AKTIVITAS ANTIBAKTERI EKSTRAK KARANG LUNAK Klyxum sp.

## YANG DIPEROLEH DARI TELUK MANADO
Gabriel Juliani Lalamentik 1) , Defny Silvia Wewengkang 1) , Henki Rotinsulu 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
The  Manado  bay  waters  are  the  habitat  of  soft  coral  Klyxum  sp.,  that  contains  potential bioactive  compounds,  which  can  be  utilized  in  the  health  field.  This  study  aims  to  determine  the antibacterial  activity  of  the  extract  and  fraction  of  soft  coral  Klyxum  sp.  against  Staphylococcus aureus and Escherichia coli bacteria. Samples were extracted by maceration and fractionation using ethanol,  methanol,  n-hexane,  and  chloroform  solvents,  respectively.  Antibacterial  activity  was performed  using  diffusion  method  agar  (disc  diffusion  Kirby  and  Bauer).  The  results  showed  soft coral  Klyxum  sp.  Obtained  from  Manado  Bay,  against  Staphylococcus  aureus  only  chloroform fraction, n-hexane fraction, and ethanol extract having antibacterial activity and against Escherichia coli only chloroform fraction, n-hexane fraction and methanol fraction having antibacterial activity, with antibacterial power class against Both bacteria are categorized as weak.
Keywords : Antibacterial Activity, soft coral, Klyxum sp., Staphylococcus aureus, Escherichia coli

## ABSTRAK
Perairan  teluk  Manado  merupakan  habitat  dari  karang  lunak Klyxum sp.  yang  memiliki kandungan  senyawa  bioaktif  potensial  yang  dapat  dimanfaatkan  dibidang  kesehatan.  Penelitian  ini bertujuan untuk mengetahui adanya aktivitas antibakteri dari ekstrak dan fraksi karang lunak Klyxum sp.  yang  diperoleh  dari teluk  Manado  terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli . Sampel  diekstraksi  secara  maserasi  dan  fraksinasi  menggunakan  pelarut  etanol,  metanol,  n-heksan, dan  kloroform.  Aktivitas  antibakteri  antibakteri  dilakukan  menggunakan  metode  difusi  agar  ( disc diffusion Kirby and Bauer) . Hasil penelitian menunjukan karang lunak Klyxum sp. yang diperoleh dari Teluk Manado, terhadap Staphylococcus aureus hanya fraksi kloroform, fraksi n-heksan, dan ekstrak etanol  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri  dan  terhadap Escherichia  coli hanya  fraksi  kloroform, fraksi  n-heksan  dan  fraksi  metanol  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri , dengan  golongan  daya antibakteri terhadap kedua bakteri dikategorikan lemah.
Kata kunci : Aktivitas antibakteri, karang lunak, Klyxum sp, Staphylococcus aureus, Escherichia coli

## PENDAHULUAN
Laut  menutupi  71%  dari  permukaan bumi, oleh sebab itu sangat banyak potensi yang bisa diambil dari laut  seperti  sumber makanan,  zat  warna,  kosmetik  bahkan obat-obatan.  Pemanfaatan  organisme  laut banyak digunakan sebagai sumber senyawa  obat  baru.  Hal  ini  disebabkan oleh  kemampuan  organisme  laut  seperti tumbuhan  dan  invertebrata  laut  dalam memproduksi senyawa kimia yang mempunyai  keanekaragaman  hayati  yang tinggi  dengan  struktur  kimia  yang  khas (Sayed et al. , 2001).
Berbagai penelitian menunjukan bahwa  biota  laut  memiliki  potensi  yang sangat besar dalam menghasilkan senyawa-senyawa aktif yang dapat digunakan sebagai bahan baku obat. Sejak tahun 1980-an, perhatian dunia pengobatan mulai  terarah  ke  biota  laut  yang  diketahui dapat  menghasilkan  senyawa  aktif  (Ismet, 2007) salah satu biota laut yang berpotensi untuk  bahan  baku  obat  adalah  karang lunak ( Soft Coral ).
Karang  lunak  merupakan  sumber yang  kaya  akan  senyawa  bioaktif  seperti terpenoid,  steroid,  dan  steroid  glikosida. Radhika  (2006),  dalam  penelitiannya melaporkan  bahwa  sekitar  50%  ekstrak karang lunak menunjukan sifat racun pada ikan, selain itu banyak metabolit sekunder yang  dihasilkan  oleh  karang  lunak memiliki aktivitas biologi seperti antifungal, sitotoksik, antineoplastik, antimikroba,  inhibitor  HIV  dan  anti- inflamatori.
Bakteri  patogen  merupakan  bakteri yang  dapat  menimbulkan  penyakit  pada manusia.  Pemakaian  antibiotik  yang  tidak tepat  dan  dosis  yang  terlalu  berlebihan dapat menimbulkan resistensi pada bakteri. Resistensi  pada  bakteri  menyebabkan bakteri  lebih  sulit  dihambat  dan  dibunuh,
sehingga  perlu  alternatif  baru  senyawa antibakteri  dari  alam  yakni  salah  satunya dari karang lunak (Gunawan, 2007).
Dari  keseluruhan  delapan  genera karang lunak yang ditemukan dari penelitian  distribusi  karang  lunak  di perairan teluk Manado oleh Maramis et al.
(2013) Klyxum sp . adalah  karang  lunak urutan  kedua  yang  paling  banyak  ditemui dengan total  individu  140 pada lokasi non reklamasi dan lokasi reklamasi.
Klyxum sp. mengandung  senyawa bioaktif yang dapat dimanfaatkan dibidang kesehatan. Senyawa bioaktif yang terdapat dalam karang lunak Klyxum sp. merupakan senyawa dari golongan diterpenoid dengan nama senyawa simplexin P-S, simplexin A dan eunicellin (Shwu et al ., 2012; Usman, 2014).
Melihat  perairan  teluk  Manado sebagai lokasi distribusi karang lunak serta kandungan senyawa bioaktif yang potensial  dari  karang  lunak Kylxum sp., maka  perlu  dilakukan  penelitian  untuk mengetahui aktivitas biologi seperti antibakteri  pada  karang  lunak Kylxum sp. yang berada pada perairan teluk Manado.

