## STUDI PERBANDINGAN ANALISIS VITAMIN E MINYAK SAWIT MERAH TERSAPONIFIKASI ANTARA METODE SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS DAN KCKT
[Comparative Study of Spectrophotometry UV- Vis and HPLC Method for the Analysis of Vitamin E in Saponified Red Palm Oil]
Arlina Mayharty Andulaa 1 , Ruslan 1* , Hardi Ys 1 , Dwi Juli Puspitasari 1
1) Jurusan Kimia, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Tadulako Jl. Soekarno Hatta, Kampus Bumi Tadulako Tondo Palu, Telp. 0451- 422611
Diterima 28 Desember 2016, Disetujui 21 Februari 2017

## ABSTRACT
A  research  about  a  comparative  study  of  spectrophotometry  UV-Vis  and  HPLC  method  for  the analysis  of  vitamin  E  in  saponified  red  palm  oil  has  been  done.  This  research  aims  to  compare  the results  of  analysis  using  Spectrophotometer  UV  -  Vis  and  HPLC  to  determine  the  concentration  of vitamin E in red palm oil previously saponified and extracted. HPLC analysis was carried out using an RP-18  column  and  mobile  phase  composed  a  methanol  and  water  (  86:14  ),  with  a  flow  rate  of  1 ml/min and  UV detection  at 290 nm. For the  Spectrophotometric UV-Vis analysis, hexane  was used as  a  solvent  and  the  wavelength  at  298,5  nm  was  selected  for  the  detection.  The  results  are  the concentration of  vitamin E  using spectrophotometric and HPLC method  was respectively  104.5 ppm and 127 ppm.
Keyword :  Vitamin E, Red Palm Oil, saponification, extraction, spectrophotometry Ultra Violet -Visible, High Performance Liquid Chromatography

## ABSTRAK
Telah  dilakukan  penelitian  tentang  Studi  Perbandingan  Analisis  Vitamin  E  Minyak  Sawit  Merah Tersaponifikasi  Antara  Metode  Spektrofotometri  UV-Vis  Dan  KCKT.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk membandingkan hasil analisis menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan KCKT dalam menentukan konsentrasi  vitamin  E  dalam  minyak  sawit  merah  yang  sebelumnya  telah  disaponifikasi  dan diekstraksi.  Analisis  dengan  metode  KCKT  menggunakan  kolom  fase  terbalik,  fase  gerak  yang digunakan  merupakan  campuran  metanol  dan  air  (86:14),  laju  alir  1  ml/menit  dan  dianalisis  pada panjang  gelombang  UV  290  nm.  Analisis  Spektrofotometri  UV-Vis,  menggunakan  heksan  sebagai pelarut  dan  dianalisis  pada  panjang  gelombang  298,5  nm.    Konsentrasi  vitamin  E  hasil  analisis dengan Spektrofotometri UV-Vis dan KCKT berturut-turut sebesar 104,5 ppm dan 127 ppm.
Kata Kunci :  Vitamin  E,  Minyak  Sawit  Merah,  Saponifikasi,  Ekstraksi,  Spektrofotometri  Ultra  Violet- Visibel, Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
*)Coresponding Author : ruslan_abdullah66@yahoo.co.id

