## UJI AKTIVITAS ANTIBAKTERI ISOLAT AKTINOMISETES ASAL TANAH HUTAN LARANGAN ADAT GHIMBO POTAI, KABUPATEN KAMPAR, PROVINSI RIAU, TERHADAP Escherichia coli DAN Staphylococcus aureus
Elsie, M.Si 1 , Nur’Atika, S.Si 1 , dan Israwati Harahap, M.Si 1
1 Program Studi Biologi, Fakultas Matematika, Ilmu Pengetahuan Alam, dan Kesehatan,
Universitas Muhammadiyah Riau, Pekanbaru (2829), Riau, Indonesia
Email: elsie@umri.ac.id

## Abstrak
Tujuan  penelitian  ini  untuk  menguji  aktivitas  antibakteri  isolat  aktinomisetes  yang telah diisolasi dari tanah Hutan Larangan Adat Ghimbo Potai, Kabupaten Kampar, Provinsi Riau.  Penelitian  dilakukan  pada  bulan  April  sampai  dengan  Juli  tahun  2016.  Uji  aktivitas dilakukan menggunakan metode difusi agar terhadap 2 bakteri uji yaitu Escherichia coli and Staphylococcus aureus. Hasil uji aktivitas isolat aktinomisetes NA-1 dan NA-2 menunjukkan bahwa hanya isolat NA-1  yang memiliki kemampuan menghambat pertumbuhan bakteri S. aureus dengan diameter zona penghambatan sebesar 7 mm.
Keywords: Actinomycetes, Antibacterial, Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

## PENDAHULUAN
Tingginya
angka kesakitan
( morbidity )  dan  kematian  ( mortality )  di negara  berkembang  disebabkan  oleh penyakit  infeksi. Mikroba  penyebab penyakit  infeksi  diantaranya  adalah  virus, jamur,  dan  bakteri  (Darmadi,  2008). Bakteri telah ditemukan sebagai organisme di  bumi  sejak  triliunan  tahun  yang  lalu. Untuk  dapat  bertahan  hidup,  bakteri mengembangkan  mekanisme  resistensi terhadap  antibiotik.  Tidak  mengherankan bila  sampai  saat  ini  beberapa  bakteri menjadi resisten terhadap agen antimikroba alami yang telah dikembangkan sejak beberapa puluh tahun yang  lalu. S.  aureus misalnya,  resisten terhadap  metisilin,  merupakan  bakteri penyebab beberapa penyakit infeksi setiap tahunnya  (Demain  &  Sanchez,  2009). Beberapa  kelompok  bakteri  Gram  positif ( Enterococcus dan Streptococcus )  dan Gram  negatif  ( Enterobacter , Eschericia ,
Serratia , Klebsiella , Pseudomonas dan Salmonella )  menjadi  penyebab  infeksi nosokomial  (Cragg  &  Newman,  2001). Untuk  itu  diperlukan  antibiotik-antibiotik baru  untuk  dapat  melawan  secara  aktif bakteri patogen yang telah resisten.
Diantara  mikroorganisme  yang memiliki  nilai  penting  di  dalam  industri, aktinomisetes  merupakan  produsen  utama antibiotik dan beberapa senyawa metabolit sekunder.  Populasi  aktinomisetes  menjadi bagian  penyusun  organisme  tanah,  dari berbagai jenis tanah. Mikroba ini banyak di dalam  tanah,  di  laut,  di  ekosistem  darat, dan  bersimbiosis  dengan  tanaman  atau organisme lainnya. Selain sebagai penghasil antibiotik dan senyawa metabolit sekunder,  aktinomisetes  juga  merupakan produsen enzim selulase, silanase, pektinase,  amilase,  lipase,  dan  protease. Lebih lanjut, aktinomisetes juga menghasilkan siderofor yang dapat diaplikasikan  di  bidang  medis  dan
pertanian. Senyawa bioaktif yang dihasilkan  oleh  aktinomisetes  memiliki peran  sebagai  senyawa  antimikroba, antitumor,  antiinflamasi,  dan  antivirus (Rana & Salam, 2014).
Beberapa penelitian telah dilakukan  dalam  mengeksplorasi  potensi aktinomisetes diantaranya dari hasil penelitian  Rana  &  Salam  (2014),  dari  23 isolat aktinomisetes yang diuji 7 diantaranya  memberikan  penghambatan yang  signifikan  terhadap  bakteri  Gram positif  ( S.  aureus )  dan  Gram  negatif ( Klebsiella pneumonia , Salmonella enterica  typhimurium ,  dan E.  coli ),  serta kelompok  cendawan  ( Trichodermaviridae dan Altenaria  alternata ).    Sunaryanto et. al. (2010)  telah  berhasil  mendapatkan  29 isolat  aktinomisetes  yang  diisolasi  dari berbagai  sampel  sedimen  dan  setelah dilakukan  uji  terhadap E.  coli ATCC 25922, S.  aureus ATCC  25923, P. aeruginosa ATCC 27853, Bacillus subtilis ATCC 66923, Candida albicans BIOMCC 0122,  dan Aspergillus  niger BIOMCC 0134.    Penelitian  ini  bertujuan  untuk menguji  aktivitas  antibakteri  2  isolat aktinomisetes (NA-1 dan NA-2) yang telah diisolasi  dari  tanah  Hutan  Larangan  Adat Ghimbo Potai, Kabupaten Kampar, Provinsi  Riau, terhadap bakteri  uji E. coli dan S. aureus .

