## PENGARUH PEMBERIAN KORO BENGUK (Mucuna pruriens L) TERHADAP KADAR GULA DARAH TIKUS DIABETES MELITUS YANG DIINDUKSI STREPTOZOTOCIN
The Influence Of Blowed Coro (Mucuna Pruriens L) On Blood Sugar Levels Of Diabetes Mellitus Diabetes Induced By Streptozotocin
1 *Endang Widhiyastuti, 2 Mastuti Widi Lestari,
1 D IV Teknologi Laboratorium Medis , STIKES Nasional , Jl. Solo Baki, Jawa Tengah, Indonesia
2 D IV Teknologi Laboratorium Medis , STIKES Nasional , Jl. Solo Baki, Jawa Tengah, Indonesia
*e-mail : Dr.endangwidhiyastuti@yahoo.co.id

## ABSTRAK
Diabetes yang terkenal di masyarakat dengan sebutan penyakit kencing manis di Indonesia adalah suatu penyakit kronik, yang terjadi ketika pankreas tidak memproduksi cukup insulin atau ketika tubuh tidak dapat memanfaatkan insulin hasil produknya sendiri. Pemberian antioksidan pada tikus DM dapat menurunkan kadar gula darah. Salah satu tanaman herbal yang dapat digunakan untuk pengendalian dan penatalaksanaan gula darah pada pada kondisi diabetes  adalah  koro  benguk.  Koro  Benguk  (Mucuna  pruriens L)  adalah  tanaman  yang  dapat  dijadikan  alternatif dalam pengobatan karena memiliki kandungan antioksidan yang dapat menjaga kesehatan tanpa menimbulkan efek toksisitas. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk  mengetahui  apakah ada pengaruh pemberian kopi koro benguk (Mucuna pruriens L) terhadap kadar gula darah Tikus Diabetes Mellitus Yang Diinduksi Streptozotocin. Penelitian ini  merupakan  penelitian  eksperimen  terhadap  tikus Sprague  Dawley. Sebanyak  35  tikus  wistar  jantan  dibagi  ke dalama 5 kelompok masing-masing : kontrol normal (K1); kontrol diabetes (K2); tikus diabetes diberi infusa kopi koro  benguk  0,63  mg/  g  BB  tikus (P1); tikus  diabetes  diberi infusa  kopi  koro  benguk  1,26  mg/  g  BB  tikus  (P2). Tikus diabetes diberi infusa kopi koro benguk20,52 mg/ g BB tikus. Kadar glukosa darah puasa (GDP) dianalisa perminggu selama 3 minggu dengan metode GOD-PAP. Hasil dari penelitian ada penurunan gula darah selama 4 kali  waktu  pengamatan  pada  hampir  seluruh  kelompok  perlakuan  kecuali  kelompok  kontrol  positif.  Kesimpulan dalam  penelitian  ini  pemberian  kopi  koro  benguk  (Mucuna  pruriens  L)  dapat  menurunkan  kadar  glukosa  darah puasa pada tikus Sprague Dawley model diabetes secara signifikan dibandingkan dengan kontrol.
Kata kunci : diabetes mellitus, kopi koro benguk (Mucuna pruriens L) , streptozotocin , gula darah

## ABSTRACT
Diabetes which is well-known in the community as diabetes in Indonesia is a chronic disease, which occurs when the pancreas does not produce enough insulin or when the body cannot utilize the insulin produced by its own products. The Provision of antioxidants  in  DM  mice  can  reduce  blood  sugar  levels.  One  of  the  herbs  that  can  be  used  for  control  and  management  of blood  sugar  in  diabetes  is  swollen  koro.  Koro  Benguk  (Mucuna  pruriens  L)  is  a  plant  that  can  be  used  as  an  alternative treatment because it contains antioxidants that can maintain health without causing toxic effects. The purpose of this study was to  determine  whether  there  is  an  effect  of  giving  koro  benguk  coffee  (Mucuna  pruriens  L)  on  blood  sugar  levels  of Streptozotocin-induced Diabetes Mellitus Rats. This study is an experimental study of Sprague Dawley mice. A total of 35 male wistar  rats  were  divided  into  5  groups  each:  normal  control  (K1);  diabetes  control  (K2);  diabetic  rats  were  given  a  large coffee  extract  0.63  mg  /  g  BW  rat  (P1);  diabetic  rats  were  given  a  large  infusion  of  coffee  koro  1.26  mg  /  g  BW  rats  (P2). Diabetic  rats  were  given  an  infusion  of  coffee  koro  benguk20,52  mg  /  g  BW  rats.  Fasting  blood glucose  (GDP)  levels  were analyzed  weekly  for  3  weeks  using  the  GOD-PAP  method.  The  results  of  the  study  showed  a  decrease  in  blood  sugar  for  4 times the observation time in almost all treatment groups except the positive control group. The conclusions in this study were the  provision  of  related  coffee  (Mucuna  pruriens  L)  can  reduce  fasting  blood  glucose  levels  in  Sprague  Dawley  rats  with diabetes models significantly compared to controls.
Keyword: diabetes mellitus, koro benguk coffee (Mucuna pruriens L), Streptozotocin, blood sugar

