Aktivitas Penyembuhan Luka Infeksi Krim Kombinasi Daun Sirsak (Annona muricata L.) Dan Daun Sirih (Piper betle L.)
Dengan Bakteri Staphylococcus aureus Pada Punggung Kelinci

## New Zealand White Secara In Vivo
Indah Ana Resti 1* , Dwi Ningsih 2 1 Sekolah Tinggi Ilmu Kesehatan Adila, Bandar Lampung, Indonesia
2 Universitas Setia Budi
Article info Abstract History
Submission : 12-03-2022
Review : 02-05-2022 Accepted : 23-08-2022
* Email: indahanaresti1@gmail.com
DOI: 10.33096/jffi.v9i2.897
Keywords: soursop ( Annona muricata L.); betel ( Piper betle L.); antibacterial; cream; Staphylococcus aureus
Several  types  of  tropical  plants  in  Indonesia  that  contain  anti-bacterial chemical compounds such as tannins, flavonoids and saponins, namely betel (Piper betle L .) leaves and soursop (Annona muricata L .) leaves. Objectives of the research was to determine activity of cream from soursop (Annona muricata L .) leaves ethanol extract and betel (Piper betle L .) leaves ethanol extract  on  the  backs  of  rabbits  infected  with  Staphylococcus  aureus bacteria.  In  addition,  the  research  conducted  could  also  determine  the stability  of  cream  that  produced  and  its  pharmacological  effects.  Data analysis technique using ANOVA method, significance value did not reach 0.05.  Extraction  process  using  70%  ethanol  as  solvent  with  extraction method, namely maceration. Parameters of cream preparation were from level of storage duration for 0 days and concentration used. Then the level of cream preparation effectiveness in wounds healing could be seen from observations of wounds and pus drying time as well as edema and erythema loss. Cream  preparation from  combination of soursop (Annona  muricata L. )  leaves  ethanol  extract  and  betel  (Piper  betle L .)  ethanol  extract  in formula 6 with concentration ratio of 10%: 12.5%, resulted better and faster healing rate against Staphylococcus aureus infection than other formulas. Required recovery time interval was 10 days and cream preparation had good stability.
I. Pendahuluan
Bakteri Staphylococcus  aureus bakteri patogen  gram  positif  yang  berperan  sebagai  karier dan dikategorikan sebagai flora normal merupakan bakteri yang genus nya paling sering menyebabkan infeksi  (Jawetz,  Melinick  and  Aldeberg,  2008) Beberapa  jenis tumbuhan obat yang memiliki efek fisiologis  pada  jenis  bakteri  patogen  terdapat  di Tanaman sirsak dan daun sirih.
Daun sirsak mengandung komponen alami yang  berbeda,  di  antaranya  mengandung  tanin, alkaloid, saponin, dan Mengandung flavonoid yang dikenal  sebagai  metode  agen  antibakteri  Hasil  uji menunjukkan  pada  suhu  setelah  di  uji  dengan inkubasi suhu 37°C didapatkan bahwa ekstrak daun sirsak  mempunyai  daya  hambat  pertumbuhan bakteri  Staphylococcus  aureus.(Tuna,  Kepel  and Leman, 2015)
Bagian  dari  daun  tumbuhan  sirsak  yang memiliki kandungan asetogenin tinggi yang berguna dalam  pengobatan  infeksi  kulit  khususnya  pada bakteri Staphylococcus aureus atupun Propionibacterium  acnes ,  Berdasarkan  hasil  riset
terdahulu,  daun  sirsak  juga  berperan  sebagai  anti bakteria  diantaranya Staphylococcus  aureus , kandungan metabolit sekunder di dalam daun sirsak diantaranya  steroid,  tannin,  dan  juga  kardiak glikosida.(Dewangga and Nirwana, 2019) Selain daun sirsak terdapat jenis tumbuhan yang  berperan  sebagai  pembunuh  bakteri Staphylococcus aureus yaitu tumbuhan Sirih ( Piper betle L.). Jenis tumbuhan ini hidup baik di daerah tropis. Kandungan senyawa kimia dialam daun sirih yaitu flavanoid,  tanin,  saponin, dan  minyak  atsiri yang  berperan  sebagai  anti bacteria. (Hambali, Husain and Alam, 2014). Berbagai penelitian telah dilaporkan bahwa tanaman ini bermanfaat dan berkhasiat sebagai anti bakteri  serta  telah  di  buktikan  oleh  penelitian Suliantari (Suliantari, Jenie and Suhartono, 2012).
Tanaman  Sirih  ( Piper  betle L.)  adalah tanaman merambat yang tumbuh dari  spesies yang mencapai ketinggian  5-15  m. Penyembuhan  efektif yang disebabkan  oleh staphylococcus aureus karena memiliki  daya  antiseptik  yang  baik.  Bagian    dari tanaman yang digunakan adalah , atau  daun, karena
banyak  mengandung  senyawa  turunan  fenol (Bustanussalam et al. , 2015)
II. Metode Penelitian II.1 Bahan, Alat, dan Hewan Uji
Beberapa  bahan  yang  diperlukan  didalam riset  yang  dilakukan  yaitu  media  VJA, bacteria Staphylococcus  aureus ,  kertas  saring  whatman  41, C2H5OH  70%,  etil  asetat,  kloroform  p.a,  acid stearin , pelarut  CMC,  NaCl  0,9%,  larutan  BaCl2. 2H2O,  0.36  N H2SO4,  natrium  biborat,  C3H8O3 1,175%, air murni, nipagin, C6H15NO3, alumunium foil , tissue beserta serbet.
Selanjutnya  alat  yang  dibutuhkan  dalam riset  yaitu  neraca  analitik,  blender,  oven,  tabung reaksi,  timbangan  analisa  jarum  ose,  cawan  petri, pembakar spiritus, deglas, pipet tetes, pipet volume, gelas ukur, mortir, batang pengaduk, kertas saring, erlenmeyer,  corong  kaca,  incubator,  beserta  kaca obyek, sudep,
Objek  yang  digunakan  dalam  riset  yaitu New  Zealand  White sejenis  kelinci  putih  dengan bobot  1,5  hingga  2  kg  dan  memiliki  umur  kurang lebih  2  hingga  3  bulan  dan  juga  berjenis  kelamin jantan. (Rahmawati, Tiara and Harti, 2009)

