## Karakterisasi Tiga Tumbuhan Obat Antihiperkolesterolemia dengan Pendekatan Berbasis Profil Anatomi, Histokimia, dan Fitokimia
Characterization of Three Medicinal Plants of Antihypercholesterolemic with Anatomical, Histochemical, and Phytochemical Profile-Based Approaches
Reny Syahruni 1 , Abdul Halim Umar 1* , Nur Hidayah Asnar 1
1 Division of Pharmaceutical Biology, College of Pharmaceutical Sciences Makassar (Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi Makassar), Jalan Perintis Kemerdekaan Km. 13.7 Daya, Makassar 90242, South Sulawesi, Indonesia. *E-mail: ahuhalim76@yahoo.com
Received: 5 Agustus 2022; Accepted: 13 Desember 2022; Published: 31 Desember 2022

## Abstrak
Karakterisasi  tumbuhan  obat  sangat  penting  divalidasi  untuk  menjamin  pemanfaatannya,  terutama  jika tumbuhan  obat  yang  akan  digunakan  hanya  menggunakan  organ  tertentu.  Tujuan  penelitian  ini  untuk memperoleh  informasi  terkait  jenis  struktur  sekretori  dan  golongan  metabolit  sekunder  yang diakumulasikannya,  serta  profil  fitokimia  dari  tiga  tumbuhan  antihiperkolesterolemia.  Penelitian  ini menggunakan  tiga  organ  (daun,  kulit  batang,  dan  akar)  dari  tiga  tumbuhan Moringa  oleifera , Muntingia calabura , dan Annona muricata dengan metode pengamatan anatomi, histokimia, dan fitokimia . Uji anatomi dan  histokimia  dilakukan  dengan  pengamatan  pada  sayatan  sampel  segar  untuk  melihat  adanya  struktur sekretori (rongga sekretori, trikoma glandular, dan sel idioblas). Uji histokimia, pada sayatan sampel segar menggunakan  pereaksi  spesifik  untuk  mengetahui  struktur  sekretori  penghasil/pengakumulasi  metabolit sekunder  (alkaloid,  fenolik,  lipofilik,  dan  terpenoid),  sedangkan  uji  fitokimia  dilakukan  untuk mengidentifikasi  metabolit  sekunder  tersebut  dengan  teknik  kromatografi  lapis  tipis  (kualitatif).  Hasil penelitian  menunjukkan  bahwa  ketiga  tumbuhan  obat  antihiperkolesterolemia  terdapat  beberapa  struktur sekretori  antara  lain: trikoma kelenjar,  sel  idioblas, dan rongga  sekretori,  serta  teridentifikasi mengandung metabolit sekunder alkaloid, fenolik, lipofilik, dan terpenoid. Temuan ini didukung hasil kromatografi dari ekstrak ketiga spesies. Teknik berbasis profil anatomi, histokimia, dan fitokimia dapat diaplikasikan untuk mengidentifikasi organ tanaman dengan kandungan metabolit sekunder spesifik.
Kata Kunci :   Histolokalisasi,  Kromatografi, Moringa  oleifera , Muntingia  calabura , Annona  muricata , Struktur Sekretori

## Abstract
It is very important to validate the characterization of medicinal plants to ensure their use, especially if the medicinal plants are to be used only for certain organs. This study aimed to obtain information related to the type of  secretory  structure  and  the  secondary  metabolites  they  accumulated, as  well  as the phytochemical profile of three antihypercholesterolemic plants. This study used three organs (leaves, stem bark, and roots) from  Moringa  oleifera,  Muntingia  calabura,  and  Annona  muricata  with  anatomical,  histochemical,  and phytochemical methods. Anatomical and histochemical tests were carried out by observing the fresh sample incision to see the presence of secretory structures (secretory cavities, glandular trichomes, idioblast cells). Histochemical  tests  were  carried  out  on  fresh  sample  incision  using  specific  reagents  to  determine  the secretory  structure  producing/accumulating  secondary  metabolites  (alkaloids,  phenolics,  lipophilic,  and terpenoids), while phytochemical tests were carried out to identify their secondary metabolites with thin layer chromatographic technique (qualitative). The results showed that the three antihypercholesterolemic plants contained several secretory structures, namely: glandular trichomes, idioblast cells, and secretory cavities, and were identified as containing secondary metabolites of alkaloids, phenolics, lipophilic, and terpenoids. This finding is supported by the chromatographic results of the extracts of the three species. Techniques based on anatomical, histochemical, and phytochemical profiles can be applied to identify plant organs containing specific secondary metabolites
Keywords: Histolocalization,  Chromatography,  Moringa oleifera , Muntingia calabura , Annona muricata , Secretory Structure

