## GAMBARAN PERTUMBUHAN Escherichia coli
PADA MEDIA ALTERNATIF UBI JALAR PUTIH (Ipomoea batatas)

## DENGAN PENAMBAHAN  KALDU DAGING
Nur Rezky Amaliah 1) , Mujahidah Basarang 2) , Prawansa Amran 3) , Rahmawati 2)
1) RSUD KH Hayyung Kabupaten Selayar
2) Akademi Analis Kesehatan Muhammadiyah Makassar
3) Poltekkes Kemenkes Makassar Alamat Korespondensi: nurrezkyamaliahh@gmail.com

## Abstrak
Media pertumbuhan bakteri dapat berasal dari bahan alam yang tersedia melimpah di Indonesia yang dikenal sebagai media alternatif. Salah satu bahan alam yang dimaksud adalah ubi jalar putih. Media  ubi  jalar  putih  telah  digunakan  sebagai  media  pertumbuhan  Escherichia  coli  namun pertumbuhannya  kurang  optimal  dibanding  pada  media  nutrient  agara  (NA)  karena  kurangnya kandungan protein pada media alternative tersebut. Kebutuhan protein pada media ubi jalar untuk pertumbuhan  bakteri  dapat  tercukup  melalui  penambahan  kaldu  daging.  Tujuan  penelitian  ini adalah  untuk  mengetahui  pertumbuhan  Escherichia  coli  pada  media  ubi  jalar  putih  dengan penambahan  kaldu  daging.  Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimen  laboratorium menggunakan    bakteri  uji  Escherichia  coli  yang  diinokulasi  dengan  metode  spread  plate  dan dihitung dengan metode Total Plate Count (TPC). Dari hasil penelitian menunjukkan Escherichia coli  pada media  ubi  jalar putih 6,0x10 6 CFU sedangkan pada  media  NA  sebanyak 3,1x10 6 CFU. Berdasarkan hasil uji statistik dengan menggunakan uji T nilai signifikansi  lebih besar dari 0,05 yang  menandakan  tidak  ada  perbedaan  yang  signifikan  antara  jumlah  rata-rata  bakteri  yang tumbuh pada media NA dan media ubi jalar putih. Hasil penelitian menunjukkan bahwa media ubi jalar  putih  dengan  penambahan  kaldu  daging  dapat  digunakan  sebagai  media  alternatif pertumbuhan Escherichia coli.
Kata Kunci: Media, Ubi Jalar Putih, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Pemeriksaan kultur bakteri dilakukan untuk mengetahui sifat-sifat dari bakteri  yaitu  dengan  menumbuhkan  dan membiakkan  bakteri  menggunakan  suatu medium yang memenuhi semua kebutuhan nutrisi bakteri untuk menunjang pertumbuhan  bakteri  tersebut.  Ketahanan dan kesinambungan pertumbuhan mikroorganisme bergantung pada persediaan  nutrisi  yang  mencukupi  dan lingkungan pertumbuhan yang baik (Cappoucino  dan  James,  2013).  Nutrisi yang  dibutuhkan  untuk  pertumbuhan mikroorganisme meliputi
karbon, nitrogen,  unsur  non  logam  seperti  sulfur dan  fosfor,  unsur  logam  seperti  kalsium (Ca),  natrium  (Na),  kalium  (K),  tembaga
(Cu), mangan (Mn), besi (Fe), vitamin, air dan  energi  (Cappucino,  2014).  Karbon merupakan substrat utama untuk metabolisme  bakteri  sehingga  dijadikan
sumber  nutrisi  bakteri.  Karbon  dapat diperoleh  dari  karbohidrat,  protein,  dan lemak (Radji dalam Arianti, 2011).
Media  pertumbuhan  bakteri  dapat berupa media sintetik dan media alternatif. Media  sintetik  adalah  media  yang mengandung  komponen-komponen  yang diketau  secara  pasti.  Seperti  media Nutrient  Agar  (NA)  yang  tersusun  atas ekstrak  daging,  pepton,  air  dan  agar-agar (Irianto  dalam  Arianti,  2016).  Sedangkan media alternatif adalah media yang terbuat dari  bahan  alam  yang  tidak  diketahui secara  pasti  komponen-komponennya. Beberapa  peneliti  telah  berhasil  membuat media  pertumbuhan  mikrorganisme  dari sumber daya alam yang mudah digunakan. Seperti  pemanfaatan  polong-polongan yaitu  kacang  tunggak,  kacang  hijau  dan kacang  kedelai  hitam  yang  digunakan sebagai media pertumbuhan mikroorganisme  (Arulanantham et  al ,
2012:  Ravimannan et  al ,  2014).  Media yang  berasal  dari  sayuran  seperti  wortel, buncis,  tomat  dan  labu  juga  dapat digunakan  sebagai  media  pertumbuhan mikroorganisme (Deivanayaki 2012). Pada penelitian lain bahkan menggunakan limbah  sayuran  seperti  kulit  bawang merah, kulit bawang putih dan kulit jagung sebagai  media  pertumbuhan    beberapa mikroorganisme (Bere, 2015).
Penelitian  serupa  dilakukan  oleh Arianti  (2016)  dengan  menggunakan media yang terbuat dari ekstrak singkong, ubi  jalar  kuning  dan ubi  jalar  putih  untuk menumbuhkan Escherichia  coli dan Bacillus subtilis . Pertumbuhan paling baik adalah  pada  media  yang  terbuat  dari ekstrak ubi jalar putih namun pertumbuhan bakteri  tersebut  hasilnya  tidak  seoptimal pada  media  NA  yang  digunakan  sebagai kontrol . Hal  tersebut  bisa  terjadi  karena kandungan  protein  pada  ubi  jalar  putih relatif  rendah  yaitu  1,5  g  tiap  100  gr  ubi jalar.  Protein  dibutuhkan  bakteri  untuk proses  metabolismenya  (Cappucino  dan Sherman, 2013). Untuk mencukupi kandungan  protein  pada  media  ubi  jalar putih  tersebut  dapat  dilakukan  dengan penambahan  kaldu  daging  pada  media. Penambahan  kaldu  daging  digunakan sebagai  pengganti  ekstrak  daging  seperti pada  media  NA  yang  merupakan  sumber protein untuk pertumbuhan bakteri.
Ubi jalar merupakan sumber karbohidrat  non  beras  tertinggi  keempat setelah  padi,  jagung,  dan  ubi  kayu.  Ubi jalar putih mengandung 35,7 gr karbohidrat  tiap  100  gram  ubi  jalar. Kandungan  karbohidrat  pada  ubi  jalar putih yang relatif tinggi dapat dimanfaatkan sebagai sumber nutrisi untuk pertumbuhan  bakteri.  Media  dari  bahan ubi jalar putih memiliki keuntungan yaitu sebagai  media  pertumbuhan  bakteri  yang bernilai  ekonomis  dengan  harga  yang murah,  mudah  didapat  dan  terdapat sumber nutrisi untuk pertumbuhan bakteri. Kandungan  gizi  yang  dimiliki  oleh    ubi jalar  putih  diantaranya;  karbohidrat, protein, lemak, kalsium, phosphor,
vitamin,  air,  karoten  dan  serat  (Arianti, 2016).
Berdasarkan  uraian  di  atas  peneliti bermaksud  meneliti  media  alternatif pengganti  media  Nutrien  Agar  (NA) menggunakan  ubi  jalar  putih  dengan penambahan kaldu daging untuk mengetahui gambaran pertumbuhan bakteri Escherichia coli.

