Analisis Kelimpahan Bakteri Pada Ikan, Substrat, Air Serta Es Yang Digunakan Pada Pengoperasian Minitrawl Di Perairan Pamekasan

## Fortunata Riana, Abdus Salam Junaedi*, Muhammad Zainuri
Program Studi Manajemen Sumberdaya Perairan, Jurusan Ilmu Kelautan dan Perikanan, Universitas Trunojoyo Madura
Jl. Raya Telang, Telang, Kamal, Bangkalan, Jawa Timur 69162 Indonesia Email: abdus.salamj@trunojoyo.ac.id

## Abstact

## Analysis of Bacterial Abundance in Fish, Substrate, Water and Ice Used in Minitrawl Operations in Pamekasan Waters
Fish  is  a  source  of  animal  protein  which  is  generally  the  choice  of  society  because  it  is  relatively cheap and easy to obtain. Fish that are sold in dead condition are prone to quality degradiation so that bacteria can easly breed. Data on the amount of bacteria in fish related to the type of gear to  another  which  can  greatly  affect  the  quality  of  the  catch.  Therefore,  this  research  was conducted  using  a  Minitrawl.  The  research  objective  was  to  see  the  amount  of  bacteria  in  fish caught  using  a  mini  fishing  boat  before  being  given  and  after  being  notified  by  considering  the amount of bacteria in the substrate in the waters, sea water and ice cubes used by fishermen. The TPC  (Total  Plate  Count)  research  method  using  Tryptic  soy  Agar  (TSA)  as  media  and  pathogenic bacteria using Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose Agar (TCBS) as media on fish “kardinal pita lebar” (Apogon  fasciatus),  sea  water,  substrate  in  the  waters,  and  ice  cubes  that  use  for  operating Minitrawl.  The  result  of  this  research  showed  value  TPC  heterotrophic  bacteria  (TSA)  which contaminated sample ITE (fish wihthout ice) 9,89 Log CFU/ml, IS (fish with ice) 9,85 Log CFU/ml, AL (sea water)  4,91 Log CFU/ml, S (substrate in the waters) 5,28 Log CFU/ml and ES (ice cubes that use for  fishermen)  3,29  Log  CFU/ml  amount  of  pathogenic  bacteria  (TCBS)  in  ITE  5,27  Log  CFU/ml  ,  IS 3,24 Log CFU/ml,  AL 3,45 Log CFU/ml, S 1,78 Log CFU/ml, ES 3,87 Log CFU/ml,most highest amount is in the ITE with value of TPC heterotrophic bacteria (TSA) 9,89 Log CFU/ml and pathogenic bacteria (TCBS) 5,27 Log CFU/ml.
Keywords : Total Plate Count, Apogon fasciatus, heterotrophic, pathogenic; bacteria

## Abstrak
Ikan  merupakan  sumber  protein  hewani  yang  umumnya  menjadi  pilihan  masyarakat  karena memiliki harga yang relatif murah dan mudah didapat. Ikan yang dijual dalam kondisi telah mati rentan  terhadap  penurunan  kualitasnya  sehingga  bakteri  dapat  dengan  mudah  berkembang biak.  Data  tentang  kelimpahan  bakteri  pada  ikan  sehubungan  dengan  jenis  alat  tangkap  perlu menjadi  perhatian  dengan  mempertimbangkan  metode  penangkapan  yang  berbeda  antara satu alat tangkap dengan alat tangkap lainnya yang sangat mungkin mempengaruhi kualitas hasil tangkapannya.  Oleh  karena  itu,  penelitian  dilakukan  dengan  menggunakan  MiniTrawl.  Tujuan penelitian  adalah  untuk  mengetahui  kelimpahan  bakteri  pada  ikan  yang  ditangkap menggunakan MiniTrawl sebelum  diberi  es  dan  sesudah  diberi  es  dengan  mempertimbangkan kelimpahan bakteri di substrat perairan dan es batu yang digunakan nelayan. Metode penelitian TPC  ( Total  Plate  Count )  menggunakan media  Tryptic  Soy  Agar (TSA)  dan  bakteri  patogen menggunakan media Thiosulfate Citrate Bile Salt Sucrose Agar (TCBS) pada ikan kardinal pita lebar ( Apogon fasciatus ), air laut, substrat perairan dan es batu yang digunakan pada pengoperasian MiniTrawl. Hasil  penelitian  menujukkan  nilai  TPC  bakteri  heterotrof  (TSA)  yang  mengkontaminasi sampel ITE (ikan tanpa es) 9,89 Log CFU/ml, IS (ikan dengan es) 9,85 Log CFU/ml, AL (air laut) 4,91
Log CFU/ml, S (substrat perairan) 5,28 Log CFU/ml dan ES (es batu yang digunakan nelayan) 3,29 Log CFU/ml. Kelimpahan bakteri patogen (TCBS) pada ITE 5,27 Log CFU/ml, IS 3,24 Log CFU/ml,  AL 3,45 Log CFU/ml, S 1,78 Log CFU/ml,  dan ES 3,87 Log CFU/ml. Kelimpahan tertinggi yaitu pada ITE dengan  nilai  TPC  bakteri  heterotrof  (TSA)  9,89  Log  CFU/ml  dan  bakteri  patogen  (TCBS)  5,27  Log CFU/ml.
Kata kunci : Total Plate Count, Apogon fasciatus , bakteri heterotrof, bakteri patogen

## PENDAHULUAN
Ikan merupakan sumber protein hewani yang  umumnya  menjadi  pilihan  masyarakat karena  memiliki  harga  yang  relatif  murah. Ikan  yang  telah  mati  rentan  terhadap penurunan  kualitasnya  sehingga  bakteri dapat  dengan  mudah  berkembang  biak (Dwiyitno,  2010).  Penurunan  kualitas  bukan hanya berasal dari bakteri yang secara alami terdapat  pada  ikan,  namun  juga  pada bakteri berasal dari sumber lain di antaranya adalah substrat perairan, air laut, penanganan  ikan  hasil  tangkapan  nelayan dan  cara  penangkapan.  Pengoperasian MiniTrawl sebagai  alat  tangkap  umumnya dioperasikan  di fishing  ground yang  memiliki dasar  perairan  berpasir  atau  berlumpur,  dan tidak terdapat karang dengan target utama ikan-ikan demersal (Aji et al ., 2013).