## METODE PENELITIAN
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  November  2016  sampai  dengan Maret
2017 di
Laboratorium
Farmakognosi  dan  Fitokimia  Program
Studi  Farmasi  Fakultas  Matematika  dan
Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas  Sam Ratulangi, dan Laboratorium Mikrobiologi
Program Studi Farmasi Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam Universitas Sam Ratulangi.
Alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu masker, sarung tangan, gunting,  snorkel,  fins,  kantong  plastik, kamera,  wadah  kaca,  pisau,  Erlenmeyer, corong, rotary  evaporator, timbangan
digital,  corong  pisah,  gelas  ukur,  gelas kimia,  cawan  petri,  autoklaf,  pinset, pembakar  spritus, magnetic  stirrer ,  pipet tetes,  mikro  tub,  batang  pengaduk, Laminar  air  flow, rak  tabung  reaksi, tabung reaksi, lemari pendingin, inkubator, cakram ( paper disc) , eksikator, mikropipet, jangka sorong, vial, pot  salep, penutup mata, jas lab.
Bahan-bahan  yang  digunakan  yaitu karang  lunak Klyxum sp.  bakteri  uji Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli ,  etanol,  aquadest,  metanol,  n-heksan, kloroform, nutrient  broth ,  nutrien  agar, siprofloksasin paper disc ,  label,  spidol permanen, tissue, aluminium  foil ,  kertas saring, kapas.

## Pengambilan sampel
Sampel  karang  lunak  diambil  dari perairan  pulau  Siladen  menggunakan  alat bantu  (masker,  snorkel  dan  fins).  Sampel difoto  dan  di  ambil,  lalu  dimasukkan  ke dalam kantong plastik, kemudian langsung dibawa  ke  Laboratorium  Fitokimia  dan Farmakognosi  Program  Studi  Farmasi Universitas  Sam  Ratulangi.  Kemudian sampel  rajang  atau  dipotong  kecil-kecil, dimasukan  dalam  botol  lalu  langsung diekstraksi dengan metode maserasi dengan  etanol  96%.  Sebagian  dari  sampel disimpan  dalam  vial  untuk  diawetkan sebagai voucher dan  diberi  label  serta nomor sampel, untuk selanjutnya dideterminasi.

## Ekstraksi Sampel
Ekstrak  karang  lunak Klyxum sp. sebanyak  359,7  g  dibuat  dengan  cara maserasi.  Sampel  dipotong  kecil-kecil dimasukkan  ke  dalam  botol,  kemudian direndam  dengan  pelarut  etanol  96% sampai sampel terendam semuanya, dan di
biarkan  selama  24  jam.  Sampel  yang direndam  disaring  menggunakan  kertas saring menghasilkan filtrat 1 dan debris 1. Debris  1  kemudian  direndam  dengan pelarut etanol  96%  sampai  sampel terendam  semuanya  dan  dibiarkan  selama 24 jam, sampel tersebut disaring menggunakan  kertas  saring  menghasilkan filtrat  2  dan  debris  2.  Debris  2  kemudian direndam  dengan  pelarut  etanol  96% sampai  sampel  terendam  semuanya  dan dibiarkan  selama  24  jam,  sampel  tersebut disaring menggunakan kertas saring menghasilkan filtrat 3 dan debris 3. Filtrat 1,  2,  dan  3  dicampur  menjadi  satu kemudian disaring, lalu dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga kering dan selanjutnya ditimbang menggunakan timbangan analitik,
diperoleh  ekstrak  etanol  sampel  sebanyak 8,0906 g. Selanjutnya ekstrak kasar karang lunak  digunakan  dalam  fraksinasi  dan pengujian antibakteri.

