Jurnal Pharmascience, Vol. 04, No.01, Februari 2017, hal: 102 - 108 ISSN-Print. 2355 – 5386 ISSN-Online. 2460-9560 http://jps.unlam.ac.id/

## Research Article

## Penentuan Kadar Flavonoid Total dan Uji Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Kasturi
( Mangifera casturi Kosterm.) dengan Metode DPPH
*Alifni Adha Bakti, Liling Triyasmono, Muhammad Ikhwan Rizki
Program Studi Farmasi, FMPA, Universitas Lambung Mangkurat, Banjarbaru Email : alifnibakti@gmail.com

## ABSTRAK
Bahan  alam  dapat  dijadikan  bahan  obat  baru  karena  mengadung  metabolit sekunder.  Di  Indonesia  terdapat  lebih  kurang  30.000  jenis  tumbuh-tumbuhan  yang mengandung  metabolit  sekunder,  lebih  kurang  7.500  jenis  diantaranya  termasuk tanaman  berkhasiat  obat.  Salah  satunya  adalah  tanaman  kasturi  ( Mangifera  casturi Kosterm.).  Tanaman M.  casturi merupakan  tumbuhan  khas  Kalimantan  Selatan  yang hanya  dimanfaatkan  oleh  masyarakat  untuk  dikonsumsi,  tidak  untuk  pengobatan. Penelitian  ini  bertujuan  untuk  menentukan  kadar  flavonoid  total  dan  aktivitas antioksidan  dari  ekstrak  etanol  daun M.  casturi .  Penelitian  ini  bersifat  non- eksperimental.  Sampel  yang  digunakan  adalah  daun M.  casturi yang  berasal  dari Kabupaten  Banjar,  Kalimantan  Selatan.  Penentuan  Kadar  flavonoid  total  dilakukan secara  spektrofotometri  UV-Vis  dengan  pereaksi  kompleks  AlCl 3 sedangkan  aktivitas antioksidan  ditentukan  dengan  metode  DPPH  (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil).  Hasil penelitian diperoleh kadar flavonoid total ekstrak etanol daun M. casturi sebesar 9,31 ± 0,08  %b/b  dan  aktivitas  antioksidan  dengan  nilai  IC 50 sebesar  34,558  ppm  sehingga termasuk dalam kategori antioksidan yang sangat aktif.
Kata kunci: Antioksidan, DPPH, Flavonoid Total, Mangifera casturi.

## ABSTRACT
Natural  resources  can  be  used  as  the  new  medicine  ingridients  because  it  has second metabolite.  In  Indonesia,  there are more than 30.000 kinds of  plants that  contain second  metabolite,  more  or  less  than  7.500  kinds  of  those  are  medicinal  plants.  One  of those  plants  is  Kasturi  (Mangifera  casturi  Kosterm.).  M.  casturi  is  a  typical  plant  from South Kalimantan that be used as a food not as a medicine. The purpose of this research is to determine the total of flavonoid content and anti-oxidant activity from ethanol extract of M.  casturi  leaves.  This  study  is  a  non-experimental  research.  Sample  which  used  in  this research  is  M.  casturi  Leaves  from  Banjar  Region,  South  Kalimantan.  The  research  for total Flavonoid content is done by UV-Vis spectrophotometric with AlCl 3 reagent complex
while the anti-oxidant activity is determined by DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) method. The result of this research are extract of M. casturi leaves obtains 9,31 ± 0,08 %b/b of total flavonoid  and  the  antioxidant  activity  result  with    IC 50 value  is  34,558  ppm,  so  it  can  be categorized as a very active anti-oxidant.
Keywords: Antioxidant, DPPH, Total Flavonoid , Mangifera casturi.

