PERBANDINGAN KADAR EUGENOL MINYAK ATSIRI BUNGA CENGKEH ( Syzygium aromaticum (L.) Meer. & Perry) DARI MALUKU, SUMATERA, SULAWESI, DAN JAWA DENGAN METODE GC-MS
DETERMINATION OF EUGENOL CONTENT IN CLOVE BUD ESSENTIAL OILS ( Syzygium aromaticum (L.) Meer. & Perry) FROM MALUKU, SUMATERA, SULAWESI, AND JAVA BY GC-MS METHOD
Elsari Dwi Harnani, Muhammad Da’i, Rima Munawaroh* Fakultas Farmasi, Universitas Muhammadiyah Surakarta safirasyifa@yahoo.com

## ABSTRAK
Senyawa  eugenol  merupakan  komponen  mayor  minyak  atsiri  bunga  cengkeh  yang mempunyai aktivitas antioksidan, antifungi, analgesik, dan antiseptik.  Tujuan penelitian ini adalah menetapkan  kadar  eugenol  minyak  atsiri  bunga  cengkeh  dari  beberapa  daerah  sentra  penghasil (Maluku,  Sumatera,  Sulawesi,  dan  Jawa)..  Sampel  minyak  atsiri  bunga  cengkeh  ( Syzygium aromaticum L.) diperoleh melalui metode destilasi uap dan air. Kandungan eugenol dalam minyak atsiri  bunga  cengkeh  dianalisis  secara  kualitatif  dan  kuantitatif  dengan  menggunakan  GC-MS. Analisis  menggunakan  kolom  kapiler  Rxi TM -1ms,  kecepatan  alir  fase  gerak  helium  0,1  mL/menit, energi ionisasi 70eV dan temperature programming 50-100 o C (kenaikan 10 o C/menit dan ditahan 1 menit),  100-140 o C  (kenaikan  5 o C/menit),  140-160 o C  (kenaikan  2 o C/menit),  dan  160-245 o C (kenaikan  5 o C/menit).  Hasil  penelitian  menunjukkan  kadar  eugenol  dalam  minyak  atsiri  bunga cengkeh  dari  Maluku,  Sumatera,  Sulawesi,  dan  Jawa  berturut-turut  93,17±1,72%b/b, 60,29±0,67%b/b, 65,66±0,80%b/b, dan 55,88±0,98%b/b. Minyak atsiri bunga cengkeh dari Maluku memiliki kualitas yang paling baik terkait kadar eugenol yang terkandung .
Kata kunci: Minyak atsiri, bunga cengkeh, Syzygium aromaticum , eugenol, GC-MS

## ABSTRACT
Eugenol is major component of clove bud essential oils and it has  activities as antioxidant, antifungi, analgesic, and antiseptic. The aim of this work was to determine eugenol composition of clove  bud  essential  oils  in  several  producer  central  regions  (Maluku,  Sumatera,  Sulawesi  and Java).  Sample  of  clove  bud  essential  oils (Syzygium  aromaticum L. ) were  obtained  by  water  and steam  distillation  method.  Eugenol  in  clove  bud  essential  oils  was  qualitatively  and  quantitatively analyzed by GC-MS. Analysis used Rxi TM -1ms capillary column, helium as mobile phase with flow 0.1mL/min,  ionization  energy  70eV,  and  temperature  programming  50-100 o C  (increase  at 10 o C/minute  and  with  hold  time  for  1  minute),  100-140 o C  (increase  at  5 o C/minute),  140-160 o C (increase at 2 o C/minute), dan 160-245 o C (increase at 5 o C/minute). The result showed that eugenol compounds in clove bud essential oils of Maluku, Sumatera, Sulawesi and Java were successively 93.17±1.72%b/b,  60.29±0.67%b/b,  65.66±0.80%b/b,  and  55.88±0.98%b/b. Maluku’s  clove  bud essential oils had the best quality based on its eugenol content.
Keywords: Essential oils, clove bud, Syzygium aromaticum , eugenol, GC-MS

