## STANDARDISASI PARAMETER SPESIFIK DAN UJI AKTIVITAS ANTIKANKER TERHADAP SEL KANKER KOLON (Widr) DARI EKSTRAK ETANOL LAMUN ( Enhalus acoroides)
Willya Anggri Paputungan 1) , Henki Rotinsulu 1) , Paulina V.Y YamLean 1)
1) Program studi farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
Cancer is a health problem since it is difficult to cure and causes death for the patient. In cancer occurs  uncontrolled  cell  proliferation  and  loss  of  ability  to  activate  apoptosis  program  so  that  cancer cells  become  immortal.  The  purpose  of  this  study  was  to  obtain  data  on  standardization  of  specific parameters  and  anticancer  activity  test  against  colon  cancer  cells  (WiDr)  from  ethanol  extract  of seagrass  Enhalus  acoroides.  Seagrass  that  has  been  taken  from  the  habitat  was  then  extracted  by maceration method using 96% ethanol for 24 hours then repeated 3 times for 24 hours. Standardization of  specific  parameter  data  includes  plant  identity,  organoleptic  test,  soluble  compound  in  certain solvents,  chemical  content  test  and  determination  of  flavanoid  level.  The  anticancer  activity  test  was using  MTT  assay  method  and  continued  with  live  cell  percentage  calculation  then  probit  analyze  and linear regression. Result of calculation of probit analysis got IC 50 value from ethanol extract of seagrass against  WiDr  cancer cell equal to  2969.0  µg/mL  and  IC 50 value  of  doxorubicin  as  positive  control  was equal  to  9.215  µg/mL.  The  result  of  linear  regression  calculation  obtained  that  IC 50 value  of  ethanol extract  of  seagrass  was  2067  µg/mL  and  IC 50 doxorubicin  value  is  121.54  µg/mL.  Result  of  this  study concluded  that  according  to  the  National  Cancer  Institute,  the  ethanol  extract  with  series  of concentrations  ranging  from  500  µg/mL  did  not  have  anticancer  activity  against  colon  cancer  cells (WiDr), compared to the positive control doxorubicin.
Keywords :  Standardization,  seagrass  (Enhalus  acoroides),  colon  cancer  cells  (WiDr),  MTT  assay, anticancer

## ABSTRAK
Kanker  merupakan  masalah  dibidang  kesehatan  karena  sukar  disembuhkan  dan  menyebabkan kematian  bagi  penderita.  Pada  kanker  terjadi  proliferasi  sel  yang  tidak  terkendali  dan  hilangnya kemampuan  mengaktifkan  program  apoptosis  sehingga  sel  kanker  menjadi  immortal.  Tujuan  penelitian ini  yaitu  mendapatkan  data  standardisasi  parameter  spesifik  dan  uji  aktivitas  antikanker  terhadap  sel kanker  kolon  (WiDr)  dari  ekstrak  etanol  Lamun  ( Enhalus  acoroides). Lamun  yang  telah  diambil  dari habitatnya  kemudian  diekstraksi  dengan  metode  maserasi  menggunakan  pelarut  etanol  96%  selama  24 jam  kemudian  di  remaserasi  sebanyak  3  kali  selama  24  jam.  Data  standardisasi  parameter  spesifik mencakup  identitas  tanaman,  uji  organoleptik,  senyawa  terlarut  dalam  pelarut  tertentu,  uji  kandungan kimia  dan  penetapan  kadar  flavonoid.  Uji  aktivitas  antikanker  menggunakan  metode  MTT  assay  dan dilanjutkan  dengan  perhitungan  persentase  sel  hidup  kemudian  dilakukan  analisis  probit  dan  regresi linear.  Hasil  perhitungan  analisis  probit  didapatkan  nilai  IC 50 dari  ekstrak  etanol  Lamun  terhadap  sel WiDr  sebesar  2969,0  µg/mL  dan  nilai  IC 50 doxorubisin  sebagai  kontrol  positif  sebesar  9,215  µg/mL. Hasil  perhitungan  regresi  linear  diperoleh  nilai  IC 50 ekstrak  etanol  Lamun  sebesar  2067,53  µg/mL  dan nilai IC 50 doxorubisin sebesar 121,54 µg/mL. Hasil penelitian ini menyimpulkan bahwa menurut Nasional Cancer Institute ekstrak etanol dengan seri konsentrasi dimulai dari 500  µg/mL tidak memiliki aktivitas antikanker terhadap sel kanker kolon (WiDr), dibandingkan dengan kontrol positif doxorubisin.
Kata  kunci :  Standardisasi,  Lamun  ( Enhalus  acoroides), sel  kanker  kolon  (WiDr),    MTT  assay, antikanker.