## I. PENDAHULUAN
Bahan  alam  dapat  dijadikan  bahan obat  baru  karena  mengandung  metabolit sekunder. Salah satu tumbuhan bahan alam yang  berkhasiat  obat  adalah  kasturi ( Mangifera  casturi Kosterm.).  Kasturi ( Mangifera  casturi Kosterm.)  merupakan tumbuhan khas Kalimantan Selatan.
Masyarakat    hanya    memanfaatkan buahnya    untuk    dikonsumsi  karena rasanya  yang  manis  dan  aromanya yang khas.  Menurut hasil penelitian Ling et al.,
(2009)  ekstrak  etanol  daun  mangga ( Mangifera  indica )  yang  memiliki  genus yang  sama  dengan M.  casturi ,  diketahui memiliki  aktivitas  sebagai  antioksidan. Tanaman dengan genus  yang sama diduga juga  memiliki  aktivitas yang  sama sehingga  kemungkinan  daun M.  casturi
juga mengandung senyawa flavonoid.
Flavonoid  yang  terkandung  dalam genus Mangifera merupakan  senyawa golongan  polifenol  yang  tersebar  di  alam dan  memiliki  sifat  sebagai  penangkal radikal  bebas  (Pourmourad et  al. ,  2006).
Radikal  bebas  yang  berlebih  dapat menyebabkan  stres  oksidatif,  sehingga menimbulkan terjadinya penyakit
degeneratif. Diharapkan dengan pemberian antioksidan  dapat  mencegah  timbulnya penyakit  degeneratif.  Antioksidan  sintetik diketahui  memiliki  efek  samping  apabila digunakan dalam jangka waktu yang lama, sehingga antioksidan alami dapat dijadikan sebagai pilihan (Zuhra et al. , 2008).
Penelitian  ini  bertujuan  untuk menentukan  kadar  flavonoid  total  yang terkandung  dalam  ekstrak  etanol  daun M. casturi dan untuk mengetahui kemampuan antioksidan  dari  ekstrak  etanol  daun M. casturi. Aktivitas  antioksidan  dari  ekstrak etanol  daun M.  casturi dapat  dinilai  dari nilai Inhibitor  Concentration 50  (IC 50 ) menggunakan  metode  DPPH.  Penentuan kadar flavonoid total menggunakan metode spektrofotometri UV-Vis.

## II. METODE

## A. Alat dan Bahan penelitian
Alat-alat  yang  digunakan  adalah alat  gelas, vacuum  rotary  evaporator (RV 06-ML  IKA  WERKE  model  VR-2B), stopwatch,  dan  spektrofotometer  UV-Vis (Spectronic Genesys 10uv).
Bahan-bahan yang digunakan adalah Daun M. casturi , etanol 70% teknis,
etanol p.a, metanol p.a, kuersetin, pereaksi DPPH  (2,2-difenil-1-pikrilhidrazin), n - butanol,  AlCl 3 10%,  asam  asetat,  asam sulfat  pekat,  amonia,  aquades,  HCl, NaOH, Pb  Asetat  10%,  aluminium  foil, dan kertas saring.
B. Cara Kerja
1.   Pembuatan  Ekstrak  Etanol  Daun M.
casturi
Sebanyak 1,0 kg serbuk diekstraksi dengan  metode  maserasi  menggunakan etanol  70%  dengan  perbandingan  1  :  2,5. Ekstrak  cair  disaring  dengan  kertas Whatman Nomor 1. Ekstrak cair diuapkan pelarutnya menggunakan rotary evaporator dengan  suhu  60 o C  dan diuapkan diatas waterbath pada suhu 60 o C hingga  diperoleh  ekstrak  kental  dengan bobot tetap (Jamshidi et al., 2014).
2. Identifikasi Flavonoid
Identifikasi flavonoid yang dilakukan  pada  penelitian  ini dilakukan dengan  tiga  cara  yaitu  uji  alkalin,  uji  Pb asetat, dan uji amonia menggunakan keras saring.
3. Penetapan Kadar Flavonoid Total
a. Penentuan Panjang Gelombang Maksimum
Larutan kuersetin 100 ppm diambil sebanyak 1 mL, ditambahkan dengan 1 mL AlCl 3 10%  dan  8  mL  asam  asetat  5%. Lakukan pembacaan dengan Spektrofotometri  UV-Vis  pada  panjang gelombang 350-450 nm (Das et al. , 2013).

