Jurnal Biologi Edukasi Edisi 28, Volume 14 Nomor 1, Juni 2022, hal 14-20

## Peningkatan Motilitas dan Viabilitas Spermatozoa Rattus norvegicus Terpapar Asap Rokok
Pasca Diterapi Sirup Cengkeh
Improvement of Spermatozoa Motility and Viability from Rattus norvegicus Exposed to Cigarette Smoke After Treatment of Clove Syrup
Adrien Jems Akiles Unitly, La Eddy, Maria Nindatu, Jesmendy Reasoa Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Pattimura, Ambon e-mail: adebiologi@yahoo.co.id

## Abstrak
Asap  rokok  merupakan  salah  satu  penyebab  gangguan  reproduksi  yang  mengakibatkan terjadinya penurunan fungsi organ reproduksi. Cengkeh  tanaman rempah khas Maluku telah banyak diteliti  dan  digunakan  sebagai  bahan  pengobatan  untuk  mengatasi  masalah  reproduksi  khususnya kualitas  spermatozoa.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mengetahui  efek  pemberian  sirup  cengkeh terhadap  motilitas  dan  viabilitas  spermatozoa  tikus Rattus  norvegicus yang  terpapar  asap  rokok. Rancangan  percobaan  yang  digunakan  dalam  penelitian  ini  adalah  rancangan  acak  lengkap  (RAL). Hasil  yang  diperoleh  dianalisis  dengan Analysis  of  Variance (ANOVA)  kemudian  dilanjutkan  Uji Duncan  pada  taraf  nyata  α  =  0,05  menggunakan  perangkat  lunak  SAS.  Sampel  berjuml ah  15  ekor tikus, yang dibagi menjadi 5 kelompok. Kelompok tikus K (-), K (+), P1, P2 dan P3 diberi paparan asap  rokok.  Tikus  K  (+)  diberi  paparan  asap  rokok  tanpa  sirup  cengkeh  sebagai  pembanding. Kelompok P1, P2 dan P3 diberikan sirup cengkeh dengan dosis berturut-turut 0,9, 1,8 dan 3,6 ml/ekor/ hari.  Tikus  diaklimatisasi  terlebih  dahulu  selama  7  hari  kemudian  diberi  perlakuan  selama  14  hari. Hasil menunjukkan adanya efek terhadap motilitas dan viabilitas spermatozoa akibat dari pemberian sirup  cengkeh,  dimana  dosis  yang  efekif  yaitu  3,6  ml/ekor/hari.  Sehingga  dapat disimpulkan  bahwa sirup  cengkeh  dengan  dosis  3,6  ml/ekor/hari  memiliki  potensi  dalam  meningkatkan  motilitas  dan viabilitas spermatozoa pada tikus Rattus norvegicus yang terpapar asap rokok.
Kata kunci : Asap rokok, motilitas, sirup cengkeh, spermatozoa, viabilitas

## Abstract
Cigarette smoke is one of the causes of reproductive disorders that result in a decrease in the function of reproductive organs. Clove (Syzygium aromaticum L.), a traditional Maluku spice plant, has been studied and used as a treatment for reproductive disorders, particularly spermatozoa quality. This  research  aimed  to  determine  the  effect  of  clove  syrup  on  the  motility  and  viability  of  the spermatozoa of  Rattus norvegicus rats exposed to cigarette smoke. The experimental design used in this  study  was  a  completely  randomized  design  (CRD).  The  data  were  analyzed  using  Analysis  of Variance (ANOVA) and the Duncan Test with a sigma value of 0.05 using SAS software. The sample included 15 rats, which were divided into five groups. K(-), K(+), P1, P2, and P3 groups were injected with cigarette smoke. As a correspondence, K(+) rats were exposed to cigarette smoke without clove syrup.  P1,  P2,  and  P3  groups  were  given  clove  syrup  with  doses  of  0,9,  1,8,  and  3,6  ml/head/day, respectively.  The  rats  were  acclimatized  for  21  days,  then  given  treatment  for  14  days.  The  results showed that there was an effect on the motility and viability of spermatozoa due to the presence of clove syrup, where the effective dose was 3.6 ml/head/day. So, it could be concluded that clove syrup at a dose of 3.6 ml/head/day has the potential to increase the motility and viability of spermatozoa in Rattus norvegicus rats exposed to cigarette smoke.
Keywords : Cigarette smoke, clove syrup, motility, spermatozoa, viability

