## Eksplorasi dan karakterisasi bakteri aerob ligninolitik serta aplikasinya untuk pengomposan tandan kosong kelapa sawit
Exploration and characterization of ligninolytic aerobic bacteria and its application in composting oil palm empty fruit bunch
Haryo Tejo PRAKOSO, Happy WIDIASTUTI*), SUHARYANTO & SISWANTO
Balai Penelitian Bioteknologi Perkebunan Indonesia, Jl. Taman Kencana No 1. Bogor 16128, Indonesia
Diterima tanggal 21 Januari 2014/disetujui tanggal 28 April 2014

## Abstract
Lignin is a complex compounds that makes up the cell walls  of  plants  and  is  quite  difficult  to  degrade  at  normal ambient  condition.  One  of  the  organic  materials  with  high lignin content is empty fruit bunches (EFB) of oil palm. So far, the well-studied microorganism to degrade lignin is of a class  of  fungi.  Utilization  of  bacteria  to  degrade  lignin  in EFB  has  rarely  been  reported  although  application  of  the bacteria  is  very  important  if  it  is  associated  with  aerobic composting  which  requires  regular  turning  process  and supporting  clean  development  mechanism  (CDM).  The objective  of  this  study  was  to  explore  and  characterize  the bacteria  having  capability  to  degrade  lignin  in  EFB.  The result  showed  that  from  14  types  of  sample,  12  and  11 isolates  were  obtained  through  non  enrichment  and enrichment  methods  respectively.  Qualitative  test  was performed  using  a  lignin  derivative  dye  (methylene blue/MB) suspended in Luria Bertani ( LB) solid media and the  formation  of  the  clear  zone  was  observed,  while quantitative  assay  was  performed  with  enzyme  activity assays of laccase (Lac), manganese peroxidase (Mn-P), and lignin  peroxidase  (Li-P).  The  best  isolate  (FS  isolate)  was obtained from enrichment method that able to make 0.6 cm clear  zone  of  LB  media + MB  and  actively  produced laccase, manganese peroxidase with and without addition of Mn  with  an  activity  of  2.68,  20.02,  and  0.36  U/mL, respectively.  While  the  best  isolate  from  non  enrichment method  was  CRK  1,  that  was  able  to  make      0.3  cm  clear zone  and  produced  Mn-peroxidase  with  and  without addition  of  Mn  as  much  as  2.09  and  0.23  U/mL, respectively.  Application  of  the  decomposer  formula  could speed  upthe  declining  rate  of  C/N  ratio  and  suppressing Escherichia  coli and Salmonella sp.in  EFB  compost produced.
[ Keywords : Microorganisms,  lignin  depolymerization , decomposer  formula,  waste  treatment,  empty- fruits bunches ]

## Abstrak
Lignin merupakan senyawa kompleks yang menyusun dinding  sel  tanaman  dan  cukup  sulit  didegradasi  secara alami.  Salah  satu  bahan  organik  yang  mempunyai  kadar lignin  tinggi  adalah  tandan  kosong  kelapa  sawit  (TKKS). Sejauh  ini,  mikroorganisme  yang  banyak  dipelajari  dalam mendegradasi  lignin  adalah  dari  golongan  jamur.  Peng- gunaan  bakteri  dalam  mendegradasi  lignin  pada  TKKS belum  banyak  dilaporkan  walaupun  peran  bakteri  lignino- litik  aerob  sangat  penting  jika  dikaitkan  dengan  proses pengomposan secara aerob  yang  membutuhkan pembalikan secara  berkala  danprogram clean  development  mechanism (CDM). Penelitian ini bertujuan mengeksplorasi dan meng-
karakterisasi  bakteri  yang  berpotensi  mendegradasi lignin dalam pengomposan TKKS. Dari 14 jenis sampel diperoleh sebanyak 12 dan 11 isolat melalui metode tanpa dan dengan pengkayaan.  Uji  kualitatif  dilakukan  dengan  mengukur terbentuknya  zona  bening  pada  media  Luria  Bertani  (LB) padat yang mengandung senyawa warna turunan lignin (biru metilen/MB).Uji  kuantitatif  dilakukan  dengan  mengukur aktivitaslakase,  Mn-peroksidase,  dan  lignin  peroksidase . Hasil  penelitian  menunjukkan  bahwa  isolat  FS    merupakan isolat  terbaik  dari  metode  pengkayaan  yang  mampu membentuk  zona  bening  pada  medium  LB  +  MB    0,6  cm, sedangkan  isolat  terbaik  dari  metode  tanpa  pengkayaan adalah  CRK  1  dengan  zona  bening  0,3  cm  pada  medium yang  sama  setelah  inkubasi  semalam.  Isolat  FS  memiliki aktivitas  lakase,  Mn-peroksidase  dengan  dan  tanpa  Mn berturut-turut  adalah  sebesar  2,68;  20,02;  dan  0,36  U/mL, sedangkan isolat CRK 1 memiliki aktivitas Mn-peroksidase dengan  dan  tanpa  Mn  berturut-turut  adalah  2,09  dan 0,23 U/mL. Aplikasi formula dekomposer pada pengompos- an  200  ton  TKKS  mampu  mempercepat  laju  penurunan nisbah  C/N  dan  menekan  populasi Escherichia  coli dan Salmonella sp.
[Kata  kunci:  Mikroorganisme,  d epolimerisasi  lignin, formula  dekomposer,  penanganan  limbah, tandan kosong kelapa sawit]