## PENDAHULUAN
Hiperkolesterolemia adalah suatu kondisi metabolik  yang  ditandai  dengan  tingginya kadar  kolesterol  plasma  darah  dan  dapat menjadi  faktor    pemicu  berbagai  penyakit kardiovaskular  (Araya-Quintanilla  et  al., 2019). Penyakit kardiovaskular akibat aterosklerosis  dinding  pembuluh  darah  dan trombosis merupakan penyebab utama kematian di dunia. Secara global, pada tahun 2019, ischemia  heart  disease (IHD)  menjadi penyebab  8,54  juta  kematian,  3,78  juta diantaranya disebabkan oleh kadar kolesterol LDL ( Low-Density Lipoprotein ) plasma yang tinggi (Pirillo et al., 2021).
Terapi  farmakologi  hiperkolesterolemia dengan  pemberian  obat  golongan  statin  yang merupakan lini pertama saja tidak akan dapat mencapai  target  penurunan  kadar  kolesterol, adapun  penggunaan  obat  simvastatin  secara umum  memiliki  efek  samping  nyeri  kepala dan  otot,  rambut  rontok  ( reversible ),  reaksi kulit, dan rasa letih (Tjay dan Raharja, 2015). Pemberian obat kolesterol sintetik memberikan  efek  samping  yang  cukup banyak,  menjadi  alasan  lebih  disukainya pemilihan  pengobatan  herbal.  Penggunaan obat herbal pada umumnya dinilai lebih aman dari  penggunaan  obat  sintetik.  Hal  ini disebabkan karena obat herbal memiliki  efek samping yang relatif lebih sedikit. Oleh karena itu,  terapi  farmakologi  dengan  pemanfaatan tumbuhan obat dapat menjadi alternatif dalam mengatasi hiperkolesterolemia.
Beberapa tumbuhan obat yang dilaporkan berkhasiat  sebagai  antihiperkolesterolemia diantaranya  kelor  ( Moringa  oleifera ),  kersen ( Muntingia  calabura ),  dan  sirsak  ( Annona muricata ).  Kandungan  zat  aktif  pada  kelor yang  dipercaya  dapat  menurunkan  kadar kolesterol  antara  lain:  flavonoid  dan β - sitosterol (Wahyu et al., 2019). Kandungan β - sitosterol  pada  daun M.  oleifera dapat menurunkan  kadar  kolesterol  dengan  cara menurunkan  konsentrasi  LDL  dalam  plasma
dan  menghambat  reabsorbsi  kolesterol  dari sumber endogen (Tjong et al., 2021).  Zat aktif flavonoid  yang  terkandung  dalam  daun M. calabura memiliki kemampuan untuk menurunkan kadar kolesterol dengan menghambat HMG-CoA ( 3-hydroxy-3- methylglutaryl coenzyme A ) reduktase sehingga  sintesis  kolesterol  menurun,  serta mengurangi penimbunan lemak dalam pembuluh  darah  dengan  menurunkan  tingkat absorpsi kolesterol (Pirillo et al., 2021; Tjong et al., 2021; Wahyu et al., 2019). Ekstrak daun A. muricata dilaporkan mengandung metabolit  sekunder  flavonoid,  glikosida,  dan tanin (Arthur et al., 2011), metabolit tersebut bersifat  antioksidan  yang  berperan  terhadap mekanisme perbaikan profil lipid (Wurdianing et al., 2014).
Pada tumbuhan obat umumnya memiliki kandungan senyawa yang kemungkinan sama atau berbeda dengan organ lainnya. Senyawa pada  organ  tersebut,  disekresikan  dan diakumulasikan  dalam  struktur  khusus  yang disebut  struktur  sekretori.  Struktur  sekretori dapat  berupa  trikoma,  sel  idioblas,  rongga sekretori,  kanal  sekretori,  dan  latisifer (Dickison,  2000;  Umar  et  al.,  2021a). Karakterisasi  struktur  sekretori  pada  ketiga spesies tumbuhan obat  tersebut  masih  sangat terbatas.  Karakterisasi  ini  sangat  penting untuk  menjamin  pemanfaatannya,  terutama jika  tumbuhan  obat  yang  akan  digunakan hanya  menggunakan  organ  tertentu  saja (Coelho  et  al.,  2012).  Oleh  karena  itu,  perlu dilakukannya pengamatan mengenai  struktur sekretori dan senyawa-senyawa yang terakumulasi pada tumbuhan obat.
Pada  penelitian  ini,  uji  anatomi  dan histokimia diaplikasikan untuk mengidentifikasi struktur sekretori dan metabolit  sekunder yang  diakumulasikannya, serta  metode  fitokimia  dengan  teknik kromatografi lapis tipis (KLT) untuk mengidentifikasi metabolit sekunder tersebut.

## METODE PENELITIAN Sampel Tumbuhan
Sampel penelitian antara lain: daun, kulit batang, dan akar M. oleifera , M. calabura , dan A.  muricata )  yang  diperoleh  dari  Desa Galesong,  Kabupaten  Takalar,  Provinsi Sulawesi  Selatan.  Gambar  1,  2,  dan  3 menyajikan  pohon  (a),  buah  (b),  bunga  (c), dan  daun  (d),  dari  masing-masing  tumbuhan obat antihiperkolesterolemia