## METODE PENELITIAN
Sampel Isolat Aktinomisetes dan Bakteri Uji.
Isolat aktinomisetes yang digunakan  yaitu  NA-1  dan  NA-2  telah disolasi  sebelumnya  dari  tanah  Hutan Larangan  Adat  Ghimbo  Potai,  Kabupaten Kampar, Provinsi Riau sedangkan  bakteri uji  yang  digunakan  adalah E.  coli dan S. aureus .  Penelitian ini dilakukan dari Bulan April sampai dengan  Bulan Juli 2016 dan
sampel  diuji  di  Laboratorium  Biologi, Fakultas MIPA dan Kesehatan, Universitas Muhammadiyah Riau.

## Peremajaan  dan  Produksi  Senyawa Antibakteri Isolat Aktinomisetes
Isolat aktinomisetes diinokulasikan pada  media Starch  Casein  Agar (SCA) yang  telah  ditambahkan 0.05  mg/ml nistatin  sebagai  antifungi dengan  metode cawan gores, kemudian diinkubasi selama selama  7  –  14  hari  pada suhu  28 o C . Produksi  senyawa  antibakteri  dilakukan dengan cara menginokulasikan isolat pada media Starch  Casein  Broth 9  mL menggunakan ose dan diinkubasikan pada suhu 30 o C selama 7 – 14 hari.

## Uji Aktivitas Senyawa Antibakteri Isolat Aktinomisetes
Uji  aktivitas  senyawa  antibakteri isolat aktinomisetes terhadap bakteri uji (E. coli dan S.  aureus) dilakukan    dengan metode difusi.  Kekeruhan suspensi bakteri uji  disamakan  dengan  kekeruhan  standar Mc.  Farland  dan  diseka  ke  media  NA sampai  merata  di  permukaan  media  NA. Setelah  media  mengering,  kertas  saring steril  yang  berdiameter  8  mm  yang  telah dicelupkan ke dalam filtrat isolat aktinomisetes diletakkan di atas media NA yang  telah  diinokulasikan  bakteri  uji, selanjutnya  diinkubasi  pada  suhu  30 o C selama 24 jam. Pengamatan terhadap zona hambat  (zona  bening)  yang  terbentuk dilakukan dengan cara mengukur diameter zona  bening  dikurangi  dengan  diameter kertas  saring  (Willey et  al .,  2008).  Bila diameter  daerah  hambatan  sebesar  5  -  14 mm  maka  aktivitas  penghambatannya dikategorikan lemah, diameter 15 - 24 mm dikategorikan  sedang  dan  bila  lebih  dari atau  sama  dengan  25  mm  dikategorikan aktivitas daya hambatnya kuat (Nedialkova
& Naidenova, 2005).

## Analisis Data
Data hasil pengukuran zona bening yang terbentuk dianalisis secara deskriptif untuk  menentukan  penghambatan  yang diberikan  oleh  kedua  isolat  aktinomisetes
terhadap bakteri uji E. coli dan S. aureus.

## HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil uji aktivitas antibakteri isolat aktinomisetes  (NA-1  dan  NA-2) terhadap bakteri E.  coli dan S.aureus dapat  dilihat pada Tabel 1 berikut.
Tabel 1. Hasil Uji Aktivitas Antibakteri Isolat NA-1 dan NA-2 No. Kode isolat Bakteri uji Zona bening Diameter Kriteria 1. NA-1 E. coli S. aureus Tidak ada Ada - 7 mm - Lemah 2. NA-2 E. coli S. areus Tidak ada Tidak ada - - - - Hasil uji aktivitas antibakteri kedua isolat  aktinomisetes ( lihat Tabel  1) menunjukkan  bahwa  hanya  isolat  NA-1 yang  mampu  menghambat  bakteri  uji S. aureus .    Hal  ini  mengindikasikan  bahwa isolat  NA-1  memiliki  potensi  sebagai penghasil  senyawa  antibakteri  untuk menghambat  salah  satu  bakteri  Gram positif dengan cara mensekresikan senyawa  tersebut  ke  media  ( lihat Gambar
1).    Susilowati et  al. (2007)  melaporkan
bahwa dari 19 isolat  yang digunakan, dua diantaranya  memberikan  penghambatan terbaik  dengan  zona  hambat  11  dan  11,5 mm.  Penghambatan  terhadap  bakteri  uji yang digunakan ( Eschericia coli K1.1. dan Pseudomonas  pseuodomallei 02  05)  yang digunakan diduga karena adanya senyawa antibakteri  yang  disekresikan  ke  media. Semakin banyak senyawa antibakteri yang disekresikan ke media maka semakin besar zona hambat yang terbentuk.
Gambar 1. Hasil uji aktivitas antibakteri isolat NA-1 terhadap S. aureus pada media Nutrient Agar (NA)
Baik  isolat  NA-1  maupun  NA-2 tidak  ada  yang  mampu  memberikan penghambatan  terhadap  pertumbuhan E. coli sebagai  bakteri  uji.    Hal  ini  dapat terjadi  kemungkinan  karena  senyawa
antibakteri  yang  disekresikan  oleh  kedua isolat  aktinomisetes  tersebut  jumlahnya masih  sedikit  atau  kemungkinan  isolat tersebut  memiliki  potensi  lain  yang  tidak hanya  menghasilkan  senyawa  antibakteri.
Menurut    Deepa et    al .      (2013), Actinomycetes menghasilkan senyawa bioaktif berupa metabolit sekunder seperti antibiotika dan agen antitumor.  Metabolit tersebut  diketahui  memiliki  aktivitas sebagai antibakteri, antifungi, antioksidan, neuritogenik,  antikanker,  anti  malaria  dan anti  inflamasi.    Ambarwati  dan  Azizah (2009)  dalam  penelitiannya  juga  berhasil mengisolasi  11  isolat  aktinomisetes dari tanah  sawah  dan  tiga  isolat  diantaranya mampu  menghambat  pertumbuhan S. aureus ATCC  25923,  yaitu  isolat  SS13 dengan diameter daerah hambatan sebesar 14,66 mm (sedang), isolat SR1 = 24,66 mm (kuat) dan isolat SR6 = 5,00 mm (lemah). Namun  demikian  tidak  ada  satupun  isolat yang  mampu  menghambat E.  coli ATCC 35218.
Pada  Gambar  1  terlihat  zona bening yang terbentuk dari hasil uji isolat NA-1  terhadap S.  aureus sebesar  7  mm.
Besarnya penghambatan tersebut dikategorikan lemah. Menurut
Nedialkova  &  Naidenova  (2005),  jika diameter daerah hambatan sebesar 5  - 14 mm  maka  aktivitas  penghambatannya dikategorikan lemah, diameter 15 - 24 mm dikategorikan  sedang  dan  lebih  dari  atau sama  dengan  25  mm  dikategorikan aktivitas daya hambatnya kuat.

## KESIMPULAN DAN SARAN
Isolat  aktinomisetes  NA-1  yang telah  diisolasi  dari  sampel  tanah  Hutan Larangan  Adat  Ghimbo  Potai,  Kabupaten Kampar, Provinsi
Riau, mampu menghambat  pertumbuhan S.  aureus
dengan  zona  hambatan  sebesar  7  mm (kategori penghambatan lemah).
Sementara  kedua  isolat  tersebut  tidak  ada yang mampu menghambat pertumbuhan E. coli. Perlu  dilakukan  penelitian  lanjutan untuk  menguji  aktivitas  kedua  isolat
tersebut  sebagai  senyawa  antifungi  dan karakterisasi kondisi optimum (temperature, pH, dan media pertumbuhan) untuk produksi isolat aktinomisetes.

## DAFTAR PUSTAKA
Cragg, G.M. and D. J. Newman. Medicinals for  The  Millennia.  The  Historic Record.  Ann  NY  Acad.  Sci .  (2001)
953a, 3 – 25.
Darmadi, 2008. Infeksi Nosokomial Problematika dan Pengendaliannya ,
5, Jakarta, Salemba Medika.
Deepa,  S.,  K.  Kanimozhi,  and  A.
Panneerselvam.  2013. 16S  rDNA Phylogenetic Analysis of Actinomycetes Isolated from Marine Environment Associated with Antimicrobial Activities. Hygeia.J.D.  Med .  5  (2)  October
2013, 43-50.
Demain, A.L. and S. Sanchez.  Microbial
Drug Discovery: 80 Years of
Progress. The Journal of Antibiotics
(2009) 62: 5 – 16.
Nedialkova,  D.  &  M.  Naidenova.  2005.
Screening the Antimicrobial Activity  of Actinomycetes Strains Isolated  from  Antarctica, Journal of Culture Collections , 4, 29-35. Rana, S. and M.D. Salam. Antimicrobial Potential of Actinomycetes Isolated from Soil Samples of Punjab, India. Journal of Microbiology & Experimentatio n. (2014) Vol 1, issue
2.
Sunaryanto, R., B. Marwoto, T.T. Irawadi, Z.A. Mas’ud, and L. Hartoto. 2010.
Isolation and Characterization of Antimicrobial Substance from Marine Streptomyces sp. Jurnal Mikrobiologi Indonesia Vol 4 (2): 84 – 89.
Susilowati,  D.  N.,  R.D.  Hastuti,  dan  E.
Yuniarti. 2007. Isolasi dan Karakterisasi Aktinomisetes Penghasil  Antibakteri  Enteropatogen Eschericia  coli K1.1, Pseudomonas
pseuodomallei 02  05,  dan Listeria monocytogenes 5407. Jurnal AgroBiogen 3(1): 15 – 23.
Willey,  J.M.,  L.M.  Sherwood,  and  C.J.
Woolverton.  2008. Prescott,  Haley, and  Klein’s  Microbiology .  7ed. McGraw Hill, Boston.