## II.2 Pembuatan  Serbuk  Daun  Sirsak  Dan  Daun Sirih
Menyiapkan  daun  sirih  dan  juga  daun sirsak  untuk  dikeringkan  didalam  oven  bersuhu 30 o C hingga 40 o C, yang sebelumnya terlebih dahulu dicuci bersih dengan air yang mengalir. Setelah itu dihancurkan  untuk  dijadikan  serbuk,  dan  untuk mendapatkan  serbuk  berkuran  kecil  dilakukan
pengayakan  dengan  alat  pengayak  berukuran  40. Kemudian dilakukan penimbangan untuk mengetahui nilai prosentase antara bobot basah dan juga bobot kering.

## II.3 Pembuatan ekstrak etanol daun sirsak dan daun sirih
Tatacara  pembuatannya  yaitu  melakukan penimbangan  serbuk  daun  sirih  dan  daun  sirsak dengan  bobot  masing-masing  600  gram  dan kemudian  memasukkannya  pada  botol  maserasi. Lalu  tambahkan  1500  ml  C 2 H 5 OH  70%  sebagai pelarut  kedalam  botol  maserasi.  Selanjutnya  tutup botol  dan  diamkan  diruang  tertutup  tidak  terkena paparan cahaya matahari dalam kurun waktu 5 hari. Selama proses pendiaman jangan mengaduk larutan atau  mengocoknya.  Setelah  itu,  meyaring  larutan dengan  kain  fanel  yang  steril.  Tahap  selanjutnya yaitu  melakukan  ekstraksi  larutan  dengan evaporator bersuhu 40 o C.

## II.4 Identifikasi kandungan senyawa kimia
Melakukan pengujian tabung untuk memastikan  kandungan  senyawa  kimia  pada  daun sirih dan juga daun sirsak yaitu saponin, flavanoid, beserta tanin.

## II.3. Pengujian Krim
Mencampurkan  masing-masing  daun  sirih dan juga daun sirsak dengan C 2 H 5 OH 70%. Setelah itu,  melakukan  vanishing  krim  menggunakan minyak  terdispersi  air  murni  (M/A).  Tabel  1 merupakan formula yang diimplementasikan dalam pembuatan krim.
Tabel 1.  Formulasi krim (fms) Komposisi Formula 1  Formula 2  Formula 3  Formula 4  Formula 5  Formula 6 Ekstrak daun sirsak - 25 % - 12,5% 25% 12,5% Ekstrak daun sirih - - 10% 5% 5% 10% Acid stearin 20,8 gr 20,8 gr 20,8 gr 20,8 gr 20,8 gr 20,8 gr Glycerin 14,7 gr 14,7 gr 14,7 gr 14,7 gr 14,7 gr 14,7 gr Natr. Biborat 0,37 gr 0,37 gr 0,37 gr 0,37 gr 0,37 gr 0,37 gr Triaethanolamin 1,47 gr 1,47 gr 1,47 gr 1,47 gr 1,47 gr 1,47 gr Nipagin 0,1 gr 0,1 gr 0,1 gr 0,1 gr 0,1 gr 0,1 gr Aq. dest. 100 gr 100 gr 100 gr 100 gr 100 gr 100 gr Pembuatan krim kombinasi dilakukan dari sterilisasi peralatan yang digunakan dengan autoklaf suhu  115 o -116 o C  selama  30  menit.  Melakukan sterilisasi  basis  krim  menggunakan  oven  dengan durasi 60 menit bersuhu 150 o C, tetapi sebelum itu, basis krim ditimbang terlebih dahulu menggunakan neraca  analitik.  Kemudian  mendinginkan  basis krim. Lalu mencampur kedua ekstrak dengan rasio konsentrasi seperti yang ditunjukkan dalam Tabel 1. Tahap selanjutnya mengaduk memakai alu dan juga lumpang  panas.  Setelah  tercampur  homogen, kemudian  menimbangnya  sesai  kebutuhan  dan
memasukkan  kedalam  pot  krim  yang  telah  di sterilkan.
II.4 Pengujian Sediaan Krim II.4.1  Pengujian  Krim  Menerapkan  Pengujian Homogenitas Beserta Organoleptik