## Pengamatan Anatomi
Pengujian anatomi menggunakan sampel segar  (daun,  kulit  batang,  dan  akar).  Sampel difiksasi dengan etanol 70%. Masing-masing organ  dibuat  preparat  berupa  irisan  tipis melintang  menggunakan  silet,  sesuai  dengan prosedur  anatomi  biologi.  Sayatan  sampel kemudian  direndam/ditetesi  dengan  pewarna kombinasi  metilen  biru  (1%)  dan  azur  (1%), serta  Safranin  O  sekitar  1  menit,  selanjutnya diletakkan  di  atas  kaca  preparat  yang  sudah ditetesi air:gliserin (1:1 v/v) kemudian ditutup menggunakan  kaca  penutup.  Sampel  diamati menggunakan  mikroskop  (Olympus  CX23) dan  pengambilan  gambar  menggunakan OptiLab  Viewer ® ver:  2.1  (Umar  et  al., 2021b).
Uji Histokimia
Sampel  segar  (daun,  kulit  batang,  dan akar)  berupa  sayatan  melintang  diuji  dengan pereaksi  spesifik,  lalu  diamati  perubahan warna  yang  terjadi.  Pengamatan  histokimia berupa perubahan warna dengan penambahan pereaksi  spesifik  untuk  masing-masing  jenis metabolit sekunder yang diuji.
Pengujian  terpenoid  dilakukan  dengan merendam  sayatan  sampel  dalam  pereaksi tembaga  asetat  5%  selama  3-5  menit. Terbentuknya  warna  kuning  atau  kuning
Gambar  2.  Tumbuhan  M.  oleifera.  Pohon  (a), buah (b), bunga (c), daun (d).
Gambar  3.  Tumbuhan  M. calabura .  Pohon  (a), buah (b), bunga (c), daun (d).
Gambar 1. Tumbuhan A. muricata. Pohon (a), buah (b),  bunga (c), dan daun (d).
kecoklatan, mengindikasikan positif terpenoid (Martin et al., 2002; Umar et al., 2021b).
Pengujian alkaloid pada sampel dilakukan dengan perendaman sayatan dalam pereaksi  Wagner  selama  3-5  menit,  hasil  uji positif ditunjukkan dengan coklat kemerahan atau  kuning  (Furr  dan  Mahlberg,  1981). Pengujian  alkaloid  juga  dipertegas  dengan pereaksi Dragendorff, hasil uji positif ditandai dengan warna emas/jingga (Brechú-Franco et al., 2016).
Kandungan lipofilik pada sampel menggunakan  pereaksi  Sudan  III.  Adanya kandungan  lipofilik  ditandai  dengan  warna merah sampai jingga (Boix et al., 2012).
Uji kandungan fenolik dilakukan dengan merendam sayatan sampel dalam larutan  besi (III)  klorida  (FeCl 3 )  10%  selama  3-5  menit, hasil  uji  positif  ditandai  dengan  warna  hijau gelap atau hitam (Castro dan Demarco, 2008).

## Uji Fitokimia
Sampel M. oleifera , M. calabura , dan A. muricata (daun,  kulit  batang,  dan  akar) dikumpulkan  dan  disortasi  basah.  Masing- masing  organ  disortasi  secara  terpisah. Sampel  dicuci  dengan  air  mengalir  lalu ditiriskan, setelah itu ditimbang lalu dikeringkan pada oven simplisia pada suhu 40 °C, hingga kering. Simplisia disortasi kering kemudian diserbukkan, lalu dilakukan proses ekstraksi  menggunakan  metode  maserasi dengan penyari etanol 70%. Setelah tiga hari, campuran disaring sehingga didapat maserat. Maserat  kemudian  diuapkan  menggunakan penguap vakum bertekanan, hingga diperoleh ekstrak kental.
Identifikasi golongan senyawa dilakukan dengan  penotolan  ekstrak  pada  plat  KLT, kemudian  dielusi  dengan  eluen  n-heksan:etil asetat (7:3), selanjutnya visualisasi menggunakan  UV  254  dan  365  nm. Identifikasi  alkaloid  menggunakan  pereaksi semprot  Dragendorff.  Hasil  positif  ditandai dengan  adanya  noda  berfluoresensi  jingga (Banu dan Nagarajan, 2014). Fenolik dengan pereaksi  besi  (III)  klorida  5%,  hasil  positif ditandai  dengan noda berwarna hitam  (Banu dan  Nagarajan,  2014;  Umar  et  al.,  2021b).
Terpenoid dengan pereaksi asam sulfat, hasil positif  ditandai  dengan  adanya  fluoresensi merah  kecoklatan  (Sopiah  et  al.,  2019). Lipofilik  dengan  pereaksi  Liebermann- Bourchard  dengan  hasil  positif  ditandai dengan adanya noda hijau kebiruan (Banu dan Nagarajan, 2014)

## HASIL DAN PEMBAHASAN Uji Anatomi Daun
Penampang  melintang  (Gambar  4a-c) pada  daun M.  oleifera dan A.  muricata teridentifikasi trikoma non glandular (Gambar  4a,c),  sedangkan  pada  daun M. calabura teridentifikasi  trikoma  glandular (Gambar  4b)  penghasil  sekret.  Trikoma kelenjar yang teridentifikasi termasuk trikoma kelenjar tipe kapitat yang terdiri atas: kepala  sekretori  ( secretory  head ),  tangkai ( stalk ), dan sel basal ( basal cell ) (Seixas et al., 2021).

