## UJI DAYA HAMBAT EKSTRAK ETANOL DAUN PANGI
( Pangium edule Reinw. ex Blume) TERHADAP BAKTERI Staphylococcus aureus , Escherichia coli DAN Pseudomonas aeruginosa
THE INHIBITION TEST OF ETHANOL EXTRACT OF PANGI (Pangium edule Reinw. ex Blume) LEAVES AGAINTS Staphylococcus aureus, Escherichia coli AND Pseudomonos aeruginosa
Glorya Sakul 1) , Herny Simbala 1) , Gerald Rundengan 1)
1) Program Studi Farmasi FMIPA UNSRAT Manado, 95115

## ABSTRACT
One of  the natural  ingredients  that are often used as a medicinal  plants  is  Pangi (Pangium edule Reinw.  Ex  Blume)  plant.  The  part  of  pangi  that  are  often  used  are  leaves,  which  is  known  have antibacterial activity. North Sulawesi people empirically use this plant as food and to cure various diseases such as treating itching on the skin caused by bacteria found on the skin. The aim of this research was to determine and study the strength of antibacterial inhibition based on the category of inhibition by Davis and Stout of ethanol extract from pangi (Pangium edule Reinw. ex Blume) leaf performed  by  disc  diffusion  Kirby  and  Bauer  method  againts  Staphylococcus  aureus,  Escherichia coli and Pseudomonos aeruginosa bacterias. The result showed that the ethanol extract from pangi (Pangium edule Reinw. Ex Blume) leaf has medium inhibitory strength at concentrations of 4%, 6% and 8%.
Keywords : Pangium edule Reinw. ex Blume leaf, Antibacterial, Disc diffusion method

## ABSTRAK
Salah  satu  bahan  alam  yang  sering  digunakan  sebagai  tumbuhan  obat  adalah  tumbuhan  pangi ( Pangium edule Reinw. ex Blume). Bagian dari tumbuhan pangi yang sering digunakan adalah bagian daun,  dimana  telah  diketahui  mempunyai  aktivitas  antibakteri.  Masyarakat  Sulawesi  Utara  secara empiris  menggunakan  tumbuhan  ini  sebagai  bahan  makanan  serta  untuk  menyembuhkan  berbagai penyakit seperti mengobati penyakit gatal-gatal pada kulit yang disebabkan oleh bakteri yang terdapat pada kulit. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kekuatan daya hambat antibakteri berdasarkan kategori penggolongan daya hambat oleh Davis dan Stout dari ekstrak etanol  daun Pangium edule Reinw.  ex.  Blume  dengan  metode  difusi  agar  (difusi  disk  Kirby  dan  Bauer)  terhadap  bakteri  uji Staphyloccocus  aureus , Escherichia  coli dan Pseudomonas  aeruginosa .  Hasil  penelitian  didapati bahwa  ekstrak  etanol  daun Pangium  edule Reinw  ex.  Blume  mempunyai  kekuatan  daya  hambat kategori sedang pada konsentrasi 4%, 6% dan 8%.
Kata kunci : Daun Pangium edule Reinw. ex Blume, Antibakteri, Metode difusi disk