## Uji organoleptik
Dilakukan  untuk  mengetahui  secara  fisik kondisi krim dari segi bau, warna maupun bentuk.

## Uji homogenitas
Dilakukan untuk mengetahui keseragaman krim dari berbagai layer krim didalam pot krim. Tata
cara  pengujiannya  yaitu,  mengambil  setiap  layer krim  mulai  dari  lapisan  atas,  tengah  dan  bawah sebanyak  0,5  gram  kemudian  meletakkannnya  di objeck    glas.Tingkat  homogen  tidaknya  dapat diketahui  dari  segi  tekstur  setiap  layer,  apakah mengandung  butiran  kasar  atau  tidak  (Jawetz, Melinick and Aldeberg, 2008).

## Uji viskositas
Dilakukan  untuk  mengetahui  tingkat viskositas suatu krim dengan menggunakan piranti viskotester.  Tatacaranya  yaitu  pertama  siapkan viskotester  dan  mengkalibrasinya  terlebih  dahulu. Tahap kedua memasang rotor di bagian viskotester dan  dikunci  kearah  kiri.  Tahap  ketiga  menyiapkan krim, yang akan diuji dan meletakkannnya kedalam cup  kemudian  menaruhnya  dibagian  rotor.  Tahap keempat menghidupkan viskotester, yang mengakibatkan  rotor  berputar.  Tahap  kelima membaca  hasil  pengukuran  yang  ditunjukkan  oleh viskotester  pada  display  jarum  penunjuk. Pembacaan ini dilakukan setelah kondidi viskotester stabil.  Satuan  yang  digunakan  dalam  pengukuran yaitu desipaskalsecond (dPas).  Setelah  pengujian pertama, menyimpan krim selama satu minggu. Lalu melakukan  pengujian  tahap  kedua  dan  seterusnya selama  satu  bulan.  Jadi  terdapat  empat  kali pengujian  dalam  sebulan  (Suliantari,  Jenie  and Suhartono, 2012).

## Uji daya sebar
Dilakukan  dengan  menggunakan  piranti anak  timbang  gram  dan  juga  ekstensometer. Tatacara  pengujiannya  yaitu  menimbang  krim seberat  0,5  gram.  Setelah  itu  meletakkannnya  di bagian  tengah kaca  bundar  dan  dibagian  atas  kaca diberi  anak  timbangan  lalu  didiamkan  selama  60 detik. Tahap selanjutnya mengukur rerata diameter penyebaran krim dari berbagai sisi.
Selanjutnya  menambahkan  krim  dengan bobot krim tambahan 50 gram, 100 gram 150 gram, 200  gram.  Setelah  itu  pengujian  yang  dilakukan sama  seperti  sebelumnya.  Setelah  itu  menyimpan krim selama  satu minggu dan dilakukan pengujian lagi. Pengujian ini dilakukan selama satu bulan, Jadi, selama  satu  bulan  terdapat  empat  kali  pengujian (Rosita, Murrukmihadi and Suwarmi, 2014) Berdasarkan pemaparan (Jawetz, Melinick and Aldeberg, 2008) pengujian ini dilakukan untuk mengetahui  tingkat  penyebaran  krim  jika diaplikasikan  ke  kulitdan  juga  tingkat  lunaknya suatu krim.

## Uji daya lekat
Dilakukan  dengan  menggunakan  piranti anak timbangan gram , stopwatch , krim beserta dua objek  glass.  Tatacara  pengujiannya  yaitu  yang pertama  melekatkkan 0,5 gram krim di tegah kaca glass.  Kemudian  dibagian  atas  diberi  beban  500 gram,  dengan  durasi  300  detik.  Lalu  meletakkan objek  di  bagian  alat  pengujian.    Mencatat  hasil pengukuran dan dilakukan pengulangan pengukuran
sebanyak  3  kali.  Berdasarkan  pemaparan  (Jawetz, Melinick and Aldeberg, 2008) pengujian dilakukan selama  sebulan.  Karena  krim  disimpan  terlebih dahulu  selama  satu  minggu,  sebelum  dilakukan pengujian kedua. Jadi, selama satu bulan ada empat kali pengujian.