## Borneo Journal of Medical Laboratory Technology

## ‘

## PENDAHULUAN
Diabetes  yang  terkenal  di masyarakat dengan sebutan penyakit kencing manis di Indonesia adalah  suatu  penyakit  kronik,  yang  terjadi  ketika pankreas  tidak  memproduksi  cukup  insulin  atau ketika tubuh tidak dapat memanfaatkan insulin hasil produknya  sendiri  (WHO,  2011).  Diabetes  Melitus adalah   masalah  utama  di dunia  dikarenakan jumlah penderita  yang  sangat  banyak  dan  terus  meningkat dan  jika  tidak  ditangani  dengan  baik  dengan pengobatan akan menimbulkan komplikasi.
Sedangkan  biaya  pengobatannya  sangat  mahal (PERKENI, 2015).
Berdasarkan  data  Kementrian  Kesehatan (2014)  kejadian  penyakit  diabetes  mellitus  di Indonesia  tahun  2013  sebesar  2,1%.  Angka  tersebut lebih tinggi dibandingkan dengan tahun 2007 (1,1%). Sebanyak  93,9%  provinsi  menunjukkan  kenaikan prevalensi  diabetes  mellitus  yang  cukup  berarti, diantaranya  Provinsi  Jawa  Tengah  sebesar  1,9%. Jumlah  kasus DM tipe 2 di Jawa Tengah tahun 2015 sebanyak  99.646  kasus,  meningkat  dibandingkan tahun 2014 (96.431 kasus).
Obat  Antidiabetik  Oral  saat  ini  banyak dipakai  untuk  pengendalian  penyakit  diabetes mellitus.  Namun  penggunaanya  memiliki  beberapa kekurangan  diantaranya  harga  yang  sangat  mahal, efikasi  yang  tidak  adekuat,  banyak  menimbulkan efek  samping  seperti  toksik  terhadap  hepar, asidosislaktat ataupun diare, gangguan kardiovaskuler  (Patel et  al .,  2008;  Rao et  al ,  2008, Nahas & Moher, 2009;McCreight et al , 2016).
Salah  satu  tanaman  herbal  yang  dapat digunakan  untuk  pengendalian  dan  penatalaksanaan diabetes adalah koro benguk. Koro Benguk (Mucuna pruriens  L)  adalah  tanaman  yang  dapat  dijadikan alternatif  dalam  pengobatan  karena  memiliki kandungan antioksidan yang dapat menjaga kesehatan  tanpa  menimbulkan  efek  toksisitas  (Jain, 2011).Biji  koro  benguk    terkandung  senyawa fenolik.    Hasil  penelitian in  vitro menunjukkan bahwa  ekstrak  metanol  biji  koro  benguk  ( Mucuna pruriens ) memiliki aktivitas antioksidan. Kandungan total  fenolik  dari  ekstrak  metanol  biji  kacang  koro
menggunakan  uji  Folin-Ciocalteau  menunjukkan 33,04 mg/g. Ekstrak metanol biji  koro benguk  pada konsentrasi  100  µg/mL  mempunyai  kemampuan memerangkap  radikal  bebas  1,1-diphenyl-2-picryl- hydrazyl (DPPH) sebesar 90,16 % (Rajeshwar, et.al ., 2005).    Apabila  di  dalam  tubuh  terdapat  radikal bebas dapat memicu kejadian stress oksidatif.  Stress Oksidatif  memiliki  kontribusi  pada  perburukan  dan perkembangan kejadian komplikasi diabetes mellitus.  Sehingga  untuk  meredam  kerusakan oksidatif  tersebut  diperlukan  antioksidan  (Matough et al ., 2012;).
Pada  penelitian  ini  biji  kacang  koro  benguk diubah  kedalam  bentuk  kopi,  dikarenakan  kopi sendiri  merupakan  minuman  kesukaan  hampir sebagai  besar  masyarakat  di  Indonesia,  selaian  itu biji  koro  benguk  yang  sudah  dibuat  dalam  bentuk kopi  memiliki  nilai  kecernaan  yang  tinggi. Pemanfaatan  kopi  koro  benguk  dalam  menurunkan kadar glukosa darah sudah diterapkan oleh sebagaian masyarakat  yang  terkena  Diabetes  Melitusdi  daerah Sumberlawang Sragen, Jawa tengah, Namum selama ini  belum  ada  penelitian  yang  membuktikan pemanfaatan  kopi  koro  benguk  dalam  menurunakan kadar gula darah.