Kualitas  air  tempat  ikan  hidup  sangat berpengaruh  terhadap  kualitas  dari  ikan. Kualitas  air  yang  baik  akan  menghasilkan ikan-ikan yang berkualitas dan kelangsungan hidup  ikan  menjadi  baik.  Hal  tersebut  sesuai dengan  pernyataan  Hamidah et  al .,  2019 kualitas  air  suatu  perairan  juga  dapat menentukan mutu dari ikan yang menempati lingkungan  tersebut.  Kualitas  suatu  perairan juga berhubungan dengan substrat perairan. Bahan  organik  yang  mengendap  di  substrat perairan  mengakibatkan  kelimpahan  bakteri yang memanfaatkan bahan organik meningkat  dan  jumlah  oksigen  di  perairan berkurang (Apriliana et al ., 2014). Askar et al., 2018 melaporkan bahwa kelimpahan bakteri coliform pada  air  laut  yang  telah  diisolasi menggunakan media LB dan BGLB. Berdasarkan  laporannya,  ditemukan  rata- rata  bakteri coliform pada  air  laut  sebanyak 9->1100  MPN/100  ml  dan  (Sinatryani,  2014) juga  melaporkan  bahwa  rata-rata  bakteri pada  substrat  perairan  yang  telah  diisolasi menggunakan  media  CMC  Agar  berkisar
antara 5,2 x 10 ⁴ - 3,5 x 10 ⁵ CFU/ml. Junaedi et al .,  2020  juga  melaporkan  pada  ikan  kurisi yang  tercemar  oleh  bakteri  heterotrof  8,59 Log  CFU/g  dan Vibrio sp.  5,41  Log  CFU/g yang telah diisolasi menggunakan media TSA dan TCBS. Pasca panen ikan harus dilakukan penanganan. Annisah et al. (2019) menyatakan  bahwa  penggunaan  es  batu yang  murah  dan  mudah  didapatkan  oleh nelayan  dapat  mempertahankan  mutu  dan kesegaran  ikan  hasil  tangkapan.  Namun, penggunaan  es  batu  yang  digunakan nelayan  dinilai  dapat  mempertahankan mutu ikan tidak dapat lepas dari kontaminasi bakteri.
Data tentang kelimpahan bakteri pada ikan  sehubungan  dengan  jenis  alat  tangkap perlu menjadi perhatian dengan mempertimbangkan  metode  penangkapan yang  berbeda  antara  satu  alat  tangkap dengan  alat  tangkap  lainnya  yang  sangat mungkin mempengaruhi kualitas hasil tangkapannya. Oleh karena itu, penelitian ini dilakukan  dengan  menggunakan MiniTrawl . Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui kelimpahan bakteri  pada ikan yang ditangkap  menggunakan MiniTrawl sebelum diberi  es  dan  setelah  diberi  es  dengan mempertimbangkan kelimpahan bakteri yang  terdapat  di  substrat  perairan,  perairan dan es yang digunakan nelayan.

## MATERI  DAN METODE
Sampel  yang  digunakan  berupa  air laut,  substrat  perairan,  es  batu  yang digunakan  nelayan  dan  daging  ikan.  Bahan yang  digunakan  pada  penelitian  ini  antara lain  NaCl,  air,  spirtus,  larutan  alkohol  70%, akuades,  media  TSA  ( Tryptic  Soy  Agar ), media  TCBS  ( Thiosulfate  Citrate  Bile  Salt Sucrose ).
Alat  yang  digunakan  dalam  penelitian ini  antara  lain: dissecting  set ,  botol  kaca  250 ml,  botol  kaca  100  ml,  timbangan  analitik,
GPS, autoklaf, oven, hand counter , inkubator, bunsen,  nampan,  korek  api,  kantong  kresek, aluminium  foil,  kapas,  tisu, blue tip, mikropipet,  lemari  pendingin, wrap  plastic , alat tulis, kertas label, cool box, cawan Petri, erlenmeyer 1000  ml,  gelas  ukur  100  ml  dan 1000  ml, magnetic  strirer,  hot  plate, botol spray ,  pengaduk,  kamera,  karet  gelang, glove , masker, spatula, plastik berukuran 2 kg, timbangan digital .
Pengambilan
sampel dilakukan dengan  mengikuti  nelayan MiniTrawl yang beroperasi  di  perairan  Pamekasan.  Jenis sampel  yang  diambil  adalah  ikan  Kardinal pita  lebar  ( Apogon  fasciatus) dengan perlakuan tanpa es, ikan dengan es, substrat perairan,  air  laut  dan  es  batu  yang digunakan  oleh  nelayan.  Penelitian  ini dilaksanakan  pada  bulan  November  2020 dengan  menggunakan  enam  (6)  kali  jumlah towing (penarikan jaring) sebagai ulangan.
Penelitian  ini  menggunakan  2  jenis sterilisasi  yaitu  sterilisasi  kering  dan  sterilisasi basah.
Burhanuddin &
Endah,
2017
menyatakan bahwa sterilisasi kering dilakukan  untuk  mensterilkan  beberapa peralatan gelas dengan menggunakan oven pada  suhu  121˚C  selama  15  menit  dan menggunakan  nyala  api  bunsen  setiap  kali hendak melakukan kegiatan aseptik. Sterilisasi  basah  dilakukan  untuk  mensterilkan beberapa jenis media pertumbuhan mikroba dengan  menggunakan  autoklaf  pada  suhu 121˚C tekanan 1 atm selama 15 menit (Lukas , 2006).
Sebanyak  16  g  media  TSA (Difco) dengan  0,9%  NaCl,  dan  sebanyak  35,5  g media  TCBS  (Difco)  masing-masing  media dilarutkan  ke  dalam  400  ml  akuades, menggunakan magnetic stirer agar  proses homogen  lebih  cepat.  Mulut  botol  kaca  250 ml  ditutup  dengan  aluminium  foil  hingga rapat  kemudian  dilapisi wrap  plastic dan selanjutnya  dipanaskan  menggunakan hot plate hingga  mendidih.  Rejeki et  al. (2016) menyatakan  bahwa  pemanasan  media pada hot plate menggunakan suhu 280˚C.
Sebanyak  18  g  NaCl  larutkan  dengan 2000  ml  akuades, stirer sampai  merata. Sebanyak  90  ml  larutan  fisiologis  (NaCl  0,9%) menggunakan  gelas  ukur  kedalam  botol
kaca 100 ml dan ditutup dengan menggunakan  aluminium  foil  hingga  rapat dan  dilakukan  sterilisasi  basah  dengan menggunakan  autoklaf  pada  suhu  121˚C dan tekanan 1 atm selama 15 menit.
Sebanyak  270  ml  akuades  diambil menggunakan gelas ukur dimasukkan dalam 3  buah  botol  kaca  100  ml  dan  ditutup dengan menggunakan aluminium foil hingga rapat  kemudian  dilapisi wrap  plastic dan dilakukan  sterilisasi  basah  menggunakan autoklaf pada suhu 121˚C dan tekanan 1 atm selama 15 menit.