## Pendahuluan
Lignin  merupakan  senyawa  kompleks  yang  ter- diri  dari  subunit  fenilpropana  yang  terdimetoksilasi, monometoksilasi,  dan  non-metoksilasi  (Martinez e t al., 2005), dan banyak ditemukan pada dinding sel sekunder tanaman. Senyawa tersebut mengisi celah di antara  selulosa,  hemiselulosa,  dan  pektin  sehingga membuat dinding sel lebih kaku, hidrofobik serta sulit didegradasi  oleh  mikroorganisme  (Bugg et  al., 2010). Salah  satu  bahan  organik  dengan  kandungan  lignin yang  tinggi  adalah  tandan  kosong  kelapa  sawit (TKKS) yakni sebesar 15 -18% (Ariffin et al ., 2008). Widiastuti et  al .  (2008)  melaporkan  bahwa  beberapa kelompok jamur pelapuk putih dari golongan basidio- misetes dapat  mendegradasi lignin  karena  menghasil- kan  enzim  ligninolitik  seperti  lakase  (Lac),  lignin peroksidase  (Li-P),  dan  Mn-peroksidase  (Mn-P). Depolimerisasi  lignin  menggunakan  fungi  sering menghasilkan  beragam  senyawa  aromatik  berbobot molekul rendah seperti guaiakol, koniferil alkohol, p - kumarat, ferulat, protokatekuat, p -hidroksibenzoat dan vanilat (Masai et al., 2007). Penggunaan jamur dalam proses  dekomposisi  lignin  sudah  banyak  dilaporkan.
*) Penulis Korespondensi: happywidastuti@yahoo.com
Eksplorasi, karakterisasi,dan aplikasi bakteri aerob ligninolitik …..(Prakoso et al.)
Nasrul  &  Maimun  (2009)  menggunakan Phane- rochaete chrysosporium , salah satu spesies fungi dari golongan  basidiomisetes  yang  enzim  ligninolitiknya sudah banyak dipelajari untuk mengomposkan TKKS. Amira et  al .  (2013)  juga  melaporkan  penggunaan jamur dari golongan Deuteromiset yaitu Trichoderma sp .  dalam  mengomposkan  TKKS  dan  dilaporkan bahwa  aktivitas  enzim  yang  terlihat  cukup  tinggi adalah xylanase dan selulase.
Isu  meningkatnya  gas  rumah  kaca  yang  me- nyebabkan pemanasan global beberapa dasawarsa ter- akhir perlu diantisipasi dengan berbagai  macam cara. Terkait  pengurangan  gas  rumah  kaca  dalam  pengom- posan TKKS, peranan bakteri aerobik sebagai dekom- poser  sangat  dibutuhkan.  Penggunaan  dekomposer jamur  untuk  proses  fermentasi  substrat  padat  seperti TKKS  terkendala  oleh  struktur  morfologis  jamur berupa  miselium  sehingga  diduga  pembalikan  pada tumpukan kompos untuk pemerataan proses, penurun- an  panas  yang  terlalu  tinggi  dan  pemberian  aerasi akan mengganggu pertumbuhan miselium dan koloni- sasi  jamur.  Hal  tersebut  secara  empiris  dapat  dilihat pada  fermentasi  tempe  kedelai,  oncom,  dan  produksi jamur  konsumsi  akan  gagal  bila  substrat  diganggu dengan  pembalikan  dan  pengadukan.  Tumpukan kompos  ( windrow )  yang  jarang  dilakukan  pembalik- an,  akan  menciptakan  kondisi  anaerob  dan  mengarah pada  pembentukan  gas  rumah  kaca.  Pengurangan emisi  gas  rumah  kaca  merupakan  parameter  yang harus  diperhatikan  bila  suatu  pabrik  kompos  ingin menerapkan  praktik  mekanisme  pembangunan  bersih ( clean development mechanisms ).
Penggunaan  bakteri  dalam  proses  dekomposisi lignin  belum  banyak  dilaporkan,  namun  beberapa peneliti  menggunakan Sphingomonas sp., Strepto- myces sp.  (Bugg et  al., 2010), Pseudomonas sp. (Delalibera et  al., 2007), Bacillus SCH1, Ochro- bactrum sp., Leucobacter sp.  (Rahman et  al., 2013) sebagai bakteri ligninolitik. Goenadi et al . (2006) telah melakukan  eksplorasi  mikroba  tropika  khususnya fungi  tingkat  rendah  seperti Trichoderma sp.  dan fungi  pelapuk  putih  yang  terbukti  mampu  mening- katkan  laju  pengomposan  limbah  padat  perkebunan. Menurut  Masai et  al. (2007)  enzim  yang  dihasilkan bakteri  ligninolitik  tersebut  tidak  sepenuhnya  sama dengan  yang  dimiliki  oleh  jamur  pelapuk  putih, walaupun  ada  beberapa bakteri  yang  memiliki  sistem enzim  yang  sama  dengan  yang  dipunyai  oleh  jamur (Bugg et  al., 2010).  Beberapa  di  antaranya  adalah glutathione-S-transferase  yang  dapat  memutus  ikatan β-aril  eter  yang  merupakan  ikatan  terbanyak  dalam lignin  (50-70%)  dan  dioksigenase  yang  mengkata- bolisme  struktur  bifenil,  asam  vanilat,  dan  asam siringat  dalam  lignin  (Masai et  al., 2007).  Bakteri penghasil  enzim  tersebut  berpeluang  besar  untuk dimanfaatkan dalam proses dekomposisi lignin karena masing-masing  tanaman  memiliki  struktur  lignin penyusun dinding sel yang unik.
Isolasi  bakteri  yang  berpotensi  mendegradasi lignin  sudah  pernah  dilaporkan  dari  beberapa  sampel yang mengandung lignin seperti tanah di bawah balok kayu  yang  terdekomposisi  (Bandounas et  al., 2011), tanah  sekitar  kebun  kelapa  sawit  (Rahman et  al ., 2013), kotoran gajah dan saluran gastrointestinal kuda dan  banteng  yang  merupakan  hewan  ruminansia (Wahyudi et  al .,  2010).  Pemanfaatan  enzim  lignin peroksidase  dari  bakteri  untuk biobleaching pernah dilaporkan oleh Bholay et al. (2012), sedangkan Arias et al. (2003) melaporkan hasil yang sama untuk enzim lakase.  Pemanfaatan  bakteri  ligninolitik  aerob  yang dapat  mendegradasi  lignin  dari  TKKS  belum  banyak dilaporkan.  Penelitian  ini  bertujuan  untuk  mendapat- kan  isolat  bakteri  ligninolitik  aerob  unggul  yang  me- miliki  kemampuan  untuk  mempercepat  dekomposisi TKKS.

## Bahan dan Metode

## Sampel untuk isolasi bakteri ligninolitik
Sampel berupa padatan dan cairan diperoleh dari area  pengomposan  TKKS  di  Pabrik  Kompos  di Palembang, Sumatera Selatan (Tabel 1). Sampel padat dimasukkan  ke  dalam  plastik high  density  poly ethylene (HDPE)  kemudian  diberi  label,  sedangkan sampel  cair  dimasukkan  ke  dalam  botol  dan  diberi label.

## Isolasi bakteri dengan metode tanpa pengakayaan
Sampel  yang  diperoleh  diencerkan  serial  dari 10 -1 sampai  dengan  10 -8 menggunakan  larutan  garam fisiologis. Larutan hasil pengenceran (0,1 mL) kemu- dian  ditaburkan  dan  diratakan  di  atas  permukaan medium  nutrient  agar  mengandung  asam  galat 0,4 mL/L dan diinkubasi pada suhu  30 o C selama satu sampai  tiga  hari.  Selanjutnya  isolat  yang  tumbuh  di- murnikan dan disimpan untuk pengujian lebih lanjut.