## METODE PENELITIAN
Alat dan Bahan Alat yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  petridisk  (pyrex), tabung  reaksi  (pyrex),  rak  tabung  reaksi, beaker glass 500 ml, beaker glass 100 ml, erlenmeyer,  hot  plate  magnetic,  water bath,  pisau,  batang  pengaduk,  magnetik stirrer,  kain  penyaring  atau  kertas  saring, timbangan  analitik,  inkubator,  batang gelas  kaca  bengkok  steril/  spreader, bunsen,  autoclave,  ose,  korek  api,  pinset, mikroskop dan pena.
Bahan  yang  digunakan  dalam penelitian ini adalah ubi jalar putih, media Nutrien  Agar  (NA),  daging  sapi  segar, agar-agar (swallow), aquadest, NaOH 0,05 N,  kapas,  aluminium  foil,  gula,  pH  stick indicator, biakan murni bakteri Escherichia coli , tissue, spirtus, NaCl, dan kertas label.
Prosedur Kerja

## Pembuatan Kaldu Daging
Pembuatan  kaldu  daging  dilakukan dengan  membersikan  daging  dari  lemak selanjutnya ditimbang 250 gr daging segar.
Daging dipotong kecil-kecil lalu ditambahkan aquadest kemudian
dipanaskan  hingga  mendidih  selama  1-2 jam.  Kaldu  daging  disaring  untuk mendapatkan  kaldu  yang  jernih  (Safitri dan Novel, 2010).

