o rt al it as (%) Variasi konsentrasi campuran AB AC AD BC BD CD
Tabel 2. Mortalitas larva Culex sp. berdasarkan jenis tanaman, konsentrasi dan waktu paparan.
Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig. Corrected Model 157409,659 a 113 1393,006 36,781 0,000 Intercept 156609,470 1 156609,470  4135,179 0,000 Jenis tanaman 375,758 5 75,152 1,984 0,084 Konsentrasi campuran 205,114 10 20,511 ,542 0,858 Waktu paparan 146222,349 3 48740,783  1286,971 0,0001 Jenis tanaman * Konsentrasi campuran 922,159 50 18,443 ,487 0,998 Jenis tanaman * Waktu paparan 8187,879 15 545,859 14,413 0,0001 Konsentrasi * Waktu paparan 1496,402 30 49,880 1,317 0,144 Error 5680,871 150 37,872 Total 319700,000 264 Corrected Total 163090,530 263 R Squared = 96,5% (Adjusted R Squared = 93,9%)
Dari  empat  tanaman  yang  diperiksa,  tiga diantaranya menunjukkan efek mortalitas (5-20%) sejak  satu  jam  setelah  paparan,  secara berurutan adalah A.  muricata,  P.  guajava, dan C.  roseus . Setelah  enam  jam  paparan,  dua  jenis  tanaman menunjukkan  efek  mortalitas  hingga  70%,  yaitu A. muricata dan P. guajava . Kedua jenis tanaman efektif  sebagai  ekstrak  tunggal,  maupun berpasangan  (perbandingan  =  1/9).  Dari  temuan ini  maka  ekstrak A.  muricata dan P.  guajava merupakan  dua  jenis  tanaman  yang  sangat berpotensi  sebagai  larvasida,  karena  memiliki efektifitas yang tinggi dalam waktu cepat. Menurut WHO,  larvasida  dianggap  efektif  jika  mampu membunuh  larva  hingga  90-95%  larva  uji,  dalam waktu 72 jam (WHO, 2005).
Efektifitas larvasida dipengaruhi oleh kandungan senyawa bioaktif dalam tanaman. Hasil penelitian  Ahyanti  &  Yushananta  (2023a) melaporkan bahwa tiga tanaman tertinggi (dari 14 yang diperiksa) kandungan flavonoid dan saponin adalah A. muricata (0,47 dan 0,96), C. roseus (0,30 dan 0,77), serta P. guajava (0,24 dan 0,54). Senyawa bioaktif  tanaman  (flavonoid,  saponin,  dan  tanin) berperan  penting  dalam  pertahanan  kimia tanaman terhadap mikroorganisme dan serangga berbahaya (Pavela et al., 2019). Flavonoid, saponin, dan tanin dapat memberikan efek kematian pada larva melalui pencernaan, pernafasan, dan sistem syaraf  (Chaieb,  2017;  Govindarajan  et  al.,  2016; Hidayati  &  Suprihatini,  2020;  Pavela  et  al.,  2019; Rohmah et al., 2020; Yushananta & Ahyanti, 2021).
Hasil  analisis  statistik  (Tabel  2)  tidak menunjukkan perbedaan mortalitas larva
berdasarkan variasi kombinasi tanaman (P = 0,084) dan  variasi  konsentrasi  campuran  (P  =  0,858). Namun  secara  signifikan  berbeda  berdasarkan waktu  paparan  (P  =  0,0001).  Semakin  lama paparan,  maka  semakin  tinggi  mortalitas  larva Culex sp.  Hasil  penelitian  ini  berbeda  dengan Ahyanti  &  Yushananta  (2023b) terhadap  larva A.  aegypti, bahwa  efek  mortalitas  larva  terlihat sejak  lima  menit  setelah  paparan,  dan  adanya perbedaan mortalitas berdasarkan jenis tanaman, konsentrasi  dan  waktu,  seperti  yang  dilaporkan oleh  Ahyanti  &  Yushananta  (2023b) . Perbedaan hasil  ini  menunjukkan  bahwa  larva A.  aegypti cenderung  lebih  rentan  dibandingkan Culex sp. Menurut  Markus  et  al.  (2019) , larva Culex sp. memerlukan  konsentrasi  lebih  tinggi  untuk mencapai  LC 50 dibandingkan  dengan  larva Aedes sp.