## Pendahuluan
Merokok  merupakan  gaya  hidup  sehari- hari  bagi  beberapa  kalangan  masyarakat tertentu,  bukan  hanya  di  kalangan  kaum  pria saja tetapi  di  kalangan  kaum  wanita juga tidak lepas  dari  gaya  hidup  merokok  ini.  Setiap tahunnya jumlah perokok cenderung meningkat dan  bertambah.  Menurut  data  Badan  Pusat Statistik,  presentase  jumlah  merokok  pada penduduk  tahun  2020  mencapai  28,69  persen. Diketahui  kandungan  dalam  asap  rokok  sangat berbahaya  bagi  siapa  saja  terutama  bagi perokok itu sendiri maupun bagi orang-orang di sekitar  yang  tidak  sengaja  menghirup  asap rokok tersebut (Pratiwi et al ., 2015) Asap  rokok  sendiri  mengandung senyawa-senyawa  berbahaya  sumber  radikal bebas terbesar yaitu: tar, nikotin, karbonmonoksida  dan  PAH  ( Poly-nuclear Aromatic Hydrogen ). Senyawa-senyawa tersebut  diketahui  dapat  menyebabkan  adanya gangguan  seperti  infertilitas  dengan  ditandai oleh  penurunan  parameter  dan  fungsi  semen serta kematian pada spermatozoa (Roychoudhury et  al .,  2017).  Penurunan parameter  kualitas  spermatozoa  ini  dapat disebabkan  oleh  adanya Reactive  Oxygen Spesies (ROS) yang  terdapat  di  dalam  asap rokok.  Spermatozoa  sangat  peka  terhadap kerusakan  yang  ditimbulkan  oleh  ROS ( Reactive  Oxygen  Spesies )  karena  membran selnya  mengandung  banyak  asam  lemak  tidak jenuh  dan  antioksidan  intraseluler  tidak  cukup untuk  melindungi  membran  sel  (Dwijayanti et al. , 2017). Radikal bebas yang ditimbulkan asap rokok dapat menyebabkan kerusakan deoxyribonucleic acid (DNA) dan apoptosis sel spermatozoa.  Selain  itu  juga, Reactive  Oxygen Spesies (ROS) atau  biasanya  disebut  dengan radikal  bebas  dapat  menyebabkan  adanya gangguan  pada  sistem  reproduksi  khususnya pria  seperti  fungsi  sel  Sertoli  dan  sel  Leydig pada testis yang tidak berkerja dengan baik dan dapat  menyebabkan  kerusakan  pada  kualitas spermatozoa yang dihasilkan (Susmiarsih dkk., 2018).  Kualitas  spermatozoa  dapat  dilihat  dari beberapa  aspek  seperti  motilitas  spermatozoa dan viabilitas spermatozoa.
Penurunan  pada  motilitas  spermatozoa dan  viabilitas  spermatozoa  dapat  dicegah dengan cara meminimalisir produksi perooksidan  atau  dengan  cara  meningkatkan senyawa  antioksidan  yang ada  di dalam  tubuh.
Para  ahli  mengatakan  bahwa  radikal  bebas dapat  dikendalikan  dan  dicegah  dengan mengkonsumsi  makanan  atau  minuman  yang mengandung  sumber  antioksidan  (Sitohang et al .,  2015).  Antioksidan  dapat  melawan pengaruh  bahaya  dari  radikal  bebas  sebagai hasil  metabolisme  oksidatif,  yaitu  hasil  reaksi- reaksi kimia dan proses  metabolik yang terjadi di dalam tubuh. Terdapat berbagai banyak jenis tumbuhan yang memiliki kandungan antioksidan  di  dalamnya,  salah  satunya  yaitu tanaman cengkeh.
Cengkeh  ( Syzygium  aromaticum L.) merupakan  tanaman  rempah  khas  Maluku  dari family Myrtaceae, yang banyak digunakan oleh masyarakat  sebagai  bahan  tambahan  untuk masakan  maupun  bahkan  sebagai  bahan  dalam pengobatan tradisional. Salah satu bagian utama tumbuhan  cengkeh  yang  sering  dimanfaatkan oleh  masyarakat  sebagai  bahan  obat-obatan maupun  rempah  yaitu  pada  bagian  bunganya, karena  terdapat  kandungan  minyak  atsiri sebesar  10-20%  (Fattimatuzzahroh,  2015). Secara tradisional, bunga cengkeh juga  banyak digunakan  dalam  bidang  kedokteran  salah satunya  karena  fungsinya  yang  ampuh  sebagai antioksidan. Cengkeh  dikenal  sebagai  sumber antioksidan  terbaik  di  antara  rempah-rempah lainnya karena sangat efektif dalam melindungi tubuh  dari  kerusakan  yang  diakibatkan  oleh radikal  bebas.  Bunga  cengkeh  dilaporkan berperan sebagai antioksidan karena mengandung  senyawa  eugenol  didalamnya (Harborne, 1987 dalam Suhendar and Sogandi, 2019).  Selain  itu,  terdapat  juga  kandungan fitokimia  dalam  bunga  cengkeh  seperti flavonoid,  alkaloid,  glikosida,  terpenoid,  fenol, saponin  dan  tanin  (Ahmed,  2016)  yang  juga berperan sebagai antioksidan.
Ekstrak Syzygium  aromaticum dan minyak cengkeh mengandung antioksidan yang secara  teoritis  dapat  menyembuhkan  kualitas sperma  (Gulcin,  2011 dalam Dehghani et  al ., 2012).  Hal  ini  dikarenakan  didalam  ekstrak Syzygium  aromaticum mengandung  senyawa eugenol  yang  berfungsi  sebagi  sumber antioksidan yang mampu mencegah pembentukan  sumber radikal bebas (ROS) dari asap rokok yang dapat menyebabkan terjadinya kerusakan pada kualitas spermatozoa. Selain itu berdasarkan  penelitian  yang  telah  dilakukan Chikere et  al., (2015),    bahwa  ekstrak  dari cengkeh berdampak pada peningkatan motilitas sperma  serta  merangsang  aktivitas  sekresi
Jurnal Biologi Edukasi Edisi 28, Volume 14 Nomor 1, Juni 2022, hal 14-20
epididimis dan vesikula seminalis dengan dosis rendah.
Atas  dasar  itu  maka  cengkeh  memiliki banyak  potensi  yang  dapat  ditingkatkan efektivitasnya dalam pengobatan untuk memperbaiki  kualitas  spermatozoa  yaitu  salah satunya  dengan  memformulasikan  cengkeh menjadi bentuk sediaan sirup. Sirup merupakan sediaan pekat dalam air dari gula atau pengganti gula  dengan  atau  tanpa  penambahan  bahan pewangi  dan  zat  obat  (Ansel,  2005 dalam Sugarda  dkk.,  2019).    Penggunaan  sirup  lebih dipilih  karena  sirup  merupakan  salah  satu produk  yang  memiliki  rasa  manis  dan berbentuk  cair  sehingga  lebih  mudah  untuk dikonsumsi  masyarakat.  Dalam  pembuatan sirup  cengkeh  ditambahkan  beberapa  bahan herbal  lainnya  seperti  kayu  manis  dan  madu. Berdasarkan hal ini, maka diduga cengkeh yang dikombinasikan  dengan  madu  dan  kayu  manis menjadi  sirup  cengkeh  mampu  meningkatkan motilitas  dan  viabilitas tikus Rattus  norvegicus yang  terpapar  asap  rokok,  segingga  perlu dilakukan penelitian tentang hal tersebut.