## PENDAHULUAN
Indonesia terletak di daerah katulistiwa yang  mempunyai  hutan  hujan  tropika  yang dikenal cukup unik dan merupakan salah satu komunitas  yang  kaya  akan  keanekaragaman spesies tumbuhan di dunia. Indonesia memiliki ±  30.000  jenis  tumbuhan  dan  ±  7000  jenis berkhasiat obat ( 90 % jenis tumbuhan obat di kawasan Asia) (Rosoedarso, 1990).
Kekayaan  keanekaragaman  spesies yang  dimiliki  Indonesia  merupakan  potensi kandungan  bahan-bahan  kimia  dan  sumber daya genetika. Potensi ini merupakan keunggulan  komparatif,  karena  pada  saat  ini terjadi  peningkatan  industri  terhadap  sumber- sumber bahan kimia untuk memproduksi obat- obatan, agrokimia, kosmetika, zat pewarna dan lain-lain.  Potensi  tersebut  didukung  oleh pengetahuan  tradisional  masyarakat  tentang khasiatnya,  menyebabkan  Indonesia  sebagai salah  satu  tujuan  bagi  pelaku  bioprospeksi. Bioprospeksi  pada  prinsipnya  adalah  upaya pencarian,  penelitian,  pengumpulan,  ekstrasi, dan  pemilihan  sumber  daya  hayati  dan pengetahuan  tradisional  untuk  mendapatkan materi  genetik  dan  sumber  biokimia  yang bernilai ekonomi tinggi (Simbala, 2007).
Bangsa Indonesia telah lama mengenal tumbuhan obat. Begitu banyak tumbuhan obat yang tersedia di Indonesia termasuk di daerah Sulawesi  Utara.  Tumbuhan  obat  umumnya merupakan tumbuhan hutan yang sejak jaman nenek  moyang  telah  menjadi  tumbuhan pekarangan dan secara turun-temurun digunakan  sebagai  tumbuhan  obat  salah satunya  adalah tumbuhan pangi  (Simbala dan Edwin, 2015).
Tumbuhan
pangi ini dapat dimanfaatkan sebagai obat tradisional, bagian daunnya  sebagai  sayuran,  daging  buahnya dapat  dimakan  jika  sudah  masak,  dan  bijinya dapat diolah sebagai bumbu masak, dapat juga dimakan  sebagai  cemilan  (Makagansa et  al. , 2015). Bagian daun tumbuhan pangi diketahui mengandung  beberapa  senyawa  kimia  seperti alkaloid,  flavonoid,  saponin,  tanin  dan terpenoid.  Senyawa  kimia  inilah  yang  diduga berkhasiat  sebagai  antibakteri  (Sangi et  al. , 2008).
Penelitian  yang  pernah  dilakukan terkait  khasiat  dari  tumbuhan  ini  yaitu  uji aktivitas  antibakteri  dari  ekstrak  biji  Pangi (Makagansa et  al. ,  2015),  uji  aktivitas antibakteri ekstrak etil asetat daun Pangi (Mora et  al .,  2014),  dan  uji  aktivitas  antibakteri ekstrak  etanol daun Pangi  pada bakteri E.coli dengan metode dilusi cair (Pinta et al., 2017). Namun, belum pernah dilakukan penelitian uji aktivitas  antibakteri  yang  lebih  spesifik mengukur  daya  hambat  atau  kekuatan antibakteri dari ekstrak etanol terhadap bakteri Staphylococcus  aureus,  Escherichia  coli  dan Pseudomonas  aeruginosa untuk  bagian  daun dari Pangi ( Pangium edule Reinw. ex Blume) dengan  metode  pengujian  secara  difusi  disk atau kertas cakram.

## METODOLOGI PENELITIAN

## Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan mulai bulan November  2019  sampai  Juni  2020.  Tempat penelitian dilaksanakan di laboratorium farmasi  lanjutan  divisi  Mikrobiologi  Program Studi Farmasi Fakultas Matematikan dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Sam Ratulangi.

## Bentuk Penelitian
Penelitian  ini  merupakan  penelitian yang  bersifat  eksperimental  di  laboratorium, dimana  dibuat  5  perlakuan  dan  setiap perlakuan terdiri atas 3 pengulangan. Perlakuan dalam penelitian ini yaitu pemberian konsentrasi 4%, 6% dan 8% pada ekstrak daun pangi  ( Pangium  edule Reinw.  ex  Blume), kontrol  positif Ciprofloxacin dan  kontrol negatif  akuades.  Metode  yang  digunakan adalah metode difusi disk terhadap bakteri uji Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli dan Pseudomonas aeruginosa .

## Alat dan Bahan
Alat-alat yang digunakan dalam penelitian ini yaitu, alat-alat gelas (erlenmeyer, gelas  piala,  gelas  ukur,  3  tabung  reaksi,  9 cawan  petri),  autoklaf,  inkubator,  timbangan digital dan manual, LAF (Laminar Air Flow) , hot plate , lampu bunsen, jarum inokulasi lurus, blender ,  lemari  pendingin, mortar dan pestle ,
rak tabung, korek api, kapas, tissue ,
evaporator , oven ,  cakram  kertas  5  mm, mikropipet  (10-1000μL),  jangka  sorong, aluminium foil dan plastik wrap, kertas label, kamera,  gunting,  pinset,  sarung  tangan, masker.
Bahan-bahan  yang  diperlukan  yaitu daun  Pangi,  bakteri Staphyloccocus  aureus , Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa ,  media Nutrient  Agar (NA), akuades, NaCl 0.9%, etanol 70%, etanol 96% dan zat antibiotik ( Ciprofloxacin ).

## Pengambilan dan Penyiapan Sampel
Sampel  yang  digunakan  yaitu  daun Pangi yang diambil di daerah Teling Tingkulu, Manado  lalu  dikumpulkan  dan  disimpan  di plastik.  Daun  pangi  disortir,  dicuci  dan ditimbang berat basah, kemudian dikeringkan dengan  cara  dikering-anginkan  dalam  suhu ruangan  lalu  ditimbang  berat  keringnya, setelah itu dihaluskan dengan blender menjadi serbuk  simplisia  halus  lalu  diayak  dengan ayakan.

## Sterilisasi Alat
Sterilisasi  alat  dilakukan  sebelum semua peralatan digunakan, yaitu dengan cara membungkus semua peralatan dengan menggunakan kertas kemudian dimasukkan ke dalam  autoklaf  pada  suhu  121 ℃ dengan tekanan 1 atm selama 15 menit. Alat yang tidak tahan panas tinggi disterilisasi dengan alkohol 70%.