Hubungan positif antara waktu paparan dengan mortalitas  larva  telah  dilaporkan  dari  beberapa penelitian. Semakin lama paparan, maka semakin tinggi mortalitas larva (Ahyanti et al., 2023; Ahyanti &  Yushananta,  2022,  2023b;  Juariah  &  Irawan, 2017;  Nasution  &  Ulina,  2022;  Pratama  & Yushananta,  2021;  Putri  &  Yushananta,  2022). Semakin  lama  larva  terpapar,  maka  semakin banyak  senyawa  racun  (bioaktif)  yang  masuk  ke dalam  tubuh  larva,  sehingga  menimbulkan kerusakan  pada  pencernaan,  pernafasan,  dan sistem syaraf.
Tiga  mekanisme  kerusakan  oleh  senyawa bioaktif terhadap larva (Ahdiyah & Purwani, 2015; Ahmad & Adriyanto, 2019; Juariah & Irawan, 2017; Pavela et al., 2019), yaitu 1) senyawa bioaktif yang
masuk melalui siphon akan menimbulkan kelayuan pada saraf dan kerusakan pada siphon, sehingga larva  tidak  dapat  bernapas;  2).  senyawa  bioaktif yang  masuk  ke  dalam  pencernaan  akan menghambat  metabolisme  sel  (menghambat transport  elektron  dalam  mitokondria),  sehingga pembentukan  energi  dari  makanan  sebagai sumber energi dalam sel tidak terjadi dan sel tidak dapat  beraktivitas;  3)  senyawa  bioaktif  dapat membentuk  kompleks  protein  dan  merusak membran  sel  dengan  cara  denaturasi  ikatan protein pada membran sel, sehingga membran sel menjadi lisis.
Walaupun A. muricata dan P. guajava yang telah terbukti  memiliki  efektifitas  larvasida  yang menjanjikan, namun penggunaan konsentrasi yang tinggi masih menjadi kendala untuk aplikasi secara meluas. Untuk itu, rekayasa senyawa bioaktif untuk meningkatkan  aktivitas  larvasida  sehingga  dapat menurunkan konsentrasi menjadi saran penelitian. Beberapa  keterbatasan  juga  diajukan  pada penelitian ini, antara lain: variasi sumber tanaman, variasi  sumber  telur  nyamuk,  penelitian  belum dilengkapi dengan uji toksisitas terhadap serangga non target, serta proses rearing hanya sampai F1, sehingga  masih  dimungkinkan  adanya  pengaruh lingkungan.

## SIMPULAN
Penelitian  telah  membuktikan  bahwa  empat tanaman  yang  diperiksa  berpotensi  sebagai larvasida  terhadap Culex sp..  Namun,  dua  jenis diantaranya  menunjukkan  efek  larvasida  terbaik, yaitu A. muricata dan P. guajava. Mortalitas larva mulai  terlihat  satu  jam  setelah  paparan  (5-20%), meningkat hingga 70% setelah enam jam paparan, dan  mencapai  100%  setelah  24  paparan. Penggunaan  konsentrasi  tinggi  masih  menjadi kendala  untuk  diaplikasikan  secara  meluas. Sehingga  rekayasa  senyawa  bioaktif  untuk menurunkan  konsentrasi  sekaligus  meningkatkan aktivitas larvasida menjadi saran penelitian.