## Isolasi bakteri dengan metode pengkayaan
Isolasi  bakteri  dengan  metode  pengkayaan  di- lakukan  mengikuti  Bandounas et  al .  (2011)  yang dimodifikasi  dengan  mengganti  sumber  karbon  yang semula  menggunakan non-dialysed Kraft  lignin dengan  serbuk  kering  TKKS  berukuran  50  mesh. Sampel padat sebanyak 5 g atau sampel cair sebanyak 5  mL  dimasukkan  ke  dalam  100  mL  larutan  garam fisiologis  dan  selanjutnya  diinkubasi  selama  satu  jam pada suhu 30°C sambil digoyang pada kecepatan 200 rpm.  Selanjutnya  5  mL  campuran  tersebut  di- pindahkan  kedalam  100  mL  Mineral  Medium  Lignin (MML)  kemudian  diinkubasi  selama  48  jam  pada suhu 30°C sambil digoyang pada kecepatan 200 rpm. Komposisi  MML  (per  liter  aquades)  adalah:  K 2 HPO 4 1,55  g,  NaH 2 PO 4 .2H 2 O  0,85  g,  (NH 4 ) 2 SO 4 2  g, MgCl 2 .6H 2 O 0,1 g, EDTA10 mg, ZnSO 4 .7H 2 O 2 mg, CaCl 2 .2H 2 O 1 mg, FeSO 4 .7H 2 O 5mg, Na 2 MoO 4 .2H 2 O 0,2  mg,  CuSO 4 .5H 2 O  0,2  mg,  CoCl 2 .6H 2 O  0,4  mg,
Tabel 1. Jenis sampel yang digunakan dalam isolasi bakteri ligninolitik.
Table 1. Type of samples used in the ligninolytic bacterial isolation.
No Jenis sampel /Type of sample Sandisampel /Sample code 1 Serabut /Fiber F1 2 Abu boiler / Boiler ash AB 3 Tanah dalam pabrik kompos/ Soil incompost processing plant TPK 4 Serabut segar / Fresh fiber FS 5 Kompos 45 hari/ Compost produced after 45 days K1 6 Kompos 40 hari/ Compost  produced after 40 days K2 7 Kompos 25 hari/ Compost  produced after 25 days K3 8 Kompos 20 hari/ Compost  produced after 20 days K4 9 Ampas perasan break cutter / Break cutter cake compost APB 10 Bubur pabrik  kompos/ Compost sludge BPK 11 Air limbah biogas/ Biogas POME CLB 12 Air limbah PMKS kolam asidifikasi/ POME  from  acidified pond CKA 13 Air lindi kompos/ Compost leacheate CLK 14 Rembesan  kompos/ Leak water of  compost CRK
MnCl 2 .2H 2 O  1  mg,  serbuk  TKKS  50  mesh  5  g. Sedangkan untuk bakteri genus Bacillus ditambahkan lagi  CuSO 4 0,5  mg,  dan yeast  extract 0,1  g.  Setelah itu, dilakukan transfer suksesif dengan cara  sebanyak 1  mL  suspensi  dari  medium  MML  yang  lama  di- transfer  ke  medium  MML  yang  baru,  kemudian diinkubasi  ulang  pada  kondisi  yang  sama.  Transfer suksesif tersebut dilakukan sebanyak tujuh kali. Hasil transfer  suksesif  kemudian  dikulturkan  pada  medium agar  miring  Luria  Bertani  (LB)  untuk  pengujian selanjutnya.

## Uji kualitatif kemampuan ligninolitik
Isolat yang didapat, baik dari metode tanpa mau- pun  dengan  pengkayaan,  diuji  kemampuan  lignino- litiknya  secara  kualitatif  dengan  cara  mengukur  zona bening  yang dihasilkan pada medium  LB  yang diberi pewarna  derivat  lignin  yaitu  biru  metilen  ( metilen blue ) dengan  konsentrasi  25 mg/L  (Bandounas et  al., 2011).  Medium LB +  biru metilen diautoklaf selama 15  menit  pada  suhu  121°C  dengan  tekanan  1,2  atm, lalu  dituangkan  ke  cawan  Petri  steril.  Uji  bakteri ligninolitik  dilakukan  dengan  cara  meratakan  0,1  mL suspensi  bakteri  umur  48  jam  pada  permukaan ( spread  plate  method )  medium  padat  LB  +  biru metilen.  Bakteri  ligninolitik  dikulturkan  pada  suhu 30ºC  selama  24  jam.  Terbentuknya  zona  bening  me- nunjukkan  bahwa  koloni  bakteri  tersebut  meng- hasilkan enzim yang mendegradasi lignin yang ada di sekitarnya.

## Uji kuantitatif kemampuan ligninolitik
Karakterisasi  isolat  juga  dilakukan  dengan mengukur  kemampuan  isolat  dalam  menghasilkan enzim  Lac,  Li-P,  dan  Mn-P.  Preparasi  untuk pengukuran ketiga enzim tersebut dilakukan bersamaan.  Sebanyak  2  g  serbuk  TKKS  ukuran  50 mesh ditambahkan  ke dalam  100 mL bufer fosfat pH 7  dan  disterilisasi  menggunakan  autoklaf.  Isolat bakteri  kemudian  diinokulasi  ke  suspensi  TKKS
tersebut  dan  diinkubasi  selama  seminggu  pada  suhu 30°C dan digoyangkan dengan kecepatan 200 rpm.
Analisis aktivitas lakase mengikuti metode yang dikemukakan Sheikhi et al ., (2012). Sebanyak 0,4 mL alikuot  ditambahkan  pada  campuran  0,5  mL  bufer asetat  pH  5  dan  0,1  mL  ABTS  1  mM  kemudian divorteks.  Untuk  pengukuran  enzim  Li-P,  0,2  mL alikuot  ditambahkan  pada  campuran  0,1  mL  veratril alkohol, 0,2 mL bufer asetat pH 5, 0,05 ml H 2 O 2 dan 0,45  mL  aquades  kemudian  divorteks  (Tien  &  Kirk, 1988).  Analisis  aktivitas  enzim  Mn-peroksidase  di- lakukan  mengikuti  metode  yang dikemukakan Huang et  al .  (2010)  dengan  dua  macam  pengukuran. Pengukuran  yang  pertama  adalah  menambahkan 0,2 mL alikuot pada campuran 0,1 mL natrium laktat pH 5, 0,1 mL guaiakol, 0,2 mL MnSO 4 , 0,1 mL H 2 O 2 dan 0,3 mL aquades. Pengukuran  yang  kedua dilaku- kan  dengan  tidak  menggunakan  MnSO 4 sehingga volume  akuades  yang  dipakai  adalah  0,5  mL.  Kedua hasil pencampuran dalam penentuan kadar enzim Mn- P  kemudian  divorteks.  Penentuan  kadar  enzim  Lac, Li-P,  dan  Mn-P  dilakukan  dengan  menggunakan spektrofotometer  pada  panjang  gelombang  secara berurutan  adalah  420  nm,  310  nm,  dan  465  nm  pada menit  ke  0  dan  30.  Satu  unit  aktivitas  lakase  didefi- nisikan  sebagai  banyaknya  enzim  yang  dibutuhkan untuk  mengoksidasi  1  µmol  ABTS  per  menit.  Satu unit aktivitas lignin peroksidase didefinisikan sebagai banyaknya  enzim  yang  mengoksidasi  1  µmol  veratril alkohol per menit. Satu unit aktivitas Mn-peroksidase didefinisikan  sebagai  banyaknya  enzim  yang  diperlu- kan untuk mengoksidasi 1 µmol guaiakol per menit.