## PENDAHULUAN
Kanker merupakan pertumbuhan sel dan jaringan  baru  yang  tidak  terkontrol  pada pengaturan kelangsungan hidup yang bersifat infiltratif. Pertumbuhan kanker yang tidak  terkontrol  tersebut  diikuti  dengan proses  invasi  ke  jaringan  sekitar  dan metastase  ke  bagian  tubuh  yang  lain (Hondermarck, 2003). Kanker kolon merupakan  kanker  kolorektal  dan  termasuk salah  satu  jenis  kanker  ganas  yang  tumbuh pada  permukaan  usus  besar  (kolon)  atau anus (rektum). Kanker kolon  ini merupakan kanker kedua terbanyak  setelah kanker paru pada  laki-laki  dan  kanker  payudara  pada wanita  dan  penyebab  kematian  karena kanker di negara-negara barat . Di Indonesia kanker kolon juga termasuk 10 besar kanker yang  sering  terjadi    (Tjindarbudi  dan Mangunkusumo, 2013).
Metode pengobatan kanker yang banyak digunakan saat ini ialah metode pengangkatan  jaringan  kanker  terlokalisasi (pembedahan)  tetapi,  pembedahan  memiliki keterbatasan  karena  tidak  dapat  dilakukan pada  sel  kanker  darah  serta  pada  kanker yang  telah  bermetastasis.  Karena  itu pembedahan  harus  diikuti  dengan  upaya mematikan  sel  kanker  dengan    radiasi, kemoterapi dan imunoterapi. Terapi tersebut memiliki  efek  samping  yang  sering  ditakuti pasien.  Efek  samping  diantaranya alopecia (kerontokan rambut), mual, emesis (muntah), anemia, hepatoksik dan menginduksi  kanker  di  organ  lain.  Pada dasarnya  metode-metode  tersebut  bertujuan untuk  mengangkat  jaringan  kanker  atau mematikan sel kanker, pengaturan siklus sel dan kontrol checkpoint yang akan mempengaruhi  proliferasi  sel,  pengaturan
tranduksi  sinyal  faktor  pertumbuhan  dan penghambatan angiogenesis (Cassidy, 2006).
Obat kemoterapi belum sepenuhnya bisa menanggulangi masalah kanker, sebab obat- obat  tersebut  bisa  membahayakan  jaringan tubuh  yang  masih  sehat.  Oleh  karena  itu, perlu  dikembangkan  obat-obat  baru  yang berasal  dari  bahan-bahan  alami  agar  efek samping pengobatan kanker dapat dikurangi. Indonesia  merupakan  negara  yang  terkenal akan keanekaragaman hayati di dunia, antara lain  berupa  tumbuhan  tropis  dan  biota  laut, sehingga sangat potensial untuk pengembangan  obat  baru  dan  fitofarmaka (Qomariyah, 2003).
Pencarian  obat  anti-kanker  ini  menarik banyak  perhatian  untuk  kembali  ke  alam dengan menggunakan tanaman-tanaman obat  yang  potensial  (Wahyuningsih et  al., 2007). Salah satunya tanaman yang hidup di perairan,  sebagai  tanaman  laut  Lamun ( Enhalus acoroides Rich. Ex Steud ) memiliki kandungan antara lain karbohidrat, protein,  lemak,  fenol  hidrokuinon,  steroid, triterpenoid dan flavonoid (Ren et al ., 2003).
Sejauh  ini  Lamun  ( Enhalus  acoroides Rich.  Ex  Steud )  hanya  diteliti  mengenai kandungan  fitokimia  dan  penelitian  yang dilakukan  Arifudin  (2013)  tentang  Uji Sitotoksik  bahan  aktif  Lamun  ( Enhalus acoroides Rich. Ex Steud ) terhadap Artemia salina (Linnaeus,1758) hasilnya yaitu Lamun memiliki aktivitas sitotoksik. Berdasarkan  kajian  tersebut,  maka  akan dilakukan  pengujian  lebih  lanjut  mengenai standardisasi  dan  uji  aktivitas  antikanker dari ekstrak etanol Lamun, menggunakan sel kanker  kolon  (WiDr)  untuk  mengetahui
apakah  ekstrak  tersebut  memiliki  aktivitas antikanker terhadap sel kanker kolon (WiDr) dengan uji nilai IC 50 .