## II.4.2 Pengujian Efek Antibakteri
Objek  yang  digunakan  dalam  riset  yaitu kelinci  yang  sudah  disapkan  sebelumnya  dengan dicukur  rambutnya  dibagian  punggung  sebelah kanan,  maupun  kiri  sampai  dengan  belakang. Setelah  itu  mensuntikkan  bakteri Staphylococcus aureus sebanyak  0,25  mili  di  6  titik  dengan kedalaman  kurang  lebih  5  cm,  dan  luas  area penyuntikkan 10 cm 2 . Lakukan pengamatan selama 2 hari, dari bakteri yang diinfeksikan ke kelinci akan menimbulkan  luka  dan  berujung  pada  munculnya nanah. Pengujian yang dilakukan yaitu, mengoleskan  krim  berformula  1  pada  kelinci pertama  didaerah  titik  suntikan  dilakukan. Mengoleskan krim berformula 2 dengan konsentrasi ekstrak daun sirsak 25% pada kelinci dua. Mengoleskan  krim  berformula  3  dengan konsentrasi ekstrak daun sirih 10% pada kelinci tiga. Mengoleskan  krim  berformula  4  dengan  rasio konsentrasi ekstrak daun sirih dan daun sirsak yaitu 5%  :  25%  pada  kelinci  empat.  Mengoleskan  krim berformula 5 dengan rasio konsentrasi ekstrak daun sirih dan daun sirsak yaitu 5% : 25% pada  kelinci lima. Mengoleskan krim berformula 6 dengan rasio konsentrasi ekstrak daun sirih dan daun sirsak yaitu 10%  :  12,5%  pada  kelinci  enam.  Setelah  formula salep  diformulasikan  pada  masing-masing  tubuh kelinci, kemudian membalutnya dengan perban agar tidak  terkontaminasi  dengan  pengaruh  luar. Mengolesi krim 2 kali sehari pada pagi dan juga sore dalam rentang waktu 3 minggu.
Perhitungan jumlah bakteri Staphylococcus aureus menggunakan  metode Plate  Count .
Penghitungan  dilakukan  setelah  tubuh  kelinci terkontaminasi  bakteri  dan  sesudah  dilakuakn pengolesan krim

## II.5 Analisa Data
Teknik penganalisaan data yang diterapkan yaitu dengan menggunakan teknik One-way Anova dengan tingkat kepercayaan 95%.