## Fraksinasi Sampel
Sebanyak  5,0800  g  dimasukkan kedalam  erlenmeyer,  kemudian  dilarutkan dengan  metanol  80%  sebanyak  100  ml. Setelah  larut,  dimasukan  kedalam  corong pisah  dan  ditambahkan  pelarut  n-heksan sebanyak 100 ml setelah itu dikocok dalam corong  pisah  sampai  homogen.  Dibiarkan hingga  terbentuk  lapisan  metanol  dan lapisan  n-heksan.  Masing-masing  lapisan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan  n-heksan  selanjutnya  dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga kering,  lalu  ditimbang  dan  diperoleh ekstrak fraksi n-heksan sebanyak 0,4788 g. Selanjutnya  lapisan  metanol  ditambahkan akuades  100  mL  kemudian  dipartisi dengan pelarut kloroform dengan perbandingan  1:1  v/v  setelah  itu  dikocok
dalam  corong  pisah  sampai  homogen. Dibiarkan  hingga  terbentuk  dua  lapisan yaitu lapisan metanol dan lapisan kloroform.
Masing-masing
lapisan ditampung  dalam  wadah  yang  berbeda. Lapisan kloroform selanjutnya dievaporasi menggunakan rotary  evaporator hingga kering lalu ditimbang dan hasil inilah yang dinamakan  fraksi  kloroform.  Lapisan metanol  dievaporasi  menggunakan rotary evaporator hingga  kering  lalu  ditimbang (Loing et  al., 2016).  Ketiga  fraksi  yang diperoleh akan digunakan dalam pengujian antibakteri.

## Sterilisasi Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian aktivitas antibakteri ini disterilkan  terlebih  dahulu.  Alat-alat  gelas disterilkan  dengan  autoklaf  pada  suhu 121˚C  selama  ±  15  menit,  pinset  dibakar dengan  pembakaran  diatas  api  langsung dan media disterilkan diautoklaf pada suhu 121˚C selama 15 menit (Mpila, 2012).

## Pembuatan media cair B1
Nutrient broth 0,26 g dan akuades sebanyak  20  mL  diaduk  sampai  rata kemudian  dibuat  homogen  menggunakan magnetic  stirrer lalu  diautoklaf  pada  suhu 121˚C  selama  15  menit.  Dipipet  1  mL media  cair,  kemudian  masukkan  dalam tabung reaksi dan tutup dengan aluminium foil . Media cair B1 siap digunakan sebagai media kultur bakteri (Ortez, 2005).

## Pembuatan Media Uji
Nutrien  agar  2,8  g  dan  akuades sebanyak  100  mL  diaduk  sampai  rata kemudian disterilkan diautoklaf pada suhu 121˚C  selama  15  menit,  kemudian didinginkan  sampai  suhu  40˚C.  setelah
dingin  dipindahkan  pada  cawan  petri (Ortez, 2005).

## Pembuatan Kontrol Negatif
Kontrol  negatif  yang  digunakan dalam  penelitian  ini  yaitu  menggunakan metanol,  dengan  cara  membuat  larutan stok metanol dengan mengambil sebanyak 200 μL metanol kemudian di totolkan pada paper  disc .  Kontrol  negatif  digunakan sebagai  pembanding  dan  pelarut  untuk pembuatan  larutan  kontrol  positif  dan pembuatan larutan uji.

## Pembuatan Larutan Uji
Dibuat  larutan  uji  dengan  cara ditimbang  ekstrak  kasar  karang  lunak sebanyak  1  mg,  kemudian  dilarutkan dalam  200  μL  sehingga  menghasilkan konsentrasi  larutan  uji  sebesar  250  μg/50 μL.  Perlakuan  yang  sama  dilakukan  pada fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  dan fraksi metanol (Ortez, 2005).