3.3.1.
Sampel  ikan  tanpa  es  yang  diambil dimasukkan  ke  dalam  plastik  berukuran  2  kg kemudian  diberi  label  dan  dimasukkan  ke dalam cool  box. Sampel  ikan  dengan  es yang  diambil  dimasukkan  ke  dalam  plastik berukuran  2  kg  kemudian  diberi  label  dan dimasukkan  ke  dalam cool  box. Sampel  air laut  diambil  dari  permukaan  perairan  di  titik nelayan  menangkap  ikan  (Nurdiana et  al ., 2019).  Sampel  air  laut  dimasukkan  ke  dalam botol sampel berukuran 300 ml hingga rapat kemudian  diberi  label  dan  dimasukkan  ke dalam cool  box. Sampel  substrat  perairan diambil  dari  substrat  perairan  di  lokasi MiniTrawl dioperasikan kemudian dimasukkan ke  dalam  plastik  berukuran  2  kg  kemudian diberi  label  dan  dimasukkan  ke  dalam cool box. Sampel  es  batu  yang  digunakan nelayan diambil dimasukkan ke dalam plastik berukuran  2  kg    kemudian  diberi  label  dan dimasukkan ke dalam cool box.
Isolasi  bakteri  heterotrof  pada  media  TSA ( Tryptic Soy Agar ) dan bakteri patogen pada media  TCBS  ( Thiosulfate  Citrate  Bile  Salt Sucrose )
Sampel  ikan  berupa  daging  sebanyak 10  g,  dilarutkan  ke  dalam  90  ml  larutan fisiologis  (NaCl  0,9%).    Larutan  ini  disebut larutan  induk  10 ⁰ .  Sebanyak  10  ml  larutan induk 10 ⁰ diencerkan ke dalam 90 ml larutan NaCl  fisiologis  seri  pengenceran  10 ⁻ ¹  dan pengenceran  dilakukan  secara  bertahap sampai  seri  pengenceran  10 ⁻⁷ .  Isolasi  pada media TCBS seri pengenceran yang digunakan  adalah  10 ⁻ ².  Isolasi  bakteri dengan  menggunakan  metode pour  plate atau  cawan  taung  yang  digunakan  untuk
mengamati  keaneka-ragaman  spesies  koloni yang  berbeda.  Menurut  Dwinanti  dan Tanbiyaskur  (2014)  metode pour  plate yaitu mengambil 1 ml larutan sampel pengenceran  10 ⁻ ²  ,  kemudian  dilakukan inokulasi ke dalam cawan Petri. Sebanyak 15 ml  media  TSA  dan  TCBS  dituang  ke  dalam cawan  Petri  dan  dihomogenkan  secara perlahan-lahan dengan menggerakkan cawan  Petri  hingga  membentuk  angka delapan.  Setelah  media  TSA  dan  TCBS memadat,  dilakukan  inkubasi  selama  24  jam pada  suhu  35˚C  (Lestari et  al. 2016). Selanjutnya dilakukan
pengamatan
karakteristik  koloni  bakteri  dari  hasil  isolasi bakteri.  Menurut  Wahjuningrum et  al. (2013) karakteristik  koloni  bakteri  dapat  diamati dengan  menggunakan  karakter  berupa bentuk  koloni,  ukuran  koloni,  warna  koloni, elevasi koloni, dan tepi koloni.
Sampel  ikan  yang  telah  beku  di diamkan  pada  suhu  ruang  beberapa  menit hingga  es  mencair.  Setelah  ikan  tidak  lagi beku  diambil  dagingnya  sebanyak  10  g, kemudian  dilakukan  pengenceran  ke  dalam 90 ml larutan fisiologis (NaCl 0,9%).  Larutan ini disebut  larutan  induk  10 ⁰ .  Sebanyak  10  ml pada 10 ⁰ diencerkan ke dalam 90 ml larutan NaCl  fisiologis  seri  pengenceran  10 ⁻ ¹    dan pengenceran  dilakukan  secara  bertahap sampai  larutan  sampel  seri  pengenceran 10 ⁻⁷ . Isolasi pada media TCBS menggunakan seri  pengenceran  10 ⁻ ².  Isolasi  bakteri  dan pengamatan karakteristik koloni bakteri pada sampel  ikan  dengan  es  dilakukan  dengan metode seperti sebelumnya.
Sebanyak  10  ml  sampel  air  laut dilakukan pengenceran dengan menggunakan  botol  kaca  100  ml  berisi larutan  fisiologis  (NaCl  0,9%)  dilarutkan  ke dalam  90  ml.    Larutan  ini  disebut  sebagai sebagai  larutan  induk  10 ⁰ .  Sebanyak  10  ml larutan induk 10 ⁰ diencerkan ke dalam 90 ml larutan fisiologis
(NaCl 0,9%) seri pengenceran 10 ⁻ ¹
dan dilakukan pengenceran secara bertahap sampai pada larutan fisiologis (NaCl 0,9%)
seri pengenceran  10 ⁻ ².  Isolasi  pada  media  TCBS menggunakan  seri  pengenceran  10 ⁻ ¹.  Isolasi dan  pengamatan  karakteristik  koloni  bakteri pada  sampel  air  laut  dilakukan  dengan metode seperti sebelumnya.
Sampel substrat perairan sebanyak 10 g dilakukan  pengenceran  ke  dalam  90  ml larutan  NaCl  fisiologis  sebagai  larutan  induk 10 ⁰ .    Sebanyak  10  ml  pada  larutan  10 ⁰ diencerkan  ke  dalam  90  ml  larutan  NaCl fisiologis  (larutan  sampel  seri  pengenceran 10 ⁻ ¹). Pengenceran dilakukan secara bertahap  sampai  pada  larutan  sampel  seri pengenceran  10 ⁻ ᶟ .  Isolasi  pada  media  TCBS menggunakan  seri  pengenceran  10 ⁻ ¹.  Isolasi bakteri  dan  pengamatan  karakteristik  koloni bakteri  pada  sampel  substrat  perairan dilakukan dengan metode yang sama seperti pada kegiatan yang telah dilakukan.
Sampel  es  batu  yang  telah  cair dilakukan pengenceran dengan menggunakan  botol  kaca  100  ml  Sampel  es batu  10  ml  dilarutkan  ke  dalam  90  ml akuades  steril.  Sebanyak  10  ml  pada  larutan induk  10 ⁰ diencerkan  ke  dalam  90  ml akuades  steril  seri  pengenceran  10 ⁻ ¹    dan pengenceran  dilakukan  secara  bertahap sampai pada larutan sampel seri pengenceran  10 ⁻ ².  Isolasi  pada  media  TCBS menggunakan  seri  pengenceran  10 ⁻ ¹.  Isolasi dan  pengamatan  karakteristik  koloni  bakteri pada  es  batu  dilakukan  seperti  kegiatan yang telah dilakukan.