## Ekstraksi Sampel
Ekstrak  daun  Pangi  dibuat  dengan  cara maserasi.  Dimana  serbuk  simplisia  daun Pangi yang  telah  ditimbang  dimasukkan  ke  dalam erlenmeyer/wadah  gelas  lainnya,  kemudian direndam  dengan  pelarut  etanol  96%.  Wadah ditutup  dengan  aluminium  foil  dan  dibiarkan selama  lima  hari  sambil  sesekali  diaduk. Setelah  lima  hari,  sampel  yang  direndam tersebut  disaring  menggunakan  kertas  saring dan menghasilkan filtrat  I dan ampas  I. Ampas yang  ada  kemudian  direndam  lagi  dengan larutan  etanol  96%,  ditutup  dengan  aluminium foil  dan  dibiarkan  selama  dua  hari  sambil
sesekali  diaduk.  Setelah  dua  hari,  sampel tersebut disaring menggunakan kertas saring,
sehingga  menghasilkan  filtrat  II  dan  ampas  II. Filtrat  I  dan  II  digabungkan,  kemudian dievaporasi  menggunakan rotary  evaporator , sehingga  diperoleh  ekstrak  kental  daun  Pangi. Ekstrak  kental  yang  dihasilkan  dibiarkan  pada suhu  ruangan  hingga  seluruh  pelarut  etanol menguap.  Setelah  itu  ekstrak  ditimbang  dan disimpan  dalam  wadah  gelas  tertutup  sebelum digunakan untuk pengujian (Pinta et al ., 2017).

## Pembuatan Media Pengujian Bakteri
Media  pengujian  dibuat  dengan  cara ditimbang Nutrient  Agar (NA) sebanyak 5,6  g, lalu  dilarutkan  dalam  200  mL  akuades menggunakan wadah erlenmeyer. Media dihomogenkan  dengan  stirer  diatas  penangas air  sampai  mendidih.  Media  yang  sudah homogen  ini  disterilkan  dalam  autoklaf  pada suhu  121˚C  selama  15  menit,  kemudian didinginkan sampai suhu ± 45-50 ˚C.

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji  yang  telah  diinokulasi diambil dengan kawat ose steril lalu disuspensikan  ke  dalam  tabung  yang  berisi  2 mL  larutan  NaCl  0,9%  hingga  diperoleh kekeruhan yang sama dengan standar kekeruhan larutan Mc. Farland. Perlakuan yang sama dilakukan pada setiap jenis bakteri uji.

## Pembuatan Larutan Kontrol Positif
Larutan  kontrol  positif  dibuat  dari sediaan obat tablet Ciprofloxacin 500 mg. Satu tablet Ciprofloxacin digerus  lalu  ditimbang 0,05  g,  kemudian  dilarutkan  dalam  50  mL akuades.  Diambil  1  mL  dari  larutan  tersebut dan  ditambahkan  akuades  sampai  10  mL, sehingga  diperoleh  larutan Ciprofloxacin dengan  konsentrasi  1μg/10μl.  Konsentrasi  ini digunakan sebagai kontrol positif.

## Pembuatan Larutan Uji
Dibuat larutan uji 4%, 6% dan 8% dengan cara ditimbang 0,04 g; 0,06 g; dan 0,08 g  ekstrak  etanol  daun  Pangi.  Masing-masing ekstrak dilarutkan dalam 1 mL akuades.

## Pembuatan Suspensi Bakteri Uji
Bakteri  uji  yang  telah  diinokulasi diambil  dengan  kawat  ose  steril  lalu disuspensikan  ke  dalam  tabung  yang  berisi  2 mL  larutan  NaCl  0,9%  hingga  diperoleh kekeruhan yang sama dengan standar kekeruhan  larutan  Mc.  Farland.  Perlakuan yang sama dilakukan pada setiap jenis bakteri uji.

## Pengujian Aktivitas Antibakteri
Metode yang digunakan dalam penelitian  ini  adalah  metode  Kirby-Bauer, yaitu  metode  difusi  dengan  cakram  kertas. Masing-masing dari suspensi bakteri Staphylococcus  aures , Escherichia  coli dan Pseudomononas  aeruginosa sebagai  biakan uji, dicampurkan pada medium NA kemudian campuran  medium  NA  dan  suspensi  bakteri dituang  ke  3  cawan  petri  steril  sebanyak  20 mL,  cawan  petri  kemudian  digoyang  secara perlahan-lahan  untuk  menyebarkan  biakan bakteri  secara  merata  dan  didiamkan  hingga medium memadat (Rostinawati, 2009). Masing-masing  dari  cakram  kertas  steril dipindahkan  secara  aseptik  menggunakan pinset steril ke konsentrasi yakni, 4%, 6%, dan 8% serta larutan antibiotik (kontrol positif) dan larutan akuades (kontrol negatif) direndam ± 1 menit (Tangapo, 2005).