## DAFTAR PUSTAKA
Ahdiyah, I., & Purwani, I. I. (2015). Pengaruh Ekstrak Daun Mangkokan ( Nathopanax scutellarium ) Sebagai Larvasida Nyamuk Culex sp. Jurnal Sains Dan Seni ITS , 4 (2), 33 – 36. https://doi.org/http://dx.doi.org/10.12962/j2337 3520.v4i2.10804
Ahmad, A., & Adriyanto, A. (2019). Efektivitas Serbuk Biji Pepaya ( Carica papaya L.) Terhadap Kematian Jentik (Larva) Culex sp. Jurnal Medikes (Media Informasi Kesehatan) , 6 (1), 104 – 112. https://doi.org/10.36743/medikes.v6i1.186 Ahyanti, M., & Yushananta, P. (2022). Kombinasi Ekstrak Daun Tapak Dara ( Catharanthus roseus ) dan Daun Sirsak ( Annona muricata ) Sebagai Bio- Larvasida. Ruwa Jurai: Jurnal Kesehatan Lingkungan , 16 (3), 113.
https://doi.org/10.26630/rj.v16i3.3611
Ahyanti, M., & Yushananta, P. (2023a). Kandungan Saponin dan Flavonoid Pada Tanaman Pekarangan Serta Potensinya Sebagai Bioinsektisida Lalat Rumah ( Musca domestica ). Ruwa Jurai: Jurnal Kesehatan Lingkungan , 17 (1),
31. https://doi.org/10.26630/rj.v17i1.3763
Ahyanti, M., & Yushananta, P. (2023b). Formulation,
Dosage, and Exposure Time of Natural Substances in Controlling Aedes aegypti Larvae. Poltekita : Jurnal Ilmu Kesehatan , 17 (3), 783 – 791. https://doi.org/10.33860/jik.v17i3.3353 Ahyanti, M., Yushananta, P., & Usman, S. (2023). Potential of Some Plants as Bioinsecticides of the House Fly ( Musca domestica ). The 1st UMSurabaya Multidisciplinary International Conference 2021 (MICon 2021) , 1020 – 1026. https://doi.org/10.2991/978-2-38476-022-0_113 Amutha, V., Deepak, P., Kamaraj, C., Balasubramani, G., Aiswarya, D., Arul, D., Santhanam, P., Ballamurugan, A. M., & Perumal, P. (2019). Mosquito-Larvicidal Potential of Metal and Oxide nanoparticles Synthesized from Aqueous Extract of the Seagrass, Cymodocea serrulata . Journal of Cluster Science , 30 (3), 797 – 812. https://doi.org/10.1007/s10876-019-01542-7 Benelli, G., & Beier, J. C. (2017). Current vector control challenges in the fight against malaria. Acta Tropica , 174 , 91 – 96. https://doi.org/10.1016/j.actatropica.2017.06.028 Bilal, H., Sahar, S., & Din, S. (2017). Bio-Pesticides:
New Tool for the Control of Aedes (Stegomyia) albopictus (Culicidae: Diptera) in Pakistan. Journal of Arthropod-Borne Diseases , 11 (2), 278 – 285. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/29062852 Chaieb, I. (2017). Saponins as Insecticides : A Review.