## Kultur Bakteri
Bakteri  yang akan digunakan  yaitu Staphylococcus  aureus dan Escherichia coli .  Bakteri  yang  akan  dikultur  diambil dari  lemari  pendingin  kemudian  dipipet sebanyak 100 μL kedalam  masing-masing tabung reaksi berisi media cair sebanyak 1 mL, kemudian ditutup dengan menggunakan aluminium foil dan diinkubasi  dalam  inkubator  pada  suhu 37˚C selama 24 jam (Ortez, 2005).

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  yaitu  metode  difusi  agar ( disc  diffusion  Kirby  and  Bauer ).  Pada pengujian  aktivitas  antibakteri  ini,  cakram ( paper  disc) yang  digunakan  berukuran  6 mm dengan daya serap 50 μL tiap cakram.
Sampel yang telah ditentukan konsentrasinya  (250  μg/50  μL)  ditotolkan pada masing-masing cakram dengan menggunakan  mikropipet.  Untuk  media agar  yang sudah diautoklaf pada suhu 121 ˚C  selama  15  menit,  kemudian  dinginkan sampai  suhu  40  ˚C.  Ambil  sebanyak  100 μL  bakteri  yang  telah  di  kultur  dalam tabung reaksi, dipipet dan diinokulasi pada media agar lalu tuangkan media agar yang telah  diinokulasi  bakteri  ke  cawan  petri, dan  tunggu  sampai  media  agar  mengeras. Masing-masing  cawan  petri  diberi  label dan  nomor  sampel  yang  sesuai.  Letakkan kertas  cakram  yang  telah  ditotolkan sampel  uji  karang  lunak Klyxum sp. dengan  pinset  kedalam  cawan  petri  lalu diinkubasi selama 24 jam (Ortez, 2005).

## Pengamatan  dan  Pengukuran  Diameter Zona Hambat/Bunuh
Pengamatan  dilakukan  setelah  24 jam  masa  inkubasi.  Daerah  pada  sekitaran cakram  menunjukkan  kepekaan  bakteri terhadap  antibiotik  atau  bahan  antibakteri yang  digunakan  sebagai  bahan  uji  yang dinyatakan dengan diameter zona hambat/bunuh.  Diameter  zona  hambat diukur  dalam  satuan  millimeter  (mm) menggunakan  jangka  sorong  dengan  cara diukur  diameter  total  zona  bening/keruh cakram.  Kemudian  diameter  zona  hambat tersebut  dikategorikan  kekuatan  daya antibakterinya  berdasarkan  penggolongan Davis dan Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN Ekstraksi dan Fraksinasi
Sampel di ekstraksi dengan menggunakan  metode  maserasi.  Tujuan pemilihan  metode  maserasi  karena  cara pengerjaan  dan  peralatan  yang  digunakan sederhana serta mudah dilakukan,
walaupun  kekurangan  dari  metode  ini adalah pengerjaannya lama dan penyariannya  kurang  sempurna  (DepKes RI,  2000).  Agar  senyawa  kimia  di  dalam sampel dapat terekstrak secara menyeluruh maka di lakukan remaserasi atau pengulangan  dengan  penggantian  pelarut sebanyak tiga kali.
Untuk menentukan komponen senyawa  aktif  yang  ingin  disari  dari sampel,  maka  menurut  Maulinda  (2010), pelarut  atau  solven  yang  adalah  tenaga pemisah harus dipilih sehingga kelarutannya terhadap salah satu komponen  murninya  adalah  terbatas  atau sama sekali tidak saling melarutkan.