## METODE PENELITIAN

## Jenis Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian  eksperimen terhadap tikus Sprague Dawley. . Kadar glukosa darah puasa  (GDP)  dianalisa  perminggu  selama  3  minggu dengan metode GOD-PAP.

## Populasi dan Sampel
Populasi  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  tikus Sprague  Dawley Sebanyak  35  tikus wistar jantan  dibagi  ke  dalama  5  kelompok  masing- masing : kontrol normal (K1); kontrol diabetes (K2); tikus  diabetes  diberi  infusa  kopi  koro  benguk  0,63 mg/ g BB tikus (P1); tikus diabetes diberi infusa kopi koro  benguk  1,26  mg/  g  BB  tikus  (P2).  Tikus diabetes diberi infusa kopi koro benguk 20,52 mg/ g BB tikus.

## Instrumen Penelitian

## Alat
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  yaitu, kompor  listrik  merk  Maspion, beaker  glass, spuit  1 cc, glukometer, alcohol swab , jarum/lancet, timbangan  BC  500,  kandang  tikus  polypropyelene, AC,  lampu,  nipple,scalpet,  pinset  anatomis,  gunting, jarum, meja lilin, handscoon, sentrifuge, spektrofotometer  UV-Visibel  (AE  LAB-S80-1S), kertas  saring,  alat-alat  gelas  berupa  labu  ukur Iwaky Pyrex  50 ml  dan  200  ml,  gelas  ukur Iwaky  Pyrex 10 ml,  gelas  beker Iwaky  Pyrex ,  corong,  tabung  reaksi, batang pengaduk, oven, botol vial,spatula.

## Bahan
Bahan  dasar  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini adalah  koro  benguk  bubuk,  streptozotocin  ( Cayman chemical  company ),  Buffer  pH  4,  air  panas,  tikus Sprague  Dawley ,  pakan  BR  1,  darah  vena  tikus, NaCl, formalin 70%, organ hepar dan pankreas, 0,15 M  Tris  HCl,  supernatan,  dithiobisnitrobenzoate, sodium  dinitrate,  TCA  ( Trichloroacetic  acid )  ,TBA ( Thiobarbituric acid ), HCl ( Hydorchloric acid ).