## LATAR BELAKANG
Vitamin  E  termasuk  dalam  vitamin yang  larut  dalam  lemak  dan  berfungsi sebagai  antioksidan.  Vitamin  E  terbagi menjadi beberapa isomer, yaitu struktur α- tokoferol ,  β-  tokoferol,  γ-  tokoferol,  δ- tokoferol,  dan tokotrienol  (Świglo et  al., 2007).  Tumbuhan  yang  kaya  lemak  atau minyak  nabati,  seperti  kelapa  sawit, gandum,  dan  beras  katul  adalah  sumber utama  vitamin  E.  Sumber  lainnya  yang hanya  mengandung  tokoferol  berupa sereal , bunga  matahari,  minyak  zaitun, dan kacang (Bonnie & Choo , 2000).
Minyak  sawit  merah  ( Red  Palm Oil /RPO)  merupakan  salah  satu  produk dari  pengolahan  minyak  sawit  mentah yang  mengandung  karoten  dan  vitamin  E yang cukup tinggi (Ooi et al ., 1991). Choo et  al. (1993)  melaporkan  bahwa  isomer vitamin  E  yang  terdapat  dalam  minyak sawit  merah  adalah  α - tokoferol  (α-T),  α- tokotrienol  (α-T 3 ),  γ-tokotrienol  (γ-T 3 )  dan δ-tocotrienol  (δ-T 3 ). Dauqan et  al. (2011) melaporkan  bahwa  kandungan  vitamin  E dalam  minyak  sawit  merah  berturut-turut sebagai  berikut  α -tokoferol  sebesar  171 ppm , α-tokotrienol  (α-T 3 )  sebesar  294 ppm, γ-tokotrienol (γ-T 3 ) sebesar 367 ppm dan δ-tocotrienol  (δ-T 3) sebesar  126  ppm.
Penentuan  vitamin  E  dapat  dilakukan dengan  menggunakan  Kromatografi  Cair
Kinerja Tinggi ( KCKT) dan
Spektrofotometer Uv-Vis.
KCKT  adalah  metode  yang  banyak digunakan  untuk  menetapkan  tokoferol dan  tokotrienol  dalam  sediaan  makanan
maupun  nutrisi  lainnya.  Semua  bentuk tokoferol dan  tokotrienol dapat dipisahkan dan  ditetapkan  kadarnya  dengan  metode KCKT  baik  dengan  menggunakan  kolom fase normal maupun fase terbalik (Lampi, 2013). Meskipun demikian, KCKT memiliki kekurangan  antara  lain  biaya  analisis yang  relatif  mahal  dan  membutuhkan keterampilan khusus dalam proses pengoperasiannya,  sehingga  dibutuhkan suatu  metode  yang  dapat  menganalisis vitamin  E  dengan  peralatan  yang  mudah diperoleh  dan  biaya  analisisnya  lebih ekonomis.  Sementra  itu,  spektrofotometri UV-Vis  merupakan  instrumen  yang  paling sering  digunakan  di  laboratorium  kimia analisis, salah satunya untuk menentukan konsentrasi suatu senyawa tunggal maupun campuran (Rohman, 2007).
Oleh  karena  itu,  perlu  dilakukan penelitian  untuk  membandingkan  antara metode  Spektrofotometri  UV-Vis  dan KCKT  dalam  menentukan  konsentrasi vitamin  E  dalam  sampel  minyak  sawit merah yang telah tersaponifikasi.

## METODE PENELITIAN Bahan dan Peralatan
Bahan yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  minyak  sawit  merah yang diperoleh dari laboratorium penelitian  Jurusan  Kimia  FMIPA  Untad, standar vitamin E yaitu α-tokoferol (Merck) (>96%),  etanol  95%,  natrium  hidroksida, antioksidan  BHT  (Butil  Hidroksi  Toluen), 2-propanol,  heksan,  metanol,  akuades, natrium klorida.
Alat yang digunakan adalah seperangkat alat spektrofotometer  UV-Vis (Cecil    CE  2021  2000  Series),  kuvet, mikropipet,  peralatan  gelas  yang  umum digunakan  di  laboratorium,  penangas  air, corong pisah, neraca analitik, seperangkat alat KCKT.

## Prosedur Penelitian
Saponifikasi  Minyak  Sawit  Merah  dan Ekstraksi Vitamin E
Sebanyak  20  mL  minyak  sawit merah  disaponifikasi  selama  45  menit dalam erlenmeyer tertutup dengan penambahan  20  mL  etanol  (95%),  60  mL NaOH  0,25  M  dan  50  mL  BHT  0,3  M. Erlenmeyer  ditempatkan  dalam  penangas air  suhu  70 o C  dan  dikocok  setiap  5-10 menit selama proses saponifikasi. Setelah proses saponifikasi, erlenmeyer didinginkan  dalam  penangas  es  dan ditambahkan  150  mL  NaCl  0,02  M (Kresnawaty, et al., 2012). Hasil saponifikasi dimasukkan ke dalam corong pemisah,  bagian  atas  adalah  fraksi minyak  yang  tak  tersabunkan,  di  tengah adalah  fraksi  minyak  yang  tersabunkan dan bagian bawah adalah fraksi air (ESA, 2002).  Selanjutnya,  fraksi  yang  tak tersabunkan  ditambahkan    dengan  70  ml metanol  dan  didiamkan  hingga  terbagi menjadi  dua  fraksi.  Bagian  atas  diambil ditambahkan  dengan  20  mL  2-propanol (1%)  dalam  heksana  (Kresnawaty et  al.,
2012)..  Fraksi  yang  larut  heksan  (bagian atas)  diambil  untuk  analisis  dengan Spektrofotometer UV-Vis dan KCKT.