Ekstraksi  sampel  ini  menggunakan pelarut  etanol  96%  karena  pelarut  etanol menyari  hampir  keseluruhan  kandungan simplisia  baik  non  polar,  semi  polar maupun  polar  (Iswanti,  2009).  Pelarut  ini bersifat selektif, tidak beracun, dan bersifat universal  yang  cocok  untuk  mengekstrak semua golongan senyawa metabolit sekunder (Kristanti et al, 2008).
Fraksinasi  bertujuan  untuk  memisahkan dan  memurnikan  kandungan  tertentu  yang terdapat dalam sampel (DepKes RI, 2000) berdasarkan  perbedaan  kepolaran.  Pada penelitian  ini  fraksinasi  dilakukan  dengan metode  FCC  (Fraksinasi  Cair-Cair)  yaitu metode  pemisahan  dengan  menggunakan dua  cairan  pelarut  yang  tidak  saling bercampur,  sehingga  senyawa  tertentu terpisahkan  menurut  kesesuaian  sifat dengan  cairan  pelarut  (Prinsip solve dissolve like ) (Kantor, 2015).
Pelarut  yang  digunakan  untuk proses fraksinasi yaitu n-heksan, kloroform, dan metanol secara berkesinambungan dengan sifat
kepolarannya  yang  berbeda-beda.  Karena masing-masing  pelarut  tersebut  dapat secara  selektif  memisahkan  kelompok
kandungan  kimia  yang  terkandung  dalam sampel,  sehingga  didapatkan  fraksi  yang berbeda-beda.
Tabel  1.  Rendemen  ekstrak  dan  fraksi Klyxum sp.
Keterangan :
EE  :  Ekstrak  Etanol,  FH  :  Fraksi  Heksan, FK  :  Fraksi  Kloroform,  FM  :  Fraksi Metanol
Untuk  mengetahui  berapa  persen zat yang terekstrak dari sampel maka hasil timbang  dari  massa  ekstrak/fraksi  dibagi dengan  massa  sampel/ekstrak  awal  dan dikalikan  100%.  Untuk  ekstrak  etanol, didapatkan  massa  dari  ekstrak  sejumlah 8,0906  g  dari  massa  sampel  yang  di maserasi  sebanyak  359,7  g,  sehingga didapatkan rendemen 2,24% dengan warna filtrat  berupa  coklat  pekat.  Selanjutnya ekstrak  etanol  di  fraksinasi  menggunakan pelarut   n-heksan, kloroform  dan metanol. Tahap  awal  fraksinasi  dilakukan  dengan melarutkan  5,08  g  ekstrak  etanol  hasil maserasi  dengan  menggunakan  pelarut metanol,  lalu  dipartisi  pertama  kali menggunakan pelarut n-heksan, didapatkan filtrat  n-heksan berwarna hijau kekuningan  dengan  massa  hasil  ekstrak sebanyak  0,4788  g,  sehingga  didapatkan rendemen  9,42%.  Metanol  kemudian dipartisi kembali dengan pelarut kloroform,  didapatkan  filtrat  kloroform
berwarna orange pekat dengan massa hasil ekstrak  sebanyak  0,273  g,  sehingga didapatkan rendemen 5,37 % dan didapatkan filtrat metanol berwarna jingga pekat dengan massa hasil ekstrak sebanyak
3,1173  g,  sehingga  didapatkan  rendemen 61,36%. Dari perbandingan persen rendemen  dari  ketiga  fraksi,  di  dapatkan bahwa senyawa dari karang lunak Klyxum sp . paling  banyak  di  tarik  oleh  pelarut yang bersifat polar.