## Uji Anatomi Kulit Batang
Penampang  melintang  kulit  batang  dari ketiga spesies ( M. oleifera , M. calabura dan A.  muricata )  pada  uji  anatomi  juga teridentifikasi dua jenis trikoma (Gambar 5a- c) yang berbeda yaitu trikoma non glandular pada M. oleifera (Gambar 5a) dan A. muricata (Gambar 5c), serta trikoma glandular pada M. calabura (Gambar 5b).
Gambar 4. Trikoma pada uji anatomi, trikoma non glandular daun M. oleifera (a), trikoma glandular daun  M.  calabura  (b)  dan  trikoma  non  glandular daun A. muricata (c). Pewarnaan pada penampang a dan c menggunakan metilen biru dan azur, serta Safranin  O  pada  penampang  b.  Singkatan: tr=trikoma.
Uji Anatomi Akar Penampang  melintang  akar  dengan  sel idioblast  pada M.  oleifera (Gambar  6a), M. calabura (Gambar  6b) dan A.  muricata (Gambar 6c). Idioblas merupakan sel tunggal dengan bentuk yang berbeda dari sel-sel tetangganya, baik dari segi ukuran, ontogeni, dan metabolisme (Coelho et al., 2012; Umar et al., 2021b).

## Uji Histokimia Alkaloid
Penampang  melintang  daun M.  oleifera,
M.  calabura dan A.  muricata diidentifikasi dengan  pereaksi  Dragendorff  dan  Wagner, alkaloid  teridentifikasi  di  dalam  sel  idioblas (Gambar 7a,b,d,g,h,i, dan k), rongga sekretori (Gambar 7c), maupun trikoma  (Gambar 4e,f dan j). Alkaloid ditandai dengan terbentuknya
warna  emas  atau  jingga  pada  pereaksi Dragendorff, serta warna cokelat kemerahan pada  pereaksi  Wagner.  Penampang  pada Gambar 7l-o tanpa penambahan pereaksi uji, merupakan kontrol dari pengujian alkaloid.
Hasil uji positif alkaloid dengan pereaksi Dragendorff  menunjukkan  adanya  amina tersier  dalam  struktur  sekretori  tumbuhan (Takagi  et  al.,  1980).  Pereaksi  Dragendorff menghasilkan  tampilan  warna  yang  baik untuk identifikasi zat alkaloid bila dibandingkan  dengan  pereaksi  alkaloid lainnya (Gomez et al., 2019).
Gambar  5.  Trikoma  pada  kulit  batang.  Trikoma non  glandular  pada  M.  oleifera  (a),  trikoma glandular  pada  M.  calabura  (b)  dan  trikoma  non glandular  pada  A.  muricata  (c).  Pewarnaan  pada penampang  a-c,  menggunakan  metilen  biru  dan azur. Singkatan: tr=trikoma.
Gambar 6.  Sel idioblas pada organ akar M. oleifera (a), M. calabura (b) dan A. muricata (c). Pewarnaan pada  penampang  a-c,  menggunakan  metilen  biru dan azur. Singkatan: id=sel idioblas.
Gambar 7. Alkaloid teridentifikasi pada sel idioblas daun M. oleifera menggunakan pereaksi Dragendorff  (a),  sel  idioblas  pada  kulit  batang  M. oleifera dengan pereaksi Dragendorff (b), sel epitel dari rongga sekretori pada kulit batang M. oleifera dengan  pereaksi  Wagner  (c),  sel  idioblas  akar  M. oleifera  dengan  pereaksi  Dragendorff (d).  Pada  M. calabura alkaloid terdeteksi pada trikoma glandular daun  dengan  pereaksi  Wagner  (e),  trikoma glandular kulit batang M.  calabura dengan pereaksi Dragendorff  (f),  sel  idioblas  akar  M.  calabura dengan  pereaksi  Wagner  (g).  Pada  A.  muricata alkaloid  terdeteksi  pada  sel  idioblas  daun  dengan pereaksi Dragendorff (h), sel idioblas kulit batang A. muricata  dengan pereaksi Dragendorff (i), trikoma non  glandular  kulit  batang  dengan  pereaksi Dragendorff  (j),  sel  idioblas  akar  A.  muricata dengan pereaksi Dragendorff (k). Penampang (l, m, n,  o)  sebagai  kontrol  negatif  tanpa  penambahan pereaksi.  Singkatan:  id=sel  idioblas,  tr=trikoma, rs=rongga sekretori