## Metode Penelitian
Rancangan Penelitian Penelitian dilaksanakan pada bulan Maret 2021-Mei  2021  pada  Laboratorium  Zoologi, Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. Penelitian ini menggunakan Rancangan  Acak  Lengkap  (RAL)  yang  terdiri dari  lima  perlakuan  dan  tiga  kali  ulangan (Renyaan, 2018). Perlakuan yang diteliti adalah perbedaan  dosis  sirup  cengkeh  yang  diberikan pada tikus yaitu:
K (-) :  Kelompok  tikus  yang  tidak  diberi paparan asap rokok dan sirup cengkeh K (+) :  Kelompok  tikus  yang  terpapar  asap rokok  10  batang/ekor/hari  selama  14 hari
P1 :  Kelompok  tikus  yang  terpapar  asap rokok  10  batang/ekor/hari  selama  14 hari,  selanjutnya  diberi  sirup  cengkeh dosis 0,9 ml/ekor/hari selama 14 hari.
P2 :  Kelompok  tikus  yang  terpapar  asap rokok  10  batang/ekor/hari  selama  14 hari,  selanjutnya  diberi  sirup  cengkeh dosis 1,8 ml/ekor/hari selama 14 hari. P3 :  Kelompok  tikus  yang  terpapar  asap rokok  10  batang/ekor/hari  selama  14 hari,  selanjutnya  diberi  sirup  cengkeh dosis 3,6 ml/ekor/hari selama 14 hari.

## Aklimatisasi Tikus
Hewan  coba  yang  digunakan  dalam penelitian  ini  adalah  tikus Rattus  norvegicus jantan  berumur  2  bulan  dengan  rata-rata  berat badan ±  200  gram sebanyak  15  ekor. Sebelum digunakan  sebagai  hewan  percobaan,  semua tikus  diaklimatisasi terlebih  dahulu  selama  7 hari  yang  ditempatkan  pada  kandang  kotak plastic  yang  kemudian  ditutupi  kawat  ram dengan  sekam  sebagai  alas,  dan  pakan  berupa pelet dan air minum.

## Pembuatan Sirup Cengkeh
Cara  pembuatan  sirup  cengkeh  adalah bunga  cengkeh  12,70  gr  direbus  dengan  kayu manis  9  gr  dengan  air  berkisar  150  ml, kemudian  masak  selama  15  menit  lamanya sampai  volume  maksimal  50  ml.  Setelah  itu disaring  airnya  dan  didiamkan,  kemudian ditambahkan  madu  sebanyak  12  ml  agar mencapai rasa yang pas (Nindatu et al ., 2021).