## Uji Aktivitas Antibakteri Karang
Lunak Klyxum sp.
Pengujian  aktivitas  antibakteri  dari ekstrak  etanol,  fraksi  metanol,  fraksi  n- heksan,  dan  fraksi  kloroform  pada  bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus menggunakan  metode  difusi  agar.
Metode  difusi  ini  dilakukan  dengan  cara kertas  cakram  yang  berisi  senyawa antibakteri,  kemudian  diletakkan  pada media padat yang telah diinokulasi bakteri. Senyawa  antibakteri  akan  berdifusi  ke dalam  media  padat  yang  diinokulasi bakteri  dan  menghambat  pertumbuhan bakteri yang ditandai dengan terbentuknya daerah  jernih  di  sekeliling  kertas  cakram (Brooks et al ., 2005).
Metode  ini  menjadi  metode  yang dipilih dalam uji aktivitas karena memiliki keuntungan yaitu prosedurnya yang sederhana  (mudah  dan  praktis)  untuk dilakukan  dan  dapat  digunakan  untuk melihat sensitivitas berbagai jenis mikroba terhadap  antimikroba  pada  konsentrasi tertentu  dan  sering  digunakan  dalam  uji kepekaan antibiotik dalam program pengendalian  mutu  (Mawaddah,  2008; Akhyar, 2010; Mpila, 2012).
Bakteri  uji  yang  digunakan  adalah Staphylococcus untuk  mewakili  bakteri gram  positif  dan Echerichia  coli untuk
No.  Sampel Rendemen (%) Warna sampel 1. EE 2,24 Coklat pekat 2. FH 9,42 Hijau kekuningan 3. FK 5,37 Orange pekat 4. FM 61,36 Jingga pekat
mewakili bakteri gram negatif.
Penggunaan  bakteri  ini  bertujuan  untuk mengetahui  bahwa  apakah  ekstrak/fraksi dari Kyxum sp. memiliki aktivitas antibakteri serta untuk mengetahui spektrum dari aktivitas antibakteri Klyxum sp.,  apakah  memiliki  spektrum  luas,  yaitu dapat  membunuh  banyak  jenis  mikroba yaitu  bakteri  gram  positif  dan  gram negatif,  atau  spektrum  sempit  yaitu  hanya membunuh  salah  satu  dari  gram  positif atau negatif.
Dalam  pengujian  ini,  hasil  yang  di dapatkan  yaitu  adanya  zona  hambat disekeliling cakram yang berkururan 6 mm ( paper  disc) yang  ditandai  dengan  area bening,  hal  ini  menunjukan  adanya kepekaan  bakteri  terhadap  ekstrak  atau fraksi  dari Klyxum sp.  dan antibiotik  yang digunakan sebagai kontrol positif.
Pengamatan  dilakukan  setelah  inkubasi pada  suhu  37˚C  selama  1x24  jam  dengan pengulangan sebanyak 2 kali pada masing- masing  bakteri,  pengulangan  dilakukan untuk  lebih  mengakuratkan  hasil  yang akan diperoleh.
Hasil  uji  aktivitas  antibakteri  serta hasil  pengukuran  diameter  zona  bunuh ( radical  zone) dan  zona  hambat  ( irradikal zone )  dari  ekstrak  etanol,  fraksi  metanol, fraksi  n-heksan,  fraksi  kloroform  gambar 2.
A B
Gambar  1.  Hasil  uji  aktivitas  antibakteri dari  ekstrak  etanol,  fraksi  n-heksan,  fraksi metanol,  dan  fraksi  kloroform  karang lunak Klyxum sp.  terhadap  bakteri  :  (A).
Staphylococcus aureus dan (B).
Escherichia coli .
Keterangan  Gambar  :  (1)  Fraksi  Kloroform, (2)  Fraksi  n-heksan,  (3)  Ekstrak  etanol,  (4) Fraksi  Metanol,  (5)  Kontrol  Positif,  (6) Kontrol  negatif,  (‘)  ulangan  pertama,  (‘‘) ulangan kedua.
Konsentrasi  yang  digunakan  yaitu 250  μg  dalam  setiap paper  disc yang memiliki  daya  serap  50  μL  dari  sampel Klyxum sp. terhadap bakteri uji Staphylococcus  aureus dan Eschericia
coli .
Hasil pengukuran rata-rata diameter  daya  antibakteri  dari  ekstrak etanol,  fraksi  kloroform,  fraksi  n-heksan, dan  fraksi  metanol  karang  lunak Klyxum sp. terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli ditunjukan pada tabel 1 dan tabel 2.