## Terpenoid
Penampang melintang daun, kulit batang, dan akar dari M. oleifera, M. calabura dan A. muricata tersaji pada Gambar 8a-f. Golongan terpenoid  diidentifikasi  dengan  pereaksi tembaga asetat. Terpenoid teridentifikasi pada sel  idioblas  (Gambar  8a,b  dan  e),  rongga sekretori  (Gambar  8c),  maupun  trikoma  non glandular  (Gambar  8d,f).  Adanya  terpenoid ditandai  dengan  warna  kuning  atau  kuning kecokelatan. Penampang pada Gambar 8g dan 8h  tanpa  penambahan  pereaksi,  merupakan kontrol dari pengujian terpenoid.
Senyawa  terpenoid  dan  beberapa  jenis senyawa  lain  yang  terakumulasi  dalam struktur  sekretori  khusus,  dan  umumnya ditemukan  dalam  sel-sel  nonfotosintetik seperti rimpang dan akar. Senyawa terpenoid memiliki  beberapa  fungsi  pertahanan  baik secara langsung dan tidak langsung, terhadap herbivora, sinyal terjadinya luka pada bagian
tumbuhan,  dan  ketahanan  terhadap  stres abiotik  (Castro  dan  Demarco,  2008;  Kromer et al., 2016).
Fenolik
Penampang melintang daun, kulit batang dan akar dari M. oleifera , M. calabura dan A. muricata (Gambar 9a-h) diidentifikasi dengan pereaksi  besi  (III)  klorida.  Golongan  fenolik teridentifikasi  pada  sel  idioblas  (Gambar 9a,b,c,d,e,f  dan  g)  yang  ditandai  dengan warna hijau gelap atau kehitaman. Penampang pada Gambar 9h, sebagai kontrol negatif dari perlakuan ini.
Senyawa  fenolik  bervariasi,  umumnya ditemukan di hampir semua bagian tumbuhan dan  berada  di  vakuola,  sitoplasma  atau  di dinding  sel  jaringan  pembuluh  dan  sekretori kanal, rongga sekretori, trikoma, sel idioblas, latisifer, koleter, nektaris, osmofor dan stigma (Castro dan Demarco, 2008).
Gambar  8.  Terpenoid  teridentifikasi  pada  sel idioblas kulit batang M. oleifera (a), pada spesies M.  calabura,  terpenoid  teridentifikasi  pada  sel idioblas  kulit  batang  (b)  dan  rongga  sekretori pada  akar  (c).  Pada  A.  muricata  terpenoid teridentifikasi pada trikoma non glandular pada sel idioblas daun (d) pada kulit batang (e), serta trikoma non glandular pada akar (f). Penampang (g, h) sebagai kontrol negatif tanpa penambahan pereaksi. Singkatan: id=sel idioblas, tr=trikoma, rs=rongga sekretori.
Gambar  9.  Fenolik  teridentifikasi  di  dalam  sel idioblas  daun  M.  oleifera  (a),  sel  idioblas  kulit batang M. oleifera (b) dan sel  idioblas akar  M. oleifera (c). Pada M. calabura, fenolik teridentifikasi  pada  sel  idioblas  daun  (d),  sel idioblas  pada  kulit  batang  (e)  dan  sel  idioblas pada akar (f). Pada A. muricata senyawa fenolik teridentifikasi  pada  sel  idioblas  akar  (g). Penampang  (h)  sebagai  kontrol  negatif  tanpa penambahan pereaksi. Singkatan: id=sel idioblas .

## Lipofilik
Penampang melintang daun, kulit batang dan akar dari M. oleifera , M. calabura dan A. muricata tersaji  pada  Gambar  10a-i  yang diidentifikasi  dengan  pereaksi  Sudan  III. Golongan  lipofilik  teridentifikasi  di  sel
idioblas (Gambar 10b) dan trikoma (Gambar 10a,c,d,e dan  f) yang ditandai  dengan warna kemerahan. Kontrol dari pengujian ini tersaji pada  Gambar  10g-i  tanpa  penambahan pereaksi uji.
Senyawa  lipofilik  pada  tumbuhan  dapat berupa  sterol,  lemak,  lilin,  trigliserida, fosfolipid, dan lain-lain yang memiliki fungsi tertentu, seperti menyimpan energi, pensinyalan, dan berperan sebagai komponen struktural membran sel (Kromer et al., 2016). Beberapa  faktor  yang  dapat  mempengaruhi senyawa  lipofilik  secara  kualitatif  dan kuantitatif  yaitu  faktor  lingkungan,  faktor stres yang berkaitan dengan perubahan iklim
(kekeringan,  radiasi  UV-B,  dan  panas). Senyawa  ini  berperan  dalam  pertahanan langsung terhadap UV-B di daun. Selain itu, senyawa  ini  melindungi  dari  kerusakan oksidatif  dan  perlindungan  terhadap  patogen (Dias  et  al.,  2016).  Rangkuman  hasil pengujian histokimia pada berbagai organ M. oleifera , M. calabura dan A. muricata tersaji pada Tabel 1.
Gambar  10.  Senyawa  lipofilik  teridentifikasi  pada  trikoma  non  glandular  daun  M.  oleifera    (a),  sel idioblas daun M. calabura (b), trikoma glandular daun M. calabura (c), trikoma glandular kulit batang A. muricata (d), trikoma non glandular daun A. muricata (e) dan trikoma non glandular kulit batang A. muricata (f). Penampang (g,h dan i) sebagai kontrol negatif tanpa penambahan pereaksi. Singkatan: id=sel idioblas, tr=trikoma.
Tabel 1. Hasil uji histokimia pada berbagai organ tanaman obat antihiperkolesterolemia.
Sampel Organ Tanaman Uji Histokimia Alkaloid Fenolik Lipofilik Terpenoid M. oleifera Daun + + + – Kulit batang + + – + Akar + + + – M. calabura Daun + + + – Kulit batang + – + + Akar + + – + A. muricata Daun + + + + Kulit batang + + + + Akar + – – + Keterangan: (+) senyawa terdeteksi; ( – ) senyawa tidak terdeteksi
Uji Fitokimia