## Pembuatan media ubi jalar putih
Ubi  jalar  ditimbang  sebanyak  75  g dipotong-potong kecil lalu dimasukkan ke dalam  250  mL  dan  dididihkan  sampai umbi  menjadi  lembut.  Selanjutnya  umbi disaring  menggunakan  kain  penyaring untuk memisahkan partikel ubi jalar yang tidak  larut  dan  mendapatkan  ekstrak  dari
ubi  jalar.  Ke  dalam  ekstrak  ubi  jalar ditambahkan gula sebanyak 5 g dan agar 5. Media  dihomogenkan  dengan  magnetik stirer  kemudian  disterilkan.  Sebelum media  dituang  ke  cawan  petri,  terlebih dahulu ditambahkan NaOH 0,05 N sampai pH  nya  menjadi  netral.  (Arianti,  2016).
Sebagai  pembanding,  media  NA  dibuat untuk
mengetahui perbandingan pertumbuhan Escherichia coli pada media NA dan media ubi jalar putih.
Inokulasi Escherichia coli  pada media Biakan  murni Escherichia  coli diencerkan  dengan  menggunakan  NaCl 0,9%.  Pengenceran  bertingkat  dilakukan sampai pengenceran 100.000 kali atau 10 - 5. Suspensi  bakteri  sebanyak  0,1  mL diinokulasi  pada  masing-masing  cawing petri yang berisi media ubi jalar putih dan media NA dan telah diberi label 10 -1 , 10 -2 ,
10 -3 ,  10 -4 dan  10 -5 menggunakan  metode sebar. Suspensi disebarkan pada permukaan  media  dengan  batang  gelas kaca  bengkok  steril  sampai  merata  pada permukaan media. Cawan petri dibalik dan diinkubasi  pada  suhu  37 0 C  selama  24-48 jam.

## Pengamatan Koloni Bakteri
Dilakukan  pengamatan  terhadap koloni  bakteri  yang  tumbuh  pada  media meliputi  warna  koloni,  bentuk  koloni, ukuran  koloni,  permukaan  koloni  dan pinggiran koloni.

## Penghitungan Jumlah Koloni
Jumlah  koloni  yang  tumbuh  pada media dihitung yaitu antara 30-300 koloni.
Masing-masing cawab petri dari pengenceran  berbeda  dihitung  jumlah koloninya. Jumlah koloni yang memenuhi syarat dikalikan dengan faktor pengencerannya akan diperoleh angka/jumlah  bakteri  per  1  gram/  1  cc sampelnya (Waluyo, 2008).
Pengamatan morfologi bakteri Dilakukan  pewarnaan  Gram  untuk mengamati  morfologi Escherichia  coli yang  tumbuh  pada  media  ubi  jalar  putih dan media NA. Pada kaca objek yang telah dibersihkan dibuat suspensi bakteri dengan mengambil  biakan  bakteri  pada  media
sebanyak 1 ose dengan 1 ose NaCl 0,9 %. Setelah  sediaan  bakteri  difiksasi,  sedian digenangi  Kristal  Violet  selama  1  menit, zat  warna  kemudian  dibuang  dibilas dengan air mengalir lalu diteteskan larutan lugol hingga menutupi seluruh permukaan sediaan,  didiamkan  selama  1  menit. Sediaan kemudiaan dicuci dengan alkohol 95%  sampai  tidak  ada  lagi  zat  warna, kemudiaan  dibilas  dengan  air  mengalir. Sediaan digenangi dengan safranin selama 45  detik,  kemudiaan  dibilas  dengan  air mengalir.  Sediaan  kemudian  dikeringkan, lalu  diamati  dibawah  mikroskop  lensa objektif  100x  (Cappucino  dan  Sherman, 2013).

## Analisis Data
Jumlah  koloni  bakteri  pada media  ubi  jalar  putih  dan  media  NA diuji statistik dengan menggunakan uji T  independen  dengan  menggunakan tingkat signifikansi 5%.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilaksanakan  pada  tanggal  26  April  –  19 Mei  2018  di  Laboratorium  Mikrobiologi
Fakultas Kedokteran Universitas Hasanuddin  Makassar  dengan  membuat media  dari  ubi  jalar  putih  sebagai pengganti  media  Nutrien  Agar  yang ditambahkan  kaldu  daging  untuk  melihat pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli didapatkan hasil sebagai berikut : Tabel 1. Jumlah Koloni Escherichia coli
pada Media dari Ubi Jalar Putih Media Jumlah koloni per pengenceran Populasi bakteri (CFU/ml) 10 -3 10 -4 10 -5 Nutrient Agar 255  208  143 6,0 x 10 6 Ubi jalar putih 235  120 79 3,1 x 10 6