Journal of Plant. Protection , 5 (1), 39 – 50. http://www.tjpp.tn/SiteWeb/PreviousIssues/TJPP 5-1/4Ikbal.pdf Duguma, D., Ortiz, S. L., Lin, Y., Wilson, P. C., & Walton, W. E. (2017). Effects of a larval mosquito biopesticide and Culex larvae on a freshwater
nanophytoplankton ( Selenastrum capricornatum ) under axenic conditions. Journal of Vector Ecology , 42 (1), 51 – 59. https://doi.org/10.1111/jvec.12239 Floore, T. G. (2006). Mosquito larval control practices: Past and present. Journal of the American Mosquito Control Association , 22 (3), 527 – 533. https://doi.org/10.2987/8756- 971X(2006)22[527:MLCPPA]2.0.CO;2 Govindarajan, M., Rajeswary, M., & Benelli, G. (2016). Chemical composition, toxicity and non-target effects of Pinus kesiya essential oil: An eco- friendly and novel larvicide against malaria, dengue and lymphatic filariasis mosquito vectors. Ecotoxicology and Environmental Safety , 129 , 85 – 90. https://doi.org/10.1016/j.ecoenv.2016.03.007 Harbach, R. E. (1985). Pictorial keys to the genera of mosquitoes, subgenera of Culex and the species of Culex (Culex) occurring in southwestern Asia and Egypt, with a note on the subgeneric placement of Culex deserticola (Diptera: Culicidae). Mosquito Systematics , 17 (2), 83 – 107. https://www.biodiversitylibrary.org/content/part /JAMCA/MS_V17_N2_P083-107.pdf Hidayati, L., & Suprihatini, S. (2020). Pengaruh Pemberian Ekstrak Biji Mahoni ( Swietenia mahagoni ) Terhadap Kematian Larva Culex sp. ASPIRATOR - Journal of Vector-Borne Disease Studies , 12 (1), 45 – 52. https://doi.org/10.22435/asp.v12i1.2171 Juariah, S., & Irawan, M. P. (2017). Biolarvasida Ekstrak Etanol Kulit Nanas ( Ananans comosus L. Merr) Terhadap Larva Nyamuk Culex sp. Unnes Journal of Public Health , 6 (4), 232 – 236. https://doi.org/10.15294/ujph.v6i4.15842 Kamatchi, P. A. C., Maheswaran, R., Sivanandhan, S.,
Ignacimuthu, S., Balakrishna, K., Reegan, A. D., & Arivoli, S. (2023). Bioefficacy of ursolic acid and its derivatives isolated from Catharanthus roseus (L) G. Don leaf against Aedes aegypti , Culex quinquefasciatus , and Anopheles stephensi larvae. Environmental Science and Pollution Research , 30 (26), 69321 – 69329.
https://doi.org/10.1007/s11356-023-27253-1
Kamran, M., Shad, S. A., Binyameen, M., Abbas, N., Anees, M., Shah, R. M., & Hafez, A. M. (2022). Toxicities and Cross-Resistance of Imidacloprid, Acetamiprid, Emamectin Benzoate, Spirotetramat, and Indoxacarb in Field Populations of Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae). Insects , 13 (9), 830. https://doi.org/https://doi.org/10.3390/insects13
090830
Kartini, & Sofia. (2022). Effects of Guva Leaf Extract ( Psidium Guajava ) Against the Killness of Aedes aegypti Larvae. Science Midwifery, 20 (2), 980 –
986.
Kauffman, E., Payne, A., Franke, M., Schmid, M., Harris, E., & Kramer, L. (2017). Rearing of Culex spp. and Aedes spp. Mosquitoes. Bio-Protocol , 7 (17). https://doi.org/10.21769/BioProtoc.2542 Kewa, M. M., Almet, J., & Laut, M. M. (2020). Median Lethal Concentration (LC50) Ekstrak Daun Sirsak (Annona muricata Linn) Terhadap Larva Culex sp di Kota Kupang. Jurnal Kajian Veteriner , 8 (2), 147 – 152. https://doi.org/10.35508/jkv.v8i2.3078 Khan, H. A. A. (2022). An impact assessment of insecticides application on the non-targeted mosquito Aedes albopictus (Skuse) in Punjab rice fields, Pakistan. PeerJ , 10 , e13697. https://doi.org/10.7717/peerj.13697
Kumar, D., Kumar, P., Singh, H., & Agrawal, V. (2020). Biocontrol of mosquito vectors through herbal- derived silver nanoparticles: prospects and challenges. Environmental Science and Pollution Research , 27 (21), 25987 – 26024. https://doi.org/10.1007/s11356-020-08444-6 Kusnatin, L., Soendjoto, M. A., Indrayatie, E. R., & Rohman, T. (2012). Konsentrasi dan Waktu Pendedahan Efektif Ekstrak Daun Sirsak ( Annona Muricata L) Sebagai Larvasida Hayati Jentik Aedes aegypti . EnviroScienteae , 8 (3), 127 – 134. https://doi.org/http://dx.doi.org/10.20527/es.v8i 3.2078 Markus, Y. E. D. P., S.M.J.Koamesah, & Trisno, I.