Penghitungan nilai TPC bakteri dilakukan  dengan  menghitung  koloni  bakteri secara  keseluruhan  pada  sampel  air  laut, substrat  perairan,  es  batu  yang  digunakan nelayan dan daging ikan. Menurut Ingr, 2010 TPC  merupakan  metode  yang  dilakukan untuk menghitung kelimpahan mikroba.
Pengamatan  karakteristik  morfologi koloni  bakteri  dilakukan  secara  makroskopis hasil  isolasi  pada  sampel  air  laut,  substrat perairan,  es  batu  yang  digunakan  nelayan dan  daging  ikan  dari  media  TSA  dan  TCBS pada  prosedur  yang  telah  dilakukan. Karakteristik  yang  diamati  yaitu  warna, bentuk, ukuran, tepi, dan elevasi (Wahjuningrum et al., 2013). Pada
pengamatan
morfologi koloni bakteri dilakukan  secara  makroskopis  menggunakan kasat mata.
Hasil  analisis  perhitungan  nilai  TPC  dan pengamatan  karakteristik  koloni  bakteri  dari sampel  ikan  tanpa  es,  ikan  dengan  es,  air laut,  substrat  peraira,  dan  es  batu  yang
digunakan nelayan dianalisis secara deskriptif berdasarkan visualisasi.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Ikan  kardinal  pita  lebar  ( A.  fasciatus) perlakuan  tanpa  es  dan  dengan  es  memiliki ukuran  hampir  sama  yaitu  rata-rata panjang tubuh  9,5  cm  sedangkan  rata-rata  berat tubuh  13,5  g.  Ukuran  panjang  ikan A. fasciatus menurut  Goren et  al. ,  2009  adalah 10  cm. Gökoğlu et  al. ,  2012  melaporkan berat  total  minimum  dan  maksimum  ikan A. fasciatus yang  di  tangkap  di  Gulf  Antalya, Turkey adalah 1,49 dan 6,55 g.
Hasil  analisis  nilai  TPC  pada  ITE  (ikan tanpa  es)  dan  IS  (ikan  dengan  es) memperoleh  hasil  yang  telah  disajikan  pada Gambar  1.  Berdasarkan  Gambar  1  dapat diketahui  bahwa  kegiatan  isolasi  bakteri heterotrof  dan  patogen  dari  sampel  ikan kardinal pita lebar ( A. fasciatus) tanpa es dan dengan  es  pada  masing-masing  jenis menunjukkan  nilai  TPC  ( Total  Plate  Count ) yang  berbeda.  Perbedaan  nilai  TPC  pada media  TSA  dan  TCBS  ini  dimungkinkan  oleh perlakuan yang diberikan pasca panen. Ikan yang  dengan  es  nilai  TPC  nya  lebih  rendah, dikarenakan  pemberian  es  dapat  menekan pertumbuhan  bakteri.  Hal  tersebut  sesuai dengan  pernyataan  Syafitri et  al .,  2016 menyatakan  bahwa,  penanganan  ikan dengan pemberian es dapat mempertahankan mutu dan dapat menekan pertumbuhan  bakteri.  Nilai  TPC  bakteri hetotrof ikan kardinal pita lebar (A. fasciatus) ITE  dan  IS  pada  media  TSA  adalah  9,89  Log CFU/g  dan  9,85  Log  CFU/g  (Gambar  1). Badan  Standarisasi  Nasional  (SNI-01-2729- 2006)  menyatakan  bahwa  batas  maksimum cemaran  pada  ikan  segar,  yaitu  5  CFU/g atau setara dengan 5,69 log CFU/g. Menurut Ingr,  2010  menyatakan  bahwa  standar maksimum  kontaminasi  bakteri  pada  ikan yaitu 1 x 10 ⁶ CFU/g atau setara dengan 6 log CFU/g.
Nilai  TPC  bakteri  patogen  ikan  kardinal pita  lebar  ( A.  fasciatus) ITE  5,27  Log  CFU/g dan  IS  3,24  Log  CFU/g  (Gambar  1).  Standar kontaminasi  bakteri Vibrio sp.  pada  ikan segar  berdasarkan  (IAMS,  1962)  sebesar  0/g. CSN  569609 (2008)  juga  melaporkan
maksimum  kontaminasi  bakteri Vibrio sp. pada ikan segar adalah 0/25g.
Hasil  penelitian  ini  menunjukkan  nilai TPC  bakteri  heterotrof  dan  bakteri  patogen pada  sampel  ITE  dan  IS  melebihi  batas maksimum  kontaminasi  bakteri  yang  dapat menyebabkan penurunan mutu ikan. Menurut  Apriani et  al., 2017  semakin  tinggi angka cemaran bakteri pada ikan menyebabkan kualitas ikan semakin menurun.  Tingginya  nilai  TPC  IS  pada  media TSA  dan  TCBS  dimungkinkan  oleh  kualitas  es yang  digunakan  selama  penanganan  (ES) hasil tangkapan di kapal.  Selain itu, nilai TPC bakteri  heterotrof  yang  tinggi  pada  ikan dapat  juga  berkaitan  dengan  AL  (air  laut) dan  S  (substrat  perairan).    Air  laut mengandung  nutrien  yang  dimanfaatkan oleh ikan sebagai bahan makanan kemudian  sisa  makanan  dan  kotoran  ikan akan  mengendap  di  substrat  perairan menjadi bahan organik. Bahan organik yang tinggi akan memiliki senyawa karbon organik sebagai  sumber  makanan  bakteri  (Askar et al., 2018).
Kontaminasi  bakteri Vibrio sp.  sering dikaitkan  dengan  makanan  laut  sebagai kontaminan  alami.  bakteri Vibrio sp.  dapat menyebabkan penyakit infeksi pada manusia (Wagey et al ., 2013). Menurut Alaboudi et al., 2016 Vibrio sp. tersebar di lingkungan laut dan menyebabkan  penyakit  gastroenteritis  pada manusia.  Autlet et al ., 2007 juga melaporkan kontaminasi  bakteri Vibrio  cholerae yang dapat  menyebabkan  penyakit  diare  kolera. Vibrio  cholera banyak  ditemukan  pada permukaan air.