## Analisis Data
Zona  bening  atau  daya  hambat  dari diameter  ekstrak  etanol  daun  pangi  yang terbentuk  disajikan  dalam  bentuk  tabel  dan gambar.  Penggolongan  kekuatan  antibakteri dari daya hambat yang diperoleh ekstrak etanol daun Pangi digolongkan berdasarkan penggolongan Davis dan Stout (1971).

## HASIL DAN PEMBAHASAN

## Penyiapan Simplisia
Bagian  tumbuhan  yang  dipakai  yaitu daun  Pangi  ( Pangium  edule Reinw.  ex Blume) yang  diperoleh  sebanyak  kurang  lebih  2  kg sampel  basah  di  daerah  Teling  Tingkulu, Manado, Sulawesi Utara.
Sebelum  proses  ekstraksi  dilakukan,  sampel dicuci  terlebih  dahulu  dan  dikeringkan  dengan
cara  dikering-anginkan  pada  suhu  ruangan kemudian  dihaluskan  dengan  alat blender lalu diayak dengan ayakan agar memperoleh serbuk. Proses  pencucian  sampel  dilakukan  untuk memisahkan  kotoran-kotoran  atau  bahan  asing lainnya  yang  menempel  pada  sampel.  Proses pengeringan sampel bertujuan untuk menghilangkan  kadar  air  dalam  sampel  karena selain  dapat  mengganggu  proses  penarikan  zat aktif, kadar air yang tinggi juga dapat membuat sampel  mudah  rusak  oleh  adanya  pertumbuhan jamur. Proses pembuatan serbuk bertujuan untuk memperbesar  luas  permukaan  kontak  dengan pelarut  sehingga  proses  ekstraksi  bisa  optimal. Sampel diayak bertujuan untuk menyeragamkan ukuran  partikel,  dimana  keseragaman  ukuran partikel  ini  dapat  mempengaruhi  keseragaman tahapan ekstraksi (Saifuddin et al. , 2011).
Ekstraksi Daun Pangi ( Pangium edule