## Alkaloid
Senyawa  alkaloid  pada  uji  fitokimia (KLT) (Gambar 11a-f) akan terdeteksi setelah disemprot  pereaksi  Dragendorff  dengan reaksi  positif  adanya  noda  berfluoresensi jingga.  Pada M.  oleifera senyawa  alkaloid terdeteksi  pada  ekstrak  daun  (Gambar  11b), pada M. calabura senyawa alkaloid terdeteksi pada ekstrak daun dan kulit batang (Gambar 11c,d),  pada A.  muricata senyawa  alkaloid terdeteksi pada ekstrak daun, kulit batang, dan akar (Gambar 11f).

## Fenolik
Senyawa fenolik pada uji fitokimia KLT (Gambar  12a-f)  akan  terdeteksi  setelah disemprotkan  pereaksi  besi  (III)  klorida dengan  reaksi  positif  yaitu  adanya  noda hitam.  Pada M.  oleifera senyawa  fenolik terdeteksi  pada  ekstrak  daun  (Gambar  12b), pada M. calabura senyawa fenolik terdeteksi pada  ekstrak  kulit  batang  dan  akar  (Gambar 12d),  sedangkan  pada A.  muricata senyawa fenolik  tidak  terdeteksi  pada  ketiga  ekstrak (Gambar 12f).

## Flavonoid
Salah satu senyawa dari golongan fenolik dengan kadar tertinggi pada tumbuhan adalah flavonoid.  Senyawa  flavonoid  pada  uji fitokimia  KLT  (Gambar  13a-f)  disemprot dengan  pereaksi  aluminium  klorida  (AlCl 3 ) dengan hasil positif adanya noda berfluoresensi  kuning.  Pada M.  oleifera flavonoid  terdeteksi  pada  ekstrak  daun  dan kulit batang (Gambar 13b), pada M. calabura senyawa  flavonoid  terdeteksi  pada  ekstrak daun dan akar (Gambar 13d), sedangkan pada A. muricata , flavonoid hanya terdeteksi pada akar (Gambar 13f).
Gambar  11.  Identifikasi  senyawa  golongan alkaloid  dengan  urutan  ekstrak  (daun-kulit batang-akar),  pengamatan  pada  sinar  tampak sampel M. oleifera (a), pengamatan pada lampu UV 365 sampel M. oleifera (b), pengamatan pada sinar tampak sampel M. calabura (c), pengamatan  pada  lampu  UV  365  sampel  M. calabura  (d),  pengamatan  pada  sinar  tampak sampel A. muricata (e), pengamatan pada lampu UV 365 sampel A. muricata (f).
Gambar  12.  Identifikasi  senyawa  golongan fenolik  dengan  urutan  ekstrak  (daun-kulit batang-akar). Pengamatan pada sinar tampak sampel M. oleifera (a), pengamatan di bawah lampu  UV  365  sampel  M.  oleifera  (b), pengamatan sinar tampak sampel M. calabura (c),  pengamatan  di  bawah  lampu  UV  365 sampel  M.  calabura  (d),  pengamatan  sinar tampak sampel A. muricata (e), pengamatan di bawah lampu UV 365 sampel A. muricata.
Gambar  13.  Identifikasi  flavonoid  menggunakan KLT  dengan  urutan  ekstrak  (daun-kulit  batang- akar),  pengamatan  pada  sinar  tampak  M.  oleifera (a), pengamatan di bawah lampu UV 365 sampel M. oleifera  (b),  pengamatan  pada  sinar  tampak  M. calabura (c), pengamatan di bawah lampu UV 365 sampel M. calabura (d), pengamatan sinar tampak sampel  A.  muricata  (e),  pengamatan  di  bawah lampu UV 365 sampel A. muricata (f).

## Terpenoid
Uji  fitokimia  (KLT)  (Gambar  14a-f) dengan  noda  berwarna  merah  kecoklatan setelah  disemprotkan  pereaksi  asam  sulfat (H 2 SO 4 )  mengindikasikan  positif  senyawa terpenoid.  Pada M.  oleifera senyawa terpenoid  terdeteksi  pada  ekstrak  daun (Gambar  14b),  pada M.  calabura senyawa terpenoid  terdeteksi  pada  ekstrak  daun (Gambar  14d),  pada A.  muricata senyawa terpenoid  juga  terdeteksi  pada  ekstrak  daun (Gambar 14f).