## METODE PENELITIAN Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian  ini  dilaksanakan  pada bulan  Oktober  2016  -  Mei  2017  di Laboratorium  Farmakognosi  dan  Fitokimia Program Studi Farmasi Fakultas Matematika dan  Ilmu  Pengetahuan  Alam  Universitas Sam  Ratulangi  Manado  dan    Laboratorium
Parasitologi Fakultas Kedokteran
Universitas Gadjah Mada Yogyakarta.
Alat dan Bahan a.  Alat
Alat-alat  yang  digunakan  dalam penelitian ini ialah tabung reaksi, rak tabung reaksi,  batang  pengaduk,  kertas  saring, aluminium  foil,  gelas  kimia  labu  ukur, cawan  petri,  oven, hot  plate,  rotatory evaporator , timbangan analitik, vortex, pipet tetes, magnetik stirrer , mikropipet (Pyramid), Spektrofotometri UV-Vis, tabung  Evendorf,  Conical  Tube,  Cryotube, Mikroskop Inverted, Hemositometer, yellow tip  dan  blue  tip,  Mikro  Plate  96,  Inkubator CO 2 (Benchmark), Laminar Air Flow , Elisa Reader.
b. Bahan
Bahan-bahan  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  ialah  tumbuhan  Lamun (Enhalus  acoroides  Rich.  Ex  Steud), Kloroform  P.A  ,  Etanol  70%,  Etanol  96%, HCL,  Serbuk  Magnesium,  Aquabides, Asetat  Anhidrida,  Asam  Sulfat,  Reagen
Meyer, Reagen Dragendorf, Reagen Wagner, FeCl 3 , Reagen Aluminium Klorida, Kuersetin,  Penisillin-Streptomisin, Fetal Bovine  Serum (FBS),  Tripsin  EDTA, NaHCO 3, Hepes,  Amphotericyn  B, Media
RPMI, MTT 5mg/mL PBS (50 mg MTT dan 10  mL  PBS Phosphate  buffer  saline )  , Dimethyl  Sulfoxide,  Sodium  Didusil  Sulfat 10%, Doxorubisin, Sel kanker WiDr.
Prosedur Penelitian Persiapan Pembuatan Ekstrak Pengambilan sampel dilakukan dengan mengambil Lamun (Enhalus acoroides  Rich.  Ex  Steud) dari  habitatnya, kemudian Lamun dibersihkan dari pasir dan kotoran-kotoran  yang  menempel  dengan menggunakan  air  tawar.  Setelah  bersih Lamun  dirajang  seperti  irisan  kecil-kecil. Lamun dimaserasi menggunakan etanol 96% selama  24  jam  dan  pada  6  jam  pertama sekali-kali  dilakukan  pengadukan.  Hasil maserasi  disaring  dengan  kapas  dan  kertas saring. Selanjutnya, residu dimaserasi kembali  sebanyak  3  kali  selama  24  jam hingga  filtrat  yang  dihasilkan  warna  hijau bening.  Filtrat  yang  diperoleh  disatukan dipekatkan  dengan  menggunakan rotary evaporator pada  suhu  40 o C  –  50 o C  sampai diperoleh  ekstrak  kental.  Rendemen  dari ekstrak kemudian dihitung dengan rumus :

## Pengujian Parameter Spesifik
Pada  Pengujian  Standardisasi Spesifik meliputi :
Identitas tanaman  yang  akan dibuat ekstrak, uji  organoleptik  ekstrak,  senyawa  larut dalam  air  dan  etanol,  uji  kandungan  kimia ekstrak  etanol  Lamun  ( Enhalus  acoroides Rich. Ex. Steud ).