## Pemaparan Asap Rokok pada Tikus
Pemaparan  asap  rokok  yang  dilakukan pada tikus dalam penelitian ini yaitu dilakukan setiap  hari  selama 14  hari lamanya.  Pemberian asap  rokok  dilakukan  dengan  dosis  10 batang/ekor/hari  yaitu  pada  pagi  hari  dan  sore hari.  Setelah  dilakukannya  pemaparan  asap rokok  selama  14  hari,  tikus  kemudian  diberi sirup  cengkeh  sebanyak  dosis  yang  ditentukan dengan cara dicekokkan selama 14 hari.
Pemaparan  asap  rokok  pada  tikus  jantan dengan menggunakan dosis 10 batang/ekor/hari yang dilakukan dalam smoking chamber . Katup oksigen  dibuka  dengan  tekanan  0,5  atmosfer, kemudian  rokok  dipasangkan  pada  pipa  yang dihubungkan dengan pompa, selanjutnya rokok dibakar  dan  pompa  dinyalakan  sehingga  asap akan  masuk  ke  dalam smoking  chamber dan terhirup  oleh  tikus  dengan  waktu  yang digunakan  adalah  15  menit/batang/tikus  jantan sehingga  total  waktu  pemaparan  untuk  10 batang rokok adalah ± 2,5 jam/ekor tikus jantan (Unitly et al ., 2014).

## Pengambilan Sampel
Hewan  coba  dibius  terlebih  dahulu menggunakan  alkohol  70%  dan  dibedah menggunakan disecting  kit untuk  mengambil cauda epididimis. Cauda epididimis yang sudah dipisahkan  dapat  diletakkan  didalam  cawan petri  yang  berisi  1  ml  NaCl  0,9%.  Cauda epididimis  kemudian  dipotong-potong  dengan menggunakan gunting sampai halus dan diaduk
agar  tersuspensi  dengan  NaCl  0,9%  sehingga terbentuk  suspensi  spermatozoa  (Batubara et al., 2013).

## Pengamatan Motilitas Spermatozoa
Suspensi spermatozoa yang terdapat pada larutan  stok  kemudian  diteteskan  pada haemasitometer  dan  dilakukan  pengamatan dibawah  mikroskop  dengan  pembesaran  400x. Motilitas  spermatozoa  yang  diperiksa  secara berurutan 5 lapangan pandang (A, B, C, D, dan E)  dengan  menggerakan  bidang  pandang  dari kiri  ke  kanan,  atas  dan  bawah  untuk memperoleh  200  spermatozoa.  Presentase motilitas  spermatozoa  kemudian  dihitung dengan  menggunakan  rumus  yang  dipakai menurut  WHO  berdasarkan  kategori  gerakan spermatozoa sebagai berikut:
Presentase  jumlah  sperma  yang  motil ditentukan  dengan  jumlah  spermatozoa  yang progresif,  dibagi  200  setelah  itu  dikalikan 100%.  Angka  200  merupakan  jumlah  semua kategori  spermatozoa  yaitu  P:  Gerakan progresif  yaitu  gerakan  maju  ke  depan,  C: Gerakan  circular  yaitu  gerakan  melingkar,  N: Necrospermia yaitu  tidak  ada  gerakan  dan  R: Gerakan reverse yaitu gerakan mundur.

## Pengamatan Viabilitas Spermatozoa
Suspensi  spermatozoa  diambil  dengan pipet  kemudian  diteteskan  pada  kaca  preparat. Kemudian  diberi  pewarna  eosin  negrosin  lalu ditutup  dengan cover  glass dan  diamati  pada
mikroskop dengan perbesaran 400x. Perhitungan  dilakukan  pada  200  spermatozoa. Spermatozoa  yang  hidup  tidak  akan  berwarna sedangkan  spermatozoa  yang  telah  mati kepalanya  akan  berwarna  merah  dan  hasilnya dinyatakan  dalam  persen  (%)  (Unitly  dkk., 2014).

## Analisis Data
Hasil  yang  diperoleh  dianalisis  dengan Analysis of Variance (ANOVA) dan dilanjutkan dengan Uji Duncan dengan selang kepercayaan 95% (α < 0.05) dengan menggunakan perangkat lunak SAS .