## Lipofilik
Senyawa  lipofilik  (steroid)  pada  uji fitokimia  (KLT)  (Gambar  15a-f)  akan teridentifikasi  setelah  disemprotkan  pereaksi Liebermann-Bourchard dengan reaksi positif hijau-biru. Pada M. oleifera senyawa lipofilik terdeteksi  pada  ekstrak  kulit  batang  dan ekstrak akar (Gambar 15b), pada M. calabura senyawa  terpenoid  terdeteksi  pada  ekstrak akar  (Gambar  15d),  sedangkan  pada A. muricata senyawa  lipofilik  terdeteksi  pada ketiga ekstrak (Gambar 15f).
Kelompok  senyawa  yang  teridentifikasi dengan  teknik  KLT  ini  dapat  diusulkan sebagai  penanda  kimia  untuk  ketiga  sampel tanaman obat  ( M. oleifera, M. calabura, dan A.  muricata ) dan  dapat  digunakan  untuk pengendalian  mutu  dan  identifikasi  berbagai bagian  bahan  tanaman.  Selain  itu,  hasil penelitian  ini  dapat  memberikan  informasi jumlah  dan  sifat  senyawa  pada  masing- masing  ekstrak.  Menurut  Aladdin  et  al., (2016),  pemisahan  zat  kimia  menggunakan teknik  kromatografi  dapat  digunakan  untuk memfasilitasi  pengembangan  proses  validasi dan  standarisasi,  serta  penentuan  golongan senyawa dan isolasi senyawa murni.

## KESIMPULAN
Struktur sekretori pada uji anatomi ketiga tumbuhan obat antihiperkolesterolemia berupa trikoma kelenjar, rongga sekretori, dan sel idioblas. Struktur sekretori ini teridentifikasi  pada  daun,  kulit  batang,  dan akar  yang  menjadi  tempat  terakumulasinya metabolit sekunder, seperti: alkaloid, fenolik, lipofilik,  dan  terpenoid.  Hasil  identifikasi tersebut  didukung  hasil  uji  fitokimia  ekstrak ketiga  tumbuhan  obat.  Temuan  ini  dapat dijadikan  landasan  dalam  pemilihan  organ
Gambar 14. Identifikasi terpenoid
menggunakan  pereaksi  semprot  asam  sulfat, urutan ekstrak (daun-kulit batang-akar). Pengamatan  sinar  tampak  sampel  M.  oleifera (a),  pengamatan  di  bawah  lampu  UV  365  M. oleifera  teridentifikasi  pada  ekstrak  daun  (b), pengamatan  sinar  tampak  sampel  M.  calabura (c), pengamatan di bawah lampu UV 365 sampel M.  calabura  teridentifikasi  pada  ekstrak  daun (d),  pengamatan  sinar  tampak  sampel  A. muricata  (e),  pengamatan  di  bawah  lampu  UV 365  sampel  A.  muricata  teridentifikasi  pada ekstrak daun (f).
Gambar  15.  Identifikasi  lipofilik  dengan pereaksi Liebermann-Bourchard, urutan ekstrak  (daun-kulit  batang-akar),  pengamatan sinar tampak sampel M. oleifera (a), pengamatan di bawah lampu UV 365 sampel M. oleifera  (b),  pengamatan  sinar  tampak  sampel M. calabura (c),  di bawah lampu UV 365 sampel M.  calabura  (d),  pengamatan  sinar  tampak sampel  A.  muricata  (e)  pengamatan  di  bawah lampu UV 365 sampel A. muricata (f).
tumbuhan  antihiperkolesterolemia  sebagai sumber alternatif bahan baku obat secara cepat dan efisien.