## PENDAHULUAN
Tanaman
cengkeh
( Syzygium aromaticum L . )  merupakan  jenis  tanaman penghasil  minyak  atsiri  yang  tumbuh  subur  di Indonesia. Hal ini menunjang potensi Indonesia sebagai  penghasil  minyak  cengkeh  dalam jumlah  besar  (Busroni,  2000)  bahkan  produk minyak atsiri cengkeh Indonesia cukup dominan  menguasai  pasar  dunia  yaitu  sekitar 2500 ton  per tahun (Gunawan,  2009). Indonesia  adalah  negara  penghasil  minyak cengkeh terbesar sehingga pemanfaatan minyak  cengkeh  dapat  dilakukan  secara
optimal  dari  segi  agrobisnis  dan  untuk  dunia pendidikan (Busroni, 2000).
Komoditi  minyak  cengkeh  Indonesia secara  garis  besar  masih  diekspor  keluar negeri  dalam  bentuk  bahan  mentah  dan  hanya sebagian  kecil  yang  diekspor  dalam  bentuk senyawa  eugenol  (Busroni,  2000).  Kebutuhan eugenol  sebagian  besar  masih  diimpor  untuk memenuhi kebutuhan industri makanan, minuman,  dan  farmasi.  Volume  impor  berkisar antara 138,8-174,2 ton/tahun dengan nilai USD 1,191-1,3  juta  (Anonim,  2008).  Senyawa eugenol  diproses  lebih  lanjut  menjadi  berbagai
produk  dengan  kegunaan  lebih  untuk  dijual kembali  dengan  harga  yang  lebih  tinggi, sehingga diperoleh nilai tambah serta keuntungan  yang  tidak  sedikit  bagi  negara importir  (Busroni,  2000).  Meskipun  beberapa perusahaan di dalam negeri mulai memproduksi  eugenol  murni  dan  isoeugenol, jumlahnya belum mampu memenuhi kebutuhan (Anonim, 2008).
Eugenol  memegang  peranan  penting sebagai bahan dasar pembuatan produk dalam industri  farmasi.  Proses  lebih  lanjut  dari eugenol dapat menghasilkan isoeugenol, eugenol  asetat,  dan  vanilin  yang  merupakan bahan  baku  industri  parfum,  dan  makanan. Industri  kesehatan  gigi  (obat  kumur,  pasta  dan formulasi  bahan  penambal  gigi)  menggunakan bahan  baku  eugenol  dalam  minyak  cengkeh karena  mempunyai  daya  antiseptik  (Anonim, 2004).  Menurut  Gunawan  dan  Mulyani  (2004), eugenol banyak diproduksi sebagai zat analgetik,  stimulansia,  korigen  odoris,  obat mulas,  serta  menghilangkan  rasa  mual  dan muntah.  Observasi  Chaieb et  al (2007) terhadap berbagai hasil penelitian menunjukkan bahwa  eugenol  terbukti  memiliki  aktivitas biologis  sebagai  antioksidan,  antifungi,  dan antiseptik.
Uapaya penegmbengan eugenol didasarkan  pada  besarnya  produksi  bahan baku  bunga  cengkeh  di  dalam  negeri  serta penggunaan senyawa eugenol yang luas dalam dunia pengobatan. Luasnya pemanfaatan eugenol  belum  didukung  ketersediaan  eugenol dalam jumlah  yang cukup,  sehingga  diperlukan upaya-upaya  untuk  mengembangkan  kuantitas dan  kualitas  eugenol,  salah  satunya  dengan menentukan  daerah  sentra  penghasil  bahan baku  bunga  cengkeh  dengan  kandungan eugenol yang  besar. Penelitian  dilakukan dengan menentukan kundungan eugenol dalam minyak  atsiri  bunga  cengkeh  dari  daerah  di Maluku, Sumatera, Sulawesi, dan Jawa sebagai  daerah  sentra  penghasil  bahan  baku bunga cengkeh di Indonesia.

## Bahan dan Alat yang digunakan
Bahan yang digunakan Sampel
bunga cengkeh kering ( Syzygium  aromaticum L . )  diperoleh  dari daerah Amboyna (Maluku),
Padang
(Sumatera),
Palopo
(Sulawesi), dan Tawangmangu (Jawa).
Bahan  kimia  yang  digunakan  adalah  eugenol (kemurnian 99%; Sigma-Aldrich), etanol (Merck),  metanol  (p.a.;  Merck),  aquadest,  Na sulfat  anhidrat  (Merck),    toluene  (Merck),  gas Helium (He).

## Alat
Alat yang diperlukan dalam penelitian ini adalah seperangkat  alat  gelas  (Pyrex®,  IWAKI TE-32 Glass,  Under  Lic),  seperangkat  alat  destilasi uap  dan  air,  piknometer  (Pyrex®,  IWAKI TE-32 Glass, Under Lic), refraktometer Abbe, seperangkat  alat GC-MS (Shimadzu GC -2010 dilengkapi  dengan  detektor mass selektif Shimadzu GCMS -QP2010S).