## Penentuan Kadar Flavonoid
Penentuan  kadar    flavonoid  dengan spektrofotometri UV-Vis menggunakan
reagen  aluminium  klorida.  Sebanyak  1  mL larutan  ekstrak  dengan  konsentrasi  2500 µg/mL  dan  5000  µg/mL,  ditambahkan dengan  2  mL  aluminium  klorida  2%  yang telah  dilarutkan  dengan  etanol,  kemudian divorteks  dan  diukur  absorbansi  pada  415 nm.  dibuat  perhitungan  rata-rata  2  kali pengukuran dan kandungan flavonoid dinyatakan  dengan  kesetaraan  pembanding baku quercetin (Chang et al ., 2002).
Uji Aktivitas Antikanker Pada Sel WiDr Pembuatan  Larutan  Uji  Sampel  Lamun (Enhalus acoroides Rich. Ex Steud )
Ditara cryotube , selanjutnya ditimbang  ekstrak  Lamun  dalam cryotube sebanyak  10  mg,  kemudian  ditimbang ekstrak uji sejumLah 0,144 gr dan dilarutkan dalam  DMSO  144  µl  (dicampur  hingga homogen  sehingga  didapatkan  konsentrasi 100.000  ppm).  Disiapkan  7  tabung  reaksi untuk  diisi  media  kultur  dan  bahan  uji, setiap  tabung  diisi  500  µl  media  kultur terlebih  dahulu,  pada  tabung  yang  pertama diisi  kembali  dengan  490  µl  media  kultur, dipipet  10  µl  larutan  bahan  uji  Lamun (Enhalus acoroides Rich. Ex Steud) kedalam tabung  yang  pertama  disuspensi,  dipipet kembali  500  µl  dan  dimasukkan  dalam tabung  yang  kedua,  seterusnya  sampai tabung terakhir, konsentrasi larutan uji yang dibuat  yaitu  500  µg/mL,  250  µg/mL,  125 µg/mL,  62,5  µg/mL,  31,25  µg/mL,  15,625 µg/mL, dan 7,8125 µg/mL.

## Pembuatan  Larutan  Uji  Kontrol  Positif Doxorubisin
Disiapkan 7 tabung reaksi untuk diisi media  kultur  dan  bahan  uji,  setiap  tabung diisi  800  µl  media  kultur  terlebih  dahulu, pada  tabung  yang  pertama  diisi  kembali
dengan  720  µl  media  kultur,  dipipet  80  µl doxorubisin kedalam tabung pertama disuspensi,  dipipet  kembali  800  µl  dan dimasukkan  dalam  tabung  yang  kedua, seterusnya sampai tabung terakhir, konsentrasi larutan uji yang dibuat yaitu 100 µg/mL,  50  µg/mL,  25  µg/mL,  12,5  µg/mL, 6,25  µg/mL,  3,125  µg/mL,  dan  1,5625 µg/mL.

## Perlakuan Terhadap Sel WiDr
Sel  diambil  dalam  inkubator  CO 2 , dibuang media kulturnya, selanjutnya dipipet  larutan  uji  100  µl  dari  konsentrasi rendah  dan  dimasukkan  pada  tiap  sumuran dan urutkan dari bawah, begitupun seterusnya  hingga  sumuran  terakhir  dan konsentrasi  paling  tinggi.  Sumuran  kontrol sel  diisi  dengan  media  kultur  sebanyak  100 µl, sedangkan untuk kontrol media dibiarkan tetap  kosong,  inkubasi  kembali  selama  24 jam dalam inkubator CO 2.