## III. Hasil dan Pembahasan
Hasil  pengujian  ditunjukkan  dalam  tabel diatas,  yang  mana  tatacara  pengujiannya  yaitu melakukan penimbangan serbuk daun sirih dan daun sirsak  dengan  bobot  masing-masing  600 gram  dan kemudian  memasukkannya  pada  botol  maserasi. Lalu  tambahkan  1500  ml  C 2 H 5 OH  70%  sebagai pelarut  kedalam  botol  maserasi.  Selanjutnya  tutup botol  dan  diamkan  diruang  tertutup  tidak  terkena paparan cahaya matahari dalam kurun waktu 5 hari. Selama proses pendiaman jangan mengaduk larutan atau  mengocoknya.  Setelah  itu,  meyaring  larutan dengan  kain  fanel  yang  steril.  Tahap  selanjutnya
yaitu  melakukan  ekstraksi  larutan  dengan evaporator bersuhu 40 o C.
Tabel 1. Rendemen ekstrak daun sirsak ( Annona muricata L . ) dan daun sirih ( Piper betle L.) Bobot Serbuk (g) Bobot Ekstrak (g) Rendemen (% b/b) Sirsak 600 g 153.6 g 25,6 % Sirih   600 g 115,2 g 19,2 % Data  hasil  pengujian  ditunjukkan  dalam  Tabel  2. Pengujian  ini  dilakukan  untuk  mengetahui kandungan  senyawa  kimia  flavanoid,  saponin,
alkaloid  beserta  tanin  didalam  ekstrak  daun  sirih maupun daun sirsak.
Tabel 2. Identifikasi kandungan senyawa kimia serbuk dan ekstrak daun sirsak ( Annona muricata L . ) dan daun sirih ( piper betle L.) Kandungan Senyawa Kimia Hasil
Pustaka Intrepetasi Data Serbuk Ekstrak Serbuk Ekstrak Flavonoid  Terbentuk warna kuning jingga pada lapisan amil alcohol Terbentuk warna kuning jingga pada lapisan amil alkohol Reaksi positif jika ada warna merah atau kuning jingga pada lapisan amil alkohol (Depkes, 1995) (+) Mengandu ng flavonoid (+) Mengandung flavonoid Tanin Terbentuk warna hijau kehitaman Terbentuk warna hijau kehitaman Reaksi positif jiks terbentuknya warna hijau kehitaman (Depkes, 1995). (+) Mengandu ng tanin (+) Mengandung tannin Saponin  Terbentuk busa <10 menit + HCl 2N busa tidak hilang Terbentuk busa <10 menit + HCl 2N busa tidak hilang Ada busa <10 menit + 1 tetes HCl 2 N, busa tidak hilang (Depkes, 1995). (+) Mengandu ng saponin (+) Mengandung saponin
Pengujian  mutu  fisik  sediaan  krim kombinasi daun sirsak  ( Annona muricata L . ) daun sirih  ( piper  betle L.)  berfungsi  untuk  memahami mutu dari krim yaitu uji organoleptis, homogenitas, uji pH, viskositas, daya sebar, dan daya lekat.
Pengujian  organoleptis  krim  percampuran ekstrak etanol daun sirsak ( Annona muricata L.) dan
ekstrak etanol daun sirih ( Piper betle L.) dari segi bau,  warna,  beserta  konsistensi.  Sebeiknya  krim yang dihasilkan menghasilkan bau yang khas tidak menyengat tetapi ediaan yang dihasilkan sebaiknya menyenangkan,  konsistensi  yang  bagus,  dan  juga mempunyai  warna  yang  menarik.  Data  hasil pengujian ditunjukkan pada Tabel 3.
Tabel 3 . Hasil pengujian organoleptis formula krim ekstrak etanol 70% daun sirsak ( Annona muricata L . )  dan daun sirih ( piper betle L.) Variabel Hari ke Formula 1 Formula 2 Formula 3 Formula 4 Formula 5 Formula 6 Warna 2 Putih Kuning Kecoklatan Putih Kehijauan Kuning Kecoklatan Kuning Kecoklatan Kuning Kecoklatan 7 Putih Kuning Kecoklatan Putih Kehijauan Kuning Kecoklatan Kuning Kecoklatan Kuning Kecoklatan 14 Putih Kuning Kecoklatan Putih Kehijauan Kuning Kecoklatan Kuning Kecoklatan Kuning Kecoklatan 21 Putih Kuning Kecoklatan Putih Kehijauan Kuning Kecoklatan Kuning Kecoklatan Kuning Kecoklatan Bau 2 Tidak Berbau Khas Khas Khas Khas Khas 7 Tidak Berbau Khas Khas Khas Khas Khas
14 Tidak Berbau Khas Khas Khas Khas Khas 21 Tidak Berbau Khas Khas Khas Khas Khas Konsistensi 2 Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat 7 Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat 14 Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat 21 Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat Semi Padat
Berdasarkan  hasil  uji,  dari  campuran ekstrak daun sirsak dan juga daun sirih didapatkan tingkatan warna, bau dan konsistensi yang sama dari hari  ke-2  stelah  pembuatan  hingga  minggu  ke-3, yaitu memiliki warna kuning dengan sedikit warna coklat.  Mempunyai  bau  khas,  serta  berkonsistensi semipadat. Sedangkan pada formula 1 (basis) warna bau dan konsentrasi tetap stabil tidak ada perubahan.
Kesimpulan  dari  hasil  pengamatan  adalah  warna, bau, dan konsistensi stabil selama penyimpanan.
Pengujian  homogenitas  krim  bertujuan untuk  mengetahui  homogenitas  dari  formula  krim yang  diteliti,  penting  untuk  dilakukan  karena homogenitas  berpengaruh  terhadap  efektivitas  dari sediaan tersebut. Hasil uji homogenitas dari ke enam formula krim dapat dilihat pada Tabel 4.