## Daftar Pustaka
Aladdin, N.-A., Jamal, J.A., Talip, N., Hamsani, N.A.M., Rahman, M.R.A., Sabandar, C.W., Muhammad,  K.,  Husain,  K.,  Jalil,  J.,  2016.  Comparative  study  of  three Marantodes pumilum varieties  by microscopy, spectroscopy and chromatography. Revista Brasileira de Farmacognosia, 26, pp. 1–14.
Araya-Quintanilla,  F.,  Gutiérrez-Espinoza,  H.,  Moyano-Gálvez,  V.,  Muñoz-Yánez,  M.J., Pavez,  L.,  García,  K.,  2019.  Effectiveness  of  black  tea  versus  placebo  in  subjects  with hypercholesterolemia:  A  PRISMA  systematic  review  and  meta-analysis.  Diabetes  & Metabolic Syndrome: Clinical Research & Reviews, 13, pp. 2250–2258.
Arthur, Woode, E., Terlabi, E.O., Larbie, C., 2011. Evaluation of acute and subchronic toxicity of Annona muricata (Linn.) aqueous extract in animals. European Journal of Experimental Biology, 1, pp. 115–124.
Banu, R., H, Nagarajan, N., 2014. TLC and HPTLC fingerprinting of leaf extracts of Wedelia chinensis (Osbeck) Merrill. Journal of Pharmacognosy and Phytochemistry, 2, pp. 29–33.
Boix, Y.F., Victório, C.P., Defaveri, A.C.A., Arruda, R.D.C.D.O., Sato, A., Lage, C.L.S., 2012. Glandular trichomes of Rosmarinus officinalis L.: Anatomical and phytochemical analyses of leaf volatiles. Plant Biosystems, 145, pp. 848–856.
Brechú-Franco, A.E., Laguna-Hernández, G., De la Cruz-Chacón, I., González-Esquinca, A.R., 2016. In situ histochemical localisation of alkaloids and acetogenins in the endosperm and embryonic  axis  of Annona  macroprophyllata Donn.  Sm.  seeds  during  germination. European Journal of Histochemistry, 60, pp. 2568.
Castro, M. de M., Demarco, D., 2008. Phenolic compounds produced by secretory structures in plants: a brief review. Natural Product Communications, 3, pp. 1273–1284.
Coelho, V.P. de M., Leite, J.P.V., Nunes, L.G., Ventrella, M.C., Coelho, V.P. de M., Leite, J.P.V., Nunes, L.G., Ventrella, M.C., 2012. Anatomy, histochemistry and phytochemical profile  of  leaf  and  stem  bark  of Bathysa  cuspidata (Rubiaceae).  Australian  Journal  of Botany, 60, pp. 49–60.
Dias, M.I., Sousa, M.J., Alves, R.C., Ferreira, I.C.F.R., 2016. Exploring plant tissue culture to improve the production of phenolic compounds: a review. Industrial Crops and Products, 82, pp. 9–22.
Dickison, W., 2000. Integrative Plant Anatomy - 1st Edition. New York: Academic Press.
Furr, M., Mahlberg, P.G., 1981. Histochemical analyses of laticifers and glandular trichomes in Cannabis sativa . Journal of Natural Products, 44, pp. 153–159.
Gomez, A.A., Mercado, M.I., Belizán, M.M.E., Ponessa, G., Vattuone, M.A., Sampietro, D.A., 2019.  In  situ  histochemical  localization  of  alkaloids  in  leaves  and  pods  of Prosopis ruscifolia . Flora, 256, pp. 1–6.
Kromer, K., Kreitschitz, A., Kleinteich, T., Gorb, S.N., Szumny, A., 2016. Oil secretory system in  vegetative  organs  of  three  Arnica  taxa:  essential  oil  synthesis,  distribution  and accumulation. Plant and Cell Physiology, 57, pp. 1020–1037.
Martin, D., Tholl, D., Gershenzon, J., Bohlmann, J., 2002. Methyl jasmonate induces traumatic resin ducts, terpenoid resin biosynthesis, and terpenoid accumulation in developing xylem of Norway Spruce stems. Plant Physiology, 129, pp. 1003–1018.
Pirillo,  A.,  Casula,  M.,  Olmastroni,  E.,  Norata,  G.D.,  Catapano,  A.L.,  2021.  Global epidemiology of dyslipidaemias. Nature Reviews Cardiology, 18, pp. 689–700.
Seixas,  D.P.,  Palermo,  F.H.,  Rodrigues,  T.M.,  2021.  Leaf  and  stem  anatomical  traits  of Muntingia  calabura L.  (Muntingiaceae)  emphasizing  the  production  sites  of  bioactive compounds. Flora, 278, pp. 151802.
Sopiah,  B.,  Muliasari,  H.,  Yuanita,  E.,  2019.  Skrining  fitokimia  dan  potensi  aktivitas antioksidan ekstrak etanol daun hijau dan daun merah kastuba. Jurnal Ilmu Kefarmasian Indonesia, 17, pp. 27.
Takagi, M., Funahashi, S., Ohta, K., Nakabayashi, T., 1980. Phyllospadine, a new flavonoidal alkaloid  from  the  sea-grass Phyllosphadix  iwatensis .  Agricultural  and  Biological Chemistry, 44, pp. 3019–3020.
Tjay,  T.H.,  Rahardja,  K.,  2015.  Obat-obat  Penting  Edisi  ketujuh.  Jakarta:  Elex  Media Komputindo.
Tjong,  A.,  Assa,  Y.A.,  Purwanto,  D.S.,  2021.  Kandungan  antioksidan  pada  daun  kelor ( Moringa oleifera ) dan potensi sebagai penurun kadar kolesterol darah. eBiomedik 9.
Umar,  A.H.,  Ratnadewi,  D.,  Rafi,  M.,  Sulistyaningsih,  Y.C.,  Hamim,  H.,  2021a.  Potensi tumbuhan Curculigo spp.  sebagai  antidiabetes:  pendekatan  berbasis  anatomi  dan histokimia, metabolomik, bioinformatika, dan bioteknologi. Disertasi Doktoral, Sekolah Pascasarjana, IPB University.
Umar, A.H., Ratnadewi, D., Rafi, M., Sulistyaningsih, Y.C., Hamim, H., 2021b. Metabolite profiling, distribution of secretory structures, and histochemistry in Curculigo orchioides Gaertn. and Curculigo latifolia Dryand. ex W.T.Aiton. Turkish Journal of Botany, 45, pp. 421–439.
Wahyu,  S.,  Arsal,  A.S.F.,  Maharani,  I.C.,  2019.  Efektivitas  ekstrak  daun  kelor  ( Moringa oleifera ) terhadap penurunan kadar kolesterol total pada tikus putih ( Rattus novergicus ). Green Medical Journal, 1, pp. 97–110.
Wurdianing,  I.,  Nugraheni,  S.A.,  Rahfiludin,  Z.,  2014.  Efek  ekstrak  daun  sirsak  ( Annona muricata Linn) terhadap profil lipid tikus putih jantan ( Rattus norvegicus ). The Indonesian Journal of Nutrition, 3, pp. 7–12.