Tabel  1.  Hasil  pengukuran  rata-rata diameter  daya  antibakteri  dari  ekstrak etanol,  fraksi  kloroform,  fraksi  n-heksan, dan  fraksi  metanol  karang  lunak Klyxum sp. terhadap bakteri Staphylococcus aureus
Rata-rata diameter (mm) Zona bunuh ( radical zone) Zona Hambat (irradical zone) Ekstrak 1,37 0,00 Fraksi kloroform 4,00 0,00 Fraksi n-heksan 2,00 0,00 Fraksi metanol 0,00 0,00 Kontrol Positif 18,00 0,00 Kontrol Negatif 0,00 0,00
1 5 6 5 6 1 2 2 3 3 4 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Tabel  2.  Hasil  pengukuran  rata-rata diameter  daya  antibakteri  dari  ekstrak etanol,  fraksi  kloroform,  fraksi  n-heksan, dan  fraksi  metanol,  karang  lunak Klyxum sp . terhadap bakteri Escherichia coli Rata-rata diameter (mm) Zona bunuh ( radical zone) Zona Hambat (irradical zone) Ekstrak 0,00 1,50 Fraksi kloroform 2,50 0,00 Fraksi n-heksan 2,00 0,00 Fraksi metanol 1,00 13,00 Kontrol Positif 18,00 0,00 Kontrol Negatif 0,00 0,00
Hasil  penelitian  menunjukan  adanya zona  bunuh  ( radical zone)  dan  zona hambat  ( irradikal zone).  Zona  bunuh ditunjukkan  dengan  adanya  area  bening disekeliling cakram sedangkan zona hambat  ditunjukan  oleh  area  yang  terlihat tidak  subur  atau  lebih  keruh  jika dibandingkan  dengan  daerah  yang  tidak terpengaruh  oleh  zat  (Ayu, et al.,  2014).
Pada  pengujian  aktivitas  antibakteri  dari karang  lunak Klyxum sp.  ditentukan berdasarkan  diameter  zona  bunuh  dengan parameter pengamatan adalah zona bening dan penggolongan kekuatan daya antibakteri  digolongkan  menurut  Davis and  Stout  (1971),  yaitu:  diameter  zona bening  5  mm  atau  kurang  dikategorikan lemah, zona bening 5-10 mm dikategorikan  sedang,  zona  bening  10-20 mm  di  kategorikan  kuat  dan  zona  bening 10-20 mm atau lebih dikategorikan sangat kuat.  Dari  hasil  yang  di  dapatkan menunjukan  bahwa  diameter  zona  bening yang  terbentuk  oleh  ekstrak  karang  lunak Klyxum sp . pada  bakteri Staphylococcus aureus dikategorikan  lemah  yaitu  4,00 mm,  sedangkan  pada  bakteri Escherichia coli 2,50  mm.  Hal  ini  menunjukan  bahwa karang  lunak Klyxum sp . memiliki aktivitas  antibakteri  yang  lebih  peka  pada
bakteri gram postitif, dibandingkan bakteri gram negatif. Namun, Klyxum sp . memiliki daya hambat pertumbuhan bakteri  yang  baik  pada  bakteri  gram negatif  dengan  rata-rata  diameter  zona keruh yaitu 13,00 mm.
Dari hasil yang diperoleh menunjukan bahwa senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol dan fraksi metanol  dari  karang  lunak Klyxum sp . sebagai  antibakteri  yang  memiliki  sifat spektrum sempit, artinya kandungan tersebut hanya memiliki aktivitas antibakteri terhadap salah satu dari bakteri gram  positif  dan  gram  negatif.  Namun berdasarkan  aktivitas  zat  antibakteri, kandungan  ekstrak  etanol  dan  fraksi metanol  pada  bakteri Escherichia  coli mampu  bersifat  bakteriostatik,  maupun bakterisida, yaitu memiliki aktivitas menghambat pertumbuhan bakteri maupun aktivitas  membunuh  bakteri  (Madigan, 2005).
Fraksi kloroform dan fraksi n-heksan dari Klyxum sp . berdasarkan kriteria Davis dan  Stout  (1971)  menunjukan  senyawa yang  terkandung  didalamnya  memiliki aktivitas  antibakteri  yang  kurang  efektif, namun  kedua  fraksi  ini  bersifat  spektrum luas,  artinya  kandungan  senyawa  tersebut memiliki  aktivitas  antibakteri  terhadap bakteri gram postitif dan gram negatif.