## Keefektifan formula dekomposer bakteri ligninolitik
Bakteri  ligninolitik  terpilih  selanjutnya  difor- mulasi  menggunakan  campuran  zeolit  dan  gambut (1:1, b/b)  sebagai  bahan  pembawa.  Dalam  formulasi- nya dua bakteri ligninolitik terpilih dipadukan dengan bakteri selulolitik isolat K3. Bakteri K3 adalah bakteri bakteri  selulolitik  yang  diisolasi dari kompos TKKS
Eksplorasi, karakterisasi,dan aplikasi bakteri aerob ligninolitik …..(Prakoso et al.)
hasil inkubasi 25 hari  yang menunjukkan pembentuk- an zone bening sebesar 0,75 cm pada medium CCRA (data  tidak  ditunjukkan).  Populasi  masing-masing bakteri  dalam  formula  dekomposer  berkisar  antara 10 7 -10 8 cfu/g. Selanjutnya, formula dekomposer yang diperoleh  diuji  keefektifannya  dalam  pengomposan TKKS  pada  skala  komersial.  Jumlah  TKKS  segar yang  digunakan  adalah  200  ton.  Bahan  tersebut sebelumnya  sudah  dicacah  dengan  mesin  pencacah ( rotary  chipper )  berukuran  10-25  cm.TKKS  di- hamparkan  ( windrow )  pada  bangsal  pengomposan  di atas  lantai  semen  dengan  ketinggian  2,5-3,0  m  dan lebar 2-2,5 m. Dua perlakuan yang diuji adalah tanpa dan  dengan  pemberian  formula  dekomposer  bakteri ligninolitik  aerob.  Dosis  formula  dekomposer  yang digunakan 4 kg untuk tiap ton TKKS.
Formula  dekomposer  diaplikasikan  dengan  cara melarutkan  4  kg  formula  ke  dalam  100  L  air  limbah asal  instalasi  biogas.  Sebelum  digunakan,  TKKS  di- jenuhkan dengan air limbah yang berasal dari instalasi biogas,  disiram  dengan  campuran  bakteri  ligninolitik aerob.  Cairan  bakteri  ligninolitik  aerob  disiramkan pada  tumpukan  TKKS  selapis  demi  selapis  dan diinkubasi selama 110 hari. Tumpukan TKKS disiram dengan air limbah asal instalasi biogas  tiap hari pada minggu pertama dan tiga hari sekali pada tiga minggu berikutnya  hingga  memiliki  kadar  air  sekitar  50%. Selama  masa  inkubasi,  dilakukan  pembalikan  TKKS setiap  dua  hari  dengan  mesin  pembalik  berjalan ( dump  tractor  turner )  dan  bersamaan  dengan  pem- balikan juga dilakukan penyiraman dengan air limbah asal  instalasi  biogas  untuk  menjaga  kadar  air  tetap optimum.  Peubah yang diamati setiap tiga hari adalah kadar air, kadar oksigen, dan suhu, sedangkan kadar C (Walkley & Black) dan N (Kjeldahl) serta pH diamati setiap  10  hari.    Populasi E.  coli diperiksa  dengan metode  MPN  menggunakan EC  broth ,  sedangkan populasi Salomonella sp.  diperiksa  dengan  me- numbuhkannya  pada  medium  Salmonella  &  Shigella agar (SSA) setiap 30, 60, dan 90 hari inkubasi.

## Hasil dan Pembahasan

## Isolasi bakteri ligninolitik
Isolasi bakteri ligninolitik yang dilakukan dengan metode  yang  dilaporkan  Bandounas et  al. (2011) dengan  modifikasi  sumber  karbon  berupa  TKKS ukuran  50  mesh,  menunjukkan  bahwa  isolat  yang tumbuh  dari  metode  pengkayaan  cenderung  murni dibandingkan dengan  metode  tanpa pengkayaan (data tidak  ditunjukkan).  Hal  ini  mengindikasikan  bahwa bakteri  yang  tumbuh  sudah  terseleksi  yakni  hanya bakteri yang dapat memanfaatkan sumber karbon dari TKKS saja. Transfer  suksesif dilakukan  untuk  meng- kondisikan  bakteri  agar  dapat  beradaptasi  pada  satu- satunya  sumber  karbon  yang  diberikan  pada  medium tersebut. Dari 14 sampel, sebanyak 12 isolat diperoleh melalui  metode  tanpa  pengkayaan  dan  11  isolat didapatkan melalui metode pengkayaan sehingga total isolat yang diperoleh adalah 23.
Bakteri  yang  diisolasi  dari  metode  tanpa  peng- kayaan  lebih  banyak  berasal  dari  sampel  cair  (tujuh isolat) daripada sampel padat (lima isolat). Sedangkan bakteri  yang  diisolasi  dari  metode  pengkayaan  lebih banyak  berasal  dari  sampel  padat  (tujuh  isolat) daripada  sampel  cair  (empat  isolat).  Hal  ini  meng- indikasikan  bahwa  senyawa  lignin  lebih  banyak terdapat pada sampel yang padat seperti di tanah dari pada  dalam  sampel  cair  seperti  di  air  danau  atau  air limbah,  sehingga  bakteri  yang  dapat  memanfaatkan senyawa  lignin  lebih  banyak  diisolasi  pada  tanah. Hasil  penelitian  ini  sesuai  dengan  laporan  Bholay et al . (2012) yang mengisolasi bakteri ligninolitik dari sampel  kompos  kotoran  sapi,  tanah,  tunggul  pohon dan air danau menggunakan prinsip pengkayaan.

## Karakterisasi isolat ligninolitik
Pada uji kualitatif degradasi ligninolitik menurut Bandounas et  al. (2011),  kemampuan  pembentukan zona bening masing-masing isolat yang diperoleh dari metode  tanpa  pengkayaan  dan  dengan  pengkayaan menunjukkan  bahwa  tidak  semua  isolat  yang  diper- oleh  mempunyai  kemampuan  membentuk  zona bening (Tabel 2 dan 3). Pembetukan zona bening pada isolat  tanpa  pengkayaan  adalah  0,3  cm    dan  berkisar antara  0  sampai  0,6  cm  untuk  isolat  yang  diperoleh dengan  pengkayaan.  Pembentukan  zona  bening terbesar dari metode tanpa pengkayaan diperoleh pada isolat CRK 1, CRK 3, K 4.1 dan K 4.2 yaitu 0,3 cm, sedangkan  dari  metode  pengkayaan  yaitu  isolat    FS dan  CLB  yang  mampu  membentuk  zona  bening sebesar 0,6 cm. Gambar 1 menunjukkan pembentukan zona  bening  isolat  CRK  yang  ditumbuhkan  pada medium  LB  yang  ditambahkan  biru  metilen.  Zona bening  yang  terbentuk  mengindikasikan  adanya degradasi biru metilen oleh isolat CRK.  Zona bening yang  terbentuk  di  sekitar  koloni  CRK  0,3  cm. Walaupun demikian  Bholay et al . (2012) melaporkan bahwa  biru  metilen  juga  dapat  digunakan  untuk pengujian  kemampuan  lignolitik  secara  kuantitatif yaitu  dengan  melihat  derajat  demetilasi  lignin peroksidase terhadap biru metilen.
Tabel 2 dan 3 menjelaskan bahwa masing-masing sebanyak  delapan  isolat  (FS1,  FS2,  FS3,  CRK2, CRK4,  CKA1,  CKA2,  dan  CKA3)  dan    lima  isolat (AB,  TPK,  BPK,  CKA,  CRK)  tidak  menunjukkan pembentukan  zona  bening  pada  medium  uji  biru metilen  namun  memiliki  aktivitas  lignolitik.  Hal  ini diduga  isolat-isolat  tersebut  tidak  mendegradasi  biru metilen namun dapat mendegradasi senyawa pewarna lain  seperti  biru  toluidin  dan  biru  azure  seperti  yang dikemukakan oleh Boundunas et al . (2011).  Hasil uji kuantitatif  kemampuan  ligninolitik  isolat  yang  diper- oleh melalui metode tanpa pengkayaan disajikan pada Tabel  2,  sedangkan  yang  diperoleh  dari  metode dengan  pengkayaan  disampaikan  pada  Tabel  3. Aktivitas  lakase  isolat  yang  diperoleh  dari  metode tanpa  pengkayaan  berkisar  antara  0  –  0,48  U/mL, sedangkan aktivitas Mn-peroksidase dengan dan tanpa
Tabel 2.  Aktivitas enzim ligninolitik isolat bakteri hasil isolasi dengan metode tanpa pengkayaan yang ditumbuhkan dalam medium padat LB + biru metilen dan medium cair mengandung TKKS 2%.
Table  2.  Ligninolytic  activity  of  bacteria  isolates  obtained  from  non-enrichment  method  grown  on solid medium of LB + methylene blue and liquid medium containing 2% EFB.