## Tabel 4. Hasil uji homogenitas krim ekstrak etanol daun sirsak dan daun sirih
Formula Hari ke- 2 Hari ke-7 Hari ke- 14 Hari ke-21 Formula I homogen homogen homogen homogen Formula II homogen homogen homogen homogen Formula III homogen homogen homogen homogen Formula IV homogen homogen homogen homogen Formula V homogen homogen homogen homogen Formula VI homogen homogen homogen homogen
Berdasarkan  penelitian  yang  di  dapat sediaan krim mempunyai sifat homogen pada hari ke tiga  maupun  hari  kedua  dari  hasil  krim  yang dioleskan  ke  glass.  Pengidentifikasian  krim  dapat dilihat  dari  hasil  pengujian  homogenitas,  apakah terdapat butiran kasar pada campuran ekstrak daun sirih dan juga daun sirsak atau tidak. Dikatakan baik jika tidak terdat butiran yang menggumpal.
Cara  pengujian  pH  krim  yaitu  dengan memasukkan  lakmus  (pH  meter)  pada  kim  hasil percampuran  ekstrak  etanol  daun  sirsak  ( Annona Muricata L.)  dan  ekstrak  etanol  daun  sirih  ( Piper Betle L.). Lakmus yang berubah mengindikatorkan tingkat  ph  dari  krim  tersebut.    Data  pengujian ditunjukkan pada Tabel 5.
Tabel 5. Uji pH krim ekstrak etanol 70% daun sirsak dan daun sirih
Pemeriksaan waktu pH Formula I Formula II Formula III Formula IV Formula V Formula VI Hari ke-2 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) Minggu 1 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) Minggu 2 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) Minggu 3 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam) 6 (Enam)
Dari  tabel  tersebut  dapat  diketahui  bahwa krim  tersebut  mempunyai  pH  6  dan  stabil,  yang artinya  cocok  dipakaikan  di  kulit  karena  pH  kulit yaitu  4,5 hingaa 6,5.  Tingkat pH  yang  terlalu  basa dapat berakibat kulit bersisik sedangkan tingkat pH yang terlalu asam membuat kulit iritasi.
Krim  kombinasi  ekstrak  daun  sirsak  dan daun  sirih  diuji  viskositasnya  dengan  alat viskometer.  Keenam  formula  krim  yang  diteliti mempunyai  viskositas  yang  berbeda  dengan  enam kali  replikasi.  Hasil  pengamatan  ditunjukkan  pada Tabel  6.  Berdasarkan  hasil  pengujian  formula  6 lebih baik dibandingkan dengan formula lainnya.
Tabel 6. Hasil uji viskositas krim kombinasi ekstrak etanol daun sirsak dan daun sirih Hari ke Rata-rata ± SD (Dpas) Formula 2 Formula 3 Formula 4 Formula 5 Formula 6 2 213.33 ± 5,77 216.67 ± 2,89 253,33 ± 5,77 273,33 ± 5,77 303,33 ± 5,77 7 216,67 ± 2,89 233,33 ± 2,89 263,33 ± 5,77 281,67 ± 2,88 316,67 ± 5,77 14 225,00 ± 5,00 238.33 ± 2.89 273,33 ± 5,77 298,33 ± 7,63 338,33 ± 2,88 21 226.67 ± 5,77 240,00 ± 5,00 280,00 ± 10,0 311,67 ± 2,88 353,33 ± 5,77
Hasil pengujian daya sebar krim ditunjukkan dalam Tabel 7. Tata cara pengujiannya yaitu menimbang krim seberat 0,5 gram. Setelah itu meletakkannnya di  bagian  tengah kaca  bundar  dan dibagian  atas  kaca  diberi  anak  timbangan  lalu
didiamkan  selama  60  detik.  Tahap  selanjutnya mengukur  rerata  diameter  penyebaran  krim  dari berbagai  sisi.  Selanjutnya  menambahkan  krim dengan  bobot  krim  tambahan  50  gram,  100  gram, 150 gram, 200 gram.
Tabel 7. Hasil uji daya sebar krim kombinasi ektrak etanol daun sirsak dan daun sirih Formula Berat Beban (gram) Rata-rata diameter penyebaran hari ke (cm ± SD) 2 hari 7 hari 14 hari 21 hari formula II Kaca (49,124) 2,47 ± 0,25 2,17 ± 0,11 2,23 ± 0,06 1,83 ± 0,06 Kaca + 100 3,07 ± 0,37 2,17 ± 0,15 2,83 ± 0,25 2,61 ± 0,08 Kaca + 200 4,23 ± 0,11 3,97 ± 0,11 3,97 ± 0,06 2,48 ± 0,08 formula III Kaca (49,124) 2,27 ± 0.15 2,07 ± 0,11 1,87 ± 0,06 1,65 ± 0,08 Kaca + 100 2,83 ± 0,25 2,73 ± 0,06 2,63 ± 0,06 2,48 ± 0,08 Kaca + 200 4,03 ± 0,15 3,57 ± 0,06 3,73 ± 0,06 3,08 ± 0,10 formula IV Kaca (49,124) 1,97 ± 0,05 1,80 ± 0,00 1,63 ± 0,05 1,43 ± 0,05 Kaca + 100 2,80 ± 0,10 2,60 ± 0,10 2,50 ± 0,10 2,33 ± 0,11 Kaca + 200 3,93 ± 0,05 3,73 ± 0,05 3,60 ± 0,10 3,53 ± 0,05 formula V Kaca (49,124) 1,67 ± 0,05 1,53 ± 0,05 1,40 ± 0,00 1,30 ± 0,10 Kaca + 100 2,47 ± 0,05 2,40 ± 0,10 2,23 ± 0,05 2,13 ± 0,05 Kaca + 200 3,63 ± 0,05 3,43 ± 0,05 3,37 ± 0,11 3,17 ± 0,05 formula VI Kaca (49,124) 1,57 ± 0,11 1,50 ± 0,10 1,43 ± 0,05 1,33 ± 0,05 Kaca + 100 2,30 ± 0,10 2,23 ± 0,05 2,13 ± 0,05 2,00 ± 0,00 Kaca + 200 3,20 ± 0,10 3,03 ± 0,05 2,93 ± 0,05 2,87 ± 0,05