## Pemberian MTT Assay
Sel yang telah diisi bahan uji diambil dalam inkubator CO 2, didokumentasi kondisi sel  sebelum  pemberian  MTT  dibawah mikroskop  inverted.  Dibuat  reagen  MTT dengan  cara  dicairkan  reagen  MTT  dengan memasukkan conical tube yang berisi reagen MTT  di  dalam  gelas  beaker  yang  diisi  air, dipipet  1  mL  MTT  dimasukkan  di  dalam conical  tube,  ditambahkan  media  kultur RPMI  sebanyak  10  mL,  dikocok  hingga homogen  (pekerjaan  dilakukan  semuanya harus  didalam  LAF),  dibuang  media  sel, dipipet 100 µl reagen MTT dan dimasukkan pada  setiap  sumuran,  diinkubasi  selama  4-6 jam  dalam  inkubator  CO 2, setelah  itu dikeluarkan dari incubator didokumentasikan kondisi sel setelah
pemberian reagen MTT di bawah mikroskop inverted. Selanjutnya dipipet 100  µl  stopper SDS 10% dan dimasukkan di dalam tiap-tiap sumuran, dibungkus dengan kertas aluminium foil dan diberi penanda, dibiarkan selama 24 jam. Selanjutnya dibaca nilai  absorban  dengan  menggunakan  Elisa Reader.

## Analisa Data
Dari hasil uji sitotoksisitas yang berupa respon serapan dikonversikan ke dalam persen kehidupan dengan rumus:
Analisis data dilakukan dengan menggunakan analisa probit untuk menentukan  IC 50 ekstrak  Lamun (Enhalus acoroides  Rich.  Ex  Steud). Menurut  NCI ( National  Cancer  Institute )  suatu  ekstrak dikatakan  aktif  apabila  memiliki  aktivitas sitotoksisitas dengan nilai  IC 50 < 30  µg/mL, sedangkan  moderat  aktif  apabila  memiliki
nilai  IC ≥ 30  µg/mL dan  IC 50 < 100 µg/mL dan dikatakan tidak aktif apabila nilai IC 50 > 100 µg/mL.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil  Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Lamun ( Enhalus acoroides Rich. Ex Steud ). Penelitian  ini  menggunakan    senyawa hasil  maserasi  dari  ekstrak  etanol  96% tanaman  Lamun  ( Enhalus  acoroides  Rich. Ex Steud ). Senyawa uji ini diperoleh dengan menyari  250  g  tanaman  Lamun  yang diekstraksi  secara  maserasi  dengan  etanol 96% 750 mL, perbandingan 1 : 3 selama 24 jam  dan  pada  6  jam  pertama  sekali-kali dilakukan pengadukan, hasil maserasi disaring  dengan  kapas  dan  kertas  saring. Selanjutnya, residu diremaserasi sebanyak 3 kali  selama  24  jam  hingga  filtrate  yang dihasilkan  berwarna  hijau  bening,  filtrat yang  diperoleh    disatukan  dan  dipekatkan dengan rotary  evaporator lalu  diuapkan pada  suhu  40 o C  di  oven  sampai  diperoleh ekstrak kental 8,4 gr.
Tabel 1 . Hasil Pembuatan Ekstrak Etanol Lamun ( Enhalus acoroides Rich. Ex Steud ).
Berat ekstrak yang diperoleh (g) Berat  bahan yang diekstrak (g) Rendamen (%) Maserasi 250 gr 8,4 g 3,36 %

## Hasil  Pengujian  Standardisasi  Parameter Spesifik
Pengujian  kandungan  kimia  ekstrak Lamun  ( Enhalus  acoroides  Rich.  Ex  Steud ) memberikan  hasil  yang  positif meliputi  uji Alkaloid,  Flavanoid,  Saponin,  Triterpenoid, Steroid, Tanin, Fenol.
Hasil Penetapan Kadar Flavanoid
Penetapan  kadar  flavonoid  dinyatakan sebagai  kuersetin  mg/kg  ekstrak.  Uji kandungan  total  flavonoid  yang  terkandung dalam  ekstrak  etanol  Lamun  ( Enhalus acoroides Rich. Ex Steud ) dengan
konsentrasi  2500  μg/mL  dan  5000  μg/mL dapat dilihat pada tabel dibawah ini  :
Tabel 2 . Hasil Pengujian Kadar Flavanoid
Konsentrasi
Kadar Flavanoid
2500 μg/mL 8,53 ± 0,45 mg/kg 5000 μg/mL 14,3 ± 4,02 mg/kg