## No
No Sampel Sample Zona bening Clear zone (cm) Aktivitas enzim ( Enzyme activity ) (U/mL) Lakase Laccase Mn- peroxidase Mn-ese peroxidase Lignin peroxidase Lignin peroxidase +Mn -Mn 1 K4 1 0,3 0 0,344 0.069 0 2 K4 2 0,3 0 0 0.055 0 3 FS 1 0 0 0 0.000 0 4 FS 2 0 0 0,399 0.647 0 5 FS 3 0 0 0 0.096 0 6 CRK 1 0,3 0 2,080 0.234 0 7 CRK 2 0 0 0,220 0.028 0 8 CRK 3 0,3 0 0,537 0 0 9 CRK 4 0 0,231 0 0 0.143 10 CKA 1 0 0 0 0.152 0 11 CKA 2 0 0,484 0,014 0.083 0 12 CKA 3 0 0 0 0.028 0
Tabel  3.  Aktivitas  enzim  ligninolitik  isolat  bakteri  hasil  isolasi  dengan  metode  pengkayaan  yang ditumbuhkan dalam medium padat LB + biru metilen dan medium cair mengandung TKKS 2%.
Table 3.  Ligninolytic activity of bacteria isolates obtained from enrichment method grown on solid medium of LB + methylene blue and liquid medium containing  2% EFB.

## No
Sampel Sample Zona bening Clear zone (cm) Aktivitas enzim (Enzyme activity) (U/mL) Lakase Laccase Mn- peroxidase Mn-ese peroxidase Lignin peroxidase Lignin peroxidase +Mn -Mn 1 AB 0 0 0 0 1,6487 2 TPK 0 0 0 0 1,7700 3 FS 0,6 2,6782 20,0245 0,3581 0 4 K2 0,5 0 0 0 3,9427 5 K3 0,03 0 0 0,0275 4,6595 6 APB 0,05 0 0 0,0275 3,8351 7 BPK 0 0,0023 0 0 1,2306 8 CLB 0,6 0,0481 0 0,0138 0 9 CKA 0 0 0 0 5,0538 10 CLK 0,05 0 0 0,0551 0 11 CRK 0 0 0 0,2342 2,8495
Gambar 1. (A). Isolat CRK (hasil isolasi tanpa pengkayaan) dan (B). Isolat FS (hasil isolasi dengan pengkayaan)  membentuk  zona  bening  (tanda  panah)  pada  medium  LB  +  25  mg/Lbiru metilen.
Figure 1.   (A). Clear zone  formation of CRK and (B) FS isolate grownon LB medium added with 25 mg/L methylene blue.
A
B
Eksplorasi, karakterisasi, dan aplikasi bakteri aerob ligninolitik …..(Prakoso et al.)
penambahan  Mn  adalah  0  -  2,08  U/mL  dan  0  -  0,65 U/mL dan aktivitas lignin peroksidase adalah 0 - 0,14 U/mL. Hal ini menunjukkan bahwa tidak semua isolat hasil  isolasi  memiliki  aktivitas  enzim  lakase.  Satu isolat  dapat  memiliki  satu,  dua  atau  tiga  jenis  enzim lignolitik  yang  membuat  isolat-isolat  tersebut  unik dalam hal kemampuan ligninolitiknya.
Isolat yang diperoleh dengan metode pengkayaan menunjukkan bahwa kisaran aktivitas lakase adalah 0 -  2,68  U/mL,  aktivitasperoksidase  dengan  dan  tanpa Mn masing-masing adalah 0 - 20,2 dan 0 -0,36 U/mL, sedangkan aktivitas lignin peroksidase  berkisar antara 0  -  5,05  U/mL.  Hasil  ini  serupa  dengan  yang  diper- oleh  dari  metode  tanpa  pengkayaan  yaitu  masing- masing  isolat  mempunyai  keunikan  dalam  aktivitas ligninolitiknya.  Enzim  Lac,  Mn-P,  dan  LiP  sangat jarang ditemukan berada pada satu organisme. Namun demikian,  Rahman et  al. (2013)  berhasil  mengisolasi tiga bakteri yang memiliki enzim ligninolitik lengkap.
Pengamatan terhadap isolat yang diperoleh tanpa dan  dengan  pengkayaan  menunjukkan  bahwa  bakteri yang  menghasilkan  enzim  lignin  peroksidase  banyak diperoleh  dengan  menggunakan  metode  pengkayaan. Aktivitas  lignin  peroksidase  tertinggi  yaitu  sebesar 5,0538  U/mL  diperoleh  dari  isolat  CKA.  Inisiasi produksi lignin peroksidase pada jamur berkaitan erat dengan respons kondisi metabolisme sekunder mereka dalam  menanggapi  penipisan  nutrien  (Bugg et  al., 2011).  Mekanisme  yang  sama  diduga  terjadi  pada bakteri.    Medium  MML  merupakan  medium  mineral minim  nutrien  (Bandounas et  al., 2011)  dengan sumber  karbon  dari  TKKS  sehingga  bakteri  yang tumbuh  adalah  bakteri  yang  mampu  memanfaatkan TKKS sebagai sumber karbon dan energi.
Aktivitas  lignolitik  tidak  selalu  diikuti  dengan kemampuan  melarutkan  senyawa  biru  metilen.  Isolat yang  paling  potensial  untuk  mendegradasi  lignin, masing-masing yang diperoleh dari  metode tanpa dan dengan pengkayaan, adalah isolat CRK dan FS karena keduanya memberikan hasil terbaik pada uji kualitatif dan  uji  kuantitatif  ligninolitik.  Isolat  CRK  1  setelah diinkubasi  semalam  menghasilkan  zona  bening  se- besar 0,3 cm dan memiliki aktivitas enzim Mn-P, baik tanpa maupun dengan induksi Mn, yaitu berturut-turut sebesar 0,23 U/mL dan 2,08  U/mL. Sedangkan isolat FS  setelah  diinkubasi  semalam  menghasilkan  zona bening  sebesar  0,6  cm  dan  memiliki  aktivitas  enzim Lac sebesar 2,69 U/mL.
Aktivitas  enzim  Lac  isolat  FS  lebih  besar  jika dibandingkan  dengan Streptomyces  cyaneus (1,2 U/mL)  (Arias et  al., 2003)  dan Bacillus sp.  SHC1 (0,002U/mL)  (Rahman et  al., 2013).  Oliveira et  al. (2009)  melaporkan  bahwa Bacillus  pumilus memiliki aktivitas  enzim  Mn-P,  dengan  penambahan  MnSO 4 , sebesar  0,0064  U/mL  yang  jauh  lebih  rendah  diban- dingkan  dengan    isolat  CRK  1  dan  FS.  Sedangkan aktivitas enzim Mn-P isolat Bacillus sp.  SHC1 tidak jauh  berbeda  dengan  isolat  CRK  1  yaitu  sebesar 2,009 U/mL (Rahman et al., 2013). Hasil pewarnaan Gram menunjukkan bahwa isolat CRK  1  termasuk  ke  dalam  Gram  positif,  sedangkan
isolat  FS  dan  K3  adalah  Gram  negatif  (Gambar  2). Tiga isolat terbaik yang diperoleh oleh Rahman et al. (2013)  merupakan  campuran  antara  Gram  positif  dan Gram  negatif  dengan  komposisi  dua  isolat  Gram positif dan satu isolat Gram negatif. Analisis bioinfor- matika yang dilakukan oleh Bugg et al . (2010),  men- jelaskan  bahwa  setiap  bakteri,  baik  yang  tergolong Gram  positif  maupun  negatif,  memiliki  kemampuan yang  berbeda-beda  dalam  mendegradasi  lignin, tergantung  jenis  enzim  yang  dimiliki  oleh  masing- masing bakteri tersebut.
Selain  enzim  Lac,  Mn-P,  dan  Li-P,  Masai et  al. (2007)  melaporkan  enzim  lain  yang  berperan  dalam degradasi  lignin  yaitu  glutathione  S  transferase  pada Sphingomonas  paucimobilis yang  berperan  dalam memutus  ikatan  β-aril  eter  yang  menyusun  sampai dengan  60%  ikatan  pada  struktur hardwood lignin. Potensi  isolat  yang  diperoleh  dalam  menghasilkan enzim  glutathione  S  transferase  perlu  dikaji  untuk mendapatkan  mekanisme  yang  lebih  lengkap  dalam mendegradasi TKKS.