## Reinw ex. Blume)
Daun Pangi yang diperoleh diekstraksi metode maserasi  menggunakan pelarut etanol 96%. Pemilihan pelarut etanol dalam penelitian  ini  karena  menurut  Herlianawati (2003),  etanol  dapat  melarutkan  senyawa- senyawa yang bersifat nonpolar maupun yang bersifat polar seperti alkaloid, tanin, flavonoid, dan  saponin.  Senyawa-senyawa  dari  fenol, tanin,  alkaloid  dan  saponin  memiliki  potensi sebagai  antibakteri  (Nakade et  al .,  2013). Setelah dimaserasi dengan etanol 96% selama 5  hari  dan  diremaserasi  selama  2  hari,  filtrat daun  pangi  yang  dihasilkan  berwarna  hijau- kehitaman.  Hasil  ekstraksi  daun Pangium edule Reinw.  ex  Blume  diperoleh  sebanyak 650 mL. Setelah dievaporasi dihasilkan filtrat kental ekstrak etanol sebanyak 20 g.
Uji Aktivitas Daya Hambat Ekstrak Etanol Daun Pangi ( Pangium edule Reinw ex. Blume)
Dalam  menggolongkan  daya  hambat antibakteri  ekstrak  dilakukan  pengukuran diameter zona hambat. Zona hambat berwarna bening yang terbentuk di sekitar kertas cakram yang diuji menandakan bahwa terjadi aktivitas daya  hambat  terhadap  bakteri.  Adanya  zona hambat  di  sekitar  kertas  cakram  merupakan daerah difusi dalam  mempengaruhi
pertumbuhan  bakteri.  Kekuatan  antibakteri dapat  diketahui  dengan  mengukur  besarnya diameter dari zona hambat berwarna bening
yang  terbentuk  oleh  ekstrak  yang  diuji (Redwik et al. , 2019).
Tabel 1 . Rata-rata diameter zona hambat ekstrak daun Pangium edule Reinw terhadap Staphylococcus aureus , Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa Konsentrasi Diameter zona hambat pertumbuhan bakteri (mm) S.aureus E.coli P. aeruginosa U1 U2 U3  Rata-rata U1 U2 U3 Rata-rata U1 U2 U3 Rata-rata 4% 5,7 6,0 5,7 5,8 6 4,65 6,3 5,65 5,9 6,55 5,5 5,85 6% 5,7 6,45 6 6,05 6,55 4,8 6,1 5,81 6 5 6,55 6,35 8% 8,3 8,4 6,1 7,6 5,9 6 6,55 6,55 7 6,55  7,05 6,5 Kontrol (+) 28,5  28,3 28 28,26 26,65  26,1  25,9 26,22 25,9 24 26,1 25,33 Kontrol (-) 0 0 0 0 0 0 0 0
0 0 0 0
Hasil  pengujian  dari  ekstrak  etanol daun Pangium  edule Reinw.  ex  Blume terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus, terlihat  memiliki  zona  hambat  di  konsentrasi 4%, 6% dan 8% masing-masing sebesar 5,8 mm,  6,05  mm  dan  7,6  mm  (Tabel  1). Kemampuan menghambat dari ketiga konsentrasi  ekstrak  lebih  lemah  daripada kemampuan  menghambat  dari  kontrol  positif yaitu  antibiotika ciprofloxacin yang  memiliki zona hambat sebesar 28,26 mm.
Hasil  pengujian  dari  ekstrak  etanol daun Pangium  edule Reinw.  ex  Blume terhadap  bakteri Escherichia  coli, terlihat memiliki zona hambat di konsentrasi 4%, 6% dan 8% masing-masing sebesar 5,65 mm, 5,81 mm  dan  6,55  mm  (Tabel  1).  Kemampuan menghambat  dari  ketiga  konsentrasi  ekstrak lebih lemah daripada kemampuan menghambat  dari  kontrol  positif  yaitu antibiotika ciprofloxacin yang  memiliki  zona hambat sebesar 26,22 mm.
Hasil  pengujian  dari  ekstrak  etanol daun Pangium  edule Reinw.  ex  Blume terhadap  bakteri Pseudomonas  aeruginosa, terlihat  memiliki  zona  hambat  di  konsentrasi 4%, 6% dan 8% masing-masing sebesar 5,85 mm,  6,35  mm  dan  6,5  mm  (Tabel  1). Kemampuan menghambat dari ketiga konsentrasi ekstrak jauh lebih lemah daripada kemampuan menghambat dari kontrol positif
yaitu  antibiotika ciprofloxacin yang  memiliki zona hambat sebesar 25,33 mm.
Dari hasil pengamatan dan pengukuran penelitian  ini,  kontrol  positif  antibiotika ciprofloxacin yang  digunakan  mempunyai zona  hambat  yang  paling  besar  diameternya daripada  zona  hambat  yang  terbentuk  dari pengujian pada ketiga jenis bakteri uji dengan ketiga  jenis  konsentrasi  masing-masing. Menurut  Jawetz et  al. (2007),  antibiotik  ini memiliki efek antibakteri yang besar (spektrum  luas),  sehingga  memiliki  aktivitas penghambatan  yang  sangat  kuat  untuk  ketiga jenis bakteri uji.
Suatu  ekstrak  atau  tanaman  perlu diketahui  kekuatan  antibakterinya.  Menurut Davis dan Stout (1971), untuk kekuatan bakteri dapat  dikelompokkan  seperti  pada  tabel berikut:
Tabel 2 . Kategori daya hambat bakteri menurut Davis-Stout
Berdasarkan  kriteria  pada  Tabel  2, maka daya hambat antibakteri dari ekstrak
etanol daun Pangium edule Reinw. ex Blume terhadap bakteri Staphylococcus aureus dengan konsentrasi 4%, 6% dan 8% termasuk dalam kategori sedang. Daya hambat antibakteri  terhadap  bakteri Escherichia  coli dengan  konsentrasi  ekstrak  4%,  6%  dan  8% juga  termasuk  sedang.  Demikian  juga  daya hambat antibakteri terhadap bakteri Pseudomonas  aeruginosa dengan  konsentrasi ekstrak  4%,  6%  dan  8%  termasuk  kategori sedang juga. Dengan demikian, dapat diketahui  bahwa  dalam  ketiga  konsentrasi ekstrak yang  digunakan  untuk  bakteri Staphylococcus  aureus , Escherichia  coli dan Pseudomonas aeruginosa , menandakan bahwa ekstrak ini memiliki aktivitas sebagai antibakteri  dengan  daya  hambatan  pada kategori sedang. Data hasil penggolongan dari pengujian  ini  dapat  dilihat  pada  Tabel  3 berdasarkan masing-masing konsentrasinya.
Tabel  3 . Data  hasil  kategori  golongan  daya hambat  3  jenis  bakteri  uji  dari pengujian  ekstrak  etanol  daun  Pangi ( Pangium edule Reinw. ex Blume) Bakteri Uji Konsentrasi Kategori Golongan Daya Hambat Staphylococcus aureus 4% 6% 8% Sedang Sedang Sedang Escherichia coli 4% 6% 8% Sedang Sedang Sedang Pseudomonas aeruginosa 4% 6% 8% Sedang Sedang Sedang
Dari  hasil  pengujian  terhadap  ketiga jenis bakteri uji, diketahui bahwa daya hambat antibakteri ekstrak etanol daun Pangium edule Reinw. ex Blume terhadap bakteri Escherichia coli ,  memiliki  diameter  zona  hambat  yang paling kecil untuk ketiga konsentrasi yaitu 4% (5,65 mm), 6% (5,81 mm) dan 8% (6,55  mm) apabila      dibandingkan      dengan      bakteri Pseudomonas aeruginosa yaitu 4% (5,85 mm), 6%  (6,35  mm)  dan  8%  (6,5  mm)  dan  juga dengan  bakteri Staphylococcus  aureus yang memiliki  diameter  zona  hambat  yang paling
besar dari antara ketiga jenis  bakteri  uji  yaitu 4% (5,8 mm), 6% (6,05 mm) dan 8% (7,6 mm) walaupun  ketiganya  memiliki  kategori  daya hambat yang sama yaitu golongan sedang.