## Sumber : Data Primer, 2018
Berdasarkan tabel di atas, diperoleh hasil  perhitungan  jumlah  bakteri  pada media NA ( Nutrien Agar ) adalah 6,0 x 10 6
CFUdan  jumlah  bakteri  pada    media  ubi jalar putih adalah 3,1 x 10 6 CFU.
Berdasarkan gambar di atas didapatkan hasil  penyebaran pertumbuhan yang terjadi pada media dari ubi jalar putih rata-rata  sama  dengan  pertumbuhan  pada media kontrolnya dalam hal ini media NA. Tampak koloni yang padat berwarna putih susu,  ukuran  koloni  kecil,  bulat,  dan permukaan rata atau datar.
Setelah dilakukan pengamatan morfologi  dan  perhitungan  jumlah  koloni dilakukan uji konfirmasi dengan pewarnaan  gram.  Dari  hasil  pewarnaan gram  yang  dilakukan  pada  kedua  media tersebut  didapatkan  bakteri  berbentuk basil, gram negatif berwarna merah. Untuk menumbuhkan suatu bakteri dibutuhkan suatu media pertumbuhan  yang  menunjang  nutrisi untuk  pertumbuhan  bakteri  tersebut. Nutrisi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan  mikroorganisme  meliputi karbon, nitrogen, unsur non logam seperti sulfur  dan  fosfor,  unsur  logam  seperti kalsium  (Ca),  natrium  (Na),  kalium  (K), tembaga  (Cu),  mangan  (Mn),  besi  (Fe), vitamin,  air  dan  energi  (Cappucino  dan Sherman,  2013).  Menurut  Arianti  (2015) media  NA  dapat  diganti  dengan  media yang terbuat dari bahan-bahan alami yang mengandung  nutrisi  untuk  pertumbuhan bakteri. Salah satunya ubi jalar putih yang kaya  akan  kandungan  karbohidrat  yang dapat  digunakan  sebagai  sumer  karbon untuk pertumbuhan bakteri. Selain karbohidrat ubi jalar putih juga mengandung  protein,  lemak,  kalsium, phospor, besi, vitamin, serat dan karoten. Hasil  yang  diperoleh  pada  kedua media tersebut untuk setiap pengencerannya  didapatkan  pertumbuhan koloni bakteri yang padat, dimana rata-rata pertumbuhan  koloni  pada  media  ubi  jalar putih dan NA (Nutrien Agar) hampir sama. Koloni yang tumbuh pada kedua media ini berwarna  putih  susu,  berbentuk  bulat, berukuran kecil, dan memiliki permukaan yang  rata.  Namun  penyebaran  koloni tunggal tidak merata ke seluruh permukaan media, hanya setengah dari luas permukaan  media  sedangkan  sisanya terbentuk  spreader  atau  koloni  yang menyatu  dan  besar.  Hal  ini  dapat disebabkan  salah  satunya  karena  cara penyebaran  sampel  yang  kurang  merata sehingga  ada  sebagian  sampel  yang menumpuk  di  salah  satu  sisi  media  yang menyebabkan  koloni  yang  tumbuh  pada bagian  tersebut  berbentuk  spreader  atau koloni yang menyatu dan besar.
Setelah dilakukan pengamatan morfologi, selanjutnya koloni dari tiap-tiap pengenceran dihitung dengan memperhatikan  syarat Standar  Plate
Counts (SPC).  Dari  hasil  perhitungan (Tabel  2)  didapatkan  jumlah  koloni  pada media kontrol (NA) masih lebih tinggi dari media ubi jalar putih. Jumlah koloni pada media  NA  untuk  setiap  pengencerannya yaitu; 2,6x10 6 CFU untuk pengenceran 10 - 3 CFU,  2,1x10 7 CFU  untuk  pengenceran 10 -4 , dan 1,4x10 8 CFU untuk pengenceran 10 -5 sedangkan untuk media dari ubi jalar putih  didapatkan  jumlah  koloni  2,4x10 6 CFU untuk pengenceran 10 -3 , 1,2x10 7 CFU
a b c Gambar  1.  a.  Koloni Escherichia  coli pada  media  NA,  b.  Koloni
Escherichia  coli pada  media  dari  ubi  jalar  putih,  c. Morfologi Escherichia coli
untuk pengenceran 10 -4 , dan 7,9x10 7 CFU untuk pengenceran 10 -5 . Sedangkan untuk pengenceran  10 -1 dan 10 -2 tidak  dapat dihitung  karena  terbentuk  koloni  yang menyatu  dan  besar  yang  tidak  memenuhi Standar Plate Counts (SPC). Berdasarkan hasil perhitungan jumlah  bakteri  yang  tumbuh  pada  media
NA dan media ubi jalar putih dilakukan uji statistik  dengan  menggunakan  uji  T independen  dengan  menggunakan  tingkat signifikansi  5%  atau  0,05,  dimana  dari hasil uji T tersebut nilai Signifikansi yakni 0,458 lebih besar dari 0,05 sehingga dapat disimpulkan  bahwa  tidak  ada  perbedaan yang signifikan antara jumlah rata-rata dari bakteri  yang  tumbuh  pada  media  NA  dan media ubi jalar putih. Sehingga media ubi jalar  putih  dengan  penambahan  kaldu daging dapat digunakan sebagai pengganti media sintesis yang biasa digunakan untuk menumbuhkan bakteri dalam hal ini media NA ( Nutrien Agar ).
Selain  faktor  nutrisi  seperti  sumber karbon, nitrogen, yang tersedia pada media ubi  jalar,  pertumbuhan Escherichia  coli
dipengaruhi beberapa faktor, yaitu temperatur,  pH,  sumber  nitrogen,  fosfor, sulfur,  dan  mineral  lain.    Sebagian  besar bakteri  tumbuh  optimal  pada  suhu  tubuh manusia.  Akan  tetapi,  beberapa  bakteri dapat  tumbuh  dalam  lingkungan  ekstrem yang  berada  di  luar  batas  pertahanan organisme eukariotik. Kebanyakan bakteri tumbuh  subur  pada  pH  6,5-7,5.  Sangat sedikit bakteri yang dapat tumbuh pada pH asam (di bawah pH 4). Ketika dibiakkan di laboratorium, bakteri sering memproduksi asam  yang  biasanya  berpengaruh  pada pertumbuhan  bakteri  itu  sendiri  (Radji, 2010).