## Jalannya Penelitian Isolasi minyak atsiri bunga cengkeh
Minyak  atsiri  bunga  cengkeh  diperoleh melalui metode destilasi uap dan air. Sebanyak 75  g  bunga  cengkeh  kering  dimasukkan  dalam bejana  destilasi  uap  yang  sudah  diisi  aquadest sebanyak  5  liter.  Sistem  pendingin  air  dialirkan secara  perlahan  dan  dijaga  agar  air  tetap mengalir selama proses penyulingan berlangsung.  Bejana  dipanaskan  sehingga minyak  akan  dibebaskan  dari  kelenjar  minyak dalam  jaringan  tanaman.  Destilat  ditampung pada tempat penampung berskala. Penampungan minyak atsiri cengkeh dihentikan setelah  tidak  terjadi  penambahan  volume minyak atsiri selama 30-45 menit. Destilat yang diperoleh merupakan campuran minyak dengan air  yang  selanjutnya  dipisahkan  dalam  corong pisah.  Na  sulfat  anhidrat  ditambahkan  dalam minyak  atsiri  untuk  mengikat  adanya  sisa  air. Volume  minyak  yang  diperoleh  dicatat  dan ditetapkan  rendemen  minyak  atsiri  yang diperoleh.  Waktu  destilasi  yang  dibutuhkan untuk  menyari  minyak  atsiri  dalam  75  g  bunga cengkeh  kering  adalah  10-27  jam.  Penetapan rendemen dilakukan 3 kali (triplo ). Minyak atsiri yang  diperoleh  dari  3  kali  proses  destilasi dicampur dan disimpan dalam botol gelap agar terlindung  dari  cahaya  dan  disimpan  ditempat yang sejuk. Rendemen minyak atsiri dinyatakan dalam %(b/b) dalam bunga cengkeh.
Rendemen  minyak  atsiri  (%b/b)  dalam  bunga cengkeh  =  Rendemen  (%v/b)  x  bobot  jenis minyak terkoreksi (25 o C)
Pemeriksaan  organoleptis  minyak  atsiri bunga cengkeh
Pemeriksaan organoleptis dilakukan terhadap  warna,  rasa,  dan  bau  minyak  atsiri bunga cengkeh.

## Pemeriksaan  bobot  jenis  minyak  atsiri bunga cengkeh
Bobot  jenis  minyak  ditetapkan  dengan menggunakan piknometer (25,0 mL). Piknometer  dibersihkan  dengan  etanol  dan dikeringkan.  Piknometer  kosong  ditimbang dengan  seksama.  Piknometer  diisi  dengan aquadest  hingga  penuh  dan  dibuka  tutup kapilernya.  Piknometer  direndam  dalam  air  es
hingga  suhunya  turun  kira-kira  2 o C  di  bawah suhu  percobaan  (27 o C)  dan  ditambahkan aquadest  hingga  piknometer  kembali  penuh. Piknometer  diangkat  dari  air  es,  dibiarkan suhunya naik hingga suhu percobaan, kemudian  ditutup  pipa  kapilernya  cepat-cepat. Diusap air yang menempel, kemudian ditimbang  dengan  seksama.  Bobot  air  dalam piknometer dihitung dengan  cara:
Bobot piknometer + air     = a + b gram Bobot piknometer kosong=     a    gram- Bobot air =      b    gram Volume piknometer ditentukan dengan cara:
Penetapan bobot minyak atsiri dalam piknometer  sama  seperti  cara  tersebut  diatas. Jika  diketahui  bobot  minyak  atsiri  bunga cengkeh  tersebut  =  c  gram,  maka  bobot  jenis minyak atsiri bunga cengkeh ditentukan dengan:
Nilai  bobot  jenis  minyak  atsiri  dikoreksi  pada suhu  25 o C  agar  dapat  dibandingkan  dengan Standar  Nasional  Indonesia  (1996).  Nilai koreksi  bobot jenis minyak atsiri cengkeh untuk perubahan  setiap  1 o C=0,00085.  Nilai  koreksi harus  ditambahkan  jika  pengukuran  sampel diatas  suhu  15 o C,  dan  dikurangi  pada  suhu dibawah 15 o C (Ketaren, 1985). Nilai bobot jenis minyak  atsiri  pada  suhu  25 o C  dihitung  dengan cara:
Bobot Jenis (25 o C)= Bobot Jenis (27 o C) + (selisih suhu x nilai koreksi)