## b. Penentuan Operating Time
Larutan kuersetin 100 ppm diambil sebanyak 1 mL ditambahkan dengan 1 mL AlCl 3 10%  dan  8  mL  asam  asetat  5%. Larutan  tersebut  diukur  absorbansinya pada  panjang  gelombang  yang  telah diperoleh  dengan  interval  pada  waktu  2 menit  sampai  diperolah  absorbansi  yang stabil.
c. Penentuan Kurva Baku Kuersetin
Larutan  seri  kadar  dibuat  dengan menggunakan  kuersetin  sebagai  baku standar.  Dibuat  seri  kadar  sebesar  60,  80, 100,  120  dan  140  ppm.  Sebanyak  1  mL larutan  seri  kadar  dari  masing-masing konsentrasi dimasukkan, direaksikan dengan  1  mL  AlCl 3 10%  dan  8  mL  asam asetat  5%. Didiamkan  selama  16  menit pembacaan  absorbansi  seri  kadar  dengan menggunakan  spektrofotometri  UV-Vis pada panjang gelombang maksimum.
d. Penentuan Flavonoid Total
Larutan  ekstrak  1000  ppm  diambil sebanyak 1 mL, ditambahkan dengan 1 mL AlCl 3 10%  dan  8  mL  asam  asetat  5% didiamkan  selama  16  menit. Dilakukan pembacaan absorbansi pada panjang gelombang maksimum.
e. Penentuan  Persen  Perolehan  Kembali atau Persen Recovery
Larutan ekstrak diambil sebanyak 1 mL,  ditambahkan  1  mL  larutan  kuarsetin 40  ppm.  Ditambahkan  1  mL  AlCl 3 10% dan  8  mL  asam  asetat  5%  d idiamkan
selama  16  menit,  lakukan  3x  replikasi.
Rentang  persen  perolehan  kemabali  yang dapat  diterima  adalah  80%  -  110% (Gonzales et al., 2010).
4. Penentuan Aktivitas Antioksidan dengan Metode DPPH
a. Penentuan Panjang Gelombang
Maksimum
Larutan  blanko  DPPH  0,4  mM sebanyak  1  mL  dalam  metanol  p.a. ditambahkan  sampai  tanda  batas  metanol p.a  pada  labu  ukur  5  mL  kemudian didiamkan  selama  30  menit  ditempat gelap.  Serapan  larutan  diukur  dengan spektrofotometer  UV-Vis  pada  panjang gelombang 450-550 nm (Molyneux, 2004; Nihlati et al. , 2008).
b. Penentuan Operating Time
Larutan DPPH 0,4 mM sebanyak 1 mL  ditambahkan  larutan  standar  kuersetin 6 ppm sampai tanda batas  pada labu ukur
5  mL.  Larutan  dibaca  absorbansinya  pada panjang  gelombang  maksimum  516  nm dengan  interval  waktu  2  menit  (Maulina,
2014).
c. Pembuatan Larutan Kuersetin Sebagai
Pembanding
Larutan  seri  kadar  dibuat  dengan menggunakan  kuersetin  sebagai  baku standar  dengan  kadar  0,5;  1;  2;  4;  dan  8 ppm.  Sebanyak  1  mL  larutan  standar  0,4 mM ditambahkan larutan standar kuersetin sampai  tanda  batas  pada  labu  ukur  5  mL, kemudian  didiamkan  di  tempat  gelap
selama  26  menit.  Absorbansi  dibaca  pada panjang  gelombang  maksimum  516  nm (Nihlati et al. , 2008).
d. Penentuan  nilai  IC 50 Ekstrak  Etanol
Daun M. casturi
Larutan  ekstrak  1000  ppm  dibuat konsentrasi  10,  20,  30,  40  dan  50  ppm. Sebanyak  1  mL  larutan  DPPH  0,4  mM ditambahkan  dengan  tiap-tiap  konsentrasi larutan sampel sampai tanda batas. Larutan didiamkan  di  tempat  gelap  selama  26 menit.  Larutan  dibaca  absorbansi  pada panjang gelombang maksimum 516 nm.