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  maka dapat  disimpulkan  bahwa  pertumbuhan bakteri Escherichia  coli pada  media  dari ubi  jalar  putih  yang  ditambahkan  kaldu daging  sama  dengan  media  NA  yakni,
tampak  koloni  yang  berwarna  putih  susu, berukuran  kecil,  berbentuk  bulat  dan memiliki  permukaan  yang  rata.  Serta
diperoleh  hasil  uji  statistik  dengan menggunakan uji T, dimana nilai Signifikansi  yakni  0,458  lebih  besar  dari 0,05  yang  artinya  tidak  ada  perbedaan yang signifikan antara jumlah rata-rata dari bakteri  yang  tumbuh  pada  media  NA  dan media ubi jalar putih.

## SARAN
Bagi peneliti selanjutnya disarankan untuk  membuat  ekstrak  ubi  jalar  putih dalam  bentuk  tepung  agar  penyimpanan bahan  ubi  tahan  lama  dan  praktis digunakan.  Selain  itu  disarankan  untuk mengkombinasikan  media  dari  umbi- umbian yang kaya akan sumber
karbohidrat dengan bahan kacang- kacangan yang kaya akan protein. DAFTAR PUSTAKA Arianti Widya. 2016. Pertumbuhan Bakteri  E.  coli  dan  Bacillus subtilis Pada Media Singkong, Ubi Jalar Putih, dan Ubi Jalar Kuning  Sebagai  Substitusi media NA (Skripsi) . Surakarta: Universitas Muhammadiyah Surakarta Arulanantham,  R.,  Pathmanathan,  S., Ravimannan,  N.,  &  Niranjan,
K.  2012. Alternative  Culture Media  For  Bacterial  Growth Using  Different  Formulation Of Protein Sources . Journal of
Natural  Product  and  Plant resourse, 2 (6); 697-700
Berde,  C.  V.,  &  Berde,  V.  B.  2015.
Vegetable Waste as Alternative Microbiological Media  for  Laboratory  and Industry . World  Journal  of Pharmacy and Pharmaceutical  Sciences , 4 (5), 1488-1494. Cappucino,  J.,  G.,  Sherman,  N.  2014. Manual Laboratorium Mikrobiologi . Jakarta: EGC Deivanayaki  M,  &  Iruthayaraj,  A.  2012. Alternative Vegetable Nutrient Source for Microbial Growth. International Journal
of Biosciences (IJB) , 2 (5): 47- 51. Jawetz,  Melnick,  &  Adelberg’s.  2005.
Mikrobiologi Kedokteran. Salemba: Medika Radji, Maksum. 2010. Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi & Kedokteran . Jakarta: EGC. Safitri,  R.,  Novel,  S.  2010. Medium Analisis Mikroorganisme . Jakarta: CV. Trans Info Media Waluyo  Lud.  2008. Teknik  dan  Metode Dasar  Dalam  Mikrobiologi . Malang: UMM Press.