## Keefektifan formula dekomposer bakteri ligninolitik
Di  samping  lignin,  TKKS  mengandung  selulosa dalam jumlah yang cukup besar yakni 37% - 45,95%. Oleh  sebab  itu,  formulasi  dekomposer  untuk percobaan pengomposan pada skala lapang digunakan kombinasi  bakteri  ligninolitik  dan  isolat  bakteri selulolitik.  Isolasi  bakteri  pendegradasi  selulosa dilakukan  menggunakan  medium Cellulose-Congo Red  Agar (CCRA)  (Feng et  al .,  2013)  dengan komposisi per liter: yeast extract 1.0 g, K 2 HPO 4 0,5 g, MgSO 4 0,25  g,  merah  kongo  0,5  g,  gelatin  2  g, karboksimetil selulosa (CMC) 1,88 g yang dimodifikasi  dengan  penambahan  100  mL  filtrat serbuk TKKS dan agar 15 g. Hasil isolasi dan seleksi diperoleh  isolat  bakteri  selulolitik  K3  yang  berasal dari kompos umur 25 hari. Formula dekomposer yang diuji  merupakan  kombinasi  isolat  ligninolitik  CRK dan FS serta isolat selulolitik K3.
Pengujian  dekomposer  dalam  pengomposan TKKS  dilakukan  selama  110  hari  untuk  mengetahui kemampuan  maksimal formula tersebut. Hasil penga- matan  menunjukkan  bahwa  kadar  air  pada  awal pengomposan  berkisar antara  58-61%,  kemudian ber- fluktuasi namun cenderung menurun hingga mencapai kadar  air  di  bawah  40%  pada  inkubasi  77  hari (Gambar 3). Pertumbuhan bakteri  mencapai  optimum pada  kadar  air  antara  60-70%  sehingga  diduga  kadar air  yang  rendah  menyebabkan  penurunan  aktivitas. Penstabilan  kadar  air  dilakukan  dengan  penjenuhan diawal proses pengomposan yaitu pada saat preparasi TKKS sebagai bahan baku kompos. Proses penyiram- an  dilakukan  secara  bertahap  dalam  jangka  waktu tujuh hari. Namun demikian, hal tersebut belum dapat menjaga  stabilitas  kadar  air  TKKS  selama  pengom- posan karena sulitnya air menembus gumpalan TKKS dengan ketinggian 2,5-3 m.
Hasil  pengamatan  menunjukkan  bahwa  kadar oksigen  lebih  besar  atau  sama  dengan  10%  sehingga
kondisi  ini  mencerminkan  proses  yang  terjadi  adalah aerobik (Baskoro, Komunikasi pribadi). Kondisi yang aerob  diharapkan  dapat  mendukung  aktivitas  bakteri ligninolitik.  Pembalikan  untuk  menjaga  kondisi  tetap aerob juga dilakukan secara rutin yaitu setiap dua hari sekali pada minggu pertama dan tiga hari sekali pada tiga  minggu  selanjutnya,  sedangkan  sisanya  tidak dilakukan pembalikan karena dianggap sebagai proses pematangan.  Gambar  4.  menunjukkan  perbedaan kadar  oksigen  antara  TKKS  yang  diberi  formula dekomposer  bakteri  ligninolitik  (BL)  dibandingkan dengan tanpa BL berkisar antara 0,1 – 2,1%.
Hasil analisis pH menunjukkan bahwa pH kompos di  atas  netral  dan  cenderung  meningkat  hingga  pada kisaran  pH  9,  walaupun  limbah  biogas  yang  diguna- kan  untuk  menyiram  TKKS  bereaksi  netral  hingga sedikit  alkalin  pH  7-8  (Gambar  5).  Perbedaan  pH antara  TKKS  yang  diberi  dan  tanpa  formula  dekom- poser  BL  tidak  cukup  nyata.  Reaksi  TKKS  yang cenderung  basa  kemungkinan  disebabkan  oleh  dea- minasi  protein  air  limbah  dari  instalasi  biogas  yang digunakan  dalam  penyiraman  maupun  dari  ammonia yang  dihasilkan  TKKS  (Supadma  &  Arthagana, 2008).
Gambar  6  menyajikan  hasil  pengamatan  suhu kompos  yang berkisar 60-78ºC. Hal ini  menunjukkan
terjadinya  akumulasi  panas  sebagai  akibat  aktivitas mikroba  dalam  proses  pengomposan.  Suhu  TKKS antara yang diberi dan tanpa formula dekomposer BL tidak  jauh  berbeda  walaupun  terdapat  kecenderungan dengan  penambahan  formula  dekomposer  BL,  suhu sedikit  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  tanpa  BL. Walaupun bakteri ligninolitik yang digunakan sebagai bahan aktif dekomposer BL berasal dari kompos pada lokasi  yang  sama,  dampak  suhu  tinggi  (60-78ºC) terhadap  aktivitas  bakteri  dalam  formula  dekomposer BL  belum  diketahui  secara  pasti.  Untuk  mengetahui pengaruh suhu tinggi terhadap aktivitas bakteri ligno- litik  maka  perlu  dilakukan  pengujian  pada  kondisi in vitro .
Analisis  nisbah  C/N  menunjukkan  bahwa  pe- nurunan  nisbah  C/N  yang  sangat  tajam  terjadi  pada periode 0–35 hari (Gambar 7).  Penurunan nisbah C/N TKKS  yang  diberi  formula  dekomposer  bakteri ligninolitik  lebih  tinggi  dibandingkan  dengan  yang tanpa bakteri ligninolitik. Nisbah C/N setelah inkubasi 30  hari  menunjukkan  angka  25  dan  pada  inkubasi70 hari  tercapai  nisbah  C/N  20  pada  perlakuan  dengan BL. Sedangkan pada saat akhir inkubasi yaitu 99 hari nilai  nisbah  C/N  lebih  kurang  17  sedangkan  tanpa formula dekomposer bakteri ligninolitik adalah sekitar 18.  Rendahnya perbedaan  rasio C/N kompos dengan
Gambar 2. Hasil uji pewarnaan Gram  isolat (A) FS, (B) CRK1 dan (C) K3.
Figure 2.   Gram staining of (A)FS,(B) CRK1 and (C) K3 isolates.
Gambar 3. Kadar air kompos TKKS tanpa dan dengan formula dekomposer bakteri ligninolitik (BL). Kadar air merupakan rata-rata dari kadar air pada ketinggian 2, 4, dan 6 m dalam pengomposan selama 110 hari.
Figure 3. Water content of EFB without and with lignolytic bacteria formula. Water content was average of 2, 4, and 6 m height of compost during composting period of 110 days.
0,0 10,0 20,0 30,0 40,0 50,0 60,0 70,0 0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 54 57 60 63 65 68 71 74 77 80 83 86 89 92 95 98 1 0 1 1 0 4 1 0 7 1 1 0 Ka d ar air ( W a ter c o n ten t) (% ) A B C
Waktu pengomposan (hari)/ Composting period ( day ) T anpa inokulasi/ Not inoculated Inokulasi dengan dekomposer/ Inoculated with decomposer
Gambar  4.  Kandungan  oksigen  TKKS  tanpa  dan  dengan  formula  dekomposer  BL.  Kandungan  oksigen merupakan rata-rata kadar oksigen TKKS pada ketinggian 2, 4, 6 m dalam pengomposan selama 110 hari.
Figure  4.        Oxygen      content    of    EFBOP  without    and    with  LB  of  decomposer  formula.  Oxygen  content  was average of 2, 4, and 6 m height of compost during composting period of110 days.
Gambar 5. Reaksi pH tumpukan TKKS tanpa dan dengan formula dekomposer BL.  Nilai pH TKKS merupakan rata-rata pH pada ketinggian 2, 4, 6 m dalam pengomposan selama 110 hari.
Figure 5.   The pH reaction of EFB without and with LB formula. The pH reaction was average of 2, 4, and 6 m height of compost during composting period of 110 days.
dan  tanpa  formula  BL  diduga  disebabkan  kondisi yang  tidak  optimum  untuk  mikroba  BL  seperti  kadar air  yang  cenderung  rendah,  dosis  aplikasi  belum optimal,  pencampuran  dekomposer  ke  dalam  TKKS dan  aerasi  yang  belum  merata.  Goenadi  (2006)  me- laporkan  bahwa Trichoderma  pseudokoningii yang diisolasi  dari  TKKS  dapat  menurunkan  nisbah  C/N dari  52  menjadi  13  setelah  diinkubasikan  selama  30 hari. Dilihat dari komponen  nisbah CN,  penurunan  C tidak tinggi namun peningkatan kadar N sedikit lebih tinggi  pada  TKKS  yang  diberi  formula  BL,  sehingga menghasilkan nilai nisbah CN yang lebih rendah.
Hasil  analisis E.  coli dan Salmonella sp.  yang merupakan  kontaminan  menunjukkan  bahwa  pem- berian  formula  bakteri  lignolitik,  menghasilkan populasi  kontaminan  yang  rendah  sedangkan  pada kompos  tanpa  bakteri  lignolitik  menghasilkan populasi E. coli dan Salmonella sp. yang cukup tinggi khususnya pada inkubasi 30 hari (Tabel 4). Kompetisi antara  bakteri  ligninolitik  dengan  kontaminan, kemungkinan  dapat  menekan  jumlah  kontaminan khususnya  pada  kompos  segar,  walaupun  demikian dugaan ini perlu diuji lebih lanjut.
0,0 2,0 4,0 6,0 8,0 10,0 12,0 14,0 16,0 18,0 20,0 0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 54 57 60 63 65 68 71 74 77 80 83 86 89 92 95 98 101 104 107 110 Ka d ar o k sig en ( Ox yg en c o n ten t) (% ) 0,0 1,0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0 0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 54 57 60 63 65 68 71 74 77 80 83 86 89 92 95 98 101104107110 pH Tanpa inokulasi/ Notinoculated Inokulasi dengan dekomposer/ Inoculated with decomposer Waktu pengomposan (hari)/ Composting period ( day )
Waktu pengomposan (hari)/ Composting period ( day ) Tanpa inokulasi/ Not inoculated Inokulasi dengan dekomposer/ Inoculated with decomposer
Gambar 6. Suhu TKKS tanpa dan dengan pemberian formula dekomposer BL. Suhu merupakan rata-rata TKKS pada ketinggian 2, 4, 6 m dalam pengomposan selama110 hari.
Figure 6. Temperature of EFB without and with LB formula. Temperature was the average measurement of 2, 4, and 6 m height of compost during composting period of 110 days.
Gambar  7.  Nisbah  C/N  kompos  TKKS  tanpa  dan  dengan  formula  dekomposer  bakteri  ligninolitik.Nilai  nisbah C/N merupakan rata-rata nisbah C/N pada ketinggian 2,4,6 m TKKS selama pengomposan 110 hari.
Figure 7.   C/N ratio of EFBOP without and with ligninolytic bacteria formula. C/N ratio is average of 2, 4, and 6 m height of compost during composting period of 110 days.
Tabel 4. Karakteristik kompos TKKS dari hasil percobaan skala 200 ton. Table 4. Characteristics of EFB compost derived from 200 ton experiment scale.
Perlakuan pengomposan Composting treatment