## Hasil Penelitian dan Pembahasan Motilitas
Rataan  motilitas  spermatozoa  setelah pemaparan  asap  rokok  dan  pemberian  sirup cengkeh  disajikan  pada  Tabel  1.  Hasil  analisis statistik  menunjukkan  bahwa  P1,  P2,  dan  P3 berbeda  nyata  dengan  kontrol  positif  (K+) (P<0.05), namun P3 tidak berbeda nyata dengan kontrol  negatif  (K-)  (P>0.05).  Hal  ini  berarti pemberian  sirup  cengkeh  berpengaruh  nyata (P<0.05)  terhadap  peningkatan  presentase motilitas  spermatozoa.  Pada  tabel  2  terlihat bahwa  semakin  meningkat  pemberian  dosis sirup  cengkeh  pada  tikus  yang  terpapar  asap rokok, maka jumlah motilitas spermatozoa pada tikus  mendekati  nilai  motilitas  kelompok  tikus normal.
Tabel 1.  Rataan  perubahan  motilitas  spermatozoa  tikus  terpapar  asap  rokok  pasca  pemberian sirup cengkeh Parameter Perlakuan K (-) K (+) P1 P2 P3 Motilitas Spermatozoa (%) 83.0± 2.78 a 8.8±4.53 d 37.1±5.50 c 45.5± 1.32 b 79.1±2.92 a
Keterangan: Huruf superscript yang  berbeda  dalam  satu  baris  menunjukkan  hasil  yang berbeda nyata (P<0.05) antar kelompok perlakuan.
Motilitas  merupakan  unsur  terpenting dalam  proses  fertilitasi  yang  menggambarkan spermatozoa  yang  sehat.  Motilitas  merupakan daya  gerak  spermatozoa  yang  dapat  menjadi indikator  bahwa  spermatozoa  dalam  keadaan sehat  dan  mampu  untuk  melakukan  aktivitas reproduksi,  sehingga  jika  terjadi  penurunan
motilitas  spermatozoa  dapat  menyebabkan terjadinya  gangguan  dalam  proses  fertilisasi. Penurunan motilitas spermatozoa dapat disebabkan oleh adanya senyawa radikal bebas. Senyawa  radikal  bebas  yang  berasal  dari  asap rokok  dapat  menyebabkan  peningkatan  jumlah lipid  peroksidasi  dan  menimbulkan  kerusakan
Jurnal Biologi Edukasi Edisi 28, Volume 14 Nomor 1, Juni 2022, hal 14-20
serta  penurunan  pada  integritas  membran spermatozoa  sehingga  mengurangi  motilitas (Karim,  2011).  Selain  itu,  radikal  bebas  dapat menyebabkan  produksi  ATP  mitokondria menjadi  rendah  sehingga  menurunkan  gerakan frekuensi  ekor  spermatozoa.  Mitokondria merupakan  tempat  menghasilkan  energi  bagi pergerakan  ekor  spermatozoa  melalui  proses perombakan  atau  katabolisme  (Susmiarsih, 2010).
Perubahan  jumlah  motilitas  spermatozoa yang meningkat secara bertahap pada kelompok P1, P2 dan P3 akibat pemberian sirup cengkeh menunjukkan  bahwa  adanya  kandungan senyawa-senyawa  fitokimia  di  dalam  sirup cengkeh  yang  diduga  dapat  menstimulasi kondisi  tersebut.  Senyawa-senyawa  fitokimia sirup  cengkeh  yang  dapat  meningkatkan motilitas  spermatozoa  yaitu  flavonoid  dan vitamin  C.  Senyawa-senyawa  ini  mengandung sumber  antioksidan  yang  dapat  menetralisir radikal  bebas  yang  berasal  dari  asap  rokok sehingga  mengurangi  kerusakan  pada  motilitas spermatozoa  yang  dihasilkan.  Berdasarkan penelitian  Purdy et  al. ,  (2004)  menyatakan bahwa flavonoid berkhasiat sebagai antioksidan karena  kemampuan  flavonoid  untuk  bertindak sebagai antioksidan ditentukan oleh strukturnya terutama  kemampuannya  dalam  mendonorkan ion hidrogen ke radikal peroksi yang dihasilkan sebagai  hasil  peroksidasi  lipid,  sehingga mampu mempertahankan motilitas sperma.
Vitamin  C  juga  berkhasiat  sebagai antioksidan  dan  prooksidan  (Pakaya,  2014). Selain  itu,  beberapa  penelitian  menyebutkan bahwa  vitamin  C  dapat  memperbaiki  kualitas spermatozoa.  Vitamin  C  dapat  melindungi spermatozoa  dari  kerusakan  yang  diakibatkan oleh  stress  oksidatif  dengan  cara  menetralkan hidroksil,  superoksida  dan  radikal  hidrogen
peroksida dan mencegah aglutinas spermatozoa (Sitohang  dkk.,  2015).  Vitamin  C  berperan penting  dalam  melindungi  lipid  sperma  yang mudah  teroksidasi  dari  reaksi  oksidasi  yang dapat  menurunkan  motilitas  spermatozoa (Agarwal  &  Sekhon,  2010 dalam Sitohang dkk.,  2015).  Vitamin  C  bertindak  sebagai pemulung  berbagai  ROS,  yang  menjelaskan kemampuannya untuk melawan efek kerusakan DNA dan produksi ROS (Ezkenazi et al ., 2005 dalam Al-Sultani et  al .,  2013).  Pada  dasarnya vitamin  C  disekresikan  dari  vesikula  seminalis selama ejakulasi untuk melindungi sperma dari kerusakan  DNA  oksidatif  endogen  (Greco et al .,  2005).  Penelitian  Mahmoud et  al ,  (1999) dalam Al-Sultani et  al., (2013)  menunjukkan bahwa  vitamin  C  memilik  peran  protektif terhadap  kerusakan  DNA  oksidatif  endogen. Proses  kerja  vitamin  C  yaitu  dengan  cara memasuki  mitokondria  melalui  transporter glukosa terfasilitasi (glut 1) dan melindunginya dari cedera oksidatif (Sagun et al ., 2005).