## Pemeriksaan indeks bias minyak atsiri
Penetapan  indeks  bias  minyak  atsiri dilakukan dengan menggunakan alat refraktometer Abbe. Penutup prisma refraktometer dibuka dan pada bagian prismanya  dibersihkan  dengan  kertas tissue yang dibasahi toluene. Refraktometer diletakkan  di  tempat  yang  terang  kemudian aliran  air  dari  kran  dialirkan  ke  dalam  lubang refraktometer  (suhu  percobaan  29 o C).  Minyak atsiri  diteteskan  di  atas  permukaan  prisma hingga  merata  kemudian  ditutup  kembali. Indeks  bias  dibaca  pada  lingkaran  skala  yang berupa  garis  perpotongan  gelap  dan  terang. Nilai  indeks  bias  minyak  atsiri  dikoreksi  pada suhu  25 o C  agar  dapat  dibandingkan  dengan Standar  Nasional  Indonesia  (1996).  Nilai koreksi    indeks  bias  minyak  atsiri  cengkeh untuk  perubahan  setiap  1 o C=0,00045.  Nilai koreksi  tersebut  harus  ditambahkan  jika pengukuran  sampel  diatas  suhu  15 o C,  dan dikurangi  pada  suhu  dibawah  15 o C  (Ketaren,
1985). Nilai indeks bias minyak atsiri pada suhu 25 o C dihitung dengan cara: Indeks bias (25 o C)= Indeks  bias  (29 o C)  +  (selisih  suhu  x  nilai koreksi)
Analisis Gas Chromatography-Mass Spectrometry ( GC - MS )
Analisis  dilakukan  dengan  menggunakan Shimadzu GC -2010 dilengkapi dengan detektor mass  selektif  Shimadzu GCMS -QP2010S  dan kolom  kapiler  Rxi TM -1ms  (30  m  x  0,25  mm, ketebalan  film  0,25  µm).  Sistem  ionisasi elektron  untuk  deteksi GC-MS menggunakan energi  ionisasi  sebesar  70  eV.  Kecepatan  alir helium  sebagai  gas  pembawa  diatur  1,0 mL/menit.  Injektor  dan MS  transfer  line temperatures diatur  pada  280  dan  245 o C, secara respektif. Suhu kolom dijaga pada 50 o C, ditingkatkan  hingga  100 o C  dengan  kenaikan 10 o C/menit (ditahan selama 1 menit), kemudian ditingkatkan  hingga  140 o C  dengan  kenaikan suhu  5 o C/menit,  ditingkatkan  kembali  hingga 160 o C  dengan  kenaikan  2 o C/menit  dan ditingkatkan  hingga  245 o C  dengan  kenaikan  5 o C/menit.  Waktu  elusi  tiap  sampel  adalah  20 menit

## Pembuatan kurva baku eugenol
Standar eugenol berupa cairan, mempunyai  bobot  jenis=  1,066  g/mL  dan kemurniannya  99%.  Satu  gram  baku  eugenol setara  dengan  0,938  mL.  Stok  eugenol (1,0%b/v)  dibuat  dengan  mengambil  50,0  µL standar  eugenol  dan  dilarutkan  dalam  metanol p.a  hingga  5,0  mL.  Konsentrasi  Dibuat  dala  5 seri,  berturut-turut  0,200;  0,100;  0,050;  0,025 dan  0,013%b/v  dari  larutan  stok  baku  eugenol (1,0%b/v).
Satu  mikroliter  (1,0  µL)  dari  tiap konsentrasi disuntikkan ke dalam kolom. Kurva baku  dibuat  3  kali  (triplo)  dengan  replikasi pembacaan  2  kali.  Persamaan  kurva  baku diperoleh melalui program regresi linier dengan memplotkan  konsentrasi  eugenol  baku  (%  b/v) versus luas  area peak eugenol  dan  ditetapkan koefisian korelasinya.
Penetapan batas deteksi dan batas kuantitasi
Pengukuran  batas  deteksi  dan  batas kuantitasi  dilakukan  dengan  mengolah  data yang  diperoleh  dari  hasil  pengukuran  linieritas standar  sehingga  diperoleh  nilai Limit  of Detection ( LOD )  dan Limit  of  Quantitation ( LOQ ). LOD dan LOQ dihitung  dengan menggunakan rumus:
Keterangan: S (y/x) 2 = variasi variable respon (y) Y= luas kromatogram rata-rata eugenol Yi= luas area hitung dari persamaan regresi N= jumlah seri konsentrasi b= slope pada persamaan regresi
Penetapan  kadar  eugenol  dalam  minyak atsiri
Larutan  stok  sampel  (3,0  %b/v)  dibuat dengan  menimbang  150,0  mg  minyak  dan dimasukkan  dalam  labu  takar  5,0  mL.  Volume 5,0  mL  dicapai  dengan  penambahan  metanol p.a.  Dibuat  sampel  (0,1  %b/v)  dengan mengambil  33,0  µL  larutan  stok  minyak  (3,0 %b/v)  dan  dimasukkan  ependorf  1,0  mL. Volume  1,0  mL  dicapai  dengan  penambahan metanol  p.a.  Satu  mikroliter  (1  µL)  sampel disuntikkan  secara  splitless. Sampel  dianalisis 3  kali  dengan  replikasi  pembacaan  2  kali. Komponen diidentifikasi dengan membandingkan  waktu  retensi  relatif  dan spektra mass yang  ditunjukkan  oleh  larutan standar eugenol.