## Analisis Data
Data  dikumpulkan  dan  dianalisis  secara statistik  dengan  uji  normalitas  dan  uji  homogenitas untuk  memenuhi  asumsi  uji  parametrik  yaitu  data berdistribusi  normal  dan  homogen.  Kemudian dilakukan uji ANOVA.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Kadar  glukosa  darah  adalah  salah  satu penilaian  kondisi  diabetes.  Tikus  yang  mendapatkan induksi streptoztocin (STZ) menunjukkan peningkatan kadar glukosa. Streptozotocin merupakan  turunan  nitrosourea  diisolasi  dari  kapang Streptomyces  griseus ,  secara  selektif  toksik  terhadap sel beta pankreas tidak menyebabkan kerusakan pada sel  endokrin  lain  maupun  pada  parenkim  eksokrin (Szkudelski, 2001; Lenzen,2008).
Berdasarkan  uji  coba  in  vitro  menunjukkan bahwa induksi streptozotocin menyebabkan peningkatan  konsumsi  Oksigen  dan  menghasilkan radikal  H2O2  (Szkudelski,  2001).  Hal  tersebut berlanjut  pada  kerusakan  sel  beta  pankreas  sehingga produksi  dan  aksi  insulin  menurun.  Kondisi  ini menimbulkan gangguan pada metabolisme karbohidrat,  lemak  dan  protein  dan  bermanifestasi
pada peningkatan kadar gula darah. Biji koro benguk memiliki kandungan antioksidan yang dapat mengurangi  kerusakan  sel  beta  pankreas  pada  tikus hiperglikemi (Retnaning, 2011).
Hasil pengukuran kadar glukosa darah puasa (GDP)  pada  tikus  dengan  perlakuan  kontrol  negatif (K-),  kontrol  positif  (K+),  kopi  koro  benguk  dosis 0,63 mg/g BB tikus(P1), kopi koro benguk dosis 1,26 mg/g BB tikus(P2) dan kopi koro benguk dosis 2,52 mg/g BB tikus (P3) disajikan dalam tabel 1 berikut :
TABEL 1. Hasil  Pemeriksaan  Gula  Darah  Tikus  Sprague Dawley Minggu ke-0 sampai minggu ke-4
Kelompok Glukosa Darah (gram) P Minggu ke- 0 1 2 3 K- )* 218,80±9,85 105,00±9,38 88,20±10,89 88,00±19,02 0,014 K+ 210,02±8,83 269,2±217,29 248,00±268,14 80,60±81,90 0,086 P1 212,50±8,57 386,2±251,77 270,80±178,88 66,4±63,05 0,021 P2 207,58±9,61 388,40±255,14 72,4±161,89 21,00±46,95 0,020 P3 215,70±5,57 337,2±229,90 277,80±215,51 96,20±60,32 0,035
Hasil  dari  penelitian  pengaruh  kopi  koro benguk  benguk  ( Mucuna  pruriens )  kadar  glukosa darah  terendah  di  dapatkan  pada  hari  ke-21. Kelompok  kontrol  negatif  menunjukkan  kadar glukosa  normal  yaitu  <  200  gl/dl.  Keadaan  ini merupakan  gambaran  bahwa  organ  pancreas  masih memiliki  fungsi  yang  normal  dalam  mengatur  kadar glukosa  darah.  Dalam  keadaan  normal,  glukosa  dari makanan  ditransportasikan  menuju  vena  porta  oleh transporter  glukosa  yang  terdapat  pada  usus  (Oran, 2007).  Salah  satu  hormon  yang  berperan  dalam mengatur  kadar  glukosa  darah  adalah  insulin  dan glukagon.  Dalam  keadaan  normal,  produksi  insulin oleh sel  meningkat sebanding dengan meningkatnya  kadar  glukosa  dalam  darah.  Adapun hormon  glukagon  akan  banyak  diproduksi  pada  saat kadar  glukosa  dalam  darah  rendah.  Regulasi  dari produksi hormon insulin dan glukagon akan menjaga kadar  glukosa  darah  dalam  keadaan  normal  (James, 2010).
Pada  kontrol  positif  kadar  GDP  masih mengalami  penurunan  mulai  minggu  ke-2  sampai minggu  ke-4.  Hal  ini  berarti  menunjukkan  bahwa kontrol  positif  mampu  menjadi  pembanding  bagi perlakuan  dengan  menggunakan  infusa  kopi  koro benguk  ( Mucuna  pruriens )dan  menunjukkan  bahwa dosis  STZ  yang  diberikan  mampu  bekerja  maksimal
merusak sel beta
pancreas. Pada perlakuanmenggunakan  dengan  memberikan  infusa kopi  koro  benguk    ( Mucuna  pruriens )  dengan  dosis 0,63  mg/g  BB  tikusdidapatkan  hasil  bahwa  kadar gula darah puasa tikus mengalami penurunan.Perlakuan  ini  menunjukkan  bahwa  infusa kopi  koro  benguk  dengan  dosis  0,63  mg/g  BB  tikus terlihat  berpotensi  menurunkan  kadar  glukosa  darah puasa.  Begitu  pula  dengan  perlakuan  yang  diberikan dosis infusa kopi koro benguk ( Mucuna pruriens )dosis 1,26 mg/g BB tikus dan 2,52 mg/g BB tikus  juga  menunjukkan  hal  yang  sama,  dimana terjadi penurunan kadar gula darah puasa.