Bakteri  patogen Vibrio sp.  yang menginfeksi ikan dapat menghambat pertumbuhan  ikan  dan  apabila  dikonsumsi oleh manusia dapat menyebabkan penyakit gastroenteritis  (Sutiknowati, 2013). Hasil penelitian  ini  menunjukkan  nilai  TPC  bakteri patogen pada ikan tinggi. Hal tersebut sesuai dengan pernyataan Sutiknowati, 2013 bakteri patogen  pada  biota  laut  dapat  menjadi indikator  biota  laut  terinfeksi  melalui  air  laut dan substrat perairan.
Analisis  terhadap  kelimpahan  bakteri heterotrof dan patogen pada AL
memperoleh hasil nilai TPC seperti yang telah disajikan  pada  (Gambar  1).  Nilai  TPC  bakteri heterotrof  AL  pada  media  TSA  adalah  4,91 Log CFU/g (Gambar 1). Menurut Askar et al ., 2018  kelimpahan  bakteri  pada  air  laut berkisar  antara  9->1100  MPN/100  ml. Kementrian  Lingkungan  Hidup  Nomor  51 tahun  2004  juga  menyatakan  standar  baku mutu  kelimpahan  bakteri  pada  air  laut sebesar 1000 MPN/100 ml.
Nilai  TPC  bakteri  patogen  AL  pada media TCBS adalah 3,45 Log CFU/g (Gambar 1).  Menurut  Ganesh et  al. (2010), quorum sensing bakteri Vibrio sp.  di  perairan  adalah 10³.  Menurut  Pepenfort et  al., 2016 quorum sensing merupakan  jumlah  kelimpahan minimal bakteri Vibrio sp. untuk mengekspresikan sifat patogennya.
Nilai  TPC  pada  AL  menunjukkan  nilai TPC pada media TSA lebih tinggi, hal tersebut diduga karena tingginya kandungan organik yang ada pada air laut sehingga menyebabkan  tingginya  nilai  TPC  pada bakteri heterotrof. Hal tersebut sesuai dengan pernyataan  Askar et  al., 2018  menyatakan bahwa,  tingginya  kandungan  organik  pada air  laut  menjadi  penyebab  melimpahnya bakteri  pada  lingkungan  tersebut.  Lou et  al., 2010  juga  menyatakan  bahwa  bahan organik  yang  berada  dilingkungan  bakteri
heterotrof hidup dimanfaatkan sebagai sumber nutrisi.
Hasil  analisis  terhadap  kelimpahan bakteri  heterotrof  pada  S  memperoleh hasilnilai  TPC  seperti  yang  telah  disajikan pada (Gambar 1). Nilai TPC bakteri heterotrof S  adalah  5,28  Log  CFU/g  (Gambar  1).  Sari dan  Agus,  (2014)  menyatakan  bahwa kelimpahan  bakteri  heterotrof  pada  substrat perairan
berkisar antara 0,60x10 ⁻⁵ 1,35x10 ⁻⁵ CFU/g.
Nilai TPC bakteri patogen S adalah 1,78 Log  CFU/g  (Gambar  1).  Askar et  al .,  2018 melaporkan  kelimpahan  bakteri Vibrio sp. pada substrat perairan berkisar antara 7,3-7,9 Log  CFU/g.  Lailatussyifa et  al. ,  2020  juga melaporkan,  kelimpahan  bakteri Vibrio sp. pada sedimen berkisar antara 4,0 X 10 ⁴ - 7,8 X 10 ⁴ Log CFU/g.
Nilai  TPC  pada  S  menunjukkan  pada media  TSA  lebih  tinggi.  Melimpahnya  bakteri heterotrof  pada  substrat  perairan  dapat disebabkan  oleh  bakteri  dan  bahan-bahan organik yang berada diperairan mengendap dilapisan  substrat  perairan.  Menurut  Askar et al .,  2018  tingginya  bakteri  heterotrof  pada  S dibandingkan dengan AL karena tidak terjadi resuspensi  substrat  perairan.  Melimpahnya bakteri  heterotrof  pada  substrat  perairan didukung  oleh  keadaan  substrat  perairan
Gambar 1 .  Nilai  TPC  ( Total  Plate  Count )  dari  bakteri  patogen  dan  bakteri  heterotrof  (Log  CFU/g) yang berhasil dihitung pada media TSA dan TCBS.
Keterangan: ITE= ikan tanpa es, IS = ikan dengan es, AL= air laut, S=  substrat perairan, ES= es yang digunakan nelayan.
0
2 4 6 8 10 12 ITE IS AL S ES Lo g C FU /g Jenis Sampel media TSA Media TCBS
yang  berlumpur,  memungkinkan  akumulasi bahan organik pada substrat perairan. Bahan organik  yang  tinggi  akan  memiliki  senyawa karbon  organik  sebagai  sumber  makanan bakteri (Askar et al., 2018).
Hasil  analisis  terhadap  kelimpahan bakteri heterotrof pada  ES memperoleh hasil nilai  TPC  seperti  yang  telah  disajikan  pada (Gambar  1).  Nilai  TPC  bakteri  heterotrof  es batu  yang  digunakan  nelayan  adalah  3,29 Log  CFU/g  (Gambar  1).  Berdasarkan  SNI  01- 3839-1995  kualitas  es  batu  yang  digunakan nelayan  secara  mikrobiologis  tidak  terpenuhi hanya  dengan  memasak  bahan  air  yang dimasak,  tetapi  juga  memperhatikan  faktor pengolahan, pengemasan dan pendistribusian.
Nilai  TPC  bakteri  patogen  ES  adalah 3,87  Log  CFU/g  (Gambar  1).  Rohman  & Tutiek,  2018  melaporkan  bahwa  rata-rata kelimpahan  bakteri  patogen  pada  es  batu balok  berkisar  0,244  x  104  CFU/ml.  Liliana et al ., 2016 melaporkan bahwa bakteri patogen
pada  es  batu  balok  6,23  x  10³CFU/ml. Pengolahan  dan  penangganan  es  batu yang  tidak  terjaga  ke  higienisannya  dapat menyebabkan melimpahnya bakteri.

## Keragaman Spesies Koloni   Bakteri
Hasil
penelitian pengamatan karakteristik  menunjukkan  jenis  koloni  bakteri heterotrof  memiliki  karakter  morfologi  yang berbeda-beda.  Karakter  bentuk  koloni  ITE dan  IS  (Tabel 1),  menunjukkan  jenis  koloni bakteri  heterotrof  yang  berhasil  diisolasi  dari sampel  ITE  dan  IS  memiliki  karakteristik  koloni yang sama yaitu  warna koloni krem; bentuk melingkar,  tidak  beraturan;  tepian  koloni bakteri  memiliki  kesamaan  pada  rata,  tidak beraturan,  berombak,  yang    berbeda  pada IS  memiliki  tepian  seperti  benang-benang tetapi  tidak  ada  pada  ITE;  elevasi  memiliki kesamaan  pada  sedikit  cembung  dan cembung  namun  datar  pada  IS  tidak terdapat  pada  ITE;  ukuran  sedang  pada  ITE terdapat  juga  pada  IS  meskipun  pada  IS terdapat juga kecil dan besar.