## Lama pengomposan
Composting duration (hari /day ) Karakteristik ( Characteristics ) C (%) N (%) Nisbah Ratio C/N E. coli CFU g -1 Salmonella sp. CFU g -1 Tanpa inokulasi/ Not inoculated 30 43,99 1,43 30,76 1,1 x 10 3 3,0 x 10 3 Inokulasi dekomposer/ Decomposer inoculation 30 43,53 1,79 24,32 Tidak terdeteksi/ Not detected Tidak terdeteksi/ Not detected Tanpa inokulasi/ Not inoculated 60 45,03 1,58 28,50 < 3 Tidak terdeteksi/ Not detected Inokulasi dekomposer/ Decomposer inoculation 60 42,89 1,56 27,49 < 3 Tidak terdeteksi/ Not detected Tanpa inokulasi/ Not inoculated 90 22,03 2,13 10,34 <3 Tidak terdeteksi/ Not detected Inokulasi dekomposer/ Decomposer inoculation 90 22,38 2,24 9,99 15 Tidak terdeteksi/ Not detected
0,0 10,0 20,0 30,0 40,0 50,0 60,0 70,0 80,0 90,0 0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 36 39 42 45 48 51 54 57 60 63 65 68 71 74 77 80 83 86 89 92 95 98 101 104 107 110 S u h u ( T emp era tu re ) (° C) 0,0 5,0 10,0 15,0 20,0 25,0 30,0 35,0 40,0 45,0 50,0 0 7 15 22 30 33 45 55 62 70 78 85 91 99 Nisb ah C /N ( C/N ra ti o )
Waktu pengomposan (hari)/ Composting period ( day ) Tanpa inokulasi/ Not  inoculated Inokulasi dengan dekomposer/ Inoculated with decomposer
Tanpa inokulasi/ Not  inoculated Inokulasi dengan dekomposer/ Inoculated with decomposer
Waktu pengomposan (hari)/ Composting period ( day )
Eksplorasi, karakterisasi, dan aplikasi bakteri aerob ligninolitik …..(Prakoso et al.)