## Analisis  Vitamin  E  dengan  Metode
Spektrofotometri UV-Vis
a. Pembuatan  Larutan  Induk  Standar

## Vitamin E Konsentrasi 100 ppm
Menimbang  0,01  g  vitamin  E  murni, melarutkannya dengan heksan dan memasukkan ke dalam  labu ukur  100 mL dan  ditambahkan  heksan  hingga  tanda batas.
b. Pembuatan Seri Larutan Standar
Mengencerkan larutan standar induk 100  ppm  dengan  heksan  pada  masing- masing  labu  ukur  25  mL  dengan konsentrasi 12,5; 17,5; 25 dan 50 ppm.
c. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Larutan  baku  diukur  absorbansinya untuk  menentukan  panjang  gelombang maksimum  pada  kisaran  280  -  328  nm menggunakan  spektrofotometer  UV-Vis. Panjang  gelombang  maksimum  yang diperoleh  ditentukan  dari  nilai  absorban tertinggi.
d. Pembuatan Kurva Standar
Mengukur  absorbansi  seri  larutan standar  12,5;  17,5;  25  dan  50  ppm  pada panjang  gelombang  maksimum  kemudian dibuat  kurva  baku,  dimana  absorban sebagai  ordinat  dan  konsentrasi  sebagai absis.  Dari  kurva  baku  ini  diperoleh persamaan linear y = ax + b.
e. Penentuan Konsentrasi Sampel
Melakukan  pengukuran  absorbansi terhadap ekstrak vitamin E hasil ekstraksi. Nilai absorbansi yang diperoleh digunakan untuk  menghitung  konsentrasi  vitamin  E dengan  menggunakan  persamaan  garis linear  regresi  dari  kurva  kalibrasi/standar
yang  telah  dibuat  sehingga  bisa  diketahui konsentrasi sampel minyak sawit merah.

## Analisis Vitamin E Menggunakan KCKT
a.  Pembuatan larutan standar
Larutan  induk  diencerkan  dengan metanol  hingga  diperoleh  deret  larutan standar  0,25;  0,5;  2,5;  5,0;  25,0  dan  50,0 ppm  kemudian  disaring  dengan  PTFE 0,45 µm dan diinjeksikan ke sistem KCKT.

## b.  Pengerjaan sampel
Sebanyak 5 gram sampel yang telah dihomogenkan  dimasukkan  ke  dalam Erlenmeyer  100  mL  dan  menambahkan etanol  95%  sebanyak  40  mL.  Kemudian menambahkan  asam  pirogalat  sebanyak 50  mg  dan  dilewatkan  gas  nitrogen sebelum dipanaskan. Setelah itu menambahkan  KOH  50%  sebanyak  10 mL.  larutan  kemudian  dikocok  dan dipanaskan  dalam waterbath pada  suhu ±80 o C  selama  45  menit  dan  dikocok setiap  10  menit.  Setelah  larutan  dingin, ditambahkan  dengan  asam  asetat  glacial dan  didinginkan  kembali  hingga  suhu ruang.  Kemudian  memasukkan  ke  dalam labu  ukur  100  mL  dan  himpitkan  larutan dengan  THF-etanol  95%  (1:1)  dan homogenkan. Setelah itu didiamkan hingga  1  jam  pada  suhu  ruang.  Larutan tersebut kemudian  disaring  dengan  PTFE 0,45µm dan diinjeksikan ke sistem KCKT.
Perhitungan  kadar  Vitamin  E  dalam sampel  dengan  menggunakan  kurva kalibrasi  standar  dengan  persamaan garis:  y  =  bx  +  a,  dengan  rumus  sebagai berikut :
Konsentrasi Vitamin E (ppm) =
Keterangan: A.spl   = Luas area sampel a =  intersep dari kurva kalibrasi standar b = slope dari kurva kalibrasi standar
fp = faktor pengenceran sampel