## Hasil  Pengujian  Aktivitas  Antikanker Pada Sel WiDr
Setelah  kultur  sel  WiDr  diberikan perlakuan  dengan  pemberian  MTT  dan stopper  dengan  tujuan  untuk  mereaksikan MTT  kedalam  sel  hidup  sehingga  terjadi intensitas  warna  ungu  yang  proporsional karena  terbentuk  kristal  formasan,  jika intensitas  warna  ungu  semakin  besar  maka jumLah sel hidup semakin banyak dan untuk
menghentikan reaksi maka diberikan stopper Sodium Didusil Sulfat 10% selama semalam yang kemudian diukur absorbansinya.
Nilai absorbansi sumuran diukur dengan menggunakan Elisa Reader sehingga diperoleh  data  nilai  absorbansi  dalam masing-masing  sumuran.  Dari  data  tersebut kemudian  dihitung  nilai  rerata  absorbansi tiap  sumuran.  Presentase  penghambatan pertumbuhan  sel  WiDr  setelah  pemberian ekstrak  etanol  Lamun  dan  kontrol  positif doxorubisin  diperoleh  dengan  melakukan perhitungan sesuai rumus.
Tabel 3. Data Hasil Uji MTT Assay Ekstrak Etanol Lamun ( Enhalus acoroides Rich. Ex Steud ) Terhadap Sel WiDr.
Konsentrasi (µg/mL) Absorbansi Rata-rata absorbansi % Sel Hidup 1 2 3 500 0,424 0,421 0,412 0,419 59,616 250 0,472 0,495 0,452 0,473 69,198 125 0,493 0,516 0,514 0,507 75,230 62,5 0,516 0,509 0,483 0,502 74.343 31,25 0,524 0,517 0,531 0,524 78,246 Kontrol Sel 0,751 0,532 0,657 0,646 Kontrol Media 0,097 0,071 0,082 0,083
Hasil  uji  sitotoksitas  Ekstrak  Etanol
Lamun  ( Enhalus  acoroides  Rich.  Ex  Steud )
terhadap  sel  kanker  kolon  WiDr  dengan
metode  MTT  assay  dapat  dilihat  pada gambar. Kondisi Sel Awal Kondisi Sel Setelah MTT
Gambar 1. Kondisi Sel WiDr Sebelum Dan Sesudah Pemberian MTT Pada Konsentrasi 500 µg/mL Dilihat Dibawah Mikroskop Inverted Dengan Perbesaran 100 Kali.
Tabel 4 . Data Hasil Uji MTT assay Kontrol Positif Doxorubisin
Konsentrasi (µg/mL) Absorbansi Rata-rata absorbansi % Sel Hidup 1 2 3 100 0,393 0,127 0,107 0,209 22,356 50 0,271 0,141 0,285 0,232 26,437 25 0,573 0,107 0,105 0,261 31,582 3,125 0,416 0,277 0,190 0,294 37,504 1.5625 0,592 0,833 - 0,712 111,603 Kontrol Sel 0,751 0,532 0,657 0,646 Kontrol Media 0,097 0,071 0,082 0,083 Hasil uji sitotoksik kontrol positif Doxorubisin terhadap sel kanker kolon WiDr dengan metode MTT assay dapat dilihat pada gambar
.