## Kesimpulan
Telah diperoleh 23 isolat bakteri yang berpotensi mendegradasi  lignin,  yaitu  11  isolat  didapatkan melalui  metode  pengkayaan  dan  12  isolat  didapatkan melalui  metode  tanpa  pengkayaan.  Isolat  bakteri ligninolitik  terbaik  dari  metode  tanpa  pengkayaan yaitu  isolat  CRK  1  dengan  kemampuan  dekolorisasi biru metilen 0,3 cm, aktivitas Mn-peroksidase dengan penambahan  Mn  dan  tanpa  penambahan  Mn  masing- masing  sebesar  2,09  U/mL  dan  0,23  U/mL.  Isolat terbaik  dari  metode  dengan  pengkayaan  yaitu  isolat FS  dengan  kemampuan  dekolorisasi  biru  metilen  0,6 cm,  aktivitas  lakase  2,68  U/mL,  Mn-peroksidase dengan  penambahan  Mn  20,02  U/mL  dan  tanpa penambahan Mn yaitu  0,36 U/mL.
Metode pengkayaan dapat meningkatkan jumlah bakteri  terisolasi  penghasil  lignin  peroksidase.  Isolat bakteri  CKA  adalah  isolat  penghasil  lignin  peroksi- dase  tertinggi  yaitu  sebesar  5,05  U/mL.  Formula dekomposer  bakteri  ligninolitik  dapat  menghasilkan kompos  TKKS  dengan  nisbah  C/N  18  pada  inkubasi 99 hari.

## Ucapan Terima Kasih
Penelitian ini  merupakan kerjasama BPBPI dan PT Pinago Utama, Palembang  melalui Kontrak Pene- litian  No.13/SPK/BPBPI/VIII/2012.  Penulis  mengu- capkan  terima  kasih  kepada  Direksi,  Pimpinan,  dan Staf  PT  Pinago  Utama  atas  bantuan  penyediaan  fasi- litas percobaan lapang, sarana, dan prasarana sehingga penelitian ini dapat terselenggara dengan baik.

## Daftar Pustaka
Amira  RD,  AR  Roshanida,  SH  Mohd-Setapar&MI  Rosli (2013).  Biodegradation  oil  palm  residues  into  compost using filamentous fungi. Adv Sci Let 12(5), 3529-33.
Ariffin  H,  MA  Hassan,  MS  Umi  Kalsom,  N  Abdullah  & Y  Shirai  (2008).  Effect  of  physical,  chemical,  and thermal pretreatments on the enzymatic hydrolysis of oil palm empty fruit bunch. J Trop Agric Fd Sc 36(2), 1-10.
Arias  ME,  M  Arenas,  J  Rodriguez,  J  Soliveri,  AS  Ball  &
M  Hernandez  (2003).  Kraft  pulp  biobleaching  and mediated  oxidation  of  a  non  phenolic  substrate  by laccase  from Streptomyces  cyaneus CECT  3335. Appl Environment Microbiol 69(4), 1953-58.
Bandounas  L,  NJP  Wierckx,  JH  Winde  &  HJ  Ruijssenaars (2011). Isolation and characterization of novel bacterial strains exhibiting ligninolytic potential. BMC Biotechnol 11(1), 94.
Bholay  AD,  BV  Borkhataria,  PU  Jadhav,  KS  Palekar, MV Dhalkari & PM Nalawade  (2012). Bacterial lignin peroxidase: A tool for biobleaching and biodegradation of industrial effluents. Univ J Environment Res Technol 2(1), 58-64.
Bugg TD, M Ahmad, EM Hardiman & R Singh (2010). The emerging role for bacteria in lignin degradation and bio- product formation. Curr Op Biotechnol 22, 1-7.
Bugg  TD,  M  Ahmad,  EM  Hardiman  &  R  Rahmanpour (2011).  Pathways  for  degradation  of  lignin  in  bacteria and fungi. Nat Prod Rep 28, 1883-1896.
Delalibera  I,  A  Vasanthakumar,  BJ  Burwitz,  PD  Schloss, KD  Klepzig,  J  Handelsman  &  KF  Raffa  (2007). Composition  of  the  bacterial  community  in  the  gut  of the  pine  engraver,  Ips  pini  (Say)  ( Coleoptera ), colonizing red pine. Symbios 43, 97-104.
Feng  HW;  Y  E.  Zhi,  W  W  Shi,  L  Mao  &  P  Zhou  (2013). Isolation,  identification  and  characterization  of  a  straw degrading Streptomyces  griseorubens JSD  -1. African J  Microbiol Res 7(22), 2730-2735.
Goenadi  DH  (2006). Developing  Technology  for  Biode- composition of Fresh Solid Wastes of Plantation Crops under Tropical Condition .Bogor, IPB Press,228 p
Huang  DL,  GM  Zeng,  CL  Feng,  SHu,  MH  Zhao,  C  Lai,
Y  Zhang,  XY  Jiang&  HL  Liu  (2010).  Mycelial  growth and solid-state fermentation of lignocellulosic waste by white-rot  fungus Phanerochaete  chrysosporium under lead stress. Chemosphere 81, 1091–109.
Martinez  AT,  M  Speranza,  FJ  Ruiz-Duenas,  P  Ferreira, S  Camarero,  F  Guillen,  MJ  Martinez,  A  Gutierrez  & JC  del  Rio  (2005).  Biodegradation  of  lignocellulosics: microbial,  chemical,  and  enzymatic  aspects  of  the fungal attack of lignin. Int Microbiol 8(3), 195-204.
Masai  E,  Y  Katayama  &  Fukuda  M  (2007).  Genetic  and biochemical  investigations  on  bacterial  catabolic pathways  for  lignin-derived  aromatic  compounds. Biosci Biotechnol and Biochemist 71(1), 1-15.
Nasrul  &  T  Maimun  (2009).  Pengaruh  penambahan  jamur pelapuk putih ( white rot  fungi ) pada proses pengomposan tandan kosong kelapa sawit. J Rekay Kim Ling 7(2), 194-199.
Oliveira  PL,  MCT  Duarte,  AN  Ponezi  &  LG  Durrant (2009).  Purification  and  partial  characterization  of manganese  peroxidase  from Bacillus  pumilus and Paenibacillus sp. Brazil J Microbiol 40, 818-826.
Rahman  NHA,  NAA  Rahman,  SA  Aziz  &  MA  Hassan (2013).  Production  of  ligninolytic  enzymes  by  newly isolated  bacteria  from  palm  oil  plantation  soils. Bioresour 8(4), 6136-50.
Sheikhi  F,  M  Roayaei  Ardakani  &  S  Rodriguez-Couto (2012).  The  determination  of  assay  for  laccase  of Bacillus  subtilis wpi  with  two  classes  of  chemical compounds  as  substrates. Indian  J  Microbiol 52  (4), 701-707.
Tien  M  &  TK  Kirk  (1988).  Lignin  peroxidase  of Phanerochaete  chrysosporium . In :  Wood et  al .  (eds) Methods  in  238  enzymology.  Biomass,  part  b,  lignin, pectin,  and  chitin.  San  Diego,  Academic  Press,  Vol. 161, 238-249.
Yang JS,  W Liu & JR Ni  (2006). Isolation, identification, of  lignin-degrading  bacteria  and  purification  of  lignin peroxidase. Pub Med 27(5), 981-985.
Wahyudi  A,  MN  Cahyanto,  M  Soejono  &  Z  Bachruddin (2010).  Potency  of  lignocelluloses  degrading  bacteria isolated from buffalo and horse gastrointestinal tract and elephant  dung  for  feed  fiber  degradation. J  Ind  Trop Anim Agric 35 (1), 34-41.
Widiastuti H, Suharyanto, A Wulaningtyas & RTM  Sutamihardja  (2008).  Activity  of  ligninolytic enzymes  during  growth  and  fruiting  body  development of  white  rot  fungi Omphalina sp.  and Pleurotus ostreatus . Hayati 5(4) , 140-144.