Tabel 1 . Keragaman spesies koloni bakteri heterotrof pada media TSA.
Keterangan: ITE= ikan tanpa es, IS = ikan dengan es, AL= air laut, S= substrat perairan, ES= es yang digunakan nelayan.
Pengamatan Makroskopik
Koloni Bakteri Media TSA ITE IS AL S ES Warna Krem Krem Krem Krem Krem Bentuk Melingkar, Tidak beraturan Melingkar, Tidak beraturan Melingkar, Seperti benang- benang radler Melingkar, Berkerut Melingkar Tepian Rata,
Berombak, Tidak beraturan Tidak
Beraturan,Ra ta,
Berombak, Seperti benang- benang Rata, Berlekuk, Seperti benang- benang Rata, Seprti benang- benang Rata Elevasi Sedikit cembung, cembung Sedikit cembung, cembung, datar Cembung, Datar, Sedikit cembung Cembung, Berlipat, Datar Datar Ukuran Sedang Kecil, Sedang, Besar Sedang, Kecil Kecil, Sedang Kecil

## Tabel 2. Keragaman spesies koloni bakteri patogen  pada media TCBS
Keterangan: ITE= ikan tanpa es, IS = ikan dengan es, AL= air laut, S= substrat perairan, ES= es yang digunakan nelayan.
Menurut  Wahjuningrum et  al. ,  2013  morfologi koloni  pada  media  TSA  berwarna  krem, elevasi  cembung  dan  tepiannya  halus. Junaedi et  al .,  2020  melaporkan  bahwa, pada  koloni  bakteri  heterotrof  yang  diisolasi dari  daging  ikan  memiliki  karakteristik morfologi yang beragam.
Berbeda  dengan  jenis  bakteri  patogen dari  sampel  ITE  dan  IS  pada  media  TCBS (Tabel  2).  ITE  dan  IS  memiliki  karakteristik warna  koloni  yang  sama  yaitu  kuning  dan hijau; bentuk koloni melingkar, yang berbeda pada  ITE  memiliki  bentuk  berlekuk,  tidak beraturan dan IS memiliki bentuk rata. Tepian koloni  bakteri  rata,  tidak  beraturan  tetapi pada  ITE  juga  memiliki  tepian  berlekuk. Elevasi  memiliki  kesamaan  pada  cembung dan  sedikit  cembung  namun  datar  pada  ITE tidak  terdapat  pada  IS;  ukuran  ITE  dan  IS memiliki  perbedaan  yaitu  pada  ITE  kecil sedangkan  IS  sedang  dan  besar.    Menurut Ihsan  &  Retnaningrum,    2017  koloni  bakteri Vibrio sp.  pada  media  TCBS  memiliki morfologi  koloni  yaitu  warna  kuning,  hijau, bentuk  koloni  melingkar,  tepian  rata  dan elevasi  cembung  dan  cekung.  Menurut Hidayat,  2013  warna  koloni  kuning  pada media TCBS terjadi ketika bakteri memfermentasikan sukrosa.
Koloni  bakteri  heterotrof  pada  AL,  S, dan  ES  juga  memiliki  kesamaan  warna  yaitu krem;  bentuk  melingkar  namun  pada  AL terdapat  seperti  benang-benang  radler sedangkan  S  berkerut;  tepian  rata,  tetapi  AL dan S memiliki tepian yang sama yaitu seperti benang-benang namun yang membedakan AL  berlekuk;  elevasi  datar  tetapi  AL  dan  S juga  memiliki  elevasi  cembung  namun  yang berbeda  AL  terdapat  sedikit  cembung; ukuran  kecil  tetapi  AL  dan  S  memiliki  ukuran sedang.  Cappucino  dan  Suherman,  2002 menyatakan  keanekaragaman  morfologi koloni  bakteri  dapat  mengindikasikan  koloni bakteri  tersebut  berasal  dari  spesies  yang berbeda.  Rinawati et  al .,  2015  juga menyatakan  bahwa  ukuran  koloni  bakteri dipengaruhi oleh medium pertumbuhan.
Jenis bakteri patogen dari sampel AL, S, dan  ES  memiliki  warna  yang  sama  yaitu kuning  namun  pada  AL  memiliki  warna  lain yaitu hijau; bentuk melingkar, tidak beraturan tetapi  pada  ES  hanya  memiliki  bentuk melingkar;  tepian  rata,  berombak  tetapi pada  ES  hanya  memiliki  tepian  rata;  elevasi sama  memiliki  kesamaan  datar,  cembung tetapi  AL,  S  juga  memiliki  elevasi  yang  sama cembung  namun  AL  juga  memiliki  elevasi rata;  ukuran  kecil  yang  membedakan  pada AL dan S memiliki ukuran sedang dan AL juga
Pengamatan Makroskopik Koloni Bakteri Media TSA ITE IS AL S ES Warna Kuning, Hijau   Kuning, Hijau Kuning, Hijau Kuning Kuning Bentuk Melingkar, Berlekuk, Tidak beraturan Melingkar, Rata Melingkar, Tidak beraturan Melingkar, Tidak beraturan Melingkar Tepian Rata, Berlekuk, Tidak beraturan Rata, Tidak beraturan Rata, Berombak Rata, Berombak Rata Elevasi Datar, Cembung, Sedikit cembung Cembung, Sedikit cembung Cembung, Datar, Rata Cembung, Datar Datar Ukuran Kecil Sedang, Besar Kecil, Sedang, Besar Kecil, Sedang Kecil
memiliki  ukuran  besar.  Hidayat et  al. ,  2006 menyatakan  bahwa  bentuk  koloni  bakteri dipengaruhi oleh umur dan syarat pertumbuhan  tertentu.  Pertumbuhan  koloni bakteri dipengaruhi oleh aktivitas pertumbuhan  bakteri,  bakteri  yang  tidak mampu  bersaing  untuk  memperoleh  nutrisi atau  makanan  akan  menyebabkan  koloni bakteri  tersebut  berukuran  kecil  (Rinawati et al. , 2015).