## III. HASIL DAN PEMBAHASAN
Serbuk  kering  daun M.  casturi yang  telah  di  maserasi  sebanyak  1,0  kg menghasilkan  persen  rendemen  yaitu 15,01%. Identifikasi flavonoid pada penelitian menunjukkan hasil positif mengandung  flavonoid.  Penetapan  kadar flavonoid  total  ekstrak  etanol  daun M. casturi menggunakan  spektrofotometer UV-Vis dengan metode kolorimetri .
Panjang  gelombang  maksimum  kuersetin yang  didapatkan  yaitu  416  nm  dengan o perating  time yang  diperoleh  pada menit ke-16.  Kurva  baku  kuersetin  dengan konsentrasi 60, 80, 100, 120, dan 140 ppm didapatkan  regresi  y  =  0,0071x  –  0,2314 dengan  nilai  korelasi  (r)  sebesar  0,999. Hasil  kadar  flavonoid  total  ekstrak  etanol daun M.  casturi yaitu  9,31  ±  0,08  %b/b. Dapat dilihat pada tabel I.

## Tabel I. Hasil perhitungan kadar flavonoid
total Sampel Absorbansi sampel Kandungan Flavonoid Total (b%/b) 𝑥 ̅  Kandungan flavonoid total (b%/b) ±SD RSD (%) Ekstrak Etanol Daun M. casturi 0,427 9,27 9,31 ± 0,08 0,859 0,427 9,27 0,437 9,41 𝑥 ̅  Kandungan flavonoid total (b%/b) ±SD
RSD (%) 9,31 ± 0,08 0,859 Penentuan persen perolehan kembali  (persen recovery )  juga  dilakukan sebagai  salah  satu  validasi  metode  dari presisi. Persen perolehan kembali dihitung untuk  mengetahui  keakuratan  dari  kadar flavonoid  total  yang  diperoleh.  Persen perolehan  kembali  yang  didapat  setelah dilakukan  3  kali  replikasi  yaitu  94,452%. Hasil ini sudah sesuai literatur yaitu 80% - 110% (Gonzales et al., 2010).
Panjang  gelombang  maksimum DPPH  yang  didapatkan  yaitu  516  nm dengan o perating  time pada  menit  ke-26.
Kuersetin  digunakan  sebagai  pembanding. Dapat  dilihat  pada  tabel  dan  grafik dibawah ini.
Tabel II.   Hasil
Perhitungan Persen Inhibisi  Larutan  Pembanding Kuersetin Sampel Konsentrasi (ppm) Persen Inhibisi (%) IC50 (ppm) 0,5 1,16 1 12,386 Kuersetin 2 19,723 5,304 4 39,573 8 74,16%
Gambar 1.  Grafik  hubungan  konsentrasi kuersetin vs persen inhibisi
Berdasarkan  persamaan  linier  diperoleh nilai  IC 50 kuersetin  sebesar  5,304  ppm. Hasil  tersebut  menunjukkan  kuersetin termasuk  dalam  golongan  antioksidan yang sangat aktif (Jun et al., 2003).
Hasil persen inhibisi ekstrak etanol daun M. casturi dapat dilihat pada tabel III dan  grafik  hubungan  konsentrasi  ekstrak etanol  daun M.  Casturi dengan  persen inhibisi dapat dilihat pada Gambar 2.
Tabel III. Hasil  perhitungan  persen inhibisi  ekstrak  etanol  daun M. casturi Sampel Konsentrasi (ppm) Persen Inhibisi (%) IC50 (ppm) Ekstrak 10 24,946 Etanol 20 29,534 Daun 30 46,125 34,558 M. casturi 40 57,550
50 65,359
0 20 40 60 80 0,5 1 2 4 8 Per sen in h ib is i Konsentrasi Kuersetin (ppm ) y = 9,4606 x – 0,1842 r = 0,997
Gambar 2. Grafik persen inhibisi ekstrak etanol daun M. casturi
Penentuan  aktivitas  antioksidan ekstrak  etanol  daun M.  casturi didapatkan persamaan  regresi  yaitu  y  =  1,080  x  + 12,677  dengan  koefisien  korelasi  (r) sebesar  0,991.  Nilai  ini  menunjukkan bahwa  antara  konsentrasi  dan  absorbansi terdapat korelasi sebesar 99,1%. Nilai IC 50 yang  diperoleh  sebesar  34,558  ppm  dan termasuk  dalam  golongan  antioksidan yang  sangat  aktif  (Jun et  al., 2003).  Hasil tersebut  sejalan  dengan  penelitian  yang telah  dilakukan  oleh  Marzuki  (2016)  pada ekstrak  etanol  kulit  batang M.  casturi memiliki  tingkat  kekuatan  antioksidan sangat aktif yaitu sebesar 26,59 ppm.