## Cara Analisis
Perhitungan kadar
Luas area peak sampel dimasukkan ke dalam persamaan regresi linier standar: y = a + bx keterangan: y= luas area sampel; a= intersep; b= slope ; x=  kadar  eugenol dalam  minyak  atsiri  yang akan dihitung (%b/v)
Setelah  diperoleh  harga  x,  dikalikan  dengan faktor  pengenceran  (fp)  dan  dikembalikan  ke berat sampel. Kadar eugenol dinyatakan dalam %b/b dalam minyak atsiri bunga cengkeh.
keterangan:
A= kadar (x) yang diperoleh dalam perhitungan (%b/v)
Kadar  eugenol  (%b/b)  dalam  bunga  cengkeh kering diperoleh dengan cara memperhitungkan rendemen minyak atsiri (%b/b) tiap daerah. Kadar eugenol (%b/b) dalam bunga cengkeh= Kadar  eugenol  (%b/b)  dalam  minyak  x rendemen dalam 100 g bunga cengkeh (gram)

## Analisis statistik
Rendemen  minyak  atsiri  bunga  cengkeh dari  keempat  daerah  dianalisis  dengan  metode analisis  statistik Shaphiro-Wilk (uji  normalitas) dan Kruskal-  Wallis dengan  uji  lanjut Post  Hoc
Mann-  Whitney dengan  nilai  signifikansi  0,05 . Kadar  eugenol  (%b/b)  dalam  minyak  atsiri dianalisis  dengan  metode  analisis  statistik Shaphiro-Wilk dan One  way  analysis  of variance ( ANOVA )  dengan  uji  lanjut Post  Hoc LSD dengan  nilai  signifikansi  0,05.  Analisis statistik dilakukan dengan menggunakan SPSS Statistics 17.0 for Windows .

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Isolasi Minyak Atsiri Bunga Cengkeh Minyak atsiri bunga cengkeh dari keempat  daerah  berwarna  kuning  muda  jernih, berbau  khas  aromatik  dan  memiliki  rasa  pedas dan agak pahit. Rendemen minyak atsiri bunga cengkeh dari Maluku, Sumatera,  Sulawesi, dan Jawa  berturut-turut  15,21±0,40;    15,05±0,41; 14,14±0,00  dan  14,09±0,00%b/b  (Tabel  1). Hasil  analisis  statistik  menunjukkan  minyak atsiri  yang  berasal  dari  Maluku  dan  Sumatera mempunyai  rendemen  yang  sama  besar (p>0,05).
Kandungan  minyak  atsiri  dalam  bunga cengkeh  kering  adalah  10-20%.  Perbedaan tingkat  rendemen  minyak  atsiri  bunga  cengkeh kering  tersebut  dapat  dipengaruhi  faktor  yaitu daerah  asal  tanaman  dan  penanganan  bahan sebelum  penyulingan  (Nurdjannah,  2004). Faktor-faktor tersebut dapat pula mempengaruhi  kualitas  minyak  atsiri    yang dihasilkan.  Parameter  penentu  kualitas  fisik minyak atsiri dapat diketahui melalui pemeriksaan bobot jenis dan indeks bias.

## Bobot Jenis Minyak Atsiri Bunga Cengkeh
Bobot jenis merupakan salah satu kriteria penting dalam menentukan mutu dan kemurnian  minyak  atsiri.  Bobot  jenis  minyak atsiri  bunga  cengkeh  dari  Maluku,  Sumatera, Sulawesi, dan Jawa berturut-turut (1,0533±0,00),  (1,0583±0,00),  (1,0605±0,00),
(1,0570±0,00) (Tabel 1). SNI (1996)
menyebutkan  nilai  mutu  minyak  atsiri  bunga cengkeh  mempunyai  bobot  jenis  1,030-1,060 pada  suhu  25 o C.  Minyak  atsiri  bunga  cengkeh dari  keempat  daerah  mempunyai  bobot  jenis sesuai  dengan  ketentuan  yang  ditetapkan Standar  Nasional  Indonesia  (SNI):  06-4267- 1996.