## Kondisi Sel Awal                             Kondisi Sel Setelah MTT
Gambar 2. Kondisi Sel WiDr Sebelum Dan Sesudah Pemberian MTT Pada    Konsentrasi 100 µg/mL Dilihat Di Bawah Mikroskop Dengan Perbesaran 100 Kali.
Analisis Data Untuk Mengetahui Nilai
IC 50
Nilai IC 50
diperoleh dengan menggunakan  analisis  probit  dan  regresi linear,  analisis  probit  ini  biasa  dipakai  pada pengujian  biologi  untuk  mengetahui  respon subjek  yang  diteliti  oleh  adanya  stimuli, misalnya  obat-obatan  .  Dalam  penelitian  ini stimuli diaplikasikan pada subjek dalam seri konsentrasi dan respon yang dihitung berupa penghambatan. Dari hasil pembacaan absorbansi  dengan  menggunakan Elisa reader pada  panjang  gelombang  595  nm dan  perhitungan  persentase  sel  hidup, kemudian  dilakukan  analisis  probit  dengan
menggunakan  SPSS  ( Statistik  program  for social  science )  22.  Hasil  perhitungan didapatkan  nilai  IC 50 dari  ekstrak  etanol Lamun  ( Enhalus  acoroides  Rich.  Ex  Steud ) terhadap  sel  WiDr  sebesar  2969,0  µg/mL dan  nilai  IC 50 kontrol  positif  doxorubisin sebesar  9,215  µg/mL.  Perhitungan  dengan regresi linear dengan menggunakan Microsoft  excel  dilakukan  pada  5  titik konsentrasi  sampel  ekstrak  Lamun  yaitu 31,25  µg/mL, 62,5  µg/mL, 125  µg/mL, 250 µg/mL, 500 µg/mL dan didapatkan persamaan  linear  y  =  -0,0378  x  +  78.653 dengan R 2 = 0,9715. Berdasarkan persamaan linear  diperoleh  nilai  IC 50 ekstrak  etanol
Lamun  yaitu  2067,53  µg/mL,  selanjutnya perhitungan  regresi  linear  kontrol  positif doxorubisin dilakukan pada 5 titik konsentrasi  yaitu  1,5625  µg/mL,  3,125 µg/mL,  25  µg/mL,  50  µg/mL,  100 µg/mLdan  didapatkan  persamaan  linear  y  =
-0,522  x  +  63.944  dengan  R 2 =  0,359. Berdasarkan  persamaan  linear  diperoleh nilai  IC 50 kontrol  positif  doxorubisin  yaitu 121,54 µg/mL.
Gambar  3 .  Hubungan  Antara  Konsentrasi  Ekstrak  Etanol  Lamun  Enhalus          acoroides terhadap Persentase Sel WiDr
Gambar 4 . Hubungan Antara Konsentrasi Doxorubisin terhadap Persentase Sel  WiDr

## KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  yang  didapatkan dari  penelitian  ini,  maka  dapat  diambil kesimpulan  bahwa:  Ektrak  etanol  Lamun ( Enhalus  acoroides  Rich.  Ex  Steud )  telah terstandardisasi  parameter  spesifik  yang meliputi  data  identitas  tanaman  yang  akan
dibuat  ekstrak,  uji  organoleptik  ekstrak, senyawa yang larut dalam air dan etanol, uji kandungan  kimia  ekstrak  etanol  Lamun ( Enhalus  acoroides  Rich.  Ex  Steud ) dan penetapan  kadar  flavonoid  ekstrak  etanol Lamun ( Enhalus acoroides Rich. Ex Steud ). Nilai  IC 50 Ekstrak  etanol  Lamun  ( Enhalus
y = -0,0378x + 78,653 R² = 0,9715 0 20 40 60 80 100 0 200 400 600 Grafik Hambatan Ekstrak Etanol Lamun (Enhalus acoroides Rich. Ex Steud) Terhadap Sel Kanker Kolon (WiDr) % viabili tas se l konsentrasi ekstrak uji y = -0,522x + 63,944 R² = 0,359 0 20 40 60 80 100 120 0 50 100 150 Grafik Hambatan Doxorubisin % Vi ab ilitas Sel
acoroides  Rich.  Ex  Steud ) berdasarkan analisis  probit  menggunakan  SPSS  yaitu 2.969,0  µg/mL,  berdasarkan  regresi  linear yaitu  2.067,53  µg/mL  jauh  lebih  besar dibandingkan dengan kontrol positif doxorubisin berdasarkan analisis probit yaitu 9,215  µg/mL,  berdasarkan  regresi  linear yaitu 121,54 µg/mL.

## SARAN
Perlu  adanya  penelitian  untuk  aktivitas antikanker  fraksi  atau  isolat  dari  Lamun ( Enhalus  acoroides  Rich.  Ex  Steud )  untuk mengetahui  mekanisme  dari  senyawa  murni dalam menghambat pertumbuhan sel kanker.