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian  yang telah  dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa karang  lunak Klyxum sp.  yang  diperoleh dari Teluk Manado, terhadap Staphylococcus aureus hanya fraksi kloroform,  fraksi  n-heksan,  dan  ekstrak etanol  yang  memiliki  aktivitas  antibakteri dan terhadap Escherichia coli hanya fraksi kloroform,  fraksi  n-heksan  dan  fraksi
metanol yang memiliki anktivitas antibakteri , dengan golongan daya antibakteri terhadap kedua bakteri dikategorikan lemah.

## SARAN
Berdasarkan hasil dan pembahasan aktivitas  antibakteri  ekstrak  karang  lunak Klyxum sp.,  maka  dapat  diberikan  saran yaitu  perlu  dilakukan  penelitian  lebih lanjut  tentang  uji  khasiat  lain  selain antibakteri,  yaitu  aktivitas  antifungal, sitotoksik,  antineoplastik,  antimikroba, inhibitor  HIV  dan  anti-inflamatori  dari karang lunak Klyxum sp. untuk mengetahui manfaat secara ilmiah.

## DAFTAR PUSTAKA
Akhyar.  2010. Uji  Daya  Hambat  dan Analisis  KLT  Bioautografi  Ekstrak
Akar dan Buah Bakau (Rhizophora stylosa Griff.)Terhadap Vibrio harveyi [skripsi].  Fakultas  Farmasi
Universitas  Hasanuddin  Makasar,
Makasar.
Ayu,  N.  D.,  Recita  I.,  Sandy  C.  2014. Efektivitas  Ekstrak  Daun  Jambu
Mete  ( Anacardium  occidentale L) Terhadap pertumbuhan Aggregatibacter Actinomycetemcomitans pada Gingivitis  –  In  Vitro. ODONTO
Dental Journal I. 1 ( 1) : 44-48.
Brooks,  G.  L.,  J.S.  Butel,  S.A  Morse. 2005. Mikrobiologi Kedokteran Ed.
23, Translation of Medical Microbiology, 23th Ed. Alih Bahasa  oleh  Hartanto,  Salemba Medika, Jakarta.
Davis, W. W., T.R. Stout. 1971. Disc plate method  of  microbiological  assay.
Journal  of  microbiology 22:  659- 665.
Direktur  Jendral  POM.  2000. Parameter
Standar  Umum  Ekstrak  Tumbuhan Obat . Direktorat Jendral Pengawasan  Obat  dan  Makanan, Jakarta. Gunawan,  I.  2007. Penapisan  Awal Ekstraksi Senyawa Bioaktif Sebagai  Antibakteri  serta  Uji Toksisitas dan Uji Minimum Inhibitory  Concentration  (MIC) dari  Karang  Lunak  Asal  Perairan Pulau
Panggang, Kepulauan seribu [skripsi]. Fakultas perikanan dan Ilmu kelautan, IPB, Bogor.
Ismet,  M.  S.  2007. Penapisan  Senyawa Bioaktif  Spons  Spons  Aaptops  dan Petrosia  sp.  dari  lokasi  yang berbeda [skripsi].  Pasca  sarjana
ITB, Bandung.
Iswanti, D.A. 2009. Uji Aktivitas Antibakteri Fraksi N-Heksan, Fraksi  Etil  Asetat,  Dan  Fraksi Etanol  96%  Daun  Ekor  Kucing (Acalypha Hispida Burm. F) Terhadap  Bakteri  Staphylococcus aureus  ATCC  25923  Secara  Dilusi [skripsi]. Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi, Surakata.
Kantor,  M.  N.  N.  2015. Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Karang  Lunak Xenia  sp.  yang  Diperoleh  dari Teluk  Manado [skripsi].  Fakultas Matematika  dan  Ilmu  Pengetahuan Alam, Manado.
Kristanti,  A.  N.,  N.S.  Aminah.,  M. Tanjung.,  B.  Kurniadi.  2008. Buku
Ajar Fitokimia . Unair Press, Surabaya.
Loing,  Q.  N.  H.,  D.S.  Wewengkang.,  J. Abidjulu. 2016. Aktivitas
Antibakteri  Ekstrak  dan  Fraksi
Karang  Lunak Lobophytum sp.
Terhadap  Bakteri Escherichia  coli dan Staphylococcus aureus. Pharmacon Jurnal Ilmiah Farmasi-UNSRAT. 5(1) : 115-124.
Madigan  M.  2005. Brock  Biology  of
Microorganisme . Hlmn :753. PrenticeHall, London.
Maramis,  J.,  F.  Kaligis.,  J.  Kusen.  2013.
Distribusi Karang Lunak di Perairan  Teluk  Manado  dengan Perbandingan Antara Kawasan Non  Reklamasi  dan  Reklamasi. Jurnal  Perikanan  dan  Kelauatan
Tropis 2: 63-67.
Maulinda,  D.  2010. Ekstraksi  Antioksidan (Likopen) dari Buah Tomat Dengan Menggunakan Solven Campuran, n-Heksana, Aseton, dan Etanol [skripsi].  Fakultas  Teknik,
Semarang.
Mawaddah,  R.  2008. Kajian  Hasil  Riset Potensi  Antimikroba  Alami  dan Aplikasinya  dalam  Bahan  Pangan di  Pusat  Informasi  Teknologi Pertanian  Fateta  IPB [skripsi]. Fakultas  Teknologi  Pertanian  ITB, Bogor.
Mpila,  D.  A.  2012. Uji  Aktivitas Antibakteri  Ekstrak  Etanol  Daun Mayana  (Coleus  atropurpureus benth)  Terhadap  Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan
Pseudomas aeruginosa Secara
Invitro [skripsi].  Program  Studi
Farmasi  FMIPA  Universitas  Sam
Ratulangi, Manado.
Ortez, J. H. 2005. Disk Diffusion testing in manual of
antimicrobial
susceptibility  testing.  Marie  B.
Coyle (Coord.  Ed).  American society for Microbiology, America.
Radhika,  P.  2006.  Chemical  constituens and  biological  activities  of  the  soft coral of genus Cladiella: A review. Biochemical Systematics and Ecological 34: 781-789. Sayed,  E.  K.,  M.  Kelly.,  U.  A.  K.  Kara., M.  T.  Hamann.  2001.  New Manzamine  Alkaloids  with  Potent Activity Against Infectious Diseases. J.  Am.  Chem.,  Soc 123: 1804-1808.
Shwu,  L.,  H.  S.  Jui.,  Y.  H.  Chiung.,  J.  T.
Chi., J. S. Ping., C. L. Chih., H. S. Jyh. 2012. Simplexins P-S, Eunicellin-Based  Diterpenes  from the  Soft  Coral  Klyxum  simplex.
Marine drugs 10: 1203-1211.
Usman,  H.  2014. Kimia  Organik  Bahan Alam Laut . Universitas Hasanuddin, Makassar