(2019). Efektivitas Ekstrak Biji Kelor ( Moringa oleifera ) Terhadap Larva Aedes aegypti dan Culex sp. Instar III/IV. Cendana Medical Journal , 7 (2), 223 – 229.
https://doi.org/https://doi.org/10.35508/cmj.v7i 2.1793
Mittal, P. K., & Subbarao, S. K. (2003). Prospects of using herbal products in the control of mosquito vector. ICMR Bulletin , 33 , 1 – 10. https://main.icmr.nic.in/sites/default/files/icmr_b ulletins/bujanuary03.pdf
Nasution, A. N., & Ulina, Y. Y. (2022). Toxicity Test of The Crown of God Stemps ( Phaleria macrocarpa (Scheff.) Boerl.) Against Culex sp. Larvae. Jambura Journal of Health Sciences and Research , 4 (2), 587 – 595. https://doi.org/10.35971/jjhsr.v4i2.13943 Ntoumba, A. A., Meva, F. E., Ekoko, W. E., Foko, L. P.
K., Hondt, E. N., Schlüsener, C., Moll, B., Loe, G. E., Kedi, P. B. E., Fouda, J. Y. S., Janiak, C., &
Lehman, L. G. (2020). Biogenic Synthesis of Silver Nanoparticles Using Guava ( Psidium guajava ) Leaf Extract and Its Larvicidal Action against Anopheles gambiae . Journal of Biomaterials and Nanobiotechnology , 11 (01), 49 – 66. https://doi.org/10.4236/jbnb.2020.111004 Pavela, R., Maggi, F., Iannarelli, R., & Benelli, G.
(2019). Plant extracts for developing mosquito larvicides: From laboratory to the field, with insights on the modes of action. Acta Tropica , 193 , 236 – 271. https://doi.org/10.1016/j.actatropica.2019.01.019 Pavunraj, M., Veluchamy, R., Shanmugavel, S.,
Velayutham, V., & Sundaram, J. (2017). Larvicidal and Enzyme Inhibitory Effects of Acalypha fruticosa (F.) and Catharanthus roseus L (G) Don. Leaf Extracts Against Culex Quinquefasciatus (Say.) (Diptera: Culicidae). Asian Journal of Pharmaceutical and Clinical Research , 10 (3), 213. https://doi.org/10.22159/ajpcr.2017.v10i3.16029 Pratama, S. D., & Yushananta, P. (2021). Efektivitas Ekstrak Kulit Batang Maja ( Aegle marmelos L.) Terhadap Kematian Larva Nyamuk Anopheles sp. Ruwa Jurai: Jurnal Kesehatan Lingkungan , 15 (2), 67. https://doi.org/10.26630/rj.v15i2.2813 Putri, I. N. A., & Yushananta, P. (2022). Efektivitas Ekstrak Daun Pandan Wangi ( Pandanus amaryllifolius ) Sebagai Biolarvasida Terhadap Larva Culex sp. Ruwa Jurai: Jurnal Kesehatan Lingkungan , 15 (3), 109. https://doi.org/10.26630/rj.v15i3.3067 Rodrigues, A., Martins, V. E., & Morais, S. (2020). Larvicidal efficacy of plant extracts and isolated compounds from Annonaceae and Piperaceae against Aedes aegypti and Aedes albopictus . Asian Pacific Journal of Tropical Medicine , 13 (9), 384. https://doi.org/10.4103/1995-7645.290583 Rodrigues, Silva, Pinto, Lima dos Santos, Carneiro de Freitas, Martins, & Maia de Morais. (2019). Larvicidal and Enzymatic Inhibition Effects of Annona muricata Seed Extract and Main Constituent Annonacin against Aedes aegypti and Aedes albopictus (Diptera: Culicidae). Pharmaceuticals , 12 (3), 112. https://doi.org/10.3390/ph12030112 Rohmah, E. A., Subekti, S., & Rudyanto, M. (2020). Larvicidal Activity and Histopathological Effect of Averrhoa bilimbi Fruit Extract on Aedes aegypti from Surabaya, Indonesia. Journal of Parasitology Research , 2020 , 1 – 5. https://doi.org/10.1155/2020/8866373 Rwang PG, Effoim, O., Mercy, K., & Etokakpan, A.