Penurunan  kadar  glukosa  darah  tersebut dikarenakan  kandungan  senyawa  antioksidan  yang ada  di  dalam  tempe  koro  benguk.  Menurut  Pinent, dkk. (2008) dalam penelitian in vitro bahwa genistein yang  terdapat  pada  isoflavon  mampu  meningkatkan sekresi  insulin  pada  MIN6  (mouse-derived)  line  sel beta  pankreas  dari  mencit  yang  dikulturkan  hingga konsentrasi  100µmol/L.  Mineral  yang  ada  dalam tempe koro benguk seperti Na, K, Ca, Zn, MG, Fe, P, Cu  Mn  dan  Cr  membantu  mekanisme  pelepasan insulin  sehingga  menurunkan  kadar  glukosa  (Pinent, dkk. 2008). Selain itu sifat hipoglikemi tersebut juga karena  adanya  senyawa  D-chiroinositol  di  dalam Mucuna pruriens L (Donati, et.al . 2005).
Komposisi  zat  gizi  yang  terkandung  dalam bijikoro  benguk  diantaranya  : protein  (24‒31,44%), karbohidrat  (42,79‒64,88%),  lemak  (4,1‒14,39%), serat  (5,3‒11,5%),  mineral,  asam  amino  dan  abu (2,9‒5,5%)  (Artari,  2017).  Kandungan  isoflavon seperti daidzi , genistein faktor-II  (6,7,4- trihydroxy isoflavone ),  dan glycitein (senyawa  antioksidan  pada kedelai) juga terdapat pada koro benguk.
Kandungan daidzin dan genistein pada  koro  benguk lebih  tinggi  dibandingkan  kedelai.  Tempe  koro benguk  juga  memiliki  faktor-II  (6,7,4- trihydroxy isoflavone )  dan genistein lebih  tinggi  dibandingkan tempe kedelai. Hal tersebut menunjukkan bahwa koro benguk  berpotensi  sebagai  alternatif  pengganti kedelai. Tempe  koro  benguk  dengan  kandungan  gizi yang  baik  dan  seimbang  dapat  menjadi  pilihan pangan  terkait  dengan  pengembangan  pangan  lokal untuk  mendampingi  tempe  kedelai  (karena  sebagian besar  kedelai  diperoleh  dari  impor).  (Retnaningsih, 2007). S elain  itu,  keunggulan  biji  koro  benguk mengandung  senyawa  fenolik.  Berdasarkan  hasil
penelitian  in  vitro  menunjukkan  bahwa  ekstrak metanol  biji  koro  benguk  (Mucuna  pruriens) mempunyai  aktivitas  antioksidan.  Kandungan  total fenolik  dari  ekstrak  metanol  biji  kacang  koro menggunakan  uji  Folin-Ciocalteau  menunjukkan 33,04  mg/g.  Ekstrak  metanol  biji  koro  benguk  pada konsentrasi  100  µg/mL  mempunyai  kemampuan memerangkap  radikal  bebas  1,1-diphenyl-2-picryl- hydrazyl  (DPPH)  sebesr  90,16  %  (Rajeshwar,  dkk., 2005).
Biji  Koro  Benguk  banyak  terkandung antioksidan,  senyawa  yang  mampu  menangkal radikal  bebas.  Radikal  bebas  adalah  atom  atau molekul  yang  memiliki  elektron  yang  tidak berpasangan dan bersifat dapat menarik elektron dari senyawa  lain  sehingga  terbentuk  radikal  bebas  yang baru. Radikal bebas yang sangat reaktif bersifat tidak stabil,  berumur  sangat  pendek  dan  sulit  dideteksi. Contoh  senyawa  reaktif  misalnya  gugus  hidroksil  (- OH), radikal peroksil (OOH), ion superoksida (O2 . ), Hidrogen peroksida (H2O2), dan lain-lain. Keberadaan  radikal  bebas  dalam  tubuh  dapat menyebabkan terjadinya penyakit degeneratif, misalnya  jantung,  diabetes,  ateroskelorosis,  kanker dan  sebagainya.  Bahkan  radikal  bebas  ini  dapat merusak  selaput  sel  dan  asam  dioksi  ribonukleat (DNA)  (Percival,  1998;  Agbafor  dan  Nwachukwu, 2011). Senyawa aktif yang bersifat antioksidan yang ada  di dalam  koro  benguk  ini  terdapat  dalam  bentuk isoflavon.  Senyawa  tersebut  masuk  dalam  kelompok flavonoid,  senyawa  polifenolik  yang  umumnya terdapat  di  dalam  buah-buahan,  sayur-sayuran,  dan biji-bijian  (Shahidi,  1999;  Bors, et.al .,  2001;  Miller, 2002).