## DAFTAR PUSTAKA
Anonim.  2000. Parameter  Standar  Umum Ekstrak Tumbuhan Obat. Departemen    Kesehatan  Republik Indonesia, Jakarta.
Cassidy,  Jim.,  P,  Johnston.,  E.  and  Van Custem.  2006. Colorectal  Cancer .
Informa Healthcare  USA. Inc, New York.
Chang, C.C., M. H. Yang., H. M. Wen and
J.  C.  Chern.  2002.  Estimation  Of Total Flavanoid Content In Propolis By Two Complementary Colorimetric  Methods. Journal  Of
Food  And  Drug  Analysis .  Vol  VI. No.1:37-45.
Chen,  T.R.,  Drabkowski,  D.,  Hay,  R.J.,
Macy,  M.,  and  Peterson  W.  Jr. 1987.  WiDr  Is  A  Derivative  Of Another  Colon  Adenocarcinoma Cell  Line,  HT-29. Cancer  Genet Cytogenet., 27(1): 125-34.
Desen,  Wan.  2011. Buku  Ajar  Onkologi Klinis  Edisi  2 .  Badan  Penerbit
Fakultas  Kedokteran  Universitas Indonesia, Jakarta. Flatmark, K., Maelandsmo, G.M., Martinsen,  M.,  Rassmusen,  H.,  and Fodstad, O. 2004. Twelve Colorectal Cancer Cell Lines
Exhibit  Highly  Variable  Growth and  Metastatic  Capacities  in  an Orthotopic  Model  in  Nude  Mice. European  Journal Of  Cancer,  40  : 1593 – 1598.
Harborne, J.B. 1987. (Terjemahan: Kosasih Padmawinata  Dan  Iwang  Sudiro).
Phytochemical  Methods  Edisi  ke-2. Penuntun Cara Modern Menganalisis  Tumbuhan. Penerbit ITB, Bandung.
Haryoto,  Muhtadi.,  Peni  Indrayudha.,
Azizah,  T.,  dan  Suhendi,  A.  2013.
Aktivitas  Sitotoksik  Ekstrak  Etanol Tumbuhan
Sala (Cynometra
Ramiflora  Linn)  Terhadap  Sel HeLa,  T47D  dan  WiDr .  Jurnal Penelitian Saintek . 18(2) : 21-22.
Hondermarck,  H.  2003.  Breast  Cancer.
Moleculer  &  Cellular  Proteomics 2.5. The  American  Society  For Biochemistry And Molecular Biology, Inc., pp . 281-291.
McCarthy,  T.L.,  Kerry,  J.P.,  Kerry  J.F.,
Lync, P.B., and Buckley, D.J. 2001. Evaluation  Of    The  Antioxidant
Potential  Of    Natural  Food/Plant Extracts As Compared With Synthetic Antioxidants And Vitamin  E  In  Raw  And  Cooked
Pork  Patties., Journal  Of  Meat Science . 57 : 45-52.
Palloza,  P.,  Serini,  S.,  Maggiano,  N., Gluseppe,  T.,  Navarra,  P  and
Ranelleti,  F.O.  2005.  Carotene Downregulates  The  Steady-state and  Heregulin-a-induced  COX-2 Pathways  in  Colon  Cancer  Cells, Journal. 135 : 129-136.
Qomariyah,  N.  2003.  Herbal  Medicine  :
Pentingnya Mengenal dan Memahaminya  : Mutiara  Medika Jurnal  Kedokteran  Kesehatan 1  (2)
: 38-41. Tjindarbudi,  D.,  Mangunkusumo,  R.,  2013 .
Cancer  In  Indonesia,  Present  and
Future. Jpn J Clin Oncol 32 (Oncol 1) S17-S21.
Wahyuningsih.,  Syarif,  R.A.,  Duana,  Y., Vindawati,  Z.S.,  Rahmawati  R.,
2007.  Cytotoxic  Effect  Of    n- Hexane  Insolubie  Fraction  Obtain From Kloroform Extract Of Kembang  Bulan  Leaves  (Tithonia Diversifolia (Hemsley) A. Gray) on Hela Cells and Mechanism Detection by Hoechst 33342. Berkala  Ilmu  Kedokteran 39  (3)  :
109-14.
Zheng Z., Huang W., Yang Y, Li Z., Cai J,
Su H., 2000. Detection Of Antitumor and Antimicrobial Activities  In  Marine  Organism
Associated  Actinomycetes  Isolated from  The  Taiwan  Strait,  China. Journal Microbial Lett . 188 : 87-91.