Berdasarkan  hasil  pengujian  daya  sebar krim  dengan  ekstensometer  yang  terdiri  dari  dua lempeng kaca bulat  terdapat perbedaan daya  sebar antara kelima formula. daya sebar 1,8-5 cm dengan beban 200 g dinyatakan baik, sehingga hasil uji daya sebar ini masih masuk dalam range tersebut.
Hasil pengujian daya lekat krim ditunjukkan  pada  Tabel  8.  Dalam  tabel  tersebut formula 6 mempunyai tingkat daya lekat yang lebih baik dibandingkan dengan formula lainnya
Tabel 8 . Hasil uji daya lekat krim kombinasi ekstak etanol daun sirsak dan daun sirih Hari ke Rata-rata ± SD Uji Daya Lekat Formula II Formula III Formula IV Formula V Formula VI 2 106.67 ± 2,88 116,67 ± 2,88 125,67 ± 1,15 153,33 ± 2,88 184,33 ± 0,57 7 188,33 ± 2,51 128,00 ± 3,46 136,67 ± 1,52 169,33 ± 1,15 184,67 ± 0,57 14 126,00 ± 3,47 134,00 ± 3,46 143,67 ± 0,57 173 ± 1,00 185,87 ± 1,154 21 127,33 ± 4,04 143,66 ± 5,13 153,33 ± 2,08 178,67 ± 0,57 186 ±1,00
Tata  cara  pengujian  aktivitas  antibakteri secara in  vivo yang  dilakukan  yaitu  mensuntikkan bakteri Staphylococcus aureus sebanyak 0,25 mili di 6  titik  dengan  kedalaman  kurang  lebih  5  cm,  dan luas  area  penyuntikkan  10  cm 2 .  Lakukan pengamatan  selama  2  hari,  dari  bakteri  yang diinfeksikan ke kelinci akan menimbulkan luka dan berujung  pada  munculnya  nanah.  Pengujian  yang dilakukan  yaitu,  mengoleskan  krim  berformula  1 pada  kelinci  pertama  didaerah  titik  suntikan dilakukan. Mengoleskan krim berformula 2 dengan konsentrasi  ekstrak  daun  sirsak  25%  pada  kelinci
dua.  Mengoleskan  krim  berformula  3  dengan konsentrasi ekstrak daun sirih 10% pada kelinci tiga. Mengoleskan  krim  berformula  4  dengan  rasio konsentrasi ekstrak daun sirih dan daun sirsak yaitu 5%  :  25%  pada  kelinci  empat.  Mengoleskan  krim berformula 5 dengan rasio konsentrasi ekstrak daun sirih dan daun sirsak yaitu 5% : 25% pada kelinci lima. Mengoleskan krim berformula 6 dengan rasio konsentrasi ekstrak daun sirih dan daun sirsak yaitu 10%  :  12,5%  pada  kelinci  enam.  Setelah  formula salep  diformulasikan  pada  masing-masing  tubuh kelinci, kemudian membalutnya dengan perban agar
tidak  terkontaminasi  dengan  pengaruh  luar. Mengolesi  krim  dilakukan  sebanyak  2  kali  dalam satu  hari  yaitu  pagi  dan  juga  sore  dalam  rentang waktu  3  minggu.  Formulasi  krim  yang  dioleskan
berhasil  atau  tidaknya  dapat  dilihat  dari  lukanya mengering,  nanahnya  sembuh  dan  diameter  luka mengecil tidak melebar. Hasil pengujian ditunjukkan pada Tabel 9.
Tabel 9. Rata-rata pengukuran luka pada punggung kelinci dari hari ke-0 sampai hari-20
Keterangan: FI basis, FII sirsak 25%, FIII sirih 10%, FIV kombinasi sirsak 12,5% sirih 5%, FV kombinasi sirsak 25% sirih 5% dan FVI kombinasi sirsak 12,5% sirih 10% dengan jumlah 0-20 hari.
Hasil  pengamatan  menunjukkan  pada Formula VI terjadi penyembuhan total pada hari ke 10  Penyembuhan  infeksi  ditandai  dengan terbentuknya  keropeng  pada  kulit  dan  tumbuhnya bulu pada punggung kelinci.
Perhitungan jumlah bakteri Staphylococcus aureus menggunakan metode Plate Count ,  menerapkan colony  counter. Penghitungan dilakukan  setelah  tubuh  kelinci  terkontaminasi bakteri  dan  sesudah  dilakuakn  pengolesan  krim. Hasil pengujian ditunjukkan dalam Tabel 10.
Tabel 10. Hasil pengamatan perhitungan jumlah koloni
Pada  Tabel  10,  F  VI  dengan  konsentrasi sirsak 12,5% sirih 10%. Kelinci dinyatakan sembuh jika  jumlah  koloni  mendekati  nilai  pada  kontrol normal atau flora normal. Dari hasil lamanya waktu penyembuhan yang memiliki kemampuan menyembuhkan  tercepat  karena  pada  konsentrasi tersebut  memiliki  kandungan  ekstrak  daun  sirsak dan daun sirih lebih besar. Zat aktif yang terkandung di dalamnya berupa minyak asitri, flavonoid, tanin, dan saponin. yang memiliki aktifitas antibakteri.