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Saponifikasi  Minyak  Sawit  Merah Dan Ekstraksi Vitamin E
Hasil  saponifikasi  dan  ekstraksi dapat dilihat pada gambar 1 berikut.
(a)
(b)
Gambar 1 (a) Hasil Saponifikasi Minyak Sawit
Merah, (b) Hasil Ekstraksi Vitamin E
Saponifikasi dan ekstraksi dilakukan untuk
memisahkan komponen tersaponifikasi  yang  dapat  mempengaruhi determinasi  vitamin  E.  Pada  tahap saponifikasi,  pemanasan  pada  suhu  70 o C dilakukan  untuk  mempercepat  reaksi.  Ini merupakan  kondisi  optimal  karena  suhu yang  lebih  tinggi  dan  waktu  yang  relatif lama  akan  merusak  isomer  vitamin  E (Ryynanen et  al. ,  2004;  Lampi,  2013;
Martha et  al. ,  2012)  sedangkan  waktu yang relatif singkat menyebabkan penurunan  tingkat  regenerasi  isomer (Martha et  al. ,  2012).  Penambahan  BHT berfungsi  mencegah  oksidasi  vitamin  E oleh udara, maupun oleh pemanasan dan NaCl  berfungsi  mengendapkan  sabun
sehingga  mudah  dipisahkan  antara  fraksi tersabunkan, fraksi tidak tersabunkan dan fraksi air.
Pada tahap ekstraksi, metanol berfungsi menarik senyawa-senyawa polar  yang  larut  di  dalamnya  sedangkan ekstraksi  menggunakan  2  propanol  (1%) dalam heksan berfungsi menarik senyawa polar  dalam  2-propanol dan senyawa non polar ke dalam heksan.
Hasil  Analisis  Konsentrasi  Vitamin  E dengan  Metode  Spektrofotometri  UV- Vis
Penentuan panjang gelombang maksimum  harus  dilakukan  sebelum analisa  meskipun  beberapa  penelitian telah dilakukan dalam penentuan panjang gelombang maksimum. Hal ini disebabkan preparasi  sampel  dan  kondisi  alat  serta lingkungan  disetiap  penelitian  berbeda. Berdasarkan spektrum vitamin E (Gambar 2) diperoleh titik tertinggi kurva  ialah pada panjang gelombang 298,5 nm.
Gambar 2.  Spektrum Larutan Standar
Vitamin E pada Penentuan

## Panjang Gelombang Maksimum
Penggunaan heksan sebagai pelarut dan  blanko  disebabkan  karena  heksan merupakan  pelarut  yang  tidak  berwarna
dan  tidak  mengandung  ikatan  rangkap pada  struktur  molekulnya  sehingga  tidak akan mengganggu analisis vitamin E juga sifatnya  yang  non-polar  baik  untuk melarutkan  vitamin  E  yang  juga  bersifat non-polar.
Meskipun  sampel  yang  dianalisis berwarna  namun  senyawa  vitamin  E dapat  menyerap  radiasi  pada  panjang gelombang UV. Hal ini disebabkan vitamin E  memiliki  gugus  fungsi  yang  disebut gugus  kromofor  sehingga  senyawa  ini dapat  menyerap  radiasi  pada  panjang gelombang UV.
Nilai absorbansi sampel yang teramati pada panjang gelombang maksimum  ialah  2,9736.  Nilai  absorbansi sampel  diplotkan  ke  dalam  persamaan linear  sehingga  diperoleh  konsentrasi vitamin E sebesar 104,5 ppm.
Hasil  Analisis Konsentrasi  Vitamin  E dengan Metode KCKT
Pada analisis KCKT ini tidak dilakukan pengukuran panjang gelombang maksimum  dan  pemilihan  laju  alir  karena metode  yang  dipakai  sudah  tervalidasi dan  sering  digunakan  dimana  panjang gelombang  yang  digunakan  yaitu  290  nm dengan laju alir 1 ml/menit.
Berdasarkan  kromatogram  dapat diketahui adanya vitamin E dalam sampel dengan  cara  membandingkan  waktu retensi  sampel  yang  diduga  merupakan vitamin  E  dengan  larutan  standar  vitamin E.  Berdasarkan  kromatogram  (Gambar  3 dan  4)  dapat  dilihat  bahwa  waktu  retensi sampel  maupun  7  seri  larutan  standar
relatif  sama  yaitu  untuk  sampel  21,928 menit  sedangkan  untuk  larutan  standar waktu retensi rata-rata yaitu 21,668 menit dengan  waktu  analisis  kurang  dari  25 menit. Sementara itu, waktu retensi antara sampel  dan  standar  memakan  waktu relatif lama. Hal ini disebabkan penggunaan  kolom  fasa  terbalik  (RP) dimana  fasa  gerak  yang  digunakan  ialah senyawa  polar  sedangkan  fase  diam adalah  non-polar.  Senyawa  yang  bersifat polar  akan  lebih  dulu  terelusi  mengikuti fase  gerak  yang  polar  sedangkan  vitamin E  yang  merupakan  senyawa  non-polar akan  terelusi  paling  akhir  karena  terjerap pada fase diam yang bersifat non-polar.