## KESIMPULAN
Koro  benguk  memiliki  kandungan  gizi  yang baik  dan  seimbang  dengan  kadar  protein  dan karbohidrat  yang  tinggi  dan  kadar  lemak  yang rendah.  Pada  tikus  yang  mendapat  perlakuan  kopi koro benguk dengan dosis 0,63 mg/ g BB tikus, 1,26 mg/g  BB  tikus  dan  2,52  mg/  g  BB  tikus  mengalami penurunan kadar glukosa darah bermakna dibandingkan kelompok kontrol positif (C+).

## DAFTAR PUSTAKA
Agbafor,K.N. dan Nwachukwu N. 2011.
Phytochemical  Analysis  and  Antioxidant Property  of  Leaf  Extracts  of  Vitexdoniana and  Mucuna  pruriens. Research  Article .
Biochemistry Research International.pp 1-4
Bors,  W.  C.,  Michel,  K.  dan  Stettmaier.  2001. Flavonoids  and  Other  Polyphenols .  Packer,
L.Ed. Academic Press. San Diego.
Guyton, A. C., Hall, J. E. 2014. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran . Edisi 12. Jakarta : EGC, 1022
James  P,  Leu,  Joel  Zonszein.  2010. Principles  of Diabetes  Mellitus .  New  York:  Springer
Science
Kementerian  Kesehatan  RI.  2014. Situasi  dan
Analisis  Diabetes .  Jakarta:  Kementerian Kesehatan RI
Matough,  Budin.,  S.B.,  Hamid,  Z.A.,  Alwahaibi,  N., and  Mohamed,  J.,    2012,  The  Role  of Oxidative Stress and Antioxidants in Diabetic Complications,  Sultan  Qaboos Univ  Med  J .
12(1): 5–18.
Miller,  A.  L.  2002. Antioxidant  Flavonoid  Structure
Function  and  Clinical Usage.  http  ://  www.
Thorne.  Com/alt  medrev/fulltext/flavonoids
1-2 html. Diunduh tanggal 18 Oktober 2019 Perkumpulan Endokrinologi Indonesia, 2015. Konsensus  Pengendalian  dan  Pencegahan Diabetes  Mellitus  Tipe  2  di  Indonesia .  PB.
PERKENI. Jakarta
Poitout,V  dan  Robertson,  R.  P.  2008.  Glucotoxicity: Fuel  excess  and  beta  cell  dysfunction. Endocrine Reviews 29(3):351-366
Rajeshwar,  Y., Kumar,  G.P.S.,  Gupta, M.  U.  K.  dan Mazumber.  2005.  Studies  on  In  Vitro
Antioxidant Activities of Methanol Extract of Mucuna pruriens (Fabaceae) Seeds. European Bulletin of Drug Research . Vol 13
(1)
Retnaning, C. 2017. Penurunan Kadar Glukosa Pada Tikus  Hiperglikemi  Dengan  Asupan  Tempe Koro Benguk (Mucuna pruriens L) Desertasi . Program  Studi  Teknologi  Pangan  Fakultas Teknologi Pertanian Unika Soegijapranata
Roy,  D.  C.,  Barman,  S.  K.,  &  Shaik,  M.  M.  2013.
Current updates on Centella asiatica: Phytochemistry, pharmacology and traditional uses. Medicinal Plant Research , 3, (4), 20-36.
Shahidi,  F.  1999. Natural  Antioxidants.  Chemistry,
Health Effect, and Applications , hal 235- 73. AOCS Press. Champaign, Illinois
Szkudelski  T.  2012.  Streptozotocin-  nicotinamide- induced diabetes in the rat. Characteristics of the experimental model. Experimetal
Biolology and Medicine 237:481-490
World  Health  Organization.  2011. Diabetes :  The Problem and The Solution.