## Indeks Bias Minyak Atsiri Bunga Cengkeh
Indeks bias minyak atsiri bunga cengkeh dari  Maluku,  Sumatera,  Sulawesi,  dan  Jawa berturut-turut (1,5272±0,00), (1,5314±0,00), (1,5300±0,00),  dan  (1,5308±0,00)  (Tabel  1). SNI  (1996)  menetapkan  mutu  minyak  atsiri bunga  cengkeh  mempunyai  indeks  bias  (25 o C) 1,527-1,535. Minyak atsiri dari keempat daerah dapat  dikatakan  mempunyai  sifat  fisika  yang baik terkait nilai indeks biasnya.
Tabel 1- Hasil Rata-rata ( Mean ± SD) Rendemen,  Bobot Jenis terkoreksi (25 o C), Indeks Bias terkoreksi (25 o C)Minyak Atsiri Bunga Cengkeh ( Syzygium aromaticum ( L .) Merr. & Perry) yang berasal dari Daerah di Maluku, Sumatera, Sulawesi, dan Jawa
Daerah Volume minyak (mL) Rendemen (% b/b) Bobot Jenis terkoreksi (25 o C) Indeks Bias terkoreksi (25 o C) Maluku 11.00±0,00 15,21±0,40* 1,0533±0,00 1,5272±0,00 Sumatera 11.00±0,29 15,05±0,41* 1,0583±0,00 1,5314±0,00 Sulawesi 10.00±0,00 14,14±0,00 1,0605±0,00 1,5300±0,00 Jawa 10.00±0,00 14,09±0,00 1,0570±0,00 1,5308±0,00 Keterangan: * = berbeda tidak signifikan
Kualitas  minyak  atsiri  bunga  cengkeh dievaluasi  pula  dari  kandungan  fenol,  terutama eugenol (Guenther, 1990). Berbedanya rendemen, bobot jenis, dan indeks bias minyak atsiri dapat menyebabkan perbedaan kandungan  kimia  minyak  atsiri  bunga  cengkeh (Ketaren,  1985)  sehingga  kadar  eugenol sebagai  senyawa  mayor  perlu  ditetapkan secara kuantitatif.