Mempertimbangkan  hasil  yang  diper- oleh melalui pengamatan mikroskopis semua perlakuan  yang  diisolasi  baik  pada  media TSA  maupun  TCBS  yang  cenderung  banyak terdapat  persamaan  pada  factor  warna, bentuk,  tepian,  elevasi  dan  ukuran,  maka dapat  diduga  kelimpahan  bakteri  pada perlakuan  ikan  tanpa  es  (ITE)  terkait  dengan kondisi  air laut (AL) dan  substrat perairan (S), sedangkan pada perlakuan ikan yang diberi es  (IS)  terkait  dengan  kondisi  air  laut  (AL), substrat  perairan  (S)  dan  es  (ES)  yang digunakan  sebagai  bahan  pengawet  hasil tangkapan nelayan MiniTrawl .

## KESIMPULAN
Kelimpahan  bakteri  heterotrof  dan patogen  yang  mengkontaminasi  sampel  ITE (ikan  tanpa  es),  IS  (ikan  es),  AL  (air  laut),  S (substrat  perairan)  dan  ES  (es  batu  yang digunakan  nelayan) MiniTrawl diperairan Pamekasan yang memiliki kelimpahan tertinggi  yaitu  pada  ikan  tanpa  es  dengan kelimpahan  bakteri  heterotrof  9,89  Log CFU/ml  dan  bakteri  patogen  5,27  Log CFU/ml.

## UCAPAN TERIMA KASIH
Terima  kasih  diucapkan  kepada  dosen pembimbing  skripsi  dan  semua  pihak  yang telah  membantu  kelancaran  penelitian  dan penulisan artikel ini.

## DAFTAR PUSTAKA
Aji,  I.N.,  Bambang,  A.W.  &  Asriyanto.  2013.
Analisis  Faktor  Produksi  Hasil  Tangkapan Alat  Tangkap  Cantrang  Di  Pangkalan Pendaran  Ikan  Bulu  Kabupaten  Tuban. Journal  of  Fisheries  Resources  Utilization Managemen and Technology . 2(4):50-58
Alaboudi,  A.R.,  Ababneh,  M.,  Osaili,  T.M.  & Shloul, K.A. 2016. Detection, identifivation, and prevalence of pathogenic Vibrio  parahaemolyticus in fish  and  coastal  environment  in  Jordan. Journal  of  Food  Science .  81(1):130-134 doi: 10.1111/1750-3841. 13151
Annisah,  U.,  Giri,  R.B.  &  Farida,  A.,  2019. Pengaruh  Penyimpanan  Terhadap  Profil Formaldehida  Alami  Dan  Kemunduran Mutu  Pada  Ikan  Beloso  ( Saurida  tumbil).
Jurnal  Pengolahan  Hasil  Perikanan Indonesia. 22(3):535-547. doi: 10.17844/jphpi.v22i3.29123 Apriani,  R.,  Reza,  F.  &  Razali,  R.  2017.  Jumlah Cemaran Mikroba Dan Nilai Organoleptik    Ikan  Tongkol  ( Euthynnus affinis ). Jurnal Ilmiah Mahasiswa Veteriner. 1(3):598-603 Apriliana,  R.,  Siti,  R.,  Pujiono,  W.P.  2014. Keanekaragaman  Jenis  Bakteri  Perairan Dasar Berdasarkan Tipe Tutupan
Permukaan  Perairan  Di  Rawa  Pening. Diponegoro  Journal  Of  Maquares .  3(2), 119-128
Askar,  A.T.,  Mochamad,  U.K.A.,Yuli,  A.,  & Lintang,  P.Y.  2018.  Kelimpahan  Bakteri Coliform Pada  Air  Laut,  Sedimen  dan
Foraminifera Jenis Calcarina Di Ekosistem Terumbu Karang Pulau
Pramuka,
Kepulauan  Seribu,  DKI  Jakarta. Jurnal Akuatika  Indonesia .  3,  36-41.  doi: 10.24198/jaki.v3i1.23391
Aulet,  O.,  Silva,  C.,  Fraga,  S.G.,  Pichel,  M., Cangemi,  R.,  Gaudioso,  C.,  Porcel,  N., Jure, M.A., Castillo, M.C.D. & Binsztein, N. 2007.  Detection  of  viable  nonculturable Vibrio cholerae O1 through cultures and immuno-fluorescenee  in  Tucuman  rivers, Argentina. Revista da sociedade brasileira  de  Medicina  Tropical, 40:  385- 390. doi: 10.1590/S0037-8682200 7000400002
Badan Pengawas Obat dan Makanan. 2009. Peraturan  Kepala  Badan  Pengawas Obat  dan  Makanan  RI  Nomor.  HK. 00.06.1.52.4011. Tentang Penetapan Batas Maksimum  Cemaran  Mikroba  dan  Kimia Dalam Makanan, Jakarta
Badan  Standarisasi  Nasional  [BSN].  2009.
Batas  Maksimum  Cemaran  Mikroba dalam  Pangan.  SNI  7388:2009.  Jakarta: Badan Standarisasi Nasional
Burhanuddin,  I.  &  Endah,  R.  2017.  Isolasi  Dan Identifikasi Bakteri Vibrio sp. Pada Kerang Kapah  ( Meretrix  meretrix )  Di  Kabupaten Trenggalek. Jurnal  Harpodon  Borneo . 10(1):23-27
Cappucino,  J.G.  &  Sherman,  N.  2002.
Microbiology  A  Laboratory  Manual ,  6th ed. Menlo Park: The Benjamin /Cummings Publishing Company, Inc: xvi
+ 491 hlm.: Benjamin Cummings
CSN  569609.  2008.  Guides  to  good  hygiene and manufacturing practice
microbiological
criteria for
foods principles  for  the  establishment  and application
Dwinanti,  S.H.  &  Tanbiyaskur.  2014.  Rekayasa Media  Padat  Untuk  Bakteri  Akuatik.
Jurnal  Akuakultur  Indonesia .  13(2):163- 166. doi: 10.19027/jai.13.163-166
Dwiyatno.  2010.  Identifikasi  bakteri  patogen pada  produk  perikanan  dengan  teknik molekuler . Jurnal Squalen . 5(2):67-78
Ganesh, E.A., Das, S., Chandrasekar, K., Arun, G.  &  Balamurugan,  S.,  2010.  Monitoring of  Total  Heterotrophic  Bacteria  and Vibrio spp.  in  a  Aquaculture  pond. Current  Research  Journal  of  Biological Sciences . 2(1), 48-52 Gökoğlu,  M.,  Özvarol,  Y. &  Balci,  B.A.,  2012. Westward  extension  of  the  indo-pacific cardinal  fish  Apogon  fasciatus  (White, 1790)  along  the  Turkish  Coast. Journal compilation. 1(3):225-227. doi: 10.3391/bir.2012.1.3.09
Goren, M., Galil, B.S., Diamant, A., Gayer, K. & Stern,  N.  2009.  First  record  of  the  Indo- Pacific  cardinal  fish Apogon fasciatus (White,  1790)  in  the  Mediterranean  Sea. Aquatic  Invasions 4(2):409-411.  doi: 10.3391/ai.2009.4.2.21
Suhartini, S., Padaga, C.M. & Hidayat, N. 2006.