## Viabilitas
Rataan  viabilitas  spermatozoa  setelah pemaparan  asap  rokok  dan  pemberian  sirup cengkeh  disajikan  pada  Tabel  2.  Hasil  analisis statistik  menunjukkan  bahwa  P1,  P2,  dan  P3 berbeda  nyata  dengan  kontrol  positif  (K+) (P<0.05), namun P3 tidak berbeda nyata dengan kontrol  negatif  (K-)  (P>0.05).  Hal  ini  berarti pemberian  sirup  cengkeh  berpengaruh  nyata (P<0.05)  terhadap  peningkatan  presentase viabilitas  spermatozoa.  Hal  ini  membuktikan bahwa  presentase  viabilitas  spermatozoa  tikus yang diberikan sirup cengkeh meningkat seiring dengan  bertambah  tinggi  dosis  yang  diberikan (Tabel 2).
Tabel 3.  Rataan  perubahan  viabilitas  spermatozoa  tikus  terpapar  asap  rokok  pasca pemberian sirup cengkeh Parameter Perlakuan K (-) K (+) P1 P2 P3 Viabilitas Spermatozoa (%)  93±2.78 a 18.8±4.53 d 47.1±5.50 c 55.5±1.32 b 89.1±3.32 a Keterangan: Huruf superscript yang  berbeda  dalam  satu  baris  menunjukkan  hasil  yang berbeda nyata (P<0.05) antar kelompok perlakuan.
Viabilitas merupakan kemampuan spermatozoa  untuk  bertahan  hidup.  Viabilitas spermatozoa  yang  diamati  pada  penelitian  ini dilakukan dengan menggunakan pewarna eosin- negrosin  untuk  melihat  adanya  spermatozoa yang  hidup  dan  spermatozoa  yang  mati.
Spermatozoa  yang  hidup  ditandai  dengan kepala berwarna putih dikarenakan spermatozoa yang  hidup  memiliki  membran  plasma  yang masih utuh. Sedangkan spermatozoa yang mati ditandai dengan terwarnainya kepala spermatozoa  berwarna  merah.  Terwarnainya
kepala  spermatozoa  ini  diakibatkan  karena rusaknya  membran  plasma  sehingga  sel  warna eosin dapat masuk dan terwarnai.
Hasil penelitian menunjukkan presentase viabilitas  spermatozoa  pada  kelompok  K  (+) lebih rendah dibandingkan dengan kelompok K (-)  dan  kelompok  perlakuan  lainnya  (yang diberi  paparan  asap  rokok  dan  sirup  cengkeh) dengan  dosis  P1  sebesar  0,9  ml/ekor/hari,  P2 sebesar  1,8ml/ekor/hari,  dan  P3  sebesar  3,6 ml/ekor/hari. Hal yang menyebabkan rendahnya persentasi viabilitas spermatozoa pada kelompok  K  (+)  diduga  akibat  adanya  ROS ( Reactive Oxygen Species ) yang bersumber dari asap  rokok.  ROS  yang  dihasilkan  asap  rokok merupakan  salah  satu  sumber  radikal  bebas yang  dapat  menyebabkan  terjadinya  kerusakan DNA spermatozoa dan mengakibatkan terjadinya  peningkatan  apoptosispada  sel sehingga  terjadi  penurunan  pada  kualitas spermatozoa  salah  satunya  yaitu  viabilitas spermatozoa.  Hal  ini  senada  dengan  Claudia dkk et al ., (2013) yang menyatakan ROS dapat menurunkan  kualitas  spermatozoa  akibat peningkatan apoptosis.
Peningkatan presentase viabilitas spermatozoa  pada  kelompok  P1,  P2  dan  P3 diduga  akibat  adanya  kandungan  senyawa- senyawa yang terdapat di dalam sirup cengkeh yang  memilik  efek  farmakologi.  Seperti  yang telah diketahui bahwa sirup cengkeh mengandung senyawa fitokimia seperti flavonoid,  alkaloid,  terpenoid,  fenol,  saponin tannin  dan  vitamin  C  (Nindatu et  al .,  2021).
Flavonoid  dan  vitamin  C  telah  terbukti khasiatnya  sebagai  sumber  antioksidan  yang dapat menetralisir dan menangkap radikal bebas atau  ROS  sehingga  dipercaya  sumber antioksidan  ini  dapat  melindungi  DNA spermatozoa  dari  kerusakan.  Verstraeten et  al , (2004)  menemukan  bahwa  flavonoid  dapat melindungi  membran  sel  dari  stress  oksidatif yang  ditimbulkan  oleh  radikal  bebas  dan mencegah  masuknya  molekul  yang  dapat mempengaruhi  integritas  membran.  Fenomena peningkatan viabilitas spermatozoa dikarenakan mekanisme  kerja  sirup  cengkeh  di  dalam tubulus  seminiferus  dapat  meningkatkan aktivitas  sel-sel  yang  memproduksi  hormon FSH  dan  LH  pada  hipofisis.  FSH  akan menstimulasikan  sel-sel  Sertoli  untuk  proses pembentukan sel-sel germinal pada spermatogenesis.  Sedangkan  LH  akan  akan merangsang sel-sel Leydig untuk memproduksi
testosteron, dimana FSH dan testosterone dapat merangsang  sel-sel  spermatogenik  untuk melakukan meiosis dan berdiferensiasi menjadi spermatozoa (El-Migdadi & Qaw 2009),