## Penetapan Kadar Eugenol Minyak Atsiri Bunga Cengkeh
Penetapan  kadar  senyawa  eugenol dilakukan  dengan  metode  analisis GC-MS . Metode ini utamanya digunakan untuk penetapan  kualitatif  dan  kuantitatif  senyawa yang  mudah  menguap  (Clark,  2007).  Bagian GC digunakan  sebagai  pemisah  komponen eugenol dari komponen lain dan MS digunakan sebagai pendeteksi keberadaan eugenol disamping penggunaan standar eugenol sebagai  penanda.  Persamanan    kurva  baku menyatakan  hubungan  yang  linier  antara konsentrasi dengan luas area peak . Persamaan kurva baku yang diperoleh adalah y=7.052.025,443x-29.596,774 dengan nilai koefisien korelasi | r | = 0,99897.
Penentuan  sensitivitas  metode  dilakukan dengan  mengolah  data  yang  diperoleh  dari hasil  pengukuran  linieritas  standar  sehingga diperoleh nilai LOD dan LOQ. LOD didefinisikan sebagai konsentrasi terkecil yang  dapat dideteksi  namun  tidak  perlu  secara  kuantitatif, sedangkan  pada  definisi LOQ dinyatakan sebagai  konsentrasi  terkecil  analit  yang  dapat diukur  secara  kuantitatif  (Novelina  dkk.,  2009). Secara  statistik,  perhitungan  batas  deteksi  dan batas  kuantitasi  diperoleh  melalui  garis  regresi linier dari kurva kalibrasi standar eugenol. Hasil perhitungan  diperoleh  nilai LOD sebesar 0,01198  %b/v  dan  nilai LOQ sebesar  0,03994 %b/v.
Penentuan  selektivitas  metode GC-MS dengan  membandingkan  kromatogram  standar dengan blanko. Hasil uji selektivitas menunjukkan peak area  pada retention  time ( RT ) 13,994  menit merupakan senyawa eugenol  (Gambar  1).  Identifikasi  senyawa
eugenol  dalam  sampel  dilakukan  dengan membandingkan  waktu  retensi  relatif  dan spektra  mass  standar  eugenol  pada WILLEYS library .  Spektogram  massa  senyawa  eugenol menunjukkan  analisis  fragmentasi  (m/z):  164 M + dan 149 (M-CH 3 ) + (Gambar 2). Data spektra massa  eugenol  menunjukkan  ion  molekuler yang  paling  stabil  pada  164  sesuai  dengan massa  molekul  relatif  eugenol.  Fragmen  pada 149 sesuai dengan hilangnya gugus metil pada rantai samping.
Kromatogram  GC  menunjukkan  eugenol sebagai  komponen  utama  minyak  atsiri  bunga cengkeh  dari  daerah  di  Maluku  (Gambar  3), Sumatera  (Gambar  4),  Sulawesi  (Gambar  5), dan  Jawa  (Gambar  6).  Waktu  retensi  eugenol dalam  sampel  sesuai  dengan  standar  yaitu 13,980-13,991  menit.  Kuantitas  komponen eugenol  dalam  minyak  atsiri  bunga  cengkeh dari  Maluku,  Sumatera,  Sulawesi  dan  Jawa berturut-turut (93,17±1,72%b/b), (60,29±0,67%b/b), (65,66±0,80%b/b), dan (55,88  ±0,98%b/b)  (Tabel  4).  Kadar  eugenol (%b/b)  minyak  atsiri  bunga  cengkeh  dari keempat  daerah  berbeda  signifikan  (p<0,05) pada  uji One  way  ANOVA dan Post  Hoc  LSD . Kadar  eugenol  tertinggi  dalam  minyak  atsiri diperoleh  dari  Maluku  diikuti  daerah  di Sulawesi, Sumatera, dan Jawa.
Kandungan eugenol dari berbagai daerah  menunjukkan  hasil  yang  berbeda, minyak  atsiri  b u nga  cengkeh  yang  berasal  dari Turki  mengandung  87,00%  (Alma et  al ,  2007), Barcelona  (Spanyol)  85,50%  (Viuda et    al , 2007)  dan  Kairo  (Mesir)  yaitu 71,56  %  (Nassar et  al ,  2007).  SNI  (1996)  menyatakan  mutu minyak atsiri bunga cengkeh ditentukan kandungan  eugenolnya  yaitu  sebesar  80-95%. Minyak  atsiri  bunga  cengkeh  dari  daerah  di Maluku  memiliki  kualitas  yang  paling  baik terkait  kandungan  eugenolnya.  Berdasarkan hasil berbagai penelitian terdapat variasi dalam kandungan  kimia  dari  minyak  atsiri  bunga cengkeh  yang  diperoleh  dari  berbagai  daerah maupun  berbagai  negara.  Variabilitas  ini bergantung pada beberapa faktor meliputi iklim, musim,  lokasi  geografis,  dan  geologi  (Viuda et al , 2007) .
Gambar 1- Kromatogram Standar Eugenol (Rt=13,994 menit)
Gambar 2. - Fragmentasi peak eugenol (Rt= 13,994 menit)Spektrogram Massa Standar Eugenol
Gambar  3- Kromatogram  Gas  Eugenol  pada  Sampel  Minyak  Atsiri  Bunga  Cengkeh  dari  Daerah  di  Maluku. Kandungan eugenol dalam minyak atsiri sebesar  (93,17±1.72%b/b).
Gambar  4- Kromatogram  Gas  Eugenol  pada  Sampel  Minyak  Atsiri  Bunga  Cengkeh  dari  Daerah  di  Sumatera. Kandungan eugenol dalam minyak atsiri sebesar  (60,29±0,67%b/b).
Gambar  5- Kromatogram  Gas  Eugenol  pada  Sampel  Minyak  Atsiri Bunga  Cengkeh  dari  Daerah  di  Sulawesi. Kandungan eugenol dalam minyak atsiri sebesar  (65,66±0,80%b/b).
Gambar  6- Kromatogram  Gas  Eugenol  pada  Sampel  Minyak  Atsiri  Bunga  Cengkeh  dari  Daerah  di  Jawa. Kandungan eugenol dalam minyak atsiri sebesar (55,88±0,98%b/b).
Tabel 2- Data Hasil Penetapan Kadar Eugenol (%b/b) dalam Sampel Minyak Atsiri dan  dalam Bunga Cengkeh
Daerah Luas area Kadar eugenol (%b/b) dalam minyak atsiri dalam bunga cengkeh kering Maluku * 616926 92,53 14,29 634535 95,12 14,03 612142.5 91.85 14,18 Mean ± SD 93,17±1,72 14,17±0,13 Sumatera * 390792 60,17 9,08 387416 59,69 8,85 396337 61,00 9,04 Mean ± SD 60,29±0,67 9,08±0,25 Sulawesi * 428238 65,53 9,27 424092.5 64,93 9,18 435138 66,52 9,41 Mean ± SD 65,66±0,80 9,28± 0,0,11 Jawa * 352390,7 56,35 7,94 359804,8 54,75 7,71 355866 56,54 7,97 Mean ± SD 55,88±0,98 7,87±0,14 Keterangan: *   = berbeda signifikan