(2016). Effects of Psidium guajava (Guava)
Extracts on Immature Stage of Mosquito. International Journal of Complementary & Alternative Medicine , 4 (5). https://doi.org/10.15406/ijcam.2016.04.00132 Santhosh, S. B., Yuvarajan, R., & Natarajan, D. (2015).
Annona muricata leaf extract-mediated silver nanoparticles synthesis and its larvicidal potential against dengue, malaria and filariasis vector. Parasitology Research , 114 (8), 3087 – 3096. https://doi.org/10.1007/s00436-015-4511-2 Schlechtriem, C., Fliedner, A., & Schäfers, C. (2012).
Determination of lipid content in fish samples from bioaccumulation studies: contributions to the revision of guideline OECD 305.
Environmental Sciences Europe , 24 (1), 13. https://doi.org/10.1186/2190-4715-24-13 Senthil-Nathan, S. (2020). A Review of Resistance Mechanisms of Synthetic Insecticides and Botanicals, Phytochemicals, and Essential Oils as Alternative Larvicidal Agents Against Mosquitoes. Frontiers in Physiology , 10 . https://doi.org/10.3389/fphys.2019.01591 Silalahi, C. N., Tu, W.-C., Chang, N.-T., Singham, G. V., Ahmad, I., & Neoh, K.-B. (2022). Insecticide Resistance Profiles and Synergism of Field Aedes aegypti from Indonesia. PLOS Neglected Tropical Diseases , 16 (6), e0010501.
https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0010501 Smith, L. B., Kasai, S., & Scott, J. G. (2016). Pyrethroid resistance in Aedes aegypti and Aedes albopictus : Important mosquito vectors of human diseases. Pesticide Biochemistry and Physiology , 133 , 1 – 12. https://doi.org/10.1016/j.pestbp.2016.03.005 Supenah, P. (2018). Uji Efektivitas Sari Daun Tapak Dara ( Catharanthus roseus ) Sebagai Larvasida Alami Nyamuk Aedes aegypti Instar III. JAKA: Jurnal Analis Kesehatan , 1 (1). https://ejournal.aakannasher.ac.id/index.php/aak /article/view/4
WHO. (2005). Guidelines for laboratory and field testing of mosquito larvicides. In World Health Organization . WHO/CDS/WHOPES/GCDPP. http://whqlibdoc.who.int/hq/2005/WHO_CDS_W HOPES_GCDPP_2005.13.pdf?ua=1 WHO. (2020). Vector-borne diseases . World Health Organization. https://www.who.int/news- room/fact-sheets/detail/vector-borne-diseases WHO. (2023). Lymphatic filariasis . World Health Organization. https://www.who.int/news- room/fact-sheets/detail/lymphatic-filariasis Widyastuti, D. A., Rahayu, P., & Dewi, L. R. (2019).
Potensi Ekstrak Sirsak ( Annona muricata ) sebagai Larvasida Pengendali Populasi Aedes
albopictus . Bioeksperimen: Jurnal Penelitian Biologi , 5 (1), 48 – 54.
https://doi.org/10.23917/bioeksperimen.v5i1.79
91
Yushananta, P. (2021). Dengue Hemorrhagic Fever and Its Correlation with The Weather Factor In Bandar Lampung City: Study From 2009-2018. Jurnal Aisyah : Jurnal Ilmu Kesehatan , 6 (1), 117 –
126. https://doi.org/10.30604/jika.v6i1.452
Yushananta, P., & Ahyanti, M. (2021). The Effectiveness of Betle Leaf ( Piper betle L.) Extract as a Bio- pesticide for Controlled of Houseflies ( Musca domestica L.). Open Access Macedonian Journal of Medical Sciences , 9 (E), 895 – 900. https://doi.org/10.3889/oamjms.2021.6886