## IV. Kesimpulan
Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan  dapat  di  simpulkan  bahwa  krim kombinasi ekstrak etanol daun sirsak dan daun sirih memiliki kestabilan viskositas yang baik, dan pada tiap konsentrasi mempunyai efek kemampuan untuk mengobati  infeksi  karena bacteria Staphylococcus aureus yang di induksikan pada hewan uji (secara in vivo)  serta  kombinasi  pada  formula  VI  dengan konsentrasi  sirih  10%  :  sirsak  12,5%,  merupakan konsentrasi yang paling efektif dalam menyebuhkan kulit  punggung  kelinci  yang  terinfeksi  bakteri
Staphylococcus  aureus ,  dengan  waktu  sembuh selama 8 hari.

## Daftar Pustaka
Bustanussalam,  B. et  al. (2015)  ‘Efektivitas Antibakteri Ekstrak Daun Sirih(Piper betle Linn)  Terhadap  Staphylococcus  aureus ATCC  25923’, FITOFARMAKA:  Jurnal Ilmiah Farmasi , 5(2), pp. 58–64. Available at: https://doi.org/10.33751/jf.v5i2.409.
Dewangga,  V.S.  and  Nirwana,  A.P.  (2019)  ‘UJI Daya Hambat Ekstrak Etanol Daun Srikaya (Annona squamosa L.) Terhadap
Pertumbuhan
Staphylococcus aureus
Secara  In  Vitro’, Jurnal  Kesehatan
Kusuma  Husada ,  4(4),  pp.  50–56.
Available
at: https://doi.org/10.34035/jk.v10i1.328.
Hambali, R.M., Husain, D.R. and Alam, G. (2014) Bioaktivitas  Ekstrak  Metanol  Daun  Tua Sirsak  Annona  muricata  L  .  Sebagai Antibakteri  Terhadap  Staphylococcus aureus  dan  Propionibacterium  acnes , Hasanuddin University Repository .
Available at: https://core.ac.uk/download/pdf/25494095 .pdf (Accessed: 20 August 2022).
Jawetz,
Melinick
and
Aldeberg (2008)
‘Mikrobiologi  Iftdokteran’, Mikrobiologi
kedokteran , 23(1), pp. 251–257.
Rahmawati,  I.,  Tiara,  N.Y.  and  Harti,  A.S.  (2009)
‘Uji Aktivitas
Antibakteri
Salep Hidrokarbon  Ekstrak  Etil  Asetat  Daun
Jengkol  (Pithecollobium  labatum  Benth) terhadap  Staphylococcus  aureus  ATCC® 25923’, Jurnal  Farmasi  Indonesia ,  6(3), pp. 28–30. Rosita, M.R.E., Murrukmihadi, M. and Suwarmi, S. (2014) ‘Pengaruh Kombinasi Oxybenzone Dan Octyl Methoxycinnamate  (Omc)Pada Karakteristik Fisik Dan Spf Dalam Sediaan Krim  Tabir  Surya  the  Influence  of Combination  Oxybenzone  and  Octyl Methoxycinnamate (Omc) on the Physical Characteristics and Spf in Cream Sunscre’, SMajalah Farmaseutik , 10(1), p. 182. Suliantari,  S.,  Jenie,  B.S.L.  and  Suhartono,  M.T. (2012) ‘Aktivitas Antibakteri Ekstrak Sirih Hijau  (Piper  betle  L.)  Terhadap  Bakteri Patogen  Pangan’, Jurnal  Teknologi  dan Industri  Pangan ,  23(2),  pp.  217–220. Available at: https://doi.org/10.6066/jtip.2012.23.2.217. Tuna,  M.R.,  Kepel,  B.J.  and  Leman,  M.A.  (2015) ‘Uji  Daya  Hambat  Ekstrak  Daun  Sirsak (Annona muricata L.) Terhadap Pertumbuhan Staphylococcus aureus Secara In Vitro’, Pharmacon , 4(4), pp. 65– 70.