Daya  hambat  dari  ekstrak  etanol  daun Pangium  edule Reinw.  ex  Blume  terhadap bakteri  gram  negatif  ( Escherichia  coli dan Pseudomonas  aeruginosa )  memiliki  aktivitas antibakteri  yang  tergolong  sedang.  Demikian juga  daya  hambat  dari  ekstrak  etanol  daun pangi terhadap bakteri gram positif ( Staphylococcus  aureus )  memiliki  aktivitas antibakteri  yang  tergolong  sedang.  Walaupun pada ketiga bakteri uji memiliki kategori daya hambat  ekstrak  etanol  daun  pangi  yang  sama yaitu  pada  golongan  sedang,  namun  hasil pengukuran  diameter  daya  hambat  rata-rata ketiga  bakteri  uji  dapat  diketahui  bahwa aktivitas antibakteri ekstrak etanol pangi lebih kuat terhadap bakteri gram positif dalam hal ini bakteri Staphylococcus  aureus dibandingkan dengan  bakteri  gram  negatif  yaitu  bakteri Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa .  Hal  ini  menunjukkan  bahwa bakteri  gram  positif  lebih  rentan  terhadap ekstrak  etanol  daun  pangi  dibandingkan dengan bakteri gram negatif.
Dewi (2010) melaporkan bahwa perbedaan sensitivitas bakteri terhadap antibakteri  dipengaruhi  oleh  struktur  dinding sel  bakteri.  Struktur  dinding  sel  gram  positif lebih sederhana dibandingkan struktur dinding sel bakteri gram negatif sehingga memudahkan senyawa  antibakteri  untuk  masuk  ke  dalam dinding sel bakteri gram positif. Bakteri gram positif  memiliki  struktur  dinding  sel  dengan lebih  banyak  peptidoglikan,  sedikit  lipid  dan dinding  sel  mengandung  polisakarida  (asam teikoat).  Asam  teikoat  merupakan  polimer yang  larut  dalam  air,  yang  berfungsi  sebagai transport ion positif untuk keluar atau masuk. Sifat larut air inilah yang menunjukkan bahwa dinding  sel  bakteri  gram  positif  bersifat  lebih polar, sedangkan senyawa fenolik dalam pangi merupakan bagian yang bersifat polar sehingga lebih mudah menembus lapisan peptidoglikan yang bersifat polar daripada lapisan lipid yang nonpolar. Itulah sebabnya aktivitas penghambatan pada bakteri gram positif lebih besar daripada bakteri gram negatif.
Menurut  Ajizah  (2004),  kemampuan suatu  bahan  antimikroba  dalam  meniadakan kemampuan hidup mikroorganisme tergantung pada konsentrasi dan jenis bahan antimikroba itu  sendiri.  Hasil  penelitian  dari  pengujian ekstrak  daun  pangi  ini  menunjukkan  bahwa aktivitas penghambatan yang terbesar ada pada konsentrasi  ekstrak  8%  untuk  semua  bakteri uji.  Ini  membuktikan  bahwa  semakin  tinggi konsentrasi ekstrak daun pangi yang diberikan maka  semakin  besar  pula  daya  hambat  yang ditimbulkan,  karena  pada  konsentrasi  yang lebih  besar  semakin  banyak  zat  antibakteri yang terkandung di dalam ekstrak.
Zona hambat yang terbentuk dari hasil pengujian  daya  hambat  ekstrak  etanol  daun pangi  diketahui  tidak  termasuk  dalam golongan  yang  kuat.  Diameter  zona  hambat yang terbentuk dapat disebabkan oleh berbagai faktor seperti dalam proses pembuatan larutan uji ekstrak daun pangi yang dilarutkan dengan larutan  akuades  tidak  mendapatkan  kelarutan yang sempurna. Kesempurnaan kelarutan akan terjadi apabila pembuatan larutan uji dilakukan pengenceran  terlebih  dahulu  dari  konsentrasi terbesar  hingga  terkecil  sehingga  kertas cakram dapat menyerap juga dengan sempurna pada  larutan  uji  yang  telah  larut  sempurna. Selain itu, penggunaan akuades sebagai pelarut terakhir dalam larutan uji akan mempengaruhi proses pengujian, karena akuades yang bersifat polar  hanya  dapat  melarutkan  senyawa antibakteri  yang  bersifat  polar  sehingga senyawa-senyawa  antibakteri  yang  bersifat non  polar  kemungkinan  tidak  larut  dan  tidak bekerja sepenuhnya untuk menghambat pertumbuhan  bakteri  pada  tahap  pengujian. Faktor  lainnya  yang  dapat  menyebabkan diameter zona hambat tidak terlalu besar yaitu karena  pada  tahap  sebelum  pengujian,  belum dilakukan  pengukuran  pH  pada  media  NA ( Nutrient Agar ) yang akan digunakan sebagai pertumbuhan bakteri sehingga bakteri uji yang digunakan  kurang  bertumbuh  secara  optimal. Menurut  Haastuti  (2008),  beberapa  faktor abiotik yang dapat mempengaruhi pertumbuhan  bakteri,  antara  lain:  suhu, kelembaban, cahaya, pH, dan nutrisi. Apabila faktor-faktor  abiotik  tersebut  memenuhi syarat, sehingga optimum untuk  pertumbuhan
bakteri,  maka  bakteri  dapat  tumbuh  dan berkembang biak.
Penelitian  yang  pernah  dilakukan terkait  khasiat  tumbuhan  ini  yaitu  uji  daya hambat  aktivitas  antibakteri  ekstrak  akuades biji pangi memberikan hasil bahwa konsentrasi yang  bisa  menunjukkan  efek  penghambatan yang baik untuk bakteri Staphylococcus aureus adalah  konsentrasi  ekstrak  4%,  6%  dan  8% dengan aktivitas penghambatan yang kuat dan sangat  kuat,  untuk  bakteri Bacillus  cereus , konsentrasi  ekstrak  2%,  4%,  dan  6%  sudah menunjukkan  efek  penghambatan  yang  kuat dan  pada  konsentrasi  8%  sangat  kuat. Sedangkan untuk  bakteri gram  negatif seperti Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa konsentrasi  2%  belum  menunjukkan  aktivitas penghambatan  yang  baik,  tetapi  konsentrasi 4%, 6% dan 8% sudah menunjukkan aktivitas yang kuat (Makagansa et al ., 2015).
Penelitian yang dilakukan oleh Pinta et al. (2017)  yaitu  uji  Kadar  Hambat  Minimum (KHM)  dan  Kadar  Bunuh  Minimum  (KBM) dan  identifikasi  fitokimia  dari  ekstrak  etanol daun  pangi  terhadap  pertumbuhan  bakteri Escherichia  coli dengan  metode  dilusi.  KHM ekstrak  daun  pangi  terdapat  pada  konsentrasi 25% dan KBM ekstrak daun pangi belum dapat ditentukan  karena  sampai  konsentrasi  50% masih  menunjukan  adanya  pertumbuhan bakteri. Berdasarkan hasil skrinning fitokimia, diperoleh  hasil  bahwa  ekstrak  etanol  daun pangi mengandung senyawa flavonoid, saponin  dan  steroid.  Senyawa-senyawa  dari penelitian  tersebut  yang  memungkinkan bekerja  sebagai  antibakteri  terhadap  ketiga bakteri  uji  dari  penelitian  ini  yaitu S.aureus , E.coli dan P. aeruginosa .
Penelitian  yang berkaitan juga dengan penelitian  ini  adalah  dari  Mora et  al. (2014) tentang  isolasi  dan  uji  aktivitas  antibakteri ekstrak etil asetat daun kepayang. Uji aktivitas antibakteri  dilakukan  dengan  metode  difusi agar  pada  konsentrasi  5%,  10%  dan  20% terhadap  bakteri Staphylococcus  aureus dan Escherichia  coli aktivitasnya  dikategorikan tingkat  lemah  sedangkan  aktivitas  senyawa hasil  isolasi  yang  didapat  yaitu  senyawa steroid pada konsentrasi 1% dan 2% tidak
menunjukkan aktivitas terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli .

## KESIMPULAN
Berdasarkan  penelitian  yang  telah dilakukan  dapat  disimpulkan  bahwa  ekstrak etanol daun Pangi  ( Pangium edule Reinw  ex. Blume) memiliki aktivitas  sebagai  antibakteri terhadap Staphylococcus  aureus , Escherichia coli dan Pseudomonas  aeruginosa dengan metode  difusi.  Konsentrasi  4%,  6%,  dan  8% merupakan  konsentrasi  yang  termasuk  dalam golongan daya hambat sedang untuk menghambat ketiga bakteri uji tersebut.

## SARAN
Diharapkan untuk penelitian yang lebih lanjut  mengenai  metode  difusi  disk  atau cakram  Kirby-Bauer  dari  ekstrak  etanol  daun pangi  ( Pangium  edule Reinw.  ex  Blume) terhadap  bakteri  uji Staphylococcus  aureus , Escherichia coli dan Pseudomonas aeruginosa menggunakan  konsentrasi  yang  lebih  tinggi agar bisa mendapatkan kekuatan daya hambat yang  lebih  besar.  Juga  sebaiknya  dilakukan isolasi  senyawa  fitokimia  yang  bersifat antibakteri terlebih dahulu dari ekstrak tersebut sebelum dilakukan pengujian.