Mikrobiologi  Industri.  Penerbit  ANDI, Yogyakarta IAMS (International Association of
Microbiological  Societies).  1962.  (www. Microbialstandard.com).
Ihsan,  B.,  Retnaningrum,  E.  2017.  Isolasi  dan identifikasi  bakteri Vibrio sp.  pada kerang  kapah  ( Meretix  meretix )  di Kabupaten Trenggalek. Jurnal Harpodon Borneo . 10(1):23-27
Ingr,  I.  2010.  Fish  Quality  and  Processing.
(Jakosta  zpracovani  ryb). 2nd  ed.  Brno:
Mendelova univerzita v Brne, 102 p.
Junaedi, A.S., Riana, F., Sari, H.C.P., Witria, W. &  Zainuri,  M.  2020.  Kualitas  Daging  Ikan Kurisi ( Nemipterus japonicus ) Hasil Tangkapan  Nelayan  Di  Pelabuhan Perikanan  Branta,  Pamekasan. Jurnal
Pengolahan  Hasil  Perikanan  Indonesia . 23(2):304-321. doi: 10.17844/jphpi.v23i2.31169 Keputusan Menteri Lingkungan Hidup Bidang Kebijakan dan Kelembagaan
Lingkungan  Hidup.  2004 . Standar  Baku Mutu  Air  Laut  Nomor  51  Tahun  2004. Jakarta: Kementerian Lingkungan Hidup RI.
Lestari,  N.W.,  Budiharjo,  G.  &  Pangastuti,  A. 2016.  Bakteri  Heterotrof  Aerobik  Asal Saluran Pencernaan Ikan Sidat ( Anguilla bicolor bicolor ) Dan Potensinya  sebagai Probiotik. Bioteknologi .  13(1):9-17.  doi: 10.1305 7/bio tek/c130102
Liliana, D.P., Maria, S., Dewi, R. & Astuti I. 2016. Perbandingan  Jumlah  Koloni  Bakteri Kontaminan Pada Es Balok dan Es Kristal di  Pabrik  Es  Batu  dan  Penjual  Minuman Sekitar Unisba. Universitas Islam Bandung. 273-278
Lukas,  S.  2006. Formulasi  Steril .  Yogyakarta  : Penerbit Andi hal. 9-14; 82-84; 86-99
Mile,  L.  2013.  Analisis  TPC  dan  Total  Bakteri Psikrofilik pada Ikan Layang ( Decapterus macrosoma ) Selama Penyimpanan Suhu Rendah. Jurnal  Ilmiah  Perikanan  dan Kelautan. 1(2): 103-106 Notowinarto  &  Fenny,  A.  2015.  Populasi Bakteri  Heterotrof  Di  Perairan  Bulang Batam. Jurnal Pendidikan Biologi
Indonesia. 1(3):334-342
Nurdiana,  F.,  Pande,  G.S.J.  &  Endang,  W.S.
2019. Kelimpahan Bakteri Coliform Pada Musim  Kemarau  di  Perairan  Laut Celukanbawang,  Provinsi  Bali. Jurnal Current  Trends  in  Aquatic  Science . 2(1):101-107
Rejeki, S., Triyanto & Murwantoko. 2016. Isolasi dan Identifikasi Aeromonas spp. Dari Lele Dumbo ( Clarias sp.)  Sakit Di Kabupaten Ngawi. Jurnal  Perikanan  Universitas Gadjah Mada . 18(2):55-60. doi: 10.22146/jfs.26917
Rinawati,  L.P,  Arsana,  I.N.  &  Juliasih,  N.K.A. 2015.  Pengaruh  konsentrasi  natrium chloride  pada  media  alkaline  peptone water terhadap pertumbuhan bakteri Vibrio cholera. Meditory . 3(1):1-9
Sari,  E.P  &  Agus,  J.E.  2014.  Dinamika  Populasi Bakteri  Heterotrof  Dan  Autotrof  Pada Pengolahan Sludge  Produced  Water Hasil  Eksplorasi  Minyak  Dan  Gas  Bumi Dengan Metode Aerated Static Pile Dan Degradasi  Anaerobik. Jurnal  Teknik Lingkungan. 1(20):68-77.  doi:  10.5614/jtl.
2014.20.1.8
Sethi, L. 2014. Pathogenicity, genetic aspects and  characterization  of  Virio  species Isolated from Marine Environment. Thesis .
Department  of  Life  Science  National Institue of Technology Rourkela, Odisha.
[SNI]  Standar  Nasional  Indonesia.  Es  Batu. Jakarta:  Badan  Standarisasi  Nasional 1995. SNI 01-3839-1995
Supriharyono.  2009.  Konservasi  Ekosistem Sumberdaya  Hayati,  Di  Wilayah  Pesisir dan  Laut  Tropis.  Pustaka  Pelajar, Jogjakarta
Sutiknowati,  L.I.  2013.  Mikroba  Parameter
Kualitas  Perairan  P.  Pari  Untuk  Upaya Pembesaran Biota Budidaya. Jurnal Ilmu dan  Teknologi  Kelautan  Tropis. 5  (1):204- 218. doi: 10.29244/jitkt.v5i1.7769
Wagey,  I.N.D.,  Frans,  G.I.  &  Joyce,  C.V.P.
2013. Tingkat Kontaminasi Vibrio
cholerae  Resisten  Merkuri  Diisolasi  Dari Ikan Kuwe (Caranax sexfasciatus). Jurnal Media Teknologi Hasil Perikanan . 1(1):21-
25 doi : 10.35800/ mthp.1.1.2013.4142
Wahjuningrum,  D.,  Retno,  A.  &  Mia,  S.  2013.
Pencegahan Infeksi Aeromonas Hydrophila pada  Benih  Ikan  Lele Clarias Spp. Yang Berumur 11 Hari Menggunakan  Bawang  Putih Allium
Sativum Dan  Meniran Phyllanthus  Niruri. Departemen  Budidaya  Perairan,  Fakultas Perikanan  Dan  Ilmu  Kelautan,  Institut Pertanian
Bogor. Jurnal Akuakultur
Indonesia . 12(1):94-104