## Simpulan
Berdasarkan hasil dan pembahasan, maka dapat  disimpulkan  bahwa  sirup  cengkeh berpengaruh terhadap peningkatan motilitas dan viabilitas tikus Rattus norvegicus yang terpapar asap rokok dengan dosis terbaik yaitu 3.6 ml.

## Daftar Pustaka
Ahmed,  W.  (2016).  Monitoring  Antioxidant  & Antityrosinase  Activity  of  Clove Aromatic  Flower  Buds. Journal  of Medicinal Plants Studies 4:163-169. Al-Sultani,  Y.  K.,  S.  R.  Al-Katib.,  &  S.  Al- Zayadi.  (2013).  Effect  of  Vitamin  C on  In-Vitro  Sperm  Activation  of Asthenozoospermic  Infertile  Patients. American  Journal  of  Research Communication 1(10): 40-48. Batubara,  I.  V.  D.,  B.  Wantouw.,  dan  L. Tendean.  (2013).  Pengaruh  Paparan Asap Rokok Kretek terhadap Kualitas Spermatozoa  Mencit  Jantan  ( Mus musculus ). Jurna l e-Biomedik 1(1) :330-337.
Chikere, O. U., F. L. Liman., E. D. Nnabuihe., E. E. Uchechi., & A. C. Jesse. (2015). The  Effects  of  Methanolic  Extract  of Syzygium aromaticum (Clove bud) on the Histology of Testis in Adult Male Wistar  Rats. J  Natural  Sci  Research 5 (12): 1-7.
Claudia,  V.,  E.  de  Queljoe.,  dan  L.  Tendean.
(2013). Perbedaan Kualitas
Spermatozoa  Mencit  Jantan  ( Mus musculus L)  yang  diberikan  Vitamin C  setelah  Pemaparan  Asap  Rokok. Jurnal eBiomedik 1 (1): 629-634.
Dehghani,
F., A. Heshmatpour., M. Panjehshahin.,  &  T.  Talaei-Khozani. (2012). Toxic Effects
of Water/Alcoholic  Extract  of Syzygium aromaticum on  Sperm  Quality,  Sex Hormones  and  Reproductive  Tissues in  Male  Mouse. European  Journal  of Biology 71 (2): 95-102.
Dwijayanti,  F.,  A.  A.  S.  A.  Sukmaningsih.,  N.
M.  R.  Suarni.,  S.  K.  S.  Sudirga.,  dan N.  M.  S.  Parwanayoni.  (2017). Pemberian  Ekstrak  Buah  Juwet
Jurnal Biologi Edukasi Edisi 28, Volume 14 Nomor 1, Juni 2022, hal 14-20
( Syzygium cumini L.) terhadap Jumlah dan  Morfologi  Tikus  Putih  ( Rattus sp.)  Jantan  yang  Terpapar  Asap Rokok. Junal Simbiosis 5 (1):20 – 24.
El-Migdadi,  F.,  &  F.  Qaw.  (2009).  Serum  and Plasma  Levels  of  Total  and  Free Testosterone  and  of  Sex  Hormone Binding Globulins in Rats Growing in The Below Sea Level Environment of The  Jordan  Valley. The  Internet Journal of Endocrinology 5 .
Fatimatuzzahroh,  F.,  N.  K.  Firani.,  dan  H.
Kristianto. (2016).  Efektifitas  Ekstrak Bunga Cengkeh ( Syzygium aromaticum ) terhadap Jumlah
Pembuluh  Darah  Kapiler  pada  Proses Penyembuhan  Luka  Insisi  Fase Proliferasi. Majalah Kesehatan FKUB
2 (2): 92-98.
Karim,  D.  (2011).  Pengaruh  Paparan  Asap Rokok  Elektrik  terhadap  Motilitas, Jumlah Sperma dan Kadar Mda Testis Mencit Jantan  ( Mus musculus ). Tesis . Fakultas  Kedokteran,  Universitas Sumatera Utara, Medan Nindatu, M.,  A. J. A. Unitly., V. B. Silahooy., L.  Eddy.,  L.  C.  Huwae.,  F.  H.  R. Sembiring.,  J.  Reasoa.,  M.  M. Matakupan.,  M.  Lesirolo.,  N.  D. Laratmase.,  E.  Pattinama.,  T.  N.  Far Far.  (2021).  Efek  Terapi  Sirup Cengkeh  terhadap  Kadar  Glukosa Darah  Tikus Rattus  norvegicus Diabetes  Melitus. Jurnal  Kalwedo Sains (KASA) 2 (1): 41-47.