## KESIMPULAN
Kandungan  eugenol  dalam  minyak  atsiri bunga cengkeh dari Maluku, Sumatera, Sulawesi, Jawa secara berturut-turut (93,17±1,72%b/b), (60,29±0,67%b/b),
(65,66±0,80%b/b), dan (55,88±0,98%b/b). Maluku  merupakan  penghasil  minyak  atsiri bunga  cengkeh  dengan  kandungan  eugenol paling tinggi diikuti daerah Sulawesi, Sumatera, dan Jawa.

## DAFTAR PUSTAKA
Alma, M.H., Ertas, M., Nitz, S., Kollmannsberger, H., 2007, Essential Oil Content, Turkish Cloves, BioResources 2(2), 265-269
Anonim, 2004, Prospek dan Arah  Pengembangan Agribisnis Cengkeh , 11-13,  Direktorat Jenderal BP Perkebunan, Jakarta
Anonim,  2008,  Menghasilkan  Minyak  Daun  Cengkeh  Bermutu, Warta  Penelitian  dan Pengembangan Pertanian , Vol. 30, No.5, 5-7
Busroni,  2000,  Sintesis  1-(3,4  Dimetoksi  Fenil)-2-Propanon  Turunan  Eugenol  Melalui Pembentukan  Senyawa  1-(3,4  Dimetoksi  Fenil)-2-Propanil  Format pada  Suhu  250-300 o C, Jurnal ILMU DASAR, Vol. 1, No.I, 35-45
Chaieb,  K.,  Hajlaoui,  H,  Zmantar,  T.,  Nakbi,  A.B.,  Rouabhia,  M.,  Mahdouani,  K.,  Bakhrout,  A., 2007,  The  Chemical  Composition  and  Biological  Acivity  of  Clove  Essential  Oil, Eugenia caryophyllata  (Syzygium  aromaticum L.  Myrtaceae):  A  Shot  Review, Phytotherapy  Research ,  21: 501-506
Clark,  J.,  2007, Kromatografi  Gas-Cair ,  (online),  (http://www.chem-is-try.org,  diakses  tanggal  5 Oktober 2009)
Guenther,  E.,  1990, Minyak  Atsiri ,  diterjemahkan  oleh  Ketaren, S.,  Jilid  IVB,  481-492, Universitas Indonesia (UI-Press), Jakarta
Gunawan,  D.,  dan  Mulyani,  S.,  2004, Ilmu  Obat  Alam  (Farmakognosi) ,  Jilid  I,  119,  Penebar Swadaya, Jakarta
Gunawan, W., 2009, Kualitas dan Nilai Minyak Atsiri, Implikasi pada Pengembangan Turunannya, Seminar  Nasional  Kimia  Bervisi  SETS  (Science,  Environment,  Technology,  Society)  Kontribusi Bagi Kemajuan Pendidikan dan Industri , Semarang, 1-11
Ketaren, S., 1985, Pengantar Teknologi: Minyak Atsiri , 57, 61-69, 133-144, Balai Pustaka, Jakarta
Nassar, M.I., Gaara,  A.H.,  El-Ghorab, A.H., Farrag, A.R.H.,  Shen, H., Huq,  E.,  Mabry, T.J., 2007, Chemical  Constituents  of  Clove  ( Syzygium  aromaticum, Fam.  Myrtaceae)  and  Their  Antioxidant Activity, Rev. Latinoamer. Quim, 35: 47-56
Novelina,  Y.M.,  Sutanto,  Fatimah,  A.,  2009,  Validasi  Metode  Analisis  Penetapan  Kadar  Senyawa Siklamat dalam Minuman Ringan, Prosiding PPI Standarisasi , Jakarta
Nurdjannah, N., 2004, Diversifikasi Bunga Cengkeh, Indonesian Center for Agricultural Postharvest Research and Development, Vol. 3, No.2, 61-70
Viuda, M.M., Ruíz, N.J., Fernández, L.J., Pérez, Á.A., 2007, Chemical Composition of the Essential Oils  Obtained  From  Some  Spices  Widely  Used  in  Mediterranean  Region, Acta  Chim. Slov,  921 – 926