## DAFTAR PUSTAKA
Ajizah,  A.  2004.  Sensitivitas Salmonella typhimurium Terhadap  Ekstrak  Daun Psidium Guajava L . Bioscientiae . 1 ( 1 ).
Davis dan Stout. 1971. Disc Plate Method Of
Microbiological Antibiotic Essay. Journal Of Microbiology . 22 ( 4 ).
Dewi,  F.  K.  2010.  Aktivitas  Antibakteri
Ekstrak Etanol Buah Mengkudu (Morinda  citrifolia,  L)  terhadap  Bakteri Pembusuk  Daging  Segar.  [Skripsi]. USM, Surakarta.
Haastuti,  U.  S.  2008. Petunjuk  Praktikum
Mikrobiologi . Universitas Negeri Malang, Malang. Herlianawati, M. 2003. Uji Potensi Antibakteri Ekstrak Etanol Umbi Binahong (Anredera  cordifolia  (Tenore)  Steen) terhadap Staphylococcus  aureus ATCC 25923  dan Pseudomonas  aeruginosa ATCC  27853,  [skripsi].  Universitas Sanata Dharma, Depok.
Jawetz,  E.  Melnick,  J.  L  dan  Adelberg,  E.A.
2007. Mikrobiologi Kedokteran Edisi
23 . Salemba Medika, Jakarta.
Makagansa, C., Mamuaja, C. F., dan Mandey, L. C. 2015. Kajian Aktivitas Antibakteri Ekstrak  Biji  Pangi  ( Pangium  Edule
Reinw ) Terhadap Staphylococcus aureus,  Bacillus  cereus,  Pseudomonas aeruginosa Dan Escherichia coli Secara In  Vitro. Jurnal  Ilmu  dan  Teknologi Pangan . 3 ( 1 ): 16-25.
Mora, K., Emrizal., dan Mulyantika, E. 2014. Isolasi  Senyawa  dan  ekstrak  etil  asetat daun  kepayang  ( Pangium  edule Reinw ex. Blume) dan uji aktivitas antibakteri. Farmasains. 2 ( 3 ).
Nakade, D. B., Mabesh, S. K., Kiran, N. P., dan Vinayak,  S.  M.  2013.  Phytochemical Screening  and  Antibacterial  of  Western Region  Wild  Leaf Colocasia  esculania . International  Research  Journal  of Biology Sciences . 2 ( 10 ) : 2278-3202.
Pinta.,  Lolo,  W.  A.,  dan  Yamlean,  P.  V.  Y. 2017. Identifikasi Kandungan Fitokimia Dan  Uji  Kadar  Hambat  Minimum  Dan Kadar  Bunuh  Minimum  Ekstrak  Etanol Daun  Pangi  ( Pangium  Edule Reinw  ex. Blume)  Terhadap  Pertumbuhan  Bakteri Escherichia coli . Pharmacon . 6 ( 3 ): 260- 267.
Redwik, D. U. W., Simbala, H. E dan Edy, H. J.  Identifikasi  Fitokimia  dan  Uji  Daya
Hambat  Dari  Ekstrak  Etanol  Tangkai Buah  Pinang  Yaki  (Areca  vestiaria giseke) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus , Escherichia coli Dan
Pseudomonas aeruginosa .
Pharmacon . 8 ( 4 ): 89-98.
Roseoedarso. 1990. Pengantar Ekologi .
Remaja Rosdakarya, Bandung.
Rostinawati,  T.  2009.  Aktivitas  Antibakteri
Etanol Bunga Rosella ( Hibiscus sabdarifa L.) Terhadap Escherichia coli , Salmonella  typhi Dan Staphylococcus aureus Dengan  Metode  Difusi  Agar. Penelitian  Mandiri :  Fakultas  Famasi, Universitas Padjajaran.
Saifuddin, A., Rahayu, V., dan Teruna, H. Y.
2011. Standarisasi  Bahan  Obat  Alam. Graha Ilmu, Jakarta.
Sangi, M., Runtuwene, M. R. J., dan Simbala, H.  E.  I.  2008.  Analisis  Fitokimia
Tumbuhan Obat Di Kabupaten Minahasa Utara. Chem. Prog . 1 ( 1 ).
Simbala,  H.  E.  I.  2007.  Keanekaragaman Floristik Dan Pemanfaatannya Sebagai
Tumbuhan Obat Di Kawasan Konservasi II  Taman  Nasional  Bogani  Nani Wartabone (Kabupaten Bolaang Mongondow Sulawesi Utara). [disertasi].  Institut  Pertanian  Bogor, Bogor. Simbala, H. E. I., dan Edwin de Queljoe. 2015. Biodiversitas Tumbuhan Obat di Sulawesi  Utara .  CV.  Patra  Media Grafindo, Bandung.
Tangapo,  A. M. 2005. Efektivitas Antibakteri
Ekstrak Tumbuhan Daun Sendok ( Plantago major ) Terhadap Staphylococcus aureus Dan Pseudomonas aerugiosa [skripsi].
Universitas Sam Ratulangi, Manado.