Pakaya,  D.  (2014).  Peranan  Vitamin  C  pada
Kulit. Medika  Tadulako:  Jurnal Ilmiah Kedokteran Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan 1 (2):
45-54.
Pratiwi,  G.  N.,  A.  Nurliani.,  H.  B.  Santoso,  &
E.  M.  Kuntorini.  (2015).  Efek Pemberian Fraksi Diklorometana Bulbus  Bawang  Dayak  ( Eleutherine americana ) pada Kualitas Spermatozoa  Tikus  Putih  ( Rattus norvegicus )  yang  dipapar  Asap Rokok. Jurnal Bioscientiae 12 (1): 44 – 59.
Purdy, P. H., S. A. Ericsson., R. E. Dodson., K. L.  Sternes.,  &  D.  L.  Garner.  (2004). Effects  of  The  Flavonoids,  Silibinin and  Catechin,  on  The  Motility  of Extended  Cooled  Caprine  Sperm.
Small  Ruminant  Research 55 (1-3): 239-243.
Roychoudhury,  S.,  Agarwal,  A.,  Virk,  G.,  & Cho,  C.  L.  (2017).  Potential  role  of green tea catechins in the management of oxidative stress-associated infertility. Reproductive  biomedicine online , 34 (5), 487-498.
Sagun,  KC.,  J.  M.  Cárcamo,  &  D.  W.  Golde.
(2005). Vitamin C Enters
Mitochondria Via Facilitative Glucose Transporter  1  (Glut1)  and  Confers Mitochondrial  Protection  Against Oxidative  Injury. Journal  The  Faseb 19 (12): 1657-1667.
Sapulette,  R.  R.  (2015).  Pengaruh  Ekstrak
Etanol Daun Gambir Laut ( Clerodendrum  inerme L.)  terhadap Motilitas  dan  Viabilitas  Spermatozoa Mencit  ( Mus  musculus ). Skripsi . Fakultas  Matematika  dan  Ilmu Pengetahuan
Alam, Universitas Pattimura, Ambon. Sitohang,  A.G.,  B.  Wantouw.,  dan  E.  de
Queljoe.  (2015).  Perbedaan  Antara Efek  Pemberian  Vitamin  C  dan Vitamin E terhadap Kualitas Spermatozoa  Tikus  Wistar  ( Rattus norvegicus )  Jantan  setelah  diberi Paparan  Asap  Rokok. Jurnal  e- Biomedik 3 (1):65-71.
Suhendar,  U.,  dan  Sogandi,  S.  (2019).
Identifikasi  Senyawa  Aktif  Ekstrak Daun Cengkeh ( Syzygium aromaticum )
sebagai Inhibitor Streptococcus  mutans . Al-Kauniyah: Jurnal Biologi 12 (2): 229-239. Susmiarsih,  T.  P.,  K.  Kenconoviyati,  dan  K. Kuslestari.  (2018).  Potensi  Ekstrak Daun  Teh  Hijau  terhadap  Morfologi dan  Motilitas  Spermatozoa  Tikus Putih  ( Rattus  norvegicus )  setelah Paparan  Asap  Rokok. Majalah Kesehatan Pharmamedika 10 (1):1 – 7. Unitly  A.  J.  A.,  N.  Kusumorini.,  S. Agungpriyono.,  A.  S.  Satyaningtijas., dan  A.  Boediono.  (2014).  Perubahan Kualitas Spermatozoa dan Jumlah Sel- sel Spermatogenik Tikus yang
Terpapar Asap Rokok. Jurnal Kedokteran Hewan 8 (2): 116-9.
Verstraeten  SV,  Oteiza  PI,  CG  Fraga.  (2004).
Membrane Effect of Cocoa
Procyanidins in Liposome and Jurkat.
Bio Res, 37(2):293-300.