## Gambar 3. Kromatogram Standar Vitamin E

## Gambar 4. Kromatogram Sampel
Setelah  diperoleh  persamaan  kurva kalibrasi, maka dapat dilakukan perhitungan dengan memplotkan nilai luas area sampel ke dalam sebuah persamaan.
Berdasarkan hasil perhitungan  diperoleh  konsentrasi  vitamin
E sebesar 127 ppm
Perbandingan Hasil Analisis
Konsentrasi  Vitamin  E  antara  Metode Spektrofotometri UV-Vis dan KCKT Prinsip dasar antara metode Spektrofotometri  UV-Vis  dengan  metode KCKT  berbeda.  Metode  Spektrofotometri UV-Vis  memiliki  prinsip  dasar  absorbansi, sedangkan  untuk  KCKT  memiliki  prinsip dasar kromatografi. Namun detektor KCKT  yang  digunakan  pada  penelitian  ini menggunakan detektor UV-Vis yang prinsipnya  sama  dengan  Spektrofotometri UV-Vis yaitu pengukuran didasarkan pada absorbansi  pada  dua  rentang  panjang gelombang yaitu panjang gelombang sinar ultraviolet  dan  pada  panjang  gelombang sinar tampak.
Panjang gelombang maksimum yang  diperoleh  pada  KCKT  ialah  290  nm sedangkan panjang gelombang maksimum  pada  spektrofotometri  UV-Vis ialah  298,5  nm  yang  keduanya  masih berada  pada  rentang  panjang  gelombang UV.  Panjang  gelombang  maksimum  ini relevan dengan beberapa penelititan yang pernah dilakukan yaitu panjang gelombang  maksimum  vitamin  E  berada pada  rentang  290-300  nm  (Hossu et  al. , 2009;  Martha et  al. ,  2012;  Lampi,  2013).
Diasumsikan  bahwa  perbedaan  panjang gelombang  maksimum  ini  disebabkan perbedaan  pelarut  yang  digunakan  untuk melarutkan standar, dimana pelarut KCKT yang  digunakan  ialah  metanol  sedangkan pada  spektrofotometri  UV-Vis  pelarutnya adalah  n-heksan.  Selain  itu,  perbedaan instrumen  yang  digunakan  juga  diprediksi
menyebabkan
perbedaan panjang gelombang maksimum.
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  metode  spektrofotometri menghasilkan kadar vitamin E yang relatif mendekati  dengan  hasil  KCKT  dengan selisih  konsentrasi  22,5  ppm.  Pada penelitian  ini,  hal  tersebut  disebabkan karena sampel yang dianalisis mengalami perlakuan pendahuluan yang sama antara metode  KCKT  dan  spektrofotometri  UV- Vis  yaitu  dengan  cara  saponifikasi  dan ekstraksi.