## IV. KESIMPULAN
Berdasarkan  hasil  penelitian,  dapat disimpulkan  bahwa  Kadar  total  flavonoid dari ekstrak etanol daun M. casturi adalah 9,31  ±  0,08  %b/b  dan  Nilai  IC 50 untuk ekstrak  etanol  daun M.  casturi sebesar 34,558 ppm yang termasuk dalam golongan antioksidan yang sangat aktif.

## DAFTAR PUSTAKA
Das,  N.,  Md.  E.  Islam.,  N.  Jahan.,  M.  S. Islam.,  A.  Khan,  Md.  R.  Islam,  & Mst.  S.  Parvin.  2014.  Antioxidant Activities  of  Ethanol  Extracts  and
Fractions  of Crescentia  cujete Leaves  and  Stembark  and  The Involvement of Phenolic Compounds. BMC  Complementary and Alternative Medicine. 14-45.
Gonzales,  A.G.,  M.  A.  Herrador,  &  A.G.
Asuero. 2010. Intra-laboratory
Assesment  of  Method  Accuracy (Trueness  and  Precision)  by  Using Validation  Standarts. Talanta. 82 : 1995-1998.
Jamshidi,  M.,  E. Shabani.,  Z.  Hashemi,  &
M. A. Ebrahimzadeh. 2014.
Evaluation  of  Three  Method  for
The Extraction of Antioxidant from Leaf  and  Aerial  Parts  of Lythrun salicaria L. (Lythraceae). International Food Research Journal . 2 : 783-78.
Jun, M. H. Y., J. Y, Yu, X. Fong, C. Wan,
S., & C. T. Yang. 2003.
Comparison of Antioxidant
Activities  of  Isoflavones  from Kudzu  Root  ( Pueraria  labata Ohwl.). Journal  of  Food  Sciences . 68 : 2117-2122.
Ling, L. T., S. Yap., A. K. Radhakrishnan, & T. Subramanian. 2009. Standardised Mangifera indica Extract  Is  an  Ideal  Antioxidant.
Food Chemistry . 113 : 1154-1159.
Marzuki. 2016. Penentuan Kadar Flavonoid  Total  dan  Aktivitas Antioksidan  Ekstrak  Etanol  Kulit Batang Kasturi (Mangifera casturi). Skripsi  Program  Studi Farmasi. Universitas Lambung Mangkurat. Banjarbaru.
Maulina,  R.  2014.  Penentuan  Nilai Sun
Protection Factor (SPF) dan
Aktivitas Antioksidan Ekstrak
Kulit  Batang  Bangkal  ( Nauclea subdita )  secara  in  vitro.  Skripsi, Fakultas Matematika dan
0 20 40 60 80 0 20 40 60 P er sen inh ibi si Konsentrasi (ppm) y = 1,080 x + 12,677 r = 0,991

## Pengetahuan  Alam,  Universitas
Lambung Mangkurat, Banjarbaru.
Molyneux,  P.  2004.  The  Use  of  Stable Free Radical Diphenylpicrylhydrazyl (DPPH) for Estimating Antioxidant
Activity. Songklanakarin  Journal
of Sciences. 26 : 211-219.
Nihlati,  A.  P.,  Rohman,  A,  &  T.  Hertiani. 2008.  Daya  Antioksidan  Ekstrak Etanol  Rimpang  Temu  Kunci
( Boesenbergia  pandurata (Roxb.)
Schletch) dengan Metode Penangkapam  Radikal  DPPH, J.
Nat. Med . 62 : 207-210.
Pourmorad,  F.,  S.J,  Hosseinimehr,  &  N,
Shahabimajd.  2008.  Antioxidant Activity,  Phenol  and  Flavonoid
Contents  of  Some  Selected  Iranian Medicinal  Plants. African  Journal of Biotechnology . 5 : 1142-1145.
Zuhra, C. F., J.B. Tarigan, & H. Sitohang.
2008. Aktivitas Antioksidan Senyawa  Flavonoid  dari  Daun
Katuk  ( Sauropus  androgunus (L) Merr.). Jurnal Biologi Sumatera . 1 : 7-10.