## Gambar 5. Perbandingan  konsentrasi  vitamin E  antara  metode  Spektrofotometri UV-Vis dan KCKT
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang dilakukan  oleh  Han  &  Choo  (2012)  dan Lampi (2013), panjang gelombang maksimum vitamin E berkisar antara 298- 300  nm  sehingga  dalam  penelitian  ini diasumsikan  senyawa  yang  terserap adalah  benar  merupakan  vitamin  E. Meskipun demikian, kemungkinan
senyawa  lain  yang  dapat  terserap  pada panjang gelombang tersebut masih ada. Perbandingan  data  konsentrasi  sampel minyak  sawit  merah  tersaponifikasi  dari
masing-masing metode pada penelitian ini disajikan dalam Gambar 5.
Meskipun  hasil  analisis  konsentrasi vitamin  E  antara  metode  Spektrofotometri UV-Vis  dengan  metode  KCKT  cenderung mendekati,  namun  bukan  berarti  dapat diklaim  bahwa  kandungan  vitamin  E secara  kuantitatif  adalah  valid  karena sejauh  ini  belum  ada  laporan  yang membuktikan tentang analogi kedua metode  tersebut  yang  divalidasi  dengan metode penetuan struktur-
IR,
Spektrofotometer Massa dan RMI. Meskipun  demikian  adanya  pendekatan metode  yang  dilakukan  seperti  serapan panjang gelombang pada Spektrofotometer UV-Vis dan KCKT mengindikasikan bahwa adanya kandungan vitamin E yang dapat dianalisis secara kuantitatif.

## KESIMPULAN
Konsentrasi vitamin E yang dianalisis  menggunakan  KCKT  ialah  127 ppm  sedangkan konsentrasi  sampel  yang dianalisis menggunakan metode Spektrofotometer  UV-Vis  sebesar  104,5 ppm.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Secara khusus peneliti
menyampaikan ucapan terima kasih kepada Prof. DR. H. Mappiratu, MS.

## DAFTAR PUSTAKA
Bonnie T.Y.P., Choo, Y.M. 2000. Practical guide to establishing palm carotenoids  profile  by  HPLC  with three dimensional diode array
0 20 40 60 80 100 120 140 Spektro UV- Vis KCKT K o n sen tr asi ( p p m ) Metode
detector . Palm Oil Development , 33 : 13-17
Choo  YM.,  AN  Ma.,  CK  Ooi.,  SC  Yap.,  Y Basiron.  1993.  Red  Palm  Oil  a- carotene  rich  nutritious  oil.  PORIM
Information Series No. 11 : Palm Oil Research. Institute of Malaysia Dauqan  E.,  Sani  HA.,  Abdullah  A.,
Muhamad  H.,  Gapor  AM.  2011. Vitamin  E  and  Beta  Carotene
Composition in Four Different
Vegetable Oils. American Journal of
Applied Sciences 8 (5): 407-412
ESA  Analytical.  2002. Determination  of tocopherol and tocotrienols , Aplication Note, ESA, Inc, Chelmsford, USA Han NM., Choo, YM. 2012. Chromatographic Analysis of Tocopherols  and  Tocotrienols  in
Palm Oil. Jurnal Of Chromatography Scie. 50 : 283-286
Hossu,  Ana-Maria.,  C  Radulescu,  M  Ilie.
Berlin. 9-11 October 2006. International  Symposium  for  High Performance Thin Layer Chromaography  :  TLC  analysis  of pharmaceutical preparations containing vitamins A, D and E
Kresnawaty  I.,  Budiani,  A.,  Tri-Panji  dan Suharyanto. 2012. Isolasi dan
mikroenkapsulasi  vitamin  E  dari crude  palm  oil  sebagai  sumber antioksidan bahan pangan. J.
Menara Perkebunan. 80(2) : 68-76
Lampi AM. 2013. Analysis of Tocopherols
and Tocotrienols by HPLC . Department Of Food and Environmetal Science. Finland:
University Of Helsinky.
Martha  SA.,  FF  Karwur,  FS  Rondonuwu.
2012. Metode  Purifikasi  Vitamin  E Dari  Minyak  Kelapa  Sawit. In  :
Seminar  Nasional  X  Pendidikan Biologi FKIP UNS
Ooi  CK.,  Choo,  YM.,  Ong,  ASH.  1991.
Recovery of Carotenoids , US Patent No. 5019668
Rohman,  Abdul.  2007. Kimia  Farmasi Analisis , Pustaka Pelajar, Yogyakarta Ryynanen  M., Lampi, A., Salo-Vaananen, P.,  Ollilainen,  V  and  Piironen,  V.
2004. A small-scale sample preparation  method  with  HPLC analysis for determination of tocopherols and tocotrienols in cereals. J  Food  Comp  Anal .  17  : 749-765
Świglo  AG.,  Sikorska,  E.,  Khmenlinskii,  I and  Sikorski,  M.  2007.  Tocopherol content  in  edible  plants  oil , Polish  J Food Nutr Sciences . 57 : 157-161.